(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
0006535688.tif 000044
［式中、
Ｒ１は、水素、Ｃ１−７アルキル、−ＣＨ２−シクロアルキル又はシクロアルキルであり；
Ｒ２は、水素、Ｃ１−７アルキル、又はヒドロキシにより置換されているＣ１−７アルキルであるか、或いは
Ｒ１及びＲ２は、これらが結合しているＮ及びＣ原子と一緒になって、１個若しくは２個のＦ原子により又はヒドロキシにより置換されていてもよいピロリジン環を形成するか、又はアゼチジン若しくはピペリジン環を形成し；
Ｒ３は、水素、Ｃ１−７アルキル、ヒドロキシにより置換されているＣ１−７アルキル、−（ＣＨ２）ｏＮＨ２、ヒドロキシによって置換されていてもよいベンジル、フェニル、−ＣＨ２−シクロアルキル、又はシクロアルキルであり；
Ｒ３’は、水素又はＣ１−７アルキルであり；
ｎは、１であり；
ｍは、１であり；
ｏは、１〜４である］
で示される化合物、或いはその薬学的に許容し得る酸付加塩、そのラセミ混合物又はその対応するエナンチオマー若しくは光学異性体。
【請求項２】
Ｒ１が、水素、Ｃ１−７アルキル、−ＣＨ２−シクロアルキル又はシクロアルキルであり、そしてＲ２が、水素、Ｃ１−７アルキル、又はヒドロキシにより置換されているＣ１−７アルキルである、請求項１記載の化合物、或いはその薬学的に許容し得る酸付加塩、そのラセミ混合物又はその対応するエナンチオマー若しくは光学異性体。
【請求項３】
Ｒ１及びＲ２が、これらが結合しているＮ及びＣ原子と一緒になって、１個若しくは２個のＦ原子により又はヒドロキシにより置換されていてもよいピロリジン環を形成するか、又はアゼチジン若しくはピペリジン環を形成する、請求項１記載の化合物、或いはその薬学的に許容し得る酸付加塩、そのラセミ混合物又はその対応するエナンチオマー若しくは光学異性体。
【請求項４】
以下：
【化２】
0006535688.tif 000045
0006535688.tif 000046
0006535688.tif 000047
0006535688.tif 000048
0006535688.tif 000049
0006535688.tif 000050
0006535688.tif 000051
0006535688.tif 000052
からなる群より選択される請求項１記載の化合物、或いはその薬学的に許容し得る酸付加塩、そのラセミ混合物又はその対応するエナンチオマー若しくは光学異性体。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項記載の化合物或いはその薬学的に許容し得る酸付加塩、そのラセミ混合物又はその対応するエナンチオマー若しくは光学異性体と薬学的に許容し得る担体及び／又はアジュバントとを含む医薬組成物。
【請求項６】
自閉症、心的外傷後ストレス障害を含むストレス、不安障害及び鬱病を含む不安、統合失調症、精神障害若しくは記憶喪失、アルコール離脱、薬物依存、又はプラダー・ウィリー症候群を処置するための、請求項１〜４のいずれか一項記載の化合物或いはその薬学的に許容し得る酸付加塩、そのラセミ混合物又はその対応するエナンチオマー若しくは光学異性体と薬学的に許容し得る担体及び／又はアジュバントとを含む医薬組成物。
【請求項７】
自閉症、心的外傷後ストレス障害を含むストレス、不安障害及び鬱病を含む不安、統合失調症、精神障害若しくは記憶喪失、アルコール離脱、又は薬物依存の治療的及び／又は予防的処置用の、或いはプラダー・ウィリー症候群の処置用の医薬を製造するための、請求項１〜４のいずれか一項記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、式
【０００２】
【化１】
0006535688.tif 000002
［式中、
Ｒ１は、水素、低級アルキル、−ＣＨ２−シクロアルキル又はシクロアルキルであり；
Ｒ２は、水素、低級アルキル、ヒドロキシにより置換されている低級アルキルであるか、或いは
Ｒ１及びＲ２は、これらが結合しているＮ及びＣ原子と一緒になって、１個若しくは２個のＦ原子により又はヒドロキシにより置換されていてもよいピロリジン環を形成してもよいか、又はアゼチジン若しくはピペリジン環を形成してもよく；
Ｒ３は、水素、低級アルキル、ヒドロキシにより置換されている低級アルキル、−（ＣＨ２）ｏＮＨ２、ヒドロキシによって置換されていてもよいベンジル、フェニル、−ＣＨ２−シクロアルキル又はシクロアルキルであり；
Ｒ３’は、水素又は低級アルキルであり；
ｎは、１であり；
ｍは、０又は１であり；
ｏは、１〜４である］
で示される化合物に、或いはその薬学的に許容し得る酸付加塩に、そのラセミ混合物に又はそれの対応するエナンチオマー及び／又はその光学異性体に関する。
【０００３】
本化合物は、オキシトシン受容体アゴニストであって、この化合物は、オキシトシンの生物活性を保持しているオキシトシンアナログであることが見出された。このようなアナログの分子は、オキシトシン受容体の結合を含めて、内因性オキシトシンに類似した様式で作用可能である。オキシトシンのアナログは、完全に新しい分子構造を有する。
【背景技術】
【０００４】
オキシトシンは、１位と６位との間にジスルフィド架橋を形成する２個のシステイン残基を有する９個のアミノ酸の環状ペプチドホルモンである。ヒトオキシトシンは、配列：Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙを含む。
【０００５】
ペプチドは、従前の低分子医薬よりも高い特異性及び効力、並びに低い毒性プロフィールの利点を提供する、市販に適したクラスの薬物として現れてきている。これらは、糖尿病、ＨＩＶ、肝炎、癌及びその他のような、多数の疾患について有望な処置のオプションを提供しており、医師及び患者は、ペプチドベースの薬をより受け容れるようになってきている。本発明は、ペプチド性オキシトシン受容体アゴニストに関し、これには、天然ホルモンのオキシトシン及びカルベトシン（carbetocin）も包含される。
オキシトシンは、子宮弛緩及び多量出血のコントロールのための強力な子宮収縮剤であり、臨床的には陣痛を誘発するために使用され、そして泌乳の開始と維持を増強することが示されている（非特許文献１、非特許文献２）。カルベトシン（１−デアミノ−１−カルバ−２−チロシン（Ｏ−メチル）−オキシトシン）もまた、子宮弛緩及び多量出血のコントロールのために臨床的に使用されている強力な子宮収縮剤である。
【０００６】
ペプチド性オキシトシンアゴニストは、２５，０００人に１人の子供が罹患する稀な遺伝障害であるプラダー・ウィリー症候群（Prader-Willi Syndrome）の処置に使用されうる。
更なる研究により、オキシトシンアゴニストは、腹痛及び背面痛（非特許文献３）を含む炎症及び疼痛、男性（非特許文献４）及び女性（非特許文献５）両方の性機能不全、過敏性腸症候群（ＩＢＳ，非特許文献６）、便秘及び消化管閉塞（非特許文献７）、自閉症（非特許文献８）、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）を含むストレス（非特許文献９）、不安障害及び鬱病を含む不安（非特許文献１０、非特許文献１１）、手術の失血又は分娩後出血のコントロール（非特許文献１２）、陣痛の誘発及び維持（非特許文献１３）、創傷治癒及び感染症、乳腺炎及び胎盤娩出、並びに骨粗鬆症の処置に有用であることが示されている。更に、オキシトシンアゴニストは、癌及び胎盤機能不全の両者の診断に有用でありうる。
【０００７】
更に、「Intranasal Oxytocin blocks alcohol withdrawal in human subjects」（非特許文献１４）及び「Breaking the loop: Oxytocin as a potential treatment for drug addiction」（非特許文献１５）という記事では、オキシトシンアゴニストを用いてアルコール離脱及び薬物依存を処置することを提案している。
【０００８】
オキシトシン及びその受容体は、側坐核や海馬のような、統合失調症の症状に関係する脳の領域に存在する。オキシトシン受容体アゴニストは、自閉症、心的外傷後ストレス障害を含むストレス、不安障害及び鬱病を含む不安、統合失調症、アルツハイマー病、精神障害、記憶喪失及び代謝疾患（特許文献１）の処置に使用されうる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】国際公開第２０１２／０１６２２９号
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Gimpl et al., Physiol. Rev., 81, (2001), 629-683
【非特許文献２】Ruis et al.,BMJ, 283, (1981), 340-342
【非特許文献３】Yang, Spine, 19, 1994, 867-71
【非特許文献４】Lidberg et al., Pharmakopsychiat., 10, 1977, 21-25
【非特許文献５】Anderson-Hunt, et al., BMJ, 309, 1994, 929
【非特許文献６】Louvel et al., Gut, 39, 1996, 741-47
【非特許文献７】Ohlsson et al., Neurogastroenterol. Motil., 17, 2005, 697-704
【非特許文献８】Hollander et al., Neuropsychopharm., 28, 2008, 193-98
【非特許文献９】Pitman et al., Psychiatry Research, 48, 107-117
【非特許文献１０】Kirsch et al., J. Neurosci., 25, 49, 11489-93
【非特許文献１１】Waldherr et al., PNAS, 104, 2007, 16681-84
【非特許文献１２】Fujimoto et al., Acta Obstet. Gynecol., 85, 2006, 1310-14
【非特許文献１３】Flamm et al., Obstet. Gynecol., 70, 1987, 70-12
【非特許文献１４】Alcohol Clin Exp Res, Vol, No. 2012
【非特許文献１５】Hormones and Behavior, 61, 2012 , 331-339
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、式Ｉの新規な化合物、並びにオキシトシン受容体に関連するＣＮＳ疾患（これらの疾患は、自閉症、心的外傷後ストレス障害を含むストレス、不安障害及び鬱病を含む不安、統合失調症、精神障害及び記憶喪失、アルコール離脱、薬物依存である）の処置のための、及びプラダー・ウィリー症候群の処置のための、式Ｉの化合物及びそれらの薬学的に許容し得る塩の使用である。
更なる目的は、式Ｉの新規な化合物及びこれらを含有する医薬の製造である。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、自閉症、心的外傷後ストレス障害を含むストレス、不安障害及び鬱病を含む不安、統合失調症、精神障害及び記憶喪失、アルコール離脱、薬物依存を含む特定のＣＮＳ疾患の処置における、並びにプラダー・ウィリー症候群の処置のための、代替法及び／又は改善法を提供する選択的で有効な化合物を提供しうる。
【００１３】
本ペプチドは、表に示されるバソプレシン受容体Ｖ１ａ及びＶ２に対して非常に良好な選択性を有することが示されている。これは、副作用を回避するための医薬としての使用には大きな利点を有しうる。これらの生理学的効果は、中枢神経系の疾患を処置することを目的とする薬の場合には、所望でない副作用であると考えられうる。したがって、バソプレシン受容体に比して、オキシトシン受容体に対する選択性を有する薬を得ることが望ましい。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本明細書中で使用されるとき、「低級アルキル」という用語は、１〜７個の炭素原子を含有する飽和の直鎖又は分岐鎖の基、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、２−ブチル、ｔ−ブチルなどを意味する。
【００１５】
「ヒドロキシにより置換されている低級アルキル」という用語は、少なくとも１個の水素原子が、ヒドロキシ基により置換されている、上記と同義の低級アルキル基を意味する。
【００１６】
「シクロアルキル」という用語は、３〜６個の炭素原子を含有する環状アルキル鎖を意味する。
【００１７】
「薬学的に許容し得る酸付加塩」という用語は、塩酸、硝酸、硫酸、リン酸、クエン酸、ギ酸、フマル酸、マレイン酸、酢酸、コハク酸、酒石酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などのような、無機酸及び有機酸との塩を包含する。
好ましいのは、ｍが１である、式Ｉの化合物である。
【００１８】
本発明の１つの目的は、Ｒ１が、水素、低級アルキル、−ＣＨ２−シクロアルキル又はシクロアルキルであり、そしてＲ２が、水素、低級アルキル、ヒドロキシにより置換されている低級アルキルであり、そして他の定義が、上記のとおりである、化合物である。
【００１９】
本発明の更なる１つの目的は、Ｒ１及びＲ２が、これらが結合しているＮ及びＣ原子と一緒になって、１個若しくは２個のＦ原子により又はヒドロキシにより置換されていてもよいピロリジン環を形成してもよいか、又はアゼチジン若しくはピペリジン環を形成してもよく、そして他の定義が、上記のとおりである、化合物である。
【００２０】
以下の具体的な化合物が調製され、オキシトシン受容体に対するそれらのアゴニスト活性について試験された：
【００２１】
【化２】
0006535688.tif 000003
0006535688.tif 000004
0006535688.tif 000005
0006535688.tif 000006
0006535688.tif 000007
0006535688.tif 000008
0006535688.tif 000009
0006535688.tif 000010
【００２２】
本発明の式Ｉの化合物の調製は、逐次的又は収束的な合成経路で実施されうる。この反応及び得られる生成物の精製を実行するのに必要な技能は、当業者には公知である。
【００２３】
本明細書中の化合物を、Ｆｍｏｃ及びＢｏｃの方法の両方を利用する固相ペプチド化学における標準的な方法により合成した。手動実行する反応を室温で実施し、一方、マイクロ波によるペプチド合成を昇温下で実施した。
【実施例】
【００２４】
全般の合成の説明：
線状ペプチドを、手動で、又は例えば、Kates and Albericio, Eds., “Solid Phase Synthesis: A practical guide”, Marcel Decker, New York, Basel, 2000 に参照されるような標準技術の固相合成プロトコール（Ｆｍｏｃ化学）を介するマイクロ波技術を用いて合成するかのいずれかで合成した。固相担体としてTentaGel-S-RAM樹脂（０．２４meq/g）を使用した。全てのＦｍｏｃ−アミノ酸を、ＣＯＭＵ（ＤＭＦ中０．５mol/L）及びＤＩＰＥＡ（ＮＭＰ中２mol/L）４eqでの活性化後に４倍過剰で加えた。Ｆｍｏｃ切断を、ＤＭＦ中の２０％ ピペリジンにより達成した。脱保護並びに樹脂からの切断及び標準処理後に、溶液中でペプチドを環化した。ＤＭＦ中の標準ペプチド活性化試薬で粗ペプチドを処理した。ＨＰＬＣにより環化をモニターした。
【００２５】
切断及び処理：
トリフルオロ酢酸、トリイソプロピルシラン及び水（９５／２．５／２．５）の切断カクテルを樹脂に加えて、室温で１時間振盪した。切断したペプチドを冷エーテル（−１８℃）中で沈殿させた。このペプチドを遠心分離して、残渣を冷エーテルで２回洗浄した。残渣を再び水／アセトニトリルに溶解し、凍結乾燥した。
【００２６】
精製：
固定相としてReprospher 100 C18-Tカラム（１００×４．６mm、粒子サイズ５um）を、そして溶離液として水／アセトニトリル（３０分かけて勾配１〜５０％ ＭｅＣＮ）を用いる、逆相高性能液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）を用いてペプチドを精製した。画分を回収して、ＬＣ／ＭＳにより分析した。純粋な生成物試料を合わせて、凍結乾燥した。全てのペプチドを純度＞８５％の白色の粉末として得た。生成物の同定を、質量分析により得た。
【００２７】
全ての標準アミノ酸を、CEMから購入した。（２Ｓ）−Ｆｍｏｃ−４，４−ジフルオロ−ピロリジン−２−カルボン酸、Ｆｍｏｃ−Trans−４−フルオロ−プロリン−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｙｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ  （２Ｓ，４Ｓ）−Ｆｍｏｃ−４−フルオロ−ピロリジン−２−カルボン酸は、Polypeptideから購入した。Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸を、後述のとおり生成した。
【００２８】
Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸の合成
ＭｅＯＨ（２５０mL）中の（２Ｓ）−２−アミノ−４−｛［（３Ｓ）−３−アミノ−３−カルボキシプロピル］ジスルファニル｝ブタン酸（１０ｇ、３７．２６３mmol）の撹拌溶液に、ＳＯＣｌ２（１０．８mL、１４９．０５mmol）を２０分かけて滴下し、反応混合物を２５℃で１８時間撹拌した。次に、この反応混合物を減圧下で濃縮することにより、（２Ｓ）−２−アミノ−４−｛［（３Ｓ）−３−アミノ−４−メトキシ−４−オキソブチル］ジスルファニル｝ブタン酸メチルＨＣｌ塩（１２ｇ、８７％）をオフホワイト色の固体として得た。Ｈ２Ｏ（５６０mL）中の（２Ｓ）−２−アミノ−４−｛［（３Ｓ）−３−アミノ−４−メトキシ−４−オキソブチル］ジスルファニル｝ブタン酸メチルＨＣｌ塩（２４ｇ、６４．９７mmol）の撹拌懸濁液に、Ｋ２ＣＯ３（５３．７ｇ、３８９．８mmol）、ジオキサン（１８００mL）中のＦｍｏｃ−Ｃｌ（３３．６ｇ、１２９．９mmol）を加え、反応混合物を２５℃で１８時間撹拌した。固体を濾別し、ＭｅＯＨ（８００mL）で洗浄して、減圧下で乾燥することにより、（２Ｓ）−２−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝−４−｛［（３Ｓ）−３−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝−４−メトキシ−４−オキソブチル］ジスルファニル｝ブタン酸メチル（３２ｇ、６６％）をオフホワイト色の固体として得た。ＬＣＭＳ：７４１（Ｍ＋Ｈ）。ＭｅＯＨ（８６４mL）及びＤＣＭ（２４０mL）中の（２Ｓ）−２−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝−４−｛［（３Ｓ）−３−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝−４−メトキシ−４−オキソブチル］ジスルファニル｝ブタン酸メチル（１６ｇ、２１．６mmol）の撹拌溶液に、Ｚｎ末（４．２ｇ、６４．８mmol）、ＴＦＡ（６４．３mL、８６３．８mmol）を加え、反応混合物を２５℃で１８時間撹拌した。反応混合物を濾過することにより、亜鉛を除去して、濾液を減圧下で濃縮した。粗生成物を酢酸エチル中にとり、１N ＨＣｌ溶液、１N ＮａＯＨ溶液、水及びブライン液で洗浄した。分離した有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して、減圧下でエバポレートすることにより、（２Ｓ）−２−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝−４−スルファニルブタン酸メチルを得、これを更に精製することなく次の工程に直接使用した。ＬＣ−ＭＳ：３７２（Ｍ＋Ｈ）。ＭｅＯＨ／ＴＨＦ（２：１、３３６mL）中の（２Ｓ）−２−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝−４−スルファニルブタン酸メチル（８ｇ、２１．５mmol）の撹拌溶液に、トリエチルアミン（３mL、２１．５mmol）、プロパ−２−エン酸tert−ブチル（４．７０mL、３２．３mmol）を加え、そして反応混合物を２５℃で３時間撹拌した。この反応混合物を減圧下でエバポレートした。粗生成物をＤＣＭ中にとり、１N ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ３溶液、水及びブライン液で洗浄した。分離した有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して、減圧下で溶媒を留去した。こうして得られた粗生成物をＤＣＭ（１００％）を用いる順相(normal)シリカカラムにより精製して、（２Ｓ）−４−｛［３−（tert−ブトキシ）−３−オキソプロピ��］スルファニル｝−２−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝−ブタン酸メチル（４．６ｇ、４４％）を無色の粘性液体として得た。ＬＣ−ＭＳ：５００（Ｍ＋Ｈ）。イソプロパノール（１２２mL）及びＨ２Ｏ（４６mL）中の（２Ｓ）−４−｛［３−（tert−ブトキシ）−３−オキソプロピル］スルファニル｝−２−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝−ブタン酸メチル（４．６ｇ、９．２mmol）の撹拌溶液に、ＣａＣｌ２（１６．５ｇ、１４９．２mmol）、ＬｉＯＨ（１．５ｇ、３６．８mmol）を加えて、反応混合物を２５℃で４０分間撹拌した。減圧下で溶媒を除去した。得られた残渣を１０％ Ｋ２ＣＯ３溶液で希釈して、ジエチルエーテルで洗浄した。分離した水層を濃ＨＣｌでｐＨ約２まで酸性にして、ＤＣＭで抽出した。分離した有機層を水、ブライン液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、減圧下でエバポレートすることにより、（２Ｓ）−４−｛［３−（tert−ブトキシ）−３−オキソプロピル］スルファニル｝−２−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝−ブタン酸（４ｇ、８９％）をオフホワイト色の粘性固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：４８４（Ｍ−Ｈ）。酢酸エチル（１８mL）中の（２Ｓ）−４−｛［３−（tert−ブトキシ）−３−オキソプロピル］スルファニル｝−２−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝−ブタン酸（３．５ｇ、７．２mmol）の撹拌溶液に、オキソン（２２．１５ｇ、３６．０mmol）を加えて、反応混合物を２５℃で４８時間撹拌した。次に反応塊を濾過し、固体を酢酸エチルで洗浄して、減圧下で濾液をエバポレートした。こうして得られた粗生成物をＤＣＭ中の０〜５％ ＭｅＯＨを用いる順相シリカカラムにより精製して、（２Ｓ）−４−｛［３−（tert−ブトキシ）−３−オキソプロパン］スルホニル｝−２−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝−ブタン酸（３．１ｇ、８４％）を白色の固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：５１６（Ｍ−Ｈ）。
【００２９】
ペプチド合成：
昇温下（７８℃）及び０．２５mmolスケールで、１アミノ酸当たり５分のカップリング時間でＣＥＭマイクロ波技術を用いて、ペプチドを合成した。合成を、固相担体としてTentalGel-S RAM樹脂（０．２４meq/g）を用いて行う。使用した全てのアミノ酸をＮＭＰ中に０．２mol濃度まで溶解した。アミノ酸を活性化するために、ＤＭＦ中の４eq. ＣＯＭＵ（０．５mol/L）の溶液及びＤＩＰＥＡを使用した。３分間のＤＭＦ中のピペリジン（２０％）により、Ｆｍｏｃ切断を達成した。Ｆｍｏｃ切断を繰り返した。
【００３０】
樹脂からの切断：
トリフルオロ酢酸、トリイソプロピルシラン、及び水（９５／２．５／２．５）からなる切断カクテル１０mlを樹脂に加えて、室温で３時間振盪した。切断したペプチドを冷Ｅｔ２Ｏ（−１８℃）中で沈殿させた。ペプチドを遠心分離（２×５０ml ポリプロピレンチューブ）した。沈殿物を冷エーテルで２回洗浄した。その後、沈殿物をＨ２Ｏ／アセトニトリルに溶解し、凍結乾燥することにより、白色の粉末８８mgを得た。
【００３１】
環化：
粗ペプチドをＤＭＦ（１５ml）に溶解した。ＤＭＦ中のカップリング試薬ＰｙｏＡＰ（０．５mol/L）１eq及びＮＭＰ中のＤＩＰＥＡ（２mol/l）を加えた。この反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応終了後（ＬＣＭＳコントロール）、ＤＭＦ内容物をおよそ２mlまで濃縮した。残渣を冷（−１８℃）ジエチルエーテル（４０ml）中で沈殿させた。このペプチドを遠心分離して、沈殿物を冷エーテルで洗浄した。
【００３２】
精製：
Reprospher 100 C18-Tカラム（１００×４．６mm、粒子サイズ５um）での分取ＨＰＬＣにより、粗ペプチドを精製した。溶離系として０．１％ ＴＦＡ／水／アセトニトリルの混合物を０〜７５分のうちに０〜１００％ アセトニトリルの勾配で使用した。画分を回収して、分析用ＨＰＬＣにより確認した。純粋な生成物を含有する画分を合わせて、凍結乾燥した。白色の粉末２７mgを得た。
【００３３】
以下に列挙される他の全てのペプチドを適切に合成した。
【００３４】
略語：
Ｆｍｏｃ：９−フルオレニルメトキシカルボニル
ｔＢｕ：tert−ブチル
Ｇｌｙ：グリシン
Ｐｈｅ：フェニルアラニン
Ｃｈａ：シクロヘキシルアラニン
Ｃｈｇ：シクロヘキシルグリシン
Ｓａｒ：サルコシン
Ｈｙｐ：ヒドロキシプロリン
Ｉｌｅ：イソロイシン
Ｌｅｕ：ロイシン
Ｎｌｅ：ノルロイシン
Ｎｖａ：ノルバリン
Ｄａｐ：ジアミノプロピオン酸
Ａｉｂ：アミノイソ酪酸
Ｐｒｏ：プロリン
Ａｌａ：アラニン
Ｖａｌ：バリン
ｈｏｍｏＶａｌ：ホモバリン
Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）：側鎖を保護した（トリチル）ヒスチジン
Ａｓｎ（Ｔｒｔ）：側鎖を保護した（トリチル）アスパラギン
Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）：側鎖を保護した（トリチル）グルタミン
Ｔｙｒ（ｔＢｕ）：側鎖を保護した（ｔＢｕ）チロシン
Ｔｈｒ（ｔＢｕ）：側鎖を保護した（ｔＢｕ）トレオニン
ＨＯＢＴ：Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＣＯＭＵ：１−［（１−（シアノ−２−エトキシ−２−オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノモルホリノ）］ウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート
ＰｙｏＡＰ：ヘキサフルオロリン酸（７−アザベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリピロリジノ−ホスホニウム
ＨＢＴＵ：ヘキサフルオロリン酸Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＮＭＰ：Ｎ−メチルピロリドン
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＭｅＣＮ：アセトニトリル
【００３５】
実施例１
【化３】
0006535688.tif 000011
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値１００６．１；実測値１００６．４
【００３６】
実施例２
【化４】
0006535688.tif 000012
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値９８０．１；実測値９８１．２
【００３７】
実施例３
【化５】
0006535688.tif 000013
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、（２Ｓ）−Ｆｍｏｃ−４，４−ジフルオロ−ピロリジン−２−カルボン酸、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値１０４２．１；実測値１０４３．１
【００３８】
実施例４
【化６】
0006535688.tif 000014
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、（Ｓ）−Ｎ−Ｆｍｏｃ−アゼチジン−２−カルボン酸、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値９９２．２；実測値９９３．４
【００３９】
実施例５
【化７】
0006535688.tif 000015
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ピペコリン酸、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値１０２０．２；実測値１０２０．５
【００４０】
実施例６
【化８】
0006535688.tif 000016
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、（２Ｓ，４Ｓ）−Ｆｍｏｃ−４−フルオロ−ピロリジン−２−カルボン酸、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値１０２４．１；実測値１０２４．５
【００４１】
実施例７
【化９】
0006535688.tif 000017
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Trans−４−フルオロ−プロリン、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値１０２４．１；実測値１０２４．５
【００４２】
実施例８
【化１０】
0006535688.tif 000018
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｙｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値１０２２．１；実測値１０２２．５
【００４３】
実施例９
【化１１】
0006535688.tif 000019
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｎｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値９８０．１；実測値９８０．４
【００４４】
実施例１０
【化１２】
0006535688.tif 000020
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｉｂ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値９５２．０；実測値９５２．４
【００４５】
実施例１１
【化１３】
0006535688.tif 000021
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｈａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値１０２０．２；実測値１０２０．６
【００４６】
実施例１２
【化１４】
0006535688.tif 000022
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値９６６．１；実測値９６６．５
【００４７】
実施例１３
【化１５】
0006535688.tif 000023
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値９８０．１；実測値９８０．４
【００４８】
実施例１４
【化１６】
0006535688.tif 000024
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｎｖａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値９６６．１；実測値９６６．５
【００４９】
実施例１５
【化１７】
0006535688.tif 000025
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｈｏｍｏＶａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値９９４．１；実測値９９４．５
【００５０】
実施例１６
【化１８】
0006535688.tif 000026
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値１０１４．１；実測値１０１４．４
【００５１】
実施例１７
【化１９】
0006535688.tif 000027
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値１０３０．１；実測値１０３０．４
【００５２】
実施例１８
【化２０】
0006535688.tif 000028
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値９５４．０；実測値９５４．４
【００５３】
実施例１９
【化２１】
0006535688.tif 000029
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値９３８．０；実測値９３８．４
【００５４】
実施例２０
【化２２】
0006535688.tif 000030
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ（ＢＯＣ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値９５３．０；実測値９５３．４
【００５５】
実施例２１
【化２３】
0006535688.tif 000031
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｈｇ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値１００６．１；実測値１００６．４
【００５６】
実施例２２
【化２４】
0006535688.tif 000032
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ＭｅＬｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値９９４．１；実測値９９４．５
【００５７】
実施例２３
【化２５】
0006535688.tif 000033
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｎｖａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値１００８．１；実測値１００８．４
【００５８】
実施例２４
【化２６】
0006535688.tif 000034
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｎｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値１０２２．２；実測値１０２２．４
【００５９】
実施例２５
【化２７】
0006535688.tif 000035
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値９９６．１；実測値９９６．３
【００６０】
実施例２６
【化２８】
0006535688.tif 000036
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｈｏｍｏＳｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値１０１０．１；実測値１０１０．４
【００６１】
実施例２７
【化２９】
0006535688.tif 000037
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ＣｙｃｌｏｐｒｏｐＧｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値１００６．１；実測値１００６．４
【００６２】
実施例２８
【化３０】
0006535688.tif 000038
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ａ−ＭｅＬｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ＣｙｃｌｏｐｒｏｐＧｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値１０２０．１；実測値１０２０．５
【００６３】
実施例２９
【化３１】
0006535688.tif 000039
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ＣｙｃｌｏｐｒｏｐＧｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値９９２．１；実測値９９２．５
【００６４】
実施例３０
【化３２】
0006535688.tif 000040
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｉｂ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ＣｙｃｌｏｐｒｏｐＧｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値９７８．１；実測値９７８．５
【００６５】
実施例３１
【化３３】
0006535688.tif 000041
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ＣｙｃｌｏｐｒｏｐＧｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値１００６．１；実測値１００６．４
【００６６】
実施例３２
【化３４】
0006535688.tif 000042
以下のアミノ酸を使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｈｇ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ＣｙｃｌｏｐｒｏｐＧｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−４−（２−tert−ブトキシカルボニル−エタンスルホニル）−酪酸、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予測値１０３２．２；実測値１０３２．４
【００６７】
材料と方法
細胞培養及び安定なクローンの産生
ヒトＶ１ａ、ヒトオキシトシン（ＯＴＲ）又はヒトＶ２受容体（後者は、キメラＧｑｓ５ Ｇタンパク質と組み合わせられて、シグナルをカルシウムフラックスにリダイレクトする）のいずれかをコードする発現プラスミドを用いて、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞をトランスフェクトした。限界希釈法により安定な細胞をクローニングすることにより、ヒトＶ１ａ、ヒトＶ２＋Ｇｑｓ５又はヒトＯＴＲ受容体のいずれかを発現するモノクローナル細胞株を得、そして受容体活性化後に細胞内のカルシウムフラックスを検出する蛍光イメージングプレートリーダー（ＦＬＩＰＲ）で検出される機能的応答に基づいて選択した。安定な細胞株を、１０％ ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、１％ ペニシリン−ストレプトマイシン、１％ Ｌ−グルタメート、２００ug/ml Geneticinを含有するＦ−１２Ｋ栄養混合物（Kaighnの改変培地）中で湿度 ９５％の１０％ ＣＯ２インキュベーターで３７℃で増殖させた。
【００６８】
蛍光イメージング（蛍光イメージングプレートリーダー、ＦＬＩＰＲ）を用いるカルシウムフラックスアッセイ
アッセイ前の午後に、各ウェルの底から細胞の検査及び蛍光測定が可能な透明底を持つ黒色９６ウェルプレート中に、５０，０００細胞／ウェルの密度で細胞を播種した。細胞の密度は、翌日コンフルエントな単層を得るのに十分であった。２０mM ＨＥＰＥＳ（ｐＨ ７．３）及び２．５mM プロベネシドを含有する、フェノールレッド不含のハンクス平衡塩溶液（アッセイ緩衝液）を各実験について新たに調製した。Beckman Biomek 2000実験室自動ワークステーションを用いて、１％ ＤＭＳＯを含有するアッセイ緩衝液中に化合物の希釈を行った。色素ローディング緩衝液は、アッセイ緩衝液に最終濃度２μM Fluo-4-AM（ＤＭＳＯ及びpluronic acidに溶解）からなった。存在する培養培地をウェルから除去して、色素ローディング緩衝液１００μlを各ウェルに加え、湿度９５％の５％ ＣＯ２インキュベーター中で３７℃でおよそ６０分間インキュベートした。色素を添加したら、細胞をアッセイ緩衝液を用いてEmbla細胞洗浄機で完全に洗浄することにより、取り込まれなかった色素を残らず除去した。アッセイ緩衝液ちょうど１００μlを各ウェルに残した。
【００６９】
色素をロードした細胞を含有する各９６ウェルプレートを、ＦＬＩＰＲ機に入れて、レーザー強度を、低い基底蛍光を検出するのに適したレベルに設定した。アゴニストとして化合物を試験するために、希釈化合物 ２５μlをプレートに１０秒で加えて蛍光測定に付し、蛍光応答を５分間記録した。最大応答を１００％、そして最小応答を０％に設定した内因性完全アゴニストの用量応答曲線に対して、蛍光データをノーマライズした。以下のとおりのMicrosoft Excel XLFitによる４パラメーターのロジスティック方程式を用いて、各アゴニストの濃度応答曲線を作成した：Ｙ＝最小＋（（最大−最小）／（１＋１０（ＬｏｇＥＣ５０−Ｘ）ｎＨ））［ここで、ｙは、ノーマライズした蛍光％であり、最小は、最小ｙであり、最大は、最大ｙであり、ｌｏｇＥＣ５０は、最大誘導蛍光の５０％を生じるｌｏｇ１０濃度であり、ｘは、アゴニスト化合物の濃度のｌｏｇ１０であり、そしてＨは、曲線の傾き（Hill係数）である］。最大値は、アゴニスト試験化合物の有効性をパーセントで与える。最大応答の半分を生じたアゴニストの濃度は、ＥＣ５０値により表され、その対数によりｐＥＣ５０値を得た。
【００７０】
【表１】
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【００７１】
式Ｉの化合物及び式Ｉの化合物の薬学的に許容し得る塩を、医薬として、例えば、医薬製剤の形で使用することができる。医薬製剤は、好ましくは経皮、鼻内、皮下又は静脈内（iv）投与できる。
【００７２】
経皮は、全身的分布のために皮膚を介して活性成分が送達される投与の経路である。例には、薬物送達に使用される経皮パッチ、及び医療又は審美的な目的に使用される経皮インプラントが含まれる。
【００７３】
経鼻投与は、局所的又は全身的効果のいずれかのために薬剤を送達するのに使用でき、局所的効果用の経鼻スプレーはかなり一般的である。ペプチド薬物を、経口投与後の薬剤分解を回避するために経鼻スプレーとして投与してもよい。
【００７４】
皮下注射もまた、ペプチド薬物の投与に一般的である。筋肉内注射は、物質の直接筋肉内への注射である。これは、医薬の投与の幾つかの代替方法の１つである。これはしばしば、少量で投与される特定の形状の医薬に使用される。この注射は皮膚の下に投与すべきである。
【００７５】
静脈内経路は、直接静脈内への液体物質の注入である。他の投与経路と比較して、静脈内経路は、流体及び薬物を身体全体に送達するための最も速い道筋である。
【００７６】
医薬製剤は、更に、保存料、可溶化剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、甘味料、着色料、香味料、浸透圧を変化させる塩、緩衝剤、マスキング剤又は酸化防止剤を含有することができる。これらはまた、更に他の治療的に有用な物質を含有することができる。
【００７７】
式Ｉの化合物又はその薬学的に許容し得る塩及び治療的に不活性な担体を含有する医薬もまた、本発明の目的であり、その製造方法も同様であり、これは、１つ以上の式Ｉの化合物及び／又は薬学的に許容し得る酸付加塩と、所望により１種以上の他の治療的に有用な物質を、１つ以上の治療的に不活性な担体と一緒にガレヌス投与形態にすることを含む。
本発明による最も好ましい適応は、中枢神経系の障害を含む適応、例えば、自閉症、心的外傷後ストレス障害を含むストレス、不安障害及び鬱病を含む不安、統合失調症、精神障害及び記憶喪失、アルコール離脱、薬物依存の治療又は予防、並びにプラダー・ウィリー症候群の処置である。
【００７８】
投与量は、広い限界内で変化させることができ、当然ながら各特定症例における個々の要求に合わせて調整しなければならない。成人に対する投与量は、１日にあたり約０．０１mgから約１０００mgまでの一般式Ｉの化合物、又はそれに対応する量のその薬学的に許容し得る塩で変化させることができる。１日投与量は、単回用量として、又は分割用量にして投与してもよく、更にまた、必要があることが見出されれば、上限を超えてもよい。
【配列表】
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