(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ＣＥＡ抗原のポリペプチドをコードする核酸およびＭＵＣ−１抗原のポリペプチドをコードする核酸を含む組換えオルソポックスウイルスと；（ｂ）ＰＤ−１の生物学的活性をブロックする抗体を含む抗ＰＤ−１アンタゴニストとを含む、ヒト癌患者に投与するための免疫原性組み合わせ物。
【請求項２】
前記組換えオルソポックスウイルスが、ワクシニアウイルス、修飾型ワクシニアＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）ウイルス、ＭＶＡ−ＢＮまたはＭＶＡ−ＢＮの誘導体から選択される、請求項１に記載の免疫原性組み合わせ物。
【請求項３】
請求項１〜２のいずれか一項に記載の免疫原性組み合わせ物であって、（ｃ）ＣＥＡ抗原およびＭＵＣ−１抗原から選択される少なくとも１つの腫瘍抗原のポリペプチドをコードする核酸を含む組換えアビポックスウイルスと；（ｄ）ＰＤ−１の生物学的活性をブロックする抗体を含む抗ＰＤ−１アンタゴニストとを更に含む、免疫原性組み合わせ物。
【請求項４】
前記アビポックスウイルスが鶏痘ウイルスである、請求項３に記載の免疫原性組み合わせ物。
【請求項５】
前記少なくとも１つの腫瘍抗原がＣＥＡ抗原である、請求項３〜４のいずれか一項に記載の免疫原性組み合わせ物。
【請求項６】
前記少なくとも１つの腫瘍抗原がＭＵＣ−１抗原である、請求項３〜４のいずれか一項に記載の免疫原性組み合わせ物。
【請求項７】
前記少なくとも１つの腫瘍抗原がＣＥＡ抗原およびＭＵＣ−１抗原である、請求項３〜４のいずれか一項に記載の免疫原性組み合わせ物。
【請求項８】
ヒト癌患者を治療する方法において使用するための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の免疫原性組み合わせ物。
【請求項９】
少なくとも１つの腫瘍抗原のポリペプチドをコードする核酸を含む１つまたは複数の後続する組換えオルソポックスウイルス、及びＰＤ−１の生物学的活性をブロックする抗体を含む抗ＰＤ−１アンタゴニストを、患者へ投与することを更に含む、請求項８に記載の使用のための免疫原性組み合わせ物。
【請求項１０】
前記癌治療が、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、胃癌、膵臓癌、膀胱癌または卵巣癌に対して向けられる、請求項８〜９のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性組み合わせ物。
【請求項１１】
前記癌治療が、乳癌に対して向けられる、請求項１０に記載の使用のための免疫原性組み合わせ物。
【請求項１２】
前記癌治療が、肺癌に対して向けられる、請求項１０に記載の使用のための免疫原性組み合わせ物。
【請求項１３】
前記癌治療が、前立腺癌に対して向けられる、請求項１０に記載の使用のための免疫原性組み合わせ物。
【請求項１４】
組み合わせ物が異種プライム−ブーストレジメンの一部として投与され；該異種プライム−ブーストレジメンが、抗ＰＤ−１アンタゴニストと組み合わせた該組換えオルソポックスウイルスの第１のプライム用量、及び抗ＰＤ−１アンタゴニストと組み合わせた該組換えアビポックスウイルスの１つまたは複数の後続するブースト用量を含む、
請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性組み合わせ物。
【請求項１５】
前記異種プライム−ブーストレジメンがＣＶ３０１の投与を含む、請求項１４に記載の使用のための免疫原性組み合わせ物。
【請求項１６】
組み合わせ物が同種プライム−ブーストレジメンの一部として投与され；
該同種プライム−ブーストレジメンが、抗ＰＤ−１アンタゴニストと組み合わせた該組換えオルソポックスウイルスの第１のプライム用量、及び抗ＰＤ−１アンタゴニストと組み合わせた同じ組換えオルソポックスウイルスの１つまたは複数の後続するブースト用量を含む、
請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性組み合わせ物。
【請求項１７】
ヒト癌患者における癌の治療に使用するためのキットであって、（ａ）ＣＥＡ抗原のポリペプチドをコードする核酸およびＭＵＣ−１抗原のポリペプチドをコードする核酸を含む組換えオルソポックスウイルスと；（ｂ）ＰＤ−１の生物学的活性をブロックする抗体を含む抗ＰＤ−１アンタゴニストとを含む、該キット。
【請求項１８】
少なくとも１つの腫瘍抗原のポリペプチドをコードする核酸（ｎｕｃｌｅｉｃ）を含む組換えアビポックスウイルスを更に含む、請求項１７に記載のキット。
【請求項１９】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の免疫原性組み合わせ物を含むヒト癌患者の治療における使用のための医薬品または組成物。
【請求項２０】
前記癌治療が、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、胃癌、膵臓癌、膀胱癌または卵巣癌に対して向けられる、請求項１９の使用のための医薬品または組成物。
【請求項２１】
ヒト癌患者における癌の治療に使用するための、ＣＥＡ抗原のポリペプチドをコードする核酸およびＭＵＣ−１抗原のポリペプチドをコードする核酸を含む組換えオルソポックスウイルスを含むワクチンであって、ＰＤ−１の生物学的活性をブロックする抗体を含む抗ＰＤ−１アンタゴニストと組み合わせて使用されるワクチン。
【請求項２２】
前記癌治療が、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、胃癌、膵臓癌、膀胱癌または卵巣癌に対して向けられる、請求項２１に記載のワクチン。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腫瘍抗原をコードする組換えポックスウイルスを使用する癌の治療に関する。より詳細には、本発明は、腫瘍抗原をコードする１つまたは複数の組換えポックスウイルスを、免疫チェックポイント阻害剤の１つまたは複数のアゴニスト及び／またはアンタゴニストと組み合わせて使用する癌の治療に関する。
【背景技術】
【０００２】
組換えポックスウイルスは、感染性生物及びより最近は腫瘍のためのワクチンとして使用された。Ｍａｓｔｒａｎｇｅｌｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．２０００；１０５（８）：１０３１−１０３４。これらのポックスウイルス群のうちの２つ（アビポックスウイルス及びオルソポックスウイルス）は、腫瘍との戦いに効果的であり、癌治療の可能性に関わることが示された。
【０００３】
１つの例示的なアビポックスウイルス種（鶏痘）は、ヒト投与のための安全なベヒクルであることが示されており、これは、鶏痘ウイルスが哺乳類細胞に入りタンパク質を発現するが、複製は不成功に終わる為である。Ｓｋｉｎｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ．２００５  Ｆｅｂ；４（１）：６３−７６。加えて、発現のためのベヒクルとしての鶏痘ウイルスの使用は、癌、マラリア、結核及びＡＩＤＳに対するワクチンについての多数の臨床試験において評価された。同文献。
【０００４】
オルソポックスウイルスは、抗原を患者へ投与して抗原に対する免疫応答を誘導するために有用なベクターであることが示された。ワクシニア（オルソポックスウイルスの最もよく知られたもの）は天然痘の世界中での撲滅において使用され、ベクター及び／またはワクチンとしての有用性を示した。組換えワクシニアベクターは、複数の腫瘍関連遺伝子（ｐ９７、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ｐ５３及びＥＴＡ等）が含まれる、広範囲の挿入遺伝子を発現するように操作された（Ｐａｏｌｅｔｔｉ，ｅｔ  ａｌ．，１９９３）。
【０００５】
別の公知のオルソポックスウイルスは修飾型ワクシニアＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）ウイルスである。ＭＶＡは、Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ科中のオルソポックスウイルス属のメンバーのワクシニアウイルスに関連する。ＭＶＡは、ワクシニアウイルスのＡｎｋａｒａ株（ＣＶＡ）をトリ胚線維芽細胞上で５１６連続継代することによって生成された（総説については、Ｍａｙｒ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ３，６−１４（１９７５）を参照）。これらの長期継代の結果として、もたらされたＭＶＡウイルスのゲノムは約３１キロベースのゲノムの配列を欠失し、したがって複製のための宿主細胞は鳥類細胞に高度に制限されるものとして記述された（Ｍｅｙｅｒ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．７２，１０３１−１０３８（１９９１））。もたらされたＭＶＡが有意に無毒であることは多様な動物モデルにおいて示された（Ｍａｙｒ，Ａ．＆Ｄａｎｎｅｒ，Ｋ．，Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄ．４１：２２５−３４（１９７８））。加えて、このＭＶＡ株は、ヒト天然痘疾患に対して免疫付与するワクチンとして臨床試験において試験された（Ｍａｙｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｚｂｌ．Ｂａｋｔ．Ｈｙｇ．Ｉ，Ａｂｔ．Ｏｒｇ．Ｂ  １６７，３７５−３９０（１９８７）；Ｓｔｉｃｋｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｔｓｃｈ．ｍｅｄ．Ｗｓｃｈｒ．９９，２３８６−２３９２（１９７４））。これらのヒトでの研究において、ワクシニアに基づくワクチンと比較して、ＭＶＡの毒性または感染性は減退する一方で、ＭＶＡはまだ良好な特異的免疫応答を誘導した。
【０００６】
その後の数十年間、ＭＶＡは、組換え遺伝子発現のためのウイルスベクターまたは組換えワクチンとしての使用のために操作された（Ｓｕｔｔｅｒ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ  １２：１０３２−４０（１９９４））。
【０００７】
たとえ、ＭＶＡが高度に弱毒化され、ヒト及び哺乳類において無毒であることを１９７０年代の間にＭａｙｒ  ｅｔ  ａｌ．が実証しても、若干の研究者は、残存する複製がこれらの細胞において起こるかもしれないので、ＭＶＡが哺乳類及びヒトの細胞株において完全には弱毒化されないと報告した（Ｂｌａｎｃｈａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ  ７９，I１５９−１１６７（１９９８）；Ｃａｒｒｏｌｌ＆Ｍｏｓｓ，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ２３８，１９８−２１１（１９９７）；Ａｌｔｅｎｂｅｒｇｅｒ、米国特許第５，１８５，１４６号；Ａｍｂｒｏｓｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｒｅｓ  ５５（５），５６９（１９９９））。使用されるウイルスの特性（特に様々な細胞株における増殖挙動）が異なるので、これらの出版物中で報告された結果がＭＶＡの様々な公知の株により得られたと推測される。かかる残存する複製は、様々な理由（ヒトにおける使用に関連する安全性についての懸念が含まれる）のために所望されない。
【０００８】
より安全な製品（ワクチンまたは医薬品等）の開発のための向上した安全性プロフィールを有するＭＶＡの株が記述された。米国特許第６，７６１，８９３号及び第６，１９３，７５２号を参照されたい。かかる株は、非ヒト細胞及び細胞株（とりわけトリ胚線維芽細胞（ＣＥＦ））における繁殖複製は可能であるが、公知のワクシニア株による複製を可能にすることが知られている特定のヒト細胞株における有意な繁殖複製は可能ではない。かかる細胞株には、ヒト角化細胞の細胞株、ＨａＣａｔ（Ｂｏｕｋａｍｐ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １０６（３）：７６１−７１（１９８８））、ヒト頚部腺癌細胞株、ＨｅＬａ（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−２）、ヒト胎児腎臓細胞株、２９３（ＥＣＡＣＣ番号８５１２０６０２）及びヒト骨の骨肉腫細胞株、１４３Ｂ（ＥＣＡＣＣ番号９１１１２５０２）が含まれる。かかる株は、例えば特定のマウス系統（重度に免疫力が低下し複製ウイルスへ高度に感染しやすい、遺伝子導入マウスモデルＡＧＲ  １２９等）においてもインビボで有意な繁殖複製は可能ではない。米国特許第６，７６１，８９３号を参照されたい。「ＭＶＡ−ＢＮ」と称される１つのかかるＭＶＡ株ならびにその誘導体及び組換え体が記述された。米国特許第６，７６１，８９３号及び第６，１９３，７５２号（それらは参照することにより本明細書に援用される）を参照されたい。
【０００９】
ＭＶＡ及びＭＶＡ−ＢＮは、それぞれ組換え遺伝子発現のためのウイルスベクターまたは組換えワクチンとしての使用のために操作された。例えばＳｕｔｔｅｒ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ  １２：１０３２−４０（１９９４）、米国特許第６，７６１，８９３号及び第６，１９３，７５２号を参照されたい。
【００１０】
癌免疫療法への特定のアプローチには腫瘍関連抗原によるワクチン接種が含まれていた。特定の事例において、かかるアプローチには、腫瘍関連抗原への宿主免疫応答を促進する送達システムの使用が含まれていた。特定の事例において、かかる送達システムには組換えウイルスベクターが含まれていた。例えばＨａｒｒｏｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１１：８０４−８１７（２００６）；Ａｒｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３２：５４９−５５５（２００５）；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（ｓｕｐｐｌ．２）：１４５６７−１４５７１（２００４）を参照されたい。
【００１１】
ＨＥＲ−２は、多数の癌患者の腫瘍細胞において過剰発現される腫瘍関連抗原である。様々なＨＥＲ−２ポリペプチドによる免疫付与を使用して、この抗原を発現する腫瘍細胞に対する免疫応答が生成された。例えばＲｅｎａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １７１：１５８８−１５９５（２００３）；Ｍｉｔｔｅｎｄｏｒｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  １０６：２３０９−２３１７（２００６）を参照されたい。
【００１２】
肺における高頻度の調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）によって特徴づけられる、強い腫瘍媒介性免疫抑制環境にもかかわらず、ＨＥＲ−２抗原（ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２）をコードするＭＶＡは、実験的肺転移のマウスモデルにおいて強力な抗腫瘍有効性を発揮することが示された。Ｍａｎｄｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ（２０１２）６１：１９−２９。組換えＭＶＡは、Ｔｈ１優位のＨＥＲ−２特異的抗体及びＴ細胞応答を強く誘導することが報告された。同文献。抗腫瘍活性は、高度に活性化されたＨＥＲ−２特異的なＣＤ８＋ＣＤ１１ｃ＋Ｔ細胞による肺の浸潤の増加、及び肺におけるＴｒｅｇ細胞の頻度の減少の付随によって特徴づけられ、エフェクターＴ細胞対Ｔｒｅｇ細胞の比の有意な増加がもたらされる。同文献。
【００１３】
ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２が安全であり、転移性設定のヒト臨床研究において特異的なＴ細胞及びＢ細胞の反応を誘導するように寛容を破壊することも示された。Ｇｕａｒｄｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ：Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  １５，２００９；Ｖｏｌｕｍｅ  ６９，Ｉｓｓｕｅ  ２４，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  ３。
【００１４】
トラスツズマブ（ハーセプチン）は、ＨＥＲ２の細胞外ドメインを標的化するヒト化モノクローナル抗体（ｍＡｂ）であり、ＨＥＲ２陽性乳癌において臨床的有効性を示した。Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１２  Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  １；７２（１７）：４４１７−４４２８。しかしながら、かなりの数の患者は初期のトラスツズマブ治療へ応答せず、継続的な治療後に、多くのトラスツズマブ応答性の腫瘍は耐性を発達させる。同文献。
【００１５】
免疫細胞上の抑制性受容体は癌における免疫回避の極めて重要な調節因子である。Ｗｏｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ；７２（４）；９１７−２７，２０１１。これらの抑制性受容体の中で、ＣＴＬＡ−４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４）は優性のオフスイッチとして供される一方で、他の受容体（ＰＤ−１（プログラムドデス（（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ）１、ＣＤ２７９）及びＬＡＧ−３（リンパ球活性化遺伝子、ＣＤ２２３）等）は、より微妙なレオスタット機能を供すると思われる。同文献。
【００１６】
ＣＴＬＡ−４は免疫チェックポイント分子であり、それは活性化されたＴ細胞上でアップレギュレートされる。Ｍａｃｋｉｅｗｉｃｚ，Ｗｓｐｏｌｃｚｅｓｎａ  ｏｎｋｏｌ  ２０１２；I６（５）：３６３−３７０。抗ＣＴＬＡ４のｍＡｂは、ＣＤ８０／８６とＣＴＬＡ−４の相互作用をブロックし、免疫抑制のメカニズムをスイッチオフにし、ＤＣによるＴ細胞の継続的な刺激を可能にすることができる。ＣＴＬＡ−４に対して作製された２つのＩｇＧ  ｍＡｂ（イピリムマブ及びトレメリムマブ）は、黒色腫に罹患した患者の臨床試験において使用された。しかしながら、抗ＣＴＬＡ−４抗体による治療は高レベルの免疫関連性有害事象を示した。同文献。
【００１７】
免疫系を修飾する別のヒトｍＡｂは、デス−１受容体（ＰＤ−１Ｒ）に対して作製されたＢＭＳ−９３６５５８（ＭＤＸ−１１０６）であり、そのリガンド（ＰＤ−１Ｌ）はメラノーマ細胞上で直接発現され得る。同文献。ＰＤ−１Ｒは、Ｔ細胞活性化及び寛容を調整する、共刺激分子のＢ７：ＣＤ２８ファミリーの一部であり、したがって抗ＰＤ−１Ｒは寛容の破壊において役割を果たすことができる。同文献。
【００１８】
ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路の連動は、Ｔ細胞のエフェクター機能、サイトカイン分泌及び増殖の阻害をもたらす。Ｔｕｒｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １：７，１１７２−１１７４；２０１２。高レベルのＰＤ−１は、消耗したかまたは慢性的に刺激されたＴ細胞に関連する。同文献。さらに、ＰＤ−１発現の増加は癌患者における生存の低減と相関する。同文献。
【００１９】
これらの最近の研究は、ＰＤ−１発現を癌における生存率に結びつけられることを示唆しているが、癌の治療におけるＰＤ−１の阻害による初期の研究は様々な有害な副作用を示した。Ｍｅｌｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ２０１１；４８０（７３７８）：４８０−４８９；Ｃｈｏｗ、Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  Ｅｄｕｃ  Ｂｏｏｋ、２０１３年、「Ｅｘｐｌｏｒｉｎｇ  ｎｏｖｅｌ  ｉｍｍｕｎｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｔｏｘｉｃｉｔｉｅｓ  ａｎｄ  ｅｎｄｐｏｉｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｉｍｍｕｎｅ−ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｉｎ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ」も参照されたい。
【００２０】
ＬＡＧ−３は、様々なリンパ系組織タイプの活性化に際して発現される負の調節分子である。同文献。ＬＡＧ−３は、生来の免疫抑制性Ｔｒｅｇ細胞及び誘導された免疫抑制性Ｔｒｅｇ細胞の最適な機能のために要求される。同文献。
【００２１】
モノクローナル抗体によるＰＤ−１及びＬＡＧ−３のコンビナトリアルブロックは、確立された腫瘍の増殖を相乗的に限定した。Ｗｏｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ；７２（４）；９１７−２７，２０１１。抗ＬＡＧ−３／抗ＰＤ−１のコンビナトリアル免疫療法は確立されたＳａ１Ｎ腫瘍及びＭＣ３８腫瘍を効果的に消去したが、この療法は確立されたＢ１６腫瘍に対して効果的ではなかった。同文献。Ｔｕｒｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．は、彼らの研究は「組み合わせ治療のアウトカムを予測する際の困難さを強調する」と報告した。Ｔｕｒｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １：７，１１７２−１１７４；２０１２。
【００２２】
誘導可能な共刺激分子（ＩＣＯＳ）は、黒色腫及び卵巣癌が含まれる様々な腫瘍に浸潤するＴｒｅｇ上で高度に発現されることが報告された。Ｆａｇｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２：３，ｅ２３１８５；Ｍａｒｃｈ  ２０１３。乳癌におけるＴＡ−ｐＤＣとＴＡ−Ｔｒｅｇの相互作用の間にＩＣＯＳ／ＩＣＯＳＬの相互作用が起こることも報告された。同文献。ＩＣＯＳに対するアンタゴニスト抗体を使用して、ＩＣＯＳ：ＩＣＯＳ−Ｌ相互作用を阻害し、ｐＤＣによって誘導されたＴｒｅｇの増殖を無効にした。ＷＯ２０１２／１３１００４。アンタゴニスト抗体を乳腺腫瘍のマウスモデルにおいて使用して、腫瘍進行を低減させた。同文献。
【００２３】
ＩＣＯＳに対して作製されたアゴニスト抗体は、腫瘍の治療のためのブロッキング用抗ＣＴＬＡ−４抗体及びブロッキング用抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて有用であることが示唆された。ＷＯ２０１１／０４１６１３。
【００２４】
活性のある免疫療法及び癌ワクチンが含まれる追加の癌治療についての実質的に満たされていない医学的必要性が明らかにある。多くの態様において、本開示の実施形態は、現在利用可能な癌治療を増加及び改善する組み合わせ療法の提供によって、これらの必要性に対処する。
【発明の概要】
【００２５】
１つの一般的態様において、本発明は、少なくとも１つの腫瘍抗原をコードする組換えポックスウイルスを、免疫チェックポイント阻害剤の１つまたは複数のアンタゴニストまたはアゴニストと組み合わせて使用して、癌患者を治療するための治療法、組成物及び方法を包含する。
【００２６】
より特定の態様において、本発明は、腫瘍抗原を発現するオルソポックスウイルス及び／またはアビポックスウイルスの組み合わせを、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３のアンタゴニスト及び／またはＩＣＯＳのアゴニストのうちの１つまたは複数の組み合わせと共に利用する、使用、方法及び組成物を包含する。
【００２７】
一実施形態において、本発明はヒト癌患者の治療のための治療法を含む。治療法は、以下の、（ａ）少なくとも１つの腫瘍抗原のポリペプチドをコードする核酸を含む組換えオルソポックスウイルスと；（ｂ）抗ＰＤ−１アンタゴニスト、抗ＬＡＧ−３アンタゴニストまたは抗ＩＣＯＳアゴニストのうちの少なくとも１つとを含む。（ａ）及び（ｂ）が組み合わせとして投与されることが本発明によって企図される。
【００２８】
別の実施形態において、本発明には、ヒト癌患者を治療する方法であって、（ａ）少なくとも１つの腫瘍抗原のポリペプチドをコードする核酸を含む組換えオルソポックスウイルスを患者へ投与することと；（ｂ）抗ＰＤ−１アンタゴニスト、抗ＬＡＧ−３アンタゴニストまたは抗ＩＣＯＳアゴニストのうちの少なくとも１つを患者へ投与することとを含む、該方法が含まれる。
【００２９】
さらに別の実施形態において、ヒト癌患者の治療のための治療法及び方法は、少なくとも１つの腫瘍抗原のポリペプチドをコードする核酸を含む組換えアビポックスウイルス、及び抗ＰＤ−１アンタゴニスト、抗ＬＡＧ−３アンタゴニストまたは抗ＩＣＯＳアゴニストのうちの少なくとも１つと組み合わせたヒト癌患者へのその投与を更に含む。
【００３０】
さらになお別の実施形態において、ヒト癌患者の治療のための治療法及び方法は、少なくとも１つの腫瘍抗原のポリペプチドをコードする核酸を含む２つ以上の組換えオルソポックスウイルス、及び抗ＰＤ−１アンタゴニスト、抗ＬＡＧ−３アンタゴニストまたは抗ＩＣＯＳアゴニストのうちの少なくとも１つと組み合わせたヒト癌患者へのその投与を更に含む。
【００３１】
追加の実施形態において、本発明は、ヒト癌患者の治療における使用のための医薬品または組成物を包含する。医薬品または組成物は、以下の、（ａ）少なくとも１つの腫瘍抗原のポリペプチドをコードする核酸を含む組換えオルソポックスウイルスと；（ｂ）抗ＰＤ−１アンタゴニスト、抗ＬＡＧ−３アンタゴニストまたは抗ＩＣＯＳアゴニストのうちの少なくとも１つとを含む。追加の実施形態において、医薬品または組成物は、以下の、（ａ）少なくとも１つの腫瘍抗原のポリペプチドをコードする核酸を含む組換えアビポックスウイルスと；（ｂ）抗ＰＤ−１アンタゴニスト、抗ＬＡＧ−３アンタゴニストまたは抗ＩＣＯＳアゴニストのうちの少なくとも１つとを更に含む。
【００３２】
さらに別の実施形態において、本発明には、ヒト癌患者の治療のための医薬組成物または医薬品の調製における、（ａ）少なくとも１つの腫瘍抗原のポリペプチドをコードする核酸を含む組換えオルソポックスウイルスと；（ｂ）抗ＰＤ−１アンタゴニスト、抗ＬＡＧ−３アンタゴニストまたは抗ＩＣＯＳアゴニストのうちの少なくとも１つとを含む組成物の使用が含まれる。追加の実施形態において、医薬品または組成物は、以下の、（ａ）少なくとも１つの腫瘍抗原のポリペプチドをコードする核酸を含む組換えアビポックスウイルスと；（ｂ）抗ＰＤ−１アンタゴニスト、抗ＬＡＧ−３アンタゴニストまたは抗ＩＣＯＳアゴニストのうちの少なくとも１つとを更に含む。
【００３３】
特定の実施形態において、本明細書において記述されるように、組換えオルソポックスウイルスは、ワクシニアウイルス、修飾型ワクシニアＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）ウイルス、及び／またはＭＶＡ−ＢＮから選択される。特定の追加の実施形態において、組換えアビポックスウイルスは鶏痘ウイルスである。
【００３４】
特定の実施形態において、本明細書において記述されるように、抗ＰＤ−１アンタゴニスト、抗ＬＡＧ−３アンタゴニスト及び抗ＩＣＯＳアゴニストは、それぞれ抗体を含む。
【００３５】
特定の実施形態において、本明細書において記述されるように、組換えオルソポックスウイルス及び組換えアビポックスウイルスによってコードされる少なくとも１つの腫瘍抗原は、ＣＥＡ、ＭＵＣ−１、ＰＡＰ、ＰＳＡ及びＨＥＲ−２抗原から選択され得る。好ましい実施形態において、少なくとも１つの腫瘍抗原はＰＡＰ及びＰＳＡから選択される。別の好ましい実施形態において、少なくとも１つの腫瘍抗原はＣＥＡ及びＭＵＣ−１から選択される。なお別の好ましい実施形態において、少なくとも１つの腫瘍抗原はＨＥＲ−２抗原である。
【００３６】
特定の追加の実施形態において、ヒト癌患者の治療は、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、胃癌、膵臓癌、前立腺癌、膀胱癌及び／または卵巣癌から選択される癌を包含する。
【００３７】
本発明の追加の目的及び利点は、続く記述において部分的に説明され、記述から部分的に明らかになるか、または本発明の実践によって学習され得る。本発明の目的及び利点は、添付の請求項中で特に指摘された要素及び組み合わせを用いて実現及び達成されるだろう。
【００３８】
前述の概要及び以下の詳述の両方は、単なる例示及び説明であり、請求されるように、本発明を制限しないことを理解すべきである。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
本明細書中で援用され、本明細書の一部を構成する添付の図面は、本発明の１つまたは複数の実施形態を例証し、記述と共に、本発明の原理について説明する役目を果たす。
【図１】ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２による処理後の肺、脾臓及び血液中のＴ細胞上のＩＣＯＳの発現を示す。ナイーブ（腫瘍なしの）マウスを、１日目（Ａ及びＢ）または１及び１５日目（Ｃ及びＤ）に、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２により処理した。ＣＤ８＋  Ｔ細胞（Ａ及びＣ）及びＣＤ４＋  Ｔ細胞（Ｂ及びＤ）上でのＩＣＯＳの発現。データは、各々のタイムポイントで１群あたり３匹のマウスで、平均±ＳＥＭとして示される。
【図２】ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２を抗ＩＣＯＳアゴニストと組み合わせて投与した後の腫瘍体積を示す。ＣＴ２６−ＨＥＲ−２固形腫瘍に罹患したマウスを、１及び１５日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２、ならびに１、４、８、１１、１５、１８、２２、２５日目に抗ＩＣＯＳにより処理した（腹腔内）。Ａ）平均腫瘍増殖。Ｂ）個別のマウスにおける腫瘍増殖。
【図３】ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２が抗ＣＴＬＡ−４と相乗して、腫瘍を消失させ、実験的肺転移モデルにおける生存を増加させることを示す。肺においてＣＴ２６−ＨＥＲ−２腫瘍に罹患したマウスを、４及び１８日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２、ならびに３及び１７日目に抗ＣＴＬＡ−４により処理した。
【図４】ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２は、単独で及び抗ＣＴＬＡ−４と組み合わせて、腫瘍移植の２５日後にＣＴ２６−ＨＥＲ２肺腫瘍量を低減させることを示す。肺においてＣＴ２６−ＨＥＲ−２腫瘍に罹患したマウスを、４及び１８日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２、ならびに３及び１７日目に抗ＣＴＬＡ−４により処理し、腫瘍量を２５日目に分析した。Ａ）各々の群からの代表的な肺は、無処理肺及び抗ＣＴＬＡ−４処理肺において小さな塊として目視可能な腫瘍を示す。ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２により処理したマウスにおいて目視可能な腫瘍はなかった。スケールバーは１ｃｍと等しい。Ｂ）ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２により処理したマウスは２５日目にナイーブマウスに類似の肺重量を有する一方で、肺重量は２５日目に無処理マウス及び抗ＣＴＬＡ−４処理マウスにおいて有意により高い。
【図５】ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２により処理されたマウスにおける腫瘍／肺からのＴ細胞上で及び周辺部中で、ならびに高腫瘍量のマウスの腫瘍／肺中で、ＩＣＯＳの発現の増加を示す。肺においてＣＴ２６−ＨＥＲ−２腫瘍に罹患したマウスを、４及び１８日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２、ならびに３及び１７日目に抗ＣＴＬＡ−４により処理した。Ａ）１１及び２５日目でのＣＤ４＋  Ｔ細胞上のＩＣＯＳの発現。Ｂ）１１及び２５日目でのＣＤ８＋  Ｔ細胞上のＩＣＯＳの発現。Ｃ）１群あたり３〜４匹のマウスによる３つの独立した実験からの、２５日目でのＣＤ４＋  Ｔ細胞上の平均のＩＣＯＳの発現。Ｄ）１群あたり３〜４匹のマウスによる３つの独立した実験からの、２５日目でのＣＤ８＋  Ｔ細胞上の平均のＩＣＯＳの発現。
【図６】ＩＣＯＳ＋  ＣＤ４＋  Ｔ細胞は腫瘍を持ったマウスにおいておよそ等しいＦｏｘＰ３＋の割合であるが、処理へ応答するマウスにおいてＦｏｘＰ３−が主であることを示す。肺においてＣＴ２６−ＨＥＲ−２腫瘍に罹患したマウスを、４及び１８日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２、ならびに３及び１７日目に抗ＣＴＬＡ−４により処理し、ＦＡＣＳ分析を腫瘍移植後２４または２５日目に遂行した。Ａ）ＦｏｘＰ３＋  Ｔｒｅｇ上のＩＣＯＳの発現。Ｂ）ＦｏｘＰ３−  ＣＤ４  Ｔ細胞上のＩＣＯＳの発現。Ｃ）１群あたり３〜４匹のマウスによる３つの独立した実験からのＦｏｘＰ３＋  Ｔｒｅｇ上の平均ＩＣＯＳの発現。Ｄ）１群あたり３〜４匹のマウスによる３つの独立した実験からのＦｏｘＰ３−  ＣＤ４  Ｔ上のＩＣＯＳの発現。
【図７】ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２と抗ＣＴＬＡ−４との組み合わせ処理が、エフェクターＴ細胞対調節性Ｔ細胞の比を増加させることを示す。肺においてＣＴ２６−ＨＥＲ−２腫瘍に罹患したマウスを、４及び１８日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２、ならびに３及び１７日目に抗ＣＴＬＡ−４により処理し、ＦＡＣＳ分析を腫瘍移植後２４または２５日目に遂行した。１群あたり３〜４匹のマウスによる単一実験からの、Ａ）ＣＤ８  Ｔｅｆｆ：Ｔｒｅｇの比（ＣＤ８＋ＩＣＯＳ＋ＦｏｘＰ３−／ＣＤ４＋ＩＣＯＳ＋ＦｏｘＰ３＋）及びＢ）ＣＤ４  Ｔｅｆｆ：Ｔｒｅｇの比（ＣＤ４＋ＩＣＯＳ＋ＦｏｘＰ３−／ＣＤ４＋ＩＣＯＳ＋ＦｏｘＰ３）。１群あたり３〜４匹のマウスによる３つの独立した実験からの、Ｃ）平均のＣＤ８  Ｔｅｆｆ：Ｔｒｅｇの比及びＤ）平均のＣＤ４  Ｔｅｆｆ：Ｔｒｅｇの比。
【図８】ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２による処理後の肺、脾臓及び血液中のＴ細胞上のＰＤ−１発現を示す。ナイーブ（腫瘍なしの）マウスを、１日目（Ａ及びＢ）または１及び１５日目（Ｃ及びＤ）に、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２により処理した。ＣＤ８＋  Ｔ細胞（Ａ及びＣ）及びＣＤ４＋  Ｔ細胞（Ｂ及びＤ）上のＰＤ−１の発現。データは、各々のタイムポイントで１群あたり３匹のマウスで、平均±ＳＥＭとして示される。
【図９】ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２処理及び抗ＰＤ−１が腫瘍増殖を減速し生存を増加させることを示す。マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２固形腫瘍を移植し、１及び１５日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２及び抗ＰＤ−１により処理した。Ａ）マウスにおける平均腫瘍体積。Ｂ）腫瘍体積＜２０００ｍｍ３に基づくマウスの生存％。Ｃ）マウスにおける個別の腫瘍増殖。
【図１０】ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２による処理後の肺、脾臓及び血液中のＴ細胞上のＬＡＧ−３発現を示す。ナイーブ（腫瘍なしの）マウスを、１日目（Ａ及びＢ）または１及び１５日目（Ｃ及びＤ）に、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２により処理した。ＣＤ８＋  Ｔ細胞（Ａ及びＣ）及びＣＤ４＋  Ｔ細胞（Ｂ及びＤ）上のＬＡＧ−３の発現。データは、各々のタイムポイントで１群あたり３匹のマウスで、平均±ＳＥＭとして示される。
【図１１】ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２及び抗ＬＡＧ−３が腫瘍増殖を減速し、生存を増加させることを示す。マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２固形腫瘍を移植し、１及び１５日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２及び抗ＬＡＧ−３により処理した。Ａ）マウスにおける平均腫瘍体積。Ｂ）腫瘍体積＜２０００ｍｍ３に基づくマウスの生存％。Ｃ）マウスにおける個別の腫瘍増殖。
【図１２】ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２、抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３処理がマウス中の腫瘍の完全な退縮をもたらすことを示す。マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２腫瘍を1日目に移植し、１及び１５日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２、抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３により処理した。Ａ）マウスにおける平均腫瘍体積。Ｂ）腫瘍体積＜２０００ｍｍ３に基づくマウスの生存％。Ｃ）マウスにおける個別の腫瘍増殖。
【図１３】ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２、抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３処理がマウス中の腫瘍の退縮をもたらすことを示す。マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２腫瘍を移植し、４及び１８日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２、抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３により処理した。図１２と比較して、処理は４及び１８日目へ遅れた（図１２は１及び１５日目）。Ａ）マウスにおける平均腫瘍体積。Ｂ）腫瘍体積＜２０００ｍｍ３に基づくマウスの生存％。Ｃ）マウスにおける個別の腫瘍増殖。
【図１４】ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２は、単独でならびに抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３と組み合わせて、実験的肺転移モデルにおける生存を増加させることを示す。肺においてＣＴ２６−ＨＥＲ−２腫瘍に罹患したマウスを、４及び１８日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２、抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３により処理した。
【図１５】ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２、抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３抗体により処理されたマウスのＨＥＲ２の特異的なＴ細胞応答がトリプル組み合わせ療法でより高いことを示す。マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２腫瘍を1日目に移植し、４及び１８日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２、抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３により処理し、最後の処理の４週間後にＩＦＮ−γをＥＬＩＳＰＯＴによって測定した。腫瘍なしのマウスからの脾細胞を、ＨＥＲ−２  ＥＣＤオーバーラップペプチドライブラリー（Ａ、１６６のオーバーラップ１５ｍｅｒ）またはＫｄ結合ＨＥＲ−２ペプチドｐ６３（Ｂ）により再び刺激した。
【図１６】増殖中のＣＴ２６−ＨＥＲ−２腫瘍は、すべての処理群の中で類似するＨＥＲ２特異的抗体を誘導することを示す。マウスにＣＴ２６−ＨＥＲ−２腫瘍を1日目に移植し、４及び１８日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２、抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３により処理した。血清をマウスから２５日目に収集し、ＨＥＲ−２力価をＥＬＩＳＡによって測定した。
【図１７】ＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１及び抗ＰＤ−１は腫瘍増殖を減速させることを示す。マウスにＭＣ３８−ＣＥＡ固形腫瘍を移植し、１及び１５日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１及び抗ＰＤ−１により処理した。Ａ）マウスにおける平均腫瘍体積。Ｂ）マウスにおける個別の腫瘍増殖。
【図１８】ＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１及び抗ＬＡＧ−３の投与後の腫瘍体積を示す。マウスにＭＣ３８−ＣＥＡ固形腫瘍を移植し、１及び１５日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１及び抗ＬＡＧ−３により処理した。Ａ）マウスにおける平均腫瘍体積。Ｂ）マウスにおける個別の腫瘍増殖。
【図１９】ＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１を抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３と組み合わせて投与した後の腫瘍体積を示す。マウスにＭＣ３８−ＣＥＡ固形腫瘍を移植し、１及び１５日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１、抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３により処理した。Ａ）マウスにおける平均腫瘍体積。Ｂ）マウスにおける個別の腫瘍増殖。
【図２０】ＰＲＯＳＴＶＡＣ及び抗ＰＤ−１の投与後の腫瘍体積を示す。マウスにＥ６（ＲＭ１１−ＰＳＡ）固形腫瘍を移植し、１日目にＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｖ、ならびに８及び１５日目にＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｆにより処理した。抗ＰＤ−１を１及び１５日目に与えた。Ａ）マウスにおける平均腫瘍体積。Ｂ）マウスにおける個別の腫瘍増殖。
【図２１】ＰＲＯＳＴＶＡＣ及び抗ＬＡＧ−３の投与後の腫瘍体積を示す。マウスにＥ６（ＲＭ１１−ＰＳＡ）固形腫瘍を移植し、１日目にＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｖ、ならびに８及び１５日目にＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｆにより処理した。抗ＬＡＧ−３を１及び１５日目に与えた。Ａ）マウスにおける平均腫瘍体積。Ｂ）マウスにおける個別の腫瘍増殖。
【図２２】ＰＲＯＳＴＶＡＣ、抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３の投与後の腫瘍体積を示す。マウスにＥ６（ＲＭ１１−ＰＳＡ）固形腫瘍を移植し、１日目にＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｖ、ならびに８及び１５日目にＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｆにより処理した。抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３を１及び１５日目に与えた。Ａ）マウスにおける平均腫瘍体積。Ｂ）マウスにおける個別の腫瘍増殖。
【図２３】ＣＶ３０１及び抗ＰＤ−１の投与後の腫瘍体積を示す。ＣＥＡ遺伝子導入マウスにＭＣ３８−ＣＥＡ固形腫瘍を移植し、４日目にＣＶ３０１−Ｖ、１１及び１８日目にＣＶ３０１−Ｆにより処理した。鶏痘ＧＭ−ＣＳＦ（ＣＶ３０１−Ｖ／Ｆと混合した）及び抗ＰＤ−１を、４、１１及び１８日目に与えた。Ａ）マウスにおける平均腫瘍体積。Ｂ）マウスにおける個別の腫瘍増殖。
【００４０】
［配列の簡潔な記述］
配列番号：１は、破傷風毒素に由来する２つのＴＨ細胞エピトープを含むＨＥＲ２タンパク質をコードするコンストラクトのヌクレオチド配列である。
【００４１】
配列番号：２は、配列番号：１のヌクレオチド配列によってコードされる修飾されたＨＥＲ２タンパク質のアミノ酸配列である。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
多数の現在の臨床試験は、１つまたは複数の腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を発現する操作された、ワクシニア、修飾型ワクシニアＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）及び鶏痘ベースのベクターを用いる治療法を含む。これらのベクターは単独で、または多様な癌に対する活性のある免疫応答を生成するプライム−ブースト戦略において使用される。ＰＲＯＳＴＶＡＣ（登録商標）は、ＰＳＡ及びＴＲＩＣＯＭ（商標）を発現するワクシニア及び鶏痘を使用する異種プライム−ブースト戦略を用い、去勢抵抗性転移性前立腺癌について現在世界レベルでの第ＩＩＩ相臨床試験（ＰＲＯＳＰＥＣＴ）中である。
【００４３】
ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２（Ｍａｎｄｌ  ｅｔ  ａｌ，２０１２）は、ＨＥＲ−２＋乳癌の治療について第Ｉ相臨床試験中である。本組換えベクターは、ＭＶＡ−ＢＮとして公知の非常に弱毒化された修飾型ワクシニアＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）ウイルスストックに由来する。それは、ＨＥＲ−２に対する効果的な免疫応答の誘導を促進する破傷風毒素（ＴＴｐ２及びＴＴｐ３０）からの２つのユニバーサルＴ細胞エピトープを含むように操作されたＨＥＲ−２の細胞外ドメインからなるＨＥＲ−２（ＨＥＲ２と表記される）の修飾された形状を発現する。
【００４４】
ポックスウイルスベースの免疫療法の抗腫瘍有効性を更に向上させるために、ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２を、ＣＴＬＡ−４（Ｔ細胞活性化をダウンレギュレートする免疫チェックポイントタンパク質）の活性をブロックするモノクローナル抗体と組み合わせた。ＣＴ２６−ＨＥＲ−２の実験的肺転移モデルにおいて、中央生存時間は、無処理マウスでの３０日からＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２処理により４９．５日へ増加する一方で、抗ＣＴＬＡ−４単独の処理は少ない生存利益（中央生存３５日）を示した。これとは対照的に、抗ＣＴＬＡ−４と組み合わせたＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２は、５０％より多くのマウスにおいて１００日を超えて（ｐ＜０．０００１）生存を有意に増加させた。１００日目に、生存マウスの肺を検査し、目視可能な腫瘍はなかった。分離した実験において、表現型分析を遂行した。ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２療法は、ナイーブマウス（腫瘍なし）の肺においてＣＤ８＋Ｔ細胞上の誘導可能な共刺激分子（ＩＣＯＳ）の劇的な増加をもたらした。２５日目の腫瘍を持ったマウスにおいて、無処理マウス及び抗ＣＴＬＡ−４処理マウスの肺において調節性Ｔ細胞（ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋）の数の増加があり、それは肺腫瘍量の増加と相関した。調節性Ｔ細胞はＩＣＯＳについて陽性であった。ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２により処理されたマウスは、ＦｏｘＰ３陰性のＩＣＯＳ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の増加があった。
【００４５】
ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２は、様々な腫瘍モデルにおいて、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３及びＩＣＯＳに対して作製された様々なアゴニスト抗体及びアンタゴニスト抗体と組み合わせて試験された。組み合わせはＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２の効果を向上させることが見出された。
【００４６】
加えて、ＰＤ−１及びＬＡＧ−３に対して作製された様々なアンタゴニスト抗体を、組換えオルソポックスウイルス及び組換えアビポックスウイルスを利用する異種プライムブースト投薬レジメンと組み合わせて、試験した。例えば、ＰＲＯＳＴＶＡＣ（登録商標）（各々がＰＳＡ及びＴＲＩＣＯＭを発現するワクシニアウイルス及び鶏痘ウイルスを含む）を、様々なアンタゴニスト抗体と組み合わせて試験した。ＣＶ３０１（ＰＡＮＶＡＣとしても公知であり、各々がＣＥＡ、ＭＵＣ−１及びＴＲＩＣＯＭを発現するワクシニアウイルス及び鶏痘ウイルスを含む）も、様々なアンタゴニスト抗体と組み合わせて試験した。様々なアンタゴニスト抗体と組み合わせて投与した場合に、異種プライム−ブースト投薬レジメンの有効性は増加した。
【００４７】
加えて、ＰＤ−１及びＬＡＧ−３に対して作製された様々なアンタゴニスト抗体を、ＭＶＡ−ＣＶ３０１の同種プライム−ブーストレジメンにおいて試験した。ＭＶＡ−ＣＶ３０１（ＣＥＡ、ＭＵＣ−１及びＴＲＩＣＯＭを発現するＭＶＡウイルスのプライム投薬及びブースト投薬を含む）の有効性は、ＰＤ−１及び／またはＬＡＧ−３に対して作製された抗体と組み合わせて試験した場合に、改善されることが見出された。
【００４８】
腫瘍抗原を含むポリペプチドをコードするオルソポックスウイルス及び／またはアビポックスウイルス
様々な態様において、本開示は、各々が腫瘍抗原をコード及び／または発現する、組換えオルソポックスウイルス及び／または組換えアビポックスウイルスを含む。１つまたは複数の好ましい態様において、オルソポックスウイルス及びアビポックスウイルスはそれぞれワクシニアウイルス及び鶏痘ウイルスである。
【００４９】
「アビポックスウイルス」という用語は、任意のアビポックスウイルス（鶏痘ウイルス、カナリア痘ウイルス、アンコポックスウイルス（Ｕｎｃｏｐｏｘｖｉｒｕｓ）、九官鳥痘ウイルス、鳩痘ウイルス、オウム痘ウイルス、ウズラ痘ウイルス、クジャク痘ウイルス、ペンギン痘ウイルス、スズメ痘ウイルス、ムクドリ痘ウイルス及び七面鳥痘ウイルス等）を指す。好ましいアビポックスウイルスは、カナリア痘ウイルス及び鶏痘ウイルスである。
【００５０】
カナリア痘ウイルスの一例はＲｅｎｔｓｃｈｌｅｒ株である。ＡＬＶＡＣと称されるプラーク精製したカナリア痘株（米国特許第５，７６６，５９８号）は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）のアクセッション番号ＶＲ−２５４７でブダペスト条約の条項下で寄託されていた。別のカナリア痘株は、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｍｅｒｉｅｕｘ，Ｉｎｃ．から入手可能なＬＦ２  ＣＥＰ  ５２４  ２４  １０（７５）と表記される商業的なカナリア痘ワクチン株である。
【００５１】
鶏痘ウイルスの例には、株ＦＰ−１、ＦＰ−５、ＴＲＯＶＡＣ（米国特許第５，７６６，５９８号）及びＰＯＸＶＡＣ−ＴＣ（米国特許第７，４１０，６４４号）が含まれるが、これらに限定されない。ＦＰ−１は、１日齢のニワトリにおいてワクチンとして使用されるように修飾されたＤｕｖｅｔｔｅ株である。この株は、Ｏ  ＤＣＥＰ  ２５／ＣＥＰ６７／２３０９  Ｏｃｔｏｂｅｒ  １９８０と表記される市販の鶏痘ウイルスワクチン株であり、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｍｅｒｉｅｕｘ，Ｉｎｃ．から入手可能である。ＦＰ−５はトリ胚起源の市販の鶏痘ウイルスワクチン株であり、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．）、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ、Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｌｉｃｅｎｓｅ  Ｎｏ．１６５、ｓｅｒｉａｌ  Ｎｏ．３０３２１から入手可能である。
【００５２】
１つまたは複数の実施形態において、組換えオルソポックスウイルスは、好ましくはワクシニアウイルス、修飾型ワクシニアＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）ウイルス及びＭＶＡ−ＢＮから選択される。
【００５３】
ワクシニアウイルス株の例には、株Ｔｅｍｐｌｅ  ｏｆ  Ｈｅａｖｅｎ及びＣｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｐａｒｉｓ、Ｂｕｄａｐｅｓｔ、Ｄａｉｒｅｎ、Ｇａｍ、ＭＲＩＶＰ、Ｐｅｒ、Ｔａｓｈｋｅｎｔ、ＴＢＫ、Ｔｏｍ、Ｂｅｒｎ、Ｐａｔｗａｄａｎｇａｒ、ＢＩＥＭ、Ｂ−１５、Ｌｉｓｔｅｒ、ＥＭ−６３、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｃｉｔｙ  Ｂｏａｒｄ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｅｌｓｔｒｅｅ、Ｉｋｅｄａ及びＷＲが含まれるが、これらに限定されない。好ましいワクシニアウイルス（ＶＶ）株は、Ｗｙｅｔｈ（ＤＲＹＶＡＸ）株（米国特許第７，４１０，６４４号）である。
【００５４】
別の好ましいＶＶ株は、修飾型ワクシニアＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）ウイルス（Ｓｕｔｔｅｒ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．［１９９４］，Ｖａｃｃｉｎｅ  １２：１０３２−４０）である。本発明の実践において有用であり、ブダペスト条約の要求に従って寄託されたＭＶＡウイルス株の例には、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  ＣｅｌｌＣｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）、Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｃｅｎｔｒｅ  ｆｏｒ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｐｏｒｔｏｎ  Ｄｏｗｎ，Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ、Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ  ＳＰ４  ０ＪＧ、Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍに、１９９４年１月２７日に寄託番号ＥＣＡＣＣ  ９４０１２７０７で寄託された株ＭＶＡ  ５７２、及び２０００年１２月７日にＥＣＡＣＣ  ００１２０７０７下で寄託されたＭＶＡ  ５７５が含まれるが、これらに限定されない。番号Ｖ０００８３００８下でＥｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ  （ＥＣＡＣＣ）に２０００年８月３０日に寄託されたＭＶＡ−ＢＮ及びその誘導体は、追加の例示的な株である。
【００５５】
ＭＶＡ−ＢＮはより高い安全性（より少ない複製能力）のために好ましいが、すべてのＭＶＡは本発明に好適である。本発明の実施形態によれば、ＭＶＡ株はＭＶＡ−ＢＮ及びその誘導体である。ＭＶＡ−ＢＮ及びその誘導体の定義はＰＣＴ／ＥＰ０１／１３６２８（それは参照により援用される）中で与えられる。
【００５６】
特定の実施形態において、ＭＶＡはＭＶＡ−ＢＮであり、Ｖ０００８３００８番号下でＥｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）に２０００年８月３０日に寄託され、国際ＰＣＴ公開ＷＯ２００２０４２４８０（例えば米国特許第６，７６１，８９３号及び第６，９１３，７５２号も参照）中で記述され、そのすべては参照により援用される。それらの特許公開中で記述されるように、ＭＶＡ−ＢＮは、細胞株２９３、１４３Ｂ、ＨｅＬａ及びＨａＣａｔ中で繁殖的に複製しない。特に、ＭＶＡ−ＢＮは、ヒト胚腎臓細胞株２９３において０．０５〜０．２の増幅比を示す。ヒト骨肉腫細胞株１４３Ｂにおいて、ＭＶＡ−ＢＮは、０．０〜０．６の増幅比を示す。ＭＶＡ−ＢＮは、ヒト頚部腺癌細胞株ＨｅＬａにおいて０．０４〜０．８、及びヒト角化細胞の細胞株ＨａＣａｔにおいて０．０２〜０．８の増幅比を示す。ＭＶＡ−ＢＮは、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＣＶ１：ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−７０）において０．０１〜０．０６の増幅比を有する。
【００５７】
ＭＶＡ−ＢＮの増幅比は、ＰＣＴ公開ＷＯ２００２０４２４８０中で記述されるようにトリ胚線維芽細胞（ＣＥＦ：初代培養）において１を超える（例えば米国特許第６，７６１，８９３号及び第６，９１３，７５２号も参照）。ウイルスは、５００より上の比でＣＥＦ初代培養において容易に繁殖及び増幅することができる。
【００５８】
特定の実施形態において、組換えＭＶＡはＭＶＡ−ＢＮの誘導体である。かかる「誘導体」には、寄託された株（ＥＣＡＣＣ番号Ｖ０００８３００８）と本質的に同じ複製特徴を示すがそのゲノムのうちの１つまたは複数の部分中の差を示すウイルスが含まれる。寄託したウイルスと同じ「複製特徴」を有するウイルスは、ＣＥＦ細胞ならびに細胞株のＨｅＬａ、ＨａＣａｔ及び１４３Ｂにおいて、寄託した株と類似する増幅比で複製するウイルス；ならびに、例えばＡＧＲ１２９遺伝子導入マウスモデルにおいて決定されるように、生体内で類似する複製特徴を示すウイルスである。
【００５９】
特定の実施形態において、オルソポックスウイルスは、オルソポックスウイルスに対して異種の追加ヌクレオチド配列を含有する組換えワクシニアウイルスである。特定のかかる実施形態において、異種配列は、免疫系による応答を誘導するエピトープをコードする。したがって、特定の実施形態において、組換えオルソポックスウイルスは、タンパク質またはエピトープを含む薬剤に対するワクチン作製に使用される。
【００６０】
特定の実施形態において、本開示に従うオルソポックスウイルス及びアビポックスウイルスは少なくとも１つの腫瘍関連抗原を含む。好ましい実施形態において、腫瘍関連抗原には、ＨＥＲ−２、ＰＳＡ、ＰＡＰ、ＣＥＡまたはＭＵＣ−１抗原が、単独または組み合わせで（例えばＣＥＡ及びＭＵＣ−１またはＰＡＰ及びＰＳＡ）、含まれるが、これらに限定されない。
【００６１】
さらなる実施形態において、腫瘍関連抗原は１つまたは複数の外来のＴＨエピトープを含むように修飾される。かかる癌免疫療法剤は非限定的実施例中で本明細書において記述され、「ＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２」と称される。本明細書において記述されるように、かかる癌免疫療法剤（ＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２が含まれるがこれらに限定されない）は癌の治療のために有用である。本発明は、免疫不全患者が含まれるヒト及び他の哺乳類のプライム／ブーストワクチン接種レジメンにおけるかかる薬剤の使用；及び体液性免疫反応及び細胞性免疫反応の両方を誘導すること（既存のＴｈ２環境中でＴｈ１免疫応答を誘導すること等）を可能にする。
【００６２】
特定の実施形態において、腫瘍関連抗原は、ウイルスゲノムの非必須領域の中へ挿入される異種核酸配列により実施される。それらの実施形態のうちの特定のものにおいて、異種核酸配列は、ＰＣＴ／ＥＰ９６／０２９２６中で記述されるようにＭＶＡゲノムの天然に存在する欠失部位に挿入される。ポックスウイルスゲノムの中へ異種配列を挿入する方法は、当業者に公知である。
【００６３】
特定の実施形態において、医薬組成物は、１つまたは複数の薬学的に許容及び／または承認される担体、添加剤、抗生物質、防腐剤、補助剤、希釈剤及び／または安定剤を含む。かかる添加剤には、例えば水、生理食塩水、グリセロール、エタノール、湿潤剤または乳化剤及びｐＨ緩衝物質が含まれるが、これらに限定されない。例示的な担体は、典型的には大きな緩慢に代謝される分子（タンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマー性アミノ酸、アミノ酸コポリマー、脂質凝集物または同種のもの等）である。
【００６４】
ワクチンの調製のために、オルソポックスウイルスは生理学的に許容される形状へと転換することができる。特定の実施形態において、かかる調製は、例えばＳｔｉｃｋｌ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，Ｄｔｓｃｈ．ｍｅｄ．Ｗｓｃｈｒ．９９，２３８６−２３９２（１９７４）中で記述されるように、天然痘のワクチン接種のために使用されるポックスウイルスワクチンの調製における経験に基づく。
【００６５】
例示的な調製は以下の通りである。精製ウイルスを１０ｍＭトリス、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．４中で製剤化して、５×１０８ＴＣＩＤ５０／ｍｌの力価により−８０℃で保存する。ワクチン注射の調製のために、例えば、１０２〜１０８のウイルスの粒子を、アンプル（好ましくはガラス製アンプル）中で、２％ペプトン及び１％ヒトアルブミンの存在下においてリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で凍結乾燥することができる。あるいは、ワクチン注射は製剤中でウイルスを段階的に冷凍乾燥することによって調製できる。特定の実施形態において、製剤は、追加の添加剤（マンニトール、デキストラン、糖、グリシン、ラクトース、ポリビニルピロリドン等）、または他の添加剤（インビボの投与のために好適な抗酸化剤もしくは不活性ガス、安定剤または組換えタンパク質（例えばヒト血清アルブミン）が含まれるが、これらに限定されないもの等）を含有する。次いでアンプルを密封し、例えば４℃〜室温の間の適切な温度で数か月間保存することができる。しかしながら、必要性が存在しない限り、アンプルは好ましくは−２０℃未満の温度で保存される。
【００６６】
ワクチン接種または治療法に関する様々な実施形態において、凍結乾燥物を０．１〜０．５ｍｌの水溶液（好ましくは生理食塩水またはトリス緩衝液）中で溶解し、全身的または局所的のいずれか、すなわち非経口、皮下、静脈内、筋肉内、鼻腔内、皮内、または当業者に公知の他の投与の経路によって投与した。投与のモード、用量及び投与の数の至適化は、当業者の技能及び知識内である。
【００６７】
特定の実施形態において、弱毒化されたワクシニアウイルス株は、免疫力が低下した動物（例えばＳＩＶに感染したサル（ＣＤ４＜４００／μｌの血液））または免疫力が低下したヒトにおいて免疫応答を誘導するのに有用である。「免疫力が低下した」という用語は、不完全な免疫応答のみを示すか、または病原菌に対する防御効率の低減を有する個体の免疫系の状況を記述する。
【００６８】
特定の例示的な腫瘍関連抗原
特定の実施形態において、免疫応答は細胞関連ポリペプチド抗原に対して被験体中で生産される。特定のかかる実施形態において、細胞関連ポリペプチド抗原は腫瘍関連抗原である。
【００６９】
「ポリペプチド」という用語は、ペプチド結合または修飾されたペプチド結合によって互いに連結された２つ以上のアミノ酸のポリマーを指す。アミノ酸は、天然に存在するものに加えて、天然に存在しないもの、または天然に存在するアミノ酸の化学的類似体であり得る。この用語は、タンパク質（すなわち少なくとも１つのポリペプチドを含む機能性生体分子）も指し、少なくとも２つポリペプチドを含む場合、これらは複合体を形成するか、共有結合で連結されるか、または共有結合で連結されない。タンパク質中のポリペプチド（複数可）は、糖鎖付加される及び／または脂質付加される及び／または補欠分子族を含む。
【００７０】
本明細書において記述されるように、好ましくは、腫瘍関連抗原は、ＨＥＲ−２、ＰＳＡ、ＰＡＰ、ＣＥＡまたはＭＵＣ−１の単独または組み合わせ（例えばＣＥＡ及びＭＵＣ−１またはＰＡＰ及びＰＳＡ）である。
【００７１】
多数の腫瘍関連抗原は当技術分野において公知である。例示的な腫瘍関連抗原には、５αリダクターゼ、α−フェトプロテイン、ＡＭ−１、ＡＰＣ、Ａｐｒｉｌ、ＢＡＧＥ、β−カテニン、Ｂｃｌ１２、ｂｃｒ−ａｂｌ、ＣＡ−１２５、ＣＡＳＰ−８／ＦＬＩＣＥ、カテプシン、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３５、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ５、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤＣ２７、ＣＤＫ４、ＣＥＡ、ｃ−ｍｙｃ、Ｃｏｘ−２、ＤＣＣ、ＤｃＲ３、Ｅ６／Ｅ７、ＣＧＦＲ、ＥＭＢＰ、Ｄｎａ７８、ファルネシル転移酵素、ＦＧＦ８ｂ、ＦＧＦ８ａ、ＦＬＫ−１／ＫＤＲ、葉酸受容体、Ｇ２５０、ＧＡＧＥファミリー、ガストリン１７、ガストリン放出ホルモン、ＧＤ２／ＧＤ３／ＧＭ２、ＧｎＲＨ、ＧｎＴＶ、ＧＰ１、ｇｐ１００／Ｐｍｅｌ１７、ｇｐ−１００−ｉｎ４、ｇｐ１５、ｇｐ７５／ＴＲＰ−１、ｈＣＧ、ヘパラナーゼ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＨＭＴＶ、Ｈｓｐ７０、ｈＴＥＲＴ、ＩＧＦＲ１、ＩＬ−１３Ｒ、ｉＮＯＳ、Ｋｉ６７、ＫＩＡＡ０２０５、Ｋ−ｒａｓ、Ｈ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、ＫＳＡ、ＬＫＬＲ−ＦＵＴ、ＭＡＧＥファミリー、マンマグロビン、ＭＡＰ１７、メラン−Ａ／ＭＡＲＴ−１、メソテリン、ＭＩＣ  Ａ／Ｂ、ＭＴ−ＭＭＰ、ムチン、ＮＹ−ＥＳＯ−１、オステオネクチン、ｐ１５、Ｐ１７０／ＭＤＲ１、ｐ５３、ｐ９７／メラノトランスフェリン、ＰＡＩ−１、ＰＤＧＦ、ｕＰＡ、ＰＲＡＭＥ、プロバシン、プロジェニポイエンチン（ｐｒｏｇｅｎｉｐｏｉｅｎｔｉｎ）、ＰＳＡ、ＰＳＭ、ＲＡＧＥ−１、Ｒｂ、ＲＣＡＳ１、ＳＡＲＴ−１、ＳＳＸファミリー、ＳＴＡＴ３、ＳＴｎ、ＴＡＧ−７２、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−β、チモシン−β−１５、ＴＮＦ−α、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、チロシナーゼ、ＶＥＧＦ、ＺＡＧ、ｐ１６ＩＮＫ４、及びグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼが含まれるが、これらに限定されない。
【００７２】
米国特許第７，２４７，６１５号（参照として本明細書に援用される）中で記述されるように、好ましいＰＳＡ抗原は位置１５５でイソロイシンからロイシンへのアミノ酸変化を含む。
【００７３】
１つまたは複数の好ましいＣＥＡ抗原には、米国特許第７，７２３，０９６号ならびにＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３７８１０号及び第ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３８６４３号（そのすべては参照により援用される）中で記述されるＣＥＡ抗原が含まれるが、これらに限定されない。
【００７４】
１つまたは複数の好ましいＭＵＣ−１抗原には、米国特許第７，１１８，７３８号ならびにＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０２００５８号、第ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３７８１０号及び第ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３８６４３号（そのすべては参照により援用される）中で記述されるＭＵＣ−１抗原が含まれるが、これらに限定されない。
【００７５】
別の例示的な腫瘍関連抗原はＨＥＲ−２である。ＨＥＲ−２は、現在４つの異なる受容体（ｃ−ｅｒｂＢ−１（ＥＧＦｒ）、ｃ−ｅｒｂＢ−２（ＨＥＲ−２、ｃ−Ｎｅｕ）、ｃ−ｅｒｂＢ−３及びｃ−ｅｒｂＢ−４で）からなる表皮増殖因子受容体ファミリー（ｃ−ｅｒｂＢ）のメンバーである（Ｓａｌｏｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ，１９９５）。Ｃ−ｅｒｂＢ−３及びｃ−ｅｒｂＢ−４は、ＥＧＦｒ及びＨＥＲ−２よりも十分に特徴づけられていない。ＨＥＲ−２は膜内糖タンパク質である。成熟タンパク質はＥＧＦｒ受容体に非常によく類似する構造上の特色があり、１８５ｋＤの分子量を有する（Ｐｒｉｇｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ，１９９２）。ＥＧＦｒも１つのサブユニットからなる膜内受容体である。それは、１７０ｋＤの見かけ上の分子量を有し、６２１アミノ酸の表面リガンド結合領域、２３アミノ酸の単一疎水性膜貫通ドメイン、及び５４２アミノ酸の高度に保存された細胞質チロシンキナーゼドメインからなる。タンパク質はＮ型糖鎖が付加される（Ｐｒｉｇｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ，１９９４）。
【００７６】
このファミリー中のすべてのタンパク質はチロシンキナーゼである。リガンドとの相互作用は受容体の二量体化をもたらし、それはチロシンキナーゼの触媒作用を増加させる（Ｂｅｒｎａｒｄ．１９９５、Ｃｈａｎｔｒｙ  １９９５）。ファミリー内のタンパク質はホモ二量体化及びヘテロ二量体化することができ、それは活性のために重要である。ＥＧＦｒは増殖促進効果を伝え、細胞によるグルコース及びアミノの酸の取り込みを刺激する（Ｐｒｉｇｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ  １９９２）。ＨＥＲ−２は増殖促進シグナルも伝える。
【００７７】
表皮増殖因子受容体は低量で正常組織上で発現されるが、多くのタイプの癌では過剰発現される。ＥＧＦｒは、乳癌（Ｅａｒｐ  ｅｔ  ａｌ，１９９３、Ｅｐｐｅｎｂｅｒｇｅｒ  １９９４）、神経膠腫（Ｓｃｈｌｅｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ，１９９４）、胃癌（Ｔｋｕｎａｇａ  ｅｔ  ａｌ，１９９５）、皮膚扁平上皮癌（Ｆｕｊｉｉ  １９９５）、卵巣癌（ｖａｎ  Ｄａｍ  ｅｔ  ａｌ，１９９４）及びその他で過剰発現される。ＨＥＲ−２も、低量で少数の正常ヒト組織上で、最も特徴的には腺上皮上で発現される。ＨＥＲ−２の過剰発現は、乳癌、胃癌、膵臓癌、膀胱癌及び卵巣癌の約３０％において起こる。
【００７８】
これらの受容体の発現は、腫瘍及び癌タイプの分化の程度に依存して変動し、例えば乳癌では原発性腫瘍は両方の受容体を過剰発現するが、胃癌では転移性腫瘍の後のステージで過剰発現が起こる（Ｓａｌｏｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ，１９９５）。癌細胞上で過剰発現された受容体の数は、患者から単離された複数の頭頸部癌、外陰癌株、乳癌株及び卵巣癌株について１０６／細胞より大きい（Ｄｅａｎ  ｅｔ  ａｌ，  １９９４）。
【００７９】
受容体ＥＧＦｒファミリーが腫瘍免疫療法のために好適な標的を構成する複数の理由がある。第一に、それらは多くのタイプの癌において過剰発現され、それは腫瘍に向けた免疫応答を指令するにちがいない。第二に、腫瘍は、この受容体のファミリーについてのリガンドをしばしば発現または過剰発現し、いくつかはリガンドによって媒介される増殖性効果に高感受性がある。第三に、増殖因子受容体を過剰発現する腫瘍に罹患した患者はしばしば予後不良である。過剰発現は、とりわけ乳癌、肺癌及び膀胱癌における予後不良と密接に結びつけられており、むしろ従来の治療法へ非感受性である浸潤性表現型／転移性表現型と関連し得る（Ｅｃｃｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ，１９９４）。
【００８０】
腫瘍抗原（または腫瘍関連抗原）をコードする核酸が発現制御配列へ操作可能に連結され得ることが企図される。コード配列へ作動可能に連結された発現制御配列は、コード配列の発現が発現制御配列と適合性のある条件下で達成されるように、つながれる。発現制御配列には、適切なプロモーター、エンハンサー、転写ターミネーター、始まりでの開始コドン、タンパク質をコードするオープンリーディングフレーム、イントロンのためのスプライシングシグナル、及びインフレームの終止コドンが含まれるが、これらに限定されない。適切なプロモーターには、ＳＶ４０初期プロモーター、ＲＳＶプロモーター、レトロウイルスＬＴＲ、アデノウイルス主要後期プロモーター、ヒトＣＭＶ最初期Ｉプロモーター、及び様々なポックスウイルスプロモーターが含まれるが、これらに限定されず、様々なポックスウイルスプロモーターには、以下のワクシニアウイルスプロモーターまたはＭＶＡ由来プロモーター（ＡＴＩプロモーター、３０Ｋプロモーター、Ｉ３プロモーター、ＰｒＳプロモーター、Ｐｒ７．５Ｋ、４０Ｋプロモーター、ＰｒＳｙｎＩＩｍプロモーター、ＰｒＬＥ１プロモーター及びＰｒＳＳＬプロモーター（ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＥＰ２００９／００８４５９中で記述されるように））が含まれるが、これらに限定されない。
【００８１】
追加の発現制御配列には、リーダー配列、終止コドン、ポリアデニル化シグナル、及び所望されるホスト系中での所望される組換えタンパク質（例えばＨＥＲ−２、ＰＳＡ、ＰＡＰ、ＣＥＡまたはＭＵＣ−１）をコードする核酸配列の適切な転写及び後続する翻訳のために必要な他の配列が含まれるが、これらに限定されない。ポックスウイルスベクターは、所望されるホスト系中での核酸配列を含有する発現ベクターの移動及び後続する複製のために必要な追加の要素も含有し得る。かかるベクターが、従来の方法（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．、「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」中で、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（１９８７））を使用して容易に構築され、市販で入手可能であることは、当業者によって更に理解されるだろう。
【００８２】
修飾された腫瘍関連抗原
特定の実施形態において、ＡＰＣの表面上でＭＨＣクラスＩ分子と会合して提示された場合にポリペプチド抗原に由来するエピトープを表面上で提示する細胞に対して、ＣＴＬ応答が誘導されるように、細胞関連ポリペプチド抗原は修飾される。特定のかかる実施形態において、少なくとも１つの第１の外来のＴＨエピトープは、提示された場合に、ＡＰＣの表面上でＭＨＣクラスＩＩ分子と会合する。特定のかかる実施形態において、細胞関連抗原は腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である。
【００８３】
エピトープを提示することができる例示的なＡＰＣには、樹状細胞及びマクロファージが含まれる。追加の例示的なＡＰＣは、任意の飲作用をするＡＰＣまたは食菌をするＡＰＣを含み、それは、１）ＭＨＣクラスＩ分子へ結合されたＣＴＬエピトープ、及び２）ＭＨＣクラスＩＩ分子へ結合されたＴＨエピトープを同時に提示することができる。
【００８４】
特定の実施形態において、被験体への投与後に、本明細書において記述される腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の１つまたは複数と優先的に反応するポリクローナル抗体が誘発されるように、本明細書において提示されるＴＡＡのうちの１つまたは複数（ＣＥＡ、ＭＵＣ−１、ＰＡＰ、ＰＳＡ、ＨＥＲ２等であるが、これらに限定されない）へ修飾が行われる。かかる抗体は、転移細胞が転移型へと発生することを防止でき、加えて腫瘍細胞を攻撃し消失させることができた。この抗腫瘍効果のエフェクター機構は補体及び抗体依存性細胞性細胞傷害を介して媒介されるだろう。加えて、誘導された抗体は、増殖因子依存性オリゴ二量体化及び受容体の内部移行の阻害を介して癌細胞増殖も阻害することができた。特定の実施形態において、かかる修飾されたポリペプチド抗原は、腫瘍細胞によってディスプレイされる公知の及び／または予測されるＴＡＡエピトープに対して向けられたＣＴＬ応答を誘導することができた。
【００８５】
特定の実施形態において、修飾されたＴＡＡポリペプチド抗原は、細胞関連ポリペプチド抗原のＣＴＬエピトープ及びバリエーションを含み、そこでバリエーションは外来のＴＨエピトープのうちの少なくとも１つのＣＴＬエピトープを含む。特定のかかる修飾されたＴＡＡには、一非限定的例において、少なくとも１つのＣＴＬエピトープを含む１つまたは複数の修飾されたＨＥＲ−２ポリペプチド抗原、及び外来のＴＨエピトープのうちの少なくとも１つのＣＴＬエピトープを含むバリエーションが含まれ得る。これらを生産する方法は、米国特許第７，００５，４９８号ならびに米国特許第２００４／０１４１９５８号及び第２００６／０００８４６５号中で記述される。
【００８６】
特定の実施形態において、外来のＴＨエピトープは、天然に存在する「無差別性」Ｔ細胞エピトープである。かかる無差別性Ｔ細胞エピトープは、動物種または動物集団の個体の大部分において活性がある。特定の実施形態において、ワクチンはかかる無差別性Ｔ細胞エピトープを含む。特定のかかる実施形態において、無差別性Ｔ細胞エピトープの使用は、同じワクチン中での非常に多数の異なるＣＴＬエピトープについての必要性を低減させる。例示的な無差別性Ｔ細胞エピトープには、破傷風毒素（Ｐ２エピトープ及びＰ３０エピトープ（Ｐａｎｉｎａ−Ｂｏｒｄｉｇｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９）が含まれるがこれらに限定されない）、ジフテリア毒素、インフルエンザウイルス赤血球凝集素（ＨＡ）及び熱帯熱マラリア原虫ＣＳ抗原からのエピトープが含まれるが、これらに限定されない。
【００８７】
追加の無差別性Ｔ細胞エピトープには、異なるＨＬＡ−ＤＲによってコードされたＨＬＡ−ＤＲ分子の大部分を結合することができるペプチドが含まれる。例えばＷＯ９８／２３６３５（Ｆｒａｚｅｒ  ＩＨ  ｅｔ  ａｌ．、Ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄへ譲渡された）；Ｓｏｕｔｈｗｏｏｄ  Ｓ  ｅｔ．ａｌ，１９９８，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：３３６３  ３３７３；Ｓｉｎｉｇａｇｌｉａ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ  ３３６：７７８  ７８０；Ｒａｍｍｅｎｓｅｅ  ＨＧ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４１：４  １７８  ２２８；Ｃｈｉｃｚ  ＲＭ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ  １７８：２７  ４７；Ｈａｍｍｅｒ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃｅｌｌ  ７４：１９７  ２０３；及びＦａｌｋ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ３９：２３０  ２４２を参照されたい。後者の参照はＨＬＡ−ＤＱ及びＨＬＡ−ＤＰリガンドも扱う。これらの参照中でリストされたすべてのエピトープは、本明細書において記述されるような候補の天然エピトープ、これらと一般的なモチーフを共有するエピトープと関連する。
【００８８】
特定の他の実施形態において、無差別性Ｔ細胞エピトープは、ハプロタイプの大部分を結合できる人工のＴ細胞エピトープである。特定のかかる実施形態において、人工のＴ細胞エピトープは、ＷＯ９５／０７７０７及び対応する論文Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １：７５１  ７６１中で記述されるような汎ＤＲエピトープペプチド（「ＰＡＤＲＥ」）である。
【００８９】
ｍＨＥＲ２
様々な修飾されたＨＥＲ−２ポリペプチド抗原及びそれを生産する方法は、米国特許第７，００５，４９８号ならびに米国特許第２００４／０１４１９５８号及び第２００６／０００８４６５号（それらは参照することにより本明細書に援用される）中で記述される。それらの文書は、ＨＥＲ−２ポリペプチド中の異なる位置で無差別性Ｔ細胞エピトープを含む様々な修飾されたＨＥＲ−２ポリペプチド抗原を記述する。
【００９０】
ヒトＨＥＲ−２配列は、もっぱらタンパク質の一次構造に基づいて多数のドメインへと分割することができる。それらのドメインは以下の通りである。細胞外（受容体）ドメインは、アミノ酸１〜６５４にわたり、以下の、アミノ酸１〜１７３にわたるドメインＩ（成熟ポリペプチドのＮ末端ドメイン）；アミノ酸１７４〜３２３にわたるドメインＩＩ（システインリッチドメイン、２４システイン残基）；アミノ酸３２４〜４８３にわたるドメインＩＩＩ（相同なＥＧＦ受容体中でのリガンド結合ドメイン）；及びアミノ酸４８４〜６２３にわたるドメインＩＶ（システインリッチドメイン、２０システイン残基）の複数のサブドメインを含有する。膜貫通残基はアミノ酸６５４〜６７５にわたる。細胞内（キナーゼ）ドメインはアミノ酸６５５〜１２３５にわたり、アミノ酸６５５〜１０１０にわたるチロシンキナーゼドメイン（コアＴＫドメインは７２５〜９９２にわたる）；及びアミノ酸１０１１〜１２３５にわたるＣ末端のドメインを含有する。
【００９１】
Ｐ２またはＰ３０のヒトＴヘルパーエピトープのいずれかによって置き換えられるＨＥＲ−２のアミノ酸配列中の部位の選択は、米国特許第７，００５，４９８号ならびに米国特許第２００４／０１４１９５８号及び第２００６／０００８４６５号中で記述される。要約のために、以下のパラメーターを考慮した。
１．公知の及び予測されるＣＴＬエピトープ；
２．関連する受容体（特定のＥＧＦＲ）への相同性；
３．システイン残基の保存；
４．予測されるループ構造、α−ヘリックス構造及びβ−シート構造；
５．可能性のあるＮ型糖鎖付加部位；
６．露出するアミノ酸残基及び埋没するアミノ酸残基の予測；
７．ドメイン構成。
【００９２】
ＣＴＬエピトープは、ドメインＩ、ドメインＩＩＩ、ＴＭドメイン、及びＴＫドメイン中の２または３の「ホットスポット」中に密集するように思われる。米国特許第７，００５，４９８号ならびに米国特許第２００４／０１４１９５８号及び第２００６／０００８４６５号中で記述されるように、これらは大部分は保存されなくてはならない。
【００９３】
他の受容体との高度の相同性を備えた領域は、ＨＥＲ−２の「全体的な」三次構造のために、及びしたがって抗体認識のために構造的に重要であるだろうが、恐らく結果として構造の局所的変更のみにより低い相同性を備えた領域を交換することができる。
【００９４】
システイン残基はしばしば分子内のジスルフィド架橋形成に関与し、したがって三次構造に関与し、変化させるべきではない。α−へリックス構造またはβ−シート構造を形成することが予測される領域は、これらの領域がタンパク質の折り畳みに関与すると考えられるので、外来のエピトープの挿入点として避けるべきである。
【００９５】
タンパク質のマンノシル化が所望されるならば、可能性のあるＮ型糖鎖付加部位は保存されるべきである。
【００９６】
分子中で内部であると（それらの疎水性特性によって）予測される領域は、これらが折り畳みに関与し得るので、好ましくは保存されるべきである。これとは対照的に、溶媒に露出される領域は、モデルＴＨエピトープのＰ２及びＰ３０の挿入のための候補位置として供することができる。
【００９７】
最終的に、タンパク質のドメイン構成は、タンパク質の構造及び機能について関連性があるので、考慮に入れるべきである。
【００９８】
米国特許第７，００５，４９８号ならびに米国特許第２００４／０１４１９５８号及び第２００６／０００８４６５号中で記述されるように、戦略の焦点は、ＨＥＲ−２の細胞外部分の構造を可能な限り保存することであり、この構造が抗体の中和のための標的として関連するタンパク質の部分であるからである。これとは対照的に、癌細胞の表面上の天然の膜結合型ＨＥＲ−２の細胞内部分は、液性免疫系については接近不能である。
【００９９】
ＨＥＲ−２の様々なドメイン中に挿入された破傷風毒素のＰ２エピトープ及びＰ３０エピトープを使用する様々な例示的なコンストラクトは、米国特許第７，００５，４９８号ならびに米国特許第２００４／０１４１９５８号及び第２００６／０００８４６５号中で提供される。「ｍＨＥＲ２」と称される１つの例示的な修飾されたＨＥＲ−２ポリペプチド抗原は、細胞外ドメイン及び９アミノ酸の膜貫通ドメイン；修飾されたＨＥＲ−２ポリペプチドのドメインＩＩ中のアミノ酸残基２７３〜２８７の間に挿入されたＰ２エピトープ；ならびに修飾されたＨＥＲ−２ポリペプチドのドメインＩＶ中のアミノ酸残基６５５〜６７５の間に挿入されたＰ３０エピトープを含む。
【０１００】
組換えＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２
非限定的実施形態において、腫瘍関連抗原を含む組換えＭＶＡ（例えばＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２）を、以下の通り構築する。最初のウイルスストックは、複製について許容する細胞タイプ（例えばＣＥＦ細胞）を使用して、細胞培養中での組換えによって生成する。細胞を、弱毒化したワクシニアウイルス（例えばＭＶＡ−ＢＮ）により接種し、腫瘍関連抗原（例えばｍＨＥＲ２）配列及びウイルスゲノムの隣接領域をコードする組換えプラスミド（例えばｐＢＮ２７９）によりトランスフェクションする。１つの非限定的実施形態において、プラスミドｐＢＮ２７９は、ＭＶＡ−ＢＮ中にも存在する配列（ＯＲＦ６４と６５との間の隣接遺伝子間領域、ＩＧＲ６４／６５）を含有する。ｍＨＥＲ２配列は、ＭＶＡ−ＢＮウイルスゲノムの中への組換えを可能にするようにＭＶＡ−ＢＮ配列の間に挿入される。特定の実施形態において、プラスミドは、ＣＥＦ細胞中の組換えコンストラクトの選択を可能にする１つまたは複数の選択遺伝子を含む選択カセットも含有する。好ましい実施形態において、組換えＭＶＡは、配列番号：２を含むポリペプチドをコードする。
【０１０１】
培養で同時に感染及びトランスフェクションを行うことは、相同組換えがウイルスゲノムと組換えプラスミドとの間で起こることを可能にする。次いでインサートを保有するウイルスを単離し、特徴づけし、ウイルスストックを調製した。特定の実施形態において、ウイルスを選択の非存在下においてＣＥＦ細胞培養で継代して、選択遺伝子、ＧＰＴ及びｍＲＦＰ１をコードする領域の喪失を可能にする。
ＰＤ−１及びＬＡＧ−３のアンタゴニスト
特定の実施形態において、本発明は、ＰＤ−１及びＬＡＧ−３のアンタゴニストを包含する。ＰＤ−１及びＬＡＧ−３のアンタゴニストは、ＰＤ−１及びＬＡＧ−３をそれぞれ妨害する。
【０１０２】
かかるアンタゴニストには、ＰＤ−１またはＬＡＧ−３へ特異的に結合し、ＰＤ−１またはＬＡＧ−３の生物学的活性を阻害する抗体；ＰＤ−１またはＬＡＧ−３の発現を妨害するアンチセンス核酸ＲＮＡ；ＰＤ−１、ＬＡＧ−３の発現を妨害する小型干渉ＲＮＡ；及びＰＤ−１またはＬＡＧ−３の小分子阻害剤が含まれる。
【０１０３】
ＰＤ−１またはＬＡＧ−３の候補アンタゴニストは、当技術分野において公知の及び／または本出願内で開示される多様な技法によって機能について検査することができる（インビトロモデルまたはマウスモデルにおいてＰＤ−１またはＬＡＧ−３の機能による阻害を妨害する能力等）。
【０１０４】
ＩＣＯＳのアゴニスト
本発明は、ＩＣＯＳのアゴニストを更に包含する。ＩＣＯＳのアゴニストはＩＣＯＳを活性化する。一実施形態において、アゴニストはＩＣＯＳ−Ｌ（ＩＣＯＳの天然リガンド）である。アゴニストは、結合特性及び活性化特性を保持するＩＣＯＳ−Ｌの変異型であり得る。ＩＣＯＳ−Ｌの変異型はインビトロでＩＣＯＳを刺激することで活性についてスクリーニングすることができる。
【０１０５】
好ましくは、ＩＣＯＳのアゴニストは抗体である。
【０１０６】
抗体
一実施形態において、ＰＤ−１もしくはＬＡＧ−３のアンタゴニストまたはＩＣＯＳのアゴニストは、抗体である。抗体は、合成、モノクローナルまたはポリクローナルであり得、当技術分野において周知の技法によって作製することができる。かかる抗体は、抗体の抗原結合部位を介してＰＤ−１、ＬＡＧ−３またはＩＣＯＳへ特異的に結合する（非特異的結合とは対照的に）。ＰＤ−１、ＬＡＧ−３またはＩＣＯＳのポリペプチド、断片、バリアント、融合タンパク質などは、それと免疫反応性のある抗体の生産における免疫原として用いることができる。より具体的には、ポリペプチド、断片、バリアント、融合タンパク質などは、抗体の形成を誘発する抗原決定基またはエピトープを含有する。
【０１０７】
これらの抗原決定基またはエピトープは直線状または立体配座的（不連続）のいずれかであり得る。直線状エピトープはポリペプチドのアミノ酸の単一セクションから構成される一方で、立体配座的エピトープまたは不連続エピトープは、タンパク質の折り畳みに際して近傍に近接させられるポリペプチド鎖の異なる領域からのアミノ酸セクションから構成される（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ，Ｊｒ．ａｎｄ  Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ、Ｉｍｍｕｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３：９（Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｉｎｃ．、第２版１９９６））。折り畳まれたタンパク質は複雑な表面を有するので、利用可能なエピトープの数はかなり多数である。しかしながら、タンパク質の立体配座及び立体障害に起因して、エピトープへ実際に結合する抗体の数は、入手可能なエピトープの数よりも少ない（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ，Ｊｒ．ａｎｄ  Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ、Ｉｍｍｕｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２：１４（Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｉｎｃ．、第２版１９９６））。エピトープは、当技術分野において公知の任意の方法によって同定することができる。
【０１０８】
ＰＤ−１、ＬＡＧ−３またはＩＣＯＳへ特異的に結合し、その機能をブロックする（「アンタゴニスト抗体」）か、またはその機能を活性化する（アゴニスト抗体）のいずれかである抗体（ｓｃＦＶ断片が含まれる）は、本発明によって包含される。かかる抗体は従来の手段によって生成することができる。
【０１０９】
本発明は、その機能をブロックする（「アンタゴニスト抗体」）か、その機能を活性化する（アゴニスト抗体）ＰＤ−１、ＬＡＧ−３またはＩＣＯＳに対するモノクローナル抗体を包含する。ＰＤ−１、ＬＡＧ−３及びＩＣＯＳに対する例示的なブロッキングモノクローナル抗体は、ＷＯ２０１２／１３１００４及びＷＯ２０１１／０４１６１３（それらは参照することにより本明細書に援用される）中で記述される。
【０１１０】
抗体は高い親和性及び特異性の両方を備えてそれらの標的へ結合できる。それらは比較的大きな分子（約１５０ｋＤａ）であり、抗体結合部位がタンパク質−タンパク質相互作用部位の近傍内にある場合、それは立体的に２つのタンパク質（例えばＰＤ−１、ＬＡＧ−３またはＩＣＯＳとその標的リガンド）の間の相互作用を阻害することができる。本発明は、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３またはＩＣＯＳのリガンド結合部位に近接した近傍内のエピトープへ結合する抗体を更に包含する。
【０１１１】
様々な実施形態において、本発明は、分子間相互作用（例えばタンパク質−タンパク質相互作用）を妨害する抗体に加えて、分子内相互作用（例えば分子内の立体配座的変化）を乱す抗体を包含する。抗体は、ＰＤ−１もしくはＬＡＧ−３の生物学的活性をブロックする能力、もしくはリガンドへのＰＤ−１もしくはＬＡＧ−３の結合、及び／または他の特性についてスクリーニングすることができる。アゴニスト抗体は、ＩＣＯＳの生物学的活性を活性化する能力について更にスクリーニングすることができる。
【０１１２】
ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体の両方は従来の技法によって調製することができる。
【０１１３】
ＰＤ−１、ＬＡＧ−３及びＩＣＯＳ、ならびにＰＤ−１、ＬＡＧ−３及びＩＣＯＳのアミノ酸配列に基づくペプチドを利用して、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３またはＩＣＯＳへ特異的に結合する抗体を調製することができる。「抗体」という用語は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、その断片（Ｆ（ａｂ’）２及びＦａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖｓ）、単一ドメイン抗体断片（ＶＨＨまたはナノボディ）、二価抗体断片（ダイアボディ）等）に加えて、任意の組換え的及び合成的に生産された結合パートナーが含まれることを意味する。
【０１１４】
抗体は、それらがＰＤ−１、ＬＡＧ−３またはＩＣＯＳポリペプチドに約１０７Ｍ−１Ｋａ以上で結合するならば、特異的に結合していると定義される。結合パートナーまたは抗体の親和性は、従来の技法（例えばＳｃａｔｃｈａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，５１：６６０（１９４９）によって記述されるもの）を使用して容易に決定することができる。
【０１１５】
ポリクローナル抗体は、当技術分野において周知の手順を使用して、多様な源（例えばウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ニワトリ、ウサギ、マウスまたはラット）から容易に生成することができる。一般に、精製されたＰＤ−１、ＬＡＧ−３もしくはＩＣＯＳ、または適切にコンジュゲートされたＰＤ−１、ＬＡＧ−３もしくはＩＣＯＳのアミノ酸配列に基づいたペプチドは、典型的には非経口の注射を介して宿主動物へ投与される。ＰＤ−１、ＬＡＧ−３またはＩＣＯＳの免疫原性は、アジュバント（例えばＦｒｅｕｎｄの完全または不完全アジュバント）の使用を介して促進することができる。ブースター免疫付与に続いて、少量の血清サンプルを収集し、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３またはＩＣＯＳポリペプチドへの反応性について試験する。かかる決定のために有用な様々なアッセイの例には、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（編）、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、１９８８中で記述されるものに加えて、向流免疫電気泳動法（ＣＩＥＰ）、放射免疫アッセイ、放射免疫沈降法、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ドットブロット分析及びサンドイッチ分析等の手順が含まれる。米国特許第４，３７６，１１０号及び第４，４８６，５３０号を参照されたい。
【０１１６】
モノクローナル抗体は容易に周知の手順を使用して調製することができる。例えば、米国特許第ＲＥ３２，０１１号、第４，９０２，６１４号、第４，５４３，４３９号及び第４，４１１，９９３号中で記述される手順；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ：Ａ  Ｎｅｗ  Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｅｓ、Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、Ｋｅｎｎｅｔｔ，ＭｃＫｅａｍ，ａｎｄ  Ｂｅｃｈｔｏｌ（編）、１９８０年を参照されたい。
【０１１７】
例えば、宿主動物（マウス等）に、単離及び精製されたＰＤ−１、ＬＡＧ−３もしくはＩＣＯＳまたはコンジュゲートされたＰＤ−１、ＬＡＧ−３もしくはＩＣＯＳペプチドを、随意にアジュバントの存在下において、少なくとも１回及び約３週間の間隔で好ましくは少なくとも２回、腹腔内に注射することができる。次いでマウス血清を従来のドットブロット技法または抗体捕捉（ＡＢＣ）によってアッセイして、どの動物を融合させることが最も好適か決定する。およそ２〜３週間後に、マウスに、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３もしくはＩＣＯＳまたはコンジュゲートされたＰＤ−１、ＬＡＧ−３もしくはＩＣＯＳペプチドの静脈内ブーストを与える。後にマウスを屠殺し、確立されたプロトコルに従って商業的に入手可能なミエローマ細胞（Ａｇ８．６５３（ＡＴＣＣ）等）と脾臓細胞を融合させる。簡潔には、ミエローマ細胞を培地中で複数回洗浄し、約３の脾臓細胞対１のミエローマ細胞の比でマウス脾臓細胞へ融合させる。融合剤は、当技術分野において使用される任意の適切な薬剤（例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ））であり得る。融合物を、融合させた細胞の選択的な増殖を可能にする培地を含有するプレートの中へプレーティングする。次いで融合させた細胞をおよそ８日間増殖させることができる。生じたハイブリドーマから上清を収集し、ヤギ抗マウスＩｇにより最初にコーティングされたプレートへ添加する。洗浄に続いて、標識（標識したＰＤ−１、ＬＡＧ−３またはＩＣＯＳポリペプチド等）を各々のウェルへ添加し、続いてインキュベーションした。引き続き陽性ウェルを検出することができる。陽性クローンはバルク培養中で増殖させることができ、引き続き上清をプロテインＡカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）の上で精製する。
【０１１８】
本発明のモノクローナル抗体は、代替の技法（Ａｌｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓ  ｅｔ  ａｌ．、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｌｉｂｒａｒｉｅｓ：Ａ  Ｒａｐｉｄ  Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｔｏ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ」、Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３：１−９（１９９０）（参照として本明細書に援用される）によって記述されるもの等）を使用して、生産することができる。同様に、結合パートナーは、特異的な結合抗体をコードする遺伝子の可変領域を取り込む組換えＤＮＡ技法を使用して構築することができる。かかる技法はＬａｒｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，７：３９４（１９８９）中で記述される。
【０１１９】
かかる抗体の抗原結合断片（従来の技法によって生産できる）も、本発明によって包含される。かかる断片の例にはＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２の断片が含まれるが、これらに限定されない。遺伝子操作技法によって生産された抗体断片及び誘導体も提供される。
【０１２０】
本発明のモノクローナル抗体はキメラ抗体（例えばマウスモノクローナル抗体のヒト化バージョン）を含む。かかるヒト化抗体は公知の技法によって調製することができ、抗体がヒトへ投与される場合、免疫原性の低減という利点がありえる。一実施形態において、ヒト化モノクローナル抗体は、マウス抗体の可変領域（または単にその抗原結合部位）及びヒト抗体に由来する定常領域を含む。あるいは、ヒト化抗体断片は、マウスモノクローナル抗体の抗原結合部位及びヒト抗体に由来する可変領域断片（抗原結合部位を欠損する）を含むことができる。キメラモノクローナル抗体及び更に操作されたモノクローナル抗体の生産のための手順には、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３，１９８８）、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．（ＰＮＡＳ  ８４：３４３９，１９８７）、Ｌａｒｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ７：９３４，１９８９）及びＷｉｎｔｅｒ  ａｎｄ  Ｈａｒｒｉｓ（ＴＩＰＳ  １４：１３９，Ｍａｙ，１９９３）中で記述されるものが含まれる。抗体を遺伝子導入により生成する手順は、ＧＢ２，２７２，４４０、米国特許第５，５６９，８２５号及び第５，５４５，８０６号中で見出すことができる。
【０１２１】
遺伝子操作方法によって生産された抗体（標準的な組換えＤＮＡ技法を使用して作製できる、ヒト部分及び非ヒト部分の両方を含むキメラモノクローナル抗体及びヒト化モノクローナル抗体等）を、使用することができる。かかるキメラモノクローナル抗体及びヒト化モノクローナル抗体は、当技術分野において公知の標準的なＤＮＡ技法を使用して、例えば、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．国際公開第ＷＯ８７／０２６７１号；Ａｋｉｒａ，ｅｔ  ａｌ．欧州特許出願０１８４１８７；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．欧州特許出願０１７１４９６；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．欧州特許出願０１７３４９４；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ国際公開第ＷＯ８６／０１５３３号；Ｃａｂｉｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．米国特許第４，８１６，５６７号；Ｃａｂｉｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．欧州特許出願０１２５０２３；Ｂｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１  １０４３，１９８８；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ８４：３４３９  ３４４３，１９８７；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１  ３５２６，１９８７；Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．ＰＮＡＳ  ８４：２１４  ２１８，１９８７；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．４７：９９９  １００５，１９８７；Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４４６  ４４９，１９８５；及びＳｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８０：１５５３  １５５９，１９８８；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２  １２０７，１９８５；Ｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４，１９８６；Ｗｉｎｔｅｒ米国特許第５，２２５，５３９号；Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５５２  ５２５，１９８６；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４，１９８８；及びＢｅｉｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３  ４０６０，１９８８中で記述される方法を使用して、遺伝子操作によって生産することができる。
【０１２２】
合成抗体及び準合成抗体に関連して、かかる用語は、抗体断片、アイソタイプスイッチした抗体、ヒト化抗体（例えばマウス−ヒト、ヒト−マウス）、ハイブリッド、複数の特異性を有する抗体、及び完全合成抗体様分子をカバーするが、これらに限定されないことが意図される。
【０１２３】
治療法上の適用のために、ヒト定常領域及び可変領域を有する「ヒト」モノクローナル抗体は、抗体に対する患者の免疫応答を最小限にするために多くの場合好ましい。かかる抗体はヒト免疫グロブリン遺伝子を含有する遺伝子導入動物の免疫付与によって生成することができる。Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ７６４：５２５−５３５（１９９５）を参照されたい。
【０１２４】
ＰＤ−１、ＬＡＧ−３またはＩＣＯＳポリペプチドに対するヒトモノクローナル抗体は、被験体のリンパ細胞に由来するｍＲＮＡから調製された免疫グロブリン軽鎖及び重鎖ｃＤＮＡを使用して、コンビナトリアル免疫グロブリンライブラリー（ＦａｂファージディスプレイライブラリーまたはｓｃＦｖファージディスプレイライブラリー等）を構築することによっても調製することができる。例えばＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０１０４７；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１  ５９７；及びＧｒｉｆｆｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）ＥＭＢＯ  Ｊ  １２：７２５  ７３４を参照されたい。加えて、抗体可変領域のコンビナトリアルライブラリーは公知のヒト抗体の変異によって生成することができる。例えば、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３またはＩＣＯＳを結合することが公知であるヒト抗体の可変領域を、例えばランダムに改変された変異オリゴヌクレオチドを使用することによって変異させて、変異させた可変領域のライブラリーを生成することができ、次いでそれはＰＤ−１、ＬＡＧ−３またはＩＣＯＳへの結合をスクリーニングすることができる。免疫グロブリン重鎖及び／または軽鎖のＣＤＲ領域内でランダム変異誘発を誘導する方法、ランダム化した重鎖及び軽鎖を掛け合わせてペアリングを形成する方法、ならびにスクリーニング方法は、例えばＢａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ公開ＷＯ９６／０７７５４；Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：４４５７  ４４６１中で見出すことができる。
【０１２５】
免疫グロブリンライブラリーをディスプレイパッケージ（好ましくは線状ファージに由来する）の集団によって発現させて、抗体ディスプレイライブラリーを形成することができる。抗体ディスプレイライブラリーの生成における使用のために特に適用可能な方法及び試薬の例は、例えばＬａｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．米国特許第５，２２３，４０９号；Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ公開ＷＯ９２／１８６１９；Ｄｏｗｅｒ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ公開ＷＯ９１／１７２７１；Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ公開ＷＯ９２／２０７９１；Ｍａｒｋｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ公開ＷＯ９２／１５６７９；Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ公開ＷＯ９３／０１２８８；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０１０４７；Ｇａｒｒａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０９６９０；Ｌａｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ公開ＷＯ９０／０２８０９；Ｆｕｃｈｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７０  １３７２；Ｈａｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｈｕｍ  Ａｎｔｉｂｏｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ３：８１  ８５；Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５  １２８１；Ｇｒｉｆｆｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）前出；Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２６：８８９  ８９６；Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４  ６２８；Ｇｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）ＰＮＡＳ  ８９：３５７６  ３５８０；Ｇａｒｒａｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７３  １３７７；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎｕｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ  １９：４１３３  ４１３７；及びＢａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）ＰＮＡＳ  ８８：７９７８  ７９８２中で見出すことができる。一旦ディスプレイパッケージ（例えば線状ファージ）の表面上にディスプレイされたならば、抗体ライブラリーをスクリーニングして、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３またはＩＣＯＳポリペプチドを結合する抗体を発現するパッケージを同定及び単離する。好ましい実施形態において、ライブラリーの一次スクリーニングは、固定化されたＰＤ−１、ＬＡＧ−３またはＩＣＯＳポリペプチドによるパニングを含み、固定化されたＰＤ−１、ＬＡＧ−３またはＩＣＯＳポリペプチドを結合する抗体を発現するディスプレイパッケージを選択する。
【０１２６】
腫瘍抗原を発現する組換えオルソポックスウイルスとＰＤ−１、ＬＡＧ−３及びＩＣＯＳのアゴニスト／アンタゴニストによる例示的な組み合わせ療法
少なくとも１つの態様において、本発明は、各々が腫瘍抗原をコードする核酸を含む組換えオルソポックスウイルス及び／または組換えアビポックスウイルスを、本発明に記載の１つまたは複数の抗体、アゴニストまたはアンタゴニストと組み合わせて用いる治療の方法を包含する。
【０１２７】
１つの例示的な実施形態において、腫瘍関連抗原ＨＥＲ−２を過剰発現する細胞によって媒介される癌（例えば乳癌）に罹患する患者は、以下の組み合わせによって治療することができる。１）１つまたは複数の組換えオルソポックスウイルス、例えばＨＥＲ−２抗原をコードするワクシニアウイルス（例えばＷｙｅｔｈまたはＭＶＡ）、または２）ＨＥＲ−２抗原をコードする組換えオルソポックスウイルス及び組換えアビポックスウイルス（例えば鶏痘ウイルス、ＰＯＸＶＡＣ−ＴＣ）の組み合わせを、本発明に記載の１つまたは複数の抗体、アゴニスト及び／またはアンタゴニストと、１）または２）の組み合わせで投与する。好ましい実施形態において、ＭＶＡはＭＶＡ−ＢＮである。特に好ましい実施形態において、ＭＶＡは配列番号：２を含むポリペプチドをコードする。
【０１２８】
追加の例示的な実施形態において、前立腺癌に罹患する患者は、ＰＳＡ抗原及び／またはＰＡＰ抗原をコードする、組換えオルソポックスウイルス（例えばワクシニアウイルス（例えばＷｙｅｔｈまたはＭＶＡ））及び組換えアビポックスウイルス（例えば鶏痘ウイルス、ＰＯＸＶＡＣ−ＴＣ）を、本発明に記載の１つまたは複数の抗体、アゴニストまたはアンタゴニストと組み合わせることによって治療することができる。特に好ましい実施形態において、組換えワクシニアウイルス及び鶏痘ウイルスの組み合わせは、ＰＲＯＳＴＶＡＣ（登録商標）（各々がＰＳＡ及びＴＲＩＣＯＭを発現するワクシニアウイルス及び鶏痘ウイルス）であり、本発明に記載の１つまたは複数の抗体、アゴニスト及び／またはアンタゴニストと共に投与される。
【０１２９】
さらに追加の実施形態において、腫瘍関連抗原ＣＥＡ及び／またはＭＵＣ−１を過剰発現する細胞によって媒介される癌に罹患する患者は、各々がＣＥＡ抗原及びＭＵＣ−１抗原をコードする、組換えオルソポックスウイルス（例えばワクシニアウイルス（例えばＷｙｅｔｈ、ＭＶＡまたはＭＶＡ−ＢＮ））及び組換えアビポックスウイルス（例えば鶏痘ウイルス、ＰＯＸＶＡＣ−ＴＣ）を、本発明に記載の１つまたは複数の抗体、アゴニストまたはアンタゴニストと、組み合わせることによって治療することができる。ＣＥＡ及びＭＵＣ−１を過剰発現する細胞によって媒介される癌のいくつかの非限定的例には、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、胃癌、膵臓癌、膀胱癌及び卵巣癌が含まれるが、これらに限定されない。１つまたは複数の好ましい実施形態において、組み合わせ療法には、ＣＶ３０１（各々がＣＥＡ、ＭＵＣ−１及びＴＲＩＣＯＭを発現するワクシニアウイルス及び鶏痘ウイルス）が含まれる。別の好ましい実施形態において、組み合わせ療法には、ＭＶＡ／鶏痘−ＣＶ３０１（各々がＣＥＡ、ＭＵＣ−１及びＴＲＩＣＯＭを発現するＭＶＡ（またはＭＶＡ−ＢＮ）及び鶏痘を含む、異種プライム−ブースト）が含まれる。
【０１３０】
さらに別の実施形態において、腫瘍関連抗原ＣＥＡ及び／またはＭＵＣ−１を過剰発現する細胞によって媒介される癌に罹患する患者は、同種プライム−ブースト（本発明に記載の１つまたは複数の抗体、アゴニストまたはアンタゴニストと組み合わせたコードされたＣＥＡ抗原及び／またはＭＵＣ−１抗原）によって治療することができる。２つ以上の組換えオルソポックスウイルスはワクシニアウイルス（例えばＷｙｅｔｈ、ＭＶＡまたはＭＶＡ−ＢＮ）であり得ることが企図される。ＣＥＡ及びＭＵＣ−１を過剰発現する細胞によって媒介される癌のいくつかの非限定的例には、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、胃癌、膵臓癌、膀胱癌及び卵巣癌が含まれるが、これらに限定されない。１つまたは複数の好ましい実施形態において、治療はＭＶＡ−ＣＶ３０１であり得、それは、各々が同種プライム−ブーストとして投与されるＣＥＡ、ＭＵＣ−１及びＴＲＩＣＯＭを発現する２つ以上のＭＶＡ（またはＭＶＡ−ＢＮ）ウイルスを含む。
【０１３１】
組換えオルソポックスウイルス及び／または組換えアビポックスウイルスは、全身的または局所的のいずれか、すなわち非経口、皮下、静脈内、筋肉内、鼻腔内、皮内、傷付処理、または当業者に公知の他の投与の経路によって投与することができる。好ましくは、投与は傷付処理を経由する。より好ましくは、投与は皮下または筋肉内を経由する。一実施形態において、１０５〜１０１０ＴＣＩＤ５０の組換えオルソポックスウイルス及び／または組換えアビポックスウイルスを患者へ投与する。好ましくは、１０７〜１０１０ＴＣＩＤ５０の組換えオルソポックスウイルス及び／または組換えアビポックスウイルスを患者へ投与する。より好ましくは、１０８〜１０１０ＴＣＩＤ５０の組換えオルソポックスウイルス及び／または組換えアビポックスウイルスを患者へ投与する。最も好ましくは、１０８〜１０９ＴＣＩＤ５０の組換えオルソポックスウイルス及び／または組換えアビポックスウイルスを患者へ投与する。
【０１３２】
上で定義されるような組換えオルソポックスウイルス及び／または組換えアビポックスウイルスの単一投与により免疫応答を誘導することは可能である。本発明に記載のオルソポックスウイルス及び／またはアビポックスウイルスを、第１のワクチン接種のために、ならびに同じものまたは第１のワクチン接種において使用されるものではなく関連する組換えオルソポックスウイルス及び／またはアビポックスウイルスの投与によって第１のワクチン接種において生成された免疫応答をブーストするために、使用することもできる。本発明に記載の組換えオルソポックスウイルス及び／またはアビポックスウイルスを異種プライム−ブーストレジームにおいて使用することもでき、そこで、プライムワクチン接種のうちの１つまたは複数は、上で定義されるようなオルソポックスウイルスにより行われ、ブーストワクチン接種のうちの１つまたは複数は、別のタイプのワクチン（例えば本明細書において定義されるようなアビポックスウイルスワクチンまたは別のウイルスワクチン、タンパク質ワクチンまたは核酸ワクチン）により行われる。
【０１３３】
癌には、好ましくは乳癌、結腸直腸癌、肺癌、胃癌、膵臓癌、膀胱癌、前立腺癌及び卵巣癌が含まれるが、これらに限定されない。
【０１３４】
癌患者は、マウスまたはラットが含まれる任意の哺乳類であり得る。好ましくは、癌患者は霊長目の動物であり、最も好ましくはヒトである。
【０１３５】
一実施形態において、本発明に記載の１つまたは複数の抗体、アゴニストまたはアンタゴニスト、及び腫瘍抗原を含むポリペプチドをコードするオルソポックスウイルスは、同時に投与される。組み合わせ治療はいずれかの治療単独より優れている。
【０１３６】
好ましい実施形態において、オルソポックスウイルスは、アゴニスト及び／またはアンタゴニスト投与の１、２、３、４、５、６または７日以内の投与のためのものである。オルソポックスウイルスはアゴニスト及び／またはアンタゴニストの前または後に投与することができる。
【０１３７】
患者へ投与される投薬アゴニストまたはアンタゴニストは、典型的には０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ患者体重である。好ましくは、患者へ投与される投薬は、０．１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ患者体重、より好ましくは１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ患者体重、最も好ましくは３ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ患者体重の間である。一般的に、ヒト抗体及びヒト化抗体は、外来のポリペプチドへの免疫応答に起因して他の種からの抗体よりも人体内で長い半減期を有する。したがって、ヒト抗体のより少ない投薬及びより低頻度の投与は多くの場合可能である。
【０１３８】
効果的な治療法のために必要な活性成分の量は、投与の手段、標的部位、患者の生理的状態、及び投与される他の医薬品が含まれる様々な因子に依存するだろう。したがって、治療投薬は安全性及び有効性を至適化するようにタイトレーションすべきである。典型的には、インビトロで使用される投薬は、活性成分のインシトゥーの投与のために有用な量における有用な指針を提供することができる。特定の障害の治療のための効果的な用量の動物試験は、ヒト投薬の更なる予測的な指標を提供するだろう。様々な考察は、例えばＧｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第７版（１９８５）、ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版（１９９０）、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ、Ｅａｓｔｏｎ  Ｐａ中で記述される。投与のための方法はその中で論じられ、それらには、経口、静脈内、腹腔内、筋肉内、経皮、鼻腔、イオン導入投与及び同種のものが含まれる。
【０１３９】
本発明の組成物は、投与の方法に依存して多様な単位投薬形状で投与することができる。例えば、経口投与のために好適な単位投薬形状には、固体投薬形状（粉末、錠剤、ピル、カプセル及び糖衣錠等）及び液体投薬形状（エリキシル、シロップ及び懸濁物等）が含まれる。活性成分は、滅菌済み液体投薬形状で非経口的に投与することもできる。ゼラチンカプセルは、活性成分、及び非活性成分として粉末担体（グルコース、ラクトース、ショ糖、マンニトール、デンプン、セルロースまたはセルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、サッカリンナトリウム、滑石、炭酸マグネシウム及び同種のもの等）を含有する。所望される色、味覚、安定性、緩衝能力、分散または他の公知の所望される特色を提供するために添加できる追加の非活性成分の例は、赤色酸化鉄、シリカゲル、ラウリル硫酸ナトリウム、二酸化チタン、食用白色インク及び同種のものである。類似する希釈剤は圧縮錠剤の作製に使用することができる。錠剤及びカプセルの両方は、数時間の期間にわたる医薬物の継続的な放出を提供する徐放性製剤として製造することができる。圧縮錠剤は、任意の不快な味覚をマスクし、大気から錠剤を保護するように糖コーティングもしくはフィルムコーティングするか、または胃腸管中での選択的分解のために腸溶性コーティングすることができる。経口投与のための液体投薬形状は、患者への受け入れを増加させるために着色剤及び風味添加物を含有することができる。
【０１４０】
医薬製剤中の本発明の組成物の濃度は、広く変動し、すなわち重量で約０．１％未満から、通常約２％で、または少なくとも約２％で、２０％程度から５０％以上であり得、選択された投与の特定のモードに従って主として液体体積、粘度などによって選択されるだろう。
【０１４１】
固体組成物については、従来の非毒性固体担体を使用することができ、それには、例えば医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、滑石、セルロース、グルコース、ショ糖、炭酸マグネシウム及び同種のものが含まれる。経口投与については、薬学的に許容される非毒性組成物は、通常用いられる賦形剤（以前にリストされた担体等）のうちの任意のもの、ならびに一般的には１０〜９５％及びより好ましくは２５％〜７５％の濃度の活性成分（すなわち本発明の１つまたは複数の組成物）を取り込むことによって形成される。
【０１４２】
エアロゾル投与については、本発明の組成物は、好ましくは界面活性剤及び噴射剤と共に微細に分割された形状で供給される。本発明の組成物の好ましいパーセンテージは、重量で０．０１％〜２０％、好ましくは１〜１０％である。界面活性剤は当然非毒性であるべきであり、好ましくは噴霧剤中で可溶性である。かかる薬剤の代表は、６〜２２の炭素原子を含有する脂肪酸（カプロン酸（ｃ−ａｐｒｏｉｃ  ａｃｉｄ）、オクタン酸、ラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、オレステリン酸（ｏｌｅｓｔｅｒｉｃ  ａｃｉｄ）及びオレイン酸等）と、脂肪族多価アルコールまたはその環状無水物とのエステルまたは部分的なエステルである。混合エステル（混合グリセリドまたは天然グリセリド等）を用いることができる。界面活性剤は、組成物の重量で０．１％〜２０％、好ましくは０．２５〜５％を構成することができる。組成物のバランスは通常噴射剤で行われる。鼻腔内送達のために所望に応じて例えば担体としてレシチンを含むことができる。
【０１４３】
本発明のコンストラクトは、加えて当技術分野において周知の技法によってデポータイプシステム、カプセル化形状、または移植で送達することができる。同様に、コンストラクトは、対象となる組織へポンプ経由で送達することができる。
【０１４４】
製剤中で活性薬剤が製剤によって不活性化されず、製剤が生理的に適合性であれば、前述の製剤のうちの任意のものは本発明に従う治療及び療法において適切であり得る。
【０１４５】
治療法用の組成物及び使用
本発明は、腫瘍エピトープに対する免疫学的反応の出現または改善を誘導するかまたはそれらに寄与することができる、治療法用の組成物またはワクチンの調製のための、本発明に記載のオルソポックスウイルスベクター及びアビポックスウイルスベクターの使用に更に関する。本発明は、したがって医薬品またはワクチンとして有用なウイルスまたはベクターを提供する。
【０１４６】
したがって、本発明は、本発明に記載の１つまたは複数の抗体、アゴニストまたはアンタゴニストと組み合わせた、本発明に記載の組換えオルソポックスウイルスベクター（ワクシニア、ＭＶＡまたはＭＶＡ−ＢＮ等）及び／または組換えアビポックスウイルスベクターを含む免疫原性組成物に関する。
【０１４７】
したがって、本発明に記載の組換えオルソポックスウイルスベクター及び組換えアビポックスウイルスベクターは、癌の治療のための治療法用の組成物または医薬品の調製のために使用することができる。
【０１４８】
本発明は、腫瘍の治療のために、及びとりわけ抗癌治療として、予防用及び／または治療法用のワクチン接種プロトコルにおける使用のための組成物を包含する。
【０１４９】
一実施形態において、本発明は、癌患者（前立腺癌、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、胃癌、膵臓癌、膀胱癌または卵巣癌の患者等であるが、これらに限定されない）への投与または治療のための組成物を包含する。
【０１５０】
１つまたは複数の好ましい実施形態において、本発明は、癌患者（特に乳癌患者または前立腺癌患者）への投与または治療のための組成物の使用を包含する。
【０１５１】
一実施形態において、同時または連続的な投与のための組成物は、本発明に記載のＭＶＡベクター、及び本発明に記載の１つまたは複数の抗体、アゴニストまたはアンタゴニストを含む。
【０１５２】
加えてまたはあるいは本明細書において記述される組成物及び方法は、１つまたは複数の免疫刺激分子／調節分子含むことができる。任意の適切な免疫刺激分子／調節分子を使用することができ、それらはインターロイキン（ＩＬ）−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ−Ｆｃ、インターフェロン（ＩＦＮ）−γ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α、Ｂ７．１、Ｂ７．２、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−２、ＬＦＡ−３、ＣＤ７０、ＣＤ−７２、ＲＡＮＴＥＳ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＯＸ−４０Ｌ、４１  ＢＢＬ、抗ＣＴＬＡ−４、ＩＤＯ阻害剤、抗ＰＤＬ１、抗ＰＤ１及びその組み合わせ等である。好ましくは、組成物は、Ｂ７．１、ＩＣＡＭ−１及びＬＦＡ−３（ＴＲＩＣＯＭとも称される）の組み合わせを含む。１つまたは複数の免疫刺激分子／調節分子は、１つまたは複数の免疫刺激分子／調節分子をコードする核酸を含むベクター（例えばポックスウイルスベクター等の組換えウイルスベクター）の形状で投与することができる。例えば、１つまたは複数の免疫刺激分子／調節分子（例えばＩＬ−１２）は、キトサン有りまたは無しでＤＮＡプラスミドの形状で投与することができる。
【０１５３】
より好ましい実施形態において、少なくとも１つの腫瘍抗原を含むことに加えて、組換えオルソポックスウイルス及び／または組換えアビポックスウイルスは、Ｂ７．１、ＩＣＡＭ−１及び／またはＬＦＡ−３（ＴＲＩＣＯＭとも称される）の組み合わせをコードする１つまたは複数の核酸を含む。
なお、本願は、特許請求の範囲に記載の発明に関するものであるが、他の態様として以下も包含し得る。
１．ヒト癌患者の治療のための治療法であって、（ａ）少なくとも１つの腫瘍抗原のポリペプチドをコードする核酸を含む組換えオルソポックスウイルスと；（ｂ）抗ＰＤ−１アンタゴニスト、抗ＬＡＧ−３アンタゴニストまたは抗ＩＣＯＳアゴニストのうちの少なくとも１つとを含み、（ａ）及び（ｂ）が組み合わせ治療として投与される、該治療法。
２．前記組換えオルソポックスウイルスが、ワクシニアウイルス、修飾型ワクシニアＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）ウイルスまたはＭＶＡ−ＢＮから選択される、上記１に記載の治療法。
３．上記１〜２のいずれか一項に記載の治療法であって、（ａ）少なくとも１つの腫瘍抗原のポリペプチドをコードする核酸を含む組換えアビポックスウイルスと；（ｂ）抗ＰＤ−１アンタゴニスト、抗ＬＡＧ−３アンタゴニストまたは抗ＩＣＯＳアゴニストのうちの少なくとも１つとを更に含み、（ａ）及び（ｂ）が組み合わせ治療として投与される、該治療法。
４．前記組換えアビポックスウイルス及びアンタゴニストまたはアゴニストの組み合わせが、上記３に記載の組換えオルソポックスウイルス及びアンタゴニストまたはアゴニストの組み合わせの後に投与される、上記１〜３のいずれか一項に記載の治療法。
５．前記アビポックスウイルスが鶏痘ウイルスである、上記３または４に記載の治療法。６．上記１〜２のいずれか一項に記載の治療法であって、（ａ）少なくとも１つの腫瘍抗原のポリペプチドをコードする核酸を含む２つ以上の組換えオルソポックスウイルスと；（ｂ）抗ＰＤ−１アンタゴニスト、抗ＬＡＧ−３アンタゴニストまたは抗ＩＣＯＳアゴニストのうちの少なくとも１つとを更に含み、（ａ）及び（ｂ）が組み合わせ治療として投与される、該治療法。
７．前記抗ＰＤ−１アンタゴニスト、抗ＬＡＧ−３アンタゴニストまたは抗ＩＣＯＳアゴニストが抗体を含む、上記１〜６のいずれか一項に記載の組み合わせ療法。
８．少なくとも１つの腫瘍抗原が、ＣＥＡ抗原、ＭＵＣ−１抗原、ＰＡＰ抗原、ＰＳＡ抗原及びＨＥＲ−２抗原から選択される、上記１〜７のいずれか一項に記載の組み合わせ療法。
９．前記癌が、乳癌、肺癌、結腸直腸癌、胃癌、膵臓癌、前立腺癌、膀胱癌または卵巣癌である、上記１〜８のいずれか一項に記載の組み合わせ療法。
１０．前記少なくとも１つの腫瘍抗原がＰＡＰ抗原である、上記１〜７のいずれか一項に記載の組み合わせ療法。
１１．前記少なくとも１つの腫瘍抗原がＰＳＡ抗原である、上記１〜７のいずれか一項に記載の組み合わせ療法。
１２．前記癌が前立腺癌である、上記１０または１１に記載の組み合わせ療法。
１３．前記少なくとも１つの腫瘍抗原がＭＵＣ−１抗原及びＣＥＡ抗原から選択される、上記１〜７のいずれか一項に記載の組み合わせ療法。
１４．前記癌が、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、胃癌、膵臓癌、膀胱癌及び卵巣癌から選択される、上記１３に記載の組み合わせ療法。
１５．前記少なくとも１つの腫瘍抗原がＨＥＲ−２抗原である、上記１〜７のいずれか一項に記載の組み合わせ療法。
１６．前記癌が乳癌である、上記１５に記載の組み合わせ療法。
１７．ヒト癌患者を治療する方法であって、
（ａ）少なくとも１つの腫瘍抗原のポリペプチドをコードする核酸を含む組換えオルソポックスウイルスを患者へ投与することと；
（ｂ）抗ＰＤ−１アンタゴニスト、抗ＬＡＧ−３アンタゴニストまたは抗ＩＣＯＳアゴニストのうちの少なくとも１つを患者へ投与することと
を含む、該方法。
１８．上記１７に記載の方法であって、
（ａ）少なくとも１つの腫瘍抗原のポリペプチドをコードする核酸を含む組換えアビポックスウイルスと；
（ｂ）抗ＰＤ−１アンタゴニスト、抗ＬＡＧ−３アンタゴニストまたは抗ＩＣＯＳアゴニストのうちの少なくとも１つと
を更に含む、該方法。
１９．前記アビポックスウイルスが鶏痘ウイルスである、上記１８に記載の方法。
２０．少なくとも１つの腫瘍抗原のポリペプチドをコードする核酸を含む１つまたは複数の後続する組換えオルソポックスウイルス、及び抗ＰＤ−１アンタゴニスト、抗ＬＡＧ−３アンタゴニストまたは抗ＩＣＯＳアゴニストのうちの少なくとも１つを、患者へ投与することを更に含む、上記１７に記載の方法。
２１．前記オルソポックスウイルスがワクシニアウイルスである、上記１７及び上記２０のいずれか一項に記載の方法。
２２．前記ワクシニアウイルスが修飾型ワクシニアＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）ウイルス及びＭＶＡ−ＢＮから選択される、上記２１に記載の方法。
２３．抗ＰＤ−１アンタゴニスト抗体を患者へ投与することを含む、上記１７〜２２のいずれか一項に記載の方法。
２４．抗ＬＡＧ−３アンタゴニスト抗体を患者へ投与することを含む、上記１７〜２２のいずれか一項に記載の方法。
２５．抗ＩＣＯＳアゴニスト抗体を患者へ投与することを含む、上記１７〜２２のいずれか一項に記載の方法。
２６．抗ＰＤ−１アンタゴニスト抗体及び抗ＬＡＧ−３アンタゴニスト抗体を患者へ投与することを含む、上記１７〜２２のいずれか一項に記載の方法。
２７．前記少なくとも１つの腫瘍抗原が、ＣＥＡ抗原、ＭＵＣ−１抗原、ＰＡＰ抗原、ＰＳＡ抗原またはＨＥＲ−２抗原である、上記１７〜２６のいずれか一項に記載の方法。
２８．前記癌治療が、前立腺癌、乳癌、肺癌、胃癌、膵臓癌、膀胱癌または卵巣癌に対して向けられる、上記１７〜２７のいずれか一項に記載の方法。
２９．前記少なくとも１つの腫瘍抗原がＣＥＡ抗原またはＭＵＣ−１抗原である、上記１７〜２６のいずれか一項に記載の方法。
３０．前記癌治療が、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、胃癌、膵臓癌、膀胱癌または卵巣癌に対して向けられる、上記２９に記載の方法。
３１．前記少なくとも１つの腫瘍抗原がＰＡＰ抗原である、上記１７〜２６のいずれか一項に記載の方法。
３２．前記少なくとも１つの腫瘍抗原がＰＳＡ抗原である、上記１７〜２６のいずれか一項に記載の方法。
３３．前記癌治療が前立腺癌に対して向けられる、上記３１または３２に記載の方法。
３４．前記少なくとも１つの腫瘍抗原がＨＥＲ−２抗原である、上記１７〜２６のいずれか一項に記載の方法。
３５．前記癌治療が乳癌に対して向けられる、上記３４に記載の方法。
３６．抗ＰＤ−１アンタゴニスト；抗ＬＡＧ−３アンタゴニストまたは抗ＩＣＯＳアゴニストのうちの少なくとも１つと組み合わせた、前記組換えオルソポックスウイルス及び前記組換えアビポックスウイルスが、異種プライム−ブーストレジメンの一部として投与され；該異種プライム−ブーストレジメンが、該アンタゴニストまたはアゴニストと組み合わせた該組換えオルソポックスウイルスの第１のプライム用量、及び該アンタゴニストまたはアゴニストと組み合わせた該組換えアビポックスウイルスの１つまたは複数の後続するブースト用量を含む、
上記１７〜１８及び上記２３〜３５のいずれか一項に記載の方法。
３７．前記異種プライム−ブーストレジメンがＰＲＯＳＴＶＡＣまたはＣＶ３０１である、上記３６に記載の方法。
３８．抗ＰＤ−１アンタゴニスト；抗ＬＡＧ−３抗体または抗ＩＣＯＳアゴニストのうちの少なくとも１つと組み合わせた、前記組換えオルソポックスウイルスが、同種プライム−ブーストレジメンの一部として投与され；
該同種プライム−ブーストレジメンが、該アンタゴニストまたはアゴニストと組み合わせた該組換えオルソポックスウイルスの第１のプライム用量、及び該アンタゴニストまたはアゴニストと組み合わせた同じ組換えオルソポックスウイルスの１つまたは複数の後続するブースト用量を含む、
上記１７〜３５のいずれか一項に記載の方法。
３９．ヒト癌患者の治療のための組み合わせ療法であって、
（ａ）各々が少なくとも１つの腫瘍抗原のポリペプチドをコードする核酸を含む組換えオルソポックスウイルスまたは組換えアビポックスウイルスと；
（ｂ）抗ＰＤ−１アンタゴニスト、抗ＬＡＧ−３アンタゴニストまたは抗ＩＣＯＳアゴニストと
を含む、該組合せ療法。
４０．前記組換えオルソポックスウイルスが、ワクシニアウイルス、修飾型ワクシニアＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）ウイルスまたはＭＶＡ−ＢＮから選択される、上記４０に記載の組み合わせ療法。
４１．前記組換えアビポックスウイルスが鶏痘ウイルスである、上記３９に記載の組み合わせ療法。
４２．（ｂ）が抗ＰＤ−１アンタゴニスト抗体を含む、上記３９〜４１のいずれか一項に記載の組み合わせ療法。
４３．（ｂ）が抗ＬＡＧ−３アンタゴニスト抗体を含む、上記３９〜４１のいずれか一項に記載の組み合わせ療法。
４４．（ｂ）が抗ＰＤ−１アンタゴニスト抗体及び抗ＬＡＧ−３アンタゴニスト抗体を含む、上記３９〜４１のいずれか一項に記載の組み合わせ療法。
４５．前記少なくとも１つの腫瘍抗原が、ＣＥＡ抗原、ＭＵＣ−１抗原、ＰＡＰ抗原、ＰＳＡ抗原及びＨＥＲ−２抗原から選択される、上記３９〜４４のいずれか一項に記載の組み合わせ療法。
４６．抗ＰＤ−１アンタゴニスト抗体、抗ＬＡＧ−３アンタゴニスト抗体または抗ＩＣＯＳアゴニスト抗体のうちの少なくとも１つと組み合わせた、各々が少なくとも１つの腫瘍抗原のポリペプチドをコードする核酸を含む１つまたは複数の後続する組換えオルソポックスウイルスまたはアビポックスウイルスを更に含む、上記３９〜４５のいずれか一項に記載の組み合わせ療法。
４７．ヒト癌患者における癌の治療のためのキットであって、（ａ）少なくとも１つの腫瘍抗原のポリペプチドをコードする核酸（ｎｕｃｌｅｉｃ）を含む組換えオルソポックスウイルスと；（ｂ）抗ＰＤ−１アンタゴニスト抗体、抗ＬＡＧ−３アンタゴニスト抗体または抗ＩＣＯＳアゴニスト抗体のうちの少なくとも１つとを含む、該キット。
４８．少なくとも１つの腫瘍抗原のポリペプチドをコードする核酸（ｎｕｃｌｅｉｃ）を含む組換えアビポックスウイルスを更に含む、上記４７に記載のキット。
４９．前記少なくとも１つの腫瘍抗原が、ＣＥＡ抗原、ＭＵＣ−１抗原、ＰＡＰ抗原、ＰＳＡ抗原ＨＥＲ−２抗原から選択される、上記４７または４８に記載のキット。
５０．ヒト癌患者の治療における使用のための医薬品または組成物であって、ａ少なくとも１つの腫瘍抗原のポリペプチドをコードする核酸を含む組換えオルソポックスウイルスと；（ｂ）抗ＰＤ−１アンタゴニスト、抗ＬＡＧ−３アンタゴニストまたは抗ＩＣＯＳアゴニストのうちの少なくとも１つとを含み、（ａ）及び（ｂ）が組み合わせとして投与される、該医薬品または組成物。
５１．上記５０に記載の医薬品または組成物であって、（ａ）少なくとも１つの腫瘍抗原のポリペプチドをコードする核酸を含む組換えアビポックスウイルスと；（ｂ）抗ＰＤ−１アンタゴニスト、抗ＬＡＧ−３アンタゴニストまたは抗ＩＣＯＳアゴニストのうちの少なくとも１つとを更に含み、（ａ）及び（ｂ）が組み合わせとして投与される、該医薬品または組成物。
５２．ヒト癌患者の治療のための医薬組成物または医薬品の調製における組成物の使用であって、該組成物が（ａ）少なくとも１つの腫瘍抗原のポリペプチドをコードする核酸を含む組換えオルソポックスウイルスと；（ｂ）抗ＰＤ−１アンタゴニスト、抗ＬＡＧ−３アンタゴニストまたは抗ＩＣＯＳアゴニストとを含む、該使用。
５３．前記組成物が、（ａ）少なくとも１つの腫瘍抗原のポリペプチドをコードする核酸を含む組換えアビポックスウイルスと；（ｂ）抗ＰＤ−１アンタゴニスト、抗ＬＡＧ−３アンタゴニストまたは抗ＩＣＯＳアゴニストのうちの少なくとも１つとを更に含み、（ａ）及び（ｂ）が組み合わせとして投与される、上記５２に記載の使用。
５４．前記組換えオルソポックスウイルスが、ワクシニアウイルス、修飾型ワクシニアＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）及びＭＶＡ−ＢＮから選択される、上記５０もしくは５１に記載の医薬品もしくは組成物または上記５２もしくは５３に記載の使用。
５５．前記組換えアビポックスウイルスが鶏痘ウイルスである、上記５１に記載の医薬品もしくは組成物または上記５３に記載の使用。
５６．前記少なくとも１つの腫瘍抗原が、ＣＥＡ抗原、ＭＵＣ−１抗原、ＰＡＰ抗原、ＰＳＡ抗原及びＨＥＲ−２抗原から選択される、上記５０〜５５に記載の医薬品または組成物。
【実施例】
【０１５４】
実施例１
ＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２の構築
培養で同時に感染及びトランスフェクションを行うことは、相同組換えがウイルスゲノムと組換えプラスミドとの間で起こることを可能にした。インサートを保有するウイルスを特徴づけし、単離し、ウイルスストックを調製した。
【０１５５】
プラスミドｐＢＮ２７９は、ＭＶＡ−ＢＮ中にも存在する配列（ＯＲＦ６４と６５との間の遺伝子間領域、ＩＧＲ６４／６５）を含有する。ｍＨＥＲ２配列は、ＭＶＡ−ＢＮウイルスゲノムの中への組換えを可能にするようにＭＶＡ−ＢＮ配列の間に挿入された。したがって、ポックスウイルスプロモーター（特に合成ワクシニアウイルスプロモーター（ＰｒＳ））の下流にｍＨＥＲ２配列を含有するプラスミドを構築した。プラスミドは、薬物耐性遺伝子（グアニン−キサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ；ＥｃｏＧＰＴ）の上流にＰｒＳプロモーター、及び単量体赤色蛍光タンパク質１（ｍＲＦＰ１）の上流にＰｒＳプロモーターを含む選択カセットも含有していた。
【０１５６】
ＨＥＲ−２配列をｐ２及びｐ３０の破傷風毒素エピトープをコードするヌクレオチド配列の添加によって修飾して、それに対する免疫応答を増加させた（ｍＨＥＲ２）。ｍＨＥＲ２がＭＶＡ−ＢＮゲノムの中へ挿入され、選択カセットが除去された後に、ウイルス「挿入領域」は、以下の構造を有していた（周囲のウイルスリーディングフレームと比較して、反対の方向性で示される）。
【０１５７】
ＰｒＳプロモーター−ｍＨＥＲ２配列。挿入領域は、細菌組換えプラスミドｐＢＮ２７９中でのように、ＭＶＡ−ＢＮ遺伝子間領域配列６４／６５（隣接部１（６４）及び隣接部２（６５））が隣接していた。コンストラクトのヌクレオチド配列を以下に示す。
【０１５８】
【表１】
0006535337.tif 000002
【０１５９】
（配列番号：１）。
【０１６０】
ＨＥＲ２開始コドン及び終止コドンを太字で示す。隣接配列はイタリック体で示す。隣接部１（６４）：４５１〜１０５２、下線、ＨＥＲ２：３２９８〜１２４７（太字）、開始：３２９８〜３２９６（太字＋下線）、終止：１２４９〜１２４７（太字＋下線）、ＰｒＳプロモーター：３４４２〜３４０３（イタリック体＋下線）、隣接部（６５）：３４６３〜４０６５（下線）．
【０１６１】
コードされたｍＨＥＲ２ポリペプチドの翻訳を以下に示す。
【０１６２】
【表２】
0006535337.tif 000003
【０１６３】
（配列番号：２）。
【０１６４】
ｐ２及びｐ３０の破傷風毒素エピトープの配列を太字で示す。
【０１６５】
ＣＥＦ培養をＭＶＡ−ＢＮにより接種し、さらにｐＢＮ２７９プラスミドＤＮＡによりトランスフェクションした。そして、これらの細胞培養からのサンプルを、選択薬物を含有する培地中のＣＥＦ培養へと接種し、ｍＲＦＰ１発現ウイルスクローンをプラーク精製によって単離した。選択薬物の存在下において増殖しｍＲＦＰ１を発現するウイルスストックを、ＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２と表記した。ＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２の生成及びウイルスストックの調製は９回の連続的な継代を伴っており、４回のプラーク精製が含まれる。
【０１６６】
ＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２を選択薬物の非存在下においてＣＥＦ細胞培養中で継代した。選択薬物の非存在は、挿入された配列からの選択遺伝子（ｇｐｔ及びｍＲＦＰ１）をコードする領域及び関連するプロモーター（選択カセット）の喪失を可能にした。選択カセットの喪失をもたらす組換えは、プラスミドｐＢＮ２７９中の選択カセットに隣接する隣接部１（Ｆ１）領域及びその領域のサブセクション（Ｆ１反復（Ｆ１  ｒｐｔ））によって媒介される。これらの重複配列が含まれて、選択カセットの喪失をもたらす組換えを媒介し、６４／６５遺伝子間領域中に挿入されたｍＨＥＲ２配列のみを残す。
【０１６７】
選択カセットを欠損するプラーク精製ウイルスを調製した。かかる調製は１５回の継代を伴っており、５回のプラーク精製が含まれる。
【０１６８】
ＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２ストック中のｍＨＥＲ２配列の存在及び親ＭＶＡ−ＢＮウイルスの非存在をＰＣＲ分析によって確認し、ネステッドＰＣＲを使用して選択カセット（ｇｐｔ遺伝子及びｍＲＦＰ１遺伝子）の非存在を検証した。
【０１６９】
ｍＨＥＲ２タンパク質の発現を、ＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２によりインビトロで接種した細胞中で実証した。
【０１７０】
実施例２
ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２及び抗体により処理されたマウス中での抗腫瘍応答の誘導
メスＢＡＬＢ／ｃマウス（６〜８週齢、約２０ｇ）を、Ｓｉｍｏｎｓｅｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｇｉｌｒｏｙ、ＣＡから購入した。実験的肺転移モデルのために、３００μＬのＤＰＢＳ中の５．０×１０４のＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞（肺中で腫瘍を形成する）をマウスに静脈内移植した。固形腫瘍モデルにおいて、１００μＬのＤＰＢＳ中の１．０×１０５のＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞をマウスの背中に皮内移植した。腫瘍を週に２回測定し、腫瘍体積を以下の式に従って計算した。腫瘍体積（ｍｍ３）＝（長さ×幅２）／２。
【０１７１】
以下の抗体、抗ＩＣＯＳ（クローン１７Ｇ９）、抗ＣＴＬＡ−４（９Ｄ９）、抗ＰＤ−１（ＲＭＰ１−１４）及び抗ＬＡＧ−３（Ｃ９Ｂ７Ｗ）を、Ｂｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ（Ｗｅｓｔ，Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）から購入した。すべての抗体を、図の凡例中で指示された日に１００μＬのＰＢＳ中で１マウスあたり２００μｇで腹腔内注射した。ウイルス処理について、マウスを、尾部傷付処理（ｔ．ｓ．、Ｂａｖａｒｉａｎ  Ｎｏｒｄｉｃ［ＢＮ］、Ｍａｒｔｉｎｓｒｉｅｄ、Ｇｅｒｍａｎｙによって行われる）によって７．１μＬの１．０×１０７感染単位のＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２で処理した。
【０１７２】
Ｍａｎｄｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ（２０１２）６１：１９−２９中で記述されるように、血清抗体価はＥＬＩＳＡによって、及びＩＦＮ−γはＥＬＩＳＰＯＴによって、決定した。全血、脾臓及び肺をＦＡＣＳ分析のために収集した。肺を１〜２ｍｍの片へ切断し、１０％のＦＢＳ、５０Ｕ／ｍＬのＤＮＡｓｅＩ及び２５０Ｕ／ｍＬのコラゲナーゼＩ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｌａｋｅｗｏｏｄ、ＮＪ）を含有するＤＭＥＭ中で３７℃で１時間インキュベーションした。肺、脾細胞及び全血からの赤色血球を溶解し、単一細胞懸濁液をＢｉｏｌｅｇｅｎｄ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）から購入した抗体、ＣＤ３ｅ（１４５−２ｃ１１または５００Ａ２）、ＣＤ４（ＲＭ４−５）、ＣＤ８（５３−６．７）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ（７Ｅ．１７Ｇ９））、ＣＤ２７９（ＰＤ−１、２９Ｆ．１ＡＡ１２）及びＣＤ２２３（ＬＡＧ−３、Ｃ９Ｂ７Ｗ）により標準的なプロトコルに従って染色した。製造者の説明書（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）に従ってＦｏｘＰ３／転写因子染色緩衝液セット及びＦｏｘＰ３抗体（ＦＪＫ１６ｓ）を使用して、調節性Ｔ細胞を同定した。
【０１７３】
ＷｉｎｄｏｗｓのためのＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍバージョン６．０１（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を使用して、図の凡例中で記述されるように、すべての統計的分析を遂行した。
【０１７４】
実施例３
ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２処理は、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ４＋Ｔ細胞上のＩＣＯＳを増加させる
ナイーブの腫瘍なしのマウスを、１日目または１及び１５日目にＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２（１０７感染単位、ｔ．ｓ．）により処理した。器官は各々のタイムポイントで３匹のマウスからのものである。図１中で示されるように、ＭＶ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２による処理は、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ４＋Ｔ細胞上のＩＣＯＳの発現を増加させた。
【０１７５】
実施例４
抗ＩＣＯＳと共にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２により処理されたマウスにおける抗腫瘍応答の誘導。
Ｂａｌｂ／ｃマウスに１日目に１０５のＣＴ２６−ＨＥＲ２細胞を皮内移植した。１及び１５日目に尾部傷付処理（ｔ．ｓ．）によって１０７感染単位のＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２、ならびに１、４、８、１１、１５、１８、２２及び２５日目に抗ＩＣＯＳ（２００μｇ、腹腔内）により、マウスを処理した。＊＊  ｐ＜０．０１、＊＊＊＊  ｐ＜０．０００１、Ｔｕｋｅｙの事後多重比較検定による反復測定の二元配置ＡＮＯＶＡ。図２中で示されるように、ＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２単独と比較して、腫瘍体積はＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２＋抗ＩＣＯＳにより有意に減少した。
【０１７６】
実施例５
抗ＣＴＬＡ−４と共にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２により処理されたマウスにおける抗腫瘍応答の誘導。
ＣＴ２６−ＨＥＲ−２の実験的肺転移モデルにおいて、１日目に５×１０４のＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞（肺中で腫瘍を形成する）をマウスに静脈内移植した。マウスを、４及び１８日目にＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２（１０７感染単位、ｔ．ｓ．）ならびに３及び１７日目に抗ＣＴＬＡ−４（２００μｇ、腹腔内）により処理した。＊＊＊＊  ｐ＜０．０００１、ログランク検定。図３中で示されるように、ＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２及び抗ＣＴＬＡ−４による処理は粗生存率を増加させることに効果的であった。
【０１７７】
実施例６
ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２は２５日目までに肺腫瘍量を有意に低減させる
１日目に５×１０４のＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞（肺中で腫瘍を形成する）をマウスに静脈内移植した。マウスを、４及び１８日目にＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２（１０７感染単位、ｔ．ｓ．）ならびに３及び１７日目に抗ＣＴＬＡ−４（２００μｇ、腹腔内）により処理した。Ａ）２５日目に、マウスを安楽死させ、気管を介してトリパンブルーを潅流した。肺を取り出し、過酸化水素中に短時間沈め、ＰＢＳ中で洗浄した。腫瘍は、無処理マウス及び抗ＣＴＬＡ−４処理マウスにおいて小さな塊として目視可能であった。ＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２により処理されたマウスの肺中で目視可能な腫瘍はなかった。スケールバーは１ｃｍと等しい。Ｂ）２５日目の肺重量。＊＊＊＊  ｐ＜０．０００１、Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較検定による一元配置ＡＮＯＶＡ。結果を図４中で示す。
【０１７８】
実施例７
肺のＩＣＯＳはＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２処理または肺腫瘍により増加する。
１日目に５×１０４のＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞（肺中で腫瘍を形成する）をマウスに静脈内移植した。マウスを、４及び１８日目にＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２（１０７感染単位、ｔ．ｓ．）ならびに３及び１７日目に抗ＣＴＬＡ−４（２００μｇ、腹腔内）により処理した。各々のタイムポイントで３匹のマウスからの器官を分析（Ａ及びＢ）のためにプールした。データは、１群あたり３〜４匹のマウスによる３つの独立した実験からの平均±ＳＥＭとして示す（Ｃ及びＤ）。図５中で示されるように、肺のＩＣＯＳはＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２による処理に際して増加した。
【０１７９】
実施例８
腫瘍を持ったマウスにおいて、ＩＣＯＳ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞はＦｏｘＰ３＋である
１日目に５×１０４のＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞（肺中で腫瘍を形成する）をマウスに静脈内移植した。マウスを、４及び１８日目にＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２（１０７感染単位、ｔ．ｓ．）ならびに３及び１７日目に抗ＣＴＬＡ−４（２００μｇ、腹腔内）により処理した。各々のタイムポイントで３匹のマウスからの器官を分析（Ａ及びＢ）のためにプールした。データは、１群あたり３〜４匹のマウスによる３つの独立した実験からの平均±ＳＥＭとして示す（Ｃ及びＤ）。図６中で示されるように、ＩＣＯＳの発現は、腫瘍を持った対照マウス及び腫瘍量が多い抗ＣＴＬＡ−４処理マウスにおいて、ＦｏｘＰ３＋  Ｔｒｅｇ及びＦｏｘＰ３−  Ｔｅｆｆ細胞の両方で増加した。ＩＣＯＳは、ＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２処理後のＦｏｘＰ３−  Ｔｅｆｆ細胞上でのみ増加し、抗ＣＴＬＡ−４との組み合わせ後により顕著であった。
【０１８０】
実施例９
抗ＣＴＬＡ−４とＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２はエフェクターＴ細胞対調節性Ｔ細胞の比を増加させる
１日目に５×１０４のＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞（肺中で腫瘍を形成する）をマウスに静脈内移植した。マウスを、４及び１８日目にＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２（１０７感染単位、ｔ．ｓ．）ならびに３及び１７日目に抗ＣＴＬＡ−４（２００μｇ、腹腔内）により処理した。各々のタイムポイントで３匹のマウスからの器官を分析（Ａ及びＢ）のためにプールした。データは、１群あたり３〜４匹のマウスによる３つの独立した実験からの平均±ＳＥＭとして示す（Ｃ及びＤ）。図７中で示されるように、ＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２及び抗ＣＴＬＡ−４による処理は、脾臓及び血液に加えて腫瘍部位において、ＣＤ８及びＣＤ４のエフェクターＴ細胞対調節性Ｔ細胞の比の両方を増加させた。
【０１８１】
実施例１０
ＰＤ−１の発現はＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２処理により増加する
ナイーブの腫瘍なしのマウスを、１日目または１及び１５日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２（１０７感染単位、ｔ．ｓ．）により処理した。器官は各々のタイムポイントで３匹のマウスからのものである。図８中で示されるように、ＭＶ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２による処理は、ＣＤ８＋及びＣＤ４＋のＴ細胞上のＰＤ−１の発現を増加させた。
【０１８２】
実施例１１
ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２及び抗ＰＤ１により処理されたマウスにおける抗腫瘍応答の誘導
１日目に１０５のＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞をＢａｌｂ／ｃマウスに、皮内移植した。１及び１５日目に尾部傷付処理（ｔ．ｓ．）によって１０７感染単位のＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２、ならびに１及び１５日目に抗ＰＤ１（２００μｇ、腹腔内）により、マウスを処理した。＊＊＊＊  ｐ＜０．０００１、Ｔｕｋｅｙの事後多重比較検定による反復測定の二元配置ＡＮＯＶＡ。図９中で示されるように、抗ＰＤ−１単独による処理と比較して、腫瘍体積はＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２＋抗ＰＤ１により有意に減少し、生存はＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２単独と比較して有意に増加した。
【０１８３】
実施例１２
ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２へのＬＡＧ−３免疫応答
ナイーブの腫瘍なしのマウスを、１日目または１及び１５日目にＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２（１０７感染単位、ｔ．ｓ．）により処理した。器官は各々のタイムポイントで３匹のマウスからのものである。図１０中で示されるように、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ４＋Ｔ細胞上でＬＡＧ−３が発現される。
【０１８４】
実施例１３
ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２及び抗ＬＡＧ−３により処理されたマウスにおける抗腫瘍応答の誘導
１日目に１０５のＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞をＢａｌｂ／ｃマウスに、皮内移植した。１及び１５日目に尾部傷付処理（ｔ．ｓ．）によって１０７感染単位のＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２、ならびに１及び１５日目に抗ＬＡＧ−３（２００μｇ、腹腔内）により、マウスを処理した。＊＊＊＊  ｐ＜０．０００１、Ｔｕｋｅｙの事後多重比較検定による反復測定の二元配置ＡＮＯＶＡ。図１１中で示されるように、ＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２単独及び抗ＬＡＧ３単独と比較して、抗ＬＡＧ３と組み合わせたＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２による処理は粗生存率を増加させた。
【０１８５】
実施例１４
ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２ならびに抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３により処理されたマウスにおける抗腫瘍応答の誘導
１日目に１０５のＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞をＢａｌｂ／ｃマウスに、皮内移植した。図１２において、１及び１５日目に尾部傷付処理（ｔ．ｓ．）によって１０７感染単位のＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２、ならびに１及び１５日目に抗ＰＤ１及び抗ＬＡＧ−３（各々２００μｇ、腹腔内）により、マウスを処理した。図１３において、４及び１８日目にｔ．ｓ．によって１０７感染単位のＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２、ならびに４及び１８日目に抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３（２００μｇ、腹腔内）により、マウスを処理した。＊＊＊＊  ｐ＜０．０００１、Ｔｕｋｅｙの事後多重比較検定による反復測定の二元配置ＡＮＯＶＡ。図１２及び１３中で示されるように、ＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２単独ならびに抗ＰＤ１及び抗ＬＡＧ３単独と比較して、抗ＰＤ１及び抗ＬＡＧ３の両方と組み合わせたＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２による処理は、腫瘍体積を減少させ（図１２Ａ及び１３Ａ）、粗生存率を増加させた（図１２Ｂ及び１３Ｂ）。
【０１８６】
実施例１５
ＭＶＡ−ＢＮ−ＨＥＲ２ならびに抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３により処理されたマウスにおける抗腫瘍応答の誘導
ＣＴ２６−ＨＥＲ−２の実験的肺転移モデルにおいて、１日目に５×１０４のＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞（肺中で腫瘍を形成する）をマウスに静脈内移植した。マウスを、４及び１８日目にＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２（１０７感染単位、ｔ．ｓ．）ならびに４及び１８日目に抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３（各々２００μｇ、腹腔内）により処理した。＊  Ｐ＜０．０５、＊＊＊  ｐ＜０．００１、ログランク検定。図１４中で示されるように、抗体ＰＤ１及び抗ＬＡＧ３単独と比較して、抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ３と組み合わせたＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２による処理は粗生存率を増加させた。
【０１８７】
実施例１６
ＥＬＩＳＰＯＴ  ＭＶＡ応答
１日目に１０５のＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞をＢａｌｂ／ｃマウスに、皮内移植した。４及び１８日目に尾部傷付処理（ｔ．ｓ．）によって１０７感染単位のＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２、ならびに４及び１８日目に抗ＰＤ１及び抗ＬＡＧ−３（２００μｇ、腹腔内）により、マウスを処理した。最後の処理後に４週間、特異的なＴ細胞応答は、Ｍａｎｄｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ（２０１２）６１：１９−２９中で記述されるようにＩＦＮ−γのＥＬＩＳＰＯＴによって決定した。図１５中で示されるように、抗ＰＤ１及び抗ＬＡＧ３単独と比較して、抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ３と組み合わせたＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２による処理は、腫瘍抗原特異的なＩＦＮ−γレベルを増加させた。
【０１８８】
実施例１７
抗体力価
１日目に１０５のＣＴ２６−ＨＥＲ−２細胞をＢａｌｂ／ｃマウスに、皮内移植した。４及び１８日目に尾部傷付処理（ｔ．ｓ．）によって１０７感染単位のＭＶＡ−ＢＮ−ｍＨＥＲ２、ならびに４及び１８日目に抗ＰＤ１及び抗ＬＡＧ−３（２００μｇ、腹腔内）により、マウスを処理した。Ｍａｎｄｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ（２０１２）６１：１９−２９．２中で記述されるように、血清抗体価はＥＬＩＳＡによって決定した。結果を図１６中で示す。
【０１８９】
実施例１８
ＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１及び抗ＰＤ−１により処理されたマウスにおける抗腫瘍応答の誘導
１日目にメスＣ５７／ＢＬ６マウス（６〜８週齢、約２０ｇ、Ｓｉｍｏｎｓｅｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｇｉｌｒｏｙ、ＣＡ）に、ＭＣ３８−ＣＥＡ細胞（２×１０５、皮内、後部脇腹中）を移植した。マウスを、１及び１５日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１（１０７感染単位、皮下、尾部根元上部）により処理した。１及び１５日目に抗ＰＤ−１（２００μｇ、腹腔内）によりマウスを処理した。結果を図１７中で示す。＊  ｐ＜０．０５、＊＊＊＊  ｐ＜０．０００１、Ｔｕｋｅｙの事後多重比較検定による反復測定の二元配置ＡＮＯＶＡ。
【０１９０】
実施例１９
ＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１及び抗ＬＡＧ−３により処理されたマウスにおける抗腫瘍応答の誘導
１日目にメスＣ５７ＢＬ／６マウス（６〜８週齢、約２０ｇ、Ｓｉｍｏｎｓｅｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｇｉｌｒｏｙ、ＣＡ）に、ＭＣ３８−ＣＥＡ細胞（２×１０５、皮内、後部脇腹中）を移植した。マウスを、１及び１５日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１（１０７感染単位、皮下、尾部根元上部）により処理した。１及び１５日目に抗ＬＡＧ−３（２００μｇ、腹腔内）によりマウスを処理した。結果を図１８中で示す。＊＊  ｐ＜０．０１、＊＊＊  ｐ＜０．００１、Ｔｕｋｅｙの事後多重比較検定による反復測定の二元配置ＡＮＯＶＡ。
【０１９１】
実施例２０
ＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１ならびに抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３により処理されたマウスにおける抗腫瘍応答の誘導
１日目にメスＣ５７ＢＬ／６マウス（６〜８週齢、約２０ｇ、Ｓｉｍｏｎｓｅｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｇｉｌｒｏｙ、ＣＡ）に、ＭＣ３８−ＣＥＡ細胞（２×１０５、皮内、後部脇腹中）を移植した。マウスを、１及び１５日目にＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１（１０７感染単位、皮下、尾部根元上部）により処理した。１及び１５日目に抗ＰＤ１及び抗ＬＡＧ−３（各々２００μｇ、腹腔内）によりマウスを処理した。＊＊  ｐ＜０．０１、＊＊＊＊  ｐ＜０．０００１、Ｔｕｋｅｙの事後多重比較検定による反復測定の二元配置ＡＮＯＶＡ。図１９中で示されるように、抗ＰＤ１及び抗ＬＡＧ３単独またはＭＶＡ−ＢＮ−ＣＶ３０１単独と比較して、ＭＶＡ−ＢＮ  ＣＶ３０１ならびに抗ＰＤ１及び抗ＬＡＧ３の組み合わせ処理は、腫瘍体積の減少をもたらした。
【０１９２】
実施例２１
ＰＲＯＳＴＶＡＣ及び抗ＰＤ−１により処理されたマウスにおける抗腫瘍応答の誘導
１日目にオスＢＡＬＢ／ｃマウス（６〜８週齢、約２０ｇ、Ｓｉｍｏｎｓｅｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｇｉｌｒｏｙ、ＣＡ）に、Ｅ６細胞（ＲＭ１１−ＰＳＡ、１．５×１０５、皮内、後部脇腹中）を移植した。マウスを、１日目にＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｖ（２×１０７感染単位、皮下、尾部根元）ならびに８及び１５日目にＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｆ（１０８感染単位、皮下、尾部根元）により処理した。１及び１５日目に抗ＰＤ−１（２００μｇ、腹腔内）によりマウスを処理した。処理の結果を図２０中で示す。
【０１９３】
実施例２２
ＰＲＯＳＴＶＡＣ及び抗ＬＡＧ−３により処理されたマウスにおける抗腫瘍応答の誘導
１日目にオスＢＡＬＢ／ｃマウス（６〜８週齢、約２０ｇ、Ｓｉｍｏｎｓｅｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｇｉｌｒｏｙ、ＣＡ）に、Ｅ６細胞（ＲＭ１１−ＰＳＡ、１．５×１０５、皮内、後部脇腹中）を移植した。マウスを、１日目にＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｖ（２×１０７感染単位、皮下、尾部根元）ならびに８及び１５日目にＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｆ（１０８感染単位、皮下、尾部根元）により処理した。１及び１５日目に抗ＬＡＧ−３（２００μｇ、腹腔内）によりマウスを処理した。処理の結果を図２１中で示す。
【０１９４】
実施例２３
ＰＲＯＳＴＶＡＣならびに抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３により処理されたマウスにおける抗腫瘍応答の誘導
１日目にオスＢＡＬＢ／ｃマウス（６〜８週齢、約２０ｇ、Ｓｉｍｏｎｓｅｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｇｉｌｒｏｙ、ＣＡ）に、Ｅ６細胞（ＲＭ１１−ＰＳＡ、１．５×１０５、皮内、後部脇腹中）を移植した。マウスを、１日目にＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｖ（２×１０７感染単位、皮下、尾部根元）ならびに８及び１５日目にＰＲＯＳＴＶＡＣ−Ｆ（１０８感染単位、皮下、尾部根元）により処理した。１及び１５日目に抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３（それぞれ２００μｇ、腹腔内）によりマウスを処理した。図２２中で示されるように、抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３単独またはＰＲＯＳＴＶＡＣ単独と比較して、ＰＲＯＳＴＶＡＣと抗ＰＤ−１及び抗ＬＡＧ−３との組み合わせ処理は、腫瘍体積の減少をもたらした。
【０１９５】
実施例２４
ＰＡＮＶＡＣ（ＣＶ３０１−Ｖ／Ｆ）及び抗ＰＤ−１により処理されたマウスにおける抗腫瘍応答の誘導
１日目に、ヒトＣＥＡについてのトランスジェニックのメスＣ５７／ＢＬ６マウス（Ｔｇ（ＣＥＡ）１８／Ｂ６ｊ、Ｃｉｔｙ  ｏｆ  Ｈｏｐｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ＣｅｎｔｅｒのＪａｃｋ  Ｓｈｉｖｅｌｙから受け取った、Ｃｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５８：１４６９ｆｆ．，１９９８も参照）に、ＭＣ３８−ＣＥＡ細胞（３．０×１０５、皮内、後部脇腹中）を移植した。マウスを、４日目にＣＶ３０１−ワクシニア（ＣＶ３０１−Ｖ）（ＰＡＮＶＡＣ−Ｖとしても公知である）（２×１０７感染単位、皮下、尾部根元）、ならびに１１及び１８日目にＣＶ３０１−鶏痘（ＣＶ３０１−Ｆ）（ＰＡＮＶＡＣ−Ｆとしても公知である）（１０８感染単位、皮下、尾部根元）により処理した。ＣＶ３０１−Ｖ／Ｆ処理を、４、１１及び１８日目に鶏痘ＧＭ−ＣＳＦ（１０７感染単位）と混合した。４、１１及び１８日目に抗ＰＤ−１（２００μｇ、腹腔内）によりマウスを処理した。＊＊  ｐ＜０．０１、＊＊＊＊  ｐ＜０．０００１、Ｔｕｋｅｙの事後多重比較検定による反復測定の二元配置ＡＮＯＶＡ。図２３中で示されるように、対照マウスと比較して、ＣＶ３０１−Ｖ／Ｆと抗ＰＤ−１との組み合わせ処理は腫瘍増殖を遅延させた。
【０１９６】
本明細書において記述される方法または組成物の正確な詳細は、記述された発明の趣旨から逸脱せずに、変更または修飾され得ることは明白であろう。以下の請求項の範囲及び趣旨内にあるすべてのかかる修飾及び変更が請求される。
【図１】
0006535337.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【配列表】
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