(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
家禽の肥満を管理し、且つ／又は心血管の利益を提供するための２５−ヒドロキシビタミンＤと、カンタキサンチンと、ビタミンＥと、ビタミンＣとの組み合わせの使用。
【請求項２】
ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、ビオチン、亜鉛、銅、マンガン、セレン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの更なる生物活性成分を追加的に含む、請求項１に記載の組み合わせの使用。
【請求項３】
前記家禽が不断給餌される、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記心血管の利益が、
ａ）非エステル化脂肪酸のクリアランス；
ｂ）血漿脂質異常症（トリグリセリド、スフィンゴミエリン、及びセラミド）の改善；
ｃ）肝臓、脚、胸筋、及び心臓におけるトリグリセリド及びセラミドの蓄積の改善；
ｄ）組織炎症誘発性ＩＬ−１βの産生及び血漿ＩＬ−６濃度の抑制；
ｅ）心臓でのＳＴＡＴ−３（シグナル伝達性転写因子３）のリン酸化の上方制御による心臓保護及び心臓機能の強化；
ｆ）免疫細胞の心臓への浸潤の抑制；
ｇ）腹水の発生率の低下；
ｈ）心血管障害による群れの突然死の発生率の低下；
ｉ）心臓の病的状態（拡張、心膜液貯留、破裂）の発生率の低下；
ｊ）ＥＣＧパターンの不規則部発生量の低下；
ｋ）不整脈の発生率の低下；
ｌ）心筋線維化の改善；
ｍ）慢性全身性炎症の改善；及び
ｎ）制限飼料摂取した又は不断飼料摂取した雌鶏における心臓細胞のアポトーシスの改善
からなる群から選択される少なくとも１つの利益である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
家禽の肥満を管理し、且つ／又は心血管の利益を提供する方法であって、２５−ヒドロキシビタミンＤと、カンタキサンチンと、ビタミンＥと、ビタミンＣとの組み合わせを前記家禽に与えるステップを含む、方法。
【請求項６】
ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、ビオチン、亜鉛、銅、マンガン、セレン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの更なる生物活性成分を与えるステップを追加的に含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記家禽が不断給餌される、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記心血管の利益が、
ａ）非エステル化脂肪酸のクリアランス；
ｂ）血漿脂質異常症（トリグリセリド、スフィンゴミエリン、及びセラミド）の改善；
ｃ）肝臓、脚、胸筋、及び心臓におけるトリグリセリド及びセラミドの蓄積の改善；
ｄ）組織炎症誘発性ＩＬ−１βの産生及び血漿ＩＬ−６濃度の抑制；
ｅ）心臓でのＳＴＡＴ−３（シグナル伝達性転写因子３）のリン酸化の上方制御による心臓保護及び心臓機能の強化；
ｆ）免疫細胞の心臓への浸潤の抑制；
ｇ）腹水の発生率の低下；
ｈ）心血管障害による群れの突然死の発生率の低下；
ｉ）心臓の病的状態（拡張、心膜液貯留、破裂）の発生率の低下；
ｊ）ＥＣＧパターンの不規則部発生量の低下；
ｋ）不整脈の発生率の低下；
ｌ）心筋線維化の改善；
ｍ）慢性全身性炎症の改善；及び
ｎ）制限飼料摂取した又は不断飼料摂取した雌鶏における心臓細胞のアポトーシスの改善
からなる群から選択される少なくとも１つの利益である、請求項５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［発明の簡単な説明］
本発明は、２５−ヒドロキシビタミンＤ（「２５−ＯＨ  Ｄ３」及び／又は「２５−ＯＨ  Ｄ２」）と酸化防止剤／抗炎症剤（アスコルビン酸、ビタミンＥ、及びカンタキサンチン）との組み合わせを含む食餌をトリに与えることにより、不断摂食する家禽が肥満になるのを防止する方法に関する。この栄養補助剤の組み合わせは、心血管疾患を含む、過食及び関連肥満に伴う様々な悪影響から家禽を保護する。本発明はまた、この目的のために使用される、２５−ヒドロキシビタミンＤと酸化防止剤／抗炎症剤との組み合わせを含む飼料及び飼料プレミックスにも関する。
【０００２】
［発明の背景］
家禽は、過食を示すことがある、即ち、摂食を自己制御せず、肥満になるリスクがある。肥満の家禽は、卵巣及び心血管に関連した疾患を含む多数の悪い状態に苦しむこともあり、従って、群れにおける肥満の発生を防止する又は少なくとも最小限にすることが望ましい。生産条件下では、これは、群れが摂食可能な飼料の量を制限することによって行われる場合が多い。しかしながら、個体によっては、餌を得るために攻撃的になって群れの他の個体と争うこともあり、従って肥満になったり、他のトリを傷つけたりする。
【０００３】
制限給餌された雌鶏とは対照的に、任意給餌は、脂肪蓄積の増加；肝臓のトリアシルグリセロールの蓄積；並びに血漿グルコース、非エステル化脂肪酸、超低密度リポタンパク質、トリアシルグリセロール、リン脂質、セラミド、及びスフィンゴミエリンの濃度上昇を含む代謝調節異常も誘発した。更に、肝臓及び血中のセラミド及びスフィンゴミエリンの蓄積、並びに肝臓及び脂肪組織での炎症誘発性ＩＬ−１βの発現の上方制御は、飼料が十分な雌鶏での脂肪毒性の発生を全身的に示した。セラミドは、特定の栄養素（即ち、飽和脂肪酸）及び炎症性サイトカイン（例えば、腫瘍壊死因子−α、ＴＮＦ−α）を細胞機能の制御に結び付け、且つインスリンのシグナル伝達及びミトコンドリア機能をアンタゴナイズする重要な媒介物である。更に、特に影響を受けやすい細胞型に対するその毒作用の結果として、セラミドは、心臓、膵臓、及び脈管構造に損傷を与える能力を有する。飼料が十分な雌鶏における卵胞閉鎖、卵巣退縮、及び血中エストラジオールのレベルの低下を含む卵巣機能不全障害もたらす脂肪毒性がセラミドの蓄積並びにＩＬ−１β、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ、及びスフィンゴミエリナーゼ転写物の存在量の上方制御によって更に例証されたが、階層的卵胞内でのプロテインキナーゼＡｋｔの活性化を抑制した。従って、生体内でのエビデンスが、ブロイラー雌鶏における過剰給餌による卵胞閉鎖及び卵巣退縮の進行の仲介におけるセラミド及びＩＬ−１βの作用を明確にした。
【０００４】
制限給餌計画が商業用ブロイラー種鶏の群れで厳密に実施されているにもかかわらず、ブロイラー種鶏固有の過食により、なお種雌鶏は非常に過食しやすい。更に、種鶏場管理者は、産卵の開始前及び最中、並びに産卵の少し前、最中、及びピーク後にいつどのように給餌するかの問題に直面している。基本的且つ根本的な問題は、過体重の雌鶏の肥満に関連した繁殖効率の悪影響及び有害な影響を改善するために、種鶏場管理者が管理ツール及び栄養ツールをどのように適用及び実施できるかを問うことである。
【０００５】
Ｈｙ・Ｄ（登録商標）（２５−ＯＨ−Ｄ３の登録商標；ＤＳＭ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄから入手可能）を、家禽の骨の健康を促進するために使用した。
【０００６】
２５−ＯＨ  Ｄ３とカンタキサンチンとの組み合わせも家禽に使用されている。国際公開第２０１０／０５７８１１号パンフレット（ＤＳＭ  ＩＰ  ＡＳＳＥＴＳ，ＢＶ）に、家禽における孵化率、受精率の向上、及び胚死亡率の低下に使用されるこの組み合わせが記載されている。この組み合わせは、ＭＡＸＩＣＨＩＣＫの登録商標で販売されている。この特許公報には、アスコルビン酸の含有又は過食関連肥満の悪影響の改善のための使用についての記載がない。
【０００７】
ビタミンＣ（アスコルビン酸）は、通常の飼育条件下でニワトリが十分なビタミンＣを産生できるため、家禽の食餌に補助剤として含められないことが多い。しかしながら、一部の特定の条件、例えば、熱ストレスの状態では使用されている。
【０００８】
ビタミンＥは、一般に家禽の飼料に添加される。ブロイラーに推奨される与えられる量は、動物の年齢により、約５０〜１００ＩＵ／飼料１ｋｇである傾向にある。
【０００９】
国際公開第１４／１９１１５３号パンフレット（ＤＳＭ  ＩＰ  ＡＳＳＥＴＳ  Ｂ．Ｖ）は、カンタキサンチンと、ビタミンＣ、ビタミンＥ、セレンの少なくとも１つと、任意選択であるチモール、オイゲノール、バニリン、及びγ−テルピネンの少なくとも１つとの組み合わせが、特に群れがワクチン接種に関連したストレスを受けている場合、免疫状態、骨の健康、骨格の発達及び成長、並びに飼料効率を向上させ得ることを教示している。
【００１０】
国際公開第１４／２０２４３３号パンフレット（ＤＳＭ  ＩＰ  ＡＳＳＥＴＳ  Ｂ．Ｖ）は、カンタキサンチンと２５−ＯＨ  Ｄ３との組み合わせが内部の卵の質を向上させる、即ち、平らな表面で破壊されたときに卵白が水のように広がるのを防止することによって卵の新鮮さを維持し、及び卵のハウトユニット値（アルブミンの高さ）を維持することを教示している。この組み合わせのアスコルビン酸への添加、又は過食関連肥満の悪影響の改善におけるその使用については記載がない。
【００１１】
食餌が不断給餌される家禽の体重増加を調節する必要がある。
【００１２】
［発明の詳細な説明］
本発明により、２５−ヒドロキシビタミンＤ（２５−ＯＨ  Ｄ３及び／又は２５−ＯＨ  Ｄ２）と酸化防止剤／抗炎症剤との組み合わせは体重増加を調節することが見出された。本発明の組み合わせを含む食餌が不断給餌される家禽は、適度な量だけ体重が増加し、肥満にはならず、又は心血管障害を含む過食関連肥満に伴う他の有害な影響も受けない。
【００１３】
２５−ＯＨ  Ｄ２及びは２５−ＯＨ  Ｄ３は、与えた後に同様に作用し得るため、酸化防止剤／抗炎症剤と組み合わせて別個に使用してもよく、又は２５−ＯＨ  Ｄ３と２５−ＯＨ  Ｄ２との両方の混合物を酸化防止剤／抗炎症剤と組み合わせて使用してもよいと考えられる。一緒に使用される場合、２５−ＯＨ  Ｄ３：２５−ＯＨ  Ｄ２の比率は、本発明の重要な部分ではない。単独で使用される２５−ＯＨ  Ｄ３が好ましい。
【００１４】
本発明の酸化防止剤／抗炎症剤は、アスコルビン酸と、ビタミンＥと、カンタキサンチンとの組み合わせを含む。従って、本発明の一態様は、家禽の体重増加の調節に使用される、２５−ＯＨ  Ｄ３と、カンタキサンチンと、ビタミンＥと、アスコルビン酸との組み合わせである。別の実施形態は、家禽の体重増加の調節に使用される、２５−ＯＨＤ２と、カンタキサンチンと、ビタミンＥと、アスコルビン酸との組み合わせである。別の実施形態は、家禽の体重増加の調節に使用される、２５−ＯＨＤ３と、２５−ＯＨＤ２と、カンタキサンチンと、ビタミンＥと、アスコルビン酸との組み合わせである。
【００１５】
また、本発明により、２５−ＯＨ  Ｄと酸化防止剤／抗炎症剤との組み合わせが家禽の心血管の健康状態も向上させ得ることも見出された。従って、本発明の別の態様は、特に不断給餌される家禽において心血管の健康状態を向上させ、且つ／又は心血管障害を改善するためのこの組み合わせの使用である。更に、本発明の別の態様は、２５−ＯＨ  Ｄと酸化防止剤／抗炎症剤との組み合わせを家禽の群れに与えるステップを含む、家禽の群れにおける心血管の健康を向上させる方法であり、前記組み合わせは、基礎食餌に加えて与えられる。
【００１６】
本発明の別の態様は、家禽における体重増加の調節及び／又は心血管障害の改善に使用される、２５−ＯＨ  Ｄと、カンタキサンチンと、ビタミンＥと、アスコルビン酸との組み合わせであり、この組み合わせは、任意選択により、ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、亜鉛、銅、マンガン、及びセレンからなる群から選択される少なくとも１つの更なる生物活性成分を更に含む。好ましくは、２５−ＯＨ  Ｄは、２５−ＯＨ  Ｄ３である。好ましくは、少なくともビタミンＤは、更なる生物活性成分である。時には、更なる生物活性成分は、少なくともビタミンＤ及びセレンを含む。場合により、更なる生物活性成分の全てが添加される。
【００１７】
更なる態様は、家禽における体重増加の調節及び／又は心血管障害の改善に使用される、２５−ＯＨ  Ｄと、カンタキサンチンと、ビタミンＥと、アスコルビン酸との組み合わせであり、この組み合わせは、任意選択により、ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、ビオチン、亜鉛、銅、マンガン、セレン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの更なる生物活性成分を更に含む。好ましくは、２５−ＯＨ  Ｄは、２５−ＯＨ  Ｄ３である。時には、更なる生物活性成分は、ビオチンを含む。時には、更なる生物活性成分は、ビタミンＤ及びビオチンを含む。時には、更なる生物活性成分は、上述の任意選択による生物活性成分の全てを含む。
【００１８】
本発明の別の態様は、家禽における体重増加の調節及び／又は心血管障害の改善に使用される、２５−ＯＨ  Ｄ２又は２５−ＯＨ  Ｄ３又はこれらの混合物と、アスコルビン酸と、ビタミンＥと、カンタキサンチンとの組み合わせを含む家禽用飼料である。
【００１９】
なお別の実施形態は、家禽における体重増加の調節及び／又は心血管障害の改善に使用される、２５−ＯＨ  Ｄと、カンタキサンチンと、ビタミンＥと、アスコルビン酸との組み合わせを含む家禽用飼料であり、この組み合わせは、任意選択により、ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、亜鉛、銅、マンガン、セレン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの更なる生物活性成分を更に含む。好ましくは、２５−ＯＨ  Ｄは、２５−ＯＨ  Ｄ３である。時には、更なる生物活性成分は、少なくともビタミンＤ及びセレンを含む。場合により、更なる生物活性成分の全てが添加される。
【００２０】
別の実施形態は、家禽における体重増加の調節及び／又は心血管障害の改善に使用される、２５−ＯＨ  Ｄと、カンタキサンチンと、ビタミンＥと、アスコルビン酸との組み合わせを含む家禽用飼料であり、この組み合わせは、任意選択により、ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、ビオチン、亜鉛、銅、マンガン、セレン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの更なる生物活性成分を更に含む。時には、更なる生物活性成分は、ビオチンを含む。好ましくは、２５−ＯＨ  Ｄは、２５−ＯＨ  Ｄ３である。時には、更なる生物活性成分は、ビタミンＤ及びビオチンを含む。時には、更なる生物活性成分は、上述の任意選択による生物活性成分の全てを含む。
【００２１】
なお別の実施形態は、心血管の予防効果の提供に使用される、２５−ＯＨ  Ｄと、カンタキサンチンと、ビタミンＥと、アスコルビン酸との組み合わせを含む家禽用飼料であり、この組み合わせは、任意選択により、ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、亜鉛、銅、マンガン、セレン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの更なる生物活性成分を更に含む。好ましくは、２５−ＯＨ  Ｄは、２５−ＯＨ  Ｄ３である。時には、更なる生物活性成分は、少なくともビタミンＤ及びセレンを含む。場合により、更なる生物活性成分の全てが添加される。
【００２２】
別の実施形態は、心血管の健康状態の向上に使用される、２５−ＯＨ  Ｄと、カンタキサンチンと、ビタミンＥと、アスコルビン酸との組み合わせを含む家禽用飼料であり、この組み合わせは、任意選択により、ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、ビオチン、亜鉛、銅、マンガン、セレン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの更なる生物活性成分を更に含む。時には、更なる生物活性成分は、ビオチンを含む。好ましくは、２５−ＯＨ  Ｄは、２５−ＯＨ  Ｄ３である。時には、更なる生物活性成分は、ビタミンＤ及びビオチンを含む。時には、更なる生物活性成分は、上述の任意選択による生物活性成分の全てを含む。
【００２３】
本発明の家禽用飼料を使用する場合、動物に不断給餌することができ、通常経験する過食による悪影響がより軽度であるか又は全くない。これにより、群れの管理が容易になると共に、群れが制限給餌されても特定の個々のトリがなお過食を示し、且つ他のトリに対する攻撃的な行動を示し得る場合に直面する問題が解消される。従って、本発明の別の態様は、家禽の体重増加を調節し、且つ／又は群れの心血管の健康状態を向上させる方法であり、この方法は、上述の飼料又は組み合わせを含む食餌を家禽に給餌するステップを含む。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】２５−ＯＨ  Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤と組み合わせられた不断飼料摂取に応じたブロイラー種雌鶏のグルコースクリアランス及びインスリン分泌を示す。雌鶏は、３週間の給餌後に羽の静脈に１回量のグルコース（０．５ｇ／体重ｋｇ）が注入された。血液サンプルは、グルコース注入後の指定の時点で羽の静脈のカニューレ―ションによって採取した（ｎ＝３）。
【図２】２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤と組み合わせられた不断飼料摂取に応じたブロイラー種雌鶏の組織中のインターロイキン−１βの含有量及びＩＬ−６のレベルを示す。組織サンプル及び血液サンプルは、飼育試験の１０週間後に採取した。上付き文字が異なる平均値は有意に異なる（ｐ＜０．０５）（ｎ＝３）。
【図３】２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤と組み合わせられた不断飼料摂取に応じたブロイラー種雌鶏の組織中のＳＴＡＴ−３活性化を示す。組織サンプル及び血液サンプルは、飼育試験の１０週間後に採取した。上付き文字が異なる平均値は有意に異なる（ｐ＜０．０５）（ｎ＝３）。
【図４】２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤含有物と組み合わせられた不断飼料摂取に応じたブロイラー雌鶏の剖検中に撮られた写真を示す。雌鶏は飼育試験の１０週間後に剖検した。
【図５】２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤含有物と組み合わせられた不断飼料摂取に応じたブロイラー雌鶏の剖検中に撮られた写真を示す。雌鶏は飼育試験の１０週間後に剖検した。
【図６】２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤含有物と組み合わせられた不断飼料摂取に応じたブロイラー雌鶏の剖検中に撮られた写真を示す。雌鶏は飼育試験の１０週間後に剖検した。
【図７】制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の産卵に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示す。
【図８】制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の生存率に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示す。
【図９】制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の体重に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示す。
【図１０】制限飼料摂取下又は不断飼料摂取下、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤が食餌添加された、死んだ雌鶏の心臓の形態全体を示す一連の写真である。
【図１１】制限飼料摂取下又は不断飼料摂取下、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤が食餌添加された、死んだ雌鶏の心臓の形態全体を示す一連の写真である。
【図１２】制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏のＥＧＣに対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を実証する一連の心電図（ＥＧＣ）である。矢印はパターンにおける不規則部を指す。
【図１３】制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の不整脈ＥＣＧパターンに対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示す一連のＥＧＳである。
【図１４】制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の（３５週齢での）心筋線維化に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響実証する写真及びグラフを示す。
【図１５】制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の血漿ＩＬ−６及びＩＬ−１βの濃度に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示すグラフである。
【図１６】制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の（３５週齢での）心臓細胞のアポトーシスに対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示す写真である。
【図１７】制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の（３５週齢での）心臓細胞のアポトーシスに対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示す写真である。
【００２５】
本明細書及び特許請求の範囲を通じて使用される用語には、以下の定義が適用される：「２５−ＯＨ  Ｄ」は、任意の形態の２５−ヒドロキシビタミンＤ（即ち、２５−ＯＨ  Ｄ２又は２５−ＯＨ  Ｄ３又はこれらの混合物）を指す。２５−ＯＨ  Ｄ３は、具体的には２５−ヒドロキシビタミンＤ３を指し；２５−ＯＨ  Ｄ２は、具体的には２５−ヒドロキシビタミンＤ２を指す。
【００２６】
「ビタミンＤ」は、ビタミンＤ２、ビタミンＤ３、又は組み合わせを意味する。ビタミンＤ３が好ましい。
【００２７】
「家禽」は、食肉となり、食卓用卵を産卵し、及び繁殖用の卵を産卵するニワトリ、カモ、ガチョウ、シチメンチョウ、ウズラ、及びダチョウを含む任意の家畜化された鳥類を意味する。
【００２８】
「過食」は、過剰な摂食である。動物はその摂取を自ら制限しない。
【００２９】
「体重増加を改善する」は、本明細書に記載の２５−ＯＨ  Ｄ３と酸化防止剤／抗炎症剤との組み合わせを摂取する、不断給餌されたときの家禽による体重の増加の量が、２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤を摂取せずに同じ食餌を摂取した家禽と比較して少ないことを意味する。この組み合わせを摂取するトリは、制限給餌されたトリよりも体重が増加し得る。
【００３０】
「アスコルビン酸」及び「ビタミンＣ」は、本明細書及び添付の特許請求の範囲を通じて互換的に使用さる。
【００３１】
「基礎食餌」は、使用される飼料が、家禽のビタミン及びミネラルが十分であるように家禽に十分なビタミン及びミネラルを供給することを意味する。
【００３２】
「２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤」は、本明細書で説明される用量範囲で、基礎食餌の追加として飼料に添加される２５−ＯＨ  Ｄ３と、ビタミンＥと、カンタキサンチンと、アスコルビン酸との組み合わせを意味する。任意選択により、好ましくは、ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、ビオチン、亜鉛、銅、マンガン、セレン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される追加の生物活性成分が、２５−ＯＨＤ３と、ビタミンＥと、カンタキサンチンと、アスコルビン酸との組み合わせに添加される。
【００３３】
「突然死」は、事前の徴候又は疾患又は外傷を示さずに個々のトリが死ぬことを意味する。トリは、見かけ上は健康であるが、高頻度に体が仰向けにひっくり返っている間の短期間の羽ばたき及び脚の動きで急に死ぬ。トリはまた、横向き又は胸を地面に付けて死んで見つかることもある。特定の肉眼的病変は全く存在しない。近年の研究により、死んだトリが心筋細胞及び心内膜下のプルキンエ細胞における病変を有することが示され、これが診断に役立ち得る。
【００３４】
本発明の一態様では、２５−ＯＨ  Ｄ３と酸化防止剤／抗炎症剤との組み合わせは、ビタミンが不十分ではなくビタミンが十分な家禽に与えられる。ビタミンが十分な状態は、家禽にとって少なくとも最小限の量のビタミン及びミネラルを供給する基礎飼料の使用によることが好ましい。従って、本発明のこの組み合わせは、好ましくは基礎食餌に加えて使用される。
【００３５】
［代謝異常の軽減］
本発明の飼料／プレミックスの使用によって弱める、軽減する、又はなくすことができる、過食に関連した代謝異常は、以下を含む：
ａ）非エステル化脂肪酸のクリアランス
ｂ）血漿脂質異常症（トリグリセリド、スフィンゴミエリン、及びセラミド）の改善
ｃ）肝臓、脚、胸筋、及び心臓におけるトリグリセリド及びセラミドの蓄積の改善
ｄ）組織炎症誘発性ＩＬ−１βの産生及び血漿ＩＬ−６濃度の抑制
ｅ）心臓におけるＳＴＡＴ−３（シグナル伝達性転写因子３）のリン酸化の上方制御による心臓の保護及び心臓機能の促進
ｆ）免疫細胞の心臓への侵入の抑制
ｇ）腹水発生の低減。
【００３６】
これらの上述の観察された向上した状態により、死亡率の低下、インスリンのシグナル伝達の向上、脂質毒性の発生及び全身性炎症の低減、及び栄養過剰による心臓病の病因に対する心臓保護機構の活性化が起こる。
【００３７】
［２．突然死を含む心血管障害］
群れ内のトリは突然死することがあり、即ち、死因が直ちにはわからない。これを実施例４に詳述されるように更に調べ、その結果が本明細書に要約されている。本発明者らは、２５−ＯＨ  Ｄ３と酸化防止剤／抗炎症剤との組み合わせと共に又はこの組み合わせなしで、不断給餌された群れ及び制限給餌された群れでのこの現象を調べた。本発明者らの結果の一部が以下に説明される。
【００３８】
本発明により、２５−ＯＨ  Ｄ３と酸化防止剤／抗炎症剤との組み合わせ、不断給餌されたトリでは、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤を含む飼料が与えられた突然死のトリ（即ち、突然死したトリ）は、より重い体重を有するが、より軽い相対的な肝臓、腹部脂肪、及び心臓の重量を有することが見出された。
【００３９】
突然死のトリでは、不断給餌は心臓順応性肥大を引き起こし；及び肥大成長の一部は病理学的に心室拡張をもたらし得る。結果として、心臓は、末梢組織への酸素送達のための血液供給の要求を満たすようにポンプ機能を維持するために、より高い収縮性を必要とする。この状態が心不全を引き起こし得る。
【００４０】
重要なことに、本発明者らは、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤が心臓の病原性の進行を低下させ、これにより、不断給餌されるトリでの心不全の発生率を低下させることを見出した。従って、本発明の別の態様は、家禽、特に不断給餌されるトリでの突然死をもたらす心臓障害の総数を減少させるための２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の使用である。
【００４１】
制限給餌されたトリ及び不断給餌されたトリの両方において、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤を摂取したトリは、より小さい順応性肥大の成長を示し、これは、殆どの過剰な栄養が筋肉に分配され得るという仮説を裏付け、従って、ポンプ機能を増強するための心臓の肥大成長は、より高い成長率（筋肉）に対する酸素供給の要求を満たすことができず、従って心不整脈及び心不全を引き起こし得る。
【００４２】
２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、以下の効果を有することが分かった：
・死んだトリの死体で観察される心臓の病的状態（拡張、心膜液貯留、破裂）の発生率の低下；
・ＥＣＧパターンの不規則部発生量の低下；
・不断給餌されるブロイラー雌鶏の不整脈の低減；
・心臓の病的状態によって引き起こされる突然死の改善；
・不断給餌される雌鶏の心筋線維化の改善；
・不断給餌される雌鶏の慢性全身性炎症の改善；
・制限飼料摂取する又は不断飼料摂取する雌鶏における心臓細胞のアポトーシスの改善。
【００４３】
従って、２５ＯＨ  Ｄ３＋酸化防止剤は心血管系を保護することができる。従って、本発明の別の態様は、心血管系を保護するための２５−ＯＨ  Ｄ３＋酸化防止剤−抗炎症剤の使用であり、この保護には、心臓の病的状態（拡張、心膜液貯留、破裂）の発生率の低減；ＥＣＧパターンの不規則部発生量の低減；不整脈の低減；群れにおける心臓の病的状態によって引き起こされる突然死数の改善；心筋線維化の改善；慢性全身性炎症の改善；及び心臓細胞のアポトーシスの改善からなる群から選択される少なくとも１つの効果が含まれる。
【００４４】
［用量］
本発明の一態様では、２５−ＯＨ  Ｄ３と酸化防止剤／抗炎症剤との組み合わせは、ビタミンが不十分ではなく十分な家禽に与えられる。ビタミンが十分な状態は、好ましくは、少なくとも最少量の家禽用のビタミン及びミネラルを供給する基礎飼料の使用による。従って、本発明の組み合わせは、好ましくは基礎食餌に加えて使用される。
【００４５】
２５−ＯＨ  Ｄ３：２５−ＯＨ  Ｄ３の量は１５〜２００μｇ／飼料１ｋｇであり得る。好ましくは、２５−ＯＨ  Ｄ３の量は３５〜１５０μｇ／飼料１ｋｇである。本発明の組み合わせが低用量の飼料では、３５μｇ／飼料１ｋｇの２５−ＯＨ  Ｄ３が好ましく；この組み合わせが中用量の飼料では、６９μｇ／飼料１ｋｇが好ましく；この組み合わせが高用量の飼料では、１５０μｇ／飼料１ｋｇが好ましい。
【００４６】
ビタミンＥ：ビタミンＥの量は４０〜４００ｍｇ／飼料１ｋｇであり得る。好ましくは、この量は８０〜３００ｍｇ／飼料１ｋｇである。本発明の組み合わせが低用量の飼料では、８０ｍｇ／ｋｇのビタミンＥが好ましい。中用量の飼料では、１５０ｍｇのビタミンＥが好ましく；高用量の飼料では、３００ｍｇ／ｋｇのビタミンＥが好ましい。
【００４７】
カンタキサンチン：カンタキサンチンの量は１〜１５ｍｇ／飼料１ｋｇであり得る。好ましくは、この量は３〜１２ｍｇ／飼料１ｋｇである。本発明の組み合わせが低用量の飼料では、３ｍｇ／ｋｇのカンタキサンチンが好ましい。中用量の飼料では、６ｍｇのカンタキサンチンが好ましく；高用量の飼料では、１２ｍｇ／ｋｇのカンタキサンチンが好ましい。
【００４８】
アスコルビン酸：アスコルビン酸の量は４０〜４００ｍｇ／飼料１ｋｇであり得る。好ましくは、この量は１００〜３００ｍｇの飼料である。本発明の組み合わせが低用量の飼料では、１００ｍｇ／ｋｇのアスコルビン酸が好ましい。中用量の飼料では、１５０ｍｇのアスコルビン酸が好ましく；高用量の飼料では、３００ｍｇ／ｋｇのアスコルビン酸が好ましい。
【００４９】
従って、本発明の特定の好ましい飼料は、以下の用量（全ての量は飼料１ｋｇ当たりである）を含む。
【００５０】
好ましい飼料番号１：
２５−ＯＨ  Ｄ３：１５〜２００μｇ、
ビタミンＥ：４０〜４００ｍｇ、
カンタキサンチン：１〜１５ｍｇ；及び
アスコルビン酸：４０〜４００ｍｇ。
【００５１】
好ましい飼料番号２：
２５−ＯＨ  Ｄ３：３５〜１５０μｇ、
ビタミンＥ：８０〜３００ｍｇ、
カンタキサンチン：３〜１２ｍｇ、及び
アスコルビン酸：８０〜３００ｍｇ。
【００５２】
好ましい飼料番号３（低用量の飼料）  この飼料は、軽度に肥満の家禽に好ましい。
２５−ＯＨ  Ｄ３：３５μｇ、
ビタミンＥ：８０ｍｇ、
カンタキサンチン：３ｍｇ
アスコルビン酸：８０ｍｇ。
【００５３】
好ましい飼料番号４（中用量の飼料）  この飼料は、中程度から高度に肥満の家禽に好ましい：
２５−ＯＨ  Ｄ３：６９μｇ
ビタミンＥ：１５０ｍｇ
カンタキサンチン：６ｍｇ
アスコルビン酸：１５０ｍｇ。
【００５４】
好ましい飼料番号５（高用量の飼料）  この飼料は、重度に肥満の家禽に好ましい：
２５−ＯＨ  Ｄ３：１５０μｇ
ビタミンＥ：３００ｍｇ
カンタキサンチン：１２ｍｇ
アスコルビン酸：３００ｍｇ。
【００５５】
上記の酸化防止剤／抗炎症剤の互いに対する比率は、以下の範囲とすることができる：
・ビタミンＣに対するビタミンＥは、１〜１０：１０〜１；好ましくは１〜５：５〜１；より好ましくは１．５：１〜１：１．５、最も好ましくは１：１であり得る。
・カンタキサンチンに対するビタミンＥ又はビタミンＣは、４０：１〜１：１；好ましくは２０：１〜１：１；より好ましくは１０：１〜１：１であり得る。
【００５６】
好ましい比率は以下を含む。
【００５７】
【表１】
0006623416.tif 000002
【００５８】
［任意選択である追加成分］
上に列記された飼料のそれぞれに対して、少なくとも１つの追加成分を添加することができる。好ましくは少なくとも１つの以下の成分、より好ましくは２つ以上の以下の成分が添加される。他の実施形態では、以下の成分が全て添加される。
【００５９】
ビタミンＤ３  −  一般的に、これは約２５００ＩＵ／飼料１ｋｇで家禽の食餌中に存在する。本発明によると、必要に応じてビタミンＤの量は少なくとも３０００ＩＵ／ｋｇに増量される。
【００６０】
ビタミンＢ２：これは、３〜２５ｍｇ／ｋｇ；好ましくは６〜２０ｍｇ／ｋｇで添加することができる。低用量の飼料の場合、６ｍｇ／ｋｇが好ましい。中用量の飼料の場合、１４ｍｇ／ｋｇが好ましく；及び高用量の飼料の場合、２０ｍｇ／ｋｇが好ましい。
【００６１】
ナイアシン：これは、２５〜３００ｍｇ／飼料１ｋｇで添加することができる。好ましくは、ナイアシンは６０〜２００ｍｇ／ｋｇである。低用量の飼料の場合、６０ｍｇ／ｋｇが好ましい。中用量の飼料の場合、１２０ｍｇ／ｋｇが好ましく；及び高用量の飼料の場合、２００ｍｇ／ｋｇが好ましい。
【００６２】
パントテン酸：これは１０〜１２０ｍｇ／飼料１ｋｇで添加することができる。好ましくは、パントテン酸は１５〜８０ｍｇ／ｋｇである。低用量の飼料の場合、１５ｍｇ／ｋｇが好ましい。中用量の飼料の場合、３０ｍｇ／ｋｇが好ましく；及び高用量の飼料の場合、８０ｍｇ／ｋｇが好ましい。
【００６３】
葉酸：これは１〜８ｍｇ／飼料１ｋｇで添加することができる。好ましくは、葉酸は２〜６ｍｇ／ｋｇである。低用量の飼料の場合、２ｍｇ／ｋｇが好ましい。中用量の飼料の場合、４ｍｇ／ｋｇが好ましく；及び高用量の飼料の場合、６ｍｇ／ｋｇが好ましい。
【００６４】
ビオチン：これは０．０５〜１．０ｍｇ／飼料１ｋｇで添加することができる。好ましくは、ビオチンは０．２〜０．８ｍｇ／ｋｇである。低用量の飼料の場合、０．２ｍｇ／ｋｇが好ましい。中用量の飼料の場合、０．４ｍｇ／ｋｇが好ましく；及び高用量の飼料の場合、０．８ｍｇ／ｋｇが好ましい。
【００６５】
亜鉛：これは５０〜３００ｍｇ／飼料１ｋｇで添加することができる。好ましくは、亜鉛は７０〜２５０ｍｇ／ｋｇである。低用量の飼料の場合、７０ｍｇ／ｋｇが好ましい。中用量の飼料の場合、１２５ｍｇ／ｋｇが好ましく；及び高用量の飼料の場合、２５０ｍｇ／ｋｇが好ましい。
【００６６】
銅：これは５〜５０ｍｇ／飼料１ｋｇで添加することができる。好ましくは、銅は１０〜３０ｍｇ／ｋｇである。低用量の飼料の場合、１０ｍｇ／ｋｇが好ましい。中用量の飼料の場合、２０ｍｇ／ｋｇが好ましく；及び高用量の飼料の場合、３０ｍｇ／ｋｇが好ましい。
【００６７】
マンガン：これは５０〜３００ｍｇ／飼料で添加することができる。好ましくは、マンガンは８０〜２７０ｍｇ／ｋｇである。低用量の飼料の場合、８０ｍｇ／ｋｇが好ましい。中用量の飼料の場合、１５０ｍｇ／ｋｇが好ましく；及び高用量の飼料の場合、２７０ｍｇ／ｋｇが好ましい。
【００６８】
セレン：これは０．０５〜０．６ｍｇ／飼料１ｋｇで添加することができる。好ましくは、セレンは０．１〜０．４ｍｇ／ｋｇである。低用量の飼料の場合、０．１ｍｇ／ｋｇが好ましい。中用量の飼料の場合、０．３ｍｇ／ｋｇが好ましく；及び高用量の飼料の場合、０．５ｍｇ／ｋｇが好ましい。
【００６９】
上述の用量及び好ましい用量を得るためにプレミックスを調製することができる。本発明の一部を構成する１つのプレミックスは、１グラムのプレミックスが１キログラムの飼料に添加されて得られる飼料が、所与の用量のいずれかで説明された用量を含むように配合される。当然、個々の成分の用量は、１キログラムのプレミックスが１メートルトンの飼料に添加されて得られる飼料が、上記の所与の用量のいずれかで説明された用量を含むように様々にすることができる。この特定の例示が以下の実施例に記載される。
【００７０】
更に、本明細書に明記される組み合わせは、あらゆる市販の家禽飼料に添加できることが企図され、従って、存在する２５−ＯＨＤ３と酸化防止剤／抗炎症剤との総量は、飼料中に元々存在した量に、本明細書に明記される追加を加えた量に等しいであろう。また、本明細書に明記される２５−ＯＨＤ３及び酸化防止剤／抗炎症剤は、家禽の栄養に最小限必要な栄養素を少なくとも含む基礎食餌に対する唯一の追加であることも企図される。
【００７１】
以下の非限定の実施例は、本発明をより良く例示するために示される。
【００７２】
［実施例］
［実施例１］
［材料及び方法］
合計３０匹の４５週齢のブロイラー種鶏（ＲＯＳＳ  ３０８）を研究のために商業用の群れから得た。ブロイラー種鶏の産卵用基礎食餌は、表１に示されているように配合した。計算した栄養成分は表２に示されている。
【００７３】
【表２】
0006623416.tif 000003
【００７４】
【表３】
0006623416.tif 000004
【００７５】
【表４】
0006623416.tif 000005
【００７６】
酸化防止剤／抗炎症剤（アスコルビン酸、カンタキサンチン）及び濃縮レベルの選択されたビタミンと組み合わせられた６９ｍｃｇ／飼料１ｋｇの２５−ＯＨ  Ｄ３を飼料に添加した又は添加しなかった。以下の給餌計画（制限及び不断）に従って雌鶏を３つの処置群に無作為に割り振った。
１．基礎食餌  −  制限給餌（１４０ｇ／日）
２．基礎食餌  −  不断給餌
３．基礎食餌  −  不断給餌＋６９ｍｃ／飼料１ｋｇの２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤
【００７７】
雌鶏は、２５±３℃の温度、１４時間：１０時間の明期：暗期の制御された室内に設けられたステンレス製ケージで個々に飼育した。水は自由に飲めるようにした。実験期間は１０週間にわたった。飼育試験の３週間後、一部のトリを関連するプラズマパラメーター分析に使用した。実験の最後に、雌鶏を更なる研究用の組織サンプルの採取のために安楽死させて犠牲にした：
組織形態の剖検
脂質及びスフィンゴ脂質プロフィールの決定  −  血清及び組織
組織炎症誘発性サイトカインの決定
インスリン抵抗性の決定
骨の強度分析のための脛骨の採取
筋疾患分析のための心臓（心筋症）及び骨格筋（胸筋及び大腿筋）の採取。
【００７８】
［実施例２］
［結果及び考察］
［２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤は、過剰給餌されたブロイラー雌鶏の脂肪蓄積及び腹部脂肪を抑制した］
種雌鶏は、肝臓、脂肪組織、及び発達中の卵母細胞の卵黄に大量の過剰なエネルギー（トリグリセリドの形態で）貯蔵することができる。脂質生成（即ち、グルコースのトリグリセリドへの変換）は、トリの肝臓で主に起こり、且つ解糖、クエン酸回路、及び脂肪酸合成を含む一連の関連した酵素触媒反応を伴う。肝臓の脂肪合成は、栄養及びホルモンの両方による制御の影響を受け、飼料の変化によく反応する。脂肪組織は主に、脂肪合成活性が殆どない脂肪の貯蔵部位としての役割を果たす。トリにおける肝臓組織と脂肪組織との脂肪生成能力の差異は、重要な転写因子、ステロール調節エレメント結合タンパク質−１（ＳＲＥＢＰ−１）の発現に応じる。ＳＲＥＢＰ−１の遺伝子は、肝臓で高度に発現されるが、脂肪組織では遥かに少ない量である。更に、多数の脂肪生成酵素遺伝子、例えば、脂肪酸合成酵素、リンゴ酸酵素、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ、ＡＴＰクエン酸リアーゼ、及びステロイルＣｏＡデサチュラーゼの発現は、ＳＲＥＢＰ−１による影響を直接受ける。
【００７９】
不断給餌された種雌鶏は、制限給餌された種雌鶏よりも多くの腹部脂肪が増大した。２５−ＯＨＤ３及び酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加は、体重及び組織重量、特に相対脂肪組織の重量（脂肪蓄積）に対する不断給餌の有害な響を改善する（表４）。不断給餌された雌鶏の脛骨強度が２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤によって強化された。
【００８０】
【表５】
0006623416.tif 000006
【００８１】
［２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤は、死亡率を低下させ、産卵数、卵巣形態、及び血漿１７βエストラジオールレベルを向上させた］
エストラジオールの分泌は、排卵卵胞の成功の顕著な特徴である。性腺刺激ホルモンの排卵前の急増を引き起こすその役割に加えて、エストラジオールは、重要な卵巣内での成長因子、分化因子、及び生存因子である。２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤を含めることにより、不断飼料摂取下のトリにおける死亡率並びに卵巣変性及び卵巣腫瘍様形態の発生率が低下し、産卵数が増加し、及び血漿エストラジオールレベルが維持された。
【００８２】
［２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤は、グルコースクリアランス障害及びインスリン感受性を改善した］
２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤を食餌に含めることにより、１０週間過剰給餌された雌鶏における空腹時血漿グルコースレベル及び非エステル化脂肪酸レベルの改善によって明らかなようにインスリン抵抗性が向上する（表６）。グルコースクリアランス試験では、痩せた雌鶏は、グルコース注入から３０〜６０分に非常に急激なクリアランス率を示したが、逆に肥満の雌鶏は、３０〜９０分に非常に鈍いクリアランス率を有していた（図１）。インスリンの分泌において、肥満の雌鶏は、痩せた雌鶏と比較すると空腹状態及びグルコース注入後に高い血漿インスリンレベルを示した（図１）。グルコースクリアランス及びグルコースによるインスリンの分泌の両方が、過剰給餌された雌鶏で２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤を３週間含めることによって修正された（図１）。
【００８３】
【表６】
0006623416.tif 000007
【００８４】
［２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤は脂質異常症を改善した］
不断給餌された雌鶏は、血漿トリグリセリド、セラミド、及びスフィンゴミエリンのレベルが上昇した。しかしながら、組み合わせられた２５−ＯＨ  Ｄ３と酸化防止剤／抗炎症剤との添加は、不断給餌された雌鶏の血漿中のこれらの脂質の代謝産物のレベルを低下させた（表６）。
【００８５】
【表７】
0006623416.tif 000008
【００８６】
［２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤は、組織中のトリグリセリド及びセラミドの含有量の蓄積を減少させた］
肝臓、心臓、及び脚筋でのトリグリセリド及びセラミドの蓄積は、不断給餌された雌鶏よりも、補助的な２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤が給餌された雌鶏で減少した（表７）。
【００８７】
【表８】
0006623416.tif 000009
【００８８】
［２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤は、過剰給餌されたブロイラー雌鶏における組織炎症誘発性ＩＬ−１βの産生及び血漿ＩＬ−６の濃度を低下させた］
肥満関連炎症が、血中ＩＬ−６のレベル並びに脂肪組織、肝臓、脚筋、胸筋、及び心臓におけるＩＬ−１βの産生の抑制によって明らかなように、食餌２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤の添加によって改善した（図２）。
【００８９】
［２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤は、不断給餌されたブロイラー種雌鶏における脂肪毒性を改善した］
肥満の主な合併症はインスリン抵抗性の発症であり、インスリン抵抗性とは、インスリンがその主な標的組織、骨格筋、及び肝臓で食後に栄養物を貯蔵できなくなる状態である。理論に拘泥することを望むものではないが、２つの推定の機構が、脂肪貯蔵量の増大が全身の全インスリン感受性にどのように影響を及ぼし、末梢組織におけるインスリンシグナル伝達の下方制御に寄与するかを説明し得ることが明らかである。第１に、栄養物の細胞又は組織への送達が細胞又は組織の貯蔵能力を超え、これにより、インスリン作用を阻害する代謝産物が生じる。特に注目すべきは、脂質誘導体、例えば、トリアシルグリセロール及びセラミドは、特定のインスリンシグナル伝達中間体を阻害することが示されており、従って食後のグルコースの取り込み及び／又はグリコーゲンの合成をブロックする。ブロイラー種雌が不断給餌される場合、末梢組織におけるこれらの代謝産物の持続的な蓄積が、雌鶏全体のインスリン抵抗性の持続的な状態及び脂質毒性の発生に寄与する可能性が高い。第２に、脂肪蓄積の増加が、脂肪細胞から又は脂肪体に浸潤したマクロファージから産生される炎症誘発性サイトカインの血中濃度の上昇によって特徴付けられる慢性炎症状態を誘発する。これらの炎症性メディエーターは、インスリンシグナル伝達を直接アンタゴナイズし、また異化プロセスを誘発し、従って栄養代謝産物のインスリン応答性器官への送達を更に増加させることを示した。
【００９０】
総じて、過剰な飽和脂肪酸の生成、従って非脂肪組織における脂質の蓄積をもたらすグルコースの過剰供給が、代謝調節並びに活性化炎症反応及び脂質毒性の発生に関与するシグナル伝達経路を阻害する活性脂質（スフィンゴ脂質）の細胞でのレベルを上昇させる。特に、セラミドは、過剰な栄養物（即ち、飽和脂肪酸）及び炎症誘発性サイトカインの両方をインスリン抵抗性の誘発に結び付ける推定上の中間体である。更に、セラミドは、種々の細胞型で毒性であり、且つ心臓、膵臓、及び脈管系を損傷させ得る。更に、２５−ヒドロキシＤ３及び酸化防止剤／抗炎症剤は、飽食量が与えられたブロイラー種雌鶏で発生する脂肪蓄積の増加から生じる代謝性及び内分泌性調節異常及び炎症誘発反応の悪影響の改善に有効であった。
【００９１】
［２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤は、過剰給餌されたブロイラー雌鶏における心臓の病的状態、腹水、及び炎症を改善する］
心臓は、過剰な脂質の蓄積によって機能不全になることがある。心臓でのトリグリセリドの蓄積を促進した不断給餌は、心臓の脂肪酸の利用可能性の増加により、適応的にエステル化してトリグリセリドになることを示唆した。加えて、心臓のセラミド含有量も不断給餌の結果として上昇した。セラミドは、脂肪毒心筋症における心臓毒であり、免疫細胞のより多くの心筋内への浸潤によって明らかなように炎症反応を引き起こした（表９）。
【００９２】
【表９】
0006623416.tif 000010
【００９３】
心臓肥大は、心臓の作業負荷の増加に対する臨床的な適応反応を表す。しかしながら、神経因子及びホルモン因子に対する心臓反応は、後負荷又は血管抵抗の増加と無関係の肥大変化も誘発し得る。栄養過剰による心臓の代償性成長がブロイラー種雌鶏で起きた（表８）。心肥大は、不適応となって最終的に病的状態を引き起こし、心不全が起こり得る。これらの結果は、心臓での脂質毒性の発生及び肥大成長が炎症反応を誘発する傾向にあるという事実を裏付けた。
【００９４】
リン酸化ＳＴＡＴ−３（シグナル伝達性転写因子３）の心臓保護の役割は、近年、次第に明らかになってきている。興味深いことに、組み合わせられた２５−ＯＨ  Ｄ３と酸化防止剤／抗炎症剤とは、制限給餌された種雌鶏よりも高いＳＴＡＴ−３の活性化（即ち、ＳＴＡＴ−３のリン酸化）を心臓で誘発し（図３）、最も低い活性化が不断給餌されたブロイラー種雌鶏で観察された。心膜内での浸出液、心室拡張、及び腹水の発生が、組み合わせられた２５−ヒドロキシＤ３と酸化防止剤／抗炎症剤とが添加されたときに不断給餌された種雌鶏で軽減された。
【００９５】
［実施例３］
［プレミックス］
【００９６】
【表１０】
0006623416.tif 000011
【００９７】
【表１１】
0006623416.tif 000012
【００９８】
【表１２】
0006623416.tif 000013
【００９９】
［実施例４］
［心筋症試験］
［材料及び方法］
合計３０匹の４５週齢のブロイラー種雌鶏（ＲＯＳＳ  ３０８）を研究のために市販の群れから得た。ブロイラー産卵種鶏の基礎食餌は、表１２に示されているように配合した。計算した栄養成分は表１３に示されている。
【０１００】
【表１３】
0006623416.tif 000014
【０１０１】
【表１４】
0006623416.tif 000015
【０１０２】
【表１５】
0006623416.tif 000016
【０１０３】
食餌を、酸化防止剤（アスコルビン酸、カンタキサンチン）と組み合わせられた６９ｍｃｇ  ２５−ＯＨ−Ｄ３／食餌１ｋｇのＨｙ・Ｄ（登録商標）を添加して又は添加せずに、選択されたビタミンのレベルに濃縮した。雌鶏を以下のように給餌計画（制限及び不断）に従って無作為に処置群に振り分けた：
１．基礎食餌  −  制限給餌（１４０ｇ／日）
２．基礎食餌  −  制限給餌＋Ｈｙ・Ｄ（登録商標）（６９ｍｃｇ／飼料１ｋｇの２５−ＯＨ−Ｄ３）＋酸化防止剤／抗炎症剤
３．基礎食餌  −  不断給餌
４．基礎食餌  −  不断給餌＋Ｈｙ・Ｄ（登録商標）（６９ｍｃｇ／飼料１ｋｇの２５−ＯＨ−Ｄ３）＋酸化防止剤／抗炎症剤
【０１０４】
［結果：］
【０１０５】
【表１６】
0006623416.tif 000017
【０１０６】
図７は、制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の産卵に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示す。表１５及び図７から、以下のように結論付けることができる：
１．２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、生存率を上げることによって総卵生産量を改善した。
２．死んだトリでは、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、不断給餌されたトリの卵生産量及び産卵率に対して影響がなかったが、制限されたトリでは卵生産量及び産卵率が低下した。しかしながら、群れ全体では、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は卵生産量を増加させたが、産卵率を増加させなかった。
３．これらの結果は、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤が、突然死しやすい制限されたトリの死への進行を加速させ、従って、突然死しやすいトリを長期生存のために排除するための群れの選択装置（ｃｕｌｌｅｒ）として機能し、これにより群れの管理費が削減されることを示唆した。
【０１０７】
【表１７】
0006623416.tif 000018
【０１０８】
図８は、制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の生存率に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示す。
【０１０９】
［表１６及び図８からの結果及び注釈：］
１．２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、トリの生存率を向上させた。
２．不断給餌されたトリでは、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤が与えられて死んだトリは、より重い体重を有していたが、より軽い相対的な肝臓、腹部脂肪、及び心臓の重量を有しており、殆どの過剰な栄養が筋肉に分配された可能性を示唆し、これにより、ポンピング機能の向上のための心臓の適応性の肥大成長がより高い成長率（筋肉）に対する酸素供給の要求を満たすことができず、従って心不整脈及び心不全が誘発され得る。
【０１１０】
【表１８】
0006623416.tif 000019
【０１１１】
５０週齢の不断給餌のトリの低い相対的な肝臓の重量は、発症した卵巣退縮、従って卵黄への蓄積のための肝臓での脂質合成の減少をもたらすエストロゲンの分泌の減少によるものと思われる。
【０１１２】
図９は、制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の体重に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示す。
【０１１３】
【表１９】
0006623416.tif 000020
【０１１４】
図１０〜図１１は、制限飼料摂取下又は不断飼料摂取下、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤が食餌添加された、死んだ雌鶏の心臓の形態全体を例示する。
【０１１５】
［表１７及び表１８並びに図９〜図１１からの結論及び注釈：］
１．不断給餌は適応性心肥大を引き起こし、及び一部の肥大成長は病理学的に心室拡張を発症させ得る。結果として、心臓は、末梢組織への酸素送達のための血液供給の要求を満たすようにポンプ機能を維持するために、より高い収縮性を必要とし、これが心不全を引き起こし得る。
２．２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、死んだトリの心臓の病的状態（拡張、心膜液貯留、破裂）の発生率を低下させた。
３．制限給餌されたトリ及び不断給餌されたトリの両方において、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤が与えられたトリは、より少ない適応性肥大成長を示した。これは、殆どの過剰な栄養が筋肉に分配され、これにより、ポンプ機能を増強するための心臓の肥大成長がより高い成長率（筋肉）に対する酸素供給の要求を満たすことができず、従って不整脈及び心不全を引き起こし得るという仮説を裏付ける。
【０１１６】
【表２０】
0006623416.tif 000021
【０１１７】
［表１９並びに図１２及び図１３からの結論及び注釈：］
２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、不断給餌されたブロイラー雌鶏のＥＣＧパターン（パターンＤ〜Ｇ）及び不整脈の不規則な発生を低減し、心臓の病的状態によって引き起こされる突然死を改善した。
【０１１８】
図１４は、制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の（３５週齢での）心筋線維化に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示す。異なる上付き文字を有する平均値は有意に異なる（ｐ＜０．０５）。
【０１１９】
［図１４からの結論及び注釈：］
１．２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、不断給餌された雌鶏の心筋線維化を改善した。
【０１２０】
図１５は、制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の血漿ＩＬ−６及びＩＬ−１βの濃度に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示す。結果は、平均値±ＳＥＭで表された（ｎ＝６）。異なる上付き文字を有する平均値は有意に異なる（ｐ＜０．０５）。
【０１２１】
［図１５からの結論及び注釈：］
２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、不断給餌された雌鶏の慢性全身性炎症を改善した。
【０１２２】
図１５は、制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の（３５週齢での）心臓細胞のアポトーシスに対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示す。結果は、平均値±ＳＥＭで表された（ｎ＝３）。異なる上付き文字を有する平均値は、有意に異なる（ｐ＜０．０５）。
【０１２３】
［図１６からの結論及び注釈：］
２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、制限飼料摂取した又は不断飼料摂取した雌鶏の心臓細胞のアポトーシスを改善した。
【０１２４】
［結論：］
補助的な２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤の使用は、様々な心血管の利益に関連した有害な影響を改善した。従って、本発明は、以下からなる群から選択される少なくとも１つの心血管の利益のための２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤の使用を含む：
ａ）非エステル化脂肪酸のクリアランス；
ｂ）血漿脂質異常症（トリグリセリド、スフィンゴミエリン、及びセラミド）の改善；
ｃ）肝臓、脚、胸筋、及び心臓におけるトリグリセリド及びセラミドの蓄積の改善；
ｄ）組織炎症誘発性ＩＬ−１βの産生及び血漿ＩＬ−６濃度の抑制；
ｅ）心臓でのＳＴＡＴ−３（シグナル伝達性転写因子３）のリン酸化の上方制御による心臓保護及び心臓機能の強化；
ｆ）免疫細胞の心臓への浸潤の抑制；
ｇ）腹水の発生率の低下；
ｈ）心血管障害による群れの突然死の発生率の低下；
ｉ）心臓の病的状態（拡張、心膜液貯留、破裂）の発生率の低下；
ｊ）ＥＣＧパターンの不規則部発生量の低下；
ｋ）不整脈の発生率の低下；
ｌ）心筋線維化の改善；
ｍ）慢性全身性炎症の改善；及び
ｎ）制限飼料摂取した又は不断飼料摂取した雌鶏における心臓細胞のアポトーシスの改善。
【図１】
0006623416.tif 000022
【図２】
0006623416.tif 000023
【図３】
0006623416.tif 000024
【図４】
0006623416.tif 000025
【図５】
0006623416.tif 000026
【図６】
0006623416.tif 000027
【図７】
0006623416.tif 000028
【図８】
0006623416.tif 000029
【図９】
0006623416.tif 000030
【図１０】
0006623416.tif 000031
【図１１】
0006623416.tif 000032
【図１２−１】
0006623416.tif 000033
【図１２−２】
0006623416.tif 000034
【図１２−３】
0006623416.tif 000035
【図１２−４】
0006623416.tif 000036
【図１２−５】
0006623416.tif 000037
【図１２−６】
0006623416.tif 000038
【図１２−７】
0006623416.tif 000039
【図１３−１】
0006623416.tif 000040
【図１３−２】
0006623416.tif 000041
【図１３−３】
0006623416.tif 000042
【図１３−４】
0006623416.tif 000043
【図１３−５】
0006623416.tif 000044
【図１４】
0006623416.tif 000045
【図１５】
0006623416.tif 000046
【図１６】
0006623416.tif 000047
【図１７】
0006623416.tif 000048