(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
滑膜炎を有する個体における滑膜炎を治療するための組成物であって、治療的に有効な量の植物性栄養素を含み、ビタミンＤを有効成分としてさらに含み、前記植物性栄養素が、オレウロペイン、ルチン、クルクミン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、前記植物性栄養素がオレウロペインを含む、組成物。
【請求項２】
前記滑膜炎が、狼瘡、痛風、関節炎、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される状態に関連したものである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記状態が、関節リウマチ、骨関節炎、骨軟骨炎、骨関節症、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される関節炎である、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
ケルセチン、ヒドロキシチロソール、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される追加の生物活性化合物をさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記植物性栄養素が、植物抽出物から単離されたものである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
滑膜炎のリスクのある個体における滑膜炎を予防するための組成物であって、治療的に有効な量の植物性栄養素を含み、ビタミンＤを有効成分としてさらに含み、前記植物性栄養素が、オレウロペイン、ルチン、クルクミン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、前記植物性栄養素がオレウロペインを含む、組成物。
【請求項７】
前記個体が、高齢のヒト及び老齢のヒトからなる群から選択される、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記植物性栄養素が、植物抽出物から単離されたものである、請求項６又は７に記載の組成物。
【請求項９】
ケルセチン、ヒドロキシチロソール、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される追加の生物活性化合物をさらに含む、請求項６〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
少なくとも１か月間、毎日投与される、請求項６〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
滑膜炎の治療又は予防のための組成物であって、治療的に有効な量の植物性栄養素を含み、ビタミンＤを有効成分としてさらに含み、前記植物性栄養素が、オレウロペイン、ルチン、クルクミン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、前記植物性栄養素がオレウロペインを含む、組成物。
【請求項１２】
栄養組成物である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記栄養組成物が、タンパク質、炭水化物、脂肪、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される成分を含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
個体における滑膜炎に続いて生じる関節軟骨分解を治療又は予防するための組成物であって、治療的に有効な量の植物性栄養素を含み、ビタミンＤを有効成分としてさらに含み、前記植物性栄養素が、オレウロペイン、ルチン、クルクミン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、前記植物性栄養素がオレウロペインを含む、組成物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
[0001]本開示は、概して、滑膜炎の治療及び予防のための方法及び組成物に関する。より具体的には、本開示は、１種又はそれより多くの抗炎症植物性栄養素を含む組成物に関し、さらに、かかる組成物を投与することを含む方法に関する。
【０００２】
[0002]滑膜性関節は、関節の骨が互いに接触するところに位置している。滑膜性関節には、骨の間に空洞が存在し、その空洞は滑膜と呼ばれる膜で縁取られている。滑膜炎は滑膜の炎症であり、この症状は、多くの場合、特に関節を動かすときに痛みを伴う。関節は、関節液が溜まることによって腫れることが多い。
【０００３】
[0003]骨関節炎（ＯＡ）は、長い間、「摩滅」による病状であって、軟骨の喪失につながるものと考えられていた。ＯＡは、ある特定の関節にかかる圧力が増加したり、軟骨基質の弱化につながったりするプロセスの唯一の結果であると従来考えられてきた。しかし、サイトカインやプロスタグランジンのような可溶性のメディエーターの多くが軟骨細胞によるマトリックスメタロプロテアーゼの生成を増加させることが明らかになり、「炎症」理論の第一歩となった。今日では、滑膜炎はＯＡの重要な特徴として受け入れられており、滑膜炎をＯＡプロセスの動因と捉える方向へ進む研究もある。
【０００４】
[0004]最近の実験データでは、ＯＡプロセスにおいて、軟骨下骨が、ＯＡの痛みのプロセス、及び軟骨の深い層の分解に関わる炎症メディエーターの源だけでなく、機械的なダンパーとして実質的な役割をしている可能性が明らかになった。よって、当初は軟骨によって引き起こされると考えられていたＯＡは、軟骨、骨、及び関節液によって放出される炎症メディエーターを伴うもっと複雑な病気である。メタボリック・シンドローム、先天免疫及び慢性炎症によって引き起こされる軽度の炎症（ｌｏｗ−ｇｒａｄｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）は、ＯＡの炎症理論にとって有利な最近の議論に見られるものである。
【０００５】
[0005]ＯＡに悩まされる個体の数が増えているにもかかわらず、治療法はまだない。現行の医学療法はあくまで苦痛軽減のみであり、鎮痛剤（アセトアミノフェン）及び非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を使用した、痛みや炎症などの症状を和らげることに焦点をあてている。さらに、このような薬による治療は、胃腸又は心血管のリスクなどの副作用をしばしば伴い、結果として研究はまだ継続されている。
【発明の概要】
【０００６】
[0006]ＯＡの理想的な解決策は、病気の進行を改変し、併せて抗炎症及び鎮痛に効果的で、かつ安全な分子である。このような、病気を改変するＯＡ薬（ＤＭＯＡＤ）がない状況では、オルタナティブな治療法、及びＯＡ予防を栄養物で実施することも可能である。それゆえ、本開示は、滑膜炎を抑制し、老化に伴う軟骨分解の進行を制限する、栄養物の解決策を提供する。
【０００７】
[0007]したがって、通常の実施形態では、本開示は滑膜炎を治療する方法を提供する。本方法は、滑膜炎を有する個体に、治療的に有効な量の植物性栄養素を含む組成物を投与することを含み、当該植物性栄養素は、オレウロペイン、ルチン、クルクミン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【０００８】
[0008]一実施形態では、滑膜炎は、狼瘡、痛風、関節炎、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される症状に関連したものである。この状態は、関節リウマチ、骨関節炎、骨軟骨炎、骨関節症、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される関節炎であり得る。
【０００９】
[0009]一実施形態では、この植物性栄養素はオレウロペインを含む。
【００１０】
[0010]一実施形態では、この組成物は、ケルセチン、ヒドロキシチロソール、ビタミンＤ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される追加の生物活性化合物をさらに含む。
【００１１】
[0011]一実施形態では、この植物性栄養素は植物抽出物から単離されたものである。
【００１２】
[0012]別の実施形態では、滑膜炎を予防する方法を提供する。本方法は、滑膜炎のリスクのある個体に、治療的に有効な量の植物性栄養素を含む組成物を投与することを含み、当該植物性栄養素は、オレウロペイン、ルチン、クルクミン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００１３】
[0013]一実施形態では、この個体は、高齢のヒト及び老齢のヒトからなる群から選択される。
【００１４】
[0014]一実施形態では、この植物性栄養素は植物抽出物から単離されたものである。
【００１５】
[0015]一実施形態では、この組成物は、ケルセチン、ヒドロキシチロソール、ビタミンＤ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される追加の生物活性化合物をさらに含む。
【００１６】
[0016]一実施形態では、この組成物は、少なくとも１か月間、毎日投与される。
【００１７】
[0017]別の実施形態では、滑膜炎の治療又は予防のための組成物を提供する。本組成物は、治療的に有効な量の植物性栄養素を含み、当該植物性栄養素は、オレウロペイン、ルチン、クルクミン、及びそれらの組み合わせからなるから選択される。
【００１８】
[0018]一実施形態では、組成物は栄養組成物である。
【００１９】
[0019]一実施形態では、この栄養組成物は、タンパク質、炭水化物、脂質、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される成分を含む。
【００２０】
[0020]別の実施形態では、滑膜炎に続いて生じる関節軟骨分解を治療又は予防する方法を提供する。本方法は、それを必要とする個体に、治療的に有効な量の植物性栄養素を含む組成物を投与することを含み、当該植物性栄養素は、オレウロペイン、ルチン、クルクミン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００２１】
[0021]本開示の利点は、滑膜炎を治療又は予防することにある。
【００２２】
[0022]本開示のさらなる利点は、抗炎症栄養素を用いて滑膜炎を治療又は予防することにある。
【００２３】
[0023]本開示の別の利点は、滑膜炎を、鎮痛剤及びＮＳＡＩＤよりも安全に治療又は予防することにある。
【００２４】
[0024]本開示のさらに別の利点は、滑膜炎を、鎮痛剤又はＮＳＡＩＤを使用せずに治療又は予防することにある。
【００２５】
[0025]本開示の追加の利点は、天然及び／又は栄養組成物を用いて滑膜炎を治療又は予防することにある。
【００２６】
[0026]本開示の別の利点は、狼瘡、痛風、又は関節リウマチ若しくは骨関節炎などの関節炎に関連する滑膜炎を治療又は予防することにある。
【００２７】
[0027]本開示のさらに別の利点は、許容範囲内の副作用で又は副作用なく滑膜炎を治療又は予防することである。
【００２８】
[0028]本開示のさらに別の利点は、滑膜炎を、栄養組成物を生理学的な用量で使用して治療又は予防することにある。
【００２９】
[0029]本開示の追加の利点は、老化による軟骨分解の進行を制限することにある。
【００３０】
[0030]本開示の別の利点は、滑膜炎に続いて生じる関節軟骨分解を治療又は予防することにある。
【００３１】
[0031]本開示のさらに別の利点は、相乗的に作用する抗炎症植物性栄養素を用いて滑膜炎を治療又は予防することにある。
【００３２】
[0032]本開示のさらなる利点は、オレウロペイン、ルチン又はクルクミンのうちの少なくとも１種を使用しつつ、フラボノイドなどの他のポリフェノール並びにミネラル及びビタミンも生理学的な用量で提供して、滑膜炎を治療又は予防することにある。
【００３３】
本発明の実施形態は例えば下記実施形態１〜１５を含む。
実施形態１：
滑膜炎を治療する方法であって、滑膜炎を有する個体に、治療的に有効な量の植物性栄養素を含む組成物を投与することを含み、前記植物性栄養素が、オレウロペイン、ルチン、クルクミン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、方法。
実施形態２：
前記滑膜炎が、狼瘡、痛風、関節炎、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される状態に関連したものである、実施形態１に記載の方法。
実施形態３：
前記状態が、関節リウマチ、骨関節炎、骨軟骨炎、骨関節症、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される関節炎である、実施形態２に記載の方法。
実施形態４：
前記植物性栄養素がオレウロペインを含む、実施形態１に記載の方法。
実施形態５：
前記組成物が、ケルセチン、ヒドロキシチロソール、ビタミンＤ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される追加の生物活性化合物をさらに含む、実施形態１に記載の方法。
実施形態６：
前記植物性栄養素が、植物抽出物から単離されたものである、実施形態１に記載の方法。
実施形態７：
滑膜炎を予防する方法であって、そのリスクのある個体に、治療的に有効な量の植物性栄養素を含む組成物を投与することを含み、前記植物性栄養素が、オレウロペイン、ルチン、クルクミン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、方法。
実施形態８：
前記個体が、高齢のヒト及び老齢のヒトからなる群から選択される、実施形態７に記載の方法。
実施形態９：
前記植物性栄養素が、植物抽出物から単離されたものである、実施形態７に記載の方法。
実施形態１０：
前記組成物が、ケルセチン、ヒドロキシチロソール、ビタミンＤ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される追加の生物活性化合物をさらに含む、実施形態７に記載の方法。
実施形態１１：
前記組成物が、少なくとも１か月間、毎日投与される、実施形態７に記載の方法。
実施形態１２：
滑膜炎の治療又は予防のための組成物であって、治療的に有効な量の植物性栄養素を含み、前記植物性栄養素が、オレウロペイン、ルチン、クルクミン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、組成物。
実施形態１３：
栄養組成物である、実施形態１２に記載の組成物。
実施形態１４：
前記栄養組成物が、タンパク質、炭水化物、脂肪、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される成分を含む、実施形態１３に記載の組成物。
実施形態１５：
滑膜炎に続いて生じる関節軟骨分解を治療又は予防する方法であって、それを必要とする個体に、治療的に有効な量の植物性栄養素を含む組成物を投与することを含み、前記植物性栄養素が、オレウロペイン、ルチン、クルクミン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、方法。
[0033]追加の特徴及び利点を本明細書に記載する。これらは、以降の発明の詳細な説明及び図面から明らかとなろう。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１Ａ】図１Ａ。細胞の正常な状態を擬するＩＬ１ａが存在しない状態での、ＧＡＰＤＨに対するＡＤＡＭＴＳ−５  ｍＲＮＡの発現を示す。条件は統計的にＣＴＬ−と比較した。
【図１Ｂ】図１Ｂ。細胞の病的な状態を擬するＩＬ１ａが存在する状態での、ＧＡＰＤＨに対するＡＤＡＭＴＳ−５  ｍＲＮＡの発現を示す。条件は、ＣＴＬ−と比較したＩＬ１ａ（実験の妥当性の検証）を除いて、統計的にＩＬ１ａと比較した。
【図２Ａ】図２Ａ。細胞の正常な状態を擬するＩＬ１ａが存在しない状態での、ＧＡＰＤＨに対するＣＯＸ−２  ｍＲＮＡの発現を示す。条件は統計的にＣＴＬ−と比較した。
【図２Ｂ】図２Ｂ。細胞の病的な状態を擬するＩＬ１ａが存在する状態での、ＧＡＰＤＨに対するＣＯＸ−２  ｍＲＮＡの発現を示す。条件は、ＣＴＬ−と比較したＩＬ１ａ（実験の妥当性の検証）を除いて、統計的にＩＬ１ａと比較した。
【図３Ａ】図３Ａ。細胞の正常な状態を擬するＩＬ１ａが存在しない状態での、ＧＡＰＤＨに対するＭＭＰ−１３  ｍＲＮＡの発現を示す。条件は統計的にＣＴＬ−と比較した。
【図３Ｂ】図３Ｂ。細胞の病的な状態を擬するＩＬ１ａが存在する状態での、ＧＡＰＤＨに対するＭＭＰ−１３  ｍＲＮＡの発現を示す。条件は、ＣＴＬ−と比較したＩＬ１ａ（実験の妥当性の検証）を除いて、統計的にＩＬ１ａと比較した。
【図４−１】図４。モルモットの膝の組織断面を示す（ヘマトキシリン、ファストグリーン、及びサフラニン−Ｏによる染色）。４Ａ及び４ＢはＡ群（オレウロペイン）を示す。４Ｃ及び４ＤはＣ群（ルチン）を示す。４Ｅ及び４ＦはＤ群（ルチン及びクルクミン）を示す。４Ｇ及び４ＨはＢ群（対照）を示す。
【図４−２】図４。モルモットの膝の組織断面を示す（ヘマトキシリン、ファストグリーン、及びサフラニン−Ｏによる染色）。４Ａ及び４ＢはＡ群（オレウロペイン）を示す。４Ｃ及び４ＤはＣ群（ルチン）を示す。４Ｅ及び４ＦはＤ群（ルチン及びクルクミン）を示す。４Ｇ及び４ＨはＢ群（対照）を示す。
【図５】図５。それぞれの群のトータルＯＡスコアを示す。第４週の対照群＝ベースライン；第３５週の対照群；Ａ＝オレウロペイン群（食事に０．０２５％）；Ｃ＝ルチン群（食事に０．５％）；Ｄ＝ルチン（食事に０．５％）＋クルクミン（食事に０．２５％）。
【図６Ａ】図６Ａ。血漿中の炎症性ＰＧＥ２バイオマーカーの濃度を示す。第４週の対照群＝ベースライン；第３５週の対照群；Ａ＝オレウロペイン群（食事に０．０２５％）；Ｃ＝ルチン群（食事に０．５％）；Ｄ＝ルチン（食事に０．５％）＋クルクミン（食事に０．２５％）。
【図６Ｂ】図６Ｂ。第４週及び第３５週における血漿中のＰＧＥ２濃度と、対応する対照群のＯＡスコアとの相関を示す。
【図７】図７。コラーゲン２の分解に関連する血漿中のＣｏｌｌ２−１ＮＯ２バイオマーカー濃度を経時的に示す。Ｂ＝対照群；Ａ＝オレウロペイン群（食事に０．０２５％）；Ｃ＝ルチン群（食事に０．５％）；Ｄ＝ルチン（食事に０．５％）＋クルクミン（食事に０．２５％）。
【図８Ａ】図８Ａ。コラーゲン２の分解に関連する血漿中のＣｏｌｌ２−１ＮＯ２バイオマーカー濃度を示す。第４週の対照群＝ベースライン；第３５週の対照群；Ａ＝オレウロペイン群（食事に０．０２５％）；Ｃ＝ルチン群（食事に０．５％）；Ｄ＝ルチン（食事に０．５％）＋クルクミン（食事に０．２５％）。
【図８Ｂ】図８Ｂ。第４週及び第３５週における血漿中のＣｏｌｌ２−１ＮＯ２バイオマーカー濃度と、対応する対照群のＯＡスコアとの相関を示す。
【図９】図９。ＯＡ患者の軟骨細胞の肥大化に関連する血漿中のＦｉｂｕｌｉｎ  ３−１バイオマーカーの濃度を示す。Ｂ＝対照群；Ａ＝オレウロペイン群（食事に０．０２５％）；Ｃ＝ルチン群（食事に０．５％）；Ｄ＝ルチン（食事に０．５％）＋クルクミン（食事に０．２５％）。
【図１０Ａ】図１０Ａ。ＯＡ患者の軟骨細胞の肥大化に関連する血漿中のＦｉｂｕｌｉｎ  ３−１バイオマーカーの濃度を示す。第４週の対照群＝ベースライン；第３５週の対照群；Ａ＝オレウロペイン群（食事に０．０２５％）；Ｃ＝ルチン群（食事に０．５％）；Ｄ＝ルチン（食事に０．５％）＋クルクミン（食事に０．２５％）。
【図１０Ｂ】図１０Ｂ。第４週及び第３５週における血漿中のＦｉｂｕｌｉｎ  ３−１バイオマーカーの濃度と、対応する対照群のＯＡスコアとの相関を示す。
【図１１Ａ】図１１Ａ。それぞれの群における総滑液スコアを示す。第４週の対照群＝ベースライン；第３５週の対照群；Ａ＝オレウロペイン群（食事に０．０２５％）；Ｃ＝ルチン群（食事に０．５％）；Ｄ＝ルチン（食事に０．５％）＋クルクミン（食事に０．２５％）。
【図１１Ｂ】図１１Ｂ。第４週及び第３５週における総滑液スコアと、対応する対照群のＯＡスコアとの相関を示す。
【図１２Ａ】図１２Ａ。それぞれの群における滑膜表層細胞の過形成を示す。第４週の対照群＝ベースライン；第３５週の対照群；Ａ＝オレウロペイン群（食事に０．０２５％）；Ｃ＝ルチン群（食事に０．５％）；Ｄ＝ルチン（食事に０．５％）＋クルクミン（食事に０．２５％）。
【図１２Ｂ】図１２Ｂ。第４週及び第３５週における滑膜表層細胞の過形成と、対応する対照群のＯＡスコアとの相関を示す。
【図１３Ａ】図１３Ａ。それぞれの群における、血管周囲のリンパ球及び単核球による滑液細胞浸潤の度合いを示す。第４週の対照群＝ベースライン；第３５週の対照群；Ａ＝オレウロペイン群（食事に０．０２５％）；Ｃ＝ルチン群（食事に０．５％）；Ｄ＝ルチン（食事に０．５％）＋クルクミン（食事に０．２５％）。
【図１３Ｂ】図１３Ｂ。第４週及び第３５週における滑液細胞浸潤と、対応する対照群のＯＡスコアとの相関を示す。
【図１４】図１４。９日間の培養の後の造骨細胞によるコラーゲン合成を示す。１，２５（ＯＨ）２Ｄ３、ＯＬＰ及びＨＴｙの組み合わせによる刺激に対する応答として、生成されたコラーゲンを総タンパク質１ミリグラムに対するマイクログラムで測定した。
【図１５】図１５。９日間の培養の後のアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）活性を示す。１，２５（ＯＨ）２Ｄ３、ＯＬＰ及びＨＴｙの組み合わせに対する応答として、ＡＬＰを総タンパク質１ミリグラムに対するマイクロモルで示した。
【図１６】図１６。１，２５（ＯＨ）２Ｄ３の存在下で培養した造骨細胞のアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）活性を、５、９、１２、又は１５日の処理後について示す。
【図１７Ａ】図１７Ａ。オレウロペインの存在下で培養した造骨細胞のアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）活性を、５、９、１２、又は１５日の処理後について示す。
【図１７Ｂ】図１７Ｂ。１，２５（ＯＨ）２Ｄ３及びオレウロペインの存在下で培養した造骨細胞のアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）活性を、５、９、１２、又は１５日の処理後について示す。
【図１８Ａ】図１８Ａ。ヒドロキシチロソールの存在下で培養した造骨細胞のアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）活性を、５、９、１２、又は１５日の処理後について示す。
【図１８Ｂ】図１８Ｂ。１，２５（ＯＨ）２Ｄ３及びヒドロキシチロソールの存在下で培養した造骨細胞のアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）活性を、５、９、１２、又は１５日の処理後について示す。
【図１９Ａ】図１９Ａ。オレウロペイン及びヒドロキシチロソールの存在下で培養した造骨細胞のアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）活性を、５、９、１２、又は１５日の処理後について示す。
【図１９Ｂ】図１９Ｂ。１，２５（ＯＨ）２Ｄ３、オレウロペイン及びヒドロキシチロソールの存在下で培養した造骨細胞のアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）活性を、５、９、１２、又は１５日の処理後について示す。
【図２０】図２０。オレウロペインの化学構造を示す。
【図２１】図２１。ルチンの化学構造を示す。
【図２２】図２２。クルクミンの化学構造を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
[0068]本明細書に記載のすべての百分率は、別途記載のない限り組成物の合計重量に基づくものである。ｐＨについての参照がなされるとき、値は標準的な装置により２５℃にて測定されるｐＨに相当する。本開示及び添付の特許請求の範囲で使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」には、文脈において明記されている場合を除き複数形を包含する。本明細書で使用するとき、「約」は、数値範囲に含まれる複数の数を指すものと理解される。さらに、本明細書におけるすべての数値範囲は、その範囲内のすべての整数又は分数を含むと理解されるべきである。本明細書に開示される組成物は、本明細書にて具体的に開示されない任意の要素を欠く場合がある。したがって、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」を用いて提示される実施形態の開示は、参照される構成要素「から本質的になる」実施形態、及び「からなる」実施形態の開示を含む。本明細書に開示される任意の実施形態は、本明細書に開示されている任意の他の実施形態と組み合わせることができる。
【００３６】
[0069]「予防」は、滑膜炎のリスク及び／又は重症度の低減を含む。用語「治療」、「治療する」及び「緩和する」は、（標的にする病態若しくは疾患の進行を予防及び／又は遅延させる）予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ又はｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ）治療、及び治癒的、治療的若しくは疾患改変的治療の両方を含み、診断した病態又は疾患を治癒する、減速させる、その症状を減少させる、及び／又はその進行を停止する治療手段、並びに疾患に冒される危険がある又は疾患に冒されたことが疑われる患者、加えて病気であるか又は疾病状態若しくは医学的状態を患っていると診断されている患者の治療を含む。この用語は、対象者が完全に回復するまで治療を受けることを必ずしも意味するものではない。用語「治療」及び「治療する」はまた、疾患を患ってはいないが、不健康な状態を起こしやすい個体の健康維持及び／又は促進も意味する。用語「治療」、「治療する」及び「緩和する」はまた、１つ又はそれより多くの主たる予防又は治療手段の相乗作用又はそうでない場合は強化を含むことも目的としている。用語「治療」、「治療する」及び「緩和する」はさらに、疾患若しくは状態の食事療法、又は疾患若しくは状態の予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ又はｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）のための食事療法を含むことも目的としている。治療は、患者に関連するか又は医師に関連するものとすることができる。
【００３７】
[0070]本明細書で使用する場合、「治療的に有効な量」とは、個体における、欠乏を防ぐ、疾病状態若しくは医学的状態を治療する、あるいはさらに一般的には、個体に対して、症状を軽減する、疾患の進行を管理する、又は栄養学的、生理学的若しくは医学的利益を提供する量である。治療効果を達成するのに必要な治療的に有効な量は、もちろん、個々の組成物、投与経路、レシピエントの年齢及び状態、並びに治療する個々の疾患や病気によって様々である。
【００３８】
[0071]「高齢の（ａｇｉｎｇ）」動物とは、その特定の種及び／又は種内の属の平均寿命の５０％を超えたものをいう。ある動物が「老齢（ｅｌｄｅｒｌｙ）」とされるときは、それが生まれた国における平均余命の最初の３分の２を経過した場合を指し、好ましくは、それが生まれた国における平均余命の最初の４分の３を経過した場合、より好ましくは、それが生まれた国における平均余命の最初の５分の４を経過した場合を指す。「老齢のヒト」とは、暦年齢で６５歳以上の人を意味する。
【００３９】
[0072]「動物」としては、齧歯類、水生哺乳類、イヌ及びネコ等の飼育動物、ヒツジ、ブタ、ウシ及びウマなどの家畜、並びにヒトを含む（但し、それらに限定されない）哺乳類が挙げられるが、それらに限定されない。「動物」、「哺乳類」、又はそれらの複数形が用いられる場合、これらの用語は、本節の文脈により効果が示されるか、又は示されるように意図されることができる動物にも当てはまる。本明細書で使用する場合、用語「患者」は、本明細書において定義されるような治療を受けている又は受けることが意図されている動物、とりわけ哺乳類、かつ一層とりわけ、ヒトを含むと理解される。本明細書では、用語「個体」及び「患者」は、多くの場合、ヒトを指して用いられるが、本開示はそのように限定されない。したがって、「個体」及び「患者」という用語は、治療が有益である可能性がある医学的状態を有する又はそのリスクのある任意の動物、哺乳動物又はヒトを指す。
【００４０】
[0073]「食品」及び「食品組成物」は、本明細書で使用される場合、例えば、１種又はそれより多くのタンパク質、炭水化物、脂肪、酸味料、増粘剤、ｐＨ調節用緩衝液若しくはｐＨ調節剤、キレート剤、着色剤、乳化剤、賦形剤、香料、ミネラル、浸透剤、薬学的に許容される担体、防腐剤、安定剤、糖、甘味料、調質剤及び／又はビタミン類などの従来の食品添加物を含む、任意の数の任意の添加成分を含むと理解される。任意の成分は任意の好適な量で添加することができる。
【００４１】
[0074]用語「キット」は、キットの構成要素が１つ又はそれより多くの容器中で又は容器と物理的に関連付けられており、製造、配送、販売又は使用のための１つのユニットとして考えられることを意味している。容器とは、袋、箱、カートン、ボトル、任意の種類、設計若しくは材料のパッケージ、オーバーラップ、収縮性ラップ、固定された構成要素（例えば、ステープリング、接着されたものなど）、又はそれらの組み合わせが挙げられるが、それらに限定されない。
【００４２】
[0075]「植物性栄養素」は、多くの食品において見られる非栄養性の化合物である。用語「植物性栄養素」は、１つ又はそれより多くの健康上の利益を使用者に付与する、植物によって産生される任意の化合物を指す。
【００４３】
[0076]理論に束縛されるものではないが、炎症メディエーターはＯＡプロセスの開始及び持続において重要な役割を果たすと発明者は考える。そのようなメディエーターの源は、関節細胞からの局所的なもの、及び血流に放出され、軟骨下骨血管構造を介して関節に到達する脂肪組織のような他の組織からの全身性のものであり得る。そして、このようなメディエーターは、軟骨、骨、及び関節液に対して有害な効果をもつ。例えば、関節の腫大は、炎症によるＯＡの１つの臨床像であり、関節液の肥厚によるか又は滲出液による滑膜炎が存在することを反映している。
【００４４】
[0077]このコンテクストにおいて、発明者らは、ＯＡの高齢の動物モデル（モルモット）において、抗酸化剤及び抗炎症栄養素の滑膜炎及び軟骨の健全性に対する有効性を評価した。クルクミン、ルチン及びオレウロペイン（及びそれに続いて生じる代謝産物）は抗炎症及び抗酸化の特性を有する。発明者らは、これらの化合物の滑膜炎及びそれに続いて生じる軟骨分解に対する効果を評価した。クルクミン、ルチン及びオレウロペインは軟骨分解及び組織学的ＯＡスコアを低減して、関節の健康を顕著に改善し、オレウロペインを投与された群は滑液変性（滑液スコア、表皮細胞過形成、及び細胞の浸潤）の顕著な減少を示した。さらに、重要な点として、オレウロペインは血清内のＰＧＥ２濃度と共に、軟骨内の酸化ストレスに関連するバイオマーカーであるＣｏｌｌ２−１ＮＯ２の濃度を減少させた。このデータは、オレウロペインが滑膜炎（関節液の炎症）を抗炎症経路（ＰＧＥ２）を介して減少できたことを示唆している。結果として、オレウロペイン及びルチンは、自然発生的にＯＡになったモルモットにおけるＯＡ病変の進行を顕著に遅延させる。さらに、オレウロペインは、ＰＧＥ２及びＣｏｌｌ２−１ＮＯ２血清濃度を顕著に減少させて、滑膜炎を低減し、オレウロペインの潜在的な抗炎症特性を示している。さらに、ｆｉｂｕｌｉｎ−３．１（軟骨細胞肥大のマーカー）の血清濃度によって、クルクミン（とルチン）との相乗効果が実証された。
【００４５】
[0078]よって、本開示により提供される組成物は、治療的に有効な量の抗炎症植物性栄養素を含み、当該抗炎症植物性栄養素は、オレウロペイン、ルチン、クルクミン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。好ましい実施形態において、組成物は少なくともオレウロペインを含む。オレウロペイン、ルチン及びクルクミンの化学構造は図２０〜２２にそれぞれ示されている。
【００４６】
[0079]一実施形態では、それを必要とする個体に抗炎症植物性栄養素を含む組成物を投与することによって滑膜炎が治療又は予防され、当該抗炎症植物性栄養素は、オレウロペイン、ルチン、クルクミン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。例えば、オレウロペイン、ルチン又はクルクミンのうちの少なくとも１種を含む組成物は、滑膜炎を治療するために滑膜炎を有する個体に投与され得る。滑膜炎は、狼瘡、痛風、又は関節リウマチ若しくは骨関節炎のような関節炎に関連し得る。一実施形態では、本組成物を１日に少なくとも１回、少なくとも１か月間、好ましくは少なくとも２か月間、より好ましくは少なくとも３か月間の期間にわたって投与する。
【００４７】
[0080]一実施形態では、オレウロペイン、ルチン又はクルクミンのうちの少なくとも１種を含む組成物を老齢のヒトのような高齢又は老齢の個体に投与することによって、滑膜炎が治療又は予防される。しかし、本開示は、投与を受けるレシピエントの特定の年齢に限定されず、任意の年齢の個体に投与することができる。
【００４８】
[0081]本組成物は、ヒドロキシチロソール（オレウロペインの代謝産物）及び／又はケルセチン（ルチンの代謝産物）などの追加のポリフェノールを含んでもよい。本組成物は、オレウロペイン、ルチン、ヒドロキシチロソール、クルクミン及びケルセチンのそれぞれを、本組成物１回投与量当たり各成分０．０１ｍｇ〜約１ｇ、好ましくは０．１ｍｇ〜１ｇ、さらに好ましくは１ｍｇ〜約１ｇの量で含み得る。
【００４９】
[0082]オレウロペイン、ヒドロキシチロソール、ルチン、クルクミン及び／又はケルセチンは任意の好適な原料からのものであり得、単離されたものであっても、化学的に合成されたものであってもよい。好ましい実施形態では、オレウロペイン、ヒドロキシチロソール、ルチン、クルクミン及び／又はケルセチンは植物原料から得られる。例えば、オレウロペイン及びヒドロキシチロソールはオリーブから得られたものであり得、ルチンは玉ねぎから、クルクミンはショウガ科のクルクマから得られたものであり得る。
【００５０】
[0083]本組成物はまた、１種又はそれより多くの追加の生物活性化合物、例えば、抗酸化剤、抗炎症化合物、グルコサミノグリカン、プレバイオティクス、繊維、プロバイオティクス、脂肪酸、ミネラル、微量元素、及びビタミンからなる群から選択される１種又はそれより多くの化合物を含んでもよい。「生物活性化合物」とは、基礎的な栄養上の需要を満足することを超えて、個体の健康に貢献するか又はヒトの身体に効果をもたらす、任意の化合物である。１種又はそれより多くの追加の生物活性化合物は天然起源のものであり得る。つまり、化合物は、植物、動物、魚、菌類、藻類、又は微生物発酵物の抽出物から得られたものであり得る。ミネラルは天然起源のものと考えられる。
【００５１】
[0084]一実施形態では、本組成物は１種又はそれより多くの追加の抗炎症化合物を含む。一実施形態では、滑膜炎を治療又は予防する方法は、１種又はそれより多くの追加の抗炎症化合物を、治療的に有効な量のオレウロペイン、ルチン又はクルクミンのうちの少なくとも１種を含む組成物に対して、連続的に又は同時に投与することを含む。例えば、１種又はそれより多くの追加の抗炎症化合物は、治療的に有効な量のオレウロペイン、ルチン又はクルクミンのうちの少なくとも１種を含む組成物と同じ組成物に供給されていてもよい。あるいは、１種又はそれより多くの追加の抗炎症化合物は、治療的に有効な量のオレウロペイン、ルチン又はクルクミンのうちの少なくとも１種を含む組成物とは別に、例えばキット内に又は一連の相互作用する（ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ）製品として供給されてもよい。治療的に有効な量のオレウロペイン、ルチン又はクルクミンのうちの少なくとも１種を含む組成物、及び１種又はそれより多くの追加の抗炎症化合物が別個の組成物で提供される場合、これらの組成物は、投与の前に混合されるか、又は同時若しくは連続的に投与され得る。
【００５２】
[0085]１種又はそれより多くの追加の抗炎症化合物は抗炎症効果のある任意の化合物であり得る。好適な追加の抗炎症化合物の非限定的な例としてオメガ−３多価不飽和脂肪酸があり、これは例えば魚から抽出できる。好適な追加の抗炎症化合物の非限定的な別の例は、フラボノイド、ポリフェノール、プロアントシアニン、及び／又はアボカド大豆不鹸化物及びオメガ−３多価不飽和脂肪酸などの脂質を含む植物抽出物である。植物抽出物は、デビルズクロウ（Ｈａｒｐａｇｏｐｈｙｔｕｍ  ｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓ）、ローズマリー（Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ヒソップ、ショウガ（Ｚｉｎｇｉｂｅｒ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）、ターメリック（Ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ）、アルニカ・モンタナ（Ａｒｎｉｃａ  Ｍｏｎｔａｎａ）、ウィロウ・バーク（ｗｉｌｌｏｗ  ｂａｒｋ）、ザクロ（Ｐｕｎｉｃａ  ｇｒａｎａｔｕｍ）、緑茶（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、キャッツ・クロウ（Ｕｎｃａｒｉａ  ｔｏｍｅｔｏｓａ、及びＵｎｃａｒｉａ  ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ）、インディアン・オリバウム（Ｂｏｓｗｅｌｉａ  ｓｅｒｒａｔａ）、パイナップル・ブロメライン（Ａｎａｎａｓ  ｃｏｍｏｓｕｓ）、ニオイクロタネソウ（Ｎｉｇｅｌｌａ  ｓａｔｉｖａ）、セント・ジョーンズ・ワート、ハイパフォリン、ゴールデンシール（Ｇｏｌｄｅｎｓｅａｌ）、ジャーマン・カモミール（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ  ｒｅｃｕｔｉｔａ）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される１種又はそれより多くの植物由来のものであり得る。
【００５３】
[0086]一実施形態では、本組成物は１種又はそれより多くの追加の抗酸化剤を含む。一実施形態では、本組成物は、抗炎症化合物と抗酸化剤の両方として特徴付けられ得る追加の化合物を含む。好適な抗酸化剤の非限定的な例として、アスタキサンチン、カロテノイド、コエンザイムＱ１０（「ＣｏＱ１Ｏ」）、フラボノイド、グルタチオン、ゴジ（クコ）、ヘスペリジン、ラクトウルフベリー（ｌａｃｔｏｗｏｌｆｂｅｒｒｙ）、リグナン、ルテイン、リコピン、ポリフェノール、セレン、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、及びゼアキサンチンが挙げられる。好ましい実施形態では、抗酸化剤は例えば植物抽出物などの天然起源のものである。
【００５４】
[0087]一実施形態では、組成物はグルコサミノグリカンを含む。グルコサミノグリカンは、健康な軟骨に存在する、大型の、強く帯電した分子である。グルコサミノグリカンの例としてグルコサミン及びコンドロイチン硫酸が挙げられる。よって、組成物の実施形態はグルコサミン又はコンドロイチン硫酸のうちの少なくとも１種を含む。
【００５５】
[0088]いくつかの実施形態では、本組成物は１種又はそれより多くのプレバイオティクスを含む。好適なプレバイオティクの非限定的な例として、アカシアガム、αグルカン、アラビノガラクタン、βグルカン、デキストラン、フラクトオリゴ糖、フコシルラクトース、ガラクトオリゴ糖、ガラクトマンナン、ゲンチオオリゴ糖、グルコオリゴ糖、グアーガム、イヌリン、イソマルトオリゴ糖、ラクトネオテトラオース、ラクトスクロース、ラクツロース、レバン、マルトデキストリン、ミルクオリゴ糖、部分加水分解グアーガム、ペクチン由来オリゴ糖、難消化性デンプン、老化デンプン、シアロオリゴ糖、シアリルラクトース、大豆オリゴ糖、糖アルコール、キシロオリゴ糖、それらの加水分解物、又はそれらの組み合わせが挙げられる。
【００５６】
[0089]本組成物は繊維質を含んでもよい。繊維質は、可溶性の繊維質、不溶性の繊維質、又はそれらの組み合わせであってもよい。可溶性の繊維質の非限定的な例として、フラクトオリゴ糖、アカシアガム、イヌリン、寒天（ａｇａｒ−ａｇａｒ）、アルギン酸塩、イナゴマメ、カラギーナン、アラビアガム、グアーガム、カラヤゴム、ペクチン、又はキサンタンガムなどが挙げられ、これらの可溶性の繊維質は、加水分解された形態であっても、加水分解されていない形態であってもよい。不溶性の繊維質の非限定例としてエンドウマメの外皮繊維が挙げられる。
【００５７】
[0090]本組成物は１種又はそれより多くのプロバイオティクスを含んでもよい。好適なプロバイオティクスの非限定的な例として、アエロコッカス（Ａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）、クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、デバロマイセス（Ｄｅｂａｒｏｍｙｃｅｓ）、エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、フソバクテリウム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ラクトバシルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、リューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）、メリッソコッカス（Ｍｅｌｉｓｓｏｃｏｃｃｕｓ）、ミクロコッカス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ムコール（Ｍｕｃｏｒ）、オエノコッカス（Ｏｅｎｏｃｏｃｃｕｓ）、ペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、ペプトストレプトコッカス（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｏｃｏｃｃｕｓ）、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、シュードカテヌラータム（Ｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ）、クモノスカビ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）、サッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、トルロプシス（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ）、ワイセラ（Ｗｅｉｓｓｅｌｌａ）、非反復性の微生物、又はそれらの組み合わせが挙げられる。
【００５８】
[0091]いくつかの実施形態では、本組成物はミネラル及び微量元素を含む。好適なミネラル及び微量元素の非限定的な例として、カルシウム、マグネシウム、ナトリウム、カリウム、リン、銅、亜鉛、鉄、セレン、クロム、及びモリブデン、並びにそれらの組み合わせが挙げられる。本組成物はカルシウム及び／又はマグネシウムを含むことが好ましい。カルシウムとしては、例えば、カルシウムの無機塩（塩化カルシウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、及び／又は炭酸カルシウム）、カルシウムの有機塩（クエン酸カルシウム、マレイン酸カルシウム、又はそれらの混合物）、及び／又は粉末スキムミルク若しくはカゼイン酸カルシウムなどの、カルシウムを含む有機成分など、有機及び／又は無機の生理学的に許容できる１種又はそれより多くの化合物であり得る。マグネシウムとしては、例えば、マグネシウムの無機塩（塩化マグネシウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、酸化マグネシウム、水酸化マグネシウム、及び／又は炭酸マグネシウム）、マグネシウムの有機塩（クエン酸マグネシウム、マレイン酸マグネシウム、又はそれらの混合物）、及び／又はマグネシウムを含む有機成分など、有機及び／又は無機の生理学的に許容できる１種又はそれより多くの化合物であり得る。
【００５９】
[0092]本組成物は、ビタミン、例えば、ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、ビタミンＣ、葉酸、チアミン、リボフラビン、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ナイアシン、ビオチン、及びパントテン酸から選択される１種又はそれより多くのビタミンを含み得る。ビタミンＤはオレウロペイン及び／又はヒドロキシチロソールなどのポリフェノールの効果を、ビタミンＤが存在しない場合よりも速く効果を増進及び／又は効果を誘発することによって増強し得る。ビタミンＤは任意の好適な形態で存在し得、本組成物１回投与量当たり８００〜１２００ＩＵの量であることが好ましい。ビタミンＤの好適な形態の非限定的な例として、コレカルシフェロール（Ｄ３）、エルゴカルシフェロール（Ｄ２）、並びにそれらの生理学的に活性な代謝物及び前駆体、例えば、１−α−ヒドロキシビタミンＤ、２５−ヒドロキシビタミンＤ、１，２５−ジヒドロキシビタミンなどが挙げられる。
【００６０】
[0093]本組成物は、ヒトへの投与、特に消化管の任意の部位への投与に好適な任意の方法で投与され得る。腸内投与、経口投与、及び管若しくはカテーテルを通しての投与は本開示にすべて含まれる。本組成物はまた、経口、経腸、舌下、唇下、頬側、局所などから選択される方法によって投与され得る。
【００６１】
[0094]本組成物は、例えば、錠剤、カプセル、液体、チュアブル、ソフトジェル、袋、粉末、シロップ、懸濁液、乳化液、及び溶液を含む任意の既知の形態で、便利な剤形で投与され得る。ソフトカプセル内では、活性成分が、脂肪油、パラフィン油、又は液体ポリエチレングリコールなどの好適な液体中に溶解又は懸濁されていることが好ましい。所望により安定剤を添加してもよい。本組成物が経管栄養により投与される場合には、栄養組成物は短期経管栄養又は長期経管栄養に使用され得る。
【００６２】
[0095]本組成物は栄養組成物又は医薬組成物であり得、ヒト又は動物に対して使用され得る。「栄養組成物」とは、個体にとって栄養源となる任意の組成物である。栄養組成物は完全栄養素源又は不完全栄養素源であり得る。本明細書において、「完全栄養素」とは、組成物が投与される動物のための唯一の栄養素供給源となるのに十分な種類と量の多量栄養素（タンパク質、脂肪、及び炭水化物）及び微量栄養素を含む栄養製品及び組成物を含む。患者は、その栄養必要量をそのような完全栄養素組成物から１００％摂取できる。本明細書において、「不完全栄養素」とは、組成物が投与される動物のための唯一の栄養素供給源となるのに十分な種類と量の多量栄養素（タンパク質、脂肪、及び炭水化物）又は微量栄養素を含まない栄養製品又は組成物を含む。部分的又は不完全な栄養組成物は栄養補助食品として使用できる。
【００６３】
[0096]本開示により提供される栄養組成物は医療用の食事であり得る。医療用の食事とは、ある状態において栄養管理を提供するよう企画された栄養組成物の特別な分類である。
【００６４】
[0097]一実施形態において、栄養組成物はタンパク質源を含む。このタンパク質源は、限定されるものではないが、動物タンパク質（乳タンパク質、食肉タンパク質、及び卵タンパク質など）、植物タンパク質（大豆タンパク質、小麦タンパク質、米タンパク質、及びエンドウマメタンパク質など）、又はそれらの組み合わせなどを含む、食品タンパク質であり得る。一実施形態において、タンパク質は、ホエー、鶏肉、トウモロコシ、カゼイン塩、小麦、アマ、大豆、イナゴマメ、エンドウマメ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００６５】
[0098]一実施形態において、栄養組成物は炭水化物源を含む。任意の好適な炭水化物が組成物中で使用され得、限定されるものではないが、デンプン、スクロース、ラクトース、グルコース、フルクトース、コーンシロップ固体、マルトデキストリン、変性デンプン、アミロースデンプン、タピオカデンプン、トウモロコシデンプン、キシリトール、ソルビトール、又はそれらの組み合わせが挙げられる。
【００６６】
[0099]一実施形態において、栄養組成物は脂肪源を含む。脂肪源は、任意の適切な脂肪又は脂肪混合物を含み得る。例えば、脂肪源としては、限定されるものではないが、植物性脂肪（例えば、オリーブ油、コーン油、ヒマワリ油、高オレイン酸油、菜種油、キャノーラ油、ヘーゼルナッツ油、大豆油、パーム油、ココナッツ油、ブラックカラントシード油、ルリヂサ油、レシチンなど）、動物性脂肪（乳脂肪など）、又はそれらの組み合わせが挙げられる。脂肪源はまた、上記の脂肪の粗精品（例えば、ポリフェノール含有のオリーブ油）であり得る。
【００６７】
[0100]本栄養組成物はまた天然又は人工着香料を含んでもよく、例えば、バナナ、オレンジ、ピーチ、パイナップル若しくはラズベリーなどのフルーツフレーバー、又はバニラ、ココア、コーヒーなどの他の植物フレーバーを含んでもよい。
【００６８】
[0101]本栄養組成物は、主要生物活性成分、任意のさらなる生物活性成分、並びに所望によりタンパク質源、炭水化物源及び脂肪源のうちの１種又はそれより多くの他に、例えば、１種又はそれより多くの酸味料、追加の増粘剤、ｐＨ調節用緩衝液若しくはｐＨ調節剤、キレート剤、着色料、乳化剤、賦形剤、香料、ミネラル、浸透剤、薬学的に許容される担体、保存料、安定剤、糖類、甘味料、品質改良剤及び／又はビタミンなどの従来の食品添加物（人工又は天然）を含む、任意の数の追加の食物成分を所望により含み得る。任意の成分は任意の好適な量で添加することができる。
【００６９】
[0102]本栄養組成物は任意の好適な形態で提供され得る。本発明による使用のための組成物が供給され得る、栄養組成物の形態の非限定的な例として、溶液、インスタント組成物（例えば、インスタント飲料組成物又はインスタント飲料）、液体食、ソフトドリンク、ジュース、スポーツ飲料、乳飲料、ミルクシェーク、ヨーグルト飲料、スープなどが挙げられる。他の実施形態では、本栄養組成物は、濃縮物、粉末、又は顆粒（例えば発泡性顆粒）の形態で提供され得、これらは、水又は乳若しくはフルーツジュースなどのその他の液体で希釈されてインスタント組成物を生成する。栄養組成物の形態は、さらに、焼いた製品、乳製品、デザート、菓子製品、シリアルバー、及び朝食用シリアルを含む。乳製品の非限定例として、乳及び乳製品、ヨーグルト、並びにその他の発酵乳製品、アイスクリーム、及びチーズが挙げられる。焼いた製品の非限定例としてパン、ビスケット及びケーキが挙げられる。
【００７０】
[0103]一実施形態では、本栄養組成物は、動物用食品として企画された形態で提供され得、特にイヌやネコに、ウェットの状態で、セミウェットの状態で、又はドライの状態、特にビスケットの形態で提供され得る。
【００７１】
[0104]一実施形態では、組成物は医薬組成物である。医薬組成物とは、栄養組成物以外の組成物であって、ヒト又は動物における病気を予防、診断、緩和、治療又は治癒するために身体上又は身体内に使用される組成物のことである。本医薬組成物は、ヒト用組成物であってもよいし、あるいは動物用組成物であってもよく、例えば、イヌ、ネコ、ウマ、特にサラブレッドのウマに好適であり得る。
【００７２】
[0105]本医薬組成物は、経口、非経口又は静脈内投与に好適であり得る。本医薬組成物が少なくとも１種の薬学的又は生理学的に許容できる賦形剤を含む場合、この賦形剤は、経口の経路による本組成物の投与に適切であるか又は非経口の経路による本組成物の投与に好適であることが好ましい。本医薬組成物は固形又は液体の形態であり得る。経口投与には、タブレット、カプセル、又はゼラチンカプセルの形態の固形医薬組成物が好ましい。液体の形態であれば、本医薬組成物は、水性若しくは非水性の懸濁液又は油中水若しくは水中油のエマルションであり得る。
【００７３】
[0106]固形医薬の形態は、ビヒクル、アジュバント又は賦形剤として、１種又はそれより多くの希釈剤、香料、可溶化剤、潤滑剤、懸濁剤、バインダー、崩壊剤、又は封入剤を含み得る。そのような化合物の非限定的な例として、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、セルローズ系材料、カカオバターなどが挙げられる。液体形態の本医薬組成物は、水を、所望により、プロピレングリコール又はポリエチレングリコールとの混合物として含み得、また、１種又はそれより多くの着色料、香料、安定剤、及び増粘剤を含んでもよい。
【００７４】
[0107]一実施形態では、本開示は、滑膜炎を治療又は予防するための栄養組成物を製造する方法を提供し、本方法は、オレウロペイン及び／又はヒドロキシチロソールを１種又はそれより多くの他の成分と混合して栄養組成物を形成することを含む。この１種又はそれより多くの他の成分はクルクミン及び／又はケルセチンを含み得る。
【実施例】
【００７５】
[0109]以下の非限定的な実施例によって、オレウロペイン、ルチン、クルクミン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される植物性栄養素を使用して滑膜炎を治療又は予防するコンセプトを展開及び支持する科学的データを提示する。
【００７６】
実施例１：
[0111]アルギン酸ビーズ内でウシの一次軟骨細胞のインビトロ実験を行った。ほぼ精製されたオレウロペイン（＞９８％）をＥｘｔｒａｓｙｎｔｈｅｓｅ（Ｇｅｎａｙ，Ｆｒａｎｃｅ）より購入した。ほぼ精製されたヒドロキシチロソール（＞９８％）をＥｘｔｒａｓｙｎｔｈｅｓｅ（Ｇｅｎａｙ，Ｆｒａｎｃｅ）より購入した。ほぼ精製されたケルセチン（＞９７％）をＨＷＩ  Ａｎａｌｙｔｉｋ  ＧｍｂＨ（Ｒｕｅｌｚｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）より購入した。ほぼ精製されたクルクミン（＞９４％）をＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｂｕｃｈｓ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）より購入した。
【００７７】
[0112]若いウシの足を洗浄して土壌を取り除いた。足より皮膚を取り除いた。関節を横方向に切開した。関節内靭帯を切断した。切開した関節をリン酸緩衝生理食塩水で洗浄した。メスの刃を用いて、軟骨の全厚みのスライスを切断して取り出し、１０ｍＭのＨｅｐｅｓ及び１％のペニシリン−ストレプトマイシンのＤＭＥＭ高グルコースに収集した。軟骨のスライスを、１０ｍＭのＨｅｐｅｓ及び１％のペニシリン−ストレプトマイシンのＤＭＥＭ高グルコースで洗浄した。
【００７８】
[0113]軟骨を、連続的に、０．５ｍｇ／ｍＬのヒアルロニダーゼで３０分間、１．０ｍｇ／ｍＬのプロナーゼＥで６０分間、１．０ｍｇ／ｍＬのコラゲナーゼで一晩、ゆっくりと攪拌しながら蒸解させた。酵素によるインキュベーションの後、細胞懸濁液を７０μｍのセルストレイナーに通して濾過し、細胞群を分離して懐死組織片を取り除いた。この細胞懸濁液を遠心分離して細胞をペレットにした。培地を処分し、細胞ペレットを遠心分離によって洗浄し、１０ｍＭのＨＥＰＥＳを含有する０．９％塩化ナトリウム溶液に再懸濁した。
【００７９】
[0114]細胞を、１．２％のアルギン酸塩を含む０．９％  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳの溶液で懸濁し、１ｍＬ当たり４．３×１０６の細胞濃度を得た。この懸濁液を、針を通じて１０２ｍＭ  ＣａＣｌ２溶液に滴下した。１０分後、重合してビーズが得られ、これを０．９％  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ溶液で洗浄した。２４ウェルの培養プレートのそれぞれのウェルに１ｍＬの完全培地と共に１０個のビーズを入れた（完全培地は、２ｍＭのＬ−グルタミン、０．５ｍｇ／ｍＬのアスコルビン酸、０．２ｍｇ／ｍＬのＬ−プロリン、及び１０％ウシ胎児血清のＤＭＥＭ高グルコースである）。細胞は培地内で２日間維持され、その後、１０ｎｇ／ｍＬのインターロイキン−１αの存在下又は非存在下で、１．５μＭのオレウロペイン、１．５μＭのヒドロキシチロソール、１．５μＭのケルセチン、１．５μＭのクルクミン、１．５μＭのオレウロペイン＋１．５μＭのケルセチン、１．５μＭのオレウロペイン＋１．５μＭのクルクミン、１．５μＭのヒドロキシチロソール＋１．５μＭのケルセチン、１．５μＭのヒドロキシチロソール＋１．５μＭのクルクミン、１．５μＭのケルセチン＋１．５μＭのクルクミン、１．５μＭのオレウロペイン＋１．５μＭのケルセチン＋１．５μＭのクルクミン、１．５μＭのヒドロキシチロソール＋１．５μＭのケルセチン＋１．５μＭのクルクミンで処理された。処理されたものをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した。ＤＭＳＯの最終濃度は０．１％であった。細胞は３日間処理に曝露された。
【００８０】
[0115]処理の最後において、ビーズを洗浄し、０．１Ｍのクエン酸ナトリウム＋０．１５Ｍの塩化ナトリウム溶液で再懸濁した。この懸濁液は遠心分離され、細胞を含むペレットを全ＲＮＡ抽出のために収集した。
【００８１】
[0116]全ＲＮＡを４０個のビーズの集合から単離し、Ｑｉａｇｅｎ社のＲＮｅａｓｙキットを用いて単離した。ｃＤＮＡは、Ｔａｋａｒａ社のＰｒｉｍｅｓｃｒｉｐｔ  １ｓｔ  ｓｔｒａｎｄ  ｃＤＮＡ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓキットを使用してＲＮＡの逆転写により得られた。ＡＤＡＭＴＳ−５、ＣＯＸ−２、ＭＭＰ−１３及びＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ発現はリアルタイムＰＣＲ（ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ）で定量化した。（ウシからの）プライマーを下記表１に記載する。
表１（プライマー）：
【表１】
0006588013.tif 000002
【００８２】
[0117]疾病状態では、ＯＬＰ、ＨＴＹ、ＱＲＣ又はＣＵＲを添加することによって、ＩＬ−１αで刺激した軟骨細胞を中和し、ＭＭＰ−１３の発現を減少させることができる。ＯＬＰ、ＨＴＹ、ＱＲＣ又はＣＵＲを３つまで組み合わせることによって相乗効果が得られる。
【００８３】
[0118]結果は以下の通りであった。図１〜３は、ＡＤＡＭＴＳ−５、ＣＯＸ−２及びＭＭＰ−１３のｍＲＮＡ発現を、培養３日後のＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡ発現を基準にして示している。データは、遺伝子発現を、陰性対照（完全培地で培養された細胞）と比較して倍数変化として表した。結果は２−ΔΔＣＴ法で計算した。
ＣＴＬ−：  陰性対照
ＯＬＰ：  オレウロペイン
ＨＴＹ：  ヒドロキシチロソール
ＱＲＣ：  ケルセチン
ＣＵＲ：  クルクミン
ＩＬ１ａ：  インターロイキン−１α  １０ｎｇ／ｍＬ
【００８４】
[0119]データは、メジアン±メジアンの標準誤差（それぞれ３複製サンプルを用いた実験を２回）として表した。統計は、クラスカル・ワリス検定の後、マン・ホイットニーのＵ検定（両側）を、＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１対陰性対照（ＣＴＬ−）又はインターロイキン−１α（ＩＬ１ａ）について実施した。
【００８５】
[0120]図１Ａは、細胞の正常な状態を擬するＩＬ１ａが存在しない状態での、ＧＡＰＤＨに対するＡＤＡＭＴＳ−５  ｍＲＮＡの発現を示す。条件は統計的にＣＴＬ−と比較した。図１Ｂは、細胞の病的な状態を擬するＩＬ１ａが存在する状態での、ＧＡＰＤＨに対するＡＤＡＭＴＳ−５  ｍＲＮＡの発現を示す。条件は、ＣＴＬ−と比較したＩＬ１ａ（実験の妥当性の検証）を除いて、統計的にＩＬ１ａと比較した。
【００８６】
[0121]通常の条件では、ＯＬＰ、ＨＴＹ、ＱＲＣ又はＣＵＲを添加すると、ＡＤＡＭＴＳ−５（軟骨破壊のマーカー）の発現が減少する。これらの異なるポリフェノールの組み合わせは相乗効果をもたらす。
【００８７】
[0122]疾病状態では、ＯＬＰ、ＨＴＹ、ＱＲＣ又はＣＵＲを添加することによって、ＩＬ−１αで刺激した軟骨細胞を中和し、ＡＤＡＭＴＳ−５の発現を減少させることができる。これらの異なるポリフェノールの組み合わせは相乗効果をもたらす。
【００８８】
[0123]図２Ａは、細胞の正常な状態を擬するＩＬ１ａが存在しない状態での、ＧＡＰＤＨに対するＣＯＸ−２  ｍＲＮＡの発現を示す。条件は統計的にＣＴＬ−と比較した。
【００８９】
[0124]図２Ｂは、細胞の病的な状態を擬するＩＬ１ａが存在する状態での、ＧＡＰＤＨに対するＣＯＸ−２  ｍＲＮＡの発現を示す。条件は、ＣＴＬ−と比較したＩＬ１ａ（実験の妥当性の検証）を除いて、統計的にＩＬ１ａと比較した。
【００９０】
[0125]通常の条件では、ＱＲＣを添加すると、ＣＯＸ−２（炎症状態のマーカー）の発現が減少し得る。ＯＬＰ、ＨＴＹ、ＱＲＣ又はＣＵＲを２つ又は３つ組み合わせることによって相乗効果が得られる。疾病状態では、ＱＲＣ又はＣＵＲを添加することによって、ＩＬ−１αで刺激した細胞を中和し、ＣＯＸ−２の発現を減少させることができる。ＯＬＰ、ＨＴＹ、ＱＲＣ又はＣＵＲを２つ又は３つ組み合わせることによって相乗効果が得られる。
【００９１】
[0126]図３Ａは、細胞の正常な状態を擬するＩＬ１ａが存在しない状態での、ＧＡＰＤＨに対するＭＭＰ−１３  ｍＲＮＡの発現を示す。条件は統計的にＣＴＬ−と比較した。
【００９２】
[0127]図３Ｂは、細胞の病的な状態を擬するＩＬ１ａが存在する状態での、ＧＡＰＤＨに対するＭＭＰ−１３  ｍＲＮＡの発現を示す。条件は、ＣＴＬ−と比較したＩＬ１ａ（実験の妥当性の検証）を除いて、統計的にＩＬ１ａと比較した。
【００９３】
[0128]通常の条件では、ＯＬＰ、ＨＴＹ、ＱＲＣ又はＣＵＲを単独で又は組み合わせて添加すると、ＭＭＰ−１３（細胞外基質の破壊に関与し、ＯＡにおける関節軟骨のターンオーバーに関連している）の発現が減少する。
【００９４】
実施例２：
[0130]Ｄｕｎｋｉｎ−Ｈａｒｔｌｅｙモルモットにおける骨関節炎の自発性発症のインビボ実験を行った。３週齢のオスのＤｕｎｋｉｎ−Ｈａｒｔｌｅｙモルモット６５頭をＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｐａｒｉｓ）より入手した。動物は、床敷ケージに１ケージ当たり５頭入れ、標準モルモット用食餌及び水を随意に与えた。すべての動物は、植物性栄養素投与の前１週間にわたって環境順応させた。居住環境を改善し、ストレスを最小にするために、ＰＶＣ管をケージに設置した。
【００９５】
[0131]１週間後、この６５頭の４週齢Ｄｕｎｋｉｎ−Ｈａｒｔｌｅｙモルモットをランダムに３つの処理グループに分けた。３つの処理グループとは、３１週間、０．０２５％のオレウロペイン、又は０．５％のルチン、又は０．５％のルチンと０．２５％のクルクミンを含む食餌を受けるグループであり、対照グループには標準の食餌を与えた。ほぼ精製されたオレウロペイン（＞９０％）をＥｘｔｒａｓｙｎｔｈｅｓｅ（Ｇｅｎａｙ，Ｆｒａｎｃｅ）より購入した。ほぼ精製されたルチン（＞９４％）をＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｂｕｃｈｓ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）より購入した。ほぼ精製されたクルクミン（＞７０％）をＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｂｕｃｈｓ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）より購入した。
グループＡ（ｎ＝１５）には、オレウロペインの１日用量を３１週間にわたって与えた。
グループＢ（ｎ＝１５）には、標準の食餌を３１週間にわたって与えた（対照）。
グループＣ（ｎ＝１５）には、ルチンの１日用量を３１週間にわたって与えた。
グループＤ（ｎ＝１５）には、ルチン及びクルクミンの１日用量を３１週間にわたって与えた。
グループＥ（ｎ＝５、基準グループ）は、含めた段階で安楽死させ、何も処置を受けなかった。
【００９６】
[0132]オレウロペイン、ルチン及びクルクミンは食餌に統合した。動物は毎週体重を測定し、マイクロチップで個体を同定した。飼料摂取は、Ｗ９、Ｗ１５、Ｗ２１、Ｗ２６及びＷ３４において、食餌の一日に与えた量と残った量を計って制御した。
【００９７】
[0133]６時間絶食時の血液を、朝に、ケタミン／キシラジントランキライザ下、耳表面の血管から採取した。これは以下の６週間毎に実施した。Ｗ４（＝Ｔ０）、Ｗ１０、Ｗ１６、Ｗ２２、Ｗ２８。Ｗ３５において、安楽死直前に、全身麻酔下、心内穿刺で血液を採取した。
【００９８】
[0134]秤量後、心内血液穿刺後にペントバルビタールナトリウム１００ｍｇ／ｋｇ下で動物の安楽死を実施した。異常がないか、主要な生体臓器を観察した（心臓、消化、及び尿路、副腎）。肝臓及び副腎を秤量した。それぞれの動物からの右膝関節を４％パラホルムアルデヒド緩衝液に２４時間固定し、その後、ＨＣｌ酸（ＤＣ２，Ｌａｂｏｎｏｒｄ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）で４時間、４℃で脱灰してパラフィン包埋をした。
【００９９】
[0135]パラフィン包埋した右膝関節を、ＯＡＲＳＩに推奨されているように、Ｃｕｓｈｉｎ  ｐｌａｎｅに沿って、メニスカスに覆われていない中央部分においてミクロトーム（Ｌｅｉｃａ）で６μｍ片に切り出した。２００μｍの間隔で３切片をヘマトキシリン、ファストグリーン及びサフラニン−Ｏで染色し、補足的に中央部分を１片、トルイジンブルーで染色した。切片の各コンパートメント（脛骨中央、脛骨外側、大腿中央、大腿外側）について、ＯＡＲＳＩ推奨方法に従って、盲検の２人のトレーニングを受けた専門家が採点し、軟骨全体のスコアを評価するために各コンパートメントのスコアを加算した。結果を図４及び５に示す。外側と内側の滑膜について、ＯＡＲＳＩ推奨方法に従って、盲検の２人のトレーニングを受けた専門家が採点し、外側と中央の膜の平均値を算出して滑膜全体のスコアを評価した。結果を図１１〜１３に示す。
【０１００】
[0136]図５に示されるように、オレウロペイン、ルチン、及びルチン＋クルクミンの群では、対照群に比較してＯＡスコア（ｐ＜０．０１）に有意な減少が見られた。
【０１０１】
[0137]顕著なことに、図１１Ａ、１２Ａ及び１３Ａに示されるように、オレウロペインの群では、対照群に比較して滑膜のスコア（ｐ＜０．０５）に有意な減少が見られた。滑膜のスコアは、対照群においてＯＡスコアと正の相関が見られた（図１１Ｂ、１２Ｂ及び１３Ｂ）。
【０１０２】
[0138]競合法ＥＬＩＳＡキット（Ａｒｂｏｒ  Ａｓｓａｙｓ，ＵＳＡ）を使用して、モルモットの血清内のＰＧＥ２を測定した。結果を図６に示す。オレウロペインの治療は、治療３５週間後に血漿中のＰＧＥ２濃度を下げることができる。しかし、ルチンとクルクミンはＰＧＥ２濃度に対して有意な効果が見られず、これらは主に軟骨の分解に対して効果があった。
【０１０３】
[0139]血漿中のＰＧＥ２濃度はＯＡスコアに正の相関があり得る。これは、ＰＧＥ２が、モルモットモデルにおけるＯＡ発症及び進行の適当なバイオマーカーであり、治療の効果を評価するための適当なバイオマーカーであることの確証である。
【０１０４】
[0140]モルモット血清中の、ＴｙｐｅＩＩコラーゲンの螺旋ドメインに局在しているニトロシル化エピトープであるＣｏｌｌ２−１ＮＯ２を、多クローン性ウサギ抗血清（Ｄ３７，Ａｒｔｉａｌｉｓ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を用いて３複製サンプルで競合法ＥＬＩＳＡにより定量した。Ｃｏｌｌ２−１ＮＯ２イムノアッセイにより、ニトロ化されたアミノ酸配列を高い特異性と親和性で定量化した。結果を図７及び８に示す。
【０１０５】
[0141]オレウロペイン処理、ルチン処理、及びルチン＋クルクミン処理は、血漿中のＣｏｌｌ２−１ＮＯ２濃度で測定されるコラーゲンの分解を低減することが可能である。Ｃｏｌｌ２−１ＮＯ２の量はＯＡスコアと正の相関がある。これは、Ｃｏｌｌ２−１ＮＯ２が、モルモットモデルにおけるＯＡ発症及び進行の適当なバイオマーカーであり、治療の効果を評価するための適当なバイオマーカーであることの確証である。
【０１０６】
[0142]Ｆｉｂ３−１は、ＯＡ患者の血清において増加するＦｉｂｕｌｉｎ−３のフラグメントである。モルモット血清中のＦｉｂ３−１を、多クローン性ウサギ抗血清（ＡＳ８８，Ａｒｔｉａｌｉｓ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を用いて３複製サンプルで競合法ＥＬＩＳＡにより定量した。結果を図９及び１０に示す。
【０１０７】
[0143]ルチン処理及びルチン＋クルクミン処理は血漿中のＦｉｂｕｌｉｎ  ３−１の濃度を低減することが可能である。血漿中のＦｉｂｕｌｉｎ  ３−１の濃度はＯＡスコアに正の相関があり得る。これは、Ｆｉｂ  ３−１が、モルモットモデルにおけるＯＡ発症及び進行の適当なバイオマーカーであり、治療の効果を評価するための適当なバイオマーカーであることの確証である。
【０１０８】
[0144]アッセイ内及びアッセイ間のＣＶは１０％未満であり、希釈曲線は、すべてのバイオマーカーアッセイにおいて標準曲線と平行であった。
【０１０９】
[0145]結果（平均±標準偏差）はそれぞれのパラメーターについて算出された。正規性検定の後、すべての実験について、パラメトリックＡＮＯＶＡをＤｕｎｎｅｔｔのポストテスト又はＰｅａｒｓｏｎ相関を用いて実施した。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１。オレウロペイン処理、ルチン処理、及びルチン＋クルクミン処理は、相違するメカニズムでモルモットにおけるＯＡスコアを低減することができる。しかし、オレウロペインのみが対照群と比較して滑膜炎を低減できる。
【０１１０】
実施例３：
[0147]造骨細胞によるコラーゲン合成とビタミンＤによる効果の相乗作用について調査した。初代造骨細胞は、Ｄｅｃｌｅｒｃｑらにより２００４年に記述されているように、酵素消化により新生ウィスターラットの頭蓋冠から単離された。すべての実験中、細胞は１０％の熱失活ウシ胎児血清及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンのα最小必須培地に、５％  ＣＯ２及び３７℃の環境下で維持された。細胞を、Ｃｏｌｌ−１コートされた９６ウェルプレートに３５００細胞／ウェルの密度で、又は２４ウェルプレートに３×１０４細胞／ウェルの密度で播種し、α−ＭＥＭで２日間培養して群生させた。細胞は、次いで以下の異なる条件に曝露された：最小培地（Ｃ−）、５０μｇ／ｍＬのアスコルビン酸を含有する最小培地、５ｍＭのβ−グリセロリン酸エステル（Ｃ＋；最適化した培地）、並びに１μＭオレウロペイン（ＯＬＰ）及び／又は１μＭヒドロキシチロソール（ＨＴｙ）及び／又は１０−９Ｍ  １，２５ジヒドロキシビタミンＤ３（１，２５（ＯＨ）２Ｄ３）を補助的に含む最小培地。ＯＬＰ及びＨＴｙはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３はエタノールに溶解した。培地におけるＤＭＳＯとエタノールの最終濃度はそれぞれ０．１％であった。培地は２日毎に交換した。
【０１１１】
[0148]９日後、細胞のコラーゲン濃度をＢｉｏｃｏｌｏｒ社のＳｉｒｃｏｌアッセイを用いて測定した。このＳｉｒｃｏｌコラーゲンアッセイは、インビトロ培養において哺乳類の組織や細胞から抽出されたコラーゲンを分析するために設計された定量的染料結合法である。この染料試薬は、哺乳類のコラーゲン（Ｔｙｐｅ  Ｉ〜Ｖ）にある［Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙ］ｎの螺旋構造に特異的に結合する。
【０１１２】
[0149]図１４に、９日間の培養の後の造骨細胞によるコラーゲン合成を示す。１，２５（ＯＨ）２Ｄ３、ＯＬＰ及びＨＴｙの組み合わせによる刺激に対する応答として、生成されたコラーゲンを総タンパク質１ミリグラムに対するマイクログラムで測定した。
１，２５（ＯＨ）２Ｄ３  ＝  １０−９Ｍ  １，２５ジヒドロキシビタミンＤ３
ＯＬＰ  ＝  １μＭオレウロペイン
ＨＴｙ  ＝  １μＭヒドロキシチロソール
Ｃ＋  ＝  陽性対照として使用される最適化された培地
【０１１３】
[0150]データは平均±ＳＥＭ（３複製サンプル）として表した。統計：クラスカル・ワリス検定の後、マン・ホイットニーのＵ検定（両側）を、＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１対陰性対照（Ｃ−）について実施した。
【０１１４】
[0151]図１４に示されるように、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３、ＯＬＰ及びＨＴｙの組み合わせを添加することによって、培養９日後の造骨細胞の細胞コラーゲン合成が有意に刺激された。
【０１１５】
実施例４：
[0153]造骨細胞のアルカリホスファターゼ活性とビタミンＤによる効果の相乗作用について調査した。初代造骨細胞は、Ｄｅｃｌｅｒｃｑらにより２００４年に記述されているように、酵素消化により新生ウィスターラットの頭蓋冠から単離された。すべての実験中、細胞は１０％の熱失活ウシ胎児血清及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンのα最小必須培地に、５％  ＣＯ２及び３７℃の環境下で維持された。細胞を、Ｃｏｌｌ−１コートされた９６ウェルプレートに３５００細胞／ウェルの密度で、又は２４ウェルプレートに３×１０４細胞／ウェルの密度で播種し、α−ＭＥＭで２日間培養して群生させた。細胞は、次いで以下の異なる条件に曝露された：最小培地（Ｃ−）、５０μｇ／ｍＬのアスコルビン酸を含有する最小培地、５ｍＭのβ−グリセロリン酸エステル（Ｃ＋；最適化した培地）、並びに１μＭオレウロペイン（ＯＬＰ）及び／又は１μＭヒドロキシチロソール（ＨＴｙ）及び／又は１０−９Ｍ  １，２５ジヒドロキシビタミンＤ３（１，２５（ＯＨ）２Ｄ３）を補助的に含む最小培地。ＯＬＰ及びＨＴｙはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３はエタノールに溶解した。培地におけるＤＭＳＯとエタノールの最終濃度はそれぞれ０．１％であった。培地は２日毎に交換した。
【０１１６】
[0154]アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）の酵素活性を、処理日数０、５、９、１２及び１５日において動態的に測定した。造骨細胞は、ＰＢＳで２回すすいだ後、ドライアイス上で凍結した。そして、細胞を、凍結溶融サイクル及び均質化により２００μＬの１Ｍジエタノールアミン及び０．２４ｍＭの塩化マグネシウムｐＨ９．８緩衝液（ＡＬＰ緩衝液）に溶解した。細胞可溶化物（１０μＬ）を、６ｍｇ／ｍＬのｐ−ニトロフェニルホスフェート（ｐ−ＮＰＰ）のＡＬＰ緩衝液溶液２００μＬに添加した。吸光度を、ＶａｒｉｏＳｋｌａｎ  Ｆｌａｓｈマイクロプレートリーダーを用いて、４０５ｎｍ及び３０℃で３０分間にわたり２分３０秒毎に測定した。ＡＬＰ活性は、タンパク質１ミリグラム当たり、１時間当たりのｐ−ＮＰＰのマイクロモルで表した。タンパク質の測定は、Ｂｒａｄｆｏｒｄの方法に従って、Ｑｕｉｃｋ  Ｓｔａｒｔ  ＢｉｏＲａｄタンパク質アッセイを用いて実施した。
【０１１７】
[0155]図１５に、９日間の培養の後のアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）活性を示す。１，２５（ＯＨ）２Ｄ３、ＯＬＰ及びＨＴｙの組み合わせに対する応答として、１時間当たりＡＬＰを総タンパク質１ミリグラムに対するマイクロモルで示した。
Ｃ−  ＝  陰性対照としての最小培地の使用
１，２５（ＯＨ）２Ｄ３  ＝  １０−９Ｍ  １，２５ジヒドロキシビタミンＤ３
ＯＬＰ  ＝  １μＭオレウロペイン
ＨＴｙ  ＝  １μＭヒドロキシチロソール
Ｃ＋  ＝  陽性対照として使用される最適化された培地
【０１１８】
[0156]データは平均±ＳＥＭとして表した。統計：クラスカル・ワリス検定の後、マン・ホイットニーのＵ検定（両側）を、＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１対陰性対照（Ｃ−）について実施した。
【０１１９】
[0157]図１５にさらに示されるように、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３、ＯＬＰ及びＨＴｙの組み合わせを添加することによって、培養９日後の造骨細胞の細胞コラーゲン合成が有意に刺激された。図１６〜１９は、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３、オレウロペイン（ＯＬＰ）及びヒドロキシチロソール（Ｈｙｔ）の単独又は組み合わせでの存在下で培養した造骨細胞のアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）活性を時間経過モデルで示している。
Ｃ−  ＝  陰性対照としての最小培地の使用
１，２５（ＯＨ）２Ｄ３  ＝  １０−９Ｍ  １，２５ジヒドロキシビタミンＤ３
ＯＬＰ  ＝  １μＭオレウロペイン
ＨＴｙ  ＝  １μＭヒドロキシチロソール
Ｃ＋  ＝  陽性対照として使用される最適化された培地。
【０１２０】
[0163]データは平均±ＳＥＭとして表した。統計：クラスカル・ワリス検定の後、マン・ホイットニーのＵ検定（両側）を、＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１対陰性対照（Ｃ−）について実施した。
【０１２１】
[0164]図１６に示されたデータから分かるように、ビタミンＤ３の添加だけで、１５日目において、小さいが統計的に有意なＡＰ活性の増加が誘発される。これは造骨細胞活性、骨形成及び／又は軟骨癒合を示している。同様に、ＨＴｙのみ又はＯＬＰのみの添加によっても、１５日目に、ビタミンＤ３の効果と同等の小さな増加が結果として現れた（対応する図を参照）。
【０１２２】
[0165]ＨＴｙとＯＬＰの両方を組み合わせても造骨細胞活性が増加する（再び、１５日目のデータを参照）が、ビタミンＤとＨＴｙ又はＯＬＰのいずれかを組み合わせた場合ほどではない。そして、対照と統計的に有意な差が見られる点は１２日目及び１５日目のみである。５日目及び９日目の早い段階での測定では、陰性対照と比較して統計的に差異は見られない。
【０１２３】
[0166]よって、提示したデータによって、ビタミンＤの添加の効果について次の２点が示される。まず、ＨＴｙ及びＯＬＰのいずれか又は両方と共にビタミンＤを添加することは造骨細胞の応答を増加させる。これは、例えば１５日目の濃度を比較することで分かる。第２に、ＨＴｙ及びＯＬＰのいずれか又は両方と共にビタミンＤを添加することは造骨細胞活性を対照よりも早く誘発する。結果として、ビタミンＤの添加によって、より早い段階でより強い応答が導かれる。ビタミンＤの添加によって、ＯＬＰ及び／又はＨＴｙにより誘発される骨形成及び／又は軟骨癒合応答に相乗効果が得られることが結論付けられる。
【０１２４】
[0167]本明細書中に記載される好ましい実施形態に対する種々の変更及び修正は当業者には明らかであると理解すべきである。本発明の主題の趣旨及び範囲から逸脱することなく、その意図される利点を損なうことなく、そのような変更及び修正を行うことができる。そのため、そのような変更及び修正は添付の特許請求の範囲に包含されることが意図される。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
0006588013.tif 000004
【図２Ａ】
0006588013.tif 000005
【図２Ｂ】
0006588013.tif 000006
【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４−１】
0006588013.tif 000009
【図４−２】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
0006588013.tif 000034
【図２０】
0006588013.tif 000035
【図２１】
0006588013.tif 000036
【図２２】
0006588013.tif 000037
【配列表】
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