(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
水銀含有物と、過マンガン酸カリウムを溶解した酸溶液とを、超音波を作用させながら接触させ、水銀を酸抽出する酸抽出工程と、
前記酸抽出工程において得られた水銀抽出溶液に還元剤を加えて、前記過マンガン酸カリウムを還元する還元工程と、
陰イオン交換樹脂を用いて、前記還元工程において得られた水銀含有溶液中の前記水銀を精製する水銀精製工程と、
免疫学的検定により前記水銀精製工程において得られた水銀含有脱離溶液中の前記水銀を分析する水銀分析工程と、を含むことを特徴とする水銀の分析方法。
【請求項２】
前記還元剤が、塩化ヒドロキシアンモニウムである請求項１に記載の水銀の分析方法。
【請求項３】
前記酸溶液が、硝酸を含む請求項１から２のいずれかに記載の水銀の分析方法。
【請求項４】
前記水銀精製工程が、前記還元工程において得られた前記水銀含有溶液を、陰イオン交換樹脂に通液し、前記水銀含有溶液中の少なくとも水銀を前記陰イオン交換樹脂に固定化する固定化処理と、
前記陰イオン交換樹脂に洗浄液を通液し、前記陰イオン交換樹脂を洗浄する洗浄処理と、
脱離溶液を前記陰イオン交換樹脂に通液し、前記水銀を前記陰イオン交換樹脂から脱離させる脱離処理と、を含む請求項１から３のいずれかに記載の水銀の分析方法。
【請求項５】
前記洗浄液が、水、塩酸、並びに塩酸及び水から選択される少なくとも１種である請求項４に記載の水銀の分析方法。
【請求項６】
前記脱離溶液が、緩衝液を含有する請求項４から５のいずれかに記載の水銀の分析方法。
【請求項７】
前記免疫学的検定が、酵素免疫測定方法、及びフロー式蛍光イムノアッセイのいずれかである請求項１から６のいずれかに記載の水銀の分析方法。
【請求項８】
前記水銀含有物が、石炭灰、及び汚泥の少なくともいずれかである請求項１から７のいずれかに記載の水銀の分析方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水銀の分析方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、水銀に関する水俣条約交渉の進展に伴い国内外で水銀汚染防止に対する関心が高まっており、石炭火力発電所にて生じた水銀を含む石炭灰や汚泥、廃棄物焼却施設にて生じた飛灰、下水処理場にて生じた水銀を含む汚泥等の水銀含有物の適切な処理、さらには有効利用が進められており、前記水銀含有物中の水銀を分析する機会が増加すると予測される。
【０００３】
これまで、前記水銀含有物中の水銀含有量の分析には、水銀含有物から水銀を抽出して測定するまでに長時間かかるという問題がある。そこで、前記水銀含有物から迅速に水銀を抽出して、還元気化−冷原子吸光装置、又は誘導結合プラズマ（ＩＣＰ）発光分光分析装置を用いて、石炭灰等の試料中の水銀を定量する石炭灰中水銀の測定方法が提案されている（例えば、特許文献１参照）。また、抽出が不要な測定として、加熱気化−冷原子吸光装置を用いて、試料中の水銀を定量する測定法が提案されている。
【０００４】
しかしながら、前記提案は、還元気化−冷原子吸光装置、誘導結合プラズマ（ＩＣＰ）発光分光分析装置、加熱気化−冷原子吸光装置等の装置を用いており、前記装置を有さない施設においては水銀の分析をすることができないという問題がある。また、還元気化−冷原子吸光装置、誘導結合プラズマ（ＩＣＰ）発光分析装置等の抽出工程を要する測定法では、石炭灰等の試料から水銀を抽出する工程が必須であり、煩雑な前処理を実施する実験設備が必要である。
そこで、前記装置を使用せず、簡便な免疫学的検定などの測定方法を利用するために、陰イオン交換樹脂を用いて分析前に水銀を前処理する水銀分析前処理方法が提案されている（例えば、特許文献２参照）。
【０００５】
しかしながら、前記提案では、水銀を迅速、及び簡便に分析するために、前記石炭灰中水銀の分析方法における酸抽出方法、及び水銀分析前処理方法を組み合わせたところ、水銀の回収率が低くなってしまい、正確に水銀の分析をすることができないという問題がある。
【０００６】
そこで、水銀の回収率が高く、水銀を迅速、及び簡便に分析することができる水銀の分析方法が望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２０１４−１７３８７８号公報
【特許文献２】特開２０１４−００２１３１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、従来における前記諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、水銀の回収率が高く、水銀を迅速、及び簡便に分析することができる水銀の分析方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
前記課題を解決するための手段としては、以下のとおりである。即ち、本発明の水銀の分析方法は、水銀含有物と、過マンガン酸カリウムを溶解した酸溶液とを、超音波を作用させながら接触させ、水銀を酸抽出する酸抽出工程と、前記酸抽出工程において得られた水銀抽出溶液に還元剤を加えて、前記過マンガン酸カリウムを還元する還元工程と、陰イオン交換樹脂を用いて、前記還元工程において得られた水銀含有溶液中の前記水銀を精製する水銀精製工程と、免疫学的検定により前記水銀精製工程において得られた水銀含有脱離溶液中の前記水銀を分析する水銀分析工程と、を含む。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、水銀の回収率が高く、水銀を迅速、及び簡便に分析することができる水銀の分析方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、実施例２、実施例４、実施例６、実施例８、比較例１２、比較例１４、比較例１６、及び比較例１８におけるフロー式蛍光イムノアッセイで測定された相対信号値（％）を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
（水銀の分析方法）
本発明の水銀の分析方法は、酸抽出工程、還元工程、水銀精製工程、及び水銀分析工程を含み、さらに必要に応じて、その他の工程を含む。
【００１３】
本発明者らは、酸抽出工程後に、前記酸抽出工程において得られた水銀を含有する溶液を水銀精製工程及び水銀分析工程に供すると、水銀の回収率が低くなることについて、以下のことを知見した。
前記酸抽出工程において得られた水銀を含有する溶液を、水銀精製工程に用いられる陰イオン交換樹脂が入った容器に通液すると、前記酸抽出工程において得られた水銀を含有する溶液に含まれる過マンガン酸カリウムにより、前記陰イオン交換樹脂の表面に結合している官能基の性質が変化し、前記陰イオン交換樹脂は水銀を吸着することはできるが、前記容器に脱離液を通液しても水銀が脱離されないため、水銀の回収率が低くなることを知見した。そこで、前記酸抽出工程後に、還元工程を行うことにより、前記酸抽出工程において得られた水銀を含有する溶液中に含まれる過マンガン酸カリウムを、還元剤を用いて還元することで、その後、前記陰イオン交換樹脂が入った容器に通液しても陰イオン交換樹脂の表面に結合している官能基の性質が変化することなく、水銀を高い回収率で回収することができることを見出した。
【００１４】
＜酸抽出工程＞
前記酸抽出工程は、水銀含有物と、過マンガン酸カリウムを溶解した酸溶液とを、超音波を作用させながら接触させ、水銀を酸抽出する工程である。前記酸抽出工程としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜公知の酸抽出方法を選択することができ、さらに必要に応じてその他の処理を含むことが好ましい。
【００１５】
＜＜水銀含有物＞＞
前記水銀含有物としては、水銀を含有していれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、石炭火力発電所における石炭灰、汚泥；下水処理場における汚泥；土壌；工業排水；焼却後の廃棄物；河川水；食品；生物；生物由来の試料などが挙げられる。
【００１６】
前記水銀含有物中の水銀の濃度としては、０．００５ｍｇ／ｋｇ以上１０ｍｇ／ｋｇ以下が好ましく、０．０１ｍｇ／ｋｇ以上１ｍｇ／ｋｇ以下がより好ましい。前記水銀の濃度が、０．００５ｍｇ／ｋｇ以上であると、十分な分析精度を得ることができ、１０ｍｇ／ｋｇ以下であると、酸抽出工程において、水銀を十分に抽出することができる。なお、水銀の濃度が、１０ｍｇ／ｋｇを超える場合は、酸抽出に用いる水銀含有物の含有量を減らすことで、前記水銀の濃度を調節することができる。
【００１７】
＜＜過マンガン酸カリウム＞＞
前記酸溶液中の過マンガン酸カリウムの含有量としては、酸溶液全量に対して、０．１ｇ／Ｌ以上５ｇ／Ｌ以下が好ましく、０．５ｇ／Ｌ以上３ｇ／Ｌ以下がより好ましく、０．５ｇ／Ｌ以上２ｇ／Ｌ以下がさらに好ましく、１ｇ／Ｌが特に好ましい。前記含有量が、０．１ｇ／Ｌ以上５ｇ／Ｌ以下であると、水銀含有物から水銀を効率よく抽出することができる。
【００１８】
＜＜酸溶液＞＞
前記酸溶液中の酸としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、塩酸、硝酸、硫酸などが挙げられる。これらの中でも、硝酸、硫酸が好ましく、硝酸がより好ましい。前記酸溶液は、酸抽出直前に調製することが好ましい。
【００１９】
前記酸の濃度としては、水銀含有物から水銀を酸溶液中に十分に抽出できれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、０．１Ｍ以上が好ましく、０．１Ｍ以上３Ｍ以下がより好ましく、０．１Ｍ以上１Ｍ以下がさらに好ましく、０．５Ｍが特に好ましい。前記酸の濃度が、０．１Ｍ以上であれば、水銀含有物中の水銀を十分に酸溶液に抽出することができる。
【００２０】
＜＜超音波＞＞
前記超音波の処理条件としては、市販されている一般的な超音波洗浄装置で作用させることが可能な条件を適宜採用すれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
前記超音波の出力としては、５０Ｗ以上２００Ｗ以下が好ましく、１００Ｗ以上１５０Ｗ以下がより好ましく、１２０Ｗが特に好ましい。
前記超音波の発振周波数としては、２０ｋＨｚ以上６０ｋＨｚ以下が好ましく、３０ｋＨｚ以上５０ｋＨｚ以下がより好ましく、４０ｋＨｚが特に好ましい。
前記超音波の処理時間としては、２０分間以上２時間以下が好ましく、４０分間以上１時間３０分間以下がより好ましく、５０分間以上１時間１０分間以下が特に好ましい。
【００２１】
前記超音波洗浄装置としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、装置名：ＡＳ８２ＧＴＵ（アズワン株式会社製）などが挙げられる。
【００２２】
前記酸抽出工程における水銀含有物と酸溶液との割合は、イムノアッセイで定量可能な量の水銀が酸溶液に抽出できれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。具体例を挙げると、例えば、石炭灰中の水銀濃度は、およそ０．０１ｍｇ−Ｈｇｋｇ−１（以下、「ｍｇｋｇ−１」とも称することがある）以上１ｍｇ−Ｈｇｋｇ−１以下であることが報告されている（Ｊ．Ｃ．Ｈｏｗｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｇｒ．Ｅｎｅｒｇ．Ｃｏｍｂｕｓｔ．Ｓｃｉ．，３６，５１０−５２９，（２０１０））。免疫学的検定においては、検出限界が０．１２μｇ／Ｌレベルの水銀の分析が可能である（Ｙ．Ｄａｔｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，８５，４３４−４４０，（２０１３））。これらの情報に基づいて、容器内に収容する酸溶液と石炭灰との割合を適宜設定すればよい。例えば、免疫学的検定で測定を行う場合には、石炭灰０．５ｇに対して酸溶液を２５ｍＬとすればよい。
【００２３】
前記酸抽出工程としては、試薬として、過マンガン酸カリウム、及び硝酸を使用する場合、ドラフトチャンバー等の排気設備内での操作を必要としない。したがって、前記酸抽出工程は、排気設備を有しない施設においても容易に導入することができる。
【００２４】
−容器−
前記酸抽出工程において用いられる容器としては、耐酸性を有し、水銀が吸着、揮散することのない材質のものであれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ポリプロピレン（ＰＰ）製、ガラス製、テフロン（登録商標）製などが挙げられる。
前記ガラス製や前記テフロン（登録商標）製の容器としては、超音波伝播性にも優れているため好適に使用できる。
前記酸抽出工程においては、試薬として、過マンガン酸カリウム、及び硝酸を使用する場合、加熱等の処理を必要としないことから、ねじ口瓶等の簡易な容器を使用することができる。
【００２５】
前記酸抽出工程における処理温度としては、２０℃以上５０℃以下が好ましく、３５℃以上４５℃以下がより好ましい。
前記酸抽出工程における処理時間としては、３０分間以上３時間以下が好ましく、４０分間以上２時間以下がより好ましい。
【００２６】
−その他の処理−
前記その他の処理としては、例えば、前記酸抽出した後に、ろ過処理を含むことが好ましい。
前記ろ過処理としては、例えば、ろ過膜を用いることができる。
前記ろ過膜の平均孔径としては、０．２μｍ以上１．０μｍ以下が好ましく、０．４５μｍがより好ましい。
前記ろ過膜の材質としては、例えば、ポリテトラフルオロエチレンなどが挙げられる。
【００２７】
前記ろ過膜としては、市販品を使用してもよく、前記市販品としては、例えば、商品名：Ｄｉｓｍｉｃ（登録商標）−２５ＨＰ０４５ＡＮ（東洋濾紙株式会社製）、商品名：ＧＤ／Ｘシリンジフィルター  ０．４５ＰＴＦＥ（ＧＥヘルスケア・ジャパン株式会社製）などが挙げられる。
【００２８】
＜還元工程＞
前記還元工程は、前記酸抽出工程において得られた水銀抽出溶液に還元剤を加えて、前記過マンガン酸カリウムを還元する工程である。前記還元工程としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜公知の還元方法を選択することができる。
水銀の分析装置として、従来から用いられている加熱気化−冷原子吸光装置、誘導結合プラズマ（ＩＣＰ）発光分光分析装置等の装置を使用する場合は、酸抽出工程における過マンガン酸カリウムが含まれていても問題とならない場合が多いが、本発明のように免疫学的検定を使用する場合は、水銀以外の不純物の除去等の点から、陰イオン交換樹脂を用いた水銀精製工程を経る必要がある。そこで、水銀以外の不純物の除去のため、前記酸抽出工程において得られた水銀抽出溶液を、そのまま前記水銀精製工程に用いる陰イオン交換樹脂が入った容器（カラム）に通液すると、前記水銀抽出溶液に含まれる過マンガン酸カリウムによって陰イオン交換樹脂の表面に結合している官能基の性質が変化し、前記陰イオン交換樹脂に吸着した水銀の脱離ができず、水銀の回収率が低下してしまうという問題がある。そのため、前記還元工程において、前記過マンガン酸カリウムを還元することにより、上記問題を解決し、効率的に水銀を精製することができる。
【００２９】
前記還元剤としては、過マンガン酸カリウムを還元でき、水銀を気化（Ｈｇ２＋→Ｈｇ）しなければ特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。例えば、化学分析において多用される還元剤として、塩化ヒドロキシルアンモニウム、水素化ホウ素ナトリウム、塩化スズ、シュウ酸ナトリウムなどが挙げられる。これらの中でも、水銀イオンを気化しない点から、シュウ酸ナトリウム、塩化ヒドロキシアンモニウムが好ましい。また、シュウ酸ナトリウムは水への溶解度が低く、抽出液に加える還元剤溶液量が不必要に増えることから、水への溶解度が高い塩化ヒドロキシルアンモニウムがより好ましい。
【００３０】
前記還元剤の濃度としては、０．０１ｇ／Ｌ以上１０ｇ／Ｌ以下が好ましく、０．０５ｇ／Ｌ以上５ｇ／Ｌ以下がより好ましい。
前記酸抽出工程において得られた水銀抽出溶液と、前記還元剤との反応時間としては、前記水銀抽出溶液中に含まれる過マンガン酸カリウムを還元できれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。なお、前記過マンガン酸カリウムの還元の判断としては、目視にて過マンガン酸カリウムの紫色の消失を指標とすることができる。
前記酸抽出工程において得られた水銀抽出溶液と、前記還元剤との反応温度としては、２０℃以上４０℃以下が好ましく、２５℃以上３５℃以下がより好ましい。
【００３１】
＜水銀精製工程＞
前記水銀精製工程は、陰イオン交換樹脂を用いて、前記還元工程において得られた水銀含有溶液中の前記水銀を精製する工程である。前記水銀精製工程としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜公知の水銀精製方法を選択することができる。前記水銀精製工程は、免疫学的検定により水銀を分析する水銀分析工程に供するときに、他の金属を除去して水銀の分析の測定精度を上げるために必要である。
【００３２】
前記水銀精製工程としては、固定化処理と、洗浄処理と、脱離処理と、を含むことが好ましい。
【００３３】
＜＜固定化処理＞＞
前記固定化処理は、還元工程において得られた水銀含有溶液を、陰イオン交換樹脂に通液し、少なくとも水銀を前記陰イオン交換樹脂に固定化する処理である。前記固定化処理としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜公知の固定化方法を選択することができる。
【００３４】
前記水銀含有溶液としては、還元工程において得られた水銀を含有する溶液であれば特に制限はなく、水銀以外の金属として、マンガン、マグネシウム、鉄、亜鉛、鉛、アルミニウム、カドミウム、銅、クロム、カルシウムなどが含有されていてもよい。
なお、本明細書において、前記水銀及び前記金属は、イオン状態ではない水銀及び水銀以外の金属であってもよいし、イオン状態の水銀及び水銀以外の金属、即ち、水銀イオン及び水銀イオン以外の金属イオンであってもよい。
【００３５】
前記陰イオン交換樹脂としては、その材質、形状、大きさ、構造など、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
前記陰イオン交換樹脂の形状としては、例えば、ビーズ状、繊維状、膜状などが挙げられる。これらの中でも、充填性に優れる点から、ビーズ状が好ましい。
前記陰イオン交換樹脂の形状がビーズ状である場合、その大きさとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、充填性に優れる点から、粒径分布が３５μｍ以上１４０μｍ以下（１００メッシュ以上４００メッシュ以下に相当）であることが好ましい。
前記陰イオン交換樹脂としては、４級アンモニウム塩基を有することが好ましい。
前記陰イオン交換樹脂としては、市販品を用いることができる。前記市販品としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、商品名：ＤｏｗｅｘＴＭ  １×２  １００−２００、商品名：ＤｏｗｅｘＴＭ  １×２  ２００−４００（以上、ダウ・ケミカル社の製造で和光純薬工業株式会社から購入可能）などが挙げられる。
【００３６】
前記陰イオン交換樹脂としては、容器に収容されていることが好ましい。前記容器に充填することにより、陰イオン交換樹脂が移動しないようにすることができ、前記陰イオン交換樹脂による層の厚みを均一にすることができる。
【００３７】
以下、本明細書において記載する種々の好ましい数値範囲は、前記陰イオン交換樹脂を容器に詰めた際に容器内における前記陰イオン交換樹脂が占める容器底面に対する体積で、０．５μＬ/ｍｍ２以上２０μＬ/ｍｍ２以下が好ましく、２．０μＬ/ｍｍ２以上１０μＬ/ｍｍ２以下が好ましい。
【００３８】
−容器−
前記容器としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、シリンジなどが挙げられる。前記シリンジの大きさとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００３９】
前記固定化処理において、前記陰イオン交換樹脂は、例えば、前記容器に充填する際に、前記容器の上端及び下端の両端において、ろ紙等の液透過材料により挟み込まれた態様で使用されることが好ましい。
【００４０】
−通液−
前記通液の方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、所定量の前記還元工程において得られた水銀含有溶液を、所定量の前記陰イオン交換樹脂が詰まった容器内部を通過させる方法などが挙げられる。
【００４１】
通液させる前記還元工程において得られた水銀含有溶液の量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、０．５ｍＬ以上１００ｍＬ以下が好ましく、２ｍＬ以上１００ｍＬ以下がより好ましい。通液させる前記水銀含有溶液の量が、前記好ましい範囲内であると、少量の試料で高精度の水銀分析測定が可能な点で有利である。
前記通液は、１回で行ってもよく、複数回に分けて行ってもよい。例えば、５ｍＬの通液を１０回行い合計５０ｍＬの通液を行ってもよい。
前記水銀含有溶液の量が多い場合、例えば、３０ｍＬ以上１００ｍＬ以下の場合には、前記脱離工程における脱離溶液の量を前記水銀含有溶液の量（ｍＬ）に対して、好ましくは１／２０以上１／２以下、より好ましくは１／１５以上１／７以下にすることにより、前記水銀含有溶液中の水銀を濃縮して水銀分析工程に供することができ、水銀分析の感度が向上できる。
【００４２】
前記通液の速度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、０．１ｍＬ／分間以上５０ｍＬ／分間以下が好ましく、０．２ｍＬ／分間以上２０ｍＬ／分間以下がより好ましく、０．３ｍＬ／分間以上１０ｍＬ／分間以下がさらに好ましく、２．０ｍＬ／分間以上６．０ｍＬ／分間以下が特に好ましい。
前記通液は、試料溶液供給部材を用いて行うことができる。前記試料溶液供給部材としては、例えば、シリンジなどが挙げられる。
【００４３】
前記水銀含有溶液の前記通液は、吸引部材を用いて行うことが好ましい。前記吸引部材を用いることにより、前記吸引部材を用いずに通液させる場合（自然に通液させる場合）に比べて、通液速度を早くすることができる。また、前記吸引部材を用いることにより、前記通液速度を精度よく制御できる。
前記吸引部材としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、吸引ポンプなどが挙げられる。前記吸引ポンプとしては、例えば、ダイアフラムポンプ、プランジャーポンプなどが挙げられる。
【００４４】
前記固定化処理においては、前記水銀以外の金属が前記陰イオン交換樹脂に固定化されてもよい。固定化された前記水銀以外の金属は、後述する洗浄処理により、前記陰イオン交換樹脂から除去することができる。
【００４５】
＜＜洗浄処理＞＞
前記洗浄処理は、陰イオン交換樹脂に洗浄液を通液し、前記陰イオン交換樹脂を洗浄する処理である。前記洗浄処理としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜公知の洗浄方法を選択することができる。
【００４６】
−洗浄液−
前記洗浄水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、塩酸、塩酸及び水などが挙げられる。これらの中でも、前記陰イオン交換樹脂から前記水銀をほとんど脱離させることなく、前記水銀以外の金属を除去できる点から、塩酸及び水が好ましい。
前記塩酸の濃度としては、１０ｍＭ以上１，０００ｍＭ以下が好ましく、５０ｍＭ以上５００ｍＭ以下がより好ましい。
前記塩酸及び水とは、塩酸で洗浄後に水で洗浄すること、あるいは水で洗浄後に塩酸洗浄することを意味する。
前記塩酸及び水による洗浄条件としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、１００ｍＭ塩酸５ｍＬ以上で洗浄後、水５ｍＬ以上で洗浄することが好ましい。
【００４７】
前記洗浄の方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、所定量の前記洗浄液を、所定量の前記陰イオン交換樹脂を充填した容器内部を通過させる方法などが挙げられる。
前記洗浄の際の前記洗浄水の量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、１回の洗浄において、１ｍＬ以上１０ｍＬ以下が好ましく、３ｍＬ以上７ｍＬ以下がより好ましい。
前記洗浄の際の洗浄回数としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、１回以上３回以下が好ましい。
前記洗浄の際の通液の速度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、０．１ｍＬ／分間以上５０ｍＬ／分間以下が好ましく、０．２ｍＬ／分間以上２０ｍＬ／分間以下がより好ましく、０．３ｍＬ／分間以上１０ｍＬ／分間以下がさらに好ましく、２．０ｍＬ／分間以上８．０ｍＬ／分間以下が特に好ましい。
前記洗浄は、洗浄液供給部材を用いて行うことができる。前記洗浄液供給部材としては、例えば、シリンジなどが挙げられる。
【００４８】
前記洗浄液の通液としては、吸引部材を用いて行うことが好ましい。前記吸引部材を用いることにより、前記吸引部材を用いずに通液させる場合（自然に通液させる場合）に比べて、通液速度を早くすることができる。また、前記吸引部材を用いることにより、前記通液速度を精度よく制御できる。
前記吸引部材としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例え
ば、吸引ポンプなどが挙げられる。前記吸引ポンプとしては、例えば、ダイアフラムポン
プ、プランジャーポンプなどが挙げられる。
【００４９】
前記洗浄処理により、前記水銀以外の金属を前記陰イオン交換樹脂から除去することができる。
【００５０】
＜＜脱離処理＞＞
前記脱離処理は、脱離溶液を前記陰イオン交換樹脂に通液し、前記水銀を前記陰イオン交換樹脂から脱離させる処理である。前記脱離処理としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜公知の脱離方法を選択することができる。
【００５１】
前記脱離溶液としては、前記陰イオン交換樹脂から前記水銀を脱離させることができる溶液であれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、緩衝液を含有することが好ましく、前記水銀をキレートして水銀錯体を形成するキレート剤と前記緩衝液とを含有してもよい。前記脱離溶液が前記緩衝液を含有することにより、水銀分析に抗体を用いる場合、ｐＨ調整をすることなく、水銀分析が可能になる。前記水銀脱離溶液が前記キレート剤と前記緩衝液とを含有すること、即ち、キレート剤含有緩衝液であることにより、水銀分析に抗体を用いる場合、ｐＨ調整やキレート剤を新たに添加することなく、抗体と混合することで水銀分析が可能になる。
また、前記脱離溶液は、硝酸、硫酸及びリン酸の少なくとも１種を含有することが好ましく、硝酸及び硫酸の少なくともいずれかを含有することがより好ましい。前記水銀脱離溶液における前記硝酸、前記硫酸及び前記リン酸の濃度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、脱離能力の点から、０．１ｍＭ以上１，０００ｍＭ以下が好ましく、１ｍＭ以上５００ｍＭ以下がより好ましく、１０ｍＭ以上１００ｍＭ以下が特に好ましい。
【００５２】
−緩衝液−
前記緩衝液としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、グッドの緩衝液、リン酸緩衝液、トリス緩衝液（トリスヒドロキシメチルアミノメタン緩衝液）、リン酸緩衝生理食塩水などが挙げられる。
【００５３】
前記脱離溶液中の前記緩衝液の濃度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、水銀の脱離能力に優れる点から、５０ｍＭ以上が好ましく、５０ｍＭ以上１，０００ｍＭ以下が好ましく、５０ｍＭ以上５００ｍＭ以下がより好ましい。
【００５４】
−キレート剤−
前記キレート剤としては、前記水銀をキレートして水銀錯体を形成するものであれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）、テトラエチレントリアミン（ＴＥＴ）、エチレンジアミン（ＥＤＡ）、ジエチレントリアミン（ＤＥＴＡ）、クエン酸、シュウ酸、クラウンエーテル、ニトリロテトラ酢酸、エチレンジアミンテトラ酢酸二ナトリウム、エチレンジアミンテトラ酢酸ナトリウム、エチレンジアミンテトラ酢酸三ナトリウム、ペニシラミン、ペンテテートカルシウム三ナトリウム、ペンテト酸、スクシメル、エチレンジアミンテトラ酢酸トリエンチンなどが挙げられる。これらは、１種単独で用いても、２種以上を併用してもよい。これらの中でも、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）がより好ましい。
【００５５】
前記脱離溶液中の前記キレート剤の濃度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、０．１μＭ以上１０ｍＭ以下が好ましく、０．５μＭ以上５００μＭ以下がより好ましく、１μＭ以上１００μＭ以下が特に好ましい。前記濃度が、前記特に好ましい範囲内であると、脱離後の水銀が安定して溶液中に存在できる点、及び高い感度でイムノアッセイができる点で有利である。
【００５６】
前記脱離溶液が前記緩衝液を含有する場合の前記脱離溶液のｐＨとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、１．０以上８．５以下が好ましく、５．０以上８．０以下がより好ましく、６．５以上７．５以下が特に好ましい。前記ｐＨが、前記好ましい範囲内であると、溶存水銀（Ｈｇ２＋）が安定する点で有利であり、前記ｐＨが、前記特に好ましい範囲内であると、さらに、ｐＨの調整を行うことなく、抗体を用いたイムノアッセイに使用できる点で有利である。
前記ｐＨを調整する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、水銀の脱離能力に優れる点から、硝酸、硫酸、リン酸、塩酸、水酸化ナトリウム、及び水酸化カリウムの少なくとも１種を含む溶液で調整することが好ましく、硝酸、硫酸、リン酸の少なくとも１種で調整することがより好ましい。
【００５７】
前記脱離溶液の使用量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、１回の通液において、０．５ｍＬ以上１５ｍＬ以下が好ましく、２．０ｍＬ以上７．５ｍＬ以下がより好ましい。
前記通液の回数としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、１回以上が好ましく、１回以上５回以下がより好ましく、２回が特に好ましい。
前記通液の速度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、０．１ｍＬ／分間以上５０ｍＬ／分間以下が好ましく、０．２ｍＬ／分間以上２０ｍＬ／分間以下がより好ましく、０．３ｍＬ／分間以上１０ｍＬ／分間以下がさらに好ましく、２．０ｍＬ／分間以上８．０ｍＬ／分間以下が特に好ましい。
【００５８】
前記脱離溶液の前記通液としては、吸引部材を用いて行うことが好ましい。前記吸引部材を用いることにより、前記吸引部材を用いずに通液させる場合（自然に通液させる場合）に比べて、通液速度を早くすることができる。また、前記吸引部材を用いることにより、前記通液速度を精度よく制御できる。
前記吸引部材としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、吸引ポンプなどが挙げられる。前記吸引ポンプとしては、例えば、ダイアフラムポンプ、プランジャーポンプなどが挙げられる。
【００５９】
前記通液は、水銀脱離溶液供給部材を用いて行うことができる。前記水銀脱離溶液供給
部材としては、例えば、シリンジなどが挙げられる。
【００６０】
＜水銀分析工程＞
前記水銀分析工程は、免疫学的検定により水銀を定量する工程である。前記水銀分析工程としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜公知の水銀分析方法を選択することができる。
【００６１】
前記免疫学的検定としては、水銀を定量できれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、酵素免疫測定方法（ｅｎｚｙｍｅ  ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ：ＥＩＡ）、フロー式蛍光イムノアッセイなどが挙げられる。
【００６２】
前記免疫学的検定における水銀の回収率としては、脱離溶液中に含まれる水銀全量に対して、８０％以上１２０％以下が好ましく、９０％以上１１０％以下が好ましく、９５％以上１０５％以下がより好ましい。
【００６３】
前記免疫学的検定における変動係数（ＣＶ）としては、２０％以下が好ましく、１０％以下がより好ましく、５％以下が特に好ましい。
【００６４】
−酵素免疫測定方法（ＥＩＡ）−
前記酵素免疫測定方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ｅｍｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ（以下、「ＥＬＩＳＡ」とも称することがある）などが好適に挙げられる。
【００６５】
前記ＥＬＩＳＡとしては、例えば、競合法、サンドイッチ法、直接吸着法、間接吸着法などが挙げられる。
【００６６】
前記ＥＩＡに用いる一次抗体としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、水銀−ＥＤＴＡ錯体に対して顕著な結合性を示す点から、受託番号：ＦＥＲＭ  Ｐ−１９７０３として寄託されているハイブリドーマから産生されたモノクローナル抗体（以下、「ＮＸ２Ｃ３」とも称することがある）、前記抗体が有する結合部位のアミノ酸配列情報を利用した機能性タンパク質が好ましい。
【００６７】
前記ＥＩＡに用いる二次抗体としては、前記一次抗体に対して顕著な結合性を示せば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、商品名：Ｐｅｒｏｘｙｄａｓｅ  ｌａｂｅｌｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｏ  ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（ＫＰＬ社製）が好ましい。
【００６８】
前記ＥＩＡにおける吸光度の測定としては、マイクロプレートリーダー（装置名：ＥＬ８０８、ＢＩＯ−ＴＥＫ  ＩＮＳＴＲＵＭＥＮＴＳ社製）などを用いることができる。
【００６９】
−フロー式蛍光イムノアッセイ−
前記フロー式蛍光イムノアッセイに用いる一次抗体としては、前記ＥＩＡで用いることができる一次抗体と同様のものを用いることができる。
【００７０】
前記フロー式蛍光イムノアッセイに用いる二次抗体としては、前記一次抗体に対して顕著な結合性を示し、かつ蛍光標識されている抗体であれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、Ａｌｅｘａ６４７  ｌａｂｅｌｅｄ  ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）  ｇｏａｔ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ社製）が好ましい。
【００７１】
前記フロー式蛍光イムノアッセイとしては、市販の装置を用いて測定することができ、前記市販の装置としては、例えば、フロー式蛍光イムノアッセイ装置（装置名：ＫｉｎＥｘＡ  ３２００、サピダイン社製）などが挙げられる。
【００７２】
前記フロー式蛍光イムノアッセイ装置における流速としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、１００μＬ／分間以上４００μＬ／分間以下が好ましく、２００μＬ／分間以上３００μＬ／分間以下がより好ましい。
【実施例】
【００７３】
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。なお、単位の「Ｍ」は、ｍｏｌ／Ｌである。
【００７４】
（実施例１）
＜酸抽出工程＞
抽出溶媒として１ｇ／Ｌ過マンガン酸カリウム、及び０．５Ｍ硝酸からなる酸溶液を調製した。試料として石炭灰（石炭灰認証標準物質：ＪＳＡＣ０５２１、水銀濃度：０．１４０ｍｇ／ｋｇ）０．５ｇを５０ｍＬボトル（商品名：アイボーイ広口５０ｍＬ、ポリプロピレン製、アズワン株式会社製）に採取し、続いて酸溶液２５ｍＬを添加した。酸抽出条件としては、特開２０１４−１７３８７８号公報の記載に従い、抽出時間は１時間とし、抽出時には超音波洗浄機（装置名：ＡＳ８２ＧＴＵ、アズワン株式会社製）を用いて超音波を照射した。酸抽出後の抽出溶液は、平均孔径が０．４５μｍのＰＴＦＥシリンジフィルター（Ｄｉｓｍｉｃ（登録商標）−２５ＨＰ０４５ＡＮ、東洋濾紙株式会社製）でろ過し、固形分を除去した。ろ過したろ過液は、室温まで放冷し、水銀を含有する酸抽出溶液２５ｍＬを得た。前記酸抽出溶液４ｍＬに対して、純水９０ｍＬ、硫酸（１＋１）、１０ｍＬ塩化スズ溶液（１００ｇ／Ｌ塩化スズ二水和物を含む２．８３質量％硫酸水溶液）５ｍＬを加え、還元気化−冷原子吸光測定装置（装置名：Ｈｇ２００、平沼産業株式会社製）を用いて水銀の含有量を測定した結果、水銀の含有量は、０．１３９ｍｇ／ｋｇ、変動係数（ＣＶ）は４％であり、回収率は約１００％であった。
【００７５】
＜還元工程＞
前記酸抽出溶液２１ｍＬに、還元剤である１００ｇ／Ｌ塩化ヒドロキシルアンモニウム０．１５ｍＬ（終濃度として０．５３５ｇ／Ｌ）、１Ｍ塩酸２．７ｍＬ（終濃度として０．１Ｍ）、純水４．０５ｍＬを添加し、過マンガン酸カリウムを還元し水銀含有溶液を得た。前記過マンガン酸カリウムの還元の判断としては、目視にて過マンガン酸カリウムの紫色の消失を指標とした。
【００７６】
＜水銀精製工程＞
−陰イオン交換樹脂入り容器の作製−
容器として容量が５ｍＬのプラスチックシリンジ（商品名：テルモシリンジＳＳ−０５ＳＺ、テルモ株式会社製）を用い、プラスチックシリンジ底部に外径１５ｍｍに切断したセルロースフィルター（商品名：Ｎｏ．５Ｂ、アドバンテック株式会社製）を配した。続いて前記セルロースフィルター上部に、陰イオン交換樹脂（商品名：ＤｏｗｅｘＴＭ  １×２  ２００−４００、ダウ・ケミカル社製、メッシュサイズ：２００以上４００以下、体積３５０μＬ）の懸濁液（樹脂：純水＝１：１（体積比））を展開した。約１分間、樹脂層が底面に沈降するのを待ち、上部から外径１５ｍｍに切断したセルロースフィルター（プラスチックシリンジ底部に用いたものと同形）を挿入することで樹脂を固定し、陰イオン交換樹脂入り容器（カラム）を作製した。作製した陰イオン交換樹脂入り容器は、吸引ポンプを接続したマニフォールドに設置し、５ｃｍＨｇで吸引することで、平均流量が１．５ｍＬ／分間以上２ｍＬ／分間以下にて運転した。
【００７７】
−陰イオン交換樹脂入り容器のコンディショニング−
作製した陰イオン交換樹脂入り容器に対して、０．１Ｍ塩酸５ｍＬを添加した後、吸引により通液し、陰イオン交換樹脂入り容器内を平衡化させた。
【００７８】
＜＜固定化処理、洗浄処理、及び脱離処理＞＞
前記還元工程において得られた水銀含有溶液を、陰イオン交換樹脂入り容器に通液することで、前記水銀含有溶液に含まれる水銀を陰イオン交換樹脂に吸着させた。次に、塩酸５ｍＬ（０．１Ｍ）、純水５ｍＬを順次通液させて洗浄を行い、続いて、脱離溶液（１００ｍＭトリス硝酸緩衝液、ｐＨ７．５）５ｍＬを通液し、陰イオン交換樹脂に吸着させた水銀を脱離させ、水銀含有脱離溶液を得た。前記酸抽出工程と同様にして、前記水銀含有脱離溶液４ｍＬを還元気化−冷原子吸光測定装置（装置名：Ｈｇ２００、平沼産業株式会社製）を用いて、水銀回収量を測定した。その結果、水銀の回収量は０．０９７ｍｇ／ｋｇであり、水銀回収率は７０％（変動係数（ＣＶ）：５％、ｎ＝４）であった。結果を表３に示す。また、脱離溶液に含まれる水銀以外の金属量を誘導結合プラズマ（ＩＣＰ）発光分析装置を用いて測定した。結果を表５に示す（実施例１）。
【００７９】
＜＜水銀分析工程＞＞
−ＥＬＩＳＡ−
ＥＬＩＳＡによる測定に際し、疑似抗原タンパク質として、カドミウム（Ｃｄ）−エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）−ウシ血清アルブミン(ＢＳＡ）（以下、「Ｃｄ−ＥＤＴＡ−ＢＳＡ」とも称することがある)を固定化した９６穴マイクロプレート（商品名：ＥＬＩＳＡ  ＆  ＡＳＳＡＹ  ＰＬＡＴＥ、イワキ株式会社製）を作製した。具体的には、各ウェルに２μｇ／ｍＬのＣｄ−ＥＤＴＡ−ＢＳＡを含む疑似抗原タンパク質溶液（５０ｍＭ  ２−モルホリノエタンスルホン酸緩衝液、ｐＨ６．５、以下、「ＭＥＳ緩衝液」とも称することがある）５０μＬを添加し、４℃で一晩（約１６時間）インキュベートした。
【００８０】
脱離処理で得た水銀含有脱離溶液に、終濃度が１０μＭとなるように２０ｍＭエチレンジアミンテトラ酢酸四ナトリウム（株式会社同仁化学製）を添加して混合した。続いて、終濃度１ｎＭとなるように１００ｎＭ  ＮＸ２Ｃ３抗体（特開２０１４−２１３１号公報参照）を添加し、混合した後に室温で３０分間インキュベートして測定溶液とした。
【００８１】
前記Ｃｄ−ＥＤＴＡ−ＢＳＡを固定化した前記９６穴マイクロプレートに対して、測定溶液５０μＬを添加し、３７℃で１５分間反応させた。次に、測定溶液を除去して、０．０２体積％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳで各ウェルを４回洗浄した。続いて、各ウェルに対して、４μｇ／ｍＬ  二次抗体（商品名：Ｐｅｒｏｘｙｄａｓｅ  ｌａｂｅｌｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｏ  ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）、ＫＰＬ社製）５０μＬを添加し、３７℃で３０分間反応させた後、測定溶液を除去し０．０２体積％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳで各ウェルを５回洗浄した。次に、発色基質でありＰｅｒｏｘｉｄａｓｅ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  Ｓｙｓｔｅｍ（商品名：ＡＢＴＳ（登録商標）  ＥＬＩＳＡ  ＨＲＰ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ、２−ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ、ＫＰＬ社製）を添加し、１０分間かけて酵素反応による発色反応を行った後、停止液（商品名：Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  ｓｔｏｐ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ（５×）、ＫＰＬ社製）により反応を停止した。各ウェルの吸光度は、マイクロプレートリーダー（装置名：ＥＬ８０８、ＢＩＯ−ＴＥＫ  ＩＮＳＴＲＵＭＥＮＴＳ社製）を用いて測定した。標準曲線は、抗原なしの際の吸光度を１００％とした際のプロットについて、４変数ロジステッィク関数による回帰を行うことで作成した。その結果、水銀の回収量は０．０９８０ｍｇ／ｋｇであり、水銀回収率は７１％（変動係数（ＣＶ）：５％、ｎ＝４）であった。結果を表３に示す。
【００８２】
（実施例２）
実施例１において、水銀分析工程において用いたＥＬＩＳＡを、下記のフロー式蛍光イムノアッセイに変更した以外は、実施例１と同様にして、水銀の回収量、及び回収率を算出した。結果を表３に示す。また、水銀精製工程において得られた水銀含有脱離溶液について、誘導結合プラズマ（ＩＣＰ）発光分析装置を用いて、共存金属の種類、及び含有量を測定した。結果を表５に示す。
【００８３】
−フロー式蛍光イムノアッセイ−
抗体捕捉担体として、疑似抗原タンパク質（Ｃｄ−ＥＤＴＡ−ＢＳＡ）を固定化したラテックス粒子（ＰＭＭＡ粒子、商品名：ガンツパールＧＡ−１００Ｓ、アイカ工業株式会社製、平均粒径１００μｍ）を公知文献（伊達安基ら：電力中央研究所報告  Ｖ１００３０（２０１１））の「２．３  金コロイド標識抗体および担体粒子の調整」、及び佐々木和裕ら，分析化学，５６，２９−３６（２００７）；佐々木和裕ら，電力中央研究所報告  Ｖ０８００７  （２００９）；Ｋ．Ｓａｓａｋｉら，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，８１，４００５−４００９（２００９）、及びＪ．Ｍ．Ｍａｒｔｉｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏａｓｓｙ，１１，３１−４７（１９９０））に従い調製した。脱離処理で得た水銀含有脱離溶液に対し、終濃度が１０μＭとなるように２０ｍＭエチレンジアミンテトラ酢酸四ナトリウム（株式会社同仁化学製）を添加し混合した。続いて、終濃度が２００ｐＭとなるように２０ｎＭ  ＮＸ２Ｃ３抗体（特開２０１４−２１３１号公報参照）を添加し、混合した後に室温で３０分間インキュベートして測定試料を得た。
測定操作は、フロー式蛍光イムノアッセイ装置（装置名：ＫｉｎＥｘＡ  ３２００、サピダイン社製）を用いて行った。前記測定は、各試料について以下の手順で行い、オートサンプラーによる自動測定を行った。
（１）装置内の測定用流路に抗体捕捉担体を導入
（２）７５０μＬ測定溶液を流速２５０μＬ／分間で通液
（３）５００μＬの２ｎＭ二次抗体（Ａｌｅｘａ６４７  ｌａｂｅｌｅｄ  ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）  ｇｏａｔ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ，  Ｊａｃｋｓｏｎ  ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ社製）を流速２５０μＬ／ｍｉｎで通液
（４）未反応抗体を１質量％ブロッキング試薬（Ｎ１０１、日油株式会社製）を含むＰＢＳ緩衝液で洗浄
（５）測定前後のセル内蛍光強度の差分ΔＶを相対信号値として出力
各測定では、標準曲線は、抗原なしの際の蛍光信号値を１００％とした際のプロットについて、４変数ロジステッィク関数による回帰を行うことで作成した。その結果、水銀の回収量は０．０９５９ｍｇ／ｋｇであり、水銀回収率は６９％（変動係数（ＣＶ）：２％、ｎ＝４）であった。結果を表３に示す。
【００８４】
（実施例３〜２２）
実施例１又は実施例２において、試料、還元工程における還元剤、洗浄工程における洗浄剤、及び水銀分析工程における免疫学的検定を、表１の還元剤、洗浄工程における洗浄剤、及び水銀分析工程における免疫学的検定に変更した以外は、実施例１又は実施例２と同様にして、水銀の回収量、及び回収率を算出した。結果を表３に示す。実施例３及び４、５及び６、並びに７及び８については、水銀精製工程後に、得られた水銀含有脱離溶液について、実施例１と同様にして、誘導結合プラズマ（ＩＣＰ）発光分析装置を用いて、共存金属の種類、及び含有量を測定した。結果を表５に示す。なお、洗浄工程における洗浄液の「水」とは、水５ｍＬで洗浄したことを意味し、「塩酸」とは、１００ｍＭ塩酸５ｍＬで洗浄したことを意味し、「塩酸及び水」とは、１００ｍＭ塩酸５ｍＬで洗浄後、水５ｍＬで洗浄したことを意味する。また、試料のＪＳＡＣ０５２２（石炭灰認証標準物質：ＪＳＡＣ０５２２）は、水銀を含まない（定量下限値以下＜０．０１ｇ／ｋｇ）。
【００８５】
（比較例１〜２０）
実施例１又は実施例２において、試料、還元工程における還元剤、洗浄工程における洗浄剤、及び水銀分析工程における免疫学的検定を、表２の還元剤、洗浄工程における洗浄剤、及び水銀分析工程における免疫学的検定に変更した以外は、実施例１又は実施例２と同様にして、水銀の回収量、及び回収率を算出した。結果を表４に示す。また、比較例１１及び１２、１３及び１４、１５及び１６、並びに１７及び１８ついては、水銀精製工程後に、得られた水銀含有脱離溶液について、実施例１と同様にして、誘導結合プラズマ（ＩＣＰ）発光分析装置を用いて、共存金属の種類、及び含有量を測定した。結果を表６に示す。なお、洗浄工程における洗浄液の「水」、「塩酸」、及び「塩酸及び水」の定義は、実施例１〜２２と同様である。また、試料のＪＳＡＣ０５２２（石炭灰認証標準物質：ＪＳＡＣ０５２２）は、水銀を含まない（＜０．０１ｍｇ／ｋｇ；定量下限以下）。
【００８６】
また、実施例２、実施例４、実施例６、実施例８、比較例１２、比較例１４、比較例１６、及び比較例１８について、フロー式蛍光イムノアッセイにおいて測定された相対信号値（％）を図１に示す。なお、標準試料０、標準試料０．５、及び標準試料５は、それぞれ０μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、及び５μｇ／ｋｇの水銀を含有する１００ｍＭトリス硝酸緩衝液（ｐＨ７．５）を用いた。
【００８７】
【表１】
0006552403.tif 000002
【００８８】
【表２】
0006552403.tif 000003
【００８９】
【表３】
0006552403.tif 000004
【００９０】
【表４】
0006552403.tif 000005
【００９１】
なお、表３〜表４中の酸抽出工程における回収率、水銀精製工程における回収率、及び水銀分析工程における回収率は、試料に含まれる初期の水銀含有量を１００％としたときの回収率を表す。また、水銀分析工程における水銀の回収率が、水銀精製工程における水銀の回収率を上回っている実施例及び比較例が存在するが、これは、水銀分析工程における分析操作のばらつきが原因である。
【００９２】
【表５】
0006552403.tif 000006
【００９３】
【表６】
0006552403.tif 000007
【００９４】
以上の結果から、本発明の水銀の分析方法では、従来の加熱気化−冷原子吸光装置、誘導結合プラズマ（ＩＣＰ）発光分光分析装置等の装置を用いて分析する場合は、約８時間〜１０時間かかっていた測定が、水銀含有物からの酸抽出から水銀の分析まで２時間〜３時間という短時間で行うことができるとともに、分析には前記加熱気化−冷原子吸光装置等の装置を使用することなく、免疫学的検定という簡便な方法により測定することができることが分かった。
【００９５】
低濃度（０．０３５ｍｇ／ｋｇ）の水銀を含む測定結果である実施例９及び１０の結果から、免疫学的検定としては、ＥＬＩＳＡよりフロー式蛍光イムノアッセイの方が、変動係数の値が小さく、分析に適していることが分かった。
また、実施例１９及び２０の結果から、比較例１９及び２０の結果と比較して、還元工程で過マンガン酸カリウムを還元することにより、水銀精製工程での陰イオン交換樹脂の破損を防止できるとともに、不純物を除去することができ、これに伴い、水銀分析工程において、良好に水銀の測定ができることが分かった。
【００９６】
図１から、フロー式蛍光イムノアッセイに用いる測定溶液に水銀等が含まれると、相対信号値が減少することが分かり、本発明に用いるフロー式蛍光イムノアッセイにおいて、水銀の定量が可能であることが分かる。
【００９７】
本発明の態様としては、例えば、以下の通りである。
＜１＞  水銀含有物と、過マンガン酸カリウムを溶解した酸溶液とを、超音波を作用させながら接触させ、水銀を酸抽出する酸抽出工程と、
前記酸抽出工程において得られた水銀抽出溶液に還元剤を加えて、前記過マンガン酸カリウムを還元する還元工程と、
陰イオン交換樹脂を用いて、前記還元工程において得られた水銀含有溶液中の前記水銀を精製する水銀精製工程と、
免疫学的検定により前記水銀精製工程において得られた水銀含有脱離溶液中の前記水銀を分析する水銀分析工程と、を含むことを特徴とする水銀の分析方法である。
＜２＞  前記還元剤が、塩化ヒドロキシアンモニウムである前記＜１＞に記載の水銀の分析方法である。
＜３＞  前記酸溶液が、硝酸を含む前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の水銀の分析方法である。
＜４＞  前記水銀精製工程が、前記還元工程において得られた前記水銀含有溶液を、陰イオン交換樹脂に通液し、前記水銀含有溶液中の少なくとも水銀を前記陰イオン交換樹脂に固定化する固定化処理と、
前記陰イオン交換樹脂に洗浄液を通液し、前記陰イオン交換樹脂を洗浄する洗浄処理と、
脱離溶液を前記陰イオン交換樹脂に通液し、前記水銀を前記陰イオン交換樹脂から脱離させる脱離処理と、を含む請求項＜１＞から＜３＞のいずれかに記載の水銀の分析方法である。
＜５＞  前記洗浄液が、水、塩酸、及び塩酸及び水から選択される少なくとも１種である前記＜４＞に記載の水銀の分析方法である。
＜６＞  前記脱離溶液が、緩衝液を含有する前記＜４＞から＜５＞のいずれかに記載の水銀の分析方法である。
＜７＞  前記免疫学的検定が、酵素免疫測定方法、及びフロー式蛍光イムノアッセイのいずれかである前記＜１＞から＜６＞のいずれかに記載の水銀の分析方法である。
＜８＞  前記水銀含有物が、石炭灰、及び汚泥の少なくともいずれかである前記＜１＞から＜７＞のいずれかに記載の水銀の分析方法である。
＜９＞  前記免疫学的検定における変動係数が、１０％以下である前記＜１＞から＜８＞のいずれかに記載の水銀の分析方法である。
【図１】
0006552403.tif 000008