(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象において膵臓癌を処置するための医薬組成物であって、
ペプチドまたは該ペプチドの多量体を含んでおり、前記ペプチドは、アミノ酸配列Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ（配列番号１）を有することを特徴とする医薬組成物。
【請求項２】
前記ペプチドは、ポリエチレングリコールリンカーにコンジュゲートすることを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記ペプチドの二量体もしくは四量体のうちの少なくとも１つ、またはそれらの組み合わせを含むことを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
追加の治療剤をさらに含むことを特徴とする請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記治療剤は、化学療法剤であることを特徴とする請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記化学療法剤は、ゲムシタビン及び免疫チェックポイント阻害剤からなる群より選択されることを特徴とする請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記化学療法剤は、ゲムシタビン、アブラキサン、またはフォルフィリノックス（フルオロウラシル、ロイコボリン、イリノテカン、オキサリプラチンレジメン）であることを特徴とする請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項８】
薬学的に許容され得るキャリアをさらに含むことを特徴とする請求項１〜７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
キャリアタンパク質をさらに含むことを特徴とする請求項１〜８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記キャリアタンパク質は、血清アルブミンであることを特徴とする請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記対象はヒトであることを特徴とする請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記ペプチドは、モノマーであることを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記ペプチドは、アミノ酸配列Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ（配列番号１）からなることを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
化学療法剤をさらに含むことを特徴とする請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記化学療法剤は、ゲムシタビン及び免疫チェックポイント阻害剤からなる群より選択されることを特徴とする請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記化学療法剤は、ゲムシタビン、アブラキサン、またはフォルフィリノックス（フルオロウラシル、ロイコボリン、イリノテカン、オキサリプラチンレジメン）であることを特徴とする請求項１５に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
膵臓癌は、悪性（癌性）細胞が膵臓の組織内で形成される疾患である。膵臓癌は、初期に診断されたときでさえ、予後不良であることが多い。膵臓癌は、典型的には、急速に拡散し、その初期段階で検出されることは滅多になく、これが、膵臓癌が癌による死亡の主要な原因である主な理由である。実際、膵臓癌は、米国（Ｕ．Ｓ．）の男女両方における癌による死因の第４位であり、死亡例は年間３８，０００を超える。
【０００２】
膵臓癌は、２０２０年までに米国における全ての癌関連死において第２位に位置づけられると予想されている。さらに、Ｕ．Ｓ．における膵臓癌の５年生存率は、固形臓器腫瘍の中でも最下位に位置づけられる。膵臓癌を早期に検出するための確かなスクリーニング検査はない。兆候及び症状は、膵臓癌がかなり進行するまで現れない可能性があり、完全な外科的除去は不可能である。
【０００３】
外科手術、放射線療法、及び化学療法を含む膵臓癌の標準処置は、主に限られた有効性しか示さない。実際、ゲムシタビン、フォルフィリノックス、ゲムシタビンとアブラキサンの併用、及びゲムシタビンとエルロチニブの併用を含む認可処置は、最良でも、数ヶ月しか生存を改善しない。新しい治療法もこれ以上の成功は実証されておらず、これはおそらく膵臓の間質が厚いこと及び血管の量が相対的に少ないことに起因する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】米国特許出願公開第２０１２／２７０７７０号明細書
【発明の概要】
【０００５】
ペプチドＡは、アミノ酸配列Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ（配列番号１）を有し、ペプチドＢは、アミノ酸配列Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（配列番号２）を有し、これらは多くの炎症性疾患モデルにおいて評価され、それらの全てにおいて強い活性を示す。
【０００６】
膵臓癌は、それが非常に強い炎症成分を有するという点で特有である（Ｆａｒｒｏｗ，ｅｔ  ａｌ．２００４  Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｓｕｒｇｅｒｙ  ２３９（６）：７６３−７７１；Ｚａｍｂｉｒｉｎｉｓ，ｅｔ  ａｌ．２０１５  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ  ２０（３）：１９５−２０２）。膵臓は、その薬物拡散／灌流要件においても特有である−膵臓腫瘍は容易に薬物を取り込まない（Ｗｈａｔｃｏｔｔ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｈ  ８：Ｄｅｓｍｏｐｌａｓｉａ  ａｎｄ  ｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ２０１２  Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  Ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  Ｔｕｍｏｒ  Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，ｅｄｉｔｏｒｓ  Ｇｒｉｐｐｏ  ａｎｄ  Ｍｕｎｓｈｉ）。加えて、間質療法の開発を通して間質を標的とすることで、膵臓癌の前臨床モデルにおいて有効な腫瘍応答を得ることができることが示されている（Ｏｌｉｖｅ，ｅｔ  ａｌ．２００９  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２４（５９３３）：１４５７−６１；Ｐｒｏｖａｎｚａｎｏ，ｅｔ  ａｌ．２０１２  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２１（３）：４１８−２９）。
【０００７】
ペプチドＡ及びペプチドＢを種々の膵臓癌動物モデルにおいて検査する際、本明細書に記載するように、該ペプチドの強い抗癌活性が膵臓癌に対して見いだされている。膵臓癌を発症するトランスジェニック動物の腫瘍を縮小させ、寿命を延長させた、認可化学療法剤であるゲムシタビンと併用するペプチドＡまたはペプチドＢの投与も本明細書に記載する。それゆえ、この開示は、強力な抗炎症活性をｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏで有するペプチドの発見に基づき、別の態様では、ペプチドが循環中で十分に安定しているという発見に基づき、これはそれらの薬物動態及び用量応答特性の決定を可能にする質量分析測定によっても示される。
【０００８】
この開示は、対象において膵臓癌を処置する方法であって、抗炎症性ペプチドＡもしくはペプチドＢ、またはそれらの変異体を含む医薬組成物を該対象に投与することを含む、方法を提供する。
【０００９】
別の態様では、本発明は、対象において膵臓癌を処置する方法であって、抗炎症性ペプチドＡもしくはペプチドＢ、またはそれらの変異体を含む医薬組成物、及び少なくとも１つの化学療法剤を該対象に投与することを含む、方法を提供する。これらの方法は、アミノ酸配列Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ（配列番号１）、もしくはＰｈｅ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（配列番号２）を含むペプチド、またはその多量体、誘導体、もしくは変異体を対象に投与することにより、対象において膵臓癌を処置することを含んでよい。これらの方法は、追加の治療剤の投与を含んでよい。追加の治療剤（複数可）は、１つまたは複数の化学療法剤であってよい。かかる化学療法剤は、ゲムシタビンまたは免疫チェックポイント阻害剤からなる群より選択されてよい。化学療法剤は、ゲムシタビン、アブラキサンまたはフォルフィリノックスレジメン（フルオロウラシル、ロイコボリン、イリノテカン、オキサリプラチン）であってよい（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃ．Ｏｃｔｏｂｅｒ  １，２０１１，２９（２８）：３７２７−３７２９）。
【００１０】
これらの方法では、投与は、非経口投与によるものであってよい。これらの方法では、ペプチドは、約０．０５〜約２５ｍｇ／ｋｇの投与量で投与されてよい。これらの方法では、対象は、ヒトであってよい。
【００１１】
一態様は、アミノ酸配列Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ（配列番号１）もしくはＰｈｅ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（配列番号２）を含むペプチドまたはその多量体、誘導体、もしくは変異体、及び薬学的に許容され得るキャリアを含む膵臓癌の処置のための医薬組成物である。これらの組成物は、少なくとも１つの追加の治療剤を含んでよく、それゆえ別の態様は、アミノ酸配列Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ（配列番号１）もしくはＰｈｅ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（配列番号２）を含むペプチドまたはその多量体、誘導体、もしくは変異体、少なくとも１つの追加の治療剤、及び薬学的に許容され得るキャリアを含む膵臓癌の処置のための医薬組成物である。関連する態様は、アミノ酸配列Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ（配列番号１）もしくはＰｈｅ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（配列番号２）を含むペプチドまたはその多量体、誘導体、もしくは変異体の膵臓癌の処置のための使用である。
【００１２】
本発明の他の態様は、以下の開示に記載されるかまたはこれから明らかであり、本発明の範囲内である。
【００１３】
以下の発明を実施するための形態は、実施例により与えられるが、記載される特定の実施形態に本発明を限定することを意図せず、添付の図面と併せて理解され得る。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１Ａ】ビヒクル（Ｈ2 ＯまたはＰＢＳ）、５０ｍｇ／ｋｇゲムシタビン、２０ｍｇ／ｋｇペプチドＡ、またはペプチドＡ（２０ｍｇ／ｋｇ）及びゲムシタビン（５０ｍｇ／ｋｇ）の組み合わせを用いる処置に無作為に割り当てられた腫瘍を有するマウスの腫瘍体積における相対的増加を示す。全ての処置は、腹腔内注射により投与された。結果は、ペプチドＡ単独がトランスジェニック動物において膵臓癌の増殖を停止し、ペプチドＡとゲムシタビンの組み合わせＲＰ−１８２がトランスジェニック動物における膵臓癌の増殖を有意に低下させたことを示す。
【図１Ｂ】３つの薬物、及び対照レジメンで処置されたトランスジェニック動物の生存を示す。生存曲線は、ＲＰ−１８２が、ゲムシタビンと組み合わされて生存を有意に改善することを示す。
【図２】膵臓癌のトランスジェニック動物モデルにおける他の治験薬（これも単独及びゲムシタビンと併用で検査された）に対するペプチドＡ投与（単独及びゲムシタビンと併用）の比較を示す。
【図３】ペプチドＡ（「ＲＰ１８２」として示す）及び他の公知の治験抗癌剤の投与後に、膵臓腫瘍に対して正規化された平均腫瘍体積における変化率（％）の比較を示す。
【図４】膵臓癌のトランスジェニック動物モデルにおいてゲムシタビンと併用して使用されたペプチドＡ（ペプチドＡは、「ＲＰ１８２」として示す）及び他の治験薬の相対的利益の概要を、腫瘍体積の変化率（％）に対する生存の増加率（％）の比率として示す。
【図５】ペプチドＡ結合がｐ１６膵臓癌細胞に特異的であることを実証するランダム１０ｍｅｒ−ビオチン化ペプチドとＣ末端−ビオチン化ペプチドＡの結合の比較を示す。
【図６】Ｎ末端を介する癌細胞へのペプチドＡの優先的な結合を示すＮ末端及びＣ末端で標識されたペプチドＡ結合に対する細胞結合曲線を示す。
【図７】膵臓癌の異種移植片モデルにおける異なる薬物処置の比較を示す。ビヒクル対ＲＰ−１８２単独（＊）については、ｐ＝０．００７である。ゲムシタビン単独対ゲムシタビン＋ＲＰ−１８２（＊＊）については、ｐ＜０．００７である。
【図８】これらの膵臓腫瘍においてペプチドＢ処置がＢ細胞を増加させ、マクロファージを減少させることを示す、ペプチドＢを用いた処置後の膵臓癌における免疫系細胞の分析を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
上記で考察するように、本明細書に開示する本発明は、抗炎症性ペプチド、具体的には免疫抑制特性を有するペプチドの使用、及びそのようなペプチドを、膵臓癌に罹患しているまたは膵臓癌を発症する恐れがある対象に投与する方法に関する。
【００１６】
定義
本明細書で用いるとき、単数形「ａ」、「ａｎｄ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が明白にそうでないと示さない限り、複数への言及を含む。ゆえに、例えば、「細胞」への言及は、複数のかかる細胞を含み、「タンパク質」への言及は、１つまたは複数のタンパク質及び当業者に公知のその等価物への言及を含む、等である。本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、そうでないと明白に示されない限り、本発明が属する技術分野の当業者に一般的に理解されるものと同じ意味を有する。
【００１７】
「ペプチド」及び「ポリペプチド」という用語は、本明細書で同義語として使用されてアミノ酸残基から構築されるポリマーを指す。
【００１８】
「ストリアパシック（ｓｔｒｉａｐａｔｈｉｃ）領域」という用語は、本明細書で用いるとき、疎水性モジュールと親水性モジュールの交互配列を指す。「疎水性モジュール」は、１〜５個の疎水性アミノ酸残基からなるペプチド配列で構成されている。同様に、親水性モジュールは、１〜５個の親水性アミノ酸残基からなるペプチド配列で構成されている。
【００１９】
「実質的に純粋な」とは、例えば、医薬組成物の文脈において、本明細書で用いるとき、ペプチドが、組成物の総含量（例えば、組成物の総タンパク質）のうちの約５０％超、または総タンパク質含量のうちの約８０％超を構成することを意味する。例えば、「実質的に純粋な」ペプチドは、総組成物のうちの少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％またはそれ以上がペプチド（例えば、総タンパク質の９５％、９８％、９９％、９９％超）である組成物を指す。ペプチドは、組成物中の総タンパク質のうちの９０％超、約９５％超、９８％超、または９９％超を構成することができる。いくつかの実施形態では、ペプチドは、生産中にペプチドが会合している有機分子から少なくとも６０重量％または少なくとも７５重量％遊離しているときに、実質的に純粋である。いくつかの実施形態では、ペプチドは、少なくとも６０重量％、少なくとも７５重量％、少なくとも８０重量％、少なくとも８５重量％、少なくとも９０重量％、少なくとも９５重量％、または少なくとも９９重量％、純粋である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節性ペプチドは、免疫調節性ペプチドが、産生中にペプチド（複数可）が会合している有機分子から少なくとも６０重量％または少なくとも７５重量％遊離しているときに、実質的に純粋であり、いくつかの実施形態では、免疫調節性ペプチドは、少なくとも６０重量％、少なくとも７５重量％、少なくとも８０重量％、少なくとも８５重量％、少なくとも９０重量％、少なくとも９５重量％、または少なくとも９９重量％のときに、純粋である。
【００２０】
「対象」、「患者」、及び「個体」という用語は、互換可能に本明細書で用いられ、多細胞動物（哺乳類（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ヒツジ、ウシ、反芻動物、ウサギ、ブタ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、アイ（ａｙｅｓ）等）、鳥類（例えば、ニワトリ）、両生類（例えば、アフリカツメガエル）、爬虫類、及び昆虫（例えば、ショウジョウバエ）を含む）を指す。「動物」には、モルモット、ハムスター、フェレット、チンチラ、マウス及びコトンラットを含む。
【００２１】
「腫瘍」は、本明細書で用いるとき、悪性または良性の全ての新生物細胞成長及び増殖、ならびに全ての前癌性及び癌性の細胞及び組織を指す。「癌」、「癌性」、「細胞増殖性障害」、「増殖性障害」及び「腫瘍」という用語は、本明細書で言及するとき互いに排他的ではない。
【００２２】
「抗炎症特性」という用語は、本明細書で用いるとき、評価されることができ、及び／またはタンパク質標的により媒介される炎症促進性のシグナルを低下もしくは阻害する、または低下もしくは阻害することが期待されるだろう、及び／または対象における炎症を低下もしくは阻害するポリペプチドの任意の特性を指す。
【００２３】
「有効量」は、所望の治療的または予防的な結果を達成するために、必要な投与量及び期間で、有効な量を指す。ペプチドまたは本明細書に記載のペプチドを含む医薬組成物の「治療有効量」は、個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重、ならびに個体において所望の応答を引き出すペプチドまたは組成物の能力などの因子に従って変動し得る。治療有効量は、ペプチドまたはペプチドを含む組成物の任意の毒性または有害な効果を、治療上有益な効果が上回るものでもある。
【００２４】
任意の数値範囲（例えば、投与量範囲）への本明細書における言及は、その範囲に包含される各数値（分数及び整数を含む）を明示的に含む。例えば、限定するものではないが、０．５ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲への本明細書における言及は、その２つの間の全ての整数及び分数を明白に含む。
【００２５】
本明細書に記載するとき、膵臓癌に「罹患している」と言及される個体は、膵臓癌であると診断されている及び／または膵臓癌の１つまたは複数の症状を表している。
【００２６】
本明細書で用いるとき、膵臓癌の「危険性がある」という用語は、膵臓癌を発症する及び／または該疾患の１つまたは複数の症状を発現する素因がある対象（例えば、ヒト）を指す。この素因は、遺伝的であり得るか、他の因子に起因し得る。本発明が、任意の特定の兆候または症状に限定されることは意図されない。ゆえに、本発明が亜臨床から本格的なものまで任意の範囲の膵臓癌を経験する対象であって、膵臓癌に関連するしるし（例えば、兆候及び症状）の少なくとも１つを呈する対象を包含することが企図される。
【００２７】
「処置する」、「処置」、または「処置すること」という用語は、本明細書で用いるとき、疾患、障害、及び／または状態（例えば、膵臓癌）の１つもしくは複数の症状または特徴を部分的にまたは完全に軽減、寛解、緩和、阻害、防止、発症を遅延、重症度を低下させる及び／または発生率を低下させるために使用される任意の方法を指す。処置は、疾患、障害、及び／または状態の兆候を呈していない対象に施されてよい。いくつかの実施形態では、処置は、疾患、障害、及び／または状態に関連する病理を発症する危険性を低減することを目的として、疾患、障害、及び／または状態の初期兆候のみを呈する対象に施されてよい。
【００２８】
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、米国特許法においてそれらに帰する広い意味を有することが意図され、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」等を意味することができる。
【００２９】
本発明は、以下の詳細な説明及び実施例を参照することにより、より完全に理解されることができ、これらは本発明の非限定的な実施形態を例示することを意図する。
【００３０】
ポリペプチド
ペプチドＡは、配列Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ（配列番号１）を有するペプチドを含むか、このペプチドから実質的に構成されるか、またはこのペプチドから構成される。
【００３１】
ペプチドＢは、配列Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（配列番号２）を有するペプチドを含むか、このペプチドから実質的に構成されるか、またはこのペプチドから構成される。
【００３２】
ペプチドＡ及びＢは、血清中で安定であり、例えば、（イオントラップ）質量分析により検出及び測定することができる。
【００３３】
変異体ポリペプチド
本明細書に記載のペプチドの「変異体」は、本明細書に開示のポリペプチドと実質的に類似し、主題のポリペプチドの少なくとも１つの抗炎症特性または抗癌性を保持する、ポリペプチドである。変異体は、本明細書に開示の主題のポリペプチドのＮ末端もしくはＣ末端で１つもしくは複数のアミノ酸残基の欠失（すなわち、トランケーション）を、本明細書に開示の主題のポリペプチドの１つもしくは複数の内部部位で１つもしくは複数のアミノ酸残基の欠失及び／もしくは付加を、ならびに／または、本明細書に開示の主題のポリペプチドの１つもしくは複数の位置で１つもしくは複数のアミノ酸残基の置換を含むことができる。１２アミノ酸残基以下の長さである主題のポリペプチドについては、変異体ポリペプチドは、好ましくは３つ以下（例えば、２、１、または無し）の欠失したアミノ酸残基を、内部で、Ｎ末端で、及び／またはＣ末端でのいずれかの位置で含む。
【００３４】
従って、本発明の方法及び組成物は、本明細書に開示の抗炎症性ポリペプチドに対して少なくとも５０％同一（例えば、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上）であり、少なくとも１つの抗炎症特性を保持する抗炎症性ポリペプチドについて同様に企図される。
【００３５】
置換されたアミノ酸残基は、置き換えられているアミノ酸残基と無関連であることができ（例えば、期間または疎水性／親水性、サイズ、電荷、極性等において無関連）、または置換されたアミノ酸残基は、類似する、保存的、または高度に保存的なアミノ酸置換を構成することができる。本明細書で用いるとき、「類似する」、「保存的」、及び「高度に保存的」なアミノ酸置換は、以下の表に示すように定義される。アミノ酸残基置換が類似する、保存的、または高度に保存的であるかどうかの決定は、アミノ酸残基の側鎖に排他的に基づき、以下に考察するようにペプチド安定性を増加させるように改変され得るペプチド骨格には基づかない。
【００３６】
【表１】
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【００３７】
主題のペプチドの文脈における保存的アミノ酸置換は、ペプチドの活性を保存するように選択される。一実施形態では、変異体ポリペプチドは、２つ以上の標的（例えば、炎症促進性標的）に結合する。より好ましくは、変異体ポリペプチドは、３、４、５、またはそれ以上の炎症促進性標的に結合する。例えば、変異体ポリペプチドは、任意の組み合わせの標的（例えば、ＮＦ−ｋＢクラスＩＩタンパク質及びヒト血清アルブミン（ＨＳＡ））に結合することができる。そのような結合は、ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、またはｉｎ  ｖｉｖｏデータに基づくことができる。
【００３８】
改変ポリペプチド
化学的または遺伝的手段による、本明細書に記載の任意の抗炎症性ポリペプチドの改変も本発明の方法及び組成物の文脈において企図される。そのような改変の例には、ＬまたはＤ型の非天然アミノ酸及び／または天然アミノ酸を伴う部分または完全配列のペプチドの構築を含む。例えば、本明細書に開示のペプチドのいずれか及びそれらの任意の変異体は、全てＤ型に産生されることができる。さらには、ポリペプチドを改変して、アミノ酸の側鎖またはＮ末端もしくはＣ末端に共有結合した炭水化物または脂質部分、例えば、糖または脂肪酸を含有することができる。加えて、ポリペプチドを改変して、投与に際して溶解度及び／または半減期を向上させることができる。例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及び関連するポリマーは、血中でのタンパク質治療剤の溶解度及び半減期を向上させるために使用されている。従って、ポリペプチドは、ＰＥＧポリマー等により改変することができる。ポリペプチドは、硫黄、亜リン酸、ハロゲン、金属等を含有するように改変されることもでき、アミノ酸模倣物を使用してポリペプチドを産生することができる。一実施形態では、ポリペプチドは、アミノ酸模倣物を含み、分解に対する耐性などの特性を向上させる。例えば、ポリペプチドは、１つまたは複数の（例えば、全ての）ペプチドモノマーを含むことができる。
【００３９】
処置／治療
ある特定の実施形態では、本発明は、対象において膵臓癌または膵臓癌に関連する１つもしくは複数の症状を処置する（例えば、軽減、寛解、緩和、安定させる、発症を遅延させる、進行を阻害する、重症度を低下させる、及び／または発生率を低下させる）及び／または防止するための方法及び組成物を提供する。対象はヒトであり得る。
【００４０】
本発明の処置方法は、対象にペプチドＡまたはペプチドＢを含む医薬組成物を投与することを含む。ある特定の実施形態では、処置方法は、対象の炎症部位で、少なくとも１つの炎症促進性サイトカイン（複数可）の発現レベル及び／または活性を（少なくとも１０％（例えば、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、またはそれ以上））低下させることをさらに含む。少なくとも１つの炎症促進性サイトカインは、ＴＮＦα、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−６、及びＩＬ−１２からなる群より選択されることができる。他の実施形態では、処置方法は、対象の炎症の潜在的部位でこれらの炎症促進性サイトカイン（複数可）のうちの少なくとも１つの発現レベル及び／または活性の増加を阻害するかまたは制限する。
【００４１】
併用療法
加えて、抗炎症性ポリペプチド（またはかかるポリペプチドを含む医薬組成物）が膵臓癌の処置において有効であると現在公知であるかまたは今後発見される少なくとも１つの他の薬物または治療と併用して投与されることができる、処置の方法（及び組成物）を本明細書に開示する。一実施形態では、薬物は、化学療法剤である。別の実施形態では、化学療法薬は、アルキル化剤、代謝拮抗薬／ヌクレオシド類似体（例えば、５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、カペシタビン、シタラビン、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア（ｈｙｄｒｏｘｕｒｅａ）、メトトレキサート、ペメトレキセド等）、抗腫瘍抗生物質及びペプチド抗生物質、例えば、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルシシン（ｉｄａｒｕｃｉｃｉｎ）等）、アクチニマイシン−Ｄ（ａｃｔｉｎｉｍｙｃｉｎ−Ｄ）、ブレオマイシン、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン等、トポイソメラーゼ阻害薬（例えば、エトポシド、テニポシド、ミトキサントロン等）、細胞分裂阻害薬（例えば、タキサン、エポチロン、ビンカアルキロイド（ｖｉｎｃａ  ａｌｋｙｌｏｉｄｓ）、エストラムスチン等）、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾン、メチルプレドニゾン、デキサメタゾン等）、細胞骨格破壊剤／タキサン、エポチロン、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤、キナーゼ阻害剤、白金系薬剤、レチノイド、ビンカアルカロイド（及び誘導体）、ならびに他の薬剤、例えば、酵素（例えば、Ｌ−アスパラギナーゼ）、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）、治療用癌ワクチン、モノクローナル抗体（腫瘍特異的モノクローナル抗体を含む）、サイトカイン（例えば、ＩＬ−２及びＩＦＮ−α）、及び免疫チェックポイント阻害剤様抗ＣＴＬＡ４または抗ＰＤ−１及び抗ＰＤ−１Ｌ薬剤からなる群より選択される。
【００４２】
免疫系は、健常細胞への免疫系の過剰活性化を回避するための複数のチェックポイントに依存し、腫瘍細胞は、免疫系による検出を逃れるために、しばしばこれらのチェックポイントを利用する。ある特定の癌において異常に上方制御され、Ｔ細胞の表面に提示されると示されているＣＴＬＡ−４、及び、同様にある特定の腫瘍において上方制御され、Ｔ細胞機能を阻害すると見いだされているＰＤ−１は、癌療法の標的であるとして研究されているチェックポイントであり、膵臓癌において有効であると見いだされる可能性がある（Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｄ．Ｍ．２０１２  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  １２（４）：２５２−２６４；Ｓｈａｒｍａ，ｅｔ  ａｌ．２０１１  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  １１（１１）：８０５−８１２）。
【００４３】
企図される治療には、外科手術（膵臓癌が膵臓に限局される場合で膵頭に位置するときは、ウィップル法（膵頭十二指腸切除術）、膵尾及び膵体にあるときは、膵尾または膵尾と膵体のごく一部を除去するための外科手術（膵体尾部切除術））、放射線療法（Ｘ線などの高エネルギービームを使用して癌細胞を破壊する）、化学療法（静脈内注射または経口摂取、１種の化学療法薬または化学療法薬の組み合わせであることができる）、放射線療法と組み合わせた化学療法（化学放射線）、標的療法（癌細胞内の特定の異常を攻撃する薬物を使用、例えば、エルロチニブは、癌細胞が増殖及び分割するようにシグナル伝達する化学物質を遮断）、抗体療法、遺伝子療法が含まれる。
【００４４】
抗炎症性ポリペプチド（複数可）は、追加の薬物及び／または治療の投与の前、それと同時、またはその後に投与することができる。一実施形態では、本発明の方法は、治療処置の有効性を評価するステップを含む。有効性のそのような評価は、任意の数の評価結果に基づくことができ、それには、組織炎症の低下、組織及び／または血清中のＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、及びＴＮＦなどの炎症性メディエータの過剰産生の抑制または減少（データは示さず）、（例えば、血清中の）炎症性サイトカインのレベルの低下等が含まれるが、これらに限定されない。評価された有効性のレベルに依存して、抗炎症性ポリペプチド（複数可）の投与量を必要に応じて増減して調整することができる。
【００４５】
ゆえに、「と組み合わせる」「と併用する」（ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ）とは、ペプチド及び追加の薬剤または治療が、一緒に送達されるために同時に投与されないといけないことまたは製剤化されないといけないことを示すことを意図しないが、これらの送達方法は本発明の範囲内である。さらには、組み合わせて利用される治療的に活性な薬剤は、単一の組成物にて一緒に投与されてよいか、または異なる組成物にて別々に投与されてよいことが理解されるだろう。一般に、各薬剤は、その薬剤について決定された用量及び／または時間計画で投与されるだろう。
【００４６】
一般に、各薬剤（本文脈では、「薬剤」の１つは、本開示の組成物である）は、その薬剤について決定された用量及び／または時間計画で投与されるだろう。加えて、本発明は、体内でのそれらのバイオアベイラビリティを改善し得る、それらの代謝を低下させるまたは改変し得る、それらの排泄を阻害し得る、またはそれらの分布を改変し得る薬剤と組み合わせた組成物の送達を包含する。
【００４７】
併用レジメンにおいて採用する治療（例えば、治療剤または手法）の具体的な組み合わせは、所望の治療剤及び／または手法の適合性ならびに達成すべき所望の治療効果を考慮に入れるだろう。一般に、併用において利用される薬剤は、それらが個別に利用されるレベルを超えないレベルで利用されるだろうと予想される。いくつかの実施形態では、併用で利用されるレベルは、個別に利用されるものよりも低いだろう。
【００４８】
診断
一実施形態では、本発明の処置方法は、対象を膵臓癌と診断すること、または、処置中に、処置方法の有効性を診断することを追加で含む。膵臓癌は、ｉ）画像検査（膵臓を含む内臓を視覚化するために例えば、超音波、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、及び磁気共鳴画像法（ＭＲＩ））、ｉｉ）腹部内部からの超音波内視鏡検査法（ＥＵＳ）を使用する膵臓の超音波画像、ｉｉｉ）血液検査（膵臓癌細胞により放出される（腫瘍マーカーを含む）特定のタンパク質について検査するため）、ｉｖ）腹腔鏡検査（膵臓の外科的視覚化）、ｉｖ）内視鏡的逆行性胆道膵管撮影（ＥＲＣＰ）、ｖ）顕微鏡下で調べるために少量の組織試料を膵臓から除去する生検（例えば、細針吸引を介してまたはＥＲＣＰ中）、ならびに／または、ｖｉ）経皮経肝胆管造影（ＰＴＣ）により診断され得る。
【００４９】
膵臓癌を処置するための組成物及び投与
本開示の膵臓癌を処置するための組成物は、当該分野で公知であり文献において広く記載されている従来法のいずれかに従って製剤化されてよい。ゆえに、活性成分（例えば、ペプチドＡもしくはペプチドＢ、またはそれらの変異体）は、任意で他の活性物質と一緒に、組成物の特定の使用に適切な１つまたは複数の従来の薬学的に許容され得るキャリア、希釈剤及び／または賦形剤等と組み込まれて、投与に好適であるかまたは好適にすることができる従来の調製物を産生してよい。それらは、意図する投与様式及び治療用途に応じて、液体、半固体または固体、液体溶液、分散液、懸濁液等として製剤化され得る。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、注射可能または注入可能な溶液の形態で調製される。
【００５０】
本開示の膵臓癌を処置するための組成物は、血清アルブミン（例えば、ＨＳＡ、ＢＳＡ等）などのキャリアタンパク質を含んでよい。血清アルブミンは、精製されるかまたは組換え的に産生されることができる。医薬組成物中の抗炎症性ポリペプチド（複数可）を血清アルブミンと混合することにより、抗炎症性ポリペプチドは、血清アルブミン上に効果的に「負荷」することができ、それにより、より多くの量の抗炎症性ポリペプチドを炎症部位にうまく送達することができるようになる。
【００５１】
本開示の膵臓癌を処置する方法には、静脈内（ＩＶ）、筋肉内（ＩＭ）、動脈内、髄内、髄腔内、皮下（ＳＱ）、脳室内、経皮、皮間、皮内を含む様々な経路のいずれか１つを介する、気管内投与、気管支内投与、及び／もしくは吸入、鼻噴霧、及び／もしくはエアロゾルとして、ならびに／または門脈カテーテルを通した投与を含んでよい。ある特定の実施形態では、静脈内注射、または注入を使用してよい。任意の適切な投与部位を使用してよい。例えば、本発明の組成物は、作用が必要とされる部位で局所的にもしくは直接投与されてよいかまたは、身体の適切な位置に対する標的化を容易にするだろう実体に付着もしくはそうでなければ会合、例えばコンジュゲートしてよい。
【００５２】
膵臓癌の処置において有用なこれらの組成物では、任意の生理学的に適合性であるキャリア、賦形剤、希釈剤、緩衝剤または安定剤を使用してよい。好適なキャリア、賦形剤、希釈剤、緩衝剤及び安定剤の例としては、水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール等、ならびにそれらの組み合わせのうちの１つまたは複数が含まれる。いくつかの場合では、等張剤、例えば、糖、ポリアルコール（例えば、マンニトール、ソルビトール）、または塩化ナトリウムが含まれてよい。ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、当該分野で周知の手法を採用することにより、対象への投与後に活性成分（ペプチドＡ、ペプチドＢ、もしくはそれらの変異体及び／または追加の薬物（複数可））の迅速な、持続的な、または遅延的な放出を提供するように製剤化され得る。上記のように、ある特定の実施形態では、組成物は、注射に好適な形態であり、好適なキャリアは、任意の適切な濃度で存在してよいが、例示的な濃度は１％〜２０％または５％〜１０％である。
【００５３】
治療用組成物は、典型的には、製造及び保管の条件下で無菌的及び安定的でなければいけない。そのような無菌性及び安定性を達成する適切な方法は、当該分野で周知であり記載されている。
【００５４】
医薬組成物は、定型的には、投与の容易性及び投与量の均一性のために単位剤形に製剤化される。しかしながら、本発明の組成物の１日総（または他の）使用量は、健全な医学的判断の範囲内で主治医によって決定されるだろうことが理解されるだろう。任意の具体的な対象に対する特定の治療上有効な投与量レベルは、種々の因子に依存し得、それには、採用される組成物の活性、投与後の組成物の半減期、対象の年齢、体重、全身健康状態、性別、及び食事、ペプチドＡ及び（使用する場合は）採用される追加の治療剤の投与時間、投与経路、及び排泄速度、処置期間、採用される特定の化合物と併用してまたは同時に使用される薬物、ならびに医学分野で周知の同様の因子が含まれる。さらには、有効な用量は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及び／またはｉｎ  ｖｉｖｏ動物モデルに由来する用量反応曲線から外挿してよい。
【００５５】
ゆえに、好適な用量の本開示のペプチド及び他の活性成分（含まれている場合）は、患者により変動し、膵臓癌のステージにも依存するだろう。いくつかの実施形態では、前記投与量は、関与する処置の性質に依存して治療有効量または予防有効量を構成する。個体において所望の反応を引き出すペプチドの能力も因子であるだろう。例示的な１日の用量は、０．１〜２５０ｍｇ／ｋｇ、または０．１〜２００もしくは１００ｍｇ／ｋｇ、または０．５〜１００ｍｇ／ｋｇ、または１〜５０もしくは１〜１０ｍｇ／ｋｇの活性成分である。これは、単回単位用量としてまたは１日１回より多く投与される複数の単位用量として、例えば、皮下、腹腔内、または静脈内投与することができる。しかしながら、適切な投与量は、患者に応じて変動し得、任意の具体的な対象に対しては、特定の投薬レジメンが、患者の個別の必要性に従って経時的に調整されるべきであることに留意されたい。ゆえに、本明細書に明記する投与量範囲は、例示的であるとみなされるべきであり、特許請求する組成物または方法の範囲または実践を限定することを意図しない。
【００５６】
膵臓癌を処置するためのキット
一態様では、本発明は、膵臓癌を処置するためのキットであって、ペプチドＡ及び／またはペプチドＢ、もしくはそれらの変異体、またはこれを含む組成物を含む、前記キットをさらに提供する。キットは、使用説明書、他の治療剤（すなわち、膵臓癌の併用療法用）、投与用の組成物を調製するための他の試薬、例えば、希釈剤、またはデバイスまたは他の材料、薬学的に許容され得るキャリア、及び対象に投与するためのデバイスまたは他の材料を含むが、これらに限定されない、１つまたは複数の他の要素を含むことができる。使用説明書は、本明細書に記載するように、例えば、ヒト対象における、推奨投与量及び／または投与様式を含む、治療適用のための説明書を含むことができる。いくつかの実施形態では、前記キットは、本明細書に記載のような方法及び用途、例えば、治療的、診断的、またはイメージング方法にて使用するためのものであるか、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイまたは方法において使用するためのものである。
【００５７】
いくつかの実施形態では、前記キットは、膵臓癌を診断するためのものであり、任意で、膵臓癌を診断するためのキット構成要素の使用説明書を含む。
【００５８】
動物モデル
上記のように、膵臓癌を有する対象の予後改善における１つの主要な障害は、治療可能時間域の欠如である。初期の癌性病変は、検出閾値を遥かに下回る。診断時までに、初期（Ｔ１）腫瘍でさえも転移性であることがあり、従来の処置に耐性であり得る。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏにおける実験的成功と臨床治験における失望の間の相違は、腫瘍微小環境の再現における現在の実験設定の非効性からの生じる可能性が高い。腫瘍塊の８０％以上を形成し得る膵管腺癌の線維性間質は、悪性細胞の受動的足場ではなく、むしろ、それらは、発癌において積極的な役割を果たす。これが、異種／同種移植マウスモデルにおいてしばしば欠けている要素である（Ｅｒｋａｎ，ｅｔ  ａｌ．２０１２  Ｃｕｒｒ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  １２（３）：２８８−３０３；Ｏｌｉｖｅ，ｅｔ  ａｌ．２００９  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２４（５９３３）：１４５７−６１）。
【００５９】
ゆえに、動物における膵臓癌のモデルは、ペプチドＡの前臨床試験に重要である。ＫＰ１６トランスジェニックマウスモデルは、膵臓癌における薬物開発にとっての至適基準と考えられており、Ｒａｓ誘発性条件付き膵臓癌モデルである（膵臓癌−特異的Ｒａｓ  Ｇ１２Ｄ対立遺伝子のノックイン及びｐ１６／ｐ１９遺伝子座のノックアウト）（Ａｇｕｉｒｒｅ，ｅｔ  ａｌ．２００３  Ｇｅｎｅｓ  ＆  Ｄｅｖ  １７（２４）：３１１２−２６）。これらの動物は、ヒト膵臓癌に非常に類似する自発的な膵臓癌を発症する。加えて、動物は、完全に免疫適格である。ホモ接合型マウスは平均的な寿命を有するが、ノックアウトマウスの寿命は約５９日間である。
【００６０】
異所性ＨＰＡＣ異種移植片モデルは、免疫低下状態のマウスに移植されたヒトＨＰＡＣ癌細胞を構成する。異所性ＨＰＡＣ異種移植片モデルは、以前に、膵臓癌における免疫療法のメリットを評価するための使用に成功している（Ａｂａｔｅ−Ｄａｇａ，ｅｔ  ａｌ．２０１４  Ｈｕ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２５（１２）：１００３−１０１２）。
【実施例】
【００６１】
以下の実施例は、例示的な目的でのみ提供され、本発明の範囲を限定することを意図しない。
【００６２】
実施例１．ポリペプチド結合
ペプチドＡは、炎症を制御する様々なシグナル伝達経路の特定の成分を標的とするペプチド結合試験を介して抗炎症活性を有すると同定された。ペプチド結合は、ボストン大学にて開発されたウェブベースのＣｌｕｓＰｒｏ（登録商標）アルゴリズムを使用して以前に評価された。ペプチドＡは、ＲｅｌＢ、ＴＧＦβ、Ｎｏｔｃｈ１、Ｗｎｔ８Ｒ、ＴＲＡＩＬ、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１０Ｒ、ＥＧＦＲ、及びＣＤＫ６に対して、高い結合親和性を実証した。ペプチドＡは、ヒストン修飾酵素ＨＭＴ、ならびに（両方とも炎症ならびに腫瘍発生及び転移に関連する）マクロファージ活性及びアポトーシスに関連するタンパク質、例えば、ＣＤ４７、ＳＩＲＰ−α、ＣＤ２０６、及びＴＧＭ２に対しても、高い結合親和性を実証した。最終的に、ペプチドＡは、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に対して高い結合親和性を有すると見いだされた。血清アルブミンは、循環中の最も豊富なタンパク質であり、固形腫瘍、特に膵臓腫瘍は、血清アルブミンをそれらの細胞中に（飲作用のプロセスを通して）取込み、エネルギー源としてそれを使用するだろう。
【００６３】
腫瘍発生及び転移における炎症の重要な役割、Ｍ２マクロファージ活性と腫瘍発達との公知の関連、ならびにＣＤ４７／ＳＩＲＰ相互作用がＭ１マクロファージの活性を不能にすることができるという指標を考慮すると、本開示のペプチドの投与が、膵臓癌処置の転帰に正の影響を与え得ることが見込まれた。
【００６４】
実施例２．ペプチドＡは、ＫＰ１６マウスモデルにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ腫瘍増殖を抑制する。
ペプチドＡは、ゲムシタビンと併用されて、生存を、膵臓癌のＫＰ１６トランスジェニックマウスモデルにおいて改善した（図１Ｂ）。所望の遺伝子型（Ｐｄｘ−１−Ｃｒｅ；ＬＳＬ−ＫｒａｓＧ１２Ｄ／＋；Ｉｎｋ４ａ（ｐ１６）／Ａｒｆ（ｐ１９）ｆｌｏｘ／ｆｌｏｘ）を有するマウスを選択し、経腹壁的超音波を６週目に開始して、スクリーニングした。２〜４ｍｍ2 の間の腫瘍を処置のために選択した。腫瘍を有するマウスを、以下の処置に無作為に割り当てた。ビヒクル（１００μｌ  Ｈ2 ＯまたはＰＢＳの腹腔内注射）、１００μｌのＰＢＳの容量中の腹腔内注射による５０ｍｇ／ｋｇの週２回のゲムシタビン、１００μｌのＨ2 Ｏ中の腹腔内注射により週２回与えられる２０ｍｇ／ｋｇのペプチドＡ、及びそれぞれの溶媒中の２０ｍｇ／ｋｇの用量で週２回与えられるペプチドＡと５０ｍｇ／ｋｇゲムシタビン週２回の併用とした。ペプチドＡは、膵臓癌の増殖をトランスジェニック動物において停止させた（図１Ａ及び１Ｂ、ペプチドＡは「ＲＰ−１８２」として示す）。
【００６５】
ペプチドＢも、ゲムシタビンと併用されて、抗腫瘍活性を同等に実証し、生存の延長及び腫瘍増殖の低下の両方を示した。
【００６６】
実施例３．ペプチドＡ＋ゲムシタビンは、膵臓癌において他の薬剤よりも高い有効性を実証する。
ペプチドＡ及びゲムシタビンの組み合わせ（ペプチドＡ＋ゲムシタビン）を臨床治験中の他の治験薬（さらに１つは規制当局の認可を得ている）と比較したとき、それぞれ膵臓癌の比較可能な動物モデルにおいて、ペプチドＡは、平均生存において対照を超えるより大きな増加率（％）を示した。比較目的のために使用された治験薬には、ＳＢ２２５００２／ＴｇｆｂｒＫＯ／Ｋｒａｓ、これは、膵管腺癌のマウスモデルにおいて、ＣＸＣＲ２を阻害し、腫瘍−間質相互作用を妨害し、生存を改善する（Ｈｉｄｅａｋｉ  Ｉｊｉｃｈｉ，ｅｔ  ａｌ．２０１１；Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎを参照されたい。本紙では、薬物及びビヒクル対照に関するデータのみを提供する）、ＩＰＩ−９２６／Ｔｒｐ５３Ｒ１７２Ｈ／Ｋｒａｓ、これは膵臓癌のマウスモデルにおいて、ヘッジホッグシグナル伝達を阻害し、化学療法の送達を向上させる（Ｋｅｎｎｅｔｈ  Ｐ．Ｏｌｉｖｅ  ｅｔ  ａｌ．２００９；Ｓｃｉｅｎｃｅを参照されたい）、ＰＥＧＨ２０／Ｔｒｐ５３Ｒ１７２Ｈ／Ｋｒａｓ、これは間質の酵素的標的化を伴い、膵管腺癌の処置に対する物理的な障壁を切断する（Ｐａｏｌｏ  Ｐｒｏｖｅｎｚａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．２０１２；Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌを参照されたい）を含む。引用する研究のそれぞれについて、全体生存転帰を見直し、ビヒクルで処置したコホートの転帰を対照と設定した。生存における変化または腫瘍増殖における変化（元の刊行物において記録された中央値として）を、コホートあたりの変化率（％）としてグラフ化した（図２、ペプチドＡは「ＲＰ−１８２」として示す）。
【００６７】
比較試験のために使用された他の治験薬には、Ｒａｓ誘発ＴｇｆｂｒＫＯ／ＫｒａｓＧ１２Ｄ動物モデルにおいて試験したＳＢ２２５００２（Ｉｊｉｃｈｉ，ｅｔ  ａｌ．２０１１  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ）、またはＰｄｘ／Ｔｒｐ５３Ｒ１７２Ｈ／ＫｒａｓＧ１２Ｄ  ＫＰＣモデルにおいて試験したＩＰＩ−９２６（Ｏｌｉｖｅ，ｅｔ  ａｌ．２００９  Ｓｃｉｅｎｃｅ）、または同じくＰｄｘ／Ｔｒｐ５３Ｒ１７２Ｈ／ＫｒａｓＧ１２Ｄ  ＫＰＣモデルにおいて試験したＰＥＧＨ２０（Ｐｒｏｖｅｎａｎｚｏ，ｅｔ  ａｌ．２０１２  Ｃｅｌｌ）が含まれ、ＩＰＩ−９２６及びＰＥＧＨ２０は、単剤としてまたはゲムシタビン併用の両方で与えられた。
【００６８】
ペプチドＡ＋ゲムシタビンは、正規化された平均腫瘍体積における変化率（％）に関して示されるように、腫瘍増殖の強い（及び、微かに改善しない場合は、匹敵する）低下も示す（図３、ペプチドＡは「ＲＰ−１８２」として示す）。比較試験のために使用される他の治験薬には、ＳＢ２２５００２；ＩＰＩ−９２６（Ｉｎｆｉｎｉｔｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓからの膵臓腺癌のための治験処置）、ＰＥＧＨ２０（ｎａｂ−パクリタキセル（アブラキサン（登録商標）及びゲムシタビンと組み合わせた処置が推奨される、２０１４年に規制当局の認可を受けた、ＰＥＧＰＨ２０の報告書では、ゲムシタビン及び薬物＋ゲムシタビン処置のみに関する腫瘍体積データしかないことに注意されたい）を含んだ。
【００６９】
膵臓癌のトランスジェニック動物モデルにおけるゲムシタビンと組み合わせた治験薬の相対利点を、腫瘍体積の変化率（％）に対する生存の増加率（％）の比率として図４にまとめる（ペプチドＡは「ＲＰ−１８２」として示す）。その後臨床治験へと移行した前述の治験薬と比較して、ペプチドＡとゲムシタビンの組み合わせは、生存の最長期化に伴う腫瘍増殖の最大低下を示した。
【００７０】
実施例４．ペプチドＡは、特異的な細胞結合を示す。
ペプチドＡの細胞標的及び／または分子標的を明瞭にするために、ｐ１６膵臓癌細胞に対する分子標的をランダム１０ｍｅｒペプチドの結合と比較した。（８（ｇｌｙ）リンカー＋ｃｙｓを介した）Ｃ末端ビオチン標識物を、漸増濃度で１０分間、ｐ１６膵臓癌細胞とインキュベートし、過剰なペプチドを洗い落とし、細胞をフルオロ標識したストレプトアビジンと再インキュベートし、フローサイトメトリーにより分析した。総細胞に対するストレプトアビジン標識細胞の割合を、各濃度に関してグラフ化し、完全ＥＣ５０薬物結合曲線を構築した（Ｉｎｇｌｅｓｅ，ｅｔ  ａｌ．２００６  ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  １０３（３１）：１１４７３−８）。図５に示すように、Ｃ末端−ビオチン化ペプチドＡ（「ＲＰ−１８２」）と、ランダム１０ｍｅｒビオチン化ペプチド（「Ｅｌｉｍペプチド」）の結合の比較は、ペプチドＡ結合がｐ１６膵臓癌細胞に特異的であることを示した。対照１０−ｍｅｒペプチドの無（または非特異的）結合と比較した結合曲線の形状及び立体配置（フルクラスｌａ曲線、シグモイド形）は、「促進された結合」、すなわち特定の細胞表面機構を通した結合を示し、これは、ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏでのコンピュータモデリングデータと一致する。加えて、ペプチドＡは、対照１０ｍｅｒペプチドよりも癌細胞に対して５倍超強い結合を呈した（図５）。
【００７１】
実施例５．ペプチドＡは、そのＮ末端を介して細胞に結合する。
ペプチドＡが、癌細胞にそのＮ末端またはＣ末端を介して結合するかどうかを決定するために、Ｎ末端及びＣ末端で標識されたペプチドＡ（「ＲＰ−１８２」）の細胞結合、続いてフローサイトメトリーを介した結合、非結合細胞画分の決定を、先行実施例のように実行した。図６のＥＣ５０曲線は、Ｎ末端を介した癌細胞の優先結合を示す。ペプチドＡのＮ末端のビオチン化を通した立体障害は、ｌｏｇ倍率で低減した細胞結合をもたらす。
【００７２】
実施例６．ペプチドＡは、膵臓癌の異種移植片モデルにおいてｉｎ  ｖｉｖｏ腫瘍増殖を抑制する。
ペプチドＡを、膵臓癌の別のマウスモデル、異所性ＨＰＡＣ異種移植片モデル（ヒトＨＰＡＣ癌細胞を移植された免疫低下状態のマウス）において試験した。１×１０6 ヒト膵臓細胞、ルシフェラーゼタグ付きを３２匹のヌード無胸腺マウスに注射した。次いで、マウスにビヒクル、ペプチドＡ、ゲムシタビン、またはペプチドＡ＋ゲムシタビンを、ペプチドＡについては２０ｍｇ／ｋｇの濃度で腹腔内に週２回、及び１２０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビン週１回を与えた（注射した）。４週間の処置の後、腫瘍及び脾臓を回収し、ＣＤ１１ｂ＋磁気細胞分離を行った。単離したＣＤ１１ｂ＋細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏでＨＰＡＣと共培養した。癌細胞の生存能を、ルシフェラーゼタグ付き癌細胞のルシフェラーゼ活性を介して定量化した。ペプチドＡ処置動物から得たＣＤ１１ｂ陽性細胞は、ビヒクル処置動物から得たＣＤ１１ｂ共培養細胞と比較して、癌細胞の増殖を阻害した。
【００７３】
ペプチドＡは、膵臓癌の異種移植片モデルにおいてｉｎ  ｖｉｖｏ腫瘍増殖を抑制すると見いだされた。図７に示すように、ＨＰＡＣ膵臓癌細胞異種移植片を、ビヒクル、ペプチドＡ（図７で「ＲＰ−１８２」として示す）、ゲムシタビン及びゲムシタビンとペプチドＡの組み合わせ（「ゲムシタビン＋ＲＰ−１８２」）を用いて、マウスがその予め決定されたエンドポイント（安楽死は治験獣医により指示）に到達するまで処置し、腫瘍を秤量した。腫瘍体積を、ビヒクル処置マウスに対する変化として記録した。ペプチドＡは、膵臓癌の異種移植片マウスモデルにおいて毒性を示さなかった（データは示さず）。腫瘍体積における統計学的有意差が、ビヒクル及びペプチドＡ（＊ｐ＝０．００７）ならびにゲムシタビン単独及びペプチドＡと組み合わせたゲムシタビン（＊＊ｐ＜０．００１）の間で見られた。
【００７４】
実施例７．ペプチドＢは、膵臓癌の免疫系に影響を与える。
ペプチドＢが、膵臓癌の免疫系に影響を与えるかどうかを調査するために、ビヒクル対２ｍｇ／ｋｇのペプチドＢを用いて１日１回腹腔内処置されたＰ１６腫瘍を、摘出し、消化し、以前に滴定して最適化した免疫細胞マーカーとインキュベートし、多色フローサイトメトリーにより分析した。様々な細胞分集団の細胞画分を図８に示す。ペプチドＢ（「ＲＰ−３９８」として示す）は、これらの腫瘍においてＢ細胞を増加させ、これらの腫瘍においてマクロファージを低下させることにより膵臓癌における免疫系に影響を与えることが見いだされた。
【００７５】
実施例８．腫瘍関連マクロファージは、未処置対処置マウスで挙動が異なる。
ペプチドＡ処置対未処置腫瘍から単離されたマクロファージは挙動が異なることが見いだされた。腹腔内注射により週２回ビヒクルまたは２０ｍｇ／ｋｇペプチドＡのいずれかを用いて処置されたＨＰＡＣ異種移植片を、１．５ｃｍを超えたときに回収し、消化し、ＣＤ１１ｂ細胞を磁気ビーズプルダウンにより単離した。８０％を超えるプルダウン後のＣＤ１１ｂ陽性細胞の濃縮を、フローサイトメトリーにより確認した。単離したＣＤ１１ｂ陽性細胞を、５，０００個のルシフェラーゼタグ付きＨＰＡＣ細胞と、３：１及び１０：１の比率で共培養し、癌細胞の増殖を、ルシフェラーゼタグ活性を使用して測定した。ペプチドＡ処置腫瘍由来のマクロファージは、それらと共培養されたとき、抗腫瘍活性を増加させ、癌細胞の増殖を停止させた（データは示さず）。
【００７６】
実施例９．ペプチドＡは、マウス及びヒト血清中で測定することができる。
質量分析を使用して、マウスの血清中のペプチドＡを定量化した（データは示さず）。本明細書に記載のマウス研究において使用された用量での腹腔内注射は、生物学的効果を発揮できる測定可能な血清濃度をもたらした。ペプチドＡは、イオン質量分析計で検出可能であり、５分後の質量は６８８．０８であり、長時間の勾配を伴った。マウス血清中へのペプチドＡのスパイクイン実験により、同一の質量及び時間変動が確認された。算出した血清濃度（ｎｇ／ｍｌ）は、生物学的機能を発揮可能であるようにペプチドＡについて一致した（データは示さず）。マウス血清中のペプチドを測定するこの能力は、薬物動態及び毒性試験の基礎である。 
【００７７】
関連出願データ
本明細書中に引用される出願及び特許のそれぞれ、ならびに該出願及び特許のそれぞれに引用される各文献または参考文献（各発行特許の出願手続き中、「出願引用文献」を含む）、ならびにこれらの出願及び特許のいずれかに対応する及び／またはそれからの優先権を主張するＰＣＴ及び外国出願または特許、ならびに出願引用文献のそれぞれに引用されるまたは言及される文献のそれぞれは、参照により本明細書に明示的に組み込まれ、本発明の実践において採用され得る。より一般的には、文献または参考文献は、特許請求の範囲の前の参考文献一覧または明細書自体においてのいずれかで本明細書に引用され、これらの文献または参考文献のそれぞれ（「本明細書引用参考文献」）、ならびに本明細書引用参考文献のそれぞれに引用される各文献または参考文献（任意の製造業者の仕様書、説明書等を含む）は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【００７８】
配列表データ
配列表テキストファイルを本明細書に添付し、これは、２０１５年１０月１３日に作製され、サイズは２キロバイトであり、ファイル名は「６１３７ＮＣＩ−３８−ＰＣＴ＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５」であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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