(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
0006550538.tif 000043
［式中、
Ｒ１はＨであるか、構造：
【化２】
0006550538.tif 000044
を有し；
Ｒ３はＨ、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ８アルキル、置換されていてもよい３〜１０員シクロアルキル、置換されていてもよい３〜１０員ヘテロシクリル、置換されていてもよい６〜１０員アリール、または置換されていてもよい５〜１０員ヘテロアリールであり；
Ｒ５はＨであるか、構造：
【化３】
0006550538.tif 000045
を有し；かつ
Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ８アルキルである］
の化合物もしくはそのＮ−オキシド、またはそれらのそれぞれの薬学的に許容される塩、または前記のそれぞれの薬学的に許容される溶媒和物。
【請求項２】
Ｒ１がＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が
【化４】
0006550538.tif 000046
の構造を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ３がＨである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ５が
【化５】
0006550538.tif 000047
である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１１およびＲ１２が独立してＣ１〜Ｃ８アルキルである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１１がメチルであり、かつＲ１２がメチルである、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ５がＨである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ３がＣ１〜Ｃ８アルキルである、請求項１〜３および請求項５〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ３がエチルである、請求項１〜３および請求項５〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
【化６】
0006550538.tif 000048
もしくはそのＮ−オキシド、またはそれらのそれぞれの薬学的に許容される塩、または前記のそれぞれの薬学的に許容される溶媒和物からなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物と少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物。
【請求項１３】
固形型、液状型、注射可能型、またはリポソーム製剤である、請求項１２に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
請求項１１に記載の化合物と少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物。
【請求項１５】
固形型、液状型、注射可能型、またはリポソーム製剤である、請求項１４に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
がんの治療薬の製造における、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物の使用方法であって、
前記がんが、結腸がん、非小肺がん、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、小細胞肺がん、子宮頸がん、胃がん、乳がん、前立腺がん、皮膚がん、黒色腫、リンパ腫、脳腫瘍、肉腫、精巣がん、卵巣がん、腎がん、頭頸部がん、肝がん、白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、ヘアリー細胞白血病、Ｔ細胞前リンパ球性白血病、大型顆粒リンパ球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、および血液がんである、使用方法。
【請求項１７】
前記がんが固形腫瘍を含む、請求項１６に記載の使用方法。
【請求項１８】
腫瘍成長を遅延または退縮させるための治療薬の製造における、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物の使用方法。
【請求項１９】
前記腫瘍成長が固形腫瘍である、請求項１８に記載の使用方法。
【請求項２０】
前記腫瘍成長が、結腸がん、非小肺がん、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、小細胞肺がん、子宮頸がん、胃がん、乳がん、前立腺がん、皮膚がん、黒色腫、リンパ腫、脳腫瘍、肉腫、精巣がん、卵巣がん、腎がん、頭頸部がん、肝がん、白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、ヘアリー細胞白血病、Ｔ細胞前リンパ球性白血病、大型顆粒リンパ球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、および血液がんである、請求項１８に記載の使用方法。
【請求項２１】
がんを処置するための治療薬の製造における、請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の医薬組成物の使用方法。
【請求項２２】
前記がんが、結腸がん、非小肺がん、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、小細胞肺がん、子宮頸がん、胃がん、乳がん、前立腺がん、皮膚がん、黒色腫、リンパ腫、脳腫瘍、肉腫、精巣がん、卵巣がん、腎がん、頭頸部がん、肝がん、白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、ヘアリー細胞白血病、Ｔ細胞前リンパ球性白血病、大型顆粒リンパ球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、および血液がんである、請求項２１に記載の使用方法。
【請求項２３】
前記がんが固形腫瘍を含む、請求項２１に記載の使用方法。
【請求項２４】
がんを処置する必要がある対象におけるがんを処置するのに使用される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２５】
約１５ｍｇ／ｍ２〜約１５００ｍｇ／ｍ２の請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物が前記対象に投与される、請求項２４に記載の使用のための化合物。
【請求項２６】
前記がんが、結腸がん、非小肺がん、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、小細胞肺がん、子宮頸がん、胃がん、乳がん、前立腺がん、皮膚がん、黒色腫、リンパ腫、脳腫瘍、肉腫、精巣がん、卵巣がん、腎がん、頭頸部がん、肝がん、白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、ヘアリー細胞白血病、Ｔ細胞前リンパ球性白血病、大型顆粒リンパ球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、および血液がんである、請求項２４に記載の使用のための化合物。
【請求項２７】
前記がんが固形腫瘍を含む、請求項２４に記載の使用のための化合物。
【請求項２８】
腫瘍成長を遅延または退縮させる必要がある対象における腫瘍成長を遅延または退縮させるのに使用される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２９】
前記腫瘍成長が固形腫瘍である、請求項２８に記載の使用のための化合物。
【請求項３０】
前記腫瘍成長が、結腸がん、非小肺がん、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、小細胞肺がん、子宮頸がん、胃がん、乳がん、前立腺がん、皮膚がん、黒色腫、リンパ腫、脳腫瘍、肉腫、精巣がん、卵巣がん、腎がん、頭頸部がん、肝がん、白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、ヘアリー細胞白血病、Ｔ細胞前リンパ球性白血病、大型顆粒リンパ球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、および血液がんである、請求項２８に記載の使用のための化合物。
【請求項３１】
がんを処置する必要がある対象におけるがんを処置するのに使用される、請求項１２〜１５のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項３２】
前記がんが、結腸がん、非小肺がん、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、小細胞肺がん、子宮頸がん、胃がん、乳がん、前立腺がん、皮膚がん、黒色腫、リンパ腫、脳腫瘍、肉腫、精巣がん、卵巣がん、腎がん、頭頸部がん、肝がん、白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、ヘアリー細胞白血病、Ｔ細胞前リンパ球性白血病、大型顆粒リンパ球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、および血液がんである、請求項３１に記載の使用のための薬学的組成物。
【請求項３３】
前記がんが固形腫瘍を含む、請求項３２に記載の使用のための薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、ポドフィロトキシンの誘導体、その組成物、ならびに対象におけるさまざまなタイプのがんを処置しかつ／または対象におけるさまざまなタイプの腫瘍成長を遅延させもしくは退縮させるためにそれらを使用することに関する。
【背景技術】
【０００２】
ポドフィロトキシンは、式：
【化１】
0006550538.tif 000002
を有する既知化合物である。この化合物は抗ウイルス薬および抗新生物剤としての活性を示す。この開示はがんを処置するのに有用なポドフィロトキシンの誘導体に関する。
【発明の概要】
【０００３】
一態様では、式（Ｉ）：
【化２】
0006550538.tif 000003
の化合物もしくはそのＮ−オキシド、またはそれらのそれぞれの薬学的に許容される塩、または前記のそれぞれの薬学的に許容される溶媒和物が、ここに提供され、式中、
Ｒ１はＨであるか、構造：
【化３】
0006550538.tif 000004
を有し；
Ｒ３はＨ、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ８アルキル、置換されていてもよい３〜１０員シクロアルキル、置換されていてもよい３〜１０員ヘテロシクリル、置換されていてもよい６〜１０員アリール、または置換されていてもよい５〜１０員ヘテロアリールであり；
Ｒ５はＨであるか、構造：
【化４】
0006550538.tif 000005
を有し；かつ
Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ８アルキルである。
【０００４】
別の一態様では、ここに提供される化合物と少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物が、ここに提供される。
【０００５】
別の一態様では、がんを処置する必要がある対象におけるがんを処置する方法であって、ここに提供される化合物の治療有効量を前記対象に投与することを含む方法が、ここに提供される。
【０００６】
別の一態様では、腫瘍成長を遅延または退縮させる必要がある対象における腫瘍成長を遅延または退縮させる方法であって、ここに提供される化合物の治療有効量を前記対象に投与することを含む方法が、ここに提供される。
【０００７】
別の一態様では、がんを処置する必要がある対象におけるがんを処置する方法であって、ここに提供される薬学的組成物の治療有効量を前記対象に投与することを含む方法が、ここに提供される。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１Ａ】Ｎ２の１Ｈ核磁気共鳴スペクトルを示す図である。
【図１Ｂ】目的化合物１の１Ｈ核磁気共鳴スペクトルを示す図である。
【図１Ｃ】目的化合物３の１Ｈ核磁気共鳴スペクトルを示す図である。
【図１Ｄ】目的化合物３の１Ｈ核磁気共鳴スペクトルを示す図である。
【図１Ｅ】目的化合物３の１Ｈ核磁気共鳴スペクトルを示す図である。
【図１Ｆ】目的化合物４の１Ｈ核磁気共鳴スペクトルを示す図である。
【０００９】
【図２】Ｎ２の１３Ｃ核磁気共鳴スペクトルを示す図である。
【００１０】
【図３Ａ】Ｎ２の液体クロマトグラフィー−マススペクトルを示す図である。
【図３Ｂ】目的化合物１の液体クロマトグラフィー−マススペクトルを示す図である。
【図３Ｃ】目的化合物３の液体クロマトグラフィー−マススペクトルを示す図である。
【図３Ｄ】目的化合物４の液体クロマトグラフィー−マススペクトルを示す図である。
【００１１】
【図４Ａ】ＣＯＬＯ２０５ヒト結腸がん異種移植片モデルの処置における製剤化されたＮ２−ＨＣｌ（ｉ．ｖ．）の抗腫瘍活性を示す図である。
【図４Ｂ】ＣＯＬＯ２０５ヒト結腸がん異種移植片モデルの処置におけるＮ２−ＨＣｌ（ｉ．ｐ．）の抗腫瘍活性を示す図である。
【００１２】
【図５Ａ】ＨＣＴ１１６ヒト結腸がん異種移植片モデルの処置における製剤化されたＮ２（ｉ．ｖ．）の抗腫瘍活性を示す図である。
【図５Ｂ】ＨＣＴ１１６ヒト結腸がん異種移植片モデルの処置におけるＮ２−ＨＣｌ（ｉ．ｐ．）の抗腫瘍活性を示す図である。
【００１３】
【図６】表１．７に記載する異なるマウス群の腫瘍成長曲線を示す図である。
【００１４】
【図７】Ｋ５６２異種移植片モデルの処置における製剤化されたＮ２およびイマチニブの抗腫瘍活性を示す図である。
【発明の詳細な説明】
【００１５】
本開示の化合物はマウス中の腫瘍に対して活性であり、一般に忍容性が高いか、そうであると考えられる。本開示の化合物はさまざまなタイプのがんを処置するのに有用であり、例えば経口投与用、外用投与用、または非経口投与用の薬学的調製物を調製するために、製剤化することができる。
【００１６】
別段の表示がある場合を除き、本明細書および特許請求の範囲において使用される、成分の量、反応条件などを表す数字はすべて、いずれの場合も用語「約」によって修飾されていると理解されるべきである。したがって、反対の表示がある場合を除き、以下の明細書および添付の特許請求の範囲に示す数値パラメータは、概数である。各数値パラメータは、少なくとも、報告されている有効数字の数を考慮し、通常の丸め技法を適用することによって解釈されるべきである。
【００１７】
この開示の全体を通して、本文では、本化合物、組成物および方法のさまざまな実施形態に言及する。記載されるさまざまな実施形態は、さまざまな具体例を提供しようとするものであり、択一的な種発明の説明であると解釈すべきでない。むしろ、ここに提供されるさまざまな実施形態の説明は、その範囲がオーバーラップすることもあり得る点に注意すべきである。ここで論じられる実施形態は単なる例示であり、本発明の範囲を制限しようとするものではない。
【００１８】
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上そうでないことが明らかな場合を除き、複数の指示対象を包含することに、注意しなければならない。したがって、例えば「賦形剤」（ａｎ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ）への言及は、複数の賦形剤を包含する。
【００１９】
本明細書では、別段の表示がある場合を除き、以下の定義が適用されるものとする。さらに、本明細書において使用されるあらゆる用語または記号が以下の説明において定義されていない場合、それは、当技術分野におけるその通常の意味を有するものとする。
【００２０】
「を含む」は、当該組成物および方法は列挙した要素を包含するが、他の要素を排除しないことを意味するものとする。組成物および方法を定義するために使用される場合、「から本質的になる」は、当該組合せにとって何らかの本質的意義を持つ他の要素を排除することを意味するものとする。例えば、ここに定義される要素から本質的になる組成物は、請求項に係る発明の基本的かつ新規な特徴に実質的な影響を及ぼすことがない他の要素を、排除しないであろう。「からなる」は、痕跡量を上回る他の成分および列挙した方法工程以外の実質的方法工程を排除することを意味するものとする。これらの移行語のそれぞれによって定義されるこれらの実施形態は、本発明の範囲内にある。
【００２１】
用語「アルキル」は、表示した数の炭素原子を有する一価飽和脂肪族炭化水素ラジカルを指す。例えば「Ｃ１〜６アルキル」または「１〜６炭素のアルキル」または「Ａｌｋ１〜６」は、当該構造中に１〜６個の炭素を含有する任意のアルキル基を指すだろう。「Ｃ１〜２０アルキル」は、１〜２０個の炭素を有する任意のアルキル基を指す。アルキルは直鎖（すなわち線状）であっても分岐鎖であってもよい。低級アルキルラジカルの代表的な例として、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、イソプロピル、イソブチル、イソペンチル、アミル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチルなどが、それらの分岐型と共にあげられる。このラジカルは、随意に、本発明の範囲内に含まれる化合物の調製を著しく妨害せず、当該化合物の効力を著しく低減することもない位置で、置換基によって置換されていてもよい。アルキルは、随意に、ハロ、低級アルコキシ、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、またはアミノからなる群より独立して選択される１〜５個の置換基で置換されていてもよい。
【００２２】
用語「アルコキシ」は、式ＲＯ−の一価ラジカルを指し、式中、Ｒは本明細書に定義するアルキルである。低級アルコキシは１〜６炭素原子のアルコキシを指し、高級アルコキシは７炭素原子以上のアルコキシである。代表的な低級アルコキシラジカルとして、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｎ−ペンチルオキシ、ｎ−ヘキシルオキシ、イソプロポキシ、イソブトキシ、イソペンチルオキシ、アミルオキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ペンチルオキシなどがあげられる。高級アルコキシラジカルとしては、本明細書に示す高級アルキルラジカルに対応するものがあげられる。このラジカルは、随意に、本発明の範囲内に含まれる化合物の調製を著しく妨害せず、当該化合物の効力を著しく低減することもない位置で、置換基によって置換されていてもよい。このラジカルは、随意に、ハロ、低級アルキル、低級アルコキシ、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、またはアミノからなる群より独立して選択される１〜５個の置換基で置換されていてもよい。
【００２３】
用語「シクロアルキル」は、環を形成する３個以上の炭素を有する一価脂環式飽和炭化水素ラジカルを指す。既知のシクロアルキル化合物には最大で３０炭素原子以上を有するものもあるが、一般的には、環内の炭素は３〜７個であるだろう。後者には、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびシクロヘプチルがある。このラジカルは、随意に、本発明の範囲内に含まれる化合物の調製を著しく妨害せず、当該化合物の効力を著しく低減することもない位置で、置換基によって置換されていてもよい。シクロアルキルは、随意に、ハロ、低級アルキル、低級アルコキシ、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、ハロゲン化低級アルキル、ハロゲン化低級アルコキシ、ヒドロキシカルボニル、低級アルコキシカルボニル、低級アルキルカルボニルオキシ、および低級アルキルカルボニルアミノからなる群より独立して選択される１〜５個の置換基で置換される。
【００２４】
用語「ヒドロキシカルボニル」は、式−Ｃ（Ｏ）ＯＨを有する一価ラジカルである。
【００２５】
用語「低級アルコキシカルボニル」は、式−Ｃ（Ｏ）ＯＡｌｋを有する一価ラジカルであり、式中、Ａｌｋは低級アルキルである。
【００２６】
用語「低級アルキルカルボキシルオキシ」は、式−ＯＣ（Ｏ）Ａｌｋを有する一価ラジカルであり、式中、Ａｌｋは低級アルキルである。
【００２７】
用語「低級アルキルカルボニルアミノ」は、式−ＮＨＣ（Ｏ）Ａｌｋを有する一価ラジカルであり、式中、Ａｌｋは低級アルキルである。
【００２８】
用語「アルキルアミノ」は、式−ＮＲ１，Ｒ２を有する一価ラジカルであり、式中、Ｒ１はアルキルであり、Ｒ２は水素またはアルキルであって、前記アルキルは、随意に、置換される。
【００２９】
「アミノ」は基−ＮＨ２を指す。
【００３０】
「アリール」または「Ａｒ」は、単一の環（例えばフェニル（Ｐｈ））を有するか、複数の縮合環（例えばナフチルまたはアントリル）を有する、６〜１４炭素原子の一価芳香族炭素環式基を指し、前記縮合環は、結合点が芳香族炭素原子にあるのであれば、芳香族であっても芳香族でなくてもよい（例えば２−ベンゾオキサゾリノン、２Ｈ−１，４−ベンゾオキサジン−３（４Ｈ）−オン−７−イルなど）。好ましいアリール基としてフェニルおよびナフチルがあげられる。
【００３１】
「置換アリール」は、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノカルボニル、アミノチオカルボニル、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノスルホニル、アミノスルホニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アミジノ、アリール、置換アリール、アリールオキシ、置換アリールオキシ、アリールチオ、置換アリールチオ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、シアノ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、置換シクロアルキルオキシ、シクロアルキルチオ、置換シクロアルキルチオ、グアニジノ、置換グアニジノ、ハロ、ヒドロキシ、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、置換ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールチオ、置換ヘテロアリールチオ、複素環式、置換複素環式、ヘテロシクリルオキシ、置換ヘテロシクリルオキシ、ヘテロシクリルチオ、置換ヘテロシクリルチオ、ニトロ、ＳＯ３Ｈ、置換スルホニル、スルホニルオキシ、チオアシル、チオール、アルキルチオ、および置換アルキルチオからなる群より選択される１〜５個、好ましくは１〜３個、より好ましくは１〜２個の置換基で置換されたアリール基を指し、該置換基は本明細書において定義される。
【００３２】
「ハロ」置換基は、クロロ、ブロモ、ヨード、およびフルオロから選ばれる一価ハロゲンラジカルである。「ハロゲン化」化合物は、１つ以上のハロ置換基で置換されているものである。
【００３３】
「ヘテロアリール」は、環内に１〜１０個の炭素原子と酸素、窒素および硫黄からなる群より選択される１〜４個のヘテロ原子とを持つ芳香族基を指す。そのようなヘテロアリール基は、単一の環（例えばピリジニルもしくはフリル）または複数の縮合環（例えばインドリジニルもしくはベンゾチエニル）を有することができ、前記縮合環は、結合点が芳香族ヘテロアリール基の原子を介しているのであれば、芳香族であっても芳香族でなくてもよく、かつ／またはヘテロ原子を含有しても含有しなくてもよい。一実施形態において、ヘテロアリール基の窒素および／または硫黄環原子は、随意に、酸化されてＮ−オキシド（Ｎ→Ｏ）、スルフィニル、またはスルホニル部分を与える。好ましいヘテロアリールとして、ピリジニル、ピロリル、インドリル、チオフェニル、およびフラニルなどの５員または６員ヘテロアリールがあげられる。
【００３４】
「置換ヘテロアリール」は、置換アリールについて定義したものと同じ置換基の群からなる群より選択される１〜５個、好ましくは１〜３個、より好ましくは１〜２個の置換基で置換されたヘテロアリール基を指す。
【００３５】
「複素環」または「複素環式」または「ヘテロシクロアルキル」または「ヘテロシクリル」は、１〜１０個の環炭素原子と窒素、硫黄、または酸素からなる群より選択される１〜４個の環ヘテロ原子とを有する飽和または部分飽和の非芳香族基を指す。Ｃｘシクロアルキルは、環ヘテロ原子を含む環原子数がｘであるヘテロシクロアルキル基を指す。複素環は、単一の環、または縮合架橋環系およびスピロ環系を含む複数の縮合環を包含する。縮合環系において、結合点が非芳香環を介しているのであれば、環の１つ以上は、シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであることができる。一実施形態において、複素環式基の窒素および／または硫黄原子は、随意に、酸化されてＮ−オキシド、スルフィニル、スルホニル部分を与える。
【００３６】
「置換複素環式」または「置換ヘテロシクロアルキル」または「置換ヘテロシクリル」は、置換シクロアルキルについて定義したものと同じ置換基のうちの１〜５個、好ましくは１〜３個の置換基で置換されたヘテロシクリル基を指す。
【００３７】
複素環およびヘテロアリールの例としては、アゼチジン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、インドール、ジヒドロインドール、インダゾール、プリン、キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチルピリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、フェナントロリン、イソチアゾール、フェナジン、イソオキサゾール、フェノキサジン、フェノチアジン、イミダゾリジン、イミダゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドリン、フタルイミド、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン、チアゾール、チアゾリジン、チオフェン、ベンゾ［ｂ］チオフェン、モルホリニル、チオモルホリニル（チアモルホリニルともいう）、１，１−ジオキソチオモルホリニル、ピペリジニル、ピロリジン、およびテトラヒドロフラニルがあげられるが、それらに限定されるわけではない。
【００３８】
「環式アミノ」は、窒素、酸素、または硫黄などの追加ヘテロ原子を２つ以上有しない飽和５員、６員、または７員環式アミン環の一価ラジカルである。代表的な例としては、例えば１−ピロリジノ、１−ピペリジノ、モルホリノ、ピペラジノ、３−ベンジルピペリジノなどがあげられる。これらは、置換されていても、無置換であってもよい。置換されている場合、それらは一般的には、低級アルキル、低級シクロアルキル、ヒドロキシ低級アルキル、フェニル（置換または無置換）、ベンジル（置換または無置換）、アミノカルボニルメチル、低級アルキルアミノカルボニルメチル、アミノ、モノ−またはジ−低級アルキルアミノ、環式アミノ、または５員もしくは６員複素環式環から選ばれる、２つ以下の置換基を有するであろう。
【００３９】
他の化学用語には、標準的な教科書および辞書からの指針に基づいて当業者が理解する、それぞれの標準的な意味が与えられる。
【００４０】
用語「ＭＴＤ」は最大耐量（ｍａｘｉｍｕｍ  ｔｏｌｅｒａｔｅｄ  ｄｏｅｓ）の略語である。
【００４１】
用語「ｎＭ」はナノモル濃度の略語である。
【００４２】
用語「ｉｐ」は腹腔内の略語である。
【００４３】
患者における疾患の「処置」（ｔｒｅａｔｉｎｇまたはｔｒｅａｔｍｅｎｔ）とは、１）当該疾患の素因がある患者または当該疾患の症状をまだ呈していない患者において、当該疾患が起こることを防止すること、２）当該疾患を阻害し、もしくはその進展を停止させること、または３）当該疾患を改善し、もしくは当該疾患の退縮を引き起こすことを指す。
【００４４】
「対象」は哺乳動物を指し、ヒトおよび非ヒト哺乳動物を包含する。患者の例として、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ブタ、ウサギ、ネコ、イヌ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、およびヒトがあげられるが、それらに限定されるわけではない。いくつかの実施形態において、患者とはヒトを指す。
【００４５】
用語「薬学的に許容される」は、インビボで、好ましくはヒト投与に関して、安全であり、非毒性であることを指す。
【００４６】
「薬学的に許容される塩」は、塩であって、薬学的に許容されるものを指す。本明細書に記載する化合物はいずれも、薬学的に許容される塩として投与することができる。
【００４７】
「塩」は、酸と塩基との間で形成されるイオン化合物を指す。ここに提供される化合物が酸性官能性を含有する場合は、そのような塩として、限定するわけではないが、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、およびアンモニウム塩があげられる。本明細書では、アンモニウム塩として、プロトン化窒素塩基およびアルキル化窒素塩基を含有する塩があげられる。薬学的に許容される塩において有用な例示的かつ非限定的なカチオンとして、Ｎａ、Ｋ、Ｒｂ、Ｃｓ、ＮＨ４、Ｃａ、Ｂａ、イミダゾリウム、および天然アミノ酸に基づくアンモニウムカチオンがあげられる。ここで利用される化合物が塩基性官能性を含有する場合は、そのような塩として、限定するわけではないが、カルボン酸およびスルホン酸などの有機酸ならびにハロゲン化水素、硫酸、リン酸などの鉱酸の塩があげられる。薬学的に許容される塩において有用な例示的かつ非限定的なアニオンとして、シュウ酸イオン、マレイン酸イオン、酢酸イオン、プロピオン酸イオン、コハク酸イオン、酒石酸イオン、塩化物イオン、硫酸イオン、硫酸水素イオン、一塩基性、二塩基性および三塩基性リン酸イオン、メシル酸イオン、トシル酸イオンなどがあげられる。
【００４８】
化合物または組成物の「有効量」または用量は、本明細書における開示に基づいて望まれる意図した結果をもたらす化合物および組成物の量を指す。有効量は、細胞培養または実験動物において標準的な薬学的手順によって、例えば限定するわけではないが、ＬＤ５０（母集団の５０％にとって致死的である用量）およびＥＤ５０（母集団の５０％において治療的に有効である用量）を決定することによって、決定することができる。治療効果に対する毒性効果の用量比が治療係数であり、これは比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表すことができる。
【００４９】
化合物または組成物の「治療有効量」または用量は、患者における症状の低減もしくは阻害または生存期間の延長をもたらす化合物または組成物の量を指す。これらの結果は、化合物または組成物の複数回の投与を必要とし得る。
【００５０】
本明細書の全体を通して使用される用語「随意の」または「随意に」は、続いて記載される事象または状況は起こり得るが、起こる必要はないこと、および当該記載が当該事象または状況が起こる場合と当該事象または状況が起こらない場合とを包含することを意味する。例えば「窒素原子は、随意に、酸化されてＮ−オキシド（Ｎ→Ｏ）部分を与える」は、窒素原子は酸化されていてもよいが、酸化されている必要はないことを意味し、この記載は窒素原子が酸化されていない状況と窒素原子が酸化されている状況とを包含する。
【００５１】
用語「置換されていてもよい」は、置換された基または無置換の基を指す。この基は、１つ以上の置換基、例えば１、２、３、４または５個の置換基で置換され得る。好ましくは、置換基は、ここに掲載される官能基から選択される。より好ましい一定の実施形態において、置換基は、オキソ、ハロ、−ＣＮ、ＮＯ２、−ＣＯ２Ｒ１００、−ＯＲ１００、−ＳＲ１００、−ＳＯＲ１００、−ＳＯ２Ｒ１００、−ＮＲ１０１Ｒ１０２、−ＣＯＮＲ１０１Ｒ１０２、−ＳＯ２ＮＲ１０１Ｒ１０２、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、−ＣＲ１００＝Ｃ（Ｒ１００）２、−ＣＣＲ１００、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ１０ヘテロシクリル、Ｃ６〜Ｃ１２アリールおよびＣ５〜Ｃ１２ヘテロアリールから選択され、ここで、各Ｒ１００は独立して水素であるか、またはＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル；Ｃ３〜Ｃ１０ヘテロシクリル；Ｃ６〜Ｃ１２アリール；もしくはＣ２〜Ｃ１２ヘテロアリールであり、各アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールは、随意に、１〜３個のハロ、１〜３個のＣ１〜Ｃ６アルキル、１〜３個のＣ１〜Ｃ６ハロアルキルまたは１〜３個のＣ１〜Ｃ６アルコキシ基で置換される。より好ましくは、置換基は、クロロ、フルオロ、−ＯＣＨ３、メチル、エチル、ｉｓｏ−プロピル、シクロプロピル、−ＯＣＦ３、−ＣＦ３および−ＯＣＨＦ２からなる群より選択される。
【００５２】
Ｒ１０１およびＲ１０２は、独立して、水素、随意に−ＣＯ２Ｈもしくはそのエステル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、オキソ、−ＣＲ１０３＝Ｃ（Ｒ１０３）２、−ＣＣＲ、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ１０ヘテロシクリル、Ｃ６〜Ｃ１２アリール、またはＣ２〜Ｃ１２ヘテロアリールで置換された、Ｃ１〜Ｃ８アルキルであるか（ここで、各Ｒ１０３は、独立して、水素であるか、またはＣ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル；Ｃ３〜Ｃ１０ヘテロシクリル；Ｃ６〜Ｃ１２アリール；もしくはＣ２〜Ｃ１２ヘテロアリールであり、各シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールは、随意に、１〜３個のアルキル基または１〜３個のハロ基で置換される）、またはＲ１０１とＲ１０２は、それらが結合している窒素原子と共に全体として、５〜７員複素環を形成する。
【００５３】
別段の表示がある場合を除き、本明細書において明示的に定義されていない置換基の命名は、その官能性の末端部分を名付けた後、結合点に向かって、隣接する官能性を名付けることによって到達される。例えば、置換基「アルコキシカルボニルアルキル」は、基（アルコキシ）−Ｃ（Ｏ）−（アルキル）−を指す。
【００５４】
上に定義した置換された基のすべてにおいて、それ自体へのさらなる置換基を持つ置換基を定義することによって到達されるポリマー（例えば、それ自体が置換アリール基で置換されている置換アリール基を置換基として有する置換アリールなど）は、本明細書では包含が意図されていないと理解される。そのような例において、そのような置換基の最大数は３である。言い換えると、上記の定義のそれぞれは、例えば置換アリール基は−置換アリール−（置換アリール）−置換アリールに制限されるという制限による制約を受ける。
【００５５】
化合物
一態様では、式（Ｉ）：
【化５】
0006550538.tif 000006
の化合物もしくはそのＮ−オキシド、またはそれらのそれぞれの薬学的に許容される塩、または前記のそれぞれの薬学的に許容される溶媒和物が、ここに提供され、式中、
Ｒ１はＨであるか、構造：
【化６】
0006550538.tif 000007
を有し；
Ｒ３はＨ、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ８アルキル、置換されていてもよい３〜１０員シクロアルキル、置換されていてもよい３〜１０員ヘテロシクリル、置換されていてもよい６〜１０員アリール、または置換されていてもよい５〜１０員ヘテロアリールであり；
Ｒ５はＨであるか、構造：
【化７】
0006550538.tif 000008
を有し；かつ
Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ８アルキルである。
【００５６】
一実施形態において、Ｒ１はＨである。別の一実施形態において、Ｒ１は構造：
【化８】
0006550538.tif 000009
を有する。
【００５７】
一実施形態において、Ｒ５はＨである。別の一実施形態において、Ｒ５は
【化９】
0006550538.tif 000010
である。
【００５８】
一実施形態において、Ｒ１１は置換されていてもよいＣ１〜Ｃ８アルキルである。別の一実施形態において、Ｒ１１はＣ１〜Ｃ８アルキルである。別の一実施形態において、Ｒ１１はメチルである。
【００５９】
一実施形態において、Ｒ１２は置換されていてもよいＣ１〜Ｃ８アルキルである。別の一実施形態において、Ｒ１２はＣ１〜Ｃ８アルキルである。別の一実施形態において、Ｒ１２はメチルである。
【００６０】
一実施形態において、Ｒ３はＨである。一実施形態において、Ｒ３は置換されていてもよいＣ１〜Ｃ８アルキルである。別の一実施形態において、Ｒ３はＣ１〜Ｃ８アルキルである。別の一実施形態において、Ｒ３は置換されていてもよい３〜１０員シクロアルキルである。別の一実施形態において、Ｒ３は置換されていてもよい３〜１０員ヘテロシクリルである。別の一実施形態において、Ｒ３は置換されていてもよい６〜１０員アリールである。別の一実施形態において、Ｒ３は置換されていてもよい５〜１０員ヘテロアリールである。別の一実施形態において、Ｒ３はエチルである。
【００６１】
一実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【化１０】
0006550538.tif 000011
の構造を有し、式中、可変部分は上記のとおり定義される。
【００６２】
一実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【化１１】
0006550538.tif 000012
もしくはそのＮ−オキシド、またはそれらのそれぞれの薬学的に許容される塩、または前記のそれぞれの薬学的に許容される溶媒和物である。
【００６３】
一実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【化１２】
0006550538.tif 000013
もしくはそのＮ−オキシド、またはそれらのそれぞれの薬学的に許容される塩、または前記のそれぞれの薬学的に許容される溶媒和物である。
【００６４】
一実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【化１３】
0006550538.tif 000014
もしくはそのＮ−オキシド、またはそれらのそれぞれの薬学的に許容される塩、または前記のそれぞれの薬学的に許容される溶媒和物である。
【００６５】
一実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【化１４】
0006550538.tif 000015
もしくはそのＮ−オキシド、またはそれらのそれぞれの薬学的に許容される塩、または前記のそれぞれの薬学的に許容される溶媒和物である。
【００６６】
一実施形態では、ここに提供される化合物の個々の立体異性体、例えばエナンチオマーが、ここに提供される。一実施形態において、ここに提供される化合物は、以下に示す立体化学的配置を有する。
【化１５】
0006550538.tif 000016
【００６７】
当業者は、本明細書および／または米国特許第８，１５８，８０９号に記載の方法に基づいて、またはそれらの方法を適合させることによって、ポドフィロトキシン誘導体を調製することができる。
【００６８】
（薬学的組成物）
別の一態様では、ここに提供される化合物と少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物が、ここに提供される。
【００６９】
一実施形態において、薬学的組成物は、固形型、液状型、注射可能型、またはリポソーム製剤である。別の一実施形態において、薬学的組成物は固形型である。別の一実施形態において、薬学的組成物は液状型である。別の一実施形態において、薬学的組成物は注射可能な形態である。別の一実施形態において、薬学的組成物はリポソーム製剤である。別の一実施形態において、薬学的組成物はミセル製剤である。
【００７０】
本開示のこの態様は、温血動物におけるがんを処置するのに有用な薬学的組成物であり、この組成物は、薬学的に許容される賦形剤と組み合わされた、本明細書において定義する本開示の化合物を含む。本組成物は、経口投与、外用投与、経皮投与、直腸投与、吸入による投与、非経口（静脈内、筋肉内、または腹腔内）投与などに適した組成物を提供するために、既知の製剤技法に従って調製される。本発明の組成物を調製するための詳細な指針は、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（ペンシルバニア州１８０４０イーストン）が刊行する「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」の第１８版または第１９版を参照することによって見いだされる。関連する部分は参照により本明細書に組み込まれる。
【００７１】
ユニットドーズまたはマルチドーズ型が考えられ、一定の臨床状況において、それぞれに利点がある。ユニットドーズは、がんを処置する状況において所望の効果をもたらすように計算された予め決定された量の活性化合物を含有するであろう。マルチドーズ型は、所望の目的を達成するために複数の単回投与または分割投与が要求される場合には、特に役立ち得る。これらの投与型はどちらも、その特定化合物のユニークな特徴、達成しようとする特定治療効果、およびがん処置のためにその特定化合物を調製する技術につきまとうあらゆる制限によって決定され、またはそれらに直接依存する、仕様を有し得る。
【００７２】
ユニットドーズは、対象におけるがんを処置するのに十分な治療有効量を含有し、約１．０〜１０００ｍｇの化合物、例えば約５０〜５００ｍｇを含有し得る。
【００７３】
化合物は、好ましくは、摂取可能な錠剤、バッカル錠、カプセル剤、カプレット剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、トローチ剤（ｔｒｏｕｃｈｅ）、ウェハ剤、口中錠などとして、適切な製剤で経口投与されるであろう。一般に、最も単純明快な製剤は錠剤またはカプセル剤である（個別にまたはまとめて「経口投薬単位」と呼ばれる）。適切な製剤は、化合物の特徴を適当な組成物の製剤化に利用することができる賦形剤と調和させる利用可能な標準的製剤化技法に従って、調製される。錠剤またはカプセル剤は、好ましくは、約５０〜約５００ｍｇの式（Ｉ）の化合物を含有するであろう。
【００７４】
本形態は、化合物を迅速に送達してもよいし、徐放性調製物であってもよい。化合物は、硬カプセルまたは軟カプセルに封入するか、錠剤に圧縮するか、飲料、食品と混合するか、または他の形で食事に組み込むことができる。最終組成物および調製物のパーセンテージはもちろんさまざまであることができ、最終形態（例えば錠剤）の重量の１〜９０％の範囲にあれば好都合であり得る。そのような治療的に有用な組成物中の量は、適切な投薬量が得られることになるような量である。好ましい本発明の組成物は、５〜１０００ｍｇの重さの投薬単位中に約５．０〜約５０重量％（％ｗ）を含有するように調製される。
【００７５】
経口投薬単位の適切な製剤は、結合剤、例えばトラガカントゴム、アラビアゴム、トウモロコシデンプン、ゼラチン；甘味剤、例えばラクトースまたはスクロース；崩壊剤、例えばトウモロコシデンプン、アルギン酸など；潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム；または香味剤、例えばペパーミント、冬緑油なども含有し得る。他にもさまざまな材料が、コーティングとして、または経口投薬単位の物理的形状を他の形で修飾するために、存在し得る。経口投薬単位は、シェラック、糖、またはその両方で、コーティングすることができる。シロップ剤またはエリキシル剤は、本化合物、甘味剤としてのスクロース、保存剤としてのメチルパラベンおよびプロピルパラベン、色素および香味剤を含有し得る。利用される材料はいずれも、薬学的に許容でき、実質的に非毒性であるべきである。有用な賦形剤のタイプの詳細は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ」（Ｍａｃｋ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、ペンシルバニア州イーストン）の第１９版に見いだすことができる。より詳しい考察については、特に第９１章〜第９３章を参照されたい。
【００７６】
化合物は、非経口的に、例えば静脈内、筋肉内、静脈内、皮下、または腹腔内に、投与することができる。担体または賦形剤もしくは賦形剤混合物は、例えばさまざまな極性または非極性溶媒、それらの適切な混合物、または油を含有する、溶媒または分散媒であることができる。本明細書にいう「担体」または「賦形剤」は薬学的に許容される担体または賦形剤を指し、ありとあらゆる溶媒、分散剤または分散媒、コーティング、抗微生物剤、等張／低張／高張剤、吸収調整剤などを包含する。薬学的活性物質のためのそのような物質および薬剤の使用は当技術分野では周知である。従来の媒質または薬剤は、それらが活性成分と不適合である場合を除けばいずれも、治療組成物における使用が考えられる。さらにまた、他の活性成分または補助的活性成分を最終組成物に組み込むこともできる。
【００７７】
本化合物の溶液剤は、水、エタノール、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、さまざまな油、および／またはそれらの混合物、ならびに当業者に知られる他の希釈剤など、適切な希釈剤中に、調製することができる。
【００７８】
注射可能な使用に適した薬学的形態としては、滅菌された溶液剤、分散剤、乳剤、および滅菌散剤があげられる。最終形態は、製造および貯蔵条件下で安定でなければならない。さらにまた、最終的な薬学的形態は汚染から保護されていなければならず、したがって、細菌または真菌などの微生物の成長を阻害することができなければならない。単回静脈内用量または単回腹腔内用量を投与することができる。あるいは、遅い長期間注入または複数の短期間連日注入を、典型的には１〜８日間継続して、利用することができる。隔日または数日ごとに１回の投与も利用することができる。
【００７９】
滅菌注射可能溶液剤は、必要量の化合物を１つ以上の適当な溶媒に組み込むことによって調製され、前記溶媒には、上に列挙した他の成分または当業者に知られている他の成分を、必要に応じて加えることができる。滅菌注射可能溶液剤は、必要量の化合物を、必要に応じてさまざまな他の成分と共に、適当な溶媒に組み込むことによって調製される。次に濾過などの滅菌手順が続く。典型的には、分散剤は、分散媒および上に示した他の必要成分をも含有する滅菌媒体に化合物を組み込むことによって作製される。滅菌散剤の場合、好ましい方法は真空乾燥または凍結乾燥を含み、そこに任意の必要成分が加えられる。
【００８０】
一実施形態において、ここに提供される組成物は、注射用溶液剤などの、注射用である。一実施形態において、ここに提供される化合物は、注射可能溶液剤として投与することができる。一実施形態において、注射可能溶液剤は、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む。一実施形態において、薬学的に許容される賦形剤は、Ｄ−マンニトール、Ｌ−乳酸、ｐＨ調節剤、および滅菌水のうちの１つ以上である。ｐＨ調節剤の非限定的な一例は水酸化ナトリウムである。一実施形態では、化合物８０１・ＨＣｌが注射可能溶液剤として投与される（下記表Ａ参照）。
【表１】
0006550538.tif 000017
【００８１】
いずれの場合も、最終形態は、上述のとおり、滅菌状態になければならず、中空針などの注射デバイスを容易に通過することができなければならない。適正な粘度は、溶媒または賦形剤の適正な選択によって、達成し、維持することができる。さらにまた、レシチンなどの分子状または粒状コーティングの使用、分散剤における粒径の適正な選択、または表面特性を持つ材料の使用も、利用することができる。
【００８２】
微生物の成長の防止または阻害は、クロロブタノール、アスコルビン酸、パラベン、テルメロサル（ｔｈｅｒｍｅｒｏｓａｌ）などの１つ以上の抗微生物剤の添加によって達成することができる。糖類または塩類などといった張性を変化させる薬剤を含めることも好ましいだろう。
【００８３】
本開示の化合物は水溶性である傾向を示すが、例えば本発明の化合物が水溶性に乏しい一部の例では、リポソーム送達を提供することが役立ち得る。この系は、脂質小胞またはリポソームの中もしくは上に、または脂質小胞もしくはリポソームによって、またはミセルによって、本発明の化合物を組み込み、カプセル化し、取り囲み、または捕捉することによって、本発明の化合物を拘束する。
【００８４】
リポソームは、がん患者に治療薬を投与するために使用されて成功を収めており、ドキソルビシン、ダウノルビシン、およびシス白金錯体などの抗がん薬の送達に臨床的に有用であることが示されている。Ｆｏｒｓｓｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９２，５２：３２５５−３２６１、Ｐｅｒｅｘ−Ｓｏｌｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９０，５０：４２６０−４２６６およびＫｈｏｋｈａｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９１，３４：３２５−３２９（これらはすべて参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【００８５】
同様に、ミセルも患者に治療薬を送達するために使用されており（Ｂｒｏｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｕｅｃ．１９：２６７−２８４（１９８２））、ミセルは、がん治療薬（Ｆｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｍａｔｅｒ．Ａｒｔｉｆ．Ｃｅｌｌｓ．Ａｒｔｉｆ．Ｏｒｇａｎｓ  １６：４３９以下参照（１９８８）およびＹｏｋｏｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５１：３２２９−３２３６（１９９１））を含めて、治療薬担体として使用され、標的治療薬送達に使用されている（Ｄ．Ｄ．Ｌａｓｉｃ、Ｎａｔｕｒｅ  ３３５：２７９−２８０（１９９２）およびＳｕｐｅｒｓａｘｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．８：１２８０−１２９１（１９９１））（これらはすべて参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【００８６】
本発明の化合物を含有するリポソームおよび／またはミセルは、がん患者に、典型的には静脈内に、投与することができる。本発明において有用なリポソーム組成物を調製するためのさらなる指針は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，０９６，３３６号に見いだし得る。
【００８７】
（処置の方法）
別の一態様では、がんを処置する必要がある対象におけるがんを処置する方法であって、ここに提供される化合物の治療有効量を前記対象に投与することを含む方法が、ここに提供される。
【００８８】
一実施形態において、投与される化合物の治療有効量は約１５ｍｇ／ｍ２〜約１５００ｍｇ／ｍ２である。別の一実施形態において、投与される化合物の治療有効量は約５０ｍｇ／ｍ２〜約１０００ｍｇ／ｍ２である。別の一実施形態において、投与される化合物の治療有効量は約１００ｍｇ／ｍ２〜約７５０ｍｇ／ｍ２である。別の一実施形態において、投与される化合物の治療有効量は約２５０ｍｇ／ｍ２〜約５００ｍｇ／ｍ２である。
【００８９】
一実施形態において、がんは、結腸がん、非小肺がん、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、小細胞肺がん、子宮頸がん、胃がん、乳がん、前立腺がん、皮膚がん、黒色腫、リンパ腫、脳腫瘍、肉腫、精巣がん、卵巣がん、腎がん、頭頸部がん、肝がん、白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、ヘアリー細胞白血病、Ｔ細胞前リンパ球性白血病、大型顆粒リンパ球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、および血液がんである。
【００９０】
一実施形態において、がんは固形腫瘍を含む。
【００９１】
別の一態様では、腫瘍成長を遅延または退縮させる必要がある対象における腫瘍成長を遅延または退縮させる方法であって、ここに提供される化合物の治療有効量を前記対象に投与することを含む方法が、ここに提供される。
【００９２】
一実施形態において、腫瘍成長は固形腫瘍である。
【００９３】
一実施形態において、がんは、結腸がん、非小肺がん、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、小細胞肺がん、子宮頸がん、胃がん、乳がん、前立腺がん、皮膚がん、黒色腫、リンパ腫、脳腫瘍、肉腫、精巣がん、卵巣がん、腎がん、頭頸部がん、肝がん、白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、ヘアリー細胞白血病、Ｔ細胞前リンパ球性白血病、大型顆粒リンパ球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、および血液がんである。
【００９４】
別の一態様では、がんを処置する必要がある対象におけるがんを処置する方法であって、ここに提供される薬学的組成物の治療有効量を前記対象に投与することを含む方法が、ここに提供される。
【００９５】
一実施形態において、がんは、結腸がん、非小肺がん、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、小細胞肺がん、子宮頸がん、胃がん、乳がん、前立腺がん、皮膚がん、黒色腫、リンパ腫、脳腫瘍、肉腫、精巣がん、卵巣がん、腎がん、頭頸部がん、肝がん、白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、ヘアリー細胞白血病、Ｔ細胞前リンパ球性白血病、大型顆粒リンパ球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、および血液がんである。
【００９６】
一実施形態において、がんは固形腫瘍を含む。
【００９７】
本開示において有用な化合物は、これらの化合物を必要とする適当な対象に、医学的に許容される投与経路によって、例えば経口投与、非経口（例えば筋肉内、静脈内、皮下、腹膜間）投与、経皮投与、直腸投与、吸入による投与などによって、治療有効用量で投与される。
【００９８】
がんという用語は、最も広義の一般的定義で、悪性新生物、すなわち異常な組織塊であって、その成長が正常組織の成長を上回り、正常組織の成長と協調せず、変化を惹起した刺激の停止後も同じく過剰に持続するものとみなされるものとする。前記異常な塊は無益であり、宿主をむしばみ、事実上自律的であることが追記されるかもしれない。がんは悪性腫瘍とみなすこともできる。新生物のさらに詳しい議論は、Ｒ．Ｓ．Ｃｏｔｒａｎ、Ｖ．Ｋｕｍａｒ、およびＴ．Ｃｏｌｌｉｎｓ著「Ｒｏｂｂｉｎｓ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｄｉｓｅａｓｅ」第６版の第８章（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ）に見いだされる。第８章からのこの情報は、参照により本明細書に組み込まれる。以下の表Ｂに、本開示の化合物を投与することによって処置され得るがん、すなわち悪性腫瘍または新生物のタイプの例を掲載する。
【表２】
0006550538.tif 000018
【００９９】
このように、本開示の化合物は、白血病の処置、ならびに固形腫瘍の処置、例えば結腸、結腸直腸、卵巣、乳房、前立腺、肺、腎臓、および黒色腫腫瘍の処置に有用である。採用される投薬量範囲は、投与経路、ならびに処置される患者の年齢、体重および状態に依存するであろう。本化合物は、例えば非経口経路によって、例えば筋肉内、静脈内に、またはボーラス注入によって、投与することができる。
【０１００】
本明細書にいう、本発明のポドフィロトキシン誘導体の「治療有効量」とは、がんの成長を阻害し、もしくはがんを遅滞させ、または悪性細胞を殺し、悪性腫瘍の退縮および寛解を引き起こす、すなわちそのような腫瘍の体積またはサイズを低減するか、腫瘍を完全に排除することになる化合物の量を意味するものとする。
【０１０１】
ヒトを含む哺乳動物の場合は、体表面積に基づいて有効量を投与することができる。投薬量の相互関係は、サイズおよび種がさまざまである動物ごとに異なり、ヒトについては（ｍｇ／ｍ２体表に基づいて）Ｅ．Ｊ．Ｆｒｅｉｒｅｉｃｈｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｒｅｐ．，５０（４）：２１９（１９６６）に記載されている。体表面積は、個体の身長および体重から近似的に決定することができる（例えばＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｔａｂｌｅｓ，Ｇｅｉｇｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ａｒｄｓｌｅｙ、Ｎ．Ｙ．ｐｐ．５３７−５３８（１９７０）を参照されたい）。適切な用量範囲は体表面積１ｍ２あたり１〜１０００ｍｇ相当の本発明化合物、例えば５０〜５００ｍｇ／ｍ２である。
【０１０２】
どの投与経路についても、最適な結果を達成するための前記投薬量の投与の厳密なタイミングは、さまざまであり得る。一般に、誘導体の担体としてＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ２０を使用するのであれば、患者に届く誘導体の実際の投薬量は少なくなるであろう。これは、シリンジ、針および調製容器の壁で、誘導体の多少の損失が起きるからであり、この損失は、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ２０懸濁剤では一般的である。綿実油などの担体を使用する場合は、シリンジなどの表面に誘導体がそれほど多くは付着しないので、この上述の損失は、それほど一般的ではない。
【０１０３】
本開示によって提供される方法のもう一つの重要な特徴は、本明細書が教示する内容に従って投与される誘導体の見掛けの総合的毒性が比較的低いことに関係する。総合的毒性は、さまざまな基準を使って判断することができる。例えば、最初に記録された体重（すなわち処置前）の１０％を上回る対象の体重減少は、毒性の１つの徴候であるとみなすことができる。加えて、対象における総合的可動性および活動度の喪失および下痢または膀胱炎の徴候も、毒性の証拠と解釈することができる。
【実施例】
【０１０４】
実施例１：Ｎ２の合成
スキーム１．
【化１６】
0006550538.tif 000019
４−カルボキシフェノキシ酢酸（２）．４−ヒドロキシ安息香酸（５０ｇ、３６１．４ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（２００ｇ、１．４５ｍｏｌ）のアセトン（７２０ｍＬ）懸濁液に、ブロモ酢酸エチル（１４０ｍＬ、１．２７ｍｏｌ）を加えた。室温で２４時間撹拌した後、その混合物を濾過し、濃縮した（６０ｔｏｒｒ、バス温４０℃）。残った濃厚油状物をＭｅＯＨ（７２０ｍＬ）に溶解し、３０％ｗｔ／ｖＮａＯＨ水溶液（３６０ｍＬのＨ２Ｏ中に１０８ｇのＮａＯＨ）を加えた。その混合物を９５℃で１７時間還流した。その混合物を０℃に冷却し、撹拌しながら、濃ＨＣｌ（３５０ｍＬ）をゆっくり加えた。添加が完了したら、その混合物を濾過し、沈殿物を水（１００ｍＬ×１）およびアセトン（１００ｍＬ×２）で洗浄してから、高真空下、４０℃で、４日間乾燥することで、４２．５ｇの生成物を白色固形物として得た（６０％）。ＥＳＩＭＳ：計算値（Ｃ９Ｈ８Ｏ５として）［Ｍ＋Ｈ］＋１９７．０４、実測値１９７．１。
【０１０５】
スキーム２．
【化１７】
0006550538.tif 000020
カンプトテシン−１０−Ｏ−［４−ピペリジノピペリジン］カルバメート（４）．文献の条件（米国特許第６，１２１，４５１号）に従って４−ピペリジノピペリジンカルバミルクロリド試薬を調製した。簡単に述べると、４−ピペリジノピペリジン（３５ｇ、２０８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２．６Ｌ）溶液に、０℃で、トリホスゲン（２２．１ｇ、８３．２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３００ｍＬ）溶液をゆっくりと加えた。その混合物を０℃から室温まで１７時間撹拌した。セライトを加え、溶液を濾過した。濾液を７％ｗｔ／ｖＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４（１００ｇ）で乾燥した。その混合物を濾過し、溶媒を蒸発させた。残留残渣を無水ＤＣＭ（２０８ｍＬ）に溶解して１Ｍ溶液とした。その溶液をこれ以上精製することなくそのまま使用した。
【０１０６】
１０−ヒドロキシカンプトテシン（２５ｇ、６８．５ｍｍｏｌ）を１：１ＤＣＭ／ピリジン（１．３７Ｌ）に溶解し、調製したばかりの４−ピペリジノピペリジンカルバミルクロリド溶液（２０８ｍＬ）を加えた。室温で４時間撹拌した後、反応混合物を濃縮し、１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（７Ｌ）によるシリカゲルクロマトグラフィー（６００ｇ）で精製することで、３８ｇの生成物を淡黄色固形物として得た（１００％）。ＥＳＩＭＳ：計算値（Ｃ３１Ｈ３４Ｎ４Ｏ６として）［Ｍ＋Ｈ］＋５５９．２５、実測値５５９．０。
【０１０７】
スキーム３．
【化１８】
0006550538.tif 000021
カンプトテシン−１０−Ｏ−［４−ピペリジノピペリジン］カルバミル］−２０−Ｏ−［４−カルボキシフェノキシ］酢酸．（５）．カンプトテシン−１０−Ｏ−［４−ピペリジノピペリジン］カルバメート（４，３８ｇ、６８．５ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（６１．４ｇ、３１９．６ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（４．８５ｇ、７９．９ｍｍｏｌ）および４−カルボキシフェノキシ酢酸（２、３９．２ｇ、１９９．７ｍｍｏｌ）を、１：１ＤＣＭ／ＤＭＦ（２．６６Ｌ）に溶解した。室温で２２時間撹拌した後、その混合物を濃縮し、残留残渣をＤＣＭ（３Ｌ）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２００ｍＬ×２）で洗浄し、次に水（２００ｍＬ×２）で洗浄した。水相を合わせ、ＤＣＭ（２００ｍＬ×２）で抽出した。有機層および有機抽出物を合わせ、ＭｇＳＯ４（１００ｇ）で乾燥し、濾過し、溶媒を蒸発させた。残留残渣を、１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ＋１％ＡｃＯＨ（２Ｌ）、２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ＋２％ＡｃＯＨ（５Ｌ）、および３０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ＋３％ＡｃＯＨ（４Ｌ）によるシリカゲルクロマトグラフィー（１ｋｇ）で精製した。生成物含有画分を合わせ、溶媒を蒸発させた。粗生成物を１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶解して、その溶液をＭｅＯＨ（５００ｍＬ）に加えた。その混合物を室温で３０分間撹拌し、その結果生じた沈殿物を濾過によって収集することで、２２．４ｇの生成物を淡黄色固形物として得た（４５％）。ＥＳＩＭＳ：計算値（Ｃ４０Ｈ４０Ｎ４Ｏ１０として）［Ｍ＋Ｈ］＋７３７．２７、実測値７３７．０。注：このステップはさらに改良することができ、本発明者らは約７０％の収率を得ることができるはずである。
【０１０８】
スキーム４．
【化１９】
0006550538.tif 000022
Ｎ２．ＥＤＣ（１７．５３ｇ、９１．３ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（３．７１ｇ、３０．４ｍｍｏｌ）、５（２２．４ｇ、３０．４ｍｍｏｌ）およびポドフィロトキシン（２５．２ｇ、６０．９ｍｍｏｌ）を１：１ＤＣＭ／ＤＭＦ（１．５２Ｌ）に溶解し、その混合物を室温で２４時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（２Ｌ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（５００ｍＬ×２）、水（５００ｍＬ×１）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（１００ｇ）で乾燥し、濾過し、溶媒を蒸発させた。残留残渣を、５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（２Ｌ）および７．５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（６Ｌ）によるシリカゲルカラムクロマトグラフィー（９００ｇ）で精製した。生成物含有画分を収集し、溶媒を蒸発させた。純粋な生成物を、１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解してから４Ｍ  ＨＣｌ／ジオキサン（２５ｍＬ）を加えることによって、酸性化した。その混合物を、撹拌したＥｔ２Ｏ（７５０ｍＬ）にゆっくりと加えた。沈殿物を濾過し、高真空下で一晩乾燥した。１７．５ｇのＮ２塩酸塩を黄色固形物として回収した（５０％）。ＥＳＩＭＳ：計算値（Ｃ６２Ｈ６０Ｎ４Ｏ１７として）［Ｍ＋Ｈ］＋１１３３．４０、実測値１１３３．０。
【０１０９】
Ｎ２の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルおよび１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルをそれぞれ図１Ａおよび図２に示す。Ｎ２のＬＣ−ＭＳスペクトルを図３Ａに示す。
【０１１０】
実施例２：Ｎ２・ＨＣｌ製剤の合成
スキーム５．
【化２０】
0006550538.tif 000023
スキーム５に示すプロセスによってＮ２・ＨＣｌ製剤を調製した。濾過したＮ２遊離塩基（１当量）のジクロロメタン（ＡＣＳ）溶液に、１０±５℃で、エーテル中のＨＣｌ（ＡＣＳ、１Ｍ、１．３当量）を加えた。溶媒を減圧下で除去した。残渣にＭＰＥＧ−２０００−ＤＳＰＥ（ｃＧＭＰ、２当量）のジクロロメタン溶液を加えた。その混合物を撹拌することで透明な溶液を得てから、溶媒を減圧下で除去した。残渣をジクロロメタンに溶解し、濃縮乾固し、真空下、室温で、ジクロルメタンがＧＣで６００ｐｐｍ以下になるまで乾燥し、ブレンダーで微粒子化し、０．３５ｍｍ篩で篩分することで、Ｎ２・ＨＣｌ製剤、ロット番号０１１０００、２．４５ｋｇを得た。
【０１１１】
実施例３：注射用Ｎ２・ＨＣｌの調製
滅菌注射用水（ＳＷＩ、１８±０．５ｋｇ）とＬ−乳酸（１８．０２ｇ）とを合わせ、溶液のｐＨが３．５±０．１になるまで０．５Ｎ水酸化ナトリウムを加え、十分量のＳＷＩを加えて溶液の全量を２０．００ｋｇにすることにより、Ｌ−乳酸溶液（０．０１Ｍ、ｐＨ３．５）を調製した。０．５Ｎ水酸化ナトリウムの添加によってｐＨを３．５±０．１に調節した。
【０１１２】
Ｎ２・ＨＣｌ製剤（６９７．７ｇ）と０．０１Ｍ  Ｌ−乳酸溶液ｐＨ３．５（１７±０．２ｋｇ）との混合物を、溶液が得られるまで撹拌した。ｄ−マンニトール（１６８．０ｇ）を混合しながら加えた。その結果生じた溶液のｐＨを０．５Ｎ水酸化ナトリウムの添加によって３．５±０．１に調節した。十分量の０．０１Ｍ  Ｌ−乳酸溶液ｐＨ３．５を加えて、溶液の全量を２０．００ｋｇにした。０．５Ｎ水酸化ナトリウムの添加によってｐＨを３．５±０．１に調節した。その溶液を０．２２ミクロン滅菌フィルタで滅菌カルボイ中に濾過してから、１バイアルにつき５．００±０．１０ｇで、滅菌１０ｍＬバイアルに充填した。滅菌条件下、＋２５℃および１００ｍＴｏｒｒで終わる凍結乾燥を行った。窒素ＮＦで減圧を解き、バイアルに滅菌シールを適用して、それを２〜８℃で貯蔵した。
【０１１３】
実施例４：目的化合物１の合成
スキーム６．
【化２１】
0006550538.tif 000024
目的化合物１（本明細書ではＮ１ともいう）は、Ｎ２について上述した手順に従い、当業者には明白であろう任意の必要な変更を加えて、合成することができる（スキーム６参照）。目的化合物１の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルおよびＬＣ−ＭＳスペクトルをそれぞれ図１Ｂおよび図３Ｂに示す。
【０１１４】
実施例５：目的化合物３の合成
スキーム７．
【化２２】
0006550538.tif 000025
目的化合物３（本明細書ではＮ３ともいう）は、Ｎ２について上述した手順に従い、当業者には明白であろう任意の必要な変更を加えて、合成することができる（スキーム７参照）。目的化合物３の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルおよびＬＣ−ＭＳスペクトルをそれぞれ図１Ｃ〜１Ｅおよび図３Ｃに示す。
【０１１５】
実施例６：目的化合物４の合成
スキーム８．
【化２３】
0006550538.tif 000026
目的化合物４（本明細書ではＮ４ともいう）は、Ｎ２について上述した手順に従い、当業者には明白であろう任意の必要な変更を加えて、合成することができる（スキーム８参照）。目的化合物４の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルおよびＬＣ−ＭＳスペクトルをそれぞれ図１Ｆおよび図３Ｄに示す。
【０１１６】
１．１．生物学的アッセイの背景
Ｎ２および目的化合物１、３、および４を使って研究を行った。インビトロ効力研究により、これらの化合物は、ヒト結腸がん細胞およびヒト肺がん細胞、特に抵抗性結腸がん細胞（多剤耐性遺伝子１［ＭＤＲ１］を過剰発現するもの）を殺すのに、非常に有効であることが証明された。その前臨床効力をさらに評価するために、２つの結腸がんモデルおよび１つの慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）モデルでインビボ効力研究を行った。４つのリード化合物の毒性はマウスでは著しく低かった。それらのうち、Ｎ２（本明細書では８０１ともいう）は、毒性がより低くヒトがん異種移植片に対する効力がより高い、有望な化合物である。結果は、８０１−ＨＣｌと製剤化された８０１がどちらも、ヒト結腸がん異種移植片モデルおよびＣＭＬ異種移植片モデルに有効であることを示した。
【０１１７】
１．２  ポドフィロトキシン類似体のインビトロ効力研究
１．２．１．コロニー形成アッセイ
２．７ｍｌの培地（１０％ウシ胎児血清ならびに１００単位／ｍｌペニシリンおよび１００ｕｇ／ｍｌストレプトマイシンを含有する改変マッコイ５ａ培地）が入っている６０ｍｍペトリディッシュにがん細胞をプレーティングした。ペトリディッシュの底に付着させるために、細胞を３７℃のＣＯ２恒温器で５時間インキュベートした。薬物を新しく培地中に最終濃度の１０倍に調製してから、この原液のうちの０．３ｍｌをディッシュ中の２．７ｍｌの培地に加えた。次に、細胞を薬物と共に３７℃で７２時間インキュベートした。インキュベーションの最後に、薬物含有培地をデカントし、ディッシュを４ｍｌのハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）で濯ぎ、５ｍｌの新鮮培地を加え、コロニー形成のためにディッシュを恒温器に戻した。インキュベーション７日後（ＨＣＴ１１６細胞株）、１４日後（ＶＭ４６細胞株）および１５日後（Ｈ２３細胞株）に、コロニーカウンターを使って細胞コロニーを計数した。細胞生存率（％）は、各薬物濃度につき３つの反復ディッシュから算出し、各被験化合物についてＩＣ５０（コロニー形成の５０％阻害をもたらす薬物濃度）の平均値を決定した。
１．２．２．ＨＣＴ１１６ヒト結腸がん細胞に対する化学治療効果
ＨＣＴ１１６ヒト結腸がん細胞に対するポドフィロトキシン化合物（Ｎ１〜４）の化学治療効果を以下の表にまとめる。
【表３】
0006550538.tif 000027
１．２．３．ＶＭ４６ヒト結腸がん細胞に対する化学治療効果
多剤耐性遺伝子１を過剰発現するＶＭ４６ヒト結腸がん細胞に対するポドフィロトキシン化合物（Ｎ１〜４）の化学治療効果を以下の表にまとめる。
【表４】
0006550538.tif 000028
１．２．４．Ｈ２３ヒト非小肺がん細胞に対する化学治療効果
Ｈ２３ヒト非小肺がん細胞に対するポドフィロトキシン化合物（Ｎ１〜４）の化学治療効果を以下の表にまとめる。
【表５】
0006550538.tif 000029
【０１１８】
要約すると、Ｎ１、Ｎ２（８０１）、Ｎ３、Ｎ４はすべて、選択された３つの細胞株に対して、ｎＭレベルの濃度で有効性を示した。Ｎ１およびＮ４は、非常に低い濃度で良好な有効性を示した。３つの細胞株のうち、ＶＭ４６ヒト結腸がん細胞は多剤耐性遺伝子１（ＭＤＲ１）を過剰発現する。すべての化合物がＭＤＲ１による薬物耐性に打ち勝った。Ｎ２（８０１）は結腸がんよりも非小肺がんに対して高い有効性を示した。
【０１１９】
１．３．正常マウスにおける化合物Ｎ１〜４の毒性研究
１．３．１  方法：
毒性研究では、２匹のＣ３Ｈ雌正常マウスに、化合物Ｎ１〜４（Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３、およびＮ４）を４０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇの低用量および中用量で投与した。これらの用量では重篤で不可逆的な毒性は起こらなかったので、新たな一対の動物を１００ｍｇ／ｋｇの１．２倍である１２０ｍｇ／ｋｇから開始した。投薬量（すなわち各薬物用量にマウス２匹ずつ）を逐次、不可逆的毒性が観察される（動物が痩せ衰える；動物が数（２〜４）日の間に急速な体重減少を起こす（悪液質）（２０％））（安楽死が必要になる）まで、１．２〜１．５倍ずつ増加させた。次に、別の一対の動物を、最高非毒性投薬量から開始して、投薬量を順次、１．１５倍ずつ増加させた。この作業の結果は、１．１５の倍率で分離された二つの投薬量であって、一方は見かけ上非毒性である投薬量、そして他方は安楽死を必要とする不可逆的毒性を示す投薬量である。６匹のマウスに各投薬量で投与した。低い方の投薬量で不可逆的毒性が起こらず、高い方の用量で少なくとも１匹に不可逆的毒性があった場合、当該低い方の用量をＭＴＤであるとみなした。Ｎ１〜４のＨＣＬ塩を、エタノール：Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ：０．２Ｍ  ＮａＡｃ：食塩水（５：５：１０：８０）の溶液に製剤化して、最終ｐＨを５．０〜５．５にした。Ｎ１〜４塩基はエタノール：Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ：食塩水（５：５：９０）の溶液に製剤化した。すべての化合物を、単回ｉ．ｐ．注射により、０．５ｍｌ／２０ｇマウスの体積で、Ｃ３Ｈ雌正常マウスに投与した。４０日間毎日チェックしたマウスで薬物毒性を評価した。報告する毒性パラメータはＭＴＤ４０である。ＭＴＤは、一つの処置群において不可逆的毒性を引き起こさない最高用量であって、次に高い用量では少なくとも１匹の動物が不可逆的毒性を呈して安楽死させられる用量であると定義される。実験の終了時にすべてのマウスを安楽死させた。
【０１２０】
１．３．２．結果：
Ｃ３Ｈ雌正常マウスにおけるＮ１、Ｎ２、Ｎ３、およびＮ４の毒性の評価を完了した。表１．３．１に示すとおり、どの化合物のＭＴＤ値も、多くの臨床的に利用可能な抗がん薬より、有意に高かった。そのＭＴＤが高いほど、正常マウスに対するその毒性は低い。４つの化合物のうち、Ｎ２は正常マウスに対する毒性が最も低い。その塩基型のＭＴＤがそのＨＣＬ塩型のＭＴＤと等しかったことに注意されたい。次に毒性が低かったのはＮｅｏｖｉａ４であった。その塩基型はそのＨＣＬ塩型よりマウスに対する毒性が低く、その塩基型の低い溶解性がこの相違の一因であるかもしれないことが示唆された。
表１．３．１．Ｃ３Ｈマウスにおける化合物Ｎ１〜４のＭＴＤ値
【表６】
0006550538.tif 000030
【０１２１】
１．４．最も有望な候補薬物を選択するための、４つのポドフィロトキシン類似体の予備的インビボ効力研究
ＨＣＴ１１６ヒト結腸がんに対する４つの化合物Ｎ１〜４のインビボ効力を評価するために、ＨＣＴ１１６ヒト結腸がん異種移植片を担持するヌードマウス（ｎｕ／ｎｕ遺伝子型）で、インビボ抗がん効力研究を行った。
【０１２２】
１．４．１．方法
ＨＣＴ１１６ヒト結腸がん異種移植片を担持するヌードマウス（ｎｕ／ｎｕ遺伝子型）でインビボ抗がん効力研究を行った。これらのヒト腫瘍はマウスの脇腹への移植後に指数的に成長し、７９．８５ｃｕ．ｍｍの平均腫瘍体積に到達した。その時点で処置を開始し、すべての計算およびプロットにおいて、処置の最初の日を０日目とした。６匹のマウスに、４つのＮｅｏｖｉａ薬物溶液（５％アルコール、５％Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、および９０％食塩水、０．５ｍｌ／２０ｇ、単回注射）のそれぞれを、ｉ．ｐ．注射した。薬物用量（ｉ．ｐ．ＭＴＤ用量）は、Ｎｅｏｖｉａ−１については１２０ｍｇ／ｋｇ、Ｎｅｏｖｉａ−２については３００ｍｇ／ｋｇ、Ｎｅｏｖｉａ−３については１２０ｍｇ／ｋｇ、そしてＮｅｏｖｉａ−４については１８０ｍｇ／ｋｇであった。対照マウス群は媒体のみで処置した。処置後は２日ごとにカリパスによって腫瘍サイズを測定した。２つの直交方向の腫瘍直径（ｄ１、ｄ２）を測定することにより、腫瘍が球状であるという近似を使って腫瘍体積を算出した（腫瘍体積＝π／６｛（ｄ１＋ｄ２）／２｝３）。各マウスについて各腫瘍成長曲線をプロットした。さまざまな処置後に腫瘍が８００ｃｕ．ｍｍのサイズまで成長するのに要した時間（日数）を、処置の効果を評価するための腫瘍成長遅延指標として算出した。処置後の生存時間も観察し、記録した。
【０１２３】
１．４．２．結果
単回ｉ．ｐ．注射後の４つの化合物Ｎ１〜４はすべて、ＨＣＴ１１６ヒト結腸がん異種移植片の成長を阻害するのに著しく有効であることが判明した。これらの結果は、４つすべての化合物のうちでＮ２（８０１）がＨＣＴ１１６ヒト結腸がんに対して最も有望な候補薬物であるだろうことを示した。
【０１２４】
１．５．インビボ効力研究：皮下ＣＯＬＯ２０５ヒト結腸がん異種移植片モデルの処置における８０１
１．５．１．目的
皮下ＣＯＬＯ２０５ヒト結腸がん異種移植片モデルの処置において化合物８０１のインビボ治療効力およびインビボ安全性を前臨床的に評価し、ＳＯＣ薬物イリノテカンと比較すること。
１．５．２．動物
【表７】
0006550538.tif 000031
【０１２５】
１．５．３．方法
腫瘍発生のために、０．１ｍｌのＰＢＳ中の５×１０６個のＣＯＬＯ２０５腫瘍細胞を、各マウスに皮下接種した。腫瘍体積が１２０ｍｍ３に到達した時に処置を開始した。主要評価項目は、腫瘍成長が遅延または退縮され得るかどうかを確かめることであった。体重および腫瘍体積を週に２回測定した。次に、腫瘍体積を使って、Ｔ−Ｃ値と腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）値の両方を算出した。
１．５．４．群および処置
【表８】
0006550538.tif 000032
【０１２６】
１．５．５．統計
群比較のために腫瘍体積の平均値間の差を、一元配置ＡＮＯＶＡ検定を使って有意性について分析した。Ｐ＜０．０５を統計的に有意とみなした。
【０１２７】
１．５．６．結果
結果は、ｉ．ｖ．ｍＰＥＧ−２０００−ＤＳＰＥ製剤化８０１が、１２５ｍｇ／ｋｇ（ｑ５ｄ×３）および１００ｍｇ／ｋｇ（ｑ３ｄ×３）の用量レベルで、中等度の抗腫瘍活性をもたらし、ＴＧＩ値はそれぞれ３７％および４２％（対照に対してｐ＝０．００８およびｐ＝０．００２）であったことを示している。
【０１２８】
結果は、１２５ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．８０１−ＨＣＩおよび７０ｍｇ／ｋｇのイリノテカンが強い抗腫瘍活性をもたらし、２９日目におけるＴＧＩ値は７０％および９７％（どちらも対照に対してｐ＜０．００１）であったことを示している。
【０１２９】
図４Ａは、ＣＯＬＯ２０５ヒト結腸がん異種移植片モデルの処置における製剤化されたＮ２−ＨＣｌ（ｉ．ｖ．）の抗腫瘍活性を示し、図４Ｂは、ＣＯＬＯ２０５ヒト結腸がん異種移植片モデルの処置における製剤化されたＮ２−ＨＣｌ（ｉ．ｐ．）の抗腫瘍活性を示している。
【０１３０】
安全性プロファイルに関して、マウスにおける処置の忍容性は高く、処置期間中は、重度の体重減少も、他の甚だしい臨床的異常も、観察されなかった。
【０１３１】
１．５．７．結論
８０１−ＨＣＩは１２５ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｐ．送達）において、良好な安全性プロファイルで、強い抗腫瘍活性を示した。ｍＰＥＧ−２０００−ＤＳＰＥ製剤化８０１（ｉ．ｖ．送達）は、中等度の効力をもたらしたが、これは、マウスにおけるｉ．ｖ．注射に関する投与体積許容量の制限による各ｉ．ｖ．投与での分割注射が引き起こしたのかもしれない。
【０１３２】
１．６．インビボ効力研究：皮下ＨＣＴ１１６ヒト結腸がん異種移植片モデルの処置における８０１
１．６．１．目的
ヌードマウスでの皮下ＨＣＴ１１６ヒト結腸がん異種移植片モデルの処置において化合物８０１のインビボ治療効力およびインビボ安全性を前臨床的に評価すること。
１．６．２．動物
【表９】
0006550538.tif 000033
【０１３３】
１．６．３．方法
腫瘍発生のために、０．１ｍｌのＰＢＳ中の５×１０６個のＨＣＴ１１６腫瘍細胞を、各マウスに皮下接種した。腫瘍体積が１００ｍｍ３に到達した時に処置を開始した。主要評価項目は、腫瘍成長が遅延または退縮され得るかどうかを確かめることであった。体重および腫瘍体積を週に２回測定した。次に、腫瘍体積を使って、Ｔ−Ｃ値と腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）値の両方を算出した。
１．６．４．群および処置
【表１０】
0006550538.tif 000034
【０１３４】
１．６．５．統計
群比較のために腫瘍体積の平均値間の差を、一元配置ＡＮＯＶＡ検定を使って有意性について分析した。Ｐ＜０．０５を統計的に有意とみなした。
【０１３５】
１．６．６．結果
図５Ａの結果は、ｉ．ｖ．ｍＰＥＧ−２０００−ＤＳＰＥ製剤化８０１が、１２５ｍｇ／ｋｇ（ｑ５ｄ×３）および１００ｍｇ／ｋｇ（ｑ３ｄ×３）の用量レベルで、中等度の抗腫瘍活性をもたらし、ＴＧＩ値はそれぞれ５２％および４９％（対照に対してｐ＝０．００２およびｐ＝０．００１）であったことを示している。
【０１３６】
図５Ｂの結果は、１２５ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．８０１−ＨＣＩおよび７０ｍｇ／ｋｇのイリノテカンが、類似する強い抗腫瘍活性をもたらし、２９日目におけるＴＧＩ値は９３％および９２％（どちらも対照に対してｐ＜０．００１）であったことを示している。
【０１３７】
図５Ａは、ＨＣＴ１１６ヒト結腸がん異種移植片モデルの処置における製剤化されたＮ２（ｉ．ｖ．）の抗腫瘍活性を示している。図５Ｂは、ＨＣＴ１１６ヒト結腸がん異種移植片モデルの処置におけるＮ２−ＨＣｌ（ｉ．ｐ．）の抗腫瘍活性を示している。
【０１３８】
安全性プロファイルに関して、８０１−ＨＣＩおよび製剤化された８０１で処置された動物について、軽微な体重減少（４〜６％）が観察されたのに対し、イリノテカンは、８％の体重減少をもたらした。処置期間中、他の甚だしい臨床的異常は観察されなかった。
【０１３９】
１．６．７．結論
８０１−ＨＣＩは、１２５ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｐ．）において、良好な安全性プロファイルで、強い抗腫瘍活性を示した。ｍＰＥＧ−２０００−ＤＳＰＥ製剤化８０１（ｉ．ｖ．）は中等度の効力をもたらしたが、これは、マウスにおけるｉｖ注射に関する投与体積許容量の制限による連日ｉｖ投与での分割注射が引き起こしたのかもしれない。
【０１４０】
１．．７．インビボ効力研究：皮下Ｋ５６２ヒト慢性骨髄性白血病異種移植片モデルの処置における８０１
１．７．１．目的
ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスでの皮下ヒト慢性骨髄性白血病異種移植片モデルの処置において化合物８０１のインビボ治療効力およびインビボ安全性を前臨床的に評価する。
１．７．２．動物
【表１１】
0006550538.tif 000035
【０１４１】
１．７．３．方法
Ｃｏ６０照射源を使ってマウスを照射した（２Ｇｙ）。２４時間後に、腫瘍発生のために、０．１ｍＬのＰＢＳ中のＫ５６２細胞（１×１０７／匹）を、各動物の右脇腹に皮下接種した。平均体積が約１５０ｍｍ３に到達するまでは妨害することなく腫瘍を発生させた。主要評価項目は、腫瘍成長が遅延または退縮され得るかどうかを確かめることであった。体重および腫瘍体積を測定した。次に、腫瘍体積を使って、Ｔ−Ｃ値と腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）値の両方を算出した。
１．７．４．群および処置
表１．７．
【表１２】
0006550538.tif 000036
【０１４２】
１．７．５．統計
群比較のために平均腫瘍体積間の差を、一元配置ＡＮＯＶＡ検定を使って統計的有意性について分析した。Ｐ＜０．０５を統計的に有意とみなした。
【０１４３】
１．７．６．結果
対照動物は、腫瘍量が大きくなったので２５日目に安楽死させた。
【０１４４】
対照動物にとってｍＰＥＧ−２０００−ＤＳＰＥ媒体の忍容性は高かった。しかし、ｍＰＥＧ−２０００−ＤＳＰＥ製剤化８０１は、６０ｍｇ／ｋｇ（ｉｖ、ＴＩＤ投与）の試験用量で、動物に重篤な毒性を引き起こし、ＴＩＤ投与は１回しか行われず、８日目の投与の翌日には１４．５％という強烈な体重減少が観察されて、８匹中の２匹が９日目および１０日目に死亡した。３００ｍｇ／ｋｇの投薬量でｉｐ送達した場合の試験剤８０１−ＨＣｌの動物における忍容性は高く、２回目の投与の翌日に最大で７．７％体重減少が記録されただけだった。陽性薬物イマチニブの動物における忍容性は高く、処置の終了時に６．２％のわずかな体重減少が観察された。
【０１４５】
異なる群の平均ＴＶを表１．７．１に提示する。２５日目のＴＧＩ値を表１．７．２に示す。表１．７にまとめた異なるマウス群の腫瘍成長曲線を図６に提示する。
【０１４６】
対照動物の平均ＴＶは、腫瘍細胞接種後、２５日目には、３，４６７ｍｍ３に到達した。試験剤ｍＰＥＧ−２０００−ＤＳＰＥ製剤化８０１（６０ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ＴＩＤ：合計１８０ｍｇ／ｋｇ）は、忍容性の問題ゆえに１日だけ投与されたが、それでも中等度の抗腫瘍活性をもたらし、ＴＧＩ値は５５％（対照に対してｐ＝０．００１）であった。試験剤８０１−ＨＣｌは、３００ｍｇ／ｋｇ（ｉｐ）において、強烈な抗腫瘍活性を呈し、ＴＧＩ値は９８％（対照に対してｐ＜０．００１）であった。この処置群では、８匹中３匹が２１日目（最初の投与の７日後）までに腫瘍の完全寛解を達成し、試験の終了時までにさらなる腫瘍再成長を起こすことはなかった。比較すると、イマチニブは、７５ｍｇ／ｋｇ（ｐｏ）では、わずかな抗腫瘍活性しか呈さず、ＴＧＩ値は３３％で、対照と比べて有意でない（対照に対してｐ＝０．０６４）。
表１．７．１．平均腫瘍体積
【表１３】
0006550538.tif 000037
表１．７．２．皮下Ｋ５６２ヒト慢性骨髄性白血病モデルの処置における８０１の抗腫瘍活性
【表１４】
0006550538.tif 000038
【０１４７】
１．７．７．結論
８０１−ＨＣＩは、３００ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｐ．）において、良好な安全性プロファイルで、強烈な抗腫瘍活性を呈した。ｍＰＥＧ−２０００−ＤＳＰＥ製剤化８０１（６０ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ＴＩＤ：合計１８０ｍｇ／ｋｇ）は、Ｃｏ６０照射源を使って２Ｇｙで照射されたマウスにおける忍容性の問題ゆえに、１日だけ投与されたが、それでも中等度の抗腫瘍活性をもたらした。
【０１４８】
１．８．インビボ効力研究：Ｋ５６２ヒト慢性骨髄性白血病異種移植片モデルの処置における８０１（２回目のＫ５６２研究）
１．８．１．目的
この研究の目的は、ＮＯＤ  ＳＣＩＤマウスでの皮下Ｋ５６２ヒト慢性骨髄性白血病異種移植片の処置において被験物質である化合物８０１のインビボ治療効力および忍容性を前臨床的に評価し、ＳＯＣ薬物イマチニブのインビボ治療効力および忍容性と比較することであった。
１．８．２．動物
【表１５】
0006550538.tif 000039
【０１４９】
１．８．３．方法
Ｃｏ６０照射源を使ってマウスを照射した（２００ｒａｄ）。２４時間後に、腫瘍発生のために、０．１ｍＬのＰＢＳ中のＫ５６２細胞（１×１０７／匹）を、各動物の右脇腹に皮下接種した。平均体積が約１３０ｍｍ３に到達するまでは妨害することなく腫瘍を発生させた。次に動物を各群８匹からなる６つの群にランダム化した。上記の実験計画表に示す予め決定されたレジメンに従って、被験物質を腫瘍担持動物に投与した。
１．８．４．群および処置
表１．８
【表１６】
0006550538.tif 000040
【０１５０】
１．８．５．統計
群比較のために平均腫瘍体積間の差を、一元配置ＡＮＯＶＡ検定を使って統計的有意性について分析した。Ｐ＜０．０５を統計的に有意とみなした。
【０１５１】
１．８．６．結果
ａ．１．８．６．１  腫瘍体積
異なる群の腫瘍サイズを表１．８．１に示す。
表１．８．１．処置群における腫瘍サイズ
【表１７】
0006550538.tif 000041
【０１５２】
ｂ．１．８．６．２  腫瘍成長阻害
腫瘍成長阻害を表１．８．２に要約した。表１．８にまとめたように、製剤化された８０１およびイマチニブで処置された、異なるマウス群の腫瘍成長曲線を、図７に提示する。
表１．８．２．Ｋ５６２ヒト慢性骨髄性白血病異種移植片モデルの処置における製剤化された８０１およびイマチニブの抗腫瘍活性
【表１８】
0006550538.tif 000042
【０１５３】
１．８．７  結論
Ｋ５６２ヒト慢性骨髄性白血病異種移植片モデルにおいて、製剤化された８０１は、５０ｍｇ／ｋｇの用量およびｑ３ｄ×８の処置スケジュールで、強い抗腫瘍活性を示したが、毒性も伴った。用量５０ｍｇ／ｋｇは、同じ処置スケジュールを使った用量２５ｍｇ／ｋｇよりも、Ｋ５６２ＣＭＬ異種移植片に対して有意に有効であったことから、用量応答関係が明らかになった。製剤化された８０１は、用量レベル（５０ｍｇ／ｋｇ）において、イマチニブの抗腫瘍活性より有意に強い抗腫瘍活性を示した（ｐ＜０．００１）。
【０１５４】
２．０  安全性研究
正常カニクイザルにおける毒性研究は、５時間の間隔で１日２回の静脈内注入による８０１ＨＣｌの投与後は、ＭＴＤが６０ｍｇ／ｋｇ／日であることを示した。カニクイザルにおける静脈内注入に続く８０１ＨＣｌの５日間反復投与毒性研究の結果は、８０１のＭＴＤが反復投与の場合は３０ｍｇ／ｋｇ／日であることを示した。
【０１５５】
ラットＭＴＤ研究では、スプレーグ・ドーリーラットに８０１ＨＣｌを６ｍｇ／ｍｌの濃度で静脈内注入または緩徐静脈内注射によって投与した。正常ラットにおける８０１のＭＴＤは１２０ｍｇ／ｋｇ／日であった。７日間の反復投与研究では、ラットに８９１をＢＩＤ緩徐ＩＶ注射により７日間にわたって投与した。データは、８０１のＭＴＤが反復投与の場合は６０ｍｇ／ｋｇ／日であることを示した。
【図１Ａ】
0006550538.tif 000049
【図１Ｂ】
0006550538.tif 000050
【図１Ｃ】
0006550538.tif 000051
【図１Ｄ】
0006550538.tif 000052
【図１Ｅ】
0006550538.tif 000053
【図１Ｆ】
0006550538.tif 000054
【図２】
0006550538.tif 000055
【図３Ａ】
0006550538.tif 000056
【図３Ｂ】
0006550538.tif 000057
【図３Ｃ】
0006550538.tif 000058
【図３Ｄ】
0006550538.tif 000059
【図４Ａ】
0006550538.tif 000060
【図４Ｂ】
0006550538.tif 000061
【図５Ａ】
0006550538.tif 000062
【図５Ｂ】
0006550538.tif 000063
【図６】
0006550538.tif 000064
【図７】
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