(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
骨再生材料を製造するための方法であって、
ハイドロキシアパタイト及び有機物質を含有する骨材料を、抽出液と接触させる第１の接触ステップであって、前記有機物質及び場合によって前記骨材料から抽出された不純物を含有する第１の液相並びに前記ハイドロキシアパタイトを含有する第２の固体ハイドロキシアパタイト相を生じさせる上記ステップと、
前記液相を前記固体ハイドロキシアパタイト相から分離する第１の分離ステップと
を含み、
前記抽出液が、１５０℃から３００℃の間の温度、１５００ｋＰａから３５００ｋＰａの間の圧力にした水性抽出溶液であり、前記分離された固体ハイドロキシアパタイト相が、前記骨再生材料を形成することを特徴とする上記方法。
【請求項２】
乾燥固体ハイドロキシアパタイト相を得るために、前記固体ハイドロキシアパタイト相の追加的な乾燥ステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記水性抽出溶液が、水である又は強塩基を０．５から１Ｎの間の濃度、好ましくは０．６から０．９Ｎの間の濃度で含有する塩基性ｐＨの濃水溶液である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記第１の分離ステップの後であり且つ前記固体ハイドロキシアパタイト相の前記乾燥ステップの前に、前記固体ハイドロキシアパタイト相と塩基性ｐＨの希水溶液との、１５０℃から３００℃の間の温度及び５００ｋＰａから１０００ｋＰａの間の圧力での第２の接触ステップを含み、前記塩基性ｐＨの希水溶液が、強塩基を０．０５から０．４Ｎの間の濃度、好ましくは０．１から０．３Ｎの間の濃度で含有し、前記第２の接触ステップの後に、第２の液相と第２の固相との間の第２の分離ステップが続き、次いでこれを乾燥することを特徴とする、請求項２から３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記固体ハイドロキシアパタイト相を、乾燥させる前に、前もって水で洗浄する、請求項２から４までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記第１の接触ステップの前に、前記骨材料の脱脂及び脱肉ステップを含む、請求項１から５までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記乾燥ステップの後に、前記乾燥固体ハイドロキシアパタイト相の滅菌ステップを含むことを特徴とする、請求項２から６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記骨材料が、天然の動物起源のものである、請求項１から７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
天然起源の骨材料から得られ、前記骨材料のものと同一の結晶構造及び結晶形態を有する固体ハイドロキシアパタイト相を含有する骨再生材料を製造するための請求項１から８までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
製造される材料の有機物質の含量が１５０ｐｐｍ未満であり、前記有機物質が、１３０ｐｐｍ未満の含量のタンパク質を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記製造される材料が、哺乳動物、好ましくはヒトの欠損部位における骨形成、骨再生又は骨修復のための、インプラント又は人工骨として使用されることを意図する、請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１２】
請求項９〜１１のいずれか一項に記載の方法により骨再生材料を製造し、該骨再生材料を医療用デバイスに含有させて医療用デバイスを製造することを含む、医療用デバイスの製造方法。
【請求項１３】
製造される材料の有機物質の含量が１５０ｐｐｍ未満であり、前記有機物質が、１３０ｐｐｍ未満の含量のタンパク質を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記医療用デバイスが、哺乳動物、好ましくはヒトの欠損部位における骨形成、骨再生又は骨修復のための、インプラント又は人工骨として使用されることを意図する、請求項１２又は１３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ハイドロキシアパタイトを含有する骨再生材料を製造するための方法に関する。
【０００２】
このタイプの骨再生材料は、特に、修復外科又は美容外科の種々の分野における、骨の劣化の治療に使用される。
【背景技術】
【０００３】
ハイドロキシアパタイト（ヒドロキシアパタイト）は、骨伝導性を有するリン酸カルシウムであり、骨の主要な無機質成分を形成しており、それ故に、その使用は、骨再建手術又は骨修復手術に十分に適している。
【０００４】
この文脈で、骨の欠損部位又は劣化部位における骨再建を促進するために、ハイドロキシアパタイトを含有する多くの材料が、インプラント、特に歯科インプラントに現在使用されている。
【０００５】
これらの材料は、直接沈殿プロセス又はゾル−ゲルタイプのプロセスを使用する、リン酸及びカルシウム塩からの合成によって調製されるハイドロキシアパタイトを含有する人工材料を含む。
【０００６】
しかし、前述の合成方法では、ハイドロキシアパタイトが、自然状態の骨基質に見出される構造に類似した多孔性の間隙構造を有する、骨再生材料を得ることができない。
【０００７】
このために、現在、自然状態の骨材料のものと同一の結晶構造及び結晶形態を示すという利点を有する、天然起源のハイドロキシアパタイトの使用への関心が高まっている。
【０００８】
特に、プリオンなどのタンパク質、ペプチド及び脂質から形成される群からの少なくとも１つの成分を含む骨の有機物質をいったん取り除いた骨サンプルから誘導される、天然のハイドロキシアパタイトを使用することによって、その人工の類似体に比べてそれ自体をより良好に骨再生に導く基質を得ることができる。
【０００９】
骨再生材料は、例えば移植状態で、移植後にそれが身体に良好に組み込まれるように、有機物質のいかなる痕跡も取り除かれるべきであり、それが置かれている生物学的環境と、骨伝導によって生体適合及び相互作用することが是非とも必要である。
【００１０】
この状況の範囲内で、本発明は、骨再生材料を製造するための方法であって、
ハイドロキシアパタイト及び有機物質を含有する骨材料を、抽出液と接触させるステップであって、前記有機物質及び場合によって前記骨材料から抽出された不純物を含有する液相並びに前記ハイドロキシアパタイトを含有する固体ハイドロキシアパタイト相を生じさせる上記ステップと、
前記液相を前記固体ハイドロキシアパタイト相から分離するステップと
を含む上記方法に関する。
【００１１】
このタイプのプロセスは、例えば、米国特許第５４１７９７５号及び国際公開第９６／１２５０９号の文献から知られている。より具体的には、米国特許第５４１７９７５号文献は、よく知られている天然起源の骨再生材料であるＢｉｏ−Ｏｓｓ（登録商標）の調製を開示しており、国際公開第９６／１２５０９号文献は、骨伝導材料の調製を開示している。
【００１２】
天然の骨再生材料は、骨伝導性を向上させるほか、その生産によって、精肉業者及び食肉処理場から有機廃棄物を回収することもでき、その有機廃棄物は豊富な骨材料を有する低コストの源を形成している。
【００１３】
米国特許第５４１７９７５号のプロセスでは、骨材料を最初に脱脂し、次いで、第一級アミン又はアンモニアの加熱水溶液中、好ましくは８０から２００℃の間の温度に加熱した水溶液中に入れ、有機物質を分解及び可溶化して、好ましくは２０から６０℃の間の温度に加温した脱塩水中、有利には少なくとも１０ｃｍ／時の水流速で連続的にすすぐことによって、最終的に抽出する。
【００１４】
脱脂は、骨材料をトルエン又はメチルシクロヘキサンなどの有機溶媒中に浸し、８０から１２０℃の間の温度にて還流下で加熱することによって得られる。
【００１５】
米国特許第５４１７９７５号によると、骨材料と前記加熱水溶液との間の接触時間は、材料の粒径、第一級アミン又はアンモニア溶液の反応性及びこの水溶液が加熱される温度によって決まる。一般に、この時間は、２から２００時間の間である。例えば、直径１ｃｍの骨材料サンプルをエチレンジアミン水溶液中で１１８℃にて処理する場合、すすぎ後の有機物質の残存含量が１５０ｐｐｍ未満であるように、有機物質の満足な分解を得るには、少なくとも５０時間の処理時間を必要とする。
【００１６】
こうして処理された骨材料は、次いで、材料の重量が一定の値に安定するまで、２５０℃から６００℃の間の温度で風乾される。高純度の骨再生材料、すなわち有機物質の含量が１５０ｐｐｍ未満である骨再生材料を得るために、脱塩水を用いるすすぎステップは、５から２５日までの範囲の期間にわたって連続的に行わなければならない。
【００１７】
残念なことに、前記プロセスにはいくつかの欠点がある。第１に、それは有機溶媒を使用する処理を伴い、その残渣を処理後に再利用することができず、処理しなければならない。次に、このプロセスは、アミン浴中６０℃での５０時間を超える処理後、脱塩水を用いた連続流水中でのすすぎを、少なくとも５日間にわたって行うことが必要である。その上、処理されなければならない汚染有機生成物の使用を含む、非常に長時間のプロセス（少なくとも５日）は、明らかに、工業規模での前記プロセスが費用のかかる、償却することが難しいものであることを意味する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
本発明の目的は、望ましくない有機物質のいかなる痕跡も含まない骨再生材料のより速い製造を可能にする、実行することが簡単な方法であって、そのステップが環境に及ぼす負の影響が制限され、製造の副生成物が処理され易い上記方法を提供することによって、現況技術の不利点を克服することである。
【００１９】
加えて、本発明の目的は、すべてのステップを、ただ１つの反応器中で、工業規模で連続的に又は半連続的に行うことができる、骨再生材料を製造するための方法を提案することである。本発明の方法は、収率の面から、エネルギー消費の面から特に効率的であり、水及び水酸化ナトリウムなどの比較的低コストの試薬のみを使用することで、追加的に「環境保全の」方法、すなわち環境に優しい方法が利用可能になるため、この産業上の利用可能性は容易に得られる。
【００２０】
実際には、方法は、有機物質の含量が１５０ｐｐｍ未満である、本発明の方法を使用して得られる骨再生材料の製造を可能にしなければならない。
【００２１】
有利には、方法は、タンパク質を１３０ｐｐｍ未満の含量で含有し、無傷のタンパク質又はペプチド、特にプリオンを全く含まない骨再生材料の製造を可能にしなければならない。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
この問題を解決するために、本発明は、最初に上記に述べたような、前記抽出液が、１５０℃から３００℃の間の温度、１５００ｋＰａから３５００ｋＰａの間の圧力にした水性抽出液であり、前記分離された固体ハイドロキシアパタイト相が、前記骨再生材料を形成することを特徴とする方法を提供する。
【００２３】
驚いたことに、いわゆる「強化された」条件下、すなわち１５０℃から３００℃の間の温度及び１５００ｋＰａから３５００ｋＰａの間の圧力での、骨材料と水性抽出液との接触は、固相に存在すれば、ハイドロキシアパタイトの生体適合性を損ない、骨インプラントとして挿入された時に拒絶を起こす可能性が高まることになる、すべての望ましくない有機物質及び他の望ましくない不純物を液相に抽出することによって、骨材料を形成するハイドロキシアパタイトを排他的に含有する固体ハイドロキシアパタイト相の生成を可能にすることが観察された。強化された条件下での水の特性は、溶媒及び試薬の両方として作用するようなものである。本方法において使用される高温、すなわち１５０℃から３００℃の間の温度は、水の解離（よって、その反応性）を高め、あらゆる反応、特に加水分解を加速し、溶媒の粘度を顕著に減少させる効果を有する。この最後者の性質が有利であるのは、不溶性の多孔性固体を液体試薬で処理する場合に、固体基質における液体の拡散速度が、化学交換の効率及び速度を決定するためである。
【００２４】
この全く予期せぬ状況の範囲内で、本発明の温度及び圧力条件下で実施される抽出ステップ及びすすぎステップは、ほぼ２〜５時間程度の時間を必要とするのみであり、現況技術、特に、この時間がほとんど５０時間、すなわち１０倍高い値である米国特許第５４１７９７５号文献とは正反対であることが、本発明の一部として示されている。より具体的には、本発明によると、抽出ステップ自体は１時間未満と短く、これによってエネルギー消費が強く制限され、本発明の方法が、なおさら効率的で産業上利用可能なものになる。
【００２５】
加えて、温度及び圧力のこれらの条件によって、温度及び圧力の通常の条件下では水に不溶性であることが知られている有機化合物の可溶化が可能になる。ハイドロキシアパタイトは、これらの強化された条件下でも、水相に不溶なままである。
【００２６】
場合によって、前記乾燥ステップの前の、第１の接触ステップ及び前記分離ステップは、いくつかの連続的な時間の繰り返しである。
【００２７】
有利には、本発明の方法は、乾燥固体ハイドロキシアパタイト相を得るために、前記固体ハイドロキシアパタイト相の追加的な乾燥ステップをさらに含む。
【００２８】
有利には、前記固体ハイドロキシアパタイト相の重量は、本発明の方法を使用して、それが処理される前の前記骨材料の重量の５５から６５％の間、好ましくは５７から６２％の間の割合に相当する。
【００２９】
好ましくは、骨材料と水性抽出溶液との接触は、２２０から２５０℃の間の温度、有利には２４０℃未満の温度で行われる。
【００３０】
本方法は、これらの温度で最適な効率に達する、すなわち、本方法は、タンパク質含量が厳密に１３０ｐｐｍ未満である骨再生材料の製造を可能にし、より高い温度が、有機物質中に含有されるタンパク質及び有機物質の初期の加水分解残渣の、すなわち、抽出液で抽出することができず、存在すれば再生材料の生体適合性を損なう恐れのある不溶性固体有機残渣がハイドロキシアパタイト相に形成されるのを促進する物質の、過度に速い分解をもたらすことが、本発明の一部として事実上観察された。
【００３１】
或いは、骨材料と水性抽出溶液との接触は、２５００ｋＰａから３０００ｋＰａの間の圧力で実施される。
【００３２】
有利には、前記水性抽出溶液は、水である又は例えば、強塩基、好ましくはアルカリ金属の水酸化物を、０．５から１Ｎの間の濃度、好ましくは０．６から０．９Ｎの間の濃度で水に可溶化することから形成される、塩基性ｐＨを有する濃水溶液（concentrated aqueous solution）である。
【００３３】
塩基性ｐＨでは、一般に水にほとんど溶けない脂肪酸残渣などの有機物質の抽出が改善されることも観察された。
【００３４】
加えて、７を超えるｐＨでは、ハイドロキシアパタイトの溶解度は非常に低いままである。それ故に、抽出ステップを塩基性ｐＨで行うことによって、抽出液中のハイドロキシアパタイトの不溶性を保証することができる。
【００３５】
本発明の方法の１つの特定の実施形態では、前記乾燥ステップは、１００℃から３００℃の間の温度での、好ましくは１２０℃での、乾熱中におけるオーブン乾燥ステップである。
【００３６】
好ましくは、前記第１の分離ステップの後であり且つ前記固体ハイドロキシアパタイト相の前記乾燥ステップの前に、本発明の方法は、前記固体ハイドロキシアパタイト相と塩基性ｐＨの希水溶液（dilute aqueous solution）との、１５０℃から３００℃の間の温度での、好ましくは１５０℃での及び９９ｋＰａから１０００ｋＰａの間の圧力での、好ましくは５００ｋＰａでの第２の接触ステップを含み、前記第２の接触ステップの後に、第２の液相と第２の固相との間の第２の分離ステップが続き、その後に乾燥する。
【００３７】
有利には、前記塩基性ｐＨの希水相は、強塩基、好ましくはアルカリ金属の水酸化物を、０．０５から０．４Ｎの間の濃度、好ましくは０．１から０．３Ｎの間の濃度で水に可溶化することによって形成される。
【００３８】
場合によって、前記固体ハイドロキシアパタイト相を、乾燥させる前に、前もって水ですすぐ。
【００３９】
１つの好ましい実施形態では、本発明の方法は、前記抽出液との第１の接触ステップの前に、前記骨材料の脱脂（degreasing）及び脱肉（defleshing）ステップを含むことを特徴とする。
【００４０】
好ましくは、この脱脂及び脱肉ステップは、前記骨材料を、好ましくは塩基性ｐＨの水溶液と、１００℃を超える温度で、好ましくは１００から２００℃の間の温度で接触させることによって行われる。
【００４１】
好ましくは、脱脂及び脱肉ステップの後に、骨材料から肉の残渣、骨髄及び軟骨をこすり落とすためのステップが続く。
【００４２】
有利には、本発明の方法は、前記乾燥ステップの後に、前記乾燥固体ハイドロキシアパタイト相の滅菌ステップを含む。
【００４３】
本発明の方法の１つの特定の実施形態では、前記滅菌ステップは、例えば、前記乾燥ハイドロキシアパタイト相を、気密フルオロポリマーバッグ中、１２０℃に１４時間加熱することによって行われる。好ましくは、乾燥温度は１００℃から３００℃の間であり、５から２０時間の間、好ましくは１０から１５時間の間で行われる。
【００４４】
好ましくは前記骨材料は、天然の動物起源のもの、例えば哺乳動物又は卵生動物由来のものであり、ウシ、ヒツジ、ウマ又はブタ起源のもの及び、特にこれらの動物の骨端又は骨幹端から抽出された同様のものであり得る。
【００４５】
一般に、骨材料は精肉業者の廃棄物に由来し、これは、本発明の方法が、この豊富に入手可能な廃棄物を回収するという利点を有することを意味する。
【００４６】
本発明の組成物の他の実施形態は、添付の特許請求の範囲に示されている。
【００４７】
本発明はまた、天然起源の骨材料から得られ、前記骨材料のものと同一の結晶構造及び結晶形態を有する固体ハイドロキシアパタイト相を含む、本発明の方法を使用して直接得られる骨再生材料に関する。
【００４８】
有利には、前記固相は、天然起源の骨材料から得られるハイドロキシアパタイトを単独で含む。
【００４９】
好ましくは、前記骨材料は、ウシ又は仔ウシの骨端又は骨幹端に由来する。
【００５０】
１つの特定の実施形態では、骨再生材料は、有機物質を１５０ｐｐｍ未満の含量で含み、前記有機物質は、タンパク質を１３０ｐｐｍ未満の含量で含有する。
【００５１】
有利には、前記材料は、哺乳動物、好ましくはヒトの欠損部位における骨形成、骨再生又は骨修復のための、インプラント又は人工骨として使用されることを意図する。
【００５２】
本発明によると、骨再生材料は、Ｂｉｏ−Ｏｓｓ（登録商標）のものに類似した結晶構造及び結晶形態を有することが追加的に示されている。
【００５３】
それ故に、Ｂｉｏ−Ｏｓｓ（登録商標）と同様に、本発明の方法を使用して得られる再生材料は、直径５０μｍ以上、好ましくは５０から１００μｍの間の孔を有するマクロ多孔性材料である。
【００５４】
本発明の方法の他の実施形態は、添付の特許請求の範囲に示されている。
【００５５】
本発明はまた、本発明の骨再生材料を含有する医療用デバイスに関する。
【００５６】
本発明の医療用デバイスの他の実施形態は、添付の特許請求の範囲に示されている。
【００５７】
本発明の他の特徴及び利点は、非限定的であり、以下に示す比較例を参照する、以下に示す説明から明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】本発明の方法を使用して得られた再生材料の赤外スペクトル（ＩＲ）（ａ）及びＢｉｏ−Ｏｓｓ（登録商標）の赤外スペクトル（ＩＲ）（ｂ）の重ね合わせを説明する図である。
【図２】本発明の方法を使用して得られた再生材料のＩＲスペクトル（ａ）及び本発明の方法での処理前の骨材料のＩＲスペクトル（ｂ）の重ね合わせを説明する図である。
【図３】本発明の方法を使用して得られた再生材料のＩＲスペクトル（ａ）、本発明の方法での処理前の骨材料のＩＲスペクトル（ｂ）及び参照タンパク質：ゼインのＩＲスペクトル（ｃ）の重ね合わせを説明する図である。
【図４】走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）によって、０から１００μｍまでの範囲のスケールで得られた、Ｂｉｏ−Ｏｓｓ（登録商標）の構造の画像を示す図である。
【図５】本発明の方法を用いて、ウシ骨端から得られた骨再生材料の、０から５０μｍまでの範囲のスケール及び０から１００μｍまでの範囲のスケールで撮影された２つのＳＥＭ画像を示す図である。
【図６】本発明の方法を使用して、仔ウシ骨幹端から得られた骨再生材料の、０から１００μｍまでの範囲のスケールで撮影された２つのＳＥＭ画像を示す図である。
【図７】本発明の方法を使用して、ウシ骨幹端から得られた骨再生材料の、０から５０μｍまでの範囲のスケールで撮影されたＳＥＭ画像を示す図である。
【図８】あるプロセスを使用し、それによって骨材料を８００℃でか焼したウシ骨端から得られた骨再生材料の、０から１００μｍまでの範囲のスケールで撮影された２つのＳＥＭ画像を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００５９】
以下の例の目的は、本発明の非限定的な説明を提供することである。
【００６０】
以下の例では、骨材料を水中で長時間煮沸することにより前もって脱脂及び脱肉した後、肉の残渣、骨髄及び軟骨をこすって除去しておいた。
【００６１】
（例１）
ハイドロキシアパタイトを含有する脱脂及び脱肉済み骨材料５０ｇ、脱塩水４００ｍｌ及び強塩基（ＮａＯＨ）１０ｇを、撹拌機のないオートクレーブ反応器中で混合し、電気ジャケットを使用する外部加熱によって、２２０℃±２℃の温度にした。反応器中の圧力を２５００ｋＰａにした。温度及び圧力のこれらの条件を１時間維持した。
【００６２】
反応器を周囲温度に冷却し、大気圧に減圧し、均質な液相を反応器からデカンテーションすることによって除去して、反応器中に固相のみを残し、これに、脱塩水４００ｍｌ中ＮａＯＨ５ｇの溶液を加えた。
【００６３】
次いで、オートクレーブ反応器を、大気圧（約１００ｋＰａ）下で１５０℃の温度にして１時間維持した。
【００６４】
反応器を再び周囲温度に冷却し、反応器の内容物をデカンテーションし、固相である固体ハイドロキシアパタイト相を脱塩水ですすぎ、その重量が定常値あたりに安定するまで、１２０℃の温度でオーブン乾燥した。
【００６５】
固体ハイドロキシアパタイト相が骨再生材料を形成し、それについてのＩＲスペクトルを図１に示し、Ｂｉｏ−Ｏｓｓ（登録商標）のものと比較した。ＩＲスペクトルは同一であり、本発明の方法を用いて得られた骨再生材料がＢｉｏ−Ｏｓｓ（登録商標）と全く同じものであることを示している。
【００６６】
図２は、本発明を用いて得られた再生材料のＩＲスペクトル（ａ）及び本発明の方法での処理前の骨材料のＩＲスペクトル（ｂ）の重ね合わせを説明している。
【００６７】
この重ね合わせは、本発明の再生材料のＩＲスペクトルの構成に対する、骨材料中のタンパク質の寄与を示す。この寄与は、３５００から３０００ｃｍ−１の間及び１７５０から１５００ｃｍ−１の間の非常に強い吸収帯を主に特徴とし、これは、本発明の方法を用いて得られた骨再生材料にはもはや見られないものである。
【００６８】
図３は、脱肉脱脂済みの骨材料のＩＲスペクトルと参照タンパク質：ゼインのＩＲスペクトルとの間の比較を説明している。３５００から３０００ｃｍ−１の間及び１７５０から１５００ｃｍ−１の間に位置する電磁スペクトルの領域において、特定のピーク間に一致が見られることは、その脱脂及び脱肉後に、骨材料中のタンパク質がほとんど存在しないことを確証している。
【００６９】
図４は、Ｂｉｏ−Ｏｓｓ（登録商標）の構造の、そのマクロ多孔性構造を確認するＳＥＭ画像である。この図を読むと、この材料が２種のタイプの孔：タンパク質の抽出に相当する直径約５０μｍの孔及び骨材料の構造に固有の直径約１００μｍの孔を含む構造を有していることが明らかに確認できる。
【００７０】
図５から図７までは、それぞれウシ骨端（図５）、仔ウシ骨幹端（図６）及びウシ骨幹端（図７）から得られた骨再生材料の構造のＳＥＭ画像である。
【００７１】
例１に従って調製された種々の骨再生材料の中で、Ｂｉｏ−Ｏｓｓ（登録商標）のものに類似したマクロ多孔性構造を示すのは、仔ウシ骨幹端から得られた材料である。
【００７２】
（例２）
ハイドロキシアパタイトを含有する脱脂及び脱肉済み骨材料１００ｇ、脱塩水４００ｍｌ及びＮａＯＨ１０ｇを、撹拌機のないオートクレーブ反応器中で混合し、電気ジャケットを使用する外部加熱によって、２３０℃±２℃の温度にした。反応器中の圧力を２５００ｋＰａにした。温度及び圧力のこれらの条件を２時間維持した。
【００７３】
反応器を周囲温度に冷却し、大気圧に減圧し、均質な液相を反応器からデカンテーションすることによって除去して、反応器中に固相のみを残し、これに、脱塩水４００ｍｌ中ＮａＯＨ３ｇの溶液を加えた。
【００７４】
次いで、オートクレーブ反応器を、大気圧（約１００ｋＰａ）下で１５０℃の温度にして２時間維持した。
【００７５】
反応器を再び周囲温度に冷却し、反応器の内容物をデカンテーションし、固体ハイドロキシアパタイト相を脱塩水で５回すすぎ、次いで、その重量が定常値あたりに安定するまで、１２０℃の温度でオーブン乾燥した。
【００７６】
こうして得られた固体ハイドロキシアパタイト相を粉砕し、１．０〜０．２５ｍｍ及び０．２５〜０．０８ｍｍの２つの画分にふるい分けし、次いで、気密フルオロポリマーバッグ中、１２０℃で１４時間滅菌した。
【００７７】
（例３）
ハイドロキシアパタイトを含有する脱脂及び脱肉済みウシ骨端１００ｇ、脱塩水４００ｍｌ及びＮａＯＨ１５ｇを、撹拌機のないオートクレーブ反応器中で混合し、電気ジャケットを使用する外部加熱によって、２３０℃±２℃の温度にした。反応器中の圧力を２５００ｋＰａにした。温度及び圧力のこれらの条件を２時間維持した。
【００７８】
反応器を周囲温度に冷却し、大気圧に減圧し、第１の均質な液相を反応器からデカンテーションすることによって除去して、反応器中に固相のみを残し、これを脱塩水ですすいだ。
【００７９】
固相を脱塩水４００ｍｌ及びＮａＯＨ１０ｇと再び混合し、さらなる時間をかけて、上述の処理に供した。
【００８０】
第２の均質な液相を反応器からデカンテーションすることによって除去して、反応器中に固相のみを残し、これに、脱塩水４００ｍｌ中ＮａＯＨ１ｇの溶液を加えた。オートクレーブ反応器を、大気圧（約１００ｋＰａ）下で１５０℃の温度にして２時間維持した。
【００８１】
反応器を再び周囲温度に冷却し、反応器の内容物をデカンテーションし、固体ハイドロキシアパタイト相を脱塩水で５回すすぎ、次いで、その重量が定常値あたりに安定するまで、１２０℃の温度でオーブン乾燥した。
【００８２】
こうして得られた固体ハイドロキシアパタイト相を粉砕し、１．０〜０．２５ｍｍで、単一画分にふるい分けした。
【００８３】
（例４）
骨材料１００ｇを、マッフル炉中、８００℃±２℃の温度にて１時間、材料が完全に白化するまでか焼した。
【００８４】
冷却後、こうして得られた固体ハイドロキシアパタイト相を粉砕し、１．０〜０．２５ｍｍ及び０．２５〜０．０８ｍｍの２つの画分にふるい分けし、次いで、気密フルオロポリマーバッグ中、１２０℃で１４時間滅菌した。
【００８５】
図８は、例４のプロトコールに従って得られた固相のＳＥＭ画像下の巨視的構造を説明している。この図に示されているように、骨材料を８００℃でか焼することによって、Ｂｉｏ−Ｏｓｓ（登録商標）のものとは異なる構造を有する固体ハイドロキシアパタイト相が生成される。その根拠として、構造の多孔性が減少し、加えて２０μｍ程度の大きさのひび割れが同時に発生しており、これが原因で、ハイドロキシアパタイト格子が崩壊し始めていることが確認できるためである。
【００８６】
この例の結果は、ハイドロキシアパタイトの高温での処理が、形態を悪化させ、よって、骨再生材料の骨伝導性を悪化させることを示す傾向がある。
【００８７】
８００℃までの温度の上昇は、ハイドロキシアパタイト構造の孔の量の減少、恐らく焼結の開始による減少を示す。
【００８８】
（例５）
本例に記載されている実施形態では、前述の例に記載されている実施形態に反して、最初に仔ウシ骨端１．７Ｋｇの清浄を、２つの連続的な煮沸ステップで実施した。これは、水３リットル中にＮａＯＨ５ｇを溶かして形成した塩基性水溶液中で２時間実施し、塩基性水溶液は、各ステップで新たに形成した。
【００８９】
各煮沸ステップの後、材料をこすって、肉の残渣、骨髄及び軟骨を除去した。
【００９０】
こうして処理された骨材料を、５ｍｍの厚さに切断した。この材料１００ｇ、脱塩水４００ｍｌ及びＮａＯＨ１０ｇを、撹拌機のないオートクレーブ反応器中で混合し、電気ジャケットを使用する外部加熱によって、２３０℃±２℃の温度にした。反応器中の圧力を２５００ｋＰａにした。温度及び圧力のこれらの条件を２時間維持した。
【００９１】
反応器を５０℃の温度に冷却し、大気圧に減圧し、均質な液相を反応器からデカンテーションすることによって除去して、反応器中に固相のみを残し、これに、脱塩水４００ｍｌ中ＮａＯＨ３ｇの溶液を加えた。
【００９２】
次いで、オートクレーブ反応器を、大気圧（約１００ｋＰａ）下で１５０℃の温度にして２時間維持した。
【００９３】
反応器を再び周囲温度に冷却し、反応器の内容物をデカンテーションし、固体ハイドロキシアパタイト相を脱塩水で５回すすぎ、次いで、その重量が定常値あたりに安定するまで、１２０℃の温度でオーブン乾燥した。
【００９４】
こうして得られた固体ハイドロキシアパタイト相を粉砕し、２．０〜１．０ｍｍ、１．０〜０．２５ｍｍ及び０．２５ｍｍ未満の３つの画分にふるい分けした。
【００９５】
本発明は、上記の実施形態に限定されるものと決して解釈されるべきではなく、それに対して多くの改変が、添付の特許請求の範囲内で行われ得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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