(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
観察期間中に胚の形態学的発生に関する複数の特性についての得られた値を使用することで該胚を順位付けして該胚の発生潜在力を示す方法であって、
該胚のそれぞれの特性について、該胚が直接卵割事象を起こしたか否かを判定すること、および直接卵割事象を起こしたと判定される胚を、直接卵割事象を起こしたと判定されない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けすることであって、胚が直接卵割事象を起こしたかどうかを判定することが、該胚の発生に関連した第１のパラメータが第１の閾値量未満であるかどうかを判定すること、および、そうである場合、該胚が直接卵割事象を起こしたと判定することを含み、
ここで、該第１のパラメータが、
前核衰退の時間、ｔＰＮｆと、３細胞への卵割の時間、ｔ３との間の差、
２細胞への卵割の時間、ｔ２と、３細胞への卵割の時間、ｔ３との間の差、および
４細胞への卵割の時間、ｔ４と、５細胞への卵割の時間、ｔ５との間の差、
を含む群から選択される、こと；と
直接卵割事象を起こしたと判定されない該胚について、該胚の予め定義された発生段階の継続時間の尺度が、予め定義された閾値継続時間を超えるか否かを判定すること、および該予め定義された発生段階の該継続時間が、該予め定義された閾値継続時間を超えると判定される胚を、該予め定義された発生段階の該継続時間が、該予め定義された閾値継続時間を超えると判定されない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けすること；と
該予め定義された発生段階の該継続時間が、該予め定義された閾値継続時間を超えると判定されない該胚について、該胚の第２の予め定義された発生段階に対する該胚の第１の予め定義された発生段階の相対継続時間の尺度が、予め定義された範囲の外側にあるか否かを判定すること、および該相対継続時間が該予め定義された範囲の外側にある胚を、該相対継続時間が該予め定義された範囲の外側にない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けすることであって、該胚の第２の予め定義された発生段階に対する該胚の第１の予め定義された発生段階の相対継続時間の尺度が予め定義された範囲の外側にあるか否かを判定する際に、
（ｉ）該第１の予め定義された発生段階が、３細胞への卵割の時間、ｔ３と、５細胞への卵割の時間、ｔ５との間の時間ピリオドの尺度であり、該第２の予め定義された発生段階が、２細胞への卵割の時間、ｔ２と、５細胞への卵割の時間、ｔ５との間の時間ピリオドの尺度であり、その結果、該相対継続時間が（ｔ５−ｔ３）／（ｔ５−ｔ２）の尺度であり、該予め定義された範囲が、０．１〜０．９、０．２〜０．８、０．３〜０．７、０．４〜０．６、および０．５〜０．６を含む群から選択される；
または
（ｉｉ）該第１の予め定義された発生段階が、２細胞への卵割の時間、ｔ２と、３細胞への卵割の時間、ｔ３との間の時間ピリオドの尺度であり、該第２の予め定義された発生段階が、２細胞への卵割の時間、ｔ２と、５細胞への卵割の時間、ｔ５との間の時間ピリオドの尺度であり、その結果、該相対継続時間が、（ｔ３−ｔ２）／（ｔ５−ｔ２）の尺度であり、該予め定義された範囲が、０．１〜０．９、０．１〜０．８、０．２〜０．７、０．３〜０．６、もしくは０．４〜０．５を含む群から選択される；
または
（ｉｉｉ）該第１の予め定義された発生段階が、３細胞への卵割の時間、ｔ３と、５細胞への卵割の時間、ｔ５との間の時間ピリオドの尺度であり、該第２の予め定義された発生段階が、５細胞への卵割の時間、ｔ５の尺度であり、その結果、該相対継続時間が、（ｔ５−ｔ３）／ｔ５の尺度であり、該予め定義された範囲が、０．１超、０．２超、および０．３超を含む群から選択される；
または
（ｉｖ）該第１の予め定義された発生段階が、５細胞への卵割の時間、ｔ５と、８細胞への卵割の時間、ｔ８との間の時間ピリオドの尺度であり、該第２の予め定義された発生段階が、４細胞への卵割の時間、ｔ４と、８細胞への卵割の時間、ｔ８との間の時間ピリオドの尺度であり、その結果、該相対継続時間が、（ｔ８−ｔ５）／（ｔ８−ｔ４）の尺度であり、該予め定義された範囲が、０．３超、０．４超、０．５超、０．６超、０．７超、０．８超、０．９超、および０．９７超を含む群から選択される；
または
（ｖ）該第１の予め定義された発生段階が、前核衰退、ｔＰＮｆと、３細胞への卵割の時間、ｔ３との間の時間ピリオドの尺度であり、該第２の予め定義された発生段階が、前核衰退、ｔＰＮｆと、４細胞への卵割の時間、ｔ４との間の時間ピリオドの尺度であり、その結果、該相対継続時間が、（ｔ３−ｔＰＮｆ）／（ｔ４−ｔＰＮｆ）の尺度であり、該予め定義された範囲が、０．３５超、０．４５超、０．５５超、０．６５超、０．７５超、０．８５超、および０．９５超を含む群から選択される；
または
（ｖｉ）該第１の予め定義された発生段階が、３細胞への卵割の時間、ｔ３と、４細胞への卵割の時間、ｔ４との間の時間ピリオドの尺度であり、該第２の予め定義された発生段階が、２細胞への卵割の時間、ｔ２と、４細胞への卵割の時間、ｔ４との間の時間ピリオドの尺度であり、その結果、該相対継続時間が、（ｔ４−ｔ３）／（ｔ４−ｔ２）の尺度であり、該予め定義された範囲が、０．３未満、０．４未満、０．５未満、０．６未満、および０．７未満を含む群から選択される；
または
（ｖｉｉ）該第１の予め定義された発生段階が、５細胞への卵割の時間、ｔ５と、８細胞への卵割の時間、ｔ８との間の時間ピリオドの尺度であり、該第２の予め定義された発生段階が、２細胞への卵割の時間、ｔ２と、８細胞への卵割の時間、ｔ８との間の時間ピリオドの尺度であり、その結果、該相対継続時間が、（ｔ８−ｔ５）／（ｔ８−ｔ２）の尺度であり、該予め定義された範囲が、０．２未満、０．３未満、０．４未満、０．５未満、および０．６未満を含む群から選択される、こと
とを含み、
該第１の閾値量と該予め定義された閾値継続時間とが異なる、方法。
【請求項２】
（ｉ）前記第１のパラメータが、前核衰退、ｔＰＮｆと、３細胞への卵割の時間、ｔ３との間の時間ピリオドの尺度であり、前記第１の閾値量が、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、および１４時間を含む群から選択され；または
（ｉｉ）前記第１のパラメータが、２細胞への卵割の時間、ｔ２と、３細胞への卵割の時間、ｔ３との間の時間ピリオドの尺度であり、前記第１の閾値量が、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、および１１時間を含む群から選択され；または
（ｉｉｉ）前記第１のパラメータが、４細胞への卵割の時間、ｔ４と、５細胞への卵割の時間、ｔ５との間の時間ピリオドの尺度であり、前記第１の閾値量が、０．１時間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、および１１時間を含む群から選択され；または
（ｉｖ）前記第１のパラメータが、３細胞への卵割の時間、ｔ３と、４細胞への卵割の時間、ｔ４との比の尺度であり、前記第１の閾値量が、０．９、０．８、０．７、および０．６を含む群から選択される、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記胚の予め定義された発生段階の継続時間の尺度が予め定義された閾値継続時間を超えるか否かを判定することが、
（ｉ）２細胞への卵割の時間、ｔ２の尺度が、２７時間、２８時間、２９時間、３０時間、３１時間、３２時間、３３時間、３４時間、および３５時間を含む群から選択される時間を超えるかどうかを判定すること；または
（ｉｉ）３細胞への卵割の時間、ｔ３の尺度が、３８時間、３９時間、４０時間、４１時間、４２時間、４３時間、４４時間、４５時間、４６時間、４７時間、および４８時間を含む群から選択される時間を超えるかどうかを判定すること；または
（ｉｉｉ）４細胞への卵割の時間、ｔ４の尺度が、４１時間、４２時間、４３時間、４４時間、４５時間、４６時間、４７時間、４７時間、４８時間、４９時間、および５０時間を含む群から選択される時間を超えるかどうかを判定すること；または
（ｉｖ）５細胞への卵割の時間、ｔ５の尺度が、５５時間、５６時間、５７時間、５８時間、５９時間、６０時間、６１時間、６２時間、および６３時間を含む群から選択される時間を超えるかどうかを判定すること
を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記第２の予め定義された発生段階に対する前記第１の予め定義された発生段階の前記相対継続時間が、予め定義された範囲の外側にある前記胚について、該相対継続時間が、該予め定義された範囲超または未満であるかどうかを判定することと、該相対継続時間が該予め定義された範囲の一方の側に対して該予め定義された範囲の外側にある胚を、該相対継続時間が該予め定義された範囲の他方の側に対して該予め定義された範囲の外側にある胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けすること
とをさらに含む、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
直接卵割事象を起こしたと判定される前記胚について、該胚の予め定義された発生段階の継続時間の尺度が予め定義された閾値継続時間を超えるか否かを判定することと、直接卵割事象を起こしたと判定され、該予め定義された発生段階の該継続時間が該予め定義された閾値継続時間を超えると判定される胚を、直接卵割事象を起こしたと判定され、該予め定義された発生段階の該継続時間が該予め定義された閾値継続時間を超えると判定されない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けすること
とをさらに含む、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
直接卵割事象を起こしたと判定される前記胚について、該胚の第２の予め定義された発生段階に対する該胚の第１の予め定義された発生段階の相対継続時間の尺度が、予め定義された範囲の外側にあるか否かを判定することと、直接卵割を起こしたと判定され、該相対継続時間が該予め定義された範囲の外側にある前記胚を、直接卵割事象を起こしたと判定され、前記相対継続時間が前記予め定義された範囲の外側にない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けすること
とをさらに含む、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
直接卵割事象を起こしたと判定されず、前記予め定義された発生段階の前記継続時間が前記予め定義された閾値継続時間を超えると判定される前記胚について、該胚の第２の予め定義された発生段階に対する該胚の第１の予め定義された発生段階の相対継続時間の尺度が、予め定義された範囲の外側にあるか否かを判定することと、直接卵割を起こしたと判定され、該予め定義された発生段階の該継続時間が該予め定義された閾値継続時間を超えると判定され、該相対継続時間が該予め定義された範囲の外側にある胚を、直接卵割事象を起こしたと判定され、該予め定義された発生段階の該継続時間が該予め定義された閾値継続時間を超えると判定され、該相対継続時間が該予め定義された範囲の外側にない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けすること
とをさらに含む、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記第２の予め定義された発生段階に対する前記第１の予め定義された発生段階の前記相対継続時間が前記予め定義された範囲内であると判定される前記胚について、それぞれの胚が予め定義された時間内に予め定義された数の細胞へと発生したか否かを判定し、該予め定義された時間内に該予め定義された数の細胞に発生しなかった胚を、該予め定義された時間内に該予め定義された数の細胞へと発生したと判定される胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けする、
請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記予め定義された数の細胞が８細胞であり、前記予め定義された時間が、６４時間、６５時間、６６時間、６７時間、６８時間、６９時間、７０時間、７１時間、および７２時間を含む群から選択される、請求項８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
前記値が、タイムラプス顕微鏡観察によって得られる、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
互いに対する前記胚の少なくとも一部についての前記順位を表す表示を出力することをさらに含む、請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
胚を順位付けして胚の発生潜在力を示すための機器であって、
観察期間中に該胚の形態学的発生に関する複数の特性についての値を得るように構成されたデータ入力エレメント；および
該胚のそれぞれの特性について、該胚が直接卵割事象を起こしたか否かを判定し、直接卵割事象を起こしたと判定される胚を、直接卵割事象を起こしたと判定されない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けし、胚が直接卵割事象を起こしたかどうかを判定することが、該胚の発生に関連した第１のパラメータが第１の閾値量未満であるかどうかを判定すること、および、そうである場合、該胚が直接卵割事象を起こしたと判定することを含み、
ここで、該第１のパラメータが、
前核衰退の時間、ｔＰＮｆと、３細胞への卵割の時間、ｔ３との間の差、
２細胞への卵割の時間、ｔ２と、３細胞への卵割の時間、ｔ３との間の差、および
４細胞への卵割の時間、ｔ４と、５細胞への卵割の時間、ｔ５との間の差、
を含む群から選択され；
直接卵割事象を起こしたと判定されない該胚について、該胚の予め定義された発生段階の継続時間の尺度が、予め定義された閾値継続時間を超えるか否かを判定し、該予め定義された発生段階の該継続時間が、該予め定義された閾値継続時間を超えると判定される胚を、該予め定義された発生段階の該継続時間が、該予め定義された閾値継続時間を超えると判定されない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けし；
該予め定義された発生段階の該継続時間が、該予め定義された閾値継続時間を超えると判定されない該胚について、該胚の第２の予め定義された発生段階に対する該胚の第１の予め定義された発生段階の相対継続時間の尺度が、予め定義された範囲の外側にあるか否かを判定し、該相対継続時間が該予め定義された範囲の外側にある胚を、該相対継続時間が該予め定義された範囲の外側にない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けし、該胚の第２の予め定義された発生段階に対する該胚の第１の予め定義された発生段階の相対継続時間の尺度が予め定義された範囲の外側にあるか否かを判定する際に、
（ｉ）該第１の予め定義された発生段階が、３細胞への卵割の時間、ｔ３と、５細胞への卵割の時間、ｔ５との間の時間ピリオドの尺度であり、該第２の予め定義された発生段階が、２細胞への卵割の時間、ｔ２と、５細胞への卵割の時間、ｔ５との間の時間ピリオドの尺度であり、その結果、該相対継続時間が（ｔ５−ｔ３）／（ｔ５−ｔ２）の尺度であり、該予め定義された範囲が、０．１〜０．９、０．２〜０．８、０．３〜０．７、０．４〜０．６、および０．５〜０．６を含む群から選択される；
または
（ｉｉ）該第１の予め定義された発生段階が、２細胞への卵割の時間、ｔ２と、３細胞への卵割の時間、ｔ３との間の時間ピリオドの尺度であり、該第２の予め定義された発生段階が、２細胞への卵割の時間、ｔ２と、５細胞への卵割の時間、ｔ５との間の時間ピリオドの尺度であり、その結果、該相対継続時間が、（ｔ３−ｔ２）／（ｔ５−ｔ２）の尺度であり、該予め定義された範囲が、０．１〜０．９、０．１〜０．８、０．２〜０．７、０．３〜０．６、もしくは０．４〜０．５を含む群から選択される；
または
（ｉｉｉ）該第１の予め定義された発生段階が、３細胞への卵割の時間、ｔ３と、５細胞への卵割の時間、ｔ５との間の時間ピリオドの尺度であり、該第２の予め定義された発生段階が、５細胞への卵割の時間、ｔ５の尺度であり、その結果、該相対継続時間が、（ｔ５−ｔ３）／ｔ５の尺度であり、該予め定義された範囲が、０．１超、０．２超、および０．３超を含む群から選択される；
または
（ｉｖ）該第１の予め定義された発生段階が、５細胞への卵割の時間、ｔ５と、８細胞への卵割の時間、ｔ８との間の時間ピリオドの尺度であり、該第２の予め定義された発生段階が、４細胞への卵割の時間、ｔ４と、８細胞への卵割の時間、ｔ８との間の時間ピリオドの尺度であり、その結果、該相対継続時間が、（ｔ８−ｔ５）／（ｔ８−ｔ４）の尺度であり、該予め定義された範囲が、０．３超、０．４超、０．５超、０．６超、０．７超、０．８超、０．９超、および０．９７超を含む群から選択される；
または
（ｖ）該第１の予め定義された発生段階が、前核衰退、ｔＰＮｆと、３細胞への卵割の時間、ｔ３との間の時間ピリオドの尺度であり、該第２の予め定義された発生段階が、前核衰退、ｔＰＮｆと、４細胞への卵割の時間、ｔ４との間の時間ピリオドの尺度であり、その結果、該相対継続時間が、（ｔ３−ｔＰＮｆ）／（ｔ４−ｔＰＮｆ）の尺度であり、該予め定義された範囲が、０．３５超、０．４５超、０．５５超、０．６５超、０．７５超、０．８５超、および０．９５超を含む群から選択される；
または
（ｖｉ）該第１の予め定義された発生段階が、３細胞への卵割の時間、ｔ３と、４細胞への卵割の時間、ｔ４との間の時間ピリオドの尺度であり、該第２の予め定義された発生段階が、２細胞への卵割の時間、ｔ２と、４細胞への卵割の時間、ｔ４との間の時間ピリオドの尺度であり、その結果、該相対継続時間が、（ｔ４−ｔ３）／（ｔ４−ｔ２）の尺度であり、該予め定義された範囲が、０．３未満、０．４未満、０．５未満、０．６未満、および０．７未満を含む群から選択される；
または
（ｖｉｉ）該第１の予め定義された発生段階が、５細胞への卵割の時間、ｔ５と、８細胞への卵割の時間、ｔ８との間の時間ピリオドの尺度であり、該第２の予め定義された発生段階が、２細胞への卵割の時間、ｔ２と、８細胞への卵割の時間、ｔ８との間の時間ピリオドの尺度であり、その結果、該相対継続時間が、（ｔ８−ｔ５）／（ｔ８−ｔ２）の尺度であり、該予め定義された範囲が、０．２未満、０．３未満、０．４未満、０．５未満、および０．６未満を含む群から選択され、
該第１の閾値量と該予め定義された閾値継続時間とが異なる
ように構成されたプロセッサーエレメント
を備える機器。
【請求項１３】
請求項１から１１のいずれかに記載の方法を実施するための機械可読命令を持つ非一時的コンピュータープログラム製品。
【請求項１４】
請求項１から１１のいずれかに記載の方法を実施するための機械可読命令を搭載され、それを実行するように操作可能である機器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明のある特定の実施形態は、胚の発生潜在力（ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）を評価するため、および特に、胚の発生潜在力によって胚を順位付けする（ｒａｎｋｉｎｇ）／スコア付けするための方法および機器に関する。
【背景技術】
【０００２】
不妊症は、世界的に８０００万人超に影響している。すべての夫婦の１０％が、原発性または続発性不妊症を経験すると推定されている。体外受精（ＩＶＦ）は、他の方法では妊娠することができなかった夫婦に妊娠を確立し、親となる機会をもたらし得る選択的な医療である。これは、卵（卵母細胞）を女性の卵巣から採取し、次いで実験室で精子と受精させるプロセスである。次いでこのプロセスで創製された胚が潜在的な着床のために子宮内に配置される。受精と移植（ｔｒａｎｓｆｅｒ）との間に、胚は、典型的には、インキュベーターのインキュベーションチャンバー内で２〜６日間貯蔵され、その時間にこれらを例えば、画像化によって定期的に監視してこれらの発生について評価することができる。温度および大気組成などのインキュベーター内の状態は、一般に、卵管および子宮中の状態を模倣する目的で制御される。
【０００３】
典型的なＩＶＦサイクルでは、単一患者からのいくつかの卵を受精させ、得られる胚をインキュベートする。しかし、すべてのインキュベートされた胚が患者の子宮に移植されるわけではないのが通常である。これは、潜在的に危険な多子出産のリスクを低減するためである。胚は、典型的には、インキュベートされた胚の発生潜在力の評価に基づいて移植について選択される。発生して生児出生する最も大きい潜在性を有すると判定される胚が、これらのコホート中の他の胚に対して優先的に選択される。したがって、ＩＶＦ処置の重要な側面は、コホートを構成する胚の発生潜在力を評価すること、すなわち、胚品質を判定することであり、この場合、胚品質は、順調に着床し、移植後に子宮内で発生し、健康なベビーの出生に至る胚の尤度（ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ）を表す予測である。
【０００４】
ここ数年にわたって開発された胚品質を評価するための強力なツールは、タイムラプス胚イメージングである。タイムラプス胚イメージングでは、胚の発生中に胚の画像を得ることを必要とする。これは、細胞分裂などの様々な発生事象のタイミング、ならびに／または例えば、異なる段階における細胞均一性（均等性）、前核（ＰＮ）の出現、および多核形成（ＭＮ）の存在の観点からの胚の発生に関する他の特性の存在もしくは非存在を確立することを可能にすることができる。
【０００５】
これらのタイミングおよび特性は、胚の形態運動的（ｍｏｒｐｈｏｋｉｎｅｔｉｃ）／形態学的パラメータと時に呼ばれる場合がある。この点において、用語「形態運動的」および「形態学的」は、一般に、互換的に本明細書で使用されるが、いくつかの点で、形態運動的特性は、厳密には、形態学的特性のサブセット、すなわちタイミングに具体的に関する形態学的特性と見なされる場合がある。研究により、どのように様々な胚発生事象のタイミングおよび継続時間ならびに様々な他の発生特性の存在または非存在を、胚の発生潜在力と相関させることができるかが示された。
【０００６】
形態運動的パラメータを考慮に入れる胚選択のモデル（すなわち、胚の発生潜在力を評価するためのモデル）は、既知の着床データ（Ｋｎｏｗｎ  Ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｄａｔａ）（ＫＩＤ）を使用して構築、評価、およびバリデートすることができ、それにより、陽性のＫＩＤ胚は、引き続いて着床したと分かっている胚であり、陰性のＫＩＤ胚は、引き続いて着床しなかったと分かっている胚である。
【０００７】
胚の発生潜在力を評価するための単純なモデルの例として、１細胞から２細胞への分裂の相対的に早期の時間は、良品質胚の指標であると判明している。他の形態運動的パラメータ、例えば、２細胞から４細胞に分裂するときの２つの分裂のシンクロニシティの程度も、胚品質に感受性であることが判明している。より一般に、胚のｉｎ−ｖｉｔｒｏ発生に関するパラメータから胚の発生潜在力を評価するための様々な手法が提案されている。したがって、タイムラプスイメージングの目的は、様々な胚発生事象のタイミング、ならびに／または異なる段階の細胞均一性（均等性）、前核（ＰＮ）の出現、および多核形成（ＭＮ）の存在の観点からの胚の発生に関する他の特性に関する様々なパラメータの値を確立することである。一連のタイムラプス画像から胚発生に関する値および特性を確立することは、アノテーションと時に呼ばれる。
【０００８】
胚発生に関連した様々なタイミングおよび特性は、胚の発生の品質指標をもたらすのに役立つことが判明しており、良品質胚を示すこれらの具体的な値は、胚がインキュベートされる条件、および様々な事象が割り当てられる仕方に従って異なる胚について異なり得る。例えば、１つの診療所は、ある特定のパーセンテージの酸素雰囲気および温度で胚をインキュベートする場合があり、一方、別の診療所は、異なるパーセンテージの酸素雰囲気および温度で胚をインキュベートする場合がある。これは、胚の発生における所与の形態学的事象の最適のタイミングは、異なる診療所／インキュベーター条件で異なり得ることを意味し得る。
【０００９】
図１は、この原理を表すグラフである（このグラフは、高度に概略的であり、実際のデータに基づいていない）。したがって、図１は、どのように着床尤度、Ｉｍｐ％が、任意の（ａｒｂｉｔｒａｒｙ）発生事象Ｘ（例えば、特定の細胞周期の継続時間または特定の卵割の時間）のタイミングの関数として変動し得るかの一例を示す。実線の曲線は、第１のセットの条件に従って発生した胚のＸについて観察されたタイミングの関数としての着床尤度の変動を表し、一方、破線の曲線は、第２のセットの条件に従って発生した胚の変動を表す。例えば、実線の曲線は、相対的に低い酸素雰囲気でインキュベートされた胚を表し得、一方、破線の曲線は、相対的に高い酸素雰囲気でインキュベートされた胚を表し得る。別の例として、実線の曲線は、細胞質内精子注入法（ＩＣＳＩ）によって受精された胚を表し得、一方、破線の曲線は、体外受精（ＩＶＦ）によって受精された胚を表し得る。さらに別の例として、２つの曲線は、異なる診療所で発生した胚を表し得る。図１中の２つの曲線は、互いに系統的にオフセットされており、その理由は、異なる条件下でインキュベートされた胚は、一般に、少なくともいくつかの点において異なる速度で発生するためである。
【００１０】
したがって、図１は、発生事象Ｘと関連した時間を、両セットの条件下で発生した胚について相対的に高い着床尤度を有する胚を同定するのに使用することができることを示す一方、高い着床尤度に関連したＸの実際の値は、２つの群で異なる。例えば、第１のセットの条件下でインキュベートされた胚について（実線）、Ｘのタイミングの最適範囲は、ｈ１〜ｈ２であると見なすことができ、一方、第２のセットの条件下でインキュベートされた胚の最適範囲（破線）は、ｈ３〜ｈ４であると見なすことができる。これが実際に意味することは、胚の発生潜在力を評価するための異なるモデルが、異なる集団について必要となることである。
【００１１】
しかし、様々な異なる条件下で発生した胚に適用可能である単一モデル、すなわち、普遍的に適用可能なモデルと呼ばれ得るもの（または一連の異なる条件下で発生した胚に適用可能な少なくとも１つのモデル）を確立することができれば好ましい。普遍的に適用可能なモデルは、異なる胚発生条件に使用するモデルを選択するプロセスを単純化するだけでなく、一部の場合では、例えば、「新しい」診療所の場合において、所与のセットの発生条件について、その特定の条件に対するモデルを確実に確立することを可能にするのに利用可能な十分なＫＩＤデータが存在しない場合がある。図１に表した概略的状況について単一モデルを提供するための１つの単純な解決策は、すべての胚についてｈ１からｈ４の間のＸのタイミングの最適範囲を仮定することである。しかし、これは、高い着床尤度を有すると間違って分類されている各集団からの胚をもたらすはずであり、それはもちろん、満足な解決策でない。
【００１２】
したがって、一連の異なる条件下で発生した胚に適用可能である、ｉｎ−ｖｉｔｒｏインキュベートヒト胚などの胚の発生潜在力（生存能／品質）を評価するためのモデルを開発する要望がある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明の第１の態様にしたがって、胚を順位付けしてその発生潜在力を示す方法であって、観察期間中に該胚の形態学的発生に関する複数の特性についての値を得ること；と、該胚のそれぞれの特性について、該胚が直接卵割事象を起こしたか否かの尺度を判定すること、および直接卵割事象を起こしたと判定される胚を、直接卵割事象を起こしたと判定されない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けすること；と、直接卵割事象を起こしたと判定されない該胚について、該胚の予め定義された発生段階の継続時間の尺度が、予め定義された閾値継続時間を超えるか否かを判定すること、および該予め定義された発生段階の該継続時間が、該予め定義された閾値継続時間を超えると判定される胚を、該予め定義された発生段階の該継続時間が、該予め定義された閾値継続時間を超えると判定されない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けすること；と、該予め定義された発生段階の該継続時間が、該予め定義された閾値継続時間を超えると判定されない該胚について、該胚の第２の予め定義された発生段階に対する該胚の第１の予め定義された発生段階の相対継続時間の尺度が、予め定義された範囲の外側にあるか否かを判定すること、および該相対継続時間が該予め定義された範囲の外側にある胚を、該相対継続時間が該予め定義された範囲の外側にない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けすることとを含む、方法が提供される。
【００１４】
本発明の第２の態様にしたがって、胚を順位付けして胚の発生潜在力を示すための機器であって、観察期間中に該胚の形態学的発生に関する複数の特性についての値を得るように構成されたデータ入力エレメント；および該胚のそれぞれの特性について、該胚が直接卵割事象を起こしたか否かの尺度を判定し、直接卵割事象を起こしたと判定される胚を、直接卵割事象を起こしたと判定されない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けし；直接卵割事象を起こしたと判定されない該胚について、該胚の予め定義された発生段階の継続時間の尺度が、予め定義された閾値継続時間を超えるか否かを判定し、該予め定義された発生段階の該継続時間が、該予め定義された閾値継続時間を超えると判定される胚を、該予め定義された発生段階の該継続時間が、該予め定義された閾値継続時間を超えると判定されない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けし；該予め定義された発生段階の該継続時間が、該予め定義された閾値継続時間を超えると判定されない該胚について、該胚の第２の予め定義された発生段階に対する該胚の第１の予め定義された発生段階の相対継続時間の尺度が、予め定義された範囲の外側にあるか否かを判定し、該相対継続時間が該予め定義された範囲の外側にある胚を、該相対継続時間が該予め定義された範囲の外側にない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けするように構成されたプロセッサーエレメントを備える機器が提供される。
【００１５】
本発明の他の態様として、本発明の第１の態様の方法を実施するための機械可読命令を持つ非一時的コンピュータープログラム製品、および本発明の第１の態様の方法を実施するための機械可読命令を搭載され、それを実行するように操作可能である機器が挙げられる。
【００１６】
本発明のさらなる態様および特徴は、特許請求の範囲によって定義される。
【００１７】
本発明の第１および他の態様に関して本明細書に記載した本発明の特徴および態様は、適切であるように、かつ上記した具体的な組合せにおいてだけでなく、本発明の他の態様による本発明の実施形態に同等に適用可能であり、該実施形態と組み合わせることができることが十分に理解される。
【００１８】
本発明の第１および他の態様に関して上記した本発明の特徴および態様は、適切であるように、かつ上記した具体的な組合せにおいてだけでなく、本発明の他の態様による本発明の実施形態に同等に適用可能であり、該実施形態と組み合わせることができることが十分に理解される。
【００１９】
次に、本発明を、以下の図面を参照して、単なる例として記載する。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
胚を順位付けして該胚の発生潜在力を示す方法であって、
観察期間中に該胚の形態学的発生に関する複数の特性についての値を得ること；と
該胚のそれぞれの特性について、該胚が直接卵割事象を起こしたか否かの尺度を判定すること、および直接卵割事象を起こしたと判定される胚を、直接卵割事象を起こしたと判定されない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けすること；と
直接卵割事象を起こしたと判定されない該胚について、該胚の予め定義された発生段階の継続時間の尺度が、予め定義された閾値継続時間を超えるか否かを判定すること、および該予め定義された発生段階の該継続時間が、該予め定義された閾値継続時間を超えると判定される胚を、該予め定義された発生段階の該継続時間が、該予め定義された閾値継続時間を超えると判定されない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けすること；と
該予め定義された発生段階の該継続時間が、該予め定義された閾値継続時間を超えると判定されない該胚について、該胚の第２の予め定義された発生段階に対する該胚の第１の予め定義された発生段階の相対継続時間の尺度が、予め定義された範囲の外側にあるか否かを判定すること、および該相対継続時間が該予め定義された範囲の外側にある胚を、該相対継続時間が該予め定義された範囲の外側にない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けすること
とを含む、方法。
（項目２）
胚が直接卵割事象を起こしたかどうかの尺度を判定することが、該胚の発生に関連した第１のパラメータが第１の閾値量未満であるかどうかを判定すること、および、そうである場合、該胚が直接卵割事象を起こしたと判定することを含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
（ｉ）前記第１のパラメータが、前核衰退、ｔＰＮｆと、３細胞への卵割の時間、ｔ３との間の時間ピリオドの尺度であり、前記第１の閾値量が、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、および１４時間を含む群から選択され；または
（ｉｉ）前記第１のパラメータが、２細胞への卵割の時間、ｔ２と、３細胞への卵割の時間、ｔ３との間の時間ピリオドの尺度であり、前記第１の閾値量が、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、および１１時間を含む群から選択され；または
（ｉｉｉ）前記第１のパラメータが、４細胞への卵割の時間、ｔ４と、５細胞への卵割の時間、ｔ５との間の時間ピリオドの尺度であり、前記第１の閾値量が、０．１時間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、および１１時間を含む群から選択され；または
（ｉｖ）前記第１のパラメータが、３細胞への卵割の時間、ｔ３と、４細胞への卵割の時間、ｔ４との比の尺度であり、前記第１の閾値量が、０．９、０．８、０．７、および０．６を含む群から選択される、
項目２に記載の方法。
（項目４）
前記胚の予め定義された発生段階の継続時間の尺度が予め定義された閾値継続時間を超えるか否かを判定することが、
（ｉ）２細胞への卵割の時間、ｔ２の尺度が、２７時間、２８時間、２９時間、３０時間、３１時間、３２時間、３３時間、３４時間、および３５時間を含む群から選択される時間を超えるかどうかを判定すること；または
（ｉｉ）３細胞への卵割の時間、ｔ３の尺度が、３８時間、３９時間、４０時間、４１時間、４２時間、４３時間、４４時間、４５時間、４６時間、４７時間、および４８時間を含む群から選択される時間を超えるかどうかを判定すること；または
（ｉｉｉ）４細胞への卵割の時間、ｔ４の尺度が、４１時間、４２時間、４３時間、４４時間、４５時間、４６時間、４７時間、４７時間、４８時間、４９時間、および５０時間を含む群から選択される時間を超えるかどうかを判定すること；または
（ｉｖ）５細胞への卵割の時間、ｔ５の尺度が、５５時間、５６時間、５７時間、５８時間、５９時間、６０時間、６１時間、６２時間、および６３時間を含む群から選択される時間を超えるかどうかを判定すること
を含む、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目５）
前記胚の第２の予め定義された発生段階に対する該胚の第１の予め定義された発生段階の相対継続時間の尺度が予め定義された範囲の外側にあるか否かを判定する際に、
（ｉ）該第１の予め定義された発生段階が、３細胞への卵割の時間、ｔ３と、５細胞への卵割の時間、ｔ５との間の時間ピリオドの尺度であり、該第２の予め定義された発生段階が、２細胞への卵割の時間、ｔ２と、５細胞への卵割の時間、ｔ５との間の時間ピリオドの尺度であり、その結果、該相対継続時間が（ｔ５−ｔ３）／（ｔ５−ｔ２）の尺度であり、該予め定義された範囲が、０．１〜０．９、０．２〜０．８、０．３〜０．７、０．４〜０．６、および０．５〜０．６を含む群から選択される；
または
（ｉｉ）該第１の予め定義された発生段階が、２細胞への卵割の時間、ｔ２と、３細胞への卵割の時間、ｔ３との間の時間ピリオドの尺度であり、該第２の予め定義された発生段階が、２細胞への卵割の時間、ｔ２と、５細胞への卵割の時間、ｔ５との間の時間ピリオドの尺度であり、その結果、該相対継続時間が、（ｔ３−ｔ２）／（ｔ５−ｔ２）の尺度であり、該予め定義された範囲が、０．１〜０．９、０．１〜０．８、０．２〜０．７、０．３〜０．６、もしくは０．４〜０．５を含む群から選択される；
または
（ｉｉｉ）該第１の予め定義された発生段階が、２細胞への卵割の時間、ｔ２と、３細胞への卵割の時間、ｔ３との間の時間ピリオドの尺度であり、該第２の予め定義された発生段階が、３細胞への卵割の時間、ｔ３と、５細胞への卵割の時間、ｔ５との間の時間ピリオドの尺度であり、その結果、該相対継続時間が、（ｔ３−ｔ２）／（ｔ５−ｔ３）の尺度であり、該予め定義された範囲が、０．０５〜１０、０．１〜９、０．１５〜８、０．２〜７、０．２５〜６、０．３〜７、０．３５〜６、０．４〜５、０．４５〜４、０．５〜３、０．６〜２、および０．７５〜１を含む群から選択される；
または
（ｉｖ）該第１の予め定義された発生段階が、３細胞への卵割の時間、ｔ３と、５細胞への卵割の時間、ｔ５との間の時間ピリオドの尺度であり、該第２の予め定義された発生段階が、５細胞への卵割の時間、ｔ５の尺度であり、その結果、該相対継続時間が、（ｔ５−ｔ３）／ｔ５の尺度であり、該予め定義された範囲が、０．１超、０．２超、および０．３超を含む群から選択される；
または
（ｖ）該第１の予め定義された発生段階が、３細胞への卵割の時間、ｔ３と、４細胞への卵割の時間、ｔ４との間の時間ピリオドの尺度であり、該第２の予め定義された発生段階が、２細胞への卵割の時間、ｔ２と、３細胞への卵割の時間、ｔ３との間の時間ピリオドの尺度であり、その結果、該相対継続時間が、（ｔ４−ｔ３）／（ｔ３−ｔ２）の尺度であり、該予め定義された範囲が、０．１未満、０．２未満、０．３未満、０．４未満、および０．５未満を含む群から選択される；
または
（ｖｉ）該第１の予め定義された発生段階が、５細胞への卵割の時間、ｔ５と、８細胞への卵割の時間、ｔ８との間の時間ピリオドの尺度であり、該第２の予め定義された発生段階が、３細胞への卵割の時間、ｔ３と、５細胞への卵割の時間、ｔ５との間の時間ピリオドの尺度であり、その結果、該相対継続時間が、（ｔ８−ｔ５）／（ｔ５−ｔ３）の尺度であり、該予め定義された範囲が、０．１未満、０．１５未満、および０．２未満を含む群から選択される；
または
（ｖｉｉ）該第１の予め定義された発生段階が、２細胞への卵割の時間、ｔ２と、３細胞への卵割の時間、ｔ３との間、および４細胞への卵割の時間、ｔ４と、５細胞への卵割の時間、ｔ５との間の時間ピリオドの組合せの尺度であり、該第２の予め定義された発生段階が、４細胞への卵割の時間、ｔ４と、８細胞への卵割の時間、ｔ８との間の時間ピリオドの尺度であり、その結果、該相対継続時間が、（（ｔ３−ｔ２）＋（ｔ５−ｔ４））／（ｔ８−ｔ４）の尺度であり、該予め定義された範囲が、０．３超、０．４超、０．５超、０．６超、０．７超、および０．８超を含む群から選択される；
または
（ｖｉｉｉ）該第１の予め定義された発生段階が、５細胞への卵割の時間、ｔ５と、８細胞への卵割の時間、ｔ８との間の時間ピリオドの尺度であり、該第２の予め定義された発生段階が、４細胞への卵割の時間、ｔ４と、８細胞への卵割の時間、ｔ８との間の時間ピリオドの尺度であり、その結果、該相対継続時間が、（ｔ８−ｔ５）／（ｔ８−ｔ４）の尺度であり、該予め定義された範囲が、０．３超、０．４超、０．５超、０．６超、０．７超、０．８超、０．９超、および０．９７超を含む群から選択される；
または
（ｉｘ）該第１の予め定義された発生段階が、前核衰退、ｔＰＮｆと、３細胞への卵割の時間、ｔ３との間の時間ピリオドの尺度であり、該第２の予め定義された発生段階が、前核衰退、ｔＰＮｆと、４細胞への卵割の時間、ｔ４との間の時間ピリオドの尺度であり、その結果、該相対継続時間が、（ｔ３−ｔＰＮｆ）／（ｔ４−ｔＰＮｆ）の尺度であり、該予め定義された範囲が、０．３５超、０．４５超、０．５５超、０．６５超、０．７５超、０．８５超、および０．９５超を含む群から選択される；
または
（ｘ）該第１の予め定義された発生段階が、３細胞への卵割の時間、ｔ３と、４細胞への卵割の時間、ｔ４との間の時間ピリオドの尺度であり、該第２の予め定義された発生段階が、２細胞への卵割の時間、ｔ２と、４細胞への卵割の時間、ｔ４との間の時間ピリオドの尺度であり、その結果、該相対継続時間が、（ｔ４−ｔ３）／（ｔ４−ｔ２）の尺度であり、該予め定義された範囲が、０．３未満、０．４未満、０．５未満、０．６未満、および０．７未満を含む群から選択される；
または
（ｘｉ）該第１の予め定義された発生段階が、５細胞への卵割の時間、ｔ５と、８細胞への卵割の時間、ｔ８との間の時間ピリオドの尺度であり、該第２の予め定義された発生段階が、２細胞への卵割の時間、ｔ２と、８細胞への卵割の時間、ｔ８との間の時間ピリオドの尺度であり、その結果、該相対継続時間が、（ｔ８−ｔ５）／（ｔ８−ｔ２）の尺度であり、該予め定義された範囲が、０．２未満、０．３未満、０．４未満、０．５未満、および０．６未満を含む群から選択される、
前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目６）
前記第２の予め定義された発生段階に対する前記第１の予め定義された発生段階の前記相対継続時間が、予め定義された範囲の外側にある前記胚について、該相対継続時間が、該予め定義された範囲超または未満であるかどうかを判定することと、該相対継続時間が該予め定義された範囲の一方の側に対して該予め定義された範囲の外側にある胚を、該相対継続時間が該予め定義された範囲の他方の側に対して該予め定義された範囲の外側にある胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けすること
とをさらに含む、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目７）
直接卵割事象を起こしたと判定される前記胚について、該胚の予め定義された発生段階の継続時間の尺度が予め定義された閾値継続時間を超えるか否かを判定することと、直接卵割事象を起こしたと判定され、該予め定義された発生段階の該継続時間が該予め定義された閾値継続時間を超えると判定される胚を、直接卵割事象を起こしたと判定され、該予め定義された発生段階の該継続時間が該予め定義された閾値継続時間を超えると判定されない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けすること
とをさらに含む、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目８）
直接卵割事象を起こしたと判定される前記胚について、該胚の第２の予め定義された発生段階に対する該胚の第１の予め定義された発生段階の相対継続時間の尺度が、予め定義された範囲の外側にあるか否かを判定することと、直接卵割を起こしたと判定され、該相対継続時間が該予め定義された範囲の外側にある前記胚を、直接卵割事象を起こしたと判定され、前記相対継続時間が前記予め定義された範囲の外側にない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けすること
とをさらに含む、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目９）
直接卵割事象を起こしたと判定されず、前記予め定義された発生段階の前記継続時間が前記予め定義された閾値継続時間を超えると判定される前記胚について、該胚の第２の予め定義された発生段階に対する該胚の第１の予め定義された発生段階の相対継続時間の尺度が、予め定義された範囲の外側にあるか否かを判定することと、直接卵割を起こしたと判定され、該予め定義された発生段階の該継続時間が該予め定義された閾値継続時間を超えると判定され、該相対継続時間が該予め定義された範囲の外側にある胚を、直接卵割事象を起こしたと判定され、該予め定義された発生段階の該継続時間が該予め定義された閾値継続時間を超えると判定され、該相対継続時間が該予め定義された範囲の外側にない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けすること
とをさらに含む、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目１０）
前記第２の予め定義された発生段階に対する前記第１の予め定義された発生段階の前記相対継続時間が前記予め定義された範囲内であると判定される前記胚について、それぞれの胚が予め定義された時間内に予め定義された数の細胞へと発生したか否かを判定し、該予め定義された時間内に該予め定義された数の細胞に発生しなかった胚を、該予め定義された時間内に該予め定義された数の細胞へと発生したと判定される胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けする、
前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目１１）
前記予め定義された数の細胞が８細胞であり、前記予め定義された時間が、６４時間、６５時間、６６時間、６７時間、６８時間、６９時間、７０時間、７１時間、および７２時間を含む群から選択される、項目１０のいずれかに記載の方法。
（項目１２）
前記値が、タイムラプス顕微鏡観察によって得られる、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目１３）
互いに対する前記胚の少なくとも一部についての前記順位を表す表示を出力することをさらに含む、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目１４）
胚を順位付けして胚の発生潜在力を示すための機器であって、
観察期間中に該胚の形態学的発生に関する複数の特性についての値を得るように構成されたデータ入力エレメント；および
該胚のそれぞれの特性について、該胚が直接卵割事象を起こしたか否かの尺度を判定し、直接卵割事象を起こしたと判定される胚を、直接卵割事象を起こしたと判定されない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けし；
直接卵割事象を起こしたと判定されない該胚について、該胚の予め定義された発生段階の継続時間の尺度が、予め定義された閾値継続時間を超えるか否かを判定し、該予め定義された発生段階の該継続時間が、該予め定義された閾値継続時間を超えると判定される胚を、該予め定義された発生段階の該継続時間が、該予め定義された閾値継続時間を超えると判定されない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けし；
該予め定義された発生段階の該継続時間が、該予め定義された閾値継続時間を超えると判定されない該胚について、該胚の第２の予め定義された発生段階に対する該胚の第１の予め定義された発生段階の相対継続時間の尺度が、予め定義された範囲の外側にあるか否かを判定し、該相対継続時間が該予め定義された範囲の外側にある胚を、該相対継続時間が該予め定義された範囲の外側にない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けする
ように構成されたプロセッサーエレメント
を備える機器。
（項目１５）
項目１から１３のいずれかに記載の方法を実施するための機械可読命令を持つ非一時的コンピュータープログラム製品。
（項目１６）
項目１から１３のいずれかに記載の方法を実施するための機械可読命令を搭載され、それを実行するように操作可能である機器。
（項目１７）
添付の図面を参照して実質的に前記項目に記載の機器。
（項目１８）
添付の図面を参照して実質的に前記項目に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１は、どのように着床尤度が、２つの異なるセットの条件下でインキュベートされた胚の２つの集団について任意の発生事象に関連したタイミングの関数として変動し得るかを表す高度に概略的なプロットである。
【図２】図２は、得られる画像に関して、卵割時間（ｔ２〜ｔ５）、細胞周期の継続時間（ｃｃ１〜ｃｃ３）、ならびに同調性（ｓ２およびｓ３）を示す、胚卵割パターンについて本明細書で使用するいくつかの命名法を概略的に表す。
【図３】図３は、最初の授精（時間ｔ＝０における）からの異なる胚発生事象における、および本明細書で使用するタイミングの専門用語のいくつかの関連した態様とともに卵割時間ｔ２〜ｔ８における胚を概略的に表す。
【図４】図４は、本発明の実施形態による胚の発生潜在力を判定するための機器を概略的に表す。
【図５】図５は、本発明の一部の実施形態による、胚の発生潜在力に基づいて胚を順位付けする方法を概略的に表すフロー図である。
【図６】図６は、既知の着床データを有する３，２７５の胚（ＫＩＤ胚）への図５のモデルの適用を概略的に表す分類ツリー図である。
【図７】図７は、請求項５の方法に従って確立した異なるスコアの間の分類ツリー図６に関連した３，２７５のＫＩＤ胚の様々なものの分布を表す棒グラフである。
【図８】図８、１０、および１２は、本発明の他の実施形態による３，２７５のＫＩＤ胚への他のモデルの適用を概略的に表す分類ツリーである。
【図９】図９、１１、および１３は、それぞれ図８、１０、および１２中の分類ツリーによって表されたモデルに従って確立した異なるスコアの間の３，２７５のＫＩＤ胚の様々なものの分布を表す棒グラフである。
【図１０】図８、１０、および１２は、本発明の他の実施形態による３，２７５のＫＩＤ胚への他のモデルの適用を概略的に表す分類ツリーである。
【図１１】図９、１１、および１３は、それぞれ図８、１０、および１２中の分類ツリーによって表されたモデルに従って確立した異なるスコアの間の３，２７５のＫＩＤ胚の様々なものの分布を表す棒グラフである。
【図１２】図８、１０、および１２は、本発明の他の実施形態による３，２７５のＫＩＤ胚への他のモデルの適用を概略的に表す分類ツリーである。
【図１３】図９、１１、および１３は、それぞれ図８、１０、および１２中の分類ツリーによって表されたモデルに従って確立した異なるスコアの間の３，２７５のＫＩＤ胚の様々なものの分布を表す棒グラフである。
【図１４】図１４〜１７は、本発明の実施形態による３，２７５のＫＩＤ胚の異なる亜集団への同じモデル（ｍｏｄｅ）の適用を概略的に表す分類ツリーである。
【図１５】図１４〜１７は、本発明の実施形態による３，２７５のＫＩＤ胚の異なる亜集団への同じモデル（ｍｏｄｅ）の適用を概略的に表す分類ツリーである。
【図１６】図１４〜１７は、本発明の実施形態による３，２７５のＫＩＤ胚の異なる亜集団への同じモデル（ｍｏｄｅ）の適用を概略的に表す分類ツリーである。
【図１７】図１４〜１７は、本発明の実施形態による３，２７５のＫＩＤ胚の異なる亜集団への同じモデル（ｍｏｄｅ）の適用を概略的に表す分類ツリーである。
【図１８】図１８は、図６に表したモデルに従って胚のそれぞれについて確立した異なるスコアのそれぞれについて、胚が受精後１２０時間までに胚盤胞期へと発生したか否か、受精後１２０時間までに胚盤胞期へと発生した胚の割合が分かっている１０，３１６の胚の分析を表す。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明のある特定の例および実施形態の態様および特徴を、本明細書に論じ／記載する。ある特定の例および実施形態の一部の態様および特徴は、慣例的に実装する（ｉｍｐｌｅｍｅｎｔｅｄ）ことができ、これらは、簡潔さの目的で詳細に論じられておらず／記載されていない。したがって詳細に記載されていない本明細書で論じた機器および方法の態様および特徴は、このような態様および特徴を実装するための任意の慣例的な技法に従って実装することができることが十分に理解される。
【００２２】
文脈上別段に要求されない限り、本明細書で使用する用語は、本開示が属する技術分野の当業者が一般に理解するその意味に従って解釈されるべきである。一部の用語は、以下の定義に従って本明細書で使用され得る（文脈上別の意味が要求されない限り）。
【００２３】
卵割時間（細胞分裂時間）は、新しく形成された割球がコンフルエントな細胞膜によって完全に分離されるとき、定義された開始ポイント（ゼロ時間）に対して最初に観察される時点として定義され、したがって卵割時間は、割球卵割の完了の時間である。したがって卵割時間は、以下の通り定義することができる。
・  ｔ２：２割球胚への卵割の時間
・  ｔ３：３割球胚への卵割の時間
・  ｔ４：４割球胚への卵割の時間
・  ｔ５：５割球胚への卵割の時間
・  ｔ６：６割球胚への卵割の時間
・  ｔ７：７割球胚への卵割の時間
・  ｔ８：８割球胚への卵割の時間
・  ｔｎ：ｎ割球胚への卵割の時間
【００２４】
卵割時間は、細胞分裂に関連した他の時点に関して同等に定義され得ることが十分に理解される。例えば、上記定義では、卵割時間は、細胞分裂の完了に関連した時間（すなわち、新しく形成される割球が完全に分離されるとき）に関係するが、別の実装（ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ）では、卵割の時間は、細胞分裂の開始に関連した時間または細胞分裂の中途のポイントに関連した時間として同等に定義され得る。
【００２５】
本文脈では、卵割時間は、通常、定義されたゼロ時間後の時間として表現される。ゼロ時間は、授精の時間（例えば、マイクロインジェクションとも呼ばれる細胞質内精子注入法（ＩＣＳＩ）の時間）であり得、またはそれは、精子および卵母細胞の混合の時間後（伝統的なＩＶＦにおける）、もしくは新しい生物（接合体）を形成するための順調な配偶子の融合が第１の時間について観察される時間後、すなわち、第２の極体の除外後でもあり得る。同様に、それは、前核の出現もしくは衰退／消失、または他の有意な発生パラメータの時間後であり得る。前核の衰退／消失に関しては、前核（ＰＮ）に関して用語「衰退した」および「消失した」が互換的に本明細書で使用されてよい。用語ｔＰＮｆは、前核衰退について判定された時間（すなわち、前核（ＰＮ）がもはや明らかでない時間であると判定された時点）を示すのに使用され得る。
【００２６】
第１の細胞周期継続時間ｃｃ１は、受精と娘細胞の第１の対（すなわち、第１の第２世代細胞）をもたらす卵割時間ｔ２との間の期間である。第２の細胞周期継続時間ｃｃ２は、第１の対の娘細胞をもたらす卵割時間ｔ２と第１の対の孫娘細胞（すなわち、第１の第３世代細胞）をもたらす卵割時間ｔ３との間の期間である。第３の細胞周期継続時間ｃｃ３は、第１の対の孫娘細胞をもたらす卵割時間ｔ３と第１の対のひ孫娘細胞（すなわち、第１の第４世代細胞）をもたらす卵割時間ｔ５との間の期間である。第４の細胞周期継続時間ｃｃ４は、第１の対のひ孫娘細胞をもたらす卵割時間ｔ５と第１の対の玄孫娘（ｇｒｅａｔ−ｇｒｅａｔ−ｇｒａｎｄｄａｕｇｈｔｅｒ）細胞（すなわち、第１の第５世代細胞）をもたらす卵割時間ｔ９との間の期間である。
【００２７】
したがって、これらの細胞周期継続時間は、それぞれの新しい世代について分裂する最速の割球に基づく。しかし、より遅い割球の分裂に関連した追加の細胞周期継続時間が存在する。
【００２８】
例えば、細胞周期継続時間ｃｃ２に加えて、第１の対の娘細胞をもたらす卵割時間ｔ２と第２の対の孫娘細胞をもたらす卵割時間ｔ４との間の期間に対応する細胞周期継続時間ｃｃ２ｂが存在する。この点において細胞周期継続時間ｃｃ２は、専門用語において簡単にするために細胞周期継続時間ｃｃ２ａと呼ばれる場合もある。
【００２９】
さらに、細胞周期継続時間ｃｃ３に加えて、第１の対の孫娘細胞をもたらす卵割時間ｔ３と第２の対のひ孫娘細胞をもたらす卵割時間ｔ６との間の期間に対応する細胞周期継続時間ｃｃ３ｂが存在する。第２の対の孫娘細胞をもたらす卵割時間ｔ４と第３の対のひ孫娘細胞をもたらす卵割時間ｔ７との間の期間に対応する細胞周期継続時間ｃｃ３ｃも存在する。第２の対の孫娘細胞をもたらす卵割時間ｔ４と第４の対のひ孫娘細胞をもたらす卵割時間ｔ８との間の期間に対応する細胞周期継続時間ｃｃ３ｄも存在する。この点において、細胞周期継続時間ｃｃ３は、専門用語における一貫性のために細胞周期継続時間ｃｃ３ａと呼ばれる場合もある。
【００３０】
したがって、細胞周期の継続時間は、以下の通り定義される。
・ｃｃ１＝ｔ２：第１の細胞周期。
・ｃｃ２（ｃｃ２ａとも呼ばれる）＝ｔ３−ｔ２：第２の細胞周期、２割球胚（２  ｂｌａｓｔｏｍｅｒｅ  ｅｍｂｒｙｏ）としての期間の継続時間。
・ｃｃ２ｂ＝ｔ４−ｔ２：両割球についての第２の細胞周期、２および３割球胚としての期間の継続時間。
・ｃｃ３（ｃｃ３ａとも呼ばれる）＝ｔ５−ｔ３：第３の細胞周期、３および４割球胚としての期間の継続時間。
・ｃｃ３ｂ、ｃｃ３ｃ、ｃｃ３ｄ＝それぞれｔ６−ｔ３；ｔ７−ｔ４；およびｔ８−ｔ４：より遅い割球についての第３の細胞周期、それぞれ３、４、および５割球胚としての；４、５、および６割球胚としての、ならびに４、５、６、および７割球胚としての期間の継続時間。
・ｃｃ２＿３＝ｔ５−ｔ２：第２および第３の細胞周期、２、３、および４割球胚としての期間の継続時間（すなわち、ｃｃ２＋ｃｃ３）。
・ｃｃ４＝ｔ９−ｔ５：第４の細胞周期、５、６、７、および８割球胚としての期間の継続時間。
シンクロニシティは、以下の通り定義される。
・ｓ２＝ｔ４−ｔ３：２割球胚から４割球胚への分裂における同調性。
・ｓ３＝ｔ８−ｔ５：４割球胚から８割球胚への分裂における同調性。
・ｓ３ａ＝ｔ６−ｔ５；ｓ３ｂ＝ｔ７−ｔ６；ｓ３ｃ＝ｔ８−ｔ７：４割球胚から８割球胚への発生に関与する個々の細胞分裂の継続時間。
【００３１】
図２および３は、上記に論じたものなどのいくつかの胚発生事象のタイミングおよび継続時間に関して本明細書で使用される専門用語の一部の態様を概略的に表す。図２は、発生の様々な段階における胚のいくつかの画像を示し、様々な発生事象、例えば、ｔ２、ｔ３、ｔ４、ｔ５、ｃｃ１、ｃｃ２（これはｃｃ２ａと本明細書で呼ばれる場合もある）、ｃｃ３（これは、ｃｃ３ａと本明細書で呼ばれる場合もある）、ｓ２、およびｓ３と関連した様々なタイミングを示す。図３は、左から右に、１、２、３、４、５、６、７、および８割球期を通じた胚の発生を概略的に表す。それぞれの細胞分裂期が完了する時間ｔ２〜ｔ８が、下軸に沿って概略的にマークされている。図３は、細胞周期継続時間ｃｃ１、ｃｃ２ａ、ｃｃ２ｂ、ｃｃ３ａ、ｃｃ３ｂ、ｃｃ３ｃ、およびｃｃ３ｄ、ならびにシンクロニシティＳ２およびＳ３も概略的に示す。
【００３２】
卵割期間は、細胞膜中の凹み（細胞質分割のオンセットを示す）の第１の観察結果から細胞質細胞分割が完了し、その結果、割球がコンフルエントな細胞膜によって完全に分離されるときまでの時間の期間として定義される。細胞質分裂の継続時間とも呼ばれる。
【００３３】
受精および卵割は、少なくとも８割球期まで、または緊密化（ｃｏｍｐａｃｔｉｏｎ）のスタートまで、胚の一次形態学的／形態運動的事象であるといくつかの点で見なされる場合がある。卵割時間、細胞周期、分裂および卵割期間の同調性は、これらの一次形態学的事象から定義することができる形態学的胚パラメータの例であり、これらの形態学的胚パラメータのそれぞれは、例えば、時間で測定される２つの形態学的事象間の時間ピリオドの継続時間として定義され得る。
【００３４】
直接卵割は、細胞が、そのＤＮＡが分裂前に適切に複製するのに要求されると仮定される時間より急速に分裂するときである。例えば、細胞は、２個の娘細胞に分裂することができ、次いで、娘細胞の１つがそのＤＮＡを複製するのに通常要する時間前に２個の孫娘細胞に分裂する場合、最初の細胞は、直接卵割事象を起こしたと仮定され得る。すなわち、最初の細胞は、予め定義された時間ピリオド内で、１個の細胞から２個超の細胞、例えば、３個の細胞に分裂している。直接卵割は、異なる細胞周期で起こり得る。例えば、図３を参照すると、ｃｃ２ａ、ｃｃ２ｂ、ｃｃ３ａ、ｃｃ３ｂ、ｃｃ３ｃ、ｃｃ３ｄの任意の短い期間は、直接卵割事象を示していると考えられ得る。
【００３５】
既に述べたように、胚の発生に関連した様々なパラメータ、例えば、上記に論じたタイミングに対応する（またはそれに基づく）パラメータから胚の発生潜在力の尺度を確立することが公知であり、これを行うために、目的の該当するパラメータの値を、胚が該当する段階を通じて発生する際の胚のタイムラプス画像から判定することができる。胚の発生潜在力を判定するための一部の手法では、他の発生特性が目的となり得る。例えば、胚の品質の評価を、以下の形態学的特性について確立された値を考慮に入れることができる。
【００３６】
・  ＮＯＴ２ＰＮ：２つの前核が胚について適切に同定されているか否かの指標。この特性は、適切な発生段階を有する部位における（ａｔ  ｔｈｅ  ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ  ｄｅｖｅｌｏｐ  ｔｈｅ  ｓｉｔｅ  ｗｉｔｈ  ａ  ｍｅｎｔａｌ  ｓｔａｇｅ）胚の画像から視覚的に判定することができ、例えば、前核が胚について適切に同定されているか否か（ｗｈｅｔｈｅｒ  ｏｒ  ｎｏｔ  ｔｏ  ｐｒｏ−ｎｕｃｌｅｉ  ａｒｅ  ｐｒｏｐｅｒｌｙ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ  ｔｈｅ  ｅｍｂｒｙｏ）を示す単純なバイナリ値をとることができ、または胚について同定された標的にされた数を示す値、例えば、胚について同定された前核の数によって「０」、「１」、「２」、「３」、もしくは「４またはそれ超」に対応する値（「２」の値が正常である）をとることができる。
【００３７】
・  ＭＮ２：２つの割球（細胞）期で観察される（任意の）多核形成の指標。この特性は、適切な発生段階における胚の画像から視覚的に判定することができ、２つの割球期における多核形成を示すと判定された細胞の数に対応する「０」、「１」、または「２」に対応する値をとることができる。
【００３８】
・  ＭＮ４：４つの割球期で観察される（任意の）多核形成の指標。この特性は、適切な発生段階における胚の画像から視覚的に判定することができ、４つの割球期における多核形成を示すと同定された細胞の数に対応する「０」、「１」、「２」、「３」または「４」に対応する値をとることができる。
【００３９】
・  ＵＮＥＶＥＮ２：２つの割球期における割球の（非）均等性の指標。この特性は、適切な発生段階における胚の画像から視覚的に判定することができ、「均等」（２つの割球胚における割球は均等と分類される）、または「非均等」（２つの割球胚における割球は非均等と分類される）に対応する値をとることができる。
【００４０】
・  ＵＮＥＶＥＮ４：４つの割球期における割球の（非）均等性の指標。この特性は、適切な発生段階における胚の画像から視覚的に判定することができ、「均等」（４つの割球胚における割球は均等と分類される）、または「非均等」（４つの割球胚における割球は非均等と分類される）に対応する値をとることができる。
【００４１】
これらのパラメータの一部についての値の確立は、例えば、胚を含む細胞が偶数であるか、偶数でないかに関して主観の要素を含み得ることが十分に理解される。具体的な値について採用される専門用語（例えば、「偶数」、「奇数」）は、重要ではなく、値は、他のやり方で、例えば、異なる潜在的な状態に関連した数値、例えば、偶数について「０」、奇数について「１」によって「真」または「偽」として同等に特徴付けることができることも十分に理解される。
【００４２】
胚発生に関連した上記同定したタイミングおよび特性は、胚の発生潜在力を評価するためのモデルを提供しようとするとき、目的のものであり得るパラメータおよび特性のタイプの全体的な理解をもたらすように示されており、典型的には、それはただ単に、所与のモデルについて目的のものであるこれらのパラメータおよび／または特性のサブセットであることがさらに十分に理解される。
【００４３】
胚品質は、移植後子宮内に順調に着床および発生する胚の能力の尺度である。高品質の胚は、低品質胚より移植後に順調に子宮内に着床し（高い着床尤度）、発生して健康なベビーになるより高い確率を有する。しかし、高品質胚でさえ、着床の保証ではなく、その理由は、実際の移植および女性の受容性が最終結果に影響を与えるためである。
【００４４】
生存能および品質は、互換的に使用され得る。胚品質（または生存能）測定値は、品質パラメータのある特定の値（例えば、どのようにパラメータが定義されるかに応じて高いまたは低い値）を有する胚が、高品質（または生存能）である高い確率、および低品質（または生存能）である低い確率を有するように胚の品質（または生存能）を反映するように意図されたパラメータである。一方、品質（または生存能）パラメータについてある特定の他の値を有する胚は、高品質（または生存能）を有する低い確率および低品質（または生存能）である高い確率を有する。
【００４５】
用語「発生潜在力」は、胚盤胞期へと発生する、着床する、妊娠をもたらす、心拍に関連した段階へと発生する、かつ／または生産児（ｌｉｖｅ−ｂｏｒｎ  ｂａｂｙ）をもたらす胚の推定尤度を反映するように使用することができる。一部の実施形態では、発生潜在力は、胚品質の判定であり得る。発生潜在力は、胚品質と同等とすることができる。正の発生潜在力（すなわち、良好な（高い）胚品質）を有する胚は、負の発生潜在力（または劣った（低い）胚品質）を有する胚と比較して、胚盤胞期へと発生する、かつ／または順調な着床をもたらす、かつ／または移植後に子宮内の胚で発生する、かつ／または妊娠をもたらす、かつ／または生産児をもたらす可能性がより高いものである。
【００４６】
したがって、良好な（高い）品質のものと判定される胚は、低品質胚と比較して移植後に順調に着床する、かつ／または子宮内で発生するより高い確率を有すると判定される。しかし、高品質胚は、着床の保証ではなく、その理由は、実際の移植および女性の受容性が、最終結果に高度に影響を与えるためであることが十分に理解される。
【００４７】
一部の場合では、用語「胚」は、その段階でそれが胎児となる受精後８週間までの子宮内の着床後の受精卵母細胞を記載するのに使用され得る。この定義によれば、受精卵母細胞は、着床が起こるまで初期胚（ｐｒｅ−ｅｍｂｒｙｏ）または接合体と呼ばれることが多い。しかし、用語「胚」は、本明細書で使用する場合、初期胚期を含むより広い定義を有する。用語「胚」は、本明細書で使用する場合、卵母細胞の受精から桑実胚、胚盤胞期、孵化、および着床を通じたすべての発生段階を包含する。したがって、用語、胚は、本明細書で、受精卵母細胞、接合体、２細胞、４細胞、８細胞、１６細胞、緊密化、桑実胚、胚盤胞、拡大胚盤胞、および孵化胚盤胞の段階のそれぞれ、ならびに間のすべての段階（例えば、３細胞または５細胞）を表すことであり得る。
【００４８】
胚は、およそ球状であり、ゼラチン様シェル、透明帯として公知の無細胞マトリックスによって囲まれた１つまたは複数の細胞（割球）から構成されている。透明帯は、胚が孵化するまで様々な機能を実施し、胚の評定の良好な目印である。透明帯は、球状かつ半透明であり、細胞デブリと明らかに区別可能であるはずである。
【００４９】
胚は、精子（ｓｐｅｒｍ）細胞（精子（ｓｐｅｒｍａｔｏｚｏａ））の融合または注射によって受精されるとき形成される。用語、胚は、孵化（すなわち、透明帯の破裂）および着床が確実になった後も伝統的に使用される。ヒトに関して、受精卵母細胞は、最初の８週間について接合体または胚と伝統的に呼ばれる。その後（すなわち、８週間後、かつすべての主要臓器が形成されたとき）、それは、胎児と呼ばれる。しかし、接合体、胚、および胎児の間の相違は、一般に、十分に定義されていない。用語、胚および接合体は、互換的に本明細書で使用され得る。
【００５０】
本明細書に記載のものなどの本発明の実施形態によって評価される胚は、以前に凍結されている場合があり、例えば、受精直後に（例えば、１細胞期で）凍結保存された胚であり得、次いで解凍され得る。代わりに、これらは、新たに調製することができ、例えば、例えば、ＩＶＦまたはＩＣＳＩ技法によって卵母細胞から新たに調製される胚であり得る。胚の発生が凍結によって停止されている限りにおいて、受精後の発生事象のタイミングは、凍結と解凍との間の時間を無視することによって定義され得ることが十分に理解される。代わりに、スタート時間は、解凍後の第１の発生事象、例えば、第２の極体の除外、または前核の出現／消失の１つとして定義され得る。
【００５１】
受精は、精子細胞が認識され、卵母細胞によって受け入れられる時点であると見なすことができる。精子細胞は、卵母細胞の減数分裂周期が第２の減数分裂の中期で中断された後に卵活性化（ｅｇｇ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）を誘発する。これは、第２の極体の生成および押出をもたらす。精子および卵子（ｏｖｕｍ）が融合して数時間後に、ＤＮＡ合成が始まる。男性および女性の前核（ＰＮ）が出現する。ＰＮは、卵の中心に移動し、膜が分解し、ＰＮが消失する（衰退する）。２つのゲノムのこの組合せは、配偶子合体と呼ばれる。その後、細胞分裂が始まる。
【００５２】
前核が消失する時間は、ｔＰＮｆと呼ばれる場合がある。前核（ＰＮ）に関して用語「衰退する（衰退した）」および「消失する（消失した）」は、互換的に本明細書で使用され得る。
【００５３】
胚発生中、割球数は、幾何学的に増加する（１−２−４−８−１６−など）。同調的な細胞分割は、一般に、８細胞期またはそれより後まで、ヒト胚における緊密化まで維持される。その後、細胞分割は、非同調性となり、最終的に個々の細胞は、それ自体の細胞周期を有する。不妊症処置中に生成されたヒト胚を、８割球期前にレシピエントに移植することができる。一部の場合では、ヒト胚はまた、移植前に胚盤胞期まで培養される。これは、多くの良品質胚が利用可能であり、またはインキュベーションの延長が着床前遺伝子診断（ＰＧＤ）の結果を待つのに必要であるとき、好ましくは行われる。しかし、インキュベーション技術が改善するにつれて、インキュベーションの延長に向かう傾向が存在する。
【００５４】
本発明の実施形態の一部の例の実装が、胚盤胞関連パラメータを確立するのに使用され得る。
【００５５】
胚盤胞品質判定基準／尺度は、胚品質判定基準／尺度の一例である。胚盤胞品質判定基準は、例えば、緊密化、すなわち、最初の緊密化から、孵化胚盤胞への胚の発生に関係し得る。緊密化は、タイトジャンクションおよびデスモソームを有する割球間の接触の強化が細胞間隙の低減および細胞輪郭の不鮮明をもたらすプロセスである。緊密化の前に、胚の割球を個々に追うことができ、緊密化の前に、胚発生は、観察し、容易にアノテートすることができる明確でほとんど同調的な細胞分裂の経路をたどる。緊密化後、胚発生は、桑実胚から胚盤胞へのある程度連続的な発生によって特徴付けられ、この場合個々の割球は、追跡することが困難になるが、いくつかの段階を、それにもかかわらず、該当する発生段階について得られる画像の目視検査によってこれらの段階と関連したパラメータの値を確立することによって特徴付けることができる。
【００５６】
緊密化のスタート（ＳＣ）は、２つまたはそれ超の割球間の緊密化が観察される第１の時間を記載する。したがって、ＳＣは、緊密化プロセスの開始をマークする。
【００５７】
桑実胚（Ｍ）は、割球同士間の原形質膜を見ることができない第１の時間と関連する。緊密化プロセスが完了したとき、緊密化を形成する割球のいずれの間にも原形質膜を見ることができず、胚を桑実胚として定義することができる。ほとんどの場合、桑実胚は、第４の同調性期間Ｓ４（すなわち、ｔ９で）付近の第３の同調性期間Ｓ３後に（すなわち、ｔ８後に）、または第４の同調性期間Ｓ４（すなわち、ｔ９で）が始まって直ぐに見られるが、より早い場合がある。まれに、胚は、緊密化がヒト胚内で開始される前に卵割して１６細胞またはそれ超になる。
【００５８】
栄養外胚葉の初期分化（ＩＤＴ）は、識別可能な栄養外胚葉細胞が認識される第１の時間として定義される。胞胚形成のスタート（ＳＢ）は、流体で満たされた空洞、胞胚腔を観察することができる第１の時間として定義される。これは、「空洞形成の開始（Ｏｎｓｅｔ  ｏｆ  ｃａｖｉｔａｔｉｏｎ）」とも呼ばれる。これは、胚の桑実胚期と胚盤胞期との間の移行期間の開始を記載する。胚は、実際の胚盤胞期に入る前にある時間にわたってこの移行段階に留まることが多い。空洞形成の開始は、通常、栄養外胚葉細胞の分化後直ちに現れる。外部環境と接触した桑実胚の外層は、塩および水を細胞間隙中に活発にポンピングし始め、その結果として、空洞（胞胚腔）が形成し始める。
【００５９】
内部細胞塊を認識することができる第１の時間として定義される内部細胞塊の初期分化（ＩＤＩＣＭ）。ＩＤＩＣＭは、内部細胞塊発達の開始を記載する。細胞同士間の境界が十分に画定されないようであるギャブジャンクション（ｇａｂ  ｊｕｎｃｔｉｏｎ）に接続された細胞の、偏心性に配置されたクラスター。
【００６０】
胚盤胞（Ｂ）は、胚盤胞が拡大し始める前の最後の像として定義され得る。これが起こるとき、透明帯（ｚｏｎａ  ｐｅｌｌｕｃｉｄ）が通常、変化し始め、栄養外胚葉と内部細胞塊細胞との間に明らかな差違が存在する。
【００６１】
胚盤胞の拡大（ＥＢ）のオンセットは、胚が囲卵腔（ｐｅｒｉｖｉｔｅｌｉｎｅ  ｓｐａｃｅ）を満たし、透明帯（Ｚｏｎａ  Ｐｅｌｕｃｉｄａｅ）を移動させ／拡大し始める第１の時間として定義することができる。ＥＢは、胚の拡大の開始を記載し得る。胚盤胞が拡大するにつれて、透明帯は、明白により薄くなる。
【００６２】
孵化胚盤胞（ＨＢ）は、栄養外胚葉細胞が透明帯を逃れ／貫通した、またはある特定の画分が孵化した第１の時間として定義することができる。
【００６３】
完全孵化胚盤胞（ＦＨ）は、孵化が、透明帯を脱落させて完了するときとして定義される。
胚盤胞発生に関連した様々なタイミングを、以下の通り定義することができる。
ｔＭ＝授精から桑実胚の形成までの時間（時間）
ｔＳＢ＝授精から胞胚形成のスタートまでの時間（時間）
ｔＢ＝授精から胚盤胞の形成までの時間（時間）
ｔＥＢ＝授精から拡大胚盤胞の形成までの時間（時間）
ｔＨＢ＝授精から孵化胚盤胞までの時間（時間）
【００６４】
図４は、本発明のある特定の実施形態によって胚８の発生潜在力を判定するための機器２を概略的に表す。機器２は、胚イメージングシステム６にカップリングした汎用コンピューター４を備える。胚イメージングシステム６は、一般に慣例的であり得、確立された技法に従って発生の様々な段階における胚８の画像を得るように構成されている。一般に、胚イメージングシステム６は、典型的には、監視期間にわたって単一の胚だけでなく、複数の胚の画像を得るように構成されることが十分に理解される。例えば、典型的な研究は、いくつかの胚、例えば、７２の胚の分析に関与し得る。胚イメージングシステムは、次の胚の画像化に進む前に１つずつ各胚の画像（潜在的に複数の焦点面で撮られている画像を有する）を記録するように構成することができる。すべての胚が画像化された後、それは、例えば、５分を要し得るが、個々の胚を画像化するサイクルを繰り返して、次の時点のそれぞれの胚のそれぞれの画像を提供することができる。
【００６５】
汎用コンピューター４は、さらに以下に記載するように、胚イメージングシステム６から得られる画像の分析から胚の発生潜在力を判定／評価するための方法を実行するように適応される（プログラムされる）。
【００６６】
したがってコンピューターシステム４は、本発明の実施形態による胚画像データの処理を実施するように構成される。コンピューター４は、中央処理機器（ＣＰＵ）２４、リードオンリーメモリ（ＲＯＭ）２６、ランダムアクセスメモリ（ＲＡＭ）２８、ハードディスクドライブ３０、ハードウェアインターフェース４６、ディスプレイドライバー３２およびディスプレイ３４、ならびにキーボード３８およびマウス４０を伴ったユーザー入力／出力（ＩＯ）回路３６を含む。これらのデバイスは、共通バス４２を介して接続される。コンピューター４は、共通バス４２を介して接続されたグラフィックスカード４４も含む。グラフィックスカードは、グラフィックスプロセシングユニット（ＧＰＵ）およびＧＰＵにしっかりとカップリングされたランダムアクセスメモリ（ＧＰＵメモリ）を含む。胚イメージングシステム６は、慣例的な技術的技法に従ってハードウェアインターフェース４６を介してコンピューター４に通信可能にカップリングされる。
【００６７】
ＣＰＵ  ２４は、ＲＯＭ  ２６、ＲＡＭ  ２８、またはハードディスクドライブ３０内に記憶されたプログラム命令を実行して、ＲＡＭ  ２８またはハードディスクドライブ３０内に記憶することができる胚画像データの処理を実施することができる。ＲＡＭ  ２８およびハードディスクドライブ３０は、一括してシステムメモリと呼ばれる。一部の実装では、本発明の実施形態による処理は、イメージングシステム６から直接コンピューター４によって得られる胚画像に基づき得る。他の実装では、本発明の実施形態による処理は、以前に得られ、コンピューター４のメモリ内、例えば、ＨＤＤ  ３０のＲＡＭ  ２８内に記憶された胚画像に基づき得る（すなわち、胚イメージングシステム６自体は、本発明の実施形態の要求されるエレメントでない）。コンピューター４の態様は、ＣＰＵが、例えば、ＲＡＭ  ２８、ＲＯＭ  ２６、またはＨＤＤ  ３０内に記憶され得るプログラムを走らせて、本明細書に記載の本発明のある特定の実施形態による処理を実施するように構成されていることを除いて概ね慣例的であり得る。
【００６８】
ある特定の例の実装による胚８は、胚イメージングシステム６を使用して定期的に監視されて関連情報（すなわち、特定の胚発生事象と関連したタイミング、特定の胚発生特性の（非）存在）が得られる。胚は、好ましくは、１時間当たり少なくとも１回、例えば、１時間当たり少なくとも２回、例えば、１時間当たり少なくとも３回、例えば、１時間当たり少なくとも４回、例えば、１時間当たり少なくとも６回、例えば、１時間当たり少なくとも１２回監視される。監視は、好ましくは、胚が、胚を培養するのに使用されるインキュベーター内に置かれている間に行われる。これは、好ましくは、タイムラプス法に関して本明細書に論じたものなどの胚の画像取得によって実施される。
【００６９】
図５は、本発明のある特定の実施形態による胚の発生潜在力によって胚を順位付けするための方法を概略的に表すフロー図である。方法は、例えば、単一患者に関連した複数の胚を順位付けして、どの胚が順調に着床し／生児出生に至る可能性が最も高いかを同定するのを助けるのに適用され得る。胚の数は、患者と処置サイクルとの間でもちろん変動するが、典型的な場合では、単一処置サイクル中の単一患者からの複数の胚は、例えば、６から１２の胚の間のどれかであり得る。方法は、コンピューター実装方法であり得、それは、搭載されたプログラムに従って方法を実装するＣＰＵ２４を有する図４のコンピューター４を使用して実装され得る。
【００７０】
ステップＳ１では、観察期間中の胚の形態学的発生に関する特性についての複数の値が得られる。３日目の移植について胚の関連した発生潜在力について胚を評価するという状況で胚を順位付けするための手法では、この観察期間は、例えば、関連した参照時間（時間ゼロ）後、約７２時間またはそれ超に及びうる。目的の形態学的特性は、目下の具体的な用途に依存し、その理由は、異なる実施形態は、以下でさらに論じるように異なる形態学的特性に依拠し得るためである。この例では、各胚について得られる特性は、
（ｉ）胚が２つの前核を適切に示すか否かに関する指標（例えば、上記で定義したＮＯＴ２ＰＮの値）。
（ｉｉ）ｔ３およびｔＰＮｆの値（これらの値間の相対的に小さい差異は、直接卵割の存在の指標であると考えられる）
（ｉｉｉ）胚の発生が望ましくなく遅いかどうかを識別するのにここで使用される予め定義された発生段階の継続時間（この例では、発生段階は、ゼロ時間（例えば、ＩＣＳＩマイクロインジェクションの時間）からｔ３までである）
（ｉｖ）これらの発生段階の１つの他の者に対する相対継続時間が所望の範囲内であるかどうかを識別するのにここで使用される２つの予め定義された発生段階の継続時間（この例では、２つの発生段階は、ｃｃ３ａの継続時間（すなわち、ｔ５−ｔ３）ならびにｃｃ２ａおよびｃｃ３ａの継続時間の組合せ（すなわち、ｔ５−ｔ２）である）。
（ｖ）胚中の細胞の数が所与の時間内に所与の数に到達することができなかったかどうかに関する指標（これは、この特定の例では、６６時間以内に８細胞である）
であると仮定される。
【００７１】
したがって、要約すると、胚の形態学的発生に関する以下の特性の値を、図５の方法の一例の実装に従って各胚について求めることができる：ＮＯＴ２ＰＮ；ｔＰＮｆ；ｔ２；ｔ３；ｔ５およびｔ８。すべての胚のすべてのこれらの特性の値を得ることが可能でない場合があることが十分に理解される。例えば、胚が観察期間内に８細胞期に到達しないことがあり得、この場合では、ｔ８の値を得ることが可能でないはずである（胚が観察／監視期間内に８細胞に到達しなかったという判定に対応する）。
【００７２】
これらのパラメータの値を、慣例的な技法に従って、例えば、インキュベーター内の胚の慣例的なタイムラプスイメージングを使用して発生中の胚の一連の画像を得、一連の画像から様々な関連した形態学的事象のタイミングおよび出現を同定するための慣例的なアノテーション手順を使用して得ることができる。例えば、これらのパラメータの値を、インキュベーション中の胚をタイムラプスモニタリングするためのＥｍｂｒｙｏＳｃｏｐｅ（ＲＴＭ）デバイス、および目的の事象をアノテートするためのその関連したＥｍｂｒｙｏＶｉｅｗｅｒ（ＲＴＭ）ソフトウェアを使用して得ることができる。ＥｍｂｒｙｏＳｃｏｐｅ（ＲＴＭ）デバイスおよびＥｍｂｒｙｏＶｉｅｗｅｒ（ＲＴＭ）ソフトウェアは、Ｕｎｉｓｅｎｓｅ  ＦｅｒｔｉｌｉＴｅｃｈ  Ａ／Ｓ（Ａａｒｈｕｓ、デンマーク）によって開発され、この会社から入手可能である。以前に確立された技法に従って、アノテーションを、手作業で（例えば、ユーザー入力に基づいて）、かつ／または自動的に（例えば、数値的画像解析／処理に基づいて）、かつ／または半自動的に（例えば、数値的画像処理およびユーザー入力の混合に基づいて）実施できることが十分に理解される。
【００７３】
ステップＳ２では、胚の１つが検討のために選択される。一般に、図５の手法は、各胚のスコアを順次確立するためであり、次いでスコアを、胚をこれらの発生潜在力によって順位付けするための基礎として使用することができる。胚が検討される順序は、重要ではなく、この点において、ステップＳ２で選択される胚は、スコア付けすべき胚から自由裁量で選択され得る。所与の反復について選択された胚は、その反復についての現在の胚と呼ばれ得る。
【００７４】
ステップＳ３では、現在の胚が順位付けされるべきかどうかに関して判定が行われる。この例では、これは、ＮＯＴ２ＰＮの値に基づく。いくつかの点で、これは、低い発生潜在力に強く関連していることが公知である１つまたは複数の特性を有する胚が同定される最初のスクリーニングステップとしてみなすことができる。
【００７５】
ステップＳ３において現在の胚が２つの前核を適切に示さないと判定される場合、胚は、さらに順位付けされるべきでないと判定され、処理は、Ｎとマークされた枝をたどってステップＳ４に行き、そこで現在の胚は、０のスコアに帰され、次いで処理は、ステップＳ１６に進む。ステップＳ１６では、すべての複数の胚が検討されたかどうか、または検討されるさらなる胚が存在するかどうかが判定される。検討されるさらなる胚が存在する場合、処理は、Ｙとマークされた枝をたどってステップＳ２に戻り、そのとき検討のための次の胚が選択される。
【００７６】
他方では、ステップＳ３において胚が２つの前核を適切に示すと判定される場合、処理は、Ｙとマークされた枝をたどってステップＳ５に行く。
【００７７】
ステップＳ５では、胚が観察期間中に直接卵割を起こしたかどうかに関して評価が行われる（直接卵割は、相対的に低い発生潜在力に関連していることが判明している）。この例では、胚の発生に関連した時間ピリオドが閾値継続時間未満であるかどうかを判定し、そうである場合、胚が直接卵割事象を起こしたと判定することに基づく。この例の実装では、直接卵割事象は、ｔＰＮＦとｔ３との間の時間の尺度（ｔ３−ｔＰＮｆ）が約１１．５時間未満（例えば、１１．４８時間未満）である場合、起こったと見なされる。他の閾値の値も使用することができ、例えば、閾値の値は、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、および１４時間を含む群から選択され得る。
【００７８】
一部の他の例の実装では、異なる時間ピリオドが、直接卵割事象があったかどうかを識別するのに使用され得る。例えば、期間の尺度（ｔ３−ｔ２）が、閾値量、例えば、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、および１１時間を含む群から選択される量未満である場合、直接卵割事象が起こったと見なすことができる。さらに別の例では、期間の尺度（ｔ５−ｔ４）が、閾値量、例えば、０．１時間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、および１１時間を含む群から選択される量未満である場合、直接卵割事象が起こったと見なすことができる。さらに別の例では、３細胞への卵割の時間ｔ３と４細胞への卵割の時間ｔ４の比の尺度（ｍｅａｓｕｒｅ  ｔｈｅ  ｒａｔｉｏ  ｏｆ）が、０．９、０．８、０．７、および０．６を含む群から選択される閾値量未満である場合、直接卵割事象が起こったと見なすことができる。一部の実装では、ステップＳ５は、任意の直接卵割事象があったかどうかを識別するのに、いくつかのこれらの時間ピリオドのいずれかがその対応する閾値未満であるかどうかを判定することに関与することができる。
【００７９】
ステップＳ５において、現在の胚が直接卵割を起こしたと判定される場合、処理は、Ｙとマークされた枝をたどってステップＳ６に行き、そこで現在の胚は、１のスコアに帰され、次いで処理は、ステップＳ１６に進む。さもなければ、処理は、Ｎとマークされた枝をたどってステップＳ７に行く。
【００８０】
ステップＳ７では、予め定義された発生段階の継続時間が予め定義された閾値継続時間超であるかどうかに関して評価が行われる。より一般に、ステップＳ７では、胚の発生の態様が相対的に遅い発生を示す（それは、相対的に低い発生潜在力に関連していると判明している）かどうかに関して評価が行われる。この例の実装では、予め定義された発生段階の継続時間は、３細胞に到達するのに要する時間、ｔ３であり、予め定義された閾値継続時間は、約４３時間（例えば、４２．９１時間）である。しかし、他の閾値の値（ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ  ｖａｌｕｅ）をｔ２に関して使用することができ、例えば、閾値の値は、３８時間、３９時間、４０時間、４１時間、４２時間、４３時間、４４時間、４５時間、４６時間、４７時間、および４８時間を含む群から選択され得る。
【００８１】
一部の他の例の実装では、異なる時間ピリオドが、遅い発生があったかどうかを識別するのに使用され得る。例えば、ｔ２の尺度が、閾値量、例えば、２７時間、２８時間、２９時間、３０時間、３１時間、３２時間、３３時間、３４時間、および３５時間を含む群から選択される量未満である場合、遅い発生が起こったと見なすことができる。さらに別の例では、ｔ４の尺度が、閾値量、例えば、４１時間、４２時間、４３時間、４４時間、４５時間、４６時間、４７時間、４７時間、４８時間、４９時間、および５０時間を含む群から選択される量未満である場合、遅い発生が起こったと見なすことができる。さらに別の例では、ｔ５の尺度が、閾値量、例えば、５５時間、５６時間、５７時間、５８時間、５９時間、６０時間、６１時間、６２時間、および６３時間を含む群から選択される量未満である場合、遅い発生が起こったと見なすことができる。一部の実装では、ステップＳ７は、時間ピリオドのいずれかに関して遅い発生があったどうかを識別するのに、いくつかのこれらの時間のいずれかが対応する閾値の値超であるかどうかを判定することに関与することができる。
【００８２】
ステップＳ７において、現在の胚が遅い発生を起こしたと判定される場合、処理は、Ｙとマークされた枝をたどってステップＳ８に行き、そこで現在の胚は、２のスコアに帰され、次いで処理は、ステップＳ１６に進む。他の方法では、処理は、Ｎとマークされた枝をたどってステップＳ９に行く。
【００８３】
ステップＳ９およびＳ１１は、胚の第２の予め定義された発生段階に対する胚の第１の予め定義された発生段階の相対継続時間が、予め定義された範囲の内側または外側にあるかどうかを判定するのに実質的に一緒に働く。より一般には、これらのステップは、組み合わさって、胚の発生の態様が、良好な発生潜在力に関連した胚と比較して、２つの発生段階の相対継続時間の観点から変則的な発生を示すかどうかを評価する。この例の実装では、評価は、２つの段階で、すなわち、第１の段階の第２の段階に対する相対継続時間が、ステップＳ９の範囲の下限未満であるかどうかを判定し、第１の段階の第２の段階に対する相対継続時間がステップｓ１１の範囲の上限超であるかどうかを判定することによって行われる。
【００８４】
したがって、ステップＳ９では、胚の第２の予め定義された発生段階に対する胚の第１の予め定義された発生段階の相対継続時間が、予め定義された制限未満であるかどうかに関して評価が行われる。この例の実装では、第１の予め定義された発生段階は、３細胞への卵割、ｔ３から５細胞への卵割、ｔ５まで（すなわち、ｃｃ３ａ）であり、第２の予め定義された発生段階は、２細胞への卵割、ｔ２から、５細胞への卵割、ｔ５までの段階（すなわち、ｃｃ２ａ＋ｃｃ３ａ）である。したがって、この例で使用される相対継続時間の尺度は、（ｔ５−ｔ３）／（ｔ５−ｔ２）（ｃｃ３ａ／（ｃｃ２ａ＋ｃｃ３ａ）と等価）である。この具体的な実装におけるこの相対継続時間の下限は、約０．３４時間である。しかし、他の下限値、例えば、０．１；０．２；０．３；０．４、または０．５もこのパラメータについて使用することができる。一部の他の例の実装では、異なる相対継続時間を使用して、変則的な発生があったかどうかを識別することができ、これについてのいくつかの例が以下でさらに論じられている。
【００８５】
ステップＳ９において、判定される相対継続時間が下限未満であるために現在の胚が変則的な発生を起こしたと判定される場合、処理は、Ｙとマークされた枝をたどってステップＳ１０に行き、そこで現在の胚は、３のスコアに帰され、次いで処理は、ステップＳ１６に進む。さもなければ、処理は、Ｎとマークされた枝をたどってステップＳ１１に行く。
【００８６】
ステップＳ１１では、胚の第２の予め定義された発生段階に対する胚の第１の予め定義された発生段階の相対継続時間が、予め定義された制限超であるかどうかに関して評価が行われる。この例の実装では、第１のおよび第２の発生段階は、ステップＳ９で使用されるのと同じであり、この具体的な実装におけるこの相対継続時間の上限は、約０．５８時間である。しかし、他の上限値、例えば、０．６、０．７、０．８、または０．９もこのパラメータについて使用することができる。上記で既に述べたように、一部の他の例の実装では、他の相対継続時間を使用して、変則的な発生があったかどうかを識別することができ、これについてのいくつかの例が以下でさらに論じられている。
【００８７】
ステップＳ１１において、該当する発生段階について判定される相対継続時間が上限超であるために現在の胚が変則的な発生を起こしたと判定される場合、処理は、Ｙとマークされた枝をたどってステップＳ１２に行き、そこで現在の胚は、４のスコアに帰され、次いで処理は、ステップＳ１６に進む。さもなければ、処理は、Ｎとマークされた枝をたどってステップＳ１３に行く。
【００８８】
したがって、かつ上記ですでに論じたように、ステップＳ９およびＳ１１の組合せは、胚の第２の予め定義された発生段階に対する胚の第１の予め定義された発生段階の相対継続時間が、予め定義された範囲内である（この場合では、図５の処理は、該当する胚について、ステップＳ１３に到達する）、または範囲の外側にあるかどうかの判定を実質的にもたらし、範囲の外側にある場合には、胚は、それが範囲未満または範囲超であるかどうかに応じて３、または４のスコアに帰されることが十分に理解される。この特定の例の実装では、相対継続時間は、（ｔ５−ｔ３）／（ｔ５−ｔ２）に対応し、予め定義された範囲は、約０．３４〜０．５８である。しかし、他の範囲が使用されてもよく、例えば、範囲は、０．１〜０．９、０．２〜０．８、０．３〜０．７、０．４〜０．６、および０．５〜０．６を含む群から選択され得る。さらに他の例では、異なる第１および第２の予め定義された発生段階を、胚がステップＳ９およびＳ１３に対応するステップにおいて変則的な発生を示すかどうかを確立するのに使用することができる。例えば、使用することができる他のパラメータおよび範囲としては：
・  （ｔ３−ｔ２）／（ｔ５−ｔ２）  −範囲は、０．１〜０．９、０．１〜０．８、０．２〜０．７、０．３〜０．６、または０．４〜０．５
・  （ｔ３−ｔ２）／（ｔ５−ｔ３）  −範囲は、０．０５〜１０、０．１〜９、０．１５〜８、０．２〜７、０．２５〜６、０．３〜７、０．３５〜６、０．４〜５、０．４５〜４、０．５〜３、０．６〜２、または０．７５〜１
・  （ｔ５−ｔ３）／ｔ５  −範囲は、０．１超、０．２超、および０．３超
・  （ｔ４−ｔ３）／（ｔ３−ｔ２）  −範囲は、０．１超、０．２未満、０．３未満、０．４未満、または０．５未満
・  （ｔ８−ｔ５）／（ｔ５−ｔ３）  −範囲は、０．１未満、０．１５未満、または０．２未満
・  （（ｔ３−ｔ２）＋（ｔ５−ｔ４））／（ｔ８−ｔ４）  −範囲は、０．３超、０．４超、０．５超、０．６超、０．７超、または０．８超
・  （ｔ８−ｔ５）／（ｔ８−ｔ４）  −範囲は、０．３超、０．４超、０．５超、０．６超、０．７超、０．８超、０．９超、または０．９７超
・  （ｔ３−ｔＰＮｆ）／（ｔ４−ｔＰＮｆ）（またはｔ３／ｔ４）  −範囲は、０．３５超、０．４５超、０．５５超、０．６５超、０．７５超、０．８５超、０．９５超
・  （ｔ４−ｔ３）／（ｔ４−ｔ２）  −範囲は、０．３未満、０．４未満、０．５未満、０．６未満、または０．７未満
・  （ｔ８−ｔ５）／（ｔ８−ｔ２）  −範囲は、０．２未満、０．３未満、０．４未満、０．５未満、および０．６未満、
が挙げられる。
【００８９】
上記に列挙した範囲の一部は、一端でのみ束縛される（すなわち、一部の範囲は、Ｘ超の値であると指定される）ことに留意される。この場合、図５の処理は、範囲が所与の制限超であるか、所与の制限未満であるかに応じてステップＳ９またはＳ１１の一方または他方を回避するように改変されてもよい。代わりに、任意の極値、例えば、０時間または９９９時間を該当する制限に設定することができる。
【００９０】
様々な発生事象についての継続時間のすべての異なる比（パラメータ（（ｔ３−ｔ２）＋（ｔ５−ｔ４））／（ｔ８−ｔ４）などについて、２７個の修正の和を個々に含み得る）について、重要であるのは、該当する比の指標であることが十分に理解される。これは、上記に示したように計算され得るが、これは、これらの比の「逆」として同等に判定することができる。この点において、Ａ／Ｂの値の表示は、Ｂ／Ａの値の表示でもあることが十分に理解される。
【００９１】
ステップＳ１３では、現在の胚が既定義の時間内に既定義の数の細胞へと発生したか否かに関して評価が行われる。この特定の例の実装では、ステップＳ１３は、現在の胚が６６時間以内に８細胞に到達することに失敗したか否かの判定に基づく。しかし、異なるパラメータを、他の例示的な制限に従って図５の処理のこの態様について使用することができる。例えば、６６時間の代わりに、評価は、異なる時間ピリオド、例えば、６４時間、６５時間、６６時間、６７時間、６８時間、６９時間、７０時間、７１時間、および７２時間を含む群から選択される時間ピリオドに基づいてもよい。
【００９２】
ステップＳ１３において、現在の胚が該当する時間内に要求される数の細胞に到達することに失敗したと判定される場合、処理は、Ｎとマークされた枝をたどってステップＳ１４に行き、そこで現在の胚は、４のスコアに帰され、次いで処理は、ステップＳ１６に進む。さもなければ、処理は、Ｙとマークされた枝をたどってステップＳ１５に行く。
【００９３】
ステップＳ１５では、現在の胚は、５のスコアに帰され、処理は、ステップＳ１６に進む。
【００９４】
上記したように、ステップＳ１６では、順位付けされている複数の胚から検討するための任意のさらなる胚が存在するかどうかについて判定され、存在する場合、処理は、Ｙとマークされた枝をたどってステップＳ２に戻り、そこで上記した処理が、次の胚を選択するために繰り返される。他方では、検討されるべき胚がもはや存在しない（すなわち、順位付けされるべきすべての複数の胚にスコアが帰されている）場合、処理は、Ｎとマークされた枝をたどってステップＳ１７に行く。
【００９５】
ステップＳ１７では、複数の胚が、そのそれぞれのスコアに従って互いに対して順位付けされる。基本的に、より高いスコアが、より大きい発生潜在力を示すと解釈される。次いで１つまたは複数の胚を、患者への着床／移植のために順位付けされた複数の胚から、それらの順位に基づいて、選択することができる。例えば、より高い順位の胚を、より低い順位（より低いスコア）を有する胚に対して優先的に患者への着床／移植のために選択することができる。この点において、各胚に帰された具体的な数値スコア（すなわち、０、１、２、・・・５）は、重要でないことが十分に理解される。他の値も同等に使用され得る。さらに、スコア付けは、良好な発生潜在力を示す低いスコアに基づくことができ、その場合では、図５の処理のステップＳ４は、ステップＳ６より高いスコアと関連付けられ、ステップＳ６はひいてはステップＳ８より高いスコアと関連付けられるなどである。実際に、スコアは、数値的である必要はない。例えば、胚を、ステップＳ４のスコアＡ、ステップＳ６のスコアＢなど、およびステップＤ１５のスコアＥまでと関連付けることができ、順位は、相対的に低い発生潜在力のものであるとしてアルファベットの最も早い文字と関連した胚を同定することに基づき得る。
【００９６】
したがって、図５の処理は、本発明の実施形態によって複数の胚をこれらの発生潜在力に従って順位付けするための方法を表す。これは、様々な発生段階が上記に論じた様々な判定基準を満たすか否かを確立することに関与する。特に、胚は、直接卵割（ステップＳ５）、遅い発生（ステップＳ７）、および変則（組み合わせたステップＳ９およびＳ１３）について評価される。これらの特定の特性、および上記したプロセスに従って全体的な順位を確立することに対するこれらの相対的な重要性は、コホートから胚を順位付けして、順調に着床し、引き続いて生児出生に至る可能性が最も高い胚を同定するモデルを提供することが本発明者らによって見出された。さらに、本発明者らは、この手法が胚の発生条件、例えば、使用される受精方法の特質（ＩＣＳＩまたは古典的なＩＶＦ）、およびインキュベーション雰囲気の特質（例えば、低酸素または周囲酸素）に関連した特性に相対的に非感受性であることを見出した。
【００９７】
図５の処理が胚をこれらの発生潜在力によって順調に順位付けする能力を実証するために、モデルを、既知の着床データが存在する胚（すなわち、ＫＩＤ胚）の履歴データに適用して、どのぐらいよくそのモデルがＫＩＤ胚の公知のアウトカムを予測するかを確立することができる。本発明者らは、約３，２７５のＫＩＤ胚についてこれを行った。３，２７５の胚のこのセットは、約１７，０００のＫＩＤ胚に関連する情報のデータベースからとった。モデルを試験するのに使用した３，２７５の胚の低減されたセットに含まれなかった１７，０００のＫＩＤ胚のデータベースからの胚は、該当する発生事象のアノテーションの品質が信頼できないと見なされたもの、患者の年齢が４０歳を超えていたもの、３日目の移植に関連していなかったもの（モデルのこの具体例に使用されるこの特定のパラメータおよび値は、３日目の移植について胚を順位付けするために選択されるので）、および着床前の遺伝子スクリーニングに関連したものであった。残りの３，２７５のＫＩＤ胚は、４つの主な環境的な群、すなわち（ｉ）古典的なＩＶＦ受精および低酸素インキュベーション雰囲気、（ｉｉ）古典的なＩＶＦ受精および周囲酸素インキュベーション雰囲気、（ｉｉｉ）ＩＣＳＩ受精および低酸素雰囲気、ならびに（ｉｖ）ＩＣＳＩ受精および周囲酸素雰囲気に分けることができた胚を含んでいた。３，２７５の胚のデータは、２３の異なる診療所に由来し、２１の診療所は、少なくとも１０のＫＩＤ胚のデータに寄与し、これらのうちの９の診療所は、少なくとも１００のＫＩＤ胚のデータに寄与している。
【００９８】
図５の処理を３，２７５のＫＩＤ胚のそれぞれに適用した。これの結果は、例えば、いくつの胚が異なるスコアに帰されたかの観点から、図６に表したものなどのモデルの分類ツリーによって表すことができる。
【００９９】
したがって、図６は、３，２７５のＫＩＤ胚への図５のモデルの適用を表す分類ツリーである。各分岐ノード（分類決定が行われる）および末端／リーフノード（スコアが帰される）は、ノードが関係する図５の処理の対応するステップによって図６中に識別されている。各ノードは、ツリーのそのノードに到達した胚の数（ｎ）およびこれらの胚の着床成功（ｉｍｐ）の表示も伴っている。したがって、ツリーは、２５．０％が順調に着床した３，２７５の胚の集団とともにステップＳ５でスタートする。ステップＳ５の処理は、３，２７５の胚を、直接卵割を示す胚（５．６％が順調に着床した２６７の胚）、および直接卵割を示さない胚（２６．６％が順調に着床した３００８の胚）に分ける。次いでステップＳ７の処理が、ステップＳ５からの３，００８の胚を、遅い発生を示す胚（１２．１％が順調に着床した４７０の胚）、および遅い発生を示さない胚（２９．４％が順調に着床した２，５３８の胚）に分ける。次いでステップＳ９の処理が、ステップＳ７からの２，５３８の胚を、１５．５％が順調に着床した１６１の胚、および３０．７％が順調に着床した２，２２９の胚に分ける。すべての胚がこのステップで分類されるわけではない（すなわち、１６１＋２，２２９＜２，５３８）ことが留意され得る。これは、例えば、関連したタイミングがタイムラプスデータにおいて識別可能でなかったために、分類判定基準を適用することが可能でなかった一部の胚が存在するためである。これらは、帰属データ（ｉｍｐｕｔｅ  ｄａｔａ）と呼ばれる場合があり、これらは、図６の分類ツリーで表したバリデーション目的のためのＫＩＤ胚への図５のモデルの適用においてさらなる検討から無視される（すなわち、これらはスコアを与えられない）。患者からの胚のコホートへのモデルの実際の適用において分類することができない胚が存在する場合、慣例的な発生学者の入力を代わりに使用して、これらの胚を順位付けすることを補助することができる。より一般に、本明細書に記載の実施形態による順位は、典型的には、発生学者が最終の順位決定を行うのを補助するのに使用され、本発明の実施形態によって得られる順位は、追加の発生学者の入力を伴わないで最終的であると考えられない場合があることがいずれにしても予期されることが認識される。
【０１００】
図６の分類ツリーから分かるように、ＫＩＤ胚に図５のモデルを適用すると、１２９４の胚が５のスコアに順位付けされ、これらの胚は、３６．１％の着床成功を有する。これは、全体として集団の着床成功より約５０％高く、それは、順位付けされる複数の胚のうちから相対的に高い品質／発生潜在力の胚を同定することができることでそのモデルの強度を実証している。合計９３５の胚がスコア４に帰されることも分かり、その内訳は、２２．９％の着床成功を有するステップＳ１４における４１０の胚、および２３．２％の着床成功を有するステップＳ１２における５２５の胚である。これは、ステップＳ１２に到達する胚およびステップＳ１４に到達する胚は、これらの群がともに同じスコアに帰される同等の着床成功率を有することが統計的に見出されるためである。
【０１０１】
バリデーションのために使用した３，２７５のＫＩＤ胚に図５のモデルを適用する結果はまた、図７に表されている。これは、異なるスコアの中での図６の分類ツリーに関連した３，２７５のＫＩＤ胚のパーセンテージ分布（凡例「ＫＩＤ全データ」によって識別した）、およびまた、順調に着床した図６の分類ツリーに関連した胚のパーセンテージ分布（凡例「ＫＩＤ陽性」によって識別した）を示す棒グラフである。図５および６で表したモデルに従ってこれらの胚について判定されたスコアの中での生児出生をもたらしたと分かった胚の集団のパーセンテージ分布（凡例「生産（ｌｉｖｅｂｏｒｎ）」によって識別した）も図７に示されている。
【０１０２】
図７の生産データに関連した胚の集団は、生児出生をもたらした３，２７５のＫＩＤ胚のすべてに単に対応していない。これは、すべてのこれらの３，２７５のＫＩＤ胚についての生児出生データが利用可能ではないためである。これは、患者が妊娠しても、彼女が処置されたＩＶＦ診療所に、妊娠の最終アウトカムに関する情報が提供されることには必ずしもならないためである。図６の分類ツリーに関連した３，２７５のＫＩＤ胚のうち、わずか約１８０が生児出生をもたらしたと分かっている。多くの他の着床中の胚も生児出生をもたらしたと予期されるが、これらの胚についてのデータは、簡単には利用可能でない。したがって、図７に表した生児出生データは、生児出生データが存在する３，２７５の胚のうちの１８０程、および生児出生データが存在する追加の１２０程の他の胚に対応した。
【０１０３】
図７は、本発明の実施形態による発生潜在力の評価がどのように良好な発生潜在力を有する胚を同定するのに役立つかを実証する。例えば、良好な発生潜在力に関連した胚（すなわち、「ＫＩＤ陽性」および「出生した」胚）の分布が、全体として集団より高いスコアに偏っていることが明らかである。
【０１０４】
異なる実施形態に従って採用され得る図５の手法の様々な改変が存在することが十分に理解される。例えば、図５は一般に、胚が順に検討およびスコア付けされる反復的手法を表すが、他の実装では、胚は、並行して、または少なくとも部分的に並行してスコア付けされ得る。例えば、順に各胚についてステップＳ２〜Ｓ１６を反復するのではなく、順位付け手順の個々のステップの他の実装では、順位付け手順の次のステップに移動する前に複数の胚について実施され得る。例えば、ステップＳ３に対応するステップは、処理がステップＳ５に対応するステップに移動する前にすべての胚について着手することができ、ステップＳ５では、胚が直接卵割を起こしたと見なされるべきかどうかに関する評価が、ステップＳ３に対応するステップにおいて０のスコアで順位付けされなかったすべての胚について実施され得る。
【０１０５】
さらに、一部の実装では、Ｓ３に対応するステップが存在しない場合がある。すなわち、一部の実装では、胚が２つの前核の出現または非出現に基づいて順位付けされるべきかどうかに関する評価が存在しない場合がある。この場合、処理は、図５に表したものと全体的に同様であり得るが、ステップＳ３およびＳ４に対応するステップを伴わない。同様に、いくつかの例では、ステップＳ１３およびＳ１４に対応するステップが存在しない場合がある。
【０１０６】
さらに、かつ既に述べたように、異なるパラメータおよび異なる閾値の値を、方法の様々なステップについて使用することができる。本発明のある特定の実施形態にとって重要なことは、モデルが、胚をこれらの発生潜在力によって順位付けするとき、直接卵割、発生（特に早期の発生）における遅さ、および発生における変則（胚の異なる発生段階に関連した２つの特性の比を評価することによる）を考慮に入れることである。上記に示した異なる例など、これらの特性を示す多くの異なるパラメータが存在する。具体的なパラメータおよび関連した閾値の値は、実装ごとに変動し得る。例えば、上記手法は、普遍的に適用可能であるモデルを提供することが判明しているが、具体的な診療所は、これらの手法に基づいて独自のモデルを開発したい場合があり、この場合、他のパラメータおよび／または閾値の値がその診療所で培養された胚についての胚の発生潜在力の最適化された区別をもたらすことを見出し得る。いずれにしても、該当するパラメータおよび値は、該当する発生条件に関連したＫＩＤ胚の統計分析から確立することができる。例えば、普遍的に適用可能なモデルを確立しようとする場合では、上記に論じた３，２７５のＫＩＤ胚についての公知のアウトカムと比較して、どのように異なるパラメータおよび関連した閾値の値が胚の順位付けにおいて機能したかの分析は、図６の分類ツリーによって表された具体的な例の実装において使用される具体的なパラメータおよびこれらのパラメータの値を識別するものである。
【０１０７】
既に述べたように、本発明の実施形態は、胚発生の３つの態様、すなわち、胚が直接卵割を起こすか否か、胚が相対的に遅い発生を示すか否か、および胚が相対的に変則的な発生を示すか否かを考慮に入れる仕方で胚を順位付けすることに関する。胚がこれらの特性のいずれかを示すか否かは、胚の発生に関連した形態運動的／形態学的データから確立することができる。図６の分類ツリーに関連した例の実装では、直接分割の評価は、パラメータ（ｔ３−ｔＰＮｆ）に基づき、相対的に遅い発生の評価は、パラメータｔ３に基づき、相対的に変則的な発生の評価は、パラメータ（ｔ５−ｔ３）／（ｔ５−ｔ２）に基づく。この特定の例の実装における各パラメータの閾値の値は、以前に論じたように、かつ図６に示したように採用される。しかし、上記したように、他の実装に従って胚を順位付けするために、上記に特定した３つの発生特性（直接卵割、遅い発生、変則的な発生）を評価するのに同等に使用され得る様々な他のパラメータおよび対応する閾値が存在する。
【０１０８】
したがって、図８、１０、および１２は、図６と同様であって、図６から理解されるが、胚が直接卵割、遅い発生、および／または変則的な発生に関連していると見なされるかどうかを評価するための異なるパラメータおよび／または閾値の値に基づく異なるモデルを表す分類ツリーを示す。図９、１１、および１３は、図８、１０、および１２に表したそれぞれの分類ツリーについての、図７と同様であって、図７から理解される、対応する棒グラフである。やはり、これらは、本発明の実施形態に従って判定された良好な発生潜在力に関連した胚の分布がどのように全体として集団より高いスコアに偏っているかを示す。
【０１０９】
図８、１０、および１２のそれぞれにおいて、分類ツリーのノードは、該ノードと最も密接に関連している図５の方法のステップによって特定される。しかし、図８、１０、および１２に表したモデルは、図５の方法の処理に対応するすべてのステップを含むわけではなく、したがって図８、１０、および１２の分類ツリーならびに図６の分類ツリー中のすべてのノード間での直接の対応はない。
【０１１０】
例えば、図８に表した順位付けモデルによれば、図５の方法におけるステップＳ１３に対応するステップはない。すなわち、図８のモデルによる胚の順位付けは、胚が所与の時間内に発生の所与の段階に到達したかどうかを判定することに基づくステップを伴わない。したがって、分類ツリー中に１つ少ない決定ノードが存在し、したがって順位付けモデルの最大スコアは結果としてより少ない（すなわち、５の代わりに４）。しかし、任意の所与のモデルによって得られる具体的な数値的順位付けは、そのモデルによる胚の相対的な発生潜在力を順位付けするためであることが十分に理解される。数値スコアは、異なるモデルで順位付けされた胚との比較のための「絶対的な」順位付けであるように意図されていない。すなわち、図６によって表されたモデルにおける５のスコアは、図６によって表されたモデルにおける４のスコアより高い順位（ｒａｎｋｉｎｇ）として解釈されるが、それは、図８によって表されたモデルにおける４のスコアより高い順位を必然的に示すとして解釈されるべきでない。
【０１１１】
さらに、図１０および１２に表されたモデルにおいて、図６に表されたモデルのステップＳ１１に対応するステップは存在しない。これは、図６における（変則）正則の発生の評価は、パラメータ（ｔ５−ｔ３）／（ｔ５−ｔ２）が、ステップＳ１１における下限およびステップＳ１３における上限によって定義される範囲の内側または外側に入るかどうかに基づくが、図１０のモデルにおける（変則）正則の発生の評価は、（ｔ８−ｔ５）／（ｔ８−２）が、一端でのみ束縛された範囲の内側または外側に入るかどうかの評価に基づくためである。
【０１１２】
各モデルについて、各リーフノードに関連した相対的スコアは、そのリーフノードに到達する胚のそれぞれの着床成功に基づく。例えば、図１２のモデルにおいて、ステップＳ６（すなわち、直接卵割を起こしたと分類された）およびＳ８（すなわち、直接卵割を起こしていないが、遅い発生を示すと分類された）に対応するとマークされたステップに到達するＫＩＤ胚はともに、同等の着床尤度を有し、したがって同じスコアに帰される。
【０１１３】
図６、８、１０、および１２に表されているモデルから分かるように、直接卵割、遅い発生、および変則的な発生について胚を評価するための異なる具体的なパラメータおよび閾値の値に基づくにもかかわらず、モデルはすべて、それにもかかわらず、着床成功によって胚を順位付けることができる。各モデルについて、最高スコアに帰された胚は、約３２％〜３６％の着床尤度に関連し、それは、２５％である、全体としてとられたＫＩＤ胚の集団についての着床尤度に対して有意な改善を表す。すなわち、上記に特定した３つの特性に基づいて胚を順位付けする手法は、着床のより低い尤度を有するものより、着床のより高い尤度を有するものを同定することができる。
【０１１４】
図１４〜１７は、図６と同様であって、図６から理解される、分類ツリー図である。図１４〜１８の分類ツリーは、図６の分類ツリーと同じモデルに基づくが（例えば、直接卵割、遅いおよび変則的な発生を評価するのに使用される具体的なパラメータおよび閾値の観点から）、３，２７５のＫＩＤ胚の異なる亜集団にモデルを適用した結果を示す。
【０１１５】
図１４は、低減酸素雰囲気下でインキュベートされた３，２７５のＫＩＤ胚のサブセットにモデルを適用した結果を示し、図１５は、周囲酸素雰囲気下でインキュベートされた３，２７５のＫＩＤ胚のサブセットにモデルを適用した結果を示す。低減および周囲酸素雰囲気下でインキュベートされた胚にモデルを適用することからの結果は、同等であり、それは、この手法が、胚が低減または周囲酸素条件下でインキュベートされるかどうかに関してほとんど感受性を伴わずに胚を順位付けすることができることを実証することが分かり、これは、本発明の実施形態による手法の普遍性を実証する。
【０１１６】
図１６は、ＩＣＳＩによって受精された３，２７５のＫＩＤ胚のサブセットにモデルを適用した結果を示し、図１７は、古典的なＩＶＦによって受精された３，２７５のＫＩＤ胚のサブセットにモデルを適用した結果を示す。ＩＣＳＩ胚およびＩＶＦ胚にモデルを適用することからの結果は、同等であり、それは、この手法が、胚がＩＣＳＩまたはＩＶＦによって受精されるかどうかに関してほとんど感受性を伴わずに胚を順位付けすることができることを実証することが分かり、これは、本発明の実施形態による手法の普遍性をさらに実証する。
【０１１７】
胚の順位を確立するとき、直接卵割、発生の遅さ、および変則について胚を評価することに加えて、本発明のある特定の実施形態の別の態様は、これらの特性のうちのどれが低い順位により寄与するはずであることかを認識することにあることが十分に理解される。特に、直接卵割は、遅い発生より劣った発生潜在力の強い指標であり、遅い発生は、ひいては、変則的な発生より劣った発生の強い指標であることが特定された。その結果として、ある特定の実施形態によれば、直接卵割を示す胚は、胚が他の判定基準を満たすかどうかにかかわらず、直接卵割を示さない胚より低く順位付けされる。すなわち、３つの判定基準：直接卵割、遅さ、および変則のうちで、直接卵割に関する判定は、遅さに関する判定よりも、他の胚に対して胚の順位付けにより大きいインパクトを有し、遅さに関する判定は、ひいては、変則に関する判定よりも（ｔｈｅｎ）、他の胚に対して胚の順位付けに大きいインパクトを有する。
【０１１８】
ＫＩＤ胚について上記に論じた様々な分類ツリーは、本発明の実施形態によって複数の胚を順位付けるための手法がどのように最大の発生潜在力（最良の品質）を有する胚を同定するのに役立ち得るかを実証する。これは、着床の尤度によって測定される発生潜在力という文脈で主に示された。しかし、かつ既に述べたように、これは、胚の発生潜在力の単に一例の測定法（ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ）であり、本明細書に記載の原理を、発生潜在力の他の尺度、例えば、胚盤胞期に到達する尤度、および／または着床した胚が生児出生へと発生する尤度、および／または着床した胚が心拍に関連する段階へと発生する尤度、および／または胚が移植された患者が妊娠する尤度に基づいて胚を順位付けするのに同等に使用することができる。
【０１１９】
上記に論じた段階的／分類ツリー手法は、これに基づいて胚を順位付けるための単に１つのアルゴリズム手法であり、他のアルゴリズム手法も同じ順位付けスキームを実質的に生じさせ得ることが十分に理解される。例えば、胚の順位を同定するのに、図５および６の手法で表したものなどの決定ツリーを使用して胚を分類するのではなく、すべての胚を、３つすべての特性（直接卵割、遅さ、変則）、および各特性に関する評価のアウトカムに基づいて得られる累積スコアについて評価してもよい。例えば、直接卵割を示さない胚は、１００のスコアを帰されてもよく、直接卵割を示す胚は、このスコア成分について０のスコアを帰されてもよい。遅さを示さない胚は、１０のスコアを帰されてもよく、遅さを示す胚は、このスコア成分について０のスコアを帰されてもよい。変則を示さない胚は、１のスコアを帰されてもよく、変則を示す胚は、このスコア成分について０のスコアを帰されてもよい。したがって、直接卵割、遅さ、および変則を示す胚は、ゼロの累積スコアを有し、一方、直接卵割、遅さ、または変則を示さない胚は、１１１（最大）の累積スコアを有する。この手法に基づくと、胚は、図６の手法のものに対応する順序で順位付けされる（図５に関連したスコアカテゴリーの一部の中の胚のより精密化された順位付けを除く）。
【０１２０】
したがって、胚を順位付けして胚の発生潜在力を示す方法が記載されてきた。方法は、観察期間中に該胚の形態学的発生に関する複数の特性についての値を得ること；該胚のそれぞれの特性について、該胚が直接卵割事象を起こしたか否かを判定し、直接卵割事象を起こしたと判定される胚を、直接卵割事象を起こしたと判定されない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けすること；および直接卵割事象を起こしたと判定されない該胚について、該胚の予め定義された発生段階の継続時間が、予め定義された閾値継続時間を超えるか否かを判定し、該予め定義された発生段階の該継続時間が、該予め定義された閾値継続時間を超えると判定される胚を、該予め定義された発生段階の該継続時間が、該予め定義された閾値継続時間を超えると判定されない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けすること；および該予め定義された発生段階の該継続時間が、該予め定義された閾値継続時間を超えると判定されない該胚について、該胚の２つの予め定義された発生段階の相対継続時間が、予め定義された範囲の外側にあるか否かを判定し、該胚の２つの予め定義された発生段階の相対継続時間が予め定義された範囲の外側にある胚を、該胚の２つの予め定義された発生段階の該相対継続時間が該予め定義された範囲の外側にない胚についてよりも低い発生潜在力を示す順位を用いて順位付けすることを含む。
【０１２１】
いくつかの点で、一部の例の実施形態は、胚を順位付けして胚の発生潜在力を示す方法であって、観察期間中に胚の形態学的発生に関する複数の特性について値を得ること；胚のそれぞれの特性について、胚が直接卵割事象を起こしたか否かの尺度を判定すること；胚のそれぞれの特性について、胚の予め定義された発生段階の継続時間が予め定義された閾値継続時間より長かったか否かの尺度を判定すること；胚のそれぞれの特性について、胚の２つの予め定義された発生段階の相対継続時間が予め定義された範囲の外側にあるか否かの尺度を判定すること；および胚が直接卵割事象を起こしたという判定が、胚の予め定義された発生段階の継続時間が予め定義された閾値継続時間より長かったという判定が寄与するよりも、相対的な低発生潜在力を示す順位に、より寄与するやり方で胚を順位付けすることを含み、ここで、胚の予め定義された発生段階が予め定義された閾値継続時間より長かったという判定が、胚の２つの予め定義された発生段階の相対継続時間が予め定義された範囲の外側にあるという判定が寄与するよりも、相対的な低発生潜在力を示す順位に、より寄与する、方法を提供する。
【０１２２】
いくつかの点で、一部の他の例の実施形態は、胚の発生潜在力を示すスコアを確立する方法であって、観察期間中に胚の形態学的発生に関する複数の特性の値を得ること；第１のスコア成分として、胚が直接卵割事象を起こしたか否かの尺度を判定すること；第２のスコア成分として、胚の予め定義された発生段階の継続時間が予め定義された閾値継続時間より長かったか否かの尺度を判定すること；第３のスコア成分として、胚の２つの予め定義された発生段階の相対継続時間が予め定義された範囲の外側にあるか否かの指標を判定すること；および第１のスコア成分が、第２または第３のスコア成分よりスコアに対して大きいインパクトを有し、第２のスコア成分が、第３のスコア成分よりスコアに対して大きいインパクトを有するやり方で、第１のスコア成分、第２のスコア成分、および第３のスコア成分を考慮に入れることによって胚の発生潜在力を示すスコアを確立することを含む、方法を提供する。
【０１２３】
したがって、かつ上記に論じたように、本明細書に記載の原理による方法は、胚の発生潜在力を示すスコアを確立するのに使用することができる。上記に示した例は、胚の試料の既知の着床データに基づく順調な着床の尤度の指標を提供することに主に着目してきた。しかし、既に説明したように、本方法は、胚の他の発生潜在力の特性、例えば、胚盤胞期へと発生する胚の尤度に関するスコアを確立するのにも適用可能である。
【０１２４】
この点において、図６に表したモデルを、５日間インキュベートされ、１２０時間までに胚が胚盤胞期へと発生したか否かが分かっている、２４１３患者／３７診療所からの１０，３１６の胚を含むデータセットに適用した。実質的に、これは、発生潜在力の指標を確立するモデルの能力を確立するのに本明細書に記載の他の結果の一部について使用した「既知の着床データ」の代わりに「既知の胚盤胞データ」と呼ばれ得るものを使用することに対応する。
【０１２５】
１０，３１６の胚のデータセットは、図６のモデルが開発されたデータセットから完全に独立していた。１０，３１６の胚のこのデータセットは、Ｃｉｒａｙらによる論文「Ｐｒｏｐｏｓｅｄ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  ａｎｄ  ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｙｎａｍｉｃ  ｈｕｍａｎ  ｅｍｂｒｙｏ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  ｂｙ  ａ  ｔｉｍｅ−ｌａｐｓｅ  ｕｓｅｒ  ｇｒｏｕｐ」、Ｈｕｍ．  ｒｅｐｒｏｄ．、２０１４年；２９巻；２６５０〜２６６０頁［１］で提案されたガイドラインに従ってアノテートされた関連した発生パラメータの動態学的情報を含有していた。受精後最大で３日目までの動態学的情報を使用して、図６によって表されたアルゴリズムに従って胚をスコア付けし、それによって各胚をスコア群（１、２、３、４、または５）の１つに割り当てるのに使用した。
【０１２６】
スコア１を割り当てた胚の数は、２０２４であった（このうち、１９１１は、伝統的なＩＶＦで受精され；９３は、ＩＣＳＩで受精され；２０の受精方法は未知であった）。スコア２を割り当てた胚の数は、１４４３であった（このうち、１２８１は、伝統的なＩＶＦで受精され；１４３は、ＩＣＳＩで受精され；１９の受精方法は、未知であった）。スコア３を割り当てた胚の数は、６５６であった（このうち、６２９は、伝統的なＩＶＦで受精され；１６は、ＩＣＳＩで受精され；１１の受精方法は、未知であった）。スコア４を割り当てた胚の数は、１７３４であった（このうち、１５４６は、伝統的なＩＶＦで受精され；１４７は、ＩＣＳＩで受精され；４１の受精方法は、未知であった）。スコア５を割り当てた胚の数は、４４５９であった（このうち、３９９１は、伝統的なＩＶＦで受精され；４１７は、ＩＣＳＩで受精され；５１の受精方法は、未知であった）。したがって、合計１０，３１６の胚について、９３５８が伝統的なＩＶＦで受精され；８１６がＩＣＳＩで受精され；１４２の受精方法は、未知であった。
【０１２７】
胚盤胞予測ツールとしてのモデルアルゴリズムの能力を評価するために、受精後１２０時間までに胚盤胞期（胚盤胞形成）へと発生した胚の割合を、５つのスコア群のそれぞれについて決定した。これの結果を図１８に提示する。これは、スコアの増大とともに胚盤胞期へと発生した各スコアに関連した胚の割合の増大を明らかに示す（例えば、胚盤胞期へと発生するスコア１に関連した胚の約１０％と比較して、スコア５に関連した胚の６０％超が胚盤胞期へと発生した）。これは、胚発生潜在力（この場合胚盤胞期へと発生する尤度）の指標を確立する上記した方法の能力をさらに実証する。
【０１２８】
胚に割り当てた、スコア群間の胚盤胞を形成した胚の画分の差異を検定するために、一般化線形混合効果回帰（ＧＬＭＥＲ、ベルヌーイ誤差分布を用いた）を、説明変数（固定効果）として、異なるスコア群についての胚盤胞形成の尤度、受精方法（ＩＣＳＩまたはＩＶＦ）、およびインキュベーション酸素レベル（低減または周囲）に関して実施した。スコア群、受精方法、および酸素レベルの間のすべての相互作用項を、スコア群中の胚盤胞形成画分がこれらのインキュベーション特性によって影響されたかどうかを検証するのに含めた。患者および診療所の変動性を説明するために、この情報をランダム切片として含め、該切片において、患者が診療所内に入れ子にした（ｎｅｓｔｅｄ）。段階的後方排除（ｓｔｅｐｗｉｓｅ  ｂａｃｋｗａｒｄｓ  ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ）を、パラメータのすべての相互作用を含む完全モデルからスタートして、モデルを低減するために使用した。ｐ＜０．０１の包含判定基準を排除手順に使用した。最終モデルは、スコアおよび受精方法（ＩＣＳＩ／ＩＶＦ）の主効果を含んでいた。
【０１２９】
この分析は、１）スコアの増大が胚盤胞形成の尤度の増大と関連した、スコア群間の胚盤胞形成の尤度の有意差、および２）ＩＶＦの胚盤胞割合がＩＣＳＩより高かったことを実証した。これは、本明細書に記載の原理を、胚盤胞形成の尤度を予測するのに受精後最大で３日目までの利用可能な情報に基づいて使用することができることを例示する。相互作用項のいずれも有意でないと判明したので、スコア群中の胚盤胞割合の一般的なパターンは、ＩＶＦとＩＣＳＩとの間で同じであると結論付けることができる。胚盤胞割合がＩＣＳＩよりＩＶＦにおいて高かったという事実は、ＩＣＳＩが、より困難な症例について特に使用されるという一般的な臨床診療によって説明され得る。
【０１３０】
本発明のさらなる特定のかつ好適な態様は、添付の独立請求項および従属請求項に示されている。従属請求項の特徴を、特許請求の範囲に明示的に示されたもの以外の組合せで独立請求項の特徴と組み合わせることができることが十分に理解される。
【化１】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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