(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
０．１ｐｇ〜１μｇの検体を含むサンプルを分析するためのラテラルフローデバイスであって、前記デバイスは、
サンプル受容部と、
前記サンプル受容部の下流にあり、前記検体に結合することができる標識プローブを含むプローブ区域と、
前記プローブ区域の下流にあり、前記標識プローブに結合することができる第１固定化捕捉試薬を含むテスト部と、を含み、
前記サンプル受容部から前記プローブ区域へ、および前記プローブ区域からテスト部への緩衝液の移動を可能にするように構成され、
前記サンプル受容部における前記デバイスの幅は、前記プローブ区域におけるものよりも大きく、
前記サンプル受容部の上流に緩衝液受容部を更に含み、前記緩衝液受容部から前記サンプル受容部への緩衝液の移動を可能にするように構成されている、
ラテラルフローデバイス。
【請求項２】
汗サンプル、好適にはエクリン汗サンプルを分析するための請求項１に記載のデバイス。
【請求項３】
指の汗のサンプルを分析するための請求項１または請求項２のいずれかに記載のデバイス。
【請求項４】
緩衝液を保持する容器を更に含み、使用時に、前記容器から前記緩衝液受容部への緩衝液の移動が許容されるように構成されている請求項１に記載のデバイス。
【請求項５】
前記容器は、１００〜５００μｌの容積を有する請求項４に記載のデバイス。
【請求項６】
前記容器は、１００〜５００μｌの緩衝液を含む請求項４または請求項５のいずれかに記載のデバイス。
【請求項７】
前記容器は、緩衝液ブリスタである請求項４〜６のいずれかに記載のデバイス。
【請求項８】
前記緩衝液は、
水混和性有機溶媒と、
界面活性剤、好適には洗剤と、
緩衝剤と、
を含む請求項５または請求項６のいずれかに記載のデバイス。
【請求項９】
前記水混和性有機溶媒は、エタノール、メタノール、およびテトラヒドロフランのうちの１つ以上を含み、および／または、
前記界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）−２０、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）−８０、トリトン（登録商標）Ｘ−１００、および臭化テトラオクチルアンモニウムのうちの１つ以上を含み、および／または、
前記緩衝剤は、ＨＥＰＥＳ、トリス、ＴＲＩＺＭＡ、およびリン酸塩緩衝液のうちの１つ以上を含む請求項８に記載のデバイス。
【請求項１０】
前記緩衝液は、１０〜３０ｖ／ｖ％の水混和性有機溶媒と、０．１〜０．３０ｗ／ｖ％の界面活性剤と、５〜１０ｍＭの緩衝剤と、を含む請求項８または請求項９に記載のデバイス。
【請求項１１】
前記テスト部の下流にあり、前記標識プローブに結合することができる第２固定化捕捉試薬を含むコントロール部を更に含み、前記テスト部から前記コントロール部への緩衝液の移動を可能にするように構成されている請求項１〜１０のいずれかに記載のデバイス。
【請求項１２】
前記第２固定化捕捉試薬は、標識プローブに特異的な抗体、アフィマ、またはアプタマを含む請求項１１に記載のデバイス。
【請求項１３】
前記プローブ区域は、１０ｐｇ〜１μｇの標識プローブを含む請求項１〜１２のいずれかに記載のデバイス。
【請求項１４】
前記プローブ区域は、１０ｐｇ〜５００ｎｇの標識プローブを含む請求項１〜１３のいずれかに記載のデバイス。
【請求項１５】
前記プローブは、抗体、アフィマ、アプタマ、およびそれらの混合物からなる群から選択され、好適には、前記プローブは、抗体である請求項１〜１４のいずれかに記載のデバイス。
【請求項１６】
前記標識プローブは、２つ以上の異なる抗体を含む請求項１〜１５のいずれかに記載のデバイス。
【請求項１７】
前記プローブは、２価の抗体および／または１価の抗体のＦａｂおよび／またはＦ（ａｂ’）２断片を含む請求項１〜１６のいずれかに記載のデバイス。
【請求項１８】
前記第１固定化捕捉試薬は、前記標識プローブに結合することができる抗原を含む請求項１〜１７のいずれかに記載のデバイス。
【請求項１９】
前記第１固定化捕捉試薬は、前記標識プローブに結合することができる２つ以上の異なる抗原を含む請求項１８に記載のデバイス。
【請求項２０】
０．１ｐｇ〜１μｇの検体を含むサンプルを分析するためのデバイスであって、前記検体は、薬物代謝産物および／または薬物を含む請求項１〜１９のいずれかに記載のデバイス。
【請求項２１】
前記サンプル受容部は、平均的な成人の指紋を受け取るように構成されている請求項１〜２０のいずれかに記載のデバイス。
【請求項２２】
前記サンプル受容部は、２５０ｍｍ２〜３５０ｍｍ２の面積を有する請求項１〜２１のいずれかに記載のデバイス。
【請求項２３】
前記サンプル受容部は、前記サンプルを濃縮し、および／または前記サンプルを前記プローブ区域の下流に導くように構成された１つ以上のくぼみおよび／またはラインを含む請求項１〜２２のいずれかに記載のデバイス。
【請求項２４】
透過膜を含む請求項１〜２３のいずれかに記載のデバイス。
【請求項２５】
前記標識プローブに結合することができない固定化標識タンパク質と、前記検体と、前記標識プローブおよび検体を含む任意の免疫複合体と、を含む標準化部位を更に含むデバイスであって、前記標準化部位の前記固定化タンパク質および前記プローブは、同じ標識により標識されている請求項１〜２４のいずれかに記載のデバイス。
【請求項２６】
前記テスト部および／または前記コントロール部の下流にあるシンクを更に含み、前記テスト部および／または前記コントロール部から前記シンクへの緩衝液の移動を可能にするように構成されているデバイスであって、前記シンクは、前記シンクから緩衝液が移動することを防止するように構成されている請求項１〜２５のいずれかに記載のデバイス。
【請求項２７】
複数のテスト部を含む請求項１〜２６のいずれかに記載のデバイス。
【請求項２８】
各テスト部は、異なる第一捕捉試薬を含む請求項２７に記載のデバイス。
【請求項２９】
前記テスト部は、直列に配置されている請求項２７または請求項２８のいずれかに記載のデバイス。
【請求項３０】
前記テスト部は、並列に配置されている請求項２７または請求項２８のいずれかに記載のデバイス。
【請求項３１】
サンプル受容区域と離れた指紋パターン受容区域を更に含む請求項１〜３０のいずれかに記載のデバイス。
【請求項３２】
前記指紋パターン受容区域は、前記サンプル受容区域と異なる材料を含む請求項３１に記載のデバイス。
【請求項３３】
前記指紋パターン受容区域は、ガラスおよび／またはプラスチックおよび／またはシリコンのウエハを含む請求項３１または請求項３２のいずれかに記載のデバイス。
【請求項３４】
前記ラテラルフローデバイスは、前記サンプル受容部上にサンプルを受けるための開口部を規定するカセット内に収容される請求項１〜３３のいずれかに記載のデバイス。
【請求項３５】
サンプルを受けるための前記開口部は、前記サンプルが前記サンプル受容部の所定の領域に堆積されるように構成されている請求項３４に記載のデバイス。
【請求項３６】
前記サンプル受容部の前記所定の領域は、平均的な成人の指紋の領域の６０〜１００％である請求項３５に記載のデバイス。
【請求項３７】
前記ラテラルフローデバイスは、テスト信号および／またはコントロール信号および／または標準化信号を見るための窓を規定するカセット内に収容されている請求項１〜３６のいずれかに記載のデバイス。
【請求項３８】
前記ラテラルフローデバイスは、前記サンプル受容部の上流にある緩衝液を受けるための開口部を規定するカセット内に収容されている請求項１〜３７のいずれかに記載のデバイス。
【請求項３９】
前記標識プローブは、蛍光標識プローブを含む請求項１〜３８のいずれかに記載のデバイス。
【請求項４０】
０．１ｐｇ〜１μｇの検体を含むサンプルを分析する方法であって、
（ａ）０．１ｐｇ〜１μｇの標的検体を含むサンプルを提供するステップと、
（ｂ）前記サンプルの少なくとも一部を緩衝液に溶解して、溶解したサンプル溶液を形成するステップと、
（ｃ）前記溶解したサンプル溶液の少なくとも一部を標識プローブを含むプローブ区域に接触させて、前記標識プローブの少なくとも一部を溶解し、前記検体が前記溶解したサンプル溶液の一部に存在する場合には、前記標識プローブを、前記溶解したサンプル溶液の一部の中の前記検体に結合させて、標識プローブ−検体複合体を形成することを可能にするステップと、
（ｄ）前記標識プローブおよび／または標識プローブ−検体複合体を、前記標識プローブに結合することができる第１固定化捕捉試薬を含むテスト部に通すステップと、
（ｅ）前記テスト部中の前記標識プローブの量を検出することによって、前記サンプル中に前記検体が存在する場合、前記サンプル中の前記検体の量が閾値を超えているか否かを決定するステップと、を含み、
前記サンプルは、手の指の汗および／または掌の汗および／または足の指の汗を含み、および、
前記サンプルは、ステップ（ｂ）で溶解され、ステップ（ｃ）で前記溶媒先端において前記プローブ区域と接触する、
方法。
【請求項４１】
前記サンプルは、汗サンプル、好適にはエクリン汗サンプルを含む請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記サンプルは、手の指の汗を含む請求項４０または請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記サンプルは、ステップ（ａ）において、ラテラルフローデバイスのサンプル受容部上に提供され、前記デバイスは、
前記サンプル受容部の下流にある前記プローブ区域と、
前記プローブ区域の下流にあり、前記標識プローブに結合することができる第１固定化捕捉試薬を含むテスト部と、を含み、
前記サンプル受容部から前記プローブ区域へ、および前記プローブ区域から前記テスト部へ緩衝液が移動することを可能にするように構成されている請求項４０〜４２のいずれかに記載の方法。
【請求項４４】
前記サンプルは、前記サンプル受容部に直接に提供される請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
ステップ（ａ）において提供された前記サンプルは、ほぼ乾燥していて、前記サンプル受容区域から前記プローブ区域に移動するには不十分な液体を含む請求項４０〜４４のいずれかに記載の方法。
【請求項４６】
ステップ（ａ）において指紋として提供され、前記指紋は、指の隆起パターンの跡として堆積した汗を含む請求項４０〜４５のいずれかに記載の方法。
【請求項４７】
ステップ（ｂ）は、前記サンプル受容部の上流に前記緩衝液を提供し、前記緩衝液をサンプル受容部に通すことによって実行される請求項４０〜４６のいずれかに記載の方法。
【請求項４８】
前記緩衝液は、１００〜５００μｌの量で提供される請求項４０〜４７のいずれかに記載の方法。
【請求項４９】
前記緩衝液と前記サンプルの量の比は、５０：１〜１０００：１である請求項４０〜４８のいずれかに記載の方法。
【請求項５０】
前記緩衝液と前記サンプルの量の比は、２００：１〜１０００：１である請求項４０〜４９のいずれかに記載の方法。
【請求項５１】
前記緩衝液と前記サンプルの量の比は、５００：１〜１０００：１である請求項４０〜５０のいずれかに記載の方法。
【請求項５２】
前記緩衝液は、
水混和性有機溶媒と、
界面活性剤、好適には洗剤と、
緩衝剤と、
を含む請求項４０〜５１のいずれかに記載の方法。
【請求項５３】
前記水混和性有機溶媒は、エタノール、メタノール、およびテトラヒドロフランのうちの１つ以上を含み、および／または、
前記界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）−２０、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）−８０、トリトン（登録商標）Ｘ−１００、および臭化テトラオクチルアンモニウムのうちの１つ以上を含み、および／または、
前記緩衝剤は、ＨＥＰＥＳ、トリス、ＴＲＩＺＭＡ、およびリン酸塩緩衝液のうちの１つ以上を含む請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記緩衝液は、１０〜３０ｖ／ｖ％の水混和性有機溶媒と、０．１〜０．３０ｗ／ｖ％の界面活性剤と、５〜１０ｍＭの緩衝剤と、を含む請求項５２または請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記サンプルは、０．１ｐｇ〜５ｎｇの検体を含む請求項４０〜５４のいずれかに記載の方法。
【請求項５６】
前記サンプルは、１ｐｇ〜５００ｐｇの検体を含む請求項４０〜５５のいずれかに記載の方法。
【請求項５７】
前記プローブ区域は、１０ｐｇ〜１０００ｎｇの標識プローブを含む請求項４０〜５６のいずれかに記載の方法。
【請求項５８】
前記プローブは、抗体、アプタマ、アフィマ、およびそれらの混合物からなる群から選択され、好適には、前記プローブは、抗体である請求項４０〜５７のいずれかに記載の方法。
【請求項５９】
前記標識プローブは、２つ以上の異なる抗体を含む請求項４０〜５８のいずれかに記載の方法。
【請求項６０】
前記プローブは、２価の抗体および／または１価の抗体のＦａｂ断片を含む請求項４０〜５９のいずれかに記載の方法。
【請求項６１】
前記第１固定化捕捉試薬は、前記標識プローブに結合することができる抗原を含む請求項４０〜６０のいずれかに記載の方法。
【請求項６２】
前記第１固定化捕捉試薬は、前記標識プローブに結合することができる２つ以上の異なる抗原を含む請求項４０〜６１のいずれかに記載の方法。
【請求項６３】
前記検体は、存在する場合は、薬物代謝産物および／または薬物を含む請求項４０〜６２のいずれかに記載の方法。
【請求項６４】
（ｆ）前記標識プローブおよび／または標識プローブ−検体複合体を、前記標識プローブおよび前記標識プローブ−検体複合体に結合することができる第２固定化捕捉試薬を含むコントロール部に通すステップと、
（ｇ）前記コントロール部中の前記標識プローブおよび／または前記標識プローブ−検体複合体の量を検出することまたは検出しないことによって、前記テストの結果が信頼できるものであるか否かを決定するステップと、
を更に含む請求項４０〜６３のいずれかに記載の方法。
【請求項６５】
前記標識プローブは、４００ｎｍ〜１ｍｍの波長を有する放射線で検出可能であり、ステップ（ｅ）および／またはステップ（ｇ）は、前記テスト部および／または第１コントロール部を４００ｎｍ〜１ｍｍの波長を有する放射線で照射して、前記標識プローブおよび／または前記標識プローブ−検体複合体が存在する場合にそれを見せることによって実行される請求項４０〜６４のいずれかに記載の方法。
【請求項６６】
（ｈ）４００ｎｍ〜１ｍｍの波長を有する放射線で標準化部位を照射し、前記標準化部位の信号強度を計測し、および前記信号強度を、前記テスト部およびまたは前記コントロール部における信号強度と比較するステップを更に含む方法であって、
前記標準化部位は、前記標識プローブに結合することができない固定化標識タンパク質と、前記検体と、前記標識プローブおよび前記検体を含む任意の標識プローブ−検体複合体とを含み、
前記固定化標識タンパク質および前記標識プローブは、同じ標識により標識されている、
請求項４０〜６５のいずれかに記載の方法。
【請求項６７】
指紋パターン受容区域の指紋パターンを取得するステップを更に含む方法であって、前記指紋パターン受容区域は、前記サンプル受容部と離れているが、同じデバイス内に収容されている請求項４０〜６６のいずれかに記載の方法。
【請求項６８】
前記指紋パターンをスキャンおよび／または記録するステップを更に含む請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
１〜１０分で実行される請求項４０〜６８のいずれかに記載の方法。
【請求項７０】
請求項２４に記載のラテラルフローデバイスを準備する方法であって、
透過膜に指紋パターン受容部を提供するステップと、
標識プローブを前記透過膜に加えてプローブ区域を作り出すステップと、
前記標識プローブに結合することができる第１捕捉試薬を前記透過膜に加えてその上に固定してテスト部を作り出すステップと、
を含み、前記サンプル受容部における前記デバイスの幅は、前記プローブ区域におけるものよりも大きい方法。
【請求項７１】
前記透過膜に緩衝液受容部を、および選択的に前記透過膜に緩衝液の容器を提供するステップを更に含む請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記標識プローブに結合することができる第２捕捉試薬を前記透過膜に加えてその上に固定してコントロール部を作り出すステップを更に含む請求項７０または請求項７１のいずれかに記載の方法。
【請求項７３】
前記標識プローブに結合することができる標識タンパク質を前記透過膜に加えてその上に固定して標準化部位を作り出すステップを更に含む請求項７０〜７２のいずれかに記載の方法。
【請求項７４】
前記プローブ区域を作り出すために、１０ｐｇ〜１μｇの前記標識プローブが前記透過膜に加えられる請求項７０〜７３のいずれかに記載の方法。
【請求項７５】
請求項３９に記載のデバイスと、
蛍光、紫外線、赤外線および／または遠赤外線検出器と、を含むサンプルの分析のためのキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、０．１ｐｇから１μｇの検体を含むサンプルを分析するためのデバイスおよび方法、特に、サンプル中の非常に少量の薬物または薬物代謝産物の有無をテストするためのラテラルフローデバイスおよび方法に関する。本発明はまた、体液を分解する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
医師、医療従事者、リハビリ病院、検視官、雇用主、政府機関、スポーツ団体、警察および一般の人々は、血液、尿、唾液、汗などの体液中の様々な物質の存在およびレベルに関心がある。臨床分析において長期間測定された物質の中には、グルコース、コレステロール、アミラーゼやクレアチンキナーゼなどの様々な酵素、薬物、およびその代謝産物がある。
【０００３】
ラテラルフローテストデバイスは、生物学的流体試料の中の特定の化合物または検体の検出のために広く使用されている。１つ以上の試薬は、セルロースまたは紙ストリップのような固体材料上に配置され、問題の検体の検出に必要または有用であるとして選択される。流体サンプルは、ストリップ上に置かれ、およびその場で、検体の存在または非存在に応じて、化学反応が起こり得るストリップに沿って、毛細管現象によって移動する。
【０００４】
生物学的流体サンプルの化学分析によって、乱用物質、例えば所有および使用に関して法律によって規制されている薬物の存在をテストするためのデバイスは周知である。過去には、例えば、薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）、ガスクロマトグラフィ（ＧＣ）、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）を含む多数の技術を用いてメタンフェタミンが検出されている。これらの方法は、一般に、薬物の化学抽出と、高度に熟練した人員を必要とする複雑な手順と、および長い分析時間とを必要とする。薄層クロマトグラフィは、労働集約的であり、かつ感度を欠く。それぞれがまた労働集約的であるガスクロマトグラフィおよび高速液体クロマトグラフィは、生物基質から検体の抽出を行うために高度に訓練された人員を必要とする。さらに、ガスクロマトグラフィは、通常、誘導工程を必要とする。
【０００５】
より最近では、競合的結合イムノアッセイ法が、特定の乱用物質の存在について生物学的液体をテストするために開発されており、およびこれらは、上に簡潔に記載された物理的方法の好適な代替物を提供する。イムノアッセイテストデバイスは、通常、ストリップ上の特定の領域に組み込まれた１つ以上の試薬を有する吸収性繊維質ストリップを含む。流体サンプルは、ストリップ上に置かれ、および毛細管現象により、サンプルがストリップに沿って移動し、化学反応が起こり得る特定の試薬ゾーンに入る。特定の量の標的物質の存在下で検出可能な反応を、例えば色の変化を明白に示す少なくとも１つの試薬が含まれる。
【０００６】
イムノアッセイ技術に基づく既知のラテラルフロー「薬物乱用」テストデバイスおよび方法の１つの制限は、このデバイスに信頼性のある方法で問題の検体の少量を定性的および／または定量的に検出するのに十分な感度がないことである。そのような制限は、生物サンプルが、通常、例えば血液または尿の形で、既知のデバイスに大量におよび／または高濃度の検体と共に供給されなければならないことを意味する。
【０００７】
本発明の１つの目的は、先行技術の欠点の少なくともいくつかを克服すること、またはそれに対する商業的に有用な代替物を提供することである。
【０００８】
本発明の更なる目的は、より複雑で費用のかかる確認手順を必要とせずに、サンプル中の検体に対する感度を高めた、使い易く安価なデバイスおよび方法を提供することである。
【０００９】
本発明の更なる目的は、少量の検体を含むサンプルを少なくとも定性的に分析するためのより信頼性の高いデバイスおよび方法を提供することである。
【００１０】
本発明の更なる目的は、デバイスに使用するための体液を溶解させる方法およびサンプルを分析する方法を提供することである。
【発明の概要】
【００１１】
第１態様では、本発明は、０．１ｐｇ〜１μｇの検体を含むサンプルを分析するためのラテラルフローデバイスであって、
サンプル受容部と、
サンプル受容部の下流にあり、検体に結合することができる標識プローブを含むプローブ区域と、
プローブ区域の下流にあり、標識プローブに結合することができる第１固定化捕捉試薬を含むテスト部と、を含むラテラルフローデバイスを提供する。
【００１２】
本明細書で定義される各態様または具体例は、逆のことが明示されない限り、任意の他の態様または具体例と組み合わされてもよい。特に、好適または有利であるとして示されている任意の特徴は、好適または有利であると示されている他の任意の特徴と組み合わされてもよい。
【００１３】
更なる態様では、本発明は、０．１ｐｇ〜１μｇの検体を含むサンプルを分析する方法であって、
（ａ）０．１ｐｇ〜１μｇの標的検体を含むサンプルを提供するステップと、
（ｂ）前記サンプルの少なくとも一部を緩衝液に溶解して、溶解したサンプル溶液を形成するステップと、
（ｃ）前記溶解したサンプル溶液の少なくとも一部を標識プローブを含むプローブ区域に接触させて、前記標識プローブの少なくとも一部を溶解し、前記検体が前記溶解したサンプル溶液の一部に存在する場合には、前記標識プローブを、前記溶解したサンプル溶液の一部の中の前記検体に結合させて、標識プローブ−検体複合体を形成することを可能にするステップと、
（ｄ）前記標識プローブおよび／または標識プローブ複合体を、前記標識プローブに結合することができる第１固定化捕捉試薬を含むテスト部に通すステップと、
（ｅ）前記テスト部中の前記標識プローブの量を検出することによって、前記サンプル中に前記検体が存在する場合、前記サンプル中の前記検体の量が閾値を超えているか否かを決定するステップと、を含む、
方法を提供する。
【００１４】
更なる態様では、本発明は、本明細書に記載のラテラルフローデバイスを準備する方法であって、
基板に指紋パターン受容部を提供するステップと、
標識プローブを基板に加えてプローブ区域を作り出すステップと、
標識プローブに結合することができる第１捕捉試薬を基板に加えてその上に固定してテスト部を作り出すステップと、
を含む方法を提供する。
【００１５】
更なる態様では、本発明は、サンプルの分析のためのキットであって、
本明細書に記載のデバイスと、
蛍光、紫外線、赤外線および／または遠赤外線検出器と、を含むキットを提供する。
【００１６】
更なる態様では、本発明は、体液を緩衝液と接触させるステップを含む体液を溶解する方法であって、緩衝液は、
水混和性有機溶媒と、
界面活性剤、好適には洗剤と、
緩衝剤と、
を含む方法を提供する。
【００１７】
更なる態様では、本発明は、サンプル中の０．１ｐｇ〜１μｇの検体を検出するためのラテラルフローデバイスを提供する。
【００１８】
本発明によるデバイスおよび方法の他の好適な具体例は、本明細書を通して、特に具体例に表れている。
【００１９】
本発明者らは、驚くべきことに、本発明のラテラルフローデバイスおよび方法が、サンプル中に少量、例えば０．１ｐｇ〜１μｇの検体が存在するか否かを確実に検出することができることを見出した。検体が存在する場合、本デバイスおよび方法はまた、サンプル中に存在する検体の同一性および量に関する正確な情報を提供することができる。
【００２０】
理論により拘束されることを望まないが、本明細書に記載のデバイスおよび方法は、少量のサンプル中の少量の検体を検出および定量することができると考えられる。例えば、サンプルは、ほぼ乾燥したサンプルであり、堆積された場合、一定量の緩衝液に溶解されることなく、毛細管現象によって基板を通って移動するには不十分な液体を含む。
【００２１】
本発明者らは、驚くべきことに、非常に小さい体積／質量のほぼ乾燥したサンプルが広い表面領域にわたって堆積される場合、サンプル（例えば指紋）から検体（例えば、薬物または薬物代謝産物）を迅速に解放する緩衝液を使用することによって、サンプル中の少量の検体を検出することができることを見いだした。緩衝液がサンプルを通過するとき、検体分子は、緩衝液溶媒先端に濃縮され、そこで検体に特異的な標識プローブ（例えば標識抗体）と接触させられる。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本明細書において他に定義されない限り、本発明に関連して使用される科学用語および技術用語は、当業者によって通常理解される意味を有するものとする。しかしながら、用語の意味と範囲は明確であるべきであるが、潜在的なあいまいさがある場合には、本明細書で提供される定義は、辞書または外部の定義よりも先行している。
【００２３】
ラテラルフローイムノアッセイ法は、家庭内テスト、臨床現場即時テスト、または実験室での利用のための、サンプル中の標的検体の存在または非存在を迅速に検出するための簡単なテストである。ラテラルフローデバイスは、移動相（例えば、緩衝液）がそこを通って毛細管現象によって反応基質に流れることができ、標的検体の存在または非存在を示すための検出可能なシグナルが生成される固体支持体を利用することが好ましい。本明細書で使用される用語「毛細管現象（capillary action）」は、表面張力および分子間の引力のような性質のために分子がラテラルフローテストデバイスを横切って引き出されるプロセスを指す。
【００２４】
本明細書に記載のラテラルフローデバイスは、イムノアッセイ法、すなわち０．１ｐｇ〜１μｇの検体を含むサンプルを分析するための方法で使用するためのものである。イムノアッセイ法は、検体に結合していない標識プローブ（例えば抗体）は、テスト部において識別可能なシグナルを提供するが、検体に結合した標識プローブは、テスト部を通過し、テスト部において識別可能なシグナルを提供しない競合的結合測定法を含む。サンプル中に存在する検体分子の数が増加するにつれて、テスト部を通過する非結合標識プローブの量が減少する。したがって、サンプル中の検体のレベルが高いほど、テスト部における識別可能な信号は弱くなる。そのようなデバイス／方法は、定性的試験、すなわちサンプルが標的検体を含むか否かをテストすることを可能にする。そのようなデバイス／方法はまた、テスト部の信号の強度を計測することによって定性的試験が行われることを可能にする。信号の強度が高いほど、サンプル中の検体の量は少ない。
【００２５】
第１態様では、本発明は、０．１ｐｇ〜１μｇの検体を含むサンプルを分析するためのラテラルフローデバイスであって、
サンプル受容部と、
サンプル受容部の下流にあり、検体に結合することができる標識プローブを含むプローブ区域と、
プローブ区域の下流にあり、標識プローブに結合することができる第１固定化捕捉試薬を含むテスト部と、を含み、
サンプル受容部からプローブ区域へ、およびプローブ区域からテスト部への緩衝液の移動を可能にするように構成されているラテラルフローデバイスを提供する。
【００２６】
使用中、標識プローブは、サンプル中に存在する検体によってブロックされない限り、テスト部中の固定された第１捕捉試薬に結合する。
【００２７】
本明細書で使用される用語「サンプル（sample）」は、１つ以上の標的検体を含むかまたは含まない流体サンプルを指す。サンプルは、ヒトまたは動物の液体の体液（例えば、尿、血液、血漿、血清、汗、唾液、眼球液、脊髄液など）を含んでもよい。
【００２８】
好適には、デバイスは、汗サンプル、好適にはエクリン汗サンプルを解析するためのものである。より好適には、デバイスは、手の指の汗および／または掌の汗および／または足の指の汗のサンプルを解析するためのものである。最も好適には、デバイスは、手の指の汗のサンプルを解析するためのものである。用語「手の指の汗」は、ヒトを含む哺乳類の手の指の皮膚の汗腺によって分泌される汗を指す。手の指の汗は、手の指の隆起パターンの跡として堆積した汗、すなわち潜在指紋を含む。用語「掌の汗」は、ヒトを含む哺乳類の掌の皮膚の汗腺によって分泌される汗を指す。用語「足の指の汗」は、ヒトを含む哺乳類の足の指の皮膚の汗腺によって分泌される汗を指す。足の指の汗は、足の指の隆起パターンの跡として堆積した汗、すなわち潜在足指紋を含む。
【００２９】
好適には、デバイスは、０．１ｐｇ〜１μｇ、または０．１ｐｇ〜５００ｎｇ、または、０．１ｐｇ〜２００ｎｇ、または０．１ｐｇ〜１００ｎｇ、または０．１ｐｇ〜５０ｎｇ、または０．１ｐｇ〜１０ｎｇ、または０．１ｐｇ〜５ｎｇの検体を含むサンプルを分析するためのものである。より好適には、デバイスは、０．５ｐｇ〜４ｎｇ、または０．５ｐｇ〜３ｎｇ、または、１ｐｇ〜２ｎｇ、または１ｐｇ〜１ｎｇ、または１ｐｇ〜５００ｐｇ、または１ｐｇ〜４００ｐｇ、または１ｐｇ〜３００ｐｇ、または２ｐｇ〜２５０ｐｇ、または３ｐｇ〜２２５ｐｇ、または５ｐｇ〜２００ｐｇの検体を含むサンプルを分析するためのものである。
【００３０】
好適には、検体は、薬物代謝産物および／または薬物を含む。
【００３１】
サンプル受容部は、サンプルを受け取るためのものであり、例えば、好適にはサンプルを吸収する繊維状の材料で構成されてもよい。好適には、サンプル受容部は、綿、ガラス繊維、レーヨン、ポリエステル、ナイロン、セルロース、ニトロセルロースおよびスパンポリエチレンのうちの１つ以上を含む透過膜上に配置される。より好適には、サンプル受容部は、ＧＥヘルスケア社から入手可能なＦｕｓｉｏｎ５を含む透過膜上に配置される。Ｆｕｓｉｏｎ５は、サンプル受容部上のサンプルが、例えばカメラで視覚化され、および／または記録されることを可能にし、それにより、デバイスを使用して実施されるあらゆるテストの精度および信頼性を高めるため、有利である。特に、視覚化は、サンプル受容部がサンプル、例えば指紋を受け取ったか否かを分析器が確認できるので有用であり得る。
【００３２】
好適には、サンプル受容部は、サンプルを濃縮し、および／またはサンプルをプローブ区域の下流に導くように構成された１つ以上のくぼみおよび／またはラインを含む。サンプル受容部上のくぼみおよび／またはラインは、プローブ区域に向かって緩衝液の下流への流れの速度を増加させ、およびサンプル受容部を別々のチャネルに分割してもよい。ある具体例では、ラインは、疎水性のインクを含む。
【００３３】
好適には、サンプル受容部は、平均的な成人の指紋を受け取るように構成される。好適には、サンプル受容部は、１００ｍｍ２〜４００ｍｍ２、または２００ｍｍ２〜３５０ｍｍ２、または２５０ｍｍ２〜３５０ｍｍ２の面積を有する。より好適には、サンプル受容部は、２７５ｍｍ２〜３２５ｍｍ２の面積を有する。代わりに、好適には、サンプル受容部は、新生児の指紋を受け取るように構成され、好適には、２５ｍｍ２〜７５ｍｍ２、または３０ｍｍ２〜６０ｍｍ２の面積を有する。好適には、サンプル受容部は、ほぼ長方形、ほぼ円形、またはほぼ楕円形である。好適には、サンプル受容部は、ある人によって、例えば指紋の形で受け取られたサンプルの面積が、同年代の別の人によって受け取られたサンプルの面積とほぼ同じであるように構成される。このようなサンプル受容部の構成は、サンプル毎により良い正規化結果を提供する。
【００３４】
好適には、デバイスは、サンプル受容部の上流の緩衝液受容部を更に含み、緩衝液受容部からサンプル受容部への緩衝液の移動を可能にするように構成されている。
【００３５】
好適には、デバイスは、緩衝液を保持する容器を更に含み、使用時に、容器から緩衝液受容部への緩衝液の移動が許容されるように構成されている。
【００３６】
好適には、容器は、１００〜５００μｌの容積を有する。より好適には、容器は、１００〜４５０μｌ、または１００〜４００μｌ、または１００〜３５０μｌ、または１００〜３００μｌ、または１００〜２５０μｌ、または１００〜２００μｌの容積を有する。代わりに、好適には、容器は、１２５〜３００μｌ、または１５０〜２５０μｌ、または１７５〜２１５μｌの容積を有する。代わりに、好適には、容器は、１５０〜５５０μｌ、または２００〜５００μｌ、より好適には２５０〜４００μｌ、または３００〜３７５μｌ、最も好適には３２５〜３５０μｌの容積を有する。
【００３７】
好適には、容器は、１００〜５００μｌの緩衝液を含む。より好適には、容器は、１００〜４５０μｌ、または１００〜４００μｌ、または１００〜３５０μｌ、または１００〜３００μｌ、または１００〜２５０μｌ、または１００〜２００μｌの緩衝液を含む。代わりに、好適には、容器は、１２５〜３００μｌ、または１５０〜２５０μｌ、または１７５〜２１５μｌの緩衝液を含む。代わりに、好適には、容器は、１５０〜５５０μｌ、または２００〜５００μｌの緩衝液を含む。より好適には、容器は、２５０〜４００μｌ、または３００〜３７５μｌの緩衝液を含み、最も好適には、３２５〜３５０μｌの緩衝液を含む。
【００３８】
好適には、容器は、緩衝液ブリスタである。用語「緩衝液ブリスタ」は、ある量の緩衝液を含む密閉容器を指し、例えばブリスタ（の壁）を突き刺すことにより、ブリスタを開ける際に少なくともその緩衝液の一部が放出される。緩衝液ブリスタは、例えば、その中の緩衝液が放出の瞬間まで無菌に保たれ得るため有利である。緩衝液ブリスタは、ブリスタが開かれ／破壊されていることを観測することが容易であり、したがって使用前に緩衝液が改ざんされるリスクを低減するため有利である。
【００３９】
好適には、緩衝液は、水混和性有機溶媒と、界面活性剤、好適には洗剤と、および緩衝剤とを含む。緩衝液は、上記の３つの成分の全てを含む点で有利である。特に、本明細書に記載の緩衝液は、好適には、毛細管現象によって制御された流速でデバイスを通って下流に分極された方法で流れ、これは、サンプル受容部に受け取られた瞬間から流速が一貫し、および予測可能であることを意味する。緩衝液はまた、好適には、検体を溶媒先端において可溶化するのに有効であり、それにより、濃縮された、効率的かつ再現可能な方法で検体を抗体に渡す。緩衝液の個々の成分およびその好適な量は、以下に更に詳細に記載される。
【００４０】
水混和性溶媒は、当前記技術分野において公知である。好適には、水混和性有機溶媒は、エタノール、メタノール、およびテトラヒドロフランのうちの１つ以上を含む。好適には、緩衝液は、１０〜３０ｖ／ｖ％の水混和性有機溶媒を含む。より好適には、緩衝液は、１５〜２５ｖ／ｖ％、または１８〜２２ｖ／ｖ％の水混和性有機溶媒を含む。水混和性有機溶媒は、親水性および疎水性分子が水中に分配するのを助ける。
【００４１】
界面活性剤は、当前記技術分野において公知であり、ミセルを形成するあらゆる分子、例えば両親媒性分子を含み得る。好適には、界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ−２０、Ｔｗｅｅｎ−８０、トリトンＸ−１００、臭化テトラオクチルアンモニウム、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびオクタン酸のうちの１つ以上を含む。代わりに、好適には、界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ−２０、Ｔｗｅｅｎ−８０、トリトンＸ−１００、トリトンＸ−１１４、臭化テトラオクチルアンモニウム、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびオクタン酸のうちの１つ以上を含む。より好適には、界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ−２０、Ｔｗｅｅｎ−８０、トリトンＸ−１００、および臭化テトラオクチルアンモニウムのうちの１つ以上を含む。代わりに、好適には、界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ−２０、Ｔｗｅｅｎ−８０、トリトンＸ−１００、トリトンＸ−１１４、および臭化テトラオクチルアンモニウムのうちの１つ以上を含む。より好適には、界面活性剤は、トリトンＸ−１１４を含む。好適には、緩衝液は、０．１〜０．３０ｗ／ｖ％の界面活性剤を含む。より好適には、緩衝液は、０．１０〜０．２５ｗ／ｖ％、または０．１０〜０．２０ｗ／ｖ％、または０．１２〜０．１７ｗ／ｖ％の界面活性剤を含む。界面活性剤、好適には洗剤は、サンプルからの薬物および／または薬物代謝産物などの検体の放出を支援し、それによりテストの精度を高めると考えられる。界面活性剤分子は、好適には臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を超える濃度で存在する。したがって、界面活性剤内に存在するミセルは、薬物および薬物代謝産物などの疎水性の検体のキャリアとして振る舞うことができ、およびこの検体を抗体などのプローブに渡すことを可能にする。
【００４２】
適切な緩衝剤は、当前記技術分野において公知である。好適には、緩衝剤は、ＨＥＰＥＳ、トリス、ＴＲＩＺＭＡ、およびリン酸塩緩衝液のうちの１つ以上を含む。好適には、緩衝液は、５〜１００ｍＭの緩衝剤を含む。より好適には、緩衝液は、５〜７５ｍＭ、または５〜５０ｍＭ、または５〜２５ｍＭ、または５〜１５ｍＭ、または５〜１０ｍＭ、または６〜９ｍＭ、または７〜８ｍＭの緩衝剤を含む。緩衝剤は、それらのｐＫａおよびＰＩ値に基づいて薬物および／または薬物代謝産物などの検体の溶解度を高めるのを助けると考えられている。
【００４３】
好適には、緩衝液は、塩を更に含む。好適には、塩は、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、またはそれらの混合物から選択される。緩衝液が塩を更に含む場合、テストのストリンジェンシーが改善されると考えられ、例えば、テスト部および／またはコントロール部および／または標準化部位を分析する場合、緩衝液中の塩のレベルを増加させることは、バックグラウンドノイズの強度を減少させるのに役立ち得る。
【００４４】
好適には、緩衝液は、１つ以上の酸化防止剤を更に含む。適切な酸化防止剤は、酢酸エチル、アントラニル酸メチル、２−ペンチルブチレート、およびエチルブチレートを含む。酸化防止剤は、検体またはその代謝産物および指紋脂質などのサンプル中の有機物質の酸化を防止するのに役立ち得る。これは、検体および／またはその代謝産物が酸化されると、その特性（例えば、その電荷）が変化し得るため、望ましい。物理的または化学的性質の変化は、検体または代謝産物のプローブ（例えば、抗体）と結合する能力を阻害し、したがって、そのような変化は、好適には、緩衝液中に１つ以上の酸化防止剤が存在することによって回避される。
【００４５】
好適には、緩衝液は、乳化剤を更に含む。好適には、乳化剤は、デオキシコレート、コレステロールおよびそれらの組み合わせから選択される。より好適には、乳化剤は、デオキシコレートである。理論により拘束されることを望まないが、デオキシコレートなどの乳化剤は、サンプル中の任意の検体またはその代謝産物をプローブに渡すことを助けるものと考えられる。これは、乳化剤が任意の疎水性の検体または代謝産物を標識プローブに渡すことを助けることによって達成されると考えられる。
【００４６】
サンプル受容部の下流は、プローブ区域である。好適には、使用中、緩衝液（サンプルからの検体などの溶ける要素を含む）は、標識プローブを緩衝液中に放出する標識プローブ区域内に引き込まれ、標識プローブ区域を通過する。好適には、標識プローブは、透過膜上に配置され、透過膜は、１つ以上のニトロセルロース、ポリエステル、レーヨン、およびガラス繊維を含んでもよい。好適には、透過膜は、Ａｈｌｓｔｒｏｍ  ＲｅｌｉａＦｌｏｗ（商標）８００を含む。代わりに、好適には、透過膜は、ＧＥヘルスケア社から入手可能なＦｕｓｉｏｎ５を含む。
【００４７】
サンプル受容区域および／またはプローブ区域および／またはテスト部が好適に配置される透過膜は、同じ膜または別個の薄膜であってもよい。サンプル受容部の薄膜は、プローブ区域／テスト部の材料と異なる材料を含んでもよい。代わりに、材料は、サンプル受容部、プローブ区域、およびテスト部と同じものであってもよい。
【００４８】
好適には、透過膜は、緩衝液の動きを制御できるように構成される。好適には、薄膜は、検体（例えば、薬物分子または薬物代謝産物）を含む試薬（例えば緩衝液）が毛細管現象によって薄膜を通過することができるという点で透過性がある。好適には、透過膜は、ニトロセルロースまたは同様のブロッティング材料を含む。好適には、薄膜は、クロマトグラフィ効果を許容せず、すなわち、透過膜は、標識プローブが検体よりも遅くまたは速く移動し、標識プローブおよび検体が分離しまたは効率的に結合しないことを許容しない。使用中、緩衝液の動きを制御および予測できるように構成された薄膜は、分析の精度および信頼性を高め、およびサンプル間で結果を再現および標準化することができる。
【００４９】
ある好適な具体例では、透過膜は、細孔が提供される疎水性の接着剤で処理され、細孔を通って緩衝液が細孔のサイズに依存して流れることができる。代わりに、または加えて、透過膜は、複数の層を含み、これらの層は、例えば緩衝液受容部からサンプル受容部への緩衝液の流れを調節すると考えられる多孔性の接着剤によって随意に分離され、その結果、望ましい流れの速度を与え、その速度は、その後溶媒先端において濃縮されるサンプルからの検体の可溶化を最大化する。
【００５０】
本明細書で使用される用語「プローブ（probe）」は、１つ以上の可変な検体結合ドメインを含む１つ以上の分子を指す。プローブは、検体（例えば、サンプル中に存在する薬物または薬物代謝産物）に特異的なものであり、検体と結合して、プローブ−検体複合体（例えば免疫複合体）を形成することができる。本明細書で使用される用語「特異的なプローブ（probe specific to）」は、標的検体以外のいかなるサンプル成分にも有意に結合しないプローブを指す。本明細書で使用される用語「結合（binding）」は、プローブと検体との間の相互作用または複合体化を指し、十分に安定な複合体をもたらす。
【００５１】
好適には、プローブは、抗体、アプタマ、およびそれらの混合物からなる群から選択される。代わりに、好適には、プローブは、抗体、アプタマ（またはその他のＤＮＡベースのタンパク結合構造）、アフィマ（affimer）（またはその他のアミノ酸ベースのタンパク結合構造）、およびそれらの混合物からなる群から選択される。より好適には、プローブは、抗体である。用語「抗体」は、天然および人工の抗体並びに２価の抗体および１価の抗体のＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片を含む。抗体は、特異的結合部位によって特異的抗原決定基または抗原のエピトープに結合する。好適には、プローブが抗体であり、検体が標的抗原である場合、抗体は、抗原（サンプル中に存在する薬物または薬物代謝産物）に特異的であり、抗原に結合して免疫複合体（抗体−抗原複合体）を形成することができる。本明細書で使用される用語「特異的な抗体」は、標的抗原以外のいかなるサンプル成分にも有意に結合しない抗体を指す。
【００５２】
好適には、標識プローブは、２つ以上の異なる抗体を含む。特に、１つの抗体は、１つの抗原に結合することができ、異なる抗体は、異なる抗原に結合することができる。例えば、１つの抗体は、モルヒネおよび／またはその代謝産物に結合することができる抗体であってもよく、別の抗体は、コカインおよび／またはその代謝産物に結合することができる抗体であってもよい。したがって、１つ以上の検体、例えば薬物または薬物代謝産物が、存在する場合、サンプル中で検出されることができるから、２つ以上の異なる抗体を提供することが有利である。標識プローブが２つ以上の異なる抗体を含む場合、異なる抗体は、異なる標識または同じ標識で標識化される。異なる標識は、サンプル、例えば同じテスト部中の異なる薬物および／またはその代謝産物の中の異なる検体の識別および／または定量化を可能にし、それによってデバイスの多重化能力を向上させる。異なる抗体が同じ標識で標識化された場合、異なるテスト部は、サンプル、例えば異なる薬物および／またはその代謝産物の中の異なる検体を識別しおよび／または定量化するために使用される。
【００５３】
好適には、プローブは、２価の抗体および／または１価の抗体のＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片を含む。「２価の抗体」は、２つの結合部位を有する抗体である。したがって、２価の抗体は、抗原の２つの分子、例えば薬物および／または薬物代謝産物に結合することができる。「１価の抗体のＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片」は、１つの結合部位を有する抗体断片である。したがって、１価の抗体のＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２断片は、抗原の１つの分子、例えば薬物および／または薬物代謝産物に結合することができ、デバイスの感度を増加させると考えられる。
【００５４】
代わりに、好適には、プローブは、１つ以上のアフィマを含む。特定の標的に特異的なアフィマを調製する方法は、当技術分野で公知である。例えば、潜在的な標的のファージディスプレイライブラリ、例えば乱用薬物、その代謝産物、または関連するリガンドは、イン・ビトロ技術によって生成されてもよい。次に、アフィマが生成されて、特定の標的のための高親和性結合表面を提示してもよい。
【００５５】
特に、イン・ビトロのディスプレイ技術は、定義された選択条件の使用を許容し、および抗体をコード化する配列の即時に利用可能にする。高処理能力のアプリケーションへのイン・ビトロのディスプレイの適合性は、基礎および応用研究におけるそれらのより広範な使用の可能性を広げる。ディスプレイライブラリは、ヒトのレパートリーから生成された最大２．５×１０１１のメンバーを含むことができる。したがって、イン・ビトロのディスプレイ技術は、乱用薬物および／またはその代謝産物に特異的なディスプレイメンバーを選択し、特徴付ける機会を提供する。
【００５６】
プローブは、プローブを視覚化または検出する手段を提供する検出可能な標識に接合され、色素原、触媒、蛍光化合物、化学発光化合物、コロイド金、色素粒子、量子ドット、または例えば色付きの染料または蛍光染料などの検出試薬でタグ付けされたラテックス粒子を含んでもよい。好適には、標識プローブは、４００ｎｍ〜１ｍｍの波長を有する放射線で検出可能である。より好適には、標識プローブは、４００ｎｍ〜５００μｍ、または４００ｎｍ〜１００μｍ、または４００ｎｍ〜１０μｍ、または４００ｎｍ〜１μｍ、または４００ｎｍ〜８００ｎｍ、または４５０ｎｍ〜７００ｎｍの波長を有する放射線で検出可能である。好適には、標識プローブは、蛍光標識プローブを含む。代わりに、好適には、標識プローブは、１つ以上の量子ドットを含む。
【００５７】
好適には、プローブ区域は、１０ｐｇ〜１μｇの標識プローブを含む。より好適には、プローブ区域は、１０ｐｇ〜５００ｎｇの標識プローブを含む。更に好適には、プローブ区域は、１０ｐｇ〜４００ｎｇ、または１０ｐｇ〜３００ｎｇ、または１０ｐｇ〜２５０ｎｇ、または１０ｐｇ〜２００ｎｇ、または１０ｐｇ〜１００ｎｇ、または１０ｐｇ〜１ｎｇ、または１０ｐｇ〜５００ｐｇ、または１０ｐｇ〜２００ｐｇの標識プローブを含む。代わりに、好適には、プローブ区域は、５０ｐｇ〜５００ｎｇ、または２００ｐｇ〜４００ｎｇ、5００ｐｇ〜３００ｎｇ、１ｎｇ〜２５０ｎｇ、１０ｎｇ〜２００ｎｇ、２０ｎｇ〜１５０ｎｇ、３０ｎｇ〜１００ｎｇの標識プローブを含む。
【００５８】
１０ｐｇ〜１００ｎｇ、１０ｐｇ〜１ｎｇ、１０ｐｇ〜５００ｐｇ、１０ｐｇ〜２００ｐｇなどの少量の標識プローブを提供することは、分析の感度を増加させると考えられ、サンプルからの非常に小さいレベルの薬物／薬物代謝産物などの検体を正確に検出することができる。２００ｎｇ〜１μｇなどのより多量の標識プローブを提供することは、サンプル中の高いレベルの検体の検出および定量化を可能にし、これは、物質、例えば薬物がいつ人を死亡させたかを特定するための大きい検出レベルに有用であり得る。標識プローブ区域における標識プローブの量は、検体に対するプローブの親和性に依存して変化することが理解される。例えば、異なる検体は、異なる親和性を有し得るから、最適レベルの感度を提供するために、より多くのまたはより少ない抗体が必要とされ得る。例えば、マウスの抗体は、通常、約１０−９ＭのＫＤ値を有する一方で、ウサギの抗体は、通常、約１０−１１ＭのＫＤ値を有するから、ウサギの抗体は、より大きな、典型的には１〜２オーダー大きな平均結合親和性を有する。これらの例の値は、周囲に正規ガウス分布が存在する平均ＫＤ値であることが強調されるため、マウスの抗体の一部（少量）がウサギの抗体と同様に機能し、逆も同様である。
【００５９】
好適には、サンプル受容部におけるデバイスの幅（例えば、基板または透過膜の幅）は、プローブ区域よりも大きい。このことは、使用時に、緩衝液がサンプル受容部のより大きな領域を通り抜け、それによって溶媒先端の検体の大部分／全体を溶解するため有利である。好適には、プローブ区域またはその上流のデバイスを狭めることは、最小量の濃縮された溶質としてプローブ区域に渡されるときに、検体が緩衝液の溶媒先端で更に濃縮されることを確実にし、そこで任意の検体と標識プローブとの結合が起こる。緩衝液の溶媒先端における最高濃度の検体を標識プローブへ渡すことは、互いに結合している２つの物質の反応速度を向上させ、その結果、分析の効率、感度および信頼性を向上させる。
【００６０】
代わりに、好適には、サンプル受容部におけるデバイスの幅とプローブ区域におけるデバイスの幅は、ほぼ同じである。このことは、デバイスをより迅速かつ容易にバルク製造することができるので、デバイスの製造および梱包において有利および便利であり得る。廃棄物は、ぴったり合うデバイスの形状のために減少し、および例えば、２つ以上のほぼ長方形のデバイスまたは薄膜は、無駄なく、または最小限の無駄で、長方形の出発材料の１片から製造されてもよい。
【００６１】
プローブ区域の下流にはテスト部があり、テスト部は、標識プローブに結合することができる第１固定化捕捉試薬を含む。テスト部は、好適には透過膜、好適にはニトロセルロース透過膜上に配置される。
【００６２】
テスト部は、デバイスの特定の領域に、好適には透過膜の上に固定化され、特定の分子を「捕捉」しまたは特定の分子に結合する第１捕捉試薬を含む。本明細書で使用される用語「第１固定化捕捉試薬」は、第１捕捉試薬がテスト部に付着しまたはテスト部に閉じ込められて、分析中にテスト部を横切る流体のラテラルフローが、第１捕捉試薬を除去しないことを意味する。したがって、標識プローブ−検体複合体（例えば、免疫複合体）の一部ではない標識プローブは、第１固定化捕捉試薬に結合する能力を有する。
【００６３】
好適には、第１固定化捕捉試薬は、標識プローブに結合することができる抗原を含む。好適には、抗原は、サンプル中に抗体としても存在し得る薬物および／または薬物代謝産物である。好適には、標識プローブは、抗体であり、および抗原は、サンプル中に抗体としても存在し得る薬物および／または薬物代謝産物である。代わりに、好適には、標識プローブは、アフィマであり、および抗原は、サンプル中に抗体としても存在し得る薬物および／または薬物代謝産物である。
【００６４】
好適には、テスト部は、１ｎｇ〜５００ｎｇの第１固定化捕捉試薬を含む。より好適には、テスト部は、１ｎｇ〜４００ｎｇ、または１ｎｇ〜３５０ｎｇ、または１ｎｇ〜３００ｎｇ、または１ｎｇ〜２５０ｎｇ、または５ｎｇ〜２２５ｎｇ、または１０ｎｇ〜２００ｎｇの第１固定化捕捉試薬を含む。１ｎｇ〜３００ｎｇ、または１ｎｇ〜２５０ｎｇなどの少量の第１固定化捕捉試薬を提供することは、分析の感度を増加させると考えられ、サンプルからの非常に小さいレベルの抗体、例えば抗原を正確に検出することができる。３５０ｎｇ〜５００ｎｇなどのより多量の第１固定化捕捉試薬を提供することは、サンプル中の高いレベルの検体の検出を可能にし、これは、物質、例えば薬物がいつ人を死亡させたかを特定するための大きい検出レベルに有用であり得る。
【００６５】
ある具体例では、第１固定化捕捉試薬は、標識プローブに結合することができる２つ以上の異なる抗原を含む。特に、標識プローブが２つ以上の異なる抗体を含む場合、１つの抗原は、１つの抗体に結合することができ、異なる抗原は、異なる抗体に結合することができてもよい。例えば、１つの抗原は、コカインまたはその代謝産物であり、他の抗原は、モルヒネまたはその代謝産物であってもよい。
【００６６】
好適には、デバイスは、複数のテスト部を含む。好適には、各テスト部は、異なる第１固定化捕捉試薬、例えば、標識プローブに結合することができる異なる固定抗原を含む。特に、標識プローブが２つ以上の異なる抗体を含む場合、抗体に結合することができる１つの抗原は、第１テスト部に固定され、異なる抗体に結合することができる異なる抗原は、第２テスト部に固定されてもよい。
【００６７】
好適には、テスト部は、直列に配置される。代わりに、好適には、テスト部は、並列に配置される。
【００６８】
好適には、第１捕捉試薬は、リンカー分子への接合によってテスト部に固定化される。リンカー分子−第１捕捉試薬接合は、テスト部に固定される。好適には、リンカー分子−第１捕捉試薬接合は、疎水性のおよび／または静電気の相互作用によってテスト部に固定される。リンカー分子は、好適には、タンパク質、合成ポリマー、修飾糖分子、修飾ＤＮＡおよびそれらの２つ以上の混合物からなる群から選択される。好適には、リンカー分子は、タンパク質であり、これは大きなペプチド分子であってもよい。より好適には、タンパク質は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ウシチログロブリン（ＢＴＧ）、西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、またはそれらの１つ以上の混合物を含む。最も好適には、タンパク質は、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む。リンカー分子は、テスト部からの第１捕捉試薬の移動を防止する。
【００６９】
第１捕捉試薬が、固定されたタンパク質への接合によって固定化された場合、好適には、各固定されたタンパク質分子は、第１捕捉試薬の１０〜５０個の、または１５〜４０個の、または２０〜３５個の分子に接合される。例えば、タンパク質がＢＳＡであり、第１捕捉試薬がモルヒネである場合、テスト部に固定された各ＢＳＡ分子は、約３０個のモルヒネ分子に接合される。
【００７０】
好適には、リンカー分子は、５μｇ／ｍｌ〜５００μｇ／ｍｌ、または１０μｇ／ｍｌ〜２５０μｇ／ｍｌ、または１０μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌの濃度で提供され、および／またはリンカー分子は、５０ｎｌ／ｃｍ〜１μｌ／ｃｍ、または１００ｎｌ／ｃｍ〜５００ｎｌ／ｃｍ、または１５０ｎｌ／ｃｍ〜４００ｎｌ／ｃｍの初期量でテスト部のラインに固定される。代わりに、好適には、リンカー分子は、５μｇ／ｍｌ〜５００μｇ／ｍｌ、または１０μｇ／ｍｌ〜２５０μｇ／ｍｌ、または１０μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌの濃度で提供され、および／またはリンカー分子は、５００ｎｌ／ｃｍ〜１μｌ／ｃｍ、または７００ｎｌ／ｃｍ〜９００ｎｌ／ｃｍ、または７５０ｎｌ／ｃｍ〜８５０ｎｌ／ｃｍの初期量でテスト部のラインに固定される。好適には、リンカー分子がタンパク質であり、第１捕捉試薬がモルヒネである場合、タンパク質は、１０μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌ、または１０μｇ／ｍｌ〜５０μｇ／ｍｌ、または２０μｇ／ｍｌ〜４０μｇ／ｍｌの濃度で提供され、および／またはタンパク質は、１００〜５００ｎｌ／ｃｍの初期量でテスト部のラインに固定される。より好適には、タンパク質は、１５０〜４００ｎｌ／ｃｍ、または２００〜３００ｎｌ／ｃｍ、または２２５ｎｌ／ｃｍ〜２７５ｎｌ／ｃｍの初期量でテスト部のラインに固定される。テスト部におけるタンパク質の濃度および１ｃｍあたりの量は、第１捕捉試薬によって異なり、必要な分析感度および各タンパク質分子に結合した第１捕捉試薬の数によって異なることが理解される。
【００７１】
代わりに、好適には、リンカー分子がタンパク質であり、第１捕捉試薬がモルヒネである場合、タンパク質は、１０μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌ、または１０μｇ／ｍｌ〜５０μｇ／ｍｌ、または２０μｇ／ｍｌ〜４０μｇ／ｍｌの濃度で提供され、および／またはタンパク質は、７００〜９００ｎｌ／ｃｍ、または７５０ｎｌ／ｃｍ〜８５０ｎｌ／ｃｍの初期量でテスト部のラインに固定される。
【００７２】
好適には、デバイスは、テスト部の下流にあり、標識プローブに結合することができる第２固定化捕捉試薬を含むコントロール部を更に含み、テスト部からコントロール部への緩衝液の移動を可能にするように構成されている。本明細書で使用される用語「第２固定化捕捉試薬」は、第２捕捉試薬がコントロール部に付着しまたはコントロール部に閉じ込められて、分析中にコントロール部を横切る流体のラテラルフローが、第２捕捉試薬を除去しないことを意味する。
【００７３】
使用中、緩衝液がコントロール部を通り抜けるため、そこで溶解された標識プローブは、サンプルからの検体に結合されているか否かにかかわらず、第２固定化捕捉試薬に結合する。例えば、サンプルが抗原を含み、標識プローブが標識抗体である場合、第２固定化捕捉試薬は、標識抗体および標識抗体を含む任意の免疫複合体（抗体−抗原複合体）に結合することができる固定された抗体を含んでもよい。したがって、本明細書に記載されるようなコントロール部は、分析が確実に機能することを示すので有利である。これは、例えばコントロール部における適切な放射線の下で、標識を識別することによって示される。分析が完了した後にコントロール部の標識を識別することは、すなわち、標識プローブが緩衝液によって溶解されて、テスト部を通過したことを確認することによって、分析が確実に機能したことを証明する。分析が完了した後に標識がコントロール部に存在しない場合、分析は、確実に機能していない可能性がある。
【００７４】
好適には、第２固定化捕捉試薬は、抗体またはアプタマ、より好適には、標識プローブに特異的な抗体を含む。好適には、第２固定化捕捉試薬は、抗体、アフィマ、またはアプタマ、より好適には、標識プローブに特異的な抗体を含む。本明細書で使用される場合、抗体、アフィマ、またはアプタマが標識プローブに「特異的」であるときは、抗体、アフィマ、またはアプタマは、標識プローブが利用可能な結合部位を有するか否かにかかわらず標識プローブに結合する。
【００７５】
好適には、デバイスは、標識プローブに結合することができない固定化標識タンパク質と、検体と、免疫複合体などの標識プローブ−検体複合体と、を含む標準化部位を更に含み、標準化部位の固定化タンパク質およびプローブは、同じ標識により標識されている。
事実上、固定化標識タンパク質は、分析においていかなる分子に対しても親和性を有さず、したがって、それに対して同じ分析における他のすべての測定値が比較および定量され、それによってデータを標準化することが可能になる一定の対照基準である。例えば、標準化部位は、異なるデバイス上の分析間で異なり得る環境因子に関してデータを標準化する。例えば、結合動力学への温度の影響を考慮に入れることができる。増加した結合速度は、タンパク質が変性し始め、結合速度が低下するまで温度が上昇すると、観察される。ある具体例では、デバイスは、分析温度を観察し、および標準化部位の一定の蛍光信号を参照してルックアップテーブルを用いてデータを標準化する。さらに、例えば、標準化部位の標識および固定化タンパク質が蛍光標識されている場合、蛍光色素の温度依存的な消光などの環境因子を考慮に入れることができる。
【００７６】
好適には、デバイスは、テスト部および／またはコントロール部の下流にあるシンクを更に含み、テスト部および／またはコントロール部からシンクへの緩衝液の移動を可能にするように構成され、シンクは、シンクから緩衝液が移動することを防止するように構成されている。好適には、シンクは、流体／緩衝液を吸収することによって、分析期間中にデバイスに加えられたあらゆる流体／緩衝液を「引っ張る」ように働く。好適には、シンクは、分析結果を損なう可能性がある流体／緩衝液がテスト部および／またはコントロール部の上流に逆流することが起こらないようにするのに十分な容量および吸収能力を有する。好適には、シンクは、１００〜５００μｌの容積を有する。より好適には、シンクは、１００〜４００μｌ、または１００〜３００μｌ、または１００〜２５０μｌ、または１００〜２００μｌの容積を有する。代わりに、好適には、シンクは、１２５〜３００μｌ、または１５０〜２５０μｌ、または１７５〜２１５μｌの容積を有する。代わりに、好適には、シンクは、１５０〜５５０μｌ、または２００〜５００μｌの、より好適には、２５０〜４００μｌ、または３００〜３７５μｌの、最も好適には、３２５〜３５０μｌの容積を有する。好適には、シンクは、吸収剤および／または親水性材料を含む。好適には、シンクは、高密度のセルロース、ガラス繊維／セルロース混合物、およびコットンリンター／繊維のうちの１つ以上を含む。
【００７７】
好適には、デバイスは、バッキング層を更に含む。好適には、バッキング層は、物理的支持体または基部として機能し、その上にサンプル受容部、標識プローブ区域、テスト部、および選択的にコントロール部および／または標準化部位および／またはシンクが搭載される。好適には、バッキング層は、例えばポリスチレンなどのプラスチック片を含む。サンプル受容部、標識プローブ区域、テスト部、および選択的にコントロール部および／または標準化部位および／またはシンクは、接着剤、好適には疎水性の接着剤によって、バッキング層に搭載される。好適には、透過膜、バッキング層、およびいずれの接着剤も、１つ以上の標識を識別するために使用される波長においては光を散乱しも蛍光を発しもしないため、分析の信頼性を向上させる。
【００７８】
好適には、デバイスは、サンプル受容区域と離れた指紋パターン受容区域を更に含む。好適には、指紋パターン受容区域は、サンプル受容区域と異なる材料を含む。好適には、指紋パターン受容区域は、ガラスおよび／またはプラスチックおよび／またはシリコンのウエハを含む。好適には、指紋パターン受容区域は、サンプルドナー（好ましくは他の指紋）が、分析前、分析中または分析後に確実に識別されるように提供される。
【００７９】
好適には、ラテラルフローデバイスは、サンプル受容部上にサンプルを受けるための開口部を規定するカセット内に収容される。好適には、サンプルを受けるための開口部は、サンプルがサンプル受容部の所定の領域に堆積されるように構成される。好適には、開口部は、ほぼ長円形、ほぼ円形、またはほぼ楕円形である。好適には、サンプル受容部の所定の領域は、平均的な成人の指紋の領域の６０〜１００％である。より好適には、サンプル受容部の所定の領域は、平均的な成人の指紋の領域の７０〜１００％、または８０〜１００％、または９０〜１００％である。このような開口部の構成は、サンプル毎により標準化された結果を提供する。
【００８０】
好適には、ラテラルフローデバイスは、テスト信号および／またはコントロール信号および／または標準化信号を見るための窓を規定するカセット内に収容される。窓は、テスト部および／またはコントロール部および／または標準化部位の上に配置され、テスト部および／またはコントロール部および／または標準化部位の視覚化または検出を可能にする。窓は、好適には、透明な高分子材料から形成される。分析の結果は、目、検出器または読取システムによって、窓を通して見ることができる。そのようなデバイスの非限定的な例は、分光光度計、反射率読取装置、照度計、蛍光光度計、光検出器または光電子増倍管、シンチレーションカウンタ、フォトダイオード、フォトダイオードアレイ、および電荷結合デバイスを含む。
【００８１】
ある具体例では、好適には、ラテラルフローデバイスは、サンプル受容部の上流にある緩衝液を受けるための開口部を規定するカセット内に収容される。
【００８２】
好適には、本発明は、０．１ｐｇ〜１μｇの検体を含むサンプルを分析する方法であって、
（ａ）０．１ｐｇ〜１μｇの標的検体を含むサンプルを提供するステップと、
（ｂ）サンプルの少なくとも一部を緩衝液に溶解して、溶解したサンプル溶液を形成するステップと、
（ｃ）溶解したサンプル溶液の少なくとも一部を標識プローブを含むプローブ区域に接触させて、標識プローブの少なくとも一部を溶解し、検体が溶解したサンプル溶液の一部に存在する場合には、標識プローブを、溶解したサンプル溶液の一部の中の検体に結合させて、標識プローブ−検体複合体を形成することを可能にするステップと、
（ｄ）標識プローブおよび／または標識免疫複合体を、標識プローブに結合することができる第１固定化捕捉試薬を含むテスト部に通すステップと、
（ｅ）テスト部中の標識プローブの量を検出することによって、サンプル中に検体が存在する場合、サンプル中の検体の量が閾値を超えているか否かを決定するステップと、を含む方法を更に提供する。
【００８３】
サンプル中に検体が存在する場合にステップ（ｃ）において形成された標識プローブ−検体複合体は、第１固定化捕捉試薬に利用可能な結合部位を有していないことが理解される。したがって、第１固定化捕捉試薬は、標識プローブに結合することができ、標識プローブ−検体複合体に結合することができない。
【００８４】
好適には、サンプルは、汗、好適にはエクリン汗を含む、より好適には、サンプルは、手の指の汗および／または掌の汗および／または足の指の汗を含む。最も好適には、サンプルは、手の指の汗を含む。
【００８５】
好適には、サンプルは、ステップ（ａ）において、ラテラルフローデバイスのサンプル受容部上に提供され、デバイスは、
サンプル受容部の下流にあるプローブ区域と、
プローブ区域の下流にあり、標識プローブに結合することができる第１固定化捕捉試薬を含むテスト部と、を含み、
サンプル受容部からプローブ区域へ、およびプローブ区域からテスト部へ緩衝液が移動することを可能にするように構成されている。
【００８６】
好適には、サンプルは、サンプル受容部に直接に提供される。すなわち、サンプルは、好適には、サンプルを得ることと、サンプルをサンプル受容部に提供することとの間には、いかなるプロセスステップも課されない。好適には、サンプルは、サンプル受容部に提供される前に緩衝液中に懸濁されていない。
【００８７】
好適には、ステップ（ａ）において提供されたサンプルは、ほぼ乾燥していて、例えば毛細管現象によってサンプル受容区域からプローブ区域に移動するには不十分な液体を含む。
【００８８】
好適には、ステップ（ａ）において指紋として提供され、指紋は、指の隆起パターンの跡として堆積した汗を含む。
【００８９】
好適には、ステップ（ｂ）は、サンプル受容部の上流に緩衝液を提供し、緩衝液をサンプル受容部に通すことによって実行される。
【００９０】
好適には、サンプルは、ステップ（ｂ）において溶解され、ステップ（ｃ）において溶媒先端のプローブ区域と接触する。
【００９１】
好適には、緩衝液は、１００〜５００μｌの量で提供される。より好適には、緩衝液は、１００〜４５０μｌ、または１００〜４００μｌ、または１００〜３５０μｌ、または１００〜３００μｌ、または１００〜２５０μｌ、または１００〜２００μｌの量で提供される。代わりに、好適には、緩衝液は、１２５〜３００μｌ、または１５０〜２５０μｌ、または１７５〜２１５μｌの量の緩衝液で提供される。代わりに、好適には、緩衝液は、１５０〜５５０μｌ、または２００〜５００μｌの、より好適には２５０〜４００μｌ、または３００〜３７５μｌの、最も好適には３２５〜３５０μｌの量で提供される。より多量の緩衝液は、非結合標識プローブをテスト部および／またはコントロール部から洗い流し、誤った測定を防止することを助けることで有利であり得る。
【００９２】
好適には、緩衝液とサンプルの量の比は、５０：１〜１０００：１、より好適には、１００：１〜１０００：１、または２００：１〜１０００：１、または３００：１〜１０００：１、または４００：１〜１０００：１である。より好適には、緩衝液とサンプルの量の比は、５００：１〜１０００：１である。
【００９３】
好適には、緩衝液の組成は、本発明のラテラルフローデバイスに関連して上述した通りである。
【００９４】
好適には、サンプルは、０．１ｐｇ〜１μｇの検体を含む。より好適には、サンプルは、０．１ｐｇ〜５００ｎｇ、または０．１ｐｇ〜２００ｎｇ、または０．１ｐｇ〜１００ｎｇ、または０．１ｐｇ〜５０ｎｇ、または０．１ｐｇ〜１０ｎｇ、または０．１ｐｇ〜５ｎｇ、または０．５ｐｇ〜４ｎｇ、または０．５ｐｇ〜３ｎｇ、または１ｐｇ〜２ｎｇ、または１ｐｇ〜１ｎｇ、または１ｐｇ〜５００ｐｇ、または１ｐｇ〜４００ｐｇ、または１ｐｇ〜３００ｐｇ、または２ｐｇ〜２５０ｐｇ、または３ｐｇ〜２２５ｐｇ、または５ｐｇ〜２００ｐｇの検体を含む。代わりに、サンプルは、１０ｐｇ〜２ｎｇ、または２０ｐｇ〜１．５ｎｇ、または３０ｐｇ〜１．２５ｎｇ、または４０ｐｇ〜１ｎｇ、または５０ｐｇ〜５００ｐｇ、または５０ｐｇ〜３００ｐｇ、または５０ｐｇ〜２００ｐｇの検体を含む。
【００９５】
好適には、検体は、存在する場合は、薬物代謝産物および／または薬物を含む。本発明の方法を使用して検出され得る薬物は、適切な抗体が存在する場合には、下記のものを含むが、これに限定されない：
【００９６】
Ａ．同化剤。下記のものを含むが、これらに限定されない：
１．蛋白同化男性化ステロイド薬（ＡＡＳ）
ａ．外因性＊ＡＡＳ
１−アンドロステンジオール（５α−アンドロスタ−１−エン−３β、１７β−ジオール）；１−アンドロステンジオン（５α−アンドロスタ−１−エン−３、１７−ジオン）；ボランジオール（１９−ノルアンドロステンジオン）；ボラステロン；ボルデノン；ボルジオン（アンドロスタ−１、４−ジエン−３、１７−ジオン）；カルステロン；クロステボール；ダナゾール（１７α−エチニル−１７β−ヒドロキシアンドロスタ−４−イノ［２、３−Ｄ］イソオキサゾール）；デヒドロクロロメチルテストステロン（４−クロロ−１７β−ヒドロキシ−１７α−メチルアンドロスタ−１、４−ジエン−３−オン）；デスオキシメチルテストステロン（１７α−メチル−５α−アンドロスタ−２−エン−１７β−オール）；ドロスタノロン；エチルエストレノール（１９−ノル−１７α−プレグナ−４−エン−１７−オール）；フルオキシメステロン；ホルメボロン；フラザボール（１７β−ヒドロキシ−１７α−メチル−５α−アンドロスタノ［２、３−ｃ］−フラザン）；ゲストリノン；４−ヒドロキシテストステロン（４、１７β−ジヒドロキシアンドロスタ−４−エン−３−オン）；メスタノロン；メステロロン；メテノロン；メタンジエノン（１７β−ヒドロキシ−１７α−メチルアンドロスタ−１、４−ジエン−３−オン）；メタンドリオール；メタステロン（２α、１７α−ジメチル−５α−アンドロスタン−３−オン−１７β−オール）；メチルジエノロン（１７β−ヒドロキシ−１７α−メチルエストラ−４、９−ジエン−３−オン）；メチル−１−テストステロン（１７β−ヒドロキシ−１７α−メチル−５α−アンドロスト−１−エン−３−オン）；メチルノルテストステロン（１７β−ヒドロキシ−１７α−メチルエストル−４−エン−３−オン）；メチルトリエノロン（１７β−ヒドロキシ−１７α−メチルエストラ−４、９、１１−トリエン−３−オン）；メチルテストステロン；ミボレロン；ナンドロロン；１９−ノルアンドロステンジオン（エストル−４−エン３、１７−ジオン）；ノルボレトン；ノルクロステボール；ノルエタンドロロン；オキサボロン；オキサンドロロン；オキシメステロン；オキシメトロン；プロスタノゾール（［３、２−ｃ］ピラゾール−５α−エチオアロコラン−１７β−テトラヒドロピラノール）；キンボロン；スタノゾロール；ステンボロン；１−テストステロン（１７β−ヒドロキシ−５α−アンドロスタ−１−エン−３−オン）；テトラヒドロゲストリノン（１８α−ホモ−プレグナ−４、９、１１−トリエン−１７β−オール−３−オン）；トレンボロン、および類似の化学構造または同様の生物学的効果を有するその他の物質。
ｂ．内因性＊＊ＡＡＳ
アンドロステンジオール（アンドロスト−５−エン−３β、１７β−ジオール）；アンドロステンジオン（アンドロスト−４−エン−３、１７−ジオン）；ジヒドロテストステロン（１７β−ヒドロキシ−５α−アンドロスタン−３−オン）；プラステロン（デヒドロエピアンドロステロン、ＤＨＥＡ）；テストステロンおよび下記の代謝物と異性体：
５α−アンドロスタン−３α、１７α−ジオール；５α−アンドロスタン−３α、１７β−ジオール；５α−アンドロスタン−３β、１７α−ジオール；５α−アンドロスタン−３β、１７β−ジオール；アンドロスト−４−エン−３α、１７α−ジオール；アンドロスト−４−エン−３α、１７β−ジオール；アンドロスト−４−エン−３β、１７α−ジオール；アンドロスト−５−エン−３α、１７α−ジオール；アンドロスト−５−エン−３α、１７β−ジオール；アンドロスト−５−エン−３β、１７α−ジオール；４−アンドロステンジオール（アンドロスト−４−エン−３β、１７β−ジオール）；５−アンドロステンジオン（アンドロスト−５−エン−３、１７−ジオン）；エピ−ジヒドロテストステロン；３α−ヒドロキシ−５α−アンドロスタン−１７−オン；３β−ヒドロキシ−５α−アンドロスタン−１７−オン；１９−ノルアンドロステロン；１９−ノルエチオコラノロン。
＊「外因性(exogenous)」とは、通常、体内で自然につくられ得ない物質を指す。
＊＊「内因性(endogenous)」とは、通常、体内で自然につくられ得る物質を指す。
２．その他の蛋白同化薬。下記のものを含むが、これらに限定されない：
クレンブテロール、チボロン、ゼラノ−ル、ジルパテロール。
【００９７】
Ｂ．ホルモン。下記のものを含むが、これらに限定されない：
１．エリスロポエチン（ＥＰＯ）；
２．成長ホルモン（ｈＧＨ）、インスリン様成長因子（例えばＩＧＦ−１）、機械的成長因子（ＭＧＦｓ）；
３．ゴナドトロピン類（ＬＨ、ｈＣＧ）、男性においてのみ禁止；
４．インスリン；
５．コルチコトロピン類。
【００９８】
Ｃ．ベータ２作用薬、そのＤ体及びＬ体を含む。
【００９９】
Ｄ．抗エストロゲン作用を有する薬物。下記のものを含むが、これらに限定されない：
１．アナストロゾール、レトロゾール、アミノグルテチミド、エクスメスタン、フォルメスタン、テストラクトンを含むアロマターゼ阻害薬であるが、これらに限定されるものではない。
２．ラロキシフェン、タモキシフェン、トレミフェンを含む選択的エストロゲン受容体調節薬（ＳＥＲＭｓ）であるが、これらに限定されるものではない。
３．クロミフェン、シクロフェニル、フルベストラントを含むその他の抗エストロゲン作用を有する薬物であるが、これらに限定されるものではない。
【０１００】
Ｅ．利尿薬およびその他の隠蔽薬。下記のものを含むが、これらに限定されない：
利尿薬＊、エピテストステロン、プロベネシド、α−還元酵素阻害薬（例えば、フィナステリド、デュタステリド）、血漿増量物質（例えば、アルブミン、デキストラン、ヒドロキシエチルデンプン）、および類似の生物学的効果を有するその他の物質。
利尿薬は、アセタゾラミド、アミロリド、ブメタニド、カンレノン、クロルタリドン、エタクリン酸、フロセミド、インダパミド、メトラゾン、スピロノラクトン、チアジド類（ベンドロフルメチアジド、クロロチアジド、ヒドロクロロチアジド等）、トリアムテレン、および類似の化学構造または類似の生物学的効果を有するその他の物質を含む。
【０１０１】
Ｆ．酸素運搬の促進剤。下記のものを含むが、これらに限定されない：
１．自己血、同種血、異種血、またはすべての赤血球製剤。
２．過フルオロ化合物、エファプロキシラール（ＲＳＲ１３）、および修飾ヘモグロビン製剤（例えば、ヘモグロビンを基にした血液代替物質、ヘモグロビンのマイクロカプセル製剤）。
【０１０２】
Ｇ．興奮薬（関連したその光学異性体（Ｄ体およびＬ体）の両方を含む）。下記のものを含むが、これらに限定されない：
アドラフィニル、アドレナリン＊＊、アンフェプラモン、アミフェナゾール、アンフェタミン、アンフェタミニル、ベンズフェタミン、ブロマンタン、カルフェドン、カチン＊＊＊、クロベンゾレックス、コカイン、クロプロパミド、クロテタミド、シクラゾドン、ジメチルアンフェタミン、エフェドリン＊＊＊＊、エタミバン、エチルアンフェタミン、エチレフリン、ファンプロファゾン、フェンブトラゼート、フェンカンファミン、フェンカミン、フェネチリン、フェンフルラミン、フェンプロポレックス、フルフェノレックス、ヘプタミノール、イソメテプテン、レブメタンフェタミン、メクロフェノキセート、メフェノレックス、メフェンテルミン、メソカルブ、メタンフェタミン（Ｄ体）、メチレンジオキシアンフェタミン、メチレンジオキシメタンフェタミン、ｐ−メチルアンフェタミン、メチルエフェドリン＊＊＊＊、メチルフェニデート、モダフィニル、ニケタミド、ノルフェネフリン、ノルフェンフルラミン、オクトパミン、オルテタミン、オキシロフリン、パラヒドロキシアンフェタミン、ペモリン、ペンテトラゾール、フェンジメトラジン、フェンメトラジン、フェンプロメタミン、フェンテルミン、４−フェニルピラセタム（カルフェドン）、プロリンタン、プロピルヘキセドリン、セレギリン、シブトラミン、ストリキニーネ、および類似の化学構造または類似の生物学的効果を有するその他の物質。
【０１０３】
Ｈ．麻薬。下記のものを含むが、これらに限定されない：
ブプレノルフィン、デキストロモラミド、ジアモルヒネ（ヘロイン）、フェンタニル及び誘導体、ヒドロモルフォン、メサドン、モルヒネ、オキシコドン、オキシモルフォン、ペンタゾシン、ペチジン。
【０１０４】
Ｉ．カンナビノイド。下記のものを含むが、これらに限定されない：
ハシシュ、マリファナ。
【０１０５】
Ｊ．糖質コルチコイド
【０１０６】
Ｋ．アルコール（エタノール）
【０１０７】
Ｌ．ベータ遮断薬。下記のものを含むが、これらに限定されない：
アセブトロール、アルプレノロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、ブノロール、カルテオロール、カルベジロール、セリプロロール、エスモロール、ラベタロール、レボブノロール、メチプラノロール、メトプロロール、ナドロール、オクスプレノロール、ピンドロール、プロプラノロール、ソタロール、チモロール。
【０１０８】
Ｍ．アンフェタミン。下記のものを含むが、これらに限定されない：
メタンフェタミンおよびＭＤＭＡ（３、４−メチレンジオキシ−Ｎ−メチルアンフェタミン）；ＬＳＤ（リセルグ酸ジエチルアミド）；ＰＣＰ（フェンシクリジン）、ケタミンおよび誘導体。
【０１０９】
Ｎ．アルカロイドおよびその誘導体。下記のものを含むが、これらに限定されない：
ニコチン、コカイン、エフェドリン、メスカリン；モルヒネおよびコデインを含むアヘンアルカロイド（オピオイド類）、およびジアモルヒネ（ヘロイン）などの半合成オピオイド類；ジメチルトリプタミンおよびアルファ−メチルトリプタミンなどのトリプタミンアルカロイド。
【０１１０】
Ｏ．ベンゾジアゼピン。下記のものを含むが、これらに限定されない：
アルプラゾラム、ジアゼパム、ロラゼパム、クロナゼパム、テマゼパム、オキサゼパム、フルニトラゼパム、トリアゾラム、クロロジアゼポキシド、フルラゼパム、およびニトラゼパム、およびイミダゾピリジン、ピラゾロピリミジン、シクロピロロンを含む非ベンゾジアゼピン。
【０１１１】
Ｐ．ＧＨＢ（γ−ヒドロキシ酪酸）および誘導体。
【０１１２】
本発明の方法およびデバイスは、抗体が利用できる上記の薬物代謝産物を検出するために使用されてもよい。薬物またはその代謝産物などの特定の標的物質に対する抗体が市販されていない場合、当業者は、周知の技術を用いてこのような抗体を容易にもたらすことができる。
【０１１３】
好適には、検体は、モルヒネ、コカイン、大麻、ベンゾジアゼピン、アンフェタミン、メタドン、ブプレノルフィン、および／またはそれらの１つ以上の代謝産物である。より好適には、抗体は、１つ以上のモルヒネ、コカイン、およびそれらのうちの１つ以上のものの代謝産物のうちの１つ以上のものである。
【０１１４】
代わりに、好適には、検体は、モルヒネ、コカイン、大麻、ベンゾジアゼピン、アンフェタミン、メタドン、ブプレノルフィン、コデイン、ジヒドロコデイン、６−メチルアセチルモルヒネ（６−ＭＡＭ）、アルコールおよび／またはそれらのうちの１つ以上のものの代謝産物のうちの１つ以上のものであって、ベンゾイルエクゴニン、コカエチレン、エゴニンエチルエステル、エゴニンメチルエステル、およびノルコカインなどのコカインの代謝産物と、エチルグルクロニドなどのアルコール代謝産物とを含む。より好適には、検体は、モルヒネ、コカイン、コデイン、アルコール、およびそれらのうちの１つ以上のものの代謝産物のうちの１つ以上のものである。
【０１１５】
好適には、検体は、コカインである。代わりに、好適には、検体は、モルヒネである。代わりに、好適には、検体は、大麻である。代わりに、好適には、検体は、アンフェタミンである。代わりに、好適には、検体は、メタンフェタミンである。代わりに、好適には、検体は、ベンゾジアゼピンである。代わりに、好適には、検体は、メタドンである。
【０１１６】
代わりに、好適には、検体代謝産物は、ベンゾイルエクゴニン、コカエチレン、エゴニンエチルエステル、エゴニンメチルエステルおよびノルコカインのうちの１つ以上から選択されるコカイン代謝産物である。より好適には、検体は、ベンゾイルエクゴニンである。
【０１１７】
代わりに、好適には、検体代謝産物は、アルコール代謝産物である。より好適には、検体代謝産物は、エチルグルクロニドである。
【０１１８】
好適には、本方法は、
（ｆ）標識プローブおよび／または標識プローブ−検体複合体を、標識プローブおよび標識プローブ−検体複合体に結合することができる第２固定化捕捉試薬を含むコントロール部に通すステップと、
（ｇ）コントロール部中の標識プローブおよび／または標識プローブ−検体複合体の量を検出することまたは検出しないことによって、テストの結果が信頼できるものであるか否かを決定するステップと、
を更に含む。
【０１１９】
好適には、標識プローブは、４００ｎｍ〜１ｍｍの波長を有する放射線で検出可能であり、ステップ（ｅ）および／またはステップ（ｇ）は、テスト部および／または第１コントロール部を４００ｎｍ〜１ｍｍの波長を有する放射線で照射して、標識プローブおよび／または標識プローブ−検体複合体が存在する場合にそれを見せることによって実行される。
【０１２０】
好適には、本方法は、
（ｈ）４００ｎｍ〜１ｍｍの波長を有する放射線で標準化部位を照射し、標準化部位の信号強度を計測し、および前記信号強度を、テスト部およびまたはコントロール部における信号強度と比較するステップを更に含み、
標準化部位は、標識プローブに結合することができない固定化標識タンパク質と、検体と、標識プローブおよび検体を含む任意の標識プローブ−検体複合体とを含み、
固定化標識タンパク質および標識プローブは、同じ標識により標識されている。
【０１２１】
好適には、本方法は、サンプル受容部と離れているが、同じデバイス内に収容されている指紋パターン受容区域の指紋パターンを取得するステップを更に含む。好適には、本方法は、指紋パターンをスキャンおよび／または記録するステップを更に含む。
【０１２２】
本方法は、サンプルおよび試薬の量を減らし（すなわち、ナノリットル／マイクロリットル）、安価で使い捨ての材料を使用し、テストステップを最小限に抑えるため、迅速、正確、および安価である。流体フロー操作は、テストストリップを通る毛細管現象によって支配される。流体操作、分離および検出の機能は、本方法内に便利に統合されている。したがって、例えば高度な熟練、大がかりなトレーニング、および高価な設備が必要な液体クロマトグラフィ−タンデム型質量分析、ラジオ・イムノアッセイ、溶媒抽出およびＨＬＰＣなどの現在の時間がかかる技術と比較して、サンプルは、数分で迅速に処理され得る。したがって、自宅または診療所において、テストを実施してから数分以内に結果を取得することができるため、本デバイスおよび方法は、患者および医療システムなどの両方のコストを低減する。好適には、本方法は、１〜１０分で実行される。
【０１２３】
好適には、本発明は、本明細書に記載のラテラルフローデバイスを準備する方法であって、
透過膜に指紋パターン受容部を提供するステップと、
標識プローブを前記透過膜に加えてプローブ区域を作り出すステップと、
前記標識プローブに結合することができる第１捕捉試薬を前記透過膜に加えてその上に固定してテスト部を作り出すステップと、
を含む方法を提供する。
【０１２４】
ラテラルフローデバイスは、当業者に周知の技術を用いて製造されてもよい。標識プローブ区域は、分注または浸漬、続いて乾燥によって、標識プローブで前処理される。テスト部および制御部位における第１捕捉試薬および選択的に第２捕捉試薬は、例えば直接吸着および共有結合などの当業者に周知のいくつかの方法を用いて固定されることができる。非特異的結合のブロッキングは、ブロッキング緩衝液、例えばウシ血清アルブミンなどおよび／または洗剤によってデバイスの表面、例えば透過膜をコーティングし、続いて乾燥することによって達成されてもよい。サンプル受容部はまた、微粒子をろ過し、分析を妨害し得るサンプル成分を結合させ、またはサンプルを破壊して標的検体を放出するために前処理されてもよい。デバイスは、オプションとして、適切な接着剤を使用してバッキング層上に取り付けられたサンプル受容部分、標識プローブ区域、テスト部、および選択的にコントロール部および／または標準化部位および／またはシンクを有するカード上に組み立てられてもよい。次に、そのカードは、切り抜かれて独立のデバイスまたはストリップになってもよい。
【０１２５】
好適には、本方法は、透過膜に緩衝液受容部を、および選択的に基板に緩衝液の容器を提供するステップを更に含む。
【０１２６】
好適には、本方法は、標識プローブに結合することができる第２捕捉試薬を透過膜に加えてその上に固定してコントロール部を作り出すステップを更に含む。
【０１２７】
好適には、本方法は、前記標識プローブに結合することができる標識タンパク質を前記透過膜に加えてその上に固定して標準化部位を作り出すステップを更に含む。
【０１２８】
好適には、プローブ区域を作り出すために、１０ｐｇ〜１μｇの標識プローブが透過膜に加えられる。より好適には、プローブ区域を作り出すために、１０ｐｇ〜５００ｎｇ、または１０ｐｇ〜４００ｎｇ、または１０ｐｇ〜３００ｎｇ、または１０ｐｇ〜２５０ｎｇ、または１０ｐｇ〜２００ｎｇ、または１０ｐｇ〜１００ｎｇ、または１０ｐｇ〜１ｎｇ、または１０ｐｇ〜５００ｐｇ、または１０ｐｇ〜２００ｐｇの標識プローブが透過膜に加えられる。代わりに、好適には、プローブ区域を作り出すために、５０ｐｇ〜５００ｎｇ、または２００ｐｇ〜４００ｎｇ、または５００ｐｇ〜３００ｎｇ、または１ｎｇ〜２５０ｎｇ、または１０ｎｇ〜２００ｎｇ、または２０ｎｇ〜１５０ｎｇ、または３０ｎｇ〜１００ｎｇが透過膜に加えられる。
【０１２９】
好適には、本発明は、
本明細書に記載のデバイスと、
蛍光、紫外線、赤外線および／または遠赤外線検出器と、
を含むサンプルの分析のためのキットを提供する。
【０１３０】
好適には、本発明は、体液の少なくとも一部を溶解する方法であって、体液を緩衝液に接触させるステップを含み、緩衝液は、
水混和性有機溶媒と、
界面活性剤、好適には洗剤と、
緩衝剤と、を含む。
【０１３１】
緩衝液は、上記の３つの成分の全てを含む点で有利である。緩衝液は、体液の少なくとも一部を可溶化するのに有効であり、その結果、体液の一部を１つ以上の試薬または技術を用いて分析することができる。緩衝液の個々の成分およびその好適な量は、以下に更に詳細に記載される。
【０１３２】
水混和性溶媒は、当前記技術分野において公知である。好適には、水混和性有機溶媒は、エタノール、メタノール、およびテトラヒドロフランのうちの１つ以上を含む。好適には、緩衝液は、１０〜３０ｖ／ｖ％の水混和性有機溶媒を含む。より好適には、緩衝液は、１５〜２５ｖ／ｖ％、または１８〜２２ｖ／ｖ％の水混和性有機溶媒を含む。水混和性有機溶媒は、親水性および疎水性分子が水中に分配するのを助ける。
【０１３３】
界面活性剤は、当前記技術分野において公知であり、ミセルを形成するあらゆる分子、例えば両親媒性分子を含み得る。好適には、界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ−２０、Ｔｗｅｅｎ−８０、トリトンＸ−１００、臭化テトラオクチルアンモニウム、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびオクタン酸のうちの１つ以上を含む。代わりに、好適には、界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ−２０、Ｔｗｅｅｎ−８０、トリトンＸ−１００、トリトンＸ−１１４、臭化テトラオクチルアンモニウム、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびオクタン酸のうちの１つ以上を含む。より好適には、界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ−２０、Ｔｗｅｅｎ−８０、トリトンＸ−１００、および臭化テトラオクチルアンモニウムのうちの１つ以上を含む。代わりに、より好適には、界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ−２０、Ｔｗｅｅｎ−８０、トリトンＸ−１００、トリトンＸ−１１４、および臭化テトラオクチルアンモニウムのうちの１つ以上を含む。好適には、緩衝液は、０．１〜０．１５ｗ／ｖ％の界面活性剤を含む。より好適には、緩衝液は、０．１１〜０．１４ｗ／ｖ％、または０．１２〜０．１３ｗ／ｖ％の界面活性剤を含む。界面活性剤、好適には洗剤は、体液からの薬物および／または薬物代謝産物などの検体の放出を支援する。界面活性剤分子は、好適には臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を超える濃度で存在する。したがって、界面活性剤内に存在するミセルは、好適には、薬物および薬物代謝産物などの疎水性の検体のキャリアとして振る舞うことができ、および体液で行われる分析中にこの検体の提示を可能にする。
【０１３４】
適切な緩衝剤は、当前記技術分野において公知である。好適には、緩衝剤は、ＨＥＰＥＳ、トリス、ＴＲＩＺＭＡ、およびリン酸塩緩衝液を含む。好適には、緩衝液は、５〜１００ｍＭの緩衝剤を含む。より好適には、緩衝液は、５〜７５ｍＭ、または５〜５０ｍＭ、または５〜２５ｍＭ、または５〜１５ｍＭ、または５〜１０ｍＭ、または６〜９ｍＭ、または７〜８ｍＭの緩衝剤を含む。緩衝剤は、それらのｐＫａおよびＰＩ値に基づいて、薬物および／または薬物代謝産物などの体液中の検体の溶解度を高めるのを助けると考えられている。
【０１３５】
好適には、緩衝液は、１つ以上の酸化防止剤を更に含む。適切な酸化防止剤は、酢酸エチル、アントラニル酸メチル、２−ペンチルブチレート、およびエチルブチレートを含む。酸化防止剤は、検体またはその代謝産物および指紋脂質などのサンプル中の有機物質の酸化を防止するのに役立ち得る。これは、検体および／またはその代謝産物が酸化されると、その性質（例えば、その電荷）が変化し得るため、望ましい。物理的または化学的性質の変化は、検体または代謝産物の分析を妨害する可能性がある。
【０１３６】
好適には、緩衝液は、乳化剤を更に含む。好適には、乳化剤は、デオキシコレート、コレステロールおよびそれらの組み合わせから選択される。より好適には、乳化剤は、デオキシコレートである。理論により拘束されることを望まないが、デオキシコレートなどの乳化剤は、分析中の体液中にある任意の検体またはその代謝産物を渡すのに役立つものと考えられる。これは乳化剤がサンプル中の脂質構造を「開放」するのを助け、疎水性の検体または代謝産物が結合のために利用可能となることを促進することによって達成されると考えられる。
【０１３７】
ある具体例では、緩衝液は、塩を更に含む。好適には、塩は、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、またはそれらの混合物から選択される。
【０１３８】
好適には、体液は、手の指の汗を含む。
【０１３９】
好適には、本発明は、サンプル中の０．１ｐｇ〜１μグラムの検体を検出するためのラテラルフローデバイスを提供する。
【０１４０】
本開示またはその好適な具体例の要素を紹介する場合、冠詞「a」、「an」、「the」および「前記」は、１つ以上の要素が存在することを意味することを意図している。「含む（comprising）」、「含む（including）」、および「有する（having）」の用語は、包括的であり、列挙された要素以外の追加の要素が存在し得ることを意味する。
【０１４１】
前述の詳細な説明は、説明および例示のために提供されたものであり、添付の特許請求の範囲を限定するものではない。本明細書に例示された現在の好ましい具体例における多くの変形は、当業者には明らかであり、添付の特許請求の範囲およびそれらと同等のものの範囲内にとどまる。
【図面の簡単な説明】
【０１４２】
本発明のこれらのおよびその他の態様を、添付の図面を参照して説明する。
【０１４３】
【図１】本発明の一例に従ったラテラルフローデバイスの図である。
【図２】例１に記載のようにして得られたラテラルフローテストストリップの写真である。
【図３】例２に記載のようにして得られたラテラルフローテストストリップの画像である。
【図４】例２に記載のようにして得られたラテラルフローテストストリップの画像である。
【図５】例２に記載のようにして得られたラテラルフローテストストリップの画像である。
【図６】例２に記載のようにして得られたラテラルフローテストストリップの画像である。
【図７】例３に記載のようにして得られたラテラルフローテストストリップの画像である。
【図８】例３に記載のようにして得られたラテラルフローテストストリップの画像である。
【図９】例３に記載のようにして得られたラテラルフローテストストリップの画像である。
【図１０】例３に記載のようにして得られたラテラルフローテストストリップの画像である。
【図１１】ニトロセルロースラテラルフロー分析とプレート分析との比較結果を示すグラフである。
【図１２】本発明のデバイスを用いた１０分間の分析のステップを示す図である。
【図１３】口腔液分析によるモルヒネ陽性者から採取した指紋サンプルのラテラルフローテストの結果を示すグラフである。
【図１４】口腔液分析によるモルヒネ陰性者から採取した指紋サンプルのラテラルフローテストの結果を示すグラフである。
【図１５】口腔液分析によるＢＺＥ陽性者から採取した指紋サンプルのラテラルフローテストの結果を示すグラフである。
【図１６】口腔液分析によるＢＺＥ陰性者から採取した指紋サンプルのラテラルフローテストの結果を示すグラフである。
【実施例】
【０１４４】
以下の非限定的な例は、本発明を更に説明する。
【０１４５】
本発明は、ここでいくつかの例に関連して説明される。
【０１４６】
例１：サンプル受容部上に均一に分布した乾燥薬物は、溶媒が堆積サンプルの上流に加えられたときに溶媒先端で濃縮される。
【０１４７】
溶液セット１（セット１）：モルヒネは、１００μｌの溶媒に対して０〜９００ｐｇの割合で、メタノール中に溶解された。
【０１４８】
溶液セット２（セット２）：モルヒネは、１００μｌの溶媒に対して０〜９００ｐｇの割合で、指紋可溶化緩衝液中に溶解された。
【０１４９】
本発明の一連のラテラルフローストリップは、２つのテスト部を有し、コントロール部を有さないようにセットアップされた。サンプル受容部の容積は約１１０μｌである。
【０１５０】
各テストライン（各テスト部）は、０．２５μｌ／ｃｍで加えられたＢＳＡ−モルヒネ（４０μｇ／ｍｌ）接合である。
【０１５１】
標識プローブ区域には、５０ｎｇの標識抗体／区域がローディングバッファ中に提供される（１０ｍＭ  ＰＢ  ｐＨ７．４２、１％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ−８０中に１００ｍＭのスクロース）。
【０１５２】
セット１からの１００μｌの溶液は、一連のラテラルフローストリップのサンプル受容部に加えられ、その後乾燥された。
【０１５３】
セット２からの１００μｌの溶液は、第２の一連のラテラルフローストリップのサンプル受容部に加えられ、そしてまだ湿った、新鮮な指紋可溶化緩衝液が使用され、緩衝液をパッドの下端、すなわちサンプル受容部の上流に加えることによって、ラテラルフローストリップを通る液体を追跡した。乾燥したモルヒネを含むパッドに指紋可溶化緩衝液を同様に加えることが並行して行われた。
【０１５４】
セット２は、従来のテストストリップのサンプルパッド領域へのサンプルの塗布と同様に、溶媒が指紋に直接加えられた場合に起こることを表している。セット１は、緩衝液が指紋の上流に加えられた場合に起こることを示す。ここで、緩衝液は、指紋領域をゆっくりと濡らし、ラテラルフローストリップの下流に進むにつれて薬物／薬物代謝産物を可溶化し、緩衝液溶媒先端において薬物材料を徐々に濃縮する。
【０１５５】
分析結果は、図２に示されている。このデータは、セット１からの薄膜内の薬物が、セット２で見られるのと同様のレベルに関して濃縮されていることを明確に示している。
【０１５６】
セット２により使用された方法（典型的なラテラルフロー方法と同様の方法）は、十分に高精度ではなく、人が法的カットオフのすぐ上にいることを示すレベルである、指紋に見られる薬物の最低レベルを検出することができない。本発明は、１サンプルあたり１５０ｐｇの薬物／代謝産物を明確に検出する。
【０１５７】
セット２の形式を使用するテストは、前記カットオフよりはるかに高い７５０〜９００ｐｇの間の薬物／代謝産物の存在を検出するようにみえるだけであり、その値が高すぎるため、日常のテストの役に立たない。
【０１５８】
例２：
２つのテスト部を有し、コントロール部を有さない本発明のラテラルフローストリップ上の様々なサンプル受容部の材料上で、３人の患者から指紋を採取した。
【０１５９】
患者の唾液中のアヘンのレベルは、以下のようにＬＧＣによって確認された。
ドナー０４７４５００７：陰性
ドナー０４７４５００８：１７００ｎｇ／ｍｌのアヘン−非常に高レベル
ドナー０４７４５００９：１０ｎｇ／ｍｌの６−アセチルモルヒネ（アヘンヘロインマーカー）−２．５×カットオフ値のレベル
【０１６０】
ラテラルフロー分析は、例１の可溶化緩衝液を加えることによって実行された。結果のテストラインの画像は、サンプルをそれぞれ５秒間照射することによって捕捉された。
【０１６１】
結果は、図３〜６に示されている。
【０１６２】
テストした４つの基板のそれぞれについて、明白な阻害（アヘンの検出）がサンプル０４７４５００８に見られる。低レベルの代謝産物と一致するサンプル０４７４５００９について、部分的な阻害が観測される。較正曲線を使用することにより、この値の定量化が可能になる。
【０１６３】
この結果は、サンプル受容部が、調査されている検体に結合しない何らかの材料を含み得るものであり、緩衝液が、サンプル受容部を通ってゆっくりと移動して、代謝産物を溶媒先端に集めて濃縮させることを可能にすることを示している。
【０１６４】
例３：分析感度範囲を変化させることについての証拠
０ｐｇ〜１５０ｐｇ、３００ｐｇ〜４５０ｐｇのモルヒネを有するサンプルは、２つのテスト部を有し、コントロール部を有さない本発明のラテラルフローストリップのサンプル受容部上に提供された。
【０１６５】
テスト部における標識抗体の量および／または抗原の量を変化させて分析が行われた。
【０１６６】
図７〜１０は、得られた結果を示している。
【０１６７】
アヘンに対するカットオフ値は、１指紋あたり約９０ｐｇである。同様の研究がコカイン代謝産物ＢＺＥについて行われており、ＢＺＥに対するカットオフ値は、１指紋あたり約６８ｐｇである。
【０１６８】
この結果は、抗体の量が少ないほど、分析がより高精度であり、低レベルの薬物および／または薬物代謝産物を検出するのに有用であることを示している。また、テスト部における固定化抗原の量が少ないほど、分析は、より高精度である。
【０１６９】
例４：ニトロセルロースラテラルフロー分析とプレート分析の間の比較
プレートは、５０μｇ／ｍｌのＢＳＡ−ＭＯＲ（４．７ｍｇ／ｍｌ）で、４℃で、一晩コーティングされた：
５．３μｌストック＋４９５μｌ  １００ｍＭ重炭酸緩衝液  ｐＨ９．５（１０７７ＲＤから希釈された）
【０１７０】
インキュベートの後、コーティングされたウエルは、（１４０２ＲＤから、Ｈ２Ｏで１ｘに希釈された）ＰＢＳＴで３回洗浄された。
【０１７１】
ＭＯＲの一連の希釈がされた。
ストック溶液：１ｍｇ／ｍｌ
ストックは、１０μｇ／ｍｌに希釈された：１０μｌストック＋９９０μｌ  ＰＢＳＴ（１４０２ＲＤから、Ｈ２Ｏで１ｘに希釈された）。１０μｇ／ｍｌの溶液は、更に１００ｎｇ／ｍｌに希釈された。：１０μｌ  １０μｇ／ｍｌ＋９９０μｌ  ＰＢＳＴ（１４０２ＲＤから、Ｈ２Ｏで１ｘに希釈された）。    １００ｎｇ／ｍｌから開始する一連の４倍希釈がされた：
・２５ｎｇ／ｍｌ：５０μｌ  １００ｎｇ／ｍｌ＋１５０μｌ  ＰＢＳＴ（１４０２ＲＤから、Ｈ２Ｏで１ｘに希釈された）
・６．２５ｎｇ／ｍｌ：５０μｌ  １００ｎｇ／ｍｌ＋１５０μｌ  ＰＢＳＴ（１４０２ＲＤから、Ｈ２Ｏで１ｘに希釈された）
・１．５６ｎｇ／ｍｌ：５０μｌ  １００ｎｇ／ｍｌ＋１５０μｌ  ＰＢＳＴ（１４０２ＲＤから、Ｈ２Ｏで１ｘに希釈された）
・０．３９ｎｇ／ｍｌ：５０μｌ  １００ｎｇ／ｍｌ＋１５０μｌ  ＰＢＳＴ（１４０２ＲＤから、Ｈ２Ｏで１ｘに希釈された）
・０．０９ｎｇ／ｍｌ：５０μｌ  １００ｎｇ／ｍｌ＋１５０μｌ  ＰＢＳＴ（１４０２ＲＤから、Ｈ２Ｏで１ｘに希釈された）
・０．０２ｎｇ／ｍｌ：５０μｌ  １００ｎｇ／ｍｌ＋１５０μｌ  ＰＢＳＴ（１４０２ＲＤから、Ｈ２Ｏで１ｘに希釈された）
・０．００６ｎｇ／ｍｌ：５０μｌ  １００ｎｇ／ｍｌ＋１５０μｌ  ＰＢＳＴ（１４０２ＲＤから、Ｈ２Ｏで１ｘに希釈された）
・０．００１５ｎｇ／ｍｌ：５０μｌ  １００ｎｇ／ｍｌ＋１５０μｌ  ＰＢＳＴ（１４０２ＲＤから、Ｈ２Ｏで１ｘに希釈された）
・０．０００４ｎｇ／ｍｌ：５０μｌ  １００ｎｇ／ｍｌ＋１５０μｌ  ＰＢＳＴ（１４０２ＲＤから、Ｈ２Ｏで１ｘに希釈された）
・０．０００１ｎｇ／ｍｌ：５０μｌ  １００ｎｇ／ｍｌ＋１５０μｌ  ＰＢＳＴ（１４０２ＲＤから、Ｈ２Ｏで１ｘに希釈された）
・コントロール：ＰＢＳＴ（１４０２ＲＤから、Ｈ２Ｏで１ｘに希釈された）
【０１７２】
ウサギ抗ＭＯＲ−ＦＩＴＣ抗体の希釈がされた：
１μｌ  ストック（ｍＡｂＦ−ＭＯＲ−００４−００６；０．５ｍｇ／ｍｌ）＋９９μｌ  抽出緩衝液  １４２０ＲＤまたはＰＢＳＴ（１４０２ＲＤから、Ｈ２Ｏで１ｘに希釈された）
【０１７３】
１８μｌのＭＯＲの希釈液は、２μｌのウサギ抗ＭＯＲ−ＦＩＴＣで培養され、室温で４分間インキュベートされた。
【０１７４】
これらの反応物の１０μｌは、ＢＳＡ−ＭＯＲでコーティングされたウエルに移され、そして室温で４分間インキュベートされた。
【０１７５】
インキュベートの後、ウエルは、１００μｌのＰＢＳＴ（１４０２ＲＤから、Ｈ２Ｏで１ｘに希釈された）で３回洗浄された。
【０１７６】
空のウエルは、１０μｌのＰＢＳＴ（１４０２ＲＤ）で満たされ、蛍光は、４８５ｎｍ励起フィルタおよび５３５ｎｍ発光フィルターを備えたプレートリーダで、１秒間測定された。
【０１７７】
溶媒としてのＰＢＳＴを用いた実験：濃度依存阻害；感度：約０．１〜０．３９ｎｇ／ｍｌ
【０１７８】
結果は、図１１に示され、４ｐｇ〜２２５ｐｇの範囲におけるモルヒネの検出を示す用量反応曲線である。
【０１７９】
例５：
１８４人の患者から口腔液が採取され、その体液は、モルヒネおよび／またはその代謝産物の存否について分析された。陽性サンプルは、モルヒネおよび／またはその代謝産物を含むことが示された。陰性サンプルは、モルヒネおよび／またはその代謝産物を含まないことが示された。９２の陽性サンプルおよび９２の陰性サンプルがあった。
【０１８０】
指紋サンプルは、同じ人から採取され、本明細書に記載のラテラルフローデバイスが用いられて、モルヒネまたはその代謝物の存否のテストがされた。指紋中のモルヒネの存在を検出するためのカットオフ点は、１８０ｐｇであった。すなわち、１８０ｐｇ以上のモルヒネおよび／またはその代謝産物を含むことが示された指紋サンプルは、陽性であると判断され、他方、１８０ｐｇ未満のモルヒネおよび／またはその代謝産物を含むことが示されたサンプルは、陰性であると判断された。
【０１８１】
この結果は、口腔液分析によって得られた結果と比較された。モルヒネおよび／またはその代謝産物の存在を示すテストであって、口腔液分析と一致するものは、真の陽性（ＴＰ）と判断された。モルヒネおよび／またはその代謝産物の存在を示すテストであって、口腔液分析と一致しないものは、偽の陽性（ＦＰ）と判断された。モルヒネおよび／またはその代謝産物の存在を示さないテストであって、口腔液分析と一致するものは、真の陰性（ＴＮ）と判断された。モルヒネおよび／またはその代謝産物の存在を示さないテストであって、口腔液分析と一致しないものは、偽の陰性（ＦＮ）と判断された。
【０１８２】
口腔液分析によって陽性と判定された人々から採取された指紋サンプルについて行われたテストの結果は、図１３に示されている。水平カットオフ線の上部の結果は、偽の陰性である。水平カットオフ線の下部の結果は、真の陽性である。
【０１８３】
口腔液分析によって陰性と判定された人々から採取された指紋サンプルについて行われたテストの結果は、図１４に示されている。水平カットオフ線の上部の結果は、真の陰性である。水平カットオフ線の下部の結果は、偽の陽性である。
【０１８４】
したがって、モルヒネおよび／またはその代謝産物についてのラテラルフローテストの精度率、感度率および特異性率は、以下のように計算することができる：
精度＝（（ＴＰの総数＋ＴＮの総数）／サンプルの総数）×１００
感度＝（ＴＰの総数／（ＴＰの総数＋ＦＮの総数））×１００
特異性＝（ＴＮの総数／（ＴＮの総数＋ＦＰの総数））×１００
【０１８５】
結果は、サンプルが１８０ｐｇ以上のモルヒネを有するのか、または１８０ｐｇ未満のモルヒネを有するのかを検出することができるラテラルフローテストの精度が、９２．９％であることを示した。感度は、８５．９％であった。特異性は、１００％であった。
【０１８６】
例６：
例６は、テストされた薬物代謝産物がベンゾイルエクゴニン（ＢＺＥ）（コカインの主な代謝産物）であったことを除いては、例５と同一であり、１００人（陽性５０人、陰性５０人）のサンプルが採取された。そして、指紋サンプルのカットオフ点は、ＢＺＥ１５０ｐｇであった。すなわち、１５０ｐｇ以上のＢＺＥを含むことが示された指紋サンプルは、陽性であると判断され、他方、１５０ｐｇ未満のＢＺＥを含むことが示されたサンプルは、陰性であると判断された。
【０１８７】
口腔液分析によって陽性と判定された人々から採取された指紋サンプルについて行われたテストの結果は、図１５に示されている。水平カットオフ線の上部の結果は、偽の陰性である。水平カットオフ線の下部の結果は、真の陽性である。
【０１８８】
口腔液分析によって陰性と判定された人々から採取された指紋サンプルについて行われたテストの結果は、図１６に示されている。水平カットオフ線の上部の結果は、真の陰性である。水平カットオフ線の下部の結果は、偽の陽性である。
【０１８９】
結果は、サンプルが１５０ｐｇ以上のＢＺＥを有するのか、または１５０ｐｇ未満のＢＺＥを有するのかを検出することができるラテラルフローテストの精度が、９５％であることを示した。感度は、９０％であった。特異性は、１００％であった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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