(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式：
【化１】
0006517827.tif 000157
の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
下記式：
【化２】
0006517827.tif 000158
の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む、組成物。
【請求項３】
神経細胞に対するアミロイドベータ作用を抑制することを含む、認知低下を示すか、認知低下を示すリスクのある対象の認知低下を抑制するために使用される組成物であって、
前記組成物は、
下記式：
【化３】
0006517827.tif 000159
の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含み、
前記化合物またはその薬学的に許容される塩が、前記細胞におけるアミロイドベータオリゴマーの結合を抑制するのに有効な量である、組成物。
【請求項４】
前記認知低下が、中枢ニューロンに対するアミロイドベータオリゴマー作用と関連している、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
アルツハイマー病における軽度の認知障害の治療方法に使用するための、請求項３に記載の組成物。 
【請求項６】
アルツハイマー病を治療する方法に使用するための、下記式：
【化４】
0006517827.tif 000160
の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項７】
薬学的に許容される塩が、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸、硫酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、酸リン酸塩、イソニコチン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチジン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロン酸塩（ｇｌｕｃａｒｏｎａｔｅ）、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩およびパモ酸塩からなる群より選択される、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２０１５年１月３０日にＰＣＴ国際出願として出願されるものであり、全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０１４年１月３１日に出願された米国仮特許出願第６１／９３４，５２８号の優先権の利益を主張するものである。
【０００２】
シグマ−２受容体と結合する新規なイソインドリン化合物、このような化合物を含む医薬組成物のほか、神経細胞のシナプス消失の抑制または回復、神経細胞の膜輸送の変化の調節ならびに認知低下、神経変性疾患および神経変性障害の治療のための方法が提供される。
【背景技術】
【０００３】
現時点でアルツハイマー病（ＡＤ）の治療にＦＤＡの承認を受けている薬剤は５種類しかない。このうち４種類はコリンエステラーゼ阻害剤のタクリン（ＣＯＧＮＥＸ（登録商標）；Ｓｃｉｅｌｅ社）、ドネペジル（ＡＲＩＣＥＰＴ（登録商標）；Ｐｆｉｚｅｒ社）、リバスチグミン（ＥＸＥＬＯＮ（登録商標）；Ｎｏｖａｒｔｉｓ社）およびガランタミン（ＲＡＺＡＤＹＮＥ（登録商標）；Ｏｒｔｈｏ−ＭｃＮｅｉｌ−Ｊａｎｓｓｅｎ社）である。ドネペジル、リバスチグミンおよびガランタミンは、肝毒性の可能性があるため処方されることがまれな第一世代化合物、タクリンの後継薬であり、いずれの段階のＡＤでも、認知および機能のシナプス改善をもたらす効果はほぼ同じである。５種類目の承認薬は、低親和性で使用依存性のＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸グルタミン酸受容体のアンタゴニストであるメマンチン（ＮＡＭＥＮＤＡ（登録商標）；Ｆｏｒｅｓｔ社）であり、中等度ないし重度のＡＤに限り同様の有益性が得られる。上記の化合物の臨床的効果は小さく一時的なものであり、現時点で得られているデータは、これらを疾患修飾薬として使用することを決定的に支持するものではない。例えば、Ｋｅｒｃｈｎｅｒら，２０１０，Ｂａｐｉｎｅｕｚｕｍａｂ，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ．，１０（７）：１１２１−１１３０を参照されたい。ＡＤ治療の代替法が必要とされているのは明らかである。
【０００４】
シグマ−２受容体の機能的アンタゴニストとして作用し可溶性Ａβオリゴマーの有害作用を阻害する、特定のイソインドリン化合物が提供される。いくつかの実施形態では、イソインドリンシグマ−２受容体アンタゴニスト化合物および組成物を用いて対象のシナプス機能不全を治療または予防する。
【発明の概要】
【０００５】
シグマ−２受容体と結合する新規なイソインドリン化合物、このような化合物を含む医薬組成物のほか、神経細胞のシナプス消失の抑制または回復、神経細胞の膜輸送の変化の調節ならびに認知低下、神経変性疾患および神経変性障害の治療のための方法が提供される。
【０００６】
いくつかの実施形態では、式Ｉおよび／または式ＩＩによるイソインドリン化合物およびその薬学的に許容される塩あるいはその薬学的に許容される塩は、シグマ−２受容体アンタゴニスト活性を示すほか、特定の治療表現型の他の態様も示し、このため、以下に明記されるように、可溶性アミロイドベータ（「Ａベータ」、「Ａβ」）のペプチドおよびオリゴマーならびにそれ以外のその可溶性種の神経細胞に対する有害作用を阻害し、したがって、アルツハイマー病などのＡベータオリゴマー誘導性病態に関連する疾患および障害を含めた状態の治療に用いることができる。
【０００７】
可溶性Ａベータオリゴマーは、特異的受容体と結合する可逆性薬理学的リガンドのように振る舞い、正常なシナプス可塑性に極めて重要なシグナル伝達経路に干渉し、最終的にはスパインおよびシナプスの消失を引き起こす。本明細書に提供される式Ｉによるイソインドリン化合物は、シグマ−２受容体と結合し機能的神経細胞アンタゴニストとして振る舞い、Ａベータオリゴマーとの薬理学的競合を示すことがわかった。したがって、本明細書に記載されるイソインドリンシグマ−２アンタゴニスト化合物は、Ａベータ誘導性細胞毒性などのＡベータオリゴマーの作用を低下させるか、予防し得る。先行技術の特定の化合物は除外される。このほか、Ａベータオリゴマーをはじめとする可溶性Ａベータ種の神経細胞に対する作用、より一般的にはアミロイドベータ病態を抑制する方法であって、細胞と、式Ｉおよび／または式ＩＩによるシグマ−２アンタゴニストあるいはその薬学的に許容される塩とを接触させることを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、初期段階のアルツハイマー病を治療する方法であって、治療有効量の式Ｉおよび／または式ＩＩによるシグマ−２機能的アンタゴニストあるいはその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法が提供される。
【０００８】
一実施形態では、式Ｉ：
【化１】
0006517827.tif 000002
による単離化合物またはその薬学的に許容される塩が提供され、式中：
Ｒ１およびＲ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはＣＨ２ＯＲ’からそれぞれ独立して選択され；Ｒ’＝ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣ（ＣＨ３）３、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、ＯＣＦ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル）、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、ＣＮ、ＮＯ２、ＮＨ２、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜６アルコキシＣ１〜６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜７シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、ヘテロアリール、ＣＯ２Ｒ’、Ｃ（Ｏ）Ｒ’、ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、ＮＨ（Ｃ３〜７シクロアルキル）、ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１〜４アルキル）、ＣＯＮＲ’２、ＮＣ（Ｏ）Ｒ’、ＮＳ（Ｏ）ｎＲ’、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲ’２、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’、Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜４アルキル）およびＣ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）からそれぞれ独立して選択され；ｎ＝０、１または２であり；Ｒ’は、それぞれ独立してＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル；または任意選択で置換されたアリール、アルキルアリール、ピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、モルホリニル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、Ｃ１〜６アルコキシ、ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）もしくはＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）２であり、ここでは、任意選択で置換された基は、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはＣ２〜Ｃ７アシルから選択されるか；あるいは
Ｒ３およびＲ４は、それが結合しているＣ原子とともに、ＯＨ、アミノ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つまたは５つの置換基で任意選択で置換された４員、５員、６員、７員または８員のシクロアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルを形成し、Ｒ３とＲ４またはＲ４とＲ５は、結合、Ｃ、Ｎ、ＳおよびＯからそれぞれ独立して選択されるか；Ｒ３とＲ４は、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成するか；あるいは
Ｒ４およびＲ５は、それが結合しているＣ原子とともに、ＯＨ、アミノ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つまたは５つの置換基で任意選択で置換された４員、５員、６員、７員または８員のシクロアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルを形成し、Ｒ３とＲ４またはＲ４とＲ５は、結合、Ｃ、Ｎ、ＳおよびＯからそれぞれ独立して選択されるか；Ｒ４とＲ５は、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成し；
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣ（ＣＨ３）３、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、ＯＣＦ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル）、Ｏ（ＣＯ）Ｒ’、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、ＣＮ、ＮＯ２、ＮＨ２、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜６アルコキシＣ１〜６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜７シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、ヘテロアリール、ＣＯ２Ｒ’、Ｃ（Ｏ）Ｒ’、ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、ＮＨ（Ｃ３〜７シクロアルキル）、ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１〜４アルキル）、ＣＯＮＲ’２、ＮＣ（Ｏ）Ｒ’、ＮＳ（Ｏ）ｎＲ’、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲ’２、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’、Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜４アルキル）およびＣ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）からそれぞれ独立して選択され；ｎ＝０、１または２であり；Ｒ’は、それぞれ独立してＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、アリール、アルキルアリール、ピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、モルホリニル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、Ｃ１〜６アルコキシ、ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）またはＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）２であるか；あるいは
Ｒ７およびＲ８は、それが結合しているＮ原子またはＣ原子とともに、ＯＨ、アミノ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つまたは５つの置換基で任意選択で置換された４員、５員、６員、７員または８員のシクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリール基を形成し、Ｒ９およびＲ１０は、結合、Ｃ、Ｎ、ＳおよびＯからそれぞれ独立して選択されるか；Ｒ７とＲ８は、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成するか；あるいは
Ｒ８およびＲ９は、それが結合しているＮ原子またはＣ原子とともに、ＯＨ、アミノ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つまたは５つの置換基で任意選択で置換された４員、５員、６員、７員または８員のシクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリール基を形成し、Ｒ９およびＲ１０は、結合、Ｃ、Ｎ、ＳおよびＯからそれぞれ独立して選択されるか；Ｒ８とＲ９は、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成し、
ここでは、Ｏ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、ヘテロアリール、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキルおよびシクロアルキルはそれぞれ独立して、ＯＨ、アミノ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つまたは５つの置換基で任意選択で置換されており；
ただし、以下の化合物：
【化２】
0006517827.tif 000003
は除外される。
【０００９】
別の実施形態では、式Ｉによる化合物またはその薬学的に許容される塩が提供され、式中、Ｒ１およびＲ２は、ＨまたはＣＨ３からそれぞれ独立して選択され；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ＯＨ、ＯＣＨ３、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル）、Ｆ、Ｃｌ、ＣＦ３、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜７シクロアルキル、ＣＯ２Ｒ’、Ｃ（Ｏ）Ｒ’、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、ＣＯＮＲ’２、ＮＣ（Ｏ）Ｒ’、ＮＳ（Ｏ）ｎＲ’、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲ’２、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’からそれぞれ独立して選択され；ｎ＝０、１または２であり；Ｒ’は、それぞれ独立してＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル；または任意選択で置換されたピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、モルホリニル、ヘテロシクロアルキルもしくはアリールであり、ここでは、任意選択で置換された基は、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはＣ２〜Ｃ７アシルから選択されるか；あるいはＲ３およびＲ４は、それが結合しているＣ原子とともに、５員または６員のＣ３〜７シクロアルキルまたはアリールを形成するか；あるいはＲ４およびＲ５は、それが結合しているＣ原子とともに、Ｃ３〜７シクロアルキルまたは５員もしくは６員アリールを形成するか；あるいはＲ３とＲ４は互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成するか；あるいはＲ４とＲ５は互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成し；Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、Ｈ、ＯＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、Ｆ、Ｃｌ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、ＯＣＨ３、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ＯＨ、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜７シクロアルキル、アルキルアリール、ＣＯ２Ｒ’、ＣＯＮＲ’２、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲ’２、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’、Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２およびＣ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）からそれぞれ独立して選択され；ｎ＝０、１または２であり；Ｒ’は、それぞれ独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、アリール、アルキルアリールまたはＣ１〜６アルコキシである。
【００１０】
さらなる実施形態では、式Ｉによる化合物またはその薬学的に許容される塩が提供され、式中、Ｒ７、Ｒ１０、Ｒ１１はそれぞれＨであり；Ｒ３およびＲ４は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’、Ｃ（Ｏ）Ｒ’からそれぞれ独立して選択され、ここでは、ｎ＝２であり、Ｒ’は、ＣＨ３、ピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、モルホリニルから選択され；Ｒ８は、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２またはＯＣ（ＣＨ３）３から選択され；Ｒ９はＯＨである。
【００１１】
別の実施形態では、
【化３】
0006517827.tif 000004
0006517827.tif 000005
からなる群より選択される化合物またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【００１２】
さらなる実施形態では、式ＩＩ：
【化４】
0006517827.tif 000006
による化合物またはその薬学的に許容される塩が提供され、式中、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、Ｈ、Ｃｌ、Ｆ、ＯＨ、ＣＨ３、Ｃ１〜６アルキル、ＯＣＨ３、ＯＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣ（ＣＨ３）３、ＯＣ１〜６アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、ＣＯ２Ｒ’、ＣＯＮＲ’２、ＮＣ（Ｏ）Ｒ’、ＮＳ（Ｏ）ｎＲ’、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲ’２、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’、Ｃ（Ｏ）Ｒ’、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２またはＣ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）からそれぞれ独立して選択され、ここでは、ｎ＝０、１または２であり；Ｒ’は、それぞれ独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル；または任意選択で置換されたアリール、アルキルアリール、ピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、モルホリニル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、Ｃ１〜６アルコキシ、ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）もしくはＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）２であり、ここでは、任意選択で置換された基は、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはＣ２〜Ｃ７アシルから選択されるか；あるいは
Ｒ３およびＲ４は、それが結合しているＣ原子とともに、６員アリールを形成するか；あるいはＲ３とＲ４は、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成するか；あるいはＲ４およびＲ５は、それが結合しているＣ原子とともに、６員アリールを形成するか；あるいはＲ４とＲ５は、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成し；
Ｒ８およびＲ９は、Ｈ、Ｃｌ、Ｆ、ＯＨ、ＣＨ３、Ｃ１〜６アルキル、ＯＣＨ３、ＯＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣ（ＣＨ３）３、Ｏ（ＣＯ）Ｒ’、ＯＣ１〜６アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、ＣＯ２Ｒ’、ＣＯＮＲ’２、ＮＣ（Ｏ）Ｒ’、ＮＳ（Ｏ）ｎＲ’、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲ’２、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２またはＣ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）からそれぞれ独立して選択されるか；あるいは
Ｒ８およびＲ９は、それが結合しているＮ原子またはＣ原子とともに、ＯＨ、アミノ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つまたは５つの置換基で任意選択で置換された４員、５員、６員、７員または８員のシクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリール基を形成し、Ｒ９およびＲ１０は、結合、Ｃ、Ｎ、ＳおよびＯからそれぞれ独立して選択されるか；あるいはＲ８とＲ９は、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成する。
【００１３】
さらなる実施形態では、式ＩＩによる化合物または薬学的に許容される塩が提供され、式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のうち少なくとも１つがＨではなく；Ｒ８およびＲ９のうち少なくとも一方がＨではない。
【００１４】
別の実施形態では、式ＩＩによる化合物または薬学的に許容される塩が提供され、式中、Ｒ７、Ｒ１０、Ｒ１１は、それぞれＨであり；Ｒ３およびＲ４は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’、Ｃ（Ｏ）Ｒ’からそれぞれ独立して選択され、ここでは、ｎ＝２であり、Ｒ’は、ＣＨ３または任意選択で置換されたピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イルもしくはモルホリニルから選択され、ここでは、任意選択で置換された基は、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはＣ２〜Ｃ７アシルから選択され；Ｒ８は、ＯＨ、Ｃｌ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２またはＯＣ（ＣＨ３）３から選択され；Ｒ９はＯＨまたはＣｌである。
【００１５】
さらなる実施形態では、式ＩＩによる化合物または薬学的に許容される塩が提供され、式中、Ｒ３およびＲ４は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’、Ｃ（Ｏ）Ｒ’からそれぞれ独立して選択され、ここでは、ｎ＝２であり、Ｒ’は、ＣＨ３、ピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イルまたはモルホリニルから選択され；Ｒ５およびＲ６はそれぞれＨであり；Ｒ８は、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２またはＯＣ（ＣＨ３）３から選択され；Ｒ９はＯＨである。
【００１６】
さらなる実施形態では、化合物またはその薬学的に許容される塩は、
【化５】
0006517827.tif 000007
0006517827.tif 000008
0006517827.tif 000009
0006517827.tif 000010
0006517827.tif 000011
からなる群より選択される。
【００１７】
さらなる実施形態では、
【化６】
0006517827.tif 000012
からなる群より選択される化合物またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【００１８】
さらなる実施形態では、
【化７】
0006517827.tif 000013
からなる群より選択される化合物またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【００１９】
別の実施形態では、神経細胞に対するアミロイドベータ作用を阻害する組成物であって、式Ｉ：
【化８】
0006517827.tif 000014
［式中：
Ｒ１およびＲ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはＣＨ２ＯＲ’からそれぞれ独立して選択され；Ｒ’＝ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣ（ＣＨ３）３、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、ＯＣＦ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル）、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、ＣＮ、ＮＯ２、ＮＨ２、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜６アルコキシＣ１〜６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜７シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、ヘテロアリール、ＣＯ２Ｒ’、Ｃ（Ｏ）Ｒ’、ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、ＮＨ（Ｃ３〜７シクロアルキル）、ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１〜４アルキル）、ＣＯＮＲ’２、ＮＣ（Ｏ）Ｒ’、ＮＳ（Ｏ）ｎＲ’、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲ’２、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’、Ｃ（Ｏ）Ｒ’、Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜４アルキル）およびＣ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）からそれぞれ独立して選択され；ｎ＝０、１または２であり；Ｒ’は、それぞれ独立してＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル；または任意選択で置換されたアリール、アルキルアリール、ピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、モルホリニル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、Ｃ１〜６アルコキシ、ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）もしくはＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）２であり、ここでは、任意選択で置換された基は、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはＣ２〜Ｃ７アシルから選択されるか；あるいは
Ｒ３およびＲ４は、それが結合しているＣ原子とともに、ＯＨ、アミノ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つまたは５つの置換基で任意選択で置換された４員、５員、６員、７員または８員のシクロアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルを形成し、Ｒ３とＲ４またはＲ４とＲ５は、結合、Ｃ、Ｎ、ＳおよびＯからそれぞれ独立して選択されるか；あるいはＲ３とＲ４は、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成するか；あるいは
Ｒ４およびＲ５は、それが結合しているＣ原子とともに、ＯＨ、アミノ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つまたは５つの置換基で任意選択で置換された４員、５員、６員、７員または８員のシクロアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルを形成し、Ｒ３とＲ４またはＲ４とＲ５は、結合、Ｃ、Ｎ、ＳおよびＯからそれぞれ独立して選択されるか；あるいはＲ４とＲ５は、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成し；
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣ（ＣＨ３）３、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、ＯＣＦ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル）、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、ＣＮ、ＮＯ２、ＮＨ２、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜６アルコキシＣ１〜６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜７シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、ヘテロアリール、ＣＯ２Ｒ’、Ｃ（Ｏ）Ｒ’、ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、ＮＨ（Ｃ３〜７シクロアルキル）、ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１〜４アルキル）、ＣＯＮＲ’２、ＮＣ（Ｏ）Ｒ’、ＮＳ（Ｏ）ｎＲ’、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲ’２、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’、Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜４アルキル）およびＣ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）からそれぞれ独立して選択され；ｎ＝０、１または２であり；Ｒ’は、それぞれ独立してＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、アリール、アルキルアリール、ピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、モルホリニル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、Ｃ１〜６アルコキシ、ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）またはＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）２であるか；あるいは
Ｒ７およびＲ８は、それが結合しているＮ原子またはＣ原子とともに、ＯＨ、アミノ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つまたは５つの置換基で任意選択で置換された４員、５員、６員、７員または８員のシクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリール基を形成し、Ｒ９およびＲ１０は、結合、Ｃ、Ｎ、ＳおよびＯからそれぞれ独立して選択されるか；あるいはＲ７とＲ８は、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成するか；あるいは
Ｒ８およびＲ９は、それが結合しているＮ原子またはＣ原子とともに、ＯＨ、アミノ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つまたは５つの置換基で任意選択で置換された４員、５員、６員、７員または８員のシクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリールを形成し、Ｒ９およびＲ１０は、結合、Ｃ、Ｎ、ＳおよびＯからそれぞれ独立して選択されるか；あるいはＲ８とＲ９は、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成し；
ここでは、Ｏ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、ヘテロアリール、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキルおよびシクロアルキルはそれぞれ独立して、ＯＨ、アミノ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つまたは５つの置換基で任意選択で置換されており；
ただし、以下の化合物：
【化９】
0006517827.tif 000015
は除外される］
による化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含み、化合物またはその塩が、前記細胞のアミロイドベータオリゴマー結合を阻害するのに有効な量で組成物中に存在する、組成物が提供される。
【００２０】
別の実施形態では、神経細胞に対するアミロイドベータ作用を阻害する組成物であって、式Ｉ：
【化１０】
0006517827.tif 000016
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は本明細書に明記される通りであり、ただし、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ１０およびＲ１１がそれぞれＨであり；Ｒ２がＣＨ３であり；Ｒ８がＯＣＨ３またはＣｌであり；Ｒ９がＯＨまたはＣｌである場合、Ｒ４はＣｌでもＣＦ３でもなく、Ｒ５はＣｌでもＣＦ３でもない］
による化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含み、化合物またはその塩が、前記細胞のアミロイドベータオリゴマー結合を阻害するのに有効な量で組成物中に存在する、組成物が提供される。
【００２１】
別の実施形態では、式Ｉによる化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含み、式中、
Ｒ１およびＲ２が、ＨまたはＣＨ３からそれぞれ独立して選択され；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ＯＨ、ＯＣＨ３、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル）、Ｆ、Ｃｌ、ＣＦ３、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜７シクロアルキル、ＣＯ２Ｒ’、Ｃ（Ｏ）Ｒ’、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、ＣＯＮＲ’２、ＮＣ（Ｏ）Ｒ’、ＮＳ（Ｏ）ｎＲ’、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲ’２、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’からそれぞれ独立して選択され；ｎ＝０、１または２であり；Ｒ’が、それぞれ独立してＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、ピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、モルホリニル、ヘテロシクロアルキルまたはアリールであるか；あるいは
Ｒ３およびＲ４が、それが結合しているＣ原子とともに、５員または６員のＣ３〜７シクロアルキルまたはアリールを形成するか；あるいはＲ４およびＲ５が、それが結合しているＣ原子とともに、Ｃ３〜７シクロアルキルまたは５員もしくは６員アリールを形成するか；あるいはＲ３とＲ４が、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成するか；あるいはＲ４とＲ５が、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成し；
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１が、Ｈ、ＯＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、Ｆ、Ｃｌ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、ＯＣＨ３、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ＯＨ、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜７シクロアルキル、アルキルアリール、ＣＯ２Ｒ’、ＣＯＮＲ’２、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲ’２、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’、Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２およびＣ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）からそれぞれ独立して選択され；ｎ＝０、１または２であり；Ｒ’が、それぞれ独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、アリール、アルキルアリールまたはＣ１〜６アルコキシである、
組成物が提供される。
【００２２】
別の実施形態では、式Ｉによる化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含み、式中、
Ｒ７、Ｒ１０、Ｒ１１がそれぞれＨであり；Ｒ３およびＲ４が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’、Ｃ（Ｏ）Ｒ’からそれぞれ独立して選択され、ここでは、ｎ＝２であり、Ｒ’が、ＣＨ３、ピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、モルホリニルから選択され；Ｒ８が、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２またはＯＣ（ＣＨ３）３から選択され；Ｒ９がＯＨである、
組成物が提供される。
【００２３】
別の実施形態では、式Ｉによる化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含み、化合物またはその薬学的に許容される塩が、
【化１１】
0006517827.tif 000017
0006517827.tif 000018
からなる群より選択される、組成物が提供される。
【００２４】
別の実施形態では、式ＩＩ：
【化１２】
0006517827.tif 000019
［式中、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、Ｈ、Ｃｌ、Ｆ、ＯＨ、ＣＨ３、Ｃ１〜６アルキル、ＯＣＨ３、ＯＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣ（ＣＨ３）３、ＯＣ１〜６アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、ＣＯ２Ｒ’、ＣＯＮＲ’２、ＮＣ（Ｏ）Ｒ’、ＮＳ（Ｏ）ｎＲ’、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲ’２、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’、Ｃ（Ｏ）Ｒ’、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２またはＣ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）からそれぞれ独立して選択され、ここでは、ｎ＝０、１または２であり；Ｒ’は、それぞれ独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキルまたは任意選択で置換されたアリール、アルキルアリール、ピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、モルホリニル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、Ｃ１〜６アルコキシ、ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）もしくはＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）２であり、ここでは、任意選択で置換された基は、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはＣ２〜Ｃ７アシルから選択されるか；あるいは
Ｒ３およびＲ４は、それが結合しているＣ原子とともに、６員アリールを形成するか；あるいはＲ３とＲ４は、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成するか；あるいはＲ４およびＲ５は、それが結合しているＣ原子とともに、６員アリールを形成するか；あるいはＲ４とＲ５は、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成し；
Ｒ８およびＲ９は、Ｈ、Ｃｌ、Ｆ、ＯＨ、ＣＨ３、Ｃ１〜６アルキル、ＯＣＨ３、ＯＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣ（ＣＨ３）３、ＯＣ１〜６アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、ＣＯ２Ｒ’、ＣＯＮＲ’２、ＮＣ（Ｏ）Ｒ’、ＮＳ（Ｏ）ｎＲ’、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲ’２、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２またはＣ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）からそれぞれ独立して選択される］
による化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む組成物が提供される。
【００２５】
別の実施形態では、式ＩＩによる化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含み、式中、Ｒ３およびＲ４が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’、Ｃ（Ｏ）Ｒ’からそれぞれ独立して選択され、ここでは、ｎ＝２であり、Ｒ’が、ＣＨ３、ピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イルまたはモルホリニルから選択され；Ｒ５およびＲ６がそれぞれＨであり；Ｒ８が、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２またはＯＣ（ＣＨ３）３から選択され；Ｒ９がＯＨである、組成物が提供される。
【００２６】
さらなる実施形態では、化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含み、化合物または塩が、
【化１３】
0006517827.tif 000020
0006517827.tif 000021
0006517827.tif 000022
0006517827.tif 000023
からなる群より選択される、組成物が提供される。
【００２７】
さらなる実施形態では、化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含み、化合物または塩が、
【化１４】
0006517827.tif 000024
からなる群より選択される、組成物が提供される。
【００２８】
さらなる実施形態では、化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含み、化合物または塩が、
【化１５】
0006517827.tif 000025
からなる群より選択される、組成物が提供される。
【００２９】
一実施形態では、神経細胞に対するアミロイドベータ作用を阻害するための方法／使用であって、式Ｉ：
【化１６】
0006517827.tif 000026
［式中、
Ｒ１およびＲ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはＣＨ２ＯＲ’からそれぞれ独立して選択され；ここでは、Ｒ’＝ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣ（ＣＨ３）３、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、ＯＣＦ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル）、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、ＣＮ、ＮＯ２、ＮＨ２、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜６アルコキシＣ１〜６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜７シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、ヘテロアリール、ＣＯ２Ｒ’、Ｃ（Ｏ）Ｒ’、ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、ＮＨ（Ｃ３〜７シクロアルキル）、ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１〜４アルキル）、ＣＯＮＲ’２、ＮＣ（Ｏ）Ｒ’、ＮＳ（Ｏ）ｎＲ’、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲ’２、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’、Ｃ（Ｏ）Ｒ’、Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜４アルキル）およびＣ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）からそれぞれ独立して選択され；ここでは、ｎ＝０、１または２であり；Ｒ’は、それぞれ独立してＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル；または任意選択で置換されたアリール、アルキルアリール、ピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、モルホリニル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、Ｃ１〜６アルコキシ、ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）もしくはＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）２であり、ここでは、任意選択で置換された基は、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはＣ２〜Ｃ７アシルから選択されるか；あるいは
Ｒ３およびＲ４は、それが結合しているＣ原子とともに、ＯＨ、アミノ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つまたは５つの置換基で任意選択で置換された４員、５員、６員、７員または８員のシクロアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルを形成し、Ｒ３とＲ４またはＲ４とＲ５は、結合、Ｃ、Ｎ、ＳおよびＯからそれぞれ独立して選択されるか；あるいはＲ３とＲ４は、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成するか；あるいは
Ｒ４およびＲ５は、それが結合しているＣ原子とともに、ＯＨ、アミノ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つまたは５つの置換基で任意選択で置換された４員、５員、６員、７員または８員のシクロアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルを形成し、Ｒ３とＲ４またはＲ４とＲ５は、結合、Ｃ、Ｎ、ＳおよびＯからそれぞれ独立して選択されるか；あるいはＲ４とＲ５は、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成し；
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣ（ＣＨ３）３、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、ＯＣＦ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル）、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、ＣＮ、ＮＯ２、ＮＨ２、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜６アルコキシＣ１〜６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜７シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、ヘテロアリール、ＣＯ２Ｒ’、Ｃ（Ｏ）Ｒ’、ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、ＮＨ（Ｃ３〜７シクロアルキル）、ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１〜４アルキル）、ＣＯＮＲ’２、ＮＣ（Ｏ）Ｒ’、ＮＳ（Ｏ）ｎＲ’、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲ’２、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’、Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜４アルキル）およびＣ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）からそれぞれ独立して選択され；ここでは、ｎ＝０、１または２であり；Ｒ’は、それぞれ独立してＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル；または任意選択で置換されたアリール、アルキルアリール、ピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、モルホリニル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、Ｃ１〜６アルコキシ、ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）もしくはＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）２であり、ここでは、任意選択で置換された基は、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはＣ２〜Ｃ７アシルから選択されるか；あるいは
Ｒ７およびＲ８は、それが結合しているＮ原子またはＣ原子とともに、ＯＨ、アミノ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つまたは５つの置換基で任意選択で置換された４員、５員、６員、７員または８員のシクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリール基を形成し、Ｒ９およびＲ１０は、結合、Ｃ、Ｎ、ＳおよびＯからそれぞれ独立して選択されるか；あるいはＲ７とＲ８は、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成するか；あるいは
Ｒ８およびＲ９は、それが結合しているＮ原子またはＣ原子とともに、ＯＨ、アミノ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つまたは５つの置換基で任意選択で置換された４員、５員、６員、７員または８員のシクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリール基を形成し、Ｒ９およびＲ１０は、結合、Ｃ、Ｎ、ＳおよびＯからそれぞれ独立して選択されるか；あるいはＲ８とＲ９は、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成し、
ここでは、Ｏ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、ヘテロアリール、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキルおよびシクロアルキルはそれぞれ独立して、ＯＨ、アミノ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つまたは５つの置換基で任意選択で置換されており；
ただし、以下の化合物：
【化１７】
0006517827.tif 000027
0006517827.tif 000028
は除外される］
による選択的シグマ−２受容体アンタゴニスト化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む有効量の組成物を投与することを含み、化合物またはその薬学的に許容される塩が、前記細胞のアミロイドベータオリゴマー結合を阻害するのに有効な量である、方法／使用が提供される。
【００３０】
別の実施形態では、神経細胞に対するアミロイドベータ作用を阻害するための方法／使用であって、式Ｉによる選択的シグマ−２受容体アンタゴニスト化合物またはその薬学的に許容される塩を含む有効量の組成物を投与することを含み、化合物またはその薬学的に許容される塩を、前記細胞の膜輸送不良を抑制するのにも有効な量で投与し、前記膜輸送作用が前記細胞の可溶性アミロイドベータオリゴマーへの曝露によるものである、方法／使用が提供される。
【００３１】
別の実施形態では、神経細胞に対するアミロイドベータ作用を阻害するための方法／使用であって、式Ｉによる選択的シグマ−２受容体アンタゴニスト化合物またはその薬学的に許容される塩を含む有効量の組成物を投与することを含み、化合物またはその薬学的に許容される塩を、細胞の可溶性アミロイドベータオリゴマーへの曝露による前記細胞のオリゴマー結合およびシナプス消失をともに抑制するのに有効な量で投与する、方法／使用が提供される。
【００３２】
別の実施形態では、神経細胞に対するアミロイドベータ作用を阻害するための方法／使用であって、有効量の式Ｉによる化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む組成物を投与することを含み、化合物またはその薬学的に許容される塩を、可溶性アミロイドベータオリゴマー仲介による認知作用を阻害するのに有効な量で投与する、方法／使用が提供される。一態様では、認知作用は、認知低下の動物モデルで試験される認知低下である。別の態様では、認知低下は、恐怖条件付けアッセイによって試験される学習の低下である。さらなる態様では、認知低下は、モーリス水迷路試験によって試験される空間学習および記憶の低下である。別の態様では、認知低下は、アルツハイマー病のトランスジェニック動物モデルで試験される、海馬による空間学習および記憶の低下である。
【００３３】
別の実施形態では、神経細胞に対するアミロイドベータ作用を阻害するための方法／使用であって、有効量の式Ｉによる化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む組成物を投与することを含み、式中：
Ｒ１およびＲ２が、ＨまたはＣＨ３からそれぞれ独立して選択され；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ＯＨ、ＯＣＨ３、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル）、Ｆ、Ｃｌ、ＣＦ３、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜７シクロアルキル、ＣＯ２Ｒ’、Ｃ（Ｏ）Ｒ’、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、ＣＯＮＲ’２、ＮＣ（Ｏ）Ｒ’、ＮＳ（Ｏ）ｎＲ’、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲ’２、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’からそれぞれ独立して選択され；ｎ＝０、１または２であり；Ｒ’が、それぞれ独立してＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、ピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、モルホリニル、ヘテロシクロアルキルまたはアリールであるか；あるいは
Ｒ３およびＲ４が、それが結合しているＣ原子とともに、５員または６員のＣ３〜７シクロアルキルまたはアリールを形成するか；あるいはＲ４およびＲ５が、それが結合しているＣ原子とともに、Ｃ３〜７シクロアルキルまたは５員もしくは６員アリールを形成するか；あるいはＲ３とＲ４が、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成するか；あるいはＲ４とＲ５が、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成し；
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１が、Ｈ、ＯＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、Ｆ、Ｃｌ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、ＯＣＨ３、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ＯＨ、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜７シクロアルキル、アルキルアリール、ＣＯ２Ｒ’、ＣＯＮＲ’２、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲ’２、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’、Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２およびＣ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）からそれぞれ独立して選択され；ｎ＝０、１または２であり；Ｒ’が、それぞれ独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、アリール、アルキルアリールまたはＣ１〜６アルコキシである、
方法／使用が提供される。
【００３４】
別の実施形態では、神経細胞に対するアミロイドベータ作用を阻害するための方法／使用であって、有効量の式Ｉによる化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む組成物を投与することを含み、式中、Ｒ７、Ｒ１０、Ｒ１１がそれぞれＨであり；Ｒ３およびＲ４が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’、Ｃ（Ｏ）Ｒ’からそれぞれ独立して選択され、ここでは、ｎ＝２であり、Ｒ’が、ＣＨ３または任意選択で置換されたピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イルもしくはモルホリニルから選択され、ここでは、任意選択で置換された基が、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはＣ２〜Ｃ７アシルから選択され；Ｒ８が、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２またはＯＣ（ＣＨ３）３から選択され；Ｒ９がＯＨである、方法／使用が提供される。
【００３５】
別の実施形態では、神経細胞に対するアミロイドベータ作用を阻害するための方法／使用であって、有効量の
【化１８】
0006517827.tif 000029
0006517827.tif 000030
からなる群より選択される化合物またはその薬学的に許容される塩を含む組成物を投与することを含む、方法／使用が提供される。
【００３６】
別の実施形態では、神経細胞に対するアミロイドベータ作用を阻害するための方法／使用であって、有効量の式ＩＩ：
【化１９】
0006517827.tif 000031
［式中、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、Ｈ、Ｃｌ、Ｆ、ＯＨ、ＣＨ３、Ｃ１〜６アルキル、ＯＣＨ３、ＯＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣ（ＣＨ３）３、ＯＣ１〜６アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、ＣＯ２Ｒ’、ＣＯＮＲ’２、ＮＣ（Ｏ）Ｒ’、ＮＳ（Ｏ）ｎＲ’、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲ’２、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’、Ｃ（Ｏ）Ｒ’、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２またはＣ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）からそれぞれ独立して選択され、ここでは、ｎ＝０、１または２であり；Ｒ’は、それぞれ独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキルまたは任意選択で置換されたアリール、アルキルアリール、ピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、モルホリニル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、Ｃ１〜６アルコキシ、ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）もしくはＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）２であり、ここでは、任意選択で置換された基は、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはＣ２〜Ｃ７アシルから選択されるか；あるいは
Ｒ３およびＲ４は、それが結合しているＣ原子とともに、６員アリールを形成するか；あるいはＲ３とＲ４は、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成するか；あるいはＲ４およびＲ５は、それが結合しているＣ原子とともに、６員アリールを形成するか；あるいはＲ４とＲ５は、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成し；
Ｒ８およびＲ９は、Ｈ、Ｃｌ、Ｆ、ＯＨ、ＣＨ３、Ｃ１〜６アルキル、ＯＣＨ３、ＯＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣ（ＣＨ３）３、ＯＣ１〜６アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、ＣＯ２Ｒ’、ＣＯＮＲ’２、ＮＣ（Ｏ）Ｒ’、ＮＳ（Ｏ）ｎＲ’、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲ’２、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２またはＣ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）からそれぞれ独立して選択される］
による化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む組成物を投与することを含む、方法／使用が提供される。
【００３７】
別の実施形態では、神経細胞に対するアミロイドベータ作用を阻害するための方法／使用であって、有効量の式ＩＩによる化合物またはその薬学的に許容される塩を含む組成物を投与することを含み、式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のうち少なくとも１つがＨではなく；Ｒ８およびＲ９のうち少なくとも一方がＨではない、方法／使用が提供される。
【００３８】
別の実施形態では、神経細胞に対するアミロイドベータ作用を阻害するための方法／使用であって、有効量の式ＩＩによる化合物またはその薬学的に許容される塩を含む組成物を投与することを含み、式中、Ｒ３およびＲ４が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’、Ｃ（Ｏ）Ｒ’からそれぞれ独立して選択され、ここでは、ｎ＝２であり、Ｒ’が、ＣＨ３、ピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イルまたはモルホリニルから選択され；Ｒ５およびＲ６がそれぞれＨであり；Ｒ８が、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２またはＯＣ（ＣＨ３）３から選択され；Ｒ９がＯＨである、方法／使用が提供される。
【００３９】
別の実施形態では、神経細胞に対するアミロイドベータ作用を阻害するための方法／使用であって、有効量の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む組成物を投与することを含み、化合物またはその塩が、
【化２０】
0006517827.tif 000032
0006517827.tif 000033
0006517827.tif 000034
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からなる群より選択される、方法／使用が提供される。
【００４０】
別の実施形態では、神経細胞に対するアミロイドベータ作用を阻害するための方法／使用であって、有効量の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む組成物を投与することを含み、化合物またはその塩が、
【化２１】
0006517827.tif 000036
からなる群より選択される、方法／使用が提供される。
【００４１】
別の実施形態では、神経細胞に対するアミロイドベータ作用を阻害するための方法／使用であって、有効量の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、化合物またはその塩が、
【化２２】
0006517827.tif 000037
からなる群より選択される、方法／使用が提供される。
【００４２】
別の実施形態では、必要とする対象の長期増強の抑制を阻害するための方法／使用であって、式Ｉおよび／または式ＩＩによるシグマ−２受容体アンタゴニスト化合物あるいはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む治療有効量の組成物を対象に投与することを含む、方法／使用が提供される。
【００４３】
別の実施形態では、認知低下を示すか、認知低下を示すリスクのある対象の認知低下を抑制するための方法／使用であって、式Ｉおよび／または式ＩＩによるシグマ−２受容体アンタゴニスト化合物あるいはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む治療有効量の組成物を対象に投与することを含む、方法／使用が提供される。
【００４４】
別の実施形態では、中枢ニューロンに対するアミロイドベータオリゴマー作用による対象の認知低下を抑制するための方法／使用であって、式Ｉおよび／または式ＩＩによるシグマ−２受容体アンタゴニスト化合物あるいはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む治療有効量の組成物を前記認知低下の認められる対象に投与することを含む、方法／使用が提供される。
【００４５】
別の実施形態では、必要とする対象のアルツハイマー病の軽度認知障害を治療するための方法／使用であって、式Ｉおよび／または式ＩＩによるシグマ−２受容体アンタゴニスト化合物あるいはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む治療有効量の組成物を対象に投与することを含む、方法／使用が提供される。
【００４６】
さらなる実施形態では、シグマ−２受容体と結合し、Ａβオリゴマーとニューロン、特にシナプスとの結合を阻害することによりシグマ−２アンタゴニストとして作用する、式Ｉおよび／または式ＩＩによるイソインドリン化合物またはその薬学的に許容される塩が提供される。いくつかの実施形態では、シグマ−２アンタゴニストは、ニューロン、特にシナプスとの結合でＡβオリゴマーと競合するか、あるいは、Ａβオリゴマー形成に干渉すること、またはＡβオリゴマーと結合すること、または推測ではあるが、Ａβオリゴマーがそのニューロンと結合することに付随するシグナル伝達機序を発動させる能力に干渉することなどにより、Ａβオリゴマーがニューロンと結合する能力を崩壊させる。ある特定の実施形態では、このようにして、シグマ−２アンタゴニストが、特に動物の膜輸送障害、シナプス機能不全、記憶および学習障害、シナプス数の減少、樹状突起スパインの長さまたは形態の変化あるいは長期増強（ＬＴＰ）の障害を含めた非致死性のＡβ病態的作用（「非致死性Ａβ病態」または「非致死性アミロイドベータ病態）を阻害する。
【００４７】
他の実施形態では、本明細書で説明する他のアッセイで活性な本明細書に提供されるイソインドリンシグマ−２アンタゴニストは、ニューロンを正常な状態に回復させるか、Ａβオリゴマー誘導性シナプス機能不全に干渉する能力を有する。理論に束縛されるものではないが、本明細書に提供されるシグマ−２アンタゴニストは、Ａβオリゴマーの非致死性作用を打ち消すことおよび初期段階の可溶性Ａβオリゴマーによる病態の治療に有用な、Ａβオリゴマーの構造、ＡβオリゴマーとニューロンまたはＡβオリゴマー誘導性分子シグナル伝達機序との結合のうちの１つまたは複数に干渉する。
【００４８】
一実施形態では、機能的ニューロンアンタゴニストであり、神経細胞のシナプス消失を抑制する方法に使用される、式Ｉおよび／または式ＩＩによるシグマ−２アンタゴニストあるいはその薬学的に許容される塩が提供され、シナプス消失は、１つまたは複数のＡベータオリゴマーをはじめとするＡベータ複合体あるいはより一般的には、モノマー型、オリゴマー型または他の可溶性の複合体型（のちに定義されるもの）のＡベータペプチドを含めたＡベータ種への細胞の曝露によるものであり、この方法は、前記細胞と、前記消失を防止または軽減するか、前記細胞のシナプス数を曝露前のレベルまで一部または全部回復させるのに有効な量の１つまたは複数のシグマ−２アンタゴニストとを接触させることを含む。
【００４９】
別の実施形態では、神経細胞の膜輸送の変化を調節する方法が提供され、前記変化は、１つまたは複数のＡベータ種への前記細胞の曝露によるものであり、この方法は、前記細胞と、前記膜輸送の変化を防止または軽減するか、前記細胞を前記Ａベータ種に曝露する前に観察されるレベルまたはそれに近いレベルに維持するのに有効な量の式Ｉおよび／または式ＩＩによる１つまたは複数のシグマ−２アンタゴニストあるいはその薬学的に許容される塩とを接触させることを含む。
【００５０】
別の実施形態では、本開示の１つまたは複数のシグマ−２アンタゴニストを対象に投与することを含む認知低下の治療法に使用する式Ｉおよび／または式ＩＩによるシグマ−２アンタゴニストあるいはその薬学的に許容される塩が提供される。
【００５１】
別の実施形態では、必要とする対象の認知低下を治療する方法であって、有効量の式Ｉおよび／または式ＩＩによる１つまたは複数のシグマ−２アンタゴニストあるいはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む、方法が提供される。
【００５２】
さらに別の実施形態では、式Ｉおよび／または式ＩＩによるシグマ−２アンタゴニストあるいはその薬学的に許容される塩は、対象に本開示の１つまたは複数のシグマ−２アンタゴニストを投与することを含む、認知低下または神経変性障害あるいはシナプスの機能および／または数の欠如を治療する方法に使用する、機能的ニューロンシグマ−２アンタゴニストである。
【００５３】
さらに別の実施形態では、対象の認知低下または神経変性障害あるいはシナプスの機能および／または数の欠如を治療する方法であって、機能的ニューロンシグマ−２アンタゴニストである式Ｉおよび／または式ＩＩによる１つまたは複数のシグマ−２アンタゴニストあるいはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む、方法が提供される。
【００５４】
さらなる実施形態では、神経細胞のアミロイドベータオリゴマー誘導性シナプス機能不全を抑制し、かつ／またはニューロンのＡベータオリゴマーへの曝露によって引き起こされる海馬長期増強抑制を阻害するのに有効な量の式Ｉおよび／または式ＩＩによる１つまたは複数のシグマ−２受容体アンタゴニストあるいはその薬学的に許容される塩を、必要とする対象に投与することを含む、方法が提供される。
【発明を実施するための形態】
【００５５】
（詳細な説明）
化合物、組成物および方法について詳細に説明する前に、本開示は、説明される特定の工程、組成物および方法論のいずれにも限定されず、これらは様々なものであり得ることが理解されるべきである。ほかにも、説明に使用される用語は、単に特定の型または実施形態の説明を目的とするものであって、添付の「特許請求の範囲」によってのみ限定される本開示の範囲を限定することを意図するものではないことが理解されるべきである。別途定義されない限り、本明細書で使用される技術用語および科学用語はいずれも、当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本開示の実施形態の実施または検証には、本明細書に記載されるものと同様または同等のものであればいかなる方法および材料も用いることができるが、好ましい方法、装置および材料について以下に説明する。
【００５６】
さらに、明確にするために個々の実施形態との関連で記載される本開示の特定の特徴が、単一の実施形態において組み合わさって記載され得ることが理解される。これとは逆に、簡潔にするために単一の実施形態との関連で記載される本開示の様々な特徴が、別個に、または適切な任意の部分的組合せで記載されることもあり得る。
【００５７】
定義
単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上明らかに別の意味を表す場合を除き、複数形の指示対象を包含する。したがって、例えば、「細胞」と言う場合、１つまたは複数の細胞および当業者に公知のその等価物を指す。
【００５８】
本明細書で使用される「約」という用語は、所与の値の±１０％を意味する。例えば、「約５０％」は４５％〜５５％の範囲内にあることを意味する。
【００５９】
「シグマ−２リガンド」は、シグマ−２受容体と結合する化合物を指し、この受容体またはタンパク質のアゴニスト、アンタゴニスト、部分アゴニスト、逆アゴニストのほか、これ以外のリガンドに対する競合物質を包含する。
【００６０】
「アゴニスト」という用語は、その存在によって生じる受容体の生物活性が、その受容体の天然に存在するリガンドの存在によって生じる生物活性と同じものである化合物を指す。
【００６１】
「部分アゴニスト」という用語は、その存在によって生じる受容体の生物活性が、その受容体の天然に存在するリガンドの存在によって生じる生物活性と同じ種類であるが強度が低いものである化合物を指す。
【００６２】
「アンタゴニスト」という用語は、その存在によって受容体の生物活性の強度が低下する実体、例えば化合物、抗体またはフラグメントを指す。ある特定の実施形態では、アンタゴニストの存在によって受容体の生物活性が完全に阻害される。本明細書で使用される「シグマ−２受容体アンタゴニスト」という用語は、例えば膜輸送アッセイ、シナプス消失アッセイ、Ａベータオリゴマー仲介によるカスパーゼ−３のシグマ−２受容体活性化もしくは行動アッセイなどのｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイまたは必要とする患者にみられるＡベータの作用、例えばＡベータオリゴマー誘導性シナプス機能不全を阻止するという点で、シグマ−２受容体において「機能的アンタゴニスト」として作用する化合物を表すのに使用される。機能的アンタゴニストは、例えばＡベータオリゴマーとシグマ−２受容体との結合を阻害することによって直接的に、あるいはＡベータオリゴマーとシグマ−２受容体との結合によって生じる下流シグナル伝達に干渉することによって間接的に作用し得る。
【００６３】
「シグマ−２受容体アンタゴニスト化合物」という用語は、測定可能な量でシグマ−２受容体と結合し、シグマ−２受容体結合によって生じるＡベータ作用オリゴマー誘導性シナプス機能不全に対する機能的アンタゴニストとして作用する分子を指す。
【００６４】
「選択性」または「選択的」という用語は、化合物のシグマ受容体、例えばシグマ−２受容体に対する結合親和性（Ｋｉ）を非シグマ受容体と比較したときの差を指す。シグマ−２アンタゴニストは、シナプスニューロンのシグマ受容体に対して高い選択性を有する。シグマ−２受容体またはシグマ２受容体とシグマ−１受容体の両方に対するＫｉと非シグマ受容体に対するＫｉとを比較する。いくつかの実施形態では、選択的シグマ−２受容体アンタゴニストまたはシグマ−１受容体リガンドは、様々な受容体での結合解離定数Ｋｉ値、ＩＣ５０値または結合定数の比較による評価で、シグマ受容体との結合に関して、非シグマ受容体の少なくとも１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、７０倍、１００倍もしくは５００倍またはそれ以上の親和性を有する。様々な受容体でのＫｉまたはＩＣ５０値は任意の既知のアッセイプロトコルを用いて評価することが可能であり、例えば、解離定数が既知の放射標識化合物の受容体からの競合的置換をモニターすることによって、例えば、ＣｈｅｎｇおよびＰｒｕｓｏｆｆの方法（１９７３）（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２２，３０９９−３１０８）または本明細書に具体的に記載される方法などによって、評価することができる。いくつかの実施形態では、シグマ−２アンタゴニスト化合物は、非シグマ受容体と比較してシグマ−２受容体との結合に関して特異的な抗体またはその活性な結合フラグメントである。抗体またはフラグメントの場合、当該技術分野で公知の手段、例えば、Ｂｅａｔｔｙら，１９８７，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈ，１００（１−２）：１７３−１７９の方法またはＣｈａｌｑｕｅｓｔ，１９８８，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２６（１２）：２５６１−２５６３の方法によりシグマ−２受容体またはフラグメントでの結合定数を算出し、非シグマ受容体での結合定数と比較することができる。非シグマ受容体は、例えば、ムスカリン性Ｍ１〜Ｍ４受容体、セロトニン（５−ＨＴ）受容体、アルファアドレナリン受容体、ベータアドレナリン受容体、オピオイド受容体、セロトニン輸送体、ドーパミン輸送体、アドレナリン輸送体、ドーパミン受容体またはＮＭＤＡ受容体から選択される。
【００６５】
本願では、「高親和性」という用語は、化合物のシグマ−１受容体部位およびシグマ−２受容体部位の両方に対する結合親和性を測定するシグマ受容体結合アッセイにおいて、例えば、Ｗｅｂｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ（ＵＳＡ）８３：８７８４−８７８８（１９８６）（参照により本明細書に組み込まれる）による開示のように、［３Ｈ］−ＤＴＧに対して６００ｎＭ未満、５００ｎＭ、４００ｎＭ、３００ｎＭ、２００ｎＭ、１５０ｎＭ未満、１００ｎＭ未満、８０ｎＭ未満、６０ｎＭ未満または好ましくは５０ｎＭ未満のＫｉ値を示す化合物を意味するものとする。特に好ましいシグマリガンドは、［３Ｈ］−ＤＴＧに対して約１５０ｎＭ未満、好ましくは１００ｎＭ未満、約６０ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満または約１ｎＭ未満のＫｉ値を示す。
【００６６】
「治療表現型」という用語は、挙動的有効性を予測するｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにおける化合物の活性パターンを表すのに使用される。（１）シグマ−２受容体と選択的に高親和性で結合し、（２）ニューロンのＡベータオリゴマー誘導性作用に対する機能的アンタゴニストとして作用する化合物が、（ｉ）Ａβ誘導性膜輸送不良を阻止または軽減し、（ｉｉ）Ａβ誘導性シナプス消失を阻止または軽減し、（ｉｉｉ）Ａベータオリゴマーの非存在下では輸送にもシナプス数にも影響を及ぼさなければ、その化合物は「治療表現型」を有するものとする。このｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにおける活性パターンは、「治療表現型」と呼ばれ、挙動的有効性を予測するものである。
【００６７】
「治療プロファイル」という用語は、治療表現型を満たすとともに、優れた脳透過性（血液脳関門を通過する能力）、優れた血漿中安定性および優れた代謝安定性を有する化合物を表すのに使用される。
【００６８】
「薬物様特性」という用語は、本明細書では、シグマ−２受容体リガンドの投与時の脳透過性、代謝安定性および／または血漿中安定性を含めた薬物動態的特徴および安定性を表すのに使用される。
【００６９】
「Ａベータ種」または「Ａβ」は、可溶性アミロイドペプチド含有成分、例えばＡベータモノマー、ＡベータオリゴマーまたはＡベータペプチドと他の可溶性ペプチドもしくはタンパク質との複合体（モノマー型、ダイマー型またはポリマー型）およびアミロイド前駆体タンパク質の任意のプロセシング産物を含めたその他の可溶性Ａベータ会合体を含む組成物を包含するものとする。可溶性Ａβオリゴマーは神経毒性を示すことが知られている。Ａβ１〜４２ダイマーでさえマウス海馬スライスのシナプス可塑性を低下させることが知られている。当該技術分野で公知のある理論では、天然のＡβ１〜４２モノマーは神経保護性を示すと考えられ、神経毒性を示すにはＡβモノマーが自己会合して可溶性Ａベータオリゴマーになる必要があるとされる。しかし、特定のＡβ変異体モノマー（ａｒｃｔｉｃ変異（Ｅ２２Ｇ））があると家族性ＡＤになることが報告されている。例えば、Ｇｉｕｆｆｒｉｄａら，β−Ａｍｙｌｏｉｄ  ｍｏｎｏｍｅｒｓ  ａｒｅ  ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００９  ２９（３４）：１０５８２−１０５８７を参照されたい。Ａベータ種を含む調製物の非限定的な例が米国特許出願第１３／０２１，８７２号；米国特許公開第２０１０／０２４０８６８号；国際特許出願第２００４／０６７５６１号；国際特許出願第２０１０／０１１９４７号；米国特許公開第２００７００９８７２１号；米国特許公開第２０１００２０９３４６号；国際特許出願第２００７／００５３５９号；米国特許公開第２００８００４４３５６号；米国特許公開第２００７０２１８４９１号；国際特許出願第２００７／１２６４７３号；米国特許公開第２００５００７４７６３号；国際特許出願第２００７／１２６４７３号、国際特許出願第２００９／０４８６３１号および米国特許公開第２００８００４４４０６号（それぞれ参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている。
【００７０】
「投与（すること）」は、本開示の化合物とともに使用される場合、化合物を標的組織内もしくは標的組織内上に直接投与すること、または患者をはじめとする対象の全身もしくは局所に化合物を投与することを意味する。
【００７１】
本明細書で使用される「動物」という用語は、特に限定されないが、ヒトのほか、非ヒト脊椎動物、例えば野生動物、実験動物、飼育動物、家畜およびペットなどを包含する。
【００７２】
本明細書で使用される「対象」、「個体」および「患者」という用語は互換的に使用され、哺乳動物、マウス、ラットをはじめとするげっ歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、霊長類、非ヒト霊長類、ヒトなどを含めた任意の動物を指す。
【００７３】
本明細書で使用される「接触（させること）」という用語は、分子（細胞または細胞膜などのさらに高次の構造を有する分子）同士が、２つのペプチド間または１つのタンパク質とまた別のタンパク質をはじめとする分子、例えば小分子などとの間の非共有相互作用などの分子間相互作用が可能な距離の範囲内に収まるように、これらの分子を一緒にする、または組み合わせることを指す。いくつかの実施形態では、組み合わせた分子または接触させた分子が一般的な溶媒中で混合され、自由に会合することが可能な溶液中で接触を実施する。いくつかの実施形態では、細胞において、または細胞内で、あるいは無細胞環境中で接触を実施し得る。いくつかの実施形態では、無細胞環境は、細胞から作製した溶解物である。いくつかの実施形態では、細胞溶解物は、全細胞溶解物、核溶解物、細胞質溶解物およびその組合せであり得る。いくつかの実施形態では、無細胞溶解物は、細胞集団から細胞の核を取り出してから溶解させる、核の抽出および単離により得られる溶解物である。いくつかの実施形態では、核を溶解させないが、それでもなお、無細胞環境であるとみなされる。分子は、ボルテックス、振盪などの混合によって一緒にすることができる。
【００７４】
「改善する」という用語は、本開示により、それを提供、適用または投与する組織の特徴および／または物理的属性のいずれかが変化することを述べるのに使用される。「改善する」という用語はほかにも、病的状態が「改善する」とき、その病的状態に関連する症状または物理的特性が減少する、軽減される、消失する、遅延するまたは防止されることになるように、病的状態とともに使用され得る。
【００７５】
「阻害（抑制）（すること）」という用語は、特定の結果もしくは過程の阻止、防止または逆の結果もしくは過程の回復を包含する。本開示の化合物の投与による予防または治療の点から言えば、「阻害（抑制）（すること）」は、症状から（部分的にまたは完全に）保護すること、症状の発現を遅延させること、症状を緩和すること、または疾患、状態もしくは障害から保護すること、これらを減少もしくは消失させることを包含する。
【００７６】
「輸送不良を抑制すること」という用語は、細胞、好ましくは神経細胞の可溶性Ａｂオリゴマー誘導性膜輸送不良を阻止する能力を指す。輸送不良を抑制することが可能な化合物は、例えば実施例６に記載されるように、膜輸送アッセイにおいて２０μＭ未満、１５μＭ未満、１０μＭ未満、５μＭ未満、好ましくは１μＭ未満のＥＣ５０を示し、さらに、可溶性Ａベータオリゴマー誘導性膜輸送不良のＡベータオリゴマー作用の阻害最大値の少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７０％の阻害が可能である。
【００７７】
「ｌｏｇ  Ｐ」という用語は、化合物の分配係数を指す。分配係数とは、２つの液相、例えばオクタノールと水それぞれの非イオン化化合物の濃度の比のことである。イオン化可能な溶質化合物の分配係数を測定するには、優勢な化合物の形態が非イオン化型になるように水相のｐＨを調整する。溶媒中の非イオン化溶質化合物の濃度比の対数をｌｏｇ  Ｐと呼ぶ。ｌｏｇ  Ｐは脂溶性の尺度となる。例えば、
ｌｏｇ  Ｐオクタノール／水＝ｌｏｇ（［溶質］オクタノール／［溶質］非イオン化、水）
である。
【００７８】
本明細書の様々な箇所において、本開示の化合物の置換基がグループまたは範囲の形で開示される。具体的には、本開示の実施形態には、このようなグループおよび範囲のメンバーのあらゆる個々の部分的組合せが含まれるものとする。例えば、「Ｃ１〜６アルキル」という用語は、具体的には、例えばメチル（Ｃ１アルキル）、エチル（Ｃ２アルキル）、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキルおよびＣ６アルキルのほか、例えばＣ１〜Ｃ２アルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ３アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルキル、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、Ｃ４〜Ｃ５アルキルおよびＣ５〜Ｃ６アルキルを個々に開示するものとする。
【００７９】
ある可変物が２つ以上みられる本開示の化合物では、各可変物は、その可変物を定めるマーカッシュ群から選択される異なる部分であり得る。例えば、同じ化合物に２つのＲ基が同時に存在するように構造が記載されている場合、その２つのＲ基は、Ｒを定めるマーカッシュ群から選択される異なる部分を表し得る。
【００８０】
ｎを整数とする「ｎ員」という用語は通常、環形成原子の数がｎである部分の環形成原子の数を表す。例えば、ピリジンは６員ヘテロアリール環の一例であり、チオフェンは５員ヘテロアリール基の一例である。
【００８１】
本明細書で使用される「アルキル」という用語は、直鎖状または分岐状の飽和炭化水素基を指すものとする。アルキル基の例としては、特に限定されないが、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、プロピル（例えば、ｎ−プロピルおよびイソプロピル）、ブチル（例えば、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル）、ペンチル（例えば、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル）などが挙げられる。アルキル基は、１〜約２０個、２〜約２０個、１〜約１０個、１〜約８個、１〜約６個、１〜約４個または１〜約３個の炭素原子を含み得る。「アルキレン」という用語は二価アルキル連結基を指す。アルキレンの例にはメチレン（ＣＨ２）がある。
【００８２】
本明細書で使用される「アルケニル」は、１つまたは複数の炭素間二重結合を有するアルキル基を指す。アルケニル基の例としては、特に限定されないが、エテニル、プロペニル、シクロヘキセニルなどが挙げられる。「アルケニレニル」という用語は、二価連結アルケニル基を指す。
【００８３】
本明細書で使用される「アルキニル」は、１つまたは複数の炭素間三重結合を有するアルキル基を指す。アルキニル基の例としては、特に限定されないが、エチニル、プロピニルなどが挙げられる。「アルキニレニル」という用語は、二価連結アルキニル基を指す。
【００８４】
本明細書で使用される「ハロアルキル」は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒおよび／またはＩから選択される１つまたは複数のハロゲン置換基を有するアルキル基を指す。ハロアルキル基の例としては、特に限定されないが、ＣＦ３、Ｃ２Ｆ５、ＣＨＦ２、ＣＣｌ３、ＣＨＣｌ２、Ｃ２Ｃｌ５、ＣＨ２ＣＦ３などが挙げられる。
【００８５】
本明細書で使用される「アリール」は、単環式または多環式（例えば、融合環を２個、３個または４個有する）芳香族炭化水素、例えば、フェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、インダニル、インデニルなどを指す。いくつかの実施形態では、アリール基は、６〜約２０個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態では、アリール基は、６〜約１０個の炭素原子を有する。
【００８６】
本明細書で使用される「シクロアルキル」は、最大２０個の環形成炭素原子を含む環化アルキル、アルケニルおよびアルキニル基を含めた非芳香族環式炭化水素を指す。シクロアルキル基は、単環式または多環式（例えば、融合環を２個、３個または４個有する）環系およびスピロ環系を含み得る。シクロアルキル基は、３〜約１５個、３〜約１０個、３〜約８個、３〜約６個、４〜約６個、３〜約５個または５〜約６個の環形成炭素原子を含み得る。シクロアルキル基の環形成炭素原子は、任意選択でオキソまたはスルフィドによって置換されていてもよい。シクロアルキル基の例としては、特に限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプタトリエニル、ノルボルニル、ノルピニル、ノルカルニル、アダマンチルなどが挙げられる。シクロアルキルの定義にはこのほか、シクロアルキル環と融合した（すなわち、結合を共有している）芳香環を１つまたは複数有する部分、例えば、ペンタン、ペンテン、ヘキサンのベンゾまたはチエニル誘導体など（例えば、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イルまたは１Ｈ−インデン−２（３Ｈ）−オン−１−イル）が含まれる。好ましくは、「シクロアルキル」は、最大２０個の環形成炭素原子を含む環化アルキル基を指す。シクロアルキルの例としては、好ましくは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、アダマンチルなどが挙げられる。
【００８７】
本明細書で使用される「ヘテロアリール」基は、環形成原子を最大２０個有し、硫黄、酸素または窒素などのヘテロ原子環員（環形成原子）を少なくとも１個有する、芳香族複素環を指す。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は、硫黄、酸素および窒素からそれぞれ独立して選択される少なくとも１つまたは複数のヘテロ原子環形成原子を有する。ヘテロアリール基には、単環式および多環式（例えば、融合環を２個、３個または４個有する）系が含まれる。ヘテロアリール基の例としては、特に限定されないが、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、フリル、キノリル、イソキノリル、チエニル、イミダゾリル、チアゾリル、インドリル、ピリル、オキサゾリル、ベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンゾチアゾリル、イソオキサゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、インダゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、イソチアゾリル、ベンゾチエニル、プリニル、カルバゾリル、ベンゾイミダゾリル、インドリニルなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は環形成原子として、１〜約２０個の炭素原子、さらなる実施形態では、約１〜約５個、約１〜約４個、約１〜約３個、約１〜約２個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は、３〜約１４、３〜約７個または５〜６個の環形成原子を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は、１〜約４、１〜約３個または１〜２個のヘテロ原子を有する。
【００８８】
本明細書で使用される「ヘテロシクロアルキル」は、最大２０個の環形成原子を有する非芳香族複素環を指し、１つまたは複数の環形成炭素原子がＯ、ＮまたはＳ原子などのヘテロ原子に置き換わった環化アルキル、アルケニルおよびアルキニル基がこれに含まれる。ヘテロシクロアルキル基は、単環式または多環式（例えば、融合系およびスピロ系の両方）であり得る。「ヘテロシクロアルキル」基の例としては、モルホリノ、チオモルホリノ、ピペラジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、２，３−ジヒドロベンゾフリル、１，３−ベンゾジオキソール、ベンゾ−１，４−ジオキサン、ピペリジニル、ピロリジニル、イソオキサゾリジニル、イソチアゾリジニル、ピラゾリジニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、イミダゾリジニル、ピロリジン−２−オン−３−イルなどが挙げられる。ヘテロシクロアルキル基の環形成炭素原子およびヘテロ原子は、任意選択でオキソまたはスルフィドによって置換されていてよい。例えば、環形成Ｓ原子が１個または２個のオキソに置換されて［すなわち、Ｓ（Ｏ）またはＳ（Ｏ）２を形成して］いてよい。また別の例として、環形成Ｃ原子がオキソに置換されて（すなわち、カルボニルを形成して）いてよい。ヘテロシクロアルキルの定義にはこのほか、非芳香族複素環と融合した（すなわち、結合を共有する）芳香環を１つまたは複数有する部分、例えば、複素環のピリジニル、チオフェニル、フタルイミジル、ナフタルイミジルおよびベンゾ誘導体、例えばインドリン、イソインドリン、イソインドリン−１−オン−３−イル、４，５，６，７−テトラヒドロチエノ［２，３−ｃ］ピリジン−５−イル、５，６−ジヒドロチエノ［２，３−ｃ］ピリジン−７（４Ｈ）−オン−５−イルおよび３，４−ジヒドロイソキノリン−１（２Ｈ）−オン−３−イル基などが含まれる。ヘテロシクロアルキル基の環形成炭素原子およびヘテロ原子は、任意選択でオキソまたはスルフィドで置換されていてよい。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は１〜約２０個の炭素原子、さらなる実施形態では約３〜約２０個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は、３〜約１４個、３〜約７個または５〜６個の環形成原子を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は、１〜約４個、１〜約３個または１〜２個のヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は０〜３個の二重結合を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は０〜２個の三重結合を含む。
【００８９】
本明細書で使用される「ハロ」または「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを包含する。
【００９０】
本明細書で使用される「アルコキシ」は−Ｏ−アルキル基を指す。アルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ（例えば、ｎ−プロポキシおよびイソプロポキシ）、ｔ−ブトキシなどが挙げられる。
【００９１】
本明細書で使用される「ハロアルコキシ」は−Ｏ−ハロアルキル基を指す。ハロアルコキシ基の例にはＯＣＦ３がある。本明細書で使用される「トリハロメトキシ」は、３つのハロゲン置換基を有するメトキシ基を指す。トリハロメトキシ基の例としては、特に限定されないが、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌＦ２、−ＯＣＣｌ３などが挙げられる。
【００９２】
本明細書で使用される「アリールアルキル」はアリールで置換されたＣ１〜６アルキルを指し、「シクロアルキルアルキル」はシクロアルキルで置換されたＣ１〜６アルキルを指す。
【００９３】
本明細書で使用される「ヘテロアリールアルキル」はヘテロアリール基で置換されたＣ１〜６アルキル基を指し、「ヘテロシクロアルキルアルキル」はヘテロシクロアルキルで置換されたＣ１〜６アルキルを指す。
【００９４】
本明細書で使用される「アミノ」はＮＨ２を指す。
【００９５】
本明細書で使用される「アルキルアミノ」は、アルキル基で置換されたアミノ基を指す。
【００９６】
本明細書で使用される「ジアルキルアミノ」は、２つのアルキル基で置換されたアミノ基を指す。
【００９７】
本明細書で使用されるＣ（Ｏ）はＣ（＝Ｏ）を指す。
【００９８】
本明細書で使用される「任意選択で置換された」という用語は、置換が任意選択のものであることを意味し、したがって、置換されていない原子および部分と置換された原子および部分の両方を包含する。「置換された」原子または部分は、指定される原子または部分の通常の原子価を超えず、かつ置換によって安定な化合物が生じる限り、指定された原子または部分上の任意の水素が、示される置換基から選択される基に置き換わっていてよいことを表す。例えば、メチル基（すなわち、ＣＨ３）が任意選択で置換されている場合、炭素原子上の３個の水素原子が示される置換基に置き換わっていてよい。
【００９９】
本明細書で使用される「アミロイドベータ作用」、例えば「非致死性アミロイドベータ作用」または「Ａベータオリゴマー作用」は、Ａベータ種と接触させた細胞に対する作用、特に非致死性作用を指す。例えば、神経細胞を可溶性アミロイドベータ（「Ａベータ」）オリゴマーと接触させると、オリゴマーが一部の神経細胞の一部のシナプスと結合することがｉｎ  ｖｉｔｒｏで明らかにされている。この結合は、例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＡベータオリゴマー結合を測定するアッセイで定量化することができる。また別の報告されているＡベータ種の作用にはシナプス数の減少があり、ヒト海馬では約１８％であることが報告されている（Ｓｃｈｅｆｆら，２００７）ほか、（例えば、シナプス数を測定するアッセイで）定量化することが可能である。また別の例として、神経細胞をアミロイドベータ（「Ａベータ」）オリゴマーと接触させると、膜輸送が調節され、その結果、膜輸送が変化することが明らかにされている。この異常は、特に限定されないがＭＴＴアッセイを含めた多数のアッセイで可視化することができる。例えば、黄色のテトラゾリウム塩がエンドサイトーシスによって細胞に取り込まれ、エンドソーム経路で小胞内に位置する酵素によって不溶性の紫色のホルマザンに還元される。紫色のホルマザンのレベルは、培養物中の代謝が活発な細胞の数を反映し、ホルマザン量の減少は、培養物の細胞死または代謝毒性の尺度であると考えられる。黄色のテトラゾリウム塩と接触させた細胞を顕微鏡で観察すると、最初に、細胞を満たす細胞内小胞内に紫色のホルマザンが見える。時間の経過とともに、エキソサイトーシスにより小胞が放出され、不溶性ホルマザンが水性培地環境に曝露されると、細胞膜の外表面にホルマザンが針状結晶として沈殿する。Ａベータ種の作用としてはこれ以外にも、認知低下、例えば新規記憶を形成する能力の低下および記憶喪失などが挙げられ、これらの作用は、動物モデルを用いたアッセイでｉｎ  ｖｉｖｏで測定することができる。いくつかの実施形態では、Ａベータ作用は、例えば膜輸送アッセイもしくはシナプス消失アッセイなどのｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイで確認されるＡベータオリゴマー誘導性シナプス機能不全、Ａベータオリゴマーの仲介によるカスパーゼ−３のシグマ−２受容体活性化、Ａベータ誘導性ニューロン機能不全、Ａベータの仲介による長期増強（ＬＴＰ）の低下または必要とする患者もしくは行動アッセイにおける認知低下から選択される。
【０１００】
いくつかの実施形態では、被験化合物が神経細胞に対する可溶性Ａベータオリゴマー種による作用をネガティブ対照に比して約１０％超、好ましくは１５％超、好ましくは２０％超阻害することができる場合、その化合物は認知低下またはそれに関連する疾患の治療に有効であるとする。いくつかの実施形態では、被験薬剤がアミロイド前駆体タンパク質のプロセシング産物の仲介による作用を陽性対照に比して約１０％超、好ましくは１５％超、好ましくは２０％超阻害することができる場合、その薬剤は有効であるとする。例えば、のちの実施例に示すように、Ａベータオリゴマー結合が１８％阻害されるだけでシナプス減少が完全に抑制される。例えば、図３Ｃおよび３Ｄを参照されたい。本明細書は、ニューロン代謝の異常およびシナプス数の減少などのＡベータ種の非致死性作用の阻害に主眼を置くものであるが、これらは認知機能と関係があることがわかっており、さらには、時間の経過とともに、アミロイド病態の下流の測定可能な症状、特に臨床症状、例えば１）フロルベタピル、ＰｉｔｔＢをはじめとする造影剤などのアミロイド造影剤によって測定される線維または斑、２）ＦＤＧ−ＰＥＴで検出されるグルコース代謝低下によって測定されるシナプス消失または細胞死あるいは３）撮像または患者から採取した脳脊髄液、脳生検もしくは血漿を対象とするＥＬＩＳＡによるタンパク質／代謝産物検出によって検出可能な脳内または体内のタンパク質発現または代謝産物量の変化、例えば、ＥＬＩＳＡによって測定されるＡベータ４２、リン酸化タウ、総タウのレベルおよび／または比の変化またはＥＬＩＳＡパネルで検出可能なタンパク質発現変化のパターンなど（全体が参照により本明細書に組み込まれる参考文献：Ｗｙｓｓ−Ｃｏｒａｙ  Ｔ．ら，Ｍｏｄｅｌｉｎｇ  ｏｆ  ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｔｒａｉｔｓ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｏｍｅ．Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  ２０１１  Ｊｕｌ  ８を参照されたい）、４）ＭＲＩによって検出可能な血管浮腫または微小出血の存在により測定される脳血管異常をはじめとする撮像技術によって検出可能な症状ならびに５）ＡＤＡＳ−Ｃｏｇ、ＭＭＳＥ、ＣＢＩＣなどの任意の認知機能検査または他の任意の認知機能検査機器などの実施によって測定される認知機能低下の軽減をもたらす（未治療対象と比較して）ことが期待される。
【０１０１】
本明細書で使用される「神経細胞」という用語は、単一細胞または細胞集団を指すのに使用され得る。いくつかの実施形態では、神経細胞は初代神経細胞である。いくつかの実施形態では、神経細胞は、不死化もしくは形質転換した神経細胞または幹細胞である。初代神経細胞とは、グリア細胞などの他の種類の神経細胞に分化することができない神経細胞のことである。幹細胞とは、ニューロンおよびグリアなどの他の種類の神経細胞に分化することができる細胞のことである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの神経細胞を含むがグリア細胞は含まない組成物をアッセイに用いる。いくつかの実施形態では、組成物は、Ａベータが内部移行し蓄積することが知られているグリア細胞を約３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満または１％未満含む。初代神経細胞は、動物の脳の任意の領域に由来するものであり得る。いくつかの実施形態では、神経細胞は海馬細胞または皮質細胞である。グリア細胞の存在は、任意の方法によって判定され得る。いくつかの実施形態では、グリア細胞はＧＦＡＰの存在により検出され、ニューロンは、ＭＡＰ２に対する抗体で陽性に染色することにより検出され得る。
【０１０２】
「薬学的に許容される」という語句は、一般に安全で無毒性であるとみなされる分子的実体および組成物を指す。特に、本開示の医薬組成物に使用される薬学的に許容される担体、希釈剤をはじめとする補形剤は、生理学的に許容され、他の成分と適合性があり、通常、患者に投与してもアレルギー反応などの有害反応（例えば、急性胃蠕動、眩暈など）を引き起こさない。好ましくは、本明細書で使用される「薬学的に許容される」という用語は、連邦政府または州政府の規制当局による承認を受けているか、米国薬局方をはじめとする一般に認められている薬局方に動物、より具体的にはヒトに使用できるものとして記載されていることを意味する。本明細書で使用される「薬学的に許容される塩（１つまたは複数）」という語句は、本開示の化合物のそのような塩であって、哺乳動物での使用に安全かつ有効であり、所望の生物活性を有する塩を包含する。薬学的に許容される塩には、本開示の化合物または本開示の方法に従って同定される化合物中に存在する酸性基または塩基性基の塩が含まれる。薬学的に許容される酸付加塩としては、特に限定されないが、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸、硫酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、酸リン酸塩、イソニコチン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチジン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロン酸塩（ｇｌｕｃａｒｏｎａｔｅ）、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩およびパモ酸塩（すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトアート））が挙げられる。本開示の特定の化合物は、様々なアミノ酸と薬学的に許容される塩を形成し得る。適切な塩基性塩としては、特に限定されないが、アルミニウム塩、カルシウム塩、リチウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、亜鉛塩、鉄塩およびジエタノールアミン塩が挙げられる。このほか、有機アミンなどのアミンを用いて薬学的に許容される塩基付加塩が形成される。適切なアミンの例には、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミンおよびプロカインがある。
【０１０３】
本明細書で使用される「治療剤」という用語は、対象の望ましくない状態または疾患を治療する、除去する、緩和させる、対象の望ましくない状態または疾患から保護する、または対象の望ましくない状態または疾患を改善するのに用いられる薬剤を意味する。
【０１０４】
本明細書で使用される「有効量」という用語は、特定の障害または病理学的過程の少なくとも１つの症状またはパラメータの測定可能な抑制をもたらす量を指す。例えば、Ａベータオリゴマーの存在下で測定可能なシナプス減少の低下をもたらす本開示のシグマ−２リガンドの量は、少なくとも直ちにアミロイド病態の臨床症状に全く変化が認められなくても、病理学的過程を抑えることから、有効量であるとみなされる。
【０１０５】
本開示の化合物または組成物の「治療有効量」または「有効量」とは、任意の医学的治療に適用可能な妥当な利益／リスク比で治療対象に治療効果をもたらす所定の量のことである。治療効果は、客観的なもの（すなわち、何らかの検査またはマーカーによる測定可能なもの）であっても主観的なもの（すなわち、対象が効果を示す、または感じるか、医師が変化を観察する）であってもよい。本開示の化合物の有効量は、約０．０１ｍｇ／Ｋｇ〜約５００ｍｇ／Ｋｇ、約０．１ｍｇ／Ｋｇ〜約４００ｍｇ／Ｋｇ、約１ｍｇ／Ｋｇ〜約３００ｍｇ／Ｋｇ、約０．０５〜約２０ｍｇ／Ｋｇ、約０．１ｍｇ／Ｋｇ〜約１０ｍｇ／Ｋｇまたは約１０ｍｇ／Ｋｇ〜約１００ｍｇ／Ｋｇの広範囲にわたり得る。本明細書で企図される効果には、必要に応じて医学的な治療的処置および／または予防的処置の両方が含まれる。治療効果および／または予防効果を得るために本開示に従って投与する化合物の具体的な量は、当然のことながら、例えば、投与する化合物、投与経路、他の有効成分の共投与、治療の対象となる状態、使用する具体的な化合物の活性、使用する具体的な組成物、患者の年齢、体重、全般的健康状態、性別および食事；使用する具体的な化合物の投与時間、投与経路および排泄速度ならびに治療期間を含めた、症例を取り巻く具体的な状況によって決まる。投与する有効量は、医師が上記の関連する状況を踏まえて妥当な医学的判断を下すことにより決定される。本開示の化合物の治療有効量は通常、生理学的に許容される補形剤組成物の形で投与しても、有効な全身濃度または組織中での局所濃度に達するに十分な量である。ヒトをはじめとする動物に単回投与または分割投与で投与する本開示の化合物の総１日量は、例えば、１日当たり０．０１ｍｇ／Ｋｇ体重〜約５００ｍｇ／Ｋｇ体重、約０．１ｍｇ／Ｋｇ体重〜約４００ｍｇ／Ｋｇ体重、約１ｍｇ／Ｋｇ体重〜約３００ｍｇ／Ｋｇ体重、約１０ｍｇ／Ｋｇ体重〜約１００ｍｇ／Ｋｇ体重、より通常には０．１〜２５ｍｇ／ｋｇ体重の量であり得る。単回投与組成物は、１日量になるように上記の量またはその約数の量を含有し得る。一般に、本開示による治療計画は、このような治療を必要とする患者への投与を含み、通常、単回投与または複数回投与で１日当たり、約１ｍｇ〜約５０００ｍｇ、１０ｍｇ〜約２０００ｍｇの化合物（１つまたは複数）、２０〜１０００ｍｇ、好ましくは２０〜５００ｍｇ、最も好ましくは約５０ｍｇの式Ｉおよび／または式ＩＩによる化合物あるいはその薬学的に許容される塩を投与するものである。
【０１０６】
本明細書で使用される「治療する」、「治療の対象となる」または「治療（すること）」という用語は、治療的処置および予防的手段の両方を指し、ここでは、その目的は望ましくない生理学的状態、障害または疾患から（部分的または完全に）保護すること、またはそれを鈍らせる（例えば、その発症を軽減するか、遅らせる）こと、あるいは有益な臨床結果または所望の臨床結果、例えば、異常であったか、異常になると思われるパラメータ、値、機能または結果の低下の部分的または全面的回復または抑制などを得ることである。本開示の目的のためには、有益な臨床結果または所望の臨床結果としては、特に限定されないが、実際の臨床症状の軽減または状態、障害もしくは疾患の増進もしくは改善に直ちにつながるかどうかを問わず、症状の緩和；状態、障害または疾患の程度、勢力または発現速度の低下；状態、障害または疾患の状態の安定化（すなわち、悪化させないこと）；状態、障害または疾患の発症の遅延または進行の緩徐化；状態、障害または病的状態の緩和；および寛解（部分的であるか全面的であるかを問わない）が挙げられる。治療では、過剰なレベルの副作用を伴わずに臨床的に有意な応答を引き起こすことを追求する。治療にはこのほか、治療を受けない場合に予想される生存期間よりも生存期間を延ばすことが含まれる。
【０１０７】
一般的には、「組織」という用語は、同じように特化した細胞が協同して特定の機能を発揮するよう集合したものを指す。
【０１０８】
本明細書で使用される「認知低下」は、動物の認知機能の任意の負の変化であり得る。例えば、認知低下としては、特に限定されないが、記憶喪失（例えば、行動記憶喪失）、新規記憶が獲得できないこと、錯乱、判断障害、人格変化、見当識障害またはその任意の組合せが挙げられる。したがって、認知低下の治療に有効な化合物は、電気生理学的に測定される長期ニューロン増強（ＬＴＰ）、長期ニューロン抑制（ＬＴＤ）またはシナプス可塑性のバランスを回復させること；神経変性を抑制、治療および／または軽減すること；一般的なアミロイドーシスを抑制、治療および／または軽減すること；アミロイド産生、アミロイド集合、アミロイド凝集およびアミロイドオリゴマー結合のうちの１つまたは複数を抑制、治療および／または軽減すること；１つまたは複数のＡベータ種のニューロン細胞に対する非致死性作用（シナプスの消失または機能不全および膜輸送異常など）を抑制、治療および／または軽減すること；ならびにその組合せによって有効であり得る。さらに、そのような化合物はほかにも、特に限定されないが認知症を含めた、Ａベータに関連する神経変性疾患および障害、例えば、特に限定されないが軽度アルツハイマー病を含めたアルツハイマー病（ＡＤ）、ダウン症候群、血管性認知症（脳アミロイド血管症および脳卒中）、レビー小体型認知症、ＨＩＶ認知症、軽度認知障害（ＭＣＩ）；加齢に伴う記憶障害（ＡＡＭＩ）；加齢による認知低下（ＡＲＣＤ）、発症前アルツハイマー病（ＰＣＡＤ）；および認知症を伴わない認知障害（ＣＩＮＤ）などの治療に有効であり得る。
【０１０９】
本明細書で使用される「天然のリガンド」という用語は、対象中に存在し、ｉｎ  ｖｉｖｏでタンパク質、受容体、膜脂質をはじめとする結合パートナーと結合することができるか、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでこれが再現されるリガンドを指す。天然のリガンドは合成起源のものであってよいが、同時に対象中にヒトの介入なしに天然に存在するものでなければならない。例えば、Ａベータオリゴマーはヒト対象中に存在することが知られている。したがって、対象中にみられるＡベータオリゴマーは天然のリガンドであるとみなされる。Ａベータオリゴマーと結合パートナーとの結合は、組換えまたは合成技術を用いてｉｎ  ｖｉｔｒｏで再現することができるが、それでもなお、Ａベータオリゴマーの調製または製造の方法に関係なく、そのＡベータオリゴマーは天然のリガンドであるとみなされる。同じ結合パートナーと結合することができる合成小分子は、それが対象中に存在しない場合、天然のリガンドではない。例えば、本明細書に記載されるイソインドリン化合物は通常、対象中には存在せず、したがって、天然のリガンドであるとみなされない。
【０１１０】
ヒトアミロイドベータ
アミロイドベータの産生過剰および蓄積はアルツハイマー病の病理学的特徴の１つである。ヒトアミロイドベータ（Ａベータ）はアルツハイマー病患者の脳にみられる不溶性アミロイド斑沈着物の主要な成分である。この斑はＡベータの線維性凝集物からなる。段階が進行したアルツハイマー病ではアミロイドベータ線維がみられることがわかっている。
【０１１１】
初期アルツハイマー病（ＡＤ）の認知面での顕著な特徴として、新規記憶を形成する能力が異常に低下するというものがある。初期の記憶喪失は、可溶性Ａβオリゴマーによって引き起こされるシナプス不全であると考えられる。このオリゴマーは、シナプス可塑性の古典的な実験パラダイムである長期増強を阻止するほか、特筆すべきことには、ＡＤ脳組織およびトランスジェニックＡＤモデルではその増加がみられる。初期の記憶喪失はニューロン死の前のシナプス不全に起因し、シナプス不全は線維ではなく可溶性Ａβオリゴマーの作用に起因するとする仮説が提唱されている（Ｌａｃｏｒら，Ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｂｙ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ−ｒｅｌａｔｅｄ  ａｍｙｌｏｉｄ  β  ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００４，２４（４５）：１０１９１−１０２００）。
【０１１２】
Ａベータは、ニューロンのシナプスに集中してみられる内在性膜タンパク質であるアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の切断産物である。アルツハイマー病患者の脳および組織には可溶型のＡベータが存在し、その存在は疾患の進行と相関する（Ｙｕら，２００９，Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｏｌｉｇｏｍｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４８（９）：１８７０−１８７７。可溶性アミロイドβオリゴマーは、学習および記憶を阻止するニューロンシナプスの変化を誘導することが示されている）。
【０１１３】
比較的小型の可溶性Ａβオリゴマーは、正常なシナプス可塑性に極めて重要な多数のシグナル伝達経路に干渉し、最終的にはスパインおよびシナプスの消失をもたらす（Ｓｅｌｋｏｅら，２００８，Ｓｏｌｕｂｌｅ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｍｐａｉｒ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｂｅｈａｖｉｏｒ，Ｂｅｈａｖ  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  １９２（１）：１０６−１１３）。アルツハイマー病は、シナプス可塑性の疾患として始まり、継続する。
【０１１４】
可溶性Ａβオリゴマーの存在は、アルツハイマー病罹患前の脳に初期の認知低下を招くと考えられている。アミロイドベータオリゴマーはニューロンシナプスの部分で結合し、ニューロンおよびグリアにはシグマ−２受容体が相当量存在することが知られている。
【０１１５】
シグマ−２受容体
シグマ受容体は多機能性アダプター／シャペロンタンパク質であり、組織内で状態に応じて複数の異なるタンパク質シグナル伝達複合体に関与する。シグマ−２受容体は脳および様々な末梢組織に低レベルで発現する（Ｗａｌｋｅｒら，１９９０  Ｓｉｇｍａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．４２：３５５−４０２）。シグマ−２受容体はヒトの海馬および皮質に存在する。シグマ−２受容体はこのほか、腫瘍細胞増殖のバイオマーカーとなることがこれまでに確認されている（Ｍａｃｈら，Ｓｉｇｍａ−２  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｓ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：１５６−１６１，１９９７）。
【０１１６】
シグマ−２受容体は、ヘム結合、シトクロームＰ４５０代謝、コレステロール合成、プロゲステロンシグナル伝達、アポトーシスおよび膜輸送などの多数のシグナル伝達経路に関与する。シグマ受容体の結合部位／シグナル伝達経路の一部のみがＡＤのオリゴマーシグナル伝達に関連する。現時点で、シグマ−２受容体ノックアウトは存在せず、神経変性との関連でヒトのシグマ−２配列変異が研究された例はない。
【０１１７】
最近、ラット肝臓のシグマ−２受容体を非可逆的に標識する光親和性プローブのＷＣ−２１を用いることにより、シグマ−２受容体がラット肝臓のプロゲステロン受容体膜成分１（ＰＧＲＭＣ１）として同定された（Ｘｕら，Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＰＧＲＭＣ１  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ａｓ  ｔｈｅ  ｐｕｔａｔｉｖｅ  シグマ−２  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ２，ａｒｔｉｃｌｅ  ｎｕｍｂｅｒ  ３８０，Ｊｕｌｙ  ５，２０１１）（参照により本明細書に組み込まれる）。ＰＧＲＭＣ１（プロゲステロン受容体膜成分１は、２０１１年８月、Ｘｕらにより、シグマ−２受容体活性の極めて重要な２５ｋＤａ成分として同定された。ＰＧＲＭＣ１はシグマ−１タンパク質と相同性のない単一の膜貫通型タンパク質であり、ファミリーのメンバーにはＰＧＲＭＣ２およびニューデシンが含まれる。ＰＧＲＭＣ１はシトクロームｂ５ヘム結合ドメインを含む。ＰＧＲＭＣ１はＳ１タンパク質と相同性のない単一の膜貫通型タンパク質であり、ファミリーのメンバーにはＰＧＲＭＣ２およびニューデシンが含まれる。ＰＧＲＭＣ１はシトクロームｂ５ヘム結合ドメインを含む。内在性ＰＧＲＭＣ１リガンドには、プロゲステロン／ステロイド、コレステロール代謝産物、グルココルチコイドおよびヘムがある。ＰＧＲＭＣ１は、細胞内の様々な位置で様々なタンパク質複合体と会合し、シャペロン／アダプターとして機能する（Ｃａｈｉｌｌ  ２００７．Ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  １：ａｎ  ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ  ｒｅｖｉｅｗ．Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１０５：１６−３６）。ＰＧＲＭＣ１はヘムと結合して活性を低下させ、ＣＹＰ４５０タンパク質と複合体を形成し（酸化還元反応の制御）、ＰＡＩＲＢＰ１と会合し、プロゲステロンによるアポトーシス阻止を仲介するほか、低コレステロールに応答してＩｎｓｉｇ−１およびＳＣＡＰと会合し、ＳＲＥ関連遺伝子の転写を誘導する。線虫（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）ホモログであるＶＥＭ１は、ＵＮＣ−４０／ＤＣＣと会合して軸索誘導を仲介する。ＰＧＲＭＣ１は、２つのＳＨ２標的配列、１つのＳＨ３標的配列、１つのチロシンキナーゼ部位、２つの好酸性キナーゼ部位（ＣＫ２）およびＥＲＫ１とＰＤＫ１のコンセンサス結合部位を含む。ＰＧＲＭＣ１は、膜輸送（小胞輸送であるカルベオリン（ｃａｌｖｅｏｌｉｎ）含有小窩のクラスリン依存性エンドサイトーシス）に関与する複数のＩＴＡＭ配列を含む。
【０１１８】
シグマ−２受容体治療剤は、ＡＤの治療以外の他のＣＮＳ症状に関してはヒト第ＩＩ相臨床試験に至っている。他の非シグマＣＮＳ受容体に対しては、シグマ−２受容体リガンドの多くがあまり選択性を示さず、親和性が高い。例えば、Ｃｙｒ−１０１／ＭＴ−２１０（Ｃｙｒｅｎａｉｃ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社；Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ社）は、統合失調症に関して第ＩＩａ相臨床試験の段階にあるシグマ−２受容体アンタゴニストであるが、５ＨＴ２ａ、ＡＤＲＡ１およびヒスタミンＨ１を含めた他の多数の受容体との相互作用を示す。シラメシン（Ｌｕｎｄｂｅｃｋ社、Ｆｏｒｅｓｔ  Ｌｕ２８１７９）は、以前、不安に関する臨床試験の段階にあったシグマ−２受容体アゴニストであるが、中止された。シグマ−１受容体リガンドは様々なＣＮＳ症状に関して臨床試験の段階にある。クタメシン二塩酸塩（ＡＧＹ  ＳＡ４５０３、Ｍ’ｓ  Ｓｃｉｅｎｃｅ社）は、脳卒中に関して第ＩＩ相臨床試験、うつ病に関して第ＩＩ相試験の段階にあったシグマ−１受容体アゴニストである。Ａｎａｖｅｘ  ２−７３は、ムスカリン様コリン作動性受容体においてＭ２／３アンタゴニスト、Ｍ１アゴニストとしても作用するシグマ−１受容体アゴニストであり、様々なイオンチャネル（ＮＭＤＡＲ、Ｎａ＋、Ｃａ＋＋）に対するアンタゴニストである。Ａｎａｖｅｘ  ２−７３は、ＡＤおよび軽度認知障害の患者を対象とする第ＩＩａ相臨床試験の段階に至っている。これまでに、ＡＤを対象に高選択的シグマ−２受容体リガンド治療剤を用いた臨床試験は実施されていない。
【０１１９】
シグマ−２アンタゴニスト
理論に束縛されるものではないが、ニューロンではシグマ−２受容体がＡベータオリゴマーの受容体になるとする説を提唱する。文献では、可溶性Ａベータオリゴマーの受容体としてプリオンタンパク質、インスリン受容体、ベータアドレナリン受容体およびＲＡＧＥ（終末糖化産物受容体）を含めた様々な受容体が提唱されている。Ｌａｕｒｅｎ，Ｊ．ら，２００９，Ｎａｔｕｒｅ，４５７（７２３３）：１１２８−１１３２；Ｔｏｗｎｓｅｎｄ，Ｍ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００７，２８２：３３３０５−３３３１２；Ｓｔｕｒｃｈｌｅｒ，Ｅ．ら，２００８，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２８（２０）：５１４９−５１５８。実際、Ａベータオリゴマーが２種類以上の受容体タンパク質と結合し得ると考える研究者は多い。理論に束縛されるものではないが、本明細書に示される証拠に基づき、本発明者らは、ニューロンには（ニューロンだけとは限らないが）別のＡベータオリゴマーの受容体が局在するものと考える。
【０１２０】
理論に束縛されるものではないが、Ａベータオリゴマーは、シグマタンパク質複合体と結合して輸送異常およびシナプス消失を引き起こすシグマ受容体アゴニストである。本明細書では、ニューロンにおいてこの相互作用および／またはシグマ受容体機能に拮抗する高親和性シグマ−２リガンドが、競合または別の形でＡベータオリゴマーに干渉し、ニューロンの応答を正常な状態に戻すことを示す。このようなリガンドは機能的シグマ−２受容体アンタゴニストとみなし、機能的シグマ−２受容体アンタゴニストまたはより簡潔にシグマ−２受容体アンタゴニストもしくはシグマ−２アンタゴニストと呼ぶ。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、式Ｉおよび／または式ＩＩによるシグマ−２受容体アンタゴニストあるいはその薬学的に許容される塩は、可溶性Ａβオリゴマー誘導性シナプス消失を抑制し、膜輸送アッセイにおいて可溶性Ａβオリゴマー誘導性不良を抑制し；シグマ−２受容体において高親和性を示し；ほかにも、１つまたは複数のシグマ受容体に対して他の非シグマ受容体よりも高い選択性を示し；優れた薬物様特性を示すという点で、神経細胞において機能的アンタゴニストとして作用する。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、本明細書で詳述する特定のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイの基準を満たすシグマ−２受容体機能的アンタゴニストは、本明細書に開示される１つまたは複数の関連する動物行動モデルにおいて、行動学的効果を示すか、行動学的効果を有することが予測される。いくつかの実施形態では、１０ｍｇ／ｋｇ以下の経口投与で行動学的効果を判定する。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、本開示は、高親和性シグマ−２受容体リガンドの行動学的効果を予測するｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイプラットフォームを提供する。このｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイプラットフォームでは、リガンドは高い親和性でシグマ−２受容体と結合し；ニューロンのＡベータオリゴマー誘導性作用に対する機能的アンタゴニストとして作用し；中枢ニューロンのＡベータオリゴマー誘導性シナプス消失を抑制するか、Ａベータオリゴマーとニューロンとの結合を減少させてシナプス消失を抑制し；Ａベータオリゴマーの非存在下での輸送にもシナプス数にも影響を及ぼさない。ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにおけるこの活性パターンを「治療表現型」と呼ぶ。シグマ−２受容体アンタゴニストが、Ａベータオリゴマーの非存在下で正常な機能に影響を及ぼさずに成熟ニューロンのＡベータオリゴマー作用を阻止する能力は、治療表現型の基準を満たすものである。これより、治療表現型を有する選択的シグマ−２アンタゴニストがＡベータオリゴマー誘導性シナプス機能不全を阻止し得ることが開示される。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、治療表現型を有する高親和性選択的シグマ−２アンタゴニストが提供され、これらはほかにも、必要とする患者のＡベータオリゴマー誘導性シナプス機能不全を治療する治療剤候補として適した以下のような特徴を有する：シグマ受容体における高親和性を示す；シグマ受容体に対する他の非シグマＣＮＳ受容体より高い選択性；シグマ−２受容体とシグマ−１受容体において、シグマ−２受容体に対するより高いまたは同等の、例えば一桁以内の親和性；中枢神経系において重要な他の受容体ではなくシグマ受容体に対する親和性ならびに優れた薬物様特性。薬物様特性には、許容される脳透過性（血液脳関門を通過する能力）、優れた血漿中安定性および例えば肝ミクロソームへの曝露によって測定される優れた代謝安定性が含まれる。理論に束縛されるものではないが、高親和性シグマ−２受容体アンタゴニストは、Ａベータオリゴマーと競合し、かつ／またはアルツハイマー病を引き起こす病的シグマ受容体シグナル伝達を停止させる。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、本開示のアンタゴニストは、シグマ−２受容体よりも高い親和性でシグマ−１受容体と結合し得るが、それでもなお、Ａベータオリゴマー誘導性作用（Ａベータ作用）を阻止または阻害するという点で、機能的ニューロンアンタゴニストとしての挙動を示すはずである。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、治療表現型を有し、ほかにも以下のような特徴を有するシグマ−２アンタゴニストが、必要とする患者のＡベータオリゴマー誘導性シナプス機能不全を治療する治療剤候補として適している：シグマ受容体における高親和性；シグマ受容体に対する他の非シグマＣＮＳ受容体よりも高い選択性；シグマ−２受容体とシグマ−１受容体において、シグマ−２受容体に対する高い親和性または同等の親和性；および優れた薬物様特性。薬物様特性としては、高い脳透過性、血漿中安定性および代謝安定性が含まれる。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、結合活性試験において、最大で約６００ｎＭ、５００ｎＭ、４００ｎＭ、３００ｎＭ、２００ｎＭ、１５０ｎＭ、１００ｎＭ、好ましくは最大で約７５ｎＭ、好ましくは最大で約６０ｎＭ、好ましくは最大で約４０ｎＭ、より好ましくは最大で１０ｎＭ、最も好ましくは最大で１ｎＭのＩＣ５０値またはＫｉ値がシグマ受容体結合部位に対する高い結合親和性を示すものとなる。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、シグマ−２受容体において高い親和性を示す（好ましくは、Ｋｉが約６００ｎＭ未満、５００ｎＭ未満、４００ｎＭ未満、３００ｎＭ未満、２００ｎＭ未満、１５０ｎＭ未満、１００ｎＭ未満、７０ｎＭ未満、６０ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、３０ｎＭ未満または１０ｎＭ未満である）シグマ−２受容体アンタゴニストであって、シグマ受容体に対する選択性が他の非シグマＣＮＳ受容体または標的受容体の約２０倍超、３０倍超、５０倍超、７０倍超または好ましくは１００倍超であり、脳透過性ならびに優れた代謝安定性および／または血漿中安定性を含めた優れた薬物様特性を有し、治療表現型を有するシグマ−２受容体アンタゴニストが行動学的効果を有すると予測され、治療を必要とする患者のＡベータオリゴマー誘導性シナプス機能不全の治療に用いることができる。
【０１２９】
本明細書で使用される「脳透過性」という用語は、薬物、抗体またはフラグメントが血液脳関門を通過する能力を指す。いくつかの実施形態では、動物を用いた薬物動態（ｐＫ）試験、例えばマウスを用いた薬物動態／血液脳関門試験を用いて脳透過性を判定または予測することができる。いくつかの実施形態では、例えば動物モデルを対象に、様々な濃度、例えば３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇの薬物を、例えば５日間経口投与することができ、様々なｐＫ特性が測定される。いくつかの実施形態では、用量相関性の血漿中レベルおよび脳中レベルを測定する。いくつかの実施形態では、脳のＣｍａｘは１００ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬ、６００ｎｇ／ｍＬ、１０００ｎｇ／ｍＬ、１３００ｎｇ／ｍＬ、１６００ｎｇ／ｍＬまたは１９００ｎｇ／ｍＬを上回る。いくつかの実施形態では、優れた脳透過性は、脳／血漿比が０．１、０．３、０．５、０．７、０．８、０．９を上回る、好ましくは１を上回る、より好ましくは２、５または１０を上回るものと定義される。他の実施形態では、優れた脳透過性は、所定の時間が経過した後に投与量の約０．１％超、１％超、５％超、約１０％超、好ましくは約１５％超がＢＢＢを通過しているものと定義される。ある特定の実施形態では、投薬を経口投与（ｐ．ｏ．）で実施する。他の実施形態では、ｐＫ特性を測定する前に投薬を静脈内投与（ｉ．ｖ．）で実施する。薬物動態アッセイおよび脳透過性については実施例７に記載する。
【０１３０】
本明細書で使用される「血漿中安定性」という用語は、血漿中での、例えば加水分解酵素およびエステラーゼなどの酵素による、化合物の分解を指す。様々なｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイのいずれを用いてもよい。薬物を様々な時間にわたって血漿中でインキュベートする。各時点で残っている親化合物（分析物）のパーセントが血漿中安定性を表す。安定性に乏しいと、生物学的利用能が低くなる傾向がみられる。優れた血漿中安定性は、３０分後に分析物の５０％超が残っている、４５分後に分析物の５０％超が残っている、好ましくは、６０分後に分析物の５０％超が残っているものと定義することができる。
【０１３１】
本明細書で使用される「代謝安定性」という用語は、化合物が初回通過代謝（経口投与した薬物が腸内および肝内で分解または包接されること）を免れる能力を指す。これは、例えば、化合物をマウスまたはヒト肝ミクロソームに曝露することによりｉｎ  ｖｉｔｒｏで評価することができる。いくつかの実施形態では、優れた代謝安定性は、化合物をマウスまたはヒト肝ミクロソームに曝露したときのｔ１／２が、５分、１０分、１５分、２０分、好ましくは３０分を上回ることを指す。いくつかの実施形態では、優れた代謝安定性は、固有クリアランス速度（Ｃｌｉｎｔ）が３００μＬ／（分・ｍｇ）未満、好ましくは２００μＬ／（分・ｍｇ）以下、より好ましくは１００μＬ／（分・ｍｇ）以下であることを指す。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、先行技術の特定の化合物が除外される。いくつかの実施形態では、表１に記載する化合物が国際公開第２０１３／０２９０５７号および／または同第２０１３／０２９０６０号（それぞれ参照により本明細書に組み込まれる）に開示されており、本明細書に提供される組成物または方法に関する権利が放棄される。
【０１３３】
【表１】
0006517827.tif 000038
0006517827.tif 000039
【０１３４】
本明細書に提供されるイソインドリン化合物は、治療表現型および優れた薬物様特性を有する高親和性選択的シグマ−２機能的アンタゴニストとして作用し、したがって、Ａベータオリゴマー誘導性シナプス機能不全の治療に使用することができる。
【０１３５】
ある特定の実施形態では、シグマ受容体に対して高い結合親和性を有する選択的シグマ−２機能的アンタゴニストとして式Ｉのイソインドリン化合物を含む組成物が提供される。いくつかの実施形態では、シグマ受容体には、シグマ−１サブタイプおよびシグマ−２サブタイプの両方が含まれる。Ｈｅｌｌｅｗｅｌｌ，Ｓ．Ｂ．およびＢｏｗｅｎ，Ｗ．Ｄ．，Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．５２７：２２４−２５３（１９９０）；ならびにＷｕ，Ｘ．−Ｚ．ら，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２５７：３５１−３５９（１９９１）を参照されたい。両シグマ部位の推定リガンドの結合親和性（両部位をほぼ等しい親和性で標識する３Ｈ−ＤＴＧに対するもの）を定量化するシグマ受容体結合アッセイがＷｅｂｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ（ＵＳＡ）８３：８７８４−８７８８（１９８６）により開示されている。あるいは、結合アッセイに［３Ｈ］ペントゾシン（ｐｅｎｔｏｚｏｃｉｎｅ）を用いてシグマ−１結合部位を選択的に標識してもよい。結合アッセイに［３Ｈ］ＤＴＧと未標識（＋）ペンタゾシンの混合物を用いてシグマ−２部位を選択的に標識する。本開示はこのほか、シグマ−１受容体およびシグマ−２受容体に対して選択性を示しシグマ−２機能的アンタゴニストとして作用する特定のリガンドを含む組成物ならびにＡベータオリゴマー誘導性シナプス機能不全の治療へのこれらの組成物の使用に関する。２つのシグマ受容体サブタイプのうちの一方に対して選択性を示すこのようなリガンドの発見は、最小限の副作用で中枢神経系障害を治療するのに有効な化合物を同定するうえで重要な因子となり得る。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のイソインドリン化合物は、シグマ−２アンタゴニスト活性、シグマ−２受容体に対する高い親和性および可溶性Ａベータオリゴマー結合またはＡベータオリゴマー誘導性シナプス機能不全を阻止する能力を示す。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、シグマ−２アンタゴニストは、血液脳関門を通過する能力が増強されるよう設計されている。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、特異的シグマ−２受容体アンタゴニスト化合物は、可溶性Ａベータオリゴマーとシグマ−２受容体との間の結合を阻止する。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、シグマ−２アンタゴニスト化合物は、シグマ−２受容体に対して高い親和性を示す。
【０１４０】
シグマ−２受容体アンタゴニストとして選択するシグマ−２受容体リガンド
いくつかの実施形態では、本開示で使用するシグマ−２受容体アンタゴニストは、追加の選択基準も満たすシグマ−２受容体リガンド化合物の中から選択される。追加の基準を用いて、シグマ−２受容体リガンドの中から本開示に使用するシグマ−２受容体アンタゴニストを選択する。追加の選択基準としては、可溶性Ａβオリゴマー誘導性シナプス消失を抑制し、膜輸送アッセイにおいて可溶性Ａβオリゴマー誘導性不良を抑制するという点で、神経細胞において機能的アンタゴニストとして作用すること；１つまたは複数のシグマ受容体に対して他の非シグマ受容体よりも高い選択性を示すこと；シグマ−２受容体において高い親和性を示すこと；ならびに優れた脳透過性、優れた代謝安定性および優れた血漿中安定性を含めた薬物様特性を示すことが挙げられる。いくつかの実施形態では、シグマ−２受容体アンタゴニストは、以下の追加の特性を１つまたは複数示すことに基づいてさらに選択される：Ａベータオリゴマーの非存在下で輸送にもシナプス数にも影響を及ぼさないこと；神経細胞にカスパーゼ−３活性を誘導しない；シグマ−２受容体アゴニストによるカスパーゼ−３活性の誘導を阻害すること；および／またはシグマ−２受容体アゴニストによって引き起こされる神経細胞の神経毒性を軽減するか、そのような神経毒性から保護すること。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、さらなる選択基準に従う特定のシグマ−２受容体リガンド化合物は、本明細書に記載に記載される化合物から選択され、本明細書または国際公開第２０１１／０１４８８０号（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０４４１３６号）、国際公開第２０１０／１１８０５５号（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０３０１３０号）、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０２６５３０号、国際公開第２０１２／１０６４２６号（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０２３４８３号）、国際公開第２０１３／０２９０５７号（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０５２５７２号）および国際公開第２０１３／０２９０６０号（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０５２５７８号）（それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている方法に従って合成され得るものである。上記の化合物を調製するための別の選択肢についてはのちに詳述する。
【０１４２】
いくつかの実施形態では、シグマ−２リガンドは、式Ｉ：
【化２３】
0006517827.tif 000040
またはその薬学的に許容される塩を含み、式中：
Ｒ１およびＲ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはＣＨ２ＯＲ’からそれぞれ独立して選択され；Ｒ’＝ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣ（ＣＨ３）３、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、ＯＣＦ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル）、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、ＣＮ、ＮＯ２、ＮＨ２、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜６アルコキシＣ１〜６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜７シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、ヘテロアリール、ＣＯ２Ｒ’、Ｃ（Ｏ）Ｒ’、ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、ＮＨ（Ｃ３〜７シクロアルキル）、ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１〜４アルキル）、ＣＯＮＲ’２、ＮＣ（Ｏ）Ｒ’、ＮＳ（Ｏ）ｎＲ’、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲ’２、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’、Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜４アルキル）およびＣ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）からそれぞれ独立して選択され；ここでは、ｎ＝０、１または２であり；Ｒ’は、それぞれ独立してＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル；または任意選択で置換されたアリール、アルキルアリール、ピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、モルホリニル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、Ｃ１〜６アルコキシ、ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）もしくはＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）２であり、ここでは、任意選択の置換された基は、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはＣ２〜Ｃ７アシルから選択されるか；あるいは
Ｒ３およびＲ４は、それが結合しているＣ原子とともに、ＯＨ、アミノ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つまたは５つの置換基で任意選択で置換された４員、５員、６員、７員または８員のシクロアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルを形成し、Ｒ３とＲ４またはＲ４とＲ５は、結合、Ｃ、Ｎ、ＳおよびＯからそれぞれ独立して選択されるか；あるいはＲ３とＲ４は、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成するか；あるいは
Ｒ４およびＲ５は、それが結合しているＣ原子とともに、ＯＨ、アミノ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つまたは５つの置換基で任意選択で置換された４員、５員、６員、７員または８員のシクロアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルを形成し、Ｒ３とＲ４またはＲ４とＲ５は、結合、Ｃ、Ｎ、ＳおよびＯからそれぞれ独立して選択されるか；あるいはＲ４とＲ５は、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成し；
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣ（ＣＨ３）３、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、ＯＣＦ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル）、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、ＣＮ、ＮＯ２、ＮＨ２、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜６アルコキシＣ１〜６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜７シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、ヘテロアリール、ＣＯ２Ｒ’、Ｃ（Ｏ）Ｒ’、ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、ＮＨ（Ｃ３〜７シクロアルキル）、ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１〜４アルキル）、ＣＯＮＲ’２、ＮＣ（Ｏ）Ｒ’、ＮＳ（Ｏ）ｎＲ’、Ｓ（Ｏ）ｎＮＲ’２、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’、Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜４アルキル）およびＣ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）からそれぞれ独立して選択され；ここでは、ｎ＝０、１または２であり；Ｒ’は、それぞれ独立してＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、アリール、アルキルアリール、ピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、モルホリニル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、Ｃ１〜６アルコキシ、ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）またはＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）２であるか；あるいは
Ｒ７およびＲ８は、それが結合しているＮ原子またはＣ原子とともに、ＯＨ、アミノ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つまたは５つの置換基で任意選択で置換された４員、５員、６員、７員または８員のシクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリール基を形成し、Ｒ９およびＲ１０は、結合、Ｃ、Ｎ、ＳおよびＯからそれぞれ独立して選択されるか；あるいはＲ７とＲ８は、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成するか；あるいは
Ｒ８およびＲ９は、それが結合しているＮ原子またはＣ原子とともに、ＯＨ、アミノ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つまたは５つの置換基で任意選択で置換された４員、５員、６員、７員または８員のシクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリール基を形成し、Ｒ９およびＲ１０は、結合、Ｃ、Ｎ、ＳおよびＯからそれぞれ独立して選択されるか；あるいはＲ８およびＲ９は、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成し；
Ｏ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、ヘテロアリール、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキルおよびシクロアルキルはそれぞれ独立して、ＯＨ、アミノ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルから独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つまたは５つの置換基で任意選択で置換されており；
ただし、以下の化合物：
【化２４】
0006517827.tif 000041
は除外される。
【０１４３】
いくつかの実施形態ではは、シグマ−２リガンドは、式Ｉの化合物のラセミ混合物または鏡像異性体を含み、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は上記の通りである。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、式Ｉ：
【化２５】
0006517827.tif 000042
による単離化合物またはその薬学的に許容される塩が提供され、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は本明細書に明記される通りであり、ただし、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ１０およびＲ１１がそれぞれＨであり；Ｒ２がＣＨ３であり；Ｒ８がＯＣＨ３またはＣｌであり；Ｒ９がＯＨまたはＣｌある場合、Ｒ４はＣｌでもＣＦ３でもなく、Ｒ５はＣｌでもＣＦ３でもない。
【０１４５】
他の実施形態では、式Ｉ：
【化２６】
0006517827.tif 000043
による単離化合物もしくはその薬学的に許容される塩またはその組成物またはその投与を含む方法が提供され、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は本明細書に明記される通りであり、ただし、式Ｉによる化合物であって、式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ１０およびＲ１１がそれぞれＨであり；Ｒ２がＣＨ３であり；Ｒ８がＯＣＨ３またはＣｌであり；Ｒ９がＯＨまたはＣｌであり；Ｒ４がＣｌまたはＣＦ３であり、Ｒ５がＣｌまたはＣＦ３である化合物は、好ましい化合物ではない。
【０１４６】
別の実施形態では、神経細胞に対するアミロイドベータ作用を阻害するための医薬組成物であって、式Ｉ：
【化２７】
0006517827.tif 000044
による化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含み、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１が本明細書に明記される通りであり、ただし、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ１０およびＲ１１がそれぞれＨであり；Ｒ２がＣＨ３であり；Ｒ８がＯＣＨ３またはＣｌであり；Ｒ９がＯＨまたはＣｌである場合、Ｒ４はＣｌでもＣＦ３でもなく、Ｒ５はＣｌでもＣＦ３でもない、医薬組成物が提供される。
【０１４７】
別の実施形態では、神経細胞に対するアミロイドベータ作用を阻害するための方法／使用であって、式Ｉ：
【化２８】
0006517827.tif 000045
による選択的シグマ−２受容体アンタゴニスト化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む有効量の組成物を投与することを含み、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１が本明細書に明記される通りであり、ただし、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ１０およびＲ１１がそれぞれＨであり；Ｒ２がＣＨ３であり；Ｒ８がＯＣＨ３またはＣｌであり；Ｒ９がＯＨまたはＣｌである場合、Ｒ４はＣｌでもＣＦ３でもなく、Ｒ５はＣｌでもＣＦ３でもなく、化合物またはその塩が、前記細胞のアミロイドベータオリゴマー結合を阻害するのに有効な量で組成物中に存在する、方法／使用が提供される。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、シグマ−２リガンドは、式ＩＩ：
【化２９】
0006517827.tif 000046
の化合物のラセミ混合物または鏡像異性体を含み、式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ８およびＲ９は本明細書に記載される通りである。
【０１４９】
別の実施形態では、式ＩＩＩ：
【化３０】
0006517827.tif 000047
による化合物またはその薬学的に許容される塩が提供され、式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は本明細書に記載される通りであり、−−−−は、単結合、二重結合または三重結合からそれぞれ独立して選択される。
【０１５０】
いくつかの態様では、式ＩＩＩによる化合物は、
【化３１】
0006517827.tif 000048
またはその薬学的に許容される塩から選択される。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、シグマ−２リガンドは、式Ｉの化合物のラセミ混合物または鏡像異性体を含み、式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ８およびＲ９は本明細書に記載される通りである。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、シグマ−２リガンドは、式Ｉの化合物または薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ８およびＲ９は、ＯＨ、Ｃ１〜６アルコキシおよびヒドロキシＣ１〜６アルコキシから独立して選択される。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、シグマ−２リガンドは、式Ｉの化合物または薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ８およびＲ９は、ＯＨおよびＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）から独立して選択される。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、シグマ−２リガンドは、式Ｉの化合物または薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ８およびＲ９は、Ｈ、ハロ、Ｃ１〜６ハロアルキルおよびＣ１〜６ハロアルコキシから独立して選択される。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、シグマ−２リガンドは、式Ｉの化合物または薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ８およびＲ９は、ＯＨ、ハロ、Ｃ１〜６アルコキシおよびＣ１〜６ハロアルコキシからそれぞれ独立して選択され、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立してＣ１〜６アルキルである。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、シグマ−２リガンドは、式Ｉの化合物または薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれメチルである。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、シグマ−２リガンドは、式Ｉの化合物または薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ１およびＲ２のうち、一方がメチルであり、他方がＨである。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、シグマ−２リガンドは、式Ｉの化合物または薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ８およびＲ９は、ＯＨおよびＣ１〜６アルコキシからそれぞれ独立して選択され、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立してメチルである。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、シグマ−２リガンドは、式Ｉの化合物または薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ８およびＲ９は、Ｈ、ハロおよびＣ１〜６ハロアルキルから独立して選択され、Ｒ１およびＲ２はそれぞれメチルである。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、シグマ−２リガンドは、式Ｉの化合物または薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ８およびＲ９は、Ｈ、ハロおよびＣ１〜６ハロアルキルからそれぞれ独立して選択される。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、シグマ−２リガンドは、式Ｉの化合物または薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ７およびＲ１１はそれぞれＨである。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、シグマ−２リガンドは、式Ｉの化合物または薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、Ｈ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキルおよびＣ１〜６アルコキシからそれぞれ独立して選択される。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、シグマ−２リガンドは、式Ｉの化合物または薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、Ｈ、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキルおよびＣ１〜６アルコキシからそれぞれ独立して選択される。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、シグマ−２リガンドは、式Ｉの化合物または薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、Ｈ、ハロ、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’、Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２およびＣ（Ｏ）Ｒ’からそれぞれ独立して選択され；ｎ＝２であり；Ｒ’は、それぞれ独立してＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキルまたは任意選択でＣ１〜Ｃ６アルキルもしくはＣ２〜Ｃ７アシルで置換されたアリール、アルキルアリール、ピペラジニル、ピペリジニル、モルホリニル、ヘテロシクロアルキルおよびヘテロアリールである。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、シグマ−２リガンドは、式Ｉの化合物または薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、Ｈ、ハロ、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’およびＣ（Ｏ）Ｒ’からそれぞれ独立して選択され；ｎ＝２であり；Ｒ’は、それぞれ独立してＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、アリール、ピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イルおよびモルホリニル−４−イルである。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、シグマ−２リガンドは、式Ｉの化合物または薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、Ｈ、ハロ、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’およびＣ（Ｏ）Ｒ’からそれぞれ独立して選択され；ｎ＝２であり；Ｒ’は、それぞれ独立してＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、アリール、ピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イルおよびモルホリニル−４−イルであり；Ｒ８およびＲ９は、ＯＨ、ハロ、Ｃ１〜６アルコキシおよびＣ１〜６ハロアルコキシからそれぞれ独立して選択され；Ｒ１およびＲ２はそれぞれメチルである。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、シグマ−２リガンドは、式Ｉの化合物または薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ３とＲ４またはＲ４とＲ５は、それが結合しているＣ原子とともに、６員シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル、アリールもしくはヘテロアリール環を形成する。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、シグマ−２リガンドは、式Ｉの化合物または薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ３とＲ４またはＲ４とＲ５はＯであり、互いに結合して−Ｏ−Ｃ１〜２メチレン−Ｏ−基を形成する。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、シグマ−２リガンドは、式Ｉの化合物または薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ２およびＲ３は、Ｈ、ＯＨ、ハロ、Ｃ１〜６アルコキシおよびＣ１〜６ハロアルキルから独立して選択される。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、シグマ−２リガンドは、式ＩＩの化合物または薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ３およびＲ４は、Ｈ、Ｃｌ、Ｆ、−ＯＭｅ、−ＣＦ３、Ｓ（Ｏ）ｎＲ’およびＣ（Ｏ）Ｒ’から独立して選択され；ｎ＝２であり；Ｒ’は、それぞれ独立してＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、アリール、ピペラジン−１−イル、ピペリジン−１−イルおよびモルホリニル−４−イルであり；Ｒ８およびＲ９は、ＯＨおよびＣ１〜６アルコキシからそれぞれ独立して選択される。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、シグマ−２リガンドは、式Ｉの化合物または薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ２およびＲ３は、Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、Ｆ、−ＯＭｅおよび−ＣＦ３から独立して選択され、Ｒ７およびＲ８は、ＨおよびＣ１〜６アルキルからそれぞれ独立して選択され、Ｒ９はＨであり、Ｒ５およびＲ６は、ＨおよびＣ１〜６ハロアルキルからそれぞれ独立して選択される。
【０１７２】
本開示に使用するのに好ましい塩としては、上記化合物の塩酸塩が挙げられる。
【０１７３】
上記のものは、本明細書に記載される一般的な方法および具体的な合成例に従って合成されたものであり、追加の段階はいずれも当該技術分野の技術の範囲内に十分に収まるものである。上記の化合物のいくつかは、本明細書に詳述される様々なアッセイで試験し、活性があることが明らかにされているものである。被験化合物はほかにも、国際公開第２０１０／１１０８５５号に開示されている化合物を参照することにより、生物学的利用能の増大を示す。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、上記の一般式それぞれに、以下の化合物：
【化３２】
0006517827.tif 000049
のうちの１つまたは複数が除外されるという但し書きが含まれ得る。
【０１７５】
式Ｉおよび／または式ＩＩによる化合物は、本明細書に記載される一般的な方法および具体的な合成例に従って合成されたものであり、追加の段階はいずれも当該技術分野の技術の範囲内に十分に収まるものである。上記の化合物のいくつかは、本明細書に詳述される様々なアッセイで試験し、活性があることが明らかにされているものである。被験化合物はほかにも、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１０／１１０８５５号に開示されている化合物を参照することにより、生物学的利用能の増大を示す。
【０１７６】
本明細書で使用される「水素結合アクセプター基」という用語は、水素結合を受容することが可能な基を指す。水素結合アクセプター基の例は既知のものであり、特に限定されないが、アルコキシ基、オキサゾリジン−２−オン基、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ−；−Ｃ（Ｏ）−Ｎ−；−Ｏ−；シクロへテロアルキルのヘテロ原子（例えば、酸素）；−Ｎ−ＳＯ２−などが挙げられる。これらの基は、いずれの方向でも結合することができ、別の炭素原子またはヘテロ原子と結合することができる。水素結合アクセプター基はこのほか、疎水性脂肪族基の中または付近に存在し得る。例えば、テトラヒドロフラン基は、水素結合アクセプター基および疎水性脂肪族基の両方を含む。テトラヒドロフラン環内に存在する酸素は水素結合アクセプターとして作用し、テトラヒドロフラン環内の炭素は疎水性脂肪族基として作用する。
【０１７７】
本明細書で使用される「疎水性脂肪族基」という用語は、炭素鎖または炭素環を指す。炭素鎖はシクロへテロアルキル内に存在し得るが、疎水性脂肪族基はヘテロ原子を含まない。上記のテトラヒドロフランの例はそのような例の１つであるが、ほかにも多数存在する。いくつかの実施形態では、疎水性脂肪族基は、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルのＣ１〜Ｃ６炭素である。「疎水性脂肪族基」は疎水性芳香族基ではない。
【０１７８】
本明細書で使用される「陽イオン化可能な基」という用語は、構造内に存在し、溶液中または細胞内でみられる生物学的条件などの特定の条件下で正荷電になり得る原子または原子群を指す。いくつかの実施形態では、陽イオン化可能な基は窒素である。いくつかの実施形態では、陽イオン化可能な基は、シクロへテロアルキル環内に存在する窒素である。例えば、ピペラジン基では、２個の窒素が２個の陽イオン化可能な基であるとみなされる。しかし、いくつかの実施形態では、陽イオン化可能な基と結合している炭素は疎水性脂肪族基であるとみなされない。いくつかの実施形態では、陽イオン化可能な基は、窒素含有環である。窒素含有環の例としては、特に限定されないが、ピペラジン、ピペラジン、トリアジナン、テトラジナンなどが挙げられる。陽イオン化可能な基に関するいくつかの実施形態では、窒素含有環は、１個、２個、３個または４個の窒素を含む。いくつかの実施形態では、陽イオン化可能な基は、−Ｎ−ＳＯ２−基内に存在する窒素ではない。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、基は、水素結合アクセプターおよび陽イオン化可能な基の両方を含む。例えば、モルホリン基は、酸素基内の水素結合アクセプターおよび窒素内の陽イオン化可能な基の両方を含む。
【０１８０】
本明細書で使用される「水素結合ドナー」という用語は、水素結合を供与することが可能な基を指す。水素結合ドナー基の例としては、特に限定されないが、−ＯＨなどが挙げられる。
【０１８１】
新規化合物の塩、溶媒和物、立体異性体、誘導体、プロドラッグおよび活性代謝物。
本開示は、上記のいずれかの式の化合物の塩、溶媒和物、立体異性体、プロドラッグおよび活性代謝物をさらに包含する。
【０１８２】
「塩」という用語は、酸付加塩または遊離塩基の付加塩を包含し得る。好ましくは、塩は薬学的に許容されるものである。薬学的に許容される酸付加塩の形成に使用し得る酸の例としては、特に限定されないが、無毒性無機酸、例えば硝酸、リン酸、硫酸または臭化水素酸、ヨウ化水素酸、フッ化水素酸、亜リン酸などに由来する塩のほか、無毒性有機酸、例えば脂肪族モノカルボン酸およびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシルアルカン酸、アルカンジオン酸、芳香族酸、脂肪族スルホン酸および芳香族スルホン酸ならびに酢酸、マレイン酸、コハク酸またはクエン酸に由来する塩が挙げられる。このような塩の非限定的な例としては、ナパジシル酸塩、ベシル酸塩、硫酸塩、ピロ硫酸塩、硫酸水素塩、亜硫酸塩、亜硫酸水素塩、硝酸塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、プロピオン酸塩、カプリル酸塩、イソブチラート、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、フタル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩などが挙げられる。このほか、アルギン酸塩などアミノ酸の塩およびグルコン酸塩、ガラクツロン酸が企図される（例えば、Ｂｅｒｇｅら，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ，”  Ｊ．Ｐｈａｒｍａ．Ｓｃｉ．１９７７；６６：１を参照されたい）。
【０１８３】
上記のいずれかの式の化合物の酸付加塩は、従来の方法で遊離塩基形態と十分な量の所望の酸とを接触させて塩を生成することによって調製され得る。遊離塩基形態は、従来の方法で塩形態と塩基とを接触させ遊離塩基を単離することによって再生され得る。遊離塩基形態は、それぞれの塩形態とは極性溶媒への溶解度などの特定の物理的特性が若干異なるが、それ以外の点では、本開示の目的に関して塩とそれぞれの遊離塩基とは同等のものである。
【０１８４】
ほかにも、全塩および部分塩の両方、すなわち、例えば式Ｉの化合物または塩の酸１モル当たり１当量、２当量または３当量、好ましくは２当量の塩基、上記のいずれかの式の化合物の塩基１モル当たり１当量、２当量または３当量、好ましくは１当量の酸を有する塩が含まれる。
【０１８５】
単離または精製を目的とする場合、薬学的に許容されない塩を用いることも可能である。しかし、治療用には薬学的に許容される無毒性塩のみを使用するため、そのような塩が好ましい。
【０１８６】
薬学的に許容される塩基付加塩は、金属またはアミン、例えばアルカリ金属およびアルカリ土類金属または有機アミンなどを用いて形成され得る。陽イオンとして使用される金属の例には、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどがある。適切なアミンの例には、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミンおよびプロカインがある。
【０１８７】
前記酸性化合物の塩基付加塩は、従来の方法で遊離酸形態と十分な量の所望の塩基とを接触させて塩を生成することによって調製される。遊離酸形態は、塩形態と酸とを接触させ遊離酸を単離することによって再生され得る。
【０１８８】
本開示の化合物は塩基中心および酸中心の両方を有し得るものであり、したがって、両性イオンまたは分子内塩の形態であり得る。
【０１８９】
通常、上記のいずれかの式の化合物の薬学的に許容される塩は、必要に応じて所望の酸または塩基を用いることによって容易に調製し得る。塩は、溶液から沈殿させ、ろ過により収集してもよく、また溶液を蒸発させることにより回収してもよい。例えば、上記のいずれかの式の化合物の水性懸濁液に塩酸などの酸の水溶液を加え、得られた混合物を蒸発乾固（凍結乾燥）させて、酸付加塩を固体として得てもよい。あるいは、上記のいずれかの式の化合物を適切な溶媒、例えばイソプロパノールなどのアルコールに溶かし、同じ溶媒または別の適切な溶媒に酸を加えてもよい。次いで、得られた酸付加塩は、直接沈殿させるか、ジイソプロピルエーテルまたはヘキサンなどの極性の小さい溶媒の添加により沈殿させ、ろ過により単離してもよい。
【０１９０】
有機化学の当業者であれば、多数の有機化合物が、反応させる溶媒または沈殿もしくは結晶化させる溶媒と複合体を形成し得ることが理解されよう。このような複合体は「溶媒和物」として知られる。例えば、水との複合体は「水和物」として知られる。本開示の化合物の溶媒和物は本開示の範囲内に含まれる。上記のいずれかの式の化合物の塩は溶媒和物（例えば、水和物）を形成し得るものであり、本開示には、このような溶媒和物がすべて包含される。「溶媒和物」という単語の意味は、溶媒と溶質との相互作用（すなわち、溶媒和）によって形成される化合物として周知のものである。溶媒和物の調製技術は当該技術分野で十分に確立されている（例えば、Ｂｒｉｔｔａｉｎ．Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｓｏｌｉｄｓ．Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｃｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９を参照されたい）。
【０１９１】
本開示はほかにも、式Ｉの化合物のＮ−オキシドを包含する。「Ｎ−オキシド」という用語は、別の状態で未置換ｓｐ２Ｎ原子を含む複素環に関して、Ｎ原子が共有結合Ｏ原子、すなわち、−Ｎ→Ｏを有し得ることを意味する。このようなＮ−オキシド置換複素環の例としては、ピリジルＮ−オキシド、ピリミジルＮ−オキシド、ピラジニルＮ−オキシドおよびピラゾリルＮ−オキシドが挙げられる。
【０１９２】
上記のいずれかの式の化合物は、１つまたは複数のキラル中心を有し得るほか、個々の置換基の性質に応じて、幾何異性体も有し得る。空間内の原子の配置が異なる異性体は「立体異性体」と呼ばれる。互いに鏡像でない立体異性体は「ジアステレオマー」と呼ばれ、互いに重ね合わせることができない鏡像である立体異性体は「鏡像異性体」と呼ばれる。化合物がキラル中心を有する場合、１対の鏡像異性体が考えられる。鏡像異性体はその不斉中心の絶対配置によって特徴付けることが可能であり、ＣａｈｎおよびＰｒｅｌｏｇのＲ−／Ｓ−順位側または分子が偏光面を回転させて右旋または左旋（すなわち、それぞれ（＋）異性体または（−）異性体）と命名される方法によって表される。キラル化合物は、個々の鏡像異性体または鏡像異性体の混合物のいずれでも存在し得る。各鏡像異性体を等しい割合で含む混合物は「ラセミ混合物」と呼ばれる。含まれる各鏡像異性体の割当てが等しくない混合物は、Ｒ化合物またはＳ化合物のいずれかの「鏡像体過剰率」（ｅｅ）を有するものとして表される。混合物中のある鏡像異性体の過剰分は多くの場合、％鏡像体過剰率（％ｅｅ）の値で表され、この値は式：
％ｅｅ＝（Ｒ）−（Ｓ）／（Ｒ）＋（Ｓ）
によって求められる。
【０１９３】
このほか、鏡像異性体の比を「光学純度」によって定めることが可能であり、ここでは、鏡像異性体の混合物が平面偏光を回転させる度数を個々の光学的に純粋なＲ化合物およびＳ化合物と比較する。光学純度は以下の式：
光学純度＝鏡像異性体ｍａｊｏｒ／（鏡像異性体ｍａｊｏｒ＋鏡像異性体ｍｉｎｏｒ）
を用いて求めることができる。
【０１９４】
化合物はこのほか、本明細書に記載される化合物の実質的に純粋な（＋）鏡像異性体または（−）鏡像異性体であり得る。いくつかの実施形態では、実質的に純粋な鏡像異性体を含む組成物は、一方の鏡像異性体を少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％含む。いくつかの実施形態では、実質的に純粋な鏡像異性体を含む組成物は、少なくとも９９．５％が一方の鏡像異性体である。いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載される化合物の一方の鏡像異性体のみを含む。
【０１９５】
本開示は、上記のいずれかの式の化合物の個々の異性体をすべて包含する。本明細書および請求項の特定の化合物の説明および名称には、個々の鏡像異性体およびそのラセミ混合物などの混合物がともに包含されるものとする。立体異性体の立体化学の判定および分割または定位合成の方法は当該技術分野で周知である。具体的には、１組の鏡像異性体を生じる上記のいずれかの式の化合物にみられるキラル中心が存在する。置換基に応じて追加のキラル中心が存在し得る。
【０１９６】
適用には多くの場合、立体選択的合成を実施し、かつ／または反応生成物をしかるべき精製段階に供して、実質的に光学的に純粋な物質を得るのが好ましい。光学的に純粋な物質を得るのに適した立体選択的合成の手順は当該技術分野で周知であり、同じく、ラセミ混合物を光学的に純粋な画分に精製する手順も当該技術分野で周知である。当業者であれば、本開示の化合物が様々な形態で結晶化することが可能な多晶形で存在し得ることが認識されよう。結晶多形を同定および分離する方法は当該技術分野で公知である。
【０１９７】
ジアステレオマーでは、物理的特性および化学的反応性がともに異なる。ジアステレオマーの混合物は、溶解度、分別結晶またはクロマトグラフィー特性、例えば、薄層クロマトグラフィー、カラムクロマトグラフィーまたはＨＰＬＣに基づいて鏡像異性体対に分離することができる。
【０１９８】
複雑なジアステレオマーの混合物を鏡像異性体に精製するには通常、２つの段階を必要とする。第一段階では、ジアステレオマーの混合物を上記のように鏡像異性体対に分割する。第二段階では、鏡像異性体対をさらに、一方または他方の鏡像異性体が濃縮された組成物に精製するか、より好ましくは、純粋な鏡像異性体を含む組成物に分割する。鏡像異性体の分割には通常、キラル剤、例えば溶媒またはカラム基質との反応または分子相互作用を必要とする。例えば、第二の薬剤、すなわち分割剤の純粋な鏡像異性体と反応させることにより鏡像異性体の混合物、例えばラセミ混合物をジアステレオマーの混合物に変換することによって、分割を達成し得る。次いで、得られた２つのジアステレオマー生成物を分離することができる。次いで、最初の化学変換を逆方向に進行させることにより、分離したジアステレオマーを純粋な鏡像異性体に再変換する。
【０１９９】
鏡像異性体の分割はほかにも、例えば、ホモキラル吸着剤を用いたクロマトグラフィーにより、キラル物質との非共有結合の差によって実施することができる。鏡像異性体とクロマトグラフィー吸着剤との間の非共有結合により、ジアステレオマー複合体が確立され、クロマトグラフィー系での移動状態と結合状態の分配に差が生じる。このため、２つの鏡像異性体がクロマトグラフィー系、例えばカラムの中を異なる速度で移動し、その分離が可能となる。
【０２００】
キラル分割カラムは当該技術分野で周知であり、市販されている（例えば、カリフォルニア州レイクフォレストのＡＮＳＹＳ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社の一部門、ＭｅｔａＣｈｅｍ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）。例えばＨＰＬＣ用のキラル固定相（ＣＳＰ）を用いて、鏡像異性体を分析し精製することができる。キラルＨＰＬＣカラムには通常、シリカ充填材料の表面に固定化された１つの形態の鏡像異性化合物が含まれている。
【０２０１】
Ｉ型ＣＳＰの例にはＤ−フェニルグリシンおよびＬ−ロイシンがあり、これらは、π−π相互作用、水素結合、双極子相互作用および立体相互作用の組合せを用いてキラル認識を達成するものである。分析物である鏡像異性体がＩ型カラムで分割されるためには、分析物がＣＳＰとの不可欠な相互作用を受けるように、鏡像異性体がＣＳＰの官能基に相補的な官能基を含んでいなければならない。試料は、好ましくは以下の官能基のうちの１つを含んでいるべきである：π−酸またはπ−塩基、水素結合ドナーおよび／またはアクセプターあるいはアミド双極子。これらを含まない化合物には、誘導体化を用いて相互作用部位を付加することもある。最もよく用いられる誘導体は、アミンとカルボン酸からアミドを形成するものである。
【０２０２】
ＩＩ型ＣＳＰの例にはＭｅｔａＣｈｉｒａｌ  ＯＤＭ（商標）がある。溶質−ＣＳＰ複合体を形成する主要な機序は、引力相互作用を介するものであるが、ほかにも包接錯体が重要な役割を果たす。ＭｅｔａＣｈｉｒａｌ（商標）ＯＤＭでのキラル分割には水素結合、π−π相互作用および双極子積層が重要である。溶質分子が溶質−カラム相互作用に必要な基を含まない場合、誘導体化が必要になることがある。アミンおよびカルボン酸のような極性の強い一部の分子は、誘導化しないと非特異的立体相互作用を介して固定相と強く相互作用する可能性があるため、通常はベンジルアミドに誘導体化する必要がある。
【０２０３】
適用可能な場合、上記のいずれかの式の化合物を、例えばシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーまたはＴＬＣにより分離することによって、ジアステレオマー対に分離することができる。このジアステレオマー対を本明細書では、ＴＬＣ  Ｒｆの高いジアステレオマー；およびＴＬＣ  Ｒｆの低いジアステレオマーと呼ぶ。ジアステレオマーをさらに、当該技術分野で周知の方法、例えば本明細書に記載される方法などを用いて、特定の鏡像異性体に関して濃縮するか、単一の鏡像異性体に分割することができる。
【０２０４】
ジアステレオマー対の相対立体配置は、理論的モデルまたは法則（例えば、クラム則、フェルキン−アーンのモデル）を適用することによって、あるいは算出化学プログラムによって得られるさらに信頼度の高い三次元モデルを用いることによって推測することができる。多くの場合、これらの方法により、いずれのジアステレオマーがエネルギー的に好ましい化学変換産物であるかを推測することができる。別の方法として、ジアステレオマー対（１つまたは複数）のうちの一方（または両方）の単一の鏡像異性体の絶対配置を明らかにすることにより、ジアステレオマー対の相対立体配置を間接的に決定することができる。
【０２０５】
立体中心の絶対配置は、当業者に非常によく知られた方法（例えば、Ｘ線回折、円二色法）によって決定することができる。絶対配置の決定はほかにも、理論的モデルの予測精度の確認に有用であり得るほか、このようなモデルの使用を類似した機序による反応（例えば、水素化物によるケトン還元およびケトンの還元的アミノ化）によって調製した同様の分子まで拡張するのに役立ち得る。
【０２０６】
本開示はこのほか、Ｚ−Ｅ型の立体異性体および環と直接結合していない二重結合へのＲ２−Ｒ３置換基によるその混合物を包含し得る。ｍが１ではなく、かつｍとｎが異なる場合、さらなるＺ−Ｅ立体異性体が生じる。二重結合した置換基の二重結合面におけるそれぞれの位置による立体異性体がＺであるかＥであるかを決定するには、カーン・インゴルド・プレローグ順位則を適用する。最も順位の高い２つの基がＣ＝Ｃ結合を通る基準面の同じ側にある場合、その立体異性体はＺ（ｚｕｓａｍｍｅｎ＝一緒）と命名される。もう一方の立体異性体はＥ（ｅｎｔｇｅｇｅｎ＝反対）と命名される。
【０２０７】
Ｅ−Ｚ型立体異性体の混合物は、これらの化合物の物理化学的特性の差に基づく古典的な精製方法を用いて、その成分により分離する（および／または特徴付ける）ことができる。このような方法には、分別結晶、低圧、中圧または高圧技術により実施するクロマトグラフィー、分留をはじめとする当業者に非常によく知られた方法がある。
【０２０８】
本開示はほかにも、上記のいずれかの式の化合物のプロドラッグ、すなわち、哺乳動物対象に投与したときに上記のいずれかの式による活性薬物をｉｎ  ｖｉｖｏで放出する化合物を包含する。プロドラッグとは、代謝的変換によって薬理学的に活性な薬剤に変換される、薬理学的に活性な化合物またはより通常には不活性な化合物のことである。上記のいずれかの式の化合物のプロドラッグは、ｉｎ  ｖｉｖｏで修飾が切断されて親化合物を放出し得るように、上記のいずれかの式の化合物中に存在する官能基を修飾することによって調製される。ｉｎ  ｖｉｖｏでは、プロドラッグが生理的条件下で容易に化学変化を受ける（例えば、天然に存在する酵素（１つまたは複数）による加水分解または作用を受ける）ことにより、薬理学的に活性な薬剤が遊離する。プロドラッグには、ヒドロキシ基、アミノ基またはカルボキシ基を、ｉｎ  ｖｉｖｏで切断されてそれぞれ遊離のヒドロキシル基、アミノ基またはカルボキシ基を再び生じ得る任意の基と結合させた、上記のいずれかの式の化合物が含まれる。プロドラッグの例としては、特に限定されないが、ｐＨが生理的ｐＨになるか酵素の作用を受けたときに活性な親薬物に変換される、上記のいずれかの式の化合物のエステル（例えば、酢酸エステル、ギ酸エステルおよび安息香酸エステル）をはじめとする誘導体が挙げられる。適切なプロドラッグ誘導体を選択および調製する従来の方法については当該技術分野で記載されている（例えば、Ｂｕｎｄｇａａｒｄ．Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ．Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５を参照されたい）。
【０２０９】
プロドラッグは、それが変換される有効成分と同じ方法で投与しても、あるいはリザーバ、例えば、プロドラッグが時間をかけて徐々に有効成分に変換され、有効成分が患者に送達されるよう（酵素をはじめとするしかるべき試薬を加えて）適合させた経皮パッチをはじめとするリザーバの形態で送達してもよい。
【０２１０】
特に明記されない限り、「有効成分」という用語は、本明細書で定義される上記のいずれかの式の化合物を指すものとして理解されるべきである。
【０２１１】
本開示はこのほか、代謝産物を包含する。本明細書に開示される化合物の「代謝産物」とは、化合物が代謝されたときに形成される、化合物の誘導体のことである。「活性代謝物」という用語は、化合物が代謝されたときに形成される、化合物の生物学的に活性な誘導体を指す。「代謝された」という用語は、特定の物質が生体内で変化する過程全体を指す。簡潔に述べれば、体内に存在する化合物はすべて、エネルギーを引き出し、かつ／またはそれを体内から除去するために、酵素によって処理される。特異的酵素が化合物の構造を特異的に変化させる。例えば、シトクロームＰ４５０は様々な酸化および還元反応を触媒し、ウリジン二リン酸グルクロニルトランスフェラーゼは、活性化グルクロン酸分子の芳香族アルコール、脂肪族アルコール、カルボン酸、アミンおよび遊離スルフィドリル基への転移を触媒する。代謝に関するさらなる情報は、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第９版，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ（１９９６），１１〜１７ページから入手され得る。本明細書に開示される化合物の代謝産物は、化合物を宿主に投与し、宿主の組織試料を分析するか、化合物を肝細胞とｉｎ  ｖｉｔｒｏでインキュベートし、生じた化合物を分析することにより同定することができる。いずれの方法も当該技術分野で周知である。
【０２１２】
シグマ−２受容体アンタゴニストの使用
いくつかの実施形態では、本開示は、シグマ−２受容体アンタゴニストの投与によって神経細胞のＡベータ種への曝露によるシナプス数減少または膜輸送異常を抑制する方法を提供する。本開示はこのほか、患者の認知低下および／または神経変性疾患、例えばアルツハイマー病または軽度認知障害（ＭＣＩ）を治療する方法であって、本明細書に記載されるシグマ−２アンタゴニスト、例えば、本明細書に記載されるいずれかの式に包含される化合物またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、認知低下および／または神経変性疾患、例えばアルツハイマー病を抑制または治療する方法は、記憶喪失、錯乱、判断障害、人格変化、見当識障害および言語能力喪失からなる群より選択される１つまたは複数の認知低下の症状を抑制または治療することを含む。いくつかの実施形態では、この方法は、Ａベータオリゴマーによって仲介されるか、Ａベータオリゴマーを原因とする疾患、障害または状態を抑制または治療することを含む（段落００２を参照されたい）。いくつかの実施形態では、認知低下および／または神経変性疾患、例えばアルツハイマー病を抑制または治療する方法は、（ｉ）電気生理学的に測定される長期増強（ＬＴＰ）、長期抑制（ＬＴＤ）もしくはシナプス可塑性または上の用語の定義で言及した他の認知機能の負の変化のいずれかを回復させること；ならびに／あるいは（ｉｉ）神経変性を抑制または治療すること；ならびに／あるいは（ｉｉｉ）一般的なアミロイドーシスを抑制または治療すること；ならびに／あるいは（ｉｖ）アミロイド産生、アミロイド集合、アミロイド凝集、アミロイドオリゴマー結合およびアミロイド沈着のうちの１つまたは複数を抑制または治療すること；ならびに／あるいは（ｖ）１つまたは複数のＡベータオリゴマーのニューロン細胞に対する作用、特に非致死性作用を抑制、治療および／または軽減することのうちの１つまたは複数を含む。いくつかの実施形態では、認知低下および／または神経変性疾患、例えばアルツハイマー病を抑制、治療および／または軽減する方法は、アミロイド産生、アミロイド集合、１つまたは複数のＡベータオリゴマーのニューロン細胞に対する活性／作用、アミロイド凝集、アミロイド結合およびアミロイド沈着のうちの１つまたは複数を抑制、治療および／または軽減することを含む。いくつかの実施形態では、認知低下および／または神経変性疾患、例えばアルツハイマー病を抑制、治療および／または軽減する方法は、１つまたは複数のＡベータオリゴマーのニューロン細胞に対する１つまたは複数の活性／作用を抑制、治療および／または軽減することを含む。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数のＡベータオリゴマーのニューロン細胞に対する活性／作用、アミロイド凝集およびアミロイド結合は、Ａベータオリゴマーの膜輸送またはシナプス数に対する作用である。いくつかの実施形態では、シグマ−２アンタゴニストは、膜輸送もしくはシナプス数に対するＡベータオリゴマー作用またはＡベータオリゴマー結合を阻害する。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、本開示は、Ａベータオリゴマー毒性、特に非致死性Ａベータオリゴマー作用によるタンパク質症を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、この方法は、上記のようなタンパク質異常疾患のある対象と、本開示のシグマ−２アンタゴニストまたはシグマ−２受容体と結合する本開示の化合物を含む組成物とを接触させることを含む。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、タンパク質症疾患は、Ａベータタンパク質の増加を特徴とするＣＮＳタンパク質症、例えばＭＣＩ、ダウン症候群、黄斑変性症またはアルツハイマー病などである。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、本開示は、本開示によるシグマ−２アンタゴニストを投与することによって１つまたは複数の軽度認知障害（ＭＣＩ）または認知症を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＭＣＩおよび認知症を治療する方法を提供する。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡベータオリゴマーなどのＡベータ種による悪影響を受けた機能の点で対象の細胞を部分的または全面的に正常な表現型に回復させるために、本開示によるシグマ−２アンタゴニストで個体を治療する方法を提供する。例には、本明細書に記載されるアッセイを含めた様々な方法によって測定することが可能なシナプス数減少および膜輸送異常がある。正常な表現型は、例えば正常な膜輸送であり得る。いくつかの実施形態では、正常な表現型は、正常な認知能力である。「正常な」表現型は、対象の結果と正常対象の試料とを比較することによって判定することができる。試料は、１例の対象または１例の試料のように少数であっても、１０例を上回る試料または対象であってもよく、標準値は、複数の対象に基づいて算出した平均値である。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、この方法は、認知低下または神経変性疾患の認められる対象に、シグマ−２タンパク質と結合しベータ−アミロイド病態を抑制する化合物または組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、ベータ−アミロイド病態は、動物における膜輸送障害、シナプス数の減少、樹状突起スパイン数の減少、樹状突起スパインの形態の変化、ＬＴＰの変化、ＬＴＤの変化、記憶および学習の測定結果の異常またはその任意の組合せなどである。上記の使用は、本発明者らが以下に提示する証拠から得られたものである：
【０２１９】
行動学的効果の評価：マウス恐怖条件付けにおけるＡベータオリゴマー誘導性記憶欠損はコロンビア大学のＯｔｔａｖｉｏ  Ａｒａｎｃｉｏ博士の研究室で確立されたモデルである（Ｐｕｚｚｏ  ２００８）。数社の製薬会社が発見の試みに同じモデルを用いている。状況的恐怖条件付けは、ヒト認知機能、特に新規記憶の形成と関係のある連合記憶形成のモデルとして認められている（Ｄｅｌｇａｄｏ  ２００６）。条件付け訓練の直前に野生型動物の海馬内にＡベータオリゴマーを注射し、２４時間後、すくみ行動により記憶を評価する。このモデル系を選択したのは、オリゴマーを海馬内に投与することにより化合物の活性およびオフターゲット毒性の比較評価を迅速に実施することが可能になるという理由からである。
【０２２０】
ほかにも、２つのトランスジェニックアルツハイマーモデルを対象に化合物をｉｎ  ｖｉｖｏで試験して、化合物がＡベータオリゴマーによる記憶喪失を正常な状態に戻すことを示すことができる。このような行動研究は全体的に、シグマ−２アンタゴニスト化合物が２つの異なるアルツハイマー病モデルで雌雄とも、短期投与または長期投与後に２つの異なる行動課題における学習および記憶を改善することを示しており、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイとｉｎ  ｖｉｖｏ活性が相関することがわかる。
【０２２１】
本明細書で考察するように、証拠は、膜輸送が仲介するニューロン表面受容体発現がＡベータオリゴマーの仲介により減少することが、シナプス可塑性（ＬＴＰ）、ひいては学習および記憶の電気生理学的手段のオリゴマー阻害の根底にあることを示唆している（Ｋａｍｅｎｅｔｚ  Ｆ，Ｔｏｍｉｔａ  Ｔ，Ｈｓｉｅｈ  Ｈ，Ｓｅａｂｒｏｏｋ  Ｇ，Ｂｏｒｃｈｅｌｔ  Ｄ，Ｉｗａｔｓｕｂｏ  Ｔ，Ｓｉｓｏｄｉａ  Ｓ，Ｍａｌｉｎｏｗ  Ｒ．ＡＰＰ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ａｎｄ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｎｅｕｒｏｎ．２００３  Ｍａｒ  ２７；３７（６）：９２５−３７；およびＨｓｉｅｈ  Ｈ，Ｂｏｅｈｍ  Ｊ，Ｓａｔｏ  Ｃ，Ｉｗａｔｓｕｂｏ  Ｔ，Ｔｏｍｉｔａ  Ｔ，Ｓｉｓｏｄｉａ  Ｓ，Ｍａｌｉｎｏｗ  Ｒ．ＡＭＰＡＲ  ｒｅｍｏｖａｌ  ｕｎｄｅｒｌｉｅｓ  Ａｂｅｔａ  ｏｌｉｇｏｍｅｒ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｓｐｉｎｅ  ｌｏｓｓ．Ｎｅｕｒｏｎ．２００６  Ｄｅｃ  ７；５２（５）：８３１−４３を参照されたい）。げっ歯類のＡベータの脳中レベルをｉｎ  ｖｉｖｏで低下させる［Ｈｏｎｇ  ＨＳ，Ｒａｎａ  Ｓ，Ｂａｒｒｉｇａｎ  Ｌ，Ｓｈｉ  Ａ，Ｚｈａｎｇ  Ｙ，Ｚｈｏｕ  Ｆ，Ｊｉｎ  ＬＷ，Ｈｕａ  ＤＨ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｗｉｔｈ  ａ  ｔｒｉｃｙｃｌｉｃ  ｐｙｒｏｎｅ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２００９  Ｆｅｂ；１０８（４）：１０９７−１１０８］Ａベータオリゴマー遮断薬を発見するべく、オリゴマーが引き起こす膜輸送速度の変化をホルマザンの形態学的変化により測定することが細胞系に用いられている［Ｍａｅｚａｗａ  Ｉ，Ｈｏｎｇ  ＨＳ，Ｗｕ  ＨＣ，Ｂａｔｔｉｎａ  ＳＫ，Ｒａｎａ  Ｓ，Ｉｗａｍｏｔｏ  Ｔ，Ｒａｄｋｅ  ＧＡ，Ｐｅｔｔｅｒｓｓｏｎ  Ｅ，Ｍａｒｔｉｎ  ＧＭ，Ｈｕａ  ＤＨ，Ｊｉｎ  ＬＷ．Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｔｒｉｃｙｃｌｉｃ  ｐｙｒｏｎｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２００６  Ｊｕｌ；９８（１）：５７−６７；Ｌｉｕ  Ｙ，Ｓｃｈｕｂｅｒｔ  Ｄ．Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ３−（４，５−ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ−２−ｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ  ｂｒｏｍｉｄｅ（ＭＴＴ）ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｅｎｈａｎｃｉｎｇ  ＭＴＴ  ｆｏｒｍａｚａｎ  ｅｘｏｃｙｔｏｓｉｓ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．１９９７  Ｄｅｃ；６９（６）：２２８５−９３；Ｌｉｕ  Ｙ，Ｄａｒｇｕｓｃｈ  Ｒ，Ｂａｎｈ  Ｃ，Ｍｉｌｌｅｒ  ＣＡ，Ｓｃｈｕｂｅｒｔ  Ｄ．Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２００４  Ｎｏｖ；９１（３）：６４８−５６；Ｌｉｕ  Ｙ，Ｓｃｈｕｂｅｒｔ  Ｄ．Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｂｙ  ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅ．Ｃｕｒｒ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｒｅｓ．２００６  Ａｐｒ；３（２）：１２９−３５；Ｒａｎａ  Ｓ，Ｈｏｎｇ  ＨＳ，Ｂａｒｒｉｇａｎ  Ｌ，Ｊｉｎ  ＬＷ，Ｈｕａ  ＤＨ．Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ  ｏｆ  ｔｒｉｃｙｃｌｉｃ  ｐｙｒｏｎｅｓ  ａｎｄ  ｐｙｒｉｄｉｎｏｎｅｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｂｅｔａ−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ＭＣ６５  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ．Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ．２００９  Ｆｅｂ  １；１９（３）：６７０−４．Ｅｐｕｂ  ２００８  Ｄｅｃ  ２４；およびＨｏｎｇ  ＨＳ，Ｍａｅｚａｗａ  Ｉ，Ｂｕｄａｍａｇｕｎｔａ  Ｍ，Ｒａｎａ  Ｓ，Ｓｈｉ  Ａ，Ｖａｓｓａｒ  Ｒ，Ｌｉｕ  Ｒ，Ｌａｍ  ＫＳ，Ｃｈｅｎｇ  ＲＨ，Ｈｕａ  ＤＨ，Ｖｏｓｓ  ＪＣ，Ｊｉｎ  ＬＷ．Ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ａｎｔｉ−Ａｂｅｔａ  ｆｌｕｏｒｅｎｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ａｎａｌｏｇｓ  ｏｆ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｉｍａｇｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ａｇｉｎｇ．２００８  Ｎｏｖ  １８．（印刷前電子出版）］。したがって、上記の試験は、初期アルツハイマー病および軽度認知障害を治療する化合物を同定するうえで妥当なものであることが確認されている。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、上記のいずれかの式の化合物は、Ａベータオリゴマーのニューロン（脳内のニューロンなど）、アミロイド集合体またはその崩壊およびアミロイド（アミロイドオリゴマーを含む）結合に対する作用ならびにアミロイド沈着のうちの１つまたは複数を阻害することに関して、ＩＣ５０値が１００μＭ未満、５０μＭ未満、２０μＭ未満、１５μＭ未満、１０μＭ未満、５μＭ未満、１μＭ未満、５００ｎＭ未満、１００ｎＭ未満、５０ｎＭ未満または１０ｎＭ未満である。いくつかの実施形態では、化合物は、オリゴマーなどのＡベータ種のニューロン（中枢神経系ニューロンなど）に対する活性／作用の阻害に関して、ＩＣ５０値が１００μＭ未満、５０μＭ未満、２０μＭ未満、１５μＭ未満、１０μＭ未満、５μＭ未満、１μＭ未満、５００ｎＭ未満、１００ｎＭ未満、５０ｎＭ未満または１０ｎＭ未満である。
【０２２３】
いくつかの実施形態では、オリゴマーなどのＡベータ種のニューロン（脳内のニューロンなど）に対する作用、例えばアミロイド（アミロイドオリゴマーを含む）のシナプスとの結合などおよびＡベータオリゴマーが仲介する膜輸送の異常のうちの１つまたは複数の本開示の化合物によるパーセント阻害を１０ｎＭ〜１０μＭの濃度で測定した。いくつかの実施形態では、測定されたパーセント阻害は、約１％〜約２０％、約２０％〜約５０％、約１％〜約５０％または約１％〜約８０％である。阻害は、例えば、アミロイドベータ種の曝露する前および後にニューロンのシナプス数を定量化することまたはシグマ−２アンタゴニストとＡベータ種の両方の存在下でシナプス数を定量化すること（シグマ−２アンタゴニストはＡベータ種への曝露と同時またはその前もしくは後である）によって評価することができる。また別の例として、膜輸送を測定し、エキソサイトーシスの速度と程度、エンドサイトーシスの速度と程度またはその他の細胞代謝の指標の尺度となる１つまたは複数のパラメータを、Ａベータ種の存在下と非存在下および本開示によるシグマ−２アンタゴニストの存在下と非存在下で比較することにより、阻害を評価することができる。本発明者らは、本開示の化合物がほかにもアミロイド凝集を阻害することを示す生化学アッセイの証拠を提出している（データ不掲載）。
【０２２４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される化合物は、シグマ−２受容体と特異的に結合する。特定の受容体と特異的に結合する化合物は、ある受容体に対して別の受容体を上回る選択性を有する化合物を指す。例えば、化合物はシグマ−１受容体およびシグマ−２受容体の両方と結合することが可能であり得るが、化合物がシグマ−１受容体よりも少なくとも１０％高い結合親和性でシグマ−２受容体と結合する場合、その化合物はシグマ−２受容体に特異的であるとすることができる。いくつかの実施形態では、ある結合パートナー（例えば、受容体）に対する特異性は、第二の結合パートナーよりも少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００％、４００％、５００％または１０００％大きい。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、本開示は、標識シグマ−２リガンドを用いて動物のベータ−アミロイドによる認知低下を測定する方法を提供する。いくつかの実施形態では、この方法は、動物と、本開示による標識シグマ−２リガンドとを接触させることと、シグマ−２の活性または発現を測定することとを含む。いくつかの実施形態では、この方法は、動物のシグマ−２の活性または発現を、ベータ−アミロイド誘導性認知低下を有することがわかっている動物のものと比較することを含む。活性または発現が、ベータ−アミロイド誘導性認知低下を有することがわかっている動物と同程度である場合、その動物は同じレベルの認知低下を有するものとする。様々な段階のベータアミロイド誘導性認知低下で明らかにされている活性または発現との類似度に応じて、その動物に順位を付けることができる。本明細書に記載されるシグマ−２リガンドはいずれも、標識されたシグマ−２リガンドをｉｎ  ｖｉｖｏで使用できるように標識することができる。
【０２２６】
上記のいずれかの式の化合物および上でシグマ−２アンタゴニストとして記載されているその他の化合物が、本明細書に記載される様々な状態を治療するのに有効であるかどうかを判定するのに、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを用いることができる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイは、化合物ＩＩを用いたｉｎ  ｖｉｖｏの作用と相関することがわかっており、例えば、化合物ＩＩと類似した構造を有する式ＩＩＩ〜ＩＶの化合物が、例えば本明細書に記載されるｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイで活性を示す場合、それをさらにシナプス消失の抑制または回復、神経細胞の膜輸送の変化の調節、記憶喪失からの保護または回復ならびにＭＣＩおよびアルツハイマー病などの認知低下の状態、疾患および障害の治療を含めた本明細書に記載される状態の治療または緩和にｉｎ  ｖｉｖｏで使用することができる。アッセイは部分的には、アミロイドベータオリゴマーおよびそれがニューロンのシナプスと結合する機能のほか、アミロイドベータオリゴマーがｉｎ  ｖｉｔｒｏでニューロンに及ぼす作用に基づくものである。いくつかの実施形態では、本発明者らがシグマ−２タンパク質を含むと考えるニューロンのＡベータオリゴマー受容体と、本明細書に記載されるアミロイドベータ集合体とを接触させ、シグマ−２タンパク質と結合する式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩによる化合物が、アミロイドベータ集合体と受容体との結合を阻害する。本発明者らは、競合的放射性リガンド結合アッセイで、本発明の化合物がシグマ−２受容体に特異的であることを明らかにした。本発明者らはほかにも、本開示の化合物が、Ａベータオリゴマーと、ニューロン表面にあってそれまで同定されていないその受容体との結合を阻害することを明らかにした。いくつかの実施形態では、上記の任意の式の化合物がニューロンのシグナル伝達においてシグマ−２リガンドとして有効であるかどうかを判定する方法を提供する。いくつかの実施形態では、この方法は、特に限定されないが初代ニューロンなどの細胞と、シグマ−２リガンドとを接触させることと、ニューロンの機能を測定することとを含む。いくつかの実施形態では、細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏで接触させる。いくつかの実施形態では、細胞をｉｎ  ｖｉｖｏで接触させる。ニューロンの活性は、シグナル伝達活性、電気的活性、シナプスタンパク質の産生または放出などであり得る。シグナル伝達を増強または回復させるシグマ−２アンタゴニストは、ニューロンの活性の調節に有効であるものとする。いくつかの実施形態では、細胞は病理学的試料に由来するものである。いくつかの実施形態では、細胞は神経変性疾患の対象に由来するものである。いくつかの実施形態では、神経変性疾患は、ＭＣＩまたはアルツハイマー病、特に軽度アルツハイマー病である。
【０２２７】
受容体結合アッセイおよび化合物スクリーニング
いくつかの実施形態では、被験化合物を細胞または細胞膜と接触させて、被験化合物がシグマ−２受容体と結合するかどうかを判定する。いくつかの実施形態では、被験化合物を担体または溶媒、例えば、特に限定されないがジメチルスルホキシドなどに溶かす。いくつかの実施形態では、細胞をコンフルエントになるまで培養する。いくつかの実施形態では、コンフルエントになったとき、細胞を穏やかに擦り取って剥離することができる。いくつかの実施形態では、トリプシン処理をはじめとする適切な剥離手段によって細胞を剥離する。
【０２２８】
いくつかの実施形態では、例えば競合的放射性リガンド結合アッセイによって、被験化合物とシグマ−２受容体との結合を判定することができる。放射性リガンド結合アッセイは、ヒト受容体を安定に発現するインタクト細胞または組織供給源で実施することができる。剥離した細胞または組織を例えば、洗浄し、遠心分離し、かつ／または緩衝液に再懸濁させることができる。本明細書に記載される方法を含めた任意の方法に従って被験化合物を放射標識することができる。様々な濃度（その範囲は例えば、１０１０〜１０３Ｍまたは１０１１〜１０４Ｍであり得る）の競合薬物の非存在下または存在下で、放射性リガンドを０．１μＣｉの一定濃度で用いることができる。緩衝液中の組織または細胞（例えば、約５０，０００個の細胞）に薬物を加え、インキュベートすることができる。各受容体サブタイプに対する広範囲の活性化因子もしくは阻害剤または機能的アゴニストもしくはアンタゴニストの存在下で（例えばシグマ受容体では、例えば、１０μＭの各受容体に対するしかるべきリガンドの存在下で）非特異的結合を判定することができる。急速ろ過によって反応を終了させることができ、次いで、氷冷緩衝液で２回洗浄することができる。特に限定されないが液体シンチレーション分析器を含めた任意の方法を用いて、乾燥させたフィルターディスクの放射活性を測定することができる。置換曲線をプロットし、例えばＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ社、サンディエゴ、カリフォルニア州）を用いて、受容体サブタイプに対する被験リガンドのＫｉ値を求めることができる。全結合（壊変毎分）と非特異的結合（壊変毎分）の間の差を全結合（壊変毎分）で除することにより、パーセント特異的結合を求めることができる。
【０２２９】
いくつかの実施形態では、細胞系または組織供給源での結合試験では、各実験内で異なる濃度の各薬物を二重反復で加え、例えばＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて、個々のＩＣ５０値を求めた。各リガンドのＫｉ値は、ＣｈｅｎｇおよびＰｒｕｓｏｆｆ（１９７３）により記載されている方程式に従って求めることができ、最終データはｐＫｉ±Ｓ．Ｅ．Ｍ．で表すことができ、この場合、いくつかの実施形態では、試験回数は約１〜６である。
【０２３０】
いくつかの実施形態では、この方法は、シグマ−２受容体と結合する化合物が、可溶性Ａβオリゴマー誘導性シナプス消失の抑制および膜輸送アッセイにおける可溶性Ａβオリゴマー誘導性不良の抑制という点で、可溶性Ａβオリゴマー誘導性神経毒性を抑制することによりシグマ−２受容体において機能的アンタゴニストとして作用するかどうかを判定することをさらに含む。いくつかの実施形態では、この方法はさらに、シグマ−２受容体アンタゴニストがＡベータオリゴマーの非存在下で輸送にもシナプス数にも影響を及ぼさないこと；神経細胞のカスパーゼ−３活性を誘導しないこと；シグマ−２受容体アゴニストによるカスパーゼ−３活性の誘導を阻害すること；および／またはシグマ−２受容体アゴニストによって引き起こされる神経細胞の神経毒性を軽減するか、そのような神経毒性から保護することを明らかにする。
【０２３１】
試験はこのほか、結合パートナーの機能に対する被験化合物の作用を判定する機能アッセイを含み得るものであり、結合パートナーは、特に限定されないがシグマ−２受容体であり得る。様々な標準的なアッセイ技術を用いることができる。例えば、生存している細胞または組織における化合物の機能的アゴニスト様またはアンタゴニスト様活性を測定する方法を用いることができる。方法としては、特に限定されないが、ｃＡＭＰ濃度およびＩＰ１レベルを測定するＴＲ−ＦＲＥＴ、カルシウムの流動をモニターするリアルタイム蛍光法、インピーダンス調節、回腸収縮または腫瘍細胞アポトーシスを測定する細胞内誘電分光測定法が挙げられる。このほか、例えば、被験化合物がシグマ−１受容体と結合するのか、シグマ−２受容体と結合するのか、いずれとも結合しないのか、両方と結合するのかを判定することによって、その化合物の特異性を判定することができる。被験化合物がシグマ−１受容体と結合するかどうかを判定する方法は、Ｇａｎａｐａｔｈｙ，Ｍ．Ｅら（１９９９）Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２８９：２５１−２６０（全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。被験化合物がシグマ−１受容体と結合するのかどうかを判定する方法は、Ｂｏｗｅｎ，Ｗ．Ｄら（１９９３）Ｍｏｌ．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．，３：１１７−１２６（全体が参照により本明細書に組み込まれる）のほかにも、Ｘｕ，Ｊら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２０１１，２：３８０  ＤＯＩ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ  １３８６（全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０２３２】
様々な実施形態では、本開示は、可溶性Ａβオリゴマー誘導性シナプス消失の抑制という点で、可溶性Ａβオリゴマー誘導性神経毒性を抑制することによって、シグマ−２受容体において機能的アンタゴニストとして作用し得る選択的高親和性シグマ−２受容体リガンドであって、膜輸送アッセイにおける可溶性Ａβオリゴマー誘導性不良を抑制し、Ａベータオリゴマーの非存在下で輸送にもシナプス数にも影響を及ぼさず；本明細書に記載される優れた薬物様特性示し、したがって、同定された選択的高親和性シグマ−２受容体アンタゴニスト化合物を可溶性Ａβオリゴマー誘導性シナプス機能不全の治療にｉｎ  ｖｉｖｏで使用することができる、リガンドを同定するアッセイプロトコルを提供する。
【０２３３】
いくつかの実施形態では、本開示は、対象をシグマ−２アンタゴニストで治療するべきかどうかを判定する方法であって、対象が、本明細書に記載される認知低下または神経変性疾患をはじめとする状態、疾患または障害を有することが疑われる、方法を提供する。いくつかの実施形態では、この方法は、患者に由来する試料とシグマ−２アンタゴニストとを接触させることと、シグマ−２調節化合物が、試料中に認められるベータ−アミロイド病態を抑制または緩和するかどうかを判定することとを含み、試料中に認められるベータ−アミロイド病態の抑制または緩和を示す試料が、対象をシグマ−２アンタゴニストで治療するべきであることを示す。
【０２３４】
さらに、本開示は、Ａβオリゴマー誘導性のシナプス数減少などを抑制するシグマ−２アンタゴニストを同定する方法を含む。いくつかの実施形態では、この方法を用いて、ベータ−アミロイド病態を治療するためのシグマ−２アンタゴニストを同定することができる。いくつかの実施形態では、この方法を用いて、ベータ−アミロイド病態を治療する治療法の有効性を判定する。いくつかの実施形態では、ベータ−アミロイド病態は、膜輸送障害、シナプス機能不全、動物の記憶および学習障害、シナプス数の減少、樹状突起スパインの長さもしくは形態の変化、ＬＴＰの障害またはタウタンパク質のリン酸化の増大である。
【０２３５】
本開示で使用するアミロイドベータ
ヒトアミロイドβは、ニューロンのシナプスに集中してみられる内在性膜タンパク質であるアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の切断産物である。アミロイドβは、自己会合して準安定性のオリゴマー集合体を形成する。Ａベータは、濃度が高くなると重合して直線状の線維に集合し、この現象はｐＨが低くなると促進される。線維がオリゴマーから形成されるのかどうかは現時点で明らかにされていない。アミロイドβオリゴマーは、動物モデルでは、ニューロンシナプスの変化を誘導して学習および記憶を阻害することにより、アルツハイマー病を引き起こすことが示されており、アミロイドβ線維は長い間、動物およびヒトの進行期アルツハイマー病の原因であるとされてきた。実際、現在のアルツハイマー病に関する作業仮説で、多数の裏付けが得られているものは、Ａベータ集合体、特にＡベータオリゴマーが、アルツハイマー病に関連する初期病態ならびにＭＣＩおよび軽度ＡＤなどの重症度の低い認知症に関連する病態の中心であるとする仮説である。Ｊａｍｅｓ  Ｐ．ら，“Ｎａｔｕｒａｌ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｍｙｌｏｉｄ−β  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｄｉｓｒｕｐｔ  ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．”  Ｎａｔｕｒｅ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｖｏｌ．８（２００５）：７９−８４；Ｋｌｙｕｂｉｎ，Ｉ．ら，Ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄｉｍｅｒ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ＣＳＦ  ｄｉｓｒｕｐｔｓ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ：ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｂｙ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｐａｓｓｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ．”  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｖｏｌ．２８（２００８）：４２３１−４２３７により明らかである。しかし、オリゴマーが形成される仕組みおよびオリゴマーの構造的状態に関してはほとんど知られていない。例えば、会合してオリゴマーを形成するアミロイドβサブユニットの数は現時点では明らかにされておらず、また、オリゴマーの構造形態も露出する残基も明らかにされていない。向神経活性を示すオリゴマーの構造状態が２つ以上あることを示唆する証拠が得られている（Ｒｅｅｄ，Ｊｅｓｓ  Ｄ．ら，“ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ  ｏｆ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ｆｏｏｄ  ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ．”  Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ６６：１８（Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２００５）：２２４８−２２６３；Ｃｌｅａｒｙ，Ｊａｍｅｓ  Ｐ．ら，“Ｎａｔｕｒａｌ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｍｙｌｏｉｄ−β  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｄｉｓｒｕｐｔ  ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．”  Ｎａｔｕｒｅ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｖｏｌ．８（２００５）：７９−８４）。
【０２３６】
アミロイドβは、ＡｐｏＥおよびＡｐｏＪを含めた脳内にみられる多くのタンパク質に対して親和性がある。しかし、シャペロンをはじめとするタンパク質が、その最終的な構造状態および／またはその向神経活性に影響を及ぼし得るタンパク質と会合するかどうかは明らかにされていない。
【０２３７】
可溶性Ａベータペプチドは、ＡＤの初期段階でシナプス機能不全および認知過程を乱すことによって重要な役割を果たしている可能性がある。例えば、Ｏｒｉｇｌｉａらは、可溶性Ａベータ（Ａベータ４２）が終末糖化産物（ＲＡＧＥ）仲介性ｐ３８ＭＡＰＫ活性化のニューロン受容体を介して嗅内皮質の長期増強（ＬＴＰ）に障害をもたらすことを明らかにしている（Ｏｒｉｇｌｉａら，２００８，Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔ−ｄｅｐｅｎｄｎｅｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐ３８  ｍｉｔｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｏｒｔｉｃａｌ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ２８（１３）：３５２１−３５３０）（参照により本明細書に組み込まれる）。
【０２３８】
シナプス機能不全はアルツハイマー病の初期段階に関与している。アミロイドベータペプチドはシナプス機能を変化させることが明らかにされている。Ｐｕｚｚｏらは、合成した線維型Ａベータが、早期タンパク質合成相には影響を及ぼさずにＬＴＰの後期タンパク質合成依存相に障害をもたらすことを報告している。この報告は、Ａベータオリゴマーが細胞に対して高い毒性を示し、シナプス機能不全に関与するというそれ以前の報告と一致する（Ｐｕｚｚｏら，２００６，Ｃｕｒｒ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｒｅｓ  ３（３）：１７９−１８３）（参照により本明細書に組み込まれる）。Ａベータは、一酸化窒素カスケードの１つであるＮＯ／ｃＧＭＰ／ｃＧＫ／ＣＲＥＢを含めた様々なセカンドメッセンジャーカスケードによって海馬長期増強（ＬＴＰ）に著明な障害をもたらすことがわかっている（Ｐｕｚｚｏら，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００５）。いくつかの実施形態では、本開示は、神経細胞のアミロイドベータオリゴマー誘導性シナプス機能不全を抑制し；ニューロンのＡベータオリゴマーへの曝露により引き起こされる海馬長期増強の抑制を阻害するシグマ−２受容体アンタゴニスを含む、組成物および方法を提供する。
【０２３９】
本開示によるスクリーニング法およびアッセイの実施には、アミロイドβのモノマー、オリゴマー、線維およびタンパク質と会合したアミロイドβ（「タンパク質複合体」）のほか、より一般的にはアミロイドβ集合体を含めた、任意の形態のアミロイドβを使用し得る。例えば、スクリーニング法には、例えば、米国特許出願第１３／０２１，８７２号；米国特許公開第２０１０／０２４０８６８号；国際公開第２００４／０６７５６１号；国際公開第２０１０／０１１９４７号；米国特許公開第２００７００９８７２１号；米国特許公開第２０１００２０９３４６号；国際公開第２００７／００５３５９号；米国特許公開第２００８００４４３５６号；米国特許公開第２００７０２１８４９１号；国際公開第２００７／１２６４７３号；米国特許公開第２００５００７４７６３号；国際公開第２００７／１２６４７３号、国際公開第２００９／０４８６３１号ならびに米国特許公開第２００８００４４４０６号、米国特許第７，９０２，３２８号および米国特許第６，２１８，５０６号（それぞれ参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている様々な形態の可溶性アミロイドβオリゴマーを使用することができる。
【０２４０】
アミロイドβのモノマーまたはオリゴマーを含めたアミロイドβ型は、任意の供給源から入手されるものであり得る。例えば、いくつかの実施形態では、市販のアミロイドβモノマーおよび／またはアミロイドβオリゴマーを水溶液中で使用してよく、他の実施形態では、タンパク質水溶液中で使用するアミロイドβモノマーおよび／またはアミロイドβオリゴマーを、当業者が多数の任意の既知の技術を用いて単離し精製することができる。一般に、タンパク質の水溶液の調製に使用するアミロイドβモノマーおよび／またはアミロイドβオリゴマーおよび様々な実施形態のアミロイドβは、水溶液に可溶性であり得る。したがって、水溶液のタンパク質およびアミロイドβはともに可溶性であり得る。
【０２４１】
加えるアミロイドβは任意のアイソフォームであり得る。例えば、いくつかの実施形態では、アミロイドβモノマーはアミロイドβ１〜４２であり得、他の実施形態では、アミロイドβモノマーはアミロイドβ１〜４０であり得る。また別の実施形態では、アミロイドβはアミロイドβ１〜３９またはアミロイドβ１〜４１であり得る。したがって、様々な実施形態のアミロイドβは、アミロイドβの任意のＣ末端アイソフォームを包含し得る。さらに別の実施形態は、Ｎ末端が切れているアミロイドβを含み、いくつかの実施形態では、上記のいずれかのアミロイドβ  Ｃ末端異性体のＮ末端は、アミノ酸２、３、４、５または６であり得る。例えば、アミロイドβ１〜４２は、アミロイドβ２〜４２、アミロイドβ３〜４２、アミロイドβ４〜４２またはアミロイドβ５〜４２およびその混合物を包含し得るものであり、同様に、アミロイドβ１〜４０は、アミロイドβ２〜４０、アミロイドβ３〜４０、アミロイドβ４〜４０またはアミロイドβ５〜４０を包含し得る。
【０２４２】
様々な実施形態に使用するアミロイドβ型は野生型、すなわち、大部分の集団によりｉｎ  ｖｉｖｏで合成されるアミロイドβのアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を有するものであり得るか、いくつかの実施形態では、アミロイドβは変異体アミロイドβであり得る。実施形態は、変異体アミロイドβの特定の変種に限定されない。例えば、いくつかの実施形態では、水溶液中に導入するアミロイドβは、例えば、「Ｄｕｔｃｈ」（Ｅ２２Ｑ）変異または「Ａｒｃｔｉｃ」（Ｅ２２Ｇ）変異を有するアミロイドβなどの既知の変異を含み得る。このような変異モノマーは、天然に存在する変異、例えば、例えばアルツハイマー病になりやすい個人の集団から単離されたアミロイドβ型である家族型アミロイドβなどを含み得る。他の実施形態では、変異体アミロイドβモノマーは、特異的変異を有するアミロイドβ変異体を作製する分子技術を用いることにより、合成的に作製され得る。また別の実施形態では、変異体アミロイドβモノマーは、これまでに同定されていない変異、例えば、ランダムに生成されるアミロイドβ変異体にみられる未同定の変異体を含み得る。本明細書で使用される「アミロイドβ」という用語は、野生型のアミロイドβおよび任意の変異体型のアミロイドβをともに包含するものとする。
【０２４３】
いくつかの実施形態では、タンパク質水溶液中のアミロイドβは、単一のアイソフォームであり得る。他の実施形態では、アミロイドβの様々なＣ末端アイソフォームおよび／またはアミロイドβの様々なＮ末端アイソフォームを組み合わせて、タンパク質水溶液にすることができるアミロイドβ混合物を形成させ得る。さらに別の実施形態では、アミロイドβは、タンパク質含有水溶液に添加されてｉｎ  ｓｉｔｕで切断されるアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）に由来するものであり得、このような実施形態では、アミロイドβの様々なアイソフォームが溶液中に含まれ得る。Ｎ末端の切断および／またはＣ末端アミノ酸の除去は、アミロイドβを加えた後に水溶液中で起こり得る。したがって、本明細書に記載される通りに調製される水溶液には、最初に単一のアイソフォームを溶液に加える場合でも、様々なアミロイドβアイソフォームが含まれ得る。
【０２４４】
水溶液に加えるアミロイドβモノマーは、生存組織などの天然の供給源から単離されたものであり得、他の実施形態では、アミロイドβは、トランスジェニックマウスまたは培養細胞などの合成供給源に由来するものであり得る。いくつかの実施形態では、正常対象および／または認知低下またはそれに関連する疾患、例えば特に限定されないが、アルツハイマー病などと診断された患者からモノマー、オリゴマーまたはその組合せを含めたアミロイドβ型を単離する。いくつかの実施形態では、アミロイドβのモノマー、オリゴマーまたはその組合せは、正常対象または罹患患者から単離したＡベータ集合体である。いくつかの実施形態では、Ａベータ集合体は、分子量が大きく、例えば１００ＫＤａを超える。いくつかの実施形態では、Ａベータ集合体は、分子量が中程度であり、例えば１０〜１００ＫＤａである。いくつかの実施形態では、Ａベータ集合体は１０ｋＤａ未満である。
【０２４５】
いくつかの実施形態のアミロイドβオリゴマーは、よく用いられる「オリゴマー」の定義に一致する任意の数のアミロイドβモノマーからなるものであり得る。例えば、いくつかの実施形態では、アミロイドβオリゴマーは、約２〜約３００、約２〜約２５０、約２〜約２００のアミロイドβモノマーを含むものであり得、他の実施形態では、アミロイドβオリゴマーは、約２〜約１５０、約２〜約１００、約２〜約５０または約２〜約２５のアミロイドβモノマーからなるものであり得る。いくつかの実施形態では、アミロイドβオリゴマーは２以上のモノマーを含み得る。様々な実施形態のアミロイドβオリゴマーは、モノマーの確認に基づいて、アミロイドβ線維およびアミロイドβ前原線維と区別され得る。特に、アミロイドβオリゴマーのアミロイドβモノマーは一般に、β−プリーツシートからなる球状であるのに対し、線維および前原線維のアミロイドβモノマーの二次構造は、平行なβ−シートである。
【０２４６】
アルツハイマー病の対象またはアルツハイマー病のリスクのある対象の特定
アルツハイマー病（ＡＤ）は、組織学的には、大脳皮質の細胞外β−アミロイド（Ａβ）斑およびニューロン内神経原線維濃縮体の存在によって定義される。様々な診断および予後予測のためのバイオマーカー、例えば磁気共鳴画像法、単一光子放射断層撮影法，ＦＤＧ  ＰＥＴ，ＰｉＢ  ＰＥＴ，ＣＳＦタウおよびＡベータ解析などが当該技術分野で公知であるほか、Ａｌｖｅｓら，２０１２，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ：ａ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｒａｃｔｉｃｅ−ｏｒｉｅｎｔｅｄ  ｒｅｖｉｅｗ，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，Ａｐｒｉｌ，２０１２，ｖｏｌ  ３，Ａｒｔｉｃｌｅ  ６３，１−２０（参照により本明細書に組み込まれる）では、その診断精度に関して得られているデータについて考察されている。
【０２４７】
認知症の診断は、認知症が発症する者の予測とともに、磁気共鳴画像法および［（１８）Ｆ］フルオロデオキシグルコース（ＦＤＧ）の使用による陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）によって補助されてきた。これらの技術はＡＤに特異的なものでない。例えば、Ｖａｌｌａｂｈａｊｏｓｕｌａ  Ｓ．Ｐｏｓｉｔｒｏｎ  ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ  ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ｆｏｒ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｂｒａｉｎ  Ｂｅｔａ−ａｍｙｌｏｉｄ．Ｓｅｍｉｎ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ．２０１１  Ｊｕｌ；４１（４）：２８３−９９を参照されたい。認知障害の患者に中頻度ないし高頻度で認められるアミロイド神経突起斑の撮像に最近ＦＤＡの承認を受けた別のＰＥＴリガンドにフロルベタピルＦ１８注射液、（４−（（１Ｅ）−２−（６−｛２−（２−（２−（１８Ｆ）フルオロエトキシ）エトキシ）エトキシ｝ピリジン−３−イル）エテニル）−Ｎ−メチルベンゼンアミン（ＡＭＹＶＩＤ（登録商標）、Ｌｉｌｌｙ社）がある。フロルベタピルは、線維状Ａベータとは特異的に結合するが、神経原線維濃縮体とは特異的に結合しない。例えば、Ｃｈｏｉ  ＳＲ，ら，Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｍｙｌｏｉｄ  ＰＥＴ  ｌｉｇａｎｄ  ｆｌｏｒｂｅｔａｐｉｒ  Ｆ  １８  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｗｉｔｈ  Ａβ  ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｎｅｕｒｉｔｉｃ  ｐｌａｑｕｅ  ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐｏｓｔｍｏｒｔｅｍ  ｂｒａｉｎ  ｔｉｓｓｕｅ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｄｉｓ  Ａｓｓｏｃ  Ｄｉｓｏｒｄ．２０１２  Ｊａｎ；２６（１）：８−１６を参照されたい。ＰＥＴリガンドのフロルベタピルには、ＰＥＴスキャンの定性的視覚的評価においては特異性が低いという欠点がある。Ｃａｍｕｓら，２０１２，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  Ｍｏｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ３９：６２１−６３１。しかし、神経突起斑のある者の多くは認知機能が正常であるように思われる。
【０２４８】
アルツハイマー病のＣＳＦマーカーとしては、総タウ、蛍光体−タウおよびＡベータ４２が挙げられる。例えば、Ａｎｄｒｅａｓｅｎ，Ｓｊｏｇｒｅｎ  ａｎｄ  Ｂｌｅｎｎｏｗ，Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｐｓｙｃｉａｔｒｙ，２００３，４（４）：１４７−１５５（参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。ＡＤでは４２アミノ酸型のＡベータ（Ａベータ４２）のＣＳＦ中レベルが低下し、総タウのＣＳＦ中レベルが増大することが多数の研究で明らかにされている。さらに、ＡＤが発症するリスクのある対象を特定するのに有用なＡＰＰ遺伝子の変異の遺伝マーカーが知られている。例えば、Ｇｏａｔｅら，Ｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｍｉｓｓｅｎｓｅ  ｍｕｔａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｇｅｎｅ  ｗｉｔｈ  ｆａｍｉｌｉａｌ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｎａｔｕｒｅ，３４９，７０４−７０６，１９９１（参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。種々の実施形態では、任意の診断法または予後予測法を用いて、アルツハイマー病の対象またはアルツハイマー病のリスクのある対象を特定することができる。
【０２４９】
シグマ−２受容体アンタゴニストを含む医薬組成物
本明細書に提供されるシグマ−２受容体アンタゴニスト化合物は、医薬組成物の形態で投与することができる。このような組成物は、製薬分野で周知の方法で調製することが可能であり、局所治療であるのか全身治療であるのかに応じて、また治療する領域に応じて、様々な経路により投与することができる。
【０２５０】
したがって、本開示の別の実施形態は、薬学的に許容される補形剤または希釈剤と、治療有効量の本開示のシグマ−２受容体アンタゴニスト化合物（その鏡像異性体、ジアステレオマー、Ｎ−オキシドまたはその薬学的に許容される塩を含む）とを含む、医薬組成物を含む。
【０２５１】
化合物を原物質として投与することも可能であるが、有効成分を医薬製剤、例えば、活性物質と、意図する投与経路および標準的薬務に応じて選択した薬学的に許容される担体とを混合した医薬製剤の形で提供するのが好ましい。
【０２５２】
したがって、一態様では、本開示は、上記のいずれかの式の化合物、抗体もしくはフラグメントをはじめとする上記のようにシグマ−２受容体アンタゴニストとして記載される化合物またはその薬学的に許容される誘導体（例えば、塩もしくは溶媒和物）を少なくとも１つと、任意選択で薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。特に、本開示は、治療有効量の少なくとも１つの上記のいずれかの式の化合物またはその薬学的に許容される誘導体と、任意選択で薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。
【０２５３】
組合せ
本開示の組成物および方法では、上記のいずれかの式の化合物をはじめとする上記のようにシグマ−２受容体アンタゴニストとして記載される化合物と、他の治療剤および／または活性物質とを併用し得る。
【０２５４】
いくつかの実施形態では、シグマ−２アンタゴニスト化合物と、コリンエステラーゼ阻害剤、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）グルタミン酸受容体アンタゴニスト、ベータ−アミロイド特異的抗体、ベータ−セクレターゼ１（ＢＡＣＥ１、ベータ部位アミロイド前駆体切断酵素１）阻害剤、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）モジュレーター、静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）またはプリオンタンパク質アンタゴニストのうちの１つまたは複数とを組み合わせることができる。いくつかの実施形態では、シグマ−２受容体アンタゴニストと、タクリン（ＣＯＧＮＥＸ（登録商標）；Ｓｃｉｅｌｅ社），ドネペジル（ＡＲＩＣＥＰＴ（登録商標）；Ｐｆｉｚｅｒ社），リバスチグミン（ＥＸＥＬＯＮ（登録商標）；Ｎｏｖａｒｔｉｓ社）またはガランタミン（ＲＡＺＡＤＹＮＥ（登録商標）；Ｏｒｔｈｏ−ＭｃＮｅｉｌ−Ｊａｎｓｓｅｎ社）から選択されるコリンエステラーゼ阻害剤とを組み合わせる。いくつかの実施形態では、シグマ−２受容体アンタゴニストと、脊柱周囲（ｐｅｒｉｓｐｉｎａｌ）エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ／Ｐｆｉｚｅｒ社）であるＴＮＦアルファモジュレーターとを組み合わせる。いくつかの実施形態では、シグマ−２受容体アンタゴニストと、バピネオズマブ（Ｐｆｉｚｅｒ社），ソラネズマブ（Ｌｉｌｌｙ），ＰＦ−０４３６０３６５（Ｐｆｉｚｅｒ社），ＧＳＫ９３３７７６（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ社），Ｇａｍｍａｇａｒｄ（Ｂａｘｔｅｒ社）またはＯｃｔａｇａｍ（Ｏｃｔａｐｈａｒｍａ社）から選択されるベータ−アミロイド特異的抗体とを組み合わせる。いくつかの実施形態では、シグマ−２受容体アンタゴニストと、メマンチン（ＮＡＭＥＮＤＡ（登録商標）；Ｆｏｒｅｓｔ社）であるＮＭＤＡ受容体アンタゴニストとを組み合わせる。いくつかの実施形態では、ＢＡＣＥ１阻害剤はＭＫ−８９３１（Ｍｅｒｃｋ社）である。いくつかの実施形態では、シグマ−２受容体アンタゴニストと、Ｍａｇｇａら，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍ  ２０１０，７：９０，Ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｐｒｏｖｉｄｅｓ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  Ａｂ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｂｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｉｎ  ａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅおよびＷｈａｌｅｙら，２０１１，Ｈｕｍａｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ７：３，３４９−３５６，Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ａｎｄ  Ｎｉｃｏｔｉａｎａ  ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ（それぞれ参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているＩＶＩＧとを組み合わせる。いくつかの実施形態では、シグマ−２受容体アンタゴニストと、Ｓｔｒｉｔｔｍａｔｔｅｒらの米国特許出願公開第２０１０／０２９１０９０号（参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているプリオンタンパク質アンタゴニストとを組み合わせる。
【０２５５】
したがって、本開示は、さらなる態様では、上記のいずれかの式の化合物またはその薬学的に許容される誘導体を少なくとも１つと、第二の活性物質と、任意選択で薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。
【０２５６】
２つ以上の化合物を同じ製剤中で組み合わせる場合、それらは安定であり、互いにおよび製剤の他の成分と適合性がなければならないことが理解されよう。それらを別個に製剤化する場合、当該技術分野でその化合物について知られている方法で好都合に、任意の好都合な製剤の形で提供しなければならない。
【０２５７】
保存剤、安定剤、色素および場合によっては香味剤を医薬組成物中に加え得る。保存剤としては、安息香酸ナトリウム、アスコルビン酸およびｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステルが挙げられる。このほか、抗酸化剤および懸濁化剤を使用し得る。
【０２５８】
モノクローナル抗体またはフラグメントなどの生物製剤を含む組合せでは、適切な補形剤を用いて、一般には非経口投与、例えば静脈内投与用の内毒素の少ない溶液中で抗体またはフラグメントが凝集するのを防ぎ、安定化させる。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ，第４部，２０１０，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  ｐｐ  １０３−１２９のＤａｕｇｈｅｒｔｙら，Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｉｓｓｕｅｓ  ｆｏｒ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓを参照されたい。
【０２５９】
本開示の化合物を、湿式粉砕などの既知の粉砕方法を用いて粉砕して、錠剤形成およびその他の種類の製剤に適した粒子径にし得る。当該技術分野で公知の工程により、本開示の化合物の微粉化（ナノ粒子状）調製物を調製してもよく、例えば、国際公開第０２／００１９６号（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ社）を参照されたい。
【０２６０】
投与経路および単位投与剤形
投与（送達）経路としては、特に限定されないが、経口投与（例えば、錠剤、カプセルとして、または摂取可能な溶液として）、局所投与、粘膜投与（例えば、経鼻スプレーまたは吸入エアゾールとして）、非経口投与（例えば、注射可能な形態による）、胃腸管投与、脊髄内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、静脈内投与、脳室内投与またはその他のデポ投与などのうちの１つまたは複数が挙げられる。抗体またはフラグメントの投与は、非経口手段によるものが一般的である。
【０２６１】
したがって、本開示の組成物は、投与様式に合わせて特別に製剤化した形態のものを含む。ある特定の実施形態では、本開示の医薬組成物を経口送達に適した形態に製剤化する。例えば、化合物ＣＢおよび化合物ＣＦは、動物モデルに経口投与して生物学的に利用可能なシグマ−２受容体アンタゴニスト化合物であり、恐怖条件付けモデルに１日１回の経口投与で有効であることが認められている（例えば、図１２Ｂを参照されたい）。経口投与で生物学的に利用可能な本明細書に記載の化合物は、経口製剤に調製することができる。いくつかの実施形態では、シグマ−２アンタゴニスト化合物は、経口送達に適した経口投与で生物学的に利用可能なものである。他の実施形態では、本開示の医薬組成物を非経口送達に適した形態に製剤化する。いくつかの実施形態では、シグマ−２受容体アンタゴニスト化合物は抗体またはそのフラグメントであり、ここでは、抗体またはフラグメントを非経口組成物に製剤化する。例えば、抗シグマ−２受容体抗体、例えばＡベータオリゴマーとシグマ−２受容体との結合を阻止する抗ＰＧＲＭＣ１抗体などを非経口送達用に製剤化することができる。
【０２６２】
本開示の化合物は、ヒト医療または獣医学医療に使用するのに好都合な方法での投与に合わせて製剤化してもよく、したがって、本開示は、ヒト医療または獣医学医療での使用に適合させた本開示の化合物を含む医薬組成物をその範囲内に含む。このような組成物は、１つまたは複数の適切な担体を用いる従来の方法で使用するために提供され得る。治療的使用に許容される担体は製薬分野で周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編，１９８５）に記載されている。医薬担体の選択は、意図する投与経路および標準的薬務に関して実施され得る。医薬組成物は、担体に加えて、任意の適切な結合剤（１つまたは複数）、滑沢剤（１つまたは複数）、懸濁化剤（１つまたは複数）、コーティング剤（１つまたは複数）および／または可溶化剤（１つまたは複数）を含み得る。
【０２６３】
送達システムに応じて様々な組成物／製剤の必要条件が存在し得る。化合物をすべて同じ経路で投与する必要があるわけではないことを理解するべきである。同様に、組成物が２つ以上の活性成分を含む場合、これらの成分を異なる経路で投与してもよい。例を挙げれば、本開示の医薬組成物は、例えば経鼻スプレーもしくは吸入エアゾールまたは摂取可能な溶液としてミニポンプを用いて、または粘膜経路によって、あるいは組成物を例えば静脈内経路、筋肉内経路または皮下経路による送達用に注射可能な形態により製剤化する非経口経路によって送達されるよう製剤化し得る。あるいは、製剤を多数の経路によって送達されるよう設計してもよい。
【０２６４】
本明細書に提供される化合物と抗体または抗体フラグメント分子との組合せは、製剤化し、多数の経路のうちのいずれかで投与することが可能であり、症状または目指す目的に治療的に有効な濃度で投与される。この目的を達成るため、当該技術分野で公知の様々な許容される補形剤を用いて抗体を製剤化し得る。抗体は通常、注射、例えば静脈内注射により投与する。この投与を達成する方法は当業者に公知である。例えば、Ｇｏｋａｒｎら，２００８，Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ９７（８）：３０５１−３０６６（参照により本明細書に組み込まれる）には、様々な高濃度の抗体自己緩衝製剤が記載されている。例えば、自己緩衝製剤のモノクローナル抗体、例えば、５．２５％ソルビトール、ｐＨ５．０中、５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂもしくは５％ソルビトール、０．０１％ポリソルベート２０、ｐＨ５．２中、６０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ；あるいは従来の緩衝製剤、例えば、５．２５％ソルビトール２５または５０ｍＭ酢酸塩、グルタミン酸塩もしくはコハク酸塩、ｐＨ５．０中、５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１；あるいは１０ｍＭ酢酸塩またはグルタミン酸塩、５．２５％ソルビトール、０．０１％ポリソルベート２０、ｐＨ５．２中、６０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１；これより濃度の低い他の製剤を当該技術分野で公知のの通りに用いることができる。
【０２６５】
本開示の好ましいシグマ−２受容体アンタゴニスト化合物は血液脳関門を通過するため、例えば、全身的方法（例えば、ｉｖ経路、ＳＣ経路、経口経路、粘膜経路、経皮経路による）または局所的方法（例えば、頭蓋内）を含めた様々な方法で投与することができる。本開示の化合物を胃腸管粘膜から経粘膜的に送達する場合、消化管を通過する間は化合物が安定な状態を維持することが可能であるべきであり；例えば、化合物がタンパク質分解に耐性を示し、酸性ｐＨにおいて安定であり、胆汁の界面活性剤作用に耐性を示すべきである。例えば、シグマ−２リガンドから選択し上記の経口投与用に調製するシグマ−２アンタゴニスト化合物を腸溶性コーティング層でコーティングし得る。腸溶性コーティング層の材料は、水または適切な有機溶媒のいずれかに分散または溶解し得るものである。腸溶性コーティング層ポリマーとして、以下に挙げるもののうち１つまたは複数を別個にまたは組み合わせて使用することができる；例えば、メタクリル酸コポリマー、酢酸セルロースフタラート、酢酸セルロースブチラート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタラート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセタートスクシナート、ポリビニルアセテートフタラート、酢酸セルローストリメリタート、カルボキシメチルエチルセルロース、セラックをはじめとする適切な腸溶性コーティング層ポリマー（１つまたは複数）の溶液または分散液。環境上の理由から、水性コーティング工程が好ましいものであり得る。このような水性工程では、メタクリル酸コポリマーが最も好ましい。
【０２６６】
必要に応じて、医薬組成物を吸入により、皮膚パッチの使用により、デンプンもしくはラクトースなどの補形剤を含有する錠剤の形態で、またはカプセル剤もしくは膣坐剤を単独でもしくは補形剤と混合して、または香味料もしくは着色剤を含有するエリキシル剤、液剤もしくは懸濁剤の形態で経口的に投与することが可能であり、あるいは医薬組成物を非経口的に、例えば静脈内、筋肉内または皮下に注射することができる。バッカルまたは舌下投与では、従来の方法で製剤化することができる錠剤またはトローチ剤の形態で組成物を投与し得る。
【０２６７】
本開示の組成物を非経口的に投与する場合、そのような投与は、本開示の化合物を静脈内、動脈内、髄腔内、脳室内、頭蓋内、筋肉内もしくは皮下に；および／または注入技術を用いることにより投与することを非限定的に含む。抗体またはフラグメントは通常、非経口的に、例えば静脈内に投与する。
【０２６８】
注射または注入に適した医薬組成物は、無菌水溶液、分散液または無菌粉末であって、必要に応じて注射または注入に適したそのような無菌溶液または分散液の調製に適合させた有効成分を含有する無菌水溶液、分散液または無菌粉末の形態であり得る。任意選択で、この調製物をリポソームに封入してもよい。いずれの場合も、最終的な調製物は、無菌であり、液体であり、製造および保管条件下で安定でなければならない。保管時の安定性を改善するため、このような調製物はほかにも、微生物の増殖を阻止する保存剤を含有し得る。微生物の活動の阻止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノールまたはアクソルビン酸（ａｃｓｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ）の添加によって達成することができる。多くの場合、体液、特に血液とほぼ同じ浸透圧を確保するため、等張物質、例えば糖類、緩衝剤および塩化ナトリウムが推奨される。モノステアリン酸アルミニウムまたはゼラチンなどの吸収遅延剤の導入により、このような注射用混合物の持続的吸収を達成することができる。
【０２６９】
分散液剤は、液体担体または中間物、例えばグリセリン、液体ポリエチレングリコール、トリアセチン油およびその混合物で調製することができる。液体担体または中間物は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールなど）、植物油、無毒性グリセリンエステルおよび適切なその混合物を含有する溶媒または液体分散媒体であり得る。リポソームの作製、分散液剤の場合は適切な粒子径の投与または界面活性剤の添加により、適切な流動性を維持し得る。
【０２７０】
非経口投与には、他の物質、例えば、溶液を血液と等張にするのに十分な量の塩またはグルコースを含有し得る無菌水溶液の形態で化合物を使用するのが最もよい。水溶液を、必要に応じて適切に（好ましくは、ｐＨ３〜９に）緩衝するべきである。無菌条件下での適切な非経口製剤の調製は、当業者に周知の標準的な製剤技術によって容易に達成される。
【０２７１】
無菌注射用液剤は、式Ｉの化合物と、しかるべき溶媒および１つまたは複数の上記担体とを混合した後、無菌ろ過することにより調製することができる。無菌注射用液剤の調製に使用するのに適した無菌粉末の場合、好ましい調製方法では、真空乾燥および凍結乾燥を実施し、のちの無菌液剤の調製に用いるシグマ−２受容体アンタゴニストと所望の補形剤との粉末状混合物を得る。
【０２７２】
本開示による化合物は、ヒト医療または獣医学医療で注射（例えば、静脈内ボーラス注射もしくは注入または筋肉内経路、皮下経路もしくは髄腔内経路を介した注射）により使用するために製剤化してもよく、必要に応じて保存剤を加えたアンプルをはじめとする単位用量容器または複数回用量に入れた単位用量形態で提供し得る。注射用組成物は、油性溶媒または水性溶媒を用いた懸濁剤、液剤または乳剤の形態であってよく、懸濁化剤、安定剤、可溶化剤および／または分散剤などの製剤用剤を含有し得る。あるいは、有効成分は、使用前に適切な溶媒、例えば無菌無発熱物質水で再構成するための無菌粉末形態であり得る。
【０２７３】
本開示の化合物は、即時放出、遅延放出、調節放出、持続放出、パルス放出または制御放出に適用する錠剤、カプセル剤、トローチ剤、膣坐剤、エリキシル剤、液剤または懸濁剤の形態で投与することができる。
【０２７４】
本開示の化合物はほかにも、経口投与またはバッカル投与に適した形態、例えば、液剤、ゲル剤、シロップ剤もしくは懸濁剤または使用前に水をはじめとする適切な溶媒で再構成するための乾燥粉末の形態で、ヒトへの使用または獣医学的使用に提供し得る。固体組成物、例えば錠剤、カプセル剤、ロゼンジ剤、トローチ剤、香錠剤、丸剤、ボーラス剤、巨丸剤、散剤、パスタ剤、顆粒剤、カプセル剤またはプレミックス製剤などを用い得る。経口使用のための固体組成物および液体組成物は、当該技術分野で周知の方法に従って調製され得る。このような組成物はほかにも、固体または液体形態の薬学的に許容される担体および補形剤を１つまたは複数含有し得る。
【０２７５】
錠剤は、微結晶性セルロース、ラクトース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、二塩基性リン酸カルシウムおよびグリシンなどの補形剤、デンプン（好ましくは、トウモロコシデンプン、バレイショデンプンまたはタピオカデンプン）、デンプングリコール酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウムおよび特定のケイ酸塩錯体などの崩壊剤ならびにポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、スクロース、ゼラチンおよびアラビアゴムなどの造粒結合剤を含有し得る。
【０２７６】
さらに、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、グリセリルベヘナートおよびタルクなどの滑沢剤が含まれ得る。
【０２７７】
組成物は、即時放出もしくは制御放出錠剤、微粒子、ミニ錠剤、カプセル剤、小袋および経口液剤もしくは懸濁剤またはその調製のための粉末剤の形態で経口的に投与され得る。経口調製物は任意選択で、様々な標準的医薬担体および補形剤、例えば結合剤、充填剤、緩衝剤、滑沢剤、滑剤、色素、崩壊剤、香料、甘味剤、界面活性剤、鋳型放出剤、付着防止剤およびコーティング剤などを含み得る。一部の補形剤は、組成物中で多数の役割を有するもの、例えば、結合剤および崩壊剤の両方として作用し得るものである。
【０２７８】
本開示に有用な経口組成物用の薬学的に許容される崩壊剤の例としては、特に限定されないが、デンプン、予めゼラチン化したデンプン、デンプングリコール酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、微結晶性セルロース、アルギン酸塩、樹脂、界面活性剤、発泡組成物、水性ケイ酸アルミニウムおよび架橋ポリビニルピロリドンが挙げられる。
【０２７９】
本明細書で有用な経口組成物用の薬学的に許容される結合剤の例としては、特に限定されないが、アラビアゴム；セルロース誘導体、例えばメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースまたはヒドロキシエチルセルロースなど；ゼラチン、グルコース、デキストロース、キシリトール、ポリメタクリル酸、ポリビニルピロリドン、ソルビトール、デンプン、予めゼラチン化したデンプン、トラガント、キサンチン樹脂、アルギン酸塩、マグネシウム・ケイ酸アルミニウム、ポリエチレングリコールまたはベントナイトが挙げられる。
【０２８０】
経口組成物用の薬学的に許容される充填剤の例としては、特に限定されないが、ラクトース、無水ラクトース、ラクトース一水和物、スクロース、デキストロース、マンニトール、ソルビトール、デンプン、セルロース（特に微結晶性セルロース）、ジヒドロリン酸カルシウムまたは無水リン酸カルシウム、炭酸カルシウムおよび硫酸カルシウムが挙げられる。
【０２８１】
本開示の組成物に有用な薬学的に許容される滑沢剤の例としては、特に限定されないが、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール、エチレンオキシドのポリマー、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム、オレイン酸ナトリウム、ナトリウムステアリルフマラートおよびコロイド状二酸化ケイ素が挙げられる。
【０２８２】
経口組成物に適切な薬学的に許容される香料の例としては、特に限定されないが、合成芳香剤および天然芳香油、例えば油、花、果物（例えば、バナナ、リンゴ、サワーチェリー、モモ）の抽出物およびその組合せなどのほか、これらと同様の芳香剤が挙げられる。その使用は多数の因子によって左右され、そのうち最も重要なのは医薬組成物を服用する集団の官能受容性である。
【０２８３】
経口組成物に適した薬学的に許容される色素の例としては、特に限定されないが、合成および天然の色素、例えば二酸化チタン、ベータ−カロテンおよびグレープフルーツの皮の抽出物が挙げられる。
【０２８４】
組成物の嚥下の促進、放出特性の調節、外観の改善および／または味のマスキングに通常用いられる経口組成物に有用な薬学的に許容されるコーティング剤の例としては、特に限定されないが、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースおよびアクリル酸−メタクリル酸コポリマーが挙げられる。
【０２８５】
経口組成物に薬学的に許容される甘味剤の適切な例としては、特に限定されないが、アスパルテーム、サッカリン、サッカリンナトリウム、シクラミン酸ナトリウム、キシリトール、マンニトール、ソルビトール、ラクトースおよびスクロースが挙げられる。
【０２８６】
薬学的に許容される緩衝剤の適切な例としては、特に限定されないが、クエン酸、クエン酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、酸化マグネシウム、炭酸カルシウムおよび水酸化マグネシウムが挙げられる。
【０２８７】
薬学的に許容される界面活性剤の適切な例としては、特に限定されないが、ラウリル硫酸ナトリウムおよびポリソルベートが挙げられる。
【０２８８】
このほか、同様の種類の固体組成物をゼラチンカプセル剤の充填剤として使用し得る。この点で好ましい補形剤としては、ラクトース、デンプン、セルロース、乳糖または高分子量ポリエチレングリコールが挙げられる。水性懸濁剤および／またはエリキシル剤には、薬剤と、様々な甘味料または着香剤、着色剤または色素、乳化剤および／または懸濁化剤ならびにエタノール、プロピレングリコールおよびグリセリンなどの希釈剤ならびにその組合せとを組み合わせ得る。
【０２８９】
適応があれば、本開示の化合物を鼻腔内に、または吸入により投与することが可能であり、乾燥粉末吸入器または適切な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＡ  １３４ＡＴ）もしくは１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン（ＨＦＡ  ２２７ＥＡ）などのヒドロフルオロアルカン、二酸化炭素をはじめとする適切なガスを用いた加圧容器、ポンプ、スプレーもしくは噴霧器からのエアロゾルスプレーの形態で送達するのが好都合である。加圧エアゾールの場合、弁を設けることにより投与単位を定めて定量送達し得る。加圧容器、ポンプ、スプレーまたは噴霧器は、例えば、滑沢剤、例えばソルビタントリオレアートをさらに含有し得るエタノールと噴射剤の混合物を溶媒に用いた活性化合物の溶液または懸濁液を含み得る。
【０２９０】
吸入器または吹入器に使用するカプセルおよびカートリッジ（例えばゼラチン製のもの）は、化合物とラクトースまたはデンプンなどの適切な粉末基剤との混合粉末を含有するように製剤化し得る。
【０２９１】
吸入による局所投与には、本開示による化合物をヒト医療または獣医学医療に使用するために噴霧器により送達し得る。
【０２９２】
本開示の医薬組成物は、体積当たり０．０１〜９９重量％の活性物質を含有し得る。例えば、局所投与には、組成物は一般に、０．０１〜１０％、より好ましくは０．０１〜１％の活性物質を含有する。
【０２９３】
化合物はこのほか、小型の一枚膜小胞、大型の一枚膜小胞および多重膜小胞などのリポソーム送達システムの形態で投与することができる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンなどの様々なリン脂質から形成され得る。
【０２９４】
本開示の医薬組成物または単位投与剤形は、特定の患者に最適な活性をもたらすと同時に毒性または副作用を最小限に抑えるべく、上に記載した指針に照らして慣例的な試験を実施することにより定められる用法／用量レジメンに従って投与され得る。しかし、このような治療レジメンの微調整は、本明細書に記載される指針に照らせば慣例的なものである。
【０２９５】
本開示の化合物の用量は、様々な因子、例えば基礎疾患の状態、個体の状態、体重、性別および年齢ならびに投与様式などに応じて異なり得る。障害の治療に有効な量は、当業者に公知の実験的方法により、例えば、用量および投与頻度のマトリックスを確立し、マトリックス内の各点で１群の実験単位または対象を比較することにより容易に決定することができる。患者に投与する正確な量は、障害の状態および重症度ならびに患者の健康状態に応じて異なる。任意の症状またはパラメータの測定可能な緩和は、当業者が決定するか、患者が医師に報告することにより決定することができる。尿路障害の任意の症状またはパラメータの臨床的または統計的に有意な減弱または緩和はいずれも、本開示の範囲内にあることが理解されよう。臨床的に有意な減弱または緩和は、患者および／または医師に認知可能なものを意味する。
【０２９６】
投与する化合物の量の範囲は、約０．０１〜約２５ｍｇ／（ｋｇ・日）、通常約０．１〜約１０ｍｇ／（ｋｇ・日）であり得、０．２〜約５ｍｇ／（ｋｇ・日）の場合が最も多い。本開示の医薬製剤は、必ずしも障害の治療に有効な化合物量全体を含有する必要はなく、したがって、そのような医薬製剤の複数の分割量を投与することによって、有効量に到達させてもよいことが理解されよう。
【０２９７】
本開示の好ましい実施形態では、化合物Ｉを、本開示の化合物を通常１０〜２００ｍｇ含有するカプセル剤または錠剤に製剤化し、好ましくは、総１日量１０〜３００ｍｇ、好ましくは２０〜１５０ｍｇ、最も好ましくは約５０ｍｇで患者に投与する。
【０２９８】
非経口投与用の医薬組成物は、医薬組成物全体である１００重量％に基づき、本開示の活性化合物を約０．０１重量％〜約１００重量％含有する。
【０２９９】
経皮剤形は一般に、剤形の総重量である１００％に対して約０．０１％〜約１００％の活性化合物を含有する。
【０３００】
医薬組成物または単位投与剤形は、単一の１日量で投与しても、あるいは総１日量を分割量で投与してもよい。さらに、障害を治療するための別の化合物との同時投与または連続投与が望ましい場合もあり得る。この目的には、有効成分を組み合わせて単一の投与単位に製剤化する。
【０３０１】
化合物の合成
式ＩおよびＩＩの化合物ならびにその鏡像異性体、ジアステレオマー、Ｎ−オキシドおよび薬学的に許容される塩は、例えば国際公開第２０１３／０２９０５７号（参照により本明細書に組み込まれる）に概説されている、あるいは本明細書でのちに記載する一般的方法により調製され得るものであり、前記方法は本開示のさらなる態様を構成する。
【０３０２】
当業者には、化合物の調製に使用する中間体の保護誘導体を用いるのが望ましい場合もあることが理解されよう。官能基の保護および脱保護は、当該技術分野で公知の方法により実施され得る（例えば、ＧｒｅｅｎおよびＷｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９を参照されたい）。ヒドロキシ基またはアミノ基は、任意のヒドロキシ保護基またはアミノ保護基で保護され得る。アミノ保護基は従来の技術により除去され得る。例えば、アルカノイル基、アルコキシカルボニル基およびアロイル基などのアシル基は、加溶媒分解、例えば、酸性または塩基性条件下での加水分解により除去され得る。アリールメトキシカルボニル基（例えば、ベンジルオキシカルボニル）は、パラジウム／チャコールなどの触媒の存在下での水素化分解により切断され得る。
【０３０３】
目的化合物の合成は、当業者に周知の標準的技術を用いて、最後から２番目の中間体に存在し得る任意の保護基を除去することにより完了する。次いで、必要に応じて、シリカゲルでのシリカゲルクロマトグラフィー、ＨＰＬＣなどの標準的技術を用いて、あるいは再結晶により、脱保護最終産物を精製する。
【実施例】
【０３０４】
実施例および合成例
実施例１および２では、本明細書に記載される実験などの実験に使用し得るＡベータオリゴマー調製物について説明する。膜輸送アッセイおよびオリゴマー結合／シナプス減少アッセイのほか、のちに記載するｉｎ  ｖｉｖｏアッセイに使用する特定の調製物については、それが関係する実施例でそれぞれ説明する。
【０３０５】
実施例１：アミロイドβオリゴマーの調製
【０３０６】
水溶性タンパク質が会合し得る環境である神経組織でアミロイドβがオリゴマー化し得る条件を再現して、アミロイドβのオリゴマーおよび線維のうち、より疾患と関係の深い構造的状態を特定した。超遠心分離によりラット脳から水溶性タンパク質を調製した。具体的には、脳組織１グラム当たり５体積のＴＢＳ緩衝液（２０ｍＭトリス−ＨＣＬ、ｐＨ７．５、３４ｍＭ  ＮａＣｌおよび完全プロテアーゼインヒビターカクテル（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ社）を氷上のラット脳組織に加えた。次いで、密にフィットする乳棒でダウンスホモジナイゼーションを実施した。次いで、ホモジナイズした脳組織を４℃、１５０，０００×ｇで１時間遠心分離した（４０，０００ｒｐｍ  Ｔｙ６５）。次いで、下澄み（浮遊ミエリンとペレット上方０．５ｃｍとの間）を取り出し、アリコートを−７５℃で凍結させた。次いで、ペレットをＴＢＳに再懸濁させて元の体積にし、アリコートで−７５℃で凍結させた。この混合物に合成単量体ヒトアミロイドβ１〜４２を加えて、最終濃度１．５μＭのアミロイドβを得、溶液を４℃で２４時間インキュベートした。混合物を５，８００ｇで１０分間遠心分離して線維集合体を除去した後、６Ｅ１０コンジュゲートアガローススピンカラム（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社）を用いて、４℃で免疫沈降を２４時間実施した。次いで、溶出したアミロイドβオリゴマーをＭＡＬＤＩ−Ｔｏｆ質量分光分析に供して、試料の内容物を同定した。
【０３０７】
タンパク質含有溶液中でアミロイドβが自己会合して、２２，５９９Ｄａの５サブユニット五量体と３１，９５０Ｄａの７サブユニット７量体のサブユニット集合体を形成した。４９，２９１Ｄａにみられる別のピークは１２サブユニット１２量体を表している可能性があるが、これはアミロイドβ１２量体の正確な分子量ではないように思われる。アミロイドβのモノマーおよび二量体を表すと思われる４５１８Ｄａ、９０３６Ｄａのいずれにもピークが観察されなかったのは注目すべきことである。しかし、９，８８２Ｄａおよび１４，７３１Ｄａのピークが７８６Ｄａ（または２×３９３Ｄａ）の脂質またはタンパク質と会合したアミロイドβ二量体および３×３９３Ｄａの脂質またはタンパク質と会合したアミロイドβ三量体をそれぞれ表すものと考えられる。さらに、１９，６８６Ｄａにピークが存在することは、集合体の状態には、推測ではあるが、三量体複合体および４９５４Ｄａのラットアミロイドβフラグメントが含まれていることを示している。したがって、上記のデータは、小型の脂質またはタンパク質とアミロイドβの二量体および三量体とが会合し、それが生理学的システムに固有の立体配座状態の組立てを指令し得ることを反映するものと思われる。
【０３０８】
実施例２：ベータ−アミロイドオリゴマーの調製
ラット脳可溶性タンパク質と混合した１．５μＭの単量体ヒトアミロイドβ１〜４２Ａの溶液を実施例１に記載した通りに４℃で２４時間インキュベートした。次いで、この溶液をトリ−フルオロエタノール（ＴＦＥ）で処理した後、スペクトルを取得した。ＴＦＥ中では、集合したタンパク質構造および非共有結合タンパク質複合体が変性タンパク質に解離し、集合したオリゴマーによるピークが消失することが予想される。実施例１で観察されたタンパク質のピークの大部分が、上で確認された９８２２Ｄａ、１４，７３１Ｄａ、３１，９５０Ｄａおよび４９，２９１Ｄａのピークを含め消失した。しかし、アミロイドβモノマーのピークを表す４５１８Ｄａに大量のピークが観察される。４９５４．７にアミロイドβ１〜４６とほぼ同じ長いａベータフラグメントを表していると思われるピークが明らかである。実施例１に記載した調製物中に存在しなかった別のピークが７０８６Ｄａに観察され、これは２５５０Ｄａの共有結合タンパク質と会合したアミロイドβモノマーを表すものと思われる。
【０３０９】
実施例３：ヒトＡＤ脳組織からのベータ−アミロイドオリゴマーの単離。
ＴＢＳ可溶性抽出物：組織病理学的分析によりブラークステージＶ／ＶＩのアルツハイマー病（ＡＤ）であることが特徴付けられたヒト患者の死後脳組織の試料を病院の脳組織バンクから入手した。年齢と性別がマッチするＡＤ組織および正常組織の標本を、１ｍＭ  ＥＤＴＡおよび１ｍｇ／ｍｌ完全プロテアーゼインヒビターカクテル（Ｓｉｇｍａ社、Ｐ８３４０）を含有する２０ｍＭトリス−ＨＣｌ、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．６で０．１５ｇｍ組織／ｍｌに希釈し、ホモジナイズした。Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｏｐｔｉｍａ  ＸＬ−８０Ｋ  Ｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅで組織ホモジネートの超遠心分離を１０５，０００ｇで１時間実施した。プロテインＡおよびタンパク質−Ｇアガロースカラム（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社）を用いて、得られたＴＢＳ可溶性画分を免疫枯渇させ、次いで、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ  ３ｋＤａ、１０ｋＤａおよび１００ｋＤａ  ＮＭＷＣＯフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）でサイズ分画した。
【０３１０】
免疫沈降：サイズ分画し免疫枯渇させたＴＢＳ可溶性抽出物をしかるべきＮＭＷＣＯ  Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａフィルターで約２００μｌに濃縮した。濃縮したＴＢＳ可溶性抽出物をＴＢＳ試料緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社）で最大４００μｌに希釈し、５，８００ｇで１０分間遠心分離して線維を除去した。次いで、得られた上清を、６Ｅ１０コンジュゲートアガロースビーズを用いて４℃で一晩免疫沈降させた後、高浸透圧Ｇｅｎｔｌｅ  ｅｌｕｔｉｏｎ  ｂｕｆｆｅｒ（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社）を用いた抗原溶出によりＡベータを含有するタンパク質種を単離した。
【０３１１】
ＭＡＬＤＩ−質量分析：免疫単離したベータアミロイドを、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（ＡＢＩ）Ｖｏｙａｇｅｒ  ＤＥ−Ｐｒｏ  ＭＡＬＤＩ−Ｔｏｆ機器を用いた質量分光分析に供した。分析する標的分子量範囲に応じてα−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸（ＣＨＣＡ）、シナピン酸（ＳＡ）または６−アザ−２−チオチミン（ＡＴＴ）などの様々な種類の基質を用いて試料を分析した。機器は可変抽出遅延とともに線形陽イオンモードで稼働させた。非積算スペクトルは１取得当たり１００ショットの「ホットスポット」を示したのに対し、積算スペクトルは、１取得当たり２００のレーザーショットで各スポットの１２の別個の領域によって表された。
【０３１２】
データ解析：Ｖｏｙａｇｅｒ社のＤａｔａ  Ｅｘｐｌｏｒｅｒソフトウェアパッケージを用いてデータの収集および解析を実施した。標準的な質量スペクトルの処理には、シグナル／ノイズ比のバリエーションに加え、スペクトル平滑化およびベースライン差引き機能を含めた。
【０３１３】
Ａｂ定量化のためのＥＬＩＳＡ：改変サンドイッチＥＬＩＳＡ法を用いて、免疫沈降させたＴＢＳ可溶性画分の「総」ＡベータおよびＡベータオリゴマーの両方の濃度を分析した。簡潔に述べれば、６Ｅ１０および４Ｇ８でコートしたＮｕｎｃ  ＭａｘｉＳｏｒｐ  ９６ウェルプレートをＡベータ含有試料とインキュベートした後、ビオチン化４Ｇ８検出抗体でプローブした。ストレプトアビジン−ＨＲＰ（Ｒｏｃｋｌａｎｄ社）とインキュベートした後、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質で発色させて、ＢｉｏＴＥｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  ＨＴプレートリーダーでａベータの比色検出（ＯＤ４５０）を可能にした。単量体Ａベータ１〜４２を標準曲線の作成に使用し、ＧＥＮ５ソフトウェアとともに免疫沈降試料のＡベータレベルの定量化を可能にした。
【０３１４】
実施例４：受容体結合アッセイ
特定の化合物について、そのアゴニストまたはアンタゴニストの結合または作用を遮断することにより、数種類の受容体との相互作用を試験する。一部の化合物については、既知の細胞受容体またはシグナル伝達タンパク質と直接相互作用するかどうかを確認するべく試験する。細胞系に過剰発現するか、組織から単離された所与のヒト受容体の既知のアゴニストまたはアンタゴニストの結合と置き換わる能力について化合物を試験することができる。このほか、所与のヒト受容体のアゴニストまたはアンタゴニストによって誘導される下流シグナル伝達を遮断する能力について化合物を試験することができる。１００種類の既知の受容体における化合物の作用を試験することが可能であり、ＣＮＳ関連受容体の小さいサブセットのみに特異的活性が起こるのが望ましい。他の受容体と比較してシグマ−２受容体と最も高い親和性で結合する化合物をシグマ−２受容体選択的リガンドと呼ぶ。
【０３１５】
同じプロトコルを用いて、表２に膜輸送のデータが記載されている一部の化合物についてシグマ−２受容体の認識を試験した。特定の好ましい式Ｉの化合物が選択的シグマ−２受容体リガンドである、すなわち、シグマ−２受容体と優先的に結合する。
【０３１６】
競合的放射性リガンド結合アッセイ。
シグマ−１受容体およびシグマ−２受容体の放射性リガンド結合アッセイを商業的開発業務受託機関で実施した。シグマ−１結合には、１００μＭ〜１ｎＭの様々な濃度の被験化合物を用いて、Ｊｕｒｋａｔ細胞膜上の内在性受容体から８ｎＭ［３Ｈ］（＋）ペンタゾシンに置き換えた（Ｇａｎａｐａｔｈｙ  ＭＥら，１９９１，Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２８９：２５１−２６０）。１０μＭハロペリドールを用いて非特異的結合を明らかにした。シグマ−２受容体には、１００μＭ〜１ｎＭの様々な濃度の被験化合物を用いて、シグマ−１受容体を覆う３００ｎＭ（＋）ペンタゾシンの存在下、ラット大脳皮質由来の膜上の内在性受容体から５ｎＭ［３Ｈ］１，３−Ｄｉ−（２−トリル）グアニジンに置き換えた（Ｂｏｗｅｎ  ＷＤら，１９９３，Ｍｏｌ．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍｃｏｌ  ３：１１７−１２６）。１０μＭハロペリドールを用いて非特異的結合を明らかにした。Ｂｒａｎｄｅｌ  １２Ｒ細胞回収機を用いてＷｈａｔｍａｎ  ＧＦ／Ｃフィルターで急速ろ過することにより反応を停止させた後、氷冷緩衝液で２回洗浄した。液体シンチレーション分析器（Ｔｒｉ−Ｃａｒｂ  ２９００ＴＲ；ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を用いて、乾燥させたフィルターディスクの放射活性を測定した。置換曲線をプロットし、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ社、サンディエゴ、カリフォルニア州）を用いて、受容体サブタイプに対する被験リガンドのＫｉ値を求めた。全結合（壊変毎分）と非特異的結合（壊変毎分）の間の差を全結合（壊変毎分）で除することにより、パーセント特異的結合を求めた。
【０３１７】
シグマ−１受容体およびシグマ−２受容体に対する親和性は通常、脳組織ホモジネートにシグマ−１受容体からの置き換えを測定する［３Ｈ］（＋）ペンタゾシンおよび３００ｎＭ（＋）ペンタゾシンの存在下でシグマ−２受容体の置き換えを測定する［３Ｈ］１，３−Ｄｉ−（２−トリル）グアニジンを用いた、公開されている研究から得られる。
【０３１８】
競合的放射性リガンド結合アッセイ２。
ほかにも、様々な既知の標識シグマ−２リガンドまたはシグマ−１リガンドの置き換えにより、シグマ−２リガンド候補化合物のシグマ−１受容体およびシグマ−２受容体における親和性を求めた。既に公開されている手順に従ってろ過アッセイを実施した（Ｘｕら，２００５）。被験化合物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはエタノールに溶かした後、１５０ｍＭ  ＮａＣｌおよび１００ｍＭ  ＥＤＴＡを含有する５０ｍＭトリス−ＨＣｌ  ｐＨ７．４緩衝液で希釈した。シグマ−１の結合アッセイにはモルモットの脳から、シグマ−２の結合アッセイにはラットの肝臓から膜ホモジネートを作製した。膜ホモジネートを５０ｍＭトリス−ＨＣｌ緩衝液、ｐＨ８．０で希釈し、９６ウェルプレート中、総体積１５０μＬで０．１ｎＭ〜１０μＭの範囲の濃度の放射性リガンドおよび被験化合物と２５℃でインキュベートした。インキュベーション終了後、９６チャネルのトランスファーピペット（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、ピッツバーグ、ペンシルベニア州）を用いて氷冷洗浄緩衝液（１０ｍＭトリスＨＣｌ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．４）１５０μＬを加えることにより反応を停止させ、試料を回収し、５０ｍＭトリス−ＨＣｌ緩衝液１００μＬで予浸した９６ウェルガラス繊維フィルタープレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社、ビレリカ、マサチューセッツ州）で急速にろ過した。各フィルターを氷冷洗浄緩衝液（１０ｍＭトリス−ＨＣｌ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．４）２００μＬで４回洗浄した。Ｗａｌｌａｃ  １４５０  ＭｉｃｒｏＢｅｔａ  液体シンチレーションカウンター（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ社、ボストン、マサチューセッツ州）を用いて結合放射活性を定量化した。
【０３１９】
モルモット脳膜ホモジネート（約３００μｇのタンパク質）および約５ｎＭ［３Ｈ］（＋）−ペンタゾシン（３４．９Ｃｉ／ｍｍｏｌ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ社、ボストン、マサチューセッツ州）を用いてシグマ−１受容体結合アッセイを実施し、インキュベーション時間を室温で９０分とした。１０μＭの非放射性ハロペリドールを含有する試料から非特異的結合を求めた。
【０３２０】
シグマ−１部位を遮断する１μＭの（＋）−ペンタゾシン存在下でラット肝臓膜ホモジネート（約３００μｇのタンパク質）および約２ｎＭのシグマ−２高選択的放射性リガンド［３Ｈ］ＲＨＭ−１単独（他の遮断剤を加えない）（Ａｍｅｒｉｃａ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社、セントルイス、ミズーリ州）、約１０ｎＭの［３Ｈ］ＤＴＧ（５８．１Ｃｉ／ｍｍｏｌ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ社、ボストン、マサチューセッツ州）または約１０ｎＭの［３Ｈ］ハロペリドール（Ａｍｅｒｉｃａ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社、セントルイス、ミズーリ州）を用いてシグマ−２受容体結合アッセイを実施し、インキュベーション時間は室温で、［３Ｈ］ＲＨＭ−１を６分、［３Ｈ］ＤＴＧおよび［３Ｈ］ハロペリドールを１２０分とした。１０μＭの非放射性ハロペリドールを含有する試料から非特異的結合を明らかにした。
【０３２１】
競合阻害実験から得られたデータを非線形回帰分析を用いてモデル化し、放射性リガンドの特異的結合を５０％阻害する阻害剤の濃度（ＩＣ５０値）を求めた。ＣｈｅｎｇおよびＰｒｕｓｏｆｆの方法を用いて、結合親和性であるＫｉ値を算出した。モルモット脳の［３Ｈ］（＋）−ペンタゾシンのＫｄ値は７．８９ｎＭであり、ラット肝臓の［３Ｈ］ＲＨＭ−１および［３Ｈ］ＤＴＧはそれぞれ０．６６ｎＭおよび３０．７３ｎＭであった。精度確認には標準化合物のハロペリドールを用いた。実施例１〜１１８の例示的化合物のシグマ−２受容体における親和性を表２示す。
【０３２２】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される式Ｉおよび／または式ＩＩによるイソインドリン化合物またはその薬学的に許容される塩は、本明細書に提供されるシグマ−２受容体結合アッセイプロトコルに従って試験した場合、１，０００ｎＭ以下、７５０ｎＭ以下、５００ｎＭ以下、２５０ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、２５ｎＭ以下または１０ｎＭ以下のシグマ−２受容体結合親和性Ｋｉを示す。
【０３２３】
実施例５：トランスジェニックマウスの記憶喪失：モーリス水泳試験
選択した化合物について、加齢とともにオリゴマーが蓄積した老齢のアルツハイマー病トランスジェニックマウスモデルにみられる記憶喪失を正常に戻すことができるかどうかを判定する試験を実施した。この試験には、マウスＴｈｙ−１プロモーターの制御下でヒトＡＰＰ７５１のスウェーデン変異（６７０／６７１）およびロンドン変異（７１７）を発現するｈＡＰＰマウスを選択した。これらのマウスは、Ａベータの量の加齢依存性の増大を示すものであり、３〜６か月齢で斑が発現しはじめ、８か月齢までに確立された認知障害を示す。この試験では、不良が起こるのを予防するのではなく、既に確立された不良を治療した。これらの試験は、事前に実験条件を知らされていない科学者による役務提供委託により実施した。８か月齢の雌マウスに被験化合物０．５ｍｇ／（ｋｇ・日）および０．１ｍｇ／（ｋｇ・日）を皮下ミニポンプで１か月間注入し、海馬による空間学習および記憶の試験であるモーリス水迷路で認知能力を試験する。このマウスモデルはニューロン消失を示さないため、記憶の回復はアポトーシスの回避に起因することは考えられない。
【０３２４】
運動能力または動機が欠乏していたかどうかを判定するため、モーリス測定の一部として遊泳速度を分析する。溶媒は５％ＤＭＳＯ／５％Ｓｏｌｕｔｏｌと９０％生理食塩水の混合物とする。トランスジェニック動物を低用量（例えば、０．１ｍｇ／（ｋｇ・日））および高用量（例えば、０．５ｍｇ／（ｋｇ・日））の化合物で治療する。１日３回、４日間連続で実施した試行の平均値を求める。通常、試験の過程で有意な運動障害も異常行動も観察されることはなく、この年齢で予測される死亡率レベルを下回る。さらに、化合物の血漿中レベルをモニターするために定期的に採血した前哨群の動物を維持する。
【０３２５】
モーリス水迷路試験の逃避潜時の測定値を採用する。通常、試験２日目に野生型動物とトランスジェニック動物との間に有意差が認められ、野生型動物の方がトランスジェニックよりも学習速度が速い。通常、この日に高い方の用量の化合物でトランスジェニック動物の能力に溶媒と比較して有意な改善が認めらる場合、高い方の用量、例えば０．５ｍｇ／（ｋｇ・日）で投与した化合物がＡＤのトランスジェニックモデルの認知能力を改善することができるという結論が下される。
【０３２６】
通常、Ａベータ４２オリゴマーはシナプス数を約１８％減少させ；好ましい被験化合物により、この消失を１００％打ち消すことができる。これ以外のシグマ−２受容体アンタゴニストもシナプス消失を阻止する。既知の先行技術のシグマ−２受容体リガンドであるＮＥ−１００およびハロペリドールはシナプス消失を完全に打ち消したのに対し、選択的シグマ１リガンドであるＳＭ−２１は、シナプス消失を打ち消す活性がわずかに認められるにとどまった（２０％の回復）。
【０３２７】
ほかにも、同様のアッセイを用いて被験化合物を試験することができる。例えば、９か月齢の雄ｈＡＰＰＳＬトランスジェニックマウス（例えば、Ｎ＝８）または非トランスジェニック同腹子（例えば、Ｎ＝６）に、化合物（例えば、１ｍｇ／（ｋｇ・日）、Ｎ＝８または１０ｍｇ／（ｋｇ・日）、Ｎ＝８）または溶媒（５％ＤＭＳＯ／５％Ｓｏｌｕｔｏｌ／９０％生理食塩水、Ｎ＝１５）を２０日間、皮下投与（Ａｌｚｅｔミニポンプ）により全身投与し、モーリス水迷路でこれらのマウスの空間学習および記憶を評価することができる。治療の最後の４日間、１日３回の試行でマウスに隠されたプラットフォームを見つけさせる試験を実施する。コンピュータ化した追跡システムで逃避潜時または遊泳距離を自動で定量化する。
【０３２８】
試験のいずれの日にも、トランスジェニック動物と非トランスジェニック動物の能力に有意な差は認められない（解析はこの２群に限定する；反復測定法による二次元（遺伝子型および時間）ＡＮＯＶＡ、次いでボンフェローニの事後検定を実施する）。同様の解析で、トランスジェニック群（治療法および時間）に限定し、トランスジェニック動物を１０ｍｇ／（ｋｇ・日）の被験化合物で治療する場合、試験の１日目に、例えばスチューデントのｔ検定で解析すると、被験化合物で治療した動物の方が溶媒で治療したトランスジェニック動物よりも有意に優れた成績を示すことが予想される。被験化合物で治療した動物は、試験期間にわたって、溶媒での治療と比較してトランスジェニック動物の能力の改善を示すことが予想される。
【０３２９】
成功を収めた被験化合物は、老齢トランスジェニック動物の学習および記憶において、確立された行動欠陥を用量依存性に正常に戻すことができる。
【０３３０】
実施例６：膜輸送アッセイにおける神経細胞に対するＡベータオリゴマー作用の阻害
本明細書に提供されるシグマ−２リガンドが細胞に対するアミロイドベータ作用を阻害することができるかどうかを試験した。シグマ−２リガンドは全般的に、膜輸送／エキソサイトーシスアッセイ（ＭＴＴアッセイ）による測定でアミロイドベータ作用を阻害することが可能であった。その結果を表２に示す。このアッセイの理論的根拠は以下の通りである：
【０３３１】
初期段階のアルツハイマー病では、広範囲に及ばない細胞死ではなく、シナプスおよび記憶の欠損が優勢であることから、このような変化を測定するアッセイは、オリゴマー活性の小分子阻害剤を発見するのに特によく適している。ＭＴＴアッセイは、培養物における毒性の尺度として用いられることが多い。黄色のテトラゾリウム塩がエンドサイトーシスによって細胞に取り込まれ、エンドソーム経路で不溶性の紫色のホルマザンに還元される。紫色のホルマザンのレベルは、培養物中の代謝が活発な細胞の数を反映し、ホルマザン量の減少は、培養物の細胞死または代謝毒性の尺度であると考えられる。顕微鏡で観察すると、最初に、細胞を満たす細胞内小胞内に紫色のホルマザンが見える。時間の経過とともに、エキソサイトーシスにより小胞が放出され、不溶性ホルマザンが水性培地環境に曝露されると、細胞膜の外表面にホルマザンが針状結晶として沈殿する。ＬｉｕおよびＳｃｈｕｂｅｒｔ（１９９７）は、細胞が還元ホルマザンのエキソサイトーシスの速度を選択的に速めると同時に、エンドサイトーシスの速度には影響を及ぼさないでおくことにより、致死量下レベルのＡベータオリゴマーに応答することを発見した。本発明者らは、これらの観察結果を成熟した初代培養ニューロンで再現し、自動化した顕微鏡観察および画像処理により、上記の形態学的変化を定量化した。このような状況下では、還元ホルマザンの総量に全体的な変化はみられず、その形成および／または細胞からの排出の速度の変化を反映する形態の変化のみがみられる。本発明者らは、このアッセイが細胞死を引き起こさない低レベルのオリゴマーに対して感度が高いというそれまでの観察結果（ＬｉｕおよびＳｃｈｕｂｅｒｔ，２００４、Ｈｏｎｇら，２００７）を確認した。実際、ＬＴＰの阻害を引き起こす程度のオリゴマーでは細胞死を引き起こすことはなく（Ｔｏｎｇら，２００４）、培養物（または脳スライス）中のホルマザンの総量が変化しないことが予想される。
【０３３２】
他の研究者によって提出された証拠から、膜輸送が仲介するニューロン表面受容体発現がＡベータオリゴマーの仲介により減少することが、シナプス可塑性（ＬＴＰ）、ひいては学習および記憶の電気生理学的手段のオリゴマー阻害の根底にあることが示唆される（Ｋａｍｅｎｅｔｚら，２００３、Ｈｓｅｉｈら，２００６）。げっ歯類のＡベータの脳中レベルをｉｎ  ｖｉｖｏで低下させる（Ｈｏｎｇら，２００９）Ａベータオリゴマー遮断薬を発見するべく、オリゴマーが引き起こす膜輸送速度の変化をホルマザンの形態学的変化により測定することが細胞系に用いられている（Ｍａｅｚａｗａら，２００６、ＬｉｕおよびＳｃｈｕｂｅｒｔ，１９９７、２００４、２００６、Ｒａｎａら，２００９、Ｈｏｎｇら，２００８）。エキソサイトーシスアッセイ／ＭＴＴアッセイについても同様の方法を文献にみることができる。例えば、Ｌｉｕ  Ｙ，ら，Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２００４  Ｎｏｖ；９１（３）：６４８−５６；Ｌｉｕ  Ｙ，およびＳｃｈｕｂｅｒｔ  Ｄ．，“Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ３−（４，５−ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ−２−ｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ  ｂｒｏｍｉｄｅ（ＭＴＴ）ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｅｎｈａｎｃｉｎｇ  ＭＴＴ  ｆｏｒｍａｚａｎ  ｅｘｏｃｙｔｏｓｉｓ．”  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．１９９７  Ｄｅｃ；６９（６）：２２８５−９３；ならびにＬｉｕ  Ｙ，およびＳｃｈｕｂｅｒｔ  Ｄ．，“Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｂｙ  ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅ”  Ｃｕｒｒ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｒｅｓ．２００６  Ａｐｒ；３（２）：１２９−３５を参照されたい。したがって、この方法は妥当なものである。
【０３３３】
このエキソサイトーシスアッセイをｉｎ  ｖｉｔｒｏで３週間成長させた成熟初代ニューロン培養物での使用に適合させた。国際公開第２０１１／１０６７８５号（全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ  ＶＴＩ自動顕微鏡観察システムを用いた画像処理による測定では、Ａベータオリゴマーは、還元された紫色のホルマザンで満たされた細胞内小胞（点）の量を用量依存性に減少させる。溶媒のみに曝露した培養神経細胞の顕微鏡写真にはホルマザンで満たされた小胞が見られ；溶媒＋Ａベータオリゴマーに曝露した神経細胞の顕微鏡写真は、ホルマザンで満たされた小胞はかなり少なく、代わりに、エキソサイトーシスで排出され細胞外の環境に接すると沈殿して結晶になるホルマザンが見られる。Ａベータオリゴマーの量が増大すると、最終的には明らかな毒性をもたらす。したがって、アッセイに用いる向神経活性Ａベータオリゴマーの濃度は、細胞死を引き起こす濃度よりもはるかに低い。本発明者らは、抗Ａベータ抗体の添加によりＡベータオリゴマーの作用が阻止されるが、抗体単独ではそれ自体に作用はないことを示すことによって、このアッセイが有効であることを確認した（データ不掲載）。アッセイをこのように設計すると、化合物の作用がオリゴマーの崩壊によるものであるか、オリゴマーとニューロンとの結合の阻害によるものであるか、オリゴマー結合によって惹起される作用のシグナル伝達機序に対する拮抗作用であるかに関係なく、Ａベータオリゴマーの非致死性作用を阻害する化合物を検出することが可能となる。
【０３３４】
膜輸送／エキソサイトーシス（ＭＴＴ）アッセイで結果を得るために用いた方法は以下の通りである。
【０３３５】
ＮＢ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）の入った３８４ウェルプレートにＥ１８  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット胎仔由来の初代海馬ニューロンを至適濃度で播いた。培養物に週２回、Ｎ２添加ＮＢ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を供給しながら３週間、ニューロンを維持した。このニューロンは、成熟脳のニューロンに特徴的なシナプスタンパク質を完全に発現し、活性依存性の電気シグナル伝達の複雑なネットワークを示す。このような培養物のニューロンおよびグリアは、インタクトの脳回路網との優れた整合を示す分子シグナル伝達ネットワークを有し、このため、学習および記憶のモデルシステムとして２０年以上用いられてきた（例えば、Ｋａｅｃｈ  Ｓ，Ｂａｎｋｅｒ  Ｇ．Ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｎｅｕｒｏｎｓ．Ｎａｔ  Ｐｒｏｔｏｃ．２００６；１（５）：２４０６−１５．Ｅｐｕｂ  ２００７  Ｊａｎ  １１を参照されたい；このほか、Ｃｒａｉｇ  ＡＭ，Ｇｒａｆ  ＥＲ，Ｌｉｎｈｏｆｆ  ＭＷ．Ｈｏｗ  ｔｏ  ｂｕｉｌｄ  ａ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｓｙｎａｐｓｅ：ｃｌｕｅｓ  ｆｒｏｍ  ｃｅｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｔｒｅｎｄｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００６  Ｊａｎ；２９（１）：８−２０．Ｅｐｕｂ  ２００５  Ｄｅｃ  ７．Ｒｅｖｉｅｗを参照されたい）。
【０３３６】
細胞に１００μＭ〜０．００１ｎＭの範囲の濃度の被験化合物を加え、次いで溶媒またはＡベータオリゴマー調製物（総Ａベータタンパク質濃度３μＭ）を加え、５％ＣＯ２、３７℃で１〜２４時間インキュベートした。ＭＴＴ試薬である（３−（４，５−ジメチルチザオール（ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉｚａｏｌ）−２イル）−２，５ジフェニルテトラゾリウムブロミド）（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ社）をリン酸緩衝生理食塩水で５ｍｇ／ｍＬに再構成した。各ウェルにＭＴＴ標識試薬１０μＬを加え、３７℃で１時間インキュベートした後、撮像した。自動化された顕微鏡観察および画像処理でエンドサイトーシスおよびエキソサイトーシスを受けたホルマザンの量を定量化することにより、エキソサイトーシスを評価した。
【０３３７】
各アッセイプレートは、各プレートでＡベータオリゴマーを加えた場合と加えなかった場合で化合物を試験できるように設定した。この設計により、毒性のある化合物または代謝活性のある化合物がスクリーニングカスケードの早い段階で（一次スクリーニングのレベルで）除去される。最初に、細胞内小胞内に還元ホルマザンが見えた。Ａベータオリゴマーにより最終的なホルマザンエキソサイトーシスが促進された。図１Ａおよび１Ｂはニューロンの顕微鏡写真の例であり、１枚目がホルマザンが最初に見られた細胞内小胞の写真、２枚目がエキソサイトーシスによって排出された不溶性の紫色の色素で覆われたニューロンの写真である。色素は培養物の水性環境中で沈殿し、ニューロン表面に針状結晶を形成した。
【０３３８】
有効濃度の活性な被験化合物の存在下では、膜輸送の変化が阻止され、細胞を溶媒処置ニューロンと区別できなくなる。さらに、いくつかの場合には、この被験化合物の作用は、細胞をＡベータオリゴマーに曝露する前に被験化合物を加えるのか、曝露した後に被験化合物を加えるのかとは無関係であるように思われ、治療効果だけでなく、予防効果もあることを示している。濃度な十分の活性な被験化合物であれば、このアッセイでみられるＡベータオリゴマーの膜輸送作用を阻止する。選択的高親和性シグマ−２受容体アンタゴニスト化合物の投与量を増大させると、オリゴマーの作用が停止し、培養物が溶媒処置培養物にさらに類似してくる。
【０３３９】
以上の結果に基づけば、Ａベータオリゴマー毒性の抑制に有効な本明細書に開示される選択的高親和性シグマ−２受容体アンタゴニスト化合物は、アミロイドベータオリゴマー毒性による認知低下、例えばアルツハイマー病にみられる認知低下などの治療法および（極めて初期の段階において）予防法として有望なものである。
【０３４０】
膜輸送アッセイで合成Ａベータオリゴマーを投与したところ、８２０ｎＭのＥＣ５０を示した。各濃度のＡベータを数種類の濃度の各選択的高親和性シグマ−２受容体アンタゴニスト被験化合物に対して試験した。活性化合物により、ＥＣ５０が右方向にほぼ２桁分遷移した。データを古典的な線形モデルおよび非線形モデルにフィットさせたところ、シルド解析で直線となり（ヒル勾配ｎＨが１）、このことから、シグマ−２受容体化合物が、膜輸送を仲介する標的に対してオリゴマーと化合物との間で真の薬理学的競合を示すことがわかる。
【０３４１】
アルツハイマー病患者の脳に由来するＡベータオリゴマーを被験化合物に対して投与することが可能であり、化合物への曝露により右側への遷移がみられることも予想される。特に有効量では、活性な被験化合物は合成オリゴマーおよびヒトアルツハイマー病患者由来オリゴマーの両方と薬理学的競合を示す。選択的高親和性シグマ−２受容体アンタゴニスト化合物候補薬物は、Ａベータオリゴマーのシナプス毒性を低下させるのに有効である。理論に束縛されるものではないが、考えられる作用機序で最も単純なものは、シグマ−２受容体化合物が競合的受容体アンタゴニストとして作用するというものである。
【０３４２】
実験対照：
公開されている方法に従って作製した陽性対照のＡベータ１〜４２オリゴマー［例えば、Ｄａｈｌｇｒｅｎら，“Ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ａｎｄ  ｆｉｂｒｉｌｌａｒ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｏｆ  ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ａｆｆｅｃｔ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ”  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２００２  Ａｕｇ  ３０；２７７（３５）：３２０４６−５３．Ｅｐｕｂ  ２００２  Ｊｕｎ  １０．；ＬｅＶｉｎｅ  Ｈ  ３ｒｄ．“Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｂｅｔａ−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｏｌｉｇｏｍｅｒ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｔ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ”    Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００４  Ｄｅｃ  １；３３５（１）：８１−９０；Ｓｈｒｅｓｔｈａら，”Ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｄｖｅｒｓｅｌｙ  ａｆｆｅｃｔｓ  ｓｐｉｎｅ  ｎｕｍｂｅｒ  ａｎｄ  ｍｏｔｉｌｉｔｙ  ｉｎ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｎｅｕｒｏｎｓ”  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００６  Ｎｏｖ；３３（３）：２７４−８２．Ｅｐｕｂ  ２００６  Ｓｅｐ  ８；Ｐｕｚｚｏら，“Ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ／ｃＧＭＰ／ｃＡＭＰ−ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｅｌｅｍｅｎｔ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐａｔｈｗａｙ  ｄｕｒｉｎｇ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ”  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００５  Ｊｕｌ  ２０；２５（２９）：６８８７−９７；Ｂａｒｇｈｏｒｎら，“Ｇｌｏｂｕｌａｒ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｏｌｉｇｏｍｅｒ−ａ  ｈｏｍｏｇｅｎｏｕｓ  ａｎｄ  ｓｔａｂｌｅ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ”  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２００５  Ｎｏｖ；９５（３）：８３４−４７．Ｅｐｕｂ  ２００５  Ａｕｇ  ３１；Ｊｏｈａｎｓｓｏｎら，Ｐｈｙｓｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  Ａ  ｂｅｔａ  １−４２  Ａｒｃｔｉｃ  ａｎｄ  Ａ  ｂｅｔａ  １−４２ｗｔ．ＦＥＢＳ  Ｊ．２００６  Ｊｕｎ；２  ７３（１２）：２６１８−３０を参照されたい］および脳由来Ａベータオリゴマー（例えば、Ｗａｌｓｈら，Ｎａｔｕｒａｌｌｙ  ｓｅｃｒｅｔｅｄ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ  ｏｆ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｏｔｅｎｔｌｙ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｎａｔｕｒｅ（２００２）．４１６，５３５−５３９；Ｌｅｓｎｅら，Ａ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｓｓｅｍｂｌｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｂｒａｉｎ  ｉｍｐａｉｒｓ  ｍｅｍｏｒｙ．Ｎａｔｕｒｅ．２００６  Ｍａｒ  １６；４４０（７０８２）：３５２−７；Ｓｈａｎｋａｒら，Ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄｉｍｅｒｓ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｄｉｒｅｃｔｌｙ  ｆｒｏｍ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｂｒａｉｎｓ  ｉｍｐａｉｒ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ．Ｎａｔ  Ｍｅｄ．２００８  Ａｕｇ；１４（８）：８３７−４２．Ｅｐｕｂ  ２００８  Ｊｕｎ  ２２を参照されたい）を用いた。上に引用され全体が参照により組み込まれる特許文献に記載されている調製物を含めた任意のＡベータオリゴマー調製物を、このアッセイに、または対照として使用し得ることに留意するべきである。
【０３４３】
膜輸送アッセイでは、種々の異なるＡベータオリゴマー調製物が、特にアルツハイマー病患者の脳から単離したオリゴマー調製物を含め、Ａベータ作用を引き起こすことが示された。
【０３４４】
死後ヒト海馬または前頭前皮質から界面活性剤を使用せずに単離したオリゴマーをは、用量依存性に膜輸送の阻害を示し、Ｋｄは６ｐＭであった。ヒトアルツハイマー病患者由来Ａベータオリゴマー（１３７ｐＭ、図１Ｊの２つ目のバー）は、溶媒（図１Ｊの１つ目のバー）と比較して統計的に有意な膜輸送阻害を示す。化合物ＩＩ（３つ目のバー）はＡＤ脳由来Ａベータオリゴマーによって引き起こされる膜輸送不良を打ち消すが、Ａベータの非存在下で投与すると輸送に影響を及ぼさない（４番目の陰影を施したバー）。データは３回の実験（ｎ＝３）の平均値である。
【０３４５】
種々のＡベータオリゴマー調製物の効力は異なる（例えば、天然のアルツハイマー病単離物はいずれの被験合成調製物よりも効力が高い−データ不掲載）が、結果は定性的には同じである、つまり、シグマ−２受容体アンタゴニスト化合物を含む本開示の組成物によって、オリゴマーが仲介する病態が阻止される。
【０３４６】
初代ニューロン培養物
リードアウトのエキソサイトーシスアッセイおよび培養物中のニューロンに対するグリアの相対的割合の免疫組織化学的分析を用いて、Ａベータオリゴマーに対する細胞応答に基づく最適な細胞密度を決定する。週１回、培養物のニューロンとグリア（グリア細胞）の割合をモニターするために免疫組織化学および画像処理による定量化により培養物をモニターする。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのスクリーニング２１日目（２１ＤＩＶ）の時点でニューロン（１：５０００（濃度可変）のＭＡＰ２に対する（ニワトリポリクローナル）抗体（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）で陽性に染色される）に対してグリア（ＧＦＡＰ陽性）を２０％超含む培養物は除外する。
【０３４７】
Ａベータオリゴマー調製物
ヒトアミロイドペプチド１〜４２をＣａｌｉｆｏｒｎｉａ  Ｐｅｐｔｉｄｅ社などの多数の業者から入手し、品質管理分析時のロット選択は偶然によるものとした。オリゴマー調製物の品質管理は、オリゴマーサイズの範囲および相対濃度を明らかにするウエスタンブロッティングおよび毒性を伴わないエキソサイトーシス促進を確認するＭＴＴアッセイで構成される。各撮像ベースのアッセイでは、ＤＮＡ結合青色色素のＤＡＰＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）で可視化した核の形態を定量化することにより毒性をモニターした。核の断片化があれば、末期アポトーシスにあるものとみなし（ＭａｊｎｏおよびＪｏｒｉｓ，１９９５）、その試験を除外する。このほか、ペプチドサイズの範囲が異常であるか、基準濃度の１．５μＭでニューロンに対する有意な毒性が認められるペプチドのロットがあれば除外する。
【０３４８】
プレートベースの対照−再設定したプレートで、慣例的方法に基づき、溶媒処置ニューロンとＡベータオリゴマー処置ニューロンとの間に最低でも統計的に有意な２倍の開き（ｐ＜０．０１、スチューデントのｔ検定、不等分散）がみられ、プレート間のＣＶが１０％以下になれば、アッセイの最適化が完了したものとみなした。
【０３４９】
統計ソフトウェアおよび統計解析：
Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ  ＶＴＩ画像解析ソフトウェアおよびＳＴＯＲＥ自動データベースソフトウェアによりデータの処理および解析を実施した。培養３週間後でもダイナミックレンジおよびニューロンのウェル間の変動が小さいため、対でのテューキー・クレーマー解析により統計学的比較を実施して、化合物＋ＡベータオリゴマーとＡベータ単独との間および化合物単独と溶媒との間の開きの有意性を判定する。成熟初代ニューロンが成体脳の電気生理学的に仲介されるシグナル伝達ネットワークにさらに近づく能力がこのスクリーニング戦略の正当性を示す。偽陰性が最小限になる数の反復スクリーニングウェル（例えば、Ｎ＝４）に検定力分析を設定した。本開示の被験化合物は、Ａベータオリゴマーの膜輸送に対する作用を有意に正常に戻すが、ニューロンの代謝そのものには影響を及ぼさない。
【０３５０】
本明細書に記載されるＭＴＴアッセイでは、Ａベータオリゴマーを加える前に、選択した式Ｉおよび／または式ＩＩによる化合物を投与し、示されるＥＣ５０でＡベータオリゴマー誘導性膜輸送不良が阻止されることがわかった。具体的には、これらの結果は、化合物がマイクロモル濃度でニューロン細胞の膜輸送に対するＡベータオリゴマーの活性／作用を阻止／軽減することを示している。
【０３５１】
式Ｉおよび／または式ＩＩの化合物のｌｏｇＰ、ｐｓａ（Å２）、膜輸送（μＭ）、シグマ−２受容体親和性、マウス肝ミクロソーム（ＭＬＭ）中でのミクロソーム安定性（ｔ１／２、分）、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ毒性カリウムチャネルｈＥＲＧ（ＩＣ５０、ｎＭ）およびニューロン表現型の結果を表２にまとめて示す。
【０３５２】
【表２】
0006517827.tif 000050
0006517827.tif 000051
0006517827.tif 000052
0006517827.tif 000053
0006517827.tif 000054
【０３５３】
表２の特定の化合物は、示されるＥＣ５０でＡベータオリゴマー誘導性のエキソサイトーシス促進を阻止することがわかった。したがって、表２の化合物は、Ａベータオリゴマーの仲介による膜輸送の変化を有意に阻止した。以上の結果は、化合物がＡベータオリゴマーのニューロン細胞に対する活性／作用を阻止／軽減し、シグマ−２リガンドを用いてＡベータオリゴマー誘導性膜輸送異常を阻止することができることを示している。
【０３５４】
表２の選択した化合物を膜輸送アッセイで投与し、示されるＥＣ５０でＡベータオリゴマー誘導性膜輸送異常を阻止することがわかった。したがって、表２の化合物は、Ａベータオリゴマーの仲介による膜輸送の変化を有意に阻止した。以上の結果は、化合物がＡベータオリゴマーのニューロン細胞に対する活性／作用を阻止／軽減し、シグマ−２受容体リガンドがＡベータオリゴマー誘導性膜輸送異常を阻止する候補化合物として使用され得ることを示している。
【０３５５】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される式Ｉおよび／または式ＩＩによるイソインドリン化合物またはその薬学的に許容される塩は、本明細書に提供される膜輸送アッセイプロトコルに従って試験した場合、２０μＭ以下、１５μＭ以下、１０μＭ以下、５μＭ以下、１μＭ以下、０．５μＭ以下のＥＣ５０でＡベータオリゴマー誘導性膜輸送不良を抑制する。
【０３５６】
上式に包含される化合物はほかにも、シグマ−２リガンドとなることが予想されるため、したがって、Ａベータオリゴマー誘導性のエキソサイトーシス促進の阻止にも有用となる。
【０３５７】
実施例７．薬物動態および代謝安定性に関する試験。
商業的開発業務受託機関により、マウスのミクロソームであるマウス肝ミクロソーム（ＭＬＭ）第一の薬物動態試験を実施した。この試験は、Ｏｂａｃｈ，Ｒ．Ｓら，（１９９７）Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２８３：４６−５８（参照により本明細書に組み込まれる）に従って実施した。ＭＬＭアッセイでの化合物の半減期（ｔ１／２）を表２に示し、その範囲は３〜６１７分であった。
【０３５８】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される式Ｉおよび／または式ＩＩによるイソインドリン化合物またはその薬学的に許容される塩は、本明細書に記載されるマウス肝ミクロソーム（ＭＬＭ）アッセイで、少なくとも５分、少なくとも１０分、少なくとも２５分、少なくとも５０分、少なくとも１００分または少なくとも２００分の半減期（ｔ１／２）を示す。
【０３５９】
結果は、いくつかの被験化合物はマウス肝ミクロソーム中の半減期が実質的に長かったことを示している。この結果は、これらの化合物は経口投与後の生物学的利用能が高いことを示している。同じ化合物を本明細書で言及される通りに上記の膜輸送アッセイおよびその活性により試験した。
【０３６０】
被験化合物の固有クリアランスの速度が速かった場合、それは実質的に初回通過代謝を受けたことを示唆する。薬物動態を改善するため、代謝安定性が増強され、薬物様特性が改善されるよう化合物を設計した。ミクロソーム安定性実験および血漿中安定性実験を実施して、候補化合物の代謝安定性および肝安定性を明らかにした。いくつかの実施形態では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏミクロソーム安定性を基準化合物のＣＴ０１０９１４に正規化した。
【０３６１】
第二のＰＫ試験をｉｎ  ｖｉｖｏで実施することができ、この試験では、様々な経路により急性または慢性に投与した被験化合物の血漿中レベルおよび脳中レベルを以下の通りに測定する：
【０３６２】
ＨＰＬＣ−ＭＳの最適化
各被験化合物の溶液を調製し、シリンジポンプによりＴＳＱ  Ｑｕａｎｔｕｍ分光計（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）源に一定速度で注入する。フルスキャンＭＳ（質量分光測定法）分析を実施し、陽イオン化モードおよび陰イオン化モードの両方で各化合物の全イオン電流クロマトグラムおよび対応する質量スペクトルを作成する。各イオン量に応じて、ポジティブ質量スペクトルまたはネガティブ質量スペクトルのいずれかからＭＳ／ＭＳの前駆体イオンを選択する。さらに、定量分析に用いるのに適した選択断片化反応を決定するため、生成イオンＭＳ／ＭＳ分析を実施する。最終反応モニタリングパラメータは、複雑な成分混合物内に存在する場合の被験化合物を定量化する能力が最大になるよう選択する。各被験化合物に用いる特異的ＳＲＭ遷移を特定した後、ＴＳＱ  Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎワークスペースに自動化プロトコルを用いて検出パラメータを最適化する。最後に、適切なＬＣカラムに分析物を注入し分離することにより、ＬＣ−ＭＳ分析に用いるクロマトグラフィー条件を特定し、必要に応じて、勾配条件の調整を実施する。
【０３６３】
ＩＶ投与用の製剤：
最初に、被験化合物のリン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．４（ＰＢＳ）への溶解性を肉眼検査により評価する。化合物が標的濃度で溶解すれば、ＰＢＳを溶媒として使用する。（化合物がＰＢＳに完全には溶解しない場合、ＩＶ投与に適合性のある他の溶媒を評価し得る。このような溶媒としては、特にＤＭＳＯ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ４００）、Ｓｏｌｕｔｏｌ  ＨＳ１５およびＣｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬが挙げられる。）ここに報告する実験では、単回ボーラスの１０ｍｇ／ｋｇの被験化合物をＩＶ投与する。
【０３６４】
ＰＯ投与用の製剤：最初に、被験化合物のＰＢＳへの溶解性を評価する。化合物が標的濃度で溶解すれば、ＰＢＳを溶媒として使用する。（被験化合物が各濃度でＰＢＳに完全には溶解しない場合、ＤＭＳＯ／Ｓｏｌｕｔｏｌ  ＨＳ１５／ＰＢＳ（５／５／９０、ｖ／ｖ／ｖ）またはＤＭＳＯ／１％メチルセルロース（５／９５、ｖ／ｖ）を使用し得る。）
【０３６５】
血漿試料の線形性
血漿のアリコートに被験化合物を特定の濃度で添加する。アセトニトリル沈殿法を用いて添加済み試料を処理し、ＨＰＬＣ−ＭＳまたはＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより分析する。ピーク面積対濃度の検量曲線を作成する。アッセイの報告可能な線形範囲を定量下限値（ＬＬＱ）とともに決定する。
【０３６６】
血漿試料の定量的生物分析
アセトニトリル沈殿法を用いて血漿試料を処理し、ＨＰＬＣ−ＭＳまたはＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより分析する。血漿の検量曲線を作成した。無薬物血漿のアリコートに被験化合物を特定の濃度で添加する。添加済み血漿試料を未知の血漿試料とともに同じ手順を用いて処理する。処理済み血漿試料（乾燥抽出物）は通常、ＨＰＬＣ−ＭＳまたはＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析まで凍結保存（−２０℃）する。乾燥抽出物を適切な溶媒に溶かして復元し、遠心分離後、ＨＰＬＣ−ＭＳまたはＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより分析した。ピーク面積を記録し、未知の血漿試料中の被験化合物の濃度をそれぞれの検量曲線を用いて求める。アッセイの報告可能な線形範囲を定量下限値（ＬＬＱ）とともに決定する。
【０３６７】
この試験に用いる動物は通常、体重がそれぞれ２０〜３０ｇの雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスまたは体重１８０〜２５０ｇの雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットである。各個体に１回のみ採血が実施されるように、各投与条件および各時点について３個体を治療する。腹腔内注射により化合物の皮下投与を実施した。胃内強制投与により経口投与を実施する。頸静脈カテーテルにより静脈内投与を実施する。
【０３６８】
化合物を様々な濃度で投与してから例えば、１０分、３０分、６０分、１２０分、２４０分、３６０分、４８０分および１４４０分後に血漿試料を採取する。
【０３６９】
マウスおよびラットからの血漿試料採取
心臓穿刺（マウス）または頸静脈カテーテル（ラット）による血液採取のため、一般的な吸入麻酔下（３％イソフルラン）で動物を鎮静させる。血液アリコート（３００〜４００μＬ）をリチウムヘパリンでコートしたチューブに採取し、穏やかにかき混ぜ、氷上で保管し、採取から１時間以内に４℃、２，５００×ｇで１５分間遠心分離する。次いで、血漿を回収し、のちの処理まで−２０℃で凍結保存する。
動物投与デザイン−Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ＰＫ−カニューレ処置も絶食もしていない動物
グループ１：ＳＣ、１時点当たりの個体数ｎ＝３（計２４個体）またはＩＶ、１時点当たりの個体数ｎ＝３（計２４個体）
グループ２：ＰＯ、１時点当たりの個体数ｎ＝３（計２４個体）
グループ３：対照動物（無薬物血液）、個体数ｎ＝５のマウス
各個体に１回の採血および１回の脳採取を実施する。
【０３７０】
動物からの脳試料採取
血液採取直後、動物を断頭し、脳全体を迅速に取り出し、冷生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ、ｇ／ｍＬ）で洗浄し、表面の血管系を破壊し、ガーゼで吸い取って乾燥させ、体重を計測し、採取から１時間以内に実施するのちの処理まで氷上で保管する。各脳を１．５ｍＬの冷リン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．４（マウス＝１．５ｍＬ、ラット＝）中、Ｐｏｗｅｒ  Ｇｅｎ１２５を用いて氷上で１０秒間ホモジナイズする。次いで、各脳の脳ホモジネートをのちの処理まで−２０℃で保管する。
【０３７１】
脳試料の線形性
脳ホモジネートのアリコートに被験化合物を特定の濃度で添加する。各脳アリコートに冷却した２６％（ｇ／ｍＬ）中性デキストラン（平均分子量６５，０００〜８５，０００、Ｓｉｇｍａ社製、カタログ番号Ｄ−１３９０）溶液を等体積加えて、最終デキストラン濃度を１３％にする。ホモジネートを４℃、５４０００×ｇで１５分間遠心分離する。次いで、アセトニトリル沈殿法を用いて上清を処理し、ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより分析する。ピーク対濃度の検量曲線を作成する。アッセイの報告可能な線形範囲を定量下限値（ＬＬＱ）とともに決定する。
【０３７２】
脳試料の定量分析
各脳ホモジネートのアリコートに冷却した２６％（ｇ／ｍＬ）中性デキストラン（平均分子量６５，０００〜８５，０００、Ｓｉｇｍａ社製、カタログ番号Ｄ−１３９０）溶液を等体積加えて、最終デキストラン濃度を１３％にする。ホモジネートを４℃、５４０００×ｇで１５分間遠心分離する。次いで、アセトニトリル沈殿法を用いて上清を処理し、ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより分析する。脳検量曲線を作成する。無薬物脳ホモジネートのアリコートに被験化合物を特定の濃度で添加する。添加済み脳ホモジネート試料を同じ手順を用いて未知の脳ホモジネート試料とともに処理する。処理済み脳試料をＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析まで−２０℃で保管し、分析時にピーク面積を記録し、未知の脳試料中の被験化合物の濃度をそれぞれの検量曲線を用いて求めた。アッセイの報告可能な線形を定量下限値（ＬＬＱ）とともに求めた。
【０３７３】
脳透過性
各時点における脳（ｎｇ／ｇ組織）および血漿（ｎｇ／ｍＬ）中の被験化合物の濃度ならびに脳中濃度と血漿中濃度の比をＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより求め、上記の通りに報告する。
【０３７４】
薬物動態
化合物の血漿中濃度対時間のプロットを作成する。経口投与およびＳＣ投与後、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ社）を用いて、血漿データの非コンパートメント解析（ＮＣＡ）から化合物の基本的な薬物動態パラメータ（ＡＵＣｌａｓｔ、ＡＵＣＩＮＦ、Ｔ１／２、ＴｍａｘおよびＣｍａｘ）を取得する。非コンパートメント解析では、薬物、代謝産物のいずれの特異的コンパートメントモデルも想定する必要がない。ＮＣＡにより、血漿中濃度−時間曲線下面積の測定に台形公式を適用することが可能となる（Ｇａｂｒｉｅｌｓｓｏｎ，Ｊ．およびＷｅｉｎｅｒ，Ｄ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃ  Ｄａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ｃｏｎｃｅｐｔｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｓｗｅｄｉｓｈ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ．１９９７）。
【０３７５】
報告される用語の定義
曲線下面積（ＡＵＣ）−体循環に到達する未変化薬物の総量の尺度。曲線下面積は、濃度対時間をプロットし、各台形の増加面積を合計することにより算出された幾何学的測定値である。
【０３７６】
ＷｉｎＮｏｎｌｉｎで面積を算出するには、線形台形法および線形対数台形法の２つの計算法がある。線形台形法は、濃度−時間曲線の下降部分で偏った結果が得られ、ＡＵＣが過大評価されることがあるため、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎではＡＵＣの計算に線形対数が選択できる。初期設定では、対数線形台形法を用いて血漿中濃度−時間曲線の残りの部分のＴｍａｘ後面積を測定する。
【０３７７】
ＡＵＣｌａｓｔ：投与時点から定量下限値を上回る値が最後に観察された時点までの曲線下面積。
【０３７８】
ＡＵＣＩＮＦ：投与時点から無限大まで外挿した曲線下面積。
【０３７９】
Ｃｍａｘ−薬物を経口投与または非ＩＶ投与した後、投与時点から最後に観察した時点までの間に得られた最大血漿中薬物濃度。
【０３８０】
Ｔｍａｘ−薬物投与から最大血漿中濃度（Ｃｍａｘ）が観察されるまでの時間を分で表したもの。
【０３８１】
Ｔ１／２−ＩＶ投与および非ＩＶ投与の両方から得られた終末消失相半減期。
【０３８２】
この場合、ラムダＺ（ｚ）は血漿中濃度−時間曲線の終末（対数線形）部分と関連する一次速度定数である。ｚは時間対対数濃度の線形回帰により推定される。
【０３８３】
結果から、特定の被験化合物が、用量０．１〜０．５ｍｇ／ｋｇの範囲で急性または慢性に（連日で５日間）投与した場合に優れた生物学的利用能および優れた脳透過性を示すことが明らかになることが予想される。このようにして、選択した被験化合物の経口生物学的利用能を評価する。
【０３８４】
実施例８：Ａベータ１〜４２オリゴマー結合およびシナプス消失アッセイ
このアッセイでは、Ａベータオリゴマーと、培養した成熟初代ニューロンとを接触させ、その結合を免疫組織化学（抗Ａベータ抗体）により判定し、画像処理により定量化した。神経炎で標識された点の数を数えることにより、ニューロン樹状突起内のＡベータの量を評価する。Ａベータオリゴマーは、初代培養物のかなりの割合（３０〜５０％）の海馬ニューロンに存在する一部のシナプス後ニューロンと飽和状態で（Ｋｄが約４００ｎＭ；Ｌａｕｒｅｎ  ２００９）高親和性に結合することが知られており（Ｌａｃｏｒら，２００４；Ｌａｍｂｅｒｔら，２００７）、このことは、アルツハイマー病患者の脳にＡベータ結合が観察されたこと（Ｌａｍｂｅｒｔら，２００７）とよく相関する。この標識は、シナプス後足場タンパク質ＰＳＤ−９５と共局在するシナプスと関係がある（Ｌａｃｏｒら，２００４）。Ａベータオリゴマーはほかにも、シナプス消失を仲介することが知られており、脳スライスのヒト海馬ニューロンでは１８％が消失することが報告されている（Ｓｃｈｅｆら，２００７）ほか、長期増強（ＬＴＰ）を阻害することが知られている。このアッセイではほかにも、免疫蛍光化学によりシナプスの数を定量化することができる。結合アッセイを実施するための同様の手順が文献中にみられる。例えば、Ｌｏｏｋ  ＧＣ．ら，Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ＡＤＤＬ−−ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｄｒｕｇｓ  ｆｏｒ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｃｕｒｒ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｒｅｓ．２００７  Ｄｅｃ；４（５）：５６２−７．Ｒｅｖｉｅｗを参照されたい。
【０３８５】
ニューロン表面に結合したＡベータの量の測定を二次スクリーニングとして用いて、以下に挙げる機序のうちの１つまたは複数を介して作用する化合物を特定することができる：Ａベータオリゴマーとニューロン表面との結合に干渉することによって、またはオリゴマーそのものに変化をもたらすこと（逆アゴニズムまたはオリゴマー解離）によって、またはオリゴマーが結合する表面受容体の変化（アロステリック調節または古典的な受容体拮抗作用）をもたらすことによって、Ａベータ作用を阻止すること。この測定によりほかにも、上記のような化合物と下流シグナル伝達事象に作用する化合物とを識別することができる。したがって、このアッセイは、Ａベータオリゴマーのニューロンに対する非致死性作用を特徴とする病的状態に重要なものであり、本発明者らが臨床的に重要な化合物の特定に用いたスクリーニングカスケードの一部を形成している。膜輸送およびこの結合／シナプス消失アッセイで活性な選択した被験化合物について、アルツハイマー病の２つの異なるトランスジェニックモデルで活性を試験することができる。したがって、このアッセイおよび膜輸送アッセイは、臨床的に重要な化合物の特定に有用であり、ｉｎ  ｖｉｖｏの結果を予測するうえで価値があるものと思われる。このアッセイの予測的価値は、それが本開示の範囲外の化合物を用いて化合物の特性を予測することができることを示すことによって確認される。
【０３８６】
上記の膜輸送アッセイの場合と同じように初代海馬ニューロンの培養を確立する。被験化合物（濃度１０−８〜３０マイクロモル）をプレートに加え、次いで、Ａベータ１〜４２オリゴマー含有調製物を飽和結合に達する濃度で加える。被験化合物で１時間、前処理し、Ａベータオリゴマーまたは無オリゴマー（溶媒単独）を加えた後、さらに２３時間インキュベートする。
【０３８７】
プレートを３．７％パラホルムアルデヒド含有リン酸緩衝生理食塩水で１５分間固定する。次いで、プレートをＰＢＳで３回、それぞれ５分間洗浄する。プレートを５％ヤギ血清および０．５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を含有するＰＢＳで１時間、室温にてブロックする。一次抗体（抗ＭＡＰ２ポリクローナル、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社、番号ＡＢ５６２２および抗ベータアミロイド６Ｅ１０モノクローナル、Ｃｏｖａｎｃｅ社、番号ＳＩＧ−３９３００、１マイクログラム／ｍｌおよびウサギポリクローナル抗シナプトフィジン、Ａｎａｓｐｅｃ社、０．２マイクログラム／ｍｌ）を５％ヤギ血清含有ＰＢＳで１：１０００に希釈する。一次抗体を４℃で一晩インキュベートする。次いで、プレートをＰＢＳで３回、それぞれ５分間洗浄する。二次抗体（Ａｌｅｘ  Ｆｌｏｒ４８８ポリクローナル、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、番号Ａ１１００８およびＡｌｅｘａ  Ｆｌｏｒ６４７モノクローナル、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、番号Ａ２１２３５）を５％ヤギ血清含有ＰＢＳで１：１０００に希釈する。二次抗体を室温で１時間インキュベートする。プレートをＰＢＳで１回洗浄する。次いで、ＤＡＰＩ（４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を０．０３μｇ／μｌで加え、室温で５分間インキュベートした後、ＰＢＳで洗浄する。
【０３８８】
結果は、のちに詳述する通りに調製し、使用する調製物に応じて３μＭまたは１μＭで投与し、ニューロンと結合したＡベータオリゴマーが赤色色素によって明らかになることを示すことが予想される。初期アルツハイマー病のヒトでは、海馬のシナプス数が年齢のマッチした認知機能の正常な個人に比して１８％減少することが明らかにされており（Ｓｃｈｅｆｆら，２００７）、この結果はほかにも、このアッセイで蛍光点、したがってシナプス数の２０％退縮によって可視化することができる。選択した被験化合物の共存下では、Ａベータ結合が実質的に対照レベルまで減少することが予想されるほか、緑色蛍光は影響を受けず、減少しなかったシナプス数を示す。Ａベータ４２オリゴマーはシナプス後スパインと結合し、初代ニューロンのシナプトフィジンで標識される。有効量の好ましい被験化合物を培養物に添加すると、シナプス後スパインおよびシナプスが実質的に対照レベルで示されることが予想される。Ａベータ４２オリゴマーを単独で添加すると、２４時間後にシナプトフィジンの点の密度が溶媒単独に比して２０％減少する。この消失は有効量の好ましい被験化合物により正常に戻る。Ａベータオリゴマーの非存在下では、好ましい被験化合物はシナプス数に影響を及ぼさず、シナプス数は対照（溶媒単独）と同等のレベルで維持される。Ａベータの点によって算出されるＡベータの結合強度は、有効量の被験化合物の存在下で約１８％低下することが予想されるが、この低下は、この化合物の存在下でシナプス数が対照レベルに達するには十分である。
【０３８９】
さらに、特定の被験化合物の存在下では、点状のシナプスＡベータオリゴマー結合が濃度依存性に約３８％減少することが予想される。点による強度のヒストグラムから、正常な二峰性の結合集団（明度の高い点がみられるニューロンおよびこれより明度の低い集団）が薬物の存在下で左方向に遷移することがわかる（データ不掲載）。Ａベータオリゴマー結合を部分的に阻害すれば、ＬＴＰ機能が１００％回復することが報告されている（Ｓｔｒｉｔｔｍａｔｔｅｒ  ＳＭら，Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｐｒｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｅｄｉａｔｅｓ  Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｓｙｎａｐｔｉｃ  Ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ  ｂｙ  Ａｍｙｌｏｉｄ−Ｂｅｔａ  Ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ  Ｎａｔｕｒｅ（２００９）４５７（７２３３：１１２８−３２））。
【０３９０】
Ａベータオリゴマーにより、２４時間後にシナプトフィジンの点の密度が溶媒処置（１つめのバー）に比して２０％減少するが、有効量の被験化合物により正常に戻る。例えば、国際公開第２０１３／０２９０６０号（参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【０３９１】
Ａベータの非存在下では、被験化合物がシナプス数に影響を及ぼさないのが望ましい。Ａベータオリゴマーによりシナプス数が１８．２％減少するが、この消失は、有効量の好ましい被験化合物によって１００％打ち消される。
【０３９２】
ＤＡＰＩで可視化した核は正常な形態を示し、神経変性が存在しないことがわかる。式Ｉおよび／またはＩＩに包含される化合物の中から選択した被験化合物でこの方法を実施する。
【０３９３】
Ａベータオリゴマー調製物：
ヒトアミロイドペプチド１〜４２をＣａｌｉｆｏｒｎｉａ  Ｐｅｐｔｉｄｅ社から入手し、品質管理分析時のロット選択は偶然によるものとする。Ａベータ１〜４２オリゴマー［例えば、Ｄａｈｌｇｒｅｎら，“Ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ａｎｄ  ｆｉｂｒｉｌｌａｒ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｏｆ  ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ａｆｆｅｃｔ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ”  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２００２  Ａｕｇ  ３０；２７７（３５）：３２０４６−５３．Ｅｐｕｂ  ２００２  Ｊｕｎ  １０．；ＬｅＶｉｎｅ  Ｈ  ３ｒｄ．“Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｂｅｔａ−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｏｌｉｇｏｍｅｒ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｔ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ”  Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００４  Ｄｅｃ  １；３３５（１）：８１−９０；Ｓｈｒｅｓｔｈａら，”Ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｄｖｅｒｓｅｌｙ  ａｆｆｅｃｔｓ  ｓｐｉｎｅ  ｎｕｍｂｅｒ  ａｎｄ  ｍｏｔｉｌｉｔｙ  ｉｎ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｎｅｕｒｏｎｓ”  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００６  Ｎｏｖ；３３（３）：２７４−８２．Ｅｐｕｂ  ２００６  Ｓｅｐ  ８；Ｐｕｚｚｏら，“Ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ／ｃＧＭＰ／ｃＡＭＰ−ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｅｌｅｍｅｎｔ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐａｔｈｗａｙ  ｄｕｒｉｎｇ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ”  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００５  Ｊｕｌ  ２０；２５（２９）：６８８７−９７；Ｂａｒｇｈｏｒｎら，“Ｇｌｏｂｕｌａｒ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｏｌｉｇｏｍｅｒ−ａ  ｈｏｍｏｇｅｎｏｕｓ  ａｎｄ  ｓｔａｂｌｅ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ”  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２００５  Ｎｏｖ；９５（３）：８３４−４７．Ｅｐｕｂ  ２００５  Ａｕｇ  ３１；Ｊｏｈａｎｓｓｏｎら，Ｐｈｙｓｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  Ａ  ｂｅｔａ  １−４２  Ａｒｃｔｉｃ  ａｎｄ  Ａ  ｂｅｔａ  １−４２ｗｔ．ＦＥＢＳ  Ｊ．２００６  Ｊｕｎ；２  ７３（１２）：２６１８−３０を参照されたい］および脳由来Ａベータオリゴマー（例えば、Ｗａｌｓｈら，Ｎａｔｕｒａｌｌｙ  ｓｅｃｒｅｔｅｄ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ  ｏｆ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｏｔｅｎｔｌｙ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｎａｔｕｒｅ（２００２）．４１６，５３５−５３９；Ｌｅｓｎｅら，Ａ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｓｓｅｍｂｌｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｂｒａｉｎ  ｉｍｐａｉｒｓ  ｍｅｍｏｒｙ．Ｎａｔｕｒｅ．２００６  Ｍａｒ  １６；４４０（７０８２）：３５２−７；Ｓｈａｎｋａｒら，Ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄｉｍｅｒｓ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｄｉｒｅｃｔｌｙ  ｆｒ���ｍ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｂｒａｉｎｓ  ｉｍｐａｉｒ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ．Ｎａｔ  Ｍｅｄ．２００８  Ａｕｇ；１４（８）：８３７−４２．Ｅｐｕｂ  ２００８  Ｊｕｎ  ２２を参照されたい）を上記のように公開されている方法に従って作製する。オリゴマー調製物の品質管理は、オリゴマーサイズの範囲および相対濃度を明らかにするウエスタンブロッティングおよび毒性を伴わないエキソサイトーシス促進を確認するＭＴＴアッセイで構成される。各撮像ベースのアッセイでは、ＤＮＡ結合青色色素のＤＡＰＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）で可視化した核の形態を定量化することにより毒性をモニターする。核の断片化があれば、末期アポトーシスにあるものとみなし、その試験を除外する。（ＭａｊｎｏおよびＪｏｒｉｓ，Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ｏｎｃｏｓｉｓ，ａｎｄ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ．Ａｎ  ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ｏｆ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ．Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １９９５；１４６：３−１６）。ペプチドサイズの範囲が異常であるか、基準濃度でニューロンに対する有意な毒性が認められるペプチドのロットがあれば除外する。  
【０３９４】
対照
オリゴマー調製物を用いた抗Ａベータ抗体６Ｅ１０の前吸着は、シナプス結合を用量依存性に（７．８４×１０−６）で阻害し、これを陽性対照として用いる。抗体は１：１０００（１マイクログラム／ｍｌ）で使用する。シナプス消失アッセイには、ＮＭＤＡアンタゴニストのジゾシルピン（ＭＫ−８０１）を陽性対照として８０μＭで用いる。
【０３９５】
画像処理
Ｎｅｕｒｏｎａｌ  Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇアルゴリズムを用いて、画像をＣｅｌｌｏｍｉｃｓ  ＶＴＩ自動顕微鏡観察プラットフォームで捕捉し解析する。統計解析には、不等分散性のテューキー・クレーマーの対比較を用いる。
【０３９６】
ウエスタンブロット
Ａベータ１〜４２を含有する試料を非還元性レーンマーカー試料緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ社、番号１８５９５９４）で希釈する（１：５）。試料３０マイクロリットル（μＬ）を１８ウェルプレキャスト４〜１５％トリス−ＨＣｌゲル（ＢＩＯＲＡＤ社、番号３４５−００２８）に投入する。ＢＩＯ−ＲＡＤ  Ｃｒｉｔｅｒｉａｎプレキャストゲルシステムにトリス−グリシン緩衝液を用いて、電気泳動を１２５ボルト（Ｖ）で９０分間実施する。ゲルをトリス−グリシン／１０％メタノール緩衝液中、３０Ｖで１２０分間、０．２μＭニトロセルロース膜上にブロットする。膜をＰＢＳ溶液中で５分間煮沸し、４℃で一晩、ＴＢＳ／５％ミルク溶液でブロックした。ＴＢＳ／１％ミルク溶液で１０μｇ／ｍＬに希釈した６Ｅ１０−ＨＲＰ（Ｃｏｖａｎｃｅ社、番号ＳＩＧ−３９３４５）により膜を室温で１時間プローブする。膜をＴＢＳ／０．０５％ｔｗｅｅｎ−２０の溶液で３回、それぞれ４０分間洗浄し、ＥＣＬ試薬（ＢＩＯ−ＲＡＤ社、番号１６２−０１１２）で５分間発光させる。Ａｌｐｈａ  Ｉｎｎｏｔｅｃｈ  ＦｌｕｏｒＣｈｅｍ  Ｑ定量撮像システムで画像取得を実施し、ＡｌｐｈａＶｉｅｗ  Ｑソフトウェアで解析する。
【０３９７】
活性
（画像処理アルゴリズムを用いた）結合アッセイにより、好ましい被験化合物がＡベータオリゴマーリガンドとニューロンとの結合を約２５％、部分的に阻止することが示されると予想される。
【０３９８】
実施例９：恐怖条件付けアッセイ
選択した被験化合物を恐怖条件付けとして知られる記憶に依存する行動課題の動物モデルで試験する。試験プロトコルは公開されているプロトコルに基づいてデザインしたものである（例えば、Ｐｕｚｚｏ  Ｄ，Ｐｒｉｖｉｔｅｒａ  Ｌ，Ｌｅｚｎｉｋ  Ｅ，Ｆａ  Ｍ，Ｓｔａｎｉｓｚｅｗｓｋｉ  Ａ，Ｐａｌｍｅｒｉ  Ａ，Ａｒａｎｃｉｏ  Ｏ．Ｐｉｃｏｍｏｌａｒ  ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ  ｉｎ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００８  Ｄｅｃ  ３１；２８（５３）：１４５３７−４５を参照されたい）。状況記憶の形成は海馬などの内側側頭葉構造の統合性に依存する。このアッセイでは、マウスに特定の顕著な状況（条件刺激；ＣＳ）が嫌悪事象、本試験の場合、軽度の足へのショック（無条件刺激、ＵＳ）と結びついていることを訓練して覚えさせる。良好な学習能力を示す動物であれば、同じ状況に再び置いたとき、すくみ行動の増加がみられる。このすくみは新規な状況ではみられない。状況におけるすくみの増加は、動物に強力な海馬依存性の記憶が形成されたことを示す。恐怖条件付けで試験する記憶は可溶性Ａβの増大に対する感度が高い。化合物ＩＩは膜輸送に対するＡベータオリゴマー仲介性作用の停止に有効であった。好ましい被験化合物であれば、Ａベータオリゴマー投与前に動物に投与すると、記憶に対するオリゴマー作用を用量依存性に阻害することが予想される。
【０３９９】
特定の好ましい被験化合物は、Ａベータオリゴマー誘導性の記憶障害を打ち消すことが可能であるが、単独で投与したときは記憶に影響を及ぼさないものである。この行動学的効果は、膜輸送アッセイにより、オリゴマーによって引き起こされる行動的記憶喪失の治療に有用な化合物を予測することが可能であることを示している。記憶の恐怖条件付けモデルを本明細書に記載される通りに実施した。いずれの用量でも有害な行動変化が観察されないのが望ましい。したがって、この化合物の膜輸送アッセイでの成績と恐怖条件付けアッセイでの成績との間には相関があり、後者のアッセイは記憶喪失の指標となる。本明細書に提供されるイソインドリン化合物は恐怖条件付けアッセイにおいて活性を示し、したがって、記憶喪失の治療に有効であることが示されることが予想される。化合物の恐怖条件付けモデルにおける成績と記憶喪失の治療における有用性との間の相関は、文献で確立されている（Ｄｅｌｇａｄｏ  ＭＲ，Ｏｌｓｓｏｎ  Ａ，Ｐｈｅｌｐｓ  ＥＡ．“Ｅｘｔｅｎｄｉｎｇ  ａｎｉｍａｌ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｆｅａｒ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ  ｔｏ  ｈｕｍａｎｓ”  Ｂｉｏｌ．Ｐｓｙｃｈｏｌ．２００６  Ｊｕｌ；７３（１）：３９−４８）。
【０４００】
実施例１０．ラット、アカゲザルおよびヒト死後脳の試料を用いたオートラジオグラフィーによる試験。
シグマ−２受容体リガンドおよびシグマ−１受容体リガンドの神経学的および薬理学的特徴を明らかにするため、Ｘｕら，２０１０（Ｘｕ，Ｊ．，Ｈａｓｓａｎｚａｄｅｈ  Ｂ，Ｃｈｕ  Ｗ，Ｔｕ  Ｚ，Ｖａｎｇｖｅｒａｖｏｎｇ  Ｓ，．Ｔｏｎｅｓ  ＬＡ，Ｌｅｕｄｔｋｅ  ＲＲ，Ｐｅｒｌｍｕｔｔｅｒ  ＪＳ，Ｍｉｎｔｕｎ  ＭＡ，Ｍａｃｈ  ＲＨ．［３Ｈ］４−（Ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ）−Ｎ−［４−（４−（２−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｉｐｅｒａｚｉｎ−１−ｙｌ）ｂｕｔｙｌ］ｂｅｎｚａｍｉｄｅ，ａ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｒａｄｉｏｌｉｇａｎｄ  ｆｏｒ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  Ｄ（３）ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．ＩＩ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  Ｄ３  ａｎｄ  Ｄ２  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｒａｔｉｏ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃａｕｄａｔｅ−ｐｕｔａｍｅｎ．Ｓｙｎａｐｓｅ  ６４：４４９−４５９（２０１０））（参照により本明細書に組み込まれる）により既に報告されているプロトコルを改変することにより、オートラジオグラフィー撮像による試験を実施する。Ｘｕ  Ｊ，Ｔｕ  Ｚ，Ｊｏｎｅｓ  ＬＡ，Ｗｈｅｅｌｅｒ  ＫＴ，Ｍａｃｈ  ＲＨの方法（［３Ｈ］Ｎ−［４−（３，４−ｄｉｈｙｄｒｏ−６，７−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｉｓｏｑｕｉｎｏｌｉｎ−２（１Ｈ）−ｙｌ）ｂｕｔｙｌ］−２−ｍｅｔｈｏｘｙ−５−ｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚａｍｉｄｅ：ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｓｉｇｍａ−２  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｐｒｏｂｅ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５２５：８−１７（２００５））（参照により本明細書に組み込まれる）により標識ＲＨＭ−１を得た。
【０４０１】
この試験には、Ｍｉｃｒｏｍクリオトームを用いてラット、アカゲザルおよび死後ヒト脳から厚さ２０μＭの脳切片を切出し、Ｓｕｐｅｒｆｒｏｓｔ  Ｐｌｕｓガラススライド（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、ピッツバーグ、ペンシルベニア州）に載せ、大脳皮質および海馬の脳領域全体の連続切片を使用する。脳切片を、シグマ−２受容体の分布を撮像するためのシグマ−１受容体ブロック（＋）−ペンタゾシンの存在下、シグマ−１受容体の特徴付けには５ｎＭの［３Ｈ］（＋）−ペンタゾシン、シグマ−２受容体の特徴付けには４ｎＭ［３Ｈ］ＲＨＭ−１単独のほか、１０ｎＭの［３Ｈ］ＤＴＧおよび［３Ｈ］ハロペリドールとインキュベートし、放射性リガンドと３０分間インキュベートした後、脳切片を含むガラススライドを氷冷緩衝液で５回、それぞれ１分間洗浄する。
【０４０２】
スライドを乾燥させ、空いている方の面を銅箔テープで覆うことにより導電性にし、次いで、ガス検出器であるＢｅｔａ  Ｉｍａｇｅｒ  ２０００Ｚ  Ｄｉｇｉｔａｌ  Ｂｅｔａ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏｓｐａｃｅ社、フランス）のガスチャンバ［アルゴンとトリエチルアミン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、米国）の混合物］に入れる。ガスが十分に混ざり合い、均一な状態になった後、高品質の画像が観察されるまでさらに２４時間〜４８時間曝露する。［３Ｈ］Ｍｉｃｒｏｓｃａｌｅ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社、セントルイス、ミズーリ州）を総放射活性定量分析のための標準物質として同時にカウントする、すなわち、ｃｐｍ／ｍｍ２をｎＣｉ／ｍｇ組織に変換する。Ｂｅｔａ−Ｉｍａｇｅ  Ｐｌｕｓ（ＢｉｏＳｐａｃｅ社、フランス）プログラムを用いて、目的とする解剖学的関心領域（ＲＯＩ）の定量分析を実施する、すなわち、皮質および海馬の領域における定量的放射活性取込み（ｃｐｍ／ｎｌｌｎ２）を求める。対応する放射性リガンドの比活性および標準物質の［３Ｈ］Ｍｉｃｒｏｓｃａｌｅから得られた検量曲線に基づき、結合密度をｆｍｏｌ／ｍｇ組織に正規化する。定量的オートラジオグラフィーを用いて、被験化合物の希釈系列（１０ｎＭ、１００ｎＭ、１，０００ｎＭおよび１０，０００ｎＭ）を４つの放射性リガンド、［３Ｈ］（＋）−ペンタゾシン、［３Ｈ］ＲＨＭ−１、［３Ｈ］ＤＴＧおよび［３Ｈ］ハロペリドールとの結合部位に対する競合を試験し、次いで特異的結合（％対照）を分析して、皮質および海馬（歯状回、海馬ＣＡＩおよびＣＡ３）の領域における結合親和性を求める。
【０４０３】
例えば正常患者、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）患者またはアルツハイマー病（ＡＤ）患者特異的結合由来のヒト前頭皮質スライスを対象に、［３Ｈ］−（＋）−ペンタゾシン（シグマ−１受容体リガンド）および／または［１２５Ｉ］−ＲＨＭ−４または［３Ｈ］−ＲＨＭ−１（シグマ−２受容体リガンド）を用いたシグマ−１受容体およびシグマ−２受容体におけるオートラジオグラフィーを実施し、対照と比較する。アルツハイマー病および可能性としてＤＬＢでは、シグマ−１受容体が正常対照に比して統計学的にダウンレギュレートされ、例えば、Ｍｉｓｈｉｎａらは、初期アルツハイマー病ではシグマ−１受容体の密度が低いことを報告している（Ｍｉｓｈｉｎａら，２００８，Ｌｏｗ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｏｆ  ｓｉｇｍａ１  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｅａｒｌｙ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｎｎ．Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  ２２：１５１−１５６）。しかし、ＡＤではシグマ−２受容体は統計学的にダウンレギュレートされない。オートラジオグラフィーを用いて、例えば、サル前頭皮質、サル海馬またはヒト側頭皮質において１８．４ｎＭ［３Ｈ］−ＲＨＭ−１が被験化合物のシグマ−２リガンドに置き換わることを示す。標的組織では、［３Ｈ］−ＲＨＭ−１の一部が既知のシグマ−２受容体リガンドであるシラメシンおよび被験化合物に置き換わることが予想される。
【０４０４】
実施例１１．ＭＴＳアッセイ：様々なシグマ−２リガンドのアゴニスト活性またはアンタゴニスト活性の判定。
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６  Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ社、マディソン、ウィスコンシン州）と用いて被験化合物の細胞毒性を判定する。簡潔に述べれば、シグマ−２受容体選択的リガンドで処置する前日、９６ウェルプレートにＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞、ＭＤＡ−ＭＢ２３１細胞またはＳＫＯＶ−３細胞を２０００細胞／ウェルの密度で播いた。２４時間処置した後、各ウェルにＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６  ＡＱｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔを加え、プレートを３７℃で２時間インキュベートする。Ｖｉｃｔｏｒ３プレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社、シェルトン、コネチカット州）によりプレートを４９０ｎｍで読み取る。各細胞系の用量反応曲線から、細胞生存能を未処置細胞に比して５０％阻害するのに必要なシグマリガンドの濃度と定義されるＥＣ５０値を求める。シラメシンはアゴニストとして認められている。シグマ−２リガンドのアゴニストおよびアンタゴニストは以下のように定義される：シグマ−２リガンド被験化合物のＥＣ５０がシラメシンのＥＣ５０の２倍未満であれば、このシグマ−２リガンド被験化合物はアゴニストであるとする。シグマ−２リガンドのＥＣ５０がシラメシンのＥＣ５０の２〜１０倍であれば、このシグマ−２リガンドは部分アゴニストであるとする。シグマ−２リガンドのＥＣ５０がシラメシンのＥＣ５０の１０倍超であれば、このシグマ−２リガンドはアンタゴニストであるとする。試験に使用するシグマ−２リガンド標準化合物は、アゴニスト（シラメシンおよびＳＶ１１９）、部分アゴニスト（ＷＣ２６）およびアンタゴニスト（ＲＨＭ−１）である。標準物質の結果を表３に示す。
【０４０５】
【表３】
0006517827.tif 000055
【０４０６】
ニューロン培養物を様々な濃度のシグマ化合物で２４時間処置し、溶媒と比較した核強度を測定する。被験濃度での核強度を低下させないシグマ−２アンタゴニスト（ＲＨＭ−１）とは対照的に、シグマ−２アゴニスト（シラメシン、ＳＶ−１１９、ＷＣ−２６）はニューロンの核の形態に有意な異常を引き起こす。例えば、シグマ−２受容体アゴニストはニューロン細胞および癌細胞に対して細胞毒性を示すことがわかったが、シグマ−２受容体アンタゴニストは毒性を示さず、さらにはシグマ−２受容体アゴニストによって引き起こされる細胞毒性を阻止した、国際公開第２０１３／０２９０６０号の図９Ｂ（参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。このアッセイで本開示のイソインドリン被験化合物を分析してニューロン表現型の判定に利用し、結果を表２に示す。
【０４０７】
実施例１２．カスパーゼ−３アッセイ。シグマ−２リガンドのアゴニストまたはアンタゴニスト活性の判定。
本明細書に記載されるように、Ｘｕらは、ＰＧＲＭＣ１タンパク質複合体を推定シグマ−２受容体結合部位として同定した（Ｘｕら，２０１１．Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｕｎ．２，ａｒｔｉｃｌｅ  ｎｕｍｂｅｒ  ３８０）（参照により本明細書に組み込まれる）。シグマ−２受容体アゴニストはカスパーゼ−３依存性細胞死を誘導し得る。Ｘｕら（２０１１）は、ＰＧＲＭＣ１がシグマ−２受容体アゴニストのＷＣ−２６によるカスパーゼ−３活性化を調節する能力を検討するための機能アッセイを開示している。
【０４０８】
Ａベータオリゴマーは低レベルのカスパーゼ−３活性化を引き起こし、ＬＴＤを生じさせる。Ａベータオリゴマーおよびカスパーゼ−３活性化のレベルが高いと、細胞死が起こる（Ｌｉら，２０１０；ＯｌｓｅｎおよびＳｈｅｎｇ，２０１２）。国際公開第２０１３／０２９０６０号（参照により本明細書に組み込まれる）では、シグマ−２受容体アゴニスト（ＳＶ−１１９、シラメシン）が腫瘍細胞およびニューロンのカスパーゼ−３を活性化することが明らかにされている（例えば、図１０Ａおよび１０Ｂを参照されたい）。この実験では、シグマ−２受容体アンタゴニストのＲＨＭ−１は、腫瘍細胞では活性化を阻害する（図１０Ａ）が、ニューロンではアゴニストのＳＶ−１１９による活性化を阻止することができなかった（図１０Ｂ）。シグマ２受容体アンタゴニストである被験化合物は、腫瘍細胞のカスパーゼ−３活性化を阻害し、ニューロンではシグマ−２受容体アゴニストＳＶ−１１９によるカスパーゼ−３活性化を阻止することができる。したがって、この実施例に示されるように、特定の被験化合物について、腫瘍細胞およびニューロンでのシグマ−２受容体アンタゴニスト挙動をカスパーゼ−３アッセイで試験する。
【０４０９】
Ｃａｓｐａｓｅ−３  Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｍｉｌｉｐｏｒｅ社、ビレリカ、マサチューセッツ州）を製造業者のプロトコル通りに用いて、シグマ−２受容体リガンドによる内在性カスパーゼ−３の活性化を測定する。簡潔に述べれば、ＭＤＡ−ＭＢ４３５細胞またはＭＤＡ−ＭＢ２３Ｉ細胞を１００ｍｍディッシュに０．５×１０６細胞で播いた。播種から２４時間後、培養皿にシグマ−２リガンドを添加してカスパーゼ３活性化を誘導する。シグマ−２リガンドの最終濃度はそのＥＣ５０とする。処置から２４時間後、細胞を回収し、細胞溶解緩衝液３００μＬで洗浄し、１０，０００×ｇで５分間遠心分離する。上清を収集し、カスパーゼ−３基質であるＤＥＶＤ−ｐＮＡ３７℃で２時間インキュベートした。Ｄｃタンパク質アッセイキット（Ｂｉｏ−Ｒａｄ社、ハーキュリーズ、カリフォルニア州）を用いてタンパク質濃度を決定する。得られた遊離ｐＮＡを、Ｖｉｃｔｏｒ３マイクロプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｉｎｅｒ  Ｌｉｆｅ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社、シェルトン、コネチカット州）を用いて４０５ｎｍで測定する。被験リガンドには、標準物質のシグマ−２  アゴニスト（シラメシン、ＳＶ１１９、ＷＣ２６）およびシグマ−２アンタゴニストのＲＨＭＷＵ−Ｉ−１０２（ＲＨＭ−１）ならびに被験化合物を含める。カスパーゼ３を活性化するリガンドをアゴニストとみなすのに対し、カスパーゼ３を活性化しないリガンドをアンタゴニストとみなす。国際公開第２０１３／０２９０６０号の図１０Ａに示されように、シグマ−２アゴニストであるシラメシンはカスパーゼ−３活性を誘導するのに対し、シグマ−２アンタゴニスト、例えば、ＲＨＭ−１およびシグマ−２アンタゴニストである被験化合物は、癌細胞にもニューロンにもカスパーゼ−３活性を誘導しない。
【０４１０】
実施例１３．治療表現型。
被験化合物の治療表現型は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイプラットフォームにより決定され、行動学的効果の予測するものである。（１）シグマ−２受容体と高い親和性で選択的に結合し、（２）ニューロンにおいて機能的アンタゴニストとして作用する化合物は、Ａβ誘導性膜輸送不良を阻止し；Ａβ誘導性シナプス消失を阻止し、かつＡベータオリゴマーの非存在下で輸送にもシナプス数にも影響を及ぼさなければ、行動学的効果を有するものと予測される。ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにおけるこの活性パターンを「治療表現型」と呼ぶ。シグマ−２受容体アンタゴニストが成熟ニューロンにおいて、Ａベータオリゴマーの非存在下で正常機能に影響を及ぼさずにＡベータオリゴマー作用を阻止することができるかどうかが治療表現型の１つの基準である。オリゴマーの非存在下で輸送またはシナプス数に影響を及ぼす化合物には行動学的効果はない。Ａベータオリゴマー誘導性記憶喪失に予防および治療に行動学的効果があるのは、正常な輸送に影響を及ぼさず、シナプス数を変化させずにオリゴマーを選択的に阻止する化合物のみである。一実施形態では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイプラットフォームにより行動学的効果を予測することができる。したがって、プラットフォームアッセイにおけるこの活性パターンが治療表現型である。
【０４１１】
まとめると、シグマ−２受容体において高い親和性を示す（好ましくは、Ｋｉが約６００ｎＭ、５００ｎＭ、４００ｎＭ、３００ｎＭ、２００ｎＭ、１５０ｎＭ、１００ｎＭ未満または７０ｎＭ未満である）シグマ−２アンタゴニストであって、シグマ受容体に対する選択性が他の非シグマＣＮＳ受容体または標的受容体の約２０倍超、３０倍超、５０倍超、７０倍超または好ましくは１００倍超であり、脳透過性ならびに代謝安定性および／または血漿中安定性を含めた優れた薬物様特性を有し、優れたを有し、治療表現型を有するシグマ−２アンタゴニストが行動学的効果を有すると予測され、治療を必要とする患者のＡベータオリゴマー誘導性シナプス機能不全の治療に用いることができる。
【０４１２】
経口生物学的利用能を有すると予測されるいくつかの式Ｉおよび／または式ＩＩによるイソインドリン化合物の機能的ニューロン表現型が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイによる特徴付けとともに表２に示されている。
【０４１３】
治療表現型
いくつかのシグマ−２リガンドは、３つの機能的ニューロン表現型：アンタゴニスト（Ａベータシグナル伝達を阻止する）；アゴニスト（Ｕ型の用量反応曲線でＡベータシグナル伝達を阻止し、高用量で毒性を示す；および不活性（ニューロン培養物に何ら効果を示さない）に分けられる。既知の先行技術のシグマ−１受容体リガンドは２つの種類：アンタゴニスト（Ａベータシグナル伝達を阻止する）および不活性（ニューロン培養物に何ら効果を示さない）に分けられる。先行技術の化合物のほとんどは、他の非シグマ受容体に対して有意な親和性を示すという点で、選択性が低いという欠点がある。いくつかの先行技術の化合物は、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過することができないほか、酸化的代謝の基質となる可能性があり、したがって、治療プロファイルには適合しないものと思われる。
【０４１４】
いくつかの臨床化合物は所望の機能的表現型を有するが、所望の治療プロファイルを満たさない。所望のアンタゴニスト機能的ニューロン表現型は有するが、非選択的であるか、ＢＢＢを通過できないか、酸化基質となることが予測され、代謝的に不安定であるかのいずれかにより、治療プロファイルの基準に当てはまらない既知の先行技術の化合物が国際公開第２０１３／０２９０６０号の表１１Ｃおよび１１Ｄ（参照により本明細書に組み込まれる）に示されている。
【０４１５】
実施例１４：ｉｎ  ｖｉｔｒｏ毒性。
代表的なシグマ−２アンタゴニスト被験化合物は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで急性に投与しても慢性に投与しても、ニューロン毒性もグリア毒性も誘発しない。シグマ−２受容体アンタゴニストは、膜輸送のＡベータオリゴマー誘導性の変化を打ち消すか、減少させる。オリゴマーを加えずに投与すると、膜輸送に対する化合物の有意な作用はみられない。ＥＣ５０濃度の１０倍までの濃度で３日間試験しても、ニューロン数、グリア数、核の大きさ、核の形態、神経突起の長さ、細胞骨格の形態に対する毒性は全くみられない。例えば、国際公開第２０１３／０２９０６０号の表１２（参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【０４１６】
被験化合物のｉｎ  ｖｉｔｒｏ毒性を多数の標準的アッセイで試験する。好ましくは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ毒性試験を実施することにより、１０μＭで遺伝毒性が認められない（ＡＭＥＳ試験、小核試験、細菌細胞毒性試験）；ＨｅｐＧ２腫瘍細胞系を用いてシグマ−２受容体における親和性の１００倍の親和性でＨｅｐＧ２毒性が認められない；１０μＭでＣＹＰ４５０酵素２Ｄ６、３Ａ４および２Ｃ１９の阻害が認められない；ｈＥＲＧ阻害が認められないことを明らかにする。被験化合物のｈＥＲＧ阻害（ＩＣ５０、ｎＭ）に関する結果が表２に示されている。
【０４１７】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される式Ｉもしくは式ＩＩによるイソインドリン化合物またはその薬学的に許容される塩は、最小限のｈＥＲＧ阻害を示し、ＩＣ５０が３００ｎＭ超、５００ｎＭ超、１，０００ｎＭ超、３，０００ｎＭ超、５，０００ｎＭ超、１０，０００超または２０，０００ｎＭ超である。特定の実施形態では、本明細書に提供される式Ｉもしくは式ＩＩによるイソインドリン化合物またはその薬学的に許容される塩は、最小限のｈＥＲＧ阻害を示し、５，０００ｎＭ超、１０，０００超または２０，０００ｎＭ超のＩＣ５０を示す。
【０４１８】
実施例１５：膜輸送アッセイを用いた化合物ＩＩの鏡像異性体の分離および活性。
いくつかの実施形態では、類似体のうちの１つの実質的に純粋な鏡像異性体または純粋な鏡像異性体を得るため、非対称的に合成を実施する。いくつかの場合には、当該技術分野で公知の任意の技術によりラセミ混合物からキラル化合物を分割する。
【０４１９】
いくつかの場合には、キラルクロマトグラフィーによりキラル化合物を（＋）鏡像異性体と（−）鏡像異性体に分離する。既知の技術によりラセミ混合物をキラルカラムのＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＤ−Ｈ（シリカゲルにコートしたアミローストリス（３，５−ジメチルフェニルカルバマート）；４．６×２５０ｍｍ）に加えることができる；例えば、国際公開第２０１３／０２９０６０号の実施例１５（参照により本明細書に組み込まれる）。カラムから溶出させた後、（＋）鏡像異性体および（−）鏡像異性体それぞれの特異的回転を決定する。分割された鏡像異性体を、例えば膜輸送アッセイで、別個に試験する。
【０４２０】
実施例１６．経口的に利用可能な化合物の行動学的効果−トランスジェニックアルツハイマー病マウスモデルにおける記憶欠損の改善。
ＡＤのＴＧモデルとして雄ｈＡＰＰ  Ｓｗｅ／Ｌｄｎトランスジェニック（Ｔｇ）マウスを用いる。溶媒または１０ｍｇ／（ｋｇ・日）もしくは３０ｍｇ／（ｋｇ・日）の被験化合物で特定の期間経口治療したトランスジェニックマウスおよび溶媒で治療した非トランスジェニック同腹子を標準的は恐怖条件付けパラダイムに供する。溶媒で同じ期間の間経口治療した９か月齢の溶媒治療雄ｈＡＰＰ  Ｓｗｅ／Ｌｄｎトランスジェニック（Ｔｇ）マウスは、状況的恐怖条件付けで溶媒治療非トランスジェニック同腹子に比して有意な記憶欠損を示した。
【０４２１】
連合記憶について試験する場合、訓練から２４時間後、反復測定による二元（遺伝子型および時間）ＡＮＯＶＡを用いて、トランスジェニック溶媒治療マウスと非トランスジェニック溶媒治療マウスとの間の総すくみ時間の有意差を検出する。経口的に利用可能な化合物の脳中濃度／血漿中トラフ濃度の比および脳中濃度／血漿中ピーク濃度の比を求める。これに続く試験を用いて、好ましい被験化合物の最小有効量を決定することができる。
【０４２２】
合成例
本明細書に提供される化合物は、任意の合成経路を介して合成され得るものであり、例えば、国際公開第２０１３／０２９０６０号および同第２０１３／０２９０６７号（それぞれ参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【０４２３】
実施例１７：ｇｅｍ−ジメチルアミン中間体の合成。
実施例１７Ａでは、スキーム１に示される例示的ｇｅｍ−ジメチルアミン中間体の調製について説明する。
【化３３】
0006517827.tif 000056
【０４２４】
スキーム１．例示的ｇｅｍ−ジメチルアミン中間体、４−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−メチルブタン−２−アミンの調製。
【０４２５】
スキーム１では、ｇｅｍ−ジメチルアミン中間体である化合物１１；４−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−メチルブタン−２−アミンの調製手順について説明する。
【０４２６】
化合物３；３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−４−ヒドロキシベンズアルデヒドの調製（スキーム１）：攪拌している３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド１（２．０ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３０ｍＬ）溶液に濃Ｈ２ＳＯ４（０．１ｍＬ）を加え、イソブチレンを３時間吹き込んだ。トリエチルアミン（２ｍＬ）を加え、混合物を室温で１時間攪拌し、減圧下で濃縮して残渣を得、これをシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）により精製して、化合物３（１．０１ｇ、３５％）を得た。
【０４２７】
化合物５、（Ｅ）−４−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−４−ヒドロキシフェニル）ブタ−３−エン−２−オンの調製（スキーム１）：攪拌している３（０．８ｇ、４．１ｍｍｏｌ）のアセトン（１０ｍＬ）溶液に１０％ＮａＯＨ水溶液（０．５ｍＬ）を加えた。混合物を室温で１２時間攪拌し、氷水に注加し、これを酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出した。水相を１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ６になるまで酸性化した。反応物をＥｔＯＡｃ（３×３０ｍＬ）で抽出し、有機層をブラインおよび水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮して残渣を得、これをシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝３：１）により精製して、表題化合物５（０．５ｇ、５０％）を得た。
【０４２８】
化合物７、（Ｅ）−４−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ブタ−３−エン−２−オンの調製（スキーム１）：攪拌している５（０．２２ｇ、０．９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４０ｍＬ）溶液にＴＢＳＣｌ（０．２８ｇ、１．８ｍｍｏｌ）およびイミダゾール（０．１４ｇ、２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で８時間攪拌し、減圧下で濃縮して残渣を得、これをシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）により精製して、表題化合物７（０．２２ｇ、６７％）を得た。
【０４２９】
化合物８、４−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ブタン−２−オンの調製（スキーム１）：攪拌している７（０．２２ｇ、０．６ｍｍｏｌ）のＥＡ（１０ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（０．０２ｇ）を加えた。混合物を室温で１２時間攪拌し、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮して残渣を得、これをシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）により精製して、表題化合物８（０．６ｇ、０．４ｍｍｏｌ、６８％）を得た。
【０４３０】
化合物９、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（４−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）ブタン−２−イリデン）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミドの調製（スキーム１）：攪拌している８（２．６ｇ、７．４ｍｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（３０ｍＬ）溶液に（Ｒ）−（＋）−ｔ−ブチルスルフィンアミド（１．０ｇ、８．１４ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＴｉ（ＯＥｔ）４（３．２ｇ、１４．８ｍｍｏｌ、２．０当量）を加えた。混合物を７０℃で一晩攪拌した。氷水で反応を停止させ、ろ過した。ろ液を酢酸エチルで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して粗生成物９（２．７ｇ、８０％）を得、これを次の段階に直接用いた。
【０４３１】
化合物１０、（Ｒ）−Ｎ−（４−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−メチルブタン−２−イル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミドの調製（スキーム１）：０℃で攪拌している９（２．７ｇ、５．９ｍｍｏｌ、１当量）のエーテル（３０ｍＬ）溶液にメチルマグネシウムブロミド（１０ｍＬ、３０ｍｍｏｌ、５当量）を加えた。混合物を室温で４時間攪拌した。氷水で反応を停止させ、酢酸エチルで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して残渣を得、これをシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）により精製して、化合物１０（１．６ｇ、５７％）を得た。
【０４３２】
化合物１１；４−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）−２−メチルブタン−２−アミンの調製（スキーム１）：攪拌している１０（１．２ｇ、２．５５ｍｍｏｌ、１当量）のＥＡ（３０ｍＬ）溶液にＥＡ（ＨＣｌ）（１０ｍＬ）を０℃で加えた。混合物を室温で２時間攪拌し、減圧下で濃縮して、１１（１．３ｇ、１００％）を黄色の油として得た。これに類似した合成経路を用いて、式Ｉおよび／またはＩＩのイソインドリンの合成に使用するｇｅｍ−ジメチルアミン中間体を調製することができる。ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ置換基および／またはｔｅｒｔ−ブトキシ置換基を別の置換基に置き換えてもよく、また、ほかのＲ１基を用いて他の類似体を作製してもよい。
【０４３３】
実施例１７Ｂでは、スキーム３に示されるｇｅｍ−ジメチルアミン中間体の一般的な調整について説明する。
【化３４】
0006517827.tif 000057
【０４３４】
スキーム３：ｇｅｍ−ジメチルアミンの一般的な調製
【０４３５】
化合物２；（Ｅ）−４−（４−フルオロフェニル）ブタ−３−エン−２−オンの調製（スキーム３）：攪拌している１，４−フルオロベンズアルデヒド（１００ｇ、８０５．７ｍｍｏｌ、１当量）のアセトン（１０００ｍＬ）溶液に１０％ＮａＯＨ水溶液（１００ｍＬ）を加えた。混合物を室温で１２時間攪拌した後、氷水に注加し、これをＥｔＯＡｃ（３×３００ｍＬ）で抽出した。有機層をブライン、水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮して残渣を得、これをシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）により精製して、表題化合物２；（Ｅ）−４−（４−フルオロフェニル）ブタ−３−エン−２−オン（１１０ｇ、８５％）を得た。
【０４３６】
化合物３；４−（４−フルオロフェニル）ブタン−２−オンの調製（スキーム３）：攪拌している２（５０ｇ、３０４．５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（４０ｍＬ）溶液にＰｄ／Ｃ（１０％、５ｇ）を加えた。混合物を室温で４時間攪拌した後、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮して化合物３；４−（４−フルオロフェニル）ブタン−２−オン（５０ｇ、３００．９ｍｍｏｌ、９９％）を得、これを次の段階に直接用いた。
【０４３７】
化合物４；（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（４−（４−フルオロフェニル）ブタン−２−イリデン）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミドの調製（スキーム３）：攪拌している３（５０ｇ、３００．９ｍｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（３０ｍＬ）溶液に（Ｒ）−（＋）−ｔ−ブチルスルフィンアミド（４０．４ｇ、３３１ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＴｉ（ＯＥｔ）４（１３６．８ｇ、６００．２ｍｍｏｌ、２当量）を加えた。混合物を７０℃で一晩攪拌し、氷水により反応を停止させ、ろ過し、ＥＡで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して粗生成物４（６５ｇ、８０％）を得、これを次の段階に直接用いた。
【０４３８】
化合物５；（Ｒ）−Ｎ−（４−（４−フルオロフェニル）−２−メチルブタン−２−イル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミドの調製（スキーム３）：攪拌している４（３０ｇ、１１１．４ｍｍｏｌ、１．０当量）のエーテル（３０ｍＬ）溶液にＭｅＭｇＢｒ（１１１ｍＬ、３３３ｍｍｏｌ、３．０当量）を０℃で加えた。混合物を室温で４時間攪拌した。氷水により反応を停止させ、ＥＡで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して残渣を得、これをシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）により精製して、表題化合物５（２８．６ｇ、９０％）を得た。
【０４３９】
化合物６；４−（４−フルオロフェニル）−２−メチルブタン−２−アミンの調製（スキーム３）：攪拌している５（２８．６ｇ、１００ｍｍｏｌ、１当量）のＥＡ（１５０ｍＬ）溶液にＥＡ（ＨＣｌ）（２００ｍＬ）を０℃で加えた。混合物を室温で２時間攪拌し、減圧下で濃縮して、６（１８ｇ、１００％）を黄色の油として得た。
【０４４０】
実施例１７Ｃでは、スキーム７に示されるｇｅｍ−ジメチルアミン中間体、４−（３−アミノ−３−メチルブチル）−２−（トリフルオロメトキシ）フェノール塩酸塩の一般的な調製について説明する。
【化３５】
0006517827.tif 000058
【０４４１】
スキーム７：ｇｅｍ−ジメチルアミン中間体、４−（３−アミノ−３−メチルブチル）−２−（トリフルオロメトキシ）フェノール塩酸塩の調製。
【０４４２】
化合物２の調製（スキーム７）：攪拌している２−トリフルオロメトキシルフェノール１（４０．０ｇ、０．２２４ｍｏｌ、１当量）のトリフルオロ酢酸（４００ｍＬ）溶液にヘキサメチレンテトラミン（１８８．７ｇ、１．３５ｍｏｌ、６当量）を加えた。混合物を７０℃で１２時間攪拌した。真空により濃縮した後、反応混合物を２Ｎ  ＨＣｌに溶かし、ＥＡ（３×４００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮してオレンジ色の油を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）にかけて表題化合物２（３０．０ｇ、６５％）を得た。
【０４４３】
化合物３の調製（スキーム７）：攪拌している４−ヒドロキシ−３−トリフルオロメトキシ−ベンズアルデヒド（３０．０ｇ、１４５．５ｍｍｏｌ、１．０当量）のアセトン（３００ｍＬ）溶液に１０％ＮａＯＨ水溶液（１５０ｍＬ）を加えた。混合物を室温で１２時間攪拌し、氷水に注加した。反応物をＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出した。水相を１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ６になるまで酸性化した。反応物をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機層をブラインおよび水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮して残渣を得、これをシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝３：１）により精製して、表題化合物３（３０．１ｇ、８４％）を得た。
【０４４４】
化合物４の調製（スキーム７）：４−（４−ヒドロキシ−３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−ブタ−３−エン−２−オン（１２ｇ、４７．５ｍｍｏｌ）のメタノール（１００ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（１ｇ）を加えた。得られた溶液をＨ２雰囲気下で８時間攪拌した。溶液をセライトのパッドでろ過し、濃縮して粗４−（４−ヒドロキシ−３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−ブタン−２−オン（１１ｇ、９４％）を得た。
【０４４５】
化合物５の調製（スキーム７）：４−（４−ヒドロキシ−３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−ブタン−２−オン（１１ｇ、４４．３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液に（Ｒ）−（＋）−ｔ−ブチルスルフィンアミド（７．０ｇ、５８ｍｍｏｌ）およびＴｉ（ＯＥｔ）４（２２．０ｇ、９６．７ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を一晩攪拌した。氷水で反応を停止させ、ろ過した。ろ液を酢酸エチルで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して粗生成物５（１１．２ｇ、７８％）を得、これを次の段階に用いた。
【０４４６】
化合物６の調製（スキーム７）：攪拌している５（２３ｇ、４９．４ｍｍｏｌ、１当量）のエーテル（１２０ｍＬ）溶液にＭｅＭｇＢｒ（８２ｍＬ、２４７ｍｍｏｌ、５当量）を０℃で加えた。混合物を室温で４時間攪拌した。氷水で反応を停止させ、ＥＡで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して残渣を得、これをシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）により精製して、表題化合物６（１６．７ｇ、７０％）を得た。
【０４４７】
化合物７の調製（スキーム７）：攪拌している６（１．０ｇ、２．０８ｍｍｏｌ、１当量）の酢酸エチル（５ｍＬ）にＨＣｌの酢酸塩（５ｍＬ）飽和溶液を０℃で加えた。混合物を室温で２時間攪拌し、減圧下で濃縮して、化合物７（０．８５ｇ、１００％）を黄色の油として得た。
【０４４８】
実施例１７Ｄでは、スキーム８に示されるｇｅｍ−ジメチルアミン中間体、４−（４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−３−（トリフルオロメトキシ）フェニル）−２−メチルブタン−２−アミンの一般的な調製について説明する。
【化３６】
0006517827.tif 000059
【０４４９】
スキーム８：ｇｅｍ−ジメチルアミン、４−（４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−３−（トリフルオロメトキシ）フェニル）−２−メチルブタン−２−アミンの調製。
【０４５０】
化合物５の調製（スキーム８）：攪拌している４（１８ｇ、７２．５ｍｍｏｌ、１当量）のＤＣＭ（２００ｍＬ）溶液にＴＢＳＣｌ（１６．４ｇ、１０８．８ｍｍｏｌ、１．５当量）およびイミダゾール（９．９ｇ、１４５ｍｍｏｌ、２．０当量）を加えた。混合物を室温で８時間攪拌し、減圧下で濃縮して残渣を得、これをシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）により精製して、表題化合物５（１９ｇ、７３％）を得た。
【０４５１】
化合物６の調製（スキーム８）：攪拌している５（１．２ｇ、３．３ｍｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液に（Ｒ）−（＋）−ｔ−ブチルスルフィンアミド（０．４ｇ、３．６ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＴｉ（ＯＥｔ）４（１．５ｇ、６．６ｍｍｏｌ、２当量）を加えた。混合物を７０℃で一晩攪拌した。氷水で反応を停止させ、ろ過し、酢酸エチルで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗生成物６（１．６ｇ、９７％）を得、これを次の段階に直接用いた。
【０４５２】
化合物７の調製（スキーム８）：０℃で攪拌している６（１．６ｇ、３．４ｍｍｏｌ、１．０当量）のエーテル（３０ｍＬ）溶液にＭｅＭｇＢｒ（５ｍＬ、１７ｍｍｏｌ、５．０当量）を加えた。混合物を室温で４時間攪拌した。氷水で反応を停止させ、酢酸エチルで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して残渣を得、これをシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）により精製して、表題化合物７（０．６ｇ、１．２ｍｍｏｌ、３７％）を得た。
【０４５３】
化合物８の調製（スキーム８）：攪拌している７（３．０ｇ、６．２ｍｍｏｌ、１当量）の酢酸エチル（３０ｍＬ）にＨＣｌの酢酸塩（１０ｍＬ）飽和溶液を０℃で加えた。混合物を室温で２時間攪拌し、減圧下で濃縮して、化合物８  ４−（４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−３−（トリフルオロメトキシ）フェニル）−２−メチルブタン−２−アミン（２．６ｇ、１００％）を黄色の油として得た。
【０４５４】
実施例１７Ｅでは、スキーム１１に示されるｇｅｍ−ジメチルアミン中間体、４−（３−アミノ−３−メチルブチル）−２−（トリフルオロメトキシ）フェニルジメチルカルバマート塩酸塩の一般的な調製について説明する。
【化３７】
0006517827.tif 000060
【０４５５】
スキーム１１：ｇｅｍ−ジメチルアミン、４−（３−アミノ−３−メチルブチル）−２−（トリフルオロメトキシ）フェニルジメチルカルバマート塩酸塩の調製。
【０４５６】
化合物８ｃの調製（スキーム１１）：７ｃ（５．０ｇ、１３．６ｍｍｏｌ、１．０当量）およびジメチルカルバミルクロリド（３．０ｇ、２７．８ｍｍｏｌ、２．２当量）のＤＣＭ（１００ｍＬ）溶液にＤＭＡＰ（０．２５ｇ、５ｍｏｌ％）、ＴＥＡ（２．９ｇ、２２．６ｍｍｏｌ、２．０当量）を加えた。混合物を室温で１２時間攪拌した。真空により濃縮した後、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（２０％〜３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）にかけて、生成物８ｃ（４．８ｇ、４８％）を得た。
【０４５７】
化合物８ｄ；４−（３−アミノ−３−メチルブチル）−２−（トリフルオロメトキシ）フェニルジメチルカルバマート塩酸塩の調製（スキーム１１）：０℃で攪拌している８ｃ（４．８ｇ、１１．０ｍｍｏｌ、１当量）のＥＡ（３０ｍＬ）溶液にＥＡ（ＨＣｌ）（３０ｍＬ）を加えた。混合物を室温で２時間攪拌し、減圧下で濃縮して、８ｄ（４．１ｇ、１００％）を黄色の油として得た。
【０４５８】
実施例１８：キラルアミン中間体の一般的な調製。
【０４５９】
実施例１８Ａでは、スキーム２に示されるキラルアミン中間体、（Ｒ）−４−（３−アミノブチル）−２−イソプロポキシフェノールの調製の１つの例について説明する。
【化３８】
0006517827.tif 000061
【０４６０】
スキーム２：キラルアミン中間体、（Ｒ）−４−（３−アミノブチル）−２−イソプロポキシフェノールの一般的な調製。
【０４６１】
化合物２；（Ｒ）−Ｎ−（（Ｒ）−４−（４−ヒドロキシ−３−イソプロポキシフェニル）ブタン−２−イル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミドの調製（スキーム２）：攪拌している１；（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（４−（４−ヒドロキシ−３−イソプロポキシフェニル）ブタン−２−イリデン）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（２０ｇ、６１．４ｍｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（２００ｍＬ）溶液にＤＡＢＡＬ−Ｈ（１８０ｍＬ、１８０ｍｍｏｌ、３当量）を−７８℃で加えた。混合物を−７８℃で４時間攪拌した後、氷水（２０ｍＬ）で反応を停止させ、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮して残渣を得、これをシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）により精製して、表題化合物２（１７．１ｇ、５２．２ｍｍｏｌ、８５％）を得た。
【０４６２】
化合物３；（Ｒ）−４−（３−アミノブチル）−２−イソプロポキシフェノールの調製（スキーム２）：攪拌している２（１７．１ｇ、５２．２ｍｍｏｌ、１当量）のＥＡ（５０ｍＬ）溶液にＥＡ（ＨＣｌ）（５０ｍＬ、１００ｍｍｏｌ、２当量、２Ｎ）を０℃で加えた。混合物を室温で２時間攪拌し、減圧下で濃縮して、化合物３（１１．６ｇ、１００％）を黄色の油として得た。
【０４６３】
実施例１８Ｂでは、スキーム４に示される出発物質３，４−ベンズアルデヒドからのキラルアミン中間体、（Ｒ）−４−（３，４−ジイソプロポキシフェニル）ブタン−２−アミンの調製について説明する。
【化３９】
0006517827.tif 000062
【０４６４】
スキーム４：キラルアミン、（Ｒ）−４−（３，４−ジイソプロポキシフェニル）ブタン−２−アミンの一般的な調製。
【０４６５】
化合物１の調製（スキーム４）：３，４−ジヒドロキシ−ベンズアルデヒド１ａ（３０．０ｇ、６５．７ｍｍｏｌ、１当量）と２−ブロモプロパン（１８．４ｇ、１３１．４ｍｍｏｌ、２当量）とＮａＨ（５．４ｇ、油中６０％、１３０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３００ｍＬ）混合物を７０℃で１２時間攪拌した。真空により濃縮した後、混合物を２Ｎ  ＨＣｌで希釈し、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮してオレンジ色の油を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（２０％〜３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）にかけて、生成物１；３，４−ジイソプロポキシベンズアルデヒド（１０．１ｇ、３０％）を得た。
【０４６６】
化合物２の調製（スキーム４）：化合物１（２０ｇ、９０ｍｍｏｌ）をアセトン（８０ｍＬ）に溶かした。次いで、容器にエタノール（８ｍＬ）、１０％ＮａＯＨ（８０ｍＬ）および水（２００ｍＬ）を加えた。得られた溶液を８時間攪拌し、ＥＡ（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮してオレンジ色の油を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにかけて、化合物２；（Ｅ）−４−（３，４−ジイソプロポキシフェニル）ブタ−３−エン−２−オン（１２ｇ、９８％）を得た。
【０４６７】
化合物３の調製（スキーム４）：攪拌している化合物２（３０．０ｇ、１１４ｍｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（３００ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（３ｇ）を加えた。混合物を室温で１２時間攪拌し、セライトのパッドでろ過した。ろ液を減圧下で濃縮して残渣を得、これをシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）により精製して、表題化合物３；４−（３，４−ジイソプロポキシフェニル）ブタン−２−オン（１１．４ｇ、３８％）を得た。
【０４６８】
化合物４の調製（スキーム４）：攪拌している化合物３（１１．４ｇ、４３．１ｍｍｏｌ、１．０当量）のＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液に（Ｒ）−（＋）−ｔ−ブチルスルフィンアミド（５．７ｇ、４７．４ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＴｉ（ＯＥｔ）４（１９．７ｇ、８６．２ｍｍｏｌ、２．０当量）を加えた。混合物を７０℃で一晩攪拌した。氷水で反応を停止させ、ろ過し、酢酸エチルで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して粗生成物４（１５ｇ、９５％）を得、これを次の段階に直接用いた。
【０４６９】
化合物５の調製（スキーム４）：−７８℃で攪拌している４（６．３ｇ、１７．１ｍｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（５０ｍＬ）にＤＡＢＡＬ−Ｈ（３４ｍＬ、３４ｍｍｏｌ、２．０当量）を加えた。混合物を−７８℃で４時間攪拌し、氷水（２０ｍＬ）で反応を停止させ、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮して残渣を得、これをシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）により精製して、表題化合物５；（Ｒ）−Ｎ−（（Ｒ）−４−（３，４−ジイソプロポキシフェニル）ブタン−２−イル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（２．５ｇ、４０％）を得た。
【０４７０】
化合物６の調製（スキーム４）：攪拌している５（２．５ｇ、６．８ｍｍｏｌ、１．０当量）のＥＡ（３０ｍＬ）溶液にＨＣｌの酢酸エチル（１０ｍＬ）飽和溶液を０℃で加えた。混合物を室温で２時間攪拌し、減圧下で濃縮して、化合物６；（Ｒ）−４−（３，４−ジイソプロポキシフェニル）ブタン−２−アミン（２．１ｇ、１００％）を黄色の油として得た。
【０４７１】
実施例１８Ｃでは、スキーム５に示されるキラルアミン中間体、（Ｒ）−２−（４−（３−アミノブチル）−２−メトキシフェノキシ）エタン−１−オールの調製について説明する。
キラルアミンの一般的な調製
【化４０】
0006517827.tif 000063
【０４７２】
スキーム５：キラルアミン中間体、（Ｒ）−２−（４−（３−アミノブチル）−２−メトキシフェノキシ）エタン−１−オールの調製。
【０４７３】
化合物２；（Ｒ）−Ｎ−（（Ｒ）−４−（４−（２−ヒドロキシエトキシ）−３−メトキシフェニル）ブタン−２−イル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミドの調製（スキーム５）：攪拌している化合物１；（Ｒ）−Ｎ−（（Ｒ）−４−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）ブタン−２−イル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（４．３ｇ、１４．４ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＭＦ（５０ｍＬ）溶液にＫ２ＣＯ３（４．０ｇ、２８．８ｍｍｏｌ、２．０当量）および２−ブロモエタノール（１．５ｇ、１３．６ｍｍｏｌ、１．２当量）を加えた。混合物を８０℃で８時間攪拌し、氷水（１００ｍＬ）で反応を停止させ、ＥＡ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮してオレンジ色の油を得た。粗生成物をシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）により精製して、表題化合物２（３．１ｇ、６３％）を得た。
【０４７４】
化合物３；（Ｒ）−２−（４−（３−アミノブチル）−２−メトキシフェノキシ）エタン−１−オールの調製（スキーム５）：攪拌している２（３．１ｇ、９．０ｍｍｏｌ、１．０当量）のＥＡ（３０ｍＬ）溶液にＨＣｌ−ＥＡ（１０ｍＬ）を０℃で加えた。混合物を室温で２時間攪拌し、減圧下で濃縮して、３（２．１ｇ、１００％）を黄色の油として得た。
【０４７５】
実施例１８Ｄでは、スキーム６に示されるキラルアミン中間体、（Ｓ）−４−（３，４−ジクロロフェニル）−１−メトキシブタン−２−アミンの調製について説明する。
【化４１】
0006517827.tif 000064
【０４７６】
スキーム６：キラルアミン中間体、（Ｓ）−４−（３，４−ジクロロフェニル）−１−メトキシブタン−２−アミンの調製。
【０４７７】
化合物２；３−（ｔｅｒｔ−ブチル）４−メチル（Ｒ）−２，２−ジメチルオキサゾリジン−３，４−ジカルボキシラートの調製（スキーム６）：室温の化合物１；メチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−セリン（１３ｇ、５９．２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１５０ｍＬ）溶液にトルエン−４−スルホン酸一水和物（２．０ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）および２，２−ジメトキシプロパン（１８．５ｇ、１７７．６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で４８時間攪拌し、濃縮して残渣を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝４：１）により精製して、化合物２（１３ｇ、８４％）を黄色の油として得た。
【０４７８】
化合物３の調製（スキーム６）：ＬｉＡｌＨ４（２．８５ｇ、７５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２００ｍＬ）混合物を０℃、Ｎ２下で２０分間攪拌した。０℃の混合物に化合物２（１３．０ｇ、５０．１ｍｍｏｌ）を滴加した。混合物を３０分間攪拌し、Ｎａ２ＳＯ４・１０Ｈ２Ｏで反応を停止させ、ろ過した。ろ液を濃縮して残渣を得、これをＦＣＣ（ＰＥ：ＥＡ＝４：１）により精製して、化合物３（１０．３ｇ、８９％）を黄色の油として得た。
【０４７９】
化合物４の調製（スキーム６）：予め−７８℃に冷却した塩化オキサリル（７．６ｇ、６０．１ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（２００ｍｌ）溶液にＤＭＳＯ（９．３ｇ、１２０．２１ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（２０ｍＬ）溶液を加えた。混合物を３０分間攪拌した。−７８℃の混合物に化合物３（１０．３ｇ、４４．５ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（３０ｍＬ）溶液を加えた。反応混合物を−７８℃で２時間攪拌し、この時点でトリエチルアミン（１８．０ｇ、１７８．１３）を加えた。得られた溶液を０℃に温め、ブライン（３０ｍＬ）で反応を停止させ、ジエチルエーテル（２×３００ｍＬ）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、濃縮して、化合物４（９．０ｇ、８５％）を油として得た。
【０４８０】
化合物６の調製（スキーム６）：−７８℃、Ｎ２下の化合物５（２８５ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５ｍｌ）溶液にｎ−ＢｕＬｉ（０．３ｍＬ、２．５Ｍ）を加えた。１０分後、沈殿が消失するまで反応混合物を−４０℃に温めた。反応混合物を−７８℃に冷却し、化合物４（１３０ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液を−７８℃で滴加した。得られた溶液を室温に温め、一晩攪拌した後、メタノール（２ｍＬ）で反応を停止させた。３０分間攪拌した後、混合物を濃縮して残渣を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝４：１）により精製して、化合物６（２００ｍｇ、９０％）を黄色の油として得た。
【０４８１】
化合物７の調製（スキーム６）：化合物６（２．６ｇ、６．９８ｍｍｏｌ）のメタノール（５０ｍＬ）溶液にＰｄ／Ｃ（２．０ｇ）をＨ２バルーン下、室温で加えた。混合物を１２時間攪拌し、ろ過し、濃縮して残渣を得、これをＦＣＣ（ＰＥ）により精製して、化合物７（２．０ｇ、７７％）を黄色の油として得た。
【０４８２】
化合物８の調製（スキーム６）：化合物７（５００ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液に０．５Ｍ  ＨＣｌ（１ｍＬ）を室温で加えた。反応物を１２時間攪拌し、Ｍｇ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過した。ろ液を濃縮して残渣を得、これをＦＣＣ（ＰＥ）により精製して、７（４００ｍｇ、９０％）を黄色の油として得た。
【０４８３】
化合物９の調製（スキーム６）：化合物８（１４０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１０ｍＬ）溶液にＡｇ２Ｏ（２００ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）、次いでヨウ化メチル（０．１５ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２４時間攪拌し、セライトのパッドでろ過した。ろ液を濃縮して残渣を得、これを分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物９（７０ｍｇ、４８％）を黄色の油として得た。
【０４８４】
化合物１０の調製（スキーム６）：化合物９（７０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２ｍＬ）溶液にＴＦＡ（１ｍＬ）を加えた。混合物を２４時間攪拌し、濃縮して、化合物１０；（Ｓ）−４−（３，４−ジクロロフェニル）−１−メトキシブタン−２−アミン（５０ｍｇ、１００％）を油として得た。
【０４８５】
実施例１８Ｅでは、スキーム９に示されるキラルアミン中間体、（Ｒ）−４−（３−アミノブチル）−２−（トリフルオロメトキシ）フェノールの調製について説明する。
【化４２】
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【０４８６】
スキーム９：キラルアミン、（Ｒ）−４−（３−アミノブチル）−２−（トリフルオロメトキシ）フェノールの調製。
【０４８７】
化合物６の調製（スキーム９）：化合物５（１１ｇ、３１．３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶かし、−７８℃に冷却した。次いで、容器にＤＩＢＡＬ−Ｈ（６０ｍＬ、ＴＨＦ中１．５Ｍ、９０ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を３時間攪拌した。反応混合物をＴＬＣにより分析したところ、出発イミンが完全に消費されてスルフィンアミド化合物５が生じたことが示された。次いで、水で溶液の反応を停止させ、ＥＡ（３×５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮してオレンジ色の油を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（５０％〜７５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）にかけて、生成物６（６ｇ、５５％）を得た。
【０４８８】
化合物７；（Ｒ）−４−（３−アミノブチル）−２−（トリフルオロメトキシ）フェノール（スキーム９）の調製：化合物６（７ｇ、１５ｍｍｏｌ）をＥＡ（２０ｍＬ）に溶かした。次いで、容器にＥＡ−ＨＣｌ（２０ｍＬ、１．５Ｍ、３０ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を室温で２時間攪拌した。溶液をＨ２Ｏ（５０ｍＬで３回）抽出した。合わせた水層を飽和Ｎａ２ＣＯ３でｐＨ１０に調整し、ＥＡ（５０ｍＬで３回）洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮して生成物７（５ｇ、９５％）を得た。
【０４８９】
実施例１８Ｆでは、スキーム１０に示されるキラルアミン中間体、（Ｒ）−４−（３−アミノブチル）−２−（トリフルオロメトキシ）フェニルジメチルカルバマートの調製について説明する。
【化４３】
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【０４９０】
スキーム１０：キラルアミン、（Ｒ）−４−（３−アミノブチル）−２−（トリフルオロメトキシ）フェニルジメチルカルバマートの調製。
化合物６ｂの調製（スキーム１０）：攪拌している６（４ｇ、１１．３ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＣＭ（５０ｍＬ）溶液にＤＭＡＰ（０．２ｇ、５ｍｏｌ％）、ＴＥＡ（２．３ｇ、２２．６ｍｍｏｌ、２．０当量）およびジメチルカルバミルクロリド５（１．５ｇ、１３．６ｍｍｏｌ、１．２当量）を加えた。混合物を４０℃で４時間攪拌し、氷水（２０ｍＬ）で反応を停止させた。混合物をＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮してオレンジ色の油を得た。粗生成物をシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）により精製して、表題化合物６ｂ（２．８ｇ、５８％）を得た。
【０４９１】
化合物７ｂの調製（スキーム１０）：０℃で攪拌している６ｂ（３ｇ、７．１ｍｍｏｌ、１当量）のＥＡ（３０ｍＬ）溶液にＥＡ（ＨＣｌ）（１０ｍＬ）を加えた。混合物を室温で２時間攪拌し、減圧下で濃縮して、７ｂ（１．８ｇ、１００％）を黄色の油として得た。
【０４９２】
実施例１８Ｇでは、スキーム１２に示されるキラルアミン中間体、（Ｒ）−２−（４−（３−アミノブチル）−２−（トリフルオロメトキシ）フェノキシ）エタン−１−オールの調製について説明する。
【化４４】
0006517827.tif 000067
【０４９３】
スキーム１２：キラルアミン、アミン（Ｒ）−２−（４−（３−アミノブチル）−２−（トリフルオロメトキシ）フェノキシ）エタン−１−オールの調製。
化合物２の調製（スキーム１２）：攪拌している１（０．７ｇ、２ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液にＫ２ＣＯ３（０．５５ｇ、４ｍｍｏｌ、２．０当量）および２−ブロモエタノール（０．３ｇ、２．４ｍｍｏｌ、１．２当量）を加えた。混合物を８０℃で８時間攪拌し、氷水（３０ｍＬ）で反応を停止させ、ＥＡ（２０ｍＬで３回）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮してオレンジ色の油を得た。粗生成物をシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）により精製して、表題化合物２（０．６６ｇ、８３％）を得た。
【０４９４】
化合物３の調製（スキーム１２）：攪拌している２（０．９ｇ、２．３ｍｍｏｌ、１当量）のＥＡ（３０ｍＬ）溶液にＥＡ（ＨＣｌ）（１０ｍｌ）を０℃で加えた。混合物を室温で２時間攪拌し、減圧下で濃縮して、３（０．７５ｇ、１００％）を黄色の油として得た。
【０４９５】
実施例１９：キラルアミン中間体またはｇｅｍ−ジメチルアミン中間体からのイソインドリンの一般的な調製。
【０４９６】
実施例１９Ａでは、スキーム１３に示されるｇｅｍ−ジメチルアミン中間体からのイソインドリン化合物５６、２−（４−（４−ヒドロキシ−３−（トリフルオロメトキシ）フェニル）−２−メチルブタン−２−イル）イソインドリン−４−カルボン酸の調製について説明する。
【化４５】
0006517827.tif 000068
【０４９７】
スキーム１３：イソインドリン、２−（４−（４−ヒドロキシ−３−（トリフルオロメトキシ）フェニル）−２−メチルブタン−２−イル）イソインドリン−４−カルボン酸の調製（例５６）。
【０４９８】
化合物２の調製（スキーム１３）：１；２，３−ジメチル安息香酸（２．０ｇ、１３．３ｍｍｏｌ、１．０当量）のＭｅＯＨ（３０ｍＬ）溶液に塩化チオニル（１．５ｍＬ）を加え、３時間、還流攪拌した。混合物を濃縮し、ＥＡ（３０ｍＬ）で抽出した。有機層を水（２×３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、それ以上精製せずに所望生成物２を得た（２．１ｇ、９８％）。
【０４９９】
化合物３の調製（スキーム１３）：２（２．１ｇ、１３．３ｍｍｏｌ、１．０当量）のＣＣｌ４（３０ｍＬ）溶液にＮＢＳ（４．７ｇ、２６．６ｍｍｏｌ、２．０当量）およびＢＰＯ（０．２ｇ）を加えた。混合物を４時間、加熱還流した。反応物をＤＣＭ（３０ｍＬ）で希釈し、水（２×３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して粗生成物を得、これをカラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物３；２，３−ビス（ブロモメチル）安息香酸メチル（４．０ｇ、９４％）を得た。
【０５００】
化合物５の調製（スキーム１３）：３（０．３ｇ、０．９３ｍｍｏｌ、１．０当量）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液にＮａ２ＣＯ３（０．２ｇ、１．９ｍｍｏｌ、２．０当量）を加えた。混合物を４時間、還流攪拌した。得られた混合物をＥＡで希釈し、ブラインで洗浄し、濃縮し、それ以上精製せずに粗生成物５を得た（３００ｍｇ、８２％）。
【０５０１】
化合物６の調製（スキーム１３）：５（０．３ｇ、０．５６ｍｍｏｌ、１．０当量）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液に１０Ｎ  ＮａＯＨ（５ｍＬ）を加えた。混合物を５５℃で４時間攪拌した。得られた混合物を濃縮し、６Ｎ  ＨＣｌでｐＨ５に調整した。混合物をＥＡで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して残渣を得、これを分取ＨＰＬＣにより精製して、所望生成物の２−（４−（４−ヒドロキシ−３−（トリフルオロメトキシ）フェニル）−２−メチルブタン−２−イル）イソインドリン−４−カルボン酸（化合物例５６）を白色の固体として得た（８６ｍｇ、３７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８．０４（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｓ，１Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．１０−４．７０（ｍ，４Ｈ），２．７３−２．６９（ｍ，２Ｈ），２．１０−２．０６（ｍ，２Ｈ），１．５６（ｓ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝４１０．１５．ＬＣ−ＭＳ：４１０．１（Ｍ＋１）＋。
【０５０２】
実施例１９Ｂでは、スキーム１４に示されるｇｅｍ−ジメチルアミン中間体からのスルホン置換イソインドリン化合物、２−メトキシ−４−（３−メチル−３−（４−（メチルスルホニル）イソインドリン−２−イル）ブチル）フェノール塩酸塩の代表的な調製について説明する。
【化４６】
0006517827.tif 000069
【０５０３】
スキーム１４：スルホン置換イソインドリン、２−メトキシ−４−（３−メチル−３−（４−（メチルスルホニル）イソインドリン−２−イル）ブチル）フェノール塩酸塩（化合物例６４）の一般的な調製手順。
【０５０４】
化合物２の調製（スキーム１４）：攪拌している１（１２．０ｇ、６４．８ｍｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（１５０ｍＬ）溶液にｎ−ＢｕＬｉ（３０ｍＬ、２．５Ｍ）を−７５℃で加えた。混合物を−７５℃で１時間攪拌し、次いでジメチルジスルフィド（７．２ｇ、７６．４ｍｍｏｌ）を滴加した。混合物を−７５℃で４時間攪拌し、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液で反応を停止させ、酢酸エチルで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗生成物２（１２ｇ、１００％）を得た。１−ブロモ−２，３−ジメチルベンゼンはＳｈａｎｇｈａｉ  ＲｕｉＤｉｎｇ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社から購入した。
【０５０５】
化合物３の調製（スキーム１４）：攪拌している２（１２．０ｇ、７８．８ｍｍｏｌ、１当量）のＤＣＭ（２００ｍＬ）溶液にｍ−ＣＰＢＡ（３０ｇ、１７３．８ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。混合物を１０℃で２時間攪拌し、１０％Ｎａ２ＳＯ３で反応を停止させた。水溶液を１０％ＮａＯＨでｐＨ１０に調整し、ＤＣＭで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗生成物を得、これをカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）により精製して、表題化合物３（９．０ｇ、６２％）を得た。３−クロロ過安息香酸はＳｈａｎｇｈａｉ  ＤｅＭｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社から購入した。
【０５０６】
化合物４の調製（スキーム１４）：攪拌している３（１．０ｇ、５．４２ｍｍｏｌ）のＣＣｌ４（１５ｍＬ）溶液にＮＢＳ（２．２２ｇ、１２．４ｍｍｏｌ、１．２当量）およびＡＩＢＮ（４００ｍｇ、２．４３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を７０℃で６時間攪拌し、冷却し、真空下で濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝３：１）により精製して、表題化合物４（１．４ｇ、７５％）を得た。Ｎ−ブロモスクシンイミドはＳｈａｎｇｈａｉ  ＪｉｎｇＣｈｕｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社から購入した。アゾビスイソブチロニトリルはＳｈａｎｇｈａｉ  ＧｕｏＹａｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社から購入した。
【０５０７】
化合物６の調製（スキーム１４）：６（４．０ｇ、１．２ｍｏｌ）のＥＡ（１００ｍＬ）溶液にＨＣｌ／ＥＡ（１．２ｇ、２Ｍ、２００ｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を室温で１時間攪拌した。反応物を濃縮して粗生成物７（２．８ｇ、９９％）を得、それ以上精製せずに次の段階に用いた。
【０５０８】
化合物７の調製（スキーム１４）：６（２８０ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液に４（４１０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（３３０ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を７０℃で１２時間攪拌した。反応混合物をセライトのパッドでろ過し、ＥＡで洗浄し、ろ液を濃縮して粗生成物７（５００ｍｇ、１００％）を得、それ以上精製せずに次の段階に用いた。
【０５０９】
化合物８の調製（スキーム１４）：７（５００ｍｇ、粗物質）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液にＴＢＡＦ（１．２ｍＬ、１Ｍ）を加えた。得られた溶液を室温で１時間攪拌した。反応混合物を濃縮して残渣を得、これを分取ＨＰＬＣにより精製して、８（２段階で１２０ｍｇ、２０％）を得た。
【０５１０】
化合物９；２−メトキシ−４−（３−メチル−３−（４−（メチルスルホニル）イソインドリン−２−イル）ブチル）フェノール塩酸塩の調製（化合物例６４）（スキーム１４）：８（１２０ｍｇ、０．３０ｍｏｌ）のＥＡ（１０ｍＬ）溶液にＨＣｌ／ＥＡ（１．２ｇ、２Ｍ、２ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を室温で１時間攪拌した。反応物を濃縮して生成物９（９０ｍｇ、７５％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．９７（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．７８−７．６８（ｍ，２Ｈ），６．８８（ｓ，１Ｈ），６．７２（ｓ，２Ｈ），５．０９（ｓ，２Ｈ），４．８５（ｓ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．２０（ｓ，３Ｈ），２．７３−２．７０（ｍ，２Ｈ），２．１３−２．１０（ｍ，２Ｈ），１．５８（ｓ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３９０．１５。
【０５１１】
実施例１９Ｃでは、スキーム１５に示されるｇｅｍ−ジメチルアミン中間体からのスルホン置換イソインドリン化合物、２−メトキシ−４−（３−メチル−３−（５−（メチルスルホニル）イソインドリン−２−イル）ブチル）フェノール塩酸塩の代表的な調製について説明する。
【化４７】
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【０５１２】
スキーム１５：スルホン置換インドリン、２−メトキシ−４−（３−メチル−３−（５−（メチルスルホニル）イソインドリン−２−イル）ブチル）フェノール塩酸塩の一般的な調製手順。
【０５１３】
化合物２ａの調製（スキーム１５）：１（５０ｇ、０．４７ｍｏｌ、１．００当量）のＣＨＣｌ３（５００ｍＬ）溶液にＨＳＯ３Ｃｌ（７５．５ｍＬ、０．９５ｍｏｌ、２．００当量）を氷冷浴下で滴加した。添加完了後、混合物を室温に温め、１時間攪拌した。得られた混合物をを氷水に注加し、次いで、ＤＣＭ（５００ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮して、白色固体の生成物２ａ（７６．５ｇ、７９．３％）を得た。１，２−ジメチルベンゼンはＳｈａｎｇｈａｉ  ＧｕｏＹａｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社から購入した。クロロスルホン酸はＳｈａｎｇｈａｉ  ＡｏＹｕｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社から購入した。
【０５１４】
化合物３ａの調製（スキーム１５）：２（７７ｇ、０．３８ｍｏｌ、１．００ｅｑ）の飽和Ｎａ２ＳＯ３（１１８ｇ、０．９４ｍｏｌ、２．５０当量）懸濁液に３２％ＮａＯＨ（３０ｇ、０．７５ｍｏｌ、２．００当量）溶液を加えた。室温で３時間攪拌した後、反応物を氷冷浴下、２５％ＨＣｌ溶液でｐＨ＝１に酸性化した。沈殿物が粗生成物３ａ（５９．７５ｇ、９３．８％）であり、これをそれ以上精製しなかった。
【０５１５】
化合物４ａの調製（スキーム１５）：密閉ガラス管でＨ２Ｏ（５０ｍＬ）とＭｅＯＨ（６７．５ｍＬ）溶液の混合物に懸濁させた３（２０ｇ、０．１２ｍｏｌ、１．００ｅｑ）にヨウ化メチル（２０ｇ、０．１４ｍｏｌ、１．１５当量）および３２％ＮａＯＨ（４７ｇ、１．２ｍｏｌ、１０．００当量）溶液を加えた。反応物を９０℃に加熱し、一晩攪拌した。反応完了後、減圧下でメタノールを除去し、ＥＡで抽出し、濃縮して生成物４ａ（８．３３ｇ、３８．５％）を得た。ヨウ化メチルはＳｈａｎｇｈａｉ  ＡｏＹｕｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社から購入した。
【０５１６】
化合物５ａの調製（スキーム１５）：化合物４（９．５ｇ、５１．６ｍｍｏｌ、１．００当量）のＣＣｌ４溶液にＮＢＳ（１８．３ｇ、１０３ｍｍｏｌ、２．００当量）およびＢＰＯ（１．０ｇ、５．２ｍｍｏｌ、０．１０当量）を加えた。反応物を６時間、加熱還流した。反応完了後、減圧下で溶媒を除去した。得られた残渣をＰＥおよびＨ２Ｏで希釈した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して粗生成物を得、これをＦＣＣ（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１〜３：１）により精製して、スルホン中間体５ａ；１，２−ビス（ブロモメチル）−４−（メチルスルホニル）ベンゼンを得た。
【０５１７】
化合物９ａ、２−メトキシ−４−（３−メチル−３−（５−（メチルスルホニル）イソインドリン−２−イル）ブチル）フェノール塩酸塩の調製は、実施例１９Ｂに記載した技術により中間体５ａから実施した。
【０５１８】
実施例２０：４−（３−（４−フルオロイソインドリン−２−イル）−３−メチルブチル）−２−イソプロポキシフェノール塩酸塩、化合物例２８の調製
実施例２０では、スキーム１６に示される４−（３−（４−フルオロイソインドリン−２−イル）−３−メチルブチル）−２−イソプロポキシフェノール塩酸塩、化合物例２８の代表的な調製について説明する。
【化４８】
0006517827.tif 000071
【０５１９】
スキーム１６：４−（３−（４−フルオロイソインドリン−２−イル）−３−メチルブチル）−２−イソプロポキシフェノール塩酸塩、化合物例２８の調製手順。
【０５２０】
化合物２の調製（スキーム１６）：１−フルオロ−２，３−ジメチルベンゼン（１００ｇ、０．８１ｍｍｏｌ）の四塩化炭素（１．５Ｌ）懸濁液にＮ−ブロモスクシンイミド（２８８ｇ、１．６２ｍｍｏｌ）、過酸化ベンゾイル（１０ｇ）を加えた。混合物を７０℃に加熱した。１５時間攪拌した後、混合物を室温に冷却し、水（１Ｌ）に注加し、ＤＣＭ（３×１Ｌ）で抽出した。合わせた有機層を石油エーテルを用いたラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、生成物２（１６１ｇ、７０％）を白色の固体として得た。
ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝１０／１；Ｒｆ（化合物１）＝１；Ｒｆ（化合物２）＝０．８
【０５２１】
化合物３の調製（スキーム１６）：１，１−ジメチルプロパルギルアミン（２０ｇ、２４０ｍｍｏｌ、１．０当量）のＴＨＦ（９００ｍＬ）混合物に化合物２（７０．７ｇ、２５３ｍｍｏｌ、１．０５当量）およびトリエチルアミン（７３ｇ、７２０ｍｍｏｌ、３当量）を加えた。反応物を６０℃で１２時間攪拌した。混合物をセライトのパッドでろ過し、パッドを酢酸エチルで洗浄した。ろ液を真空下で濃縮してオレンジ色の油を得た。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ、１０／１）により精製して、化合物３（３０ｇ、６１％）を黄色の固体として得た。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝１０／１；Ｒｆ（化合物２）＝０．８；Ｒｆ（化合物３）＝０．５。
【０５２２】
化合物５の調製（スキーム１６）：２−イソプロポキシ−フェノール（１００ｇ、０．６６ｍｏｌ、１．０当量）のメタノール（７００ｍＬ）溶液に水酸化ナトリウム（３９．４ｇ、１．０ｍｏｌ、１．５当量）およびヨウ化カリウム（１１４．５ｇ、０．６９ｍｏｌ、１．０５当量）を加えた。反応物を室温で攪拌した。反応混合物に次亜塩素酸ナトリウム（９７８ｇ、１．３１ｍｏｌ、２．０当量）を滴加した。ＬＣＭＳにより出発物質がなくなったことが示されたとき、ｐＨ１になるまで濃ＨＣｌを加えた。亜硫酸ナトリウム（５６ｇ、４４５ｍｍｏｌ、１．０当量）を加えた。混合物を酢酸エチル（３×５００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、真空下で濃縮して、化合物５（１７５ｇ、９６％）を白色の固体として得た。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝１０／１；Ｒｆ（化合物４）＝０．４；Ｒｆ（化合物５）＝０．４
【０５２３】
化合物６の調製（スキーム１６）：化合物５（３５０ｇ、１．２６ｍｏｌ、１．０当量）のＤＭＦ（２Ｌ）溶液に水素化ナトリウム（６５．４ｇ、１．６４ｍｏｌ、１．３当量）を窒素下、０℃で加えた。０．５時間攪拌した後、クロロメチルメチルエーテル（１３１．７ｇ、１．６４ｍｍｏｌ、１．３当量）を徐々に加えた。反応物を室温で２時間攪拌した。水（４Ｌ）で反応を停止させ、酢酸エチル（３×１Ｌ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、真空下で濃縮して粗生成物を得た。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ、１０／１）により精製して、化合物６（３００ｇ、７４％）を白色の固体として得た。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝１０／１；Ｒｆ（化合物５）＝０．４；Ｒｆ（化合物６）＝０．６
【０５２４】
化合物７の調製（スキーム１６）：化合物６（５６．２ｇ、１７４ｍｍｏｌ、１．０当量）のアセトニトリル（６００ｍＬ）溶液に化合物３（３９ｇ、１９２ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＸ−Ｐｈｏｓ（４．１６ｇ、９．０ｍｍｏｌ、０．０５当量）、次いで炭酸セシウム（５６．９ｇ、１７４ｍｍｏｌ、１．０当量）および二酢酸パラジウム（１．２ｇ、５．２３ｍｍｏｌ、０．０３当量）を加えた。反応物を６０℃で１２ｈ時間攪拌した。氷水（１Ｌ）で反応を停止させた後、酢酸エチル（３×５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、真空下で濃縮して粗生成物を得た。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ、１０／１）により精製して、化合物６（４８．５ｇ、７０％）を褐色の固体として得た。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝１０／１；Ｒｆ（化合物６）＝０．６；Ｒｆ（化合物７）＝０．３。
【０５２５】
化合物２８の調製（スキーム１６）：化合物７（７２ｇ、１８１ｍｍｏｌ、１．０当量）のメタノール（１．４Ｌ）溶液に濃ＨＣｌ（３６ｍＬ、３６０ｍｍｏｌ、２．０当量）および１０％パラジウム／活性炭（１４ｇ）を加えた。反応物を水素バルーン下、室温で４時間攪拌した。混合物をセライトパッドでろ過し、パッドをメタノールで洗浄した。ろ液を真空下で濃縮して、薄オレンジ色の油を得た。残渣をエーテルで希釈し、室温で攪拌し、固体を形成させた。固体をろ過し、エタノールで洗浄して、化合物例２８（６０ｇ、９３％）を白色の固体として得た。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝３／１；Ｒｆ（化合物７）＝０．６；Ｒｆ（生成化合物例２８）＝０．３。ＬＣ−ＭＳ：３５８．２（Ｍ＋１）＋。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．１７（ｓ，１Ｈ），δ８．５９（ｓ，１Ｈ），δ７．４３（ｍ，１Ｈ），δ７．２１（ｍ，２Ｈ），δ６．８０（ｓ，１Ｈ），６．７１−６．６３（ｍ，２Ｈ），４．８８−４．７９（ｍ，２Ｈ），δ４．６６（ｍ，２Ｈ），δ４．４７（ｍ，２Ｈ），δ２．５３（ｍ，２Ｈ），δ１．９７（ｍ，２Ｈ），δ１．４３（ｓ，６Ｈ），δ１．２２（ｓ，６Ｈ）。
【０５２６】
実施例２１：２−（Ｔｅｒｔ−ブトキシ）−４−（３−メチル−３−（５−（メチルスルホニル）イソインドリン−２−イル）ブチル）フェノール、化合物例６２の調製。
実施例２１では、スキーム１７に示される２−（Ｔｅｒｔ−ブトキシ）−４−（３−メチル−３−（５−（メチルスルホニル）イソインドリン−２−イル）ブチル）フェノール、化合物例６２の代表的な調製について説明する。
【化４９】
0006517827.tif 000072
【０５２７】
スキーム１７：２−（Ｔｅｒｔ−ブトキシ）−４−（３−メチル−３−（５−（メチルスルホニル）イソインドリン−２−イル）ブチル）フェノール、化合物例６２の調製手順。
【０５２８】
化合物１の調製（スキーム１７）：カテコール（５０．０ｇ、４５４ｍｍｏｌ、１．０当量）と濃硫酸（０．３ｍＬ）のジクロロメタン（２００ｍＬ）混合物の入った−３０℃のガラス製加圧瓶にイソブテン（１５２．６ｇ、２．７２ｍｏｌ、６．０当量）を凝縮させた。Ｔｅｆｌｏｎ保護ゴム製Ｏリングで覆われたねじ式Ｔｅｆｌｏｎキャップで加圧瓶を密閉した後、透明な溶液が得られるまで混合物を３５℃で３時間加熱した。冷却（−３０℃）後、トリエチルアミン（１．５ｍＬ、１０．８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を濃縮した。残渣を０．５Ｍ  ＮａＯＨ（１Ｌ）に懸濁させ、１０分間攪拌した。濃緑食の溶液を石油エーテル（２×１００ｍＬ）で洗浄し、洗浄層を０．５Ｍ  ＮａＯＨ（３×１００ｍＬ）で再抽出した。合わせた水層を２Ｎ  ＨＣｌ（４００ｍＬ）でｐＨ７〜８にし、酢酸エチル（２×１Ｌ）で抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して、生成物１（６７．７ｇ、９０％）を無色の油として得、それ以上精製せずに次の段階の反応に直接用いた。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝５０／１；Ｒｆ（カテコール）＝０．１；Ｒｆ（化合物１）＝０．６。
【０５２９】
化合物２の調製（スキーム１７）：０℃で攪拌している化合物１（１１２．２ｇ、６７６ｍｍｏｌ、１．２当量）とヨウ化カリウム（１１２．２ｇ、６７６ｍｍｏｌ、１．０当量）のメタノール（２Ｌ）溶液に水酸化ナトリウム（２７．０ｇ、６７６ｍｍｏｌ、１．０当量）を徐々に加え、次いで、反応物を０℃未満に維持しながら亜塩素酸ナトリウム水溶液（７％水溶液、７１８．８ｍＬ、７１０ｍｍｏｌ、１．０５当量）を３時間かけて滴加した。混合物を０℃でさらに３０分間攪拌し、０℃の２Ｎ  ＨＣｌを加えることによりｐＨ７になるまで中和し、ＤＣＭ（２×１Ｌ）で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して生成物２（１７９．８ｇ、９１％）を得た。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝５０／１；Ｒｆ（化合物１）＝０．６；Ｒｆ（化合物２）＝０．６。
【０５３０】
化合物３の調製（スキーム１７）：０℃で攪拌している化合物２（１７９．８ｇ、６１６ｍｍｏｌ、１．０当量）とトリエチルアミン（１８６．６ｇ、１．８５ｍｏｌ、３．０当量）のジクロロメタン（２Ｌ）溶液に塩化アセチル（５３．２ｇ、６７７ｍｍｏｌ、１．１当量）を徐々に加えた。混合物を０℃でさらに３０分間攪拌し、室温まで温め、室温で３時間攪拌し、反応混合物に水（１Ｌ）を加え、有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して生成物３（２０６ｇ、１００％）を得、それ以上精製せずに次の段階に直接用いた。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝５０／１；Ｒｆ（化合物２）＝０．６；Ｒｆ（化合物３）＝０．５。
【０５３１】
化合物４の調製（スキーム１７）：攪拌している化合物３（２０６ｇ、６１６ｍｍｏｌ、１．０当量）のトリエチルアミン（４．０Ｌ）溶液に２−メチルブト−３−イン−２−アミン（１０２．５ｇ、１．２３ｍｏｌ、２．０当量）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（１５．１ｇ、１８．５ｍｍｏｌ、０．０３当量）およびヨウ化銅（Ｉ）（５．９ｇ、３１ｍｍｏｌ、０．０５当量）を加えた。得られた混合物を室温で１７時間攪拌した。減圧下で溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、表題化合物４（１３２．７ｇ、７４％）を得た。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝１／１；Ｒｆ（化合物３）＝０．９；Ｒｆ（化合物４）＝０．３。
【０５３２】
化合物５の調製（スキーム１７）：攪拌している化合物４（１０４．５ｇ、０．３６ｍｏｌ）のエタノール（１．５Ｌ）溶液にＰｄ／Ｃ（１０重量％、１０．５ｇ）を加えた。混合物を水素（バルーン）下で一晩攪拌し、ろ過した。ろ液を蒸発乾固させて化合物５（１０６．３ｇ、１００％）を得、それ以上精製せずに次の段階に直接用いた。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝１／１；Ｒｆ（化合物４）＝０．３；Ｒｆ（化合物５）＝０．３。
【０５３３】
化合物６の調製（スキーム１７）：０℃のｏ−キシレン（１１５．７ｇ、１．０９ｍｏｌ、１．０当量）のクロロホルム（１．０Ｌ）溶液にＣｌＳＯ３Ｈ（２５４ｇ、２．１８ｍｏｌ、２．０当量）を滴加した。添加後、反応混合物を室温で２日間攪拌子、氷中に注加した。粗混合物をジクロロメタン（３×１．０Ｌ）で抽出した。有機層を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して、粗化合物６（１６１．５ｇ、８０％）を白色の固体として得、それ以上精製せずに次の段階に直接用いた。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝５／１；Ｒｆ（化合物６）＝０．７。
【０５３４】
化合物７の一般的な調製手順（スキーム１７）：飽和亜硫酸ナトリウム溶液（２７３ｇ、２．１７ｍｏｌ、２．５当量、水２．０Ｌ中）に溶かした化合物６（１６１．５ｇ、０．８７ｍｏｌ、１．０当量）の溶液を攪拌しながら、溶液のｐＨが９に達するまで３２％ＮａＯＨ（６９．４ｇ、１．７３ｍｏｌ、２．０当量）を滴加した。室温で一晩攪拌した後、氷冷浴中、反応混合物を濃ＨＣｌでｐＨ１まで酸性化した。沈殿をろ過し、氷水（２×）で洗浄し、真空下で濃縮して粗生成物７（１３１ｇ、８８％）を得、それ以上精製せずに次の段階に直接用いた。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝５／１；Ｒｆ（化合物６）＝０．７；Ｒｆ（化合物７）＝０．６。
【０５３５】
化合物８の調製（スキーム１７）：攪拌している化合物７（１３０ｇ、０．７６ｍｏｌ、１．０当量）と炭酸カリウム（２１１ｇ、１．５３ｍｏｌ、２．０当量）のＤＭＦ（３００ｍＬ）にヨードメタン（９６ｍＬ、１．５３ｍｏｌ、２．０当量）を加えた。反応物を４０℃で一晩攪拌した。反応混合物を蒸発乾固させ、酢酸エチルで抽出した。有機層を水およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ、１０：１〜５：１）により精製して、化合物８（８５．２ｇ、６１％）を得た。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝５／１；Ｒｆ（化合物７）＝０．６；Ｒｆ（化合物８）＝０．３。
【０５３６】
化合物９の調製（スキーム１７）：攪拌している化合物８（７８．２ｇ、４２４ｍｍｏｌ、１．０当量）の１，２−ジクロロエタン（１．２Ｌ）溶液にＮ−ブロモスクシンイミド（１６６ｇ、９３４ｍｍｏｌ、２．２当量）およびＡＩＢＮ（６．９ｇ、４２．４ｍｍｏｌ、０．１当量）を加えた。反応物を一晩、還流攪拌した。反応物を水およびジクロロメタンで希釈した。有機層を収集し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して化合物９を得、これをさらに熱メタノールから再結晶させて、純粋な生成物８（７５ｇ、５２％）を得た。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝５／１；Ｒｆ（化合物８）＝０．３；Ｒｆ（化合物９）＝０．２。
【０５３７】
化合物１０の調製（スキーム１７）：攪拌している化合物５（４６ｇ、１５７ｍｍｏｌ、１．０当量）と化合物９（５３．５ｇ、１５７ｍｍｏｌ、１．０当量）のＴＨＦ（４６０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（４７．７ｇ、４７２ｍｍｏｌ、３．０当量）を加えた。反応物を４０℃で一晩攪拌し、ろ過し、ろ液を蒸発乾固させ、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物１０（４５ｇ、６３％）を得た。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝１／１；Ｒｆ（化合物５）＝０．３；Ｒｆ（化合物９）＝１．０；Ｒｆ（化合物１０）＝０．４。
【０５３８】
化合物６２の調製（スキーム１７）：攪拌している化合物１０（４５ｇ、９８．４ｍｍｏｌ）のメタノール（３００ｍＬ）溶液にナトリウムメトキシド（８４４ｍｇ、１５．６ｍｍｏｌ、０．１６当量）を一度に加えた。溶媒を室温で一晩攪拌した。反応混合物に水（２５０ｍＬ）を１時間かけて滴加し、室温で２時間攪拌し、ろ過した。白色の固体を収集し、真空下で一晩乾燥させて、純粋な化合物例６２の塩基（３８ｇ、８９％）を得た。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝１／１；Ｒｆ（化合物１０）＝０．４；Ｒｆ（化合物６２）＝０．４；ＥＳＩ−ＭＳ：４３２（Ｍ＋１）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．８０−７．７８（ｍ，２Ｈ）．７．４０−７．３８（ｍ，１Ｈ），６．８７−６．７９（ｍ，３Ｈ），５．５８（ｓ，１Ｈ），４．１１（ｓ，４Ｈ），３．０５（ｓ，３Ｈ），２．６１−２．５７（ｍ，２Ｈ），１．７６−１．７２（ｍ，２Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ），１．１８（ｓ，６Ｈ）。
【０５３９】
実施例２２：（２−（４−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−２−メチルブタン−２−イル）イソインドリン−４−イル）（ピペラジン−１−イル）メタノン、化合物例７６の調製。
実施例２２では、スキーム１８に示される（２−（４−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−２−メチルブタン−２−イル）イソインドリン−４−イル）（ピペラジン−１−イル）メタノン、化合物例７６の代表的な調製について説明する。
【化５０】
0006517827.tif 000073
【０５４０】
スキーム１８：（２−（４−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−２−メチルブタン−２−イル）イソインドリン−４−イル）（ピペラジン−１−イル）メタノン、化合物例７６の調製手順。
【０５４１】
化合物２の調製（スキーム１８）：０℃の２，３−ジメチル安息香酸（６０ｇ、０．３９９ｍｏｌ）のメタノール溶液に塩化チオニル（２０ｍＬ）を加えた。反応物を６０℃に加熱した。一晩攪拌した後、反応物を冷却し、濃縮して粗メチルエステル（６５ｇ、０．３９６ｍｏｌ）を得た。粗メチルエステル（６５ｇ、０．３９６ｍｏｌ）の四塩化炭素（５００ｍＬ）懸濁液にＮ−ブロモスクシンイミド（１４２．２ｇ、０．７９８ｍｍｏｌ）、過酸化ベンゾイル（６ｇ、２４．８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を７０℃に加熱した。１５時間攪拌した後、混合物を室温に冷却し、水（２５０ｍＬ）に注加し、ジクロロメタン（３×２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を石油エーテルを用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、生成物２（１２０ｇ、９４％）を白色の固体として得た。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝１０／１；Ｒｆ（化合物１のメチルエステル）＝０．８；Ｒｆ（化合物２）＝０．７。
【０５４２】
化合物３の調製（スキーム１８）：
１，１−ジメチルプロパルギルアミン（１１．４ｇ、０．１４ｍｏｌ、１．０当量）のＴＨＦ（５００ｍＬ）混合物に２，３−ビス（ブロモメチル）安息香酸メチル（４０．０ｇ、０．１２５ｍｏｌ、１．１当量）およびトリエチルアミン（５０．５ｇ、０．５０ｍｏｌ、４．０当量）を加えた。反応物を６０℃で１２時間攪拌した。混合物をセライトのパッドでろ過し、パッドを酢酸エチルで洗浄した。ろ液を真空下で濃縮して、オレンジ色の油を得た。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ：１０／１）により精製して、化合物３（１９ｇ、６２％）を黄色の固体として得た。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝１０／１；Ｒｆ（化合物２）＝０．８；Ｒｆ（化合物３）＝０．５。
【０５４３】
化合物５の調製（スキーム１８）：２−メトキシフェノール（１００ｇ、０．８１ｍｏｌ、１．０当量）のメタノール（１Ｌ）溶液に水酸化ナトリウム（４８．３ｇ、１．２１ｍｏｌ、１．５当量）およびヨウ化カリウム（１４０．４ｇ、０．８４ｍｏｌ、１．０５当量）を加えた。反応物を室温で攪拌した。反応混合物に次亜塩素酸ナトリウム（１１９９ｇ、１．６１ｍｏｌ、２．０当量）を滴加した。ＬＣＭＳにより出発物質がなくなったことが示されたとき、濃ＨＣｌをｐＨ１になるまで加えた。亜硫酸ナトリウム（５６ｇ、０．４４ｍｏｌ、０．５４当量）を加えた。混合物を酢酸エチル（３×５００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、真空下で濃縮して、化合物５（１６０ｇ、７９％）を黄色の油として得た。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝１０／１；Ｒｆ（化合物４）＝０．４；Ｒｆ（化合物５）＝０．４。
【０５４４】
化合物６の調製（スキーム１８）：化合物５（３１．４ｇ、１２５．８ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＭＦ（２００ｍＬ）溶液に水素化ナトリウム（６．５４ｇ、１６３．６ｍｍｏｌ、１．３当量）を窒素下、０℃で加えた。０．５時間後、クロロメチルメチルエーテル（１３．２ｇ、１６３．６ｍｍｏｌ、１．３当量）を徐々に加えた。反応物を室温で２時間攪拌した。水（４００ｍＬ）で反応を停止させ、酢酸エチル（３×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、真空下で濃縮して粗生成物を得た。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ、１０／１）により精製して、化合物６（３０ｇ、７４％）を黄色の油として得た。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝１０／１；Ｒｆ（化合物５）＝０．４；Ｒｆ（化合物６）＝０．６。
【０５４５】
化合物７の調製（スキーム１８）：化合物６（１０．２ｇ、３４．５ｍｍｏｌ、１．２当量）のアセトニトリル（１２０ｍＬ）溶液に化合物３（７．００ｇ、２８．７ｍｍｏｌ、１．０当量）およびＸ−Ｐｈｏｓ（６２４ｍｇ、１．３０ｍｍｏｌ、０．０５当量）、次いで炭酸セシウム（９．３８ｇ、２８．７ｍｍｏｌ、１．０当量）および酢酸パラジウム（１６８ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ、０．０３当量）を加えた。反応物を６０℃で１２時間攪拌した。氷水（１００ｍＬ）で反応を停止させ、酢酸エチル（３×３００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、真空下で濃縮して粗生成物を得た。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ、１０／１）により精製して、化合物６（９．４ｇ、７９％）を褐色の固体として得た。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝１０／１；Ｒｆ（化合物６）＝０．６；Ｒｆ（化合物７）＝０．３。
【０５４６】
化合物８の調製（スキーム１８）：化合物７（３．８１ｇ、９．３１ｍｍｏｌ、１．０当量）のメタノール（２２０ｍＬ）溶液に濃ＨＣｌ（２ｍＬ）およびパラジウム／活性炭（１．８ｇ、１０％）を加えた。反応物を水素雰囲気下、室温で４時間攪拌した。混合物をセライトパッドでろ過し、パッドをメタノールで洗浄した。ろ液を真空下で濃縮して、薄オレンジ色の油を得た。残渣をエーテルで希釈し、室温で攪拌し、固体を形成させた。固体をろ過し、エタノールで洗浄して、８（４．８ｇ、１００％）を黄色の固体として得た。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝３／１；Ｒｆ（化合物７）＝０．６；Ｒｆ（生成物８）＝０．３。
【０５４７】
化合物９の調製（スキーム１８）：化合物８（４．８０ｇ、１３．０ｍｍｏｌ、１．０当量）のメタノール（１００ｍＬ）溶液に水酸化ナトリウム（２．０ｇ、５０ｍｍｏｌ）および水（１５ｍＬ）を加えた。反応物を４０℃で６時間攪拌した。室温に冷却した後、反応物を６Ｎ  ＨＣｌでｐＨ７に調整し、（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１０／１；３×１００ｍＬ）で抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、真空下で濃縮して粗生成物を得、これを酢酸エチルで研和して、９（２．８ｇ、６０％）を青色の固体として得た。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝２／１；Ｒｆ（化合物８）＝０．６；Ｒｆ（生成物９）＝０．０５。
【０５４８】
化合物７６の調製（スキーム１８）：９（２．８ｇ、７．８７ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＭＦ（５０ｍＬ）混合物に１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペラジン（１．５４ｇ、８．２６ｍｍｏｌ、１．０４当量）、ＥＤＣＩ（１．８１ｇ、９．４４ｍｍｏｌ、１．２当量）、ＨＯＢＴ（６１５ｍｇ、４．５５ｍｍｏｌ、０．５７当量）およびトリエチルアミン（１．７４ｇ、１７．２ｍｍｏｌ、２．１８当量）を連続して加えた。反応物を２５℃で３６時間攪拌した。混合物をセライトのパッドでろ過し、パッドを酢酸エチルで洗浄した。ろ液を真空下で濃縮して油を得た。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物１０（２．０ｇ）を白色の固体として得た。化合物１０（２．０ｇ）をＨＣｌの酢酸エチル溶液（３．５Ｍ、１５ｍＬ）で処理した。２５℃で１時間攪拌した後、石油エーテル（１００ｍＬ）を加えた。得られた白色の固体をろ過し、エーテルで洗浄し、風乾させて、化合物例７６（１．６ｇ、４１％、２段階）を白色の固体として得た。ＴＬＣ：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１０／１；Ｒｆ（化合物９）＝０．３；Ｒｆ（生成物１０）＝０．３５；ＬＣ−ＭＳ：４２４．７０（Ｍ＋１）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ７．５５−７．４８（ｍ，３Ｈ），６．８７（ｓ，１Ｈ），６．７２−６．７０（ｍ，２Ｈ），４．９５−４．７９（ｍ，４Ｈ）３．９０−３．８０（ｍ，７Ｈ），３．３５−３．３０（ｍ，４Ｈ），２．７２−２．６９（ｍ，２Ｈ），２．１２−２．０８（ｍ，２Ｈ），１．５６（ｓ，６Ｈ）。
【０５４９】
実施例２３：イソインドリン化合物種の分析データ。
実施例２３では、上記の方法と類似した方法で調製した化合物の分析データを記載する。
【０５５０】
【化５１】
0006517827.tif 000074
化合物例１：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．４５（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），８．７６（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），７．４８−７．４１（ｍ，３Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），６．６９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．５３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．８０−４．５０（ｍ，４Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），３．５３−３．５０（ｍ，１Ｈ），２．７０−２．６５（ｍ，１Ｈ），２．１２−２．１０（ｍ，１Ｈ），１．８３−１．８０（ｍ，１Ｈ），１．３６（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３３２．０５。
【０５５１】
【化５２】
0006517827.tif 000075
化合物例２：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．７５−７．４５（ｍ，４Ｈ），６．８５−６．６０（ｍ，５Ｈ），５．７１（ｂｒ．ｓ，２Ｈ），４．１４−３．７５（ｍ，７Ｈ），２．９０−２．５０（ｍ，５Ｈ），１．７８−１．２０（ｍ，８Ｈ０，１．２６−１．２３（ｍ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３６６．１０。
【０５５２】
【化５３】
0006517827.tif 000076
化合物例３：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．５７（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），８．８０（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），６．７９（ｓ，１Ｈ），６．６８（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），６．６０（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）３．７４（ｓ，３Ｈ），３．５３−３．５０（ｍ，１Ｈ），２．７０−２．６０（ｍ，１Ｈ），２．１２−２．１０（ｍ，１Ｈ），１．８３−１．８０（ｍ，１Ｈ），１．３６（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３６６．２０。
【０５５３】
【化５４】
0006517827.tif 000077
化合物例４：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．７５−７．７２（ｍ，２Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５１−７．４５（ｍ，２Ｈ），７．２４（ｄｄ，Ｊ１＝８．０Ｈｚ，Ｊ２＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），５．０５−４．９０（ｍ，２Ｈ），４．７５−４．６５（ｍ，２Ｈ），３．６９−３．６４（ｍ，１Ｈ），２．８９−２．８２（ｍ，１Ｈ），２．７３−２．６７（ｍ，１Ｈ），２．２７−２．２２（ｍ，１Ｈ），１．９８−１９３（ｍ，１Ｈ），１．５２（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３８８．１０。
【０５５４】
【化５５】
0006517827.tif 000078
化合物例５：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．６１（ｂｒ，ｓ．２Ｈ），７．４９−７．４５（ｍ，２Ｈ），７．２２（ｄｄ，Ｊ１＝８．４Ｈｚ，Ｊ２＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．８０−４．２０（ｍ，４Ｈ），３．６６−３．６２（ｍ，１Ｈ），２．８９−２．８０（ｍ，１Ｈ），２．７５−２．６５（ｍ，１Ｈ），２．２５−２．２０（ｍ，１Ｈ），１．９８−１．９０（ｍ，１Ｈ），１．５２（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３９０．００。
【０５５５】
【化５６】
0006517827.tif 000079
化合物例６：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ６．８４（ｓ，２Ｈ），６．７４−６．６８（ｍ，２Ｈ），５．９９（ｓ，２Ｈ），４．７４−４．６５（ｍ，２Ｈ），４．４７−４．４１（ｍ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．６０−３．５５（ｍ，１Ｈ），２．８０−２．７０（ｍ，１Ｈ），２．６５−２．５５（ｍ，１Ｈ），２．２５−２．１５（ｍ，１Ｈ），１．９８−１．９０（ｍ，１Ｈ），１．４６（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３４２．０５。
【０５５６】
【化５７】
0006517827.tif 000080
化合物例７：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ８．６１（ｓ，１Ｈ），６．８３（ｓ，２Ｈ），６．７４（ｓ，１Ｈ），６．６５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．５７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８０（ｓ，４Ｈ），３．６９（ｓ，６Ｈ），３．６０−３．５５（ｍ，１Ｈ），２．８５−２．８０（ｍ，１Ｈ），２．７５−２．７０（ｍ，１Ｈ），１．８２−１．７５（ｍ，１Ｈ），１．６０−１．５５（ｍ，１Ｈ），１．０６（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３５８．２５。
【０５５７】
【化５８】
0006517827.tif 000081
化合物例８：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．２０（ｓ，１Ｈ），８．７９（ｓ，１Ｈ），７．４４−７．４０（ｍ，１Ｈ），７．２４−７．１９（ｍ，２Ｈ），６．８４（ｓ，１Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．６５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．８５−４．５７（ｍ，４Ｈ），３．５２−３．４８（ｍ，１Ｈ），２．７１−２．６４（ｍ，１Ｈ），２．２０−２．１７（ｍ，１Ｈ），１．９７−１．８４（ｍ，１Ｈ），１．４０−１．３８（ｍ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３１６．１０。
【０５５８】
【化５９】
0006517827.tif 000082
化合物例９：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．６０（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４８−７．４３（ｍ，２Ｈ），７．２４（ｄｄ，Ｊ１＝８．８Ｈｚ，Ｊ２−２．０Ｈｚ，２Ｈ），７．１５（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．９０−４．７０（ｍ，４Ｈ），３．７０−３．６０（ｍ，１Ｈ），２．９０−２．８０（ｍ，１Ｈ），２．３０−２．２０（ｍ，１Ｈ），２．００−１．８０（ｍ，１Ｈ），１．５１（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３３８．１０。
【０５５９】
【化６０】
0006517827.tif 000083
化合物例１０：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．９０（ｓ，１Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｄｄ，Ｊ１＝８．０Ｈｚ，Ｊ２＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），４．６５−４．５０（ｍ，２Ｈ），４．４８−４．３５（ｍ，２Ｈ），３．５５−３．４５（ｍ，１Ｈ），２．８２−２．７８（ｍ，１Ｈ），２．６５−２．５５（ｍ，１Ｈ），２．１５−２．０５（ｍ，１Ｈ），１．９０−１．８０（ｍ，１Ｈ），１．３５（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３６４．１０。
【０５６０】
【化６１】
0006517827.tif 000084
化合物例１１：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．９６（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｓ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄｄ，Ｊ１＝８．０Ｈｚ，Ｊ２＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９４（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），４．６６−４．５５（ｍ，２Ｈ），４．４８−４．３５（ｍ，２Ｈ），３．７４（ｓ，６Ｈ），３．５５−３．４５（ｍ，１Ｈ），２．８２−２．７８（ｍ，１Ｈ），２．６５−２．５５（ｍ，１Ｈ），２．２０−２．１０（ｍ，１Ｈ），１．９５−１．８０（ｍ，１Ｈ），１．３７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３８０．１５。
【０５６１】
【化６２】
0006517827.tif 000085
化合物例１２：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．５８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４１−７．３８（ｍ，１Ｈ），７．２８（ｄｄ，Ｊ１＝８．０Ｈｚ，Ｊ２＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２４−７．１６（ｍ，３Ｈ），４．７３−４．６２（ｍ，２Ｈ），４．５８−４．４５（ｍ，２Ｈ），３．５５−３．４５（ｍ，１Ｈ），２．８２−２．７８（ｍ，１Ｈ），２．６５−２．５５（ｍ，１Ｈ），２．２０−２．１０（ｍ，１Ｈ），１．９５−１．８０（ｍ，１Ｈ），１．３７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３３８．１０。
【０５６２】
【化６３】
0006517827.tif 000086
化合物例１３：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．５８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｄｄ，Ｊ１＝８．０Ｈｚ，Ｊ２＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄｄ，Ｊ１＝８．０Ｈｚ，Ｊ２＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），４．７３−４．６１（ｍ，２Ｈ），４．５４−４．４５（ｍ，２Ｈ），３．５２−３．４９（ｍ，１Ｈ），２．８０−２．７５（ｍ，１Ｈ），２．６５−２．５９（ｍ，１Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ），２．１６−２．１４（ｍ，１Ｈ），１．９０−１．８５（ｍ，１Ｈ），１．３５（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３３４．１５。
【０５６３】
【化６４】
0006517827.tif 000087
化合物例１４：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．４１−７．３８  ９ｍ，１Ｈ），７．２５−７．１５（ｍ，２Ｈ），６．８０（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），６．６８（ｄ，８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．６２（ｄｄ，Ｊ１＝８．０Ｈｚ，Ｊ２＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．７７−４．６３（ｍ，２Ｈ），４．５９−４．４４（ｍ，２Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），３．５１−３．４８（ｍ，１Ｈ），２．７０−２．６２（ｍ，１Ｈ），２．５２−２．４４（ｍ，１Ｈ），２．１４−２．１１（ｍ，１Ｈ），１．９０−１．８５（ｍ，１Ｈ），１．３５（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３１６．６０。
【０５６４】
【化６５】
0006517827.tif 000088
化合物例１５：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．６０（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｓ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２９−７．２４（ｍ，２Ｈ），６．９３−６．９０（ｍ，２Ｈ），４．７５−４．５８（ｍ，２Ｈ），４．５８−４．４４（ｍ，２Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ），３．５２−３．５０（ｍ，１Ｈ），２．８１−２．７４（ｍ，１Ｈ），２．６５−２．５７（ｍ，１Ｈ），２．２０−２．１０（ｍ，１Ｈ），１．９０−１．８０（ｍ，１Ｈ），１．３６（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３５０．１５。
【０５６５】
【化６６】
0006517827.tif 000089
化合物例１６：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．３２（ｓ，１Ｈ），７．６０（ｓ，１Ｈ），７．５６−７．５４（ｍ，１Ｈ），７．４４−７．２８（ｍ，４Ｈ），４．８６−４．４０（ｍ，４Ｈ），３．６０−３．５０（ｍ，１Ｈ），２．８３−２．７５（ｍ，１Ｈ），２．６５−２．５９（ｍ，１Ｈ），２．３０−２．１５（ｍ，１Ｈ），１．９５−１．８２（ｍ，１Ｈ），１．１７−１．１３（ｍ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３５６．１５。
【０５６６】
【化６７】
0006517827.tif 000090
化合物例１７：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．９３（ｄｄ，Ｊ１＝１１．６Ｈｚ，Ｊ２＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６３−７．５４（ｍ，２Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，１Ｈ），６．９２−６．８６（ｍ，１Ｈ），６．７８−６．７０（ｍ，２Ｈ），５．２２−４．７６（ｍ，４Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．７５−３．６５（ｍ，１Ｈ），２．８３−２．７７（ｍ，１Ｈ），２．６８−２．６０（ｍ，１Ｈ），２．４０−２．３０（ｍ，１Ｈ），２．１０−１．９５（ｍ，１Ｈ），１．５８−１．５０（ｍ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３４８．６５。
【０５６７】
【化６８】
0006517827.tif 000091
化合物例１８：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．０６（ｓ，１Ｈ），７．９５−７．８７（ｍ，４Ｈ），７．６２−７．５０（ｍ，４Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．９８−４．８５（ｍ，２Ｈ），４．７３−４．６３（ｍ，２Ｈ），３．５９−３．５５（ｍ，１Ｈ），２．８６−２．７８（ｍ，１Ｈ），２．６８−２．６０（ｍ，１Ｈ），２．２５−２．２０（ｍ，１Ｈ），２．００−１．９０（ｍ，１Ｈ），１．４３（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３７０．２０。
【０５６８】
【化６９】
0006517827.tif 000092
化合物例１９：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．９４（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６４−７．４３（ｍ，５Ｈ），７．４０−７．３０（ｍ，１Ｈ），５．３４−４．８０（ｍ，４Ｈ），３．８０−３．７０（ｍ，１Ｈ），２．９０−２．８０（ｍ，１Ｈ），２．８０−２．７０（ｍ，１Ｈ），２．４０−２．３０（ｍ，１Ｈ），２．１０−２．００（ｍ，１Ｈ），１．６０−１．５５（ｍ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３７０．１０。
【０５６９】
【化７０】
0006517827.tif 000093
化合物例２０：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．６２（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｓ，１Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９４（ｓ，２Ｈ），４．６８−５．５５（ｍ，２Ｈ），４．４９−４．４０（ｍ，２Ｈ），３．７３（ｓ，６Ｈ），３．５５−３．４８（ｍ，１Ｈ），２．８２−２．７８（ｍ，１Ｈ），２．６５−２．５７（ｍ，１Ｈ），２．２０−２．０８（ｍ，１Ｈ），１．９０−１．８０（ｍ，１Ｈ），１．３６（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３８０．１０。
【０５７０】
【化７１】
0006517827.tif 000094
化合物例２１：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．２０（ｓ，１Ｈ），７．４２（ｄｄ，Ｊ１＝１２．８Ｈｚ，Ｊ２＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３３−７．３０（ｍ，２Ｈ），７．２３−７．１８（ｍ，２Ｈ），７．１５−７．０５（ｍ，２Ｈ），４．８８−４．７２（ｍ，２Ｈ），４．７０−４．５５（ｍ，２Ｈ），３．６０−３．５０（ｍ，１Ｈ），２．８０−２．７０（ｍ，１Ｈ），２．６５−２．５２（ｍ，１Ｈ），２．２２−２．１０（ｍ，１Ｈ），１．９０−１．８２（ｍ，１Ｈ），１．４２−１．３５（ｍ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝２８８．１５。
【０５７１】
【化７２】
0006517827.tif 000095
化合物例２２：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．０５（ｓ，１Ｈ），７．４０−７．０９（ｍ，７Ｈ），４．７６−４．６５（ｍ，２Ｈ），４．６０−４．４５（ｍ，２Ｈ），３．５５−３．４８（ｍ，１Ｈ），２．８０−２．７０（ｍ，１Ｈ），２．６２−２．５２（ｍ，１Ｈ），２．２０−２．０８（ｍ，１Ｈ），１．９０−１．８２（ｍ，１Ｈ），１．３７（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝２８８．１５。
【０５７２】
【化７３】
0006517827.tif 000096
化合物例２３：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．２９（ｄｄ，Ｊ１＝８．０Ｈｚ，Ｊ２−６．４Ｈｚ，２Ｈ），７．０３（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．８５（ｓ，２Ｈ），６．００（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，２Ｈ），４．７５−４．６７（ｍ，２Ｈ），４．５１−４．４４（ｍ，２Ｈ），３．６０−３．５５（ｍ，１Ｈ），２．８３−２．７９（ｍ，１Ｈ），２．７２−２．６７（ｍ，１Ｈ），２．２２−２．１８（ｍ，１Ｈ），１．９３−１．８９（ｍ，１Ｈ），１．４７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３１４．２０。
【０５７３】
【化７４】
0006517827.tif 000097
化合物例２４：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．１２（ｓ，１Ｈ），７．０８（ｄｄ，Ｊ１＝８．４Ｈｚ，Ｊ２＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄ，８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．８４（ｓ，２Ｈ），６．００（ｓ，２Ｈ），４．７５−４．５０（ｍ，４Ｈ），３．５８−３．５３（ｍ，１Ｈ），２．８１−２．７３（ｍ，１Ｈ），２．６５−２．５８（ｍ，１Ｈ），２．２２−２．１８（ｍ，１Ｈ），１．９３−１．８２（ｍ，１Ｈ），１．４５（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３９６．１５。
【０５７４】
【化７５】
0006517827.tif 000098
化合物例２５：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ６．９１（ｂｒ．ｓ，３Ｈ），６．８１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．０６（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，２Ｈ），４．８２−４．７２（ｍ，２Ｈ），４．６８−４．６１（ｍ，１Ｈ），４．５５−４．４８（ｍ，２Ｈ），３．６２−３．５７（，１Ｈ），２．８６−２．７８（ｍ，１Ｈ），２．６８−２．６０（ｍ，１Ｈ），２．２６−２．２２（ｍ，１Ｈ），１．９７−１．９１（ｍ，１Ｈ），１．５２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），１．３８（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３７０．２０。
【０５７５】
【化７６】
0006517827.tif 000099
化合物例２６：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．４５−７．４１（ｍ，１Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１７−７．１１（ｍ，１Ｈ），６．８４（ｓ，１Ｈ），６．７４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．６９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．８２−４．５０（ｍ，５Ｈ），３．６１−３．５６（，１Ｈ），２．８０−２．７０（ｍ，１Ｈ），２．６２−２．５５（ｍ，１Ｈ），２．２５−２．１８（ｍ，１Ｈ），１．９５−１．８５（ｍ，１Ｈ），１．４８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），１．３０（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３７０．２０。
【０５７６】
【化７７】
0006517827.tif 000100
化合物例２７：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．４１（ｄｄ，Ｊ１＝８．０Ｈｚ，Ｊ２＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．１６−７．１４（ｍ，１Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），６．７４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．７１（ｄｄ，Ｊ１＝８．０Ｈｚ，Ｊ２＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），４．８２−４．６２（ｍ，４Ｈ），４．５８−４．５５（ｍ，１Ｈ），２．６７−２．６３（ｍ，２Ｈ），２．０５−２．００（ｍ，２Ｈ），１．５２（ｓ，６Ｈ），１．３０（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３５８．１５。
【０５７７】
【化７８】
0006517827.tif 000101
化合物例２８：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．４９−７．４３（ｍ，１Ｈ），７．２４（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｓ，１Ｈ），６．７４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７１（ｄｄ，Ｊ１＝８．０Ｈｚ，Ｊ２＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），４．８７−４．７９（ｍ，４Ｈ），４．５８−４．５６（ｍ，１Ｈ），２．６７−２．６３（ｍ，２Ｈ），２．０７−２．０３（ｍ，２Ｈ），１．５４（ｓ，６Ｈ），１．３０（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３５８．２５。
【０５７８】
【化７９】
0006517827.tif 000102
化合物例２９：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ６．８４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８３（ｓ，２Ｈ），６．７３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．９８（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，２Ｈ），４．６８−４．５４（ｍ，５Ｈ），２．６６−２．６２（ｍ，２Ｈ），２．０４−２．００（ｍ，２Ｈ），１．５０（ｓ，６Ｈ），１．３０（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３８４．２５。
【０５７９】
【化８０】
0006517827.tif 000103
化合物例３０：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．４０（ｄｄ，Ｊ１＝８．０Ｈｚ，Ｊ２＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１５−７．１２（ｍ，１Ｈ），６．９２−６．９０（ｍ，２Ｈ），６．８０（ｄｄ，Ｊ１＝８．０Ｈｚ，Ｊ２＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．８５−４．５２（ｍ，４Ｈ），４．０２−４．００（ｍ，１Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．８５−３．８２（ｍ，２Ｈ），３．６１−３．５５（ｍ，１Ｈ），２．８４−２．７７（ｍ，１Ｈ），２．６７−２．５９（ｍ，１Ｈ），２．２４−２．１８（ｍ，１Ｈ），１．９４−１．８８（ｍ，１Ｈ），１．４８（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３６０．２０。
【０５８０】
【化８１】
0006517827.tif 000104
化合物例３１：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．３８−７．３４（ｍ，１Ｈ），７．１４−７．０８（ｍ，３Ｈ），７．０４（ｄｄ，Ｊ１＝８．０Ｈｚ，Ｊ２＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），４．８６−４．７３（ｍ，２Ｈ），４．６０−４．４８（ｍ，２Ｈ），３．６０−３．５３（ｍ，１Ｈ），２．７６−２．６９（ｍ，１Ｈ），２．６１−２．５３（ｍ，１Ｈ），２．１６−２．１２（ｍ，１Ｈ），１．８６−１．８２（ｍ，１Ｈ），１．４２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３７０．１０。
【０５８１】
【化８２】
0006517827.tif 000105
化合物例３２：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．４２−７．３８（ｍ，１Ｈ），７．２４−７．１１（ｍ，５Ｈ），４．９２−４．８０（ｍ，２Ｈ），４．６８−４．５５（ｍ，２Ｈ），４．１０−４．０７（ｍ，２Ｈ），３．８８−３．８６（ｍ，２Ｈ），６．６４−３．６０（ｍ，１Ｈ），２．８５−２．７５（ｍ，１Ｈ），２．７２−２．６０（ｍ，１Ｈ），２．２４−２．１８（ｍ，１Ｈ），１．９８−１．８８（ｍ，１Ｈ），１．４９（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝４１４．２０。
【０５８２】
【化８３】
0006517827.tif 000106
化合物例３３：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．４６−７．４１（ｍ，１Ｈ），７．３２−７．２９（ｍ，２Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１３（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｔ，８．８Ｈｚ，２Ｈ），４．８６−４．８０（ｍ，４Ｈ），２．７８−２．７３（ｍ，２Ｈ），２．１２−２．０８（ｍ，２Ｈ），１．５６（ｓ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３０２．１０。
【０５８３】
【化８４】
0006517827.tif 000107
化合物例３４：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．３１−７．２７（ｍ，２Ｈ），７．０３（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．９８（ｓ，２Ｈ），４．７２（ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，２Ｈ），４．６１（ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，２Ｈ），３．８３（６Ｈ），２．８１−２．７２（ｍ，２Ｈ），２．０７−１．９８（ｍ，２Ｈ），１．５６（ｓ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３４４．２０。
【０５８４】
【化８５】
0006517827.tif 000108
化合物例３５：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．４３−７．４０（ｍ，２Ｈ），７．３２−７．２７（ｍ，２Ｈ），７．２０−７．１４（ｍ，２Ｈ），７．０３（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），４．８５−４．７０（ｍ，４Ｈ），２．７７−２．７２（ｍ，２Ｈ），２．０８−２．０３（ｍ，２Ｈ），１．５４（ｓ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３０２．２０。
【０５８５】
【化８６】
0006517827.tif 000109
化合物例３６：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．２９（ｄｄ，Ｊ１＝８．４Ｈｚ，Ｊ２＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），７．０１（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．８３（ｓ，２Ｈ），４．６７（ｄ，Ｊ＝１４．０Ｈｚ，２Ｈ），４．５８（ｄ，Ｊ＝１４．０Ｈｚ，２Ｈ），２．７８−２．７１（ｍ，２Ｈ），２．０７−２．０３（ｍ，２Ｈ），１．５３（ｓ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３２８．１０。
【０５８６】
【化８７】
0006517827.tif 000110
化合物例３７：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．３８（ｄｄ，Ｊ１＝８．０Ｈｚ，Ｊ２＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１６−７．１０（ｍ，２Ｈ），６．８６（ｓ，１Ｈ），６．７５（ｄ，Ｊ＝８．０ＨＺ，１Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），４．９３−４．７６（ｍ，２Ｈ），４．６２−４．５０（ｍ，３Ｈ），３．６０−３．５２（ｍ，１Ｈ），２．７８−２．７０（ｍ，１Ｈ），２．６２−２．５５（ｍ，１Ｈ），２．２５−２．１５（ｍ，１Ｈ），１．９５−１．８５（ｍ，１Ｈ），１．４７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），１．３０（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３４４．１５。
【０５８７】
【化８８】
0006517827.tif 000111
化合物例３８：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．３９（ｄｄ，Ｊ１＝８．４Ｈｚ，Ｊ２＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１７−７．１０（ｍ，２Ｈ），６．８９（ｓ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝８．４ＨＺ，１Ｈ），６．８１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．９２−４．８３（ｍ，２Ｈ），４．５８−４．４２（ｍ，４Ｈ），３．６０−３．５５（ｍ，１Ｈ），２．８０−２．７０（ｍ，１Ｈ），２．６５−２．５５（ｍ，１Ｈ），２．２５−２．１５（ｍ，１Ｈ），１．９５−１．８５（ｍ，１Ｈ），１．４７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），１．３０−１．２５（ｍ，１２Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３８６．２５。
【０５８８】
【化８９】
0006517827.tif 000112
化合物例３９：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．４６−７．４０（ｍ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｓ，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝８．４ＨＺ，１Ｈ），６．８２（ｄｄ，Ｊ１＝８．０Ｈｚ，Ｊ２＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．９５−４．８５（ｍ，２Ｈ），４．７０−４．６２（ｍ，２Ｈ），４．６０−４．５２（ｍ，１Ｈ），４．５０−４．４２（ｍ，１Ｈ），３．６０−３．５２（ｍ，１Ｈ），２．８２−２．７２（ｍ，１Ｈ），２．６５−２．５５（ｍ，１Ｈ），２．２８−２．１８（ｍ，１Ｈ），１．９５−１．８８（ｍ，１Ｈ），１．４９（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），１．３０−１．２５（ｍ，１２Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３８６．７０。
【０５８９】
【化９０】
0006517827.tif 000113
化合物例４０：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．２６（ｓ，１Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．７２−６．６５（ｍ，４Ｈ），６．００（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），４．９６−４．８７（ｍ，２Ｈ），４．５０−４．４１（ｍ，２Ｈ），４．１８−４．１０（ｍ，２Ｈ），３．４２−３．３６（ｍ，１Ｈ），２．７７−２．７４（ｍ，１Ｈ），２．５８−２．５０（ｍ，１Ｈ），２．１８−２．１０（ｍ，１Ｈ），１．９２−１．８６（ｍ，１Ｈ），１．４２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，３Ｈ），１．３０−１．２５（ｍ，１２Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝４１２．３０。
【０５９０】
【化９１】
0006517827.tif 000114
化合物例４１：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．４７−７．４２（ｍ，１Ｈ），７．３５−７．３０（ｍ，２Ｈ），７．２５−７．２２（ｍ，２Ｈ），７．１３（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．０１−４．９１（ｍ，２Ｈ），４．７２−４．６５（ｍ，２Ｈ），３．７２−３．６５（ｍ，１Ｈ），３．１２（ｓ，３Ｈ），２．９８（ｓ，３Ｈ），２．９２−２．８５（ｍ，１Ｈ），２．８０−２．７０（ｍ，１Ｈ），２．３０−２．２０（ｍ，１Ｈ），２．０２−１．９５（ｍ，１Ｈ），１．５２（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝４４１．２０。
【０５９１】
【化９２】
0006517827.tif 000115
化合物例４２：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．４３−７．４０（ｍ，１Ｈ），７．１９−７．１６（ｍ，２Ｈ），６．８９−６．８７（ｍ，２Ｈ），６．８２（ｄｄ，Ｊ１＝８．８Ｈｚ，Ｊ２＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．８４−４．６７（ｍ，４Ｈ），４．５５−４．４５（ｍ，２Ｈ），２．７１−２．６６（ｍ，２Ｈ），２．０８−２．０３（ｍ，２Ｈ），１．５３（ｓ，６Ｈ），１．３０−１．２６（ｍ，１２Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝４００．２５。
【０５９２】
【化９３】
0006517827.tif 000116
化合物例４３：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．４６−７．３８（ｍ，１Ｈ），７．３６−７．３２（ｍ，２Ｈ），７．２６−７．２２（ｍ，１Ｈ），７．２０−７．１２（ｍ，２Ｈ），４．９０−４．８０（ｍ，２Ｈ），４．７０−４．５５（ｍ，２Ｈ），３．７０−３．６０（ｍ，１Ｈ），３．１２（ｓ，３Ｈ），２．９９（ｓ，３Ｈ），２．９５−２．８５（ｍ，１Ｈ），２．８０−２．７０（ｍ，１Ｈ），２．３０−２．２０（ｍ，１Ｈ），２．００−１．９０（ｍ，１Ｈ），１．５０（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝４４１．１５。
【０５９３】
【化９４】
0006517827.tif 000117
化合物例４４：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．１５（ｓ，１Ｈ），７．４４−７．４２（ｍ，１Ｈ），７．２４−７．２１（ｍ，２Ｈ），６．８８−６．８６（ｍ，２Ｈ），６．７７−６．７５（ｍ，１Ｈ），４．８８−４．７９（ｍ，２Ｈ），４．７１−４．６６（ｍ，２Ｈ），３．９３−３．９０（ｍ，２Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ），３．６９−３．６６（ｍ，２Ｈ），２．６３−２．５８（ｍ，２Ｈ），２．０５−２．００（ｍ，２Ｈ），１．４５（ｓ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３４７．１５。
【０５９４】
【化９５】
0006517827.tif 000118
化合物例４５：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．４３−７．３９（ｍ，１Ｈ），７．１８−７．１２（ｍ，２Ｈ），６．９２−６．８８（ｍ，２Ｈ），６．８２−６．８０（ｍ，１Ｈ），４．８５−４．７０（ｍ，４Ｈ），４．０２−３．９９（ｍ，２Ｈ），３．８５−３．８２（ｍ，５Ｈ），２．７３−２．６９（ｍ，２Ｈ），２．１０−２．０５（ｍ，２Ｈ），１．５４（ｓ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３７４．１５。
【０５９５】
【化９６】
0006517827.tif 000119
化合物例４６：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．４８（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４４−７．３８（ｍ，１Ｈ），７．２３（ｄｄ，Ｊ１＝８．０Ｈｚ，Ｊ２＝２．０ｈｚ，１Ｈ），７．２０−７．１２（ｍ，２Ｈ），４．８５−４．５５（ｍ，４Ｈ），３．８６−３．７５（ｍ，２Ｈ），３．７２−３．６５（ｍ，１Ｈ），３．４６（ｓ，３Ｈ），２．８５−２．７０（ｍ，２Ｈ），２．１８−２．１２（ｍ，２Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３６８．０５。
【０５９６】
【化９７】
0006517827.tif 000120
化合物例４７：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ６．９０−６．８６（ｍ，４Ｈ），６．７４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．０４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），４．６３（ｄｄ，Ｊ１＝１４．０Ｈｚ，Ｊ２＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），４．４６（ｄｄ，Ｊ１＝１４．０Ｈｚ，Ｊ２＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），３．６９−３．６７（ｍ，２Ｈ），２．６２−２．５７（ｍ，２Ｈ），１．９９−１．９６（ｍ，２Ｈ），１．４２（ｓ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝４００．１５。
【０５９７】
【化９８】
0006517827.tif 000121
化合物例４８：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ６．９９（ｂｒ．ｓ，２Ｈ），６．９２−６．８９（ｍ，２Ｈ），６．８１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．７２（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，２Ｈ），４．６２（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，２Ｈ），４．０２−４．００（ｍ，２Ｈ），３．８６−３．８２（ｍ，１１Ｈ），２．７３−２．６８（ｍ，２Ｈ），２．０９−２．０５（ｍ，２Ｈ），１．５３（ｓ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝４１６．２０。
【０５９８】
【化９９】
0006517827.tif 000122
化合物例４９：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．２２（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），７．４６−７．４１（ｍ，１Ｈ），７．２４−７．２０（ｍ，２Ｈ），７．０１（ｓ，１Ｈ），６．９６（ｄ，Ｊ＝８．０ＨＺ，１Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），４．９２−４．８０（ｍ，２Ｈ），４．７２−４．６９（ｍ，２Ｈ），３．０２（ｓ，３Ｈ），２．８８（ｓ，３Ｈ），２．７０−２．６６（ｍ，２Ｈ），２．０９−２．０５（ｍ，２Ｈ），１．４７（ｓ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝４０１．２０。
【０５９９】
【化１００】
0006517827.tif 000123
化合物例５０：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．０７（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），７．４２−７．３９（ｍ，１Ｈ），７．２４−７．１８（ｍ，２Ｈ），７．０１−６．９５（ｍ，２Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．８２−４．６０（ｍ，４Ｈ），３．０２（ｓ，３Ｈ），２．８８（ｓ，３Ｈ），２．７０−２．６５（ｍ，２Ｈ），２．０７−２．０４（ｍ，２Ｈ），１．４４（ｓ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝４０１．１５。
【０６００】
【化１０１】
0006517827.tif 000124
化合物例５１：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．４８−７．４２（ｍ，１Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９２（ｓ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．８０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．０１−４．８９（ｍ，２Ｈ），４．６９−４．６３（ｍ，２Ｈ），４．０３−４．００（ｍ，２Ｈ），３．８６−３．８３（ｍ，５Ｈ），３．６４−３．６０（ｍ，１Ｈ），２．８６−２．７８（ｍ，１Ｈ），２．６７−２．６０（ｍ，１Ｈ），２．３０−２．２０（ｍ，１Ｈ），１．９８−１．９０（ｍ，１Ｈ），１．５０（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３６０．１５。
【０６０１】
【化１０２】
0006517827.tif 000125
化合物例５２：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ６．９１（ｓ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．８３（ｓ，２Ｈ），６．７９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．９８（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，２Ｈ），４．７５−４．６６（ｍ，２Ｈ），４．４９−４．４２（ｍ，２Ｈ），４．０２−３．９９（ｍ，２Ｈ），３．８６−３．７９（ｍ，５Ｈ），３．５０−３．４４（ｍ，１Ｈ），２．８２−２．７５（ｍ，１Ｈ），２．６６−２．５８（ｍ，１Ｈ），２．２５−２．１８（ｍ，１Ｈ），１．９５−１．８６（ｍ，１Ｈ），１．４６（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３８６．２０。
【０６０２】
【化１０３】
0006517827.tif 000126
化合物例５３：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．４０−７．３６（ｍ，１Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｓ，１Ｈ），６．７３（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．６８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），３．５８（ｂｒ．ｓ，４Ｈ），４．８１−４．７５（ｍ，３Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），２．６７−２．６３（ｍ，２Ｈ），２．１０−２．０６（ｍ，２Ｈ），１．５２（ｓ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３３０．１０。
【０６０３】
【化１０４】
0006517827.tif 000127
化合物例５４：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１０．０４（ｓ，１Ｈ），７．４６−７．４０（ｍ，１Ｈ），７．２３−７．１８（ｍ，３Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．８５−４．７８（ｍ，２Ｈ），４．６９−４．６６（ｍ，２Ｈ），２．６３−２．５９（ｍ，２Ｈ），２．０３−１．９８（ｍ，２Ｈ），１．４６（ｓ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３８４．１５。
【０６０４】
【化１０５】
0006517827.tif 000128
化合物例５５：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．２０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），７．１５（ｓ，１Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．９０−４．８６（ｍ，４Ｈ），２．７３−２．６８（ｍ，２Ｈ），２．１０−２．０６（ｍ，２Ｈ），１．５４（ｓ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝４０２．１５。
【０６０５】
【化１０６】
0006517827.tif 000129
化合物例５６：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８．０４（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｓ，１Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．１０−４．７０（ｍ，４Ｈ），２．７３−２．６９（ｍ，２Ｈ），２．１０−２．０６（ｍ，２Ｈ），１．５６（ｓ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝４１０．１５。
【０６０６】
【化１０７】
0006517827.tif 000130
化合物例５７：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．４８−７．３８（ｍ，３Ｈ），７．１２（ｓ，１Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．８１−４．７１（ｍ，４Ｈ），３．０９  ９ｓ，３Ｈ），２０９（ｓ，３Ｈ），２．７１−２．６６（ｍ，２Ｈ），２．０７−２．０３（ｍ，２Ｈ），１．６２（ｓ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝４３７．２５。
【０６０７】
【化１０８】
0006517827.tif 000131
化合物例５８：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８．０７−８．０５（ｍ，１Ｈ），７．６６−７．５４（ｍ，２Ｈ），６．９０−６．７８（ｍ，３Ｈ），５．２０−４．８０（ｍ，４Ｈ），２．６７−２．６０（ｍ，２Ｈ），２．０７−２．００（ｍ，２Ｈ），１．５５（ｓ，６Ｈ），１．３５（ｓ，９Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３９８．２５。
【０６０８】
【化１０９】
0006517827.tif 000132
化合物例５９：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．３２（ｓ，１Ｈ），７．４４−７．３７（ｍ，３Ｈ），６．８３−６．７４（ｍ，３Ｈ），４．８１−４．５６（ｍ，４Ｈ），３．００（ｓ，３Ｈ），２．９１（ｓ，３Ｈ），２．６０−２．５０（ｍ，２Ｈ），２．００−１．９０（ｍ，２Ｈ），１．４３（ｓ，６Ｈ），１．２８（ｓ，９Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝４２５．３５。
【０６０９】
【化１１０】
0006517827.tif 000133
化合物例６０Ａ：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．１９（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），６．９０（ｓ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．７９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．８６−４．８０（ｍ，４Ｈ），３．６５−３．６０（ｍ，１Ｈ），２．８０−２．７０（ｍ，１Ｈ），２．６２−２．５２（ｍ，１Ｈ），２．２５−２．１５（ｍ，２Ｈ），１．９５−１．８５（ｍ，１Ｈ），１．４８（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ），１．３６（ｓ，９Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３７６．２５。
【０６１０】
【化１１１】
0006517827.tif 000134
化合物例６０Ｂ：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．１８−７．１５（ｍ，１Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），６．８８−６．８０（ｍ，４Ｈ），４．０４−４．００（ｍ，４Ｈ），２．８０−２．７２（ｍ，１Ｈ），２．７０−２．６２（ｍ，１Ｈ），２．６０−２．５０（ｍ，１Ｈ），１．９５−１．８８（ｍ，１Ｈ），１．７６−１．７０（ｍ，１Ｈ），１．４２（ｓ，９Ｈ），１．２０（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３５８．２５。
【０６１１】
【化１１２】
0006517827.tif 000135
化合物例６１：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．９５（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），１０．００（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），７．９３（ｓ，２Ｈ），７．６５−７．６４（ｍ，１），７．２２−７．０９（ｍ，２Ｈ），６．９２−６．９０（ｍ，１Ｈ），４．８５−４．７５（ｍ，４Ｈ），３．２３（ｓ，３Ｈ），２．６５−２．６０（ｍ，２Ｈ），２．０２−１．９５（ｍ，２Ｈ），１．４５（ｓ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝４４４．２０。
【０６１２】
【化１１３】
0006517827.tif 000136
化合物例６２：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．８０−７．７８（ｍ，２Ｈ），７．４０−７．３８（ｍ，１Ｈ），６．８７−６．７８（ｍ，３Ｈ），４．１８−４．１０（ｍ，４Ｈ），３．０２（ｓ，３Ｈ），２．６２−２．５６（ｍ，２Ｈ），１．８０−１．６０（ｍ，２Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ），１．２０（ｓ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝４３２．２５。
【０６１３】
【化１１４】
0006517827.tif 000137
化合物例６３：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．９８−７．９５（ｍ，１Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｓ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．９０−４．８０（ｍ，４Ｈ），３．６６−３．６０（ｍ，１Ｈ），３．１２（ｓ，３Ｈ），２．８０−２．７２（ｍ，１Ｈ），２．６５−２．５５（ｍ，１Ｈ），２．２５−２．１５（ｍ，１Ｈ），１．９５−１．８５（ｍ，１Ｈ），１．４７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），１．３６（ｓ，９Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝４１８．２０。
【０６１４】
【化１１５】
0006517827.tif 000138
化合物例６４：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．９７（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．７８−７．６８（ｍ，２Ｈ），６．８８（ｓ，１Ｈ），６．７２（ｓ，２Ｈ），５．０９（ｓ，２Ｈ），４．８５（ｓ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．２０（ｓ，３Ｈ），２．７３−２．７０（ｍ，２Ｈ），２．１３−２．１０（ｍ，２Ｈ），１．５８（ｓ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３９０．１５。
【０６１５】
【化１１６】
0006517827.tif 000139
化合物例６５：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８．７５（ｓ，１Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８３（ｓ，１Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．６４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．０５−４．６０（ｍ，４Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ），３．６０−３．５０（ｍ，１Ｈ），３．４０−３．３０（ｍ，２Ｈ），２．７２−２．６５（ｍ，１Ｈ），２．２０−２．１０（ｍ，１Ｈ），１．９０−１．８０（ｍ，１Ｈ），１．４５−１．４０（ｍ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３７６．１０。
【０６１６】
【化１１７】
0006517827.tif 000140
化合物例６６：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８．５５（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７４−７．６７（ｍ，２Ｈ），６．８３−６．７７（ｍ，３Ｈ），４．９３（ｓ，２Ｈ），４．８１−４．７３（ｍ，２Ｈ），３．２８（ｓ，３Ｈ），２．６０−２．５５（ｍ，２Ｈ），２．０２−１．９８（ｍ，２Ｈ），１．４８−１．４６（ｍ，６Ｈ），１．２８（ｓ，９Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝４３２．３０。
【０６１７】
【化１１８】
0006517827.tif 000141
化合物例６７：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．９３（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．７６−７．６６（ｍ，２Ｈ），７．１５（ｓ，１Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），５．０５（ｓ，２Ｈ），４．８２（ｓ，２Ｈ），３．２０（ｓ，３Ｈ），２．７５−２．７０（ｍ，２Ｈ），２．３０−２．００（ｍ，２Ｈ），１．５７−１．５６（ｍ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝４４４．１５。
【０６１８】
【化１１９】
0006517827.tif 000142
化合物例６８：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．９８（ｓ，２Ｈ），７．６６−７．６３（ｍ，１Ｈ），６．８４（ｓ，１Ｈ），６．７５−６．６９（ｍ，２Ｈ），４．８３（ｓ，４Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．６３−３．５９（ｍ，１Ｈ），３．１３（ｓ，３Ｈ），２．８２−２．７６（ｍ，１Ｈ），２．６６−２．５８（ｍ，１Ｈ），２．２４−２．２１（ｍ，１Ｈ），１．９６−１．９１（ｍ，１Ｈ），１．４９（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３７６．１５。
【０６１９】
【化１２０】
0006517827.tif 000143
化合物例６９：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．９９（ｓ，２Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｓ，１Ｈ），６．７５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．８４（ｓ，４Ｈ），４．６０−４．５５（ｍ，１Ｈ），３．６０−３．５６（ｍ，１Ｈ），３．１３（ｓ，３Ｈ），２．７８−２．７３（ｍ，１Ｈ），２．６２−２．５８（ｍ，１Ｈ），２．２２−２．１８（ｍ，１Ｈ），１．９３−１．８９（ｍ，１Ｈ），１．４８（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），１．３１（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝４０４．２０。
【０６２０】
【化１２１】
0006517827.tif 000144
化合物例７０：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８．０１（ｓ，２Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｓ，１Ｈ），６．７８−６．７０（ｍ，２Ｈ），４．８４（ｓ，４Ｈ），４．６０−４．５６（ｍ，１Ｈ），３．１３（ｓ，３Ｈ），２．７０−２．６６（ｍ，２Ｈ），２．０８−２．０４（ｍ，２Ｈ），１．５５（ｓ，６Ｈ），１．３１（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝４１８．２５。
【０６２１】
【化１２２】
0006517827.tif 000145
化合物例７１：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．９９−７．９１（ｍ，４Ｈ），７．６２−７．５４（ｍ，４Ｈ），６．８３（ｓ，１Ｈ），６．７２−６．６８（ｍ，２Ｈ），４．８２（ｓ，４Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），２．７０−２．６５（ｍ，２Ｈ），２．０８−２．０２（ｍ，２Ｈ），１．５１（ｓ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝４５２．００。
【０６２２】
【化１２３】
0006517827.tif 000146
化合物例７２：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８．００（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｓ，１Ｈ），６．７４−６．７０（ｍ，２Ｈ），４．８５（ｓ，４Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．１３（ｓ，３Ｈ），２．７２−２．６８（ｍ，２Ｈ），２．１０−２．０６（ｍ，２Ｈ），１．５６（ｓ，６Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３９０．１５。
【０６２３】
【化１２４】
0006517827.tif 000147
化合物例７３。
【０６２４】
【化１２５】
0006517827.tif 000148
化合物例７４：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．０３−６．９９（ｍ，２Ｈ），６．８８−６．８３（ｍ，２Ｈ），６．７８−６．７５（ｍ，１Ｈ），４．８０−４．６５（ｍ，４Ｈ），２．６５−２．６０（ｍ，２Ｈ），２．０３−１．９９（ｍ，２Ｈ），１．５２（ｓ，６Ｈ），１．４０（ｓ，９Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３９０．２０。
【０６２５】
【化１２６】
0006517827.tif 000149
化合物例７５：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８．０７−８．０５（ｍ，１Ｈ），７．６６−７．５４（ｍ，２Ｈ），６．９０−６．７８（ｍ，３Ｈ），５．２０−４．８０（ｍ，４Ｈ），２．６７−２．６０（ｍ，２Ｈ），２．０７−２．００（ｍ，２Ｈ），１．５５（ｓ，６Ｈ），１．３５（ｓ，９Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）（Ｍ＋Ｈ）＋＝３９８．２５。
【０６２６】
【化１２７】
0006517827.tif 000150
化合物例７６：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ７．５５−７．４８（ｍ，３Ｈ），６．８７（ｓ，１Ｈ），６．７２−６．７０（ｍ，２Ｈ），４．９５−４．７９（ｍ，４Ｈ）３．９０−３．８０（ｍ，７Ｈ），３．３５−３．３０（ｍ，４Ｈ），２．７２−２．６９（ｍ，２Ｈ），２．１２−２．０８（ｍ，２Ｈ），１．５６（ｓ，６Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：４２４．７０（Ｍ＋１）＋。
【０６２７】
上記のものと類似した方法で追加の化合物を調製し、表４に示すように、１Ｈ−ＮＭＲおよびＭＳにより各化合物の構造を確認した。
【０６２８】
【表４】
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【０６２９】
要約および図面を含めた本明細書に開示されるあらゆる特徴ならびに開示される任意の方法または工程のあらゆる段階は、このような特徴および／または段階の少なくとも一部が互いに排反するような組合せを除き、任意の組合せで組み合わせ得る。要約および図面を含めた本明細書に開示される各特徴は、別途明記されない限り、同じ目的、同等の目的または類似した目的にかなう代替的特徴に置き換えることができる。したがって、別途明示されない限り、開示される各特徴は一般的な一連の同等の特徴または類似した特徴の一例にすぎない。当業者には、これまでの記載から、本明細書に記載される改変に加えて様々な改変が明らかになるであろう。このような改変も添付の「特許請求の範囲」の範囲に含まれるものとする。
【０６３０】
本明細書で言及される刊行物はいずれも、その全体が参照により組み込まれる。本明細書に記載されるものはいずれも、そのような開示が先行開示であるという理由で、本開示をそれに先行するものとする権利がないことを認めるものとして解釈されるべきではない。