(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＳＰＣ及びＩＮＦγに起因する炎症に有効な抗炎症剤の評価又は選択方法であって、
以下の（Ａ）〜（Ｄ）の工程を含む方法、
（Ａ）表皮細胞にＳＰＣ及びＩＮＦγを添加、さらに抗炎症剤を添加する工程、
（Ｂ）当該表皮細胞において発現又は産生するＮＧＦβの発現量又は産生量を測定する工程、
（Ｃ）（Ｂ）において算出されたＮＧＦβの発現量または産生量を、表皮細胞に抗炎症剤を添加した場合と、添加していない場合と、で比較する工程。
（Ｄ）上記（Ｃ）の結果に基づいて、皮膚に刺激を与えた場合に有効な抗炎症剤の評価又は選択を行う工程。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗炎症剤の新規な評価または選択方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
炎症は、種々の外因性または内因性の組織障害刺激に対する生体の応答である。感染などにより生体組織の一部が障害されると、組織からは様々な生体反応修飾物質が産生・放出され、炎症が生じる。初期にはＴＮＦ−αやＩＬ−１などの炎症性サイトカインが炎症部位で産生され、炎症部位より産生されるＩＬ−８などの走化因子によって、単球やリンパ球、好中球が炎症組織に浸潤する。
【０００３】
炎症性疾患の治療には様々な抗炎症剤が用いられるが、種々の炎症性メディエーターの産生するものとしては、いまだに決め手となるようなものはない。その理由の一つとしては、上述したように炎症反応には多数の遺伝子産物が関与するため、サイトカイン産生をブロックするだけでは不十分と考えられることである。
【０００４】
一方、最近では表皮細胞に刺激物質を接触させることで、ＬｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅＢ４、ＮＯ等の炎症性の物質を産生することが知られている（非特許文献１）。よって、表皮細胞を刺激することで発赤、熱感、膨張、疼痛などの炎症が発症することが想起される。また、皮膚に対する刺激としては紫外線や熱、乾燥などの日常的な刺激があり、表皮細胞による炎症性物質の発現、産生抑制を評価することで、皮膚刺激に起因する炎症に有効な抗炎症剤を選択することが期待されている。実際、表皮細胞に紫外線を照射し、表皮細胞が分泌するマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）の抑制が評価されている（特許文献１）。しかし、表皮細胞に刺激物質を接触させることに起因して表皮細胞が産生する炎症性物質を抑制する評価方法は確立されていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】痒みにおける表皮ケラチノサイトの重要性  安東嗣修  ４０３． ＹＡＫＵＧＡＫＵ  ＺＡＳＳＩ  １２６（６）  ４０３−４０８（２００６）
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０１４−９１７２８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従って、本発明の課題は、表皮細胞の炎症性物質産生を増加させる刺激物質、刺激物質を表皮細胞に接触させることにより増加する炎症性物質を明確にすること。及び表皮細胞への刺激と炎症の相関関係を示し、これによって皮膚の刺激に起因する炎症に有効な抗炎症剤の評価を確立する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、皮膚刺激によることを想定した刺激物質を用いて表皮細胞に添加、産生が促進された炎症性物質の測定、さらに抗炎症効果が知られているレモングラス抽出物を添加することによって、炎症性物質の産生抑制を確認し、皮膚の刺激に起因する炎症に有効な抗炎症剤の評価方法を見出した。
【０００９】
刺激物質としてはＳＰＣ、ＳｕｂｓｔａｎｃｅＰ、ＩＦＮγを想定し、用いた。ＳＰＣ（スフィンゴシルホスフォリルコリン）とは自己の細胞や組織が壊れることにより外部に放出され、自然免疫を活性化させる分子の総称ＤＡＭＰｓ（ダメージ関連分子パターン）の一例であり、アトピー性皮膚炎患者の肌で濃度が高いことが報告されている。
【００１０】
ＳｕｂｓｔａｎｃｅＰとは１１個のアミノ酸からなる神経ペプチドで、一次知覚神経の神経伝達物質であり、主として痛覚情報伝達物質として知られている。ＳｕｂｓｔａｎｃｅＰは末梢神経に含有されており、神経終末から遊離され、放出されたＳｕｂｓｔａｎｃｅＰは血管拡張や血漿蛋白の漏出をもたらしたり、紅斑や浮腫を形成したり、肥満細胞の脱顆粒を促進して、ヒスタミンやロイコトリエンなどを遊離させ、一次刺激を引き起こす要因ともなる。ＳｕｂｓｔａｎｃｅＰについても表皮細胞から産生されることが知られている。
【００１１】
ＩＦＮγは、Ｔｈ１細胞等が分泌するサイトカインであって、抗ウイルス作用を賦与したり、免疫系の活性化および調整に関わる作用を有することが知られている。Ｔｈ１細胞は樹状細胞等の真菌刺激を受けたときなどに産生されることが知られている。
【発明の効果】
【００１２】
本発明者らは、ＳＰＣ及びＩＦＮγ、ＳｕｂｓｔａｎｃｅＰが表皮細胞の刺激物質となり炎症性物質を増加させること、及び当該表皮細胞が上記刺激物質により、炎症性の物質であるＩＬ−８、ＮＯ、ＮＧＦβの産生亢進、ＩＬ−８遺伝子、ＮＧＦβ遺伝子、ＳｕｎｓｔａｎｃｅＰ遺伝子の発現が促進されることを見出した。これにより、上記の刺激物質と炎症に相関関係が確認され、皮膚の刺激に起因する炎症に有効な抗炎症剤の評価、選択方法を見出した。
【００１３】
よって、本発明によれば、皮膚刺激に起因する炎症に有効な、抗炎症剤を簡単に評価し選択することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】表皮細胞にＳＰＣを添加したもので、ＩＬ−８遺伝子発現量を示した図である。
【図２】表皮細胞にＳＰＣを添加したもので、ＩＬ−８産生量を示した図である。
【図３】表皮細胞にＳＰＣを添加したもので、細胞あたりのＩＬ−８産生量を示した図である。
【図４】表皮細胞にＳＰＣを添加したもので、細胞活性量を示した図である。
【図５】表皮細胞にＳＰＣを添加したもので、ＮＯ産生量を示した図である。
【図６】表皮細胞にＳＰＣを添加したもので、ＮＧＦβ遺伝子発現量を示した図である。
【図７】表皮細胞にＩＦＮγ及びＳｕｂｓｔａｎｃｅＰを添加したもので、ＮＧＦβ遺伝子発現量を示した図である。
【図８】表皮細胞にＩＦＮγ及びＳｕｂｓｔａｎｃｅＰを添加したもので、ＮＧＦβ産生量を示した図である。
【図９】表皮細胞にＩＦＮγ及びＳＰＣを添加したもので、ＮＧＦβ産生量を示した図である。
【図１０】表皮細胞にＩＦＮγ及びＳＰＣを添加したもので、ＳｕｂｓｔａｎｃｅＰの遺伝子発現量を示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明の方法は、以下の工程（Ａ）〜（Ｄ）により行われる。
（Ａ）表皮細胞に刺激物質を添加、さらに抗炎症剤を添加する工程、
（Ｂ）当該表皮細胞において発現、産生した炎症性の物質を測定する工程、
（Ｃ）（Ｂ）において算出された炎症性の物質の発現量または産生量を、表皮細胞に抗炎症剤を添加した場合と、添加していない場合で比較する工程。
（Ｄ）上記（Ｃ）の結果に基づいて、皮膚に刺激を与えた場合に有効な抗炎症剤の評価または選択を行う工程。
【００１６】
なお、本発明における表皮細胞とは、表皮を構成する細胞であればよく、表皮ケラチノサイト、ランゲルハンス細胞、メラノサイト等が挙げられる。特に、皮膚の外側の表皮を大部分を構成する表皮ケラチノサイトが好ましい。
【００１７】
また、本発明における抗炎症剤としては、広く皮膚に対して適用する物質や組成物であれば問題ないが、防腐剤、界面活性剤、色素沈着抑制剤、チロシナーゼ活性阻害剤、メラノサイトメラニン生成抑制剤、保湿剤、細胞賦活剤／代謝活性化剤、抗酸化剤、活性酸素消去剤／ラジカル生成抑制剤、脂肪代謝促進剤、収斂剤、抗炎症剤／インターロイキン産生抑制剤／消炎剤、抗脂漏剤、抗菌剤／抗ウイルス剤、血流促進剤／血管刺激剤、抗アンドロゲン剤、構造タンパク質分解酵素（エラスターゼ、コラゲナーゼ、ケラチンプロテアーゼ、セリンプロテアーゼ、インテグリン分解酵素、インボルクリン分解酵素、フィラグリン分解酵素、ラミニン分解酵素、フィブロネクチン分解酵素、プロテオグリカン分解酵素等）活性阻害剤／構造タンパク質分解酵素発現抑制剤、構造タンパク質合成促進剤、ムコ多糖類（ヒアルロン酸又はその塩、コンドロイチン硫酸、プロテオグリカン等）分解酵素阻害剤、ムコ多糖類合成促進剤、細胞間脂質生成促進剤／細胞間脂質状態改善剤、角質溶解剤／角層剥離促進剤、プラスミノーゲンアクチベーター拮抗阻害剤、メイラード反応阻害剤、テストステロン５αレダクターゼ活性阻害剤、有臭物質消去剤等の有効成分や、その他、医薬品、医薬部外品又は化粧料の形態を形成する上で使用が好まれる植物系原料、動物系原料、微生物系原料、その他天然物原料等を由来とするエキスや代謝物等成分、又は種々の化合物等が挙げられる。
【００１８】
また、本発明で用いる刺激物質としては体内に存在し、表皮細胞へ炎症に起因する刺激を与えることが予測される物質なら特に限定されない。例としては、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、ＳＰＣ、ＳｕｂｓｔａｎｃｅＰ、ＬＰＳ、ＩＬ−１、ＴＳＬＰ等が挙げられる。刺激物質を培地に添加した後は、室温で１２時間〜７２時間程度行うのが好ましい。
【００１９】
このようにして評価、選択された抗炎症剤は皮膚刺激に伴う炎症の治療剤または予防剤としての提供が可能になり、皮膚刺激の関与が推定される、乾癬や紫外線による皮膚炎症、蕁麻疹、慢性関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、気管支炎、接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎等の治療または予防にも使用することが可能となる。よって、本発明の方法により選択された抗炎症剤を上記目的で医薬品、医薬部外品、化粧品に有効成分として配合することが可能となる。
【実施例】
【００２０】
（試験条件）
以下の試験１〜９を行った。試験１〜８について、細胞は市販の正常ヒト表皮角化細胞（クラボウ）を、細胞培養培地は前培養培地としてＥｐｉＬｉｆｅ  ＫＧ２（クラボウ）培地を使用し、本試験用培地として前培養培地からｈＥＧＦ、ハイドロコルチーゾン、ＢＰＥを除いたものを使用した。前培養、本試験培養ともに、メーカーの説明書に従い行った。尚、抗炎症剤としてはレモングラス抽出物（一丸ファルコス社製）を使用した。また、試験１〜８の結果についてはいずれもコントロールを１００として相対値を示した。
【００２１】
（試験１）ＳＰＣ添加によるＩＬ−８遺伝子発現
【００２２】
（試験方法）
正常ヒト表皮角化細胞を、培養プレートに播種し、１００％コンフルエント状態になるまで前培養した。その後、本試験用培地に置換し、２４時間培養した。翌日、新たな本試験用の培地に置換し、抗炎症剤を培養液中に添加した。細胞を２４時間培養したのち、ＳＰＣ１０μＭを正常ヒト表皮角化細胞に添加し、４．５時間培養後、ｔｏｔａｌ  ＲＮＡを調整し、Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＰＣＲ法にてＩＬ−８のｍＲＮＡ相対発現量を測定した。尚、抗炎症剤の終濃度は０．１％である。
【００２３】
（試験結果）
結果は図１に示した通り、正常ヒト表皮角化細胞に、ＳＰＣを添加するとＩＬ−８遺伝子の発現が亢進され、抗炎症剤の添加によるＩＬ−８遺伝子の発現抑制が確認できた。
【００２４】
（試験２）ＳＰＣ添加によるＩＬ−８産生
【００２５】
（試験方法）
正常ヒト表皮角化細胞を、培養プレートに播種し、１００％コンフルエント状態になるまで前培養した。その後、本試験用培地に置換し、２４時間培養した。翌日、新たな本試験用の培地に置換し、抗炎症剤を培養液中に添加した。細胞を２４時間培養したのち、ＳＰＣ１０μＭを正常ヒト表皮角化細胞に添加し、さらに２４時間培養した。培養終了後上清を回収し、上清中のＨｕｍａｎ  ＩＬ−８  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ♯ＥＨ２ＩＬ８）を用いて測定した。上清回収後の細胞（起痒物質添加時間を２４時間経過した細胞）は、Ｃｅｌｌｃｏｕｎｔｉｎｇ  ｋｉｔ−８（ＤＯＪＩＮＤＯ）を用い、細胞活性量の測定に供した。尚、抗炎症剤の終濃度は０．１％である。
【００２６】
（試験結果）
結果は図２、図３、図４に示した通り、正常ヒト表皮角化細胞に対し、ＳＰＣを添加させるとＩＬ−８の産生が亢進され、抗炎症剤の添加によるＩＬ−８の産生抑制が確認できた。
【００２７】
（試験３）ＳＰＣ添加によるＮＯ産生
【００２８】
（試験方法）
正常ヒト表皮角化細胞を、培養プレートに播種し、１００％コンフルエント状態になるまで前培養した。その後、本試験用の培地に置換し、２４時間培養した。その後、再度、本試験用の培地に置換し、抗炎症剤を培養液中に添加し、２４時間培養した。翌日、本試験用の培地に置換しＳＰＣ１０μＭを添加し、２０分培養した。培養終了後上清を回収し、そのＮＯ濃度をＮｉｔｒａｔｅ／Ｎｉｔｒｉｔｅ  Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｃａｙｍａｎ♯７８００５１）にて測定した。尚、抗炎症剤の終濃度は０．１％である。
【００２９】
（試験結果）
結果は図５に示した通り、正常ヒト表皮角化細胞に対し、ＳＰＣを添加させるとＮＯの産生が亢進され、抗炎症剤の添加によるＮＯの産生抑制が確認できた。
【００３０】
（試験４）ＳＰＣ添加によるＮＧＦβ遺伝子発現
【００３１】
（試験方法）
正常ヒト表皮角化細胞を、培養プレートに播種し、１００％コンフルエント状態になるまで前培養した。その後、本試験用の培地に置換し、２４時間培養した。翌日、新たな本試験用の培地に置換し、抗炎症剤を培養液中に添加した。細胞を２４時間培養したのち、ＳＰＣ１０μＭを正常ヒト表皮角化細胞に添加し、４．５時間培養後、ｔｏｔａｌ  ＲＮＡを調整し、Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＰＣＲ法を行い、ＮＧＦ−β遺伝子の発現量をもとめた。尚、同時に、Ｃｅｌｌｃｏｕｎｔｉｎｇ  ｋｉｔ−８（ＤＯＪＩＮＤＯ）を用い、細胞活性量を測定した。尚、抗炎症剤の終濃度は０．１％である。
【００３２】
（試験結果）
結果は図６に示した通り、正常ヒト表皮角化細胞に対し、ＳＰＣを添加させるとＮＧＦβ遺伝子の発現が亢進され、抗炎症剤の添加によるＮＧＦβ遺伝子の発現抑制が確認できた。
【００３３】
（試験５）ＩＦＮγ、ＳｕｂｓｔａｎｃｅＰの併用によるＮＧＦβ遺伝子発現
【００３４】
（試験方法）
正常ヒト表皮角化細胞を、培養プレートに播種し、１００％コンフルエント状態になるまで前培養した。その後、本試験用の培地に置換し、２４時間培養した。翌日、新たな本試験用の培地に置換し、抗炎症剤を培養液中に添加した。細胞を３時間培養したのち、ＳｕｂｓｔａｎｃｅＰの終濃度が１００μＭになるように正常ヒト表皮角化細胞に添加し、１０分間室温にて静置した。その後、ＩＦＮ  γ  ２０ｎｇ／ｍＬをウェルに加え、５時間  ５％ＣＯ２、３７℃の条件で培養した。５時間培養後、ｔｏｔａｌ  ＲＮＡを調整し、Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＰＣＲ法にてＮＧＦβ遺伝子の発現量をもとめた。尚、抗炎症剤の終濃度は０．１％である。
【００３５】
（試験結果）
結果は図７に示した通り、正常ヒト表皮角化細胞に対し、ＩＦＮγ、ＳｕｂｓｔａｎｃｅＰを添加させるとＮＧＦβ遺伝子の発現が亢進され、抗炎症剤の添加によるＮＧＦβの遺伝子発現抑制が確認された。
【００３６】
（試験６）ＩＦＮγ、ＳＰＣの併用によるＳｕｂｓｔａｎｃｅＰ遺伝子発現
【００３７】
（試験方法）
正常ヒト表皮角化細胞を、培養プレートに播種し、１００％コンフルエント状態まで培養した後、本試験用の培地に置換し、２４時間培養した。翌日、新たな本試験用の培地に置換し、抗炎症剤を培養液中に添加した。細胞を３時間培養したのち、ＳＰＣ１０μＭを正常ヒト表皮角化細胞に添加し、１０分間室温にて静置した。その後、ＩＦＮ  γ  ２０ｎｇ／ｍＬをウェルに加え、５時間  ５％ＣＯ２、３７℃の条件で培養した。５時間培養後、ｔｏｔａｌ  ＲＮＡを調整し、Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＰＣＲ法にてＳｕｂｓｔａｎｃｅＰ遺伝子の発現量をもとめた。また同時に、Ｃｅｌｌｃｏｕｎｔｉｎｇ  ｋｉｔ−８（ＤＯＪＩＮＤＯ）を用い、細胞活性量を測定した。尚、抗炎症剤の終濃度は０．１％である。
【００３８】
（試験結果）
結果は図１０に示した通り、正常ヒト表皮角化細胞に対し、ＩＦＮγ、ＳＰＣを添加させるとＳｕｂｓｔａｎｃｅＰの遺伝子発現が亢進され、抗炎症剤の添加によるＳｕｂｓｔａｎｃｅＰの遺伝子発現抑制が確認された。
【００３９】
（試験７）ＩＦＮγ、ＳＰＣの併用によるＮＧＦβ産生
【００４０】
（試験方法）
正常ヒト表皮角化細胞を、培養プレートに播種し、１００％コンフルエント状態になるまで前培養した。その後、本試験用の培地に置換し、２４時間培養した。翌日、新たな本試験用の培地に置換し、抗炎症剤を培養液中に添加した。細胞を３時間培養したのち、ＳＰＣ１０μＭを正常ヒト表皮角化細胞に添加し、１０分間室温にて静置した。その後、ＩＦＮ  γ  ２０ｎｇ／ｍＬをウェル加え、４８時間  ５％ＣＯ２、３７℃の条件で培養した。培養後、上清を回収しＢｅｔａ  Ｎｅｒｖｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｈｕｍａｎ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（ａｂｃａｍ♯ａｂ９９９８６）にて測定した。上清を回収後の細胞（起痒物質添加時間を２４時間経過した細胞）は、Ｃｅｌｌ  ｃｏｕｎｔｉｎｇ  ｋｉｔ−８（ＤＯＪＩＮＤＯ）を用い、細胞活性量を測定した。結果は、細胞あたりのＮＧＦβ産生量を以下に記した。尚、抗炎症剤の終濃度は０．１％である。
【００４１】
（試験結果）
結果は図９に示した通り、正常ヒト表皮角化細胞に対し、ＩＦＮγ、ＳＰＣを添加するとＮＧＦβを産生が亢進され、抗炎症剤の添加によるＮＧＦβの産生抑制が確認された。
【００４２】
（試験８）ＩＦＮγ、ＳｕｂｓｔａｎｃｅＰの併用によるＮＧＦβ産生
【００４３】
（試験方法）
正常ヒト表皮角化細胞を、培養プレートに播種し、１００％コンフルエント状態になるまで前培養した。その後、本試験用の培地に置換し、２４時間培養した。翌日、新たな本試験用の培地に置換し、抗炎症剤を培養液中に添加した。細胞を３時間培養したのち、ｓｕｂｓｔａｎｃｅＰ１００μＭ  を正常ヒト表皮角化細胞に添加し、１０分間室温にて静置した。その後、ＩＦＮ  γ  ２０ｎｇ／ｍＬをウェルに加え、４８時間  ５％ＣＯ２、３７℃の条件で培養した。培養後、上清を回収しＢｅｔａ  Ｎｅｒｖｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｈｕｍａｎ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（ａｂｃａｍ♯ａｂ９９９８６）にて測定した。上清を回収後の細胞（起痒物質添加時間を２４時間経過した細胞）は、Ｃｅｌｌ  ｃｏｕｎｔｉｎｇ  ｋｉｔ−８（ＤＯＪＩＮＤＯ）を用い、細胞活性量を測定した。結果は、細胞あたりのＮＧＦβ産生量を以下に記した。尚、抗炎症剤の終濃度は０．１％である。
【００４４】
（試験結果）
結果は図８に示した通り、正常ヒト表皮角化細胞に対し、ＩＦＮγ、ＳｕｂｓｔａｎｃｅＰを添加するとＮＧＦβの産生が亢進され、抗炎症剤の添加によるＮＧＦβの産生抑制が確認された。
【００４５】
（試験９）皮膚疾患改善効果
【００４６】
（試験方法）
敏感肌の自覚があり、アトピー性皮膚炎や乾燥等によるかゆみを訴える成人男女１２名に対して、下記処方のクリームと、レモングラス抽出物を含まない下記処方のクリームと同じ組成のクリームを対照品として、かゆみの患部に１日２回塗布し１ヶ月間の使用試験を行った。なお、被験者は６人づつに分け、それぞれ異なるクリームを塗布した。
【００４７】
（処方）クリーム                                              重量％
１．レモングラス抽出物（一丸ファルコス社製）                  １．０
２．４−ｔｅｒｔ−ブチル−４’−メトキシベンゾイルメタン      ０．３０
３．テトラ２−ヘキシルデカン酸アスコルビル                    １．０
４．濃グリセリン                                              ３．０
５．ミツロウ                                                  １．５
６．スクラワン                                                ８．０
７．メチルポリシロキサン                                    ０．３０
８．デカメチルシクロペンタシロキサン                          ４．０
９．パルミチン酸セチル                                        ５．０
１０．トリオクタノイン                                          ６．０
１１．ベヘニルアルコール                                        １．０
１２．ステアリン酸                                              ２．５
１３．キサンタンガム（２％水溶液）                            １０．０
１４．メチルパラベン                                              適量
１５．プロピルパラベン                                            適量
１６．フェノキシエタノール                                    ０．２０
１７．精製水                                        全量で１００にする
【００４８】
有    効：肌のかゆみ又は敏感肌、アトピー性皮膚炎、乾燥等の皮膚疾患が改善された。
やや有効：肌のかゆみ又は敏感肌、アトピー性皮膚炎、乾燥等の皮膚疾患がやや改善された。
無    効：使用前と変化なし。
【表１】
0006516534.tif 000002
【００４９】
試験結果より、レモングラス抽出物を含有したクリームは肌のかゆみや敏感肌、アトピー性皮膚炎、乾燥等の皮膚疾患に対する改善効果を有しており、皮膚への刺激による炎症を評価した試験１〜８の結果と相関があると認められる。よって、試験１〜８の表皮細胞への刺激に起因する炎症を評価することによって、皮膚刺激に起因する炎症に有効な抗炎症剤を評価、選択することができる。
【図１】
0006516534.tif 000003
【図２】
0006516534.tif 000004
【図３】
0006516534.tif 000005
【図４】
0006516534.tif 000006
【図５】
0006516534.tif 000007
【図６】
0006516534.tif 000008
【図７】
0006516534.tif 000009
【図８】
0006516534.tif 000010
【図９】
0006516534.tif 000011
【図１０】
0006516534.tif 000012