(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
トランス−ジ−Ｎ−ピコリネートテトラアザシクロアルカン配位子と金属カチオンとの錯体形成により生じたキレートであって、
前記配位子が下記式Ａ：
【化１】
0006525968.tif 000010
（式中、
ｎは、０と等しく、
ＲおよびＲ’は、メチル基である。）
によって表され、
前記金属カチオンが、鉛（ＩＩ）およびビスマス（ＩＩＩ）からなる群より選択される金属のカチオンである、キレート。
【請求項２】
前記金属が、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉおよび２１３Ｂｉからなる群より選択される放射性同位元素であることを特徴とする、請求項１に記載のキレート。
【請求項３】
鉛（ＩＩ）を捕捉するための、請求項１または２に記載の配位子の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は化学の分野に関する。
【０００２】
より具体的には、本発明は、テトラアザシクロアルカン型の配位子の金属カチオンとの錯体形成の結果として生じるキレートに関する。
【０００３】
特に本発明は、ビスマス（ＩＩＩ）および鉛（ＩＩ）と高い親和性を有するテトラアザシクロアルカン型の配位子ベースのキレートに関し、前記配位子は、これらの元素のいずれか一方と錯体形成することができる。
【０００４】
本発明は、特にアルファ線放射免疫療法の分野に応用することができる。
【背景技術】
【０００５】
鉛は、大量に使用されている元素であるが、生物に吸収されてその組織に蓄積され、組織を損傷させる可能性がある汚染物質である。鉛中毒の症例の大半は、鉛（ＩＩ）の吸入または摂取に起因しており、これによって、特に乳幼児が影響を受ける。それは、乳幼児は、摂取した鉛を最大５０％まで吸収する可能性があり、重篤な神経学的および血液学的な障害を引き起こすためである。鉛は、胃腸管内に摂取された後、軟部組織、特に脳、腎臓および肝臓に集まり、そこでタンパク質、核酸および細胞膜にあるチオールおよびリン酸基と結合する。このように、鉛（ＩＩ）を捕捉できるキレートを探索することが主な課題であり、この金属イオンによって効率的に錯体を形成することは、依然として錯体化学の主要な側面の１つである。
【０００６】
アルファ線放射免疫療法それ自体は、がんの治療を対象とした治療的処置の技術であるが、今のところ効果的な臨床応用は示されていない。
【０００７】
このような技術は、モノクローナル抗体等の生物学的なベクターと結合した、アルファ線を放射する放射性同位元素を含んだ放射性医薬品を実現する。このようにしてベクターと結合した放射性医薬品は、これらの抗原特性によって、可能な限り正確に特定の主要な細胞を標的として、特にがん細胞を標的として破壊することを目的とする。
【０００８】
ベータ線とは異なり、アルファ線はヒト組織への短い経路を有する。これにより、そのエネルギーはより狭い領域に吸収され、健康な組織の最小限の損傷でより効率的ながん細胞の破壊をもたらす（T.M. Behr, M. Behe, M.G. Stabin, E. Wehrmann, C. Apostolidis, R. Molinet, F. Strutz, A. Fayyazi, E. Wieland, S. Gratz, L. Koch, D.M. Goldenberg, W. Becker, Cancer Res., 1999, 59, 2635-2643）。
【０００９】
このように、アルファ線の放射源は、小さな腫瘍、播種性の疾患または微小転移性の疾患の症例の特定の治療に理想的であるため、したがって好適である。
【００１０】
アルファ線放射免疫療法タイプの用途として、現在使用されているアルファ線の放射源のうち、特に２１２Ｂｉおよび２１３Ｂｉ放射源が研究されている。
【００１１】
しかしながら、このような放射源の使用は、現在いくつかの障害に直面している。
【００１２】
第一に、２１２Ｂｉおよび２１３Ｂｉ放射源は、多くの放射性金属のように、毒性が高いため遊離イオンの形態では使用できない。
【００１３】
また、２１２Ｂｉおよび２１３Ｂｉの半減期（それぞれ、ｔ１／２＝６０．６分およびｔ１／２＝４５．６分）は、確実にこれらを効率的に準備して、その標的に向けて輸送できるほど長いものではない。
【００１４】
さらに、この金属の塩は、ｐＨ値が２を超える水溶液に入れられると、迅速に水酸化ビスマスが沈殿することとなる。
【００１５】
これら課題のうちの一つについては、テトラアアザシクロアルカン大環状の配位子によって放射性の金属カチオンを閉じ込め、カチオンの毒性を消すキレートを形成する方法が知られている。大環状のパターンは、これらの４つの窒素原子により機能化させることができ、４つの付加的なキレート基を使用することによって、金属カチオンを非常に安定したパターンで配位結合させる。
【００１６】
したがって、特にＤＯＴＡＭおよびＤＯＴＡなどの１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカンおよび１，４，７，１０−テトラザシクロドデカンの誘導体は、配位子として数々の放射性の金属カチオンと効率的に錯体を形成することが知られている配位子。
【化１】
0006525968.tif 000002
【化２】
0006525968.tif 000003
【００１７】
これらはまた、（ＤＯＴＡ−Ｇｄ３＋）ＭＲＩに対する造影剤（A. E. Merbach, E. Toth, ed., The Chemistry of Contrast Agents in Medical Magnetic Resonance Imaging, John Wiley & Sons Ltd, Chichester, 2001）または生物発光マーカーとして、医療分野にて応用されてきた。これらはまた、銅６４、ガリウム６８、インジウム１１１、テクネチウム９９ｍ等の放射性核種の方向付け(vectoring)に関する核医学において集中的に研究されている。
【００１８】
しかしながら、アルファ線放射免疫療法等の臨床応用に対するこのような配位子の潜在的な価値は、極めて限られたものである。
【００１９】
実際に、放射性同位元素としての錯体形成の反応速度は、目的とする生理学的な部位に迅速に運搬され得る放射性の金属キレートを得ることを考慮すると、遅すぎる。また、これらのキレートは、インビボにおける安定性に課題を残している。さらに、これらの配位子の大員環(macrocycles)には、治療のために目的の細胞に放射性同位元素を運搬するモノクローナル抗体等の生物学的なベクターとカップリングする官能基を枝状につなぐための、結合のない窒素原子が存在しない。
【００２０】
前述した第２の課題を克服しようとするために、数々の調査研究が、親同位元素、すなわち、２１２Ｂｉの半減期よりもはるかに長い約１１時間の半減期を有する２１２Ｐｂのβ崩壊後に２１２Ｂｉを形成する可能性を用いようと行われている。
【００２１】
しかしながら、「インサイチュの２１２Ｐｂ／２１２Ｂｉジェネレータ」アプローチとして知られるこのアプローチは、鉛およびビスマスの両方と錯体形成することができる配位子の使用を必要としている。現在のところ、多数の鉛（ＩＩ）キレート構造はあるものの、安定してビスマス（ＩＩＩ）を捕捉できるものは、はるかにまれである。結果として、これら２種類の金属に対して高い親和性を示す配位子の数はさらに少なくなる。
【００２２】
よって、ポリアザ大環状の配位子、すなわち、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカンまたは１，４，７，１０−テトラザシクロドデカン型のテトラアザシクロアルカン配位子、ならびにそれらの不飽和類似体、特にバスケットハンドル型カルボキシレートポルフィリンの鉛およびビスマスとの親和性が研究されてきている（Z. Halime, M. Lachkar, B. Boitrel, Biochimie, 2009, 91, 1318-1320）。
【００２３】
これらの研究によって、ポルフィリン誘導体のうちの１つ、カルボキシレートペンダントアームにより官能化された２つのバスケットハンドルを有する誘導体のみが鉛およびビスマスに対して有望な親和性をもつことが示された。しかしながら、これらの研究も、鉛の存在下で二金属錯体が得られることを示しているに過ぎない。
【００２４】
さらに、これらの配位子を合成するために使用される方法は、非常に長く、採用することが難しい。また、特に、その収率は低く、これによってクロマトグラフィー精製カラムと大量の溶媒の使用が必要となってしまう。
【００２５】
とりわけ、このようなポルフィリン誘導体の鉛との錯体形成により得られるキレートの水性媒体に対する溶解度は、ほぼゼロである。すなわち、これらは前述した第３の課題に対するいかなる解決策も提供するものではない。
【００２６】
したがって、これら先行技術に記載された配位子は、アルファ線放射免疫療法等の臨床応用に必要とされる不可欠な条件に対処できそうなキレートを得るための手段として採用することはできない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２７】
本発明の目的は、ビスマス（ＩＩＩ）および鉛（ＩＩ）の両方に対して高い親和性を示す配位子の錯体形成によって得られる特定のキレートを提供することである。
【００２８】
特に、本発明の目的は、少なくとも特定の実施形態において、高い安定性を有するこのようなキレートを提供することである。
【００２９】
また、本発明のさらに別の目的は、水性媒体に可溶性のこのようなキレートを提供することである。
【００３０】
また、本発明のさらに別の目的は、少なくとも特定の実施形態において、インサイチュの２１２Ｐｂ／２１２Ｂｉまたは２１３Ｂｉジェネレータとの関係において応用することができるこのようなキレートを提供することである。
【００３１】
また、本発明のさらに別の目的は、少なくとも特定の実施形態において、特に、鉛（ＩＩ）を捕捉するため、またはアルファ線放射免疫療法に応用されやすいこのようなキレートを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００３２】
本発明によれば、こうした様々な目的または少なくともその一部を達成することができる。本発明は、トランス−ジ−Ｎ−ピコリネートテトラアザシクロアルカン配位子(a trans-diN-picolinate tetraazacycloalkane ligand)の金属カチオンとの錯体形成の結果として生じるキレートに関し、
前記配位子は式Ａ：
【化３】
0006525968.tif 000004
（ここで、前記式中、
ｎは、０または１と等しく、
Ｒは、ＨまたはＣ１〜Ｃ１８アルキル基であり、
Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ１８アルキル基である。）
に対応し、
前記金属カチオンは、鉛（ＩＩ）およびビスマス（ＩＩＩ）からなる群より選択される金属のカチオンである。
また、ＲまたはＲ’がアルキル基の場合、ＲまたはＲ’は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基であることが好ましい。
【００３３】
本発明は、ピコリネートペンダントアームを有する１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカンまたは１，４，７，１０−テトラザシクロドデカンベースのキレートを提案する。以下に示す化学的な構造を有したこれらの芳香族基には、金属の配位に関与できる１つの窒素原子と１つの酸素原子との両方があるため、二座配位子の利点がある。
【化４】
0006525968.tif 000005
【００３４】
なお、ピコリネートアームを有する１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカンまたは１，４，７，１０−テトラザシクロドデカンベースの配位子は、特に画像化用途のための銅（ＩＩ）およびガドリニウム（ＩＩＩ）の錯体形成に使用されてきた（(a) C. Gateau, M. Mazzanti, J. Pecaut, F. A. Dunand, L. Helm, Dalton Trans, 2003, 2428-2433; (b) P. H. Fries, C. Gateau, M. Mazzanti, J. Am. Chem. Soc., 2005, 127, 15801-15814; (c) L. M. P. Lima, D. Esteban-Gomez, R. Delgado, C. Platas-Iglesias, R. Tripier, Inorg. Chem., 2012, 51, 6916-6927）。しかしながら、特に治療応用のための、このような配位子のビスマスまたは鉛との錯体形成は、現在のところ提案されていない。
【００３５】
ピコリネート基は、安定して鉛（ＩＩ）またはビスマス（ＩＩＩ）の金属カチオンを捕捉することができ、酸性のｐＨであってもそれを行えるという利点がある。
【００３６】
また、ピコリネート基の二座配位子の特性のため、テトラアザ大員環(tetraazamacrocycle)は、このような基によってのみ二置換されて、こうした金属の安定した錯体形成を得ることができる。
【００３７】
さらに、このように、これらの大員環の４つの窒素原子のうち２つのみを置換することにより、大員環の他の２つの窒素原子を、他の目的のため、特にキレートを目的とする他の分子とカップリングすることを意図して、利用可能なまま残しておくことを可能とする。
【００３８】
本発明に係るキレートは、好ましくは上記式Ａに対応し、式中、ｎは０と等しく、Ｒはメチル基である。結果的に、配位子は下記式Ｂを満たすこととなる。
【化５】
0006525968.tif 000006
【００３９】
以降、ＲおよびＲ’がそれぞれＨである場合、前記式Ｂのこの配位子をＤＯＤＰＡとも呼び、ＲおよびＲ’がそれぞれメチル基である場合、Ｍｅ−ＤＯＤＰＡとも呼ぶ。
【００４０】
一形態によれば、前記金属は、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉおよび２１３Ｂｉからなる群より選択される放射性同位元素である。
【００４１】
本発明はまた、以下を特徴とするあらゆる化合物を包含するものである。その化合物は上記キレートによって構成され、その金属は２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉまたは２１３Ｂｉであり、薬剤、特に生物学的薬剤とのカップリングのための少なくとも１つのカップリング官能基が、前記配位子の２つの三級アミン官能基のうちの少なくとも一方および／または大員環の炭素原子に付加されている。
【００４２】
前述のとおり、ピコリネートアームの二座配位子の特性は、配位子の鉛またはビスマスとの効率的な錯体形成を可能とすると共に、大員環の２つの窒素原子は結合しないままに残しておくことができる。これらの窒素原子は、特に、生物学的なベクターに対する少なくとも１つのカップリング官能基を枝状につなぐために有利にも使用される。
【００４３】
このカップリング官能基は、アミン、イソチオシアネート、活性エステル（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、Ｎ−ヒドロキシグルタルイミド、マレイミド）、カルボキシル酸、活性化カルボキシル酸（酸無水物、酸ハロゲン化物）、アルコール、アルキン、ハロゲン化物、アジ化物等のうちから選択されたものが好ましい。
【００４４】
また本発明は、上記のとおりキレートを含むあらゆる放射性医薬品をも範囲に含むものであり、その放射性医薬品の金属は、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉまたは２１３Ｂｉであり、そこに前記カップリング官能基によって目的の細胞を標的とする生物学的なベクターがカップリングされる。
【００４５】
前記生物学的なベクターはモノクローナル抗体であることが好ましい。
【００４６】
また、前記生物学的なベクターはがん細胞を標的とするモノクローナル抗体であることがより好ましい。
【００４７】
また、本発明は、アルファ線放射免疫療法剤としてのこのような放射性医薬品の使用に関するものである。
【００４８】
さらに、本発明は、前述のとおり、鉛（ＩＩ）を捕捉するための配位子の使用も目的とするものである。
【００４９】
本発明及びそれがもたらすさまざまな利点は、説明のためおよび非網羅的ベースで提供する本発明による実施形態の以下の説明からさらに明確に理解されるであろう。
【００５０】
これらの実施形態は、以下の添付の図面を参照して示される。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】図１は、前記式Ｂの配位子の鉛（ＩＩ）との錯体形成の結果として生じる本発明によるキレートのＸ線結晶構造である。簡略化するために、これらの図には水素原子は示していない。
【図２】図２は、上記の式Ｂの配位子のビスマス（ＩＩＩ）との錯体形成の結果として生じる本発明によるキレートのＸ線結晶構造である。簡略化するために、これらの図には水素原子は示していない。
【図３】図３は、この同じ配位子のビスマスとの形成および解離のＵＶ／Ｖｉｓスペクトルである。
【図４】図４は、この同じ配位子の鉛との形成および解離のＵＶ／Ｖｉｓスペクトルである。
【図５】図５は、２１３Ｂｉおよびキレート２１３Ｂｉ−Ｍｅ−ＤＯＤＰＡの薄層クロマトグラフである。
【図６】図６は、この同じキレートのＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図７】図７は、ヒト血漿の存在下における同じキレートのゲル浸透クロマトグラムである。
【図８】図８は、タンパク質の沈殿後の上清中のキレート２１３Ｂｉ−Ｍｅ−ＤＯＤＰＡの薄層クロマトグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００５２】
［ＤＯＤＰＡおよびＭｅ−ＤＯＤＰＡ配位子の合成］
ＤＯＤＰＡおよびＭｅ−ＤＯＤＰＡ配位子は、A. Rodriguez-Rodriguez, D. Esteban-Gomez, A. De Blas, T. Rodriguez-Blas, M. Fekete, M. Botta, R. Tripier, Platas-Iglesias, Inorg. Chem., 2012, 51, 2509-2521に示される方法によって合成することができる。
【００５３】
しかしながら、ここで新規の配位子ＤＯＤＰＡの合成方法を提案する。以下に図式１にて概要を示す本方法によれば、トランス位の２つのアミンのみが置換され得る化合物としてサイクレン−ジオキソール２を得るためにサイクレン１（１，４，７，１０−テトラザシクロドデカン）をグリオキサールと反応させる。中間体２を、その後、エステル３によりトランスアルキル化して、これが、ビスアンモニウム４を収率９３％でもたらす。この化合物を、ヒドラジン一水和物により還元し、これがビス−アセトヒドラジド中間化合物の形成につながり、この中間化合物は酸媒体中ですぐに加水分解されて、サイクレン１に対して算出した６１％の収率で配位子ＤＯＤＰＡを得る。
【化６】
0006525968.tif 000007
【００５４】
［ＤＯＤＰＡおよびＭｅ−ＤＯＤＰＡ配位子のビスマスおよび鉛との錯体形成］
ＤＯＤＰＡおよびＭｅ−ＤＯＤＰＡ配位子の鉛およびビスマスとの錯体形成を、図式２にて以下に示す方法により行った。
【化７】
0006525968.tif 000008
【００５５】
上記の方法では、サイクレンジピコリネート塩酸塩、ＤＯＤＰＡ．×ＨＣｌまたはＭｅ−ＤＯＤＰＡ．×ＨＣｌを水に溶解させ、当量のＢｉ（ＮＯ３）．５Ｈ２Ｏを添加する。その後、不溶性の水酸化ビスマスの形成を防ぐために、ｐＨを３〜４にまで徐々に上昇させる。水の蒸発後に、反応粗生成物をメタノールに入れる。さまざまな無機塩を沈殿させ、ろ過によって除去する。６０〜８０％程度の高い収率でビスマスキレートを単離するために、この操作を数回実施する。
【００５６】
同様の方法で、ＰｂＣｌ２の酸性水溶液を塩酸塩に添加することによって鉛（ＩＩ）錯体を得た。数分後にｐＨを６〜７に調節した。メタノールによる沈殿後に、鉛錯体（ＩＩ）を準定量的に単離した。
【００５７】
［得られるキレートの特徴および特性］
結晶構造
結晶［Ｐｂ（Ｍｅ）ＤＯＤＰＡ］および［Ｂｉ（Ｍｅ−ＤＯＤＰＡ）］（ＮＯ３）．Ｈ２Ｏは、単離された錯体の水溶液をゆっくり蒸発させることによって得られた。そのＸ線構造をそれぞれ、図１および図２に示す。
【００５８】
錯体Ｐｂ（ＩＩ）の結晶は、実体［Ｐｂ（Ｍｅ−ＤＯＤＰＡ］および不規則な水分子を示す。一方で、Ｂｉ（ＩＩＩ）の錯体の結晶は、カチオン［Ｂｉ（Ｍｅ−ＤＯＤＰＡ）］＋、硝酸イオンおよび不規則な水分子を示す。
【００５９】
これらの構造によって、金属イオンは、配位子の８つのドナー原子と直接的に連結される。これらは、大員環の同じ側に配置された２つの独立したピコリネートアームを含むｓｙｎ構造を有している。
【００６０】
下記表１は、Ｐｂ（Ｍｅ−ＤＯＤＰＡ）］および［Ｂｉ（Ｍｅ−ＤＯＤＰＡ）］＋錯体について、図１および図２にて言及した配位金属と原子の間の特定の結合の長さを、オングストロームで示している。括弧内の値は、最後の桁または数字に関する不確実性に対応する。
【００６１】
【表１】
0006525968.tif 000009
【００６２】
安定性
鉛（ＩＩ）とのＤＯＤＰＡまたはＭｅ−ＤＯＤＰＡキレートについて、熱力学的な安定性の定数ｐＫを、２５℃で濃度が０．１０ＭのＫＮＯ３中で、電位差の測定によって直接的に確認した。ｐＫ定数は、キレート［Ｐｂ（Ｍｅ−ＤＯＤＰＡ）］に関して１８．７４であり、キレートＰｂ（ＤＯＤＰＡ）に関して１７．０９であることを確認した。しかしながら、これらのｐＫの値は、この化合物が異なる塩基度を有する限り、先行技術のキレートＰｂ（ＤＯＴＡ）の値と比較することはできなかった。よって、キレートになっていない鉛の濃度に対応するｐＭ値を、鉛（ＩＩ）とのＤＯＤＰＡまたはＭｅ−ＤＯＤＰＡキレートに関して算出し、鉛（ＩＩ）とのＤＯＴＡキレートに関する既知の値と比較することとした。この値ｐＭは、Ｐｂ（ＩＩ）の濃度が１０μＭおよび１０倍の高配位子濃度で、ｐＨ７．４における遊離金属濃度の負の対数によって定義した。ｐＭ値は、ＤＯＤＰＡと鉛（ＩＩ）のキレート関しては１２．３と測定され、Ｍｅ−ＤＯＤＰＡと鉛（ＩＩ）のキレートに関して１４．９と測定された。一方、ＤＯＴＡと鉛（ＩＩ）の錯体に関する既知のｐＭ値は、１８．４である。
【００６３】
Ｍｅ−ＤＯＤＰＡとビスマス（ＩＩＩ）またはＤＯＤＰＡとビスマス（ＩＩＩ）のキレートに関しては、ビスマス（ＩＩＩ）のＭｅ−ＤＯＤＰＡまたはＤＯＤＰＡおよびＤＯＴＡとの錯体形成の競合性を試験する際に、ＮＭＲ  １Ｈによって熱力学的な安定性の定数を評価した（１０−２Ｍの濃度において）。実際に、ビスマスキレートについて、このような定数は、電位差測定によっては直接的に測定できない。
【００６４】
ｐＨ＝１にて、あるモル当量のＢｉ（ＮＯ）３を、ＤＯＤＰＡおよびＤＯＴＡの等モル溶液に添加した。その後、ｐＨを３に調整し、ＮＭＲスペクトルを記録した。２５℃にて５日後に、約４０％のＤＯＤＰＡがビスマス（ＩＩＩ）と錯体を形成したことを確認した。これは、錯体［Ｂｉ（ＤＯＤＰＡ）］＋の熱力学的な安定性の定数ｐＫが、E. Csajbok, Z. Baranyai, I. Banyai, E. Brucher, R. Kiraly, A. Muller-Fahrnow, J. Platzek, B. Raduchel, M. Schafer, Inorg. Chem., 2003, 42, 2342-2349によると、約３０．３である錯体［Ｂｉ（ＤＯＴＡ）］−のｐＫよりもわずかに低かったことを示していた。一方、［Ｂｉ（ＤＯＴＡ）］−より高い安定性ことが錯体［Ｂｉ（Ｍｅ−ＤＯＤＰＡ）］＋で確認された。実際に、Ｍｅ−ＤＯＤＰＡおよびＤＯＴＡの等モル混合物の存在下で、ビスマス（ＩＩＩ）の全体がＭｅ−ＤＯＤＰＡによって錯体形成され、遊離配位子の形態のＤＯＴＡが残された。
【００６５】
第２の実験として、金属のキレート化における動態因子の制約を排除するために、遊離型の配位子Ｍｅ−ＤＯＤＰＡを、予め形成された錯体［Ｂｉ（ＤＯＴＡ）］−と競合させた。重水素化媒体中、ｐＨ６、周囲温度で１０−２Ｍの濃度において、トランスキレート化を１Ｈ  ＮＭＲによって確認した。実験の５日後に、［Ｂｉ（Ｍｅ−ＤＯＤＰＡ）］＋からのＮＭＲシグナルのために［Ｂｉ（ＤＯＴＡ）］−からのＮＭＲシグナルが消失することもまた、Ｍｅ−ＤＯＤＰＡとのビスマス錯体の安定性の定数がＤＯＴＡの安定性の定数より高いことを示していた。
【００６６】
これらの結果は、ジピコリネート配位子がビスマス（ＩＩＩ）に対して非常に高い親和性を有し、かつ極めて安定した錯体（特にＭｅ−ＤＯＤＰＡの場合、ＤＯＴＡの安定性よりも高い安定性）をもたらすことを実証するものである。
【００６７】
錯体の形成および解離の反応速度
ビスマス（ＩＩＩ）および鉛（ＩＩ）とのＭｅ−ＤＯＤＰＡキレートの錯体形成の反応速度をＵＶ／Ｖｉｓ分光測定により調査した。
【００６８】
得られたＵＶスペクトルを、それぞれ図３および図４に示す。
【００６９】
Ｂｉ（ＮＯ３）３．５Ｈ２Ｏ（１．６５×１０−４Ｍ）の水溶液を、Ｍｅ−ＤＯＤＰＡの水溶液（１．６５×１０−４Ｍ）に添加した。ＵＶ／Ｖｉｓスペクトルを、さまざまな反応時間で記録した。図３に示すように、周囲温度における撹拌の３０分後にＭｅ−ＤＯＤＰＡのビスマス（ＩＩＩ）との完全な錯体形成が確認された。
【００７０】
また、図４に示すように、ｐＨ＝７においてＰｂＣｌ２の水溶液およびＭｅ−ＤＯＤＰＡの水溶液を等モル混合した（０．７４×１０−４Ｍ）１０分後に、Ｍｅ−ＤＯＤＰＡの鉛（ＩＩ）との完全な錯体形成が確認された。
【００７１】
これらの結果は、ピコリネートアーム配位子は、ビスマス（ＩＩＩ）であろうと、鉛（ＩＩ）であろうと、非常に迅速に重金属と錯体を形成することを示している。ビスマス（ＩＩＩ）の場合、錯体形成の反応速度は、ＤＯＴＡ等の先行技術の配位子で観察された速度に比べて、はるかに速いものである。
【００７２】
これらの錯体の解離の反応速度も、ＮＭＲによって調査した。この状況において、［Ｂｉ（Ｍｅ−ＤＯＤＰＡ）］（ＮＯ３）および［Ｐｂ（Ｍｅ−ＤＯＤＰＡ）］錯体を０．１ＭのＤＣｌに溶解させた。
【００７３】
［Ｂｉ（Ｍｅ−ＤＯＤＰＡ）］（ＮＯ３）については、数日後でも、いかなる解離も観察されなかったのに対して、７日目の終わりに錯体［Ｐｂ（Ｍｅ−ＤＯＤＰＡ）］の完全な解離が観察された。
【００７４】
これらの結果は、本発明により、鉛（ＩＩ）およびビスマス（ＩＩＩ）の両方に対して、安定したキレートを同一の配位子から得られることを示している。
【００７５】
さらに、水溶性のこのようなキレートは、生物学的なベクターを枝状につなぐために利用可能な窒素原子を有する限り、放射性医薬品、特にアルファ線放射免疫療法に使用可能な放射性医薬品を製造するために使用することができる。よって、このように枝状につなぐことは、例えばメチル（ＲまたはＲ’）アームのうちの一方を、エチルアミンまたはプロピルアミンアームで置換することにより、当業者が利用可能な標準的な技術で非常に簡単に行われる。そのＤＯＤＰＡ類似物と比較してＭｅ−ＤＯＤＰＡに関して得られた最良の結果は、三級アミンが存在すると、キレートの物理化学的な特性が高まって、このような後々の方向付けを好適なものにすることを示している。
【００７６】
［放射標識キレート（２１３Ｂｉ（Ｍｅ−ＤＯＤＰＡ））＋の調製およびそのインビトロ安定性の試験］
このキレートの標識化を、薄層クロマトグラフフィー（ＴＬＣ）（溶離液：ＭｅＯＨ／ＮＨ４Ｃｌ（２０％）；１／１）およびＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８カラムを使用した逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（２０分間のＴＦＡ（０．０１％の水）−ＣＨ３ＣＮの直線グラジエント）により評価し、その活性をＮａＩガンマシンチレーターにより検出した。
【００７７】
ｐＨ７．４の緩衝化したＭｅ−ＤＯＤＰＡ２−の溶液（３．５ｎｍｏｌにおける０．１１５）を２１３Ｂｉの溶離液（１００から５００μＬ）に添加し、その活性は、３〜１２ＭＢｑに及んだ。算出した体積のｐＨ７．４のアスコルビン酸塩溶液を添加して、５０ｍＭの濃度のサンプルを得た。この混合物を、周囲温度および９０℃で１５分間インキュベートした。
【００７８】
図５は、ＴＬＣ分析は、遊離２１３Ｂｉの前面比（Ｆｒ）が０（ａ）であり、キレート（２１３Ｂｉ（Ｍｅ−ＤＯＤＰＡ））＋のＲｆ値が０．５（ｂ）であることを示している。
【００７９】
図６は、（２１３Ｂｉ（Ｍｅ−ＤＯＤＰＡ））＋キレートについて、保持時間が約５．５分であるＨＰＬＣ分析は、遊離２１３ＢｉはＣ１８カラムに対して親和性がないことを示している。
【００８０】
これらの実験の結果は、このキレートを調製するために３０から４０ＭＢｑ／ｎｍｏｌの活性／配位子比を使用して、キレート化が９０℃で行われる場合（配位子に関連する放射能が９１％から９６％）の方が周囲温度行われる場合（配位子に関連する放射能が６０％）よりも良好なキレート化収率を示すことを示している。
【００８１】
また、血清およびインビトロにおけるキレートの安定性もＴＬＣおよびＨＰＬＣによって調査した。
【００８２】
血清中の安定性に関して、２００μＬの放射標識化Ｍｅ−ＤＯＤＰＡ２−溶液（活性：１ＭＢｑ、放射化学的純度：９５％）を、８００μＬのヒト血漿と混合した。血漿中の安定性の値は、周囲温度におけるインキュベーションの１および２時間後（約１および２半減期）に、ＰＤ−１０カラムにおいて血漿に対して直接、ゲル浸透クロマトグラフィーをすることおよび硫酸アンモニウムによる血漿タンパク質の沈殿後にこの上清のＴＬＣ分析することによって遊離２１３Ｂｉと比較して管理した。前と同じ条件下でＴＬＣ分析を行った。沈殿後、沈殿物中の活性（７８．８％）ならびに上清中の活性（３．８％）を測定した。
【００８３】
図７は、遊離２１３Ｂｉおよび錯体（２１３Ｂｉ（Ｍｅ−ＤＯＤＰＡ））＋を含む血漿のゲル浸透クロマトグラムを示している。図７に示すクロマトグラムは、低分子量（＜１０ｋＤａ）の分子の存在を示している。
【００８４】
図８は、上清のＴＬＣ分析は、この上清中に遊離２１３Ｂｉ（Ｒｆ＝０）は存在しなかったが、（２１３Ｂｉ（Ｍｅ−ＤＯＤＰＡ））＋のキレートは存在していることを示している。実際に、９０％を超える放射能がＲｆ＝０．５程度で検出されている。
【００８５】
これらの結果は、キレート（２１３Ｂｉ（Ｍｅ−ＤＯＤＰＡ））＋が大部分はヒト血漿中に存在し、そこで少なくとも２つの半減期について安定であったことを示している。
【００８６】
また、これらの結果は、配位子Ｍｅ−ＤＯＤＰＡ２−により２１３Ｂｉを質的および量的にキレート化できることを示している。
【００８７】
さらに、このようなキレートは、ヒト血漿中で安定であるため、放射性医薬品、特にアルファ線放射免疫療法に使用可能な放射性医薬品を製造するために使用することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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