(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
0006463747.tif 000013
（ここで、ｎが１である）
の化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の式Ｉの化合物を調製する方法であって、
化合物Ａと、１，２−エポキシプロパンとを反応させて化合物Ｂを得る工程
【化２】
0006463747.tif 000014
（ここで、該化合物Ａの構造中、Ｘが塩素、臭素又はヨウ素である）
を含む方法。
【請求項３】
化合物Ａは、
４−メチルチアゾールと、クロロ酢酸、ブロモ酢酸又はヨード酢酸とを反応させて化合物Ａを得る工程
【化３】
0006463747.tif 000015
を介して調製される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
化合物Ａ及び／又は化合物Ｂが、再結晶化を介して分離及び精製される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
再結晶化に用いる溶媒が、アセトン、メタノール、エタノール、エチルエーテル、石油エーテル及びｎ−ヘキサン、又はその混合物、からからなる群から独立して選択されるいずれか一つである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
請求項１に記載の式Ｉの化合物の単結晶を調製する方法であって、
３−ヒドロキシカルボニルメチル−４−メチル−チアゾール分子内塩をメタノールに溶解し、次いで、酢酸エチルを滴下して添加し、静置して単結晶を取得する工程を含む、方法。
【請求項７】
１ｍｇの３−ヒドロキシカルボニルメチル−４−メチル−チアゾール分子内塩、０．０５ｍｌのメタノール及び０．３ｍｌの酢酸エチルを使用する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
請求項１に記載の式Ｉの化合物の使用であって、該使用が、タンパク質老化関連疾患又は障害の治療及び／又は軽減及び／又は予防及び／又はアジュバント療法のための薬剤の製造における使用であり、ここで該タンパク質老化関連疾患又は障害が、以下、
ｉ）皮膚の弾力性の増加又は皮膚しわの減少、ｉｉ）糖尿病、ｉｉｉ）糖尿病の後遺症、ｉｖ）腎臓損傷、ｖ）血管損傷、ｖｉ）高血圧症、ｖｉｉ）網膜症、ｖｉｉｉ）水晶体タンパク質損傷、ｉｘ）白内障、ｘ）末梢神経障害、ｘｉ）変形性関節症、及び、ｘｉｉ）糖尿病に関連する高血圧症、
から選択される、使用。
【請求項９】
請求項１に記載の式Ｉの化合物の使用であって、動物の歯の着色の逆転剤、歯の着色の予防又は逆転する経口製剤、タンパク質保存剤又は動物タンパク質保存剤、架橋タンパク質のブレーカー、終末糖化産物を切断する薬剤、血漿ＢＮＰの含有量及び／又は血漿ＭＣＰ−１の含有量を低減する薬剤、心血管系硬化症を改善する薬剤、糖尿病又は心血管疾患の治療感度を増強する薬剤、あるいは、慢性心不全の治療及び／又は予防及び／又はアジュバント療法のための薬剤、の製造における使用。
【請求項１０】
以下の項目（１）〜（３）：
（１）インビトロで終末糖化産物（ＡＧＥｓ）を切断する方法、
（２）歯の着色を予防又は逆転する方法、及び
（３）植物性タンパク質又は動物性タンパク質の保存方法、
から選択される方法であって、
該方法が、請求項１に記載の式Ｉの化合物の有効量を使用する工程を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、製薬化学物質の分野、及び、チアゾール分子内塩化合物及びその製造方法及び使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
最終糖化産物（ＡＧＥｓ）は共有結合付加産物であって、ヒトの老化及び糖尿病の発症を伴うインビボの生理的環境において、タンパク質、リポタンパク質又は核酸等の巨大分子と、グルコース又は他の還元糖との間の非酵素的触媒作用により自然反応で形成される。ＡＧＥの架橋構造の形成は低速で進行する。高分子の末端還元アミノ基とグルコース分子のアルデヒド基とが、付加により可逆早期糖化産物（シッフ塩基）を形成する。数日後、不安定なシッフ塩基は、転位反応を介して徐々に、より安定したアマドリ（Ａｍａｄｏｒｉｃ）型初期糖化産物を形成する。そのアマドリ産物が、脱水素、酸化及び転位の一連の反応によってＡＧＥとなるが、その機序は十分に解明されていない。ＡＧＥの架橋能力により、ＡＧＥと、タンパク質、脂肪、核酸等の高分子との間に、グリコシル化を介してジカルボニル結合による架橋が生じ、これによってより巨大な分子量を有するＡＧＥ架橋構造が形成される。
【０００３】
ＡＧＥによって形成される架橋構造は、コラーゲンを老化させ、動脈硬化を加速し、マトリックス成分を変化させ、血小板凝集を引き起こす。その結果、血管の弾力性を減少させ、血管コンプライアンスを減少させ、リポタンパク質代謝異常を発生させ、それにより、心血管系の機能を損なう。したがって、ＡＧＥは、腎機能低下、神経系疾患、脳卒中、アルツハイマー病、皮膚の老化、網膜症、白内障、心血管疾患及び動脈硬化のような糖尿病の多くの合併症及び老化プロセスと密接に関連している。
【０００４】
現在のところ、ＡＧＥの蓄積を抑制するためのいくつかの治療法が開発されている。中国特許第１０１６８４１０６号明細書は、チアゾールオニウム塩化合物を開示しており、例えば、以下の式Ａの３−カルボキシメチル−４−メチルチアゾリウムブロマイド、
【化１】
0006463747.tif 000002
（ここで、
ＭはＮａ又はＫであって、
ＸはＢｒ、Ｃｌ又はＩである）
を開示している。
【０００５】
式Ａの化合物は、長期糖尿病ラットの大動脈、左心室心筋及び腎臓のインビボのＡＧＥの蛍光含有量を有意に減らし、その間に、心筋のコラーゲン及び尾部コラーゲンの溶解性を向上し、糖尿病ラットの大動脈コンプライアンスを向上させ、総末梢抵抗を低減し、心拍出量を増加させ、左心室機能を大幅に向上することが可能であった。従って、この化合物は、形成されたＡＧＥの架橋構造を溶解し、血管構造を再構築し、心血管系における糖尿病によって誘導される硬化症及び機能不全を逆戻りさせることができる、新しいタイプＡＧＥブレーカーである。
【０００６】
しかしながら、その後の研究者によれば、式Ａの化合物は、物理的及び化学的特性が不安定であり、大規模製造プロセスでの製品品質制御が困難であり、そのサンプルは、室温での貯蔵において不安定であり、水分を吸収しやすく、変色するため、薬剤としてさらに開発されることには適していない。
【０００７】
例えば：
（１）多くの試験で、式Ａの化合物の元素分析の結果は有意な差を示し、理論値からかけ離れていた（０．３％の誤差限界を超える）。
（２）品質が安定しておらず、３ヶ月間の貯蔵後、水分を吸収しやすく、凝集しやすく、変色しやすいものである（温度：４０℃、湿度：７５％、大気圧）。図１Ａ及び図１Ｂを参照。
【０００８】
任意の理論に制限されることなく、本発明の発明者らは、Ｘ線回折及び元素分析の結果から慎重に検討した後に、第四級アンモニウム塩の構造及びカルボキシレート構造の両方を有する化合物が、独立して安定した分子形態で存在することが非常に困難であることを見出した。なぜなら、分子中のＮａ及びＢｒはＮａＢｒの形で非常に簡単に結合する可能性があり、そのため、式Ａの化合物は新薬開発性（ｄｒｕｇｇａｂｉｌｉｔｙ）において重要な欠陥がある。
【０００９】
式Ａの化合物は、インビトロ及びインビボにおいて、優れた薬理活性及び良好な薬物動態学的特性を示すが、オニウム臭化物のその形態は、物理的及び化学的特性において不安定であるため、医薬として使用するのに適していない。
【００１０】
したがって、新規の安定かつ有効なチアゾール分子内塩化合物を開発する必要性が未だに存在している。
【発明の概要】
【００１１】
本発明の発明者らは、徹底的な研究及び創造的な仕事によって、式Ｉのチアゾール分子内塩化合物を得た。本発明者らは、驚くべきことに、式Ｉの化合物が構造的に安定し、優れた物理的及び化学的特性並びに良好な薬理活性を有していることを見出した。また、それは、安定で、制御可能で、信頼性の高い品質を有するサンプルを得る大規模な製造が可能であり、そのため、医薬開発に適していた。したがって、以下の発明が提供される。
【００１２】
本発明の一態様は、式Ｉの化合物又は医薬的に許容されるその塩に関する。
【化２】
0006463747.tif 000003
ここで、
ｎが０、１、２又は３である。
【００１３】
本発明のいずれかに記載の式Ｉの化合物又は医薬的に許容されるその塩であって、該式Ｉの化合物は、
３−メチルカルボニルオキシ−４−メチル−チアゾール分子内塩（n＝０）、及び
３−メチルカルボニルオキシ−４−メチル−チアゾール分子内塩一水和物（n＝１）から選択される。
【００１４】
３−メチルカルボニルオキシ−４−メチル−チアゾール分子内塩は、直接合成によって得られる生成物であってもよい。
【００１５】
３−メチルカルボニルオキシ−４−メチル−チアゾール分子内塩一水和物は、３−メチルカルボニルオキシ−４−メチル−チアゾール分子内塩の単結晶培養産物であってもよい。
【００１６】
式Ｉの化合物の単結晶（ｎ＝１、２又は３）を製造する方法は、以下の工程を含む。
【００１７】
３−メチルカルボニルオキシ−４−メチル−チアゾール分子内塩（n＝０）をメタノールに溶解し、次いで、酢酸エチルを滴下して添加し、静置して単結晶を得る。好ましくは、１ｍｇの３−メチルカルボニルオキシ−４−メチル−チアゾール分子内塩に対して、メタノール０．０５ｍＬ及び酢酸エチル０．３ｍＬを使用する。
【００１８】
本発明の一実施形態において、単結晶の製造方法は、２ｍｇの３−メチルカルボニルオキシ−４−メチル−チアゾール分子内塩の白色結晶が提供され、０．１ｍｌのメタノールを添加し、次いで、結晶を溶解した後に酢酸０．６ｍＬを加え、結晶粒子がゆっくりと単結晶に成長するまで静置する、ことを含む。
【００１９】
本発明の一実施形態において、提供されるのは化合物３−メチルカルボニルオキシ−４−メチル−チアゾール分子内塩（ｎ＝０）の結晶形態であって、それらのＸ線粉末回折スペクトルは、１２．６、１３．３、１４．９、１８．５、１９．１、２７．０、２７．７、２８．８、２９．８、３２．１、４０．８、４２，８、４５．２、４７．９、５２．６、５４．８、５５．６、５９．０（２θ／°Ｃ）にて、特徴的な回折ピークを示す（図４の詳述を参照）。
【００２０】
本発明の一実施形態において、提供されるのは、化合物３−メチルカルボニルオキシ−４−メチル−チアゾール分子内塩一水和物（ｎ＝１）の結晶形であって、それらのＸ線粉末回折スペクトルは、１１．８、１５．２、１６．７、１８．９、１９．３、１９．８、２１．０、２３．８、２４．５、２５．２、２６．４、２６．９、２８．６、２９．３、３１．３、３１．９、３２．１、３４．１、３４．７、３５．０、３５．６、３８．９、４０．１、４０．６、４３．１、４５．９、４６．７、４８．１、４９．０（２θ／°Ｃ）にて特徴的な回折ピークを示す（図５の詳述を参照）。
【００２１】
本発明の別の態様は、本発明のいずれかに記載の式Ｉの化合物の製造方法に関するものであって、以下の工程を含む：
【００２２】
化合物Ａと、１，２−エポキシプロパンとを反応させて、化合物Ｂを得る工程、
【化３】
0006463747.tif 000004
（ここで、化合物Ａの構造において、Ｘは、塩素、臭素又はヨウ素である）
【００２３】
本発明のいずれかに記載の方法であって、ここで、化合物Ａは、以下の工程を介して製造される：
【００２４】
４−メチルチアゾールを、クロロ酢酸、ブロモ酢酸又はヨード酢酸と反応させて、化合物Ａを得る工程、
【化４】
0006463747.tif 000005
【００２５】
化合物Ｂは、３−メチルカルボニルオキシ−４−メチル−チアゾール分子内塩である（n＝０）。
【００２６】
本発明のいずれかに記載の方法であって、化合物Ａ及び／又は化合物Ｂは、再結晶によって分離されて精製され、好ましくは、再結晶に用いる溶媒は、アセトン、メタノール、エタノール、エチルエーテル、石油エーテル、ｎ−ヘキサン又はそれらの任意の混合物からなる群から、独立に、任意の一つが選択される。
【００２７】
発明の一実施形態において、製造方法は、５０ｍＬの無水アセトンに１５．６ｇの４−メチルチアゾールを溶解し、ブロモ酢酸２１ｇを添加し、３時間撹拌し、固体を得るためにろ過し、白色固体を得るためにエタノールで固体を再結晶化し、乾燥して７２％の収率の生成物２６ｇを取得すること、を含む。１０ｇの３−カルボキシメチル−４−メチルチアゾリウムブロマイド白色固体を蒸留水５０ｍＬに溶解し、次いで、１，２−エポキシプロパン７．３１ｇを添加し、室温で１２時間撹拌し、反応終了後、反応液をジクロロメタン３０ｍＬで抽出し、そして、３回抽出する。ここで、ジクロロメタン層は廃棄され、淡黄色油状物質を得るために、水層を減圧下で蒸発する。淡黄色の粒子を沈殿させるために、油状物質物に適当量のアセトンを添加し、エタノール−エチルエーテル系で再結晶して（ここで、最適化された再結晶化率は以下の通り：黄色粒子の１ｇを加熱下でエタノール４．５ｍＬに溶解し、その後、エチルエーテル２ｍＬを添加する）、７８％の収率の白色結晶５．１５ｇを得た。
【００２８】
本発明の一実施形態において、製造方法は
【化５】
0006463747.tif 000006
を含む。
【００２９】
数多くの創造的な合成デザインと実践的な調査を通して、本発明者らは化合物３及び化合物４（図２）を取得し、これら二つの化合物の化学的特性とインビボでの薬物動態学的特性をテストし、そして、両性イオン化合物４（３−メチルカルボニルオキシ−４−メチル−チアゾール分子内塩、Ｃ6Ｈ7ＮＯ2Ｓ）がこの構造体の中で最も安定した形態であることを最終的に決定した。
【００３０】
本発明のさらに別の態様は、１以上の発明のいずれかに記載の式Ｉの化合物又は医薬的に許容されるその塩、及び、任意に１以上の医薬的又は化粧品として許容される賦形剤を含む、組成物に関する。また、任意に、組成物はさらに、１以上の降圧薬を含む。好ましくは、該降圧薬がニフェジピンである。好ましくは、該組成物は、口腔洗浄製剤である。
【００３１】
本発明の一実施形態において、組成物は医薬組成物である。医薬組成物は、異なる投与経路に対して種々の形態でありうる。
【００３２】
本発明の医薬組成物は、式Ｉの化合物、その水和物、又は医薬的に許容されるその塩の有効量並びに１以上の適切な医薬的に許容される担体を含む。医薬的に許容される担体としては、これらに限定されないが、イオン交換体、酸化アルミニウム、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、例えばヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸塩などの緩衝物質、グリセリン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩などの塩又は電解質、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース、ポリエチレングリコール、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、蜜蝋、ウールグリースを含む。
【００３３】
本発明の化合物は、強力な架橋タンパク質ブレーカーの群であり、グリコシル化した熟成タンパク質を切断する優れた能力を有し、したがって、これらに限定されないが、（i）皮膚の弾力性の増加又は皮膚しわの減少、（ii）糖尿病の治療、（iii）糖尿病の後遺症の治療又は軽減、（iv）腎臓損傷の治療又は軽減、（v）血管損傷の治療又は軽減、(vi）高血圧症の治療又軽減、（vii）網膜症の治療又は軽減、（viii）水晶体タンパク質（lensprotein）損傷の治療又は軽減、（ix）白内障の治療又は軽減、（x）末梢神経障害の治療又は軽減、（xi）変形性関節症の治療又は軽減、（xii）糖尿病に関連する高血圧症を治療するための抗高血圧剤と組み合わせた使用、のために使用されうる。
【００３４】
本発明の化合物は、心血管系の硬化症を大幅に改善することができる。
【００３５】
本発明の化合物は、薬剤に対して、糖尿病又は心血管系の治療感度を非常に増強させうる。
【００３６】
本発明の化合物は、慢性心不全の治療効果を有する。
【００３７】
口腔内での非酵素反応は歯の着色をもたらす。現在使用されている抗う蝕薬はカルボニル化を加速し、さらにその結果、歯を着色する。最近、抗う蝕機能を有するカチオン性殺菌剤の一種は、一般的に、従来の口腔の洗浄に使用される。これらのカチオン性抗菌剤は、アレキシジン、セチルピリジニウム塩素酸塩、などを含む。これらの薬剤は、グリコシル化における重要なメイラード反応を促進させ、それによって歯の着色を加速する（Ｎｏｒｄｂｏ、Ｊ．Ｄｅｎｔ．Ｒｅｓ、５８：１４２９（１９７９））。また、いくつかのレポートは、インビトロにおいて、ヒビテンとゼフィランが、グリコシル化を触媒することができることを示した（褐変反応）。メイラード反応により、糖及びアミノ酸の混合物へのヒビテンの添加は、色素の形成を加速する。
【００３８】
上記のメカニズムに基づいて、本発明の化合物及びそれらの医薬組成物は、口腔内で使用され、特に口腔洗浄液及び練り歯磨きの添加剤として使用されうる。
【００３９】
本発明の化合物の上記の用途のために、無毒で医薬的に許容される担体の適切な形態が口腔洗浄液及び練り歯磨き内で使用されうる。
【００４０】
本発明の化合物の医薬組成物は、以下のいずれかの経路で投与することができる。経口投与、噴霧吸入、直腸内適用、経鼻投与、口腔投与、局所投与、例えば、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、髄腔内、脳室内、胸骨内及び頭蓋内注射若しくは輸液などの非経口投与、又は、説明のリザーバーを介した投与。経口投与、腹腔内又は静脈内投与が好ましい。
【００４１】
経口投与に関しては、本発明の化合物は、任意の経口的に許容される製剤の形態にすることができ、限定されないが、錠剤、カプセル、水溶液又は水懸濁液を含み、ここで、錠剤のために使用される担体は、通常は、ラクトース及びコーンスターチを含み、ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤をさらに添加することができる。カプセル製剤に使用される希釈剤は、通常、ラクトース及び乾燥コーンスターチを含む。水懸濁液においては、有効成分は、通常、乳化剤及び懸濁剤と混合して使用される。必要であれば、上記の経口製剤は、甘味剤、香味材又は着色剤を含んでも良い。
【００４２】
局所投与、特に、表面又は、目、皮膚または下部腸管などの臓器に被る局所外部適用に対して、本発明の化合物は、異なる被る表面または臓器ごとに、異なる局所投与形態にすることができる。詳細は以下の通りである。
【００４３】
眼への局所投与のために、本発明の化合物は、微粒子化懸濁液又は溶液の形態であってもよく、ここで、使用される担体は、ある一定のｐＨ値を有する等張滅菌生理食塩水であってよく、クロロベンジルアルコキシドなどの保存剤が添加又は非添加であってもよい。眼用途のために、化合物は、ワセリンペーストなどのペースト状であってもよい。
【００４４】
皮膚への局所投与のために、本発明の化合物は、適切な軟膏、ローション又はクリームの形態であってもよく、ここで、活性成分は、１つ以上の担体中に懸濁又は溶解されている。軟膏に使用される担体としては、これらに限定されないが、ミネラルオイル、液体ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン、乳化ワックス及び水を含む。ローション又はクリームで使用される担体としては、これらに限定されないが、ミネラルオイル、ソルビタンモノステアレート、ツイン−60、ヘキサデカンエステルワックス、ヘキサデカン芳香族アルコール、２−オクチルドデシルアルコール、ベンジルアルコール及び水を含む。
【００４５】
本発明の化合物はまた滅菌注射剤の形態で投与することができ、滅菌注射用水又は油性懸濁液又は滅菌注射溶液を含んでおり、ここで、使用可能な担体及び溶媒は、水、リンゲル液又は等張性塩化ナトリウム溶液を含んでいる。また、モノグリセリド又はジグリセリドなどの滅菌不揮発性油は、溶媒又は懸濁媒体として使用されてもよい。
【００４６】
本発明の別の態様は、本発明のいずれかに記載の式Ｉの化合物又は医薬的に許容されるその塩の使用に関するものであって、タンパク質老化関連疾患又は障害の治療及び／又は軽減及び／又は予防及び／又はアジュバント療法のための薬物等の生成物の製造における使用に関する。好ましくは、該タンパク質老化関連疾患又は障害は、以下より、１以上選択される：
【００４７】
ｉ）皮膚の弾力性の低下又は皮膚しわの増加、ｉｉ）糖尿病、ｉｉｉ）糖尿病の後遺症、ｉｖ）腎臓損傷、ｖ）は血管損傷、ｖｉ）高血圧、ｖｉｉ）網膜症、ｖｉｉｉ）水晶体タンパク質障害、ｉｘ）白内障、ｘ）末梢神経障害、ｘｉ）変形性関節症、ｘｉｉ）糖尿病関連高血圧。
【００４８】
本発明の別の局面は、本発明のいずれかに記載の式Ｉの化合物又は医薬的に許容されるその塩の使用に関するものであって、動物の歯の着色のための逆転剤、歯の着色を予防又は逆転するための経口製剤、タンパク質保存剤又は動物性タンパク質保存剤、架橋されたタンパク質のブレーカー、終末糖化産物を切断するための薬剤、血漿ＢＮＰの含有量及び／又は血漿ＭＣＰ−１の含有量を低減するための薬剤、心臓血管系の硬化症を改善するための薬剤、糖尿病と心血管疾患の治療の感受性を増強するための薬剤、又は慢性心不全の治療及び／又は予防及び／又はアジュバント療法のための薬剤の製造における使用に関する。
【００４９】
本発明の別の態様は、以下の項目（１）〜（７）の任意の１つから選択される方法に関するものであって、本発明の任意の項目の式Ｉの化合物若しくは医薬的に許容されるその塩、又は本発明の組成物の有効量を使用又は投与する工程を含む方法を特徴とする。
【００５０】
（１）インビボ又はインビトロで終末糖化産物（ＡＧＥｓ）を切断する方法。
（２）心臓血管系の硬化を改善する方法。
（３）薬物療法のために、糖尿病又は心血管疾患の感受性を増強する方法。
（４）慢性心不全の治療及び／又は予防及び／又はアジュバント療法のための方法。
（５）歯の着色を予防又は逆転させる方法。
（６）植物性タンパク質や動物性タンパク質の保存方法。
【００５１】
（７）タンパク質老化関連疾患又は障害の治療及び／又は軽減及び／又は予防及び／又はアジュバント療法のための方法であって、好ましくは、該タンパク質老化関連疾患又は障害が、以下より選択される：
ｉ）皮膚の弾力性の低下又は皮膚しわの増加、ｉｉ）糖尿病、ｉｉｉ）糖尿病の後遺症、ｉｖ）腎臓損傷、ｖ）は血管損傷、ｖｉ）高血圧、ｖｉｉ）網膜症、ｖｉｉｉ）水晶体タンパク質障害、ｉｘ）白内障、ｘ）末梢神経障害、ｘｉ）変形性関節症、ｘｉｉ）糖尿病関連高血圧。
【００５２】
本発明の一実施形態では、該方法は治療を目的としていない。
【００５３】
本発明の化合物を使用する用量及び方法は、患者の年齢、体重、性別、一般的な健康状態及び栄養状態、化合物の活性強度、投与時間、代謝率、障害重症度及び主治医の主観的な判断を含む多くの要因に依存することが指摘されるべきである。好適な用量は、０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ（体重）／日の間であり、最も好ましい用量は２０ｍｇの／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ（体重）／日である。
【００５４】
本発明において、用語「有効量」は、被験体において、本発明に記載の疾患又は障害の治療、予防、緩和及び/又は軽減を果たすことができる用量を意味する。
【００５５】
用語「被験体」は、ヒト、イヌ、サル、ウシ、ウマ等の患者又は動物を意味し、すなわち、本発明の疾患又は障害の治療、予防、緩和及び／又は軽減のための本発明の組成物が投与されるものである。
【００５６】
用語「疾患又は障害」は、被験体の身体状態を意味し、本発明の疾患及び／又は障害に関連する。
【発明の効果】
【００５７】
式Ｉの化合物、その水和物、又は医薬的に許容される塩は、ＡＧＥを切断するための同等の活性を有し、中国特許第１０１６８４１０６号明細書に開示されている好適な化合物３−カルボキシメチル−４メチル−ブロモチアゾリウムナトリウム塩（参照：式Ａ）と比較して、より安定な薬物動態を有する。加えて、該製品は、品質管理において容易であり、製薬業界及び／又は化粧品産業により適している。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】図1：保存の前及び保存３カ月後の式Ａの化合物（Ｍ＝Ｎａ、Ｋ＝Ｂｒ）の外観の比較。図１Ａは、新たに調製した式Ａの化合物である。図１Ｂは、保存３ヶ月後（温度：４０℃、湿度：７５％、大気圧）の式Ａの化合物である。
【図２】図２：３−メチルカルボニルオキシ−４−メチル−チアゾール分子内塩一水和物のＸ単結晶回折構造図（ｎ＝１）。
【図３】図３：３−メチルカルボニルオキシ−４−メチル−チアゾール分子内塩一水和物の分子結晶パッキング図（ｎ＝１）。
【図４】図４：３−メチルカルボニルオキシ−４−メチル−チアゾール分子内塩のＸ線粉末回折図（ｎ＝０）。
【図５】図５：３−メチルカルボニルオキシ−４−メチル−チアゾール分子内塩一水和物のＸ線粉末回折図（ｎ＝１）。
【図６】図６：時間１０：００〜２０：００における、異なる群の収縮期血圧の動的曲線（平均±標準偏差、n＝１２）。
【図７】図７：時間１０：００〜２０：００における、異なる群の収縮期血圧変数係数（平均±標準偏差、ｎ＝１２。*Ｐ＜０．０５，#Ｐ＜０．０１対正常群、**Ｐ＜０．０１対モデル）。
【図８】図８：時間１０：００〜２０：００における、異なる群の拡張期血圧の動的曲線。
【図９】図９：時間１０：００〜２０：００における、異なる群の脈圧の動的曲線。
【図１０】図１０：時間１０：００〜２０：００における、異なる群の心拍数の動的曲線。
【図１１】図11：時間１０：００〜２０：００における、異なる群の収縮期血圧の動的曲線（Ｍ平均値±標準偏差、ｎ＝１２、##Ｐ＜０．０１対モデル群、**Ｐ＜０．０１対ニフェジピン群）。
【図１２】図１２：時間１０：００〜２０：００における、異なる群の収縮期血圧の降下範囲の動的曲線（平均値±標準偏差、ｎ＝１２、##Ｐ＜０．０１対モデル群、*Ｐ＜０．０５，**Ｐ＜０．０１対ニフェジピン群）。
【図１３】図１３：時間１１：００〜１５：００における、異なる群の収縮期血圧可変係数の動的曲線（平均±標準偏差、ｎ＝１２、**Ｐ＜０．０１対モデル群）。
【図１４】図1４：時間１０：００〜２０：００における、異なる群の拡張期血圧の動的曲線（平均±標準偏差、ｎ＝１２、##Ｐ＜０．０１対モデル群、*Ｐ＜０．０５，**Ｐ＜０．０１対ニフェジピン群）。
【図１５】図１５：時間１０：００〜２０：００における、異なる群の脈圧の動的曲線（平均±標準偏差、ｎ＝１２、**Ｐ＜０．０１対ニフェジピン群）。
【図１６】図１６：時間１０：００〜２０：００における、異なる群の心拍数動的曲線。
【図１７】図１７：時間１０：００〜２０：００における、異なる群の排出時間動的曲線（Ｍ平均値±標準偏差、ｎ＝１２、*Ｐ＜０．０５対ニフェジピン群）。
【図１８】図１８：時間１０：００〜２０：００における、異なる群の筋肉の酸素摂取量指数動的曲線（平均±標準偏差、ｎ＝１２、*Ｐ＜０．０５対ニフェジピン群）。
【図１９】図１９：異なる群の血漿６−ケトン−プロスタグランジン含有量（平均値±標準偏差、ｎ＝９〜１１、*Ｐ＜０．０５対正常群、**Ｐ＜０．０１対モデル群、##Ｐ＜０．０５対ニフェジピン群）。
【図２０】図２０：異なる群の血漿ＴＸＢ2の含有量（平均値±標準偏差、ｎ＝９〜１１、*Ｐ＜０．０１対正常群、**Ｐ＜０．０１対モデル群）。
【図２１】図２１：異なる治療群のＴＸＢ2／６−ケト−ＰＧＩ１ａ値（平均値±標準偏差、ｎ＝９〜１１、*Ｐ＜０．０１対正常群、**Ｐ＜０．０１対モデル群、$$Ｐ＜０．０５対ニフェジピン群）。
【図２２】図２２：異なる治療群の血漿ＭＣＰ−１含有量（平均値±標準偏差、ｎ＝９〜１１、*Ｐ＜０．０５対正常群、##Ｐ＜０．０１対モデル群）。
【図２３】図２３：異なる治療群の血漿ＢＮＰ含有量（平均値±標準偏差ｎ＝９〜１１、*Ｐ＜０．０５対正常群、△△Ｐ＜０．０５，**Ｐ＜０．０１対モデル群、##Ｐ＜０．０１対ニフェジピン群）。
【発明を実施するための形態】
【００５９】
＜本発明を実施するための特定のモデル＞
本発明の実施形態は、以下の実施例に関連して詳細に説明するが、実施例を理解する当業者が本発明だけを説明することに使用されるのであって、本発明の範囲を制限するためではない。実施例に示されていなかった任意の特定の条件は、従来の条件やメーカーが提示する条件である。メーカーから与えられなかった試薬や機器は市場で市販されているすべての従来の製品である。
【００６０】
化合物の融点は、ＳＲＹ−１型融点測定装置で測定されたものであり、それは、温度校正を受けていなかった。１Ｈ−ＮＭＲ及び１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルはＢｒｕｋｅｒＡＲＸ４００型核磁気共鳴分光装置を用いて測定した。質量スペクトルは、ＡＰＩ−１５０ＥＸ  ＬＣ／ＭＳ高分解能質量分析装置を用いて測定した。Ｘ線単結晶回折は、Ｒｉｇａｋｕ  Ｓａｔｕｒｎ９４４  ＣＣＤ回折装置を用いて測定した。Ｘ線粉末回折は、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ８  Ａｄｖａｎｃｅ回折装置を用いて測定した。
【実施例１】
【００６１】
実施例１：３−カルボキシメチル−４−メチル−チアゾリウムブロマイド（化合物Ａ）の調製
【００６２】
１５．６ｇの４−メチルチアゾールを、５０ｍｌの無水アセトンに溶解し、２１ｇのブロモ酢酸を添加し、３時間撹拌した。ろ過を行って固体を得た。エタノールで再結晶化して白色固体を得た。乾燥して７２％、ｍＰ＝２４０．６〜２４１．６℃の生成物２６ｇを取得した。
【００６３】
ＭＳ［Ｍ］+＝１５８．２ｍ／ｅ；  1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）、２．４８（ｄ、３Ｈ）；  ５．５５（ｓ、２Ｈ）；８．０９（ｄ、１Ｈ）；  １０．２５（ｄ、１Ｈ）；１４．０５（ｂｒｓ、１Ｈ）。
【実施例２】
【００６４】
実施例２：３−メチルカルボニルオキシ−４−メチル−チアゾール分子内塩（ｎ＝０）の調製
【００６５】
白色固体１０ｇの３−カルボキシメチル−４−メチルチアゾリウムブロマイドを、５０ｍＬの蒸留水に溶解し、７．３１ｇの１，２−エポキシプロパンを添加し、室温で１２時間撹拌した。反応終了後、反応液はジクロロメタン３０ｍＬを用いて３回抽出し、ジクロロメタン層を廃棄した。水層を減圧にて蒸発し、淡黄色の油状物質を得た。規定量のアセトンを淡黄色の油状物質に添加し、沈殿して淡黄色の粒子を得た。エタノール−エチルエーテル系を用いて再結晶化し（ここで、最も好ましい再結晶化比は、１ｇの黄色粒子の加熱、４．５ｍｌのエタノールに溶解、２ｍＬのエチルエーテルの添加、であった）、収率７８％、ｍＰ＝１６９℃の白色結晶５．１５ｇを得た。
【００６６】
ＭＳ：１５８［Ｍ＋Ｈ］+、３１  ［２Ｍ＋Ｈ］+、４７２［３Ｍ＋Ｈ］+、1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）、２．４１（ｄ、３Ｈ）、４．７６（ｓ、２Ｈ）、７．９０（ｄ、１Ｈ）、９．９７（ｄ、１Ｈ）；  13Ｃ−ＮＭＲ（メタノール−ｄ４）、δ１２．９８、５６．７１、１２１．４７、１４８．３６、１６９．７１；
【００６７】
元素分析：Ｃ6Ｈ7ＮＯ2Ｓ（１５７．２）の解析計算値（Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ）：Ｃ、４５．８５；  Ｈ、４．４９；  Ｎ、８．９１％
【００６８】
実測値（Ｆｏｕｎｄ）：Ｃ、４５．７４；  Ｈ、４．５１；  Ｎ、８．８７％
【００６９】
結晶構造は、Ｘ単結晶回折を用いて測定した。
【００７０】
それは、結晶形の化合物３−メチルカルボニルオキシ−４−メチル−チアゾール内部塩（ｎ＝０）であり、そのＸ線粉末回折スペクトルは、１２．６、１３．３、１４．９、１８．５、１９．１、２７．０、２７．７、２８．８、２９．８、３２．１、４０．８、４２．８、４５．２、４７．９、５２．６、５４．８、５５．６、５９．０（２θ／℃）にて特徴的な回折ピークを示した（詳細は図４参照）。
【実施例３】
【００７１】
実施例３：３−メチルカルボニルオキシ−４−メチル−チアゾール分子内塩一水和物（ｎ＝１）の調製
【００７２】
実施例２で調製した２ｇの３−メチルカルボニルオキシ−４−メチル−チアゾール分子内塩（ｎ＝０）を１００ｍＬのメタノールと１ｍＬの水との混合溶媒中に２０℃で溶解し、完全に溶解した後、３００ｍＬの酢酸エチル溶液をゆっくりと添加した。均一に混合した後、１２時間５℃で静置後、析出した結晶は、３−メチルカルボニルオキシ−４−メチル−チアゾール分子内塩一水和物（ｎ＝１）であった。
【００７３】
X線単結晶回折を有する結晶構造決定試験：
【００７４】
２ｍｇの３−メチルカルボニルオキシ−４−メチル−チアゾール分子内塩の白色結晶に０．１ｍｌ無水メタノールを添加し、粒子を溶解した後、０．６ｍｌの酢酸エチルを滴下して添加し、結晶粒子がゆっくりと成長して単結晶（３−メチルカルボニルオキシ−４−メチル−チアゾール分子内塩一水和物、ｎ＝１）を形成するまで静置した。結晶構造は、Ｘ単結晶回折を用いて決定した。
【００７５】
それは、化合物３−メチルカルボニルオキシ−４−メチル−チアゾール分子内塩一水和物（ｎ＝１）の結晶形であり、そのＸ線粉末回折スペクトルは、１１．８、１５．２、１６．７、１８．９、１９．３、１９．８、２１．０、２３．８、２４．５、２５．２、２６．４、２６．９、２８．６、２９．３、３１．３、３１．９、３２．１、３４．１、３４．７、３５．０、３５．６、３８．９、４０．１、４０．６、４３．１、４５．９、４６．７、４８．１、４９．０（２θ／℃）にて特徴的な回折ピークを示した（詳細は図５参照）。
【００７６】
結晶学的データ：Ｃ6Ｈ7ＮＯ2Ｓ・Ｈ2Ｏ、Ｍｒ＝１７５．２０、斜方晶系、空間群Ｐ−１、結晶学的パラメータ：ａ＝５．６０８２（１１）Å、α＝９０ｄｅｇ．、ｂ＝８．４６１５（１７）Å、β＝９０ｄｅｇ．、ｃ＝１６．０６４（３）Å、γ＝９０ｄｅｇ．
【００７７】
単結晶構造図を図２に示した。分子結晶パッキング図を図３に示した。
【実施例４】
【００７８】
実施例４：安定性試験
【００７９】
サンプルの３つのバッチ（実施例２に従って調製）は、中国薬局方２０１０年版に従って、販売用包装のように包装し（薬物包装に使用される高密度ポリエチレン袋を使用した）、試験を加速するために室温（ＲＴ）４０℃、ＲＨ７５％（飽和ＮａＣｌ溶液）の条件下で静置し、１、２、３、６ヶ月後、式Ｉの化合物及び式Ａの化合物の観察のためにサンプリングし、０日目のデータと比較した。その結果を、表１及び表２に示す。
【００８０】
実施例３に従って調製されたサンプルの一つのバッチを取り出し、販売用包装のように包装し（薬物包装に使用される高密度ポリエチレン袋を使用した）、室温（ＲＴ）４０℃、ＲＨ７５％（飽和ＮａＣｌ溶液）の条件下で静置し、１、２、３ヶ月後、サンプリングし、０日目のデータと比較した。その結果を表3に示した。
【００８１】
式Ａの化合物の試料の３つのバッチを、中国薬局方２０１０年版に従って、販売用包装のように包装し（薬物包装に使用される高密度ポリエチレン袋を使用した）、室温（ＲＴ）４０℃、ＲＨ７５％（飽和ＮａＣｌ溶液）の条件下で静置し、１、２、３ヶ月後サンプリングし、０日目のデータと比較した。その結果を表１及び表３に示した。
【００８２】
【表１】
0006463747.tif 000007
【００８３】
【表２】
0006463747.tif 000008
【００８４】
【表３】
0006463747.tif 000009
【００８５】
【表４】
0006463747.tif 000010
【００８６】
上記のデータから理解されるように、実施例２及び実施例３の化合物は、既知の式Ａの既化合物よりも有意に優れた安定性を示し、従って医薬品としてより適している可能性を有している。
【実施例５】
【００８７】
実施例５：インビトロ赤血球表面架橋ＩｇＧ（免疫グロブリンＧ）切断試験
【００８８】
赤血球表面架橋したＩｇＧは典型的なＡＧＥ架橋構造であるため、化合物が赤血球の表面に架橋したＩｇＧを切断する程度を定量することは、ＡＧＥ架橋構造を切断する化合物の能力を評価する優れた方法として知られている（Ｂｒｕｃｅｈ．Ｒ．Ｗｏｌｆｆｅｎｂｕｔｔｅｌ，  Ｂｒｅａｋｅｒｓ  ｏｆ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｒｅｓｔｏｒｅ  ｌａｒｇｅ  ａｒｔｅｒｙ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｄｉａｂｅｔｅｓ，Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１９９８，９５，４６３０）。
【００８９】
血液細胞を処理する方法：１６週の糖尿病ラットに麻酔をかけ、頸動脈から血液サンプルを採取し、抗凝固のためにヘパリンを添加し、３分間、４℃、１０００ｇで遠心分離し、下層のＲＢＣ（赤血球）を回収した。３回、０．１ｍｏｌ／Ｌ  ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で洗浄し、毎回３分間、４℃、１０００ｇにて遠心分離し、下層ＲＢＣを試験に使用した。
【００９０】
インビトロ投与方法：０．１ｍｏｌ／Ｌ等張ＰＢＳ（リン酸緩衝液）（ｐＨ７．４）を陰性対照として使用した。試験する化合物の各々緩衝液を用いて異なる濃度に調製した。溶液又は溶媒の９００μＬに、１００μＬのＲＢＣを添加し、１６〜１８時間、３７℃で少々振盪し、３分間１０００ｇ、４℃にて遠心分離し、上清を廃棄した。残留化合物を除去するために４回０．１ｍｏｌ／Ｌ  ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で洗浄した。３分間１０００ｇ、４℃で遠心分離し、下層ＲＢＣを１：１００の比で、ＥＬＩＳＡ定量用に希釈した。
【００９１】
免疫吸着法を介したＲＢＣ表面架橋ＩｇＧの含有量の定量手順：スーパーブロック（３００μＬ／ウェル）を満たしたマルチスクリーン−ＨＡ０．４５μｍ９６ウェルプレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）をシールして、３７℃、１時間後、陰圧５ｍｍＨｇで排水した。全プレートは、毎回１分間振盪して３回ＰＢＳＴで洗浄し、２回０．１ＭのＰＢＳ（ｐＨ７．４）で洗浄した。試験用にＲＢＣ（５０μＬ／ウェル）を添加し、別のＰＢＳのバックグラウンドコントロールウェル（ＯＤ0）を設定した。陰圧で排水した。毎回１分間プレートを振盪して４回０．１ｍｏｌの１５０μＬ／Ｌ  ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で洗浄した。陰圧で排出した後、１：５００希釈したヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ（５０μＬ／ウェル）を添加し、室温で２時間静置し、排水し、毎回１分間プレートを振盪して１５０μＬ／ウェル、３回０．１ｍｏｌ／Ｌ  ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で洗浄した。排水し、ｏ−フェニレンジアミン（ＯＰＤ）基質現像液（１００μＬ／ウェル）を添加し、暗所にて３０分間室温で静置した。反応は２ｍｏｌ／ＬのＨ2ＳＯ4（１００μＬ／ウェル）で終了させた。反応液（１５０μＬ／ウェル）を迅速に吸引し、通常の９６ウェルＥＬＩＳＡプレートに移し、ＯＤ値を４９０ｎｍで定量した。
【００９２】
試験する化合物の溶解速度の算出：
【００９３】
補正後のＯＤ＝試験するＲＢＣサンプルの平均ＯＤ  −  ＲＢＣフリーのＰＢＳバックグラウンドウエルの平均ＯＤ。溶解速度は、ＯＤ４９０ｎｍの低下した％で表される：（ＰＢＳウェルのＯＤ４９０ｎｍ  −  試験する化合物のＯＤ４９０ｎｍ）／ＰＢＳウェルのＯＤ４９０ｎｍ  ×１００％。試験結果を表５に示した。
【００９４】
【表５】
0006463747.tif 000011
【００９５】
表５の結果は、実施例２の化合物が、ＲＢＣ表面架橋ＩｇＧに対する高い溶解速度を有することを示している。
【実施例６】
【００９６】
実施例６：高血圧症を伴う糖尿病ラットにおける２４時間尿量／水摂取に対する実施例２の化合物の効果
【００９７】
１．試験方法：
（１）グループ化及び投与方法
ラットは体重や血圧に応じてグループ分けした。薬剤投与されなかった高血圧症を伴う糖尿病ラット群（モデル群）、ニフェジピン群、実施例２化合物＋ニフェジピン群。一方、同週齢の純粋な糖尿病群と正常対照群も設定した。実施例２の化合物（３６ｍｇ／ｋｇ）は使用直前に蒸留水に溶解し、５週間、１日１回、胃内に投与した。投与３週間後、インプラントを腹部大動脈に埋め込み、１週間回復させ、血圧が安定するまで血圧を３日間モニターした。その後、ニフェジピン（０．７５ｍｇ／ｋｇ）を１日１回、連続７日間、胃内に午前１０：００に投与した。
【００９８】
（２）ニフェジピン溶液の調製
ニフェジピン粉末を５ｍＬのＥＰチューブに入れ、一定量ＣＭＣ−Ｎａを添加し、４つの鋼球（ｓｔｅｅｌ  ｂａｌｌ）を加え、５〜１０分間攪拌した。ニフェジピンを完全に懸濁した後、体積を計測し、懸濁液を再び実施した。
【００９９】
（３）水摂取量と尿量の定量
投与の第３週に、各群のラットを代謝ケージへ一匹ずつ移し、餌を与えた。１９、２０日、２１日での、２４時間の水の摂取量と尿量を記録した。
【０１００】
（４）ニフェジピンとの組み合わせにおける実施例２の化合物の血圧モニタリング
操作手順は（１）、（２）、（３）と同様であり、術後の回復の１週間後、ラットのケージをＤＳＩレシーバ上に配置して、モニターするパラメータとチャネルを設置した。磁気スイッチを使用してインプラントを起動した。デバッグ後、生体信号の記録を開始した。連続した３日後、ニフェジピン及び実施例２の化合物を毎日午前１０：００に投与した。１０：００〜２０：００の期間のラットの心臓血管のパラメータを連続７日間、動的に記録した（この期間、生理食塩水濃度は厳密に１％に制御した）。
【０１０１】
（５）ラットにおける血管作動性物質の含有量定量方法
ＴＸＢ2、６−ケト−ＰＧＦ１ａの決定方法：全血サンプルを採取し、抗凝固のためにインドメタシンＥＤＴＡ−Ｎａ  ４０μＬを添加し、４℃、３５００ｒｍｐ／分、１５分間遠心分離して血漿を得て、−７０℃で保存した。定量は北京華エイ市バイオ株式会社（Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｈｕａｙｉｎｇ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）を介したラジオイムノアッセイで行った。
【０１０２】
ＢＮＰ、ＭＣＰ−１の定量方法：全血サンプルを採取し、抗凝固のために４０μＬのＥＤＴＡ−Ｎａを添加し、１０００ｇ／分、１０分遠心分離して血漿を得た。−７０℃で保存した。定量は北京華エイ市バイオ株式会社（Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｈｕａｙｉｎｇ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）を介したラジオイムノアッセイで行った。
【０１０３】
（６）統計学的方法
テストデータは、平均±ＳＤ（平均±標準偏差）で表現し、データを処理するためにＳＰＳＳ２．０ソフトウェアを使用した。統計処理は、一元配置分散分析を用いて実施し、Ｐ＜０．０１であるとき、有意差があるとした。
【０１０４】
実施例２の化合物を投与後第３週における２４時間のラットのＶ尿／Ｖ水摂取量の値を算出した。
【０１０５】
２．テスト結果
結果を表６に示した。
【０１０６】
【表６】
0006463747.tif 000012
【０１０７】
実施例６の試験結果は、ラットにおいて、実施例２の化合物が著しく水摂取と尿量を増加させることが可能であることを示している。
【実施例７】
【０１０８】
実施例７：高血圧症を伴う糖尿病ラットに対する実施例２の化合物の影響
【０１０９】
実施例２の化合物の投与４週間後、モデル群のラットは、時間１０：００〜２０：００における平均収縮期圧が、正常対照群（ＮＣ群）よりも有意に高いことを示した。実施例２の化合物は、時間１０：００〜２０：００における平均収縮期圧がモデル群よりも有意に低いことを示した（１６９．８±１５．８ｍｍＨｇ対１８１±１４．９ｍｍＨｇ、Ｐ＜０．０５）（詳細は図６参照）。
【０１１０】
実施例２の化合物の投与４週間後、糖尿病群のラットは、時間１０：００〜２０：００における収縮期血圧可変係数（ＣＶ）はＮＣ群より有意に高いことを示した（Ｐ＜０．０５）が、一方で、モデル群のラットは、さらに収縮期圧ＣＶの増加を示しました（Ｐ＜０．０１）。モデル群と比較して、実施例２の化合物の群のラットは、有意に、収縮期圧ＣＶの減少を示した（Ｐ＜０．０１）（詳細は図７参照）。
【０１１１】
実施例２の化合物の投与４週間後、モデル群のラットは、ＮＣ群と比較して時間１０：００〜２０：００における平均収縮期血圧の有意な増加を示した。モデル群と比較して、実施例２の化合物の群は、大幅に時間１０：００〜２０：００における平均収縮期血圧の低下を示した（１２３．１±１３．４ｍｍＨｇ対１３２．３±１２．７ｍｍＨｇ）（詳細は図８参照）。
【０１１２】
実施例２の化合物の投与４週間後、モデル群のラットは、ＮＣ群と比較して時間１０：００〜２０：００における平均パルス圧力差の有意な増加を示した（Ｐ＜０．０１）。モデル群と比較して、実施例２の化合物の群は、有意な変化を示さなかった（４６．５±５．７ｍｍＨｇ対４９．７±３．５ｍｍＨｇ）（詳細は図９参照）。
【０１１３】
実施例２の化合物の投与４週間後、モデル群のラットは、ＮＣ群と比較して時間１０：００〜２０：００における平均心拍数の有意な減少を示した（Ｐ＜０．０１）。モデル群と比較して、実施例２の化合物の群は、有意な変化を示さなかった（２５５±１７対２５７±１３拍／分）（詳細は図１０参照）。
【０１１４】
実施例７の結果は、実施例２の化合物が、血圧を安定化させる効果を有し、それは高血圧症を伴う糖尿病の治療の原則に準拠しており、抗高血圧薬との組合せで血圧安定性を高めるアジュバント薬として作用し得ることを示している。
【実施例８】
【０１１５】
実施例８：高血圧症を伴う糖尿病ラットに対するニフェジピンとの組み合わせた実施例２の化合物の影響
【０１１６】
１０：００にニフェジピン投与後、投与群の収縮期血圧は急速に降下し、１．５時間後に血圧降下が最大値に達した。ニフェジピン群は、投与２時間後に収縮期血圧が上昇状態を示し、収縮期血圧は１０時間後のモデル群と実質的に近接していた。実施例２化合物＋ニフェジピン群は、収縮期血圧が最小値に達した後、５時間安定保持することが出来、徐々に回復した。ニフェジピン群と比較して、実施例２化合物＋ニフェジピン群は、投与１時間後（１３５．８±１２．５ｍｍＨｇ対１５５．２±１４．９、Ｐ＜０．０１）、５時間後（１３５．０±１１．４ｍｍＨｇ対１６６．０±１５．０ｍｍＨｇ、Ｐ＜０．０１）、１０時間後（１５２．２±１０．４ｍｍＨｇ対１７９．０±１４．１ｍｍＨｇ、Ｐ＜０．０１）における平均収縮期血圧が有意な減少を示した（詳細は図１１参照）。
【０１１７】
投与１．５時間後、実施例２化合物＋ニフェジピン群は、ニフェジピン群より有意に高い圧力降下ΔＳＢＰを示した（３７．１±１３．５ｍｍＨｇ対２５．３±９．３ｍｍＨｇ、Ｐ＜０．０５）。投与５時間後、実施例２化合物＋ニフェジピン群はニフェジピン群よりも有意に高いΔＳＢＰを示した（３０．９±１２．５ｍｍＨｇ対１５．９±９．３ｍｍＨｇ、Ｐ＜０．０１）。投与１０時間後、実施例２化合物＋ニフェジピン群はニフェジピン群より有意に高いΔＳＢＰを示した（１９．４±６．４ｍｍＨｇ対１．１９±３．５ｍｍＨｇ、Ｐ＜０．０１）（詳細は図１２参照）。
【０１１８】
投与１〜５時間後、モデル群と比較して、ニフェジピン群は有意な収縮期血圧可変係数（ＣＶ）を示さなかった（０．０４７±０．０１７対０．０５１±０．０１２）。実施例２化合物＋ニフェジピン群はＣＶの有意な減少を示した（０．０１９±０．００６対０．０５１±０．０１２、Ｐ＜０．０１）（詳細は図１３参照）。
【０１１９】
１０：００に投与後、投与群の収縮期血圧は迅速な減少を示し、ほぼ１．５時間後に最大血圧降下範囲に達し、その後徐々に回復した。投与１．５時間後、実施例２化合物＋ニフェジピン群は、ニフェジピン群と比較して、平均収縮期血圧の有意な減少を示した（９５．８±１４．５ｍｍＨｇ対１１１．２±１５．３、Ｐ＜０．０５）。投与５時間後、実施例２化合物＋ニフェジピン群は、ニフェジピン群と比較して、平均収縮期血圧の有意な減少を示した（９６．６±１２．３ｍｍＨｇ対１１５．９±１５．７ｍｍＨｇ、Ｐ＜０．０１）。投与１０時間後、ニフェジピン群は、モデル群に近い拡張期血圧を示し、実施例２化合物＋ニフェジピン群は、ニフェジピン群と比較して、平均収縮期血圧の有意な減少を示した（１０６．１±１６．４ｍｍＨｇ対１３０．１±１４．８ｍｍＨｇ、Ｐ＜０．０１）（詳細は図１４参照）。
【０１２０】
１０：００に投与後、実施例２の化合物＋ニフェジピン群は脈圧差（ＰＨ）の急速な低下を示し、それは１１：００に血圧降下の最大値に達した。ニフェジピン群はＰＨのわずかな減少を示し、それは１時間後に上昇し始め、１０時間後にほぼモデル群のＰＨに達した。実施例２化合物＋ニフェジピン群は、１時間後にＰＨが最低値に達し、そこからゆっくりと上昇し始めた。投与１時間後、実施例２化合物＋ニフェジピン群は、ニフェジピン群と比較して、平均脈圧の差が有意な減少を示した（４０．２±４．５対４６．９±２．９ｍｍＨｇ、Ｐ＜０．０１）。投与５時間後、実施例２化合物＋ニフェジピン群は、ニフェジピン群と比較して平均脈圧の差の有意な減少を示した（４０．６±４．９対４８．１±５．１ｍｍＨｇ、Ｐ＜０．０１）。投与１０時間後、実施例２化合物＋ニフェジピン群はニフェジピン群と比較して平均脈拍の差は、変化を示さなかった（４５．６±５．８対４８．７±５．２ｍｍＨｇ）（詳細は図１５参照）。
【０１２１】
１０：００に投与後、投与群では心拍数（ＨＲ）の急速な増加を示し、２０分後に最大に達し、その後、ゆっくりと落下し始めた。投与８時間後、投与群の心拍数は実質的に投与前のレベルへと回復した。投与後、実施例２化合物＋ニフェジピン群はニフェジピン群と比較して心拍数の変化を示さなかった（詳細は図１６参照）。
【０１２２】
１０：００投与後、投与群では駆出時間（ＥＴ）の急速な低下を示し、２０分後には最小値に達し、その後ゆっくりと上昇し始めた。投与５時間後、ニフェジピン群のＥＴは、実質的に投与前のレベルに回復した。投与１０時間後、ニフェジピン群は、ＭＣ群のものと実質的に同等のＥＴ値を示した。投与２０分後、実施例２化合物＋ニフェジピン群はニフェジピン群と比較して、ＥＴの有意な減少を示し（６７．３±５．３ｍｓ対７１．８±４．２ｍｓ）、その後ＥＴは徐々に上昇し始め、８〜１０時間後のステージにて急速な増加を示し、１０時間後のＭＣ群のものと実質的に同等のＥＴレベルに達した。投与５時間後、実施例２化合物＋ニフェジピン群は、ニフェジピン群と比較してＥＴの有意な減少を示し（７４．２±５．２ｍｓ対８１．１±５．０ｍｓ、Ｐ＜０．０５）、この効果は４時間持続した（詳細は図１７参照）。
【０１２３】
心筋酸素消費指数（ＭＯＣＩ）は全心筋酸素消費量を反映している。投与１時間後、モデル群と比較して有意差はないが、ニフェジピン群はＭＯＣＩの減少を示し（３７７２．７±４４４．７対４２５５．０±４１６．１、Ｐ＝０．３６）、一方で、実施例２化合物＋ニフェジピン群はＭＯＣＩの有意な減少を示した（３１２８．４±２３８．７対４２５５．０±４１６．１、Ｐ＜０．０５）。投与５時間後、モデル群と比較して、有意差はないがニフェジピン群はＭＯＣＩの減少を示し、実施例２化合物＋ニフェジピン群はＭＯＣＩの有意な減少を示した（Ｐ＜０．０５）。投与１０時間後、ＭＯＣＩは投与前のレベルに回復し、実施例２の化合物＋ニフェジピン群は、有意差はないが、モデル群とニフェジピン群のそれよりも低いＭＯＣＩを示した（詳細は図１８参照）。
【０１２４】
実施例８の結果は、実施例２の化合物は、有意に心臓におけるニフェジピンの効果を高めることができることを示した。また、ニフェジピンとの組み合わせた実施例２の化合物は、高血圧を伴う糖尿病ラットの血圧を大幅に低下させる可能性がある。
【実施例９】
【０１２５】
実施例９：高血圧症を伴う糖尿病ラットにおける、ニフェジピンと組み合わせ実施例２化合物の血管活性因子含有量への影響
【０１２６】
（１）高血圧症を伴う糖尿病ラットにおける血漿６−ケトン−プロスタグランジン含有量に対するニフェジピンとの組み合わせた実施例２の化合物の効果
【０１２７】
血漿６−ケトン−プロスタグランジンはプロスタサイクリン（ＰＧ１2）の代謝産物であって、血漿中のＰＧ１2の含有量を反映している。糖尿病群と比較して、モデル群のラットは正常群と比較して血漿６−ケトン−プロスタグランジン含有量が、有意な減少を示した（７８．１５±５．６、７７．６２±８．６７ｖｓ．８５．４１±４．３６ｐｇ／ｍＬ、Ｐ＜０．０５）。実施例２化合物＋ニフェジピン群のラットは、モデル群と比較して有意な増加を示し（８７．２１±６．９０ｖｓ．７７．６２±８．６７ｐｇ／ｍＬ、Ｐ＜０．０１）、同様にニフェジピン群と比較して有意な増加を示した（Ｐ＜０．０５）（詳細は図１９参照）。
【０１２８】
（２）高血圧症を伴う糖尿病ラットの血漿中のＴＸＢ2の含有量に対するニフェジピンとの組み合わせたＡＧＥブレーカーの効果
【０１２９】
ＴＸＢ2はＴＸＡ2の代謝産物であり、血漿中のＴＸＡ2の含有量を反映している。正常群と比較して、糖尿病群とモデル群のラットは、ＴＸＢ2含有量の有意な増加を示した（９３．１４±１０．９９、１０４．１９±１１．６８対６４．８８±７．２４、Ｐ＜０．０１）。実施例２化合物＋ニフェジピン群とニフェジピン群は、モデル群と比較して、ＴＸＢ2含有量の有意な減少を示した（７３．６４±１２．２７、８０．８８±１５．３１対１０４．１９±１１．６８ｐｇ／ｍＬ、Ｐ＜０．０１）。実施例２化合物＋ニフェジピン群は、ニフェジピン群と比較してＴＸＢ2含有量に有意差を示さなかった（詳細は図２０参照）。
【０１３０】
（３）高血圧症を伴う糖尿病ラットの血漿ＴＸＢ2／６−ケト−ＰＧＩ１ａ比に対するニフェジピンとの組み合わせた実施例２化合物の効果
【０１３１】
ＴＸＢ2／６−ケト−ＰＧＩ１ａ比は、血漿ＴＸＡ2／ＰＧＩ2のレベルを反映している。正常群と比較して、糖尿病群とモデル群のラットは、ＴＸＢ2／６−ケト−ＰＧＩ１ａの有意な増加を示した（１．１５±０．１５、１．１８±０．１６対０．８０±０．１０、Ｐ＜０．０１）。実施例２化合物＋ニフェジピン群は、モデル群と比較して、ＴＸＢ2／６−ケト−ＰＧＩ１ａの有意な減少を示した（０．９３±０．１３対１．１８±０．１６、Ｐ＜０．０１）。ニフェジピン群は、有意差は伴わず、モデル群と比較してわずかな減少を示した（１．０６±０．１４対１．１８±０．１６）。実施例２化合物＋ニフェジピン群は、ニフェジピン群と比較してＴＸＢ2／６−ケト−ＰＧＩ１ａの有意な減少を示した（０．９３±０．１３対１．０６±０．１４、Ｐ＜０．０５）（詳細は図２１参照）。
【０１３２】
（４）高血圧症を伴う糖尿病ラットにおける血漿ＭＣＰ−１含有量に対するニフェジピンと組み合わせた実施例２化合物の効果
【０１３３】
正常群と比較して、糖尿病群とモデル群のラットは、血漿ＭＣＰ−１含有量の有意な増加を示した（７５．９±９．７、７７．４±９．５対６６．９±７．３ｐｇ／ｍＬ、Ｐ＜０．０５）。実施例２化合物＋ニフェジピン群は、モデル群と比較して血漿中のＭＣＰ−１含有量の有意な減少を示した（６４．０±１４．２対７７．４±９．５ｐｇ／ｍＬ、Ｐ＜０．０１）。ニフェジピン群は、有意差は伴わないが、モデル群に比較して血漿ＭＣＰ−１含有量のわずかな減少を示した（７０．７±８．８対７７．４±９．５ｐｇ／ｍＬ）。実施例２化合物＋ニフェジピン群は、ニフェジピン群と比較して、血漿ＭＣＰ−１含有量の有意な減少を示した（Ｐ＜０．０５）（詳細は図２２参照）。
【０１３４】
（５）高血圧症を伴う糖尿病ラットにおける血漿ＢＮＰ含有量に対するニフェジピンと組み合わせた実施例２化合物の効果
【０１３５】
正常群と比較して、モデル群のラットは血漿ＢＮＰ量の有意な増加を示した（１６．７±２．０対１４．３±２．１ｐｇ／ｍＬ、Ｐ＜０．０５）。実施例２化合物＋ニフェジピン群は、モデル群と比較して、血漿ＢＮＰ量の有意な減少を示した（１２．２±３．５対１６．７±２．０ｐｇ／ｍｌ、Ｐ＜０．０１）。ニフェジピン群はモデル群と比較して、血漿ＢＮＰ量の有意な減少を示した（１４．６±２．４対１６．７±２．０ｐｇ／ｍＬ、Ｐ＜０．０５）。実施例２化合物＋ニフェジピン群は、ニフェジピン群と比較して、血漿ＭＣＰ−１含有量の有意な減少を示した（Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０１）（詳細は図２３参照）。
【０１３６】
実施例９の結果は、実施例２の化合物が、ＴＸＡ２／ＰＧＩ２比の減少、血管拡張、血栓症の減少、アテローム性動脈硬化症の進行（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）の遅延、及び血管保護をもたらすことを示した。ＡＧＥブレーカーはまた、高血圧症を伴う糖尿病ラットにおける血漿ＢＮＰ含有量を低減し、高血圧を伴う糖尿病ラットにおける血漿ＭＣＰ−１含有量を大幅に低減することが可能である。
【０１３７】
本発明の特定のモデルは、本発明の特定のモデルで詳細に説明したが、これらの詳細を理解する当業者は、開示に従って変更及び置換することが可能である。また、これらの全ての変形は、本発明の保護範囲内に含まれる。本発明の保護範囲は、添付の特許請求の範囲及びその任意の均等物によって与えられる。
【図１Ａ−１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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