(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）濃度が約４００ＩＵ／ｍＬ〜２，０００ＩＵ／ｍＬのＣ１−ＩＮＨ、及び
（ｂ）計算上のモル浸透圧濃度２０〜１２０ｍＯｓｍ／Ｌを有するクエン酸三ナトリウム又は計算上のモル浸透圧濃度６０〜１２０ｍＯｓｍ／Ｌを有するリン酸二水素ナトリウム／リン酸水素二ナトリウム、及び
（ｃ）
（ｉ）（ｂ）の物質以外の、１種又はそれ以上の、計算上のモル浸透圧濃度１５０〜６００ｍＯｓｍ／Ｌを有する、生理学的に許容される塩、又は、
（ｉｉ）  計算上のモル浸透圧濃度が５０〜５００ｍＯｓｍ／Ｌを有する、グリシン及び／又は１種又はそれ以上の塩基性のＬ−アミノ酸及び／又は１種又はそれ以上の酸性のＬ−アミノ酸、又はそれらの塩から選択される１種又はそれ以上のアミノ酸、又は
（ｉｉｉ）併せて計算したモル浸透圧濃度が８０〜７４０ｍＯｓｍ／Ｌを有する、（ｂ）の物質以外の１種又はそれ以上の生理学的に許容される塩と、グリシン及び／又は１種又はそれ以上の塩基性のＬ−アミノ酸及び／又は１種又はそれ以上の酸性のＬ−アミノ酸、又はそれらの塩から選択される１種又はそれ以上のアミノ酸、
とを含み、
ここで、製剤全体としての計算上のモル浸透圧濃度が、１７０〜８００ｍＯｓｍ／Ｌである
安定な医薬製剤。
【請求項２】
生理学的に許容される塩が生理学的に許容されるナトリウム塩、好ましくは塩化ナトリウム、ＥＤＴＡ二ナトリウム、酢酸ナトリウム、コハク酸ナトリウム及び硫酸ナトリウムから選択される請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項３】
塩基性のＬ−アミノ酸が、アルギニン、リジン及び／又はヒスチジン又はその塩である請求項１又は２に記載の医薬製剤。
【請求項４】
酸性のＬ−アミノ酸がグルタミン酸および／またはアスパラギン酸またはその塩である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項５】
製剤のｐＨが約６．７と約７．５の間である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項６】
製剤が、
（ａ）Ｃ１−ＩＮＨ約４００〜６２５ＩＵ／ｍＬ、
（ｂ）クエン酸三ナトリウム約２０〜１２０ｍＯｓｍ／Ｌ
（ｃ）グリシン約５０〜３００ｍＯｓｍ／Ｌ、及び
（ｄ）塩化ナトリウム約１９０〜４００ｍＯｓｍ／Ｌ
を含み、ここで、製剤全体として計算上のモル浸透圧濃度が、２６０〜６００ｍＯｓｍ／Ｌである請求項１〜５のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項７】
前記製剤中の、ＤＳＦで測定した、Ｃ１−ＩＮＨの融解温度が、約５５℃以上、好ましくは約５５−６０℃である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項８】
製剤が、更に
（ａ）ＰＳ８０（ポリソルベート８０）及びＰＳ２０（ポリソルベート２０）からなる群から選択される界面活性剤、及び／又は
（ｂ）ベンジルアルコール、クレゾール、フェノール、メチオニン及びグルタチオンからなる群から選択される保存剤及び／又は抗酸化剤を含む請求項１〜７のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項９】
Ｃ１−ＩＮＨがヒトＣ１−ＩＮＨであり、好ましくはヒトＣ１−ＩＮＨがヒト血漿由来である請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項１０】
製剤が最終剤形当たりＣ１−ＩＮＨの絶対量を少なくとも１，２００ＩＵ、少なくとも１，５００ＩＵ又は少なくとも１，８００ＩＵ含む請求項１〜９のいずれか１項に記載の
医薬製剤。
【請求項１１】
製剤を
（ａ）凍結乾燥粉末を適切な液体で再構成することにより、得ることが出来るか、又は
（ｂ）液状製剤として提供する請求項１〜１０のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項１２】
製剤が、皮下投与、又は静脈内投与によって投与し得る、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項１３】
患者が製剤を自己投与することが出来る、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項１４】
２０℃における製剤の動粘度が、１０ｍｍ2／ｓ未満、８ｍｍ2／ｓ未満、６ｍｍ2／ｓ未満又は５ｍｍ2／ｓ未満である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項１５】
製剤が、高分子量成分（ＨＭＷＣ）１０重量％未満、ＨＭＷＣ８重量％未満、ＨＭＷＣ５重量％未満又はＨＭＷＣ３重量％未満を含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項１６】
キニン形成に関連する障害の、急性及び／又は予防的治療における、特に、遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）、好ましくはＨＡＥ  Ｉ型、ＨＡＥ  ＩＩ型又はＨＡＥ  ＩＩＩ型、二次脳浮腫、中枢神経系の浮腫、低血圧ショック、又は血液が人工物表面に接触している間の、若しくは、その後の浮腫に対して、
虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）に関連する障害の、急性及び／又は予防的治療における、特にＩＲＩの外科的介入、特に血管手術、心臓手術、神経外科手術、外傷手術、癌手術、整形外科手術、移植、最小の侵襲手術、又は、薬理学的に有効な物質の送達のために、又は、障害物の全体若しくは部分を機械的に除去するために、挿入する器具に起因する障害に対して、
網膜症の急性及び／又は予防的治療における、又は
患者に移植された組織の拒絶反応を回避する際に、
使用するための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項１７】
凍結乾燥粉末及び再構成するための夫々に適切な容量の液体として請求項１〜１６のいずれか１項に記載の医薬製剤を含むキット。
【請求項１８】
請求項１〜１６のいずれか１項に記載の医薬製剤と、少なくとも１本の注射器及び／又は１本の針とを含むキット。
【請求項１９】
請求項１〜１６のいずれか１項に記載の液状医薬製剤で充填した注射器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、長期貯蔵のためのより高い安定性と低減した動粘度を示すＣ１エステラーゼ阻害剤「Ｃ１−ＩＮＨ」を含む医薬製剤に関し、キナーゼ形成に関する欠陥の治療又は予防における使用を改善する。
【背景技術】
【０００２】
分子量１０４ｋＤａを有する血漿糖蛋白質であるＣ１−ＩＮＨは、セリンプロテアーゼ阻害剤（セルピン）の蛋白質ファミリーに属し、セリンプロテアーゼの触媒活性を阻害することにより、その活性を調節する（非特許文献１）。Ｃ１−ＩＮＨは、活性化されたセリンプロテアーゼＣ１ｓおよびＣ１ｒを阻害することにより、補体系の古典的経路を阻害する。さらに、Ｃ１−ＩＮＨは、活性化セリンプロテアーゼ第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）および血漿カリクレインを阻害する能力があるため、接触活性化系の中の主要な阻害剤である（非特許文献２；非特許文献３）。Ｃ１−ＩＮＨの欠乏は、皮膚、喉頭又は内臓器官のような皮下または粘膜下組織における急性血管浮腫発作の発症を特徴とする遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）の臨床症状をもたらし（非特許文献４）、１日ないし７日の間に終了はするが、不規則な間隔で生じる。血漿中のＣ１−ＩＮＨの含有量、またはその機能的活性における異常（多くの場合、Ｃ１−ＩＮＨの機能的欠損と称する）は、Ｃ１−ＩＮＨ遺伝子における種々の大小の変異から生じる（上記参照）（非特許文献５）。
【０００３】
一般に、遺伝的Ｃ１−ＩＮＨ欠損症には２種のタイプが存在する。より一般的であるＩ型ＨＡＥは、血行におけるＣ１−ＩＮＨ含有量が低く（正常の３５％未満）しかも阻害活性が低いという特徴がある。ＩＩ型ＨＡＥは、機能活性の低いＣ１−ＩＮＨの抗原レベルが正常、又は上昇したものに関連する。最近、正常なＣ１−ＩＮＨを有するＨＡＥ（ＩＩＩ型ＨＡＥとしても知られる）は、（１）第ＸＩＩ因子遺伝子の突然変異に起因し、その結果として、第ＸＩＩ因子の活性が増加し、ブラジキニンの高産生を引き起こすＨＡＥ、及び（２）遺伝的原因が不明なＨＡＥ、の２種に分類して記載されている。ＨＡＥ発作は、Ｃ１−ＩＮＨを投与することにより効果的に治療することができる（非特許文献６；非特許文献７）。更に、Ｃ１−ＩＮＨを予防的に患者に投与した場合にも浮腫形成を防ぐことが示されている。現在、Ｃ１−ＩＮＨは、Ｂｅｒｉｎｅｒｔ（登録商標）（ＣＳＬベーリング社）、Ｃｅｔｏｒ（登録商標）（Ｓａｎｑｕｉｎ社）、Ｃｉｎｒｙｚｅ（登録商標）（Ｓｈｉｒｅ社）、Ｒｕｃｏｎｅｓｔ（登録商標）／Ｒｈｕｃｉｎ（登録商標）（ファーミング社製組換えＣ１阻害剤）として上市されている。補体と接触活性化系に及ぼす阻害効果のために、Ｃ１−ＩＮＨ置換は恒常性機能を正常に回復し、かつ血管浮腫の形成に媒介するブラジキニン等の血管作用性ペプチドの過剰な形成を阻害する。
【０００４】
Ｃ１−ＩＮＨは、脳虚血−再灌流のための齧歯類モデルにおける虚血−再灌流傷害を低減することが報告されている。（非特許文献８；非特許文献９）。
【０００５】
Ｃ１−ＩＮＨ欠乏症の治療用として商業的に入手可能なＣ１−ＩＮＨ組成物は、現今に至るまで、すべて容量の大きな製剤であり、すなわちこれらの製剤は静脈内注射によって投与する必要がある。Ｃ１−ＩＮＨは、予防的に与えた場合に、遺伝性血管浮腫を有する患者における浮腫形成を防ぐことを示しているという事実（非特許文献１０）に鑑み、罹患した患者が、容易に、定期的に自己投与することが可能な製剤への要求がある。
【０００６】
ＨＡＥを長期的に予防する目的は、血管浮腫発症の回数及び重症度を予防または最小化することにある。しかしながら、現在多くの場合、長期的な予防に利用可能な薬剤が最適であるとは言えない。１日用量を複数回必要とする経口抗線維溶解剤は、相対的に効果がなく、しかも、頻繁に重大な副作用を伴う。アナボリックアンドロゲンは摂取するのが簡便であり、通常は２００ｍｇ／日未満の用量で有効であるが、重篤な副作用という重大なリスクを付随し得る。現在入手可能なＣ１−ＩＮＨの製剤は、静脈内を利用する必要があり、患者、医療提供者、又はその両方に重い負担を課している。静脈内の利用を維持するためには、多くの患者に、感染および血栓症のリスク増大を伴う静脈ポートを移植する必要があった。Ｃ１−ＩＮＨ濃縮物の治療用量を静脈内投与した後、機能的Ｃ１−ＩＮＨの血漿レベルは、急速に低下し、３日以内に基底レベルに近づく。
【０００７】
Ｃ１−ＩＮＨなどの蛋白質治療薬を製造する場合、監督官庁は、治療用蛋白質製品の製造業者に対し、蛋白質の多量体化及び凝集を可能な限り最小限にするように、強く推奨している。更に、このような治療薬を長期保存するために、蛋白質治療薬の安定性を向上することが強く望まれている。蛋白質の安定性を向上させる条件は又、多量体化及び凝集による高分子量成分（ＨＭＷＣ）、特に治療用蛋白質の変性と形成を防止するための、最良の条件でもある。
【０００８】
従って、可能な限り早期に開発すべき製品開発において、ＨＭＷＣ形成を最小にする戦略が、強く望まれている。  これは、例えば、適切な細胞基質を使用し、ＨＭＷＣ形成を最小限にする製造条件を選択し、可能な限り最大限にＨＭＷＣを除去する精製の仕組みを採用し、蛋白質のＨＭＷＣ形成を最小化する容器システムを選択し、そして最も顕著には、貯蔵中のＨＭＷＣの形成、分解、及び変性、を最小化する製剤を選択することにより、達成することが出来る。
【０００９】
従って、製剤成分は、主に、治療用蛋白質の本来の立体配座を、ＨＭＷＣ形成を誘引し得る疎水性相互作用に起因する変性を防止することにより、並びに、切断、酸化、及び脱アミド化を含む化学的分解を防止することにより、保持する能力に基づいて選択される（非特許文献１１；非特許文献１２；非特許文献１３）。
【００１０】
蛋白質ＨＭＷＣにより誘引される免疫応答の潜在的な臨床的結果は、ＨＭＷＣにおける本来のエピトープの消失又は保持に依存し得る（ａ）天然の蛋白質を含有するＨＭＷＣに対するヒト被験体により生成されるいくつかの抗体は、単量体蛋白質と、同様に、ＨＭＷＣと結合し得て、生成物活性を阻害し、又は中和し得る。（ｂ）変性／分解され、従って凝集した蛋白質に対する他の抗体は、ＨＭＷＣ物質に独特な結合をするが、天然の蛋白質単量体には結合しない。（治療用蛋白質に関する産業免疫原性評価のガイダンス、米国保健福祉食品医薬品局  、薬物評価研究センター（ＣＤＥＲ）、生物学的評価研究センター（ＣＢＥＲ）、２０１４年８月）。
【００１１】
Ｖｉｒｏｐｈａｒｍａ社（現：Ｓｈｉｒｅ社）による、皮下投与のＣ１−ＩＮＨ（３３３ＩＵ／ｍＬ）及びヒアルロニダーゼ（ｒＨｕＰＨ２０）を含む濃縮物の開発は、臨床開発中に中止された。特に臨床試験に参加したほとんど全ての人は、注射部位での有害事象を被った。
【００１２】
特許文献１には、Ｃ１−ＩＮＨ約４００又は５００Ｕ／ｍＬを有するＣ１−ＩＮＨ組成物を開示している。皮下投与のために、緩衝物質としてクエン酸塩又はクエン酸を使用することは示唆されていない。開示された製剤は、特定の緩衝物質のみを低濃度で含み、他の賦形剤は添加されていない。開示された全てのＣ１−ＩＮＨ製剤は、ｔ0におけるモノマー含有率は約６７％であり、全体として比較的低い純度を有する。当初の粘度レベルは、注射可能な製品の使用のために通常設定された限度内であるが、更に良好な粘度を有する製品が求められている。安定性に関して、特許文献１には、４０℃で１週間後及び２５℃で２週間後のデータのみが開示され、すなわち長期安定性データは示されず、したがって長期安定性は証明されていない。本発明において、特許文献１に開示されているＣ１−ＩＮＨ製剤の長期安定性を相当に改善できることが見出された。
【００１３】
要約すると、ＨＭＷＣの形成、並びに変性及び分解を起こしにくくすることにより、長期間の保存安定性が証明され、薬剤に関連する重大な有害事象を引き起こすことなく、注射部位では許容可能な、治療創発的有害事象を起こすのみで、かつ低粘度を有するＣ１−ＩＮＨ製剤が必要である。更に、低容量を高濃度で、容易に投与される製剤が早急に必要とされている。加えて、遺伝性血管浮腫を患っている患者の予防的治療ばかりではなく急性療法のために使用し得る製剤が望ましい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】国際特許公開第ＷＯ２０１４／１４５５１９号
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Ｂｏｃｋ  ＳＣら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９８６、２５：４２９２−４３０１
【非特許文献２】Ｄａｖｉｓ  ＡＥ、Ｃｌｉｎ、Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５、１１４  ：３−９
【非特許文献３】Ｃａｌｉｅｚｉ  Ｃら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．  ２０００、５２：９１−１１２
【非特許文献４】Ｌｏｎｇｈｕｒｓｔ  Ｈ、ｅｔ  ａｌ．Ｌａｎｃｅｔ  ２０１２、３７９：４７４−４８１
【非特許文献５】Ｋａｒｎａｕｋｈｏｖａ  Ｅ、Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｄｉｓ．、２０１３、１−７
【非特許文献６】Ｌｏｎｇｈｕｒｓｔ  Ｈら、Ｌａｎｃｅｔ  ２０１２，３７９：４７４−４８１
【非特許文献７】Ｂｏｒｋ  Ｋ、Ａｌｌｅｒｇｙ  Ａｓｔｈｍａ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１０、６：１５
【非特許文献８】Ｄｅ  Ｓｉｍｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｅｒｅｂ  Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  Ｍｅｔａｂ．２００３，２３：２３２−９
【非特許文献９】Ａｋｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ５２：３９５−４００
【非特許文献１０】Ｃｉｃａｒｄｉ  Ｍ ら、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．２００７；８：３１７３−３１８１
【非特許文献１１】Ｃｌｅｌａｎｄら、Ｃｒｉｔ．  Ｒｅｖ．  Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ．１９９３、１０（４）：３０７−３７７
【非特許文献１２】Ｓｈｉｒｅら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．２００４、９３（６）：１３９０−１４０２
【非特許文献１３】Ｗａｋａｎｋａｒ  Ｂｏｒｃｈａｒｄｔ、Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．２００６、９５（１１）：２３２１−２３３６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
概要
本発明は、高濃度のＣ１−ＩＮＨを含み、Ｃ１−ＩＮＨ安定性を向上させることにより長期保存に十分適合させた低容量の製剤を提供するものである。更に、この製剤は、低減した粘度を示し、特に、前記製剤を患者自身によって適用し得る場合に、この化合物を皮下及び静脈内への投与が簡便になる。
【００１７】
本発明は更に、キニン形成に関連する障害の急性及び／又は予防的治療における、前記の製剤の使用に関する。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
特に、本発明は、
（ａ）Ｃ１−ＩＮＨの濃度、約４００ＩＵ／ｍＬ〜２，０００ＩＵ／ｍＬ、及び
（ｂ）計算上のモル浸透圧濃度２０〜１２０ｍＯｓｍ／Ｌを有するクエン酸ナトリウム又は計算上のモル浸透圧濃度６０〜１２０ｍＯｓｍ／Ｌを有するリン酸二水素ナトリウム／リン酸水素二ナトリウム、及び
（ｃ）
（ｂ）の物質以外の、計算上のモル浸透圧濃度１５０〜６００ｍＯｓｍ／Ｌを有する、１種又はそれ以上の生理学的に許容される塩、又は、
計算上のモル浸透圧濃度が５０〜５００ｍＯｓｍ／Ｌを有する、グリシン及び／又は１種又はそれ以上の塩基性の及び／又は１種又はそれ以上の酸性のＬ−アミノ酸、から選択される１種又はそれ以上のアミノ酸又はそれらの塩/塩類、又は、
併せて計算したモル浸透圧濃度が８０〜７４０ｍＯｓｍ／Ｌを有する、（ｂ）の物質以外の１種又はそれ以上の生理学的に許容される塩、と、グリシン及び／又は１種又はそれ以上の塩基性の及び／又は１種又はそれ以上の酸性の Ｌ−アミノ酸、から選択される１種又はそれ以上のアミノ酸又はそれらの塩/塩類
とを含み、
ここで、製剤全体としての計算上のモル浸透圧濃度は、１７０〜８００ｍＯｓｍ／Ｌである、安定な、生理学的に許容される製剤に関する。
【００１９】
種々の実施態様において、上記製剤の生理学的に許容される塩は、生理学的に許容されるナトリウム塩、好ましくは塩化ナトリウム、ＥＤＴＡ二ナトリウム、酢酸ナトリウム、コハク酸ナトリウム及び硫酸ナトリウムから選択される。
【００２０】
種々の実施態様において、塩基性Ｌ−アミノ酸は、アルギニン、リジン及び／又はヒスチジン又はその塩／塩類、好ましくは塩酸塩である。
【００２１】
種々の実施態様において、酸性Ｌ−アミノ酸は、Ｌ−グルタミン酸及び／又はＬ−アスパラギン酸又はその塩／塩類、好ましくはナトリウム塩である。
【００２２】
様々の実施態様において、上記の医薬製剤のｐＨは、約６．７〜約７．５である。
【００２３】
いくつかの実施態様において、医薬製剤は、
（ａ）Ｃ１−ＩＮＨ約４００〜６２５ＩＵ／ｍＬ、
（ｂ）クエン酸ナトリウム約２０〜１２０ｍＯｓｍ／Ｌ
（ｃ）グリシン約５０〜３００ｍＯｓｍ／Ｌ、及び
（ｄ）塩化ナトリウム約１９０〜４００ｍＯｓｍ／Ｌを含み、
ここで、製剤の全体として計算上のモル浸透圧濃度は、２６０〜６００ｍＯｓｍ／Ｌである。
【００２４】
様々な実施態様において、上記製剤中、ＤＳＦにより測定されるＣ１−ＩＮＨの融解温度は、約５５℃またはそれ以上、好ましくは約５５〜６０℃である。
【００２５】
様々な実施態様において、上記の製剤は、更に
（ａ）ＰＳ８０（ポリソルベート８０）及びＰＳ２０（ポリソルベート２０）からなる群から選択される界面活性剤、及び／又は
（ｂ）ベンジルアルコール、クレゾール、フェノール、メチオニン及びグルタチオンからなる群から選択される保存剤及び／又は抗酸化剤を含み得る。
【００２６】
様々な実施態様において、Ｃ１−ＩＮＨはヒトＣ１−ＩＮＨである。好ましい実施態様では、ヒトＣ１−ＩＮＨはヒト血漿由来である。
【００２７】
種々の実施態様において、上記で言及された製剤は、Ｃ１−ＩＮＨの絶対量を最終の剤形当たり少なくとも１，２００ＩＵ、少なくとも１，５００ＩＵ又は少なくとも１，８００ＩＵを含む。
【００２８】
様々な実施態様において、上記製剤は、
（ａ）凍結乾燥粉末を適切な液体で再構成することにより、得ることができるか、又は
（ｂ）液体製剤として提供する。
【００２９】
上記で言及した全ての実施態様において、製剤は、皮下投与経由又は静脈内投与経由により、投与することができ、これにより、場合により前記製剤を患者が自己投与することが出来る。
【００３０】
様々な実施態様において、製剤の動粘度は、１０ｍｍ2／ｓ未満、８ｍｍ2／ｓ未満、６ｍｍ2／ｓ未満又は５ｍｍ2／ｓ未満である。
【００３１】
様々な実施態様において、本発明による製剤は、高分子量成分（ＨＭＷＣ）１０％未満、ＨＭＷＣ８％未満、ＨＭＷＣ５％未満又はＨＭＷＣ３％未満を含む。
【００３２】
本発明の別の態様は、
・キニン形成に関連する障害、特に、遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）、好ましくはＨＡＥ  Ｉ型、ＨＡＥ  ＩＩ型又はＨＡＥ  ＩＩＩ型、二次脳浮腫、中枢神経系の浮腫、低血圧ショック、又は血液が人造物表面に接触している間の、若しくは、その後の浮腫に対する、急性及び／又は予防的治療において、
・虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）に関連する障害、特にＩＲＩは外科的介入、特に血管手術、心臓手術、神経外科手術、外傷手術、癌手術、整形外科手術、移植、最小の侵襲手術、又は、薬理学的に有効な物質の送達のために、又は、全体若しくは部分的な障害物を機械的に除去するために挿入する器具に、起因する急性及び／又は予防的治療において、
・網膜症の急性及び／又は予防的治療において、又は
・患者に移植された組織の拒絶を回避する際に、
使用するための医薬製剤を示す。
【００３３】
本発明の別の態様は、本発明の医薬製剤を凍結乾燥粉末及び再構成するためそれぞれに適切な容量の液体として含むキットを示す。本発明の更に別の態様は、本発明の医薬製剤及び少なくとも１個の注射器及び／又は１本の針を含むキットを示す。更に別の態様は、本発明の液状医薬製剤を予め充填した注射器を示す。
【００３４】
定義
本発明によれば、用語「Ｃ１エステラーゼ阻害剤」又は「Ｃ１阻害剤」（「Ｃ１−ＩＮＨ」）は、蛋白質又はそのフラグメントを意味し、セリンプロテアーゼ阻害剤として機能し、補体系に関連する、好ましくはプロテアーゼＣ１ｒ及びＣ１ｓ、並びにＭＡＳＰ−１及びＭＡＳＰ−２、カリクレイン−キニン系に関連する、好ましくは血漿カリクレイン及び第ＸＩＩａ因子及び、凝固系に関連する、好ましくは第Ｘｌａ因子及び第ＸＩＩａ因子を阻害する。更に、Ｃ１−ＩＮＨは、内皮細胞へのセレクチン媒介性の白血球接着を低減する抗炎症分子として役立ち得る。本明細書中で使用されるＣ１−ＩＮＨは天然セリンプロテアーゼ阻害剤又はその活性断片でもよく、又は、組換えペプチド、合成ペプチド、ペプチド模倣物、又は、プロテアーゼＣ１ｒ及びＣ１ｓ、ならびに／又はＭＡＳＰ−１及びＭＡＳＰ−２、及び／又は血漿カリクレイン、及び／又は第ＸＩＩａ因子、及び／又は第Ｘｌａ因子などと同様の機能的特性を提供するペプチド断片を含み得る。用語Ｃ１−ＩＮＨはまた、Ｃ１−ＩＮＨと同じ又は類似の機能を有する全ての天然に存在する対立遺伝子、スプライス変異体及びアイソフォームを包含する。Ｃ１−ＩＮＨの構造及び機能に関する更なる開示については、米国特許第４，９１５，９４５号、米国特許第５，９３９，３８９号、米国特許第６，２４８，３６５号、米国特許第７，０５３，１７６号及び国際公開第２００７／０７３１８６号を参照のこと。
【００３５】
Ｃ１−ＩＮＨの１「単位」（「Ｕ」）は、健常なドナーの新鮮なクエン酸添加血漿１ｍＬ中のＣ１−ＩＮＨ活性と同等である。Ｃ１−ＩＮＨは、「国際単位」（「ＩＵ」）で決定することもできる。これらの単位は、現在の世界保健機関（ＷＨＯ）のＣ１−ＩＮＨ濃縮物（０８／２５６）に関する規準に基づいており、正常な局所ヒト血漿プールを用いた国際共同研究で較正されたものである。一般に、ＵとＩＵは等価である。
【００３６】
本明細書で使用する用語「遺伝性血管浮腫」（「ＨＡＥ」）とは、血行中のＣ１−ＩＮＨの低含量及び阻害活性が低いことに、起因する血管浮腫（ＨＡＥ  Ｉ型）、又は機能的な活性の低いＣ１−ＩＮＨの抗原レベルが正常か上昇して存在することに起因する（ＨＡＥ  ＩＩ型）を意味する。本明細書で使用する用語「ＨＡＥ」とは、また、正常なＣ１−ＩＮＨを有するＨＡＥ（ＨＡＥ  ＩＩＩ型としても知られる）を包含し、最近、２つの下位分類、（１）第ＸＩＩ因子遺伝子における突然変異による結果として、第ＸＩＩ因子の活性が増加し、ブラジキニンの高産生をもたらすＨＡＥ、及び（２）未知の遺伝的原因のＨＡＥ、で記載されている。遺伝性血管浮腫に罹患している患者には、浮腫発作が、毎日、毎週、毎月、又は年ベースを含む様々の間隔で起こり得る。更に、浮腫が発症しない罹患患者が存在する。
【００３７】
本明細書で使用する用語「血管浮腫」（「浮腫」）とは、組織の腫脹、例えば皮膚又は粘膜の腫脹を意味する。腫脹は、例えば、顔面、手足、又は性器で起こり得る。更に、腫脹は、胃腸管又は気道で起こり得る。他の臓器も影響を受け得る。腫脹は通常１〜３日間持続する。然しながら、数時間後又は数週間を経過する前に寛解が起こり得る。
【００３８】
用語「虚血−再灌流傷害」「ＩＲＩ」とは、虚血又は酸素欠乏の後に血液が組織へ戻る「再灌流」により起こる損傷である。組織への直接的損傷は、血流の中断により生起し、主に生存組織への酸素供給の喪失に起因し、元に戻らなければ最終的には梗塞に至る。然しながら、損傷が元に戻った場合、虚血組織の再灌流は逆説的に「間接的」に更なる損傷を引き起こす可能性がある。長期間の虚血の際は、低酸素状態のみに起因する「直接的な」損傷が主要なメカニズムである。虚血の期間がより短い場合、引き起こされる損傷に対して、「間接的」な再灌流を介在する損傷が、より多く寄与する。
【００３９】
本明細書で使用する用語「網膜症」とは、急性又は持続性の眼の損傷に関する。網膜症は糖尿病（糖尿病性網膜症に至る）、動脈性高血圧（高血圧性網膜症に至る）、新生児の未熟児（未熟児網膜症に至る）、電離放射線への曝露（放射線網膜症）、直射日光への暴露（日光網膜症）、鎌状赤血球症、網膜血管疾患、例えば網膜静脈閉塞又は網膜動脈閉塞、外傷、特に頭部及び他の疾患又は状態により引き起こされ得る。網膜症の多くのタイプは増殖性であり、最も頻繁に、新血管形成又は血管の過増殖をもたらす。新しい血管の新芽形成である、血管新生は顕著な前兆であり、特に黄斑が冒された場合には失明又は重度の視力喪失に至る可能性がある。稀に、網膜症が遺伝病により起こる場合もある。
【００４０】
本明細書で使用する用語「急性治療」又は「治療」とは、急性症状を示す患者の治療を意味する。急性の治療は、症状の出現から症状の完全寛解に至るまで、発生し得る。急性治療が、所望の治療効果を達成するまで１回又は数回発生しても良い。
【００４１】
本明細書で使用する用語「予防的治療」又は「予防」又は「防止」は、症状の発症を防止するための患者の治療を意味する。予防的治療は、日、週又は月に規則的な間隔で発生しても良い。予防的治療も、場合により発生しても良い。
【００４２】
用語「約」とは、測定システムの限界に部分的に依存する特定の値に関し、許容誤差範囲内であることを意味する。
【００４３】
本明細書で使用する用語「ＨＭＷＣ」又は「高分子量成分」とは、最小の機能性サブユニットとして定義されるモノマーを有する、自己会合した、即ち多量体化した、又は凝集した蛋白質種の何れか、特にＣ１−ＩＮＨを意味する。ＨＭＷＣは、更に５種の特性、大きさ、可逆性／解離性、立体配座、化学修飾及び形態に基づいて更に分類される（Ｎａｒｈｉら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．２０１２、１０１（２）：４９３−４９８）。
【００４４】
ＨＭＷＣ、特に多量体及び凝集体は、治療用蛋白質製品に対する免疫応答を引き出す潜在能力があると、半世紀以上に亘り、認識されている（Ｇａｍｂｌｅ、Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ａｐｐｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９６６、３０（５）：４４６−４５５）。蛋白質ＨＭＷＣが免疫応答を誘発又は増強し得る根本的なメカニズムには、とりわけ以下のものが含まれる：効率的なＢ細胞活性化を引き起こすＢ細胞受容体の広範な架橋（Ｄｉｎｔｚｉｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８９、１４３）：１２３９−１２４４；Ｂａｃｈｍａｎｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ１９９３、２６２（５１３８）：１４４８−１４５１）、抗原取り込み、処理と症状の亢進、及び免疫刺激性の危険シグナルをトリガーする（Ｓｅｏｎｇ  ａｎｄ  Ｍａｔｚｉｎｇｅｒ、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００４、４（６）：４６９−４７８）。このようなメカニズムにより、高親和性のアイソタイプスイッチしたＩｇＧ抗体の産生に必要とされるＴ細胞の救援補充を増強することができ、これにより抗体反応は、生成効率の中和と最も関連する（Ｂａｃｈｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｚｉｎｋｅｒｎａｇｅｌ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２３５−７０）。
【００４５】
薬剤の「最終剤形（ＦＤＦ）」という用語は、最終容器に包装し、ラベルを付けることを含む、製造のすべての段階を経た薬剤の剤形である。
【００４６】
本発明における用語「生理学的に許容される塩」とは、ヒトの病状の治療、特にキニン形成に関連する障害の治療又は予防に主に使用される製剤中の塩類を意味する。更に、生理学的に許容される塩とは、液体、好ましくは、水性液体に可溶性のイオン性物質を意味し、生理学的に許容される塩は、その溶解したカチオン及びアニオンの形態で存在し、しかも、人体に投与した後に重大な有害な副作用を引き起こさない。この意味で、製剤又はその最終剤形は、他の賦形剤と共に生理学的実務に相応しい。
【００４７】
用語「浸透圧濃度」又は「モル浸透圧濃度」とは、溶液１リットル（Ｌ）当たりの溶質のオスモル数（Ｏｓｍ）として定義される溶質濃度の尺度（ｏｓｍｏｌ／Ｌ、又はＯｓｍ／Ｌ）である。モル浸透圧濃度は溶液の単位体積当たりの溶質粒子のオスモル数を測定し、一方、モル濃度は溶液の単位体積あたりの溶質のモル数を測定する。
【００４８】
浸透圧は、当業者に周知の方法により、例えば凝固点降下を測定することによって測定することができる。凝固点降下により、溶液のモル浸透圧濃度を測定する方法は、例えば、欧州薬局方２．２．３５及び米国薬局方第７８５章に記載されている。例えば、水については、１ｋｇの水に溶質１オスモルを添加すると、凝固点を１．８６℃降下する。
【００４９】
浸透圧の理論的計算は、当業者に周知である。簡単に説明すると、溶液の各成分について、浸透係数ｆ、水中で解離する分子の粒子数ｎ、及びその成分のモル濃度の積を計算し、次にその結果を全成分にわたり合計する。したがって、溶液のモル浸透圧濃度（Ｏｓｍ／Ｌ）は以下のように計算することができる。
Ｏｓｍ／Ｌ＝ΣｆiｎiＣi
指数ｉは、塩イオンなどの特定の成分の同一性を表す。
ｆはその特定成分の浸透圧係数であり、
ｎは、その特定の成分の分子が水中で解離する粒子の数であり、
Ｃはその特定の成分のモル濃度である。
【００５０】
モル濃度は若干の温度依存性を有する。本発明の目的のためには、大気圧下で２〜３５℃、好ましくは１０〜３０℃、より好ましくは２５℃における濃度を示す。
【００５１】
特許を請求する注射用の組成物に通常使用される濃度において、特定の成分各々について浸透係数が１であると仮定すると、溶液のモル浸透圧濃度を計算するのに十分な近似が得られる。例えば、塩化ナトリウムは、水中で２つの粒子に解離する特定の成分であり、
塩化ナトリウムのモル浸透圧濃度はそのモル濃度の２倍である。リン酸二水素ナトリウム／リン酸水素二ナトリウムは、両成分が略等モルの混合物で適用可能なｐＨ範囲にあるため、水中で各々２個又は３個の粒子に解離し、リン酸塩のモル浸透圧濃度はそのモル濃度の２．５倍である。本明細書で使用するように、特許請求する製剤中のＣ１−ＩＮＨのモル濃度は非常に低く、浸透圧を計算する間は無視することが出来る。
【００５２】
モル浸透圧濃度の測定値とモル浸透圧濃度の計算値との間の偏差が生じることはよく知られている。特に、Ｃ１−ＩＮＨのような高度に荷電した蛋白質が存在する溶液中では、ドナン電位のために、測定されたモル浸透圧濃度に対するその蛋白質の強い影響があり得る。従って、本発明の用語「モル浸透圧濃度」又は「計算上のモル浸透圧濃度」とは、計算したモル浸透圧濃度を意味する。
【００５３】
「ＤＳＦ」という用語は、「示差走査型蛍光分析」を意味し、標的蛋白質の安定性と蛋白質にリガンドが結合した時のその後の蛋白質の融解温度の上昇を測定する熱移動アッセイ法又は熱変性アッセイ法である。低分子量リガンドの結合は、蛋白質の熱安定性を高めることが出来る。この安定性の変化は、Ｓｙｐｒｏ（登録商標）Ｏｒａｎｇｅのような蛍光色素の存在下で熱変性曲線を実施することにより測定する。蛋白質が展開した時、露出した疎水性表面は色素に結合し、蛍光の増加が起こる。安定性曲線及びその中点値（融解温度ｍｔ）は、温度を徐々に上げて蛋白質を展開し、各点の蛍光を測定することにより得られる。言い換えれば、ＤＳＦは、蛍光色素の存在下での蛋白質の熱展開を監視し、蛋白質展開温度は、蛋白質が展開するに連れて露出するその蛋白質の疎水性部分に対して親和性を有するその色素の蛍光の増加によって測定する。融解温度の差は、蛋白質安定性を増強するかどうかに従って緩衝液条件、添加剤をランク付けするために使用しても良い。
【００５４】
融解温度（ｍｔ）は、展開した状態のギブス自由エネルギー（ΔＧｕ）によって定義される。温度の上昇は、折り畳んだ蛋白質部分の減少とΔＧｕの減少をもたらす。ΔＧｕは折り畳んだ蛋白質と展開した蛋白質との比が等しい状態でゼロに等しい。対応する温度が、蛋白質の融解温度である。従って、融解温度は、蛋白質の熱安定性を評価するための尺度である。本発明の製剤は、表２〜３に見られるように、従来技術のＣ１−ＩＮＨ製剤と比較して融解温度の上昇を提示する。より高い安定性を有するこのような製剤は、Ｃ１−ＩＮＨの貯蔵を、より長くするためにより適したものにしている。
【００５５】
用語「ＷＦＩ」は「注射用水」を意味する。これは、溶媒が水である非経口投与のための医薬品の製造に使用することを意図した水である。又は、非経口投与のための物質又は製剤を溶解又は希釈するために使用する水を意味する。これは、化学物質及び微生物の除去における蒸留と同等又はそれより優れた蒸留又は精製工程により精製される。
【００５６】
動粘度（ｍ2／ｓ）は絶対粘度［Ｐａ＊ｓ＝ｋｇ／ｍ・ｓ］と流体の密度［ｋｇ／ｍ3］との比である。
【００５７】
本発明において、「クエン酸ナトリウム」又は「Ｎａ−クエン酸塩」又は「Ｎａ3−クエン酸塩」という用語は、クエン酸三ナトリウム、すなわちＮａ3Ｃ（ＯＨ）（ＣＯＯ-）（ＣＨ2ＣＯＯ-）2を意味する。
【００５８】
Ｃ１エステラーゼ阻害剤
本発明の特定の実施態様において、Ｃ１−ＩＮＨは、血漿由来又は組換えＣ１−ＩＮＨである。更なる実施態様では、前記阻害剤は、天然に存在するヒト蛋白質又はその変異体と同一である。他の実施態様では、前記阻害剤はヒトＣ１−ＩＮＨである。他の実施態様では、前記阻害剤は、ヒトＣ１−ＩＮＨ蛋白質の組換え類似体である。
【００５９】
本発明によれば、Ｃ１−ＩＮＨは、その生物学的利用能及び／又は半減期を改善し、その効力を改善し、及び／又は潜在的な副作用を低減するために改変され得る。この改変は、組換え合成の間に又は他の方法で導入することができる。そのような改変の例としては、Ｃ１−ＩＮＨのグリコシル化、ペグ化及びＨＥＳ化又は記述のＣ１−ＩＮＨのアルブミン融合である。いくつかの実施態様では、Ｃ１−ＩＮＨは、Ｃ１−ＩＮＨとアルブミンとの融合構築物、特にヒトアルブミンを含む。いくつかの実施態様では、アルブミンは組換え蛋白質である。特定の実施態様において、Ｃ１−ＩＮＨとアルブミン蛋白質は直接、又はリンカーポリペプチドを介して結合している。蛋白質のグリコシル化及びアルブミン融合に関する更なる開示については、国際特許公報第ＷＯ  ０１／７９２７１号を参照されたい。
【００６０】
Ｃ１−ＩＮＨの調製
本発明の目的のために、Ｃ１−ＩＮＨは、当業者公知の方法に従って製造しても良い。
例えば、血漿由来Ｃ１−ＩＮＨは、ドナー数人から血漿を収集することにより調製しても良い。血漿ドナーは、当技術分野で定義されているように健康でなければならない。好ましくは、数千人（１０００人以上）の健康なドナーの血漿をプールし、場合により更に処理する。治療目的のＣ１−ＩＮＨを調製するための例示的な工程は、米国特許第４，９１５，９４５号に開示されている。又、他の実施態様において、Ｃ１−ＩＮＨは、当該分野で公知の技術を用いて、天然の組織供給源から収集し濃縮しても良い。組換えＣ１−ＩＮＨは、公知の方法によって調製しても良い。
【００６１】
特定の実施態様では、Ｃ１−ＩＮＨはヒト血漿由来である。更なる実施態様において、Ｃ１−ＩＮＨは組換体発現によって調製する。
【００６２】
Ｃ１−ＩＮＨを含む市販の製品は、例えば、血漿由来のＢｅｒｉｎｅｒｔ（登録商標）（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ社製）である。Ｂｅｒｉｎｅｒｔ（登録商標）はＡ．Ｆｅｕｓｓｎｅｒら（Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  ２０１４，５４：２５６６−７３）、に従って作製され、遺伝性血管浮腫及び先天性欠損の治療に必要である。また、これに替わるＣ１−ＩＮＨを含む市販製品としては、血漿由来のＣｅｔｏｒ（登録商標）（Ｓａｎｑｕｉｎ社製）、Ｃｉｎｒｙｚｅ（登録商標）（Ｓｈｉｒｅ社製）及び組換えＲｕｃｏｎｅｓｔ（登録商標）／  Ｒｈｕｃｉｎ（登録商標）（Ｐｈａｒｍｉｎｇ社製）が挙げられる。
【００６３】
Ｃ１−ＩＮＨ製剤
本発明は、（ａ）Ｃ１−ＩＮＨを含む安定な医薬製剤に関する。本発明のこれら高濃縮製剤は、低い粘度を有する少容量の製剤として供給される。製剤は、耐容性が良好であり、静脈内及び特に皮下投与に適している。
【００６４】
前記製剤中のＣ１−ＩＮＨの濃度は、約４００ＩＵ／ｍＬ〜２，０００ＩＵ／ｍＬ、好ましくは約４００ＩＵ／ｍＬ〜１，２００ＩＵ／ｍＬ、より好ましくは約４００ＩＵ／ｍＬ〜１０００ＩＵ／ｍＬ、より好ましくは  約４００ＩＵ／ｍＬ〜８００ＩＵ／ｍＬ、より好ましくは約４００ＩＵ／ｍＬ〜６５０ＩＵ／ｍＬ、最も好ましくは約５００ＩＵ／ｍＬ又はその間の何れかの範囲である。
【００６５】
更に、前記製剤は、下記、
（ｂ）計算上のモル浸透圧濃度２０〜１２０ｍＯｓｍ／Ｌを有するクエン酸ナトリウム、又は計算上のモル浸透圧濃度６０〜１２０ｍＯｓｍ／Ｌを有するリン酸二水素ナトリウム／リン酸水素二ナトリウム、及び
（ｃ）（ｂ）の物質以外の、１種又はそれ以上の、計算上のモル浸透圧濃度１５０〜６００ｍＯｓｍ／Ｌを有する、生理学的に許容される塩、又は、
計算上のモル浸透圧濃度が５０〜５００ｍＯｓｍ／Ｌを有する、グリシン及び／又は１種又はそれ以上の塩基性の及び／又は酸性のＬ−アミノ酸、から選択される１種又はそれ以上のアミノ酸又はそれらの塩類、又は、
（ｂ）の物質以外の、併せて計算したモル浸透圧濃度が８０〜７４０ｍＯｓｍ／Ｌを有する、１種又はそれ以上の生理学的に許容される塩、と、
グリシン及び／又は１種又はそれ以上の塩基性の及び／又は酸性のＬ−アミノ酸、から選択される１種又はそれ以上のアミノ酸又はそれらの塩類、
とを含み、
ここで、製剤全体の計算上のモル浸透圧濃度は１７０〜８００ｍＯｓｍ／Ｌである。
【００６６】
特定の実施態様において、クエン酸ナトリウムの計算上のモル浸透圧濃度は８０〜１２０ｍＯｓｍ／Ｌ、より好ましくは８０ｍＯｓｍ／Ｌ〜１２０ｍＯｓｍ／Ｌである。又は他の特定の実施態様では、クエン酸ナトリウムの計算上の浸透圧モル濃度は３０〜８０ｍＯｓｍ／Ｌ、より好ましくは４０〜７０ｍＯｓｍ／Ｌである。
【００６７】
他の特定の実施態様において、リン酸二水素ナトリウム／リン酸水素二ナトリウムの計算上のモル浸透圧濃度は、６０〜９０ｍＯｓｍ／Ｌである。
【００６８】
更に、特定の実施態様では、（ｂ）の物質以外の、１種又はそれ以上の生理学的に許容される塩は、計算上の浸透圧モル濃度１７０〜５００ｍＯｓｍ／Ｌ、より好ましくは２３０〜４７０ｍＯｓｍ／Ｌを有する。他の特定の実施態様では、１種又はそれ以上のアミノ酸は、計算上の浸透圧モル濃度１７０−５００ｍＯｓｍ／Ｌ、より好ましくは２３０−４７０ｍＯｓｍ／Ｌの浸透圧モル濃度を有する。又、（ｂ）の物質以外の１種又はそれ以上の生理学的に許容される塩と１種又はそれ以上のアミノ酸とは、共に、計算上の浸透圧モル濃度１５０〜６００ｍＯｓｍ／Ｌ、より好ましくは２３０〜４７０ｍＯｓｍ／Ｌを有する。
【００６９】
他の実施態様では、製剤全体の計算上のモル浸透圧濃度は２３０〜７００ｍＯｓｍ／Ｌ、より好ましくは２５０−６００ｍＯｓｍ／Ｌである。更により好ましくは、モル浸透圧濃度は２７０〜３３０ｍＯｓｍ／Ｌ、最も好ましくは２８０〜３３０ｍＯｓｍ／Ｌ、又は何れかの範囲の中間にある。他の更に好ましい実施態様では、モル浸透圧濃度は４００〜６００ｍＯｓｍ／Ｌ、最も好ましくは４５０〜５５０ｍＯｓｍ／、Ｌ又は何れかの範囲の中間にある。
【００７０】
様々な実施態様において、生理学的に許容される塩は、アルカリ金属及び／又はアルカリ土類金属塩である。特定の実施態様において、生理学的に許容される塩は、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩又はカルシウム塩、好ましくはナトリウム塩である。
【００７１】
種々の実施態様において、生理学的に許容される塩の塩基は、炭酸塩、硫酸塩、塩化物などのハロゲン化物、及びＥＤＴＡ、酢酸塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、及び酒石酸塩などのカルボキシル基含有塩基から選択し得るが、これに限定するものではない。特定の実施態様では、生理学的に許容される塩の塩基は、塩化物、硫酸塩、酢酸塩又はコハク酸塩である。
【００７２】
特定の実施態様では、生理学的に許容される塩は、ＮａＣｌ、Ｎａ2ＳＯ4、Ｎａ−酢酸塩及びＮａ−コハク酸塩から選択される。
【００７３】
特定の実施態様において、１種又はそれ以上の塩基性Ｌ−アミノ酸は、Ｌ−アルギニン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−リシン又はそれらの塩、好ましくは塩酸塩から選択される。いくつかの実施態様において、１種又はそれ以上の酸性Ｌ−アミノ酸は、Ｌ−グルタミン酸及びＬ−アスパラギン酸又はその塩、好ましくはそのナトリウム塩から選択される。
【００７４】
特定の実施態様では、医薬製剤は１種類のアミノ酸のみを含む。
【００７５】
特定の実施態様では、医薬製剤は、例えば、ヒアルロニダーゼのような組織透過性増強剤を含まない。
【００７６】
様々な実施態様において、医薬製剤のｐＨは、約６．７〜７．５、約６．８〜７．４、約６．９〜７．３、約７．０〜７．２の間、又は何れかの範囲の間である。最も好ましい実施態様では、製剤のｐＨは約７．０、約７．１又は約７．２である。
【００７７】
いくつかの実施態様において、医薬製剤は、
（ａ）Ｃ１−ＩＮＨ  約４００〜６２５ＩＵ／ｍＬ、
（ｂ）クエン酸ナトリウム約２０〜１２０ｍＯｓｍ／Ｌ  、
（ｃ）グリシン約５０〜３００ｍＯｓｍ／Ｌ、及び
（ｄ）塩化ナトリウム約１９０〜４００ｍＯｓｍ／Ｌ、
を含み、製剤全体の計算上のモル浸透圧濃度は約２６０〜８００ｍＯｓｍ／Ｌである。
【００７８】
好ましい実施態様において、医薬製剤は、
（ａ）Ｃ１−ＩＮＨ約４００〜６２５ＩＵ／ｍＬ、
（ｂ）クエン酸ナトリウム約４０〜６０ｍＯｓｍ／Ｌ、
（ｃ）グリシン約１００〜２００ｍＯｓｍ／Ｌ、及び
（ｄ）塩化ナトリウム約２４０〜３５０ｍＯｓｍ／Ｌ、
を含み、製剤全体の計算上のモル浸透圧濃度は約３８０〜６００ｍＯｓｍ／Ｌである。
【００７９】
より好ましい実施態様において、医薬製剤は、
（ａ）Ｃ１−ＩＮＨ約４５０〜５５０ＩＵ／ｍＬ、
（ｂ）クエン酸ナトリウム約４０〜６０ｍＯｓｍ／Ｌ、
（ｃ）グリシン約１００〜２００ｍＯｓｍ／Ｌ、及び
（ｄ）塩化ナトリウム約２４０〜３５０ｍＯｓｍ／Ｌ、
を含み、製剤全体の計算上のモル浸透圧濃度は３８０〜６００ｍＯｓｍ／Ｌである。
【００８０】
更に好ましい実施態様において、医薬製剤は、
（ａ）Ｃ１−ＩＮＨ約４９０〜５１０ＩＵ／ｍＬ、
（ｂ）クエン酸ナトリウム約４０〜６０ｍＯｓｍ／Ｌ、
（ｃ）グリシン約１００〜２００ｍＯｓｍ／Ｌ、及び
（ｄ）塩化ナトリウム約２４０〜３５０ｍＯｓｍ／Ｌ、
を含み、製剤全体の計算上のモル浸透圧濃度は３８０〜６００ｍＯｓｍ／Ｌである。
【００８１】
一実施態様では、上記製剤は、Ｃ１−ＩＮＨの他に、ｐＨが６．９〜７．１において、クエン酸ナトリウム約１３ｍＭ、グリシン約１３３ｍＭ、及びＮａＣｌ約１５４ｍＭを含む。
【００８２】
特定の実施態様において、医薬製剤は、
（ａ）Ｃ１−ＩＮＨ  約４００〜６２５ＩＵ／ｍＬ、
（ｂ）クエン酸ナトリウム約４０〜１２０ｍＯｓｍ／Ｌ、
（ｃ）硫酸ナトリウム約２００〜６００ｍＯｓｍ／Ｌ、を含み、
ここで、製剤全体の計算上のモル浸透圧濃度は約２５０〜７２０ｍＯｓｍ／Ｌである。
【００８３】
好ましい実施態様において、医薬製剤は、
（ａ）Ｃ１−ＩＮＨ  約４００〜６２５ＩＵ／ｍＬ、
（ｂ）クエン酸ナトリウム約４０〜８０ｍＯｓｍ／Ｌ、
（ｃ）硫酸ナトリウム約２００〜５００ｍＯｓｍ／Ｌ、を含み、
ここで、製剤全体の計算上のモル浸透圧濃度は約２８０〜５８０ｍＯｓｍ／Ｌである。
【００８４】
いくつかの実施態様において、医薬製剤は、
（ａ）Ｃ１−ＩＮＨ  約４００〜６２５ＩＵ／ｍＬ、
（ｂ）クエン酸ナトリウム約４０〜８０ｍＯｓｍ／Ｌ、
（ｃ）硫酸ナトリウム約２００〜３１０ｍＯｓｍ／Ｌ、を含み、
ここで、製剤全体の計算上のモル浸透圧濃度は約２８０〜３５０ｍＯｓｍ／Ｌである。
【００８５】
他の実施態様において、医薬製剤は、
（ａ）Ｃ１−ＩＮＨ  約４００〜６２５ＩＵ／ｍＬ、
（ｂ）クエン酸ナトリウム約４０〜８０ｍＯｓｍ／Ｌ、
（ｃ）硫酸ナトリウム約４００〜５００ｍＯｓｍ／Ｌ、を含み、
ここで、製剤全体の計算上のモル浸透圧濃度は約４００〜５５０ｍＯｓｍ／Ｌである。
【００８６】
特定の実施態様では、医薬製剤は、ｐＨ７．０、７．１又は７．２で表１に開示した濃度を有する賦形剤を含む。
【００８７】
様々な実施態様において、開示した製剤中のＣ１−ＩＮＨの融解温度は、ＤＳＦにより測定され、約５５℃以上、約５６℃以上、又は約５７℃以上である。特定の実施態様において、ＤＳＦにより測定される融解温度は、約５５〜６０℃、約５６〜６０℃又は約５７〜６０℃である。ＤＳＦにより測定される融解温度は、約＋／−１℃の測定差を有する。
【００８８】
更なる実施態様において、提供する製剤は、１種又はそれ以上の界面活性剤及び／又は１種又はそれ以上の保存剤及び／又は１種又はそれ以上の抗酸化剤を含む。
【００８９】
特定の実施態様において、医薬製剤は、ＰＳ８０（ポリソルベート８０）及び／又はＰＳ２０（ポリソルベート２０）を含み得る。医薬製剤において、ＰＳ８０及び／又はＰＳ２０は、濃度約０．５〜２ｍｇ／ｍＬで存在し得る。
【００９０】
特定の実施態様において、保存剤及び／又は抗酸化剤は、ベンジルアルコール、クレゾール、フェノール、メチオニン及びグルタチオンからなる群から選択される。医薬製剤において、保存剤及び／又は抗酸化剤は、濃度約１〜５ｍＭで存在し得る。
【００９１】
提供する製剤は、当該技術分野で公知の医薬担体及び賦形剤を更に含んでも良い（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、Ｆｒｏｋｊａｅｒら、Ｔａｙｌｏｒ＆Ｆｒａｎｃｉｓ  ２０００又は“Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ”、第３版、Ｋｉｂｂｅら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ  ２０００）。
【００９２】
いくつかの実施態様では、Ｃ１−ＩＮＨはヒトＣ１−ＩＮＨである。特定の実施態様では、ヒトＣ１−ＩＮＨはヒト血漿由来であるか、又はヒトＣ１−ＩＮＨは組換発現体である。好ましくは、Ｃ１−ＩＮＨはヒト血漿由来である。
【００９３】
いくつかの実施態様において、製剤は、Ｃ１−ＩＮＨの絶対量を約１，０００ＩＵ／ＦＤＦ、約１，２００ＩＵ／ＦＤＦ、約１，５００ＩＵ／ＦＤＦ、約１，８００ＩＵ／ＦＤＦ、約２，１００ＩＵ／ＦＤＦ、約２，４００ＩＵ／ＦＤＦ、約２，７００ＩＵ／ＦＤＦ又は約３，０００ＩＵ／ＦＤＦ含むか、又はその間の何れかの絶対量である。好ましい実施態様において、製剤は、Ｃ１−ＩＮＨの絶対量を少なくとも１，２００ＩＵ／ＦＤＦ、ＦＤＦ当たり１，５００ＩＵ、又はＦＤＦ当たり少なくとも１，８００ＩＵの含む。
【００９４】
様々な実施態様において、液状医薬製剤は、約０．１〜１０ｍＬ／ＦＤＦ、約１〜５ｍＬ／ＦＤＦ又は約３ｍＬ／ＦＤＦの容量又はその間の何れかの容量で提供する。好ましい実施態様において、製剤は、ＦＤＦ当たり約３ｍＬ、ＦＤＦ当たり約４ｍＬ又はＦＤＦ当たり約６ｍＬの容量の水溶液として提供する。
【００９５】
種々の実施態様において、製剤調製直後に測定した製剤の動粘度は、１０ｍｍ2／ｓ未満、好ましくは８ｍｍ2／ｓ未満、より好ましくは６ｍｍ2／ｓ未満、更により好ましくは５ｍｍ2／ｓ未満である。調製直後とは、調製後１日以内を意味する。動粘度の測定は２０℃で行った。好ましくは、３つの試料の動粘度を、Ｓｃｈｏｔｔ−ＧｅｒaｔｅＧｍｂＨ社製、Ｈｏｆｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙによる、毛細管粘度計を用いて測定する。絶対粘度を得るには、約１ｇ／ｃｍ3と仮定し得る対応する溶液の質量密度に動粘度を掛けなければならない。（絶対粘度（ｃＰ）＝動粘度（ｃＳｔ）×密度（（ｋｇ／ｍ3））。
【００９６】
種々の実施態様において、本発明の医薬製剤は、ＳＥＣ−ＨＰＬＣにより直ちに測定されるように、ＨＭＷＣを１０％未満、好ましくはＨＭＷＣを８％未満、より好ましくはＨＭＷＣを５％未満、又は更により好ましくはＨＭＷＣを３％を含む。調製後、直ちにとは、調製後１日以内を意味する。
【００９７】
特定の様々な実施態様において、上記のように測定された製剤の動粘度は、１０ｍｍ2／ｓ未満、好ましくは８ｍｍ2／ｓ未満、より好ましくは６ｍｍ2／ｓ未満、更により好ましくは５ｍｍ2／ｓ未満であり、その製剤はＨＭＷＣを１０％未満、好ましくは８％未満、より好ましくは５％未満、最も好ましくは３％未満含む。
【００９８】
いくつかの実施態様においては、医薬製剤を提供し、前記製剤は、
（ａ）凍結乾燥粉末と適切な液体とで再構成することにより得ることが出来か、又は
（ｂ）液状製剤として提供する。
【００９９】
換言すれば、様々な実施態様において、医薬製剤の成分は、手間を更にかけることなく注射に適した溶液中に存在し、即ち、製剤を安定な液状製剤として提供する。又は、その成分は、安定な凍結乾燥粉末として提供され、適切な液体それぞれの容量中で凍結乾燥粉末を再構成した時に指示された濃度に達する。再構成に適した液体は、注射用水（ＷＦＩ）を含む。再構成に適した液体は、好ましくは、ＷＦＩである。
【０１００】
本明細書で使用する用語「安定製剤」、「安定凍結乾燥粉末」、「安定凍結乾燥製剤」又は「安定液状製剤」は、少なくとも２〜８℃、好ましくは約２５℃で一定期間の保存後にＣ１−ＩＮＨ活性に顕著な低下が観察されない医薬製剤を意味する。用語「Ｃ１−ＩＮＨ活性の顕著な低下がない」とは、Ｃ１−ＩＮＨ活性が当初有するＣ１−ＩＮＨ活性の少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％であることを意味する。「Ｃ１−ＩＮＨ活性」という用語は、血漿中のＣ１−ＩＮＨ蛋白質の阻害活性を意味し、「ＩＵ／ｍＬ」で示され、例えば、発色アッセイによって制限なく測定することができる。
【０１０１】
別の実施態様では、本明細書で使用する用語「安定製剤」、「安定凍結乾燥粉末」、「安定凍結乾燥製剤」又は「安定液状製剤」は、少なくとも２〜８℃、好ましくは約２５℃で一定期間保存した後、ＨＭＷＣ形成の顕著な増加がない製剤であることを意味する。「ＨＭＷＣ形成の顕著な増加がない」という用語は、ある時点、例えば１，２，３，４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１５，１８，２１又は２４ヶ月後に、ＨＭＷＣ中の蛋白質が最大で２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、９％、８％、７％、６％、５％であること、即ち、ＨＭＷＣのパーセンテージを、この、ある時点の製剤中の全蛋白質の中のＨＭＷＣのパーセンテージとして、測定し、この値が最大で２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％であることを意味する。全蛋白質含量の中のＨＭＷＣのレベルは、ＳＥＣＨＰＬＣ（例えば、実施例３参照）により、制限なしに測定することができる。
【０１０２】
別の実施態様では、本明細書で使用する用語「安定製剤」、「安定凍結乾燥粉末」、「安定凍結乾燥製剤」又は「安定液状製剤」は、少なくとも２〜８℃、好ましくは約２５℃で一定期間保存した後、断片化の顕著な増加がない製剤であることを意味する。「断片化の顕著な増加がない」という用語は、ある時点、例えば１，２，３，４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１５，１８，２１又は２４ヶ月後に、断片が最大で２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、９％、８％、７％、６％、５％であること、即ち、断片のパーセンテージを、この、ある時点の製剤中の全蛋白質の中の断片のパーセンテージとして、測定し、この値が最大で２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％であることを意味する。全蛋白質含量の中の断片のレベルは、ＳＥＣＨＰＬＣにより、制限なしに測定することができる（例えば、実施例３参照）。
【０１０３】
別の実施態様では、本明細書で使用する用語「安定製剤」、「安定凍結乾燥粉末」、「安定凍結乾燥製剤」又は「安定液状製剤」は、ＤＳＦにより測定した融解温度が約５５℃以上、５６℃以上、又は約５７℃以上である製剤を意味する。更なる実施態様において、ＤＳＦにより測定した安定な製剤の融解温度は、約５５〜６０℃、約５６〜６０℃又は約５７〜６０℃である。一般に、ＤＳＦにより測定した融解温度は、約＋／−１℃の測定差を有する。
【０１０４】
一連の実施態様において、凍結乾燥した上で、提供する本発明の製剤は、一定期間、即ち、２５℃で、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０，４１，４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８ヶ月又はそれより長期間、安定である。より好ましい実施態様においては、凍結乾燥製剤は少なくとも６ヶ月間（２５℃）安定である。より好ましい実施態様において、凍結乾燥製剤は少なくとも１２ヶ月間（２５℃）安定である。別の好ましい実施態様において、凍結乾燥製剤は少なくとも２４ヶ月間（２５℃）安定である。
【０１０５】
別の一連の実施態様において、本明細書で提供する液状製剤は、一定期間、即ち２〜８℃で、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８ヶ月又はそれより長期間安定である。より好ましい実施態様においては、液状製剤は少なくとも６ヶ月間（２〜８℃）安定である。より好ましい実施態様において、液状製剤は少なくとも１２ヶ月間（２〜８℃）安定である。別の好ましい実施態様において、液状製剤は少なくとも２４ヶ月間（２〜８℃）安定である。
【０１０６】
他の一連の実施態様において、本明細書で提供する液状製剤は、一定期間、即ち２５℃で、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８ヶ月、又はそれより長期間安定である。好ましい実施態様においては、液状製剤は少なくとも６ヶ月間（２５℃）安定である。より好ましい実施態様において、液状製剤は少なくとも１２ヶ月間（２５℃）安定である。
【０１０７】
ある一定の実施態様では、提供する液状製剤は、２〜８℃で１ヶ月間貯蔵した後に、Ｃ１−ＩＮＨ活性を少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、及び最も好ましくは少なくとも９５％保持する。
【０１０８】
ある一定の実施態様では、提供する液状製剤は、２〜８℃で６ヶ月間貯蔵した後に、Ｃ１−ＩＮＨ活性を少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、及び最も好ましくは少なくとも９５％保持する。
【０１０９】
ある一定の実施態様では、提供する液状製剤は、２〜８℃で１２ヶ月間貯蔵した後に、Ｃ１−ＩＮＨ活性を少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、及び最も好ましくは少なくとも９５％保持する。
【０１１０】
ある一定の実施態様では、提供する液状製剤は、２５℃で１ヶ月間貯蔵した後に、Ｃ１−ＩＮＨ活性を少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、及び最も好ましくは少なくとも９５％保持する。
【０１１１】
ある一定の実施態様では、提供する液状製剤は、２５℃で６ヶ月間貯蔵した後に、Ｃ１−ＩＮＨ活性を少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、及び最も好ましくは少なくとも９５％保持する。
【０１１２】
ある一定の実施態様では、提供する液状製剤は、２５℃で１２ヶ月間貯蔵した後に、Ｃ１−ＩＮＨ活性を少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、及び最も好ましくは少なくとも９５％保持する。
【０１１３】
ある一定の実施態様では、提供する液状製剤は、３５℃で１ヶ月間貯蔵した後に、Ｃ１−ＩＮＨ活性を少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、及び最も好ましくは少なくとも６０％保持する。
【０１１４】
ある一定の実施態様では、提供する液状製剤は、３５℃で６ヶ月間貯蔵した後に、Ｃ１−ＩＮＨ活性を少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、及び最も好ましくは少なくとも６０％保持する。
【０１１５】
ある一定の実施態様では、提供する液状製剤は、３５℃で１２ヶ月間貯蔵した後に、Ｃ１−ＩＮＨ活性を少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、及び最も好ましくは少なくとも６０％保持する。
【０１１６】
ある一定の実施態様では、提供する凍結乾燥製剤は、２５℃で６ヶ月間貯蔵した後に、Ｃ１−ＩＮＨ活性を少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、及び最も好ましくは少なくとも９５％保持する。
【０１１７】
ある一定の実施態様では、提供する凍結乾燥製剤は、２５℃で１２ヶ月間貯蔵した後に、Ｃ１−ＩＮＨ活性を少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、及び最も好ましくは少なくとも９５％保持する。
【０１１８】
ある一定の実施態様では、提供する凍結乾燥製剤は、２５℃で２４ヶ月間貯蔵した後に、Ｃ１−ＩＮＨ活性を少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、及び最も好ましくは少なくとも９５％保持する。
【０１１９】
ある一定の実施態様では、提供する凍結乾燥製剤は、２５℃で４８ヶ月間貯蔵した後に、Ｃ１−ＩＮＨ活性を少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、及び最も好ましくは少なくとも９５％保持する。
【０１２０】
ある一定の実施態様では、提供する凍結乾燥製剤は、３５℃で６ヶ月間貯蔵した後に、Ｃ１−ＩＮＨ活性を少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、及び最も好ましくは少なくとも６０％保持する。
【０１２１】
ある一定の実施態様では、提供する凍結乾燥製剤は、３５℃で１２ヶ月間貯蔵した後に、Ｃ１−ＩＮＨ活性を少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、及び最も好ましくは少なくとも６０％保持する。
【０１２２】
ある一定の実施態様では、提供する凍結乾燥製剤は、３５℃で２４ヶ月間貯蔵した後に、Ｃ１−ＩＮＨ活性を少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、及び最も好ましくは少なくとも６０％保持する。
【０１２３】
従って、提供する医薬製剤は、待機薬物として利用することが出来る、即ち、例えば、遺伝性血管浮腫に罹患している患者は、このような製剤を常に（冷却の必要なしに）身近に保持することが可能であり、浮腫発作の発生時に即座に治療を受けることが出来る。更に、提供する医薬製剤は、低濃度の緩衝賦形剤のみを有する濃縮型のＣ１−ＩＮＨ製剤と比較して、長期安定性を示す。
【０１２４】
提供する医薬製剤は、皮下並びに静脈内投与に適している。一般に、皮下投与は遺伝性血管浮腫を患う患者を予防的に治療するために好ましく、静脈内投与は遺伝性血管浮腫を患う患者を急性治療するために好ましい。提供する医薬製剤は静脈内投与でも皮下投与でも、重篤な薬剤に関連する有害な副作用を引き起こすことはないが、軽度の治療創発的有害作用を引き起こすのみである。従って、提供する製剤は両方の投与に使用することが出来る。更なる実施態様では、本明細書に記載した医薬製剤は、動脈内及び／又は筋肉内投与に適している。
【０１２５】
更に、患者は、提供する医薬製剤を自己投与することができる。
【０１２６】
患者は、提供する製剤を予防的治療のために使用することが出来、更に、血管浮腫発作が発生した時、同じ製剤を急性治療に使用することが出来る。従って、患者は１種類の製剤を供給されるのみであり、これは高い患者コンプライアンスを明確に示し、かつ必要に応じて使用可能である。これらの理由から、提供する製剤は、高い患者コンプライアンスを達成し得る。
【０１２７】
更に、提供する製剤は、皮下及び静脈内注射に際し、高い局所的寛容を示し、重大な薬物関連有害事象はなく、良好な寛容性を示す。特に、提供する製剤は皮下投与において、軽度から中等度の局所部位の反応を伴うのみで安全で良好な寛容性を示す。同様に、動脈内注射及び筋肉内注射に際しても、高い局所的寛容が達成される。
【０１２８】
更に、記載した製剤を記載したいかなる用量で患者に投与しても、その後、血栓症、血餅形成、血栓塞栓合併症が起こることはない。更に、記載した製剤の投与が、患者への血栓形成リスクを増すことはない。
【０１２９】
本発明の医薬製剤は、静脈内投与時と同様に皮下投与時のＣ１−ＩＮＨの良好な生体利用能を確実にする。皮下投与の場合、ヒト患者におけるＣ１−ＩＮＨ生体利用能は、（静脈内投与と比較して）約４０〜５０％が達成され得る。この皮下の生体利用能の理由は、部分的には、注射部位での、又はリンパ管及び血管輸送中の、分解又は消費に起因する可能性がある。Ｃ１−ＩＮＨ欠乏症患者ではＣ１−ＩＮＨが迅速に代謝されることが知られている。これは、ヘテロ接合性運搬体が正常な蛋白質レベルの５０％を有する他のほとんどの遺伝性の血漿蛋白質欠損とは対照的である。
【０１３０】
更に、提供する製剤を周期的に皮下投与すると、機能的Ｃ１−ＩＮＨ活性に、用量依存的な増加をもたらし、１週間に２回、３０００ＩＵ及び６０００ＩＵの用量で、健康な人における血漿レベルの４０％を超える一定のＣ１−ＩＮＨ活性レベルを達成し、これはＨＡＥ発作を予防する上で臨床的に意義ある効果を有すると言えよう。提供する製剤を皮下投与すると、Ｃ１−ＩＮＨ機能活性時間特性は、皮下投与後のピークとトラフとの比が相当低く、かつより調和した曝露を有していることが達成される。皮下投与した際、ピークとトラフとの変動がより低いことは、予防的治療に際して特に望ましい、というのは、このような血漿レベルが、遺伝性血管浮腫に罹患した患者における血管浮腫発作の持続的な防御を確実にするからである。
【０１３１】
別の態様では、本明細書に記載した凍結乾燥製剤及び再構成に適した液体のそれぞれの量を含むキットを提供する。特定の実施態様では、好ましい液体は注射用水、好ましくは注射用の脱イオン滅菌水である。
【０１３２】
いくつかの実施態様において、キットは、本明細書に記載の医薬製剤及び注射器を含んで良い。特定の実施態様において、注射器は皮下注射に適している。他の実施態様では、注射器は静脈内注射に適している。また、これに替わる実施態様では、注射器は、皮下注射及び静脈内注射に適している。更なる実施態様では、注射器は、動脈内注射及び／又は筋肉内注射に適している。
【０１３３】
いくつかの実施態様では、キットは、更に、静脈内注射に適した針及び／又は皮下注射に適した針を更に含んでも良い。更なる実施態様では、キットは、動脈内注射に適した針及び／又は筋肉内注射に適した針を含んでも良い。
【０１３４】
別の観点では、本明細書に記載の液状製剤を予め充填したシリンジを提供する。特定の実施態様では、注射器は皮下注射に適したものである。他の実施態様では、シリンジは静脈内注射に適したものである。また、これに替わる実施態様では、注射器は、皮下注射及び静脈内注射に適したものである。更なる実施態様では、注射器は、動脈内注射及び／又は筋肉内注射に適したものである。
【０１３５】
方法と使用
提供する製剤は、様々な疾患及び症状の治療に使用することができる。
【０１３６】
いくつかの実施態様において、提供する製剤は、キニン形成に関連する障害、特に遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）、二次脳浮腫、中枢神経系の浮腫、低血圧ショック、又は人工物の表面に血液を接触させている時、又は後で起こる、浮腫の治療及び／又は予防に、使用し得る。
【０１３７】
更に、キニン形成に関連する障害、特に遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）、二次的な脳浮腫、中枢神経系の浮腫、低血圧ショック、又は患者の内部にある人工物表面との血液の接触中に又はその後の浮腫、を治療又は予防する方法であり、本明細書に記載した製剤の何れかを医薬的有効量で投与することを含む方法を提供する。
【０１３８】
特定の実施態様において、提供する製剤は、遺伝性血管浮腫、特にＨＡＥ  Ｉ型、ＨＡＥ  ＩＩ型及び／又はＨＡＥ  ＩＩＩ型の治療及び／又は予防に使用する。
【０１３９】
ある実施態様において、遺伝性血管浮腫、特にＨＡＥ  Ｉ型、ＨＡＥ  ＩＩ型及び／又はＨＡＥ  ＩＩＩ型の患者に、本明細書に記載の製剤のいずれかの薬学的有効量を投与することを含む、治療又は予防する方法を提供する。
【０１４０】
更なる実施態様では、提供する製剤は、虚血−再灌流傷害（ＩＲＩ）の治療及び／又は予防に使用することが出来、ここで、特に、ＩＲＩとは外科的な介在、特に血管手術、心臓手術、神経外科手術、外傷手術、癌手術、整形外科手術、移植、最小限の侵襲手術、即ち、薬理学的に活性な物質を送達するため、又は全体又は部分的な障害物の機械的除去のための器具の挿入、に起因するものである。
【０１４１】
更に、虚血−再灌流傷害（ＩＲＩ）、ここで、特にＩＲＩとは、特に血管手術、心臓手術、神経外科手術、外傷手術、癌手術、整形外科手術、移植、最小限の侵襲手術、即ち、薬理学的に活性な物質を送達するための、又は全体又は部分的な障害物を機械的に除去するための、器具の挿入、などの外科的な介在に起因する障害である、の治療又は予防のための、本明細書に記載の製剤の何れかの医薬的有効用量を投与することを含む方法を提供する。
【０１４２】
いくつかの実施態様では、提供する製剤を使用して、患者内の移植組織の拒絶反応を防止することが出来る。移植は、同種移植又は異種移植でも良い。
【０１４３】
更に、本明細書に記載の製剤の何れかの医薬的有効用量を投与することを含む、患者内の移植組織の拒絶反応を防止する方法を提供する。移植は、同種移植又は異種移植でも良い。
【０１４４】
更なる実施態様において、提供する製剤は、網膜症の治療及び／又は予防に使用することが出来る。
【０１４５】
更に、本明細書に記載した製剤の何れかの医薬的有効用量を投与することを含む、患者の網膜症を治療又は予防する方法を提供する。
【０１４６】
治療と投与
様々な実施態様において、急性治療は、遺伝性血管浮腫を有し、急性血管浮腫を発症した患者の治療時に生じる。
【０１４７】
更なる実施態様において、遺伝性血管浮腫に罹患した患者の予防的治療は、浮腫の発生を予防するために生じる。遺伝性血管浮腫に罹患した患者の予防的治療は、規則的に行うことが出来、及び、場合により、例えば、外科的介在、歯科治療、及び患者により浮腫の発作を認識されるような他の徴候をトリガーする状況の前に、行っても良い。
【０１４８】
様々な実施態様において、提供する製剤は、皮下注射によって投与しても良い。別の実施態様において、提供する製剤は、静脈内注射によって投与しても良い。製剤は、点滴又は大量注射によって連続的に投与しても良い。特定の実施態様では、提供する製剤は、皮下注射及び静脈内注射によって投与しても良い。更なる実施態様では、提供する製剤を患者は、自己投与しても良い。
【０１４９】
いくつかの実施態様では、提供する製剤は、患者の急性治療中に静脈内注射によって投与される。他の実施態様において、提供する製剤は、患者の予防的治療の間は皮下注射によって投与される。
【０１５０】
更なる実施態様において、提供する製剤は、動脈内注射により投与しても良い。更なる実施態様において、提供する製剤は、筋肉内注射により投与しても良い。
【０１５１】
更なる実施態様において、本明細書に記載の製剤は、医薬的に適切な任意の投与手段により患者に投与しても良い。様々な送達系が知られ、それを使用して、都合のよい任意の経路で、組成物を投与しても良い。好ましくは、本発明の製剤は全身に投与される。全身的な使用のために、本発明の治療用蛋白質は、従来方法に倣い、非経口（例えば、静脈内、皮下、筋肉内、腹腔内、脳内、肺内、鼻腔内又は経皮）又は経腸（例えば、経口、膣又は直腸）用として製剤される。製剤によっては徐放系を包含するものもある。
【０１５２】
いくつかの実施態様において、提供する医薬製剤は、調製直後の製剤の動粘度が、純水（約１ｍｍ2／ｓ）の値を上回るが、１０ｍｍ2／ｓ未満、好ましくは８ｍｍ2／ｓ未満、より好ましくは６ｍｍ2／ｓ未満、更に好ましくは５ｍｍ2／ｓ未満を有する。動粘度の測定は２０℃で行う。特定の実施態様において、前記動粘度は、約４００〜６２５ＩＵ／ｍＬのＣ１−ＩＮＨ、好ましくは約４００〜６００ＩＵ／ｍＬ、より好ましくは約４５０〜５５０ＩＵ／ｍＬを含む溶液に適用される。粘度が低いほど、特定の時間内に特定容量の薬剤を送達するのに必要な力が低くなり、薬物を静脈内及び皮下両方に適用するには利点となる。これは、患者がＣ１−ＩＮＨ製剤を自己投与する場合に特に利点となる。
【０１５３】
投薬体系
特定の実施態様では、Ｃ１−ＩＮＨを約１，２００ＩＵ、約１，５００ＩＵ、約１，６００ＩＵ、約１，７００ＩＵ、約１，８００ＩＵ、約１，９００ＩＵ、約２，０００ＩＵ、約２，１００ＩＵ、約２，２００ＩＵ、約２，３００ＩＵ約２，４００ＩＵ、約２，５００ＩＵ、約２，６００ＩＵ、約２，７００ＩＵ、約２，８００ＩＵ、約２，９００ＩＵ、約３，０００ＩＵ、約３，５００ＩＵ、約４，０００ＩＵ、約４，５００ＩＵ、約５，０００ＩＵ、約５，５００ＩＵ、又は約６，０００ＩＵ用量で、又はその間の任意の量で患者に投与する。好ましい実施態様では、約１，５００ＩＵ、約２，０００ＩＵ、約３，０００ＩＵ、約４，０００ＩＵ、約５，０００ＩＵ、又は約６，０００ＩＵの用量を患者に投与する。
【０１５４】
更なる実施態様では、Ｃ１−ＩＮＨを、約１０〜１００ＩＵ／ｋｇ体重、約２０〜９０ＩＵ／ｋｇ体重、約２０〜８０ＩＵ／ｋｇ体重、約３０〜７０ＩＵ／ｋｇ体重、約４０〜６０ＩＵ／ｋｇ体重又はその間の任意の範囲の用量で患者に投与する。
【０１５５】
ある実施態様では、皮下投与に際して、Ｃ１−ＩＮＨを、約２０〜８０ＩＵ／ｋｇ体重、約３０〜８０ＩＵ／ｋｇ体重、約４０〜８０ＩＵ／ｋｇ体重、約４０〜６０ＩＵ／ｋｇ体重、約５０〜６０ＩＵ／ｋｇ体重又はその間の任意の範囲の用量で患者に投与する。
【０１５６】
特定の実施態様では、静脈内投与に際して、好ましくは急性治療において、Ｃ１−ＩＮＨを、約１０〜６０ＩＵ／ｋｇ体重、約２０〜４０ＩＵ／ｋｇ体重、約２０ＩＵ／ｋｇ体重、又はその間の任意の範囲の用量で患者に投与する。
【０１５７】
特定の実施態様では、予防的治療において目標は、Ｃ１−ＩＮＨ活性レベルの平均に到達することである。
【０１５８】
種々の実施態様において、Ｃ１−ＩＮＨの用量を、好ましくは予防的治療において、１，２，３，４，５，６又は７日の間隔で投与する。更なる実施態様において、Ｃ１−ＩＮＨの用量を、好ましくは予防的治療において、１〜２日毎の間隔で、２〜３日毎の間隔で、３〜４日毎の間隔で、４〜５日毎の間隔で、５〜６日毎の間隔で、又は６〜７日毎の間隔で投与する。
【０１５９】
いくつかの実施態様では、Ｃ１−ＩＮＨ製剤約１，５００ＩＵのＦＤＦを１種、２種又はそれ以上含む用量を、好ましくは皮下的に２〜３日毎の間隔で投与する。
【０１６０】
更なる実施態様では、Ｃ１−ＩＮＨ製剤約３，０００ＩＵのＦＤＦを１種、２種又はそれ以上含む用量を、好ましくは皮下的に３〜４日毎の間隔で投与する。
【０１６１】
更なる実施態様では、Ｃ１−ＩＮＨ製剤の、約１，５００ＩＵ、約３，０００ＩＵ、約４，０００ＩＵ、約５，０００ＩＵ又は約６，０００ＩＵを含む用量を、好ましくは皮下的に毎週投与する。
【０１６２】
更なる実施態様では、Ｃ１−ＩＮＨ製剤の、約１，５００ＩＵ、約３，０００ＩＵ、約４，０００ＩＵ、約５，０００ＩＵ又は約６，０００ＩＵを含む用量を、好ましくは皮下的に、週に２回投与する。
【０１６３】
他の実施態様では、体重１ｋｇあたりＣ１−ＩＮＨ約２０〜４０ＩＵの用量を含む用量を、好ましくは皮下的にに２〜３日毎の間隔で投与する。
【０１６４】
更なる実施態様では、体重１ｋｇ当たりＣ１−ＩＮＨ約４０〜６０ＩＵの用量を含む用量を、好ましくは皮下に、３〜４日毎の間隔で投与する。
【０１６５】
更なる実施態様では、体重１ｋｇあたりＣ１−ＩＮＨ約４０〜８０ＩＵ、又は体重１ｋｇあたりＣ１−ＩＮＨ約４０〜６０ＩＵの用量を含む用量を、好ましくは毎週皮下投与する。
【０１６６】
更なる実施態様では、体重１ｋｇあたりＣ１−ＩＮＨ約４０〜８０ＩＵ、又は体重１ｋｇあたりＣ１−ＩＮＨ約４０〜６０ＩＵの用量を含む用量を、好ましくは皮下的に週２回投与する。
【０１６７】
他の実施態様では、Ｃ１−ＩＮＨ約１，５００ＩＵのＦＤＦを１種、２種又はそれ以上を、急性治療中の患者に、好ましくは静脈内投与により投与する。更なる実施態様では、Ｃ１−ＩＮＨ製剤約３，０００ＩＵのＦＤＦを１種、又はそれ以上を、急性治療中の患者に、好ましくは静脈内投与により投与する。
【０１６８】
更なる実施態様では、急性治療中の患者に、好ましくは静脈内投与により、体重１ｋｇあたりＣ１−ＩＮＨ約２０ＩＵを１回、２回又はそれ以上の用量を投与する。更なる実施態様では、急性治療中の患者に、体重１ｋｇあたりＣ１−ＩＮＨ約４０ＩＵの用量の１回又はそれ以上の用量を好ましくは静脈内投与により、投与する。
【０１６９】
図は次のとおりである。
【図面の簡単な説明】
【０１７０】
【図１−１】図１  種々のＣ１−ＩＮＨ製剤を５℃でインキュベートした後の、Ｃ１−ＩＮＨ活性（１ａ）、相対的Ｃ１−ＩＮＨ活性（１ｂ）、ＳＥＣＨＰＬＣによるＨＭＷＣレベル（１ｃ）及びＳＥＣＨＰＬＣによる断片レベル（１ｄ）。
【図１−２】図１−１の続き。
【図２−１】図２  種々のＣ１−ＩＮＨ製剤を２５℃でインキュベートした後の、Ｃ１−ＩＮＨ活性（２ａ）、相対的Ｃ１−ＩＮＨ活性（２ｂ）、ＳＥＣ  ＨＰＬＣによるＨＭＷＣレベル（２ｃ）及びＳＥＣＨＰＬＣによる断片レベル（２ｄ）。
【図２−２】図２−１の続き。
【図３−１】図３  種々のＣ１−ＩＮＨ製剤を３５℃でインキュベートした後の、Ｃ１−ＩＮＨ活性（３ａ）、相対的Ｃ１−ＩＮＨ活性（３ｂ）、ＳＥＣ  ＨＰＬＣによるＨＭＷＣレベル（３ｃ）及びＳＥＣ  ＨＰＬＣによる断片レベル（３ｄ）。
【図３−２】図３−１の続き。
【図４】図４  Ｃ１−ＩＮＨの平均値、Ｂｅｒｉｎｅｒｔ（登録商標）とＣＳＬ０６との生物学的同等性を示すＡｇ血漿レベル（等分目盛）。試料数量は、各時点及び群についてＮ＝１０であり、ＣＳＬ０６群（ｎ＝２）の９６時間値を保存した。
【図５−１】図５  試験計画（ａ）試験中の投薬計画及び試料採取、（ｂ）
【化１】
0006516855.tif 000002
＝ＩＶＣ１−ＩＮＨの単回投与、
【化２】
0006516855.tif 000003
＝ＳＣＣＳＬ０６の単回投与、
【化３】
0006516855.tif 000004
＝Ｃ１−ＩＮＨ機能活性及び血漿Ｃ１−ＩＮＨ及びＣ４抗原濃度の評価、
【化４】
0006516855.tif 000005
＝血漿Ｃ１−ＩＮＨ機能的活性の追加評価。
【図５−２】図５−１の続き。
【図６】図６  ＣＳＬ０６のＰＫ結果。モデル化した定常状態のトラフのＣ１−ＩＮＨ機能活性（主要評価項目；赤色四角形）及び観察したＣ１−ＩＮＨ機能活性（黒三角）。データポイントは、平均及び信頼区間９５％を示す。
【図７】図７  観察したＣ１−ＩＮＨ機能活性の最終集団ＰＫモデル対個々のＣ１−ＩＮＨ機能活性の予測。識別線（ｌｉｎｅ  ｏｆ  ｉｄｅｎｔｉｔｙ、実線）を参照として含む。
【図８−１】図８（ａ）Ｃ１−ＩＮＨ濃縮物１０００ＩＵｐｄの治療用量をＩＶ投与、又はＣＳＬ０６の（ｂ）１５００ＩＵ、（ｃ）３０００ＩＵ、若しくは（ｄ）６０００ＩＵをＳＣ投与した後のモデル化した週２回毎のＣ１−ＩＮＨ機能活性。機能活性の中央値（実線）、５及び９５パーセンタイル（陰影領域）及び４０％のＣ１−ＩＮＨ機能活性（破線）を示した。
【図８−２】図８−１の続き。
【０１７１】
実施例
これらの実施例は、本発明を説明するものであり、決して本発明を限定するものではない。
【０１７２】
実施例１  Ｃ１−ＩＮＨ製剤の生成
Ｂｅｒｉｎｅｒｔ（登録商標）の製造工程（Ａ．Ｆｅｕｓｓｎｅｒら、Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  ２０１４，５４：２５６６−７３による）に基づいて製造されるが、（再構成後に）Ｃ１−ＩＮＨ濃度が増加して濃縮される、Ｃ１−ＩＮＨ濃縮物を使用して、数種のＣ１−ＩＮＨ製剤を調製する。種々のＣ１−ＩＮＨ製剤は、凍結乾燥したＣ１−ＩＮＨ濃縮物をＷＦＩ中に約１５００ＩＵ／ｍＬの濃度で溶解することにより調製する。ＰＤ１０脱塩カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社製）を、既述の濃度（表１）で各々の賦形剤を含有する標的とする製剤緩衝液で平衡化する。次に、少量のＣ１−ＩＮＨ溶液をＰＤ１０カラムごとに適用する。Ｃ１−ＩＮＨを対応する製剤緩衝液を用い、カラム排除容量以内で溶離する。Ｃ１−ＩＮＨ濃度は発色アッセイ法（Ｂｅｒｉｃｈｒｏｍ  Ｃ１−Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ、Ｓｉｅｍｅｎｓ社製）によって測定し、対応する製剤緩衝液を用いて各々の濃度に調整する。
【０１７３】
【表１】
0006516855.tif 000006
【０１７４】
【表２】
0006516855.tif 000007
【０１７５】
【表３】
0006516855.tif 000008
【０１７６】
【表４】
0006516855.tif 000009
【０１７７】
実施例２  ＤＳＦによるＣ１−ＩＮＨの融解温度測定
ＤＳＦによるＣ１−ＩＮＨの融解温度の決定のために、種々の緩衝液中で緩衝されたＣ１−ＩＮＨ濃縮物（Ａ．Ｆｅｕｓｓｎｅｒら、Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  ２０１４，５４：２５６６−７３によるＢｅｒｌｅｒｔ（登録商標）の製造工程に基づいて製造した）を、塩及び／又は他の賦形剤、水及びＳｙｐｒｏ  Ｏｒａｎｇｅ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）の保存溶液と混合し、Ｃ１−ＩＮＨの濃度が３６ＩＵ／ｍＬの、表２及び表３に記載したような、緩衝液、塩及び／又は他の賦形剤の最終的濃度、及び当初のＳｙｐｒｏ  Ｏｒａｎｇｅ保存溶液の１：１０００の希釈液を得た。アッセイ定量反応当たりの全容量は５０μｌであった。ＤＳＦアッセイ法は、主に、（その蛋白質の濃度ではなく）蛋白質製剤の賦形剤の型と濃度を最適化するために使用するので、使用されるＣ１−ＩＮＨ濃度は、このアッセイ法の効率化のために最適化される。
【０１７８】
示差走査蛍光測定法（ＤＳＦ）は、Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ  Ｃｙｃｌｅｒ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製７５００）で９６穴マルチプレートで実施した。温度は１℃／分の傾きで２５℃から９５℃に上昇させた。蛍光を、６１０ｎｍの放射波長で連続的に記録した。データは、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｓｈｉｆｔ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）を用いて分析した。Ｃ１−ＩＮＨの融解温度は、温度に対してプロットした蛍光の一次導関数の最大値として決定した。ＤＳＦで測定した融解温度の結果を表２および表３に示す。
【０１７９】
結果
このＤＳＦによるデータより、緩衝液中に賦形剤としてのリン酸塩又はクエン酸塩のみを低濃度で有する製剤の融解温度がはるかに低いことを示した。同様のことは、プロリン及びサッカロースなどの追加的な非荷電賦形剤が存在する製剤にも当てはまるが、このような製剤は、全体としての計算上のモル浸透圧濃度約３００ｍＯｓｍ／Ｌを有した。対照的に、低濃度のクエン酸塩又はリン酸塩を有し、ＮａＣｌ、硫酸ナトリウム及び／又はコハク酸ナトリウムなどの生理学的に許容される塩（又は塩類）の追加的な量を有し、かつ全体としての計算モル浸透圧濃度約３００〜５００ｍＯｓｍｌ／Ｌを有する製剤は、ＤＳＦにより測定した融解温度が５５℃又はそれ以上であり、これらのデータ（及び長期安定性データ、実施例３参照）に基づくと安定していると思われる。
【０１８０】
【表５】
0006516855.tif 000010
【０１８１】
【表６】
0006516855.tif 000011
【０１８２】
【表７】
0006516855.tif 000012
【０１８３】
実施例３  液状保存時のＣ１−ＩＮＨの長期安定性
凍結乾燥したＣ１−ＩＮＨ濃縮物（（Ａ．Ｆｅｕｓｓｎｅｒら、Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  ２０１４，５４：２５６６−７３）によるＢｅｒｌｅｒｔ（登録商標）の製造工程基づいて製造した）をＷＦＩに溶解し、濃度約１５００ＩＵ／ｍＬとした。ＰＤ１０脱塩カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社製）を目的の製剤緩衝液で平衡化した。次に、Ｃ１−ＩＮＨ１５００ＩＵ／ｍＬを２．５ｍｌ、ＰＤ１０カラム毎に適用した。カラム排除容量内で対応する製剤緩衝液（表３参照）３．５ｍｌを用いＣ１−ＩＮＨを溶離した。Ｃ１−ＩＮＨ濃度は発色アッセイ法（Ｂｅｒｉｃｈｒｏｍ  Ｃ１−Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ、Ｓｉｅｍｅｎｓ社製）により測定し、対応する製剤緩衝液を用いて５００ＩＵ／ｍＬに調整した。調製したＣ１−ＩＮＨを０．２μｍを通じてろ過し、次いで０．３ｍｌのガラス製バイアルにアリコート０．２５ｍｌで分注し、次いでシリコン栓で無菌条件下で栓をした。これを表３に開示した７種の異なるＣ１−ＩＮＨ製剤の各々について実施した。ガラス製バイアルを各々、最終的に５℃、２５℃又は３５℃の調節室に移した。各Ｃ１−ＩＮＨ製剤の試料バイアルを種々の時点で採取し、Ｃ１−ＩＮＨの活性については、発色アッセイ法により、及びＨＭＫＣの形成と断片化については、溶離緩衝液として、２０ｍＭ  ＮａＨ2ＰＯ4、２０ｍＭ  Ｎａ2ＨＰＯ4、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ＝７．２を用いるＴＳＫ−Ｇｅｌ  Ｇ３０００ＳＷＸＬ（Ｔｏｓｏｈ社製）上でＳＥＣ  ＨＰＬＣにより、試験した。
【０１８４】
結果
結果を表４〜１２及び図１〜３に示した。これらのデータより、高浸透圧硫酸ナトリウム製剤（ＣＳＬ４３、ＣＳＬ４４）がＣ１−ＩＮＨ活性保存性が最良であり、ＨＭＷＣの形成が最低であることを示した。ＰＳ８０を添加すると、長期保存におけるＨＭＷＣの量に対しては正の効果を有するが、Ｃ１−ＩＮＨ活性の保存性には負の効果を示した。高浸透圧塩化ナトリウム／グリシン製剤（ＣＳＬ０６）のような等モル浸透圧濃度の硫酸ナトリウム製剤（ＣＳＬ４１、ＣＳＬ４２）は、同様のＣ１−ＩＮＨ活性の保存性及び同等のＨＭＷＣ形成を有した。一般に、本発明による製剤は、これらのデータに基づく許容可能な長期安定性を示した。
【０１８５】
【表８】
0006516855.tif 000013
【０１８６】
【表９】
0006516855.tif 000014
【０１８７】
【表１０】
0006516855.tif 000015
【０１８８】
【表１１】
0006516855.tif 000016
【０１８９】
【表１２】
0006516855.tif 000017
【０１９０】
【表１３】
0006516855.tif 000018
【０１９１】
【表１４】
0006516855.tif 000019
【０１９２】
【表１５】
0006516855.tif 000020
【０１９３】
【表１６】
0006516855.tif 000021
【０１９４】
実施例４  Ｃ１−ＩＮＨ製剤の粘度測定
Ａ．  Ｆｅｕｓｓｎｅｒ  ら（Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  ２０１４，  ５４：  ２５６６−７３）に従って製造した市販のＣ１−ＩＮＨ製品（Ｂｅｒｉｎｅｒｔ（登録商標）、再構成後で５０ＩＵ／ｍＬ）と、Ｂｅｒｉｎｅｒｔ（登録商標）の製造工程に基づいて製造されるが、Ｃ１−ＩＮＨ濃度を増加し（再構成後に５００ＩＵ／ｍＬ）濃縮したＣ１−ＩＮＨ濃縮物とを使用して、種々のＣ１−ＩＮＨ濃度及び種々の賦形剤濃度の溶液を調製した（表１３）。試料１及び２は、Ｃ１−ＩＮＨ及び賦形剤を含みその濃度を表１３に示した。試料３は、透析法による緩衝液交換を用いて調製し、Ｃ１−ＩＮＨ及び賦形剤を含みその濃度を表１３に示した。Ｃ１−ＩＮＨ濃度は発色アッセイ法（Ｂｅｒｉｃｈｒｏｍ  Ｃ１−Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ、Ｓｉｅｍｅｎｓ社製）により測定した。
【０１９５】
【表１７】
0006516855.tif 000022
【０１９６】
３種の試料の動粘度は、ドイツ工業標準規格第５１５６２号（ＤＩＮ５１５６２）、第２部に基づくＵｂｂｅｌｏｈｄｅ（装置番号９０８８２９、毛細管タイプ５３６  ２０  ／  ＩＩ、Ｓｃｈｏｔｔ−Ｇｅｒaｔｅ社製、Ｈｏｆｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）による毛管粘度計を用いて、試料調製直後（ｔ0，当初）及び＋４０℃で１週間経過後（ｔ1）測定した（表１４  参照のこと）。４０℃で貯蔵中に如何なるバイオバーデンの増殖も避けるために、アジ化ナトリウム０．０５％で調整することによって試料を保護した。
【０１９７】
動粘度の測定は２０℃で実施した。毛細管直径０．５３ｍｍを有する毛細管粘度計を水浴中で調節した。試料を粘度計に充填し、５分間インキュベートして測定温度と平衡にした。粘度計の製造メーカーの指示する通りに、測定は２回実施し、その平均値を算出した。測定の前に、ドイツ国、Ｂｉｔｔｅｒｆｅｌｄ「ＺｅｎｔｒｕｍｆuｒＭｅｓｓｅｎ  ｕｎｄ  Ｋａｌｉｂｒｉｅｒｅｎ社製」の較正済溶液を使用して毛細管定数を確認した。
注：絶対粘度を得るには、約１ｇ／ｃｍ3と推定し得る、対応する溶液の質量密度と動粘度とを掛け合わせなければならない。（絶対粘度（ｃＰ）＝動粘度（ｃＳｔ）＊密度（ｋｇ／ｍ3））。
【０１９８】
【表１８】
0006516855.tif 000023
【０１９９】
結果
賦形剤としてクエン酸ナトリウムのみを有する試料３は、製剤１及び２に比べて顕著に高い粘度を示した。試料２（これは本発明による製剤である）の粘度の増加は、最先技術である試料１と比較するとき、許容出来るものである。４０℃で１週間経過後の試料３の粘度増加は、試料２の増加に比べ、はるかに高かった。
【０２００】
実施例５  ウサギへの静脈内投与後のＢｅｒｉｎｅｒｔ（登録商標）及びＣＳＬ０６の生物学的同等性を評価する薬物動態調査
この研究では、実施例１のＢｅｒｉｎｅｒｔ（登録商標）及びＣＳＬ０６の生物学的同等性の評価を実施し、血漿曲線の薬物動態形状を考慮して発症及び緩和の潜在的変化の洞察を得るための薬物動態（ＰＫ）調査を行った。Ｂｅｒｉｎｅｒｔ（登録商標）及びＣＳＬ０６を、１０匹のメスのＣｈｉｎｃｈｉｌｌａ  Ｂａｓｔａｒｄ（ＣＨＢ）ウサギへの静脈内経路を介して２００ＩＵ／ｋｇの用量でそれぞれ投与した。
【０２０１】
血漿中のヒトＣ１−ＩＮＨ：Ａｇレベルの９６時間後の最後の測定値までの曲線下面積（ＡＵＣ0-96h）を生物学的同等性の主要パラメータとして使用した。更に、ＰＫパラメータを調べ、生物学的同等性である、最大血漿中濃度（即ち、生体内回収率と同等）、クリアランス、平均滞留時間、最終半減期、定常状態での分布容積、及び最終分布容積、を評価した。ＰＫパラメータの測定のために、血漿試料を投与前及び投与後５分、３０分、１時間、４時間、８時間、２４時間、４８時間、７２時間及び９６時間経過後に採取し、Ｃ１−ＩＮＨ：Ａｇ血漿中濃度をＥＬＩＳＡシステムを用いて測定した。
【０２０２】
２つの製品の生物学的同等性を評価するための標的変数は、ＡＵＣ0-96h、、投与から９６時間までに観察されたＣ１−ＩＮＨ：Ａｇ血漿中濃度経時曲線の下方の面積、であった。ＣＳＬ０６群内の、及びＢｅｒｉｎｅｒｔ（登録商標）群内のＡＵＣ0-96hの幾何平均値を測定し、推定した幾何平均の比は、１０９％と計算され、両側に１００％〜１１８％の範囲の９０％信頼区間を有した。従って、可変ＡＵＣ0-96hに関して、２つの製品の平均した生物学的同等性を、８０％〜１２５％の範囲内で５％の有意水準で実証した（図４）。
【０２０３】
ＣＳＬ０６及びＢｅｒｉｎｅｒｔ（登録商標）の平均的な生物学的同等性を、他の薬物動態パラメータ：最大血漿中濃度（即ち、生体内回収と同等）、クリアランス、平均滞留時間、最終半減期、定常状態での分布容積、についても同様に、実証した。
【０２０４】
ＣＳＬ０６及びＢｅｒｉｎｅｒｔ（登録商標）について、クリアランスの幾何学的平均値を測定し、クリアランスの幾何平均比は９２％と算出され、９０％信頼区間は８５％から１００％であった。
【０２０５】
ＣＳＬ０６及びＢｅｒｉｎｅｒｔ（登録商標）について、末端半減期の幾何平均値を測定し、末端半減期の推定幾何平均比は、１０１％と算出され、９０％信頼区間は９４％〜１０９％であった。
【０２０６】
ＣＳＬ０６とＢｅｒｉｎｅｒｔ（登録商標）に関する末端分布容積の幾何平均値は、末端分布容積の推定幾何平均比が９３％であり、９０％信頼区間が８４％〜１０２％であった。
【０２０７】
結論として、この研究は、ウサギへの単回静脈内大量点滴後のＣＳＬ０６及びＢｅｒｉｎｅｒｔ（登録商標）の平均の生物学的同等性に関する特許請求の範囲を支持した。
【０２０８】
実施例６  ＣＳＬ０６を静脈内、動脈内、皮下または筋肉内に１回注射した後のニュージーランド白ウサギにおける局所寛容試験
この試験では、ウサギへの静脈内、動脈内、皮下または筋肉内注射１回後のＣＳＬ０６（試験品目）の局所寛容を評価した。雄２匹と雌１匹からなるニュージーランド白ウサギ４つの群に、静脈内または動脈内に点滴で、左側の皮下または筋肉内に注射で１回、試験品目ＣＳＬ０６を与えた。ＣＳＬ０６は、ニュージーランド白ウサギに、静脈内、動脈内点滴および皮下注射で用量３ｍＬ／注射を、および筋肉内注射で用量０．５ｍＬ／注射を、１回投与した。各動物の右側を同じ実験条件下でＮａＣｌ（対照項目）０．９％で治療した。投与後、動物を４日間継続して観察した。各動物を死亡または罹患の徴候および臨床的徴候について毎日検査した。皮膚反応は、投与前１日目および治療１時間後、２日目は、投与終了後およそ２４時間後、次に３日目および４日目に１日１回評価した。体重はグループ割当て前に１回、次いで１、３日目に記録した。観察期間の完了時に、動物を犠牲にし、次いで肉眼により死後検査を実施した。全ての動物の注射部位について顕微鏡による検査を実施した。
【０２０９】
予定外の死亡や全身性の臨床的徴候は記録されなかった。体重は、投与経路とは無関係にＣＳＬ０６による治療には影響を受けなかった。ＣＳＬ０６に関連する局所反応は、静脈内、動脈内及び筋肉内注射部位で全く観察されなかった。ＣＳＬ０６で治療した皮下注射部位で、紅斑及び浮腫が観察され、対照部位と比較すると、発生率及び／又は重症度が若干高かった。試験品の治療に関連した、注射部位での死後変化は肉眼では全く観察されなかった。顕微鏡検査では、治療に起因する所見が、静脈内（雄）、皮下（雌）及び筋肉内（雄及び雌）、左の注射部位で、時々、観察されたが、動脈内経路では差異は観察されなかった。これらの病変は、正常範囲内の反応であり、極微ないし僅少な静脈周辺のコラーゲン分解及び単核細胞浸潤（静脈内経路）、コラーゲン分解（皮下経路）及び単核細胞浸潤（筋肉内経路）から成っていた。
【０２１０】
この試験の実験条件下で、ＣＳＬ０６の単回静脈内又は動脈内点滴又は皮下又は筋肉内注射は、ウサギにおいて臨床的、局所的及び組織学的に良好な寛容性を示した。
【０２１１】
実施例７  ニュージーランド白ウサギにＣＳＬ０６、及びＢｅｒｉｎｅｒｔ（登録商標）を皮下注射１回行った後の局所寛容比較試験
２匹の雄および１匹の雌のニュージーランド白ウサギからなる３つの群に、Ｃ１−阻害剤製品でありＢｅｒｉｎｅｒｔ（登録商標）として現在市販中の試験品目、ＣＳＬ０６、又はプラセボ（Ｃ１−ＩＮＨを含まないＢｅｒｉｎｅｒｔ（登録商標）製剤緩衝液）を、左側に一度皮下注射を施す。各動物の右側を同じ実験条件下でＮａＣｌ（対照項目）０．９％で治療し、絶対対照部位としての役目を持たせた。投与量は一定の３ｍＬ／注射とした。投与の後、動物を４日間継続して観察した。各動物の死亡または罹患の徴候および臨床的徴候について毎日検査した。皮膚反応は、投与前１日目および治療１時間後、２日目は、投与終了から、およそ２４時間後、次に３日目および４日目に１日１回評価した。体重はグループ割当て前に１回、次いで１、３日目に記録した。観察期間の終了時に、動物を犠牲にし、肉眼により死後検査を実施した。全ての動物の注射部位について顕微鏡による検査を実施した。
【０２１２】
予定外の死亡および全身毒性を示す臨床的徴候は全く観察されなかった。体重は試験品目による治療の影響を受けなかった。ＮａＣｌ  ０．９％を注射した部位での反応は全く観察されなかった。  ＣＳＬ０６、Ｂｅｒｉｎｅｒｔ（登録商標）またはプラセボを注射した部位では、有意な差は全く観察されなかった。治療後に、時折、紅斑を観察することがあり、３日間持続するものもあった。この反応の重篤度は、一般的には、軽微とみなすものであった。４日目に、試験品目の１種を注射した動物２匹の注射部位で乾燥を示した。ＣＳＬ０６又はプラセボを注射した部位に、治療後、血腫も見られ、４日目まで持続した。何れの注射部位においても試験品目に関連する死後病変は肉眼では特に言及するものはなかった。注射部位に関する顕微鏡検査では、場合によっては、角化症または極微の漿膜痂皮を伴う極微な表皮肥厚症、及び、上部真皮に多かれ少なかれ好異球を伴う、単核炎症細胞の極微な又は軽微な浸潤、を示した。注射の部位（０．９％ＮａＣｌ、プラセボまたは試験品目）にかかわらず、ほとんどの動物で観察された、類似した発生率と重症度を有するこれらの小さな変化は、投与手順に関連すると考えられた。
【０２１３】
本試験の実験条件下において、ＣＳＬ０６、Ｂｅｒｉｎｅｒｔ（登録商標）及びプラセボＢｅｒｉｎｅｒｔ（登録商標）製剤緩衝液は、単回の皮下注射後に局所的に十分に寛容されると考えられた。
【０２１４】
実施例８  ニュージーランド白ウサギにＣＳＬ４３、及びＣ１−ＩＮＨを含まないＣＳＬ４３の緩衝液を皮下注射１回行った後の局所寛容比較試験
３匹の雌ニュージーランド白ウサギ、各動物の背側右側に皮下注射により１回、試験品目であるＣＳＬ４３を受けさせた。同じ実験条件下で、同じ動物の背側の左側を液状製剤緩衝液（Ｃ１−ＩＮＨを含まないＣＳＬ４３緩衝液）で治療し、絶対対照部位としての役目を持たせた。注射には、一定大量の投与量５ｍＬを使用した。投与後、動物を７２時間継続して観察した。動物の身体的状態及び臨床的兆候を外見から管理した。注射部位の写真を数回の時点で撮り、スコアシートを使用した。血液パラメータの決定にはベースライン及び７２時間に、ＳｃｉｌＶｅｔを用いた。死体解剖時に皮膚生検を行い、将来あり得る組織学的分析のために１０％ホルマリン溶液中に保存した。
【０２１５】
予定外の死亡及び全身毒性を示す臨床的徴候は観察されなかった。ＣＳＬ４３又は液体製剤緩衝液の適用直後、及び引き続く観察全期間を通じて、治療した何れの動物においても局所的反応の徴候は肉眼では観察されなかった。７２時間の観察期間の終了時に、注射部位の死体解剖を実施した。ここで、１匹の動物において、ＣＳＬ４３の注射部位の下方皮下組織中に、非常に軽微で小さな血腫（０．５ｃｍ×１．０ｃｍ）が観察され、これは手順に関連していると判断した。他のすべての動物においては、治療に伴う局所反応又は他の兆候は全く観察されなかった。更に、血液パラメータの分析に際して、何れの動物においても治療に関連する変化は全く観察されなかった。
【０２１６】
本試験の実験条件の下で、試験品目であるＣＳＬ８３１の単回皮下注射は、ウサギにおける臨床的及び局所的に十分に寛容性を有した。ＣＳＬ４３又は液体製剤緩衝液を注射した部位には有意ある差は全く観察されなかった。
【０２１７】
実施例９
研究計画
第ＩＩ相試験を実施し、ＨＡＥを有する１８人の被験者に皮下（ＳＣ）投与したＣＳＬ０６の薬物動態、薬力学、及び安全性の特性を明らかにした。
【０２１８】
３０日間に及ぶスクリーニング期間の後に、治療研究者は、被験者を、６つのＣＳＬ０６治療配列の１つに順次割り当てた（図５ａ）。最初のＣＳＬ０６投薬期間の２〜７日前に静脈内（ＩＶ）に単回投与量のＢｅｒｉｎｅｒｔ  ２０ＩＵ／ｋｇを投与した。各被験者には、４週間に亘る２回の、その期間の間には４週間までの洗い出し期間がある、治療期間を有し、その治療の間に、３通りの可能性のあるＣＳＬ０６用量のうちの２通り（短期皮下注射［５００ＩＵ／ｍＬ］として、週２回、１５００ＩＵ、３０００ＩＵ、または６０００ＩＵを投与する）を受けさせる。破綻的な発作のためには救援投薬（ＩＶ  Ｃ１−ＩＮＨ）の投与を認めるものとした。
【０２１９】
研究母集団
臨床病歴に基づき、かつスクリーニング時の試験（Ｃ１−ＩＮＨ機能活性＜５０％であるか、又は研究所の参照範囲より低いＣ１−ＩＮＨ抗原レベルである）により中央研究所で確認された、Ｃ１−阻害剤が欠損したＨＡＥ（Ｉ型）を有するか、又は機能不全のＣ１−阻害剤を有するＨＡＥ（ＩＩ型）である１８歳以上の男性又は女性被験者を、試験の適格者とした。被験者は、スクリーニング時に体重が５０ｋｇ以上かつ、１１０ｋｇ以下であり、かつ、スクリーニング来院前の３ヶ月以内に経験したＨＡＥ発作５回以下であり、スクリーニング来院前の３０日以内に起こしたＨＡＥ発作は１回以下であることを要求された。
【０２２０】
主要な除外基準には、現在のＣ１−ＩＮＨ予防療法、スクリーニングの３０日以内のアンドロゲン治療、及びスクリーニングの７日以内のＨＡＥ特異的治療を含ませた。
【０２２１】
評価項目
主要な評価項目は、モデル化及び模擬実験に基づく４週目のＣ１−ＩＮＨ機能活性平均トラフであった。観測されたトラフレベルよりもむしろモデル化から導かれたレベルを、主に選択し、研究中に起こり得るレスキューＩＶ  Ｃ１−ＩＮＨを使用する交絡した性質を説明した。
【０２２２】
二次評価項目は、各投与計画の第４週における、Ｃ１−ＩＮＨ機能活性トラフ、Ｃ１−ＩＮＨ抗原レベル及びＣ４抗原レベルの観察データに基づくベースラインからの平均及び平均変化であった。
【０２２３】
安全性を評価するために、治療創発的有害事象（ＡＥ）についての種々の概要で実施した。
【０２２４】
投与と試料採取
投与計画及び試料採取を図５ｂに図示した。Ｃ１−ＩＮＨの最初の単回用量を投与したのは、ＩＶ  Ｃ１−ＩＮＨレスキュードーズの投与を説明する際の薬物動態（ＰＫ）モデルを補助するためであり、かつ、ＳＣ  ＣＳＬ０６の生物学的利用能について研究の範囲内で推定可能にするためである。Ｃ１−ＩＮＨ機能活性、Ｃ１−ＩＮＨ血漿中濃度及びＣ４抗原レベルを、各投薬期間を通していくつかの時点で評価した。血漿Ｃ１−ＩＮＨ機能活性をＣＳＬ０６投与の直前に、追加的に評価した。
【０２２５】
ＰＫ及びＰＤ測定
血漿Ｃ１−ＩＮＨ機能活性は、検証済の発色アッセイ（Ｂｅｒｉｃｈｒｏｍ  Ｃ１−Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ、Ｓｉｅｍｅｎｓ社；参照範囲：標準の７０〜１３０％）によって評価した。血漿Ｃ１−ＩＮＨ抗原（Ｃ１試薬、Ｎ−Ａｎｔｉｓｅｒａ、Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社；参照範囲：０．１８−０．３２ｍｇ／Ｌ）及びＣ４抗原レベルを比濁分析法（Ｃ４試薬、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ社；参照範囲：０．１−０．４ｇ／Ｌ）。すべての測定は、検証済アッセイ（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ社、Ｍａｒｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて中央研究所で実施した。
【０２２６】
Ｃ４抗原レベルを薬力学（ＰＤ）パラメータとして定義したのは、Ｃ４活性がＣ１−ＩＮＨの下流で起こるからであり、従って、Ｃ１−ＩＮＨを置換するとＣ４レベルに影響を及ぼす。Ｃ４抗原のレベルは、ＩＶ血漿由来のＣ１−ＩＮＨ（ｐｄＣ１−ＩＮＨ）を投与した後に経時的にゆっくりと上昇することを示していた。
【０２２７】
ＰＫ及びＰＤ分析
主要評価項目の分析及びモデル化由来Ｃ１−ＩＮＨ機能活性の測定には、完全分析一式（ＣＳＬ０６の投与を１回以上受け、かつ、Ｃ１−ＩＮＨ機能測定を１回以上提供された患者１８人）を使用した。ＰＫのモデル化に関する以前の試験結果に基づくと、一つの投与計画当たり１２名の患者数は、Ｃ１−ＩＮＨ活性の推定値を提供するのに十分であった。各治療に関するデータを、記述統計及び混合モデルを用いて要約した。
【０２２８】
ＳＣ及びＩＶ  Ｃ１−ＩＮＨ機能活性データを、集団として、非線形混合効果モデリング（ＮＯＮＭＥＭバージョン７．２）を用いた集団ベースのアプローチに付した。ＣＳＬ０６のＰＫ特性の調査は、関連する個体相互間のバラツキを伴うクリアランス（ＣＬ）及び分布容積（Ｖ）などのパラメータに関する代表的かつ独立した値を推定することによって、評価した。被験者のベースライン特性の影響も調査した。ＣＬ、Ｖ、生物学的利用能（Ｆ）、吸収速度定数（Ｋａ）、半減期（ｔ1/2）及び増分回復などの薬物動態パラメータを、最終集団ＰＫモデルで推定した。
【０２２９】
薬物動態模擬試験を行い、Ｃ１−ＩＮＨ機能活性の定常状態トラフレベルが体重に依存するかどうかを調べた。体重効果は、基礎的な体重が、＜６０ｋｇ、６０−１００ｋｇ、及び＞１００ｋｇである範囲について、４０若しくは６０ＩＵ／ｋｇ及び固定用量の３０００若しくは４５００ＩＵの用量における、血清Ｃ１−ＩＮＨ機能活性のモデル化予測した定常状態トラフの分布を調べることによって評価した。観察されたままの評価項目の分析に関して、第４週のトラフレベルとベースラインからのトラフレベルの増加とを、ＣＳＬ０６投薬計画各々のＣ１−ＩＮＨ機能活性、Ｃ１−ＩＮＨ抗原レベル及びＣ４抗原レベルについて記述統計を用いてまとめた。
【０２３０】
安全性評価
安全性及び寛容性を、継続的な有害事象の観察及び試験全体を通じて、特定の時点に実施した安全性評価により評価した。これらの評価には、点滴部位の寛容性、実験室パラメータ、バイタルサイン、体重、身体検査、及び併用薬物の使用を含ませた。深部静脈血栓症に関するリスク評価についても、Ｃ１−ＩＮＨ濃縮物を使用するＨＡＥ患者における血栓塞栓症の副作用に関する初期の単一症例報告に基づいて実施した。
【０２３１】
結果
研究テーマ
８つの研究場所からの２２人の被験者がインフォームドコンセントに署名した。これらのうち、１８人の患者がコンピュータが作成したリストによる治療に割り当てられ、治験薬を受けた。４人の被験者は同意書に署名したが、無作為化しなかった。２人は選択／除外規準を満たさなかったためであり、２人は適格であると判断された時点で既に１８人の被験者の対象に達していたためである。被験者の人口統計学的属性を表１５に纏めた。
【０２３２】
皮下のＣＳＬ０６の後の薬物動態学的結果
第４週目におけるＣ１−ＩＮＨ機能活性の定常状態のトラフの観察した平均値は、ＣＳＬ０６用量と共に増加し（図６）、ベースラインからの増加は、１５００ＩＵ、３０００ＩＵ、及び６０００ＩＵ用量について、夫々１６．４％、３３．２％及び６３．３％であった。Ｃ１−ＩＮＨ抗原レベルもまた、ＣＳＬ０６用量と共に増加し、第４週目のＣ１−ＩＮＨ抗原のベースラインからの増加は、３回の投与計画に関し、夫々０．０２ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ及び０．１４ｍｇ／ｍＬであった。
【０２３３】
集団薬物動態モデル
Ｃ１−ＩＮＨの機能的活性は、１次吸収を有する線形１―コンパートメント薬物動態モデルによって記載した。モデルパラメータと以下のベースライン共変量である、年齢、性別、体重、体格指数、理想体重、除脂肪体重、クレアチニンクリアランス、及びＣ１−ＩＮＨ機能活性との間の関係を調査した。モデルパラメータに対して統計的に唯一有意であると同定された共変量効果は、ＣＬ及びＶに対する体重の影響であり、これを以下の関係により記述した。
【数１】
0006516855.tif 000024
ここで、ＣＬｉは個々のクリアランスの値であり、Ｖｉは個々の分布の容積、及びＷＴｉは被験者ｉの体重である。
【０２３４】
モデルの適合度プロット（図７）は、モデルの予測が観測データと一致していることを示している、というのは、点が同一線の周りに一様に分布しているからである。従って、規則的な偏りは全くなかった。
【０２３５】
モデルから誘導したＣ１−ＩＮＨトラフレベル及び薬物動態パラメータ
主要評価項目は、第４週目のＣ１−ＩＮＨ機能平均トラフレベルであり、モデル化と模擬試験に基づいたものである（図６）。Ｃ１−ＩＮＨ機能活性の平均は用量に依存した増加が観察され、ベースライン時の１４．６％から、１５００，３０００及び６０００ＩＵの用量について、夫々３１．７％、４４．３％及び８０．５％に増加した。第４週間目のモデル化した定常状態のＣ１−ＩＮＨ機能活性のトラフは、観察したＣ１−ＩＮＨ機能活性と同様であった。
【０２３６】
このモデルはまた、定常状態における、ゼロから投与間隔の終了までの間の活性―経時曲線下方面積（ＡＵＣ(0-t)）、血漿Ｃ１−ＩＮＨ機能最大活性レベル（Ｃｍａｘ）、定常状態（Ｃavg）における平均血漿活性（Ｃａｖｇ）、増分回復、及び排出半減期など他のＰＫパラメータを調査し、誘導するためにも使用した。表１６は、ＩＶ及びＳＣ  Ｃ１−ＩＮＨを投与した後の機能的Ｃ１−ＩＮＨの活性をモデル化したＰＫパラメーターを纏めたものである。ＳＣ  ＣＳＬ０６の生物学的利用能は４４％であり、ＩＶ  Ｃ１−ＩＮＨと比較して同様の排出半減期を有していた。使用したＣＳＬ０６用量は体重に基づいていないため、体重、体格指数及び理想体重を評価して、機能的Ｃ１−ＩＮＨレベルの中央値への影響を決定した。予期してなかった訳ではないが、夫々の投与計画について、体重と定常状態のトラフレベルとの間にわずかな負の関係が、見出された。固定用量を投与された低体重の患者は、より高体重の患者と比較して、比較的高い機能的Ｃ１−ＩＮＨレベルを達成することが予測された。従って、体重で用量を調整すると、体重の範囲を跨いで同等レベルの活性を達成すると予測された。
【０２３７】
【表１９】
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【０２３８】
【表２０】
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【０２３９】
薬力学
Ｃ４抗原レベルについても、又、第４週の各投与計画中に測定した。Ｃ４抗原レベルは用量依存的な態様で増加し、ＣＳＬ０６の全用量で標準化した。ＣＳＬ０６の用量１５００ＩＵ、３０００ＩＵ及び６０００ＩＵで、夫々１１．１ｍｇ／ｄＬ、１４．１ｍｇ／ｄＬ及び１８．４ｍｇ／ｄＬのＣ４レベルを観察した。Ｃ４抗原レベルは、用量１５００ＩＵ、３０００ＩＵ及び６０００ＩＵで、第４週目の基準線から夫々４．３ｍｇ／ｄＬ、５．６ｍｇ／ｄＬ及び９．１ｍｇ／ｄＬ（標準レベルは１４ｍｇ／ｄＬ）増加した。
【０２４０】
ＣＳＬ０６の固定用量を体重当たりの用量として計算した時、平均Ｃ４抗原レベルは体重当たりの用量と共に増加した。第４週目における観察したＣ４抗原レベルの平均は、２０ＩＵ／ｋｇ以下、２０ＩＵ／ｋｇ〜４５ＩＵ／ｋｇ以下、４５ＩＵ／ｋｇ〜９０ＩＵ／ｋｇ以下及び、９０ＩＵ／ｋｇを超える区分中で、夫々１１．３ｍｇ／ｍＬ、１１．７ｍｇ／ｍＬ、１８．０ｍｇ／ｍＬ及び１８．２ｍｇ／ｍＬであった。
【０２４１】
４週間に亘る、モデル化した週２回のＣＳＬ０６対ＩＶｐｄＣ１−ＩＮＨ
４週間に亘り、１週間に２回１５００ＩＵ、３０００ＩＵ及び６０００ＩＵの３種の異なるＳＣ計画を模擬試験することにより、ＳＣ  ＣＳＬ０６対ＩＶｐｄＣ１−ＩＮＨ濃縮物１０００ＩＵの投与が、Ｃ１−ＩＮＨ機能活性に及ぼす効果を、事後解析で調べた（図８）。模擬試験Ｃ１−ＩＮＨ機能活性の時間特性は、１０００ＩＵのｐｄＣ１−ＩＮＨ濃縮物を週２回注射する現在の標準的予防治療計画と比較して、ＳＣ投与後のピーク対トラフ比はより低くかつ（模擬試験と）より一致した曝露を示した。
【０２４２】
安全性
ＣＳＬ０６に関連する重篤な有害事象（ＡＥ）又は死亡、又は研究全体を通じて有害事象による治療中止は全くなかった。血栓塞栓事象は全く観察されなかった。実験室の調査監視では如何なる安全性に関する警告も示されず、しかも阻害的な自己抗体の発生の証拠はなかった。
【０２４３】
最も一般的な治療創発的有害事象（ＴＥＡＥ）は、注射部位での痛み、腫脹、挫傷及びかゆみとして報告された局所部位反応であった。
【０２４４】
ほとんどの局所部位反応の強度は軽度から中等度であり、３日以内に解決した。点滴部位の中程度の腫脹は、２つの他の低用量群（１５００ＩＵ用量群に２人（被験者１２人中）及び３０００ＩＵ用量群に１人（被験者１２人中）と比較して、６０００ＩＵ用量群（５人／被験者１２人中）の方に、より多くの被験者の報告があり、これはおそらく注射の容量に関係していた。他の局所部位反応については用量との明らかな関係はなかった。
【０２４５】
本研究中に発生したＨＡＥ関連の症状は、ＡＥとして報告した。全体として、本研究の過程で７人の患者においてＨＡＥ関連ＡＥとして、２９件が報告された。これら２９件のＨＡＥ事象の内、１１件はＳＣ  ＣＳＬ０６を用いる４週間の間隔で投薬する間に報告されたものである。１５００ＩＵの用量群では、１２人の患者のうち２人が夫々２回及び５回のＨＡＥ発作を起こした。３０００ＩＵ投与群では、２人の患者がそれぞれ１回及び３回の発作を起こした。６０００ＩＵ用量群の患者は、４週間ＳＣ投与期間中に如何なるＨＡＥ症状も経験しなかった。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図４】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図６】
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【図７】
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【図８−１】
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【図８−２】
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