(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ  ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料を摂取した家畜動物の糞便から製造した堆肥であって、２０℃〜４０℃の好気条件下で生育する放線菌数が、２０℃よりも低い温度又は４０℃よりも高い温度の好気条件下で生育する放線菌数よりも多いことを特徴とする堆肥。
【請求項２】
前記ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ  ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料が、バイオバランス（登録商標）Ｙであることを特徴とする、請求項１に記載の堆肥。
【請求項３】
大腸菌群陰性である、請求項１又は請求項２に記載の堆肥。
【請求項４】
ｐＨが６．０〜９．０であることを特徴とする、請求項１〜請求項３のいずれか１項に記載の堆肥。
【請求項５】
水分含量が４５％以上であるであることを特徴とする、請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の堆肥。
【請求項６】
放線菌又は放線菌を含有する資材が添加されていないことを特徴とする、請求項１〜請求項５のいずれか１項に記載の堆肥。
【請求項７】
請求項１〜請求項６のいずれか１項に記載の堆肥の製造方法。
【請求項８】
ａ）ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ  ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料を摂取した家畜動物から得た糞便の水分を調製するステップ、
ｂ）前記糞便を堆積して静置するステップ、
ｃ）前記工程により得られた堆肥を反転させるステップ、及び、
ｄ）前記堆肥を静置するステップ、
を備える、請求項７に記載の製造方法。
【請求項９】
前記反転は１回行われる、請求項８に記載の製造方法。
【請求項１０】
ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ  ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料が、バイオバランス（登録商標）Ｙであることを特徴とする、請求項７〜請求項９のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１１】
放線菌又は放線菌を含有する資材を添加しないことを特徴とする、請求項７〜請求項１０のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１２】
ａ）ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ  ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料を摂取した家畜動物から得た糞便の水分を調製するステップ、
ｂ）前記糞便を堆積して静置するステップ、
ｃ）前記工程により得られた堆肥を１回反転させるステップ、及び、
ｄ）前記堆肥を静置するステップ、
を備える、堆肥中の２０℃〜４０℃の好気条件下で生育する放線菌数を増加させる方法であって、放線菌又は放線菌を含有する資材を添加しないことを特徴とする、方法。
【請求項１３】
ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ  ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料が、バイオバランス（登録商標）Ｙであることを特徴とする、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
２０℃〜４０℃の好気条件下で生育する放線菌が、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ４４株及び／又はＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ５１株を含む、請求項１〜請求項６のいずれか１項に記載の堆肥。
【請求項１５】
請求項１〜請求項６、及び請求項１４のいずれか１項に記載の堆肥と乾材とを含有する、戻し堆肥。
【請求項１６】
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ４４株及び／又はＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ５１株を添加することを含む、請求項７〜請求項１０のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１７】
請求項７〜請求項１１、及び、請求項１６のいずれか１項に記載の製造方法により得られた堆肥と乾材とを混合するステップを備える、戻し堆肥の製造方法。
【請求項１８】
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ４４株及び／又はＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ５１株を添加することを含む、請求項１２又は請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１〜請求項６、及び請求項１４のいずれか１項に記載の堆肥を含有することを特徴とする、培養土、肥料、又は土壌改良剤。
【発明の詳細な説明】
【クロスリファレンス】
【０００１】
本出願は、２０１４年９月１９日に日本国において出願された特願２０１４−１９０９０４号に基づく優先権を主張するものであり、当該出願に記載された内容は全て、参照によりそのまま本明細書に援用される。また、本願において引用した全ての特許、特許出願及び文献に記載された内容は全て、参照によりそのまま本明細書に援用される。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、動物（特に家畜動物）の糞尿を原料として製造される堆肥の分野に関する。また、本発明は、前記堆肥を含有する、戻し堆肥、植物（特には野菜や米等の食用植物）育成用の肥料、培養土、又は土壌改良剤の分野に関する。
【背景技術】
【０００３】
伝統的な動物（特に家畜動物）の糞尿を原料とした堆肥の製造は、糞尿と稲藁などを混合して野積みし、長時間かけて堆肥化されていた。しかし、この方法では悪臭等の問題が生じることが問題となっていた。また、堆肥化の過程では、枯草菌などの好気性微生物による発酵を利用することから、従来、複数回の堆積切り返しを行うか、攪拌を行うことにより、悪臭を除くと共に空気との接触面や接触時間を増やす必要があった（特許文献１〜３）。【０００４】
悪臭の発生を抑制し、短期間で堆肥化させる別の手段として、有機物の分解作用を示す微生物を添加する堆肥化方法が報告されている（特許文献４〜８）。また、堆肥化過程における悪臭を抑制するための別の手段として、微生物を含む飼料を与えた家畜の糞尿から堆肥を製造することが報告されている（特許文献９〜１３）。そのほとんどは、得られた糞尿の堆肥化には従来どおりの複数回の堆積切り返しや攪拌を必要としている（特許文献９〜１２）が、特許文献１３は、バチルス属に属する微生物及びクロストリジウム属に属する微生物を含む混合微生物と、多孔質担体を組み合わせて飼料に添加することにより、１回の切り返しでも悪臭も少なく堆肥化可能であることが開示されている。【０００５】
一方、本発明者は、ラクトバチルス属デルブリッキー種に属する乳酸菌を添加した飼料を摂取した家畜の糞尿は、悪臭が抑制されることを報告している（特許文献１４）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００５−３２０１８１号
【特許文献２】特開２０１２−２４６１７７号
【特許文献３】特開２０１３−２３４０９７号
【特許文献４】特開２００８−１２７２２５号
【特許文献５】特開２０１１−６５号
【特許文献６】特開２０１１−２２３８８３号
【特許文献７】特開２０１２−２３９９４号
【特許文献８】特開２０１３−６０３７８号
【特許文献９】特開２００４−９１２２５号
【特許文献１０】特開２００７−１４２４１号
【特許文献１１】特開２００７−１４２４３号
【特許文献１２】特開２００７−１５８８１号
【特許文献１３】特開２００８−２５３２２６号
【特許文献１４】特開２００５−２４５２９９号
【発明の概要】
【０００７】
既に報告されている堆肥の製造方法、特には、特開２００８−２５３２２６号（前記特許文献１３）に記載された堆肥の製造方法においては、有用菌のほかに本来食用ではない多孔質担体を家畜に摂取させる必要があり、家畜の品質維持・健康管理上の問題が考えられていた。また、当該文献において得られた堆肥（有機肥料）の水分含有率は４４．２％と低く、水分を必要とする堆肥中の有用菌数も減少していると思われた。
【０００８】
本発明者は、家畜にとってより安全で、かつ、簡便な手法で質のよい堆肥を製造する方法について鋭意検討した結果、ラクトバチルス属デルブリッキー種に属する乳酸菌を摂取した動物由来の糞尿を原料として用いることにより、切り返しの数が１回程度でも悪臭を発することなく堆肥化が短期間で進み、かつ、堆肥中の水分含有量も豊富となる堆肥が製造できることを見出した。また、本発明者は、このような堆肥の特徴を与える堆肥中の要因を特定すべく鋭意研究を行った。その結果、好気条件下、このような堆肥においては、低温域から中温域（２０〜４０℃）において高い増殖活性を示す放線菌の数が際立って多いことを見出した。更に、本発明者らは、このような放線菌の中から特徴的であると思われる株を単離することに成功し、本発明を完成させた。
【０００９】
すなわち、本発明は、好気条件下、中温域において高い増殖活性を示す放線菌の数が際立って多いことを特徴とする堆肥、特には、ラクトバチルス属デルブリッキー種に属する乳酸菌を摂取した動物由来の糞尿を原料として用いることにより得られた堆肥に関し、具体的には以下の発明に関する。
（１）  家畜動物の糞便から製造した堆肥であって、中温域の温度範囲内の好気条件下で生育する放線菌数が、低温域又は高温域の好気条件下で生育する放線菌数よりも多いことを特徴とする堆肥。
（２）  家畜動物の糞便から製造した堆肥であって、中温域の好気条件下で生育する放線菌数が、好気堆肥中の同条件で生育する放線菌数よりも多いことを特徴とする堆肥。
（３）  前記家畜動物が、ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ  ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料を摂取した家畜動物であることを特徴とする、（１）〜（２）のいずれか１項に記載の堆肥。
（４）  前記ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ  ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料が、バイオバランス（登録商標）Ｙであることを特徴とする、（３）に記載の堆肥。
（５）  大腸菌陰性である、（１）〜（４）のいずれか１項に記載の堆肥。
（６）  ｐＨが６．０〜９．０であることを特徴とする、（１）〜（５）のいずれか１項に記載の堆肥。
（７）  水分含量が４５％以上であるであることを特徴とする、（１）〜（６）のいずれか１項に記載の堆肥。
（８）  放線菌又は放線菌を含有する資材が添加されていないことを特徴とする、（１）〜（７）のいずれか１項に記載の堆肥。
（９）  ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ  ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料を摂取した家畜動物から得た糞便を堆積することを備える、堆肥の製造方法。
（１０）  ａ）ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ  ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料を摂取した家畜動物から得た糞便の水分を調製するステップ、
ｂ）前記糞便を堆積して静置するステップ、
ｃ）前記工程により得られた堆肥を反転させるステップ、及び、
ｄ）前記堆肥を静置するステップ、
を備える、（９）に記載の製造方法。
（１１）  前記ステップａ）の期間中、放線菌数が少ないことを特徴とする、（１０）に記載の製造方法。
（１２）  前記ステップｂ）及びステップｄ）の期間中の前記糞便又は前記堆肥堆積物の内部温度が３０〜６０℃であることを特徴とする、（１０）又は（１１）に記載の製造方法。
（１３）  前記ステップａ）における水分調製が、乾材を添加することにより行われることを特徴とする、（１０）〜（１２）に記載の製造方法。
（１４）  ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ  ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料が、バイオバランス（登録商標）Ｙであることを特徴とする、（９）〜（１３）のいずれか１項に記載の製造方法。
（１５）  放線菌又は放線菌を含有する資材を添加しないことを特徴とする、（９）〜（１４）のいずれか１項に記載の製造方法。
（１６）  ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ  ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料を摂取した家畜動物から得た糞便を堆積することを備える、堆肥中の中温域の好気条件下で生育する放線菌数を増加させる方法。
（１７）  ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ  ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料が、バイオバランス（登録商標）であることを特徴とする、（１６）に記載の方法。
（１８）  放線菌又は放線菌を含有する資材を添加しないことを特徴とする、（１６）又は（１７）に記載の方法。
（１９）  以下の、ｉ）〜ｉｉ）のいずれか一つに記載の放線菌
ｉ）Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ４４株  
ｉｉ）Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ５１株
（２０）  前記中温域の好気条件下で生育する放線菌が、請求項１９に記載の放線菌の少なくとも１つを含む、（１）〜（８）のいずれか１項に記載の堆肥。
（２１）  （１）〜（８）、及び（２０）のいずれか１項に記載の堆肥と乾材とを含有する、戻し堆肥。
（２２）  少なくとも１つの（１９）に記載の放線菌を添加することを含む、（９）〜（１４）のいずれか１項に記載の製造方法。
（２３）  （９）〜（１４）、及び、（２０）のいずれか１項に記載の製造方法により得られた堆肥と乾材とを混合するステップを備える、戻し堆肥の製造方法。
（２４）  少なくとも１つの請求項１９に記載の放線菌を添加することを含む、（１６）〜（１７）のいずれか１項に記載の方法。
（２５）  （１）〜（８）、及び（２０）のいずれか１項に記載の堆肥を含有することを特徴とする、培養土、肥料、又は土壌改良剤。
（２６）  （１９）に記載の放線菌を含有する有害菌を排除するための組成物。
（２７）  （１９）に記載の放線菌を添加することを含む、土壌、堆肥又は糞尿中の有害菌の排除方法。
（２８）  有害菌が大腸菌、及び／又はストレプトコッカス属の菌である、（２６）に記載の組成物又は（２７）に記載の方法。
（２９）    有害菌が、大腸菌、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｕｂｅｒｉｓ、及びＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅから選択される１以上の菌である、（２６）に記載の組成物又は（２７）に記載の方法。
【００１０】
よって、一態様において、本発明は、家畜動物の糞便から製造した堆肥であって、中温域の好気条件下で生育する放線菌数が多いことを特徴とする堆肥に関する。本明細書において、家畜動物とは、主にその生産物（乳、肉、卵、毛、皮、毛皮、労働力など）の利用を目的として飼育される動物を意味し、例えば、牛、馬、水牛、鹿、羊、山羊、アルパカ、豚、猪、ウサギ、鶏、鶉、ダチョウ、七面鳥、ガチョウ、アヒル、キジ、ホロホロ鳥を含む。
【００１１】
好ましくは、家畜動物は、ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）  ＡＮＴＩ  ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料（以下、本段落において「本飼料」という）を摂取した家畜動物である。ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）  ＡＮＴＩ  ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０６６３）は、２００４年２月２７日付にて、産業技術総合研究所つくばセンター  特許生物寄託センター（日本国茨城県つくば市東１−１−１中央第６）（現在の独立行政法人製品評価技術基盤機構  特許生物寄託センター（千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８））に受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０６６３として寄託されている。本飼料、並びに、その製造方法及び摂取方法については、特開２００５−２４５２９９号公報に記載されている。また、本飼料として、好ましくは、バイオバランス（登録商標）Ｙ（株式会社バイオバランス、日本国愛知県名古屋市）である。本明細書において、バイオバランス（登録商標）Ｙは、株式会社バイオバランス（日本国愛知県名古屋市）が販売しているラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）  ＡＮＴＩ  ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０６６３）を含有する家畜用飼料のことである。
【００１２】
本明細書において、「中温域の好気条件下で生育する放線菌」とは、好気条件下、中温域に属する温度範囲で一定期間（例えば、１週間〜１ヶ月）培養した際の増殖率が高い放線菌を意味する。本発明の堆肥化方法を利用することにより、攪拌や強制通気、高温条件を利用しないことから、このような放線菌が十分に生育することが可能である。
【００１３】
本明細書において、「中温域」とは、例えば、１５℃〜４５℃の温度範囲を意味し、好ましくは、２０℃〜４０℃の温度範囲とすることができ、最も好ましくは３７℃である。また、本明細書において、「低温域」とは、中温域の下限値よりも低い温度を意味し、例えば、１５℃未満、２０℃未満、３７℃未満を意味しても良い。また、本明細書において、「高温域」とは、中温域の上限値よりも高い温度を意味し、例えば、４５℃よりも高い温度、４０℃よりも高い温度、又は３７℃よりも高い温度を意味しても良い。
【００１４】
本明細書において、中温域の好気条件下で生育する放線菌数が「多い」とは、例えば、同じ堆肥中に含まれる他の温度範囲（低温域、又は高温域）で生育する放線菌と比較して、中温域で生育する放線菌の数が多いことを意味する。あるいは、当該放線菌数が「多い」とは、好気堆肥と比較して、堆肥質量（例えば、１ｇ）当たりに含まれる中温域で生育する放線菌の数が多いことを意味しても良い。ここで、「好気堆肥」とは、上述のとおり空気との接触面や接触時間を人工的に増やすことにより醸成された堆肥を意味する。空気との接触面や接触時間の増加は、機械的に行われたものであっても良いし、人力で行われたものでも良い。堆肥の製造過程において、人力により空気との接触面や接触時間が増加される場合、通常は堆肥の反転（切り返しとも呼ばれる）により行われるが、本明細書における好気堆肥は、このような反転が少なくとも２回行われることにより製造された堆肥を意味する。このような好ましくは、好気堆肥は高温条件下（例えば、７０℃以上）で醸成させたものであってもよい。なお、本明細書において、特にそのように解することが不整合である場合を除き、放線菌の「数」とは、単位体積（例えば、１ｃｍ３）又は単位重量（例えば、１ｇ）当たりの数を意味する。
【００１５】
本明細書において、放線菌とは、放線菌（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）に分類される菌であれば特に限定されないが、例えば、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に分類される菌であってもよい。好ましくは、本発明における中温域の好気条件下で生育する放線菌はＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ４４株、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ５１株である。これらの放線菌は、日本国北海道帯広市において静置発酵型堆肥より分離されたものである。これらの微生物は、２０１４年９月９日付にて、独立行政法人製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センター（千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８）に受領番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−０１９３４（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ４４株）、及びＮＩＴＥ  ＢＰ−０１９３５（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ５１株）として寄託されている。
【００１６】
特に、本発明の堆肥は、作物又はそれを食するものにとって有害な微生物となりうる大腸菌が陰性である特徴を備えていても良い。ここで、大腸菌が陰性とは、大腸菌がまったく存在しないことを意味するものではなく、堆肥１ｇ当たりの大腸菌数が１００個以下であることを意味する。堆肥１ｇ当たりの大腸菌数は、例えば、堆肥１ｇを滅菌生理食塩水に懸濁させた後、段階希釈して寒天培地に播種し、３７℃で２４時間培養後、コロニー数を計数し、希釈倍率とコロニー数を掛け合わせることにより、計算することができる。
【００１７】
また、本発明の堆肥は、弱酸性〜弱アルカリ性を示すことが特徴であっても良く、好ましくは、ｐＨ６．０〜９．０であり、より好ましくは、ｐＨ６．５〜８．０である。
【００１８】
更に、本発明の堆肥は、水分含量が高いことが特徴であってもよく、例えば、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上であってよい。特に、水分量が５５％以上であれば、有用菌の生存・増殖が妨げられないことから好ましい。よって、本発明の堆肥は、水分含量が、４５〜９０％、５５〜９０％、５０〜８５％、５５〜８５％、５５〜８０％などであっても良い。
【００１９】
後述のとおり、本発明によれば、堆肥化過程において放線菌やバチルス属の微生物などを添加しなくとも、比較的嫌気的な条件下（切り替えし１回）でも既に述べたような質の高い堆肥を得ることができる。即ち、本発明の堆肥は、その製造工程において有用微生物（放線菌、バチルス属の微生物を含む）、又は有用微生物を含有する資材が添加されていないことを特徴としても良い。天然には多数の微生物が存在するため、ここで、「添加されていない」とは、少なくとも菌培養物（培養液、培養培地を含む）として添加されていないことを意味し、例えば、糞尿又は糞尿と乾材との混合物に対するＣＦＵ／ｇ−ＤＭ（乾燥重量）値として、１０３以上、１０４以上、１０５以上、１０６以上、１０７以上、１０８以上、１０９以上、１０１０以上、又は１０１１以上の有用微生物を添加しないことを意味しても良い。
【００２０】
別の態様において、本発明は、本発明の堆肥を含有する戻し堆肥に関する。本発明の戻し堆肥は、本発明の堆肥と乾材との混合物であってもよく、又は当該混合物を主成分として含んでいてもよい。例えば、本発明の堆肥と乾材との混合割合は、堆肥：乾材＝７：３〜８：２とすることができる。
【００２１】
更に別の態様において、本発明は、本発明の堆肥を含有する培養土、肥料、又は土壌改良剤に関する。培養土、肥料、又は土壌改良剤における本発明の堆肥の含有割合は、目的に応じて任意の量とすることができるが、例えば、１００％、１０％〜９０％、２０〜８０％、３０％〜７０％とすることができる。特に、本発明の堆肥はそのまま（１００％）でも培養土として使用することができる点で優れている。
【００２２】
別の態様において、本発明は、本発明の放線菌を含有する有害菌を排除するための組成物に関する。本発明の組成物は、例えば、放線菌培養物又はその加工物であってもよく、ここで加工物とは濃縮又は乾燥させて放線菌培養物を含む。本明細書において、有害菌とは、人体、家畜、農産物等に悪影響を与える菌であれば特に限定されないが、好ましくは、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）又はストレプトコッカス属の菌である。ストレプトコッカス属の菌としては、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅなどのｐｙｏｇｅｎｉｃグループ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｎｇｉｎｏｓｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓなどのａｎｇｉｎｏｓｕｓグループ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｉｔｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｎｇｕｉｎｉｓなどのｍｉｔｉｓグループ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｕｂｅｒｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｒｉｓｔａｔｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇｏｒｄｏｎｉｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｏｒａｌｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐａｒａｓａｎｇｕｉｎｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｂａｒｉｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｂｏｖｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓを挙げることができる。有害菌として好ましくは、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓ．ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ｕｂｅｒｉｓ、及びＳ．ａｇａｌａｃｔｉａｅである。例えば、有害菌としては、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＩＩＤ５６２、Ｓ．ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ  ＮＲＩＣ１９８６、Ｓ．ｕｂｅｒｉｓ  ＮＲＩＣ１１５３、及びＳ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ  ＮＲＩＣ１１３７であってもよい。
【発明の効果】
【００２３】
本発明は、家畜にとってより安全で、かつ、簡便な手法で質のよい堆肥を提供することができる。また、本発明の堆肥は、非常に簡単な方法で製造することができるため、堆肥化に要する費用、時間等を節約することができる。特に、本発明の堆肥は、堆肥中の水分含有量が豊富で、大腸菌数が非常に少なく、戻し堆肥や植物の育成用の肥料として非常に有用である。また、本発明の放線菌は、このような優れた堆肥の性質を維持する上で非常に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】ＢＢ堆肥中と一般的な好気堆肥中の放線菌数を比較したグラフである。横軸は、放線菌の培養温度を示し、縦軸は放線菌数（ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｇ堆肥）を示す。
【図２】単離した放線菌２株（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ４４株、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ５１株）のＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ  ＩＩＤ５６２株に対する抗菌活性を測定した結果を示す写真及び表である。
【図３】Ａ４４株の分子系統解析図である。
【図４】Ａ５１株の分子系統解析図である。
【図５】Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ４４株及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ５１株による、堆肥中の大腸菌排除試験の結果を表すグラフである。縦軸は大腸菌数（ＣＦＵ／ｇ）を表し、横軸は大腸菌接種からの日数を表す。グラフ中、ひし形は対照群、白丸はＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ４４株及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ５１株の培養物を０．２％添加した群、黒丸はＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ４４株及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ５１株の培養物を１％添加した群を表す。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
１．堆肥の製造方法
一態様において本発明は、ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ  ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料を摂取した家畜動物から得た糞便を堆積することを備える堆肥の製造方法に関する。上述のとおり、ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）  ＡＮＴＩ  ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０６６３）は、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０６６３として寄託されている。ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ  ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料は、当該乳酸菌を含有している飼料であれば、その形態、組成が限定されるものではなく、固形飼料の他、粉体、液体、ゲル状、グミ状などのあらゆる形態の動物が経口摂取可能な飼料を含む。また、ここで言う飼料とは、家畜動物の成育に必要な成分を含んでいるか否かは問わない。よって、例えば、無栄養であっても、家畜動物が経口摂取可能であれば飼料に含まれる。このような飼料として好ましくは、バイオバランス（登録商標）Ｙ（株式会社バイオバランス、日本国愛知県名古屋市）である。
【００２６】
より具体的には、本発明の堆肥の製造方法は、以下のステップを備えることができる：
ａ）ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ  ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料を摂取した家畜動物から得た糞便の水分を調製するステップ、
ｂ）前記糞便を堆積して静置するステップ、
ｃ）前記工程により得られた堆肥を反転させるステップ、及び、
ｄ）前記堆肥を静置するステップ、
を備える、堆肥の製造方法。
【００２７】
前記ａ）のステップの水分調製は、例えば、乾材を添加することにより行うことができる。このような乾材としては、オガクズ、カンナクズ、又はモミガラ等を挙げることができる。含有させる水分量は、堆肥の熟成が可能な水分量であり、例えば、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上であってよい。特に、水分量が５５％以上であれば、有用菌の生存・増殖が妨げられないことから好ましい。よって、本発明の方法において含有させる水分量は、４５〜９０％、５５〜９０％、５０〜８５％、５５〜８５％、５５〜８０％などであっても良い。また、本発明の方法では、堆肥化の初期過程（堆積化されたばかりの糞便）では放線菌数が少ないが、（その後、放線菌を外部から添加しなくとも）最終的に製造された堆肥には放線菌が豊富に存在する。よって、前記ステップａ）における糞便中の放線菌数は少なくてもよい。ここで、放線菌数が少ないとは、好ましくは、糞便又は堆肥１ｇ当たりの放線菌数が６．０  ｌｏｇ  ＣＦＵ未満、又は、２．０〜５．０  ｌｏｇ  ＣＦＵであることを意味しても良い。
【００２８】
前記ステップｂ）及びステップｄ）の静置（堆積）は、任意の場所で行うことができ、コンクリート等の人口地面や土等の天然の地面の上でよい。好ましくは、これらのステップは、風雨にさらされない場所で行われ、例えば、屋根等の雨除けの下、小屋等の室内、表面を水不透性のシート（例えば、ビニールシート）で覆われて行われる。また、これらのステップの間の糞便又は堆肥の堆積物の内部温度としては、例えば、３０〜６０℃、３０〜５５℃であってもよく、好ましくは、有用菌を死滅させないために、高温になりすぎない温度（例えば、５５℃以下）が選択される。静置の期間は、ステップｂ）については、１〜３ヶ月とすることができ、好ましくは、１〜２ヶ月である。ステップｄ）の静置の期間は既に熟成が進んでいることから、より短くい時間で堆肥化させることができ、例えば、２週間〜１ヶ月とすることができる。堆積する高さは、任意の高さとすることができるが、堆積・切り返しが容易な高さ、または適切な内部温度を与える高さとして、１〜５ｍとすることができ、好ましくは、２〜３ｍである。
【００２９】
ステップｃ）の堆肥の反転は、本技術分野では切り返しと呼ばれる方法であり、堆肥の内側と外側を入れ替えたり、内側と外側の堆肥を混合したりすることによって、堆肥全体の熟成度を均一にするために行われる。本発明の堆肥の製造方法は、堆肥の反転ステップ（ステップｃ））の回数が少ないにもかかわらず良質な堆肥を製造可能である。本発明の堆肥の製造方法においては、通常、堆肥の反転は１回のみでよい。
【００３０】
好ましくは、本発明の堆肥の製造方法は、本発明の家畜動物の糞便から製造した堆肥であって、中温域の好気条件下で生育する放線菌数が多いことあるいは、低温域又は高温域の好気条件下で生育する放線菌数よりも多いことを特徴とする堆肥の製造方法である。
【００３１】
また、本発明の堆肥の製造方法は、堆肥化開始時には放線菌数が少ない。それにもかかわらず、外部から放線菌を添加しなくとも、堆肥化が完了した時点では非常に多くの放線菌を含有させることができる。即ち、従来は、堆肥中の放線菌数を増やすために放線菌又は放線菌を含有する資材を堆肥の製造途中で人工的に添加していたが、本発明の方法においてはそのような添加は不要である。よって、一態様において本発明の製造方法は、その製造工程において、人工的に放線菌又は放線菌を含有する資材を添加しないことを特徴としてもよい。ここで、放線菌を含有する資材とは、放線菌を増殖させ又は付着させた植物、植物加工品（発酵物など）、土壌、又は培地等を意味する。
【００３２】
あるいは、本発明においては、堆肥の性質を向上させるために有用である、放線菌Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ４４株、及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ５１株を見出したことから、別の態様において、本発明の方法は、これらの放線菌株の少なくとも１つの菌株を堆肥化工程において添加することを備えていても良い。
【００３３】
２．放線菌数を増加させる方法
別の態様において、本発明は、ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ  ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料を摂取した家畜動物から得た糞便を堆積することを備える、堆肥中の中温域の好気条件下で生育する放線菌数を増加させる方法に関する。ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ  ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料については、上述の製造方法と同様である。
【００３４】
また、特に本発明の方法は、堆肥化開始時には放線菌数が少ないにもかかわらず、外から放線菌を添加しなくとも、堆肥化が完了した時点では非常に多くの放線菌を含有させることができる。よって、一態様において本発明の方法は、放線菌又は放線菌を含有する資材を添加しないことを特徴としてもよい。ここで、放線菌を含有する資材とは、放線菌を増殖させ又は付着させた植物、植物加工品（発酵物など）、土壌、又は培地等を意味する。
【００３５】
あるいは、本発明の方法は、本発明において特に有用であることが見出された放線菌Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ４４株、及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ５１株の少なくとも１つの菌株を堆肥化工程において添加することを備えていても良い。
【００３６】
３．戻し堆肥の製造方法
本発明の堆肥は、戻し堆肥とすることができる。よって、一態様において本発明は、前記堆肥の製造方法により得られた堆肥と乾材とを混合するステップを備える、戻し堆肥の製造方法に関する。ここで、乾材としては、オガクズ、カンナクズ、又はモミガラ等を挙げることができる。
【００３７】
４．本発明の堆肥を含有する各種プロダクトの製造方法
本発明の堆肥を含有する培養土、肥料、又は土壌改良剤は、堆肥からこれらのプロダクトを製造するための当業者周知の方法を適宜利用して、製造することができる。
【００３８】
５．本発明の堆肥、戻し堆肥、本発明の堆肥を含有する各種プロダクトの使用方法
本発明の堆肥、戻し堆肥、本発明の堆肥を含有する各種プロダクトは、それぞれの用途に応じて、当業者が通常使用する方法に準じて使用することができる。
【００３９】
６．本発明の放線菌を含有する有害菌を排除するための組成物の製造
本発明の放線菌を含有する有害菌を排除するための組成物は、例えば、放線菌培養物又はその加工物として製造することができる。放線菌の培養は放線菌に適した培地中で行うことができ、例えば、ブドウ糖と酵母エキスを水に溶解した液体培地に土壌（例えば、バーミキュライト）を混合した培地を用いることができる。Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．Ａ４４株及び／又はＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．Ａ５１株の種菌を生理食塩水に懸濁して放線菌培地に接種し、１０日間〜２月間培養を行うことにより、放線菌培養物を得ることができる。放線菌培養物は、必要に応じて、濃縮又は乾燥させて放線菌培養物の加工物としてもよい。
【００４０】
７．本発明の放線菌を添加することを含む、土壌、堆肥又は糞尿中の有害菌の排除方法
本発明の放線菌は、土壌、堆肥又は糞尿中の有害菌を排除することができることから、このような有害菌の排除方法に用いることができる。本発明の有害菌の排除方法においては、目的の土壌、堆肥又は糞尿に前記放線菌組成物を直接添加することにより行うことができ、必要に応じて添加後に混合しても良い。あるいは、牛舎、豚舎又は鶏舎等の家畜の収容施設内の糞尿が接触する箇所や戻し堆肥に予め前記放線菌組成物を散布又は混合しておいてもよい。
【００４１】
以下、本発明をより詳細に説明するため実施例を示すが、本発明はこれに限定されるものではない。なお、本願全体を通して引用される全文献は参照によりそのまま本願に組み込まれる。
【００４２】
（実施例１）ＢＢ堆肥の製造方法
バイオバランス（登録商標）Ｙ（株式会社バイオバランス、日本国愛知県名古屋市）を給与した牛の除糞物に、オガクズ加えて水分７０％に調整し、雨除けの下で２〜３ｍの高さに堆積し、１月静置した。この期間の中心温度を測定したところ、４０〜５５℃であった。その後、反転してさらに１ケ月間静置堆積を行ない堆肥化を完了した。（以下、得られた堆肥を「ＢＢ堆肥」という）
【００４３】
（実施例２）好気堆肥とバイオバランス（登録商標）Ｙにおける放線菌数の差異
実施例１で得られたＢＢ堆肥を１０５℃で６時間乾燥したものと好気堆肥各１ｇをＳＤＳ−酵母エキス（Ｙｅａｓｔ  ｅｘｔｒａｃｔ）を含む前処理液９ｇに分散し、４０℃、２０分間前処理した。その後、滅菌生理食塩水で１００００倍まで段階希釈ものを５０μｌＨＶ平板（Ｈｕｍｉｃ  ａｃｉｄ−ｖｉｔａｍｉｎ  ａｇａｒ、ＨＶ  ａｇａｒ）に塗抹した。塗抹した平板を好気条件で５５℃、３７℃、２５℃に設定したインキュベーターにて２週間培養した。出現したコロニーを放線菌として計数した。
【００４４】
ＳＤＳ−酵母エキス（Ｙｅａｓｔ  ｅｘｔｒａｃｔ）を含む前処理液は、０．５ｇのＳｏｄｉｕｍ  ｄｏｄｅｃｙｌ  ｓｕｌｆａｔｅ（関東化学）及び６０ｇのＹｅａｓｔ  ｅｘｔｒａｃｔ（ＯＸＯＩＤ）を５０ｍＭ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ  ７．０）に溶解し、１２１℃で１５分間オートクレーブして作製した。
また、放線菌分離培地であるＨＶ平板（Ｈｕｍｉｃ  ａｃｉｄ−ｖｉｔａｍｉｎ  ａｇａｒ、ＨＶ  ａｇａｒ）は、以下の組成をｐＨ７．２に調整後、１２１℃１５分オートクレーブし、常法に従い平板を作製した。
Ｈｕｍｉｃ  ａｃｉｄ＊１（和光純薬）          １．０ｇ
Ｎａ２ＨＰＯ４（関東化学）                    ０．５ｇ
ＫＣｌ（関東化学）                            １．７ｇ
ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ（関東化学）              ０．０５ｇ
ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ（関東化学）              ０．０１ｇ
ＣａＣＯ３（関東化学）                        ０．０２ｇ
Ｂ−ｖｉｔａｍｉｎｓ＊２                      ５ｍＬ
Ｃｙｃｌｏｈｅｘｉｍｉｄｅ＊３（和光純薬）    ５０ｍｇ
Ｎａｌｉｄｉｘｉｃ  ａｃｉｄ＊４（和光純薬）  ２０ｍｇ
Ａｇａｒ（極東化学）                          ２０ｇ
Ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ  ｗａｔｅｒ                １Ｌ
＊１  Ｈｕｍｉｃ  ａｃｉｄ溶液
５ｇ／１００ｍｌ  ０．２Ｎ  ＮａＯＨ溶液として１１０℃、１０分間加熱溶解したものを培地１Ｌに対して２０ｍｌ添加した。
＊２  Ｂ−Ｖｉｔａｍｉｎｓ
下記試薬（全て、和光純薬）を溶解して調製後、フィルターで濾過滅菌した。
Ｔｈｉａｍｉｎｅ−ＨＣｌ                    １００ｍｇ
Ｒｉｖｏｆｌａｖｉｎ                        １００ｍｇ
Ｎｉａｃｉｎ                                １００ｍｇ
Ｐｙｒｉｄｏｘｉｎ−ＨＣｌ                  １００ｍｇ
Ｉｎｏｓｉｔｏｌ                            １００ｍｇ
Ｃａ−ｐａｎｔｏｔｈｅｎａｔｅ              １００ｍｇ
ｐ−ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ      １００ｍｇ
ｂｉｏｔｉｎ                                ５０ｍｇ
＊３  Ｃｙｃｌｏｈｅｘｉｍｉｄｅ溶液（終濃度５０ｐｐｍ）
１０００ｍｇ／１００ｍｌのＥｔＯＨ溶液として調製し、培地１Ｌに対して５ｍｌを添加した。
＊４  Ｎａｌｉｄｉｘｉｃ  ａｃｉｄ溶液（終濃度５００ｐｐｍ）
２０００ｍｇ／１００ｍｌ、０．２Ｎ  ＮａＯＨ溶液として調製し、培地１Ｌに対して１ｍｌ添加した。
【００４５】
結果を図１に示す。２５〜３７℃で培養することにより出現した放線菌のコロニー数は好気堆肥よりもＢＢ堆肥の方が１００倍以上多かった。また、同じＢＢ堆肥内での比較においても、２５〜３７℃で培養することにより出現した放線菌のコロニー数は他の温度で培養することにより出現した放線菌のコロニー数より多かった。したがって、ＢＢ堆肥は好気堆肥よりも、放線菌による有機物分解が活用しやすい堆肥であることが示された。
【００４６】
（実施例３）抗菌活性を有する放線菌の単離
実施例２で培養したＨＶ培地から放線菌を釣菌し、ＹＭ培地で画線単離した。単離した放線菌２株（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ４４株、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ５１株）をＹＭ培地、ＨＶ培地で再度培養して生育条件を検討した。あらかじめＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ  ＩＩＤ５６２株を塗抹したＮＢ培地に、放線菌が生育したＹＭ培地片を乗せ、２４時間後における阻止円の形成を確認した。
【００４７】
結果を表１及び図２に示す。単離放線菌は、２５℃と３７℃で生育を示したが、５５℃では生育しなかった。なお、単離放線菌は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ  ＩＩＤ５６２株に対して抗菌性を示した。したがって、単離放線菌は、堆積期間中に病原菌の増殖を抑制すると考えられる。
【００４８】
【表１】
0006614673.tif 000002
【００４９】
（実施例４）放線菌株の特定
得られた放線菌株は、ＩＳＰ培地Ｎｏ．２（ＩＳＰ２）寒天培地（「ダイゴ」（日本製薬））にて３０℃、１週間好気培養を行い、光学顕微鏡（ＢＸ５０Ｆ４（オリンパス））と実体顕微鏡（ＳＺＨ１０（オリンパス））を用いて簡易形態観察を行った。また、１６Ｓ  ｒＤＮＡ塩基配列については、ＢＬＡＳＴ相同性検索、及び分子系統解析はアポロンＤＢ−ＢＡ１０．０（テクノスルガ・ラボ）、国際塩基配列データベース（ＧｅｎＢａｎｋ／ＤＤＢＪ／ＥＭＢＬ）を基に解析を行った。Ａ４４株及びＡ５１株から得られた塩基配列を、それぞれ、配列番号１及び配列番号２に示す。これらの配列と、データベース上位３０株の相同率を比較した。ソフトウェアはアポロン３．０（テクノスルガ・ラボ）を使用した。比較結果を基に分子系統解析を行い、Ａ４４株、Ａ５１株の分子系統学的位置を確認した。
【００５０】
得られた放線菌株を特定した結果を表２（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ４４株）及び表３（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ５１株）に示す。また、その結果、相同率の比較においてＡ４４株、Ａ５１株はデータベース上の既知種と完全に一致する相同率を示さず、分子系統学的位置においても何れの既知種とも異なる分子系統学的位置を示した。Ａ４４株及びＡ５１株分子系統解析図をそれぞれ図３及び図４に示す。これらの解析結果からＡ４４株、Ａ５１株をそれぞれＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．と同定した。この結果から、いずれもストレプトマイセスの新株であることが確認された。
【００５１】
【表２】
0006614673.tif 000003
【００５２】
【表３】
0006614673.tif 000004
【００５３】
（実施例５）堆肥の微生物叢
バイオバランス（登録商標）Ｙ（株式会社バイオバランス、日本国愛知県名古屋市）を給与した牛の除糞物に、オガクズ加えて水分７０％に調整して堆積した。５０〜６０℃で１ケ月間静置堆積を行なった後、反転してさらに１ケ月間静置堆積を行ない肥化を完了した。完成した堆肥について、大腸菌群はＸＭＧ培地を、放線菌はＨＡ培地を用いて検査した。
【００５４】
その結果、大腸菌群は陰性であった。放線菌は２．０×１０５ＣＦＵ／ｇとなった。これにより、乳房炎や細菌性下痢の原因となる大腸菌群を含まない衛生的堆肥であることが示された。
【００５５】
（実施例６）放線菌培養物の有害菌排除作用
（１）放線菌培養物の調製
ブドウ糖４ｇ、酵母エキス４ｇを水１Ｌに溶解し液体培地とした。バーミキュライト１ｋｇに対し、水１０ｍｌを添加し固体培地とした。液体培地と固体培地はそれぞれ１２１℃、１５分間高圧蒸気滅菌を行った後、１：１に混合し放線菌培地とした。トリプチケースソイ寒天培地に塗抹し、十分に生育させたＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．Ａ４４株とＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．Ａ５１株のコロニーを採取したものを生理食塩水に懸濁して種菌とした。種菌を放線菌培地に接種し、２８日間培養を行い、培養後の放線菌培養物に含まれる放線菌数を測定した。２８日間の培養で得られた放線菌培養物に含まれる放線菌数は８．９×１０６ＣＦＵ／ｇであった。
【００５６】
（２）放線菌培養物の有害菌排除作用試験
前記（１）で得られた放線菌培養物を堆肥の重量に対して０．２％、又は１．０％混合し、有害菌としてＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ  ＩＩＤ５６２株を１ｇ当り１０６〜１０７ＣＦＵとなるように接種した。対照群として、放線菌を添加していない堆肥に同様にＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ  ＩＩＤ５６２株を１ｇ当り１０６〜１０７ＣＦＵとなるように接種した。その後、全ての堆肥を５０〜６０℃で２８日間静置し、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ  ＩＩＤ５６２株についてＸＭＧ培地を用いて検査した。
【００５７】
結果を図５に示す。放線菌培養物を添加した堆肥はいずれも対照群と比べて大腸菌数が速やかに減少した。従って、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．Ａ４４株及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．Ａ５１株は、堆肥中に含まれる大腸菌を速やかに排除する効果を有することが示された。
【００５８】
（実施例７）放線菌の諸性質の検討
「放線菌の分類と同定」（日本放線菌学会編、日本学会事務センター）に記載の内容に基づき、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ４４株とＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ５１株の形態的性質、培養的性質、生理学的性質について検討した。Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ４４株及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ５１株の結果を、それぞれ、以下の表４及び表５に示す。
【００５９】
【表４】
0006614673.tif 000005
【００６０】
【表５】
0006614673.tif 000006
【００６１】
（実施例８）放線菌が有する抗菌活性の検討
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ４４株又はＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ５１株をＴＳ寒天培地又はＹＭ寒天培地で２５℃又は３７℃で生育させた。それぞれの生育培地を５ｍｍストローで打ち抜き、寒天片を採取した。抗菌活性を測定する対象の菌（供試菌）としては、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＩＩＤ５６２、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＮＲＩＣ０２０１、Ｓ．ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ  ＮＲＩＣ１９８６、Ｓ．ｕｂｅｒｉｓ  ＮＲＩＣ１１５３、及びＳ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ  ＮＲＩＣ１１３７を使用した。供試菌を予め塗抹したＬＢ培地に、前記寒天片を乗せ、３６〜４８時間培養後に生育阻止部分の長さを計測した。
【００６２】
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ４４株及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ５１株の阻止円を測定した結果を、それぞれ表６及び表７に示す。この結果から、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ４４株及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ５１株はいずれも中温域（２５℃）で３〜７日培養することにより、より強い抗菌活性を発揮することが示された。また、培養温度と培養培地の違により、抗菌スペクトルと抗菌活性の強さが異なっていたことから、二種類以上の抗菌活性物質を生産していることが推測された。Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ４４株は、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＩＩＤ５６２、Ｓ．ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ  ＮＲＩＣ１９８６、Ｓ．ｕｂｅｒｉｓ  ＮＲＩＣ１１５３、及びＳ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ  ＮＲＩＣ１１３７に対して抗菌活性を示し、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  Ａ５１株は、Ｓ．ｕｂｅｒｉｓ  ＮＲＩＣ１１５３、及びＳ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ  ＮＲＩＣ１１３７に対して抗菌活性を示すことが明らかとなった。
【表６】
0006614673.tif 000007
【００６３】
【表７】
0006614673.tif 000008
【図１】
0006614673.tif 000009
【図２】
0006614673.tif 000010
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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