(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
0006486364.tif 000038
により表される化合物又はその幾何異性体若しくは互変異性体；あるいは前記のいずれかの薬学的に許容できる塩若しくは溶媒和物。
【請求項２】
以下：
【化２】
0006486364.tif 000039
により表される化合物又はその幾何異性体若しくは互変異性体；あるいは前記のいずれかの薬学的に許容できる塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
以下：
【化３】
0006486364.tif 000040
により表される化合物又はその幾何異性体若しくは互変異性体；あるいは前記のいずれかの溶媒和物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
以下：
【化４】
0006486364.tif 000041
により表される化合物又はその幾何異性体若しくは互変異性体である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
以下：
【化５】
0006486364.tif 000042
により表される、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドの結晶性化合物。
【請求項７】
以下の回折角度（２θ）：６．２±０．２、７．１±０．２、９．４±０．２、１０．７±０．２、１５．６±０．２、１９．０±０．２、２０．０±０．２、及び２５．２±０．２でのピークを含むＸ線粉末回折パターンを示す、請求項６に記載の結晶性化合物。
【請求項８】
請求項７に記載の結晶性化合物であって、下記：
（ａ）前記回折角度（２θ）でのピークの相対強度が少なくとも３０％であり；
（ｂ）回折角度２θ、面間隔ｄ、及び相対強度（最大強度のピークに対するパーセンテージとして表される）について以下のＸ線粉末回折パターン：
【表１】
0006486364.tif 000043
で表され；あるいは
（ｃ）前記Ｘ線粉末回折パターンが、図３：
0006486364.tif 000044
に示される通りであること
のうちの１つを特徴とする、結晶性化合物。
【請求項９】
請求項６〜８のいずれか一項に記載の結晶性化合物であって、下記：
（ａ）１５７℃から１６１℃の範囲に、示差走査熱量測定により決定される融点開始点を有し；
（ｂ）１５９℃の示差走査熱量測定により決定される融点開始点を有し；あるいは
（ｃ）図４：
0006486364.tif 000045
に示されるものと同一である示差走査熱量測定曲線を有すること
のうちの１つを特徴とする、結晶性化合物。
【請求項１０】
以下の回折角度（２θ）：６．３±０．２、７．３±０．２、１１．０±０．２、１２．８±０．２、１６．９±０．２、１９．２±０．２、２０．６±０．２、２２．２±０．２、２５．７±０．２、２６．０±０．２、及び３５．７±０．２でのピークを含むＸ線粉末回折パターンを示す、請求項６に記載の結晶性化合物。
【請求項１１】
前記回折角度（２θ）でのピークの相対強度が少なくとも１５％である、請求項１０に記載の結晶性化合物。
【請求項１２】
回折角度２θ、面間隔ｄ、及び相対強度（最大強度のピークに対するパーセンテージとして表される）について以下のＸ線粉末回折パターン：
【表２】
0006486364.tif 000046
【表３】
0006486364.tif 000047
で表されることを特徴とする、請求項１０に記載の結晶性化合物。
【請求項１３】
前記Ｘ線粉末回折パターンが、図５：
0006486364.tif 000048
に示される通りである、請求項１０に記載の結晶性化合物。
【請求項１４】
１５８℃から１６５℃の範囲に、示差走査熱量測定により決定される融点開始点を有する、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の結晶性化合物。
【請求項１５】
図６：
0006486364.tif 000049
に示されるものと同一である示差走査熱量測定曲線を有する、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の結晶性化合物。
【請求項１６】
以下の回折角度（２θ）：６．２±０．２、８．３±０．２、１４．７±０．２、１７．５±０．２、１７．９±０．２、１８．５±０．２、２０．２±０．２、２０．９±０．２、２３．５±０．２、及び２５．９±０．２でのピークを含むＸ線粉末回折パターンを示す、３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドアセトン溶媒和物の結晶性化合物であって、下記：
（ａ）前記回折角度（２θ）でのピークの相対強度が少なくとも１５％であり；
（ｂ）回折角度２θ、面間隔ｄ、及び相対強度（最大強度のピークに対するパーセンテージとして表される）について以下のＸ線粉末回折パターン：
【表４】
0006486364.tif 000050
で表され；
（ｃ）前記Ｘ線粉末回折パターンが、図１：
0006486364.tif 000051
に示される通りであり；
（ｄ）１５９℃の示差走査熱量測定により決定される融点開始点を有し；あるいは
（ｅ）図２：
0006486364.tif 000052
に示されているものと同一である示差走査熱量測定曲線を有すること
のうちの１つによってさらに特徴付けられていてもよい、結晶性化合物。
【請求項１７】
請求項１に記載の化合物及び薬学的に許容できる担体を含む、医薬組成物。
【請求項１８】
請求項２に記載の化合物及び薬学的に許容できる担体を含む、医薬組成物。
【請求項１９】
請求項４又は５に記載の化合物及び薬学的に許容できる担体を含む、医薬組成物。
【請求項２０】
請求項６に記載の結晶性化合物及び薬学的に許容できる担体を含む、医薬組成物。
【請求項２１】
請求項１０に記載の結晶性化合物及び薬学的に許容できる担体を含む、医薬組成物。
【請求項２２】
請求項１２に記載の結晶性化合物及び薬学的に許容できる担体を含む、医薬組成物。
【請求項２３】
腸溶性コーティング錠剤又は腸溶性コーティングカプセル剤の形態である、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
腸溶性コーティング錠剤又は腸溶性コーティングカプセル剤の形態である、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
腸溶性コーティング錠剤又は腸溶性コーティングカプセル剤の形態である、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物を含む、免疫疾患、炎症性疾患、心血管疾患、骨髄腫、リンパ腫、癌、及び細菌感染からなる群から選択される疾患を治療するための薬剤。
【請求項２７】
前記疾患が、関節リウマチ、乾癬、慢性移植片対宿主病、急性移植片対宿主病、クローン病、炎症性腸疾患、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、セリアックスプルー、特発性血栓性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、シェーグレン症候群、強皮症、潰瘍性大腸炎、喘息、ブドウ膜炎、又は表皮過形成である、請求項２６に記載の薬剤。
【請求項２８】
前記疾患が、クローン病である、請求項２６に記載の薬剤。
【請求項２９】
前記疾患が、潰瘍性大腸炎である、請求項２６に記載の薬剤。
【請求項３０】
前記疾患が、炎症性腸疾患である、請求項２６に記載の薬剤。
【請求項３１】
前記疾患が、リンパ腫である、請求項２６に記載の薬剤。
【請求項３２】
前記疾患が、乾癬である、請求項２６に記載の薬剤。
【請求項３３】
前記化合物が、経口で投与されるものである、請求項２６〜３２のいずれか一項に記載の薬剤。
【請求項３４】
前記化合物が、経皮で投与されるものである、請求項２６〜３２のいずれか一項に記載の薬剤。
【請求項３５】
請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物を含む、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼを阻害するための薬剤。
【請求項３６】
前記化合物が、請求項２に記載の化合物である、請求項２６〜３５のいずれか一項に記載の薬剤。
【請求項３７】
前記化合物が、請求項４に記載の化合物である、請求項２６〜３５のいずれか一項に記載の薬剤。
【請求項３８】
前記化合物が、請求項１０に記載の化合物である、請求項２６〜３５のいずれか一項に記載の薬剤。
【請求項３９】
前記化合物が、請求項１２に記載の化合物である、請求項２６〜３５のいずれか一項に記載の薬剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１３年１２月１０日に出願された米国仮特許出願第６１／９１４，０８５号明細書及び２０１４年４月１５日に出願された米国仮特許出願第６１／９７９，６１９号明細書の利益及び優先権を主張し、そのそれぞれの内容を引用により本明細書に組み込む。
【０００２】
本発明は、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ（例えば、ミトコンドリアＦ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ）の阻害剤及びその治療用途に提供する。とりわけ、本発明は、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼを阻害するトリフルオロメチルピラゾリルグアニジン化合物、及び治療剤としてトリフルオロメチルピラゾリルグアニジン化合物を使用していくつかの病状を治療する方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
多細胞生物は、細胞数の精密な制御を行っている。細胞増殖と細胞死の間のバランスが、この恒常性を達成する。細胞死は、壊死又はアポトーシスとして知られる自殺形態の細胞死により、ほぼ全ての種類の脊椎動物細胞に起こる。アポトーシスは、一般的な、遺伝的にプログラムされた死のメカニズムと連結する種々の細胞外及び細胞内シグナルにより誘発される。
【０００４】
多細胞生物はアポトーシスを利用して、損傷を受けた又は不必要な細胞に、生物のために自身を破壊するように指示する。したがって、アポトーシスプロセスの制御は、正常な発生のために重要であり、例えば、指及び足指の胎児期の発生には、アポトーシスによる、相互に連結している過剰な組織の制御された除去が必要であり、脳内の神経シナプスの形成でも同じである。同様に、制御されたアポトーシスは、月経開始時の子宮の内層（子宮内膜）の剥がれ落ちを担っている。アポトーシスは、組織の形造り及び正常な細胞維持に重要な役割を有する一方で、生物の健康を脅かす細胞及び侵入者（例えば、ウイルス）に対する主要な防御の一成分でもある。
【０００５】
多くの疾患は、アポトーシス性細胞死の調節不全と関連している。実験モデルは、異常なアポトーシス制御と種々の腫瘍性疾患、自己免疫疾患、及びウイルス性疾患の病原性との間の因果関係を証明した。例えば、細胞媒介の免疫応答において、エフェクター細胞（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球「ＣＴＬ」）は、ウイルスに感染した細胞がアポトーシスを起こすように誘導して、感染細胞を破壊する。生物は、その後に、エフェクター細胞がもはや必要でなくなると、アポトーシスプロセスに頼ってエフェクター細胞を破壊する。自己免疫は、ＣＴＬが、互いの中で、及び自身の中ですらアポトーシスを誘導することにより、通常防がれている。このプロセスの欠損は、紅斑性狼蒼及び関節リウマチなどの種々の免疫疾患に関連する。
【０００６】
多細胞生物もアポトーシスを利用して、損傷した核酸（例えば、ＤＮＡ）を有する細胞が、癌性になる前に自身を破壊するように指示する。いくつかの発癌性のウイルスは、正常なアポトーシス性プロセスを中止するように、感染した（形質転換した）細胞をリプログラミングすることにより、この防護策に打ち勝つ。例えば、いくつかのヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）は、ｐ５３アポトーシスプロモーターを不活性化させるタンパク質（Ｅ６）を産生することにより、形質転換した細胞のアポトーシス性除去を抑制することにより、子宮頸癌を起こすことに関与してきた。同様に、エプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）は、単球増加症及びバーキットリンパ腫の原因因子であるが、異常な細胞の正常なアポトーシス性除去を妨げるタンパク質を産生するように感染細胞をリプログラミングし、それにより癌細胞が増殖し、生物全体に広がる。
【０００７】
さらに他のウイルスは、細胞のアポトーシス機構を、癌の発生を直接もたらさずに、破壊的に操作する。例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染した個体における免疫系の破壊は、感染したＣＤ４＋Ｔ細胞（約１００，０００のうち１）が、感染していない姉妹細胞にアポトーシスを受けるように指示することにより進行すると考えられる。
【０００８】
非ウイルス性の手段により起こるいくつかの癌も、アポトーシスによる破壊を逃れる機構を開発している。メラノーマ細胞は、例えば、Ａｐａｆ−１をコードする遺伝子の発現を阻害することにより、アポトーシスを回避する。他の癌細胞、特に肺及び結腸癌細胞は、異常な細胞のＣＴＬ媒介性除去の開始を阻害する可溶性デコイ分子を高レベルで分泌する。アポトーシス機構の不完全な制御も、種々の変性病態及び血管疾患に関与してきた。
【０００９】
アポトーシスプロセス及びその細胞機構の制御された調節は、多細胞生物の生存にとって重要である。典型的には、アポトーシスを受けるように指示された細胞中に起こる生化学的変化は、秩序だって進行する。しかし、上記に示された通り、アポトーシスの欠陥のある制御は、生物に重篤な有害作用を起こし得る。
【００１０】
これらのプロセスの不完全な制御を特徴とする疾患及び病態（例えば、ウイルス感染症、過増殖性の自己免疫疾患、慢性炎症性病態、及び癌）を患っている対象のアポトーシスプロセスを制御する、改善された組成物及び方法が必要とされている。本発明は、これらの必要性に対処し、他の関連する利点を与える。
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ（例えば、ミトコンドリアＦ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ）を阻害するトリフルオロメチルピラゾリルグアニジン化合物、トリフルオロメチルピラゾリルグアニジン化合物を含む医薬組成物、並びにそのような化合物及び医薬組成物を使用していくつかの病状を治療する方法を提供する。本発明は、驚くべき優れた薬学的性質を有する組成物の発見に一部関する。例えば、化合物、３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミド（化合物１）が、３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミド（化合物２）と比べて、減少したオフターゲット効果を有することが驚くべきことに発見された。例えば、化合物１は、化合物２と比べて、チトクロムＰ４５０  ２Ｄ６酵素に対しておよそ３分の１の効力を有することが驚くべきことに発見された。チトクロムＰ４５０  ２Ｄ６酵素に対する化合物１の減少した効力は、本明細書に記載される医学的障害を治療するための化合物１との併用療法の一部として、又は異なる病気の治療のためのいずれかで、追加の医薬品を服用している患者における化合物の安全性プロファイルを向上させる。組成物及び方法の他の利点及び利益は、例えば、詳細な説明及び実施例に記載される。
【００１２】
したがって、本発明の一態様は、式Ｉ：
【化１】
0006486364.tif 000002
（式中、Ｒ１は、それが結合するフェニル基のメタ位又はパラ位に位置するクロロ基である）
により表される化合物のファミリー又はその幾何異性体若しくは互変異性体；あるいは前記のいずれかの薬学的に許容できる塩若しくは溶媒和物を提供する。
【００１３】
本発明の別の態様は、以下：
【化２】
0006486364.tif 000003
により表される化合物又はその幾何異性体若しくは互変異性体；あるいは前記のいずれかの薬学的に許容できる塩を提供する。
【００１４】
本発明の別の態様は、下記：
【化３】
0006486364.tif 000004
により表される化合物又はその幾何異性体若しくは互変異性体；あるいは前記のいずれかの溶媒和物を提供する。
【００１５】
本発明は、結晶形態にある化合物も提供する。例えば、本発明の一態様は、３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドの結晶性化合物を提供する。特定の実施形態において、３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドの結晶性化合物は、多形体Ｉであり、以下の回折角度（２θ）：６．２±０．２、７．１±０．２、９．４±０．２、１０．７±０．２、１５．６±０．２、１９．０±０．２、２０．０±０．２、及び２５．２±０．２でのピークを含むＸ線粉末回折パターンを示す。特定の他の実施形態において、３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドの結晶性化合物は多形体ＩＩにあり、以下の回折角度（２θ）：６．３±０．２、７．３±０．２、１１．０±０．２、１２．８±０．２、１６．９±０．２、１９．２±０．２、２０．６±０．２、２２．２±０．２、２５．７±０．２、２６．０±０．２、及び３５．７±０．２でのピークを含むＸ線粉末回折パターンを示す。
【００１６】
本発明の別の態様は、３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドアセトン溶媒和物の結晶性化合物を提供する。特定の実施形態において、３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドアセトン溶媒和物の結晶性化合物は、以下の回折角度（２θ）：６．２±０．２、８．３±０．２、１４．７±０．２、１７．５±０．２、１７．９±０．２、１８．５±０．２、２０．２±０．２、２０．９±０．２、２３．５±０．２、及び２５．９±０．２でのピークを含むＸ線粉末回折パターンを示す。
【００１７】
前記の化合物は、本明細書に記載される化合物及び薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物中に存在してよい。
【００１８】
本発明の別の態様は、医学的障害に苦しむ対象を治療する方法を提供する。方法は、疾患の症状を改善するために、対象に、治療上有効な量の本明細書に記載される１種以上のトリフルオロメチルピラゾリルグアニジン化合物、例えば、式Ｉの化合物又は本明細書に記載されるその結晶形態の１つを投与することを含む。数多くの障害が、本明細書に記載されるトリフルオロメチルピラゾリルグアニジン化合物を使用して治療できる。例えば、本明細書に記載される化合物を使用して、免疫性疾患又は炎症性疾患、例えば、関節リウマチ、乾癬、慢性移植片対宿主病、急性移植片対宿主病、クローン病、炎症性腸疾患、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、セリアックスプルー、特発性血栓性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、シェーグレン症候群、強皮症、潰瘍性大腸炎、喘息、表皮過形成、及び本明細書に記載される他の医学的障害などを治療できる。本明細書に記載される化合物を使用して、心血管疾患、骨髄腫、リンパ腫、癌、又は細菌感染も治療できる。
【００１９】
本発明の別の態様は、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ、例えば、ミトコンドリアＦ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼを阻害する方法を提供する。方法は、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼを、本明細書に記載される化合物、例えば、式Ｉの化合物又は本明細書に記載されるその結晶形態の１つに曝露させて、前記Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼを阻害することを含む。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】実施例２にさらに説明される３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドアセトン溶媒和物のＸ線粉末ディフラクトグラムである。
【図２】それぞれ実施例２にさらに説明される、３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドアセトン溶媒和物の熱重量分析（ＴＧＡ）曲線に加え、３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドアセトン溶媒和物の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）曲線である。
【図３】実施例３にさらに説明される３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドの結晶形態ＩのＸ線粉末ディフラクトグラムである。
【図４】それぞれ実施例３にさらに説明される、３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドの結晶形態Ｉの熱重量分析（ＴＧＡ）曲線に加え、３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドの結晶形態Ｉの示差走査熱量測定曲線（ＤＳＣ）である。
【図５】実施例４にさらに説明される３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドの結晶形態ＩＩのＸ線粉末ディフラクトグラムである。
【図６】実施例４にさらに説明される３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドの結晶形態ＩＩの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）曲線である。
【図７】実施例５にさらに説明される３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドの結晶形態ＩＩのＸ線粉末ディフラクトグラムである。
【図８】実施例５にさらに説明される３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドの結晶形態ＩＩの示差走査熱量測定曲線である。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明は、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ（例えば、ミトコンドリアＦ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ）を阻害するトリフルオロメチルピラゾリルグアニジン化合物、トリフルオロメチルピラゾリルグアニジン化合物を含む医薬組成物、及びトリフルオロメチルピラゾリルグアニジン化合物及び医薬組成物を療法に使用する方法を提供する。上記に一部説明された通り、本発明の一態様は、驚くべき優れた薬学的性質を有する組成物の発見に関する。例えば、化合物、３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミド（化合物１）は、３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミド（化合物２）と比べて減少したオフターゲット効果を有することが驚くべきことに発見された。例えば、化合物１は、化合物２と比べて、チトクロムＰ４５０  ２Ｄ６酵素に対しておよそ３分の１の効力を有することが驚くべきことに発見された。
【００２２】
チトクロムＰ４５０  ２Ｄ６酵素に対する化合物１の減少した効力は、本明細書に記載される医学的障害を治療するための化合物１との併用療法の一部として、又は異なる病気の治療のためのいずれかで、追加の医薬品を服用している患者における化合物の安全性プロファイルを向上させる。チトクロムＰ４５０  ２Ｄ６は、多くの治療剤の代謝に関与している。チトクロムＰ４５０  ２Ｄ６の作用の阻害は、そのような阻害が治療剤の代謝速度を変え、そうでなければ安全な投薬量又は頻度を患者にとって危険にすることがあるので望ましくない。本発明は、チトクロムＰ４５０  ２Ｄ６酵素に対する減少した情動（ａｆｆｅｃｔｓ）を有する組成物を提供し、それにより、他の医薬品を服用する患者に投与された場合、改善された安全性プロファイルを治療剤に提供する。
【００２３】
本発明の典型的な組成物及び方法が、以下の項でより詳細に説明される：Ｉ．Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ活性の調節剤；ＩＩ．トリフルオロメチルピラゾリルグアニジン化合物；ＩＩＩ．トリフルオロメチルピラゾリルグアニジン化合物の治療用途、並びにＩＶ．医薬組成物、製剤、並びに典型的な投与経路及び投薬上考慮すべき事項。ある特定の項で説明される本発明の態様は、どの特定の項にも限定されないものとする。
【００２４】
本発明の実施は、特記されない限り、有機化学、薬理学、分子生物学（組換え技法を含む）、細胞生物学、生化学、及び免疫学の従来の技法を利用するが、それらは当技術分野の技量内にある。そのような技法は、それぞれ引用により全体として本明細書に組み込まれる“Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（Ｂ．Ｍ．Ｔｒｏｓｔ  ＆  Ｉ．Ｆｌｅｍｉｎｇ，ｅｄｓ．，１９９１−１９９２）；“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ：ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ”Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９）；“Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）；“Ａｎｉｍａｌ  ｃｅｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ”（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８７）；ｔｈｅ  ｓｅｒｉｅｓ“Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ”（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；“Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ  ＆  Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．）；“Ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ”（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ  ＆  Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）；“Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ”（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７，ａｎｄ  ｐｅｒｉｏｄｉｃ  ｕｐｄａｔｅｓ）；“ＰＣＲ：ｔｈｅ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｃｈａｉｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ”（Ｍｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）；及び“Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）などの文献に完全に説明されている。
【００２５】
本発明の理解を助けるため、いくつかの用語及び句が以下に定義される。
【００２６】
本明細書では、用語「グアニジン」は、薬学的に許容できる塩形態を含む、以下のコア構造を有する化合物を指す。
【化４】
0006486364.tif 000005
記号
【化５】
0006486364.tif 000006
は、結合点を示す。
【００２７】
本開示の化合物は、１つ以上の二重結合を含むことがあり、したがって、幾何異性体として存在し得る。他に示されない限り、具体的な化合物の一般的な化学構造及び図解表示は全ての幾何異性体を包含する。本発明は、二重結合（例えば、炭素−炭素二重結合、又は炭素−窒素二重結合）の周囲の置換基の配置から生じる種々の幾何異性体及びその混合物を包含する。二重結合の周囲の置換基は、「Ｚ」又は「Ｅ」配置にあると称されるが、ここで、用語「Ｚ」及び「Ｅ」はＩＵＰＡＣ基準に従って使用される。特記されない限り、二重結合を描写する構造は、「Ｅ」と「Ｚ」の両異性体を包含する。或いは、二重結合の周囲の置換基は、「シス」又は「トランス」と称されることもあり、ここで、「シス」は置換基が二重結合の同じ側にあることを表し、「トランス」は置換基が二重結合の反対側にあることを表す。
【００２８】
本明細書に記載される特定の化合物は、単一の互変異性体としても、互変異性体の混合物としても存在し得る。例えば、少なくとも１つのグアニジン窒素原子に結合している水素原子を有する特定のグアニジン化合物は、単一の互変異性体としても、互変異性体の混合物としても存在し得る。説明すると、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３位置で結合している置換基に応じて、グアニジン化合物は、Ａ、Ｂ、又はＣにより表される単一の互変異性体としても、Ａ、Ｂ、及びＣの２つ以上の混合物としても存在し得る。
【化６】
0006486364.tif 000007
【００２９】
本明細書に開示される化合物は、水、エタノール、アセトンなどの薬学的に許容できる溶媒と溶媒和された形態並びに溶媒和されていない形態で存在し得るが、本発明が溶媒和された形態と溶媒和されていない形態の両方を包含することが意図される。
【００３０】
本発明は、先に列挙された化合物と同一であるが、１つ以上の原子が、天然に通常みられる原子質量又は質量数と異なる原子質量又は質量数を有する原子に置き換わっている、同位体標識された本発明の化合物を包含する。本発明の化合物に組み込まれ得る同位体の例には、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、及び塩素の同位体、例えば、それぞれ、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、及び３６Ｃｌがある。
【００３１】
特定の同位体標識された開示された化合物（例えば、３Ｈ及び１４Ｃで標識されたもの）は、化合物及び／又は基質組織分布アッセイに有用である。トリチウム化した（すなわち３Ｈ）及び炭素−１４（すなわち１４Ｃ）同位体は、調製の容易さ及び検出可能性のために特に好ましい。さらに、重水素（すなわち２Ｈ）などの重い同位体による置換は、高い代謝安定性（例えば、増加したインビボ半減期又は減少した用量の要件）から生じる特定の治療上の利点を与え得るので、いくつかの場合に好ましくなり得る。同位体標識された本発明の化合物は、例えば、本明細書の実施例に開示された手順と類似の手順に従って、同位体標識されていない試薬を同位体標識された試薬に替えることにより、一般的に調製できる。
【００３２】
化学名「３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミド」は以下の化合物を指す：
【化７】
0006486364.tif 000008
【００３３】
用語、オルト、メタ、及びパラは当技術分野で認識されており、それぞれ、１，２−、１，３−、及び１，４−二置換ベンゼンを指す。例えば、名称１，２−ジメチルベンゼンとオルト−ジメチルベンゼンは同義である。
【００３４】
用語「ＩＣ５０」は当技術分野で認識されており、その標的の５０％阻害のために要する化合物の濃度を指す。
【００３５】
用語「ＥＣ５０」は当技術分野で認識されており、その最大効果の５０％が観察される化合物の濃度を指す。
【００３６】
用語「対象」及び「患者」は、本発明の方法により治療すべき生物を指す。そのような生物には、好ましくは、哺乳動物（例えば、ネズミ科の動物、サル、ウマ科の動物、ウシ属の動物、ブタ、イヌ科の動物、ネコ科の動物など）があるが、これらに限定されず、最も好ましくはヒトがある。本発明の状況において、用語「対象」及び「患者」は、一般に、アポトーシスプロセスの調節不全を特徴とする病態に関して治療（例えば、本発明の化合物及び任意選択で１種以上の他の薬剤の投与）を受けるか、又は受けた個体を指す。
【００３７】
本明細書では、用語「有効量」は、有益な又は所望の結果をもたらすのに充分な化合物の量を指す。有効量は、１つ以上の投与、塗布、又は用量で投与でき、特定の製剤又は投与経路に限定されないものとする。本明細書では、用語「治療すること」は、あらゆる効果、例えば、病態、疾患、障害などの改善をもたらす軽減、減少、調節、改善、若しくは解消、又はその症状の改善を含む。
【００３８】
句「病的に増殖又は成長している細胞」は、正常な成長の通常の制限により支配されていない動物の増殖している細胞の局所的な集団を指す。
【００３９】
本明細書では、用語「活性化されていない標的細胞」は、Ｇｏ期にあるか、刺激が加えられていない細胞を指す。
【００４０】
本明細書では、用語「活性化された標的リンパ球様細胞」は、適切な刺激により初回刺激が与えられてシグナル伝達カスケードを起こしたリンパ球様細胞か、或いはＧｏ期にないリンパ球様細胞を指す。活性化されたリンパ球様細胞は、増殖し、活性化誘導細胞死を起こし、１種以上の細胞毒、サイトカイン、又は細胞型（例えば、ＣＤ８＋又はＣＤ４＋）に特徴的な他の関連する膜結合タンパク質を産生し得る。それらは、また、表面に特定の抗原を示すあらゆる標的細胞を認識し、結合して、その後に、そのエフェクター分子を放出することが可能である。
【００４１】
本明細書では、用語「活性化された癌細胞」は、適切な刺激により初回刺激が与えられて、シグナル伝達を起こした癌細胞を指す。活性化された癌細胞は、Ｇｏ期にあることも、ないこともある。
【００４２】
活性化剤は、標的細胞との相互作用と同時に、シグナル伝達カスケードをもたらす刺激である。活性化刺激の例には、小分子、放射エネルギー、及び細胞活性化細胞表面受容体に結合する分子があるが、これらに限定されない。活性化刺激により誘発される応答は、とりわけ、細胞内Ｃａ２＋、スーパーオキシド、若しくはヒドロキシルラジカルレベルの変化；キナーゼ若しくはホスファターゼのような酵素の活性；又は細胞のエネルギー状態により特徴づけることができる。癌細胞では、活性化剤は、形質転換癌遺伝子を含む。
【００４３】
本明細書では、用語「細胞死のプロセスの調節不全」は、壊死かアポトーシスにより細胞死を受ける細胞の能力（例えば、素因）のあらゆる異常を指す。細胞死の調節不全は、例えば、免疫疾患（例えば、全身性エリテマトーデス、自己免疫疾患、関節リウマチ、移植片対宿主病、重症筋無力症、シェーグレン症候群など）、慢性炎症性病態（例えば、乾癬、喘息、及びクローン病）、過剰増殖性疾患（例えば、腫瘍、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫など）、ウイルス感染（例えば、ヘルペス、乳頭腫、ＨＩＶ）、並びに変形性関節症及びアテローム性動脈硬化などの他の病態を含む種々の病態に関連するか、それらにより誘発される。
【００４４】
調節不全がウイルス感染により誘発されるか、又はそれと関連する場合、調節不全が起こるか、又は観察される時点で、ウイルス感染が検出可能なことも、検出可能でないこともある点に留意されたい。すなわち、ウイルス誘発性の調節不全は、ウイルス感染の症状の消失の後ですら起こり得る。
【００４５】
本明細書での「過剰増殖性疾患」は、動物の増殖している細胞の局所集団が、正常な成長の通常の制限により支配されていない病態を指す。過剰増殖性疾患の例には、腫瘍、新生物、リンパ腫などがある。新生物は、浸潤又は転移を起こさない場合には良性であると言われ、それらのいずれかを起こす場合悪性であると言われる。転移性の細胞又は組織は、細胞が周囲の体構造に侵入し、破壊できることを意味する。過形成は、構造又は機能の著しい変更なしに組織又は器官内の細胞数増加を伴う細胞増殖の一形態である。異形成は、ある種類の完全に分化した細胞が別の種類の分化した細胞に替わる、制御された細胞成長の一形態である。異形成は、上皮又は結合組織細胞で起こり得る。典型的な異形成は、幾分無秩序な異形成上皮を伴う。
【００４６】
活性化されたリンパ球様細胞の病理学的な成長は、免疫疾患又は慢性炎症性病態をもたらすことが多い。本明細書では、用語「免疫疾患」は、生物が、生物自体の分子、細胞、又は組織を認識する抗体又は免疫細胞を産生するあらゆる病態を指す。免疫疾患の非限定的な例には、自己免疫疾患、免疫性溶血性貧血、免疫性肝炎、ベルガー病又はＩｇＡ腎症、セリアックスプルー、慢性疲労症候群、クローン病、皮膚筋炎、線維筋痛症、移植片対宿主病、グレーブス病、橋本甲状腺炎、特発性血小板減少性紫斑病、扁平苔癬、多発性硬化症、重症筋無力症、乾癬、リウマチ熱、リウマチ性関節炎、強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、１型糖尿病、潰瘍性大腸炎、白斑、結核などがある。
【００４７】
本明細書では、用語「慢性炎症性病態」は、生物の免疫細胞が活性化されている病態を指す。そのような病態は、病的な後遺症を伴う持続性炎症反応を特徴とする。この状態は、単核細胞の浸潤、線維芽細胞及び小血管の増殖、結合組織の増加、並びに組織破壊を特徴とする。慢性炎症性疾患の例には、クローン病、乾癬、慢性閉塞性肺疾患、炎症性腸疾患、多発性硬化症、及び喘息があるが、これらに限定されない。関節リウマチ及び全身性エリテマトーデスなどの免疫疾患も慢性炎症性状態をもたらし得る。
【００４８】
本明細書では、用語「共投与」は、少なくとも２種の薬剤（例えば、本発明の化合物）又は療法の対象への投与を指す。いくつかの実施形態において、２種以上の薬剤／療法の共投与は同時である。他の実施形態において、第一の薬剤／療法は、第二の薬剤／療法の前に投与される。当業者は、使用される種々の薬剤／療法の製剤及び／又は投与経路が様々になり得ることを理解する。共投与の適切な用量は、当業者により容易に決定できる。いくつかの実施形態において、薬剤／療法が共投与される場合、それぞれの薬剤／療法は、それらの単独での投与に適切であるよりも低い用量で投与される。そのため、共投与は、薬剤／療法の共投与が、公知の潜在的に有害な（例えば、毒性のある）薬剤の必要な用量を低下させる実施形態において、特に望ましい。
【００４９】
本明細書では、用語「医薬組成物」は、活性薬剤と、組成物をインビボ又はエクスビボでの診断又は治療的な用途に特に好適にする不活性又は活性な担体との組み合わせを指す。
【００５０】
本明細書では、用語「薬学的に許容できる担体」は、リン酸緩衝生理食塩水、水、エマルション（例えば、油／水又は水／油エマルションなど）、及び様々な種類の湿潤剤などの標準的な薬学的担体のいずれも指す。組成物は、安定剤及び保存剤も含み得る。担体、安定剤、及び補助剤の例には、例えば、Ｍａｒｔｉｎ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ［１９７５］を参照されたい。
【００５１】
本明細書では、用語「薬学的に許容できる塩」は、対象への投与と同時に、本発明の化合物又はその活性代謝物若しくは残基を提供できる、本発明の化合物の薬学的に許容できる塩（例えば、酸又は塩基）を指す。当業者に公知である通り、本発明の化合物の「塩」は、無機又は有機の酸及び塩基から誘導できる。酸の例には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン−ｐ−スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ベンゼンスルホン酸などがあるが、これらに限定されない。シュウ酸などの他の酸は、それ自体は薬学的に許容できないが、本発明の化合物及びその薬学的に許容できる酸付加塩を得る際の中間体として有用な塩の調製に利用できる。
【００５２】
塩基の例には、アルカリ金属（例えば、ナトリウム）水酸化物、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）、水酸化物、アンモニア、及び式ＮＷ４＋の化合物（式中、ＷはＣ１−４アルキルである）などがあるが、これらに限定されない。
【００５３】
塩の例には、以下があるが、これらに限定されない：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、硫酸水素塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、カンファースルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、フルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パルモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、ウンデカン酸塩など。塩の他の例には、Ｎａ＋、ＮＨ４＋、及びＮＷ４＋（式中、ＷはＣ１−４アルキル基である）などの好適なカチオンと合わさった本発明の化合物のアニオンがある。
【００５４】
治療用途には、本発明の化合物の塩は、薬学的に許容できることが企図される。しかし、薬学的に許容できない酸及び塩基の塩も、例えば、薬学的に許容できる化合物の調製又は精製に使用され得る。
【００５５】
本明細書では、用語「調節する」は、細胞成長、増殖、アポトーシスなどを含むがこれらに限定されない細胞機能の状況に影響を与える（例えば、促進する、又は妨げる）化合物（例えば、本発明の化合物）の活性を指す。
【００５６】
説明全体で、組成物が具体的な成分を有する、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）、若しくは含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）と記載される場合、又はプロセス及び方法が、具体的な工程を有する、含む、若しくは含むと記載される場合、さらに、詳述された成分から基本的になる、又はそれからなる本発明の組成物があり、詳述された加工工程から基本的になる、又はそれからなる本発明によるプロセス及び方法があることが企図される。
【００５７】
一般的に、パーセンテージを明示する組成は、特記されない限り、重量基準である。さらに、変数が定義を伴わない場合、変数の先の定義が優先する。
【００５８】
Ｉ．Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ活性の調節剤
いくつかの実施形態において、本発明は、本発明の化合物への細胞の曝露により、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ活性（例えば、ミトコンドリアＦ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ活性）を制御する。いくつかの実施形態において、化合物は、ＡＴＰ合成及びＡＴＰ加水分解を阻害する。化合物の効果は、細胞変化の何らかの数を検出することにより測定できる。例えば、ミトコンドリアＦ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ活性及び／又は細胞死は、本明細書及び当技術分野に記載される通りに、アッセイできる。いくつかの実施形態において、細胞株は、密度依存性制約なしに指数増殖を達成するのに適切な細胞培養条件（例えば、気体（ＣＯ２）、温度、及び培地）下で、適切な期間維持される。細胞数及び／又は生存度は、トリパンブルー排除／血球計算法又はアラマーブルー若しくはＭＴＴ色素変換アッセイなど標準的な技法を利用して測定される。或いは、アポトーシス又は壊死の異常に関連した遺伝子又は遺伝子産物の発現に関して、細胞を分析できる。
【００５９】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物の細胞への曝露は、アポトーシスを誘導する。特定の他の実施形態において、本発明は、ミトコンドリアＦ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼとの相互作用によりアポトーシス又は細胞増殖の停止を誘導する。さらに他の実施形態において、本発明の化合物は、対象に投与された場合、細胞のＲＯＳレベル（例えば、Ｏ２−）の初期の増加を起こす。
【００６０】
ＩＩ．トリフルオロメチルピラゾリルグアニジン化合物
本発明の一態様は、式Ｉ：
【化８】
0006486364.tif 000009
（式中、Ｒ１は、それが結合しているフェニル基のメタ位又はパラ位に位置するクロロ基である）
により表される化合物のファミリー又はその幾何異性体若しくは互変異性体；あるいは前記のいずれかの薬学的に許容できる塩若しくは溶媒和物を提供する。用語「メタ」及び「パラ」が、１位をカルボニルの結合点として、それぞれフェニル基の３位及び４位を指すことが理解される。
【００６１】
特定の実施形態において、化合物は、式Ｉの化合物又はその幾何異性体若しくは互変異性体、あるいは前記のいずれかの薬学的に許容できる塩である。特定の他の実施形態において、化合物は、式Ｉの化合物又はその幾何異性体若しくは互変異性体、あるいは前記のいずれかの溶媒和物である。特定の実施形態において、化合物は、アセトン溶媒和物の形態である。
【００６２】
特定の実施形態において、化合物は、以下：
【化９】
0006486364.tif 000010
により表されるもの又はその幾何異性体若しくは互変異性体；あるいは前記のいずれかの薬学的に許容できる塩である。特定の他の実施形態において、化合物は、以下：
【化１０】
0006486364.tif 000011
により表されるもの又はその幾何異性体若しくは互変異性体；あるいは前記のいずれかの溶媒和物である。特定の実施形態において、化合物は、アセトン溶媒和物の形態である。
【００６３】
さらに他の実施形態において、化合物は、以下：
【化１１】
0006486364.tif 000012
により表されるもの又はその幾何異性体若しくは互変異性体である。さらに他の実施形態において、化合物は以下により表される。
【化１２】
0006486364.tif 000013
【００６４】
本発明の別の態様は、以下：
【化１３】
0006486364.tif 000014
により表される化合物又はその幾何異性体若しくは互変異性体；あるいは前記のいずれかの薬学的に許容できる塩若しくは溶媒和物を提供する。特定の実施形態において、化合物は、
【化１４】
0006486364.tif 000015
により表されるもの又はその幾何異性体若しくは互変異性体；あるいは前記のいずれかの薬学的に許容できる塩である。特定の他の実施形態において、化合物は、
【化１５】
0006486364.tif 000016
により表されるもの又はその幾何異性体若しくは互変異性体；あるいは前記のいずれかの溶媒和物である。さらに他の実施形態において、化合物は、
【化１６】
0006486364.tif 000017
で表されるもの又はその幾何異性体若しくは互変異性体である。
【００６５】
さらに他の実施形態において、化合物は、
【化１７】
0006486364.tif 000018
で表されるものである。
【００６６】
化合物の結晶形態
本発明の別の態様は、結晶形態にある化合物を提供する。例えば、本発明の別の態様は、３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドの結晶性化合物を提供する。この結晶性化合物は、異なる多形体になり得る。例えば、多形体Ｉ及び多形体ＩＩが発見された。
【００６７】
Ａ．３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドの結晶形態Ｉ
３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドの結晶形態Ｉを製造する手順は、例えば、本明細書の実施例３に記載されている。形態ＩのＸ線粉末ディフラクトグラムは、図３に与えられている。形態Ｉの示差走査熱量測定曲線は、形態Ｉの熱重量分析曲線と共に、図４に与えられている。３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドの形態Ｉは、そのＸ線粉末ディフラクトグラム及び示差走査熱量測定により決定されるその融点開始点により特徴付けできる。
【００６８】
したがって、本発明の一態様は、以下の回折角度（２θ）：６．２±０．２、７．１±０．２、９．４±０．２、１０．７±０．２、１５．６±０．２、１９．０±０．２、２０．０±０．２、及び２５．２±０．２でのピークを含むＸ線粉末回折パターンを示す、結晶性の３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドを与える。特定の実施形態において、前記回折角度（２θ）でのピークの相対強度は少なくとも２０％である。特定の実施形態において、前記回折角度（２θ）でのピークの相対強度は少なくとも３０％である。
【００６９】
結晶性化合物は、回折角度２θ、面間隔ｄ、及び相対強度（最大強度のピークに対するパーセンテージとして表される）について表される以下のＸ線粉末回折パターンによりさらに特徴付けできる：
【００７０】
【表１】
0006486364.tif 000019
【００７１】
なおさらなる実施形態において、結晶形態Ｉは、実質的に図３に示されるＸ線粉末回折パターンを有するものとしてさらに特徴付けできる。
【００７２】
Ｘ線粉末回折パターンは、ＣｕＫα線を利用して得ることができる。Ｘ線粉末回折パターンが得られる温度は、例えば、２５±２℃であり得る。
【００７３】
結晶形態Ｉは、示差走査熱量測定により決定されるその融点開始点の温度によりさらに特徴付けできる。特定の実施形態において、結晶性化合物は、約１４９℃から約１６４℃の範囲に、示差走査熱量測定により決定される融点開始点を有する。特定の他の実施形態において、結晶性化合物は、約１５７℃から約１６１℃の範囲に、示差走査熱量測定により決定される融点開始点を有する。さらに他の実施形態において、結晶性化合物は、約１５９℃に示差走査熱量測定により決定される融点開始点を有する。なおさらに、結晶形態Ｉは、実質的に図４に示されるものと同一の示差走査熱量測定曲線を有することによりさらに特徴付けできる。
【００７４】
Ｂ．３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドの結晶形態ＩＩ
３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドの結晶形態ＩＩを製造する手順は、例えば、本明細書の実施例４及び５に記載されている。結晶形態ＩＩの典型的なＸ線粉末ディフラクトグラムは、図５及び７に与えられている。結晶形態ＩＩの示差走査熱量測定曲線は、図６及び８に与えられている。３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドの結晶形態ＩＩは、そのＸ線粉末ディフラクトグラム及び示差走査熱量測定により決定されるその融点開始点により特徴付けできる。
【００７５】
したがって、本発明の一態様は、以下の回折角度（２θ）：６．３±０．２、７．３±０．２、１１．０±０．２、１２．８±０．２、１６．９±０．２、１９．２±０．２、２０．６±０．２、２２．２±０．２、２５．７±０．２、２６．０±０．２、及び３５．７±０．２でのピークを含むＸ線粉末回折パターンを示す、結晶性の３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドを提供する。特定の実施形態において、前記回折角度（２θ）でのピークの相対強度は少なくとも１５％である。特定の他の実施形態において、前記回折角度（２θ）でのピークの相対強度は少なくとも１８％である。
【００７６】
特定の実施形態において、結晶形態ＩＩは、Ｘ線粉末回折パターンにおける以下の（回折角度２θ、面間隔ｄ、及び相対強度（最大強度のピークに対するパーセンテージとして表される）についての）特徴を含むものとしてさらに特徴付けできる：
【００７７】
【表２】
0006486364.tif 000020
【００７８】
結晶形態ＩＩは、回折角度２θ、面間隔ｄ、及び相対強度（最大強度のピークに対するパーセンテージとして表される）について表される、以下のＸ線粉末回折パターンによりさらに特徴付けできる：
【００７９】
【表３】
0006486364.tif 000021
【００８０】
【表４】
0006486364.tif 000022
【００８１】
なおさらなる実施形態において、結晶形態ＩＩは、実質的に図５に示されるＸ線粉末回折パターンを有するものとしてさらに特徴付けできる。他の実施形態において、結晶形態ＩＩは、実質的に図７に示されるＸ線粉末回折パターンを有するものとしてさらに特徴付けできる。
【００８２】
Ｘ線粉末回折パターンは、ＣｕＫα線を利用して得ることができる。Ｘ線粉末回折パターンが得られる温度は、例えば、２５±２℃であり得る。
【００８３】
結晶形態ＩＩは、示差走査熱量測定により決定されるその融点開始点温度によりさらに特徴付けできる。特定の実施形態において、結晶性化合物は、約１５８℃から約１６５℃の範囲に、示差走査熱量測定により決定される融点開始点を有する。特定の他の実施形態において、結晶性化合物は、約１５９℃から約１６４℃の範囲に、示差走査熱量測定により決定される融点開始点を有する。さらに他の実施形態において、結晶性化合物は、約１５８℃、約１５９℃、約１６０℃、約１６３℃、約１６４℃、又は約１６５℃に示差走査熱量測定により決定される融点開始点を有する。さらに他の実施形態において、結晶性化合物は、約１５９℃に示差走査熱量測定により決定される融点開始点を有する。なおさらに、結晶形態ＩＩは、実質的に図６に示されるものと同一の示差走査熱量測定曲線を有することによりさらに特徴付けできる。さらに他の実施形態において、結晶形態ＩＩは、実質的に図８に示されているものと同一の差走査熱量測定曲線を有することによりさらに特徴付けできる。
【００８４】
Ｃ．結晶性の３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドアセトン溶媒和物
結晶性の３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドアセトン溶媒和物を製造する手順は、例えば、本明細書の実施例２に記載されている。結晶性の３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドアセトン溶媒和物のＸ線粉末ディフラクトグラムは、図１に与えられている。示差走査熱量測定曲線は、熱重量分析曲線と共に、図２に与えられている。３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドアセトン溶媒和物は、そのＸ線粉末ディフラクトグラム及び示差走査熱量測定により決定されるその融点開始点により特徴付けできる。
【００８５】
したがって、本発明の一態様は、以下の回折角度（２θ）：６．２±０．２、８．３±０．２、１４．７±０．２、１７．５±０．２、１７．９±０．２、１８．５±０．２、２０．２±０．２、２０．９±０．２、２３．５±０．２、及び２５．９±０．２でのピークを含むＸ線粉末回折パターンを示す、結晶性の３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドアセトン溶媒和物を提供する。特定の実施形態において、前記回折角度（２θ）における相対強度は少なくとも１０％である。特定の他の実施形態において、前記回折角度（２θ）における相対強度は少なくとも１５％である。
【００８６】
結晶性化合物は、回折角度２θ、面間隔ｄ、及び相対強度（最大強度のピークに対するパーセンテージとして表される）について表される以下のＸ線粉末回折パターンによりさらに特徴付けできる：
【００８７】
【表５】
0006486364.tif 000023
【００８８】
なおさらなる実施形態において、結晶性の３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドアセトン溶媒和物は、実質的に図１に示されるＸ線粉末回折パターンを有するものとしてさらに特徴付けできる。
【００８９】
Ｘ線粉末回折パターンは、ＣｕＫα線を利用して得ることができる。Ｘ線粉末回折パターンが得られる温度は、例えば、２５±２℃であり得る。
【００９０】
結晶性の３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドアセトン溶媒和物は、約１５９℃に融点開始点を有することによりさらに特徴付けできる。なおさらに、結晶性化合物は、実質的に図２に示されるものと同一の示差走査熱量測定曲線によりさらに特徴付けできる。
【００９１】
特定の他の実施形態において、化合物は、実施例１〜７に列記された化合物の１つ又は前記化合物の薬学的に許容できる塩である。特定の他の実施形態において、化合物は、実施例１〜８に列記された化合物の１つ又は前記化合物の薬学的に許容できる塩である。前記化合物を薬学的に許容できる担体と組み合わせて、医薬組成物を製造できることが理解される。
【００９２】
本明細書に記載される化合物を調製する典型的な方法は、実施例に与えられている。
【００９３】
ＩＩＩ．トリフルオロメチルピラゾリルグアニジン化合物の治療用途
本明細書の式Ｉのグアニジン化合物及び結晶形態にある特定の化合物などの本明細書に記載されるグアニジン化合物が、いくつかの病態の１つ以上、例えば、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ活性の調節不全を特徴とする疾患、細胞又は組織中の壊死及び／又はアポトーシスプロセスの調節不全を特徴とする疾患、並びに異常な細胞成長及び／又は過剰増殖を特徴とする疾患を患っている患者に治療効果を与えることが企図される。本明細書に記載される化合物を使用して、本明細書の他の場所に記載されている細胞死に関連する種々の調節不全疾患を治療することもできる。さらに、本明細書に記載される化合物を使用して、ＡＴＰ合成を阻害できる。
【００９４】
したがって、本発明の一態様は、医学的障害を患っている対象を治療する方法を提供する。方法は、障害の症状を改善するために、治療上有効な量の、１種以上の本明細書に記載されるグアニジン化合物、例えば、上記ＩＩ項に記載された式Ｉ又は結晶形態にある特定の化合物を対象に投与することを含む。
【００９５】
本明細書に記載されるグアニジン化合物を使用して、多数の医学的障害を治療できる。例えば、本明細書に記載される化合物を使用して、細胞又は組織中の壊死及び／若しくはアポトーシスプロセスの調節不全を特徴とする医学的障害、異常な細胞成長及び／若しくは過剰増殖を特徴とする疾患など、又は狼瘡、関節リウマチ、乾癬、移植片対宿主病、クローン病、炎症性腸疾患、多発性硬化症、心血管疾患、骨髄腫、リンパ腫、癌、及び細菌感染を治療できる。特定の実施形態において、癌は、固形腫瘍、白血病、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、胃癌、子宮頸癌、精巣腫瘍、皮膚癌、直腸癌、甲状腺癌、腎臓癌、子宮癌、食道（ｅｓｐｏｐｈａｇｕｓ）癌、肝臓癌、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、メラノーマ、神経芽細胞腫、又は網膜芽細胞腫である。
【００９６】
特定の理論に拘束されることを望むものではないが、冒された細胞又は組織中のＦ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ複合体（例えば、ミトコンドリアＦ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ複合体）の活性を調節する（例えば、阻害する又は促進する）ことにより、化合物が治療効果を与えると考えられている。いくつかの実施形態において、本発明の組成物を使用して、免疫／慢性炎症性疾患（例えば、乾癬、自己免疫疾患、臓器−移植片拒絶、及び表皮過形成）が治療される。さらなる実施形態において、本発明の組成物が狭窄療法と共に使用されて、損なわれた（例えば、閉塞した）血管が治療される。
【００９７】
特定の実施形態において、グアニジン化合物を含む組成物は、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼに向けられる所望の効果を最大にする条件下（例えば、時機、投与量、他の薬剤との共投与、投与様式、対象の選択、標的化薬剤の使用など）で投与される。
【００９８】
特定の実施形態において、医学的障害は免疫疾患である。特定の他の実施形態において、医学的障害は炎症性疾患である。特定の他の実施形態において、医学的障害は自己免疫疾患である。特定の他の実施形態において、医学的障害は、関節リウマチ、乾癬、慢性移植片対宿主病、急性移植片対宿主病、クローン病、炎症性腸疾患、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、セリアックスプルー、特発性血栓性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、シェーグレン症候群、強皮症、潰瘍性大腸炎、喘息、ブドウ膜炎、又は表皮過形成である。
【００９９】
特定の実施形態において、医療疾患は、クローン病又は潰瘍性大腸炎である。
【０１００】
特定の他の実施形態において、医学的障害は、軟骨炎症、骨分解、関節炎、若年性関節炎、若年性関節リウマチ、少関節型若年性関節リウマチ、多関節型若年性関節リウマチ、全身型若年性関節リウマチ、若年性強直性脊椎炎、若年性腸炎性関節炎、若年性反応性関節炎、若年性レター（Ｒｅｔｅｒ’ｓ）症候群、ＳＥＡ症候群、若年性皮膚筋炎、若年性乾癬性関節炎、若年性強皮症、若年性全身性エリテマトーデス、若年性血管炎、少関節型関節リウマチ、多関節型関節リウマチ、全身型関節リウマチ、強直性脊椎炎、腸炎性関節炎、反応性関節炎、レター症候群、皮膚筋炎、乾癬性関節炎、血管炎、ミオリティス（ｍｙｏｌｉｔｉｓ）、多発性筋炎（ｐｏｌｙｍｙｏｌｉｔｉｓ）、皮膚筋炎（ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｌｉｔｉｓ）、変形性関節症、結節性多発動脈炎（ｐｏｌｙａｒｔｅｒｉｔｉｓ  ｎｏｄｏｓｓａ）、ウェゲナー肉芽腫症、動脈炎、リウマチ性多発筋痛、サルコイドーシス、硬化症、原発性硬化性胆管炎、硬化性胆管炎、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、アテローム性動脈硬化、スティル病、慢性閉塞性肺疾患、ギランバレー病、Ｉ型糖尿病、グレーブス病、アジソン病、レイノー現象、又は自己免疫性肝炎である。特定の実施形態において、乾癬は、尋常性乾癬、滴状乾癬、逆乾癬、膿疱性乾癬、又は乾癬性紅皮症である。
【０１０１】
特定の他の実施形態において、医学的障害は、クローン病、炎症性腸疾患、多発性硬化症、移植片対宿主病、狼瘡、関節リウマチ、又は乾癬である。特定の他の実施形態において、医学的障害は、心血管疾患、骨髄腫、リンパ腫、又は癌である。特定の他の実施形態において、医学的障害は、狼瘡、関節リウマチ、乾癬、移植片対宿主病、骨髄腫、又はリンパ腫である。特定の他の実施形態において、医学的障害は、心血管疾患又は癌である。特定の他の実施形態において、医学的障害は、クローン病、炎症性腸疾患、又は多発性硬化症である。特定の他の実施形態において、医学的障害は移植片対宿主病である。さらなる実施形態において、医学的障害は細菌感染である。特定の実施形態において、患者（又は対象）はヒトである。
【０１０２】
先に示された通り、本明細書に記載されるグアニジン化合物は、細菌感染の治療に使用できる。種々の細菌が、グアニジン化合物に影響を受けやすいことが企図される。代表的な細菌には、ブドウ球菌種（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）；腸球菌種（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｅ．フェカリス（Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ）及びＥ．フェシウム（Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ）；レンサ球菌種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｓ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）及びＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）；大腸菌種（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、腸管毒素原性、腸管病原性、腸管侵入性、腸管出血性、及び腸管凝集性Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）株を含むＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）；ヘモフィルス属菌種（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｈ．インフルエンザ（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）；並びにモラクセラ属菌種（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｍ．カタラーリス（Ｍ．ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）がある。他の例には、マイコバクテリウム属菌種（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｍ．ツベルクローシス（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、Ｍ．アビアン−イントラセルラーレ（Ｍ．ａｖｉａｎ−ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、Ｍ．カンサシ（Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ）、Ｍ．ボビス（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）、Ｍ．アフリカナム（Ｍ．ａｆｒｉｃａｎｕｍ）、Ｍ．ゲナベンス（Ｍ．ｇｅｎａｖｅｎｓｅ）、Ｍ．レプラエ（Ｍ．ｌｅｐｒａｅ）、Ｍ．ゼノピ（Ｍ．ｘｅｎｏｐｉ）、Ｍ．シミアエ（Ｍ．ｓｉｍｉａｅ）、Ｍ．スクロフラセウム（Ｍ．ｓｃｒｏｆｕｌａｃｅｕｍ）、Ｍ．マルモエンセ（Ｍ．ｍａｌｍｏｅｎｓｅ）、Ｍ．セラタム（Ｍ．ｃｅｌａｔｕｍ）、Ｍ．アブセサス（Ｍ．ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）、Ｍ．ケロネー（Ｍ．ｃｈｅｌｏｎａｅ）、Ｍ．ツルガイ（Ｍ．ｓｚｕｌｇａｉ）、Ｍ．ゴルドネ（Ｍ．ｇｏｒｄｏｎａｅ）、Ｍ．ヘモフィルム（Ｍ．ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｍ）、Ｍ．フォルツニ（Ｍ．ｆｏｒｔｕｎｉ）、及びＭ．マリヌム（Ｍ．ｍａｒｉｎｕｍ）；コリネバクテリウム属菌種（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｃ．ジフテリエ（Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）；ビブリオ属菌種（Ｖｉｂｒｉｏ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｖ．コレラエ（Ｖ．ｃｈｏｌｅｒａｅ）；カンピロバクター属菌種（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｃ．ジェニュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）；ヘリコバクター属菌種（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｈ．ピロリ（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）；シュードモナス属菌種、例えば、Ｐ．アエルギノーサ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）；レジオネラ属菌種（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｌ．ニューモフィラ（Ｌ．ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）；トレポネーマ属菌種（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｔ．パリズム（Ｔ．ｐａｌｌｉｄｕｍ）；ボレリア属菌種（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｂ．ブルグドルフェリ（Ｂ．ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）；リ��テリア属菌種（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｌ．モノサイトゲネス（Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）；バシラス属菌種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｂ．セレウス（Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ）；ボルダテラ属菌種（Ｂｏｒｄａｔｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｂ．ペルツシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）；クロストリジウム属菌種（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｃ．ペルフリンゲンス（Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、Ｃ．テタニ（Ｃ．ｔｅｔａｎｉ）、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、及びＣ．ボツリヌム（Ｃ．ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）；ナイセリア属菌種（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｎ．メニンジチディス（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、及びＮ．ゴノローエ（Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）；クラミジア属菌種（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｃ．シタッチ（Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ）、Ｃ．ニューモニエ（Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、及びＣ．トラコマチス（Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）；リケッチア属菌種（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｒ．リケッチ（Ｒ．ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ）及びＲ．プロワツェキイ（Ｒ．ｐｒｏｗａｚｅｋｉｉ）；シゲラ属菌種（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｓ．ソンネイ（Ｓ．ｓｏｎｎｅｉ）；サルモネラ属菌種（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｓ．ティフィムリウム（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）；エルシニア属菌種（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｙ．エンテロコリチカ（Ｙ．ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）及びＹ．シュードツベルクロシス（Ｙ．ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）；クレブシエラ属菌種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｋ．ニューモニエ（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）；マイコプラズマ属菌種（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）、例えば、Ｍ．ニューモニエ（Ｍ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）；並びにトリパノソーマ・ブルセイ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ）がある。特定の実施形態において、本明細書に記載されるグアニジン化合物を使用して、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）、Ｅ．フェカリス（Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ）、Ｅ．フェシウム（Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ）、Ｓ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、Ｓ．ニューモニア（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、及びＰ．アエルギノーサ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）からなる群から選択される細菌感染を患っている対象が治療される。特定の実施形態において、本明細書に記載されるグアニジン化合物を使用して、トリパノソーマ・ブルセイ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ）感染を患っている対象が治療される。
【０１０３】
本明細書に記載される化合物の抗菌活性は、米国臨床検査標準委員会、Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｉｎｇ；Ｆｏｕｒｔｅｅｎｔｈ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ．ＮＣＣＬＳ  ｄｏｃｕｍｅｎｔ  Ｍ１００−Ｓ１４｛ＩＳＢＮ  １−５６２３８−５１６−Ｘ｝にさらに記載される微量液体希釈最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）アッセイなどの当技術分野に公知である標準的なアッセイを利用して評価できる。このアッセイを利用して、溶液中の可視的な細菌成長を防ぐのに必要な化合物の最低濃度を決定できる。一般に、試験すべき薬物はウェルに連続希釈され、液体細菌培養物のアリコートが加えられる。この混合物は適切な条件下でインキュベートされ、次いで、細菌の成長に関して試験される。抗生物質活性が低い、又は無い化合物（高いＭＩＣ）は化合物の高濃度で成長を可能にし、抗生物質活性が高い化合物は、より低い濃度でのみ細菌成長を可能にする（低いＭＩＣ）。
【０１０４】
アッセイは、選択された細菌の株に適切な保存細菌培養条件を利用する。永久保存培養コレクションからの保存培養物は、凍結懸濁液として−７０℃で保存できる。培養物を、ドライアイス／エタノール中で急速凍結する前に、１０％スキムミルク（ＢＤ）に懸濁し、次いで−７０℃のフリーザーに置くことができる。培養物を、５％ヒツジ血液を含むトリプチックソイ寒天上で、室温で（２０℃）で維持でき、各培養物を凍結形態から戻してもう一度ＭＩＣ試験の前に移すことができる。試験前日に新しいプレートは接種され、一晩インキュベートされ、純度及び正体を確認するためにチェックされる。
【０１０５】
保存培養から戻した培養物の正体及び純度を確認して、汚染の可能性を除外できる。株の正体は、標準的な微生物学的方法により確認できる（例えば、Ｍｕｒｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｉｇｈｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＡＳＭ  Ｐｒｅｓｓ｛ＩＳＢＮ  １−５５５８１−２５５−４｝参照）。一般に、培養物は、純度、期待されるコロニーモルホロジー、及び溶血パターンの可視化のために適切な寒天プレート上で画線される。グラム染色も利用できる。ＭｉｃｒｏＳｃａｎ  ＷａｌｋＡｗａｙ  ４０  ＳＩ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｄａｄｅ  Ｂｅｈｒｉｎｇ，Ｗｅｓｔ  Ｓａｃｒａｍｅｎｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用して正体が確認される。この装置は、自動インキュベーター、リーダー、及びコンピューターを利用して、確認目的のために、各生物により行われる生化学反応を評価する。ＭｉｃｒｏＳｃａｎ  ＷａｌｋＡｗａｙを利用して、予備的なＭＩＣを決定することもできるが、それは以下に記載される方法を利用して確認できる。
【０１０６】
凍結保存培養物を、微量液体希釈最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）試験を実施するための、生物の最初の供給源として使用できる。保存培養は、使用前に、その標準的な成長培地で、少なくとも１成長周期（１８〜２４時間）過ごされる。ほとんどの細菌は、適切な肉汁培地の１０ｍＬアリコート中で、直接寒天プレートから直接調製できる。細菌培養物は、０．５番のマクファーランド濁度標準液の不透明度に調整される（波長６００ｎｍに設定されたＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｌａｍｂｄａ  ＥＺ１５０  Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ，Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓでの０．２８〜０．３３の光学濃度値）。次いで、調整された培養物は成長培地中で４００倍に希釈され（０．２５ｍＬ接種物＋１００ｍＬブロス）、およそ５×１０５コロニー形成単位（ＣＦＵ）／ｍＬの出発懸濁剤が製造される。ほとんどの細菌株は、カチオン調整ミューラーヒントンブロス（ＣＡＭＨＢ）で試験できる。
【０１０７】
試験化合物（「薬物」）は、ＤＭＳＯなどのアッセイに好適な溶媒中で可溶化される。薬物ストック溶液は、試験の日に調製できる。微量液体希釈ストックプレートは、２つの希釈系列、６４から０．０６μｇ薬物／ｍＬ及び０．２５から０．０００２５μｇ薬物／ｍＬで調製できる。高い濃度系列では、２００μＬのストック溶液（２ｍｇ／ｍＬ）が、９６ウェルマイクロタイタープレートの二連の列に加えられる。これは、希釈系列の第一のウェルとして使用される。段階２倍減少希釈液が、残り１１ウェルのうち１０ウェルで、ＢｉｏＭｅｋ  ＦＸロボット（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｉｎｃ．，Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，ＣＡ）を使用して作られるが、ウェルはそれぞれ１００μＬの適切な溶媒／希釈剤を含む。列１２は溶媒／希釈剤のみを含み、対照として機能する。低濃度系列の第一のウェルでは、２００μＬの８μｇ／ｍＬストックが９６ウェルプレートの二連の列に加えられる。２倍段階希釈液が、上述の通り作成される。
【０１０８】
娘９６ウェルプレートを、上述のストックプレートからＢｉｏＭｅｋ  ＦＸロボットを使用してスポッティングして（３．２μＬ／ウェル）、直ちに使用しても、使用まで−７０℃で凍結してもよい。ＢｉｏＭｅｋ  ＦＸロボットを使用して、解凍したプレートに好気性生物を接種できる（１００μＬ体積）。接種されたプレートは積み重ねて置かれ、空のプレートで覆われる。次いで、これらのプレートは、ＣＬＳＩガイドライン（米国臨床検査標準委員会、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｌｕｔｉｏｎ，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｔｅｓｔｓ  ｆｏｒ  Ｂａｃｔｅｒｉａ  ｔｈａｔ  Ｇｒｏｗ  Ａｅｒｏｂｉｃａｌｌｙ；Ａｐｐｒｏｖｅｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄ−Ｓｉｘｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＮＣＣＬＳ  ｄｏｃｕｍｅｎｔ  Ｍ７−Ａ６｛ＩＳＢＮ  １−５６２３８−４８６−４｝）に従って、周囲雰囲気中で１６から２４時間インキュベートされる。
【０１０９】
接種及びインキュベーション後に、細菌成長の程度を、暗くした部屋で、Ｔｅｓｔ  Ｒｅａｄｉｎｇ  Ｍｉｒｒｏｒ（Ｄｙｎｅｘ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ２２０  １６）を使用して、１つの照明がマイクロブロストレイの上部を直接通って照らしている状態で目視により評価できる。ＭＩＣは、試験の条件下で、肉眼で見える成長を防ぐ薬物の最低濃度である。
【０１１０】
さらに、あらゆる１種以上の本明細書に記載されるピラゾリルグアニジン化合物を使用して、対象のＦ１Ｆ０−ＡＴＰヒドロラーゼ関連疾患（例えば、心筋梗塞、心室肥大、冠動脈疾患、非Ｑ波心筋梗塞、鬱血性心不全、心律動異常、不安定狭心症、慢性不安定狭心症、プリンツメタル狭心症、高血圧、間欠性跛行、末梢動脈閉塞性疾患、血栓塞栓症脳卒中の血栓性又は血栓塞栓性症状、静脈血栓症、動脈血栓症、脳血栓症、肺動脈塞栓症、脳塞栓症、栓友病、播種性血管内凝固症候群、再狭窄、心房細動、脳室拡大、アテローム動脈硬化性血管疾患、動脈硬化プラーク破裂、動脈硬化プラーク形成、移植片アテローム性動脈硬化、血管再構築アテローム性動脈硬化、癌、手術、炎症、全身性感染症、人工表面、介入性心臓病学、不動、医薬品、妊娠及び胎児消失、並びに網膜症、腎障害、及び神経障害を含む糖尿病性合併症）を治療できる。
【０１１１】
併用療法
さらに、本明細書に記載されるグアニジン化合物を、Ｂｚ−４２３（米国特許第７，１４４，８８０号明細書及び同第７，１２５，８６６号明細書、米国特許出願第１１／５８６，０９７号明細書、同第１１／５８５，４９２号明細書、同第１１／４４５，０１０号明細書、同第１１／３２４，４１９号明細書、同第１１／１７６，７１９号明細書、同第１１／１１０，２２８号明細書、同第１０／９３５，３３３号明細書、同第１０／８８６，４５０号明細書、同第１０／７９５，５３５号明細書、同第１０／６３４，１１４号明細書、同第１０／４２７，２１１号明細書、同第１０／２１７，８７８号明細書、及び同第０９／７６７，２８３号明細書、並びに米国仮特許出願第６０／８７８，５１９号明細書、同第６０／８１２，２７０号明細書、同第６０／８０２，３９４号明細書、同第６０／７３２，０４５号明細書、同第６０／７３０，７１１号明細書、同第６０／７０４，１０２号明細書、同第６０／６８６，３４８号明細書、同第６０／６４１，０４０号明細書、同第６０／６０７，５９９号明細書、及び同第６０／５６５，７８８号明細書に記載されるベンゾジアゼピン化合物）、カリウムチャネル開口薬、カルシウムチャネル遮断剤、ナトリウム水素交換輸送体阻害剤、抗不整脈剤、抗アテローム性動脈硬化剤、抗凝固剤、抗血栓剤、血栓溶解促進剤、フィブリノーゲン拮抗剤、利尿剤、降圧剤、ＡＴＰアーゼ阻害剤、鉱質コルチコイド受容体拮抗剤、ホスポジエステラーゼ（ｐｈｏｓｐｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ）阻害剤、抗糖尿病剤、抗炎症剤、酸化防止剤、血管新生調節因子、抗骨粗鬆症剤、ホルモン補充療法、ホルモン受容体調節因子、経口避妊薬、抗肥満剤、抗うつ剤、抗不安剤、抗精神病剤、抗増殖剤、抗腫瘍剤、抗潰瘍及び胃食道逆流症剤、成長ホルモン剤及び／又は成長ホルモン分泌促進因子、甲状腺ミメティクス、抗感染症剤、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗真菌剤、コレステロール／脂質降下剤、及び脂質プロファイル療法、虚血プレコンディショニング及び／又は心筋気絶を模倣する薬剤、抗アテローム性動脈硬化剤、抗凝固剤、抗血栓剤、降圧剤、抗糖尿病剤、ＡＣＥ阻害剤、ＡＴ−１受容体拮抗剤、ＥＴ受容体拮抗剤、デュアルＥＴ／ＡＩＩ受容体拮抗剤、バソペプシダーゼ（ｖａｓｏｐｅｐｓｉｄａｓｅ）阻害剤から選択される降圧剤、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａブロッカー、Ｐ２Ｙ１及びＰ２Ｙ１２拮抗剤、トロンボキサン受容体拮抗剤、又はアスピリンから選択される抗血小板剤などの少なくとも１種の他の治療剤と組み合わせて、薬学的に許容できる担体又は希釈剤と共に、医薬組成物中で使用できる。
【０１１２】
ＩＶ．医薬組成物、製剤、並びに典型的な投与経路及び投薬上考慮すべき事項
種々の企図される医薬品及び医薬組成物の典型的な実施形態が以下に提供される。
【０１１３】
Ａ．医薬品の調製
本発明の化合物は、細胞死の調節不全、異常な細胞成長、及び過剰増殖に関連する病態など種々の病態を治療する医薬品の調製に有用である。当業者は、多くの具体的な実施形態を含む本明細書に記載される化合物の１種以上が、標準的な医薬製造手順を適用することにより調製されることを認識するだろう。そのような医薬品は、医薬分野に周知である送達方法を利用して対象に送達することができる。
【０１１４】
Ｂ．典型的な医薬組成物及び製剤
本発明のいくつかの実施形態において、組成物は単独で投与されるが、いくつかの他の実施形態において、組成物は、好ましくは、先に議論された少なくとも１種の有効成分／薬剤を固体担体と共に含むか、或いは、１種以上の薬学的に許容できる担体及び任意選択で他の治療剤（例えば、本明細書の上記ＩＩＩ項に記載されたもの）と共に含む医薬製剤中に存在する。各担体は、製剤の他の成分と適合性があり、対象にとって有害でないという意味で「許容できる」ものでなくてはならない。
【０１１５】
企図される製剤には、経口、直腸、鼻腔内、局所（経皮、頬側、及び舌下含む）、膣内、非経口（皮下、筋肉内、静脈内、及び皮内含む）、及び肺投与に好適なものがある。いくつかの実施形態において、製剤は、単位剤形で呈されるのが簡便であり、調剤分野に公知である任意の方法により調製できる。そのような方法には、有効成分を、１種以上の副成分を構成する担体と合わせる工程がある。一般に、製剤は、有効成分を、液体担体若しくは微粉砕された固体担体又は両方と、均一且つ完全に合わせ（例えば、混合）、次いで、必要な場合、生成物を付形することにより調製される。
【０１１６】
経口投与に好適な本発明の製剤は、それぞれが、好ましくは所定量の有効成分を含むカプセル、カシェ剤、又は錠剤などの個別単位として；散剤若しくは顆粒剤として；水性若しくは非水性液体中の液剤若しくは懸濁剤として；又は水中油型液体エマルション若しくは油中水型液体エマルションとして、呈され得る。他の実施形態において、有効成分は、ボーラス、舐剤、又はペースト剤などとして呈される。
【０１１７】
いくつかの実施形態において、錠剤は少なくとも１種の有効成分を含み、任意選択で１種以上の補助剤／担体は、それぞれの薬剤を圧縮又は成形して作られる。いくつかの実施形態において、打錠剤は、任意選択で、結合剤（例えば、ポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性な希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウム、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）界面活性剤又は分散剤と混合された粉末又は顆粒などの自由流動形態の有効成分を、好適な機械中で圧縮して調製される。湿製錠は、好適な機械中で、不活性な液体希釈剤により湿らされた粉末化合物（例えば、有効成分）の混合物を成形して作られる。錠剤は、任意選択で、被膜しても溝を付けてもよく、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを種々の比率で利用してその中の有効成分の緩徐又は制御放出を与えて、所望の放出プロファイルを与えるように製剤できる。錠剤及びカプセルは、任意選択で、胃以外の腸の部分で放出する腸溶性コーティングを備え得る。
【０１１８】
口への局所投与に好適な製剤には、スクロース及びアラビアゴム又はトラガカントなどの風味が付いた基剤中に有効成分を含むロゼンジ剤；ゼラチン及びグリセリン又はスクロース及びアラビアゴムなどの不活性な基剤中に有効成分を含む香錠；並びに好適な液体担体中に有効成分を含む洗口液がある。
【０１１９】
本発明による局所投与の医薬組成物は、任意選択で、軟膏剤、クリーム剤、懸濁剤、ローション剤、散剤、液剤、ペースト剤、ゲル剤、スプレー剤、エアゾール剤、又は油剤として製剤される。代替実施形態において、局所製剤は、パッチ又は包帯若しくは有効成分及び任意選択で１種以上の賦形剤若しくは希釈剤を含浸させたばんそうこうなどの外傷用手当材料を含む。いくつかの実施形態において、局所製剤は、皮膚又は他の患部を通る活性薬剤の吸収又は浸透を促進する化合物を含む。そのような皮膚の浸透促進剤の例には、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）及び関連する類似化合物がある。
【０１２０】
望まれる場合、クリーム基剤の水相は、例えば、少なくとも約３０％ｗ／ｗの多価アルコール、すなわち、プロピレングリコール、ブタン−１，３−ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロール、及びポリエチレングリコール並びにこれらの混合物など、２つ以上のヒドロキシル基を含むアルコールを含む。
【０１２１】
いくつかの実施形態において、本発明の油相乳剤は、公知の成分から、公知の方法で構成される。この相は、典型的には、唯一の乳化剤（ｅｍｕｌｓｉｆｉｅｒ）（或いは、乳化剤（ｅｍｕｌｇｅｎｔ）としても知られる）を含むが、いくつかの実施形態において、この相が、少なくとも１種の乳化剤と、脂肪若しくは油又は脂肪と油の両方との混合物をさらに含むことも望ましい。
【０１２２】
好ましくは、親水性乳化剤が、安定剤として作用するために、親油性乳化剤と共に含まれる。いくつかの実施形態において、脂肪と油の両方が含まれることも好ましい。まとめると、安定剤があってもなくても乳化剤はいわゆる乳化蝋を構成し、蝋は、油及び／又は脂肪と共に、クリーム製剤の油性分散相を形成する、いわゆる乳化性軟膏基剤を構成する。
【０１２３】
眼への局所投与に好適な製剤には、有効成分が好適な担体、特に薬剤用の水性溶媒中に溶解又は懸濁している点眼剤もある。
【０１２４】
直腸投与用の製剤は、例えば、ココアバター又はサリチラートを含む好適な基剤を有する坐剤として呈され得る。
【０１２５】
膣内投与に好適な製剤は、薬剤に加えて、適切であることが当技術分野に公知である担体を含むペッサリー、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、フォーム剤、又はスプレー製剤として呈され得る。
【０１２６】
担体が固体である鼻腔内投与に好適な製剤には、例えば、約２０から約５００ミクロンの範囲の粒径を有する粗い粉末があり、かぎ薬を嗅ぐように、すなわち、鼻の近くに保持された散剤の容器から鼻孔を通る迅速な吸入（例えば、強制）により投与される。担体が投与用の液体である他の好適な製剤には、鼻腔内スプレー、滴剤、ネブライザーによるエアゾール剤があるが、これらに限定されず、薬剤の水性又は油性溶液を含む。
【０１２７】
非経口投与に好適な製剤には、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、及び製剤を、意図される受容者の血液と等張性にする溶質を含み得る水性及び非水性の等張性滅菌注射液；並びに懸濁化剤及び増粘剤、及びリポソーム又は化合物を血液成分又は１つ以上の器官に標的化するように設計された他の微小粒子系を含み得る水性及び非水性の滅菌懸濁剤がある。いくつかの実施形態において、製剤は、単位用量又は多用量密封容器、例えば、アンプル及びバイアル中に呈され／製剤され、使用直前に滅菌液体担体、例えば注射用水の添加のみを要する凍結乾燥された（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄ）（凍結乾燥された（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ））状態で保存できる。処方箋に応じた注射液及び懸濁液は、先に記載された種類の滅菌散剤、顆粒剤、及び錠剤から調製できる。
【０１２８】
好ましい単位用量製剤は、本明細書で先に列挙された通り、薬剤の１日量、若しくは単位、１日副投与量、又はその適切な部分を含むものである。
【０１２９】
先に詳細に言及された成分に加え、本発明の製剤が、検討する製剤の種類を考慮して当技術分野に従来ある他の薬剤を含み得ること、例えば、経口投与に好適なものが、甘味剤、増粘剤、及び着香剤などのさらなる作用物質を含み得ることを理解されたい。本発明の薬剤、組成物、及び方法が他の好適な組成物及び療法と組み合わせられ得ることも意図される。さらに他の製剤は、任意選択で、食品添加物（好適な甘味剤、着香剤、着色剤など）、植物栄養素（例えば、亜麻仁油）、無機質（例えば、Ｃａ、Ｆｅ、Ｋなど）、ビタミン類、及び他の許容できる組成物（例えば、共役リノール酸（ｌｉｎｏｅｌｉｃ  ａｃｉｄ））、増量剤、及び安定剤などを含む。
【０１３０】
Ｃ．典型的な投与経路及び投薬上考慮すべき事項
例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセル中のカプセル化、受容体依存性エンドサイトーシスなど、種々の送達系が公知であり、本発明の治療剤（例えば、上述の典型的な化合物）を投与するのに利用できる。送達の方法には、動脈内、筋肉内、静脈内、鼻腔内、及び経口経路があるが、これらに限定されない。具体的な実施形態において、本発明の医薬組成物を、治療を必要とする部分に局所投与することが望ましくなり得る。それは、例えば、非限定的に、手術中の局所注入、注射、又はカテーテルにより達成され得る。
【０１３１】
特定された薬剤は、標的細胞の病理学的な成長及び関連する病態をおこしやすい、又はそのリスクがある対象又は個体に投与できる。薬剤が、マウス、ラット、又はヒトの患者など対象に投与される場合、薬剤は薬学的に許容できる担体に加えられ、対象に、局所又は全身投与できる。有益に治療できる患者を特定するために、組織試料が患者から取り除かれ、薬剤に対する感受性に関して、細胞が試験される。
【０１３２】
治療量は経験的に決定され、治療されている病状、治療されている対象、並びに薬剤の効能及び毒性に応じて変動する。動物に送達される場合、方法は、薬剤の効能をさらに確認するのに有用である。動物モデルの一例は、ＭＬＲ／ＭｐＪ−ｌｐｒ／ｌｐｒ（「ＭＬＲ−ｌｐｒ」）（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅから入手可能）である。ＭＬＲ−ｌｐｒマウスは、全身性自己免疫疾患を起こす。或いは、例えば、ヌードマウスに、約１０５から約１０９の過増殖性の癌細胞又は本明細書に定義される標的細胞を皮下接種して腫瘍成長を誘発することにより、他の動物モデルを発生させることができる。腫瘍が確立されると、本明細書に記載される化合物が、例えば、腫瘍周辺に皮下注射により投与される。腫瘍サイズの低下を決定するための腫瘍測定が、ノギスを使用して、２方向で、週に２回行われる。他の動物モデルも、必要に応じて利用できる。上述の疾患及び障害のためのそのような動物モデルは、当技術分野に周知である。
【０１３３】
いくつかの実施形態において、インビボ投与は、１つの投与量で、連続的又は間欠的に、治療のクールを通して実施される。最も効果的な投与の手段及び用量を決定する方法は、当業者に周知であり、療法に使用される組成物、療法の目的、治療される標的細胞、及び治療される対象により様々である。投与量レベル及びパターンが治療する医師により選択されて、単回又は反復投与が実施される。
【０１３４】
薬剤を投与する好適な用量製剤及び方法は、当業者により容易に決定される。好ましくは、化合物は、約０．０１ｍｇ／ｋｇから約２００ｍｇ／ｋｇで、より好ましくは約０．１ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇで、さらにより好ましくは約０．５ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇで投与される。本明細書に記載される化合物が別の薬剤（例えば、感作剤として）と共投与される場合、有効量は、薬剤が単独で使用される場合より低くなり得る。
【０１３５】
医薬組成物は、経口的に、鼻腔内に、非経口的に、又は吸入療法により投与でき、錠剤、ロゼンジ剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、アンプル剤、坐剤、又はエアゾール形態の形態をとり得る。それらは、水性又は非水性希釈剤中の有効成分の懸濁剤、液剤、及び乳剤、シロップ剤、顆粒剤、又は散剤の形態もとり得る。本発明の薬剤の他に、医薬組成物は、他の薬学的に活性な化合物又は本発明の複数の化合物も含み得る。
【０１３６】
より詳細には、本明細書で有効成分とも称される本発明の薬剤は、経口、直腸、鼻腔内、局所（経皮、エアゾール、頬側、及び舌下を含むがこれらに限定されない）、膣内、親の（ｐａｒｅｎｔａｌ）（皮下、筋肉内、静脈内、及び皮内を含むがこれらに限定されない）、及び肺を含むがこれらに限定されないあらゆる好適な経路により、療法のために投与できる。好ましい経路は、受容者の病態及び年齢、並びに治療される疾患により変わることも認識される。
【０１３７】
理想的には、薬剤は、疾患部位で活性化合物のピーク濃度を達成するように投与されなければならない。これは、例えば、任意選択で食塩水中にある薬剤の静脈注射によっても、例えば、有効成分を含む錠剤、カプセル、又はシロップ剤として経口投与によっても達成できる。
【０１３８】
薬剤の望ましい血液レベルは、疾患組織内に治療量の有効成分を与える連続注入により維持できる。各個別の治療用化合物又は薬物が単独で使用される場合に必要とされ得るよりも低い各成分の全体用量を要する治療的な組み合わせを与え、それにより有害作用を減少させる、効力のある組み合わせの使用が企図される。
【０１３９】
Ｄ．典型的な共投与経路及び投薬上考慮すべき事項
本発明は、本明細書に記載される化合物と１種以上の追加の活性薬剤との共投与を含む方法も含む。実際に、本発明の化合物を共投与することにより従来技術の療法及び／又は医薬組成物を強化させる方法を提供することは、本発明のさらなる態様である。共投与手順において、薬剤は、同時にも、連続的にも投与できる。一実施形態において、本明細書に記載される化合物は、他の活性薬剤の前に投与される。医薬製剤及び投与の様式は、上述のもののいずれでもよい。さらに、２種以上の共投与される化学薬剤、生物学的薬剤、又は放射線は、それぞれ、異なる様式又は異なる製剤を利用して投与してよい。
【０１４０】
共投与すべき薬剤又は複数の薬剤は、治療されている病態の種類による。例えば、治療される病態が癌である場合、追加の薬剤は、化学療法剤又は放射線であり得る。治療される病態が免疫疾患である場合、追加の薬剤は免疫抑制剤又は抗炎症剤であり得る。治療される病態が慢性炎症である場合、追加の薬剤は、抗炎症剤であり得る。抗癌剤、免疫抑制剤、抗炎症剤などの共投与すべき追加の薬剤は、現在臨床使用されているものを含むがそれに限定されない当技術分野の周知の薬剤のいずれでもよい。放射線治療の適切な種類及び線量の決定も、当技術分野の技量内にあるか、比較的容易に決定できる。
【０１４１】
異常なアポトーシスと関連する種々の病態の治療は、一般的に以下の２つの主な因子により制限されている：（１）薬剤耐性の発生及び（２）公知の治療剤の毒性。特定の癌において、例えば、化学剤及び放射線療法への耐性が、アポトーシスの阻害と関連することが示されている。いくつかの治療剤は、非特異的リンパ球毒性、腎及び骨髄毒性を含む有害な副作用を有する。
【０１４２】
本明細書に記載される方法は、これらの問題の両方に対処する。薬剤耐性は、治療効果を得るのに要する用量が増加する場合であるが、本明細書に記載される化合物を公知の薬剤と共投与することにより克服される。本明細書に記載される化合物は、標的細胞を公知の薬剤に感作する（逆も同様）ので、治療効果を得るのに必要なこれらの薬剤は少なくなる。
【０１４３】
請求項記載の化合物の感作機能は、公知の治療剤の毒性作用に関連する問題にも対処する。公知の薬剤に毒性がある場合、全ての場合で投与される用量を制限することが望ましく、薬剤耐性により必要な用量が増えた場合特に望ましい。請求項記載の化合物が公知の薬剤と共投与される場合、それらは必要とされる用量を減少させ、それは、また、有害作用を減少させる。
【実施例】
【０１４４】
全般的に説明されている本発明は、以下の実施例を参照してより容易に理解されるだろうが、実施例は、本発明の特定の態様及び実施形態の説明の目的のみに含められており、本発明を限定しないものとする。他に示されない限り、利用したＨＰＬＣ方法は以下の通りである：Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ−１８カラム、４．６×１５０ｍｍ、３．５ミクロン、２５℃、１．０ｍＬ／分、Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）中５％ＭｅＣＮからＨ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）中９５％ＭｅＣＮへの２５分勾配、次いで、Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）中９５％ＭｅＣＮで１０分間、次いで、Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）中５％ＭｅＣＮに５．０分にわたり平衡化である。句「Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）」は当技術分野で認識されており、０．１％ｖ／ｖトリフルオロ酢酸を含む水を指す。
【０１４５】
実施例１−３−クロロ−Ｎ−（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）カルバモチオイル）ベンズアミドの調製
【化１８】
0006486364.tif 000024
３−クロロベンゾイルクロリド（２００ｇ、１．１４ｍｏｌ）をアセトニトリル（４．５Ｌ）に溶解させ、この混合物を含む反応容器を氷／水浴中で冷却した。チオシアン酸カリウム（１２２ｇ、１．２６ｍｏｌ、１．１０当量）を反応混合物に加えた。１５分後に冷却浴を反応容器から外し、生じたスラリーを室温でおよそ１時間撹拌した。次に、３−クロロ−５−フルオロアニリン（１３８ｍＬ、１．３７ｍｏｌ、１．２当量）を、アセトニトリル（１３８ｍＬ）中の溶液として５分かけて加えた。次いで、反応混合物を室温で一晩撹拌し、その後、水（４．３０Ｌ）でクエンチし、次いで室温で１時間撹拌した。生じた固体を濾過により回収し、アセトニトリル／水（体積で１／１の混合物、７８０ｍＬ）ですすいだ。固体を真空中６０℃で乾燥させると、３９０ｇ（収率９９％）の標記化合物を固体として与えた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．５（ｓ，１Ｈ），１１．９（ｓ，１Ｈ），８．０１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１．８），７．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８），７．６９（ｍ，３Ｈ），７．５６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．８），７．３４（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．７，１．８）．ＨＰＬＣ：２３．７３分で、純度９９％超。
【０１４６】
実施例２−結晶性の３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドアセトン溶媒和物の調製
【化１９】
0006486364.tif 000025
３−クロロ−Ｎ−（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）カルバモチオイル）ベンズアミド（７５ｇ、２１９ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（ＴＢＭＥ）（１．１Ｌ）中の懸濁液を５０℃に加熱した。次に、５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（３９．６ｇ、２６２ｍｍｏｌ、１．２０当量）及びＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ）（６４．２ｇ、３２８ｍｍｏｌ、１．５０当量）を加えた。生じた反応混合物を５０℃で１時間撹拌し、ＥｔＯＡｃ（１．０Ｌ）と水（１．０Ｌ）で希釈した。有機抽出物を、飽和塩化ナトリウム水溶液（０．５Ｌ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。生じた残渣をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で希釈し、この混合物を５０℃に温め、次いでＣｅｌｉｔｅに通して濾過した。次に、濾液をおよそ７５ｍＬに濃縮し、ヘキサン（７５０ｍＬ）でゆっくりと希釈した。生じた混合物を室温で１時間撹拌し、濾過した。生じた固体をアセトン（１００ｍＬ）中で加熱し、濾過し、ヘキサン（１００ｍＬ）で希釈し、透明な溶液ができるまで生じた混合物を加熱した。次に、混合物をヘキサン（３００ｍＬ）でさらに希釈し、室温で一晩撹拌した。生じた固体を濾過により回収し、ヘキサン（１００ｍＬ）ですすぎ、真空中室温で乾燥させると、（２５．１ｇ、収率２５％）の結晶性の３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドアセトン溶媒和物を与えた。１Ｈ  ＮＭＲ分析により、３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドとアセトンとのモル比が３対２であることが示される。標記化合物の１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１３．３（ｓ，１Ｈ），１０．７（ｓ，１Ｈ），１０．０（ｓ，１Ｈ），７．９０（ｓ，１Ｈ），７．８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６），７．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４），７．５８（ｍ，２Ｈ），７．０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４），６．０３（ｓ，１Ｈ），２．０５（ｓ，４Ｈ，アセトン）。ＨＰＬＣ：２６．０８分で、純度９７．６％。
【０１４７】
標記組成物のＸ線粉末ディフラクトグラムを図１に与える。標記組成物の示差走査熱量測定曲線を、熱重量分析曲線と共に、図２に与える。図１におけるＸ線粉末ディフラクトグラムの表にした特性を以下の表１に与えるが、それは、回折角度２θ、面間隔ｄ、及び相対強度（最大強度のピークに対するパーセンテージとして表される）を列記する。
【０１４８】
【表６】
0006486364.tif 000026
【０１４９】
実施例３−３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドの結晶形態Ｉの調製
３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミド、アセトン溶媒和物（１６ｇ）を乾燥させると（６０℃／１０トル）、３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドを、本明細書で形態Ｉと称する結晶性固体として与えた。解析的分析により、結晶性固体中の溶媒和物分子は確認されなかった。標記化合物の１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１３．３（ｓ，１Ｈ），１０．７（ｓ，１Ｈ），１０．０（ｓ，１Ｈ），７．９０（ｓ，１Ｈ），７．８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６），７．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４），７．５８（ｍ，２Ｈ），７．０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４），６．０３（ｓ，１Ｈ）。ＨＰＬＣ：２６．０８分で、純度９７．６％。
【０１５０】
標記組成物のＸ線粉末ディフラクトグラムを図３に与える。標記組成物の示差走査熱量測定曲線を、熱重量分析曲線と共に図４に与える。図３におけるＸ線粉末ディフラクトグラムの表にした特性を以下の表２に与えるが、それは、回折角度２θ、面間隔ｄ、及び相対強度（最大強度のピークに対するパーセンテージとして表される）を列記する。
【０１５１】
【表７】
0006486364.tif 000027
【０１５２】
実施例４−３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドの結晶形態ＩＩの調製
３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミド、アセトン溶媒和物（０．５００ｇ）をＥｔＯＨ（５ｍＬ）に溶解させ、４０℃に温めた。混合物を、セライトに通す濾過により透明にし、次いで、４０℃のＥｔＯＨ／水（体積で１／１、１．２５ｍＬ）で希釈した。懸濁液を、４０℃のＥｔＯＨ／水（体積で１／１、５ｍＬ）でさらに希釈し、次いで、混合物を室温に放冷し、撹拌を４日間続けた。生じた懸濁液を濾過し、ＥｔＯＨ／水（体積で１／１、５ｍＬ）ですすぎ、乾燥させると（６０℃／１０トル）、３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドを、本明細書で形態ＩＩと称される結晶性固体として与えた。解析的分析により、結晶性固体中の溶媒和物分子は確認されなかった。
【０１５３】
標記組成物のＸ線粉末ディフラクトグラムを図５に与える。標記組成物の示差走査熱量測定曲線を図６に与える。図５におけるＸ線粉末ディフラクトグラムの表にした特性を以下の表３に与えるが、それは、回折角度２θ、面間隔ｄ、及び相対強度（最大強度のピークに対するパーセンテージとして表される）を列記する。
【０１５４】
【表８】
0006486364.tif 000028
【０１５５】
【表９】
0006486364.tif 000029
【０１５６】
実施例５−３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドの結晶形態ＩＩを調製する代替手順
３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドアセトン溶媒和物（１７６ｇ）をＥｔＯＨ（８７５ｍＬ）に溶解させ、４０℃に温めた。混合物を、セライトに通す濾過により透明にし、次いで、４０℃のＥｔＯＨ／水（体積で１／１の混合物、１７５ｍＬ）で希釈した。３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドの形態ＩＩの結晶（４３７ｍｇ）を、混合物に加えた。次に、懸濁液を、４０℃のＥｔＯＨ／水（体積で１／１の混合物、７００ｍＬ）で４０分かけてさらに希釈し、次いで、混合物を室温に放冷し、撹拌を一晩続けた。最後に、生じた懸濁液を濾過し、単離した残渣をＥｔＯＨ／水（体積で１／１の混合物、５００ｍＬ）ですすぎ、乾燥させると（６０℃／１０トル）、１３０ｇ（７４％回収）の３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドを、結晶性の固体形態ＩＩとして与えた。解析的分析により、結晶性固体中に溶媒和物分子は確認されなかった。
【０１５７】
標記組成物のＸ線粉末ディフラクトグラムを図７に与える。標記組成物の示差走査熱量測定曲線を図８に与える。図７におけるＸ線粉末ディフラクトグラムの表にした特性を以下の表４に与えるが、それは、回折角度２θ、面間隔ｄ、及び相対強度（最大強度のピークに対するパーセンテージとして表される）を列記する。
【０１５８】
【表１０】
0006486364.tif 000030
【０１５９】
実施例６−３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン−１３Ｃ）ベンズアミド−１，２，３，４，５，６−１３Ｃ６の調製
標記化合物を以下の手順に従って調製した。
【０１６０】
パートＩ：３−クロロ安息香−１，２，３，４，５，６−１３Ｃ６酸の調製
【化２０】
0006486364.tif 000031
１−クロロ−３−ヨードベンゼン−１，２，３，４，５，６−１３Ｃ６（１ｇ、４．１ｍｍｏｌ）の、−７８℃の窒素雰囲気下の無水テトラヒドロフラン（１２ｍＬ）溶液に、２．０Ｍのイソプロピルマグネシウムクロリド（２．３ｍＬ、４．５ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液を５分かけて滴加した。生じた混合物を−７８℃の温度で１０分間撹拌し、次いで、二酸化炭素ガスを溶液にバブリングし、反応全体を通して二酸化炭素バブリングの安定した流れを維持した。次に、反応混合物を−７８℃で１５分間撹拌し、次いで、反応容器を冷却浴から除いた。反応混合物が周囲温度まで温まると、反応溶液をジエチルエーテル（４０ｍＬ）で希釈し、生成物を２Ｍ水酸化ナトリウム（３×２０ｍＬ）に抽出した。水性抽出物を合わせ、容器を氷浴に入れることにより冷却し、次いで、冷却された容器中の水性抽出物を６Ｍ塩酸により酸性化した。生成物を、ジエチルエーテル（３×２０ｍＬ）を使用して水性抽出物から抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮すると、標記化合物（６００ｍｇ、９０％）を与えた。ＥＳＩ  ｍ／ｚ  １６１．０７，１６３．０４（Ｍ−Ｈ）−。
【０１６１】
パートＩＩ：３−クロロ−Ｎ−（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）カルバモチオイル−１３Ｃ）ベンズアミド−１，２，３，４，５，６−１３Ｃ６の調製
【化２１】
0006486364.tif 000032
３−クロロ安息香−１，２，３，４，５，６−１３Ｃ６酸（０．４４ｇ、２．７ｍｍｏｌ）の、０℃の窒素雰囲気下の無水ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の懸濁液に、塩化オキサリル（０．３４ｍＬ、４．１ｍｍｏｌ）を加え、それに続いて無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０μＬ）を加えた。いくらかの気体発生を認めた。反応容器を冷却浴から外し、反応混合物を放置して周囲温度まで温めた。反応混合物中の懸濁した固体はゆっくりと溶解した。次に、反応混合物を周囲温度で２時間撹拌した。次いで、揮発物を真空中で除去した。生じた残渣をトルエン（３×）と共沸させ、次いでクロロホルム（３×）と共沸させた。生じた油をアセトニトリル（８ｍＬ）に溶解させると、混合物を与え、それを氷水浴により冷却した。冷却した溶液に、チオシアン酸カリウム−１３Ｃ（０．２８ｇ、２．８ｍｍｏｌ）を一度に加えた。１５分後、反応容器を冷却浴から外し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。生じた懸濁液に３−クロロ−５−フルオロアニリン（０．３９ｇ、２．７ｍｍｏｌ）を加えた。アニリンの添加の後、反応混合物は非常に粘性になり、アセトニトリル（５ｍＬ）で希釈した。反応混合物を周囲温度で１時間撹拌した。次いで、水（１０ｍＬ）を加えると、固体が形成した。固体を濾去し、次いで固体を水で洗浄し、５０℃の真空オーブン中で一晩乾燥させると、標記化合物（８２０ｍｇ、収率８６％）を与えた。
【０１６２】
パートＩＩＩ：３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン−１３Ｃ）ベンズアミド−１，２，３，４，５，６−１３Ｃ６の調製
【化２２】
0006486364.tif 000033
３−クロロ−Ｎ−（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）カルバモチオイル−１３Ｃ）ベンズアミド−１，２，３，４，５，６−１３Ｃ６（０．７７ｇ、２．２ｍｍｏｌ）の３５℃のメチルｔ−ブチルエーテル（５ｍＬ）中の懸濁液に、５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（０．４ｇ、２．６ｍｍｏｌ）を加え、それに続いてＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（０．６５ｇ、３．３ｍｍｏｌ）を加えた。生じた懸濁剤を３時間３５℃で撹拌し、その間に、固体を反応容器の側面から周期的にこすり落とした。次に、反応混合物を、メチルｔ−ブチルエーテルとブラインとの間で分配し、有機層を分離して、硫酸ナトリウムで乾燥させ、セライトに通して濾過し、次いで、粗いシリカ上で濃縮した。混合物を、ヘキサン中０％から１０％ｖ／ｖ酢酸エチルへの勾配で溶離させるカラムクロマトグラフィーにより精製すると、標記化合物（３２０ｍｇ、収率３０％）を与えた。
【０１６３】
実施例７−４−クロロ−Ｎ−（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）カルバモチオイル）ベンズアミドの調製
【化２３】
0006486364.tif 000034
４−クロロベンゾイルクロリド（１０．２ｇ、５８．５ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（２３０ｍＬ）に溶解させ、この混合物を含む反応容器を氷／水浴中で冷却した。この混合物に、チオシアン酸カリウム（６．２５ｇ、６４．４ｍｏｌ、１．１０当量）を加えた。１５分後、冷却浴を反応容器から外し、生じた反応スラリーを室温でおよそ１時間撹拌した。３−クロロ−５−フルオロアニリン（７．０５ｍＬ、７０．２ｍｏｌ、１．２当量）を、アセトニトリル（７ｍＬ）中の溶液として５分かけて反応混合物に加えた。次に、反応混合物を室温で一晩撹拌し、次いで、水（２３０ｍＬ）でクエンチし、生じた混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を濾過して固体を回収し、単離した固体をアセトニトリル／水（体積で１／１の混合物、５０ｍＬ）ですすぎ、生じた固体を真空中６０℃で乾燥させると、２０．５ｇの標記化合物を固体として与えた。標記化合物の１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．５（ｓ，１Ｈ），１１．８（ｓ，１Ｈ），８．０１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１．８），７．９６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．６），７．６７（ｍ，２Ｈ），７．５９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．６），７．３３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４）．ＨＰＬＣ：２３．５２分で、純度９９％超。
【０１６４】
実施例８−４−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドの調製
【化２４】
0006486364.tif 000035
４−クロロ−Ｎ−（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）カルバモチオイル）ベンズアミド（２０．５ｇ、５９．７ｍｍｏｌ）のＴＢＭＥ（５００ｍＬ）中の懸濁液を５０℃に加熱した。５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（１０．８ｇ、７１．７ｍｍｏｌ、１．２０当量）及びＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ）（１７．６ｇ、８９．６ｍｍｏｌ、１．５０当量）を加えた。生じた反応混合物を４０℃で３時間撹拌し、次いで、飽和塩化ナトリウム水溶液（０．５Ｌ）で希釈した。生じた混合物の有機層を単離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。生じた残渣をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈し、この混合物を５０℃に温め、次いでヘプタン（２０ｍＬ）で希釈した。次に、熱源を外し、混合物を室温に放冷し、次いで氷／水浴を反応容器に当てて、沈殿に影響を与えた。生じた固体を濾過により回収し、ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（体積で１／１の混合物、２０ｍＬ）ですすぎ、室温で風乾した。次いで、固体をＥｔＯＨ（８０ｍＬ）に溶解させ、生じた混合物を４０℃に温めた。ＥｔＯＨ／水（体積で１／１の混合物、８０ｍＬ）を混合物にゆっくりと４０分かけて加えた。次いで、熱源を反応容器から外し、反応混合物を室温で２日間撹拌した。次いで、反応混合物を濾過し、回収した固体をＥｔＯＨ／水（体積で１／１の混合物、１５ｍＬ）ですすぎ、乾燥させると（６０℃／１０トル）、標記化合物（１５．２．ｇ、収率５７％）を与えた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）の表題の化合物：δ１３．３（ｓ，１Ｈ），１０．７（ｓ，１Ｈ），１０．０（ｓ，１Ｈ），７．９０（ｓ，１Ｈ），７．９０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４），７．７２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．５），７．６３（ｍ，３Ｈ），７．０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．５），６．００（ｓ，１Ｈ）．ＨＰＬＣ：２６．０２分で、純度９８．６％。
【０１６５】
実施例９−ＡＴＰアーゼ及びラモス細胞に対する生物学的活性
典型的な化合物を、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ及びラモス細胞に対する活性に関して試験した。実験手順及び結果を以下に記載する。
【０１６６】
パートＩ
以下の表５の化合物を、化合物がＡＴＰ合成を阻害する能力を測定して、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼに対する活性に関して試験した。さらに、化合物を、ラモス細胞中で細胞傷害性に関して評価した。生物学的活性試験の結果を以下の表５に示す。ＡＴＰ合成におけるＦ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ活性の阻害及びラモス細胞中の細胞傷害性を、Ｋ．Ｍ．Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２００５，１２，４８５−４９６に記載の手順に従って測定した。
【０１６７】
【表１１】
0006486364.tif 000036
【０１６８】
パートＩＩ
化合物、３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドのＦ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ及びラモス細胞に対する活性を、パートＩに記載のアッセイ手順を複数回実施することにより評価した。詳細には、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼに対する活性を、１２の独立した実験で、化合物がＡＴＰ合成を阻害する能力を測定することにより評価した。ラモス細胞に対する細胞傷害性は、１３の独立した実験で測定した。パートＩの手順と一致して、化合物をジメチルスルホキシドに溶解させて溶液を形成し、それを、Ｆ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ又はラモス細胞に適用し、アッセイを、Ｋ．Ｍ．Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２００５，１２，４８５−４９６に記載の手順に従って実施した。
【０１６９】
実験手順の複数の反復から得たＩＣ５０値（ＡＴＰ合成におけるＦ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ活性の阻害）を平均化した。ＡＴＰ合成におけるＦ１Ｆ０−ＡＴＰアーゼ活性の阻害の、３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドの平均ＩＣ５０値を、２７±１．７ｎＭであると決定した。
【０１７０】
同様に、実験手順の複数の反復から得たＥＣ５０値（ラモス細胞に対する細胞傷害性）を平均化した。ラモス細胞に対する細胞傷害性の、３−クロロ−Ｎ−（（（３−クロロ−５−フルオロフェニル）アミノ）（（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）メチレン）ベンズアミドの平均ＥＣ５０値を、５９±６ｎＭであると決定した。
【０１７１】
実施例１０−チトクロムＰ４５０  ２Ｄ６の阻害
以下の表６の化合物を、チトクロムＰ４５０  ２Ｄ６（以下「ＣＹＰ２Ｄ６」）に対する活性に関して試験した。手順及び結果を以下に記載する。
【０１７２】
パートＩ−試験手順：
ヒト肝臓ミクロソーム（Ｇｉｂｃｏ、０．２ｍｇ／ｍＬ）及びＭｇＣｌ２（５ｍＭ）をリン酸カリウム緩衝液（１０ｍＭ）中に含むマスター溶液を調製した。ミクロソーム溶液のアリコート（１６９μＬ）に、アセトニトリル（１μＬ）及びＤＭＳＯ（１μＬ）中の試験化合物を加えて、０、０．００５、０．０５、０．２５、１、５、１０、及び２５μＭの最終試験化合物濃度を与えた。
【０１７３】
超純水（２０μＬ）中のＮＡＤＰＨ（１０ｍＭ）を加え、この混合物を３７℃で３０分間インキュベートした。次いで、１μＬのアセトニトリル及び９μＬの超純水に溶解させた酵素基質（デキストロメトルファン）を加えることにより、酵素反応を開始した。最終基質濃度は１０μＭであった。
【０１７４】
２０分後、インキュベーション混合物を、イミプラミン（２００ｎＭ）、ラベタロール（２００ｎＭ）、及びケトプロフェン（２μＭ）を内部標準として含む３体積の冷メタノールで希釈した。試料を、１６，０００ｇで１０分間遠心分離し、次いで、上清のアリコート（２００μＬ）を除き、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより分析した。
【０１７５】
Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣ及びＡＰＩ  ４０００質量分析計を利用して、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析を二連で実施した。液体クロマトグラフィーは、ガードカラムを備えたＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｃ１８、５μｍ、５０×２ｍｍカラムを利用した。溶媒Ａは、０．１％ｖ／ｖギ酸を含むアセトニトリルであった。溶媒Ｂは、０．１％ｖ／ｖギ酸を含む水であった。溶離は、毎分０．５ｍＬで実施した：０−２分、５％溶媒Ａ／９５％溶媒Ｂから１００％溶媒Ａへの勾配；２．０−２．２分、１００％溶媒Ａ；２．２−２．４分、１００％溶媒Ａから５％溶媒Ａ／９５％溶媒Ｂへの勾配；２．４−３．０分、溶媒５％Ａ／溶媒Ｂ９５％。
【０１７６】
代謝物の形成をピーク面積により評価し、データを、Ｐｒｉｓｍ５．０ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）を利用して分析した。試験化合物を含まない対照試料に比べた、形成した代謝物の量を、試験化合物濃度の関数としてプロットした。
【０１７７】
試験化合物のＩＣ５０値を、試験化合物が代謝物形成の５０％阻害を授ける濃度として、プロットから決定した。
【０１７８】
パートＩＩ−結果：
化合物１及び化合物２のＩＣ５０阻害値を、表６に与える。化合物１は、実験において、化合物２と比べて、ＣＹＰ２Ｄ６の阻害においておよそ３分の１の効力であった。
【０１７９】
【表１２】
0006486364.tif 000037
【０１８０】
引用による組み込み
本明細書に言及された特許文書及び科学記事のそれぞれの開示全体は、全ての目的のため引用により組み込まれる。
【０１８１】
等価物
本発明は、その趣旨又は基本的な特徴から逸脱せずに、他の具体的な形態で具体化できる。したがって、前記実施形態は、あらゆる点で、本明細書に記載される本発明を限定するのではなく説明的であるとみなすべきである。そのため、本発明の範囲は、前記説明よりも、添付される特許請求の範囲により示され、請求項の同等性の意味及び範囲内にある変化は全て、本発明に包含されるものとする。
【図１】
0006486364.tif 000053
【図２】
0006486364.tif 000054
【図３】
0006486364.tif 000055
【図４】
0006486364.tif 000056
【図５】
0006486364.tif 000057
【図６】
0006486364.tif 000058
【図７】
0006486364.tif 000059
【図８】
0006486364.tif 000060