(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
眼血管新生の用量依存的な治療もしくは予防における使用のための、眼血管新生の局所的な治療もしくは予防における使用のための、または用量依存的な治療もしくは予防である眼血管新生の局所的な治療もしくは予防における使用のための、式（Ｉ）：
【化１】
0006579714.tif 000026
式中、
ｎは、１、２、３または０であり；
Ｒ１は、１以上の置換基を有していてもよい、４〜８員の炭素環基；１以上の置換基を有していてもよい、１個の酸素原子を含む４〜８員の複素環基；１以上の置換基を有していてもよい、１個の窒素原子を含む４〜８員の複素環基、１以上の置換基を有していてもよい１個の窒素原子および１個の酸素原子を含む４〜８員の複素環基；１以上の置換基を有していてもよい２個の窒素原子を含む４〜８員の複素環基；１以上の置換基を有していてもよい３個の窒素原子を含む４〜８員の複素環基、または１以上の置換基を有していてもよい、縮合芳香族複素環基であり；
Ｘは、ＣＨまたはＮであり；
Ｙは、ＣＨまたはＮであり；
Ｚは、Ｏ、ＳまたはＮＨであり；および
Ｒ２は、Ｈ、それぞれ１以上の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基；フェニル基；４〜８員の複素環基；または縮合芳香族複素環基である；
を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物。
【請求項２】
ｎは、１、２、３または０であり；
Ｒ１は、１以上の置換基を有していてもよい、４〜８員の炭素環基；１以上の置換基を有していてもよい、１個の窒素原子を有する４〜８員の複素環基、１以上の置換基を有していてもよい１個の窒素原子および１個の酸素原子を含む４〜８員の複素環基、または１以上の置換基を有していてもよい２個の窒素原子を含む４〜８員の複素環基であり；
Ｘは、ＣＨまたはＮであり；
Ｙは、ＣＨまたはＮであり；
Ｚは、Ｏ、ＳまたはＮＨであり；および
Ｒ２は、フェニル基；４〜８員の複素環基または縮合芳香族複素環基である、請求項１に記載の式（Ｉ）を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物。
【請求項３】
前記眼血管新生は脈絡膜血管新生である、請求項１または２に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物。
【請求項４】
前記眼血管新生は網膜血管新生である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物。
【請求項５】
哺乳動物患者の抗血管新生治療における使用のための、または用量依存的な治療である哺乳動物患者の抗血管新生治療における使用のための、請求項１または２に記載の式（Ｉ）を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物。
【請求項６】
前記抗血管新生治療は癌の治療を含む、請求項５に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物。
【請求項７】
ａ．微小血管透過性亢進疾患の治療または予防における、またはＶＥＧＦｘｘｘアイソフォームの血管新生誘導の浸透亢進特性（ｐｒｏ−ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ）の制御における、または透過性の増加なしでの上皮細胞の生存の支持における、または上皮濾過膜の開窓（ｆｅｎｅｓｔｒａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ  ｍｅｍｂｒａｎｅｓ）の性質の低下における使用のための、
ｂ．神経障害および神経変性疾患の治療もしくは予防における使用のための、もしくはインビボもしくはインビトロにおける神経保護剤もしくは神経再生剤としての使用のための、
ｃ．ＶＥＧＦＲ２媒介性の非炎症性疼痛の治療もしくは予防における使用のための、または
ｄ．メスの哺乳動物が子癇前症もしくはそれに関連する合併症を発症する、もしくはメスの哺乳動物の胎児が母体の子癇前症に関連する胎児もしくは新生児の欠陥を発症するリスクの低減における使用のための、請求項１または２に記載の式（Ｉ）を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物。
【請求項８】
式（Ｉ）：
【化２】
0006579714.tif 000027
式中、
ｎは、１、２、３または０であり；
Ｒ１は、１以上の置換基を有していてもよい、４〜８員の炭素環基；１以上の置換基を有していてもよい、１個の酸素原子を含む４〜８員の複素環基；１以上の置換基を有していてもよい、１個の窒素原子を含む４〜８員の複素環基、１以上の置換基を有していてもよい１個の窒素原子および１個の酸素原子を含む４〜８員の複素環基；１以上の置換基を有していてもよい２個の窒素原子を含む４〜８員の複素環基；１以上の置換基を有していてもよい３個の窒素原子を含む４〜８員の複素環基、または１以上の置換基を有していてもよい、縮合芳香族複素環基であり；
Ｘは、ＣＨまたはＮであり；
Ｙは、ＣＨまたはＮであり；
Ｚは、Ｏ、ＳまたはＮＨであり；および
Ｒ２は、Ｈ、それぞれ１以上の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基；フェニル基；４〜８員の複素環基または縮合芳香族複素環基である、を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物。
【請求項９】
ｎは、１、２、３または０であり；
Ｒ１は、１以上の置換基を有していてもよい、４〜８員の炭素環基；１以上の置換基を有していてもよい、１個の窒素原子を含む４〜８員の複素環基、１以上の置換基を有していてもよい１個の窒素原子および１個の酸素原子を含む４〜８員の複素環基、または１以上の置換基を有していてもよい２個の窒素原子を含む４〜８員の複素環基であり；
Ｘは、ＣＨまたはＮであり；
Ｙは、ＣＨまたはＮであり；
Ｚは、Ｏ、ＳまたはＮＨであり；および
Ｒ２は、フェニル基；４〜８員の複素環基または縮合芳香族複素環基である、
請求項８に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物。
【請求項１０】
Ｒ１は、
ａ．１以上の置換基を有していてもよい、１個の窒素原子を含む４〜８員の複素環基、
ｂ．１以上の置換基を有していてもよい、１個の窒素原子を含む６員の芳香族複素環基、
ｃ．それぞれ１以上の置換基を有していてもよい、２−、３−もしくは４−ピリジル基、
ｄ．１以上の置換基を有していてもよい、ピリミジニル基、
ｅ．１以上の置換基を有していてもよい、４〜８員の炭素環基、または
ｆ．１以上の置換基を有していてもよい、フェニル基
を表す、請求項８または９に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物。
【請求項１１】
Ｒ２は、１以上の置換基を有していてもよい、窒素もしくは酸素を含有する４〜８員の芳香族複素環を表す、または、Ｒ２は、１以上の置換基を有していてもよい、窒素を含有する４〜８員の芳香族複素環を表す、請求項８〜１０のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物。
【請求項１２】
Ｒ２は、
ａ．それぞれ１以上の置換基を有していてもよい、２−、３−もしくは４−ピリジル基、
ｂ．１以上の置換基を有していてもよい、酸素を含有する４〜８員の複素環、
ｃ．１以上の置換基を有していてもよい、４〜８員の炭素環基、
ｄ．１以上の置換基を有していてもよい、フェニル基、
ｅ．Ｈ、もしくは１以上の置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル、
ｆ．１以上の置換基を有していてもよい、メチル基、または
ｇ．１以上の置換基を有していてもよい、テトラヒドロピラニル基
を表す、請求項８〜１１のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物。
【請求項１３】
ａ．ＸおよびＹはＣＨであり、かつ、ＺはＯである、
ｂ．ＸおよびＹはＣＨであり、かつ、ＺはＳである、
ｃ．ＸおよびＹはＮであり、かつ、ＺはＯである、または
ｄ．ＸはＮであり、ＹはＣＨであり、かつ、ＺはＯであり、
この際、ｎは１もしくは２であってもよい、請求項８〜１２のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物。
【請求項１４】
ｎは、１または２であり、
Ｒ１は、それぞれ１以上の置換基を有していてもよい、２−、３−もしくは４−ピリジル基またはフェニル基であり、
Ｒ２は、Ｈ、または、それぞれ１以上の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基、２−、３−もしくは４−ピリジル基、もしくはテトラヒドロピラニル基であり、
ＸおよびＹはＣＨであり、かつ、ＺはＯである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物。
【請求項１５】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）を有する化合物を含む医薬組成物、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）を有する化合物、１以上の他の活性成分および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物、または眼内注射に適した形態もしくは眼への局所投与に適した形態である請求項１〜１３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）を有する化合物を含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗血管新生治療、および抗血管新生治療、特に血管新生によって特徴付けられる状態（例えば、加齢性黄斑変性症など）に使用する化合物に関する。
【０００２】
また、本発明は、透過性亢進疾患の治療、および透過性亢進疾患の治療における使用のための化合物の治療に関する。
【０００３】
また、本発明は、例えば、アルツハイマー病などの、神経障害および神経変性疾患の治療、ならびに神経障害および神経変性疾患の治療における使用のための化合物に関する。
【０００４】
また、本発明は、疼痛の治療、および疼痛の治療における使用のための化合物にも関する。
【０００５】
また、本発明は、子癇前症のリスクを低減する方法、およびこのような方法における使用のための化合物にも関する。
【背景技術】
【０００６】
黄斑の中央領域に影響を及ぼす視力喪失を引き起こす疾患である加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）は、５０歳を超える人々の失明の主要な原因である（Ｂｒｅｓｓｌｅｒ、２００４）。滲出性ＡＭＤは、主に黄斑の下の脈絡膜循環から生じ、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）によって特徴付けられるＡＭＤの最も重篤な形態である（Ｆｅｒｒｉｓら、１９８４）。ＣＮＶは、脈絡膜から網膜色素上皮（ＲＰＥ）への新生血管の異常成長であり（Ｐａｔｚら、１９７７）、最終的に光受容体の喪失、網膜剥離および高密度黄斑瘢痕につながるＲＰＥの下への血液や漿液の漏出によって視力喪失につながると考えられている（Ｆｉｎｅら、２０００；Ｃａｍｐｏｃｈｉａｒｏら、２００６）。血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）は、血管新生および血管漏出の重要な因子であり（Ｄｖｏｒａｋら、１９９５）、ＣＮＶの進行中に上方制御され（Ｄ’Ａｍｏｒｅ、１９９４；Ｓｐｉｌｓｂｕｒｙら、２０００；Ａｎｄｅｒｓｏｎら、２００２；Ｄａｓら、２００３）、滲出性ＡＭＤの治療の主要な治療標的となっている。
【０００７】
ＶＥＧＦは、選択的にスプライシングされて複数のアイソフォームを有するファミリーを形成する複合遺伝子であり（Ｌｅｕｎｇら、１９８９；Ｊｉｎｇｊｉｎｇら、１９９９）、各アイソフォームは生物学的性質、活性および機能が異なる（Ｈｏｕｃｋら、１９９１）。大部分の細胞は、ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１６５およびＶＥＧＦ１８９アイソフォームを通常発現する一方、ＶＥＧＦ１４５およびＶＥＧＦ２０６については比較的まれである。ＶＥＧＦアイソフォームの大部分は、エクソン１〜５（ＶＥＧＦ１１１を除く（Ｍｉｎｅｕｒら、２００７））を含むが、ヘパリン硫酸（ＨＳ）結合ドメインをコードするエキソン６および７の異なる部分である。これらのエキソンの使用の変更は、細胞表面のヘパラン硫酸プロテオグリカンに結合して血管新生因子を放出する能力（Ｔｉｓｃｈｅｒら、１９９１；Ｎｅｕｆｅｌｄら、１９９９）などの選択的にスプライシングされたアイソフォームの生物学的特性を変化させる。
【０００８】
２００２年に、近位スプライス部位（ＰＳＳ）から遠位スプライス部位（ＤＳＳ）６６塩基下流までの第８エキソンの特異的スプライシング（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｓｐｌｉｃｉｎｇ）が示された（Ｂａｔｅｓら、２００２；Ｗｏｏｌａｒｄら、２００４）。この領域における選択的スプライシングは、それらの抗血管新生特性に関して注目されるアイソフォームの第２のファミリー（ＶＥＧＦｘｘｘｂ）を生み出した（Ｐｅｒｒｉｎら、２００５）。国際公開第０３／１０２１０５号（その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）は、選択的にスプライシングされたアイソフォーム、およびその治療的意義を記載している。
【０００９】
病理学的血管新生の間、血管新生促進アイソフォームは選択的に上方制御され（Ｖａｔｅｓら、２００２；Ｖａｒｅｙら、２００８；Ｐｒｉｔｃｈａｒｄ−Ｊｏｎｅｓら、２００７）、ＶＥＧＦｘｘｘおよびＶＥＧＦｘｘｘｂが別個の調節経路を有することを示唆している。ＶＥＧＦ１６５ｂおよびＶＥＧＦ１２１ｂなどのこれらの抗血管新生アイソフォームは、眼内注射後に網膜および脈絡膜血管新生の動物モデルにおいて強力に抗血管形成性であることが示されており（Ｈｕａら、２００８）、内皮細胞および網膜上皮細胞の両方の細胞保護作用をもたらす（Ｍａｇｎｕｓｓｅｎら、２０１０）。
【００１０】
２００４年１２月に新生血管ＡＭＤの治療薬として承認された最初の治療法は、ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１８９およびＶＥＧＦ２０６特異的アプタマーであるペガプタニブナトリウム（マクジェン）であった。臨床試験中、ペガプチニブは用量依存的に重度の視力喪失のリスクを低下させ、新生血管ＡＭＤの進行を遅らせたが（Ｇｒａｇｏｕｄａｓら、２００４）、視力の有意な改善をもたらさなかった。２００６年、新規のヒト化抗ＶＥＧＦ抗体フラグメントであるラニビズマブ（ルセンティス）は、新生血管ＡＭＤの治療薬としてＦＤＡ承認を受けた。その承認は３つの臨床試験の結果に基づいており、ルセンティス（０．５ｍｇ）で毎月治療した患者の約９５％が視力（１５文字未満の減少として定義される）を維持し、１年間で４０％以下が視力改善し（１５文字以上の増加として定義される）、それに比べて偽対照対照群では１１％であった（Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら、２００６；Ｂｒｏｗｎら、２００６；Ｂｒｏｗｎら、２００９）。現在の治療レジームでは、眼内注射によるルセンティスの投与を毎月行う必要がある（Ｂｒｏｗｎら、２００９；Ｓｃｈｍｉｄｔ−Ｅｒｆｕｔｈら、２０１１）。そのような眼内注射は、眼内圧の上昇（Ｇｏｏｄら、２０１０）、ならびに、軽度ではあるが、内眼肉芽腫およびその他の重篤な副作用のリスク（Ｊａｇｅｒら、２００４）をもたらす。さらに、ルセンティス由来の抗ＶＥＧＦ抗体であるベビシズマブ（アバスチン）は、ＶＥＧＦ１６５に対してと同等の力でＶＥＧＦ１６５ｂに結合し、血管新生誘導ＶＥＧＦアイソフォームおよび抗血管新生ＶＥＧＦアイソフォームの両方を標的とした（Ｖａｒｅｙら、２００８）。
【００１１】
ＶＥＧＦの抗血管新生および血管新生アイソフォームの両方は同じ遺伝子に由来するから、アイソフォームファミリーの制御は、選択的スプライシングの制御の結果である。最近我々は、近位のスプライス部位を使用し、それによりＶＥＧＦの血管新生誘導アイソフォームを生成する（Ｎｏｗａｋら、２００８；Ｎｏｗａｋら、２０１０）ための細胞による決定に必要な因子としてＲＮＡ結合タンパク質ＳＲＳＦ１（Ｎｏｗａｋら、２００８；Ａｍｉｎら、２０１１）およびそのキナーゼＳＲＰＫ１（Ｓａｎｆｏｒｄら）に関与する、近位スプライス部位におけるＶＥＧＦのスプライシングを制御するいくつかの経路を同定した。ＳＲＰＫ１のノックダウンは、腫瘍におけるインビボでのＶＥＧＦ媒介血管新生を強力に減少させ、ＳＲＰＫ１および２の阻害はインビボでの血管新生を減少させた（Ａｍｉｎら、２０１１）。
【００１２】
その内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２００８／１１０７７号、国際公開第２００９／１０６８５５号、国際公開第２０１０／０５８２２７号、国際公開第２０１１／０３６４２９号および国際公開第２０１１／１４８２００号は、ＶＥＧＦｘｘｘｂアイソフォームを選択的に直接発現する薬剤の治療的および生理学的使用を記載している。ＳＲＰＫ阻害剤は、原則としてそのような薬剤を構成することができる。
【００１３】
国際公開第２００５／０６３２９３号は、ＳＲＰＩＮ３４０ならびにその誘導体および類似体を含むＳＲＰＫ阻害剤のクラスを記載する。
【００１４】
その内容が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１４／０６０７６３号（ＰＣＴ／ＧＢ２０１３／０５２７１６）は、抗血管新生剤、神経保護剤、透過性亢進疾患の治療または予防に使用される薬剤として、疼痛の治療のための薬剤として、および子癇前症のリスクの軽減のためのまたは子癇前症の治療のための薬剤として特に使用されるための、ＳＲＰＫ１を標的とするＳＲＰＫ阻害剤を記載する。
【００１５】
ＶＥＧＦｘｘｘｂアイソフォームの発現を指示する薬剤の開発は、例えば新生血管ＡＭＤの治療だけでなく、ＶＥＧＦｘｘｘｂが関与する他の全ての疾患の新しい時代を表す。
【００１６】
本発明は、部分的に、抗血管新生剤、神経保護剤、透過性亢進疾患の治療または予防における使用のための薬剤として、疼痛治療剤として、および子癇前症のリスクを低減するためのまたは子癇前症の治療のための薬剤として特に使用される、ＳＲＰＫ１を標的とする新規な低分子阻害剤に基づいている。
【００１７】
また、本発明は、少なくとも一部は、ＳＲＰＫ１（例えば、ＳＲＰＩＮ３４０ならびにその誘導体および類似体）を阻害することが知られているこれらの低分子量化合物が、ＣＮＶの進行を阻害するのに局所的にまたは用量依存的に使用されうるという驚くべき知見に基づいている。
【発明の概要】
【００１８】
第１の態様において、本発明は、眼血管新生の用量依存的な治療または予防における使用のための、式（Ｉ）：
【００１９】
【化１】
0006579714.tif 000002
【００２０】
式中、
ｎは、１、２、３または０であり；
Ｒ１は、Ｈ；１以上の置換基を有していてもよい、４〜８員の炭素環基；１以上の置換基を有していてもよい、１個の酸素原子を含む４〜８員の複素環基；１以上の置換基を有していてもよい、１個の窒素原子を含む４〜８員の複素環基、１以上の置換基を有していてもよい１個の窒素原子および１個の酸素原子を含む４〜８員の複素環基；１以上の置換基を有していてもよい２個の窒素原子を含む４〜８員の複素環基；１以上の置換基を有していてもよい３個の窒素原子を含む４〜８員の複素環基、または１以上の置換基を有していてもよい、縮合芳香族複素環基であり；
Ｘは、ＣＨ、Ｏ、ＮＨまたはＮであり；
Ｙは、ＣＨ、Ｏ、ＮＨまたはＮであり；
Ｚは、Ｏ、Ｓ、ＮまたはＮＨであり；および
Ｒ２は、Ｈ、それぞれ１以上の置換基を有していてもよい、Ｃ１−６アルキル基；フェニル基；４〜８員の複素環基；または縮合芳香族複素環基である；
を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物もしくはプロドラッグを提供する。
【００２１】
用量依存性は、好ましくは、Ｓ字状の有効性／用量関係であり、例えば添付の図面の図４Ｃに示されているタイプである。「眼血管新生」との表現は、その範囲内に、例えば加齢性黄斑変性症などの脈絡膜新生血管形成を含む、眼血管新生を特徴とする疾患および障害を含む。また、「眼血管新生」との用語は、その範囲内に、網膜血管新生を特徴とする疾患および障害を含む。
【００２２】
第２の態様において、本発明は、眼血管新生の局所的な治療または予防における使用のための式（Ｉ）を有する化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物もしくはプロドラッグを提供する。
【００２３】
また、本発明の第１および第２の態様は、式（Ｉ）を有する化合物をそのような治療を必要とする患者に投与することによる眼血管新生の治療または予防のそれぞれの方法、ならびに、用量依存的な治療および／または局所的な治療としての眼血管新生の治療または予防のための医薬の調製における式（Ｉ）を有する化合物のそれぞれの使用を提供する。
【００２４】
本発明で使用される化合物が、用量依存的な眼血管新生の治療もしくは予防または眼血管新生の局所的な治療または予防を可能にすることは、驚くべきことであり、かつ従来技術から予期できない。用量依存的な治療は、本質的に予測可能ではないが、有効な治療にとって非常に望ましく有益である。
【００２５】
式（Ｉ）を有する特定の化合物、および式（Ｉ）を有する化合物の好ましいまたは例示されたサブクラスは、本発明における使用のために特に言及される。
【００２６】
本発明の方法において使用することができる式（Ｉ）を有する化合物のさらなる例は、Ｒ１が１以上の置換基を有していてもよい１個の窒素原子を含む４〜８員の複素環基であるものである。そのような化合物の例としては、Ｒ１が１個の窒素原子を含む６員の芳香族複素環基（例えば２−または３−または４−ピリジル基）が挙げられる。このような化合物のさらなる例としては、それぞれ１以上の置換基を有していてもよい、Ｒ１が２個または３個の窒素原子を含む６員の芳香族複素環（例えばピリミジン環、ピリダジン環、ピラジン環またはトリアジン環）が挙げられる。このような化合物のさらなる例としては、それぞれ１以上の置換基を有してもよい、Ｒ１が１個の窒素原子を含む６員の芳香族複素環基（例えばピペリジン基またはピペラジン基）が挙げられる。
【００２７】
一例として、式（Ｉ）を有する化合物は、Ｒ１が本明細書に記載の窒素を含有する６員の複素環またはフェニル基であり、本明細書に記載のｎ、Ｘ、Ｙ、ＺおよびＲ２の任意の組み合わせであるものを含む。例えば、Ｒ１が本明細書に記載の窒素を含有する６員の複素環またはフェニル基であり；Ｒ２はＨ；Ｃ１−６アルキル基；フェニル基；置換基を有していてもよい４〜８員の複素環基または縮合芳香族複素環基であり、ＸおよびＹはＣＨであり；ＺはＯであり、かつｎ＝１である化合物が挙げられる。
【００２８】
疑念を避けるために、下記：
【００２９】
【化２】
0006579714.tif 000003
【００３０】
は、ピペラジン環とＲ１との間のアルキル架橋単位を指す。従って、上記部分は、ｎ＝１であるメチレン（ＣＨ２）架橋；ｎ＝２であるエチレン架橋（ＣＨ２ＣＨ２）；ｎ＝３であるプロピレン架橋（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）である。
【００３１】
これらの式（Ｉ）を有する化合物およびそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物もしくはプロドラッグは新規であり、（眼血管新生の用量依存的な治療または予防、および／または眼血管新生の局所的な治療または予防における使用と同様に）化合物自体として、これらは本発明のさらなる態様を構成する。
【００３２】
新規化合物を含む医薬組成物、ならびに抗血管新生治療（異常な血管新生または過剰な血管新生を特徴とする障害および疾患の治療および予防を含む）における新規化合物およびそれらを含む医薬組成物の使用、透過性亢進疾患の治療、神経障害および神経変性疾患の治療、神経炎症性疼痛の治療、および子癇前症のリスクを低減する方法は、本発明のさらなる態様を構成する。
【００３３】
したがって、本発明は、式（Ｉ）を有する化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、（ｉ）本明細書で定義される異常な血管新生もしくは過剰な血管新生を特徴とする障害および疾患を治療または予防する方法；（ｉｉ）本明細書で定義される透過性亢進疾患を治療または予防する方法；（ｉｉｉ）本明細書で定義される神経障害および神経変性疾患を治療または予防する方法；（ｉｖ）非炎症性疼痛を治療または予防する方法；（ｖ）子癇前症のリスクを低減する方法、をも提供する。
【００３４】
特に言及される式（Ｉ）を有する化合物としては、ｎが１または２であるものが挙げられる。
【００３５】
特に言及される式（Ｉ）を有する化合物としては、ＸおよびＹがＣＨであり、かつＺがＯであるもの；ＸおよびＹの一方がＣＨであり、かつＸおよびＹの他方がＮであり、かつＺがＯであるもの；またはＸおよびＹがＮであり、かつＺがＯであるものが挙げられる。
【００３６】
特に言及される式（Ｉ）を有する化合物としては、ＸおよびＹがＣＨであり、かつＺがＳであるもの；ＸおよびＹの一方がＣＨであり、かつＸおよびＹの他方がＮであり、かつＺがＳであるもの；またはＸおよびＹがＮであり、かつＺがＳであるものが挙げられる。
【００３７】
特に言及される式（Ｉ）を有する化合物としては、ＸおよびＹがＣＨであり、かつＺがＮＨであるもの；ＸおよびＹの一方がＣＨであり、ＸおよびＹの他方がＮであり、かつＺがＮＨであるもの；またはＸおよびＹがＮであり、ＺがＮＨであるものが挙げられる。
【００３８】
式（Ｉ）を有する化合物の好ましい例としては、Ｒ１が１以上の置換基を有していてもよい２−または３−または４−ピリジル基（例えば非置換３−ピリジル基）（すなわち、ここでピリジル基の窒素ヘテロ原子は５員環に対してメタ位である）であるものが言及される。
【００３９】
式（Ｉ）を有する化合物の好ましい例としては、Ｒ１が１以上の置換基（例えばメトキシ置換基）を有していてもよいフェニル基であるものが挙げられる。
【００４０】
式（Ｉ）を有する化合物の好ましい例としては、Ｒ１が１以上の置換基を有していてもよい縮合芳香族複素環基であるものが挙げられる。例えば、Ｒ１がインドリル基、イソインドリル基、ベンゾイミダゾリル基、キノリル基またはイソキノリル基である化合物が挙げられる。
【００４１】
式（Ｉ）を有する化合物の好ましい例としては、Ｒ２が１以上の置換基を有していてもよい２−もしくは３−もしくは４−ピリジル基、またはピリミジニル基であるものが挙げられる。Ｒ２が１以上の置換基を有していてもよい２−または３−または４−ピリジル基である式（Ｉ）を有する化合物において、１以上の置換基を有していてもよい２−または３−または４−ピリジル基としては、例えば、非置換３−ピリジル基（すなわち、ピリジル基の窒素ヘテロ原子が５員環に対してメタ位である）であってもよい。
【００４２】
式（Ｉ）を有する化合物の好ましい例としては、Ｒ２が１以上の置換基を有していてもよいフェニル基または縮合芳香族複素環基であり、ここで縮合芳香族複素環基は、インドリル基、イソインドリル基、ベンゾイミダゾリル基、キノリル基またはイソキノリル基を含んでもよい。
【００４３】
式（Ｉ）を有する化合物の好ましい例としては、Ｒ２が水素またはＣ１−６アルキル基（例えばメチル基もしくはエチル基）であるものが挙げられる。
【００４４】
本発明の第１および第２の態様における使用のために、特に好ましくは（ａ）ｎ＝１であり；ＸおよびＹがＣＨであり、かつＺがＯであり；Ｒ１が２−または３−もしくは４−ピリジル置換基であり；Ｒ２が、フェニル置換基もしくは２−もしくは３−もしくは４−ピリジル置換基、または１以上の置換基を有していてもよいフェニル置換基もしくは２−もしくは３−もしくは４−ピリジル基である；式（Ｉ）を有する上記化合物、ならびに（ｂ）その薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物またはプロドラッグが言及される。式（Ｉ）を有する化合物の例としては、表１または表２に示される化学式の化合物が挙げられる。
【００４５】
式（Ｉ）を有する化合物ならびにその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物およびプロドラッグは、１以上の下記の特徴によってさらに特徴づけられてもよく、これらは、個々であろうと組み合わせであろうと、化合物のために、本明細書または国際公開第２００５／０６３２９３号において提示されるいかなる実施例および選好と任意に組み合わせてもよい。
【００４６】
１．ｎは１であり；
２．Ｒ１は、フェニル基、２−もしくは３−もしくは４−ピリジル基、またはピリミジニル基であってもよく；
３．ＺはＯであり；
４．ＸおよびＹはＣＨであり；
５．Ｒ２は、テトラヒドロピラニル基、フェニル基または２−もしくは３−もしくは４−ピリジル基を表してもよい。
【００４７】
式（Ｉ）で表される化合物としては、例えば、
（１）上記ｎが１または２であるような化合物；
（２）上記ｎが１であるような化合物；
（３）上記Ｒ１が、１以上の置換基を有していてもよい、４〜８員の炭素環基；１以上の置換基を有していてもよい、４〜８員の複素環基または１以上の置換基を有していてもよい１〜２個の窒素原子を含む４〜８員の複素環基であるような化合物；
（４）上記Ｒ１が２−または３−または４−ピリジル基であるような化合物；
（５）上記ＸおよびＹがＣＨまたはＮから独立して選択されるような化合物；
（６）上記ＸおよびＹがともにＣＨであるような化合物；
（７）上記ＺがＯまたはＳまたはＮＨであるような化合物；
（８）上記ＺがＯであるような化合物；
（９）上記Ｒ２が水素；Ｃ１−６アルキル基；１以上の置換基を有していてもよい４〜８員の炭素環；１以上の置換基を有していてもよい窒素を含有する４〜８員のヘテロアリール環、または１以上の置換基を有していてもよい酸素を含有する４〜８員のヘテロアリール環または縮合芳香族複素環基であるような化合物；
（１０）上記Ｒ２が水素、メチルまたは１以上の置換基を有していてもよい窒素を含有する６員のヘテロアリール環であるような化合物；
（１１）上記Ｒ２が１以上の置換基を有していてもよいピリジル環またはピリミジニル環であるような化合物；
（１２）上記Ｒ２が２−または３−または４−ピリジル環であるような化合物
などが挙げられる。
【００４８】
上記化合物において、ｎは（１）から（２）の順で好ましく、（２）が好ましい。Ｒ１は（３）から（４）の順で好ましく、（４）がより好ましい。ＸおよびＹは、（５）から（６）の順で好ましく、（６）がより好ましく、Ｚは（７）から（８）の順で好ましく、（８）がより好ましい。Ｒ２は（９）から（１２）の順で好ましく、（１２）がより好ましい。
【００４９】
［発明の詳細な説明］
本発明の化合物は、ＳＲＰＫ１特異的阻害剤である。ゆえに、ＳＲＰＫ１が関与する任意の疾患または症状を治療または予防する方法において使用されうる。そのような症状および治療を以下に記載する。
【００５０】
［抗血管新生治療］
本発明の化合物は、抗血管新生治療に使用することができる。抗血管新生治療には、好ましくは、血管新生促進ＶＥＧＦアイソフォーム（ＶＥＧＦｘｘｘ）の異常な血管新生または異常な過剰産生に関連する任意の疾患または障害の治療または予防が含まれる。このような疾患および障害としては、例えば、血管疾患（例えば、血管収縮および血管収縮を特徴とする障害、ならびに心血管疾患）、悪性および良性新生物（例えば、血管新生依存性癌（例えば腫瘍性癌））、腫瘍転移、炎症性障害、糖尿病、糖尿病性網膜症および糖尿病の他の合併症（例えば、糖尿病性血管新生）、トラコーマ、後腹膜肥厚、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、血管腫、移植角膜組織の免疫拒絶、眼損傷または感染に伴う角膜血管新生、オスラー−ウェーバー症候群、血管形成症、血友病関節、血管線維腫、毛細血管拡張症乾癬強皮症、化膿性肉芽腫、ルベーゼ症、肥満、関節炎（例えば、関節リウマチ）、造血、脈管形成、歯肉炎、アテローム性動脈硬化症、子宮内膜症、新生内膜過形成、乾癬、多毛症および増殖性網膜症などが挙げられる。また、本発明による抗血管新生治療は、健康な患者に対して行われる非治療的処置、例えば化粧目的での血管発生を阻害するための治療的処置を含みうる。異常な血管新生および抗血管新生治療に関連する疾患および障害のさらなる詳細については、その内容が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２００８／１１０７７７号を参照されたい。
【００５１】
特に、本発明の化合物は、網膜血管新生または脈絡膜血管新生または加齢性黄斑変性症を含む眼血管新生の治療または予防に使用することができる。さらに、本発明の化合物は、悪性新生物または癌（例えば、前立腺癌および乳癌）の治療または予防に使用することができる。
【００５２】
［微小血管過透過性亢進疾患、上皮細胞生存の障害および上皮濾過膜の開窓（ｆｅｎｅｓｔｒａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ  ｍｅｍｂｒａｎｅｓ）の障害］
ＳＲＰＫ１阻害剤としての本発明の化合物は、選択的にスプライスされたＶＥＧＦｘｘｘｂアイソフォームが関与する他の疾患の治療において治療剤として使用することもできる。例えば、ＶＥＧＦｘｘｘｂは、微小血管透過性亢進疾患、上皮細胞生存の障害および上皮濾過膜の開窓の障害に対して有効であることが、その内容が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１０／０５８２２７号に示されている。
【００５３】
微小血管透過性亢進、ＶＥＧＦｘｘｘアイソフォームの血管新生促進性透過亢進特性の調節障害、上皮細胞の生存および浸透性の障害、および／または上皮濾過の開窓の性質（例えば、数密度および／またはサイズ）の障害は、多くの重大な病状の根底にある。
【００５４】
そのような症状としては、例えば、タンパク尿、尿毒症、微量アルブミン尿、低アルブミン血、腎過剰ろ過、ネフローゼ症候群、腎不全、肺高血圧症、毛細血管過敏性、微小動脈瘤、水腫および糖尿病の血管合併症が挙げられる。
【００５５】
このような糖尿病の血管合併症としては、例えば、糖尿病性網膜症、増殖性および非増殖性の両方の糖尿病性腎症が含まれる。糖尿病の血管合併症は、Ｉ型またはＩＩ型糖尿病のいずれかと関連しうる。
【００５６】
血液からのタンパク質の損失は、例えば、血栓症（特に脳内の血栓症）および感染症に対する感受性などのさらなる合併症につながる可能性がある。血液からの天然タンパク質の損失は、癌治療の有効性を著しく損なう可能性がある。
【００５７】
微小血管透過性亢進疾患は、特に腎障害（例えばＧＦＢの透過性障害（例えば足細胞の浸透性障害））であってもよい。
【００５８】
上皮細胞の生存を支持する治療が有効である障害の例は、以下の通りである：
急性肺線維症、成人呼吸窮迫症候群、成人呼吸窮迫症候群、進行癌、アレルギー性呼吸器疾患、血管新生、関節炎、腹水、喘息、喘息または熱傷後の浮腫、アテローム性動脈硬化症、自己免疫疾患、骨吸収、水疱性類天疱瘡を含む表皮下水疱形成に関連する水疱性障害、心臓血管症状、糸球体またはメサンギウム細胞の増殖に関連する特定の腎疾患、慢性およびアレルギー性炎症、慢性肺疾患、慢性閉塞性肺疾患、肝硬変、角膜血管新生、角膜疾患、冠状動脈および脳の側副血管新生、冠状動脈再狭窄、心臓病に続く損傷、疱疹状皮膚炎、糖尿病、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、内毒素性ショック、多形性紅斑、線維症、糸球体腎炎、糸球体腎炎、移植片拒絶、グラム陰性敗血症、血管腫、肝硬変、肝不全、帯状疱疹、宿主対移植片反応（虚血再灌流傷害および腎臓、肝臓、心臓、および皮膚の同種移植片拒絶）、単純ヘルペス感染、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）からの感染、炎症、癌、炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎）、ステント内再狭窄、ステント内狭窄、虚血、虚血性網膜−静脈閉塞、カポジ肉腫、ケロイド、急性炎症時の肝疾患、肺同種移植片拒絶（閉塞性気管支炎）、慢性閉塞性肺疾患、新生血管新生緑内障、非インスリン依存性真性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）、リンパ性白血病（リンパ球性白血病）、リンパ性白血病、網膜血管増殖に関連する眼疾患、オスラーウェーバーランデュ疾患、変形性関節症、慢性閉塞性肺疾患、慢性閉塞性肺疾患、卵巣過刺激症候群、パジェット病、膵炎、類天疱瘡、多発性嚢胞腎疾患、ポリープ、閉経後骨粗鬆症、子癇前症、乾癬、肺水腫、肺線維症、肺サルコイドーシス、再狭窄、再狭窄、糖尿病性網膜症を含む網膜症、未熟児網膜症および加齢性黄斑変性症；リウマチ性関節炎、関節リウマチ、ルベーゼ症、サルコイドーシス、敗血症、脳卒中、滑膜炎、全身性エリテマトーデス、甲状腺炎、血栓性細小血管症症候群、外傷、腫瘍関連血管新生、血管移植片再狭窄、移植片拒絶反応、血管移植片再狭窄、フォンヒッペルリンダウ病、創傷治癒。
【００５９】
本発明は、黄斑ジストロフィーの治療に使用することができる。これには、スタルガルト病／眼底フラビマクラツス；スタルガルト様黄斑ジストロフィー；スタルガルト様黄斑ジストロフィー；常染色体優性の「ブルズアイ」黄斑ジストロフィーベストの黄斑ジストロフィー；成人卵形ジストロフィー；パターンジストロフィー；Ｄｏｙｎｅハニカム網膜ジストロフィー；ノースカロライナ州黄斑ジストロフィー；ＭＣＤＲ１に似た常染色体優性黄斑ジストロフィー；難聴に関連するノースカロライナ様黄斑ジストロフィー；進行性二焦点脈絡膜萎縮；ソルスビーの眼底ジストロフィー；中枢神経系の脈絡膜ジストロフィー；優性嚢胞黄斑ジストロフィー；若年性網膜症；潜在性黄斑ジストロフィー；非家族性泌尿器黄斑ジストロフィーが含まれる。
【００６０】
この障害は、特に、網膜上皮の障害（例えば、地理的萎縮）、または加齢性黄斑変性症でありうる。
【００６１】
微小血管透過性亢進疾患、上皮細胞生存の障害および上皮濾過膜の開窓の障害およびその治療についてのさらなる詳細は、国際公開第２０１０／０５８２２７号を参照されたい。
【００６２】
［神経障害および神経変性疾患］
ＳＲＰＫ１阻害剤としての本発明の化合物は、選択的にスプライスされたＶＥＧＦｘｘｘｂアイソフォームが関与する他の疾患の治療において治療剤として使用することもできる。例えば、国際公開第２００９／１０６８５５号（その内容は参照により本明細書に組み込まれる）において、ＶＥＧＦｘｘｘｂが神経保護効果および神経再生効果を有することが示されている。
【００６３】
本発明に従って治療または予防される神経障害には、神経因性疼痛および糖尿病ならびに他の神経障害が含まれる。
【００６４】
本発明に従って治療または予防される神経変性疾患には、認知型および非認知型の神経変性、神経筋変性、運動感覚神経変性、眼の神経変性が含まれる。
【００６５】
ＶＥＧＦｘｘｘｂファミリーのタンパク質の活性は、症状および障害を積極的に防止し、積極的に逆転させることが予測される。
【００６６】
さらに、軽度の認知機能障害は、健康な人の特定のクラス（例えば、高齢者、ストレス下にある者、疲れた者または非常に疲れた者）の正常な状態に関連することが多いので、本発明は、思考、記憶、学習、集中および推論などの認知機能および行動を調整または正常化する健康な者の非治療的処置にも適用可能である。
【００６７】
さらに、神経再生は、精神医学的または行動的異常を有する患者の脳神経ネットワークの正常化を助けることができるので、これらが１つ以上の認識された精神状態として診断症状であるか否かにかかわらず、本発明は、精神障害を有する者の治療的処置および身体的に健康な者の非治療的処置について、彼らの認知および行動を正常状態に調整することにも適用できる。
【００６８】
例えば、本発明は、疼痛（例えば、神経因性疼痛）、認知症、加齢性認知障害、アルツハイマー病、アルツハイマー型老人性痴呆（ＳＤＡＴ）、レビー小体型認知症、血管性認知症、パーキンソン病、脳炎後パーキンソニズム、うつ病、統合失調症、筋萎縮性側索硬化症（ＦＳＨ）、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー筋ジストロフィーおよびブルース型筋ジストロフィーを含む筋ジストロフィー、Ｆｕｃｈｓジストロフィー、筋緊張性ジストロフィー、角膜ジストロフィー、反射性交感神経性ジストロフィー症候群（ＲＳＤＳＡ）、神経血管ジストロフィー、重症筋無力症、ランバートイートン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を含む運動ニューロン疾患、多発性硬化症、姿勢性低血圧、外傷性ニューロパチーまたは神経変性（例えば脳卒中後または事故後（例えば、頭部外傷または脊髄損傷）、バタン病、コケイン症候群、ダウン症候群、大脳基底核神経節変性、多系統萎縮症、脳萎縮症、オリーブ橋小脳萎縮症、歯状核萎縮症、淡蒼球動脈萎縮症、スピノーバー萎縮症、視神経炎、硬化性全脳炎（ＳＳＰＥ）、注意欠陥障害、ポストウイルス性脳炎、麻疹後症候群、ファー（Ｆａｈｒ）症候群、ジュベール症候群、ギラン・バレー症候群、リセンスファリー、モヤモヤ病、ニューロン移行障害、自閉症症候群、ポリグルタミン病、ニーマン・ピック病、進行性多巣性白質脳症、偽腫瘍髄芽腫、レフサム病、ツェルウィガー症候群、核上麻痺、フリードライヒ失調症、２型脊髄小脳失調症、レット症候群、シャイ・ドレーガー症候群、結節性硬化症、ピック病、慢性疲労症候群、遺伝性ニューロパチーを含むニューロパシー、糖尿病性ニューロパチーおよび有糸分裂性ニューロパチー、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、変異型ＣＪＤ、新規変異型ＣＪＤ、ウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）、ＧＳＳ、ＦＦＩ、クルおよびアルパー症候群、ヤコブ病などのプリオンに基づく神経変性、急性播種性脳脊髄炎、くも膜炎、中枢神経系の血管病変、四肢の神経機能の喪失、シャルコー・マリー・トゥース病、クラッベ病、白質ジストロフィー、心不全への感受性、喘息、てんかん、聴覚神経変性、色素性網膜炎および緑内障誘発性視神経変性の治療または予防を提供する。
【００６９】
一般的に言えば、精神障害は、関連する行動や思考が個人に重大な苦痛をもたらすか、日々の機能に支障を与えない限り、「精神障害」と診断されない。したがって、診断可能な障害と、類似するがそれほど重篤または破壊的でない心理学的機能との間には境界線があり、その治療は非治療的とみなされるべきである（下記参照）。
【００７０】
本発明が関係する精神障害の例としては、これに限定されないが、不安障害（例えば、急性ストレス障害、パニック障害、広場恐怖症、社会恐怖症、特定の恐怖症、強迫性障害、性的不安障害、心的外傷後ストレス障害、体異型障害および全般性不安障害）、小児期障害（例えば、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、アスペルガー障害、自閉症障害、行動障害、反抗的障害、分離不安障害およびトゥレット症）、摂食障害（例えば、神経性食欲不振および神経性過食症）、気分障害（例えば、うつ病、大うつ病性障害、双極性障害（躁うつ病）、季節性情動障害（ＳＡＤ）、気分循環障害および気分変調障害）、睡眠障害、認知精神障害（例えば、せん妄、健忘障害）、人格障害（例えば、妄想性人格障害、統合失調症性人格障害、統合失調症性人格障害、反社会的性格障害、境界性人格障害、組織的人格障害、自己愛的人格障害、回避性人格障害、依存性人格障害および強迫性人格障害）、精神病性障害（例えば、統合失調症、妄想性障害、短期精神病性障害、統合失調症様障害、統合失調性感情障害および共有精神病性障害）、ならびに物質関連障害（例えば、アルコール依存症、アンフェタミン依存症、大麻依存症、コカイン依存症、幻覚剤依存症、吸入依存症、ニコチン依存症、オピオイド依存、フェンシクリジン依存および鎮静依存）などが挙げられる。
【００７１】
神経障害および神経変性疾患ならびにこれらの治療に関するさらなる詳細については、国際公開第２００９／１０６８５５号を参照されたい。その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００７２】
［疼痛の治療］
ＳＲＰＫ１阻害剤としての本発明の化合物は、選択的にスプライスされたＶＥＧＦｘｘｘｂアイソフォームが関与する他の疾患の治療において治療剤として使用することもできる。例えば、国際公開第２０１１／１４８２００号（その内容は参照により本明細書に組み込まれる）において、ＶＥＧＦｘｘｘｂが哺乳動物のＶＥＧＦＲ２媒介性の非炎症性疼痛に対して鎮痛効果を有することが示されている。
【００７３】
本発明に従って治療または予防されるＶＥＧＦＲ２媒介性の非炎症性疼痛には、ＶＥＧＦＲ２受容体が疼痛の原因または伝達に関与する非炎症性神経障害性および侵害受容性疼痛が含まれる。例えば、本発明の化合物は、非炎症性異痛症および疼痛（抗アロディニア性および鎮痛性）に対して活性を有すると予測される。このタイプの疼痛状態には、間欠的または一定の形態の慢性疼痛が含まれる。そのような疼痛状態としては、例えば、腰痛、神経痛、非定型の顔面痛のような非定型の痛み、（例えば、外科手術または損傷後に神経損傷を引き起こす）手術後、障害後に、または癌もしくは癌治療（例えば、細胞傷害性もしくは放射線療法）に関連して現れる痛み、または糖尿病に関連するニューロパチー（糖尿病性ニューロパチー、インスリン神経炎）または他の全身性もしくは自己免疫疾患もしくは病状もしくはこれらの治療、アルコール依存症もしくはＨＩＶ感染、老化関連ニューロパチー、または未知の神経障害などが挙げられる。
【００７４】
ＶＥＧＦＲ２アゴニスト（例えばＶＥＧＦｘｘｘｂファミリー）のタンパク質の活性は、ＶＥＧＦＲ２媒介性の非炎症性疼痛を積極的に予防し、積極的に逆転させると予測される。
【００７５】
しかし、ＶＥＧＦｘｘｘｂファミリーのタンパク質の抗血管新生活性の観点からは、本発明の化合物の使用は、血管新生の可能な阻害が患者にとって有害でない状況においては疼痛に限定されるであろう。
【００７６】
本発明で使用される化合物は、前記１種以上の異なる疼痛治療剤で治療（または同時治療）される患者の疼痛に対する感受性を正常化する目的で、１種以上の異なる疼痛治療剤と組み合わせて使用してもよい。「正常化」という用語は、患者の疼痛感受性を正常レベルに向かって動かすことを意味し、１種以上の異なる疼痛治療剤が痛みに対する感情または感受性の過度な減少を引き起こす場合、感受性の促進を含んでもよい。１種以上の異なる疼痛治療剤は、現在知られているかまたは未だ考案されていない疼痛治療剤から選択してもよい。そのような選択は、十分に当業者の技術範囲内である。そのような複合治療では、患者の疼痛感受性の細かい制御および患者の特定の症状およびニーズに係る全体的な副作用の最小化が可能となる。
【００７７】
疼痛およびその治療のさらなる詳細については、国際公開第２０１１／１４８２００号を参照されたい。その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００７８】
［子癇前症のリスク軽減］
ＳＲＰＫ１阻害剤としての本発明の化合物は、選択的にスプライスされたＶＥＧＦｘｘｘｂアイソフォームが関与する他の疾患の治療において治療剤として使用することもできる。例えば、国際公開第２０１１／０３６４２９号（その内容は参照により本明細書に組み込まれる）において、妊娠したメスの哺乳動物のＶＥＧＦｘｘｘｂレベルの低下は、メスの哺乳動物が子癇前症を発症するリスクを増加させることが示されている。したがって、本発明の化合物は、妊娠中のメスの哺乳動物のＶＥＧＦｘｘｘｂレベルを上昇させて、子癇前症、メスの哺乳動物が子癇前症またはそれに関連する合併症を発症する、またはメスの哺乳動物の胎児が母体の子癇前症に関連する胎児または新生児の欠損を発症するリスクを低減させる。
【００７９】
ヒトの子癇前症は、妊娠２０週の早期に発症する可能性がある。妊娠の約３４週間前に発生する子癇前症は、通常、「早期子癇前症」または「早期子癇前症」と呼ばれる。妊娠の約３４週間後に発生する子癇前症は、通常、「遅発性子癇前症」または「遅発性子癇前症」と呼ばれる。
【００８０】
さらに、子癇前症は、英国王立産科婦人科学会によって確立された基準に基づいて、「重度の子癇前症」として分類することができる。これらの基準の下で、「重度の子癇前症」の患者は、収縮期血圧（ＢＰ）が１６９ｍｍＨｇを超えるか、拡張期血圧が１０９ｍｍＨｇを超え、タンパク尿が１ｇ／２４ｈを超える；またはＨＥＬＬＰ症候群（溶血、上昇した肝臓酵素および低血小板数）の発生を示すであろう。
【００８１】
妊娠中のメスの哺乳動物が子癇前症および子癇前症またはそれに関連した合併症を発症するリスクを低減する方法、またはメスの哺乳動物の胎児が母体の子癇前症に関連する胎児または新生児の欠陥を発症するリスクを低減する方法のさらなる詳細については、国際公開第２０１１／０３６４２９号を参照されたい。
【００８２】
［活性化合物］
本発明の化合物は、式（Ｉ）によって定義される通りであり、キナーゼＳＲＰＫ１およびＳＲＰＫ２の一方または両方の阻害剤であることが示されており、ゆえに本明細書に記載の治療に有用である。
【００８３】
本発明の化合物は、任意の公知の方法によって合成することができる。必要に応じて、国際公開第２００５／０６３２９３号に開示されているような適切な方法を適合させてもよい。化合物１２の合成例を以下の実施例に記載する。
【００８４】
［同時投与］
本発明の化合物は、必要に応じて、例えば、これに制限されないが、コリンエステラーゼ阻害剤、ドーパミンアゴニスト（例えばＬ−ドーパ）、ＣＯＭＴ阻害剤、ＭＡＯ−Ｂ阻害剤、抗コリン作動薬、アセチルコリンアゴニスト、セロトニンアゴニスト、ＡＭＰＡ受容体アゴニスト、ＧＡＢＡ受容体アゴニスト、ＮＭＤＡ受容体アゴニスト、β−アドレナリン受容体アゴニスト、ジゴキシン、ドブタミン、抗炎症薬、神経栄養因子、スタチン、アデノシンＡ２ａ受容体アンタゴニスト、アルドースレダクターゼ阻害剤、免疫調節剤、カンナビノイドアゴニスト、インターフェロンまたは三環系抗うつ薬から選択される１種以上の追加の活性薬剤とともに同時投与してもよい。
【００８５】
［定義］
本明細書における式（Ｉ）の定義において、「Ｃ１−６アルキル基」とは、１〜６個の炭素原子を含む直鎖状または分岐状のアルキル基を意味し、炭素数１〜６の脂肪族炭化水素から任意の水素原子を除いた１価の基である。具体的には、Ｃ１−６アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、１−プロピル基、２−プロピル基、２−メチル−１−プロピル基、２−メチル−２−プロピル基、１−ブチル基、２−ブチル基、１−ペンチル基、２−ペンチル基、３−ペンチル基、２−メチル−１−ブチル基、３−メチル−１−ブチル基、２−メチル−２−ブチル基、３−メチル−２−ブチル基、２，２−ジメチル−１−プロピル基、１−ヘキシル基、２−ヘキシル基、３−ヘキシル基、２−メチル−１−ペンチル基、３−メチル−１−ペンチル基、４−メチル−１−ペンチル基、２−メチル−２−ペンチル基、３−メチル−２−ペンチル基、４−メチル−２−ペンチル基、２−メチル−３−ペンチル基、３−メチル−３−ペンチル基、２，３−ジメチル−１−ブチル基、３，３−ジメチル−１−ブチル基、２，２−ジメチル−１−ブチル基、２−エチル−１−ブチル基、３，３−ジメチル−２−ブチル基、２，３−ジメチル−２−ブチル基等のアルキル基が挙げられる。
【００８６】
「複素環」または「複素環基」は、環を構成する原子の少なくとも１個、例えば１個または２個がヘテロ原子である、環内に二重結合を含んでいてもよい芳香族または非芳香族環を指す。
【００８７】
「窒素含有複素環」または「１個以上の窒素原子を含む複素環基」は、環内に二重結合を含んでもよい芳香族または非芳香族環を指し、ここで、環を構成する原子の少なくとも１個、例えば１個または２個は窒素原子である。
【００８８】
「酸素含有複素環」または「１個以上の酸素原子を含む複素環基」は、環内に二重結合を含んでいてもよい芳香族または非芳香族環を指し、環を構成する原子の少なくとも１個、例えば１個または２個は酸素原子である。
【００８９】
「ヘテロ原子」は、硫黄原子、酸素原子、または窒素原子を意味する。
【００９０】
「窒素を含有する５〜１０員のヘテロアリール環」または「窒素を含有する５〜１０員の芳香族複素環基」とは、５〜１０個の原子で環が構成される芳香環を意味し、この際、環を構成する原子の少なくとも１個は窒素原子であり、１個以上の窒素原子以外のヘテロ原子がさらに含まれていてもよい。具体的には、窒素を含有する５〜１０員のヘテロアリール環としては、例えば、ピリジン環、インドール環、イソインドール環、ピリダジン環、ピリミジン環、ピラジン環、キノリン環、イソキノリン環、およびベンズイミダゾール環等が挙げられる。等の５〜１０員環のヘテロアリール環等が挙げられる。
【００９１】
「窒素を含有する５〜１０員のヘテロアリール基」とは、上記「５〜１０員のヘテロアリール環」から１個または２個の任意の水素原子を除いた１価または２価の基を意味する。具体的には、窒素を含有する５〜１０員のヘテロアリール基としては、例えば、ピリジル基、インドリル基、イソインドリル基、ピリダジニル基、ピリミジニル基、ピラジニル基、キノリル基、イソキノリル基、およびベンズイミダゾリル基等が挙げられる。
【００９２】
「窒素を含有する４〜８員のヘテロアリール環」または「窒素を含有する４〜８員の芳香族複素環基」とは、４〜８個の原子で環が構成される芳香環を意味し、この際、環を構成する原子の少なくとも１個は窒素原子であり、１個以上の窒素原子以外のヘテロ原子がさらに含まれていてもよい。具体的には、窒素を含有する４〜８員のヘテロアリール環としては、例えば、ピリジン環、ピリダジン環、ピリミジン環、ピラジン環等が挙げられる。
【００９３】
「窒素を含有する４〜８員のヘテロアリール基」とは、上記「４〜８員のヘテロアリール環」から１個または２個の任意の水素原子を除いた１価または２価の基を意味する。具体的には、窒素を含有する４〜８員のヘテロアリール基としては、例えば、ピリジル基、ピリダジニル基、ピリミジニル基、ピラジニル基等が挙げられる。
【００９４】
「酸素を含有する５〜１０員のヘテロアリール環」とは、５〜１０個の原子で環が構成される芳香環を意味し、この際、環を構成する原子の少なくとも１個は酸素原子であり、１個以上の酸素原子以外のヘテロ原子はがさらに含まれていてもよい。具体的には、酸素を含有する５〜１０員のヘテロアリール環としては、例えば、ピラン環等が挙げられる。
【００９５】
「酸素を含有する４〜８員のヘテロアリール基」とは、４〜８個の原子で環が構成される芳香環を意味し、この際、環を構成する原子の少なくとも１個が酸素原子であり、１個以上の酸素原子以外の原子がさらに含まれていてもよく、例えばピラニル基である。
【００９６】
「４〜８員の非芳香族複素環」とは、以下の定義を満たす非芳香環をいう：
１．４〜８個の原子で環が構成され、
２．環を構成する原子の１個または２個はヘテロ原子であり、
３．環内に１以上の二重結合が含まれていてもよく、
４．１〜３個のカルボニル基が環に含まれていてもよく、かつ
５．基が単環式である。
【００９７】
４〜８員の非芳香族複素環は、ヘテロ原子として窒素原子を含む、窒素を含有する４〜８員の複素環であることが好ましい。
【００９８】
具体的には、４〜８員の非芳香族複素環としては、例えば、アゼチジン環、ピロリジン環、ピペリジン環、アゼパン環、アゾシン環、テトラヒドロフラン環、テトラヒドロピラン環、モルホリン環、チオモルホリン環、ピペラジン環、チアゾリジン環、ジオキサン環、イミダゾリン環、チアゾリン環等が挙げられる。「４〜８員複素環」としては、好ましくはピロリジン環、ピペリジン環、モルホリン環、ピペラジン環を含む。
【００９９】
「４〜８員の非芳香族複素環基」とは、上記「４〜８員の非芳香族複素環」から１個または２個の任意の水素原子を除いた１価または２価の基を意味する。具体的には、４〜８員の複素環基としては、例えば、アゼチジニル基、ピロリジニル基、ピペリジニル基、アゼパニル基、アゾカニル基、テトラヒドロフリル基、テトラヒドロピラニル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ピペラジニル基、チアゾリジニル基、ジオキサニル基、イミダゾリル基、チアゾリル基等が挙げられる。
【０１００】
「縮合芳香族複素環」は、複素環部分がベンゼン環のような芳香環と縮合した（例えばオルト縮合環した）構造を意味する。複素環部分は、上記で定義した複素環である。
【０１０１】
「縮合芳香族複素環基」とは、複素環部分が環（例えばベンゼン環などの芳香環）と縮合した（例えばオルト縮合した）環構造を意味する。複素環部分は、上記で定義した複素環基である。
【０１０２】
縮合芳香族複素環基としては、例えば、インドリル基、インドリニル基、イソインドリル基、イソインドリニル基、および１，２，３，４−テトラヒドロキノリン等が挙げられる。
【０１０３】
「４〜８員の炭素環」は、例えばフラン環、テトラヒドロフラン環、ピラン環またはテトラヒドロピラン環等の飽和または不飽和炭素環を意味する。
【０１０４】
「４〜８員の炭素環基」とは、上記で定義した４〜８員の炭素環から１個または２個の任意の水素原子を除いて得られる１価または２価の基を意味する。具体的には、「４〜８員の炭素環基」は、フラニル基、テトラヒドロフラニル基、ピラニル基またはテトラヒドロピラニル基を意味する。
【０１０５】
ここで、「ハロゲン化Ｃ１−６アルキル基」とは、前記「Ｃ１−６アルキル基」において少なくとも１個の任意の水素原子が前記「ハロゲン原子」で置換された基を意味する。ハロゲン化Ｃ１−６アルキル基としては、例えば、トリフルオロメチル基、ジフルオロメチル基、およびモノフルオロメチル基等が挙げられる。
【０１０６】
ここで、「１以上の置換基を有していてもよい」とは、ある基または化合物が、置換可能な位置に１以上の置換基を任意に任意に選択または組み合わせて有していてもよいことを意味する。具体的には、置換基としては、例えば、ハロゲン、ヒドロキシル、ヒドロキシメチル、ヒドロキシエチル、メルカプト、ニトロ、シアノ、ホルミル、カルボキシル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アミノ、オキソ、イミノ、Ｃ１−６アルキル（例えばメチル）、Ｃ１−６アルコキシ（例えば、メトキシ）、Ｃ１−６チオアルキル（例えば、チオメチル）、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル；Ｃ１−６アルコキシカルボニル、Ｃ１−６アルキルスルホニル、Ｃ６−１０アリール、ベンジル、ヘテロアリール、フェニル、または１以上のハロゲン、ヒドロキシル、ヒドロキシメチル、ヒドロキシエチル、メルカプト、ニトロ、シアノ、ホルミル、カルボキシル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アミノ、オキソ、イミノ、Ｃ１−６アルキル（例えばメチル）、Ｃ１−６チオアルキル（例えばチオメチル）、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル；Ｃ１−６アルコキシカルボニル、Ｃ１−６アルキルスルホニル、もしくはＣ１−６アルコキシ（例えば、メトキシ）からなる１以上の原子または基で置換されたＣ６−１０アリールもしくはベンジルもしくはフェニルもしくはヘテロアリールである。
【０１０７】
「Ｃ２−６アルケニル基」は、２〜６個の炭素を含む直鎖状または分岐状のアルケニル基を意味する。具体的には、Ｃ２−６アルケニル基としては、例えば、ビニル基、アリル基、１−プロペニル基、２−プロペニル基、１−ブテニル基、２−ブテニル基、３−ブテニル基、ペンテニル基、ヘキセニル基等が挙げられる。
【０１０８】
「Ｃ２−６アルキニル基」は、２〜６個の炭素を含む直鎖状または分枝状のアルキニル基を意味する。具体的には、Ｃ２−６アルキニル基としては、例えば、エチニル基、１−プロピニル基、２−プロピニル基、ブチニル基、ペンチニル基、およびヘキシニル基等が挙げられる。
【０１０９】
「Ｃ１−６アルコキシ基」とは、前記「Ｃ１−６アルキル基」が結合したオキシ基をいう。具体的には、Ｃ１−６アルコキシ基としては、例えば、メトキシ基、エトキシ基、１−プロピルオキシ基、２−プロピルオキシ基、２−メチル−１−プロピルオキシ基、２−メチル−２−プロピルオキシ基、１−ブチルオキシ基、２−ブチルオキシ基、１−ペンチルオキシ基、２−ペンチルオキシ基、３−メチルペンチルオキシ基、２−メチル−１−ブチルオキシ基、３−メチル−１−ブチルオキシ基、２−メチル−２−ブチルオキシ基、３−メチル−２−ブチルオキシ基、２，２−ジメチル−１−プロピルオキシ基、１−ヘキシルオキシ基、２−ヘキシルオキシ基、３−ヘキシルオキシ基、２−メチル−１−ペンチルオキシ基、３−メチル−１−ペンチルオキシ基、４−メチル−１−ペンチルオキシ基、２−メチル−２−ペンチルオキシ基、３−メチル−２−ペンチルオキシ基、４−メチル−２−ペンチルオキシ基、２−メチル−３−ペンチルオキシ基、３−メチル−３−ペンチルオキシ基、２，３−ジメチル−１−ブチルオキシ基、３，３−ジメチル−１−ブチルオキシ基、２，２−ジメチル−１−ブチルオキシ基、２−エチル−１−ブチルオキシ基、３，３−ジメチル−２−ブチルオキシ基、３−ジメチル−２−ブチルオキシ基等が挙げられる。
【０１１０】
「Ｃ１−６アルキルチオ基」とは、前記「Ｃ１−６アルキル基」が結合したチオ基をいう。具体的には、「Ｃ１−６アルキルチオ基」としては、例えば、メチルチオ基、エチルチオ基、１−プロピルチオ基、２−プロピルチオ基、ブチルチオ基、およびペンチルチオ基等が挙げられる。
【０１１１】
「Ｃ１−６アルコキシカルボニル基」とは、前記「Ｃ１−６アルコキシ基」が結合したカルボニル基をいう。具体的には、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基としては、例えば、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、１−プロピルオキシカルボニル基、および２−プロピルオキシカルボニル基等が挙げられる。
【０１１２】
「Ｃ１−６アルキルスルホニル基」とは、前記「Ｃ１−６アルキル基」が結合したスルホニル基を意味する。具体的には、Ｃ１−６アルキルスルホニル基としては、例えば、メチルスルホニル基、エチルスルホニル基、１−プロピルスルホニル基、２−プロピルスルホニル基等が挙げられる。
【０１１３】
「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子を意味する。
【０１１４】
「Ｃ６−１０アリール基」は、６〜１０個の炭素原子を含む芳香族環状炭化水素基を指す。具体的には、Ｃ６−１０アリール基としては、例えば、フェニル基、１−ナフチル基、および２−ナフチル基等が挙げられる。
【０１１５】
「塩」は、本発明の化合物で形成される薬学的に許容される塩であれば特に限定されない。このような塩としては、例えば、無機酸塩、有機塩、無機塩基塩、有機塩基塩、酸性または塩基性アミノ酸塩が挙げられる。好ましい無機酸塩の例としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、およびリン酸塩等が挙げられる。好ましい有機塩の例としては、酢酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、ステアリン酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、およびｐ−トルエンスルホン酸塩等が挙げられる。
【０１１６】
好ましい無機塩基塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩；およびアンモニウム塩が挙げられる。好ましい有機塩基塩としては、ジエチルアミン塩、ジエタノールアミン塩、メグルミン塩、およびＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩等が挙げられる。
【０１１７】
好ましい酸性アミノ酸塩の例としては、アスパラギン酸およびグルタミン酸等が挙げられる。好ましい塩基性アミノ酸塩としては、例えば、アルギニン塩、リジン塩、オルニチン塩等が挙げられる。
【０１１８】
空気中に放置すると、本発明の化合物は時には水分を吸収し、吸収された水に付着したり、水和物に変換されることがある。このような水和物も本発明に含まれる。
【０１１９】
さらに、本発明の化合物は、いくつかの他の溶媒を吸収する溶媒和物に変換されることがある。 そのような溶媒和物も本発明に含まれる。
【０１２０】
原則として、任意の有機溶媒を用いて、本発明の化合物の溶媒和物を調製することができる。
【０１２１】
溶媒和物は、１種以上の有機溶媒と共に水も含むことができる。
【０１２２】
したがって、例えば、溶媒は、ケトン、アルコール、エーテル、エステル、芳香族溶媒、および可能であれば、これら相互の混合物、他の有機溶媒との混合物および／または水との混合物から選択することができる。
【０１２３】
本発明では、式（Ｉ）を有する化合物の薬学的に許容されるプロドラッグ形態を使用してもよい。「薬学的に許容されるプロドラッグ」は、過度の毒性、刺激、アレルギー応答などを伴わずに、ヒトおよび下等動物の組織と接触させて使用するのに適した、健全な医学的および獣医学的判断の範囲内である化合物のプロドラッグを意味し、合理的な利益／リスク比に相応し、それらの意図された用途に有効であり、また可能な場合には化合物の両性イオン形態である。「プロドラッグ」との用語は、インビボで迅速に変換されて、例えば血液中での加水分解により、上記式の親化合物を生じる化合物を意味する。インビボで代謝的切断により迅速に変換され得る官能基は、カルボキシル基と反応する基のクラスを形成する。化合物の代謝的に切断可能な基がインビボで切断される容易さのため、このような基を有する化合物はプロドラッグとして作用する。プロドラッグの徹底的な議論は、以下に提供される：プロドラッグの設計、Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，ｅｄ．，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５；酵素学における方法、Ｋ．Ｗｉｄｄｅｒら、Ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，４２，ｐ．３０９−３９６，１９８５；薬物設計と開発の教科書、Ｋｒｏｇｓｇａａｒｄ−ＬａｒｓｅｎおよびＨ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，ｅｄ．，第５章；プロドラッグの設計と応用ｐ．１１３−１９１，１９９１；Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，Ｈ．Ｂｕｎｄｇａｒｄ，８、ｐ．Ｉ−３８、１９９２；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，７７，ｐ．２８５，１９８８；Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，Ｎ．Ｎａｋｅｙａら，３２，ｐ．６９２，１９８４；新規デリバリーシステムとしてのプロドラッグ、Ｔ．ＨｉｇｕｃｈｉおよびＶ．Ｓｔｅｌｌａ，Ｖｏｌ．Ａ．Ｃ．Ｓ．シンポジウムシリーズ１４頁、および薬剤設計におけるバイオリバーシブルキャリア，Ｅｄｗａｒｄ  Ｂ．Ｒｏｃｈｅ編、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎならびにＰｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７（その内容は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０１２４】
［構成と管理］
本発明による化合物は、活性薬剤および任意の適切な追加成分を含む組成物の形態で投与してもよい。組成物は、例えば、局所投与（例えば、点眼剤もしくはクリームもしくはローション）もしくは非経口投与（例えば、注射、移植または注入）に好適な医薬組成物（医薬）であってもよい。あるいは、組成物は、例えば、食料品、食品サプリメント、飲料または飲料サプリメントであってもよい。
【０１２５】
本発明の文脈における用語「医薬組成物」または「医薬品」は、活性薬剤を含み、さらに１種以上の薬学的に許容される担体を含む組成物を意味する。組成物は、投与様式および剤形の性質に応じて、例えば、希釈剤、アジュバント、賦形剤（ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ）、賦形剤（ｖｅｈｉｃｌｅｓ）、保存剤、充填剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、甘味剤、香味剤、芳香剤、抗菌剤、抗真菌剤、潤滑剤および分散剤、から選択される成分をさらに含んでもよい。組成物は、例えば、錠剤、糖衣錠、散剤、エリキシル剤、シロップ剤、懸濁剤を含む液体製剤、噴霧剤、錠剤、ロゼンジ、エマルジョン、溶液、カシェ剤、顆粒剤、カプセル剤および坐剤、ならびにリポソーム調製物を含む注射用液体製剤の形態をとっていてもよい。技術および製剤は、一般に、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡの最新版で見つけることができる。
【０１２６】
液体形態の製剤としては、溶液、懸濁液、およびエマルジョン等が挙げられる。一例としては、非経口注射または局所投与用の水または水−プロピレングリコール溶液が挙げられる。また、液体製剤は水性ポリエチレングリコール溶液の溶液中に処方されてもよい。
【０１２７】
また、使用の直前に、局所、経口または非経口投与用の液体形態の製剤に変換されることを意図した固体形態の製剤も含まれる。そのような液体形態としては、溶液、懸濁液、およびエマルジョン等が挙げられる。これらの特定の固体形態調製物は、単位用量形態で提供されるのが最も便利であり、ゆえに単一の液体投与ユニットを提供するために使用される。あるいは、液体形態に変換した後、シリンジ、ティースプーン、または他の容積容器または装置のように、所定量の液体形態調製物を測定することによって、複数の個々の液体投与量を得ることができるように、十分量の固体が提供されてもよい。液体形態に変換されることを意図した固体形態調製物は、活性物質に加えて、香味料、着色剤、安定剤、緩衝剤、人工および天然甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤等を含んでもよい。液体形態調製物を調製するために利用される液体は、水、等張水、エタノール、グリセリン、プロピレングリコールなど、ならびにそれらの混合物であってもよい。当然のことながら、利用される液体は、投与経路に関して選択され、例えば、大量のエタノールを含有する液体製剤は、局所的または非経口的使用には適さない。
【０１２８】
組成物は、局所適用を意図した製剤であってもよい。製剤は、放出を制御するためのゲル化製剤、ゆえに以下の局所適用の活性物質の利用可能性であってもよい。製剤は、１種以上のゲル化剤（例えばヒドロキシプロピルメチルセルロース）を含有してもよい。製剤は、１種以上の界面活性剤（例えば、チロキサポール、およびＢＡＳＦ由来のＰｌｕｒｏｎｉｃｓ（登録商標）ポロキサマーなどの非イオン性液体ポリマー）を含むことができる。製剤は、１種以上の可溶化剤（例えばデキストロースまたはソルビトール）を含有してもよい。製剤は、１種以上の抗菌剤または消毒剤（例えば塩化ベンザルコニウム）を含有してもよい。上記のゲル化剤、界面活性剤、可溶化剤および抗菌剤は、例として単純に列挙されており、これらの機能を果たす他の薬剤が知られていることは理解されよう。
【０１２９】
投与量は、患者の必要条件、治療される症状の重篤度、および使用される化合物に応じて異なってもよい。特定の状況のための適切な投与量の決定は、当業者の技術範囲内である。一般に、治療は、化合物の最適投与量よりも少ないより低投与量で開始される。その後、状況下での最適効果に達するまで、用量を少しずつ増加させる。便宜上、所望であれば、１日の総投与量を分割し、１日の間に分割して投与することができる。
【０１３０】
活性剤の投与のための投与計画は、例えば、例えば１日〜１４日の範囲の投与期間で、１μｇ以下、例えば５００ｎｇ以下、例えば５０ｎｇ以下、例えば２０ｎｇ未満の活性薬剤の総用量を含んでもよい。例えば、１８ｎｇ、１７ｎｇ、１６ｎｇ、１５ｎｇ、１４ｎｇ、１３ｎｇ、１２ｎｇ、１１ｎｇまたは１０ｎｇ未満の総用量を投与してもよい。
【０１３１】
式（Ｉ）を有する化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物もしくはプロドラッグは、治療有効量で投与されてもよい。ＣＮＶの治療のための局所投与用の式（Ｉ）を有する化合物の治療有効量は、少なくとも約５μｇ／１０μｌ送達賦形剤であってもよい。あるいは、治療有効量は、少なくとも約１００μｇ／ｍＬ、例えば少なくとも約２００μｇ／ｍＬ、少なくとも約３００μｇ／ｍＬ、少なくとも約４００μｇ／ｍＬ、少なくとも約５００μｇ／ｍＬ、少なくとも約６００μｇ／ｍＬ、少なくとも約７００μｇ／ｍＬ、少なくとも約８００μｇ／ｍＬ、少なくとも約９００μｇ／ｍＬ、または少なくとも約１０００μｇ／ｍＬであってもよい。あるいは、治療有効量は、少なくとも約１ｍｇ／ｍＬ、例えば少なくとも約２ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約３ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約４ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約５ｍｇ／ｍＬであってもよい。あるいは、治療有効量は、約５ｍｇ／ｍＬ未満、例えば約４ｍｇ／ｍＬ未満、約３ｍｇ／ｍＬ未満、約２ｍｇ／ｍＬ未満、約１ｍｇ／ｍＬ未満であってもよい。治療有効量は、例えば１日〜１４日の範囲の投与期間で、毎日投与してもよい。治療有効量は、１日中に分割して、例えば１日２回、分割して投与される総１日用量であってもよい。
【０１３２】
哺乳動物患者の抗血管新生治療のための、または微小血管透過性亢進疾患の治療または予防に使用するための、またはＶＥＧＦｘｘｘアイソフォームの血管新生誘導の透過亢進特性の調節における、または透過性の増加なしでの上皮細胞の生存の支持における、上皮濾過膜の開窓（fｅｎｅｓｔｒａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ  ｍｅｍｂｒａｎｅｓ）の性質（例えば数密度および／もしくはサイズ）の低下における、または神経障害および神経変性疾患の治療もしくは予防における使用のための、インビボもしくはインビトロにおける神経保護剤もしくは神経再生剤として使用されるための、ＶＥＧＦＲ２媒介性の非炎症性疼痛の治療もしくは予防における使用のための、またはメスの哺乳動物が子癇前症もしくはそれに関連する合併症を発症するリスク、もしくはメスの哺乳動物の胎児が母体の子癇前症に関連する胎児または新生児の欠陥を発症するリスクの低減における使用のための、式（Ｉ）を有する化合物の治療有効量は、治療される患者の体重に応じて計算でき、少なくとも約２０ｍｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約３０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約４０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約５０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約６０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約７０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約８０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約９０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１００ｍｇ／ｋｇであってもよい。あるいは、治療有効量は、約１００ｍｇ／ｋｇ未満、例えば約９０ｍｇ／ｋｇ未満、約８０ｍｇ／ｋｇ未満、約７０ｍｇ／ｋｇ未満、約６０ｍｇ／ｋｇ未満、約５０ｍｇ／ｋｇ未満、約４０ｍｇ／ｋｇ未満、約３０ｍｇ／ｋｇ未満、または約２０ｍｇ／ｋｇ未満、例えば約１０ｍｇ／ｋｇ未満、約５ｍｇ／ｋｇ未満であってもよい。
【０１３３】
「治療または予防する」
本明細書で使用される「治療する」または「予防する」という表現および類似の用語は、一般的な医学的および精神医学的慣習に従って利用可能な試験のいずれかに従って判定されるように、障害を除去もしくは回避する、またはその症状を緩和することを意図した、予防的、治癒的および緩和的ケアを含む健康管理のすべての形態を指す。「治療または予防する」という表現には、特定の結果を達成する合理的な期待を狙っているが、必ずしもそうとは限らない介入が含まれる。「治療または予防する」という表現の範疇には、障害の進行を遅延または停止させるのに成功する介入が含まれる。
【０１３４】
特定の神経学的および精神医学的障害は、個体がある範囲の可能性のある症状の一部または全部を呈してもよく、または軽度の形態の障害しか示さなくてもよい「スペクトル」状態であるとみなされる。さらに、多くの神経学的および精神医学的症状は進行性であり、比較的軽度な異常症状から始まり、より重度の異常症状に進行する。本発明は、あらゆる種類および段階のあらゆる神経学的および精神医学的症状の治療および予防を含む。
【０１３５】
「影響を受けやすい」
本明細書で使用される「影響を受けやすい（ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ  ｔｏ）」という表現および類似の用語は、個体または障害の既知の危険因子を用いて評価されるように、医学的もしくは精神医学的障害、または性格変化を発症するリスクが通常よりも高い個体を特に指す。そのような個体は、例えば、投薬が処方され、かつ／または特別な食事、生活様式もしくは同様の推奨がその個体になされる程度に、１以上の特定の障害または人格の変化を発症する実質的なリスクを有すると分類されてもよい。
【０１３６】
「非治療法」
本明細書で使用される「非治療法（nｏｎ−ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｍｅｔｈｏｄ）」との表現は、特に、神経学的または心理学的種類の機能を正常化または増強または改善するために、正常範囲内で神経学的または心理学的に罹患した個体に対して行われる介入を指す。非治療的に適切に治療されうる神経学的機能としては、例えば、特に症状のスケールのより緩やかな収束、ならびに軽度の異常な行動や性格の特性への、認知（思考、推論、記憶、想起、想像力および学習など）、集中および注意等が挙げられる。非治療的に適切に治療することができる心理的機能としては、例えば、人間の行動、気分、人格および社会的機能（例えば、悲しみ、不安、うつ病、不機嫌、不機嫌、１０代の気分、睡眠パターンの乱れ、鮮やかな夢、悪夢、夢遊病）等が挙げられる。
【０１３７】
診断可能な神経学的および精神医学的障害と、正常範囲内の（診断不可能な）神経学的および心理学的機能との間には境界線が存在する。したがって、本発明の非治療的方法に従って治療可能な上記の神経学的及び心理的機能の例に加えて、関連する行動や思考が個人に重大な苦痛をもたらさないか、または日常の機能に支障をきたさないため、診断不可能である、軽度の形態の神経学的および精神医学的障害も、本発明に係る非治療的に治療可能な症状とみなされる。
【０１３８】
「標準化」
本明細書で使用される「標準化」との表現および類似する用語は、特に、正常と特徴づけられる状態に実際に到達するか否かにかかわらず、一般的な正常な神経学的または精神医学的な健康の特徴である状態への生理学的調整を指す。
【０１３９】
［哺乳動物］
本発明は、ヒトの治療に有用であることに加えて、広範囲の哺乳動物においても有用である。このような哺乳動物としては、例えば、例えば動物園の非ヒト霊長類（例えば、類人猿、サル、およびエルム）、猫またはイヌ等のコンパニオン動物、ウマおよびポニーなどの労働およびスポーツ動物、家畜（例えばブタ、ヒツジ、ヤギ、シカ、ウシ、ウシ）、ならびに実験動物（例えば、ウサギ、ラット、マウス、ハムスター、アレチネズミまたはモルモット）等が挙げられる。
【０１４０】
治療される障害または機能がヒトに限定される場合、治療される哺乳動物はヒトであることが理解されるであろう。治療される障害または機能がその種のみに限定されている場合、他の哺乳動物種にもそれぞれ同じことが当てはまる。
【図面の簡単な説明】
【０１４１】
本発明の実施形態を、純粋に一例として、添付の図面を参照して説明する。
【図１】図１は、ＳＲＰＫ１に対する式（Ｉ）を有する化合物１２〜１４（それぞれＳＰＨＩＮＸ３１、ＳＰＨＩＮＸ３２およびＳＰＨＩＮＸ３３と称する）の活性を示す。
【図２】図２は、参照化合物ＳＰＨＩＮＸおよびＳＰＨＩＮＸ７と比較した、ＳＰＨＩＮＸ３１のＳＲＰＫ１脱抑制（ＤＤＳ）細胞におけるＳＲＳＦ１リン酸化に対する効果を示す。
【図３】図３は、ＤＤＳ細胞における参照化合物ＳＰＨＩＮＸおよびＳＰＨＩＮＸ７に対するＳＰＨＩＮＸ３１の用量応答曲線を示す。
【図４】図４Ａおよび４Ｂは、参照化合物ＳＲＰＩＮ３４０およびＳＰＨＩＮＸ７と比較した、レーザー誘導マウスＣＮＶモデルにおけるＳＰＨＩＮＸ３１の効果を示す。図４Ｃは、レーザー誘発マウスＣＮＶモデルにおけるＳＰＨＩＮＸ３１の用量応答曲線を示す。図４Ｄは、ＳＰＨＩＮＸ３１または参照化合物ＳＰＨＩＮＸ７で処置した後のレーザー誘発マウスＣＮＶモデルにおける代表的病変サイズを示すフルオレセイン血管造影の画像を示す。
【図５】図５は、ＳＰＨＩＮＸ３１のｈＥＲＧ阻害プロファイルを示す。
【図６】図６は、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ  ＫＩＮＯＭＥｓｃａｎ（登録商標）結合親和性アッセイを用いて、全ての既知のキナーゼに対するＳＰＨＩＮＸ３１のキノムスクリーンのＴＲＥＥｓｐｏｔ  ＴＭ結果を示す。
【図７】図７は、示差走査型蛍光光度法を用いて計算された等価結合親和性を示す。
【図８】図８は、本発明の化合物の塩（ＨＣｌ塩）が、インビトロでＳＲＰＫ１活性を用量依存的に阻害し、非結合ＳＰＨＩＮＸ化合物と同様に効率的に阻害することを示す。
【図９】図９は、（１μＭ  ＳＰＨＩＮＸ３１で）ＳＰＨＩＮＸ３１がＰＣ−３細胞におけるＳＲＳＦ１リン酸化をも阻害することを示す。
【図１０ａ】図１０Ａおよび１０Ｂは、ＳＰＨＩＮＸ３１がＰＣ−３癌細胞（図１０ａ）およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１癌細胞（図１０ｂ）におけるＳＲＳＦ１の核局在化をブロックすることを示す。
【図１０ｂ】図１０Ａおよび１０Ｂは、ＳＰＨＩＮＸ３１がＰＣ−３癌細胞（図１０ａ）およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１癌細胞（図１０ｂ）におけるＳＲＳＦ１の核局在化をブロックすることを示す。
【図１１】図１１は、ＳＰＨＩＮＸ化合物が、Ｄｅｎｙｓ  Ｄｒａｓｈ（ＤＤＳ）足細胞および正常足細胞における抗血管新生ＶＥＧＦ１６５ｂの発現を用量依存的に増加させることを示す。
【図１２】図１２は、ＳＰＨＩＮＸ化合物が、ＭＣＦ７乳癌細胞（左手チャート）およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞（右手チャート）における抗血管新生ＶＥＧＦ１６５ｂの発現を増加させることを示す。
【図１３】図１３は、ＳＰＨＩＮＸ化合物がＲＰＥ細胞における抗血管新生ＶＥＧＦ１６５ｂの発現を用量依存的に増加させることを示す。
【図１４Ａ−Ｃ】図１４Ａは、本発明の化合物が強膜を貫通し得るかどうかを試験するために使用される透過性チャンバーを示す。対照としてパザポニブ（ｐａｚａｐｏｎｉｂ）を用いた。図１４Ｂは、ウサギ眼組織における０、４または２４時間後の底部チャンバー（「硝子体」）における化合物の濃度を示す。図１４Ｃは、ウサギ眼組織における４時間後の網膜濃度を適用濃度の百分率として示す。
【図１４Ｄ−Ｇ】図１４Ｄは、ブタの眼組織における２４時間後の強膜組織中の化合物濃度を適用濃度の百分率として示している。図１４Ｅは、ブタの眼組織における２４時間後のＲＰＥ／脈絡膜組織中の化合物濃度を適用濃度の百分率として示す。図１４Ｆは、ブタの眼組織における２４時間後の網膜組織中の化合物濃度を適用濃度の百分率として示す。図１４Ｇは、ブタの眼組織における２４時間後の下部チャンバー（「硝子体」）中の化合物濃度を適用濃度の百分率として示す。
【図１５】図１５は、ＳＰＨＩＮＸ３１添加２４時間後のマウスの網膜における化合物の実質的な蓄積を示す。
【図１６】図１６は、インビボウサギ試験において、パゾパニブと比較してＳＰＨＩＮＸ３１が網膜によく浸透していることを示す。
【図１７】図１７は、ＳＰＨＩＮＸ３１が、パゾパニブが結合する場合よりも、実質的に少ないメラニンに結合することを示す。
【図１８】図１８は、臭化プロパンテリンと比較した化合物のヒト血漿中での安定性を示す。
【図１９】図１９は、ＳＰＨＩＮＸ３１およびその代謝物ＳＰＨＩＮＸ４６のいずれもＡｍｅｓ試験では遺伝毒性を誘発しないことを示す。
【図２０Ａ−Ｄ】図２０は、局所点眼投与による２μｇ／ｍｌのコントロールまたはＳＰＨＩＮＸ３１で処置２４時間後に採取したマウスにおけるＧａｎｚｆｅｌｄ  ＥＲＧ記録を示す。１で処置２４時間後に採取したマウスにおけるＧａｎｚｆｅｌｄ  ＥＲＧ記録を示す。
【図２０Ｅ−Ｆ】図２０は、局所点眼投与による２μｇ／ｍｌのコントロールまたはＳＰＨＩＮＸ３１で処置２４時間後に採取したマウスにおけるＧａｎｚｆｅｌｄ  ＥＲＧ記録を示す。
【図２０Ｇ−Ｊ】図２０は、局所点眼投与による２μｇ／ｍｌのコントロールまたはＳＰＨＩＮＸ３１で処置２４時間後に採取したマウスにおけるＧａｎｚｆｅｌｄ  ＥＲＧ記録を示す。
【図２１】図２１は、局所点眼投与による２μｇ／ｍｌのコントロールまたはＳＰＨＩＮＸ３１で処置２４時間後に採取したマウスにおけるＧａｎｚｆｅｌｄ  ＥＲＧ記録を示す。
【図２２ａ】図２２ａは、ＳＲＰＫ１に連結していない選択的スプライシングを有する遺伝子を発現するＲＰＥ細胞に対するＳＰＨＩＮＸ化合物の効果を示す。
【図２２ｂ】図２２ｂは、ＳＲＰＫ１に連結している選択的スプライシングを有するＲＰＥ発現遺伝子に対するＳＰＨＩＮＸ化合物の効果を示す。
【図２３】図２３は、ＳＲＰＫ１依存選択的スプライシングを有するＲＰＥ発現遺伝子であるＭＫＮＫ２に対するＳＰＨＩＮＸ化合物の効果を示す。図２３Ａは、ＭＫＮＫ２遺伝子の選択的スプライシングを示す。図２３Ｂおよび２３Ｃは、この選択的スプライシングに対するＳＰＨＩＮＸ化合物の効果を示す。
【０１４２】
＜方法＞
［合成プロトコル］
化合物の一般的な合成プロトコルを以下のスキーム１に示し、化合物１２の合成例（本明細書ではＳＰＨＩＮＸ３１ともいう）を下のスキーム２に示す。これらの化合物は様々な方法で合成することができるが、これは最短かつ最も効率的である。このプロトコルを変形して本明細書に記載の他の化合物を合成することは、当業者の願望の範囲内である。
【０１４３】
【化３−１】
0006579714.tif 000004
【０１４４】
【化３−２】
0006579714.tif 000005
【０１４５】
ＳＰＨＩＮＸ３１実験
ｔ−ブチル４−（ピリジン−２−イルメチル）ピペラジン−１−カルボキシラート（３）
【０１４６】
【化４】
0006579714.tif 000006
【０１４７】
１−Ｂｏｃピペラジン（１）（２．２４ｇ、１３．６７ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（４．９８ｇ、３６．０２ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１２ｍＬ）懸濁液に、室温で、２−（クロロメチル）ピリジン塩酸塩（２）（１．９７ｇ、１０．５８ｍｍｏｌ）を固体として一度に加えた。懸濁液を室温で１６時間撹拌した後、重炭酸ナトリウム飽和水溶液に注いだ。混合物を酢酸エチルで抽出した（×３）。有機抽出物をまとめ、水および塩水で洗浄した後、乾燥させた（Ｎａ２ＳＯ４）。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物を６０％酢酸エチル／ｎ−ヘキサンで溶出する不活性シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、文献（Ｅ．Ｃａｒｃｅｌｌｅｒ，Ｍ．Ｍｅｒｌｏｓ，Ｍ．Ｇｉｒａｌ，Ｃ．Ａｌｍａｎｓａ，Ｊ．Ｂａｒｔｒｏｌｉ，Ｊ．Ｇａｒｃｉａ−Ｒａｆａｎｅｌｌ，Ｊ．Ｆｏｒｎ；Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９３，３６，２９８４−２９９７）で報告されている全分析物質データと合致する生成物（３）を無色ゴム状物として得た（２．９８ｇ、９８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）δ１．４４（ｓ，９Ｈ），２．４２−２．４５（ｍ，４Ｈ），３．４３−３．４６（ｍ，４Ｈ），３．６５（ｓ，２Ｈ），７．１４−７．１８（ｍ，１Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６１−７．６７（ｍ，１Ｈ），８．５５−８．５７（ｍ，１Ｈ）。
【０１４８】
１−（ピリジン−２−イルメチル）ピペラジン（４）
【０１４９】
【化５】
0006579714.tif 000007
【０１５０】
Ｂｏｃ−ピペラジン（３）（２．９８ｇ、１０．７６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２１．５ｍＬ）溶液に対し、０℃（氷）で、トリフルオロ酢酸（２１．５ｍＬ、２８０．９６ｍｍｏｌ）を滴下した。溶液を０℃で１０分間撹拌した後、冷浴を除去し、溶液を室温で４時間撹拌した。この溶液を飽和重炭酸ナトリウム水溶液を用いてｐＨ９に中和した。ジクロロメタン層を除去し、残った水溶液をジクロロメタンで抽出した（×２）。有機抽出物をまとめ、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、水および塩水で洗浄した後、乾燥させた（Ｎａ２ＳＯ４）。溶媒を減圧下で除去し、次の段階で用いるのに十分な純度であり、文献（Ｅ．Ｃａｒｃｅｌｌｅｒ，Ｍ．Ｍｅｒｌｏｓ，Ｍ．Ｇｉｒａｌ，Ｃ．Ａｌｍａｎｓａ，Ｊ．Ｂａｒｔｒｏｌｉ，Ｊ．Ｇａｒｃｉａ−Ｒａｆａｎｅｌｌ，Ｊ．Ｆｏｒｎ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９３，３６，２９８４−２９９７）で報告されている全分析物質データと合致する生成物（４）を淡黄色油状物として得た（１．９１ｇ、９９％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）δ１．９５（ｓ，１Ｈ），２．４４−２．４７（ｍ，４Ｈ），２．８８−２．９１（ｍ，４Ｈ），３．６２（ｓ，２Ｈ），７．１３（ｄｄ，Ｊ＝７．６および１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５９−７．６５（ｍ，１Ｈ），８．５２−８．５５（ｍ，１Ｈ）。
【０１５１】
１−（２−ニトロ−４−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−（ピリジン−２−イルメチル）ピペラジン（５）
【０１５２】
【化６】
0006579714.tif 000008
【０１５３】
ピペラジン（４）（７．０１ｇ、３９．５６ｍｍｏｌ）、４−クロロ−３−ニトロベンゾトリフルオリド（６）（６．１ｍＬ、４１．５１ｍｍｏｌ）および固体重炭酸ナトリウム（８．３１ｇ、９８．９１ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（３９．５ｍＬ）溶液を１６時間加熱還流した。溶液を室温に冷却し、反応溶液をセライトのショートパッドを通してろ過し、酢酸エチルで溶出させた。溶媒を減圧下で除去し、次の段階で用いるのに十分な純度である生成物（５）を橙色ゴム状物として得た（１０．７２ｇ、７４％）。粗生成物が不純であるときには、２％メタノール／酢酸エチルで溶出させながら不活性化シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、生成物を得た。（５００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）δ２．６７−２．６９（ｍ，４Ｈ），３．２０−３．２２（ｍ，４Ｈ），３．７３（ｓ，２Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１７−７．２０（ｍ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６３−７．６８（ｍ，２Ｈ），８．０３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），８．５９（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）δ５０．９，５２．９，６４．５，１２０．６，１２２．１（ｑ，ＪＣ−Ｆ＝３４．７Ｈｚ），１２２．４，１２３．４（ｑ，ＪＣ−Ｆ＝２７０．８Ｈｚ），１２３．５，１２４．３（ｑ，ＪＣ−Ｆ＝３．９Ｈｚ），１３０．２（ｑ，ＪＣ−Ｆ＝３．５Ｈｚ），１３６．６，１４０．６，１４８．１，１４９．６，１５８．０；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）１６２５ｃｍ−１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＭＳ）：ｍ／ｚ  ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ１７Ｈ１７Ｆ３Ｎ４Ｏ２Ｎａ  ［Ｍ＋Ｎａ］＋  ３８９．１２０１，ｆｏｕｎｄ  ３８９．１１８５。
【０１５４】
２−（４−（ピリジン−２−イルメチル）ピペラジン−１−イル）−５−（トリフルオロメチル）アニリン（７）
【０１５５】
【化７】
0006579714.tif 000009
【０１５６】
ピペラジン（５）（１０．７２ｇ、２９．２５ｍｍｏｌ）、塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物（１．５９ｇ、５．８７ｍｍｏｌ）および木炭（１．１７ｇ）のメタノール（２９０ｍＬ）溶液に対し、室温で、ヒドラジン水和物（３５．５ｍＬ、７３１．８４ｍｍｏｌ）を滴下した。溶液を還流下で２時間加熱した。溶液を室温に冷却した後、セライトのショートパッドを通して濾過し、酢酸エチルで溶出させた。溶媒を減圧下で除去した。残渣を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した（×３）。有機抽出物をまとめ、乾燥させた（Ｎａ２ＳＯ４）。溶媒を減圧下で除去し、次の段階で用いるのに十分な純度である生成物７を白色固体として得た（９．３５ｇ、９５％）。Ｍｐ  １２６−１２７℃；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）δ２．６７−２．６９（ｍ，４Ｈ），２．９７−３．００（ｍ，４Ｈ），３．７４（ｓ，２Ｈ），４．０７（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），６．９２−７．０４（ｍ，３Ｈ），７．１６−７．２０（ｍ，１Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６４−７．７０（ｍ，１Ｈ），８．５７−８．６０（ｍ，１Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）δ５０．７，５４．０，６４．８，１１１．６（ｑ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），１１５．５（ｑ，Ｊ＝４．１Ｈｚ），１１９．７，１２２．３，１２３．４，１２４．６（ｑ，ＪＣ−Ｆ＝２７１．２Ｈｚ），１２６．５（ｑ，ＪＣ−Ｆ＝３２．２Ｈｚ），１３６．６，１４１．７，１４２．２，１４９．５，１５８．５；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）３１８７，３２８３ｃｍ−１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＭＳ）：ｍ／ｚ  ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ１７Ｈ２０Ｆ３Ｎ４  ［Ｍ＋Ｎａ］＋  ３３７．１６４０，ｆｏｕｎｄ  ３３７．１５９４。
【０１５７】
メチル５−ブロモフラン−２−カルボキシラート（８）
【０１５８】
【化８】
0006579714.tif 000010
【０１５９】
カルボン酸（９）（２０．０ｇ、０．１０５ｍｏｌ）のメタノール（１０５０ｍＬ）溶液に対し、室温で、濃硫酸（０．５６ｍＬ、１０．５１ｍｍｏｌ）を滴下した。この溶液を還流下で１７時間加熱した。溶液を室温に冷却し、メタノールを減圧下で除去した。残渣を水で希釈し、固体の重炭酸ナトリウムを用いて溶液のｐＨをｐＨ９に調整した。混合物を酢酸エチル（×３）で抽出した。有機抽出物を合わせ、水および塩水で洗浄した後、乾燥させた（Ｎａ２ＳＯ４）。溶媒を減圧下で除去し、次の段階で用いるのに十分な純度であり、文献（Ｙ．Ｚｈｕ，Ｈ．Ｙａｎ，Ｌ．Ｌｕ，Ｄ．Ｌｉｕ，Ｇ．Ｒｏｎｇ，Ｊ．Ｍａｏ  Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２０１３，７８，９８９８−９９０５）で報告されている全分析物質データと合致する生成物８を白色固体として得た（１９．４７ｇ、９１％）。Ｍｐ  ６７−６８℃；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）δ３．９０（ｓ，３Ｈ），６．４６（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１Ｈ），７．１３（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１６０】
メチル５−（ピリジン−４−イル）フラン−２−カルボキシラート（１０）
【０１６１】
【化９】
0006579714.tif 000011
【０１６２】
フラスコに、エステル８（２．１７ｇ、１０．５８ｍｍｏｌ）、４−ピリジニルボロン酸（１１）（１．００ｇ、８．１４ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（０．２９ｇ、０．４１ｍｍｏｌ）、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（１０．２ｍＬ、２２．４ｍｍｏｌ）および１，２−ジメトキシエタン（８１ｍＬ）を加えた。フラスコを凍結−ポンプ−解凍し（×３）、アルゴンを充填し、１７時間加熱還流した。溶液を室温に冷却し、ＤＭＥを減圧下で除去した。残渣のｐＨを２Ｍ塩酸水溶液を用いてｐＨ１に調整した。溶液をジクロロメタンで抽出した（×３）。ジクロロメタン抽出物を捨てた。残りの水溶液を固体の重炭酸ナトリウムを用いてｐＨ９に中和し、酢酸エチルで抽出した（×３）。各有機抽出物をまとめ、水および塩水で洗浄した後、乾燥させた（Ｎａ２ＳＯ４）。溶媒を減圧下で除去し、次の段階で用いるのに十分な純度であり、文献（Ｈ．Ｙ．Ｆｕ，Ｈ．Ｄｏｕｃｅｔ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２０１１，７１６３-７１７３）で報告されている全分析物質データと合致する生成物１０を白色固体として得た（１．４１ｇ、８５％）。Ｍｐ  ９５−９７℃；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）δ３．９４（ｓ，３Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６２−７．６４（ｍ，２Ｈ），８．６６−８．６８（ｍ，２Ｈ）。
【０１６３】
Ｎ−（２−（４−（ピリジン−２−イルメチル）ピペラジン−１−イル）−５−トリフルオロメチル）フェニル）−５−（ピリジン−４−イル）フラン−２−カルボキサミド（ＳＰＨＩＮＸ３１）（１２）
【０１６４】
【化１０】
0006579714.tif 000012
【０１６５】
アニリン７（０．１８９ｇ、０．５６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１．１ｍＬ）溶液に対し、室温で、トリメチルアルミニウムの２Ｍトルエン溶液（０．８４ｍＬ、１．６８ｍｍｏｌ）を滴下した。溶液を室温で１時間撹拌した後、エステル１０（０．１１４ｇ、０．５６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（０．６ｍＬ）溶液を室温で滴下した。反応溶液を室温でさらに1６時間攪拌した。反応をクエンチするために、飽和ロッシェル塩水溶液を室温で滴下し、溶液を室温でさらに１５分間撹拌した。混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液で希釈し、ジクロロメタンで抽出した（×３）。各有機抽出物をまとめ、水および塩水で洗浄した後、乾燥させた（Ｎａ２ＳＯ４）。溶媒を減圧下で除去し、次の段階で用いるのに十分な純度である生成物を白色固体として得た（０．１９ｇ、６７％）。粗生成物が不純であるときには、２％メタノール／酢酸エチルで溶出させながら不活性化シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、生成物を得た。Ｍｐ  １５７−１５９℃；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ２．８５（ｂｒ  ｓ，４Ｈ），３．０４（ｂｒ  ｓ，４Ｈ），３．７８（ｓ，２Ｈ），７．０６（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｍ，１Ｈ），７．３１−７．４１（ｍ，４Ｈ），７．６５−７．７２（ｍ，３Ｈ），８．６０（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），８．８０−８．８７（ｍ，３Ｈ），９．６５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ５２．２，５４．５，６５．０，１１１．３，１１６．７（ｑ，ＪＣ−Ｆ＝４．５Ｈｚ），１１７．７，１１８．５，１２１．１，１２１．３（ｑ，ＪＣ−Ｆ＝４．５Ｈｚ），１２２．５，１２３．５，１２４．１（ｑ，ＪＣ−Ｆ＝２７２Ｈｚ），１２８．０（ｑ，ＪＣ−Ｆ＝３４Ｈｚ），１３３．５，１３６．７，１４８．６，１４９．７，１５０．８，１５３．２，１５５．７，１５７．９；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２７Ｈ２４Ｆ３Ｎ５Ｏ２（ＭＨ＋）５０８．１９６０３，ｆｏｕｎｄ  ５０８．１９３１５；ＩＲ：（ｎｅａｔ）１６６９，３３３２ｃｍ−１。
【０１６６】
すべての化合物の分析データを表４に示す。
【０１６７】
［インビトロキナーゼアッセイ］
候補化合物をＫｉｎａｓｅ−Ｇｌｏアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ；ＫｏｒｅｓａｗａおよびＯｋａｂｅ、２００４）によりスクリーニングし、その結果を表１および表２に示す。９．６ｍＭ  ＭＯＰＳ  ｐＨ７および０．２ｎＭ  ＥＤＴＡ  ｐＨ８を含む反応緩衝液を、１０μＭ  ＳＲＳＦ１  ＲＳペプチド（ＮＨ２−ＲＳＰＳＹＧＲＳＲＳＲＳＲＳＲＳＲＳＲＳＲＳＮＳＲＳＲＳＹ−ＯＨ（配列番号１））および精製ＳＲＰＫ１キナーゼ０．１μｇに添加した。候補化合物を１０μＭ〜０．５ｎＭで連続希釈して反応混合物に添加し、ＳＲＰＫ１キナーゼを省いたウェルおよび化合物を省いたウェルも対照として加えた。全てのウェルは１％のＤＭＳＯを含有していた。１マイクロモルのＡＴＰを添加し、ＡＴＰを差し引いたウェルをバックグラウンド対照として用いた。次いで、プレートを３０℃で１０分間インキュベートした。等量のキナーゼ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ、２５μｌ）を各ウェルに添加し、プレートをＦｌｕｏｓｔａｒ  Ｏｐｔｉｍａ（ＢＭＧ  Ｌａｂｔｅｃｈ）を用いて発光について読み取った。
【０１６８】
［ＳＲＳＦ１リン酸化の阻害］
ＳＲＳＫ１発現を抑制できないＷＴ１突然変異体を有するＤＤＳ細胞（ＤＤＳ＝Ｄｅｎｙｓ  Ｄｒａｓｈ症候群）とも呼ばれるＤｅｎｙｓ  Ｄｒａｓｈ足細胞を、ＳＰＨＩＮＸ３１、または参照化合物であるＳＰＨＩＮＸ７もしくはＳＰＨＩＮＸの濃度を増加させて処理した。
【０１６９】
全細胞溶解物（核および細胞質）タンパク質抽出物ならびに核タンパク質抽出物の両方を使用した。次いで、マウス抗ＳＲＰＫ１（抗ＳＲＰＫ１；ＢＤ  ６１１０７２；１：１０００）、ウサギ抗ｐａｎＶＥＧＦ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ａ２０  ｓｃ−１５２；１：５００）、マウス抗ＶＥＧＦｘｘｘｂ（ＭＡＢ３０４５；Ｒ＆Ｄ；１：５００）、マウス抗ＳＲＳＦ１（ＡＫ９６）（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  ＳＣ−３３５６２）またはウサギ抗ＧＡＰＤＨ（Ｓｉｇｍａ  Ｇ９５４５，１：２０００）のいずれかを使用して、抽出物を免疫ブロットした。免疫沈降ホスホ−ＳＲＳＦ１試験のために、細胞溶解物をマウス抗ＳＲＳＦ１（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  ＳＣ−３３５６２）または抗Ｐａｎ−ホスホ−ＳＲ抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ＳＣ−１３５０９）およびＧタンパク質Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と共にインキュベートした。リン酸化ＳＲＳＦ１を検出するために、溶出液を抗ＳＲＳＦ１または抗Ｐａｎ−ホスホ−ＳＲ抗体（１：５００）のいずれかで免疫ブロットした。
【０１７０】
ＤＭＳＯ（賦形剤）、化合物１２（ＳＰＨＩＮＸ３１）または参照化合物のいずれかの存在下で、ＰＣ３前立腺癌細胞を１０μＭのＥＧＦで１時間処理した。細胞を溶解し、上記のように免疫ブロッティングに供した。
【０１７１】
［レーザー病変誘発プロトコル］
６〜８週齢のＣ５７／Ｂ６マウス（Ｂ＆Ｋ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）および成人ノルウェーブラウンラット（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を、５０ｍｇ／ｋｇケタミンおよび０．５ｍｇ／ｋｇメデトミジンの混合物の腹腔内注射により麻酔した。瞳孔を２．５％フェニレフリン塩酸塩および１％トロピカミドで拡張した。各眼の１〜２の円板直径の距離での乳頭周囲分布における網膜血管間にクリプトンレッドレーザー（マウス：２５０ｍＷ、０．０１ｓ、７５μｍ、ラット：２００ｍＷ、０．０１ｓ、７５μｍ、ＩＲＩＳ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ８１０ｎｍ  Ｏｃｕｌｉｇｈｔ  Ｓｌｘレーザー）で４つの光凝固病変をもたらした。治療時に網膜下の泡を伴うレーザー病変のみがこの試験に含まれた。レーザー光凝固の直後、動物には、両眼に硝子体内注射（０日目および７日目）を与えるか、片眼に対照化合物ＳＲＰＩＮ３４０、ＳＰＨＩＮＸ７またはＳＰＨＩＮＸ３１を、他方の眼にコントロール賦形剤を１日２回局所点眼した。動物を４日目または１４日目に採取し、眼を網膜解剖およびタンパク質抽出のために固定しないか、または固定および除核し、脈絡膜をイソレクチン−Ｂ４について染色し、またはフルオレセイン血管造影によって画像化した。
【０１７２】
局所投与試験の間、化合物をゲルベースの薬物送達賦形剤中に構成して、眼への薬物曝露の持続時間を補助し（Ｄｏｕｋａｓら、２００８）、コントロール賦形剤に添加する前に０．０５％ＤＭＳＯを用いて化合物を溶解させた。
【０１７３】
［ｈＥＲＧ阻害］
ＩｏｎＷｏｒｋｓパッチクランプ電気生理学を用いて、化合物をヒトｅｔｈｅｒ−ａ−ｇｏ−ｇｏ関連遺伝子（ｈＥＲＧ）Ｋ＋チャネルの阻害について試験した。３倍段階希釈液（Ｅｓｓｅｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて８点の濃度−応答曲線を作成した。
【０１７４】
示差走査型蛍光測定は、Ｆｅｄｅｒｏｖら（２０１１）に記載のように行った。
【０１７５】
アイソフォーム特異的ＥＬＩＳＡは、Ｖａｒｅｙら（２００８）およびＣａｒｔｅｒら（２０１４）に記載のように実施した。
【０１７６】
改変Ｕｓｓｉｎｇチャンバーアセンブリを用いて、等張アッセイ緩衝液（ｐＨ７．４）中で強膜透過性を測定した。上皮側がドナーチャンバーに面し、網膜側がレシーバーチャンバーに面するように、ウサギまたはブタの切除した眼組織をチャンバー内に取り付けた。１μｇ／ｍｌ化合物あり（ドナー側）または１μｇ／ｍｌ化合物なし（レシーバー側）のアッセイ緩衝液の等容量でチャンバーを満たした。４時間後または２４時間後、組織をチャンバーから取り出し、レシーバー側（「硝子体」）を採取した。組織を強膜、脈絡膜／ＲＰＥ、および網膜に解剖し、ホモジナイズした。トレーサー（ＳＰＨＩＮＸ７）を添加し、Ｇａｍｍｏｎｓら（２０１３）に記載のようにアセトニトリル抽出によって組織を抽出した。次いで、Ｇａｍｍｏｎｓら（２０１３）に記載のように、化合物を質量分析法により分析した。
【０１７７】
［ウサギの薬物動態試験］
ウサギは、片眼につき５０μｇのＳＰＨＩＮＸ３１、および５０μｇのパゾパニブを２００μｌの点眼液として用いて、６日間毎日３回処置した。最後の点眼から１２時間後にウサギを剖検し、血液および肝臓を採取し、網膜を脈絡膜／強膜から切断し、切開を行い、平らにし、写真を撮影した。両眼の区画を１７の異なる領域に切断した。すべてのサンプルを秤量した。網膜および脈絡膜／強膜試料ならびに上記の肝臓および血漿から逆相抽出により化合物を抽出し、目の異なる領域、血液および肝臓において質量分析で定量した。各試料に対し、ＳＰＨＩＮＸ３１およびパゾパニブについて組織１グラム当たりの量を計算し、平均化した。
【０１７８】
［マウス網膜電図検査毒性試験］
眼用滴剤として１眼につき２μｇのＳＰＨＩＮＸ３１でマウスを６日間処理し、製造業者の指示により推奨されるようにＭｉｃｒｏｎ  ＩＶ  Ｇａｎｚｆｉｅｌｄ  ＥＲＧシステムを用いてＥＲＧを行った。
【０１７９】
［メラニン結合アッセイ］
１０μｇ／ｍｌメラニン中で、１０μｇ／ｍｌ  のＳＰＨＩＮＸ３１またはパゾパニブを３７℃で１時間インキュベートした。次いで、溶液を１５ｋｇで１５分間回転させ、上清を回収し、化合物をアセトニトリルで抽出した。次に、それらを定量のために質量分析に供した。
【０１８０】
＜結果＞
［新規ＳＲＰＫ１阻害剤の同定］
新規なＳＲＰＫ１阻害剤を同定するために、さまざまな阻害剤をインビトロキナーゼアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ；ＫｏｒｅｓａｗａおよびＯｋａｂｅ、２００４）でスクリーニングした。以前に同定されたＳＲＰＫ阻害剤ＳＰＨＩＮＸおよびＳＰＨＩＮＸ７を新規候補の同定のための陽性対照として用いた。キナーゼアッセイは、表１の化合物１２〜１４（それぞれＳＰＨＩＮＸ３１〜３３と呼ばれる）が、以前に報告された化合物と比較して１０〜２０倍の効力の上昇を有することを示しており、ＩＣ５０値が３．２〜１７ｎＭであることを示した（図１）。
【０１８１】
表２に示される構造で生成される新しい化合物を用いて、新しい化合物のメカニズムおよび可能性を同定するための構造活性相関試験が行われた。化合物６１のサブｎＭ効力までこれらの化合物でさらなる活性が達成された。基質ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ結合親和性アッセイを用いた全ての既知のキナーゼに対するＳＨＨＩＮＸ３１のキノムスクリーンは、結合を示す他の唯一のキナーゼがＣｌｋ１およびＣｌｋ４に密接に関連していることを実証し、１μＭで２７％および１４％の結合を示した（図６）。示差走査熱量測定法を用いて、我々は、ＳＰＨＩＮＸ３１がＳＲＰＫ１（ΔＴｍ１２．８℃）に対して、ＳＲＰＫ２（ΔＴｍ６．７℃）またはＣｌｋ１（ΔＴｍ６．７℃）に比べて４４倍、およびＣｌｋ４（ΔＴｍ５．７℃）に比べて８８倍高い結合親和性を有することを確認した。Ｃｌｋ２、Ｃｌｋ３、ＰＩＭ１、ＰＩＭ２、ＤＹＲＫ１、ＤＹＲＫ２、ＰＲＰＦ４ＢおよびＳＲＰＫ３に対する結合活性は無視できるものであった（ΔＴｍ＜３℃）（図７）。化合物の塩形態（ＳＰＨＩＮＸ３１，３２および３３）も強力な阻害剤であり、より自由に水に溶解した（図８）。
【０１８２】
これらの化合物が細胞におけるＳＲＰＫ１活性を阻害するかどうかを決定するために、（ＳＲＰＫ１リプレッサー（ＷＴ１）における変異によって引き起こされる）構成的に活性なＳＲＰＫ１を有するＤｅｎｙｓ  Ｄｒａｓｈ有毛細胞を、ＳＰＨＩＮＸ３１と称する化合物１２の濃度を増加させて処理した。図２は、ＳＰＨＩＮＸ３１量の増加はＳＲＳＦ１リン酸化の阻害を増加させることを示し、図３は、ＳＲＳＦ１リン酸化がＳＰＨＩＮＸ３１での処理によって用量依存的に阻害されることを示す。
【０１８３】
ＳＲＰＫ１阻害感受性であることが以前に示された前立腺癌細胞（ＰＣ３）においてこれを繰り返し、ＳＲＳＦ１リン酸化を阻害した（図９）。また、ＰＣ３前立腺癌細胞およびＭＤＡ−ＭＢ２３１（図１０ａ（ＰＣ３細胞）および１０ｂ  ＭＤＡ−ＭＢ２３１）における（ＳＲＰＫ１リン酸化の結果であることが知られている）ＳＲＳＦ１の局在化に対する効果について、免疫蛍光により測定した。ＳＰＨＩＮＸ３１処理は、両方の細胞型で細胞局在を阻害した。
【０１８４】
化合物の投薬がＤｅｎｙｓ  Ｄｒａｓｈ足細胞および正常足細胞においてＶＥＧＦ−Ａ１６５ａからＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂへのスプライシングを依存的に切り替えたことを示すデータ（図１１）により、下流のスプライシング活性への影響についても調査した。アイソフォーム特異的ＥＬＩＳＡを用いることで、乳癌細胞（ＭＣＦ７およびＭＤＡ−ＭＢ２３１）細胞の場合にもこれが示された（図１２）。血管新生眼疾患におけるＶＥＧＦの主要な供給源であることが示されているＲＰＥ細胞（図１３ａ）において、ＳＰＨＩＮＸ３１は２０ｎＭのＥＣ５０でＶＥＧＦ１６５ｂの用量依存的増加を示した（図１３）。
【０１８５】
ＳＰＨＩＮＸ３１がより大きな動物の強膜も横断できるどうかを判定するために、ウサギ強膜を２つのチャンバーの間にクランプし、生理食塩水を底部チャンバーに添加し、化合物を上部チャンバーに添加して、ＳＰＨＩＮＸ３１またはパゾパニブ（ＶＥＧＦＲ２  ＴＫＩ）を強膜に添加した。０，４または２４時間後、底部チャンバー（硝子体）および網膜組織から液体を単離し、化合物をアセトニトリル抽出およびＨＰＬＣにより精製した。図１４は、ＳＰＨＩＮＸ３１が４時間で網膜および硝子体の両方で有意な濃度で検出される一方、パゾパニブは検出できないことを示す。２４時間後には硝子体で両者が検出されたが、ＳＰＨＩＮＸ３１はパゾパニブよりも多く検出された。我々はまた、ＳＰＨＩＮＸ３１がブタの眼を通過できるかどうかを確認した。パゾパニブは強膜およびＲＰＥ／脈絡膜層に蓄積したが、網膜には浸透しなかった。対照的に、ＳＰＨＩＮＸ３１は網膜および硝子体を横断した。
【０１８６】
我々はまた、５μｇ／ｍｌのＳＰＨＩＮＸ３１を含有する点眼液１０μｌで処理した後のマウスのさまざまな組織における、式（Ｉ）を有する化合物の蓄積を調べた。３０分、１時間、４時間、８時間または２４時間後にマウスを剖検した。眼を除去し、眼組織を切断した。抽出効率を補正するために添加した対照トレーサー化学物質で試料を抽出し、質量分析に供して組織１ｍｇあたりの化合物量を決定した。図１５Ａは、眼のさまざまな組織におけるＳＰＨＩＮＸ３１の蓄積を示す。図１５Ｂは、他の組織におけるＳＰＨＩＮＸ３１の蓄積を示す。これらの結果は、ＳＰＨＩＮＸ３１添加２４時間後の網膜における化合物の実質的な蓄積を示す。
【０１８７】
ＳＰＨＩＮＸ３１が大きい目を有する動物の網膜にアクセスできるかどうかを判定するために、ウサギを１日あたり１５０μｇのＳＰＨＩＮＸ３１またはパゾパニブに曝露した（図１６）。６日後、動物を剖検し、眼を採取した。次に、眼の後ろ半分からの強膜および網膜の個々の切片をパゾパニブまたはＳＰＨＩＮＸ３１についてアッセイした。網膜浸透はパゾパニブとＳＰＨＩＮＸ３１の両方で見られたが、ＳＰＨＩＮＸ３１の濃度は化合物のＩＣ５０の１０倍である一方、パゾパニブでは濃度がＩＣ５０と類似していた。
【０１８８】
我々は、ＳＲＰＩＮ３４０（ＩＣ５０  １μＭ）またはＳＰＨＩＮＸ（ＩＣ５０  ０．４４μＭ）によるＳＲＰＫ１阻害は、これらの化合物が比較的親油性であるため眼への浸透性が高いため、１０μｇ／ｍｌで最大効果を有する点眼剤として、脈絡膜血管新生のマウスモデルにおいて抗血管新生性であることを示した。したがって、我々は、同じモデルでＳＰＨＩＮＸ３１の点眼薬としての効果を試験した。ＳＰＨＩＮＸ３１は、脈絡膜血管新生の用量依存的阻害を発揮し、２μｇ／ｍｌでより高い有効性であり、かつＩＣ５０は０．２４μｇ／ｍｌであった（図４）。
【０１８９】
眼の中の化合物がメラニンによって隔離される可能性が懸念されている。したがって、我々は、化合物のメラニン結合を測定し、パゾパニブのメラニンへの結合に比べてＳＰＨＩＮＸ３１では結合が実質的に弱いことを確認した（図１７）。また、我々は、ヒト肝ミクロソームに暴露された場合のこれらの化合物の半減期を試験した。これにより、化合物の半減期は下記の表３に示されるようなものであった。
【０１９０】
【表１】
0006579714.tif 000013
【０１９１】
しかし、化合物は血漿中で安定であり（図１８）、肝臓に摂取され、そこで分解される可能性が最も高いことが示された。
【０１９２】
式（Ｉ）を有する化合物の患者への投与が安全であるかどうかを試験するために、我々は、インビトロでこれらの化合物の基本的な安全性試験を開始した。ＳＰＨＩＮＸ７、ＳＰＨＩＮＸおよびＳＰＨＩＮＸ３１に対する細胞傷害性の用量依存性において、ＳＰＨＩＮＸ３１は影響が無かったが、参照化合物ＳＰＨＩＮＸ７は１０μＭを超える用量で毒性であることがわかった。
【０１９３】
また、我々は、パッチクランプ電気生理学を用いて、これらの化合物がヒトｅｔｈｅｒ−ａ−ｇｏ−ｇｏ関連遺伝子（ｈＥＲＧ）カリウムチャネルを阻害できるかどうかを試験した。ｈＥＲＧチャネルの薬理学的遮断と薬物誘発性のＱＴ延長症候群およびトルサード・ド・ポワント不整脈との確立された関連性により（Ｈａｎｃｏｘら，Ｇｉｎｔａｎｔ，２００８）、新規な薬物候補は「ｈＥＲＧ」カリウムチャネルの阻害能について通常スクリーニングされる。ＳＰＨＩＮＸは以前に記載されているようにｈＥＲＧを阻害しなかった（Ｇａｍｍｏｎｓら，２０１３）。
【０１９４】
眼への局所的な局所適用で試験された式（Ｉ）を有する全ての化合物の血漿レベルは非常に低く（検出レベル１ｐＭ未満）、それゆえ、インビボでの点眼剤としてのこれらの化合物の使用において、心臓での実質的なｈＥＲＧチャネル阻害は起こりそうにない。既知化合物ＳＲＰＩＮ３４０およびＳＰＨＩＮＸがｈＥＲＧを阻害しないという知見は、実質的なｈＥＲＧ活性なしにＳＲＰＫ１に対して有意な薬理作用を有することが可能であることを示唆している（Ｇａｍｍｏｎｓら，２０１３）。したがって、我々は、ＳＲＰＫ１に対するＩＣ５０値（３．２ｎＭ）に比べて１００倍高いＩＣ５０  ０．３μＭでｈＥＲＧを阻害するＳＰＨＩＮＸ３１を試験した（図５）。
【０１９５】
また、我々は、遺伝毒性のＡｍｅｓ試験において、ＳＰＨＩＮＸ３１およびその代謝産物（図１９においてＳＰＨＩＮＸ４６と称する）を試験したところ、両化合物は遺伝毒性を誘導しなかった（図１９）。
【０１９６】
神経機能に対する毒性効果の兆候があるかどうかを判定するために、正常マウスに２μｇ／ｍｌのＳＰＨＩＮＸ３１を投与し、Ｐｈｏｅｎｉｘ  Ｇａｎｚｆｅｌｄ  ＥＲＧシステムで網膜電図写真を測定した。緑色（図２０Ａ、２０Ｃ、２０Ｅ、２０Ｇ）光（Ｍコーンおよびロッドを活性化するため）またはＵＶ（図２０Ｂ、２０Ｄ、２０Ｆ、２０Ｈ）の強度を増加させながら刺激した後の暗順応動物の暗順応ＥＲＧ記録を取った。緑色光（図２０Ａ）およびＵＶ光（図２０Ｂ）で３．７５６ｃｄ．ｓ．ｍ２で刺激した平均ＥＲＧ振幅の経時変化。Ａ波（図２０Ｃ、２０Ｄ）およびＢ波（図２０Ｅ、２０Ｆ）について、緑色（図２０Ｃ、２０Ｅ）またはＵＶ（図２０Ｄ、２０Ｆ）の異なる強度でのＥＲＧ振幅が示されている。Ａ波：Ｂ波の比はＳＰＨＩＮＸ３１処理によって影響を受けなかった（図２０Ｇ、図２０Ｈ）。ＥＲＧ記録後、両眼を摘出し、解剖し、ホモジナイズし、ＳＰＨＩＮＸ７で固定し、抽出効率を測定し、次いで質量分析によって分析した（図２０Ｉ、図２０Ｊ）。ＳＰＨＩＮＸ３１は網膜（抽出効率に対して標準化した場合、適用した点眼薬用量の０．１６５％）および脈絡膜（適用用量の０．０１７５％）が検出された。対照眼におけるＳＰＨＩＮＸ３１レベルを、比較のためにバックグラウンドレベルとして示す。明所視ＥＲＧ記録を行い、１０分間の光順応および３０ｃｄ．ｍ．ｓ２の強度の白色光による連続的なバックグラウンド刺激後のロッド応答からコーン応答を単離した。１２０および１９２０ｃｄ．ｓ．ｍ２の緑色光（Ｍコーンおよびロッドを活性化するため）、ＵＶ光（Ｓコーンおよびロッドを活性化するため）、または白色光でのＡ波（Ａ）およびＢ波のＥＲＧ振幅。暗順応または明所視活性に影響は見られず、視覚的な機能毒性効果は見られなかった（図２０，２１）。ＲＰＥ細胞内で発現したさまざまな遺伝子の選択的スプライシングを調べることにより、的外れのスプライシング効果もスクリーニングされ、ＶＥＧＦＲスプライシングはわずかに変化したが、ジェネリックスプライシングの変化は見られなかった（図２２）。既知のＳＲＰＫ１標的ＭＫＮＫ２は、これらの細胞株において改変された（図２３）。
【０１９７】
この研究で提示されたデータは、ＡＭＤに関連する血管新生促進性のＶＥＧＦ媒介性ＣＮＶを減少させるための新規な低分子量化合物阻害剤を示す。さらに、我々は、本発明の化合物は、大きな動物モデルの眼後部に浸透し、マウスにおいて局所投与後にＣＮＶを低下させるのに有効であり、腫瘍細胞の増殖を減少させ、これまで行われた試験において安全であることを示した。
【０１９８】
【表２−１】
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【０１９９】
【表２−２】
0006579714.tif 000015
【０２００】
試験したさらなる化合物を以下の表２に示す。
【０２０１】
【表３−１】
0006579714.tif 000016
【０２０２】
【表３−２】
0006579714.tif 000017
【０２０３】
【表３−３】
0006579714.tif 000018
【０２０４】
【表４−１】
0006579714.tif 000019
【０２０５】
【表４−２】
0006579714.tif 000020
【０２０６】
【表４−３】
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【０２０７】
【表４−４】
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【０２０８】
【表４−５】
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【０２０９】
【表４−６】
0006579714.tif 000024
【０２１０】
【表４−７】
0006579714.tif 000025
【０２１１】
＜リファレンス＞
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Ｖａｒｅｙ，Ａ．Ｈ．Ｒ．，Ｒｅｎｎｅｌ，Ｅ．Ｓ．，Ｑｉｕ，Ｙ．，Ｂｅｖａｎ，Ｈ．Ｓ．，Ｐｅｒｒｉｎ，Ｒ．Ｍ．，Ｒａｆｆｙ，Ｓ．，Ｄｉｘｏｎ，Ａ．Ｒ．，Ｐａｒａｓｋｅｖａ，Ｃ．，Ｚａｃｃｈｅｏ，Ｏ．，Ｈａｓｓａｎ，Ａ．Ｂ．，Ｈａｒｐｅｒ，Ｓ．Ｊ．およびＢａｔｅｓ，Ｄ．Ｏ．（２００８）「抗血管新生ＶＥＧＦ−ＡアイソフォームであるＶＥＧＦ（１６５）ｂは、実験的な結腸直腸癌において、ベバシズマブ処理に結合し、阻害する：血管新生ＶＥＧＦ−Ａアイソフォームのバランスは治療に影響を与える」，Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，９８（８），１３６６−１３７９．
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Ｈｕａ，Ｊ．，Ｓｐｅｅ，Ｃ．，Ｋａｓｅ，Ｓ．，Ｒｅｎｎｅｌ，Ｅ．Ｓ．，Ｍａｇｎｕｓｓｅｎ，Ａ．Ｌ．，Ｑｉｕ，Ｙ．，Ｖａｒｅｙ，Ａ．，Ｄｈａｙａｄｅ，Ｓ．，Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ，Ａ．Ｊ．，Ｈａｒｐｅｒ，Ｓ．Ｊ．，Ｂａｔｅｓ，Ｄ．Ｏ．およびＨｉｎｔｏｎ，Ｄ．Ｒ．（２０１０）「組換えヒトＶＥＧＦ（１６５）ｂは実験的な脈絡膜血管新生を阻害する」，Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ＆  Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，５１（８），４２８２−４２８８．
Ｍａｇｎｕｓｓｅｎ，Ａ．Ｌ．，Ｒｅｎｎｅｌ，Ｅ．Ｓ．，Ｈｕａ，Ｊ．，Ｂｅｖａｎ，Ｈ．Ｓ．，Ｌｏｎｇ，Ｎ．Ｂ．，Ｌｅｈｒｌｉｎｇ，Ｃ．，Ｇａｍｍｏｎｓ，Ｍ．，Ｆｌｏｅｇｅ，Ｊ．，Ｈａｒｐｅｒ，Ｓ．Ｊ．，Ａｇｏｓｔｉｎｉ，Ｈ．Ｔ．，Ｂａｔｅｓ，Ｄ．Ｏ．およびＣｈｕｒｃｈｉｌｌ，Ａ．Ｊ．（２０１０）「ＶＥＧＦ−Ａ（１６５）ｂは網膜における細胞保護作用および抗血管新生作用を有する」，Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ＆  Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，５１（８），４２７３−４２８１．
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０ａ】
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【図１０ｂ】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４Ａ−Ｃ】
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【図１４Ｄ−Ｇ】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０Ａ−Ｄ】
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【図２０Ｅ−Ｆ】
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【図２０Ｇ−Ｊ】
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【図２１】
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【図２２ａ】
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【図２２ｂ】
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【図２３】
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【配列表】
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