(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ペプチドに共有結合された、界面活性剤Ｘを含むペプチド生成物であって、該ペプチドは、リンカーアミノ酸Ｕおよび少なくとも１つの他のアミノ酸を含み：
【化１】
0006525456.tif 000086
式中、界面活性剤Ｘは、以下の式Ｉの基であり：
【化２】
0006525456.tif 000087
式中：
Ｒ１ａは、各々の出現で独立して、単結合、Ｈ、または置換または非置換のＣ６−Ｃ２０アルキル基であり；少なくとも１つの出現でＲ１ａは、疎水性の置換または非置換のＣ６−Ｃ２０アルキル基であり、および各々の出現でＣ６−Ｃ２０アルキル基は、独立して、随意に、シアノ、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、フルオロアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロ脂環、アリール、ヘテロアリール、アルコキシ、アルキル−アミノ、ジアルキル−アミノ、アルキルチオ、アリールオキシ、およびアリールチオからなる群の１つ以上で置換され得、
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは、各々の出現で独立して、単結合またはＨであり；
Ｗ１は、各々の出現で独立して、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、または−ＣＨ２−Ｓ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−、−ＣＨ２−、または−Ｓ−であり；
Ｒ２は、各々の出現で独立して、単結合、Ｕに対する単結合、またはＨであり；および
ｎは、２であり；
ペプチドは、以下の式ＩＩであり：
【化３】
0006525456.tif 000088
式中：
Ｚは、−ＯＨ、−Ｎ−Ｒ４−Ｈｉｓ、または−ＮＨ−Ｒ３であり、
ここで、
Ｒ３は、Ｈ、置換または非置換のＣ１−Ｃ１２アルキルまたは１０Ｄａ未満のＰＥＧ鎖であり；および
Ｒ４は、Ｃ２−Ｃ１０アシル基であり；
ａａ１は、Ｈｉｓ、Ｎ−Ｒ４−Ｈｉｓ、ｐＧｌｕ−Ｈｉｓ、またはＮ−Ｒ３−Ｈｉｓであり；
ａａ２は、Ｓｅｒ、Ｄ−Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、ＭｅＰｒｏ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、またはＡｃ５ｃであり；
ａａ３は、Ｇｌｎ、またはＣｉｔであり；
ａａ４は、Ｇｌｙ、またはＤ−Ａｌａであり；
ａａ５は、Ｔｈｒ、またはＳｅｒであり；
ａａ６は、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、２ＦＰｈｅ、ＭｅＰｈｅ、２ＦＭｅＰｈｅ、またはＮａｌ２であり；
ａａ７は、Ｔｈｒ、またはＳｅｒであり；
ａａ８は、Ｓｅｒ、またはＡｓｐであり；
ａａ９は、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり；
ａａ１０は、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｎａｌ２、Ｂｉｐ、Ｂｉｐ２ＥｔＭｅＯ、またはＵであり；
ａａ１１は、存在しない、またはＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｂｉｐ、またはＵであり；
ａａ１２は、存在しない、またはＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、またはＵであり；
ａａ１３は、存在しない、またはＴｙｒ、Ｇｌｎ、Ｃｉｔ、またはＵであり；
ａａ１４は、存在しない、またはＬｅｕ、Ｍｅｔ、Ｎｌｅ、またはＵであり；
ａａ１５は、存在しない、またはＡｓｐ、Ｇｌｕ、またはＵであり；
ａａ１６は、存在しない、またはＳｅｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃ５ｃ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＵであり；
ａａ１７は、存在しない、またはＡｒｇ、ホモアルギニン、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｃｉｔ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、Ｌｙｓ、またはＵであり；
ａａ１８は、存在しない、またはＡｒｇ、ホモアルギニン、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ１９は、存在しない、またはＡｌａ、Ｖａｌ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ２０は、存在しない、またはＧｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｃｉｔ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ２１は、存在しない、またはＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ２２は、存在しない、またはＰｈｅ、Ｔｒｐ、Ｎａｌ２、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ２３は、存在しない、またはＶａｌ、Ｉｌｅ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ２４は、存在しない、またはＧｌｎ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｃｉｔ、またはＵであり；
ａａ２５は、存在しない、またはＴｒｐ、Ｎａｌ２、またはＵであり；
ａａ２６は、存在しない、またはＬｅｕ、またはＵであり；
ａａ２７は、存在しない、またはＭｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｌｙｓ、またはＵであり；
ａａ２８は、存在しない、またはＡｓｎ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｃｉｔ、またはＵであり；
ａａ２９は、存在しない、またはＴｈｒ、Ｇｌｙ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ３０は、存在しない、またはＬｙｓ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、Ａｒｇ、またはＵであり；
ａａ３１は、存在しない、またはＡｒｇ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ３２は、存在しない、またはＡｓｎ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ３３は、存在しない、またはＡｒｇ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ３４は、存在しない、またはＡｓｎ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ３５は、存在しない、またはＡｓｎ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ３６は、存在しない、またはＡｌａ、Ｉｌｅ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ３７は、存在しない、またはＵであり；および
Ｕは、界面活性剤Ｘに共有結合するために使用される、官能基を含む天然または非天然のアミノ酸であり；
ここで、ａａ１−ａａ３７のいずれか２つは、それらの側鎖を介して随意に環化されることで、ラクタム結合を形成し；
但し、ａａ１０−ａａ３７の１つ、または少なくとも１つが、Ｘに共有結合されたリンカーアミノ酸Ｕであり、
ペプチド生成物は、ペプチドに共有結合された界面活性剤Ｘとともに生物学的活性を発揮する、ペプチド生成物。
【請求項２】
（ａ）Ｒ１ａが、置換または非置換のＣ１２−Ｃ２０のアルキル基である；または
（ｂ）界面活性剤Ｘが、オクタデシル、ヘキサデシル、テトラデシル、またはドデシルのアルキル基を含む；または
（ｃ）界面活性剤Ｘが、１−アルキルグリコシドクラスの界面活性剤である；または
（ｄ）界面活性剤Ｘが、１−アイコシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−オクタデシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−テトラデシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−ドデシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−デシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、あるいは１−オクチルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、または官能化した１−アイコシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−オクタデシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−テトラデシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−ドデシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−デシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−オクチルベータ−Ｄ−マルトシド、１−アイコシルベータ−Ｄ−メリビオシド、１−オクタデシルベータ−Ｄ−メリビオシド、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−メリビオシド、１−テトラデシルベータ−Ｄ−メリビオシド、１−ドデシルベータ−Ｄ−メリビオシド、１−デシルベータ−Ｄ−メリビオシド、あるいは１−オクチルベータ−Ｄ−メリビオシド、または対応する６−カルボキシルあるいは６，６’−ジカルボキシルの部分、を含む、
ことを特徴とする、請求項１に記載のペプチド生成物。
【請求項３】
Ｕが、界面活性剤Ｘへの共有結合のために使用される官能基を含む、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、Ｏｒｎ、Ｇｌｕ、または非天然のアミノ酸であることを特徴とする、請求項１または２に記載のペプチド生成物。
【請求項４】
以下の構造を有し：（ａ）
【化４】
0006525456.tif 000089
式中：
Ｚは、−ＯＨ、または−ＮＨ−Ｒ３であり、
ここでＲ３は、Ｈ、置換または非置換のＣ１−Ｃ１２アルキル、または１０Ｄａ未満のＰＥＧ鎖であり；
ａａ１は、Ｈｉｓ、Ｎ−Ａｃ−Ｈｉｓ、ｐＧｌｕ−Ｈｉｓ、またはＮ−Ｒ３−Ｈｉｓであり；
ａａ２は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、ＭｅＰｒｏ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、またはＡｃ５ｃであり；
ａａ３は、Ｇｌｎ、またはＣｉｔであり；
ａａ４は、Ｇｌｙ、またはＤ−Ａｌａであり；
ａａ５は、Ｔｈｒ、またはＳｅｒであり；
ａａ６は、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、２ＦＰｈｅ、ＭｅＰｈｅ、２ＦＭｅＰｈｅ、またはＮａｌ２であり；
ａａ７は、Ｔｈｒ、またはＳｅｒであり；
ａａ８は、Ｓｅｒ、またはＡｓｐであり；
ａａ９は、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり；
ａａ１０は、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｎａｌ２、Ｂｉｐ、Ｂｉｐ２ＥｔＭｅＯ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１１は、存在しない、またはＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｂｉｐ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１２は、存在しない、またはＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１３は、存在しない、またはＴｙｒ、Ｇｌｎ、Ｃｉｔ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１４は、存在しない、またはＬｅｕ、Ｍｅｔ、Ｎｌｅ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１５は、存在しない、またはＡｓｐ、Ｇｌｕ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１６は、存在しない、またはＳｅｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃ５ｃ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１７は、存在しない、またはＡｒｇ、ホモアルギニン、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｃｉｔ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１８は、存在しない、またはＡｒｇ、ホモアルギニン、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１９は、存在しない、またはＡｌａ、Ｖａｌ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２０は、存在しない、またはＧｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｃｉｔ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２１は、存在しない、またはＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２２は、存在しない、またはＰｈｅ、Ｔｒｐ、Ｎａｌ２、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２３は、存在しない、またはＶａｌ、Ｉｌｅ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２４は、存在しない、またはＧｌｎ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｃｉｔ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２５は、存在しない、またはＴｒｐ、Ｎａｌ２、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２６は、存在しない、またはＬｅｕ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２７は、存在しない、またはＭｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｌｙｓ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２８は、存在しない、またはＡｓｎ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、またはＵ（Ｘ）であり；および
ａａ２９は、存在しない、またはＴｈｒ、Ｇｌｙ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ここで、ａａ１−ａａ２９のいずれか２つは、それらの側鎖を介して随意に環化されることで、ラクタム結合を形成し；
但し、ａａ１０、ａａ１１、ａａ１２、ａａ１６、ａａ１７、ａａ１８、ａａ１９、ａａ２０、ａａ２１、ａａ２２、ａａ２３、ａａ２４、ａａ２５、ａａ２６、ａａ２７、ａａ２８およびａａ２９の１つ、または少なくとも１つが、Ｘに共有結合された天然または非天然のアミノ酸Ｕであり、または以下の構造を有し：（ｂ）
【化５】
0006525456.tif 000090
式中：
Ｚは、−ＯＨ、または−ＮＨ−Ｒ３であり、
ここでＲ３は、Ｈ、置換または非置換のＣ１−Ｃ１２アルキル、または１０Ｄａ未満のＰＥＧ鎖であり；
ａａ２は、Ｇｌｙ、ＭｅＰｒｏ、またはＡｉｂであり；
ａａ３は、Ｇｌｎ、またはＣｉｔであり；
ａａ６は、Ｐｈｅ、２ＦＰｈｅ、ＭｅＰｈｅ、２ＦＭｅＰｈｅ、またはＮａｌ２であり；
ａａ１０は、Ｔｙｒ、Ｎａｌ２、Ｂｉｐ、Ｂｉｐ２ＥｔＭｅＯ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１１は、存在しない、またはＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｂｉｐ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１２は、存在しない、またはＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１３は、存在しない、またはＴｙｒ、Ｇｌｎ、Ｃｉｔ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１４は、存在しない、またはＬｅｕ、Ｎｌｅ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１５は、存在しない、またはＡｓｐ、Ｇｌｕ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１６は、存在しない、またはＳｅｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１７は、存在しない、またはＡｒｇ、ホモアルギニン、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｃｉｔ、Ａｉｂ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１８は、存在しない、またはＡｒｇ、ホモアルギニン、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１９は、存在しない、またはＡｌａ、Ａｉｂ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２０は、存在しない、またはＧｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｃｉｔ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２１は、存在しない、またはＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ａｉｂ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２２は、存在しない、またはＰｈｅ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２３は、存在しない、またはＶａｌ、Ｉｌｅ、ＡｉｂまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２４は、存在しない、またはＡｌａ、Ｇｌｎ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２５は、存在しない、またはＴｒｐ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２６は、存在しない、またはＬｅｕ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２７は、存在しない、またはＭｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｌｙｓ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２８は、存在しない、またはＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｃｉｔ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２９は、存在しない、またはＴｈｒ、Ａｉｂ、またはＵ（Ｘ）であり；および
ａａ３０は、存在しない、またはＡｒｇ、またはＵ（Ｘ）であり；
ここで、ａａ１−ａａ２３のいずれか２つは、それらの側鎖を介して随意に環化されることで、ラクタム結合を形成し；
但し、ａａ１０、ａａ１１、ａａ１２、ａａ１６、ａａ１７、ａａ１８、ａａ１９、ａａ２０、ａａ２１、ａａ２２、ａａ２３、ａａ２４、およびａａ２８の１つ、または少なくとも１つが、Ｘに共有結合された天然または非天然のアミノ酸Ｕである、
ことを特徴とする、請求項１乃至３のいずれか１項に記載のペプチド生成物。
【請求項５】
（ａ）ａａ１７、ａａ２０、ａａ２４、またはａａ２８が、Ｘに結合されたリジン残基である；または
（ｂ）ａａ２が、グリシンまたはＡｉｂの残基である；または
（ｃ）ペプチドが、１つ以上のＡｉｂ残基を含む；または
（ｄ）ａａ１６およびａａ２０が、環化されることで、ラクタム結合を形成する、
ことを特徴とする、請求項１乃至４のいずれか１項に記載のペプチド生成物。
【請求項６】
ペプチドに共有結合された、界面活性剤Ｘを含むペプチド生成物であって、該ペプチドは、リンカーアミノ酸Ｕおよび少なくとも１つの他のアミノ酸を含み、ペプチド生成物は、ペプチドに共有結合された界面活性剤Ｘとともに生物学的活性を発揮し： 
【化６】
0006525456.tif 000091
式中、界面活性剤Ｘは、以下の式Ｉの基であり：
【化７】
0006525456.tif 000092
式中：
Ｒ１ａは、各々の出現で独立して、単結合、Ｈ、または置換または非置換のＣ６−Ｃ２０アルキル基であり；少なくとも１つの出現でＲ１ａは、疎水性の置換または非置換のＣ６−Ｃ２０アルキル基であり、および各々の出現でＣ６−Ｃ２０アルキル基は、独立して、随意に、シアノ、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、フルオロアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロ脂環、アリール、ヘテロアリール、アルコキシ、アルキル−アミノ、ジアルキル−アミノ、アルキルチオ、アリールオキシ、およびアリールチオからなる群の１つ以上で置換され得、
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは、各々の出現で独立して、単結合またはＨであり；
Ｗ１は、各々の出現で独立して、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、または−ＣＨ２−Ｓ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−、−ＣＨ２−、または−Ｓ−であり；
Ｒ２は、各々の出現で独立して、単結合、Ｕに対する単結合、またはＨであり；
ｎは、１または２であり；および
Ｕは、界面活性剤Ｘに共有結合するために使用される、官能基を含む天然または非天然のアミノ酸であり；
ペプチドは、以下の構造を有し：（ａ）
【化８】
0006525456.tif 000093
式中、
ａａ２は、ＧｌｙまたはＡｉｂであり；
ａａ１６は、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、またはＡｉｂであり；
ａａ１７は、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２０は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、またはＡｒｇであり；
ａａ２３は、ＩｌｅまたはＶａｌであり；
ａａ２４は、Ａｌａ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２７は、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、またはＬｅｕであり；および
ａａ２８は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、またはＵ（Ｘ）であり、
少なくとも１つのＵ（Ｘ）を有し、および
図２の表２のＥＵ−Ａ５０７と名付けられたペプチド生成物を除く、または以下の構造を有し：（ｂ）
【化９】
0006525456.tif 000094
式中、
ａａ２は、ＧｌｙまたはＡｉｂであり；
ａａ１６は、Ｇｌｕ、Ａｌａ、Ａｉｂであり；
ａａ１７は、Ｕ（Ｘ）であり；および
ａａ２７は、ＬｅｕまたはＶａｌであり、または以下の構造を有し：（ｃ）
【化１０】
0006525456.tif 000095
式中、
ａａ２は、ＧｌｙまたはＡｉｂであり；
ａａ１６は、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、またはＡｉｂであり；
ａａ１７は、Ａｒｇ、ホモアルギニン、またはＧｌｎであり；
ａａ２０は、ＬｙｓまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２３は、ＩｌｅまたはＶａｌであり；
ａａ２４は、Ｇｌｎ、Ａｌａ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２７は、ＬｅｕまたはＶａｌであり；および
ａａ２８は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、またはＵ（Ｘ）であり、および
少なくとも１つのＵ（Ｘ）を有し、または以下の構造を有し：（ｄ）
【化１１】
0006525456.tif 000096
式中、
ａａ２は、ＧｌｙまたはＡｉｂであり；
ａａ１６は、Ｇｌｕ、Ａｌａ、またはＡｉｂであり；
ａａ１７は、Ａｒｇ、ホモアルギニン、またはＧｌｎであり；
ａａ２０は、Ｕ（Ｘ）であり；
ａａ２３は、ＩｌｅまたはＶａｌであり；
ａａ２４は、ＧｌｎまたはＡｌａであり；
ａａ２７は、ＬｅｕまたはＶａｌであり；および
ａａ２８は、ＡｓｎまたはＧｌｎであり、または以下の構造を有し：（ｅ）
【化１２】
0006525456.tif 000097
式中、
ａａ２は、ＡｉｂまたはＧｌｙであり；
ａａ１６およびａａ２０は、各々、個々に、ＬｙｓまたはＧｌｕのいずれかであり、それらの側鎖を介して環化されることで、ラクタム結合を形成し；
ａａ１７は、Ａｒｇ、ホモアルギニン、またはＧｌｎであり；
ａａ２７は、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＮｌｅであり；
ａａ２８は、ＡｓｎまたはＧｌｎであり；および
Ｘは、１−アルキルベータ−Ｄ−グルコシド、１−アルキルベータ−Ｄ−マルトシド、または１−アルキルベータ−Ｄ−メリビオシドであり、ここでアルキルが、Ｃ８−Ｃ２０の直鎖状のアルキル鎖であり、および
図２の表２のＥＵ−Ａ５０７と名付けられたペプチド生成物を除く、または以下の構造を有し：（ｆ）
【化１３】
0006525456.tif 000098
式中、
ａａ２は、ＡｉｂまたはＧｌｙであり；
ａａ１６は、Ｇｌｕ、Ａｌａ、またはＡｉｂであり；
ａａ１７は、Ｌｙｓ（Ｎ−オメガ−Ｘ）であり；および
Ｘは、１−アルキルベータ−Ｄ−グルコシド、１−アルキルベータ−Ｄ−マルトシド、または１−アルキルベータ−Ｄ−メリビオシドであり、ここでアルキルが、Ｃ８−Ｃ２０の直鎖状のアルキル鎖であり、または以下の構造を有し：（ｇ）
【化１４】
0006525456.tif 000099
式中、
ａａ２は、ＧｌｙまたはＡｉｂであり；
ａａ１６は、Ｇｌｕ、Ａｌａ、またはＡｉｂであり；
ａａ１７は、Ａｒｇまたはホモアルギニンであり；
ａａ２０は、Ｌｙｓ（Ｎ−オメガ−Ｘ）であり；
ａａ２３は、ＩｌｅまたはＶａｌであり；
ａａ２４は、ＧｌｎまたはＡｌａであり；
ａａ２７は、ＬｅｕまたはＶａｌであり；
ａａ２８は、ＡｓｎまたはＧｌｎであり；および
Ｘは、１−アルキルベータ−Ｄ−グルコシド、１−アルキルベータ−Ｄ−マルトシド、または１−アルキルベータ−Ｄ−メリビオシドであり、ここでアルキルが、Ｃ８−Ｃ２０の直鎖状のアルキル鎖であり、または以下の構造を有し：（ｈ）
【化１５】
0006525456.tif 000100
式中、
ａａ２は、ＧｌｙまたはＡｉｂであり；および
ａａ２８は、ＡｓｎまたはＧｌｎであり、または以下の構造を有し：（ｉ）
【化１６】
0006525456.tif 000101
式中、
ａａ１６およびａａ２０は、各々、個々に、ＬｙｓまたはＧｌｕのいずれかであり、それらの側鎖を介して環化されることで、ラクタム結合を形成し；
ａａ２８は、ＡｓｎまたはＧｌｎであり；および
Ｘは、１−アルキルベータ−Ｄ−グルコシド、１−アルキルベータ−Ｄ−マルトシド、または１−アルキルベータ−Ｄ−メリビオシド、あるいは対応するアルファグリコシドであり、ここでアルキルは、Ｃ８−Ｃ２０の直鎖状のアルキル鎖であり、または以下の構造を有し：（ｊ）
【化１７】
0006525456.tif 000102
式中、
Ｇｌｕ＊１６およびＬｙｓ＊２０は、それらの側鎖を介して環化されることで、ラクタム結合を形成し；および
Ｘは、１−アルキルベータ−Ｄ−グルコシド、１−アルキルベータ−Ｄ−マルトシド、または１−アルキルベータ−Ｄ−メリビオシド、あるいは対応するアルファグリコシドであり、ここでアルキルは、Ｃ８−Ｃ２０の直鎖状のアルキル鎖である、
ことを特徴とする、ペプチド生成物。
【請求項７】
ＥＵ−Ａ７７０およびＥＵ−Ａ７７４と名付けられたペプチド生成物を除く、図３の表３のペプチド生成物から選択されるペプチド生成物。
【請求項８】
ＥＵ−Ａ９９４と名付けられたペプチド生成物またはＥＵ−Ａ１０２４と名付けられたペプチド生成物である、請求項７に記載のペプチド生成物。
【請求項９】
インスリン抵抗性に関係する疾病を処置するための製剤の調製における請求項１乃至８のいずれか１項のペプチド生成物の使用。
【請求項１０】
糖尿病を処置するための製剤の調製における請求項１乃至８のいずれか１項のペプチド生成物の使用であって、請求項１乃至３および５のいずれか１項のペプチド生成物のペプチドが、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏ．１のアミノ酸残基ａａ１−ａａ２７、ａａ１−ａａ２８、ａａ１−ａａ２９、またはａａ１−ａａ３０を含むグルカゴン類似体を含み、ペプチド生成物が、随意に体重減少を引き起こす、使用。
【請求項１１】
心血管系疾患を処置するための製剤の調製における請求項１乃至８のいずれか１項のペプチド生成物の使用であって、請求項１乃至３および５のいずれか１項のペプチド生成物のペプチドが、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏ．１のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１７、ａａ１−ａａ１８、ａａ１−ａａ１９、またはａａ１−ａａ２０を含むグルカゴン類似体を含み、心血管系疾患が、虚血性の事象に関係する、使用。
【請求項１２】
以下の構造を有するペプチド生成物：（ａ）
【化１８】
0006525456.tif 000103
または（ｂ）
【化１９】
0006525456.tif 000104
または（ｃ）
【化２０】
0006525456.tif 000105
または（ｄ）
【化２１】
0006525456.tif 000106
または（ｅ）
【化２２】
0006525456.tif 000107
または（ｆ）
【化２３】
0006525456.tif 000108
または（ｇ）
【化２４】
0006525456.tif 000109
または（ｈ）
【化２５】
0006525456.tif 000110
または（ｉ）
【化２６】
0006525456.tif 000111
または（ｊ）
【化２７】
0006525456.tif 000112
または（ｋ）
【化２８】
0006525456.tif 000113
または（ｌ）
【化２９】
0006525456.tif 000114
または（ｍ）
【化３０】
0006525456.tif 000115
または（ｎ）
【化３１】
0006525456.tif 000116
または（ｏ）
【化３２】
0006525456.tif 000117
または（ｐ）
【化３３】
0006525456.tif 000118
または（ｑ）
【化３４】
0006525456.tif 000119
または（ｒ）
【化３５】
0006525456.tif 000120
または（ｓ）
【化３６】
0006525456.tif 000121
または（ｔ）
【化３７】
0006525456.tif 000122
または（ｕ）
【化３８】
0006525456.tif 000123
または（ｖ）
【化３９】
0006525456.tif 000124
または（ｗ）
【化４０】
0006525456.tif 000125
または（ｘ）
【化４１】
0006525456.tif 000126
または（ｙ）
【化４２】
0006525456.tif 000127
または（ｚ）
【化４３】
0006525456.tif 000128
【請求項１３】
メタボリック症候群を処置するための製剤の調製における請求項１乃至８および１２のいずれか１項のペプチド生成物の使用であって、該ペプチド生成物が随意に、請求項１２のペプチド生成物である、使用。
【請求項１４】
請求項１乃至８および１２のいずれか１項の治療上有効な量のペプチド生成物、またはその薬学的に許容可能な塩、および少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、２０１２年１１月２０日に出願の、米国仮特許出願第６１／７２８，６４９号の利益を主張し、その全体が引用によって本明細書に組み込まれる。
【０００２】
真性糖尿病の増加する罹患率は、患者の罹病率および死亡率に対する主要な寄与体および主要な経済的負担である、蔓延する世界的な健康危機である。肥満症は、２型糖尿病の重要な危険因子であり、２型糖尿病の患者のおよそ９０％は、太り過ぎか、肥満である。肥満症は、世界中で急速に増加する問題であり、現在、米国の成人の６５％以上は太り過ぎである（Ｈｅｄｌｅｙ， Ａ．Ａ．， ｅｔ ａｌ． （２００４） ＪＡＭＡ ２９１： ２８４７−２８５０）。肥満症および真性糖尿病に対する安全且つ効果的な薬品治療の発達が必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
本明細書には、限定されないが、肥満症、症候群Ｘ、メタボリック症候群、インスリン抵抗性、２型糖尿病、高血圧症、心保護、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、ベータ細胞保護などを含む、インスリン抵抗性に関係する障害の処置または予防のための組成物および方法が記載される。幾つかの実施形態では、前記方法は、ペプチド及び／又はタンパク質による予防的な及び／又は治療上の処置を含む。天然のペプチド及び／又はタンパク質およびペプチド及び／又はタンパク質の製剤には、しばしば、医療でのそれらの使用において幾つかの制限がある（Ｎｅｓｔｏｒ，Ｊ．Ｊ．，Ｊｒ．（２００７）Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＩＩ ２：５７３−６０１）、例えば、作用の短い持続時間、乏しいバイオアベイラビリティ、および受容体サブタイプの選択性の欠如などが挙げられる。加えて、ペプチド及び／又はタンパク質は、製剤中に不安定であり、しばしば、凝集の影響下にある。
【０００４】
本明細書には、特定の共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質（例えば、ＧＬＰ−１、グルカゴン、関連する類似体（ａｎａｌｏｇｓ）など）が記載され、これによって、修飾されたペプチド及び／又はタンパク質の投与後の作用のより長い持続時間及び／又はを改善されたバイオアベイラビリティが可能となる。そのような共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質は、肥満症、メタボリック症候群、インスリン抵抗性、２型糖尿病、高血圧症、アテローム性動脈硬化症などに関係する疾病の予防及び／又は処置に適している。
【０００５】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質は、グリコシド界面活性剤に付けられる。一態様では、共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質は、グリコシド界面活性剤に付けられ、ここでペプチド及び／又はタンパク質は、界面活性剤中のグリコシドに付けられ、その後、グリコシドは疎水基に付けられる。本明細書にはまた、幾つかの実施形態において、界面活性剤の組み込みを介する、修飾されたペプチド及び／又はタンパク質（例えば、修飾されたＧＬＰ１、グルカゴン、オキシントモジュリン、グルカゴンの類似体、オキシントモジュリンまたはＧＬＰ１、他のインクレチンなど）の合成のための、試薬および中間物が提供される。
【０００６】
本明細書には、幾つかの実施形態において、ペプチドに共有結合的に付けられた、界面活性剤Ｘを含むペプチド生成物が提供され、ペプチドは、リンカーアミノ酸Ｕおよび少なくとも１つの他のアミノ酸を含み：
【０００７】
【化１】
0006525456.tif 000002
式中、界面活性剤Ｘは、以下の式Ｉの基であり：
【０００８】
【化２】
0006525456.tif 000003
式中：
Ｒ１ａは、各々の出現で独立して、単結合、Ｈ、保護基、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、糖類、置換または非置換のアルコキシアリール基、あるいは置換または非置換のアラルキル基であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは、各々の出現で独立して、単結合、Ｈ、保護基、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換のアルコキシアリール基、あるいは置換または非置換のアラルキル基であり；
Ｗ１は、各々の出現で独立して、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、−（Ｃ＝Ｓ）−、−（Ｃ＝Ｓ）−ＮＨ−、または−ＣＨ２−Ｓ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−、−ＣＨ２−、または−Ｓ−であり；
Ｒ２は、各々の出現で独立して、単結合、Ｈ、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換のアルコキシアリール基、あるいは置換または非置換のアラルキル基、−ＮＨ２、−ＳＨ、Ｃ２−Ｃ４−アルケン、Ｃ２−Ｃ４−アルキン、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｂｒ、−（ＣＨ２）ｍ−マレイミド、あるいは−Ｎ３であり；
ｎは、１、２または３であり；
ｍは、１−１０の整数であり；
ペプチドは、以下の式ＩＩから選択され：
【０００９】
【化３】
0006525456.tif 000004
式中：
Ｚは、ＯＨ、Ｎ−Ｒ４−Ｈｉｓ、または−ＮＨ−Ｒ３であり、
ここで、
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１２の置換または非置換のアルキルあるいは１０Ｄａ未満のＰＥＧ鎖であり；および
Ｒ４は、Ｃ２−Ｃ１０アシル基、例えば、ＡｃまたはＢｚであり；
ａａ１は、Ｈｉｓ、Ｎ−Ｒ４−Ｈｉｓ、ｐＧｌｕ−Ｈｉｓ、またはＮ−Ｒ３−Ｈｉｓであり；
ａａ２は、Ｓｅｒ、Ｄ−Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、ＭｅＰｒｏ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、またはＡｃ５ｃであり；
ａａ３は、Ｇｌｎ、またはＣｉｔであり；
ａａ４は、Ｇｌｙ、またはＤ−Ａｌａであり；
ａａ５は、Ｔｈｒ、またはＳｅｒであり；
ａａ６は、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、２ＦＰｈｅ、ＭｅＰｈｅ、２ＦＭｅＰｈｅ、またはＮａｌ２であり；
ａａ７は、Ｔｈｒ、またはＳｅｒであり；
ａａ８は、Ｓｅｒ、またはＡｓｐであり；
ａａ９は、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり；
ａａ１０は、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｎａｌ２、Ｂｉｐ、Ｂｉｐ２ＥｔＭｅＯ、またはＵであり；
ａａ１１は、存在しない、またはＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｂｉｐ、またはＵであり；
ａａ１２は、存在しない、またはＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、またはＵであり；
ａａ１３は、存在しない、またはＴｙｒ、Ｇｌｎ、Ｃｉｔ、またはＵであり；
ａａ１４は、存在しない、またはＬｅｕ、Ｍｅｔ、Ｎｌｅ、またはＵであり；
ａａ１５は、存在しない、またはＡｓｐ、Ｇｌｕ、またはＵであり；
ａａ１６は、存在しない、またはＳｅｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃ５ｃ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＵであり；
ａａ１７は、存在しない、またはＡｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｃｉｔ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、Ｌｙｓ、またはＵであり；
ａａ１８は、存在しない、またはＡｒｇ、ｈＡｒｇ、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ１９は、存在しない、またはＡｌａ、Ｖａｌ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ２０は、存在しない、またはＧｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｃｉｔ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ２１は、存在しない、またはＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ２２は，存在しない、またはＰｈｅ、Ｔｒｐ、Ｎａｌ２、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ２３は、存在しない、またはＶａｌ、Ｉｌｅ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ２４は、存在しない、またはＧｌｎ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｃｉｔ、またはＵであり；
ａａ２５は、存在しない、またはＴｒｐ、Ｎａｌ２、またはＵであり；
ａａ２６は、存在しない、またはＬｅｕ、またはＵであり；
ａａ２７は、存在しない、またはＭｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｌｙｓ、またはＵであり；
ａａ２８は、存在しない、またはＡｓｎ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｃｉｔ、またはＵであり；
ａａ２９は、存在しない、またはＴｈｒ、Ｇｌｙ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ３０は、存在しない、またはＬｙｓ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５Ｃ、Ａｒｇ、またはＵであり；
ａａ３１は、存在しない、またはＡｒｇ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ３２は、存在しない、またはＡｓｎ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ３３は、存在しない、またはＡｒｇ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ３４は、存在しない、またはＡｓｎ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ３５は、存在しない、またはＡｓｎ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ３６は、存在しない、またはＩｌｅ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ３６は、存在しない、またはＡｌａ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ３７は、存在しない、またはＵであり；
Ｕは、界面活性剤Ｘに共有結合的に付けるために使用される、官能基を含む天然または非天然のアミノ酸であり；
ここで、ａａ１−ａａ３７のいずれか２つは、それらの側鎖を介して随意に環化されることで、ラクタム結合を形成し；
但し、ａａ１０−ａａ３７の１つ、または少なくとも１つが、Ｘに共有結合的に付けられたリンカーアミノ酸Ｕであることを前提とする。
【００１０】
幾つかの実施形態では、ｎは１である。幾つかの実施形態では、ｎは２であり、第１グリコシドは、第１グリコシドのＷ２と、第２グリコシドのＯＲ１ｂ、ＯＲ１ｃまたはＯＲ１ｄのいずれか１つとの間の結合を介して第２グリコシドに付けられる。幾つかの実施形態では、ｎは３であり、第１グリコシドは、第１グリコシドのＷ２と、第２グリコシドのＯＲ１ｂ、ＯＲ１ｃまたはＯＲ１ｄのいずれか１つとの間の結合を介して第２グリコシドに付けられ、第２グリコシドは、第２グリコシドのＷ２と、第３グリコシドのＯＲ１ｂ、ＯＲ１ｃまたはＯＲ１ｄのいずれか１つとの間の結合を介して第３グリコシドに付けられる。
【００１１】
一実施形態では、式Ｉ−Ａの化合物は、Ｘが以下の構造を有する化合物であり：
【００１２】
【化４】
0006525456.tif 000005
式中：
Ｒ１ａは、Ｈ、保護基、糖類、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、またはステロイド核を含有する部分であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは、各々の出現で独立して、Ｈ、保護基、あるいは置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基であり；
Ｗ１は、各々の出現で独立して、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、−（Ｃ＝Ｓ）−、−（Ｃ＝Ｓ）−ＮＨ−、または−ＣＨ２−Ｓ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−、−Ｓ−であり；
Ｒ２は、単結合、Ｃ２−Ｃ４−アルケン、Ｃ２−Ｃ４−アルキン、または−（ＣＨ２）ｍ−マレイミドであり；および
ｍは、１−１０である。
【００１３】
別の実施形態では、式Ｉ−Ａの化合物は、Ｘが以下の構造を有する化合物である：
【００１４】
【化５】
0006525456.tif 000006
【００１５】
したがって、上に記載される実施形態では、Ｒ２は単結合である。
【００１６】
例えば、上に記載されるＸの構造の典型的な実施形態では、Ｗ１は、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−であり、Ｒ２は、Ｗ１と、ペプチド内のアミノ酸残基Ｕとの間の単結合（例えば、ペプチドに存在するリジン残基の側鎖中のアミノ基）である。
【００１７】
さらなる実施形態では、式Ｉ−Ａの化合物は、Ｘが以下の構造を有する化合物である：
【００１８】
【化６】
0006525456.tif 000007
【００１９】
例えば、上に記載されるＸの構造の典型的な実施形態では、Ｗ１は、−ＣＨ２−であり、Ｒ２は、Ｘ上のアルキル結合したマレイミド官能基であり、Ｒ２は、ペプチド内のアミノ酸残基Ｕの適切な部分に付けられる（例えば、ペプチドのシステイン残基中のチオール基は、Ｘ上のマレイミドとチオエーテルを形成する）。
【００２０】
また別の実施形態では、式Ｉ−Ａの化合物は、Ｘが以下の構造を有する化合物であり：
【００２１】
【化７】
0006525456.tif 000008
式中：
Ｒ１ａは、Ｈ、保護基、糖類、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、またはステロイド核を含有する部分であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは、各々の出現で独立して、Ｈ、保護基、あるいは置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基であり；
Ｗ１は、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−であり；および
Ｒ２は、単結合である。
【００２２】
さらなる実施形態では、式Ｉ−Ａの化合物は、Ｘが以下の構造を有する化合物であり：
【００２３】
【化８】
0006525456.tif 000009
式中：
Ｒ１ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは、Ｈであり；
Ｗ１は、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−であり；および
Ｒ２は、単結合である。
【００２４】
上に又は本明細書に記載される幾つかの実施形態では、Ｒ１ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基である。
【００２５】
上に又は本明細書に記載される幾つかの実施形態では、Ｒ１ａは、置換または非置換のＣ６−Ｃ２０アルキル基である。
【００２６】
上に又は本明細書に記載される幾つかの実施形態では、Ｒ１ａは、糖類である。幾つかの実施形態では、糖類は、ガラクトースである。特定の実施形態では、糖類は、アルファ結合したガラクトースである。他の実施形態では、糖類は、アルファ結合したガラクトピラノース、ベータ結合したガラクトピラノース、アルファ結合したガラクトフラノース、またはベータ結合したガラクトフラノースである。
【００２７】
本明細書にはまた、式Ｉ−Ａ中のＸが以下の構造を有する、代替的な実施形態が熟慮される：
【００２８】
【化９】
0006525456.tif 000010
【００２９】
例えば、上に記載されるＸの構造の典型的な実施形態では、Ｗ１は−Ｓ−であり、Ｒ２はＣ１−Ｃ３０アルキル基であり、Ｗ２はＳであり、Ｒ１ａは、Ｗ２と、ペプチド内のアミノ酸残基Ｕの適切な部分との間の単結合である（例えば、ペプチドのシステイン残基中のチオール基は、Ｘとチオエーテルを形成する）。
【００３０】
上に記載されるＸの構造の別の典型的なの実施形態では、Ｗ１は−Ｏ−であり、Ｒ２はＣ１−Ｃ３０アルキル基であり、Ｗ２はＯであり、Ｒ１ａは、Ｗ２と、ペプチド内のアミノ酸残基Ｕの適切な部分との間の単結合である（例えば、ペプチドのセリンまたはテレオニンの残基中のヒドロキシル基は、Ｘとエーテルを形成する）。
【００３１】
幾つかの実施形態では、Ｕは、Ｘに共有結合的に付けるために使用され、二塩基性の天然または非天然のアミノ酸、チオールを含む天然または非天然のアミノ酸、−Ｎ３基を含む非天然のアミノ酸、アセチレン基を含む非天然のアミノ酸、あるいは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｂｒまたは−（ＣＨ２）ｍ−マレイミドを含む非天然のアミノ酸であり、ここで、ｍは、１−１０である。
【００３２】
ペプチド生成物の幾つかの実施形態では、界面活性剤は、１−アルキルグリコシドクラスの界面活性剤である。ペプチド生成物の幾つかの実施形態では、界面活性剤は、アミド結合を介してペプチドに付けられる。
【００３３】
ペプチド生成物の幾つかの実施形態では、界面活性剤Ｘは、１−アイコシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−オクタデシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−テトラデシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−ドデシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−デシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−オクチルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−アイコシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−オクタデシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−テトラデシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−ドデシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−デシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−オクチルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、または官能化した１−アイコシルベータ−Ｄ−グルコース、１−オクタデシルベータ−Ｄ−グルコース、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−グルコース、１−テトラデシルベータ−Ｄ−グルコース、１−ドデシルベータ−Ｄ−グルコース、１−デシルベータ−Ｄ−グルコース、１−オクチルベータ−Ｄ−グルコース、１−アイコシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−オクタデシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−テトラデシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−ドデシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−デシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−オクチルベータ−Ｄ−マルトシド、１−アイコシルベータ−Ｄ−メリビオシド（ｍｅｌｉｂｉｏｓｉｄｅ）、１−オクタデシルベータ−Ｄ−メリビオシド、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−メリビオシド、１−テトラデシルベータ−Ｄ−メリビオシド、１−ドデシルベータ−Ｄ−メリビオシド、１−デシルベータ−Ｄ−メリビオシド、１−オクチルベータ−Ｄ−メリビオシドなどの他に、対応する６’または６’，６のカルボン酸を含み、ペプチド生成物は、前述の基とペプチド上の基（例えば、前述の基における−ＣＯＯＨ基とペプチドのアミノ基）との間の結合の形成によって調製される。幾つかの実施形態では、界面活性剤Ｘは、１−テトラデシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−ドデシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−デシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−オクチルベータ−Ｄ−マルトシド、１−アイコシルベータ−Ｄ−メリビオシド、１−オクタデシルベータ−Ｄ−メリビオシド、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−メリビオシド、１−テトラデシルベータ−Ｄ−メリビオシド、１−ドデシルベータ−Ｄ−メリビオシド、１−デシルベータ−Ｄ−メリビオシド、１−オクチルベータ−Ｄ−メリビオシドの他に、対応する６’または６’，６のカルボン酸である。幾つかの実施形態では、界面活性剤Ｘは、１−テトラデシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−アイコシルベータ−Ｄ−メリビオシド、１−オクタデシルベータ−Ｄ−メリビオシド、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−メリビオシド、１−テトラデシルベータ−Ｄ−メリビオシド、１−ドデシルベータ−Ｄ−メリビオシド、１−デシルベータ−Ｄ−メリビオシド、または１−オクチルベータ−Ｄ−メリビオシドである。
【００３４】
ペプチド生成物の幾つかの実施形態では、Ｕは、ペプチドの末端アミノ酸である。ペプチド生成物の幾つかの実施形態では、Ｕは、ペプチドの非末端アミノ酸である。ペプチド生成物の幾つかの実施形態では、Ｕは、天然のＤ−またはＬ−アミノ酸である。ペプチド生成物の幾つかの実施形態では、Ｕは、非天然のアミノ酸である。ペプチド生成物の幾つかの実施形態では、Ｕは、界面活性剤Ｘに共有結合的に付けるために使用される官能基を含む、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、Ｏｒｎ、または非天然のアミノ酸から選択される。
【００３５】
ペプチド生成物の幾つかの実施形態では、ペプチドを界面活性剤Ｘに共有結合的に付けるために使用される官能基は、−ＮＨ２、−ＳＨ、−ＯＨ、−Ｎ３、ハロアセチル、−（ＣＨ２）ｍ−マレイミド（ここでｍは１−１０である）、またはアセチレン基である。
【００３６】
幾つかの実施形態では、２つの異なるアミノ酸残基の側鎖官能基は、結合されて、環状ラクタムを形成する。この結合は、それ故結合された２つの残基上でアスタリスクによって示される。例えば、幾つかの実施形態では、Ｌｙｓ＊側鎖は、Ｇｌｕ＊の側鎖と環状ラクタムを形成する。幾つかの実施形態では、このようなラクタム構造は、反転され（ｒｅｖｅｒｓｅｄ）、Ｇｌｕ＊およびＬｙｓ＊から形成される。幾つかの例でのこのようなラクタム結合は、ペプチドにおいてアルファヘリックス構造を安定させると知られている（Ｃｏｎｄｏｎ， Ｓ．Ｍ．， ｅｔ ａｌ． （２００２） Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ １０： ７３１−７３６； Ｍｕｒａｇｅ， Ｅ．Ｎ．， ｅｔ ａｌ （２００８） Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ １６： １０１０６−１２）； Ｍｕｒａｇｅ， Ｅ．Ｎ．， ｅｔ ａｌ． （２０１０） Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ５３： ６４１２−２０）。幾つかの実施形態では、システイン残基は、配座制御（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ）の類似した形態を達成するために、およびヘリックス構造の形成を助けるために、ジスルフィド形成を介し結合されてもよい（Ｌｉ， Ｙ．， ｅｔ ａｌ． （２０１１） Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ３２： １４００−１４０７）。幾つかの実施形態では、配座制御の類似した形態および安定化したヘリカル配座を達成するために、２つの異なるアミノ酸残基の側鎖官能基は、結合されて、側鎖アジドとアルキン官能基との間の「クリック反応」を介して生成された複素環を形成する（Ｌｅ Ｃｈｅｖａｌｉｅｒ Ｉｓａａｄ Ａ．， ｅｔ ａｌ． （２００９） Ｊ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｃｉ １５： ４５１−４）。幾つかの実施形態では、２つの異なるアミノ酸残基の側鎖官能基は、結合されて、オレフィン複分解反応の使用を介してＣ−Ｃ二重結合を形成し、Ｃ−Ｃ単結合への還元（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）によってさらに修飾され得る（Ｖｅｒｄｉｎｅ， Ｇ．Ｌ． ａｎｄ Ｈｉｌｉｎｓｋｉ， Ｇ． Ｊ． （２０１１） Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ ５０３： ３−３３）。
【００３７】
幾つかの実施形態では、共有結合的に結合されたアルキルグリコシドを含むペプチド生成物は、共有結合的に修飾されたグルカゴンまたはその類似体である。このような実施形態の幾つかにおいて、ペプチド生成物は、共有結合的に結合した１−Ｏ−アルキル β−Ｄ−グルクロン酸を含み、ペプチドは、グルカゴンの類似体である。
【００３８】
幾つかの実施形態では、共有結合的に結合されたアルキルグリコシドを含むペプチド生成物は、共有結合的に修飾されたＧＬＰ−１、またはその類似体である。このような実施形態の幾つかにおいて、ペプチド生成物は、共有結合的に結合した１−Ｏ−アルキル β−Ｄ−グルクロン酸を含み、ペプチドは、ＧＬＰ−１の類似体である。
【００３９】
幾つかの実施形態では、式Ｉ−Ａのペプチド生成物は、以下の式ＩＩＩ−Ａの構造を有し：
【００４０】
【化１０】
0006525456.tif 000011
式中：
Ｚは、ＯＨ、または−ＮＨ−Ｒ３であり、Ｒ３は、Ｈ、あるいはＣ１−Ｃ１２の置換または非置換のアルキル、または１０Ｄａ未満のＰＥＧ鎖であり；
ａａ１は、Ｈｉｓ、Ｎ−Ａｃ−Ｈｉｓ、ｐＧｌｕ−Ｈｉｓ、またはＮ−Ｒ３−Ｈｉｓであり；
ａａ２は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、ＭｅＰｒｏ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、またはＡｃ５ｃであり；
ａａ３は、Ｇｌｎ、またはＣｉｔであり；
ａａ４は、Ｇｌｙ、またはＤ−Ａｌａであり；
ａａ５は、Ｔｈｒ、またはＳｅｒであり；
ａａ６は、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、２ＦＰｈｅ、ＭｅＰｈｅ、２ＦＭｅＰｈｅ、またはＮａｌ２であり；
ａａ７は、Ｔｈｒ、またはＳｅｒであり；
ａａ８は、Ｓｅｒ、またはＡｓｐであり；
ａａ９は、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり；
ａａ１０は、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｎａｌ２、Ｂｉｐ、Ｂｉｐ２ＥｔＭｅＯ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１１は、存在しない、またはＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｂｉｐ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１２は、存在しない、またはＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１３は、存在しない、またはＴｙｒ、Ｇｌｎ、Ｃｉｔ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１４は、存在しない、またはＬｅｕ、Ｍｅｔ、Ｎｌｅ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１５は、存在しない、またはＡｓｐ、Ｇｌｕ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１６は、存在しない、またはＳｅｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃ５ｃ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１７は、存在しない、またはＡｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｃｉｔ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１８は、存在しない、またはＡｒｇ、ｈＡｒｇ、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１９は、存在しない、またはＡｌａ、Ｖａｌ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２０は、存在しない、またはＧｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｃｉｔ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２１は、存在しない、またはＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２２は、存在しない、またはＰｈｅ、Ｔｒｐ、Ｎａｌ２、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２３は、存在しない、またはＶａｌ、Ａｒｇ、Ｉｌｅ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２４は、存在しない、またはＧｌｎ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｃｉｔ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２５は、存在しない、またはＴｒｐ、Ｎａｌ２、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２６は、存在しない、またはＬｅｕ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２７は、存在しない、またはＭｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｌｙｓ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２８は、存在しない、またはＡｓｎ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２９は、存在しない、またはＴｈｒ、Ｇｌｙ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ここで、ａａ１−ａａ２９のいずれか２つは、それらの側鎖を介して随意に環化されることで、ラクタム結合を形成し；
但し、ａａ１０、ａａ１１、ａａ１２、ａａ１６、ａａ１７、ａａ１８、ａａ１９、ａａ２０、ａａ２１、ａａ２２、ａａ２３、ａａ２４、ａａ２５、ａａ２６、ａａ２７、ａａ２８またはａａ２９の１つ、または少なくとも１つが、Ｘに共有結合的に付けられた天然または非天然のアミノ酸Ｕであることを前提とする。
【００４１】
幾つかの実施形態では、式Ｉ−Ａのペプチド生成物は、以下の式ＩＩＩ−Ｂの構造を有し：
【００４２】
【化１１】
0006525456.tif 000012
式中：
Ｚは、ＯＨ、または−ＮＨ−Ｒ３であり、
ここで、Ｒ３は、Ｈ、置換または非置換のＣ１−Ｃ１２アルキル、または１０Ｄａ未満のＰＥＧ鎖であり；
ａａ２は、Ｇｌｙ、ＭｅＰｒｏまたはＡｉｂであり；
ａａ３は、Ｇｌｎ、またはＣｉｔであり；
ａａ６は、Ｐｈｅ、２ＦＰｈｅ、ＭｅＰｈｅ、２ＦＭｅＰｈｅ、またはＮａｌ２であり；
ａａ１０は、Ｔｙｒ、Ｎａｌ２、Ｂｉｐ、Ｂｉｐ２ＥｔＭｅＯ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１１は、存在しない、またはＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｂｉｐ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１２は、存在しない、またはＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１３は、存在しない、またはＴｙｒ、Ｇｌｎ、Ｃｉｔ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１４は、存在しない、またはＬｅｕ、Ｎｌｅ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１５は、存在しない、またはＡｓｐ、Ｇｌｕ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１６は、存在しない、またはＳｅｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１７は、存在しない、またはＡｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｃｉｔ、Ａｉｂ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１８は、存在しない、またはＡｒｇ、ｈＡｒｇ、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１９は、存在しない、またはＡｌａ、Ａｉｂ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２０は、存在しない、またはＧｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｃｉｔ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２１は、存在しない、またはＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ａｉｂ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２２は、存在しない、またはＰｈｅ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２３は、存在しない、またはＶａｌ、Ｉｌｅ、ＡｉｂまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２４は、存在しない、またはＡｌａ、Ｇｌｎ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２５は、存在しない、またはＴｒｐ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２６は、存在しない、またはＬｅｕ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２７は、存在しない、またはＭｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｌｙｓ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２８は、存在しない、またはＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｃｉｔ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２９は、存在しない、またはＴｈｒ、Ａｉｂ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ３０は、存在しない、またはＡｒｇ、またはＵ（Ｘ）であり；
ここで、ａａ１−ａａ２３のいずれか２つは、それらの側鎖を介して随意に環化されることで、ラクタム結合を形成し；
但し、ａａ１０、ａａ１１、ａａ１２、ａａ１６、ａａ１７、ａａ１８、ａａ１９、ａａ２０、ａａ２１、ａａ２２、ａａ２３、ａａ２４、またはａａ２８の１つ、または少なくとも１つが、Ｘに共有結合的に付けられた天然または非天然のアミノ酸Ｕであることを前提とする。
【００４３】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、Ｕは、本明細書に記載される任意のリンカーアミノ酸である。
【００４４】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ａａ１２はリジンである。式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ａａ１４はロイシンである。
【００４５】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ａａ１８は、Ｘに付けられたリジン残基である。
【００４６】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ａａ１７はホモアルギニン（ｈＡｒｇ）残基である。
【００４７】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ａａ１７はグリシン残基である。
【００４８】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ａａ２は、ＡｉｂまたはＡｃ４ｃの残基である。幾つかの実施形態では、ａａ２はＡｉｂ残基である。
【００４９】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチドは１つ以上のＡｉｂ残基を含む。
【００５０】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチドは、Ｃ末端に１つ以上のＡｉｂ残基を含む。
【００５１】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【００５２】
【化１２】
0006525456.tif 000013
式中：
ａａ２は、ＧｌｙまたはＡｉｂであり；
ａａ１６は、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、またはＡｉｂであり；
ａａ１７は、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２０は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、またはＡｒｇであり；
ａａ２３は、ＩｌｅまたはＶａｌであり；
ａａ２４は、Ａｌａ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２７は、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、またはＬｅｕであり；
ａａ２８は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、またはＵ（Ｘ）である。
【００５３】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【００５４】
【化１３】
0006525456.tif 000014
式中：
ａａ２は、ＧｌｙまたはＡｉｂであり；
ａａ１６は、Ｇｌｕ、Ａｌａ、Ａｉｂであり；
ａａ１７は、ＬｙｓまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２７は、ＬｅｕまたはＶａｌである。
【００５５】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【００５６】
【化１４】
0006525456.tif 000015
式中：
ａａ２は、ＧｌｙまたはＡｉｂであり；
ａａ１６は、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、またはＡｉｂであり；
ａａ１７は、Ａｒｇ、ｈＡｒｇ、またはＧｌｎであり；
ａａ２０は、ＬｙｓまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２３は、ＩｌｅまたはＶａｌであり；
ａａ２４は、Ｇｌｎ、Ａｌａ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２７は、ＬｅｕまたはＶａｌであり；および
ａａ２８は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、またはＵ（Ｘ）である。
【００５７】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【００５８】
【化１５】
0006525456.tif 000016
式中：
ａａ２は、ＧｌｙまたはＡｉｂであり；
ａａ１６は、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ａｉｂであり；
ａａ１７は、Ａｒｇ、ｈＡｒｇまたはＧｌｎであり；
ａａ２０は、ＬｙｓまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２３は、ＩｌｅまたはＶａｌであり；
ａａ２４は、Ｇｌｎ、Ａｌａ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２７は、ＬｅｕまたはＶａｌであり；
ａａ２８は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、またはＵ（Ｘ）である。
【００５９】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【００６０】
【化１６】
0006525456.tif 000017
式中：
ａａ２は、ＡｉｂまたはＧｌｙであり；
ａａ１６およびａａ２０は、各々、個々に、ＬｙｓまたはＧｌｕのいずれかであり、それらの側鎖を介して環化されることで、ラクタム結合を形成し；
ａａ１７は、Ａｒｇ、ｈＡｒｇ、またはＧｌｎであり；
ａａ２７は、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＮｌｅであり；
ａａ２８は、ＡｓｎまたはＧｌｎであり；および
アルキルは、Ｃ８−Ｃ２０の直鎖状のアルキル鎖である。
幾つかの実施形態では、Ｌｙｓ（Ｎ−オメガ−Ｘ）２４は、Ｌｙｓ（Ｎ−オメガ−１’−アルキルベータ−Ｄ−グルクロニル）である。
【００６１】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【００６２】
【化１７】
0006525456.tif 000018
式中：
ａａ２は、ＡｉｂまたはＧｌｙであり；
ａａ１６は、Ｇｌｕ、Ａｌａ、またはＡｉｂであり；
ａａ１７は、ＬｙｓまたはＬｙｓ（Ｎ−オメガ−Ｘ）であり；および
アルキルは、Ｃ８−Ｃ２０の直鎖状のアルキル鎖である。
幾つかの実施形態では、ａａ１７は、Ｌｙｓ（Ｎ−オメガ−１’−アルキルベータ−Ｄ−グルクロニル）である。
【００６３】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【００６４】
【化１８】
0006525456.tif 000019
式中：
ａａ２は、ＧｌｙまたはＡｉｂであり；
ａａ１６は、Ｇｌｕ、Ａｌａ、Ａｉｂであり；
ａａ１７は、Ａｒｇ、ｈＡｒｇであり；
ａａ２０は、ＬｙｓまたはＬｙｓ（Ｎ−オメガ−Ｘ）であり；
ａａ２３は、ＩｌｅまたはＶａｌであり；
ａａ２４は、ＧｌｎまたはＡｌａであり；
ａａ２７は、ＬｅｕまたはＶａｌであり；
ａａ２８は、ＡｓｎまたはＧｌｎであり；および
アルキルは、Ｃ８−Ｃ２０の直鎖状のアルキル鎖である。
幾つかの実施形態では、ａａ２０は、Ｌｙｓ（Ｎ−オメガ−１’−アルキルベータ−Ｄ−グルクロニル）である。
【００６５】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【００６６】
【化１９】
0006525456.tif 000020
式中：
ａａ２は、Ｇｌｙ、Ａｉｂ、またはＭｅＰｒｏであり；
ａａ６は、Ｐｈｅ、２ＦＰｈｅ、ＭｅＰｈｅ、または２ＦＭｅＰｈｅであり；
ａａ１０は、Ｔｙｒ、Ｎａｌ２、Ｂｉｐ、Ｂｉｐ２Ｅｔ、またはＢｉｐ２ＥｔＭｅＯであり；
ａａ１１は、ＬｙｓまたはＬｙｓ（Ｎ−オメガ−Ｘ）であり；および
アルキルは、Ｃ８−Ｃ２０の直鎖状のアルキル鎖である。
幾つかの実施形態では、ａａ１１は、Ｌｙｓ（Ｎ−オメガ−１’−アルキルベータ−Ｄ−グルクロニル）である。
【００６７】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【００６８】
【化２０】
0006525456.tif 000021
式中：
ａａ２は、ＧｌｙまたはＡｉｂであり；
ａａ２８は、ＡｓｎまたはＧｌｎである。
【００６９】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【００７０】
【化２１】
0006525456.tif 000022
式中：
ａａ１６およびａａ２０は、各々、個々に、ＬｙｓまたはＧｌｕのいずれかであり、それらの側鎖を介して環化されることで、ラクタム結合を形成し；および
ａａ２８は、ＡｓｎまたはＧｌｎであり；
Ｘは、１−アルキルベータ−Ｄ−グルコシド、１−アルキルベータ−Ｄ−マルトシド、１−アルキルベータ−Ｄ−メリビオシド、または対応するアルファグリコシドなどから調製されたグルクロニルクラスの部分を含み、ここでアルキルは、Ｃ８−Ｃ２０の直鎖状のアルキル鎖である。
【００７１】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【００７２】
【化２２】
0006525456.tif 000023
式中：
ａａ１６−ａａ２０は、それらの側鎖を介して環化されることで、ラクタム結合を形成し；および
Ｘは、１−アルキルベータ−Ｄ−グルコシド、１−アルキルベータ−Ｄ−マルトシド、１−アルキルベータ−Ｄ−メリビオシド、または対応するアルファグリコシドなどから調製されたグルクロニルクラスの部分を含み、ここでアルキルは、Ｃ８−Ｃ２０の直鎖状のアルキル鎖である。
【００７３】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【００７４】
【化２３】
0006525456.tif 000024
式中：
Ｇｌｕ＊１６およびＬｙｓ＊２０は、それらの側鎖を介して環化されることで、ラクタム結合を形成する。
【００７５】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【００７６】
【化２４】
0006525456.tif 000025
式中：
Ｇｌｕ＊１６およびＬｙｓ＊２０は、それらの側鎖を介して環化されることで、ラクタム結合を形成する。
【００７７】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【００７８】
【化２５】
0006525456.tif 000026
式中：
Ｇｌｕ＊１６およびＬｙｓ＊２０は、それらの側鎖を介して環化されることで、ラクタム結合を形成する。
【００７９】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【００８０】
【化２６】
0006525456.tif 000027
式中：
Ｇｌｕ＊１６およびＬｙｓ＊２０は、それらの側鎖を介して環化されることで、ラクタム結合を形成する。
【００８１】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ａａ１６およびａａ２０は、環化されることで、ラクタム結合を形成する。
【００８２】
幾つかの実施形態では、式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂのいずれかの化合物に関して、Ｘは、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル、またはオクタデシルのアルキル鎖で構成される。
【００８３】
幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、ＧＬＰ１Ｒ及び／又はＧＬＣＲに結合する生物活性ペプチド生成物である。
【００８４】
具体的な実施形態では、上におよび本明細書に記載される、式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂのペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【００８５】
【化２７】
0006525456.tif 000028
式中、Ｒ１ａは、図１の表１に記載されるようなＣ１−Ｃ２０アルキル鎖であり、Ｒ’は、図１の表１、図２の表２、および図３の表３に記載されるようなペプチドであり、式Ｉ−ＡのＷ２は−Ｏ−であり、および式Ｉ−ＡのＷ１は、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−であり、ペプチドＲ’に対するアミド結合の一部である。このような実施形態の幾つかにおいて、Ｒ１ａは、Ｃ６−Ｃ２０アルキル鎖である。このような実施形態の幾つかにおいて、Ｒ１ａは、Ｃ８−Ｃ２０アルキル鎖である。このような実施形態の幾つかにおいて、Ｒ１ａは、Ｃ１２−Ｃ２０アルキル鎖である。このような実施形態の幾つかにおいて、Ｒ１ａは、Ｃ１２−Ｃ１６アルキル鎖である。
【００８６】
上に記載される実施形態では、アミノ酸のアミノ部分及び／又はペプチドＲ’（例えば、リジンなどのアミノ酸残基のアミノ基、またはペプチドＲ’内のリジン残基）は、以下の構造の化合物との共有結合を形成するために使用され：
【００８７】
【化２８】
0006525456.tif 000029
式中、Ｒ１ａは、上におよび図１の表１、図２の表２、および図３の表３に記載されるようなＣ１−Ｃ２０アルキル鎖である。
【００８８】
そのような場合において、上に記載される化合物Ａに対する共有結合を形成するために使用される、アミノ部分を有するアミノ酸残基（例えば、ペプチドＲ’内のリジン）は、式Ａの構造を有する界面活性剤Ｘに付けられるリンカーアミノ酸Ｕである。したがって、一例として、図１の表１、図２の表２、または図３の表３のＬｙｓ（Ｃ１２）は、以下の構造を有する：
【００８９】
【化２９】
0006525456.tif 000030
【００９０】
本明細書に示される実施形態の範囲内でまた、カルボン酸官能基のいずれか又は両方での結合を介する、マルツロン酸ベースの界面活性剤に由来する式Ｉ−Ａのペプチド生成物が熟慮される。したがって、一例として、図１の表１、図２の表２、または図３の表３におけるペプチドは、マルツロン酸ベースの界面活性剤Ｘに結合した、および以下の構造を有する、リジンリンカーアミノ酸を含む：
【００９１】
【化３０】
0006525456.tif 000031
【００９２】
１つの実施形態では、式Ｉ−Ａの化合物を得るために、式Ｉ−Ａの化合物は、リジンを基Ｘに付け、その後、追加のアミノ酸残基及び／又はペプチドを、リジン−Ｘ化合物に付けることによって調製されることが理解されるであろう。本明細書に記載される他の天然または非天然のアミノ酸は、界面活性剤Ｘへの取付けにも適しており、式Ｉ−Ａの化合物を得るために、追加のアミノ酸／ペプチドを付けることに適していることが理解されるであろう。別の実施形態では、式Ｉ−Ａの化合物を得るために、式Ｉ−Ａの化合物は、全長または部分的な長さのペプチドを基Ｘに付け、その後、追加のアミノ酸残基及び／又はペプチドを付けることによって調製されることが理解されるであろう。
【００９３】
具体的な実施形態において、本明細書には、図１の表１、図２の表２、または図３の表３の化合物から選択される化合物が提供される。
【００９４】
本明細書にはまた、上に記載される治療上有効な量のペプチド生成物、またはその許容可能な塩、および少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含む医薬組成物が提供される。
【００９５】
医薬組成物の幾つかの実施形態では、担体は、水性ベースの担体である。医薬組成物の幾つかの実施形態では、担体は、非水性ベースの担体である。医薬組成物の幾つかの実施形態では、非水性ベースの担体は、サブミクロンの無水のα−ラクトースまたは他の賦形剤を含み得るヒドロフルオロアルカン様の溶媒である。
【００９６】
本明細書に示される実施形態の範囲内では、求核試薬を運ぶリンカーアミノ酸Ｕを含むアミノ酸及び／又はペプチドと、脱離基または脱離基を含むために活性化され得る官能基、例えば、カルボン酸、または任意の他の反応基を含む基Ｘとの反応が熟慮され、それによって、リンカーアミノ酸Ｕを介する、界面活性剤Ｘに対するアミノ酸及び／又はペプチドの共有結合が可能となり、式Ｉ−Ａのペプチド生成物が提供される。
【００９７】
本明細書に示される実施形態の範囲内ではまた、脱離基または脱離基を含むために活性化され得る官能基、例えば、カルボン酸、または任意の他の反応基を運ぶリンカーアミノ酸Ｕを含む、アミノ酸及び／又はペプチドと、求核基を含む基Ｘとの反応が熟慮され、それによって、リンカーアミノ酸Ｕを介する、界面活性剤Ｘに対するアミノ酸及び／又はペプチドの共有結合が可能となり、式Ｉ−Ａのペプチド生成物が提供される。
【００９８】
一実施形態では、式Ｉ−Ａの化合物は、リンカーアミノ酸ＵのＸとの反応によって調製され、その後、さらなる残基をＵに加えることによって、式Ｉ−Ａのペプチド生成物が得られることが理解されるであろう。代替的な実施形態では、式Ｉ−Ａの化合物は、リンカーアミノ酸Ｕを含む適切なペプチドのＸとの反応によって調製され、その後、さらなる残基をＵに随意に加えることによって、式Ｉ−Ａのペプチド生成物が得られることが理解されるであろう。
【００９９】
本明細書にはさらに、上に記載されるペプチド生成物を合成するための方法が提供され、該方法は、連続する、
（ａ）ペプチドを、中間物、即ち、以下の式ＩＶの化合物と結合する工程であって：
【０１００】
【化３１】
0006525456.tif 000032
式中：
Ｒ１ａは、各々の出現で独立して、単結合、Ｈ、糖類、脱離基、保護基、天然または非天然のアミノ酸、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換のアルコキシアリール基、あるいは置換または非置換のアラルキル基であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは、各々の出現で独立して、単結合、Ｈ、脱離基、保護基、可逆的に保護された天然または非天然のアミノ酸、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル、置換または非置換のアルコキシアリール基、あるいは置換または非置換のアラルキル基であり；
Ｗ１は、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、−（Ｃ＝Ｓ）−、−（Ｃ＝Ｓ）−ＮＨ−、または−ＣＨ２−Ｓ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−、−ＣＨ２−、または−Ｓ−であり；
Ｒ２は、各々の出現で独立して、単結合、Ｈ、脱離基、保護基、可逆的に保護された天然または非天然のアミノ酸、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換のアルコキシアリール基、あるいは置換または非置換のアラルキル基、−ＮＨ２、−ＳＨ、Ｃ２−Ｃ４−アルケン、Ｃ２−Ｃ４−アルキン、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｂｒ、−（ＣＨ２）ｍ−マレイミド、あるいは−Ｎ３であり；
ｎは、１、２または３であり；
ｍは、１−１０の整数である、工程；
および
（ｂ）工程（ａ）の結合したペプチドを随意に脱保護する工程、を含む。
【０１０１】
方法の幾つかの実施形態では、各々の天然または非天然のアミノ酸は、各々の出現で独立して、可逆的に保護されたリンカーアミノ酸である。方法の幾つかの実施形態では、各々の天然または非天然のアミノ酸は、各々の出現で独立して、可逆的に保護された又は遊離したリジンである。
【０１０２】
方法の幾つかの実施形態では、ペプチドは、上に記載されるような式ＩＩのペプチドである。
【０１０３】
方法の幾つかの実施形態では、
ｎは、１であり；。
Ｗ１は、−（Ｃ＝Ｏ）−であり；
Ｒ１ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換の１−アルコキシアリール基、あるいは置換または非置換の１−アラルキル基であり、
Ｒ２は、Ｄ構成またはＬ構成の可逆的に保護されたリジンである。
【０１０４】
方法の幾つかの実施形態では、
ｎは、１であり；
Ｗ１は、−（Ｃ＝Ｏ）−であり；
Ｒ１ａは、置換または非置換のＣ８−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換の１−アルコキシアリール基、あるいは置換または非置換の１−アラルキル基であり、
Ｒ２は、Ｄ構成またはＬ構成の可逆的に保護されたリジンである。
【０１０５】
方法の幾つかの実施形態では、Ｒ１ａは、オクチル、デシル、ドデシル、テトラデシル、またはヘキサデシル基である。
【０１０６】
上に又は本明細書に記載される幾つかの実施形態では、Ｒ１ａは、糖類である。幾つかの実施形態では、糖類は、ガラクトースである。特定の実施形態では、糖類は、アルファ結合したガラクトースである。他の実施形態では、糖類は、アルファ結合したガラクトピラノース、ベータ結合したガラクトピラノース、アルファ結合したガラクトフラノース、またはベータ結合したガラクトフラノースである。
【０１０７】
方法の幾つかの実施形態では、
ｎは、１であり；
Ｗ１は、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−または−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−であり；
Ｒ２は、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル疎水基、置換または非置換の１−アルコキシアリール基、あるいは置換また非置換の１−アラルキル基であり、
Ｒ１ａは、Ｄ構成またはＬ構成の可逆的に保護されたセリンまたはテレオニンである。
【０１０８】
方法の幾つかの実施形態では、Ｒ２は、オクチル、デシル、ドデシル、テトラデシル、またはヘキサデシル基である。
【０１０９】
方法の幾つかの実施形態では、
ｎは、１であり；
ｍは、１−６であり；
Ｗ１は、−ＣＨ２−であり；
Ｒ１ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル疎水基、置換または非置換の１−アルコキシアリール基、あるいは置換または非置換の１−アラルキル基であり、
Ｒ２は、−Ｎ３、ＮＨ２、−Ｃ２−アルキン、−（ＣＨ２）ｍ−マレイミド、ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｂｒ、またはＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｉである。
【０１１０】
式ＩＶの幾つかの実施形態では、
ｎは、１であり；
Ｗ１は、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−であり；
Ｒ２は、Ｈであり、
Ｒ１ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル疎水基である。
【０１１１】
方法の幾つかの実施形態では、Ｗ１は、−（ＣＨ２）Ｏである。方法の幾つかの実施形態では、ｎは１である。幾つかの実施形態では、ｎは２であり、第１グリコシドは、第１グリコシドのＷ２と、第２グリコシドのＯＲ１ｂ、ＯＲ１ｃまたはＯＲ１ｄのいずれか１つとの間の結合を介して第２グリコシドに付けられる。
【０１１２】
方法の幾つかの実施形態では、ｎは３であり、第１グリコシドは、第１グリコシドのＷ２と、第２グリコシドのＯＲ１ｂ、ＯＲ１ｃまたはＯＲ１ｄのいずれか１つとの間の結合を介して第２グリコシドに付けられ、第２グリコシドは、第２グリコシドのＷ２と、第３グリコシドのＯＲ１ｂ、ＯＲ１ｃまたはＯＲ１ｄのいずれか１つとの間の結合を介して第３グリコシドに付けられる。
【０１１３】
方法の幾つかの実施形態では、式ＩＶの化合物は、Ｄ構成またはＬ構成の可逆的に保護されたＮ−ε−（１’−アルキルグルクロニル）−リジンであり、式中、Ｒ１ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ２０アルキル鎖、置換または非置換の１−アルコキシアリール基、あるいは置換または非置換の１−アラルキル基である。
【０１１４】
方法の幾つかの実施形態では、式ＩＶの化合物は、Ｄ構成またはＬ構成の可逆的に保護されたＮ−ε−（１’−ドデシルβ−Ｄ−グルクロニル）−リジンである。
【０１１５】
方法の幾つかの実施形態では、脱保護は、緩酸及びまたは緩塩基（ｍｉｌｄ ｂａｓｅ）の処置の使用を含む。方法の幾つかの実施形態では、脱保護は、強酸の使用を含む。
【０１１６】
幾つかの実施形態では、方法はさらに、クロマトグラフィー、逆相による中間物の脱塩、高速液体クロマトグラフィー、または中間物のイオン交換クロマトグラフィーの工程を含む。
【０１１７】
上に及び本明細書に記載される治療上有効な量のペプチド生成物、またはその許容可能な塩、および少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含む医薬組成物。
【０１１８】
本明細書には、インスリン抵抗性に関係する疾病を処置するための方法が提供され、該方法は、本明細書に記載される任意のペプチド生成物または化合物を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。
【０１１９】
本明細書には、糖尿病、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎症、創傷治癒、インスリン抵抗性、高血糖症、高インスリン血症、メタボリック症候群、糖尿病合併症、遊離脂肪酸またはグリセロールの高い血中濃度、高脂血症、肥満症、高トリグリセリド血症、アテローム性動脈硬化症、急性心血管系疾患、梗塞症、虚血再灌流または高血圧症を処置するための方法が提供され、該方法は、上に及び本明細書に記載される治療上有効な量のペプチド生成物を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。
【０１２０】
本明細書には、体重増加を減少させる又は体重減少を誘発する方法が提供され、該方法は、上に及び本明細書に記載される治療上有効な量のペプチド生成物を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。
【０１２１】
本明細書には、肥満症関連のインスリン抵抗性またはメタボリック症候群によって特徴付けられた哺乳動物の疾病を処置するための方法が提供され、該方法は、上に及び本明細書に記載される体重減少を誘発する又はインスリン抵抗性を改善する量のペプチド生成物を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。
【０１２２】
幾つかの実施形態では、処置される疾病は、メタボリック症候群（症候群Ｘ）である。幾つかの実施形態では、処置される疾病は、糖尿病である。幾つかの実施形態では、処置される疾病は、高脂血症である。幾つかの実施形態では、処置される疾病は、高血圧症である。幾つかの実施形態では、処置される疾病は、アテローム性動脈硬化症を含む血管疾患、または高いＣ反応性タンパク質によって特徴付けられた全身性の炎症である。
【０１２３】
方法の幾つかの実施形態では、投与のためのペプチド生成物の有効な量は、約０．１μｇ／ｋｇ／日から約１００．０μｇ／ｋｇ／日、または０．０１μｇ／ｋｇ／日から約１ｍｇ／ｋｇ／日、または０．１μｇ／ｋｇ／日から約５０ｍｇ／ｋｇ／日である。幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、非経口で投与される。幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、皮下に投与される。幾つかの実施形態では、ペプチド生成物の投与の方法は、経鼻的吸入である。
【０１２４】
しかしながら、処置を必要としている任意の特定の被験体に対する投与の特定の投与量レベルおよび頻度が、様々であり得、利用される具体的な化合物の活性、その化合物の代謝安定性および作用持続時間、年齢、体重、健康状態、性別、食事、投与の様式および時間、分泌の速度、薬物の組み合わせ、特定の疾病の重症度、および治療を受けている宿主を含む、様々な因子に依存することが理解されるだろう。
【０１２５】
本明細書には、メタボリック症候群、またはその要素の疾患（ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｄｉｓｅａｓｅｓ）を処置する方法が提供され、該方法は、上に記載される治療上有効な量のペプチド生成物を、それを必要としている被験体に投与する工程を含む。幾つかの実施形態では、メタボリック症候群の疾病は、糖尿病に進行した。
【０１２６】
本明細書にはまた、共有結合的に修飾されたＧＬＣＲ及び／又はＧＬＰ１Ｒ結合ペプチドまたはその類似体が提供され、これは、本明細書に記載されるような親水基；および親水基に共有結合的に付けられた疎水基を含む。具体的な実施形態では、共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質生成物は、糖類である親水基、およびＣ１−Ｃ２０アルキル鎖またはアラルキル鎖である疎水基を含む。
【０１２７】
一実施形態では、組成物または分子の生物作用（例えば、受容体結合または酵素活性）を増加させる又は保持するために、界面活性剤に対する共有結合によって化学的に分子を修飾するための方法が提供される。幾つかの実施形態では、分子は、ペプチドである。方法はさらに、ポリエチレングリコールなどのポリマーに組成物中の分子を共有結合的に付ける工程を含む、さらなる修飾を含むことができる。
【０１２８】
別の実施形態では、少なくとも１つのアルキルグリコシドにペプチド鎖を共有結合的に結合することによって、ペプチド及び／又はタンパク質の薬物の免疫原性を減少または除去する方法が提供され、ここでアルキルは、１乃至３０の炭素原子を有する。
【０１２９】
また、限定されないが、肥満症、メタボリック症候群、２型糖尿病、高血圧症、アテローム性動脈硬化症などを含む、インスリン抵抗性に関係する疾病を処置する方法が提供され、該方法は、少なくとも１つのアルキルグリコシドに共有結合的に結合され、脊椎動物に送達された、ペプチドを含む薬剤組成物を投与する工程を含み、ここでアルキルは、１乃至３０の炭素原子、１乃至２０の炭素、またはさらに６乃至１６の炭素原子の範囲内で炭素原子、または６乃至１８の炭素を有し、ここで、ペプチドに対するアルキルグリコシドの共有結合は、薬物の安定性、バイオアベイラビリティ及び／又は作用持続時間を増加させる。
【０１３０】
本明細書にはさらに、上に及び本明細書に記載される任意の疾病の処置のための薬剤の製造における本明細書に記載されるペプチド生成物（例えば、式Ｉ−Ａ、式ＩＩＩ−Ａ、または式ＩＩＩ−Ｂのペプチド生成物）の使用が提供される。
【図面の簡単な説明】
【０１３１】
【図１】図１の表１は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．１−３およびＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．７７４−７８３および７８５−７９７に対する配列を提供する。さらに、図１の表１は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．４−１２９を有する化合物ＥＵ−Ａ３００からＥＵ−Ａ４２５に対するＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図１の表１内の化合物、および示されるそれぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、本明細書に組み込まれる。
【図２】図２の表２は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．１−３およびＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．７７４−７９７を提供する。さらに、図２の表２は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．１３０−３１７を有する化合物ＥＵ−Ａ４２６からＥＵ−５９９に対するＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図２の表２内の化合物、および示されるそれぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、本明細書に組み込まれる。
【図３】図３の表３は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．１−３およびＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．７７４−７９７を提供する。さらに、図３の表３は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．３１８−７７３；７９８−８０６を有する化合物ＥＵ−Ａ７００からＥＵ−Ａ１１７４に対するＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図３の表３内の化合物、および示されるそれぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、本明細書に組み込まれる。
【図４】図４は、ＧＬＰ−１受容体の細胞外ドメインの結合部位のＸ線結晶構造（Ｒｕｎｇｅ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８３：１１３４０−７）を示し、本発明のペプチド上の界面活性剤の疎水性の１’−アルキル部分によって模倣される且つ交換される、受容体およびリガンドエキセンジン−４（Ｖａｌ１９＊、Ｐｈｅ２２＊、Ｔｒｐ２５＊、Ｌｅｕ２６＊）の重要な疎水性の結合要素を示す。この場合、アスタリスクは、残基がリガンド中にあることを意味する。
【図５】図５は、ｔ＝０，７時間での本発明の示される量の試験化合物（ＥＵ−Ａ９９３およびＥＵ−Ａ１０２３）の皮下（ｓ．ｃ．）投与後の、ｄｂ／ｄｂマウスにおけるインビボでの血中グルコース反応を例証する。
【図６】図６は、本発明の幾つかの化合物の詳細な構造、および、この場合位置２４での、Ｌｙｓ残基のイプシロンアミノ官能基を介するそれらの結合の例から、本発明の一方法に従って修飾された単糖類および二糖類の界面活性剤の例を例証する。
【図７】図７は、本発明の構造のタイプの例である、ＥＵ−Ａ９９２、の構造を例証する。
【発明を実施するための形態】
【０１３２】
本明細書には、改善された薬学的特性を有する特定の共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質が記載される。本明細書にはまた、肥満症およびメタボリック症候群に関連する障害の処置のための共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質の使用のための方法が提供される。
【０１３３】
幾つかの実施形態では、修飾されたペプチド及び／又はタンパク質は、親水基、「頭部（ｈｅａｄ）」（例えば、ポリオール（例えば、糖類））に共有結合的に付けられたペプチド及び／又はタンパク質を含み；親水基は、疎水基、「尾部（ｔａｉｌ）」に共有結合的に付けられ、それによって、界面活性剤を生成する。幾つかの実施形態では、ペプチドまたはタンパク質（例えば、グルカゴンまたはＧＬＰ−１関連のペプチドなど）の共有結合修飾のための疎水性結合したグリコシド界面活性剤（例えば、アルキルグリコシド）部分の使用によって、身体内の投与の部位での薬物の沈着物（ｄｅｐｏｔｓ）の形成および疎水性担体タンパク質に対する結合を含む、複数の機構によるペプチド及び／又はタンパク質の作用の持続時間は延ばされる。幾つかの実施形態では、ペプチド及び／又はタンパク質構造への立体障害の組み込みによって、ペプチド及び／又はタンパク質生成物へのプロテアーゼの接近を防ぐことができ、それによって、タンパク質分解を防ぐ。幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるようなペプチド及び／又はタンパク質の界面活性剤の修飾（例えば、界面活性剤のアルキルグリコシドクラスの共有結合的な取付け）は、粘膜障壁にわたる移動を増加させる。したがって、本明細書に記載されるペプチド及び／又はタンパク質の修飾は、限定されないが、タンパク質分解からの保護、および投与の部位からの遅延した運動を含む、望ましい恩恵を提供し、それによって、持続性の薬物動態学的行動（例えば、循環するｔ１／２の延長）および改善された口腔粘膜のバイオアベイラビリティにつながる。
【０１３４】
幾つかの実施形態では、改善されたペプチド及び／又はタンパク質のそれらの受容体との相互作用は、配列のトランケーション（ｔｒｕｎｃａｔｉｏｎ）、制約（ｃｏｎｓｔｒａｉｎｔ）の導入、及び／又は立体障害の組み込みによる有益な方法で修飾される。本明細書には、修飾されたペプチド及び／又はタンパク質における剛性および立体の障害の両方の組み込みを可能にする、新規のアルキルグリコシド試薬が記載される。幾つかの実施形態では、立体障害は、本明細書に記載される修飾されたペプチド及び／又はタンパク質に受容体選択性を与える。幾つかの実施形態では、立体障害は、タンパク質分解からの保護を提供する。
【０１３５】
タンパク質およびペプチドは、効能および安全性に影響を与え得る、多数の物理的および化学的な変化を受ける。これらの中では、凝集があり、これは、二量体形成、三量体形成、およびアミロイドなどの高次凝集の形成を含む。凝集は、ペプチド及び／又はタンパク質ベースの治療に対する複数の潜在的に有害な作用の根底にある主要問題であり、これは、効力の損失、変更された薬物動態、減少した安定性または生成物の貯蔵寿命、および望ましくない免疫原性の誘発を含む。自己会合（ｓｅｌｆ−ａｓｓｏｃｉａｔｉｎｇ）ペプチドのバイオアベイラビリティおよび薬物動態は、凝集の大きさ、および皮下の部位での非共有結合的な分子間相互作用の破壊（ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ）の容易性による影響を受け得る（Ｍａｊｉ，Ｓ．Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．（２００８）ＰＬｏＳ Ｂｉｏｌ ６：ｅ１７）。幾つかの例では、ペプチドは、３０日以上のｔ１／２で分離する（ｄｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅ  ｗｉｔｈ）皮下沈着物へと凝集することができる。このようなゆっくりした分解は、単一の皮下注射からの１か月間の送達などの、好ましい効果につながり得、低い血中濃度を引き起こすため、ペプチドはインビボで不活性であるように見える。したがって、幾つかの例では、疎水性の凝集は、ペプチドのバイオアベイラビリティおよび有効性を排除する（Ｃｌｏｄｆｅｌｔｅｒ，Ｄ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ １５：２５４−２６２）。本明細書に記載される修飾されたペプチド生成物は、界面活性剤で結合され、必要に応じて、凝集の妨害、または凝集の増強のいずれかを可能にするように随意に設計されている。
【０１３６】
タンパク質に共有結合的に付けられている、しばしば自然発生するオリゴ糖には、界面活性剤の特徴はない。幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるペプチド及び／又はタンパク質生成物は、共有結合的に付けられた糖類、および修飾されたペプチドに界面活性剤の特徴を与える、追加の疎水基を有し、それによって、界面活性剤で修飾されたペプチドの、バイオアベイラビリティ、免疫原性、及び／又は薬物動態学的行動の同調が可能となる。
【０１３７】
オリゴ糖で修飾されたタンパク質およびペプチドは、酵素的手法（Ｇｉｊｓｅｎ， Ｈ．Ｊ．， ｅｔ ａｌ． （１９９６） Ｃｈｅｍ Ｒｅｖ ９６： ４４３−４７４； Ｓｅａｒｓ， Ｐ． ａｎｄ Ｗｏｎｇ， Ｃ．Ｈ． （１９９８） Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ ５４： ２２３−２５２； Ｇｕｏ， Ｚ． ａｎｄ Ｓｈａｏ， Ｎ． （２００５） Ｍｅｄ Ｒｅｓ Ｒｅｖ ２５： ６５５−６７８）または化学的手法（Ｕｒｇｅ， Ｌ． ， ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ １８４： １１２５−１１３２； Ｓａｌｖａｄｏｒ， Ｌ．Ａ．， ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ５１： ５６４３−５６５６； Ｋｉｈｌｂｅｒｇ， Ｊ．， ｅｔ ａｌ． （１９９７） Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２８９： ２２１−２４５； Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ， Ｇ．， ｅｔ ａｌ． （２０００） Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ ５７： １９６４−１９６９； Ｃｈａｋｒａｂｏｒｔｙ， Ｔ．Ｋ．， ｅｔ ａｌ． （２００５） Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ Ｊ ２２： ８３−９３； Ｌｉｕ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ． （２００５） Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ Ｒｅｓ ３４０： ２１１１−２１２２； Ｐａｙｎｅ， Ｒ．Ｊ．， ｅｔ ａｌ． （２００７） Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ １２９： １３５２７−１３５３６； Ｐｅｄｅｒｓｅｎ， Ｓ．Ｌ．， ｅｔ ａｌ． （２０１０） Ｃｈｅｍｂｉｏｃｈｅｍ １１： ３６６−３７４）を使用する、糖類またはオリゴ糖の構造の組み込みを介して、例えばＪｅｎｓｅｎ，Ｋ．Ｊ．およびＢｒａｓｋ，Ｊ．（２００５）Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒ ８０： ７４７−７６１に記載される。タンパク質と同様にペプチドも、グリコシル化によって修飾された（Ｆｉｌｉｒａ， Ｆ．， ｅｔ ａｌ． （２００３） Ｏｒｇ Ｂｉｏｍｏｌ Ｃｈｅｍ １： ３０５９−３０６３）； （Ｎｅｇｒｉ， Ｌ．， ｅｔ ａｌ． （１９９９） Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ４２： ４００−４０４）； （Ｎｅｇｒｉ， Ｌ．， ｅｔ ａｌ． （１９９８） Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １２４： １５１６−１５２２）； Ｒｏｃｃｈｉ， Ｒ．， ｅｔ ａｌ． （１９８７） Ｉｎｔ Ｊ Ｐｅｐｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ ２９： ２５０−２６１； Ｆｉｌｉｒａ， Ｆ．， ｅｔ ａｌ． （１９９０） Ｉｎｔ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｍａｃｒｏｍｏｌ １２： ４１−４９； Ｇｏｂｂｏ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ｉｎｔ Ｊ Ｐｅｐｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ ４０： ５４−６１； Ｕｒｇｅ， Ｌ．， ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ １８４： １１２５−１１３２； Ｄｊｅｄａｉｎｉ−Ｐｉｌａｒｄ， Ｆ．， ｅｔ ａｌ． （１９９３） Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ３４： ２４５７ − ２４６０； Ｄｒｏｕｉｌｌａｔ， Ｂ．， ｅｔ ａｌ． （１９９７） Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ ７： ２２４７−２２５０； Ｌｏｈｏｆ， Ｅ．， ｅｔ ａｌ． （２０００） Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ Ｅｎｇｌ ３９： ２７６１−２７６４； Ｇｒｕｎｅｒ， Ｓ．Ａ．， ｅｔ ａｌ． （２００１） Ｏｒｇ Ｌｅｔｔ ３： ３７２３−３７２５； Ｐｅａｎ， Ｃ．， ｅｔ ａｌ． （２００１） Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １５４１： １５０−１６０； Ｆｉｌｉｒａ， Ｆ．， ｅｔ ��ｌ． （２００３） Ｏｒｇ Ｂｉｏｍｏｌ Ｃｈｅｍ １： ３０５９−３０６３； Ｇｒｏｔｅｎｂｒｅｇ， Ｇ．Ｍ．， ｅｔ ａｌ． （２００４） Ｊ Ｏｒｇ Ｃｈｅｍ ６９： ７８５１−７８５９； Ｂｉｏｎｄｉ， Ｌ．， ｅｔ ａｌ． （２００７） Ｊ Ｐｅｐｔ Ｓｃｉ １３： １７９−１８９； Ｋｏｄａ， Ｙ．， ｅｔ ａｌ． （２００８） Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ １６： ６２８６−６２９６； Ｙａｍａｍｏｔｏ， Ｔ．， ｅｔ ａｌ． （２００９） Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ５２： ５１６４−５１７５）。
【０１３８】
しかしながら、前述の試みは、ペプチド結合したオリゴ糖に付けられた追加の疎水基を記載していない。したがって、本明細書には、ペプチド及び／又はタンパク質に共有結合的に付けられ、バイオアベイラビリティ、免疫原性および薬物動態学的行動の同調を可能にする、糖類及び／又はオリゴ糖に付けられた疎水基を組み込む、修飾されたペプチド及び／又はタンパク質が提供される。したがって、本明細書にはまた、オリゴ糖および疎水基を含む界面活性剤の試薬が提供され、これは、例えば、グルカゴン及び／又はＧＬＰ−１及び／又はその類似体などの、ペプチド及び／又はタンパク質の共有結合修飾を可能にする。
【０１３９】
本明細書には、ペプチド及び／又はタンパク質の特性を改善するための、ペプチドに対する共有結合における糖類ベースの界面活性剤の使用が提供される。幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるようなペプチド及び／又はタンパク質の界面活性剤の修飾（例えば、界面活性剤のアルキルグリコシドクラスの共有結合的な取付け）は、粘膜障壁にわたる移動を増加させる。幾つかの実施形態では、ペプチド及び／又はタンパク質生成物に対して界面活性剤を共有結合的に付けることによって、ペプチド及び／又はタンパク質の凝集が減少または防止される。幾つかの実施形態では、共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質は、共有結合的に修飾されたグルカゴンまたはＧＬＰ−１ペプチド、またはその類似体であり、これらは、アルキルグリコシドの界面活性剤部分との共有結合修飾によってそれらの薬学的および医療的特性を改善するために修飾される。これらの界面活性剤で修飾された類似体は、身体からタンパク質分解を妨害し、取り込みを遅らせ、クリアランス（ｃｌｅａｒａｎｃｅ）を遅らせる立体障害を増加させた。
【０１４０】
特定の例では、界面活性剤の効果は、医薬製剤の物理的な性質または効能に対して有益であるが、皮膚及び／又は他の組織に対して刺激的であり、特に、鼻、口、眼、膣、直腸、頬側（ｂｕｃｃａｌ）または舌下の領域において見られるものなどの粘膜に対して刺激的である。さらに、幾つかの例では、界面活性剤は、タンパク質を変性させるため、それらの生体機能を破壊する。界面活性剤が、臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を超える効果を発揮するため、低いＣＭＣを有する界面活性剤が望ましく、その結果、それらは、医薬製剤中に低濃度で又は少量で効果を有して利用され得る。したがって、幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるペプチド修飾に適した界面活性剤（例えば、アルキルグリコシド）は、純水または水溶液中で約１ｍＭ未満のＣＭＣを有している。ほんの一例として、水中のアルキルグリコシドに対する特定のＣＭＣの値は：オクチルマルトシド １９．５ｍＭ；デシルマルトシド １．８ｍＭ；ドデシル−β−Ｄ−マルトシド ０．１７ｍＭ；トリデシルマルトシド ０．０３ｍＭ；テトラデシルマルトシド ０．０１ｍＭ；スクロースドデカノアート ０．３ｍＭ、である。当然のことながら、適切な界面活性剤は、修飾されるペプチド及び／又はタンパク質に依存して、より高い又は低いＣＭＣを有し得る。本明細書で使用されるように、「臨界ミセル濃度」または「ＣＭＣ」は、溶液中のミセル（球状ミセル、円形ロッド、ラメラ構造など）の形成が開始される溶液中での両親媒性の成分（アルキルグリコシド）の濃度である。特定の実施形態では、アルキルグリコシドのドデシル、トリデシル、およびテトラデシルマルトシドまたはグルコシドは、スクロースドデカノアート、トリデカノアート、およびテトラデカノアートと同様に、より低いＣＭＣを有し、本明細書に記載されるペプチド及び／又はタンパク質の修飾に適している。
【０１４１】
インスリン抵抗性
遷延性の高血糖症に関係するリスクは、微小血管合併症、感覚ニューロパチー、心筋梗塞、脳卒中、巨大血管性死亡率（ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ）、および総死亡率の増加したリスクを含む。２型糖尿病も、肥満症、さらなる世界的流行病と原因となって関連している。少なくとも２，３２０億ドルが、２００７年の世界中の糖尿病の処置および予防に費やされ、その４分の３が、工業先進国において、長期的合併症の処置に、および微小血管性および巨大血管性の合併症を予防する試みなどの、一般的な医療に費やされた。２００７年に、米国経済に対する糖尿病（糖尿病による、障害、生産性の損失、および早期死亡）の見積もられた間接費は、５８０億ドルであった。
【０１４２】
肥満症は、インスリン抵抗性、インスリン受容体を介してインスリン刺激に反応する身体中の細胞の減少した能力、および重大な細胞内シグナル伝達系に対するこれらの受容体の減少した結合につながる。肥満状態はさらに、「メタボリック症候群」、非常に大きなヘルスケアの結果を有する様々な疾患（インスリン抵抗性、高血圧症、アテローム性動脈硬化症など）につながる。インスリン抵抗性が十分早期に診断される場合、顕性の２型糖尿病が予防または遅延され得、ライフスタイル介入は、カロリー摂取量および体脂肪の減少に向けられ、薬物療法を介して血糖コントロールを正常化する。処置ガイドラインが早期の積極的な介入を推奨しているにもかかわらず、多くの患者が、血糖コントロールの目標に達していない。心理社会的および経済的影響および利用可能な抗糖尿病薬の有効性、利便性および耐性の特性の欠点を含む、多くの因子が、２型糖尿病をうまく管理することができない一因となっている。本明細書に記載されるペプチド及び／又はタンパク質生成物は、これらの欠点を克服するように設計されている。
【０１４３】
インクレチン効果
「インクレチン効果」は、経口で送達されたグルコース負荷が、静脈内に投与された同じグルコース負荷よりもはるかに多いインスリン分泌をもたらす現象を記載するために使用される。この効果は、腸管Ｌ細胞によって分泌された少なくとも２つのインクレチンホルモンによって媒介される。グルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチド（ＧＩＰ）およびグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）は、インクレチンとして特定され、健康な個体は、インクレチン効果から最大７０％の食事の（ｐｒａｎｄｉａｌ）インスリン分泌反応を引きだすと考えられる。
【０１４４】
通常、インクレチンペプチドは、摂取された栄養素に応じて、必要に応じ分泌され、ジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶ（ＤＰＰ−４）酵素による分解が原因のより短い血漿半減期を有している。２型糖尿病の人において、ＧＬＰ−１に対する膵臓の反応性は損なわれるが、インスリン分泌反応は、薬理学的用量のヒトＧＬＰ−１で回復され得る（Ｋｉｅｆｆｅｒ， Ｔ．Ｊ．， ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １３６： ３５８５−３５９６）。さらに、ＧＬＰ−１は、ベータ細胞の新生および保存を促進する（Ａａｂｏｅ， Ｋ．， ｅｔ ａｌ． （２００８） Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｏｂｅｓ Ｍｅｔａｂ １０： ９９４−１００３）。ＧＬＰ−１は、心臓機能などに対するさらなる有益な効果を有し（Ｔｒｅｉｍａｎ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ． （２０１０） Ｔｒｅｎｄｓ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｍｅｄ ２０： ８−１２）：例えば、それは、ヒト被験体において左心室機能を向上させる（Ｓｏｋｏｓ， Ｇ．Ｇ．， ｅｔ ａｌ． （２００６） Ｊ Ｃａｒｄ Ｆａｉｌ １２： ６９４−６９９）。ＧＬＰ−１はまた、ヒトにおいて胃内容排出を遅らせ、食欲を減少させる（Ｔｏｆｔ−Ｎｉｅｌｓｅｎ， Ｍ．Ｂ．， ｅｔ ａｌ． （１９９９） Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ ２２： １１３７−１１４３）。
【０１４５】
ＧＬＰ−１の代謝的に安定した及び長時間作用性の類似体による糖尿病患者の処置は、例えば、Ｄｒａｂ， Ｓ．Ｒ． （２０１０） Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ ３０： ６０９−６２４に記載され：使用の利便性および吐き気、膵臓炎のリスクおよび甲状腺癌などの副作用に関連する問題を抱えている。ＧＬＰ−１類似体は、インスリン分泌のグルコース依存性の刺激を提供し、低血糖症のリスクの減少につながる。さらに、糖尿病に対する多くの現在の処置は、体重増加を引き起こすが、下記に記載されるように、ＧＬＰ−１類似体は満腹および軽度の体重減少を誘発する。したがって、幾つかの実施形態では、本明細書には、長時間作用する且つ低薬量で投与されるＧＬＰ−１類似体が提供され、それによって、現在の処置に関係する副作用が減少する。
【０１４６】
多くのペプチド消化管ホルモンは、食欲を調整すると知られている（Ｓａｎｇｅｒ， Ｇ．Ｊ． ａｎｄ Ｌｅｅ， Ｋ． （２００８） Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ ７： ２４１−２５４）。幾つかのペプチドは、プレプログルカゴン遺伝子産物：例えば、グルカゴン、ＧＬＰ−１、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、グリセンチン、およびオキシントモジュリン（ＯＸＭ）、の組織特異的な酵素プロセシンング（ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ）（プロホルモン転換酵素；ＰＣ）から生じる（Ｄｒｕｃｋｅｒ， Ｄ．Ｊ． （２００５） Ｎａｔ Ｃｌｉｎ Ｐｒａｃｔ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ １： ２２−３１； Ｓｉｎｃｌａｉｒ， Ｅ．Ｍ． ａｎｄ Ｄｒｕｃｋｅｒ， Ｄ．Ｊ． （２００５） Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ （Ｂｅｔｈｅｓｄａ） ２０： ３５７−３６５）。ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−２、グリセンチンおよびＯＸＭは、摂食に応じて、腸内のＬ細胞から同時分泌される（ｃｏ−ｓｅｃｒｅｔｅｄ）。プレプログルカゴンは、膵島中のα細胞におけるグルカゴンを生成するために、代替的に処理される（ＰＣ２）。ＯＸＭの構造は、本質的に、８つの残基のＣ末端伸長を有するグルカゴンである。
【０１４７】
インスリンの生合成およびグルコース依存性のインスリン分泌の刺激に加えて、ＧＬＰ−１およびその安定した模倣物（例えば、エキセンディン−４、リラグルチド）もまた、動物モデルにおいて（Ｍａｃｋ， Ｃ．Ｍ．， ｅｔ ａｌ． （２００６） Ｉｎｔ Ｊ Ｏｂｅｓ （Ｌｏｎｄ） ３０： １３３２−１３４０； Ｋｎｕｄｓｅｎ， Ｌ．Ｂ． （２０１０） Ｉｎｔ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｒａｃｔ ６４ （Ｓｕｐｐｌ． １６７）： ４−１１）、および２型糖尿病患者において（ＤｅＦｒｏｎｚｏ， Ｒ．Ａ．， ｅｔ ａｌ． （２００５） Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ ２８： １０９２−１１００； Ｂｕｓｅ， Ｊ．Ｂ．， ｅｔ ａｌ． （２０１０） Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ ３３： １２５５−１２６１）適度の体重減少を引き起こす。グルカゴン注入は、ヒトにおいて食物摂取を減少させ（Ｇｅａｒｙ， Ｎ．， ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２６２： Ｒ９７５−９８０）、一方で脂肪組織の継続的なグルカゴン処置はまた、脂肪分解（Ｈｅｃｋｅｍｅｙｅｒ， Ｃ．Ｍ．， ｅｔ ａｌ． （１９８３） Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １１３： ２７０−２７６）および体重減少（Ｓａｌｔｅｒ， Ｊ．Ｍ．， ｅｔ ａｌ． （１９６０） Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ９： ７５３−７６８； Ｃｈａｎ， Ｅ．Ｋ．， ｅｔ ａｌ． （１９８４） Ｅｘｐ Ｍｏｌ Ｐａｔｈｏｌ ４０： ３２０−３２７）を促進する。グルカゴンは、エネルギー代謝に対して広範囲の効果を有する（Ｈｅｐｐｎｅｒ， Ｋ．Ｍ．， ｅｔ ａｌ． （２０１０） Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｂｅｈａｖ）。グルカゴン、または類似体は、腸管の一時的麻痺に対する診断様式で使用され得る。したがって、プレプログルカゴンタンパク質のＰＣプロセシング（ｐｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ）からの生成物の少なくとも２つは、満腹および代謝効果に関連している。
【０１４８】
げっ歯類動物において、プレプログルカゴンの第３の生成物である、ＯＸＭの繰り返しの腹腔内投与は、対照と比較した、白色脂肪組織の減少および体重の減少に関係している（Ｄａｋｉｎ， Ｃ．Ｌ．， ｅｔ ａｌ． （２００４） Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １４５： ２６８７−２６９５）。Ｏｘｍは、標準体重のヒトに対する静脈内注入での投与の間に食物摂取を１９．３％減少させ、この効果は、注入後１２時間以上続く（Ｃｏｈｅｎ， Ｍ．Ａ．， ｅｔ ａｌ． （２００３） Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ ８８： ４６９６−４７０１）。４週の期間にわたるボランティアの処置は、結果として、満腹効果の持続および体脂肪の減少を反映する体重減少をもたらした（Ｗｙｎｎｅ， Ｋ．， ｅｔ ａｌ． （２００５） Ｄｉａｂｅｔｅｓ ５４： ２３９０−２３９５）。
【０１４９】
ＯＸＭは、ＧＬＰ−１およびグルカゴンによって構造上相同性であり、グルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）およびＧＬＰ−１受容体（ＧＬＰ１Ｒ）の両方を活性化するが、人名に由来する（ｅｐｏｎｙｍｏｕｓ）リガンドより１０〜１００倍効能が低い。さらに、ＧＬＰ１ＲとのＯＸＭの相互作用に関する研究は、これが、ＧＬＰ−１と比較して、ベータ−アレスチン動員に対して異なる効果を有するかもしれず（Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ， Ｒ．， ｅｔ ａｌ． （２００７） Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ ３２２： １４８−１５４）、それによって、「バイアスされた（ｂｉａｓｅｄ）」リガンドとして作用するかもしれないことを示唆している。ＯＸＭに対する特有の受容体が長年求められたが、まだ解明されておらず、それは、ＧＬＰ１ＲおよびＧＣＧＲの経路を介して作用すると仮定される。したがって、本明細書には、満腹の誘発、体重減少、インスリン抵抗性の緩和、及び／又は糖尿病に対する糖尿病前症の進行の遅れを可能にする消化管ペプチドの界面活性剤の修飾のための方法が提供される。
【０１５０】
ＧＬＰ−１
上に記載された満腹および代謝に対するプレプログルカゴンタンパク質の生成物の複雑で相互作用する行動を考慮して、複数のグループからの研究者は、ＧＬＰ−１およびグルカゴンの構造に関する構造活性相関を研究してきた。配列の全体にわたる残基は、置換を受け入れると示された。例えば、Ａｌａによる置換は、ＧＬＰ−１のＮ末端領域、特に２、３、５、８、１１および１２で十分に受け入れられる（Ａｄｅｌｈｏｒｓｔ， Ｋ．， ｅｔ ａｌ． （１９９４） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６９： ６２７５−６２７８）。
【０１５１】
ＧＬＰ１ＲおよびＧＬＣＲに結合する能力を有するキメラ類似体が、Ｃ末端残基ををＧＬＰ−１からグルカゴンのＮ末端上に移植する（ｇｒａｆｔｉｎｇ）ことによって達成され得ることが示された（Ｈｊｏｒｔｈ， Ｓ．Ａ．， ｅｔ ａｌ． （１９９４） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６９： ３０１２１−３０１２４）。位置３での残基（ＧＬＰ１中の酸性のＧｌｕあるいはグルカゴンまたはＯＸＭ中の中性のＧｌｎ）は、ＧｌＰ１Ｒに対する、グルカゴンの親和性を減少させる（Ｒｕｎｇｅ， Ｓ．， ｅｔ ａｌ． （２００３） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７８： ２８００５−２８０１０）か、またはＯＸＭの親和性を減少させる（Ｐｏｃａｉ， Ａ．， ｅｔ ａｌ． （２００９） Ｄｉａｂｅｔｅｓ ５８： ２２５８−２２６６）。位置３でＧＬＰ−１の、あるいはＧｌｎを有するグルカゴンまたはＯＸＭの安定した類似体で処置された動物の代謝特性に対する効果が研究された（Ｄａｙ， Ｊ．Ｗ．， ｅｔ ａｌ． （２００９） Ｎａｔ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ ５： ７４９−７５７； Ｄｒｕｃｅ， Ｍ．Ｒ．， ｅｔ ａｌ． （２００９） Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １５０： １７１２−１７２２； Ｐｏｃａｉ， Ａ．， ｅｔ ａｌ． （２００９） Ｄｉａｂｅｔｅｓ ５８： ２２５８−２２６６）。これらの類似体は、ＧＬＰ１ＲおよびＧＣＧＲの両方に対してアゴニスト作用を有するように設計された（Ｄａｙ， Ｊ．Ｗ．， ｅｔ ａｌ． ＵＳ ２０１０／０１９０７０１ Ａ１； Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ， Ｊ．Ｔ．， ｅｔ ａｌ． （２０１１） Ｊ Ｐｅｐｔ Ｓｃｉ １７： ６５９−６６６； Ｒｉｂｉｅｒ， Ｄ．， 米国特許出願２０１２／０１７８６７０）。
【０１５２】
キメラ類似体は、それらの受容体に作用する親ホルモンの望ましい効果を有するはずであり、それ故、ＯＸＭの効果に類似して、明らかにＧＬＰ−１ＲおよびＧＬＣＲの両方：脂肪分解およびグルカゴンが原因の脂肪の燃焼との増加と関連した、グルコース依存性のインスリン分泌および満腹、に作用する。キメラ類似体は、体重の減少および脂肪の燃焼の増加の望ましい効果を引き起こすと示された。そのような特性は肥満症の処置において魅力的であるが、肥満処置における主な問題はコンプライアンスである。それぞれ、ＧＬＰ−１ＲおよびＧＬＣＲの両方に対する親和性を有する、グルカゴンおよびＯＸＭの現在知られている全長類似体は、体重減少を結果としてもたらすことができるが、高いバイオアベイラビリティ、薬学的特性、および最適な薬物の処置レジメンが必要な患者への最適な送達のために最適化されていない。したがって、本明細書には、肥満症及び／又は糖尿病及び／又はメタボリック症候群などの疾病の処置における治療結果の改善のための高いバイオアベイラビリティ及び／又は長い永続効果を可能にする、消化管ペプチドの類似体（例えば，ＧＬＰ、ＯＸＭ、グルカゴンなど）が提供される。
【０１５３】
ＯＸＭ様の分子によるメタボリック症候群および糖尿病の最適化された処置に対するさらなる因子は、処置の期間およびグルカゴン作用の量に関連する。例えば、ＧＬＰ−１およびグルカゴン受容体を活性化する類似体による継続的な処置（ＯＸＭの薬理学的特性）は、体脂肪量の非常に大きい且つ急速な減少を結果としてもたらすことができる（Ｄａｙ， Ｊ．Ｗ．， ｅｔ ａｌ． （２００９） Ｎａｔ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ ５： ７４９−７５７）が、除脂肪筋肉量の減少も引き起こしかねず（Ｋｏｓｉｎｓｋｉ， Ｊ．Ｒ．， ｅｔ ａｌ． （２０１２） Ｏｂｅｓｉｔｙ （Ｓｉｌｖｅｒ Ｓｐｒｉｎｇ）： ｄｏｉ： １０．１０３８／ｏｂｙ．２０１２．６７）、これはこのクラスでの製剤には好ましくない。例えば、Ｋｏｓｉｎｓｋｉ， Ｊ．Ｒ．， ｅｔ ａｌ．による研究論文において、天然ホルモンＯｘｍは、Ａｌｚｅｔのミニポンプから１４日間続けて投与され、体脂肪量の３０％の減少を結果としてもたらすが、除脂肪量（筋肉）の７％の減少も引き起こした。
【０１５４】
グルカゴン作用は、グリコーゲン分解、脂肪分解および脂肪の燃焼の増加を刺激すると知られているが、筋肉に対する異化効果も有し得る。ＧＬＰ−１とグルカゴン作用を組み合わせる薬剤を使用する処置（ＯＸＭ特性）を成功させるために、程好い量のグルカゴン作用（脂肪燃焼）を有する、ＧＬＰ−１類似体の満腹および増強されたグルコース依存性のインスリン分泌を最適に引き起こす必要がある。さらに、そのような薬剤の間欠的な使用は、除脂肪量の減少を最小限にしながら、体脂肪量の減少を介して、適度の継続的な体重減少の望ましい臨床的特性を提供する。本明細書には、治療における（例えば、メタボリック症候群、糖尿病、肥満症などにおける）最適な使用を可能にする、ＧＬＰ−１とＯＸＭ作用の望ましい組み合わせに加えて、調整可能な薬物動態学的／薬理学的な特性を有する分子が提供される。
【０１５５】
一実施形態では、式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、およびＩＩＩ−Ｂの化合物は、グルカゴン様の活性またはＧＬＰ−１様の活性のいずれかを提供するように設計されている。さらなる実施形態では、式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、およびＩＩＩ−Ｂの化合物は、調整可能な活性を提供する。例えば、１つの例において、本明細書に記載されるペプチド生成物（例えば、図１の表１、図２の表２、および図３の表３の化合物）は、グルカゴンおよびＧＬＰ−１の両方に対する受容体で、約５００ｎＭ未満、好ましくは約５０ｎＭ未満、より好ましくは約２０ｎＭ未満のＥＣ５０を有している。別の例では、本明細書に記載されるペプチド生成物（例えば、図１の表１、図２の表２、および図３の表３の化合物）は、ＧＬＰ−１受容体に対してより効能があり（例えば、１０ｎＭ未満、好ましくは５ｎＭ未満、より好ましくは約１ｎＭのＥＣ５０）、グルカゴン受容体に対してはそれほど効能がない（例えば、５０ｎＭ未満、好ましくは約２０ｎＭ未満、より好ましくは約５ｎＭ未満のＥＣ５０）。生物学的活性のこの調整は、程好い量のグルカゴンの作用の幾らかの保持を可能にし、それによって、増強されたグルコース依存性のインスリン分泌の有益な効果も保持しながら、脂肪燃焼を生じさせる。ＯＸＭは、ＧＬＰ−１およびグルカゴンによって構造上相同性であり、グルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）およびＧＬＰ−１受容体（ＧＬＰ１Ｒ）の両方を活性化する。したがって、幾つかの実施形態では、式Ｉ−Ａ、式ＩＩＩ−Ａ、および式ＩＩＩ−Ｂの化合物は、調整可能なＯＸＭ様の生物学的活性を提供する。幾つかの具体的な実施形態では、本明細書に記載されるペプチド生成物は、ＧＬＰ−１及び／又はその類似体（例えば、本明細書に記載される修飾された非天然のアミノ酸置換、本明細書に記載される環化されたラクタム結合、本明細書に記載される界面活性剤の修飾、またはそれらの組み合わせを含む、類似体）のアミノ酸残基１−１７を有するペプチドを含む。幾つかの他の実施形態では、本明細書に記載されるペプチド生成物は、ＧＬＰ−１及び／又はその類似体（例えば、本明細書に記載される修飾された非天然のアミノ酸置換、本明細書に記載される環化されたラクタム結合、本明細書に記載される界面活性剤の修飾、またはそれらの組み合わせを含む、類似体）のアミノ酸残基１−１６を有するペプチドを含む。さらなる実施形態では、本明細書に記載されるペプチド生成物は、ＧＬＰ−１及び／又はその類似体（例えば、本明細書に記載される修飾された非天然のアミノ酸置換、本明細書に記載される環化されたラクタム結合、本明細書に記載される界面活性剤の修飾、またはそれらの組み合わせを含む、類似体）のアミノ酸残基１−１８を有するペプチドを含む。さらに、本明細書に記載されるペプチド生成物は、式Ｉ−Ａ、式ＩＩＩ−Ａ、および式ＩＩＩ−Ｂの設計された化合物、および図１の表１、図２の表２、および図３の表３の化合物のヘリックス安定化を提供する、１つ以上の残基（例えば、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ）を含む。
リガンドのグルカゴンサブファミリーは、多くのクラスＢの受容体（セクレチンクラス、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ））に共通する２ドメイン様式（ｔｗｏ ｄｏｍａｉｎ ｍｏｄｅ）でそれらの受容体に結合すると考えられる。ＧＬＰ−１に関して、膜貫通ヘリックスの上部に結合する、残基１からおよそ残基１６のＮ末端領域（膜近接領域）、および受容体の、大きな、細胞外の、Ｎ末端伸長（ＥＣＤ）に結合する、残基１７から３１のヘリカルＣ末端領域が存在するようである。これらのリガンドの結合は、これらのペプチドリガンドのＮ末端が切断された類似体が、受容体の単に単離されたＥＣＤ領域に対する実質的な結合親和性および選択性をまだ保持することができるという事実に焦点を当てている（ｆｏｃｕｓｅｓ ｏｎ）。それ故、Ｎ末端領域が受容体活性化の要因であり、一方でＣ末端領域が結合の要因であることが示唆されてきた。ＧＬＰ−１の、短い、Ｎ末端類似体が、効能のある結合剤と受容体活性化因子の両方になり得ることが最近示された（Ｍａｐｅｌｌｉ， Ｃ．， ｅｔ ａｌ． （２００９） Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ５２： ７７８８−７７９９； Ｈａｑｕｅ， Ｔ．Ｓ．， ｅｔ ａｌ． （２０１０） Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ３１： ９５０−９５５； Ｈａｑｕｅ， Ｔ．Ｓ．， ｅｔ ａｌ． （２０１０） Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ３１： １３５３−１３６０）。
【０１５６】
さらに、Ｎ末端領域で結合された、ＧＬＰ−１模倣物、エキセンディン−４（Ｂｙｅｔｔａ）の切断されたアンタゴニスト類似体を用いるＧＬＰ１ＲのＮ末端領域のＸ線結晶構造の研究（Ｒｕｎｇｅ， Ｓ．， ｅｔ ａｌ． （２００８） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８３： １１３４０−７）は、ＥＣＤにおける重要なリガンド結合領域が高い疎水性を有することを示している（図３）。Ｇｌｕ１５を超える（ｂｅｙｏｎｄ）エキセンディン−４の配列は、このまさに疎水の領域を有する両親媒性のヘリックスとして相互作用し（Ｖａｌ１９＊、Ｐｈｅ２２＊、Ｔｒｐ２５＊、Ｌｅｕ２６＊）、この場合、アスタリスクは、残基がリガンド中にあることを示している。一実施形態では、ＧＬＰ−１またはグルカゴンの切断されたＮ末端フラグメントは、ＧＬＣＲに結合するように修飾され、界面活性剤に共有結合される。界面活性剤の疎水性の１’−アルキル部分は、天然のホルモンリガンドのＣ末端領域を模倣して、それに取って代わり、ペプチドの効能、有効性、および作用持続時間を増加させる。さらに、そのような類似体は、そのより小さなサイズが要因で主要な利点があり、これによって、その複雑性、合成コスト、およびタンパク質分解に対する感受性が減少される。さらに、より小さなペプチドは、鼻粘膜または腸細胞の障壁を通ってより容易に吸収される。
【０１５７】
低血糖症は、生命を脅かしかねない低血糖の疾病であり、強化インスリン療法による高血糖のより積極的な処置が行われているように、より多くの患者でますます確認されている。血中グルコース値が低下しすぎて、身体の活性のために脳および筋肉に十分なエネルギーを提供することができないときに、低血糖症が確認される。グルカゴンは、この疾病を処置するために使用され得、肝臓を刺激してグリコーゲンを分解することでグルコースを生成し、血中グルコース値を平年値へと上昇させることによって使用されている。
ＧＬＣＲを活性化する能力を保持するグルカゴンの類似体は、血中グルコース値に対して望ましい効果を達成するために使用されてもよい。
【０１５８】
ＧＬＰ１Ｒを活性化するＧＬＰ−１の類似体は、その産生、および高まった血中グルコース値の存在下で、膵臓からのインスリンの放出を刺激する。エクセナチド（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））などの現在の生成物に見られるように、この作用は、血中グルコース値の効率的な抑制および正常化を結果としてもたらす。さらに、そのような生成物は、食欲減退をもたらし、胃からの食物の移動を遅くするようである。したがって、それらは、複数の機構を介する糖尿病の処置に有効である。ＧＬＣＲとＧＬＰ１Ｒの両方を活性化するグルカゴンおよびＧＬＰ−１の効果を組み合わせる類似体は、食欲を抑える、グルコース依存性の方法でインスリンを放出する、低血糖症からの保護を助ける、および脂肪の燃焼を加速する共同作用を介する、糖尿病の処置における有益性を提供し得る。
【０１５９】
インスリン依存性または非インスリン依存性いずれかでの、糖尿病、１型真性糖尿病、２型真性糖尿病、または妊娠性糖尿病を含む高血糖症を処置するためのそのような方法は、腎症、網膜症および血管疾患を含む、糖尿病の合併症を減少させるのに有用であると期待される。心血管系疾患における適用は、微小血管性および巨大血管性の疾患を包含し（Ｄａｖｉｄｓｏｎ， Ｍ．Ｈ．， （２０１１） Ａｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ １０８［ｓｕｐｐｌ］：３３Ｂ−４１Ｂ； Ｇｅｊｌ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ． （２０１２） Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ ９７：ｄｏｉ：１０．１２１０／ｊｃ．２０１１−３４５６）、心筋梗塞の処置を含む。食欲を減退させる又は体重の減少を促進するためのそのような方法は、体重の減少、体重増加の予防、または薬物誘発性肥満症を含む様々な原因の肥満症の処置、および血管疾患（冠動脈疾患、脳卒中、末梢血管疾患、虚血再灌流など）、高血圧症、２型糖尿病の発症、高脂血症および筋骨格疾患を含む、肥満症に関係する合併症の減少に有用であると予想される。
【０１６０】
本明細書で使用されるように、用語グルカゴンまたはＧＬＰ−１類似体は、そのすべての薬学的に許容可能な塩またはエステルを含む。
【０１６１】
ペプチドおよびその類似体
１つの態様では、共有結合的に修飾され、本明細書に記載される方法に適したペプチドは、グルカゴン及び／又はその関連するホルモンＧＬＰ−１の切断された類似体であり、該類似体は、限定されないが、以下を含む：
グルカゴン：
【０１６２】
【化３２】
0006525456.tif 000033
オキシントモジュリン：
【０１６３】
【化３３】
0006525456.tif 000034
ＧＬＰ−１（グルカゴンのナンバリングを使用する）：
【０１６４】
【化３４】
0006525456.tif 000035
【０１６５】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【０１６６】
【化３５】
0006525456.tif 000036
式中：
Ｚは、ＯＨ、Ｎ−Ｒ４−Ｈｉｓ、または−ＮＨ−Ｒ３であり、ここでＲ３は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１２の置換または非置換のアルキル、または１０Ｄａ未満のＰＥＧ鎖であり；およびＲ４は、Ｃ２−Ｃ１０アシル基、例えば、ＡｃまたはＢｚであり；
ａａ１は、Ｈｉｓ、Ｎ−Ｒ４−Ｈｉｓ、ｐＧｌｕ−Ｈｉｓ、またはＮ−Ｒ３−Ｈｉｓであり；
ａａ２は、Ｓｅｒ、Ｄ−Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、ＭｅＰｒｏ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、またはＡｃ５ｃであり；
ａａ３は、Ｇｌｎ、またはＣｉｔであり；
ａａ４は、Ｇｌｙ、またはＤ−Ａｌａであり；
ａａ５は、Ｔｈｒ、またはＳｅｒであり；
ａａ６は、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、２ＦＰｈｅ、ＭｅＰｈｅ、２ＦＭｅＰｈｅ、またはＮａｌ２であり；
ａａ７は、Ｔｈｒ、またはＳｅｒであり；
ａａ８は、Ｓｅｒ、またはＡｓｐであり；
ａａ９は、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり；
ａａ１０は、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｎａｌ２、Ｂｉｐ、Ｂｉｐ２ＥｔＭｅＯ、またはＵであり；
ａａ１１は、存在しない、またはＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｂｉｐ、またはＵであり；
ａａ１２は、存在しない、またはＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、またはＵであり；
ａａ１３は、存在しない、またはＴｙｒ、Ｇｌｎ、Ｃｉｔ、またはＵであり；
ａａ１４は、存在しない、またはＬｅｕ、Ｍｅｔ、Ｎｌｅ、またはＵであり；
ａａ１５は、存在しない、またはＡｓｐ、Ｇｌｕ、またはＵであり；
ａａ１６は、存在しない、またはＳｅｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃ５ｃ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＵであり；
ａａ１７は、存在しない、またはＡｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｃｉｔ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、Ｌｙｓ、またはＵであり；
ａａ１８は、存在しない、またはＡｒｇ、ｈＡｒｇ、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ１９は、存在しない、またはＡｌａ、Ｖａｌ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ２０は、存在しない、またはＧｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｃｉｔ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ２１は、存在しない、またはＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ２２は、存在しない、またはＰｈｅ、Ｔｒｐ、Ｎａｌ２、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵであり；
ａａ２３は、存在しない、またはＶａｌ、Ｉｌｅ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ２４は、存在しない、またはＧｌｎ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｃｉｔ、またはＵであり；
ａａ２５は、存在しない、またはＴｒｐ、Ｎａｌ２、またはＵであり；
ａａ２６は、存在しない、またはＬｅｕ、またはＵであり；
ａａ２７は、存在しない、またはＭｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｌｙｓ、またはＵであり；
ａａ２８は、存在しない、またはＡｓｎ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｃｉｔ、またはＵであり；
ａａ２９は、存在しない、またはＴｈｒ、Ｇｌｙ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ３０は、存在しない、またはＬｙｓ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５Ｃ、Ａｒｇ、またはＵであり；
ａａ３１は、存在しない、またはＡｒｇ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ３２は、存在しない、またはＡｓｎ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ３３は、存在しない、またはＡｒｇ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ３４は、存在しない、またはＡｓｎ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ３５は、存在しない、またはＡｓｎ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ３６は、存在しない、またはＩｌｅ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ３６は、存在しない、またはＡｌａ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ３７は、存在しない、またはＵであり；
Ｕは、界面活性剤Ｘに共有結合的に付けるために使用される、官能基を含む天然または非天然のアミノ酸であり；
ここで、ａａ１−ａａ３７のいずれか２つは、それらの側鎖を介して随意に環化されることで、ラクタム結合を形成し；
但し、ａａ１０−ａａ３７の１つ、または少なくとも１つが、Ｘに共有結合的に付けられたリンカーアミノ酸Ｕであることを前提とする。
【０１６７】
具体的な実施形態では、結合アミノ酸Ｕは、ＬｙｓまたはＯｒｎなどのジアミノ酸であり、Ｘは、Ｕに結合された１−アルキルグリコシドクラスからの修飾された界面活性剤であり、Ｚは、ＯＨ、または−ＮＨ−Ｒ２であり、ここで、Ｒ３は、ＨまたはＣ１−Ｃ１２；または１０Ｄａ未満のＰＥＧ鎖である。
【０１６８】
幾つかの実施形態では、式Ｉ−Ａのペプチド生成物は、以下のＩＩＩ−Ａの構造を有し：
【０１６９】
【化３６】
0006525456.tif 000037
式中：
Ｚは、ＯＨ、または−ＮＨ−Ｒ３であり、ここでＲ３は、Ｈ、あるいはＣ１−Ｃ１２の置換または非置換のアルキル、または１０Ｄａ未満のＰＥＧ鎖であり；
ａａ１は、Ｈｉｓ、Ｎ−Ａｃ−Ｈｉｓ、ｐＧｌｕ−Ｈｉｓ、またはＮ−Ｒ３−Ｈｉｓであり；
ａａ２は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、ＭｅＰｒｏ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、またはＡｃ５ｃであり；
ａａ３は、Ｇｌｎ、またはＣｉｔであり；
ａａ４は、Ｇｌｙ、またはＤ−Ａｌａであり；
ａａ５は、Ｔｈｒ、またはＳｅｒであり；
ａａ６は、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、２ＦＰｈｅ、ＭｅＰｈｅ、２ＦＭｅＰｈｅ、またはＮａｌ２であり；
ａａ７は、Ｔｈｒ、またはＳｅｒであり；
ａａ８は、Ｓｅｒ、またはＡｓｐであり；
ａａ９は、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり；
ａａ１０は、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｎａｌ２、Ｂｉｐ、Ｂｉｐ２ＥｔＭｅＯ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１１は、存在しない、またはＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｂｉｐ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１２は、存在しない、またはＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１３は、存在しない、またはＴｙｒ、Ｇｌｎ、Ｃｉｔ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１４は、存在しない、またはＬｅｕ、Ｍｅｔ、Ｎｌｅ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１５は、存在しない、またはＡｓｐ、Ｇｌｕ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１６は、存在しない、またはＳｅｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃ５ｃ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１７は、存在しない、またはＡｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｃｉｔ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１８は、存在しない、またはＡｒｇ、ｈＡｒｇ、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１９は、存在しない、またはＡｌａ、Ｖａｌ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２０は、存在しない、またはＧｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｃｉｔ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２１は、存在しない、またはＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２２は、存在しない、またはＰｈｅ、Ｔｒｐ、Ｎａｌ２、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２３は、存在しない、またはＶａｌ、Ａｒｇ、Ｉｌｅ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２４は、存在しない、またはＧｌｎ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｃｉｔ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２５は、存在しない、またはＴｒｐ、Ｎａｌ２、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２６は、存在しない、またはＬｅｕ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２７は、存在しない、またはＭｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｌｙｓ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２８は、存在しない、またはＡｓｎ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２９は、存在しない、またはＴｈｒ、Ｇｌｙ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ここで、ａａ１−ａａ２９のいずれか２つは、それらの側鎖を介して随意に環化されることで、ラクタム結合を形成し；
但し、ａａ１０、ａａ１１、ａａ１２、ａａ１６、ａａ１７、ａａ１８、ａａ１９、ａａ２０、ａａ２１、ａａ２２、ａａ２３、ａａ２４、ａａ２５、ａａ２６、ａａ２７、ａａ２８またはａａ２９の１つ、または少なくとも１つが、Ｘに共有結合的に付けられた天然または非天然のアミノ酸Ｕであることを前提とする。
【０１７０】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるペプチド生成物は、以下の式ＩＩＩ−Ｂの構造を有し：
【０１７１】
【化３７】
0006525456.tif 000038
式中：
Ｚは、ＯＨ、または−ＮＨＲ３であり、ここでＲ３は、Ｈあるいは置換または非置換のＣ１−Ｃ１２アルキル；または１０Ｄａ未満のＰＥＧ鎖であり；
ａａ２は、Ｇｌｙ、ＭｅＰｒｏまたはＡｉｂであり；
ａａ３は、Ｇｌｎ、またはＣｉｔであり；
ａａ６は、Ｐｈｅ、２ＦＰｈｅ、ＭｅＰｈｅ、２ＦＭｅＰｈｅ、またはＮａｌ２であり；
ａａ１０は、Ｔｙｒ、Ｎａｌ２、Ｂｉｐ、Ｂｉｐ２ＥｔＭｅＯ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１１は、存在しない、またはＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｂｉｐ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１２は、存在しない、またはＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１３は、存在しない、またはＴｙｒ、Ｇｌｎ、Ｃｉｔ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１４は、存在しない、またはＬｅｕ、Ｎｌｅ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１５は、存在しない、またはＡｓｐ、Ｇｌｕ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１６は、存在しない、またはＳｅｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１７は、存在しない、またはＡｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｃｉｔ、Ａｉｂ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１８は、存在しない、またはＡｒｇ、ｈＡｒｇ、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１９は、存在しない、またはＡｌａ、Ａｉｂ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２０は、存在しない、またはＧｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｃｉｔ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２１は、存在しない、またはＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ａｉｂ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２２は、存在しない、またはＰｈｅ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２３は、存在しない、またはＶａｌ、Ｉｌｅ、ＡｉｂまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２４は、存在しない、またはＡｌａ、Ｇｌｎ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２５は、存在しない、またはＴｒｐ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２６は、存在しない、またはＬｅｕ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２７は、存在しない、またはＭｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｌｙｓ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２８は、存在しない、またはＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｃｉｔ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２９は、存在しない、またはＴｈｒ、Ａｉｂ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ３０は、存在しない、またはＡｒｇ、またはＵ（Ｘ）であり；
ここで、ａａ１−ａａ２３のいずれか２つは、それらの側鎖を介して随意に環化されることで、ラクタム結合を形成し；
但し、ａａ１０、ａａ１１、ａａ１２、ａａ１６、ａａ１７、ａａ１８、ａａ１９、ａａ２０、ａａ２１、ａａ２２、ａａ２３、ａａ２４、またはａａ２８の１つ、または少なくとも１つが、Ｘに共有結合的に付けられた天然または非天然のアミノ酸Ｕであることを前提とする。
【０１７２】
式ＩＩＩ−Ａおよび式ＩＩＩ−Ｂの幾つかの具体的な実施形態では、Ｘは、以下の構造を有し：
【０１７３】
【化３８】
0006525456.tif 000039
式中：
Ｒ１ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは、Ｈであり；
Ｗ１は、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−であり；および
Ｒ２は、単結合である。
【０１７４】
上に記載される実施形態の幾つかでは、Ｒ１ａは、Ｃ１−Ｃ２０アルキル基、Ｃ８−Ｃ２０アルキル基、Ｃ１２−１８アルキル基またはＣ１４−Ｃ１８アルキル基である。
【０１７５】
式ＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、Ｕは、本明細書に記載される任意のリンカーアミノ酸である。図１の表１、図２の表２、および図３の表３は、本明細書に記載されるような界面活性剤と共有結合したペプチドの特定の例を例証する。
【０１７６】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【０１７７】
【化３９】
0006525456.tif 000040
式中
ａａ２は、ＧｌｙまたはＡｉｂであり；
ａａ２８は、ＡｓｎまたはＧｌｎである。
【０１７８】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【０１７９】
【化４０】
0006525456.tif 000041
式中
ａａ１６およびａａ２０は、各々、個々に、ＬｙｓまたはＧｌｕのいずれかであり、それらの側鎖を介して環化されることで、ラクタム結合を形成し；
およびａａ２８は、ＡｓｎまたはＧｌｎであり；
Ｘは、１−アルキルベータ−Ｄ−グルコシド、１−アルキルベータ−Ｄ−マルトシド、１−アルキルベータ−Ｄ−メリビオシド、または対応するアルファグリコシドなどから調製されたグルクロニルクラスの部分を含み、ここでアルキルは、Ｃ８−Ｃ２０の直鎖状のアルキル鎖である。
【０１８０】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【０１８１】
【化４１】
0006525456.tif 000042
式中
ａａ１６−ａａ２０は、それらの側鎖を介して環化されることで、ラクタム結合を形成し；
およびＸは、１−アルキルベータ−Ｄ−グルコシド、１−アルキルベータ−Ｄ−マルトシド、１−アルキルベータ−Ｄ−メリビオシド、または対応するアルファグリコシドなどから調製されたグルクロニルクラスの部分を含み、ここでアルキルは、Ｃ８−Ｃ２０の直鎖状のアルキル鎖である。
【０１８２】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【０１８３】
【化４２】
0006525456.tif 000043
式中
Ｇｌｕ＊１６およびＬｙｓ＊２０は、それらの側鎖を介して環化されることで、ラクタム結合を形成する。
【０１８４】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【０１８５】
【化４３】
0006525456.tif 000044
式中
Ｇｌｕ＊１６およびＬｙｓ＊２０は、それらの側鎖を介して環化されることで、ラクタム結合を形成する。
【０１８６】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【０１８７】
【化４４】
0006525456.tif 000045
式中
Ｇｌｕ＊１６およびＬｙｓ＊２０は、それらの側鎖を介して環化されることで、ラクタム結合を形成する。
【０１８８】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【０１８９】
【化４５】
0006525456.tif 000046
式中：
Ｇｌｕ＊１６およびＬｙｓ＊２０は、それらの側鎖を介して環化されることで、ラクタム結合を形成する。
【０１９０】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【０１９１】
【化４６】
0006525456.tif 000047
式中：
Ｇｌｕ＊１６およびＬｙｓ＊２０は、それらの側鎖を介して環化されることで、ラクタム結合を形成する。
【０１９２】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【０１９３】
【化４７】
0006525456.tif 000048
式中：
Ｇｌｕ＊１６およびＬｙｓ＊２０は、それらの側鎖を介して環化されることで、ラクタム結合を形成する。
【０１９４】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【０１９５】
【化４８】
0006525456.tif 000049
式中：
Ｇｌｕ＊１６およびＬｙｓ＊２０は、それらの側鎖を介して環化されることで、ラクタム結合を形成する。
【０１９６】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【０１９７】
【化４９】
0006525456.tif 000050
式中：
Ｇｌｕ＊１６およびＬｙｓ＊２０は、それらの側鎖を介して環化されることで、ラクタム結合を形成する。
【０１９８】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【０１９９】
【化５０】
0006525456.tif 000051
式中：
Ｇｌｕ＊１６およびＬｙｓ＊２０は、それらの側鎖を介して環化されることで、ラクタム結合を形成する。
【０２００】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有する：
【０２０１】
【化５１】
0006525456.tif 000052
【０２０２】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有する：
【０２０３】
【化５２】
0006525456.tif 000053
【０２０４】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有しる：
【０２０５】
【化５３】
0006525456.tif 000054
式中：
Ｇｌｕ＊１６およびＬｙｓ＊２０は、それらの側鎖を介して環化されることで、ラクタム結合を形成する。
【０２０６】
式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【０２０７】
【化５４】
0006525456.tif 000055
式中：
Ｇｌｕ＊１６およびＬｙｓ＊２０は、それらの側鎖を介して環化されることで、ラクタム結合を形成する。
【０２０８】
本明細書に提示される実施形態の範囲内では、式Ｉ−Ａ、式ＩＩＩ−Ａ、または式ＩＩＩ−Ｂのペプチド生成物が熟慮され、ここで、ペプチド生成物は、１つまたはそれ以上の界面活性剤の基（例えば、式Ｉの構造を有している基Ｘ）を含む。一実施形態では、式Ｉ−Ａ、式ＩＩＩ−Ａ、または式ＩＩＩ−Ｂのペプチド生成物は、１つの界面活性剤の基を含む。別の実施形態では、式Ｉ−Ａ、式ＩＩＩ−Ａ、または式ＩＩＩ−Ｂのペプチド生成物は、２つの界面活性剤の基を含む。また別の実施形態では、式Ｉ−Ａ、式ＩＩＩ−Ａ、または式ＩＩＩ−Ｂのペプチド生成物は、３つの界面活性剤の基を含む。
【０２０９】
本明細書には、インスリン抵抗性及び／又は心血管性の疾病に関係する疾病の処置のためのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏ．１の特定部分の重要性が認識されている。したがって、本明細書には、必要としている個体において糖尿病を処置する方法が提供され、該方法は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏ．１のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１７を含む治療上有効な量のグルカゴン類似体を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。
【０２１０】
さらなる実施形態において、本明細書には、必要としている個体において糖尿病を処置する方法が提供され、該方法は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏ．１のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１８を含む治療上有効な量のグルカゴン類似体を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。
【０２１１】
別の実施形態において、本明細書には、必要としている個体において糖尿病を処置する方法が提供され、該方法は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏ．１のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１９を含む治療上有効な量のグルカゴン類似体を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。
【０２１２】
別の実施形態において、本明細書には、必要としている個体において糖尿病を処置する方法が提供され、該方法は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏ．１のアミノ酸残基ａａ１−ａａ２０を含む治療上有効な量のグルカゴン類似体を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。
【０２１３】
さらなる実施形態では、上に記載される前記グルカゴン類似体の投与は、体重減少を引き起こす。
【０２１４】
本明細書には、インスリン抵抗性及び／又は心血管性の疾病に関係する疾病の処置のためのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏ．１の特定部分の重要性が認識されている。したがって、本明細書には、必要としている個体において糖尿病を処置する方法が提供され、該方法は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏ．１のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１７を含む治療上有効な量のグルカゴン類似体を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。
【０２１５】
さらなる実施形態において、本明細書には、必要としている個体において糖尿病を処置する方法が提供され、該方法は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏ．１のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１８を含む治療上有効な量のグルカゴン類似体を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。
【０２１６】
別の実施形態において、本明細書には、必要としている個体において糖尿病を処置する方法が提供され、該方法は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏ．１のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１９を含む治療上有効な量のグルカゴン類似体を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。
【０２１７】
別の実施形態において、本明細書には、必要としている個体において糖尿病を処置する方法が提供され、該方法は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏ．１のアミノ酸残基ａａ１−ａａ２０を含む治療上有効な量のグルカゴン類似体を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。
【０２１８】
さらなる実施形態では、上に記載される前記グルカゴン類似体の投与は、体重減少を引き起こす。
【０２１９】
上に記載される実施形態のいずれかでは、前記グルカゴン類似体は、以下の式Ｉの界面活性剤Ｘで修飾され：
【０２２０】
【化５５】
0006525456.tif 000056
式中：
Ｒ１ａは、各々の出現で独立して、単結合、Ｈ、糖類、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換のアルコキシアリール基、置換または非置換のアラルキル基、またはステロイド核を含有する部分であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは、各々の出現で独立して、単結合、Ｈ、保護基、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換のアルコキシアリール基、あるいは置換または非置換のアラルキル基であり；
Ｗ１は、各々の出現で独立して、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、−（Ｃ＝Ｓ）−、−（Ｃ＝Ｓ）−ＮＨ−、または−ＣＨ２−Ｓ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−、−ＣＨ２−、または−Ｓ−であり；
Ｒ２は、各々の出現で独立して、Ｕに対する単結合、Ｈ、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換のアルコキシアリール基、あるいは置換または非置換のアラルキル基、−ＮＨ２、−ＳＨ、Ｃ２−Ｃ４−アルケン、Ｃ２−Ｃ４−アルキン、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｂｒ、−（ＣＨ２）ｍ−マレイミド、または−Ｎ３であり；
ｎは、１、２または３であり；
ｍは、１−１０の整数である。
【０２２１】
具体的な実施形態では、前記グルカゴン類似体は、界面活性剤で修飾され、Ｘは、以下の構造を有し：
【０２２２】
【化５６】
0006525456.tif 000057
式中：
Ｒ１ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは、Ｈであり；
Ｗ１は、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−であり；および
Ｒ２は、単結合である。
【０２２３】
上に記載される実施形態の幾つかでは、Ｒ１ａは、Ｃ１−Ｃ２０アルキル基、Ｃ８−Ｃ２０アルキル基、Ｃ１２−Ｃ１８アルキル基またはＣ１４−Ｃ１８アルキル基である。
【０２２４】
上に又は本明細書に記載される幾つかの実施形態では、Ｒ１ａは、糖類である。幾つかの実施形態では、糖類は、ガラクトースである。特定の実施形態では、糖類は、アルファ結合したガラクトースである。他の実施形態では、糖類は、アルファ結合したガラクトピラノース、ベータ結合したガラクトピラノース、アルファ結合したガラクトフラノース、またはベータ結合したガラクトフラノースである。
【０２２５】
本明細書で使用されるように、用語糖尿病は、１型糖尿病および２型糖尿病の両方を含む。したがって、幾つかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、式ＩＩ、ＩＩＩ−Ａ、及び／又はＩＩＩ−Ｂの化合物、及び／又は図１の表１、図２の表２、および図３の表３に記載される化合物を含む、本明細書に記載される任意の化合物を、１型糖尿病を患う個体に投与する工程を含む。幾つかの他の実施形態では、本明細書に記載される方法は、式ＩＩ、ＩＩＩ−Ａ、及び／又はＩＩＩ−Ｂの化合物、及び／又は図１の表１、図２の表２、および図３の表３に記載される化合物を含む、本明細書に記載される任意の化合物を、２型糖尿病を患う個体に投与する工程を含む。
【０２２６】
本明細書にはまた、必要としている個体において心血管系疾患を処置する方法が提供され、該方法は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏ．１のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１７を含む治療上有効な量のグルカゴン類似体を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。
【０２２７】
本明細書にはまた、必要としている個体において心血管系疾患を処置する方法が提供され、該方法は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏ．１のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１８を含む治療上有効な量のグルカゴン類似体を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。
【０２２８】
本明細書にはまた、必要としている個体において心血管系疾患を処置する方法が提供され、該方法は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏ．１のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１９を含む治療上有効な量のグルカゴン類似体を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。
【０２２９】
本明細書にはまた、必要としている個体において心血管系疾患を処置する方法が提供され、該方法は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏ．１のアミノ酸残基ａａ１−ａａ２０を含む治療上有効な量のグルカゴン類似体を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。
【０２３０】
上に記載される実施形態に対する幾つかの場合では、心血管系疾患が虚血性の事象に関係するときに、前記グルカゴン類似体が投与される。
【０２３１】
本明細書にはまた、必要としている個体において心血管系疾患を処置する方法が提供され、該方法は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏ．１のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１７を含む治療上有効な量のグルカゴン類似体を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。
【０２３２】
本明細書にはまた、必要としている個体において心血管系疾患を処置する方法が提供され、該方法は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏ．１のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１８を含む治療上有効な量のグルカゴン類似体を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。
【０２３３】
本明細書にはまた、必要としている個体において心血管系疾患を処置する方法が提供され、該方法は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏ．１のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１９を含む治療上有効な量のグルカゴン類似体を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。
【０２３４】
本明細書にはまた、必要としている個体において心血管系疾患を処置する方法が提供され、該方法は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏ．１のアミノ酸残基ａａ１−ａａ２０を含む治療上有効な量のグルカゴン類似体を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。
【０２３５】
上に記載される実施形態に対する幾つかの場合では、心血管系疾患が虚血性の事象に関係するときに、前記グルカゴン類似体が投与される。
【０２３６】
上に記載される実施形態のいずれかでは、前記グルカゴン類似体は、以下の式Ｉの界面活性剤Ｘで修飾され：
【０２３７】
【化５７】
0006525456.tif 000058
式中：
Ｒ１ａは、各々の出現で独立して、単結合、Ｈ、糖類、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換のアルコキシアリール基、置換または非置換のアラルキル基、またはステロイド核を含有する部分であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは、各々の出現で独立して、単結合、Ｈ、保護基、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換のアルコキシアリール基、あるいは置換または非置換のアラルキル基であり；
Ｗ１は、各々の出現で独立して、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、−（Ｃ＝Ｓ）−、−（Ｃ＝Ｓ）−ＮＨ−、または−ＣＨ２−Ｓ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−、−ＣＨ２−、または−Ｓ−であり；
Ｒ２は、各々の出現で独立して、Ｕに対する単結合、Ｈ、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換のアルコキシアリール基、あるいは置換または非置換のアラルキル基、−ＮＨ２、−ＳＨ、Ｃ２−Ｃ４−アルケン、Ｃ２−Ｃ４−アルキン、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｂｒ、−（ＣＨ２）ｍ−マレイミド、または−Ｎ３であり；
ｎは、１、２または３であり；
ｍは、１−１０である。
【０２３８】
具体的な実施形態では、前記グルカゴン類似体は、界面活性剤で修飾され、Ｘは、以下の構造を有し：
【０２３９】
【化５８】
0006525456.tif 000059
式中：
Ｒ１ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは、Ｈであり；
Ｗ１は、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−であり；および
Ｒ２は、単結合である。
【０２４０】
上に記載される実施形態の幾つかでは、Ｒ１ａは、Ｃ１−Ｃ２０アルキル基、Ｃ８−Ｃ２０アルキル基、Ｃ１２−Ｃ１８アルキル基またはＣ１４−Ｃ１８アルキル基である。
【０２４１】
上に又は本明細書に記載される幾つかの実施形態では、Ｒ１ａは、糖類である。幾つかの実施形態では、糖類は、ガラクトースである。特定の実施形態では、糖類は、アルファ結合したガラクトースである。他の実施形態では、糖類は、アルファ結合したガラクトピラノース、ベータ結合したガラクトピラノース、アルファ結合したガラクトフラノース、またはベータ結合したガラクトフラノースである。
【０２４２】
アミノ末端またはカルボキシル末端での修飾は、ペプチド（例えば、グルカゴンまたはＧＬＰ−１）へと随意に導入され得る（Ｎｅｓｔｏｒ， Ｊ．Ｊ．， Ｊｒ． （２００９） Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １６： ４３９９ − ４４１８）。例えば、ペプチドは、幾つかのペプチドに対して見られるように、低い効力、部分アゴニストおよびアンタゴニストの活性を示すペプチド類似体を与えるために、Ｎ末端上で切断またはアシル化され得（Ｇｏｕｒｌｅｔ， Ｐ．， ｅｔ ａｌ． （１９９８） Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ３５４： １０５−１１１， Ｇｏｚｅｓ， Ｉ． ａｎｄ Ｆｕｒｍａｎ， Ｓ． （２００３） Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｄｅｓ ９： ４８３−４９４）、それらの内容は、引用によって本明細書に組み込まれる。例えば、ｂＰＴＨの最初の６つの残基の欠失によって、アンタゴニスト類似体がもたらされ（Ｍａｈａｆｆｅｙ， Ｊ．Ｅ．， ｅｔ ａｌ． （１９７９） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５４： ６４９６−６４９８； Ｇｏｌｄｍａｎ， Ｍ．Ｅ．， ｅｔ ａｌ． （１９８８） Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １２３： ２５９７−２５９９）、本明細書に記載されるペプチドに対する類似した操作によって、効能のあるアンタゴニスト類似体が生じる。Ｄ−ＰｈｅなどのＤ−アミノ酸の欠失または組み込みのような、ペプチドのＮ末端に対する他の修飾によってもまた、長鎖アルキルグリコシドなどの、本明細書に記載される修飾によって置換されるときの、効能のある且つ長時間作用するアゴニストまたはアンタゴニストを得ることができる。このようなアゴニストおよびアンタゴニストはまた、商業上有用であり、本明細書に記載される熟慮された実施形態の範囲内にある。
【０２４３】
本明細書に記載される実施形態の範囲内ではまた、ペプチド類似体に共有結合的に付けられた界面活性剤が熟慮され、ここで、天然のペプチドは、アセチル化、アシル化、ＰＥＧ化、ＡＤＰリボシル化、アミド化、脂質または脂質の誘導体の共有結合的な取付け、ホスホチジルイノシトール（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ）の共有結合的な取付け、交差結合、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、システインの共有結合的な交差結合形成の形成、ピログルタミン酸の形成、フォルミル化、ガンマ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、グリコシル化、脂質の取付け、硫酸化、グルタミン酸残基のガンマ−カルボキシル化、ヒドロキシル化およびＡＤＰリボシル化、セレニル化（ｓｅｌｅｎｏｙｌａｔｉｏｎ）、硫酸化、アルギニル化（ａｒｇｉｎｙｌａｔｉｏｎ）などの、タンパク質に対するアミノ酸の転移ＲＮＡ媒介性の付加、およびユビキチン化によって修飾される。例えば、（Ｎｅｓｔｏｒ， Ｊ．Ｊ．， Ｊｒ． （２００７） Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＩＩ ２： ５７３−６０１， Ｎｅｓｔｏｒ， Ｊ．Ｊ．， Ｊｒ． （２００９） Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １６： ４３９９ − ４４１８， Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ， Ｔ．Ｅ． （１９９３， Ｗｏｌｄ， Ｆ． （１９８３） Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｖａｌｅｎｔ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ １−１２， Ｓｅｉｆｔｅｒ， Ｓ． ａｎｄ Ｅｎｇｌａｒｄ， Ｓ． （１９９０） Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ １８２： ６２６−６４６， Ｒａｔｔａｎ， Ｓ．Ｉ．， ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ａｎｎ Ｎ Ｙ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ６６３： ４８−６２）を参照。本明細書に記載される実施形態の範囲内ではまた、分枝形成のある又はない、分枝または環状のペプチドが熟慮される。環状ペプチド、分枝ペプチド、および分枝した環状ペプチドは、翻訳後の自然工程から結果として生じ、適切な合成方法によっても作られる。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される任意のペプチド生成物は、その後にアルキル−グリコシドの界面活性剤部分に共有結合的に付けられる、上に記載されるペプチド類似体を含む。
【０２４４】
本明細書に示される実施形態の範囲内ではまた、例えば、Ｌｙｓのε−位置で、オクタン、デカン酸、ドデカン酸、テトラデカン酸、ヘキサデカン酸、オクタデカン酸、３−フェニルプロパン酸などの、脂肪酸を有する、リンカーアミノ酸上のアシル化による本明細書で請求される類似体の、飽和または不飽和のアルキル鎖との置換によって、適切な位置で置換されたペプチド鎖が熟慮される（Ｚｈａｎｇ， Ｌ． ａｎｄ Ｂｕｌａｊ， Ｇ． （２０１２） Ｃｕｒｒ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ １９： １６０２−１６１８）。
同様に、そのようなアシル化は、ガンマ結合したグルタミン酸などのスペーサーに関連し得るか、またはガンマ結合したグルタミン酸上でさらに、９−アミノ−４，７−ジオキサノナン酸などの「ミニ（ｍｉｎｉ）−ＰＥＧ」に関連し得る（ＤｉＭａｒｃｈｉ， Ｒ．Ｄ． ａｎｄ Ｗａｒｄ， Ｂ．Ｐ （２０１２） 米国特許出願２０１２／０２３８４９３）。そのような類似体の限定ぃない、例示的な例は次の通りである：
【０２４５】
【化５９】
0006525456.tif 000060
【０２４６】
【化６０】
0006525456.tif 000061
【０２４７】
【化６１】
0006525456.tif 000062
【０２４８】
【化６２】
0006525456.tif 000063
【０２４９】
【化６３】
0006525456.tif 000064
【０２５０】
【化６４】
0006525456.tif 000065
【０２５１】
【化６５】
0006525456.tif 000066
【０２５２】
【化６６】
0006525456.tif 000067
【０２５３】
さらなる実施形態では、ペプチド鎖は、リンカーアミノ酸、例えば、Ｃｙｓのスルフヒドリル上の、スペーサー、およびステロイド核などの疎水性の部分、例えば、コレステロール部分との反応によって、適切な位置で随意に置換される。このような実施形態の幾つかでは、修飾されたペプチドはさらに、１つ以上のＰＥＧ鎖を含む。このような分子の限定しない例は、以下などである：
【０２５４】
【化６７】
0006525456.tif 000068
【０２５５】
【化６８】
0006525456.tif 000069
【０２５６】
２０の標準のアミノ酸に加えて、当該技術分野に公知である、および上に記載されるように、本明細書に記載される化合物に組み込まれ得る、莫大な数の「非標準のアミノ酸」または非天然のアミノ酸がある。他の非標準のアミノ酸は、共役ための反応性側鎖によって修飾される（Ｇａｕｔｈｉｅｒ， Ｍ．Ａ． ａｎｄ Ｋｌｏｋ， Ｈ．Ａ． （２００８） Ｃｈｅｍ Ｃｏｍｍｕｎ （Ｃａｍｂ） ２５９１−２６１１； ｄｅ Ｇｒａａｆ， Ａ．Ｊ．， ｅｔ ａｌ． （２００９） Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ ２０： １２８１−１２９５）。一手法では、発展したｔＲＮＡ／ｔＲＮＡシンテターゼ対は、アンバーサプレッサーコドンによって発現プラスミドにおいてコード化される（Ｄｅｉｔｅｒｓ， Ａ， ｅｔ ａｌ． （２００４）． Ｂｉｏ−ｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ． １４， ５７４３−５）。例えば、ｐ−アジドフェニルアラニンは、ペプチドに組み込まれ、その後、官能化された界面活性剤、または還元剤および銅イオンの存在下でアセチレン部分を有しているＰＥＧポリマーと反応させられて、「ヒュスゲン［３＋２］環化付加（Ｈｕｉｓｇｅｎ ［３＋２］ ｃｙｃｌｏａｄｄｉｔｉｏｎ）」として知られる有機反応を促進する。アセチレンで修飾されたアルキルグリコシドまたはＰＥＧで修飾されたグリコシドを含有している本明細書に記載される試薬を使用する類似した反応配列は、ペグ化された又はアルキルグリコシドで修飾されたペプチドを結果としてもたらす。約５０未満の残基のペプチドに関して、標準の固相合成が、鎖中の所望の位置で反応性のアミノ酸残基の組み込みのために使用される。このような界面活性剤で修飾されたペプチド及び／又はタンパク質は、ＰＥＧの取り込み単独によって修飾されたペプチドとは異なる範囲の薬理学的および薬学的な特性を示す。
【０２５７】
当業者は、ペプチド類似体の多数の並べ替え（ｐｅｒｍｕｔａｔｉｏｎｓ）が可能であることを理解し、アミノ酸配列が組み込まれた界面活性剤の部分を有することを前提に、本明細書に記載される界面活性剤で修飾されたペプチド生成物の望ましい特質を有するであろう。
【０２５８】
特定の定義
明細書で使用されるように、「ａ」または「ａｎ」は、１つ以上を意味する。請求項で使用されるように、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と併用して使用されるときに、用語「ａ」または「ａｎ」は、１つ以上を意味する。本明細書で使用されるように、「別の」は、少なくとも２つ又はそれ以上を意味する。
【０２５９】
本明細書で使用されるように、様々な一般的なアミノ酸に対する１文字および３文字の略語は、Ｐｕｒｅ Ａｐｐｌ． Ｃｈｅｍ． ３１， ６３９−６４５ （１９７２）および４０， ２７７−２９０ （１９７４）で推奨される通りであり、３７ ＣＦＲ § １．８２２ （５５ ＦＲ １８２４５，Ｍａｙ １，１９９０）に従う。略語は、Ｄ−またはＤＬとして特に指定されていない限り、Ｌ−アミノ酸を表わす。天然および非天然の両方である、特定のアミノ酸は、アキラル、例えば、グリシン、Ｃα−ジエチルグリシン（Ｄｅｇ）、α−アミノ−イソ酪酸（Ａｉｂ）、１−アミノシクロブタン−１−カルボン酸（Ａｃ４ｃ）、１−アミノシクロペンタン−１−カルボン酸（Ａｃ５ｃ）、１−アミノシクロヘキサン−１−カルボン酸（Ａｃ６ｃ）である。グルタミンの類似体は、シトルリン（Ｃｉｔ）を含む。すべてのペプチド配列は、左にＮ−末端アミノ酸および右にＣ末端アミノ酸を有して示される。Ｃ−アルファ−メチルプロリン（ＭｅＰｒｏ）は、Ｃ−アルファ−メチルフェニルアラニン（ＭｅＰｈｅ）、２−フルオロフェニルアラニン（２ＦＰｈｅ）、Ｃ−アルファ−メチル−２−フルオロフェニルアラニン（２ＦＭｅＰｈｅ）、およびＣ−アルファ−メチルリシン（ＭｅＬｙｓ）のように、ペプチド結合を抑制するために使用され得る。さらなる非天然の芳香族アミノ酸は、２−ナフチルアラニン（Ｎａｌ２）、ビフェニルアラニン（Ｂｉｐ）、（２−エチル−４’−メトキシビフェニルアラニン（Ｂｉｐ２ＥｔＭｅＯ）で置換され得、効能を増加させ得る。
【０２６０】
「アルキル」基は、脂肪族炭化水素基を指す。アルキル基への言及は、「飽和アルキル」及び／又は「不飽和アルキル」を含む。アルキル基は、飽和または不飽和であろうと、分枝鎖、直鎖、または環状の基を含む。「置換された（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ）」アルキル基は、１つ以上の追加の基で置換される。特定の実施形態では、１つ以上の追加の基は、アミド、エステル、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、アルキルスルホキシド、アリールスルホキシド、エステル、アルキルスルホン、アリールスルホン、シアノ、ハロゲン、アルコイル（ａｌｋｏｙｌ）、アルコイルオキソ（ａｌｋｏｙｌｏｘｏ）、イソシアナート、チオシアナート、イソチオシアナート、ニトロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、フルオロアルキル、アミノ、アルキル−アミノ、ジアルキル−アミノ、アミド、オキソ、ステロイドなどの疎水性の天然物、アラルキル鎖（アルコキシアリールを含む）、アシル部分を含むアルキル鎖など、から個々に及び独立して選択される。幾つかの実施形態では、アルキル基は、ペプチド中の残基（例えば、ＴｙｒまたはＤｍｔ）のＮα−位置に結合される。このクラスは、Ｎ−アルキルと呼ばれ、Ｃ１−Ｃ１０からの直鎖または分枝鎖のアルキル基、またはベンジル、フェニルエチルなどのアリールで置換されたアルキル基を含む。幾つかの実施形態では、アルキル部分は、糖類部分に対するグリコシド結合中である（典型的に、例えばグルコースの１−位置に）１−アルキル基である。そのような１−アルキル基は、Ｃ１−Ｃ３０アルキル基である。
【０２６１】
「アリール」基は、環を形成する原子の各々が炭素原子である、芳香環を指す。本明細書に記載されるアリール環は、５、６、７、８、９、またはそれ以上の炭素原子を有する環を含む。アリール基は、ハロゲン、アルキル、アシル、アルコキシ、アルキルチオ、スルフォニル、ジアルキル−アミノ、カルボキシルエステル、シアノなどから選択される置換基で随意に置換される。アリール基の例は、限定されないが、フェニル、およびナフタレニルを含む。
【０２６２】
用語「アシル」は、Ｃ１−Ｃ２０アシル鎖を指す。この鎖は、直鎖状の脂肪鎖、分枝した脂肪鎖、環状のアルキル部分を含む鎖、ステロイドなどの疎水性の天然物、アラルキル鎖、またはアシル部分を含むアルキル鎖を含み得る。
【０２６３】
用語「ステロイド核」は、以下に示されるような、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤと指定される、４つの縮合環の配置を含むステロイドの芯を指す：
【０２６４】
【化６９】
0006525456.tif 000070
ステロイド核を含む部分の例は、限定されないが、コレステロールなどを含む。
【０２６５】
本明細書で使用されるように、「治療上の組成物（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）」は、水性か有機の担体または賦形剤との混合物を含むことができ、例えば、錠剤、ペレット剤、カプセル剤、凍結乾燥物、坐剤、溶液、エマルジョン、懸濁液、または使用に適した他の形態のための通常無毒で、薬学的に許容可能な担体と調合され得る。担体は、上に開示されるものに加えて、固体、半固体、または液体の形態で、アルギナート、コラーゲン、グルコース、ラクトース、マンノース、アラビアゴム、ゼラチン、マンニトール、デンプン糊、三珪酸マグネシウム、タルク、トウモロコシデンプン、ケラチン、コロイドシリカ、ジャガイモデンプン、尿素、中鎖長トリグリセリド、デキストラン、および調剤の製造に使用するに適した他の担体、を含むことができる。さらに、補助安定剤、増粘剤または着色剤は、例えば、トリウロース（ｔｒｉｕｌｏｓｅ）などの安定化乾燥剤として使用され得る。
【０２６６】
本明細書で使用されるように、「薬学的に許容可能な担体」または「治療上有効な担体」は、水性または非水性（固体）、例えば、アルコール性または油性であるか、あるいはその混合物であり、界面活性剤、緩和薬、潤滑剤、安定剤、色素、香料、防腐剤、ｐＨの調整のための酸または塩基、溶媒、乳化剤、ゲル化剤、保湿剤、安定剤、湿潤剤、持続放出製剤、保水剤、または医薬組成物の特定の形態に一般に含まれる他の成分を含むことができる。薬学的に許容可能な担体は、当該技術分野に周知であり、例えば、水または生理学的な緩衝食塩水などの水溶液、またはグリコール、グリセロール、およびオリーブオイルまたは注射可能な有機酸エステルなどの油のような他の溶媒またはビヒクルを含む。薬学的に許容可能な担体は、特異的阻害剤、例えば、グルコース、スクロースまたはデキストランなどの炭水化物、アスコルビン酸またはグルタチオンなどの抗酸化剤、キレート剤、低分子量タンパク質、または他の安定剤または賦形剤の吸収を安定化または増加させるように作用する、生理学的に許容可能な化合物を含むことができる。
【０２６７】
本明細書で使用されるように、ペプチド生成物の「インスリン再抵抗性改善の（ｉｎｓｕｌｉｎ−ｒｅｓｅｎｓｉｔｉｚｉｎｇ）」量は、例えば、経口グルコース負荷試験（ｏｒａｌ ｇｌｕｃｏｓｅ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ ｔｅｓｔ）または正常血糖クランプ試験によって証拠づけられるように、典型的に体重を減少させながら、内因的または外因的に投与されたインスリンに対する身体の反応を、それを必要としている個体において増加させる、量である。
【０２６８】
医薬組成物はまた、生理学的条件に近づく（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅ）ように必要に応じて他の薬学的に許容可能な補助剤を包含し得、そのような「補助剤」は、限定されないが、ｐＨ調節剤および緩衝剤、等張化剤など、例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウムなどを含む。さらに、ペプチド、またはその変異体、懸濁液は、保存中に脂質を遊離基および脂質過酸化による破損から保護する脂質保護剤を含んでもよい。アルファ−トコフェロールなどの脂肪親和性の遊離基消光剤、およびフェリオキサミンなどの水溶性の鉄特異的なキレート化剤などが適切である。
【０２６９】
本明細書で使用されるように、「界面活性剤」は、水の界面張力を修飾する界面活性剤である。典型的に、界面活性剤は、分子中に１つの親油性の及び１つの親水性の基または領域を有している。広範囲に、基は、石鹸、洗浄剤、乳化剤、分散剤および湿潤剤、および防腐剤の幾つかの基を含む。より具体的には、界面活性剤は、ステアリルトリエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオン酸（ｌａｕｒｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｉｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、レシチン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウムおよびグリセリンモノステアラート；およびポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、およびヒドロキシプロピルセルロースなどの親水性ポリマー、またはアルキルグリコシド、を含む。幾つかの実施形態では、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤（例えば、アルキルグリコシド界面活性剤）である。幾つかの実施形態では、界面活性剤は、イオン性界面活性剤である。
【０２７０】
本明細書で使用されるように、「アルキルグリコシド」は、当該技術分野で知られているように、任意の疎水性のアルキルに対する結合によって連結された任意の糖を指す。疎水性のアルキルは、所望される疎水性および糖類部分の親水性に依存して、あらゆる所望のサイズから選択され得る。一態様では、アルキル鎖の範囲は、１乃至３０の炭素原子；
または６乃至１６の炭素原子である。
【０２７１】
本明細書で使用されるように、「糖類」は、直鎖または環状の形態での、単糖類、オリゴ糖または多糖類を包含する。オリゴ糖は、２つ以上の単糖類残基を有する糖類である。官能化された形態で使用するのに適した多くのあり得る糖類の幾つかの例は、グルコース、ガラクトース、マルトース、マルトトリオース、マルトテトラオース、スクロース、トレハロースなどを含む。
【０２７２】
本明細書で使用されるように、「スクロースエステル（ｓｕｃｒｏｓｅ ｅｓｔｅｒｓ）」は、脂肪酸のスクロースエステルである。スクロースエステルは、反応に利用可能なスクロース中の８つのヒドロキシル基ために、およびアセテートから、スクロースと反応され得るより大きく、よりかさ高い脂肪までの、多くの脂肪酸基のために、多くの形態をとることができる。この柔軟性は、多くの生成物および官能性が、使用される脂肪酸部分に基づて調整され得ることを意味している。スクロースエステルは、特に界面活性剤および乳化剤としての、食品用途および非食品用途のためのものであり、製剤、化粧品、洗浄剤および食品添加物における適用が増加してきている。それらは、生分解性であり、無毒であり、および皮膚に優しい。
【０２７３】
本明細書で使用されるように、「適切な」アルキルグリコシドは、無毒で、非イオン性であるアルキルグリコシドを意味する。幾つかの例では、適切なアルキルグリコシドは、眼、鼻、鼻涙、舌下腺、頬側、吸引の経路を介して、あるいは皮下、筋肉内、または静脈内の経路などの注入経路によって、化合物と投与されるときに、免疫原性または凝集を減少させ、化合物のバイオアベイラビリティを増加させる。
【０２７４】
「リンカーアミノ酸」は、官能化された界面活性剤との共有結合に使用される反応性官能基（ｄｅ Ｇｒａａｆ， Ａ．Ｊ．， ｅｔ ａｌ． （２００９） Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ ２０： １２８１−１２９５）を含む任意の天然または非天然のアミノ酸である。一例として、幾つかの実施形態では、リンカーアミノ酸は、Ｌｙｓ、または反応性官能基−ＮＨ２を有するＯｒｎ；または反応性官能基−ＳＨを有するＣｙｓ；あるいは反応性官能基−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨを有する、ＡｓｐまたはＧｌｕである。一例として、幾つかの他の実施形態では、リンカーアミノ酸は、−ＯＨ、−Ｎ３、ハロアセチル、または適切に官能化された界面活性剤との共有結合の形成に使用されるアセチレン基などの、反応性官能基を有する任意のアミノ酸である。
【０２７５】
本明細書で使用されるように、「官能化された界面活性剤」は、リンカーアミノ酸との共有結合に適した反応性基を含む界面活性剤である。一例として、幾つかの実施形態では、官能化された界面活性剤は、リンカーアミノ酸との共有結合に適した反応性基として（例えば、単糖類の６つの位置で）カルボン酸基を含む。一例として、幾つかの実施形態では、官能化された界面活性剤は、例えば、（模式図６に示されるように）単糖類の６位置で、適切なリンカーアミノ酸との共有結合を可能にする、−ＮＨ２基、−Ｎ３基、アセチレン基、ハロアセチル基、−Ｏ−ＮＨ２基、または−（ＣＨ２−）ｍ−マレイミド基を含む。幾つかの実施形態では、官能化された界面活性剤は、本明細書に記載されるような式ＩＩの化合物である。随意に、幾つかの具体的な実施形態では、官能化された界面活性剤は、共有結合的に付けられたリンカーアミノ酸を含み；界面活性剤で修飾されたペプチドは、リンカーアミノ酸への１つ以上のアミノ酸の連続する付加によって形成される。
【０２７６】
本明細書で使用されるように、用語「ペプチド」は、２つ以上のアミノ酸を含む任意のペプチドである。用語ペプチドは、ポリペプチド、短いペプチド（例えば、２乃至１４のアミノ酸を含むペプチド）、中長鎖ペプチド（１５−５０）または長鎖ペプチド（例えば、タンパク質）を含む。用語、ペプチド、ポリペプチド、中長鎖ペプチドおよびタンパク質は、本明細書で交換可能に使用されてもよい。本明細書で使用されるように、用語「ペプチド」は、アミノ酸残基、関連する自然発生の構造変異体、およびペプチド結合を介して結合された合成の非自然発生の類似体から成るポリマーを意味するように解釈される。合成ペプチドは、例えば、自動化したペピチド合成機を使用して合成され得る。
【０２７７】
ペプチドは、２０の遺伝子にコード化されたアミノ酸以外のアミノ酸を含み得る。「ペプチド」は、プロセシングおよび他の翻訳後修飾などの自然プロセスによって、または化学修飾技術によっても修飾されたペプチドを含む。そのような修飾は、基礎的なテキストにおいて、およびより詳細な研究論文において十分に記載されており、当業者に周知である。幾つかの実施形態において、同じタイプの修飾が、与えられたペプチド中の幾つかの部位で同じ程度または異なる程度で存在することが認識される。また、与えられたペプチドは、幾つかの実施形態において、１つを超えるタイプの修飾を包含している。修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖、およびアミノ末端またはカルボキシル末端を含む、ペプチド中のあらゆる場所で生じる。
【０２７８】
用語ペプチドは、天然および非天然のアミノ酸または天然のアミノ酸の類似体を含む、ペプチドまたはタンパク質を含む。本明細書で使用されるように、ペプチド及び／又はタンパク質「類似体」は、パラ置換されたチロシン、オルト置換されたチロシン、およびメタ置換されたチロシンを含む、チロシン類似体などの、天然のアミノ酸に基づいた非天然のアミノ酸を含み、ここで、チロシン上の置換基は、アセチル基、ベンゾイル基、アミノ基、ヒドラジン、ヒドロキシアミン、チオール基、カルボキシ基、メチル基、イソプロピル基、Ｃ２−Ｃ２０の直鎖の又は分枝した炭化水素、飽和または不飽和の炭化水素、Ｏ−メチル基、ポリエーテル基、ハロゲン、ニトロ基など、を含む。Ｔｙｒ類似体の例は、２，４−ジメチル−チロシン（Ｄｍｔ）、２，４−ジエチル−チロシン、Ｏ−４−アリル−チロシン、４−プロピル−チロシン、Ｃα−メチル−チロシンなどを含む。リジン類似体の例は、オルニチン（Ｏｒｎ）、ホモ−リジン、Ｃα−メチル−リジン（ＣＭｅＬｙｓ）などを含む。フェニルアラニン類似体の例は、限定されないが、メタ置換されたフェニルアラニンを含み、ここで、置換基は、メトキシ基、Ｃ１−Ｃ２０アルキル基、例えば、メチル基、アリル基、アセチル基などを含む。具体的な例は、限定されないが、２，４，６−トリメチル−Ｌ−フェニルアラニン（Ｔｍｔ）、Ｏ−メチル−チロシン、３−（２−ナフチル）アラニン（Ｎａｌ（２））、３−（１−ナフチル）アラニン（Ｎａｌ（１））、３−メチル−フェニルアラニン、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸（Ｔｉｃ）、フッ素化フェニルアラニン、イソプロピル−フェニルアラニン、ｐ−アジド−フェニルアラニン、ｐ−アシル−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−フェニルアラニン、ｐ−ヨード−フェニルアラニン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−フェニルアラニン、およびイソプロピル−フェニルアラニンなどを含む。ペプチド類似体の設計に使用される他の非標準または非天然のアミノ酸は、限定されないが、Ａｉｂ、Ｃα―ジエチルグリシン（Ｄｅｇ）、アミノシクロペンタン−１−カルボン酸（Ａｃ５ｃ）などの、Ｃ−アルファ−二置換されたアミノ酸を含む。このようなアミノ酸は、大抵の場合アルファヘリカル構造に向けられる、抑制された構造にしばしばつながる（Ｋａｕｌ， Ｒ． ａｎｄ Ｂａｌａｒａｍ， Ｐ． （１９９９） Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ７： １０５−１１７）。類似体の設計に有用なそのような非天然のアミノ酸のさらなる例は、ホモ−アルギニン（Ｈａｒ）などである。特定の例における減少されたアミド結合の置換は、酵素的破壊からの保護の改善につながるか、または受容体結合を変更する。一例として、Ｔｉｃ−Ｐｈｅジペプチド単位の、（Ｔｉｃ−［ＣＨ２−ＮＨ］−Ψ−Ｐｈｅとして指定される）残基間の減少されたアミド結合との組み込みは、酵素分解を減少させる。したがって、本明細書に記載される実施形態の範囲内ではまた、上に記載される修飾されたアミノ酸及び／又はペプチド類似体を含むペプチドに共有結合的に付けられた界面活性剤が熟慮される。特定の非天然のアミノ酸が以下に示される：
【０２７９】
【化７０】
0006525456.tif 000071
【０２８０】
本明細書で使用されるように、用語「変異体（ｖａｒｉａｎｔ）」は、参照ペプチドと異なるが、不可欠な特性を保持するペプチドを意味するように解釈される。ペプチドの典型的な変異体は、別の、参照ペプチドとはアミノ酸配列が異なる。一般に、参照ペプチドおよび変異体の配列が、全体として略類似しており、および多くの領域で同一であるような差は限定されている。変異体および参照ペプチドは、任意の組み合わせで１つ以上の置換、付加、欠失によって、アミノ酸配列が異なり得る。置換された又は挿入されたアミノ酸残基は、遺伝子コードによってコード化されたものかもしれないし、そうではないかもしれない。ペプチドの非自然発生の変異体は、変異誘発技術、直接合成、および他の適切な組み換え法によって作られ得る。
【０２８１】
方法
本明細書には、幾つかの実施形態において、インスリン感受性の減少に関係する疾病の予防及び／又は処置のための方法が提供され、該方法は、本明細書に記載される治療上有効な量の界面活性剤で修飾されたペプチド及び／又はタンパク質生成物（例えば、式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂのペプチド生成物）を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。幾つかの実施形態では、インスリン感受性の減少によって特徴付けられた疾病は、限定されないが、メタボリック症候群、肥満症関連のインスリン抵抗性、高血圧症、高いＣ反応性タンパク質に関係する全身性の炎症、糖尿病などを含む。
【０２８２】
本明細書にはまた、インスリン抵抗性の処置のための方法が提供され、該方法は、本明細書に記載される治療上有効な量の界面活性剤で修飾されたペプチド及び／又はタンパク質生成物（例えば、式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂのペプチド生成物）を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。幾つかの実施形態では、インスリン抵抗性は、メタボリック症候群（症候群Ｘ）及び／又は糖尿病に関係する。
【０２８３】
本明細書にはさらに、インスリンに対する身体の再感作を刺激するための方法が提供され、該方法は、本明細書に記載される治療上有効な量の界面活性剤で修飾されたペプチド及び／又はタンパク質生成物（例えば、式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂのペプチド生成物）を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。
【０２８４】
またさらなる実施形態において、本明細書には、体重減少を介してインスリン感受性を増加させるための方法が提供され、該方法は、本明細書に記載される治療上有効な量の界面活性剤で修飾されたペプチド及び／又はタンパク質生成物（例えば、式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂ、および図１の表１、図２の表２、および図３の表３のペプチド生成物）を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。
【０２８５】
本明細書にはまた、糖尿病または前糖尿病を処置する方法が提供され、該方法は、上に及び本明細書に、および図１の表１、図２の表２、および図の表３に記載される治療上有効な量のペプチド生成物を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。
【０２８６】
本明細書には、糖尿病、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎症、インスリン抵抗性、高血糖症、高インスリン血症、メタボリック症候群、糖尿病合併症、遊離脂肪酸またはグリセロールの高い血中濃度、高脂血症、肥満症、高トリグリセリド血症、アテローム性動脈硬化症、急性心血管系疾患、梗塞症、虚血再灌流、高血圧症から選択される疾病を処置する又はその進行または発症を遅らせるための方法が提供され、該方法は、本明細書に及び図１の表１、図２の表２、および図の表３に記載される治療上有効な量のペプチド生成物を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。さらなる実施形態において、本明細書には、創傷治癒の遅れを処置するための方法が提供され、該方法は、本明細書に及び図１の表１、図２の表２、および図の表３に記載される治療上有効な量のペプチド生成物を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。
【０２８７】
一実施形態では、処置されるべき疾病は、糖尿病である。一実施形態では、処置される疾病は、インスリン抵抗性である。一実施形態では、処置される疾病は、メタボリック症候群である。一実施形態では、有効な量のペプチドは、約０．１μｇ／ｋｇ／日から約１００．０μｇ／ｋｇ／日である。
【０２８８】
一実施形態では、投与の方法は、非経口である。一実施形態では、投与の方法は、経口である。一実施形態では、投与の方法は、皮下である。一実施形態では、投与の方法は、経鼻的吸入である。
【０２８９】
本明細書にはさらに、体重増加を減少させる又は体重減少を誘発する方法が提供され、該方法は、本明細書に及び図１の表１、図２の表２、および図の表３に記載される治療上有効な量のペプチド生成物を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。幾つかの実施形態では、体重増加は、メタボリック症候群に関係する。
【０２９０】
本明細書には、低血糖症を処置する方法が提供され、該方法は、本明細書に及び図１の表１、図２の表２、および図の表３に記載される治療上有効な量のペプチド生成物を、それを必要としている個体に投与する工程を含む。
【０２９１】
本明細書にはまた、糖尿病の処置のための方法が提供され、該方法は、本明細書に及び図１の表１、図２の表２、および図の表３に記載される治療上有効な量のペプチド生成物、および少なくとも１つの追加の治療薬を、それを必要としている個体に投与する工程を含み；ここで、前記治療薬は、抗糖尿病薬、抗肥満剤、満腹剤（ｓａｔｉｅｔｙ ａｇｅｎｔ）、抗炎症剤、降圧薬、抗アテローム性動脈硬化剤および脂質低下薬から選択される。
【０２９２】
上に記載される方法の幾つかの実施形態では、界面活性剤に共有結合的に付けられているペプチド及び／又はタンパク質は、グルカゴンまたはＧＬＰ−１ペプチド、またはその類似体である。幾つかの実施形態では、界面活性剤で修飾されたペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂのペプチド生成物）は、予防的に投与され、限定されないが、メタボリック症候群、高血圧症、糖尿病、２型糖尿病、妊娠性糖尿病、高脂血症、アテローム性動脈硬化症、全身性の炎症などを含む、インスリン抵抗性に関係する任意の疾病の発症を遅らせる。幾つかの実施形態では、界面活性剤で修飾されたペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂのペプチド生成物）は、治療上投与され、メタボリック症候群、高血圧症、糖尿病、２型糖尿病、妊娠性糖尿病、高脂血症、アテローム性動脈硬化症、全身性の炎症などを含む、インスリン抵抗性に関係する任意の疾病の進行を遅らせる。幾つかの実施形態では、界面活性剤で修飾されたペプチド及び／又はタンパク質（例えば、学式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂのペプチド生成物）は、予防的に及び／又は治療上投与され、糖尿病に対するインスリン抵抗性の進行を遅らせる。幾つかの実施形態では、界面活性剤で修飾されたペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂのペプチド生成物）は、予防的に及び／又は治療上投与され、インスリン抵抗性のさらなる損失を減少または停止し、それによって、疾患を安定化する。
【０２９３】
幾つかの実施形態では、界面活性剤で修飾されたペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂのペプチド生成物）は、非経口で投与される。幾つかの実施形態では、界面活性剤で修飾されたペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂのペプチド生成物）は、皮下に投与される。幾つかの実施形態では、界面活性剤で修飾されたペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂのペプチド生成物）は、経鼻的吸入によって投与される。
【０２９４】
上に記載される方法の幾つかの実施形態では。界面活性剤で修飾されたペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａまたは、ＩＩＩ−Ｂのペプチド生成物）は、現在知られている治療薬を含む製剤（例えば、エクセナチド、メトホルミンなど）と比較して、より長い作用持続時間を有する。
【０２９５】
併用療法
上に記載される方法の幾つかの実施形態では、界面活性剤で修飾されたペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂのペプチド生成物）は、抗糖尿病薬、抗肥満剤、降圧薬、抗アテローム性動脈硬化剤および脂質低下薬を含む群から選択されるメタボリック症候群の処置の他の方法と組み合わせて投与される。一例として、本明細書に記載される界面活性剤で修飾されたペプチド及び／又はタンパク質生成物と組み合わせた投与に適した効果的な抗糖尿病薬は、ビグアニド、スルフォニル尿素、αグルコシダーゼ阻害剤、ＰＰＡＲγアゴニスト、ＰＰＡＲα／γデュアルアゴニスト、ａＰ２阻害剤、ＤＰＰ４阻害剤、インスリン抵抗性改善薬、ＧＬＰ−１類似体、インスリンおよびメグリチニドを含む。さらなる例は、メトホルミン、グリブライド、グリメピリド、グリピリド（ｇｌｉｐｙｒｉｄｅ）、グリピジド、クロルプロパミド、グリクラジド、アカルボース、ミグリトール、ピオグリタゾン、トログリタゾン、ロシグリタゾン、ムラグリタザール（ｍｕｒａｇｌｉｔａｚａｒ）、インスリン、Ｇｌ−２６２５７０、イサグリタゾン（ｉｓａｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、ＪＴＴ−５０１、ＮＮ−２３４４、Ｌ８９５ ６４５、ＹＭ−４４０、Ｒ−１１９７０２、Ａ１９６７７、レパグリニド、ナテグリニド、ＫＡＤ １１２９、ＡＲ−ＨＯ ３９２４２、ＧＷ−４０ Ｉ ５ ４４、ＫＲＰ２ Ｉ ７、ＡＣ２９９３、ＬＹ３ Ｉ ５９０２、ＮＶＰ−ＤＰＰ−７２８Ａおよびサクサグリプチンを含む。
【０２９６】
上に記載される方法の幾つかの実施形態では、界面活性剤で修飾されたペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂのペプチド生成物）は、効果的な抗肥満剤の群から選択されるメタボリック症候群の処置の他の方法と組み合わせて投与される。一例として、本明細書に記載されるペプチド生成物との投与に適した効果的な抗肥満剤は、ベータ３アドレナリンアゴニスト、リパーゼ阻害剤、セロトニン（およびドーパミン）再取込み阻害剤、甲状腺受容体ベータ化合物、ＣＢ−１アンタゴニスト、ＮＰＹ−Ｙ２およびＮＰＹ−Ｙ４受容体アゴニスト、および食欲抑制剤を含む。これらのクラスの具体的なメンバーは、オルリスタット、ＡｆＬ−９６２、Ａ１９６７１、Ｌ７５０３５５、ＣＰ３３１６４８、シブトラミン、トピラマート、アキソキン（ａｘｏｋｉｎｅ）、デキストロアンフェタミン、フェンテルミン、フェニルプロパノラミン、リモナバン（ＳＲ１  ４Ｉ７１６４）、およびマジンドールを含む。
【０２９７】
上に記載される方法の幾つかの実施形態では、界面活性剤で修飾されたペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂのペプチド生成物）は、効果的な脂質低下薬の群から選択されるメタボリック症候群の処置の他の方法と組み合わせて投与される。一例として、本明細書に記載されるペプチド生成物との投与に適した効果的な脂質低下薬は、ＭＴＰ阻害剤、コレステロールエステル転送タンパク質、ＨＭＧ ＣｏＡリダクターゼ阻害剤、スクワレン合成酵素阻害剤、フィブリン酸誘導体、ＬＤＬ受容体活性のアップレギュレーター（ｕｐｒｅｇｕｌａｔｏｒ）、リポキシゲナーゼ阻害剤、およびＡＣＡＴ阻害剤から成る群から選択される薬剤を含む。これらのクラスからの具体的な例は、プラバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ニスバスタチン、ビサスタチン、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、クロフィブレート、アバシミベ（ａｖａｓｉｍｉｂｅ）、ＴＳ−９６２、ＭＤ−７００、ＣＰ−５２９４１ ４、およびＬＹ２９５ ４２７を含む。
【０２９８】
上に記載される方法の幾つかの実施形態では、界面活性剤で修飾されたペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、またはＩＩＩ−Ｂのペプチド生成物）は、動物モデルおよびヒトにおいて満腹促進効果を示すと知られている、ペプチドホルモンおよびその類似体と組み合わせて投与される。本明細書に示される実施形態の範囲内では、肥満症の処置のための、本明細書に記載されるペプチド生成物と、長時間作用する満腹剤の組み合わせが熟慮される。そのようなペプチド満腹剤の例は、ＧＬＰ−１、膵臓ポリペプチド（ＰＰ）、コレシストキニン（ＣＣＫ）、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）、アミリン、カルシトニン、ＯＸＭ、ニューロペプチドＹ（ＮＰＹ）、およびそれらの類似体を含む（Ｂｌｏｏｍ， Ｓ．Ｒ．， ｅｔ ａｌ． （２００８） Ｍｏｌ Ｉｎｔｅｒｖ ８： ８２−９８； Ｆｉｅｌｄ， Ｂ．Ｃ．， ｅｔ ａｌ． （２００９） Ｂｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ６８： ８３０−８４３）。
【０２９９】
本明細書に示される実施形態の範囲内ではまた、肥満症の処置のための方法が熟慮され、該方法は、本明細書に記載されるペプチド生成物を、限定されないが、レプチン、グレリンおよびＣＡＲＴ（コカインおよびアンフェタミン制御した転写物）類似体およびアンタゴニストを含む、ペプチドホルモンと組み合わせて投与する工程を含む。
【０３００】
身体中のさらなるペプチド生成物は、脂肪細胞または肥満状態（アディポカイン）に関係し、炎症誘発性効果を有すると知られている（Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｐｅｒｉｚ， Ａ． ａｎｄ Ｃｌａｒｉａ， Ｊ． （２０１０） ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＷｏｒｌｄＪｏｕｒｎａｌ １０： ８３２−８５６）。そのような薬剤は、本明細書に記載されるペプチド生成物と組み合わせて使用されるときに、さらなる好ましい作用を有するであろう。本明細書に記載されるペプチド生成物と組み合わせて使用されたときに有益な効果を提供する薬剤の例は、アディポネクチン、ケマリン、ビスファチン、ネスファチン、オメンチン（ｏｍｅｎｔｉｎ）、レジスチン、ＴＮＦアルファ、ＩＬ−６およびオベスタチンの類似体およびアンタゴニストを含む。
【０３０１】
中間物
１つの実施形態では、本明細書には、界面活性剤の部分、および天然または非天然のアミノ酸上で反応性官能基と単結合を形成することができる反応性官能基を含む、中間物及び／又は試薬が提供される。これらの中間物及び／又は試薬は、バイオアベイラビリティ、およびヒトおよび動物の疾患に有用なペプチド及び／又はタンパク質の薬学的、薬物動態学的及び／又は薬理学的な行動の向上を可能にする。アミノ酸の側鎖上、例えば、Ｌｙｓのイプシロン−アミノ官能基、Ｃｙｓのスルフヒドリル上、あるいはペプチド及び／又はタンパク質標的のアミノ末端またはカルボキシ末端での、官能基を介するそのような中間物及び／又は試薬の共有結合的な取付け、本明細書に記載されるペプチド生成物の合成を可能にする。具体的な実施形態では、非イオン性界面活性剤の部分は、Ｏ−アルキルグリコシド置換による単糖類または二糖類であり、グリコシド結合は、アルファまたはベータ構成の結合である。具体的な実施形態では、Ｏ−アルキル鎖は、Ｃ１−Ｃ２０またはＣ６−Ｃ１６アルキル鎖からのものである。
【０３０２】
別の実施形態において、本明細書には、Ｏ−アルキルグリコシド結合を模倣する特定のアルキルグリコシド結合を有する非イオン性界面活性剤の部分、および天然または非天然のアミノ酸上で反応性官能基と単結合を形成することができる反応性官能基を含む、中間物及び／又は試薬が提供される。そのような中間物及び／又は試薬は、Ｓ結合したアルキル鎖またはＮ結合したアルキル鎖を含み、Ｏ結合したアルキルグリコシド結合の生成物と比較して、変更された化学的及び／又は酵素的安定性を有する。
【０３０３】
幾つかの実施形態では、本明細書で提供される中間物及び／又は試薬は、親水基が、修飾されたグルコース、ガラクトース、マルトース、グルクロン酸、ジグルクロン酸などである、化合物である。幾つかの実施形態では、親水基は、グルコースで、マルトース、グルクロン酸、またはジグルクロン酸であり、疎水基は、Ｃ１−Ｃ２０アルキル鎖またはアラルキル鎖である。幾つかの実施形態では、疎水基に対するグリコシド結合は、アルファ構成の結合であり、幾つかの場合では、糖類上のアノマ中心でのベータ構成の結合である。
【０３０４】
幾つかの実施形態では、親水基は、グルコース、マルトース、グルクロン酸、またはジグルクロン酸であり、疎水基は、Ｃ１−Ｃ２０アルキルまたはアラルキル鎖である。
【０３０５】
幾つかの実施形態では、本明細書で提供される中間物及び／又は試薬は、カルボン酸基、アミノ基、アジド、アルデヒド、マレイミド、スルフヒドリル、ヒドロキシルアミノ基、アルキンなどである反応性官能基を含有している界面活性剤を含む。
【０３０６】
幾つかの実施形態では、中間物及び／又は試薬は、カルボン酸またはアミノ官能基となるように修飾されたヒドロキシル官能基の１つを有するＯ結合したアルキルグリコシドである。幾つかの実施形態では、試薬は、アルファまたはベータの構成の１−Ｏ−アルキルグルクロン酸であり、アルキル鎖は、長さがＣ１からＣ２０である。そのような実施形態のう幾つかでは、アルキル基は、長さがＣ６からＣ１６である。
【０３０７】
幾つかの実施形態では、試薬は、アルファまたはベータの構成の１−Ｏ−アルキルジグルクロン酸を含み、アルキル鎖は、長さがＣ１からＣ２０である。そのような実施形態の幾つかでは、アルキル基は、長さがＣ６からＣ１６である。
【０３０８】
幾つかの実施形態では、試薬は、カルボン酸またはアミノ官能基となるように修飾されたヒドロキシル官能基の１つを有するアルファまたはベータの構成のＳ結合したアルキルグリコシドである。
【０３０９】
幾つかの実施形態では、試薬は、カルボン酸またはアミノ官能基となるように修飾されたヒドロキシル官能基の１つを有するアルファまたはベータの構成のＮ結合したアルキルグリコシドである。
【０３１０】
さらに別の実施形態において、本明細書には、ヒトおよび動物の疾患に使用するの許容可能な特性を有する共有結合されたアルキルグリコシドを包含しているペプチド及び／又はタンパク質生成物が提供される。模式図１は、本明細書に記載される界面活性剤で修飾されたペプチド生成物の合成に有用である試薬及び／又は中間物を与えるために修飾され得る、典型的な非イオン性界面活性剤を示す。
【０３１１】
【化７１】
0006525456.tif 000072
模式図１．アルキルグリコシドクラスの市販の非イオン性界面活性剤の例
【０３１２】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質は、界面活性剤の部分をペプチド構造に組み込む。具体的な実施形態では、本明細書に記載される共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質は、アルキル、アルコキシアリール、またはアラルキルグリコシドのクラスの非イオン性界面活性剤を組み込む。アルキルグリコシドは、重要な商品であり、食品、サービスおよびクリーニング産業において広く使用されている。したがって、商業上有意な規模でのそれらの生産が、広範囲な研究の主題となっている。酵素的および化学的なプロセスの両方が、非常に低い価格でそれらの生産に利用可能である（Ｐａｒｋ， Ｄ．Ｗ．， ｅｔ ａｌ． （２０００） Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２２： ９５１−９５６）。これらのアルキルグリコシドは、本明細書に記載される共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質の合成のための中間物を生成するために、さらに修飾され得る。したがって、酸素の存在下で保護されていない物質および白金黒触媒を使用するときに、１−ドデシルベータ−Ｄ−グルコシドが、高収率で対応するグルクロン酸類似体を得るために、６位置上で優先的に酸化されることが知られている（ｖａｎ Ｂｅｋｋｕｍ， Ｈ． （１９９０） Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ ａｓ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｒａｗ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ ２８９−３１０）。アルキルグルコシドの６位置での第１アルコールの酸化のためのさらなる化学選択的方法が利用可能である。例えば、触媒量の２，２，６，６−テトラメチル−１−ピペリジニルオキシル（ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｙｌｏｘｙｌ）（ＴＥＭＰＯ）の、化学量論量の（ｓｔｏｉｃｈｉｏｍｅｔｒｉｃ ａｍｏｕｎｔｓ ｏｆ）の有機酸化剤（ＢＡＩＢ）（Ｄｅ Ｍｉｃｏ， Ａ．， ｅｔ ａｌ． （１９９７） Ｊ Ｏｒｇ Ｃｈｅｍ １９９７： ６９７４−６９７７）との使用は、第１のヒドロキシルの酸化によって、顕著な収率のヌクレオシド−５’−カルボン酸（Ｅｐｐ， Ｊ．Ｂ． ａｎｄ Ｗｉｄｌａｎｓｋｉ， Ｔ．Ｓ． （１９９９） Ｊ Ｏｒｇ Ｃｈｅｍ ６４： ２９３−２９５）を与えた。この酸化は、他の、第２のヒドロキシルが保護されていないときでさえも、第１のヒドロキシルに対しては化学選択性である（Ｃｏｄｅｅ， Ｊ．Ｄ．， ｅｔ ａｌ． （２００５） Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ １２７： ３７６７−３７７３）。類似した方法で、１−ドデシルβ−Ｄ−グルコピラノシド、１−テトラデシルβ−Ｄ−グルコピラノシド、１−ヘキサデシルβ−Ｄ−グルコピラノシド、１−オクタデシルβ−Ｄ−グルコピラノシド、および１−アイコシルβ−Ｄ−グルコピラノシドは、水中で化学量論的な酸化剤としてＫＢｒおよび次亜塩素酸ナトリウムを使用するＴＥＭＰＯによる酸化によって（Ｍｉｌｋｅｒｅｉｔ， Ｇ．， ｅｔ ａｌ． （２００４） Ｃｈｅｍ Ｐｈｙｓ Ｌｉｐｉｄｓ １２７： ４７−６３）、対応するウロン酸（１−ドデシルβ−Ｄ−グルクロン酸、１−テトラデシルβ−Ｄ−グルクロン酸、１−ヘキサデシルβ−Ｄ−グルクロン酸、１−オクタデシルβ−Ｄ−グルクロン酸、１−アイコシルβ−Ｄ−グルクロン酸）に酸化された。（ジアセトキシヨード）ベンゼン（ＤＡＩＢ ａｋａ Ｂ���ＩＢ）を使用する軽度の酸化の手順が、実施例で示される。特定のこれらのグルクロン酸の中間物は、市販で入手可能であり（例えば、オクチルｂ−Ｄ−グルクロン酸；Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ，ＭＯ ０７９２８）、示されるように、慣例的な方法（Ｓｃｈａｍａｎｎ， Ｍ． ａｎｄ Ｓｃｈａｆｅｒ， Ｈ．Ｊ． （２００３） Ｅｕｒ Ｊ Ｏｒｇ Ｃｈｅｍ ３５１−３５８； Ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｏｓ， Ｌ．Ｊ．， ｅｔ ａｌ． （２００７） Ｅｕｒ Ｊ Ｏｒｇ Ｃｈｅｍ ３９６３−３９７６）によって、または商業的供給源からのリクエストで、広範囲で調製の対象となる。模式図２は、例として、本明細書に記載される中間物及び／又は試薬を調製するために使用される、反応性官能基としての−ＣＯＯＨ基を含む特定の官能化された界面活性剤の中間物を例証する。
【０３１３】
【化７２】
0006525456.tif 000073
模式図２．アルキルジグルクロン酸およびグルクロン酸のクラスの試薬の例。
【０３１４】
同様に、アラルキルグリコシド（アルコキシアリールを含む）は、密接に関連する非イオン性界面活性剤の試薬の基礎を形成することができる。例えば、４−アルコキシフェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドは、三フッ化硼素エーテラートの存在下での、４−アルキルオキシフェノールの、ペンタ−Ｏ−アセチルβ−Ｄ−グルコースとの反応によって容易に合成される。上に及び例に記載されるような、メタノール／水中のトリメチルアミンを使用する続く脱アセチル化および選択酸化は、本明細書に記載される試薬およびペプチドを形成するのに適切なアルコキシアリールグルクロン酸の試薬をもたらす（Ｓｍｉｔｓ， Ｅ．， ｅｔ ａｌ． （１９９６） Ｊ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ， Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ Ｉ ２８７３−２８７７； Ｓｍｉｔｓ， Ｅ．， ｅｔ ａｌ． （１９９７） Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｒｙｓｔａｌｓ ２３： ４８１−４８８）。
【０３１５】
【化７３】
0006525456.tif 000074
模式図３．アラルキルまたはアルコキシアリールの界面活性剤の部分の例示的なメンバー。
【０３１６】
中間物のグルクロン酸クラスは、（例えばＬｙｓの）アミノ酸側鎖に対する結合のための標準的なカップリング剤によって容易に活性化される。したがって、模式図４に示されるように、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ−Ｏ−ＴＭＳ（トリメチルシリル＝ＴＭＳ）は、カップリング剤の存在下でオクチルベータ−Ｄ−グルクロン酸と反応され得、その後、Ｏ−ＴＭＳ保護基は、水性のワークアップ（ａｑｕｅｏｕｓ ｗｏｒｋｕｐ）中に加水分解されて、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（１−オクチルベータ−Ｄ−グルクロン酸アミド）をもたらす。分子のＮ末端領域の近くに界面活性剤の部分を組み込むことが望まれるときに、この試薬は、標準的な結合プロトコルを使用して、ペプチドの固相合成へと取り込むために使用され得る。第２のヒドロキシル基は、Ｌｙｓアミノ官能基の非常に高い反応性が原因で、保護されないままにされ得、それらは過アセチル化（ｐｅｒａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ）によって保護され得る。アセチル保護された形態が使用される場合、アセチル保護基は、ＭｅＯＨ／ＮａＯＭｅまたはＭｅＯＨ／Ｅｔ３Ｎのいずれかによる処置によって、高収率で除去され得る。模式図４は、本明細書に記載される試薬の調製を例証する。
【０３１７】
【化７４】
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模式図４．試薬の調製の例。
【０３１８】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される生物活性ペプチド生成物の調製のための試薬及び／又は中間物は、合成ペプチド生成物への組み込みのための界面活性剤で修飾されたリンカーアミノ酸のファミリーを含む。したがって、一実施形態では、本明細書に記載されるペプチド生成物は、官能化された界面活性剤が、リンカーアミノ酸の側鎖上の官能基（例えば、リジン残基のアミノ基）を介して可逆的に保護されたリンカーアミノ酸に付けられている、直鎖の方法で合成されて、成長するペプチド鎖へと組み込まれ得る（模式図４に示されたような）専売の試薬をもたらし、その後、残りのペプチドは、さらなるアミノ酸をシステイン残基に付けることによって合成される。本明細書に記載される修飾されたペプチド及び／又はタンパク質の合成に適した保護基は、例えば、Ｔ． Ｗ． Ｇｒｅｅｎ， Ｐ． Ｇ． Ｍ． Ｗｕｔｓ， Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９９９， ５０３−５０７， ７３６−７３９に記載され、その開示は、引用によって本明細書に組み込まれる。
【０３１９】
別の実施形態では、本明細書に記載されるペプチド生成物は、ペプチド鎖中にあるリンカーアミノ酸上の適切な官能基を介する全長ペプチドに対する官能化された界面活性剤の共有結合的な取付けによって合成される。
【０３２０】
代替的に、官能化された界面活性剤は、ペプチドの固相合成の間に脱保護されたリンカーアミノ酸側鎖に加えられ得る。一例として、アルキルグルクロニル基は、ペプチドの固相合成中にリンカーアミノ酸側鎖（例えば、脱保護されたＬｙｓ側鎖）に直接加えられ得る。例えば、サブユニットとしてのＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）−ＯＨの使用は、ペプチドがまだ樹脂上にある間に除去され得る直交性の保護（ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）を提供する。したがって、Ｐｄ／チオバルビタール、Ｐｄ／１，３−ジメチルバルビツール酸（ＤＭＢＡ）または他のＡｌｌｏｃ脱保護の処方を使用するＬｙｓ側鎖の脱保護は、アシル保護された又は保護されていない１−オクチルベータ−Ｄ−グルクロン酸単位とのカップリングのための、または側鎖ラクタム形成のためのアミノ基の露出を可能にする。その後、低い％ ＣＦ３ＣＯ２Ｈ（ＴＦＡ）の開裂カクテル（ｃｌｅａｖａｇｅ ｃｏｃｋｔａｉｌ）を有する最終的な脱保護は、所望の生成物をもたらす。グリコシド結合は強酸に対して不安定であるが、本明細書での及び他による経験では、それが低い％ ＴＦＡ開裂条件に対して比較的安定している。代替的に、糖類のＯＨ官能基上のアシル保護（例えば、アセチル、Ａｃ；ベンゾイル、Ｂｚ）またはトリアルキルシリル保護は、グリコシド結合に増大した保護を提供するために使用されてもよい。塩基（ＮＨ２ＮＨ２／ＭｅＯＨ；ＮＨ３／ＭｅＯＨ、ＮａＯＭｅ／ＭｅＯＨ）による続く脱保護は、所望の脱保護された生成物をもたらす。模式図４は、本明細書に記載される試薬を例証する。模式図５は、本明細書に記載されるペプチド中間物の限定しない例を例証する。本実施例は、ペプチドのＮ末端で界面活性剤の結合を有するペプチドを例証するが、本明細書に記載される方法は、ペプチド内の中央領域、Ｃ末端領域または任意の位置で界面活性剤に対する結合を有しているペプチド中間物の合成に適している。
【０３２１】
【化７５】
0006525456.tif 000076
模式図５．ペプチド中間物の例示的な例。
【０３２２】
以下の模式図６に示されるように、らなる試薬が、６位置の官能基の修飾によって生成されて、アミノ酸側鎖官能基に対する結合の様々な手段を与える。したがって、アミノ置換は、ＡｓｐまたはＧｌｕの側鎖に対する結合に使用され得る。アジドまたはアルキンの置換は、ヒュスゲン３＋２環化付加のための相補的な受容体を包含している非天然のアミノ酸に対する結合に使用され得る（Ｇａｕｔｈｉｅｒ， Ｍ．Ａ． ａｎｄ Ｋｌｏｋ， Ｈ．Ａ． （２００８） Ｃｈｅｍ Ｃｏｍｍｕｎ （Ｃａｍｂ） ２５９１−２６１１）。アミノキシまたはアルデヒドの官能基は、それぞれ、アルデヒドに連結するために（すなわち、オキシム結合）またはアミノ官能基に連結するために（すなわち、還元アルキル化）に使用され得る。マレイミドまたは−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｂｒ官能基は、Ｃｙｓまたは他のＳＨの官能基と化学選択的に結合することができる。これらのタイプの結合の方策は、本明細書に記載される試薬と併用して使用されるときに利点がある。官能基の相互転換は、有機合成で広く実施されており、本明細書にリストされる官能基修飾の各々に対する複数の経路の包括的なリストが入手可能である（Ｌａｒｏｃｋ， Ｒ．Ｃ． （１９９９）） "Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ"， ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ。
【０３２３】
したがって、例えば、オクチル１−β−Ｄ−グルコシドの位置６上の第１のヒドロキシルは、アジドアニオンによる活性化および変位、炭水化物化学に使用される反応などの反応によって（例えば、トシル化、その後のＮａＮ３によって）、アジドに変換される。対応するアジドは、ピリジン中のチオ酢酸での還元によって（Ｅｌｏｆｓｓｏｎ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ． （１９９７） Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ５３： ３６９−３９０）、またはアミノ基生成の類似した方法によって（Ｓｔａｎｇｉｅｒ， Ｐ．， ｅｔ ａｌ． （１９９４） Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｒｙｓｔａｌｓ １７： ５８９−５９５）、アミノ官能基に還元される。アセチレン、アミノキシ、およびアルデヒドの部分へのアプローチは、Ａｃ２Ｏによる処置、その後の第１アミンの軽度の加水分解による市販のグルコシドから利用可能な、トリアセトキシ形態で最適に実行される。この６−ヒドロキシ形態は、アルデヒドに選択的に酸化され得るか、トシラートまたはトリフレートとして活性化され得、ＮＨ２ＯＨまたはナトリウムアセチリドによって変位され得る。マレイミド結合は、示されるような炭素結合を介し得るか、好ましくは、再び、当該技術分野に周知の、活性化されたヒドロキシルの変位またはアミノ結合したマレイミド試薬に対するグルクロン酸誘導体の結合によって、Ｏまたはアミドの結合を介し得る。さらなる官能基の相互転換は、薬化学の当業者に周知であり、本明細書に記載される実施形態の範囲内にある。
【０３２４】
本明細書に記載される合成方法の範囲内ではまた、糖類および疎水性鎖がアルファグリコシド結合を介して共有結合的に付けられる、界面活性剤が熟慮される。優位にα結合したグリコシドへの合成の経路は、当該技術分野に周知であり、典型的に過アセチル糖を用いて生じ、酸性触媒（例えば、ＳｎＣｌ４、ＢＦ３またはＨＣｌ）を使用して、α−グリコシル化を達成する（Ｃｕｄｉｃ， Ｍ． ａｎｄ Ｂｕｒｓｔｅｉｎ， Ｇ．Ｄ． （２００８） Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ４９４： １８７−２０８； Ｖｉｌｌ， Ｖ．， ｅｔ ａｌ． （２０００） Ｃｈｅｍ Ｐｈｙｓ Ｌｉｐｉｄｓ １０４： ７５−９１、そのような開示のための引用によって本明細書に組み込まれる）。類似した合成経路が、二糖配糖体のために存在する（ｖｏｎ Ｍｉｎｄｅｎ， Ｈ．Ｍ．， ｅｔ ａｌ． （２０００） Ｃｈｅｍ Ｐｈｙｓ Ｌｉｐｉｄｓ １０６： １５７−１７９、そのような開示のための引用によって本明細書に組み込まれる）。その後、対応するα結合した試薬の生成のために、官能基の相互転換を上述されるように進めて、６−カルボン酸などをもたらす。
【０３２５】
模式図６は、本明細書に記載される共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質の合成に有用な特定の化合物および試薬を示す。アミノ酸に対する一文字の略語が用いる標準名称法が使用される。
【０３２６】
【化７６】
0006525456.tif 000077
模式図６．さらなる試薬の例。
【０３２７】
多くのアルキルグリコシドは、例えば、（Ｒｏｓｅｖｅａｒ， Ｐ．， ｅｔ ａｌ． （１９８０） Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９： ４１０８−４１１５， Ｌｉ， Ｙ．Ｔ．， ｅｔ ａｌ． （１９９１） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６６： １０７２３−１０７２６）またはＫｏｅｌｔｚｏｗ ａｎｄ Ｕｒｆｅｒ， Ｊ． Ａｍ． Ｏｉｌ Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， ６１：１６５１−１６５５ （１９８４）， 米国特許第３，２１９，６５６号および米国特許第３，８３９，３１８号に記載されるように、または酵素的に、例えば、（Ｌｉ， Ｙ．Ｔ．， ｅｔ ａｌ． （１９９１） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６６： １０７２３−１０７２６， Ｇｏｐａｌａｎ， Ｖ．， ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６７： ９６２９−９６３８）に記載されるように、既知の手順によって合成され得る。セリンなどの天然のアミノ酸に対するＯ−アルキル結合は、過アセチルグルコースを使用して、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨ上で実行され得、Ｎα−Ｆｍｏｃ−４−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｌ−セリンをもたらす。この物質は、第１炭素原子（位置６）で選択的に脱保護され、上に記載されるようにＴＥＭＰＯ／ＢＡＩＢを使用して選択的に酸化されて、脂肪親和性アミンに結合され得る対応する６−カルボキシル官能基をもたらし、新しいクラスの非イオン性界面活性剤および試薬を生成する（模式図７）。
【０３２８】
【化７７】
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模式図７．イオン性界面活性剤の試薬の代替的な例。
【０３２９】
疎水性アルキルと親水性糖類との間の結合は、他の可能性の中でとりわけ、グリコシド、チオグリコシド（ｔｈｉｏｇｌｙｃｏｓｉｄｉｃ）、アミド（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ ａｓ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｒａｗ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ， Ｆ． Ｗ． Ｌｉｃｈｔｅｎｔｈａｌｅｒ ｅｄ． ， ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９９１）、ウレイド（Ａｕｓｔｒｉａｎ Ｐａｔ． ３８６，４１４ （１９８８）； Ｃｈｅｍ． Ａｂｓｔｒ． １１０：１３７５３６ｐ （１９８９）；Ｇｒｕｂｅｒ， Ｈ． ａｎｄ Ｇｒｅｂｅｒ， Ｇ．， "Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｓｕｃｒｏｓｅ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ" ｉｎ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ ａｓ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｒａｗ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ， ｐｐ． ９５−１１６を参照）またはエステルの結合（Ｓｕｇａｒ Ｅｓｔｅｒｓ： Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ， Ｊ． Ｃ． Ｃｏｌｂｅｒｔ ｅｄ．， （Ｎｏｙｅｓ Ｄａｔａ Ｃｏｒｐ．， Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）， （１９７４））を含む。
【０３３０】
有用なアルキルグリコシドが、試薬に対する修飾のために又は本明細書に記載される生成物の製剤のために選択され得る例は、以下を含む：アルキルグリコシド、例えば、オクチル−、ノニル−、デシル−、ウンデシル−、ドデシル−、トリデシル−、テトラデシル−、ペンタデシル−、ヘキサデシル−、ヘプタデシル−、およびオクタデシル−Ｄ−マルトシド、−メリビオシド、−グルコシドまたは−スクロシド（ｓｕｃｒｏｓｉｄｅ）（すなわち、スクロースエステル）（ｏｅｌｔｚｏｗ ａｎｄ Ｕｒｆｅｒ； Ａｎａｔｒａｃｅ Ｉｎｃ．， Ｍａｕｍｅｅ， Ｏｈｉｏ； Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， Ｃａｌｉｆ．； Ｆｌｕｋａ Ｃｈｅｍｉｅ， Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄに従って合成された）；アルキルチオマルトシド、例えば、ヘプチル、オクチル、ドデシル−、トリデシル−、およびテトラデシル−β−Ｄ−チオマルトシド（Ｄｅｆａｙｅ， Ｊ． ａｎｄ Ｐｅｄｅｒｓｏｎ， Ｃ．， "Ｈｙｄｒｏｇｅｎ Ｆｌｕｏｒｉｄｅ， Ｓｏｌｖｅｎｔ ａｎｄ Ｒｅａｇｅｎｔ ｆｏｒ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ" ｉｎ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ ａｓ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｒａｗ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ， ２４７−２６５ （Ｆ． Ｗ． Ｌｉｃｈｔｅｎｔｈａｌｅｒ， ｅｄ．） ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９９１）； Ｆｅｒｅｎｃｉ， Ｔ．， Ｊ． Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ， １４４：７−１１ （１９８０）に従って合成された）；アルキルチオグルコシド、例えば、１−ドデシル−または１−オクチル−チオα−またはβ−Ｄ−グルコピラノシド（Ａｎａｔｒａｃｅ社（Ａｎａｔｒａｃｅ， Ｉｎｃ．， Ｍａｕｍｅｅ， Ｏｈｉｏ；Ｓａｉｔｏ， Ｓ． ａｎｄ Ｔｓｕｃｈｉｙａ， Ｔ． Ｃｈｅｍ． Ｐｈａｒｍ． Ｂｕｌｌ． ３３：５０３−５０８ （１９８５）を参照）；アルキルチオスクロース（例えば、Ｂｉｎｄｅｒ， Ｔ． Ｐ． ａｎｄ Ｒｏｂｙｔ， Ｊ． Ｆ．， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ． Ｒｅｓ． １４０：９−２０ （１９８５）に従って合成された）；アルキルマルトトリオシド（Ｋｏｅｌｔｚｏｗ ａｎｄ Ｕｒｆｅｒに従って合成された）；スクロースアミノ−アルキルエーテルの長鎖脂肪族炭酸アミド；（Ａｕｓｔｒｉａｎ Ｐａｔｅｎｔ ３８２，３８１ （１９８７）； Ｃｈｅｍ． Ａｂｓｔｒ．， １０８：１１４７１９ （１９８８） ａｎｄ Ｇｒｕｂｅｒ ａｎｄ Ｇｒｅｂｅｒ ｐｐ． ９５−１１６に従って合成された）；アルキル鎖に対するアミド結合によってに結合されたパラチノースおよびイソマルタミン（ｉｓｏｍａｌｔａｍｉｎｅ）の誘導体（Ｋｕｎｚ， Ｍ．， "Ｓｕｃｒｏｓｅ−ｂａｓｅｄ Ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ Ｂｌｏｃｋｓ ａｓ Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ ａｎｄ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ" ｉｎ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ ａｓ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｒａｗ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ， １２７−１５３に従って合成された）；尿素によってアルキル鎖に結合されたイソマルタミンの誘導体（Ｋｕｎｚに従って合成された）；スクロースアミノ−アルキルエーテルの長鎖脂肪族炭酸ウレイド（Ｇｒｕｂｅｒ ａｎｄ Ｇｒｅｂｅｒ， ｐｐ． ９５−１１６に従って合成された）；およびスクロースアミノ−アルキルエーテルの長鎖脂肪族炭酸アミド（Ａｕｓｔｒｉａｎ Ｐａｔｅｎｔ ３８２，３８１ （１９８７）， Ｃｈｅｍ． Ａｂｓｔｒ．， １０８：１１４７１９ （１９８８） ａｎｄ Ｇｒｕｂｅｒ ａｎｄ Ｇｒｅｂｅｒ， ｐｐ． ９５−１１６に従って合成された）。
【０３３１】
ペプチドに対する結合のための反応官能性を組み込むためにさらに修飾され得る幾つかの好ましいグリコシドは、６、８、１０、１２、１４、または１６の炭素原子のアルキル鎖に対するグリコシドまたはエステルの結合によって結合された、糖類のマルトース、スクロース、グルコース、およびガラクトース、例えば、ヘキシル−、オクチル−、デシル−、ドデシル−、テトラデシル−、およびヘキサデシル−マルトシド、−メリビオシド、−スクロシド、−グルコシドおよび−ガラクトシドを含む。身体において、これらのグリコシドは、無毒なアルコールまたは脂肪酸、およびオリゴ糖または糖類に分解される。上述の例は、本明細書で請求される方法に使用されるアルキルグリコシドのタイプを例証するものであるが、リストは、すべてを網羅するようには意図されていない。
【０３３２】
一般に、これらの界面活性剤（例えば、アルキルグリコシド）は、バイオアベイラビリティ、半減期、受容体選択性、毒性、体内分布、溶解性、安定性、例えば、熱、加水分解、酸化、酵素分解に対する抵抗性など、精製およびプロセシングのための設備、構造的特性、分光学的特性、化学的及び／又は光化学的な特性、触媒活性、酸化還元電位、他の分子と反応する能力、例えば、共有結合または非共有結合などを調整するなどの、ペプチドの生物学的特性を変更するように随意に設計または選択される。
【０３３３】
界面活性剤
用語「界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）」は、句「界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｅ ａｃｔｉｖｅ ａｇｅｎｔ）」を短くしたものである。薬学的適用において、界面活性剤は、液体医薬製剤に有用であり、ここで、界面活性剤は、乳化剤、可溶化剤、および湿潤剤として作用して、多くの目的を果たす。乳化剤は、脂肪親和性または部分的に脂肪親和性の物質の水溶液を安定化する。可溶化剤は、達成され得る濃度を増加させる医薬組成物の成分の溶解性を増大させる。湿潤剤は、流体の表面張力を低下させ、それが適用される表面上に容易に広がるように誘発し、それ故、流体による表面の「湿潤（ｗｅｔｔｉｎｇ）」さえも引き起こす、化学添加剤である。湿潤剤は、粘膜または医薬製剤が接触する他の表面領域との密な接触を達成するための液体製剤の手段を提供する。したがって、界面活性剤は、本明細書に記載されるペプチド生成物の製剤の安定化の他に、ペプチド自体の特性の変更のためにも有用な添加物であり得る。
【０３３４】
具体的な実施形態では、合成的に利用可能なアルキルグリコシド、例えば、アルキルグリコシドのドデシル、トリデシル、テトラデシルマルトシド、−メリビオシドまたは−グルコシドの他に、スクロースドデカノアート、トリデカノアート、およびテトラデカノアートは、本明細書に記載されるようなペプチドに対する共有結合的な取付けに適している。同様に、対応するアルキルチオグリコシドは、製剤の発達に許容可能である、安定した、合成的に利用可能な界面活性剤である。
【０３３５】
広範囲の物理的な及び界面活性剤の特性は、界面活性剤（例えば、アルキルグリコシド）の疎水性か親水性の領域の適切な修飾によって達成され得る。例えば、ドデシルマルトシド（ＤＭ）の二層活性（ｂｉｌａｙｅｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ）を、ドデシルグルコシド（ＤＧ）のの二層活性と比較する研究は、同じ長さの疎水性の尾部を有しているのにもかかわらず、ＤＭの二層活性がＤＧの二層活性よりも３倍以上高くなることを発見した（Ｌｏｐｅｚ， Ｏ．， ｅｔ ａｌ． （２００２） Ｃｏｌｌｏｉｄ Ｐｏｌｙｍ Ｓｃｉ ２８０： ３５２−３５７）。特定の例では、極性領域（ｐｏｌａｒ ｒｅｇｉｏｎ）の同一性（二糖類対単糖類）は、界面活性剤の作用に影響を与える。ペプチド、例えば、本明細書に記載されるペプチド生成物に連結された界面活性剤の場合において、ペプチド領域はまた、全体的な分子に対して疎水性または親水性の特徴を与え得る。したがって、物理的な及び界面活性剤の特性の調整は、個々のペプチド標的に適した特定の物理的および薬学的な特性を達成するために使用され得る。
【０３３６】
ＰＥＧ修飾
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される界面活性剤で修飾されたペプチド生成物は、１つ以上のＰＥＧ部分を組み込むためにさらに修飾される（Ｖｅｒｏｎｅｓｅ， Ｆ．Ｍ． ａｎｄ Ｍｅｒｏ， Ａ． （２００８） ＢｉｏＤｒｕｇｓ ２２： ３１５−３２９）。幾つかの例では、大きなＰＥＧ鎖の組み込みは、腎臓中の糸球体におけるペプチドの、そこで形成される希釈尿への濾過を防ぐ（Ｎｅｓｔｏｒ， Ｊ．Ｊ．， Ｊｒ． （２００９） Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １６： ４３９９ − ４４１８， Ｃａｌｉｃｅｔｉ， Ｐ． ａｎｄ Ｖｅｒｏｎｅｓｅ， Ｆ．Ｍ． （２００３） Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ ５５： １２６１−１２７７）。幾つかの実施形態では、随意のＰＥＧ親水性鎖は、より長い鎖のアルキルグリコシド部分の組み込みによって疎水性を与えられた（ｒｅｎｄｅｒｅｄ）ペプチドまたはタンパク質の溶解性と物理的性質とのバランスを保つことを可能にする。
【０３３７】
タンパク質のＰＥＧ化は、潜在的に負の効果も有し得る。したがって、ＰＥＧ化は、幾つかのタンパク質に対して生物活性の大きな損失を引き起こしかねず、これは、受容体の特異的なクラスのためのリガンドに関連し得る。そのような例では、可逆的なＰＥＧ化に対して恩恵がり得る（Ｐｅｌｅｇ−Ｓｈｕｌｍａｎ， Ｔ．， ｅｔ ａｌ． （２００４） Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ４７： ４８９７−４９０４， Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ， Ｒ．Ｂ．， ｅｔ ａｌ． （２００３） Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ ５５： ２１７−２５０， Ｒｏｂｅｒｔｓ， Ｍ．Ｊ． ａｎｄ Ｈａｒｒｉｓ， Ｊ．Ｍ． （１９９８） Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ８７： １４４０−１４４５）。
【０３３８】
さらに、増加した分子量は、糸球体膜の障壁以外の生理学的障壁の浸透を防ぎ得る。例えば、ＰＥＧ化の高分子量形態が、幾つかの組織への浸透を防ぎ得、それによって、治療上の有効性を減少させることが示された。さらに、高分子量は、粘膜の障壁にわたる取り込み（鼻、頬側、膣、経口、直腸、肺の送達）を防ぎ得る。しかしながら、遅れた取り込みは、肺に対する安定した分子の投与にとって大きな利点があり得、実質的に作用持続時間を引き延ばす。本明細書に記載されるペプチド及び／又はタンパク質生成物は、経粘膜のバイオアベイラビリティを増大させ、これによって、鼻腔内または他の経粘膜の経路に従う商業上有意なバイオアベイラビリティの達成による界面活性剤の修飾と併用して使用される、より長い鎖のＰＥＧ修飾が可能となる。
【０３３９】
幾つかの実施形態では、長鎖ＰＥＧポリマー、および短鎖ＰＥＧポリマーは、本明細書に記載されるタンパク質およびペプチドの修飾に適している。吸引による糖尿病の処置の適用は、薬物送達のための新しい手法であり、肺には非常に透過性のある障壁（例えば、エクスベラ）がある。この適用のために（肺の障壁の遅れた浸透）、ＰＥＧ化の好ましい形態は、Ｃ１０乃至Ｃ４００（およそ２５０Ｄａ乃至１０，０００Ｄａ）のより低い分子量範囲にある。したがって、ＰＥＧによる延長のための主要な経路は、糸球体濾過のカットオフ値を超える（６８ｋＤａより高い）「有効分子量」の達成であるが、より短い鎖の使用は、肺疾患および他の呼吸器の疾病の処置に対する肺内の滞留の延長のための経路であり得る。したがって、約５００Ｄａ乃至３０００ＤａのＰＥＧ鎖は、末梢循環へのエントリーを遅くするのに十分なサイズであるが、かなり延長された循環時間を有するのには不十分なサイズである。幾つかの実施形態では、ＰＥＧ化は、本明細書に記載される共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質に対する全身性の副作用の可能性を減少させながら、増加した局所的有効性を肺組織に与えるために適用される。そのような実施形態の幾つかでは、約７５０Ｄａ乃至約１５００Ｄａの範囲のＰＥＧ鎖は、「ＰＥＧ１Ｋ」と総称される。
【０３４０】
さらに、他のポリマーが、それらの物理的性質を最適化するために、本明細書に記載される化合物と併用して使用されてもよい。例えば、ポリ（２−エチル２−オキサゾリン）抱合体は、可変的な疎水性および作用持続時間を増大するのに十分なサイズを有している（Ｍｅｒｏ， Ａ．， ｅｔ ａｌ． （２００８） Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ １２５： ８７−９５）。糖類に対するそのようなポリマーの結合は、本明細書に記載されるペプチド及び／又はタンパク質の修飾における使用に適した界面活性剤のクラスをもたらす。
【０３４１】
ポリエチレングリコール鎖は、ペプチド及び／又はタンパク質鎖上の反応性基に対するそれらの抱合を可能にするために官能化される。典型的な官能基は、ポリエチレングリコール鎖上の対応するカルボキシル、アミノ、マレイミドの基（など）を介する、ペプチド上のアミノ、カルボキシル、またはスルフヒドリルの基との反応を可能にする。一実施形態では、ＰＥＧは、Ｃ１０−Ｃ３０００鎖を含む。別の実施形態では、ＰＥＧは、４０，０００ダルトンを超える分子量を有する。さらに別の実施形態では、ＰＥＧは、１０，０００ダルトン未満の分子量を有する。タンパク質修飾としてのＰＥＧは、当該技術分野で周知であり、その用途は、例えば、米国特許第４，６４０，８３５号；第４，４９６，６８９号；第４，３０１，１４４号；第４，６７０，４１７号；第４，７９１，１９２号；および第４，１７９，３３７号に記載される。
【０３４２】
従来のタイプでないＰＥＧ鎖は、本質的に両親媒性となるように修飾される。すなわち、これは、親水性のＰＥＧ構造であるが、脂肪酸エステルおよび他の疎水性成分などの疎水性領域を含むように修飾される、構造を有する。例えば、（Ｍｉｌｌｅｒ， Ｍ．Ａ．， ｅｔ ａｌ． （２００６） Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ １７： ２６７−２７４）；Ｅｋｗｕｒｉｂｅ，ｅｔ ａｌ．ＵＳ ６，３０９，６３３；Ｅｋｗｕｒｉｂｅ，ｅｔ ａｌ．ＵＳ ６，８１５，５３０；Ｅｋｗｕｒｉｂｅ，ｅｔ ａｌ．ＵＳ ６，８３５，８０２）を参照。タンパク質に対するこれらの両親媒性のＰＥＧ抱合体は、経口のバイオアベイラビリティを増大させるために元来開発されたが、この役割においては比較的有効ではなかった。しかしながら、両親媒性のペプチドでのそのような両親媒性のＰＥＧ抱合体の使用は、これらの製薬の有用な生物活性を拡張するために、肺内の著しく延長された滞留をもたらす。好ましいＰＥＧ鎖は、５００Ｄａ乃至３０００Ｄａの分子量範囲にある。これらの抱合体の合成の方法の詳細な記載が、上述の引用においてなされ、その完全な内容が本明細書に組み込まれる。
【０３４３】
ＰＥＧの実体（ｅｎｔｉｔｙ）それ自体は、ペプチドなどの標的分子に付けられる官能基を有していない。それ故、ＰＥＧの取付けを作り出すために、ＰＥＧの実体は、最初に官能化されなければならず、その後、官能化された取付けは、ペプチドなどの標的分子にＰＥＧの実体を付けるために使用される（Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ， Ｒ．Ｂ．， ｅｔ ａｌ． （２００３） Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ ５５： ２１７−２５０， Ｖｅｒｏｎｅｓｅ， Ｆ．Ｍ． ａｎｄ Ｐａｓｕｔ， Ｇ． （２００５） Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ １０： １４５１−１４５８， Ｒｏｂｅｒｔｓ， Ｍ．Ｊ．， ｅｔ ａｌ． （２００２） Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ ５４： ４５９−４７６）。一実施形態では、部位特異的なＰＥＧ化は、ペプチド分子上のＣｙｓ置換を介して達成され得る。標的ペプチドは、本明細書に記載されるように、固相合成、組み換え手段、または他の手段によって合成され得る。
【０３４４】
したがって、幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるペプチド生成物は、アルキルグリコシド、および分子中のどこかにある少なくとも１つのＣｙｓ残基、Ｌｙｓ残基または他の反応性アミノ酸残基上の特異的なＰＥＧ化によって修飾された、Ｌｙｓまたは他の反応残基を含む。
【０３４５】
別の実施形態では、求核性の側鎖を有するＬｙｓまたは他の残基は、ＰＥＧ残基の組み込みのために使用され得る。これは、ＰＥＧカルボキシルまたはＰＥＧカーボネートの鎖に対するアミドまたはカルバメートの結合の使用を介して達成され得る。例えば、記載される（Ｖｅｒｏｎｅｓｅ， Ｆ．Ｍ． ａｎｄ Ｐａｓｕｔ， Ｇ． （２００５） Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ １０： １４５１−１４５８）を参照。代替的な手法は、メルカプトアセチル、メルカプトプロピオニル（ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＳＨ）などの、ＳＨ含有残基の取付けを介してＬｙｓ側鎖のアミノ官能基を修飾することである。代替的に、ＰＥＧ鎖は、合成の間にアミドとしてＣ末端で組み込まれ得る。ＰＥＧ鎖を付けるためのさらなる方法は、ＨｉｓおよびＴｒｐの側鎖との反応を利用する。ＰＥＧ鎖の取付けを可能にするペプチド鎖を修飾する他の類似した方法は、当該技術分野で知られており、引用によって本明細書に組み込まれる（Ｒｏｂｅｒｔｓ， Ｍ．Ｊ．， ｅｔ ａｌ． （２００２） Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ ５４： ４５９−４７６）。
【０３４６】
製剤
一実施形態では、本明細書に記載されような共有結合的に修飾されたペプチドまたはタンパク質は、被験体に投与されたときに、組成物中のペプチド及び／又はタンパク質の会合（ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）または凝集をさらに減少させる、防ぐ、または軽減する、例えば、ペプチド及び／又はタンパク質の自己会合または凝集を減少させる、あるいは他のペプチドまたはタンパク質との会合または凝集を減少させる、製剤中に提供される。
【０３４７】
高タンパク質濃度での自己会合は、治療上の製剤において問題である。例えば、自己会合は、水溶液中の濃縮されたモノクローナル抗体の粘性を増大させる。濃縮されたインスリン製剤は、自己凝集によって不活性化される。これらの自己会合するタンパク質の相互作用は、特に高タンパク質濃度で、多くの治療薬の生物活性を減少させる、調整する、または取り除く（Ｃｌｏｄｆｅｌｔｅｒ， Ｄ．Ｋ．， ｅｔ ａｌ． （１９９８） Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ １５： ２５４−２６２）。注入または他の手段による送達のために高濃度で製剤された治療上のタンパク質は、物理的に不安定になるか、またはこれらのタンパク質の相互作用の結果として不溶性になり得る。
【０３４８】
ペプチドおよびタンパク質の製剤の調製における深刻な問題は、製造可能且つ安定した剤形を開発することである。プロセシングおよび操作のために重要である、物理安定度の特性は、しばしば不十分に特徴づけられ、予測するのが困難である。タンパク質の相互作用および溶解度特性によって決定されるような、会合、凝集、結晶化および沈澱などの、様々な物理的不安定度の現象が生じる。これは、結果として、深刻な製造、安定性、分析、および送達の問題となる。多い投薬量（ｈｉｇｈ ｄｏｓｉｎｇ）（およそｍｇ／ｋｇ）を必要とするペプチドおよびタンパク質の薬物のための製剤の開発が、多くの臨床的症状で必要とされている。例えば、ＳＣ経路を使用すると、およそ＜１．５ｍＬが、許容可能な投与量である。これには、十分な投薬量を達成するために、＞１００ｍｇ／ｍＬのタンパク濃度が必要とされ得る。類似した懸念事項が、モノクローナル抗体に対する高濃度の凍結乾燥された製剤の開発において存在する。一般に、より高いタンパク質濃度によって、より少ない注入量が使用され、これは、患者の快適性、利便性、およびコンプライアンスにとって非常に重要である。本明細書に記載される界面活性剤で修飾された化合物は、そのような凝集の事象を最小限にするように設計されており、本明細書に記載されるような少量の界面活性剤の使用を介してさらに促進され得る。
【０３４９】
多くの人にとって注入は投与の不快な様式であるため、ペプチド治療薬を投与する他の手段は求められている。特定のペプチドおよびタンパク質の治療薬が、例えば、鼻腔内、頬側、経口、膣、吸引、または他の経粘膜の投与によって適用され得る。その例は、商用の経鼻スプレー製剤として投与される、ナファレリン（Ｓｙｎａｒｅｌ（登録商標））およびカルシトニンである。本明細書に記載される共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質は、そのような経粘膜の投与を促進するように設計され、そのような製剤は、本明細書に記載されるような少量の界面活性剤の使用を介してさらに促進され得る。
【０３５０】
典型的な製剤のパラメーターは、最適な溶液ｐＨ、緩衝液、および安定化賦形剤の選択を含む。さらに、凍結乾燥されたケーキの再構成は、凍結乾燥された又は粉末状の製剤にとって重要である。さらなる及び深刻な問題は、自己会合後のタンパク質製剤の粘性の変化を含む。粘度の変化は、例えば、鼻腔内、肺、または口腔のスプレーのためのスプレー（エアロゾル）送達において、送達特性を著しく変更し得る。さらに、増大した粘度は、シリンジまたは静脈内（ｉｖ）ラインによる注入送達を、より困難に又は不可能にしかねない。
【０３５１】
ペプチドの完全性および生理活性を安定化且つ維持する多くの試みが報告されてきた。幾つかの試みは、特にインスリンポンプ系に関して、熱変性および凝集に対する安定化をもたらした。ポリマー界面活性剤が記載される（Ｔｈｕｒｏｗ， Ｈ． ａｎｄ Ｇｅｉｓｅｎ， Ｋ． （１９８４） Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ ２７： ２１２−２１８； Ｃｈａｗｌａ， Ａ．Ｓ．， ｅｔ ａｌ． （１９８５） Ｄｉａｂｅｔｅｓ ３４： ４２０−４２４）。これらの化合物によるインスリンの安定化は、立体的性質であると考えられた。使用される他の系の中で、糖類（Ａｒａｋａｗａ， Ｔ． ａｎｄ Ｔｉｍａｓｈｅｆｆ， Ｓ．Ｎ． （１９８２） Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２１： ６５３６−６５４４）、アミノ酸などのオスモライト（Ａｒａｋａｗａ， Ｔ． ａｎｄ Ｔｉｍａｓｈｅｆｆ， Ｓ．Ｎ． （１９８５） Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｊ ４７： ４１１−４１４）、および尿素などの水構造ブレーカー（ｗａｔｅｒ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｂｒｅａｋｅｒｓ）（Ｓａｔｏ， Ｓ．， ｅｔ ａｌ． （１９８３） Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ７２： ２２８−２３２）がある。これらの化合物は、タンパク質またはペプチドの分子内の疎水的相互作用を調整することによって、それらの作用を発揮する。
【０３５２】
様々なペプチド、ペプチド、またはタンパク質は、本明細書に記載され、本明細書に記載される共有結合された界面活性剤の試薬によって修飾され得る。好都合なことに、本明細書に記載されるペプチド修飾は、親水性（例えば糖類）および疎水性（例えばアルキル鎖）の基を含む界面活性剤の共有結合的な取付けを含み、それによって、生理学的条件下でペプチドの安定化を可能にする。幾つかの実施形態では、ペプチド、及び／又は本明細書に記載されるタンパク質に対する、親水基および疎水基（例えばグリコシド界面活性剤）を含む部分の共有結合によって、安定性を増加させる（例えば、凝集を減少させる）ためにペプチド、及び／又はタンパク質のアミノ酸配列を修飾する必要はなくなる。
【０３５３】
幾つかの実施形態では、製剤は、本明細書に記載される界面活性剤由来の試薬で修飾されたペプチドを含む、少なくとも１つの薬物を含み、および製剤中にさらに界面活性剤に関係し得、ここで界面活性剤は、さらに、例えば糖類、アルキルグリコシド、または他の賦形剤から構成され、滴下、スプレー、エアロゾル、凍結乾燥物、スプレー乾燥品、注射可能、および持続放出の様式から成る群から選択される様式で投与され得る。スプレーおよびエアロゾルは、適切な調合器（ｄｉｓｐｅｎｓｅｒ）の使用を通介して達成され得、鼻腔内、経頬（ｔｒａｎｓｂｕｃｃａｌ）、吸引または他の経粘膜の経路によって投与され得る。凍結乾燥物は、マンニトール、糖類、サブミクロンの無水のα−ラクトース、ゼラチン、生体適合性のゲル剤またはポリマーなどの他の化合物を含み得る。持続放出の様式は、眼球インサート、侵食可能な微粒子、加水分解性ポリマー、膨張する粘膜付着性粒子、ｐＨ感受性微粒子、ナノ粒子／ラテックス系、イオン交換樹脂、および他のポリマーゲル剤およびインプラントであり得る（Ｏｃｕｓｅｒｔ， Ａｌｚａ Ｃｏｒｐ．， Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ； Ｊｏｓｈｉ， Ａ．， Ｓ． Ｐｉｎｇ ａｎｄ Ｋ． Ｊ． Ｈｉｍｍｅｌｓｔｅｉｎ， Ｐａｔｅｎｔ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ＷＯ ９１／１９４８１）。有意な経口のバイオアベイラビリティも達成可能である。
【０３５４】
本明細書に記載されるペプチドおよびタンパク質の修飾は、有機溶媒の必要性を減らし、幾つかの場合には、それを排除し得る。トレハロース、ラクトース、およびマンニトール並びに他の糖類は、凝集を防ぐために使用されてきた。抗ＩｇＥのヒト化モノクローナル抗体の凝集は、３００：１から５００：１（賦形剤：タンパク質）の範囲のモル比での又はそれを超えるトレハロースによる製剤によって最小限にされた。しかしながら、粉末剤は、エアロゾル投与には過度に凝集性且つ不適切であったか、または保存の間に望ましくないタンパク質の糖化を示した（Ａｎｄｙａ， Ｊ．Ｄ．， ｅｔ ａｌ． （１９９９） Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ １６： ３５０−３５８）。発見された添加物の各々は、異物代謝、刺激または毒性、あるいは高コストを含む、治療薬に対する添加物としての制限がある。本明細書に記載される共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質との使用のために、有効で、非刺激性の、無毒な賦形剤が熟慮され、これらは、天然の糖、脂肪酸、または長鎖アルコールで構成されるために異物代謝を必要とせず、水溶液中で、または血漿または唾液などの水性の体液による生理学的な水性の再構成によるインサイツでの乾燥したペプチド及び／又はタンパク質製剤の水性の再構成後に、凝集を最小限にするために使用されてもよい。
【０３５５】
他の製剤成分は、とりわけ、緩衝液および生理学的な塩、アプロチニンおよび大豆トリプシン阻害剤などの無毒なプロテアーゼ阻害剤、アルファ−１−アンチトリプシン、およびプロテアーゼ不活性化モノクローナル抗体を含み得る。緩衝液は、アセテート、シトレート、グルコナート、フマレート、マレート、ポリリシン、ポリグルタミン酸、キトサン、硫酸デキストランなどの有機物、またはリン酸塩および硫酸塩などの無機物を含み得る。そのような製剤はさらに、ベンジルアルコールなどの低濃度の静菌剤を包含し得る。
【０３５６】
鼻腔内の投与に適した製剤はまた、ヒドロフルオロアルカンなどの許容可能な蒸発溶媒中に、本明細書に記載される修飾されたペプチド及び／又はタンパク質生成物の溶液または懸濁液を含む。そのような製剤は、定量吸入器（ＭＤＩ）からの投与に適しており、投与の部位から移動の欠如、低刺激、および滅菌の必要性の欠如という利点を有する。そのような製剤はまた、サブミクロンの無水のα−ラクトースなどの、許容可能な賦形剤または充填剤を包含し得る。
【０３５７】
また別の態様では、本明細書に記載される共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質は、増加した保存期間（ｓｈｅｌｆ−ｌｉｆｅ）を示す。本明細書で使用されるように、句「保存期間」は、使用または消費に不適切となることなく生成物が保存され得る期間として広く記載される。本明細書に記載される組成物の「保存期間」はまた、組成物の質の許容損失に対応する期間を示し得る。本明細書に使用されるような組成上の保存期間は、有効期限（ｅｘｐｉｒａｔｉｏｎ ｄａｔｅ）とは区別され；「保存期間」は、本明細書に記載される組成物の質に関し、一方で、「有効期限」は、組成物の製造および試験の要件により関連する。例えば、「有効期限」を過ぎた組成物は、まだ安全且つ有効であり得るが、最適な質は製造業者によってもはや保証されていない。
【０３５８】
投薬
本明細書に記載される共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質は、多くの疾患状態において有益な治療効果を与えるための相当量で投与され得る。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質は、炎症の処置に有用である。一実施形態では、本明細書に示される化合物は、手術後または慢性の痛みの調整において有益な活性を与える。一実施形態では、ペプチドは、痛みを調整する処置の他の形態の濃度よりも高い又は低い濃度で患者に投与される。また別の実施形態では、ペプチドは、相乗的な治療効果をもたらすために、他の化合物とともに投与される。
【０３５９】
代表的な送達レジメンは、経口、経粘膜の投与、非経口（皮下、腹腔内、筋肉内および静脈内の注入を含む）、直腸、頬側（舌下を含む）、経皮、吸引、眼、経粘膜（鼻腔内）の投与の様式を含む。ペプチドの送達のための魅力的且つ広く使用される方法は、制御放出の注射可能な製剤の皮下注射を伴う。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質は、皮下、鼻腔内、および吸引の投与に有用である。その上、処置されている疾病によって、これらの治療上の組成物は、全身または局所に投与される。製剤および投与のための技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ" （Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ， Ｅａｓｔｏｎ Ｐａ．）の最新版において見られる。
【０３６０】
正確な用量および組成物並びに最も適切な送達レジメンの選択は、とりわけ、選択されたペプチドの薬理学的性質、処置されている疾病の本質および重症度、およびレシピエントの身体的状態および精神的な鋭敏度（ｍｅｎｔａｌ ａｃｕｉｔｙ）によって影響される。さらに、投与の経路は、異なる量の吸収された物質を結果としてもたらす。異なる経路を介するペプチドの投与のためのバイオアベイラビリティは、特に変わり易く、１％未満から１００％近くまでの量が確認されている。典型的に、静脈内、腹腔内または皮下の注入以外の経路からのバイオアベイラビリティは、５０％以下である。
【０３６１】
一般に、本明細書に記載される有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質、またはその塩は、皮下注射によって、１日当たり約０．１μｇ／ｋｇ乃至１０００μｇ／ｋｇ体重、または１日当たり約０．１μｇ／ｋｇ乃至約１００μｇ／ｋｇ体重の量で投与される。５０ｋｇのヒト女性の被験体については、活性成分の一日量は、皮下注射によって、約５μｇから約５０００μｇであるか、または約５μｇから約５０００μｇである。投与の経路、化合物の効能、薬物動態学的特性および観察される適用可能なバイオアベイラビリティに依存して、異なる用量が必要とされる。吸引によって、一日量は、１日２回の１０００から約２０，０００μｇである。ウマ、イヌ、およびウシなどの他の哺乳動物では、より多い用量が必要とされ得る。この投与量は、最も有効な結果を達成するために必要に応じて、単一の投与によって、複数回の適用によって、または制御放出を介して、従来の医薬組成物中に送達され得る。
【０３６２】
本明細書に記載される任意の共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質、またはその塩の投与は、任意の適切な投薬スケジュールに従い得る。幾つかの実施形態では、投与量は、毎日、１週ごと、２週ごと、または月ごとに投与される。幾つかの実施形態では、投与量は、週１回または週２回投与される。他の実施形態では、投与量は、週３回、週４回、週５回、週６回、または週７回投与される。幾つかの実施形態では、投与量は、１日１回、１日２回、または２日に１回投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、３日に１回、４日に１回、５日に１回、または６日に１回投与される。幾つかの実施形態では、投与量は、月ごとに投与される。
【０３６３】
薬学的に許容可能な塩は、毒性の副作用なしで、親ペプチドの所望の生物活性を保持する。そのような塩の例は、（ａ）無機酸、例えば、塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸などで形成された、酸付加塩；および例えば、酢酸、トリフルオロ酢酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パモン酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタリンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクツロン酸などの有機酸で形成された塩；（ｂ）亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウムなどの多価金属カチオン、またはＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミンまたはエチレンジアミンから形成された有機カチオンで形成された、塩基付加塩または複合体；あるいは（ｃ）例えば、亜鉛タンニン酸塩などの（ａ）と（ｂ）の組み合わせ、である。
【０３６４】
また、幾つかの実施形態において、薬学的に許容可能な、無毒な担体と組み合わせて、活性成分として本明細書に記載される共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質、またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物が熟慮される。上に言及されるように、そのような組成物は、特に液体溶液または懸濁液の形態で非経口（皮下、筋肉内、または静脈内）投与のために；特に錠剤またはカプセル剤の形態で経口または頬側の投与のために；特に粉末剤、点鼻液、蒸発溶液またはエアロゾルの形態で鼻腔内投与のために；特に広く定義される賦形剤を用いる液体溶液または乾燥粉末剤の形態で吸引のために；および直腸または経皮の投与のために、調製され得る。
【０３６５】
組成物は、単位用量形態で好都合に投与され得、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １７ｔｈ ｅｄ．， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａ．， （１９８５）（引用によって本明細書に組み込まれる）に記載されるように、医薬の技術分野に周知の方法のいずれかよって調製され得る。非経口投与のための製剤は、賦形剤として、滅菌水または生理的食塩水、プロピレングリコールなどのアルキレングリコール類、ポリエチレングリコールなどのポリアルキレングリコール、糖類、植物由来の油、水素化したナフタレン、血清アルブミンナノ粒子（Ａｂｒａｘａｎｅ（商標）に使用される、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ， Ｉｎｃ． Ｓｃｈａｕｍｂｕｒｇ ＩＬ）などを含む。経口投与のために、製剤は、胆汁酸塩またはアシルカルニチンの付加によって増強され得る。経鼻投与のための製剤は、ハイドロフルオロカーボンなどの蒸発溶媒中で固体または溶液であり得、安定化のための賦形剤、例えば、糖類、界面活性剤、サブミクロンの無水のα−ラクトースまたはデキストランを含み得、あるいは点鼻液または定量スプレーの形態での使用のために水性または油性の溶液であり得る。頬側の投与のために、典型的な賦形剤は、糖、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、α化デンプンなどを含む。
【０３６６】
経鼻投与のために製剤されるときに、鼻粘膜にわたる吸収は、約０．１乃至１５重量パーセント、約０．５乃至４重量パーセント、または約２乃至重量パーセントの範囲の量で、例えば、グリココール酸、コール酸、タウロコール酸、エトコール酸（ｅｔｈｏｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ）、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、デヒドロコール酸、グリコデオキシコール酸、シクロデキストリンなどの、界面活性剤によってさらに増強され得る。減少した刺激を有してより高い有効性を示すと報告された吸収促進剤のさらなるクラスは、テトラデシルマルトシド（ｔｅｔｒａｄｅｃｙｌｍａｌｔｏｓｉｄｅ）（Ａｒｎｏｌｄ， Ｊ．Ｊ．， ｅｔ ａｌ． （２００４） Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ９３： ２２０５−２２１３， Ａｈｓａｎ， Ｆ．， ｅｔ ａｌ． （２００１） Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ １８： １７４２−１７４６）およびそこで引用されるものなどの、アルキルマルトシドのクラスであり、これらすべては、引用によって本明細書に組み込まれる。
【０３６７】
吸引による送達のために製剤されるときに、多くの製剤が利点を示す。ジケトピペラジンなどの容易に分散した固形物（例えばテクノスフェア粒子（Ｔｅｃｈｎｏｓｐｈｅｒｅ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ）；（Ｐｆｕｔｚｎｅｒ， Ａ． ａｎｄ Ｆｏｒｓｔ， Ｔ． （２００５） Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ ２： １０９７−１１０６）または類似した構造に対する活性ペプチドの吸収は、治療薬の迅速な最初の取り込みに結果としてもたらす製剤を与える。活性ペプチドおよび賦形剤を含有している、凍結乾燥された粉末剤、特にガラス状の粒子は、優れたバイオアベイラビリティを有して肺に対する送達に有用である（例えば、Ｅｘｕｂｅｒａ（登録商標）（ｉｎｈａｌｅｄ ｉｎｓｕｌｉｎ ｂｙ Ｐｆｉｚｅｒ ａｎｄ Ａｖｅｎｔｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．））。吸引によるペプチドの送達のためのさらなるシステムが記載される（Ｍａｎｄａｌ， Ｔ．Ｋ．， Ａｍ． Ｊ． Ｈｅａｌｔｈ Ｓｙｓｔ． Ｐｈａｒｍ． ６２： １３５９−６４ （２００５））。
【０３６８】
長時間、例えば、１週間から１年間の期間の被験体に対する本明細書に記載される共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質の送達は、所望の放出期間の間のの十分な活性成分を含有している制御放出系の単一の投与によって達成され得る。モノリシック（ｍｏｎｏｌｉｔｈｉｃ）またはリザーバー（ｒｅｓｓｅｒｖｏｉｒ）タイプのマイクロカプセル、デポ剤インプラント（ｄｅｐｏｔ ｉｍｐｌａｎｔｓ）、ポリマーヒドロゲル、浸透圧ポンプ、ベシクル（ｖｅｓｉｃｌｅｓ）、ミセル、リポソーム、経皮パッチ、イオン浸透装置および代替的な注射可能剤形などの、様々な制御放出系が、この目的のために利用され得る。制御放出の賦形剤も、週２回または週ごとの投与のために開発されており、例えば、保護されたグラフトコポリマー系（Ｃａｓｔｉｌｌｏ， Ｇ．Ｍ．， ｅｔ ａｌ． （２０１２） Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ ２９： ３０６−１８）が、本発明のペプチドなどの、疎水性の又は疎水的に修飾されたペプチドに使用され得る。活性成分の送達が望まれる部位での局所化は、幾つかの制御放出装置の追加の特徴であり、これは、特定の障害の処置に有益であることを証明し得る。
【０３６９】
制御放出製剤の一形態は、Ｋｅｎｔ， Ｌｅｗｉｓ， Ｓａｎｄｅｒｓ， ａｎｄ Ｔｉｃｅ（米国特許第４，６７５，１８９号（引用によって本明細書に組み込まれる））の先駆け的な文献に記載されるように、コポリ（乳／グリコール）酸（ｃｏｐｏｌｙ（ｌａｃｔｉｃ／ｇｌｙｃｏｌｉｃ） ａｃｉｄ）などの、ゆっくり分解する、無毒な、非抗原性のポリマー中に分散またはカプセル化されたペプチドまたはその塩を含む。化合物、またはその塩はまた、コレステロールまたは他の脂質マトリックスのペレット剤、あるいはシラストマーマトリックスインプラント（ｓｉｌａｓｔｏｍｅｒ ｍａｔｒｉｘ ｉｍｐｌａｎｔｓ）において製剤され得る。さらなる徐放、デポインプラントまたは注射可能な製剤は、当業者に明白となる。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｊ． Ｒ． Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｄ．， Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９７８， ａｎｄ Ｒ． Ｗ． Ｂａｋｅｒ， Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ Ａｃｔｉｖｅ Ａｇｅｎｔｓ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９８７を参照。
【０３７０】
制御放出製剤のさらなる形態は、コポリ（乳／グリコール）酸などの生分解性ポリマー、または乳酸およびＰＥＧ（生物学的に許容可能な（ｂｉｏａｃｃｅｐｔａｂｌｅ）溶媒である）のブロックコポリマーの溶液を含み、これは、デポ製剤を達成するために皮下または筋肉内に注入される。本明細書に記載されるペプチドの、そのようなポリマー製剤との混合は、非常に長い作用持続時間のある製剤を達成するのに適切である。
【０３７１】
本明細書で使用されるように、「治療上有効な量」は、本明細書の目的のために「有効量」と交換可能であり、当該技術分野で知られているような考察などによって決定される。その量は、その疾患を患う処置される被験体において所望の薬物媒介性の効果を達成するのに有効な量でなければならない。治療上有効な量はまた、限定されないが、当業者によって選択される適切な尺度、例えば、改善された生存率、より迅速な回復、または改善、症状の改善または除去、あるいは他の許容可能なバイオマーカーまたは代替マーカーを含む。
【０３７２】
しかしながら、処置を必要としている任意の特定の被験体に対する投与の特定の投与量レベルおよび頻度が、様々であり得、利用される具体的な化合物の活性、その化合物の代謝安定性および作用持続時間、年齢、体重、健康状態、性別、食事、投与の様式および時間、分泌の速度、薬物の組み合わせ、特定の疾病の重症度、および治療を受けている宿主を含む、様々な因子に依存することが理解されるだろう。
【０３７３】
投薬方法は、限定されないが、ペプチド及び／又はタンパク質の薬物の免疫原性を減少させる又は除去する、非刺激性である、抗細菌または抗菌活性を有する、薬物の増加した安定性またはバイオアベイラビリティを有する、その薬物のバイオアベイラビリティの変動を減少させる、初回通過の肝臓クリアランスを避ける、およびあらゆる副作用を減少させる又は除去する、組成物を含む、本明細書に記載される組成物のすべての態様を含む。本明細書で使用されるように、用語「免疫原性」は、免疫反応を誘発する特定の物質または組成物または薬剤の能力である。本明細書に記載される共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質の免疫原性は、当該技術分野で既知の方法によって確証される。
【０３７４】
本明細書で言及されるすべての公報および特許出願は、個々の公報または特許出願の各々が、明確に且つ個々に引用によって組み込まれると示されるのと同じ程度まで、引用によって本明細書に組み込まれる。
【０３７５】
本明細書に記載される共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質およびその合成のための試薬は、多数の変更および変動が当業者に明白であるために、例示のみとして意図される以下の実施例中により詳細に記載される。
【実施例】
【０３７６】
実施例１：試薬 − Ｎ−α−Ｆｍｏｃ，（Ｎ）−ε−（１−オクチルβ−Ｄ−グルクロニド−６−イル）−Ｌ−リジン
オーブンで乾燥した２５０ｍＬのエルレンマイヤーフラスコに、１−オクチルβ−Ｄ−グルクロン酸（Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ Ｌｔｄ．、３．０６ｇ、１０ｍｍｏｌ）、５０ｍＬの無水のＤＭＦ、および無水の１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１．６２ｇ、１２ｍｍｏｌ）を入れる。５０ｍＬのＤＭＦ中のＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（２．４８ｇ、１２ｍｍｏｌ）の冷却した（４℃）溶液を、撹拌しながら加え、反応を５分間進める。Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシル尿素の大量の白色沈殿物を、フリットガラス漏斗上で濾過し、濾液を、２５ｍｌの無水のＤＭＦ中のＮ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−リジン（３．６８ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液に加える。室温まで温めながら２５分間またはニンヒドリン色がかなり薄くなるまで、反応を進める。反応混合物を、濾過し、取り除いて、乾燥させ、ＭｅＯＨ中の溶解およびＥｔ２Ｏによる曇点までのゆっくりとした希釈によってＭｅＯＨ／Ｅｔ２Ｏから結晶化して、その後、冷凍する。さらなる精製は、ＥｔＯＡｃからＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＡｃＯＨまでの溶媒勾配を使用して、シリカゲルクロマトグラフィーによって達成され得る。
【０３７７】
類似した方法ではあるが、Ｎ−α−Ｂｏｃ−Ｌ−リジンを置換することによって、遊離したＮ末端に対するＮ末端の組み込みおよび開裂に適切な、Ｎ−α−Ｂｏｃ，Ｎ−ε−（１−オクチルβ−Ｄ−グルクロニド−６−イル）−Ｌ−リジンが得られる。類似した方法ではあるが、Ｎ−α−Ａｃ−Ｌ−リジンを置換することによって、遮断されたＮ末端によるペプチドのＮ末端での取り込みに適切な、Ｎ−α−Ａｃ，Ｎ−ε−（１−オクチルβ−Ｄ−グルクロニド−６−イル）−Ｌ−リジンが得られる。類似した方法ではあるが、適切な量のＮ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−オルニチンを置換することによって、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ，Ｎ−δ−（１−オクチルβ−Ｄ−グルクロニド−６−イル）−Ｌ−オルニチンが得られる。類似した方法ではあるが、他のＮ−モノ−保護されたジアミノ酸を置換することによって、対応する試薬が得られる。代替的に、結合中の、および１−オクチルβ−Ｄ−グルクロン酸の前活性化（ｐｒｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）なしでの、一時的なＭｅ３Ｓｉエステル保護基の使用は、試薬の形成に容易な経路を提供する。一時的なＭｅ３Ｓｉエステルは、ジクロロメタン（ＣＨ２Ｃｌ２）中の等モル量のＮ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミドとのＦｍｏｃ−Ｌｙｓ−ＯＨの反応によって生成される。有機質層は、上記のように１−アルキルグルクロニドとの結合の準備ができている、ＣＨ２Ｃｌ２中の溶液としての所望の試薬を含有している。濾過された反応混合物を、水性のＮａＨＳＯ４で洗浄して、Ｍｅ３Ｓｉエステルを加水分解し、ＭｇＳＯ４によって乾燥させて、溶媒を除去する。
【０３７８】
同様にではあるが、過アセチルまたは過ベンゾイル１−オクチルβ−Ｄ−グルクロン酸を使用して、試薬のＡｃ、または、Ｂｚ保護された形態（例えば、Ａｃ２Ｏでの処置によって形成された、２，３，４−トリスアセチル１−オクチルβ−Ｄ−グルクロン酸など）が得られる。そのような試薬は、樹脂からの酸分解中に増加した安定性を有し、脱保護中の不安定性が検知されるときに使用される（（Ｋｉｈｌｂｅｒｇ， Ｊ．， ｅｔ ａｌ． （１９９７） Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２８９： ２２１−２４５）およびそこで引用されるものを参照）。そのような生成物の最終的な脱保護は、上に記載されるように、ＭｅＯＨ／ＮＨ３、ＭｅＯＨ／ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ／ＮＨ２ＮＨ２の使用を介して、開裂後に塩基で触媒されたエステル転移反応によって実行される。
【０３７９】
実施例２：合成ペプチド類似体
一般に、ペプチド合成方法は、成長するペプチド鎖に対する保護されたアミノ酸の連続する付加を包含している。通常、アミノまたは第１アミノ酸のカルボキシル基および任意の反応性側鎖基のいずれかが保護される。この保護されたアミノ酸は、その後、不活性の固体担体に付けられるか、または溶液中で利用され、同様に適切に保護された、配列中の次のアミノ酸が、アミド結合の形成に適用可能な条件下で加えられる。所望のアミノ酸のすべてが適切な配列中で連結された後に、保護基および任意の固体担体は、除去されて、粗製ペプチドが得られる。ペプチドを、脱塩し、クロマトグラフィーによって精製する。
【０３８０】
約５０より少ないアミノ酸を有している、生理学的に活性な切断されたペプチドの類似体を調製する好ましい方法は、固相ペプチド合成を包含している。この方法で、α−アミノ（Ｎα）官能基および任意の反応性側鎖は、酸または塩基感受性の基によって保護される。保護基は、残存するペプチド鎖に影響を与えることなく容易に除去可能でありながら、ペプチド結合形成の状態に対して安定しているはずである。適切なα−アミノ保護基は、限定されないが、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、ｏ−クロロベンジルオキシカルボニル、ビフェニルイソプロピルオキシカルボニル、ｔ−アミルオキシカルボニル（Ａｍｏｃ）、イソボルニルオキシカルボニル、α，α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシ−カルボニル、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル、２−シアノ−ｔ−ブトキシカルボニル、９−フルオレニル−メトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）など、好ましくはＢｏｃ、またはより好ましくは、Ｆｍｏｃを含む。適切な側鎖保護基は、限定されないが、アセチル、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、Ｂｏｃ、ｔ−ブチル、ｏ−ブロモベンジルオキシカルボニル、ｔ−ブチル、ｔ−ブチルジメチルシリル、２−クロロベンジル（Ｃｌ−ｚ）、２，６−ジクロロベンジル、シクロヘキシル、シクロペンチル、イソプロピル、ピバロイル（ｐｉｖａｌｙｌ）、テトラヒドロピラン−２−イル、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルフォニル（Ｐｂｆ）、トリメチルシリルおよびトリチルを含む。化合物の合成のための好ましいＮα−保護基は、Ｆｍｏｃ基である。好ましい側鎖保護基は、Ｇｌｕ、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、ＡｓｐおよびＳｅｒのためのＯ−ｔ−ブチル基；ＬｙｓおよびＴｒｐの側鎖のためのＢｏｃ基；ＡｒｇのためのＰｂｆ基；Ａｓｎ、Ｇｌｎ、およびＨｉｓのためのＴｒｔ基、である。Ｌｙｓ残基の選択的修飾のために、Ｆｍｏｃまたはｔ−ブチルベースの保護基を開裂する試薬によって除去されていない保護基による直交性の保護が好ましい。Ｌｙｓ側鎖の修飾のための好ましい例は、限定されないが、ピペリジンではなくヒドラジンによって除去されたもの；例えば、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキサ−１−イリデン）−３−メチルブチル（ｉｖＤｄｅ）または１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキサ−１−イリデン）エチル（Ｄｄｅ）およびアリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）を含む。
【０３８１】
Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）またはＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）の保護基のスキーム（ｓｃｈｅｍｅ）が、側鎖ラクタム形成が望ましい場合に好ましく（Ｈｏｕｓｔｏｎ， Ｍ．Ｅ．， Ｊｒ．， ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｊ Ｐｅｐｔ Ｓｃｉ １： ２７４−２８２； Ｍｕｒａｇｅ， Ｅ．Ｎ．， ｅｔ ａｌ． （２０１０） Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ）、なぜなら、この場合、ＦｍｏｃＧｌｕ（Ｏ−アリル）およびＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）は、一時的な保護を提供するために組み込まれる且つ使用され得、その後、ラクタム形成のために脱保護されるからであり、一方で、Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）保護基は、官能化された界面活性剤での後の除去および反応のために残る。酸性および塩基性の残基（例えばＧｌｕおよびＬｙｓ）間の側鎖ラクタムは、当該技術分野に周知の標準的なプロトコルを使用して、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）／１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）または２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＢＴＵ）／Ｎ，Ｎ−ジ−イソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）による、カルボキシル側鎖官能基の活性化によって、アリルベースの保護の除去後に実行される。
【０３８２】
固相合成では、Ｃ末端アミノ酸は、適切な樹脂担体に最初に付けられる。適切な樹脂担体は、試薬および段階的な濃縮および脱保護反応の反応条件に不活性であり、使用される培地において不溶性である物質である。市販の樹脂の例は、反応性基によって修飾されたスチレン／ジビニルベンゼン樹脂、例えば、クロロメチル化したコ−ポリ−（スチレン−ジビニルベンゼン）、ヒドロキシメチル化したコ−ポリ−（スチレン−ジビニルベンゼン）などを含む。ベンジル化した、ヒドロキシメチル化したフェニルアセトアミドメチル（ＰＡＭ）樹脂は、ペプチド酸の調製のために好ましい。化合物のＣ末端がアミドであるときに、好ましい樹脂は、ｐ−メチルベンズヒドリルアミノ−コ−ポリ（スチレン−ジビニルベンゼン）樹脂、２，４ジメトキシベンズヒドリルアミノベースの樹脂（「Ｒｉｎｋアミド」）、４−ヒドロキシメチルフェノキシアセチルアミノメチル樹脂（ＨＭＰ Ａｍ）などである。より大きなペプチドの合成に特に好ましい担体は、Ｒｉｎｋアミド−ＰＥＧおよびＰＡＬ−ＰＥＧ−ＰＳ樹脂（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）またはＦｍｏｃプロトコルを使用してペプチドアミド合成のために設計された類似した樹脂などの、他のポリマーマトリックス上にグラフト化された（ｇｒａｆｔｅｄ）ＰＥＧ配列を含む市販の樹脂である。したがって、特定の場合に、ＰＥＧ鎖に対するアミド結合を有していることが望ましい。その場合、Ｎ−Ｆｍｏｃ−アミノ−ＰＥＧ−カルボン酸をアミド形成樹脂（例えば、Ｒｉｎｋアミド樹脂など）に結合するのが好適である。鎖の第１アミノ酸は、Ｎ−Ｆｍｏｃ−アミノ酸としてＰＥＧ鎖のアミノ官能基に結合され得る。最終的な脱保護は、所望のペプチド−ＮＨ−ＰＥＧ−ＣＯ−ＮＨ２生成物をもたらす。
【０３８３】
ＰＡＭ樹脂に対する取付けは、Ｎα保護されたアミノ酸、例えば、そのアンモニウム、セシウム、トリエチルアンモニウム、１，５−ジアザビシクロ−［５．４．０］ウンデカ−５−エン、テトラメチルアンモニウム、またはエタノール、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の類似した塩など、好ましくはＤＭＦ中のセシウム塩としての、Ｂｏｃアミノ酸と、約１２時間から７２時間、好ましくは約４８時間の間、例えば、約４０℃から６０℃、好ましくは約５０℃の高温での樹脂との反応によって達成され得る。これは、最終的に、酸分解後のペプチド酸の生成物またはアミノリシス後のアミドをもたらす。
【０３８４】
Ｎα−Ｂｏｃ−アミノ酸は、例えば、ＣＨ２Ｃｌ２またはＤＭＦ、好ましくはＣＨ２Ｃｌ２などの溶媒中に、約１０℃から５０℃、好ましくは２５℃の温度で、約２時間から約２４時間、好ましくは約２時間の間、（ＤＩＣ）／ＨＯＢｔ媒介性の結合によって、ベンズヒドリルアミン樹脂に付けられ得る。
【０３８５】
Ｂｏｃベースのプロトコルのために、保護されたアミノ酸の連続する結合は、当該技術分野に周知の方法、典型的に自動化したペピチド合成器によって実行され得る。トリエチルアミン、ＤＩＥＡ、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、コリジン、または類似した塩基による中和後に、保護されたアミノ酸のそれぞれは、およそ１．５倍から２．５倍のモル過剰量で導入され、周囲温度で、ＣＨ２Ｃｌ２、ＤＭＦ、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、またはそれらの混合物、好ましくはジクロロメタンなどの、不活性で、非水性の、極性溶媒中で、結合が実行される。Ｆｍｏｃベースのプロトコルに関して、脱保護のために酸は使用されないが、塩基、好ましくはＤＩＥＡまたはＮＭＭが、結合混合物へと通常組み込まれる。結合は、ＤＭＦ、ＮＭＰ、ＤＭＡまたは混合溶媒、好ましくはＤＭＦ中で典型的に行われる。代表的なカップリング剤は、単独での、またはＨＯＢｔ、Ｏ−アシル尿素、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＰｙＢｏｐ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、他のＮ−ヒドロキシイミド、またはオキシムの存在下での、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル−カルボジイミド（ＤＩＣ）または他のカルボジイミドである。代替的に、保護されたアミノ酸活性エステル（例えば、ｐ−ニトロフェニル、ペンタフルオロフェニルなど）または対称的な無水物が使用されてもよい。好ましいカップリング剤は、ＨＢＴＵ、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＡＴＵ）、２−（６−クロロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＣＴＵ）などの、アミニウム／ウロニウム（サプライヤーによって使用される代替的な呼称）クラスのカップリング剤である。
【０３８６】
Ｆｍｏｃ−ＰＡＬ−ＰＥＧ−ＰＳ樹脂に対する取付けの好ましい方法は、５分、７５°の最大結合サイクルでマイクロ波支援のペプチド合成器において、ＤＭＦ中のＨＢＴＵ：ジ−イソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）（１：２）を使用して、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−アミノ酸の約５倍のモル過剰量で、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンによる樹脂リンカーの脱保護、その後のＮ−α−Ｆｍｏｃ保護されたアミノ酸の反応によって達成され得る。
【０３８７】
マイクロ波支援のペプチド合成器中のこのＦｍｏｃベースのプロトコルのために、Ｎ−α−Ｆｍｏｃアミノ酸保護基は、３０秒間二重の脱保護プロトコルにおいて、およびその後、３分間７５℃に設定された最大温度で、０．１Ｍの１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）を含有しているＤＭＦ中の２０％のピペリジンによって除去される。ＨＯＢｔは、アスパルトイミド形成を減少させるために脱保護溶液に加えられる。その後、次のアミノ酸の結合が、５分間、７５°の最大の二重結合サイクルで、ＨＢＴＵ：ＤＩＥＡ（１：２）を使用して、５倍のモル過剰量を利用する。
【０３８８】
固相合成の最後に、完全に保護されたペプチドを、樹脂から除去する。樹脂担体に対する結合がベンジルエステルタイプであるときに、開裂は、約１２時間から２４時間、好ましくは約１８時間の間、約−１０℃から５０℃、好ましくは約２５℃の温度で、アルキルアミドＣ末端を有するペプチドに対するアルキルアミンまたはフルオロアルキルアミンとのアミノリシスによって、または例えば、非置換のアミドＣ末端を有するペプチドに対するアンモニア／メタノールまたはアンモニア／エタノールとアンモノリシスによって達成され得る。ヒドロキシＣ末端を有するペプチドは、ＨＦまたは他の強く酸性の脱保護レジメンによって、または鹸化によって開裂され得る。代替的に、ペプチドは、例えばメタノールとのエステル転移反応、その後のアミノリシスまたは鹸化によって、樹脂から除去され得る。保護されたペプチドは、シリカゲルまたは逆相ＨＰＬＣによって精製され得る。
【０３８９】
側鎖保護基は、約１５分から２時間、好ましくは約１．５時間の間、約−１０℃から＋１０℃、好ましくは、約０℃の温度で、アニソールまたは他のカルボニウムイオンスカベンジャーの存在下で、アミノリシス生成物を、例えば、無水の液体フッ化水素によって処理することによって、フッ化水素／ピリジン複合体による処理によって、トリス（トリフルオロアセチル）ホウ素およびトリフルオロ酢酸による処理によって、炭素またはポリビニルピロリドン上の水素およびパラジウムによる還元によって、あるいは液体アンモニア中のナトリウム、好ましくは液体フッ化水素およびアニソールによる還元によって、ペプチドから除去され得る。
【０３９０】
ベンズヒドリルアミンタイプの樹脂上のペプチドのために、樹脂の開裂および脱保護の工程は、上に記載されるような液体フッ化水素およびアニソールを利用する、または好ましくは、より軽度の開裂カクテルの使用を介する、単一工程に組み合わせられ得る。例えば、ＰＡＬ−ＰＥＧ−ＰＳ樹脂のために、好ましい方法は、毎回３８℃で１８分間、ＴＦＡ／水／トリ−イソ−プロピルシラン／３，６−ジオキサ−１，８−オクタンジチオール（ＤＯＤＴ）（９２．５／２．５／２．５／２．５）などの、当該技術分野で既知の軽度の開裂カクテルの１つを使用する、マイクロ波支援のペピチド合成器における二重の脱保護プロトコルの使用を介する。アルキルグリコシドを含有している物質の開裂は、９／１から１９／１の範囲でＴＦＡ／水の比率を有するプロトコルを使用して、アルキルグルコシド結合の生存を示した。典型的なカクテルは、９４％のＴＦＡ：２％のＥＤＴ；２％のＨ２Ｏ；２％のＴＩＳ、である。典型的に、完全に脱保護された生成物を、沈殿し、冷たい（−７０℃から４℃）Ｅｔ２Ｏで洗浄し、脱イオン水中に溶解し、凍結乾燥させる。
【０３９１】
ペプチド溶液は、脱塩され得（例えば、ＢｉｏＲａｄ ＡＧ−３（登録商標）の陰イオン交換樹脂によって）、ペプチドは、以下のタイプのいずれかまたはすべてを利用する一連のクロマトグラフィー工程によって精製され得る：アセテート形態の弱塩基性樹脂上のイオン交換；非誘導化のコ−ポリ（スチレン−ジビニルベンゼン）（例えばＡｍｂｅｒｌｉｔｅ（登録商標）ＸＡＤ）上の疎水性の吸着クロマトグラフィー；シリカゲル吸着クロマトグラフィー；カルボキシメチルセルロース上のイオン交換クロマトグラフィー；（例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５上の）分配クロマトグラフィー；向流分配；超臨界流体クロマトグラフィー；あるいはＨＰＬＣ、特にオクチル−またはオクダデシルシリルシリカ（ＯＤＳ）結合した相カラム充填上の逆相ＨＰＬＣ。
【０３９２】
本明細書にまた、本明細書に記載される共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質およびその薬学的に許容可能な塩を調製するためのプロセスが提供され、該プロセスは、適切な樹脂担体上で保護されたアミノ酸を連続して縮合すること、保護基および樹脂担体を除去すること、および生成物を精製することを含み、それによって、本明細書に記載される、生理学的に活性な切断された相同体の類似体および共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質の類似体を得る。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質は、上に定義されるように、アルキルグリコシド修飾を組み込む。別の態様は、本明細書に記載される共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質およびその薬学的に許容可能な塩を調製するためのプロセスに関し、該プロセスは、適切な樹脂担体上で保護されたアミノ酸を連続して縮合するためにマイクロ波支援の固相合成ベースのプロセスまたは標準的なペプチド合成プロトコルを使用すること、保護基および樹脂担体を除去すること、および生成物を精製することを含み、それによって、上に定義されるように、生理学的に活性なペプチドの類似体を得る。
【０３９３】
実施例３．ウロン酸のための一般的な酸化方法
２０ｍＬのアセトニトリルおよび２０ｍＬのＤＩ水中の１−ドデシルβ−Ｄ−グルコピラノシド（Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ）［２．０ｇ、５．７４ｍｍｏｌ］の溶液に、（ジアセトキシヨード）ベンゼン（Ｆｌｕｋａ）［４．４ｇ、１３．７ｍｍｏｌ］およびＴＥＭＰＯ（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ）［０．１８０ｇ、１．１５ｍｍｏｌ］を加えた。反応混合物を、２０時間室温で撹拌した。その後、反応混合物を、質量分析法（例えば、ＬＣＱ ＥＳＩ）にかけ、完了後に、水で希釈し、凍結乾固して、白色粉体として、１．５２ｇ（粗収率７３．１％）の粗製生成物、１−ドデシルβ−Ｄ−グルクロン酸を得、それをさらなる精製なしで固相合成に直接使用した。この生成物を、明細書に記載されるように、酸化剤としてのＮａＯＣｌを使用して、代替的なプロセスによって事前に調製し、より長いアルキル基にも使用してきた。より長いアルキル基ののために、１，４−ジオキサンを、アセトニトリルの代わりに使用し、温度を３０℃にまで上昇させた。類似した方法で、本明細書に記載される生成物および試薬を作るために使用される所望のアルキル糖類のウロン酸を調製する。
【０３９４】
類似した方法ではあるが、例えば、対応する１−オクチル、１−デシル、１−ウンデシル、１−テトラデシル、１−ヘキサデシル、および１−オクタデシルのグリコシド（Ａｎａｔｒａｃｅ， Ｍａｕｍｅｅ， ＯＨから購入）を使用して、本明細書に記載される生成物および試薬を作るために使用される所望の１−アルキル糖類のウロン酸を調製した。
類似した方法ではあるが、例えば、対応する１−オクチル、１−デシル、１−ウンデシル、１−テトラデシル、１−ヘキサデシル、および１−オクタデシルβ−Ｄ−メリビオシドまたはβ−Ｄ−マルトシド（Ａｎａｔｒａｃｅ， Ｍａｕｍｅｅ， ＯＨから購入）を使用して、本明細書に記載される生成物および試薬を作るために使用される所望の１−アルキル二糖類のウロン酸を調製した。
【０３９５】
実施例４：類似体ＥＵ−Ａ３８７の調製。
Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ−Ａｉｂ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｂｉｐ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）−Ｒｉｎｋのアミド樹脂のサンプルを、室温で暗所において一晩中、ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：１）中に、実施例１に記載されるようなＮ−アルファ−Ｆｍｏｃ保護されたアミノ酸を連続して加えることによって調製し、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．５等量（ｅｑ））およびＤＭＢＡ（２０ｅｑ）によるインキュベーションによってＬｙｓ−Ｎ−イプシロン位置上で脱保護した。ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２による洗浄後、Ｌｙｓ側鎖を、ＤＩＣ／ＨＯＢｔの使用を介してＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２中で１’−ドデシルβ−Ｄ−グルクロン酸によってアシル化した。結合の完了を、ニンヒドリンによって確認し、生成物を、ＣＨ２Ｃｌ２で広範囲に洗浄した。
【０３９６】
生成物樹脂を、室温で２４０分の間、最終的な脱保護および開裂カクテル（９４％のＴＦＡ：２％のＥＤＴ；２％のＨ２Ｏ；２％のＴＩＳ）での処理による樹脂からの開裂にさらす。混合物を、Ｅｔ２Ｏで処理して、生成物を沈殿させ、Ｅｔ２Ｏで広範囲に洗浄して、真空内の乾燥後に粗製の表題ペプチド生成物を得た。
【０３９７】
精製を、逆相（Ｃ１８）ｈｐｌｃによって２つのバッチ中で実行する。粗製ペプチドを、１５ｍＬ／分の流量で４．１ｘ２５ｃｍのｈｐｌｃカラム上に充填し（１５％の有機修飾剤；酢酸緩衝液）、５０℃で６０分の間に１５−４５％の緩衝液Ｂからの勾配によって溶離した。生成物の画分（ｆｒａｃｔｉｏｎ）を、凍結乾燥して、分析的なｈｐｌｃ（１８．６分；０．１％のＴＦＡ中に３０−６０％のＣＨ３ＣＮ）／質量分析法（Ｍ＋１ピーク＝２３８２．１４）による純度９８．０３％で表題生成物ペプチドを得る。類似した方法で、本発明の他の類似体を調整し、その特徴は以下に例証される。
表題化合物の対応する１−メチルおよび１−オクチルの類似体を、類似した方法ではあるが、試薬１’−メチルβ−Ｄ−グルクロン酸および１’−オクチルβ−Ｄ−グルクロン酸（Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ）を使用して調製する。対応する１−デシル、１−ドデシル、１−テトラデシル、１−ヘキサデシル、１−オクタデシルおよび１−アイコシル基の類似体を、上に記載されるように調製された、対応するグルクロン酸を使用して調製する。代替的に、１−アルキルグルクロニル、または他のウロン酸アシル化された類似体は、脱保護された又は部分的に脱保護されたペプチドの最初の精製、その後の所望のウロン酸試薬によるアシル化によって調製され得る。
【０３９８】
実施例５：類似体ＥＵ−Ａ１０２４の調製。
Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ａｉｂ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（Ｏ−アリル）−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）−Ｇｌｕ（Ｏ−ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＨＭＰのアミド樹脂のサンプル（Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＨＭＰ Ａｍ Ｒｅｓｉｎから開始した（置換 ０．４５ｍｍｏｌ／ｇ））を、実施例１に記載されるようなＮ−アルファ−Ｆｍｏｃ保護されたアミノ酸の連続する付加によって調製した。ＧｌｕおよびＬｙｓ上のアリルベースの側鎖を、室温で暗所において一晩中、ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：１）中で、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．５ｅｑ）およびＤＭＢＡ（２０ｅｑ）によるインキュベーションによって脱保護した。淡黄色の樹脂が得られるまで、樹脂を、ＤＭＦ（２回）中で０．５％のＤＩＥＡによって、ＤＭＦ（２回）およびＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２中で０．５％のナトリウムジエチルジチオカルバメートによって洗浄した。ＤＭＦ中でＧｌｕおよびＬｙｓをＤＩＣ／ＨＯＢＴ（５等量）と結合させることによって、側鎖ラクタム結合を形成した。ニンヒドリンによる完全性のために反応を確認し、必要に応じて再結合した。ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２による洗浄後、Ｌｙｓ側鎖を、２回、それぞれ１５分間、ＤＭＦ（１０等量）中で５％のヒドラジン水和物でのインキュベーションによって脱保護した。ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２による洗浄後、脱保護されたＬｙｓ残基の側鎖アミノ基を、ＤＩＣ／ＨＯＢｔの使用を介して、ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２中で、１’−テトラデシルβ−Ｄ−メリビオウロン酸（ｍｅｌｉｂｉｏｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）と反応させた。結合の完了を、ニンヒドリンによって確認し、生成物を、ＣＨ２Ｃｌ２で広範囲に洗浄した。ニンヒドリンによって完了しなかったあらゆる結合を再実行した。一般に、１０−１２ｇのペプチド生成物樹脂を、２ｍｍｏｌｅの合成から得た。
【０３９９】
生成物樹脂を、室温で２４０分の間、最終的な脱保護および開裂カクテル（９４％のＴＦＡ：２％のＥＤＴ；２％のＨ２Ｏ；２％のＴＩＳ）での処理による樹脂からの開裂にさらした。混合物を、Ｅｔ２Ｏで処理して、生成物を沈殿させ、Ｅｔ２Ｏで広範囲に洗浄して、真空内の乾燥後に粗製の表題ペプチド生成物を得た。一般に、５〜８ｇの粗製生成物ペプチドを得た。
【０４００】
精製を、逆相（Ｃ１８）ｈｐｌｃによって２つのバッチ中で実行した。粗製ペプチド（１−１．５ｇ）を、１５ｍＬ／分の流量で４．１ｘ２５ｃｍのｈｐｌｃカラム上に充填し（１５％の有機修飾剤；０．１％のＴＦＡ緩衝液）、室温で７０分の間に３５−５５％の緩衝液Ｂからの勾配によって溶離した。より純度の低い画分の再精製を、＞７０％の純度の画分に対して行った。生成物の画分を、凍結乾燥して、分析的なｈｐｌｃ（１０．３分；０．１％のＴＦＡ中に４５−７５％のＣＨ３ＣＮ）／質量分析法（１３１７．６７、＋３充填した（ｃｈａｒｇｅｄ）；１９７６．１３、＋２充填した；分子量３９５０．４４）による純度９８．７％で表題生成物ペプチドを得た。類似した方法で、本発明の他の類似体を調整し、その特徴は以下に例証される。
【０４０１】
表題化合物の対応する１−メチルおよび１−オクチルの類似体を、類似した方法ではあるが、試薬１’−メチルβ−Ｄ−グルクロン酸および１’−オクチルβ−Ｄ−グルクロン酸（Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ）を使用して調製する。類似した方法ではあるが、対応する１−オクチル、１−デシル、１−ウンデシル、１−テトラデシル、１−ヘキサデシル、および１−オクタデシルβ−Ｄ−グルクロン酸（上に記載されるように調製した）を使用して、本発明の生成物を調整した。類似した方法ではあるが、対応する１−オクチル、１−デシル、１−ウンデシル、１−テトラデシル、１−ヘキサデシル、および１−オクタデシルβ−Ｄ−メリビオウロン酸（ｍｅｌｉｂｉｏｕｒｏｎｉｃ）またはβ−Ｄ−マルトウロン酸（ｍａｌｔｏｕｒｏｎｉｃ）（上に記載されるように調製した）を使用して、本発明に記載される生成物および試薬を調整した。代替的に、１−アルキルグルクロニル、または他のウロン酸アシル化された類似体は、脱保護された又は部分的に脱保護されたペプチドの最初の精製、その後の所望のウロン酸試薬によるアシル化によって調製され得る。
【０４０２】
分析および特徴づけを、以下の表で与えられた溶離液勾配を使用して、陽イオンの様式でＨＰＬＣ／質量分析法によって行った。
【０４０３】
【表１−１】
0006525456.tif 000079
【０４０４】
【表１−２】
0006525456.tif 000080
０．１％のＴＦＡ中のＨＰＬＣ勾配
［ａ．］３０分にわたる３５％乃至６５％のＣＨ３ＣＮ
［ｂ．］２０分にわたる３０％乃至６０％のＣＨ３ＣＮ
［ｃ．］２０分にわたる３５％乃至６５％のＣＨ３ＣＮ
［ｄ．］２０分にわたる２５％乃至５５％のＣＨ３ＣＮ
［ｅ．］２０分にわたる４０％乃至７０％のＣＨ３ＣＮ
［ｆ．］２０分にわたる４５％乃至７５％のＣＨ３ＣＮ
Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ ５ミクロン ２５０ｘ４．６ｍｍ上のＨＰＬＣ
上に記載されるように合成且つ分析された追加の化合物は、以下の通りである：
【０４０５】
【表２−１】
0006525456.tif 000081
【０４０６】
【表２−２】
0006525456.tif 000082
０．１％のＴＦＡ中のＨＰＬＣ勾配
［ａ］３０分にわたる３５％乃至６５％のＣＨ３ＣＮ
［ｂ］２０分にわたる３０％乃至６０％のＣＨ３ＣＮ
［ｃ］２０分にわたる３５％乃至６５％のＣＨ３ＣＮ
［ｄ］２０分にわたる２５％乃至５５％のＣＨ３ＣＮ
［ｅ］２０分にわたる４０％乃至７０％のＣＨ３ＣＮ
［ｆ］２０分にわたる４５％乃至７５％のＣＨ３ＣＮ
［ｇ］２０分にわたる５０％乃至８０％のＣＨ３ＣＮ
［ｈ］２０分にわたる１０％乃至４０％のＣＨ３ＣＮ
［ｉ］２０分にわたる３０％乃至９０％のＣＨ３ＣＮ
Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ ５ミクロン ２５０ｘ４．６ｍｍの分析的なカラム上でＨＰＬＣを実行した。
【０４０７】
実施例６：化合物の細胞アッセイ。
化合物を、およそ１ｍｇの量で正確に計量し、標準的な細胞アッセイ（Ｃｅｒｅｐ ＳＡ）においてアッセイした。読み出し（ｒｅａｄｏｕｔ）は、アゴニストまたはアンタゴニストの様式のいずれかで、試験化合物によって処置された細胞中に生成されたｃＡＭＰの量である。使用されるアッセイは、グルカゴン（ヒト、ＣＨＯ細胞へとクローン化）およびＧＬＰ−１（ネズミの細胞株）の細胞アッセイ中のｃＡＭＰレベルの刺激であった。そのアッセイは、Ｃｈｉｃｃｈｉ， Ｇ．Ｇ．， ｅｔ ａｌ． （１９９７） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７２： ７７６５−７７６９ ａｎｄ Ｒｕｎｇｅ， Ｓ．， ｅｔ ａｌ． （２００３） Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １３８： ７８７−７９４に記載される。
【０４０８】
化合物ＥＵ−Ａ３９１に関して、ＧＬＣＲの細胞反応は変化せず、ＧＬＰ１Ｒの細胞反応は、４２０ｎＭのＥＣ５０で著しく高まる。
【０４０９】
【表３】
0006525456.tif 000083
【０４１０】
さらなる一連の細胞アッセイを、ｃＡＭＰ刺激またはアレスチン活性化の読み出しを使用する標準的な細胞アッセイ（ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ，ＬｅａｄＨｕｎｔｅｒアッセイ）を使用して実行した。
化合物を、およそ１ｍｇの量で正確に計量し、希釈およびアッセイのためにＤｉｓｃｏｖｅＲｘに輸送した。
使用されるアッセイは、細胞アッセイ中のグルカゴン（ヒト、ＣＨＯ細胞へのクローン化）およびＧＬＰ−１（ヒト、ＣＨＯ細胞へのクローン化）の受容体のためのものであった。
【０４１１】
【表４】
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【０４１２】
実施例７：化合物のインビボでのアッセイ − ｄｂ／ｄｂマウス
この研究用の６０匹の雌のｄｂ／ｄｂ Ｂ６ＢＫＳ（Ｄ）Ｌｅｐｒｄｂ／Ｊ（株０００６９７）マウスは、到着時におよそ８〜９週齢であった（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ， Ｍａｉｎｅ）。マウスを体重によって無作為化し、８匹の雌マウスの２つの処置群に、各々１００ｎｍｏｌｅｓ／ｋｇまたは３００ｎｍｏｌｅｓ／ｋｇの投与量レベルで、試験物、ＥＵ−Ａ９９４、ＥＵ−Ａ９９５、またはＥＵ−Ａ１０２６を投与した。８匹の雌マウスの１つの群は、ビヒクル対照としての役割を果たし、生理食塩水、ｐＨ７．４中で、ビヒクル、０．２％のＢＳＡを受けた。８匹の雌マウスのもう１つの群は、５０ｎｍｏｌｅｓ／ｋｇの投与量レベルで、陽性対照物、リラグルチドを受けた。試験物、ビヒクル、および陽性対照物を、６ｍＬ／ｋｇの投与量で皮下注射を介して、研究の間に、１日目のおよそ０、７、および２４時間で投与した。
【０４１３】
臨床観察を、無作為化前の受理日、および毎日最初から５まで行なわれた。体重を、受理日（ａｔ ｒｅｃｅｉｐｔ）、無作為化前、および１日目から５日目まで毎日、測定且つ記録した。摂食量を、１日目から５日目まで毎日、測定且つ記録した。グルコース分析用の血液サンプルを、予備試験で（−３日目）および１日目の最初の投与の０、１、２、４、８、１０、２４、４８、７２、および９６時間後に収集した。研究の終了時に、すべての動物を安楽死させ、さらなる評価なしで死骸を廃棄した。
【０４１４】
著しい体重の変化は、２日目および３日目にリラグルチドのためのビヒクルおよび高用量のＥＵ−Ａ９９４および高用量のＥＵ−Ａ１０２６に対して、および３日目および４日目に低用量のＥＵ−Ａ１０２６に対して顕著であった。摂食量の分析において、リラグルチドで処置された動物は、１日目および２日目のビヒクル、１日目の高用量のＥＵ−Ａ９９４、１日目および２日目の低用量のＥＵ−Ａ９９５、１日目の高用量のＥＵ−Ａ９９４とは著しく異なり、２日目の低用量および高用量のＥＵ−Ａ１０２６は、リラグルチドとは著しく異なった。１０時間でのリラグルチド並びに１０および２４時間での高用量のＥＵ−Ａ９９４に対するグルコース値は、ビヒクルとは著しく異なった。１０時間での低用量のＥＵ−Ａ９９５およびＥＵ−Ａ１０２６は、リラグルチドとは著しく異なった（図５）。類似した方法で、一連のもの（ｓｅｒｉｅｓ）からの他の類似体を、血中グルコース、体重および摂食量に対する効果に関して試験した。
【０４１５】
【表５】
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【０４１６】
実施例８：化合物のインビボでのアッセイ − ＤＩＯマウス
６０匹の食餌誘発性の肥満のＣ５７ＢＬ／６Ｊ雄マウスを、１４週齢でＪＡＸ ｌａｂｓから受け取った。マウスを、識別のために耳に刻み目をつけ、１つのケージ当たり１匹のマウスの密度でＨＥＰＡ濾過空気のある、別々の陽圧換気したポリカーボネートのケージに収容した。動物室は、制御された１２時間の明／暗のサイクルで、人工の蛍光照明で全体が照らされている。動物室の標準温度および相対湿度範囲は、それぞれ、２２±４℃および５０±１５％である。２．８乃至３．１のｐＨまで酸性化された、濾過した水道水、および高脂肪食（６０ｋｃａｌ％）が、自由に提供される。
【０４１７】
２週間の順化後、４０匹のマウスが、所望の体重範囲に基づいて選択され、以下のような群（ｎ＝１０）へと無作為化される。群１．処置されるビヒクル；群２．低用量の試験化合物；群３．中用量の試験化合物；群４．高用量の試験化合物。マウスに、２８日間皮下（ＳＣ）で毎日投薬しる。体重およびケージサイドの観察（ｃａｇｅ ｓｉｄｅ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ）を、毎日記録する。食物および水分の摂取量を毎週記録する。マウスは、１日目（投与前）および２６日目に全身の脂肪およびリーン成分（ｌｅａｎ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）を測定するためのＮＭＲ測定を受ける。０、１４および２７日目に、マウスを、経口グルコース負荷試験のために一晩絶食させる。翌日、第１血液サンプルを、テールニック（ｔａｉｌ ｎｉｃｋ）（ｔ＝０）を介して（尾部を切ることによって）収集する。その後、マウスに、１．０ｇ／ｋｇのグルコースの塊を投与する。グルコース投与の５、３０、６０および１２０分後にテールニックを介して血液サンプルを得て、血漿グルコースが、血糖計を使用してすぐに測定される。
【０４１８】
屠殺および組織収集：２９日目にマウスを屠殺する。終末血液を血清／血漿へと処理し、分割量が、グルコース、インスリンおよび脂質特性の分析のために送られる。体組成をＮＭＲによって測定する。最適な化合物特性は、ＯＧＴＴ中の減少したグルコース変動（ｅｘｃｕｒｓｉｏｎ）、減少した基礎的なインスリン分泌（増強されたグルコース依存性のインスリン分泌を有する）、減少した体重増加、減少した体脂肪量（除脂肪量に対しては最小限の効果）を示す。
【０４１９】
実施例９：化合物の使用
本明細書に記載される共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質は、肥満症、メタボリック症候群、心血管系疾患および糖尿病に関係する様々な疾患の予防および処置に有用である。適切に標識化された界面活性剤で修飾されたペプチドは、診断プローブとして使用され得る。
【０４２０】
代表的な送達レジメンは、経口、非経口（皮下、筋肉内および静脈内の注入）、直腸、頬側（舌下を含む）、経皮、吸引、眼、および鼻腔内を含む。ペプチドの送達のための魅力的且つ広く使用される方法は、制御放出の注射可能な製剤の皮下注射を伴う。本明細書に記載される共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質の適用のための他の投与経路は、皮下、鼻腔内および吸引の投与である。
【０４２１】
実施例１０．インスリン抵抗性の処置のための薬学的用途。
インスリン抵抗性またはメタボリック症候群が確認される、ヒト患者を、０．５ｍｇ／ｍＬ乃至１０ｍｇ／ｍＬの医薬製剤を含有している、およびベンジルアルコールなどの標準的な賦形剤を含有している生理食塩水中で、医薬製剤の溶液の技術分野で使用される標準的な噴霧器からの鼻腔内投与（２００μＬ）によってＥＵ−Ａ５９６で処置する。肥満症、高血中グルコースなどの症状の緩和のために必要に応じて、処置を繰り返す。類似した方法で、ヒドロフルオロアルカンなどを含有している蒸発溶媒中の、ＥＵ−Ａ５９６の溶液、および選択された賦形剤を、インスリン抵抗性を減少させるために必要に応じて、定量吸入器（ＭＤＩ）によって鼻腔内投与する。処置の効果を、血中グルコース値、ＨｂＡ１ｃ、体容量指数、及び／又は体重の測定、及び／又はウエスト・ヒップ比の測定を含む、標準試験を使用して決定する。
【０４２２】
類似した方法で、経頬、膣内、吸引、皮下、静脈内、眼内、または経口の経路による調節された量の投与を、身体における細胞上のＧＬＰ１Ｒ及び／又はＧＬＣＲの刺激のレベルを測定するために、および治療効果を測定するために試験する。
【０４２３】
配列
明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．１−３およびＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．７７４−７８３および７８５−７９７に対する配列を提供する。さらに、図１の表１は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．４−１２９を有する化合物ＥＵ−Ａ３００からＥＵ−Ａ４２５に対するＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図１の表１内の化合物、および示されるそれぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、本明細書に組み込まれる。さらに、図２の表２は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．１３０−３１７を有する化合物ＥＵ−Ａ４２６からＥＵ−５９９に対するＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図２の表２内の化合物、および示されるそれぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、本明細書に組み込まれる。さらに、図３の表３は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．３１８−７７３；７９８−８０６を有する化合物ＥＵ−Ａ７００からＥＵ−Ａ１１７４に対するＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図３の表３内の化合物、および示されるそれぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、本明細書に組み込まれる。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図１−３】
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【図１−４】
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【図１−５】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図２−４】
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【図２−５】
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【図２−６】
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【図２−７】
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【図２−８】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
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【図３−４】
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【図３−５】
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【図３−６】
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【図３−７】
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【図３−８】
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【図３−９】
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【図３−１０】
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【図３−１１】
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【図３−１２】
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【図３−１３】
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【図３−１４】
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【図３−１５】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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