(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）の治療のための、アクチビンＡに対する抗体を含む、医薬組成物。
【請求項２】
前記抗体が、配列番号：１及び５、配列番号：９及び１３、又は配列番号：１８及び１７で示される重鎖及び軽鎖可変領域を含む抗体との結合を競合する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記抗体が、配列番号：１及び５、配列番号：９及び１３、又は配列番号：１８及び１７の重鎖及び軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記抗体が、キメラ抗体、ベニヤ化抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記抗体がインタクトな抗体である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記抗体がヒトκＩｇＧ１抗体である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記抗体がヒトκＩｇＧ１抗体である、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記抗体がヒトκＩｇＧ１抗体である、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記抗体がヒトκＩｇＧ１抗体である、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記抗体がヒトκＩｇＧ１抗体である、請求項５に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の定めにより、２０１４年９月１２日に出願された米国仮特許出願第６２／０４９，８６９号及び２０１５年４月１日に出願された同第６２／１４１，７７５号の利益を主張し、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）は、早期発症、骨格筋及び関連する結合組織の偶発性かつ進行性の骨化を特徴とする常染色体優性遺伝疾患である。ＦＯＰは、ＡＣＶＲ１（ＡＬＫ２）の細胞内ドメインにおける突然変異によって生じ、大部分においてアルギニン２０６をヒスチジン（Ｒ２０６Ｈ）に変化させる（非特許文献１）。ＡＣＶＲ１は、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）のＩ型受容体である。特に、Ｒ２０６Ｈ突然変異は、活性化に対する受容体の感受性を増加させ、サイレンシングに対する耐性を向上させる。ＦＯＰに対して有効な内科的治療は判明していない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Ｐｉｇｎｏｌｏ，Ｒ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．２０１１，Ｏｒｐｈａｎｅｔ  Ｊ．Ｒａｒｅ  Ｄｉｓ．６：８０
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）を患う被験者に、有効なレジメンのアクチビン受容体２Ａ型（ＡＣＶＲ２Ａ）及び／又はアクチビン受容体２Ｂ型（ＡＣＶＲ２Ｂ）アンタゴニストを投与することを含む、ＦＯＰの治療方法を提供する。いくつかの方法では、このアンタゴニストは、ＡＣＶＲ２Ａ又はＡＣＶＲ２Ｂ細胞外ドメインを含む。いくつかの方法では、このアンタゴニストは、ＡＣＶＲ２Ａ又はＡＣＶＲ２Ｂ  Ｆｃ融合タンパク質を含む。いくつかの方法では、Ｆｃ融合タンパク質のアイソタイプは、ヒトＩｇＧ１である。いくつかの方法では、このアンタゴニストは、ＡＣＶＲ２Ｂ細胞外ドメインに結合された、ＡＣＶＲ２Ａ細胞外ドメインを含む。いくつかの方法では、このアンタゴニストは、Ｆｃドメインを更に含む。いくつかの方法では、このアンタゴニストは、第１のＦｃドメインと融合したＡＣＶＲ２Ａ細胞外ドメインと、第２のＦｃドメインと融合したＡＣＶＲ２Ｂ細胞外ドメインと、を含み、第１及び第２のＦｃドメインは、互いと複合化している。いくつかの方法では、このアンタゴニストは、それぞれＦｃドメインと融合したＡＣＶＲ２ＡとＡＣＶＲ２Ｂ細胞外ドメインとの間にリンカーを含む。いくつかの方法では、このアンタゴニストは、ＡＣＶＲ２Ａ細胞外ドメインと、ＡＣＶＲ２Ｂ細胞外ドメインと、Ｆｃドメインと、を含む、融合タンパク質である。いくつかの方法では、有効なレジメンのＡＣＶＲ２Ａアンタゴニスト及びＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストが投与される。いくつかの方法では、ＡＣＶＲ２Ａアンタゴニストは、ＡＣＶＲ２Ａ  Ｆｃ融合タンパク質であり、ＡＣＶＲ２ＢアンタゴニストはＡＣＶＲ２Ｂ  Ｆｃ融合タンパク質である。いくつかの方法では、このアンタゴニストは、ＡＣＶＲ２Ａ又はＡＣＶＲ２Ｂに対する抗体である。いくつかの方法では、被験者は、ＩＩ型糖尿病、筋ジストロフィ、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、又は骨粗鬆症を患っておらず、これらのリスクもない。
【０００５】
本発明は、ＦＯＰを患う被験者に、有効なレジメンのアクチビン受容体１型（ＡＣＶＲ１）アンタゴニストを投与することを含む、ＦＯＰの治療方法を更に提供する。いくつかの方法では、このアンタゴニストは、ＡＣＶＲ１細胞外ドメインを含む。いくつかの方法では、このアンタゴニストは、ＡＣＶＲ１融合タンパク質を含む。いくつかの方法では、Ｆｃ融合タンパク質のアイソタイプは、ヒトＩｇＧ１である。いくつかの方法では、このアンタゴニストは、ＡＣＶＲ１に対する抗体である。
【０００６】
本発明は、進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）を患う被験者に、アクチビン受容体１型（ＡＣＶＲ１）アンタゴニストと共に有効なレジメンのアクチビン受容体２Ａ型（ＡＣＶＲ２Ａ）及び／又はアクチビン受容体２Ｂ型（ＡＣＶＲ２Ｂ）アンタゴニストを投与することを含む、ＦＯＰの治療方法を更に提供する。いくつかの方法では、このアンタゴニストは、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／又はＡＣＶＲ２Ｂ細胞外ドメインを含む。いくつかの方法では、このアンタゴニストは、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／又はＡＣＶＲ２Ｂ  Ｆｃ融合タンパク質を含む。いくつかの方法では、Ｆｃ融合タンパク質のアイソタイプは、ヒトＩｇＧ１である。いくつかの方法では、このアンタゴニストは、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／又はＡＣＶＲ２Ｂに対する抗体である。
【０００７】
本発明は、進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）を患う被験者に、有効なレジメンのアクチビンＡに対する抗体を投与することを含む、ＦＯＰの治療方法を更に提供する。任意選択的に、この抗体は、Ｈ４Ｈ１０４４６Ｐ、Ｈ４Ｈ１０４３０Ｐ、又はＡ１と称される抗体の重鎖及び軽鎖可変領域を含む抗体との結合を競合する。任意選択的に、この抗体は、Ｈ４Ｈ１０４４６Ｐ、Ｈ４Ｈ１０４３０Ｐ、又はＡ１と称される抗体の重鎖及び軽鎖可変領域を含む。任意選択的に、この抗体は、キメラ抗体、ベニヤ化（veneered）抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体である。任意選択的に、この抗体は、インタクトな抗体である。任意選択的に、この抗体は、ヒトκＩｇＧ１抗体である。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】ＡＣＶＲ２Ａ−Ｆｃ／ＡＣＶＲ２Ｂ−Ｆｃ治療を含む及び含まない、タモキシフェン投与開始６週間後の異所性骨形成を示す、マウスのマイクロＣＴデータを示す。対照ｍＦＣ治療を受けたマウス１０例中９例（１番〜９番）は、タモキシフェン投与６週間後に異所性骨形成を示した。最もよく見られる位置は、後肢、頸部、及び胸骨である。ＡＣＶＲ２Ａ−Ｆｃ／ＡＣＶＲ２Ｂ−Ｆｃで治療を受けたマウス１１例中２例（１２番〜１４番）は、タモキシフェン投与６週間後に異所性骨形成を示した。これら２例の異所性骨病変は、ｍＦｃ治療を受けたグループの病変のサイズと比較して小さく、どちらも胸骨に位置した。
【図２】ＬＤＮ２１２８５４治療を含む又は含まない、タモキシフェン投与開始４週間後の異所性骨形成を示す、マウスのマイクロＣＴデータを示す。１番〜８番は、タモキシフェン＋ビヒクル治療を受けたマウスに対応する。大型の異所性骨結節（ectopic bone nodule）が、１番、２番、３番、４番、５番、及び７番のマウスに形成され、小型の異所性骨結節が６番及び８番のマウスに形成された。９番から１６番は、タモキシフェン＋ＬＤＮ２１２８５４治療を受けたマウスに対応する。小さい異所性骨結節が、９番、１２番、及び１３番のマウスに形成された。１０番、１１番、１４番、１５番、又は１６番のマウスでは、異所性骨結節を検出できなかった。
【図３】アクチビンＡに対する抗体、アイソタイプ適合の無関係対照抗体、及びＡＣＶＲ２Ａ−Ｆｃで治療した、異所性骨形成傾向のマウスのマイクロＣＴデータを示す。アクチビンＡに対する抗体は、異所性骨結節の形成を最も効果的に阻害した。
【図４】アクチビンＡ対する抗体、アイソタイプ適合の無関係対照抗体、及びＡｃｖｒ２ａ／Ａｃｖｒ２ｂに対する抗原で治療した、異所性骨形成傾向のマウスのマイクロＣＴデータを示す。アクチビンＡに対する抗体及びＡｃｖｒ２ａ／Ａｃｖｒ２ｂに対する抗体は、異所性骨結節の形成を阻害した。
【図５】アイソタイプ適合の無関係対照抗体と比較して様々な用量のアクチビンＡに対する抗体で治療した異所性骨形成傾向のマウスのマイクロＣＴデータを示す。１ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇの用量では、試験した用量で１０ｍｇ／ｋｇが最も効果的であることが判明した。
【０００９】
定義
アンタゴニストは、通常、単離形態で提供される。つまり、アンタゴニストは、通常、少なくとも５０ｗ／ｗ％純度の干渉タンパク質及びその産物又精製から生じた他の混入物質であるが、アンタゴニストが過度の薬学的に許容可能な担体又はその使用を促進することを意図する他のビヒクルと組み合わされる可能性を排除しない。場合によっては、アンタゴニストは、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、又は９９ｗ／ｗ％の純度の干渉タンパク質及び産生又は精製から生じた混入物質である。
【００１０】
アミノ酸置換を保存的又は非保存的として分類する目的で、アミノ酸は、以下のように分類する。グループＩ（疎水性側鎖）：ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；グループＩＩ（中性親水性側鎖）：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；グループＩＩＩ（酸性側鎖）：ａｓｐ、ｇｌｕ；グループＩＶ（塩基性側鎖）：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；グループＶ（鎖方向に影響する残基）：ｇｌｙ、ｐｒｏ；及びグループＶＩ（芳香性側鎖）：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。保存的置換には、同一クラスのアミノ酸間での置換が含まれる。非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを、別のメンバーと交換することからなる。
【００１１】
配列同一性パーセントは、可変領域に関するＫａｂａｔ番号付与規則又は定常領域に関するＥＵ番号付与規則によって最大限にアライメントした抗体配列で決定される。他のタンパク質の場合、配列同一性は、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ７．０（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）のＢＥＳＴＦＩ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡなどアルゴリズムを使用してデフォルトのギャップパラメータで配列をアライメントすることによって、又はインスペクションと最適なアライメントによって決定され得る。アライメント後、被験者の抗体領域（例えば、重鎖又は軽鎖の成熟可変領域全体）を参照抗体の同じ領域と比較する場合、被験者と参照抗体領域との配列同一性パーセントは、ギャップを除外して、被験者及び参照抗体領域の両方において同一アミノ酸が占める位置の数を、両領域のアライメントした位置の総数で割って、１００を乗じてパーセンテージに変換して得られる。
【００１２】
１つ又は２つ以上の列挙された要素を「含む」組成物又は方法は、明確に列挙されていない他の要素を含み得る。例えば、抗体を含む組成物は、その抗体を単独で、又は他の成分と組み合わせて含有し得る。
【００１３】
ヒト化抗体は、遺伝子操作を受けた抗体であり、非ヒト「ドナー」抗体からのＣＤＲは、ヒト「受容体」抗体配列に移植される（例えば、米国特許第５，５３０，１０１号及び同第５，５８５，０８９号（Ｑｕｅｅｎ）；同第５，２２５，５３９号（Ｗｉｎｔｅｒ）；同第６，４０７，２１３号（Ｃａｒｔｅｒ）；同第５，８５９，２０５号及び同第６，８８１，５５７号（Ａｄａｉｒ）；同第６，８８１，５５７号（Ｆｏｏｔｅ）を参照）。受容体抗体配列は、例えば、成熟ヒト抗体配列、かかる配列の合成体、ヒト抗体配列のコンセンサス配列、又は生殖細胞系領域配列であり得る。したがって、ヒト化抗体は、完全に又は実質的にドナー抗体及び可変領域フレームワーク配列からの一部又は全てのＣＤＲと、存在する場合は、完全に又は実質的にヒト抗体配列からの定常領域と、を有する抗体である。同様に、ヒト化重鎖は、完全に又は実質的にドナー抗体重鎖及び重鎖可変領域フレームワーク配列からの少なくとも１つ、２つ、通常、３つのＣＤＲと、存在する場合は、完全に又は実質的にヒト重鎖可変領域フレームワーク及び定常領域配列からの重鎖定常領域と、を有する。同様に、ヒト化軽鎖は、完全に又は実質的にドナー抗体軽鎖及び軽鎖可変領域フレームワーク配列からの少なくとも１つ、２つ、通常、３つ全てのＣＤＲと、存在する場合は、完全に又は実質的にヒト軽鎖可変領域フレームワーク及び定常領域配列からの軽鎖定常領域と、を有する。ナノボディ及びｄＡｂ以外では、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖と、ヒト化軽鎖と、を含む。対応残基の少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％（Ｋａｂａｔによって定義）がそれぞれのＣＤＲ間で一致するとき、ヒト化抗体のＣＤＲは、実質的に非ヒト抗体の対応するＣＤＲからのものである。抗体鎖の可変領域フレームワーク配列又は抗体鎖の定常領域は、対応残基の少なくとも８５、９０、９５、又は１００％（Ｋａｂａｔによって定義）が同一であるとき、実質的にそれぞれヒト可変領域フレームワーク配列又はヒト定常領域からのものである。
【００１４】
ヒト化抗体は、多くの場合、マウス抗体からの６つのＣＤＲ（好ましくはＫａｂａｔによって定義）を全て組み込むが、全てのＣＤＲよりも少ないＣＤＲで（例えば、少なくとも３つ、４つ、又は５つの、マウス抗体からのＣＤＲ）で構成され得る（例えば、Ｐａｓｃａｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６，２００２；Ｖａｊｄｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３２０：４１５〜４２８，２００２；Ｉｗａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６：１０７９〜１０９１，１９９９；Ｔａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１６４：１４３２〜１４４１，２０００）。
【００１５】
キメラ抗体は、非ヒト抗体（例えば、マウス）の軽鎖及び重鎖の成熟可変領域がヒト軽鎖及び重鎖定常領域と組み合わされる抗体である。かかる抗体は、実質的に又は完全に、マウス抗体の結合特異性を保持し、約２／３ヒト配列である。
【００１６】
ベニヤ化抗体は、一部、及び通常、全てのＣＤＲと非ヒト抗体の一部の非ヒト可変領域フレームワーク残基と、を保持するが、Ｂ細胞エピトープ又はＴ細胞エピトープに寄与し得る他の可変領域フレームワーク残基、例えば、露出した残基（Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９，１９９１）を、ヒト抗体配列の対応位置からの残基で置換する、１種のヒト化抗体である。結果として、抗体は、ＣＤＲが完全に又は実質的に非ヒト抗体からのものであり、非ヒト抗体の可変領域フレームワークは、置換によってよりヒトに似せられている。
【００１７】
ヒト抗体は、ヒトから単離され得る、又は別の方法でヒト免疫グロブリン遺伝子の発現から生じる（例えば、トランスジェネリックマウス内で、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、又はファージディスプレイによって）。ヒト抗体の作製法としては、Ｏｅｓｔｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｓ  ｍｕｏｍａ  ２：３６１〜３６７（１９８３）；米国特許第４，６３４，６６４号（Ｏｅｓｔｂｅｒｇ）；及び同４，６３４，６６６号（Ｅｎｇｌｅｍａｎ）のトリオーマ法が挙げられる。モノクローナル抗体はまた、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．（Ｍｕｒｐｈｙ，ＰＮＡＳ  １１１  ｎｏ．１４，５１５３〜５１５８（２０１４））からのＶｅｌｏｃＩｍｍｕｎｅ（登録商標）マウス、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２５，１１３４〜１１４３（２００７））からのＸｅｎｏｍｏｕｓｅ、又はＭｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．（Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１８１，６９〜９７（２００８））からのＨｕＭＡｂマウス；国際公開第９３／１２２２７号（Ｌｏｎｂｅｒｇら、１９９３）；米国特許第５，８７７，３９７号、同第５，８７４，２９９号、同第５，８１４，３１８号、同第５，７８９，６５０号、同第５，７７０，４２９号、同第５，６６１，０１６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，５４５，８０６号、Ｎａｔｕｒｅ１４８，１５４７〜１５５３（１９９４），Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４，８２６（１９９６）、国際公開第９１／１０７４１号（Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ、１９９１）などヒト免疫系遺伝子を有するトランスジェネリックマウスによって産生され得る。ヒト抗体はまた、ファージディスプレイ法によって産生され得る（例えば、国際公開第９１／１７２７１号（Ｄｏｗｅｒら）及び同第９２／０１０４７号（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら）、米国特許第５，８７７，２１８号、同第５，８７１，９０７号、同第５，８５８，６５７号、同第５，８３７，２４２号、同第５，７３３，７４３号、及び同第５，５６５，３３２号を参照）。
【００１８】
アンタゴニストが、由来する親抗体の特性を保持すると言われるとき、完全保持又は部分的保持であり得る。活性の完全保持とは、アンタゴニストの活性が、実験誤差の範囲内で同一であるか、由来する分子の活性よりも大きいことを意味する。活性の部分的保持とは、活性が陰性対照の背景レベルよりも著しく高く（すなわち、実験誤差を超える）、由来する分子の対応する活性の好ましくは少なくとも５０％であることを意味する。
【００１９】
２個の抗体は、一方の抗体の結合を低減するか、排除する抗体内の全てのアミノ酸突然変異が、他方の抗体の結合を低減するか、排除する場合、同一のエピトープを有する。２個の抗体は、一方の抗体の結合を低減するか、排除する一部のアミノ酸突然変異が、他方の抗体の結合を低減するか、排除する場合、重複エピトープを有する。
【００２０】
抗体間の競合は、試験下の抗体が共通抗原に対する参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイによって測定される（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５０：１４９５，１９９０を参照）。試験抗体は、過剰な試験抗体（例えば、少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍、又は１００倍）が、参照抗体の結合を少なくとも５０％だが、好ましくは７５％、９０％、又は９９％（競合結合アッセイでの測定時）阻害する場合、参照抗体と競合する。競合アッセイによって識別される抗体（競合抗体）としては、参照抗体と同一のエピトープに結合する抗体、及び立体障害を生じさせるために、参照抗体によって結合されたエピトープに十分に近位の隣接エピトープに結合する抗体が挙げられる。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
Ｉ．概要
進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）の治療方法を提供する。かかる方法は、ＦＯＰを患う被験者に、有効なレジメンのアクチビン受容体２Ａ型（ＡＣＶＲ２Ａ）及び／若しくはアクチビン受容体２Ｂ型（ＡＣＶＲ２Ｂ）アンタゴニスト、並びに／又はアクチビン受容体１型（ＡＣＶＲ１）アンタゴニスト、並びに／又はアクチビンＡアンタゴニストを投与することを含む。かかるアンタゴニストは、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２Ｂ、及び／又はＡＣＶＲ１の１つ又は２つ以上の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）と、免疫グロブリン重鎖のＦｃドメインと、を含む融合タンパク質を含む。ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２Ｂ、ＡＣＶＲ１、又はアクチビンＡの抗体アンタゴニストも提供する。
【００２２】
ＩＩ．ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２Ｂ、及びアクチビンＡ
リガンドのトランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦβ）スーパーファミリーとしては、例えば、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）及び成長分化因子（ＧＤＦ）が挙げられる。これらのリガンドの受容体は、Ｉ型及びＩＩ型の膜貫通型セリン受容体／スレオニンキナーゼ受容体で構成される、異種受容体複合体である。Ｉ型受容体の例としては、アクチビン受容体Ｉ型Ａ（ＡＣＴＲＩＡ、ＡＣＶＲ１、又はＡＬＫ２）、ＢＭＰ受容体Ｉ型Ａ、及びＢＭＰ受容体Ｉ型Ｂが挙げられる。ＩＩ型受容体の例としては、アクチビン受容体ＩＩＡ型及びＩＩＢ型（ＡＣＴＲＩＩＡ又はＡＣＶＲ２Ａ、及びＡＣＴＲＩＩＢ又はＡＣＶＲ２Ｂ）並びにＢＭＰ受容体ＩＩ型が挙げられる。ＴＧＦβスーパーファミリーのリガンドは、異なるＩ型及びＩＩ型受容体に対してそれぞれ異なる親和性を有する。
【００２３】
Ｉ型及びＩＩ型受容体のどちらも、細胞外リガンド結合ドメイン（ＥＣＤ）と、細胞内セリン／スレオニンキナーゼドメインと、を有する。加えて、Ｉ型受容体は、キナーゼドメイン及びキナーゼドメイン内のＬ４５ループに先立ってグリシン／セリンリッチ領域（ＧＳボックス）を有する。どちらの受容体も、リガンドが、Ｓｍａｄ及び非Ｓｍａｄシグナル伝達経路など下流シグナル伝達経路を活性化させるように連携する。活性化としては、リガンド結合、リガンド−受容体オリゴマー形成、及びＩＩ型受容体キナーゼによるＩ型受容体のＧＳボックスのリン酸転移が挙げられる。ＩＩ型受容体キナーゼは構成的に活性であり、リガンド結合及びＩ型受容体の活性化において役割を担う。
【００２４】
アクチビンＡ受容体Ｉ型としても知られるＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ１Ａ、ＡＣＶＲＬＫ２、又はＡＬＫ２は、リガンドのＴＧＦβスーパーファミリーに対するＩ型受容体である。ＡＣＶＲ１は、セリン／スレオニンキナーゼ活性を有し、Ｓｍａｄタンパク質をリン酸化し、下流シグナル伝達経路を活性化する。ＡＣＶＲ１は、骨格筋及び軟骨など体の多くの組織に存在し、骨及び筋肉の成長及び発達を促進する。本明細書の他箇所に記載するように、ＡＣＶＲ１遺伝子における特定の突然変異によりＦＯＰが生じる。ＡＣＶＲ１活性の例としては、リガンドに結合する能力、ＩＩ型受容体と複合体を形成する能力、又はＳｍａｄ経路など下流シグナル伝達経路を活性化させる能力が挙げられる。
【００２５】
アクチビン受容体ＩＩ型としても知られるＡＣＶＲ２は、リガンドのＴＧＦβスーパーファミリーに対するＩＩ型受容体である。少なくとも２種類のＡＣＶＲ２受容体、例えば、アクチビン受容体ＩＩＡ型（ＡＣＶＲ２Ａ又はＡＣＴＲＩＩＡ）及びアクチビン受容体ＩＩＢ型（ＡＣＶＲ２Ｂ又はＡＣＴＲＩＩＢ）が存在する。ＡＣＶＲ２への言及は、ＡＣＶＲ２Ａ及びＡＣＶＲ２Ｂのいずれか、又はその両方を含む。ＡＣＶＲ２Ａ及びＡＣＶＲ２Ｂは、骨格筋、胃、心臓、子宮内膜、睾丸、前立腺、卵巣、及び神経組織など多数の組織で発現し得る。
【００２６】
リガンド結合時には、ＡＣＶＲ２受容体は、ＡＣＶＲ１などＩ型受容体と複合体を形成し、Ｉ型受容体のＧＳボックスをリン酸化し、したがって、Ｉ型受容体のキナーゼ活性を増強させる。ＡＣＶＲ２Ａ及びＡＣＶＲ２Ｂ活性の例としては、リガンドに結合する能力、Ｉ型受容体と複合体を形成する能力、又はＩ型受容体をリン酸化する能力が挙げられる。
【００２７】
ヒトＡＣＶＲ２Ａの例示的形態は、Ｓｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ２７０３７を有する。残基１〜１９はシグナルペプチドであり、残基２０〜１３５は細胞外ドメインであり、残基５９〜１１６はアクチビンＩ型及びＩＩ型受容体ドメインであり、残基１３６〜１６１は膜貫通ドメインであり、残基１６２〜５１３は細胞質ドメインである。ヒトＡＣＶＲ２Ｂの例示的な形態には、Ｓｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔ番号Ｑ１３７０５が割り当てられる。残基１〜１８はシグナル配列であり、残基１９〜１３７は細胞外ドメインであり、残基２７〜１１７はアクチビンＩ型及びＩＩ型受容体ドメインであり、残基１３８〜１５８は膜貫通ドメインであり、残基１５９〜５１２は細胞質ドメインである。ヒトＡＣＶＲ１の例示的形態は、Ｓｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ０４７７１を有する。残基１〜２０はシグナル配列であり、残基２１〜１２３は細胞外ドメインであり、残基３３〜１０４はアクチビンＩ型及びＩＩ型受容体ドメインであり、残基１２４〜１４６は膜貫通ドメインであり、残基１４７〜５０９は細胞質ドメインである。ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及びＡＣＶＲ２Ｂへの言及は、これらの例示的形態、既知のアイソフォーム及びその多型（Ｓｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔデータベースに含まれているものなど）、他種からの同族形態、及び例示した形態と少なくとも９０、９５、９６、９７、９８、又は９９％の配列同一性を有する他の変種を含む。
【００２８】
上記で定めた、例示した配列以外のＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２Ｂ、及びＡＣＶＲ１の形態の残基は、対応する例示した配列との最大限のアライメントによって番号が付与され、したがって、アライメントされた残基には同一番号が割り当てられる。例示した配列からの置換は、保存的置換又は非保存的置換であり得る。ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、又はＡＣＶＲ２Ｂへの言及は、インタクトな細胞外ドメイン（例えば、それぞれＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２Ｂ、及びＡＣＶＲ１の残基２０〜１３５、１９〜１３７、又は２１〜１２３）、又は膜貫通部分及び細胞質部分を含まない若しくは実質的に含まないその一部を含む。細胞外ドメインの一部は、インタクトな細胞外ドメインの十分な残基を有して、インタクトな細胞外ドメインに結合し、それによって関連受容体（例えば、それぞれＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２Ｂ、及びＡＣＶＲ１の残基５９〜１１６、２７〜１１７、又は３３〜１０４）に拮抗する、少なくとも１個のリガンド又はカウンター受容体を結合する。
【００２９】
ヒト内のアクチビンＡは、ホモ二量体タンパク質又はヘテロ二量体タンパク質として存在し得る。ホモ二量体タンパク質は、ホモ二量体βＡサブユニット対を含む。ヘテロ二量体タンパク質は、βサブユニット及びβＢ、βＣ、又はβＥサブユニット（すなわち、βＡ  βＢ、βＡ  βＣ、又はβＡ  βＥ）を含む。これらのサブユニットは、シグナルペプチド、プロペプチド、及び成熟ポリペプチドなど前駆体ポリペプチドとしてそれぞれ発現する。ヒトβＡサブユニット前駆体の例示的形態は、Ｓｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔ  Ｐ０８４７６と称される長さ４２６のアミノ酸のポリペプチドであり、残基１〜２０はシグナルペプチドであり、残基２１〜３１０はプロペプチドであり、残基３１１〜４２６は成熟ポリペプチドである。βＢサブユニット前駆体ポリペプチドの例示的形態はＳｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔ  Ｐ０９５２９と称され、残基１〜２８はシグナルペプチドであり、残基２９〜２９２はプロペプチドであり、残基２９３〜４０７は成熟ポリペプチドである。βＣサブユニットの例示的形態はＳｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔ  Ｐ５５１０３と称され、残基１〜１８はシグナルペプチドであり、残基１９〜２３６はプロペプチドであり、残基２３７〜３５２は成熟ポリペプチドである。βＥサブユニット前駆体の例示的形態は、Ｓｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔ  Ｐ５８１６６と称され、残基１〜１９はシグナルペプチドであり、残基２０〜２３６はプロペプチドであり、残基２３７〜３５０は成熟ポリペプチドである。これらの配列のいくつかの変異体は、Ｓｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔデータベースに含まれているものとして既知である。アクチビンＡへの言及は、βＡホモ二量体、βＡ  βＢ、βＡ  βＣ、及びβＡ  βＥヘテロ二量体形態、並びにこれらのサブユニット、並びにこれらの前駆体のいずれかを含み、サブユニットは提供された例示的Ｓｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔ配列又はこれらの配列の他の天然由来のヒト形態によって定められたプロペプチド及び／又はシグナルペプチドに結合される。アクチビンＡは、ＡＣＶＲ２Ａ又はＡＣＶＲ２Ｂへの結合を介してシグナル伝達を行うが、ＡＣＶＲ１に対するリガンドであることは知られていない。
【００３０】
ＩＩＩ．ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２Ｂのアンタゴニスト
ＦＯＰ治療用にＩ型受容体ＡＣＶＲ１及びＩＩ型受容体ＡＣＶＲ２タンパク質（例えば、ＡＣＶＲ２Ａ及び／又はＡＣＶＲ２Ｂ）のアンタゴニストを提供する。かかるアンタゴニストは、受容体に結合することによって直接的に（ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、又はＡＣＶＲ２Ｂに対する抗体の場合）、又はリガンド若しくはカウンター受容体に結合し、機構の中でも特にＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、若しくはＡＣＶＲ２Ｂへのリガンド又はカウンター受容体の結合を阻害することによって間接的に（ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、又はＡＣＶＲ２Ｂの融合タンパク質の場合）拮抗できる。ＡＣＶＲ２Ａ及びＡＣＶＲ２Ｂのアンタゴニストはまた、アクチビンＡに結合し得る。
【００３１】
本明細書で提供するＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、又はＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストは、アンタゴニストを受容しない対照細胞又は動物モデルと比較して、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／又はＡＣＶＲ２Ｂの活性を少なくとも１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％以上阻害し得るか、低減し得る。
【００３２】
ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２Ｂの任意のアンタゴニストは、ＦＯＰの治療方法で使用できる。アンタゴニストは、例えば、例えば、細胞外ドメイン、アンタゴニスト抗体、又は小分子阻害剤などＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、又はＡＣＶＲ２Ｂポリペプチドを含み得る。
【００３３】
Ａ．ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及びＡＣＶＲ２Ｂポリペプチドの細胞外ドメイン
アンタゴニストは、それぞれＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及びＡＣＶＲ２Ｂのうちの少なくとも１つの活性を阻害するのに有効である、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及びＡＣＶＲ２Ｂタンパク質、並びにこれらのフラグメントを含む。かかるアンタゴニストは、通常、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、若しくはＡＣＶＲ２Ｂの細胞外ドメイン、又はこれらの一部を含む。好ましくは、かかる細胞外ドメインは、膜貫通及び細胞質領域を完全に含まない、又は実質的に含まない（すなわち、これらの領域からの残っている全残基は、細胞外ドメインの機能に有意な作用を及ぼさない）。換言すると、かかるアンタゴニストのＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２Ｂ、又はＡＣＶＲ１成分は、上記で定めたようにＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２Ｂ、若しくはＡＣＶＲ１の細胞外ドメインの全体若しくはその一部からなる、又は本質的になる。かかるアンタゴニストは、以下で詳述するように、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２Ｂ、又はＡＣＶＲ１とは異なる他の成分を含んでも、含まなくてもよい。膜貫通及び細胞質ドメインを含まない、又は実質的に含まないかかる細胞外ドメインは、可溶性である。かかる細胞外ドメインは、可溶性リガンド又はカウンター受容体に結合し、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、又はＡＣＶＲ２Ｂ細胞表面受容体に結合しているリガンド又はカウンター受容体と効果的に競合し、したがって、ｉｎ  ｖｉｖｏでのリガンド又はカウンター受容体の入手可能性を調整（低減）することによって、アンタゴニストとして機能できる。
【００３４】
可溶性細胞外ドメインは、最初に、発現の過程で分割されるシグナル配列を用いて発現し得る。シグナル配列は、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、又はＡＣＶＲ２Ｂの天然シグナル配列（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第７，７０９，６０５号などに記載）であり得る、又は異なるタンパク質からのシグナル配列（ミツバチメリチン（ＨＢＭ）又は組織プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）など）であり得る。あるいは、可溶性細胞外ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、又はＡＣＶＲ２Ｂポリペプチドは、シグナル配列なしで合成され得るか、発現し得る。
【００３５】
ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及びＡＣＶＲ２ＢのＥＣＤ又はリガンド結合ドメインは、マウス及びヒトなどの種の中で極めて高度に保存される。ＥＣＤは、システインリッチ領域と、Ｃ末端領域と、を含む。ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及びＡＣＶＲ２ＢのＥＣＤは、例えば、アクチビンＡ、ミオスタチン（ＧＤＦ−８）、ＧＤＦ−１１、及びＢＭＰなど多様なＴＧＦβファミリーリガンドに結合する。例えば、Ｓｏｕｚａ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ２２（１２）：２６８９〜２７０２を参照されたい。
【００３６】
ＡＣＶＲ２Ａ及びＡＣＶＲ２Ｂポリペプチド並びに可溶性ＡＣＶＲ２Ａ及びＡＣＶＲ２Ｂポリペプチドの例としては、それぞれが参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第７，８４２，６３３号、同第７，９６０，３４３号、同第７，７０９，６０５号に開示されているものが挙げられる。
【００３７】
ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、又はＡＣＶＲ２ＢポリペプチドのＥＣＤは、変異体ポリペプチドが改変されたリガンド結合特性（例えば、結合特異性又は親和性）を有するように変異し得る。一部の変異体ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、又はＡＣＶＲ２Ｂポリペプチドは、特定のリガンドに対して改変された（例えば、増減した）結合親和性を有する。変異体は、自然発生のＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、又はＡＣＶＲ２Ｂ配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、生物活性を保持し、したがって、本明細書の他箇所に記載するように、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、又はＡＣＶＲ２Ｂ活性を有する。ＡＣＶＲ２Ａ及びＡＣＶＲ２Ｂの活性変異体及びフラグメントは、例えば、それぞれが参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第７，８４２，６３３号、同第７，９６０，３４３号、及び同第７，７０９，６０５号に記載されている。
【００３８】
ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、又はＡＣＶＲ２Ｂ活性を測定するアッセイは、例えば、米国特許第７，８４２，６３３号、同第７，９６０，３４３号、及び同第７，７０９，６０５号に記載されている。例えば、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、又はＡＣＶＲ２Ｂポリペプチド変異体は、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、又はＡＣＶＲ２Ｂ受容体タンパク質にリガンドを結合する能力又はこれらへのリガンドの結合を阻止する能力をスクリーニングできる。
【００３９】
Ｂ．融合タンパク質
上記のＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及びＡＣＶＲ２Ｂポリペプチドは、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／又はＡＣＶＲ２Ｂポリペプチドの少なくとも一部と、１つ又は２つ以上の融合ドメインと、を有する、融合タンパク質として発現し得る。
【００４０】
融合ドメインとしては、免疫グロブリン重鎖定常領域（Ｆｃ）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、プロテインＡ、プロテインＧ、又は融合タンパク質の安定化、単離、若しくは多量体化に有用であり得る任意の融合ドメインが挙げられる。
【００４１】
免疫グロブリン重鎖のＦｃドメインは、融合タンパク質にとって望ましいドメインである。免疫グロブリンのＦｃ部分との融合は、広範囲のタンパク質に望ましい薬物速度論的特性（例えば、安定性及び／又はタンパク質の血中半減期の増加）をもたらす。したがって、本発明は、免疫グロブリンのＦｃドメインと融合した、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／又はＡＣＶＲ２Ｂの少なくとも１つのＥＣＤを含む融合タンパク質を提供する。
【００４２】
本方法で使用するＦｃドメインは、任意の免疫グロブリン由来であり得る。ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥなど様々なクラスの免疫グロブリンのいずれかを使用できる。ＩｇＧクラス内では、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４など異なるサブクラス、つまりアイソタイプが存在する。一実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質は、ＩｇＧ分子のＦｃドメインを含む。更なる実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１分子由来である。免疫グロブリン分子は、例えば、哺乳類、齧歯類、ヒト、マウス、ラット、ハムスター、又はウサギなど任意の動物タイプであり得る。一実施形態では、免疫グロブリンＦｃドメインは哺乳類由来である。別の実施形態では、Ｆｃドメインはヒト由来である。更に別の実施形態では、Ｆｃドメインは、マウス又はラットなど齧歯類由来である。特定の実施形態では、融合タンパク質のＦｃドメインはヒトＩｇＧ１由来である。
【００４３】
本明細書で提供するＦｃ融合タンパク質は、当該技術分野において周知の任意の方法で作製され得る。Ｆｃ融合タンパク質は、少なくともＣＨ２及びＣＨ３領域と、通常、ヒンジ領域の少なくとも一部と、を含み得る。ＣＨ１領域は存在し得るが、通常、融合タンパク質では、欠落している。
【００４４】
融合は、免疫グロブリン定常ドメインのＦｃ部分内の任意の部位で行われ得る。融合は、定常ドメインのＦｃ部分のＣ末端、又は重鎖のＣＨ１領域に接するＮ末端に対して行われ得る。Ｆｃ融合タンパク質の生物活性、分泌、又は結合特性を最適化するために、特定部位が選択され得る。
【００４５】
場合によっては、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／又はＡＣＶＲ２ＢのＥＣＤをコードする核酸は、免疫グロブリン定常ドメイン配列のＮ末端をコードする核酸に融合されたＣ末端である。他の場合では、Ｎ末端融合も可能である。ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／又はＡＣＶＲ２ＢのＥＣＤを、免疫グロブリン定常ドメイン配列のＮ末端及びＣ末端の両方に融合することも可能である。
【００４６】
免疫グロブリン融合の産生については、それぞれが参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第５，４２８，１３０号、同第５，８４３，７２５号、同第６，０１８，０２６、及び国際公開第２００５／０７０９６６号も参照されたい。
【００４７】
融合タンパク質は、例えば、融合タンパク質をコードする核酸の組み換え発現によって産生され得る。例えば、融合タンパク質は、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／又はＡＣＶＲ２ＢのＥＣＤをコードする核酸を、Ｆｃドメインをコードする核酸に融合させることによって作製され得る。ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／又はＡＣＶＲ２ＢのＥＣＤ核酸は、Ｆｃドメインをコードする核酸のＮ末端と融合し得るか、Ｆｃドメインをコードする遺伝子のＣ末端と融合し得る。あるいは、ＥＣＤは、Ｆｃドメインに任意の位置において融合され得る。
【００４８】
ＥＣＤ融合タンパク質はまた、リンカーを含み得る。Ｆｃ融合タンパク質の場合、リンカーは、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、又はＡＣＶＲ２ＢのＥＣＤと、ヒンジ領域の一部又は全てを任意選択的に置換するＦｃドメインとの間に位置し得る。リンカーは、二次構造を比較的含まない、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、５０以上のアミノ酸であり得る。リンカーは、グリシン及びプロリン残基を多く含み得、例えば、スレオニン／セリン及びグリシンの繰り返し配列（例えば、ＴＧ４又はＳＧ４繰り返し体）を含み得る。
【００４９】
リンカーによって、２個又は３個以上のＥＣＤ−Ｆｃ融合タンパク質を結合し得る。かかる場合では、リンカーは、ＥＣＤの間に位置し得る、又はリンカーは、Ｆｃドメイン管に位置して融合タンパク質を結合させ得る。例えば、１個、２個、３個、４個以上のＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／又はＡＣＶＲ２ＢのＦｃ融合タンパク質が結合し得る。
【００５０】
ＡＣＶＲ２Ａ、及び／又はＡＣＶＲ２ＢのＥＣＤ融合タンパク質の例は、それぞれが参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第７，８４２，６３３号、及び同第７，９６０，３４３号、及び同第７，７０９，６０５に記載されている。
【００５１】
ＡＣＶＲ２Ａアンタゴニストの一例は、Ｓｏｔａｔｅｒｃｅｐｔとして知られている（ＡＣＥ−０１１とも呼ばれる）。Ｓｏｔａｔｅｒｃｅｐｔは、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインと融合するＡＣＶＲ２ＡのＥＣＤを含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｃａｒｒａｎｃｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ．１６５（６）：８７０〜８７２に詳述されている。
【００５２】
ＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストの一例は、ＡＣＥ−０３１として知られている。ＡＣＥ−０３１は、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインと融合するＣＶＲ２ＢのＥＣＤを含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｓａｋｏ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８５（２７）：２１０３７〜２１０４８に詳述されている。
【００５３】
ＡＣＶＲ１  ＥＣＤ融合タンパク質の一例は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｂｅｒａｓｉ，ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ，２９（４）：１２８〜１３９に記載されるものなど既知である。
【００５４】
Ｃ．ハイブリッドＥＣＤ融合タンパク質
ハイブリッド、つまり多重特異性ＥＣＤ融合タンパク質アンタゴニストも提供する。ハイブリッドＥＣＤ融合タンパク質は、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／又はＡＣＶＲ２Ｂ  ＥＣＤのうちの２つ又は３つ以上の組み合わせを含み得る。例えば、融合タンパク質は、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／又はＡＣＶＲ２Ｂ  ＥＣＤの１個、２個、３個、４個以上の分子を含み得る。一実施形態では、このアンタゴニストは、ＡＣＶＲ２Ｂ  ＥＣＤに結合されたＡＣＶＲ２Ａ  ＥＣＤを含む。更なる実施形態では、このアンタゴニストは、Ｆｃドメインを更に含む。
【００５５】
一実施形態では、融合タンパク質は、ＡＣＶＲ２Ａ  ＥＣＤの１個又は２個以上の分子と、ＡＣＶＲ２Ｂ  ＥＣＤの１個又は２個以上の分子と、を含み得る。別の実施形態では、融合タンパク質は、ＡＣＶＲ１  ＥＣＤの１個又は２個以上の分子と、ＡＣＶＲ２Ａ  ＥＣＤの１個又は２個以上の分子と、を含み得る。別の実施形態では、融合タンパク質は、ＡＣＶＲ１  ＥＣＤの１個又は２個以上の分子と、ＡＣＶＲ２Ｂ  ＥＣＤの１個又は２個以上分子と、を含み得る。
【００５６】
一実施形態では、融合タンパク質は、１個又は２個以上のＡＣＶＲ２Ａ  ＥＣＤ−Ｆｃ融合タンパク質と、１個又は２個以上のＡＣＶＲ２Ｂ  ＥＣＤ−Ｆｃ融合タンパク質と、を含み、これらを合わせて複合体化する。別の実施形態では、融合タンパク質は、１個又は２個以上のＡＣＶＲ１  ＥＣＤ−Ｆｃ融合タンパク質と、１個又は２個以上のＡＣＶＲ２Ａ  ＥＣＤ−Ｆｃ融合タンパク質と、を含み、これらを合わせて複合体化する。別の実施形態では、融合タンパク質は、１個又は２個以上のＡＣＶＲ１  ＥＣＤ−Ｆｃ融合タンパク質と、１個又は２個以上のＡＣＶＲ２Ｂ  ＥＣＤ−Ｆｃ融合タンパク質と、を含み、これらを合わせて複合体化する。かかる場合では、融合タンパク質は、例えば、少なくとも１個のジスルフィド結合によって、又はリンカー配列によって、Ｆｃドメインを介して結合され得る。あるいは、融合タンパク質のＥＣＤ部分は、リンカー配列によって結合され得る。
【００５７】
一実施形態では、アンタゴニストは、第１のＦｃドメインと融合したＡＣＶＲ２Ａ  ＥＣＤと、第２のＦｃドメインと融合したＡＣＶＲ２Ｂ  ＥＣＤと、を含む。かかる場合では、Ｆｃドメインは、互いと複合体化し得る。別の実施形態では、アンタゴニストは、それぞれＦｃドメインと融合する、ＡＣＶＲ２Ａ  ＥＣＤとＡＣＶＲ２Ｂ  ＥＣＤとの間にリンカーを含む。
【００５８】
融合タンパク質は、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／又はＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストをタンデム式に生成するように構築され得る。一実施形態では、融合タンパク質は、タンデム式のＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／又はＡＣＶＲ２Ｂ由来の２つ又は３つ以上のＥＣＤ、続いてＦｃドメインを含む。場合によっては、タンデムに配置されたＥＣＤは、リンカー配列によって単離される。かかるタンデム融合タンパク質は、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／又はＡＣＶＲ２ＢのＥＣＤのうちの１つ、２つ、３つ、４つ以上を含み得る。
【００５９】
Ｄ．抗体アンタゴニスト
ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、又はＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストには、これらの受容体のいずれかに対する抗体（換言すると、これらに特異的に結合する）、好ましくは細胞外ドメイン内にエピトープを有する抗体が含まれる。抗体又は融合タンパク質の、その標的抗原への特異的結合とは、少なくとも１０６、１０７、１０８、１０９、又は１０１０Ｍ−１の親和性を意味する。特異的結合は、検出可能により強く、少なくとも１つの無関係標的に対して生じる非特異的結合と区別できる。抗体の調製方法は、当該技術分野において既知である。例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ＆  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５〜４９７及びＨａｒｌｏｗ  ＆  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹを参照されたい。
【００６０】
ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／又はＡＣＶＲ２Ｂの活性を阻害する、又は低減する任意の抗体（例えば、アンタゴニスト抗体）を使用できる。かかるＡＣＶＲ２Ａ及びＡＣＶＲ２Ｂ抗体としては、例えば、それぞれが参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第８，４８６，４０３号、同第８，１２８，９３３号、国際公開第２００９／１３７０７５号、及びＬａｃｈ−Ｔｒｉｆｉｌｉｅｆｆ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．３４（４）：６０６〜６１８に開示される抗体が挙げられる。任意のこれらの抗体のヒト化、キメラ、及びベニヤ化形態は、これらとの結合を競合する抗体として含まれてよい。
【００６１】
一実施形態では、この抗体は抗ＡＣＶＲ２Ａ抗体である。別の実施形態では、この抗体は抗ＡＣＶＲ２Ｂ抗体である。他の実施形態では、この抗体は、ＡＣＶＲ２Ａ及びＡＣＶＲ２Ｂの両方に対する二重特異性抗体であり得る。別の実施形態では、この抗体は抗ＡＣＶＲ１抗体である。他の実施形態では、この抗体は、ＡＣＶＲ１及びＡＣＶＲ２Ａの両方、又はＡＣＶＲ１及びＡＣＶＲ２Ｂの両方に対する二重特異性抗体であり得る。
【００６２】
用語「抗体」は、２対の重鎖及び軽鎖を有するインタクトな抗体、抗原を結合できる抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ‘）２、Ｆｖ、短鎖抗体、二重特異性抗体（diabodies）、キメラ抗体、ハイブリッド抗体、二重特異性抗体（bispecific antibodies）、ヒト化抗体など）、並びに前述のもの（forgoing）を含む組み換えペプチドを含む。
【００６３】
「抗体フラグメント」は、インタクトな抗体の一部、好ましくは、インタクトな抗体の抗原結合又は可変領域を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント；二重特異性抗体；線状抗体（linear antibodies）（Ｚａｐａｔａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１０：１０５７〜１０６２）；短鎖抗体分子；並びに抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体が挙げられる。
【００６４】
抗体は、モノクローナル又はポリクローナルであり得る。「モノクローナル抗体」は、実質的に均質の抗体の集団から得た抗体である。つまり、この集団を構成する個々の抗体は、少量存在し得る、自然発生し得る突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、極めて特異的であることが多く、単一抗原部位に対する抗体である。更に、通常、様々な決定基（エピトープ）に対する様々な抗体を含む従来の（ポリクローナル）抗体の調製とは対照的に、各モノクローナル抗体は、通常、抗原上の単一決定基に対する抗体である。修飾語「モノクローナル」は、抗体の特性が、Ｂ細胞のクローン集団によって産生された抗体であるなど、実質的に均質の抗体集団から得られたものであることを示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要としない。
【００６５】
本明細書で提供する方法に従って使用するモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５によって最初に説明されたハイブリドーマ法、又はその改良法によって作製され得る。通常、マウスなどの動物は、抗原（例えば、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／若しくはＡＣＶＲ２Ｂポリペプチド、又はアクチビンＡ、特に細胞外ドメイン（受容体内）若しくはその一部）を含有する溶液で免疫化される。
【００６６】
免疫化は、食塩水、好ましくはフロイント完全アジュバントなどアジュバント中で、抗原含有溶液を混合又は乳化し、混合物又はエマルションを非経口で注入することによって実行できる。動物の免疫化後、脾臓（及び、任意選択的に、数個の大リンパ節）を除去し、単一細胞に解離する。脾臓細胞は、対象抗原でコーティングしたプレート又はウェルに細胞懸濁液を適用することによってスクリーニングできる。抗原に対して特異的な、Ｂ細胞発現膜結合型免疫グロブリンをプレートに結合させ、洗い流さない。得られたＢ細胞、つまり全ての解離した脾臓細胞を骨髄腫細胞と融合させて、ハイブリドーマを形成し、選択培地内で培養する。得られた細胞は、系列希釈によってめっきを施し、対照抗原に特異的に結合する（かつ、無関係の抗原には結合しない）抗体の産生を測定する。次いで、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ（例えば、組織培養瓶又は中空繊維反応器内）又はｉｎ  ｖｉｖｏ（マウスの腹水として）で選択したモノクローナル抗体（ｍＡｂ）分泌ハイブリドーマを培養する。
【００６７】
あるいは、モノクローナル抗体は、組み換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７を参照）によって作製できる。モノクローナル抗体はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４〜６２８；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１〜５９７；及び米国特許第５，５１４，５４８号に記載の技法を使用して、ファージ抗体ライブラリーから単離できる。
【００６８】
「抗体」としては、上記で定めたように、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２Ｂ、及びアクチビンＡのいずれかに対するキメラ抗体、ベニヤ化抗体、ヒト化抗体、及びヒトモノクローナル抗体が挙げられる。
【００６９】
重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは異なるクラスに割り当てられ得る。免疫グロブリンには、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭという５つの主要クラスが存在し、これらのうちのいくつかは、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２などサブクラス（アイソタイプ）に更に分類できる。様々なクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれアルファ、デルタ、エプシロン、ガンマ、及びミューと呼ばれる。様々なクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元構造は周知である。
【００７０】
本発明のモノクローナル抗体又はＦｃ融合タンパク質は、様々な抗体クラスのいずれかであり得る。一実施形態では、モノクローナル抗体はＩｇＧクラス抗体である。他の実施形態では、モノクローナル抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、又はＩｇＡクラスの抗体であり得る。特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４など、ＩｇＧのアイソタイプ、具体的にはヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４である。
【００７１】
重鎖のＣ末端リジンなど軽鎖及び／又は重鎖のアミノ末端又はカルボキシ末端にある１個又は複数個のアミノ酸は、欠落し得る、又は分子の一部及び全てにおいて誘導体化され得る。置換は定常領域において行われ得、補体媒介性細胞障害又はＡＤＣＣなどエフェクター機能を増減する（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号（Ｗｉｎｔｅｒら）；同第５，８３４，５９７号（Ｔｓｏら）；及びＬａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０３：４００５，２００６を参照）、又はヒトで半減期を延長させる（例えば、Ｈｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：６２１３，２００４を参照）。例示的置換としては、抗体の半減期を増加させるための位置２５０におけるＧｌｎ、及び／又は位置４２８（ＥＵ番号付与）におけるＬｅｕが挙げられる。２３４、２３５、２３６、及び／又は２３７のいずれかの位置における置換は、Ｆｃγ受容体、とりわけＦｃγＲＩ受容体に対する親和性を低減させる（例えば、米国特許第６，６２４，８２１号を参照）。任意選択的に、ヒトＩｇＧ２における位置２３４、２３６、及び／又は２３７はアラニンで置換され、位置２３５はグルタミンで置換される（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号を参照）。エフェクター機能はまた、位置２３２〜２３６のＥＦＬＧをＰＶＡで置換することにより低減できる（国際公開第１４／１２１０８７号を参照）。任意選択的に、位置４２８のＳはＰで置換でき、とりわけヒトＩｇＧ４において、内因性免疫グロブリンと外因性免疫グロブリンとの間での交換を低減する。他の変異は、Ｎ−Ｘ−Ｓ／ＴモチーフにおけるＮ−結合グリコシル化など翻訳後修飾部位を追加又は除去できる。変異はまた、瘤（すなわち、より大型のアミノ酸での１個又は２個以上のアミノ酸の置換）又は孔（すなわち、より小型のアミノ酸での１個又は２個以上のアミノ酸の置換）の導入を含んで、二重特異性抗体の産生のために異なる重鎖間でのヘテロ二量体の形成を促進し得る。瘤及び孔の対を形成する例示的置換は、それぞれＴ３３６Ｙ及びＹ４０７Ｔである（Ｒｉｄｇｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｖｏｌ．９  ｎｏ．７  ｐｐ．６１７〜６２１，１９９６）。変異はまた、ＥＵ番号付与体系におけるプロテインＡ相互作用（例えば、Ｈ４３５Ｒ及びＹ４３６Ｆ）を低減させる突然変異を含み得る。一方の重鎖はかかる突然変異を有し、他方は有さない二重特異性抗体は、プロテインＡの親和クロマトグラフィーによって親抗体から分離し得る。
【００７２】
抗体はまた、アクチビンＡに特異的に結合する抗体を含み得る。かかる抗体は、βＡ  βＡ、βＡ  βＢ、βＡ  βＣ、及びβＡ  βＥ形態のアクチビンＡのいずれか、又は全てに特異的に結合し得る。一部の抗体は、これらの形態（すなわち、βＡ  βＡ、βＡ  βＢ、βＡ  βＣ、又はβＡ  βＥ）のうちの１つのみに特異的に結合する。βＡ  βＢ、βＡ  βＣ、及びβＡ  βＥ形態に対する特異性は、それぞれβＢ、βＣ、又はβＥサブユニット内のエピトープによって、又はヘテロ二量体の両成分が寄与するエピトープのために、与えられ得る。βＡ  βに対する特異性は、ホモ二量体内の両分子（例えば、サブユニットの界面における）によって寄与されるエピトープによって与えられ得る。一部の抗体は、これらの形態のアクチビンＡの全てに結合する。この場合、エピトープは、通常、βＡサブユニット上にある。抗体は、通常、前駆体タンパク質の成熟ポリペプチド成分内にエピトープを有する。一部の抗体は、α（Ｓｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔ  Ｐ０５１１１）βＡ又はαβＢヘテロ二量体の形態で存在するヒトインヒビンに結合せずに、いずれか又は全ての形態のアクチビンＡに特異的に結合する。一部の抗体は、いずれか又は全ての形態のアクチビンＡに特異的に結合し、いずれか又は両方の形態のヒトインヒビンに結合する。かかる抗体は、１個又は２個以上のカウンター受容体（ＡＣＶＲ２Ａ及び／又はＡＣＶＲ２Ｂ及び／又はＢＭＰＲ２）を使用してアクチビンＡのシグナル伝達を阻害すると考えられているが、ＦＯＰの治療方法においてかかる抗体を使用するために機構を理解する必要はない。
【００７３】
アクチビンＡに対する抗体は、相当な数が報告されている。例えば、米国特許出願公開第２０１５／００３７３３３９号は、Ｈ４Ｈ１０４２３Ｐ、Ｈ４Ｈ１０４２４Ｐ、Ｈ４Ｈ１０４２６Ｐ、Ｈ４Ｈ１０４２９Ｐ、Ｈ４Ｈ１０４３０Ｐ、Ｈ４Ｈ１０４３２Ｐ２、Ｈ４Ｈ１０４３３Ｐ２、Ｈ４Ｈ１０４３６Ｐ２、Ｈ４Ｈ１０４３７Ｐ２、Ｈ４Ｈ１０４３８Ｐ２、Ｈ４Ｈ１０４４０Ｐ２、Ｈ４Ｈ１０４４２Ｐ２、Ｈ４Ｈ１０４４５Ｐ２、Ｈ４Ｈ１０４４６Ｐ２、Ｈ４Ｈ１０４４７Ｐ２、Ｈ４Ｈ１０４４７Ｐ２、Ｈ４Ｈ１０４４８Ｐ２、Ｈ４Ｈ１０４５２Ｐ２と称されるヒト抗体を開示する。米国特許第８，３０９，０８２号は、ヒト抗体Ａ１〜Ａ１４を開示する。アクチビンＡに対するマウス抗体は、Ｒ＆Ｄ  ＳｙｓｔｅｍｓからのＭＡＢ３３８１、又はＮｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓからの９Ｈ１６、又はＡｂＣａｍからのＭＭ００７４−７Ｌ１８（ａｂ８９３０７）などいくつかの商用供給業者から入手可能である。
【００７４】
好ましい抗体は、（米国特許出願公開第２０１５／００３７３３３９号の実施例３のように２５℃での測定したとき）少なくとも１０８Ｍ−１、１０９Ｍ−１、１０１０Ｍ−１、１０１１Ｍ−１、１０１２Ｍ−１、又は１０１３Ｍ−１のアクチビンＡに対する親和性
を有する。一部の抗体は、１０９〜１０１２Ｍ−１の範囲内の親和性を有する。好ましい抗体は、４ｎＭ未満、好ましくは４００ｐＭ未満、又は４０ｐＭのＩＣ５０でアクチビンＡのシグナル伝達を阻害する。一部の抗体は、４ｎＭ〜１０ｐＭ、又は３．５ｎＭ〜３５ｐＭの範囲のＩＣ５０でシグナル伝達を阻害する。
【００７５】
シグナル伝達の阻害は、以下に要約するように、米国特許出願公開第２０１５００３７３３９号の実施例６のように測定できる。Ｓｍａｄ  ２／３−ルシフェラーゼレポータープラスミドでヒトＡ２０４横紋筋肉腫細胞系をトランスフェクトして、Ａ２０４／ＣＡＧＡｘ１２−Ｌｕｃ細胞系を産生する。Ａ２０４／ＣＡＧＡｘ１２−Ｌｕｃ細胞を、１０％ウシ胎児血清、ペニシリン／ストレプトマイシン／グルタミン、及び２５０μｇ／ｍＬのＧ４１８を補充したマッコイ５Ａ中で維持する。バイオアッセイのために、Ａ２０４／ＣＡＧＡｘ１２−Ｌｕｃ細胞を、９６ウェルアッセイプレートに、低血清培地、０．５％  ＦＢＳ、及びＯＰＴＩＭＥＭ中１０，０００セル／ウェルで播種し、３７℃、５％のＣＯ２で一晩インキュベートした。１００から０．００２ｎＭまで１：３でアクチビンＡを段階希釈し、アクチビンを含まない対照から開始して細胞に添加した。適切なアイソタイプ対照抗体を含むか、又は抗体を含まないかのいずれかである対照サンプルを含む、１００から０．００２ｎＭまで、１０００から０．０２ｎＭまで、又は３００から０．００５ｎＭまで１：３で抗体を段階的に希釈し、一定濃度の１００ｐＭのアクチビンＡと共に細胞に添加した。
【００７６】
一部の抗体は、受容体が細胞から発現するか、細胞外ドメインが融合タンパク質としてＦｃドメインと融合し、融合タンパク質が固定化されて担持する（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅセンサーチップ）ときに測定されるように、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／又はＡＣＶＲ２Ｂ、及び／又はＢＭＰＲ２へのアクチビンＡの結合を少なくとも１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％阻害する。かかる測定では、抗体及びアクチビンＡは、等モル量で存在し、受容体又は細胞外ドメインは過剰に存在しなくてはならない。
【００７７】
一部の抗体は、成熟タンパク質のＣ１１〜Ｓ３３及びＣ８１〜Ｅ１１１に対応する、完全長アクチビンＡの残基３２１〜３４３又は３９１〜４２１内のエピトープに結合する。
【００７８】
本実施例で使用した例示的抗体は、米国特許出願公開第２０１５０３７３３９号でＨ４Ｈ１０４４６Ｐと称される。その重鎖可変領域、並びに重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、米国特許出願公開第２０１５／００３７３３３９号の配列番号：１６２、１６４、１６６、及び１６８（それぞれ本発明の配列番号：１〜４）のアミノ酸配列をそれぞれ有する。その軽鎖可変領域及び軽鎖ＣＤＲであるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３は、米国特許出願公開第２０１５／００３７３３９号の配列番号：１４６、１４８、１５０、及び１５２（それぞれ本発明の配列番号：５〜８）のアミノ酸配列をそれぞれ有する。Ｈ４Ｈ１０４４６Ｐは、アクチビンＡによって媒介されるシグナル伝達をＡＣＶＲ２Ａ及び／又はＡＣＶＲ２Ｂによって阻害するが、ＡＣＶＲ２Ａ又はＡＣＶＲ２ＢへのアクチビンＡの結合は、阻害するとしても強くは阻害しない。ヒトアクチビンＡへの結合又はＨ４Ｈ１０４４６Ｐと同一のヒトアクチビンＡ上のエピトープへの結合に関して、Ｈ４Ｈ１０４４６Ｐと競合する、他の抗体は含まれており、シグナル伝達の阻害を共有するものも含まれている。
【００７９】
本方法で使用した、別の例示的抗体は、米国特許出願公開第２０１５０３７３３９号でＨ４Ｈ１０４３０Ｐと称される。その重鎖可変領域及び重鎖ＣＤＲであるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３は、米国特許出願公開第２０１５／００３７３３３９号において、配列番号：６６、６８、７０、及び７２（それぞれ本発明の配列番号：９〜１２）のアミノ酸配列をそれぞれ有する。その軽鎖可変領域及び軽鎖ＣＤＲであるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３は、米国特許出願公開第２０１５／００３７３３９号において、配列番号：７４、７６、７８、及び８０（それぞれ本発明の配列番号：１３〜１６）のアミノ酸配列をそれぞれ有する。この抗体は、ＡＣＶＲ２Ａ及び／又はＡＣＶＲ２ＢへのアクチビンＡの結合を阻害し、これらの一方又は両方の受容体を介したシグナル伝達を阻害する。アクチビンＡへの結合又はＨ４Ｈ１０４３０Ｐと同一のアクチビンＡ上のエピトープへの結合に関して、Ｈ４Ｈ１０４３０Ｐと競合し、アクチビンＡのＡＣＶＲ２Ａ及びＡＣＶＲ２Ｂへの結合及びこれらによるシグナル伝達の阻害特性を共有する、他の抗体も含まれる。
【００８０】
本方法で使用する別の例示的抗体は、米国特許第８，３０９，０８２号でＡ１と称される抗体であり、同８，３０９，０８２号で配列番号：９及び１０（それぞれ本発明の配列番号：１７及び１８）を有する軽鎖及び重鎖可変領域を特徴とする。その軽鎖ＣＤＲであるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３は、米国特許第８，３０９，０８２号において配列番号：１１、１２、及び１３（それぞれ本発明の配列番号：１９〜２１）をそれぞれ有し、その重鎖ＣＤＲであるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３は同第８，３０９，０８２号において配列番号：６２、６３、及び６４（それぞれ本発明の配列番号：２２〜２４）をそれぞれ有する。アクチビンＡへの結合又はＨ４Ｈ１０４３０Ｐと同一のアクチビンＡ上のエピトープへの結合に関して、Ｈ４Ｈ１０４３０Ｐと競合し、アクチビンＡのＡＣＶＲ２Ａ及び／又はＡＣＶＲ２Ｂへの結合及びこれらによるシグナル伝達の阻害特性を共有する、他の抗体も含まれる。
【００８１】
他の抗体は、上記の抗体のいずれかの重鎖及び軽鎖をコードするｃＤＮＡの突然変異誘発によって得ることができる。本発明には、成熟重鎖及び／若しくは軽鎖可変領域のアミノ酸配列内の上記の抗体のいずれかと少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であり、その機能特性を維持するモノクローナル抗体、並びに／又は少数の機能的に重要ではないアミノ酸置換（例えば、保存的置換）、欠失、若しくは挿入によってそれぞれの抗体とは異なるモノクローナル抗体も含まれる。例示した抗体のいずれかの対応するＣＤＲと９０％、９５％、９９％、又は１００％同一である、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、及び好ましくは６つ全てのＣＤＲを有するモノクローナル抗体も含まれる。ＣＤＲは、好ましくはＫａｂａｔによって定義されるとおりであるが、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａ併用、接触定義、又はＡｂＭ定義（ｗｏｒｌｄ  ｗｉｄｅ  ｗｅｂのｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓを参照）など任意の従来の別の定義によっても定義され得る。
【００８２】
Ｅ．小分子アンタゴニスト
ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及びＡＣＶＲ２Ｂのアンタゴニストはまた、小分子アンタゴニストであり得る。かかる小分子アンタゴニストは、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２Ｂ、又はアクチビンＡの活性を阻害し得る。ＡＣＶＲ１の小分子アンタゴニストとしては、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｍｏｈｅｄａｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．８：１２９１〜１３０２に記載のＬＤＮ−２１２８５４が挙げられる。
【００８３】
ＩＶ．スクリーニングアッセイ
様々なＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／又はＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニスト並びにこれらの変異体又はフラグメントの活性は、様々なアッセイでスクリーニングできる。例えば、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／又はＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニスト並びにこれらの変異体は、リガンドに結合する能力、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、若しくはＡＣＶＲ２Ｂ受容体に結合する能力、ＡＣＶＲ１及び／若しくはＡＣＶＲ２ポリペプチドへのリガンドの結合を阻害する能力、並びに／又はＡＣＶＲ１若しくはＡＣＶＲ２受容体の活性を阻害する能力をスクリーニングできる。
【００８４】
ＡＣＶＲ１若しくはＡＣＶＲ２アンタゴニスト、又はこれらの変異体若しくはフラグメントの活性は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又は細胞ベースのアッセイで検査できる。Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合アッセイ及び受容体活性の阻害を測定するアッセイは周知である。ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、又はＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストの活性を測定する様々なアッセイは、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第７，８４２，６６３号に記載されている。
【００８５】
ＡＣＶＲ１又はＡＣＶＲ２ポリペプチドとその結合タンパク質との間での複合体形成を調節するアンタゴニストの能力は、様々な技法で検出できる。例えば、複合体の形成の調節は、例えば、放射性標識タンパク質（例えば、３２Ｐ、３５Ｓ、１４Ｃ、又は３Ｈ）、蛍光標識タンパク質（例えば、ＦＩＴＣ）、又は酵素標識ＡＣＶＲ１若しくはＡＣＶＲ２ポリペプチド又はその結合タンパク質など検出可能に標識化されたタンパク質を使用して、イムノアッセイによって、又はクロマトグラフィー検出によって定量化できる。
【００８６】
ＡＣＶＲ１又はＡＣＶＲ２受容体によって媒介されるシグナル伝達を阻害するＡＣＶＲ１又はＡＣＶＲ２アンタゴニストは、観察できる。例えば、Ｓｍａｄ活性など下流シグナル伝達の影響は、Ｓｍａｄ応答性レポーター遺伝子を使用して観察できる。
【００８７】
ＡＣＶＲ１及び／又はＡＣＶＲ２アンタゴニスト並びにこれらの変異体又はフラグメントはまた、ｉｎ  ｖｉｖｏアッセイで活性をスクリーニングできる。例えば、ＡＣＶＲ１若しくはＡＣＶＲ２アンタゴニスト、又はこれらの変異体は、ＦＯＰのマウスモデルにおいてＦＯＰを治療する能力（例えば、異所性骨形成を低減させる能力）をスクリーニングできる。ＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］をコードする条件付きの対立遺伝子を有するトランスジェネリックノックインマウスを作製する。これらのＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］ＣＯＩＮ／＋マウスは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許出願第１４／２０７，３２０号及び国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０２６５８２号に記載されている。この対立遺伝子は、Ｃｒｅリコンビナーゼによる活性化後にのみＲ２０６Ｈ変異体を発現する。これにより、異なる種類のＣｒｅドライバー株を使用することによって、特定の組織で、かつ特定の時間にＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］発現のＣｒｅ依存性活性化が可能になる。このようにして、得られたマウスはまた、ＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］の未規制ノックイン対立遺伝子で見られる周産期致死性を回避する。若年又は成年マウスでのＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］発現の活性化は、異所性骨形成をもたらす。例えば、ＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］ＣＯＩＮ／＋；Ｇｔ（ＲＯＳＡ２６）ＳｏｒＣｒｅＥＲｔ２／＋マウス（ＣｒｅＥＲｔ２はタモキシフェンによる調整が可能なリコンビナーゼ（Ｆｅｉｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ
【００８８】
Ｃｏｍｍｕｎ．２３７（３）：７５２〜７を参照）であり、Ｇｔ（ＲＯＳＡ２６）Ｓｏｒ遺伝子座に挿入されている。したがって、構成的かつグローバルに発現する）は、タモキシフェンへの曝露後にＦＯＰＷを発症する。つまり、タモキシフェンの不在下では、ＣｒｅＥＲｔ２は不活性である。タモキシフェンは、Ｃｒｅの発現を活性化させ、次いで、ＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］ＣＯＩＮ／＋に作用してＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］／＋に変換させ、したがって、ＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］であるＦＯＰ患者の遺伝子型をミラーリングするようにマウスの遺伝子型を変換させる。ＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］対立遺伝子はＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］を発現させる。ＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］／＋；Ｇｔ（ＲＯＳＡ２６）ＳｏｒＣｒｅＥＲｔ２／＋マウスにおけるＦＯＰの発症を促進には、これで十分である。これにより、従来のＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］ノックインマウス、ＡＣＶＲ１ｔｍ１Ｅｍｓｈ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．ｊａｘ．ｏｒｇ／ａｌｌｅｌｅ／ｋｅｙ／８２８１５３）で経験する胚性致死性を回避する。タモキシフェン治療後、ＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］ＣＯＩＮ／＋；Ｇｔ（ＲＯＳＡ２６）ＳｏｒＣｒｅＥＲｔ２／＋マウスにＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／若しくはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニスト、又は対照を投与し、この動物の異所性骨形成を観察した。Ｃｈａｋｋａｌａｋａｌ  ＳＡ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２０  Ａｎ  Ａｃｖｒ１  Ｒ２０６Ｈ  ｋｎｏｃｋ−ｉｎ  ｍｏｕｓｅ  ｈａｓ  ｆｉｂｒｏｄｙｓｐｌａｓｉａ  ｏｓｓｉｆｉｃａｎｓ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖａ．Ｊ  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ  Ｒｅｓ．２７（８）：１７４６〜５６を参照されたい。このアッセイについては、以下の実施例で詳述する。
【００８９】
Ｖ．進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）
ＦＯＰは、異所性骨化によって結合組織など骨外性部位において組織学的かつ生物学的に「正常な」骨を形成する、稀な遺伝性疾患である。この疾患は、偶発性であるが、累積的であり、重篤度が増加する不可逆的障害をもたらす。
【００９０】
ＦＯＰの世界的有病率は、約１／２，０００，０００である。ＦＯＰには、民族的、人種的、性的、又は地理的傾向はない。極めて重大な障害をもたらす疾患であるだけではなく、著しく短い寿命の疾患でもある。
【００９１】
ＦＯＰの特徴としては、例えば、母趾の先天性奇形、頭部、頸部、及び／又は背中の疼痛及び炎症を伴う軟組織腫脹を特徴とするフレアアップ、並びに軟骨内骨化による、進行性の異所性骨形成が挙げられる。
【００９２】
ＦＯＰは、母趾の奇形の存在に基づいて臨床的に疑われ得る。Ｘ線又は骨のスキャンなど診断検査によって、母趾の異常を実証し、異所性骨化の存在を確認できる。ＦＯＰ診断はまた、遺伝子検査によって、例えば、ＡＣＶＲ１遺伝子で６１７Ｇ＞Ａ（Ｒ２０６Ｈ）突然変異を検出することによって確認できる。
【００９３】
ＦＯＰが他の異所性骨化の疾患など他のいくつかの疾患として誤診されることはよくある。ＦＯＰは、鑑別診断によって、例えば、孤立性先天性奇形、リンパ水腫、軟部組織肉腫、類腱腫、悪性若年性線維腫症、若年性外反母趾、孤立性短趾、進行性骨異形成、及び異所性骨化などから区別されるべきである。母趾の先天性奇形及び疼痛を伴う軟組織のフレアアップの存在は、ＦＯＰを他の疾患と区別するために使用できる。
【００９４】
ＦＯＰを患う患者は、母趾の先天性奇形を有するが、出生時には正常に見える。ＦＯＰに関連するフレアアップは、生後１０年間に始まる。フレアアップは、例えば、軟組織の損傷、剥落、披露、ウイルス感染、又は筋肉注射によって引き起こされ得る。フレアアップの結果として、間膜、骨格筋、又は腱など軟組織が異所性骨に変えられる。
【００９５】
これまでは、ＦＯＰの治療法はなかった。ＦＯＰは、安全性及び戦略を向上させて負傷を最小限に留めること、筋肉注射を回避すること、及び歯科治療を受けるときは注意することなど予防対策によって管理された。フレアアップの最初の２４時間以内に高用量のコルチコステロイド治療を開始すると、フレアアップに関連する炎症及び浮腫の低減に役立ち得る。異所性骨を除去するという手術戦略は逆効果であり、外傷によって誘発された新たな異所性骨化を引き起こすため、推奨されない。
【００９６】
ＦＯＰは、ＧＳドメインと抑制分子ＦＫＢＰ１２との相互作用を不安定化させると見られる、ＡＣＶＲ１（ＡＬＫ２としても知られる）における突然変異によって生じる（Ｇｒｏｐｐｅ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．２０１１，Ｃｅｌｌｓ  Ｔｉｓｓｕｅｓ  Ｏｒｇａｎｓ，１９４：２９１〜２９５）。ＦＫＢＰ１２は、ＡＣＶＲ１の負のモジュレーターであり、非活性コンフォメーションで受容体を安定化させるように機能する（Ｈｕｓｅ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．１９９９，Ｃｅｌｌ，９６：４２５〜４３６）。Ｋａｐｌａｎ，Ｆ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．２０１２，Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｍｏｄｅｌｓ  ＆  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，５：７５６〜７６２を参照されたい。
【００９７】
ＦＯＰに関連するＡＣＶＲ１での突然変異の例は、細胞内ドメインにおけるアルギニン２０６＞ヒスチジン（Ｒ２０６Ｈ）突然変異である。
【００９８】
ＦＯＰを発症するリスクのある被験者としては、ＦＯＰに関連するＡＣＶＲ１  Ｒ２０６Ｈ突然変異又は他の突然変異を有する全被験者、母趾の奇形を持って生まれた被験者、又は当該技術分野において承認されている基準によって定められたＦＯＰの診断に十分なＦＯＰの症状をまだ発症していない、ＦＯＰの家族歴を有する被験者が挙げられる。
【００９９】
ＶＩ．治療方法
本明細書では、ＦＯＰを患う被験者に、有効なレジメンのＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／又はＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストを投与することを含むＦＯＰの治療方法を提供する。一実施形態では、有効なレジメンのＡＣＶＲ２Ａアンタゴニスト及びＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストが投与される。更なる実施形態では、ＡＣＶＲ２Ａアンタゴニストは、Ｆｃ融合タンパク質であり、ＡＣＶＲ２ＢアンタゴニストはＦｃ融合タンパク質である。別の実施形態では、ＦＯＰは、有効なレジメンのアクチビンＡに対する抗体を投与することによって治療される。
【０１００】
ＦＯＰを患う被験者を「治療」することは、ＦＯＰを患う被験者への、有効なレジメンのＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／若しくはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニスト又はアクチビンＡに対する抗体の投与を意味し、その目的は、ＦＯＰの１つ又は２つ以上の症状の状態の回復、治癒、緩和、軽減、改変、改善、改良、向上、又はそれらへの作用である。
【０１０１】
「被験者」は、ＦＯＰ治療を与えたいと欲する、ヒト、霊長類、マウス及びラットなど齧歯類、イヌ、ネコ、畜牛、ウマ、ブタ、ヒツジなど農業用動物及び家畜など任意の動物（すなわち、哺乳類）である。本発明のいずれの方法においても、被験者は、哺乳類、好ましくはヒトであり得る。
【０１０２】
有効なレジメンのアクチビンＡ、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／若しくはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニスト又はアクチビンＡに対する抗体は、少なくとも１つのＦＯＰの兆候又は症状において肯定的な反応をもたらすアンタゴニストの投与の用量、頻度、及び経路の組み合わせを意味する。肯定的な反応は、少なくとも１つのＦＯＰの兆候又は症状の低減、排除、改善、悪化の抑制を含み得る。肯定的な反応の対象であり得るＦＯＰの兆候又は症状としては、例えば、異所性（ectopic）、つまり異所性（heterotopic）骨形成、ＦＯＰフレアアップ、又はフレアアップに伴う疼痛及び腫脹が挙げられる。レジメンは、治療前後の兆候及び症状を比較することによって、単一の患者で評価できる。レジメンは、治療後に少なくとも１つの兆候又は症状が肯定的な反応を示すと、効果的とみなされる。あるいは、又は加えて、レジメンは、アンタゴニスト又は本発明のアンタゴニストで治療した被験者の集団の兆候及び症状を、治療を受けていない被験者の対照集団と比較することによって評価できる。かかる比較のための被験者は、動物モデル又は臨床治験中（例えば、フェーズＩ、フェーズＩＩ、ＩＩａ、ＩＩｂ、又はＩＩＩ）のヒト被験者であり得る。レジメンは、統計的に有意な肯定的な反応が少なくとも１つの兆候又は症状において集団間に存在すると、効果的とみなされる。
【０１０３】
いくつかのＦＯＰ治療方法では、被験者は、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／若しくはＡＣＶＲ２Ｂに対するアンタゴニスト、又はアクチビンＡに対する抗体で治療可能な他の疾患を有さないか、これらのリスクがない。例えば、被験者は、ＩＩ型糖尿病、筋ジストロフィ、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、及び骨粗鬆症のいずれか又は全てを有さない場合がある。
【０１０４】
Ａ．投与法
ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／若しくはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニスト、又はアクチビンＡに対する抗体は、通常、タンパク質又は小分子として直接投与するが、タンパク質の場合、かかるタンパク質をコードする核酸として投与できる。かかるアンタゴニストは、細胞トランスフェクション、遺伝子治療、送達ビヒクル又は薬学的に許容可能な担体での直接投与、本明細書で提供するＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／若しくはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニスト、又はアクチビンＡに対する抗体をコードする核酸を含む組み換え細胞を提供することによる間接送達など、様々な方法で投与できる。
【０１０５】
様々な送達系を使用して、本明細書で提供するＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／若しくはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニスト、又はアクチビンＡに対する抗体を投与できる。例えば、リポソーム中でのカプセル化、微小粒子、マイクロカプセル、化合物を発現でき組み換え細胞、受容体によって媒介されるエンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９〜４４３２を参照）、レトロウイルス又は他のベクトルの一部としての核酸の構築などが挙げられる。
【０１０６】
投与法は、腸内投与でも、非経口投与でもあり得、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、肺内、鼻腔内、眼球内、硬膜外、及び経口の各経路を含む。化合物は、任意の好適な経路によって、例えば、注入又はボーラス注射によって、上皮層又は皮膚粘膜層（例えば、口腔粘膜、直腸、及び腸粘膜など）からの吸収によって投与し得、他の生物学的活性剤と共に投与できる。投与は全身性でも、局所的でもあり得る。加えて、脳室内注射及び髄腔内注射など任意の好適な経路によって本発明の医薬組成物を中枢神経系に導入することが望ましくあり得、脳室内注射は、例えば、Ｏｍｃａｎａリザーバなどリザーバに装着した脳室内カテーテルによって容易になり得る。例えば、吸入具又は噴霧器の使用及びエアロゾル化剤を含む配合物によって、肺内投与を用いることができる。
【０１０７】
本発明の医薬組成物は、治療を必要とする領域に局所的に投与できる。これは、例えば、手術中の局所注入、局所適用によって、例えば、注射によって、カテーテルによって、又は植え込み物によって達成でき、前記植え込み物は、有孔、無孔、又はＳｉｌａｓｔｉｃ膜（sialastic membranes）などの膜、繊維、若しくは市販の皮膚代替物などゲル状物質である。
【０１０８】
別の実施形態では、活性剤は、小胞、具体的にはリポソームに入れて送達できる（Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７〜１５３３を参照）。別の実施形態では、活性剤は、放出制御システムで送達できる。一実施形態では、ポンプを使用できる（Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）上記を参照）。別の実施形態では、ポリマー材料を使用できる（Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５）．本発明の活性剤がタンパク質をコードする核酸である別の実施形態では、適切な核酸発現ベクターの一部として構成し、細胞内となるように投与することによって、例えば、レトロウイルスベクターを使用することによって（例えば、米国特許第４，９８０，２８６号を参照）、又は直接注入によって、又は微粒子銃、又は脂質、若しくは細胞表面受容体、若しくはトランスフェクション剤でのコーティングの使用によって、又は核に入ることが既知であるホメオボックス様ペプチドと連携して投与することなどによって（例えば、Ｊｏｌｉｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：１８６４〜１８６８を参照）などでｉｎ  ｖｉｖｏで核酸を投与して、そのコードされたタンパク質の発現を促進することができる。あるいは、核酸は、細胞内に導入し、相同的組み換えによってホスト細胞ＤＮＡ内に組み込んで発現させることができる。
【０１０９】
Ｂ．併用療法
本明細書で提供するＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及びＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニスト、又はアクチビンＡに対する抗体は、互いに組み合わせて、又他の治療法と組み合わせて投与できる。一実施形態では、ＦＯＰの治療方法は、ＡＣＶＲ２ＡアンタゴニストとＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストとの同時投与を含む。別の実施形態では、ＦＯＰの治療方法は、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及びＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストの同時投与を含む。他の実施形態では、ＡＣＶＲ１アンタゴニストは、ＡＣＶＲ２Ａ及び／又はＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストと同時投与できる。ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及びＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニストは、別個の医薬組成物として投与できる、又はこれらの薬剤の組み合わせを含む単一の医薬組成物として投与できる。ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／若しくはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニスト、又はアクチビンＡに対する抗体は、単独で、又は組み合わせて、１種又は２種以上の追加の治療用化合物と共に投与できる。併用療法は、同時投与又は交互投与を包含し得る。加えて、組み合わせは、急性投与又は慢性投与を包含し得る。
【０１１０】
Ｃ．医薬組成物
本発明はまた、本明細書で提供するアクチビンＡ、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／若しくはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニスト、又はアクチビンＡに対する抗体を含む医薬組成物、並びに薬学的に許容可能な担体を提供する。用語「薬学的に許容可能な」は、動物、とりわけヒトで使用するために、連邦政府又は州政府の規制機関の承認を受けているか、米国薬局方又は他の一般的に承認されている薬局方に記載されていることを意味する。用語「担体」は、治療が投与される希釈剤、補助剤、賦形剤、又はビヒクルを指す。かかる医薬担体は、石油、動物、植物、又は合成起源（ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ごま油など）を含む、水及び油など滅菌液であり得る。好適な薬学的に許容可能な賦形剤としては、澱粉、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。所望に応じて、組成物はまた、少量の湿潤剤、乳化剤、又はｐＨ緩衝剤を含み得る。
【０１１１】
これらの組成物は、溶液、懸濁液、エマルション、錠剤、丸薬、カプセル、粉末、徐放性製剤などの形態を取り得る。組成物は、従来の結合剤及び担体、トリグリセリドなどを使用して、座薬として配合され得る。経口配合物は、医薬品等級のマンニトール、ラクトース、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的担体を含み得る。好適な製薬担体は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ‘ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」（Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ）に記載されている。
【０１１２】
一実施形態では、組成物は、ヒトへの静脈内投与に適した医薬品組成物として、所定の手順に従って配合される。必要に応じて、組成物はまた、可溶化剤及び注射部位での疼痛を緩和するリドカインなど局所麻酔剤を含み得る。組成物を注入によって投与しようとする場合、無菌医薬品等級の水又は生理食塩水を含有する注入ビンを用いて分注することができる。組成物を注射によって投与しようとする場合、投与前に、成分を混合可能であるように、注射用の無菌水又は生理食塩水のアンプルを提供することができる。
【０１１３】
アクチビンＡ、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／若しくはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニスト、又はアクチビンＡに対する抗体は、中性型又は塩型として配合できる。薬学的に許容可能な塩としては、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するものなど遊離型のアミノ基と共に形成されるもの、並びにナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するものなど遊離型のカルボキシル基と共に形成されるもの、が挙げられる。
【０１１４】
特定の経路で投与される、ＦＯＰの治療に有効なアクチビンＡ、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ２Ａ、及び／若しくはＡＣＶＲ２Ｂアンタゴニスト、又はアクチビンＡに対する抗体の量及び頻度（例えば、有効なレジメン）は、本明細書の記載に基づき、標準的臨床技術によって決定できる。加えて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを使用して、最適な用量範囲の同定に役立てることができる。配合物に使用する正確な用量はまた、投与経路、及び疾患の深刻度によって異なるため、担当医の判断及び各被験者の状況に従って決定するべきである。しかしながら、非経口投与、好ましくは静脈内投与又は皮下投与の好適な用量範囲は、概して、体重１キログラムあたり約２０〜５００００マイクログラムの活性化合物である。アクチビンＡに対する抗体の場合、好適な用量範囲としては、１〜２５ｍｇ／ｋｇ、２〜２０ｍｇ／ｋｇ、５〜１５ｍｇ／ｋｇ、８〜１２ｍｇ／ｋｇ、及び１０ｍｇ／ｋｇが挙げられる。
【０１１５】
鼻腔内投与の好適な用量範囲は、概して、約０．０１ｐｇ／ｋｇ体重〜１ｍｇ／ｋｇ体重である。有効量は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又は動物モデル試験系から得られる用量反応曲線から推定できる。
【０１１６】
投与の頻度はまた、他の因子の中でも特に疾患の重篤度及び薬剤の半減期などに応じて異なるが、通常、例えば、週２回、毎週、隔週、毎月、隔月など毎日と３か月に１回との間である。薬剤はまた、他の因子の中でも特に患者の状態又は閾値以下への薬剤の血中濃度での低下などに対応して、不規則間隔で投与できる。
【０１１７】
上記又は以下で引用した全ての特許出願、ウェブサイト、他の刊行物、アクセッション番号などは、あたかもそれぞれ個々のアイテムが参照により組み込まれると具体的かつ個別的に示されるように、あらゆる目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。異なるバージョンの配列がその時々においてアクセッション番号と関連付けられる場合、本願の有効出願日に当該アクセッション番号と関付けられたバージョンを意図する。有効出願日は、実際の出願日又は、該当する場合、アクセッション番号を参照する優先出願の出願日の早い方を意図する。同様に、異なるバージョンの刊行物、ウェブサイトなどがその時々に公開される場合、別途記載のない限り、本願の有効出願日の直近に公開されたバージョンを意図する。本発明の機構、工程、要素、実施形態、又は態様はいずれも、別途記載のない限り、組み合わせて使用することができる。
【実施例】
【０１１８】
実施例１：ＦＯＰのマウスモデルにおける異所性骨形成を抑制するためのＡＣＶＲ２Ａ−Ｆｃ／ＡＣＶＲ２Ｂ−Ｆｃの使用
ＡＣＶＲ２Ａ−Ｆｃ／ＡＣＶＲ２Ｂ−Ｆｃ治療によるタモキシフェン治療後、ＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］ＣＯＩＮ／＋；Ｇｔ（ＲＯＳＡ２６）ＳｏｒＣｒｅＥＲｔ２／＋を異所性骨形成から保護した。
【０１１９】
ＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］ＣＯＩＮ／＋；Ｇｔ（ＲＯＳＡ２６）ＳｏｒＣｒｅＥＲｔ２／＋と呼ぶＦＯＰのマウスモデルに、１ｍｇ／マウスの用量のタモキシフェンを８日間腹腔内投与した。１１例のマウスは、１０ｍｇ／ｋｇのＡＣＶＲ２Ａ−Ｆｃ及び１０ｍｇ／ｋｇのＡＣＶＲ２Ｂ−Ｆｃで週２回治療し、１０例のマウスは、１０ｍｇ／ｋｇの対象ｍＦｃで週２回、６週間治療した。マウスは、ベースライン時、タモキシフェン投与開始から２週間後、４週間後、及び６週間後に、ｉｎ  ｖｉｖｏ  μＣＴを使用して観察した。６週間後、ｍＦｃグループのマウス１０例中９例が、少なくとも１つの位置で異所性骨を形成した。対照的に、ＡＣＶＲ２Ａ−Ｆｃ及びＡＣＶＲ２Ｂ−Ｆｃグループのマウスは１１例中２例しか異所性骨の形成を示さず、この骨のサイズは小さかった。これらの結果を
図１に示す。
【０１２０】
実施例２：ＦＯＰのマウスモデルにおける異所性骨形成を抑制するためのＡＣＶＲ１キナーゼ小分子阻害剤の使用
ＡＣＶＲ１キナーゼ阻害剤ＬＤＮ−２１２８５４治療によるタモキシフェン治療後、ＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］ＣＯＩＮ／＋；Ｇｔ（ＲＯＳＡ２６）ＳｏｒＣｒｅＥＲｔ２／＋
を異所性骨形成から保護した。
【０１２１】
１６例のＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］ＣＯＩＮ／＋；Ｇｔ（ＲＯＳＡ２６）ＳｏｒＣｒｅＥＲｔ２／＋マウスに、１ｍｇ／マウスの用量のタモキシフェンを８日間腹腔内投与した。８例のマウスは、３ｍｇ／ｋｇのＡＣＶＲ１キナーゼ阻害剤ＬＤＮ−２１２８５４（Ｍｏｈｅｄａｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．８：１２９１〜１３０２）で１日２回、４週間治療した。８例のマウスは、ビヒクル対照で１日２回、４週間治療した。マウスは、ベースライン時、タモキシフェン投与開始から２週間後及び４週間後に、ｉｎ  ｖｉｖｏ  μＣＴを使用して観察した。４週間後、ビヒクル対象グループのマウス８例中８例が異所性骨形成を示した。これらのマウスのうち６例では、異所性骨病変のサイズが大きかった。対照的に、ＬＤＮ−２１２８５４で治療したグループでは、マウス８例中３例が異所性骨形成を示し、３例のマウスで形成された異所性骨病変のサイズは、ビヒクル対照グループと比較して小さかった。これらの結果を図２に示す。
【０１２２】
実施例３：ＦＯＰのマウスモデルにおける異所性骨形成を抑制するためのアクチビンＡに対する抗体の使用
２３例のＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］ＣＯＩＮ／＋；Ｇｔ（ＲＯＳＡ２６）ＳｏｒＣｒｅＥＲｔ２／＋マウスは、１ｍｇ／マウスの容量のタモキシフェンで腹腔内投与により８日間治療した。７例のマウスは、２５ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照抗体で週２回治療し、８例のマウスは、２５ｍｇ／ｋｇのアクチビンＡ抗体（Ｈ４Ｈ１０４４６Ｐ）で週２回治療し、８例のマウスは、１０ｍｇ／ｋｇのＡＣＶＲ２ａ−Ｆｃで週２回、３週間治療した。これらの薬剤での治療は、タモキシフェン治療の開始と同時に開始した。マウスは、ベースライン時、タモキシフェン投与開始から２週間後及び３週間後に、ｉｎ  ｖｉｖｏマイクロコンピュータ断層撮影（μＣＴ）を使用して観察した。図３は、３週間後に、アイソタイプ対照抗体グループの全てのマウスが、少なくとも１つの位置で異所性骨を形成し、対照的に、アクチビンＡ抗体グループのマウスは、この時点で異所性骨の形成を示さなかったことを示す。ＡＣＶＲ２ａ−Ｆｃグループの２例のマウスは、３週間の時点で異所性骨を形成した。
【０１２３】
実施例４：
アクチビンＡ並びにＡｃｖｒ２ａ及びｂ遮断抗体の両方によるタモキシフェン治療後、ＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］ＣＯＩＮ／＋；Ｇｔ（ＲＯＳＡ２６）ＳｏｒＣｒｅＥＲｔ２／＋を異所性骨形成から保護した。
【０１２４】
２６例のＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］ＣＯＩＮ／＋；Ｇｔ（ＲＯＳＡ２６）ＳｏｒＣｒｅＥＲｔ２／＋マウスに、４０ｍｇ／ｋｇの用量のタモキシフェンを８日間腹腔内投与した。８例のマウスは、１０ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照抗体（ＲＥＧＮ１９４５）で、９例のマウスは、１０ｍｇ／ｋｇのアクチビンＡ抗体（Ｈ４Ｈ１０４４６Ｐ）（ＲＥＧＮ２４７７）で、９例のマウスは、１０ｍｇ／ｋｇのＡｃｖｒ２ａ／Ａｃｖｒ２ｂ抗体で週２回、６週間治療した。マウスは、ベースライン時、タモキシフェン投与開始から２週間後、３週間後、及び４週間後に、ｉｎ  ｖｉｖｏ  μＣＴを使用して観察した。図４は、４週間後に、アイソタイプ対照抗体グループでは、マウス８例中７例が少なくとも１つの位置で異所性骨を形成し、対照的にアクチビンＡ抗体で治療したグループでは１例のマウスのみ、Ａｃｖｒ２ａ／Ａｃｖｒ２ｂ抗体で治療したグループでは、３例のマウスが４週間の時点で異所性骨を形成したことを示す。抗体で治療したグループで形成された異所性骨のサイズは、アイソタイプ対照で治療したグループよりも小さかった。
【０１２５】
実施例５：
アクチビンＡ遮断抗体によるタモキシフェン治療後、ＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］ＣＯＩＮ／＋；Ｇｔ（ＲＯＳＡ２６）ＳｏｒＣｒｅＥＲｔ２／＋を異所性骨形成から保護した。
【０１２６】
３５例のＡＣＶＲ１［Ｒ２０６Ｈ］ＣＯＩＮ／＋；Ｇｔ（ＲＯＳＡ２６）ＳｏｒＣｒｅＥＲｔ２／＋マウスに、４０ｍｇ／ｋｇのタモキシフェンを８日間腹腔内投与した。８例のマウスは２５ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照抗体（ＲＥＧＮ１９４５）で、９例のマウスは２５ｍｇ／ｋｇのアクチビンＡ抗体（Ｈ４Ｈ１０４４６Ｐ）（ＲＥＧＮ２４７７）で、９例のマウスは１０ｍｇ／ｋｇのアクチビンＡ抗体（ＲＥＧＮ２４７７）で、９例のマウスは１ｍｇ／ｋｇのアクチビンＡ抗体（ＲＥＧＮ２４７７）で週１回、６週間治療した。マウスは、ベースライン時、タモキシフェン投与開始から２週間後、３週間後、４週間後、及び６．５週間後に、ｉｎ  ｖｉｖｏ  μＣＴを使用して観察した。各マウスの異所性骨の体積をμＣＴ画像から算出した。図５は、４週間後に、アイソタイプ対照抗体グループの全てのマウスが少なくとも１つの位置で異所性骨を形成し、一方、アクチビンＡ抗体で治療したグループでは、それぞれ２例のマウスのみが形成したことを示す。６．５週間後の時点では、アイソタイプで治療したグループの異所性骨の平均総体積は、２５ｍｇ／ｋｇのアクチビン抗体で治療したグループの１．８７ｍ３、１０ｍｇ／ｋｇのアクチビン抗体で治療したグループの０．３ｍｍ３、１ｍｇ／ｋｇのアクチビン抗体で治療したグループの７．３ｍｍ３と比較して、６５．４ｍｍ３であった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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