(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
0006483666.tif 000014
［式中、
Ｒ８はＨまたはメチルであり、
Ｒ９は、−Ｈ、メチルまたはヒドロキシルであり、
Ｒ１０は、メチル、ヒドロキシルまたはＮＲ１１Ｒ１２であり、
ここで、Ｒ１１およびＲ１２は独立して選択され、
Ｒ１１は、−Ｈ、メチルまたは−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３であり、
Ｒ１２は、
−Ｈ、オキソピロリジニル、ジオキシドチオピラニル、イソプロピルスルホニル、テトラヒドロピラニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、ヒドロキシル、ジメチルアミンエタンスルホニル、アミンエタンスルホニル、ジメチルアミンプロパンスルホニルであるか、
直鎖状、分岐鎖状または環状のＣ１〜Ｃ６アルキルであって、任意選択により、
メトキシ、−Ｆ，≡Ｎ、メチルオキセタニル、エトキシ、オキソ−、メチルイミダゾリル、メチルチオ、
メチルまたは−ＣＦ３で任意選択により置換されているピペラジニル、
メチルまたはエチルで任意選択により置換されているアセトアミジル、
メチルで任意選択により置換されているオキサゾリル、
メチル、シアノまたはヒドロキシルで任意選択により置換されているピラゾリル
により置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであるか、
−Ｃ（Ｏ）Ｒ１３であり、ここで、
Ｒ１３は、
環状、分岐鎖状または直鎖状のＣ１〜Ｃ７アルキルであって、任意選択により、
ＮＲ１４Ｒ１５（式中、Ｒ１４およびＲ１５は、メチルおよび−Ｈから独立に選択される）；
メトキシ、ヒドロキシル、メチルチオ、エチルチオ、メチルスルホニル、オキソ−、チアゾリジニル、ピリジニル、ピラゾロピリジニル、メチルアミノ、チアゾリル、−Ｆ、モルホリニル、メチルイソオキサゾリル、メチルオキセタニル、アミノオキセタニル、
ヒドロキシルで任意選択により置換されているフェニル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２；
１個または２個の炭素原子が窒素原子で置換されている飽和または不飽和の５員シクロアルキル（ここで、シクロアミンまたはシクロジアミンがヒドロキシルまたはメチルで任意選択により置換されている）により置換されているＣ１〜Ｃ７アルキルである］
の化合物、その立体異性体もしくはその立体異性体の混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項２】
（Ｒ）−５−（３−アミノピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
５−（（３Ｒ，５Ｓ）−３−アミノ−５−メチルピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
５−（（３Ｒ，５Ｓ）−３−（ジメチルアミノ）−５−メチルピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
（Ｒ）−５−（５−アミノ−３，３−ジメチルピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）アセトアミド；
５−（（３Ｒ，５Ｓ）−３−ヒドロキシ−５−メチルピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
５−（（３Ｓ，５Ｒ）−３−メチル−５−（メチルアミノ）ピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−２−（ジメチルアミノ）アセトアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−２−メトキシアセトアミド；
２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）アセトアミド；
５−（（３Ｒ，５Ｓ）−３−（（２−メトキシエチル）アミノ）−５−メチルピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
５−（（３Ｒ，５Ｓ）−３−（（２−メトキシエチル）アミノ）−５−メチルピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル２−ヒドロキシプロパン−１，２，３−トリカルボキシレート；
２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−２−メチルプロパンアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−２−（メチルアミノ）アセトアミド；
５−（（３Ｒ、５Ｓ）−３−アミノ−５−メチルピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボキサミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−２−ヒドロキシアセトアミド；
（Ｓ）−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−２−ヒドロキシ−３−メチルブタンアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３−ヒドロキシベンズアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−４−ヒドロキシベンズアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−２−（メチルチオ）アセトアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−２−（エチルチオ）アセトアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−２−（メチルスルホニル）アセトアミド；
（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）プロパンアミド；
（Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）プロパンアミド；
１−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）シクロプロパンカルボキサミド；
（Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３−ヒドロキシプロパンアミド；
（Ｒ）−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）ピロリジン−２−カルボキサミド；
２−（アゼチジン−３−イル）−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）アセトアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）ピロリジン−３−カルボキサミド；
２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３−メチルブタンアミド；
（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３−メチルブタンアミド；
５−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）ペンタンアミド；
（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）ペンタンアミド；
（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３−メトキシプロパンアミド；
（２Ｒ，３Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３−ヒドロキシブタンアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）ピペリジン−３−カルボキサミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−２−（ピロリジン−３−イル）アセトアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）ピペラジン−２−カルボキサミド；
（２Ｓ，４Ｒ）−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボキサミド；
（２Ｓ，３Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３−メチルペンタンアミド；
（Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−４−メチルペンタンアミド；
（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−４−メチルペンタンアミド；
（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３，３−ジメチルブタンアミド；
２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３，３−ジメチルブタンアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３−メチル−２−（メチルアミノ）ブタンアミド；
（Ｓ）−３−アミノ−Ｎ１−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）スクシンアミド；
（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ１−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）スクシンアミド；
（Ｒ）−２−アミノ−Ｎ１−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）スクシンアミド；
（Ｓ）−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）チアゾリジン−４−カルボキサミド；
４−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）ベンズアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−２−（ピペリジン−４−イル）アセトアミド；
Ｎ−（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−４−メチルピペリジン−４−カルボキサミド；
１−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３−ヒドロキシシクロペンタンカルボキサミド；
（Ｓ）−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３−メチル−２−（メチルアミノ）ブタンアミド；
（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−４，４−ジメチルペンタンアミド；
（Ｓ）−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−２−（メチルアミノ）ヘキサンアミド；
（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）ペンタンジアミド；
（Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３−（エチルチオ）プロパンアミド；
２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−４−（メチルチオ）ブタンアミド；
（Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−２−フェニルアセトアミド；
（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−２−フェニルアセトアミド；
（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）プロパンアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３−（ピペリジン−２−イル）プロパンアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３−（ピペリジン−３−イル）プロパンアミド；
１−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−４−ヒドロキシシクロヘキサンカルボキサミド；
（Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３−フェニルプロパンアミド；
（２Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−４−（メチルスルフィニル）ブタンアミド；
（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３−（ピリジン−２−イル）プロパンアミド；
（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３−（ピリジン−４−イル）プロパンアミド；
（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３−（ピリジン−３−イル）プロパンアミド；
（Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３−（ピリジン−４−イル）プロパンアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−３−カルボキサミド；
２−（１−（アミノメチル）シクロヘキシル）−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）アセトアミド；
（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３−（チアゾール−４−イル）プロパンアミド；
（Ｓ）−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−２−（メチルアミノ）−３−フェニルプロパンアミド；
（Ｒ）−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−２−（メチルアミノ）−３−フェニルプロパンアミド；
（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロパンアミド；
（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−４−（メチルスルホニル）ブタンアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−２，２，２−トリフルオロアセトアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）プロパン−２−スルホンアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３，３，３−トリフルオロプロパンアミド；
（Ｓ）−３−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−４−メチルペンタンアミド；
（Ｓ）−３−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）ブタンアミド；
５−（（３Ｓ，５Ｒ）−３−メチル−５−（（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ）ピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
５−（（３Ｒ，５Ｓ）−３−（（２，２−ジフルオロエチル）アミノ）−５−メチルピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）モルホリン−２−カルボキサミド；
（Ｓ）−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド；
（Ｒ）−３−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−４−メチルペンタンアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−５−メチルイソオキサゾール−３−カルボキサミド；
（Ｒ）−３−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）ブタンアミド；
（Ｓ）−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３−メチル−２−（メチルアミノ）ブタンアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−２−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）アセトアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−２−（ピリジン−２−イル）アセトアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−２−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）アセトアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）ニコチンアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボキサミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボキサミド；
（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３，３，３−トリフルオロプロパンアミド；
（Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３，３，３−トリフルオロプロパンアミド；
５−（（３Ｓ，５Ｒ）−３−メチル−５−（（３，３，３−トリフルオロプロピル）アミノ）ピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
５−（（３Ｒ，５Ｓ）−３−（（シアノメチル）アミノ）−５−メチルピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
Ｎ−（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３−メチルオキセタン−３−カルボキサミド；
５−（（３Ｓ，５Ｒ）−３−メチル−５−（（（３−メチルオキセタン−３−イル）メチル）アミノ）ピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
（Ｒ）−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）モルホリン−３−カルボキサミド；
（Ｓ）−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）モルホリン−３−カルボキサミド；
３−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）オキセタン−３−カルボキサミド；
５−（（３Ｒ，５Ｓ）−３−（（（３−アミノオキセタン−３−イル）メチル）アミノ）−５−メチルピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
エチル２−（（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）アミノ）アセテート；
ジエチル２，２’−（（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）アザンジイル）ジアセテート；
５−（（３Ｓ，５Ｒ）−３−メチル−５−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アミノ）ピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
５−（（３Ｒ，５Ｓ）−３−（エチルアミノ）−５−メチルピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
５−（（３Ｓ，５Ｒ）−３−メチル−５−（オキセタン−３−イルアミノ）ピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
５−（（３Ｓ，５Ｒ）−３−メチル−５−（（（５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）メチル）アミノ）ピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
５−（（３Ｓ，５Ｒ）−３−メチル−５−（（テトラヒドロフラン−３−イル）アミノ）ピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
２−（（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）アミノ）アセトアミド；
２−（（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）アミノ）−Ｎ−メチルアセトアミド；
２−（（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）アミノ）−Ｎ−エチルアセトアミド；
２−（（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）アミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド；
５−（（３Ｓ，５Ｒ）−３−メチル−５−（（オキサゾール−２−イルメチル）アミノ）ピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
５−（（３Ｓ，５Ｒ）−３−メチル−５−（（（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）アミノ）ピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
５−（（３Ｓ，５Ｒ）−３−メチル−５−（（（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）メチル）アミノ）ピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
５−（（３Ｒ，５Ｓ）−３−（（（１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メチル）アミノ）−５−メチルピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
５−（（３Ｒ，５Ｓ）−３−（（（１，４−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）メチル）アミノ）−５−メチルピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
５−（（３Ｒ，５Ｓ）−３−（（（３，５−ジメチルイソオキサゾール−４−イル）メチル）アミノ）−５−メチルピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
５−（（３Ｓ，５Ｒ）−３−メチル−５−（（２−オキソピロリジン−３−イル）アミノ）ピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
５−（（３Ｓ，５Ｒ）−３−メチル−５−（（３−（メチルスルホニル）プロピル）アミノ）ピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
５−（（３Ｒ，５Ｓ）−３−（（２−シアノシクロペンチル）アミノ）−５−メチルピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
５−（（３Ｓ，５Ｒ）−３−メチル−５−（（１−（ピリジン−２−イル）エチル）アミノ）ピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
５−（（３Ｓ，５Ｒ）−３−メチル−５−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル）アミノ）ピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
５−（（３Ｒ，５Ｓ）−３−（（（１Ｓ，４Ｓ）−４−ヒドロキシシクロヘキシル）アミノ）−５−メチルピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
５−（（３Ｒ，５Ｓ）−３−（（（１Ｒ，４Ｒ）−４−ヒドロキシシクロヘキシル）アミノ）−５−メチルピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
５−（（３Ｓ，５Ｒ）−３−メチル−５−（（４−オキソシクロヘキシル）アミノ）ピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
５−（（３Ｒ，５Ｓ）−３−（（１，１−ジオキシドテトラヒドロ−２Ｈ−チオピラン−４−イル）アミノ）−５−メチルピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
５−（（３Ｓ，５Ｒ）−３−メチル−５−（（１−（６−メチルピリジン−２−イル）エチル）アミノ）ピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル；
２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）エタンスルホンアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−２−（ジメチルアミノ）エタンスルホンアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−３−（ジメチルアミノ）プロパン−１−スルホンアミド；
５−（（３Ｓ，５Ｒ）−３−メチル−５−（メチル（オキセタン−３−イル）アミノ）ピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリルアセテート；および
５−（（５Ｓ）−３−（（１−ヒドロキシプロパン−２−イル）アミノ）−５−メチルピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル
またはそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択される化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
５−（（３Ｒ，５Ｓ）−３−アミノ−５−メチルピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリルまたはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物または薬学的に許容される塩の薬学的有効量を含む、全身性エリテマトーデスまたはループスの治療のための医薬組成物。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物の薬学的に許容される塩の薬学的有効量を含む、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物または薬学的に許容される塩の薬学的有効量を含む、ＴＬＲ７に拮抗するための医薬組成物。
【請求項７】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物または薬学的に許容される塩の薬学的有効量を含む、ＴＬＲ８に拮抗するための医薬組成物。
【請求項８】
少なくとも１種の請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物または薬学的に許容される塩と、少なくとも１種の薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項９】
前記化合物またはその薬学的に許容される塩が、ＨＥＫ−２９３細胞株中のヒトＴＬＲ７受容体に対して１００ｎＭ以下のＩＣ５０を有する、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記化合物またはその薬学的に許容される塩が、ＨＥＫ−２９３細胞株中で発現するヒトＴＬＲ７受容体に対して２０ｎＭ以下のＩＣ５０を有する、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記化合物またはその薬学的に許容される塩が、ＨＥＫ−２９３細胞株中で発現するヒトＴＬＲ７受容体に対して５ｎＭ以下のＩＣ５０を有する、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
ＨＥＫ−２９３細胞株中で発現するヒトＴＬＲ７受容体に対する前記ＩＣ５０が、（１）ＴＬＲ７を安定的に発現する前記ＨＥＫ−２９３細胞株の細胞を、３８４ウェルプレート中、１０％ウシ胎仔血清を含有するダルベッコ変法イーグル培地に密度２．２２×１０５細胞／ｍｌでプレーティングし、３７℃、５％ＣＯ２で２日間インキュベートすること；（２）前記化合物またはその薬学的に許容される塩を添加し、前記細胞を３０分間インキュベートすること；（３）２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｃ］キノリン−４−アミンを３ｕｇ／ｍｌで添加し、前記細胞をおよそ２０時間インキュベートすること；および（４）発光を測定することによりＮＦ−κＢ依存性レポーターの活性化を定量化すること、によって測定される、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物または薬学的に許容される塩の薬学的有効量を含む、全身性エリテマトーデス、皮膚ループス、神経精神ループスまたはループスの治療のための医薬組成物。
【請求項１４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物の薬学的に許容される塩の薬学的有効量を含む、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物の薬学的に許容される塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
背景
本開示の分野
本開示の実施形態は、選択的に置換されたキノリン化合物、および活性成分として本化合物を１種以上含む医薬品に関する。本開示の実施形態は、特に、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）７および８の拮抗剤または阻害剤として作用する本化合物、ならびに全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）およびループス腎炎の治療に有効な医薬組成物中におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
関連技術の説明
全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）およびループス腎炎は、炎症および組織損傷を特徴とする自己免疫疾患である。例えば、ＳＬＥは、皮膚、肝臓、腎臓、関節、肺および中枢神経系に損傷を引き起こす場合がある。ＳＬＥ罹患者は、極度の疲労、関節痛および関節腫脹、説明困難な発熱、皮疹ならびに腎機能障害などの全身症状を経験し得る。器官系の併発症は患者によって異なるため、症状は多様であり得る。ＳＬＥは主に若い女性の疾患であり、発症のピークは１５〜４０歳の間で、女性の罹患率は男性よりおよそ１０倍高い。
【０００３】
ＳＬＥの現行の治療は、通常、ベリムマブ、ヒドロキシクロロキン、プレドニゾンおよびシクロホスファミドなどの免疫調節薬物を必要とする。これらの薬物の全てに用量制限副作用があり得、依然として疾患の制御が不十分である患者が多い。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本開示の概要
本開示の実施形態は、化合物、および患者におけるＴｏｌｌ様受容体７または８の活性化を特徴とする疾患または病態を予防または治療するための使用方法を提供する。一実施形態は、式（Ｉ）の化合物を重点的に扱う。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
別の実施形態は、式（Ｉ）：
【化１】
0006483666.tif 000002
［式中、
Ｒ８はＨまたはメチルであり、
Ｒ９は、−Ｈ、メチルまたはヒドロキシルであり、
Ｒ１０は、−Ｈ、メチル、ヒドロキシルまたはＮＲ１１Ｒ１２であり、
ここで、Ｒ１１およびＲ１２は独立して選択され、
Ｒ１１は、−Ｈ、メチルまたは−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３であり、
Ｒ１２は、
−Ｈ、オキソピロリジニル、ジオキシドチオピラニル、イソプロピルスルホニル、テトラヒドロピラニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、ヒドロキシル、ジメチルアミンエタンスルホニル、アミンエタンスルホニル、ジメチルアミンプロパンスルホニルであるか、
直鎖状、分岐鎖状または環状のＣ１〜Ｃ６アルキルであって、任意選択により、
メトキシ、−Ｆ，≡Ｎ、メチルオキセタニル、エトキシ、オキソ−、メチルイミダゾリル、メチルチオ、
メチルまたは−ＣＦ３で任意選択により置換されているピペラジニル、
メチルまたはエチルで任意選択により置換されているアセトアミジル、
メチルで任意選択により置換されているオキサゾリル、
メチル、シアノまたはヒドロキシルで任意選択により置換されているピラゾリル
により置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであるか、
−Ｃ（Ｏ）Ｒ１３であり、ここで、
Ｒ１３は、
環状、分岐鎖状または直鎖状のＣ１〜Ｃ７アルキルであって、任意選択により、
ＮＲ１３Ｒ１４（式中、Ｒ１３およびＲ１４は、メチルおよび−Ｈから独立に選択される）；
メトキシ、ヒドロキシル、メチルチオ、エチルチオ、メチルスルホニル、オキソ−、チアゾリジニル、ピリジニル、ピラゾロピリジニル、メチルアミノ、チアゾリル、−Ｆ、モルホリニル、メチルイソオキサゾリル、メチルオキセタニル、アミノオキセタニル、
ヒドロキシルで任意選択により置換されているフェニル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２；
１個または２個の炭素原子が窒素原子で置換されている飽和または不飽和の５員シクロアルキル（ここで、シクロアミンまたはシクロジアミンがヒドロキシルまたはメチルで任意選択により置換されている）
により置換されているＣ１〜Ｃ７アルキルである］
の化合物を提供する。
【０００６】
別の実施形態では、化合物は５−（（３Ｒ，５Ｓ）−３−アミノ−５−メチルピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリルである。
【０００７】
別の実施形態では、上記の段落の化合物または化合物の薬学的に有効な塩は、ＨＥＫ−２９３細胞株中で発現するヒトＴＬＲ７受容体に対して２０ｎＭ以下のＩＣ５０を有する。別の実施形態では、本開示の上記の段落の化合物またはその薬学的に有効な塩は、ＨＥＫ−２９３細胞株中で発現するヒトＴＬＲ７受容体に対して１００ｎＭ以下のＩＣ５０を有する。別の実施形態では、ＨＥＫ−２９３細胞株中で発現するヒトＴＬＲ７受容体に対するＩＣ５０は、（１）ＴＬＲ７を安定的に発現するＨＥＫ−２９３細胞株の細胞を、３８４ウェルプレート中、１０％ウシ胎仔血清を含有するダルベッコ変法イーグル培地に密度２．２２×１０５細胞／ｍｌでプレーティングし、３７℃、５％ＣＯ２で２日間インキュベートすること；（２）化合物またはその薬学的に許容される塩を添加し、細胞を３０分間インキュベートすること；（３）ＣＬ０９７(InvivoGen)を３ｕｇ／ｍｌで添加し、細胞をおよそ２０時間インキュベートすること；および（４）発光を測定することによりＮＦ−κＢ依存性レポーターの活性化を定量化することによって測定される。
【０００８】
本開示の別の実施形態では、ＨＥＫ−２９３細胞株中で発現するヒトＴＬＲ７受容体に対する化合物のＩＣ５０は、２００ｎＭ以下、１８０ｎＭ以下、１６０ｎＭ以下、１４０ｎＭ以下、１２０ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、８０ｎＭ以下、６０ｎＭ以下、４０ｎＭ以下または２０ｎＭ以下である。本開示の別の実施形態では、ＨＥＫ−２９３細胞株中で発現するヒトＴＬＲ７受容体に対する化合物のＩＣ５０は、１０ｎＭ〜３０ｎＭ、１０ｎＭ〜５０ｎＭ、１０ｎＭ〜１００ｎＭ、３０ｎＭ〜５０ｎＭ、３０ｎＭ〜１００ｎＭまたは５０ｎＭ〜１００ｎＭである。別の実施形態では、ＨＥＫ−２９３細胞株中で発現するヒトＴＬＲ７受容体に対するＩＣ５０は、（１）ＴＬＲ７を安定的に発現するＨＥＫ−２９３細胞株の細胞を、３８４ウェルプレート中、１０％ウシ胎仔血清を含有するダルベッコ変法イーグル培地に密度２．２２×１０５細胞／ｍｌでプレーティングし、３７℃、５％ＣＯ２で２日間インキュベートすること；（２）化合物またはその薬学的に許容される塩を添加し、細胞を３０分間インキュベートすること；（３）ＣＬ０９７(InvivoGen)を３ｕｇ／ｍｌで添加し、細胞をおよそ２０時間インキュベートすること；および（４）発光を測定することによりＮＦ−κＢ依存性レポーターの活性化を定量化することによって測定される。
【０００９】
別の実施形態は、本開示の化合物または薬学的に許容される塩の薬学的有効量を投与する工程を含む、全身性エリテマトーデス、皮膚ループス、神経精神ループス、胎児心臓ブロックおよび抗リン脂質抗体症候群の治療を含むがこれらに限定されないループスの治療方法を提供する。
【００１０】
別の実施形態は、本開示の化合物または薬学的に許容される塩の薬学的有効量を投与する工程を含む、ＴＬＲ７に拮抗する方法を提供する。
【００１１】
別の実施形態は、本開示の化合物または薬学的に許容される塩の薬学的有効量を投与する工程を含む、ＴＬＲ８に拮抗する方法を提供する。
【００１２】
別の実施形態は、本開示の少なくとも１種の化合物または薬学的に許容される塩と、少なくとも１種の薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
【００１３】
別の実施形態は、本開示の化合物または薬学的に許容される塩の薬学的有効量を投与する工程を含む、全身性エリテマトーデスまたはループスの治療方法を提供する。
【００１４】
別の実施形態は、本開示の化合物または薬学的に許容される塩の薬学的有効量を投与する工程を含む、ＴＬＲ７に拮抗する方法を提供する。
【００１５】
別の実施形態は、本開示の化合物または薬学的に許容される塩の薬学的有効量を投与する工程を含む、ＴＬＲ８に拮抗する方法を提供する。
【００１６】
別の実施形態は、本開示の少なくとも１種の化合物または薬学的に許容される塩と、少なくとも１種の薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
【００１７】
本明細書で使用する場合、「任意選択により置換されている」という用語は、対象の構造が、低級アルキル、メトキシ−、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３または−ＯＣＨ（ＣＨ３）２から独立して選択される１個以上の置換基を含んでいてもよいが、含むことが必須ではないことを意味する。任意選択により置換されている部分が環状であるなら、その場合、任意選択による置換は、環内の２個の原子間のメチル架橋であってもよい。
【００１８】
本明細書で使用する場合、「Ｃ（Ｏ）」という記号は、式Ｃ＝Ｏを有するカルボニル基を指す。
【００１９】
別段の指定のない限り、特許請求の範囲を含む本開示で使用する場合、「ａ」および「ａｎ」は、「１つ以上の」を意味する。
【００２０】
本明細書で使用する場合、「低級アルキル」は、直鎖状の飽和炭化水素、または３個および４個の炭素の基の場合は、直鎖状、分岐鎖状または環状の飽和炭化水素を指し、これらは１個〜４個の炭素原子を有する。
【００２１】
本明細書で使用する場合、窒素を含む複素環部分について言うときの「窒素を介して結合している」という用語は、その部分が別の構造に結合している点が、複素環の一部である窒素を介していることを意味する。
【００２２】
本明細書で使用する場合、「ＴＬＲ７／８」という用語は、「ＴＬＲ７およびＴＬＲ８」または「ＴＬＲ７またはＴＬＲ８」または「ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８」を意味する。「ＴＬＲ７／８」が登場する文脈を基に、当業者はその特定の意味を理解することができる。
【００２３】
本明細書に記載する複素環部分としては、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、メチルアゼチジニル、ピラゾリル、ピペラジニル、モルホリニル、チアゾリル、ピロロピロリル、イミダゾリジニルおよびイソチアゾリルが挙げられる。複素環基について述べる場合、別段の指定のない限り、当然のことながら、複素環の基の中の原子は基の中のいずれの位置にあってもよい。さらに当然のことながら、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリルおよびピロリルは、不飽和でも部分的に不飽和でもよい。本開示の実施形態には、１種以上の本開示の化合物を薬学的に許容される添加剤とともに含む医薬組成物を含めてもよい。この医薬組成物は、ＴＬＲ７／８活性化を特徴とする疾患または病態を治療または予防するために、このような病態または疾患がある患者、またはこれらになりやすい患者、典型的にはヒト患者に使用することができる。ＴＬＲ７／８活性化を特徴とする疾患または病態の例としては、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）およびループス腎炎が挙げられる。
【００２４】
本明細書で使用する場合、本開示の実施形態の化合物の「有効量」とは、ＳＬＥおよびループス腎炎を治療または予防するのに十分な量としての、上記で特定した化合物の有効量である。
【００２５】
本明細書に記載する実施形態は、不斉中心またはキラル中心を含んでもよい。実施形態は、様々な立体異性体およびその混合物を含む。本開示の実施形態の化合物の個々の立体異性体は、不斉中心またはキラル中心を含有する市販の出発材料からの合成によって、または鏡像異性化合物の混合物を製造してからその化合物を分割することによって、製造することができる。分割に好適な方法には、鏡像異性体のラセミ混合物を指定（＋／−）してキラル補助剤に結合させ、得られたジアステレオマーをクロマトグラフィーまたは再結晶化によって分離し、光学的に純粋な生成物を補助剤から分離するもの；または光学対掌体の混合物をキラルクロマトグラフィーカラムで直接分離するものが含まれる。
【００２６】
本開示の実施形態はまた、本開示の任意の化合物および薬学的に許容される添加剤を含む医薬組成物も含む。この医薬組成物は、ＳＬＥおよびループス腎炎を治療または予防するために使用することができる。したがって、本開示の実施形態はまた、ループス腎炎またはＳＬＥがある、またはこれらになりやすいヒト患者において、ＳＬＥまたはループス腎炎を治療または予防する方法も取り扱うことができる。
【００２７】
本開示の実施形態は、本明細書に記載する化合物の薬学的に許容される塩を含む。「薬学的に許容される塩」という用語は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激またはアレルギー応答を起こさずに、ヒトおよび動物の組織に接触して使用するのに好適な塩を指す。薬学的に許容される塩は当技術分野において周知である。例えば、S.M. Bergeらは、J. Pharmaceutical Sciences 66: 1-19, 1977の中で、薬学的に許容される塩を詳細に記述している。塩は、化合物の最終単離および精製中にｉｎ  ｓｉｔｕで、またはそれとは別に遊離塩基基を好適な有機酸と反応させて製造することができる。代表的な酸付加塩としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、モノマレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、トリフルオロ酢酸塩、ウンデカン酸塩および吉草酸塩などが挙げられる。代表的なアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム塩、リチウム塩、カリウム塩、カルシウム塩およびマグネシウム塩など、ならびに非毒性のアンモニウム、第四級アンモニウムおよびアミンの陽イオン、例えば、以下に限定されるものではないが、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミンおよびエチルアミンなどの陽イオンが挙げられる。「薬学的に許容されるエステル」という用語は、本明細書で使用する場合、ｉｎ  ｖｉｖｏで加水分解し、人体内で容易に分解して親化合物またはその塩を残すものを含むエステルを表す。好適なエステル基としては、例えば、薬学的に許容される脂肪族カルボン酸、特に、各アルキル基またはアルケニル基が、炭素原子を通常６個まで有するアルカン酸、アルケン酸、シクロアルカン酸およびアルカン二酸から誘導されたものが挙げられる。特定のエステルの例としては、ギ酸エステル、酢酸エステル、プロピオン酸エステル、ブチル酸エステル、アクリル酸エステルおよびエチルコハク酸エステルが挙げられる。
【００２８】
本願では、鏡像異性体は、「Ｒ」または「Ｓ」の記号で示されるか、または従来の手法により、三次元空間で平面のページの上方の置換基を規定する太線、および三次元空間で平面の印刷ページの下方の置換基を規定する破線または点線を用いて描かれる。立体化学の明示がなされていなければ、その場合、構造の定義には立体化学の両選択肢が含まれる。構造または化学名に「ＲＥＬ」または「ｒｅｌ」が含まれていれば、その場合、その構造は相対立体化学を示していると理解される。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】図１Ａ〜図１Ｄは、ＤＢＡ／１プリスタンモデルにおけるＥＲ−８８８８４０（５−（（３Ｒ，５Ｓ）−３−アミノ−５−メチルピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル）を用いた処置の結果を示す。図の説明：１０週齢の雌のＤＢＡ／１マウスに０．５ｍｌのプリスタンまたはＰＢＳの腹腔内注射をした。１８週齢で動物から採血して投与前ベースラインの自己抗体価を調べた。ビヒクル（Ｖｅｈ；０．５％メチル−セルロース）またはＥＲ−８８８８４０の１１ｍｇ／ｋｇ、３３ｍｇ／ｋｇもしくは１００ｍｇ／ｋｇの１日１回経口投与を、プリスタン注射から８週間後の１８週齢で開始し、処置を１２週間継続した。実験の終了時に、血漿サンプルを採取し、抗ｄｓＤＮＡ価および抗ヒストン価（図１Ａ）ならびに抗Ｓｍ／ＲＮＰ価および抗ＲｉｂｏＰ価（図１Ｂ）をＥＬＩＳＡで測定した。（図１Ｃ）処置から８週間後に、ＩＦＮが制御する遺伝子の全血中の発現をｑＰＣＲパネルで測定した。プリスタン処置マウスにおける、プリスタン処置により上方制御され、化合物処置により調整された遺伝子を列挙している。（図１Ｄ）個々のマウスのインターフェロンスコアを計算し（ＩＦＮスコアの計算に関する詳細については薬理学試験の材料および方法の項を参照）、マン・ホイットニーのｔ検定を使用して群間比較をした。
【図２】図２Ａ〜図２Ｅは、ＤＢＡ／１プリスタンモデルにおけるＥＲ−８８８８４０を用いた処置の結果を示す。図の説明：１０週齢の雌のＤＢＡ／１マウスに０．５ｍｌのプリスタンまたはＰＢＳの腹腔内注射をした。１２週齢で動物から採血してベースラインの自己抗体価を調べた。ビヒクル（Ｖｅｈ；０．５％メチル−セルロース）またはＥＲ−８８８８４０の３３ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇもしくは３００ｍｇ／ｋｇの１日１回経口投与を、プリスタン注射から４週間後の１４週齢で開始し、処置を８週間継続した。実験の終了時に、血漿を採取し、抗ｄｓＤＮＡ価（図２Ａ）、抗ＲｉｂｏＰ価（図２Ｂ）、抗ヒストン価（図２Ｃ）および抗Ｓｍ／ＲＮＰ価（図２Ｄ）をＥＬＩＳＡで測定した。（図２Ｅ）。処置から１２週間後に、ＩＦＮが制御する遺伝子の全血中の発現をｑＰＣＲパネルで測定し、ＩＦＮ遺伝子シグネチャースコアを計算した（ＩＦＮスコアの計算に関する詳細については薬理学試験の材料および方法の項を参照）。表は、プリスタン処置によりＰＢＳ対照に対して有意に上方制御された１８遺伝子の完全リストを示す。各処置群の個々の動物のインターフェロンスコアをプロットし、マン・ホイットニーの検定を使用して比較している。
【図３】図３Ａ〜図３ＢＢは、多数の頁を含み、本明細書に記載する様々な実施形態による構造および対応する化学名を示す。「ＥＲ−番号」とは、各化合物に割り当てた参照番号である。入手可能な場合、ヒトＴＬＲ７を安定的に発現するＨＥＫ細胞株に対する抗活性、ヒトＴＬＲ９を安定的に発現するＨＥＫ細胞株に対する抗活性、１Ｈ  ＮＭＲデータおよび質量分析データも含めている。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
本開示の詳細な説明
Ｉ．ＴＬＲおよびループス
哺乳動物のＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、外因性（「非自己」）の病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）の検出（即ち、ＴＬＲ４による細菌のＬＰＳ検出）が可能な自然免疫受容体としての役割に加えて、宿主組織が損傷またはストレスを受けると放出される内因性の刺激（ＤＡＭＰ）を認識することも可能である。Kono, H. and K.L. Rock, How dying cells alert the immune system to danger. Nat Rev Immunol, 2008. 8(4):p. 279-89。過去１０年で、内因性（「自己」）の損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）によるＴＬＲ活性化と自己免疫障害の病因との関連が認識されるようになった。具体的には、ＴＬＲ７は哺乳動物源とウイルス源の両者に由来する一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）により活性化することができ、ＴＬＲ９は、哺乳動物源、ウイルス源および細菌源に由来するＤＮＡにより活性化することができる。
【００３１】
ループスは、二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）自体および関連タンパク質（ヒストン）に抗反応性の、ならびに多岐にわたるＲＮＡ関連タンパク質、例えばＲｏ、Ｌａ、Ｓｍｉｔｈ（Ｓｍ）およびＵｌ  ｓｎＲＮＰに抗反応性の自己抗体を特徴とする。Kirou, K.A., et al., Activation of the interferon-alpha pathway identifies a subgroup of systemic lupus erythematosus patients with distinct serologic features and active disease. Arthritis Rheum, 2005. 52(5):p. 1491-503。ループスに共通の第２の特徴は、１型インターフェロン（ＩＦＮ）、特にＩＦＮαの発現の調節不全、およびこれに応じたループス患者のＰＢＭＣ中の広範なＩＦＮαが制御する遺伝子の上昇（いわゆる「１型ＩＦＮ遺伝子シグネチャー」）であり、この特徴は、疾患重症度と直接相関することが示された。Kirou, K.A., et al.,前掲。血液中のＩＦＮの主要な供給源は、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）と呼ばれる特異性免疫細胞であり、これはＴＬＲ７とＴＬＲ９の両方を恒常的に発現する。
【００３２】
これら２種の疾患特性、自己抗体およびＩＦＮレベル間の因果関係が想定されたのは、複数の研究グループが共同で、健常ドナーではなくループス患者から単離した抗体複合体が、ＴＬＲ７／９およびＲＮＡ／ＤＮＡに依存してｐＤＣによるＩＦＮの産生を促進できることを実証した際であった。Means, T.K., et al., Human lupus autoantibody -DNA complexes activate DCs through cooperation of CD 32 and TLR9. J Clin Invest, 2005. 115(2): p. 407-17; Vollmer, J., et al., Immune stimulation mediated by autoantigen binding sites within small nuclear RNAs involves Toll-like receptors 7 and 8. J Exp Med, 2005. 202(11): p. 1575-85; Savarese, E., et al., Ul small nuclear ribonucleoprotein immune complexes induce type I interferon in plasmacytoid dendritic cells through TLR7. Blood, 2006. 107(8): p. 3229- 34。さらに、ＩＦＮはＢ細胞でのＴＬＲ７／９発現の増加を刺激し、それにより、自己反応性Ｂ細胞のＴＬＲ／ＢＣＲ（Ｂ細胞受容体）活性化を増強して、抗体産生血漿細胞へと分化させる。Banchereau, J. and V. Pascual, Type I interferon in systemic lupus erythematosus and other autoimmune diseases. Immunity, 2006. 25(3): p. 383-92。このように、核酸ＴＬＲ７／９リガンドを含有する自己抗体複合体のレベルは、炎症促進性サイクルおよびループス疾患進行を促進する。ＴＬＲ７／８の薬理学的な拮抗作用が、この炎症促進性サイクルを中断し、ＩＦＮレベルを低減し、ｐＤＣおよびＢ細胞が媒介する自己免疫疾患プロセスを抑制することによって、ループス患者に治療有益性をもたらす可能性があると考えられる。
【００３３】
他の筋でも、ヒトループスの病因におけるＴＬＲ７の役割を示唆する証拠があり、ＴＬＲ受容体が疾患の治療介入の適正な標的であるという考えを裏付けている。ＴＬＲ７の３’ＵＴＲにおける特異的な多型性が確認され、ＴＬＲ７の発現上昇とＩＦＮ遺伝子シグネチャーの増強との両方に関連があることが示された。Shen, N., et al., Sex-specific association of X-linked Toll-like receptor 7 (TLR7) with male systemic lupus erythematosus. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(36): p. 15838-43. Deng, Y. et al., MicroRNA-3148 modulates allelic expression of toll-like receptor 7 variant associated with systemic lupus erythematosus. PLOS Genetics, 2013. el003336。加えて、ループスの標準治療（ＳＯＣ）であるクロロキンなどの抗マラリア薬は、エンドソームのＴＬＲ７／９シグナル伝達を中断し、ｓｓＲＮＡ−リボ核タンパク質複合体またはループス患者の血清によって誘発されるＰＢＭＣおよび／またはｐＤＣのＩＦＮα産生を阻害する。さらに、骨髄系ＤＣおよび単球は、自己ＲＮＡ／ＴＬＲ８シグナル伝達に次いでＩＬ−１２ｐ４０、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−６を産生し、これは、ＴＬＲ７に促進されるｐＤＣによるＩＦＮの他に、ＴＬＲ８に依存する炎症促進性のサイトカインがヒトループスの病因の別の一因となっていることを示唆している。Vollmer,前掲;Gorden, K.B., et al., Synthetic TLR agonists reveal functional differences between human TLR7 and TLR8. J Immunol, 2005. 174(3): p. 1259-68。
【００３４】
ループスにおけるＴＬＲの役割について、マウスモデルの証拠も存在する。公表された研究は、単一のＴＬＲ７の遺伝子欠失もしくは２種のＴＬＲ７／９の遺伝子欠失の両方、または２種のＴＬＲ７／９の薬理学的阻害が、４種の別個のループスモデルにおいて疾患重症度を低減することを共同で実証した。Nickerson, K.M., et al., TLR9 regulates TLR7- and MyD88-dependent autoantibody production and disease in a murine model of lupus. J Immunol, 2010. 184(4): p. 1840-8; Fairhurst, A.M., et al., Yaa autoimmune phenotypes are conferred by overexpression of TLR7. Eur J Immunol, 2008. 38(7): p. 1971-8; Deane, J.A., et al., Control of toll-like receptor 7 expression is essential to restrict autoimmunity and dendritic cell proliferation. Immunity, 2007. 27(5): p. 801-10; Savarese, E., et al., Requirement of Toll-like receptor 7 for pristane-induced production of autoantibodies and development of murine lupus nephritis. Arthritis Rheum, 2008. 58(4): p. 1107-15。ＴＬＲ７の役割は自己免疫の極めて重要な決定因子として強調され、遺伝子導入によりＴＬＲ７単独を過剰発現すると、通常は疾患耐性のＣ５７ＢＬ／６系に抗ＲＮＡ自己反応性および腎炎が自然発症する。Deane,前掲。
【００３５】
安全性の見地からすれば、ＴＬＲ７、８もしくは９の単一遺伝子が欠損したマウスまたは７／８の２種および７／９の２種の遺伝子が欠損したマウスは、日和見病原体による感染が観察される程度まで免疫力が低下しているという報告はない。さらに、ＳＯＣ抗マラリア薬は、ループス疾患フレアを制御するために、ＴＬＲ７／９シグナル伝達を少なくとも部分的に阻止すると予測されている用量にて、ヒトが長期使用しても、概して安全で有効であると考えられている。Lafyatis, R., M. York, and A. Marshak-Rothstein, Antimalarial agents: closing the gate on Toll-like receptors? Arthritis Rheum, 2006. 54(10): p. 3068-70; Costedoat-Chalumeau, N., et al., Low blood concentration of hydroxychloroquine is a marker for and predictor of disease exacerbations in patients with systemic lupus erythematosus. Arthritis Rheum, 2006. 54(10): p. 3284-90。事実、ＴＬＲおよびＩＬ−１Ｒシグナル伝達経路が大いに損なわれている（ＭｙＤ８８欠損またはＩＲＡＫ−４欠損）ヒトは、小児期にグラム陽性菌感染症への易感染性が増加し、成人期にその程度が低減することを除けば、それでもなお健常であり、十分な宿主防御機構を維持している。Casanova, J.L., L. Abel, and L. Quintana-Murci, Human TLRs and IL-IRs in Host Defense; Natural Insights from Evolutionary, Epidemiological, and Clinical Genetics. Annu Rev Immunol, 2010。
【００３６】
この情報および他の情報を基に、前臨床マウスＳＬＥモデルに関連して、特にＴＬＲ７は極めて有効な標的であると考えられる。遺伝学的ヒト研究と機能的ヒト研究は両者とも、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８経路の拮抗作用がループス患者に治療的有益性をもたらすであろうという仮説を裏付ける。さらに、マウスＴＬＲ遺伝子欠失研究とヒトにおける抗マラリア薬の長期使用は両者とも、宿主防御を大幅に損なうことなく、薬理学的なＴＬＲ７、８および／または９の抑制を行うことができることを示唆している。
【００３７】
したがって、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ７とＴＬＲ８の両方を抑制する化合物は、ＳＬＥまたはループス腎炎の治療薬または予防薬として作用すると期待され得る。
【００３８】
発明者らは、ＴＬＲ７および／または８を抑制する化合物を発見した。したがって、これらはＳＬＥまたはループス腎炎に対して予防効果または治療効果を有することが期待される。本開示の化合物および方法を本明細書に記載する。
【００３９】
ＩＩ．治療的使用
本開示の医薬組成物中の活性成分の投与量レベルは、特定の患者、組成物および投与方法について所望の治療反応を実現する活性化合物の量を得るために変化し得る。選択される投与量レベルは、特定の化合物の活性、投与経路、治療される病態の重症度、ならびに治療を受ける患者の病態および以前の病歴に依存して決まる。用量は、具体的な各症例について、標準方法を用いて、患者に特有の要因、例えば年齢、体重、全身の健康状態、および本開示の化合物の有効性に影響を及ぼし得る他の要因によって決定される。通常、経口投与の場合、本開示による化合物またはその薬学的に許容される塩は、成人１日当たりおよそ３０μｇ〜１００μｇの用量、３０μｇ〜５００μｇの用量、３０μｇ〜１０ｇの用量、１００μｇ〜５ｇの用量、または１００μｇ〜１ｇの用量で投与される。注射による投与の場合、成人１日当たりおよそ３０μｇ〜１ｇの用量、１００μｇ〜５００ｍｇの用量、または１００μｇ〜３００ｍｇの用量で投与される。どちらの場合も、用量は、一度に投与されるか、または数回の投与に分割される。投与量は、例えば、Simcyp（登録商標）プログラムを使用してシミュレートしてもよい。
【００４０】
ヒトを含む哺乳動物への本開示の化合物の投与は、特定の投与方法、投与量、または投与頻度に限定されるというものではない。本開示は、経口、経腹腔、経筋肉、経静脈、経関節、経病巣、経皮下、またはＳＬＥもしくはループス腎炎を予防または治療するのに適切な用量を供給するのに十分な他の任意の経路を含む全ての投与方法を意図している。本開示の１種以上の化合物は、単回用量または複数回用量で哺乳動物に投与することができる。複数回用量が投与される場合、例えば、数時間、１日、１週間、１カ月または１年で用量を互いに分離してもよい。当然のことながら、いずれの特定の対象についても、具体的な投与量レジメンは、個体の要求、および本開示の化合物を含む医薬組成物を投与する、またはその投与を管理する人の専門的な判断に従って、経時で調整されるべきである。
【００４１】
臨床適用では、本開示の化合物は、一般に、経静脈、経皮下、経筋肉、経結腸、経鼻、経腹腔、経直腸、経頬側または経口で投与されてもよい。人間医学または獣医学での使用に好適な、本開示の少なくとも１種の化合物を含有する組成物は、好適な経路での投与を可能にする形態で提示され得る。これらの組成物は、慣習的方法に従って、１種以上の薬学的に許容される助剤または添加剤を使用して製造することができる。助剤は、特に、希釈剤、滅菌水性媒体および種々の非毒性有機溶媒を含む。治療的使用に容認できる担体または希釈剤は医薬品分野において周知であり、例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20th ed.), ed. A. R. Gennaro, Lippincott Williams & Wilkins, 2000, Philadelphia, and Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick and J. C. Boylan, 1988, 1999, Marcel Dekker, New Yorkに記載されている。組成物は、錠剤、丸剤、顆粒剤、散剤、水性溶液剤もしくは懸濁剤、注射液剤、エリキシル剤またはシロップ剤の形態で提示されてもよく、薬学的に許容される製剤を得るために、組成物は、甘味剤、香味剤、着色剤および安定化剤を含む群から選ばれる１種以上の作用剤を任意選択により含有してもよい。
【００４２】
ビヒクルおよびビヒクル中の活性物質の含有量の選択は、一般に、製品の溶解性および化学的性質、特定の投与方法、ならびに薬務において遵守されるべき規定に従って決定される。例えば、添加剤（例えば、ラクトース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウムおよびリン酸二カルシウム）ならびに崩壊剤（例えば、デンプン、アルギン酸、および特定の複合ケイ酸塩）を、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウムおよびタルク）と組み合わせて、錠剤の製造に使用することができる。カプセル剤の製造には、ラクトースおよび高分子量ポリエチレングリコールを使用するのが有利である。水性懸濁液を使用する場合、懸濁を促進する乳化剤を含有させたものでもよい。希釈剤、例えば、スクロース、エタノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセロール、クロロホルム、またはこれらの混合物を使用することもできる。
【００４３】
非経口投与には、植物油（例えば、ゴマ油、落花生油またはオリーブ油）中、水性有機溶液（例えば、水およびプロピレングリコール）中、注射可能な有機エステル（例えばオレイン酸エチル）中、または薬学的に許容される塩の滅菌水性溶液中の、本開示の組成物の乳液、懸濁液または溶液が使用される。本開示の組成物の塩の溶液は、筋肉内注射または皮下注射による投与に特に有用である。塩の蒸留純水溶液を含む水性溶液は、（ｉ）ｐＨが好適に調整されている、（ｉｉ）適切に緩衝されており、十分な量のグルコースまたは塩化ナトリウムと等張である、および（ｉｉｉ）加熱、照射または精密濾過により滅菌されているという条件で、経静脈投与に使用してもよい。本開示の化合物を含有する好適な組成物は、ネブライザーで、または懸濁液もしくは溶液のエアゾール剤として使用するのに好適な担体中に溶解または懸濁していてもよく、ドライパウダー吸入器で使用するのに好適な固体担体に吸収されまたは吸着していてもよい。経直腸投与用固体組成物としては、既知の方法に従って製剤された、本開示の少なくとも１種の化合物を含有する坐剤が挙げられる。
【００４４】
治療的投与に使用される本開示の化合物の投与製剤は滅菌とするべきである。滅菌は、滅菌膜（例えば０．２ミクロンの膜）を通す濾過によって、または他の従来方法によって、容易に実現される。製剤は、通常、凍結乾燥形態で、または水性溶液として保管される。いくつかの実施形態では、本開示の組成物のｐＨは、例えば、上下限を含めて、３〜１１の間でもよく、５〜９の間でもよく、７〜８の間でもよい。
【００４５】
１つの投与経路が経口投薬投与によるものである場合に、同時に他の投与方法を用いてもよい。例えば、組成物は、経皮下、経静脈、経筋肉、経結腸、経直腸、経鼻または経腹腔で、様々な剤形、例えば坐剤、埋め込みペレット剤または小型シリンダー、エアゾール剤、経口投与製剤、ならびに局所製剤、例えば、軟膏剤、滴下剤および皮膚貼付剤で投与することができる。本開示の実施形態の化合物は、不活性材料、例えば合成ポリマーまたはシリコーン（例えば、Silastic（登録商標）組成物、シリコーンゴム、または他の市販のポリマー）を使用してもよい挿入物（弁、ステント、チューブおよび人工装具を含むが、これらに限定されない）などの造形品に組み入れられてもよい。このようなポリマーとしては、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシ−プロピル−メタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシエチル−アスパルトアミド−フェノール、またはパルミトイル残基で置換されているポリエチレンオキシド−ポリリシンを挙げることができる。さらに、本開示の化合物は、薬物の放出制御を実現するのに有用なある種の生分解性ポリマー、例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸とのコポリマー、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、およびハイドロゲルの架橋または両親媒性のブロックコポリマーに結合していてもよい。
【００４６】
本開示の化合物はまた、リポソーム送達システムの形態、例えば、小さな単層ベシクル、大きな単層ベシクルおよび多重層のベシクルとして投与されてもよい。リポソームは、様々な脂質、例えば、コレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンから形成することができる。本開示の化合物はまた、化合物分子が結合する、抗体、抗体断片、成長因子、ホルモンまたは他の標的部分（例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy、前掲参照）を使用して送達することもでき、本開示の実施形態の化合物の血液成分へのｉｎ  ｖｉｖｏコンジュゲーションも含まれる。
【００４７】
ＩＩＩ．合成
本開示の実施形態の製造に有用であると判明した一般的合成経路および特定の合成経路を提供する。当業者は、これらの手順に一定の変更または変形がなされてもやはり本開示による化合物の合成ができることを認識し得る。場合により、「例えば(such as)」という表現は、より一般的な化合物または構造を得るための様々な選択肢を列挙するために使用される。当然のことながら、「例えば(such as)」は限定するものと解釈されるべきではなく、その意味は「例えば、〜を含むが、それらに限定されるものではない」と合致するものである。
【００４８】
一定の条件を、以下に記載する特定の実施例に共通のものとした。マイクロ波加熱は、Biotage（登録商標）Emrys LiberatorまたはInitiatorマイクロ波反応器を使用して行った。カラムクロマトグラフィーは、Biotage（登録商標）SP4フラッシュクロマトグラフィーシステムを使用して行った。溶媒除去は、BuechiiロータリーエバポレーターまたはGenevac（登録商標）遠心エバポレーターを使用して行った。ＮＭＲスペクトルは、Varian Unity（登録商標）分光計にて、重水素化溶媒を使用して、４００ＭＨｚで記録した。化学シフトは残留プロトン化溶媒に対するものとして報告される。
【００４９】
薄層クロマトグラフィーを、０．２５ｍｍのシリカゲルの層をプレコートしたWhatman(登録商標）ガラス板で、以下の１種以上の溶媒（ＥｔＯＡｃ、ヘプタン、ジクロロメタンまたはＭｅＯＨ）を様々な比率で使用して行った。
【００５０】
分析用ＬＣ／ＭＳを、多数の実施例について、Waters Acquity（商標）システムにて、XBridge（商標）C18  １．７μｍ  ２．１×５０ｍｍカラムを使用して行った。溶媒ＡおよびＢは、それぞれ、水ｗ／０．１％ギ酸およびアセトニトリルｗ／０．１％ギ酸である。全動作時間５分で、４分間にわたって流速０．３ｍｌ／分にて５％Ｂから９９％Ｂへ。質量スペクトルデータを、Waters SQDにて、エレクトロスプレーポジティブモードで１００〜２０００ａｍｕの範囲で得た。
【００５１】
別法として、純度および質量の確認をWaters自動分取精製システムにて、XBridge（商標）C8  ３．５μｍ４．６×５０ｍｍカラムを使用して行った。溶媒ＡおよびＢは、それぞれ、水ｗ／０．１％ギ酸およびアセトニトリルｗ／０．１％ギ酸である。全動作時間６分で、５分間にわたって流速２．５ｍｌ／分にて１０％Ｂから９５％Ｂへ。質量スペクトルデータを、Micromass ZQ（商標）にて、エレクトロスプレーポジティブモードで１３０〜１０００ａｍｕの範囲で得た。
【００５２】
分取逆相ＬＣ／ＭＳを、多数の実施例について、Waters自動分取精製システムにて、XBridge（商標）C8  ５μｍ、１９×１００ｍｍカラムを使用して行った。溶媒ＡおよびＢは、それぞれ、水ｗ／０．１％ギ酸およびアセトニトリルｗ／０．１％ギ酸である。全動作時間１２分で、１０分間にわたって流速２０ｍｌ／分にて３０％Ｂから９５％Ｂへ。質量スペクトルデータを、Micromass ZQ（商標）にて、エレクトロスプレーポジティブモードで１３０〜１０００ａｍｕの範囲で得た。
【００５３】
ラセミ化合物の分取ＨＰＬＣ分割を、多数の実施例について、以下のキラルカラムのうち１つを使用して行った：Chiralpak（登録商標）IA（５ｃｍ×５０ｃｍまたは２ｃｍ×２５ｃｍ）、Chiralpak（登録商標）AD（２ｃｍ×２５ｃｍ）またはChiralcel（登録商標）OD（２ｃｍ×２５ｃｍ）。精製した化合物の鏡像異性体比を、同様の固定相（IA、ADまたはOD）から構成される０．４５ｃｍ×２５ｃｍカラムのＨＰＬＣ分析によって求めた。
【００５４】
本開示の化合物を製造するための一般的方法および実験を以下に説明する。場合により、特定の化合物が例として記載されている。しかし、いずれの場合も、本開示の一連の化合物は以下に記載するスキームおよび実験に従って製造されたことが理解されるであろう。ＮＭＲおよび／または質量分析データが入手可能な化合物については、そのデータを図３に記載している。
【００５５】
以下の略語を本明細書で使用する：
定義：以下の略語は指定の意味を有する：
ＡｃＯＨ：酢酸
ａｎｈｙｄ：無水
ａｑ．：水溶液
Ｂｎ：ベンジル
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブトキシカボニル
ＣＳＡ：カンファースルホン酸
ｄ：日
ＤＡＭＰ：損傷関連分子パターン
ＤＢＵ：１，８−ジアゾビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン
ＤＣＥ：１，２−ジクロロエタン
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡ：Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド
ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ｄｓＤＮＡ：二本鎖ＤＮＡ
ＥＤＣ：１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩
ｅｅ：鏡像体過剰率
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ＥｔＯＨ：エタノール
ｈ：時間
ＨＡＴＵ：Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＣｌ：塩酸
ＨＣＱ：ヒドロキシクロロキン
ｈｅｐ：ｎ−ヘプタン
ＨＥＰＥＳ：４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＩＦＮ：インターフェロン
ＩＰＡ：イソプロピルアルコールまたはイソプロパノール
Ｋ２ＣＯ３：炭酸カリウム
ＭｅＯＨ：メタノール
ＭｇＳＯ４：硫酸マグネシウム（無水）
ｍｉｎ：分
ＭＴＢＥ：メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル
Ｎａ２ＣＯ３：炭酸ナトリウム
Ｎａ２ＳＯ４：硫酸ナトリウム（無水）
ＮａＢＨ４：水素化ホウ素ナトリウム
ＮａＣｌ：塩化ナトリウム
ＮａＨ：６０％水素化ナトリウム油中分散体
ＮａＨＣＯ３：炭酸水素ナトリウム
ＮａＯＨ：水酸化ナトリウム
ＮＢＳ：Ｎ−ブロモスクシンイミド
ＮＨ４Ｃｌ：塩化アンモニウム
ＮＨ４Ｃｌ：塩化アンモニウム
ＮＨ４ＯＨ：水酸化アンモニウム
ＮＭＰ：Ｎ−メチルピロリドン
Ｎｓ：ノシルまたはｏ−ニトロベンゼンスルホニル
℃：セ氏温度
ＰＡＭＰ：病原体関連分子パターン
ＰＢＭＣ：末梢血単核細胞
ＰＢＳ：リン酸緩衝食塩水
ｐＤＣ：形質細胞様樹状細胞
ＰｈＮＴｆ２：Ｎ−フェニルトリフルオロメタンスルホンイミド
ｑＰＣＲ：定量的ポリメラーゼ連鎖反応
Ｒ８４８：レシキモド
ｒｔ：室温
ｓａｔ：飽和
ＳＮＡＰ：BIOTAGE（登録商標）銘柄フラッシュクロマトグラフィーカートリッジ
ＳＯＣ：標準治療
ｓｓＲＮＡ：一本鎖ＲＮＡ
Ｔ３Ｐ：プロピルホスホン酸無水物
ｔＢｕＯＫ：カリウムｔｅｒｔ−ブチルオキシド
ＴＥＡ：トリエチルアミン
ＴＥＭＰＯ：２，２，６，６−テトラメチルピペリジン１−オキシル
Ｔｆ：トリフルオロメタンスルホネート
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＬＤＡ：Taqman（登録商標）低密度アレイ
ＴＬＲ：Ｔｏｌｌ様受容体
ＴＳＡ：ｐ−トルエンスルホン酸
【実施例】
【００５６】
一般的な合成方法：
本発明の化合物を、以下のスキームに示す一般的な合成方法に従って作製した：
【化２】
0006483666.tif 000003
【００５７】
少なくとも１つの実施例の製造に、スキーム１に図示した経路に従って製造することができる中間体３を使用する。市販の５−ブロモキノリン−８−カルボアルデヒド１(Frederieric de Montigny, Gilles Argouarch, Claude Lapinte, “New Route to Unsymmetrical 9,10-Disubstituted Ethynylanthracene Derivatives,” Synthesis, 2006, 293-298.)をヒドロキシルアミン塩酸塩で処理してオキシム２を得る。次に触媒量の酢酸銅の存在下で、２を、対応するニトリル３に変換して本発明の重要中間体の１つを得る。中間体３は、以下に詳細に説明する適切な条件を使用して、５−ブロモキノリン−８−カルボアルデヒドの５位を、適切な芳香族化合物、複素環式芳香族化合物および飽和複素環式化合物、例えば、ピペリジン、ピペラジンおよびモルホリンで置換することによって、本発明の化合物を生成するために使用される。
【００５８】
重要中間体３を生成するための別の方法がスキーム２に示されており、ここでは合成の最初のステップのトリエチルアミンが酢酸ナトリウムに置き換わっている。
【化３】
0006483666.tif 000004
【００５９】
本発明の実施例の化合物の別の一式の方法がスキーム３に示されている。適切に置換された市販のピリジン４８から出発し、遊離アミンを保護して４９を得、その後、ピリジンの窒素を活性化して５０を得る。ホウ化水素または他の還元剤を使用してピリジニウム塩を還元することにより、不飽和ピペリジン５１を得、次に、パラジウム触媒の存在下で水素を使用する別の還元条件により、二置換のピペリジンをラセミ混合物、即ち５２および５３として得る。所望の鏡像異性体の分割は、１当量のキラル酸、例えば（２Ｒ，３Ｒ）−２，３−ビス（（４−メトキシベンゾイル）オキシ）コハク酸を使用してジアステレオマー塩の混合物を形成してから、所望のジアステレオマー塩を溶液から結晶化させることによって行うことができる。得られた結晶を回収、再結晶化および脱塩すると、所望の鏡像異性体５３を高ｅｅで得ることが可能になる。次いで、適切なカップリング試薬を使用して５３を５−ブロモキノリン３とカップリングさせて、Ｂｏｃ保護された５４を得、これを容易に脱保護して実施例５５またはＥＲ−８８８８４０にする。アルコール類似体５６は、アミン５５を亜硝酸ナトリウムで処理することによって容易に生成することができる。
【化４】
0006483666.tif 000005
【００６０】
別の実施例の化合物は、スキーム４およびスキーム５に示すように、５４または５５を重要中間体として使用して製造することができる。５４のアルキル化は、アミドプロトンを強塩基で脱プロトン化し、次いで適切に活性化したアルキル化剤を添加することによって可能である。５５のアルキル化は、還元的アミノ化方法によって可能であり、一般構造５７で図示した実施例を得ることが可能である。５５のアルキル化はまた、適切な脱離基（ＬＧ）を含有する適切な置換アルキル基、アリール基の存在下で適切な塩基を使用することによって可能であり、スキーム４に図示した一般構造５７および５８で示される一置換および二置換の実施例の混合物が得られる。
【化５】
0006483666.tif 000006
【００６１】
活性化した酸を使用して、または種々のアミドまたはペプチドカップリング試薬を使用して５５をアシル化すると、スキーム５に図示したような一般構造５９のアミドが得られる。塩基性条件下で５９をアルキル化すると、一般構造６０に図示した実施例が得られる。５５のスルホンアミドは、同様に、当業者に周知の条件を使用し、活性化したアルキルまたはアリールスルホニル試薬を使用して一般構造６１に図示した実施例を形成することによって得ることができる。
【化６】
0006483666.tif 000007
【００６２】
実施例の製造
化合物３−スキーム１
５−ブロモキノリン−８−カルボアルデヒド１（１．００ｇ、４．２４ｍｍｏｌ）とヒドロキシルアミン塩酸塩（１．１７７ｇ、１６．９４ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１１０ｍＬ）中懸濁液に、ＴＥＡ（２．３６２ｍＬ、１６．９４ｍｍｏｌ）を添加し、次いで３時間加熱還流して、黄色の懸濁液を得た。完了した反応完了生成物を室温まで冷却し、沈殿物を濾過し、濾過ケーキをアセトニトリル（５０ｍＬ）ですすいだ。粗製固体をシリカゲル（１０ｇ）のショートパッドにてＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で溶離して精製し、アルドキシム２を黄色の固体として得た。
【００６３】
無水アセトニトリル（１８０ｍＬ）中、アルドキシム２（１．００１ｇ、４．０ｍｍｏｌ）および酢酸銅（ＩＩ）一水和物（８４．６ｍｇ、０．４２４ｍｍｏｌ）を、還流しながら１２ｈ撹拌した。反応完了生成物を室温まで冷却し、濾過し、フィルターパッドをＨ２Ｏで洗浄して褐色の固体を得た。粗製固体をシリカゲル（およそ１０ｇ）のショートパッドにて（ＤＣＭ  １００ｍＬ）で溶離して精製し、溶離生成物を濃縮および真空乾燥した後に、５−ブロモキノリン−８−カルボニトリル、３を白ベージュ色の固体として得た（０．７８３ｇ、３．４ｍｍｏｌ、２工程で収率７９．３％）。参照：Frederieric de Montigny, Gilles Argouarch, Claude Lapinte, Synthesis, 2006, 293。
【００６４】
化合物３−スキーム２
酢酸ナトリウム三水和物（３１．６ｇ、０．２３２ｍｏｌ）のＥｔＯＨ（０．４９８Ｌ）中１５℃の撹拌溶液に、５−ブロモキノリン−８−カルボアルデヒド（４９．８４ｇ、０．２１１ｍｏｌ）を添加し、次いでヒドロキシルアミン塩酸塩（１５．５５ｇ、０．２２３ｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を７０℃に３ｈ加熱し、その後、反応生成物を３５℃まで冷却し、次いで、水（２５０ｍＬ）で希釈した。この混合物をおよそ２５０ｍＬまで部分的に濃縮し、その後、水（２５０ｍＬ）、２−メトキシ−２−メチルプロパン（１２０ｍＬ）およびヘプタン（１２０ｍＬ）を添加し、次いで、混合物をおよそ２５０ｍＬまで再濃縮した。得られたスラリーを水（２５０ｍＬ）で希釈し、０℃まで冷却し、その後、１Ｍ  ＮａＯＨの水（２１ｌｍＬ）溶液を添加し、最終混合物を１０分間激しく撹拌した。この懸濁液を濾過し、水（４９８ｍＬ）ですすぎ、濾過ケーキを３０℃で１８ｈ乾燥して、アルドキシム２を黄褐色の粉末として得た（４９．７５ｇ、０．１９８ｍｏｌ、収率９３．９％）。
【００６５】
２（４８．２１ｇ、０．１９２ｍｏｌ）のアセトニトリル（３８６ｍＬ）中１５℃の撹拌懸濁液に、酢酸銅（ＩＩ）（０．５２３ｇ、２．９ｍｍｏｌ）を添加し、次いで酢酸（１３．１ｍＬ、０．２２９ｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を２１ｈ加熱還流し、その後、反応完了生成物を５０℃まで冷却した。水（０．３９Ｌ）を添加し、この混合物を部分的に濃縮し、次いで、水（２９０ｍＬ）で希釈し、５℃まで冷却した。１Ｍ  ＮａＯＨの水（２３０ｍＬ）溶液を添加し、１０分間継続して激しく撹拌した。この懸濁液を濾過し、濾過ケーキを水（５００ｍＬ）ですすぎ、乾燥して、化合物３を暗灰色の粉末として得た（４２．８０ｇ、０．１８３ｍｏｌ、収率９５．６％）。
【００６６】
スキーム３を使用したＥＲ−８８８８４０の合成
化合物５０：
市販の５−メチルピリジン−３−アミン４８（１７．５２ｇ、１６２．０１ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（５２．６ｍＬ）中１７℃の撹拌溶液に、ＤＭＡＰ（０．９９０ｇ、８．１０ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を３０℃まで加温し、その後、ＣＯ２放出および＜４０℃の温度を制御しながら、１ｈにわたって、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（３９．５ｍＬ、１７０．１１ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（３５．０ｍＬ）中溶液を初期反応混合物にゆっくりと添加した。得られた混合物を、３５〜４０℃でさらに１ｈ撹拌し、次いで、１８ｈ加熱還流した。最終混合物を室温まで冷却し、トルエン（１７５ｍＬ）で希釈し、次いで、シリカゲル（１７．５２ｇ）を添加した。得られたスラリーを２０〜２３℃で３０ｈ撹拌し、次いで、濾過し、濾過ケーキをＥｔＯＡｃ（８８ｍＬ）とトルエン（８８ｍＬ）の混合物ですすいだ。濾液を部分的に濃縮乾固して、粗製ｔｅｒｔ−ブチル（５−メチルピリジン−３−イル）カルバメート、４９を、橙／褐色の固体として得た。
【００６７】
粗製物４９のアセトニトリル（１７５ｍＬ）中撹拌溶液に、２０℃の臭化ベンジル（１９．８５ｍＬ、１６７ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、２ｈ加熱還流した。反応完了生成物を室温まで冷却し、トルエン（３１５ｍＬ）で希釈し、０℃まで冷却し、１ｈ撹拌した。粗製混合物を濾過し、トルエン（１７５ｍＬ）ですすぎ、得られた固体を４５℃で１７ｈ真空乾燥して、１−ベンジル−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−５−メチルピリジン−１−イウムブロミド、５０をオフホワイト色の粉末として得た（３５．５９ｇ、９３．８ｍｍｏｌ）。濾液を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）とエタノール（１５ｍＬ）の混合物中に懸濁し、得られた固体を濾過し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）ですすぎ、真空乾燥して、追加の５０を得た（５．２０ｇ、１３．７ｍｍｏｌ、即ち２工程で全収率６６．４％）。
【００６８】
化合物５２および５３：
５０（９．８５ｇ、２６．０ｍｍｏｌ）のエタノール（８９ｍｌ）中−３℃の撹拌溶液に、冷却した（０℃）ＮａＢＨ４（３．０１３ｇ、７９．６ｍｍｏｌ）の０．１０Ｍ  ＮａＯＨ（２０ｍｌ、２．０ｍｍｏｌ）中溶液を、温度を＜３℃に維持しながら添加し、その後、反応物を０〜３℃で３ｈ撹拌した。反応完了生成物を、温度を＜１０℃に維持しながらＭＴＢＥ（０．１０Ｌ）および水（０．０５Ｌ）で希釈し、次いで、Ｈ２放出および＜１０℃の温度を制御しながら、２０ｗｔ％のクエン酸（５０ｇ）を添加した。得られた混合物を５〜１０℃で１０分間激しく撹拌し、次いで、およそ５０ｍｌまで部分的に濃縮した。激しく撹拌しながらＭＴＢＥ（１００ｍＬ）を添加し、この混合物をおよそ５０ｍｌまで再濃縮した。得られた混合物をＭＴＢＥ（０．１０Ｌ×２）で抽出し、まとめた有機層を水（２０ｍｌ）、９ｗｔ％ＮａＨＣＯ３（３ｇ）で洗浄し、濃縮し、エタノール（各５０ｍｌ）と２回共沸させた。得られた混合物をＭＴＢＥ（５０ｍｌ）で希釈し、濾過した。濾液を濃縮し、エタノールで希釈して、総重量５０．０ｇに調整した粗製物５１を得、これをさらなる濃縮も精製もせずに次の工程に使用した。
【００６９】
Ｈ２ガスでの水素化による５２および５３の形成：
５１の分割量５．０ｇ（上記の総量の１０％）をエタノール（１０ｍｌ）で希釈し、１．０４ｂａｒ  Ｈ２ガス下で１０ｗｔ％Ｐｄ−Ｃ（０．２７２ｇ）を用いて水素化を行った。２４ｈ後、反応混合物をCelite（２ｇ）のパッドで濾過した。反応器および濾過ケーキをエタノール（１０ｍｌ）ですすぎ、濾液を濃縮乾固して、ｔｅｒｔ−ブチル（（３Ｓ，５Ｒ）−５−メチルピペリジン−３−イル）カルバメート、５２およびｔｅｒｔ−ブチル（（３Ｒ，５Ｓ）−５−メチルピペリジン−３−イル）カルバメート、５３を、白色の固体として得た（０．４７２ｇ、２．２１ｍｍｏｌ、収率８５％、１Ｈ−ＮＭＲによる５２：５３の比１：５〜６）。
【００７０】
水素移動反応による５２および５３の形成：
５１の分割量１０ｇ（上記の総量の２０％）を濃縮し、水（１０ｍｌ）と混合し、次いで、ギ酸アンモニウム（３．２８ｇ、５２ｍｍｏｌ）およびエタノール（２０ｍｌ）を添加した。５ｗｔ％Ｐｄ−Ｃ（０．５４８ｇ）をＮ２雰囲気下で添加し、その後、得られた混合物を２５〜３０℃で２０ｈ撹拌した。反応完了生成物をCelite 545（４ｇ）のパッドで濾過し、濾過ケーキをエタノール（２０ｍｌ）ですすぎ、濾液を濃縮乾固した。１．０Ｍ  ＮａＯＨ（６ｍｌ）を添加し、この混合物をＤＣＭ（各４０ｍｌ）で２回抽出した。まとめた有機層を２５ｗｔ％ＮａＣｌ（６ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４（４ｇ）で脱水し、濾過し、濃縮して、５２および５３を黄白色の固体として得た（０．８４４ｇ、３．９４ｍｍｏｌ、収率７５％、シス／トランス３：１）。
【００７１】
化合物５２は、既報告の方法（参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１０／００９０１４号）に従って製造することもできる。
【００７２】
５３の分割：
５２および５３のラセミ混合物（８４ｇ、０．３９２ｍｏｌ）をアセトン／ＩＰＡ９５：５（１５９６ｍｌおよび８４ｍｌ）中に懸濁させた。（２Ｒ，３Ｒ）−２，３−ビス（（４−メトキシベンゾイル）オキシ）コハク酸（Ｌ−ＤＡＴＡ；１６４ｇ、０．３９２ｍｏｌ）を周囲温度で添加し、得られた混合物を終夜（２０ｈ）撹拌した。白色の沈殿物を濾過によって回収し、予冷したアセトン（１６００ｍｌ）ですすぎ、真空乾燥した。回収したジアステレオマー塩（ｄｒ＝９４．９：５．１）をアセトン（１０００ｍｌ）中に再スラリー化させた。濾過してから乾燥し、６５ｇの５３  １／２  Ｌ−ＤＡＴＡ塩を得た（ｄｒ＝９８．５：１．５、０．１５ｍｏｌ、収率３９％）。キラルＨＰＬＣ条件：Lux 3u Cellulose-4カラム(00G-4490-E0)、移動相は９０％Ａ（ＭｅＣＮ＋０．１％ＤＥＡ）と１０％Ｂ（ＭｅＯＨ＋０．１％ＤＥＡ）との定組成混合物を使用。
【００７３】
５３  １／２  Ｌ−ＤＡＴＡ塩（１５６ｇ、０．３６８ｍｏｌ）のＤＣＭ（１２４８ｍｌ）中撹拌懸濁液に、１．０Ｍ  ＮａＯＨ（６２４ｍｌ、０．６２４ｍｏｌ）を周囲温度でゆっくりと添加した。１ｈ後、層を分配した。水性層をＤＣＭ（１２００ｍｌ）で抽出した。まとめた有機層を水（１５００ｍｌ）で洗浄し、濃縮して、５３を白色の固体として得た（７５ｇ、０．３５０ｍｏｌ、収率９５％）。
【００７４】
化合物５５（ＥＲ−８８８８４０）：
５３（２．５２ｇ、１１．７４ｍｍｏｌ）と３（２．２８ｇ、９．７８ｍｍｏｌ）のＤＭＡ（６．８４ｍｌ）中撹拌懸濁液に、ＤＩＰＥＡ（３．４２ｍｌ）を添加し、次いで、３ｈ加熱および還流した。反応完了生成物を室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃ／ｎ−ヘプタン２：１（１８０ｍｌ）と５ｗｔ％ＮａＣｌ（６０ｍｌ）とに分配し、Celite 545（５ｇ）のパッドで濾過した。有機層を５ｗｔ％ＮａＣｌ（６０ｍｌ）で洗浄し、Florisil（７．７ｇ）で処理し、濾過し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ）ですすぎ、濃縮した。このようにして得られた粗生成物をシリカゲル（４０ｇ、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  １９：１、９：１および４：１で段階溶離）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）カルバメート、５４を橙色の固体として得、これを次の反応に直接使用した。
【００７５】
５４のＤＣＭ（２０ｍｌ）中撹拌溶液に、ＴＦＡ（２０ｍｌ）をゆっくりと添加し、さらに３０分間撹拌した。反応完了生成物を濃縮し、ＤＣＭ（５００ｍｌ）と飽和ＮａＨＣＯ３（２２０ｇ）とに分配した。有機層をｓａｔ．ＮａＨＣＯ３（２２０ｇ）で洗浄し、濃縮して、粗生成物を橙色の固体／油として得、これをシリカゲル（４０ｇ、１００％ＥｔＯＡｃで、次いでＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ４：１および７：３で段階的に溶離）で精製して、５５を橙色の泡沫として得た（ＥＲ−８８８８４０、１．４０１ｇ、５．２６ｍｍｏｌ、４７を基準として収率５３％）。
【００７６】
ＥＲ−８８８８４０−ＨＣｌ：
５５（３３．３ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ）をＩＰＡ（９．６３ｍＬ）中に懸濁させ、４５℃まで加熱し、次いで、温度を４０〜４５℃に維持しながら０．１Ｍ  ＨＣｌ（１．１３ｍＬ、０．１２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温まで冷却し、２ｈ継続して撹拌した。黄色の沈殿物を濾過によって回収し、ＩＰＡ（２．０ｍＬ）ですすぎ、Ｎ２／真空下で２ｈ乾燥し、さらに真空オーブン内にて４５℃で２０ｈ乾燥して、ＥＲ−８８８８４０−ＨＣｌを黄色の固体として得た（１４．５ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ、収率３８％）。
【００７７】
ＥＲ−８７８９２１（５．２ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ、収率３２．８％）を、化合物３（１５ｍｇ、０．０６４ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−ピペリジン−３−アミン二塩酸塩（１３．４ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８８８８４０と同様に製造した。反応生成物を１８０℃で３ｈマイクロ波処理し、この一連の実施例について説明している方法で精製した。
【００７８】
ＥＲ−８９６４６４または化合物５６の製造、スキーム１４：
ＥＲ−８８８８４０（１７５ｍｇ、．６５７ｍｍｏｌ）の酢酸（１ｍＬ、１７．４６８ｍｍｏｌ）中撹拌懸濁液に、亜硝酸ナトリウム（９１ｍｇ、１．３１４ｍｍｏｌ）の１５０ｕＬ水溶液を３分にわたって滴加した。この混合物を室温で４０分撹拌すると、この時、ＴＬＣによってＥＲ−８８８８４０が残存していることが明らかになった。さらに１ｅｑの亜硝酸ナトリウムの１００ｕＬ水溶液を添加し、この混合物を室温でさらにｌｈ撹拌した。反応完了生成物を濃縮し、残留物をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解し、ｓａｔ．ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮乾固した。残留物をエタノール（１ｍＬ）に溶解し、１０％ａｑ水酸化ナトリウム（１００ｕＬ）で処理した。室温で９０分撹拌してから、この混合物を塩化メチレンで希釈し、水で洗浄し、ＭｇＳＯ４）で脱水し、濾過し、濃縮乾固した。残留物をシリカゲル（Biotage、０〜７０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタンで溶離）で精製して、Ｏ−アセテートのシス異性体およびトランス異性体と暫定的に同定される２種の溶離化合物を得た。７０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタンで溶離された主要なピークを、４：１〜５：１のシス異性体対トランス異性体混合物としてのヒドロキシエピマーと同定した。シス−５６またはＥＲ−８９６４６４（９５ｍｇ、０．３５５ｍｍｏｌ、収率５４．１％）について、多い方のジアステレオマーと同定した。
【００７９】
ＥＲ−８９７１８４．ＨＣｌの製造：
５４（１００ｍｇ、．２７３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．００ｍｌ、１２．９１５ｍｍｏｌ）中撹拌溶液に、水素化ナトリウム（６０％油中分散体、１２．０１ｍｇ、．３０ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を室温で３０ｍ撹拌し、その後、ヨウ化メチル（０．０２０ｍｌ、．３２７ｍｍｏｌ）を添加した。最終反応混合物を室温で２ｈ撹拌し、その後、反応完了生成物を塩化アンモニウム水溶液（５ｍＬ）でゆっくりと反応停止した。混合物を、１：１  ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（各３ｍＬ）で３回抽出し、まとめた有機抽出物を水（３ｍＬ）、塩水（３ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４）で脱水し、濾過し、濃縮した。粗生成物を、シリカゲルにて、４０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタンで溶離して精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）カルバメートを得た（９６ｍｇ、０．２５２ｍｍｏｌ、収率９２％）。
【００８０】
ｔｅｒｔ−ブチル（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）カルバメート（９６ｍｇ、０．２５２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１．０ｍｌ）中撹拌溶液に、ＴＦＡ（１．００ｍｌ、１２．９８ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を室温で１ｈ撹拌し、その後、反応完了生成物を濃縮乾固し、残留物をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解し、MP-carbonate塩基性樹脂（約２５０ｍｇ）を添加した。この混合物を室温で３０分間撹拌し、その後、この懸濁液を濾過し、濾液を濃縮し、真空乾燥した。アミンを４．０Ｍ  ＨＣｌのジオキサン（０．０３７ｍＬ）溶液で、室温にて３０分間処理し、その後、この混合物をトルエン（各２ｍＬ）で２回共沸乾固し、真空乾燥して、ＥＲ−８９７１８４−ＨＣｌを橙色の固体として得た（７９．８ｍｇ、０．２５２ｍｍｏｌ、収率１００．０％）。
【００８１】
ＥＲ−８９７２７５（４９ｍｇ、０．１５１ｍｍｏｌ、収率５５．３％）を、５４−２ＨＣｌ（１００ｍｇ、０．２７３ｍｍｏｌ）および１−ブロモ−２−メトキシエタン（３７．９ｍｇ、．２７３ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７１８４と同様に製造した。第二級アミンを、ＨＣｌ塩を形成せずに単離した。
【００８２】
化合物５５の還元的アミノ化によるＥＲ−８９９３６９．ＨＣｌの製造、スキーム４：
ｔｅｒｔ−ブチル（３−ホルミルオキセタン−３−イル）カルバメート（４７ｍｇ、．２３４ｍｍｏｌ）と５５（８１ｍｇ、．３０４ｍｍｏｌ）のＤＣＥ（５ｍｌ）中撹拌溶液に、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（９９ｍｇ、．４６７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１８ｈ撹拌し、その後、反応完了生成物を１Ｎ  ＮａＯＨ（５ｍＬ）で反応停止した。１０分撹拌してから、この混合物を水（５ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈した。水性層をＥｔＯＡｃ（各５ｍＬ）で２回抽出し、まとめた有機層を水（５ｍＬ）および塩水（５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。粗生成物を、シリカゲル（２０ｇ、１０〜１００％ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭで溶離）で精製してＢｏｃ保護された中間体を得、これを脱保護し、ＥＲ−８９７１８４−ＨＣｌについて説明したように、ＥＲ−８９９３６９．ＨＣｌに変換した（６０．１ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ、収率６６．４％）。
【００８３】
ＥＲ−８９９０７５（４８．８ｍｇ、０．１３５ｍｍｏｌ、収率９１％）を、５５−２ＨＣｌ（５０．３ｍｇ、０．１４８ｍｍｏｌ）および３−メチルオキセタン−３−カルボアルデヒド（２２．５ｍｇ、．２２５ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９９３６９と同様に製造した。この実施例には脱保護を必要としなかった。ＨＣｌ塩は形成しなかった。
【００８４】
ＥＲ−８９９５０６（１０７ｍｇ、０．３０５ｍｍｏｌ、収率９２％）を、５５−２ＨＣｌ（５０．３ｍｇ、０．１４８ｍｍｏｌ）およびテトラヒドロ−４Ｈ−ピラン−４−オン（０．０９２ｍｌ、．９９９ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−９９０７５と同様に製造した。
【００８５】
ＥＲ−８９９５４１（１１ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ、収率１７．８％）を、５５−２ＨＣｌ（６５ｍｇ、０．１９２ｍｍｏｌ）およびオキセタン−３−オン（０．０２５ｍＬ、０．３８４ｍｍｏｌ）にＤＩＰＥＡ（０．０５ｍＬ、０．２８８ｍｍｏｌ）を加えて出発して、ＥＲ−９９０７５と同様に製造した。
【００８６】
ＥＲ−８９９５４３（１１ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ、収率１７．８％）を、５５−２ＨＣｌ（５７ｍｇ、０．１６８ｍｍｏｌ）および５−（トリフルオロメチル）ピコリンアルデヒド（５８．８ｍｇ、０．３３６ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−９９５４１と同様に製造した。
【００８７】
ＥＲ−８９９５４４（３７ｍｇ、０．１１０ｍｍｏｌ、収率６５．５％）を、５５−２ＨＣｌ（５７ｍｇ、０．１６８ｍｍｏｌ）およびジヒドロフラン−３（２Ｈ）−オン（２８．９ｍｇ、０．３３６ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−９９５４１と同様に製造した。
【００８８】
ＥＲ−８９９５５１（２３ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ、収率３２．６％）を、５５−２ＨＣｌ（６９ｍｇ、０．２０３ｍｍｏｌ）およびオキサゾール−２−カルボアルデヒド（３９．４ｍｇ、０．４０６ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−９９５４１と同様に製造した。
【００８９】
ＥＲ−８９９５５２（２４ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ、収率３２．６％）を、５５−２ＨＣｌ（６９ｍｇ、０．２０３ｍｍｏｌ）および１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボアルデヒド（４４．７ｍｇ、０．４０６ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−９９５４１と同様に製造した。
【００９０】
ＥＲ−８９９５６３（８．８ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ、１２．３％収率）を、５５−２ＨＣｌ（５７ｍｇ、０．１６８ｍｍｏｌ）および６−（トリフルオロメチル）ニコチンアルデヒド（５８．８ｍｇ、０．３３６ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−９９５４１と同様に製造した。
【００９１】
ＥＲ−８９９５６４（１７ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ、収率１２．３％）を、５５−２ＨＣｌ（５８ｍｇ、０．１７１ｍｍｏｌ）および１Ｈ−ピラゾール−５−カルボアルデヒド（３３ｍｇ、０．３４２ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−９９５４１と同様に製造した。
【００９２】
ＥＲ−８９９５６５（２７ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ、収率３８．１％）を、５５−２ＨＣｌ（６４ｍｇ、０．１８９ｍｍｏｌ）および１，４−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボアルデヒド（４６．９ｍｇ、０．３７８ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−９９５４１と同様に製造した。
【００９３】
ＥＲ−８９９５６６（２５ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ、収率３６．０％）を、５５−２ＨＣｌ（６３ｍｇ、０．１８６ｍｍｏｌ）および３，５−ジメチルイソオキサゾール−４−カルボアルデヒド（４６．５ｍｇ、０．３７２ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−９９５４１と同様に製造した。
【００９４】
ＥＲ−８９９５７７（１８ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ、収率３１．８％）を、５５−２ＨＣｌ（５５ｍｇ、０．１６２ｍｍｏｌ）およびピロリジン−２，４−ジオン（３２．１ｍｇ、．３２４ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−９９５４１と同様に製造した。
【００９５】
ＥＲ−８９９６０２（１１ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ、収率４．８％）をＥＲ−９９５４１と同様に製造したが、５５−２ＨＣｌ（２０１ｍｇ、０．５９２ｍｍｏｌ）および３−（メチルチオ）プロパナール（１２３ｍｇ、１．１８５ｍｍｏｌ）から出発し、次いで中間体チオールをＤＣＭ（３ｍｌ）に溶解し、０℃まで冷却し、３−クロロペルオキシ安息香酸（２５５ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を０℃で５分間撹拌し、室温まで加温し、さらに３ｈ撹拌した。反応生成物を０℃まで冷却してから３−クロロペルオキシ安息香酸（１００ｍｇ、０．５８０ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、室温で１ｈ撹拌した。反応完了生成物をＤＣＭ（１０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）および塩水（５ｍＬ）で洗浄した。まとめた水性層をＤＣＭ（各５ｍＬ）で２回抽出し、その後、まとめた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮乾固した。粗製残留物をシリカゲル（Biotage ultra、１０ｇ、ＤＣＭ中０〜２０％ＭｅＯＨの勾配で溶離）で精製し、次いで、所望の画分を濃縮し、逆相ＨＰＬＣカラム（（X-Bridge C18  １９×１００ｍｍカラム；０．１％ＮＨ４ＯＨを含有する水中にアセトニトリルを増加させて行く勾配で溶離）で再精製した。所望の画分を濃縮し、真空乾燥して、ＥＲ−８９９６０２を得た。
【００９６】
ＥＲ−８９９６０４（１８ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ、収率２５．０％）を、５５−２ＨＣｌ（６８ｍｇ、０．２００ｍｍｏｌ）および２−オキソシクロペンタンカルボニトリル（４３，７ｍｇ、．４０１ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−９９５４１と同様に製造した。
【００９７】
ＥＲ−８９９６０７（１５ｍｇ、０．０４０ｍｍｏｌ、収率２２．１％）を、５５−２ＨＣｌ（６２ｍｇ、０．１８３ｍｍｏｌ）および１−（ピリジン−２−イル）エタノン（０．０４１ｍＬ、．３６５ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−９９５４１と同様に製造した。
【００９８】
ＥＲ−８９９６２１（２５ｍｇ、０．０７１ｍｍｏｌ、収率４２．５％）を、５５−２ＨＣｌ（５７ｍｇ、０．１６８ｍｍｏｌ）およびジヒドロ−２Ｈ−ピラン−３（４Ｈ）−オン（３３．６ｍｇ、．３３６ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−９９５４１と同様に製造した。
【００９９】
ＥＲ−８９９６３３（４１．２ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ、収率５２．３％）を、５５−２ＨＣｌ（６７ｍｇ、０．１９７ｍｍｏｌ）およびジヒドロ−２Ｈ−チオピラン−４（３Ｈ）−オン１，１−ジオキシド（５８．５ｍｇ、．３９５ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−９９５４１と同様に製造した。
【０１００】
ＥＲ−８９９６３４（２０ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ、収率３０．９％）を、５５−２ＨＣｌ（５７ｍｇ、０．１６８ｍｍｏｌ）および１−（６−メチルピリジン−２−イル）エタノン（４５．４ｍｇ、．３３６ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−９９５４１と同様に製造した。
【０１０１】
ＥＲ−８９９６３０（１２ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ、収率８．７％）およびＥＲ−８９９６３１（１９ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ、収率１３．７％）をＥＲ−８９９５４１と同様に製造したが、５５−２ＨＣｌ（１２９ｍｇ、０．３８０ｍｍｏｌ）および４−ヒドロキシシクロヘキサノン（８７ｍｇ、．７６ｍｍｏｌ）（両ジアステレオマーをシリカゲルクロマトグラフィーによって単離した）から出発した。但し：両化合物の立体化学は任意に割り当てたものであり、確認されているものではない。
【０１０２】
ＤＣＭ（３ｍＬ）中のＤＭＰ（３７３ｍｇ、．８７９ｍｍｏｌ）を４部分に分け、１部分当たり１ｈにわたって室温にて添加して、ＥＲ−８９９６３０とＥＲ−８９９６３１とのジアステレオマー混合物（６４ｍｇ、０．１７６ｍｍｏｌ）を酸化することによって、ＥＲ−８９９６３２（１２ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ、収率１８．９％）を製造した。反応完了生成物をＤＣＭ（１０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）で、次いで塩水（５ｍＬ）で洗浄した。まとめた水性層をＤＣＭ（各５ｍＬ）で２回抽出し、その後、まとめた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮乾固した。粗製残留物をシリカゲル（Biotage ultra、１０ｇ、ＤＣＭ中０〜２０％ＭｅＯＨで溶離）で精製し、次いで、所望の画分を濃縮し、逆相ＨＰＬＣカラム（（X-Bridge C18  １９×１００ｍｍカラム；０．１％ＮＨ４ＯＨを含有する水中にアセトニトリルを増加させて行く勾配で溶離）で再精製した。所望の画分を濃縮し、真空乾燥して、ＥＲ−８９９６３２を得た。
【０１０３】
ＥＲ−８９９５０８：
５５（８５ｍｇ、．２５１ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（３４．６ｍｇ、．２５１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ、１２．９２ｍｍｏｌ）中撹拌懸濁液に、メタンスルホン酸３，３，３−トリフルオロプロピル（０．０５２ｍＬ、．３７６ｍｍｏｌ）を添加した。反応生成物を室温で２４ｈ撹拌し、その後、反応生成物をＥｔＯＡｃ−ヘプタン（約４：１）（１０ｍＬ）および水（５ｍＬ）で希釈した。水性層をＥｔＯＡｃ−ヘプタン（約４：１）（各５ｍＬ）で２回抽出し、まとめた有機層を塩水（５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧濃縮した。粗製物をシリカゲル（１２ｇカラム、ヘプタン中２５〜１００％ＥｔＯＡｃで溶離）で精製して、所望の画分をまとめ、濃縮し、真空乾燥した後の副生物としてＥＲ−８９９５０８を得た（３．７ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ、収率５．０％）。
【０１０４】
ＥＲ−８９９８２３：
塩化オキサリル（０．１０８ｍｌ、１．２３４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２ｍＬ）中−７８℃の撹拌溶液に、ＤＭＳＯ（０．１７５ｍｌ、２．４６９ｍｍｏｌ）を滴加した。添加完了後、この混合物を−７８℃で３０ｍ撹拌し、その後、ＥＲ−８９６４６４（２２０ｍｇ、．８２３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２ｍＬ）溶液を滴加し、次いで、室温まで加温し、さらにｌｈ撹拌した。ＤＩＰＥＡ（０．７１９ｍｌ、４．１１５ｍｍｏｌ）を滴加し、ｌｈ撹拌し、次いで、塩化アンモニウム水溶液（２ｍＬ）で反応停止した。混合物をＥｔＯＡｃ（各５ｍＬ）で３回抽出した。まとめた有機層を塩水（５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、粗製（Ｓ）−５−（３−メチル−５−オキソピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリルを得、これをさらなる精製をせずに次の工程に使用した。
【０１０５】
（Ｓ）−５−（３−メチル−５−オキソピペリジン−１−イル）キノリン−８−カルボニトリル（５０ｍｇ、．１８８ｍｍｏｌ）と２−アミノプロパン−１−オール（２８．３ｍｇ、．３７７ｍｍｏｌ）のＤＣＥ（２ｍＬ、２５．３８４ｍｍｏｌ）中撹拌溶液に、酢酸（１０．７９μＬ、．１８８ｍｍｏｌ）およびナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（１６０ｍｇ、．７５４ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、５０℃で２４ｈ加熱した。反応完了生成物を室温まで冷却し、１Ｎ  ＮａＯＨ（２ｍＬ）および水（５ｍＬ）で反応停止した。混合物をＥｔＯＡｃ（各５ｍＬ）で３回抽出し、まとめた有機層を塩水（５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲル（１０ｇ、ＤＣＭ中０〜１０％ＭｅＯＨで溶離）で精製し、所望の画分をまとめ、濃縮し、真空乾燥した後に、ＥＲ−８９９８２３を得た（２９ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ、収率４７．４％）。
【０１０６】
ＥＲ−８９９５０４およびＥＲ−８９９５０５：
ＥＲ−８８８８４０（６８８ｍｇ、２．０２８ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（４２３ｍｇ、３．０６１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．００ｍＬ）中撹拌懸濁液に、ブロモ酢酸エチル（３６８μｌ、３．３０５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１４ｈ撹拌し、その後、反応完了生成物をｓａｔ．ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈し、層を分離した。水性層をＥｔＯＡｃ（各５ｍＬ）で２回抽出し、まとめた有機層を塩水（５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲル（１０ｇ、ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃで溶離）で精製して、所望の各画分を別々にまとめ、濃縮し、真空乾燥した後に、２種の生成物、ＥＲ−８９９５０５（３８２ｍｇ、０．８７１ｍｍｏｌ、収率４３．０％）およびＥＲ−８９９５０４（２０７ｍｇ、０．５８７ｍｍｏｌ、収率２９．０％）を黄色の油として得た。
【０１０７】
ＥＲ−８９９７１５：
ＥＲ−８９９５４１（４０ｍｇ、．１２４ｍｍｏｌ）の３７％ａｑホルムアルデヒド（１ｍｌ、．１２４ｍｍｏｌ）中撹拌溶液に、ギ酸（７０μｌ、１．８２５ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、１００℃で２ｈ加熱した。反応完了生成物をＮａＨＣＯ３水溶液（５ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（各３ｍＬ）で３回抽出した。まとめた有機層を塩水（５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（０．５ｍＬ）に溶解し、次いで酢酸（０．００８ｍＬ、０．１２４ｍｍｏｌ）に溶解し、室温で３０分撹拌し、その後、真空内で濃縮乾燥して、さらなる精製を必要としないＥＲ−８９９７１５−ＨＯＡｃ（３２ｍｇ、０．０８１ｍｍｏｌ、収率６５．１％）を得た。
【０１０８】
ＥＲ−８９６３１０：
ＥＲ−８８８８４０（１００ｍｇ、．３７５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１．０ｍｌ、１５．５４２ｍｍｏｌ）中撹拌溶液に、ピリジン（０．０９１ｍｌ、１．１２６ｍｍｏｌ）を添加し、次いで無水酢酸（０．０４３ｍｌ、．４５１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２ｈ撹拌し、その後、反応完了生成物をＤＣＭ（５ｍＬ）で希釈し、ａｑ  ＮａＨＣＯ３（２ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲル（Biotage）で精製し、所望の各画分を別々にまとめ、濃縮し、真空乾燥した後に、ＥＲ−８９６３１０を得た（９７ｍｇ、０．３１５ｍｍｏｌ、収率８４％）。
【０１０９】
ＥＲ−８９８７５８（１７ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ、収率１５．９％）を、ＥＲ−８８８８４０−２ＨＣｌ（１００ｍｇ、０．２９５ｍｍｏｌ）およびトリフルオロ無水酢酸（０．０５２ｍＬ、０．３６８ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９６３１０と同様に製造した。
【０１１０】
ＥＲ−８９８９１２：
ＥＲ−８８８８４０（５０ｍｇ、０．１８８ｍｍｏｌ）とピリジン（０．０４６ｍＬ、．５６３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２ｍＬ）中混合物に、５−メチルイソオキサゾール−３−カルボニルクロリド（２７．３ｍｇ、．１８８ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を室温で１８ｈ撹拌し、次いで、ＤＭＡＰ（２３ｍｇ、０．１８８ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で６ｈ撹拌した。ＨＡＴＵ（８５．８ｍｇ、０．２２６ｍｍｏｌ）を添加し、反応生成物を室温で１８ｈ撹拌した。反応完了生成物をＤＣＭ（１０ｍＬ）で希釈し、次いで、０．５Ｍクエン酸（３ｍＬ）、水（３ｍＬ）およびｓａｔ．ＮａＨＣＯ３（３ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮し、次いで、シリカゲル（１０ｇ、ＤＣＭ中０〜１０％ＭｅＯＨで溶離）で精製した。所望の画分をまとめ、濃縮し、真空乾燥して、ＥＲ−８９８９１２を得た（５１ｍｇ、０．１３６ｍｍｏｌ、収率７２．４％）。
【０１１１】
ＥＲ−８９７２７２：
ＥＲ−８８８８４０（５０ｍｇ、．１８８ｍｍｏｌ）と、２−（ジメチルアミノ）酢酸塩酸塩（３１．４ｍｇ、．２２５ｍｍｏｌ）と、ＨＢＴＵ（８５ｍｇ、．２２５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２ｍＬ）中撹拌溶液にＴＥＡ（７８μｌ、．５６３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１８ｈ撹拌し、その後、反応完了生成物をＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）で希釈し、ａｑ．ＮＨ４Ｃｌ（２ｍＬ）、水（２ｍＬ）および塩水（２ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（Biotage、１０ｇ、ヘプタン中０〜３０％ＥｔＯＡｃで溶離）で精製し、所望の画分を濃縮し、真空乾燥した後に、ＥＲ−８９７２７２を得た（４０ｍｇ、０．１１４ｍｍｏｌ、収率６０．５％）。
【０１１２】
ＥＲ−８９７２７３（４３ｍｇ、０．１２７ｍｍｏｌ、収率６７．６％）を、ＥＲ−８８８８４０（５０ｍｇ、０．１８８ｍｍｏｌ）および２−メトキシ酢酸（２０．２９ｍｇ、．２２５ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７２７２と同様に製造した。
【０１１３】
ＥＲ−８９７２７４（５３ｍｇ、０．１６３ｍｍｏｌ、収率８７．２％）を、ＥＲ−８９７２７２と同様に製造したが、ＥＲ−８８８８４０（５０ｍｇ、０．１８８ｍｍｏｌ）および２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）酢酸（３９．５ｍｇ、．２２５ｍｍｏｌ）から出発し、次いで、ＴＦＡおよび前述の実施例で説明した中和方法を使用してＢｏｃ基を脱保護した。
【０１１４】
ＥＲ−８９７６０７．ＨＣＬ（４７ｍｇ、０．１２１ｍｍｏｌ、収率６４．９％）を、ＥＲ−８９７２７２と同様に製造したが、ＥＲ−８８８８４０（５０ｍｇ、０．１８８ｍｍｏｌ）および２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−メチルプロパン酸（４５．８ｍｇ、．２２５ｍｍｏｌ）にＥＤＣ（５４．０ｍｇ、．２８２ｍｍｏｌ）を添加して出発し、次いで、前述の実施例で説明した方法に従い、ジオキサン中ＨＣｌを使用してＢｏｃ基を脱保護した。
【０１１５】
ＥＲ−８９７６０８．ＨＣｌ（４０ｍｇ、０．１０７ｍｍｏｌ、収率７１．２％）を、ＥＲ−８８８８４０（４０ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）および２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（メチル）アミノ）酢酸（３４．１ｍｇ、．１８ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７６０７と同様に製造した。
【０１１６】
ＥＲ−８９７９７１：
ＥＲ−８８８８４０−ＨＣｌ（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）のＮＭＰ（５００．０μｌ）中撹拌溶液に、２−ヒドロキシ酢酸（１１．０ｍｇ、０．１４５ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（４３．０ｍｇ、０．１１３ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（４５．０μｌ、０．２５８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を５０℃で終夜撹拌し、次いで、逆相ＨＰＬＣカラム（（X-Bridge C18  １９×１００ｍｍカラム；０．１％ＮＨ４ＯＨを含有する水中にアセトニトリルを増加させて行く勾配で溶離）で直接精製した。生成物を含有する画分をまとめ、真空濃縮して、ＥＲ−８９７９７１を得た（１６．９ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ、収率５０．５％）。
【０１１７】
ＥＲ−８９７９７２（１５．２ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ、収率１３．８％）を、ＥＲ−８８８８４０−ＨＣｌ（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−メチルブタン酸（１８．０ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７１と同様に製造した。
【０１１８】
ＥＲ−８９７９７３（５．２ｍｇ、０．０３９ｍｍｏｌ、収率３８．１％）を、ＥＲ−８８８８４０−ＨＣｌ（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および３−ヒドロキシ安息香酸（２１．０ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７１と同様に製造した。
【０１１９】
ＥＲ−８９７９７５（４．７ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ、収率１１．８％）を、ＥＲ−８８８８４０−ＨＣｌ（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および４−ヒドロキシ安息香酸（２１．０ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７１と同様に製造した。
【０１２０】
ＥＲ−８９７９７６（１５．９ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ、収率４３．５％）を、ＥＲ−８８８８４０−ＨＣｌ（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および２−（メチルチオ）酢酸（１６．０ｍｇ、０．１５１ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７１と同様に製造した。
【０１２１】
ＥＲ−８９７９７７（１６．７ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ、収率４３．９％）を、ＥＲ−８８８８４０−ＨＣｌ（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および２−（エチルチオ）酢酸（１８．０ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７１と同様に製造した。
【０１２２】
ＥＲ−８９７９７８（１２．６ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ、収率３１．６％）を、ＥＲ−８８８８４０−ＨＣｌ（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および２−（メチルスルホニル）酢酸（２１．０ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７１と同様に製造した。
【０１２３】
ＥＲ−８９７９７９（９．２ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ、収率２６．２％）を、ＥＲ−８９７９７１と同様に製造したが、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロパン酸（２９．４ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ）から出発し、次いで、ＴＦＡおよび前述の実施例で説明した中和方法を使用してＢｏｃ基を脱保護した。
【０１２４】
ＥＲ−８９７９８０（１２．６ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ、収率３２．０％）を、５４ｂ（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロパン酸（２８．４ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１２５】
ＥＲ−８９７９８１（１２．８ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ、収率３５．９％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および１−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−シクロプロパンカルボン酸（３０．７ｍｇ、０．１５３ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１２６】
ＥＲ−８９７９８２（１．９ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ、収率４．９％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−ヒドロキシプロパン酸（３０．９ｍｇ、０．１５１ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１２７】
ＥＲ−８９７９８３（５．６ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ、収率１４．６％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−２−カルボン酸（３３．２ｍｇ、０．１５４ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１２８】
ＥＲ−８９７９８４（０．３ｍｇ、０．００１ｍｍｏｌ、収率１．０％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および２−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アゼチジン−３−イル）酢酸（３３．０ｍｇ、０．１５３ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１２９】
ＥＲ−８９７９８５（８．７ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、収率２３．３％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−カルボン酸（３２．３ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１３０】
ＥＲ−８９７９８６（１２．５ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ、収率３３．０％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−メチルブタン酸（３４．０ｍｇ、０．１５６ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１３１】
ＥＲ−８９７９８７（２．８ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ、収率７．８％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−メチルブタン酸（３３．５ｍｇ、０．１５４ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１３２】
ＥＲ−８９７９８８（９．９ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ、収率２６．２％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および５−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ペンタン酸（３３．１ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１３３】
ＥＲ−８９７９８９（９．０ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ、収率２４．３％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ペンタン酸（３２．７ｍｇ、０、１５１ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１３４】
ＥＲ−８９７９９０（３．５ｍｇ、０．０１０ｍｍｏｌ、収率９．２％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−メトキシプロパン酸（３３．０ｍｇ、０．１５１ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１３５】
ＥＲ−８９７９９１（７．１ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ、収率１８．４％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（２Ｒ，３Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−ヒドロキシブタン酸（３３．９ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１３６】
ＥＲ−８９７９９２（１２．２ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ、収率３１．１％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−カルボン酸（３４．８ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１３７】
ＥＲ−８９７９９３（９．７ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ、収率２５．２％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−３−カルボン酸（３４．４ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１３８】
ＥＲ−８９７９９４（９．８ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ、収率２５．２％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および２−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル）酢酸（３４．４ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１３９】
ＥＲ−８９７９９５（１０．８ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ、収率２７．２％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペラジン−２−カルボン酸（３４．５ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１４０】
ＥＲ−８９７９９６（１１．２ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ、収率２９．１％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（２Ｓ，４Ｒ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボン酸（３５．０ｍｇ、０．１５１ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１４１】
ＥＲ−８９７９９７（４．９ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ、収率１２．６％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（２Ｓ，３Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−メチルペンタン酸（３５．６ｍｇ、０．１５４ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１４２】
ＥＲ−８９７９９８（９．３ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ、収率２４．３％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−４−メチルペンタン酸（３５．７ｍｇ、０．１５４ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１４３】
ＥＲ−８９７９９９（７．７ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ、収率２９．５％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−４−メチルペンタン酸（３４．８ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１４４】
ＥＲ−８９８０００（９．５ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ、収率２４．３％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３，３−ジメチルブタン酸（３４．９ｍｇ、０．１５１ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１４５】
ＥＲ−８９８００１（３．３ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ、収率８．７％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３，３−ジメチルブタン酸（３４．９ｍｇ、０．１５１ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１４６】
ＥＲ−８９８３３４（４．５ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ、収率１１．７％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）−３−メチルブタン酸（３５．０ｍｇ、０．１５１ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１４７】
ＥＲ−８９８３３５（５．１ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ、収率１２．６％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−４−アミノ−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−４−オキソブタン酸（３５．３ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１４８】
ＥＲ−８９８３３６（２．６ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ、収率６．６％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−４−アミノ−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−４−オキソブタン酸（３５．３ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１４９】
ＥＲ−８９８３３７（２．８ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ、収率７．１％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−４−アミノ−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−４−オキソブタン酸（３５．４ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１５０】
ＥＲ−８９８３３８（４．５ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ、収率１１．７％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）チアゾリジン−４−カルボン酸（３５．８ｍｇ、０．１５３ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１５１】
ＥＲ−８９８３３９（２．７ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ、収率６．８％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）安息香酸（３６．１ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１５２】
ＥＲ−８９８３４１（７．５ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ、収率１８．４％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および２−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−イル）酢酸（３６．０ｍｇ、０．１４８ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１５３】
ＥＲ−８９８３４２（８．８ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、収率２１．３％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−メチルピペリジン−４−カルボン酸（３６．０ｍｇ、０．１４８ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１５４】
ＥＲ−８９８３４３（２．２ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ、収率５．４％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および１−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−ヒドロキシシクロペンタンカルボン酸（３７．０ｍｇ、０．１５１ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１５５】
ＥＲ−８９８３４４（９．４ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、収率２３．３％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）−４−メチルペンタン酸（３７．０ｍｇ、０．１５１ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１５６】
ＥＲ−８９８３４５（８．０ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ、収率１９．４％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−４，４−ジメチルペンタン酸（３７．０ｍｇ、０．１５１ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１５７】
ＥＲ−８９８３４６（６．５ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ、収率１６．５％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（メチル）アミノ）ヘキサン酸（３７．０ｍｇ、０．１５１ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１５８】
ＥＲ−８９８３４７（０．９ｍｇ、０．００２ｍｍｏｌ、収率２．２％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−５−アミノ−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−５−オキソペンタン酸（３７．０ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１５９】
ＥＲ−８９８３４８（６．３ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ、収率１５．５％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（エチルチオ）プロパン酸（３７．０ｍｇ、０．１４８ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１６０】
ＥＲ−８９８３４９（６．０ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ、収率１４．６％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−４−（メチルチオ）ブタン酸（３７．０ｍｇ、０．１４８ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１６１】
ＥＲ−８９８３５０（５．６ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ、収率１３．６％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−フェニル酢酸（３８．０ｍｇ、０．１５１ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１６２】
ＥＲ−８９８３５１（８．６ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、収率２１．３％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−フェニル酢酸（３８．０ｍｇ、０．１５１ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１６３】
ＥＲ−８９８３５２（５．１ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ、収率１２．６％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン酸（３８．０ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１６４】
ＥＲ−８９８３５３（６．８ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ、収率１６．５％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および３−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−２−イル）プロパン酸（３９．０ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１６５】
ＥＲ−８９８３５４（４．９ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ、収率１１．７％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および３−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−３−イル）プロパン酸（３９．０ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１６６】
ＥＲ−８９８３５５（３．２ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ、収率７．７％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および１−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−４−ヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸（３９．０ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１６７】
ＥＲ−８９８３５６（３．３ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ、収率７．８％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−フェニルプロパン酸（４０．０ｍｇ、０．１５１ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１６８】
ＥＲ−８９８３５７（９．１ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、収率２１．３％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（２Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−４−（メチルスルフィニル）ブタン酸（４０．１ｍｇ、０．１５１ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１６９】
ＥＲ−８９８３５８（１２．６ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ、収率２９．１％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（ピリジン−２−イル）プロパン酸（４０．０ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１７０】
ＥＲ−８９８３５９（１６．３ｍｇ、０．０３９ｍｍｏｌ、収率３７．９％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（ピリジン−４−イル）プロパン酸（４０．０ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１７１】
ＥＲ−８９８３６０（１７．１ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ、収率３９．８％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（ピリジン−３−イル）プロパン酸（４０．０ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１７２】
ＥＲ−８９８３６１（１９．６ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ、収率４５．６％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（ピリジン−３−イル）プロパン酸（４０．０ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１７３】
ＥＲ−８９８３６２（９．１ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、収率２１．４％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−３−カルボン酸（４０．０ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１７４】
ＥＲ−８９８３６４（９．１ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、収率２１．４％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および２−（１−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）メチル）−シクロヘキシル）酢酸（４１．７ｍｇ、０．１５４ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１７５】
ＥＲ−８９８３６５（１１．７ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ、収率２７．２％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（チアゾール−４−イル）プロパン酸（４１．０ｍｇ、０．１５１ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１７６】
ＥＲ−８９８３６６（１３．７ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ、収率３１．１％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）−３−フェニルプロパン酸（４２．０ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１７７】
ＥＲ−８９８３６７（１４．５ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ、収率３３．０％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）−３−フェニルプロパン酸（４３．０ｍｇ、０．１５４ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１７８】
ＥＲ−８９８３６８（６．８ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ、収率１５．５％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロパン酸（４２．２ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１７９】
ＥＲ−８９８３６９（９．５ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、収率２１．４％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−４−（メチルスルホニル）ブタン酸（４３．０ｍｇ、０．１５３ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１８０】
ＥＲ−８９８７５８（９．５ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、収率２１．４％）を、ＥＲ−８８８８４０（３５．０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−４−（メチルスルホニル）ブタン酸（４３．０ｍｇ、０．１５３ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９７９７９と同様に製造した。
【０１８１】
ＥＲ−８９８７６１：
ＥＲ−８８８８４０−２ＨＣｌ（５０ｍｇ、．１４７ｍｍｏｌ）とＤＣＭ（１．０ｍｌ、１５．５４２ｍｍｏｌ）とＴＥＡ（０．０４１ｍｌ、．２９５ｍｍｏｌ）との撹拌溶液に、３，３，３−トリフルオロプロパン酸（５６．６ｍｇ、．４４２ｍｍｏｌ）およびＨＯＢＴ（２９．９ｍｇ、．２２１ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、０℃に冷却した。ＥＤＣ（８５ｍｇ、．４４２ｍｍｏｌ）を添加し、得られた反応混合物を４０℃で３ｈ撹拌した。反応完了生成物をＤＣＭ（２ｍＬ）で希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１ｍＬ）および塩水（１ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮し、次いで、シリカゲル（Biotage SP4. Column Interchim  ２５ｇ）で精製し、所望の画分を濃縮し、真空乾燥した後に、ＥＲ−８９８７６１を白色の固体として得た（３６ｍｇ、０．０９６ｍｍｏｌ、収率６４．９％）。
【０１８２】
ＥＲ−８８８８４０−２ＨＣｌ（６０ｍｇ、０．１７７ｍｍｏｌ）および２−アミノ−３，３，３−トリフルオロプロパン酸（２５．３ｍｇ、．１７７ｍｍｏｌ）から出発し、ＥＲ−８９８７６１と同様の製造法を使用して、ＥＲ−８９８９９１（３．６ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ、収率５．１％）とＥＲ−８９８９９２（１．６ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ、収率２．３％）とを分離した。両ジアステレオマーの立体化学は任意に割り当てたものであり、確認されたものではない。
【０１８３】
ＥＲ−８９９０７２（５１．４ｍｇ、０．１３７ｍｍｏｌ、収率８９％）を、ＥＲ−８８８８４０−２ＨＣｌ（５２．３ｍｇ、０．１５４ｍｍｏｌ）および３−メチルオキセタン−３−カルボン酸（５０．２ｍｇ、０．４３２ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９８７６１と同様に製造した。
【０１８４】
ＥＲ−８９８７６３（１９ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ、収率３４．０％）をＥＲ−８９８７６１と同様に製造したが、ＥＲ−８８８８４０−２ＨＣｌ（５０ｍｇ、０．１４７ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−４−メチルペンタン酸（１０２ｍｇ、．４４２ｍｍｏｌ）から出発し、次いで、ＴＦＡおよび前述の実施例で説明した中和方法を使用してＢｏｃ基を脱保護した。
【０１８５】
ＥＲ−８９８７６５（１９ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ、収率３６．７％）を、ＥＲ−８８８８４０−２ＨＣｌ（５０ｍｇ、０．１４７ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタン酸（９０ｍｇ、．４４２ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９８７６３と同様に製造した。
【０１８６】
ＥＲ−８９８９０１（４２ｍｇ、０．１２０ｍｍｏｌ、収率８１．６％）を、ＥＲ−８８８８４０−２ＨＣｌ（５０ｍｇ、０．１４７ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパン酸（９０ｍｇ、．４４２ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９８７６３と同様に製造した。
【０１８７】
ＥＲ−８９８９０２（１３ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ、収率２３．１％）を、ＥＲ−８８８８４０−２ＨＣｌ（５０ｍｇ、０．１４７ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−４−メチルペンタン酸（１０２ｍｇ、．４４２ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９８７６３と同様に製造した。
【０１８８】
ＥＲ−８９８９７６（１９ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ、収率３６．７％）を、ＥＲ−８８８８４０−２ＨＣｌ（５０ｍｇ、０．１４７ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタン酸（９０ｍｇ、．４４２ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９８７６３と同様に製造した。
【０１８９】
ＥＲ−８９８９７７（５０ｍｇ、０．１３２ｍｍｏｌ、収率８９．８％）を、ＥＲ−８８８８４０−２ＨＣｌ（５０ｍｇ、０．１４７ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）−３−メチルブタン酸（１０２ｍｇ、．４４２ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９８７６３と同様に製造した。
【０１９０】
ＥＲ−８９９１２７：
（Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）モルホリン−３−カルボン酸（８７ｍｇ、．３７５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２．０ｍｌ）中室温の撹拌溶液に、４−メチルモルホリン（０．０４１ｍｌ、．３７５ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、クロロギ酸イソブチル（０．０４９ｍｌ、．３７５ｍｍｏｌ）を滴加した。これとは別に、ＥＲ−８８８８４０−２ＨＣｌ（５１．２ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（０．０５２ｍｌ、．３０ｍｍｏｌ）の溶液を室温で撹拌し、１５分後、予め製造しておいた混合無水物にこの溶液を添加した。全反応混合物をさらに３ｈ撹拌し、その後、反応完了生成物を濃縮し、残留物をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解した。この溶液をシリカゲル（１２ｇ、ヘプタン中０〜７５％ＥｔＯＡｃで溶離）で精製して、Ｂｏｃ保護された中間体を黄色の固体として得た。
【０１９１】
この中間体をＤＣＭ（１．０ｍｌ）に溶解し、ＴＦＡ（１．００ｍｌ、１２．９８ｍｍｏｌ）を一度に添加した。この混合物を室温で１ｈ撹拌し、その後、反応完了生成物を濃縮乾固した。残留物をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解し、MP-carbonate塩基性樹脂（約２５０ｍｇ）を添加した。この混合物を室温で３０分間撹拌すると、橙色から淡黄色になった。この懸濁液を濾過し、濾液を濃縮し、真空乾燥してＥＲ−８９９１２７を得た（２１．７ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ、収率３７．９％）。
【０１９２】
ＥＲ−８９９１２８（２９．９ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ、収率５２．２％）を、ＥＲ−８８８８４０−２ＨＣｌ（５１．２ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）モルホリン−３−カルボン酸（８７ｍｇ、．３７５ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９９１２７と同様に製造した。
【０１９３】
ＥＲ−８９８８８１（１０１ｍｇ、０．２６６ｍｍｏｌ、収率３１．６％）を、ＥＲ−８８８８４０−２ＨＣｌ（２５０ｍｇ、０．８４１ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（アミノメチル）モルホリン−４−カルボキシレート（３６４ｍｇ、１．６８２ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９９１２７と同様に製造した。
【０１９４】
ＥＲ−８９８９７９：
２−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）酢酸塩酸塩（３３ｍｇ、０．２００ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．５ｍＬ）中撹拌溶液に、ＨＡＴＵ（７６ｍｇ、０．２００ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を室温で３０分撹拌し、その後、ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中ＥＲ−８８８８４０−２ＨＣｌ（６８ｍｇ、０．２００ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、ＤＩＰＥＡ（０．１４ｍＬ、０．８０ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を室温で２４ｈ撹拌し、その後、ａｑ．ＮａＨＣＯ３（２ｍＬ）および水（１０ｍＬ）で反応停止した。固体を濾過によって回収し、水で洗浄し、真空乾燥し、シリカゲル（１０ｇ、ＤＣＭ中０〜１０％ＭｅＯＨ）で精製し、所望の画分を回収し、濃縮し、真空乾燥した後に、ＥＲ−８９８９７９を得た（２３ｍｇ、０．０６１ｍｍｏｌ、収率３０．７％）。
【０１９５】
ＥＲ−８９８９８０（３０ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ、収率３６．７％）を、ＥＲ−８８８８４０−２ＨＣｌ（６８ｍｇ、０．２００ｍｍｏｌ）および２−（ピリジン−２−イル）酢酸塩酸塩（３４．７ｍｇ、．２００ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９８９７９と同様に製造した。
【０１９６】
ＥＲ−８９８９８１（２５ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ、収率３３．４％）を、ＥＲ−８８８８４０−２ＨＣｌ（６８ｍｇ、０．２００ｍｍｏｌ）および２−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）酢酸（２５．２ｍｇ、．２００ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９８９７９と同様に製造した。
【０１９７】
ＥＲ−８９８９８２（１０ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ、収率１３．９％）を、ＥＲ−８８８８４０−２ＨＣｌ（６８ｍｇ、０．２００ｍｍｏｌ）および１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（２２．４ｍｇ、．２００ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９８９７９と同様に製造した。
【０１９８】
ＥＲ−８９８９８４（１８ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ、収率２４．４％）を、ＥＲ−８８８８４０−２ＨＣｌ（６８ｍｇ、０．２００ｍｍｏｌ）およびニコチン酸（２５ｍｇ、．２００ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９８９７９と同様に製造した。
【０１９９】
ＥＲ−８９８９８５（２７ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ、収率３６．１％）を、ＥＲ−８８８８４０−２ＨＣｌ（６８ｍｇ、０．２００ｍｍｏｌ）および１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸（２５．２ｍｇ、．２００ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９８９７９と同様に製造した。
【０２００】
ＥＲ−８９８９８６（４５ｍｇ、０．１２０ｍｍｏｌ、収率６０．１％）を、ＥＲ−８８８８４０−２ＨＣｌ（６８ｍｇ、０．２００ｍｍｏｌ）および１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボン酸（２５．２ｍｇ、．２００ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９８９７９と同様に製造した。
【０２０１】
ＥＲ−８９９３５０．ＨＣｌ（３６ｍｇ、０．０９０ｍｍｏｌ、収率３０．５％）をＥＲ−８９８９７９と同様に製造したが、ＥＲ−８８８８４０−２ＨＣｌ（１００ｍｇ、０．２９５ｍｍｏｌ）および３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）オキセタン−３−カルボン酸（７０．４ｍｇ、．３２４ｍｍｏｌ）から出発し、ＴＦＡを使用してＢｏｃ基を脱保護し、前述の実施例で説明したようにＨＣｌ塩を形成した。
【０２０２】
ＥＲ−８９６７６０：
ＥＲ−８８８８４０−２ＨＣｌ（１００ｍｇ、．２９５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１．０ｍｌ）中撹拌溶液に、ＴＥＡ（０．２０５ｍｌ、１．４７４ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、イソプロピルスルホニルクロリド（０．０５０ｍｌ、．４４２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２ｈ撹拌し、その後、反応完了生成物をＤＣＭ（１０ｍＬ）で希釈し、次いで、ｓａｔ．ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）および塩水（５ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮し、次いで、シリカゲル（Biotage SP4. Column Interchim  ２５ｇ、３０μＭ、ヘプタン中６〜５０％ＥｔＯＡｃ）で精製し、所望の生成物画分を濃縮し、濃縮し、真空乾燥した後に、ＥＲ−８９８７６０を白色の固体として得た（３．７ｍｇ、９．９３μｍｏｌ、収率３．３７％）。
【０２０３】
ＥＲ−８９９６７２．ＨＣＬ（２５ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ、収率３７．６％）を、ＥＲ−８８８８４０−２ＨＣｌ（５０ｍｇ、０．１４７ｍｍｏｌ）および３−（ジメチルアミノ）プロパン−１−スルホニルクロリド塩酸塩（６５．５ｍｇ、．２９５ｍｍｏｌ）から出発して、ＥＲ−８９８７６０と同様に製造した。塩酸塩を、他の実施例での説明と同様に作製した。
【０２０４】
ＥＲ−８９９６６９−ＨＣｌ：
ＥＲ−８８８８４０−２ＨＣｌ（２００ｍｇ、．５９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２．０ｍｌ、３１．０８３ｍｍｏｌ）中撹拌溶液に、ＴＥＡ（０．４１１ｍｌ、２．９４８ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、２−（１，３−ジオキソイソインドリン−２−イル）エタンスルホニルクロリド（３２３ｍｇ、１．１７９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２ｈ撹拌し、その後、反応完了生成物をＤＣＭ（５ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（２ｍＬ）および塩水（２ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮し、次いで、シリカゲル（Biotage SP4. Column Biotage SNAP Ultra  ５０ｇ、３０μＭ、１２〜１００％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）で精製した。所望の画分を濃縮し、真空乾燥して、Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−２−（１，３−ジオキソイソインドリン−２−イル）エタンスルホンアミドを得た（２６６ｍｇ、０，５２８ｍｍｏｌ、収率９０％）。
【０２０５】
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）−２−（１，３−ジオキソイソインドリン−２−イル）エタンスルホンアミド（１００ｍｇ、．１９９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２．００ｍＬ）中ヒドラジン一水和物（０．０９６ｍＬ、１．９８６ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を室温で終夜撹拌し、その後、反応完了生成物をCelite 545のパッドで濾過し、ＴＨＦ（５ｍＬ）ですすいだ。粗生成物をシリカゲル（Biotage SP4. Column Biotage SNAP Ultra  ２５ｇ、３０μＭ、１〜４０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製し、所望の画分をまとめ、濃縮し、真空乾燥して、ＥＲ−８９９６６９を黄色の固体として得た（５２ｍｇ、０．１３９ｍｍｏｌ、収率７０．１％）。
【０２０６】
ＥＲ−８９９６６９（５２ｍｇ、０．１３９ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（２．０ｍｌ）に溶解し、４．００Ｍ  ＨＣｌのジオキサン（０．０３７ｍＬ）溶液で室温にて３０分間処理した。この混合物をトルエン（２ｍＬ）で希釈し、濃縮した。生成物をトルエン（２ｍＬ）と共沸させた。生成物を真空ポンプで乾燥して、ＥＲ−８９９６６９−ＨＣｌを橙色の固体として得た（５７ｍｇ、０．１３９ｍｍｏｌ、収率１００．０％）。
【０２０７】
ＥＲ−８９９６７１−ＨＣｌ：
ＥＲ−８９９６６９（５０ｍｇ、．１３４ｍｍｏｌ）と３７％ホルムアルデヒド水溶液（１０９ｍｇ、１．３３９ｍｍｏｌ）のギ酸（０．１ｍｌ、２．６０７ｍｍｏｌ）中溶液を８０℃で８ｈ撹拌した。反応完了生成物をトルエン（各２ｍＬ）と２回共沸させた。残留物をＭｅＯＨ（５ｍＬ）に溶解し、次いで、Amberlite IRA400水酸化物形態を添加し、中性ｐＨが得られるまで１０分間にわたって撹拌した。Amberliteを濾過し、ＭｅＯＨですすぎ、濾液を濃縮し、次いで、トルエン（２ｍＬ）で２回共沸乾固した。残留物をシリカゲル（Biotage SP4. Column Biotage SNAP Ultra  ２５ｇ、３０μＭ、１〜４０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製し、所望の画分をまとめ、濃縮し、真空乾燥して、ＥＲ−８９９６７１を得た（２８ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ、収率５２．１％）。
【０２０８】
ＥＲ−８９９６７１（２８ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（２．０ｍｌ）に溶解し、４．０Ｍ  ＨＣｌのジオキサン（０．０１７ｍｌ、．０６６ｍｍｏｌ）溶液で室温にて３０分間処理した。この混合物をトルエン（各２ｍＬ）と３回共沸させた。生成物を真空乾燥して、ＥＲ−８９９６７１−ＨＣｌを橙色の固体として得た（３０ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ、収率１００％）。
【０２０９】
他の実施例：
ＥＲ−８８９５９１：
ＥＲ−８８８８４０（１５ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）と、ギ酸（０．０．６４ｍＬ、ｍｍｏｌ）と、３７％ａｑ．ホルムアルデヒド（０．０４２ｍＬ、ｍｍｏｌ）とを組み合わせ、８０℃で８ｈマイクロ波処理し、その後、冷却した反応生成物を濃縮した。粗生成物をＭｅＯＨ（２ｍＬ）で希釈し、Ｃ−１８逆相ＨＰＬＣにて、０．１％ＴＦＡを含む水中１０〜１００％アセトニトリルで溶離して精製した。所望の画分を濃縮し、ＭｅＯＨ（１ｍｌ）に溶解し、塩基性シリカゲルカラム（Biotage Isolute SPE、１ｇ  ＳｉＣＯ３、ＭｅＯＨで溶離）に通過させ、次いで、濃縮し、真空乾燥して、ＥＲ−８８９５９１を得た（２．１ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ、収率１２．７％）。
【０２１０】
ＥＲ−８９５３８６：
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル（１，５−ジヒドロキシ−４，４−ジメチルペンタン−２−イル）カルバメート（６３６ｍｇ、２．５７１ｍｍｏｌ）とＴＥＡ（１．４３４ｍＬ、１０．２８６ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）中０℃の溶液に、メタンスルホニルクロリド（０．４２１ｍＬ、５．４０ｍｍｏｌ）を滴加し、その後、この混合物を０℃で２ｈ撹拌した。反応をａｑ．ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）で停止し、層を分離し、水性層をＥｔＯＡｃ（各５ｍＬ）で３回抽出した。まとめたＥｔＯＡｃ層を水（５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮乾固した。生成物、（Ｒ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２，２−ジメチルペンタン−１，５−ジイルジメタンスルホネート（１．０１ｇ、２．５０３ｍｍｏｌ、収率９７％）を精製せずに使用した。
【０２１１】
ベンジルアミン（０．８１９ｍｌ、７．５０ｍｍｏｌ）を５０℃まで加温し、次いで、（Ｒ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２，２−ジメチルペンタン−１，５−ジイルジメタンスルホネート（１．００９ｇ、２．５０ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（１．５０ｍｌ、１４．４３１ｍｍｏｌ）溶液を、１５分間にわたって滴加した。添加完了後、混合物を５０℃で２０ｈ撹拌した。反応完了生成物を室温まで冷却し、飽和ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈し、次いで、１０分間激しく撹拌した。得られた混合物の有機画分を塩水（５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物をシリカゲル（Biotage、ヘプタン中０〜１０％ＥｔＯＡｃで溶離）で精製し、所望の画分をまとめ、濃縮し、真空乾燥した後に、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル（１−ベンジル−５，５−ジメチルピペリジン−３−イル）カルバメートを得た（５００ｍｇ、１．５７０ｍｍｏｌ、収率６２．８％）。
【０２１２】
Ｔｅｒｔ−ブチル（（３Ｒ，５Ｓ）−１−ベンジル−５−メチルピペリジン−３−イル）カルバメート（５００ｍｇ、１．６４２ｍｍｏｌ）をエタノール（５０ｍｌ、８５６．３３５ｍｍｏｌ）に溶解し、H-Cubeで、５％Ｐｄ／Ｃ媒質のcatcartを使用し、４５℃および５０ｂａｒのＨ２ガス、溶液の流速１ｍＬ／分にて７ｈ水素化した。溶液を濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル（（３Ｒ，５Ｓ）−５−メチルピペリジン−３−イル）カルバメートを白色の粉末として得（３５０ｍｇ、１．６３３ｍｍｏｌ、収率９９．５％）、さらなる精製をせずに使用した。
【０２１３】
ｔｅｒｔ−ブチル（（３Ｒ，５Ｓ）−５−メチルピペリジン−３−イル）カルバメート（８９０ｍｇ、４．１５３ｍｍｏｌ）と５−ブロモキノリン−８−カルボニトリル（１４５２ｍｇ、６．２２９ｍｍｏｌ）のＤＭＡＣ（１４ｍＬ）中撹拌溶液に、ＤＩＰＥＡ（２．１７６ｍＬ、１２．４５９ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、密封し、１１０℃まで加熱し、４８ｈ撹拌した。反応完了生成物を室温まで冷却し、水（２０ｍＬ）で希釈し、次いで、ＥｔＯＡｃ（各１０ｍＬ）で３回抽出した。まとめた有機層を水（１０ｍＬ）および塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮乾固した。粗生成物をシリカゲル（Biotage, SP4  ヘプタン中０〜１００％ＥｔＯＡｃで溶離）で精製し、所望の画分をまとめ、濃縮し、真空乾燥した後に、ｔｅｒｔ−ブチル（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）カルバメートを得た（８１７ｍｇ、２．２２９ｍｍｏｌ、収率５３．７％）。
【０２１４】
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル（１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５，５−ジメチルピペリジン−３−イル）カルバメート（７０ｍｇ、．１８４ｍｍｏｌ）を４Ｍ  ＨＣｌジオキサン（２ｍｌ、８．００ｍｍｏｌ）で処理し、室温で１ｈ撹拌した。反応完了生成物を濃縮し、真空乾燥し、さらなる精製をせずにＥＲ−８９５３８６を二塩酸塩として得た（５１．６ｍｇ、０．１８４ｍｍｏｌ、収率１００％）。
【０２１５】
ＥＲ−８９７８１０：
ｔｅｒｔ−ブチル（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−シアノキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）カルバメート、５４（７５ｍｇ、０．２０５ｍｍｏｌ）のエタノール（４．５ｍｌ）中撹拌溶液に、０．５Ｍ水酸化ナトリウム（４．５０３ｍＬ、２．２５１ｍｍｏｌ）を添加し、次いで６０％過酸化水素水（０．２３３ｍＬ、２．２８１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を５０℃まで加温し、次いで４ｈ撹拌した。反応完了生成物を室温まで冷却し、次いで、５％ａｑチオ硫酸ナトリウム（１ｍＬ）を添加し、５分間撹拌し、１Ｎ  ＨＣｌをｐＨ７〜８になるまで添加した。この混合物を５０％体積まで濃縮し、次いで、ＤＣＭ（各５ｍＬ）で３回抽出した。まとめた有機層を水（５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮乾固した。粗生成物をシリカゲル（１０ｇ、ヘプタン中０〜６０％ＥｔＯＡｃで溶離）で精製し、所望の画分を回収し、濃縮し、真空乾燥した後に、ｔｅｒｔ−ブチル（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−カルバモイルキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）カルバメートを得た（５７ｍｇ、０．１４８ｍｍｏｌ、収率７２．４％）。
【０２１６】
ｔｅｒｔ−ブチル（（３Ｒ，５Ｓ）−１−（８−カルバモイルキノリン−５−イル）−５−メチルピペリジン−３−イル）カルバメート（５７ｍｇ、．１４８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）中撹拌溶液に、ＴＦＡ（０．５ｍｌ、６．４９ｍｍｏｌ）を添加し、その後、この混合物を室温でｌｈ撹拌した。反応完了生成物を濃縮し、次いで、ＭｅＯＨ（２ｍＬ）に溶解し、０．５ｇバイカーボネート樹脂で処理した。室温で３０分撹拌してから、この懸濁液を濾過し、ＭｅＯＨ（１ｍＬ）で２回洗浄し、まとめた濾液を濃縮して淡黄色の固体にした。この固体をＥｔＯＡｃ（１ｍＬ）に溶解し、４Ｍ  ＨＣｌのジオキサン（０．０２９ｍＬ、０．１１５ｍｍｏｌ）溶液で処理し、１５分撹拌した。得られた固体を濾過によって回収し、真空乾燥して、ＥＲ−８９７８１０−ＨＣｌを得た（３７ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ、収率７８％）。
【０２１７】
一般的スクリーニングアッセイおよび薬理学試験計画。
強力で選択的なＴＬＲ７／８用化合物を同定するために、類似体を、ヒトＴＬＲ４、ＴＬＲ７およびＴＬＲ９レポーター株の細胞ベースのパネルで初期スクリーニングした（より詳細には材料および方法を参照）。ＴＬＲ７に対して強力で選択的であった少なくとも１種の化合物については、ＴＬＲ８活性について（下の表２を参照）、およびヒトＰＢＭＣ一次アッセイにおけるＴＬＲ７／８に対する効力についても（より詳細には材料および方法を参照）試験した。一定の化合物を短期ｉｎ  ｖｉｖｏ（ＳＴＩＶ）アッセイに進めて、用量依存的活性およびマウスＴＬＲ７に対する抗作用期間を測定した（より詳細には材料および方法を参照）。次に、選択化合物を、以下のループス疾患マウスモデルのうち１種以上で、影響について評価した：ＢＸＳＢ−Ｙａａ、ＮＺＢ×ＮＺＷ、およびプリスタン：ＤＢＡ／１。
【０２１８】
本明細書で実施形態として報告される多くの化合物は、細胞株または初代細胞に発現したヒトとマウスの両方のＴＬＲ７およびヒトＴＬＲ８が、合成小分子（ＣＬ０９７、Ｒ８４８）または核酸（ＲＮＡ）リガンドで刺激されると、これらの受容体に対してナノモル効力を示す。逆に、本明細書で実施形態として報告される化合物のほとんどが、ＴＬＲ９経路に対しては不活性である。
【０２１９】
現行のループスＳＯＣ薬物としては、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＴＬＲ７／９活性化を阻害することが示されている、クロロキンおよびヒドロキシクロロキン（ＨＣＱ）などの抗マラリア薬が挙げられる。このことは、ループスフレアの制御におけるそれらの有効性を少なくとも部分的に説明し得る。しかし、本開示の実施形態は、それより大いに強力な阻害を提供することがわかっている。これは下の表１に示す結果によって実証されている。
【０２２０】
【表１】
0006483666.tif 000008
【０２２１】
【表２】
0006483666.tif 000009
【０２２２】
短期ｉｎ  ｖｉｖｏ（ＳＴＩＶ）アッセイ：
マウスＴＬＲ７に対する化合物のｉｎ  ｖｉｖｏでの効力を評価するために、短期ｉｎ  ｖｉｖｏ（ＳＴＩＶ）アッセイを利用した。簡単に説明すると、マウスに化合物を経口投与し、それ以後の様々な時点で、ＴＬＲ７を刺激する作動薬Ｒ８４８を皮下注射した。次に、Ｒ８４８で刺激した後の血漿ＩＬ−６レベルをＥＬＩＳＡで測定して、化合物の効力および作用期間を評価した。重要なことであるが、ＴＬＲ７欠損マウスの利用によって、Ｒ８４８でのｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ刺激の後のサイトカインの産生は、完全にＴＬＲ７依存であることがわかった。したがって、ＳＴＩＶアッセイにおける化合物の活性は、確実に、化合物によるＴＬＲ７経路の調節に起因するものであるとすることができる。調査対象の化合物のＳＴＩＶアッセイによる効力の概要を下の表３に表す。
【０２２３】
【表３】
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【０２２４】
ループス疾患マウスモデル。
異なる２種のループス疾患モデル（ＮＺＢ／Ｗおよびプリスタン）を化合物のＰＯＣ評価用に選んだ。なぜなら、（１）ＮＺＢ／Ｗ系は多遺伝子性の病因による自然疾患を発症し、ＤＮＡに関連する自己反応性、蛋白尿および免疫複合体が仲介する腎炎など、多くのヒトループスの特徴を示し、（２）ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ９を標的とした陽性の検証結果が両疾患モデルに報告されているからである。
【０２２５】
ＳＬＥ疾患モデルにおけるＥＲ−８８８８４０の重要な結果は次のとおりである（図６および図７を参照）：
１）ＥＲ−８８８８４０は、プリスタンモデルにおいて複数の自己抗体特異性を抑制した。ＥＲ−８８８８４０はまた、プリスタン誘導性疾患の動物において、インターフェロンスコアに反映されているように、インターフェロンが制御する遺伝子の発現を用量依存的に有意に低減させた。
【０２２６】
結果の概要：
これらのデータは、ヒトループスの重要な態様に関わるプロセスについて説明される、化合物の緩和効果を示す。核酸を含有する免疫複合体は、樹状細胞による１型インターフェロンの産生を促進することができ、インターフェロンの存在、およびそれに次ぐインターフェロンが制御する遺伝子の発現を反映する「インターフェロンシグネチャー」は疾患重症度と結びついている。ＥＲ−８８８８４０は、プリスタンモデルにおいて、インターフェロンが誘導する遺伝子の上方制御を抑制した。ＥＲ−８８８８４０は、いくつかの自己抗体特異性の産生を制限した。これらの結果は、この化合物がヒト患者においてループスの症状および進行を制御する可能性を有することを示している。
【０２２７】
薬理学の材料および方法：
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ薬理学：
ヒトＥ−セレクチン遺伝子（アクセッション番号ＮＭ＿０００４５０）のプロモーターの塩基対−２２４１ｂｐから−２５４ｂｐを含有するプラスミドｐＧＬ３(Promega)に由来するＮＦ−κＢ転写因子誘導性Ｅ−セレクチン（ＥＬＡＭ−１）ルシフェラーゼレポーターを安定的に発現するように、ＨＥＫ−２９３細胞（ＡＴＣＣ）を改変した。次に、この細胞をヒトＴＬＲ４、ＴＬＲ７またはＴＬＲ９の全長ＯＲＦ  ｃＤＮＡを安定的かつ個別に発現するように引き続き改変した。ヒトＴＬＲ４  ｃＤＮＡ（アクセッション番号ＮＭ＿１３８５５４）をｐｃＤＮＡ  ３．０発現ベクター(Invitrogen)にクローニングした。ＴＬＲ４をトランスフェクトした細胞を、ヒトＭＤ−２補助受容体［ＭＤ−２  ｃＤＮＡ（アクセッション番号ＮＭ＿０１５３６４）をｐＥＦ−ＢＯＳベクターにクローニングした］を発現するようにさらに改変し、ＬＰＳ反応性を最適化するために、培地に１０ｎＭの可溶性ＣＤ１４(R&D Systems)を補充した。ヒトＴＬＲ９  ｃＤＮＡ（アクセッション番号ＮＭ＿０１７４４２）をpBluescript II KSベクター(Agilent)にクローニングした。ヒトＴＬＲ７  ｃＤＮＡ（アクセッション番号ＮＭ＿０１６５６２）をOriGeneから得た。ヒトＴＬＲ８（アクセッション番号ＮＭ＿１３８６３６）またはマウスＴＬＲ７（アクセッション番号ＮＭ＿１３３２１１）を安定的に発現するＨＥＫ−２９３細胞をInvivoGenから購入し、次いで、ｐＮｉＦｔｙ２（ＮＦ−κＢ）−ルシフェラーゼレポータープラスミド(InvivoGen)を安定的にトランスフェクトした。各細胞型を、３８４ウェルプレート中で、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含有するダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）に密度２．２２×１０５細胞／ｍｌでプレーティングし、３７℃、５％ＣＯ２で２日間インキュベートした。次いで、様々な濃度の拮抗剤化合物を添加した。次に、細胞をさらに３０分間インキュベートしてから、次のように適切なＴＬＲ作動薬を添加した（最終濃度を示す）：リポ多糖（ＬＰＳ；Sigma）を１０ｎｇ／ｍｌでＴＬＲ４に、ＣＬ０９７(InvivoGen)を３ｕｇ／ｍｌでヒトＴＬＲ７およびＴＬＲ８ならびにマウスＴＬＲ７に、ならびにＣｐＧ−２００６−２Ａ［配列：ＴＣＧＴＣＧＴＴＡＡＧＴＣＧＴＴＡＡＧＴＣＧＴＴ（配列番号：１）、ホスホロチオエート骨格を有し、Sigma-Aldrichにより合成］を０．６ｕＭでＴＬＲ９に。次いで、細胞を終夜インキュベートし、ＮＦ−κＢに依存するルシフェラーゼレポーター活性化を、SteadyGlo（登録商標）(Promega)またはSteadylite（商標）(Perkin Elmer)試薬を用いて、製造元推薦のプロトコルに従って発光を測定することにより、定量化した。
【０２２８】
ヒトＰＢＭＣ細胞ベースアッセイ。
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、健常ドナーから新鮮採取したヘパリン添加（１０ＵＳＰ単位／ｍｌ、Hospira、Lakeforest、IL）全血から、密度勾配によって単離した(Histopaque（登録商標）1077,Sigma、Inc.,St.Louis,MO)。簡単に説明すると、２５ｍｌの血液を、５０ｍｌコニカルチューブに入れ、１５ｍｌのＰＢＳ（Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋不含）で希釈し、脊髄穿刺針を使用して１２ｍｌのHistopaqueを底に入れた。チューブを１２００ｒｐｍ（３５０×ｇ）で４５分間遠心分離し、ＰＢＭＣをバフィーコートから採取した。次いで、細胞をＰＢＳで２回洗浄し、赤血球を５ｍｌの塩化アンモニウム溶液(IX Red Blood Cell Lysis Buffer, eBioscience)中に室温で５分間懸濁させることによって溶解した。ＰＢＳで最終洗浄してから、ＰＢＭＣをＬ−グルタミン(Invitrogen)を含むＲＰＭＩ−１６４０培地に最終濃度２×１０６／ｍｌで再懸濁させ、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ(Mediatech, Inc, Manassas VA)、１０％ウシ胎仔血清(HyClone,Logan,UT)およびペニシリン−ストレプトマイシン−グルタミン(Mediatech)を補充し、組織培養処理した９６ウェルプレート(Falcon)に１００ｕｌ／ウェル（２×１０５細胞／ウェル）でプレーティングした。
【０２２９】
１００％ＤＭＳＯに溶解し、段階希釈した拮抗剤化合物を、３通りで細胞に添加して、最終濃度０．１％ＤＭＳＯ（ｖ／ｖ）を得た。ＰＢＳに溶解し、段階希釈したヒドロキシクロロキン(Acros Organics)を、３通りで細胞に添加した。ＰＢＭＣを拮抗剤化合物またはＨＣＱとともに、３７℃、５％ＣＯ２で３０分間インキュベートしてから、様々なＴＬＲ作動薬試薬を、１００ｕｌ完全培地に、ウェル毎に以下のように添加した（最終濃度を示す）：Ｒ８４８（レシキモド；GLSynthesis, Worcester, MA）をｌｕＭでＴＬＲ７およびＴＬＲ８に、Ｐａｍ３ＣＳＫ４(InvivoGen)を５０ｎｇ／ｍｌでＴＬＲ１／２に、ＬＰＳ(Sigma)を１０ｎｇ／ｍｌでＴＬＲ４に、およびＣｐＧ−２２１６(InvivoGen)を５ｕｇ／ｍｌでＴＬＲ９に。ループス患者におけるＲＮＡを含有する自己抗体免疫複合体を模倣するＴＬＲ７／８作動薬を製造するために、ヒトＵ１  ｓｎＲＮＡステムループＩＶ［（配列：ＧＧＧＧＧＡＣＵＧＣＧＵ−ＵＣＧＣＧＣＵＵＵＣＣＣ（配列番号：２）、ホスホロチオエート骨格を有する］に由来する配列を有する２６−ｍｅｒ  ＲＮＡを合成した(Dharmacon, Inc., Lafayette, CO)。これは強力なＴＬＲ７およびＴＬＲ８作動薬であることが以前に示されている。このＲＮＡ分子を血清不含のＲＰＭＩに入れて２．５μＭまで希釈し、ＲＮＡとも交差反応するマウス抗ヒト一本鎖ＤＮＡモノクローナル抗体(MAB3034, Millipore, Inc., Billerica, MA)を、１：２５の希釈比または１ｕｇ／ｍｌにて添加した。得られた「ＲＮＡ−Ｉｇ」刺激剤を室温で１５〜３０分間インキュベートしてから、細胞に添加した。ＰＢＭＣを様々なＴＬＲ作動薬とともに、３７℃、５％ＣＯ２で２０時間インキュベートした。細胞培養上清を回収し、種々のヒトサイトカインのレベルを、標準的なＥＬＩＳＡ手順に示されているとおりに、製造元推薦のプロトコル(BD Biosciences, Inc., San Diego, CA)に従って評価した。結果を表４に示す。
【０２３０】
【表４】
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【０２３１】
マウス脾臓細胞ベースアッセイ。
ＣＯ２で安楽死させた雌のＢＡＬＢ／ｃマウス(Jackson Labs, Bar Harbor,ME)から脾臓を採取する。脾臓を４０μｍナイロンのセルストレーナーに通過させることによって、単個細胞懸濁液を得る。細胞を５０ｍｌのＰＢＳ(Mediatech, Inc., Manassas, VA)で２回洗浄し、赤血球を５ｍｌのＲＢＣ溶解緩衝液(eBioscience, Inc., San Diego, CA)中に室温で５分間溶解する。細胞をＰＢＳ中でさらに２回洗浄し、最終的に、補充されたＲＰＭＩ−１６４０中に２．５×１０６細胞／ｍｌで再懸濁させる。組織培養処理した９６ウェルプレート(Falcon)に、細胞を１００μｌ／ウェル（２．５×１０５細胞／ウェル）でプレーティングする。１００％ＤＭＳＯに溶解した化合物の段階希釈物を３通りで細胞に添加して、最終濃度０．１％ＤＭＳＯを得る。細胞を化合物とともに３７℃、５％ＣＯ２で３０分間インキュベートしてから、１００μｌ／ウェルの７４０ｎＭ  Ｒ８４８（レシキモド；GLSynthesis, Worcester, MA）を完全培地に添加して、最終濃度３７０ｎＭ  Ｒ８４８にする。細胞を３７℃、５％ＣＯ２で２０時間インキュベートする。培養上清を回収し、ＩＬ−６のレベルを、標準的なＥＬＩＳＡ手順により、製造元推薦のプロトコル(BD Biosciences, Inc., San Diego, CA)に従って評価する。
【０２３２】
ｉｎ  ｖｉｖｏ薬理学試験：
短期ｉｎ  ｖｉｖｏ（ＳＴＩＶ）アッセイ。
６〜８週齢の雌のＢＡＬＢ／ｃマウス(Jackson Labs, Bar Harbor, ME)に、０．５％メチル−セルロース水溶液(Sigma, St. Louis, MO)中に配合した拮抗剤化合物を含む２００ｕｌ体積を強制経口投与により投与した。その後の様々な時点で、マウスに１５ｕｇのＲ８４８（レシキモド；GLSynthesis, Worcester, MA）を含む１００ｕｌ体積を皮下（ｓ．ｃ．）注射して、ＴＬＲ７を刺激した。血漿を心穿刺によって採取し、次いで、ＴＬＲ７刺激後１．５時間でのＩＬ−６のレベルを、標準的なＥＬＩＳＡ手順により、製造元推薦のプロトコル(R&D Systems)に従って評価した。
【０２３３】
ループス疾患マウスモデル系。
雄のＢＸＳＢ−Ｙａａマウスおよび雌のＮＺＢＷＦ１／ＪマウスをJackson Labs(Bar Harbor, ME)から購入した。両者ともに自然ループス疾患が顕在している。雌のＤＢＡ／１マウスをHarlan Laboratories(Indianapolis, IN)から購入し、指定の週齢で、０．５ｍｌのプリスタン（２，６，１０，１４−テトラメチルペンタデカン；Sigma, St. Louis, MO）を腹腔内注射してループス疾患を化学的に誘導、または０．５ｍｌのＰＢＳを腹腔内注射して同週齢、非疾患の対照マウスを作製した。
【０２３４】
ＥＬＩＳＡによる自己抗体価の評価。
抗ｄｓＤＮＡ価、抗Ｓｍ／ｎＲＮＰ価、抗ＲｉｂｏＰ価および抗ヒストン価を標準的なＥＬＩＳＡ手法により評価した。簡単に説明すると、９６ウェルＥＩＡ／ＲＩＡ  ＥＬＩＳＡプレート(Corning)に、ＰＢＳ中に希釈した抗原１００ｕｌを、次のように室温で９０分間コーティングした（最終濃度を示す）：１０Ｕ／ｍｌ  Ｓｍ／ｎＲＮＰ複合体(Immunovision)、１０ｕｇ／ｍｌ仔ウシ胸腺ｄｓＤＮＡ(Sigma)、５Ｕ／ｍｌ  ＲｉｂｏＰ(Immunovision)および５ｕｇ／ｍｌヒストン(Immunovision)。プレートをＰＢＳ／０．０５％  Tween20（洗浄用緩衝液）で洗浄し、ＰＢＳ／１％ＢＳＡ（ブロッキング緩衝液）で４℃にて終夜ブロッキングした。プレートを洗浄し、ブロッキング緩衝液中に希釈したマウス血漿サンプル（モデルおよび抗原に依存して１：２５〜１：１０，０００の範囲）をウェル当たり１００ｕｌ体積でウェルに添加し、プレートを室温で９０分間インキュベートした。次いで、プレートを洗浄し、ＰＢＳ／１％ＢＳＡ／０．０５％  Tween中に１：５０，０００に希釈した１００ｕｌ抗マウス−ＩｇＧ−ＨＲＰＯ(Southern Biotech)を各ウェルに添加し、プレートを室温で９０分間インキュベートした。プレートを洗浄し、OptEIA TMB基質キット(BD Biosciences)由来の１：１混合の基質成分１００ｕｌをウェルに添加した。プレートを室温でインキュベートし、十分に発色してから、０．１８Ｍ硫酸溶液１００ｕｌを添加して反応を停止した。分光光度法により４５０ｎｍにてプレートを読み取った。
【０２３５】
蛋白尿の評価。
個々のマウスから手作業にて、または代謝ケージ１つ当たりマウス１〜２匹を１８時間ハウジングすることによって尿を採取し、尿中アルブミン／クレアチニン比（ＵＡＣＲ）を、腎機能の間接測定値として、各動物について測定した（ＵＡＣＲは尿１ｄＬ当たりアルブミンｍｇ／クレアチニンｇの比として計算）。尿サンプル中のアルブミンレベルは、コーティング抗体、および検出用のＨＲＰコンジュゲートで標識した二次抗体を含む抗マウスアルブミン抗体セット(Bethyl Labs)を使用する特注のサンドイッチＥＬＩＳＡプロトコルを使用して測定した。クレアチニン値は、市販のクレアチニンアッセイキット(Cayman)を使用して測定した。
【０２３６】
腎炎の組織学的評価。
腎臓を個々のマウスから採取し、１０％ホルマリン中に２４時間固定し、パラフィンに包埋し、Ｈ＆Ｅ染色した切片を作製して、盲検方式で組織病理学評価を行った。腎炎疾患スコアの特徴は次のとおりである：グレード０−正常範囲；グレード１−帯状の毛細血管壁肥厚；グレード２−細胞過形成、分節状化、半月体形成；グレード３−グレード２を参照、糸球体病変の重症度および程度（冒された糸球体の％）の増加；グレード４−硬化症；重度の糸球体疾患（非機能性器官）。
【０２３７】
全血中のインターフェロン遺伝子発現の評価。
ＩＦＮが制御する遺伝子の全血中の発現をｑＰＣＲによって測定した。簡単に説明すると、マウスを安楽死させ、血液を大静脈から採取し、RNAlater(Ambion, Austin TX)を含有するチューブに１００ｕｌを保存した。全ＲＮＡを、Mouse RiboPure Blood RNA Isolation Kit (Ambion)を使用して単離した。ＲＮＡ濃度を、NanoDrop ND-1000分光光度計(Thermo Scientific, Waltham MA)を使用して測定した。ファーストストランドｃＤＮＡを、Superscript（登録商標）VILO（商標）Master Mix (Life Technologies, Grand Island, NY)を使用して、１００ｎｇの全ＲＮＡから合成した。逆転写をしてから、ｃＤＮＡをヌクレアーゼ不含の水で希釈し、TaqMan（登録商標）Fast Advanced Master Mix(Applied Biosystems)と混合した。次いで、混合物を、Applied Biosystems製の特注TaqMan（登録商標）低密度アレイ（ＴＬＤＡ）に塗布し、ｑＰＣＲをABI 7900HT Fast Real-time PCR System (Applied Biosystems)で行った。生データをRQ Manager 1.2.1 (Applied Biosystems)を使用して収集し、GeneData Analyst 2.2ソフトウェア(GeneData)を使用して分析した。
【０２３８】
ＴＬＤＡパネルには、下の表７から選んだ４５種もの標的遺伝子および規準化のために３種のハウスキーピング遺伝子を含めた。ハウスキーピング遺伝子Ｈｐｒｔ１を、変動係数に基づく規準化のために選んだ。標的遺伝子については相対量を求め、これを使用して、腹腔内ＰＢＳ注射のみを受けた非疾患対照群に対する各疾患マウスの倍率変化を計算した。標準的なスチューデントのｔ−検定を行って、非疾患群（ＰＢＳ処置）とビヒクル処置疾患群（プリスタン処置）との間でどの標的遺伝子が有意に増加したかを判定し、それにより、疾患に制御される遺伝子セットを表示した。次に「ＩＦＮスコア」を、各マウスについて、ｔ−検定で同定した疾患に制御される全ての遺伝子の倍率変化の中央値として計算した。
【０２３９】
【表５】
0006483666.tif 000012
【０２４０】
【表６】
0006483666.tif 000013
【図１Ａ】
0006483666.tif 000015
【図１Ｂ】
0006483666.tif 000016
【図１Ｃ】
0006483666.tif 000017
【図１Ｄ】
0006483666.tif 000018
【図２Ａ】
0006483666.tif 000019
【図２Ｂ】
0006483666.tif 000020
【図２Ｃ】
0006483666.tif 000021
【図２Ｄ】
0006483666.tif 000022
【図２Ｅ】
0006483666.tif 000023
【図３Ａ】
0006483666.tif 000024
【図３ＡＡ】
0006483666.tif 000025
【図３Ｂ】
0006483666.tif 000026
【図３ＢＢ】
0006483666.tif 000027
【図３Ｃ】
0006483666.tif 000028
【図３Ｄ】
0006483666.tif 000029
【図３Ｅ】
0006483666.tif 000030
【図３Ｆ】
0006483666.tif 000031
【図３Ｇ】
0006483666.tif 000032
【図３Ｈ】
0006483666.tif 000033
【図３Ｉ】
0006483666.tif 000034
【図３Ｊ】
0006483666.tif 000035
【図３Ｋ】
0006483666.tif 000036
【図３Ｌ】
0006483666.tif 000037
【図３Ｍ】
0006483666.tif 000038
【図３Ｎ】
0006483666.tif 000039
【図３Ｏ】
0006483666.tif 000040
【図３Ｐ】
0006483666.tif 000041
【図３Ｑ】
0006483666.tif 000042
【図３Ｒ】
0006483666.tif 000043
【図３Ｓ】
0006483666.tif 000044
【図３Ｔ】
0006483666.tif 000045
【図３Ｕ】
0006483666.tif 000046
【図３Ｖ】
0006483666.tif 000047
【図３Ｗ】
0006483666.tif 000048
【図３Ｘ】
0006483666.tif 000049
【図３Ｙ】
0006483666.tif 000050
【図３Ｚ】
0006483666.tif 000051
【配列表】
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