(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
２５−ヒドロキシビタミンＤ（２５−ＯＨ  Ｄ）と、ビタミンＣと、ビタミンＥと、カンタキサンチンとの組み合わせを含む基礎家禽飼料添加組成物。
【請求項２】
ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、ビオチン、亜鉛、銅、マンガン、及びセレンからなる群から選択される少なくとも１つの生物活性成分を更に含む、請求項１に記載の基礎家禽飼料添加組成物。
【請求項３】
ビタミンＥ又はビタミンＣのカンタキサンチンに対する量が４０：１〜１：１の範囲であり得る、請求項１又は２に記載の基礎家禽飼料添加組成物。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の基礎家禽飼料添加組成物を含む飼料又はプレミックス。
【請求項５】
家禽に適している、請求項４に記載の飼料又はプレミックス。
【請求項６】
２５−ヒドロキシビタミンＤが２５−ヒドロキシビタミンＤ３（２５−ＯＨ  Ｄ３）である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の基礎家禽飼料添加組成物、又は請求項４若しくは５に記載の飼料若しくはプレミックス。
【請求項７】
２５−ＯＨ  Ｄ３の量が１５〜２００μｇ／ｋｇであり、
ビタミンＥの量が４０〜４００ｍｇ／ｋｇであり、
ビタミンＣの量が４０〜４００ｍｇ／ｋｇであり、
カンタキサンチンの量が１〜１５ｍｇ／ｋｇである、請求項６に記載の飼料。
【請求項８】
２５−ＯＨ  Ｄ３の量が８０〜１５０μｇ／ｋｇであり、
ビタミンＥの量が３０〜３００ｍｇ／ｋｇであり、
ビタミンＣの量が８０〜３００ｍｇ／ｋｇであり、
カンタキサンチンの量が１〜１５ｍｇ／ｋｇである、請求項６に記載の飼料。
【請求項９】
２５−ＯＨ  Ｄ３：３５〜１５０μｇ／ｋｇ、
ビタミンＥ：８０〜３００ｍｇ／ｋｇ、
カンタキサンチン：３〜１２ｍｇ／ｋｇ、及び
ビタミンＣ：１００〜３００ｍｇ／ｋｇを含む、請求項６に記載の飼料。
【請求項１０】
２５−ＯＨ  Ｄ３：３５μｇ／ｋｇ、
ビタミンＥ：８０ｍｇ／ｋｇ、
カンタキサンチン：３ｍｇ／ｋｇ、及び
ビタミンＣ：１００ｍｇ／ｋｇを含む、請求項６に記載の飼料。
【請求項１１】
２５−ＯＨ  Ｄ３：６９μｇ／ｋｇ、
ビタミンＥ：１５０ｍｇ／ｋｇ、
カンタキサンチン：６ｍｇ／ｋｇ、及び
ビタミンＣ：１５０ｍｇ／ｋｇを含む、請求項６に記載の飼料。
【請求項１２】
２５−ＯＨ  Ｄ３：１５０μｇ／ｋｇ、
ビタミンＥ：３００ｍｇ／ｋｇ、
カンタキサンチン：１２ｍｇ／ｋｇ、及び
ビタミンＣ：３００ｍｇ／ｋｇを含む、請求項６に記載の飼料。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［発明の簡単な説明］
本発明は、家禽飼料に使用される、２５−ヒドロキシビタミンＤ（「２５−ＯＨ  Ｄ３」及び／又は「２５−ＯＨ  Ｄ２」）と酸化防止剤／抗炎症剤（アスコルビン酸、ビタミンＥ、及びカンタキサンチン）との組み合わせに関する。この栄養補助剤の組み合わせは、過食及び関連肥満に伴う様々な悪影響から家禽を保護する。本発明はまた、２５−ヒドロキシビタミンＤと酸化防止剤／抗炎症剤との組み合わせを含む飼料及び飼料プレミックスにも関する。
【０００２】
［発明の背景］
生殖効率及び病原性障害（ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）の発生率は、家禽の卵巣の発達及び栄養の程度によって直接影響を受ける。例えば、ブロイラー種雌鶏の微調整された生殖器系は、孵化卵の生産における照明の影響下での卵巣、卵管、脳、肝臓、及び骨格系の間での情報交換を必要とする。脳内にある視床下部は、光刺激での光エネルギーによって直接刺激される。従って、成熟（生殖的に機能する）視床下部は、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）を分泌し、この黄体形成ホルモン放出ホルモンは、下垂体前葉に作用して、黄体形成ホルモン（ＬＨ）及び卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の産生を刺激する。ＬＨ及びＦＳＨの両方は、卵巣を標的とし、これらはそれぞれ卵巣ホルモンの産生及び初期卵胞の発達を刺激する。
【０００３】
未成熟雌鶏の卵巣は、裸眼では見えない非常に小さい未分化卵胞のみを有する。これらの卵胞は、性的に成熟すると、大きくなって一連の小さい卵胞及び大きさが異なる大きい卵胞の階層を形成する。小さい卵胞は、視床下部の成熟後にエストロゲンを産生する。大きい黄色の卵胞は、通常、直径が１ｃｍを超えているとして定義され、その数は、照明プログラム、栄養の水準、及び種鶏の年齢によって直接影響を受ける。最も大きい卵胞から放出されるプロゲステロンは、排卵プロセスを誘発する。成熟卵胞は、排卵の僅か数時間前にプロゲステロンを産生することができる。肝臓は、脂肪酸の生成及びこれに続く、エストロゲンによって誘導される卵黄の形成に寄与するトリグリセリドの生成をもたらす脂質合成の部位であるため、卵の産生における重要な器官である。骨格系は、エストロゲンの影響下でのカルシウムの動員、貯蔵、及び放出におけるその役割において産卵に密接に関連している。
【０００４】
過食及びこれによる脂肪蓄積がブロイラー種雌で起き、この脂肪蓄積は、ブロイラー鶏の速い成長のための永続的な遺伝子選択と共に増加した。ブロイラー種雌における過剰給餌による卵巣機能不全及び生殖の非効率性、並びに腹水のような代謝障害、突然死症候群、及び脂肪肝は、生体系に対する栄養過剰が原因で生じる脂質毒性の発生の結果である。従って、現代の雌ブロイラー種系統の管理上の課題は、効率的な産卵及びニワトリの生産を支援するのに最適な体重及び身体組成を達成するように、これらの雌鶏による、成長及び発育の最中の十分に自己制御された飼料摂取が不可能であることである。従って、ブロイラー種雌は、高度の制限給餌計画下にある。飼料制限が、ブロイラー種雌での生殖効率に有益となる主な機構は、卵胞発育の制御よりもむしろ複数の階層に配置される過剰な数の黄色卵胞の形成を制限することである。
【０００５】
生殖発達中に過剰給餌されたブロイラー種雌は、過剰な大きい黄色卵胞を産生するだけでなく、より多くの閉鎖性黄色卵胞も産生し、いくつかの生殖の問題、例えば、卵胞閉鎖、殻の柔らかい又は膜状の卵の産生、卵黄が２つの卵、卵黄腹膜炎（腹腔内での卵黄の存在）、複数個産卵する日、及び順番通りではない産卵を含む異常な産卵及び欠陥卵症候群（ＥＯＤＥＳ）を一般に示し、規定外の卵の生産が増加することになる。
【０００６】
対照試験により、自由給餌（即ち、ブロイラー種雌鶏が飽食状態）が低い産卵数、高い死亡率、及び異常な卵巣構造（主に明らかな階層的卵胞閉鎖）をもたらすことが報告された。制限給餌された雌鶏とは対照的に、任意給餌は、脂肪蓄積の増加；肝臓のトリアシルグリセロールの蓄積；並びに血漿グルコース、非エステル化脂肪酸、超低密度リポタンパク質、トリアシルグリセロール、リン脂質、セラミド、及びスフィンゴミエリンの濃度上昇を含む代謝調節異常も誘発した。更に、肝臓及び血中のセラミド及びスフィンゴミエリンの蓄積、並びに肝臓及び脂肪組織での炎症誘発性ＩＬ−１βの発現の上方制御は、飼料が十分な雌鶏での脂肪毒性の発生を全身的に示した。セラミドは、特定の栄養素（即ち、飽和脂肪酸）及び炎症性サイトカイン（例えば、腫瘍壊死因子−α、ＴＮＦ−α）を細胞機能の制御に結び付け、且つインスリンのシグナル伝達及びミトコンドリア機能をアンタゴナイズする重要な媒介物である。更に、特に影響を受けやすい細胞型に対するその毒作用の結果として、セラミドは、心臓、膵臓、及び脈管構造に損傷を与える能力を有する。飼料が十分な雌鶏における卵胞閉鎖、卵巣退縮、及び血中エストラジオールのレベルの低下を含む卵巣機能不全障害もたらす脂肪毒性がセラミドの蓄積並びにＩＬ−１β、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ、及びスフィンゴミエリナーゼ転写物の存在量の上方制御によって更に例証されたが、階層的卵胞内でのプロテインキナーゼＡｋｔの活性化を抑制した。従って、生体内でのエビデンスが、ブロイラー雌鶏における過剰給餌による卵胞閉鎖及び卵巣退縮の進行の仲介におけるセラミド及びＩＬ−１βの作用を明確にした。
【０００７】
制限給餌計画が商業用ブロイラー種鶏の群れで厳密に実施されているにもかかわらず、ブロイラー種鶏固有の過食により、なお種雌鶏は非常に過食しやすい。更に、種鶏場管理者は、産卵の開始前及び最中、並びに産卵の少し前、最中、及びピーク後にいつどのように給餌するかの問題に直面している。基本的且つ根本的な問題は、過体重の雌鶏の肥満に関連した繁殖効率の悪影響及び有害な影響を改善するために、種鶏場管理者が管理ツール及び栄養ツールをどのように適用及び実施できるかを問うことである。
【０００８】
Ｈｙ・Ｄ（登録商標）（２５−ＯＨ−Ｄ３の登録商標；ＤＳＭ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄから入手可能を、家禽の骨の健康を促進するために使用した。
【０００９】
２５−ＯＨ  Ｄ３とカンタキサンチンとの組み合わせも家禽に使用されている。国際公開第２０１０／０５７８１１号パンフレット（ＤＳＭ  ＩＰ  ＡＳＳＥＴＳ，ＢＶ）に、家禽における孵化率、受精率、及び胚死亡率の向上に使用される２５−ＯＨ  Ｄ３とカンタキサンチンとの組み合わせが記載されている。この組み合わせは、ＭＡＸＩＣＨＩＣＫという商標名で市販されている。
【００１０】
この特許公報には、過食関連肥満の悪影響を改善するためのアスコルビン酸及び高レベルのビタミンＥの含有及びこれらの使用についての記載がない。
【００１１】
ビタミンＣ（アスコルビン酸）は、通常の飼育条件下でニワトリが十分なビタミンＣを産生できるため、家禽の食餌に補助剤として含められないことが多い。しかしながら、ビタミンＣは、一部の特定の条件、例えば、熱ストレス状態では使用されている。
【００１２】
ビタミンＥは、一般に家禽飼料に添加される。家禽種に推奨される用量は、動物の年齢によって約５０〜１００ＩＵ／飼料１ｋｇである傾向にある。
【００１３】
国際公開第１４／２０２４３３号パンフレット（ＤＳＭ  ＩＰ  ＡＳＳＥＴＳ  Ｂ．Ｖ）は、体内の卵の品質を向上させるため、即ち、卵黄を覆う卵黄膜の強度を高めるためのカンタキサンチンと２５−ＯＨ  Ｄ３との組み合わせを教示している。この組み合わせへのアスコルビン酸の添加についても、過食関連肥満の悪影響の改善におけるその使用についても教示がない。
【００１４】
国際公開第１４／１９１１５３号パンフレット（ＤＳＭ  ＩＰ  ＡＳＳＥＴＳ  Ｂ．Ｖ）は、カンタキサンチンと、ビタミンＣ、ビタミンＥ、セレンの少なくとも１つと、任意選択であるチモール、オイゲノール、バニリン、及びγ−テルピネンの少なくとも１つとの組み合わせが、特に群れがワクチン接種に関連したストレスを受けている場合、免疫状態、骨の健康、骨格の発達及び成長、並びに飼料効率を向上させ得ることを教示している。
【００１５】
グルコース調節障害、インスリン作用、心筋症、及び最終的な腹水及び突然死を引き起こすことを含む肥満の進行を病態生理学的に誘発する、ブロイラー種雌鶏における過食の結果としての代謝及びホルモン調節異常を軽減又は改善する必要がある。
【００１６】
［発明の詳細な説明］
本発明により、２５−ヒドロキシビタミンＤ（２５−ＯＨ  Ｄ３及び／又は２５−ＯＨ  Ｄ２）と酸化防止剤／抗炎症剤との組み合わせが、家禽が不断給餌されたとき又は過食関連肥満を経験したときに観察される有害な代謝状態を改善することが見出された。また、本発明により、酸化防止剤として飼料に従来含められる生物活性剤が、過食関連肥満の悪影響を緩和する抗炎症活性も有することが見出された。
【００１７】
２５−ＯＨ  Ｄ２及びは２５−ＯＨ  Ｄ３は、与えた後に同様に作用し得るため、酸化防止剤／抗炎症剤と組み合わせて別個に使用してもよく、又は２５−ＯＨ  Ｄ３と２５−ＯＨ  Ｄ２との両方の混合物を酸化防止剤／抗炎症剤と組み合わせて使用してもよいと考えられる。一緒に使用される場合、２５−ＯＨ  Ｄ３：２５−ＯＨ  Ｄ２の比率は、本発明の重要な部分ではない。単独で使用される２５−ＯＨ  Ｄ３が好ましい。
【００１８】
本発明の酸化防止剤／抗炎症剤は、アスコルビン酸と、ビタミンＥと、カンタキサンチンとの組み合わせを含む。従って、本発明の一態様は、２５−ＯＨ  Ｄ３と、カンタキサンチンと、ビタミンＥと、アスコルビン酸との組み合わせである。別の実施形態は、２５−ＯＨ  Ｄ２と、カンタキサンチンと、ビタミンＥと、アスコルビン酸との組み合わせである。別の実施形態は、２５−ＯＨＤ３と、２５−ＯＨＤ２と、カンタキサンチンと、ビタミンＥと、アスコルビン酸との組み合わせである。
【００１９】
好ましい実施形態では、２５−ＯＨ  Ｄと、カンタキサンチンと、ビタミンＥと、アスコルビン酸との組み合わせが、完全な家禽の栄養に必要な成分を全て含む基礎食餌に添加され、即ち、この組み合わせは、上記の生理学的な量の組成を提供する。従って、これは、家禽がビタミン不足又は栄養不足にならないように栄養要件を単に満たすために提供される１つ又はいくつかの成分の従来の使用とは区別することができる。
【００２０】
本発明の別の態様は、２５−ＯＨ  Ｄと、カンタキサンチンと、ビタミンＥと、アスコルビン酸との組み合わせであり、この組み合わせは、任意選択により、ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、亜鉛、銅、マンガン、及びセレンからなる群から選択される少なくとも１つの更なる生物活性成分を更に含む。好ましくは、２５−ＯＨ  Ｄは、２５−ＯＨ  Ｄ３である。好ましくは、少なくともビタミンＤは、更なる生物活性成分である。時には、更なる生物活性成分は、少なくともビタミンＤ及びセレンを含む。場合により、更なる生物活性成分の全てが添加される。
【００２１】
更なる態様は、２５−ＯＨ  Ｄと、カンタキサンチンと、ビタミンＥと、アスコルビン酸との組み合わせであり、この組み合わせは、任意選択により、ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、ビオチン、亜鉛、銅、マンガン、セレン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの更なる生物活性成分を更に含む。好ましくは、２５−ＯＨ  Ｄは、２５−ＯＨ  Ｄ３である。時には、更なる生物活性成分は、ビオチンを含む。時には、更なる生物活性成分は、ビタミンＤ及びビオチンを含む。時には、更なる生物活性成分は、上述の任意選択による生物活性成分の全てを含む。
【００２２】
本発明の別の態様は、２５−ＯＨ  Ｄ２又は２５−ＯＨ  Ｄ３又はこれらの混合物と、アスコルビン酸と、ビタミンＥと、カンタキサンチンとの組み合わせを含む家禽飼料である。
【００２３】
なお別の実施形態は、２５−ＯＨ  Ｄと、カンタキサンチンと、ビタミンＥと、アスコルビン酸との組み合わせを含む家禽用飼料であり、この組み合わせは、任意選択により、ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、亜鉛、銅、マンガン、セレン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの更なる生物活性成分を更に含む。好ましくは、２５−ＯＨ  Ｄは、２５−ＯＨ  Ｄ３である。時には、更なる生物活性成分は、少なくともビタミンＤ及びセレンを含む。場合により、更なる生物活性成分の全てが添加される。
【００２４】
好ましい実施形態では、完全な基礎家禽飼料は、２５−ＯＨ  Ｄと、カンタキサンチンと、ビタミンＥと、アスコルビン酸との組み合わせと、ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、亜鉛、銅、マンガン、セレン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの更なる生物活性成分とを含む。好ましくは、２５−ＯＨ  Ｄは、２５−ＯＨ  Ｄ３である。時には、更なる生物活性成分は、少なくともビタミンＤ及びセレンを含む。場合により、更なる生物活性成分の全てが添加される。従って、本発明のこの組み合わせ及び追加の更なる生物活性成分は、通常の家禽の栄養に必要な上記の成分であり、即ち、これらは上記の生理学的用量である。
【００２５】
別の実施形態は、２５−ＯＨ  Ｄと、カンタキサンチンと、ビタミンＥと、アスコルビン酸との組み合わせを含む家禽用飼料であり、この組み合わせは、任意選択により、ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、ビオチン、亜鉛、銅、マンガン、セレン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの更なる生物活性成分を更に含む。時には、更なる生物活性成分は、ビオチンを含む。好ましくは、２５−ＯＨ  Ｄは、２５−ＯＨ  Ｄ３である。時には、更なる生物活性成分は、ビタミンＤ及びビオチンを含む。時には、更なる生物活性成分は、上述の任意選択による生物活性成分の全てを含む。
【００２６】
本発明の別の態様は、２５−ＯＨ  Ｄと、ビタミンＥと、アスコルビン酸と、カンタキサンチンとの組み合わせを含む家禽飼料用のプレミックスである。好ましくは、２５−ＯＨ  Ｄは、２５−ＯＨ  Ｄ３である。このプレミックス及びこれに続く飼料は、過食傾向又は肥満傾向の動物に給餌されると、過食に関連した有害な代謝状態を向上させる／改善する。一部の実施形態では、飼料及びプレミックスは、ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、亜鉛、銅、マンガン、セレン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの更なる生物活性成分も含む。時には、更なる生物活性成分は、少なくともビタミンＤ及びセレンを含む。場合により、更なる生物活性成分の全てが添加される。
【００２７】
本発明の別の態様は、ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、ビオチン、亜鉛、銅、マンガン、セレン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの更なる生物活性成分を更に含む家禽飼料用のプレミックスである。時には、更なる生物活性成分はビオチンを含む。時には、更なる生物活性成分は、ビタミンＤ及びビオチンを含む。時には、更なる生物活性成分は、上述の任意選択の生物活性成分の全てを含む。
【００２８】
本発明の家禽飼料を使用する場合は、動物に不断給餌することができ、通常経験する悪影響がより軽度であるか又は全くない。これにより、群れの管理が容易になると共に、群れが制限給餌されても特定の個々のトリがなお過食を示し、及び他のトリに対する攻撃的な行動を示し得る場合に直面する問題が解消される。
【００２９】
更に、本発明の２５−ＯＨ  Ｄ３と酸化防止剤／抗炎症剤との組み合わせが群れの生存率を向上させることが見出された。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】２５−ＯＨ  Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤と組み合わせられた不断飼料摂取に応じたブロイラー種雌鶏のグルコースクリアランス及びインスリン分泌を示す。雌鶏は、３週間の給餌後に羽の静脈に１回量のグルコース（０．５ｇ／体重ｋｇ）が注入された。血液サンプルは、グルコース注入後の指定の時点で羽の静脈のカニューレ―ションによって採取した（ｎ＝３）。
【図２】２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤と組み合わせられた不断飼料摂取に応じたブロイラー種雌鶏の組織中のインターロイキン−１βの含有量及びＩＬ−６のレベルを示す。組織サンプル及び血液サンプルは、飼育試験の１０週間後に採取した。上付き文字が異なる平均値は有意に異なる（ｐ＜０．０５）（ｎ＝３）。
【図３】２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤と組み合わせられた不断飼料摂取に応じたブロイラー種雌鶏の組織中のＳＴＡＴ−３活性化を示す。組織サンプル及び血液サンプルは、飼育試験の１０週間後に採取した。上付き文字が異なる平均値は有意に異なる（ｐ＜０．０５）（ｎ＝３）。
【図４】２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤含有物と組み合わせられた不断飼料摂取に応じたブロイラー雌鶏の剖検中に撮られた写真を示す。雌鶏は飼育試験の１０週間後に剖検した。
【図５】２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤含有物と組み合わせられた不断飼料摂取に応じたブロイラー雌鶏の剖検中に撮られた写真を示す。雌鶏は飼育試験の１０週間後に剖検した。
【図６】２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤含有物と組み合わせられた不断飼料摂取に応じたブロイラー雌鶏の剖検中に撮られた写真を示す。雌鶏は飼育試験の１０週間後に剖検した。
【図７】制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の産卵に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示す。
【図８】制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の生存率に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示す。
【図９】制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の体重に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示す。
【図１０】制限飼料摂取下又は不断飼料摂取下、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤が食餌添加された、死んだ雌鶏の心臓の形態全体を示す一連の写真である。
【図１１】制限飼料摂取下又は不断飼料摂取下、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤が食餌添加された、死んだ雌鶏の心臓の形態全体を示す一連の写真である。
【図１２】制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏のＥＧＣに対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を実証する一連の心電図（ＥＧＣ）である。矢印はパターンにおける不規則部を指す。
【図１３】制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の不整脈ＥＣＧパターンに対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示す一連のＥＧＳである。
【図１４】制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の（３５週齢での）心筋線維化に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響実証する写真及びグラフを示す。
【図１５】制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の血漿ＩＬ−６及びＩＬ−１βの濃度に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示すグラフである。
【図１６】制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の（３５週齢での）心臓細胞のアポトーシスに対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示す写真である。
【図１７】制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の（３５週齢での）心臓細胞のアポトーシスに対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示す写真である。
【００３１】
本明細書及び特許請求の範囲を通じて使用される用語には、以下の定義が適用される：「２５−ＯＨ  Ｄ」は、任意の形態の２５−ヒドロキシビタミンＤ（即ち、２５−ＯＨ  Ｄ２又は２５−ＯＨ  Ｄ３又はこれらの混合物）を指す。２５−ＯＨ  Ｄ３は、具体的には２５−ヒドロキシビタミンＤ３を指し；２５−ＯＨ  Ｄ２は、具体的には２５−ヒドロキシビタミンＤ２を指す。
【００３２】
「ビタミンＤ」は、ビタミンＤ２、ビタミンＤ３、又は組み合わせを意味する。ビタミンＤ３が好ましい。
【００３３】
「家禽」は、食肉となり、食卓用卵を産卵し、及び繁殖用の卵を産卵するニワトリ、カモ、ガチョウ、シチメンチョウ、ウズラ、及びダチョウを含む任意の家畜化された鳥類を意味する。
【００３４】
「過食」は、過剰な摂食である。動物はその摂取を自ら制限しない。
【００３５】
「体重増加を改善する」は、本明細書に記載の２５−ＯＨ  Ｄ３と酸化防止剤／抗炎症剤との組み合わせを摂取する、不断給餌されたときに家禽が増加し得る体重が有意に少ないことを意味する。この組み合わせを摂取するトリは、制限給餌されるトリよりも体重が増加し得る。
【００３６】
「アスコルビン酸」及び「ビタミンＣ」は、本明細書及び添付の特許請求の範囲を通じて互換的に使用さる。
【００３７】
「基礎食餌」は、使用される飼料が、家禽のビタミン及びミネラルが十分であるように家禽に十分なビタミン及びミネラルを供給することを意味する。
【００３８】
「２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤」は、本明細書で説明される用量範囲で、基礎食餌の追加として飼料に添加される２５−ＯＨ  Ｄ３と、ビタミンＥと、カンタキサンチンと、アスコルビン酸との組み合わせを意味する。任意選択により、好ましくは、ビタミンＤ、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、ビオチン、亜鉛、銅、マンガン、セレン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される追加の生物活性成分が、２５−ＯＨＤ３と、ビタミンＥと、カンタキサンチンと、アスコルビン酸との組み合わせに添加される。
【００３９】
「突然死」は、事前の徴候又は疾患又は外傷を示さずに個々のトリが死ぬことを意味する。トリは、見かけ上は健康であるが、高頻度に体が仰向けにひっくり返っている間の短期間の羽ばたき及び脚の動きで急に死ぬ。トリはまた、横向き又は胸を地面に付けて死んで見つかることもある。特定の肉眼的病変は全く存在しない。近年の研究により、死んだトリが心筋細胞及び心内膜下のプルキンエ細胞における病変を有することが示され、これが診断に役立ち得る。
【００４０】
［過食に関連した有害な状態］
［１．卵巣障害］
本発明により、２５−ＯＨ  Ｄ３と、ビタミンＥと、カンタキサンチンと、アスコルビン酸とを含む飼料の使用が、特に卵巣の健康に寄与し得ることが見出された。生殖発達中に過剰給餌されたブロイラー種雌は、過剰な大きい黄色卵胞を産生するだけでなく、より多くの閉鎖性黄色卵胞も産生し、いくつかの生殖の問題、例えば、卵胞閉鎖、殻の柔らかい又は膜状の卵の産生、卵黄が２つの卵、卵黄腹膜炎（腹腔内での卵黄の存在）、複数個産卵する日、及び順番通りではない産卵を含む異常な産卵及び欠陥卵症候群（ＥＯＤＥＳ）を一般に示し、規定外の卵の生産が増加することになる。本発明の飼料／プレミックスの使用は、これらの状態のそれぞれを緩和するか、軽減するか、改善するか、又はなくすことができる。
【００４１】
更に、本発明により、驚くべきことに、２５−ＯＨ  Ｄ３と酸化防止剤／抗炎症剤との組み合わせが、より多くのトリの生存率を高めることによって群れの全卵生産量を改善できることが見出された。個々のトリでは、この組み合わせが、不断給餌されたトリでは卵生産量／産卵数に対して影響がないが、制限給餌された個々のトリでは、卵生産量が低下し得ることもあることが見出された。しかしながら、本発明の酸化防止剤／抗炎症剤と組み合わせられた２５−ＯＨ  Ｄ３は、（産卵率ではなく）全卵生産量を増加させた。
【００４２】
これらの結果は、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤が、突然死しやすい制限給餌されたトリの死への進行を加速させ、従って、長期の生存のために突然死しやすいトリを排除するための群れの選択装置（ｃｕｌｌｅｒ）として機能し、これにより群れの管理費が削減されることを示唆している。
【００４３】
［２．代謝異常］
本発明の飼料／プレミックスの使用によって弱める、軽減する、又はなくすことができる、過食に関連した代謝異常は、以下を含む：
ａ）非エステル化脂肪酸のクリアランス
ｂ）血漿脂質異常症（トリグリセリド、スフィンゴミエリン、及びセラミド）の改善
ｃ）肝臓、脚、胸筋、及び心臓におけるトリグリセリド及びセラミドの蓄積の改善
ｄ）組織炎症誘発性ＩＬ−１βの産生及び血漿ＩＬ−６濃度の抑制
ｅ）心臓におけるＳＴＡＴ−３（シグナル伝達性転写因子３）のリン酸化の上方制御による心臓の保護及び心臓機能の促進
ｆ）免疫細胞の心臓への侵入の抑制
ｇ）腹水発生の低減。
【００４４】
これらの上述の観察された向上した状態により、死亡率の低下、インスリンのシグナル伝達の向上、脂質毒性の発生及び全身性炎症の低減、及び栄養過剰による心臓病の病因に対する心臓保護機構の活性化が起こる。
【００４５】
［３．突然死を含む心血管障害］
群れのトリは、突然死、即ち、死因が容易には明らかにならない死を経験し得る。本発明者らは、実施例４に詳述されるようにこれを更に調べた。本発明者らは、２５−ＯＨ  Ｄ３と酸化防止剤／抗炎症剤との組み合わせを用いて又は用いずに、不断給餌された群れ及び制限給餌された群れでこの現象を調べた。本発明者らの結果の一部が以下に示される。
【００４６】
本発明により、不断給餌されたトリでは、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤が与えられた突然死のトリ（即ち、突然死したトリ）は、より重い体重を有していたが、より軽い相対的な肝臓、腹部脂肪、及び心臓の重量を有していたことが見出された。
【００４７】
突然死のトリでは、不断給餌は心臓順応性肥大を引き起こし；及び肥大成長の一部は病理学的に心室拡張をもたらし得る。結果として、心臓は、末梢組織への酸素送達のための血液供給の要求を満たすようにポンプ機能を維持するために、より高い収縮性を必要とする。この状態が心不全を引き起こし得る。
【００４８】
重要なことに、本発明者らは、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤が心臓の病原性の進行を低下させ、これにより、不断給餌されたトリの心不全の発生率を低下させることを見出した。従って、本発明の別の態様は、突然死をもたらす心臓障害の程度を低下させるための２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／炎症性物質の使用である。
【００４９】
制限給餌されたトリ及び不断給餌されたトリの両方において、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤を摂取したトリは、より小さい順応性肥大の成長を示し、これは、殆どの過剰な栄養が筋肉に分配され得るという仮説を裏付け、従って、ポンプ機能を増強するための心臓の肥大成長は、より高い成長率（筋肉）に対する酸素供給の要求を満たすことができず、従って心不整脈及び心不全を引き起こし得る。
【００５０】
２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の包含は、以下の効果を有することが分かった：
・死んだトリの死体で観察される心臓の病的状態（拡張、心膜液貯留、破裂）の発生率の低下。
・ＥＣＧパターンの不規則部発生量の低下
・不断給餌されるブロイラー雌鶏の不整脈の低減
・心臓の病的状態によって引き起こされる突然死の改善
・不断給餌される雌鶏の心筋線維化の改善。
・不断給餌される雌鶏の慢性全身性炎症の改善
・制限飼料摂取する又は不断飼料摂取する雌鶏における心臓細胞のアポトーシスの改善。
【００５１】
従って、２５ＯＨ  Ｄ３＋酸化防止剤は心血管系を保護し得る。
【００５２】
［３．用量］
本発明の一態様では、２５−ＯＨ  Ｄ３と酸化防止剤／抗炎症剤との組み合わせは、ビタミンが不十分ではなく十分な家禽に与えられる。ビタミンが十分な状態は、好ましくは、少なくとも最少量の家禽用のビタミン及びミネラルを供給する基礎飼料の使用による。従って、本発明の組み合わせは、好ましくは基礎食餌に加えて使用される。
【００５３】
２５−ＯＨ  Ｄ３：２５−ＯＨ  Ｄ３の量は１５〜２００μｇ／飼料１ｋｇであり得る。好ましくは、２５−ＯＨ  Ｄ３の量は３５〜１５０μｇ／飼料１ｋｇである。本発明の組み合わせが低用量の飼料では、３５μｇ／飼料１ｋｇの２５−ＯＨ  Ｄ３が好ましく；この組み合わせが中用量の飼料では、６９μｇ／飼料１ｋｇが好ましく；この組み合わせが高用量の飼料では、１５０μｇ／飼料１ｋｇが好ましい。
【００５４】
ビタミンＥ：ビタミンＥの量は４０〜４００ｍｇ／飼料１ｋｇであり得る。好ましくは、この量は８０〜３００ｍｇ／飼料１ｋｇである。本発明の組み合わせが低用量の飼料では、８０ｍｇ／ｋｇのビタミンＥが好ましい。中用量の飼料では、１５０ｍｇのビタミンＥが好ましく；高用量の飼料では、３００ｍｇ／ｋｇのビタミンＥが好ましい。
【００５５】
カンタキサンチン：カンタキサンチンの量は１〜１５ｍｇ／飼料１ｋｇであり得る。好ましくは、この量は３〜１２ｍｇ／飼料１ｋｇである。本発明の組み合わせが低用量の飼料では、３ｍｇ／ｋｇのカンタキサンチンが好ましい。中用量の飼料では、６ｍｇのカンタキサンチンが好ましく；高用量の飼料では、１２ｍｇ／ｋｇのカンタキサンチンが好ましい。
【００５６】
アスコルビン酸：アスコルビン酸の量は４０〜４００ｍｇ／飼料１ｋｇであり得る。好ましくは、この量は１００〜３００ｍｇの飼料である。本発明の組み合わせが低用量の飼料では、１００ｍｇ／ｋｇのアスコルビン酸が好ましい。中用量の飼料では、１５０ｍｇのアスコルビン酸が好ましく；高用量の飼料では、３００ｍｇ／ｋｇのアスコルビン酸が好ましい。
【００５７】
従って、本発明の特定の好ましい飼料は、以下の用量（全ての量は飼料１ｋｇ当たりである）を含む。
【００５８】
好ましい飼料番号１：
２５−ＯＨ  Ｄ３：１５〜２００μｇ、
ビタミンＥ：４０〜４００ｍｇ、
カンタキサンチン：１〜１５ｍｇ；及び
アスコルビン酸：４０〜４００ｍｇ。
【００５９】
好ましい飼料番号２：
２５−ＯＨ  Ｄ３：３５〜１５０μｇ、
ビタミンＥ：８０〜３００ｍｇ、
カンタキサンチン：３〜１２ｍｇ、及び
アスコルビン酸：８０〜３００ｍｇ。
【００６０】
好ましい飼料番号３（低用量の飼料）  この飼料は、軽度に肥満の家禽に好ましい。
２５−ＯＨ  Ｄ３：３５μｇ、
ビタミンＥ：８０ｍｇ、
カンタキサンチン：３ｍｇ
アスコルビン酸：８０ｍｇ。
【００６１】
好ましい飼料番号４（中用量の飼料）  この飼料は、中程度から高度に肥満の家禽に好ましい：
２５−ＯＨ  Ｄ３：６９μｇ
ビタミンＥ：１５０ｍｇ
カンタキサンチン：６ｍｇ
アスコルビン酸：１５０ｍｇ。
【００６２】
好ましい飼料番号５（高用量の飼料）  この飼料は、重度に肥満の家禽に好ましい：
２５−ＯＨ  Ｄ３：１５０μｇ
ビタミンＥ：３００ｍｇ
カンタキサンチン：１２ｍｇ
アスコルビン酸：３００ｍｇ。
【００６３】
上記の酸化防止剤／抗炎症剤の互いに対する比率は、以下の範囲とすることができる：
・ビタミンＣに対するビタミンＥは、１〜１０：１０〜１；好ましくは１〜５：５〜１；より好ましくは１．５：１〜１：１．５、最も好ましくは１：１であり得る。
・カンタキサンチンに対するビタミンＥ又はビタミンＣは、４０：１〜１：１；好ましくは２０：１〜１：１；より好ましくは１０：１〜１：１であり得る。
【００６４】
好ましい比率は以下を含む。
【００６５】
【表１】
0006623415.tif 000002
【００６６】
［任意選択である追加成分］
上に列記された飼料のそれぞれに対して、少なくとも１つの追加成分を添加することができる。好ましくは少なくとも１つの以下の成分、より好ましくは２つ以上の以下の成分が添加される。他の実施形態では、以下の成分が全て添加される。
【００６７】
ビタミンＤ３  −  一般的に、これは約２５００ＩＵ／飼料１ｋｇで家禽の食餌中に存在する。本発明によると、必要に応じてビタミンＤの量は少なくとも３０００ＩＵ／ｋｇに増量される。
【００６８】
ビタミンＢ２：これは、３〜２５ｍｇ／ｋｇ；好ましくは６〜２０ｍｇ／ｋｇで添加することができる。低用量の飼料の場合、６ｍｇ／ｋｇが好ましい。中用量の飼料の場合、１４ｍｇ／ｋｇが好ましく；及び高用量の飼料の場合、２０ｍｇ／ｋｇが好ましい。
【００６９】
ナイアシン：これは、２５〜３００ｍｇ／飼料１ｋｇで添加することができる。好ましくは、ナイアシンは６０〜２００ｍｇ／ｋｇである。低用量の飼料の場合、６０ｍｇ／ｋｇが好ましい。中用量の飼料の場合、１２０ｍｇ／ｋｇが好ましく；及び高用量の飼料の場合、２００ｍｇ／ｋｇが好ましい。
【００７０】
パントテン酸：これは１０〜１２０ｍｇ／飼料１ｋｇで添加することができる。好ましくは、パントテン酸は１５〜８０ｍｇ／ｋｇである。低用量の飼料の場合、１５ｍｇ／ｋｇが好ましい。中用量の飼料の場合、３０ｍｇ／ｋｇが好ましく；及び高用量の飼料の場合、８０ｍｇ／ｋｇが好ましい。
【００７１】
葉酸：これは１〜８ｍｇ／飼料１ｋｇで添加することができる。好ましくは、葉酸は２〜６ｍｇ／ｋｇである。低用量の飼料の場合、２ｍｇ／ｋｇが好ましい。中用量の飼料の場合、４ｍｇ／ｋｇが好ましく；及び高用量の飼料の場合、６ｍｇ／ｋｇが好ましい。
【００７２】
ビオチン：これは０．０５〜１．０ｍｇ／飼料１ｋｇで添加することができる。好ましくは、ビオチンは０．２〜０．８ｍｇ／ｋｇである。低用量の飼料の場合、０．２ｍｇ／ｋｇが好ましい。中用量の飼料の場合、０．４ｍｇ／ｋｇが好ましく；及び高用量の飼料の場合、０．８ｍｇ／ｋｇが好ましい。
【００７３】
亜鉛：これは５０〜３００ｍｇ／飼料１ｋｇで添加することができる。好ましくは、亜鉛は７０〜２５０ｍｇ／ｋｇである。低用量の飼料の場合、７０ｍｇ／ｋｇが好ましい。中用量の飼料の場合、１２５ｍｇ／ｋｇが好ましく；及び高用量の飼料の場合、２５０ｍｇ／ｋｇが好ましい。
【００７４】
銅：これは５〜５０ｍｇ／飼料１ｋｇで添加することができる。好ましくは、銅は１０〜３０ｍｇ／ｋｇである。低用量の飼料の場合、１０ｍｇ／ｋｇが好ましい。中用量の飼料の場合、２０ｍｇ／ｋｇが好ましく；及び高用量の飼料の場合、３０ｍｇ／ｋｇが好ましい。
【００７５】
マンガン：これは５０〜３００ｍｇ／飼料で添加することができる。好ましくは、マンガンは８０〜２７０ｍｇ／ｋｇである。低用量の飼料の場合、８０ｍｇ／ｋｇが好ましい。中用量の飼料の場合、１５０ｍｇ／ｋｇが好ましく；及び高用量の飼料の場合、２７０ｍｇ／ｋｇが好ましい。
【００７６】
セレン：これは０．０５〜０．６ｍｇ／飼料１ｋｇで添加することができる。好ましくは、セレンは０．１〜０．４ｍｇ／ｋｇである。低用量の飼料の場合、０．１ｍｇ／ｋｇが好ましい。中用量の飼料の場合、０．３ｍｇ／ｋｇが好ましく；及び高用量の飼料の場合、０．５ｍｇ／ｋｇが好ましい。
【００７７】
上述の用量及び好ましい用量を得るためにプレミックスを調製することができる。本発明の一部を構成する１つのプレミックスは、１グラムのプレミックスが１キログラムの飼料に添加されて得られる飼料が、所与の用量のいずれかで説明された用量を含むように配合される。当然、個々の成分の用量は、１キログラムのプレミックスが１メートルトンの飼料に添加されて得られる飼料が、上記の所与の用量のいずれかで説明された用量を含むように様々にすることができる。この特定の例示が以下の実施例に記載される。
【００７８】
更に、本明細書に明記される組み合わせは、あらゆる市販の家禽飼料に添加できることが企図され、従って、存在する２５−ＯＨＤ３と酸化防止剤／抗炎症剤との総量は、飼料中に元々存在した量に、本明細書に明記される追加を加えた量に等しいであろう。また、本明細書に明記される２５−ＯＨＤ３及び酸化防止剤／抗炎症剤は、家禽の栄養に最小限必要な栄養素を少なくとも含む基礎食餌に対する唯一の追加であることも企図される。
【００７９】
以下の非限定の実施例は、本発明をより良く例示するために示される。
【００８０】
［実施例］
［実施例１］
合計３０匹の４５週齢のブロイラー種鶏（ＲＯＳＳ  ３０８）を研究のために商業用の群れから得た。ブロイラー種鶏の産卵用基礎食餌は、表１に示されているように配合した。計算した栄養成分は表２に示されている。
【００８１】
【表２】
0006623415.tif 000003
【００８２】
【表３】
0006623415.tif 000004
【００８３】
【表４】
0006623415.tif 000005
【００８４】
酸化防止剤／抗炎症剤（ビタミンＥ、アスコルビン酸、カンタキサンチン）及び濃縮レベルの選択されたビタミンと組み合わせられた６９ｍｃｇ／飼料１ｋｇの２５−ＯＨ  Ｄ３を飼料に添加した又は添加しなかった。以下の給餌計画（制限及び不断）に従って雌鶏を３つの処置群に無作為に割り振った。
１．基礎食餌  −  制限給餌（１４０ｇ／日）
２．基礎食餌  −  不断給餌
３．基礎食餌  −  不断給餌＋６９ｍｃ／飼料１ｋｇの２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤
【００８５】
雌鶏は、２５±３℃の温度、１４時間：１０時間の明期：暗期の制御された室内に設けられたステンレス製ケージで個々に飼育した。水は自由に飲めるようにした。実験期間は１０週間にわたった。飼育試験の３週間後、一部のトリを関連するプラズマパラメーター分析に使用した。実験の最後に、雌鶏を更なる研究用の組織サンプルの採取のために安楽死させて犠牲にした：
組織形態の剖検
脂質及びスフィンゴ脂質プロフィールの決定  −  血清及び組織
組織炎症誘発性サイトカインの決定
インスリン抵抗性の決定
骨の強度分析のための脛骨の採取
筋疾患分析のための心臓（心筋症）及び骨格筋（胸筋及び大腿筋）の採取。
【００８６】
［実施例２］
［結果及び考察］
［２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤は、過剰給餌されたブロイラー雌鶏の脂肪蓄積及び腹部脂肪を抑制した］
種雌鶏は、肝臓、脂肪組織、及び発達中の卵母細胞の卵黄に大量の過剰なエネルギー（トリグリセリドの形態で）貯蔵することができる。脂質生成（即ち、グルコースのトリグリセリドへの変換）は、トリの肝臓で主に起こり、且つ解糖、クエン酸回路、及び脂肪酸合成を含む一連の関連した酵素触媒反応を伴う。肝臓の脂肪合成は、栄養及びホルモンの両方による制御の影響を受け、飼料の変化によく反応する。脂肪組織は主に、脂肪合成活性が殆どない脂肪の貯蔵部位としての役割を果たす。トリにおける肝臓組織と脂肪組織との脂肪生成能力の差異は、重要な転写因子、ステロール調節エレメント結合タンパク質−１（ＳＲＥＢＰ−１）の発現に応じる。ＳＲＥＢＰ−１の遺伝子は、肝臓で高度に発現されるが、脂肪組織では遥かに少ない量である。更に、多数の脂肪生成酵素遺伝子、例えば、脂肪酸合成酵素、リンゴ酸酵素、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ、ＡＴＰクエン酸リアーゼ、及びステロイルＣｏＡデサチュラーゼの発現は、ＳＲＥＢＰ−１による影響を直接受ける。
【００８７】
不断給餌された種雌鶏は、制限給餌された種雌鶏よりも多くの腹部脂肪が増大した。２５−ＯＨＤ３及び酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加は、体重及び組織重量、特に相対脂肪組織の重量（脂肪蓄積）に対する不断給餌の有害な響を改善する（表４）。不断給餌された雌鶏の脛骨強度が２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤によって強化された。
【００８８】
【表５】
0006623415.tif 000006
【００８９】
［２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤は、死亡率を低下させ、産卵数、卵巣形態、及び血漿１７βエストラジオールレベルを向上させた］
エストラジオールの分泌は、排卵卵胞の成功の顕著な特徴である。性腺刺激ホルモンの排卵前の急増を引き起こすその役割に加えて、エストラジオールは、重要な卵巣内での成長因子、分化因子、及び生存因子である。２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤を含めることにより、不断飼料摂取下のトリにおける死亡率並びに卵巣変性及び卵巣腫瘍様形態の発生率が低下し、産卵数が増加し、及び血漿エストラジオールレベルが維持された。
【００９０】
［２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤は、グルコースクリアランス障害及びインスリン感受性を改善した］
２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤を食餌に含めることにより、１０週間過剰給餌された雌鶏における空腹時血漿グルコースレベル及び非エステル化脂肪酸レベルの改善によって明らかなようにインスリン抵抗性が向上する（表６）。グルコースクリアランス試験では、痩せた雌鶏は、グルコース注入から３０〜６０分に非常に急激なクリアランス率を示したが、逆に肥満の雌鶏は、３０〜９０分に非常に鈍いクリアランス率を有していた（図１）。インスリンの分泌において、肥満の雌鶏は、痩せた雌鶏と比較すると空腹状態及びグルコース注入後に高い血漿インスリンレベルを示した（図１）。グルコースクリアランス及びグルコースによるインスリンの分泌の両方が、過剰給餌された雌鶏で２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤を３週間含めることによって修正された（図１）。
【００９１】
【表６】
0006623415.tif 000007
【００９２】
［２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤は脂質異常症を改善した］
不断給餌された雌鶏は、血漿トリグリセリド、セラミド、及びスフィンゴミエリンのレベルが上昇した。しかしながら、組み合わせられた２５−ＯＨ  Ｄ３と酸化防止剤／抗炎症剤との添加は、不断給餌された雌鶏の血漿中のこれらの脂質の代謝産物のレベルを低下させた（表６）。
【００９３】
【表７】
0006623415.tif 000008
【００９４】
［２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤は、組織中のトリグリセリド及びセラミドの含有量の蓄積を減少させた］
肝臓、心臓、及び脚筋でのトリグリセリド及びセラミドの蓄積は、不断給餌された雌鶏よりも、補助的な２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤が給餌された雌鶏で減少した（表７）。
【００９５】
【表８】
0006623415.tif 000009
【００９６】
［２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤は、過剰給餌されたブロイラー雌鶏における組織炎症誘発性ＩＬ−１βの産生及び血漿ＩＬ−６の濃度を低下させた］
肥満関連炎症が、血中ＩＬ−６のレベル並びに脂肪組織、肝臓、脚筋、胸筋、及び心臓におけるＩＬ−１βの産生の抑制によって明らかなように、食餌２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤の添加によって改善した（図２）。
【００９７】
［２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤は、不断給餌されたブロイラー種雌鶏における脂肪毒性を改善した］
肥満の主な合併症はインスリン抵抗性の発症であり、インスリン抵抗性とは、インスリンがその主な標的組織、骨格筋、及び肝臓で食後に栄養物を貯蔵できなくなる状態である。理論に拘泥することを望むものではないが、２つの推定の機構が、脂肪貯蔵量の増大が全身の全インスリン感受性にどのように影響を及ぼし、末梢組織におけるインスリンシグナル伝達の下方制御に寄与するかを説明し得ることが明らかである。第１に、栄養物の細胞又は組織への送達が細胞又は組織の貯蔵能力を超え、これにより、インスリン作用を阻害する代謝産物が生じる。特に注目すべきは、脂質誘導体、例えば、トリアシルグリセロール及びセラミドは、特定のインスリンシグナル伝達中間体を阻害することが示されており、従って食後のグルコースの取り込み及び／又はグリコーゲンの合成をブロックする。ブロイラー種雌が不断給餌される場合、末梢組織におけるこれらの代謝産物の持続的な蓄積が、雌鶏全体のインスリン抵抗性の持続的な状態及び脂質毒性の発生に寄与する可能性が高い。第２に、脂肪蓄積の増加が、脂肪細胞から又は脂肪体に浸潤したマクロファージから産生される炎症誘発性サイトカインの血中濃度の上昇によって特徴付けられる慢性炎症状態を誘発する。これらの炎症性メディエーターは、インスリンシグナル伝達を直接アンタゴナイズし、また異化プロセスを誘発し、従って栄養代謝産物のインスリン応答性器官への送達を更に増加させることを示した。
【００９８】
総じて、過剰な飽和脂肪酸の生成、従って非脂肪組織における脂質の蓄積をもたらすグルコースの過剰供給が、代謝調節並びに活性化炎症反応及び脂質毒性の発生に関与するシグナル伝達経路を阻害する活性脂質（スフィンゴ脂質）の細胞でのレベルを上昇させる。特に、セラミドは、過剰な栄養物（即ち、飽和脂肪酸）及び炎症誘発性サイトカインの両方をインスリン抵抗性の誘発に結び付ける推定上の中間体である。更に、セラミドは、種々の細胞型で毒性であり、且つ心臓、膵臓、及び脈管系を損傷させ得る。更に、２５−ヒドロキシＤ３及び酸化防止剤／抗炎症剤は、飽食量が与えられたブロイラー種雌鶏で発生する脂肪蓄積の増加から生じる代謝性及び内分泌性調節異常及び炎症誘発反応の悪影響の改善に有効であった。
【００９９】
［２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症剤は、過剰給餌されたブロイラー雌鶏における心臓の病的状態、腹水、及び炎症を改善する］
心臓は、過剰な脂質の蓄積によって機能不全になることがある。心臓でのトリグリセリドの蓄積を促進した不断給餌は、心臓の脂肪酸の利用可能性の増加により、適応的にエステル化してトリグリセリドになることを示唆した。加えて、心臓のセラミド含有量も不断給餌の結果として上昇した。セラミドは、脂肪毒心筋症における心臓毒であり、免疫細胞のより多くの心筋内への浸潤によって明らかなように炎症反応を引き起こした（表９）。
【０１００】
【表９】
0006623415.tif 000010
【０１０１】
心臓肥大は、心臓の作業負荷の増加に対する臨床的な適応反応を表す。しかしながら、神経因子及びホルモン因子に対する心臓反応は、後負荷又は血管抵抗の増加と無関係の肥大変化も誘発し得る。栄養過剰による心臓の代償性成長がブロイラー種雌鶏で起きた（表８）。心肥大は、不適応となって最終的に病的状態を引き起こし、心不全が起こり得る。これらの結果は、心臓での脂質毒性の発生及び肥大成長が炎症反応を誘発する傾向にあるという事実を裏付けた。
【０１０２】
リン酸化ＳＴＡＴ−３（シグナル伝達性転写因子３）の心臓保護の役割は、近年、次第に明らかになってきている。興味深いことに、組み合わせられた２５−ＯＨ  Ｄ３と酸化防止剤／抗炎症剤とは、制限給餌された種雌鶏よりも高いＳＴＡＴ−３の活性化（即ち、ＳＴＡＴ−３のリン酸化）を心臓で誘発し（図３）、最も低い活性化が不断給餌されたブロイラー種雌鶏で観察された。心膜内での浸出液、心室拡張、及び腹水の発生が、組み合わせられた２５−ヒドロキシＤ３と酸化防止剤／抗炎症剤とが添加されたときに不断給餌された種雌鶏で軽減された。
【０１０３】
［実施例３］
［プレミックス］
【０１０４】
【表１０】
0006623415.tif 000011
【０１０５】
【表１１】
0006623415.tif 000012
【０１０６】
【表１２】
0006623415.tif 000013
【０１０７】
［実施例４］
［心筋症試験］
［材料及び方法］
合計３０匹の４５週齢のブロイラー種雌鶏（ＲＯＳＳ  ３０８）を研究のために市販の群れから得た。ブロイラー産卵種鶏の基礎食餌は、表１２に示されているように配合した。計算した栄養成分は表１３に示されている。
【０１０８】
【表１３】
0006623415.tif 000014
【０１０９】
【表１４】
0006623415.tif 000015
【０１１０】
【表１５】
0006623415.tif 000016
【０１１１】
食餌を、酸化防止剤（アスコルビン酸、カンタキサンチン）と組み合わせられた６９ｍｃｇ  ２５−ＯＨ−Ｄ３／食餌１ｋｇのＨｙ・Ｄ（登録商標）を添加して又は添加せずに、選択されたビタミンのレベルに濃縮した。雌鶏を以下のように給餌計画（制限及び不断）に従って無作為に処置群に振り分けた：
１．基礎食餌  −  制限給餌（１４０ｇ／日）
２．基礎食餌  −  制限給餌＋Ｈｙ・Ｄ（登録商標）（６９ｍｃｇ／飼料１ｋｇの２５−ＯＨ−Ｄ３）＋酸化防止剤／抗炎症剤
３．基礎食餌  −  不断給餌
４．基礎食餌  −  不断給餌＋Ｈｙ・Ｄ（登録商標）（６９ｍｃｇ／飼料１ｋｇの２５−ＯＨ−Ｄ３）＋酸化防止剤／抗炎症剤
【０１１２】
［結果：］
【０１１３】
【表１６】
0006623415.tif 000017
【０１１４】
図７は、制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の産卵に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示す。表１５及び図７から、以下のように結論付けることができる：
１．２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、生存率を上げることによって総卵生産量を改善した。
２．死んだトリでは、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、不断給餌されたトリの卵生産量及び産卵率に対して影響がなかったが、制限されたトリでは卵生産量及び産卵率が低下した。しかしながら、群れ全体では、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は卵生産量を増加させたが、産卵率を増加させなかった。
３．これらの結果は、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤が、突然死しやすい制限されたトリの死への進行を加速させ、従って、突然死しやすいトリを長期生存のために排除するための群れの選択装置（ｃｕｌｌｅｒ）として機能し、これにより群れの管理費が削減されることを示唆した。
【０１１５】
【表１７】
0006623415.tif 000018
【０１１６】
図８は、制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の生存率に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示す。
【０１１７】
表１６及び図８から、以下を結論付けることができる：
１．２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、トリの生存率を向上させた。
２．不断給餌されたトリでは、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤が与えられて死んだトリは、より重い体重を有していたが、より軽い相対的な肝臓、腹部脂肪、及び心臓の重量を有しており、殆どの過剰な栄養が筋肉に分配され得ることを示唆し、これにより、ポンピング機能の増強のための心臓の適応性の肥大成長がより高い成長率（筋肉）に対する酸素供給の要求を満たすことができず、従って心不整脈及び心不全を引き起こし得る。
【０１１８】
【表１８】
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【０１１９】
５０週齢の不断給餌のトリの低い相対的な肝臓の重量は、発症した卵巣退縮、従って卵黄への蓄積のための肝臓での脂質合成の減少をもたらすエストロゲンの分泌の減少によるものと思われる。
【０１２０】
図９は、制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の体重に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示す。
【０１２１】
【表１９】
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【０１２２】
図１０〜図１１は、制限飼料摂取下又は不断飼料摂取下、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤が食餌添加された、死んだ雌鶏の心臓の形態全体を例示する。
【０１２３】
［表１７及び表１８並びに図９〜図１１からの結論及び注釈：］
１．不断給餌は適応性心肥大を引き起こし、及び一部の肥大成長は病理学的に心室拡張を発症させ得る。結果として、心臓は、末梢組織への酸素送達のための血液供給の要求を満たすようにポンプ機能を維持するために、より高い収縮性を必要とし、従って心不全を引き起こし得る。
２．２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、死んだトリの心臓の病的状態（拡張、心膜液貯留、破裂）の発生率を低下させた。
３．制限給餌されたトリ及び不断給餌されたトリの両方において、２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤が与えられたトリは、より少ない適応性肥大成長を示した。これは、殆どの過剰な栄養が筋肉に分配され、これにより、ポンプ機能を増強するための心臓の肥大成長がより高い成長率（筋肉）に対する酸素供給の要求を満たすことができず、従って不整脈及び心不全を引き起こし得るという仮説を裏付ける。
【０１２４】
【表２０】
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【０１２５】
［表１９並びに図１２及び図１３からの結論及び注釈：］
２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、不断給餌されたブロイラー雌鶏のＥＣＧパターン（パターンＤ〜Ｇ）及び不整脈の不規則な発生を低減し、心臓の病的状態によって引き起こされる突然死を改善した。
【０１２６】
図１４は、制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の（３５週齢での）心筋線維化に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示している。バーの上に文字を有する平均値は有意に異なる（ｐ＜０．０５）。
【０１２７】
［図１４からの結論及び注釈：］
１．２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、不断給餌された雌鶏の心筋線維化を改善した。
【０１２８】
図１５は、制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の血漿ＩＬ−６（上のグラフ）及びＩＬ−１β（下のグラフ）の濃度に対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示している。結果は、平均値±ＳＥＭで表された（ｎ＝６）。バーの上に異なる文字を有する平均値は有意に異なる（ｐ＜０．０５）。
【０１２９】
［図１５からの結論及び注釈：］
２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、不断給餌された雌鶏の慢性全身性炎症を改善した。
【０１３０】
図１６は、制限飼料摂取した又は不断飼料摂取したブロイラー雌鶏の（３５週齢での）心臓細胞のアポトーシスに対する２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤の食餌添加の影響を示している。結果は、平均値±ＳＥＭで表された（ｎ＝３）。バーの上に異なる文字を有する平均値は有意に異なる（ｐ＜０．０５）。
【０１３１】
［図１６からの結論及び注釈：］
１．２５−ＯＨ−Ｄ３＋酸化防止剤／抗炎症剤は、制限飼料摂取した又は不断飼料摂取した雌鶏の心臓細胞のアポトーシスを改善した。
【０１３２】
［結論：］
補助的な２５−ＯＨ  Ｄ３及び酸化防止剤／抗炎症は、ブロイラー種雌鶏の過剰給餌に関連した悪影響を以下によって改善した：
・過剰給餌されたブロイラー種雌鶏の脂肪率を低下させ、及び卵巣機能、従って生殖能力を向上させること。
・内分泌（インスリン）シグナル伝達を向上させること。
・脂質毒性の発生及び全身性炎症を軽減すること。
・栄養過剰による心臓病の病因に対する心臓保護機構を活性化させること。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２−１】
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【図１２−２】
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【図１２−３】
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【図１２−４】
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【図１２−５】
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【図１２−６】
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【図１２−７】
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【図１３−１】
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【図１３−２】
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【図１３−３】
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【図１３−４】
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【図１３−５】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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