(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のＩＯＣ−２２またはＩＯＣ−６０として示された式を有する複合体。
【化１】
0006491649.tif 000335
【請求項２】
糖尿病を治療するための医薬の製造における請求項１に記載の複合体の使用。
【請求項３】
Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、妊娠性糖尿病、耐糖能異常または前糖尿病を治療するための医薬の製造における、請求項１に記載の複合体の使用。
【請求項４】
ＩＯＣ−２２またはＩＯＣ−６０として示された式を有する複合体、および医薬として許容される担体を含む組成物。
【請求項５】
糖尿病の治療のための請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記糖尿病がＩ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病または妊娠性糖尿病である請求項５に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１３年１０月４日出願の米国暫定特許出願６１/８８６，７１７号（これは、その全体が本明細書に組み込まれる。）の恩恵を主張するものである。
【０００２】
本発明は、ＣｏｎＡなどの外因性多価糖類結合性分子の非存在下に投与を必要とする対象者に投与する場合であっても、グルコースまたはα−メチルマンノースなどの糖類の全身濃度に応答する薬物動態（ＰＫ）および／または薬力学（ＰＤ）プロファイルを示すフコースを含むインシュリン複合体に関する。特に、本発明は、リンカーの各腕が独立に糖類を含むリガンドに結合しており、少なくとも一つのリガンドへの糖類がフコースである少なくとも一つの二座リンカーに共有結合したインシュリン分子を含むインシュリン複合体に関するものである。
【背景技術】
【０００３】
先行技術（例えば、酵素的に不安定なカプセルからの薬剤放出について記載しているＳｅａｒｓに対する米国特許第４，１４５，４１０号）で公知の「徐放」薬剤送達系の大半が、ヒト身体中に存在する分子指標（例えば、代謝物）の量に正比例する間隔および濃度で患者に薬剤を提供することができない。そうして、これらの先行技術システムにおける薬剤は文字通りに「制御される」のではなく、単に外部および内部因子から独立の持続放出方式で提供される。注射でのインシュリンによる糖尿病の治療は、インシュリンの制御されない持続放出が望ましくない公知で研究し尽くされた例である。実際、単なるホルモンの置き換えは、この疾患に関連する病的後遺症を防ぐには十分ではないことは明らかである。これらの後遺症の発生は、患者が経験する多様な血糖濃度に比例する外因性インシュリンを提供できないことを反映するものと考えられる。この問題を解決することを目的として、より生理的なインシュリン送達システムを開発するいくつかの生理的および生体工学的アプローチが提示されている（例えば、Ｂｒｏｗｎｌｅｅらに対する米国特許第４，３４８，３８７号；Ｔａｙｌｏｒらに対する米国特許第５，８３０，５０６号、同５，９０２，６０３号および同６，４１０，０５３号およびＺｉｏｎらに対する米国特許出願公開番号２００４−０２０２７１９を参照する）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】米国特許第４，１４５，４１０号
【特許文献２】米国特許第４，３４８，３８７号
【特許文献３】米国特許第５，８３０，５０６号
【特許文献４】米国特許第５，９０２，６０３号
【特許文献５】米国特許第６，４１０，０５３号
【特許文献６】米国特許出願公開番号２００４−０２０２７１９
【発明の概要】
【０００５】
これらのシステムのそれぞれが、多価グルコース結合性分子（例えば、レクチンＣｏｎＡ）および多価グルコース結合性分子によって可逆的に結合する糖系成分の組み合わせに依存する。残念ながら、ＣｏｎＡおよび他の容易に入手可能なレクチン類の多くが、リンパ球増殖を刺激する能力を有する。特定の種類のリンパ球の表面上の炭水化物受容体に結合することで、これらのいわゆる「分裂促進性」レクチンは、リンパ球の有糸分裂を誘発することにより、それらを増殖させ得る。ＣｏｎＡなどのほとんどの分裂促進性レクチンは、選択的Ｔ細胞マイトジェンである。いくつかのレクチンは選択性が低く、Ｔ細胞とＢ細胞の両方を刺激する。分裂促進レクチンへの局所もしくは全身イン・ビボ曝露により、炎症、細胞毒性、マクロファージ消化、およびアナフィラキシーなどのアレルギー反応が生じ得る。さらに、植物レクチンは、特に免疫原性が強く、高力価の抗レクチン特異的抗体の産生を生じることが知られている。従って、分裂促進レクチンは、それの放出を防止するのにかなり注意を払わない限り、イン・ビボでの方法および機器に天然型で用いることが不可能であることは明らかである。例えば、米国特許第５，８３０，５０６号において、Ｔａｙｌｏｒは、ＣｏｎＡの使用に関与する毒性リスクに焦点を当て、機器内外で自由に拡散するのにグルコースおよびインシュリン分子も必要とするＣｏｎＡを医薬送達機器内に含ませることの重要性および難しさを強調している。レクチン類を必要としない別の薬剤徐放システムが提供されるのであれば、レクチン類のこれらおよび他のイン・ビボ使用に関連するリスクおよび困難は大きく軽減されるものと考えられる。
【０００６】
本発明は、ＣｏｎＡなどの外因性多価糖類結合性分子の非存在下に投与を必要とする対象者に投与した場合に、グルコースまたはα−メチルマンノースなどの糖類の全身濃度に応答する薬物動態（ＰＫ）および／または薬力学（ＰＤ）プロファイルを示すフコースを含むインシュリン複合体を提供する。その複合体は、少なくとも一つの２本の腕を有する分岐リンカー（二座リンカー）に共有結合的に結合したインシュリンまたはインシュリン類縁体分子を含み、各腕は独立に糖類を含むリガンドに結合しており、そのリンカーの少なくとも一つのリガンドがフコースである。特定の実施形態において、リンカーは非重合体である。特定の実施形態において、複合体は、多分散性指数１を有し、約２０，０００Ｄａ未満の分子量を有する。特定の実施形態において、当該複合体は長期作用性である（すなわち、可溶性組換えヒトインシュリン（ＲＨＩ）より長い持続性のＰＫプロファイルを示す）。
【０００７】
本明細書に開示の複合体は、外因性糖類結合性分子の非存在下に投与を必要とする対象者に投与した場合に、血清糖類の血清濃度に感受性の薬力学（ＰＤ）または薬物動態（ＰＫ）プロファイルを示す。特定の態様において、当該血清糖類はグルコースまたはα−メチルマンノースである。さらに別に態様において、複合体は、投与を必要とする対象者に投与した場合に、６０または７０ｍｇ/ｄＬ以下の血清グルコース濃度で内因性糖類結合性分子に結合する。複合体の内因性糖類結合性分子への結合は、血清糖類の血清濃度に対して感受性である。別の態様において、その複合体は、６０、７０、８０、９０または１００ｍｇ/ｄＬより高い血清糖類濃度でインシュリン受容体に結合する能力を有する。６０または７０ｍｇ/ｄＬの血清糖類濃度では、複合体はインシュリン受容体より内因性糖類結合性分子に優先的に結合し、血清糖類の血清濃度が６０または７０ｍｇ/ｄＬから上昇するに連れて、複合体の内因性糖類結合性分子への結合が減少し、複合体のインシュリン受容体への結合が増加する。
【０００８】
従って、本発明は、第１および第２の腕を有する少なくとも一つの分岐リンカーに共有結合的に結合したインシュリンまたはインシュリン類縁体分子を含む複合体であって、前記第１の腕が第１の糖類を含むもしくはそれからなる第１のリガンドに連結しており、前記第２の腕が第２の糖類を含むもしくはそれからなる第２のリガンドに連結しており、少なくとも一つの分岐リンカーにおける前記第１の糖類がフコースである複合体を提供する。さらに提供されるものは、前記複合体および医薬として許容される担体、ならびに適宜に１以上の医薬として許容される賦形剤（ｉｎｃｉｐｉａｎｔｓ）、保存剤、亜鉛塩および／または界面活性剤を含む組成物である。
【０００９】
複合体の特定の態様において、第２の糖類はフコース、マンノース、グルコサミン、またはグルコースである。他の態様において、第２のリガンドは二糖類、三糖類、四糖類、または分岐三糖類を含む。別の態様において、第２のリガンドはジマンノース、トリマンノース、テトラマンノース、または分岐トリマンノースを含む。特定の態様において、第１の糖類と第２の糖類の両方がフコースである。特定の態様において、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類は分岐トリマンノースである。特定の態様において、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はトリマンノースである。特定の態様において、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はグルコースである。特定の態様において、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はマンノースである。特定の態様において、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はジマンノースである。特定の態様において、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はトリマンノースである。特定の態様において、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はテトラマンノースである。
【００１０】
特定の態様において、前記少なくとも一つの分岐リンカーは、インシュリンまたはインシュリン類縁体分子の位置Ａ１；インシュリンまたはインシュリン類縁体分子の位置Ｂ１；インシュリンまたはインシュリン分子の位置Ｂ２９；インシュリン類縁体分子の位置Ｂ２８；またはインシュリン類縁体分子の位置Ｂ３のアミノ酸に共有結合的に連結されている。
【００１１】
複合体のさらに別の態様において、インシュリンまたはインシュリン類縁体は、糖類を含むもしくはそれからなるリガンドを含む直鎖もしくは分岐リンカーにさらに共有結合的に連結されている。特定の態様において、糖類はフコース、マンノース、グルコサミン、またはグルコースである。他の態様において、リガンドは二糖類、三糖類、四糖類、または分岐三糖類を含む。別の態様において、リガンドはジマンノース、トリマンノース、テトラマンノース、または分岐トリマンノースを含む。
【００１２】
複合体のさらに別の態様において、複合体は下記一般式（Ｉ）を有する。
【化１】
0006491649.tif 000002
【００１３】
式中、
（ｉ）
【化２】
0006491649.tif 000003
【００１４】
の各場合は、複合体の分岐内の可能な繰り返しを表し；
（ｉｉ）
【化３】
0006491649.tif 000004
【００１５】
の各場合は独立に、共有結合、炭素原子、ヘテロ原子、またはアシル、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環からなる群から選択される置換されていても良い基であり；
（ｉｉｉ）Ｔの各場合は独立に、共有結合または２価の直鎖もしくは分岐の飽和もしくは不飽和の置換されていても良いＣ１−３０炭化水素鎖であり、Ｔの１以上のメチレン単位は独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、複素環基、アリール基、またはヘテロアリール基によって置き換わっていても良く；
（ｉｖ）Ｒの各場合は独立に、水素、好適な保護基、またはアシル部分、アリールアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分もしくはヘテロ脂肪族部分であり；
（ｖ）−Ｂは−Ｔ−ＬＢ−Ｘであり、Ｘの各場合は独立に糖類を含むリガンドであり、ＬＢの各場合は独立に、共有結合またはＴとＸとの共有結合から誘導される基であり；
（ｖｉ）ｎは１、２、または３であり、
ただし、前記インシュリンまたはインシュリン類縁体は少なくとも一つのリンカーと結合し、リガンドＸの一つが糖類を含み、それはフコースである。
【００１６】
複合体の特定の態様において、少なくとも一つのリンカーにおける少なくとも一つの糖類がフコースであり、他の糖類もしくは複数の糖類はフコース、マンノース、グルコサミンまたはグルコースである。他の態様において、少なくとも一つのリンカーにおける少なくとも一つの糖類はフコースであり、他の糖類または複数の糖類は二糖類、三糖類、四糖類または分岐三糖類である。別の態様において、少なくとも一つのリンカーにおける少なくとも一つの糖類はフコースであり、他の糖類または複数の糖類はジマンノース、トリマンノース、テトラマンノースまたは分岐トリマンノースである。さらに、前記複合体および医薬として許容される担体、および適宜に１以上の医薬として許容される賦形剤（ｉｎｃｉｐｉａｎｔｓ）、保存剤、亜鉛塩および／または界面活性剤を含む組成物が提供される。
【００１７】
複合体の特定の態様において、ｎは１であり、Ｘの第１の場合における糖類はフコースであり、Ｘの第２の場合における糖類はフコース、マンノース、グルコサミンまたはグルコースである。他の態様において、Ｘの第１の場合における糖類はフコースであり、Ｘの第２の場合における糖類は二糖類、三糖類、四糖類または分岐三糖類である。別の態様において、Ｘの第１の場合における糖類はフコースであり、Ｘの第２の場合における糖類はジマンノース、トリマンノース、テトラマンノースまたは分岐トリマンノースである。さらに、前記複合体および医薬として許容される担体、および適宜に１以上の医薬として許容される賦形剤（ｉｎｃｉｐｉａｎｔｓ）、保存剤、亜鉛塩および／または界面活性剤を含む組成物が提供される。
【００１８】
複合体の特定の態様において、ｎは２であり、Ｘの第１の場合における糖類はフコースであり、Ｘの第２、第３および第４の場合における糖類は独立にフコース、マンノース、グルコサミン、グルコース、二糖類、三糖類、四糖類、または分岐三糖類、ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノース、または分岐トリマンノースである。さらに、前記複合体および医薬として許容される担体、および適宜に１以上の医薬として許容される賦形剤（ｉｎｃｉｐｉａｎｔｓ）、保存剤、亜鉛塩および／または界面活性剤を含む組成物が提供される。
【００１９】
複合体の特定の態様において、ｎは３であり、Ｘの第１の場合における糖類はフコースであり、Ｘの第２、第３、第４、第５および第６の場合における糖類は独立にフコース、マンノース、グルコサミン、グルコース、二糖類、三糖類、四糖類、分岐三糖類、ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノース、または分岐トリマンノースである。さらに、前記複合体および医薬として許容される担体、および適宜に１以上の医薬として許容される賦形剤（ｉｎｃｉｐｉａｎｔｓ）、保存剤、亜鉛塩および／または界面活性剤を含む組成物が提供される。
【００２０】
複合体のさらに別の態様において、前記複合体は、下記一般式（ＩＩ）を含む。
【化４】
0006491649.tif 000005
【００２１】
式中、
（ｉ）
【化５】
0006491649.tif 000006
【００２２】
の各場合は、複合体の分岐内の可能な繰り返しを表し；
（ｉｉ）
【化６】
0006491649.tif 000007
【００２３】
の各場合は独立に、共有結合、炭素原子、ヘテロ原子、またはアシル、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環からなる群から選択される置換されていても良い基であり；
（ｉｉｉ）Ｔの各場合は独立に、共有結合または２価の直鎖もしくは分岐の飽和もしくは不飽和の置換されていても良いＣ１−３０炭化水素鎖であり、Ｔの１以上のメチレン単位は独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基によって置き換わっていても良く；
（ｉｖ）Ｒの各場合は独立に、水素、好適な保護基、またはアシル部分、アリールアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分もしくはヘテロ脂肪族部分であり；
（ｖ）−Ｂ１は−Ｔ−ＬＢ１−Ｘ１であり、Ｘ１はフコースを含むリガンドであり、ＬＢ１は共有結合またはＴのＸ１との共有結合から誘導される基であり；
（ｖｉ）−Ｂ２は−Ｔ−ＬＢ２−Ｘ２であり、Ｘ２は糖類を含むリガンドであり、その糖類はフコース、マンノースまたはグルコースであることができ；ＬＢ２は共有結合またはＴのＸ２との共有結合から誘導される基であり；
（ｖｉｉ）ｎは１、２または３である。
【００２４】
複合体の特定の態様において、Ｘ２はフコース、マンノース、グルコサミン、グルコース、二糖類、三糖類、四糖類、または分岐三糖類、ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノース、または分岐トリマンノースである。さらに、前記複合体および医薬として許容される担体、および適宜に１以上の医薬として許容される賦形剤（ｉｎｃｉｐｉａｎｔｓ）、保存剤、亜鉛塩および／または界面活性剤を含む組成物が提供される。
【００２５】
複合体のさらに別の態様において、前記二座リンカーは下記式を有する。
【化７】
0006491649.tif 000008
0006491649.tif 000009
0006491649.tif 000010
0006491649.tif 000011
0006491649.tif 000012
0006491649.tif 000013
0006491649.tif 000014
【００２６】
式中、各Ｘは独立に、糖類を含むリガンドであり、ただしインシュリンまたはインシュリン類縁体に結合した少なくとも一つの二座リンカー複合体は二座リンカーの少なくとも一方の腕上にフコースを含むリガンドＸを含む。さらに、前記二座リンカーおよび医薬として許容される担体、および適宜に１以上の医薬として許容される賦形剤（ｉｎｃｉｐｉａｎｔｓ）、保存剤、亜鉛塩および／または界面活性剤を有する前記複合体を含む組成物が提供される。
【００２７】
複合体のさらに別の態様において、各Ｘは独立に、下記式を有することができる。
【化８】
0006491649.tif 000015
0006491649.tif 000016
【００２８】
式中、波線は、その結合が二座リンカーを含む原子に連結されていることを示しており、ただしインシュリンまたはインシュリン類縁体に結合した少なくとも一つの二座リンカー複合体は二座リンカーの少なくとも一つの腕上にＥＤＦを含む。さらに、前記複合体および医薬として許容される担体、および適宜に１以上の医薬として許容される賦形剤（ｉｎｃｉｐｉａｎｔｓ）、保存剤、亜鉛塩および／または界面活性剤を含む組成物が提供される。
【００２９】
複合体のさらに別の態様において、複合体は、それぞれ第１および第２の腕を有する少なくとも二つの分岐リンカーに共有結合的に結合したインシュリンまたはインシュリン類縁体分子を含み、前記第１の腕は第１の糖類を含む第１のリガンドに連結されており、前記第２の腕は第２の糖類を含む第２のリガンドに連結されており、第１の糖類はフコースである。複合体の特定の態様において、第２の糖類は独立に、フコース、マンノース、グルコサミンまたはグルコースである。他の態様において、第２の糖類は独立に二糖類、三糖類、四糖類または分岐三糖類である。別の態様において、第２の糖類は独立にジマンノース、トリマンノース、テトラマンノースまたは分岐トリマンノースである。特定の態様において、第１の糖類および第２の糖類の両方がフコースである。特定の態様において、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類は分岐トリマンノースである。特定の態様において、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はトリマンノースである。特定の態様において、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はグルコースである。特定の態様において、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はマンノースである。特定の態様において、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はジマンノースである。特定の態様において、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はトリマンノースである。特定の態様において、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はテトラマンノースである。
【００３０】
上記複合体のさらに別の態様において、インシュリンまたはインシュリン類縁体分子のＡ１、Ｂ１、Ｂ２９、Ｂ２８およびＢ３から選択される二つのアミノ酸位置が二つのリンカーに共有結合的に連結されている。
【００３１】
複合体のさらに別の態様において、複合体は、それぞれ第１および第２の腕を有する少なくとも三つの分岐リンカーに共有結合的に結合しているインシュリンまたはインシュリン類縁体分子を含み、第１の腕は第１の糖類を含む第１のリガンドに連結されており、第２の腕は第２の糖類を含む第２のリガンドに連結されており、第１の糖類はフコースである。複合体の特定の態様において、第２の糖類は独立に、フコース、マンノース、グルコサミンまたはグルコースである。他の態様において、第２の糖類は独立に、二糖類、三糖類、四糖類または分岐三糖類である。別の態様において、第２の糖類は独立に、ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノースまたは分岐トリマンノースである。特定の態様において、第１の糖類および第２の糖類の両方はフコースである。特定の態様において、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類は分岐トリマンノースである。特定の態様において、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はトリマンノースである。特定の態様において、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はグルコースである。特定の態様において、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はマンノースである。特定の態様において、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はジマンノースである。特定の態様において、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はトリマンノースである。特定の態様において、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はテトラマンノースである。
【００３２】
上記複合体のさらに別の態様において、インシュリンまたはインシュリン類縁体分子のＡ１、Ｂ１、Ｂ２９、Ｂ２８およびＢ３から選択される三つのアミノ酸位置は、その三つのリンカーに共有結合的に連結されている。
【００３３】
複合体のさらに別の態様において、複合体は、それぞれ第１および第２の腕を有する少なくとも二つの分岐リンカーに結合した共有結合的にインシュリンまたはインシュリン類縁体分子を含み、第１の腕は第１の糖類を含む第１のリガンドに連結されており、第２の腕は第２の糖類を含む第２のリガンドに連結されており、二つのリンカーの一つの第１の糖類がフコースである。
【００３４】
複合体の特定の態様において、残りの第１の糖類および第２の糖類は独立に、フコース、マンノース、グルコサミンまたはグルコースである。他の態様において、残りの第１の糖類および第２の糖類は独立に、二糖類、三糖類、四糖類、または分岐三糖類である。別の態様において、残りの第１の糖類および第２の糖類は独立に、ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノースまたは分岐トリマンノースである。
【００３５】
特定の態様において、二つのリンカーのそれぞれにおいて第１の糖類および第２の糖類の両方がフコースである。特定の態様において、二つのリンカーのそれぞれにおいて、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類は分岐トリマンノースである。特定の態様において、二つのリンカーのそれぞれにおいて、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はトリマンノースである。特定の態様において、二つのリンカーのそれぞれにおいて、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はグルコースである。特定の態様において、二つのリンカーのそれぞれにおいて、二つのリンカーのそれぞれにおいて、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はマンノースである。特定の態様において、二つのリンカーのそれぞれにおいて、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はジマンノースである。特定の態様において、二つのリンカーのそれぞれにおいて、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はトリマンノースである。特定の態様において、二つのリンカーのそれぞれにおいて、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はテトラマンノースである。
【００３６】
特定の態様において、二つのリンカーのうちの一つにおいて第１の糖類および第２の糖類の両方がフコースであり、第２のリンカーにおいて第１の糖類および第２の糖類は独立にフコース、マンノース、グルコサミン、グルコース二糖類、三糖類、四糖類、または分岐三糖類ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノース、または分岐トリマンノースである。特定の態様において、二つのリンカーのうちの一つにおいて、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類は分岐トリマンノースであり、第２のリンカーにおいて、第１の糖類および第２の糖類は独立にフコース、マンノース、グルコサミン、グルコース二糖類、三糖類、四糖類、または分岐三糖類ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノース、または分岐トリマンノースである。特定の態様において、二つのリンカーのうちの一つにおいて、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はトリマンノースであり、第２のリンカーにおいて、第１の糖類および第２の糖類は独立にフコース、マンノース、グルコサミン、グルコース二糖類、三糖類、四糖類、または分岐三糖類ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノース、または分岐トリマンノースである。特定の態様において、二つのリンカーのうちの一つにおいて、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はグルコースであり、第２のリンカーにおいて、第１の糖類および第２の糖類は独立にフコース、マンノース、グルコサミン、グルコース二糖類、三糖類、四糖類、または分岐三糖類ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノース、または分岐トリマンノースである。特定の態様において、二つのリンカーのうちの一つにおいて、二つのリンカーのそれぞれにおいて第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はマンノースであり、第２のリンカーにおいて、第１の糖類および第２の糖類は独立にフコース、マンノース、グルコサミン、グルコース二糖類、三糖類、四糖類、または分岐三糖類ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノース、または分岐トリマンノースである。特定の態様において、二つのリンカーのうちの一つにおいて、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はジマンノースであり、第２のリンカーにおいて、第１の糖類および第２の糖類は独立にフコース、マンノース、グルコサミン、グルコース二糖類、三糖類、四糖類、または分岐三糖類ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノース、または分岐トリマンノースである。特定の態様において、二つのリンカーのうちの一つにおいて、第１の糖類はフコースであり、第２の糖類はトリマンノースであり、第２のリンカーにおいて、第１の糖類および第２の糖類は独立にフコース、マンノース、グルコサミン、グルコース二糖類、三糖類、四糖類、または分岐三糖類ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノース、または分岐トリマンノースである。特定の態様において、二つのリンカーのうちの一つにおいて、第１の糖類はフコースであり、第２のリンカーにおいて、第２の糖類はテトラマンノースであり、第１の糖類および第２の糖類は独立にフコース、マンノース、グルコサミン、グルコース二糖類、三糖類、四糖類、または分岐三糖類ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノース、または分岐トリマンノースである。
【００３７】
上記複合体のさらに別の態様において、インシュリンまたはインシュリン類縁体分子のＡ１、Ｂ１、Ｂ２９、Ｂ２８、およびＢ３から選択される二つのアミノ酸位置が、その二つのリンカーに共有結合的に連結されている。
【００３８】
複合体のさらに別の態様において、複合体は、それぞれ第１および第２の腕を有する少なくとも三つの分岐リンカーに共有結合的に結合したインシュリンまたはインシュリン類縁体分子を有し、第１の腕は第１の糖類を含む第１のリガンドに連結されており、第２の腕は第２の糖類を含む第２のリガンドに連結されており、三つのリンカーのうちの少なくとも一つの第１の糖類がフコースであり、残りの第１の糖類および第２の糖類が独立にフコース、マンノース、グルコサミンまたはグルコースである。他の態様において、残りの第１の糖類および第２の糖類は独立に、二糖類、三糖類、四糖類または分岐三糖類である。別の態様において、残りの第１の糖類および第２の糖類はジマンノース、トリマンノース、テトラマンノース、または分岐トリマンノースである。
【００３９】
上記複合体のさらに別の態様において、インシュリンまたはインシュリン類縁体分子のＡ１、Ｂ１、Ｂ２９、Ｂ２８およびＢ３から選択される三つのアミノ酸位置が、その三つのリンカーに共有結合的に連結されている。
【００４０】
さらに、ＩＯＣ−１、ＩＯＣ−２、ＩＯＣ−３、ＩＯＣ−４、ＩＯＣ−５、ＩＯＣ−６、ＩＯＣ−７、ＩＯＣ−８、ＩＯＣ−９、ＩＯＣ−１０、ＩＯＣ−１１、ＩＯＣ−１２、ＩＯＣ−１３、ＩＯＣ−１４、ＩＯＣ−１５、ＩＯＣ−１６、ＩＯＣ−１７、ＩＯＣ−１８、ＩＯＣ−１９、ＩＯＣ−２０、ＩＯＣ−２１、ＩＯＣ−２２、ＩＯＣ−２３、ＩＯＣ−２４、ＩＯＣ−２５、ＩＯＣ−２６、ＩＯＣ−２７、ＩＯＣ−２８、ＩＯＣ−２９、ＩＯＣ−３０、ＩＯＣ−３１、ＩＯＣ−３２、ＩＯＣ−３３、ＩＯＣ−３４、ＩＯＣ−３５、ＩＯＣ−３６、ＩＯＣ−３７、ＩＯＣ−３８、ＩＯＣ−３９、ＩＯＣ−４１、ＩＯＣ−４２、ＩＯＣ−４３、ＩＯＣ−４４、ＩＯＣ−４５、ＩＯＣ−４６、ＩＯＣ−４７、ＩＯＣ−４９、ＩＯＣ−５０、ＩＯＣ−５１、ＩＯＣ−５２、ＩＯＣ−５３、ＩＯＣ−５４、ＩＯＣ−５５、ＩＯＣ−５６、ＩＯＣ−５７、ＩＯＣ−５８、ＩＯＣ−５９、ＩＯＣ−６０、ＩＯＣ−６１、ＩＯＣ−６２、ＩＯＣ−６３、ＩＯＣ−６４、ＩＯＣ−６５、ＩＯＣ−６６、ＩＯＣ−６７、ＩＯＣ−６８、ＩＯＣ−６９、ＩＯＣ−７０、ＩＯＣ−７１、ＩＯＣ−７２、ＩＯＣ−７３、ＩＯＣ−７４、ＩＯＣ−７５、ＩＯＣ−７６、ＩＯＣ−７７、ＩＯＣ−７８、ＩＯＣ−７９、ＩＯＣ−８０、ＩＯＣ−８１、ＩＯＣ−８２、ＩＯＣ−８３、ＩＯＣ−８４、ＩＯＣ−８５、ＩＯＣ−８６、ＩＯＣ−８７、ＩＯＣ−８８、ＩＯＣ−８９、ＩＯＣ−９０、ＩＯＣ−９１、ＩＯＣ−９２、ＩＯＣ−９３、ＩＯＣ−９４、ＩＯＣ−９５、ＩＯＣ−９６、ＩＯＣ−９７、ＩＯＣ−９８、ＩＯＣ−９９またはＩＯＣ−１００について記載の式を有する複合体または複合体を含む組成物が提供される。
【００４１】
さらに、ＩＯＣ−１０１、ＩＯＣ−１０２、ＩＯＣ−１０３、ＩＯＣ−１０４、ＩＯＣ−１０５、ＩＯＣ−１０６、ＩＯＣ−１０７、ＩＯＣ−１０８、ＩＯＣ−１０９、ＩＯＣ−１１０、ＩＯＣ−１１１、ＩＯＣ−１１２、ＩＯＣ−１１３、ＩＯＣ−１１４、ＩＯＣ−１１５、ＩＯＣ−１１６、ＩＯＣ−１１７、ＩＯＣ−１１８、ＩＯＣ−１１９、ＩＯＣ−１２０、ＩＯＣ−１２１、ＩＯＣ−１２２、ＩＯＣ−１２３、ＩＯＣ−１２４、ＩＯＣ−１２５、ＩＯＣ−１２６、ＩＯＣ−１２７、ＩＯＣ−１２８、ＩＯＣ−１２９、ＩＯＣ−１３０、ＩＯＣ−１３１、ＩＯＣ−１３２、ＩＯＣ−１３３、ＩＯＣ−１３４、ＩＯＣ−１３５、ＩＯＣ−１３６、ＩＯＣ−１３７、ＩＯＣ−１３８、ＩＯＣ−１３９、ＩＯＣ−１４０、ＩＯＣ−１４１、ＩＯＣ−１４２、ＩＯＣ−１４３、ＩＯＣ−１４４、ＩＯＣ−１４５、ＩＯＣ−１４６、ＩＯＣ−１４７、ＩＯＣ−１４９、ＩＯＣ−１５０、ＩＯＣ−１５１、ＩＯＣ−１５２、ＩＯＣ−１５３、ＩＯＣ−１５４、ＩＯＣ−１５５、ＩＯＣ−１５６、ＩＯＣ−１５７、ＩＯＣ−１５８、ＩＯＣ−１５９、ＩＯＣ−１６０、ＩＯＣ−１６１、ＩＯＣ−１６２、ＩＯＣ−１６３、ＩＯＣ−１６４、ＩＯＣ−１６５、ＩＯＣ−１６６、ＩＯＣ−１６７、ＩＯＣ−１６８、ＩＯＣ−１６９、ＩＯＣ−１７０、ＩＯＣ−１７１、ＩＯＣ−１７２、ＩＯＣ−１７３、ＩＯＣ−１７４、ＩＯＣ−１７５、ＩＯＣ−１７６、ＩＯＣ−１７７、ＩＯＣ−１７８、ＩＯＣ−１７９、ＩＯＣ−１８０、ＩＯＣ−１８１、ＩＯＣ−１８２、ＩＯＣ−１８３、ＩＯＣ−１８４、ＩＯＣ−１８５、ＩＯＣ−１８６、ＩＯＣ−１８７、ＩＯＣ−１８８、ＩＯＣ−１８９、ＩＯＣ−１９０、ＩＯＣ−１９１、またはＩＯＣ−１９２について記載の式を有する複合体または複合体を含む組成物が提供される。
【００４２】
さらに、ＩＯＣ−１９３、ＩＯＣ−１９４、ＩＯＣ−１９５、ＩＯＣ−１９６、ＩＯＣ−１９７、ＩＯＣ−１９８、ＩＯＣ−１９９、ＩＯＣ−２００、ＩＯＣ−２０１、ＩＯＣ−２０２、ＩＯＣ−２０３、ＩＯＣ−２０４、ＩＯＣ−２０５、ＩＯＣ−２０６、ＩＯＣ−２０７、ＩＯＣ−２０８、ＩＯＣ−２１０、ＩＯＣ−２１１、ＩＯＣ−２１２、ＩＯＣ−２１３、ＩＯＣ−２１４、ＩＯＣ−２１５、ＩＯＣ−２１６、ＩＯＣ−２１７、ＩＯＣ−２１８、ＩＯＣ−２１９、ＩＯＣ−２２０、ＩＯＣ−２２１、ＩＯＣ−２２２、ＩＯＣ−２２３、ＩＯＣ−２２４、ＩＯＣ−２２５、ＩＯＣ−２２６、ＩＯＣ−２２７、ＩＯＣ−２２８、ＩＯＣ−２２９、ＩＯＣ−２３０、ＩＯＣ−２３１、ＩＯＣ−２３２、ＩＯＣ−２３３、ＩＯＣ−２３４、ＩＯＣ−２３５、ＩＯＣ−２３６、ＩＯＣ−２３７、ＩＯＣ−２３８、ＩＯＣ−２３９、ＩＯＣ−２４０、ＩＯＣ−２４１、ＩＯＣ−２４２、ＩＯＣ−２４３、ＩＯＣ−２４４、ＩＯＣ−２４５、ＩＯＣ−２４６、ＩＯＣ−２４７、ＩＯＣ−２４８、ＩＯＣ−２４９、ＩＯＣ−２５０、ＩＯＣ−２５１、ＩＯＣ−２５２、ＩＯＣ−２５３、ＩＯＣ−２５４、ＩＯＣ−２５５、ＩＯＣ−２５６、ＩＯＣ−２５７、ＩＯＣ−２５８、ＩＯＣ−２５９、ＩＯＣ−２６０、ＩＯＣ−２６１、ＩＯＣ−２６２、ＩＯＣ−２６３、ＩＯＣ−２６４、ＩＯＣ−２６５、ＩＯＣ−２６６、ＩＯＣ−２６７、ＩＯＣ−２６８、ＩＯＣ−２６９、ＩＯＣ−２７０、ＩＯＣ−２７１、またはＩＯＣ−２７２について記載の式を有する複合体または複合体を含む組成物が提供される。
【００４３】
上記複合体はさらに、医薬として許容される担体および適宜に１以上の医薬として許容される賦形剤、保存剤、および／または界面活性剤を含む医薬製剤で提供され得る。さらに別の態様において、当該複合体はさらに、亜鉛および／またはプロタミンを含むことができる。当該複合体は、結晶型として提供されても良い。
【００４４】
従って、本発明はさらに、本明細書に一般的または具体的に開示されている１以上の複合体、および医薬として許容される担体、および適宜に１以上の医薬として許容される賦形剤（ｉｎｃｉｐｉａｎｔｓ）、保存剤、亜鉛塩および／または界面活性剤を含む組成物を提供する。さらに、結晶型での本明細書に一般的または具体的に開示されている１以上の複合体および医薬として許容される担体、および適宜に１以上の医薬として許容される賦形剤（ｉｎｃｉｐｉａｎｔｓ）、保存剤、亜鉛塩、プロタミン、および／または界面活性剤を含む組成物が提供される。
【００４５】
複合体のさらに別の態様において、インシュリン分子は哺乳動物インシュリンであり、それは特定の実施形態において、ヒトインシュリン、ウシインシュリン、イヌインシュリン、ネコインシュリン、ヤギインシュリン、ウマインシュリン、ブタインシュリンまたはそれらの類縁体であることができる。特定の実施形態において、インシュリン類縁体は、インシュリンリスプロまたはインシュリングルリジンである。さらに別の実施形態において、インシュリンまたはインシュリン類縁体を修飾して、インシュリンまたはインシュリン類縁体のアミノ酸に共有結合的に連結されたポリエチレングリコールまたは脂肪酸を含むようにする。特定の実施形態において、インシュリン類縁体は、インシュリンリスプロ、インシュリングラルギン、インシュリンアスパルト、インシュリンデテミル、またはインシュリングルリジンである。
【００４６】
本発明はさらに、本明細書で開示の複合体または本明細書で開示の複合体を含む医薬製剤を、糖尿病である対象者に投与することを含む、糖尿病の治療方法を提供する。本発明はさらに、糖尿病治療のための医薬製造における本明細書で開示の複合体の使用を提供する。
【００４７】
本発明はさらに、第１の腕および第２の腕を有する少なくとも一つの分岐リンカーに共有結合的に結合したインシュリンまたはインシュリン類縁体分子（第１の腕が第１の糖類を含む第１のリガンドに連結されており、第２の腕が第２の糖類を含む第２のリガンドに連結されており、第１の糖類がフコースであることで、複合体が提供される。）および医薬として許容される担体を含む組成物または医薬組成物を提供する。
【００４８】
概して、第２の糖類はフコース、マンノース、グルコサミン、グルコース、二糖類、三糖類、四糖類、分岐三糖類、ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノース、または分岐トリマンノースである。
【００４９】
特定の態様において、分岐リンカーは、インシュリンまたはインシュリン類縁体分子の位置Ａ１；インシュリンまたはインシュリン類縁体分子の位置Ｂ１；インシュリンまたはインシュリン分子の位置Ｂ２９；インシュリン類縁体分子の位置Ｂ２８；またはインシュリン類縁体分子の位置Ｂ３でアミノ酸に共有結合的に連結されている。
【００５０】
さらに別の実施形態において、インシュリンまたはインシュリン類縁体は、第１の腕および第２の腕を有する第２の分岐リンカーに共有結合的に結合しており、第１の腕は第３の糖類を含む第３のリガンドに連結されており、第２の腕は第４の糖類を含む第４のリガンドに連結されている。特定の態様において、第２の分岐リンカーは、第１の分岐リンカーによって占有されていない、インシュリンまたはインシュリン類縁体分子の位置Ａ１；インシュリンまたはインシュリン類縁体分子の位置Ｂ１；インシュリンまたはインシュリン分子の位置Ｂ２９；インシュリン類縁体分子の位置Ｂ２８；またはインシュリン類縁体分子の位置Ｂ３でアミノ酸に共有結合的に結合している。
【００５１】
さらに別の実施形態において、インシュリンまたはインシュリン類縁体は、第１の腕および第２の腕を有する第３の分岐リンカーに共有結合的に結合しており、第１の腕は第５の糖類を含む第５のリガンドに連結されており、第２の腕は第６の糖類を含む第６のリガンドに連結されている。特定の態様において、第３の分岐リンカーは、第１の分岐リンカーおよび第２の分岐リンカーによって占有されていない、インシュリンまたはインシュリン類縁体分子の位置Ａ１；インシュリンまたはインシュリン類縁体分子の位置Ｂ１；インシュリンまたはインシュリン分子の位置Ｂ２９；インシュリン類縁体分子の位置Ｂ２８；またはインシュリン類縁体分子の位置Ｂ３でアミノ酸に共有結合的に連結されている。
【００５２】
上記複合体のあらゆる実施形態において、第３、第４、第５および第６の糖類はそれぞれ独立に、フコース、マンノース、グルコサミン、グルコース、二糖類、三糖類、四糖類、分岐三糖類、ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノース、または分岐トリマンノースである。
【００５３】
別の態様において、インシュリンまたはインシュリン類縁体分子はさらに、糖類を含むリガンドを含む直鎖リンカーに共有結合的に連結されており、その糖類はフコース、マンノース、グルコサミン、グルコース、二糖類、三糖類、四糖類、分岐三糖類、ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノース、または分岐トリマンノースであることができる。
【００５４】
特定の態様において、インシュリン類縁体分子はインシュリンリスプロ、インシュリングラルギン、インシュリンアスパルト、インシュリンデテミル、またはインシュリングルリジンである。
【００５５】
上記態様または実施形態のいずれのものにおいても、複合体は、外因性糖類結合性分子の非存在下に、投与を必要とする対象者に投与した場合に、血清糖類の血清濃度に対して感受性である薬力学（ＰＤ）または薬物動態（ＰＫ）プロファイルを示す。特定の態様において、血清糖類はグルコースまたはα−メチルマンノースである。特定の態様において、複合体は、投与を必要とする対象者に投与した場合に６０ｍｇ／ｄＬ以下の血清グルコース濃度で内因性糖類結合性分子に結合する。内因性糖類結合性分子は、ヒトマンノース受容体１であることができる。
【００５６】
組成物の特定の態様において、複合体は下記一般式（Ｉ）を有する。
【化９】
0006491649.tif 000017
【００５７】
式中、
（ｉ）
【化１０】
0006491649.tif 000018
【００５８】
の各場合は、複合体の分岐内の可能な繰り返しを表し；
（ｉｉ）
【化１１】
0006491649.tif 000019
【００５９】
の各場合は独立に、共有結合、炭素原子、ヘテロ原子、またはアシル、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環からなる群から選択される置換されていても良い基であり；
（ｉｉｉ）Ｔの各場合は独立に、共有結合または２価の直鎖もしくは分岐の飽和もしくは不飽和の置換されていても良いＣ１−３０炭化水素鎖であり、Ｔの１以上のメチレン単位は独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、複素環基、アリール基、またはヘテロアリール基によって置き換わっていても良く；
（ｉｖ）Ｒの各場合は独立に、水素、好適な保護基、またはアシル部分、アリールアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分もしくはヘテロ脂肪族部分であり；
（ｖ）−Ｂは−Ｔ−ＬＢ−Ｘであり、Ｘの各場合は独立に糖類を含むリガンドであり、ＬＢの各場合は独立に、共有結合またはＴとＸとの共有結合から誘導される基であり；
（ｖｉ）ｎは１、２、または３であり、
ただし、少なくとも一つのＸがフコースである。
【００６０】
組成物の特定の態様において、複合体は下記一般式（ＩＩ）を含む。
【化１２】
0006491649.tif 000020
【００６１】
式中、
（ｉ）
【化１３】
0006491649.tif 000021
【００６２】
の各場合は、複合体の分岐内の可能な繰り返しを表し；
（ｉｉ）
【化１４】
0006491649.tif 000022
【００６３】
の各場合は独立に、共有結合、炭素原子、ヘテロ原子、またはアシル、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環からなる群から選択される置換されていても良い基であり；
（ｉｉｉ）Ｔの各場合は独立に、共有結合または２価の直鎖もしくは分岐の飽和もしくは不飽和の置換されていても良いＣ１−３０炭化水素鎖であり、Ｔの１以上のメチレン単位は独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基によって置き換わっていても良く；
（ｉｖ）Ｒの各場合は独立に、水素、好適な保護基、またはアシル部分、アリールアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分もしくはヘテロ脂肪族部分であり；
（ｖ）−Ｂ１は−Ｔ−ＬＢ１−フコースであり、ＬＢ１は共有結合またはＴのＸとの共有結合から誘導される基であり；
（ｖｉ）−Ｂ２は−Ｔ−ＬＢ２−Ｘであり、Ｘは糖類を含むリガンドであり、その糖類はフコース、マンノースまたはグルコースであることができ；ＬＢ２は共有結合またはＴのＸとの共有結合から誘導される基であり；
（ｖｉｉ）ｎは１、２または３である。
【００６４】
組成物の特定の態様において、二座リンカーは、上記で示した式Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｏ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｕ、Ｖ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ＡＡ、ＡＢ、ＡＣ、ＡＤ、ＡＥ、ＡＦ、ＡＧ、ＡＨ、ＡＩ、ＡＪまたはＡＫを有し、各Ｘは独立に糖類を含むリガンドであり、ただしインシュリンまたはインシュリン類縁体に結合した少なくとも一つの二座リンカー複合体が二座リンカーの少なくとも一つの腕上のフコースを含む。特定の態様において、各Ｘは独立に、上記で示した式ＥＧ、ＥＭ、ＥＢＭ、ＥＧＡ、ＥＦ、ＥＦβ、ＥＢＭ、ＥＴＭ、ＥＤＧ、ＥＤＦまたはＥＤＭを有することができる。
【００６５】
さらに、ＩＯＣ−１、ＩＯＣ−２、ＩＯＣ−３、ＩＯＣ−４、ＩＯＣ−５、ＩＯＣ−６、ＩＯＣ−７、ＩＯＣ−８、ＩＯＣ−９、ＩＯＣ−１０、ＩＯＣ−１１、ＩＯＣ−１２、ＩＯＣ−１３、ＩＯＣ−１４、ＩＯＣ−１５、ＩＯＣ−１６、ＩＯＣ−１７、ＩＯＣ−１８、ＩＯＣ−１９、ＩＯＣ−２０、ＩＯＣ−２１、ＩＯＣ−２２、ＩＯＣ−２３、ＩＯＣ−２４、ＩＯＣ−２５、ＩＯＣ−２６、ＩＯＣ−２７、ＩＯＣ−２８、ＩＯＣ−２９、ＩＯＣ−３０、ＩＯＣ−３１、ＩＯＣ−３２、ＩＯＣ−３３、ＩＯＣ−３４、ＩＯＣ−３５、ＩＯＣ−３６、ＩＯＣ−３７、ＩＯＣ−３８、ＩＯＣ−３９、ＩＯＣ−４１、ＩＯＣ−４２、ＩＯＣ−４３、ＩＯＣ−４４、ＩＯＣ−４５、ＩＯＣ−４６、ＩＯＣ−４７、ＩＯＣ−４９、ＩＯＣ−５０、ＩＯＣ−５１、ＩＯＣ−５２、ＩＯＣ−５３、ＩＯＣ−５４、ＩＯＣ−５５、ＩＯＣ−５６、ＩＯＣ−５７、ＩＯＣ−５８、ＩＯＣ−５９、ＩＯＣ−６０、ＩＯＣ−６１、ＩＯＣ−６２、ＩＯＣ−６３、ＩＯＣ−６４、ＩＯＣ−６５、ＩＯＣ−６６、ＩＯＣ−６７、ＩＯＣ−６８、ＩＯＣ−６９、ＩＯＣ−７０、ＩＯＣ−７１、ＩＯＣ−７２、ＩＯＣ−７３、ＩＯＣ−７４、ＩＯＣ−７５、ＩＯＣ−７６、ＩＯＣ−７７、ＩＯＣ−７８、ＩＯＣ−７９、ＩＯＣ−８０、ＩＯＣ−８１、ＩＯＣ−８２、ＩＯＣ−８３、ＩＯＣ−８４、ＩＯＣ−８５、ＩＯＣ−８６、ＩＯＣ−８７、ＩＯＣ−８８、ＩＯＣ−８９、ＩＯＣ−９０、ＩＯＣ−９１、ＩＯＣ−９２、ＩＯＣ−９３、ＩＯＣ−９４、ＩＯＣ−９５、ＩＯＣ−９６、ＩＯＣ−９７、ＩＯＣ−９８、ＩＯＣ−９９もしくはＩＯＣ−１００について記載の式を有する複合体および医薬として許容される担体を含む組成物；ＩＯＣ−１０１、ＩＯＣ−１０２、ＩＯＣ−１０３、ＩＯＣ−１０４、ＩＯＣ−１０５、ＩＯＣ−１０６、ＩＯＣ−１０７、ＩＯＣ−１０８、ＩＯＣ−１０９、ＩＯＣ−１１０、ＩＯＣ−１１１、ＩＯＣ−１１２、ＩＯＣ−１１３、ＩＯＣ−１１４、ＩＯＣ−１１５、ＩＯＣ−１１６、ＩＯＣ−１１７、ＩＯＣ−１１８、ＩＯＣ−１１９、ＩＯＣ−１２０、ＩＯＣ−１２１、ＩＯＣ−１２２、ＩＯＣ−１２３、ＩＯＣ−１２４、ＩＯＣ−１２５、ＩＯＣ−１２６、ＩＯＣ−１２７、ＩＯＣ−１２８、ＩＯＣ−１２９、ＩＯＣ−１３０、ＩＯＣ−１３１、ＩＯＣ−１３２、ＩＯＣ−１３３、ＩＯＣ−１３４、ＩＯＣ−１３５、ＩＯＣ−１３６、ＩＯＣ−１３７、ＩＯＣ−１３８、ＩＯＣ−１３９、ＩＯＣ−１４０、ＩＯＣ−１４１、ＩＯＣ−１４２、ＩＯＣ−１４３、ＩＯＣ−１４４、ＩＯＣ−１４５、ＩＯＣ−１４６、ＩＯＣ−１４７、ＩＯＣ−１４９、ＩＯＣ−１５０、ＩＯＣ−１５１、ＩＯＣ−１５２、ＩＯＣ−１５３、ＩＯＣ−１５４、ＩＯＣ−１５５、ＩＯＣ−１５６、ＩＯＣ−１５７、ＩＯＣ−１５８、ＩＯＣ−１５９、ＩＯＣ−１６０、ＩＯＣ−１６１、ＩＯＣ−１６２、ＩＯＣ−１６３、ＩＯＣ−１６４、ＩＯＣ−１６５、ＩＯＣ−１６６、ＩＯＣ−１６７、ＩＯＣ−１６８、ＩＯＣ−１６９、ＩＯＣ−１７０、ＩＯＣ−１７１、ＩＯＣ−１７２、ＩＯＣ−１７３、ＩＯＣ−１７４、ＩＯＣ−１７５、ＩＯＣ−１７６、ＩＯＣ−１７７、ＩＯＣ−１７８、ＩＯＣ−１７９、ＩＯＣ−１８０、ＩＯＣ−１８１、ＩＯＣ−１８２、ＩＯＣ−１８３、ＩＯＣ−１８４、ＩＯＣ−１８５、ＩＯＣ−１８６、ＩＯＣ−１８７、ＩＯＣ−１８８、ＩＯＣ−１８９、ＩＯＣ−１９０、ＩＯＣ−１９１もしくはＩＯＣ−１９２について記載の式を有する複合体および医薬として許容される担体を含む組成物；およびＩＯＣ−１９３、ＩＯＣ−１９４、ＩＯＣ−１９５、ＩＯＣ−１９６、ＩＯＣ−１９７、ＩＯＣ−１９８、ＩＯＣ−１９９、ＩＯＣ−２００、ＩＯＣ−２０１、ＩＯＣ−２０２、ＩＯＣ−２０３、ＩＯＣ−２０４、ＩＯＣ−２０５、ＩＯＣ−２０６、ＩＯＣ−２０７、ＩＯＣ−２０８、ＩＯＣ−２１０、ＩＯＣ−２１１、ＩＯＣ−２１２、ＩＯＣ−２１３、ＩＯＣ−２１４、ＩＯＣ−２１５、ＩＯＣ−２１６、ＩＯＣ−２１７、ＩＯＣ−２１８、ＩＯＣ−２１９、ＩＯＣ−２２０、ＩＯＣ−２２１、ＩＯＣ−２２２、ＩＯＣ−２２３、ＩＯＣ−２２４、ＩＯＣ−２２５、ＩＯＣ−２２６、ＩＯＣ−２２７、ＩＯＣ−２２８、ＩＯＣ−２２９、ＩＯＣ−２３０、ＩＯＣ−２３１、ＩＯＣ−２３２、ＩＯＣ−２３３、ＩＯＣ−２３４、ＩＯＣ−２３５、ＩＯＣ−２３６、ＩＯＣ−２３７、ＩＯＣ−２３８、ＩＯＣ−２３９、ＩＯＣ−２４０、ＩＯＣ−２４１、ＩＯＣ−２４２、ＩＯＣ−２４３、ＩＯＣ−２４４、ＩＯＣ−２４５、ＩＯＣ−２４６、ＩＯＣ−２４７、ＩＯＣ−２４８、ＩＯＣ−２４９、ＩＯＣ−２５０、ＩＯＣ−２５１、ＩＯＣ−２５２、ＩＯＣ−２５３、ＩＯＣ−２５４、ＩＯＣ−２５５、ＩＯＣ−２５６、ＩＯＣ−２５７、ＩＯＣ−２５８、ＩＯＣ−２５９、ＩＯＣ−２６０、ＩＯＣ−２６１、ＩＯＣ−２６２、ＩＯＣ−２６３、ＩＯＣ−２６４、ＩＯＣ−２６５、ＩＯＣ−２６６、ＩＯＣ−２６７、ＩＯＣ−２６８、ＩＯＣ−２６９、ＩＯＣ−２７０、ＩＯＣ−２７１もしくはＩＯＣ−２７２について記載の式を有する複合体および医薬として許容される担体を含む組成物が提供される。
【００６６】
本発明はさらに、糖尿病治療への本明細書に開示の組成物の使用を提供する。特定の態様において、糖尿病はＩ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病または妊娠性糖尿病である。
【００６７】
本発明はさらに、糖尿病を治療するために一定量の組成物を対象者に投与することを含む糖尿病を有する対象者を治療する方法であって、前記組成物が糖尿病を治療するために第１の腕および第２の腕を有する少なくとも一つの分岐リンカーに共有結合的に結合したインシュリンまたはインシュリン類縁体分子（第１の腕が第１の糖類を含む第１のリガンドに連結されており、第２の腕が第２の糖類を含む第２のリガンドに連結されており、第１の糖類がフコースであることで複合体を提供する）および医薬として許容される担体を含み；前記投与が糖尿病を治療する方法を提供する。特定の態様において、投与される組成物の量は、有効量または治療上有効量である。
【００６８】
概して、第２の糖類はフコース、マンノース、グルコサミン、グルコース、二糖類、三糖類、四糖類、分岐三糖類、ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノース、または分岐トリマンノースである。
【００６９】
特定の態様において、分岐リンカーは、インシュリンまたはインシュリン類縁体分子の位置Ａ１；インシュリンまたはインシュリン類縁体分子の位置Ｂ１；インシュリンまたはインシュリン分子の位置Ｂ２９；インシュリン類縁体分子の位置Ｂ２８；またはインシュリン類縁体分子の位置Ｂ３でアミノ酸に共有結合的に連結されている。
【００７０】
さらに別の実施形態において、インシュリンまたはインシュリン類縁体は、第１の腕および第２の腕を有する第２の分岐リンカーに共有結合的に結合しており、第１の腕は第３の糖類を含む第３のリガンドに連結されており、第２の腕は第４の糖類を含む第４のリガンドに連結されている。特定の態様において、第２の分岐リンカーは、第１の分岐リンカーによって占有されていない、インシュリンまたはインシュリン類縁体分子の位置Ａ１；インシュリンまたはインシュリン類縁体分子の位置Ｂ１；インシュリンまたはインシュリン分子の位置Ｂ２９；インシュリン類縁体分子の位置Ｂ２８；またはインシュリン類縁体分子の位置Ｂ２８でアミノ酸に共有結合的に連結されている。
【００７１】
さらに別の実施形態において、インシュリンまたはインシュリン類縁体は、第１の腕および第２の腕を有する第３の分岐リンカーに共有結合的に結合しており、第１の腕は第５の糖類を含む第５のリガンドに連結されており、第２の腕は第６の糖類を含む第６のリガンドに連結されている。特定の態様において、第３の分岐リンカーは、第１の分岐リンカーおよび第２の分岐リンカーによって占有されていない、インシュリンまたはインシュリン類縁体分子の位置Ａ１；インシュリンまたはインシュリン類縁体分子の位置Ｂ１；インシュリンまたはインシュリン分子の位置Ｂ２９；インシュリン類縁体分子の位置Ｂ２８；またはインシュリン類縁体分子の位置Ｂ３でアミノ酸に共有結合的に連結されている。
【００７２】
上記複合体のあらゆる実施形態において、第３、第４、第５および第６の糖類はそれぞれ独立に、フコース、マンノース、グルコサミン、グルコース、二糖類、三糖類、四糖類、分岐三糖類、ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノース、または分岐トリマンノースである。
【００７３】
別の態様において、インシュリンまたはインシュリン類縁体分子はさらに、糖類を含むリガンドを含む直鎖リンカーに共有結合的に連結されており、その糖類はフコース、マンノース、グルコサミン、グルコース、二糖類、三糖類、四糖類、分岐三糖類、ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノース、または分岐トリマンノースであることができる。
【００７４】
特定の態様において、インシュリン類縁体分子は、インシュリンリスプロ、インシュリングラルギン、インシュリンアスパルト、インシュリンデテミル、またはインシュリングルリジンである。
【００７５】
上記態様または実施形態のいずれのものにおいても、複合体は、外因性糖類結合性分子の非存在下に投与を必要とする対象者に投与した場合に血清糖類の血清濃度に感受性である薬力学（ＰＤ）または薬物動態（ＰＫ）プロファイルを示す。特定の態様において、血清糖類はグルコースまたはα−メチルマンノースである。特定の態様において、複合体は、投与を必要とする対象者に投与した場合に６０ｍｇ／ｄＬ以下の血清グルコース濃度で内因性糖類結合性分子に結合する。内因性糖類結合性分子は、ヒトマンノース受容体１であることができる。
【００７６】
当該組成物の特定の態様において、複合体は下記一般式（Ｉ）を有する。
【化１５】
0006491649.tif 000023
【００７７】
式中、
（ｉ）
【化１６】
0006491649.tif 000024
【００７８】
の各場合は、複合体の分岐内の可能な繰り返しを表し；
（ｉｉ）
【化１７】
0006491649.tif 000025
【００７９】
の各場合は独立に、共有結合、炭素原子、ヘテロ原子、またはアシル、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環からなる群から選択される置換されていても良い基であり；
（ｉｉｉ）Ｔの各場合は独立に、共有結合または２価の直鎖もしくは分岐の飽和もしくは不飽和の置換されていても良いＣ１−３０炭化水素鎖であり、Ｔの１以上のメチレン単位は独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、複素環基、アリール基、またはヘテロアリール基によって置き換わっていても良く；
（ｉｖ）Ｒの各場合は独立に、水素、好適な保護基、またはアシル部分、アリールアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分もしくはヘテロ脂肪族部分であり；
（ｖ）−Ｂは−Ｔ−ＬＢ−Ｘであり、Ｘの各場合は独立に糖類を含むリガンドであり、ＬＢの各場合は独立に、共有結合またはＴとＸとの共有結合から誘導される基であり；
（ｖｉ）ｎは１、２、または３であり、
ただし、少なくとも一つのＸがフコースである。
【００８０】
組成物の特定の態様において、複合体は下記一般式（ＩＩ）を含む。
【化１８】
0006491649.tif 000026
【００８１】
式中、
（ｉ）
【化１９】
0006491649.tif 000027
【００８２】
の各場合は、複合体の分岐内の可能な繰り返しを表し；
（ｉｉ）
【化２０】
0006491649.tif 000028
【００８３】
の各場合は独立に、共有結合、炭素原子、ヘテロ原子、またはアシル、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環からなる群から選択される置換されていても良い基であり；
（ｉｉｉ）Ｔの各場合は独立に、共有結合または２価の直鎖もしくは分岐の飽和もしくは不飽和の置換されていても良いＣ１−３０炭化水素鎖であり、Ｔの１以上のメチレン単位は独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基によって置き換わっていても良く；
（ｉｖ）Ｒの各場合は独立に、水素、好適な保護基、またはアシル部分、アリールアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分もしくはヘテロ脂肪族部分であり；
（ｖ）−Ｂ１は−Ｔ−ＬＢ１−フコースであり、ＬＢ１は共有結合またはＴのＸとの共有結合から誘導される基であり；
（ｖｉ）−Ｂ２は−Ｔ−ＬＢ２−Ｘであり、Ｘは糖類を含むリガンドであり、その糖類はフコース、マンノースまたはグルコースであることができ；ＬＢ２は共有結合またはＴのＸとの共有結合から誘導される基であり；
（ｖｉｉ）ｎは１、２または３である。
【００８４】
組成物の特定の態様において、二座リンカーは、上記で示した式Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｏ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｕ、Ｖ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ＡＡ、ＡＢ、ＡＣ、ＡＤ、ＡＥ、ＡＦ、ＡＧ、ＡＨ、ＡＩ、ＡＪまたはＡＫを有し、各Ｘは独立に糖類を含むリガンドであり、ただしインシュリンまたはインシュリン類縁体に結合した少なくとも一つの二座リンカー複合体が二座リンカーの少なくとも一つの腕上のフコースを含む。特定の態様において、各Ｘは独立に、上記で示した式ＥＧ、ＥＭ、ＥＢＭ、ＥＧＡ、ＥＦ、ＥＦβ、ＥＢＭ、ＥＴＭ、ＥＤＧ、ＥＤＦまたはＥＤＭを有することができる。
【００８５】
本発明はさらに、対象者に対してＩＯＣ−１、ＩＯＣ−２、ＩＯＣ−３、ＩＯＣ−４、ＩＯＣ−５、ＩＯＣ−６、ＩＯＣ−７、ＩＯＣ−８、ＩＯＣ−９、ＩＯＣ−１０、ＩＯＣ−１１、ＩＯＣ−１２、ＩＯＣ−１３、ＩＯＣ−１４、ＩＯＣ−１５、ＩＯＣ−１６、ＩＯＣ−１７、ＩＯＣ−１８、ＩＯＣ−１９、ＩＯＣ−２０、ＩＯＣ−２１、ＩＯＣ−２２、ＩＯＣ−２３、ＩＯＣ−２４、ＩＯＣ−２５、ＩＯＣ−２６、ＩＯＣ−２７、ＩＯＣ−２８、ＩＯＣ−２９、ＩＯＣ−３０、ＩＯＣ−３１、ＩＯＣ−３２、ＩＯＣ−３３、ＩＯＣ−３４、ＩＯＣ−３５、ＩＯＣ−３６、ＩＯＣ−３７、ＩＯＣ−３８、ＩＯＣ−３９、ＩＯＣ−４１、ＩＯＣ−４２、ＩＯＣ−４３、ＩＯＣ−４４、ＩＯＣ−４５、ＩＯＣ−４６、ＩＯＣ−４７、ＩＯＣ−４９、ＩＯＣ−５０、ＩＯＣ−５１、ＩＯＣ−５２、ＩＯＣ−５３、ＩＯＣ−５４、ＩＯＣ−５５、ＩＯＣ−５６、ＩＯＣ−５７、ＩＯＣ−５８、ＩＯＣ−５９、ＩＯＣ−６０、ＩＯＣ−６１、ＩＯＣ−６２、ＩＯＣ−６３、ＩＯＣ−６４、ＩＯＣ−６５、ＩＯＣ−６６、ＩＯＣ−６７、ＩＯＣ−６８、ＩＯＣ−６９、ＩＯＣ−７０、ＩＯＣ−７１、ＩＯＣ−７２、ＩＯＣ−７３、ＩＯＣ−７４、ＩＯＣ−７５、ＩＯＣ−７６、ＩＯＣ−７７、ＩＯＣ−７８、ＩＯＣ−７９、ＩＯＣ−８０、ＩＯＣ−８１、ＩＯＣ−８２、ＩＯＣ−８３、ＩＯＣ−８４、ＩＯＣ−８５、ＩＯＣ−８６、ＩＯＣ−８７、ＩＯＣ−８８、ＩＯＣ−８９、ＩＯＣ−９０、ＩＯＣ−９１、ＩＯＣ−９２、ＩＯＣ−９３、ＩＯＣ−９４、ＩＯＣ−９５、ＩＯＣ−９６、ＩＯＣ−９７、ＩＯＣ−９８、ＩＯＣ−９９もしくはＩＯＣ−１００について記載の式を有する複合体および医薬として許容される担体を含む組成物を投与して、その対象者における糖尿病を治療することを含む、糖尿病の対象者を治療する方法；対象者に対してＩＯＣ−１０１、ＩＯＣ−１０２、ＩＯＣ−１０３、ＩＯＣ−１０４、ＩＯＣ−１０５、ＩＯＣ−１０６、ＩＯＣ−１０７、ＩＯＣ−１０８、ＩＯＣ−１０９、ＩＯＣ−１１０、ＩＯＣ−１１１、ＩＯＣ−１１２、ＩＯＣ−１１３、ＩＯＣ−１１４、ＩＯＣ−１１５、ＩＯＣ−１１６、ＩＯＣ−１１７、ＩＯＣ−１１８、ＩＯＣ−１１９、ＩＯＣ−１２０、ＩＯＣ−１２１、ＩＯＣ−１２２、ＩＯＣ−１２３、ＩＯＣ−１２４、ＩＯＣ−１２５、ＩＯＣ−１２６、ＩＯＣ−１２７、ＩＯＣ−１２８、ＩＯＣ−１２９、ＩＯＣ−１３０、ＩＯＣ−１３１、ＩＯＣ−１３２、ＩＯＣ−１３３、ＩＯＣ−１３４、ＩＯＣ−１３５、ＩＯＣ−１３６、ＩＯＣ−１３７、ＩＯＣ−１３８、ＩＯＣ−１３９、ＩＯＣ−１４０、ＩＯＣ−１４１、ＩＯＣ−１４２、ＩＯＣ−１４３、ＩＯＣ−１４４、ＩＯＣ−１４５、ＩＯＣ−１４６、ＩＯＣ−１４７、ＩＯＣ−１４９、ＩＯＣ−１５０、ＩＯＣ−１５１、ＩＯＣ−１５２、ＩＯＣ−１５３、ＩＯＣ−１５４、ＩＯＣ−１５５、ＩＯＣ−１５６、ＩＯＣ−１５７、ＩＯＣ−１５８、ＩＯＣ−１５９、ＩＯＣ−１６０、ＩＯＣ−１６１、ＩＯＣ−１６２、ＩＯＣ−１６３、ＩＯＣ−１６４、ＩＯＣ−１６５、ＩＯＣ−１６６、ＩＯＣ−１６７、ＩＯＣ−１６８、ＩＯＣ−１６９、ＩＯＣ−１７０、ＩＯＣ−１７１、ＩＯＣ−１７２、ＩＯＣ−１７３、ＩＯＣ−１７４、ＩＯＣ−１７５、ＩＯＣ−１７６、ＩＯＣ−１７７、ＩＯＣ−１７８、ＩＯＣ−１７９、ＩＯＣ−１８０、ＩＯＣ−１８１、ＩＯＣ−１８２、ＩＯＣ−１８３、ＩＯＣ−１８４、ＩＯＣ−１８５、ＩＯＣ−１８６、ＩＯＣ−１８７、ＩＯＣ−１８８、ＩＯＣ−１８９、ＩＯＣ−１９０、ＩＯＣ−１９１もしくはＩＯＣ−１９２について記載の式を有する複合体および医薬として許容される担体を含む組成物を投与して、その対象者における糖尿病を治療することを含む、糖尿病の対象者を治療する方法；および対象者に対してＩＯＣ−１９３、ＩＯＣ−１９４、ＩＯＣ−１９５、ＩＯＣ−１９６、ＩＯＣ−１９７、ＩＯＣ−１９８、ＩＯＣ−１９９、ＩＯＣ−２００、ＩＯＣ−２０１、ＩＯＣ−２０２、ＩＯＣ−２０３、ＩＯＣ−２０４、ＩＯＣ−２０５、ＩＯＣ−２０６、ＩＯＣ−２０７、ＩＯＣ−２０８、ＩＯＣ−２１０、ＩＯＣ−２１１、ＩＯＣ−２１２、ＩＯＣ−２１３、ＩＯＣ−２１４、ＩＯＣ−２１５、ＩＯＣ−２１６、ＩＯＣ−２１７、ＩＯＣ−２１８、ＩＯＣ−２１９、ＩＯＣ−２２０、ＩＯＣ−２２１、ＩＯＣ−２２２、ＩＯＣ−２２３、ＩＯＣ−２２４、ＩＯＣ−２２５、ＩＯＣ−２２６、ＩＯＣ−２２７、ＩＯＣ−２２８、ＩＯＣ−２２９、ＩＯＣ−２３０、ＩＯＣ−２３１、ＩＯＣ−２３２、ＩＯＣ−２３３、ＩＯＣ−２３４、ＩＯＣ−２３５、ＩＯＣ−２３６、ＩＯＣ−２３７、ＩＯＣ−２３８、ＩＯＣ−２３９、ＩＯＣ−２４０、ＩＯＣ−２４１、ＩＯＣ−２４２、ＩＯＣ−２４３、ＩＯＣ−２４４、ＩＯＣ−２４５、ＩＯＣ−２４６、ＩＯＣ−２４７、ＩＯＣ−２４８、ＩＯＣ−２４９、ＩＯＣ−２５０、ＩＯＣ−２５１、ＩＯＣ−２５２、ＩＯＣ−２５３、ＩＯＣ−２５４、ＩＯＣ−２５５、ＩＯＣ−２５６、ＩＯＣ−２５７、ＩＯＣ−２５８、ＩＯＣ−２５９、ＩＯＣ−２６０、ＩＯＣ−２６１、ＩＯＣ−２６２、ＩＯＣ−２６３、ＩＯＣ−２６４、ＩＯＣ−２６５、ＩＯＣ−２６６、ＩＯＣ−２６７、ＩＯＣ−２６８、ＩＯＣ−２６９、ＩＯＣ−２７０、ＩＯＣ−２７１もしくはＩＯＣ−２７２について記載の式を有する複合体および医薬として許容される担体を含む組成物を投与して、その対象者における糖尿病を治療することを含む、糖尿病の対象者を治療する方法を提供する。
【００８６】
前記方法の上記の態様または実施形態のいずれにおいても、糖尿病はＩ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病または妊娠性糖尿病である。
【００８７】
本発明はさらに、インシュリンおよびインシュリン類縁体複合体であって、前記複合体が少なくとも一つのフコース分子を含み、前記複合体が機能性インシュリン受容体リン酸化アッセイによって求められたＥＣ５０またはＩＰのマクロファージマンノース受容体での競合結合アッセイによって求められたＩＣ５０またはＩＰに対する比率が約０．５：１から約１：１００；約１：１から約１：５０；約１：１から約１：２０；または約１：１から約１：１０であることを特徴とする複合体；および医薬として許容される担体を含む組成物を提供する。
【００８８】
特定の態様において、当該複合体は、第１の腕および第２の腕を有する少なくとも一つの分岐リンカーに共有結合的に結合したインシュリンまたはインシュリン類縁体分子を含み、第１の腕は第１の糖類を含む第１のリガンドに連結されており、第２の腕は第２の糖類を含む第２のリガンドに連結されており、第１の糖類はフコースである。さらに別の態様において、第２の糖類は、フコース、マンノース、グルコサミン、グルコース、二糖類、三糖類、四糖類、分岐三糖類、ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノース、または分岐トリマンノースである。
【００８９】
特定の実施形態において、前記複合体は、本明細書に開示の複合体であることができる。
【００９０】
本発明はさらに、フコースを含み、機能性インシュリン受容体リン酸化アッセイによって求められたＥＣ５０またはＩＰのマクロファージマンノース受容体での競合結合アッセイによって求められたＩＣ５０またはＩＰに対する比率が約０．５：１から約１：１００；約１：１から約１：５０；約１：１から約１：２０；または約１：１から約１：１０であることを特徴とする複合体および医薬として許容される担体を含む組成物を対象者に投与することで糖尿病を治療することを含む、糖尿病である対象者を治療する方法を提供する。
【００９１】
特定の実施形態において、前記複合体は、第１の腕および第２の腕を有する少なくとも一つの分岐リンカーに共有結合的に結合したインシュリンまたはインシュリン類縁体分子を含み、第１の腕は第１の糖類を含む第１のリガンドに連結されており、第２の腕は第２の糖類を含む第２のリガンドに連結されており、第１の糖類はフコースである。さらに別の態様において、第２の糖類は、フコース、マンノース、グルコサミン、グルコース、二糖類、三糖類、四糖類、分岐三糖類、ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノース、または分岐トリマンノースである。
【００９２】
特定の実施形態において、前記複合体は、本明細書で開示の複合体であることができる。
【００９３】
特定の態様において、糖尿病はＩ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、または妊娠性糖尿病である。
【００９４】
定義
明細書を通じて使用される特定の官能基、化学用語および一般用語の定義について、下記でより詳細に説明する。本発明に関して、化学元素は、元素周期表、ＣＡＳ版、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ，  ７５ｔｈ  Ｅｄ．、内表紙に従って同定され、特定の官能基はそこに記載のように定義される。さらに、有機化学の一般原理ならびに特定の官能部分および反応性が、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ，  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ，  Ｓａｕｓａｌｉｔｏ，  １９９９；Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ  Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ２００１；Ｌａｒｏｃｋ，  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，  ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９８９；  Ｃａｒｒｕｔｈｅｒｓ，  Ｓｏｍｅ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，  １９８７に記載されている。
【００９５】
アシル−本明細書で使用される場合、「アシル」という用語は、一般式−Ｃ（−Ｏ）ＲＸ１、−Ｃ（−Ｏ）ＯＲＸ１、−Ｃ（−Ｏ）−Ｏ−Ｃ（−Ｏ）ＲＸ１、−Ｃ（−Ｏ）ＳＲＸ１、−Ｃ（−Ｏ）Ｎ（ＲＸ１）２、−Ｃ（−Ｓ）ＲＸ１、−Ｃ（−Ｓ）Ｎ（ＲＸ１）２、および−Ｃ（−Ｓ）Ｓ（ＲＸ１）、−Ｃ（−ＮＲＸ１）ＲＸ１、−Ｃ（−ＮＲＸ１）ＯＲＸ１、−Ｃ（−ＮＲＸ１）ＳＲＸ１、および−Ｃ（−ＮＲＸ１）Ｎ（ＲＸ１）２を有する基を指し、ＲＸ１は、水素；ハロゲン；置換されたもしくは置換されていないヒドロキシル；置換されたもしくは置換されていないチオール；置換されたもしくは置換されていないアミノ；置換されたもしくは置換されていないアシル；環状もしくは非環状の置換されたもしくは置換されていない分岐もしくは分岐していない脂肪族；環状もしくは非環状の置換されたもしくは置換されていない分岐もしくは分岐していないヘテロ脂肪族；環状もしくは非環状の置換されたもしくは置換されていない分岐もしくは分岐していないアルキル；環状もしくは非環状の置換されたもしくは置換されていない分岐もしくは分岐していないアルケニル；置換されたもしくは置換されていないアルキニル、置換されたもしくは置換されていないアリール、置換されたもしくは置換されていないヘテロアリール、脂肪族オキシ、ヘテロ脂肪族オキシ、アルキルオキシ、ヘテロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、脂肪族チオキシ、ヘテロ脂肪族チオキシ、アルキルチオキシ、ヘテロアルキルチオキシ、アリールチオキシ、ヘテロアリールチオキシ、モノもしくはジ脂肪族アミノ、モノもしくはジヘテロ脂肪族アミノ、モノもしくはジアルキルアミノ、モノもしくはジヘテロアルキルアミノ、モノもしくはジアリールアミノ、またはモノもしくはジヘテロアリールアミノであり；または２個のＲＸ１基が一体となって、５から６員複素環を形成している。アシル基の例には、アルデヒド（−ＣＨＯ）、カルボン酸（−ＣＯ２Ｈ）、ケトン類、アシルハライド、エステル、アミド、イミン、カーボネート、カーバメート、および尿素などがある。アシル置換基には、安定な部分の形成を生じる本明細書に記載の置換基（例えば、脂肪族、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロ脂肪族、複素環、アリール、ヘテロアリール、アシル、オキソ、イミノ、チオオキソ、シアノ、イソシアノ、アミノ、アジド、ニトロ、ヒドロキシル、チオール、ハロ、脂肪族アミノ、ヘテロ脂肪族アミノ、アルキルアミノ、ヘテロアルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルアリール、アリールアルキル、脂肪族オキシ、ヘテロ脂肪族オキシ、アルキルオキシ、ヘテロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、脂肪族チオキシ、ヘテロ脂肪族チオキシ、アルキルチオキシ、ヘテロアルキルチオキシ、アリールチオキシ、ヘテロアリールチオキシ、アシルオキシなど。これらはそれぞれさらに置換されていても置換されていなくても良い。）などがあるが、これらに限定されるものではない。
【００９６】
脂肪族−本明細書で使用される場合、「脂肪族」または「脂肪族基」という用語は、直鎖（すなわち、未分岐）、分岐、または環状（「炭素環」）であることができ、完全飽和であることができ、または１以上の不飽和単位を含むことができるが、芳香族ではない置換されていても良い炭化水素部分を指す。別段の断りがない限り、脂肪族基は１から１２個の炭素原子を含む。一部の実施形態において、脂肪族基は１から６個の炭素原子を含む。一部の実施形態において、脂肪族基は１から４個の炭素原子を含み、さらに別の実施形態において、脂肪族基は１から３個の炭素原子を含む。好適な脂肪族基には、直鎖もしくは分岐、アルキル、アルケニルおよびアルキニル基、および（シクロアルキル）アルキル、（シクロアルケニル）アルキルまたは（シクロアルキル）アルケニルなどのそれらの混成体などがあるが、これらに限定されるものではない。
【００９７】
アルケニル−本明細書で使用される場合、「アルケニル」という用語は、１個の水素原子の除去によって少なくとも一つの炭素−炭素二重結合を有する直鎖もしくは分岐の脂肪族部分から誘導される置換されていても良い１価基を示す。特定の実施形態において、本発明で使用されるアルケニル基は、２から６個の炭素原子を含む。特定の実施形態において、本発明で使用されるアルケニル基は、２から５個の炭素原子を含む。一部の実施形態において、本発明で使用されるアルケニル基は２から４個の炭素原子を含む。別の実施形態において、用いられるアルケニル基は、２から３個の炭素原子を含む。アルケニル基には、例えばエテニル、プロペニル、ブテニル、１−メチル−２−ブテン−１−イルなどがある。
【００９８】
アルキル−本明細書で使用される場合、「アルキル」という用語は、１個の水素原子の除去によって１から６個の炭素原子を含む脂肪族部分から誘導される置換されていても良い飽和の直鎖もしくは分岐の炭化水素基を指す。一部の実施形態において、本発明で使用されるアルキル基は１から５個の炭素原子を含む。別の実施形態において、使用されるアルキル基は１から４個の炭素原子を含む。さらに他の実施形態において、アルキル基は１から３個の炭素原子を含む。さらに別の実施形態において、アルキル基は１から２個の炭素を含む。アルキル基の例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｓｅｃ−ペンチル、イソ−ペンチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、ｓｅｃ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−デシル、ｎ−ウンデシル、ドデシルなどがあるが、これらに限定されるものではない。
【００９９】
アルキニル−本明細書で使用される場合、「アルキニル」という用語は、１個の水素原子の除去によって少なくとも一つの炭素−炭素三重結合を有する直鎖もしくは分岐の脂肪族部分から誘導される置換されていても良い１価基を指す。特定の実施形態において、本発明で使用されるアルキニル基は２から６個の炭素原子を含む。特定の実施形態において、本発明で使用されるアルキニル基は２から５個の炭素原子を含む。一部の実施形態において、本発明で使用されるアルキニル基は２から４個の炭素原子を含む。別の実施形態において、使用されるアルキニル基は２から３個の炭素原子を含む。代表的なアルキニル基には、エチニル、２−プロピニル（プロパルギル）、１−プロピニルなどがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１００】
アリール−本明細書で使用される場合、単独でまたは「アラルキル」、「アラルコキシ」または「アリールオキシアルキル」でのようにより大きい部分の一部として使用される「アリール」という用語は、合計５から１０個の環員を有する置換されていても良い単環式および二環式環系を指し、その系における少なくとも一つの環が芳香族であり、その系中の各環は３から７個の環員を含む。「アリール」という用語は、「アリール環」という用語と互換的に用いることができる。本発明の特定の実施形態において、「アリール」は、芳香族環系を指し、それには１以上の置換基を有していても良いフェニル、ビフェニル、ナフチル、アントラシルなどがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１０１】
アリールアルキル−本明細書で使用される場合、「アリールアルキル」という用語は、アリール基（例えば、芳香族またはヘテロ芳香族基）で置換されたアルキル基を指す。
【０１０２】
二座−１個の単位分子として一緒に共有結合的に結合した２以上の分子から形成された分子。
【０１０３】
二価炭化水素鎖−本明細書で使用される場合、「２価の炭化水素鎖」（「２価のアルキレン基」とも称される）という用語はポリメチレン基、すなわち−（ＣＨ２）ｚ−であり、ｚは１から３０、１から２０、１から１２、１から８、１から６、１から４、１から３、１から２、２から３０、２から２０、２から１０、２から８、２から６、２から４、または２から３の正の整数である。置換された２価の炭化水素鎖は、１以上のメチレン水素原子が置換基によって置き換わっているポリメチレン基である。好適な置換基には、置換された脂肪族基について下記のものなどがある。
【０１０４】
カルボニル−本明細書で使用される場合、「カルボニル」という用語は、炭素−酸素二重結合を含む１価または２価の部分を指す。カルボニル基の例には、アルデヒド、ケトン、カルボン酸、エステル、アミド、エノン、アシルハライド、無水物、尿素、カーバメート、カーボネート、チオエステル、ラクトン、ラクタム、ヒドロキサメート、イソシアネートおよびクロロホルメートなどがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１０５】
シクロ脂肪族−本明細書で使用される場合、単独でまたはより大きい部分の一部としての「シクロ脂肪族」、「炭素環」または「炭素環式」という用語は、３から１０個の環員を有する本明細書に記載の置換されていても良い飽和もしくは部分不飽和環状脂肪族単環式または二環式環系を指す。シクロ脂肪族基には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプチル、シクロヘプテニル、シクロオクチル、シクロオクテニル、およびシクロオクタジエニルなどがあるが、これらに限定されるものではない。一部の実施形態において、シクロアルキルは３から６個の炭素を有する。
【０１０６】
フコース−これは、フコースのＤ型もしくはＬ型を指し、酸素もしくは炭素連結グリコシドを指すことができる。
【０１０７】
ハロゲン−本明細書で使用される場合、「ハロ」および「ハロゲン」という用語は、フッ素（フルオロ、−Ｆ）、塩素（クロロ、−Ｃｌ）、臭素（ブロモ、−Ｂｒ）、およびヨウ素（ヨード、−Ｉ）から選択される原子を指す。
【０１０８】
ヘテロ脂肪族−本明細書で使用される場合、「ヘテロ脂肪族」または「ヘテロ脂肪族基」という用語は、炭素原子に加えて、１から５個のヘテロ原子を有する置換されていても良い炭化水素部分を示し、それは直鎖（すなわち、未分岐）、分岐もしくは環状（「複素環」）であることができ、完全飽和であることができ、または１以上の不飽和単位を含むことができるが、それは芳香族ではない。別段の断りがない限り、ヘテロ脂肪族基は１から６個の炭素原子を含み、１から３個の炭素原子が適宜におよび独立に酸素、窒素および硫黄から選択されるヘテロ原子で置き換わっている。一部の実施形態において、ヘテロ脂肪族基は１から４個の炭素原子を含み、１から２個の炭素原子が適宜におよび独立に酸素、窒素および硫黄から選択されるヘテロ原子で置き換わっている。さらに別の実施形態において、ヘテロ脂肪族基は１から３個の炭素原子を含み、１個の炭素原子が適宜におよび独立に酸素、窒素および硫黄から選択されるヘテロ原子で置き換わっている。好適なヘテロ脂肪族基には、直鎖もしくは分岐のヘテロアルキル基、ヘテロアルケニル基およびヘテロアルキニル基などがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１０９】
ヘテロアラルキル−本明細書で使用される場合、「ヘテロアラルキル」という用語は、ヘテロアリールによって置換されたアルキル基を指し、そのアルキルおよびヘテロアリール部分は独立に置換されていても良い。
【０１１０】
ヘテロアリール−本明細書で使用される場合、単独でまたはより大きい部分、例えば「ヘテロアラルキル」もしくは「ヘテロアラルコキシ」の一部としての「ヘテロアリール」という用語は、５から１０個の環原子、好ましくは５、６もしくは９個の環原子を有し；環状配置で共有された６、１０もしくは１４個のπ原子を有し；炭素原子に加えて１から５個のヘテロ原子を有する置換されていても良い基を指す。ヘテロアリール基には、チエニル、フラニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、インドリジニル、プリニル、ナフチリジニルおよびプテリジニルなどがあるが、これらに限定されるものではない。本明細書で使用される場合、「ヘテロアリール」および「ヘテロアル（ｈｅｔｅｒｏａｒ）−」という用語も、ヘテロ芳香環が１以上のアリール環、炭素環または複素環に縮合している基であって、結合の基または箇所がヘテロ芳香環上にあるものを含む。例を挙げると、インドリル、イソインドリル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、ジベンゾフラニル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、キノキザリニル、４Ｈ−キノリジニル、カルバゾリル、アクリジニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、テトラヒドロキノリニルおよびテトラヒドロイソキノリニルなどがあるが、それらに限定されるものではない。ヘテロアリール基は単環式または二環式であることができる。「ヘテロアリール」という用語は、「ヘテロアリール環」、「ヘテロアリール基」または「ヘテロ芳香族」という用語と互換的に使用することができ、それらのいずれの用語にも、置換されていても良い環が含まれる。
【０１１１】
ヘテロ原子−本明細書で使用される場合、「ヘテロ原子」という用語は窒素、酸素または硫黄を指し、窒素または硫黄の酸化型、および塩基性窒素の四級価型を含む。「窒素」という用語には、置換された窒素も含まれる。
【０１１２】
複素環−本明細書で使用される場合、「複素環」、「複素環式」、「複素環基」および複素環式環」という用語は互換的に使用され、飽和もしくは部分不飽和であり、炭素原子に加えて、上記で定義の１以上のヘテロ原子を有する安定な置換されていても良い５から７員単環式または７から１０員二環式複素環部分を指す。複素環は、安定な構造を生じるヘテロ原子または炭素原子でのそれのペンダント基に結合していることができ、いずれの環原子も置換されていても良い。そのような飽和もしくは部分不飽和複素環基の例には、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ピロリジニル、ピロリドニル、ピペリジニル、ピロリニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オキサゾリジニル、ピペラジニル、ジオキサニル、ジオキソラニル、ジアゼピニル、オキサゼピニル、ジアゼピニル、モルホリニルおよびキヌクリジニルなどがあるが、これらに限定されるものではない。「複素環」、「複素環式」、「複素環式環」、「複素環基」、「複素環部分」および「複素環遊離基」という用語は、本明細書において互換的に使用され、複素環が１以上のアリール環、ヘテロアリール環またはインドリニル、３Ｈ−インドリル、クロマニル、フェナントリジニルもしくはテトラヒドロキノリニルなどの炭素環に縮合している基も含み、結合の基または箇所は複素環上にある。複素環基は単環式または二環式であることができる。「複素環式アルキル」という用語は、複素環式によって置換されたアルキル基を指し、そのアルキル部分および複素環部分は独立に、置換されていても良い。
【０１１３】
不飽和−本明細書で使用される場合、「不飽和」という用語は、ある部分が１以上の二重結合もしくは三重結合を有することを意味する。
【０１１４】
部分不飽和−本明細書で使用される場合、「部分不飽和」という用語は、少なくとも一つの二重結合もしくは三重結合を含む環部分を指す。「部分不飽和」という用語は、複数の不飽和部位を有する環を包含するものであるが、本明細書で定義のアリールまたはヘテロアリール部分を含むものではない。
【０１１５】
置換されていても良い−本明細書で使用される場合、本発明の化合物は、「置換されていても良い」部分を含んでいても良い。概して、「〜しても良い」という用語が先行していてもいなくとも、「置換された」という用語は、指定された部分の１以上の水素が好適な置換基によって置き換わっていることを意味する。別段の断りがない限り、「置換されていても良い」基は、その基の各置換可能な位置で好適な置換基を有することができ、いずれかの所定の構造における複数の位置が、指定された基から選択される複数の置換基で置換されていても良い場合、その置換基は、あらゆる位置で同一であっても異なっていても良い。本発明によって想到される置換基の組み合わせは好ましくは、安定かつ化学的に存在可能な化合物の生成に至るものである。本明細書で使用される場合、「安定な」という用語は、それの製造、検出、ならびに、特定の実施形態において、それの回収、精製、および本明細書に開示の目的の１以上についての使用を可能とする条件に曝露された場合に実質的に変化しない化合物を指す。
【０１１６】
「置換されていても良い」基の置換可能な炭素原子上の好適な１価置換基は独立に、ハロゲン；−（ＣＨ２）０−４Ｒ°；−（ＣＨ２）０−４ＯＲ°；−Ｏ−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；−（ＣＨ２）０−４ＣＨ（ＯＲ°）２；−（ＣＨ２）０−４ＳＲ°；−（ＣＨ２）０−４Ｐｈ（Ｒ°で置換されていても良い）；−（ＣＨ２）０−４Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ（Ｒ°で置換されていても良い）；−ＣＨ−ＣＨＰｈ（Ｒ°で置換されていても良い）；−ＮＯ２；−ＣＮ；−Ｎ３；−（ＣＨ２）０−４Ｎ（Ｒ°）２；−（ＣＨ２）０−４Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｓ）Ｒ°；−（ＣＨ２）０−４Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＮＲ°２；−Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｓ）ＮＲ°２；−（ＣＨ２）０−４Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；−Ｎ（Ｒ°）Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｎ（Ｒ°）Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＮＲ°２；−Ｎ（Ｒ°）Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｃ（Ｓ）Ｒ°；−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＳＲ°；−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＯＳｉＲ°３；−（ＣＨ２）０−４ＯＣ（Ｏ）Ｒ°；−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）０−４ＳＲ−、ＳＣ（Ｓ）ＳＲ°；−（ＣＨ２）０−４ＳＣ（Ｏ）Ｒ°；−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＮＲ°２；−Ｃ（Ｓ）ＮＲ°２；−Ｃ（Ｓ）ＳＲ°；−ＳＣ（Ｓ）ＳＲ°、−（ＣＨ２）０−４ＯＣ（Ｏ）ＮＲ°２；−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＲ°）Ｒ°；−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｃ（ＮＯＲ°）Ｒ°；−（ＣＨ２）０−４ＳＳＲ°；−（ＣＨ２）０−４Ｓ（Ｏ）２Ｒ°；−（ＣＨ２）０−４Ｓ（Ｏ）２ＯＲ°；−（ＣＨ２）０−４ＯＳ（Ｏ）２Ｒ°；−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ°２；−（ＣＨ２）０−４Ｓ（Ｏ）Ｒ°；−Ｎ（Ｒ°）Ｓ（Ｏ）２ＮＲ°２；−Ｎ（Ｒ°）Ｓ（Ｏ）２Ｒ°；−Ｎ（ＯＲ°）Ｒ°；−Ｃ（ＮＨ）ＮＲ°２；−Ｐ（Ｏ）２Ｒ°；−Ｐ（Ｏ）Ｒ°２；−ＯＰ（Ｏ）Ｒ°２；−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ°）２；ＳｉＲ°３；−（Ｃ１−４直鎖もしくは分岐）アルキレン）Ｏ−Ｎ（Ｒ°）２；または−（Ｃ１−４直鎖もしくは分岐アルキレン）Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｎ（Ｒ°）２であり、各Ｒ°は下記で定義のように置換されていても良く、独立に水素、Ｃ１−６脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ、または独立に窒素、酸素もしくは硫黄から選択される０から４個のヘテロ原子を有する５から６員の飽和環、部分飽和環もしくはアリール環であり、または上記の定義があっても、Ｒ°の二つの独立の場合が、それらの介在原子とともに、独立に窒素、酸素もしくは硫黄から選択される０から４個のヘテロ原子を有する３から１２員の飽和、部分不飽和もしくはアリールの単環式もしくは二環式環を形成しており、それは下記で定義のように置換されていても良い。
【０１１７】
Ｒ°上の好適な１価置換基（またはＲ°の二つの独立の場合が介在原子と一体となって形成された環）は独立に、ハロゲン、−（ＣＨ２）０−２Ｒ●、−（ハロＲ●）、−（ＣＨ２）０−２ＯＨ、−（ＣＨ２）０−２ＯＲ●、−（ＣＨ２）０−２ＣＨ（ＯＲ●）２；−Ｏ（ハロＲ●）、−ＣＮ、−Ｎ３、−（ＣＨ２）０−２Ｃ（Ｏ）Ｒ●、−（ＣＨ２）０−２Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）０−２Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−（ＣＨ２）０−２ＳＲ●、−（ＣＨ２）０−２ＳＨ、−（ＣＨ２）０−２ＮＨ２、−（ＣＨ２）０−２ＮＨＲ●、−（ＣＨ２）０−２ＮＲ●２、−ＮＯ２、−ＳｉＲ●３、−ＯＳｉＲ●３、−Ｃ（Ｏ）ＳＲ●、−（Ｃ１−４直鎖もしくは分岐アルキレン）Ｃ（Ｏ）ＯＲ−または−ＳＳＲ−であり、各Ｒ●は置換されていないか、「ハロ」が前に付くと１以上のハロゲンのみで置換されており、独立にＣ１−４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ、または独立に窒素、酸素もしくは硫黄から選択される０から４個のヘテロ原子を有する５から６員の飽和、部分不飽和もしくはアリールの環から選択される。Ｒ°の飽和炭素原子上の好適な二価置換基には、−Ｏおよび−Ｓなどがある。
【０１１８】
「置換されていても良い」基の飽和炭素原子上の好適な二価置換基には、次のもの：−Ｏ、−Ｓ、−ＮＮＲ＊２、−ＮＮＨＣ（Ｏ）Ｒ＊、−ＮＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ＊、−ＮＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ＊、−ＮＲ＊、−ＮＯＲ＊、−Ｏ（Ｃ（Ｒ＊２））２−３Ｏ−または−Ｓ（Ｃ（Ｒ＊２））２−３Ｓ−などがあり、Ｒ＊の各独立の場合は、水素、Ｃ１−６脂肪族（下記のように置換されていても良い）、または独立に窒素、酸素もしくは硫黄から選択される０から４個のヘテロ原子を有する置換されていない５から６員の飽和、部分不飽和もしくはアリールの環から選択される。「置換されていても良い基の隣接する置換可能な炭素に結合している好適な二価置換基には−Ｏ（ＣＲ＊２）２−３Ｏ−などがあり、Ｒ＊の各独立の場合は、水素、Ｃ１−６脂肪族（下記で定義のように置換されていても良い）、または独立に窒素、酸素もしくは硫黄から選択される０から４個のヘテロ原子を有する置換されていない５から６員の飽和、部分不飽和もしくはアリールの環から選択される。
【０１１９】
Ｒ＊の脂肪族基上の好適な置換基には、ハロゲン、−Ｒ●、−（ハロＲ●）、−ＯＨ、−ＯＲ●、−Ｏ（ハロＲ●）、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−ＮＨ２、−ＮＨＲ●、−ＮＲ●２または−ＮＯ２などがあり、各Ｒ●は置換されていないか、「ハロ」が前に付くと、１以上のハロゲンのみによって置換されており、独立にＣ１−４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ、または独立に窒素、酸素もしくは硫黄から選択される０から４個のヘテロ原子を有する５から６員の飽和、部分不飽和もしくはアリールの環である。
【０１２０】
「置換されていても良い」基の置換可能な窒素上の好適な置換基には、−Ｒ†、−ＮＲ†２、−Ｃ（Ｏ）Ｏ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ†、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ†、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ†２、−Ｃ（Ｓ）ＮＲ†２、−Ｃ（ＮＨ）ＮＲ†２または−Ｎ（Ｒ†）Ｓ（Ｏ）２Ｒ†などがあり；各Ｒ†は独立に、水素、Ｃ１−６脂肪族（下記で定義のように置換されていても良い）、置換されていない−ＯＰｈ、または独立に窒素、酸素もしくは硫黄から選択される０から４個のヘテロ原子を有する置換されていない５から６員の飽和、部分不飽和もしくはアリールの環であり、または上記の定義があったとしても、Ｒ†の二つの独立の場合がそれらの介在原子とともに、独立に窒素、酸素もしくは硫黄から選択される０から４個のヘテロ原子を有する置換されていない３から１２員の飽和、部分不飽和もしくはアリールの単環式もしくは二環式環を形成している。
【０１２１】
Ｒ†の脂肪族基上の好適な置換基は独立に、ハロゲン、−Ｒ●、−（ハロＲ●）、−ＯＨ、−ＯＲ●、−Ｏ（ハロＲ●）、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−ＮＨ２、−ＮＨＲ●、−ＮＲ●２または−ＮＯ２であり、各Ｒ●は置換されていないか、または「ハロ」が先に付いている場合、１以上のハロゲンによってのみ置換されており、独立にＣ１−４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ、または独立に窒素、酸素もしくは硫黄から選択される０から４個のヘテロ原子を有する５から６員の飽和、部分不飽和もしくはアリールの環である。
【０１２２】
好適な保護基−本明細書で使用される場合、「好適な保護基」という用語は、化合物内での位置に応じたアミノ保護基またはヒドロキシル保護基を指し、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｔ．  Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．  Ｇ．  Ｍ．  Ｗｕｔｓ，  ３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  １９９９に詳細に記載されているものなどがある。
【０１２３】
好適なアミノ保護基には、メチルカーバメート、エチルカーバメート（ｃａｒｂａｍａｎｔｅ）、９−フルオレニルメチルカーバメート（Ｆｍｏｃ）、９−（２−スルホ）フルオレニルメチルカーバメート、９−（２，７−ジブロモ）フルオレニルメチルカーバメート、２，７−ジ−ｔ−ブチル−［９−（１０，１０−ジオキソ−１０，１０，１０，１０−テトラヒドロチオキサンチル）］メチルカーバメート（ＤＢＤ−Ｔｍｏｃ）、４−メトキシフェナシルカーバメート（Ｐｈｅｎｏｃ）、２，２，２−トリクロロエチルカーバメート（Ｔｒｏｃ）、２−トリメチルシリルエチルカーバメート（Ｔｅｏｃ）、２−フェニルエチルカーバメート（ｈＺ）、１−（１−アダマンチル）−１−メチルエチルカーバメート（Ａｄｐｏｃ）、１，１−ジメチル−２−ハロエチルカーバメート、１，１−ジメチル−２，２−ジブロモエチルカーバメート（ＤＢ−ｔ−ＢＯＣ）、１，１−ジメチル−２，２，２−トリクロロエチルカーバメート（ＴＣＢＯＣ）、１−メチル−１−（４−ビフェニリル）エチルカーバメート（Ｂｐｏｃ）、１−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−１−メチルエチルカーバメート（ｔ−Ｂｕｍｅｏｃ）、２−（２′−および４′−ピリジル）エチルカーバメート（Ｐｙｏｃ）、２−（Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボキサミド）エチルカーバメート、ｔ−ブチルカーバメート（ＢＯＣ）、１−アダマンチルカーバメート（Ａｄｏｃ）、ビニルカーバメート（Ｖｏｃ）、アリルカーバメート（Ａｌｌｏｃ）、１−イソプロピルアリルカーバメート（Ｉｐａｏｃ）、シンナミルカーバメート（Ｃｏｃ）、４−ニトロシンナミルカーバメート（Ｎｏｃ）、８−キノリルカーバメート、Ｎ−ヒドロキシピペリジニルカーバメート、アルキルジチオカーバメート、ベンジルカーバメート（Ｃｂｚ）、ｐ−メトキシベンジルカーバメート（Ｍｏｚ）、ｐ−ニト（ｎｉｔｏ）ベンジルカーバメート、ｐ−ブロモベンジルカーバメート、ｐ−クロロベンジルカーバメート、２，４−ジクロロベンジルカーバメート、４−メチルスルフィニルベンジルカーバメート（Ｍｓｚ）、９−アントリルメチルカーバメート、ジフェニルメチルカーバメート、２−メチルチオエチルカーバメート、２−メチルスルホニルエチルカーバメート、２−（ｐ−トルエンスルホニル）エチルカーバメート、［２−（１，３−ジチアニル）］メチルカーバメート（Ｄｍｏｃ）、４−メチルチオフェニルカーバメート（Ｍｔｐｃ）、２，４−ジメチルチオフェニルカーバメート（Ｂｍｐｃ）、２−ホスホニオエチルカーバメート（Ｐｅｏｃ）、２−トリフェニルホスホニオイソプロピルカーバメート（Ｐｐｏｃ）、１，１−ジメチル−２−シアノエチルカーバメート、ｍ−クロロ−ｐ−アシルオキシベンジルカーバメート、ｐ−（ジヒドロキシボリル）ベンジルカーバメート、５−ベンゾイソオキサゾリルメチルカーバメート、２−（トリフルオロメチル）−６−クロモニルメチルカーバメート（Ｔｃｒｏｃ）、ｍ−ニトロフェニルカーバメート、３，５−ジメトキシベンジルカーバメート、ｏ−ニトロベンジルカーバメート、３，４−ジメトキシ−６−ニトロベンジルカーバメート、フェニル（ｏ−ニトロフェニル）メチルカーバメート、フェノチアジニル−（１０）−カルボニル誘導体、Ｎ′−ｐ−トルエンスルホニルアミノカルボニル誘導体、Ｎ′−フェニルアミノチオカルボニル誘導体、ｔ−アミルカーバメート、Ｓ−ベンジルチオカーバメート、ｐ−シアノベンジルカーバメート、シクロブチルカーバメート、シクロヘキシルカーバメート、シクロペンチルカーバメート、シクロプロピルメチルカーバメート、ｐ−デシルオキシベンジルカーバメート、２，２−ジメトキシカルボニルビニルカーバメート、ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキサミド）ベンジルカーバメート、１，１−ジメチル−３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキサミド）プロピルカーバメート、１，１−ジメチルプロピニルカーバメート、ジ（２−ピリジル）メチルカーバメート、２−フラニルメチルカーバメート、２−ヨードエチルカーバメート、イソボルニルカーバメート、イソブチルカーバメート、イソニコチニルカーバメート、ｐ−（ｐ′−メトキシフェニルアゾ）ベンジルカーバメート、１−メチルシクロブチルカーバメート、１−メチルシクロヘキシルカーバメート、１−メチル−１−シクロプロピルメチルカーバメート、１−メチル−１−（３，５−ジメトキシフェニル）エチルカーバメート、１−メチル−１−（ｐ−フェニルアゾフェニル）エチルカーバメート、１−メチル−１−フェニルエチルカーバメート、１−メチル−１−（４−ピリジル）エチルカーバメート、フェニルカーバメート、ｐ−（フェニルアゾ）ベンジルカーバメート、２，４，６−トリ−ｔ−ブチルフェニルカーバメート、４−（トリメチルアンモニウム）ベンジルカーバメート、２，４，６−トリメチルベンジルカーバメート、ホルムアミド、アセトアミド、クロロアセトアミド、トリクロロアセトアミド、トリフルオロアセトアミド、フェニルアセトアミド、３−フェニルプロパンアミド、ピコリンアミド、３−ピリジルカルボキサミド、Ｎ−ベンゾイルフェニルアラニル誘導体、ベンズアミド、ｐ−フェニルベンズアミド、ｏ−ニト（ｎｉｔｏ）フェニルアセトアミド、ｏ−ニトロフェノキシアセトアミド、アセトアセトアミド、（Ｎ′−ジチオベンジルオキシカルボニルアミノ）アセトアミド、３−（ｐ−ヒドロキシフェニル）プロパンアミド、３−（ｏ−ニトロフェニル）プロパンアミド、２−メチル−２−（ｏ−ニトロフェノキシ）プロパンアミド、２−メチル−２−（ｏ−フェニルアゾフェノキシ）プロパンアミド、４−クロロブタンアミド、３−メチル−３−ニトロブタンアミド、ｏ−ニトロシンナミド、Ｎ−アセチルメチオニン誘導体、ｏ−ニトロベンズアミド、ｏ−（ベンゾイルオキシメチル）ベンズアミド、４，５−ジフェニル−３−オキサゾリン−２−オン、Ｎ−フタルイミド、Ｎ−ジチアコハク酸イミド（Ｄｔｓ）、Ｎ−２，３−ジフェニルマレイミド、Ｎ−２，５−ジメチルピロール、Ｎ−１，１，４，４−テトラメチルジシリルアザシクロペンタン付加物（ＳＴＡＢＡＳＥ）、５−置換された１，３−ジメチル−１，３，５−トリアザシクロヘキサン−２−オン、５−置換された１，３−ジベンジル−１，３，５−トリアザシクロヘキサン−２−オン、１−置換された３，５−ジニトロ−４−ピリドン、Ｎ−メチルアミン、Ｎ−アリルアミン、Ｎ−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチルアミン（ＳＥＭ）、Ｎ−３−アセトキシプロピルアミン、Ｎ−（１−イソプロピル−４−ニトロ−２−オキソ−３−ピコリン−３−イル）アミン、四級アンモニウム塩、Ｎ−ベンジルアミン、Ｎ−ジ（４−メトキシフェニル）メチルアミン、Ｎ−５−ジベンゾスベリルアミン、Ｎ−トリフェニルメチルアミン（Ｔｒ）、Ｎ−［（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル］アミン（ＭＭＴｒ）、Ｎ−９−フェニルフルオレニルアミン（ＰｈＦ）、Ｎ−２，７−ジクロロ−９−フルオレニルメチレンアミン、Ｎ−フェロセニルメチルアミノ（Ｆｃｍ）、Ｎ−２−ピコリルアミノＮ′−オキサイド、Ｎ−１，１−ジメチルチオメチレンアミン、Ｎ−ベンジリデンアミン、Ｎ−ｐ−メトキシベンジリデンアミン、Ｎ−ジフェニルメチレンアミン、Ｎ−［（２−ピリジル）メシチル］メチレンアミン、Ｎ−（Ｎ′，Ｎ′−ジメチルアミノメチレン）アミン、Ｎ，Ｎ′−イソプロピリデンジアミン、Ｎ−ｐ−ニトロベンジリデンアミン、Ｎ−サリチリデンアミン、Ｎ−５−クロロサリチリデンアミン、Ｎ−（５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）フェニルメチレンアミン、Ｎ−シクロヘキシリデンアミン、Ｎ−（５，５−ジメチル−３−オキソ−１−シクロヘキセニル）アミン、Ｎ−ボラン誘導体、Ｎ−ジフェニルボリン酸誘導体、Ｎ−［フェニル（ペンタカルボニルクロム−またはタングステン）カルボニル］アミン、Ｎ−銅キレート、Ｎ−亜鉛キレート、Ｎ−ニトロアミン、Ｎ−ニトロソアミン、アミンＮ−オキサイド、ジフェニルホスフィンアミド（Ｄｐｐ）、ジメチルチオホスフィンアミド（Ｍｐｔ）、ジフェニルチオホスフィンアミド（Ｐｐｔ）、ジアルキルホスホルアミデート、ジベンジルホスホルアミデート、ジフェニルホスホルアミデート、ベンゼンスルフェンアミド、ｏ−ニトロベンゼンスルフェンアミド（Ｎｐｓ）、２，４−ジニトロベンゼンスルフェンアミド、ペンタクロロベンゼンスルフェンアミド、２−ニトロ−４−メトキシベンゼンスルフェンアミド、トリフェニルメチルスルフェンアミド、３−ニトロピリジンスルフェンアミド（Ｎｐｙｓ）、ｐ−トルエンスルホンアミド（Ｔｓ）、ベンゼンスルホンアミド、２，３，６，−トリメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｒ）、２，４，６−トリメトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｂ）、２，６−ジメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｐｍｅ）、２，３，５，６−テトラメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｅ）、４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｂｓ）、２，４，６−トリメチルベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｓ）、２，６−ジメトキシ−４−メチルベンゼンスルホンアミド（ｉＭｄｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホンアミド（Ｐｍｃ）、メタンスルホンアミド（Ｍｓ）、β−トリメチルシリルエタンスルホンアミド（ＳＥＳ）、９−アントラセンスルホンアミド、４−（４′，８′−ジメトキシナフチルメチル）ベンゼンスルホンアミド（ＤＮＭＢＳ）、ベンジルスルホンアミド、トリフルオロメチルスルホンアミド、およびフェナシルスルホンアミドなどがある。好適なヒドロキシル保護基には、メチル、メトキシルメチル（ＭＯＭ）、メチルチオメチル（ＭＴＭ）���ｔ−ブチルチオメチル、（フェニルジメチルシリル）メトキシメチル（ＳＭＯＭ）、ベンジルオキシメチル（ＢＯＭ）、ｐ−メトキシベンジルオキシメチル（ＰＭＢＭ）、（４−メトキシフェノキシ）メチル（ｐ−ＡＯＭ）、グアヤコールメチル（ＧＵＭ）、ｔ−ブトキシメチル、４−ペンテニルオキシメチル（ＰＯＭ）、シロキシメチル、２−メトキシエトキシメチル（ＭＥＭ）、２，２，２−トリクロロエトキシメチル、ビス（２−クロロエトキシ）メチル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル（ＳＥＭＯＲ）、テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）、３−ブロモテトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、１−メトキシシクロヘキシル、４−メトキシテトラヒドロピラニル（ＭＴＨＰ）、４−メトキシテトラヒドロチオピラニル、４−メトキシテトラヒドロチオピラニルＳ，Ｓ−ジオキシド、１−［（２−クロロ−４−メチル）フェニル］−４−メトキシピペリジン−４−イル（ＣＴＭＰ）、１，４−ジオキサン−２−イル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフラニル、２，３，３ａ，４，５，６，７，７ａ−オクタヒドロ−７，８，８−トリメチル−４，７−メタノベンゾフラン−２−イル、１−エトキシエチル、１−（２−クロロエトキシ）エチル、１−メチル−１−メトキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシ−２−フルオロエチル、２，２，２−トリクロロエチル、２−トリメチルシリルエチル、２−（フェニルセレニル）エチル、ｔ−ブチル、アリル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−メトキシフェニル、２，４−ジニトロフェニル、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル、３，４−ジメトキシベンジル、ｏ−ニトロベンジル、ｐ−ニトロベンジル、ｐ−ハロベンジル、２，６−ジクロロベンジル、ｐ−シアノベンジル、ｐ−フェニルベンジル、２−ピコリル、４−ピコリル、３−メチル−２−ピコリルＮ−オキシド、ジフェニルメチル、ｐ，ｐ′−ジニトロベンズヒドリル、５−ジベンゾスベリル、トリフェニルメチル、α−ナフチルジフェニルメチル、ｐ−メトキシフェニルジフェニルメチル、ジ（ｐ−メトキシフェニル）フェニルメチル、トリ（ｐ−メトキシフェニル）メチル、４−（４′−ブロモフェナシルオキシフェニル）ジフェニルメチル、４，４′，４″−トリス（４，５−ジクロロフタルイミドフェニル）メチル、４，４′，４″−トリス（レブリノイルオキシフェニル）メチル、４
，４′，４″−トリス（ベンゾイルオキシフェニル）メチル、３−（イミダゾール−１−イル）ビス（４′，４″−ジメトキシフェニル）メチル、１，１−ビス（４−メトキシフェニル）−１′−ピレニルメチル、９−アントリル、９−（９−フェニル）キサンテニル、９（９−フェニル−１０−オキソ）アントリル、１，３−ベンゾジチオラン−２−イル、ベンゾイソチアゾリルＳ，Ｓ−ジオキシド、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、トリエチルシリル（ＴＥＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）、ジメチルイソプロピルシリル（ＩＰＤＭＳ）、ジエチルイソプロピルシリル（ＤＥＩＰＳ）、ジメチルヘキシル（ｔｈｅｘｙｌ）シリル、ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、ｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、トリベンジルシリル、トリ−ｐ−キシリルシリル、トリフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル（ＤＰＭＳ）、ｔ−ブチルメトキシフェニルシリル（ＴＢＭＰＳ）、ホルメート、ベンゾイルホルメート、アセテート、クロロアセテート、ジクロロアセテート、トリクロロアセテート、トリフルオロアセテート、メトキシアセテート、トリフェニルメトキシアセテート、フェノキシアセテート、ｐ−クロロフェノキシアセテート、３−フェニルプロピオネート、４−オキソペンタノエート（レブリネート）、４，４−（エチレンジチオ）ペンタノエート（レブリノイルジチオアセタール）、ピバロエート、アダマントエート、クロトネート、４−メトキシクロトネート、ベンゾエート、ｐ−フェニルベンゾエート、２，４，６−トリメチルベンゾエート（メシトエート）、アルキルメチルカーボネート、９−フルオレニルメチルカーボネート（Ｆｍｏｃ）、アルキルエチルカーボネート、アルキル２，２，２−トリクロロエチルカーボネート（Ｔｒｏｃ）、２−（トリメチルシリル）エチルカーボネート（ＴＭＳＥＣ）、２−（フェニルスルホニル）エチルカーボネート（Ｐｓｅｃ）、２−（トリフェニルホスホニオ）エチルカーボネート（Ｐｅｏｃ）、アルキルイソブチルカーボネート、アルキルビニルカーボネートアルキルアリルカーボネート、アルキルｐ−ニトロフェニルカーボネート、アルキルベンジルカーボネート、アルキルｐ−メトキシベンジルカーボネート、アルキル３，４−ジメトキシベンジルカーボネート、アルキルｏ−ニトロベンジルカーボネート、アルキルｐ−ニトロベンジルカーボネート、アルキルＳ−ベンジルチオカーボネート、４−エトキシ−１−ナフチルカーボネート、メチルジチオカーボネート、２−ヨードベンゾエート、４−アジドブチレート、４−ニトロ−４−メチルペンタノエート、ｏ−（ジブロモメチル）ベンゾエート、２−ホルミルベンゼンスルホネート、２−（メチルチオメトキシ）エチル、４−（メチルチオメトキシ）ブチレート、２−（メチルチオメトキシメチル）ベンゾエート、２，６−ジクロロ−４−メチルフェノキシアセテート、２，６−ジクロロ−４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェノキシアセテート、２，４−ビス（１，１−ジメチルプロピル）フェノキシアセテート、クロロジフェニルアセテート、イソブチレート、モノスクシノエート、（Ｅ）−２−メチル−２−ブテノエート、ｏ−（メトキシカルボニル）ベンゾエート、α−ナフトエート、硝酸エステル、アルキルＮ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルホスホロジアミデート、アルキルＮ−フェニルカーバメート、ホウ酸エステル、ジメチルホスフィノチオイル、アルキル２，４−ジニトロフェニルスルフェネート、硫酸エステル、メタンスルホネート（メシレート）、ベンジルスルホネート、およびトシレート（Ｔｓ）などがある。１，２−または１，３−ジオール類の保護に関しては、保護基には、メチレンアセタール、エチリデンアセタール、１−ｔ−ブチルエチリデンケタール、１−フェニルエチリデンケタール、（４−メトキシフェニル）エチリデンアセタール、２，２，２−トリクロロエチリデンアセタール、アセトニド、シクロペンチリデンケタール、シクロヘキシリデンケタール、シクロヘプチリデンケタール、ベンジリデンアセタール、ｐ−メトキシベンジリデンアセタール、２，４−ジメトキシベンジリデンケタール、３，４−ジメトキシベンジリデンアセタール、２−ニトロベンジリデンアセタール、メトキシメチレンアセタール、エトキシメチレンアセタール、ジメトキシメチレンオルトエステル、１−メトキシエチリデンオルトエステル、１−エトキシエチリデンオルトエステル、１，２−ジメトキシエチリデンオルトエステル、α−メトキシベンジリデンオルトエステル、１−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチリデン誘導体、α−（Ｎ，Ｎ′−ジメチルアミノ）ベンジリデン誘導体、２−オキサシクロペンチリデンオルトエステル、ジ−ｔ−ブチルシリレン基（ＤＴＢＳ）、１，３−（１，１，３，３−テトライソプロピルジシロキサニリデン）誘導体（ＴＩＰＤＳ）、テトラ−ｔ−ブトキシジシロキサン−１，３−ジイリデン誘導体（ＴＢＤＳ）、環状カーボネート、環状ボロネート、エチルボロネート、およびフェニルボロネートなどがある。
【０１２４】
化学可変要素（例えば、Ｒ基）が環の結合を横切る結合に結合しているように示されている場合、それは、１以上のそのような可変要素が交差した結合を有する環に結合していても良いことを意味する。そのような環上の各Ｒ基は、その環上のいずれか好適な位置で結合していることができ、それはその基が親環上の水素原子に代えて結合していることを意味するものと理解される。これには、２個のＲ基が同じ環原子に結合し得る可能性を含むものである。さらに、一つの環上に複数のＲ基が存在する場合、それぞれが、それに結合している他のＲ基と同一であっても異なっていても良く、各基は、それらが同じ識別記号によって表すことができる場合であっても、同一分子上に別の形で結合していることができる他の基から独立に定義される。
【０１２５】
生物分解性−本明細書で使用される場合、「生物分解性」という用語は、生理条件下またはエンドソーム条件下で分解（すなわち、共有結合構造の少なくとも一部を失う）する分子を指す。生物分解性分子は、必ずしも加水分解的に分解するとは限らず、分解するのに酵素作用を必要とする可能性もある。
【０１２６】
生体分子−本明細書で使用される場合、「生体分子」という用語は、天然であるか人工的に作られたもの（例えば、合成法または組換え法によって）であるかを問わず、細胞および組織で一般に認められる分子（例えば、ポリペプチド類、アミノ酸類、ポリヌクレオチド類、ヌクレオチド類、多糖類、糖類、脂質、核タンパク質類、糖タンパク質類、リポタンパク質類、ステロイド類、代謝物など）を指す。具体的な種類の生体分子には、酵素、受容体、神経伝達物質、ホルモン、サイトカイン類、増殖因子および走化因子などの細胞応答調整剤、抗体、ワクチン類、ハプテン類、毒素、インターフェロン類、リボザイム類、アンチセンス剤、プラスミド類、ＤＮＡおよびＲＮＡなどがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１２７】
薬剤−本明細書で使用される場合、「薬剤」という用語は、生物剤を変化させる、阻害する、活性化する、または他の形で影響する小分子または生体分子を指す。例えば、薬剤には、抗ＡＩＤＳ物質、抗癌物質、抗生物質、抗糖尿病物質、免疫抑制物質、抗ウィルス物質、酵素阻害剤、神経毒、オピオイド類、睡眠薬、抗ヒスタミン薬、潤滑剤、精神安定剤、抗痙攣薬、筋弛緩剤および抗パーキンソン物質、鎮痙剤およびチャンネル遮断薬などの筋肉収縮剤、縮瞳剤および抗コリン作用薬、抗緑内障化合物、抗寄生虫および／または抗原虫化合物、細胞増殖阻害剤および抗接着分子などの細胞−細胞外基質相互作用の調節剤、血管拡張剤、ＤＮＡ、ＲＮＡもしくはタンパク質合成の阻害剤、血圧降下剤、鎮痛剤、解熱剤、ステロイド系および非ステロイド系抗炎症剤、抗血管新生因子、抗分泌因子、抗凝血剤および／または抗血栓剤、局所麻酔薬、麻酔薬、眼科薬、プロスタグランジン類、抗鬱薬、抗精神病物質、制吐剤および造影剤などがあり得るが、これらに限定されるものではない。本発明での使用に好適な薬剤例のより完全なリストは、“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ：  Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ，  Ｐａｔｅｎｔｓ，  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”，  ｂｙ  Ａｘｅｌ  Ｋｌｅｅｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｊｕｒｇｅｎ  Ｅｎｇｅｌ，  Ｔｈｉｅｍｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，  １９９９；ｔｈｅ  “Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ：  Ａｎ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，  Ｄｒｕｇｓ，  およびＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ”，  ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｓｕｓａｎ  Ｂｕｄａｖａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  １９９６，  およびｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ−２５／Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ−２０，  ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍｃｏｐｅｉａｌ  Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ，  Ｉｎｃ．，  Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ  Ｍｄ．，  ２００１にある。
【０１２８】
外因性−本明細書で使用される場合、「外因性」分子は、患者に投与されない限りは、患者において有意なレベルでは存在しない分子である。特定の実施形態において、患者は哺乳動物、例えばヒト、イヌ、ネコ、ラット、ミニ豚などである。本明細書で使用される場合、その種類の患者の正常な血清が０．１Ｍ未満の分子を含む場合、その分子は患者において有意なレベルでは存在しない。特定の実施形態において、患者において正常な血清には、０．０８ｍＭ未満、０．０６ｍＭ未満、または０．０４ｍＭ未満の分子などがあり得る。
【０１２９】
超分岐−本明細書で使用される場合、「超分岐」構造は、少なくとも一つの分岐した分岐（例えば、デンドリマー構造）を含む共有結合構造である。超分岐構造は、ポリマー性および／または非ポリマー性下位構造を含むことができる。
【０１３０】
正常血清−本明細書で使用される場合、「正常血清」は、５名以上の非糖尿病患者からの凝固した全血のほぼ等量の液体部分を蓄積することによって得られる血清である。非糖尿病ヒト患者は、採血時に糖尿病の症状を示さない無作為に選択された１８から３０歳の患者である。
【０１３１】
ポリマー−本明細書で使用される場合、「ポリマー」または「ポリマー構造」は、一続きの共有結合的に結合したモノマーを含む構造である。ポリマーは、１種類のモノマーまたは複数種類のモノマーから製造することができる。従って、「ポリマー」という用語は、異なる種類のモノマーがポリマー全体内で別々に群分けされるブロックコポリマーなどのコポリマーを包含する。ポリマーは、直鎖もしくは分岐であることができる。
【０１３２】
ポリヌクレオチド−本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」は、ヌクレオチドのポリマーである。「ポリヌクレオチド」、「核酸」および「オリゴヌクレオチド」という用語は、互換的に用いることができる。そのポリマーには、天然ヌクレオシド（すなわち、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン、およびデオキシシチジン）、ヌクレオシド類縁体（例えば、２−アミノアデノシン、２−チオチミジン、イノシン、ピロロ−ピリミジン、３−メチルアデノシン、５−メチルシチジン、Ｃ５−ブロモウリジン、Ｃ５−フルオロウリジン、Ｃ５−ヨードウリジン、Ｃ５−プロピニル−ウリジン、Ｃ５−プロピニル−シチジン、Ｃ５−メチルシチジン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−オキソアデノシン、８−オキソグアノシン、Ｏ（６）−メチルグアニン、４−アセチルシチジン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン、ジヒドロウリジン、メチルシュードウリジン、１−メチルアデノシン、１−メチルグアノシン、Ｎ６−メチルアデノシン、および２−チオシチジン）、化学修飾塩基、生理的修飾塩基（例えば、メチル化塩基）、挿入塩基、修飾糖類（例えば、２′−フルオロリボース、リボース、２′−デオキシリボース、２′−Ｏ−メチルシチジン、アラビノース、およびヘキソース）、または修飾されたリン酸基（例えば、ホスホロチオエートおよび５′−Ｎ−ホスホルアミダイト連結）などがあり得る。
【０１３３】
ポリペプチド−本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」は、アミノ酸のポリマーである。「ポリペプチド」、「タンパク質」、「オリゴペプチド」、および「ペプチド」という用語は互換的に用いることができる。ポリペプチドは、当業界で公知のように天然アミノ酸、非アミノ酸（すなわち、天然物ではないが、ポリペプチド鎖に組み込むことができる化合物）および／またはアミノ酸類縁体を含むことができる。さらに、ポリペプチドにおけるアミノ酸残基の１以上を、例えば、結合、官能化その他の修飾のために炭水化物基、リン酸基、ファルネシル基、イソファルネシル基、脂肪酸基、リンカーなどの化学要素を付加することで修飾することができる。これらの修飾は、ペプチドの環化、Ｄ−アミノ酸の組み込みなどを含むことができる。
【０１３４】
多糖類−本明細書で使用される場合、「多糖類」は、糖類のポリマーである。「多糖類」、「炭水化物」、および「オリゴ糖類」という用語は、互換的に用いることができる。そのポリマーには、天然糖類（例えば、アラビノース、リキソース、リボース、キシロース、リブロース、キシルロース、アロース、アルトロース、ガラクトース、グルコース、グロース、イドース、マンノース、タロース、果糖、プシコース、ソルボース、タガロース、マンオヘプツロース、セドヘプツロース、オクトロースおよびシアロース（ｓｉａｌｏｓｅ））および／または修飾糖類（例えば、２′−フルオロリボース、２′−デオキシリボース、およびヘキソース）などがあり得る。二糖類の例には、ショ糖、乳糖、麦芽糖、トレハロース、ゲンチオビオース、イソマルトース、コージビオース、ラミナリビオース、マンノビオース、メリビオース、ニゲロース、ルチノースおよびキシロビオースなどがある。
【０１３５】
小分子−本明細書で使用される場合、「小分子」という用語は、天然物であるか人工的に作られたか（例えば、化学合成を介して）を問わず、比較的低分子量を有する分子を指す。代表的には、小分子は単量体であり、約１５００Ｄａ未満の分子量を有する。好ましい小分子は、動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトにおいて局所効果または全身効果を生じるという点で生理活性である。特に好ましい実施形態では、小分子は薬剤である。必須ではないが、好ましくは、その薬剤は、適切な政府当局または機関によって使用において安全かつ有効であるとすでに考えられているものである。例えば、２１Ｃ．Ｆ．Ｒ．§§３３０．５、３３１−３６１および４４０−４６０下にＦＤＡによって挙げられたヒトで使用される薬剤；２１Ｃ．Ｆ．Ｒ．§§５００−５８９下にＦＤＡによって挙げられた動物で使用される薬剤は全て、本発明に従っての使用に許容されると考えられる。
【０１３６】
治療する−本明細書で使用される場合、「治療する」という用語（または「を治療する」、「治療される」、「治療」など）は、ある状態（例えば、糖尿病）、ある状態の症状もしくは複数の症状（例えば、高血糖）、またはある状態への素因を軽減、緩和、変化、寛解、改善もしくは影響することを目的として、処置を必要とする対象者に本開示の複合体を投与することを指す。例えば、本明細書で使用される場合、「糖尿病を治療」という用語は、血糖レベルをほぼ正常レベルに維持することを指し、所定の状況に応じて血糖レベルを上昇または低下させることを含み得るものである。
【０１３７】
医薬として許容される担体−本明細書で使用される場合、その用語は、リン酸緩衝生理食塩水、水、油／水もしくは水／油型乳濁液などの乳濁液、および各種湿展剤などの標準的な医薬担体を含む。その用語は、米国連邦政府の規制当局が承認し、ヒトなどの動物での使用に関して米国薬局方に挙げられている薬剤も包含するものである。
【０１３８】
医薬として許容される塩−本明細書で使用される場合、その用語は、親化合物の生理活性を保持し、生理的その他において望ましくないものではない化合物の塩を指す。本明細書に開示の化合物の多くが、アミノおよび／またはカルボキシル基またはそれらに類似の基の存在によって酸塩および／または塩基塩を形成することができる。
【０１３９】
医薬として許容される塩基付加塩は、無機塩基および有機塩基から製造することができる。無機塩基由来の塩には、単に例示するだけであるが、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩およびマグネシウム塩などがある。有機塩基由来の塩には、１級、２級および３級アミンの塩などがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１４０】
医薬として許容される酸付加塩は、無機および有機酸から製造することができる。無機酸由来の塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などがある。有機酸由来の塩には、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸などがある。
【０１４１】
有効量または治療上有効量−本明細書で使用される場合、これは、無毒性であるが所望の効果を提供するのに十分なインシュリン類縁体の量を指す。例えば、ある望ましい効果は、高血糖の予防または治療であると考えられる。「有効」な量は、個体の年齢および全身状態、投与形態などに応じて、対象者ごとに変動するものである。従って、正確な「有効量」を特定することが常に可能であるとは限らない。しかしながら、いずれか個々の症例における適切な「有効」量は、通常の実験を用いて当業者が求めることができる。
【０１４２】
非経口−本明細書で使用される場合、その用語は、消化管からではなく、鼻腔内、吸入、皮下、筋肉、脊髄内または静脈などの何らかの他の経路によることを意味する。
【０１４３】
インシュリン−本明細書で使用される場合、その用語は、動物身体における炭水化物の代謝に影響し、糖尿病治療において価値のある膵臓の活性成分を意味する。その用語は、構造、用途および所期の効果において天然のインシュリンと同一または類似しており、糖尿病の治療において価値のある合成製造物およびバイオテクノロジー由来製造物を含むものである。
【０１４４】
インシュリンまたはインシュリン分子−その用語は、配列番号１に示したアミノ酸配列を有するＡ鎖ペプチドおよび配列番号２に示したアミノ酸配列を有するＢ鎖ペプチドを含む５１アミノ酸ヘテロ二量体を指す総称であり、Ａ鎖の位置６および１１のシステイン残基はジスルフィド結合で連結されており、Ａ鎖の位置７およびＢ鎖の位置７のシステイン残基はジスルフィド結合で連結されており、Ａ鎖の位置２０およびＢ鎖の１９のシステイン残基はジスルフィド結合で連結されている。
【０１４５】
インシュリン類縁体または類似体−本明細書で使用されるこの用語は、天然Ａ鎖ペプチドおよび／またはＢ鎖ペプチドの１以上の修飾を含むヘテロ二量体類似体または一本鎖類似体を含むものである。修飾には、Ａ４、Ａ５、Ａ８、Ａ９、Ａ１０、Ａ１２、Ａ１３、Ａ１４、Ａ１５、Ａ１６、Ａ１７、Ａ１８、Ａ１９、Ａ２１、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４、Ｂ５、Ｂ９、Ｂ１０、Ｂ１３、Ｂ１４、Ｂ１５、Ｂ１６、Ｂ１７、Ｂ１８、Ｂ２０、Ｂ２１、Ｂ２２、Ｂ２３、Ｂ２６、Ｂ２７、Ｂ２８、Ｂ２９、およびＢ３０から選択される位置での天然アミノ酸のあるアミノ酸への置換；位置Ｂ１から４およびＢ２６から３０のいずれかまたは全ての欠失；または直接またはポリマーもしくは非ポリマーリンカーによる、１以上のアシル、ポリエチルグリシン（ＰＥＧ）もしくは糖類部分（複数部分）の結合；またはそれらのいずれかの組み合わせなどがあるが、これらに限定されるものではない。本明細書に開示のＮ−連結グリコシル化インシュリン類似体など、その用語はさらに、少なくとも一つのＮ−連結グリコシル化部位を有するよう修飾されたインシュリンヘテロ二量体および一本鎖類似体、特には、Ｎ−連結グリコシル化部位がＮ−グリカンに連結されているか、それによって占有されている実施形態を含むものである。インシュリン類似体の例には、公開国際特許出願ＷＯ２０１０００８０６０６、ＷＯ２００９／０９９７６３、およびＷＯ２０１００８０６０９（これらの開示内容は、参照によって本明細書に組み込まれる）に開示のヘテロ二量体および一本鎖類似体などがあるが、これらに限定されるものではない。一本鎖インシュリン類似体の例には、公開国際特許出願ＷＯ９６３４８８２、ＷＯ９５５１６７０８、ＷＯ２００５０５４２９１、ＷＯ２００６０９７５２１、ＷＯ２００７１０４７３４、ＷＯ２００７１０４７３６、ＷＯ２００７１０４７３７、ＷＯ２００７１０４７３８、ＷＯ２００７０９６３３２、ＷＯ２００９１３２１２９；米国特許第５，３０４，４７３号および同６，６３０，３４８号；およびＫｒｉｓｔｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｊ．  ３０５：９８１−９８６（１９９５）（これらの開示内容は、参照によって本明細書に組み込まれる）に開示のものなどもあるが、それらに限定されるものではない。
【０１４６】
その用語はさらに、インシュリン受容体ではほとんど検出可能な活性を持たないが、修飾されて１以上のアミノ酸修飾もしくは置換を含んだことで、インシュリン受容体で活性を有するようになっており、天然インシュリンと比較してインシュリン受容体で少なくとも１％、１０％、５０％、７５％もしくは９０％の活性を有し、少なくとも一つのＮ−連結グリコシル化部位をさらに含む一本鎖およびヘテロ二量体ポリペプチド分子を含む。特定の態様において、インシュリン類似体は、インシュリン受容体で天然インシュリンの１／２から１／１００の活性を有する部分作動薬である。他の態様において、インシュリン類似体は、インシュリン受容体、例えば、公開国際特許出願ＷＯ２０１００８０６０７（参照によって本明細書に組み込まれる）に開示のＩＧＦＢ１６Ｂ１７誘導体ペプチドで高い活性を有する。インシュリン成長ホルモン受容体で低い活性を有し、インシュリン受容体で高い活性を有するこれらのインシュリン類似体には、ヘテロ二量体および一本鎖類似体の両方が含まれる。
【０１４７】
一本鎖インシュリンまたは一本鎖インシュリン類縁体−本明細書で使用される場合、この用語は、Ａ鎖ペプチドもしくは機能性類似体およびＢ鎖ペプチドもしくは機能性類似体が２から３５アミノ酸のペプチドもしくはポリペプチドまたは非ペプチドポリマー性もしくは非ポリマー性リンカーによって共有結合的に連結されており、天然インシュリンと比較してインシュリン受容体で少なくとも１％、１０％、５０％、７５％もしくは９０％のインシュリン活性を有する、構造的に関連のあるタンパク質の群を包含する。一本鎖インシュリンまたはインシュリン類似体はさらに、三つのジスルフィド結合を含み、第１のジスルフィド結合はＡ鎖もしくはそれの機能性類似体の位置６および１１のシステイン残基間であり、第２のジスルフィド結合はＡ鎖もしくはそれの機能性類似体の位置７およびＢ鎖もしくはそれの機能性類似体の位置７のシステイン残基間であり、第３のジスルフィド結合はＡ鎖もしくはそれの機能性類似体の位置２０およびＢ鎖もしくはそれの機能性類似体の位置１９のシステイン残基間である。
【０１４８】
結合ペプチドまたはＣ−ペプチド−本明細書で使用される場合、その用語は、一本鎖プレプロインシュリン様分子のＢ−Ｃ−Ａポリペプチド配列の連結部分「Ｃ」を指す。具体的には、天然インシュリン鎖において、Ｃ−ペプチドは、Ｂ鎖の位置３０のアミノ酸とＡ鎖の位置１のアミノ酸を連結する。その用語は、天然インシュリンＣ−ペプチド（配列番号３０）、サルＣ−ペプチド、およびＢ鎖をＡ鎖に連結することから、一本鎖インシュリン類似体（例えば、米国公開特許出願番号２００９０１７０７５０および２００８００５７００４およびＷＯ９６３４８８２参照）およびＷＯ９５１６７０８および米国特許第７，１０５，３１４号に開示のものなどのインシュリン前駆体分子におけるＢ鎖ペプチドをＡ鎖ペプチドに連結するあらゆるペプチドを包含するものである３から３５アミノ酸の他のペプチドの両方を指すことができる。
【０１４９】
アミノ酸修飾−本明細書で使用される場合、その用語は、アミノ酸の置換、またはアミノ酸への／それからの化学基の付加および／または除去によるアミノ酸の誘導体化を指し、ヒトタンパク質において一般に認められる２０種類のアミノ酸のいずれか、ならびに異型もしくは非天然アミノ酸による置換を含む。異型アミノ酸の商業的入手先には、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）、ＣｈｅｍＰｅｐ  Ｉｎｃ．（Ｍｉａｍｉ、ＦＬ）およびＧｅｎｚｙｍｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）などがある。異型アミノ酸は、商業的供給者から購入することができるか、デ・ノボで合成することができるか、天然アミノ酸を化学的に修飾したり、誘導体化することができる。
【０１５０】
アミノ酸置換−本明細書で使用される場合、あるアミノ酸残基の異なるアミノ酸残基による置き換えを指す。
【０１５１】
保存アミノ酸置換−本明細書で使用される場合、その用語は、本明細書において、下記の５群のうちの１群内での交換と定義される。
【０１５２】
Ｉ．小さい脂肪族、非極性もしくは若干極性の残基：
Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ；
ＩＩ．極性の負電荷を有する残基およびそれらのアミド：
Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、システイン酸およびホモシステイン酸；
ＩＩＩ．極性の正電荷を有する残基：
Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ；オルニチン（Ｏｒｎ）
ＩＶ．大きい脂肪族非極性残基：
Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｃｙｓ、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、ホモシステイン
Ｖ．大きい芳香族残基：
Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、アセチルフェニルアラニン。
【図面の簡単な説明】
【０１５３】
【図１】デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．６９ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−２の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）。各実験では、動物に（□）静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））または（●）ＰＢＳを注入した。データは、２コンパートメント双指数関数モデルから誘導される曲線と適合させた平均値としてプロットしている。
【図２】デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．１７ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−３の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）。各実験では、動物に（□）静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））または（●）ＰＢＳを注入した。データは、２コンパートメント双指数関数モデルから誘導される曲線と適合させた平均値としてプロットしている。
【図３】デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．１７ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−８の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）。各実験では、動物に（□）静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））または（●）ＰＢＳを注入した。データは、２コンパートメント双指数関数モデルから誘導される曲線と適合させた平均値としてプロットしている。
【図４】デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．１７ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−９の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）。各実験では、動物に（□）静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））または（●）ＰＢＳを注入した。データは、２コンパートメント双指数関数モデルから誘導される曲線と適合させた平均値としてプロットしている。
【図５】デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．３５ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−１６の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）。各実験では、動物に（□）静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））または（●）ＰＢＳを注入した。データは、２コンパートメント双指数関数モデルから誘導される曲線と適合させた平均値としてプロットしている。
【図６】デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．３５ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−２２の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）。各実験では、動物に（□）静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））または（●）ＰＢＳを注入した。データは、２コンパートメント双指数関数モデルから誘導される曲線と適合させた平均値としてプロットしている。
【図７】デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．３５ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−２３の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）。各実験では、動物に（□）静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））または（●）ＰＢＳを注入した。データは、２コンパートメント双指数関数モデルから誘導される曲線と適合させた平均値としてプロットしている。
【図８】デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．３５ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−４６の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）。各実験では、動物に（□）静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））または（●）ＰＢＳを注入した。データは、２コンパートメント双指数関数モデルから誘導される曲線と適合させた平均値としてプロットしている。
【図９】デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．３５ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−４８の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）。各実験では、動物に（□）静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））または（●）ＰＢＳを注入した。データは、２コンパートメント双指数関数モデルから誘導される曲線と適合させた平均値としてプロットしている。
【図１０】デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．３５ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−５２の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）。各実験では、動物に（□）静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））または（●）ＰＢＳを注入した。データは、２コンパートメント双指数関数モデルから誘導される曲線と適合させた平均値としてプロットしている。
【図１１】デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．６９ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−５６の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）。各実験では、動物に（□）静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））または（●）ＰＢＳを注入した。データは、２コンパートメント双指数関数モデルから誘導される曲線と適合させた平均値としてプロットしている。
【図１２】デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．３５ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−６０の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）。各実験では、動物に（□）静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））または（●）ＰＢＳを注入した。データは、２コンパートメント双指数関数モデルから誘導される曲線と適合させた平均値としてプロットしている。
【図１３】デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．６９ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−７５の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）。各実験では、動物に（□）静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））または（●）ＰＢＳを注入した。データは、２コンパートメント双指数関数モデルから誘導される曲線と適合させた平均値としてプロットしている。
【図１４】デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．１７ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−７６の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）。各実験では、動物に（□）静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））または（●）ＰＢＳを注入した。データは、２コンパートメント双指数関数モデルから誘導される曲線と適合させた平均値としてプロットしている。
【図１５】（●）ＰＢＳ注入または（□）静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）注入（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））の条件下での０．６９ｎｍｏｌ／ｋｇでの複合体ＩＯＣ−２の静脈注射後のデュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタにおける血糖降下曲線（試験当たりｎ＝３）。
【図１６】（●）ＰＢＳ注入または（□）静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）注入（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））の条件下での０．１７ｎｍｏｌ／ｋｇでの複合体ＩＯＣ−３の静脈注射後のデュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタにおける血糖降下曲線（試験当たりｎ＝３）。
【図１７】（●）ＰＢＳ注入または（□）静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）注入（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））の条件下での０．３５ｎｍｏｌ／ｋｇでの複合体ＩＯＣ−１６の静脈注射後のデュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタにおける血糖降下曲線（試験当たりｎ＝３）。
【図１８】（●）ＰＢＳ注入または（□）静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）注入（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））の条件下での０．３５ｎｍｏｌ／ｋｇでの複合体ＩＯＣ−２２の静脈注射後のデュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタにおける血糖降下曲線（試験当たりｎ＝３）。
【図１９】（●）ＰＢＳ注入または（□）静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）注入（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））の条件下での０．３５ｎｍｏｌ／ｋｇでの複合体ＩＯＣ−２３の静脈注射後のデュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタにおける血糖降下曲線（試験当たりｎ＝３）。
【図２０】（●）ＰＢＳ注入または（□）静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）注入（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））の条件下での０．３５ｎｍｏｌ／ｋｇでの複合体ＩＯＣ−５２の静脈注射後のデュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタにおける血糖降下曲線（試験当たりｎ＝３）。
【図２１】（●）ＰＢＳ注入または（□）静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）注入（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））の条件下での０．６９ｎｍｏｌ／ｋｇでの複合体ＩＯＣ−５６の静脈注射後のデュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタにおける血糖降下曲線（試験当たりｎ＝３）。
【図２２】（●）ＰＢＳ注入または（□）静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）注入（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））の条件下での０．３５ｎｍｏｌ／ｋｇでの複合体ＩＯＣ−６０の静脈注射後のデュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタにおける血糖降下曲線（試験当たりｎ＝３）。
【発明を実施するための形態】
【０１５４】
本発明は、グルコースなどの糖類の全身濃度に応答する形で、インシュリンの薬物動態（ＰＫ）および／または薬力学（ＰＤ）プロファイルを制御する方法を提供する。その方法は、特定のインシュリン複合体を修飾して分岐トリマンノースなどの高アフィニティ糖類リガンドを含むようにした場合に、それらが、レクチンコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）などの外因性の多価糖類結合性分子の非存在下であっても糖類濃度変化に応答するＰＫ／ＰＤプロファイルを示すようになる可能性があるという米国公開特許出願番号２０１１／０３０１０８３で開示の発見に一部基づくものである。
【０１５５】
概して、本発明のインシュリン複合体は、二本の腕を有するかそれらからなる少なくとも一つの分岐リンカーに共有結合的に結合したインシュリンもしくはインシュリン類縁体分子を含み、各腕は独立に糖類を含むかそれからなるリガンドに共有結合的に結合しており、リンカーの少なくとも一つのリガンドは糖類フコースを含む。特定の実施形態において、リガンドは、内因性糖類結合性分子への結合に関して糖類（例えば、グルコースまたはα−メチルマンノース）と競合することができる。特定の実施形態において、リガンドは、ＣｏｎＡへの結合に関してグルコースまたはα−メチルマンノースと競合することができる。特定の実施形態において、リンカーは非ポリマー性である。特定の実施形態において、複合体は、多分散指数１および約２０，０００Ｄａ未満のＭＷを有することができる。特定の実施形態において、複合体は、本明細書で定義および記載の式（Ｉ）または（ＩＩ）のものである。特定の実施形態において、複合体は長期作用性である（すなわち、可溶性組換えヒトインシュリン（ＲＨＩ）より持続性であるＰＫプロファイルを示す）。
【０１５６】
本明細書で使用される場合、「インシュリン複合体」という用語には、（ｉ）インシュリンの天然または野生型アミノ酸配列を有するインシュリン分子を含むインシュリン複合体および（ｉｉ）インシュリン類縁体分子を含むインシュリン複合体（インシュリン類縁体は、少なくとも一つのアミノ酸置換、欠失、転位もしくは付加により天然もしくは野生型インシュリンアミノ酸配列と異なるアミノ酸配列を含む。）が含まれる。その用語はさらに、ポリエチレングリコールまたは脂肪酸分子に結合したインシュリンもしくはインシュリン類縁体分子を含む。インシュリン分子は、ヒトインシュリン、ブタインシュリン、ウシインシュリン、ウサギインシュリン、ヒツジインシュリンなど、またはそれらの類縁体であることができる。多くのこれらインシュリン分子が、例えばＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から市販されている。各種の改変型インシュリンが当業界で知られている（例えば、Ｃｒｏｔｔｙ  ａｎｄ  Ｒｅｙｎｏｌｄｓ，  Ｐｅｄｉａｔｒ．  Ｅｍｅｒｇ．  Ｃａｒｅ．  ２３：９０３−９０５，  ２００７およびＧｅｒｉｃｈ，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  １１３：３０８−１６，  ２００２およびそれらで引用されている参考文献参照）。改変型のインシュリンは、化学修飾（例えば、下記に記載のＰＥＧ基または脂肪アシル鎖などの化学部分の付加による）および／または突然変異（すなわち、１以上のアミノ酸の付加、欠失または置換による）したものであることができる。
【０１５７】
インシュリン複合体
１態様において、本発明は、少なくとも一つの２本の腕を有する分岐リンカー（二座リンカー）に共有結合的に結合したインシュリンもしくはインシュリン類縁体分子を含み、前記二座リンカーの各腕が独立に、糖類を含むかそれからなるリガンドに共有結合的に連結されており、二座リンカーの第１のリガンドが、フコースである第１の糖類を含むかそれからなる、インシュリン複合体を提供する。二座リンカーの第２のリガンドは、フコース、マンノース、グルコサミンもしくはグルコースであることができる第２の糖類を含むかそれからなるものである。特定の態様において、第２のリガンドは二糖類、三糖類、四糖類もしくは分岐三糖類を含むかそれからなる。特定の態様において、第２のリガンドはジマンノース、トリマンノース、テトラマンノースまたは分岐トリマンノースを含む。
【０１５８】
特定の態様において、インシュリンもしくはインシュリン類縁体分子は、１個、２個、３個もしくは４個の二座リンカーに結合しており、各二座リンカーの各腕は独立に、糖類を含むかそれからなるリガンドに共有結合的に連結されており、二座リンカーの第１のリガンドは、フコースである第１の糖類を含むかそれからなり、二座リンカーの第２のリガンドは、フコース、マンノースもしくはグルコースであることができる第２の糖類を含むかそれからなる。特定の態様において、第２のリガンドは、二糖類、三糖類、四糖類もしくは分岐三糖類を含むかそれからなる。特定の態様において、第２のリガンドは、ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノースまたは分岐トリマンノースを含むかそれからなる。
【０１５９】
特定の態様において、インシュリンもしくはインシュリン類縁体分子は、１個、２個、３個もしくは４個の二座リンカーに結合しており、各二座リンカーの各腕は独立に、糖類を含むかそれからなるリガンドに共有結合的に連結されており、二座リンカーのうちの少なくとも一つについて、二座リンカーの第１のリガンドは、フコースである第１の糖類を含むかそれからなり、二座リンカーの第２のリガンドは、フコース、マンノースもしくはグルコースであることができる第２の糖類を含むかそれからなる。特定の態様において、第２のリガンドは、二糖類、三糖類、四糖類もしくは分岐三糖類を含むかそれからなる。特定の態様において、第２のリガンドは、ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノースまたは分岐トリマンノースを含むかそれからなる。第２、第３および第４の二座リンカーにおいて、第１および第２の糖類は独立に、フコース、マンノース、グルコース、二糖類、三糖類、四糖類、分岐三糖類、ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノース、または分岐トリマンノースであることができる。
【０１６０】
特定の態様において、インシュリンもしくはインシュリン類縁体分子は、（ｉ）１個の二座リンカーに結合しており、各二座リンカーの各腕は独立に、糖類を含むかそれからなるリガンドに共有結合的に連結されており、二座リンカーの第１のリガンドは、フコースである第１の糖類を含むかそれからなり、二座リンカーの第２のリガンドは、フコース、マンノース、グルコース、二糖類、三糖類、四糖類、分岐三糖類、ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノースもしくは分岐トリマンノースであることができる第２の糖類を含むかそれからなる。
【０１６１】
特定の態様において、本明細書に開示のインシュリン複合体のインシュリンもしくはインシュリン類縁体分子はさらに、フコース、マンノース、グルコサミンもしくはグルコースであることができる糖類を含むかそれからなる１個のリガンドを有する少なくとも一つの直鎖リンカーに共有結合的に結合している。特定の態様において、リガンドは、二糖類、三糖類、四糖類または分岐三糖類を含むか、それからなる。特定の態様において、リガンドは、ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノースまたは分岐トリマンノースを含むかそれからなる。
【０１６２】
特定の態様において、本明細書に開示のインシュリンもしくはインシュリン類縁体分子複合体はさらに、少なくとも一つの三座リンカーに共有結合的に結合しており、その三座リンカーの各腕は独立に、フコース、マンノース、グルコサミンもしくはグルコースであることができる糖類を含むかそれからなるリガンドに共有結合的に連結されている。特定の態様において、リガンドは、二糖類、三糖類、四糖類もしくは分岐三糖類を含むかそれからなる。特定の態様において、リガンドは、ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノースまたは分岐トリマンノースを含むかそれからなる。
【０１６３】
インシュリン複合体を哺乳動物に投与する場合、複合体の少なくとも一つの薬物動態または薬力学特性が、糖類の血清濃度に感受性である。特定の実施形態において、複合体のＰＫおよび／またはＰＤは、グルコースなどの内因性糖類の血清濃度に感受性である。特定の実施形態において、複合体のＰＫおよび／またはＰＤ特性は、外因性糖類、例えばマンノース、Ｌ−フコース、Ｎ−アセチルグルコサミンおよび／またはα−メチルマンノースなど（これらに限定されるものではない）の血清濃度に感受性である。
【０１６４】
ＰＫおよびＰＤ特性
各種実施形態において、インシュリン複合体の薬物動態および／または薬力学挙動は、糖類の血清濃度が変動することで変わり得る。例えば、薬物動態（ＰＫ）の観点からは、糖類（例えば、グルコース）の血清濃度が上昇する場合、または糖類の血清濃度が閾値（例えば、正常グルコースレベルより高い）を通過する場合、血清濃度曲線は上方向に移動し得る。
【０１６５】
特定の実施形態において、複合体の血清濃度曲線は、空腹状態下および高血糖状態下で哺乳動物に投与した場合に実質的に異なる。本明細書で使用される場合、「実質的に異なる」という用語は、その二つの曲線がスチューデントのｔ検定（ｐ＜０．０５）によって求めた場合に実質的に異なることを意味する。本明細書で使用される場合、「空腹状態」という用語は、血清濃度曲線が５以上の空腹非糖尿病個体からのデータを合わせることで得られたものであることを意味している。特定の実施形態において、空腹非糖尿病個体は、採血時に糖尿病の症状を示さず、採血の１２時間以内に食事を摂っていない無作為に選択される１８から３０歳ヒトである。本明細書で使用される場合、「高血糖状態」という用語は、血清濃度曲線が、高血糖状態（グルコースＣｍａｘが空腹状態下で認められる平均グルコース濃度より少なくとも１００ｍｇ／ｄＬ高い）が複合体およびグルコースの同時投与によって誘発された５名以上の空腹非糖尿病個体からのデータを合わせることで得られたことを意味する。複合体およびグルコースの同時投与は単に、
複合体が血清中に検出可能なレベルで存在する期間中にグルコースＣｍａｘが生じることを必要とする。例えば、グルコース注射（または消化）が、複合体を投与する直前、同時または直後に生じるように時間を決定することができるものと考えられる。特定の実施形態において、複合体およびグルコースは、異なる経路または異なる位置で投与される。例えば、特定の実施形態において、複合体は皮下投与し、一方でグルコースは経口投与もしくは静脈投与する。
【０１６６】
特定の実施形態において、複合体の血清Ｃｍａｘは、空腹状態と比較して、高血糖状態下の方が高い。さらにまたは代替形態として、特定の実施形態において、複合体の血清の曲線下面積（ＡＵＣ）は、空腹状態と比較して高血糖状態下の方が高い。各種実施形態において、複合体の血清排出速度は、空腹状態と比較して高血糖状態下の方が遅い。特定の実施形態において、複合体の血清濃度曲線は、一方が短半減期および一方が長半減期の２コンパートメント双指数モデルを用いて適合させることができる。長半減期は、グルコース濃度に対して特に感受性であるように思われる。従って、特定の実施形態において、長半減期は、空腹状態と比較して高血糖状態下の方が長い。特定の実施形態において、空腹状態には、１００ｍｇ／ｄＬ未満（例えば、８０ｍｇ／ｄＬ、７０ｍｇ／ｄＬ、６０ｍｇ／ｄＬ、５０ｍｇ／ｄＬなど）のグルコースＣｍａｘが関与する。特定の実施形態において、高血糖状態には、２００ｍｇ／ｄＬを超える（例えば、３００ｍｇ／ｄＬ、４００ｍｇ／ｄＬ、５００ｍｇ／ｄＬ、６００ｍｇ／ｄＬなど）グルコースＣｍａｘが関与する。平均血清滞留時間（ＭＲＴ）、平均血清吸収時間（ＭＡＴ）などの他のＰＫパラメータを、上記のパラメータに代えて、またはそれらと組み合わせて用いることが可能であろうことは明らかである。
【０１６７】
ヒト、イヌ、ネコおよびラットでのグルコース濃度の正常範囲は、６０から２００ｍｇ／ｄＬである。当業者であれば、異なる正常範囲を有する動物種について下記の値を外挿することができるであろう（例えば、ミニブタにおけるグルコース濃度の正常範囲は４０から１５０ｍｇ／ｄＬである。）。６０ｍｇ／ｄＬ以下のグルコース濃度は低血糖と考えられる。２００ｍｇ／ｄＬを超えるグルコース濃度は高血糖と考えられる。特定の実施形態において、複合体のＰＫ特性はグルコースクランプ法を用いて調べることができ（実施例参照）、複合体の血清濃度曲線は５０および２００ｍｇ／ｄＬ、５０および３００ｍｇ／ｄＬ、５０および４００ｍｇ／ｄＬ、５０および５００ｍｇ／ｄＬ、５０および６００ｍｇ／ｄＬ、１００および２００ｍｇ／ｄＬ、１００および３００ｍｇ／ｄＬ、１００および４００ｍｇ／ｄＬ、１００および５００ｍｇ／ｄＬ、１００および６００ｍｇ／ｄＬ、２００および３００ｍｇ／ｄＬ、２００および４００ｍｇ／ｄＬ、２００および５００ｍｇ／ｄＬ、２００および６００ｍｇ／ｄＬなどのグルコース濃度で投与した場合に実質的に異なり得る。さらにまたは代替形態として、血清Ｔｍａｘ、血清Ｃｍａｘ、平均血清滞留時間（ＭＲＴ）、平均血清吸収時間（ＭＡＴ）および／または血清半減期は、二つのグルコース濃度で実質的に異なり得る。下記で記載するように、特定の実施形態において、１００ｍｇ／ｄＬおよび３００ｍｇ／ｄＬを比較グルコース濃度として用いることができる。しかしながら、理解すべき点として、本開示は、次のペア：５０および２００ｍｇ／ｄＬ、５０および３００ｍｇ／ｄＬ、５０および４００ｍｇ／ｄＬ、５０および５００ｍｇ／ｄＬ、５０および６００ｍｇ／ｄＬ、１００および２００ｍｇ／ｄＬ、１００および４００ｍｇ／ｄＬ、１００および５００ｍｇ／ｄＬ、１００および６００ｍｇ／ｄＬ、２００および３００ｍｇ／ｄＬ、２００および４００ｍｇ／ｄＬ、２００および５００ｍｇ／ｄＬ、２００および６００ｍｇ／ｄＬなどのいずれか（これらに限定されるものではない）の別の比較グルコース濃度ペアであるこれら実施形態のそれぞれを包含するものである。
【０１６８】
従って、特定の実施形態において、複合体のＣｍａｘは、二つのグルコース濃度（例えば、３００と１００ｍｇ／ｄＬグルコース）の高い方の哺乳動物に投与した場合の方が高い。特定の実施形態において、複合体のＣｍａｘは、二つのグルコース濃度（例えば、３００と１００ｍｇ／ｄＬグルコース）の高い方の哺乳動物に投与した場合の方が、少なくとも５０％（例えば、少なくとも１００％、少なくとも２００％または少なくとも４００％）高い。
【０１６９】
特定の実施形態において、複合体のＡＵＣは、二つのグルコース濃度（例えば、３００と１００ｍｇ／ｄＬグルコース）の高い方の哺乳動物に投与した場合の方が高い。特定の実施形態において、複合体のＡＵＣは、二つのグルコース濃度（例えば、３００と１００ｍｇ／ｄＬグルコース）の高い方の哺乳動物に投与した場合の方が少なくとも５０％（例えば、少なくとも例えば、少なくとも１００％、少なくとも２００％または少なくとも４００％）高い。
【０１７０】
特定の実施形態において、複合体の血清排出速度は、二つのグルコース濃度（例えば、３００と１００ｍｇ／ｄＬグルコース）の高い方の哺乳動物に投与した場合の方が遅い。特定の実施形態において、複合体の血清排出速度は、二つのグルコース濃度（例えば、１００と３００ｍｇ／ｄＬグルコース）の低い方の哺乳動物に投与した場合の方が、少なくとも２５％（例えば、少なくとも５０％、少なくとも１００％、少なくとも２００％、または少なくとも４００％）早い。
【０１７１】
特定の実施形態において、複合体の血清濃度を、一つの短半減期および一つの長半減期を有する２コンパートメント双指数を用いて適合させることができる。長半減期はグルコース濃度に対して特に感受性であるように思われる。従って、特定の実施形態において、長半減期は、二つのグルコース濃度（例えば、３００と１００ｍｇ／ｄＬグルコース）の高い方の哺乳動物に投与した場合の方が長い。特定の実施形態において、長半減期は、二つのグルコース濃度（例えば、３００と１００ｍｇ／ｄＬグルコース）の高い方の哺乳動物に投与した場合の方が少なくとも５０％（例えば、少なくとも１００％、少なくとも２００％または少なくとも４００％）長い。
【０１７２】
特定の実施形態において、本開示は、複合体の血清濃度曲線を二つの異なるグルコース濃度（例えば、３００と１００ｍｇ／ｄＬグルコース）で得る方法を提供し、その二つの曲線を一つの短半減期および一つの長半減期のある２コンパートメント双指数モデルを用いて適合させ、二つのグルコース濃度下で得られた長半減期を比較する。特定の実施形態において、この方法を、１以上の複合体のグルコース感受性を調べるアッセイまたは比較するアッセイとして用いることができる。
【０１７３】
特定の実施形態において、本開示は、複合体化薬剤（例えば、本開示のインシュリン複合体）および非複合体化型の薬剤（例えば、ＲＨＩ）の血清濃度曲線を同じ状態（例えば、空腹状態）で得る方法を提供し、その二つの曲線を、一つの短半減期および一つの長半減期を有する２コンパートメント双指数モデルを用いて適合させ、複合体化薬剤および非複合体化薬剤について得られた長半減期を比較する。特定の実施形態において、この方法を、非複合体化薬剤より急速にクリアランスされる複合体を確認するアッセイとして用いることができる。
【０１７４】
特定の実施形態において、複合体の血清濃度曲線は、高血糖状態下の哺乳動物に投与された場合の非複合体型薬剤の血清濃度曲線と実質的に同じである。本明細書で使用される場合、「実質的に同じ」という用語は、スチューデントｔ検定（ｐ＞０．０５）によって測定される二つの曲線間に統計的差がないことを意味する。特定の実施形態において、複合体の血清濃度曲線は、空腹状態下で投与された場合に、非複合体化型薬剤の血清濃度曲線とは実質的に異なる。特定の実施形態において、複合体の血清濃度曲線は、高血糖状態下で投与した場合は非複合体化型薬剤の血清濃度曲線と実質的に同じであり、空腹状態下で投与した場合は実質的に異なる。
【０１７５】
特定の実施形態において、高血糖状態には、２００ｍｇ／ｄＬを超える（例えば、３００ｍｇ／ｄＬ、４００ｍｇ／ｄＬ、５００ｍｇ／ｄＬ、６００ｍｇ／ｄＬなど）グルコースＣｍａｘが関与する。特定の実施形態において、空腹状態には、１００ｍｇ／ｄＬ未満（例えば、８０ｍｇ／ｄＬ、７０ｍｇ／ｄＬ、６０ｍｇ／ｄＬ、５０ｍｇ／ｄＬなど）のグルコースＣｍａｘが関与する。血清Ｔｍａｘ、血清Ｃｍａｘ、ＡＵＣ、平均血清滞留時間（ＭＲＴ）、平均血清吸収時間（ＭＡＴ）および／または血清半減期などの上記ＰＫパラメータのいずれかを比較可能であることは明らかであろう。薬力学（ＰＤ）の観点からは、グルコース濃度が上昇すると、またはグルコース濃度が閾値（例えば、正常グルコースレベルより高い）を通過すると、複合体の生理活性は上昇し得る。特定の実施形態において、複合体の生理活性は、高血糖状態と比較して、空腹状態下で投与した場合の方が低い。特定の実施形態において、空腹状態には、１００ｍｇ／ｄＬ未満（例えば、８０ｍｇ／ｄＬ、７０ｍｇ／ｄＬ、６０ｍｇ／ｄＬ、５０ｍｇ／ｄＬなど）のグルコースＣｍａｘが関与する。特定の実施形態において、高血糖状態には、２００ｍｇ／ｄＬを超える（例えば、３００ｍｇ／ｄＬ、４００ｍｇ／ｄＬ、５００ｍｇ／ｄＬ、６００ｍｇ／ｄＬなど）グルコースＣｍａｘが関与する。
【０１７６】
特定の実施形態において、定常グルコース濃度を維持するのに必要なグルコース注入速度（ＧＩＲ）を測定することで、複合体のＰＤ特性を調べることができる。そのような実施形態によれば、５０および２００ｍｇ／ｄＬ、５０および３００ｍｇ／ｄＬ、５０および４００ｍｇ／ｄＬ、５０および５００ｍｇ／ｄＬ、５０および６００ｍｇ／ｄＬ、１００および２００ｍｇ／ｄＬ、１００および３００ｍｇ／ｄＬ、１００および４００ｍｇ／ｄＬ、１００および５００ｍｇ／ｄＬ、１００および６００ｍｇ／ｄＬ、２００および３００ｍｇ／ｄＬ、２００および４００ｍｇ／ｄＬ、２００および５００ｍｇ／ｄＬ、２００および６００ｍｇ／ｄＬなどのグルコース濃度で投与した場合に、複合体の生理活性は実質的に異なり得る。従って、特定の実施形態において、複合体の生理活性は、二つのグルコース濃度（例えば、３００と１００ｍｇ／ｄＬグルコース）の高い方の哺乳動物に投与した場合の方が高い。特定の実施形態において、複合体の生理活性は、二つのグルコース濃度（例えば、３００と１００ｍｇ／ｄＬグルコース）の高い方の哺乳動物に投与した場合の方が少なくとも２５％（例えば、少なくとも５０％または少なくとも１００％）高い。
【０１７７】
特定の実施形態において、複合体は、薬剤としてインシュリン分子を含む。そのような実施形態によれば、インシュリンについてのＰＤ挙動は、最小血糖濃度（Ｔｎａｄｉｒ）に達するのに要する時間を比較することで観察することができ、その期間中、血糖レベルは初期値の特定のパーセント以下に維持する（例えば、初期値の７０％またはＴ７０％ＢＧＬなど）。
【０１７８】
概して、このセクションで議論されるＰＫおよびＰＤの特徴のいずれかを、各種の公開された薬物動態法および薬力学法のいずれかに従って確認できることは明らかであろう（例えば、皮下送達に好適な方法については、Ｂａｕｄｙｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．  ９：１７６−１８３，  １９９８を参照する。）。さらに理解すべき点として、ＰＫおよび／またはＰＤ特性はあらゆる哺乳動物（例えば、ヒト、ラット、ネコ、ミニブタ、イヌなど）で測定することができる。特定の実施形態において、ＰＫおよび／またはＰＤ特性をヒトで測定する。特定の実施形態において、ＰＫおよび／またはＰＤ特性をラットで測定する。特定の実施形態において、ＰＫおよび／またはＰＤ特性をミニブタで測定する。特定の実施形態において、ＰＫおよび／またはＰＤ特性をイヌで測定する。
【０１７９】
さらに、前記の内容はグルコース応答性複合体の文脈で記載されたたものであるが、同じ特性およびアッセイが外因性糖類、例えば、マンノース、Ｌ−フコース、Ｎ−アセチルグルコサミン、α−メチルマンノースなどの他の糖類に応答する複合体に適用されることは明らかであろう。下記および実施例でより詳細に議論されるように、空腹状態および高血糖状態下でのＰＫおよび／またはＰＤ特性を比較するのではなく、外因性糖類を投与する場合と投与しない場合で空腹状態下にてＰＫおよび／またはＰＤ特性を比較することができる。理解すべき点として、複合体は、所定の外因性糖類の異なるＣｍａｘ値に応答するよう設計することができる。
【０１８０】
リガンド
概して、インシュリン複合体は、少なくとも一つの２個のリガンドを有する二座リンカーに共有結合的に結合したインシュリンもしくはインシュリン類縁体分子を含み、そのリガンドの少なくとも一方（第１のリガンド）はフコースである糖類を含むかそれからなり、他方のリガンド（第２のリガンド）は１以上の糖類を含むかそれからなる。特定の実施形態において、インシュリン複合体はさらに、１以上の直鎖リンカーを含むことができ、各リンカーが、１以上の糖類を含むかそれからなる単一のリガンドを含む。特定の実施形態において、インシュリン複合体はさらに、それぞれが少なくとも２個、３個、４個、５個もしくはそれ以上のリガンドを含む１以上の分岐リンカーを含むことができ、各リガンドは独立に、１以上の糖類を含むかそれからなる。複数のリガンドが存在する場合、それらリガンドは、同一または異なる化学構造を有することができる。
【０１８１】
特定の実施形態において、リガンドは、内因性糖類結合性分子（例えば、界面活性剤タンパク質ＡおよびＤまたはセレクチンファミリーの構成員などがあるが、これらに限定されるものではない）への結合に関して糖類（例えば、グルコース、α−メチルマンノース、またはマンノース）と競合することができる。特定の実施形態において、リガンドは、細胞表面糖受容体（例えば、マクロファージマンノース受容体、グルコース輸送体リガンド、内皮細胞糖受容体、または肝細胞糖受容体などがあるが、これらに限定されるものではない）への結合に関して糖類（例えば、グルコース、α−メチルマンノース、またはマンノース）と競合することができる。特定の実施形態において、リガンドは、内因性グルコース結合性分子（例えば、界面活性剤タンパク質ＡおよびＤまたはセレクチンファミリーの構成員などがあるが、これらに限定されるものではない）への結合に関してグルコースと競合することができる。特定の実施形態において、リガンドは、ヒトマクロファージマンノース受容体１（ＭＲＣ１）への結合に関してグルコースまたはα−メチルマンノースと競合することができる。特定の実施形態において、リガンドは、非ヒトレクチン（例えば、ＣｏｎＡ）への結合に関して糖類と競合することができる。特定の実施形態において、リガンドは、非ヒトレクチン（例えば、ＣｏｎＡ）への結合に関してグルコース、α−メチルマンノース、またはマンノースと競合することができる。グルコース結合性レクチンの例には、カルネキシン、カルレティキュリン、Ｎ−アセチルグルコサミン受容体、セレクチン、アシアロ糖タンパク質受容体、コレクチン（マンノース結合性レクチン）、マンノース受容体、アグリカン、バーシカン、エンドウマメアグルチニン（ＰＳＡ）、ソラマメレクチン、レンズマメレクチン、ダイズレクチン、ピーナッツレクチン、ヒゲレンリソウレクチン、イガマメレクチン、エンジュレクチン、ボーリンギア・ミルブラエジイ（ｂｏｗｒｉｎｇｉａ  ｍｉｌｂｒａｅｄｉｉ）レクチン、コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）、およびヤマゴボウマイトジェンなどがある。
【０１８２】
特定の実施形態において、糖類フコースを含むかそれからなる第１のリガンド以外のリガンドは、グルコースと同じ化学構造を有することができるか、グルコースの化学的に関連のある化学種、例えばグルコサミンであることができる。各種実施形態において、リガンドがグルコースとは異なる化学構造を有することで、例えば、複合体のグルコース応答を微調整することが有利な場合がある。例えば、特定の実施形態において、グルコース、マンノース、Ｌ−フコースまたはこれらの誘導体（例えば、α−Ｌ−フコピラノシド、マンノサミン、β−連結Ｎ−アセチルマンノサミン、メチルグルコース、メチルマンノース、エチルグルコース、エチルマンノース、プロピルグルコース、プロピルマンノースなど）および／またはこれらのより高次の組み合わせ（例えば、ジマンノース、直鎖および／または分岐トリマンノースなど）を含むリガンドを用いることが考えられる。
【０１８３】
特定の実施形態において、リガンドには、単糖類などがある。特定の実施形態において、リガンドには二糖類などがある。特定の実施形態において、リガンドには三糖類などがある。一部の実施形態において、リガンドは、糖類および１以上のアミン基を含む。一部の実施形態において、リガンドは糖類およびエチル基を含む。特定の実施形態において、糖類およびアミン基は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、例えばＣ１−Ｃ３アルキル基によって分離されている。一部の実施形態において、リガンドはアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）である。一部の実施形態において、リガンドはアミノエチルマンノース（ＡＥＭ）である。一部の実施形態において、リガンドはアミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）である。一部の実施形態において、リガンドはアミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）である。一部の実施形態において、リガンドはβ−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）である。一部の実施形態において、リガンドはアミノエチルフコース（ＡＥＦ）である。特定の実施形態において、糖類は「Ｄ」配置のものであり、他の実施形態において糖類は「Ｌ」配置のものである。下記のものは、Ｃ２エチル基によって糖類から分離されたアミン基を有する例示的糖類の構造であり、Ｒは水素またはリンカーのカルボニル基であることができる。他のリガンドの例は、当業者には明らかであろう。
【化２１】
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【０１８４】
インシュリン
本明細書で使用される場合、「インシュリン」または「インシュリン分子」という用語は、インシュリン分子の全ての塩の形態および非塩の形態を包含する。塩形態は、インシュリン分子により、アニオン性でもカチオン性でもよいことは明らかである。「インシュリン」または「インシュリン分子」は、生理活性（すなわち、イン・ビボで投与された場合、グルコースの検出可能な還元を起こすことができる）である限りにおいて、野生型インシュリンも修飾型インシュリンも両方包含するものと本発明者らは意図する。野生型インシュリンとして、精製、合成または組換えの形態を問わず、あらゆる動物種からのインシュリン（たとえば、ヒトインシュリン、ブタインシュリン、ウシインシュリン、ウサギインシュリン、ヒツジインシュリンなど）が挙げられる。これらの数多くが、たとえば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から市販されている。インシュリンの各種修飾型（インシュリン類縁体）が当分野で公知である（例えば、Ｃｒｏｔｔｙ  ａｎｄ  Ｒｅｙｎｏｌｄｓ，  Ｐｅｄｉａｔｒ．  Ｅｍｅｒｇ．  Ｃａｒｅ．  ２３：９０３−９０５，  ２００７およびＧｅｒｉｃｈ，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  １１３：３０８−１６，  ２００２およびそこに列挙されている参考文献参照）。修飾型のインシュリンは、化学的に修飾（たとえば、以下に記載するように、ＰＥＧ基または脂肪族アシル鎖のような化学的部分の付加によって）してもよく、および／または突然変異を（すなわち、１個以上のアミノ酸の付加、欠失または置換によって）起こさせてもよい。
【０１８５】
特定の実施形態では、本開示のインシュリン分子は、１から１０個の（たとえば、１−９、１−８、１−７、１−６、１−５、１−４、１−３、１−２、２−９、２−８、２−７、２−６、２−５、２−４、２−３、３−９、３−８、３−７、３−６、３−５、３−４、４−９、４−８、４−７、４−６、４−５、５−９、５−８、５−７、５−６、６−９、６−８、６−７、７−９、７−８、８−９、９、８、７、６、５、４、３、２または１）アミノ酸置換、付加および／または欠失の点で、野生型インシュリンと異なる。特定の実施形態では、本開示のインシュリン分子は、アミノ酸置換のみの点で、野生型インシュリンと異なる。特定の実施形態では、本開示のインシュリン分子は、アミノ酸付加のみの点で、野生型インシュリンと異なる。特定の実施形態では、本開示のインシュリン分子は、アミノ酸置換および付加の点で、野生型インシュリンと異なる。特定の実施形態では、本開示のインシュリン分子は、アミノ酸置換と欠失との点で、野生型インシュリンと異なる。
【０１８６】
特定の実施形態では、アミノ酸置換を、関与する残基の極性、荷電性、溶解性、疎水性、親水性および／または両親媒性特性における類似性に基づいて行ってもよい。特定の実施形態では、置換は保存的であってもよく、すなわち、一つのアミノ酸が、それと類似した形および電荷を持つものと置き換えられてもよい。保存的置換は、当分野で公知であり、通常、以下の群、グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸；アスパラギン、グルタミン；セリン、トレオニン；リジン、アルギニン；およびチロシン、フェニルアラニン内での置換が挙げられる。特定の実施形態では、適切な置換変異の選択において、アミノ酸の疎水性指数を考慮してもよい。ポリペプチドにおける相互作用的生理機能の付与における疎水性アミノ酸指数の重要性は、当分野で一般的に理解されている。あるいは、アミノ酸と同じ置換は、親水性に基づいて効果的に行うことができる。ポリペプチドにおける相互作用的生理機能の付与における親水性の重要性は、当分野で一般的に理解されている。ポリペプチドの設計における疎水性指数または親水性の使用については、米国特許第５，６９１，１９８号で、さらに検討されている。
【０１８７】
ヒトインシュリンの野生型配列（Ａ鎖およびＢ鎖）を、以下に示す。
【０１８８】
Ａ鎖（配列番号１）：ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ
Ｂ鎖（配列番号２）：ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＰＫＴ。
【０１８９】
各種実施形態で、本開示のインシュリン分子は、Ｂ−ペプチド配列のＢ２８および／またはＢ２９位で変異を起こす。例えば、インシュリンリスプロ（ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標））は、Ｂ−ペプチドのＣ末端上の最後から２番目のリジンと、プロリン残基とが逆転した速効性インシュリン変異体（ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインシュリン）（配列番号３）である。この修飾により、インシュリン多量体の形成が遮断される。インシュリンアスパルト（ＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標））は、Ｂ２８位のプロリンがアスパラギン酸で置換された他の速効性インシュリン変異体（ＡｓｐＢ２８−ヒトインシュリン）（配列番号４）である。この変異体も、多量体の形成を阻止する。一部の実施形態では、Ｂ２８および／またはＢ２９位での変異は、インシュリンポリペプチドの別の部分での１個以上の変異によって達成される。例えば、インシュリングルリシン（ＡＰＩＤＲＡ（登録商標））は、Ｂ３位のアスパラギン酸がリジン残基で置き換えられ、Ｂ２９位のリジンがグルタミン酸残基で置き換えられた別の速効性インシュリン変異体（ＬｙｓＢ３ＧｌｕＢ２９−ヒトインシュリン）（配列番号５）でもある。
【０１９０】
各種実施形態で、本開示のインシュリン分子は、ヒトインシュリンに対してシフトする等電点を有する。一部の実施形態では、等電点のシフトは、１個以上のアルギニン残基を、インシュリンＡ−ペプチドのＮ末端および／またはインシュリンＢ−ペプチドのＣ末端に付加することによって達成される。そのようなインシュリンポリペプチドの例として、ＡｒｇＡ０−ヒトインシュリン、ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインシュリン、ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインシュリン、ＡｒｇＡ０ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインシュリンおよびＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインシュリンが挙げられる。さらなる例として、インシュリングラルギン（ＬＡＮＴＵＳ（登録商標））は、ＡｓｐＡ２１がグリシン（配列番号６）で置き換えられ、２個のアルギニン残基がＢ−ペプチド（配列番号７）のＣ末端に付加された例示的な持続型インシュリン変異体である。これらの変化の効果は、等電点をシフトさせることであり、ｐＨ４で完全に溶解する溶液を作り出す。従って、一部の実施形態では、本開示のインシュリン分子は、Ａ２１がＧｌｙであるＡ−ペプチド配列と、Ｂ３１およびＢ３２がＡｒｇ−ＡｒｇであるＢ−ペプチド配列とを含む。本開示は、これらの変異および本明細書で記載される他のいかなる変異（例えば、ＧｌｙＡ２１−ヒトインシュリン、ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１−ヒトインシュリン、ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインシュリン、ＡｒｇＢ３１−ヒトインシュリン）の単独および複数の組合せ全てを包含することは理解されるべきである。
【０１９１】
各種実施形態で、本開示のインシュリン分子は切断される。例えば、ある実施形態では、本開示のインシュリンポリペプチドのＢ−ペプチド配列は、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ２６、Ｂ２７、Ｂ２８、Ｂ２９および／またはＢ３０が欠けている。特定の実施形態では、残基の組合せが、本開示のインシュリンポリペプチドのＢ−ペプチド配列から欠けている。例えば、Ｂ−ペプチド配列は、残基Ｂ（１−２）、Ｂ（１−３）、Ｂ（２９−３０）、Ｂ（２８−３０）、Ｂ（２７−３０）および／またはＢ（２６−３０）を欠いてもよい。一部の実施形態では、これらの欠失および／またはトランケーションは、先に記載したいずれのインシュリン分子（例えば、ｄｅｓ（Ｂ３０）−インシュリンリスプロ、ｄｅｓ（Ｂ３０）−インシュリンアスパルト、ｄｅｓ（Ｂ３０）−インシュリングルリシン、ｄｅｓ（Ｂ３０）−インシュリングラルギンなど（これらに限定されない）を製造するために）にも適用される。
【０１９２】
一部の実施形態で、インシュリン分子は、ＡまたはＢ−ペプチド配列のＮまたはＣ末端に追加のアミノ酸残基を含有する。一部の実施形態では、１個以上のアミノ酸残基が、Ａ０、Ａ２１、Ｂ０および／またはＢ３１位に位置する。一部の実施形態では、１個以上のアミノ酸残基がＡ０位に位置する。一部の実施形態では、１個以上のアミノ酸残基がＡ２１位に位置する。一部の実施形態では、１個以上のアミノ酸残基がＢ０位に位置する。一部の実施形態では、１個以上のアミノ酸残基がＢ３１位に位置する。特定の実施形態では、インシュリン分子は、Ａ０、Ａ２１、Ｂ０またはＢ３１位にはいかなる追加のアミノ酸残基も含まない。
【０１９３】
特定の実施形態では、本開示のインシュリン分子を、１個以上のアミド化アミノ酸を酸性型で置き換えるように変異させる。例えば、アスパラギンを、アスパラギン酸またはグルタミン酸で置き換えてもよい。同様に、グルタミンをアスパラギン酸またはグルタミン酸で置き換えてもよい。特に、ＡｓｎＡ１８、ＡｓｎＡ２１またはＡｓｎＢ３、またはこれらの残基の任意の組合せを、アスパラギン酸またはグルタミン酸で置き換えてもよい。ＧｌｎＡ１５またはＧｌｎＢ４、または両方を、アスパラギン酸またはグルタミン酸で置き換えてもよい。特定の実施形態では、インシュリン分子は、Ａ２１位でアスパラギン酸を、またはＢ３位でアスパラギン酸を有し、またはその両方でアスパラギン酸を有する。
【０１９４】
当業者であれば、生理活性を保ちつつ、インシュリン分子内の他のアミノ酸も変異することが可能であることを認識する。例えば、以下の修飾も、限定されることなく当分野で広く認められている。Ｂ１０位のヒスチジン残基のアスパラギン酸による置換え（ＨｉｓＢ１０→ＡｓｐＢ１０）、Ｂ１位のフェニルアラニン残基のアスパラギン酸による置換え（ＰｈｅＢ１→ＡｓｐＢ１）、Ｂ３０位のトレオニン残基のアラニンによるによる置換え（ＴｈｒＢ３０→ＡｌａＢ３０）、Ｂ２６位のチロシン残基のアラニンによる置換え（ＴｙｒＢ２６→ＡｌａＢ２６）、およびＢ９位のセリン残基のアスパラギン酸による置換え（ＳｅｒＢ９→ＡｓｐＢ９）。
【０１９５】
各種実施形態で、本開示のインシュリン分子は、作用の遅延性プロフィールを有する。従って、特定の実施形態では、本開示のインシュリン分子は、脂肪酸でアシル化されてもよい。すなわち、インシュリン分子上のアミノ基と脂肪酸のカルボン酸基との間にアミド結合が形成されている。アミノ基は、インシュリン分子のＮ末端アミノ酸のα−アミノ基でもよいし、またはインシュリン分子のリジン残基のε−アミノ基でもよい。本開示のインシュリン分子は、野生型ヒトインシュリンに存在する３個のアミノ基の１個以上のアミノ基で、アシル化されてもよいし、または野生型ヒトインシュリン配列に導入されているリジン残基でアシル化されてもよい。特定の実施形態では、インシュリン分子は、Ｂ１位でアシル化されてもよい。特定の実施形態では、インシュリン分子は、Ｂ２９位でアシル化されてもよい。ある実施形態では、脂肪酸は、ミリスチン酸（Ｃ１４）、ペンタデシル酸（Ｃ１５）、パルミチン酸（Ｃ１６）、ヘプタデシル酸（Ｃ１７）およびステアリン酸（Ｃ１８）から選択される。例えば、インシュリンデテミル（ＬＥＶＥＭＩＲ（登録商標））は、ＴｈｒＢ３０が欠失され、Ｃ１４脂肪酸鎖（ミリスチン酸）がＬｙｓＢ２９に結合されている持続型インシュリン変異体である。
【０１９６】
一部の実施形態では、Ａ−ペプチドのＮ末端、Ｂ−ペプチドのＮ末端、Ｂ２９位のＬｙｓのε−アミノ基、または本開示のインシュリン分子中の任意の他の可能なアミノ基は、下記一般式：
【化２２】
0006491649.tif 000031
【０１９７】
（式中、ＲＦは、水素またはＣ１−３０アルキル基である）の脂肪酸部分に共有結合で結合している。一部の実施形態では、ＲＦは、Ｃ１−２０アルキル基、Ｃ３−１９アルキル基、Ｃ５−１８アルキル基、Ｃ６−１７アルキル基、Ｃ８−１６アルキル基、Ｃ１０−１５アルキル基またはＣ１２−１４アルキル基である。特定の実施形態では、インシュリンポリペプチドは、Ａ１位で前記部分に複合体化する。特定の実施形態では、インシュリンポリペプチドは、Ｂ１位で前記部分に複合体化する。特定の実施形態では、インシュリンポリペプチドは、Ｂ２９位のＬｙｓのε−アミノ基で前記部分に複合体化する。特定の実施形態では、インシュリン分子のＢ２８位はＬｙｓであり、ＬｙｓＢ２８のε−アミノ基が脂肪酸部分に複合体化する。特定の実施形態では、インシュリン分子のＢ３位はＬｙｓであり、ＬｙｓＢ３のε−アミノ基が脂肪酸部分に複合体化する。一部の実施形態では、脂肪酸鎖は、炭素数８から２０の長さである。一部の実施形態では、脂肪酸は、オクタン酸（Ｃ８）、ノナン酸（Ｃ９）、デカン酸（Ｃ１０）、ウンデカン酸（Ｃ１１）、ドデカン酸（Ｃ１２）、またはトリデカン酸（Ｃ１３）である。特定の実施形態では、脂肪酸は、ミリスチン酸（Ｃ１４）、ペンタデカン酸（Ｃ１５）、パルミチン酸（Ｃ１６）、ヘプタデカン酸（Ｃ１７）、ステアリン酸（Ｃ１８）、ノナデカン酸（Ｃ１９）またはアラキドン酸（Ｃ２０）である。
【０１９８】
各種実施形態で、本開示のインシュリン分子は、３つの野生型ジスルフィド架橋（すなわち、１つはＡ鎖の７位とＢ鎖の７位との間にあり、２番目はＡ鎖の２０位とＢ鎖の１９位との間にあり、３番目はＡ鎖の６位と１１位との間にある）を含む。特定の実施形態では、インシュリン分子を変異部位を複合点として使用し、変異部位での複合が、インシュリン受容体（例えば、ＬｙｓＡ３）への結合を減らすように変異させる。特定の実施形態では、野生型アミノ酸が存在するところまたは末端での複合により、インシュリン受容体（例えば、ＧｌｙＡ１）への結合が減る。一部の実施形態では、インシュリン分子は、Ａ４、Ａ５、Ａ８、Ａ９またはＢ３０位で複合体化する。特定の実施形態では、Ａ４、Ａ５、Ａ８、Ａ９またはＢ３０位での複合は、野生型アミノ酸側鎖（例えば、ＧｌｕＡ４）により行われる。特定の他の実施形態では、インシュリン分子は、Ａ４、Ａ５、Ａ８、Ａ９またはＢ３０位で変異を起こし、複合のための部位（例えば、ＬｙｓＡ４、ＬｙｓＡ５、ＬｙｓＡ８、ＬｙｓＡ９またはＬｙｓＢ３０）を提供する。
【０１９９】
インシュリン分子を複合体化する方法を、以下に記載する。特定の実施形態では、インシュリン分子は、Ａ１アミノ酸残基を介して、リンカーに複合体化される。特定の実施形態では、Ａ１アミノ酸残基はグリシンである。しかしながら、本開示は、Ｎ末端複合に限定されず、特定の実施形態では、インシュリン分子は、末端ではないＡ鎖アミノ酸残基を介して複合体化されてもよいことは理解される。特に、本開示は、Ａ鎖（野生型または部位特異的変異によって導入された）の任意の位置に存在するリジン残基のε−アミン基を介する複合を包含する。Ａ鎖上の異なる複合位置は、インシュリン活性の異なる減少を起こし得る。特定の実施形態において、インシュリン分子は、Ｂ１アミノ酸残基を介してリンカーに結合する。特定の実施形態において、Ｂ１アミノ酸残基はフェニルアラニンである。しかしながら、理解すべき点として、本開示はＮ末端配置に限定されるものではなく、特定の実施形態において、インシュリン分子は非末端Ｂ鎖アミノ酸残基を介して結合し得る。特に、本開示は、Ｂ鎖（野生型または部位特異的変異により導入された）の任意の位置に存在するリジン残基のε−アミン基を介する結合を包含する。例えば、特定の実施形態では、インシュリン分子はＢ２９リジン残基を介して複合体化されてもよい。インシュリングルリジンの場合、Ｂ３リジン残基を介した少なくとも一つのリガンドへの結合を用いることができる。Ｂ鎖上の異なる結合位置がインシュリン活性の異なる低減に至る可能性があることは明らかであろう。
【０２００】
特定の実施形態において、リガンドは、インシュリン分子上の複数の複合体化箇所に結合する。例えば、インシュリン分子は、Ａ１  Ｎ末端およびＢ２９リジンの両方で結合し得る。一部の実施形態において、アミド複合体化は、カーボネート緩衝液中で起こり、Ｂ２９位置およびＡ１位置で複合体化するが、Ｂ１位置では複合体化しない。他の実施形態において、インシュリン分子は、Ａ１  Ｎ末端、Ｂ１  Ｎ末端およびＢ２９リジンで結合し得る。さらに別の実施形態では、保護基を用いて、Ｂ１位置とＢ２９位置またはＢ１位置とＡ１位置で結合が起こるようにする。インシュリン分子上の結合箇所のいずれの組み合わせも用いることが可能であることは明らかであろう。一部の実施形態において、結合箇所の少なくとも一つが、突然変異リジン残基、例えばＬｙｓＡ３である。
【０２０１】
インシュリン複合体の例
各種実施形態において、本開示のインシュリン複合体は、少なくとも一方の二座リンカーに結合したインシュリンもしくはインシュリン類縁体分子を含み、二座リンカーの少なくとも一つの腕がリガンドアミノエチルフコース（ＡＥＦ）に結合している。二座リンカーの他の腕は、リガンドＡＥＦおよび／またはアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、ｐ−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）からなる群から独立に選択される１以上のリガンドに結合していることができる。特定の実施形態において、インシュリン分子は、Ａ１アミノ酸残基を介して結合している。特定の実施形態において、インシュリン分子はＢ１アミノ酸残基を介して結合している。特定の実施形態において、インシュリン分子は、ＬｙｓＢ２９のε−アミノ基を介して結合している。特定の実施形態において、インシュリン分子は、位置Ｂ２８でリジン（ＬｙｓＢ２８）を含む類縁体であり、インシュリン分子は、ＬｙｓＢ２８のε−アミノ基を介して結合しており、例えば、ＬｙｓＢ２８のε−アミノ基を介して結合したインシュリンリスプロである。特定の実施形態において、インシュリン分子は、位置Ｂ３でリジン（ＬｙｓＢ３）を含む類縁体であり、インシュリン分子は、ＬｙｓＢ３のε−アミノ基を介して結合しており、例えばＬｙｓＢ３のε−アミノ基を介して結合したインシュリングルリジンである。
【０２０２】
特定の実施形態において、インシュリンまたは上記インシュリン複合体のインシュリン分子は、１以上のリガンドに結合した１以上の別のリンカーに結合していることができ、各リガンドは独立にアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）リガンド、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）リガンド、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択される。前記別のリンカーは、直鎖、二座、三座、四座などであることができ、リンカーの各腕は、独立にアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）リガンド、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）リガンド、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択されることができるリガンドを含む。
【０２０３】
従って、特定の実施形態において、インシュリン複合体は、一つの二座リンカーを含むかそれからなることができ、その二座リンカーの少なくとも一つの腕が、インシュリンもしくはインシュリン類縁体の位置Ａ１のアミノ基；またはインシュリンもしくはインシュリン類縁体の位置Ｂ１のアミノ基；またはインシュリン類縁体の位置Ｂ３のアミノ基；またはインシュリン類縁体の位置Ｂ２８のアミノ基；またはインシュリンもしくはインシュリン類縁体の位置Ｂ２９のアミノ基に結合したリガンドアミノエチルフコース（ＡＥＦ）に結合している。
【０２０４】
特定の実施形態において、インシュリン複合体は、二つの二座リンカーを含むかそれからなることができ、第１の二座リンカー（第１の二座リンカーの一方の腕に結合したリガンドアミノエチルフコース（ＡＥＦ）および二座リンカーの他方の腕に結合したアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択されるリガンドを有する）は位置Ａ１のアミノ基に結合しており、１以上のリガンド（各リガンドは独立にアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択される。）に結合している第２の二座リンカーは位置Ｂ１、Ｂ３、Ｂ２８もしくはＢ２９のアミノ基に結合している。
【０２０５】
特定の実施形態において、インシュリン複合体は二つの二座リンカーを含むかそれからなることができ、第１の二座リンカー（第１の二座リンカーの一方の腕に結合したリガンドアミノエチルフコース（ＡＥＦ）および二座リンカーの他方の腕に結合したアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択されるリガンドを有する）は位置Ｂ１のアミノ基に結合しており、１以上のリガンド（各リガンドは独立に、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択される。）に結合した第２の二座リンカーは位置Ａ１、Ｂ３、Ｂ２８もしくはＢ２９のアミノ基に結合している。
【０２０６】
特定の実施形態において、インシュリン複合体は二つの二座リンカーを含むかそれからなることができ、第１の二座リンカー（第１の二座リンカーの一方の腕に結合したリガンドアミノエチルフコース（ＡＥＦ）および二座リンカーの他方の腕に結合したアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）、およびアミノエチルフコース（ＡＥＦから選択されるリガンドを有する）は位置Ｂ３のアミノ基に結合しており、１以上のリガンド（各リガンドは独立に、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択される。）に結合した第２の二座リンカーは、位置Ｂ１、Ａ１、Ｂ２８もしくはＢ２９のアミノ基に結合している。
【０２０７】
特定の実施形態において、インシュリン複合体は二つの二座リンカーを含むかそれからなることができ、第１の二座リンカー（第１の二座リンカーの一方の腕に結合したリガンドアミノエチルフコース（ＡＥＦ）および二座リンカーの他方の腕に結合したアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択されるリガンドを有する）は位置Ｂ２８のアミノ基に結合しており、１以上のリガンド（各リガンドは独立に、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択される）に結合した第２の二座リンカーは位置Ｂ１、Ｂ３、Ａ１もしくはＢ２９のアミノ基に結合している。
【０２０８】
特定の実施形態において、インシュリン複合体は二つの二座リンカーを含むかそれからなることができ、第１の二座リンカー（第１の二座リンカーの一方の腕に結合したリガンドアミノエチルフコース（ＡＥＦ）および二座リンカーの他方の腕に結合したアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択されるリガンドを有する）は、位置Ｂ２９のアミノ基に結合しており、１以上のリガンド（各リガンドは独立に、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択される）に結合した第２の二座リンカーは位置Ｂ１、Ｂ３、Ｂ２８もしくはＡ１のアミノ基に結合している。
【０２０９】
特定の実施形態において、インシュリン複合体は三つの二座リンカーを含むかそれからなることができ、第１の二座リンカー（第１の二座リンカーの一方の腕に結合したリガンドアミノエチルフコース（ＡＥＦ）および二座リンカーの他方の腕に結合したアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択されるリガンドを有する）は位置Ａ１のアミノ基に結合しており；１以上のリガンド（各リガンドは独立に、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択される）に結合した第２の二座リンカーは位置Ｂ１のアミノ基に結合しており；１以上のリガンド（各リガンドは独立に、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択される。）に結合した第３の二座リンカーは位置Ｂ３、Ｂ２８もしくはＢ２９のアミノ基に結合している。
【０２１０】
特定の実施形態において、インシュリン複合体は四つの二座リンカーを含むかそれからなることができ、第１の二座リンカー（第１の二座リンカーの一方の腕に結合したリガンドアミノエチルフコース（ＡＥＦ）および二座リンカーの他方の腕に結合したアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択されるリガンドを有する）は位置Ａ１のアミノ基に結合しており；１以上のリガンド（各リガンドは独立に、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択される）に結合した第２の二座リンカーは位置Ｂ１のアミノ基に結合しており；１以上のリガンド（各リガンドは独立にアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択される。）に結合した第３の二座リンカーは位置Ｂ３のアミノ基に結合しており；１以上のリガンド（各リガンドは独立に、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択される。）に結合した第４の二座リンカーは位置Ｂ２８またはＢ２９のアミノ基に結合している。
【０２１１】
特定の実施形態において、インシュリン複合体は、（ａ）二座リンカー（二座リンカーの少なくとも一つの腕が、位置Ａ１のアミノ基；または位置Ｂ１のアミノ基；または位置Ｂ３のアミノ基；または位置Ｂ２８のアミノ基；または位置Ｂ２９のアミノ基に結合したリガンドアミノエチルフコース（ＡＥＦ）に結合している。）および（ｂ）１以上のリガンド（各リガンドは独立に、位置Ａ１のアミノ基；または位置Ｂ１のアミノ基；または位置Ｂ３のアミノ基；または位置Ｂ２８のアミノ基；または位置Ｂ２９のアミノ基（どの位置も二座リンカーによって占有されていない）に結合したアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択される。）に結合した直鎖もしくは三座リンカーを含むかそれらからなることができる。
【０２１２】
特定の実施形態において、インシュリン複合体は、（ａ）位置Ａ１のアミノ基に結合した二座リンカー（第１の二座リンカーの一方の腕に結合したリガンドアミノエチルフコース（ＡＥＦ）および二座リンカーの他方の腕に結合したアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択されるリガンドを有する）および（ｂ）位置Ｂ１、Ｂ３、Ｂ２８もしくはＢ２９のアミノ基に結合した１以上のリガンド（各リガンドは独立に、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択される。）に結合した直鎖もしくは三座リンカーを含むかそれらからなることができる。
【０２１３】
特定の実施形態において、インシュリン複合体は、（ａ）位置Ｂ１のアミノ基に結合した二座リンカー（第１の二座リンカーの一方の腕に結合したリガンドアミノエチルフコース（ＡＥＦ）および二座リンカーの他方の腕に結合したアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択されるリガンドを有する）および（ｂ）位置Ａ１、Ｂ３、Ｂ２８もしくはＢ２９のアミノ基に結合した１以上のリガンド（各リガンドは独立に、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択される）に結合した直鎖もしくは三座リンカーを含むかそれらからなることができる。
【０２１４】
特定の実施形態において、インシュリン複合体は、（ａ）位置Ｂ３のアミノ基に結合した二座リンカー（第１の二座リンカーの一方の腕に結合したリガンドアミノエチルフコース（ＡＥＦ）および二座リンカーの他方の腕に結合したアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択されるリガンドを有する）および（ｂ）位置Ｂ１、Ａ１、Ｂ２８もしくはＢ２９のアミノ基に結合した１以上のリガンド（各リガンドは独立に、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択される。）に結合した直鎖もしくは三座リンカーを含むかそれらからなることができる。
【０２１５】
特定の実施形態において、インシュリン複合体は、（ａ）位置Ｂ２８のアミノ基に結合した二座リンカー（第１の二座リンカーの一方の腕に結合したリガンドアミノエチルフコース（ＡＥＦ）および二座リンカーの他方の腕に結合したアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択されるリガンドを有する）および（ｂ）位置Ｂ１、Ｂ３、Ａ１もしくはＢ２９のアミノ基に結合した１以上のリガンド（各リガンドは独立に、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択される。）に結合した直鎖もしくは三座リンカーを含むかそれらからなることができる。
【０２１６】
特定の実施形態において、インシュリン複合体は、（ａ）位置Ｂ２９のアミノ基に結合した二座リンカー（第１の二座リンカーの一方の腕に結合したリガンドアミノエチルフコース（ＡＥＦ）および二座リンカーの他方の腕に結合したアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択されるリガンドを有する）および（ｂ）位置Ｂ１、Ｂ３、Ｂ２８もしくはＡ１のアミノ基に結合した１以上のリガンド（各リガンドは独立に、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択される。）に結合した直鎖もしくは三座リンカーを含むかそれらからなることができる。
【０２１７】
特定の実施形態において、インシュリン複合体は、（ａ）二座リンカー（第１の二座リンカーの一方の腕に結合したリガンドアミノエチルフコース（ＡＥＦ）および二座リンカーの他方の腕に結合したアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択されるリガンドを有する）；（ｂ）１以上のリガンド（各リガンドは独立に、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択される。）に結合した第１の直鎖もしくは三座リンカー；および（ｃ）１以上のリガンド（各リガンドは独立に、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、アミノエチルマンノース（ＡＥＭ）、アミノエチルジマンノース（ＡＥＢＭ）、アミノエチルトリマンノース（ＡＥＴＭ）、β−アミノエチル−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＡＥＧＡ）およびアミノエチルフコース（ＡＥＦ）から選択される。）に結合した第２の直鎖もしくは三座リンカーを含むかそれらからなることができ、各リンカーはそれぞれ、位置Ａ１，Ｂ１、Ｂ３、Ｂ２８もしくはＢ２９のアミノ基に結合しており、ただしそれぞれは、合計で３部位が占有されるように別個の位置を占有している。
【０２１８】
インシュリン複合体
本セクションは、いくつかの例示的なインシュリン複合体もしくはインシュリン類縁体複合体について説明するものである。
【０２１９】
特定の実施形態において、少なくとも一つのフコースを含むインシュリンおよびインシュリン類縁体複合体であって、当該複合体が機能性インシュリン受容体リン酸化アッセイによって求めたＥＣ５０またはＩＰのマクロファージマンノース受容体での競合結合アッセイによって求めたＩＣ５０またはＩＰに対する比が約０．５：１から約１：１００；約１：１から約１：５０；約１：１から約１：２０；または約１：１から約１：１０であることを特徴とする複合体が提供される。さらに別の態様において、上記複合体は、第１の腕および第２の腕を有するインシュリンもしくはインシュリン類縁体分子に共有結合的に結合した少なくとも一つの分岐リンカーを含み、前記第１の腕は第１の糖類を含む第１のリガンに連結されており、前記第２の腕は第２の糖類を含む第２のリガンドに連結されており、前記第１の糖類はフコースであり、前記複合体は機能性インシュリン受容体リン酸化アッセイによって求めたＥＣ５０またはＩＰのマクロファージマンノース受容体で競合結合アッセイによって求めたＩＣ５０またはＩＰに対する比が約０．５：１から約１：１００；約１：１から約１：５０；約１：１から約１：２０；または約１：１から約１：１０であることを特徴とする。特定の態様において、第２の糖類は、フコース、マンノース、グルコサミン、グルコース、二糖類、三糖類、四糖類、分岐三糖類、ジマンノース、トリマンノース、テトラマンノースまたは分岐トリマンノースである。
【０２２０】
「ＩＰ」という用語は、曲率または凹部が正から負または負から正に符号が変わる点である変曲点を指す。概して、ＩＰは通常、ＥＣ５０またはＩＣ５０と等価である。
【０２２１】
特定の態様において、マクロファージマンノース受容体での競合結合アッセイによって求めたＩＣ５０またはＩＰは、約１００ｎＭ未満であって約０．５ｎＭより大きいものであることができる。特定の態様において、そのＩＣ５０またはＩＰは、約５０ｎＭ未満であって約１ｎＭより大きく；約２５ｎＭ未満であって約１ｎＭより大きく；または約２０ｎＭ未満であって約１ｎＭより大きい。特定の態様において、機能性インシュリン受容体リン酸化アッセイによって求めたＩＣ５０またはＩＰは、約１００ｎＭ未満であって約０．５ｎＭより大きいものであることができる。特定の態様において、そのＩＣ５０またはＩＰは、約５０ｎＭ未満であって約１ｎＭより大きく；約２５ｎＭ未満であって約１ｎＭより大きく；または約２０ｎＭ未満であって約１ｎＭより大きい。
【０２２２】
各種実施形態において、複合体は下記一般式（Ｉ）を有することができる。
【化２３】
0006491649.tif 000032
【０２２３】
式中、
【化２４】
0006491649.tif 000033
【０２２４】
の各場合は、複合体の分岐内の可能な繰り返しを表し；
【化２５】
0006491649.tif 000034
【０２２５】
の各場合は独立に、共有結合、炭素原子、ヘテロ原子、またはアシル、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環からなる群から選択される置換されていても良い基であり；
Ｔの各場合は独立に、共有結合または２価の直鎖もしくは分岐の飽和もしくは不飽和の置換されていても良いＣ１−３０炭化水素鎖であり、Ｔの１以上のメチレン単位は独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、複素環基、アリール基、またはヘテロアリール基によって置き換わっていても良く；
Ｒの各場合は独立に、水素、好適な保護基、またはアシル部分、アリールアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分もしくはヘテロ脂肪族部分であり；
−Ｂは−Ｔ−ＬＢ−Ｘであり、Ｘの各場合は独立にリガンドであり；
ＬＢの各場合は独立に、共有結合またはＴとＸとの共有結合から誘導される基であり；
ｎは１、２、または３であり、
ただし、前記インシュリンは少なくとも一つのリンカーと結合し、リガンドＸの一つがフコースである。
【０２２６】
特定の態様において、前記複合体は、機能性インシュリン受容体リン酸化アッセイによって求めたＥＣ５０またはＩＰのマクロファージマンノース受容体での競合結合アッセイによって求めたＩＣ５０またはＩＰに対する比が約０．５：１から約１：１００；約１：１から約１：５０；約１：１から約１：２０；または約１：１から約１：１０であることを特徴とすることができる。
【０２２７】
特定の実施形態において、前記インシュリン複合体もしくはインシュリン類縁体複合体は下記一般式（ＩＩ）を有することができる。
【化２６】
0006491649.tif 000035
【０２２８】
式中、
【化２７】
0006491649.tif 000036
【０２２９】
の各場合は、複合体の分岐内の可能な繰り返しを表し；
【化２８】
0006491649.tif 000037
【０２３０】
の各場合は独立に、共有結合、炭素原子、ヘテロ原子、またはアシル、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環からなる群から選択される置換されていても良い基であり；
Ｔの各場合は独立に、共有結合または２価の直鎖もしくは分岐の飽和もしくは不飽和の置換されていても良いＣ１−３０炭化水素鎖であり、Ｔの１以上のメチレン単位は独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基によって置き換わっていても良く；
Ｒの各場合は独立に、水素、好適な保護基、またはアシル部分、アリールアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分もしくはヘテロ脂肪族部分であり；
−Ｂ１は−Ｔ−ＬＢ１−フコースであり、
ＬＢ１は共有結合またはＴのＸとの共有結合から誘導される基であり；
−Ｂ２は−Ｔ−ＬＢ２−Ｘであり、
Ｘは糖類を含むリガンドであり、その糖類はフコース、マンノースまたはグルコースであることができ；ＬＢ２は共有結合またはＴのＸとの共有結合から誘導される基であり；
ｎは１、２または３である。
【０２３１】
特定の態様において、前記複合体は、機能性インシュリン受容体リン酸化アッセイによって求めたＥＣ５０またはＩＰのマクロファージマンノース受容体での競合結合アッセイによって求めたＩＣ５０またはＩＰに対する比が約０．５：１から約１：１００；約１：１から約１：５０；約１：１から約１：２０；または約１：１から約１：１０であることを特徴とすることができる。
【０２３２】
例示的な基の説明
【化２９】
0006491649.tif 000038
【０２３３】
（ノード）
特定の実施形態において、
【化３０】
0006491649.tif 000039
【０２３４】
の各場合は独立に、アシル、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環からなる群から選択される置換されていても良い基である。一部の実施形態において、
【化３１】
0006491649.tif 000040
【０２３５】
の各場合は同一である。一部の実施形態において、中央の
【化３２】
0006491649.tif 000041
【０２３６】
は、
【化３３】
0006491649.tif 000042
【０２３７】
の他の全ての場合と異なる。特定の実施形態において、
【化３４】
0006491649.tif 000043
【０２３８】
の全ての場合が、中央の
【化３５】
0006491649.tif 000044
【０２３９】
を除いて同一である。
【０２４０】
一部の実施形態において、
【化３６】
0006491649.tif 000045
【０２４１】
は、置換されていても良いアリールまたはヘテロアリール基である。
【０２４２】
一部の実施形態において、
【化３７】
0006491649.tif 000046
【０２４３】
は、２、３、４、６もしくは８員のアリールまたはヘテロアリール基である。一部の実施形態において、
【化３８】
0006491649.tif 000047
【０２４４】
は、５員もしくは６員の複素環基である。特定の実施形態において、
【化３９】
0006491649.tif 000048
【０２４５】
は、Ｎ、ＯまたはＳから選択されるヘテロ原子である。一部の実施形態において、
【化４０】
0006491649.tif 000049
【０２４６】
は窒素原子である。一部の実施形態において、
【化４１】
0006491649.tif 000050
【０２４７】
は酸素原子である。一部の実施形態において、
【化４２】
0006491649.tif 000051
【０２４８】
は硫黄原子である。一部の実施形態において、
【化４３】
0006491649.tif 000052
【０２４９】
は炭素原子である。一部の実施形態において、
【化４４】
0006491649.tif 000053
【０２５０】
は、下記構造
【化４５】
0006491649.tif 000054
【０２５１】
である。
【０２５２】
Ｔ（スペーサー）
特定の実施形態において、Ｔは、それぞれ独立に、２価の直鎖もしくは分岐で飽和もしくは不飽和の置換されていても良いＣ１−２０炭化水素鎖であり、Ｔの１以上のメチレン単位が、独立に−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基で置き換えられていても良い。特定の実施形態において、Ｔの１、２、３、４または５個のメチレン単位が、独立に置き換えられていても良い。特定の実施形態において、Ｔは、Ｃ１−１０、Ｃ１−８、Ｃ１−６、Ｃ１−４、Ｃ２−１２、Ｃ４−１２、Ｃ６−１２、Ｃ８−１２またはＣ１０−１２炭化水素鎖であり、Ｔの１以上のメチレン単位が、独立に−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基で置き換えられていても良い。一部の実施形態において、Ｔの１以上のメチレン単位は、複素環基によって置き換えられている。一部の実施形態において、Ｔの１以上のメチレン単位は、トリアゾール部分によって置き換えられている。特定の実施形態において、Ｔの１以上のメチレン単位は、−Ｃ（Ｏ）−によって置き換えられる。特定の実施形態において、Ｔの１個以上のメチレン単位は、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−によって置き換えられている。特定の実施形態において、Ｔの１以上のメチレン単位は、−Ｏ−によって置き換えられている。
【０２５３】
特定の実施形態において、Ｔは下記構造であることができる。
【化４６】
0006491649.tif 000055
0006491649.tif 000056
【０２５４】
特定の実施形態において、本開示は、１、２または３個の二座リンカーを含むインシュリン複合体もしくはインシュリン類縁体複合体を提供し、各リンカーは下記のものからなる群から独立に選択される。
【化４７】
0006491649.tif 000057
0006491649.tif 000058
0006491649.tif 000059
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0006491649.tif 000062
0006491649.tif 000063
【０２５５】
式中、各Ｘは独立に、糖類を含むリガンドであり、ただしインシュリンもしくはインシュリン類縁体に結合した少なくとも一つの二座リンカーが、二座リンカーの少なくとも一つの腕上にフコースを含む。特定の実施形態において、各Ｘは独立に、下記のものであることができる。
【化４８】
0006491649.tif 000064
0006491649.tif 000065
【０２５６】
式中、波線は、その結合が二座リンカーを含む原子に連結されていることを示している。ＥＧはエチルグルコースであり、ＥＭはエチルマンノースであり、ＥＦはエチルフコースであり、ＥＴＭはエチルトリマンノースであり、ＥＢＭはエチルジマンノースであり、ＥＧＡはエチルグルコサミンであり、ＥＤＧはエチルデオキシグルコースであり、ＥＤＦはエチルデオキシフコースであり、ＥＤＭはエチルデオキシマンノースである。
【０２５７】
当業者には、各種の複合化化学を用いて、ＸとＴおよび／またはＷとＴ（一般的に「成分」）との共有結合的に結合させることが可能であることは明らかである。そのような技術は、当業界で広く知られており、例示的な技術について以下に述べる。成分は、直接結合（すなわち、介在する化学基なしで）しているか、スペーサー（例えば、複合体化された要素とリンカーの残りの部分との間の何らかの物理的分離を提供するカップリング剤または共有結合鎖）を介して間接的に結合していることができる。理解すべき点として、成分は、アミド結合、アミン結合、エステル結合、エーテル結合、チオエーテル結合、イソ尿素結合、イミン結合など（これらに限定されない）の任意の数の化学結合を介してリンカーに共有結合的に結合していることができる。
【０２５８】
各種実施形態において、当業界で公知の「クリックケミストリー」反応を使用して、成分をリンカーに共有結合的に結合させてもよい。これらの方法としては、例えば、環化付加反応、求核開環反応、および炭素−炭素多重結合に対する付加（例えば、Ｋｏｌｂ  ａｎｄ  Ｓｈａｒｐｌｅｓｓ，  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ  ８：１１２８−１１３７，  ２００３およびそれで引用の参考文献、ならびにＤｏｎｄｏｎｉ，  Ｃｈｅｍ．  Ａｓｉａｎ  Ｊ．  ２：７００−７０８，  ２００７およびそれに引用の参考文献参照）などがある。上記で説明のように、各種実施形態において、成分は、天然または化学的に付加された側鎖基を介して、リンカーに結合していてもよい。概して、一対の反応性基（例えば、反応してアミド結合を生じるカルボキシル基とアミン基）の第１の構成員および第２の構成員は、成分および骨格のいずれか一つ上に存在し得る（すなわち、二つの構成員の相対的な位置は、それらが反応して複合体を生成する限り重要ではない。）ことは明らかであろう。連結の例を下記でさらに詳細に説明する。
【０２５９】
特定の成分は自然に、複数の同じ化学反応性部分を有し得る。一部の例では、化学的反応の種類および条件を選択することで、それらの成分をこれらの部位の一つのみで選択的に反応させることが可能である。例えば、インシュリンを、反応性アミンを介して複合体化する場合、特定の実施形態では、インシュリンの生理活性を保存する上では、Ｎ末端α−Ｐｈｅ−Ｂ１の方が、Ｎ末端α−Ｇｌｙ−Ａ１およびε−Ｌｙｓ−Ｂ２９より結合箇所として望ましい可能性がある（例えば、Ｍｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｈａｒｍ．  Ｒｅｓ．  １６：１６８０−１６８６，  １９９９およびそれで引用の参考文献、ならびにＴｓａｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  ８６：１２６４−１２６８，  １９９７参照）。インシュリンとヘキサデセナール（アルデヒド末端分子）との間の例示的な反応において、研究者らは、水素化ホウ素シアノナトリウムの存在下、二つの成分を、５４％イソプロパノール含有１．５ＭのｐＨ６．８のサリチル酸ナトリウム水溶液中で、１：６の比（インシュリン：アルデヒド（モル比））で終夜混合することによって、単一置換Ｐｈｅ−Ｂ１  ２級アミン複合体化生成物への変換率が８０％を超えることを発見した（Ｍｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｈａｒｍ．  Ｒｅｓ．  １６：１６８０−１６８６，  １９９９）。彼らの研究は、溶媒、ｐＨおよびインシュリン：アルデヒド比の選択が全て、反応の選択性および収率に影響を及ぼすことを示した。しかしながら、ほとんどの場合、化学反応条件の選択により選択率を達成することは困難である。従って、特定の実施形態において、反応に望ましいもの以外の全ての部位での成分（例えば、インシュリン）を選択的に保護し、次に、物質を反応および精製した後に脱保護段階を行うことが有利であり得る。例えば、酸性（ＢＯＣ）、弱酸性（シトラコン酸無水物）および塩基性（ＭＳＣ）条件下で脱保護され得るものなどの文献で利用可能なインシュリンアミン基の選択的保護については多くの例がある（例えば、Ｔｓａｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  ８６：１２６４−１２６８，  １９９７；Ｄｉｘｏｎｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｊ．  １０９：３１２−３１４，  １９６８；およびＳｃｈｕｅｔｔｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｄ．  Ｂｒａｎｄｅｎｂｕｒｇ  Ｈｏｐｐｅ  Ｓｅｙｌｅｒ′ｓ  Ｚ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ３６０：１７２１，  １９７９参照）。一例では、Ｇｌｙ−Ａ１およびＬｙｓ−Ｂ２９アミンは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）基で選択的に保護され、これは次いで、複合体化後に、９０％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）／１０％アニソール溶液中４℃で１時間インキュベートして除去される。１実施形態において、インシュリンの乾燥粉末を、脱水ＤＭＳＯに溶解し、次いで過剰のトリエチルアミンを溶解させる。この溶液に、約２当量のジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートのＴＨＦ溶液をゆっくり加え、その溶液を３０から６０分間混合する。反応後、粗溶液を過剰量のアセトンに投入し、次いで希ＨＣｌを滴下して、反応したインシュリンを析出させる。析出した物質を遠心し、アセトンで洗浄し、完全に真空乾燥する。
【０２６０】
所望のジ−ＢＯＣ保護生成物を、分取逆相ＨＰＬＣまたはイオン交換クロマトグラフィーを使用して、未反応のインシュリン、望ましくないジ−ＢＯＣ異性体ならびにモノ−ＢＯＣおよびトリ−ＢＯＣ副生物から分離することができる（例えば、Ｔｓａｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  ８６：１２６４−１２６８，  １９９７参照）。逆相ＨＰＬＣの場合、粗生成物の０．１％ＴＦＡ含有７０％水／３０％アセトニトリル溶液を、Ｃ８カラムに負荷し、アセトニトリル増加勾配によって溶離する。所望のジ−ＢＯＣピークを回収し、アセトニトリルを除去し、凍結乾燥して、生成物を得る。
【０２６１】
特定の実施形態において、インシュリンオリゴ糖複合体は、インシュリンもしくはインシュリン類縁体および第１の腕および第２の腕を有する少なくとも一つの二座リンカーを含むことができ、前記第１の腕は第１の糖類を含む第１のリガンドに連結されており、前記第２の腕は第２の糖類を含む第２のリガンドに連結されており、少なくとも一つの二座リンカーにおいて、第１の糖類はフコースであり、前記少なくとも一つの二座リンカーは、インシュリンもしくはインシュリン類縁体のＡ鎖もしくはＢ鎖のＮ末端アミノ酸のα−アミノ基またはインシュリンもしくはインシュリン類縁体のＡ鎖もしくはＢ鎖のリジン残基のε−アミノ基に結合している。特定の実施形態において、複合体は、少なくとも二つのリンカーを含むことができ、少なくとも一つのリンカーがフコースを含む二座リンカーである。特定の実施形態において、複合体は少なくとも三つのリンカーを含むことができ、少なくとも一つのリンカーがフコースを含む二座リンカーである。
【０２６２】
特定の実施形態において、前記少なくとも一つの二座リンカーは、上記で示した式Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｏ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｕ、Ｖ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ＡＡ、ＡＢ、ＡＣ、ＡＤ、ＡＥ、ＡＦ、ＡＧ、ＡＨ、ＡＩ、ＡＪまたはＡＫを有することができ、Ｘは糖類であり、ただし少なくとも一つの二座リンカーにおいて、少なくとも一つの二座リンカーの少なくとも一つの腕上のＸはフコースである。特定の実施形態において、Ｘは、上記で示した式ＥＧ、ＥＭ、ＥＢＭ、ＥＧＡ、ＥＦ、ＥＦβ、ＥＢＭ、ＥＴＭ、ＥＤＧ、ＥＤＦまたはＥＤＭを有する。
【０２６３】
特定の実施形態において、インシュリン類縁体は、ＧＩＶＥＱＣＣＸ１ＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＸ２（配列番号８）の配列を含むＡ鎖配列；およびＸ３ＬＣＧＸ４Ｘ５ＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦ（配列番号９）もしくはＸ８ＶＮＱＸ３ＬＣＧＸ４Ｘ５ＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＸ６Ｘ７（配列番号１０）の配列を含むＢ鎖配列を含むことができ、
Ｘ１は、トレオニンおよびヒスチジンからなる群から選択され；
Ｘ２は、アスパラギンまたはグリシンであり；
Ｘ３は、ヒスチジンおよびトレオニンからなる群から選択され；
Ｘ４は、アラニン、グリシンおよびセリンからなる群から選択され；
Ｘ５は、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ホモシステイン酸およびシステイン酸からなる群から選択され；
Ｘ６は、アスパラギン酸−リジンジペプチド、リジン−プロリンジペプチド、またはプロリン−リジンジペプチドであり；
Ｘ７は、トレオニン、アラニンまたはトレオニン−アルギニン−アルギニントリペプチドであり；
Ｘ８は、フェニルアラニンおよびデスアミノ−フェニルアラニンからなる群から選択される。
【０２６４】
特定の実施形態において、Ａ鎖は配列番号１もしくは配列番号６に示したアミノ酸配列を有することができ、Ｂ鎖は配列番号２、配列番号３、配列番号４もしくは配列番号５に示したアミノ酸配列を有することができる。特定の実施形態において、インシュリン類縁体は、デスＢ３０インシュリン類縁体、デスＢ２９−Ｂ３０インシュリン類縁体、デスＢ２８−Ｂ３０インシュリン類縁体、デスＢ２７−Ｂ３０インシュリン類縁体またはデスＢ２６−Ｂ３０インシュリン類縁体である。
【０２６５】
特定の実施形態において、本発明のインシュリンオリゴ糖複合体は下記式を有することができる。
【化４９】
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【０２６６】
式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立に、Ｈ（水素）または糖類を含むリガンドを有する直鎖リンカーまたは第１の腕および第２の腕を有する二座リンカーのいずれかであり、前記第１の腕は第１の糖類を含む第１のリガンドに連結されており、前記第２の腕は第２の糖類を含む第２のリガンドに連結されており、ただしＲ１、Ｒ２またはＲ３のうちの少なくとも一つが二座リンカーであり、第１の糖類はフコースである。ある特定の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２またはＲ３はそれぞれ独立に、Ｈ（水素）または上記で示した式Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｏ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｕ、Ｖ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ＡＡ、ＡＢ、ＡＣ、ＡＤ、ＡＥ、ＡＦ、ＡＧ、ＡＨ、ＡＩ、ＡＪもしくはＡＫを有する二座リンカーのいずれかであり、Ｘは糖類であり；ただしＲ１、Ｒ２またはＲ３のうちの少なくとも一つが二座リンカーであり、少なくとも一つの二座リンカーの少なくとも一つの腕上のＸはフコースである。特定の実施形態において、Ｘは、上記で示した式ＥＧ、ＥＭ、ＥＢＭ、ＥＧＡ、ＥＦ、ＥＦβ、ＥＢＭ、ＥＴＭ、ＥＤＧ、ＥＤＦまたはＥＤＭを有する。
【０２６７】
本発明のヒトインシュリンオリゴ糖複合体（ＩＯＣ）の例には、下記の構造を有するＩＯＣなどがある。
【化５０】
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【０２６８】
徐放製剤
特定の実施形態において、徐放形態で（すなわち、可溶性組換えヒトインシュリンより徐放性の高い吸収プロファイルを示す形態で）インシュリン複合体を投与することが有利である可能性がある。これは、代表的なグルコース変動時間スケール（すなわち、分ではなく時間）により関連の深い時間スケールでのグルコースにおける変動に応答し得る複合体の持続レベルを提供する。特定の実施形態において、徐放製剤は、非高血糖状態（すなわち、空腹状態）下で哺乳動物に投与した場合に、複合体のゼロ次放出を示すことができる。
【０２６９】
持続吸収プロファイルを提供するあらゆる製剤を使用可能であることは明らかであろう。特定の実施形態において、これは、複合体を、それの全身循環への放出特性を遅くする他の成分と組み合わせることで達成することができる。例えば、ＰＺＩ（プロタミン亜鉛インシュリン）製剤を、そのために用いることができる。本開示は、これらＰＺＩ製剤の非晶質型および結晶型を包含する。
【０２７０】
従って、特定の実施形態において、本開示の製剤は、約０．０５から約１０ｍｇプロタミン／ｍｇ複合体を含む。例えば、約０．２から約１０ｍｇプロタミン／ｍｇ複合体、例えば、約１から約５ｍｇプロタミン／ｍｇ複合体である。
【０２７１】
特定の実施形態において、本開示の製剤は、約０．００６から約０．５ｍｇ亜鉛／ｍｇ複合体を含む。例えば約０．０５から約０．５ｍｇ亜鉛／ｍｇ複合体、例えば約０．１から約０．２５ｍｇ亜鉛／ｍｇ複合体である。
【０２７２】
特定の実施形態において、本開示の製剤は、プロタミンおよび亜鉛を、約１００：１から約５：１、例えば約５０：１から約５：１、例えば、約４０：１から約１０：１の範囲の比（重量比）で含む。特定の実施形態において、本開示のＰＺＩ製剤は、プロタミンおよび亜鉛を、約２０：１から約５：１、例えば約２０：１から約１０：１、約２０：１から約１５：１、約１５：１から約５：１、約１０：１から約５：１、約１０：１から約１５：１の範囲の比（重量比）で含む。
【０２７３】
次の成分：抗微生物保存剤、等張剤および／または非複合体化インシュリン分子のうちの１以上がＰＺＩ製剤に含まれていても良い。
【０２７４】
特定の実施形態において、本開示の製剤は、抗微生物保存剤（例えば、ｍ−クレゾール、フェノール、メチルパラベンまたはプロピルパラベン）を含む。特定の実施形態において、抗微生物保存剤はｍ−クレゾールである。例えば、特定の実施形態において、製剤は、約０．１から約１．０％（体積比）ｍ−クレゾールを含むことができる。例えば、約０．１から約０．５％（体積比）ｍ−クレゾール、例えば約０．１５から約０．３５％（体積比）ｍ−クレゾールである。
【０２７５】
特定の実施形態において、本開示の製剤は、等張剤としての多価アルコール（例えば、マンニトール、プロピレングリコールまたはグリセリン）を含む。特定の実施形態において、等張剤はグリセリンである。特定の実施形態において、等張剤は、塩、例えばＮａＣｌである。例えば、製剤は、約０．０５から約０．５Ｍ  ＮａＣｌ、例えば約０．０５から約０．２５Ｍ  ＮａＣｌまたは約０．１から約０．２Ｍ  ＮａＣｌを含むことができる。
【０２７６】
特定の実施形態において、本開示の製剤は、一定量の非複合体化インシュリン分子を含む。特定の実施形態において、製剤は、約１００：１から１：１、例えば約５０：１から２：１または約２５：１から２：１の範囲のモル比の複合化インシュリン分子：非複合体化インシュリン分子を含む。
【０２７７】
本開示はまた、小分子製剤の業界で公知である標準的な徐放（持続性とも称される）製剤の使用を包含する（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １９ｔｈ  ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ，  １９９５参照）。本開示はまた、徐々に複合体を送達するための、ポンプまたは束縛拡散に依存する機器の使用を包含する。特定の実施形態において、修飾インシュリン分子を用いることで、長期作用製剤を（さらにまたは代わりに）提供することができる。例えば、複合体の製造において野生型ヒトインシュリンに代えてインシュリングラルギン（ＬＡＮＴＵＳ（登録商標）またはインシュリンデテミル（ＬＥＶＥＭＩＲ（登録商標））を用いることができると考えられる。インシュリングラルギンはＡ鎖の位置Ａ２１のＡｓｎがグリシンによって置き換わっており、二つのアルギニン残基がＢ鎖のＣ末端にある例示的な長期作用性インシュリン類縁体である。これらの変化の効果は、等電点を移動させて、生理ｐＨで不溶であるがｐＨ４で可溶であるインシュリンを生じることである。インシュリンデテミルは、Ｂ鎖の位置Ｂ３０のＴｈｒが欠失され、Ｃ１４脂肪酸鎖が位置Ｂ２９のＬｙｓに結合している別の長期作用性インシュリン類縁体である。
【０２７８】
複合体の使用
別の態様において、本開示はインシュリン複合体の使用方法を提供する。概して、インシュリン複合体を用いて、糖類（例えば、グルコースまたはマンノース、α−メチルマンノース、Ｌ−フコースなどの外因性糖類）に応答して、必要とする個体にインシュリンを制御可能に提供することができる。本開示は、本開示のインシュリン複合体を投与することによる糖尿病治療を包含する。インシュリン複合体を用いてあらゆる患者（例えば、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、マウスなど）を治療することが可能であるが、それらは最も好ましくはヒトの治療で用いる。インシュリン複合体は、あらゆる経路によって患者に投与することができる。概して、本開示は、経口、静脈、筋肉、動脈、皮下、脳室内、経皮、直腸、経膣、腹腔内、局所（粉剤、軟膏もしくは滴剤として）、口腔による投与、または経口もしくは経鼻噴霧剤もしくはエアロゾルとしての投与を包含する。これらの異なる経路のための製剤および医薬組成物製造において通常考慮すべきことは、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ′ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １９ｔｈ  ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ，  １９９５にある。各種実施形態において、複合体は、皮下投与、例えば注射によって投与することができる。インシュリン複合体は、送達を容易にするために担体に溶解させることができる。例えば、担体は、無菌水、生理食塩水または緩衝生理食塩水（これらに限定されるものではない）などの水溶液であることができる。
【０２７９】
概して、治療上有効量のインシュリン複合体を投与する。「治療上有効量」という用語は、インシュリン複合体の効力と毒性の均衡が関与する妥当な利益／リスク比で糖尿病を治療する上で十分なインシュリン複合体量を意味する。各種実施形態において、インシュリンの平均１日用量は、１０から２００Ｕ、例えば、２５から１００Ｕ（インシュリン１単位は約０．０４ｍｇである。）の範囲である。特定の実施形態では、これらのインシュリン用量での複合体の量を１日１回投与する。特定の実施形態では、これらのインシュリン用量の５から１０倍での複合体の量を、週１回投与する。特定の実施形態では、これらのインシュリン用量の１０から２０倍での複合体の量を、２週に１回投与する。特定の実施形態では、これらのインシュリン用量の２０から４０倍での複合体の量を、月１回投与する。
【０２８０】
特定の実施形態において、本開示の複合体を用いて、患者（例えば、哺乳動物またはヒト患者）における高血糖を治療することができる。特定の実施形態において、患者は糖尿病である。しかしながら、本方法は、糖尿病患者の治療に限定されるものではない。例えば、特定の実施形態において、複合体を用いて、血糖制御の障害に関連する感染患者における高血糖を治療することができる。特定の実施形態では、複合体を用いて糖尿病を治療することができる。
【０２８１】
特定の実施形態において、本開示のインシュリン複合体または製剤を患者（例えば、哺乳動物患者）に投与する場合、それは非複合体化版のインシュリン分子より低い低血糖を誘発する。特定の実施形態において、本開示の製剤は、非複合体化版のインシュリン分子を含む製剤より患者（例えば、哺乳動物またはヒト患者）において低いＨｂＡ１ｃ値を誘発する。特定の実施形態において、その製剤により、非複合体化版のインシュリン分子を含む製剤より少なくとも１０％低い（例えば、少なくとも２０％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも５０％低い）ＨｂＡ１ｃ値となる。特定の実施形態において、その製剤により、７％未満、例えば、約４から約６％の範囲のＨｂＡ１ｃ値となる。特定の実施形態において、非複合体化版のインシュリン分子を含む製剤により、７％を超える、例えば、約８から約１２％のＨｂＡ１ｃ値となる。
【０２８２】
外因性トリガー
前述のように、本明細書に記載の方法、複合体および組成物は、グルコース応答性複合体に限定されるものではない。実施例で示したように、いくつかの例示的なインシュリン複合体も、α−メチルマンノースなどの外因性糖類に対して応答性であった。従って、特定の実施形態において、α−メチルマンノースなどのグルコース以外の糖類または複合体のＰＫもしくはＰＤ特性を変えることができる何らかの他の糖類の外因性投与によってインシュリン複合体をトリガーすることができることは明らかであろう。
【０２８３】
複合体を上記のように投与したら（例えば、徐放製剤として）、好適な外因性糖類の投与によって、それをトリガーすることができる。ある特定の実施形態において、トリガー量の外因性糖類を投与する。本明細書で使用される場合、「トリガー量」の外因性糖類は、複合体の少なくとも一つのＰＫおよび／またはＰＤ特性（例えば、前述のようなＣｍａｘ、ＡＵＣ、半減期など）における変化を生じさせるのに十分な量である。理解すべき点として、複合体についての前記あらゆる投与方法が外因性糖類に等しく適用される。やはり理解すべき点として、複合体および外因性糖類についての投与方法は同一であっても異なっていても良い。各種実施形態において、投与方法は異なっている（例えば、説明のために、複合体は週１回で皮下注射によって投与することができ、外因性糖類は１日１回経口投与する。）。外因性糖類の経口投与は、それが患者の服用遵守を高めることから特に価値がある。概して、複合体のＰＫおよびＰＤ特性が外因性糖類のＰＫプロファイルに関係することは明らかであろう。従って、外因性糖類のＰＫプロファイルを制御することで、複合体ＰＫおよびＰＤ特性を調整することができる。当業界で公知のように、外因性糖類のＰＫプロファイルを、用量、経路、回収および使用される製剤に基づいて調整することができる。例えば、複合体の短期間で強い活性化が望まれる場合、経口即時放出製剤を用いることができると考えられる。対照的に、複合体のより長期間の比較的弱い活性化が望まれる場合には、代わりに経口持続放出製剤を用いることができるものと考えられる。製剤ならびに即時放出製剤および持続放出製剤の製造において検討すべきことは、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ′ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １９ｔｈ  ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ，  １９９５に記載されている。
【０２８４】
本開示の複合体および外因性糖類の投与の相対的頻度は同一であっても異なっていても良いことも明らかであろう。特定の実施形態では、外因性糖類を複合体より高頻度で投与する。例えば、特定の実施形態において、複合体は１日１回投与することができ、外因性糖類は１日複数回投与する。特定の実施形態において、複合体は週２回、週１回、二週に１回または月に１回投与することができ、外因性糖類は１日１回投与する。特定の実施形態において、複合体を月１回投与し、外因性糖類を週２回、週１回または二週に１回投与する。これらの手法についての他の変形型は当業者には明らかであり、使用される複合体および製剤の性質に応じて変わるものである。
【０２８５】
下記の実施例は、本発明についての理解をさらに深めるためのものである。
【０２８６】
実施例
一般手順
化学物質はいずれも、別段の断りがない限り、商業的入手先から購入した。水分や空気に感受性の反応は、脱水溶媒および試薬を用い、窒素またはアルゴン下に行った。反応の進行は、分析薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、高速液体クロマトグラフィー−質量分析（ＨＰＬＣ−ＭＳ）、または超高速液体クロマトグラフィー−質量分析（ＵＰＬＣ−ＭＳ）によってモニタリングした。ＴＬＣは、シリカゲル６０Ｆ−２５４、層厚０．２５ｍｍをプレコートしたＥ．  Ｍｅｒｃｋ  ＴＬＣプレートで行った。プレートは、２５４ｎｍＵＶを用い、および／またはモリブデン酸セリウムアンモニウム（ＣＡＭ）またはｐ−アニスアルデヒド染色溶液への曝露とそれに続く炭化によって肉眼観察した。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は、勾配４．０分かけて１０：９０から９９：１（体積比）ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋０．０５体積％ＴＦＡ、次に９８：２（体積比）ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋０．０５体積％ＴＦＡで０．７５分保持；流量１．０ｍＬ／分、ＵＶ範囲２００から４００ｎｍ（ＬＣ−ＭＳ方法Ａ）でＳｕｐｅｌｃｏ  Ａｓｃｅｎｔｉｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｃ１８  ２．７μｍ  ３．０×１００ｍｍカラムを用いるＡｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズＨＰＬＣで行った。質量分析は、陽イオン検出モードでの電気スプレーイオン化を行うＷａｔｅｒｓ  Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ（登録商標）  ＺＱ（商標名）で行い、質量−電荷比の走査範囲は、１７０から９００または５００から１５００であった。超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）は、勾配４．０分かけて１０：９０から９０：１０（体積比）ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋０．１体積％ＴＦＡおよび０．５分かけて９０：１０から９５：５（体積比）ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋０．１体積％ＴＦＡ；流量０．３ｍＬ／分、ＵＶ波長２００から３００ｎｍ（ＵＰＬＣ方法Ａ）でのＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ（商標名）  ＵＰＬＣ（登録商標）ＢＥＨ３００  Ｃ４  １．７μｍ  ２．１×１００ｍｍカラムを用いるＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ（商標名）  ＵＰＬＣ（登録商標）システムで行った。別のＵＰＬＣ条件は、ＵＰＬＣ方法Ｂ（勾配４．０分かけての１０：９０から７０：３０（体積比）ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋０．１体積％ＴＦＡおよび４０秒かけての７０：３０から９５：５（体積比）ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋０．１体積％ＴＦＡ；流量０．３ｍＬ／分、ＵＶ波長２００から３００ｎｍでのＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ（商標名）  ＵＰＬＣ（登録商標）  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７μｍ  ２．１×１００ｍｍカラム）、ＵＰＬＣ方法Ｃ（勾配４．０分かけての６０：４０から１００：０（体積比）ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋０．１体積％ＴＦＡおよび４０秒かけての１００：０から９５：５（体積比）ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋０．１体積％ＴＦＡ；流量０．３ｍＬ／分、ＵＶ波長２００から３００ｎｍでのＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ（商標名）  ＵＰＬＣ（登録商標）  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７μｍ  ２．１×１００ｍｍカラム）、ＵＰＬＣ方法Ｄ（勾配４．３分かけての１０：９０から５０：５０（体積比）ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋０．１体積％ＴＦＡおよび０．５分かけての５０：５０から７０：３０（体積比）ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋０．１体積％ＴＦＡ；流量０．３ｍＬ／分、ＵＶ���長２００から３００ｎｍでのＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ（商標名）  ＵＰＬＣ（登録商標）  ＢＥＨ３００  Ｃ４  １．７μｍ  ２．１×１００ｍｍカラム）、ＵＰＬＣ方法Ｅ（勾配４．３分かけての１０：９０から６０：４０（体積比）ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋０．１体積％ＴＦＡおよび０．５分かけての６０：４０から９０：１０（体積比）ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋０．１体積％ＴＦＡ；流量０．３ｍＬ／分、ＵＶ波長２００から３００ｎｍでのＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ（商標名）  ＵＰＬＣ（登録商標）  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７μｍ  ２．１×１００ｍｍカラム）、ＵＰＬＣ方法Ｆ（勾配４．０分かけての６０：４０から１００：０（体積比）ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋０．１体積％ＴＦＡおよび０．４分かけての１００：０から９５：５（体積比）ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋０．１体積％ＴＦＡ；流量０．３ｍＬ／分、ＵＶ波長２００から３００ｎｍでのＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ（商標名）  ＵＰＬＣ（登録商標）  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７μｍ  ２．１×１００ｍｍカラム）、およびＵＰＬＣ方法Ｇ（勾配４．２分かけての１０：９０から５５：４５（体積比）ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋０．１体積％ＴＦＡおよび０．４分かけての１００：０から９５：５（体積比）ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋０．１体積％ＴＦＡ；流量０．３ｍＬ／分、ＵＶ波長２００から３００ｎｍでのＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ（商標名）  ＵＰＬＣ（登録商標）  ＢＥＨ  Ｃ８  １．７μｍ  ２．１×１００ｍｍカラム）と記した。質量分析は、陽イオン検出モードでの電気スプレーイオン化を用いるＷａｔｅｒｓ  Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ（登録商標）  ＬＣＴ  Ｐｒｅｍｉｅｒ（商標名）ＸＥで行い、質量−電荷比の走査範囲は３００から２０００であった。生成したインシュリン複合体の同定は、理論分子量をＵＰＬＣ−ＭＳを用いて測定した実験値に比較することで確認した。糖修飾の位置の決定のために、具体的に、インシュリン複合体についてＤＴＴ処理（ａ／ｂ鎖について）またはＧｌｕ−Ｃ消化（還元およびアルキル化を伴う）を行い、次に、得られたペプチドをＬＣ−ＭＳによって分析した。測定された質量に基づいて、糖位置を推定した。
【０２８７】
フラッシュクロマトグラフィーは、Ｂｉｏｔａｇｅフラッシュクロマトグラフィー装置（Ｄｙａｘ  Ｃｏｒｐ．）またはＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）Ｒｆ装置（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ）のいずれかを用いて行った。順相クロマトグラフィーは、記載の大きさのプレパックカートリッジ中のシリカゲル（２０から７０μｍ、６０Å孔経）で行った。逆相クロマトグラフィーは、記載の大きさのプレパックカートリッジ中のＣ１８結合シリカゲル（２０から６０μｍ、６０から１００Å孔径）で行った。分取規模のＨＰＬＣは、記載の勾配でのＷａｔｅｒｓ  Ｄｅｌｔａ  Ｐａｋ  Ｃ４  １５μｍ、３００Å、５０×２５０ｍｍカラムまたはＫｒｏｍａｓｉｌ（登録商標）  Ｃ８  １０μｍ、１００Å、５０×２５０ｍｍカラム、流量８５ｍＬ／分を用いるＧｉｌｓｏｎ  ３３３−３３４バイナリシステムで行った。溶液の濃縮は、減圧下にロータリーエバポレータで行うか、ＶｉｒＴｉｓ  Ｆｒｅｅｚｅｍｏｂｉｌｅ凍結乾燥機（ＳＰ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で凍結乾燥した。
【０２８８】
１Ｈ  ＮＭＲスペクトラムは、記載の重水素化溶媒中、５００ＭＨｚ（または他の形で具体的に記載）スペクトル装置で得た。化学シフトは、百万分率（ｐｐｍ）で報告した。テトラメチルシラン（ＴＭＳ）または重水素化溶媒の残留プロトンピークを、内部標準として用いた。カップリング定数（Ｊ）は、ヘルツ（Ｈｚ）単位で報告した。
【０２８９】
略称：酢酸（ＡｃＯＨ）、アセトニトリル（ＡｃＣＮ）、水系（ａｑ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロホスフェート）（ＨＡＴＵ）、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）、ジエチルエーテル（エーテルまたはＥｔ２Ｏ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンまたはヒューニッヒ塩基（ＤＩＰＥＡ）、（４−ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ′−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）、グラム（ｇ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（ＨＯＢｔ）、時間（ｈまたはｈｒ）、質量スペクトラム（ｍｓまたはＭＳ）、ミクロリットル（μＬ）、ミリグラム（ｍｇ）、ミリリットル（ｍＬ）、ミリモル（ｍｍｏｌ）、分（ｍｉｎ）、ペンタフルオロフェノール−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロホスフェート（ＰＦＴＵ）、石油エーテル（ＰＥ）、保持時間（Ｒｔ）、室温（ｒｔ）、飽和（ｓａｔ．またはｓａｔ′ｄ）、飽和塩化ナトリウム水溶液（ブライン）、トリエチルアミン（ＴＥＡ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、およびＮ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチル−Ｏ−（Ｎ−スクシニミジル）ウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＳＴＵ）。
【０２９０】
実施例１
下記構造を有するオリゴ糖リンカー６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−Ｎ−（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）−６−オキソヘキサンアミド（ＭＬ−１）の合成について説明する。
【化５１】
0006491649.tif 000248
【０２９１】
段階Ａ：６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキサン酸ベンジル
６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサン酸（３．３ｇ、１３．９７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５０ｍＬ）中溶液に０℃で、ＴＳＴＵ（４．３ｇ、１４．２８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２．５ｍＬ、１４．３１ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で１時間撹拌後、反応混合物をＥｔ２Ｏと水との間で分配した。有機層を分離し、水層をエーテルでさらに抽出した（１５０ｍＬで２回）。合わせた有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ１７Ｈ１９ＮＯ６の計算値：３３３．１２、実測ｍ／ｅ：３３４．１０［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．７５分。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．４０−７．３０（５Ｈ、ｍ）、５．１０（２Ｈ、ｓ）、２．８０（４Ｈ、ｓ）、２．６２−２．５８（２Ｈ、ｍ）、２．４１−２．３７（２Ｈ、ｍ）、１．８０−１．７２（４Ｈ、ｍ）。
【０２９２】
段階Ｂ：６−（｛２−［（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサン酸ベンジル
２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシド（１．２３ｇ、２．２４７ｍｍｏｌ、ＷＯ２０１０／０８８２９４Ａ１）のＤＭＦ（２０ｍＬ）中溶液に０℃で、６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキサン酸ベンジル（１．０２ｇ、３．０６ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（０．５ｍＬ、３．５９ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で１時間撹拌後、反応混合物を濃縮し、残留物を０％から４０％ＡｃＣＮ／Ｈ２Ｏで溶離を行うＣ１８逆相シリカゲルカラム（２７５ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ３３Ｈ５１ＮＯ１９の計算値：７６５．３１、実測ｍ／ｅ＝７６６．２６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝４．０４分。１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ７．４３−７．３７（５Ｈ、ｍ）、５．１４（２Ｈ、ｓ）、５．０７−５．０６（１Ｈ、ｍ）、４．８２−４．８１（１Ｈ、ｍ）、４．７７−４．７６（１Ｈ、ｍ）、４．０６−４．０１（２Ｈ、ｍ）、３．９６−３．９２（２Ｈ、ｍ）、３．８７−３．８１（５Ｈ、ｍ）、３．７９−３．７７（１Ｈ、ｍ）、３．７４−３．６７（５Ｈ、ｍ）、３．６５−３．６０（４Ｈ、ｍ）、３．５３−３．４９（１Ｈ、ｍ）、３．３７−３．３５（２Ｈ、ｍ）、２．４３−２．４０（２Ｈ、ｍ）、２．２２−２．１９（２Ｈ、ｍ）、１．６２−１．５２（４Ｈ、ｍ）。
【０２９３】
段階Ｃ：６−（｛２−［（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサン酸
６−（｛２−［（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサン酸ベンジル（１．１５ｇ、１．５０２ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（８０ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）の水（１０ｍＬ）中混合物をＨ２風船下に室温で１６時間撹拌した。触媒を濾去し、Ｈ２Ｏで洗浄した（１０ｍＬで３回）。濾液を濃縮して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ２６Ｈ４５ＮＯ１９の計算値：６７５．２６、実測ｍ／ｅ：６７６．２１［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．５０分。
【０２９４】
段階Ｄ：６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−Ｎ−（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）−６−オキソヘキサンアミド
６−（｛２−［（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサン酸（１．５５ｇ、２．２９４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２２ｍＬ）中溶液に０℃で、ＴＳＴＵ（７６０ｍｇ、２．５２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．５２ｍＬ、２．９８ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で１時間撹拌後、反応液を、ＴＦＡ（３７１μＬ、４．８２ｍｍｏｌ）を加えることで反応停止し、得られた混合物を濃縮して約３ｍＬとした。残留物を、自動ピペットによって、脱水アセトニトリル（４５ｍＬ）の入った管に滴下によって移し入れた。白色沈澱を遠心（３０００ｒｐｍ、１５分、４℃）によって回収し、脱水ＡｃＣＮ（１ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ３０Ｈ４８Ｎ２Ｏ２１の計算値：７７２．２７、実測ｍ／ｅ：７７３．２３［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．６５分。１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ５．０７−５．０６（１Ｈ、ｍ）、４．８４−４．８３（１Ｈ、ｍ）、４．７９−４．７８（１Ｈ、ｍ）、４．０６−４．０１（２Ｈ、ｍ）、３．９６−３．９３（２Ｈ、ｍ）、３．８７−３．８３（５Ｈ、ｍ）、３．８０−３．７８（１Ｈ、ｍ）、３．７５−３．６９（５Ｈ、ｍ）、３．６７−３．６１（４Ｈ、ｍ）、３．５７−３．５２（１Ｈ、ｍ）、３．４１−３．３８（２Ｈ、ｍ）、２．９１（４Ｈ、ｓ）、２．７５−２．７１（２Ｈ、ｍ）、２．２９−２．２５（２Ｈ、ｍ）、１．７５−１．５８（４Ｈ、ｍ）。
【０２９５】
実施例２
下記構造を有するオリゴ糖リンカー６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−Ｎ−（２−｛［３−Ｏ−（α−Ｄ−マンノピラノシル）−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）−６−オキソヘキサンアミド（ＭＬ−２）の合成について説明する。
【化５２】
0006491649.tif 000249
【０２９６】
段階Ａ：２−アジドエチル２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−６−Ｏ−トリチル−β−Ｄ−マンノピラノシド
２５０ｍＬ丸底フラスコ中、２−アジドエチル２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシド（１．０ｇ、２．１８６ｍｍｏｌ；ＷＯ２０１０／０８８２９４Ａ１参照（参照によって本明細書に組み込まれる））をピリジン（５０ｍＬ）に溶かした。上記溶液に、ＤＭＡＰ（１３ｍｇ、０．１０９ｍｍｏｌ）、次にトリチルクロライド（７６２ｍｇ、２．７３ｍｍｏｌ）を加えた。８０℃で１８時間撹拌後、反応混合物を濃縮した。残留物を、０％から５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行うシリカゲル（４０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｃ：ｍ／ｅ＝７２２．２９５５、［Ｍ＋Ｎａ］；Ｒｔ＝４．５０。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．０−８．３（ｍ、２５Ｈ）、５．８（ｔ、１Ｈ）、５．５（ｍ、１Ｈ）、５．２（ｓ、１Ｈ）、４．３（ｍ、１Ｈ）、４．１（ｍ、２Ｈ）、４．０（ｍ、１Ｈ）、３．５（ｍ、１Ｈ）、３．４（ｍ、２Ｈ）、３．２（ｄｄ、１Ｈ）、２．７（ｄ、１Ｈ）。
【０２９７】
段階Ｂ：２−アジドエチル２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−３−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル）−６−Ｏ−トリチル−α−Ｄ−マンノピラノシド
１００ｍＬ丸底フラスコ中、２−アジドエチル２，４−ビス−Ｏ−ベンゾイル−６−Ｏ−トリチル−α−Ｄ−マンノピラノシド（４００ｍｇ、０．５７２ｍｍｏｌ）、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−１−Ｏ−（２，２，２−トリクロロエタンイミドイル）−α−Ｄ−マンノピラノース（５０８ｍｇ、０．６８６ｍｍｏｌ）および４Åモレキュラーシーブス（３００ｍｇ）を加えた。上記混合物に、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）を加えた。反応混合物を冷却して−７８℃とし、それにＴＭＳＯＴｆ（１０．３３μＬ、０．０５７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を徐々に昇温させて０℃とし、３０分間撹拌した。次に、飽和ＮａＨＣＯ３で反応停止し、セライト層で濾過した。濾液をＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）で希釈し、ブラインおよび水で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物を、０％から１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行うシリカゲル（８０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題生成物を得た。ＬＣ−ＭＳ方法Ａ：ｍ／ｅ＝１２７８．８０［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．１４分。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．１−８．３（ｍ、３０Ｈ）、６．０（ｔ、１Ｈ）、５．８（ｔ、１Ｈ）、５．７（ｍ、２Ｈ）、５．４（ｓ、１Ｈ）、５．３８（ｍ、１Ｈ）、５．２（ｓ、１Ｈ）、４．７（ｄｄ、１Ｈ）、４．６（ｄｄ、１Ｈ）、４．４５（ｍ、１Ｈ）、４．３５（ｄｄ、１Ｈ）、３．９−４．０（ｍ、２Ｈ）、３．８（ｍ、２Ｈ）、３．７（ｍ、１Ｈ）、３．４（ｍ、２Ｈ）。
【０２９８】
段階Ｃ：２−アジドエチル２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−３−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル）−α−Ｄ−マンノピラノシド
５０ｍＬ丸底フラスコ中、２−アジドエチル２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−３−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル）−６−Ｏ−トリチル−α−Ｄ−マンノピラノシド（４５０ｍｇ、０．３５２ｍｍｏｌ）およびＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）を加えた。上記溶液に、ＴＦＡ（３ｍＬ、３８．９ｍｍｏｌ）を加えた。２５℃で１時間撹拌後、反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）で希釈し、水（１５ｍＬで３回）およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を、０％から１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行うシリカゲル（４０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題生成物を得た。ＬＣ−ＭＳ方法Ａ：ｍ／ｅ＝１０５３．５７［Ｍ＋１８］；Ｒｔ＝２．７３分。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．０−８．５（ｍ、４５Ｈ）、６．１（ｔ、１Ｈ）、６．０（ｔ、１Ｈ）、５．７（ｍ、２Ｈ）、５．４（ｓ、１Ｈ）、５．３（ｓ、１Ｈ）、５．２５（ｓ、１Ｈ）、４．６（ｍ、２Ｈ）、４．５（ｍ、１Ｈ）、４．３（ｍ、１Ｈ）、４．０−４．２（ｍ、３Ｈ）、３．８（ｍ、１Ｈ）、３．３−３．５（ｍ、３Ｈ）。
【０２９９】
段階Ｄ：２−アジドエチル３−Ｏ−α−Ｄ−マンノピラノシル−α−Ｄ−マンノピラノシド
５０ｍＬ丸底フラスコ中、２−アジドエチル２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−３−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル）−α−Ｄ−マンノピラノシド（３５０ｍｇ、０．３３８ｍｍｏｌ）およびＣＨ３ＯＨ（５ｍＬ）を加えた。上記溶液に、ｐＨ＞１０までＮａＯＣＨ３（濃）を滴下した。反応混合物を２５℃で６時間撹拌した。上記溶液に、ｐＨ約７までＤｏｗｅｘ  Ｈ＋（５０Ｗ×８−２００）樹脂を加えた。固体樹脂を濾去し、濾液を濃縮して、標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ方法Ａ：ｍ／ｅ＝４３４．００［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝０．４４分。
【０３００】
段階Ｅ：２−アミノエチル３−Ｏ−α−Ｄ−マンノピラノシル−α−Ｄ−マンノピラノシド
５０ｍＬ丸底フラスコ中、２−アジドエチル３−Ｏ−α−Ｄ−マンノピラノシル−α−Ｄ−マンノピラノシド（１３９ｍｇ、０．３３８ｍｍｏｌ）を水／ＣＨ３ＯＨ（体積比１：１、５ｍＬ）に溶かした。上記溶液に、Ｐｄ／Ｃ（１０％、３６ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２５℃でＨ２風船下に１８時間撹拌した。混合物をセライト層で濾過し、濾液を濃縮して、標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ方法Ａ：ｍ／ｅ＝３８６．０８［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝０．２４分。
【０３０１】
段階Ｆ：６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−Ｎ−（２−｛［３−Ｏ−（α−Ｄ−マンノピラノシル）−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）−６−オキソヘキサンアミド
段階Ｂにおいて２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシドに代えて２−アミノエチル３−Ｏ−α−Ｄ−マンノピラノシル−α−Ｄ−マンノピラノシドを用い、ＭＬ−１について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６１１．２０１［Ｍ＋１］：Ｒｔ＝１．８２分。
【０３０２】
実施例３
下記構造を有するオリゴ糖リンカー６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−Ｎ−（２−｛［６−Ｏ−（α−Ｄ−マンノピラノシル）−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）−６−オキソヘキサンアミド（ＭＬ−３）の合成について説明する。
【化５３】
0006491649.tif 000250
【０３０３】
段階Ａ：２−アジドエチル２，３，４−トリ−Ｏ−ベンゾイル−６−トリチル−α−Ｄ−マンノピラノシド
２５０ｍＬ丸底フラスコ中、２−アジドエチル２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシド（１．０ｇ、１．４２９ｍｍｏｌ）をピリジン（２０ｍＬ）に溶かした。上記溶液に０℃で、ベンゾイルクロライド（１６６μＬ、１．４２９ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１８時間撹拌後、混合物を濃縮し、残留物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）に溶かし、水（１０ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を０％から５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行うシリカゲル（４０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ方法Ａ：ｍ／ｅ＝８０４．４４［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．８８分。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．０−８．２（ｍ、３０Ｈ）、６．１（ｔ、１Ｈ）、５．８（ｄｄ、１Ｈ）、５．２（ｄ、１Ｈ）、４．２−４．３（ｍ、１Ｈ）、４．０−４．１（ｍ、１Ｈ）、３．８（ｍ、１Ｈ）、３．６（ｍ、１Ｈ）、３．５（ｍ、１Ｈ）、３．４（ｄｄ、Ｈ）、３．３（ｄｄ、１Ｈ）。
【０３０４】
段階Ｂ：２−アジドエチル２，３，４−トリ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシド
１００ｍＬ丸底フラスコ中、２−アジドエチル２，３，４−トリ−Ｏ−ベンゾイル−６−トリチル−α−Ｄ−マンノピラノシド（１．１ｇ、１．３６８ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）に溶かした。上記溶液に、ＴＦＡ（１０ｍＬ、１３０ｍｍｏｌ）を加えた。２５℃で１８時間撹拌後、混合物をＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）で希釈し、ブライン（１０ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ３でｐＨ約７まで洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を、０％から１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行うシリカゲル（４０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ方法Ａ：ｍ／ｅ＝５７９．１２［Ｍ＋１８］および５８４．１０［Ｍ＋Ｎａ］；Ｒｔ＝２．２２分。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．２−８．２（ｍ、１５Ｈ）、６．０（ｄｄ、１Ｈ）、５．９（ｔ、１Ｈ）、５．７（ｍ、１Ｈ）、５．２（ｂｒｓ、１Ｈ）、４．１−４．２（ｍ、２Ｈ）、３．８５（ｍ、１Ｈ）、３．７−３．８（ｍ、２Ｈ）、３．６（ｍ、１Ｈ）、３．５（ｍ、１Ｈ）。
【０３０５】
段階Ｃ：２−アジドエチル２，３，４−トリ−Ｏ−ベンゾイル−６−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル）−α−Ｄ−マンノピラノシド
１００ｍＬ丸底フラスコ中、２−アジドエチル２，３，４−トリ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシド（７２０ｍｇ、１．２８２ｍｍｏｌ）、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−１−Ｏ−（２，２，２−トリクロロエタンイミドイル）−α−Ｄ−マンノピラノース（１．１４ｇ、１．５３９ｍｍｏｌ）および４Åモレキュラーシーブス（３００ｍｇ）を加えた。上記混合物に、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）を加えた。反応混合物を冷却して−７８℃とした。上記混合物に、ＴＭＳＯＴｆ（２３．２μＬ、０．１２８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を徐々に昇温させて０℃とし、３０分間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３で反応停止し、混合物をセライト層で濾過した。濾液をＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）で希釈し、ブラインおよび水で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を０％から１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行うシリカゲル（８０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題生成物を得た。ＬＣ−ＭＳ方法Ａ：ｍ／ｅ＝１１５７．６４［Ｍ＋１８］および１１６３．５２［Ｍ＋Ｎａ］；Ｒｔ＝３．０１分。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．２−８．３（ｍ、２５Ｈ）、６．０（ｔ、１Ｈ）、５．８（ｔ、１Ｈ）、５．７（ｍ、２Ｈ）、５．４（ｓ、１Ｈ）、５．３８（ｍ、１Ｈ）、５．２（ｓ、１Ｈ）、４．７（ｄｄ、１Ｈ）、４．６（ｄｄ、１Ｈ）、４．４５（ｍ、１Ｈ）、４．３５（ｄｄ、１Ｈ）、３．９−４．０（ｍ、２Ｈ）、３．８（ｍ、２Ｈ）、３．７（ｍ、１Ｈ）、３．４（ｍ、２Ｈ）。
【０３０６】
段階Ｄ：６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−Ｎ−（２−｛［６−Ｏ−（α−Ｄ−マンノピラノシル）−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）−６−オキソヘキサンアミド
段階Ｄで２−アジドエチル２，４−ビス−Ｏ−ベンゾイル−３−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル）−α−Ｄ−マンノピラノシドに代えて２−アジドエチル２，３，４−トリ−Ｏ−ベンゾイル−６−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル）−α−Ｄ−マンノピラノシドを用い、ＭＬ−２について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６１１．２０２［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．８８分。
【０３０７】
実施例４
下記構造を有するオリゴ糖リンカー６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−Ｎ−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝−６−オキソヘキサンアミド（ＭＬ−４）の合成について説明する。
【化５４】
0006491649.tif 000251
【０３０８】
段階Ｂで２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシドに代えて２−アミノエチルα−Ｌ−フコピラノシド（Ｂｉｌｓｔｅｉｎ  Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  ２０１０，  ６，  ６９９−７０３）を用い、ＭＬ−１について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝４３３．１４［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．１４分。
【０３０９】
実施例５
下記構造を有するオリゴ糖リンカー６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−Ｎ−［２−（α−Ｄ−マンノピラノシルオキシ）エチル］−６−オキソヘキサンアミド（ＭＬ−５）の合成について説明する。
【化５５】
0006491649.tif 000252
【０３１０】
段階Ｂで２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシドに代えて２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシド（Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  ２００２，  ７９−８６）を用い、ＭＬ−１について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝４４９．１４［Ｍ＋１］、Ｒｔ＝１．９０分。
【０３１１】
実施例６
下記構造を有するオリゴ糖リンカーＮ，Ｎ−ビス［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキサンアミド（ＭＬ−６）の合成について説明する。
【化５６】
0006491649.tif 000253
【０３１２】
段階Ａ：６−［ビス（２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−オキソエチル）アミノ］−６−オキソヘキサン酸ベンジル
６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサン酸（１．５ｇ、６．３５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５０ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それに室温でＤＩＰＥＡ（２．２１８ｍＬ、１２．７０ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１．９４５ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（２．４３４ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチル２，２′−イミノジアセテート（２．３４ｇ、９．５２ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１６時間撹拌後、反応混合物をＨ２Ｏ（３０ｍＬ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した（３０ｍＬで２回）。合わせた有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物を０％から４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行うシリカゲル（８０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ方法Ａ：ｍ／ｅ＝４６４．０４［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．４７分。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．３２（ｍ、５Ｈ）、５．０７（ｓ、２Ｈ）、４．０２（ｓ、２Ｈ）、３．９６（ｓ、２Ｈ）、２．３５（ｓ、２Ｈ）、２．２６（ｓ、２Ｈ）、１．６６（ｓ、４Ｈ）、１．４２−１．４４（ｂｓ、１８Ｈ）。
【０３１３】
段階Ｂ：２，２′−｛［６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサノイル］イミノ｝ジ酢酸
６−［ビス（２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−オキソエチル）アミノ］−６−オキソヘキサン酸ベンジル（５．９ｇ、１２．７３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それに室温で、ＴＦＡ（３０ｍＬ、１２．７３ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１６時間撹拌後、混合物を濃縮した。残留物をＣ１８逆相シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ方法Ａ：ｍ／ｅ＝４８６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．５３分。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ７．３０（ｍ、５Ｈ）、５．０６（ｓ、２Ｈ）、４．８１（ｓ、４Ｈ）、４．１９（ｓ、２Ｈ）、４．０７（ｓ、２Ｈ）、２．３４（ｑ、４Ｈ、Ｊ＝７．０３）。
【０３１４】
段階Ｃ：６−｛ビス［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝−６−オキソヘキサン酸ベンジル
２，２′−｛［６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサノイル］イミノ｝ジ酢酸（８００ｍｇ、２．２７７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１２ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それに室温で、２−アミノエチルα−Ｌ−フコピラノシド（１．１３２ｇ、５．４６ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（８３４ｍｇ、６．８３ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（１．５２８ｇ、７．９７ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１６時間撹拌後、反応混合物を濃縮し、残留物を０％から４０％ＡｃＣＮ／水で溶離を行うＣ１８逆相シリカゲル（１２０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ方法Ａ：ｍ／ｅ＝７３０．２６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．４２分。
【０３１５】
段階Ｄ：６−｛ビス［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝−６−オキソヘキサン酸
６−｛ビス［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝−６−オキソヘキサン酸ベンジル（９００ｍｇ、１．２３３ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（５ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それに室温で、ジヒドロキシパラジウム（８６６ｍｇ、１．２３３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を脱気し、Ｈ２風船下に撹拌した。Ｈ２下に室温で１６時間撹拌後、反応混合物をセライト層で濾過し、ＣＨ３ＯＨで洗浄した（１０ｍＬで３回）。濾液を濃縮して、標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ方法Ａ：ｍ／ｅ＝６４０．１７［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝０．９８分。
【０３１６】
段階Ｅ：Ｎ，Ｎ−ビス［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキサンアミド
６−｛ビス［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝−６−オキソヘキサン酸（１６０ｍｇ、０．２５０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．０ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それに０℃で、ＴＳＴＵ（９４ｍｇ、０．３１３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液を加え、５分後、ＤＩＰＥＡ（５３μＬ、０．３００ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で１．５時間撹拌後、遠心管中、混合物をＥｔ２Ｏ（３０ｍＬ）に滴下した。３５００ｒｐｍで３０分間遠心後、上清を傾斜法によって除去し、固体残留物をＨ２Ｏに溶かし、それを凍結乾燥して、標題生成物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝７３７［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．１９分。
【０３１７】
実施例７
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２，２′−｛［２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−オキソエチル］イミノ｝ビス（Ｎ−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アセトアミド）（ＭＬ−７）の合成について説明する。
【化５７】
0006491649.tif 000254
【０３１８】
段階Ａ：２，２′−［（２−｛［６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキシル］アミノ｝−２−オキソエチル）イミノ］ジ酢酸
４−メチルベンゼンスルホン酸６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサン−１−アミニウム（２．０ｇ、５．０８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中溶液に０℃で、Ｋ２ＣＯ３（７３８ｍｇ、５．３４ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で２時間撹拌後、反応混合物の上清を、３−（２，６−ジオキソモルホリン−４−イル）プロパン酸（１．１０ｇ、６．３５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中溶液に０℃で加えた。０℃で３０分間撹拌後、反応混合物を室温で１時間撹拌し、冷却して０℃とし、次に水（１０ｍＬ）を加えた。得られた混合物を濃縮し、残留物を水（１０ｍＬ）に懸濁させた。０℃で１６時間撹拌後、固体を濾過によって回収し、乾燥させて、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ７．３６−７．３０（ｍ、５Ｈ）、５．１１（ｓ、２Ｈ）、３．５６（ｓ、４Ｈ）、３．４３（ｓ、２Ｈ）、３．２３（ｔ、Ｊ＝６．７、２Ｈ）、２．３９（ｔ、Ｊ＝７．３、２Ｈ）、１．６８−１．６２（ｍ、２Ｈ）、１．５７−１．５１（ｍ、２Ｈ）、１．４０−１．３５（ｍ、２Ｈ）。
【０３１９】
段階Ｂ：６−［（｛ビス［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝アセチル）アミノ］ヘキサン酸ベンジル
２−アミノエチルα−Ｌ−フコピラノシド（７．８８ｇ、３８．０４ｍｍｏｌ）および２，２′−［（２−｛［６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキシル］アミノ｝−２−オキソエチル）イミノ］ジ酢酸（２．５ｇ、１９．０２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中溶液に、ＨＯＢｔ（２．４３ｇ、１５．８５ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（３．０４ｇ、１５．８５ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１６時間撹拌後、反応混合物を濃縮し、残留物を０％から５０％ＡｃＣＮ／水で溶離を行うＣ１８逆相シリカゲル（１２０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝７７３．２９２［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．７４分。
【０３２０】
段階Ｃ：２，２′−｛［２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−オキソエチル］イミノ｝ビス（Ｎ−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アセトアミド）
段階Ｄで６−｛ビス［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝−６−オキソヘキサン酸ベンジルに代えて６−［（｛ビス［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝アセチル）アミノ］ヘキサン酸ベンジルを用い、ＭＬ−６について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝７８０．２６５［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．３９分。
【０３２１】
実施例８
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ，Ｎ−ビス［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］グリシル−β−アラニネート（ＭＬ−８）の合成について説明する。
【化５８】
0006491649.tif 000255
【０３２２】
段階Ａ：２，２′−［（２−｛［３−（ベンジルオキシ）−３−オキソプロピル］アミノ｝−２−オキソエチル）イミノ］ジ酢酸
３−アミノプロパン酸ベンジル塩酸塩（４．４９ｇ、２０．８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３０ｍＬ）中溶液を氷浴で冷却し、それにＫ２ＣＯ３（３．０２ｇ、２１．８４ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を０℃で２時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を、氷浴で冷却した２−（２，６−ジオキソモルホリノ）酢酸（４．４７ｇ、２５．８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３０ｍＬ）中溶液に加えた。得られた混合物を０℃で３０分間、室温で２時間撹拌した。反応を、水（３０ｍＬ）を加えることで反応停止し、得られた混合物を濃縮した。残留物を水（４０ｍＬ）とともに撹拌し、得られた沈澱を濾過によって回収し、乾燥させて、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ２．５３（ｔ、Ｊ＝６．８、２Ｈ）、３．２７（ｓ、２Ｈ）、３．３６（ｑ、Ｊ＝６．２、２Ｈ）、３．４２（ｍ、２Ｈ）、３．４９（ｓ、２Ｈ）、５．０９（ｓ、２Ｈ）、７．２８（ｍ、４Ｈ）、８．１６（ｍ、１Ｈ）、１２．４５（ｂｒｓ、２Ｈ）。
【０３２３】
段階Ｂ：２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ，Ｎ−ビス［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］グリシル−β−アラニネート
段階Ｂで２，２′−［（２−｛［６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキシル］アミノ｝−２−オキソエチル）イミノ］ジ酢酸に代えて２，２′−［（２−｛［３−（ベンジルオキシ）−３−オキソプロピル］アミノ｝−２−オキソエチル）イミノ］ジ酢酸を用い、ＭＬ−７について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｅ：ｍ／ｅ＝７３８．２１４９［Ｍ＋１；Ｒｔ＝１．７７分。
【０３２４】
実施例９
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ，Ｎ−ビス［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］グリシルグリシネート（ＭＬ−９）の合成について説明する。
【化５９】
0006491649.tif 000256
【０３２５】
段階Ａで６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサン−１−アミニウム４−メチルベンゼンスルホネートに代えてベンジルグリシネートを用い、ＭＬ−７について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝７２４．２３［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．１０分。
【０３２６】
実施例１０
下記構造を有するオリゴ糖リンカー１５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−Ｎ−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝−３−［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−５，１５−ジオキソ−９，１２−ジオキサ−３，６−ジアザペンタデカン−１−アミド（ＭＬ−１０）の合成について説明する。
【化６０】
0006491649.tif 000257
【０３２７】
段階Ａで６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサン−１−アミニウム４−メチルベンゼンスルホネートに代えて３−［２−（２−アミノエトキシル）エトキシ］プロパン酸ベンジルを用い、ＭＬ−７について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝８２５．８１２［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．１７分。
【０３２８】
実施例１１
下記構造を有するオリゴ糖リンカー６−｛［ビス（｛３−オキソ−３−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］−２−オキソエチル｝アミノ）プロピル］アミノ｝−６−オキソヘキサン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル（ＭＬ−１１）の合成について説明する。
【化６１】
0006491649.tif 000258
【０３２９】
段階Ａ：３，３′−｛［６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサノイル］イミノ｝ジプロパン酸
３，３′−イミノジプロピオン酸（２．５９ｇ、７．７６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）中溶液に０℃で、ＤＭＦ（３ｍＬ）中の６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキサン酸ベンジル（２．５９ｇ、７．７６ｍｍｏｌ）を１５分の期間をかけて少量ずつ加え、次にＴＥＡ（９５１μＬ、６．８３ｍｍｏｌ）を１０分の期間をかけて滴下した。得られた懸濁液を室温で１６時間撹拌した。不溶物を濾過によって除去し、濾液を濃縮した。残留物を、５％から５０％ＡｃＣＮ／水で溶離を行うＣ１８逆相シリカゲル（１５０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝３８０．１７７［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．４６分。
【０３３０】
段階Ｂ：６−｛［ビス（｛３−オキソ−３−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］−２−オキソエチル｝アミノ）プロピル］アミノ｝−６−オキソヘキサン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル
段階Ｃで２，２′−｛［６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサノイル］イミノ｝ジ酢酸に代えて３，３′−｛［６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサノイル］イミノ｝ジプロパン酸を用い、ＭＬ−６について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝７６５．３６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．１５分。
【０３３１】
実施例１２
下記構造を有するオリゴ糖リンカー１−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−１−オキソヘキサン−２−イル］−Ｎ−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝−Ｎ′−［（２Ｓ）−６−｛［６−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサノイル］アミノ｝ヘキサンジアミド（ＭＬ−１２）の合成について説明する。
【化６２】
0006491649.tif 000259
【０３３２】
段階Ａ：Ｎ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ６−［６−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサノイル］−Ｌ−リジン
２５０ｍＬ丸底フラスコ中、Ｎ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−リジン（１９４ｍｇ、０．６９４ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（１０ｍＬ）を加えた。上記溶液に、ＤＭＦ（５ｍＬ）中のＭＬ−４（３００ｍｇ、０．６９４ｍｍｏｌ）を滴下し、次に、ＤＩＰＥＡ（１２１μＬ、０．６９４ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１８時間撹拌後、反応混合物を濃縮した。残留物を、０％から４０％ＡｃＣＮ／水で溶離を行うＣ１８逆相シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題生成物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝５９８．２９９７［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．９９分。
【０３３３】
段階Ｂ：Ｎ６−［６−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサノイル］−Ｌ−リジン
１００ｍＬフラスコ中、Ｎ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ６−［６−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサノイル］−Ｌ−リジン（２００ｍｇ、０．３３５ｍｍｏｌ）を水（５ｍＬ）に溶かした。フラスコを脱気し、Ｎ２を充填した。上記混合物に、ＰｄＯＨ２（４８．７ｍｇ、０．０６９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＨ２風船下に２時間撹拌した。混合物をセライト層で濾過し、濾液を濃縮して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝４６４．２６９７［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．６１分。
【０３３４】
段階Ｃ：６−（｛Ｎ２，Ｎ６−ビス［６−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサノイル］−Ｌ−リシル｝アミノ）ヘキサン酸ベンジル
４０ｍＬバイアル中、Ｎ６−［６−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサノイル］−Ｌ−リジン（１５０ｍｇ、０．３２４ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（５ｍＬ）を加えた。溶液を冷却して０℃とした。上記溶液に、ＤＭＦ（２ｍＬ）中のＭＬ−４（１４０ｍｇ、０．３２４ｍｍｏｌ）を滴下し、次にＴＥＡ（４５μＬ、０．３２４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を昇温させて室温とし、１時間撹拌した。得られた混合物に、ＴＳＴＵ（９７ｍｇ、０．３２４ｍｍｏｌ）を加え、次にＴＥＡ（４５μＬ、０．３２４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２０分撹拌した。得られた混合物に、６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサン−１−アミニウム４−メチルベンゼンスルホネート（１２７ｍｇ、０．３２４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．０ｍＬ）中溶液を加えた。室温で１８時間撹拌後、混合物を濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝９８４．５４６９［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．３７分。
【０３３５】
段階Ｄ：１−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−１−オキソヘキサン−２−イル１−Ｎ−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝−Ｎ′−（２Ｓ）−６−｛［６−（｛２−［（α−Ｌ−ガラクトピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサノイル］アミノ｝ヘキサンジアミド
段階Ｃで６−（｛２−［（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサン酸ベンジルに代えて６−（｛Ｎ２，Ｎ６−ビス［６−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサノイル］−Ｌ−リシル｝アミノ）ヘキサン酸ベンジルを用い、ＭＬ−１について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝９９１．５１８２［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．４１分。
【０３３６】
実施例１３
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２Ｎ−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝−Ｎ′−［（５Ｓ）−６−｛［６−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキシル］アミノ｝−５−（｛８−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−８−オキソオクタノイル｝アミノ）−６−オキソヘキシル］ヘキサンジアミド（ＭＬ−１３）の合成について説明する。
【化６３】
0006491649.tif 000260
【０３３７】
段階Ａ：Ｎ２−｛８−（ベンジルオキシ）−８−オキソオクタノイル｝−Ｎ６−［６−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサノイル］−Ｌ−リジン
Ｎ６−［６−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサノイル］−Ｌ−リジン（３１０ｍｇ、０．６６９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）中溶液に０℃で、８−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−８−オキソオクタン酸ベンジル（２４２ｍｇ、０．６６９ｍｍｏｌ）を加え、次にＤＩＰＥＡ（０．１１７ｍＬ、０．６６９ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を昇温させて２５℃とし、この温度で１８時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物を、０％から３０％ＣＡＮ／水で溶離を行うＣ１８逆相シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝７１０．４２３［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝４．５９分。
【０３３８】
段階Ｂ：８−（｛（１２Ｓ）−１，２６−ビス［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］−４，１１，１８，２３−テトラオキソ−３，１０，１７，２４−テトラアザヘキサコサン−１２−イル｝アミノ）−８−オキソオクタン酸ベンジル
４０ｍＬバイアル中、Ｎ２−｛８−（ベンジルオキシ）−８−オキソオクタノイル｝−Ｎ６−［６−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサノイル］−Ｌ−リジン（１００ｍｇ、０．１４１ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（５ｍＬ）を加えた。上記溶液に０℃で、ＥＤＣ（４０．５ｍｇ、０．２１１ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（２３．７ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を昇温させて室温とし、室温で２０分間撹拌した。上記混合物に、６−アミノ−Ｎ−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝ヘキサンアミド（４５．１ｍｇ、０．１４１ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１８時間撹拌後、混合物を濃縮した。残留物を０％から４０％ＡｃＣＮ／水で溶離を行うフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝１０１２．６３４８［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．２８分。
【０３３９】
段階Ｃ：Ｎ−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝−Ｎ′−［（５Ｓ）−６−｛［６−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキシル］アミノ｝−５−（｛８−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−８−オキソオクタノイル｝アミノ）−６−オキソヘキシル］ヘキサンジアミド
段階Ｃで６−（｛２−［（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサン酸ベンジルに代えて８−（｛（１２Ｓ）−１，２６−ビス［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］−４，１１，１８，２３−テトラオキソ−３，１０，１７，２４−テトラアザヘキサコサン−１２−イル｝アミノ）−８−オキソオクタン酸ベンジルを用い、ＭＬ−１について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝１０１９．５８８［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．３８分。
【０３４０】
実施例１４
下記構造を有するオリゴ糖リンカーＮ−｛（５Ｓ）−５−（｛８−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−８−オキソオクタノイル｝アミノ）−６−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−６−オキソヘキシル｝−Ｎ′−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝ヘキサンジアミド（ＭＬ−１４）の合成について説明する。
【化６４】
0006491649.tif 000261
【０３４１】
段階Ａ：Ｎ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ６−［６−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサノイル］−Ｌ−リジン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル
６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサノエートに代えてＮ２−｛８−（ベンジルオキシ）−８−オキソオクタノイル｝−Ｎ６−［６−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサノイル］−Ｌ−リジンを用い、ＭＬ−１段階Ａについて記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６９５．２１３［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．９８分。
【０３４２】
段階Ｂ：Ｎ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ６−［６−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサノイル］−Ｎ−（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）−Ｌ−リジンアミド
４０ｍＬバイアル中、２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシド（８８３ｍｇ、１．６１２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶かした。上記溶液に０℃で、Ｎ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ６−［６−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサノイル］−Ｌ−リジン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル（７００ｍｇ、１．００８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中溶液を滴下した。室温で１８時間撹拌後、混合物を濃縮した。残留物をＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｄｅｌｔａ  Ｐａｋ  Ｃ４  ３００Ａ、１５μｍ、５０×２５０ｍｍカラム、流量８５ｍＬ／分、２５分以内で勾配８％から３０％ＡＣＮ／水）によって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝１１２７．３３５［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．８３分。
【０３４３】
段階Ｃ：Ｎ−｛（５Ｓ）−５−アミノ−６−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−６−オキソヘキシル｝−Ｎ′−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝ヘキサンジアミド
１００ｍＬフラスコ中、Ｎ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ６−［６−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサノイル］−Ｎ−（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）−Ｌ−リジンアミド（９５０ｍｇ、０．８４３ｍｍｏｌ）を水（１０ｍＬ）に溶かした。フラスコを脱気し、Ｎ２を充填した。得られた混合物に、Ｐｄ／Ｃ（１０％、１７９ｍｇ、０．１６９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＨ２風船下に１８時間撹拌した。混合物をセライト層で濾過し、濾液を濃縮して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝９９３．３２６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．３７分。
【０３４４】
段階Ｄ：Ｎ−｛（５Ｓ）−５−（｛８−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−８−オキソオクタノイル｝アミノ）−６−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−６−オキソヘキシル｝−Ｎ′−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝ヘキサンジアミド
段階ＣでＮ６−［６−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサノイル］−Ｌ−リジンに代えてＮ−｛（５Ｓ）−５−アミノ−６−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−６−オキソヘキシル｝−Ｎ′−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝ヘキサンジアミドを用い、ＭＬ−１２について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝１２１８．４１８［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．２５分。
【０３４５】
実施例１５
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２，２′−｛［２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−オキソエチル］イミノ｝ビス［Ｎ−（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アセトアミド］（ＭＬ−１５）の合成について説明する。
【化６５】
0006491649.tif 000262
【０３４６】
段階Ｂで２−アミノエチルα−Ｌ−フコピラノシドに代えて２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシドを用い、ＭＬ−７について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝１４６０．５８［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．５３分。
【０３４７】
実施例１６
下記構造を有するオリゴ糖リンカーＮ，Ｎ′−ビス｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝−１−｛６−［２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキサノイル｝ピロリジン−シス−３，４−ジカルボキサミド（ＭＬ−１６）の合成について説明する。
【化６６】
0006491649.tif 000263
【０３４８】
段階Ｃで２，２′−｛［６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサノイル］イミノ｝ジ酢酸に代えてピロリジン−シス−３，４−ジカルボン酸を用い、ＭＬ−６について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝７６３．３８［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．１２分。
【０３４９】
実施例１７
下記構造を有するオリゴ糖リンカー１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキサノイル｝−Ｎ，Ｎ′−ビス｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝ピペリジン−シス−３，５−ジカルボキサミド（ＭＬ−１７）の合成について説明する。
【化６７】
0006491649.tif 000264
【０３５０】
段階Ａ：Ｎ，Ｎ′−ビス｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝ピリジン−３，５−ジカルボキサミド
３，５−ピリジンジカルボン酸（３１１ｍｇ、１．８６１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３０ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それに室温で、２−アミノエチルα−Ｌ−フコピラノシド（２．０７７ｇ、９．３０ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（５６８ｍｇ、４．６５ｍｍｏｌ）、およびＥＤＣ（１７８４ｍｇ、９．３０ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１６時間撹拌後、反応混合物を濃縮した。残留物を、ＡｃＣＮ／水で溶離を行うＣ１８逆相シリカゲル（３００ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝５７８．３１［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝０．２５分。
【０３５１】
段階Ｂ：Ｎ，Ｎ′−ビス｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝ピペリジン−シス−３，５−ジカルボキサミド
Ｎ，Ｎ′−ビス｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝ピリジン−３，５−ジカルボキサミド（５５０ｍｇ、０．９５２ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（１２ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それに室温で、ＰｔＯ２（６４．９ｍｇ、０．２８６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を脱気し、Ｈ２風船下に室温で４時間撹拌した。反応混合物をセライト層で濾過し、濾液を濃縮し、ＣＨ３ＯＨに再溶解させ、遠心分離して、固体触媒を沈澱させた。上清を濃縮して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝５８４．２７［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．１４分。
【０３５２】
段階Ｃ：６−［シス−３，５−ビス（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝カルバモイル）ピペリジン−１−イル］−６−オキソヘキサン酸ベンジル
６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサン酸（１２５ｍｇ、０．５２９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それに室温で、ＤＭＡＰ（６４．６ｍｇ、０．５２９ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（２０３ｍｇ、１．０５８ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ′−ビス｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝ピペリジン−シス−３，５−ジカルボキサミド（４３８ｍｇ、０．７９４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液を加えた。室温で終夜撹拌後、反応混合物を濃縮し、残留物を、０％から５０％ＡｃＣＮ／水で溶離を行うＣ１８逆相シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｆ：ｍ／ｅ＝７７０．４８［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．３８分。
【０３５３】
段階Ｄ：１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキサノイル｝−Ｎ，Ｎ′−ビス｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝ピペリジン−シス−３，５−ジカルボキサミド
段階Ｄで６−｛ビス［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝−６−オキソヘキサン酸ベンジルに代えて６−［シス−３，５−ビス（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝カルバモイル）ピペリジン−１−イル］−６−オキソヘキサン酸ベンジルを用い、ＭＬ−６について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｆ：ｍ／ｅ＝７７７．３５［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．２３分。
【０３５４】
実施例１８
下記構造を有するオリゴ糖リンカーＮ１，Ｎ５−ビス｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝−Ｎ２−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキサノイル｝−Ｌ−グルタミド（ＭＬ−１８）の合成について説明する。
【化６８】
0006491649.tif 000265
【０３５５】
段階Ａ：ベンジル［（２Ｓ）−１，５−ジオキソ−１，５−ビス（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）ペンタン−２−イル］カーバメート
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−グルタミン酸（１．１ｇ、３．９１ｍｍｏｌ）および２−アミノエチルα−Ｌ−フコピラノシド（２．０２６ｇ、９．７８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中溶液に、ＥＤＣ（３．００ｇ、１５．６４ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．０４８ｇ、０．３９１ｍｍｏｌ）を加えた。室温で２４時間撹拌後、反応混合物を濃縮し、残留物を５倍カラム体積にわたり１００％ＥｔＯＡｃ、次に定組成ＥｔＯＡｃ：ＡｃＣＮ：ＭｅＯＨ６：１：１で溶離を行うシリカゲル（８０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ７．３８−７．２９（ｍ、５Ｈ）、５．１３−５．０５（ｍ、２Ｈ）、４．７６（ｓ、２Ｈ）、４．０９（ｄｄ、Ｊ＝５．３、８．６、１Ｈ）、３．９５−３．９１（ｍ、２Ｈ）、３．７４−３．６５（ｍ、６Ｈ）、３．５３−３．２５（ｍ、８Ｈ）、２．３０（ｔ、Ｊ＝７．５、２Ｈ）、２．０６−２．０４（ｍ、１Ｈ）、１．９２−１．８９（ｍ、１Ｈ）、１．１９（ｄ、Ｊ＝６．５、６Ｈ）。
【０３５６】
段階Ｂ：２−［（Ｎ−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝−Ｌ−α−グルタミニル）アミノ］エチルα−Ｌ−フコピラノシド
ベンジル［（２Ｓ）−１，５−ジオキソ−１，５−ビス（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）ペンタン−２−イル］カーバメート（９４０ｍｇ、１．４２５ｍｍｏｌ）およびパールマン触媒（２０ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＯＨ（２０ｍＬ）中懸濁液を約０．２１ＭＰａ（３０ｐｓｉ）Ｈ２下に室温で振盪した。１６時間後、触媒を濾去し、濾液を濃縮して標題化合物を得た。
【０３５７】
段階Ｃ：｛［（２Ｓ）−１，５−ジオキソ−１，５−ビス（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）ペンタン−２−イル］アミノ｝−６−オキソヘキサン酸ベンジル
６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサン酸（２６０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中溶液に０℃で、ＴＳＴＵ（３４８ｍｇ、１．１５５ｍｍｏｌ）と次にＤＩＰＥＡ（２０２μＬ、１．１５５ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で１時間撹拌後、反応混合物を、Ｅｔ２Ｏ（１００ｍＬ）とブライン（１００ｍＬ）との間で分配した。有機相を分離し、ブラインでさらに洗浄し（１００ｍＬで２回）、ＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物をＤＭＦ（５ｍＬ）に再溶解させ、２−［（Ｎ−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝−Ｌ−α−グルタミニル）アミノ］エチルα−Ｌ−フコピラノシド（３６８ｍｇ、１．１０３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中溶液に０℃で加え、次にＥｔ３Ｎ（１５４μＬ、１．１０３ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で３０分間撹拌後、反応混合物を徐々に昇温させて室温とし、２時間撹拌した。反応混合物をＣＨ３ＯＨ（１０ｍＬ）で希釈し、ＨＰＬＣ（勾配３４分かけて６％から３０％  ０．１％ＴＦＡ／水、５０×２５０ｍｍ  Ｃ４  １５μｍ、３００Ａ、１００ｍＬ／分流量）によって精製した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ８．１８（ｍ、１Ｈ）、７．３５−７．３０（ｍ、５Ｈ）、５．１１（ｓ、２Ｈ）、４．７６（ｄ、Ｊ＝３．６、２Ｈ）、４．３０（ｄｄ、Ｊ＝５．５、８．６、１Ｈ）、３．９３（ｄｄ、Ｊ＝６．５、１３．１、２Ｈ）、３．７４−３．７１（ｍ、４Ｈ）、３．６５（ｓ、２Ｈ）、３．５４−３．２５（ｍ、６Ｈ）、２．４０（ｔ、Ｊ＝６．７、２Ｈ）、２．２９−２．２６（ｍ、４Ｈ）、２．０７−２．０３（ｍ、２Ｈ）、１．９３−１．８８（ｍ、２Ｈ）、１．６５−１．６４（ｍ、４Ｈ）、１．１９（ｄ、Ｊ＝６．５、６Ｈ）。
【０３５８】
段階Ｄ：｛［（２Ｓ）−１，５−ジオキソ−１，５−ビス（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）ペンタン−２−イル］アミノ｝−６−オキソヘキサン酸
｛［（２Ｓ）−１，５−ジオキソ−１，５−ビス（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）ペンタン−２−イル］アミノ｝−６−オキソヘキサン酸ベンジル（３８０ｍｇ、０．５１１ｍｍｏｌ）およびパールマン触媒（５０ｍｇ、０．０７１ｍｍｏｌ）のメタノール（３０ｍＬ）中懸濁液を、パール振盪器にて約０．３４ＭＰａ（５０ｐｓｉ）Ｈ２下に室温で撹拌した。１６時間後、触媒を濾去し、濾液を濃縮して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ４．７６−４．７５（ｍ、２Ｈ）、４．３２−４．２９（ｍ、１Ｈ）、３．９６−３．９１（ｍ、２Ｈ）、３．７６−３．６６（ｍ、５Ｈ）、３．５５−３．２７（ｍ、９Ｈ）、２．３４−２．２７（ｍ、６Ｈ）、２．０９−２．０４（ｍ、１Ｈ）、１．９９−１．８８（ｍ、１Ｈ）、１．６７−１．６１（ｍ、４Ｈ）、１．２０（ｄ、Ｊ＝６．７、６Ｈ）。
【０３５９】
段階Ｅ：Ｎ１，Ｎ５−ビス｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝−Ｎ２−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキサノイル｝−Ｌ−グルタミド
｛［（２Ｓ）−１，５−ジオキソ−１，５−ビス（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）ペンタン−２−イル］アミノ｝−６−オキソヘキサン酸（２８９ｍｇ、０．４２２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５．０ｍＬ）中懸濁液に０℃で、を加えＴＳＴＵ（１４０ｍｇ、０．４６４ｍｍｏｌ）、次にヒューニッヒ塩基（８１０μＬ、０．４６４ｍｍｏｌ）。撹拌後１時間、混合物を濃縮して標題生成物を得て、それをそれ以上精製せずに用いた。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．８２分。
【０３６０】
実施例１９
下記構造を有するオリゴ糖リンカーＮ１，Ｎ４−ビス｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝−Ｎ２−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキサノイル｝−Ｌ−アスパルトアミド（ＭＬ−１９）の合成について説明する。
【化６９】
0006491649.tif 000266
【０３６１】
段階ＡでＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−グルタミン酸に代えてＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アスパラギン酸を用い、ＭＬ−１８について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝７３７．３１２６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．０４分。
【０３６２】
実施例２０
下記構造を有するオリゴ糖リンカーＮ２−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキサノイル｝−Ｎ５−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝−Ｎ１−｛２−［（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝−Ｌ−グルタミド（ＭＬ−２０）の合成について説明する。
【化７０】
0006491649.tif 000267
【０３６３】
段階Ａ：Ｎ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ−｛２−［（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝−Ｌ−グルタミン酸ベンジル
Ｚ−Ｇｌｕ−γ−Ｂｎ（１．０ｇ、２．６９ｍｍｏｌ）および２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシド（２．２１ｇ、４．０４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中溶液に、ＥＤＣ（１．２９ｇ、６．７３ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（４１ｍｇ、０．２６９ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（３８μＬ、０．２６９ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１６時間撹拌後、混合物をＨＰＬＣ（５０×２５０ｍｍ、Ｃ４、流量８５ｍＬ／分、勾配３０分かけての２５％から３５％ＡｃＣＮ／Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ含有））によって精製して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ８．１２−８．１０（ｍ、１Ｈ）、７．３８−７．２６（ｍ、１０Ｈ）、５．５０−５．０４（ｍ、５Ｈ）、４．８１（ｓ、１Ｈ）、４．７３（ｓ、１Ｈ）、４．１６−４．１３（ｍ、１Ｈ）、４．０６（ｓ、１Ｈ）、３．９９−３．３．９７（ｍ、１Ｈ）、３．９３−３．３７（ｍ、２０Ｈ）、２．４８（ｔ、Ｊ＝７．６、２Ｈ）、２．１５−２．１０（ｍ、１Ｈ）、１．９７−１．９０（ｍ、１Ｈ）。
【０３６４】
段階Ｂ：Ｎ−｛２−［（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝−Ｌ−グルタミン
Ｎ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ−｛２−［（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝−Ｌ−グルタミン酸ベンジル（１．４１ｇ、１．５７ｍｍｏｌ）およびパールマン触媒（１１０ｍｇ、０．１５７ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（３０ｍＬ）中混合物を、パール振盪器で約０．３４ＭＰａ（５０ｐｓｉ）Ｈ２下に室温で撹拌した。１６時間後、触媒を濾去し、濾液を凍結乾燥して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ５．０７（ｓ、１Ｈ）、４．８７（ｓ、１Ｈ）、４．８１（ｓ、１Ｈ）、４．０８−３．５５（ｍ、２２Ｈ）、３．４１−３．３６（ｍ、１Ｈ）、２．３２（ｔ、Ｊ＝７．５、２Ｈ）、２．１０−２．０６（ｍ、２Ｈ）。
【０３６５】
段階Ｃ：Ｎ２−［６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサノイル１−Ｎ−｛２−［（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝−Ｌ−グルタミン
段階Ｃで２−［（Ｎ−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝−Ｌ−α−グルタミニル）アミノ］エチルα−Ｌ−フコピラノシドに代えてＮ−｛２−［（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝−Ｌ−グルタミンを用い、ＭＬ−１８について記載の手順と同様の手順を用い、標題化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ８．０９−８．０６（ｍ、１Ｈ）、７．３５−７．３０（ｍ、５Ｈ）、５．１１（ｓ、２Ｈ）、５．０８（ｓ、１Ｈ）、４．７９（ｍ、１Ｈ）、４．７２（ｓ、１Ｈ）、４．３４−４．３１（ｍ、１Ｈ）、４．０６−３．３７（ｍ、２２Ｈ）、２．４２−２．３６（ｍ、４Ｈ）、２．２９−２．２６（ｍ、２Ｈ）、２．０９−２．０５（ｍ、１Ｈ）、１．９３−１．８８（ｍ、１Ｈ）、１．６５−１．６２（ｍ、４Ｈ）。
【０３６６】
段階Ｄ：Ｎ２−［６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサノイル］−Ｎ５−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝−Ｎ１−｛２−［（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝−Ｌ−グルタミド
Ｎ２−［６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサノイル］−Ｎ−｛２−［（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝−Ｌ−グルタミン（５００ｍｇ、０．５５９ｍｍｏｌ）および２−アミノエチルα−Ｌ−フコピラノシド（１１６ｍｇ、０．５５９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中溶液に、ＥＤＣ（１６１ｍｇ、０．８３８ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（８．５６ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１６時間撹拌後、混合物をＨＰＬＣ（５０×２５０ｍｍ、Ｃ４、流量８５ｍＬ／分、勾配３０分かけて２５％から３５％ＡｃＣＮ／Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ含有））によって精製して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ８．１２−８．０８（ｍ、１Ｈ）、７．３５−７．２９（ｍ、５Ｈ）、５．１１（ｓ、２Ｈ）、５．０８（ｓ、１Ｈ）、４．８０（ｓ、１Ｈ）、４．７７（ｓ、１Ｈ）、４．７２（ｓ、１Ｈ）、４．３２−４．２９（ｍ、１Ｈ）、４．１２−３．２６（ｍ、３０Ｈ）、２．４２−２．３９（ｍ、２Ｈ）、２．３０−２．２６（ｍ、４Ｈ）、２．０９−２．０４（ｍ、１Ｈ）、１．９３−１．８８（ｍ、１Ｈ）、１．６５−１．６４（ｍ、４Ｈ）、１．１９（ｄ、Ｊ＝６．７、３Ｈ）。
【０３６７】
段階Ｅ：Ｎ２−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキサノイル｝−Ｎ５−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝−Ｎ１−｛２−［（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝−Ｌ−グルタミド
段階Ｄで｛［（２Ｓ）−１，５−ジオキソ−１，５−ビス（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）ペンタン−２−イル］アミノ｝−６−オキソヘキサン酸ベンジルに代えてＮ２−［６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサノイル］−Ｎ５−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝−Ｎ１−｛２−［（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝−Ｌ−グルタミドを用い、ＭＬ−１８について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ５．０８（ｓ、１Ｈ）、４．８０（ｓ、１Ｈ）、４．７７（ｓ、１Ｈ）、４．７２（ｓ、１Ｈ）、４．３３−４．３０（ｍ、１Ｈ）、４．０６−３．３３（ｍ、３０Ｈ）、２．８４−２．８２（ｍ、４Ｈ）、２．６９−２．６６（ｍ、２Ｈ）、２．３４−２．２７（ｍ、４Ｈ）、２．１０−２．０２（ｍ、１Ｈ）、１．９４−１．８９（ｍ、１Ｈ）、１．７６−１．７４（ｍ、４Ｈ）、１．２０（ｄ、Ｊ＝６．５、３Ｈ）。
【０３６８】
実施例２１
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ２−［５−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−５−オキソペンタノイル］−Ｎ−（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）−Ｌ−グルタミニルグリシネート（ＭＬ−２１）の合成について説明する。
【化７１】
0006491649.tif 000268
【０３６９】
段階Ａ：（Ｓ）−ベンジル２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−５−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−５−オキソペンタノエート
２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシド（２．６ｇ、４．７５ｍｍｏｌ）、および（Ｓ）−５−（ベンジルオキシ）−４−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−５−オキソペンタン酸（２．０ｇ、５．３９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３６ｍＬ）中溶液に０℃で、ＤＭＡＰ（５８０ｍｇ、４．７５ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（３．６４ｇ、１９．００ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を徐々に昇温させて室温とした、１６時間撹拌後、反応混合物を濃縮し、残留物を、１０％から５５％ＡｃＣＮ／Ｈ２Ｏで溶離を行うＣ１８逆相シリカゲル（２７５ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ４０Ｈ５６Ｎ２Ｏ２１の計算値：９００．３４、実測ｍ／ｅ：９０１．２６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．４６分。
【０３７０】
段階Ｂ：（Ｓ）−２−アミノ−５−（（２−（（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ）エチル）アミノ）−５−オキソペンタン酸
（Ｓ）−ベンジル２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−５−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−５−オキソペンタノエート（１．０ｇ、１．１１ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（１１８ｍｇ、０．１１１ｍｍｏｌ）の水（１０ｍＬ）中混合物をＨ２風船下に室温で１６時間撹拌した。触媒を濾去し、Ｈ２Ｏで洗浄した（１０ｍＬで３回）。濾液を濃縮して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ２５Ｈ４４Ｎ２Ｏ１９の計算値：６７６．２５、実測ｍ／ｅ：６７７．２１［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝０．８６分。
【０３７１】
段階Ｃ：５−オキソ−５−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）ペンタン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル
６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキサン酸ベンジルに代えて５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−５−オキソペンタン酸ベンジルを用い、ＭＬ−４について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ１７Ｈ２６Ｎ２Ｏ１０の計算値：４１８．１６、実測ｍ／ｅ：４１９．１１［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．００分。
【０３７２】
段階Ｄ：（Ｓ）−５−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−５−オキソ−２−［５−オキソ−５−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）ペンタンアミド］ペンタン酸
（Ｓ）−２−アミノ−５−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−５−オキソペンタン酸（３５０ｍｇ、４．７５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に０℃で、５−オキソ−５−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）ペンタン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル（２１６ｍｇ、０．５１７ｍｍｏｌ、６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサン酸に代えて５−（ベンジルオキシ）−５−オキソペンタン酸を用い、実施例４、ＭＬ−４、段階Ａに従って製造）およびＴＥＡ（０．２ｍＬ、１．４３５ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で２時間撹拌後、反応混合物を濃縮し、残留物を、５％から４０％ＡｃＣＮ／Ｈ２Ｏで溶離を行うＣ１８シリカゲル（１５０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ３８Ｈ６５Ｎ３Ｏ２６の計算値：９７９．３９、実測ｍ／ｅ：９８０．３１［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝０．９２分。
【０３７３】
段階Ｅ：（Ｓ）−２，５−ジオキソピロリジン−１−イル５−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−５−オキソ−２−［５−オキソ−５−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）ペンタンアミド］ペンタノエート
（Ｓ）−５−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−５−オキソ−２−［５−オキソ−５−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）ペンタンアミド］ペンタン酸（３６６ｍｇ、０．３７３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液に０℃で、ＴＳＴＵ（１１５ｍｇ、０．３８１ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．１ｍＬ、０．５７３ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で１時間撹拌後、ＴＦＡ（６０μＬ、０．７８４ｍｍｏｌ）で反応停止した。反応混合物を、ピペットによって、ＡｃＣＮ（４５ｍＬ）を含む管に滴下して移し入れ。得られた白色懸濁液を遠心して（３０００ｒｐｍ、１５分、４℃で）、透明上清および白色ペレットを得た。上清を廃棄し、白色ペレットをＡｃＣＮ（１ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ４２Ｈ６８Ｎ４Ｏ２８の計算値：１０７６．４０、実測ｍ／ｅ：１０７７．２８［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝０．９０分。
【０３７４】
段階Ｆ：ベンジルＮ２−［５−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−５−オキソペンタノイル］−Ｎ−（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）−Ｌ−グルタミニルグリシネート
（Ｓ）−２，５−ジオキソピロリジン−１−イル５−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−５−オキソ−２−［５−オキソ−５−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）ペンタンアミド］ペンタノエート（０．３５ｇ、０．３２５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍＬ）中溶液に０℃で、２−（ベンジルオキシ）−２−オキソエタンアミニウムクロライド（７７ｍｇ、０．３８２ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（０．１５ｍＬ、１．０７６ｍｍｏｌ）を加えた。室温で２４時間撹拌後、反応混合物を濃縮し、残留物を、５％から４０％ＡｃＣＮ／Ｈ２Ｏで溶離を行うＣ１８逆相シリカゲル（１５０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ４７Ｈ７４Ｎ４Ｏ２７の計算値：１１２６．４５、実測ｍ／ｅ：１１２７．３９［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．８４分。
【０３７５】
段階Ｇ：２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ２−［５−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−５−オキソペンタノイル］−Ｎ−（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）−Ｌ−グルタミニルグリシネート
段階Ｃで６−（｛２−［（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサン酸ベンジルに代えてＮ２−［５−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−５−オキソペンタノイル］−Ｎ−（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）−Ｌ−グルタミニルグリシン酸ベンジルを用い、ＭＬ−１について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ４４Ｈ７１Ｎ５Ｏ２９の計算値：１１３３．４２、実測ｍ／ｅ：１１３４．３４［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．１７分。
【０３７６】
実施例２２
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２−｛（２Ｓ）−８−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−１−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−１，８−ジオキソオクタン−２−イル｝−Ｎ′−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝ヘキサンジアミド（ＭＬ−２２）の合成について説明する。
【化７２】
0006491649.tif 000269
【０３７７】
段階Ａ：（２Ｓ）−８−（ベンジルオキシ）−２−｛［６−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサノイル］アミノ｝−８−オキソオクタン酸
ＭＬ−４（３００ｍｇ、０．６９４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ中溶液に０℃で、（Ｓ）−２−アミノ−８−（ベンジルオキシ）−８−オキソオクタン酸（１９４ｍｇ、０．６９４ｍｍｏｌ）、次にＤＩＰＥＡ（１２１μＬ、０．６９４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、濃縮した。残留物を、５％から２８％ＡｃＣＮ／Ｈ２Ｏで溶離を行うＣ１８逆相シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝５９７．２２６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．４５分。
【０３７８】
段階Ｂ：Ｎ−｛（２Ｓ）−８−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−１−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−１，８−ジオキソオクタン−２−イル｝−Ｎ′−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝ヘキサンジアミド
段階Ａでベンジル６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサン酸に代えて（２Ｓ）−８−（ベンジルオキシ）−２−｛［６−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサノイル］アミノ｝−８−オキソオクタン酸を用い、ＭＬ−１について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ：１１３３．３１２［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．２３分。
【０３７９】
実施例２３
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］−１３−｛２−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４，１１，１５−トリオキソ−３，１０，１３，１６−テトラアザドコサン−２２−オエート（ＭＬ−２３）の合成について説明する。
【化７３】
0006491649.tif 000270
【０３８０】
段階Ａ：ベンジル（６−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）エチル］アミノ｝−６−オキソヘキシル）カーバメート
２−アミノエチルα−Ｌ−フコピラノシド（３．０ｇ、１４．４８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（８０ｍＬ）中溶液に室温で、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサノエート（６．３ｇ、１７．３７ｍｍｏｌ）を加え、１時間後にＴＥＡ（４．４４ｍＬ、３１．８ｍｍｏｌ）を加えた。１６時間撹拌後、反応混合物を濃縮し、残留物を、５％から４０％ＡｃＣＮ／水で溶離を行うＣ１８逆相シリカゲル（２３０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝４５５．２５６８［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．８６分。
【０３８１】
段階Ｂ：６−アミノ−Ｎ−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝ヘキサンアミド
ベンジル（６−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）エチル］アミノ｝−６−オキソヘキシル）カーバメート（１．７２ｇ、３．７９ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（２０ｍＬ）中溶液に、Ｐｄ／Ｃ（２３ｍｇ、０．２１７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を脱気し、Ｈ２風船下に撹拌した。２時間後、反応混合物をセライト層で濾過し、濾液を凍結乾燥して、標題化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．２１（ｄ、３Ｈ）、１．４０−１．３８（ｍ、２Ｈ）、１．６２−１．６０（ｍ、４Ｈ）、２．２３（ｔ、２Ｈ）、２．７６（ｔ、２Ｈ）、３．２８−３．２７（ｍ、１Ｈ）、３．４４−３．４３（ｍ、１Ｈ）、３．５４−３．５２（ｍ、１Ｈ）、３．６６（ｓ、１Ｈ）、３．７５−３．７４（ｍ、２Ｈ）、３．９４−３．９３（ｍ、１Ｈ）、４．７６（ｄ、１Ｈ）。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝３２１．２３２３［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．０２分。
【０３８２】
段階Ｃ：［（２−｛［６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキシル］アミノ｝−２−オキソエチル）（２−｛［６−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキシル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］酢酸
２，２′−［（２−｛［６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキシル］アミノ｝−２−オキソエチル）アザネジイル］ジ酢酸（１．０ｇ、２．５４ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中懸濁液に０℃で、無水トリフルオロ酢酸（４４８μＬ、３．１７ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で３時間撹拌後、混合物を冷却して−３０℃とし、それにＥｔ３Ｎ（８４８μＬ、６．０８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）中溶液を３０分間かけて滴下した。−３０℃で３０分間撹拌後、６−アミノ−Ｎ−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝ヘキサンアミド（８１２ｍｇ、２．５４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３０ｍＬ）中混合物を加え、得られた混合物を室温で撹拌した。１６時間撹拌後、混合物を濃縮し、残留物を、０％から４０％ＡｃＣＮ／水で溶離を行うＣ１８逆相シリカゲル（４２ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６９７．３８７６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．３９８分。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．２３（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．５９）、１．３９−１．３６（４Ｈ、ｍ）、１．５６（６Ｈ、ｓ）、１．６７（６Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０．３２）、２．２３（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．５０）、２．４１（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．３７）、３．２４（６Ｈ、ｍ）、３．４２（４Ｈ、ｓ）、３．４９（２Ｈ、ｓ）、３．５７−３．５２（３Ｈ、ｍ）、３．６８（１Ｈ、ｓ）、３．７７（３Ｈ、ｔ、Ｊ＝１．６５）、３．９８−３．９４（１Ｈ、ｍ）、４．７７（１Ｈ、ｓ）、５．１４（２Ｈ、ｓ）、７．３８（５Ｈ、ｄ、Ｊ＝４．４３）。
【０３８３】
段階Ｄ：ベンジル１−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］−１３−｛２−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４，１１，１５−トリオキソ−３，１０，１３，１６−テトラアザドコサン−２２−オエート
［（２−｛［６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキシル］アミノ｝−２−オキソエチル）（２−｛［６−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキシル］アミノ｝−２−オキソエチル）アミノ］酢酸（８００ｍｇ、１．１４８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５ｍＬ）中溶液に、２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）］−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシド（１．８９ｇ、３．４４ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１７．６ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）、およびＥＤＣ（７７０ｍｇ、４．０２ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１６時間撹拌後、反応混合物を濃縮し、残留物を、１０％から４０％ＡｃＣＮ／水で溶離を行うＣ１８逆相シリカゲル（５０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝１２２６．５９９０［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．９６分。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．２３（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．５８）、１．３８（６Ｈ、ｓ）、１．５６（６Ｈ、ｓ）、１．６９−１．６５（６Ｈ、ｍ）、２．２３（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．４４）、２．４１（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．３５）、３．２７−３．２３（６Ｈ、ｍ）、３．３７（１Ｈ、ｓ）、３．３７（１Ｈ、ｓ）、３．３８（１Ｈ、ｓ）、３．４５（１Ｈ、ｓ）、３．４７（１Ｈ、ｓ）、３．４７（１Ｈ、ｓ）、３．５４（３Ｈ、ｓ）、３．６０（１Ｈ、ｓ）、３．６２（２Ｈ、ｓ）、３．６４（１Ｈ、ｓ）、３．６５（１Ｈ、ｓ）、３．６７（２Ｈ、ｓ）、３．６８（３Ｈ、ｓ）、３．８８−３．７２（２０Ｈ、ｍ）、４．０７（１Ｈ、ｓ）、４．７６（１Ｈ、ｓ）、４．７８（１Ｈ、ｓ）、４．８４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．６９）、５．１０（１Ｈ、ｓ）、５．１４（２Ｈ、ｓ）、７．３８（５Ｈ、ｄ、Ｊ＝４．３７）。
【０３８４】
段階Ｅ：２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１３−（２−（（２−（（（（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）］−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル−オキシ−（１−Ｏ→２））−エチルアミノ）−２−オキソエチル）−４，１１，１５−トリオキソ−１−（（（２−（α−Ｌ−フコピラノシル−オキシ）−（１−Ｏ→２）））オキシ）−３，１０，１３，１６−テトラアザドコサン−２２−オエート
段階Ｄで６−｛ビス［２α−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝−６−オキソヘキサン酸ベンジルに代えてベンジル１−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］−１３−｛２−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−４，１１，１５−トリオキソ−３，１０，１３，１６−テトラアザドコサン−２２−オエートを用い、ＭＬ−６について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝１２３３．６００６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．２２３分。
【０３８５】
実施例２１
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−（２−｛［６−（｛２−［（６−デオキシ−α−Ｌ−ガラクトピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキシル］アミノ｝−２−オキソエチル）−Ｎ−［２−（｛６−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−オキソエチル］グリシル−β−アラニネート（ＭＬ−２１）の合成について説明する。
【化７４】
0006491649.tif 000271
【０３８６】
段階Ａ：ベンジル｛６−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノイル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−６−オキソヘキシル｝カーバメート
２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシド（１．８ｇ、３．２９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５０ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それに０℃で、ベンジル｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−ヘキシル｝カーバメート（１．７８７ｇ、４．９３ｍｍｏｌ）および３０分後にＥｔ３Ｎ（１．１４６ｍＬ、８．２２ｍｍｏｌ）を加えた。１６時間撹拌後、反応混合物を濃縮し、得られた残留物を、５％から４０％ＡｃＣＮ／水で溶離を行うＣ１８逆相シリカゲル（２４０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．３５（ｂｒｓ、２Ｈ）、１．５２（ｂｒｓ、２Ｈ）、１．６３（ｂｒｓ、２Ｈ）、２．２１（ｓ、２Ｈ）、３．１２（ｓ、２Ｈ）、３．３７（ｓ、１Ｈ）、３．５１−３．３７（ｂｒｍ、５Ｈ）、３．８１−３．６９（ｂｒｍ、１４Ｈ）、３．９８（ｓ、１Ｈ）、４．０６（ｓ、１Ｈ）、４．７２（ｓ、１Ｈ）、４．８１（ｓ、２Ｈ）、５．０７（ｓ、２Ｈ）、７．３５（ｓ、５Ｈ）。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝７９５．３０３［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．４９分。
【０３８７】
段階Ｂ：６−アミノ−Ｎ−（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）ヘキサンアミド
段階Ｂでベンジル（６−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）エチル］アミノ｝−６−オキソヘキシル）カーバメートに代えてベンジル｛６−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノイル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−６−オキソヘキシル｝カーバメートを用い、ＭＬ−２３について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．４０（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．９７）、１．６３（４Ｈ、ｄ、Ｊ＝１２．７８）、２．２３（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．３７）、２．８２（２Ｈ、ｑ、Ｊ＝８．４６）、３．４４−３．３７（２Ｈ、ｍ）、３．５３−３．４６（１Ｈ、ｍ）、３．６３−３．６１（４Ｈ、ｍ）、３．７２−３．７０（６Ｈ、ｍ）、３．８０（５Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝９．９６、４．５２）、３．８３（２Ｈ、ｓ）、３．９０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１１．０５、５．８７）、３．９７（１Ｈ、ｓ）、４．０３（１Ｈ、ｓ）、４．７２（１Ｈ、ｓ）、４．８１（１Ｈ、ｓ）、５．０６（１Ｈ、ｓ）。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ６６１．３５４３［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．８９分。
【０３８８】
段階Ｃ：２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−（２−｛［６−（｛２−［（６−デオキシ−α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキシル］アミノ｝−２−オキソエチル）−Ｎ−［２−（｛６−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−オキソエチル］グリシル−β−アラニネート
段階Ｃで２−アミノエチルα−Ｌ−フコピラノシドおよび２，２′−［（２−｛［６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキシル］アミノ｝−２−オキソエチル）イミノ］ジ酢酸に代えてそれぞれ６−アミノ−Ｎ−（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）ヘキサンアミドおよびベンジルＮ，Ｎ−ビス（カルボキシメチル）グリシル−３−アラニネートを用い、段階Ｄで６−アミノ−Ｎ−（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）ヘキサンアミドに代えて６−アミノ−Ｎ−｛２−［（６−デオキシ−α−Ｌ−ガラクトピラノシル）オキシ］エチル｝ヘキサンアミドを用い、ＭＬ−２３について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｅ：ｍ／ｅ＝１３０４．４４４［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．７６分。
【０３８９】
実施例２５
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］−１３−［２−（｛６−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−オキソエチル］−４，１１，１５−トリオキソ−３，１０，１３，１６−テトラアザドコサン−２２−オエート（ＭＬ−２５）の合成について説明する。
【化７５】
0006491649.tif 000272
【０３９０】
ベンジルＮ，Ｎ−ビス（カルボキシメチル）グリシル−β−アラニネートに代えて２，２′−［（２−｛［６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキシル］アミノ｝−２−オキソエチル）イミノ］ジ酢酸を用い、ＭＬ−２３について記載の手順と同様の手順を用い、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｅ：ｍ／ｅ＝１３４６．５９５０［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．２９分。
【０３９１】
実施例２６
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］−１１−［２−（｛４−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−４−オキソブチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−４，９，１３−トリオキソ−３，８，１１，１４−テトラアザイコサン−２０−オエート（ＭＬ−２６）の合成について説明する。
【化７６】
0006491649.tif 000273
【０３９２】
段階Ａ：ベンジル｛４−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノイル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−４−オキソブチル｝カーバメート
２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）］−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシド（７９０ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）および４−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタン酸（３４２ｍｇ、１．４４３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中混合物に、ＥＤＣ（５５３ｍｇ、２．８９ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（１７６ｍｇ）を加えた。室温で終夜撹拌後、反応混合物を濃縮し、残留物を、５％から４０％ＡｃＣＮ／水で溶離を行うＣ１８逆相シリカゲル（４３ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝７６７．２０８４［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．５６分。
【０３９３】
段階Ｂ：４−アミノ−Ｎ−（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）ブタンアミド
ベンジル｛４−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノイル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−４−オキソブチル｝カーバメート（９５５ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）の水（６ｍＬ）中溶液に窒素を流し、それに１０％パラジウム／炭素（１３３ｍｇ）を加え、得られた混合物をＨ２風船下に４時間撹拌した。反応混合物をセライト層で濾過し、濾液を凍結乾燥して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６３３．２２２４［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝０．７８分。
【０３９４】
段階Ｃ：４−アミノ−Ｎ−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝ブタンアミド
段階Ａで２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）］−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシドに代えて２−アミノエチルα−Ｌ−フコピラノシドを用い、ＭＬ−２６について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｅ：ｍ／ｅ＝１２４８．３６５［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．３７分。
【０３９５】
段階Ｄ：１１−［２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−１−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）−４，９，１３−トリオキソ−３，８，１１，１４−テトラアザオクタデカン−１８−アミド
それぞれ、段階Ｃで６−アミノ−Ｎ−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝ヘキサンアミドに代えて４−アミノ−Ｎ−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝ブタンアミドを用い、そして段階Ｄで２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）］−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシドに代えて４−アミノ−Ｎ−（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）ブタンアミドを用い、ＭＬ−２３について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｅ：ｍ／ｅ＝１２９０．４０１２［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．０３分。
【０３９６】
実施例２７
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−（２−｛［４−（｛２−［（６−デオキシ−α−Ｌ−ガラクトピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−４−オキソブチル］アミノ｝−２−オキソエチル）−Ｎ−［２−（｛４−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−４−オキソブチル｝アミノ）−２−オキソエチル］グリシル−β−アラニネート（ＭＬ−２７）の合成について説明する。
【化７７】
0006491649.tif 000274
【０３９７】
段階Ｂでベンジル｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝カーバメートに代えてベンジル｛４−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−４−オキソブチル｝カーバメートを用い、ＭＬ−２３について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｅ：ｍ／ｅ＝１２４８．３６５［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．３７分。
【０３９８】
実施例２８
下記構造を有するオリゴ糖リンカーＮ−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝−１１−［２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−オキソエチル］−１−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝−４，９，１３−トリオキソ−３，８，１１，１４−テトラアザイコサン−２０−アミド（ＭＬ−２８）の合成について説明する。
【化７８】
0006491649.tif 000275
【０３９９】
段階Ｄで２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）］−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシドに代えて４−アミノ−Ｎ−（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）ブタンアミドを用い、ＭＬ−２３について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｅ：ｍ／ｅ＝１３１８．４２７０［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．１９分。
【０４００】
実施例２９
下記構造を有するオリゴ糖リンカー６−（｛［（２−オキソ−２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］−２−オキシエチル｝アミノ）（｛２−オキソ−２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］−２−オキソエチル｝アミノ）エチル］アミノ｝アセトアミド）−６−オキソヘキサン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル（ＭＬ−２９）の合成について説明する。
【化７９】
0006491649.tif 000276
【０４０１】
段階Ｃで６−アミノ−Ｎ−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝ヘキサンアミドに代えて２−アミノエチルα−Ｌ−フコピラノシドを用い、ＭＬ−２３について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ａ：ｍ／ｅ＝１１２０．３０［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．９０分。
【０４０２】
実施例３０
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２−（｛［（２−オキソ−２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］−２−オキシエチル｝アミノ）（｛２−オキソ−２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］−２−オキソエチル｝アミノ）エチル］アミノ｝アセトアミド）酢酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル（ＭＬ−３０）の合成について説明する。
【化８０】
0006491649.tif 000277
【０４０３】
段階Ｃでそれぞれ、２，２′−（（２−（（６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキシル）アミノ）−２−オキソエチル）イミノ）ジ酢酸に代えてベンジルＮ，Ｎ−ビス（カルボキシメチル）グリシルグリシネートを用い、６−アミノ−Ｎ−（２−α−Ｌ−フコピラノシル）エチル）ヘキサンアミドに代えて２−アミノエチルα−Ｌ−フコピラノシドを用い、ＭＬ−２３について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝１０６４．２５［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．６５分。
【０４０４】
実施例３１
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２−｛［２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−オキソエチル］［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝−Ｎ−（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−β−Ｄ−グルコピラノシル］オキシ｝エチル）アセトアミド（ＭＬ−３１）の合成について説明する。
【化８１】
0006491649.tif 000278
【０４０５】
段階Ａ：ベンジル｛２−［（４，６−Ｏ−ベンジリデン−β−Ｄ−グルコピラノシル）オキシ］エチル｝カーバメート
ベンジル［２−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）エチル］カーバメート（１０ｇ、２８．０ｍｍｏｌ、Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎ  Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．２０１０，  ６，  ６９９）のＡｃＣＮ（１５０ｍＬ）中溶液に、ベンズアルデヒドジメチルアセタール（５ｍＬ、３１．６ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホン酸・１水和物（６０ｍｇ、０．３１５ｍｍｏｌ）を加えた。２４時間撹拌後、反応混合物を濃縮した。残留物を、０％から２０％ＣＨ３ＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶離を行うシリカゲル（３３０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ２３Ｈ２７ＮＯ８の計算値：４４５．１７、実測ｍ／ｅ：４４６．０６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．２１分。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．５０−７．４５（２Ｈ、ｍ）、７．３５−７．２５（８Ｈ、ｍ）、５．５０（１Ｈ、ｓ）、５．１０（２Ｈ、ｓ）、４．４０−４．３６（１Ｈ、ｍ）、４．３１−４．２６（１Ｈ、ｍ）、３．９５−３．８５（１Ｈ、ｍ）、３．８０−３．７０（２Ｈ、ｍ）、３．５５−３．４０（４Ｈ、ｍ）、３．４０−３．３０（２Ｈ、ｍ）。
【０４０６】
段階Ｂ：ベンジル｛２−［（２−Ｏ−ベンゾイル−４，６−Ｏ−ベンジリデン−β−Ｄ−グルコピラノシル）オキシ］エチル｝カーバメート
ベンジル｛２−［（４，６−Ｏ−ベンジリデン−β−Ｄ−グルコピラノシル）オキシ］エチル｝カーバメート（４．５ｇ、１０．１０ｍｍｏｌ）およびジブチルスタンナノン（３ｇ、１２．０５ｍｍｏｌ）のトルエン（５０ｍＬ）中混合物を撹拌しながら、５時間還流させた。得られた混合物を冷却して室温とし、ベンゾイルクロライド（１．３ｍＬ、１１．１９ｍｍｏｌ）で処理した。室温で１時間撹拌後、混合物を濃縮した。残留物を、シリカゲル（３３０ｇ、０％から１０％アセトン／ＣＨ２Ｃｌ２で溶離）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ３０Ｈ３１ＮＯ９の計算値：５４９．２０、実測ｍ／ｅ：５７２．０９［Ｍ＋Ｎａ］；Ｒｔ＝３．９４分。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．０５−８．００（２Ｈ、ｍ）、７．５５−７．４５（３Ｈ、ｍ）、７．４０−７．２５（１０Ｈ、ｍ）、５．５５（１Ｈ、ｓ）、５．１８−５．１２（１Ｈ、ｍ）、５．０４−５．００（１Ｈ、ｍ）、４．９３−４．８９（１Ｈ、ｍ）、４．６６−４．６３（１Ｈ、ｍ）、４．３８−４．３２（１Ｈ、ｍ）、４．０５−４．００（１Ｈ、ｍ）、３．９０−３．８５（１Ｈ、ｍ）、３．８２−３．７７（１Ｈ、ｍ）、３．７０−３．６０（２Ｈ、ｍ）、３．５５−３．４５（１Ｈ、ｍ）、３．４０−３．２５（２Ｈ、ｍ）。１Ｈ−１Ｈ  ２Ｄ  ＣＯＳＹ実験によって位置化学を確認した。
【０４０７】
段階Ｃ：ベンジル｛２−［（２−Ｏ−ベンゾイル−４−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコピラノシル）オキシ］エチル｝カーバメート
ベンジル｛２−［（２−Ｏ−ベンゾイル−４，６−Ｏ−ベンジリデン−β−Ｄ−グルコピラノシル）オキシ］エチル｝カーバメート（２．５８ｇ、４．６９ｍｍｏｌ）およびボランテトラヒドロフラン錯体（４０ｍＬ、４０．０ｍｍｏｌ、１．０ＭのＴＨＦ中溶液）の溶液に０℃で、ジブチル（（（トリフルオロメチル）スルホニル）オキシ）ボランの溶液（６ｍＬ、６．００ｍｍｏｌ、１．０Ｍ  ＣＨ２Ｃｌ２中溶液）を滴下した。０℃で２時間撹拌後、ＴＥＡ（０．５ｍＬ）を反応混合物に加え、次にＨ２発生が止むまでＣＨ３ＯＨを注意深く加えた。反応混合物を濃縮し、残留物を、０％から１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行うシリカゲル（３３０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＴＬＣ：シリカゲル、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ：３５／６５、Ｒｆ＝０．５．１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．０５−８．００（２Ｈ、ｍ）、７．５５−７．２５（１３Ｈ、ｍ）、５．０５−４．９８（３Ｈ、ｍ）、４．８６−４．８２（１Ｈ、ｍ）、４．７８−４．７４（１Ｈ、ｍ）、４．６０−４．５８（１Ｈ、ｍ）、３．９５−３．９０（２Ｈ、ｍ）、３．８５−３．８０（１Ｈ、ｍ）、３．７５−３．６５（２Ｈ、ｍ）、３．６１−３．５８（１Ｈ、ｍ）、３．４５−３．４０（１Ｈ、ｍ）、３．３５−３．３０（２Ｈ、ｍ）。１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹおよび１Ｈ−１３Ｃ単一結合相関（ＨＳＱＣ）２Ｄ  ＮＭＲ実験によって位置化学を確認した。
【０４０８】
段階Ｄ：ベンジル（２−｛［２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−２−Ｏ−ベンゾイル−４−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコピラノシル］オキシ｝エチル）カーバメート
ベンジル｛２−［（２−Ｏ−ベンゾイル−４−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコピラノシル）オキシ］エチル｝カーバメート（１．４７ｇ、２．６７ｍｍｏｌ）、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−マンノピラノシルトリクロロアセトイミデート（４．１５ｇ、５．６０ｍｍｏｌ、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，  ２００３，  ５，  ４０４１）および４ÅモレキュラーシーブスのＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）中混合物に−３０℃で、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（０．２５ｍＬ、１．３８４ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を徐々に昇温させて室温とした。６時間撹拌後、ＴＥＡ（０．４ｍＬ、２．８７ｍｍｏｌ）で反応停止した。反応混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残留物を、０％から７５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行うシリカゲル（３３０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＴＬＣ：シリカゲル、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ３／２、Ｒｆ＝０．５。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．２０−７．９５（８Ｈ、ｍ）、７．８５−７．７５（８Ｈ、ｍ）、７．６５−７．６０（３Ｈ、ｍ）、７．５５−７．４０（８Ｈ、ｍ）、７．３８−７．１８（２４Ｈ、ｍ）、７．１５−７．０５（４Ｈ、ｍ）、６．００−５．９５（１Ｈ、ｍ）、５．８８−５．８５（１Ｈ、ｍ）、５．７５−５．６５（３Ｈ、ｍ）、５．４８−５．４６（１Ｈ、ｍ）、５．３５−５．２５（２Ｈ、ｍ）、５．２２−５．２０（１Ｈ、ｍ）、５．０７−５．０５（１Ｈ、ｍ）、４．９５−４．８５（２Ｈ、ｍ）、４．７８−４．７５（１Ｈ、ｍ）、４．７０−４．６０（１Ｈ、ｍ）、４．６０−４．５５（２Ｈ、ｍ）、４．４０−４．３０（２Ｈ、ｍ）、４．２７−４．２３（１Ｈ、ｍ）、４．２０−４．１０（２Ｈ、ｍ）、３．９５−３．９０（１Ｈ、ｍ）、３．８０−３．７５（１Ｈ、ｍ）、３．７５−３．７０（３Ｈ、ｍ）、３．６０−３．５５（１Ｈ、ｍ）、３．５１−３．４８（１Ｈ、ｍ）、３．４０−３．２５（２Ｈ、ｍ）。
【０４０９】
段階Ｅ：ベンジル（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−４−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコピラノシル］オキシ｝エチル）カーバメート
ベンジル（２−｛［２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−２−Ｏ−ベンゾイル−４−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコピラノシル］オキシ｝エチル）カーバメート（３．３９ｇ、１．９８４ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＯＨ（３０ｍＬ）中溶液に、ＮａＯＣＨ３（０．４ｍＬ、０．２ｍｍｏｌ、０．５Ｍ  ＣＨ３ＯＨ中溶液）を加えた。室温で２４時間撹拌後、反応混合物にアンバーライト（アンバーライト（ａｍｂｅｒｌｉｔｅ））ＩＲ  １２０（Ｈ）イオン交換樹脂（ＣＨ３ＯＨ３０ｍＬで３回予洗）を加えた。得られた混合物をさらに１５分間撹拌した。樹脂を濾去し、ＣＨ３ＯＨで洗浄した（５ｍＬで３回）。濾液を濃縮して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ３５Ｈ４９ＮＯ１８の計算値：７７１．２９、実測ｍ／ｅ：７７２．４２［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．５１分。
【０４１０】
段階Ｆ：２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−β−Ｄ−グルコピラノシド
ベンジル（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−４−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコピラノシル］オキシ｝エチル）カーバメート（０．９６ｇ、１．２４４ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（１２４ｍｍｏｌ）の水（２０ｍＬ）中混合物をＨ２風船下に室温で１６時間撹拌した。触媒を濾去し、Ｈ２Ｏで洗浄した（１０ｍＬで３回）。濾液を濃縮して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ２０Ｈ３７ＮＯ１６の計算値：５４７．２１、実測ｍ／ｅ：５４８．２９［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝０．８７分。１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ５．２０−５．１９（１Ｈ、ｍ）、４．８８−４．８７（１Ｈ、ｍ）、４．５１−４．４９（１Ｈ、ｍ）、４．０５（１Ｈ、ｍ）、４．００−３．９０（４Ｈ、ｍ）、３．８５−３．７０（９Ｈ、ｍ）、３．７０−３．６０（５Ｈ、ｍ）、３．４０−３．３０（１Ｈ、ｍ）、３．０５−３．００（２Ｈ、ｍ）。
【０４１１】
段階Ｇ：２−｛［２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−オキソエチル］［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝−Ｎ−（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−β−Ｄ−グルコピラノシル］オキシ｝エチル）アセトアミド
２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシドに代えて２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−β−Ｄ−グルコピラノシドを用い、ＭＬ−２９について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ４４Ｈ７１Ｎ５Ｏ２９の計算値：１１３３．４２、実測ｍ／ｅ：１１３４．３４［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．１７分。
【０４１２】
実施例３２
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２−｛［２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−オキソエチル］［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝−Ｎ−（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−グルコピラノシル］オキシ｝エチル）アセトアミド（ＭＬ−３２）の合成について説明する。
【化８２】
0006491649.tif 000279
【０４１３】
段階Ａ：２−クロロエチル３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フルオロ−Ｄ−グルコピラノシド
２−クロロエタノール（１．０ｍＬ、１４．９２ｍｍｏｌ）、３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フルオロ−Ｄ−グルコピラノシルトリクロロアセトイミデート（１．４ｇ、３．０９ｍｍｏｌ、Ａｎｇｅｗ．  Ｃｈｅｍ．  Ｉｎｔ．  Ｅｄ．  ２０１０，  ４９，  ８７２４）および４ÅモレキュラーシーブスのＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中溶液に−３０℃で、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（０．２５ｍＬ、１．３８４ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を徐々に昇温させて室温とした。２時間撹拌後、ＴＥＡ（０．１３ｍＬ、０．９３３ｍｍｏｌ）で反応停止した。得られた混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残留物を、０％から６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行うシリカゲル（８０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。このアノマー混合物を、それ以上精製せずに次の段階で直接用いた。ＴＬＣ：シリカゲル、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ：３／１、Ｒｆ＝０．３５。
【０４１４】
段階Ｂ：２−クロロエチル２−デオキシ−２−フルオロ−Ｄ−グルコピラノシド
２−クロロエチル３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フルオロ−Ｄ−グルコピラノシド（０．８５ｇ、２．２９３ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＯＨ（１０ｍＬ）中溶液に、ＮａＯＣＨ３（０．４６ｍＬ、０．２３０ｍｍｏｌ、０．５Ｍ  ＣＨ３ＯＨ中溶液）を加えた。得られた混合物を室温で２時間撹拌した。Ｄｏｗｅｘ  ５０ｗｘ  ２−２００（Ｈ）イオン交換樹脂（ＣＨ３ＯＨ１０ｍＬで３回予洗）を反応混合物に加えた。１５分間撹拌後、樹脂を濾去し、濾液を濃縮して、標題化合物を得た。このアノマー混合物を、それ以上精製せずに次の段階で直接用いた。ＴＬＣ：シリカゲル、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ：１／１、Ｒｆ＝０．２。
【０４１５】
段階Ｃ：２−クロロエチル４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−グルコピラノシド
２−クロロエチル２−デオキシ−２−フルオロ−Ｄ−グルコピラノシド（０．５５ｇ、２．２４８ｍｍｏｌ）のＡｃＣＮ（１０ｍＬ）中溶液に、ベンズアルデヒドジメチルアセタール（５４０μＬ、３．６ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホン酸・１水和物（６ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ）を加えた。３時間撹拌後、反応混合物を濃縮した。残留物を、０％から６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行うシリカゲル（８０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ７．５０−７．４７（２Ｈ、ｍ）、７．３５−７．３２（３Ｈ、ｍ）、５．５８（１Ｈ、ｓ）、４．７６−４．７２（１Ｈ、ｍ）、４．３２−４．２８（１Ｈ、ｍ）、４．１６−４．０２（２Ｈ、ｍ）、３．９５−３．８５（２Ｈ、ｍ）、３．８０−３．７４（１Ｈ、ｍ）、３．７０−３．６６（２Ｈ、ｍ）、３．５２−３．４８（２Ｈ、ｍ）。βアノマー立体化学を、１Ｈ−１３Ｃ単一結合相関（ＨＳＱＣ）および１Ｈ−１Ｈ  ＮＯＥ（ＮＯＥＳＹ）２Ｄ  ＮＭＲ実験によって確認した。ＴＬＣ：シリカゲル、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ：７／３、Ｒｆ＝０．５。
【０４１６】
段階Ｄ：２−クロロエチル４−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−グルコピラノシド
２−クロロエチル４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−グルコピラノシド（４２２ｍｇ、１．２６８ｍｍｏｌ）のボラン・テトラヒドロフラン錯体（９ｍＬ、９．０ｍｍｏｌ、１．０Ｍ  ＴＨＦ中溶液）中溶液に０℃で、ジブチル｛［（トリフルオロメチル）スルホニル］オキシ｝ボラン溶液（１．２７ｍＬ、１．２７０ｍｍｏｌ、１．０Ｍ  ＣＨ２Ｃｌ２注溶液）を滴下した。０℃で２時間撹拌後、ＴＥＡ（０．５ｍＬ）を反応混合物に加え、次にＨ２発生が止むまでＣＨ３ＯＨを注意深く加えた。反応混合物を濃縮し、残留物を、０％から６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行うシリカゲル（４０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＴＬＣ：シリカゲル、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ：１／１、Ｒｆ＝０．６。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．３８−７．２８（５Ｈ、ｍ）、４．８４−４．７１（２Ｈ、ｍ）、４．５６−４．５３（１Ｈ、ｍ）、４．２２−４．０４（２Ｈ、ｍ）、３．９３−３．８３（３Ｈ、ｍ）、３．７７−３．７１（１Ｈ、ｍ）、３．６７−３．６３（２Ｈ、ｍ）、３．５５−３．５０（１Ｈ、ｍ）、３．４０−３．３７（１Ｈ、ｍ）。１Ｈ−１３Ｃ単一結合相関（ＨＳＱＣ）；１Ｈ−１３Ｃ多結合相関（ＨＭＱＣ）；および１Ｈ−１Ｈ  ＮＯＥ（ＮＯＥＳＹ）  ２Ｄ  ＮＭＲ実験によって、位置化学を確認した。
【０４１７】
段階Ｅ：２−アジドエチル４−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−グルコピラノシド
２−クロロエチル４−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−グルコピラノシド（１．５３ｇ、４．５７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４５ｍＬ）中溶液に室温で、アジ化ナトリウム（３６０ｍｇ、５．５４ｍｍｏｌ）を加えた。７０℃で１６時間撹拌後、反応混合物を冷却して室温とし、氷水（２００ｍＬ）に投入し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した（１００ｍＬで３回）。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し（１００ｍＬで２回）、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を、０％から１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行うシリカゲル（１２０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＴＬＣ：シリカゲル、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ：１／１、Ｒｆ＝０．５５。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．３７−７．２８（５Ｈ、ｍ）、４．８４−４．７１（２Ｈ、ｍ）、４．５５−４．５２（１Ｈ、ｍ）、４．２２−４．０７（１Ｈ、ｍ）、４．０３−３．９８（１Ｈ、ｍ）、３．９４−３．８６（２Ｈ、ｍ）、３．７９−３．７１（２Ｈ、ｍ）、３．５６−３．５１（１Ｈ、ｍ）、３．４８−３．３６（３Ｈ、ｍ）。
【０４１８】
段階Ｆ：２−アジドエチル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−４−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−グルコピラノシド
２−アジドエチル４−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−グルコピラノシド（１．２３ｇ、３．６ｍｍｏｌ）、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−マンノピラノシルトリクロロアセトイミデート（５．３５ｇ、７．２２ｍｍｏｌ、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，  ２００３,  ５,  ４０４１）、および４ÅモレキュラーシーブスのＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）中溶液に−３０℃で、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（０．２５ｍＬ、１．３８４ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を徐々に昇温させて室温とした。６時間撹拌後、ＴＥＡ（０．４ｍＬ、２．８７ｍｍｏｌ）で反応停止した。得られた混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残留物を、０％から７５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行うシリカゲル（３３０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．２０−７．７０（１６Ｈ、ｍ）、７．６０−７．０５（２９Ｈ、ｍ）、６．１４−５．９８（２Ｈ、ｍ）、５．９０−５．８０（２Ｈ、ｍ）、５．７９−５．７７（１Ｈ、ｍ）、５．６６−５．６４（１Ｈ、ｍ）、５．４２−５．４１（１Ｈ、ｍ）、５．２３−５．２２（１Ｈ、ｍ）、５．０３−５．０２（１Ｈ、ｍ）、４．９１−４．８９（１Ｈ、ｍ）、４．７０−４．６０（３Ｈ、ｍ）、４．５７−４．５５（１Ｈ、ｍ）、４．５０−４．４８（１Ｈ、ｍ）、４．４０−４．２２（３Ｈ、ｍ）、４．１０−４．００（２Ｈ、ｍ）、３．８０−３．７０（３Ｈ、ｍ）、３．５５−３．４５（２Ｈ、ｍ）、３．４４−３．３８（１Ｈ、ｍ）、３．３６−３．３０（１Ｈ、ｍ）。
【０４１９】
段階Ｇ：２−アジドエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−４−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−グルコピラノシド
２−アジドエチル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−４−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−グルコピラノシド（５．０ｇ、３．３４ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＯＨ（４０ｍＬ）中溶液に、ＮａＯＣＨ３（１．０ｍＬ、０．５ｍｍｏｌ、０．５Ｍ  ＣＨ３ＯＨ中溶液）を加えた。室温で２４時間撹拌後、アンバーライト（アンバーライト（ａｍｂｅｒｌｉｔｅ））  ＩＲ  １２０（Ｈ）イオン交換樹脂（ＣＨ３ＯＨ  ３０ｍＬで３回予洗）を反応混合物に加えた。１５分後、樹脂を濾去し、ＣＨ３ＯＨで洗浄した（５ｍＬで３回）。濾液を濃縮し、残留物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に取り、２時間撹拌した。固体を濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄し（１５ｍＬで３回）、乾燥して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ２７Ｈ４０ＦＮ３Ｏ１５の計算値：６６５．２４、実測ｍ／ｅ：６６６．３５［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．０３分。
【０４２０】
段階Ｈ：２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−４−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−グルコピラノシド
２−アジドエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−４−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−グルコピラノシド（１．７７ｇ、２．６６ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（０．１３３ｍｍｏｌ）の水（３０ｍＬ）中混合物をＨ２風船下に室温で１６時間撹拌した。触媒を濾去し、Ｈ２Ｏで洗浄した（１０ｍＬで３回）。濾液を濃縮して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ２０Ｈ３６ＦＮＯ１５の計算値：５４９．２１、実測ｍ／ｅ：５５０．２９［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝０．８６分。１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ５．１６−５．１４（１Ｈ、ｍ）、４．８８−４．８６（１Ｈ、ｍ）、４．８０−４．７６（１Ｈ、ｍ）、４．３０−４．１６（１Ｈ、ｍ）、４．０６−４．０３（１Ｈ、ｍ）、３．９８−３．８８（４Ｈ、ｍ）、３．８６−３．７２（９Ｈ、ｍ）、３．７０−３．６２（５Ｈ、ｍ）、２．９４−２．８８（２Ｈ、ｍ）。
【０４２１】
段階Ｉ：２−｛［２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−オキソエチル］［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝−Ｎ−（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−グルコピラノシル］オキシ｝エチル）アセトアミド
２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシドに代えて２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−４−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−グルコピラノシドを用い、ＭＬ−２９について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ４４Ｈ７１Ｎ５Ｏ２９の計算値：１１３３．４２、実測ｍ／ｅ：１１３４．３４［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．１７分。
【０４２２】
実施例３３
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２−｛［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］［２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝−Ｎ−［２−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）エチル］アセトアミド（ＭＬ−３３）の合成について説明する。
【化８３】
0006491649.tif 000280
【０４２３】
それぞれ、段階Ｃで６−アミノ−Ｎ−（２−α−Ｌ−フコピラノシル）エチル）ヘキサンアミドに代えて２−アミノエチルα−Ｌ−フコピラノシドを用い、段階Ｄで２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシドに代えて２−アミノエチルα−Ｄ−グルコピラノシドを用い、ＭＬ−２３について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝７９６．３８［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．８７分。
【０４２４】
実施例３４
下記構造を有するオリゴ糖リンカーＮ，Ｎ−ビス｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝−６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキサンアミド（ＭＬ−３４）の合成について説明する。
【化８４】
0006491649.tif 000281
【０４２５】
段階Ａ：プロパ−２−エン−１−イル２，３，４−トリ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｌ−フコピラノシド
１，２，３，４−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−Ｌ−フコピラノシド（７０．３４ｇ、１２１ｍｍｏｌ、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２００７,  ９,  １２２７−３０）のＣＨ２Ｃｌ２（３００ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それに０℃で、アリルアルコール（１２．３６ｍＬ、１８２ｍｍｏｌ）を加え、次に内部温度を２０℃以下に維持しながら、１時間かけて三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート（４４．９ｍＬ、３６３ｍｍｏｌ）を滴下した。室温で１６時間撹拌後、反応混合物を冷却して０℃とし、それに飽和ＮａＨＣＯ３（６００ｍＬ、１２１ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。１６時間撹拌後、反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した（４００ｍＬで２回）。有機相を水（２００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬで３回）、およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄した。有機相を分離し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過した。濾液を濃縮し、残留物を５つの等しい部分に分け、それらを別個に０％から６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行うシリカゲル（３３０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。（α異性体Ｒｆ＝０．６３３０：７０ＥｔＯＡｃ：ヘキサン）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．３２（３Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．７７）、２．０９（１Ｈ、ｓ）、４．１５−４．１４（１Ｈ、ｍ）、４．３３−４．３１（１Ｈ、ｍ）、４．５１−４．４９（１Ｈ、ｍ）、５．２２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０．５２）、５．３９−５．３８（２Ｈ、ｍ）、５．７３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．７４、３．６７）、５．８２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．３０）、５．９２−５．９１（１Ｈ、ｍ）、６．０４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．７５、３．４３）、７．４４（３Ｈ、ｄｔ、Ｊ＝２２．６４、７．６１）、７．４８−７．５７（５Ｈ、ｍ）、７．６５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．４９）、７．８４（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．８４）、８．０４（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．８４）、８．１５（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．７９）。
【０４２６】
段階Ｂ：２−オキソエチル２，３，４−トリ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｌ−フコピラノシド
プロパ−２−エン−１−イル２，３，４−トリ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｌ−フコピラノシド（６．０６ｇ、１１．７３ｍｍｏｌ）のアセトン（９４ｍＬ）および水（２３．５ｍＬ）中溶液に、４−メチルモルホリン４−オキサイド（２．７５ｇ、２３．４６ｍｍｏｌ）を加え、次に２．５％ＯｓＯ４水溶液（５．９７ｇ、０．５８７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。得られた混合物に、ＮａＩＯ４（５．４０ｇ、２３．４６ｍｍｏｌ）の水（１００ｍＬ）中溶液を加えた。さらに６時間撹拌後、沈澱を濾過し、アセトン（２００ｍＬ）で洗浄した。濾液の体積を最初の体積の１／３とし、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で抽出した。有機相を分離し、飽和ＮａＨＣＯ３（２００ｍＬ）で洗浄した。水相をＥｔＯＡｃで抽出した（１００ｍＬで３回）。有機相を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物を、０％から１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行うシリカゲル（２２０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．３３−１．２９（３Ｈ、ｍ）、３．２７（１Ｈ、ｓ）、３．４１（１Ｈ、ｓ）、４．３５−４．３１（１Ｈ、ｍ）、５．５１−５．４５（１Ｈ、ｍ）、５．７５−５．６９（１Ｈ、ｍ）、５．８１（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１３．９１、３．５７）、６．０５−５．９８（１Ｈ、ｍ）、７．４２（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．７６）、７．５３（５Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．６１）、７．６７−７．６３（２Ｈ、ｍ）、７．８４−７．８１（２Ｈ、ｍ）、８．０１（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝８．８２）、８．１４−８．１２（２Ｈ、ｍ）、９．７７−９．７７（１Ｈ、ｍ）。
【０４２７】
段階Ｃ：ベンジル｛２−［（２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝カーバメート
１，２，３，４−テトラ−Ｏ−アセチル−Ｌ−フコピラノース（２００ｇ、６０１．８６ｍｍｏｌ）のＡｃＣＮ（１００ｍＬ）およびベンジル（２−ヒドロキシエチル）カーバメート（１４０．９６ｇ、７２２．０８ｍｍｏｌ）中溶液を撹拌しながら、それに０℃で、ＢＦ３・Ｅｔ２Ｏ（４２７．７ｇ、３．０１モル）を２時間かけて滴下した。室温で１６時間撹拌後、反応混合物を冷却して０℃とし、次にＥｔ３Ｎ（１３０ｍＬ）を加えた。得られた混合物を濃縮し、残留物をＣＨ２Ｃｌ２（２．０Ｌ）に溶かし、次にそれを飽和ＮａＨＣＯ３（５００ｍＬで２回）、水（５００ｍＬで２回）およびブライン（５００ｍＬ）で洗浄した。有機相を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物を、ＥｔＯＡｃ／石油エーテル（１：３）で溶離を行うシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．３３−７．３７（５Ｈ、ｍ）、５．１２−５．３２（５Ｈ、ｍ）、４．９９−５．０４（１Ｈ、ｍ）、４．４２−４．４５（１Ｈ、ｄ）、３．８７−３．９４（１Ｈ、ｍ）、３．７８−３．８４（１Ｈ、ｍ）、３．６６−３．７０（１Ｈ、ｍ）、３．４２−３．４４（２Ｈ、ｍ）、２．１９（３Ｈ、ｓ）、２．０５−２．１２（６Ｈ、ｍ）、１．２５−１．３０（３Ｈ、ｄ）。
【０４２８】
段階Ｄ：２−アミノエチル２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシド
ベンジル｛２−［（２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝カーバメート（１．０ｇ、２．１３９ｍｍｏｌ）の水（１０ｍＬ）中溶液にＰｄ／Ｃ（６８ｍｇ、０．６４２ｍｍｏｌ）を加えた。得られた懸濁液を脱気し、Ｈ２風船下に室温で撹拌した。１時間後、反応混合物をセライト層で濾過し、濾液を凍結乾燥して標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝３３４．１５６３［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．４３分。
【０４２９】
段階Ｅ：２−（ベンジルアミノ）エチル２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシド
２−アミノエチル２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシド（８．５６ｇ、２５．７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中溶液に、ベンズアルデヒド（２．１９７ｍＬ、２１．６７ｍｍｏｌ）、酢酸（３７２μＬ、６．５０ｍｍｏｌ）およびＮａＣＮＢＨ３（３．４０ｇ、５４．２ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１６時間撹拌後、反応混合物を濃縮し、残留物を、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）と飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）との間で分配した。有機相を分離し、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬで２回）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物を、０％から１００％ＡｃＣＮ／水で溶離を行うＣ１８逆相シリカゲル（１３０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝４２４．２０８９［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．４２分。
【０４３０】
段階Ｆ：２−（ベンジル｛２−［（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）エチル２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシド
２−（ベンジルアミノ）エチル２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシド（１．０２１ｇ、２．４１１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中溶液に、２−オキソエチル２，３，４−トリ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｌ−フコピラノシド（１．２５ｇ、２．４１１ｍｍｏｌ）、酢酸（４１μＬ、０．７２３ｍｍｏｌ）およびＮａＣＮＢＨ３（２２７ｍｇ、３．６２ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１６時間撹拌後、反応混合物を濃縮し、残留物を、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）と飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）との間で分配した。有機相を分離し、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬで２回）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィーシリカゲル（１２０ｇ、０％から１００ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離）によって精製した。標題化合物を含む分画を合わせ、濃縮した。残留物を、０％から１００％ＡｃＣＮ／水で溶離を行うＣ１８逆相シリカゲル（１３０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによってさらに精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍｅ／ｅ＝９２６．３２３４［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．９４７分。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．１２（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．５４）、１．２７（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．５７）、２．００（６Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．４０）、２．２０（３Ｈ、ｓ）、２．７８（２Ｈ、ｑ、Ｊ＝５．８５）、２．８５（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝５．７２）、３．４８−３．４６（１Ｈ、ｍ）、３．７７−３．５９（４Ｈ、ｍ）、３．８７−３．８５（１Ｈ、ｍ）、４．０９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．６３）、４．３９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．７１）、５．０２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．７１）、５．１４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．８２、３．６８）、５．３０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．３６）、５．３７−５．３４（２Ｈ、ｍ）、５．６５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．７２、３．６６）、５．７７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．４９）、５．９８（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．７０、３．４７）、７．２９（６Ｈ、ｓ）、７．３６（３Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．７４）、７．４５（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．５９）、７．５２（３Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．７３）、７．６４（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．４６）、７．８１（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．００、１．４１）、７．９７（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．０７、１．４０）、８．１４−８．１２（２Ｈ、ｍ）。
【０４３１】
段階Ｇ：２−（ベンジル｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）エチル６−α−Ｌ−フコピラノシド
２−（ベンジル｛２−［（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）エチル２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシド（４３２．９ｍｇ、０．４６８ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＯＨ（１０ｍＬ）中溶液に、ＮａＯＣＨ３（０．０８７μＬ、０．４６８ｍｍｏｌ、１．０Ｍ）を加えた。１６時間撹拌後、反応混合物を濃縮して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝４８８．２３２４［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．１０６分。
【０４３２】
段階Ｈ：２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）エチルα−Ｌ−フコピラノシド
２−（ベンジル｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）エチル６−α−Ｌ−フコピラノシド（２２０ｍｇ、０．４５１ｍｍｏｌ）の水（１０ｍＬ）中溶液に、Ｐｄ／Ｃ（１４．４１ｍｇ、０．１３５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を脱気し、Ｈ２風船下に撹拌した。１時間後、反応混合物をセライト層で濾過し、濾液を凍結乾燥して標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法：ｍ／ｅ＝３９８．２１６１［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．１１９分。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．２４（６Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．５８）、２．９１−２．８９（４Ｈ、ｍ）、３．５６（２Ｈ、ｄｄｄ、Ｊ＝１０．６６、６．６４、４．６６）、３．７０−３．６９（２Ｈ、ｍ）、３．８０−３．７５（４Ｈ、ｍ）、３．８６（２Ｈ、ｄｔ、Ｊ＝１０．６１、４．５３）、３．９８（２Ｈ、ｑ、Ｊ＝６．６３）、４．８０（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．４５）。
【０４３３】
段階Ｉ：６−（ビス｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサン酸ベンジル
６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサン酸（４０ｍｇ、０．１６９ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（１１４ｍｇ、０．５９３ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（２．５９ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に室温で、２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）エチルα−Ｌ−フコピラノシド（１９０ｍｇ、０．４７８ｍｍｏｌ）を加えた。１６時間撹拌後、反応混合物を濃縮し、残留物を、５％から４０％ＡｃＣＮ／水で溶離を行うＣ１８逆相シリカゲル（５０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６１６．２９２３［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．１１４分。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．２４（６Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．５８）、１．７２−１．６４（４Ｈ、ｍ）、２．４５（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．１１）、２．５３（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．３２）、３．９１−３．５５（１７Ｈ、ｍ）、４．７８−４．７５（２Ｈ、ｍ）、５．１４（２Ｈ、ｓ）、７．３８−７．３７（５Ｈ、ｍ）。
【０４３４】
段階Ｊ：Ｎ，Ｎ−ビス｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝−６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキサンアミド
段階Ｃで６−（｛２−［（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサン酸ベンジルに代えて６−（ビス｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサン酸ベンジルを用い、ＭＬ−１について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６２３．２８５３［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．１５５分。
【０４３５】
実施例３５
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）エチルα−Ｌ−フコピラノシド（ＭＬ−３５）の合成について説明する。
【化８５】
0006491649.tif 000282
【０４３６】
段階Ａ：６−（ビス｛２−［（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）ヘキサン酸ベンジル
２−オキソエチル２，３，４−トリ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｌ−フコピラノシド（１．２５ｇ、２．４１１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中溶液に、６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサン−１−アミニウム４−メチルベンゼンスルホネート、酢酸（１７μＬ、０．３００ｍｍｏｌ）およびＮａＣＮＢＨ３（１８９ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１６時間撹拌後、反応混合物を濃縮し、残留物を、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）と飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）との間で分配した。有機相を分離し、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬで２回）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物を、０％から１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行うシリカゲル（１２０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。標題化合物を含む分画を合わせ濃縮した。残留物を、０％から１００％ＡｃＣＮ／水で溶離を行うＣ１８逆相シリカゲル（５０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによってさらに精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝１２２６．４５９１［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．３１０分。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．２９（５Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．６２）、２．３６−２．３１（２Ｈ、ｍ）、２．７５（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝２３．３１）、３．５３（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝９．２６）、３．７８−３．７６（１Ｈ、ｍ）、４．４５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．６６）、５．１３（２Ｈ、ｓ）、５．３５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．６４）、５．６４（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．６９、３．６３）、５．７９（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．４８）、５．９８（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．７１、３．４４）、７．２６（４Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．６４）、７．５６−７．４０（１４Ｈ、ｍ）、７．６４（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．７２）、７．８２−７．８０（５Ｈ、ｍ）、７．９９−７．９７（５Ｈ、ｍ）、８．１９−８．１２（５Ｈ、ｍ）。
【０４３７】
段階Ｂ：６−（ビス｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）ヘキサン酸メチル
２−（ベンジル｛２−［（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）エチル２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシドに代えて６−（ビス｛２−［（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）ヘキサン酸ベンジルを用い、段階ＧでＭＬ−３４について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝５２６．２８５２［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．１１２分。
【０４３８】
段階Ｃ：６−（ビス｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）ヘキサン酸
６−（ビス｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）ヘキサン酸メチル（４５ｍｇ、０．０８６ｍｍｏｌ）の水（１０ｍＬ）中溶液に、ＮａＯＨ（０．０８６μＬ、０．０８６ｍｍｏｌ、１．０Ｍ）を加えた。１６時間撹拌後、反応混合物を０．０１Ｍ  ＨＣｌで中和し、得られた溶液を凍結乾燥して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝５１２．２８６６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．７０９分。
【０４３９】
段階Ｄ：２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）エチルα−Ｌ−フコピラノシド
６−（｛２−［（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサン酸に代えて６−（ビス｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）ヘキサン酸を用い、ＭＬ−１段階Ｄについて記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６０９．２８０８［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．０８８分。
【０４４０】
実施例３６
下記構造を有するオリゴ糖２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝［３−（α−Ｌ−フコピラノシル）プロピル］アミノ）エチル２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（ＭＬ−３６）の合成について説明する。
【化８６】
0006491649.tif 000283
【０４４１】
段階Ａ：３−（２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）−１−プロペン
１，２，３，４−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノース（１２ｇ、３６．１ｍｍｏｌ）およびアリルトリメチルシラン（１１．４８ｍＬ、７２．２ｍｍｏｌ）のＡｃＣＮ（６０ｍＬ）中溶液に０℃で、ＴＭＳ−ＯＴｆ（３．５２ｍＬ、１９．５０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃で１８時間、次に室温で６時間撹拌した。得られた赤色溶液をＣＨ２Ｃｌ２（２５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（１５０ｍＬ）を注意深く加えた。水層を分離し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した（５０ｍＬで２回）。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を、１５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行うシリカゲル（２２０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）δ１．１６（ｄ、Ｊ＝６．４、３Ｈ）、２．０４（ｓ、３Ｈ）、２．０８（ｓ、３Ｈ）、２．１８（ｓ、３Ｈ）、２．３４（ｍ、１Ｈ）、２．５７（ｍ、１Ｈ）、４．００（ｍ、１Ｈ）、４．２９（ｄｔ、Ｊ＝１０．４、７．３、１Ｈ）、５．１３（ｍ、２Ｈ）、５．２３（ｄｄ、Ｊ＝１０．０、３．４、１Ｈ）、５．３０（ｄｄ、Ｊ＝３．４、１．９、１Ｈ）、５．３５（ｄｄ、Ｊ＝１０．０、５．６、１Ｈ）、５．７７（ｍ、１Ｈ）。
【０４４２】
段階Ｂ：３−（α−Ｌ−フコピラノシル）−１−プロペン
３−（２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）−１−プロペン（１０．６５ｇ、３３．９ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＯＨ（５０ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それにＮａＯＣＨ３（１８３ｍｇ、３．４ｍｍｏｌ）を加えた。室温で２時間撹拌後、反応混合物をアンバーライト（アンバーライト（ａｍｂｅｒｌｉｔｅ））ＩＲ１２０（メタノール２５ｍＬで３回予洗）で中和した。樹脂を濾去し、濾液を濃縮して白色固体を得て、それをＥｔＯＡｃ（約２００ｍＬ）から再結晶して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）δ１．２２（ｄ、Ｊ＝６．５、３Ｈ）、２．４１（ｍ、１Ｈ）、２．４７（ｍ、１Ｈ）、３．７３（ｍ、２Ｈ）、３．８５（ｑｄ、Ｊ＝６．５、２．０、１Ｈ）、３．９０（ｄｄ、Ｊ＝８．９、５．５、１Ｈ）、３．９９（ｍ、１Ｈ）、５．０７（ｍ、１Ｈ）、５．１５（ｄｑ、Ｊ＝１７．２、１．７、１Ｈ）、５．８５（ｍ、１Ｈ）。
【０４４３】
段階Ｃ：３−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−１−プロペン
ＮａＨ（３．９１ｇ、オイル中６０％分散品、９８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１２０ｍＬ）中懸濁液を撹拌しながら、それに室温で、３−（α−Ｌ−フコピラノシル）−１−プロペン（４．６ｇ、２４．４４ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。２時間後、得られた混合物に、ヨウ化テトラブチルアンモニウム（４５１ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）を加え、次に臭化ベンジル（１３．１ｍＬ、１１０ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。室温で１６時間撹拌後、反応混合物を濃縮し、残留物を、水（３００ｍＬ）とＥｔ２Ｏ（１５０ｍＬ）との間で分配した。水層をＥｔ２Ｏで抽出した（１５０ｍＬで３回）。合わせた有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を、０％から４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行うシリカゲル（２２０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）δ１．３４（ｄ、Ｊ＝６．６、３Ｈ）、２．３３（ｍ、１Ｈ）、２．４２（ｍ、１Ｈ）、３．８２（ｍ、３Ｈ）、３．９９（ｍ、１Ｈ）、４．１２（ｍ、１Ｈ）、４．５８（ｄ、Ｊ＝１１．８、１Ｈ）、４．６４（ｄ、Ｊ＝１１．８、２Ｈ）、４．６９（ｄ、Ｊ＝１２．０、１Ｈ）、４．７６（ｄｄ、Ｊ＝１２．０、８．９、２Ｈ）、５．０５、５．０７および５．１１（ｍ、２Ｈ）、５．８０（ｍ、１Ｈ）、７．３０−７．４０（ｍ、１５Ｈ）。
【０４４４】
段階Ｄ：３−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）プロパノール
３−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−１−プロペン（１０．４ｇ、２２．６８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）中溶液に０℃で、９−ＢＢＮ（５８．５ｍＬ、２９．３ｍｍｏｌ、０．５Ｍ  ＴＨＦ中溶液）をゆっくり加えた。混合物を昇温させて室温とし、次に３時間還流した。反応混合物を冷却して室温とし、エタノール（４．４ｍＬ、７５ｍｍｏｌ）を滴下して、次にＮａＯＨ（１１．５１ｍＬ、４６ｍｍｏｌ、４．０Ｍ水溶液）を滴下した。得られた混合物を冷却して０℃とし、３５％過酸化水素（１０ｍＬ、１１５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた懸濁液を室温で終夜撹拌した。反応混合物をブライン（１２５ｍＬ）およびエーテル（２００ｍＬ）で希釈した。有機層をブラインで洗浄し（１２５ｍＬで２回）、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を、０％から１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行うシリカゲル（３３０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）δ１．３３（ｄ、Ｊ＝６．６、３Ｈ）、１．６７（ｍ、３Ｈ）、１．７０（ｍ、１Ｈ）、３．６５（ｍ、２Ｈ）、３．８０（ｍ、３Ｈ）、３．９８（ｍ、１Ｈ）、４．０２（ｍ、１Ｈ）、４．５６（ｄ、Ｊ＝１１．８、１Ｈ）、４．６３（ｔ、Ｊ＝１２．２、２Ｈ）、４．６９（ｄ、Ｊ＝１２．０、１Ｈ）、４．７８（ｄｄ、Ｊ＝１２．１、２．１、２Ｈ）、７．２７−７．４０（ｍ、１５Ｈ）。
【０４４５】
段階Ｅ：３−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）プロパナール
３−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）プロパノール（８．４ｇ、１７．６２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中溶液に０℃で、デス−マーチンペルヨージナン（１１．２１ｇ、２６．４ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を０℃で１時間、次に室温で２時間撹拌した。ＴＬＣでは、原料のアルコールがまだ若干存在していることが示されていることから、追加のデス−マーチンペルヨージナン（５ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温でさらに２時間撹拌した。得られた混合物を飽和ＮａＨＣＯ３（１５０ｍＬで３回）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を、０％から８０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行うシリカゲル（２２０ｇ）でのによって精製してフラッシュクロマトグラフィーして、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）δ１．２６（ｄ、Ｊ＝６．６、３Ｈ）、１．８２（ｍ、１Ｈ）、２．０６（ｍ、１Ｈ）、２．４０−２．５８（ｍ、２Ｈ）、３．８０（ｍ、２Ｈ）、３．８４（ｍ、１Ｈ）、３．９０（ｍ、１Ｈ）、３．９９（ｄｔ、Ｊ＝１０．９、３．８、１Ｈ）、４．５５（ｄ、Ｊ＝１１．８、１Ｈ）、４．６５（ｄ、Ｊ＝１１．８、１Ｈ）、４．７０（ｔ、Ｊ＝１２．０、２Ｈ）、４．７９（ｄｄ、Ｊ＝１２．０、９．２、２Ｈ）、７．２８−７．４０（ｍ、１５Ｈ）。
【０４４６】
段階Ｆ：２−｛［３−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）プロピル］アミノ｝エチル２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド
３−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）プロパナール（８００ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）および２−アミノエチル３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（９８７ｍｇ、２．５３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）中混合物に、酢酸（２９μＬ、０．５０６ｍｍｏｌ）および水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム（８９３ｍｇ、４．２１ｍｍｏｌ）を加えた。室温で終夜撹拌後、反応混合物を濃縮し、残留物をＥｔＯＡｃ（７０ｍＬ）に取り、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬで２回）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物をＣＨ３ＯＨ（８ｍＬ）に取り、それにＮａＯＣＨ３（２７ｍｇ、０．５０６ｍｍｏｌ）を加えた。室温で２時間撹拌後、得られた混合物を濃縮し、残留物を、５％から１００％ＡｃＣＮ／水で溶離を行うＣ１８逆相シリカゲル（１２０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）δ１．３０（ｄ、Ｊ＝６．６、３Ｈ）、１．５０（ｍ、１Ｈ）、１．６０（ｍ、１Ｈ）、１．６８（ｍ、１Ｈ）、２．０２（ｓ、３Ｈ）、２．６４（ｍ、２Ｈ）、２．８１（ｍ、２Ｈ）、３．３９（ｍ、１Ｈ）、３．５７（ｍ、２Ｈ）、３．６９（ｍ、１Ｈ）、３．７８−３．８５（ｍ、４Ｈ）、３．９２（ｍ、２Ｈ）、４．００（ｍ、２Ｈ）、４．４５（ｄ、Ｊ＝７．７、１Ｈ）、４．５２（ｄ、Ｊ＝１１．９、１Ｈ）、４．６２（ｄ、Ｊ＝１１．８、１Ｈ）、４．６８（ｄ、Ｊ＝１２．１、１Ｈ）、４．７９（ｄ、Ｊ＝１２．０、２Ｈ）、７．２８−７．３８（ｍ、１５Ｈ）、７．６５（ｓ、１Ｈ）；［Ｍ＋Ｈ／ｅ］＋＝７２３．３９２５。
【０４４７】
段階Ｇ：６−｛［３−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）プロピル］（２−｛［２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ｝ヘキサン酸ベンジル
６−オキソヘキサン酸ベンジル（１７０ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）および２−｛［３−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジルオキシ−α−Ｌ−フコピラノシル）プロピル］アミノ｝エチル２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（５５８ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（８ｍＬ）中混合物に、酢酸（１３μＬ、０．２３２ｍｍｏｌ）および水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム（３２７ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温で２時間撹拌した。追加の６−オキソヘキサン酸ベンジル（１７０ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を終夜続けた。混合物を溶媒留去し、残留物を、ＥｔＯＡｃ（４０ｍＬ）と飽和ＮａＨＣＯ３（６０ｍＬ）との間で分配し、有機層をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を、５％から２０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶離を行うシリカゲル（４０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）：１．２７−１．３８（ｍ、５Ｈ）、１．４８（ｍ、１Ｈ）、１．６２−１．７５（ｍ、４Ｈ）、１．８０（ｍ、１Ｈ）、２．０９（ｓ、３Ｈ）；２．３７（ｔ、Ｊ＝７．３、２Ｈ）、２．９０−３．０２（ｍ、４Ｈ）、３．０４（ｍ、１Ｈ）、３．１３（ｍ、１Ｈ）、３．４２（ｍ、１Ｈ）、３．５９（ｔ、Ｊ＝８．９、１Ｈ）、３．６５−３．７５（ｍ、３Ｈ）、３．７８（ｄ、Ｊ＝４．９、２Ｈ）、３．８６（ｍ、１Ｈ）、３．８７−４．０５（ｍ、４Ｈ）、４．１５（ｄ、Ｊ＝１１．２、１Ｈ）、４．４９（ｄ、Ｊ＝１１．９、１Ｈ）、４．６２（ｄ、Ｊ＝１１．８、１Ｈ）、４．６６（ｄ、Ｊ＝１１．７、１Ｈ）、４．６９（ｍ、２Ｈ）、４．７４（ｄ、Ｊ＝１１．８、１Ｈ）、４．７８（ｄ、Ｊ＝１２．０、１Ｈ）、５．１２（ｓ、２Ｈ）、７．２５−７．３８（ｍ、１５Ｈ）、８．３６（ｓ、１Ｈ）；ＵＰＬＣ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ／ｅ］＋＝９２７．５０４９。
【０４４８】
段階Ｈ：２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝［３−（α−Ｌ−フコピラノシル）プロピル］アミノ）エチル２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド
段階Ｃで６−（｛２−［（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ−６−オキソヘキサン酸ベンジルに代えて６−｛［３−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）プロピル］（２−｛［２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ｝ヘキサン酸ベンジルを用い、実施例１、ＭＬ−１について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６６４．３４７４［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．０８分。
【０４４９】
実施例３７
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝［３−（α−Ｌ−フコピラノシル）プロピル］アミノ）エチルβ−Ｄ−グルコピラノシド（ＭＬ−３７）の合成について説明する。
【化８７】
0006491649.tif 000284
【０４５０】
段階Ｆで２−アミノエチル３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシドに代えて２−アミノエチル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシドを用い、ＭＬ−３６について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６２３．３２７７［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．１１分。
【０４５１】
実施例３８
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝［３−（α−Ｌ−フコピラノシル）プロピル］アミノ）エチルα−Ｄ−グルコピラノシド（ＭＬ−３８）の合成について説明する。
【化８８】
0006491649.tif 000285
【０４５２】
段階Ｆで２−アミノエチル３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシドに代えて２−アミノエチル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−グルコピラノシドを用い、ＭＬ−３６について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６２３．３３３６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．１１分。
【０４５３】
実施例３９
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−｛［３−（α−Ｌ−フコピラノシル）プロピル］［２−（α−Ｄ−グルコピラノシル）プロピル］アミノ｝ヘキサノエート（ＭＬ−３９）の合成について説明する。
【化８９】
0006491649.tif 000286
【０４５４】
段階Ａ：メチル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシド
ＮａＨ（オイル中６０％分散品５．１９ｇ、１３０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５０ｍＬ）中懸濁液に、メチル−α−Ｄ−グルコピラノシド（４．２ｇ、２１．６ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。得られた混合物を室温で２時間撹拌し、それに臭化テトラブチルアンモニウム（８００ｍｇ、２．１６ｍｍｏｌ）を加え、次に臭化ベンジル（１１．５８ｍＬ、９７ｍｍｏｌ）を滴下した。室温で終夜撹拌後、混合物を濃縮し、残留物を水に懸濁させ、エーテルで抽出した（１５０ｍＬで３回）。合わせたエーテル層をブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去した。残留物を、０％から３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行うシリカゲル（３３０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）δ３．４４（ｓ、３Ｈ）、３．６２（ｄｄ、Ｊ＝９．６、３．５、１Ｈ）、３．６６−３．７２（ｍ、２Ｈ）、３．７５−３．８２（ｍ、２Ｈ）、４．０４（ｔ、Ｊ＝９．３、１Ｈ）、４．５１−４．５５（ｍ、２Ｈ）、４．６６（ｄ、Ｊ＝１２．１、１Ｈ）、４．６９（ｄ、Ｊ＝３．５、１Ｈ）、４．７２（ｄ、Ｊ＝１２．１、１Ｈ）、４．８３−４．９０（ｍ、３Ｈ）、５．０４（ｄ、Ｊ＝１１．０、１Ｈ）、７．１９（ｍ、２Ｈ）、７．３０−７．４３（ｍ、１８Ｈ）。
【０４５５】
段階Ｂ：３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル）−１−プロペン
１，２，３，４−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノースに代えてメチル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシドを用い、段階ＡでＭＬ−３６について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ２．４８−２．６０（ｍ、２Ｈ）、３．６４−３．７０（ｍ、３Ｈ）、３．７６（ｄｄ、Ｊ＝１０．５、３．２、１Ｈ）、３．８０−３．８８（ｍ、２Ｈ）、４．１８（ｍ、１Ｈ）、４．５２（ｄ、Ｊ＝１０．５、２Ｈ）、４．６８（ｄ、Ｊ＝１３．７、２Ｈ）、４．７４（ｄ、Ｊ＝１１．６、１Ｈ）、４．８６（ｄｄ、Ｊ＝１０．６、３．３、２Ｈ）、４．９８（ｄ、Ｊ＝１１．０、１Ｈ）、５．１１−５．１８（ｍ、２Ｈ）、５．８４−５．９０（ｍ、１Ｈ）、７．１８（ｍ、２Ｈ）、７．２９−７．４１（ｍ、１８Ｈ）。
【０４５６】
段階Ｃ：３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル）プロパノール
３−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−１−プロペンに代えて３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル）−１−プロペンを用い、段階ＤでＭＬ−３６について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．７０（ｍ、２Ｈ）、１．８５（ｍ、２Ｈ）、３．６１（ｍ、１Ｈ）、３．６５−３．７６（ｍ、２Ｈ）、３．７６−３．８６（ｍ、２Ｈ）、４．９１（ｍ、１Ｈ）、４．５２（ｄ、Ｊ＝１０．８、１Ｈ）、４．５５（ｄ、Ｊ＝１２．３、１Ｈ）、４．６５（ｄ、Ｊ＝１２．１、１Ｈ）、４．６７（ｄ、Ｊ＝１１．８、１Ｈ）、４．７５（ｄ、Ｊ＝１１．７、１Ｈ）、４．８６（ｄ、Ｊ＝１１．３、２Ｈ）、４．９８（ｄ、Ｊ＝１１．０、１Ｈ）、７．１８（ｍ、２Ｈ）、７．２９−７．４０（ｍ、１８Ｈ）。
【０４５７】
段階Ｄ：メタンスルホン酸３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル）プロピル
３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル）プロパノール（３．３５ｇ、５．７５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中溶液に０℃で、ＤＩＰＥＡ（１．２５ｍＬ、７．１９ｍｍｏｌ）を加え、次にメタンスルホニルクロライド（５３８μＬ、６．９ｍｍｏｌ）を滴下した。０℃で１時間撹拌後、反応混合物を水（５０ｍＬ）に投入した。有機層を分離し、飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．７６−１．９０（ｍ、３Ｈ）、１．９０−１．９９（ｍ、２Ｈ）、３．００（ｓ、３Ｈ）、３．５８−３．６６（ｍ、２Ｈ）、３．６８−３．７４（ｍ、２Ｈ）、３．７７−３．８５（ｍ、２Ｈ）、４．０６（ｍ、１Ｈ）、４．５２（ｄ、Ｊ＝１０．７、１Ｈ）、４．５４（ｄ、Ｊ＝１２．１、１Ｈ）、４．６５（ｄ、Ｊ＝１２．１、１Ｈ）、４．６６（ｄ、Ｊ＝１１．６、１Ｈ）、４．７６（ｄ、Ｊ＝１１．６、１Ｈ）、４．８５（ｄ、Ｊ＝１０．９、１Ｈ）、４．９８（ｄ、Ｊ＝１０．９、１Ｈ）、７．１８（ｍ、２Ｈ）、７．３０−７．４０（ｍ、１８Ｈ）。
【０４５８】
段階Ｅ：３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル）プロピルアジド
メタンスルホン酸３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル）プロピル（３．７８ｇ、５．７２ｍｍｏｌ）のＡｃＣＮ（５０ｍＬ）中溶液に、アジ化テトラブチルアンモニウム（１．６６ｇ、５．８３ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を終夜還流させた。冷却して室温とした後、反応混合物を濃縮した。残留物をエーテル（５０ｍＬ）に溶かし、それを水（５０ｍＬで２回）、ブライン（２５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を、シリカゲル（１２０ｇ、０％から３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．５８−１．６８（ｍ、２Ｈ）、１．７４−１．８６（ｍ、２Ｈ）、３．３２−３．４１（ｍ、２Ｈ）、３．５８−３．７６（ｍ、４Ｈ）、３．７６−３．８５（ｍ、２Ｈ）、４．４０（ｍ、１Ｈ）、４．５２（ｔ、Ｊ＝１０．４、２Ｈ）、４．６５（ｄｄ、Ｊ＝１１．７、２．５、２Ｈ）、４．７５（ｄ、Ｊ＝１１．７、１Ｈ）、４．８６（ｍ、２Ｈ）、４．９７（ｄ、Ｊ＝１０．８、１Ｈ）、７．１６（ｍ、２Ｈ）、７．２８−７．４０（ｍ、１８Ｈ）。
【０４５９】
段階Ｆ：３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル）プロピルアミン
３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル）プロピルアジド（３ｇ、４．９４ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＯＨ（１００ｍＬ）中溶液に窒素を流し、それに１０％Ｐｄ／Ｃ（５２５ｍｇ）を加えた。得られた混合物をＨ２風船下に終夜撹拌した。反応混合物をセライト層で濾過し、濾液を濃縮して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．４８（ｍ、１Ｈ）、１．５９（ｍ、１Ｈ）、２．２３（ｍ、１Ｈ）、２．３０（ｍ、２Ｈ）、３．６６−３．７６（ｍ、５Ｈ）、４．００（ｍ、１Ｈ）、４．０９（ｍ、１Ｈ）、４．３８（ｄ、Ｊ＝１０．０、１Ｈ）、４．５０（ｄ、Ｊ＝１２．１、１Ｈ）、４．６１（ｄ、Ｊ＝１１．７、１Ｈ）、４．６８（ｄ、Ｊ＝１１．８、１Ｈ）、４．７０（ｄ、Ｊ＝１２．０、１Ｈ）、４．７９（ｄ、Ｊ＝１０．０、１Ｈ）、４．８６（ｄ、Ｊ＝１１．２、１Ｈ）、５．０２（ｄ、Ｊ＝１１．２、１Ｈ）、７．００（ｍ、２Ｈ）、７．２５−７．４０（ｍ、１８Ｈ）、８．０６（ｓ、２Ｈ）。
【０４６０】
段階Ｇ：２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−｛［３−（α−Ｌ−フコピラノシル）プロピル］［２−（α−Ｄ−グルコピラノシル）プロピル］アミノ｝ヘキサノエート
段階Ｆで２−アミノエチル３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシドに代えて３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル）プロピルアミンを用い、ＭＬ−３６について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６２１．３４２４［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．０８分。
【０４６１】
実施例４０
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−｛［３−（α−Ｌ−フコピラノシル）プロピル］［２−（β−Ｄ−グルコピラノシル）プロピル］アミノ｝ヘキサノエート（ＭＬ−４０）の合成について説明する。
【化９０】
0006491649.tif 000287
【０４６２】
段階Ａ：２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−グルコピラノシルブロマイド
β−Ｄ−グルコースペンタアセテート（５ｇ、１２．８１ｍｍｏｌ）に、室温で３３％ＨＢｒ／酢酸（３０ｍＬ、１９２ｍｍｏｌ）を加えた。４０分撹拌後、混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１５０ｍＬ）で希釈し、洗浄液が中性ｐＨとなるまで氷冷水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ２．０６（ｓ、３Ｈ）、２．０８（ｓ、３Ｈ）、２．１２（ｓ、３Ｈ）、２．１３（ｓ、３Ｈ）、４．１５（ｄ、Ｊ＝１１．１、１Ｈ）、４．３１−４．３７（ｍ、２Ｈ）、４．８６（ｄｄ、Ｊ＝９．９、４．０、１Ｈ）、５．１９（ｔ、Ｊ＝９．８、１Ｈ）、５．５８（ｔ、Ｊ＝９．８、１Ｈ）、６．６３（ｄ、Ｊ＝４．０、１Ｈ）。
【０４６３】
段階Ｂ：３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−１−プロペン
アリルマグネシウムブロマイドの溶液（１００ｍＬ、１００ｍｍｏｌ、１．０Ｍエーテル中溶液）に０℃で、１時間の期間をかけて２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−グルコピラノシルブロマイド（４．４５ｇ、１０．８２ｍｍｏｌ）のエーテル（６０ｍＬ）中溶液を滴下した。添加完了後、混合物を昇温させ、室温で終夜撹拌した。得られた混合物に、水（２００ｍＬ）を注意深く加え、次に酢酸を加えてマグネシウム塩を溶解させた。有機層を分離し濃縮した。残留物を無水酢酸（７０ｍＬ、７４０ｍｍｏｌ）およびピリジン（１００ｍＬ）で処理した。室温で終夜撹拌後、混合物を濃縮し、残留物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）に取り、飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄し（３００ｍＬで５回）、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去した。残留物を、シリカゲル（１２０ｇ、０％から１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ２．００（ｓ、３Ｈ）、２．０３（ｓ、３Ｈ）、２．０４（ｓ、３Ｈ）、２．０９（ｓ、３Ｈ）、２．２６−２．３７（ｍ、２Ｈ）、３．５１（ｍ、１Ｈ）、３．６５（ｍ、１Ｈ）、４．１０（ｄｄ、Ｊ＝１２．２、２．２、１Ｈ）、４．２４（ｄｄ、Ｊ＝１２．２、５．０、１Ｈ）、４．９３（ｔ、Ｊ＝９．４、１Ｈ）、５．０７（ｍ、２Ｈ）、５．０９（ｓ、１Ｈ）、５．１７（ｔ、Ｊ＝９．４、１Ｈ）、５．８３（ｍ、１Ｈ）。
【０４６４】
段階Ｃ：３−（β−Ｄ−グルコピラノシル）−１−プロペン
３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−１−プロペン（４．１５ｇ、１１．１４ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＯＨ（５０ｍＬ）中溶液に、ＮａＯＣＨ３（０．５６ｍＬ、２．２ｍｍｏｌ、４．０Ｍ  ＣＨ３ＯＨ中溶液）を加えた。室温で２時間撹拌後、反応混合物を、Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ（酸性型）を用いて中和した。樹脂を濾去し、濾液を濃縮して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ２．０９（ｍ、１Ｈ）、２．４９（ｍ、１Ｈ）、２．８８（ｔ、Ｊ＝８．９、１Ｈ）、２．９８−３．０７（ｍ、３Ｈ）、３．１１（ｍ、１Ｈ）、３．３９（ｄｄ、Ｊ＝１１．４、４．７、１Ｈ）、３．６０（ｄ、Ｊ＝１１．６、１Ｈ）、４．９９（ｄｄ、Ｊ＝１０．３、０．９、１Ｈ）、５．０６（ｄ、Ｊ＝１７．２、１Ｈ）、５．９０（ｍ、１Ｈ）。
【０４６５】
段階Ｄ：３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−１−プロペン
３−（α−Ｌ−フコピラノシル）−１−プロペンに代えて３−（β−Ｄ−グルコピラノシル）−１−プロペンを用い、段階ＣでＭＬ−３６について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ２．３９（ｍ、１Ｈ）、２．６５（ｍ、１Ｈ）、３．４１（ｍ、２Ｈ）、３．４９（ｍ、１Ｈ）、３．６８（ｔ、Ｊ＝９．５、１Ｈ）、３．７２−３．８２（ｍ、３Ｈ）、４．７２（ｄｄ、Ｊ＝１０．８、２．１、１Ｈ）、４．８９（ｄ、Ｊ＝１０．７、１Ｈ）、４．９４−５００（ｍ、３Ｈ）、５．１６（ｍ、２Ｈ）、６．０３（ｍ、１Ｈ）、７．２５（ｍ、２Ｈ）、７．３２−７．４４（ｍ、１８Ｈ）。
【０４６６】
段階Ｅ：３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−１−プロパノール
３−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−１−プロペンに代えて３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−１−プロペンを用い、段階ＤでＭＬ−３６について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．６０（ｍ、１Ｈ）、１．７６（ｍ、２Ｈ）、２．０４（ｍ、１Ｈ）、２．３６（ｔ、Ｊ＝５．７、１Ｈ）、３．３５（ｍ、２Ｈ）、３．４９（ｍ、１Ｈ）、３．６２−３．７２（ｍ、４Ｈ）、３．７２−３．７７（ｍ、２Ｈ）、４．５８（ｄ、Ｊ＝１２．２、１Ｈ）、４．６０（ｄ、Ｊ＝１０．７、１Ｈ）、４．６５（ｄ、Ｊ＝１２．２、１Ｈ）、４．７０（ｄ、Ｊ＝１０．８、１Ｈ）、４．８６（ｄ、Ｊ＝１０．８、１Ｈ）、４．９５（ｍ、３Ｈ）、７．２１（ｍ、２Ｈ）、７．３１−７．４１（ｍ、１８Ｈ）。
【０４６７】
段階Ｆ：２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−｛［３−（α−Ｌ−フコピラノシル）プロピル］［２−（β−Ｄ−グルコピラノシル）プロピル］アミノ｝ヘキサノエート
段階Ｄで３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル）プロパノールに代えて３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−１−プロパノールを用い、ＭＬ−３９について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６２１．３４１２［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．０８分。
【０４６８】
実施例４１
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝［３−（α−Ｄ−マンノピラノシル）プロピル］アミノ）エチルα−Ｌ−フコピラノシド（ＭＬ−４１）の合成について説明する。
【化９１】
0006491649.tif 000288
【０４６９】
段階Ａ：３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル）−１−プロペン
メチル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシドに代えてメチル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシドを用い、段階ＢでＭＬ−３９について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物をαおよびβアノマーの混合物として製造した。これらのアノマーを、３０％ＩＰＡ（０．１％ＤＥＡ）／ＣＯ２、１００バール、２００ｍＬ／分、２２０ｎｍ；注入量：１６２ｍｇ／ｍＬ４：１（体積比）ＩＰＡ／ＣＨ２Ｃｌ２の濃度で１．０ｍＬ）で溶離を行うキラルＳＦＣクロマトグラフィー（カラム：ＡＤ−Ｈ（５０×２５０ｃｍ））によって分離して、主生成物をαアノマーとして得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ２．３８（ｍ、２Ｈ）、３．６８（ｄｄ、Ｊ＝４．６、３．２、１Ｈ）、３．７６（ｄｄ、Ｊ＝１０．４、３．７、１Ｈ）、３．８３（ｍ、２Ｈ）、３．９０（ｍ、２Ｈ）、４．１０（ｍ、１Ｈ）、４．５５−４．６２（ｍ、４Ｈ）、４．６２−４．６５（ｍ、３Ｈ）、４．７５（ｄ、Ｊ＝１１．３、１Ｈ）、５．０６（ｄ、Ｊ＝４．６、１Ｈ）、５．０８（ｓ、１Ｈ）、５．８０（ｍ、１Ｈ）、７．２５（ｍ、２Ｈ）、７．３０−７．４２（ｍ、１８Ｈ）。
【０４７０】
段階Ｂ：３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル）−１−プロパノール
３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル）−１−プロペンに代えて３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル）−１−プロペンを用い、段階ＣでＭＬ−３９について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．８５−２．００（ｍ、２Ｈ）、２．５３（ｍ、１Ｈ）、２．６０（ｍ、１Ｈ）、３．６２（ｄｄ、Ｊ＝６．０、２．４、１Ｈ）、３．７３（ｄｄ、Ｊ＝１０．２、４．２、１Ｈ）、３．７８−３．８７（ｍ、３Ｈ）、３．９０（ｍ、１Ｈ）、３．９８（ｍ、１Ｈ）、４．５４−４．６２（ｍ、７Ｈ）、４．６７（ｄ、Ｊ＝１１．５、１Ｈ）、７．２５（ｍ、２Ｈ）、７．２８−７．４０（ｍ、１８Ｈ）、９．７９（ｓ、１Ｈ）。
【０４７１】
段階Ｃ：２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝［３−（α−Ｄ−マンノピラノシル）プロピル］アミノ）エチルα−Ｌ−フコピラノシド
段階Ｅで３−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）プロパノールに代えて３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル）−１−プロパノールを用い、段階Ｆで２−アミノエチル（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド）に代えて２−アミノエチル（２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシド）を用い、ＭＬ−３６について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６２３．３２３５［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．１３分。
【０４７２】
実施例４２
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−｛［３−（α−Ｌ−フコピラノシル）プロピル］［２−（α−Ｄ−マンノピラノシル）プロピル］アミノ｝ヘキサノエート（ＭＬ−４２）の合成について説明する。
【化９２】
0006491649.tif 000289
【０４７３】
段階Ｄで３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル）プロパノールに代えて３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル）−１−プロパノールを用い、ＭＬ−３９について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６２１．３３５８［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．１１分。
【０４７４】
実施例４３
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２，５−ジオキソピロリジン−１−イル３−（｛６−［（｛ビス［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝アセチル）アミノ］ヘキシル｝アミノ）−Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｄ−アラニネート（ＭＬ−４３）の合成について説明する。
【化９３】
0006491649.tif 000290
【０４７５】
段階Ａ：６−［（｛ビス［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝アセチル）アミノ］ヘキサン酸ペンタフルオロフェニル
６−［（｛ビス［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝アセチル）アミノ］ヘキサン酸（１．０ｇ、１．４６５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（７．７ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それに０℃で、ＰＦＴＵ（６２７ｍｇ、１．４６５ｍｍｏｌ）および５分後にＤＩＰＥＡ（２５６μＬ、１．４６５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を徐々に昇温させて室温とした。１６時間撹拌後、反応混合物を濃縮し、残留物をＥｔＯＡｃ  ３００ｍＬで溶離を行うシリカゲル（４０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、非極性混合物を洗い出し、次に混合溶媒（体積比ＥｔＯＡｃ／Ｈ２Ｏ／ＭｅＯＨ／ＡｃＣＮ：６／１／１／１）、＝６：１：１：１）で溶離を行って、標題生成物を得た。ＬＣ−ＭＳ方法Ａ：ｍ／ｅ＝８４９．５０［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．９４分。
【０４７６】
段階Ｂ：３−アミノ−Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニン塩酸塩
３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｄ−アラニン（１．０ｇ、２．３５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１１．７２ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それにＨＣｌ（４．０Ｍジオキサン中溶液、１１．７２ｍＬ、４６．９ｍｍｏｌ）を加えた。１６時間撹拌後、反応混合物を濃縮して標題生成物を得て、それをそれ以上精製せずに用いた。ＬＣ−ＭＳ方法Ａ：ｍ／ｅ＝３２７．１９［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．７３分。
【０４７７】
段階Ｃ：３−（｛６−［（｛ビス［２−オキソ−２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）エチル］アミノ｝アセチル）アミノ］ヘキサノイル｝アミノ）−Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニン
６−［（｛ビス［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝アセチル）アミノ］ヘキサン酸ペンタフルオロフェニル（２７０ｍｇ、０．３１８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ中溶液を撹拌しながら、それに０℃で、３−アミノ−Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニン塩酸塩（３０３ｍｇ、０．３０６ｍｍｏｌ）および５分後にＤＩＰＥＡ（１１１μＬ、０．６３６ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で２時間撹拌後、反応混合物を濃縮し、残留物を、最初にＥｔＯＡｃ  １００ｍＬで溶離し、次に０％から２０％の溶媒Ｂ／溶媒Ａ（溶媒Ａ：（体積比）ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ／ＡｃＣＮ／Ｈ２Ｏ：６／１／１／１；溶媒Ｂ（体積比）ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ／ＡｃＣＮ／Ｈ２Ｏ：２／１／１／１）で溶離を行うシリカゲル（２２ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ方法Ａ：ｍ／ｅ＝９９１．６６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．８４分。
【０４７８】
段階Ｄ：２，５−ジオキソピロリジン−１−イル３−（｛６−［（｛ビス［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝アセチル）アミノ］ヘキシル｝アミノ）−Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｄ−アラニネート
段階Ｄで６−（｛２−［（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサン酸に代えて３−（｛６−［（｛ビス［２−オキソ−２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）エチル］アミノ｝アセチル）アミノ］ヘキサノイル｝アミノ）−Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニンを用い、ＭＬ−１について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＬＣ−ＭＳ方法Ａ：ｍ／ｅ＝１０８８．９［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．９６分。
【０４７９】
実施例４４
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２，５−ジオキソピロリジン−１−イル３−（｛６−［（｛ビス［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝アセチル）アミノ］ヘキシル｝アミノ）−Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニネート（ＭＬ−４４）の合成について説明する。
【化９４】
0006491649.tif 000291
【０４８０】
段階Ｂで３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｄ−アラニンに代えて３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニンを用い、ＭＬ−４３について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＬＣ−ＭＳ方法Ａ：ｍ／ｅ＝１０８８．９［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．９６分。
【０４８１】
実施例４５
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２，２′−｛［２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−オキソエチル］イミノ｝ビス（Ｎ−｛［１−（α−Ｄ−マンノピラノシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル］メチル｝アセトアミド）（ＭＬ−４５）の合成について説明する。
【化９５】
0006491649.tif 000292
【０４８２】
段階Ａ：６−［（｛ビス［２−オキソ−２−（プロパ−２−イン−１−イルアミノ）エチル］アミノ｝アセチル）アミノ］ヘキサン酸ベンジル
２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシドに代えてプロパルギルアミンを用い、ＭＬ−１段階Ｂについて記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）δ７．３２（ｍ、５Ｈ）、５．０８（ｓ、２Ｈ）、４．０１４（ｓ、４Ｈ）、３．２９８（ｍ、４Ｈ）、３．２３（ｍ、２Ｈ）、３．２１（ｍ、２Ｈ）、２．３２（ｍ、２Ｈ）、２．２２（ｓ、２Ｈ）、１．６３（ｍ、２Ｈ）、１．５１（ｍ、２Ｈ）、１．３３（ｍ、２Ｈ）。
【０４８３】
段階Ｂ：６−［（｛ビス［２−オキソ−２−（｛［（１−（α−Ｄ−マンノピラノシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル］メチル｝アミノ）エチル］アミノ｝アセチル）アミノ］ヘキサン酸ベンジル
６−［（｛ビス［２−オキソ−２−（プロパ−２−イン−１−イルアミノ）エチル］アミノ｝アセチル）アミノ］ヘキサン酸ベンジル（５４６ｍｇ、１．１６５ｍｍｏｌ）およびα−Ｄ−マンノピラノシルアジド（５９８ｍｇ、２．９１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５．８ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それにＤＩＰＥＡ（１．０ｍＬ、５．８３ｍｍｏｌ）およびヨウ化Ｃｕ（Ｉ）（２２２ｍｇ、１．１６５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を全てのＣｕＩが溶解するまで６０℃で３０分間撹拌し、室温で１時間撹拌した。反応混合物を１０倍体積のＣＨ３ＯＨによって希釈した。沈澱した無機物を濾去した。濾液を濃縮し、残留物を０％から６０％溶媒Ｂ／溶媒Ａ（溶媒Ａ：（体積比）ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ／ＡｃＣＮ／Ｈ２Ｏ：６／１／１／１；溶媒Ｂ（体積比）ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ／ＡｃＣＮ／Ｈ２Ｏ：２／１／１／１）で溶離を行うシリカゲル（４０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ方法Ａ：ｍ／ｅ＝８７９．３１［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝０．９８分。
【０４８４】
段階Ｃ：２，２′−｛［２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−オキソエチル］イミノ｝ビス（Ｎ−｛［１−（α−Ｄ−マンノピラノシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル］メチル｝アセトアミド）
段階Ｃで６−（｛２−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサン酸ベンジルに代えて６−［（｛ビス［２−オキソ−２−（｛［１−（α−Ｄ−マンノピラノシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル］メチル｝アミノ）エチル］アミノ｝アセチル）アミノ］ヘキサン酸ベンジルを用い、ＭＬ−１について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ａ：ｍ／ｅ＝８８６．２［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．０２分。
【０４８５】
実施例４６
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２，２′−｛［２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−オキソエチル］イミノ｝ビス（Ｎ−｛２−［（β−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アセトアミド）（ＭＬ−４６）の合成について説明する。
【化９６】
0006491649.tif 000293
【０４８６】
段階Ｂで２−アミノエチルα−Ｌ−フコピラノシドに代えて２−アミノエチルβ−Ｌ−フコピラノシドを用い、ＭＬ−７について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝７８０．３６１［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．０９分。
【０４８７】
実施例４７
下記構造を有するオリゴ糖リンカー６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−Ｎ−［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−｛２−［（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−６−オキソヘキサンアミド（ＭＬ−４７）の合成について説明する。
【化９７】
0006491649.tif 000294
【０４８８】
２，２′−［（２−｛［６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキシル］アミノ｝−２−オキソエチル）イミノ］ジ酢酸に代えて２，２′−｛［６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサノイル］イミノ｝ジ酢酸を用い、ＭＬ−２９について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝１０７０．３３［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．０８分。
【０４８９】
実施例４８
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２−｛［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］［２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝−Ｎ−［２−（α−Ｄ−マンノピラノシルオキシ）エチル］アセトアミド（ＭＬ−４８）の合成について説明する。
【化９８】
0006491649.tif 000295
【０４９０】
それぞれ、段階Ｃで６−アミノ−Ｎ−（２−α−Ｌ−フコピラノシル）エチル）ヘキサンアミドに代えて２−アミノエチルα−Ｌ−フコピラノシドを用い、段階Ｄで２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシドに代えて２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシドを用い、ＭＬ−２３について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂｍ／ｅ＝７９６．３７［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．８７分。
【０４９１】
実施例４９
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２−｛［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］［２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝−Ｎ−［２−（β−Ｄ−マンノピラノシルオキシ）エチル］アセトアミド（ＭＬ−４９）の合成について説明する。
【化９９】
0006491649.tif 000296
【０４９２】
段階Ａ：ベンジル｛２−［（３，６−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）オキシ］エチル｝カーバメート
ベンジル２−（｛２−［（β−Ｄ−ガラクトピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）カーバメート（１５．５ｇ、４３．４ｍｍｏｌ、Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎ  Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  ２０１０,  ６,  ６９９）および４Åモレキュラーシーブスのトルエン（１５０ｍＬ）中溶液に、ジブチルスタンナノン（２３．４ｇ、９４ｍｍｏｌ）を加えた。５時間還流後、反応混合物をゆっくり冷却して０℃とし、それにベンゾイルクロライド（１１ｍＬ、９５ｍｍｏｌ）を滴下した。得られた混合物を徐々に昇温させて室温とした。室温で２４時間撹拌後、反応混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残留物を、０％から７５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行うシリカゲル（３３０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＴＬＣ：シリカゲル、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ：１／１、Ｒｆ＝０．３５。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ３０Ｈ３１ＮＯ１０の計算値：５６５．１９、実測ｍ／ｅ＝５６６．２１［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．８７分。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．０５−７．９５（４Ｈ、ｍ）、７．６０−７．２５（１１Ｈ、ｍ）、５．１０−５．０５（１Ｈ、ｍ）、５．０２（２Ｈ、ｓ）、４．６０−４．５５（１Ｈ、ｍ）、４．５０−４．４５（１Ｈ、ｍ）、４．４０−４．３５（１Ｈ、ｍ）、４．２０−４．１５（１Ｈ、ｍ）、４．０５−４．００（１Ｈ、ｍ）、３．９０−３．８０（２Ｈ、ｍ）、３．７５−３．７０（１Ｈ、ｍ）、３．４５−３．３０（１Ｈ、ｍ）、３．３５−３．２５（１Ｈ、ｍ）。１Ｈ−１３Ｃ単一結合相関（ＨＳＱＣ）；１Ｈ−１３Ｃ多結合相関（ＨＭＢＣ）；および１Ｈ−１Ｈ  ＮＯＥ（ＮＯＥＳＹ）  ２Ｄ  ＮＭＲ実験によって位置化学を確認した。
【０４９３】
段階Ｂ：ベンジル｛２−［（３，６−ジ−Ｏ−ベノイル（ｂｅｎｏｙｌ）−β−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝カーバメート
ベンジル｛２−［（３，６−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）オキシ］エチル｝カーバメート（１．１７ｇ、２．０６９ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２６ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それに−２０℃で、ピリジン（２．４ｍＬ、２９．７ｍｍｏｌ）を加え、５分後に無水トリフ酸（１．１ｍＬ、６．５１ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を２時間かけて−２０℃から０℃までゆっくり昇温させた。得られた混合物をＣＨ２Ｃｌ２（７５ｍＬ）で希釈し、それを冷１．０Ｍ  ＨＣｌ（１００ｍＬ）、冷飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）、冷水（１００ｍＬ）、および冷ブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、低温で濃縮した。残留物をＡｃＣＮ（２０ｍＬ）に溶かし、それに亜硝酸テトラブチルアンモニウム（３．０ｇ、１０．４０ｍｍｏｌ）のＡｃＣＮ（６ｍＬ）中溶液を加えた。５０℃で６時間撹拌後、反応混合物を濃縮し、残留物を０％から７５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行うシリカゲル（３３０ｇ）でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＴＬＣ：シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル：１／１、Ｒｆ＝０．３３。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ３０Ｈ３１ＮＯ１０の計算値：５６５．１９、実測ｍ／ｅ＝５６６．２２［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．８４分。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．１０−８．００（４Ｈ、ｍ）、７．５５−７．２５（１１Ｈ、ｍ）、５．０５−５．００（３Ｈ、ｍ）、４．７２−４．６８（１Ｈ、ｍ）、４．６４−４．５８（２Ｈ、ｍ）、４．２４−４．２０（１Ｈ、ｍ）、４．１７−４．１２（１Ｈ、ｍ）、３．９３−３．８７（１Ｈ、ｍ）、３．７７−３．７２（１Ｈ、ｍ）、３．６５−３．６０（１Ｈ、ｍ）、３．４６−３．３４（２Ｈ、ｍ）。１Ｈ−１３Ｃ単一結合相関（ＨＳＱＣ）；１Ｈ−１３Ｃ多結合相関（ＨＭＢＣ）；および１Ｈ−１Ｈ  ＮＯＥ（ＮＯＥＳＹ）  ２Ｄ  ＮＭＲ実験によって立体化学を確認した。
【０４９４】
段階Ｃ：ベンジル［２−（β−Ｄ−マンノピラノシルオキシ）エチル］カーバメート
ベンジル｛２−［（３，６−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝カーバメート（２８７ｍｇ、０．５０７ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＯＨ（５ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それにＮａＯＣＨ（０．１ｍＬ、０．０５ｍｍｏｌ、０．５Ｍ  ＣＨ３ＯＨ中溶液）を加えた。４時間後、アンバーライト（アンバーライト（ａｍｂｅｒｌｉｔｅ））  ＩＲ１２０（Ｈ）イオン交換樹脂（ＣＨ３ＯＨ５ｍＬで３回予洗）を、撹拌した反応混合物に加えた。１５分後、樹脂を濾去し、ＣＨ３ＯＨで洗浄した（５ｍＬで３回）。濾液を濃縮し、残留物を、５％から６０％ＡｃＣＮ／Ｈ２Ｏで溶離を行うＣ１８逆相シリカゲル（５０ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ１６Ｈ２３ＮＯ８の計算値：３５７．１４、実測ｍ／ｅ＝３５８．１６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．４０分。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ７．３５−７．２４（５Ｈ、ｍ）、５．０４（２Ｈ、ｓ）、４．５０−４．４８（１Ｈ、ｍ）、３．９０−３．８２（３Ｈ、ｍ）、３．７４−３．６０（２Ｈ、ｍ）、３．５５−３．５０（１Ｈ、ｍ）、３．４２−３．３７（１Ｈ、ｍ）、３．３６−３．３０（２Ｈ、ｍ）、３．１８−３．１２（１Ｈ、ｍ）。
【０４９５】
段階Ｄ：２−アミノエチルβ−Ｄ−マンノピラノシド
ベンジル［２−（β−Ｄ−マンノピラノシルオキシ）エチル］カーバメート（１３３ｍｇ、０．３７２ｍｍｏｌ）、およびＰｄ／Ｃ（２０ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）の水（５ｍＬ）中混合物をＨ２風船下に室温で４時間撹拌した。触媒を濾去し、Ｈ２Ｏで洗浄した（５ｍＬで３回）。濾液を濃縮して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ４．５３−４．５２（１Ｈ、ｍ）、３．９３−３．８５（３Ｈ、ｍ）、３．７２−３．６４（２Ｈ、ｍ）、３．５３−３．４９（１Ｈ、ｍ）、３．４４−３．４２（１Ｈ、ｍ）、３．２２−３．１８（１Ｈ、ｍ）、２．９２−２．８５（２Ｈ、ｍ）。
【０４９６】
段階Ｅ：２−｛［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］［２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝−Ｎ−［２−（β−Ｄ−マンノピラノシルオキシ）エチル］アセトアミド
２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシドに代えて２−アミノエチルβ−Ｄ−マンノピラノシドを用い、ＭＬ−４８について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝７９６．３７［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．１９分。
【０４９７】
実施例５０
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２−｛［２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−オキソエチル］［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝−Ｎ−（２−｛１［α−Ｄ−マンノピラノシル］，４［α−Ｄ−マンノピラノシル］−オキシ｝ブチル）アセトアミド（ＭＬ−５０）の合成について説明する。
【化１００】
0006491649.tif 000297
【０４９８】
段階Ａ：ベンジル（１［２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル］，４［２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル］−ジヒドロキシブタン−２−イル）カーバメート
４Åモレキュラーシーブスの入った５００ｍＬ丸底フラスコに、（Ｓ）−ベンジル（１，４−ジヒドロキシブタン−２−イル）カーバメート（２．７ｇ、１１．２８ｍｍｏｌ）、および２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−マンノピラノシルトリクロロアセトイミデート（１７．３５ｇ、２３．４２ｍｍｏｌ、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｌｅｔｔｅｒｓ,  ２００３，  ｖｏｌ．５，  Ｎｏ．２２，  ４０４１に従って製造）の脱水ジクロロメタン（２００ｍＬ）中溶液を加えた。混合物を冷却して−３０℃とし、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（０．４ｍＬ、２．２１４ｍｍｏｌ）を加えた。窒素下に−３０℃から環境温度で４時間撹拌後、反応混合物をＴＥＡ（３．１５ｍＬ、２２．５７ｍｍｏｌ）で反応停止し、濾過し、減圧下に濃縮した。残留物をシリカクロマトグラフィー（０％から６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、標題化合物を得た。（ＴＬＣ：シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル：３／２、生成物Ｒｆ＝０．４）。１Ｈ  ＮＭＲ（クロロホルム−ｄ、５００ＭＨｚ）：δ８．１５−８．１０（４Ｈ、ｍ）、８．１０−８．０５（４Ｈ、ｍ）、８．００−７．９５（４Ｈ、ｍ）、７．８０−７．７５（４Ｈ、ｍ）、７．６５−７．５５（４Ｈ、ｍ）、７．４５−７．２０（１５Ｈ、ｍ）、６．１５−６．１０（２Ｈ、ｍ）、５．９５−５．８５（２Ｈ、ｍ）、５．８０−５．７５（２Ｈ、ｍ）、５．１５−５．１０（４Ｈ、ｍ）、４．７５−４．６５（２Ｈ、ｍ）、４．５５−４．４０（４Ｈ、ｍ）、４．２５−４．２０（１Ｈ、ｍ）、４．１０−４．００（２Ｈ、ｍ）、３．７５−３．６５（２Ｈ、ｍ）、２．１５−２．０５（２Ｈ、ｍ）。
【０４９９】
段階Ｂ：ベンジル（１［α−Ｄ−マンノピラノシル］，４［α−Ｄ−マンノピラノシル］−ジヒドロキシブタン−２−イル）カーバメート
ベンジル（１［２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル］，４［２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル］−ジヒドロキシブタン−２−イル）カーバメート（９．７２ｇ、６．９６ｍｍｏｌ）のメタノール（３０ｍＬ）中溶液に、０．５Ｍナトリウムメトキシドのメタノール中溶液（１．５ｍＬ、０．７５０ｍｍｏｌ）を加えた。室温で４８時間撹拌後、アンバーライト（ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）  ＩＲ  １２０（Ｈ）イオン交換樹脂（メタノール３０ｍＬで３回予洗）を反応混合物に加え、さらに１５分間撹拌した。イオン交換樹脂を濾去し、メタノールで洗浄した（５ｍＬで２回）。濾液を濃縮し、残留物を、５％ＣＨ３ＣＮ／水（３カラム体積）と次に５％から５０％ＣＨ３ＣＮ／水（２０カラム体積）で溶離を行うＣ１８カラム逆相８６ｇで精製して、標題化合物を白色固体として得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：Ｃ２４Ｈ３７ＮＯ１４の計算値：５６３．２２、実測ｍ／ｅ：５６４．２４（Ｍ＋Ｈ）＋（Ｒｔ：２．３１／５．００分）。
【０５００】
段階Ｃ：１（α−Ｄ−マンノピラノシル），４（α−Ｄ−マンノピラノシル）−ジヒドロキシブタン−２−アミン
ベンジル（１［α−Ｄ−マンノピラノシル］，４［α−Ｄ−マンノピラノシル］−ジヒドロキシブタン−２−イル）カーバメート（３．７３ｇ、６．６２ｍｍｏｌ）、およびＰｄ／Ｃ（０．３００ｇ、０．２８２ｍｍｏｌ）の水（６０ｍＬ）中混合物をＨ２風船下に室温で２時間撹拌した。触媒を濾去し、Ｈ２Ｏで洗浄した（１０ｍＬで３回）。濾液を濃縮して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：Ｃ１６Ｈ３１ＮＯ１２の計算値：４２９．１８、実測ｍ／ｅ：４３０．２１（Ｍ＋Ｈ）＋（Ｒｔ：１．３７／５．００分）。
【０５０１】
段階Ｄ：２−｛［２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−オキソエチル］［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝−Ｎ−（２−｛１−［α−Ｄ−マンノピラノシル］４［−α−Ｄ−マンノピラノシル］−オキシ｝ブチル）アセトアミド
２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシドに代えて１（α−Ｄ−マンノピラノシル），４（α−Ｄ−マンノピラノシル）−ジヒドロキシブタン−２−アミンを用い、ＭＬ−２９について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ４０Ｈ６２Ｎ５Ｏ２４の計算値：１００１．４２、実測ｍ／ｅ：１００２．４８［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．０５分。
【０５０２】
実施例５１
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２−｛［２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−オキソエチル］［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝−Ｎ−（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−β−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アセトアミド（ＭＬ−５１）の合成について説明する。
【化１０１】
0006491649.tif 000298
【０５０３】
段階Ａ：（２−（（３，６−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）オキシ）クロロエチル）
４Åモレキュラーシーブスの入った５００ｍＬ丸底フラスコに、２−クロロエチル−３−Ｄ−ガラクトピラノシド（６．５８ｇ、２７．１ｍｍｏｌ、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．  Ｒｅｓ．  １９９２，  ２２３，  ３０３に従って製造）、ジブチルスタンナノン（１４．５ｇ、５８．２ｍｍｏｌ）および脱水トルエン（１５０ｍＬ）を加えた。混合物を３時間還流攪拌した。３時間後、反応混合物を冷却して室温とし、次に０℃とした。粗反応溶液を０℃で冷却しながら、それにベンゾイルクロライド（６．７ｍＬ、５７．７ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を０℃から環境温度で撹拌した。２４時間後、反応混合物を濾去し、濾液を減圧下に濃縮した。残留物を、シリカクロマトグラフィー（０％から７５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：Ｃ２２Ｈ２３ＣｌＯ８の計算値：４５０．１１実測、ｍ／ｅ：４７３．１１（Ｍ＋Ｎａ）＋（Ｒｔ：１．８２／５．００分）。１Ｈ  ＮＭＲ（クロロホルム−ｄ、５００ＭＨｚ）：δ８．１０−８．０５（２Ｈ、ｍ）、８．０５−８．００（２Ｈ、ｍ）、７．６０−７．５５（２Ｈ、ｍ）、７．５０−７．４０（４Ｈ、ｍ）、５．２０−５．１０（１Ｈ、ｍ）、４．７０−４．６０（１Ｈ、ｍ）、４．５５−４．５０（１Ｈ、ｍ）、４．５０−４．４５（１Ｈ、ｍ）、４．２５−４．２０（１Ｈ、ｍ）、４．２０−４．１５（１Ｈ、ｍ）、４．１２−４．０８（１Ｈ、ｍ）、４．００−３．９５（１Ｈ、ｍ）、３．９０−３．８５（１Ｈ、ｍ）、３．７２−３．６８（２Ｈ、ｍ）。１Ｈ−１３Ｃ単一結合相関（ＨＳＱＣ）；１Ｈ−１３Ｃ多結合相関（ＨＭＢＣ）；および１Ｈ−１Ｈ  ＮＯＥ（ＮＯＥＳＹ）  ２Ｄ  ＮＭＲ実験によって位置化学を確認した。
【０５０４】
段階Ｂ：（２−（（３，６−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ）クロロエチル）
（２−（（３，６−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）オキシ）クロロエチル）（１ｇ、２．２１８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２８ｍＬ）中溶液に−２０℃で、ピリジン（２．５ｍＬ、３０．９ｍｍｏｌ）を加えた。５分間撹拌後、無水トリフ酸（１．２ｍＬ、７．１０ｍｍｏｌ）を滴下し、混合物を撹拌しながら、２時間かけて−２０℃から０℃まで昇温させた。得られた混合物をＤＣＭ  ７５ｍＬで希釈し、冷１Ｍ  ＨＣｌ（１００ｍＬで１回）；冷ＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍＬで１回）；冷水（１００ｍＬで１回）および冷ブライン１００ｍＬで洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、低温で減圧下に濃縮した。残留物を、それ以上精製せずに次の段階で直接用いた。亜硝酸テトラブチルアンモニウム（３．３ｇ、１１．４４ｍｍｏｌ）の脱水アセトニトリル（５ｍＬ）中溶液を、トリフ化中間体の脱水アセトニトリル（２２ｍＬ）中溶液に加え、５０℃で５時間反応させた。得られた混合物を減圧下に濃縮し、シリカクロマトグラフィー（０％から７５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって直接精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：Ｃ２２Ｈ２３ＣｌＯ８の計算値：４５０．１１、実測ｍ／ｅ：４５１．１３（Ｍ＋Ｈ）＋（Ｒｔ：１．８０／５．００分）。１Ｈ  ＮＭＲ（クロロホルム−ｄ、５００ＭＨｚ）：δ８．１５−８．０５（４Ｈ、ｍ）、７．６５−７．６０（２Ｈ、ｍ）、７．５０−７．４０（４Ｈ、ｍ）、５．１２−５．０８（１Ｈ、ｍ）、４．７７−４．７２（２Ｈ、ｍ）、４．６８−４．６５（１Ｈ、ｍ）、４．３４−４．３２（１Ｈ、ｍ）、４．２４−４．１４（２Ｈ、ｍ）、３．９０−３．８４（１Ｈ、ｍ）、３．７１−３．６６（３Ｈ、ｍ）、２．９８−２．９６（１Ｈ、ｂ）、２．４１−２．３９（１Ｈ、ｂ）。１Ｈ−１３Ｃ単一結合相関（ＨＳＱＣ）；１Ｈ−１３Ｃ多結合相関（ＨＭＢＣ）；および１Ｈ−１Ｈ  ＮＯＥ（ＮＯＥＳＹ）  ２Ｄ  ＮＭＲ実験によって立体化学を確認した。
【０５０５】
段階Ｃ：（２−（（２，４−Ｏ−ベンジル，３，６−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ）クロロエチル）
２５０ｍＬ丸底フラスコ中、２−（ベンジルオキシ）−１−メチルピリジン−１−イウム・トリフルオロメタンスルホネート（５ｇ、１４．３１ｍｍｏｌ）、酸化マグネシウム（０．０８５ｇ、２．１１８ｍｍｏｌ）、トリフルオロトルエン（４０ｍＬ）、および（２（（３，６−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ）クロロエチル）（１．９１ｇ、４．２４ｍｍｏｌ）を加えた。得られた不均一反応混合物を８２℃で４８時間撹拌した。反応完了したら、反応混合物を濾過し、減圧下に濃縮した。残留物を、シリカクロマトグラフィー（０％から７５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：Ｃ３６Ｈ３５ＣｌＯ８の計算値：６３０．２０、実測ｍ／ｅ：６３１．２１（Ｍ＋Ｈ）＋（Ｒｔ：３．９７／５．００分）。
【０５０６】
段階Ｄ：（２−（（２，４−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ）クロロエチル）
（２−（（２，４−Ｏ−ベンジル，３，６−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ）クロロエチル）、（１．６ｇ、２．５４ｍｍｏｌ）のメタノール（２５ｍＬ）およびＤＣＭ（５ｍＬ）中溶液に、０．５Ｍナトリウムメトキシドのメタノール中溶液（０．５ｍＬ、０．２５ｍｍｏｌ）を加えた。室温で４時間撹拌後、アンバーライト（ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）  ＩＲ  １２０（Ｈ）イオン交換樹脂（メタノール５ｍＬで３回予洗）を反応混合物に加え、さらに１５分間撹拌した。イオン交換樹脂を濾去し、メタノールで洗浄した（５ｍＬで３回）。濾液を減圧下に濃縮し、残留物をシリカクロマトグラフィー（０％から７５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：Ｃ２２Ｈ２７ＣｌＯ６の計算値：４２２．１５、実測ｍ／ｅ：４２３．１４（Ｍ＋Ｈ）＋（Ｒｔ：１．９０／５．００分）。
【０５０７】
段階Ｅ：（２−（（２，４−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ）アジドエチル）
（２−（（２，４−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ）クロロエチル）（８００ｍｇ、１．８９２ｍｍｏｌ）の脱水ＤＭＦ（２５ｍＬ）中溶液に、アジ化ナトリウム（１４０ｍｇ、２．１５４ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応混合物を加熱して７０℃とし、窒素下に１６時間撹拌した。反応完了したら、粗反応混合物を冷却して室温とし、氷水（２００ｍＬ）に投入し、エーテルで抽出した（１００ｍＬで３回）。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し（１００ｍＬで２回）、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下に濃縮した。残留物をシリカクロマトグラフィー（０％から１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：Ｃ２２Ｈ２７Ｎ３Ｏ６の計算値：４２９．１９、実測ｍ／ｅ：４３０．１９（Ｍ＋Ｈ）＋（Ｒｔ：１．８７／５．００分）。
【０５０８】
段階Ｆ：（２−（（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−（２，４−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ）アジドエチル）
４Åモレキュラーシーブスの入った２５０ｍＬ丸底フラスコに、（２−（（２，４−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ）アジドエチル）（７１０ｍｇ、１．６５３ｍｍｏｌ）および２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−マンノピラノシルトリクロロアセトイミデート（２．６ｇ、３．５１ｍｍｏｌ、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、２００３，  ｖｏｌ．  ５，  Ｎｏ．２２，  ４０４１に従って製造）の脱水ジクロロメタン（３０ｍＬ）中溶液を加えた。混合物を冷却して−３０℃とし、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（０．０３ｍＬ、０．１６６ｍｍｏｌ）を加えた。窒素下に−３０℃から環境温度で４時間撹拌後、反応混合物をＴＥＡ（０．１ｍＬ、０．７１７ｍｍｏｌ）で反応停止し、濾過し、減圧下に濃縮した。残留物を、シリカクロマトグラフィー（０％から７５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、標題化合物を得た。（ＴＬＣ：シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル：３／２、生成物Ｒｆ＝０．６）。１Ｈ  ＮＭＲ（クロロホルム−ｄ、５００ＭＨｚ）：δ８．１５−７．８０（１６Ｈ、ｍ）、７．６２−７．４９（８Ｈ、ｍ）、７．４７−７．３２（２０Ｈ、ｍ）、７．３０−７．１５（６Ｈ、ｍ）、６．１３−６．０５（２Ｈ、ｍ）、６．０１−５．９１（２Ｈ、ｍ）、５．８７−５．８５（１Ｈ、ｍ）、５．７１−５．６９（１Ｈ、ｍ）、５．４３−５．４２（１Ｈ、ｍ）、５．２６−５．２３（１Ｈ、ｍ）、５．１３−５．１２（１Ｈ、ｍ）、５．０３−５．００（１Ｈ、ｍ）、４．８４−４．８１（１Ｈ、ｍ）、４．６８−４．６３（２Ｈ、ｍ）、４．６０−４．５５（２Ｈ、ｍ）、４．５４−４．４８（２Ｈ、ｍ）、４．３１−４．２５（２Ｈ、ｍ）、４．２０−４．１５（１Ｈ、ｍ）、４．０８−４．０７（１Ｈ、ｍ）、３．９８−３．８８（３Ｈ、ｍ）、３．８４−３．８０（１Ｈ、ｍ）、３．７８−３．７３（１Ｈ、ｍ）、３．６２−３．５４（２Ｈ、ｍ）、３．３８−３．３３（１Ｈ、ｍ）。
【０５０９】
段階Ｇ：（２−（（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−（２，４−Ｏ−ベンジル、β−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ）アジドエチル）
２−（（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−（２，４−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ）アジドエチル（２．５２ｇ、１．５８８ｍｍｏｌ）のメタノール（２０ｍＬ）およびＤＣＭ（４ｍＬ）中溶液に、０．５Ｍナトリウムメトキシドのメタノール中溶液（０．３２ｍＬ、０．１６ｍｍｏｌ）を加えた。室温で２４時間撹拌後、アンバーライト（ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）  ＩＲ  １２０（Ｈ）イオン交換樹脂（メタノール３０ｍＬで３回予洗）を反応混合物に加え、撹拌をさらに１５分間行った。イオン交換樹脂を濾去し、メタノールで洗浄した（５ｍＬで３回）。濾液を減圧下に濃縮し、残留物を逆相クロマトグラフィー（Ｃ１８カラム）（ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ（調節剤なし））によって精製して、標題生成物を得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：Ｃ３４Ｈ４２Ｎ３Ｏ１６の計算値：７５３．３０、実測ｍ／ｅ：７５４．２９（Ｍ＋Ｈ）＋（Ｒｔ：２．９３／５．００分）。
【０５１０】
段階Ｈ：２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−β−Ｄ−マンノピラノシド
２−（（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−（２，４−Ｏ−ベンジル、１３−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ）アジドエチル（１．０５ｇ、１．３９３ｍｍｏｌ）、およびＰｄ／Ｃ（０．１４８ｇ、０．１３９ｍｍｏｌ）の水（２５ｍＬ）中混合物をＨ２風船下に室温で１６時間撹拌した。触媒を濾去し、Ｈ２Ｏで洗浄した（５ｍＬで３回）。濾液を減圧下に濃縮して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：Ｃ２０Ｈ３２ＮＯ１６の計算値：５４７．２１、実測ｍ／ｅ：５４８．２３（Ｍ＋Ｈ）＋（Ｒｔ：１．０７／５．００分）。１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ、５００ＭＨｚ）：δ５．０６−５．０５（１Ｈ、ｍ）、４．８６−４．８５（１Ｈ、ｍ）、４．６５５−４．６５（１Ｈ、ｍ）、４．１３−４．１２（１Ｈ、ｍ）、４．０２−４．０１（１Ｈ、ｍ）、３．９５−３．８２（６Ｈ、ｍ）、３．８０−３．６７（８Ｈ、ｍ）、３．６６−３．５７（３Ｈ、ｍ）、３．５３−３．４９（１Ｈ、ｍ）、２．９０−２．８５（２Ｈ、ｍ）。
【０５１１】
段階Ｉ：２−｛［２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−オキソエチル］［２−（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−２−オキソエチル］アミノ｝−Ｎ−（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−β−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝エチル）アセトアミド
２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシドに代えて２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−β−Ｄ−マンノピラノシドを用い、ＭＬ−２９について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ４４Ｈ７３Ｎ５Ｏ２８の計算値：１１１９．４４、実測ｍ／ｅ：１１２０．４６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．０９分。
【０５１２】
実施例５２
下記構造を有するオリゴ糖リンカー６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−Ｎ−｛２−［（β−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝−６−オキソヘキサンアミド（ＭＬ−５２）の合成について説明する。
【化１０２】
0006491649.tif 000299
【０５１３】
段階Ｂで２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシドに代えて２−アミノエチルβ−Ｄ−マンノピラノシドを用い、ＭＬ−１について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ−ＭＳ：Ｃ１８Ｈ２８Ｎ２Ｏ１１の計算値：４４８．１７、実測ｍ／ｅ：４４９．１９（Ｍ＋Ｈ）＋（Ｒｔ：１．９６／５．００分）。
【０５１４】
実施例５３
下記構造を有するオリゴ糖リンカー４−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−Ｎ−｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝４−オキソブタンアミド（ＭＬ−５３）の合成について説明する。
【化１０３】
0006491649.tif 000300
【０５１５】
段階Ａで６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサン酸に代えて４−（ベンジルオキシ）−４−オキソブタン酸を用い、ＭＬ−４について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ−ＭＳ：Ｃ１６Ｈ２４Ｎ２Ｏ１０の計算値：４０４．１４、実測ｍ／ｅ：４０５．１４（Ｍ＋Ｈ）＋（Ｒｔ：１．８７／５．００分）。
【０５１６】
実施例５４
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２，２′−｛［２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−オキソエチル］イミノ｝ビス［Ｎ−（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−β−Ｄ−グルコピラノシル］オキシ｝エチル）アセトアミド］（ＭＬ−５４）の合成について説明する。
【化１０４】
0006491649.tif 000301
【０５１７】
段階Ｂで２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシドに代えて２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−β−Ｄ−グルコピラノシドを用い、ＭＬ−１５について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ５６Ｈ９３Ｎ５Ｏ３９の計算値：１４５９．５４、実測ｍ／ｅ：ｍ／ｅ＝１４６０．６２［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝０．９２分。
【０５１８】
実施例５５
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２−（２−｛（［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ）エチル｝｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）エチルα−Ｌ−フコピラノシド（ＭＬ−５５）の合成について説明する。
【化１０５】
0006491649.tif 000302
【０５１９】
段階Ａ：２−アミノエチル２，３，４，６−ペンタ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［２，３，４，６−ペンタ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−２，４−ジベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシド
２−アジドエチル２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［２，３，４，６−Ｏ−ペンタ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシド（２５ｇ、１５．５ｍｍｏｌ、ＷＯ２０１０／０８８２９４Ａ１）のＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）中溶液に窒素を流し、それに１０％パラジウム／炭素（１．６５ｇ）を加え、得られた混合物を室温で水素風船下に終夜撹拌した。混合物をセライトで濾過し、濾液を溶媒留去し、残留物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ：３３０ｇ）溶離液：勾配８カラム体積かけて２％から５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、標題化合物（１８ｇ、７３％）をオフホワイト泡状物として得た。ＵＰＬＣ方法Ｃ：Ｃ９０Ｈ７７ＮＯ２６の計算値：１５８７．４７、実測ｍ／ｅ：１５８８．６６３６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝４．１７分。
【０５２０】
段階Ｂ：６−（２−｛２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６］−２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル］−２−オキシエチル｝アミノ）ヘキサン酸ベンジル
２−アミノエチル２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシド（１８ｇ、１１．３５ｍｍｏｌ）および６−オキソヘキサン酸ベンジル（１ｇ、４．５４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１５０ｍＬ）中溶液に、酢酸（０．２６ｍＬ、４．５４ｍｍｏｌ）および水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム（２．４１ｇ、１１．３５ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温で終夜撹拌した。混合物を溶媒留去し、残留物をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）に溶解させ、飽和ＮａＨＣＯ３（３００ｍＬで２回）、飽和ＮａＣｌ（２００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ：２×３３０ｇ）溶離液：勾配８倍カラム体積かけて２％から５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、標題化合物（４．８ｇ、５９％）を白色泡状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．３３（２Ｈ、ｍ）、８．１８（２Ｈ、ｍ）、８．１３（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．０および１．４Ｈｚ）、８．１０（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．０および１．４Ｈｚ）、８．０６（２Ｈ、ｍ）、８．０５（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ４．８および１．６Ｈｚ）、７．８４（４Ｈ、ｍ）、７．７８（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．０および１．４Ｈｚ）、７．７４（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．０および１．４Ｈｚ）、７．６７−７．４８（８Ｈ、ｍ）、７．４７−７．３０（２３Ｈ、ｍ）、７．２５（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）、６．１４（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝１０．１Ｈｚ）、６．１０（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝１０．０Ｈｚ）、６．０３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．１および３．３Ｈｚ）、５．９３（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝１０．０Ｈｚ）、５．８０（２Ｈ、ｍ）、５．７５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．１および３．３Ｈｚ）、５．４２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．９Ｈｚ）、５．３８（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝３．３および１．９Ｈｚ）、５．２０（１Ｈ、ｓ）、５．１８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ）、５．１１（２Ｈ、ｓ）、４．６９（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝９．７および３．５Ｈｚ）、４．６７（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１２．４および２．６Ｈｚ）、４．６２（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１２．２および２．４Ｈｚ）、４．５７（１Ｈ、ｍ）、４．４８（１Ｈ、ｄｔ、Ｊ＝１０．１および２．８Ｈｚ）、４．４２−４．３１（３Ｈ、ｍ）、４．２２（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．８および６．３Ｈｚ）、４．０９（１Ｈ、ｄｔ、Ｊ＝１０．０および５．４Ｈｚ）、３．８３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０．６Ｈｚ）、３．７８（１Ｈ、ｍ）、３．０２（２Ｈ、ｍ）、２．７３（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ）、２．３７（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、１．７１（２Ｈ、ｍ）、１．５９（２Ｈ、ｍ）、１．４０（２Ｈ、ｍ）。
【０５２１】
段階Ｃ：２−オキソエチル２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシド
プロパ−２−エン−１−イル２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシド（１．３４ｇ、４．０６ｍｍｏｌ）のアセトン（３０ｍＬ）および水（７．５ｍＬ）中溶液に、４−メチルモルホリン４−オキサイド（９５０ｍｇ、８．１１ｍｍｏｌ）を加え、次に２．５％ＯｓＯ４のｔｅｒｔ−ブタノール中溶液（２．０４ｍＬ、０．１６２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。得られた混合物に、ＮａＩＯ４（１．７４ｇ、８．１１ｍｍｏｌ）の水（１５ｍＬ）中溶液を加えた。さらに４時間撹拌後、沈澱を濾過し、アセトン（５０ｍＬ）で洗浄した。濾液の体積を初期体積の約１／３まで減量し、次に飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）で希釈した。混合物をＥｔＯＡｃで抽出した（５０ｍＬで３回）。有機相を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物を０％から８０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行うシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ：１２０ｇ）によって精製して、標題化合物を得た（６６０ｍｇ、４９％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ９．７２（１Ｈ、ｓ）、５．４４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．９および３．３Ｈｚ）、５．３５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝３．４および１．８Ｈｚ）、５．１９（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．９および３．８Ｈｚ）、５．１３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．８Ｈｚ）、４．２６（３Ｈ、ｍ）、２．１９（３Ｈ、ｓ）、２．１５（３Ｈ、ｓ）、２．０２（３Ｈ、ｓ）、１．１７（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ）。
【０５２２】
段階Ｄ：６−｛［｛２−（２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）−オキシ｝エチル］（２−｛（２−｛２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル］−オキシ｝エチル）アミノ｝ヘキサン酸ベンジル
６−（２−｛２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル］−２−オキシエチル｝アミノ）ヘキサン酸ベンジル（１．３ｇ、０．７２５ｍｍｏｌ）および２−オキソエチル２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシド（６５１ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）中溶液に、酢酸（０．０４２ｍＬ、０．７２５ｍｍｏｌ）および水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム（３０７ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温で終夜撹拌した。混合物を溶媒留去し、残留物をＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）と飽和ＮａＨＣＯ３（８０ｍＬ）との間で分配し；有機層を追加の飽和ＮａＨＣＯ３（８０ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去した。残留物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ：８０ｇ）溶離液：勾配１０倍カラム体積かけての２０％から１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、標題化合物（１．５ｇ、９９％）を白色泡状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．３４（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝６．７および３．２Ｈｚ）、８．１５（２Ｈ、ｍ）、８．１０（４Ｈ、ｍ）、８．０７（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．０および１．４Ｈｚ）、８．０５（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ８．１および１．５Ｈｚ）、７．８８（４Ｈ、ｍ）、７．７８（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．０および１．４Ｈｚ）、７．７２（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．８および１．５Ｈｚ）、７．６２−７．５５（６Ｈ、ｍ）、７．５４−７．３６（１４Ｈ、ｍ）、７．３４−７．２９（１１Ｈ、ｍ）、７．２５（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．７Ｈｚ）、６．１４（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝１０．０Ｈｚ）、６．０７（１Ｈ、ｍ）、６．０３（２Ｈ、ｍ）、５．８３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝３．３および１．８Ｈｚ）、５．７５（２Ｈ、ｍ）、５．４１（１Ｈ、ｍ）、５．３９（２Ｈ、ｍ）、５．３５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．８Ｈｚ）、５．３３（２Ｈ、ｍ）、５．５９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．７Ｈｚ）、５．１８（３Ｈ、ｍ）、５．１６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．８Ｈｚ）、５．１３（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝４．２Ｈｚ）、５．１０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．７Ｈｚ）、５．０６（２Ｈ、ｓ）、４．６２（２Ｈ、ｍ）、４．５４（１Ｈ、ｍ）、４．５０（２Ｈ、ｍ）、４．５７（１Ｈ、ｍ）、４．３３（３Ｈ、ｍ）、４．２５（２Ｈ、ｍ）、４．１９（２Ｈ、ｍ）、３．８０（２Ｈ、ｍ）、２．８２（２Ｈ、ｍ）、２．６０（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ）、２．３２（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ）、２．２０（３Ｈ、ｓ）２．１１（３Ｈ、ｓ）２．０２（３Ｈ、ｓ）、１．６３（２Ｈ、ｍ）、１．５１（１Ｈ、ｍ）１．３４（１Ｈ、ｍ）１．１８（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ）。
【０５２３】
段階Ｅ：６｛［｛２−（−α−Ｌ−フコピラノシル）−オキシ｝エチル］（２−｛（２−｛−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］−オキシ｝エチル）アミノ｝ヘキサン酸メチル
６−｛［｛２−（２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）−オキシ｝エチル］（２−｛（２−｛２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル］−オキシ｝エチル）アミノ｝ヘキサン酸ベンジル（１．５ｇ、０．７１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）およびＭｅＯＨ（１５ｍＬ）混合物中溶液に、ナトリウムメトキシド（０．５Ｍ  ＭｅＯＨ中溶液０．２８４ｍＬ、０．１４２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で４日間撹拌した。混合物を溶媒留去して体積を約４ｍＬとし、撹拌アセトニトリル（８０ｍＬ）に滴下して、白色沈澱を得た。混合物を２０分間にわたり３５００ｒｐｍで遠心し、上清を傾斜法で除去し、固体をアセトニトリル（８０ｍＬ）に再懸濁させ、さらに２０分間３５００ｒｐｍで遠心し、上清を傾斜法によって除去し、固体を乾燥窒素気流下に乾燥させて、標題化合物（５８０ｍｇ、９４％）を白色固体として得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ３５Ｈ６３ＮＯ２３の計算値：８６５．３８、実測ｍ／ｅ：８６６．４８［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．７１分。
【０５２４】
段階Ｆ：６−｛［｛２−（−α−Ｌ−フコピラノシル）−オキシ｝エチル］（２−｛（２−｛−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］−オキシ｝エチル）アミノ｝ヘキサン酸
６−｛［｛２−（−α−Ｌ−フコピラノシル）−オキシ｝エチル］（２−｛（２−｛−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］−オキシ｝エチル）アミノ｝ヘキサン酸メチル（５８０ｍｇ、０．６７ｍＬ）の水（３ｍＬ）中溶液に、５Ｎ  ＮａＯＨ（０．１６１ｍＬ、０．８０４ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温で６時間撹拌した。酢酸（０．０３９ｍＬ、０．６８３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を凍結乾燥して、標題化合物を得た（６２０ｍｇ、１００％）。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ３４Ｈ６１ＮＯ２３の計算値：８５１．３６、実測ｍ／ｅ：８５２．４８［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．７４分。
【０５２５】
段階Ｇ：２−（２−｛（［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ）エチル｝｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）エチルα−Ｌ−フコピラノシド
６−｛［｛２−（−α−Ｌ−フコピラノシル）−オキシ｝エチル］（２−｛（２−｛−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］−オキシ｝エチル）アミノ｝ヘキサン酸（１００ｍｇ、０．１１７ｍｍｏｌ）の脱水ＤＭＦ（２ｍＬ）中懸濁液に、ヒューニッヒ塩基（０．０８２ｍＬ、０．４７ｍｍｏｌ）および１−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ）（ピロリジン−１−イル）メチレン）ピロリジン−１−イウム・ヘキサフルオロホスフェート（Ｖ）（５８ｍｇ、０．１４１ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温で３０分間撹拌した。ＴＦＡ（０．０３６ｍＬ、０．４７ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を脱水アセトニトリル（４０ｍＬ）に滴下して、白色沈澱を生成した。混合物を３５００ｒｐｍで２０分間遠心し、溶媒を傾斜法によって除去し、固体をアセトニトリル（４０ｍＬ）に再懸濁させ、３５００ｒｐｍで２０分間遠心し、溶媒を傾斜法によって除去し、固体を乾燥窒素気流下で乾燥させて、標題化合物（８４ｍｇ、７５％）を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ３８Ｈ６４Ｎ２Ｏ２５の計算値：９４８．３８、実測ｍ／ｅ：９４９．４８［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．６４分。
【０５２６】
実施例５６
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２−（２−｛（［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ）エチル｝｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）エチルβ−Ｌ−フコピラノシド（ＭＬ−５６）の合成について説明する。
【化１０６】
0006491649.tif 000303
【０５２７】
段階Ｃでプロパ−２−エン−１−イル２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシドに代えてプロパ−２−エン−１−イル２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｌ−フコピラノシドを用い、ＭＬ−５５について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝９４９．４８［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．７０分。
【０５２８】
実施例５７
下記構造を有するオリゴ糖リンカー３−（２−｛（［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ）エチル｝｛６−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−６−オキソヘキシル｝アミノ）プロピルα−Ｌ−フコピラノシド（ＭＬ−５７）の合成について説明する。
【化１０７】
0006491649.tif 000304
【０５２９】
段階Ａ：６−｛［３−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）プロピル］（２−［２−｛２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル｝−オキシ］エチル）アミノ｝ヘキサン酸ベンジル
ＭＬ−ＸＸ段階Ｄについて説明した手順に従って６−（２−｛２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル］−２−オキシエチル｝アミノ）ヘキサン酸ベンジル［ＭＬ−ＸＸ段階Ｂ］および３−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）プロパナール［ＭＬ−３６段階Ｅ］から製造した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．３５（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝６．４および２．９Ｈｚ）、８．１７（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．７Ｈｚ）、８．１０（４Ｈ、ｍ）、８．０６（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．１および１．５Ｈｚ）、８．０４（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．７および１．５Ｈｚ）、７．８９（２Ｈ、ｍ）、７．８７（２Ｈ、ｍ）、７．８０（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．９および１．４Ｈｚ）、７．７４（２Ｈ、ｍ）、７．６１（２Ｈ、ｍ）、７．５９−７．５５（４Ｈ、ｍ）、７．４９（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、７．４５−７．３５（１２Ｈ、ｍ）、７．３５−７．２７（２６Ｈ、ｍ）、７．２３（２Ｈ、ｍ）、６．１８（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝９．９Ｈｚ）、６．１１−６．０２（３Ｈ、ｍ）、５．８５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝３．３および１．８Ｈｚ）、５．７５（２Ｈ、ｍ）、５．３７（２Ｈ、ｍ）、５．１７（２Ｈ、ｍ）、５．０６（２Ｈ、ｓ）、４．７７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１２．０Ｈｚ）、４．７０（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ）、４．６７−４．６０（５Ｈ、ｍ）、４．５６（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ）、４．５５−４．４７（４Ｈ、ｍ）、４．３３（３Ｈ、ｍ）、４．１９（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１１．０および４．８Ｈｚ）、４．０１（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．５および４．７Ｈｚ）、３．８６（１Ｈ、ｍ）、３．７９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１１．２Ｈｚ）、３．７５（２Ｈ、ｍ）、３．６２（１Ｈ、ｍ）、２．７９（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ）、２．５２（４Ｈ、ｍ）、２．３２（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、１．６５（４Ｈ、ｍ）、１．４８（２Ｈ、ｍ）、１．３０（３Ｈ、ｍ）、１．２５（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ）。
【０５３０】
段階Ｂ：６−｛［３−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）プロピル］（２−［２−｛−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル｝−オキシ］エチル）アミノ｝ヘキサン酸メチル
６−｛［３−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）プロピル］（２−［２−｛２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル｝−オキシ］エチル）アミノ｝ヘキサン酸ベンジル（１．３ｇ、０．５７７ｍｍｏｌ）の脱水ＤＣＭ（５ｍＬ）および脱水ＭｅＯＨ（１５ｍＬ）混合物中溶液に、ナトリウムメトキシド（０．５Ｍ  ＭｅＯＨ中溶液１．１６ｍＬ、０．５７７ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温で３日間撹拌した。混合物を溶媒留去して約５ｍＬの体積とし、撹拌した脱水アセトニトリル（８０ｍＬ）に滴下した。混合物を３５００ｒｐｍで３０分間遠心し、溶媒を傾斜法によって除去し、固体をアセトニトリル（８０ｍＬ）に再懸濁させた。混合物を３５００ｒｐｍで３０分間遠心し、溶媒中を傾斜法によって除去し、固体を窒素気流下で風乾させて、標題化合物（６５０ｍｇ、１００％）を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ５７Ｈ８３ＮＯ２２の計算値：１１３３．５４、実測ｍ／ｅ：１１３４．６４［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．０８分。
【０５３１】
段階Ｃ：６−｛［３−（−α−Ｌ−フコピラノシル）プロピル］（２−［２−｛−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル｝−オキシ］エチル）アミノ｝ヘキサン酸メチル塩酸塩
６−｛［３−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）プロピル］（２−［２−｛−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル｝−オキシ］エチル）アミノ｝ヘキサン酸メチル（６５０ｍｇ、０．５７７ｍｍｏｌ）のメタノール（５ｍＬ）中溶液に濃ＨＣｌ（０．１４２ｍＬ、１．７３ｍｍｏｌ）を加え、窒素を流し、１０％パラジウム／炭素（６１ｍｇ）を加え、水素風船下に３時間撹拌した。０．４ミクロンシリンジ先端フィルターで濾過し、濾液を溶媒留去した。残留物を水（４ｍＬ）に溶かし、凍結乾燥して、標題化合物を得た（５３１ｍｇ、１００％）。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ３９Ｈ６６Ｎ２Ｏ２４の計算値：８６３．４０、実測ｍ／ｅ：８６４．４３［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．６４分。
【０５３２】
段階Ｄ：３−（２−｛（［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ）エチル｝｛６−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−６−オキソヘキシル｝アミノ）プロピルα−Ｌ−フコピラノシド
ＭＬ−ＸＸ段階ＦおよびＧについて説明した手順に従って、６−｛［３−（−α−Ｌ−フコピラノシル）プロピル］（２−［２−｛−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］−オキシ］エチル）アミノ｝ヘキサン酸メチル塩酸塩から製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ３９Ｈ６６Ｎ２Ｏ２４の計算値：９４６．４０、実測ｍ／ｅ：９４７．５１［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．５５分。
【０５３３】
実施例５８
下記構造を有するオリゴ糖リンカー４−（２−｛（［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ）エチル｝６−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−６−オキソヘキシル｝アミノ）ブチルα−Ｌ−フコピラノシド（ＭＬ−５８）の合成について説明する。
【化１０８】
0006491649.tif 000305
【０５３４】
段階Ａ：メタンスルホン酸３−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）プロピル
氷浴で冷却した３−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）プロパノール［ＭＬ−３６段階Ｄ］（１０．６ｇ、２２．２ｍｍｏｌ）およびヒューニッヒ塩基（４．６６ｍＬ、２６．７ｍｍｏｌ）の脱水ＤＣＭ（１００ｍＬ）中溶液に、メタンスルホニルクロライド（１．９ｍＬ、２４．５ｍｍｏｌ）を滴下した。添加完了後、混合物を氷浴温度で１時間撹拌した。混合物を水（１００ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去して標題化合物を得た（１２．６ｇ、１００％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．３７（１５Ｈ、ｍ）、４．８０（２Ｈ、ｍ）、４．６８（２Ｈ、ｍ）、４．６３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１１．８Ｈｚ）、４．５３（１Ｈ、Ｊ＝１１．８Ｈｚ）、４．２２（２Ｈ、ｍ）、４．００（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝９．８Ｈｚ）、３．９４（１Ｈ、ｍ）、２．９９（３Ｈ、ｓ）、１．８８（１Ｈ、ｍ）、１．７５（２Ｈ、ｍ）、１．６２（１Ｈ、ｍ）、１．３１（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ）。
【０５３５】
段階Ｂ：３−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）ブタンニトリル
メタンスルホン酸３−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）プロピル（３ｇ、５．４ｍｍｏｌ）の脱水ＤＭＦ（３０ｍＬ）中溶液に、アジ化ナトリウム（４２２ｍｇ、６．４９ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を６０℃で終夜加熱した。混合物を冷却し、水（１００ｍＬ）で希釈し、Ｅｔ２Ｏで抽出し（３０ｍＬで３回）；合わせたＥｔ２Ｏ層を飽和ＮａＣｌ（３０ｍＬ）で洗浄し；Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去した。残留物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ；１２０ｇ）溶離液：勾配０％から７０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、標題化合物を得た（６ｇ、７６％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．２９（１５Ｈ、ｍ）、４．８０（２Ｈ、ｍ）、４．７１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１１．８Ｈｚ）、４．６９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１１．８Ｈｚ）、４．６５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１１．８Ｈｚ）、４．５４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１１．８Ｈｚ）、３．９５（２Ｈ、ｍ）、３．７９（３Ｈ、ｍ）、２．３７（２Ｈ、ｍ）、１．８０（２Ｈ、ｍ）、１．６２（２Ｈ、ｍ）、１．３１（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ）。
【０５３６】
段階Ｃ：３−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）ブタン酸
３−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）ブタンニトリル（６ｇ、１２．３６ｍｍｏｌ）のエタノール（１００ｍＬ）中混合物を水（１００ｍＬ）および５Ｎ  ＮａＯＨ（２５ｍＬ、１２４ｍｍｏｌ）で処理し、得られた混合物を３日間加熱還流した。混合物を冷却し、エタノールを溶媒留去によって除去し、残りの水層を濃ＨＣｌを加えることで酸性とし、ＥｔＯＡｃで抽出し（１００ｍＬで３回）；合わせたＥｔＯＡｃ層を飽和ＮａＣｌ（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去して、標題化合物（５．２ｇ、８３％）を明黄色油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．４０−７．３０（１５Ｈ、ｍ）、４．７９（２Ｈ、ｍ）、４．７１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１２．０Ｈｚ）、４．６５（２Ｈ、ｍ）、４．５３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１１．８Ｈｚ）、４．０１（１Ｈ、ｍ）、３．９２（１Ｈ、ｍ）、３．８３（１Ｈ、ｍ）、３．７８（２Ｈ、ｍ）、２．３９（２Ｈ、ｍ）、１．７５（２Ｈ、ｍ）、１．５９（２Ｈ、ｍ）、１．３０（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ）。
【０５３７】
段階Ｄ：４−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）ブタン−１−オール
３−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）ブタン酸（５．２ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）の脱水ＴＨＦ（１００ｍＬ）中溶液を氷浴で冷却し、それにボラン−テトラヒドロフラン錯体（１Ｍ  ＴＨＦ中溶液１２．３ｍＬ、１２．３ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、得られた混合物を昇温させて室温とし、３日間撹拌した。混合物を、メタノール（５ｍＬ）を加えることで反応停止し、飽和ＮａＣｌ（２００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出し（１５０ｍＬで２回）；合わせたＥｔＯＡｃ層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去した。残留物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ：１２０ｇ）溶離液：勾配０％から１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、標題化合物（１．７３ｇ、３４％）を透明油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．４０−７．２８（１５Ｈ、ｍ）、４．７９（２Ｈ、ｍ）、４．７１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１２．１Ｈｚ）、４．６６（２Ｈ、ｍ）、４．５４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１１．９Ｈｚ）、３．９９（１Ｈ、ｍ）、３．９３（１Ｈ、ｍ）、３．８０（３Ｈ、ｍ）、３．６５（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ）、１．６７（２Ｈ、ｍ）、１．６０−１．４１（４Ｈ、ｍ）、１．３０（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ）。
【０５３８】
段階Ｅ：４−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）ブタナール
４−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）ブタン−１−オール（１．７３ｇ、３．５３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）中溶液に、デス−マーチン試薬（２．２４ｇ、５．２９ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温で３時間撹拌した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）で洗浄し；Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去した。残留物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ：８０ｇ）溶離液：勾配０％から８０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、標題化合物を得た（１．２４ｇ、７２％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ９．７７（１Ｈ、ｓ）、７．４０−７．２８（１５Ｈ、ｍ）、４．８０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１２．０Ｈｚ）、４．７８（１Ｈ、Ｊ＝１２．０Ｈｚ）、４．７１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１２．０Ｈｚ）、４．６６（２Ｈ、ｍ）、４．５４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１１．８Ｈｚ）、３．９８（１Ｈ、ｍ）、３．９２（１Ｈ、ｍ）、３．８３−３．７６（３Ｈ、ｍ）、２．４３（２Ｈ、ｍ）、１．８０−１．６３（２Ｈ、ｍ）、１．６２−１．４８（２Ｈ、ｍ）、１．３０（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ）。
【０５３９】
段階Ｆ：４−（２−｛（［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ）エチル｝｛６−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−６−オキソヘキシル｝アミノ）ブチルα−Ｌ−フコピラノシド
ＭＬ−５７について説明した手順に従って４−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）ブタナールから製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ４０Ｈ６８Ｎ２Ｏ２４の計算値：９６０．４２、実測ｍ／ｅ：９６１．４８［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．４６分。
【０５４０】
実施例５９
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝［３−（α−Ｌ−フコピラノシル）プロピル］アミノ）エチルα−Ｄ−マンノピラノシド（ＭＬ−５９）の合成について説明する。
【化１０９】
0006491649.tif 000306
【０５４１】
段階Ｆで２−アミノエチル３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシドに代えて２−アミノエチル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−マンノピラノシドを用い、ＭＬ−３６について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ２７Ｈ４６Ｎ２Ｏ１４の計算値：６２２．２９、実測ｍ／ｅ＝６２３．３２３１［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．１６分。
【０５４２】
実施例６０
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝［３−（α−Ｌ−フコピラノシル）プロピル］アミノ）エチルβ−Ｄ−マンノピラノシド（ＭＬ−６０）の合成について説明する。
【化１１０】
0006491649.tif 000307
【０５４３】
段階Ａ：ベンジル（２−（（４，６−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）オキシ）エチル）カーバメート
ベンジル（２−（（４，６−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）オキシ）エチル）カーバメート（９．４ｇ、２６．３ｍｍｏｌ）に、４Å粉末モレキュラーシーブス３ｇを加え、混合物を脱水トルエン（１００ｍＬ）に懸濁させた。この混合物に、酸化ジブチルスズ（ＩＶ）（１４．２１ｇ、５７．１ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を９５℃で５時間加熱した。混合物を放冷して室温とし、次に氷浴で冷却し、塩化ベンゾイル（６．６６ｍＬ、５７．３ｍｍｏｌ）を滴下した。微細白色沈澱が生成し、脱水アセトニトリル（１５ｍＬ）を加え、室温で４８時間撹拌した。混合物を溶媒留去し、残留物をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ：３３０ｇ）、溶離液：０％から５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（８カラム体積）；および５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１０カラム体積））によって精製して、標題化合物（１１．５６ｇ、７８％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．１１（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．７Ｈｚ）、８．０４（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．９および１．４Ｈｚ）、７．５８（２Ｈ、ｍ）、７．４５（４Ｈ、ｍ）、７．３６−７．２９（５Ｈ、ｍ）、５．５３（１Ｈ、ｍ）、５．１４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．１および３．３Ｈｚ）、５．０６（２Ｈ、ｓ）、４．６４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１１．５および６．３Ｈｚ）、４．５５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１１．５および６．６Ｈｚ）、４．４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．７Ｈｚ）、４．２４（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝４．２Ｈｚ）、４．０８（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、３．９３（２Ｈ、ｍ）、３．７６（１Ｈ、ｍ）、３．４８（１Ｈ、ｍ）、３．３７（１Ｈ、ｍ）、３．２８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．３Ｈｚ）、２．８０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．３Ｈｚ）。
【０５４４】
段階Ｂ：ベンジル（２−（（（（３，５−ビス（トリフルオロメチル）スルホニル）オキシ）−４，６−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）オキシ）エチル）カーバメート
ＤＣＭ（２００ｍＬ）に溶かしたベンジル（２−（（４，６−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）オキシ）エチル）カーバメート（１１．５６ｇ、２０．４４ｍｍｏｌ）溶液を冷却して−１５℃とし、それにピリジン（２１．５ｍＬ、２６６ｍｍｏｌ）を加え、次に無水トリフ酸（１０．３６ｍＬ、６１．３ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、得られた混合物を３時間かけて昇温させて０℃とした。混合物を追加のＤＣＭ（２００ｍＬ）で希釈し、氷冷１Ｎ  ＨＣｌ（５００ｍＬ）、氷冷飽和ＮａＨＣＯ３（５００ｍＬ）および氷冷飽和ＮａＣｌ（５００ｍＬ）で洗浄し；Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去して、標題化合物（１６．９ｇ、１００％）を黄色泡状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．１６（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．０および１．４Ｈｚ）、８．０４（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．１および１．４Ｈｚ）、７．６５（２Ｈ、ｍ），７．５２（２Ｈ、ｍ）、７．５０（２Ｈ、ｍ）、７．３９（４Ｈ、ｍ）、７．３３（１Ｈ、ｍ）、５．５５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．４および３．１Ｈｚ）、５．５０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．１Ｈｚ）、５．３５（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、５．１４（２Ｈ、ｓ）、５．１２（１Ｈ、ｍ）、４．７７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ）、４．７３（１Ｈ、ｍ）、４．２８（２Ｈ、ｍ）、４．０６（１Ｈ、ｍ）、３．８０（１Ｈ、ｍ）、３．５５（１Ｈ、ｍ）、３．４７（１Ｈ、ｍ）。
【０５４５】
段階Ｃ：ベンジル（２−（（３，５−ジ−Ｏ−アセチル−４，６−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ）エチル）カーバメート
ベンジル（２−（（（（３，５−ビス（トリフルオロメチル）スルホニル）オキシ）−４，６−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）オキシ）エチル）カーバメート（１６．９ｇ、２０．３７ｍｍｏｌ）の脱水トルエン（１００ｍＬ）中溶液に、酢酸テトラブチルアンモニウム（２５ｇ、８２．９ｍｍｏｌ）のトルエン（１５０ｍＬ）およびＤＭＦ（４ｍＬ）混合物中溶液を加え、得られた混合物を室温で終夜撹拌した。ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＣｌで洗浄し（１００ｍＬで２回）、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去した。残留物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ：３３０ｇ）溶離液：０％から５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１０カラム体積）と次に５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（５カラム体積））によって精製して、標題化合物を得た（８ｇ、６０．５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．１０（２Ｈ、ｍ）、７．９８（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．１および１．４Ｈｚ）、７．６１（２Ｈ、ｍ）、７．４８（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）、７．４６（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．７Ｈｚ）、７．３７（４Ｈ、ｍ）、７．３３（１Ｈ、ｍ）、５．７０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．３Ｈｚ）、５．６１（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝１０．０Ｈｚ）、５．２９（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．０および３．３Ｈｚ）、５．２６（１Ｈ、ｍ）、５．１０（２Ｈ、ｓ）、４．７９（１Ｈ、ｓ）、４．６４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１２．１および２．７Ｈｚ）、４．４７（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１２．１および５．８Ｈｚ）、３．９４（２Ｈ、ｍ）、３．７４（１Ｈ、ｍ）、３．４８（１Ｈ、ｍ）、３．３７（１Ｈ、ｍ）、２．１５（３Ｈ、ｓ）、２．００（３Ｈ、ｓ）。
【０５４６】
段階Ｄ：２−アミノエチル３，５−ジ−Ｏ−アセチル−４，６−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−マンノピラノシド
ベンジル（２−（（３，５−ジ−Ｏ−アセチル−４，６−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ）エチル）カーバメート（８ｇ、１２．３１ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）中溶液に窒素を流し、それに１０％パラジウム／炭素（１．３１ｇ）を加え、得られた混合物を水素風船下に終夜撹拌した。混合物をセライトで濾過し、濾液を溶媒留去して、標題化合物（６．３ｇ、９９％）を明黄色泡状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．１１（２Ｈ、ｍ）、７．９０（２Ｈ、ｍ）、７．６０（２Ｈ、ｍ）、７．４７（４Ｈ、ｍ）、５．７２（１Ｈ、ｄｄｄ、Ｊ＝９．２、３．２および１．１Ｈｚ）、５．５９（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝９．７Ｈｚ）、５．３３（１Ｈ、ｄｄｄ、Ｊ＝１０．１、４．８および３．３Ｈｚ）、４．８５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ１６．０および１．１Ｈｚ）、４．６５（１Ｈ、ｍ）、４．４５（１Ｈ、ｄｄｄ、Ｊ＝１２．１、５．７および２．０Ｈｚ）、３．９５（２Ｈ、ｍ）、３．７３（１Ｈ、ｍ）、３．０９（２Ｈ、ｂｓ）、２．９０（１Ｈ、ｍ）、２．１５（３Ｈ、ｓ）、１．９９（３Ｈ、ｓ）。
【０５４７】
段階Ｅ：２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝［３−（α−Ｌ−フコピラノシル）プロピル］アミノ）エチルα−Ｄ−マンノピラノシド
段階Ｆで２−アミノエチル３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシドに代えて２−アミノエチル３，５−ジ−Ｏ−アセチル−４，６−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−マンノピラノシドを用い、ＭＬ−３６について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ２７Ｈ４６Ｎ２Ｏ１４の計算値：６２２．２９、実測ｍ／ｅ＝６２３．３５３６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．１３分。
【０５４８】
実施例６１
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル）−α−Ｄ−マンノピラノシド（ＭＬ−６１）の合成について説明する。
【化１１１】
0006491649.tif 000308
【０５４９】
段階Ａ：２−｛［２−（２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）エチル］アミノ｝エチル−２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−マンノピラノシド
２−オキソエチル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−マンノピラノシド（１．３ｇ、３．３３ｍｍｏｌ）および２−アミノエチル２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシド（２．２２ｇ、６．７ｍｍｏｌ）の脱水ＤＣＭ（２０ｍＬ）中混合物に、ＴＦＡ（０．２５７ｍＬ、３．３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１０分間撹拌し、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム（１．４１ｇ、６．６６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。混合物を溶媒留去し、残留物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）と飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）との間で分配し；有機層を飽和ＮａＣｌ（５０ｍＬ）で洗浄し；Ｎａ２ＳＯ４で脱水し；濾過し、溶媒留去した。残留物を、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ：Ｃ１８２７５ｇ）溶離液：勾配１０％から１００％ＣＨ３ＣＮ／水）によって精製して、標題化合物を得た（６６７ｍｇ、２８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ５．３７（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．０および３．５Ｈｚ）、５．３２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝９．８Ｈｚ）、５．２９（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝３．４および１．９Ｈｚ）、５．２６（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝３．５および１．１Ｈｚ）、５．２０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．５および７．９Ｈｚ）、５．０４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．５および３．４Ｈｚ）、４．８７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ）、４．５０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ）、４．３２（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１２．３および２．５Ｈｚ）、４．１３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１２．２および２．５Ｈｚ）、４．０４（１Ｈ、ｍ）、４．００（１Ｈ、ｍ）、３．８６−３．７９（２Ｈ、ｍ）、３．６９（１Ｈ、ｍ）、３．５９（１Ｈ、ｍ）、２．９１−２．８５（４Ｈ、ｍ）、２．１９（３Ｈ、ｓ）、２．１８（３Ｈ、ｓ）、２．１３（３Ｈ、ｓ）、２．０９（３Ｈ、ｓ）、２．０７（３Ｈ、ｓ）、２．０２（３Ｈ、ｓ）、２．０１（３Ｈ、ｓ）、１．２５（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）。
【０５５０】
段階Ｂ：６−｛［２−（２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）エチル］（２−｛［２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−マンノピラン］オキシ｝エチル）アミノ｝ヘキサン酸ベンジル
２−｛［２−（２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）エチル］アミノ｝エチル−２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−マンノピラノシド（６６７ｍｇ、０．９４３ｍｍｏｌ）および６−オキソヘキサン酸ベンジル（３１１ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（６ｍＬ）中溶液に、酢酸（０．０５４ｍＬ、０．９４３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１０分間撹拌し、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム（４００ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。ＵＰＬＣ−ＭＳは変換が完了していることを示している。混合物を溶媒留去し、残留物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）と飽和ＮａＨＣＯ３（４０ｍＬ）との間で分配し；有機層を飽和ＮａＣｌ（２０ｍＬ）で洗浄し；Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去した。残留物を、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ：Ｃ１８４０ｇ）溶離液：勾配５％から１００％ＣＨ３ＣＮ／水）によって精製して、標題化合物を得た（４３４ｍｇ、５０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．３７（５Ｈ、ｍ）、５．３５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝９．９および３．１Ｈｚ）、５．３２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ）、５．２５（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝３．２および１．７Ｈｚ）、５．１９（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．５および７．９Ｈｚ）、５．１４（２Ｈ、ｓ）、５．０４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．４および３．５Ｈｚ）、４．８５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．７Ｈｚ）、４．５１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ）、４．３２（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１２．２および５．１Ｈｚ）、４．１２（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１２．２および２．５Ｈｚ）、４．０４（１Ｈ、ｍ）、３．９３（１Ｈ、ｄｔ、Ｊ＝９．９および５．９Ｈｚ）、３．８５（１Ｈ、ｍ）、３．７２（１Ｈ、ｄｔ、Ｊ＝１０．１および６．０Ｈｚ）、３．５９（１Ｈ、ｄｔ、Ｊ＝９．９および６．６Ｈｚ）、３．５１（１Ｈ、ｍ）、２．７４−２．７１（４Ｈ、ｍ）、２．５０（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ）、２．３９（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ）、２．１９（３Ｈ、ｓ）、２．１８（３Ｈ、ｓ）、２．１３（３Ｈ、ｓ）、２．０７（３Ｈ、ｓ）、２．０６（３Ｈ、ｓ）、２．０１（３Ｈ、ｓ）、２．００（３Ｈ、ｓ）、１．７０−１．６６（４Ｈ、ｍ）、１．４４（２Ｈ、ｍ）、１．３２（２Ｈ、ｍ）、１．２４（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）。
【０５５１】
段階Ｃ：２−（｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル）−α−Ｄ−マンノピラノシド
６−（ビス｛２−［（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）ヘキサン酸ベンジルに代えて６−｛［２−（２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）エチル］（２−｛［−２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−マンノピラン］オキシ｝エチル）アミノ｝ヘキサン酸ベンジルを用い、段階ＢでＭＬ−３５について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：Ｃ２６Ｈ４４Ｎ２Ｏ１５の計算値：６２４．２７、実測ｍ／ｅ＝６２５．２９９０［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．１２。
【０５５２】
実施例６２
下記構造を有するオリゴ糖リンカーＮ，Ｎ′−ビス｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝−１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキサノイル｝ピロリジン−（２Ｒ，５Ｒ）−２，５−ジカルボキサミド（ＭＬ−６２）の合成について説明する。
【化１１２】
0006491649.tif 000309
【０５５３】
段階Ｃで２，２′−｛［６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサノイル］イミノ｝ジ酢酸に代えて（２Ｒ，５Ｒ）−ピロリジン−２，５−ジカルボン酸を用い、ＭＬ−６について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝７３６．３６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．２２分。
【０５５４】
実施例６３
下記構造を有するオリゴ糖リンカーＮ，Ｎ′−ビス｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝−１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキサノイル｝（ピペリジン−４，４−ジイル）ジアセトアミド（ＭＬ−６３）の合成について説明する。
【化１１３】
0006491649.tif 000310
【０５５５】
段階Ｃで２，２′−｛［６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサノイル］イミノ｝ジ酢酸に代えて２，２′−（ピペリジン−４，４−ジイル）ジ酢酸を用い、ＭＬ−６について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝８０５．３８［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．３５分。
【０５５６】
実施例６４
下記構造を有するオリゴ糖リンカー１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキサノイル｝−Ｎ，Ｎ′−ビス｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝ピペリジン−シス−３，４−ジカルボキサミド（ＭＬ−６４）の合成について説明する。
【化１１４】
0006491649.tif 000311
【０５５７】
段階Ａでの原料として３，５−ピリジンジカルボン酸に代えて３，４−ピリジンジカルボン酸を用い、ＭＬ−１７について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｆ：ｍ／ｅ＝７７７．３６６０［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．１５分。
【０５５８】
実施例６５
下記構造を有するオリゴ糖リンカー６−（（３Ｒ，４Ｒ）−３，４−ビス（（２−（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）ヘキサン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル（ＭＬ−６５）の合成について説明する。
【化１１５】
0006491649.tif 000312
【０５５９】
段階Ａ：（３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ３，Ｎ４−ビス（２−（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）ピペリジン−３，４−ジカルボキサミド
段階Ａで原料として３，５−ピリジンジカルボン酸に代えて３，４−ピリジンジカルボン酸を用い、ＭＬ−１７段階ＡおよびＢについて記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｆ：ｍ／ｅ＝５５２．２７３３［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．３７分。
【０５６０】
段階Ｂ：６−（（３Ｒ，４Ｒ）−３，４−ビス（（２−（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）ヘキサン酸ベンジル
（３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ３，Ｎ４−ビス（２−（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）ピペリジン−３，４−ジカルボキサミド（１１８ｍｇ、０．２１４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）に溶かし、それにＴＨＦ（０．５ｍＬ）中の６−オキソヘキサン酸ベンジル（７０．７ｍｇ、０．３２１ｍｍｏｌ）を加え、次に水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム（１３６ｍｇ、０．６４２ｍｍｏｌ）および酢酸（３．６７μＬ、０．０６４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で３時間撹拌した。生成物を、０％から３０％ＡｃＮ／水の勾配を用いるＣ−１８カラムでの分取逆相クロマトグラフィーによって単離した。ＵＰＬＣ方法Ｆ：ｍ／ｅ＝７５６．４２４１［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．０５分。
【０５６１】
段階Ｃ：オリゴ糖リンカー６−（（３Ｒ，４Ｒ）−３，４−ビス（（２−（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）ヘキサン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イルの合成
段階Ｃで６−（｛２−［（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサン酸ベンジルに代えて６−（（３Ｒ，４Ｒ）−３，４−ビス（（２−（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）ヘキサン酸ベンジルを用い、段階Ｄで６−（｛２−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］エチル｝アミノ）−６−オキソヘキサン酸に代えて６−（（３Ｒ，４Ｒ）−３，４−ビス（（２−（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）ヘキサン酸を用い、ＭＬ−１段階ＣおよびＤについて記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｆ：ｍ／ｅ＝７６３．７７９６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．１５分。
【０５６２】
実施例６６
下記構造を有するオリゴ糖リンカー６−（（２Ｒ，５Ｒ）−２，５−ビス（（２−（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）−６−オキソヘキサン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル（ＭＬ−６６）の合成について説明する。
【化１１６】
0006491649.tif 000313
【０５６３】
段階Ａで原料として３，５−ピリジンジカルボン酸に代えて２，５−ピリジンジカルボン酸を用い、ＭＬ−１７について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ａ：ＵＰＬＣｍ／ｅ＝７７７．０［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝０．５分。
【０５６４】
実施例６７
下記構造を有するオリゴ糖リンカー６−（（（Ｒ）−１，４−ジオキソ−１−（（２−（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）アミノ）−４−（（２−（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）アミノ）ブタン−２−イル）アミノ）−６−オキソヘキサン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル（ＭＬ−６７）の合成について説明する。
【化１１７】
0006491649.tif 000314
【０５６５】
段階Ａで、Ｚ−ＡＳＰ（ＯＢＺＬ）−ＯＨに代えてＺ−Ｇｌｕ−γ−Ｂｎを用い、２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシドに代えて２−アミノエチルα−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシドを用い、ＭＬ−２０について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝７５３．２６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．５９分。
【０５６６】
実施例６８
下記構造を有するオリゴ糖リンカー（ＭＬ−６８）の合成について説明する。
【化１１８】
0006491649.tif 000315
【０５６７】
段階ＡでＺ−ＡＳＰ（ＯＢＺＬ）−ＯＨに代えてＺ−Ｇｌｕ−γ−Ｂｎを用い、ＭＬ−２０について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝１０７７．５２［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．９３分。
【０５６８】
実施例６９
下記構造を有するオリゴ糖リンカー６−（２−（ビス（−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）エチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル（ＭＬ−６９）の合成について説明する。
【化１１９】
0006491649.tif 000316
【０５６９】
段階Ａ：１，２，３，４−テトラキス（オキシ）テトラキス（トリメチルシラン）Ｌ−フコース
Ｌ−フコース（４．０ｇ、２４．３７ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＭＦ（２５ｍＬ）中溶液に０℃で、ＴＥＡ（１７．３２ｍＬ、１２４ｍｍｏｌ、５．１当量）を加えた。上記混合物に、ＴＭＳ−Ｃｌ（１５．８８ｍＬ、１２５ｍｍｏｌ、５．１当量）を滴下した。反応液を昇温させて室温とし、室温で４時間撹拌した。反応混合物を氷およびヘキサン混合物（１００ｍＬ、１：１）に投入した。混合物をヘキサンで抽出した（１００ｍＬで３回）。有機層を水で洗浄し（１０ｍＬで３回）、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過した。濾液を濃縮し、高真空ポンプで乾燥させて、標題化合物を無色油状物として得た（８．７ｇ、１９．２ｍｍｏｌ、７９％）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、１２５ＭＨｚ）δ９４．５（１Ｃ）、７０．６（１Ｃ）、６９．６（１Ｃ）、６６．６（１Ｃ）、３９．６（４Ｃ）、１６．７（Ｍｅ）、０．６７（３Ｍｅ）、０．４３（３Ｍｅ）、０．２９（３Ｍｅ）、０．１６（３Ｍｅ）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、５００ＭＨｚ）δ５．０（ｓ、１Ｈ）、４．０（ｍ、１Ｈ）、３．８（１Ｈ）、３．６（１Ｈ）、１．０（ｄ、３Ｈ）、０−０．２（ｍ、３６Ｈ）。
【０５７０】
段階Ｂ：６−（２−（ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸ベンジル
２−（ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ）酢酸（５００ｍｇ、３．０６ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中溶液に０℃で、ＴＳＴＵ（１１０７ｍｇ、３．６８ｍｍｏｌ、１．２当量）と、次にＴＥＡ（０．５１２ｍＬ、３．６８ｍｍｏｌ、１．２当量）を加えた。反応液を昇温させて室温とし、その温度で２時間撹拌した。上記の混合物に、ＴＥＡ（０．５１２ｍＬ、３．６６ｍｍｏｌ）と予め混合したＬ−０００５０３０４８−００１Ｗ００１（１４４７ｍｇ、３．６８ｍｍｏｌ、１．２当量）を加えた。反応液を室温で１８時間撹拌した．ＵＰＬＣで、所望の生成物の生成が示された。ＤＭＦを減圧下に除去した。粗取得物をＣ１８逆相クロマトグラフィー（１６カラム体積で０％から３０％ＡＣＮ／水で溶離）によって精製した。所望の生成物を含む分画を合わせ、濃縮し、凍結乾燥して、標題化合物を無色シロップとして得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝３６７．２３５６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．５４分。
【０５７１】
段階Ｃ：６−（２−（ビス（２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）エチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸ベンジル
６−（２−（ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸ベンジル（２１０ｍｇ、０．５７３ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液に０℃で、ＴＢＡＩ（１８２０ｍｇ、４．９３ｍｍｏｌ、８．６当量）、ＤＩＰＥＡ（０．５００ｍＬ、２．８７ｍｍｏｌ、５．０当量）を加えた。その混合物を昇温させて室温とし、室温で３０分間撹拌した。上記溶液に、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の１，２，３，４−テトラキス（オキシ）テトラキス（トリメチルシラン）Ｌ−フコース（１５５７ｍｇ、３．４４ｍｍｏｌ、６．０当量）とヨードトリメチルシラン（０．３９０ｍＬ、２．８７ｍｍｏｌ、５．０当量）を滴下した。混合物を室温で１８時間撹拌した。ＵＰＬＣで、所望の生成物の生成が示された。ＤＣＭを除去し、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）およびＤｏｗｅｘ  Ｈ＋樹脂をｐＨ約２となるまで加えた。室温で１時間撹拌した。セライト層で濾過した。濾液を濃縮し、Ｃ１８逆相クロマトグラフィー（１６カラム体積で０％から３０％ＡＣＮ／水で溶離）によって精製した。所望の生成物を含む分画を合わせ、濃縮し、凍結乾燥して、標題化合物を無色シロップとして得た（４０ｍｇ、０．０６１ｍｍｏｌ、１０．６％）。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６５９．３７４５［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．３６分。
【０５７２】
段階Ｄ：６−（２−（ビス（２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）エチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸
６−（２−（ビス（２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）エチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸ベンジル（４０ｍｇ、０．０６１ｍｍｏｌ）の水（５ｍＬ）中溶液に、Ｐｄ／Ｃ（３０．５ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ）を加えた。反応液をＨ２風船下に１８時間撹拌した。ＵＰＬＣにより、所望の生成物の生成が示された。上記溶液をＭｅＯＨ（５ｍＬ）で希釈し、セライト層で濾過し、濃縮し、凍結乾燥して、標題化合物を無色シロップとして得た（２０ｍｇ、６．１％）。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝５６９．３１９１［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．９３分。
【０５７３】
段階Ｅ：６−（２−（ビス（−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）エチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル
６−（２−（ビス（２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）エチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸（２０ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＭＦ（１ｍＬ）中溶液に、ＴＳＴＵ（１６．６８ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ、１．５当量）、次にヒューニッヒ塩基（７．７４μＬ、０．０４４ｍｍｏｌ、１．２当量）を加えた。反応液を室温で１時間撹拌した。ＴＬＣ（４／１／１／１ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ／ＡＣＮ／水）により、原料が全く残っていないことが示された。ＵＰＬＣにより、生成物の生成が示された。ＤＭＦを減圧下に除去した。粗生成物を精製せずに用いた。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６６６．３３５１［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．２８分。
【０５７４】
実施例７０
下記構造を有するオリゴ糖リンカー６−（２−（ビス（−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）プロピル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル（ＭＬ−７０）の合成について説明する。
【化１２０】
0006491649.tif 000317
【０５７５】
段階Ａ：６−（ビス（３−ヒドロキシプロピル）アミノ）−６−オキソヘキサン酸ベンジル
３，３′−アザネジイルビス（プロパン−１−オール）（１０００ｍｇ、７．５１ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中溶液に、（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）アジピン酸ベンジル（２５０３ｍｇ、７．５１ｍｍｏｌ、１．０当量）と、次にＴＥＡ（１．０４６ｍＬ、７．５１ｍｍｏｌ、１．０当量）を加えた。反応液を２５℃で１８時間撹拌した。ＵＰＬＣにより、所望の生成物の生成が示された。ＤＭＦを減圧下に除去した。粗取得物をＣ１８逆相クロマトグラフィー（１６カラム体積で０％から４０％ＡＣＮ／水で溶離）によって精製した。所望の生成物を含む分画を合わせ、濃縮して、標題化合物を無色油状物として得た（１．５５ｇ、４．４１ｍｍｏｌ、５８．７％）。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝３５２．２１７１［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．４７分。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、５００ＭＨｚ）δ７．３−７．５（ｍ、５Ｈ）、５．１５（ｍ、２Ｈ）、３．６５（ｍ、２Ｈ）、３．４０（ｍ、５Ｈ）、２．６６（ｓ、３Ｈ）、２．４５（ｍ、３Ｈ）、２．２９（ｓ、１Ｈ）、１．８４（ｓ、１Ｈ）、１．７０（ｍ、７Ｈ）。
【０５７６】
段階Ｂ：６−（２−（ビス（２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）プロピル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸ベンジル
段階Ｃで６−（２−（ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸ベンジルに代えて６−（ビス（３−ヒドロキシプロピル）アミノ）−６−オキソヘキサン酸ベンジルを用い、ＭＬ−ＹＺ−１について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６４４．３４５４［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．２８分。
【０５７７】
段階Ｃ：６−（２−（ビス（２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）プロピル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸
段階Ｄで６−（２−（ビス（２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）エチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸ベンジルに代えて６−（２−（ビス（２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）プロピル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸ベンジルを用い、ＭＬ−ＹＺ−１について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝５５４．３０７６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．１３分。
【０５７８】
段階Ｅ：６−（２−（ビス（−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）プロピル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル
段階Ｅで６−（２−（ビス（２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）エチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸に代えて６−（２−（ビス（２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）プロピル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸を用い、ＭＬ−ＹＺ−１について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６５１．３１６６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．４１分。
【０５７９】
実施例７１
下記構造を有するオリゴ糖リンカー６−（２−（ビス（２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）ブチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸ベンジル（ＭＬ−７１）の合成について説明する。
【化１２１】
0006491649.tif 000318
【０５８０】
段階Ａ：４−（ベンジルオキシ）−Ｎ−（４−（ベンジルオキシ）ブチル）ブタンアミド
４−（ベンジルオキシ）ブタン酸（１ｇ、５．１５ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に０℃で、ＴＳＴＵ（１．６２７ｇ、５．４１ｍｍｏｌ、１．０５当量）と、次にＴＥＡ（０．７１８ｍＬ、５．１５ｍｍｏｌ、１．０当量）を加えた。反応液を昇温させて室温とし、室温で２時間撹拌した。上記反応液に、４−（ベンジルオキシ）ブタン−１−アミン（０．９６９ｇ、５．４１ｍｍｏｌ、１．０５当量）と、次にＴＥＡ（０．７１８ｍＬ、５．１５ｍｍｏｌ、１．０当量）を加えた。反応液を室温で１８時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳによって、所望の生成物の生成が示された。ＤＭＦを減圧下に除去した。粗取得物をシリカゲルカラム（１２０ｇ、１６カラム体積で０％から１５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶離）によって精製した。所望の生成物を含む分画を合わせ、濃縮して、標題化合物を得た（１．６５ｇ、４．６４ｍｍｏｌ、収率９０％）。ＬＣ−ＭＳ方法Ａ：ｍ／ｅ＝３５６．７０［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．２２分。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、５００ＭＨｚ）δ７．２−７．４（ｍ、１０Ｈ）、５．９８（ｓ、１Ｈ）、４．５１（ｍ、４Ｈ）、３．５３（ｍ、４Ｈ）、３．２４（ｍ、２Ｈ）、２．２８（ｍ、２Ｈ）、１．９６（ｍ、２Ｈ）、１．５−１．７（ｍ、４Ｈ）。
【０５８１】
段階Ｂ：ビス（４−（ベンジルオキシ）ブチル）アミン
２００ｍＬ丸底フラスコ中、４−（ベンジルオキシ）−Ｎ−（４−（ベンジルオキシ）ブチル）ブタンアミド（１．６５ｇ、４．６４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）中溶液に０℃で、ＢＨ３・ＴＨＦ（１３．９３ｍＬ、１３．９３ｍｍｏｌ）を滴下した。反応液を昇温させて室温とし、室温で１８時間撹拌した。ＴＬＣにより生成物の生成および原料の消失が示された。飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液で反応停止した。混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃで希釈し、１Ｎ  ＨＣｌとともに振盪し、重炭酸塩、ブラインおよび水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。粗取得物を、精製せずに次の段階で用いた。ＬＣ−ＭＳ方法Ａ：ｍ／ｅ＝３４１．００［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．０６分。
【０５８２】
段階Ｃ：４，４′−アザネジイルビス（ブタン−１−オール）
ビス（４−（ベンジルオキシ）ブチル）アミン（３００ｍｇ、０．８７９ｍｍｏｌ）のジオキサン（５ｍＬ）／水（５ｍＬ）の混合溶媒中溶液に、ＰｄＯＨ２（３０．８ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を約０．２８ＭＰａ（４０ｐｓｉ）のＨ２下に１８時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳにより、原料がないことおよび所望の生成物の生成が示された。混合物をセライト層で濾過し、ジオキサン／水（１０ｍＬ、１／１）で洗浄した。濾液を濃縮し、高真空ポンプで脱水して、標題化合物を得た（１３０ｍｇ、０．８０６ｍｍｏｌ、収率９２％）。ＬＣ−ＭＳ方法Ａ：ｍ／ｅ＝１６２．０１［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝０．１８分。
【０５８３】
段階Ｄ：６−（２−（ビス（２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）ブチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸ベンジル
段階Ｃで６−（２−（ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸ベンジルに代えて６−（ビス（３−ヒドロキシブチル）アミノ）−６−オキソヘキサン酸ベンジルを用い、ＭＬ−６９について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６４４．３４５４［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．２８分。
【０５８４】
段階Ｅ：６−（２−（ビス（２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）プロピル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸
段階Ｄで６−（２−（ビス（２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）エチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸ベンジルに代えて６−（２−（ビス（２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）ブチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸ベンジルを用い、ＭＬ−６９について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝５５４．３０７６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．１３分。
【０５８５】
段階Ｆ：６−（２−（ビス（−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）ブチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル
段階Ｅで６−（２−（ビス（２−Ｒα−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）エチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸に代えて６−（２−（ビス（２−Ｒα−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）ブチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸を用い、ＭＬ−６９について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６５１．３１６６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．４１分。
【０５８６】
段階Ｇ：６−（２−（ビス（２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）ブチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸ベンジル
段階Ｃで６−（２−（ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸ベンジルに代えて６−（ビス（３−ヒドロキシブチル）アミノ）−６−オキソヘキサン酸ベンジルを用い、ＭＬ−６９について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６４４．３４５４［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．２８分。
【０５８７】
実施例７２
下記構造を有するオリゴ糖リンカー６−（２，３−ビス−２［２−（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシエチル）カルバモイル）シクロプロパンカルボキシリック）アミノ）アセトアミド））ヘキサン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル（ＭＬ−７２）の合成について説明する。
【化１２２】
0006491649.tif 000319
【０５８８】
段階Ａ：２，３−ビス−２［２−（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシエチル）カルバモイル）シクロプロパンカルボン酸
Ｌ−０００７１９５０４−０００×００３（３５３ｍｇ、２．０２７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中溶液に、ＥＤＣ（８１６ｍｇ、４．２６ｍｍｏｌ）およびＨＯＢＴ（９３ｍｇ、０．６０８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２５℃で３０分間撹拌した。上記混合物に、ＡＥＦ（８８２ｍｇ、４．２６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２５℃で１８時間撹拌した。ＵＰＬＣにより、所望の生成物の生成が示された。ＤＭＦを減圧下に除去した。粗取得物をＣ１８逆相クロマトグラフィー（３７分で０％から３０％ＡＣＮ／水（０．０５％ＴＦＡ含有）で溶離）によって精製した。所望の生成物を含む分画を合わせ、凍結乾燥して、標題化合物（８０ｍｇ、０．１４５ｍｍｏｌ、収率７．１４％）を得た。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝５５３．２５３９［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．６３分。
【０５８９】
段階Ｂ：６−（２，３−ビス−２［２−（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシエチル）カルバモイル）シクロプロパンカルボキシリック）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸ベンジル
段階Ｂで２−（ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ）酢酸に代えて２，３−ビス−２［２−（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシエチル）カルバモイル）シクロプロパンカルボン酸を用い、ＭＬ−６９について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝７５６．３６８９［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．１５分。
【０５９０】
段階Ｃ：６−（２，３−ビス−２［２−（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシエチル）カルバモイル）シクロプロパンカルボキシリック）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸
段階Ｄで６−（２−（ビス（２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）エチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸ベンジルに代えて６−（２−（ビス（２−Ｒα−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）エチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸ベンジルを用い、ＭＬ−６９について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６６６．３１５１［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．２３分。
【０５９１】
段階Ｄ：６−（２，３−ビス−２［２−（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシエチル）カルバモイル）シクロプロパンカルボキシリック）アミノ）アセトアミド））ヘキサン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル
段階Ｅで６−（２−（ビス（２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）エチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸に代えて６−（２，３−ビス−２［２−（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシエチル）カルバモイル）シクロプロパンカルボキシリック）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸を用い、ＭＬ−６９について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝７６３．３４１１［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．９９分。
【０５９２】
実施例７３
下記構造を有するオリゴ糖リンカー６−オキソ−（６−（（３−α−Ｄ−マンノピラノシル）プロピル−α−Ｌ−フコピラノシル）エチル］アミノ）ヘキサン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル（ＭＬ−７３）の合成について説明する。
【化１２３】
0006491649.tif 000320
【０５９３】
段階Ａ：ｐｅｒ−ＴＭＳＤ−マンノース
段階ＡでＬ−フコースに代えてＤ−マンノースを用い、ＭＬ−６９について記載の手順と同様の手順を用いて標題化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、５００ＭＨｚ）δ４．９（ｓ、１Ｈ）、３．５−３．９（ｍ、６Ｈ）、０−０．３（ｍ、４５Ｈ）。
【０５９４】
段階Ｂ：２，３，４，６−テトラ−Ｏ−トリメチルシランＤ−マンノピラノシル
ｐｅｒ−ＴＭＳＤ−マンノース（５．４ｇ、９．９８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２５ｍＬ）中溶液に０℃で、ヨードトリメチルシラン（１．４２６ｍＬ、１０．４８ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を昇温させて室温とし、室温で１時間撹拌した。減圧によってＤＣＭを除去した。その中間体を、精製せずに次の段階で用いた。
【０５９５】
段階Ｃ：３−ヨードプロポキシルα−Ｄ−マンノピラノジドおよび３−ヨードプロポキシルβ−Ｄ−マンノピラノジド
２，３，４，６−テトラキス（トリメチルシラン）Ｄ−マンノピラノシル（２．８９ｇ、４．９９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液に０℃で、オキセタン（０．４８８ｍＬ、７．４９ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を昇温させて室温とし、室温で５時間撹拌した。ＤＣＭをロータリーエバポレータによって除去した。混合物をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶かした。上記溶液に、ｐＨ約２までＤｏｗｅｘ  Ｈ＋樹脂を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳにより、所望の生成物の生成が示された。混合物をセライト層で濾過し、濃縮し、Ｃ８逆相クロマトグラフィー（２５分で５％から２５％ＡＣＮ／水（０．０５％ＴＦＡ含有）で溶離）によって精製した。所望の生成物を含む分画を回収し、凍結乾燥して、３−ヨードプロポキシルα−Ｄ−マンノピラノシド（７１０ｍｇ、２．０４ｍｍｏｌ、４０．８％）および３−ヨードプロポキシルβ−Ｄ−マンノピラノシド（４２０ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ、２４．２％）を得た。ＬＣ−ＭＳ方法Ａ：ｍ／ｅ＝６９６．９６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝０．４６分およびＲｔ＝０．５３分。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ、５００ＭＨｚ）３−ヨードプロポキシルβ−Ｄ−マンノピラノシド：δ４．５４（ｄ、Ｊ＝０．９５Ｈｚ、１Ｈ）、３．９５（ｍ、１Ｈ）、３．８８−３．９２（ｍ、２Ｈ）、３．７５（ｍ、１Ｈ）、３．６５（ｍ、１Ｈ）、３．５０（ｍ、１Ｈ）、３．４５（ｍ、１Ｈ）、３．３−３．４（ｍ、２Ｈ）、３．２３（ｍ、１Ｈ）、２．１（ｍ、２Ｈ）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ、５００ＭＨｚ）３−ヨードプロポキシルα−Ｄ−マンノピラノシド：δ４．８１（ｍ、１Ｈ）、３．８−３．９（ｍ、３Ｈ）、３．６−３．８（ｍ、３Ｈ）、３．５−３．６（ｍ、２Ｈ）、３．３−３．４（ｍ、２Ｈ）、２．１（ｍ、２Ｈ）。
【０５９６】
段階Ｄ：α−Ｌ−フコピラノシル）エチル］アミノ｝プロピルα−Ｄ−マンノピラノジド
３−ヨードプロポキシルα−Ｄ−マンノピラノシド（２２０ｍｇ、０．６３２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に、ＡＥＦ（１３１ｍｇ、０．６３２ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ（１５．１３ｍｇ、０．６３２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２４時間撹拌した。ＵＰＬＣで生成物の生成が示された。ＤＭＦを減圧下に除去した。粗取得物を精製せずに次の段階で用いた。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝４２８．２２５２［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．０２分。
【０５９７】
段階Ｅ：６−オキソ−（６−（（３−α−Ｄ−マンノピラノシル）プロピル−α−Ｌ−フコピラノシル）エチル］アミノ）ヘキサン酸ベンジル
段階Ａでα−Ｌ−フコピラノシル）エチル］アミノ｝プロピルα−Ｄ−マンノピラノジドに代えてα−Ｌ−フコピラノシル）エチル］アミノ｝プロピルα−Ｄ−マンノピラノジドを用い、ＭＬ−６９について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６４６．３２３３［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．１３分。
【０５９８】
段階Ｆ：６−オキソ−（６−（（３−α−Ｄ−マンノピラノシル）プロピル−α−Ｌ−フコピラノシル）エチル］アミノ）ヘキサン酸
段階Ｄで６−（２−（ビス（２−Ｒα−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）エチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸ベンジルに代えて６−オキソ−（６−（（３−α−Ｄ−マンノピラノシル）プロピル−α−Ｌ−フコピラノシル）エチル］アミノ）ヘキサン酸ベンジルを用い、ＭＬ−６９について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝５５６．２７３１［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝１．７７分。
【０５９９】
段階Ｇ：６−オキソ−（６−（（３−α−Ｄ−マンノピラノシル）プロピル−α−Ｌ−フコピラノシル）エチル］アミノ）ヘキサン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル
段階Ｅで６−（２−（ビス（２−Ｒα−Ｌ−フコピラノシル）オキシ）エチル）アミノ）アセトアミド）ヘキサン酸に代えて６−オキソ−（６−（（３−α−Ｄ−マンノピラノシル）プロピル−α−Ｌ−フコピラノシル）エチル］アミノ）ヘキサン酸を用い、ＭＬ−６９について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６５３．３００８［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．０９分。
【０６００】
実施例７４
下記構造を有するオリゴ糖リンカー６−オキソ−（６−（（３−β−Ｄ−マンノピラノシル）プロピル−α−Ｌ−フコピラノシル）エチル］アミノ）ヘキサン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル（ＭＬ−７４）の合成について説明する。
【化１２４】
0006491649.tif 000321
【０６０１】
段階ＡからＦでα−Ｄ−マンノースに代えてβ−Ｄ−マンノピラノースを用い、ＭＬ−７３について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６５３．３１６７［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．０７分。
【０６０２】
実施例７５
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２，５−ジオキソピロリジン−１−イル８−オキソ−（６−（（３−β−Ｄ−マンノピラノシル）プロピル−α−Ｌ−フコピラノシル）エチル］アミノ）オクタンジエート（ＭＬ−７５）の合成について説明する。
【化１２５】
0006491649.tif 000322
【０６０３】
段階ＡからＦでα−Ｄ−マンノースに代えてβ−Ｄ−マンノピラノースを用い、（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）アジピン酸ベンジルに代えてベンジル８−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オクタンジエートを用い、ＭＬ−７３について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６８１．３５６８［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．４４分。
【０６０４】
実施例７６
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２，５−ジオキソピロリジン−１−イル８−オキソ−（６−（（３−α−Ｄ−マンノピラノシル）プロピル−α−Ｌ−フコピラノシル）エチル］アミノ）オクタンジエート（ＭＬ−７６）の合成について説明する。
【化１２６】
0006491649.tif 000323
【０６０５】
（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）アジピン酸ベンジルに代えてベンジル８−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オクタンジエートを用い、ＭＬ−７３について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６８１．３４５６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．２１分。
【０６０６】
実施例７７
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２，５−ジオキソピロリジン−１−イル９−オキソ−（６−（（３−α−Ｄ−マンノピラノシル）プロピル−α−Ｌ−フコピラノシル）エチル］アミノ）ノナンジオエート（ＭＬ−７７）の合成について説明する。
【化１２７】
0006491649.tif 000324
【０６０７】
（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）アジピン酸ベンジルに代えてベンジル９−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）ノナンジオエートを用い、ＭＬ−７３について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝６９５．３５３２［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．５５分。
【０６０８】
実施例７８
下記構造を有するオリゴ糖リンカー２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１０−オキソ−（６−（（３−α−Ｄ−マンノピラノシル）プロピル−α−Ｌ−フコピラノシル）エチル］アミノ）デカンジオエート（ＭＬ−７８）の合成について説明する。
【化１２８】
0006491649.tif 000325
【０６０９】
（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）アジピン酸ベンジルに代えてベンジル１０−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）デカンジオエートを用い、ＭＬ−７３について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝７０９．３７６６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝２．７９分。
【０６１０】
実施例７９
下記構造を有するオリゴ糖リンカー６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−Ｎ−（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−β−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝プロピル）−６−オキソヘキサンアミド（ＭＬ−７９）の合成について説明する。
【化１２９】
0006491649.tif 000326
【０６１１】
段階Ａ：３−アジドプロポキシルβ−Ｄ−マンノピラノシド
３−ヨードプロポキシルβ−Ｄ−マンノピラノシド（２．０ｇ、５．７４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中溶液に、アジ化ナトリウム（４４８ｍｇ、０．４４８ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を昇温させて６０℃とし、この温度でＮ２下に１２時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳにより、所望の生成物の生成が示された。ＤＭＦを減圧下に除去した。粗生成物をＣ１８逆相クロマトグラフィー（１６カラム体積で０％から２０％ＡＣＮ／水、次に２カラム体積で１００％ＡＣＮ、０％ＡＣＮで２カラム体積で溶離）によって精製した。所望の生成物を含む分画を合わせ、凍結乾燥して、標題化合物を得た（１．２７ｇ、４．８２ｍｍｏｌ、収率８４％）。ＬＣ−ＭＳ方法Ａ：ｍ／ｅ＝２６４．１６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝０．２１．１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ、５００ＭＨｚ）：δ４．５３（ｍ、１Ｈ）、４．０２（ｍ、１Ｈ）、３．９７（ｍ、２Ｈ）、３．６５（ｍ、２Ｈ）、３．５６（ｍ、１Ｈ）、３．４８（ｍ、３Ｈ）、３．２２（ｍ、１Ｈ）、１．９２（ｍ、２Ｈ）。
【０６１２】
段階Ｂ：２．４−ベンゾイル３−アジドプロポキシルβ−Ｄ−マンノピラノシド
３−アジドプロポキシルβ−Ｄ−マンノピラノシド（１０３０ｍｇ、３．９１ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１５ｍＬ）中溶液に、オルト安息香酸トリエチル（２．３５２ｍＬ、１０．１７ｍｍｏｌ）と、次にＴＦＡ（０．０３０ｍＬ、０．３９１ｍｍｏｌ）およびＡＣＮ（０．５ｍＬ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。ロータリーエバポレータによってＡＣＮを除去した。ＴＦＡ（１０％水溶液）（４．２８ｍＬ、５．５５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌した。残留物をエーテル／ＣＨ２Ｃｌ２で溶離を行うシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーによって精製して、上記の生成物を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、５００ＭＨｚ）：δ７．０−８．２（ｍ、１０Ｈ）、５．７２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．４Ｈｚ、Ｊ＝１．１Ｈｚ）、５．４４（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝９．６Ｈｚ）、４．７９（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１．１Ｈｚ）、４．１６（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．４Ｈｚ、Ｊ＝１．１Ｈｚ）、４．００（ｍ、１Ｈ）、３．８８（ｍ、１Ｈ）、３．８２（ｍ、１Ｈ）、３．６６（ｍ、２Ｈ）、３．３１（ｍ、２Ｈ）、１．８２（ｍ、２Ｈ）。
【０６１３】
段階Ｃ：２−アジドプロポキシル２，４−ジ−Ｏ−ベンゾイル−３，６−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル）−β−Ｄ−マンノピラノシド
段階Ｂで２−アジドエチル２，４−ビス−Ｏ−ベンゾイル−６−Ｏ−トリチル−α−Ｄ−マンノピラノシドに代えて２．４−ベンゾイル３−アジドプロポキシルβ−Ｄ−マンノピラノシドを用い、ＭＬ−２について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、５００ＭＨｚ）：δ７．０−８．３（ｍ、５０Ｈ）、６．２（ｍ、２Ｈ）、５．９５（ｍ、２Ｈ）、５．８５（ｍ、２Ｈ）、５．７０（ｍ、１Ｈ）、５．３５（ｍ、２Ｈ）、５．２２（ｓ、１Ｈ）、３．０−５．０（ｍ、１５Ｈ）、１．９０（ｍ、２Ｈ）。
【０６１４】
段階Ｄ：６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−Ｎ−（２−｛［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−β−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ｝プロピル）−６−オキソヘキサンアミド
段階ＤからＦでＭＬ−２について記載の手順と同様の手順を用いて、標題化合物を製造した。ＵＰＬＣ方法Ｂ：ｍ／ｅ＝７８７．３８１６［Ｍ＋１］；Ｒｔ＝３．３９分。
【０６１５】
実施例８０
Ａ１保護インシュリンの合成について説明する。
【０６１６】
適切な大きさの容器中、インシュリンを、塩基、例えばＴＥＡの存在下に室温で有機溶媒、例えばＤＭＳＯに懸濁させる。混合物を、インシュリンが完全に溶解するまでやさしく撹拌する。得られた溶液に、保護試薬、例えば、トリフルオロ酢酸エチルまたは９−フルオレニルメチルペンタフルオロフェニルカーボネートを無希釈でまたはＤＭＳＯもしくはＤＭＦなどの有機溶媒の溶液中で加える。ＵＰＬＣクロマトグラムで反応混合物のかなり部分がＡ１−保護インシュリンに変換されていることが示された後、反応混合物について、直接、逆相ＨＰＬＣ精製（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ４  ２５０×５０ｍｍカラム、１０μｍ、１０００ÅカラムまたはＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８  ２５０×５０ｍｍ、１０μｍ、１００Åカラム；緩衝液Ａ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／脱イオン水；緩衝液Ｂ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮ）を行うことができるか、０℃で冷酸性Ｈ２Ｏ（２０×、ｐＨ約３．０）によって注意深く希釈することで反応停止することができ、それのｐＨを、１Ｎ  ＨＣｌ（必要に応じて０．１Ｎ  ＮａＯＨ）を用いて最終ｐＨ２．５に調節する。溶液を最初に、接線流濾過（ＴＦＦ）システムによる、または１Ｋ、３Ｋもしくは１０Ｋ  ＭＷＣＯ膜を用いるＡｍｉｃｏｒｎ  Ｕｌｔｒａ−１５遠心ユニットを用いる限外濾過によって濃縮することができる。次に、濃縮した溶液について、逆相ＨＰＬＣ精製（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ４  ２５０×５０ｍｍカラム、１０μｍ、１０００ÅカラムまたはＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８  ２５０×５０ｍｍ、１０μｍ、１００Åカラム；緩衝液Ａ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／脱イオン水；緩衝液Ｂ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮ）を行う。標題複合体を含む分画を合わせ、凍結乾燥し、またはＴＦＦシステムおよび／またはＡｍｉｃｏｒｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて緩衝液交換を行って、ＮＡ１保護インシュリンを得る。
【０６１７】
実施例８１
ＮＡ１−トリフルオロアセチルインシュリンの合成について説明する。
【０６１８】
１００丸底フラスコにインシュリン（３００ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）を入れ、それにＤＭＳＯ  ８ｍＬ、次にＴＥＡ（４３．４ｍｇ、０．４２９ｍｍｏｌ）を加える。混合物を、透明溶液が得られるまで室温で約３０分間やさしく撹拌する。得られた溶液に、トリフルオロ酢酸エチル（３５．２ｍｇ、０．２４８ｍｍｏｌ）を加える。室温で４時間撹拌後、混合物をＨ２Ｏ（１００ｍＬ、ｐＨ＝３．００）で注意深く希釈する。１０ＭＷＣＯ  Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５遠心管を用いて、それの容量を２０ｍＬに減らした後、得られた溶液をＨＰＬＣ（Ｋｒｏｍａｓｉｌ（登録商標）  Ｃ８  １０μｍ、１００Å、５０×２５０ｍｍカラム、２１０ｎｍ、流量：８５ｍＬ／分、０．０５％ＴＦＡのＡｃＣＮ／Ｈ２Ｏ中溶液、２６％ＡｃＣＮから３７％ＡｃＣＮのＨ２Ｏ中溶液、２０分の勾配）によって精製する。所望の分画を合わせ、凍結乾燥して、ＮＡ１−トリフルオロアセチルインシュリンを得る。ＵＰＬＣ方法Ａ：ｍ／ｅ＝１４７６．５５［（Ｍ＋４）／４］；Ｒｔ＝３．６２分。
【０６１９】
実施例８２
本実施例は、ＩＯＣ−１４３の合成を示すものである。
【０６２０】
ＮＡ１−トリフルオロアセチルヒトインシュリン（７７．７ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１．２ｍＬ）中溶液に室温で、ＴＥＡ（１８μＬ、０．１３２ｍｍｏｌ）およびＭＬ−１１（３０．２ｍｇ、０．０３９ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（３００μＬ）中溶液を加えた。室温で４時間撹拌後、混合物をＡｃＣＮ（４０ｍＬ）に加えた。沈澱を遠心によって回収した。回収した固体を水（５ｍＬ、ｐＨ＝３．００）に溶かし、混合物を冷却して０℃とし、それにＮＨ４ＯＨ溶液（５ｍＬ、２８％水溶液）を加えた。混合物を０℃で２時間撹拌し、水（２０ｍＬ、ｐＨ＝３．００）で希釈した。得られた溶液の体積を、１０Ｋ  ＭＷＣＯ  Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５遠心フィルターユニットを用いて５ｍＬに減らし、水（１００ｍＬ、ｐＨ＝３．００）でさらにダイアフィルトレーションして、最終体積約７．５ｍＬとし、それをＨＰＬＣによって精製してＩＯＣ−１４３を得た。ＵＰＬＣ方法Ａ：Ｒｔ＝３．５８分；ｍ／ｅ＝１８０１．９０６。
【０６２１】
実施例８３
ＮＡ１−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］ヒトインシュリン（Ｎ１−Ｆｍｏｃインシュリン）の合成について説明する。
【０６２２】
２０ｍＬシンチレーションバイアル中、インシュリン（１．５ｇ、０．２５８ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（６ｍＬ）に溶かした。そのインシュリン溶液に、ＤＭＳＯ（１ｍＬ）中の９−フルオレニルメチルペンタフルオロフェニルカーボネート（０．１０５ｇ、０．２５８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１５分間撹拌した。
【０６２３】
生成物を、Ｃ−４逆相カラムでのＧｉｌｓｏｎ  ＨＰＬＣクロマトグラフィーによって精製した。所望の分画（最初に溶出するモノマー）を回収し、凍結乾燥して、所望のＮαＡ１−Ｆｍｏｃインシュリン生成物を得た。ＵＰＬＣ  ＭＳ（Ｃ４、５分）：１５０８．３７（Ｍ＋４／４）（４．４７分）。
【０６２４】
実施例８４
Ａ１、Ｂ２９保護インシュリンまたはＡ１，Ｂ２８保護インシュリンリスプロの合成について説明する。
【０６２５】
適切な大きさの容器中、インシュリンを室温で、塩基、例えばＴＥＡ存在下に有機溶媒または混合水／有機溶媒、例えばＤＭＳＯに懸濁させる。インシュリンが完全に溶解するまで、混合物をやさしく撹拌する。得られた溶液に、無希釈またはＤＭＳＯもしくはＤＭＦなどの有機溶媒の溶液で、保護試薬、例えば、トリフルオロ酢酸エチルまたは９−フルオレニルメチルペンタフルオロフェニルカーボネートを加える。ＵＰＬＣクロマトグラムが、反応混合物のかなりの部分がＡ１，Ｂ２９−保護インシュリン（Ａ１，Ｂ２８−保護インシュリンリスプロ）に変換されていることを示した後、反応混合物について、直接、逆相ＨＰＬＣ精製（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ４２５０×５０ｍｍカラム、１０μｍ、１０００ÅカラムまたはＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８２５０×５０ｍｍ、１０μｍ、１００Åカラム；緩衝液Ａ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／脱イオン水；緩衝液Ｂ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮ）を行うことができるか、０℃で冷酸性Ｈ２Ｏ（２０×、ｐＨ約３．０）によって注意深く希釈することで反応停止することができ、それのｐＨを、１Ｎ  ＨＣｌ（および必要に応じて０．１Ｎ  ＮａＯＨ）を用いて最終ｐＨ２．５に調節する。溶液を最初に、接線流濾過（ＴＦＦ）システムによる、または１Ｋ、３Ｋもしくは１０Ｋ  ＭＷＣＯ膜を用いるＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５遠心ユニットを用いる限外濾過によって濃縮することができる。次に、濃縮した溶液について、逆相ＨＰＬＣ精製（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ４  ２５０×５０ｍｍカラム、１０μｍ、１０００ÅカラムまたはＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８  ２５０×５０ｍｍ、１０μｍ、１００Åカラム；緩衝液Ａ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／脱イオン水；緩衝液Ｂ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮ）を行う。標題複合体を含む分画を合わせ、凍結乾燥し、またはＴＦＦシステムおよび／またはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて緩衝液交換を行って、標題生成物を得る。
【０６２６】
実施例８５
ＮＡ１，ＮεＢ２９−ビス（トリフルオロアセチル）ヒトインシュリンの合成について説明する。
【０６２７】
１００丸底フラスコに、ヒトインシュリン（３００ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）を入れ、それにＡｃＣＮ（６．０ｍＬ）、水（６．０ｍＬ）、およびＤＩＰＥＡ（１．５ｍＬ、８．５９ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物に０℃で、トリフルオロ酢酸エチル（０．９ｍＬ、７．５４ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で２時間撹拌後、混合物をＨＰＬＣ（Ｋｒｏｍａｓｉｌ（登録商標）  Ｃ８  １０μｍ、１００Å、５０×２５０ｍｍカラム、２１０ｎｍ、流量：８５ｍＬ／分、０．０５％ＴＦＡのＡｃＣＮ／Ｈ２Ｏ中溶液、２７％ＡｃＣＮから３７％ＡｃＣＮのＨ２Ｏ中溶液、２０分の勾配）によって精製した。所望の分画を合わせ、凍結乾燥して、ＮＡ１，ＮεＢ２９−ビス（トリフルオロアセチル）ヒトインシュリンを得た。ＵＰＬＣ方法Ａ：ｍ／ｅ＝１５００．６７７［（Ｍ＋４）／４］；Ｒｔ＝３．８７分。
【０６２８】
実施例８６
ＮＡ１，ＮεＢ２９−ビス［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］ヒトインシュリンの合成について説明する。
【０６２９】
２０ｍＬシンチレーションバイアル中、ヒトインシュリン（１．１９ｇ、０．２０５ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（２５７μＬ、１．８４４ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１０ｍＬ）に溶かした。このインシュリン溶液に、ＤＭＳＯ（２ｍＬ）中の１−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］オキシ｝ピロリジン−２，５−ジオン（２０７ｍｇ、０．６１５ｍｍｏｌ）を加えた。室温で３０分間撹拌後、ＨＣｌ（１．８４ｍＬ、１．８４４ｍｍｏｌ、１．０Ｍ）を加えることで反応停止した。得られた混合物を逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィーによって精製した。所望の分画を回収し、凍結乾燥して、ＮＡ１，ＮεＢ２９−ビス［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］ヒトインシュリンを得た。ＵＰＬＣ方法Ａ：ｍ／ｅ＝１５６４．０４［（Ｍ＋４／４）］；Ｒｔ＝４．４１分。
【０６３０】
実施例８７
インシュリンのＮＡ１およびＮεＢ２９での同じリンカー−オリゴ糖との複合体の合成
適切な大きさの容器中、インシュリンを室温で、塩基、例えばＴＥＡ存在下に有機溶媒、例えばＤＭＳＯに懸濁させる。インシュリンが完全に溶解するまで、混合物をやさしく撹拌する。別のバイアル中、活性化エステル中間体を室温で、有機溶媒、例えばＤＭＳＯに溶かす。ＵＰＬＣクロマトグラムで未修飾インシュリンが全て反応して、反応混合物のかなりの部分がＡ１，Ｂ２９−複合体化インシュリンに変換されるまで、活性化エステルの溶液の小分けしたものを、インシュリンを含有する溶液に一定期間をかけて加える。アミン求核剤、例えば２−アミノエタノールを加えることで反応停止する。反応溶液を室温で３０分間撹拌する。得られた溶液を、０℃で冷Ｈ２Ｏ（２０倍）で注意深く希釈し、それのｐＨを１Ｎ  ＨＣｌ（および必要に応じて０．１Ｎ  ＮａＯＨ）を用いて最終ｐＨ２．５に調節する。溶液を最初に、接線流濾過（ＴＦＦ）システムによる、または１Ｋ、３Ｋもしくは１０Ｋ  ＭＷＣＯ膜を用いるＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５遠心ユニットを用いる限外濾過によって濃縮する。通常、最初に、濃縮した溶液について、イオン交換クロマトグラフィー（ＰｏｌｙＳＵＬＦＯＥＴＨＹＬ  Ａカラム、ＰｏｌｙＬＣ  Ｉｎｃ．、２５０×２１ｍｍ、５ｍ、１０００Å；緩衝液Ａ：０．１％（体積比）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ；緩衝液Ｂ：０．１％（体積比）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ／０．５Ｍ  ＮａＣｌ）を行う。所望の純度でＡ１，Ｂ２９−複合体を含む分画を合わせ、ＴＦＦシステムまたはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて濃縮する。得られた溶液を、逆相ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ４  ２５０×５０ｍｍカラム、１０μｍ、１０００ÅカラムまたはＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８  ２５０×５０ｍｍ、１０μｍ、１００Åカラム；緩衝液Ａ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／脱イオン水；緩衝液Ｂ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮ）によってさらに精製する。標題複合体を含む分画を合わせ、凍結乾燥し、またはＴＦＦシステムおよび／またはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて緩衝液交換を行って、標題生成物を得る。
【０６３１】
実施例８８
インシュリンのＮＡ１でのリンカー−オリゴ糖との複合体の合成
適切な大きさの容器中、インシュリンを室温で、塩基、例えばＴＥＡ存在下に有機溶媒、例えばＤＭＳＯに懸濁させる。インシュリンが完全に溶解するまで、混合物をやさしく撹拌する。別のバイアル中、活性化エステル中間体を室温で、有機溶媒、例えばＤＭＳＯに溶かす。ＵＰＬＣクロマトグラムで未修飾インシュリンのほとんどが反応して、反応混合物のかなりの部分がＡ１−複合体化インシュリンに変換されるまで、活性化エステルの溶液の小分けしたものを、インシュリンを含有する溶液に一定期間をかけて加える。アミン求核剤、例えば２−アミノエタノールを加えることで反応停止する。反応溶液を室温で３０分間撹拌する。得られた溶液を、０℃で冷Ｈ２Ｏ（２０倍）で注意深く希釈し、それのｐＨを１Ｎ  ＨＣｌ（および必要に応じて０．１Ｎ  ＮａＯＨ）を用いて最終ｐＨ２．５に調節する。溶液を最初に、接線流濾過（ＴＦＦ）システムによる、または１Ｋ、３Ｋもしくは１０Ｋ  ＭＷＣＯ膜を用いるＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５遠心ユニットを用いる限外濾過によって濃縮する。通常、最初に、濃縮した溶液について、イオン交換クロマトグラフィー（ＰｏｌｙＳＵＬＦＯＥＴＨＹＬ  Ａカラム、ＰｏｌｙＬＣ  Ｉｎｃ．、２５０×２１ｍｍ、５μｍ、１０００Å；緩衝液Ａ：０．１％（体積比）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ；緩衝液Ｂ：０．１％（体積比）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ／０．５Ｍ  ＮａＣｌ）を行う。所望の純度でＡ１−複合体を含む分画を合わせ、ＴＦＦシステムまたはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて濃縮する。得られた溶液を、逆相ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ４  ２５０×５０ｍｍカラム、１０μｍ、１０００ÅカラムまたはＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８  ２５０×５０ｍｍ、１０μｍ、１００Åカラム；緩衝液Ａ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／脱イオン水；緩衝液Ｂ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮ）によってさらに精製する。標題複合体を含む分画を合わせ、凍結乾燥し、またはＴＦＦシステムおよび／またはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて緩衝液交換を行って、標題生成物を得る。
【０６３２】
実施例８９
インシュリンのＮＢ１でのリンカー−オリゴ糖との複合体の合成
ＮＢ１インシュリン複合体を、実施例５０に従って製造することができる。またはそれは、基質として保護されたインシュリンを用いて製造することができる。
【０６３３】
適切な大きさの容器中、保護されたインシュリン、例えば、ＮＡ１，ＮεＢ２９−ビス［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−またはＮＡ１，ＮεＢ２９−ビス（トリフルオロアセチル）ヒトインシュリンを室温で、塩基、例えばＴＥＡ存在下に有機溶媒、例えばＤＭＳＯに懸濁させる。保護インシュリンが完全に溶解するまで、混合物をやさしく撹拌する。別のバイアル中、活性化エステル中間体を室温で、有機溶媒、例えばＤＭＳＯに溶かす。ＵＰＬＣクロマトグラムで未修飾インシュリンが全て反応して、反応混合物のかなりの部分がＢ１−複合体化保護インシュリンに変換されるまで、活性化エステルの溶液の小分けしたものを、インシュリンを含有する溶液に一定期間をかけて加える。過剰量のアミン求核剤、例えば２−アミノエタノールまたはアンモニアを加えることで、低温で反応停止する。ＵＰＬＣクロマトグラムで保護基が完全に除去されたことが示されるまで、反応溶液を低温で撹拌する。得られた溶液を、０℃で冷Ｈ２Ｏ（２０倍）で注意深く希釈し、それのｐＨを１Ｎ  ＨＣｌ（および必要に応じて０．１Ｎ  ＮａＯＨ）を用いて最終ｐＨ２．５に調節する。溶液を最初に、接線流濾過（ＴＦＦ）システムによる、または１Ｋ、３Ｋもしくは１０Ｋ  ＭＷＣＯ膜を用いるＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５遠心ユニットを用いる限外濾過によって濃縮する。通常、最初に、濃縮した溶液について、イオン交換クロマトグラフィー（ＰｏｌｙＳＵＬＦＯＥＴＨＹＬ  Ａカラム、ＰｏｌｙＬＣ  Ｉｎｃ．、２５０×２１ｍｍ、５μｍ、１０００Å；緩衝液Ａ：０．１％（体積比）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ；緩衝液Ｂ：０．１％（体積比）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ／０．５Ｍ  ＮａＣｌ）を行う。所望の純度でＢ１−複合体を含む分画を合わせ、ＴＦＦシステムまたはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて濃縮する。得られた溶液を、逆相ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ４  ２５０×５０ｍｍカラム、１０μｍ、１０００ÅカラムまたはＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８  ２５０×５０ｍｍ、１０μｍ、１００Åカラム；緩衝液Ａ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／脱イオン水；緩衝液Ｂ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮ）によってさらに精製する。標題複合体を含む分画を合わせ、凍結乾燥し、またはＴＦＦシステムおよび／またはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて緩衝液交換を行って、標題生成物を得る。
【０６３４】
実施例９０
インシュリンのＮεＢ２９でのリンカー−オリゴ糖との複合体の合成
適切な大きさの容器中、インシュリンを、やさしく撹拌しながら、室温で混合溶媒：２：３（体積比）０．１Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３：ＡｃＣＮに溶かす。混合物が透明となった後、アルカリ溶液、例えば０．１Ｎ  ＮａＯＨを用いて、ｐＨを１０．５から１０．８の値に調節する。別のバイアル中、活性化エステル中間体を室温で、有機溶媒、例えばＤＭＳＯに溶かす。ＵＰＬＣクロマトグラムで未修飾インシュリンのほとんどが反応して、反応混合物のかなりの部分がＢ２９−複合体化インシュリンに変換されるまで、活性化エステルの溶液の小分けしたものを、インシュリンを含有する溶液に一定期間をかけて加える。アミン求核剤、例えば２−アミノエタノールを加えることで反応停止する。反応溶液を室温で３０分間撹拌する。得られた溶液を、０℃で冷Ｈ２Ｏ（２０倍）で注意深く希釈し、それのｐＨを１Ｎ  ＨＣｌ（および必要に応じて０．１Ｎ  ＮａＯＨ）を用いて最終ｐＨ２．５に調節する。溶液を最初に、接線流濾過（ＴＦＦ）システムによる、または１Ｋ、３Ｋもしくは１０Ｋ  ＭＷＣＯ膜を用いるＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５遠心ユニットを用いる限外濾過によって濃縮する。通常、最初に、濃縮した溶液について、イオン交換クロマトグラフィー（ＰｏｌｙＳＵＬＦＯＥＴＨＹＬ  Ａカラム、ＰｏｌｙＬＣ  Ｉｎｃ．、２５０×２１ｍｍ、５μｍ、１０００Å；緩衝液Ａ：０．１％（体積比）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ；緩衝液Ｂ：０．１％（体積比）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ／０．５Ｍ  ＮａＣｌ）を行う。所望の純度でＢ２９−複合体を含む分画を合わせ、ＴＦＦシステムまたはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて濃縮する。得られた溶液を、逆相ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ４  ２５０×５０ｍｍカラム、１０μｍ、１０００ÅカラムまたはＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８  ２５０×５０ｍｍ、１０μｍ、１００Åカラム；緩衝液Ａ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／水；緩衝液Ｂ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮ）によってさらに精製する。標題複合体を含む分画を合わせ、凍結乾燥し、またはＴＦＦシステムおよび／またはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて緩衝液交換を行って、標題生成物を得る。
【０６３５】
実施例９１
インシュリンのＮＢ１およびＮεＢ２９での同じリンカー−オリゴ糖との複合体の合成
適切な大きさの容器中、保護されたインシュリン、例えば、ＮＡ１−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル−またはＮＡ１−（トリフルオロアセチル）ヒトインシュリンを室温で、塩基、例えばＴＥＡ存在下に有機溶媒、例えばＤＭＳＯに懸濁させる。保護インシュリンが完全に溶解するまで、混合物をやさしく撹拌する。別のバイアル中、活性化エステル中間体を室温で、有機溶媒、例えばＤＭＳＯに溶かす。ＵＰＬＣクロマトグラムで未修飾保護インシュリンが全て反応して、反応混合物のかなりの部分がＢ１，Ｂ２９−複合体化保護インシュリンに変換されるまで、活性化エステルの溶液の小分けしたものを、インシュリンを含有する溶液に一定期間をかけて加える。過剰量のアミン求核剤、例えば２−アミノエタノールまたはアンモニアを加えることで低温で反応停止する。ＵＰＬＣクロマトグラムで保護基が完全に除去されたことが示されるまで、反応溶液を低温で撹拌する。得られた溶液を、０℃で冷Ｈ２Ｏ（２０倍）で注意深く希釈し、それのｐＨを１Ｎ  ＨＣｌ（および必要に応じて０．１Ｎ  ＮａＯＨ）を用いて最終ｐＨ２．５に調節する。溶液を最初に、接線流濾過（ＴＦＦ）システムによる、または１Ｋ、３Ｋもしくは１０Ｋ  ＭＷＣＯ膜を用いるＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５遠心ユニットを用いる限外濾過によって濃縮する。通常、最初に、濃縮した溶液について、イオン交換クロマトグラフィー（ＰｏｌｙＳＵＬＦＯＥＴＨＹＬ  Ａカラム、ＰｏｌｙＬＣ  Ｉｎｃ．、２５０×２１ｍｍ、５μｍ、１０００Å；緩衝液Ａ：０．１％（体積比）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ；緩衝液Ｂ：０．１％（体積比）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ／０．５Ｍ  ＮａＣｌ）を行う。所望の純度でＢ１，Ｂ２９−複合体を含む分画を合わせ、ＴＦＦシステムまたはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて濃縮する。得られた溶液を、逆相ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ４  ２５０×５０ｍｍカラム、１０μｍ、１０００ÅカラムまたはＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８  ２５０×５０ｍｍ、１０μｍ、１００Åカラム；緩衝液Ａ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／脱イオン水；緩衝液Ｂ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮ）によってさらに精製する。標題複合体を含む分画を合わせ、凍結乾燥し、またはＴＦＦシステムおよび／またはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて緩衝液交換を行って、標題生成物を得る。
【０６３６】
実施例９２
インシュリンのＮＡ１、ＮＢ１およびＮεＢ２９での同じリンカー−オリゴ糖との複合体の合成
適切な大きさの容器中、インシュリンを室温で、塩基、例えばＴＥＡ存在下に有機溶媒、例えばＤＭＳＯに懸濁させる。インシュリンが完全に溶解するまで、混合物をやさしく撹拌する。別のバイアル中、活性化エステル中間体を室温で、有機溶媒、例えばＤＭＳＯに溶かす。ＵＰＬＣクロマトグラムで未修飾インシュリンが全て反応して、反応混合物のかなりの部分がＡ１−、Ｂ１−およびＢ２９−複合体化インシュリンに変換されるまで、活性化エステルの溶液の小分けしたものを、インシュリンを含有する溶液に一定期間をかけて加える。アミン求核剤、例えば２−アミノエタノールを加えることで反応停止する。反応溶液を室温で３０分間撹拌する。得られた溶液を、０℃で冷Ｈ２Ｏ（２０倍）で注意深く希釈し、それのｐＨを１Ｎ  ＨＣｌ（および必要に応じて０．１Ｎ  ＮａＯＨ）を用いて最終ｐＨ２．５に調節する。溶液を最初に、接線流濾過（ＴＦＦ）システムによる、または１Ｋ、３Ｋもしくは１０Ｋ  ＭＷＣＯ膜を用いるＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５遠心ユニットを用いる限外濾過によって濃縮する。通常、最初に、濃縮した溶液について、イオン交換クロマトグラフィー（ＰｏｌｙＳＵＬＦＯＥＴＨＹＬ  Ａカラム、ＰｏｌｙＬＣ  Ｉｎｃ．、２５０×２１ｍｍ、５μｍ、１０００Å；緩衝液Ａ：０．１％（体積比）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ；緩衝液Ｂ：０．１％（体積比）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ／０．５Ｍ  ＮａＣｌ）を行う。
【０６３７】
所望の純度でＡ１、Ｂ１、Ｂ２９−複合体を含む分画を合わせ、ＴＦＦシステムまたはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて濃縮する。得られた溶液を、逆相ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ４  ２５０×５０ｍｍカラム、１０μｍ、１０００ÅカラムまたはＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８  ２５０×５０ｍｍ、１０μｍ、１００Åカラム；緩衝液Ａ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／脱イオン水；緩衝液Ｂ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮ）によってさらに精製する。標題複合体を含む分画を合わせ、凍結乾燥し、またはＴＦＦシステムおよび／またはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて緩衝液交換を行って、標題生成物を得る。
【０６３８】
実施例９３
インシュリンのＮＡ１およびＮεＢ２９での異なるリンカー−オリゴ糖との複合体の合成
適切な大きさの容器中、ＮεＢ２９−複合体化インシュリンを室温で、塩基、例えばＴＥＡ存在下に有機溶媒、例えばＤＭＳＯに懸濁させる。インシュリンが完全に溶解するまで、混合物をやさしく撹拌する。別のバイアル中、活性化エステル中間体を室温で、有機溶媒、例えばＤＭＳＯに溶かす。ＵＰＬＣクロマトグラムで未修飾インシュリンが全て反応して、反応混合物のかなりの部分がＡ１−、Ｂ２９−複合体化インシュリンに変換されるまで、活性化エステルの溶液の小分けしたものを、インシュリンを含有する溶液に一定期間をかけて加える。アミン求核剤、例えば２−アミノエタノールを加えることで反応停止する。反応溶液を室温で３０分間撹拌する。得られた溶液を、０℃で冷Ｈ２Ｏ（２０倍）で注意深く希釈し、それのｐＨを１Ｎ  ＨＣｌ（および必要に応じて０．１Ｎ  ＮａＯＨ）を用いて最終ｐＨ２．５に調節する。溶液を最初に、接線流濾過（ＴＦＦ）システムによる、または１Ｋ、３Ｋもしくは１０Ｋ  ＭＷＣＯ膜を用いるＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５遠心ユニットを用いる限外濾過によって濃縮する。最初に、濃縮した溶液について、イオン交換クロマトグラフィー（ＰｏｌｙＳＵＬＦＯＥＴＨＹＬ  Ａカラム、ＰｏｌｙＬＣ  Ｉｎｃ．、２５０×２１ｍｍ、５μｍ、１０００Å；緩衝液Ａ：０．１％（体積比）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ；緩衝液Ｂ：０．１％（体積比）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ／０．５Ｍ  ＮａＣｌ）を行うことができる。所望の純度でＡ１，Ｂ２９−複合体を含む分画を合わせ、ＴＦＦシステムまたはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて濃縮する。得られた溶液を、逆相ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ４  ２５０×５０ｍｍカラム、１０μｍ、１０００ÅカラムまたはＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８  ２５０×５０ｍｍ、１０μｍ、１００Åカラム；緩衝液Ａ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／脱イオン水；緩衝液Ｂ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮ）によってさらに精製する。標題複合体を含む分画を合わせ、凍結乾燥し、またはＴＦＦシステムおよび／またはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて緩衝液交換を行って、標題生成物を得る。
【０６３９】
実施例９４
インシュリンのＮＢ１およびＮεＢ２９での同じリンカー−オリゴ糖との複合体の合成
適切な大きさの容器中、保護されたインシュリン、例えば、ＮεＢ２９−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル−またはＮＡ１−（トリフルオロアセチル）ヒトインシュリンを室温で、塩基、例えばＴＥＡ存在下に有機溶媒、例えばＤＭＳＯに懸濁させる。保護インシュリンが完全に溶解するまで、混合物をやさしく撹拌する。別のバイアル中、活性化エステル中間体を室温で、有機溶媒、例えばＤＭＳＯに溶かす。ＵＰＬＣクロマトグラムで未修飾保護インシュリンが全て反応して、反応混合物のかなりの部分がＡ１，Ｂ１−複合体化保護インシュリンに変換されるまで、活性化エステルの溶液の小分けしたものを、インシュリンを含有する溶液に一定期間をかけて加える。過剰量のアミン求核剤、例えば２−アミノエタノールまたはアンモニアを加えることで低温で反応停止する。ＵＰＬＣクロマトグラムで保護基が完全に除去されたことが示されるまで、反応溶液を低温で撹拌する。得られた溶液を、０℃で冷Ｈ２Ｏ（２０倍）で注意深く希釈し、それのｐＨを１Ｎ  ＨＣｌ（および必要に応じて０．１Ｎ  ＮａＯＨ）を用いて最終ｐＨ２．５に調節する。溶液を最初に、接線流濾過（ＴＦＦ）システムによる、または１Ｋ、３Ｋもしくは１０Ｋ  ＭＷＣＯ膜を用いるＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５遠心ユニットを用いる限外濾過によって濃縮する。通常、最初に、濃縮した溶液について、イオン交換クロマトグラフィー（ＰｏｌｙＳＵＬＦＯＥＴＨＹＬ  Ａカラム、ＰｏｌｙＬＣ  Ｉｎｃ．、２５０×２１ｍｍ、５μｍ、１０００Å；緩衝液Ａ：０．１％（体積比）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ；緩衝液Ｂ：０．１％（体積比）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ／０．５Ｍ  ＮａＣｌ）を行う。所望の純度でＢ１，Ｂ２９−複合体を含む分画を合わせ、ＴＦＦシステムまたはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて濃縮する。得られた溶液を、逆相ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ４  ２５０×５０ｍｍカラム、１０μｍ、１０００ÅカラムまたはＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８  ２５０×５０ｍｍ、１０μｍ、１００Åカラム；緩衝液Ａ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／脱イオン水；緩衝液Ｂ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮ）によってさらに精製する。標題複合体を含む分画を合わせ、凍結乾燥し、またはＴＦＦシステムおよび／またはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて緩衝液交換を行って、標題生成物を得る。
【０６４０】
実施例９５
ＮεＢ２９−（トリフルオロアセチル）ヒトインシュリンの合成について説明する。
【０６４１】
１００丸底フラスコにヒトインシュリン（２００ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ）を入れ、それにＡｃＣＮ（４．０ｍＬ）、水（４．０ｍＬ）、およびＴＥＡ（０．５ｍＬ、３．４４ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物に０℃で、トリフルオロ酢酸エチル（０．４１ｍＬ、３．４４ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で３０分間撹拌後、混合物を水（２０ｍＬ、ｐＨ約３．０）で希釈した。得られた溶液をｐＨ約２．５となるまで注意深く酸性とした後、混合物をＨＰＬＣ（Ｄｅｌｔａ  Ｐａｋ  Ｃ４  １５μｍ、３００Å、５０×２５０ｍｍカラム、２１０ｎｍ、流量：８５ｍＬ／分、０．０５％ＴＦＡのＡｃＣＮ／Ｈ２Ｏ中溶液、２７％ＡｃＣＮから３７％ＡｃＣＮのＨ２Ｏ中溶液、２０分の勾配）によって精製した。所望の分画を合わせ、凍結乾燥して、標題化合物を得た。ＵＰＬＣ方法Ａ：ｍ／ｅ＝１４７６．５０１２［（Ｍ＋４）／４］；Ｒｔ＝３．７１分。
【０６４２】
実施例９６
ＩＯＣ−３、リンカーＭＬ−７にＢ１およびＢ２９で結合したヒトインシュリンの合成
ＮαＡ１−Ｔｆａ−インシュリン（６０ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）を室温でＤＭＳＯ  １ｍＬに溶かし、この溶液にトリエチルアミン（１０．３ｍｇ、０．１０２ｍｍｏｌ）を加え、ＭＬ−７（１８．２ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ  １００μＬに溶かし、反応混合物に加えた。室温で４時間撹拌後、混合物をＡｃＣＮ  ４０ｍＬに加えた。沈澱が生成し、遠心によって回収した。回収した固体をｐＨ＝３．００ＤＩ水５ｍＬに溶かし、冷却して０℃とし、ＮＨ４ＯＨ（２８％水溶液）５ｍＬを前記水溶液に加え、混合物を０℃で２時間撹拌し、ＤＩ水ｐＨ＝３．００  ２０ｍＬで希釈した。混合物を１０Ｋ膜Ａｍｉｃｏｎ遠心管で濃縮して５ｍＬとし、ｐＨ＝３．００ＤＩ水１００ｍＬでさらにダイアフィルトレーションして最終容量約７．５ｍＬとし、分取ＨＰＬＣによって精製した。ＨＰＬＣ条件は、Ｋｒｏｍａｓｉｌ（登録商標）  Ｃ８  １０μｍ、１００Å、５０×２５０ｍｍカラム、２１０ｎｍ、流量：８５ｍＬ／分、０．０５％ＴＦＡのＡｃＣＮ／Ｈ２Ｏ中溶液、２６％ＡｃＣＮから３２％ＡｃＣＮのＨ２Ｏ中溶液、２５分の勾配であり、分画を回収し、凍結乾燥して粉末を得た。（３８．８ｍｇ、収率５２．４％）。１７８４．７６［Ｍ＋４］／４、ｔＲ＝３．４３５
実施例９７
本実施例は、オリゴ糖リンカーＭＬ−１１がヒトインシュリンの位置Ｂ１およびＢ２９でＮＨ２基に連結されているインシュリンオリゴ糖複合体（ＩＯＣ−１２３）の製造を示すものである。
【０６４３】
ＮαＡ１−Ｆｍｏｃインシュリン（８０ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）およびリンカーＭＬ−１１（１００ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）を昇温させて室温として３０分間経過させた。２０ｍＬバイアル中のＤＭＳＯ（１．００ｍＬ）中ＮαＡ１−Ｆｍｏｃインシュリン（８０ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）に、トリエチルアミン（１８．９５μＬ、０．１３６ｍｍｏｌ）を加えた。ＤＭＳＯ（０．９０ｍＬ）中のＭＬ−１１（１００ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）を、反応バイアルに、等量ずつ３回、５０分間の間隔で加えた。２−アミノエタノール（１０３μＬ、１．７００ｍｍｏｌ）を加えることで反応停止し、混合物を室温で２０分間撹拌した。混合物を、０℃でＨ２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈した。反応混合物のｐＨを、１Ｎ  ＨＣｌを用いて約２．５に調節する。
【０６４４】
粗生成物を最初に、イオン交換クロマトグラフィーによって精製した。所望の分画を、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ遠心フィルターを用いて濃縮するか終夜凍結乾燥し、次に逆相分取ＨＰＬＣ（Ｇｉｌｓｏｎ  Ｃ−４カラム）によってさらに精製した。合わせた所望の分画を凍結乾燥して、固体を製造した。次に、固体を水に溶かし、０．１Ｎ  ＮａＯＨ溶液を用いてｐＨを７に調節することで、ＩＯＣ−１２３の溶液を得た。
【０６４５】
実施例９８
本実施例は、ヒトインシュリンのＡ１およびＢ１位置がＭＬ−１７に結合しているＩＯＣ−１１３（ＮＡ１，ＮβＢ２９−ビス｛６−［シス−３，５−ビス（｛２−［（α−Ｌ−フコピラノシル）オキシ］エチル｝カルバモイル）ピペリジン−１−イル］−６−オキソヘキサノイル｝ヒトインシュリン）の合成を説明するものである。
【０６４６】
ヒトインシュリン（１０５ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）の入った２０ｍＬシンチレーションバイアルに室温で、ＤＭＳＯ（１ｍＬ）およびＤＩＰＥＡ（３５．１ｍｇ、０．２７１ｍｍｏｌ）を加えた。インシュリンが溶解するまで、混合物をやさしく撹拌した。別のバイアル中、リンカーＭＬ−１７（３５．１ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）を室温でＤＭＳＯ（０．９ｍＬ）に溶かした。ヒトインシュリンを含む溶液に、ＭＬ−１７の溶液を５０分の間隔で等量ずつ３回で加えた。２−アミノエタノール（３４μＬ、０．４２ｍｍｏｌ）を加えることで反応停止した。室温で２０分間撹拌後、得られた混合物を０℃で冷Ｈ２Ｏ（４ｍＬ）で注意深く希釈した。得られた混合物のｐＨを、１Ｎ  ＨＣｌ（または０．１Ｎ  ＮａＯＨ）を用いて最終ｐＨ２．５に調節した。混合物について、最初に、イオン交換クロマトグラフィー（（ＰｏｌｙＳＵＬＦＯＥＴＨＹＬ  Ａカラム、ＰｏｌｙＬＣ  Ｉｎｃ．、２５０×２１ｍｍ、５μｍ、１０００Å；緩衝液Ａ：０．１％（体積比）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ；緩衝液Ｂ：０．１％（体積比）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ／０．５Ｍ  ＮａＣｌ））を行った。主要生成物として標題複合体を含む分画を合わせ、Ａｍｉｃｏｎ−１５ＭＷＣＯ  ３ｋまたは１０ｋ超遠心フィルターを用いて濃縮するか、ｐＨ約７．０に中和したのちに凍結乾燥した。得られた溶液または再生した複合体溶液を、逆相分取ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ４  ２５０×５０ｍｍカラム、１０μｍ、１０００ÅカラムまたはＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８  ２５０×５０ｍｍ、１０μｍ、１００Åカラム；緩衝液Ａ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／脱イオン水；緩衝液Ｂ：０．０５％から０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮ）によってさらに精製した。＞９５％標題複合体を含む分画を合わせ、凍結乾燥して標題生成物を得た。ＵＰＬＣＭＳ（Ｃ４、５分）：１９４８．６６（Ｍ＋４／４）（３．４８分）。
【０６４７】
実施例９９
本実施例は、ヒトインシュリンのＡ１およびＢ１残基がそれぞれ、リンカーＭＬ−４およびＭＬ−２９に結合しているＩＯＣ−５２（ＮＡ１−６−オキソ−６−（（２−（α−Ｌ−フコピラノシルオキシ）エチル）アミノ）ヘキサノイル−ＮεＢ２９−６−（（（（２−オキソ−２−（（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）−２−オキシエチル）アミノ）（２−オキソ−２−（（α−Ｌ−フコピラノシルオキシ）−２−オキソエチル）アミノ）エチル）アミノ）アセトアミド）−６−オキソヘキサノイルヒトインシュリン）の構築を示すものである。
【０６４８】
ＮεＢ２９−６−（（（（２−オキソ−２−（（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）−２−オキシエチル）アミノ）（２−オキソ−２−（（α−Ｌ−フコピラノシルオキシ）−２−オキソエチル）アミノ）エチル）アミノ）アセトアミド）−６−オキソヘキサノイルヒトインシュリン（ＩＯＣ−５８）の合成
ヒトインシュリン（１０００ｍｇ、０．１７２ｍｍｏｌ）をＮａ２ＣＯ３水溶液（８．６ｍＬ、０．１Ｍ）およびＡｃＣＮ（５．７ｍＬ）に溶かした。得られた溶液のｐＨを１０．５に調節し、それにＭＬ−２９（６−（（（（２−オキソ−２−（（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）−２−オキシエチル）アミノ）（２−オキソ−２−（（α−Ｌ−フコピラノシルオキシ）−２−オキソエチル）アミノ）エチル）アミノ）アセトアミド）−６−オキソヘキサン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）（２８９ｍｇ、０．２５８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．９ｍＬ）中溶液を少量ずつ加えた。反応の進行をＵＰＬＣ−ＭＳによってモニタリングし、エタノールアミン（５２．１μＬ、０．８６１ｍｍｏｌ）を加えることで反応停止した。反応混合物をＨ２Ｏ（１５ｍＬ）で希釈し、１．０Ｎ  ＨＣｌ溶液を用いてｐＨを約２．５に調節した。得られた混合物をＨＰＬＣ（イオンクロマトグラフィー、ＰｏｌｙＳＵＬＦＯＥＴＨＹＬ  Ａ、９．４×２５０ｍｍ、勾配１０％から４５％）（３０分かけて移動相Ａ：０．１％（体積比）Ｈ３ＰＯ４／２５％アセトニトリルの水溶液、移動相Ｂ：０．１％（体積比）Ｈ３ＰＯ４／２５％アセトニトリル／０．５Ｍ  ＮａＣｌの水溶液）、流量１５ｍＬ／分）によって精製した。所望の分画を合わせ、３５００ｒｐｍにて４℃でＵｔｒａｃｅｌ  １０Ｋを用いるＡｍｉｃｏｎ超遠心フィルター６個を用いて濃縮し、凍結乾燥して、標題化合物（６００ｍｇ、収率５１％）を白色粉末として得た。ＵＰＬＣ方法Ａ：ｔＲ＝３．５８分。［Ｍ＋４Ｈ／４］＋＝１７０３．９９。
【０６４９】
ＮＡ１−６−オキソ−６−（（２−（α−Ｌ−フコピラノシルオキシ）エチル）アミノ）ヘキサノイル−ＮεＢ２９−６−（（（（２−オキソ−２−（（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）−２−オキシエチル）アミノ）（２−オキソ−２−（（α−Ｌ−フコピラノシルオキシ）−２−オキソエチル）アミノ）エチル）アミノ）アセトアミド）−６−オキソヘキサノイルヒトインシュリンの合成
ＮεＢ２９−６−（（（（２−オキソ−２−（（α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）］−α−Ｄ−マンノピラノシル）−２−オキシエチル）アミノ）（２−オキソ−２−（（α−Ｌ−フコピラノシルオキシ）−２−オキソエチル）アミノ）エチル）アミノ）アセトアミド）−６−オキソヘキサノイルヒトインシュリン（１５０ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（３０．７μＬ、０．２２ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１．５ｍＬ）中溶液に室温で、６−オキソ−６−（（２−（α−Ｌ−フコピラノシルオキシ）エチル）アミノ）ヘキサン酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル（１７ｍｇ、０．０４０ｍｍｏｌ）（ＭＬ−４）のＤＭＳＯ（１．０ｍＬ）中溶液を少量ずつ加えた。エタノールアミン（１３．３２μＬ、０．２２ｍｍｏｌ）を加えることで反応停止した。室温で１５分間撹拌後、反応混合物をＨ２Ｏ（１５ｍＬ）で希釈し、１．０Ｎ  ＨＣｌ溶液を用いてｐＨを約２．５に調節した。得られた混合物をＨＰＬＣ（イオンクロマトグラフィー、ＰｏｌｙＳＵＬＦＯＥＴＨＹＬ  Ａ、９．４×２５０ｍｍ、勾配１０％から４０％）（３０分かけての移動相Ａ：０．１％（体積比）Ｈ３ＰＯ４／２５％アセトニトリルの水溶液、移動相Ｂ：０．１％（体積比）Ｈ３ＰＯ４／２５％アセトニトリル／０．５Ｍ  ＮａＣｌの水溶液）、流量１５ｍＬ／分）によって精製した。所望の分画を合わせ、３５００ｒｐｍにて４℃でＵｔｒａｃｅｌ  １０Ｋを用いるＡｍｉｃｏｎ超遠心フィルター２個を用いて濃縮した。得られた混合物を、ＨＰＬＣ（Ｃ４、５０×２５０ｍｍ、３０分かけての勾配２５％から３０％ＡｃＣＮ／Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ含有）、流量８５ｍＬ／分）で精製した。所望の分画を合わせ、凍結乾燥して、標題化合物（３１ｍｇ、収率１９％）を白色粉末として得た。ＵＰＬＣ方法Ａ：ｔＲ＝３．７９分。［Ｍ＋４Ｈ／４］＋＝１７８３．３。
【０６５０】
実施例１００
ＩＯＣ−１０、リンカーＭＬ−６にＢ１およびＢ２９で結合したヒトインシュリンの合成
Ａ１  Ｆｍｏｃインシュリン（８０ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）およびリンカーＭＬ−６（１００ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）を昇温させて室温として３０分経過させた。２０ｍＬバイアルに入ったＤＭＳＯ（１．００ｍＬ）中のＡ１  Ｆｍｏｃインシュリン（８０ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）に、トリエチルアミン（１８．９５μＬ、０．１３６ｍｍｏｌ）を加えた。ＤＭＳＯ（０．９０ｍＬ）中のリンカーＭＬ−６（１００ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）を、３回等量ずつ、５０分間の間隔で反応バイアルに加えた。２−アミノエタノール（１０３μＬ、１．７００ｍｍｏｌ）を加えることで反応停止し、混合物を室温で２０分間撹拌した。混合物を、０℃でＨ２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈した。反応混合物のｐＨを、１Ｎ  ＨＣｌを用いて約２．５に調節する。
【０６５１】
粗生成物を最初に、イオン交換クロマトグラフィーによって精製した。所望の分画を、Ａｍｉｃｏｎ超遠心フィルターを用いて濃縮するか、終夜凍結乾燥してから、逆相分取ＨＰＬＣ（Ｇｉｌｓｏｎ  Ｃ−４カラム）によってさらに精製した。合わせた所望の分画を凍結乾燥した。次に、固体を水に溶かし、０．１Ｎ  ＮａＯＨ溶液を用いてｐＨを７に調節した。サンプルの濃度を、λ２７６でＬａｍｂｄａ  Ｂｉｏ＋ＵＶ＼Ｖｉｓ分光計によって測定した。ＵＰＬＣＭＳ（Ｃ４、５分）：１７６３．３（Ｍ＋４／４）（３．７２分）。
【０６５２】
実施例１０１
ＩＯＣ−２２６、リンカーＭＬ−３１およびＭＬ−５４にそれぞれＢ１およびＢ２９で結合したヒトインシュリン複合体の合成
ＮαＡ１−Ｔｆａ−インシュリン（４０ｍｇ、０．００６７ｍｍｏｌ）を室温でＤＭＳＯ  １ｍＬに溶かし、この溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．０３８ｍＬ、０．２１５ｍｍｏｌ）を加え、ＭＬ−５４（１１．５ｍｇ、０．００７８ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ  １１５μＬに溶かし、反応混合物に加えた。反応混合物を、２時間またはＵＰＬＣクロマトグラムで反応混合物のかなりの部分がＢ２９−複合体化インシュリンに変換されていることが示されるまで室温で撹拌した。次に、第２の活性化エステル、ＭＬ−３１（１６ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ  １６０μＬに溶かし、反応混合物に加えた。反応混合物を、１６時間またはＵＰＬＣクロマトグラムで反応混合物のかなりの部分がＢ１、Ｂ２９−複合体化インシュリンに変換されていることが示されるまで、室温で撹拌した。混合物をＡｃＣＮ  ４０ｍＬに加えた。沈澱が生成し、遠心によって回収した。回収した固体をｐＨ＝３．００  ＤＩ水５ｍＬに溶かし、冷却して０℃とし、その水溶液にＮＨ４ＯＨ（２８％水溶液）５ｍＬを加え、混合物を０℃で２時間撹拌し、ＤＩ水ｐＨ＝３．００  ２０ｍＬで希釈した。混合物を１０Ｋ膜Ａｍｉｃｏｎ遠心管で濃縮して３ｍＬとし、ｐＨ＝３．００ＤＩ水６０ｍＬでさらにダイアフィルトレーションして、最終体積約５ｍＬとした。粗生成物を最初に、イオン交換クロマトグラフィーによって精製した。所望の分画を、Ａｍｉｃｏｎ超遠心フィルターを用いて濃縮し、次に逆相分取ＨＰＬＣによってさらに精製した。ＨＰＬＣ条件は、Ｋｒｏｍａｓｉｌ（登録商標）  Ｃ８  １０μｍ、１００Å、５０×２５０ｍｍカラム、２１０ｎｍ、流量：８５ｍＬ／分、０．０５％ＴＦＡのＡｃＣＮ／Ｈ２Ｏ中溶液、２７％ＡｃＣＮから３３％ＡｃＣＮのＨ２Ｏ中溶液、２５分の勾配であり、分画を回収し、凍結乾燥して粉末を得た。次に、固体を水に溶かし、０．１Ｎ  ＮａＯＨ溶液を用いてｐＨを７に調節した。λ２７６でＬａｍｂｄａ  Ｂｉｏ＋ＵＶ＼Ｖｉｓ分光計によって、サンプルの濃度を測定した。（１６．５３ｍｇ、収率２９．２％）。１６３２．５４［Ｍ＋５］／５、ｔＲ＝３．３５。
【０６５３】
実施例１０１
インシュリン受容体結合アッセイを下記のように実施した。
【０６５４】
二つの競合結合アッセイを用いて、１２５［Ｉ］で標識した内因性リガンド、インシュリンに対するヒトインシュリン受容体Ｂ型（ＩＲ（Ｂ））へのＩＯＣアフィニティを求めた。
【０６５５】
方法Ｅ：ＩＲ結合アッセイは、ヒトＩＲ（Ｂ）を過剰発現するＣＨＯ細胞を用いる全細胞結合法であった。細胞を１０％ＦＢＳおよび抗生物質（Ｇ４１８、ペニシリン／ストレプトアビジン（Ｓｔｒｅｐａｖｉｄｉｎ））を含むＦ１２培地で増殖させ、９６ウェル組織培養プレートに４０，０００細胞／ウェルで蒔き、少なくとも８時間経過させた。１％ＢＳＡを含むＤＭＥＭ培地（インシュリンを含まない）に切り換えて終夜経過させることで、細胞を血清飢餓状態とした。細胞を、１％ＢＳＡを含む冷ＤＭＥＭ培地（インシュリンを含まない）で２回洗浄し、次に同じ培地９０μＬ中適切な濃度のＩＯＣ分子を加えた。細胞を氷上で６０分間インキュベートした。１２５［Ｉ］−インシュリン（１０μＬ）を０．０１５ｎＭ最終濃度で加え、氷上で４時間インキュベートした。細胞を、冷培地で３回やさしく洗浄し、振盪しながら室温でＣｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ溶解緩衝液（カタログ番号９８０３）３０μＬで１０分間溶解させた。溶解物をシンチレーション液に加え、カウンティングを行って、ＩＲへの１２５［Ｉ］−インシュリン結合およびこの相互作用に対するＩＯＣ分子の滴定効果を求めた。
【０６５６】
方法Ｄ：１０％ＦＢＳおよび抗生物質（Ｇ４１８、ペニシリン／ストレプトアビジン（Ｓｔｒｅｐａｖｉｄｉｎ））を含むＦ１２培地で増殖させたヒトＩＲ（Ｂ）を過剰発現するＣＨＯ細胞から製造した細胞膜を用い、３８４ウェル形式で、シンチレーション近似アッセイ（ＳＰＡ）にて、ＩＲ結合アッセイを行った。５ｍＭ  ＭｇＣｌ２含有５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ緩衝液、ｐＨ７．８中で、細胞膜を準備した。アッセイ緩衝液は、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ緩衝液、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．１％ＢＳＡおよびプロテアーゼ阻害薬（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ−Ｍｉｎｉ−Ｒｏｃｈｅ）を含んでいた。細胞膜をＷＧＡ  ＰＶＴ  ＰＥＩ  ＳＰＡビーズ（５ｍｇ／ｍＬ最終濃度）に加え、次にＩＯＣ分子を適切な濃度で加えた。室温で５から１５分間インキュベーション後、１２５［Ｉ］−インシュリンを０．０１５ｎＭ最終濃度で加えて、最終総体積を５０μＬとした。その混合物を振盪しながら、室温で１から１２時間インキュベートし、次にシンチレーションカウンティングを行って、ＩＲへの１２５［Ｉ］−インシュリン結合およびこの相互作用に対するＩＯＣ分子の滴定効果を求めた。
【０６５７】
実施例１０２
インシュリン受容体リン酸化アッセイを以下にように実施した。
【０６５８】
インシュリン受容体リン酸化アッセイを、市販のＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）ｐＩＲアッセイ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，  ９２３８  Ｇａｉｔｈｅｒｓ  Ｒｏａｄ，  Ｇａｉｔｈｅｒｂｕｒｇ，  ＭＤ参照）を用いて実施した。ヒトＩＲ（Ｂ）を安定に発現するＣＨＯ細胞を１０％ＦＢＳおよび抗生物質（Ｇ４１８、ペニシリン／ストレプトアビジン（Ｓｔｒｅｐａｖｉｄｉｎ））を含むＦ１２細胞培地で少なくとも８時間増殖させ、ＦＢＳに代えて０．５％ＢＳＡを含むＦ１２培地（インシュリンを含まない）に切り換えて血清飢餓状態として終夜増殖させた。細胞を回収し、ＭＳＤ  ｐＩＲアッセイで用いるために小分けして冷凍した。すなわち、冷凍細胞を、９６ウェル（４０，０００細胞／ウェル、方法ＡおよびＢ）または３８４ウェル（１０，０００細胞／ウェル、方法Ｃ）透明細胞培養プレートに蒔き、回復させた。適切な濃度のＩＯＣ分子を加え、細胞を３７℃で８分間インキュベートした。培地を吸引し、ＭＳＤキットの説明書に従って、冷ＭＳＤ細胞溶解緩衝液を加えた。細胞を氷上で４０分間溶解させ、次に溶解物を室温で１０分間混和した。溶解物をＭＳＤキットｐＩＲ検出プレートに移した。アッセイの残りを、ＭＳＤキット推奨プロトコールに従って実施した。
【０６５９】
実施例１０３
ヒトマクロファージマンノース受容体１（ＭＲＣ１）結合アッセイを下記のように実施した。
【０６６０】
ＭＲＣ１についての競合結合アッセイで、文献に報告のようにリガンド、ＤＥＬＦＩＡ  Ｅｕ−Ｎ１−ＩＴＣ試薬で標識したマンノシル化−ＢＳＡを用いた。１００ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２および０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０（洗浄緩衝液）を含む５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ緩衝液、ｐＨ７．５  １００μＬで３回洗浄したタンパク質Ｇプレートに、抗ＭＲＣ１抗体（２５μＬ、２ｎｇ／μＬ）を加えた。その抗体をプレートで室温にて振盪しながら１時間インキュベートした。プレートを３から５回洗浄緩衝液で洗浄し、次に１％安定剤ＢＳＡを含むＰＢＳ  ２５μＬ中のＭＲＣ１（２ｎｇ／μＬ最終濃度）を加えた。プレートを、室温でやさしく振盪しながら１時間インキュベートした。プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄した。適切な濃度の緩衝液１２．５μＬ中ＩＯＣ分子を加え、次に１００ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２および０．２％安定剤ＢＳＡを含む５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．５中のＥｕ−マンノシル化ＢＳＡ１２．５μＬ（０．１ｎＭ最終濃度）を加えた。プレートを振盪しながら室温で２時間インキュベートし、次に洗浄緩衝液で３回洗浄した。パーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）Ｅｕ−誘発試薬（２５μＬ）を加え、室温で３０分間インキュベートしてから、Ｅｕシグナルの検出を行った（励起＝３４０ｎｍ：発光＝６１５ｎｍ）。手動液体分配（方法Ｆ）により、もしくは自動液体分配（方法Ｇ）を用いて９６ウェルプレートで、または自動分配（方法Ｈ）により３８４ウェルプレートでアッセイを実施した。
【０６６１】
実施例１０４
下記の表には、上記で記載の一般法の一つに従って、適切な中間体を用いて製造した複合体を挙げてある。これらの複合体は、アスタリスクによって示されたＵＰＬＣ方法ＡもしくはＵＰＬＣ方法Ｄ、または＃によって示されたＵＰＬＣ方法Ｇを用いること、ある一定の保持時間（Ｒｔ）で親化合物の４価、すなわち［（Ｍ＋４）／４］、（または５価、すなわち［（Ｍ＋５）／５］）化学種を示すことを特徴とした。インシュリン受容体（ＩＲ）に対するそれらのイン・ビトロ生理活性を、下記のように表示した上記のようなリガンド競合アッセイまたは機能性リン酸化アッセイによって測定した。方法Ａ：手動液体分配による９６ウェルに基づくＩＲリン酸化アッセイ；方法Ｂ：自動液体分配での９６ウェルに基づくＩＲリン酸化アッセイ；方法Ｃ：自動液体分配での３８４ウェルに基づくＩＲリン酸化アッセイ；方法Ｄ：ＩＲ結合アッセイ方法Ｄ；方法Ｅ：ＩＲ結合アッセイ方法Ｅ；方法Ｆ：ＭＲＣ１アッセイを手動液体分配での９６ウェルプレートで実施；方法Ｇ：ＭＲＣ１アッセイを自動液体分配での９６ウェルプレートで実施；方法Ｈ：ＭＲＣ１アッセイを自動分配での３８４ウェルプレートで実施した。結果を表１に示す。
【表１】
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【０６６２】
実施例１０５
非糖尿病ミニブタにおけるＩＯＣのＰＫおよびＰＤに対するメチルα−Ｄ−マンノピラノジド（αＭＭ）の効果を評価した。
【０６６３】
二つの尾静脈血管アクセスポート（ＶＡＰ）を設けた非糖尿病の雄ユカタンミニブタを、これらの試験で用いる。動物は終夜絶食させてから試験に供する。試験当日、動物を吊り包帯で拘束し、注入およびサンプリングにＶＡＰを用いる。ｔ＝−６０分で、ＰＢＳ（ｎ＝３）または２１．２％α−メチルマンノース（ａＭＭ）（ｎ＝３）の一定注入を、２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の速度で開始する。この注入は、試験期間中維持される。ｔ＝０分で、および血漿グルコース測定用の基底線血液サンプルを採取した後に、動物に、単一ボラスＩＶとしてＩＯＣを投与する。サンプリングを９０分間続け、血漿グルコースおよび化合物レベルの最終読み取りを行う。
【０６６４】
ＩＯＣは、塩化ナトリウム（８７ｍＭ）、フェノール（２１ｍＭ）、リン酸水素ナトリウム（２６．５ｍＭ）、オスモル濃度＝２７５ｍＯｓｍ、ｐＨ＝７．４；適量の注射用水中１７から６９ｎｍｏｌ／ｍＬで製剤する。
【０６６５】
サンプル採取の時間点：−６０分、０分、１分、２分、４分、６分、８分、１０分、１５分、２０分、２５分、３０分、３５分、４５分、６０分、および９０分。
【０６６６】
Ｋ３−ＥＤＴＡ管に採血を行い、１０μｇ／ｍＬアプロチニンを補充し、採血の３０分以内で処理まで氷浴上に置いておく。３０００ｒｐｍ、４℃で８分間遠心後、血漿を採取し、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＡＵ４８０  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ分析装置を用いるグルコース測定用およびＬＣ−ＭＳによる化合物レベル測定用に小分けした。
【０６６７】
グルコースの結果は、ｔ＝０分での基底線値に対する％変化として表し、図１から１４でそれぞれ、ＩＯＣ−２、ＩＯＣ−３、ＩＯＣ−８、ＩＯＣ−９、ＩＯＣ−１６、ＩＯＣ−２２、ＩＯＣ−２３、ＩＯＣ−４６、ＩＯＣ−４８、ＩＯＣ−５２、ＩＯＣ−５６、ＩＯＣ−６０、ＩＯＣ−７５、ＩＯＣ−７５およびＩＯＣ−７６について示してある。
【０６６８】
図１は、静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））またはＰＢＳを注入した、デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．６９ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−２の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）を示す。
【０６６９】
図２は、静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））またはＰＢＳを注入した、デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．１７ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−３の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）を示す。
【０６７０】
図３は、静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））またはＰＢＳを注入した、デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．１７ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−８の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）を示す。
【０６７１】
図４は、静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））またはＰＢＳを注入した、デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．１７ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−９の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）を示す。
【０６７２】
図５は、静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））またはＰＢＳを注入した、デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．３５ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−１６の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）を示す。
【０６７３】
図６は、静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））またはＰＢＳを注入した、デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．３５ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−２２の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）を示す。
【０６７４】
図７は、静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））またはＰＢＳを注入した、デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．３５ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−２３の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）を示す。
【０６７５】
図８は、静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））またはＰＢＳを注入した、デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．３５ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−４６の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）を示す。
【０６７６】
図９は、静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））またはＰＢＳを注入した、デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．３５ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−４８の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）を示す。
【０６７７】
図１０は、静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））またはＰＢＳを注入した、デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．３５ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−５２の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）を示す。
【０６７８】
図１１は、静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））またはＰＢＳを注入した、デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．６９ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−５６の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）を示す。
【０６７９】
図１２は、静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））またはＰＢＳを注入した、デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．３５ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−６０の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）を示す。
【０６８０】
図１３は、静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））またはＰＢＳを注入した、デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．６９ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−７５の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）を示す。
【０６８１】
図１４は、静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）溶液（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））またはＰＢＳを注入した、デュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタへの０．１７ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈（ｉ．ｖ．）注射後のＩＯＣ−７６の血清濃度のプロット（試験当たりｎ＝３）を示す。
【０６８２】
ＩＯＣ−２、ＩＯＣ−３、ＩＯＣ−１６、ＩＯＣ−２２、ＩＯＣ−２３、ＩＯＣ−５２、ＩＯＣ−５６およびＩＯＣ−６０についてのＰＫ結果を、それぞれ図１５から２２に示した。
【０６８３】
図１５は、ＰＢＳ注入または静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）注入の条件下での０．６９ｎｍｏｌ／ｋｇでの複合体ＩＯＣ−２の静脈注射後のデュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタにおける血糖降下曲線（試験当たりｎ＝３）を示す。
【０６８４】
図１６は、ＰＢＳ注入または静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）注入の条件下での０．１７ｎｍｏｌ／ｋｇでの複合体ＩＯＣ−３の静脈注射後のデュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタにおける血糖降下曲線（試験当たりｎ＝３）を示す。
【０６８５】
図１７は、ＰＢＳ注入または静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）注入の条件下での０．３５ｎｍｏｌ／ｋｇでの複合体ＩＯＣ−１６の静脈注射後のデュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタにおける血糖降下曲線（試験当たりｎ＝３）を示す。
【０６８６】
図１８は、ＰＢＳ注入または静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）注入の条件下での０．３５ｎｍｏｌ／ｋｇでの複合体ＩＯＣ−２２の静脈注射後のデュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタにおける血糖降下曲線（試験当たりｎ＝３）を示す。
【０６８７】
図１９は、ＰＢＳ注入または静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）注入（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））の条件下での０．３５ｎｍｏｌ／ｋｇでの複合体ＩＯＣ−２３の静脈注射後のデュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタにおける血糖降下曲線（試験当たりｎ＝３）を示す。
【０６８８】
図２０は、ＰＢＳ注入または静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）注入の条件下での０．３５ｎｍｏｌ／ｋｇでの複合体ＩＯＣ−５２の静脈注射後のデュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタにおける血糖降下曲線（試験当たりｎ＝３）を示す。
【０６８９】
図２１は、ＰＢＳ注入または静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）注入（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））の条件下での０．６９ｎｍｏｌ／ｋｇでの複合体ＩＯＣ−５６の静脈注射後のデュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタにおける血糖降下曲線（試験当たりｎ＝３）を示す。
【０６９０】
図２２は、ＰＢＳ注入または静注α−メチルマンノース（ａＭＭ）注入（２．６７ｍＬ／ｋｇ／時の一定速度で注入した２１．２％（重量／体積））の条件下での０．３５ｎｍｏｌ／ｋｇでの複合体ＩＯＣ−６０の静脈注射後のデュアル血管アクセスポートを取り付けた非糖尿病雄ユカタンミニブタにおける血糖降下曲線（試験当たりｎ＝３）を示す。
【０６９１】
本明細書において、例示の実施形態を参照して本発明を説明しているが、理解すべき点として、本発明はそれに限定されるものではない。当業界における通常の技術を有し、本明細書の記述を読んだ者には、本発明の範囲内でさらなる改変および実施形態は明らかであろう。従って本発明は、本明細書に添付の特許請求の範囲によってのみ限定される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【配列表】
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