(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉａ）：
【化９】
0006517833.tif 000014
により表される構造を有する化合物であって、
式中：
Ｒ１は、水素、または非置換メチルであり、
Ｒ３は、水素、または非置換メチルであり、
ここで、Ｒ１およびＲ３は、同時に水素ではない、
化合物。
【請求項２】
Ｒ１が非置換メチルであり、Ｒ３が水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が水素であり、Ｒ３が非置換メチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１が非置換メチルであり、Ｒ３が非置換メチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物および薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項６】
患者におけるＴＤＰ−４３タンパク質症により特徴付けられる疾患を処置するかまたは予防するための組成物であって、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物の治療または予防有効量を含む、組成物。
【請求項７】
患者における筋萎縮性側索硬化症を処置するかまたは予防するための組成物であって、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物の治療または予防有効量を含む、組成物。
【請求項８】
患者におけるアルツハイマー病を処置するかまたは予防するための組成物であって、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物の治療または予防有効量を含む、組成物。
【請求項９】
患者におけるパーキンソン病を処置するかまたは予防するための組成物であって、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物の治療または予防有効量を含む、組成物。
【請求項１０】
患者における運動ニューロン疾患を処置するかまたは予防するための組成物であって、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物の治療または予防有効量を含む、組成物。
【請求項１１】
患者における前頭側頭葉変性症を処置するかまたは予防するための組成物であって、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物の治療または予防有効量を含む、組成物。
【請求項１２】
軽度認知障害を示す患者における軽度認知障害を処置するかもしくは予防するための、またはアルツハイマー病の発生を予防するための組成物であって、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物の治療または予防有効量を含む、組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２０１３年１１月２５日に出願された米国仮特許出願第６１／９０８，４５５号の利益を米国特許法§１１９（ｅ）の下、主張し、この出願は本明細書においてその全体が参照として援用される。
【０００２】
背景
技術分野
本出願は、ウィザノライド天然物の合成類似体およびその医薬的使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
関連技術の説明
神経変性疾患は、脳および脊髄の特定部位における選択的神経変性により特徴付けられる。一般に「ルー・ゲーリック病」として公知の筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）は、病因が不明の進行性神経変性疾患である。この疾患は、随意筋肉運動を制御する個体の能力を進行性に障害する。この疾患は、ほとんどの事例で、急速に進行し、診断の２〜５年内に麻痺および死亡につながる傾向がある。現在のところ、ＡＬＳに罹っている患者に対する治療的選択肢はほとんどない。ＡＬＳの処置用の唯一のＦＤＡ承認薬は、１９９５年に導入されたＲｉｌｕｔｅｋ（登録商標）であり、それによりＡＬＳを有する個体の平均余命は数か月間引き延ばされる。
【０００４】
ＡＬＳの病原に関する仮説の数は、増えている。１つは、中枢神経系（ＣＮＳ）における最も大量の興奮性神経伝達物質であるグルタメートが、そのレベルが慢性的に上昇した場合にニューロン細胞死を起こすというものである。グルタメートレベルが、ＡＬＳ患者において上昇していることが示されている（Ａ．ＰｌａｔｉｔａｋｉｓおよびＪ．Ｔ．Ｃａｒｏｓｃｉｏ、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．１９８７年、２２巻：５５７５〜５７９頁）。酸化ストレスが、ＡＬＳ研究における別の注目分野である。事例の約２０％を占める家族性ＡＬＳに、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）１の変異が関連する（Ｄ．Ｒ．Ｒｏｓｅｎら、１９９３年、Ｎａｔｕｒｅ、３６２巻：５９〜６２頁）という発見により、抗酸化機能不全の潜在的重要性が引き起こされた。自己免疫機序は、別の潜在的ＡＬＳ病原である（Ｍ．Ｒ．Ｐａｇａｎｉら、Ｎｅｕｒｏｌ．Ｒｅｓ．Ｉｎｔ．、２０１１年、２０１１：４９７０８０）。異常タンパク質ミスフォールディングおよび凝集は、ＡＬＳおよび他の数種の神経変性疾患における根底にある発症機序として、近年認識されてきている。ＡＬＳにおいて高次構造ミスフォールディングを示す細胞内タンパク質は、ＳＯＤ１およびトランス活性応答（ＴＡＲ）ＤＮＡ−結合タンパク質−４３（ＴＤＰ−４３）を含む。
【０００５】
数年前、高度に保存された核タンパク質であるＴＤＰ−４３における異常は、ＡＬＳと密接に関連性があると実証された（Ｔ．Ａｒａｉら、２００６年、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、３５１巻：６０２〜６１１頁）。健康な神経細胞において、ＴＤＰ−４３の細胞内分布は、核領域に制限される。しかしながら、ＡＬＳに冒されたニューロン細胞において、ＴＤＰ−４３は、細胞質集合体内にも顕著に存在した。さらに、神経病理に関連するＴＤＰ−４３は、変則的にリン酸化され、広範にユビキチン化され、タンパク分解性に切断され、冒された脳領域に、カルボキシル末端断片を生み出すことが示された（Ｍ．Ｎｅｕｍａｎｎら、２００６年、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１４巻：１３０〜１３３頁）。従って、改変ＴＤＰ−４３の蓄積様式は、細胞内プロセシング異常と同様に、ＡＬＳにおける変性ニューロン細胞変化の誘因として提唱された。ＴＤＰ−４３に関するこれらの異常および他の異常は、本明細書で、ＴＤＰ−４３タンパク質症と称する。
【０００６】
ＴＤＰ−４３に関する比較的最近の発見により、ＡＬＳで作用している発症機序への基本的洞察が提供された。ラバル大学で実施された研究により、ＡＬＳ患者から得られた脊髄試料における、核内因子のκＢ（ＮＦ−κＢ）炎症調節転写因子のｐ６５サブユニットに、ＴＤＰ−４３が予想外に関連することが示された（Ｖ．Ｓｗａｒｕｐら、２０１１年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、２０８巻：２４２９〜２４４７頁）。
【０００７】
ＮＦ−κＢシグナル伝達経路の活性化は、活性酸素種、インターロイキン−１（ＩＬ−１）および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）を含むさまざまな炎症促進性サイトカイン、同様に異なる細菌産物も含む複数の刺激により誘発される（Ｓ．ＶａｌｌａｂｈａｐｕｒａｐｕおよびＭ．Ｋａｒｉｎ、２００９年、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２７巻：６９３〜７３３頁；Ｌ．Ｖｅｒｓｔｒｅｐｅｎら、２００８年、Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．６５巻：２９６４〜２９６７８頁）。ＮＦ−κＢ活性は、最初は抑制ＩκＢタンパク質によってその物理的相互作用により制限されている。静止細胞中で、ＮＦ−κＢは、潜伏性の不活性なＩκＢ結合複合体として細胞質中に存在する。細胞が、閾値のこれらのシグナルの一つを受け取ると、ＮＦ−κＢは、迅速にＩκＢから遊離し、核に入り、その多くが炎症促進性および免疫応答調節タンパク質をコードする特異的遺伝子の転写を活性化する。ＮＦ−κＢシグナル伝達経路を誘発するほとんど全てのシグナルは、セリン残基−特異的ＩκＢキナーゼ（ＩＫＫ）を含有する分子複合体の活性化に集中する（Ｍ．Ａｄｌｉら、２０１０年、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ、５巻：ｅ９４２８頁）。古典的ＮＦ−κＢ経路において、ＩＫＫ複合体の活性化は、ＩκＢαのＮ末端近くの２つの特異的セリンのＩＫＫβにより媒介されるリン酸化に至り、続いてＩκＢαを２６Ｓプロテアソーム複合体による分子内のユビキチン化および分解の標的とする（Ｖａｌｌａｂｈａｐｕｒａｐｕ  ２００９年、前掲書；Ｍ．Ａｄｌｉ  ２０１０年、前掲書）。ＮＦ−κＢシグナル伝達経路の活性化は、一般に一過性の細胞内での現象であり、密接に調節されている（Ｖａｌｌａｂｈａｐｕｒａｐｕ  ２００９年、前掲書）。
【０００８】
ＴＤＰ−４３とＮＦ−κＢのｐ６５鎖は、細胞培養系、トランスジェニックＴＤＰ−４３マウスからの脊髄抽出物、および対応対照試料ではないが死後のＡＬＳ患者から調製された脊髄試料の中で共免疫沈降することが示された（Ｓｗａｒｕｐ  ２０１１年、前掲書）。マウス脊髄試料およびヒト脊髄試料の中で、ｐ６５は、ミクログリア、アストロサイトおよびニューロンの核内でＴＤＰ−４３と共存する傾向があった。ＡＬＳ脊髄試料中で、対照の主題物質と比較して、ＴＤＰ−４３ｍＲＮＡレベルは、２．５倍に上方制御され、一方、ＮＦ−κＢ  ｍＲＮＡは、およそ４倍に上方制御された（Ｓｗａｒｕｐ  ２０１１年、前掲書）。ゲルシフトアッセイにより、ＮＦ−κＢ  ｐ６５のｐ６５鎖は、ＴＤＰ−４３の存在下でレポーターＤＮＡのコンセンサス配列に結合する可能性がより高いことが確認された。さらに、ＴＤＰ−４３の過剰発現により、炎症促進性サイトカインの産生が増加し、それにより神経毒性要素に対するニューロンの感受性が高められた。欠失変異タンパク質マッピング研究により、ＴＤＰ−４３は、そのＮ末端ドメインおよびＲＮＡ認識モチーフ（ＲＭＭ−１）を通して、ＮＦ−κＢのｐ６５鎖成分と相互作用することが明らかになった。（Ｓｗａｒｕｐ  ２０１１年、前掲書）。ＮＦ−κＢ阻害により、グルタメート誘導またはミクログリア細胞媒介毒性に対する、ＴＤＰ−４３過剰発現培養ニューロンの脆弱性が減弱された。
【０００９】
ウィザフェリンＡ（ＷＡ）を用いる薬理的介入により、疾患症状が減弱され、ＴＤＰ−４３トランスジェニックマウスにおける運動機能障害が寛解した。ＷＡは、チオアルキル化−感受性酸化還元機序を介して、ＴＮＦα誘導ＩκＢキナーゼβ（ＩＫＫβ）の活性化を阻害することが示された（Ｗ．Ｖａｎｄｅｎ  Ｂｅｒｇｈｅら、２０１２年、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、８４巻：１２８２〜１２８９１頁）。ＷＡにより誘導されたＩＫＫβ  Ｓｅｒ−１８１過剰リン酸化により、ＮＦ−κＢ移行、ＮＦ−κＢ／ＤＮＡ結合および遺伝子転写を防止する、ＩκＢαのリン酸化および分解の阻害に至った（Ｍ．Ｋａｉｌｅｈら、２００７年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２８２巻：４２５３〜４２６４頁）。
【００１０】
ウィザフェリンＡ（ＷＡ）は、Ｗｉｔｈａｎｉａ  ｓｏｍｉｆｅｒａ植物の葉から単離された最初のウィザノライド型化合物であった。
【化１】
0006517833.tif 000002
【００１１】
この化合物は、その抗炎症性、抗腫瘍性、抗血管新生、および免疫抑制性の活性で注目されている。ＷＡは、ウィザノライドに属し、非損傷のまたは再配置されたエルゴスタン骨格上に構築された、自然起源のＣ２８−ステロイド性のラクトントリテルペノイドの群として一般に記述され、Ｃ−２２およびＣ−２６は、適切に酸化され、６員環のラクトンを形成する（Ｍ．Ｈ．Ｍｉｒｊａｌｉｌｉら、Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ２００９年、１４巻（７号）：２３７３〜２３９３頁）。ＷＡの多数の類似体は、ウィザノライド含有植物材料から精製され、合成され、またはＷＡ出発物質から半合成調製された（米国特許出願公開第２０１１／０２３０５５１号）。
【００１２】
ＷＡは、ＡＬＳ、前頭側頭葉変性症、パーキンソン病およびアルツハイマー病などの神経変性疾患のための処置として提唱され（国際公開第２０１２／１７４６６６号）、ＷＡは、ＡＬＳのマウスモデルにおいて疾患進行の寛解に効果的であることが示された。ＷＡの、ＮＦ−κＢ阻害を通じたｉｎ  ｖｉｖｏでの治療効果は、４種の広く認められているＡＬＳのトランスジェニックマウスモデルにおいて実証された。
【００１３】
ＷＡは、ＡＬＳおよび他の神経変性疾患の処置のための有望な治療剤であるけれども、ｉｎ  ｖｉｖｏで投与された場合、いくつかの毒性と同様に短い半減期を有する。従って、改善された薬物動態、体内分布、および安全性プロフィールを有する新規な化合物に対する必要性がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】米国特許出願公開第２０１１／０２３０５５１号明細書
【特許文献２】国際公開第２０１２／１７４６６６号
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Ａ．ＰｌａｔｉｔａｋｉｓおよびＪ．Ｔ．Ｃａｒｏｓｃｉｏ、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．１９８７年、２２巻：５５７５〜５７９頁
【非特許文献２】Ｄ．Ｒ．Ｒｏｓｅｎら、１９９３年、Ｎａｔｕｒｅ、３６２巻：５９〜６２頁
【非特許文献３】Ｍ．Ｒ．Ｐａｇａｎｉら、Ｎｅｕｒｏｌ．Ｒｅｓ．Ｉｎｔ．、２０１１年、２０１１：４９７０８０
【非特許文献４】Ｔ．Ａｒａｉら、２００６年、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、３５１巻：６０２〜６１１頁
【非特許文献５】Ｍ．Ｎｅｕｍａｎｎら、２００６年、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１４巻：１３０〜１３３頁
【非特許文献６】Ｖ．Ｓｗａｒｕｐら、２０１１年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、２０８巻：２４２９〜２４４７頁
【非特許文献７】Ｓ．ＶａｌｌａｂｈａｐｕｒａｐｕおよびＭ．Ｋａｒｉｎ、２００９年、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２７巻：６９３〜７３３頁
【非特許文献８】Ｌ．Ｖｅｒｓｔｒｅｐｅｎら、２００８年、Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．６５巻：２９６４〜２９６７８頁
【非特許文献９】Ｍ．Ａｄｌｉら、２０１０年、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ、５巻：ｅ９４２８頁
【非特許文献１０】Ｗ．Ｖａｎｄｅｎ  Ｂｅｒｇｈｅら、２０１２年、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、８４巻：１２８２〜１２８９１頁
【非特許文献１１】Ｍ．Ｋａｉｌｅｈら、２００７年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２８２巻：４２５３〜４２６４頁
【非特許文献１２】Ｍ．Ｈ．Ｍｉｒｊａｌｉｌｉら、Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ２００９年、１４巻（７号）：２３７３〜２３９３頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１６】
要旨
本明細書に記載されるのは、半合成のウィザフェリンＡ類似体、ならびに筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、パーキンソン病、アルツハイマー病および軽度認知障害などの神経変性疾患または状態の予防もしくは処置のためにこの類似体を使用する方法である。
【００１７】
従って、一態様では、本発明は、単離された立体異性体またはその混合物としての、式（Ｉ）：
【化２】
0006517833.tif 000003
［式中：
Ｒ１は、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アラルキル、ヘテロシクリルアルキル、−Ｒａ−ＯＲｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｂ、シクロアルキルアルキルまたは−Ｐ（Ｏ）２Ｏ２−であり；
Ｒ２は、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、−ＯＲｂまたは−ＯＣ（Ｏ）Ｒｂであり；
Ｒ３は、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アラルキル、ヘテロシクリルアルキル、−Ｒａ−ＯＲｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｂ、シクロアルキルアルキルまたは−Ｐ（Ｏ）２Ｏ２−であり；
Ｒ４は、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、−ＯＲｂまたは−ＯＣ（Ｏ）Ｒｂであり；
Ｒａは、アルキレンまたはアルケニレン鎖であり；
Ｒｂは、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アラルキル、シクロアルキルアルキルまたはヘテロシクリルアルキルである］
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であって、ただし、
Ｒ２およびＲ４が、それぞれ水素である場合、Ｒ１およびＲ３が、両方とも水素および−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３からなる群から選択され得ない、または
Ｒ１およびＲ３が、それぞれ−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である場合、Ｒ２もしくはＲ４が、両方とも水素および−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３からなる群から選択され得ない、
化合物、またはその薬学的に許容される塩に関する。
【００１８】
一部の実施形態では、化合物は、式（Ｉ）［式中、Ｒ２およびＲ４は、それぞれ水素である］の化合物であり、化合物は、式（Ｉａ）：
【化３】
0006517833.tif 000004
［式中：
Ｒ１は、水素、アルキルまたはアルケニルであり、
Ｒ３は、水素、アルキルまたはアルケニルである］
により表される構造を有する。
【００１９】
さらなる実施形態では、化合物は：２７−Ｏ−メチルウィザフェリンＡ（Ｒ１は、水素であり、Ｒ３は、メチルである）、４−Ｏ−メチルウィザフェリンＡ（Ｒ１はメチルであり、Ｒ３は水素である）、および４，２７−Ｏ−ジメチルウィザフェリンＡ（Ｒ１はメチルであり、Ｒ３はメチルである）である。
【００２０】
本発明の別の態様は、式（Ｉ）または式（Ｉａ）の化合物および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物に関する。
【００２１】
別の態様では、本発明は、式（Ｉ）または式（Ｉａ）の化合物の治療または予防有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、患者におけるＴＤＰ−４３タンパク質症により特徴付けられる疾患を処置するかまたは予防する方法に関する。
【００２２】
別の態様では、本発明は、式（Ｉ）または式（Ｉａ）の化合物の治療または予防有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、患者における筋萎縮性側索硬化症を処置するかまたは予防する方法に関する。
【００２３】
さらなる態様では、本発明は、式（Ｉ）または式（Ｉａ）の化合物の治療または予防有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、患者におけるアルツハイマー病を処置するかまたは予防する方法に関する。
【００２４】
さらなる態様では、本発明は、式（Ｉ）または式（Ｉａ）の化合物の治療または予防有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、患者におけるパーキンソン病を処置するかまたは予防する方法に関する。
【００２５】
別の態様では、本発明は、式（Ｉ）または式（Ｉａ）の化合物の治療または予防有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、患者における運動ニューロン疾患を処置するかまたは予防する方法に関する。
【００２６】
別の態様では、本発明は、式（Ｉ）または式（Ｉａ）の化合物の治療または予防有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、患者における前頭側頭葉変性症を処置するかまたは予防する方法に関する。
【００２７】
別の態様では、本発明は、式（Ｉ）または式（Ｉａ）の化合物の治療または予防有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、軽度認知障害を示す患者における軽度認知障害を処置するかもしくは予防する方法、またはアルツハイマー病の発生を予防する方法に関する。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
単離された立体異性体またはその混合物としての、式（Ｉ）：
【化８】
0006517833.tif 000005
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であって、
式中：
Ｒ１は、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アラルキル、ヘテロシクリルアルキル、−Ｒａ−ＯＲｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｂ、シクロアルキルアルキルまたは−Ｐ（Ｏ）２Ｏ２−であり；
Ｒ２は、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、−ＯＲｂまたは−ＯＣ（Ｏ）Ｒｂであり；
Ｒ３は、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アラルキル、ヘテロシクリルアルキル、−Ｒａ−ＯＲｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｂ、シクロアルキルアルキルまたは−Ｐ（Ｏ）２Ｏ２−であり；
Ｒ４は、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、−ＯＲｂまたは−ＯＣ（Ｏ）Ｒｂであり；
Ｒａは、アルキレンまたはアルケニレン鎖であり；
Ｒｂは、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アラルキル、シクロアルキルアルキルまたはヘテロシクリルアルキルであり、
ただし、
Ｒ２およびＲ４が、それぞれ水素である場合、Ｒ１およびＲ３は、両方とも水素および−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３からなる群から選択され得ない、あるいは
Ｒ１およびＲ３が、それぞれ−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である場合、Ｒ２またはＲ４は、両方とも水素および−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３からなる群から選択され得ない、
化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目２）
Ｒ１およびＲ３が、それぞれ独立して低級アルキルまたはアルケニルである、項目１に記載の化合物。
（項目３）
Ｒ１およびＲ３が、独立してメチルである、項目２に記載の化合物。
（項目４）
Ｒ２およびＲ４が、それぞれ水素であり、前記化合物が、式（Ｉａ）：
【化９】
0006517833.tif 000006
により表される構造を有し、
式中：
Ｒ１は、水素、アルキルまたはアルケニルであり、
Ｒ３は、水素、アルキルまたはアルケニルである、
項目１に記載の化合物。
（項目５）
Ｒ１がメチルであり、Ｒ３が水素である、項目４に記載の化合物。
（項目６）
Ｒ１が水素であり、Ｒ３がメチルである、項目４に記載の化合物。
（項目７）
Ｒ１がメチルであり、Ｒ３がメチルである、項目４に記載の化合物。
（項目８）
項目１から７のいずれか一項に記載の化合物および薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
（項目９）
患者におけるＴＤＰ−４３タンパク質症により特徴付けられる疾患を処置するかまたは予防する方法であって、項目１から７のいずれか一項に記載の化合物の治療または予防有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法。
（項目１０）
患者における筋萎縮性側索硬化症を処置するかまたは予防する方法であって、項目１から７のいずれか一項に記載の化合物の治療または予防有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法。
（項目１１）
患者におけるアルツハイマー病を処置するかまたは予防する方法であって、項目１から７のいずれか一項に記載の化合物の治療または予防有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法。
（項目１２）
患者におけるパーキンソン病を処置するかまたは予防する方法であって、項目１から７のいずれか一項に記載の化合物の治療または予防有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法。
（項目１３）
患者における運動ニューロン疾患を処置するかまたは予防する方法であって、項目１から７のいずれか一項に記載の化合物の治療または予防有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法。
（項目１４）
患者における前頭側頭葉変性症を処置するかまたは予防する方法であって、項目１から７のいずれか一項に記載の化合物の治療または予防有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法。
（項目１５）
軽度認知障害を示す患者における軽度認知障害を処置するかもしくは予防する方法、またはアルツハイマー病の発生を予防する方法であって、項目１から７のいずれか一項に記載の化合物の治療または予防有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】図１Ａは、リポ多糖（ＬＰＳ）への曝露、次に食塩水またはウィザノライド化合物４−Ｏ−メチルＷＡもしくは２７−Ｏ−メチルＷＡを用いる処置の後の、ＧＦＡＰ−ルシフェラーゼトランスジェニックマウスの脳の生物発光画像化を示す。図１Ｂは、図１Ａからの脳画像の生物発光の相対強度を示す棒グラフである。
【００２９】
【図２】図２は、ＬＰＳの刺激を受けたＢＶ２ミクログリア細胞におけるＮＦ−κＢレポーター活性に対する、異なる濃度のウィザノライド４−Ｏ−メチルＷＡ、２７−Ｏ−メチルＷＡおよび４，２７−Ｏ−ジメチルＡの効果を示す棒グラフを含む。
【００３０】
【図３】図３は、ＨＥＫ２９３−ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター細胞系における、ＴＮＦ−α誘導シグナル伝達活性の上方制御に対する、異なる濃度のウィザノライド４−Ｏ−メチルＷＡ、２７−Ｏ−メチルＷＡおよび４，２７−Ｏ−ジメチルＷＡの効果を示す棒グラフを含む。
【００３１】
【図４】図４Ａは、ビヒクル、４−Ｏ−メチルＷＡまたは２７−Ｏ−メチルＷＡ類似体を用いて処置をした、１５週期を超えたＴＤＰ−４３  Ａ３１５Ｔマウスの、加速ロータロッドの成績を示す。図４Ｂは、図４Ａにおけるデータの線形回帰分析を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
詳細な説明
本明細書に開示されるのは、半合成のウィザフェリンＡ類似体、ならびにそのさまざまな医薬的使用、詳細には、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、パーキンソン病、軽度認知障害（ＭＣＩ）、アルツハイマー病、およびＴＰＤ−４３タンパク質症に関連する疾患を含む神経変性疾患を処置することである。一実施形態は、単離された立体異性体またはその混合物としての、式（Ｉ）：
【化４】
0006517833.tif 000007
［式中：
Ｒ１は、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アラルキル、ヘテロシクリルアルキル、−Ｒａ−ＯＲｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｂ、シクロアルキルアルキルまたは−Ｐ（Ｏ）２Ｏ２−であり；
Ｒ２は、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、−ＯＲｂまたは−ＯＣ（Ｏ）Ｒｂであり；
Ｒ３は、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アラルキル、ヘテロシクリルアルキル、−Ｒａ−ＯＲｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｂ、シクロアルキルアルキルまたは−Ｐ（Ｏ）２Ｏ２−であり；
Ｒ４は、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、−ＯＲｂまたは−ＯＣ（Ｏ）Ｒｂであり；
Ｒａは、アルキレンまたはアルケニレン鎖であり；
Ｒｂは、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アラルキル、シクロアルキルアルキルまたはヘテロシクリルアルキルである］
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であって、ただし、
Ｒ２およびＲ４が、それぞれ水素である場合、Ｒ１およびＲ３が、両方とも水素および−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３からなる群から選択され得ない、または
Ｒ１およびＲ３が、それぞれ−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である場合、Ｒ２もしくはＲ４が、両方とも水素および−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３からなる群から選択され得ない、
化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００３３】
さまざまな実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、詳細にはＣ−４位、Ｃ−２７位またはその両方の位置において、１つまたは複数のアルキルエーテル部分を含む。
【００３４】
ある特定の実施形態では、Ｒ１およびＲ３は、独立して低級アルキルまたはアルケニルである。さらなる実施形態では、Ｒ１およびＲ３は、独立してメチルである。
【００３５】
さまざまな実施形態では、Ｒ２およびＲ４は、それぞれ水素であり、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉａ）：
【化５】
0006517833.tif 000008
［式中：
Ｒ１は、水素、アルキルまたはアルケニルであり、
Ｒ３は、水素、アルキルまたはアルケニルである］
により表される構造を有する。
さらなる実施形態では、化合物は：２７−Ｏ−メチルウィザフェリンＡ（Ｒ１は、水素であり、Ｒ３は、メチルである）、４−Ｏ−メチルウィザフェリンＡ（Ｒ１はメチルであり、Ｒ３は水素である）、および４，２７−Ｏ−ジメチルウィザフェリンＡ（Ｒ１はメチルであり、Ｒ３はメチルである）である。
【００３６】
米国特許出願公開第２０１１／０２３０５５１号に開示されるそれぞれ個々の化合物は、式（Ｉ）および（ＩＩａ）の範囲から明示的に除外されている。
【００３７】
別の実施形態は、本明細書に定義される式（Ｉ）または式（Ｉａ）の化合物、および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００３８】
さまざまな実施形態は、さらに式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物の医薬的使用を提供する。より詳細には、上記化合物または上記化合物を含む組成物の医薬的使用は、神経変性疾患の処置または神経変性疾患の進行もしくは悪化を予防することを含む。詳細には、神経変性疾患は、ＴＤＰ−４３タンパク質症により特徴付けられる。
【００３９】
従って、一実施形態は、式（Ｉ）または式（Ｉａ）の化合物の治療または予防有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、患者におけるＴＤＰ−４３タンパク質症により特徴付けられる疾患を処置するかまたは予防する方法を提供する。
【００４０】
さらなる実施形態は、式（Ｉ）または式（Ｉａ）の化合物の治療または予防有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、患者における筋萎縮性側索硬化症を処置するかまたは予防する方法を提供する。
【００４１】
別の実施形態は、式（Ｉ）または式（Ｉａ）の化合物の治療または予防有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、患者におけるアルツハイマー病を処置するかまたは予防する方法を提供する。
【００４２】
別の実施形態は、式（Ｉ）または式（Ｉａ）の化合物の治療または予防有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、患者におけるパーキンソン病を処置するかまたは予防する方法を提供する。
【００４３】
別の実施形態は、式（Ｉ）または式（Ｉａ）の化合物の治療または予防有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、患者における運動ニューロン疾患を処置するかまたは予防する方法を提供する。
【００４４】
別の実施形態は、式（Ｉ）または式（Ｉａ）の化合物の治療または予防有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、患者における前頭側頭葉変性症を処置するかまたは予防する方法を提供する。
【００４５】
別の実施形態は、式（Ｉ）または式（Ｉａ）の化合物の治療または予防有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、軽度認知障害を示す患者における軽度認知障害を処置するかもしくは予防する方法、またはアルツハイマー病の発生を予防する方法を提供する。
【００４６】
定義
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用されるように、反対であると特定されない限り、以下の用語は、示された意味を有する。
【００４７】
「アミノ」は、−ＮＨ２ラジカルを指す。
【００４８】
「カルボキシ」は、−Ｃ（Ｏ）ＯＨラジカルを指す。
【００４９】
「シアノ」は、−ＣＮラジカルを指す。
【００５０】
「ニトロ」は、−ＮＯ２ラジカルを指す。
【００５１】
「オキソ」は、＝Ｏラジカルを指す。
【００５２】
「チオキソ」は、＝Ｓラジカルを指す。
【００５３】
「アルキル」は、炭素原子および水素原子のみからなり、不飽和を含有せず、１〜１２個の炭素原子、好ましくは１〜８個の炭素原子または１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分枝の炭化水素鎖ラジカルを指し、アルキルは単結合により分子残部に結合している、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、１−メチルエチル（イソ−プロピル）、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、１，１−ジメチルエチル（ｔ−ブチル）、３−メチルヘキシル、２−メチルヘキシルなどである。本発明の目的上、用語「低級アルキル」は、１〜４個の炭素原子を有するアルキルラジカルを指す。
【００５４】
「アルケニル」は、炭素原子および水素原子のみからなり、少なくとも１個の二重結合を含有し、２〜１２個の炭素原子、好ましくは１〜８個の炭素原子を有する直鎖または分枝の炭化水素鎖ラジカルを指し、アルケニルは単結合により分子残部に結合している、例えば、エテニル、プロパ−１−エニル、ブタ−１−エニル、ペンタ−１−エニル、ペンタ−１，４−ジエニルなどである。
【００５５】
「アルキレン鎖」は、分子残部とラジカル基を結び付けており、炭素および水素のみからなり、不飽和を含有せず、１〜１２個の炭素原子を有する直鎖または分枝の２価の炭化水素鎖を指し、例えばメチレン、エチレン、プロプレン、ｎ−ブチレンなどである。アルキレン鎖は、単結合を通して分子残部に、かつ単結合を通してラジカル基に結合している。アルキレン鎖の分子残部へのおよびラジカル基への結合点は、アルキレン鎖中の１個の炭素を通して、または鎖中の任意の２個の炭素を通してであり得る。
【００５６】
「アルケニレン鎖」は、分子残部とラジカル基を結び付けており、炭素および水素のみからなり、少なくとも１個の二重結合を含有し、２〜１２個の炭素原子を有する直鎖または分枝の２価の炭化水素鎖を指し、例えば、エテニレン、プロペニレン、ｎ−ブテニレンなどである。アルケニレン鎖は、二重結合または単結合を通して分子残部に、かつ二重結合または単結合を通してラジカル基に結合している。アルケニレン鎖の分子残部へのおよびラジカル基への結合点は、鎖中の１個の炭素または任意の２個の炭素を通してであり得る。
【００５７】
「アリール」は、水素、６〜１４個の炭素原子、および少なくとも１個の芳香環を含む炭化水素環系ラジカルを指す。本発明の目的上、アリールラジカルは、単環式、二環式、または三環式系であり得、スピロ環系を含み得る。アリールラジカルは、必ずしもそうではないが、一般に、アリールラジカルの芳香環を介して親分子に結合している。アリールラジカルは、アセナフチレン、アントラセン、アズレン、ベンゼン、６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アンヌレン、フルオレン、ａｓ−インダセン、ｓ−インダセン、インダン、インデン、ナフタレン、フェナレンおよびフェナントレンに由来するアリールラジカルを含むが、これらに限定されない。
【００５８】
「アラルキル」は、式−Ｒａ−Ｒｃのラジカルを指し、Ｒａは上に定義したようなアルキレン鎖であり、Ｒｃは上に定義したような１つまたは複数のアリールラジカルである。アラルキルの例として、ベンジル、ジフェニルメチルなどが限定されることなく挙げられる。
【００５９】
「シクロアルキル」は、炭素原子および水素原子のみからなる安定な非芳香族の単環式または多環式の炭化水素ラジカルを指し、シクロアルキルは、縮合環、スピロ環、または架橋環系を含み、３〜１５個の炭素原子を有し、好ましくは３〜１０個の炭素原子、より好ましくは５〜７個の炭素を有し、飽和または不飽和であり、単結合により分子残部に結合している。本発明の目的上、架橋環系は、その非隣接の２個の環原子が、１個の原子または原子群を通して連結されており、その原子または原子群は架橋要素である系である。シクロアルキルの例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、およびシクロオクチルが限定されることなく挙げられる。多環式ラジカルは、縮合環、スピロ環、または架橋環のシクロアルキルラジカル、例えば、アダマンタニル（架橋）およびデカリニル（縮合）などのＣ１０ラジカル、ならびにビシクロ［３．２．０］ヘプタニル（縮合）、ノルボルナニルおよびノルボルネニル（架橋）などのＣ７ラジカル、同様に置換多環式ラジカル、例えば、７，７−ジメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタニル（架橋）などの置換Ｃ７ラジカルなどを含む。
【００６０】
「シクロアルキルアルキル」は、式−ＲａＲｄのラジカルを指し、Ｒａは上に定義したようなアルキレン鎖であり、Ｒｄは上に定義したようなシクロアルキルラジカルである。
【００６１】
「ハロ」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨードを指す。
【００６２】
「ハロアルキル」は、上に定義したようなアルキルラジカルを指し、上に定義したような１つまたは複数のハロラジカルにより置換されており、例えば、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、トリクロロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、１−フルオロメチル−２−フルオロエチル、３−ブロモ−２−フルオロプロピル、１−ブロモメチル−２−ブロモエチルなどである。
【００６３】
「ヘテロシクリル」は、安定な３員から１８員の非芳香環系ラジカルを指し、ヘテロシクリルは１〜１２個の炭素原子、ならびに窒素、酸素および硫黄からなる群から選択される、１〜６個のヘテロ原子を含む。本明細書中で特に他に記載されない限り、ヘテロシクリルラジカルは、単環式、二環式、三環式または四環式の環系であり得、スピロ環、または架橋環系を含み得；ヘテロシクリルラジカル中の窒素、炭素または硫黄原子は、任意選択で酸化され得；窒素原子は任意選択で四級化され得；ヘテロシクリルラジカルは、部分的にまたは完全に飽和であり得る。架橋ヘテロシクリルの例として、アザビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、ジアザビシクロ［２．２．２］オクタニル、ジアザビシクロ［３．２．１］オクタニル、ジアザビシクロ［３．３．１］ノナニル、ジアザビシクロ［３．２．２］ノナニルおよびオキサアザビシクロ［２．２．１］ヘプタニルが挙げられるが、これらに限定されない。「架橋Ｎ−ヘテロシクリル」は、少なくとも１個の窒素を含有する架橋されたヘテロシクリルであるが、Ｏ、ＮおよびＳから選択される４個までの付加的なヘテロ原子を任意選択で含有する。本発明の目的上、非架橋環系はその非隣接の２個の環原子が、１個の原子または原子群を通して連結されていない系である。ヘテロシクリルラジカルの例として、ジオキソラニル、１，４−ジアゼパニル、デカヒドロイソキノリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、イソチアゾリジニル、イソオキサゾリジニル、モルホリニル、オクタヒドロインドリル、オクタヒドロイソインドリル、オクタヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジニル、オクタヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジニル、オクタヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジニル、オクタヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｂ］ピリジニル、オクタヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピロリル、オクタヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジニル、２−オキソピペラジニル、２−オキソピペリジニル、２−オキソピロリジニル、オキサゾリジニル、３，７−ジアザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル、ピペリジニル、ピペラジニル、４−ピペリドニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル、キヌクリジニル、チアゾリジニル、テトラヒドロフラニル、チエニル［１，３］ジチアニル、トリチアニル、テトラヒドロピラニル、チオモルホリニル、チアモルホリニル、１−オキソ−チオモルホリニル、１，１−ジオキソ−チオモルホリニル、アゼチジニル、オクタヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピロリル、オクタヒドロピロロ［３，４−ｂ］ピロリル、デカヒドロプラジノ［１，２−ａ］アゼピニル、アゼパニル、アザビシクロ［３．２．１］オクチル、および２，７−ジアザスピロ［４．４］ノナニルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６４】
「ヘテロシクリルアルキル」は、式−Ｒａ−Ｒｅのラジカルを指し、Ｒａは上に定義したようなアルキレン鎖であり、Ｒｅは上に定義したようなヘテロシクリルラジカルであり、ヘテロシクリルが窒素含有のヘテロシクリルである場合、そのヘテロシクリルは窒素原子でアルキレン鎖に結合し得る。
【００６５】
本明細書で使用されるように、他に特定されない限り、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アラルキル、ヘテロシクリルアルキル、アルキレン鎖、アルケニレン鎖、シクロアルキルアルキル部分のうちのそれぞれ１つは、任意選択で置換され得、１つまたは複数の水素は１つまたは複数の以下の置換基：アミノ、ハロ、シアノ、ニトロ、オキソ、チオキソ、トリアルキルシラニル（トリメチルシラニルを含む）、−ＯＲｆ、−ＯＣ（Ｏ）−Ｒｆ、−Ｎ（Ｒｆ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒｆ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｆ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｆ）２、−Ｎ（Ｒｆ）Ｃ（Ｏ）ＯＲｆ、−Ｎ（Ｒｆ）Ｃ（Ｏ）Ｒｆ、−Ｎ（Ｒｆ）Ｓ（Ｏ）２Ｒｆ、−Ｓ（Ｏ）ｔＯＲｆ（ｔは１または２である）、−Ｓ（Ｏ）ｐＲｆ（ｐは０、１または２である）、および−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒｆ）２により置き換えられ、ここで各Ｒｆは独立して、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アラルキル、ヘテロシクリルアルキル、シクロアルキルアルキルからなる群から選択される。
【００６６】
「患者」は、神経変性疾患と診断されているか、または遺伝的にそのような疾患にかかりやすい哺乳動物を意味する。
【００６７】
「哺乳動物」は、Ｍａｍｍａｌｉａ綱の任意の脊椎動物を意味する。ヒト、およびネコ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ウサギなどの飼育動物が特に中心である。好ましくは、本発明の目的上、哺乳動物は霊長類（例えば、サル、ヒヒ、チンパンジー、およびヒト）であり、より好ましくは哺乳動物はヒトである。
【００６８】
「薬学的に許容される賦形剤」は、米国食品医薬品局により、ヒトまたは飼育動物における使用に許容されると承認されている、任意のアジュバント、担体、賦形剤、流動化剤、甘味料、希釈剤、防腐剤、色素／着色剤、調味料、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、懸濁剤、安定剤、等張剤、溶媒または乳化剤を、限定されることなく含む。
【００６９】
「薬学的に許容される塩」は、酸付加塩と塩基付加塩の両方を含む。
【００７０】
「薬学的に許容される酸付加塩」は、遊離塩基の生物学的効果および特性を保持しており、生物学的にまたはその他の面でも不都合なく、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などであるが、これらに限定されない無機酸と、酢酸、２，２−ジクロロ酢酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４−アセトアミド安息香酸、ショウノウ酸、ショウノウ−１０−スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、炭酸、ケイ皮酸、クエン酸、シクラミン酸、ドデシルスルホン酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチジン酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、グルタル酸、２−オキソ−グルタル酸、グリセロリン酸、グリコール酸、馬尿酸、イソ酪酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、オレイン酸、オロト酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、プロピオン酸、ピログルタミン酸、ピルビン酸、サリチル酸、４−アミノサリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、酒石酸、チオシアン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、ウンデシレン酸などであるが、これらに限定されない有機酸とで形成されている塩を指す。
【００７１】
「薬学的に許容される塩基付加塩」は、遊離酸の生物学的効果および特性を保持しており、生物学的にまたはその他の面でも不都合ない塩を指す。これらの塩は、無機塩基または有機塩基を遊離酸に添加することから調製される。無機塩基に由来する塩として、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウムなどの塩が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい無機塩は、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウムおよびマグネシウムの塩である。有機塩基に由来する塩として、一級、二級、および三級アミン、天然由来の置換アミンを含む置換アミン、環状アミン、ならびにアンモニア、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、ジエタノールアミン、エタノールアミン、２−ジメチルアミノエタノール、２−ジエチルアミノエタノール、ジシクロヘキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、ベネタミン、ベンザチン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、ポリアミン樹脂などの塩基性イオン交換樹脂の塩が挙げられるが、これらに限定されない。特に好ましい有機塩基は、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、トリメチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、コリン、およびカフェインである。
【００７２】
「医薬組成物」は、式（Ｉ）の化合物の製剤、または本明細書に記述される治療薬の製剤、および哺乳動物、例えばヒトに対して生物活性化合物を送達するための、当技術分野で一般に認められている媒体を指す。そのような媒体は、それらの薬学的に許容される全ての担体、希釈剤、または賦形剤を含む。
【００７３】
「神経変性疾患」は、ニューロンの構造または機能の進行性喪失を指し、ニューロンの死を含む。神経変性疾患の例として、パーキンソン病、アルツハイマー病、ＡＬＳ、運動ニューロン疾患、および前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）が限定されることなく挙げられる。詳細には、神経変性疾患は、ＴＤＰ−４３タンパク質症により特徴付けられ得る。神経変性疾患はまた、軽度認知障害（ＭＣＩ）も含む（Ｓ．Ｇａｕｔｉｅｒら、２００６年、Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ  ３５１巻：１２６２〜１２７０頁に記述される）。
【００７４】
「治療有効量」は、神経変性の進行を遅らせる、未然に防ぐ、もしくは最小限に抑えるために、または神経変性疾患の処置もしくは管理における治療効果を提供するために十分な治療薬の量を指し、神経変性疾患に関連する症状の寛解を含む。
【００７５】
「予防有効量」は、神経変性疾患を、特に、遺伝的にそのような疾患にかかりやすくあり得る患者において、予防するまたは未然に防ぐ結果をもたらすために十分な予防薬の量を指す。予防有効量は、神経変性疾患の加齢性発症または早期発症を予防するために十分な予防薬の量を指し得る。
【００７６】
本明細書で使用されるように、用語「予防する」、「予防すること」および「予防」は、患者における神経変性疾患の蔓延または発症の予防を指す。
【００７７】
本明細書で使用されるように、用語「処置する」、「処置すること」および「処置」は、好ましくは、ＡＬＳ、パーキンソン病、アルツハイマー病、ＦＴＬＤ、または軽度認知障害（ＭＣＩ）などの神経変性疾患が神経変性から発生し得る前に、神経変性過程を遅らせる、未然に防ぐ、または最小限に抑えることを指す。これらの用語はまた、神経変性疾患の管理も表し、神経変性疾患に関連する症状の寛解も含む。
【００７８】
式（Ｉ）および（Ｉａ）の化合物、または薬学的に許容されるそれらの塩は、１つまたは複数の不斉中心を含有し得、従って、エナンチオマー、ジアステレオマー、および絶対立体化学の観点から、アミノ酸に対して、（Ｒ）−もしくは（Ｓ）−として、または（Ｄ）−もしくは（Ｌ）−として定義され得る他の立体異性体を生じ得る。本発明は、全てのそのような可能性のある異性体、同様にそれらのラセミ体および光学的に純粋な形態も含むことを意味する。光学活性（＋）および（−）、（Ｒ）−および（Ｓ）−、または（Ｄ）−および（Ｌ）−の異性体は、キラルシントンもしくはキラル試薬を使用して調製され得るか、またはキラルカラムを使用するＨＰＬＣなどの従来技術を使用して分割され得る。本明細書で記述される化合物が、オレフィン性二重結合、または他の幾何学的非対称の中心を含有する場合、かつ他に特定されない限り、その化合物は、Ｅ幾何異性体およびＺ幾何異性体の両方を含むことを意図する。同様に、全ての互変異性型もまた、含まれることを意図する。
【００７９】
「立体異性体」は、同一の結合によって結び付けられた同一の原子から作られているが、互換的ではない異なる三次元構造を有する化合物を指す。本発明は、さまざまな立体異性体およびそれらの混合物を企図し、その分子が互いに重ね合わせることができない鏡像である、２つの立体異性体を指す「エナンチオマー」を含む。
【００８０】
式（Ｉ）の化合物の調製
以下の反応スキームは、出発物質としてウィザフェリンＡを使用することにより、式（Ｉａ）の化合物を調製するための半合成手法を示す。より詳細には、ウィザフェリンＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃａｎａｄａから入手可能）は、１つまたは複数のアルキル化剤で処理して、ウィザフェリンＡの−ＯＨ基をアルキル化することができる。
【化６】
0006517833.tif 000009
【００８１】
この反応により、Ｃ−４位またはＣ−２７位でモノアルキル化された化合物、ならびにＣ−４位およびＣ−２７位の両方でジアルキル化されたＷＡの混合物を生成することができる。アルキル化された化合物は、当技術分野で公知の方法により、分離され、かつ単離され得る。Ｒ１およびＲ３が同一である場合、１つのアルキル化ステップが実行され得る。Ｒ１およびＲ３が異なる場合、２つのアルキル化ステップが実行され得る。例えば、アルキル化剤Ｒ１−ＸおよびＲ３−Ｘ（Ｘは脱離基である）を使用する段階的な反応を実行し、ウィザフェリンＡのヒドロキシ基を別々にアルキル化することができる。
【００８２】
ウィザフェリンＡのＣ−４位またはＣ−２７位のヒドロキシ基を選択的に保護して、アルキル化ステップを特定の位置に方向付けることができる。例えば、Ｃ−４位のヒドロキシ基を最初に保護して、アルキル化ステップがＣ−２７位のヒドロキシ基においてのみ起きるようにし得る。
【００８３】
式（Ｉ）の化合物のＣ−１２位およびＣ−１５位における官能基化は、米国特許出願公開第２０１１／０２３０５５１号に開示される方法に従って実行され得、この参照文献は、その記載内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００８４】
以下に記載のプロセスにおいて、中間体化合物の官能基は、適切な保護基により保護される必要があり得ることが、当業者には理解される。そのような官能基として、ヒドロキシ、アミノ、メルカプト、およびカルボン酸が挙げられる。ヒドロキシに対する適切な保護基として、トリアルキルシリルまたはジアリールアルキルシリル（例えば、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、もしくはトリメチルシリル）、テトラヒドロピラニル、ベンジルなどが挙げられる。アミノ、アミジノおよびグアニジノに対する適切な保護基として、ベンジル、ｔ−ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニルなどが挙げられる。メルカプトに対する適切な保護基として、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ”（ここで、Ｒ”は、アルキル、アリールまたはアリールアルキルである）、ｐ−メトキシベンジル、トリチルなどが挙げられる。カルボン酸に対する適切な保護基として、アルキル、アリール、またはアリールアルキルのエステルが挙げられる。
【００８５】
保護基は、当業者に公知であり本明細書に記載される標準的な技術に基づいて、付加されまたは除去され得る。保護基の使用は、Ｇｒｅｅｎｅ，  Ｔ．Ｗ．およびＰ．Ｇ．Ｍ  Ｗｕｔｓ、Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（１９９９年）、第３版、Ｗｉｌｅｙに詳述されている。当業者が認識しているように、保護基は、ワング樹脂、リンク樹脂または２−クロロトリチル−クロリド樹脂などのポリマー樹脂でもあり得るが、これに限定されない。
【００８６】
投薬量
処置における使用に必要とされるウィザノライド化合物の量は、選択される特定の化合物によって異なるだけでなく、投与経路、処置を必要とする状態、および患者の年齢と状態の性質によっても異なり、最終的に医師によって決定される。一般に、処置における使用に必要とされる化合物の量は、選択される特定の化合物によって異なるだけでなく、投与経路、処置を必要とする状態および患者の年齢と状態の性質によっても異なり、最終的に医師によって決定される。一般に、適切な投薬量は、例えば、０．０１〜１０００ｍｇ／体重ｋｇ／日の範囲、または例えば、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲、または例えば、０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲、または例えば、１〜２５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。投薬量は、適当な間隔で、例えば、１日当たり１、２、３、４回の投薬またはそれを超える投薬で投与され得る。場合によっては、投薬量は、毎日、２〜３日ごとに、４〜５日ごとに、または５〜７日ごとに投与され得る。投薬は、必要に応じて何日間か、何週間か、何か月間か、または何年間か、継続し得る。
【実施例】
【００８７】
（実施例１）
ＷＡからのＷＡメチルエーテル類似体の調製
【化７】
0006517833.tif 000010
【００８８】
調製
１５０ｍｇのウィザフェリンＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃａｎａｄａから入手可能）（ＷＡ１）を、ヨウ化メチル中で水素化ナトリウムを用いて処理した。この反応により、モノメチル化化合物およびジメチル化ＷＡの両方の混合物を生成した。反応混合物を濾過して、過剰の水素化ナトリウムおよびヨウ化ナトリウムを除去した。濾液を乾燥して、残渣をジクロロメタンに再溶解した。得られた溶液をシリカゲルカラムでクロマトグラフィーにかけた。モノメチルエーテル（２および３）ならびにジメチルエーテル（４）を含有する画分を合わせて、その化合物を逆相クロマトグラフィーにより分離した。
【００８９】
各化合物の純粋な画分をプールし、濃縮し、ジクロロメタン中に抽出し、乾燥した。このようにしておよそ５〜１０ｍｇの各化合物を、白色固体として各々得た。これらの化合物の分光分析法データを以下の表１に提供する。
【表１】
0006517833.tif 000011
【００９０】
（実施例２）
ＬＰＳに曝露したＧＦＡＰ−ルシフェラーゼマウスにおける脳生物発光
【００９１】
２種の新規なウィザノライドを、トランスジェニックマウスモデルを使用してｉｎ  ｖｉｖｏでその治療活性に関して試験した。Ｊ．Ｐ．Ｊｕｌｉｅｎ博士の研究所で作製されたトランスジェニックＧＦＡＰ−ルシフェラーゼマウスを使用して、ウィザノライドが、リポ多糖（ＬＰＳ）曝露により誘導される炎症に関連するアストログリオーシスを阻害する能力を検討評価した。Ｉｎ  ｖｉｖｏ生物発光画像化を実施して、頭蓋領域における炎症性応答を検討評価した。評価された領域における、対照（食塩水）と比較した生物発光シグナルの減少により、ウィザノライドは、血液脳関門を通過することとそれに続くグリオーシスを阻害することが示された。
【００９２】
ウィザノライド［４−Ｏ−メチルウィザフェリンＡ（４−Ｏ−メチルＷＡ）および２７−Ｏ−メチルウィザフェリンＡ（２７−Ｏ−メチルＷＡ）］を、１００％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に２ｍｇ／ｍｌの最終濃度で希釈した。ＧＦＡＰ−ｌｕｃトランスジェニックマウスを使用して、ｉｎ  ｖｉｖｏでこれらの類似体の有効性を試験した。これらのトランスジェニックマウスにおいて、ホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子は、グリア線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーター（Ｃａｌｉｐｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）の１２ｋｂＤＮＡ断片の制御下にある。ルシフェラーゼレポーターは、ＬＰＳ投与の後に誘導可能であり、ＧＦＡＰ転写調節をもたらす。ＬＰＳ注入の後の試験化合物の投与により、ＧＦＡＰ−ｌｕｃマウスにおけるＬＰＳ誘導アストログリオーシスが減少するならば、これは画像化後の生物発光シグナルの低下として可視化される。
【００９３】
麻酔下にあるトランスジェニックマウスに、５μｌのＬＰＳ（０．９％食塩水中に１ｍｇ／ｍｌ）溶液または０．９％の食塩水溶液単独のいずれかを吸入させ、次に２時間後に０．５ｍｌの試験化合物（０．９％食塩水中に１０％希釈）を、４ｍｇ／ｋｇの最終濃度で腹腔内（ｉ．ｐ．）注入した。その次の日に、画像化の２時間前（ＬＰＳ溶液投与の２４時間後）に、トランスジェニックマウスに、再度、前述のようにウィザノライドを注入した。画像化の２０分前に、そのトランスジェニックマウスはルシフェラーゼ基質Ｄ−ルシフェリン（１５０ｍｇ／ｋｇ）のｉ．ｐ．注入を受けた。Ｄ−ルシフェリンを、０．９％食塩水に溶解し、２０ｍｇ／ｍｌの最終濃度とした。マウスに麻酔を施し、ＩＶＩＳ２００画像化システム（ＣａｌｉｐｅｒＬＳ−Ｘｅｎｏｇｅｎ）を使用して、画像化した。
【００９４】
結果は、４−Ｏ−メチルＷＡまたは２７−Ｏ−メチルＷＡのいずれかで処置されたマウスにおける生物発光シグナルは、食塩水−ＤＭＳＯ単独で処置されたマウスと比較して、有意な減少を示した（図１Ａ）。図１Ｂは、図１Ａで示されたＧＦＡＰ−トランスジェニックマウスの脳における、総光子放出の数値として表されるルシフェラーゼ活性の定量化の要約グラフを示す。この実験により、４−Ｏ−メチルＷＡまたは２７−Ｏ−メチルＷＡのいずれかで処置されたＧＦＡＰ−トランスジェニックマウスにおけるアストログリオーシスの有意な低下が実証された。
【００９５】
（実施例３）
新規なウィザノライドは、ＬＰＳで刺激を受けたＢＶ２ミクログリア細胞におけるＮＦ−κＢレポーター活性を阻害する。ウィザノライド４−Ｏ−メチルＷＡ、２７−Ｏ−メチルＷＡおよび４，２７−Ｏ−ジメチルＷＡを、ＮＦ−κＢ活性化を阻害する能力に関して試験した。ＢＶ−２ミクログリア細胞におけるＮＦ−κＢ特異的ルシフェラーゼレポーター系を最初に確立した。ルシフェラーゼレポーター４ｋＢｗｔルシフェラーゼプラスミドの安定な挿入、およびハイグロマイシン（ｈｙｇｏｍｙｃｉｎ）を用いたその後の選択を伴うＢＶ−２細胞の安定なトランスフェクションにより、この細胞系を作製した。これらの細胞におけるＮＦ−κＢ活性を刺激するために、ＬＰＳを使用した。２５０００のハイグロマイシンＢ−耐性ＢＶ−２細胞を、２４−ウェルディッシュの各ウェルに播種し、終夜、付着させた。翌朝、培地（ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ）を除去して、１ｍｌの新鮮培地（ＦＢＳなしのＤＭＥＭ）を各ウェルに添加した。ウィザノライドの保存液（ＤＭＳＯ中２ｍｇ／ｍｌ）を１×ＰＢＳ中でさまざまな濃度（０．０５〜５μＭ）に希釈し、ウェルに添加した。１時間後に、ＬＰＳを１００ｎｇ／ｍｌの最終濃度で添加した。４時間後に、製造業者の指示書（Ｂｒｉｇｈｔ−ＧｌｏＴＭ  ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  ａｓｓａｙ  ｓｙｓｔｅｍ、Ｐｒｏｍｅｇａ、ウィスコンシン）に従って実施されるルシフェラーゼアッセイを進める前に、ＢＶ−２細胞を１×ＰＢＳですすいだ。
【００９６】
図２に提供された結果により、試験を行ったウィザノライドの全てが、ＮＦ−κＢ発現を阻害する能力を有することが示された。以下の表２は、式（Ｉａ）の特定の化合物のＩＣ５０を示す。
【表２】
0006517833.tif 000012
【００９７】
（実施例４）
新規なウィザノライドは、ＨＥＫ２９３−ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター細胞系中における、ＴＮＦ−α誘導シグナル伝達活性の上方制御を阻害する
１００００のハイグロマイシンＢ−耐性ＨＥＫ−２９３細胞を、９６−ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ニューヨーク）の各ウェルに播種し、終夜、付着させた。翌朝、培地（ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ）を除去して、１００ｍｌの新鮮培地（ＦＢＳなしのＤＭＥＭ）を各ウェルに添加した。ウィザノライド４−Ｏ−メチルＷＡ、２７−Ｏ−メチルＷＡおよび４，２７−Ｏ−ジメチルＷＡの保存液（ＤＭＳＯ中に２ｍｇ／ｍｌ）を、１×ＰＢＳ中でさまざまな濃度（０．０５〜５μＭ）に希釈し、ウェルに添加した。ヒト組み換えＴＮＦ−アルファ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ミネアポリス）を、１時間後に４０ｎｇ／ｍｌの最終濃度で添加した。４時間後に、製造業者の指示書（Ｂｒｉｇｈｔ−ＧｌｏＴＭ  ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  ａｓｓａｙ  ｓｙｓｔｅｍ、Ｐｒｏｍｅｇａ、ウィスコンシン）に従って実施されるルシフェラーゼアッセイの前に、ＨＥＫ−２９３細胞を１×ＰＢＳですすいだ。
【００９８】
図３に示すアッセイの結果により、４−Ｏ−メチルＷＡ、２７−Ｏ−メチルＷＡおよび４，２７−Ｏ−ジメチルＷＡは、ＮＦ−κＢ発現を阻害することが確認された。４−Ｏ−メチルＷＡ、２７−Ｏ−メチルＷＡおよび４，２７−Ｏ−ジメチルＷＡのＩＣ５０を表３に示す。
【表３】
0006517833.tif 000013
【００９９】
（実施例５）
ＷＡ、４−Ｏ−メチルＷＡおよび２７−Ｏ−メチルＷＡの安全性比較
ＷＡ、４−Ｏ−メチルＷＡおよび２７−Ｏ−メチルＷＡのｉｎ  ｖｉｖｏでの忍容性を比較するために、短期投与量漸増研究を実行した。正常なＣ５７ＢＬ／６の雌マウスに、ＷＡ、４−Ｏ−メチルＷＡまたは２７−Ｏ−メチルＷＡを、２０〜６５ｍｇ／ｋｇ（２０、２５、３０、３５、４５、５５および６５ｍｇ／ｋｇ）の範囲の投薬量で腹腔内に注入した。罹患率、死亡率、ならびに挙動、呼吸、心拍動、水分補給、および他の状態（腹水、ショック、重度の下痢および出血など）における臨床的変化の徴候に関して、投薬の１時間後、６時間後および２４時間後に動物を観察した。投薬の前および２４時間後に、体重を測定した。
【０１００】
ウィザノライド４−Ｏ−メチルＷＡおよび２７−Ｏ−メチルＷＡの両方とも、ＷＡよりかなり良好な安全性プロフィールを示した。ＬＤ５０（５０％致死量）は、ＷＡに関して５５ｍｇ／Ｋｇであることが見出された。ＷＡに関して同一のＬＤ５０値（５４ｍｇ／ｋｇ）が、以前に報告された（Ｐａｔｗａｒｄｈａｎら、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、（２００６年）、Ｍ．Ｓ．Ｃｈｏｒｇｈａｄｅ編、Ｗｉｌｅｙ）。対照的に、マウスに５５ｍｇ／ｋｇの４−Ｏ−メチルＷＡか２７−Ｏ−メチルＷＡのいずれかを投与した場合、死亡は見られなかった。研究において試験された最高投薬量の６５ｍｇ／ｋｇで、４−Ｏ−メチルＷＡまたは２７−Ｏ−メチルＷＡのいずれかを注入されたマウスに関して、死亡は見られなかった。しかしながら、これらの群の動物は、投薬後に、いくらかの虚弱および活動の減少を示した。
【０１０１】
（実施例６）
ウィザフェリンＡ類似体は、ＡＬＳのＴＤＰ−４３  Ａ３１５Ｔトランスジェニックマウスモデルにおける神経疾患の発生を阻害する
４−Ｏ−メチルＷＡおよび２７−Ｏ−メチルＷＡの投薬を繰り返すことによる、ＡＬＳのＴＤＰ−４３  Ａ３１５Ｔトランスジェニックマウスモデルにおける神経疾患の発生に対する影響を評価した。ＡＬＳのＴＤＰ−４３  Ａ３１５Ｔマウスモデルは、Ｓｗａｒｕｐ，Ｖら、Ｂｒａｉｎ  １３４巻：２６１０〜２６２６頁、２０１１年に十分に記述されている。ＴＤＰ−４３  Ａ３１５Ｔマウスは、多数の行動および運動機能試験（バーンズ迷路試験、加速ロータロッド試験および受動的回避試験）におけるその成績により測定すると、月齢約９か月で神経障害を示し始める。
【０１０２】
月齢およそ９か月および２５〜５５ｇの、雄および雌のＴＤＰ−４３  Ａ３１５Ｔマウスを研究に含み、以下の３群に無作為に割り当てた：
１群（ｎ＝６）は、５ｍｇ／ｋｇの４−Ｏ−メチルＷＡを受け；
２群（ｎ＝７）（対照群）は、ビヒクル（２％ポリソルベート［Ｔｗｅｅｎ−８０］／５％ＤＭＳＯ／９３％食塩水）を受け；
３群（ｎ＝７）は、５ｍｇ／ｋｇの２７−Ｏ−メチルＷＡを受けた。
【０１０３】
全ての動物は、１５週間において２日ごとに、ビヒクルまたは５ｍｇ／ｋｇの試験ＷＡ類似体のいずれかのｉ．ｐ．注入を受けた。１２．５ｍＬ／ｋｇの注入容量は、研究開始時の各個々の動物の体重を基準とした。
【０１０４】
全ての動物を、研究中ずっと少なくとも１日１回、臨床徴候に関して観察し、１週間に１回、ロータロッド試験の前に個々に秤量した。研究期間にわたり、体重および臨床徴候における有意な変化はなかった。１５週間後に、マウスを屠殺し、抗体免疫蛍光試験またはウエスタンブロット試験により、各マウスの脊髄中の変異ＴＰＤ−４３Ａ３１５Ｔタンパク質の発現を確認した。
【０１０５】
加速ロータロッド（Ｇｒｏｓ−Ｌｏｕｉｓ，  Ｆ．ら、Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  １７巻、２６９１〜２７０２頁（２００８年）に記述）を、研究中に最初の投薬の前、および１週間に１回の間隔で実施した。０．２５ｒｐｍ／ｓの加速を伴う４−ｒｐｍの速度で、試験を実施した。各マウスは、１セッション当たり３回の試行を施された。各試行でロータロッド装置に各マウスが残した秒数を記録した。
【０１０６】
結果を図４Ａおよび４Ｂに示す。図４Ａは、各群の個々のマウスの（３回の試行の）最高スコアを示す。図４Ｂは、図４Ａのデータの回帰分析を示す。データは、ビヒクル処置群のロータロッドの成績は、１５週の期間にわたり減退したことを示す。しかしながら、４−Ｏ−メチルＷＡ群および２７−Ｏ−メチルＷＡ群の両方の成績は、その期間中にわたり実際に改善された。線形回帰分析により、４−Ｏ−メチルＷＡ（ｐ値０．０２）および２７−Ｏ−メチルＷＡ（ｐ値０．０２）両方の統計学的有意性が示されたが、ビヒクル（ｐ値０．２）に関しては有意性は示されなかった。
【０１０７】
その結果もまた、マウスは１５週間１日おきの、５ｍｇ／ｋｇのＷＡ類似体の投与を許容することができることを実証し、その化合物の安全性に関するさらなる根拠を提供している。
【０１０８】
（実施例７）
２７−Ｏ−メチルウィザフェリンＡのより大規模な合成および精製
以下に概要を述べる手順を使用して、２７−Ｏ−メチルウィザフェリンをウィザフェリンＡ出発物質から調製し、精製した。
【０１０９】
１．  ４，２７−ビス−Ｏ−トリエチルシリルウィザフェリンＡの調製
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４０ｍＬ）中のウィザフェリンＡ（４．０ｇ）の撹拌溶液に０℃で、イミダゾール（２．３１ｇ、４当量）を添加した。トリエチルクロロシラン（４．２８ｍＬ、３当量）を、およそ５分間にわたり少量に分けて添加し、得られた混合物を窒素下０℃で、およそ２時間撹拌した。ＨＰＬＣにより決定されるように反応が完了した後、メタノール（２ｍＬ）を添加し、混合物をさらに５〜１０分間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル（２５０ｍＬ）で希釈し、ブラインで洗浄（１００ｍＬで４回）した。洗浄水溶液を合わせて、酢酸エチルで逆抽出（１００ｍＬで２回）した。全ての酢酸エチル抽出物を合わせて、ブラインで再度洗浄（１００ｍＬで３回）し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、１０ｇの粗４，２７−ビス−Ｏ−トリエチルシリルウィザフェリンＡを、淡色（ｐａｌｅ）油状物として得た。
【０１１０】
２．  ４−Ｏ−トリエチルシリルウィザフェリンＡの調製
粗４，２７−ビス−Ｏ−トリエチルシリルウィザフェリンＡ（１０ｇ）を、テトラヒドロフラン水溶液（１２０ｍＬ、ＴＨＦ／水、９／１）に、室温で溶解した。ｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウム（ＰＰＴＳ、１２０ｍｇ）を添加した。混合物をおよそ１３時間撹拌し、撹拌中に追加のＰＰＴＳ（およそ１４５ｍｇ）を６〜３０ｍｇに分けて、１時間の間隔で反応に添加した。反応の進行をＨＰＬＣによって綿密に監視した。反応が完了した後、混合物を酢酸エチル（３００ｍＬ）で希釈し、ブラインで洗浄（１００ｍＬで５回）した。洗浄水溶液を合わせて、酢酸エチルで逆抽出（５０ｍＬで２回）した。全ての酢酸エチル抽出物を合わせて、ブラインで洗浄（１００ｍＬ）し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、粗生成物（１１．５ｇ）を、淡色ゴム状物として得た。粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／アセトン９５〜９３／５〜７）により精製し、４．２ｇの純粋４−Ｏ−トリエチルシリルウィザフェリンＡを得た。
【０１１１】
３．  ２７−Ｏ−メチル−４−Ｏ−トリエチルシリルウィザフェリンＡの調製
４−Ｏ−トリエチルシリルウィザフェリンＡ（１．０ｇ）を、無水ＴＨＦ（４０ｍＬ）とヨウ化メチル（８ｍＬ）との混合物中に溶解し、氷−水浴中で窒素下で冷却した。水素化ナトリウム（ミネラルオイル中６０％、１０８ｍｇ、１．５８当量）を添加し、混合物を室温で４分間撹拌した。次に、混合物を室温でおよそ１時間４０分間撹拌し、撹拌中に反応をＨＰＬＣによって綿密に監視した。生成物が２０〜３０％に達した後、混合物を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈し、ブラインで洗浄（８０ｍＬで３回）した。全ての洗浄液を合わせて、酢酸エチルで逆抽出（５０ｍＬで２回）した。全ての酢酸エチル抽出物を合わせて、１０％チオ硫酸ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）、ブライン（８０ｍＬで２回）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。
【０１１２】
０．５ｇの４−Ｏ−トリエチルシリルウィザフェリンＡで開始した別のバッチとプールした粗生成物を、カラム（ジクロロメタン／アセトン９５〜９３／５〜７）で精製し、４１３ｍｇの２７−Ｏ−メチル−４−Ｏ−トリエチルシリルウィザフェリンＡおよび７５６ｍｇの回収された出発物質を得た。平均収率は約２７％であった。
【０１１３】
４．  ２７−Ｏ−メチルウィザフェリンＡの調製
２７−Ｏ−メチル−４−Ｏ−トリエチルシリルウィザフェリンＡ（４１３ｍｇ）を、ＴＨＦ（９．５ｍＬ）とピリジン（１．２ｍＬ）との混合物中に溶解し、氷−水浴中で撹拌した。フッ化水素ピリジン（０．８５ｍＬ）を５分後に０℃で滴下添加し、混合物を室温で１．５時間撹拌した。混合物を酢酸エチル（１５０ｍＬ）で希釈し、０．１Ｎ塩酸（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬで２回）で洗浄した。洗浄液を合わせて、酢酸エチルで逆抽出（５０ｍＬで２回）した。全ての酢酸エチル抽出物を合わせて、飽和重炭酸ナトリウム（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬで２回）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／アセトン、７０〜６５／３０〜３５）によって精製し、２７５ｍｇの２７−Ｏ−メチルウィザフェリンＡを得た（純度９５％以上；収率８２％）。精製した生成物を、アセトンおよびヘキサン中でさらに再結晶し、純度をＨＰＬＣで検討評価しておよそ９９％に上げた。
【０１１４】
（実施例８）
４−Ｏ−メチルウィザフェリンＡのより大規模な合成および精製
以下の手順を使用して、４−Ｏ−メチルウィザフェリンＡをウィザフェリンＡ出発物質から調製し、精製した。
【０１１５】
１．  ２７−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）ウィザフェリンＡの調製
５．６ｇのウィザフェリンＡを、６０ｍＬのジクロロメタン中に溶解した。トリエチルアミン（４．０ｍＬ）を混合溶液に添加し、次に４．０１ｇのｔｅｒｔ−ブチルジメチルクロロシランを添加した。溶液を周囲温度でおよそ８０時間撹拌した。溶液を水で洗浄し、濃縮して６．９５ｇの粗２７−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルウィザフェリンＡを得た。これをメタノールから結晶化し、乾燥して、９９．５％のＨＰＬＣ純度を有する、５．６ｇの２７−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルウィザフェリンＡを得た。０．５ｇのジメチルアミノピリジンを添加することにより、より短い反応時間を達成することができ、１２時間で９５％完了に至ることができる。
【０１１６】
２．  ２７−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）ウィザフェリンＡのメチル化
４．０ｇの２７−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）ウィザフェリンＡを、窒素下で丸底フラスコに入れた。２０ｍＬの無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドをフラスコに添加した。固体の溶解は不完全であったが、１０ｍＬのヨウ化メチルの添加により透明溶液を得た。水素化ナトリウム（０．３２ｇ、ミネラルオイル中６０％）を、混合溶液に１０分間にわたり添加した。ＨＰＬＣによりほぼ８０％の完了が示された。追加の０．５ｇの水素化ナトリウムを添加し、９９％の完了を達成した。酢酸を使用して、残存する水素化ナトリウムをクエンチした。混合物をジクロロメタンで希釈し、水で洗浄した。有機層を２０ｍＬまで濃縮した。ＨＰＬＣにより、８８％の純度の４−Ｏ−メチル−２７−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）ウィザフェリンＡが示された。
【０１１７】
３．  ４−Ｏ−メチルウィザフェリンＡの調製
上記で得られた４−Ｏ−メチル−２７−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）ウィザフェリンＡの溶液を、３０ｍＬのジクロロメタンですすいでから、ＰＴＦＥフラスコに移した。ピリジン（３ｍＬ）を添加し、次に１ｍＬのフッ化水素ピリジンを添加した。反応をＨＰＬＣによって監視した。５．５時間後に、追加の０．５ｍＬのフッ化水素ピリジンを添加した。反応をさらに３時間継続し、９２％まで完了した。有機溶液を水、次に重炭酸ナトリウム溶液、そして最後に塩化ナトリウム溶液で洗浄することにより、反応を後処理した。ジクロロメタン層をロータリーエバポレーターで濃縮し、粘稠性の液体を得た。この液体を、３６．５ｍＬのジクロロメタンおよび３６．５ｍＬのメタノールで希釈し、７３ｍＬの水で洗浄した。有機層を真空下で濃縮し、３．９ｇの粗４−Ｏ−メチルウィザフェリンＡを得た。
【０１１８】
４．  ４−Ｏ−メチルウィザフェリンＡの精製
上記で得られた粗４−Ｏ−メチルウィザフェリンＡを、ジクロロメタンに溶解し、ジクロロメタンで充填した１００ｇのシリカゲルカラム上にロードした。カラムをジクロロメタン中３０％ｖ／ｖアセトンで溶出した。画分を、ＨＰＬＣによって分析し、純粋な生成物を含有するこれらを合わせて、蒸発させ、１．８ｇの固体を９７％の純度で得た。この固体を５ｍＬのメタノールと１０ｍＬのメチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテルとの混合物から結晶化した。この固体を真空乾燥機中で乾燥し、０．６１ｇの４−Ｏ−メチルウィザフェリンＡを９８％のＨＰＬＣ純度で得た。
【０１１９】
上述のさまざまな実施形態は、組み合わせてさらなる実施形態を提供することができる。本明細書に記載されるおよび／または出願データシートに列記される、全ての米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願および非特許刊行物は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。実施形態の態様は、改変され、必要ならば、さまざまな特許、出願および刊行物の概念を採用して、またさらなる実施形態を提供することができる。
【０１２０】
上記詳述の説明を考慮すると、これらのおよび他の変更を、実施形態に対して行うことができる。一般に、添付の特許請求の範囲内で、使用される用語は、特許請求の範囲を、本明細書および特許請求の範囲に開示される特定の実施形態に限定すると解釈されるべきではなく、そのような特許請求の範囲が権利を与えられる全範囲の同等物と共に、全ての可能な実施形態を含むと解釈すべきである。従って、特許請求の範囲は、本開示により限定されない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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