(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
HCMV感染症を治療するための医薬品又はヘルスケア製品を調製するための八N-酪酸20(R)-ジンセノサイドrg3の使用。
【請求項２】
請求項１の使用であって、医薬品が八N-酪酸20(R)-ジンセノサイドrg3及び薬学的に許容される担体から構成されることを特徴とする使用。
【請求項３】
請求項１又は２の使用であって、医薬品が錠剤、カプセル剤、丸剤、粉剤、顆粒剤、シロップ剤、液剤、乳剤、注射剤、スプレー剤、エアロゾール剤、ゲル剤、クリーム剤、チンキ剤、パップ剤、ゴム硬膏（rubber emplastrum）又は硬膏（emplastrum）の形態で存在することを特徴とする使用。
【請求項４】
八N-酪酸20(R)-ジンセノサイドrg3を有効成分とするHCMV感染症治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は薬品の分野に属し、ヒトのサイトメガロウイルス感染症治療のための医薬品又は健康食品に関し、特に、サイトメガロウイルス感染症治療のための医薬品又は健康食品における朝鮮人参(伝統中国医薬)抽出物及びその誘導体の応用に関する。
【背景技術】
【０００２】
細胞封入体ウイルスであるとして知られるヒトサイトメガロウイルス(HCMV)は、感染した細胞が膨張すること、及び巨大な核内封入体を有することのために名付けられている。HCMVはβヘルペスウイルス亜科に属し、直径が約200nmで、最も巨大な動物ウイルスの一つで、ウイルスDNAを含む64nmの内核を有し、110nmの20面体によって外側が覆われている。統合された粒子は、エンベロープ、その中でBJは少なくとも25-30ウイルス粒子にエンコードされた蛋白質又は糖蛋白質からなる、によって覆われている。HCMVは、235-240kbの長さ、150-160*103kDaの分子量、直鎖状二本鎖DNAからなるゲノムを有し、DNAウイルスに属する。HCMVはロング(L)及びショート(S)の組成物又は断片からなる。2つの組成物の相補結合における異なる又は逆方向のために、そのDNAの分子構造は4つの同質の異性体を有している。広く分布しているので、他の動物は感染でき、軽度の症候性感染から主に生殖泌尿系、中枢神経系及び肝疾患に基づく重篤な状態又は死までの多様な種類の組織感染を引き起す。
【０００３】
HCMV遺伝子は、3つの感染細胞特異的、すなわち、前初期蛋白質領域、初期蛋白質領域及び後期蛋白質領域をエンコードするポリペプチド断片を構造的に含み、これら3種類の蛋白質は免疫原性及び時制を有する。HCMVの転写-翻訳は、HCMV及び宿主細胞によって調節及び管理される。前初期遺伝子及び前記遺伝子の発現は、プロモーターによって調節及び管理され、これは一般的に急性感染として検出される。後期遺伝子の転写及び翻訳は、IE及びE遺伝子並びにこれらの蛋白質によって調節及び管理され、検出後にウイルスの潜伏期間を示す。ウイルスの組み立ての完成は、HCMV感染後期の結果である。HCMVゲノムは、細胞形質転換を含む3形態変換領域、すなわち、mtrI、mtrII及びmtrIIIを備えている。mtrIは、ADl69株ゲノムUのHindIII消化物の左端のE断片に位置して、588bpの長さを有し、NIH3T3及び初期ラット胚細胞の形質転換に使用できる。mtrIIは、HCMVのTowne株由来DNAのXbal/BamHI消化物のEM断片に位置して、980bpの長さを有し、NIH3T3及びrat-2細胞を形質転換できる。HCMVのADl69及びTdCMvTanaka株は、それぞれの株に対応して、2つのプロモーター、P1及びP2を含む領域を備える。そして、全ての形質転換細胞及び腫瘍細胞は、mtrIIの存在によって形成される。mtrIIIはXbal/BamHI断片上に位置し、分子量72kDの前初期蛋白質の主要部分をコードするために使用できる。その蛋白質は、ウイルスの転写促進及び自己制御と関連する。そして、mtrIIIは形質転換細胞には存在しない。  
【０００４】
細胞レベルの観点からすると、感染は3種類に分けられる。すなわち、a.毒素源性感染、b.潜伏性感染、及びc.細胞形質転換又は潜伏的発癌性感染である。試験管内試験からのHCMVは、ヒト線維細胞に接種されたのち、ウイルス抗原を有し、形質転換細胞の特徴を有する細胞株を生じることができる。接種された細胞から、HCMV-DNAの特定の断片が抽出される。そして、一部の細胞は、細胞染色体DNAにDNAが融合されて形質転換し、無胸腺のヌードマウスに接種することによって腫瘍を生じることができる。劉朝奇（Chaoqi Liu）らは、HCMV IEの接種によってHPV不死化ヒト子宮頸部上皮細胞株を樹立し、その結果、HCMVは細胞染色体に融合したのち、HPV16と連係して子宮頸部上皮細胞の悪質な形質転換を促進し、ヌードマウスに腫瘍を形成できることを示し、これはHCMVと子宮頸癌との間の密接な関係を説明する。魯徳銀（Deyin Lu）らは、紫外線を使用して不活化したHCMVを週3回8週間マウスの子宮頸部に接種する。その結果は、HCMV群が27.8%(23/83)の子宮頸部前癌病変率及び20.5%(17/83)の癌発生率を有するということ、を示す。
【０００５】
サイトメガロウイルス(CMV)は、典型的なヘルペスウイルス型の形態をしており、DNA構造はHSVと類似しているものの、HSVのそれよりも5%大きい。そのウイルスは高い宿主又は培養細胞特異性を有する。HCMVは、ヒトのみ感染させることができ、ヒト線維芽細胞中でのみ大量増殖できる。ウイルスは、細胞培養中でゆっくり増殖し、長い複製周期を有し、30-40日後の初代分離の間に細胞変性効果を示せる。CMVは、細胞膨張及び細胞円形化、核拡大及び核の中でハロー（Halo）によって囲まれた細胞封入体を特徴とする。生物の細胞性免疫機能は、CMV感染の発生及び成長において、重要な役目を果たす。細胞性免疫欠損者は、長期間に渡って重篤なCMV感染を受け、細胞傷害性T細胞の活性低下、NM細胞の機能低下等ように、細胞性免疫がさらに抑制される。生物は、CMVの初感染後に特異的抗体及び細胞傷害性Tリンパ球を生成して、NM細胞を活性化する。抗体は、CMVの複製を制限する能力と同じ株の再感染に対する程度の抵抗力を備えているが、内因性潜伏ウイルスの励起及び異なる株のCMVによる外因性感染には抵抗できない。しかし、これらの細胞は、特異的細胞毒性Tリンパ球及び抗体-依存細胞の毒性を通じて、最大の抗ウイルス効果を発揮する。
【０００６】
HCMV感染は人混みの中ではありふれており、様々な疾患を引き起すことができる。成人感染は免疫不全又は免疫抑制状態でしばしば引き起される。具体的には、HCMV感染は、臓器移植及び骨髄移植の間に免疫抑制剤治療を受けた後や放射線療法及び化学療法を受けた悪性腫瘍患者で、頻繁かつ非常に簡単に引き起される。AIDS患者は、HCMV感染の罹病率が極めて高い。HCMV感染は、普遍性及び深刻な結果を生じる可能性があるため、世界的に価値が非常に高く、HCMV感染に関するのウイルス学と同様に、その疫学的基礎研究、診断方法、治療法及び予防方法は非常に重要な意義がある。化学療法又は放射線療法を受けた後、腫瘍患者の免疫機能は健常者のそれよりも顕著に低い。潜伏HCMVは、再活性化して重篤な感染を引き起こし易いので、腫瘍患者の生存率及び生活の質に影響する重要な感染因子である。
【０００７】
CMV感染症は、CMVによって引き起される先天的又は後天的な感染である。CMVによって引き起される先天的又は後天的な感染において、CMVは、ヘルペスウイルス群に属する二本鎖DNAウイルスであり、他のヘルペスウイルスと形態が類似しており、宿主又は組織培養細胞による明らかな種特異性を有する。HCMVはヒト胚線維芽細胞でのみ分離及び培養できる。
【０００８】
HCMV感染は人混みの中でとてもよく広がっている。中国における成人の感染率は95%以上に達している。成人感染は免疫不全又は免疫抑制状態でしばしば引き起される。具体的には、HCMV感染は、臓器移植及び骨髄移植の間に免疫抑制剤治療を受けた後や放射線療法及び化学療法を受けた悪性腫瘍患者で、頻繁かつ非常に簡単に引き起される。感染者の殆どは臨床症状を示さないが、重篤な疾患が特定条件下で多臓器及び多器官に影響を与えることによって生じさせられる。ウイルスは、多核白血球及びリンパ球と同様に、肺、肝臓、腎臓、唾液腺、乳腺及び他の分泌腺を侵すことができ、唾液、母乳、汗、血液、尿、精液、子宮分泌物及び他の部分から長期的又は間欠的に排出され、口腔、生殖管、胎盤、輸血又は臓器移植及び他の経路によって一般的に広がる。
【０００９】
(I)先天的な感染:妊娠した母体のHCMV感染は、胎盤を通じて胎児を侵し、先天的な感染及び少数の早産児、妊娠中絶、死産又は出生後死亡を引き起す。小児患者は、黄疸、肝脾腫、血小板減少性紫斑病及び溶血性貧血を患う。生き残った小児は、恒久的な知的障害、神経及び筋肉の運動障害、難聴及び脈絡網膜炎等が一般的にいつまでも残る。
【００１０】
(II)周産期感染:HCMVは尿路及び妊産婦の子宮頸部を通じて排出されたのち、乳児は出産中に産道を介して感染し、その多くは軽度の症状を有するか又は臨床症状を伴わない潜伏感染であり、その内の何人かは軽度の呼吸器障害又は肝機能障害を有する。
【００１１】
(III)小児及び成人感染:潜伏感染は、授乳、キス、性的接触、輸血等によって一般的に引き起され、これは異好性抗体の陰性単核球症も時々引き起す。単球及びリンパ球に潜伏したウイルスは、免疫抑制療法を受けること、臓器移植、腫瘍及び妊娠中の他の因子によって活性化され、単核球症、肝炎、間質性肺炎、網膜炎及び脳炎等を引き起す。
【００１２】
(IV)細胞形質転換及び癌化可能性:紫外線によって不活化されたHCMVによって、齧歯動物胚の線維芽細胞が形質転換される。子宮頸癌、結腸癌、前立腺癌及びカポジ肉腫のような特定の腫瘍中で、HCMVはDNAの発見率が高く、抗体価は健常者よりも高い。腫瘍から樹立した細胞株においてウイルス粒子が発見され、そのウイルスはHCMVと同様に潜在的発癌可能性を有することを示す。化学療法又は放射線療法を受けた後、腫瘍患者の免疫機能は健常者のそれよりも顕著に低い。潜伏したHCMVは再活性化して重篤な感染を引き起こし易いので、腫瘍患者の生存率及び生活の質に影響する重要な感染因子である。
【００１３】
HCMVに感染した患者の多くは潜伏感染の状態にあるので、HCMVが生体内で複製能力を備えていても、無症状の感染は頻繁に避けられる。現時点では、有効で安全な抗HCMV医薬品は入手できず、HCMV感染症の治療は未だ症候性感染の間の対処療法に限られている。ガンシクロビルは、骨髄抑制及び他の毒性又は副作用のため、症候性感染に慎重に唯一使用できる。ガンシクロビルDHPGは、HCMVの拡散を防ぐ効果を備えており、もし高力価の抗HCMV免疫グロブリンとともに使用すれば、骨髄移植に伴うHCMV肺炎合併症による死亡率を低減できる。ホスカルネットナトリウムは、ガンシクロビルDHPGに耐えるHCMV感染のために選択でき、HCMVの拡散を恒久的に減らせるものの、その効果はガンシクロビルDHPGよりも低い。国外で開発されたHCMV生ウイルスワクチンは抗体産生を誘導できるが、ワクチンの発癌性を除去する問題を解決する必要がある。
【００１４】
人参(Panax ginseng C. A. Mey.、すなわち、朝鮮人参) は伝統中国医薬は高価な医薬原料である。ジンセノサイドは、朝鮮人参の主な有効成分であり、広く研究され使用されている。ジンセノサイドの中でも、朝鮮人参抽出物及びその誘導体は最も人目を引く。朝鮮人参の主な有効成分であるので、安全なジンセノサイドは臨床に応用される抗腫瘍経口剤に調製されており、注射剤として深く研究されている。
【００１５】
進化した分離及び精製技術の選択によって、発明者らは、HCMV感染の治療のための有効成分として利用する朝鮮人参抽出物及びその誘導体を、現代科学研究を利用して大量に、朝鮮人参医薬原料から抽出し、HCMV感染の治療のための朝鮮人参抽出物、その誘導体及びそれと関連する医薬超製品における薬力学的及び薬理学的な研究を行う。その結果は、朝鮮人参抽出物及びその誘導体モノマーが、明確な薬理学的効果、強いHCMV感染症治療効果、低い毒性又は副作用及び高い安全性を有し、効果的で低毒性のHCMV感染治療薬を提供できること、を証明した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
HCMV感染症治療における前記の技術的課題を解決するため、本発明の目的の一つは、八N-酪酸20(R)-ジンセノサイドrg3のヒトサイトメガロウイルス(HCMV)感染症治療のための薬剤又はヘルスケア製品の調製における新規使用を提供することである。八N-酪酸20(R)-ジンセノサイドrg3は、HCMV感染症治療の能力及び効果がある。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
前記課題を解決するため、本発明は、HCMV感染症を治療するための医薬品又はヘルスケア製品を調製するための八N-酪酸20(R)-ジンセノサイドrg3の応用を提供する。すなわち、以下では、朝鮮人参抽出物、ジンセノサイド又はジンセノサイド誘導体について開示しているが、そのうち、本発明の対象は、「八N-酪酸20(R)-ジンセノサイドrg3」の応用である。
【００１８】
ここで、HCMV感染によって引き起される疾患は、心臓血管及び脳血管の疾患、腫瘍、熱傷、AIDS、臓器移植又は周産期等の治療においてHCMV感染によって生じる疾患を含む。
【００１９】
HCMV感染症の治療に有効な天然活性化合物（natural active component）の探索において、発明者らは、朝鮮人参の化学的構成成分である朝鮮人参抽出物、ジンセノサイド及びジンセノサイド誘導体が強いHCMV感染症治療効果を有すること、を見出した。
【００２０】
ここで、医薬品は、朝鮮人参抽出物、ジンセノサイド又はジンセノサイド誘導体及び薬学的に許容される担体からなる。
【００２１】
具体的には、朝鮮人参抽出物は、朝鮮人参アルコール抽出物及び朝鮮人参水抽出物から選択される。ジンセノサイドは朝鮮人参根の全ジンセノサイド、パナキサジオール型（panaxdiol type）ジンセノサイド、及び20(R)-ジンセノサイドrg3である。そして、ジンセノサイド誘導体は20(R)-ジンセノサイドrg3誘導体である。
【００２２】
特に、ジンセノサイドrg3誘導体は、八N-酪酸20(R)-ジンセノサイドrg3（20(R)-ginsenoside Rg3 8-N-butyrate）、その分子式はC86H144O21であり、構造式は式(I)に示される。
【００２３】
【化１】
0006457661.tif 000002
【００２４】
ここで、朝鮮人参アルコール抽出物は以下の工程に沿って調製される。
１）朝鮮人参の薬草を抽出溶媒と均一に混ぜ合わせ、浸漬処理を行う。
２）朝鮮人参と抽出溶媒の浸漬混合物を加熱抽出し、濾過して抽出液を収集する。
３）収集した抽出液をエキスに濃縮して、エキスを乾燥し、朝鮮人参アルコール抽出物を得る。
【００２５】
具体的には、工程１）における浸漬処理時間は30-60分であり、30分が好ましい。
特に、朝鮮人参医薬原料と抽出溶媒との重量比は1:8-12であり、1:10が好ましい。
本発明の朝鮮人参医薬原料は、朝鮮人参の薬草とも呼ばれる。
具体的には、抽出溶媒は体積%が≧50%のエタノール溶液であり、50-75%エタノール溶液が好ましい。
【００２６】
ここで、工程２）における加熱抽出回数は2-3回であり、3回が好ましい。
具体的には、各加熱抽出処理において、朝鮮人参医薬原料と抽出溶媒との重量比は1:8-12であり、1:8が好ましい。各加熱抽出処理の温度は60-80℃であり、70℃が好ましい。そして、加熱抽出時間は0.5-2時間であり、1時間が好ましい。
【００２７】
ここで、工程３）において、濃縮処理の濃縮温度は65-85℃であり、80℃が好ましい。濃縮エキスの相対密度は1.05-1.15であり、1.1が好ましい。そして、乾燥温度は70-90℃であり、85℃が好ましい。
【００２８】
具体的には、朝鮮人参アルコール抽出物におけるジンセノサイドの全含有量は、2-5%(検出方法は国家規格GB/T19506-2009の付録Bに従う。)である。
【００２９】
ここで、朝鮮人参水抽出物は以下の工程に沿って調製される。
１）朝鮮人参の薬草を水に浸漬する。
２）朝鮮人参の薬草及び水の浸漬混合物を煮出抽出し、濾過して抽出液を収集する。
３）収集した抽出液をエキスに濃縮して、エキスを乾燥し、朝鮮人参水抽出物を得る。
【００３０】
具体的には、工程１）において、浸漬処理時間は30-60分であり、30分が好ましい。
特に、朝鮮人参と水との重量比は1:8-12であり、1:10が好ましい。
【００３１】
ここで、工程２）における煮出抽出回数は2-3回であり、3回が好ましい。
具体的には、各煮出抽出処理において、朝鮮人参医薬原料と水との重量比は1:8-12であり、1:8が好ましい。煮出抽出温度は90-100℃であり、90-95℃が好ましい。そして、煮出抽出時間は0.5-2時間であり、1時間が好ましい。
【００３２】
ここで、工程３）における濃縮温度は70-95℃であり、80℃が好ましい。エキスの相対密度は1.05-1.15であり、1.1が好ましい。そして、乾燥温度は70-95℃であり、85℃が好ましい。
【００３３】
具体的には、朝鮮人参水抽出物の全ジンセノサイド含有量は2-5%(検出方法は国家規格GB/ T19506-2009の付録Bに従う。)である。
【００３４】
ここで、朝鮮人参根の全ジンセノサイドは以下の工程に沿って調製される。
１）朝鮮人参医薬原料と抽出溶媒とを均一に混ぜ合わせ、浸漬処理を行う。
２）朝鮮人参と抽出溶媒の浸漬混合物を加熱抽出し、濾過して抽出液を収集する。
３）朝鮮人参抽出液にマイクロ多孔質樹脂（macroporous resin）分離をして、溶離液を収集及び混合し、朝鮮人参-樹脂カラム溶離液を得る。
４）朝鮮人参-樹脂カラム溶離液を濃縮及び乾燥して、朝鮮人参根の全ジンセノサイドを得る。
【００３５】
具体的には、工程１）の浸漬工程の時間は30-60分であり、30分が好ましい。
特に、朝鮮人参医薬原料と抽出溶媒との重量比は1:8-12であり、1:10が好ましい。
具体的には、抽出溶媒は体積%が≧50%のエタノール溶液であり、50-75%エタノール溶液が好ましい。
【００３６】
ここで、工程２）の加熱抽出の回数は2-3回であり、3回が好ましい。
具体的には、各加熱抽出処理において、朝鮮人参医薬原料と抽出溶媒との重量比は1:8-12であり、1:8が好ましい。各加熱抽出時の温度は60-80℃であり、70℃が好ましい。そして、加熱抽出時間は0.5-2時間であり、1時間が好ましい。
【００３７】
具体的には、本発明の方法は、さらに、工程２）で収集された朝鮮人参抽出物を濃縮して朝鮮人参濃縮物を得たのち、マイクロ多孔質樹脂カラム分離を行ってもよい。
【００３８】
特に、朝鮮人参濃縮物が、1ml当たり、1-3.5gの朝鮮人参粗医薬原料を含み、これは1-3.5g朝鮮人参粗医薬原料/mlの朝鮮人参濃縮物に相当する、であり、2.5g朝鮮人参粗医薬原料/mlである朝鮮人参濃縮物が好ましい。
【００３９】
ここで、工程３）のマイクロ多孔質樹脂カラムクロマトグラフィーは下記の連続する工程を含む。すなわち、３Ａ）朝鮮人参抽出液をマイクロ多孔質樹脂カラムに加え、水を溶離液としてマイクロ多孔質樹脂カラムを溶離する。及び３Ｂ）体積%が30%-50%（v/v）のエタノール溶液を溶離液としてマイクロ多孔質樹脂カラムを溶離して、溶離の後にマイクロ多孔質樹脂カラムからの液体を収集し、朝鮮人参樹脂溶離液を得る。
【００４０】
具体的には、マイクロ多孔質樹脂カラムクロマトグラフィーの間、朝鮮人参抽出物中の朝鮮人参重量とマイクロ多孔質樹脂の体積との比は1:0.8-2.5であり、1:1が好ましい。
特に、マイクロ多孔質樹脂分離の間、マイクロ多孔質樹脂カラムのカラム直径と樹脂のカラム高さとの比は1:5-10であり、1:5-7が好ましく、1:5.5-5.9がより好ましい。
【００４１】
ここで、工程３）におけるマイクロ多孔質吸着樹脂はX-5,AB-8,NK-2,NKA-2,NK-9,D3520,D101及びWLDの内の一つから選択され、D101が好ましい。
【００４２】
具体的には、工程３Ａ）で使用された水の重量とマイクロ多孔質樹脂カラムのカラム体積との比は2-4:1であり、4:1が好ましい。工程３Ｂ）において、エタノール溶液(30%-50%,v/v)の重量とマイクロ多孔質樹脂の体積との比は2-8:1であり、4-8:1が好ましく、8:1がより好ましい。
【００４３】
特に、工程３Ｂ）において、溶離液として利用されるエタノール溶液の体積%濃度50%である。
【００４４】
ここで、工程４）の濃縮温度は65-90℃であり、80℃が好ましい。そして、乾燥温度は75-95℃であり、85℃が好ましい。
【００４５】
具体的には、朝鮮人参根の全ジンセノサイド含有量は20-50%(検出方法は国家規格GB/T19506-2009の付録Bに従う。)である。
【００４６】
ここで、パナキサジオール型ジンセノサイドは以下の工程に沿って調製される。
１）朝鮮人参医薬原料と抽出溶媒とを均一に混ぜ合わせ、浸漬処理を行って浸漬混合物を得る。
２）浸漬混合物を加熱抽出し、濾過して抽出液を収集する。
３）朝鮮人参抽出液に第１マイクロ多孔質樹脂クロマトグラフィー分離を行って、溶離液を収集して混合し、第１朝鮮人参-樹脂カラム溶離液を得る。
４）第１朝鮮人参-樹脂カラム溶離液に、第２マイクロ多孔質樹脂クロマトグラフィー分離を行って、溶離液を収集して混合し、第２朝鮮人参-樹脂カラム溶離液を得る。
５）第２朝鮮人参-樹脂カラム溶離液を濃縮及び乾燥して、パナキサジオール型ジンセノサイドを得る。
【００４７】
具体的には、工程１）における浸漬時間は30-60分であり、30分が好ましい。
特に、朝鮮人参医薬原料と抽出溶媒との重量比は1:8-12であり、1:10が好ましい。
【００４８】
具体的には、抽出溶媒は体積%が≧50%であるエタノール溶液であり、50-75%のエタノール溶液が好ましい。
【００４９】
ここで、工程２）における加熱抽出回数は2-3回であり、3回が好ましい。
具体的には、各加熱抽出処理において、朝鮮人参医薬原料と抽出溶媒との重量比は1:8-12であり、1:8が好ましい。各回の加熱抽出温度は60-80℃であり、70℃が好ましい。そして、加熱抽出時間は0.5-2時間であり、1時間が好ましい。
【００５０】
具体的には、本方法は工程２Ａ）をさらに含む。これは、工程２）で収集された朝鮮人参抽出液を濃縮して朝鮮人参濃縮液を得て、マイクロ多孔質樹脂カラム分離を行う工程である。
【００５１】
特に、朝鮮人参濃縮液は、1mlあたり、1-3.5gの朝鮮人参粗医薬原料を含み、これは1-3.5g朝鮮人参粗医薬原料/mlの朝鮮人参濃縮液に等しい、であり、2.5g朝鮮人参粗医薬原料/mlの朝鮮人参濃縮液が好ましい。
【００５２】
ここで、工程３）における第１マイクロ多孔質樹脂カラムクロマトグラフィーは下記の連続する工程を含む。すなわち、３Ａ）朝鮮人参抽出液をマイクロ多孔質樹脂カラムに加えたのち、溶離液である水で溶離する。そして、３Ｂ）30%-50%（v/v）のエタノール溶液を溶離液としてマイクロ多孔質樹脂カラムを溶離し、溶離後のマイクロ多孔質樹脂カラムからの液体を収集し、第１朝鮮人参-樹脂カラム溶離液を得る。
【００５３】
具体的には、マイクロ多孔質樹脂カラムクロマトグラフィーにおいて、朝鮮人参抽出液中の朝鮮人参の重量とマイクロ多孔質樹脂の体積との比は1:0.8-2.5であり、1:1が好ましい。
【００５４】
特に、マイクロ多孔質樹脂分離において、マイクロ多孔質樹脂カラムのカラム直径と樹脂のカラム高さとの比は1:5-10であり、1:5-7が好ましく、1:5.5-5.9がより好ましい。
【００５５】
ここで、工程３）におけるマイクロ多孔質吸着樹脂は、X-5,AB-8,NK-2,NKA-2,NK-9,D3520,D101及びWLDの内の一つから選択され、D101が好ましい。
【００５６】
具体的には、工程３Ａ）において使用される水の量とマイクロ多孔質樹脂カラムのカラム体積との比は2-4:1であり、4:1が好ましい。工程３Ｂ）において、エタノール溶液(30%-50%,v/v)とマイクロ多孔質樹脂カラムのカラム体積との比は2-8:1であり、4-8:1が好ましく、8:1がより好ましい。
【００５７】
特に、工程３Ｂ）において、溶離液として使用されるエタノール溶液の体積%濃度は50%である。
【００５８】
具体的には、本方法は、さらに、工程３）で収集された第１朝鮮人参-樹脂カラム溶離液を濃縮し、第１朝鮮人参-樹脂濃縮液を得たのち、第２マイクロ多孔質樹脂クロマトグラフィー分離を行ってもよい。
【００５９】
特に、第１朝鮮人参-樹脂濃縮液は、1mlあたり、3.5-6gの朝鮮人参粗医薬原料を含み、これは3.5-6g朝鮮人参粗医薬原料/mlの朝鮮人参濃縮液に等しい、であり、5.0g朝鮮人参粗医薬原料/mlの朝鮮人参濃縮液が好ましい。
【００６０】
具体的には、工程４）における第２マイクロ多孔質樹脂カラムクロマトグラフィーにおいて、以下の連続した工程を含む。すなわち、４Ａ）第１朝鮮人参-樹脂カラム溶離液をマイクロ多孔質樹脂カラムに加えたのち、溶離液であるエタノール溶液(50-60%,v/v)で溶離する。及び４Ｂ）溶離液であるエタノール溶液(70-80%,v/v)で溶離し、溶離後のマイクロ多孔質樹脂カラムからの液体を収集し、第２朝鮮人参-樹脂カラム溶離液を得る。
【００６１】
具体的には、工程４）の第２マイクロ多孔質樹脂カラムクロマトグラフィーにおいて、第１朝鮮人参-樹脂カラム溶離液中の朝鮮人参の重量と多孔質カラムの体積との比は、1:0.8-2.5であり、1:1が好ましい。
【００６２】
特に、マイクロ多孔質樹脂分離において、マイクロ多孔質樹脂カラムのカラム直径と樹脂のカラム高さとの比は1:5-10であり、1:5-7が好ましく、1:5.5-5.9がより好ましい。
【００６３】
ここで、工程４）におけるマイクロ多孔質吸着樹脂は、HPD-200,D203,XAD-4及びHPD-100の内の一つから選択され、HPD-100が好ましい。
【００６４】
具体的には、工程４Ａ）におけるエタノール溶液(50-60%,v/v)の重量とマイクロ多孔質樹脂カラムのカラム体積の比は2-4:1であり、4:1が好ましい。そして、工程４Ｂ）におけるエタノール溶液(70-80%,v/v)の重量とマイクロ多孔質樹脂カラムのカラム体積の比は2-8:1であり、4-8:1が好ましく、8:1がより好ましい。
【００６５】
ここで、工程５）における濃縮温度は65-95℃であり、80℃が好ましい。そして、乾燥処理の温度は70-95℃であり、85℃が好ましい。
【００６６】
具体的には、パナキサジオール型ジンセノサイドにおけるパナキサジオールサポニン（Panaxadiol Saponin,PDS)の全含有量は、30-70%(検出方法：検出は国家規格 GB/T19506-2009の付録Bに記載の方法に従う。)である。
【００６７】
ここで、20(R)-ジンセノサイドrg3の含有量は1%-98%であり、30-80%が好ましく、60%がより好ましい。
【００６８】
具体的には、20(R)-ジンセノサイドrg3の含有量は、≧1%であり、≧30%が好ましく、≧60%がより好ましく、≧80%がさらに好ましく、≧98%がこれよりも好ましい。
【００６９】
ここで、20(R)-ジンセノサイドrg3誘導体の含有量は、1%-98%であり、30-80%が好ましく、60%がより好ましい。
【００７０】
具体的には、20(R)-ジンセノサイドrg3誘導体の含有量は、≧1%であり、≧30%が好ましく、≧60%がより好ましく、≧80%がより好ましく、≧98%がこれよりも好ましい。
【００７１】
ここで、朝鮮人参アルコール抽出物の全ジンセノサイド含有量は2-5%である。朝鮮人参水抽出物の全ジンセノサイド含有量は2-5%である。朝鮮人参根の全ジンセノサイド含有量は20-50%である。パナキサジオール型ジンセノサイドのパナキサジオールサポニン含有量は30-70%である。
【００７２】
具体的には、薬学的に許容される担体は、目的を達成するために薬物の非活性成分として働くものであると、健康管理の専門家には一般的に考えられる。薬学的に許容される担体の全体像は、例えば「Handbook of Pharmaceutical excipients, 2nd Edition, edited by A. Wade and P. J. Weller, published by American Pharmaceutical Association, Washington 及びPharmaceutical Press, London, 1994.」などの参考文献に記載されている。
【００７３】
具体的には、担体は、澱粉及び水のような賦形剤、ステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤、微結晶性セルロースのような崩壊剤、ラクトースのような増量剤、アルファ化澱粉及びデキストリンのような結合剤、甘味料、抗酸化剤、防腐剤、香味料、香料などを含む。
【００７４】
ここで、医薬品は、錠剤、カプセル剤、丸剤、粉剤、顆粒剤、シロップ剤、液剤、乳剤、注射剤、スプレー剤、エアロゾール剤、ゲル剤、クリーム剤、チンキ剤、パップ剤、ゴム硬膏（rubber emplastrum）又は硬膏（emplastrum）の形態で存在する。
【００７５】
本発明は、また、朝鮮人参抽出物、ジンセノサイド又はジンセノサイド誘導体を含むHCMV感染症の治療のための医薬品又はヘルスケア製品を提供する。
【００７６】
ここで、朝鮮人参抽出物は朝鮮人参アルコール抽出物及び朝鮮人参水抽出物から選ばれる。ジンセノサイドは朝鮮人参根の全ジンセノサイド、パナキサジオール型ジンセノサイド及び20(R)-ジンセノサイドrg3である。そして、ジンセノサイド誘導体は20(R)-ジンセノサイドrg3誘導体である。
【００７７】
具体的には、ジンセノサイドrg3誘導体は八N-酪酸20(R)-ジンセノサイドRg3である。
ここで20(R)-ジンセノサイドrg3の含有量は1%-98%であり、30-80%が好ましく、60%がより好ましい。
【００７８】
具体的には、20(R)-ジンセノサイドrg3の含有量は≧1%であり、≧30%が好ましく、≧60%がより好ましく、≧80%がさらに好ましく、≧98%がこれらより好ましい。
【００７９】
ここで、20(R)-ジンセノサイドrg3誘導体の含有量は1%-98%であり、30-80%が好ましく、60%がより好ましい。
【００８０】
具体的には、20(R)-ジンセノサイドrg3誘導体の含有量は≧1%であり、≧30%が好ましく、≧60%がより好ましく、≧60%がさらに好ましく、≧98%がこれらより好ましい。
【００８１】
ここで、朝鮮人参アルコール抽出物の全ジンセノサイド含有量は2-5%である。朝鮮人参水抽出物の全ジンセノサイド含有量は2-5%である。朝鮮人参根の全ジンセノサイド含有量は20-50%である。そして、パナキサジオール型ジンセノサイドのパナキサジオールサポニン含有量は30-70%である。
【００８２】
具体的には、朝鮮人参抽出物、ジンセノサイド又はジンセノサイド誘導体の重量と医薬品又はヘルスケア製品の全重量との比は0.01-10:100であり、0.1-10:100が好ましく、1-10:100がより好ましい。
【００８３】
具体的には、医薬品又はヘルスケア製品は、山豆根(Radix Sophorae Tonkinensis)抽出物、蒼耳子（Fructus xanthii）抽出物、半枝蓮（Herba Scutellariae barbatae）抽出物、苦参（Radix Sophorae flavescentis）抽出物、 蒲公英（Herba taraxaci）抽出物、金銀花（Flos lonicerae）抽出物、生姜（Zingiber officinale Rosc.）抽出物、葡萄種子（Grape seed）抽出物、石榴種子（Pomegranate seed）抽出物、ビタミンC及びその誘導体又はビタミンE及びその誘導体の内の一つ又はそれ以上を含む。
【００８４】
薬物は、この技術分野で一般的に知られている方法によって、錠剤、カプセル剤、丸剤、粉剤、顆粒剤、シロップ剤、液剤、乳剤、注射剤、スプレー剤、エアロゾール剤、ゲル剤、クリーム剤、パップ剤、ゴム硬膏（rubber emplastrum）又はパッチ剤のような異なる医薬品に調製される。
【００８５】
本発明は、HCMV感染症の治療方法、これは朝鮮人参抽出物、ジンセノサイド又はジンセノサイド誘導体の医薬品を患者に治療効果のある量投与すること、治療効果のある用量は0.6-12mg/kg/dであり、1-6mg/kg/dが好ましく、1.5-3mg/kg/dがより好ましい、も提供する。
【００８６】
別段の指示がない限り、ここで使用される「治療有効量」の語は、効果を生じるために必要な薬物の量のことである。「治療有効量」は、調整可能及び可変であり、投与経路、調製方法の特徴、受容者の体重、年齢及びその他の状態、並びに治療される疾患の特質及び重篤度等を考慮したうえで、これらに応じて医療担当者によって最終的には決定される。
【発明の効果】
【００８７】
従来技術と比較すると、本発明は次のような明確な利点がある。
１．本発明は、朝鮮人参抽出物、ジンセノサイド又はジンセノサイド誘導体の新規医療的価値、HCMV感染関連疾患の治療に使用されること、を開発している。関連疾患は、心臓血管及び脳血管の疾患、臓器移植、周産期、腫瘍、熱傷、AIDS及び他の疾患の治療における患者のHCMV感染、特に、臓器移植及び骨髄移植の間になされた免疫抑制剤治療を受けた後に免疫不全又は免疫抑制状態でのHCMV感染、及び放射線療法及び化学療法を受けている悪性腫瘍患者を含む。それに加えて、朝鮮人参抽出物、ジンセノサイド又はジンセノサイド誘導体は、HCMV感染の治療のための医薬品又は健康食品の調製に使用され、朝鮮人参医薬原料に新しい応用分野を開発する。
【００８８】
２．本発明の連続した実験は、朝鮮人参抽出物、ジンセノサイド又はジンセノサイド誘導体がHCMV感染症の予防及び治療に対して明らかな効果を備えていること、を証明する。
【００８９】
３．本発明の朝鮮人参抽出物、ジンセノサイド又はジンセノサイド誘導体は、強い薬理学的効果、HCMV感染症の治療に顕著な効果、効き目が速く、毒性又は副作用が小さく、高い安全性と優れた医薬的可能性（medicinal prospect）とを備えており、長期間使用される。
【００９０】
４．本発明の製品は、豊富で安価な資源を有し、安全に治療に使用でき、調製処理が単純で用量が少量ですみ、様々な形態に調製でき、簡単に使用できるので、容易に大衆化できる。
【００９１】
５．本発明において、朝鮮人参抽出物、ジンセノサイド又はジンセノサイド誘導体はHCMV感染の治療のための医薬品又は健康食品の調製に使用され、朝鮮人参抽出物、ジンセノサイド又はジンセノサイド誘導体は他の有効成分(例えば、山豆根抽出物、蒼耳子抽出物、半枝蓮抽出物、苦参抽出物、蒲公英抽出物、金銀花抽出物、生姜抽出物、葡萄種子抽出物、石榴種子抽出物、ビタミンC及びその誘導体又はビタミンE及びその誘導体の内の一つ又はそれ以上)と組み合わされることができ、HCMV感染の治療のための調合薬に調製される。
【発明を実施するための形態】
【００９２】
本発明の利点は、以下の特定の実施例によりさらに説明される。これらの実施例は単に本発明の例示のためのものであり、これらは本発明の範囲を限定する意図はない。この技術分野の専門家によって、本発明の技術的解決方法の細部及び形状の改良又は変更は、本発明の概念及び使用範囲を逸脱しないのであればなされてもよい、と理解されるべきである。ただ、これら全ての改良又は変更は本発明の範囲に含まれる。
【００９３】
実施例１  朝鮮人参アルコール抽出物の調製
１．第１抽出
朝鮮人参(300g)及び体積%が70%(v/v)であるエタノール溶液(3000g)が、中国伝統薬の多機能抽出タンクに加えられた。30分間浸漬したのち、多機能抽出タンクを稼働させて加熱し、朝鮮人参医薬原料の第１加熱抽出した。第１加熱処理においては、70℃で1時間定温抽出して、濾過し、第１抽出液及び第１朝鮮人参残留物を得る、ここで朝鮮人参と抽出溶媒(エタノール溶液)との重量比は1:10である。
【００９４】
本発明において、朝鮮人参と抽出溶媒の重量比(1:10)に加えて、1:8-12の他のすべての比は本発明に適している。30分の浸漬時間に加えて、≧30分の他の全ての浸漬時間は本発明に適しており、30-60分が好ましい。エタノール溶液(70%,v/v)に加えて、体積%濃度が≧50%の他のエタノール溶液が本発明に適しており、体積%濃度が50-75%のエタノール溶液及び無水エタノールが好ましい。そして、60-80℃の抽出温度及び0.5-2時間の抽出時間が本発明に適している。
【００９５】
２．第２抽出
エタノール溶液(70%,v/v)を第１朝鮮人参残留物に加え、混合物を加熱し、朝鮮人参医薬原料に70℃で1時間第２加熱抽出したのち、濾過して、第２抽出液及び第２朝鮮人参残留物を得る、ここで朝鮮人参と抽出溶媒との重量比は1:10である。
【００９６】
３．第３抽出
エタノール溶液(70%,v/v)を第２医薬残留物に加え、混合物を加熱し、朝鮮人参医薬原料に70℃で1時間第３加熱抽出したのち、濾過して、第３抽出液を得る、ここで朝鮮人参と抽出溶媒との重量比は1:10である。
【００９７】
本発明の実施例において、70%体積濃度のエタノール溶液に加え、体積%濃度が≧50%の他の全てのエタノール溶液が本発明に適しており、50-75%濃度のエタノール溶液及び無水エタノールが好ましい。抽出温度は60-80℃が本発明に適している。全ての加熱抽出時間は0.5-2時間が本発明に適している。
【００９８】
本発明の実施例において、朝鮮人参アルコール抽出物の調製工程における加熱抽出回数は3回、全ての抽出回数は2-3回が、本発明に適している。
【００９９】
４．濃縮及び乾燥
濾過後の第１、第２、第３抽出液を混ぜ合わせ、全抽出液をロータリーエバポレーターに入れ、その後80℃で蒸発させることにより濃縮し、相対密度が1:1のエキスを得て、その後、エキスを一定重量になるまで85℃のオーブンで乾燥させて、朝鮮人参アルコール抽出物を得る。
【０１００】
朝鮮人参アルコール抽出物は茶色がかった黄色い粉末であり独特の匂いを有し、エタノールに溶解する。国家規格に従って測定された朝鮮人参アルコール抽出物の全ジンセノサイド含有量(長白山脈由来の朝鮮人参、産物の地理的表示、GB/T19506-2009の付録Bに記載の方法で得られる。) は3%である。
【０１０１】
本発明の朝鮮人参アルコール抽出物の濃縮処理において、濃縮温度は65-85℃及び濃縮エキスの相対密度は1.05-1.15が本発明に適している。乾燥温度は70-90℃が本発明に適している。本発明の方法により調製された朝鮮人参アルコール抽出物の全ジンセノサイド含有量は2-5%である。
【０１０２】
実施例２  朝鮮人参水抽出物の調製
１．浸漬処理
粉砕された朝鮮人参(300g)及び抽出溶媒である水道水(3000g)を、中国伝統薬の多機能抽出タンクに入れて、均一に混合して浸漬する。朝鮮人参と水との重量比は1:10である。
【０１０３】
本発明における朝鮮人参水抽出の調製の間、≧30分の全ての浸漬時間が本発明に適しており、30-60分が好ましい。そして、朝鮮人参と水との他の全ての重量比は、1:10に加えて、例えば1:8-12が、本発明に適している。
【０１０４】
２．第１抽出
30分間浸漬したのち、朝鮮人参医薬原料に第１煮出抽出を行うために多機能抽出タンクを稼働させ、95℃で1時間抽出し、濾過して、第１抽出液及び第１朝鮮人参残留物を得る。
【０１０５】
３．第２抽出
水道水を第１朝鮮人参残留物に加え、混合物を加熱し、90℃で1時間第２煮出抽出したのち、濾過して、第２抽出液及び第２朝鮮人参残留物を得る、ここで朝鮮人参と抽出溶媒との重量比は1:10である。
【０１０６】
４．第３抽出
水道水を第２朝鮮人参残留物に加え、混合物を加熱し、90℃で1時間第３煮出抽出したのち、濾過して、第３抽出液を得る、ここで朝鮮人参と抽出溶媒との重量比は1:10である。
【０１０７】
本発明の実施例において、朝鮮人参水抽出物の第１、第２及び第３処理における他の全ての朝鮮人参医薬原料と抽出溶媒水との重量比は、1:10に加えて、例えば1:8-12が本発明に適している。全ての抽出温度は90-100℃が本発明に適しており、90-95℃が好ましい。そして、全ての加熱抽出時間は0.5-2時間が本発明に適しており、1時間が好ましい。
【０１０８】
本発明の実施例において、朝鮮人参水抽出の調製工程における加熱抽出回数は3回、全ての抽出回数は2-3回が、本発明に適している。
【０１０９】
５．濃縮及び乾燥
3回の濾過後の第１、第２、第３抽出液を混ぜ合わせ、ロータリーエバポレーターに入れ、その後80℃で蒸発させることにより濃縮し、相対密度が1:1のエキスを得て、エキスを一定重量になるまで85℃のオーブンで乾燥させて朝鮮人参水抽出物を得る。
【０１１０】
朝鮮人参水抽出は茶色がかった黄色い粉末であり、独特の匂いと高い水溶性を有している。国家規格(GB/T19506-2009の付録B)にしたがって測定された朝鮮人参水抽出物の全ジンセノサイド含有量は2%である。
【０１１１】
本発明の朝鮮人参水抽出物の濃縮において、濃縮温度は70-95℃及び濃縮エキスの相対密度は1.05-1.15が本発明に適している。全ての乾燥温度は70-95℃が本発明に適している。本発明の方法により調製された朝鮮人参水抽出物の全ジンセノサイド含有量は2-5%である。
【０１１２】
実施例３  朝鮮人参根の全ジンセノサイドの調製
１．第１抽出
実施例１と同じ。
【０１１３】
２．第２抽出
実施例１と同じ。
【０１１４】
３．第３抽出
実施例１と同じ。
【０１１５】
４．濃縮
3回の濾過によって得られた第１、第２及び第３抽出液を混ぜ合わせ、混合物をロータリーエバポレーターに入れ、混合物を80℃で蒸発させることにより濃縮して、朝鮮人参濃縮液(120ml)、これは2.5g粗薬(朝鮮人参原料)/mlの朝鮮人参溶液と等しい、を得る。
【０１１６】
本発明の濃縮の間、他の朝鮮人参濃縮液は、1mlあたり2.5gの粗薬である朝鮮人参濃縮液のほか、1mlあたり1-3.5gの粗薬(すなわち、1-3.5gの粗薬/ml)が、本発明に適している。
【０１１７】
５．マイクロ多孔質樹脂カラムクロマトグラフィー
分離のために朝鮮人参濃縮液をマイクロ多孔質樹脂カラムに加え、ここでマイクロ多孔質吸着樹脂はD101マイクロ多孔質吸着樹脂である。また、樹脂カラム中の樹脂の体積(300ml)と朝鮮人参（乾燥重量）の重量の比は1:1である(すなわち、朝鮮人参の乾燥重量が1kgのとき、マイクロ多孔質樹脂の体積は1Lである。また、医薬原料の乾燥重量が1gのとき、マイクロ多孔質樹脂の体積は1mlである。)。濃縮された上清が樹脂カラムに完全に流入したのち、カラム体積の4倍の体積の水で溶離して、溶離液を廃棄する。カラム体積の8倍の体積のエタノール溶液(50%,v/v)で溶離して、溶離液を収集し、朝鮮人参-マイクロ多孔質樹脂溶離液を得る。
【０１１８】
朝鮮人参濃縮液のマイクロ多孔質樹脂カラムクロマトグラフィー処理において、朝鮮人参抽出液の朝鮮人参(粗薬)の重量とマイクロ多孔質樹脂の体積との比は、1:0.8-2.5が本発明に適している。別の種類のマイクロ多孔質吸着樹脂X-5,AB-8,NK-2,NKA-2,NK-9,D3520,D101及びWLDが、D101以外に本発明に適している。水による溶離の間、水の重量とマイクロ多孔質樹脂カラムのカラム体積との比は2-4:1であり、本発明に適している。エタノール溶液による溶離のときは、体積濃度が30%-50%のエタノール溶液であれば、50%以外のエタノール溶液であっても、本発明に適している。そして、エタノール溶液とマイクロ多孔質樹脂との体積比は2-4:1が本発明に適している。
【０１１９】
６．濃縮及び乾燥
朝鮮人参-マイクロ多孔質樹脂溶離液をロータリーエバポレーターに入れ、真空条件下、80℃の温度で濃縮し、溶媒を回収し、残留物を乾燥オーブンに入れ、85℃の温度で乾燥し、朝鮮人参の全ジンセノサイド2.6gを得る。
【０１２０】
朝鮮人参根の全ジンセノサイドは茶色がかった黄色い粉末で、特有の匂いを有する。得られた朝鮮人参根中の全ジンセノサイドの含有量は、GB/T19506-2009の付録Bに記載の方法に従って測定された32%である。
【０１２１】
本発明における朝鮮人参-マイクロ多孔質樹脂溶離液の濃縮処理の間、全ての濃縮温度は65-90℃が本発明に適している。全ての乾燥温度は70-90℃が本発明に適している。本発明の方法により調製された全ジンセノサイド含有量は20-50%である。
【０１２２】
実施例４  パナキサジオール型ジンセノサイドの調製
１．第３抽出
実施例３と同じ。
【０１２３】
２．第２抽出
実施例３と同じ。
【０１２４】
３．第３抽出
実施例３と同じ。
【０１２５】
４．濃縮
実施例３と同じ。
【０１２６】
５．第１マイクロ多孔質樹脂カラムクロマトグラフィー
実施例３と同様にして、第１朝鮮人参-樹脂溶離液を得る。
分離のために朝鮮人参濃縮液をマイクロ多孔質樹脂カラムに加え、ここでマイクロ多孔質吸着樹脂はD101マイクロ多孔質吸着樹脂である。また、樹脂カラム中の樹脂の体積(300ml)と朝鮮人参（乾燥重量）の重量の比は1:1である(すなわち、朝鮮人参の乾燥重量が1kgのとき、マイクロ多孔質樹脂の体積は1Lである。また、医薬原料の乾燥重量が1gのとき、マイクロ多孔質樹脂の体積は1mlである。)。濃縮された上清が樹脂カラムに完全に流入したのち、カラム体積の4倍の体積の水で溶離して、溶離液を廃棄する。カラム体積の8倍の体積のエタノール溶液(50%,v/v)で溶離して、溶離液を収集し、第１朝鮮人参-マイクロ多孔質樹脂溶離液を得る。
【０１２７】
６．第２マイクロ多孔質樹脂カラムクロマトグラフィー
第１朝鮮人参-樹脂溶離液をロータリーエバポレーターに入れ、80℃で濃縮し、第１朝鮮人参-マイクロ多孔質樹脂濃縮液(60ml)、5.0g粗薬/mlの朝鮮人参溶液に対応する、を得る。
【０１２８】
第１朝鮮人参-マイクロ多孔質樹脂濃縮液サンプルを分離のためマイクロ多孔質樹脂カラムに入れ、ここでマイクロ多孔質吸着樹脂はHPD-100マイクロ多孔質吸着樹脂である。そして、樹脂カラム中の樹脂の体積(300ml)と朝鮮人参の重量(乾燥重量)の比は1:1(すなわち、朝鮮人参の乾燥重量(粗薬)が1kgのときは、マイクロ多孔質樹脂の体積は1Lである。また、医薬原料(朝鮮人参)の乾燥重量が1gのときは、マイクロ多孔質樹脂の体積は1mlである。)。濃縮された上清が樹脂カラムに完全に流入したのち、カラム体積の4倍の体積のエタノール溶液(60%,v/v)を使用して溶離して、溶離液を廃棄する。カラム体積の8倍の体積のエタノール溶液(80%,v/v)を使用して溶離し、溶離液を収集し、第２朝鮮人参-マイクロ多孔質樹脂溶離液を得る。
【０１２９】
本発明の濃縮の間、第１朝鮮人参-マイクロ多孔質樹脂濃縮液の濃度は1mlあたり3.5-6gに等しい粗薬(例えば、3.5-6gの粗薬/ml)であれば、1mlあたり5.0gの粗薬を含む第１朝鮮人参-マイクロ多孔質樹脂濃縮液以外でも、本発明に適している。
【０１３０】
第１朝鮮人参-マイクロ多孔質樹脂濃縮液におけるマイクロ多孔質樹脂カラムクロマトグラフィー処理において、第１朝鮮人参-マイクロ多孔質樹脂濃縮液の朝鮮人参(粗薬)の重量とマイクロ多孔質樹脂の体積との比は1:0.8-2.5が本発明に適している。HPD-100以外の他のマイクロ多孔質吸着樹脂は、HPD-200,D203及びXAD-4が本発明に適している。60%エタノール溶液による溶離処理において、エタノール溶液(60%,v/v)とマイクロ多孔質樹脂の体積比は2-4:1であり、本発明に適している。そして、80%エタノール溶液による溶離処理において、エタノール溶液(80%,v/v)とマイクロ多孔質樹脂との体積比は2-4:1が本発明に適している。
【０１３１】
７．濃縮及び乾燥
第２朝鮮人参-マイクロ多孔質樹脂溶離液をロータリーエバポレーターに入れ、真空条件下、80℃の温度で濃縮し、溶媒を回収し、残留物を乾燥オーブンに入れ、85℃の温度で乾燥し、パナキサジオール型全ジンセノサイド0.7gを得る。
【０１３２】
パナキサジオール型全ジンセノサイドは薄い黄色の粉末であり、特有の匂いと優れた水溶性を有している。得られたパナキサジオール型ジンセノサイドの含有量は、中国薬局方（Chinese Pharmacopoeia）I(2010版)の付録VIに従ってHLPCによって測定される。パナキサジオール型ジンセノサイドの含有量は59%である。
【０１３３】
本発明における朝鮮人参-マイクロ多孔質樹脂溶離液の濃縮処理の間、全ての濃縮温度は65-95℃が本発明に適している。そして、全ての乾燥温度は70-95℃が本発明に適している。本発明の方法により調製されたパナキサジオール型ジンセノサイド中のパナキサジオールサポニン(PDS)含有量は30-70%である。
【０１３４】
実施例５  朝鮮人参アルコール抽出物錠剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
朝鮮人参アルコール抽出物(全ジンセノサイド濃度は2%)  500g
澱粉                                                1,000g
タルク粉                                            15g
ステアリン酸マグネシウム                            15g
【０１３５】
２．朝鮮人参アルコール抽出物及び澱粉を均一に混合し、その後混合物を顆粒に調製し、タルク粉とステアリン酸マグネシウムとを加え、均一に混合し、その後混合物を10,000錠に圧縮する。
【０１３６】
実施例６  朝鮮人参アルコール抽出物錠剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
朝鮮人参アルコール抽出物(全ジンセノサイド濃度は5%)    100g
澱粉                                                  1,000g
タルク粉                                              11g
ステアリン酸マグネシウム                              11g
【０１３７】
２．朝鮮人参アルコール抽出物及び澱粉を均一に混合し、その後混合物を顆粒に調製し、タルク粉とステアリン酸マグネシウムとを加え、均一に混合し、その後混合物を10,000錠に圧縮する。
【０１３８】
実施例７  朝鮮人参アルコール抽出物錠剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
朝鮮人参アルコール抽出物(全ジンセノサイド濃度は3%)    10g
澱粉                                                  1,000g
タルク粉                                              10g
ステアリン酸マグネシウム                              10g
【０１３９】
２．朝鮮人参アルコール抽出物及び澱粉を均一に混合し、その後混合物を顆粒に調製し、タルク粉とステアリン酸マグネシウムとを加え、均一に混合し、その後混合物を10,000錠に圧縮する。
【０１４０】
実施例８  朝鮮人参アルコール抽出物カプセル
１．原料を以下の重量比で準備する。
朝鮮人参アルコール抽出物(全ジンセノサイド濃度は3%)    30g
山豆根抽出物                                          30g
ビタミンC                                             600g
澱粉                                                  1,000g
【０１４１】
２.朝鮮人参アルコール抽出物、山豆根抽出物、ビタミンC及び澱粉を混合し、その後混合物をカプセルに供給して10,000カプセルを形成する。
【０１４２】
実施例９  朝鮮人参アルコール抽出物顆粒剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
朝鮮人参アルコール抽出物(全ジンセノサイド濃度は3%)  30g
生姜抽出物                                          30g
ビタミンC                                           600g
粉末ショ糖                                          5,000g
【０１４３】
２．朝鮮人参アルコール抽出物、生姜抽出物、ビタミンC及び粉末ショ糖を均一に混合し、混合物を顆粒に調製して、顆粒を袋に供給し、その後10,000袋形成する。
【０１４４】
実施例１０  朝鮮人参アルコール抽出物経口液剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
朝鮮人参アルコール抽出物(全ジンセノサイド濃度は3%)  4g
半枝蓮抽出物                                        3g
苦参抽出物                                          3g
液状ショ糖                                          5g
脱イオン水                                          適量
【０１４５】
２．少量のエタノールを使用して朝鮮人参アルコール抽出物を溶解し、半枝蓮抽出物、苦参抽出物及び液状ショ糖を溶液に加え、最後に脱イオン水を100mlまで加え、朝鮮人参アルコール抽出物経口液剤を得る。
【０１４６】
実施例１１  朝鮮人参水抽出物錠剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
朝鮮人参水抽出物(全ジンセノサイド濃度は2%)    500g
澱粉                                          1,000g
タルク粉                                      15g
ステアリン酸マグネシウム                      15g
【０１４７】
２．朝鮮人参水抽出物及び澱粉を均一に混合し、その後混合物を顆粒に調製し、タルク粉とステアリン酸マグネシウムとを加え、均一に混合し、その後混合物を10,000錠に圧縮する。
【０１４８】
実施例１２  朝鮮人参水抽出物錠剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
朝鮮人参水抽出物(全ジンセノサイド濃度は3%)    100g
澱粉                                          1,000g
タルク粉                                      11g
ステアリン酸マグネシウム                      11g
【０１４９】
２．朝鮮人参水抽出物及び澱粉を均一に混合し、その後混合物を顆粒に調製し、タルク粉とステアリン酸マグネシウムとを加え、均一に混合し、その後混合物を10,000錠に圧縮する。
【０１５０】
実施例１３  朝鮮人参水抽出物錠剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
朝鮮人参水抽出物(全ジンセノサイド濃度は5%)      10g
澱粉                                            1,000g
タルク粉                                        10g
ステアリン酸マグネシウム                        10g
【０１５１】
２．朝鮮人参水抽出物及び澱粉を均一に混合し、その後混合物を顆粒に調製し、タルク粉とステアリン酸マグネシウムとを加え、均一に混合し、その後混合物を10,000錠に圧縮する。
【０１５２】
実施例１４  朝鮮人参水抽出物カプセル
１．原料を以下の重量比で準備する。
朝鮮人参アルコール抽出物(全ジンセノサイド濃度は3%)  30g
山豆根抽出物                                        30g
ビタミンC                                           600g
澱粉                                                1,000g
【０１５３】
２．朝鮮人参水抽出物、山豆根抽出物、ビタミンC及び澱粉、その後混合物をカプセルに供給して10,000カプセルを形成する。
【０１５４】
実施例１５  朝鮮人参水抽出物顆粒剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
朝鮮人参水抽出物(全ジンセノサイド濃度は3%)    30g
生姜抽出物                                    30g
ビタミンC                                     600g
粉末ショ糖                                    5,000g
【０１５５】
２．朝鮮人参水抽出物、生姜抽出物、ビタミンC及び粉末ショ糖を均一に混合し、混合物を顆粒に調製し、その後顆粒を袋に供給して10,000袋形成する。
【０１５６】
実施例１６  朝鮮人参水抽出物経口液剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
朝鮮人参水抽出物(全ジンセノサイド濃度は3%)      4g
半枝蓮抽出物                                    3g
苦参抽出物                                      3g
液状ショ糖                                      5g
脱イオン水                                      適量
【０１５７】
２．朝鮮人参水抽出物少量のエタノールを使用して溶解し、半枝蓮抽出物、苦参抽出物及び液状ショ糖を溶液に加え、最後に脱イオン水を100mlまで加え、朝鮮人参水抽出物経口液剤を得る。
【０１５８】
実施例１７  朝鮮人参根の全ジンセノサイド錠剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
朝鮮人参根の全ジンセノサイド(全ジンセノサイド濃度は32%)   500g
澱粉                                                      1,000g
タルク粉                                                  15g
ステアリン酸マグネシウム                                  15g
【０１５９】
２．朝鮮人参全ジンセノサイド及び澱粉を均一に混合し、その後混合物を顆粒に調製し、タルク粉とステアリン酸マグネシウムとを加え、均一に混合し、その後混合物を10,000錠に圧縮する。
【０１６０】
実施例１８  朝鮮人参根の全ジンセノサイド錠剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
朝鮮人参根の全ジンセノサイド(全ジンセノサイド濃度は25%)     100g
澱粉                                                        1,000g
タルク粉                                                    11g
ステアリン酸マグネシウム                                    11g
【０１６１】
２．朝鮮人参全ジンセノサイド及び澱粉を均一に混合し、その後混合物を顆粒に調製し、タルク粉とステアリン酸マグネシウムとを加え、均一に混合し、その後混合物を10,000錠に圧縮する。
【０１６２】
実施例１９  朝鮮人参根の全ジンセノサイド錠剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
朝鮮人参根の全ジンセノサイド(全ジンセノサイド濃度は50%)     10g
澱粉                                                        1,000g
タルク粉                                                    10g
ステアリン酸マグネシウム                                    10g
【０１６３】
２．朝鮮人参全ジンセノサイド及び澱粉を均一に混合し、その後混合物を顆粒に調製し、タルク粉とステアリン酸マグネシウムとを加え、均一に混合し、その後混合物を10,000錠に圧縮する。
【０１６４】
実施例２０  朝鮮人参根の全ジンセノサイドカプセル
１．原料を以下の重量比で準備する。
朝鮮人参根の全ジンセノサイド(全ジンセノサイド濃度は32%)     30g
山豆根抽出物                                                30g
ビタミンC                                                   600g
澱粉                                                        1,000g
【０１６５】
２．朝鮮人参全ジンセノサイド、山豆根抽出物、ビタミンC及び澱粉を均一に混合し、その後混合物をカプセルに供給して10,000カプセルを形成する。
【０１６６】
実施例２１  朝鮮人参根の全ジンセノサイド顆粒剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
朝鮮人参根の全ジンセノサイド(全ジンセノサイド濃度は32%)     30g
生姜抽出物                                                  30g
ビタミンC                                                   600g
粉末ショ糖                                                  5,000g
【０１６７】
２．朝鮮人参全ジンセノサイド、生姜抽出物、ビタミンC及び粉末ショ糖を均一に混合し、混合物を顆粒に調製し、その後顆粒を袋に供給して10,000袋形成する。
【０１６８】
実施例２２  朝鮮人参根の全ジンセノサイド経口液剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
朝鮮人参根の全ジンセノサイド(全ジンセノサイド濃度は32%)     4g
半枝蓮抽出物                                                3g
苦参抽出物                                                  3g
液状ショ糖                                                  5g
脱イオン水                                                  適量
【０１６９】
２．朝鮮人参全ジンセノサイドを少量のエタノールを使用して溶解し、半枝蓮抽出物、苦参抽出物及び液状ショ糖を溶液に加え、最後に脱イオン水を100mlまで加え、全ジンセノサイド経口液剤を得る。
【０１７０】
実施例２３  パナキサジオール型ジンセノサイド錠剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
パナキサジオール型ジンセノサイド(パナキサジオールサポニンの含有量は59%)  500g
澱粉                                                                  1,000g
タルク粉                                                              15g
ステアリン酸マグネシウム                                              15g
【０１７１】
２．パナキサジオール型ジンセノサイド及び澱粉を均一に混合し、その後混合物を顆粒に調製し、タルク粉とステアリン酸マグネシウムとを加え、均一に混合し、その後混合物を10,000錠に圧縮する。
【０１７２】
実施例２４  パナキサジオール型ジンセノサイド錠剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
パナキサジオール型ジンセノサイド(パナキサジオールサポニンの含有量は35%)  100g
澱粉                                                                  1,000g
タルク粉                                                              11g
ステアリン酸マグネシウム                                              11g
【０１７３】
２．パナキサジオール型ジンセノサイド及び澱粉を均一に混合し、その後混合物を顆粒に調製し、タルク粉とステアリン酸マグネシウムとを加え、均一に混合し、その後混合物を10,000錠に圧縮する。
【０１７４】
実施例２５  パナキサジオール型ジンセノサイド錠剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
パナキサジオール型ジンセノサイド(パナキサジオールサポニンの含有量は70%)  10g
澱粉                                                                  1,000g
タルク粉                                                              10g
ステアリン酸マグネシウム                                              10g
【０１７５】
２．パナキサジオール型ジンセノサイド及び澱粉を均一に混合し、その後混合物を顆粒に調製し、タルク粉とステアリン酸マグネシウムとを加え、均一に混合し、その後混合物を10,000錠に圧縮する。
【０１７６】
実施例２６  パナキサジオール型ジンセノサイドカプセル
１．原料を以下の重量比で準備する。
パナキサジオール型ジンセノサイド(パナキサジオールサポニンの含有量は59%)  30g
山豆根抽出物                                          30g
ビタミンC                                             600g
澱粉                                                  1,000g
【０１７７】
２．パナキサジオール型ジンセノサイド、山豆根抽出物、ビタミンC及び澱粉を均一に混合し、その後混合物をカプセルに供給して10,000カプセルを形成する。
【０１７８】
実施例２７  パナキサジオール型ジンセノサイド顆粒剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
パナキサジオール型ジンセノサイド(パナキサジオールサポニンの含有量は59%)  30g
生姜抽出物                                    30g
ビタミンC                                     600g
粉末ショ糖                                    5,000g
【０１７９】
２．パナキサジオール型ジンセノサイド、生姜抽出物、ビタミンC及び粉末ショ糖を均一に混合し、混合物を顆粒に調製し、その後顆粒を袋に供給して10,000袋形成する。
【０１８０】
実施例２８  パナキサジオール型ジンセノサイド経口液剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
パナキサジオール型ジンセノサイド(パナキサジオールサポニンの含有量は59%)  4g
半枝蓮抽出物                                  3g
苦参抽出物                                    3g
液状ショ糖                                    5g
脱イオン水                                    適量
【０１８１】
２．パナキサジオール型ジンセノサイドを少量のエタノールを使用して溶解し、半枝蓮抽出物、苦参抽出物及び液状ショ糖を溶液に加え、最後に脱イオン水を100mlまで加え、パナキサジオール型ジンセノサイド経口液剤を得る。
【０１８２】
実施例２９  ジンセノサイドrg3錠剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
20(R)-ジンセノサイドrg3(60%の含有量)          500g
澱粉                                          1,000g
タルク粉                                      15g
ステアリン酸マグネシウム                      15g
【０１８３】
２．ジンセノサイドrg3及び澱粉を均一に混合し、その後混合物を顆粒に調製し、タルク粉とステアリン酸マグネシウムとを加え、均一に混合し、その後混合物を10,000錠に圧縮する。
【０１８４】
実施例３０  ジンセノサイドrg3錠剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
20(R)-ジンセノサイドrg3(98%)                        100g
澱粉                                                1,000g
タルク粉                                            11g
ステアリン酸マグネシウム                            11g
【０１８５】
２．ジンセノサイドrg3及び澱粉を均一に混合し、その後混合物を顆粒に調製し、タルク粉とステアリン酸マグネシウムとを加え、均一に混合し、その後混合物を10,000錠に圧縮する。
【０１８６】
実施例３１  ジンセノサイドrg3錠剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
20(R)-ジンセノサイドrg3(98%)                        10g
澱粉                                                1,000g
タルク粉                                            10g
ステアリン酸マグネシウム                            10g
【０１８７】
２．ジンセノサイドrg3及び澱粉を均一に混合し、その後混合物を顆粒に調製し、タルク粉とステアリン酸マグネシウムとを加え、均一に混合し、その後混合物を10,000錠に圧縮する。
【０１８８】
実施例３２  ジンセノサイドrg3カプセル
１．原料を以下の重量比で準備する。
20(R)-ジンセノサイドrg3(98%の含有量)                30g
山豆根抽出物                                        30g
ビタミンC                                           600g
澱粉                                                1,000g
【０１８９】
２．ジンセノサイドrg3、山豆根抽出物、ビタミンC及び澱粉を均一に混合し、その後混合物をカプセルに供給して10,000カプセルを形成する。
【０１９０】
実施例３３  ジンセノサイドrg3顆粒剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
20(R)-ジンセノサイドrg3(98%の含有量)                30g
生姜抽出物                                          30g
ビタミンC                                           600g
粉末ショ糖                                          5,000g
【０１９１】
２．ジンセノサイドrg3、生姜抽出物、ビタミンC及び粉末ショ糖を均一に混合し、混合物を顆粒に調製し、その後顆粒を袋に供給して10,000袋形成する。
【０１９２】
実施例３４  ジンセノサイドrg3経口液剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
20(R)-ジンセノサイドrg3(98%の含有量)              4g
半枝蓮抽出物                                      3g
苦参抽出物                                        3g
液状ショ糖                                        5g
脱イオン水                                        適量
【０１９３】
２．ジンセノサイドrg3を少量のエタノールを使用して溶解し、半枝蓮抽出物、苦参抽出物及び液状ショ糖を溶液に加え、最後に脱イオン水を100mlまで加え、ジンセノサイドrg3経口液剤を得る。
【０１９４】
実施例３５  ジンセノサイドrg3誘導体(八N-酪酸20(R)-ジンセノサイドRg3)錠剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
ジンセノサイドrg3誘導体(60%の含有量)                  500g
澱粉                                                  1,000g
タルク粉                                              15g
ステアリン酸マグネシウム                              15g
【０１９５】
２．ジンセノサイドrg3誘導体及び澱粉を均一に混合し、その後混合物を顆粒に調製し、タルク粉とステアリン酸マグネシウムとを加え、均一に混合し、その後混合物を10,000錠に圧縮する。
【０１９６】
実施例３６  ジンセノサイドrg3誘導体(八N-酪酸20(R)-ジンセノサイドRg3)錠剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
ジンセノサイドrg3誘導体(98%の含有量)                    100g
澱粉                                                    1,000g
タルク粉                                                11g
ステアリン酸マグネシウム                                11g
【０１９７】
２．ジンセノサイドrg3誘導体及び澱粉を均一に混合し、その後混合物を顆粒に調製し、タルク粉とステアリン酸マグネシウムとを加え、均一に混合し、その後混合物を10,000錠に圧縮する。
【０１９８】
実施例３７  ジンセノサイドrg3誘導体(八N-酪酸20(R)-ジンセノサイドRg3)錠剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
ジンセノサイドrg3誘導体(98%の含有量)                  10g
澱粉                                                  1,000g
タルク粉                                              10g
ステアリン酸マグネシウム                              10g
【０１９９】
２．ジンセノサイドrg3誘導体及び澱粉を均一に混合し、その後混合物を顆粒に調製し、タルク粉とステアリン酸マグネシウムとを加え、均一に混合し、その後混合物を10,000錠に圧縮する。
【０２００】
実施例３８  ジンセノサイドrg3誘導体(八N-酪酸20(R)-ジンセノサイドRg3)カプセル
１．原料を以下の重量比で準備する。
ジンセノサイドrg3誘導体(98%の含有量)                  30g
山豆根抽出物                                          30g
ビタミンC                                             600g
澱粉                                                  1,000g
【０２０１】
２．ジンセノサイドrg3誘導体、山豆根抽出物、ビタミンC及び澱粉を均一に混合し、その後混合物をカプセルに供給して10,000カプセルを形成する。
【０２０２】
実施例３９  ジンセノサイドrg3誘導体(八N-酪酸20(R)-ジンセノサイドRg3)顆粒剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
ジンセノサイドrg3誘導体(98%の含有量)                30g
生姜抽出物                                          30g
ビタミンC                                           600g
粉末ショ糖                                          5,000g
【０２０３】
２．ジンセノサイドrg3誘導体、生姜抽出物、ビタミンC及び粉末ショ糖を均一に混合し、混合物を顆粒に調製し、その後顆粒を袋に供給して10,000袋形成する。
【０２０４】
実施例４０  ジンセノサイドrg3誘導体(八N-酪酸20(R)-ジンセノサイドRg3)経口液剤
１．原料を以下の重量比で準備する。
ジンセノサイドrg3誘導体(98%の含有量)                4g
半枝蓮抽出物                                        3g
苦参抽出物                                          3g
液状ショ糖                                          5g
【０２０５】
２．ジンセノサイドrg3誘導体を少量のエタノールを使用して溶解し、半枝蓮抽出物、苦参抽出物及び液状ショ糖を溶液に加え、最後に脱イオン水を100mlまで加え、ジンセノサイドrg3誘導体経口液剤を得る。
【０２０６】
試験例１  HCMV染マウスにおける免疫機能における朝鮮人参抽出物、ジンセノサイド及び誘導体の影響
１．実験材料
【０２０７】
１．１  動物、ウイルス及び細胞
昆明マウス(体重:18-22g)、雌雄同数、は浙江中医薬科大学（Zhejiang Chinese Medical University）の動物センターによって提供され、ライセンス番号はSCXK (上海) 2008-00l6である。
【０２０８】
ウイルス及び細胞:HCMVADl69標準株及びヒト胎児肺線維芽細胞(HEL)は、山東医学科学院ウイルス研究室（Viral Laboratory of Shandong Academy of Medical Sciences）によって提供される。
【０２０９】
ヒトサイトメガロウイルスモノクローナル抗体(HCMVMcAb)は、中国予防医科学院ウイルス院診断室（Diagnosis Room of Virus Institute in Chinese Academy of Preventive Medicine）から導入し、 早期抗原モノクローナル抗体である。ELISA (酵素結合免疫吸着検査法) は l×10-5の実効力価（working titer）で使用される。
【０２１０】
１．２  薬剤
朝鮮人参アルコール抽出物:茶色がかった黄色い粉末、3%の全ジンセノサイドを含む、大連富生天然薬物開発有限公司（Dalian Fusheng Natural Medicine Development Co., Ltd.）により製造された、バッチ番号は20120601である。
【０２１１】
朝鮮人参水抽出物:茶色がかった黄色い粉末、2%の全ジンセノサイドを含む、大連富生天然薬物開発有限公司により製造された、バッチ番号は20120602である。
【０２１２】
朝鮮人参根の全ジンセノサイド:茶色がかった黄色い粉末、32%の全ジンセノサイドを含む、大連富生天然薬物開発有限公司により製造された、バッチ番号は20120502である。
【０２１３】
パナキサジオール型ジンセノサイド:薄い黄色の粉末、59%のパナキサジオールサポニン(PDS)を含む、大連富生天然薬物開発有限公司により製造された、バッチ番号は20120403である。
【０２１４】
20(R)-ジンセノサイドrg3(含有量>98%)は大連富生天然薬物開発有限公司により製造された、バッチ番号は20120303。国立食品医薬品研究所（National Institute for Food and Drug Control of China）によって供給された標品と比較してHPLCにより測定したところ、較正値による含有量、及び測定値は98.2%である。
【０２１５】
ジンセノサイドrg3誘導体(八N-酪酸20(R)-ジンセノサイドRg3)は、大連富生天然薬物開発有限公司により開発され、高速液体クロマトグラフィーのための2つの検出器、すなわち、紫外線検出器及び蒸発光散乱検出器を使用する面積正規化法によって測定したところ、それぞれの純度は99.6%である。
【０２１６】
陽性対照薬物:ガンシクロビル(規格:250mg。麗珠集団湖北科益薬業有限公司（Lizhu Group Hubei Keyi Pharmaceutical Co., Ltd.）。バッチ番号:020506)、毎日の臨床用量（clinical daily dose）は45.5mg/体重kgである。
【０２１７】
１．３  ウイルス標準株HCMVADl69及び種の増殖は、1999年10月に中国予防医科学院の種ウイルス室（Virus Seed Room）によって導入される。そのウイルスは、1640年の培地に溶かされ、予備の単層HEL細胞に接種されていた。37℃で16時間後に細胞の病変が発生し、細胞は膨張する。細胞質中に反射粒子は増加させられる。細胞の一部は丸くさせられる。それぞれの細胞は脱落する。 接種時間の延長に伴って病変の範囲が広がり、96時間培養後には病変は90%以上まで広がった。細胞病変が+++から++++に達したらHEL培養上清が廃棄され、PBSで3回軽く洗浄される。2倍量の蒸留水が加えられる。凍結解凍が、-20℃で3回行われる。様々な加熱と加圧が行われる。10,000r/分の遠心分離が4℃で20分間行われる。そして、上清が収集されウイルス標準株が得られる。
【０２１８】
２．  実験方法
２．１  群分け及び投与
210匹の昆明マウス、雌雄同数、は実験条件下で1週間飼育され、性別及び体重により無作為に21群、すなわち、一つの正常対照群、一つのモデル群、一つの陽性薬物対照群、高/中/低-用量の朝鮮人参アルコール抽出物群、高/中/低-用量の朝鮮人参水抽出物群、高/中/低-用量の朝鮮人参根の全ジンセノサイド群、高/中/低-用量のパナキサジオール型ジンセノサイド群、高/中/低-用量のジンセノサイドrg3群、及び高/中/低-用量のジンセノサイドrg3誘導体群、に分けられる。
【０２１９】
ガンシクロビル(45.5mg/kg/d)が陽性対照群に与えられる。朝鮮人参アルコール抽出物0.012mg/kg/d、0.06mg/kg/d及び0.3mg/kg/dが朝鮮人参アルコール抽出物の3群にそれぞれ与えられる。朝鮮人参水抽出物0.012mg/kg/d、0.06mg/kg/d及び0.3mg/kg/dが朝鮮人参水抽出物の3群にそれぞれ与えられる。朝鮮人参全ジンセノサイド0.012mg/kg/d,0.06mg/kg/d及び0.3mg/kg/dが朝鮮人参根の全ジンセノサイドの3群にそれぞれ与えられる。パナキサジオール型ジンセノサイド0.012mg/kg/d、0.06mg/kg/d及び0.3mg/kg/dがパナキサジオール型ジンセノサイドの3群にそれぞれ与えられる。ジンセノサイドrg3  0.012mg/kg/d、0.06mg/kg/d及び0.3mg/kg/dがジンセノサイドrg3の3群にそれぞれ与えられる。ジンセノサイドrg3誘導体0.012mg/kg/d、0.06mg/kg/d及び0.3mg/kg/dがジンセノサイドrg3誘導体の3群にそれぞれ与えられる。
【０２２０】
マウスは、マウスの尻尾にある尾静脈を通じてHCMV10-3(0.1ml/マウス)を注射された。0.9%生理食塩水(0.1ml/マウス)を正常対照群に注射する。そして、胃内投与は用量を決定するため、感染の2日目に開始され21日間投薬される。
【０２２１】
２．２  体重、胸腺指数及び脾臓指数の測定
実験期間中、動物の体重が測られるとともに、胸腺及び脾臓の重量が投薬21日目に測られ、それらの指数が(胸腺指数、脾臓指数、体重10gあたりの胸腺及び脾臓の重量(mg))が計測された。
【０２２２】
２．３  血清ヘモリジン抗体の測定
最後の投与から40分後に、眼球を摘出して放血して、血清を収集し、血清を生理食塩水で100倍希釈し、1mLの希釈された血清、0.5mLの5%ニワトリ赤血球懸濁液及び0.5mLの10%補体(モルモット血清)を均一に混合し、37℃の培養器中で30分培養し、0℃の冷蔵庫に30分収納して反応を停止する。遠心分離して、上清を取り出し、540nmにおける吸光度(OD値)を分光光度計で測定する。
【０２２３】
２．４  血清中IL-2濃度の測定
各群から6匹のマウスを無作為に選び、最後の投与から40分後に、眼球を摘出して放血し、遠心管で血液を収集する。血液を凝固したのち、3000r/分で高速遠心分離を5分間行って、血清を収集する。血清中のIL-2はELISAキットのマニュアルに従って測定される。
【０２２４】
３．  実験結果
３．１  HCMV感染マウスの生存率及び体重の測定
実験手続に死亡した動物の数を記録する。HCMV感染マウスの生存率及び体重の実験結果は表１に示される。
【０２２５】
全てのマウスは、全実験手続期間において21日間に渡って医薬品に連続的にさらされる。投与期間中、立毛、片麻痺、全身の運動失調及び体重減少等の感染中毒症状が、モデル群のマウスでは、毒物に曝露されてから最短で2-4日後に発生し、死亡が5-7日後から始まり、3匹のマウスだけが21日まで生き延びる、これはモデリングが成功したことを示している。
【０２２６】
朝鮮人参アルコール抽出物、朝鮮人参水抽出物、朝鮮人参根の全ジンセノサイド、パナキサジオール型ジンセノサイド、20(R)-ジンセノサイドrg3及び20(R)-ジンセノサイドrg3誘導体の群のマウスは穏やかな中毒症状、より少ない死亡及びよい体重の増加を示し、これは、これらの薬物が明白なウイルスの抑制効果を備えており、マウスの生存率を多様に増加することを示した。全ての群において生き延びた動物数は、それぞれモデル群のそれと統計的に比較され、HCMV感染マウスにおける高用量群の明確な差異と中/低用量群の明白な保護効果を証明する。ガンシクロビルを投与された動物の生存数、体重増加及び病徴発現は、全体的に大用量（large-dosage）群のそれに相当する。
【０２２７】
【表１】
0006457661.tif 000003
【０２２８】
３．２  HCMV感染マウスの脾臓及び胸腺指数における影響
胸腺及び脾臓は重要な免疫組織であり、臓器指数は生物の免疫機能をある程度反映する。胸腺は、T-リンパ球の発生及びサイモシン（thymosin）の分泌において主な機能を備え、主に細胞性免疫に関与している。そして、豊富なリンパ球及びマクロファージが脾臓に含まれている。胸腺及び脾臓の重量は、これらが含有する免疫細胞の量及びリンパ球の増殖の程度と同様に、その機能と関連している。脾臓及び胸腺指数の実験結果は表２に示される。
【０２２９】
【表２】
0006457661.tif 000004
【０２３０】
実験は、朝鮮人参アルコール抽出物、朝鮮人参水抽出物、朝鮮人参全ジンセノサイド、パナキサジオール型ジンセノサイド、ジンセノサイドrg3及びジンセノサイドrg3誘導体が、HCMV感染マウスの免疫器官において明白な重量増加効果を備え、全ての実験群の重量はモデル群のそれよりも高く、具体的には、ジンセノサイドrg3群及びジンセノサイドrg3誘導体群の脾臓指数及び胸腺指数がモデル群のそれらとはそれぞれ著しく異なっていたこと、を証明する。実験結果は、朝鮮人参抽出物、ジンセノサイド及びその誘導体が、HCMV感染マウスの胸腺及び脾臓において保護効果を獲得し、抗原と同様の免疫効果を備え、脾臓リンパ球の活性を回復・促進でき、正の免疫調節効果を備えていること、を証明する。したがって、朝鮮人参抽出物及びその誘導体はHCMV感染の治療のために使用されうる。
【０２３１】
３．３  血清中のIL-2濃度の実験結果
IL-2、すなわちインターロイキン-2は、T細胞成長因子(TCGF)とも名付けられ、幅広い生物活性を有する細胞因子であり、活性化されたCD4+Th1細胞によって産生され、Th0及びCTLの増殖を促進でき、そのため、免疫応答の調節と制御において重要な因子である。IL-2は、多種の細胞に由来(主に、活性化T細胞により産生される。)し、多面的な作用を有する細胞因子(主にリンパ球の成長の促進、増殖及び分化に使用される)であり、免疫応答及び抗ウイルス感染等に重要な影響を与え、特定の抗原又はマイトジェン因子によって開始されたT細胞の増殖を刺激でき、T細胞を活性化して細胞因子の産生を促進でき、NK細胞の増殖を刺激し、NK細胞の殺活性を高めるともにLAK細胞の産生を誘導するための細胞因子を産生し、B細胞の増殖と抗体産生を促進し、マクロファージを活性化する。マウス血清中のIL-2濃度の実験結果は表３に示される。
【０２３２】
【表３】
0006457661.tif 000005
【０２３３】
表３の結果は次のことを示す。モデル群はIL-2の濃度が最も低く、これは正常対照群(P<0.01)と顕著に異なり、このモデルが成功していることを示している。朝鮮人参アルコール抽出物、朝鮮人参水抽出物、全ジンセノサイド、パナキサジオール型ジンセノサイド、ジンセノサイドrg3及びジンセノサイドrg3誘導体の各群におけるIL-2はモデル群のそれよりも高く、これは朝鮮人参アルコール抽出物、朝鮮人参水抽出物、全ジンセノサイド、パナキサジオール型ジンセノサイド、ジンセノサイドrg3及びジンセノサイドrg3誘導体がHCMV感染マウスのIL-2濃度を高める効果を備えていること、を示している。そして、朝鮮人参水抽出物群、朝鮮人参全ジンセノサイド群、パナキサジオール型ジンセノサイド群、ジンセノサイドrg3群及びジンセノサイドrg3誘導体群のIL-2濃度は陽性薬物対照群のそれよりも優れており、これは、朝鮮人参水抽出物群、全ジンセノサイド群、パナキサジオール型ジンセノサイド群、ジンセノサイドrg3群及びジンセノサイドrg3誘導体群が、HCMV感染マウスにおいて陽性薬物よりも強い治療効果を備えていること、を示している。
【０２３４】
３．４  血清中ヘモリジン抗体の測定
マウス血清中のヘモリジン抗体の測定結果は表４に示される。
【０２３５】
【表４】
0006457661.tif 000006
【０２３６】
実験は、朝鮮人参アルコール抽出物、朝鮮人参水抽出物、朝鮮人参全ジンセノサイド、パナキサジオール型ジンセノサイド、ジンセノサイドrg3及びジンセノサイドrg3誘導体の全てがHCMV感染マウスの血清中ヘモリジン抗体濃度を向上させる効果を有すること、モデル群と比較して、顕著な差異が存在することを証明する。具体的には、朝鮮人参水抽出物群、朝鮮人参全ジンセノサイド群、パナキサジオール型ジンセノサイド群、ジンセノサイドrg3群及びジンセノサイドrg3誘導体群の血清中ヘモリジン抗体濃度は陽性薬物対照群のそれよりも優れており、これは朝鮮人参水抽出物群、全ジンセノサイド群、パナキサジオール型ジンセノサイド群、ジンセノサイドrg3群及びジンセノサイドrg3誘導体群が、HCMV-感染マウスにおいて、陽性薬物対照群よりも強い治療効果を備えることを、示している。