(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物：
【化１】
0006588546.tif 000046
［式中、
Ｒ1は、Ｒ9によって置換されているか又は置換されていないＣ６〜Ｃ１０アリール；Ｒ9によって置換されているか又は置換されていないＯ、Ｎ及びＳから選択される１、２又は３個のヘテロ原子を含むヘテロアリール５〜８員環；Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１、２、３、４個のヘテロ原子を含む８〜１３個の原子を含み、かつ、Ｒ9で置換されているか又は置換されていない少なくとも２個の炭素原子を含むものと定義される縮合ヘテロアリール、から選択され、
Ｌは、任意に置換された（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル；Ｒ4で置換された直鎖又は分枝鎖（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル；任意に置換された（Ｃ５〜Ｃ１０）シクロアルケニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）アルケニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）アルキニル；Ｃ＝Ｏ；ＳＯ；ＳＯ2；（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ8；（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ；（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル；ＳＯ2−ＮＲ8；ＮＲ8から選択されるものであって、ここでＲ4は、Ｈ；任意に置換された（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）アルケニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）アルキニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル；任意に置換された（Ｃ５〜Ｃ１０）シクロアルケニル；任意に置換された（Ｃ８〜Ｃ１０）シクロアルキニル；任意に置換された（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール；ＯとＮとＳから選択される１、２、３、４個のヘテロ原子を含む８〜１３個の原子を含み、かつ、水素、ハロゲン原子、１以上のハロゲン原子（単数又は複数）で置換された（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、カルボキシ、ＮＲ8Ｒ8’、ＯとＮとＳから独立して選択される１、２若しくは３個までのヘテロ原子を含む飽和又は不飽和４〜９員環、から独立に選択される１以上の置換基で置換されている又は置換されていない少なくとも２個の炭素原子を含むものと定義されるヘテロアリール５〜８員環あるいは縮合ヘテロアリール、から選択され、
Ｒ2は、ＮＲ5Ｒ6から選択され；
Ｒ3は、水素原子；ハロゲン原子；１以上のハロゲン原子（単数又は複数）、ヒドロキシル、アルコキシ、−ＮＲ5Ｒ6で置換されているか若しくは置換されていない直鎖又は分枝鎖（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル；（Ｃ２〜Ｃ１０）アルケニル；（Ｃ２〜Ｃ１０）アルキニル；（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル；（Ｃ５〜Ｃ１０）シクロアルケニル；（Ｃ８〜Ｃ１０）シクロアルキニル；（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ；ヒドロキシル；ニトロ；シアノ；ＮＲ5Ｒ6；Ｏ−（Ｒ7）；（ＣＯ）−Ｒ7；（ＣＯ）−Ｏ−Ｒ7；（ＣＯ）−ＮＲ5Ｒ6；Ｏ−（ＣＯ）−Ｒ7；Ｏ−（ＣＯ）−ＮＲ5Ｒ6；ＮＲ5−（ＣＯ）−Ｒ7；ＮＲ5−（ＣＯ）−ＯＲ7；ＮＲ5−（ＣＯ）−ＮＲ5Ｒ6；−（Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2−）m−ＯＲ11；−（Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2−）m−ＮＲ11Ｒ11’；ＳＯ2−Ｒ7；ＮＲ5−ＳＯ2−Ｒ7；ＳＯ2−ＮＲ5Ｒ6；ＮＲ5−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキル−ＮＲ5Ｒ6；任意に置換されたアリール；任意に置換されたベンジル；Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１、２又は３個のヘテロ原子を含む５〜８員環の任意に置換されたヘテロアリール；Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１、２、３、４個のヘテロ原子を８〜１３個の原子を含み、かつ、少なくとも２個の炭素原子を含むものとして定義される任意に置換された縮合ヘテロアリール；Ｏ、Ｎ及びＳから独立して選択される１、２又は３個までのヘテロ原子を含む、飽和又は不飽和４〜９員環の任意に置換されたヘテロシクリル、から選択され；
Ｒ5及びＲ6は、水素；任意に置換された（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）アルケニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）アルキニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル；任意に置換された（Ｃ５〜Ｃ１０）シクロアルケニル；任意に置換された（Ｃ８〜Ｃ１０）シクロアルキニル；（ＣＯ）−Ｒ7；（ＣＯ）−Ｏ−Ｒ7；（ＣＯ）−ＮＲ8Ｒ8’；ＳＯ2−Ｒ7；ＳＯ2−ＮＲ8Ｒ8’；ＮＲ8Ｒ8’で置換された（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル；ＮＲ8Ｒ8’で置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル；任意に置換されたアリール；任意に置換されたベンジル；Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１個、２個又は３個のヘテロ原子を含む任意に置換されたヘテロアリール５〜８員環；Ｏ、Ｎ及びＳから独立して選択される１、２又は３個までのヘテロ原子を含む、飽和又は不飽和の４〜９員環の任意に置換されたヘテロシクリル；から独立して選択される、又は、Ｒ5及びＲ6は、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される追加の１、２又は３個のヘテロ原子を含み得る４〜９員環を形成するヘテロシクリル基を形成するために共有結合されている窒素原子と共に連結される；
Ｒ7は、水素；任意に置換された（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）アルケニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）アルキニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル；任意に置換された（Ｃ５〜Ｃ１０）シクロアルケニル；任意に置換された（Ｃ８〜Ｃ１０）シクロアルキニル；ＮＲ8Ｒ8’で置換されたＣ１〜Ｃ１０の直鎖又は分枝鎖アルキル；任意に置換された（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール；任意に置換されたベンジル；Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１、２又は３個のヘテロ原子を含む任意に置換されたヘテロ芳香族５〜８員環；から選択される；
Ｒ8及びＲ8’は、水素；任意に置換された（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）アルケニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）アルキニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル；任意に置換された（Ｃ５〜Ｃ１０）シクロアルケニル；任意に置換された（Ｃ８〜Ｃ１０）シクロアルキニル；から独立して選択される、又は、Ｒ8及びＲ8’は、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される追加の１、２又は３個のヘテロ原子を含み得る４〜９員環を形成するヘテロシクリル基を形成するために共有結合される窒素原子と共に連結される；
Ｒ9は、水素；ハロゲン原子；任意に置換された（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル；１つ以上のハロゲン原子（単数又は複数）、ヒドロキシル、アルコキシで置換された直鎖又は分枝鎖（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル；任意に置換された（Ｃ２〜Ｃ１０）アルケニル；任意に置換された（Ｃ２〜Ｃ１０）アルキニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル；任意に置換された（Ｃ５〜Ｃ１０）シクロアルケニル；任意に置換された（Ｃ８〜Ｃ１０）シクロアルキニル；任意に置換された（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ；ヒドロキシル；ニトロ；シアノ；ＮＲ5Ｒ6；（ＣＯ）−Ｒ7；（ＣＯ）−Ｏ−Ｒ7；（ＣＯ）−ＮＲ5Ｒ6；Ｏ−（ＣＯ）−Ｒ7；Ｏ−（ＣＯ）−ＮＲ5Ｒ6；ＮＲ5−（ＣＯ）−Ｒ7；ＮＲ5−（ＣＯ）−ＯＲ7；ＮＲ5−（ＣＯ）−ＮＲ5Ｒ6；ＳＯ2−Ｒ7；ＮＲ5−ＳＯ2−Ｒ7；ＳＯ2−ＮＲ5Ｒ6；ＮＲ5Ｒ6で置換された（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル；ＮＲ5−（Ｃ２〜Ｃ１０）−アルキル−ＮＲ5Ｒ6；−（Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2−）m−ＯＲ11；−（Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2−）m−ＮＲ11Ｒ11’；任意に置換された（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール；任意に置換されたベンジル；Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１個、２個又は３個のヘテロ原子を含む任意に置換されたヘテロアリール５〜８員環；Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１、２又は３個のヘテロ原子を含み得る４〜９員環を形成する任意に置換されたヘテロシクリル基；−ＮＲ5Ｒ10；−Ｏ−Ｒ10；から独立して選択され；
Ｒ10は、水素；Ｒ12で置換された又は置換されていない（Ｃ６〜Ｃ１２）−アリール；Ｒ12で置換された又は置換されていないベンジル；Ｒ12で置換された又は置換されていないＯ、Ｎ及びＳから選択される１、２又は３個のヘテロ原子を含む５〜８員環のヘテロアリール；Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１、２、３、４個のヘテロ原子を含む８〜１３個の原子を含み、かつ、Ｒ12によって置換された又は置換されていない少なくとも２個の炭素原子を含むものと定義される縮合ヘテロアリール；Ｒ12で置換された又は置換されていないＯ、Ｎ及びＳから選択される０、１、２又は３個のヘテロ原子を含有し得る４〜９員環を形成するヘテロシクリル；から独立して選択され、
Ｒ11及びＲ11’は、水素原子；任意に置換された（Ｃ２〜Ｃ１０）アルキル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）アルケニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）アルキニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル；任意に置換された（Ｃ５〜Ｃ１０）シクロアルケニル；任意に置換された（Ｃ８〜Ｃ１０）シクロアルキニル；１つ以上のハロゲン原子（単数又は複数）で置換されているか、又は置換されていない（Ｃ２〜Ｃ１０）直鎖又は分枝鎖アルキル；から独立して選択される、又は、Ｒ11及びＲ11’は、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される追加の１、２又は３個のヘテロ原子を含み得る飽和又は不飽和４〜９員環を形成するヘテロシクリル基を形成するために共有結合されている窒素原子と共に連結される；
Ｒ12は、水素原子；ハロゲン原子；１つ以上のハロゲン原子、ヒドロキシル、アルコキシ、ＮＲ11Ｒ11’で置換されているか又は置換されていない直鎖又は分枝鎖（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル；（Ｃ２〜Ｃ１０）アルケニル；（Ｃ２〜Ｃ１０）アルキニル；（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル；（Ｃ５〜Ｃ１０）シクロアルケニル；（Ｃ８〜Ｃ１０）シクロアルキニル；（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ；ヒドロキシル；ニトロ；シアノ；ＮＲ11Ｒ11’；Ｏ−（Ｒ7）；（ＣＯ）−Ｒ7；（ＣＯ）−Ｏ−Ｒ7；（ＣＯ）−ＮＲ11Ｒ11’；Ｏ−（ＣＯ）−Ｒ7；Ｏ−（ＣＯ）−ＮＲ11Ｒ11’；ＮＲ11−（ＣＯ）−Ｒ7；ＮＲ11−（ＣＯ）−ＯＲ11’；ＮＲ11−（ＣＯ）−ＮＲ11Ｒ11’；−（Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2−）m−ＯＲ11；−（Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2−）m−ＮＲ11Ｒ11’；ＳＯ2−Ｒ7；ＮＲ5−ＳＯ2−Ｒ7；ＳＯ2−ＮＲ11Ｒ11’；ＮＲ11−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキル−ＮＲ11Ｒ11’；任意に置換されたアリール；任意に置換されたベンジル；Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１、２又は３個のヘテロ原子を含む５〜８員環の任意に置換されたヘテロアリール；Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１、２、３、４個のヘテロ原子を含む８〜１３個の原子を含み、かつ、少なくとも２個の炭素原子を含むものと定義される任意に置換された縮合ヘテロアリール；Ｏ、Ｎ及びＳから独立して選択される１、２又は３個までのヘテロ原子を含む、飽和又は不飽和の４〜９員環の任意に置換されたヘテロシクリル；から選択され、
ｎは、値０、１、２、３又は４のいずれか１つを有し得る等しい整数を表すことができ；
ｍは、値１、２又は３のいずれか１つを有し得る等しい整数を表すことができ；
ｗは、値０又は１のいずれか１つを有し得る等しい整数を表すことができるものであって、ここで、
「任意に置換された」という用語は、ハロゲン原子、１つ以上のハロゲン原子（単数又は複数）で置換されているか又は置換されていない直鎖又は分枝鎖（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル、１つ以上のハロゲン原子（単数又は複数）で置換されているか又は置換されていない直鎖又は分枝鎖（Ｃ２〜Ｃ１０）アルケニル、１つ以上のハロゲン原子（単数又は複数）で置換されているか又は置換されていない直鎖又は分枝鎖（Ｃ２〜Ｃ１０）アルキニル、１つ以上のハロゲン原子（単数又は複数）で置換されているか又は置換されていない（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル、１つ以上のハロゲン原子（単数又は複数）で置換されているか又は置換されていない（Ｃ５〜Ｃ１０）シクロアルケニル、１つ以上のハロゲン原子（単数又は複数）で置換されているか又は置換されていない（Ｃ８〜Ｃ１０）シクロアルキニル、（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、ＮＲ8Ｒ8’（上記のＲ8及びＲ8’を有する）、から独立して選択される１以上の置換基で任意に置換されていることを意味する］
及び、医薬的に許容されるその塩、溶媒和物、立体異性体若しくは立体異性体の混合物、又は溶媒和物。
【請求項２】
２−（４−クロロフェニルアミノ）−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン（１−５）；２−（４−クロロベンジルアミノ）−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン（２−２）；２−［３−メチル−４−（ピリミジン−２−イルアミノ）フェニルアミノ］−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン（３−４）；２−｛４−［４−（ピリジン−３−イル）−２−ピリミジンアミノ］−３−メチル−フェニルアミノ｝−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン（４−２）；２−（４−クロロフェニルアミノ）−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン塩酸塩（１−６）；２−（４−クロロベンジルアミノ）−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン塩酸塩（２−３）；２−［３−メチル−４−（ピリミジン−２−イルアミノ）フェニルアミノ］−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン塩酸塩（３−５）；２−｛４−［４−（ピリジン−３−イル）−２−ピリミジンアミノ］−３−メチル−フェニルアミノ｝−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン塩酸塩（４−３）、から選択される請求項１に記載の化合物、又は医薬的に許容されるその塩、又は溶媒和物。
【請求項３】
治療有効量の請求項１〜２のいずれか１項に記載の化合物、医薬的に許容されるその塩、又は溶媒和物、及び医薬的に許容されるアジュバント、希釈剤又は担体を含む、医薬組成物。
【請求項４】
さらに１種以上の抗悪性腫瘍剤を組み合わせて含む、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
治療有効量の請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物が、ナノ粒子中に製剤化又は共製剤化されている、請求項３及び４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記ナノ粒子が、ポリマー生分解性組成物を含む、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記ポリマーが、７〜２４０ｋＤａの分子量を有するポリ（ＤＬ−乳酸−ｃｏ−グリコール酸）をベースにしているものである；又は、分子比が９５：５〜５０：５０であるポリ乳酸（ＰＬＡ）とポリグリコール酸（ＰＧＡ）とのコポリマーである、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記ナノ粒子が、リソソーム生分解性組成物を含む、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記ナノ粒子が、生体適合性ポリマー又はコポリマーを含む、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記ナノ粒子が、リポソーム製剤を含む、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記ナノ粒子が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と共有結合又は非共有結合している、請求項５〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記ナノ粒子が、８０〜６００ｎｍの平均サイズを有する、請求項５〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
請求項１又は２に記載の化合物が、少なくとも１つの治療的に活性を有する抗癌剤と結合された、請求項５〜１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
経口、非経口、眼球、経皮、経鼻投与又は吸入に適している、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記ナノ粒子が、ＰＬＧＡナノ粒子、ＰＬＧＡ−ＰＥＧナノ粒子（ブロック型ＡＢ、ＢＡ、ＡＢＡ又はＢＡＢであって、ここで、Ａ＝ＰＬＧＡ及びＢ＝ＰＥＧである）及び標的化ナノ粒子から選択されるアイテムを含む、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記ナノ粒子が、シグナル伝達モチーフを含む標的化ナノ粒子である、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
治療有効量の請求項１又は２に記載の化合物と、治療有効量の１種以上の抗悪性腫瘍剤との組み合わせを含む医薬組成物であって、前記組み合わせを構成する成分が、癌治療において、同時、分離又は逐次使用するためのものである、医薬組成物。
【請求項１８】
前記抗悪性腫瘍剤が、エベロリムス、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、トラベクテジン、アブラキサン、ＴＬＫ２８６、ＡＶ−２９９、ＤＮ−１０１、パゾパニブ、ＧＳＫ６９０６９３、ＲＴＡ  ７４４、ＯＮ  ０９１０．Ｎａ、ＡＺＤ  ６２４４（ＡＲＲＹ−１４２８８６）、ＡＭＮ−１０７、ＴＫＩ−２５８、ＧＳＫ４６１３６４、ＡＺＤ  １１５２、エンザスタウリン、バンデタニブ、ＡＲＱ−１９７、ＭＫ−０４５７、ＭＬＮ８０５４、ＰＨＡ−７３９３５８、Ｒ−７６３、ＡＴ−９２６３、ペメトレキセド、エルロチニブ、ダサタニブ（ｄａｓａｔａｎｉｂ）、ニロチニブ、デカタニブ（ｄｅｃａｔａｎｉｂ）、パニツムマブ、アムルビシン、オレゴボマブ、Ｌｅｐ−ｅｔｕ、ノラトレキセド、ａｚｄ２１７１、バタブリン（ｂａｔａｂｕｌｉｎ）、オファツムマブ、ザノリムマブ、エドテカリン、テトランドリン（ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ）、ルビテカン、テスミリフェン（ｔｅｓｍｉｌｉｆｅｎｅ）、オブリメルセン、チシリムマブ、イピリムマブ、ゴシポール、Ｂｉｏ  １１１、１３１−Ｉ−ＴＭ−６０１、ＡＬＴ−１１０、ＢＩＯ  １４０、ＣＣ  ８４９０、シレンジタイド、ジャイマテカン．ＩＬ１３−ＰＥ３８ＱＱＲ、ＴＮＯ  １００１、ＩＰｄＲ１  ＫＲＸ−０４０２、ルカントン、ＬＹ  ３１７６１５、ニューラジアブ（ｎｅｕｒａｄｉａｂ）、ビテスパン（ｖｉｔｅｓｐａｎ）、Ｓｄｘ  １０２、タランパネル、アトラセンタン、Ｘｒ３１１、ロミデプシン、ＡＤＳ−１００３８０、スニチニブ、５−フルオロウラシル、ボリノスタット、エトポシド、ゲムシタビン、ドキソルビシン、イリノテカン、リポソーマルドキソルビシン、５’−デオキシ−５−フルオロウリジン、ビンクリスチン、テモゾロミド、ＺＫ−３０４７０９、セリシクリブ、ＰＤ０３２５９０１、ＡＺＤ−６２４４、カペシタビン、Ｌ−グルタミン酸、Ｎ−［４−［２−（２−アミノ−４，７−ジヒドロ−４−オキソ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）エチル］ベンゾイル］−ジナトリウム塩７水和物、カンプトテシン、ＰＥＧ標識イリノテカン、タモキシフェン、クエン酸トレミフェン、アナストラゾール、エキセメスタン、レトロゾール、ＤＥＳ（ジエチルスチルベストロール）、エストラジオール、エストロゲン、結合型エストロゲン、ベバシズマブ、ＩＭＣ−１Ｃ１１、ＣＨＩＲ−２５８、３−［５−（メチルスルホニルピペラジンメチル）−インドリル］−キノロン、バタラニブ、ＡＧ−０１３７３６、ＡＶＥ−０００５、Ｄ−Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）6，Ａｚｇｌｙ10］（ピロ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｚｇｌｙ−ＮＨ2アセテートの酢酸塩、ゴセレリン（ｇｏｓｅｒｅｌｉｎ）アセテート、ロイプロリドアセテート、トリプトレリンパモエート、メドロキシプロゲステロンアセテート、ヒドロキシプロゲステロンカプロン酸エステル、メゲストロール酢酸エステル、ラロキシフェン、ビカルタミド、フルタミド、ニルタミド、ＣＰ−７２４７１４；ＴＡＫ−１６５、ＨＫＩ−２７２、ラパタニブ（ｌａｐａｔａｎｉｂ）、カネルチニブ、ＡＢＸ−ＥＧＦ抗体、アービタックス、ＥＫＢ−５６９、ＰＫＩ−１６６、ＧＷ−５７２０１６、ロ���ファミブ、ＢＭＳ−２１４６６２、チピファルニブ；アミフォスチン、ＮＶＰ−ＬＡＱ８２４、スベロイルアナリドヒドロキサム酸（ｓｕｂｅｒｏｙｌ  ａｎａｌｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ  ａｃｉｄ）、バルプロ酸、トリコスタチンＡ、ＦＫ−２２８、ＳＵ１１２４８、ソラフェニブ、ＫＲＮ９５１、アミノグルテチミド、アルンセクリン、アナグレリド、Ｌ−アスパラギナーゼ、カルメット−ゲラン桿菌（ＢＣＧ）ワクチン、ブレオマイシン、ブセレリン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロドロネート、シプロテロン、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ジエチルスチルベストロール、エピルビシン、フルダラビン、フルドロコルチゾン、フルオキシメステロン、グリベック、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、ロイプロリド、レバミゾール、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、６−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、オクトレオチド、オキサリプラチン、パミドロネート、ペントスタチン、プリカマイシン、ポルフィマー、プロカルバジン、ラルチトレキセド、リツキシマブ、ストレプトゾシン、テニポシド、テストステロン、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、トレチノイン、ビンデシン、１３−シス−レチノイン酸、フェニルアラニンマスタード、ウラシルマスタード、エストラムスチン、アルトレタミン、フロクスウリジン、５−デオキシウリジン、シトシンアラビノシド、デオキシコホルマイシン、カルシトリオール、バルルビシン、ミスラマイシン、ビンブラスチン、ビノレルビン、トポテカン、ラゾキシン、マリマスタット、ＣＯＬ−３、ネオバスタット、ＢＭＳ−２７５２９１、スクアラミン、エンドスタチン、ＳＵ５４１６、ＳＵ６６６８、ＥＭＤ１２１９７４、インターロイキン−１２、１Ｍ８６２、アンジオスタチン、ビタキシン（ｖｉｔａｘｉｎ）、スピロノラクトン、フィナステリド、シミチジン（ｃｉｍｉｔｉｄｉｎｅ）、トラスツズマブ、デニロイキンジフチトクス、ゲフィチニブ、ボルテジミブ、パクリタキセル、イリノテカン、ドセタキセル、ベバシズマブ（モノクローナル抗体）及びエルビタックス（ｅｒｂｉｔｕｘ）、クレモホルフリーパクリタキセル（ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ−ｆｒｅｅ  ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、エピチロンＢ（ｅｐｉｔｈｉｌｏｎｅ  Ｂ）、ＢＭＳ−２４７５５０、ＢＭＳ−３１０７０５、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、ピペンドキシフェン（ｐｉｐｅｎｄｏｘｉｆｅｎｅ）、ＥＲＡ−９２３、アルゾキシフェン、フルベストラント、アコルビフェン（ａｃｏｌｂｉｆｅｎｅ）、ラソフォキシフェン、イドキシフェン、ＴＳＥ−４２４、ＨＭＲ−３３３９、ＺＫ１８６６１９、ＰＴＫ７８７／ＺＫ  ２２２５８４、ＶＸ−７４５、ＰＤ  １８４３５２、ラパマイシン、４０−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）−ラパマイシン、テムシロリムス、ＡＰ−２３５７３、ＲＡＤ００１、ＡＢＴ−５７８、ＢＣ−２１０、ＬＹ２９４００２、ＬＹ２９２２２３、ＬＹ２９２６９６、ＬＹ２９３６８４、ＬＹ２９３６４６、ワートマニン、ＺＭ３��６３７２、Ｌ−７７９，４５０、ＰＥＧ−フィルグラスチム、ダルベポエチン、エリトロポエチン、顆粒球コロニー刺激因子、ゾレンドロネート（ｚｏｌｅｎｄｒｏｎａｔｅ）、プレドニゾン、セツキシマブ、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ヒストレリン、ＰＥＧ化ＩＦＮ−α−２ａ、ＩＦＮ−α−２ａ、ＰＥＧ化ＩＦＮ−α−２ｂ、ＩＦＮ−α−２ｂ、アザシチジン、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、レナリドマイド、ゲムツズマブ、ヒドロコルチゾン、インターロイキン−１１、デクスラゾキサン、アレムツズマブ、全トランス型レチノイン酸、ケトコナゾール、インターロイキン−２、メゲストロール、ナイトロジェンマスタード、メチルプレドニゾロン、イブリツモマブチウキセタン（ｉｂｒｉｔｇｕｍｏｍａｂ  ｔｉｕｘｅｔａｎ）、アンドロゲン、デシタビン、ヘキサメチルメラミン、ベキサロテン、トシツモマブ、亜ヒ酸、コルチゾン、エディトロネート（ｅｄｉｔｒｏｎａｔｅ）、シクロスポリン、リポソーマルダウノルビシン、エドウィーナ−アスパラギナーゼ（Ｅｄｗｉｎａ−ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ）、ストロンチウム８９、カソピタント、ネツピタント（ｎｅｔｕｐｉｔａｎｔ）、ＮＫ−１レセプターアンタゴニスト、パロノセトロン、アプレピタント、ジフェンヒドラミン、ヒドロキシジン、メトクロプラミド、ロラゼパム、アルプラゾラム、ハロペリドール、ドロペリドール、ドロナビノール、デキサメタゾン、プロクロルペラジン、グラニセトロン、オンダンセトロン、ドラセトロン、トロピセトロン、ペグフィルグラスチム、エポエチンα及びダルベポエチンα、イピリムマブ（ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）、ベムラフェニブ、ＦＬＴ−３阻害剤、ＶＥＧＦＲ阻害剤、オーロラキナーゼ阻害剤、ＰＩＫ−１モジュレーター、Ｂｃｌ−２阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、ｃ−ＭＥＴ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、Ｃｄｋ阻害剤、ＥＧＦＲ  ＴＫ阻害剤、ＩＧＦＲ−ＴＫ阻害剤、抗−ＨＧＦ抗体、ＰＩ３キナーゼ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤、チェックポイント−１又は２阻害剤、焦点接着キナーゼ阻害剤（ｆｏｃａｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）、Ｍａｐキナーゼキナーゼ（ＭＥＫ）阻害剤、ＶＥＧＦトラップ抗体、及びそれらの混合物、からなる群から選択される、請求項４又は１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
徐放又は持続放出に適している、請求項３〜１８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
治療に使用するための、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項２１】
増殖性及び／又は腫瘍性疾患の治療及び／又は予防のための治療上有効物質としての使用のための、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項２２】
前記増殖性及び／又は腫瘍性疾患が：癌腫；頭部、腎臓、肝臓、肺、鼻咽頭、頚部、卵巣、乳房、子宮頸部、膵臓、前立腺又は胃；白血病（例えば、急性骨髄性白血病、急性リンパ球性白血病、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、急性Ｔ細胞リンパ芽球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、好塩基球性白血病、好酸球性白血病、顆粒球性白血病、毛様細胞白血病、白血球減少性白血病、リンパ性白血病、リンパ芽球性白血病、リンパ球性白血病、巨核球性白血病、小骨髄芽球性白血病、単球性白血病、好中球性白血病及び幹細胞白血病）；悪性リンパ腫、悪性黒色腫；骨髄増殖性疾患；肉腫；中枢神経系の腫瘍；生殖系腫瘍（ｇｅｒｍ−ｌｉｎｅ  ｔｕｍｏｒ）；精巣癌；甲状腺癌；星状細胞腫；食道癌；結腸癌、及び腫瘍（ｎｅｏｐｌａｓｉａ）の混合型、からなる群から選択される、請求項２１に記載の使用のための化合物。
【請求項２３】
増殖性及び／又は腫瘍性疾患の治療及び／又は予防のための、請求項１又は２に記載の化合物、又は請求項３〜１９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
癌幹細胞（ＣＳＣ）、腫瘍開始細胞、癌関連間葉様細胞、間葉系癌細胞又は間葉系細胞の増殖又は分化を阻害するための、請求項１又は２に記載の化合物、又は請求項３〜１９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明分野
本発明は、新規な２−第一級アミノ−４−第二級アミノ−キノリン誘導体、それらの製造、それらを含む医薬組成物及び医薬としてのそれらの使用に関する。本発明の活性化合物は、増殖性の腫瘍性及び非腫瘍性疾患の治療及び予防に有用である。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
新しい抗がん剤の創薬は、近年、細胞ベースのアッセイから、よく特徴づけされ、単離され、トランスフェクションによって発現された、新薬開発につながる標的タンパク質のより焦点を絞ったインビトロアプローチへと移行した。このタンパク質（群）を標的とした薬物発見のパラダイムは、ヒトカイノームを探索することを可能にするヒトキナーゼ阻害剤の合理的設計の創薬分野において多大なる努力を払い、当該分野において十分に記載されている。事実、ヒトキナーゼは突然変異し、キナーゼの脱調節が、通常、悪性形質転換し、成長し、そしてヒト癌の最終的な転移進化を起こす。白血病、リンパ腫、非小細胞肺癌、メラノーマ、結腸癌、乳癌、腎臓癌、肝細胞癌．．．において、癌の発生及び増殖におけるこのキナーゼの関与は十分に確立されている。現在、いくつかの癌においてヒトキナーゼ機能不全を標的とするこの多大なる努力が払われているにもかかわらず、抗癌治療におけるキナーゼ阻害剤の使用の臨床的ブレークスルーは、治療又は寛解には明らかに関連しておらず、いくつかの癌は、キナーゼ阻害剤の臨床的使用に対して自然に耐性を維持しているようである（例えば、肝細胞癌）。さらに、キナーゼ阻害剤はインビボでいくつかの突然変異及び耐性株を選択することができ、又は形質転換細胞は等しく補償経路を見出すことができる。この文脈において、発明者らは、偏りのない表現型細胞スクリーニングアッセイの開発により、細胞コンパートメント全体及び細胞培養環境を考慮に入れることに決めた。さらに、細胞形質転換、癌の成長及び転移進化の分子的理解及び分子的記述は、例えば癌幹細胞（ＣＳＣ）の概念又は腫瘍開始細胞（ＴＩＣ）の最近の記述と共に、依然として絶えず発展している。細胞スクリーニングにおける予期しない効果は、新たな薬剤開発につながる標的の発見のための他の標的又は特異的相互作用を示唆し得る。従って、新しい抗がん剤の開発は、予測不可能な成果をもたらす独特の挑戦であり、新規で革新的な化合物の発見のための場のままである。
【０００３】
本発明者らは、新規抗癌剤の発見するためのヒト癌細胞株（ＭＯＬＭ１４、ＫＧ−１、ＭＶ４−１１、Ａ３７５、ＨＣＴ１１６、ＨｅｐＧ２、ｈｕｈ−７、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＣＡＬＩ−１、７８６−Ｏ)及び患者由来癌初代細胞のパネルに対してスクリーニングされた２−第一級アミノ−２−第二アミノ−アリールキノリン化合物ライブラリーの多様性指向の新規シリーズを調製した。さらに、このクラスの化合物は、抗癌治療後の癌の再発（ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）及び再燃（ｒｅｌａｐｓｅ）において広く原因とみなされているヒト癌幹細胞（ＣＳＣ）に対し、付加的活性を同等に示す。当技術分野で十分に記載されている、ＡＬＤＨアッセイは、ＣＳＣに対する活性を記載するための癌幹細胞機能マーカーとして用いられた（Ｇｒｅｖｅ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ａ  ２０１２（８１）２８４−２９３、Ｌｉｕ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ２０１３（２５）ｅ８１０５０、Ｒａｎ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２００９（３７）１４２３−１４３４、Ｃｈｅｕｎｇ，Ａ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２００７（２１）１４２３−１４３０、Ｐｅａｒｃｅ，Ｄ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  ２００５（２３）７５２−７６０）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
従って、本発明の目的は、種々の生物における細胞増殖を予防又は阻害するための活性剤を提供すること、及びその合成方法を提供することである。
【０００５】
本発明の別の目的は、治療有効量の本発明の活性剤を単独で又は他の活性剤との併用、及び医薬的に許容されるアジュバント、希釈剤又は担体を含む、医薬組成物を提供することである。
【０００６】
本発明の別の目的は、治療に使用するための活性剤を提供することである。
【０００７】
本発明の別の目的は、増殖性疾患及び／又は腫瘍性疾患の治療及び／又は予防のための方法を提供することである。
【０００８】
本発明の別の目的は、癌幹細胞（ＣＳＣ）、腫瘍開始細胞、癌に関連する間葉様細胞、間葉系癌細胞、又は間葉細胞の増殖又は分化を阻害する方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
発明の概要
本発明は、式（Ｉ）の化合物、
【化１】
0006588546.tif 000002
[式中、
Ｒ1は、Ｒ9によって置換されているか又は置換されていないＣ６〜Ｃ１０アリール；Ｒ9によって置換されているか又は置換されていないＯ、Ｎ及びＳから選択される１、２又は３個のヘテロ原子を含むヘテロアリール５〜８員環；Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１、２、３、４個のヘテロ原子を含む８〜１３個の原子を含み、かつ、Ｒ9で置換されているか又は置換されていない少なくとも２個の炭素原子を含むものと定義される縮合ヘテロアリール、から選択され得、
ＬWは、任意に置換された（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル；Ｒ4で置換された直鎖又は分枝鎖（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル；任意に置換された（Ｃ５〜Ｃ１０）シクロアルケニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）アルケニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）アルキニル；Ｃ＝Ｏ；ＳＯ；ＳＯ2；（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ8；（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ；（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル；ＳＯ2−ＮＲ8；ＮＲ8から選択され得るものであって、ここでＲ4は、Ｈ；任意に置換された（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）アルケニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）アルキニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル；任意に置換された（Ｃ５〜Ｃ１０）シクロアルケニル；任意に置換された（Ｃ８〜Ｃ１０）シクロアルキニル；任意に置換された（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール；ＯとＮとＳから選択される１、２、３、４個のヘテロ原子を含む８〜１３個の原子を含み、かつ、水素、ハロゲン原子、１以上のハロゲン原子（単数又は複数）で置換された（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、カルボキシ、ＮＲ8Ｒ8’、ＯとＮとＳから独立して選択される１、２若しくは３個までのヘテロ原子を含む飽和又は不飽和４〜９員環、から独立に選択される１以上の置換基で置換されている又は置換されていない少なくとも２個の炭素原子を含むものと定義されるヘテロアリール５〜８員環あるいは縮合ヘテロアリール、から選択され得、
Ｒ2は、ＮＲ5Ｒ6から選択され；
Ｒ3は、水素原子；ハロゲン原子；１以上のハロゲン原子（単数又は複数）、ヒドロキシル、アルコキシ、−ＮＲ5Ｒ6で置換されているか若しくは置換されていない直鎖又は分枝鎖（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル；（Ｃ２〜Ｃ１０）アルケニル；（Ｃ２〜Ｃ１０）アルキニル；（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル；（Ｃ５〜Ｃ１０）シクロアルケニル；（Ｃ８〜Ｃ１０）シクロアルキニル；（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ；ヒドロキシル；ニトロ；シアノ；ＮＲ5Ｒ6；Ｏ−（Ｒ7）；（ＣＯ）−Ｒ7；（ＣＯ）−Ｏ−Ｒ7；（ＣＯ）−ＮＲ5Ｒ6；Ｏ−（ＣＯ）−Ｒ7；Ｏ−（ＣＯ）−ＮＲ5Ｒ6；ＮＲ5−（ＣＯ）−Ｒ7；ＮＲ5−（ＣＯ）−ＯＲ7；ＮＲ5−（ＣＯ）−ＮＲ5Ｒ6；−（Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2−）m−ＯＲ11；−（Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2−）m−ＮＲ11Ｒ11’；ＳＯ2−Ｒ7；ＮＲ5−ＳＯ2−Ｒ7；ＳＯ2−ＮＲ5Ｒ6；ＮＲ5−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキル−ＮＲ5Ｒ6；任意に置換されたアリール；任意に置換されたベンジル；Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１、２又は３個のヘテロ原子を含む５〜８員環の任意に置換されたヘテロアリール；Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１、２、３、４個のヘテロ原子を８〜１３個の原子を含み、かつ、少なくとも２個の炭素原子を含むものとして定義される任意に置換された縮合ヘテロアリール；Ｏ、Ｎ及びＳから独立して選択される１、２又は３個までのヘテロ原子を含む、飽和又は不飽和４〜９員環の任意に置換されたヘテロシクリル、から選択され得；
Ｒ5及びＲ6は、水素；任意に置換された（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）アルケニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）アルキニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル；任意に置換された（Ｃ５〜Ｃ１０）シクロアルケニル；任意に置換された（Ｃ８〜Ｃ１０）シクロアルキニル；（ＣＯ）−Ｒ7；（ＣＯ）−Ｏ−Ｒ7；（ＣＯ）−ＮＲ8Ｒ8’；ＳＯ2−Ｒ7；ＳＯ2−ＮＲ8Ｒ8’；ＮＲ8Ｒ8’で置換された（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル；ＮＲ8Ｒ8’で置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル；任意に置換されたアリール；任意に置換されたベンジル；Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１個、２個又は３個のヘテロ原子を含む任意に置換されたヘテロアリール５〜８員環；Ｏ、Ｎ及びＳから独立して選択される１、２又は３個までのヘテロ原子を含む、飽和又は不飽和の４〜９員環の任意に置換されたヘテロシクリル；から独立して選択され得る、又は、Ｒ5及びＲ6は、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される追加の１、２又は３個のヘテロ原子を含み得る４〜９員環を形成するヘテロシクリル基を形成するために共有結合される窒素原子と共に連結され得る；
Ｒ7及びＲ7’は、水素；任意に置換された（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）アルケニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）アルキニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル；任意に置換された（Ｃ５〜Ｃ１０）シクロアルケニル；任意に置換された（Ｃ８〜Ｃ１０）シクロアルキニル；ＮＲ8Ｒ8’で置換されたＣ１〜Ｃ１０の直鎖又は分枝鎖アルキル；任意に置換された（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール；任意に置換されたベンジル；Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１、２又は３個のヘテロ原子を含む任意に置換されたヘテロ芳香族５〜８員環；から独立して選択され得る；
Ｒ8及びＲ8’は、水素；任意に置換された（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）アルケニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）アルキニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル；任意に置換された（Ｃ５〜Ｃ１０）シクロアルケニル；任意に置換された（Ｃ８〜Ｃ１０）シクロアルキニル；から独立して選択され得る、又は、Ｒ8及びＲ8’は、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される追加の１、２又は３個のヘテロ原子を含み得る４〜９員環を形成するヘテロシクリル基を形成するために共有結合される窒素原子と共に連結され得る；
Ｒ9は、水素；ハロゲン原子；任意に置換された（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル；１つ以上のハロゲン原子（単数又は複数）、ヒドロキシル、アルコキシで置換された直鎖又は分枝鎖（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル；任意に置換された（Ｃ２〜Ｃ１０）アルケニル；任意に置換された（Ｃ２〜Ｃ１０）アルキニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル；任意に置換された（Ｃ５〜Ｃ１０）シクロアルケニル；任意に置換された（Ｃ８〜Ｃ１０）シクロアルキニル；任意に置換された（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ；ヒドロキシル；ニトロ；シアノ；ＮＲ5Ｒ6；（ＣＯ）−Ｒ7；（ＣＯ）−Ｏ−Ｒ7；（ＣＯ）−ＮＲ5Ｒ6；Ｏ−（ＣＯ）−Ｒ7；Ｏ−（ＣＯ）−ＮＲ5Ｒ6；ＮＲ5−（ＣＯ）−Ｒ7；ＮＲ5−（ＣＯ）−ＯＲ7；ＮＲ5−（ＣＯ）−ＮＲ5Ｒ6；ＳＯ2−Ｒ7；ＮＲ5−ＳＯ2−Ｒ7；ＳＯ2−ＮＲ5Ｒ6；ＮＲ5Ｒ6で置換された（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル；ＮＲ5−（Ｃ２〜Ｃ１０）−アルキル−ＮＲ5Ｒ6；−（Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2−）m−ＯＲ11；−（Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2−）m−ＮＲ11Ｒ11’；任意に置換された（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール；任意に置換されたベンジル；Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１個、２個又は３個のヘテロ原子を含む任意に置換されたヘテロアリール５〜８員環；Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１、２又は３個のヘテロ原子を含み得る４〜９員環を形成する任意に置換されたヘテロシクリル基；−ＮＲ5Ｒ10；−Ｏ−Ｒ10；から独立して選択され得る；
Ｒ10は、水素；Ｒ12で置換されているか、又は置換されていない（Ｃ６〜Ｃ１２）−アリール；Ｒ12で置換されているか、又は置換されていないベンジル；Ｒ12で置換された又は置換されていないＯ、Ｎ及びＳから選択される１、２又は３個のヘテロ原子を含む５〜８員環のヘテロアリール；Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１、２、３、４個のヘテロ原子を含む８〜１３個の原子を含み、かつ、Ｒ12によって置換された又は置換されていない少なくとも２個の炭素原子を含むものと定義される縮合ヘテロアリール；Ｒ12で置換された又は置換されていないＯ、Ｎ及びＳから選択される０、１、２又は３個のヘテロ原子を含有し得る４〜９員環を形成するヘテロシクリル；から独立して選択され得る、
Ｒ11及びＲ11’は、水素原子；任意に置換された（Ｃ２〜Ｃ１０）アルキル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）アルケニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）アルキニル；任意に置換された（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル；任意に置換された（Ｃ５〜Ｃ１０）シクロアルケニル；任意に置換された（Ｃ８〜Ｃ１０）シクロアルキニル；１つ以上のハロゲン原子（単数又は複数）で置換されているか、又は置換されていない（Ｃ２〜Ｃ１０）直鎖又は分枝鎖アルキル；から独立して選択され得る、又は、Ｒ11及びＲ11’は、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される追加の１、２又は３個のヘテロ原子を含み得る飽和又は不飽和４〜９員環を形成するヘテロシクリル基を形成するために共有結合されている窒素原子と共に連結され得る；
Ｒ12は、水素原子；ハロゲン原子；１つ以上のハロゲン原子、ヒドロキシル、アルコキシ、ＮＲ11Ｒ11’で置換されているか、又は置換されていない直鎖又は分枝鎖（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル；（Ｃ２〜Ｃ１０）アルケニル；（Ｃ２〜Ｃ１０）アルキニル；（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル；（Ｃ５〜Ｃ１０）シクロアルケニル；（Ｃ８〜Ｃ１０）シクロアルキニル；（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ；ヒドロキシル；ニトロ；シアノ；ＮＲ11Ｒ11’；Ｏ−（Ｒ7）；（ＣＯ）−Ｒ7；（ＣＯ）−Ｏ−Ｒ7；（ＣＯ）−ＮＲ11Ｒ11’；Ｏ−（ＣＯ）−Ｒ7；Ｏ−（ＣＯ）−ＮＲ11Ｒ11’；ＮＲ11−（ＣＯ）−Ｒ7；ＮＲ11−（ＣＯ）−ＯＲ11’；ＮＲ11−（ＣＯ）−ＮＲ11Ｒ11’；−（Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2−）m−ＯＲ11；−（Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2−）m−ＮＲ11Ｒ11’；ＳＯ2−Ｒ7；ＮＲ5−ＳＯ2−Ｒ7；ＳＯ2−ＮＲ11Ｒ11’；ＮＲ11−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキル−ＮＲ11Ｒ11’；任意に置換されたアリール；任意に置換されたベンジル；Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１、２又は３個のヘテロ原子を含む５〜８員環の任意に置換されたヘテロアリール；Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１、２、３、４個のヘテロ原子を含む８〜１３個の原子を含み、かつ、少なくとも２個の炭素原子を含むものと定義される任意に置換された縮合ヘテロアリール；Ｏ、Ｎ及びＳから独立して選択される１、２又は３個までのヘテロ原子を含む、飽和又は不飽和の４〜９員環の任意に置換されたヘテロシクリル；から選択され得、
ｎは、値０、１、２、３又は４のいずれか１つを有し得る等しい整数を表すことができ；
ｍは、値１、２又は３のいずれか１つを有し得る等しい整数を表すことができ；
ｗは、値０又は１のいずれか１つを有し得る等しい整数を表すことができるものであって、ここで、
「任意に置換された」という用語は、ハロゲン原子、１つ以上のハロゲン原子（単数又は複数）で置換されているか又は置換されていない直鎖又は分枝鎖（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル、１つ以上のハロゲン原子（単数又は複数）で置換されているか又は置換されていない直鎖又は分枝鎖（Ｃ２〜Ｃ１０）アルケニル、１つ以上のハロゲン原子（単数又は複数）で置換されているか又は置換されていない直鎖又は分枝鎖（Ｃ２〜Ｃ１０）アルキニル、１つ以上のハロゲン原子（単数又は複数）で置換されているか又は置換されていない（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル、１つ以上のハロゲン原子（単数又は複数）で置換されているか又は置換されていない（Ｃ５〜Ｃ１０）シクロアルケニル、１つ以上のハロゲン原子（単数又は複数）で置換されているか又は置換されていない（Ｃ８〜Ｃ１０）シクロアルキニル、（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、ＮＲ8Ｒ8’（上記のＲ8及びＲ8’を有する）、から独立して選択される１以上の置換基で任意に置換されていることを意味する］
及び、医薬的に許容されるその塩、溶媒和物、異性体、立体異性体若しくは立体異性体の混合物、溶媒和物又はプロドラッグ、を提供する。
【００１０】
いくつかの特定の実施形態では、本発明は：
式（Ｉａ）の２−（４−クロロフェニルアミノ）−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン  （１−５）
【化２】
0006588546.tif 000003
【００１１】
式（Ｉｂ）の２−（４−クロロベンジルアミノ）−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン  （２−２）
【化３】
0006588546.tif 000004
【００１２】
式（Ｉｃ）の２−［３−メチル−４−（ピリミジン−２−イルアミノ）フェニルアミノ］−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン  （３−４）
【化４】
0006588546.tif 000005
【００１３】
式（Ｉｄ）の２−｛４−［４−（ピリジン−３−イル）−２−ピリミジンアミノ］−３−メチル−フェニルアミノ｝−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン  （４−２）
【化５】
0006588546.tif 000006
から選択される化合物又はその医薬的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグを提供する。
【００１４】
いくつかの他の特定の実施形態において、本発明は、２−（４−クロロフェニルアミノ）−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン塩酸塩（１−６）、２−（４−クロロベンジルアミノ）−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン塩酸塩（２−３）、２−［３−メチル−４−（ピリミジン−２−イルアミノ）フェニルアミノ］−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン塩酸塩（３−５）、２−｛４−［４−（ピリジン−３−イル）−２−ピリミジンアミノ］−３−メチル−フェニルアミノ｝−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン塩酸塩（４−３）から選択される化合物を提供する。
【００１５】
別の態様では、本発明は、治療有効量の上記化合物、又はその医薬的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ、及び医薬的に許容されるアジュバント、希釈剤又は担体を含み得る医薬組成物を提供する。
【００１６】
いくつかの特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、１つ以上の抗悪性腫瘍剤をさらに含み得る。
【００１７】
いくつかの特定の実施形態では、上記の医薬組成物は、ナノ粒子中に製剤化又は共製剤化され得る、治療上有効量の本発明の化合物を含み得る。
【００１８】
本発明の医薬組成物のいくつかの特定の実施形態では、ナノ粒子は、リソソーム生分解性組成物を含み得る。
【００１９】
本発明の医薬組成物のいくつかの特定の実施形態において、ナノ粒子は生体適合性ポリマー又はコポリマーを含み得る。
【００２０】
本発明の医薬組成物のいくつかの特定の実施形態では、ナノ粒子は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と共有結合又は非共有結合され得る。
【００２１】
本発明の医薬組成物のいくつかの特定の実施形態において、ナノ粒子は、約８０〜約６００ｎｍの平均サイズを有し得る。
【００２２】
本発明の医薬組成物のいくつかの特定の実施形態では、ナノ粒子は、シグナル伝達モチーフを含む標的化ナノ粒子であり得る。
【００２３】
いくつかの特定の実施形態では、ナノ粒子は高分子生分解性組成物を含み得る。
【００２４】
いくつかのとりわけ特定の実施形態では、ポリマーは、７〜２４０ｋＤａの分子量を有し得るポリ（ＤＬ−乳酸−グリコール酸）に基づくものであり得る、又はポリ乳酸（ＰＬＡ）とポリグリコール酸（ＰＧＡ）との共重合体であり、分子比は９５：５〜５０：５０であり得る。
【００２５】
本発明の医薬組成物のいくつかの特定の実施形態では、ナノ粒子は、ＰＬＧＡナノ粒子、ＰＬＧＡ−ＰＥＧナノ粒子（ブロックタイプＡＢ、ＢＡ、ＡＢＡ又はＢＡＢであって、ここで、Ａ＝ＰＬＧＡ及びＢ＝ＰＥＧである）及び標的化ナノ粒子から選択されるアイテム（ｉｔｅｍ）を含み得る。
【００２６】
本発明の医薬組成物のいくつかの特定の実施形態において、ナノ粒子は、リポソームから選択されるアイテムを含み得る。
【００２７】
いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、徐放又は持続放出に適し得る。
【００２８】
いくつかの特定の実施形態において、本発明の医薬組成物は、経口、非経口、眼球、経皮、経鼻投与、又は吸入に適し得る。
【００２９】
本発明の医薬組成物のいくつかの特定の実施形態において、本発明の活性化合物は、少なくとも１つの治療的に活性を有する抗癌剤と結合され得る。
【００３０】
いくつかの特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、治療有効量の本発明の化合物と、治療有効量の１種以上の抗悪性腫瘍剤との組み合わせを含み得、前記組み合わせを構成する成分が、癌治療において、同時、分離又は逐次使用するためのものであり得る。
【００３１】
本発明の医薬組成物の特定の実施形態において、抗悪性腫瘍剤は、エベロリムス、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、トラベクテジン、アブラキサン、ＴＬＫ２８６、ＡＶ−２９９、ＤＮ−１０１、パゾパニブ、ＧＳＫ６９０６９３、ＲＴＡ  ７４４、ＯＮ  ０９１０．Ｎａ、ＡＺＤ  ６２４４（ＡＲＲＹ−１４２８８６）、ＡＭＮ−１０７、ＴＫＩ−２５８、ＧＳＫ４６１３６４、ＡＺＤ  １１５２、エンザスタウリン、バンデタニブ、ＡＲＱ−１９７、ＭＫ−０４５７、ＭＬＮ８０５４、ＰＨＡ−７３９３５８、Ｒ−７６３、ＡＴ−９２６３、ペメトレキセド、エルロチニブ、ダサタニブ（ｄａｓａｔａｎｉｂ）、ニロチニブ、デカタニブ（ｄｅｃａｔａｎｉｂ）、パニツムマブ、アムルビシン、オレゴボマブ、Ｌｅｐ−ｅｔｕ、ノラトレキセド、ａｚｄ２１７１、バタブリン（ｂａｔａｂｕｌｉｎ）、オファツムマブ、ザノリムマブ、エドテカリン、テトランドルメ（ｔｅｔｒａｎｄｒｍｅ）、ルビテカン、テスミリフェン（ｔｅｓｍｉｌｉｆｅｎｅ）、オブリメルセン、チシリムマブ、イピリムマブ、ゴシポール、Ｂｉｏ  １１１、１３１−Ｉ−ＴＭ−６０１、ＡＬＴ−１１０、ＢＩＯ  １４０、ＣＣ  ８４９０、シレンジタイド、ジャイマテカン．ＩＬ１３−ＰＥ３８ＱＱＲ、ＴＮＯ  １００１、ＩＰｄＲ１  ＫＲＸ−０４０２、ルカントン、ＬＹ  ３１７６１５、ニューラジアブ（ｎｅｕｒａｄｉａｂ）、ビテスパン（ｖｉｔｅｓｐａｎ）、Ｒｔａ  ７４４、Ｓｄｘ  １０２、タランパネル、アトラセンタン、Ｘｒ３１１、ロミデプシン、ＡＤＳ−１００３８０、スニチニブ、５−フルオロウラシル、ボリノスタット、エトポシド、ゲムシタビン、ドキソルビシン、イリノテカン、リポソーマルドキソルビシン、５’−デオキシ−５−フルオロウリジン、ビンクリスチン、テモゾロミド、ＺＫ−３０４７０９、セリシクリブ、ＰＤ０３２５９０１、ＡＺＤ−６２４４、カペシタビン、Ｌ−グルタミン酸、Ｎ−［４−［２−（２−アミノ−４，７−ジヒドロ−４−オキソ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）エチル］ベンゾイル］−ジナトリウム塩７水和物、カンプトテシン、ＰＥＧ標識イリノテカン、タモキシフェン、クエン酸トレミフェン、アナストラゾール、エキセメスタン、レトロゾール、ＤＥＳ（ジエチルスチルベストロール）、エストラジオール、エストロゲン、結合型エストロゲン、ベバシズマブ、ＩＭＣ−１Ｃ１１、ＣＨＩＲ−２５８、３−［５−（メチルスルホニルピペラジンメチル）−インドリル］−キノロン、バタラニブ、ＡＧ−０１３７３６、ＡＶＥ−０００５、Ｄ−Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）6，Ａｚｇｌｙ10］（ピロ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｚｇｌｙ−ＮＨ2アセテートの酢酸塩、ゴセレリン（ｇｏｓｅｒｅｌｉｎ）アセテート、ロイプロリドアセテート、トリプトレリンパモエート、メドロキシプロゲステロンアセテート、ヒドロキシプロゲステロンカプロン酸エステル、メゲストロール酢酸エステル、ラロキシフェン、ビカルタミド、フルタミド、ニルタミド、メゲストロール酢酸エステル、ＣＰ−７２４７１４；ＴＡＫ−１６５、ＨＫＩ−２７２、エルロチニブ、ラパタニブ（ｌａｐａｔａｎｉｂ）、カネルチ��ブ、ＡＢＸ−ＥＧＦ抗体、アービタックス、ＥＫＢ−５６９、ＰＫＩ−１６６、ＧＷ−５７２０１６、ロナファミブ、ＢＭＳ−２１４６６２、チピファルニブ；アミフォスチン、ＮＶＰ−ＬＡＱ８２４、スベロイルアナリドヒドロキサム酸（ｓｕｂｅｒｏｙｌ  ａｎａｌｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ  ａｃｉｄ）、バルプロ酸、トリコスタチンＡ、ＦＫ−２２８、ＳＵ１１２４８、ソラフェニブ、ＫＲＮ９５１、アミノグルテチミド、アルンセクリン、アナグレリド、Ｌ−アスパラギナーゼ、カルメット−ゲラン桿菌（ＢＣＧ）ワクチン、ブレオマイシン、ブセレリン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロドロネート、シプロテロン、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ジエチルスチルベストロール、エピルビシン、フルダラビン、フルドロコルチゾン、フルオキシメステロン、フルタミド、ゲムシタビン、グリベック、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、ロイプロリド、レバミゾール、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、６−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、ニルタミド、オクトレオチド、オキサリプラチン、パミドロネート、ペントスタチン、プリカマイシン、ポルフィマー、プロカルバジン、ラルチトレキセド、リツキシマブ、ストレプトゾシン、テニポシド、テストステロン、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、トレチノイン、ビンデシン、１３−シス−レチノイン酸、フェニルアラニンマスタード、ウラシルマスタード、エストラムスチン、アルトレタミン、フロクスウリジン、５−デオキシウリジン、シトシンアラビノシド、６−メルカプトプリン（６−ｍｅｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ）、デオキシコホルマイシン、カルシトリオール、バルルビシン、ミスラマイシン、ビンブラスチン、ビノレルビン、トポテカン、ラゾキシン、マリマスタット、ＣＯＬ−３、ネオバスタット、ＢＭＳ−２７５２９１、スクアラミン、エンドスタチン、ＳＵ５４１６、ＳＵ６６６８、ＥＭＤ１２１９７４、インターロイキン−１２、１Ｍ８６２、アンジオスタチン、ビタキシン（ｖｉｔａｘｉｎ）、ドロロキシフェン、イドキシフェン（ｉｄｏｘｙｆｅｎｅ）、スピロノラクトン、フィナステリド、シミチジン（ｃｉｍｉｔｉｄｉｎｅ）、トラスツズマブ、デニロイキンジフチトクス、ゲフィチニブ、ボルテジミブ、パクリタキセル、イリノテカン、トポテカン、ドキソルビシン、ドセタキセル、ビノレルビン、ベバシズマブ（モノクローナル抗体）及びエルビタックス（ｅｒｂｉｔｕｘ）、クレモホルフリーパクリタキセル（ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ−ｆｒｅｅ  ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、エピチロンＢ（ｅｐｉｔｈｉｌｏｎｅ  Ｂ）、ＢＭＳ−２４７５５０、ＢＭＳ−３１０７０５、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、ピペンドキシフェン（ｐｉｐｅｎｄｏｘｉｆｅｎｅ）、ＥＲＡ−９２３、アルゾキシフェン、フルベストラント、アコルビフェン（ａｃｏｌｂｉｆｅｎｅ）、ラソフォキシフェン、イドキシフェン、ＴＳＥ−４２４、ＨＭＲ−３３３９、ＺＫ１８６６１９、ＰＴＫ７８７／ＺＫ  ２２２５８４��ＶＸ−７４５、ＰＤ  １８４３５２、ラパマイシン、４０−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）−ラパマイシン、テムシロリムス、ＡＰ−２３５７３、ＲＡＤ００１、ＡＢＴ−５７８、ＢＣ−２１０、ＬＹ２９４００２、ＬＹ２９２２２３、ＬＹ２９２６９６、ＬＹ２９３６８４、ＬＹ２９３６４６、ワートマニン、ＺＭ３３６３７２、Ｌ−７７９，４５０、ＰＥＧ−フィルグラスチム、ダルベポエチン、エリトロポエチン、顆粒球コロニー刺激因子、ゾレンドロネート（ｚｏｌｅｎｄｒｏｎａｔｅ）、プレドニゾン、セツキシマブ、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ヒストレリン、ＰＥＧ化ＩＦＮ−α−２ａ、ＩＦＮ−α−２ａ、ＰＥＧ化ＩＦＮ−α−２ｂ、ＩＦＮ−α−２ｂ、アザシチジン、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、レナリドマイド、ゲムツズマブ、ヒドロコルチゾン、インターロイキン−１１、デクスラゾキサン、アレムツズマブ、全トランス型レチノイン酸、ケトコナゾール、インターロイキン−２、メゲストロール、ナイトロジェンマスタード、メチルプレドニゾロン、イブリツモマブチウキセタン（ｉｂｒｉｔｇｕｍｏｍａｂ  ｔｉｕｘｅｔａｎ）、アンドロゲン、デシタビン、ヘキサメチルメラミン、ベキサロテン、トシツモマブ、亜ヒ酸、コルチゾン、エディトロネート（ｅｄｉｔｒｏｎａｔｅ）、ミトタン、シクロスポリン、リポソーマルダウノルビシン、エドウィーナ−アスパラギナーゼ（Ｅｄｗｉｎａ−ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ）、ストロンチウム８９、カソピタント、ネツピタント（ｎｅｔｕｐｉｔａｎｔ）、ＮＫ−１レセプターアンタゴニスト、パロノセトロン、アプレピタント、ジフェンヒドラミン、ヒドロキシジン、メトクロプラミド、ロラゼパム、アルプラゾラム、ハロペリドール、ドロペリドール、ドロナビノール、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プロクロルペラジン、グラニセトロン、オンダンセトロン、ドラセトロン、トロピセトロン、ペグフィルグラスチム、エポエチンα及びダルベポエチンα、イピルムマブ（ｉｐｉｌｕｍｕｍａｂ）、ベムラフェニブ、ＦＬＴ−３阻害剤、ＶＥＧＦＲ阻害剤、ＥＧＦＲ  ＴＫ阻害剤、オーロラキナーゼ阻害剤、ＰＩＫ−１モジュレーター、Ｂｃｌ−２阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、ｃ−ＭＥＴ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、Ｃｄｋ阻害剤、ＥＧＦＲ  ＴＫ阻害剤、ＩＧＦＲ−ＴＫ阻害剤、抗−ＨＧＦ抗体、ＰＩ３キナーゼ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤、チェックポイント−１又は２阻害剤、焦点接着キナーゼ阻害剤（ｆｏｃａｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）、Ｍａｐキナーゼキナーゼ（ＭＥＫ）阻害剤、ＶＥＧＦトラップ抗体、及びそれらの混合物、からなる群から選択され得る。
【００３２】
別の態様では、本発明は、増殖性及び／又は腫瘍性疾患の治療及び／又は予防のための方法であって、治療有効量の本発明の化合物、又はそれを含む医薬組成物を、それを必要とするヒト又は動物に投与する工程を含み得る、方法を提供する。
【００３３】
別の態様では、本発明は、癌幹細胞（ＣＳＣ）、腫瘍開始細胞、癌関連間葉様細胞、間葉系癌細胞、又は間葉系細胞の増殖又は分化を阻害する方法であって、治療有効量の本発明の化合物、又はそれを含む医薬組成物を、それを必要とするヒト又は動物に投与する工程を含み得る、方法を提供する。
【００３４】
別の態様では、本発明は、増殖性及び／又は腫瘍性疾患の治療及び／又は予防のための化合物を提供する。
【００３５】
別の態様では、本発明は、癌幹細胞（ＣＳＣ）、腫瘍開始細胞、癌関連間葉様細胞、間葉系癌細胞又は間葉細胞の増殖又は分化を阻害するための化合物を提供する。
【００３６】
図面の簡単な説明
本発明の上記及びその他の特徴及び利点は、以下の実施例を通して、及び添付の図面を参照してより容易に明らかになるであり、
ここで、
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】図１は、化合物２−３（Ａｌｄｅｆｌｕｏｒ（商標）アッセイ）で処理した場合のＣＲＣ患者由来細胞（ＣＰＰ１９、ＣＰＰ３０及びＣＰＰ４５）におけるＡＬＤＨ＋集団細胞の減少を示し；
【図２】図２は、肝転移性結腸直腸癌（ＣＲＣ）患者由来細胞の腫瘍スフェア（ｔｕｍｏｒｏｓｐｈｅｒｅ）形成の、化合物２−３による阻害を示し；
【図３】図３は、ＤＭＳＯ−ｄ6中の化合物１−６の1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示し；
【図４】図４は、ＤＭＳＯ−ｄ6中の化合物２−３の1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示し；
【図５】図５は、ＤＭＳＯ−ｄ6中の化合物３−５の1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示し；
【図６】図６は、ＤＭＳＯ−ｄ6中の化合物４−３の1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
詳細な説明
本明細書において、「アルキル」という用語は、単独で又は他の基と組み合わせて、１〜２０個の炭素原子、好ましくは１〜１６個の炭素原子、より好ましくは１〜１０個の炭素原子の分枝鎖又は直鎖の１価飽和脂肪族炭化水素基ラジカルを言う。用語「低級アルキル」は、単独で又は組み合わせて、１〜６個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖のアルキル基（「Ｃ1〜Ｃ6−アルキル」）、好ましくは１〜５個を有する直鎖又は分岐鎖アルキル基（「Ｃ1〜Ｃ5−アルキル」）、特に好ましくは１〜３個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖アルキル基（「Ｃ1〜Ｃ3−アルキル」）示す。直鎖及び分枝鎖低級アルキル基の例は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、異性体ペンチル、異性体ヘキシル、好ましくはメチル及びエチル及びプロピル及びイソプロピルであり、最も好ましくはメチルである。
【００３９】
「低級アルコキシ」という用語は、Ｒ’−Ｏ−基を指し、ここで、Ｒ’が低級アルキルであり、「低級アルキル」という用語は先に与えられた意味を有する。低級アルコキシ基の例は、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ及びｔｅｒｔ−ブトキシ、好ましくはメトキシ及びエトキシ及びイソプロポキシ及びｔｅｒｔ−ブトキシであり、最も好ましくはメトキシ及びエトキシである。
【００４０】
用語「低級アルケニル」は、オレフィン結合及び２〜６個の炭素原子（「Ｃ2〜Ｃ6−アルケニル」）、好ましくは２〜５個の炭素原子（「Ｃ2〜Ｃ5−アルケニル」）、特に好ましくは２〜４個の炭素原子（「Ｃ2〜Ｃ4−アルケニル」）を含む直鎖又は分枝鎖の炭化水素残基を意味する。低級アルケニル基の例は、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、イソプロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、イソブテニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、イソペンテニルである。好ましい例は、２−プロペニル、２−ブテニル及びイソペンテニルである。
【００４１】
「低級アルキニル」という用語は、アルキン結合及び２〜６個の炭素原子（「Ｃ2〜Ｃ6−アルキニル」）、好ましくは２〜５個の炭素原子（「Ｃ2〜Ｃ6−アルキニル」）、特に好ましくは２〜４個の炭素原子（「Ｃ2〜Ｃ4−アルキニル」）を含む直鎖又は分枝鎖の炭化水素残基を意味する。アルキニル基の例は、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−ブチニル、３−ブチニル、４−ブチニル、１−ブト−２−イン、１−ペンチニル、ペント−２−イン−１−イル、ペント−３−イン−１−イル、ペント−４−イン−１−イル、ペント−２−イン−３−イルである。好ましい例は、プロピン−１−イル、プロピン−３−イル、ブチン−１−イル、ブチン−３−イル、ブチン−４−イル、ブト−２−イン−１−イルである。
【００４２】
「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素を指し、フッ素、塩素及び臭素が好ましい。
【００４３】
「シクロアルキル」という用語は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル又はシクロヘプチルなどの３〜７個の炭素原子（「Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル」）を含む飽和炭素環式基を意味する。好ましいシクロアルキルは、シクロプロピル、シクロペンチル及びシクロヘキシルである。
【００４４】
用語「複素環基」は、酸素原子、窒素原子又は硫黄原子から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を有する、完全に飽和又は不飽和であるが完全に不飽和でない、例えば３〜７員の単環式基又は７〜１１員の縮合二環式環系を意味する。複素環式基の各環は、窒素原子、酸素原子及び／又は硫黄原子から選択される少なくとも１つのヘテロ原子を有し得る。好ましい複素環基は、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、テトラヒドロフラン、ビス−テトラヒドロフラン及びモルホリンである。
【００４５】
用語「カルボキシル」は、−ＣＯＯＨ基を意味する。
【００４６】
「ヘテロアリール」という用語は、一般に、少なくとも１個のヘテロ原子を含み、加えて窒素、酸素及び／又は硫黄から選択される１、２、３又は４個の原子を含み得る芳香族の５員又は１１員環を意味し、例えばピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、２−オキソル、2−ジヒドロピリジニル、オキサジアゾリル、イソキサゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チオフェニル、フラニル、オキサゾリル、イソチアゾリル及びチアゾリルである。「ヘテロアリール」という用語は、さらに、２つの５員又は６員環を含み、一方又は両方の環が窒素、酸素又は硫黄から選択される１、２、３又は４個の原子を含み得る二環式芳香族又は部分不飽和基を指し、例えば、キノリニル、イソキノリニル、シンノリニル（ｃｉｎｎｏｌｉｎｙｌ）、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、チオフェニル、フラニル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピラゾロ〔１，５−α〕ピリジル、イミダゾ〔１，２−α〕ピリジル、キノキサリニル、キナゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾトリアゾリル、１H−ベンゾ〔ｄ〕イミダゾール、ベンゾ［ｄ］イソオキサゾリル、ベンゾ〔ｄ〕イソチアゾリル、ベンゾ〔ｃ〕イソオキサゾリル、ベンゾ〔ｃ〕イソチアゾリル、インドリル、イソインドリニル、６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ〔３，４−ｂ〕ピリジニル、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジニル、６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］ピリミジニル、プリニル、インダゾリル、インドリジニル、イミダゾ［１，２−α]ピリジニル、イミダゾ［１，５−α］ピリジニル、イミダゾ［１，５−α］ピラジニル、イミダゾ［１，２−ａ］ピラジニル、１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピラジニル、ピラゾロ［１，５−α］ピリジニル、ピロロ[1,2-α]ピリミジニル、ピロロ[1,2-α]ピラジニル、ピロロ［１，２−ｃ］ピリミジニル、オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジニル、オキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジニル、オキサゾロ［５，４−ｃ］ピリジニル、オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジニル、チアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニル、チアゾロ［４，５−ｃ］ピリジニル、チアゾロ［５，４−ｃ］ピリジニル、チアゾロ[５，４−ｂ］ピリジニル、オキサゾロ［５，４−ｄ］ピリミジニル、オキサゾロ［４，５−ｄ］ピリミジニル、チアゾロ［５，４−ｄ］ピリミジニル、チアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジニル、オキサゾロ［４，５−ｂ］ピラジニル、チアゾロ［４，５−ｂ］ピラジニル、イソキサゾロ[４，５−ｂ］ピラジニル、イソチアゾロ［４，５−ｂ］ピラジニル、イソキサゾロ［４，５−ｄ］ピリミジニル、イソチアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジニル、イソキサゾロ［５，４−ｄ］ピリミジニル、イソチアゾロ［５，４−ｄ］ピリミジニル、イソキサゾロ［５，４−ｂ］ピリミジニル、イソチアゾロ［５，４−ｃ］ピリミジニル、イソキサゾロ［５，４−ｃ］ピリジニル、イソチアゾロ［４，５−ｃ］ピリジニル、イソキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジニル、イソキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジニル、イソキサゾロ［４，３−ｄ］ピリミジニル、イソチアゾロ［４，３−ｄ］ピリミジニル、イソキサゾロ［３，４−ｄ］ピリミジニル、イソチアゾロ［３，４−ｄ］ピリミジニル、ピリド［２，３−ｄ］ピリミジニル、ピリド［３，４−ｄ］ピリミジニル、ピリド［４，３−ｄ］ピリミジニル、ピリド［３，２−ｄ］ピリミジニル、ピリド［２，３−ｂ］ピラジニル、ピリド［３，４−ｂ］ピラジニル、［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニル、［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｃ］ピリジニル、３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジニルである。好ましいヘテロアリール基は、ピリジル、チオゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、キノゾリニル及びピラジニルである。
【００４７】
「医薬的に許容される塩」という用語は、生物学的に又は他の点で望ましくないものではない、遊離塩基又は遊離酸の生物学的有効性及び特性を保持する塩を指す。塩は、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸、好ましくは塩酸、及び、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、オキシリン酸、マレイン酸、マロン酸、サリチル酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、グルタル酸、桂皮酸、マンデル酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、Ｎ−アセチルシステインなどの有機酸により形成されるものである。さらに、これらの塩は、遊離酸に無機塩基又は有機塩基を添加して調製されてもよい。無機塩基に由来する塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩などが挙げられるが、これらに限定されない。有機塩基に由来する塩としては、第一級、第二級及び第三級アミンの塩、天然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環状アミン及び塩基性イオン交換樹脂、例えばイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、リジン、アルギニン、Ｎ−エチルピペリジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂等が挙げられるがこれに限定されない。式Ｉの化合物は、双性イオンの形態で存在することもできる。
【００４８】
式Ｉの化合物の特に好ましい医薬的に許容される塩は、塩酸塩である。
【００４９】
式Ｉの化合物はまた、溶媒和、例えば、水和されていてもよい。溶媒和は、製造プロセスの過程で達成され得るか、又は例えば、最初に式Ｉ又はＩＩの無水化合物の吸湿特性の結果（水和）として生じてもよい。「医薬的に許容される塩」という用語は、生理学的に許容される溶媒和物も含む。
【００５０】
「異性体」は、同一の分子式を有するが、それらの原子の結合の性質又は配列、又はそれらの原子の空間における配置が異なる化合物である。空間におけるそれらの原子の配置が異なる異性体は、「立体異性体」と呼ばれる。互いに鏡像ではない立体異性体は「ジアステレオ異性体」と呼ばれ、重ね合わせることができない鏡像である立体異性体は「鏡像異性体」又は時には光学異性体と呼ばれる。
【００５１】
本明細書で使用される場合、用語「対象」又は「患者」は、互換的に使用される。本明細書で使用する「対象（単数）」及び「対象（複数）」という用語は、動物（例えば、鳥類、爬虫類及び哺乳動物）、好ましくは非霊長類（例えば、ラクダ、ロバ、ゼブラ、乳牛（ｃｏｗ）、ブタ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ラット及びマウス）及び霊長類（例えば、サル、チンパンジー、及びヒト）を含む動物、及び最も好ましくはヒトをいう。
【００５２】
本明細書中で使用される場合、用語「療法（複数）（ｔｈｅｒａｐｉｅｓ）」及び「療法（単数）（ｔｈｅｒａｐｙ）」は、本明細書中に記載される、ウイルス若しくは細菌感染、又はそれに関連する症状、癌などを含む疾患の予防、治療、管理又は改善に仕様され得る、任意のプロトコル（単数又は複数）、方法（単数又は複数）、組成物、製剤、及び／又は剤（単数又は複数）を指し得る。特定の実施形態では、「療法（複数）」及び「療法（単数）」という用語は、当業者に知られている様々な疾患の治療、管理、予防、又は改善に有用である、生物学的療法、支持療法、及び／又はその他の療法を指す。
【００５３】
化合物の「治療有効量」という用語は、疾患の症状を予防、軽減又は緩和するか、又は治療される対象の生存を延長させるのに有効な化合物の量を意味する。治療有効量の決定は、当業者の範囲内である。本発明による化合物の治療有効量又は投与量は、広い範囲内で変えることができ、当技術分野で公知の方法で決定することができる。そのような投与量は、投与される特定の化合物、投与経路、治療される状態、並びに治療される患者を含む各特定のケースにおける個々の要件に合わせて調整されてもよい。指示された場合に上限を超えることができるが、一般に、約７０ｋｇの成人の経口又は非経口投与の場合、１日用量が０．１ｍｇ〜５ｇ、好ましくは約０．１ｍｇ〜１ｇ、より好ましくは０．５ｍｇ〜５００ｍｇ、最も好ましくは約１ｍｇ〜３００ｍｇの範囲が適切であるべきである。１日用量は、単回用量又は分割用量として投与することができ、又は非経口投与であってもよく、連続注入として与えてもよい。
【００５４】
「医薬的に許容される担体」という用語は、溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤、並びに医薬投与に適合する他の材料及び化合物を含む、医薬投与に適合する任意の及びすべての材料を含むことを意図する。任意の従来の媒体又は薬剤が活性化合物と不適合である場合を除いて、本発明の組成物におけるその使用が企図される。補充の活性化合物も組成物中に組み込むことができる。これらの組成物は、Ａｎｓｅｉ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｔｅｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）２０１４，Ｌｏｙｄ  Ａｌｌｅｎ，Ｈｏｗａｒｄ  Ｃ．Ａｎｓｅｌ編纂，Ｗｏｌｔｅｒｓ  Ｋｌｕｗｅｒ出版；Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ｔｗｅｎｔｙ−ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）２０１２，Ｌｏｙｄ  Ｖ．Ａｌｌｅｎ編纂，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ出版、に記載される当該技術分野で公知の技術を適用することによって調製さえ得、それぞれが参考して本明細書に援用される。
【００５５】
本明細書で使用する「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」及び「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、ウイルス感染を治療するための対象への療法の投与の文脈において示すものであり、療法又は療法の組み合わせの投与から得られる以下の効果の１、２、３、４、５又はそれ以上を指す：（ｉ）疾患及び／又はそれに関連する症状の重篤度の軽減又は改善；及び（ｉｉ）疾患及び／又はそれに関連する症状の持続時間の減少；（ｉｉｉ）疾患及び／又はそれに関連する症状の退縮；（ｉｖ）病原体の力価の低下；（ｖ）疾患に関連する臓器不全の減少；（ｖｉ）対象の入院の減少；（ｖｉｉ）入院期間の短縮；（ｖｉｉｉ）対象の生存の増加；（ｉｘ）感染の排除；（ｘ）感染及び／又はそれに関連する症状の進行の阻害；（ｘｉ）細胞、組織又は対象から別の細胞、組織又は対象へのウイルスの拡散の阻害；及び／又は（ｘｉｉ）別の療法の治療効果の増強又は改善。
【００５６】
「プロドラッグ」とは、生物学的系内で本発明の化合物に変換される化合物を意味する。プロドラッグは、薬物自体よりも不活性であるか、又はそれ以下の化学誘導体である。体内に投与して拡散後、プロドラッグ誘導体は、活性薬物を放出する１つ以上の代謝過程を経る。プロドラッグから薬物への変換は、一般に酵素プロセス（通常、代謝手段、例えば加水分解、還元又は酸化）の制御下で実施され、体内でのその拡散中に古典的な化学反応によってはあまり起こらない。担体と薬物との間の結合は、限定されないが、エステル、アミド、カーボネート、カルバメート、イミン、アセタール、エーテル（例えばグルコロ結合（ｇｌｕｃｏｒｏ  ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ））、酸化可能な官能基及び分子系、還元可能な官能基及び還元可能な分子系、光活性化官能基及び光活性化分子系を含む。例えば、ヒドロキシル基を含有する化合物のエステルプロドラッグは、インビボでの加水分解によって親分子に変換可能であり得る。ヒドロキシル基を含む本発明の化合物の好適なエステルは、例えば酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、マロン酸塩、シュウ酸塩、サリチル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、メチレン−ビス−β−ヒドロキシナフトエート（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ−ｂｉｓ−β−ｈｙｄｒｏｘｙｎａｐｈｔｈｏａｔｅｓ）、ゲスチジン酸塩、イセチオン酸塩、ジ−ｐ−トルオイル酒石酸塩（ｄｉ−ｐ−ｔｏｌｕｏｙｌｔａｒｔｒａｔｅｓ）、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、シクロヘキシルスルファミン酸塩及びキナ酸が挙げられる。別の例として、カルボキシ基を含む本発明の化合物のエステルプロドラッグは、インビボでの加水分解によって親分子に変換可能であり得る（エステルプロドラッグの例は、Ｆ．Ｊ．Ｌｅｉｎｗｅｂｅｒ，Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．Ｒｅｓ．１９８７，（１８）ｐｐ３７９に記載され、参照により本明細書に組み込まれる）。同様に、アミノ基を含有する化合物のアシルプロドラッグは、インビボでの加水分解によって親分子に変換可能であり得る（アミン及びアルコールを含むこれら及び他の官能基のプロドラッグの例は、Ｐｒｏｄｒｕｇｓ：Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｗａｒｄｓ（Ｐａｒｔｓ  １  ａｎｄ  ２）；Ｅｄ  Ｖ．Ｓｔｅｌｌａ，Ｒ．Ｂｏｒｃｈａｒｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２００７，及びＰｒｏｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｔｏｗａｒｄｓ  Ｂｅｔｔｅｒ  ＡＤＭＥ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  Ｅｄ．Ｊ．Ｒａｕｔｉｏ，Ｓｅｉｅｓ  Ｅｄ．Ｒ．Ｍａｎｎｈｏｌｄ，Ｈ．Ｋｕｂｉｎｙｌ，Ｇ．Ｆｏｌｋｅｒｓ．Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ  ２０１１に記載されており、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる）。
【００５７】
プロドラッグキャリアシステムは、一般に、水溶性又は脂溶性を高め、毒性を低減し、感受性化合物の化学的及び生物学的安定性を高め、体内循環時間（Ｔ1/2）を増加させ、全薬物暴露（ＡＵＣ）及び臓器分布（ＰＫ−ＰＤプロファイリング）及び部位特異的ターゲティングを増加するために使用される。
【実施例】
【００５８】
実施例１、２、３及び４に関する材料及び方法
【００５９】
試薬及び溶媒は、商業的供給業者から入手し、さらに精製することなく使用した。乾燥塩化メチレンを乾燥させ、ＣａＣｌ2で蒸留し、アルゴン下でモレキュラーシーブ４Ａ上にて貯蔵した。テトラヒドロフランをアルゴン下でナトリウム／ベンゾフェノンケチルで乾燥し、使用前に蒸留した。固定相としてＭｅｒｃｋシリカゲル（４０〜６３μＭ又は１５〜４０μＭ）でフラッシュクロマトグラフィー精製を行った。
【００６０】
ＮＭＲスペクトルはＢｒｕｋｅＲＡｖａｎｃｅ  ３００ＭＨｚで記録した。分析用超高速液体クロマトグラフィー−質量分析（ＵＨＰＬＣ−ＭＳ）：質量分析計タンデム四重極  Ｗａｔｅｒｓ  Ｑｕａｔｔｒｏ  ＰｒｅｍｉｅＲＸＥに連結した、ＵＰＬＣ  Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ、ＵＶ  ＤＡＤ。
【００６１】
Ｃｏｌｕｍｎ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８（２．１×５０ｍｍ）１．７μｍ、移動相：Ｈ2Ｏ＋０．１％ＴＦＡ、Ｂ：ＭｅＣＮ＋０．１％ＴＦＡ。溶出条件は、線形勾配（分／％Ｂ）：０／５％Ｂ、４／９８％Ｂ、流速０．４ｍｌ／分を含んだ。
【００６２】
１．実施例１：２−（４−クロロフェニルアミノ）−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン塩酸塩（１−６）の調製。
【化６】
0006588546.tif 000007
【００６３】
中間体４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン（１−２）の製造：
【化７】
0006588546.tif 000008
【００６４】
１．１．  １−ベンジル−４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン（１−１）の合成
【化８】
0006588546.tif 000009
【００６５】
Ｔ＜１５℃で、乾燥トルエン及びｔｅｒｔ−ブチルアミン（１３５ｍｌ、１２８０ｍｍｏｌ）５００ｍｌ中のＮ−ベンジル−４−ピペリジノン（６０．０ｇ、３１４ｍｍｏｌ）の溶液に、乾燥トルエン２５０ｍｌ溶液中の四塩化チタン（２３．０ｍｌ、２１０ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。得られた混合物を室温で２０時間撹拌し、次いでＣｅｌｉｔｅ（登録商標）パッドで濾過した。トルエン溶液を高圧水素化反応器に移し、触媒二酸化プラ白金（１６０ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）を添加した。水素を圧力５バールで反応器に導入し、反応を室温で２日間進行させた。次いで、得られた混合物を２Ｍ  ＮａＯＨ水溶液（４００ｍｌ）で希釈し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）パッドで濾過した。層を分離し、水層をトルエンで抽出した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、１−ベンジル−４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジンに対応する橙色油状物６８．０５ｇ（収率８８％）を得た。
質量：（ＥＳ＋）Ｃ16Ｈ26Ｎ2、要求２４６；実測値２４７［Ｍ＋Ｈ］
1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）
【００６６】
１．２．  ４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン（１−２）の合成
【化９】
0006588546.tif 000010
【００６７】
水素化化学反応器において及び７００ｍLのメタノール中の１−ベンジル−４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン（６８．０５ｇ、２７６ｍｍｏｌ）の窒素脱気溶液に、窒素下で、炭素粉末上のパラジウム１０ｗｔ％、５０％湿潤（２９．４０ｇ、１３．８１ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）を加えた。水素を３バールの圧力で反応器に導入し、反応を室温で２日間進行させた。次いで、得られた混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）パッドで濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジンに対応する黄色固体３８．８６ｇ（収率９０％）を得た。
質量：（ＥＳ＋）Ｃ9Ｈ20Ｎ2  要求１５６；実測値１５７［Ｍ＋Ｈ］
1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）
【００６８】
１．３．  ２，４−ジクロロキノリン（１−３）の合成
【化１０】
0006588546.tif 000011
【００６９】
キノリン−２，４−ジオール（５０．０ｇ、３１０ｍｍｏｌ）に０℃で塩化ホスホリル（２５０ｍｌ、２６８２ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。得られた混合物を撹拌し、還流下で一晩加熱した。その後、混合物を冷却し、減圧濃縮し、トルエン５００ｍｌで２回共沸させた。次いで、残留物をＤＣＭ（５００ｍｌ）に取り出し、冷水で洗浄した。水層をＤＣＭで抽出し、合わせた有機層を合わせ、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、２，４−ジクロロキノリンに相当する褐色固体（５７．０ｇ、収率９３％）を得た。
質量：（ＥＳ＋）Ｃ9Ｈ5Ｃｌ2Ｎ  要求１９７；実測値１９８［Ｍ＋Ｈ］
1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）
【００７０】
１．４．  ２−（４−クロロフェニルアミノ）−４−クロロキノリン（１−４）の合成
【化１１】
0006588546.tif 000012
【００７１】
窒素ガス下、乾燥ＴＨＦ（２０ｍｌ）中の２，４−ジクロロキノリン（２．００ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）の溶液に、４−クロロアニリン（１．４５ｇ、１１．１ｍｍｏｌ）及びＫ2ＣＯ3（３．９１ｇ、２８．３ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を窒素で５分間脱気し、次いでＸａｎｔｐｈｏｓ（５９０ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ＯＡｃ）2（１２０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を還流下で２時間加熱した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣を水とＡｃＯＥｔに分配し、水層をＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、黄色油状物を得た。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（７／３〜０／１０の勾配シクロヘキサン／ＡｃＯＥｔ）で精製して、２−（４−クロロフェニルアミノ）−４−クロロキノリンに対応する黄色固体２．１３ｇ（収率７３％）を得た。
質量：（ＥＳ＋）Ｃ15Ｈ10Ｃｌ2Ｎ2  要求２８８；実測値２８９［Ｍ＋Ｈ］
1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）
【００７２】
１．５．  ２−（４−クロロフェニルアミノ）−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン（１−５）の合成
【化１２】
0006588546.tif 000013
【００７３】
５ｍｌのＮＭＰ中の２−（４−クロロフェニルアミノ）−４−クロロキノリン（１．００ｇ、３．４６ｍｍｏｌ）及び４−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）−ピペリジン（６８４ｍｇ、４．３８ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．９４７ｍｌ、５．４７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１４０℃で２４時間加熱した。次に、反応混合物を冷却し、１Ｎ  ＮａＯＨ水溶液で希釈し、得られた混合物をＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、褐色液体を得た。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（８／２から２／８の勾配シクロヘキサン／ＡｃＯＥｔ）で精製して黄色がかった固体を得た。この固体をＭｅＣＮから再結晶して、２−（４−クロロフェニルアミノ）−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリンに相当する白色固体１．１９ｇ（収率８４％）を得た。
ＨＰＬＣ−ＭＳ：ｔr＝１．２４分、（ＥＳ＋）Ｃ24Ｈ29ＣｌＮ4 要求４０８；実測値４０９［Ｍ＋Ｈ］、３５３［Ｍ−ｔＢｕ＋Ｈ］
1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）
【００７４】
１．６．  ２−（４−クロロフェニルアミノ）−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン塩酸塩（１−６）の合成
【化１３】
0006588546.tif 000014
【００７５】
４ｍｌのＥｔＯＨ中の２−（４−クロロフェニルアミノ）−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン（４４０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＥｔＯＨ中のＨＣｌ３．２５Ｍ溶液３７１μＬを滴下して加えた。固体を溶解し、混合物を室温で２０分間撹拌した。次に、得られた溶液を減圧下で約半分に濃縮し、エーテル６ｍｌを加えた。得られた混合物を室温で１時間撹拌して白色固体を得、それを濾過し、エーテルですすぎ、４５℃にて真空下で乾燥させて、２−（４−クロロフェニルアミノ）−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン塩酸塩に想到する白色固体４０１ｍｇ（収率８５％）を得た。
ＨＰＬＣ−ＭＳ：ｔr＝１．２１分、（ＥＳ＋）Ｃ24Ｈ29ＣｌＮ4  要求４０８；実測値４０９［Ｍ＋Ｈ］、３５３［Ｍ−ｔＢｕ＋Ｈ］
1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤ3ＯＤ）
13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤ3ＯＤ）
【００７６】
２．実施例２：２−（４−クロロベンジルアミノ）−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン塩酸塩（２−３）の調製
【化１４】
0006588546.tif 000015
【００７７】
２．１．  ２−（４−クロロベンジルアミノ）−４−クロロキノリン（２−１）の合成
【化１５】
0006588546.tif 000016
【００７８】
窒素ガス下、乾燥ＴＨＦ（１０ｍｌ）中の２，４−ジクロロキノリン（１．００ｇ、５．０５ｍｍｏｌ）の溶液に、４−クロロベンジルアミン（１．４６ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）及びｔ−ＢｕＯＮａ（１．３６ｇ、１４．１ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を窒素で５分間脱気し、次いでＸａｎｔｐｈｏｓ（２９５ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ＯＡｃ）2（５８ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を還流下で２時間加熱した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣を鹹水（ｂｒｉｎｅ）とＡｃＯＥｔに分配し、水層をＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、褐色油状物を得た。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（５／５〜０／１０の勾配シクロヘキサン／ＤＣＭ）により精製して、２−（４−クロロベンジルアミノ）−４−クロロキノリンに相当する褐色固体８９７ｍｇ（収率５９％）を得た。
質量：（ＥＳ＋）Ｃ16Ｈ12Ｃｌ2Ｎ2  要求３０２；実測値３０３［Ｍ＋Ｈ］
1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）
【００７９】
２．２．  ２−（４−クロロベンジルアミノ）−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン（２−２）の合成
【化１６】
0006588546.tif 000017
【００８０】
５ｍｌのＮＭＰ中の２−（４−クロロベンジルアミノ）−４−クロロキノリン（１．０５ｇ、３．４６ｍｍｏｌ）及び４−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）−ピペリジン（０．６８４ｇ、４．３８ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ-ジイソプロピルエチルアミン（０．９４７ｍｌ、５．４７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１４０℃で２２時間加熱した。次に、反応混合物を冷却し、１Ｎ  ＮａＯＨ水溶液で希釈し、得られた混合物をＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、黄色油状物を得た。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（８／２〜０／１０の勾配シクロヘキサン／ＡｃＯＥｔ）で精製して、黄色の固体を得た。この固体をＭｅＣＮから再結晶して、２−（４−クロロベンジルアミノ）−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリンに相当する白色固体９０４ｍｇ（収率６２％）を得た。
ＨＰＬＣ−ＭＳ：ｔr＝１．３０分、（ＥＳ＋）Ｃ25Ｈ31ＣｌＮ4  要求４２２；実測値４２３［Ｍ＋Ｈ］、３６８［Ｍ−ｔＢｕ＋Ｈ］
1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）
【００８１】
２．３．  ２−（４−クロロベンジルアミノ）−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン塩酸塩（２−３）の合成
【化１７】
0006588546.tif 000018
【００８２】
２．５ｍＬのＥｔＯＨ中の２−（４−クロロベンジルアミノ）−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン（４５０ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＥｔＯＨ中の７MのＨＣｌ溶液４００μＬを滴下して添加した。固体を溶解し、混合物を室温で３時間撹拌した。次に、得られた溶液を減圧下で濃縮し、エーテルを加えた。得られた混合物を撹拌し、室温で粉砕して黄色がかった固体を得、それを濾過し、エーテルですすぎ、真空下で乾燥させた。黄色がかった固体を純水に溶解させた後、凍結乾燥して２−（４−クロロベンジルアミノ）−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン塩酸塩に相当する白色固体４０１ｍｇ（収率９４％）を得た。
ＨＰＬＣ−ＭＳ：ｔr＝１．３１分、（ＥＳ＋）Ｃ25Ｈ31ＣｌＮ4、要求４２２；実測値４２３［Ｍ＋Ｈ］、３６９［Ｍ−ｔＢｕ＋Ｈ］
1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）
【００８３】
３．実施例３：２−［３−メチル−４−（ピリミジン−２−イルアミノ）フェニルアミノ］−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン塩酸塩（３−５）の調製
【化１８】
0006588546.tif 000019
【００８４】
３．１．  ２−メチル−Ｎ1−（ピリミジン−２−イル）−Ｎ4−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−ベンゼン−１，４−ジアミン（３−１）の合成
【化１９】
0006588546.tif 000020
【００８５】
乾燥ＴＨＦ（４８ｍｌ）中の２−メチル−Ｎ4−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−ベンゼン−１，４−ジアミン（２．４０ｇ、１０．８ｍｍｏｌ）、２−クロロピリミジン（０．７８ｇ、６．５ｍｍｏｌ）及びＫ2ＣＯ3（２．２４ｇ、１６．２ｍｍｏｌ）を窒素で１５分間脱気した。次いで、Ｐｄ（ＯＡｃ）2（５８ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）及びＢＩＮＡＰリガンド（３２０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を２０分間で２回脱気した。反応混合物を最後に還流下で１時間加熱した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣を水とＡｃＯＥｔに分配し、水層をＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（１０／０〜７／３の勾配シクロヘキサン／ＡｃＯＥｔ）により精製して、２−メチル−Ｎ1−（ピリミジン−２−イル）−Ｎ4−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−ベンゼン−１，４−ジアミンに相当する褐色固体６５０ｍｇ（収率３３％）を得た。
ＨＰＬＣ−ＭＳ：ｔr＝２．０６分、（ＥＳ＋）Ｃ16Ｈ20Ｎ4Ｏ2 要求３００；実測値３０１［Ｍ＋Ｈ］
1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤ3ＯＤ）
【００８６】
３．２．  ２−メチル−Ｎ１−（ピリミジン−２−イル）−ベンゼン−１，４−ジアミン（３−２）の合成
【化２０】
0006588546.tif 000021
【００８７】
２−メチル−Ｎ1−（ピリミジン−２−イル）−Ｎ４−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−ベンゼン−１，４−ジアミン（１．１８ｇ、３．９３ｍｍｏｌ）に、室温で３Ｍ  ＨＣｌのメタノール溶液（１５ｍＬ）を滴下して加えた。次いで、反応混合物を室温で１時間撹拌した。次いで、反応を減圧下で濃縮し、残渣をＤＣＭと１Ｍ  ＮａＯＨ水溶液との間で分配し、水層をＤＣＭで抽出した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、２−メチル−Ｎ１−（ピリミジン−２−イル）ベンゼン−１，４−ジアミンに相当する黄色油７８７ｍｇ（収率９８％）を得た。
質量：（ＥＳ＋）Ｃ11Ｈ12Ｎ4  要求２００；実測値２０１［Ｍ＋Ｈ］
1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤ3ＯＤ）
【００８８】
３．３．  ２−［４−（２−ピリミジニルアミノ）−３−メチル−フェニルアミノ］−４−クロロキノリン（３−３）の合成
【化２１】
0006588546.tif 000022
【００８９】
乾燥ＴＨＦ（７ｍｌ）中の２−メチル−Ｎ1−（ピリミジン−２−イル）ベンゼン−１，４−ジアミン（７７１ｍｇ、３．８５ｍｍｏｌ）、２，４−ジクロロキノリン（６９３ｍｇ、３．５ｍｍｏｌ）及びＫ2ＣＯ3（１．３５ｇ、９．８０ｍｍｏｌ）の溶液を、窒素で２０分間脱気した。次いで、Ｐｄ（ＯＡｃ）2（４７ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）及びＸａｎｔＰｈｏｓリガンド（６１ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を２０分間で２回脱気した。反応混合物を最後に還流下で４時間加熱した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣を水とＡｃＯＥｔに分配し、水層をＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（１０／０〜５／５の勾配シクロヘキサン／ＡｃＯＥｔ）により精製して、２−［４−（２−ピリミジニルアミノ）−３−メチル−フェニルアミノ］−４−クロロキノリンに相当する黄色固体５２０ｍｇ（収率４１％）を得た。
質量：（ＥＳ＋）Ｃ20Ｈ16ＣｌＮ5、要求３６１；実測値３６２［Ｍ＋Ｈ］
【００９０】
３．４．  ２−［４−（２−ピリミジニルアミノ）−３−メチル−フェニルアミノ］−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン（３−４）の合成
【化２２】
0006588546.tif 000023
【００９１】
ＮＭＰ（１．５ｍｌ）中の２−［４−（２−ピリミジニルアミノ）−３−メチル−フェニルアミノ］−４−クロロキノリン（３５０ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）の溶液に、４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン（７６０ｍｇ、４．８０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を実験用電子レンジで２００℃、３０分間加熱した。次に、得られた混合物を冷却し、水とＡｃＯＥｔとの間で分配し、水層をＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（１０／０〜５／５の勾配シクロヘキサン／ＡｃＯＥｔ）により精製して、２−［４−（２−ピリミジニルアミノ）−３−メチル−フェニルアミノ］−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリンに相当する褐色固体７５ｍｇ（収率１６％）を得た。
ＨＰＬＣ−ＭＳ：ｔr＝１．１５分、（ＥＳ＋）Ｃ29Ｈ35Ｎ7  要求４８１；実測値４８２［Ｍ＋Ｈ］、４２６［Ｍ−ｔＢｕ＋Ｈ］
【００９２】
３．５．  ２−［４−（２−ピリミジニルアミノ）−３−メチル−フェニルアミノ］−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン塩酸塩（３−５）の合成
【化２３】
0006588546.tif 000024
【００９３】
ＥｔＯＨ中のＨＣｌの３．０Ｍ溶液（２９０ｕＬ）を、２−［４−（２−ピリミジニルアミノ）−３−メチル−フェニルアミノ］−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン（７５ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）に添加した。得られた混合物を濾過し、減圧下で蒸発させて、２−［４−（２−ピリミジニルアミノ）−３−メチル−フェニルアミノ］−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン塩酸塩に相当する黄色がかった固体８０ｍｇ（収率９３％）を得た。
ＨＰＬＣ−ＭＳ：ｔr＝１．１５分、（ＥＳ＋）Ｃ29Ｈ35Ｎ7の計算値４８１；実測値４８２［Ｍ＋Ｈ］、４２６［Ｍ−ｔＢｕ＋Ｈ］
1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤ3ＯＤ＋数滴のＤＭＳＯ−ｄ6）
【００９４】
４．実施例４：２−［３−メチル−４−（ピリミジン−２−イルアミノ）フェニルアミノ］−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン塩酸塩（４−３）の調製
【化２４】
0006588546.tif 000025
【００９５】
４．１．  ２−｛４−［４−（ピリジン−３−イル）−２−ピリミジンアミノ］−３−メチル−フェニルアミノ｝−４−クロロキノリン（４−１）の合成
【化２５】
0006588546.tif 000026
【００９６】
乾燥ＴＨＦ（１１．９ｍｌ）中の２−メチル−Ｎ1−［４−（ピリジン−３−イル）−ピリミジン−２−イル］ベンゼン−１，４−ジアミン（１．１８ｇ、４．２６ｍｍｏｌ）、２，４−ジクロロキノリン（７６７ｍｇ、３．８７mmol）の溶液に、Ｋ2ＣＯ3（２．７ｇ、１９．０mmol）を加え、反応混合物を窒素で１５分間脱気した。次いで、ＸａｎｔＰｈｏｓリガンド（２２６ｍｇ、０．３８７ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ＯＡｃ）2（４４ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１５分間で２回脱気した。最後に反応混合物を還流下で一晩加熱した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣を水とＡｃＯＥｔに分配し、水層をＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（１０／０〜０／１０の勾配シクロヘキサン／ＡｃＯＥｔ）により精製して、２−｛４−［４−（ピリジン−３−イル）ピリミジン−４−イル）−２−ピリミジンアミノ］−３−メチル−フェニルアミノ｝−４−クロロキノリンに相当する褐色固体１．０８ｇ（収率６４％）を得た。
質量：（ＥＳ＋）Ｃ25Ｈ19ＣｌＮ6  要求４３８；実測値４３９［Ｍ＋Ｈ］
1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤ3ＯＤ）
【００９７】
４．２．  ２−｛４−［４−（ピリジン−３−イル）−２−ピリミジンアミノ］−３−メチル−フェニルアミノ｝−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン（４−２）の合成
【化２６】
0006588546.tif 000027
【００９８】
ＮＭＰ（１０ｍｌ）中の２−｛４−［４−（ピリジン−３−イル）−２−ピリミジンアミノ］−３−メチル−フェニルアミノ｝−４−クロロキノリン（１．０ｇ、２．２８ｍｍｏｌ）の溶液に、４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン（１．８ｇ、１１．０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を実験室の電子レンジで２００℃にて９０分間加熱した。得られた混合物を水とＡｃＯＥｔに分配し、水層をＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＡｃＯＥｔ／ＤＣＭ  ３／２からＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ９／１）により精製して１．０１ｇの黄色固体を得、これをＥｔＯＨから再結晶して２−｛４−［４−（ピリジン−３−イル）−２−ピリミジンアミノ］−３−メチル−フェニルアミノ｝−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリンに相当する５５０ｍｇ（収率４３％）の白色固体を得た。
ＨＰＬＣ−ＭＳ：ｔr＝１．２０分、（ＥＳ＋）Ｃ34Ｈ38Ｎ8  要求５５８；実測値５５９［Ｍ＋Ｈ］、５０３［Ｍ−ｔＢｕ＋Ｈ］
1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）
【００９９】
４．３．  ２−｛４−［４−（ピリジン−３−イル）−２−ピリミジンアミノ］−３−メチル−フェニルアミノ｝−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン塩酸塩（４−３）の合成
【化２７】
0006588546.tif 000028
【０１００】
ＥｔＯＨ中の２−｛４−［４−（ピリジン−３−イル）−２−ピリミジンアミノ］−３−メチル−フェニルアミノ｝−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン（５．５ｍｌ）に、ＥｔＯＨ中の３．０Ｍ  ＨＣｌの溶液（４ｍｌ）を滴下して加えた。形成された黄色固体を濾別し、次いでシクロヘキサンで粉砕した。この懸濁液を濾過して、２−｛４−［４−（ピリジン−３−イル）−２−ピリミジンアミノ］−３−メチル−フェニルアミノ｝−４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルアミノピペリジン−１−イル）−キノリン塩酸塩に相当する白色固体５０５ｍｇ（収率７７％）をえた。
ＨＰＬＣ−ＭＳ：ｔr＝１．２２分、（ＥＳ＋）Ｃ34Ｈ38Ｎ8、要求５５８；実測値５５９［Ｍ＋Ｈ］、５０３［Ｍ−ｔＢｕ＋Ｈ］
1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤ3ＯＤ＋数滴のＤＭＳＯ−ｄ6）13Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤ3ＯＤ）
【０１０１】
５．実施例５：ＭＯＬＭ−１４、ＫＧ−１、ＭＶ４−１１、Ａ３７５、ＨＣＴ−１１６、ＨｅｐＧ２、Ｈｕｈ−７、ＭＲＣ−５、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＡＲＰＥ−１９細胞株及びＰＢＭＣ細胞における化合物１−６、２−３、３−５及び４−３の活性プロファイル
【０１０２】
細胞培養：全ての細胞株を、１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｄｕｔｓｃｈｅｒ、Ｐ０６−０７１００）及びＫＧ−１細胞株及びＰＢＭＣについては２０％であることを除いて、１０％ウシ胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ、Ｗ３３８７Ｌ）を含む培地中で維持し、３７℃５％ＣＯ2で培養した。
【０１０３】
ＨｅｐＧ２、Ｈｕｈ７、ＨＣＴ−１１６、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１及びＡ３７５細胞株を、ダルベッコ変法イーグル培地（Ｄｕｔｓｃｈｅｒ、Ｌ０１０３）中で培養した。
【０１０４】
ＫＧ−１及びＭＶ４−１１細胞株をイスコフ改変ダルベッコ培地（Ｄｕｔｓｃｈｅｒ、Ｌ０１９０）中で培養した。
【０１０５】
ＭＯＬＭ−１４細胞株をＭＥＭアルファ培地（Ｇｉｂｃｏ、２２５６１−０２１）で維持した。
【０１０６】
ＲＰＭＩ１６４０培地（Ｄｕｔｓｃｈｅｒ、Ｌ０４９８）中でＰＢＭＣを維持した。
【０１０７】
ＭＲＣ−５細胞株をＭＥＭ（Ｄｕｔｓｃｈｅｒ、Ｌ０４１６）中で維持した。
【０１０８】
ＡＲＰＥ−１９細胞株をＤＭＥＭ：Ｆ１２培地（Ｄｕｔｓｃｈｅｒ、Ｌ００９３）で培養した。
【０１０９】
細胞生存率アッセイ：Ｉｎｆｉｎｉｔｅ  Ｆ２００Ｐｒｏルミノメーター（Ｔｅｃａｎ）を使用して製造者（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｒｅｆｇ７５７１）が記載したＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイを用いて、細胞生存率を測定した。簡単に説明すると、付着細胞については、ウェル当たり９０μＬの培地中の９６ウェルプレート（透明底部を有する白色）上に細胞をプレーティングし、アッセイ前に一晩増殖させた。懸濁液中で増殖する細胞については、アッセイの直前に９６ウェルプレートに細胞をプレーティングした。１ウェルあたり播種された細胞の数を以下の表１に示す。
【表１】
0006588546.tif 000029
【０１１０】
化合物を異なる濃度で各ウェルに添加し、細胞培養物を７２時間インキュベートした。対照としてビヒクル（Ｈ2Ｏ）を用い、一定割合のＨ2Ｏで全ての化合物を試験した。１００μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を加えた後、Ｉｎｆｉｎｉｔｅ  Ｆ２００Ｐｒｏ（Ｔｅｃａｎ）を用いて発光を測定した。未処理細胞培養物について得られたシグナルの５０％まで発光値を低下させるのに必要な化合物の用量を、ＥＣ50値を決定した。実験データは、コンピュータプログラムＧｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｖ５（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｉｎｃ．、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を用いて分析した。
【０１１１】
すべての実験は、少なくとも２回繰り返し、２回の独立した時間で繰り返した。
【０１１２】
【表２】
0006588546.tif 000030
【０１１３】
【表３】
0006588546.tif 000031
【０１１４】
【表４】
0006588546.tif 000032
【０１１５】
【表５】
0006588546.tif 000033
【０１１６】
【表６】
0006588546.tif 000034
【０１１７】
６．実施例６：ＭＯＬＭ−１４細胞株におけるＡＬＤＨ＋コンパートメント分析
【０１１８】
ＭＯＬＭ−１４細胞株を、１０％ｖ／ｖウシ胎仔血清、１％ペニシリン−ストレプトマイシンを補充したＭＥＭアルファ培地で培養し、３７℃、５％ＣＯ2で維持した。アッセイの直前に１０，０００細胞を９６ウェルプレートに播種した。
【０１１９】
各化合物を異なる濃度（６つの濃度の組み合わせ）で各ウェルに添加し、細胞培養物を７２時間インキュベートした。対照としてビヒクル（Ｈ2Ｏ）を用い、すべての化合物をビヒクルの一定割合で試験した。Ｃｅｎｔｒｏ（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ、Ｆｒａｎｃｅ）プレートリーダーを用いて、製造業者（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｒｅｆｇ７５７１  Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ、ＵＳＡ）によって記載されたＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイを用いて細胞増殖を測定した。
【０１２０】
各実験において、各点は、細胞培養における三重反復の平均を表す。
【０１２１】
実験データは、コンピュータプログラムＧｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｖ５（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｉｎｃ．、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を用いて分析し、ＥＣ50値は、ビヒクル処理細胞培養について得られたシグナルの５０％に吸光度値を低下させるのに必要な化合物の用量として決定した。
【０１２２】
アルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＡＬＤＨ）コンパートメント及びアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性の高活性レベル（ＡＬＤＨ＋）の分析を用いて、腫瘍開始細胞（癌幹細胞、ＣＳＣ）集団を検出した。Ａｌｄｅｆｌｕｏｒ（商標）キットアッセイ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、０１７００）により、ＭＯＬＭ−１４急性骨髄性白血病細胞株において、ＣＳＣ細胞様細胞への薬物の活性を評価することができた（参照：Ｓｔｏｒｍｓ，Ｒ．Ｗ．，Ｔｒｕｊｉｌｌｏ，Ａ．Ｐ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｊ．Ｂ．，Ｓｈａｈ，Ｌ．，Ｃｏｌｖｉｎ，Ｏ．Ｍ．，Ｌｕｄｅｍａｎ，Ｓ．Ｍ．，＆  Ｓｍｉｔｈ，Ｃ．（１９９９）．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｉｍｉｔｉｖｅ  ｈｕｍａｎ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ａｌｄｅｈｙｄｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，９６（１６），９１１８−９１２３）。ＡｌｄｅｆｌｕｏＲ（商標）キットアッセイを、製造者によって記載された手順に従って使用した。簡単に述べると、ＭＯＬＭ−１４細胞株を、１０％ｖ／ｖウシ胎仔血清、１％ペニシリン−ストレプトマイシンを補充したＭＥＭアルファ培地中で培養し、３７℃、５％ＣＯ2で維持した。５．１０5細胞をこのアッセイで使用した。各化合物を異なる濃度で添加し（表８参照）、細胞培養物を７２時間インキュベートした。対照としてビヒクル（Ｈ2Ｏ）を用い、全ての化合物をビヒクルの一定割合で試験した。細胞培養から得られた細胞を、蛍光ＡＬＤＨアルデヒド基質であるＢｏｄｉｐｙ（商標）−アミノアセトアルデヒドを含有するＡｌｄｅｆｌｕｏＲ（商標）緩衝液アッセイを用いて３７℃で４５分間インキュベートした。ＡＬＤＨは、蛍光基質ＢＡＡＡを、細胞に保持されているＢｏｄｉｐｙ（商標）アミノ酢酸（ＢＡＡ）に変換する。基質生成物ＡＬＤＨ依存性変換ＢＡＡの細胞からの活性流出を避けるために、活性流出阻害剤がＡｄｅｌｆｌｕｏｒ（商標）アッセイ緩衝液中に存在する。蛍光シグナルは、細胞内のＡＬＤＨ活性に直接比例し、フローサイトメトリーによって測定される。ネガティブコントロールを用いて、バックグラウンド蛍光レベルが測定される。このような目的のために、４−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）−ベンズアルデヒド（ＤＥＡＢ）を選択的ＡＬＤＨ阻害剤として使用した。生存能力細胞数は、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｆｉｘａｂｌｅ遠赤色死細胞染色キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて行った。実験データは、コンピュータプログラムＧｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｖ５（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｉｎｃ．、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を用いて分析し、ＥＣ50値は、ビヒクル処理細胞培養について得られたシグナルの５０％に吸光度値を低下させるのに必要な化合物の用量として決定した。
【０１２３】
【表７】
0006588546.tif 000035
【０１２４】
【表８】
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【０１２５】
７．実施例７：化合物２−３の存在下でのＨｅｐ３Ｂ−Ｌｕｃ細胞株の増殖阻害アッセイ（ＥＣ50、μＭ）
化合物処理の前に、化合物をＨ2Ｏに溶解して１０ｍＭのストック溶液を作製した。次いで、１０％ウシ胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ、１００９９１４１）を含有するＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ、１１２８３１９）を用いて、ワーキング溶液（最終濃度５倍）を調製した。
【０１２６】
アッセイを行う場合、ＢＥＬ−７４０２細胞株（ヒト初代肝細胞癌）に対するドキソルビシンの用量応答試験を、アッセイに対し、各アッセイプレートの内部対照として使用する。５％Ｈ2Ｏ（５ｘ）を添加したＭＥＭ培地をネガティブコントロールとして細胞に添加する。最終的なＨ2Ｏ濃度は各ウェルで１％であった。
【０１２７】
Ｈｅｐ３Ｂ−Ｌｕｃ細胞株（同所性腫瘍モデルに対するルシフェラーゼでトランスフェクトしたヒト肝癌細胞株）を１０％ｖ／ｖウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、１％ペニシリン−ストレプトマイシンを補充したＭＥＭ培地中で培養し、３７℃、５％ＣＯ2で維持した。８００個の細胞を、３８４ウェルの平底透明な白（Ｃｏｒｎｉｎｇ、３７０７）上に播種した。
【０１２８】
アッセイ手順：対数期の細胞を収集し、計数する。細胞懸濁液をウェルあたり８００個の細胞（総容量４０μＬ）で３８４ウェルプレートの各ウェルに添加する。周囲ウェルはＰＢＳ緩衝液で満たされる。様々な濃度の試験化合物を２連で添加する（プレートに化合物溶液１０μｌを加える）。アッセイプレートを３７℃／５％ＣＯ2インキュベーター中で７２時間インキュベートする。細胞生存率は、製造業者（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｒｅｆｇ７５７１）によって記載されたＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイを用いて測定した。１００μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）反応液を添加した後、ＰＨＥＲＡｓｔａｒ  Ｐｌｕｓルミノメーターを用いて発光を測定した。データはＰＨＥＲＡｓｔａｒ  Ｐｌｕｓで記録し、データの取得と分析はＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  ＥｘｃｅｌプログラムとＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｖ．６ソフトウェアを使用して行った。
【０１２９】
【表９】
0006588546.tif 000037
【０１３０】
８．実施例８：化合物２−３の存在下でのＣＡＫＩ−１及び７８６−Ｏ細胞株の増殖阻害アッセイ（ＥＣ50、μＭ）
【０１３１】
細胞培養：ＣＡＫＩ−１及び７８６−０細胞株は、１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｄｕｔｓｃｈｅｒ、Ｐ０６−０７１００）及び１０％ウシ胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ、Ｗ３３８７Ｌ）を含有するＲＰＭＩ１６４０培地（Ｄｕｔｓｃｈｅｒ、Ｌ０４９８）中で維持され、５％ＣＯ2、３７℃で培養された。
【０１３２】
細胞生存率の測定：Ｉｎｆｉｎｉｔｅ  Ｆ２００Ｐｒｏルミノメーター（Ｔｅｃａｎ）を使用して製造者（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｒｅｆｇ７５７１）が記載したＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイを用いて細胞生存率を測定した。簡単に説明すると、ウェル当たり９０μＬの培地中で細胞を９６ウェルプレート（透明底部を有する白色）にプレーティングし、アッセイ前に一晩増殖させた。１ウェルあたり播種した細胞の数を以下の表に示す：
【０１３３】
【表１０】
0006588546.tif 000038
【０１３４】
化合物２−３及び２つの参照化合物（ソラフェニブ及びスニチニブ）を異なる濃度で各ウェルに添加し、細胞培養物を７２時間インキュベートした。化合物２−３の分析のために、Ｈ2Ｏをネガティブコントロール（＝未処理）として使用し、すべての濃度をＨ2Ｏの一定割合にて試験した。ソラフェニブ及びスニチニブの分析では、ＤＭＳＯをネガティブコントロール（＝未処理）として使用し、すべての濃度をＤＭＳＯの一定割合で試験した。化合物のインキュベーションの７２時間後、１００μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を各ウェルに加え、発光をＩｎｆｉｎｉｔｅ  Ｆ２００Ｐｒｏ（Ｔｅｃａｎ）を用いて測定した。未処理細胞培養物について得られたシグナルの５０％までの発光値を低下させるのに必要な化合物の用量として、ＥＣ50値を決定した。実験データは、コンピュータプログラム、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｖ５（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｉｎｃ．、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を用いて分析した。全ての実験は、少なくとも３回繰り返し、少なくとも３回の独立した時間繰り返した。
【０１３５】
【表１１】
0006588546.tif 000039
【０１３６】
【表１２】
0006588546.tif 000040
【０１３７】
９．実施例９：肝臓転移性大腸癌細胞及び結腸癌幹細胞の亜集団に対する化合物２−３のインビトロ効果
この研究の目的は、患者から新たに単離された肝転移性結腸癌患者由来細胞、より具体的にはＣＳＣ亜集団に対する化合物２−３の細胞傷害活性をインビトロで評価することであった。インビトロでＣＳＣを追跡するために、現在、わずかな方法が利用可能である。例えば、アルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＡＬＤＨ）活性は、結腸癌における癌性ヒト幹細胞を同定するためのマーカーとして使用することができる。さらに、ＣＳＣは、成長因子を補った無血清培地に懸濁した細胞を培養することにより濃縮することができる。そのような状況では、ＣＳＣのみが「腫瘍スフェア」と呼ばれる多細胞三次元クローンとして増殖した。腫瘍スフェア形成能力を利用することによって、試料中のＣＳＣの量を推定し、ＣＳＣの自己再生能力に対する所与の分子の効果を評価することができる。
【０１３８】
患者由来の腫瘍細胞培養
患者由来肝転移細胞（ＣＰＰ１９、３０、３６及びＣＰＰ４５−臨床記述については表１参照）を、１０％ＦＢＳを含む完全ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）中で維持した。承認されたプロトコルの範囲内で、ＣＨＵ−Ｃａｒｅｍｅａｕ（Ｎｉｍｅｓ、Ｆｒａｎｃｅ）によって提供された生検から細胞を得た。署名されたインフォームドコンセントは、すべての倫理的及び法的側面に従ってサンプルを取得する前に患者から得られた。腫瘍を洗浄し、フラグメント（＜２ｍｍ3）に細かく切り刻み、Ａｃｃｕｍａｘ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）に再懸濁したリベラーゼＨ（０．２６Ｕ／ｍＬ、Ｒｏｃｈｅ）で消化した。３７℃で２時間後、細胞懸濁液を４０μｍメッシュに通し、単一細胞懸濁液を得て、ＦＢＳ、グルタミン、抗生物質及び非必須アミノ酸を補充したＤＭＥＭ培地に播種した。患者由来の腫瘍細胞の単層が形成された際に、トリプシン／ＥＤＴＡを用いて細胞を剥離し、１０％ＦＢＳ（接着細胞の場合）を含むＤＭＥＭ又は合成Ｍ１１培地（スフェア形成の場合）に再懸濁した。細胞を３７℃、５％ＣＯ2の加湿雰囲気下で培養した。
【０１３９】
インビトロ毒性アッセイ
細胞を１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ中のＰ９６ウェルプレートにウェルあたり１０4細胞にて播種した。２４時間後細胞を化合物２−３で処理し、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）により処理後７２時間の細胞生存率を評価した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｖ６（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｉｎｃ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を用いてＥＣ50を計算した。
【０１４０】
Ａｌｄｅｆｌｕｏｒ（商標）アッセイ及び蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）
Ａｌｄｅｆｌｕｏｒ（商標）アッセイ（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、０１７００）は、製造者の指示（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に従って実施した。ＡＬＤＨ陽性細胞は、ＡＬＤＨ阻害剤である、ジエチルアミノベンズアルデヒド（ＤＥＡＢ）有り、及び無しで、同じサンプルと比較することによって同定された。ＡＬＤＨ活性のＦＡＣＳゲーティングは、ＤＥＡＢの存在下で０．１％に設定した。ＭａｃｓＱｕａｎｔを用いて細胞を分析し、Ｃｙｆｌｏｇｉｃソフトウェアを用いてデータを分析した。ＣＰＰ３６細胞は、高い細胞自己蛍光プロファイルが理由で、これらの分析では使用されなかった。
【０１４１】
スフェア形成アッセイ
細胞形成スフェアの評価は、超低付着プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）のＰ９６ウェル中でＭ１１培地に５００細胞／２００μＬウェルにプレーティングした後、測定した。Ｍ１１は、Ｎ２、グルタミン３ｍＭ、グルコース０．６％、インスリン４μｇ／ｍｌ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、ｈＢａｓｉｃ−ＦＧＦ  １０ｎｇ／ｍｌ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、及び２０ｎｇ／ｍｌのｈＥＧＦ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）が補充されたＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）である。５０μｍを超えるスフェアサイズを１０日後に数え、画像フィールド当たりのスフェアの数で表した。ＣＰＰ４５細胞は、腫瘍スフェアを形成することができないため、これらの分析には使用されなかった。
【０１４２】
統計分析
各実験について、データは３つの独立した実験の平均Ｓ．Ｅ．Ｍとして示されている。GｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｖ６（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｉｎｃ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）は、データ分析、すなわちステューデントｔ検定に使用された。
【０１４３】
【表１３】
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【０１４４】
肝転移性結腸直腸癌（ＣＲＣ）患者由来細胞に対する化合物２−３の細胞毒性のインビトロ評価
【０１４５】
製造者（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｒｅｆｇ７５７１）によって記載された、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイは、肝転移性ＣＲＣ患者由来細胞における化合物２−３の細胞毒性を決定するために使用した。未処理対照細胞の細胞生存率は１００％に設定される。細胞をまずＰ９６プレート中１ウェルあたり１０．０００細胞／１００μＬの密度で播種し、５％ＣＯ2を含む加湿雰囲気中、３７℃で２４時間インキュベートした。次いで、細胞を溶媒（０．１％ＤＭＳＯ、未処理対照細胞）又は漸増濃度の化合物２−３でインキュベートした。０．１〜３０μＭの範囲の濃度で７２時間インキュベートした後、化合物２−３は、新鮮な肝転移生検から確立された４つの異なるＣＲＣ患者由来細胞に対して用量反応性細胞傷害活性を示した（表１４）。
【０１４６】
【表１４】
0006588546.tif 000042
【０１４７】
肝転移性ＣＲＣ患者由来細胞からのＡｌｄｅｆｌｕｏｒ（商標）陽性細胞に対する化合物２−３のインビトロ評価
【０１４８】
細胞を最初にＰ９６プレートに１ウェルあたり２５０．０００細胞／１０００μＬの密度で播種し、５％ＣＯ2を含む加湿雰囲気下、３７℃で２４時間インキュベートした。次いで、細胞を溶媒（０．１％ＤＭＳＯ）又は漸増濃度の化合物２−３で７２時間インキュベートした。細胞をトリプシン処理し、回収し、洗浄した。ＭＡＣＳＱｕａｎｔフローサイトメーター（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ｂｉｏｔｅｃ）を用いて、低光散乱及びＳｙｔｏｘ  Ｂｌｕｅ死細胞染色陽性（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に基づいて、無細胞粒子及び死細胞を除外した。ＡＬＤＨブライト細胞の割合は、その後、Ａｌｄｅｆｌｕｏｒ（商標）アッセイ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，０１７００）を用いて定量した。ＡＬＤＨ陽性細胞の正確な同定を確実にするためにＡＬＤＨ阻害剤であるジエチルアミノベンズアルデヒド（ＤＥＡＢ）を添加した。ＡＬＤＨ阻害剤ＤＥＡＢを適用した場合、蛍光を減少させ（左にシフト）、これらの細胞の上限を示すゲートを描いた。このゲートを用いて、ＡＬＤＨ高染色部分集団を選択した。示されるように、１〜３μMの範囲の濃度で７２時間インキュベーション後、化合物２−３は、新鮮な肝転移生検から確立された３つの異なるＣＲＣ患者由来細胞におけるＡｌｄｅｆｌｕｏｒ（登録商標）陽性細胞亜集団に対し有意な（ｐ＜０．００１）及び用量応答細胞傷害活性証明した（図１）。
【０１４９】
化合物２−３は、肝転移性ＣＲＣ患者由来細胞の腫瘍スフェア形成を遮断する。
【０１５０】
インビトロ腫瘍スフェア形成は、これらの細胞のみが自己再生能力を有するために、固形腫瘍又は異種細胞集団における癌幹細胞（ＣＳＣ）の存在を同定するために広く使用されている。本発明者らは、このアッセイをＣＳＣ頻度及び生存率の機能的尺度として使用し、化合物２−３による処理後に腫瘍スフェアを形成する肝転移患者由来細胞の能力を調べた。この目的のために、細胞は、まず、コンフルエント近くまで達するまで、単層として、ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含むＤＭＥＭ完全培地をを用いて、組織培養フラスコ中で増殖させた。細胞をトリプシン処理し、回収し、洗浄してＦＢＳを除去し、４０μｍメッシュの細胞ストレーナに通した。次いで、単一細胞懸濁液を、Ｐ９６ウェル超低接着プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｔｅｗｋｓｂｕｒｙ，ＭＡ）中で、２０ｎｇ／ｍｌのＥＧＦ、２０ｎｇ／ｍｌのｂＦＧＦ及びＮ２サプリメント（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）を添加したＤＭＥＭ−Ｆ１２からなるＣＳＣ培地（すなわちＭ１１培地）で培養した。細胞を１ウェル当たり５００細胞／１００μＬの密度で播種し、３７℃で５％ＣＯ2の加湿雰囲気下でインキュベートした。腫瘍種スフェア形成効率及びスフェアサイズに対する化合物２−３の効果を決定するために、Ｍ１１の最終容量２００μＬに播種してから２４時間後に化合物２−３を２つの濃度（０．３μＭ又は３μＭ）で添加した。１０日後、倒立顕微鏡を用いて腫瘍スフェア形成（＞５０μｍ）についてプレートを検査した。位相コントラスト画像を撮り、スフェアのサイズと数をＩｍａｇｅ  Ｊを用いて画像から手動で測定し、数えた。図２に示されるように、化合物２−３は、肝転移から単離された３種の試験されたＣＲＣ患者由来細胞（ＣＰＰ１９、ＣＰＰ３０及びＣＰＰ３６）における腫瘍スフェア形成における劇的かつ用量依存的な減少を誘導した。事実、腫瘍スフェア形成効率は３μＭの化合物２−３によって有意に抑制された。対照的に、腫瘍スフェアのサイズは、ＣＰＰ１９細胞に対し、３μＭを除いて（ｐ＝０．０２）、処置によって統計学的に減少しなかった。
【０１５１】
実施例１０：化合物２−３の存在下での肝細胞癌（ＨＣＣ）患者由来細胞の増殖阻害アッセイ（ＥＣ50、μＭ）
【０１５２】
患者由来肝細胞癌（ＨＣＣ）細胞は、ＣｒｏｗｎＢｉｏ機関審査委員会の承認を得て、ヒト被験者に関する医学研究に関するヘルシンキ宣言の厳格な遵守の下で、インフォームドコンセントを受けた後に得られた。
【０１５３】
患者由来の肝細胞癌（ＨＣＣ）細胞を、ヒドロコルチゾン（５０ｎＭ）、）表皮成長因子（２０ｎｇ／ｍｌ）、β線維芽細胞増殖因子（１０ｎｇ／ｍｌ）、ヘパリン（２ｐｇ／ｍｌ）ＩＴＳ液体培地補充物（１Ｘ）及び非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ、０．０１ｍＭ、１Ｘ）を含有する初代細胞培養用（ＰＣＳ）補充液と共に、１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、１５０７Ｏ−０６３）を含む、表１５に記載のそれぞれの培地中で維持した。初代細胞を３７℃、５％ＣＯ2の加湿雰囲気（９５％相対湿度）で培養した。
【０１５４】
【表１５】
0006588546.tif 000043
【０１５５】
細胞増殖阻害アッセイは、製造者（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｒｅｆｇ７５７１）によって記載されたＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイを用いて、実施例５において先に記載したように行った。ウェルあたりに播種した細胞の数（９６ウェル平底クリアボトムブラックポリスチレンＴＣ−処理マイクロプレート、Ｃａｔ＃３３４０、Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標））は、表１６チュに記載されている。バックシール黒色ステッカー（Ｃａｔ＃６００５１８９、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）の発光を記録する前に、各プレートの底に置いた。
【０１５６】
【表１６】
0006588546.tif 000044
【０１５７】
実験データは、コンピュータプログラムＧｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  Ｖ  ５．０（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｉｎｃ．Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を用いて分析し、ＥＣ50値は、吸光度値を、ビヒクル処理細胞培養で得られたシグナルの５０％に減少させるのに必要な化合物の用量として決定し、少なくとも３回の独立した実験の平均であった。
【０１５８】
７２時間のインキュベーション後、化合物２−３は、８種の異なるＨＣＣ患者由来細胞に対する用量反応性細胞傷害活性を示した（表１７参照）。
【０１５９】
【表１７】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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