(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
平面視環状の密閉された培養空間を有する容器部と、前記培養空間の内部と外部とを連通するポート部とを備え、前記容器部が、培養時に上側となる第１の容器壁および下側となる第２の容器壁と、外周壁および内周壁または外周縁および内周縁とからなり、前記密閉された培養空間が環状である、旋回培養用の細胞培養容器。
【請求項２】
前記第１の容器壁が、柔軟性を具備している、請求項１に記載の細胞培養容器。
【請求項３】
前記第１の容器壁および前記第２の容器壁の双方が、柔軟性を具備している、請求項１に記載の細胞培養容器。
【請求項４】
前記第１の容器壁が、柔軟性を具備し、前記第２の容器壁が、形状維持性を具備している、請求項１に記載の細胞培養容器。
【請求項５】
前記容器部が、前記第２の容器壁の外周部から立ち上がる環状の外周壁と、前記第２の容器壁の内周部から立ち上がる環状の内周壁とを備えた、請求項４に記載の細胞培養容器。
【請求項６】
前記第１の容器壁および前記第２の容器壁の双方が、形状維持性を具備している、請求項１に記載の細胞培養容器。
【請求項７】
前記容器部内の気体を含めた内容物を排出したときに、前記第１の容器壁の内面と前記第２の容器壁の内面との少なくとも一部が密着するものである、請求項２〜５のいずれかに記載の細胞培養容器。
【請求項８】
前記第１の容器壁および前記第２の容器壁の少なくとも一方が、酸素透過性である、請求項１〜７のいずれかに記載の細胞培養容器。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれかに記載の細胞培養容器を固定するための治具であって、
前記細胞培養容器の前記容器部を挟持するための第１のプレートおよび第２のプレートと、前記第１のプレートおよび前記第２のプレートで前記容器部を挟持した状態を保持するための保持手段とを備えた、細胞培養容器の固定用治具。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、密閉された培養空間を備えた細胞培養容器および細胞培養容器の固定用治具に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、特に、ＥＳ細胞やｉＰＳ細胞の研究・開発の進展に伴い、様々な細胞の作製が可能となり、細胞を利用した細胞治療や再生治療への期待が高まっている。それに伴い、これらの治療に利用するための細胞を、大量に、安定的に、かつ容易に入手するための新たな細胞培養技術への要求も高まっている。
【０００３】
例えば、培養細胞等を医療目的に使用する場合には、使用される培養容器は、培養性能が良く、容易に培養状態が観察でき、培養中の細胞が細菌に汚染される機会が少なく、かつ取扱い易いものであることが好ましい。すなわち、無菌操作性が良いものが望ましい。無菌操作性の観点から、細胞培養容器を従前のシャーレ、フラスコなどではなく、容器内への内容液の充填・排出用として、ポートおよびポートに連結するチューブを設けた袋状の容器（バッグ）に代える試みも行われている。例えば、ガス透過性の良い容器壁を有する袋状容器の中で細胞を培養し、細胞の成育に必要な酸素の供給と、細胞の代謝産物の一つである二酸化炭素の排出を、容器壁を介して行おうとするものである。
【０００４】
このような袋状容器として、特開２００９−０２７９４４号公報に記載の細胞培養用袋状容器が提案されている。また、振とう台のロッキング（シーソー）で、細胞培養バッグ内の培養液をシーソー状に移動させて細胞培養を行う、振とう培養に好適な袋状容器として、特開２０１０−１３６６２８号公報に記載の細胞培養バッグが提案されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００９−０２７９４４号公報
【特許文献２】特開２０１０−１３６６２８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、いずれの細胞培養容器も密閉された培養空間を備えているが、培養容器を水平に旋回させて容器内の液体培地に旋回流を生じさせる、旋回培養には適さない。また、細胞培養の目的によっては、旋回時に培養容器の中心へ向かう液体培地の渦流の発生を阻止することが望ましい場合もある。
そこで、本発明は、このような事情に鑑み案出されたものであり、その目的は、旋回培養に好適で、密閉された培養空間を備え、さらに、旋回時に培養容器の中心へ向かう液体培地の渦流の発生を阻止することができる細胞培養容器を提供することにある。また、細胞培養容器を挟持する固定用治具を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、以下のとおりである。
［１］平面視環状の密閉された培養空間を有する容器部と、前記培養空間の内部と外部とを連通するポート部とを備え、前記容器部は、培養時に上側となる第１の容器壁および下側となる第２の容器壁を備えた、細胞培養容器。
［２］前記第１の容器壁が、柔軟性を具備している、［１］に記載の細胞培養容器。
［３］前記第１の容器壁および前記第２の容器壁の双方が、柔軟性を具備している、［１］に記載の細胞培養容器。
［４］前記第１の容器壁が、柔軟性を具備し、前記第２の容器壁が、形状維持性を具備している、［１］に記載の細胞培養容器。
［５］前記容器部が、前記第２の容器壁の外周部から立ち上がる環状の外周壁と、前記第２の容器壁の内周部から立ち上がる環状の内周壁とを備えた、［４］に記載の細胞培養容器。
［６］前記第１の容器壁および前記第２の容器壁の双方が、形状維持性を具備している、［１］に記載の細胞培養容器。
［７］前記容器部内の気体を含めた内容物を排出したときに、前記第１の容器壁の内面と前記第２の容器壁の内面とが略密着する、［２］〜［５］のいずれかに記載の細胞培養容器。
［８］前記第１の容器壁および前記第２の容器壁の少なくとも一方が、酸素透過性である、［１］〜［７］のいずれかに記載の細胞培養容器。
［９］［１］〜［８］のいずれかに記載の細胞培養容器を固定するための治具であって、
前記細胞培養容器の前記容器部を挟持するための第１のプレートおよび第２のプレートと、前記第１のプレートおよび前記第２のプレートで前記容器部を挟持した状態を保持するための保持手段とを備えた、細胞培養容器の固定用治具。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の細胞培養容器は、密閉された培養空間を有する容器部を備えることから、細胞培養中のコンタミネーションのリスクを低減することができる。また、旋回時に環状の培養空間に沿った旋回流を容器内の液体培地に生じさせることができるため、旋回培養に好適であり、さらに、環状の培養空間を形成する内周縁や内周壁等により、容器部の中心へ向かう液体培地の渦流の発生を阻止することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】本発明に係る細胞培養容器の一実施の形態（浮き輪型バッグ）を示す斜視図である。
【図２】本発明に係る細胞培養容器の他の実施の形態（二重円型トレイ状バッグ）を示す斜視図である。
【図３】図２で示される細胞培養容器（二重円型トレイ状バッグ）の容器部の模式的な断面図である。
【図４】図１で示される細胞培養容器（浮き輪型バッグ）が治具で固定された状態を示す斜視図である。
【図５】図１で示される細胞培養容器（浮き輪型バッグ）が治具で固定された状態を示す側面図である。
【図６】図１で示される細胞培養容器（浮き輪型バッグ）が治具で固定される状態を示す分解図である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明の実施形態に係る細胞培養容器は、平面視環状の密閉された培養空間を有する容器部と、培養空間の内部と外部とを連通するポート部とを備える。そして、容器部は、培養時に上側となる第１の容器壁および下側となる第２の容器壁を備える。また、第１の容器壁および第２の容器壁のうち、少なくとも第１の容器壁が、柔軟性を具備していることが好ましく、例えば、軟質シートで形成される。なお、本発明の実施形態に係る細胞培養容器が旋回培養に使用される場合、平面視環状の密閉された培養空間が環状の流路となる。また、同様に当該細胞培養容器が旋回培養に使用される場合、当該培養空間の内径は、例えば、旋回時に培養容器の中心へ向かう液体培地の渦流の発生を阻止できる範囲で決定される。
【００１１】
本発明の実施の形態として、第１の容器壁および第２の容器壁の双方が、柔軟性を具備しており、例えば、軟質シートで形成されたものを挙げることができる。図１に示すような浮き輪型バッグは、そのような細胞培養容器の一例である。
【００１２】
また、本発明の他の実施の形態として、第１の容器壁が、柔軟性を具備し、例えば、軟質シートで形成され、第２の容器壁が、形状維持性を具備し、例えば、硬質シートで形成されたものを挙げることができる。さらに、本発明の他の実施の形態として、第２の容器壁が、その外周部から立ち上がる環状の外周壁と、その内周部から立ち上がる環状の内周壁とを備えたものであって、硬質シートで形成されたものを挙げることができる。図２に示すような二重円型トレイ状バッグは、そのような細胞培養容器の一例である。なお、二重円型トレイ状バッグにおいて、第２の容器壁は、形状維持性を具備していれば、軟質シートで形成してもよい。
【００１３】
また、本発明の他の実施の形態として、第１の容器壁および第２の容器壁の双方が、形状維持性を具備しており、例えば、硬質シートで形成されたものを挙げることができる。
【００１４】
これらの細胞培養容器において、第１の容器壁や第２の容器壁の厚さは、例えば、細胞培養容器の内外径の大きさや容器部内に供給される液体培地の重量等により、適宜選択される。また、「シート」という用語でその厚さが特定の範囲に限定されるものでもない。
【００１５】
図１に示すような浮き輪型バッグにおいては、第１の容器壁および第２の容器壁の双方の厚さは、同じであっても、異なってもよく、例えば、当該バッグの内外径の大きさやバッグ内に供給される液体培地の重量等に応じて、第２の容器壁の厚さを第１の容器壁の厚さよりも大きくしてもよい。図２に示すような二重円型トレイ状バッグにおいても、同様である。
【００１６】
ここで、第１の容器壁および第２の容器壁の柔軟性とは、例えば、空気の出入り無しに液体培地等の内容液が容器部内に流入または容器部内から流出できる程度に変形して容積を確保する容器壁の追従性である。この追従性は、単に、容器壁を形成する材料の物理的数値によって決まるのではなく、容器形態、容器内に存在する空気量等によっても変わるので、一概に、容器壁を形成する材料の物理的数値で制限することは適切ではない。
【００１７】
少なくとも第１の容器壁が、柔軟性を具備していることによって、ポート部を介した容器部内への液体培地や気体等の供給により、第１の容器壁が変形して、容器部の内容積が増大する一方、ポート部を介した容器部内からの液体培地や気体等の排出により第一の容器壁が変形して、容器部の内容積が減少する。容器部内からの液体培地や気体等の内容物を排出したとき、第１の容器壁の内面と第２の容器壁の内面とが略密着することが好ましい。
【００１８】
ここで、図１に示すような浮き輪型バッグにおいては、液体培地や気体等の供給によって容器部が膨らんで立体形状となり、これらの排出によって容器部が萎んで平面形状となるため、液体培地や気体等の出し入れによる容器部の内容積の変化は大きいが、図２に示すような二重円型トレイ状バッグにおいては、後述するように、立体形状の容器部が当初より形成されているため、液体培地や気体等の出し入れによる容器部の内容積の変化は、浮き輪型バッグに比べて一般的に小さい。
【００１９】
図１に示すような浮き輪型バッグにおいては、液体培地等の内容液を容器部に供給後、さらに空気等の気体を供給することで、第１の容器壁の内面が液体培地の液面から容易に離間するため、液体培地の旋回流と第１の容器壁の内面との不要な干渉を防止することができる。
【００２０】
図２に示すような二重円型トレイ状バッグにおいても、液体培地等の内容液を容器部ら供給後、さらに空気等の気体を供給することで、第１の容器壁の内面を液体培地の液面から容易に離間させ、液体培地の旋回流と第１の容器壁の内面との不要な干渉を防止できるように構成してもよい。
【００２１】
一方、第２の容器壁は、形状維持性を具備していてもよい。ここで、形状維持性とは、
液体培地等の内容液を容器部に供給しても、第２の容器壁の形状が実質的に変わらないことをいう。第２の容器壁が、形状維持性を具備していることによって、旋回時の内容液の流動や、例えば、細胞観察や培地交換等の際に細胞培養容器を持ち上げたときの内容液の自重による第２の容器壁の変形を抑えることができる。なお、細胞培養容器（容器部）が大径化すれば、これに伴い容器部内の液体培地の自重も増大するため、細胞培養容器（容器部）を持ち上げたときに、内容液の自重で第２の容器壁が多少撓んでも、形状維持性を具備しているに含まれるものとする。また、第２の容器壁が形状維持性を具備している場合は、第２の容器壁のうち、環状流路の底面となる部分は、従来のディッシュの底面のように平面であることが好ましい。
【００２２】
細胞培養容器の第１の容器壁および第２の容器壁を構成する材料は、任意であるが、成形性、経済性、取扱い性などの観点から、天然または合成樹脂であり、好ましくは、合成樹脂である。合成樹脂の例としては、ポリスチレン樹脂、ポリエステル樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリメチルメタクリル樹脂、シクロオレフィン樹脂、ポリエチレン樹脂、エチレン−酢酸ビニル共重合樹脂、ポリプロピレン樹脂、およびこれらの混合物などが挙げられる。例えば、第２の容器壁をこれらの樹脂からなる単層シート、またはこれらの樹脂を複合した複合シートで形成してもよい。なお、ここで複合シートとは、樹脂混合物からなるシート、ラミネートフィルム、樹脂フィルムへの樹脂コーティング、樹脂フィルムへ樹脂印刷等複数の樹脂からなるシートを指す。
【００２３】
細胞培養容器において、第１の容器壁および第２の容器壁を構成する、軟質シートを形成する樹脂の例としては、低密度ポリエチレン樹脂、エチレン−酢酸ビニル共重合樹脂、ポリプロピレン樹脂、エチレン−プロピレン共重合樹脂、ポリブタジエン樹脂、スチレン−ブタジエン共重合樹脂およびそれらの水素添加樹脂、ポリウレタン樹脂、ならびにそれらの樹脂の混合物などが挙げられる。また、硬質シートを形成する樹脂として、これらを用いてもよい。
【００２４】
低密度ポリエチレンとしては、一般の低密度ポリエチレンはもちろんのこと直鎖状低密度ポリエチレン樹脂、メタロセン触媒系低密度ポリエチレン樹脂が含まれる。また、ポリプロピレン樹脂には、ステレオブロックポリプロピレン樹脂およびポリプロピレン樹脂とステレオブロックポリプロピレン樹脂の混合物も含まれる。
【００２５】
第１の容器壁および第２の容器壁の内側（培養空間の側）の面は、細胞の接着を防止するためには、疎水性表面であることが好ましく、疎水性樹脂により形成するか、あるいは予め疎水化処理または細胞の接着を阻害する処理を施すことが好ましい。そのような処理の例として、アガロースコーティング、ポリメタクリル酸ヒドロキシエチル（ポリＨＥＭＡ）コーティング、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）コーティングなどが挙げられる。なお、第１の容器壁および第２の容器壁の内側（培養空間の側）の面は、疎水性表面に限定されるものではない。培養する細胞の種類、液体培地の種類、添加物、培養容器の大きさ、培養容器の旋回速度などによって、第１の容器壁および第２の容器壁の内側（培養空間の側）の面が、疎水性表面あるいは親水性表面のいずれが良いか選択される。
【００２６】
親水性表面が好ましい場合は、親水性樹脂により形成するか、あるいは予め親水化処理または細胞の接着を促進する処理を施す。そのような処理の例として、表面に水酸基およびカルボキシル基を付加するコロナ放電処理、コラーゲンＩコーティング、ポリ−Ｄ−リジンコーティング等が挙げられる。
【００２７】
また、培養容器の第１の容器壁および第２の容器壁の少なくとも一方が、気体透過性、特に、酸素および二酸化炭素の透過性を有することが好ましい。細胞に必要な酸素の容器内への供給と二酸化炭素の容器外への排出を、容器壁を介して行うことにより、すなわち、容器内外を直接連通させないことにより、容器内部の無菌性を維持しようとするものである。
【００２８】
ここで気体透過性は、主に酸素および二酸化炭素の透過性であるが、酸素透過性と二酸化炭素の透過性は、各種の素材に対して類似した傾向があり、しかも、二酸化炭素の透過性が酸素透過性に比較して著しく大きいことから、一般に、細胞の培養に用いられる容器の気体透過性は酸素透過性で評価される。
【００２９】
したがって、第１の容器壁および第２の容器壁は、酸素透過性であってもよい。酸素透過性は、培養される細胞量と酸素が透過する容器壁の面積に応じて変化する。通常、容器壁に必要とされる酸素透過性は、培養される細胞量に比例し、酸素が透過する容器壁の面積に反比例する。
【００３０】
第１の容器壁および第２の容器壁は、それぞれ異なる酸素透過性を有する容器壁で形成されてもよい。例えば、最も効率良く培養された場合の細胞量は培地の量に比例するとすれば、２５℃における第１の容器壁の実効面積あたりの酸素透過性と第２の容器壁の実効面積あたりの酸素透過性の和を、内容液の液量で割った数値を、０．２ｃｃ／ａｔｍ・ｄａｙ・ｍｌ以上になるように設計すれば、培養時に、細胞が酸素不足に陥ることはない培養用の容器を完成することができる。
【００３１】
ここで、酸素透過性は、２５℃において、容器壁に差圧１ａｔｍの酸素圧を２４時間かけ続けたときに、容器壁を透過する酸素量を容器壁１ｍ２あたりで表した数値である。
また、容器壁の実効面積あたりの酸素透過性は、容器壁の酸素透過性に容器壁の面積をかけた数値であって、容器壁が容器内に酸素を供給する能力を表し、一つの容器の持つ全ての容器壁の実効面積あたりの酸素透過性の総和は、その容器が容器内に酸素を供給する能力を表す。
【００３２】
さらに、実効面積あたりの酸素透過性の総和を、本発明の細胞培養容器に供給される液体培地の量で割ることによって、容器が、培地に１ｍｌあたりに供給できる酸素量を表すことができる。
【００３３】
以下、本発明の実施形態を図面に基づいて詳しく説明する。
図１は、本発明の一実施の形態に係る細胞培養容器（浮き輪型バッグ）１を示す斜視図である。なお、図１は、細胞培養容器１に細胞を播種した液体培地等と無菌フィルターを通した所定量の空気を注入して、細胞培養容器１が膨らんでいる状態を示している。
【００３４】
細胞培養容器１の容器部は、平面視環状の第１の容器壁２を構成する、柔軟性を具備した平面状の軟質シートと、略同一形状の第２の容器壁３を構成する、柔軟性を具備した平面状の軟質シートとを、それぞれ外周縁および内周縁で互いに接合することにより、外周縁部４および内周縁部５を有する平面視環状（浮き輪型）の密閉された培養空間を構成する。なお、第１の容器壁２および第２の容器壁３の双方が、軟質シートで形成されている。
【００３５】
細胞培養容器１の容器部は、気体を含めた内容物の供給前、および、これらの排出後は、第１の容器壁２の内面と第２の容器壁３の内面とが略密着して平面形状となるが、容器部に気体を含めた内容物を供給すると、第１の容器壁２の柔軟性と第２の容器壁３の柔軟性により、容器部が膨らんで、浮き輪型の立体形状となる。
【００３６】
第１の容器壁２および第２の容器壁３を構成する軟質シートの一例として、柔軟性と酸素透過性を具備し、エチレン−酢酸ビニル共重合樹脂からなる厚さ１４０μｍの単層シートを例示できる。なお、後述する細胞培養容器（二重円型トレイ状バッグ）の第２の容器壁として、これらの複合シートを用いてもよい。
また、細胞培養容器１の大きさとして、外周縁部の直径が８０ｍｍ、内周縁部の直径が４５ｍｍのものが例示できる。
【００３７】
第１の容器壁２および第２の容器壁３の双方が柔軟性を具備しており、第１の容器壁２および第２の容器壁３の内面のそれぞれを容易に密着できるため、例えば、液体培地の交換時に容器部からの液体培地の排出を容易に行うことができる。また、環状の容器部において、後述するポートと対向する一端側の箇所をクリップ等で挟み、第１の容器壁２の内面の一部とこれに対向する第２の容器壁３の一部とを一時的に密着することで、環状の容器部内の空間をポート側の大きな空間と非ポート側の小さな空間とに一時的に分離することができる。このため、非ポート側の小さな空間に、培養中または培養後の細胞を一時的に隔離することで、液体培地のみを容易に排出・交換することができる。
【００３８】
細胞培養容器１のポート部は、少なくとも容器部の培養空間の内部と外部とを連通するポート６を備えており、さらに、ポート６の開口端に接続されたチューブ７と、チューブ７の先端に設けられた導出口８と、導出口８の先端に装着されたキャップ９とを備えていてもよい。なお、ポート部がポート６のみで構成されているときは、ポート６の先端にキャップが装着されていることが望ましいが、キャップに替えてポート６の先端を熱融着等で閉塞してもよい。
【００３９】
細胞培養容器１の容器部は、細胞を播種した液体培地等と無菌フィルターを通した所定量の空気を注入して容器部が膨らむと、浮き輪状の立体形状となり、旋回装置のテーブル面に載置したときに、テーブル面と所定径の円環で接することになるため、旋回時において、容器部は、旋回テーブル上で揺動することなく、安定な姿勢を保持することができる。
【００４０】
また、細胞培養容器１を旋回する際、例えば、細胞培養容器１を図４に示す治具にセットしてもよい。治具にセットし、容器部を圧迫することで、容器部（環状流路）の底面の径方向の幅を大きくすることができる。また、治具にセットすることで、細胞培養容器１を持ち上げたときの変形も防止できるため、例えば、細胞観察にも好都合である。このような治具は、細胞の浮遊培養に影響しないものであれば、特に限定されない。例えば、治具は、培養機器に備え付けのものであってもよいし、培養機器とは独立したものであってもよい。
【００４１】
培養機器とは独立した治具を用いて細胞培養容器１を固定した例が、図４〜図６に示される。図４は、細胞培養容器１が治具２０で固定された状態を示す平面図であり、図５は、その側面図であり、図６は、それらの分解図である。ここで、治具２０は、細胞培養容器１の容器部を挟持する第１のプレート２４および第２のプレート２５と、第１のプレート２４および第２のプレート２５をそれぞれプレートの４隅に設けられたボルト穴を介して連結する連結ボルト２１およびナット２２と、第１のプレート２４と第２のプレート２５の間隔を調整するワッシャー２３とを備える。第１のプレート２４と第２のプレート２５の間隔は、ワッシャー２３の使用枚数により調整する。第１のプレート２４および第２のプレート２５は、細胞培養容器１の内部の観察のため、透明であるものが好ましい。なお、図５に示す状態から治具２０の上下を反転し、連結ボルト２１の頭部が旋回装置のテーブル面に接するように治具２０をテーブル面に載置してもよい。また、第１のプレート２４および第２のプレート２５で細胞培養容器１の容器部を挟持した状態を保持するための保持手段は、連結ボルト２１、ナット２２およびワッシャー２３に限定されず、その構成は任意であり、例えば、複数枚のワッシャー２３に替えて、所定長さに形成した管状部材（パイプ）を用いてもよい。
【００４２】
図２は、本発明の別の実施の形態に係る細胞培養容器（二重円型トレイ状バッグ）１０を示す斜視図であり、図３は、細胞培養容器１０の容器部の模式的な断面図である。
【００４３】
細胞培養容器１０の容器部は、第１の容器壁１１と第２の容器壁１２で構成されており、第１の容器壁１１が、軟質シートで形成されて柔軟性を具備し、また、第２の容器壁１２が、硬質シートで形成されて形状維持性を具備している。第２の容器壁１２は、外周部から延出して立ち上がる環状の外周壁１３と、内周部から延出して立ち上がる環状の内周壁１４とを備えており、内周壁１４の頂部の内径側は、上面１４ａで閉塞されている。このように、第２の容器壁１２には、外周壁１３や内周壁１４等が一体に形成されている。
【００４４】
本実施形態においては、第２の容器壁１２が、当初より外周壁１３や内周壁１４を備えてトレイ状に形成されており、このように、第２の容器壁１２を当初より凹型の立体構造に形成しておくことで、第２の容器壁１２を変形させることなく、液体培地等の内容液を容器部内に供給することができる。なお、第２の容器壁１２は、形状維持性を具備している限り、軟質シートで形成してもよい。
【００４５】
容器部は、外周壁１３と内周壁１４との高さが略同一であることが好ましい。本実施形態においても、図２および図３に示すように、外周壁１３と内周壁１４との高さが略同一となっており、第２の容器壁１２の外周壁１３の頂部は、第一の容器壁１１の外周縁と接合していが、第２の容器壁１２の内周壁１４の頂部は、第１の容器壁１１の内面と接合されるか、または離間可能に密着していてもよい。あるいは、内周壁１４の頂部の内径側の上面１４ａが、対向する第一の容器壁１１の内面と接合しているか、または離間可能に密着していてもよい。これらより、平面視環状の密閉された培養空間１５が構成される。
【００４６】
平面視環状の密閉された培養空間１５が構成される限り、内周壁１４の頂部の内径側の上面１４ａは無くてもよく、この場合、内周壁１４の頂部が第１の容器壁１１の内面と接合される。また、内周壁１４の頂部が第１の容器壁１１の内面と接合される場合は、第１の容器壁１１において、当該接合箇所より内径側の容器壁が無くてもよい。
【００４７】
細胞培養容器１０においては、第２の容器壁１２が形状維持性を具備しており、第２の容器壁１２に内周壁１４と上面１４ａが形成されているため、少なくとも第２の容器壁１２の外周壁１３の頂部が第一の容器壁１１の外周縁と接合している限り、平面視環状の密閉された培養空間１５が構成される。
【００４８】
なお、第２の容器壁１２に一体に設けた内周壁１４に替えて、第２の容器壁１２の底面をディッシュのような平面とし、その中央部に内周壁１４に相当する環状部材を後から接合してもよい。
【００４９】
細胞培養容器１０において、第１の容器壁１１を構成する軟質シートに径方向にたるみを持たせ、容器部内の気体を含めた内容物を排出したときに、第１の容器壁１１の内面と第２の容器壁１２の内面（底面）とが略密着するように構成してもよい。
【００５０】
また、細胞培養容器１０において、第１の容器壁１１を構成する軟質シートに径方向にたるみを持たせ、容器部内に無菌フィルターを通した空気を注入したときに、第１の容器壁１１が上側に膨らむように構成してもよい。
【００５１】
細胞培養容器１０のポート部は、少なくとも容器部の培養空間の内部と外部とを連通するポート１６を備えており、さらに、ポート１６の開口端に接続されたチューブ１７と、チューブ１７の先端に設けられた導出口１８と、導出口１８の先端に装着されたキャップ１９とを備えていてもよい。なお、ポート部がポート１６のみで構成されているときは、ポート１６の先端にキャップが装着されていることが望ましいが、キャップに替えてポート１６の先端を熱融着等で閉塞してもよい。
【００５２】
また、細胞培養容器１（１０）の第１の容器壁２（１１）および第２の容器壁３（１２）の少なくとも一方が、好ましくは、透明である。より好ましくは、第１の容器壁２（１１）および第２の容器壁３（１２）の双方が透明である。細胞培養においては、顕微鏡下で、細胞の形、色等を観察して、培養の進み具合、細胞の状態を観察して、次の処置を施すことが一般に行われているため、本発明の培養容器の少なくとも顕微鏡観察側の容器壁は、顕微鏡で細胞が観察できる程度に透明であること、すなわち、光線透過率が８０％以上であることが好ましい。
【００５３】
図１に示す細胞培養容器１においては、旋回培養ができれば、その大きさは任意であり、例えば、外径４０ｍｍ×内径３０ｍｍ程度のものから、外径２０００ｍｍ×内径４００ｍｍ程度のものが例示できる。また、図２に示す細胞培養容器１０においても、旋回培養ができれば、その大きさは任意であり、外径４０ｍｍ×内径３０ｍｍ×高さ５ｍｍ程度のものから、外径２０００ｍｍ×内径４００ｍｍ×高さ１０００ｍｍ程度のものが例示できる。また、図１に示す細胞培養容器１および図２に示す細胞培養容器１０においては、いずれも環状の培養空間を構成する外周縁部４（外周壁１３）および内周縁部５（内周壁１４）が円環状のものを例示したが、本発明に係る細胞培養容器の平面視環状の培養空間を構成する外周縁部（外周壁）や内周縁部（内周壁）は、円環状のものに限定されず、例えば、当該細胞培養容器を旋回培養に使用する場合は、旋回培養に支障がない範囲で、多角形等であってもよい。
【００５４】
このように、本発明の細胞培養容器は、閉鎖システムの構築が容易であるため、本発明の容器で培養された細胞、タンパク質などは、一般の細菌による汚染の危険性を減少させることができるだけでなく、クロスコンタミによる他人の体液からのウィルス汚染等も減少させることができる。
【００５５】
本発明の細胞培養容器は、特に、浮遊系細胞の培養用に使用でき、各種タンパク質をコーティングすれば、接着性細胞の培養用または浮遊系細胞刺激用としても使用できる。また、本発明の細胞培養容器は、旋回培養に好適であるが、旋回培養に限定されるものではなく、その適用範囲は任意である。さらに、本発明の細胞培養容器に予め液体培地等を密封した培地入り細胞培養容器としてもよい。
【産業上の利用可能性】
【００５６】
本発明の細胞培養容器は、密閉された培養空間を有する容器部を備えることから、細胞培養中のコンタミネーションのリスクを低減することができる。また、環状の培養空間に沿った旋回流を容器内の液体培地に生じさせることができるため、旋回培養に好適である。
【符号の説明】
【００５７】
１  細胞培養容器
２  第１の容器壁
３  第２の容器壁
４  外周縁部
５  内周縁部
６  ポート
７  チューブ
８  導出口
９  キャップ
１０  細胞培養容器
１１  第１の容器壁
１２  第２の容器壁
１３  外周壁
１４  内周壁
１５  培養空間
１６  ポート
１７  チューブ
１８  導出口
１９  キャップ
２０  治具
２１  連結ボルト（保持手段）
２２  ナット（保持手段）
２３  ワッシャー（保持手段）
２４  第１のプレート
２５  第２のプレート
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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