(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株（ＦＥＲＭＢＰ−１０９６）の菌体を有効成分として含む、経口ヒトノロウイルス感染予防剤。
【請求項２】
バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株（ＦＥＲＭＢＰ−１０９６）の培養物を有効成分として含む、請求項１に記載のヒトノロウイルス感染予防剤。
【請求項３】
前記培養物が大豆培養物である、請求項２に記載のヒトノロウイルス感染予防剤。
【請求項４】
バチルス・ズブチリスの芽胞を含む、請求項３に記載のヒトノロウイルス感染予防剤。
【請求項５】
経口摂取によりヒトノロウイルスを低減させる、請求項１〜４のいずれか１項に記載のヒトノロウイルス感染予防剤。
【請求項６】
錠剤である、請求項１〜５のいずれか１項に記載のヒトノロウイルス感染予防剤。
【請求項７】
錠剤が素錠である、請求項６に記載のヒトノロウイルス感染予防剤。
【請求項８】
錠剤が糖衣錠である、請求項６に記載のヒトノロウイルス感染予防剤。
【請求項９】
麦芽糖及びでんぷんを含む、請求項６〜８のいずれか１項に記載のヒトノロウイルス感染予防剤。
【請求項１０】
１錠あたり２．０×１０8〜５．０×１０10ＣＦＵのバチルス・ズブチリスＣ−３１０２株を含む請求項６〜９のいずれか１項に記載のヒトノロウイルス感染予防剤。
【請求項１１】
１錠あたり４．０×１０8〜９．０×１０9ＣＦＵのバチルス・ズブチリスＣ−３１０２株を含む請求項１０に記載のヒトノロウイルス感染予防剤。
【請求項１２】
１日あたり１〜５錠服用されることを特徴とする、請求項１０又は１１に記載のヒトノロウイルス感染予防剤。
【請求項１３】
１日あたり２．０×１０9〜９．０×１０9ＣＦＵのバチルス・ズブチリスＣ−３１０２株を摂取できるように製剤化されている、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のヒトノロウイルス感染予防剤。
【請求項１４】
少なくとも６カ月間服用される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のヒトノロウイルス感染予防剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、バチルス・ズブチリス、特にバチルス・ズブチリスＣ−３１０２株またはその培養物を有効成分とする、ヒトノロウイルス感染予防剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ノロウイルスは、カリシウイルス科に属する小型の球形ウイルス（直径約３８ｎｍ）で、世界中に広く分布し、年間数十万〜数百万人に及ぶ多くの非細菌性急性胃腸炎を発生させている。ノロウイルスには、I〜Vまで５つのGenogroupが存在するが、これらのうち、ヒトに感染するのはI、II、IV型のみで、ウシから発見されたIII型、及びマウスから発見されたV型はヒトには感染しない。
【０００３】
ある種のバチルス・ズブチリス（Bucillus subtilis）の培養上清によりマウスノロウイルスの増殖が抑制されたとの報告がある（非特許文献１）。しかし、ヒトに感染するノロウイルスと、マウスに感染するノロウイルスでは、その感染、増殖機構が全く異なっており、マウスノロウイルスはヒトには感染しない（非特許文献２）。実際バチルス属微生物のヒトノロウイルスに対する作用についてはこれまで報告はない。
【０００４】
バチルス・ズブチリスは、好気性のグラム陽性桿菌で、芽胞を形成することで、熱や消毒薬に対する耐久性を有する。出願人は、バチルス・ズブチリスの活性酸素の産生抑制作用やこれを利用した炎症性腸疾患予防治療剤（特許文献１）、バチルス・ズブチリスを鶏をはじめとする家畜に摂取させて、腸内有害細菌の数を減少させて、これらの菌による食中毒を回避する効果やこれを利用した飼料添加用腸内有害細菌抑制剤（特許文献２）について報告しているが、ノロウイウルス等の感染症に対する予防効果について報告したことはない。
【０００５】
現在マウスノロウイルスについては培養細胞での増殖が可能となっているが、ヒトノロウイルスについては培養細胞で増殖する技術は確立できていない。さらに、ヒトの感染モデルとなる非ヒト動物モデルも存在しないため、その感染や複製機構の研究が遅れ、効果的な予防薬や治療薬の開発もできていない。
【０００６】
ノロウイルス感染症は、食材からの感染と感染者の嘔吐物や糞便等からの二次感染に大別できる。そのため現在行われている主な感染予防は、食材の加熱処理、手洗いの励行、感染者の嘔吐物や糞便の適切な処理等である。ノロウイルスの感染者には子供も多いことから、経口摂取など、安全かつ簡便にノロウイルス感染を予防できる方法の開発が望まれる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特再公表２００８−６９１０２号
【特許文献２】特開平５−１４６２６０号
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Shearer A.E., et al., Journal of Food Protection, 2014 Jan; vol.77(1): 145-149.
【非特許文献２】片山和彦、IASR 2007年10月号、vol.28., p293-294
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の課題は、経口摂取等により、安全かつ簡便にヒトノロウイルスの感染を予防する手段を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記課題を解決するために鋭意検討し、発明者らは、バチルス・ズブチリスの菌体を経口摂取することで、ヒトノロウイルスが有意に低減することを見出した。
【００１１】
すなわち、本発明は以下の（１）〜（１５）を提供する。
（１）バチルス・ズブチリスを有効成分として含むヒトノロウイルス感染予防剤；
（２）バチルス・ズブチリスの培養物を有効成分として含む、上記（１）に記載のヒトノロウイルス感染予防剤；
（３）前記培養物が大豆培養物である、上記（２）に記載のヒトノロウイルス感染予防剤；
（４）バチルス・ズブチリスの芽胞を含む、上記（３）に記載のヒトノロウイルス感染予防剤。
（５）前記バチルス・ズブチリスがＣ−３１０２株（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９６）である、上記（１）〜（４）のいずれかに記載のヒトノロウイルス感染予防剤；
（６）経口摂取によりヒトノロウイルスを低減させる、上記（１）〜（５）のいずれかに記載のヒトノロウイルス感染予防剤；
（７）錠剤である、上記（１）〜（６）のいずれかに記載のヒトノロウイルス感染予防剤；
（８）錠剤が素錠である、上記（７）に記載のヒトノロウイルス感染予防剤；
（９）錠剤が糖衣錠である、上記（７）に記載のヒトノロウイルス感染予防剤；
（１０）麦芽糖及びでんぷんを含む、上記（７）〜（９）のいずれかに記載のヒトノロウイルス感染予防剤；
（１１）１錠あたり２．０×１０8〜５．０×１０10ＣＦＵのバチルス・ズブチリスを含む上記（７）〜（１０）のいずれか１項に記載のヒトノロウイルス感染予防剤；
（１２）１錠あたり４．０×１０8〜９．０×１０9ＣＦＵのバチルス・ズブチリスを含む上記（１１）に記載のヒトノロウイルス感染予防剤；
（１３）１日あたり１〜５錠服用されることを特徴とする、上記（１１）又は（１２）に記載のヒトノロウイルス感染予防剤；
（１４）１日あたり２．０×１０9〜９．０×１０9ＣＦＵのバチルス・ズブチリスを摂取できるように製剤化されている、上記（１）〜（１３）のいずれかに記載のヒトノロウイルス感染予防剤；
（１５）少なくとも６カ月間服用される、上記（１）〜（１４）のいずれかに記載のヒトノロウイルス感染予防剤。
【発明の効果】
【００１２】
本発明のヒトノロウイルス感染予防剤は、微量かつ短期間でヒトノロウイルスを低減させ、その感染を予防することができる。有効成分であるバチルス・ズブチリス古くから食品等に使用されており、長期にわたって安全に経口摂取することができる。それゆえ、本発明によれば、経口摂取という簡便な方法でヒトノロウイルスを低減させ、安全にその感染を予防することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株ゲノムＤＮＡの制限酵素ＮｏｔＩまたはＳｆｉＩ消化パターンを示す。
【図２】図２は、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株を含む素錠を４週間連続摂取中における排便回数を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
１．本発明のヒトノロウイルス感染予防剤
１．１  有効成分：バチルス・ズブチリス
本発明のヒトノロウイルス感染予防剤は、バチルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）を有効成分として含む。バチルス属の菌は古くからヒトの食生活に深くかかわっており、その機能性についての情報は多いが、ヒトノロウイルスに対する効果があることは未だ報告されていない。
【００１５】
本発明のヒトノロウイルス感染予防剤は、バチルス属に属する細菌の菌体またはその培養物、好ましくはバチルス・ズブチリスの菌体またはその培養物を有効成分として含むことを特徴とする。バチルス・ズブチリスの菌学的性質はバージーズ・マニュアル・オブ・バクテリオロジー Ｖｏｌ．１１（１９８６）等に記載されており、具体的には例えば以下の特徴を有する。
（１）グラム陽性
（２）卵円形の芽胞を形成
（３）桿菌
（４）運動性：あり
（５）好気性
（６）カタラーゼ：陽性
（７）５０℃における発育：＋
（８）ｐＨ５．７における発育：＋
（９）クエン酸塩の利用：＋
（１０）糖類からの酸生成の有無：アラビノース、グルコース、キシロース、マンニット：＋
（１１）ＶＰ反応：＋
（１２）デンプンの加水分解：＋
（１３）硝酸塩の還元性：＋
（１４）インドールの生成：−
（１５）ゼラチンの加水分解：＋
（１６）カゼインの加水分解：＋
（１７）液体培地での被膜形成：＋
（１８）牛乳の凝固：−
（１９）牛乳のペプトン化：＋
【００１６】
バチルス・サブチリスは芽胞（胞子）を形成し、芽胞は高温や消化酵素に対して耐久性を有する。本発明のヒトノロウイルス感染予防剤は、このバチルス・サブチリスを芽胞状態で含み、それゆえ、経口摂取しても生きたまま腸に届き、その効果を発揮できる。
【００１７】
本発明に用いるバチルス・ズブチリスとしては、例えば、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株（１９８５年１２月２５日付にて受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０９６として生命工学工業技術研究所に寄託されている（現  独立行政法人製品評価技術基盤機構特許生物寄託センター：千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８  １２２室））を挙げることができる。
【００１８】
バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株については、整腸作用（特表２０１１−１１１７８３号、脂質代謝改善作用（特表２００８−２３６０８号）、腎機能改善作用（特表２００８−２３６０７号）等、さまざまな有用な効果が知られている。すでに、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株を含む食品も市販されており、長期摂取による安全性も確立されている。
【００１９】
バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株の大豆培養物は家畜に対して、腸内細菌叢改善、増体、感染防御、卵殻強化、肉質改善、便臭改善等の効果があり、添加物として利用されている（特公平４−２４０２２）。またこの株の保健効果として、整腸作用、腸内腐敗産物の減少などが知られている（腸内細菌学会誌 第18巻 第二号 93-99（2004））。
【００２０】
バチルス・ズブチリスＣ−３１０２は、下記配列１及び配列２のＰＣＲプライマーを用いてＰＣＲ反応を行うと約７００ｂｐｓの断片が増幅するという特徴を持つ。他のバチルス・ズブチリスでは、このＰＣＲプライマーによっては増幅は起こらない。バチルス・ズブチリスＣ−３１０２のゲノムをテンプレートとして増幅される約７００ｂｐｓの断片は、アミラーゼの配列と相同性を有しないという特徴をもち、この点においてＣ−３１０２株はバチルス・ズブチリスの他の株と明確に識別される。
配列１：５'−ＧＣＣＣＣＧＣＡＣＡＴＡＣＧＡＡＡＡＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＡ−３'（配列番号１）
配列２：５'−ＧＧＡＴＣＣＣＡＣＧＴＴＧＴＧＡＴＴＡＡＡＡＧＣＡＧＣＧＡＴ−３'（配列番号２）
【００２１】
さらに、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株は以下の性質を有する：
（１）プラスミドＤＮＡを有しない。
（２）ゲノムＤＮＡを調製し、制限酵素ＮｏｔＩまたはＳｆｉＩで消化してアガロース電気泳動により分離したときの消化パターンは図１に示されるとおりである。
（３）B.cerous抗菌物質を産生する。
（４）アンピシリン、クロラムフェニコール、シプロフロキサシン、エリスロマイシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、リネゾリド、キヌプリスチン／ダルフォプリスチン、リファムピン、ストレプトマイシン、テトラサイクリン、トリメトプリム、バンコマイシンに対して耐性を有しない（いずれも最小阻害濃度０．０３〜４μｇ／ｍｌ）。
【００２２】
１．２  バチルス・ズブチリスの培養物
バチルス・ズブチリスは、培地として微生物培養に通常使用される炭素源、窒素源、無機物等を含む液体培地又は固体培地を用いて培養することができる。炭素源としては、バチルス・ズブチリスが資化可能な炭素源であればよく、例えばグルコース、フルクトース、スクロース、スターチ、糖蜜等を、また窒素源としては、例えばペプトン、カゼイン加水分解物、肉エキス、硫安等を挙げることができる。更に、必要に応じて燐酸、カリウム、マグネシウム、カルシウム、ナトリウム、鉄およびマンガン等の塩類、ビタミン類、アミノ酸類、界面活性剤等を添加することもできる。また、これらの合成培地の他、大豆油かすなどの天然物由来物質を用いて培養してもよい。培養条件としては、好気的条件が好ましく、培養装置としては例えばジャーファーメンターによる通気撹拌液体培養、棚式固体培養、自動製麹培養装置等が好ましい。培養温度は２０〜５０℃、特に３０〜４５℃が好ましく、培養時間は１２時間〜７日間、培養初発ｐＨはｐＨ５〜９、特に好ましくはｐＨ６〜８である。
【００２３】
このようにして得られた培養物は、バチルス・ズブチリスの菌体、培地および発酵生成物を含む。培養物は、ヒトノロウイルス感染予防剤としてそのまま用いてもよく、培養物を濃縮してもよく、またはこれらに賦形剤等を加えて乾燥粉末、顆粒、錠剤等の製剤として用いてもよい。また、培養物から分離した菌体を用いてもよく、培養物から菌体を除去して用いてもよく、菌体を含む形の培養物を用いてもよい。特に好ましい態様においては、バチルス・ズブチリスは、大豆油かす、大豆煮豆、小豆煮豆、米飯、麦飯、小麦ふすま、煮とうもろこし、その他の穀類などの食用に適した天然物由来物質を用いて培養し、培養物から菌体を分離することなく、そのまま食品に配合する。
【００２４】
本発明のヒトノロウイルス感染予防剤は、薬理学的に許容される担体や添加物とともに適宜製剤化され、液体、粉末、造粒物、カプセル剤、錠剤等の形で投与してもよく、食品添加物として飲食品中に配合して摂取してもよい。飲食品としては、例えば、飲料、製菓錠菓、ペースト、パン、魚肉加工製品、乳製品、ゼリー、キャンディ、レトルト食品、クッキー、カステラ、ビスケット、チョコレートなどが挙げられる。本発明のヒトノロウイルス感染予防剤をこれらの様々な食品素材に添加して、健康飲料、健康食品あるいは機能性食品として提供することができる。
【００２５】
本発明のヒトノロウイルス感染予防剤は、１日あたり１．０×１０8〜１．０×１０11ＣＦＵ、好ましくは１日あたり１．０×１０9〜５．０×１０10ＣＦＵ、より好ましくは１日あたり２．０×１０9〜２．０×１０10ＣＦＵ、さらに好ましくは１日あたり２．０×１０9〜９．０×１０9ＣＦＵのバチルス・ズブチリスを摂取できるように服用されることが好ましい。服用回数は１錠に含まれる菌数にもより適宜設定され、特に限定されないが、１日１回〜５回、好ましくは１回〜４回、より好ましくは１日１回〜３回に分けて服用するか、あるいは１日１回服用する。
【００２６】
本発明の有効成分であるバチルス・ズブチリスは微量かつ短期間で有効で、保存性と耐酸性にもすぐれ腸内に到達して増殖しやすく、持続的なヒトノロウイルス低減作用が期待できる。一方、本発明のバチルス・ズブチリスは長期にわたって安全に摂取することができる。それゆえ、本発明のヒトノロウイルス感染予防剤は３ヶ月以上、好ましくは６ヶ月以上、より好ましくは１年以上継続して使用するとよい。
【００２７】
２．ヒトノロウイルス感染予防用の錠剤
本発明は、バチルス・ズブチリス又はその培養物と薬理学的に許容しうる担体を含む錠剤（錠剤として製剤化されたヒトノロウイルス感染予防剤）を提供する。
【００２８】
薬理学的に許容しうる担体としては、例えば賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、矯味剤等が挙げられるが、これらに制限されず、その他常用の担体が適宜使用できる。
【００２９】
賦形剤としては、乳糖、白糖、Ｄ−マンニトール、Ｄ−ソルビトール、デンプン、α化デンプン、デキストリン、結晶セルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、アラビアゴム、プルラン、軽質無水ケイ酸、合成ケイ酸アルミニウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウムが挙げられる。
【００３０】
滑沢剤としては、例えば、ショ糖脂肪酸エステルやグリセリン脂肪酸エステルなどのシュガーエステル類、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ステアリルアルコール、粉末植物油脂などの硬化油、サラシミツロウなどのロウ類、タルク、ケイ酸、ケイ素、等が挙げられる。
【００３１】
結合剤としては、α化デンプン、ショ糖、ゼラチン、アラビアゴム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、結晶セルロース、白糖、Ｄ−マンニトール、トレハロース、デキストリン、プルラン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドンが挙げられる。
【００３２】
崩壊剤としては、乳糖、白糖、デンプン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、軽質無水ケイ酸、低置換度ヒドロキシプロピルセルロースが挙げられる。
【００３３】
防腐剤としては、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸が挙げられ。また、抗酸化剤としては、亜硫酸塩、アスコルビン酸塩等が挙げられる。
【００３４】
着色剤としては、水溶性食用タール色素、水不溶性レーキ色素、β−カロチン、クロロフィル、ベンガラ等の天然色素が挙げられる。
【００３５】
甘味剤としては、サッカリンナトリウム、グリチルリチン酸二カリウム、アスパルテーム、ステビアが挙げられる。
【００３６】
上記のほか、例えば、ビタミン類、ミネラル類、アミノ酸類、カテキンや甜茶などの茶抽出物、グルコサミン、コンドロイチン、ノコギリヤシやりんごなどの植物抽出物、ぶどうやりんごなどに含まれるポリフェノール類、乳酸菌、ビフィズス菌、酪酸菌、納豆菌、糖化菌、酵母、デンプン、デキストリン、アラビアゴム、マンニトールやキシリトールなどの糖アルコール類、結晶セルロースやヒドロキシプロピルセルロースなどのセルロース誘導体、ゼラチン、グリセリン、発酵乳、ラクトフェリン、食物繊維、フレーバー等を含んでいてもよい。
【００３７】
特に、本発明のヒトノロウイルス感染予防剤を含む錠剤は、グルコースやフルクトースなどの単糖、スクロースやラクトースなどの二糖、イソマルトやシクロデキストリンなどのオリゴ糖、グラニュー糖、麦芽糖、乳糖などの糖類、及びでんぷんを含むことが好ましい。
【００３８】
錠剤は、糖衣錠であっても素錠であってもよい。糖衣錠は、素錠に比べて一般的には崩壊性は低いが、有効成分の風味や臭いを感じにくいという利点がある。
【００３９】
本発明の錠剤は、ヒトノロウイルス感染予防剤は、１日あたり１．０×１０8〜１．０×１０11ＣＦＵ、好ましくは１日あたり１．０×１０9〜５．０×１０10ＣＦＵ、より好ましくは１日あたり２．０×１０9〜２．０×１０10ＣＦＵ、さらに好ましくは１日あたり２．０×１０9〜９．０×１０9ＣＦＵのバチルス・ズブチリスを摂取できるように服用され、好ましくは１日１回〜５回、より好ましくは１回〜４回、さらに好ましくは１日１回〜３回に分けて服用するか、あるいは１日１回服用することが好ましい。それゆえ、そのような服用に適した錠剤として製剤化されることが望ましい。
【００４０】
例えば、本発明の錠剤は、１錠あたり２．０×１０7〜１．０×１０11ＣＦＵ、好ましくは１錠あたり２．０×１０8〜５．０×１０10ＣＦＵ、より好ましくは１錠あたり４．０×１０8〜２．０×１０10ＣＦＵ、さらに好ましくは１錠あたり４．０×１０8〜９．０×１０9ＣＦＵのバチルス・ズブチリスを含むように調製される。
【００４１】
上述のとおり、本発明の有効成分であるバチルス・ズブチリスは微量かつ短期間で有効であるが、長期にわたって安全に摂取することができる。それゆえ、本発明の錠剤は、上記用法用量にしたがい、３ヶ月以上、好ましくは６ヶ月以上、より好ましくは１年以上継続して使用するとよい。
【実施例】
【００４２】
以下に実施例により本発明をより詳細に説明するが，これらの実施例は本発明の範囲を制限するものではない。
【００４３】
実施例においては、バチルス属に属する細菌の例として、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株（１９８５年１２月２５日付にて受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０９６として生命工学工業技術研究所に寄託されている（現  独立行政法人製品評価技術基盤機構特許生物寄託センター：千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８  １２２室））を用いた。
【００４４】
実施例１：バチルス・ズブチリスのヒトノロウイルスに対する効果
１．糖衣錠の調製
市販大豆油かす造粒品１０ｋｇに水５ｋｇを加えて１２１℃、６０分間殺菌し、予め前培養しておいたバチルス・ズブチリスＣ−３１０２株の培養液を接種し、３７℃程度で、６０．５時間培養することにより、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株の大豆培養物を製造した。このようにして得られた培養物を乾燥粉砕し、下記の表に示す他の成分を配合して、糖衣錠を製造した。糖衣錠の組成を表１、２に示す。
【００４５】
【表１】
0006594623.tif 000002
【００４６】
【表２】
0006594623.tif 000003
【００４７】
２．試験方法
幼稚園・保育園で働く健康な成人従業員２７２名を対象とし、このうち１２３名に３錠あたり４  ×１０9ＣＦＵのバチルス・ズブチリスＣ−３１０２株を含む糖衣錠を１日３錠、６ヶ月間摂取させ、残り１４９名には、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株を摂取させなかった。毎月検便を実施し、便中のノロウイルス、サルモネラ菌、赤痢菌、パラチフス菌、チフス菌、病原性大腸菌（Ｏ１、Ｏ１８、Ｏ８６）を測定した。６ヶ月間の累積値を表３に示す。
【００４８】
【表３】
0006594623.tif 000004
【００４９】
３．結果
病原性大腸菌（Ｏ１、Ｏ１８、Ｏ８６）、サルモネラについて両群において有意な差はみられなかった。一方、ノロウイルスについては、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株摂取群において、非摂取群と比較し陽性者数が低値傾向を示した。以上の結果から、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株が、ノロウイルス低減作用を有することが明らかとなった。
【００５０】
実施例２：バチルス・ズブチリスを含む素錠
実施例１にしたがい、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株の大豆培養物を製造した。得られた培養物を乾燥粉砕し、下記の表に示す他の成分を配合して、糖衣を施さない素錠を製造した。
【００５１】
【表４】
0006594623.tif 000005
【００５２】
２．崩壊性試験
第十六改正日本薬局方に準じて崩壊性試験を実施し、素錠の崩壊性を実施例１の糖衣錠と比較した。結果を下表に示す。
【００５３】
【表５】
0006594623.tif 000006
【００５４】
３．保存試験
アルミパウチ中で２３ヶ月及び３６ヶ月保存（２０℃）したときの保存安定性（菌数推移）を素錠と糖衣錠で比較した。結果を下表に示す。
【００５５】
【表６】
0006594623.tif 000007
【００５６】
４．素錠の過剰摂取安全性試験
実施例１にしたがって、３錠あたり５×１０9ＣＦＵのバチルス・ズブチリスＣ−３１０２株を含む素錠を調製し、便秘傾向者（男性５名、女性１名、合計６名）に、１日３錠（１日１回、原則として朝食後摂取）、４週間連続摂取させ、摂取期間中の排便回数を記録した。結果を図２に示す。
【００５７】
摂取１週目から排便回数が有意に増加した。バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株大豆培養物は素錠の形態にしても、服用による有害事象は認められず、糖衣錠と同様に便秘者において排便回数増加作用を有することが明らかとなった。
【００５８】
素錠は同じ組成の糖衣錠と比較して崩壊性に優れ、同等の保存安定性を示し、過剰摂取しても有害事象は認められず、糖衣錠と同様に安全であることが確認された。このことから、素錠についても、糖衣錠と同等あるいはそれ以上のノロウイルス低減作用が期待できる。
【００５９】
参考例１：ホームユーステスト
実施例１及び２にしたがって、３錠あたり７×１０9ＣＦＵのバチルス・ズブチリスＣ−３１０２株を含む素錠及び糖衣錠を調製し、４５〜５４歳の女性３０名に素錠（１５名）もしくは糖衣錠（１５名）を６日間服用させ、体調変化、飲みやすさ（粒の大きさや粒の数が気になるか否か）についてアンケート調査を実施した。結果を下表に示す。
【００６０】
【表７】
0006594623.tif 000008
【００６１】
【表８】
0006594623.tif 000009
【００６２】
体調が改善した者は、糖衣錠摂取群と比較し、有意に素錠摂取群で多かった。また、粒の大きさや粒の数が気になる人の数が糖衣錠摂取群と比較し、素錠摂取群で減少した。
【００６３】
製剤例１：カプセル剤
バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株大豆培養物と食用油脂を混合し、常法により下記成分からなるソフトカプセル剤皮の中に充填し、１粒３８０ｍｇのソフトカプセルを得た。
内容物
バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株大豆培養物                １００ｍｇ
食用油脂                                                    １５０ｍｇ
剤皮
ゼラチン                                                    １００ｍｇ
グリセリン                                                    ３０ｍｇ
【００６４】
製剤例２：粉末剤
下記成分を配合し、常法に従って造粒し、５ｇ入りスティック顆粒を製造した。
配合
バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株大豆培養物              ５％
ＣＭＣＮａ                                                適宜
デキストリン                                              適宜
【００６５】
製剤例３：液剤
下記成分を配合し、常法に従って、水１０ｋｇを加えて液剤を調製した。
配合
バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株大豆培養物          １００ｇ
液糖                                                ４０００ｇ
ＤＬ−酒石酸ナトリウム                                    １ｇ
クエン酸                                                ５０ｇ
ビタミンＣ                                              ５０ｇ
ビタミンＥ                                            １５０ｇ
シクロデキストリン                                      ２５ｇ
塩化カリウム                                              ５ｇ
硫酸マグネシウム                                          ２ｇ
【産業上の利用可能性】
【００６６】
本発明のノロウイルス感染予防剤は、経口摂取によりヒトノロウイルスの菌数を低減させることができる。バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株はすでに整腸作用等を目的とした錠剤として利用されており、その安全性も確立している。よって、本発明のノロウイルス感染予防剤は、医薬品のみならず、ノロウイルス感染予防を目的とした医薬部外品、食品として有用である。
【配列表フリーテキスト】
【００６７】
配列番号１：合成ＤＮＡ（フォワードプライマー）
配列番号２：合成ＤＮＡ（リバースプライマー）
【受託番号】
【００６８】
ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９６
【図１】
0006594623.tif 000010
【図２】
0006594623.tif 000011
【配列表】
0006594623000001.app