(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造式（Ｉ）
【化１】
0006460540.tif 000009
（式中、
−  ｍは、０．０１〜０．９９の間で変動し；ｐは、０．９９〜０．０１の間で変動し；かつｑは、０．９９〜０．０１の間で変動し；
−  ｎは、５〜１００の間で変動し；
−  Ｒ１は、（Ｃ２〜Ｃ２０）アルキレン、（Ｃ２〜Ｃ２０）アルケニレンおよびそれらの組み合わせからなる群から独立して選択され；
−  それぞれ単一主鎖単位ｍまたはｐの中にあるＲ３およびＲ４は、水素、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−（ＣＨ２）ＳＨ、−（ＣＨ２）２Ｓ（ＣＨ３）、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−（ＣＨ２）４ＮＨ３＋、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、ＣＨ３−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−、（ＣＨ３）２−ＣＨ−ＣＨ２−、Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）４−、フェニル−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３、ＨＯ−ｐ−フェニル−ＣＨ２−、（ＣＨ３）２−ＣＨ−、フェニル−ＮＨ−、ＮＨ２−（ＣＨ２）３−ＣＨ２−またはＮＨ２−ＣＨ＝Ｎ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−からなる群から独立して選択され、
−  Ｒ５は、（Ｃ２〜Ｃ２０）アルキレン、（Ｃ２〜Ｃ２０）アルケニレンからなる群から選択され、
−  Ｒ６は、構造式（ＩＩ）
【化２】
0006460540.tif 000010
の１，４：３，６−ジアンヒドロヘキシトールの二環式断片から選択され；
−  Ｒ７は、水素、（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは保護基（例えば、ベンジル）であり；
−  Ｒ８は、独立して、（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレンまたは（Ｃ２〜Ｃ２０）アルケニルである）
を含む生分解性ポリエステルアミドコポリマーを含む生体適合性ポリマーと、
鎮痛薬または疾患緩和用抗リウマチ薬と、
を含む注射用サイズの微粒子を含む、関節障害の処置のためにヒトまたは獣医学的患者に注射される処方物。
【請求項２】
前記式（Ｉ）のポリエステルアミドコポリマーが、Ｒ１が−（ＣＨ２）８−であり；前記主鎖単位ｍおよびｐの中のＲ３およびＲ４が（ＣＨ３）２−ＣＨ−ＣＨ２−であり、−Ｒ５が−（ＣＨ２）６−であり、Ｒ６が構造式（ＩＩ）の１，４：３，６−ジアンヒドロヘキシトールの二環式断片であり；Ｒ７がベンジル基であり、かつＲ８が−（ＣＨ２）４−である、ｍ＋ｐ＋ｑ＝１、ｑ＝０．２５、ｐ＝０．４５を含む、請求項１に記載の処方物。
【請求項３】
Ｒ７がベンジル基である、請求項１に記載の処方物。
【請求項４】
前記微粒子が、抗炎症薬、局所麻酔薬およびオピオイドから選択される鎮痛薬を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の処方物。
【請求項５】
前記微粒子が、ＮＳＡＩＤ  ＣＯＸ−２阻害剤である鎮痛薬を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の処方物。
【請求項６】
前記微粒子が、コルチコステロイドである鎮痛薬を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の処方物。
【請求項７】
前記コルチコステロイドが、トリアムシノロンアセトニドである、請求項６に記載の処方物。
【請求項８】
前記微粒子が、疾患緩和用抗リウマチ薬を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の処方物。
【請求項９】
前記微粒子の大きさが、０．１〜１０００マイクロメートルである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の処方物。
【請求項１０】
関節炎の処置における使用のための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の処方物。
【請求項１１】
変形性関節症の処置における使用のための、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の処方物。
【請求項１２】
膝、股関節部、脊椎または肩の変形性関節症の処置における使用のための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の処方物。
【請求項１３】
前記処方物が、１年に１回または２回の注射で投与される、関節障害の処置における使用のための請求項１〜１２のいずれか一項に記載の処方物。
【請求項１４】
前記微粒子を１０分間水に浸漬した後に光散乱により測定される前記微粒子の平均直径が０．１〜１００マイクロメートルである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の処方物。
【請求項１５】
前記微粒子を１０分間水に浸漬した後と、４００分間水に浸漬した後との、光散乱により測定される前記微粒子の平均直径を比較した際に、前記微粒子が凝集の形跡を示さない、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の処方物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、関節障害の処置における使用のための二環式１，４：３，６−ジアンヒドロヘキシトールのジオールを少なくとも含む生分解性ポリエステル−アミドコポリマーを含んだ注射用サイズの物品を含む処方物に関する。本発明はさらに、１年に１回または２回の注射によって投与される関節障害の処置における使用のための処方物に関する。
【０００２】
関節障害は、患者に疼痛および不快感をもたらす強い炎症性反応と関連する。疼痛は、多くの医学的状態と関係し、何百万人もの人々を襲う。米国疼痛財団（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐａｉｎ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ）の報告によると、６０歳以上の個体のうちの関節炎または背部痛に罹っている２０パーセントを含む５，０００万人を超える米国人が、慢性疼痛を患っているとのことである。さらに、毎年、ほぼ２，５００万人の米国人が、創傷または外科的処置による急性疼痛を経験する。疼痛管理に要する費用は、毎年１，０００億ドルと見積もられている。その経済的負担に加えて、疼痛は、罹患した個体の生活の質に非常に大きな影響を与え、急性および慢性の能力障害の最も一般的な原因のうちの１つである。
【０００３】
病原体、外傷、炎症状態、あるいは有害なまたは有害性の機械的刺激、熱および／もしくは冷刺激または化学的刺激からの範囲にある有害性の刺激によって身体組織（神経線維を含む）が損傷を受けたときに、人体は疼痛を知覚する。損傷した組織および神経線維と関係する肥満細胞は、炎症メディエーター（例えば、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、ヒスタミン、インターロイキン−１（ＩＬ−Ｉ）、ＩＬ−６、ＩＬ−８、および神経成長因子（ＮＧＦ））を分泌することによって炎症過程を開始する。これらのメディエーターは、外傷部位への他の細胞（例えば、単球、好中球、および類似の細胞）の遊走を引き起こす。さらに、これらのメディエーターはまた、白血球の一部（例えば、貪食細胞）がそれら自身の炎症メディエーターを活性化するのを助ける。損傷を受けたまたは刺激された神経細胞および線維によって分泌されるＮＧＦなどの炎症メディエーターは、活性な神経線維の数を増加させることが明らかになっている。
【０００４】
疼痛に関与する炎症メディエーターは、限定するものではないが、関節炎、例えば、変形性関節症、関節リウマチ、腰痛、乾癬性関節炎、自己免疫性関節炎、化膿性関節炎または滑膜炎を含み得る、種々の障害と関係している。一般的に、炎症は、あらゆる有害性の刺激に対する正常かつ不可欠な反応であり、局所反応から全身反応まで様々であり得る。炎症反応は、一般的に、１）炎症メディエーター（例えば、ヒスタミン、セロトニン、ロイコキニン、ＳＲＳ−Ａ、リソソーム酵素、リンホカイニン（ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｉｎ）、プロスタグランジンなど）の放出を引き起こす初期創傷；２）血管透過性の亢進および滲出を含む血管拡張；３）白血球の遊走、化学走性、および貪食作用；ならびに４）結合組織細胞の増殖を含む、一連の事象を経て進む。
【０００５】
関節炎は、１つ以上の関節の炎症を伴う関節障害の一形態である。１００種を超える異なる形態の関節炎が存在する。最も一般的な形態である変形性関節症（変性関節疾患）は、関節への外傷、関節の感染、または年齢の結果である。他の関節炎形態は、関節リウマチ、乾癬性関節炎、および関連する自己免疫疾患である。化膿性関節炎は、関節感染によって引き起こされる。
【０００６】
変形性関節症は、手、手首、肩、足、背、股関節部、脊椎または膝を含む、身体の大関節および小関節の両方を冒し得る。変形性関節症は、軟骨の変性を引き起こし、最終的には、２つの対向する骨の互いの侵食を引き起こす。この状態は、最初は活動中の軽い疼痛から始まるが、そのうち疼痛が継続的になって、静止状態にあるときでさえも疼痛が生じることがある。変形性関節症は、典型的に、体重を支える身体部分（例えば、股関節部、膝、脊椎、加えて骨盤および肩）を冒す。関節リウマチと異なり、変形性関節症は、最も一般的には高齢者の疾患である。３０パーセントより多くの女性が、６５歳までにある程度の変形性関節症に罹る。変形性関節症の危険因子には、以前の関節外傷、肥満、および体を動かさない生活様式が含まれる。
【０００７】
変形性関節症は、関節リウマチと同様に、今のところ、治すことができない。疼痛薬物は、変形性関節症に罹っている個体によって広く必要とされており、特に抗炎症薬が、炎症を処置するのに有用なものとして当該技術分野において知られている。抗炎症薬の範囲内において、コルチコステロイドが、多くの場合、疼痛を処置するために使用される。コルチコステロイドは、身体の全ての組織に影響を及ぼし、様々な細胞効果を生じる。これらのステロイドは、炭水化物、脂質、タンパク質の生合成および代謝、ならびに水および電解質バランスを調整する。細胞の生合成または代謝に影響を及ぼすコルチコステロイドは、糖質コルチコイドと呼ばれ、水および電解質バランスに影響するものは、鉱質コルチコイドである。
【０００８】
コルチコステロイド注射は、多くの場合、例えば、変形性関節症において疼痛を緩和するために使用される。しかしながら、これらの注射の臨床的利益は、合併症が大ボーラスステロイド注射と関連があるとされるので、議論の的となっている。さらに、これらの製品は、短時間作用性であり、短期間の疼痛緩和を提供するにすぎない。
【０００９】
米国特許出願公開第２０１２２８２２９８号明細書は、変形性関節症、関節リウマチ、急性痛風関節炎または滑膜炎の処置のために使用される、乳酸−グリコール酸コポリマー微粒子を含む、クラスＢコルチコステロイドの長期制御放出性または持続放出性の処方物を開示している。しかしながら、この処方物の不利点は、乳酸−グリコール酸コポリマーが加水分解により分解し、それによってそのポリマー分解の間に酸性の副生物が放出されることである。
【００１０】
上述の欠点を克服すること、および持続放出様式で局所治療濃度の薬物を提供することが、本発明の目的である。変性関節疾患は、多くの場合、（例えば強い活性により誘発される）炎症性発赤事象を伴うものであり、その間に患者が感じる疼痛はより強い。疼痛の強度に応じた薬物放出を提供することが望ましいであろう。
【００１１】
さらに、治療投薬量の薬物の持続放出を提供することによって、より長期的なより適切な疼痛緩和を意味するより効率的な疼痛管理を提供することが、本発明の目的である。
【００１２】
ポリエステルは加水分解によって分解して酸性エンティティを放出するので、薬物の放出のためにＰＬＧＡなどのポリエステルを含む処方物と比較して、薬物に対してより高い安定性を提供することが、本発明のさらなる目的である。
【００１３】
本発明の目的は、関節障害の処置のために使用される二環式１，４：３，６−ジアンヒドロヘキシトールのジオールを少なくとも含む生分解性ポリエステル−アミドコポリマーを含んだ注射用サイズの物品を含む処方物を提供することによって達成される。
【００１４】
驚くべきことに、この関節障害の処置のための処方物は、炎症レベルに応じた薬物の持続放出を提供し、本明細書では複数ヶ月を意味するより長期的な、適切な疼痛緩和を提供することが見出された。物品からの薬物の放出は、炎症レベルに依存的であることが見出された。これは、薬物の放出が炎症によって導かれ得るということを意味しており、炎症誘導放出と称される。さらに、炎症過程が緩慢になると、薬物放出も緩慢になり、薬物の不必要な曝露が最小限度に抑えられる。
【００１５】
本発明は、鎮痛薬または疾患緩和用抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）の局所送達のための生分解性ポリエステルアミドコポリマーを含む持続放出性物品の、炎症性疾患（例えば、関節障害）によって引き起こされる疼痛を処置するための使用を提供する。より具体的には、本発明は、患者の疼痛源の部位付近に生分解性ポリエステルアミドコポリマーを含む物品によって持続的に放出され得る局所送達用量の鎮痛薬または疾患緩和用抗リウマチ薬を提供する。
【００１６】
好ましくは、当該処方物は、関節炎の処置のために使用され、より好ましくは、当該処方物は、変形性関節症の処置のために使用される。最も好ましくは、当該処方物は、膝の変形性関節症の処置のために使用される。
【００１７】
二環式１，４：３，６−ジアンヒドロヘキシトールのジオールを少なくとも含む生分解性ポリエステルアミドコポリマーは、米国特許第８４４５００７号明細書から知られている。米国特許第８４４５００７号明細書は、機械的性質の著しい改善を伴う、２つの（ビス−α−アミノ酸）に基づく構成単位を含むＰＥＡコポリマーを開示している。このＰＥＡの２つのビス（α−アミノ酸）に基づく構成単位のうちの少なくとも一方にジオール残基として１，４：３，６−ジアンヒドロヘキシトールの二環式断片を組み込むことにより、ポリマーに、高いガラス転移温度（Ｔｇ）が付与される。これらのＰＥＡは、疎水性、比較的高いガラス転移温度（Ｔｇ）、および可変の伸びまたは柔軟性の特性の組み合わせを必要とする特定の用途に好適である。さらに、これらのＰＥＡが、外科用デバイス（例えば、外科用縫合糸、外科用ネジ、植込み可能なプレート、植込み可能なロッド、血管ステントまたは透析用シャント）の製造のために使用され得ることが開示されている。可能な薬物送達形態として、粒子が開示されている。しかしながら、この特許は、関節障害の処置のために使用される処方物については触れていない。
【００１８】
好ましくは、本発明の処方物において使用されるポリエステルアミドコポリマーは、二塩基酸、二環式１，４：３，６−ジアンヒドロヘキシトールと異なるジオール、および少なくとも２種の異なるアミノ酸をさらに含む。これらのポリマーは、物品の形状安定性および処方物の注射可能性にとって有益な、より高いガラス転移温度を有している。さらに、そのような組成のＰＥＡは、薬物溶出と生分解特性との間のより良好なバランスを示す。
【００１９】
より好ましくは、当該ポリエステルアミドコポリマーは、以下の構造式（Ｉ）
【化１】
0006460540.tif 000002
（式中、
−  ｍは、０．０１〜０．９９の間で変動し；ｐは、０．９９〜０．０１の間で変動し；かつｑは、０．９９〜０．０１の間で変動し；
−  ｎは、５〜１００の間で変動し、
−  Ｒ１は、（Ｃ２〜Ｃ２０）アルキレンおよびそれらの組み合わせからなる群から独立して選択され；
−  それぞれ単一主鎖単位ｍまたはｐの中にあるＲ３およびＲ４は、水素、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−（ＣＨ２）ＳＨ、−（ＣＨ２）２Ｓ（ＣＨ３）、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−（ＣＨ２）４ＮＨ３＋、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、ＣＨ３−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−、（ＣＨ３）２−ＣＨ−ＣＨ２−、Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）４−、フェニル−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３、ＨＯ−ｐ−フェニル−ＣＨ２−、（ＣＨ３）２−ＣＨ−、フェニル−ＮＨ−、ＮＨ２−（ＣＨ２）３−ＣＨ２−またはＮＨ２−ＣＨ＝Ｎ−ＣＨ＝Ｃ−ＣＨ２−からなる群から独立して選択され、
−  Ｒ５は、（Ｃ２〜Ｃ２０）アルキレン、（Ｃ２〜Ｃ２０）アルケニレンからなる群から選択され、
−  Ｒ６は、構造式（ＩＩ）
【化２】
0006460540.tif 000003
の１，４：３，６−ジアンヒドロヘキシトールの二環式断片から選択され；
−  Ｒ７は、水素、（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは保護基（例えば、ベンジル）であり；
−  Ｒ８は、独立して、（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレンである）
を含む、ランダムコポリマーである。
【００２０】
本明細書で使用される場合、「アルキレン」という用語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−へキシルなどを含む、直鎖または分岐鎖の炭化水素基を意味する。
【００２１】
「アリール」という用語は、少なくとも１個の環が芳香族である約９〜１０個の環原子を有するフェニルラジカルまたはオルト縮合二環式炭素環式ラジカルを示すために、本明細書における構造式に関して使用される。アリールの例としては、フェニル、ナフチル、およびニトロフェニルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２２】
当該コポリマーにおいて使用されるα−アミノ酸のうちの少なくとも１つは、天然α−アミノ酸である。例えば、Ｒ３またはＲ４がＣＨ２Ｐｈである場合、合成において使用される天然α−アミノ酸は、Ｌ−フェニルアラニンである。Ｒ３またはＲ４がＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２である代替例において、当該コポリマーは、天然アミノ酸のロイシンを含有する。本明細書に記載される２つのコモノマーの変形例の範囲内でＲ３およびＲ４を独立して変更することにより、他の天然α−アミノ酸、例えば、グリシン（Ｒ３またはＲ４が−Ｈである場合）、アラニン（Ｒ３またはＲ４がＣＨ３である場合）、バリン（Ｒ３またはＲ４がＣＨ（ＣＨ３）２である場合）、イソロイシン（Ｒ３またはＲ４がＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ３である場合）、フェニルアラニン（Ｒ３またはＲ４がＣＨ２−Ｃ６Ｈ５である場合）、リジン（Ｒ３またはＲ４が（ＣＨ２）４−ＮＨ２である場合）；またはメチオニン（Ｒ３またはＲ４が−（ＣＨ２）２Ｓ（ＣＨ３）である場合）、およびそれらの混合物もまた使用され得る。
【００２３】
最も好ましくは、式（Ｉ）のポリエステルアミドコポリマーは、Ｒ１が−（ＣＨ２）８−であり；主鎖単位ｍおよびｐの中のＲ３およびＲ４がロイシンであり、−Ｒ５が−（ＣＨ２）６−であり、Ｒ６が構造式（ＩＩ）の１，４：３，６−ジアンヒドロヘキシトールの二環式断片であり；Ｒ７がベンジル基（Ｂｚ）であり、かつＲ８が−（ＣＨ２）４−である、ｍ＋ｐ＋ｑ＝１、ｑ＝０．２５、ｐ＝０．４５を含む。このポリエステルアミドは、式（ＩＩＩ）のＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚとしてさらに言及される。
【００２４】
当該ＰＥＡコポリマーは、好ましくは、１５，０００〜２００，０００ダルトンの範囲にある数平均分子量（Ｍｎ）を有する。本明細書に記載されるＰＥＡコポリマーは、様々な分子量、ならびにコポリマーの２つのビス−（αアミノ酸）含有単位および任意選択のリジンに基づくモノマーの様々な相対比で、製造され得る。特定の用途に適した分子量は、当業者により容易に決定される。好適なＭｎは、約１５，０００〜約１００，０００ダルトン（例えば、約３０，０００〜約８０，０００または約３５，０００〜約７５，０００）程度であろう。Ｍｎは、標準としてポリスチレンを用いてＴＨＦ中でＧＰＣにより測定される。
【００２５】
ポリエステルアミドの基本的な重合方法は、Ｇ．Ｔｓｉｔｌａｎａｄｚｅ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｍａｔｅｒ．Ｓｃｉ．Ｐｏｌｙｍ．Ｅｄｎ．（２００４）１５：１−２４により記載される方法に基づくが、異なる構成単位および活性化基を使用した。
【００２６】
式（Ｉ）のポリエステルアミドは、例えば、パラトルエンスルホネートジアミン塩と活性化二塩基酸との溶液重縮合によって合成される。典型的には、ジメチルスルホキシドまたはジメチルホルムアミドが溶媒として使用される。典型的には、塩基としてトリエチルアミドが添加され、反応は、一定の撹拌下において、２４〜７２時間にわたり６０℃にて不活性雰囲気下で実施される。次いで、得られた反応混合物は、水沈殿、続いて有機沈殿および濾過によって精製される。減圧下での乾燥により、ポリエステルアミドが得られる。
【００２７】
より具体的には、式（Ｉ）のポリエステルアミドコポリマーは、スキーム１に従って製造され得る。スキーム１では、具体的には式（ＩＩＩ）のＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚが製造される。
【００２８】
本明細書で使用される場合、「物品」という用語は、例えば、微粒子、繊維、管または棒を意味する。より好ましくは、物品は、微粒子である。これらの物品は、注射用サイズのものであるが、これは、それらが約１８〜３０ゲージの内径を有する薬剤注射針によって注射され得るということを意味している。物品の安定性は、処方物の注射可能性に関する臨界因子である。したがって、例えば微粒子などの物品が安定なままであり、凝集しないことが極めて重要である。
【００２９】
本明細書で使用される場合、薬物という用語は、鎮痛薬または疾患緩和用抗リウマチ薬を包含する。鎮痛薬は、好ましくは、抗炎症薬、局所麻酔薬またはオピオイドの群から選択される。抗炎症薬は、ステロイドまたは非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）であり得る。
【００３０】
ステロイド抗炎症剤の例としては、コルチコステロイド、例えば、アルクロメタゾンジプロピオナート、アムシノニド、アムシナフェル（ａｍｃｉｎａｆｅｌ）、アムシナフィド、ベクラメタゾン（ｂｅｃｌａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ベタメタゾン、ベタメタゾンジプロピオナート、ベタメタゾンバレラート、クロベタゾンプロピオナート、クロロプレドニゾン、クロコルテロン（ｃｌｏｃｏｒｔｅｌｏｎｅ）、コルチゾール、コルチゾン、コルトドキソン、ジフルオロゾンジアセタート（ｄｉｆｌｕｏｒｏｓｏｎｅ  ｄｉａｃｅｔａｔｅ）、デスシノロン、デソニド、デフルプレドナート（ｄｅｆｌｕｐｒｅｄｎａｔｅ）、ジヒドロキシコルチゾン、デスオキシメタゾン、デキサメタゾン、デフラザコート、ジフロラゾン、ジフロラゾンジアセタート、ジクロリソン、ベタメタゾンのエステル、フルアザコルト、フルセトニド（ｆｌｕｃｅｔｏｎｉｄｅ）、フルクロロニド、フルドロチゾン（ｆｌｕｄｒｏｔｉｓｏｎｅ）、フルオロコルチゾン、フルメタゾン、フルニソリド、フルオシノニド、フルオシノロン、フルオシノロンアセトニド、フルコルトロン、フルペロロン、フルプレドニソロン、フルロアンドレノロンアセトニド（ｆｌｕｒｏａｎｄｒｅｎｏｌｏｎｅ  ａｃｅｔｏｎｉｄｅ）、フルオシノロンアセトニド、フルランドレノリド、フルオラメトロン（ｆｌｕｏｒａｍｅｔｈｏｌｏｎｅ）、フルチカゾンプロピオナート、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンブチラート、ヒドロコルチゾンバレラート、ヒドロコルタマート、ロテプレンドール（ｌｏｔｅｐｒｅｎｄｏｌ）、メドリソン、メプレドニゾン、メチルプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、モメタゾンフロアート、パラメタゾン、パラメタゾンアセタート、プレドニゾン、プレドニゾロン、プレドニドン（ｐｒｅｄｎｉｄｏｎｅ）、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンヘキサカトニド（ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ  ｈｅｘａｃａｔｏｎｉｄｅ）、およびトリアムシノロン、それらの塩、それらの誘導体、およびそれらの混合物が挙げられる。本明細書で使用される場合、「誘導体」という用語は、材料と十分に構造的に類似した物質であって、その材料の代わりにその物質が使用される場合にその材料と実質的に類似した機能性または活性（例えば、治療有効性）を有するような誘導体として同定される、あらゆる物質を意味する。
【００３１】
関節障害の処置のために使用される処方物中の最も好ましいコルチコステロイドは、トリアムシノロンアセトニドまたはその市販の化学的類似体もしくは薬学的に受容可能な塩である。
【００３２】
非ステロイド抗炎症剤の例としては、イブプロフェン、ジクロフェナク、メロキシカム、ナプロキセン、エトフェナマート（ｅｔｏｆｅｎａｍａａｔ）、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、ロフェコキシブまたはセレコキシブおよびそれらの誘導体）などおよびそれらの混合物が挙げられる。
【００３３】
関節障害の処置のために使用される処方物中の最も好ましい非ステロイド抗炎症剤は、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブまたはその市販の化学的類似体もしくは薬学的に受容可能な塩）である。
【００３４】
オピオド（ｏｐｉｏｄ）の例としては、コデインまたはモルヒネが挙げられる。
【００３５】
局所麻酔薬の例としては、リドカインまたはロピバカインが挙げられる。
【００３６】
疾患緩和用抗リウマチ薬の例は、アバタセプト、アダリムマブ、アザチオプリン、クロロキン、Ｄ−ペニシラミン、エタネルセプト、ゴリムマブ、インフリキシマブ、レフルノミド、メトトレキサート、ミノサイクリン、リツキシマブまたはスルファサラジン、オーラノフィン、シクロホスファミドまたはシクロスポリンである。
【００３７】
関節障害の処置のために使用される処方物は、ヒトまたは獣医学的患者に注射され得る任意の好適な物品を含み得る。物品が微粒子である場合、微粒子は、約１８〜３０ゲージの内径を有する薬剤注射針によって注射され得るような大きさである。
【００３８】
当該微粒子の大きさは、０．１〜１０００マイクロメートルの間で変動し得る。典型的に、体積百分率に関してフラウンホーファー（Ｆｒａｕｎｈｏｆｅｒ）理論によって与えられる当該微粒子の平均直径は、１００ｎｍ〜１０００μｍの範囲にある。好ましい平均直径は、１〜２００μｍの間、より好ましくは５〜８０μｍの間で変動し得る。１０００ｎｍ未満の平均直径を有する粒子は、ナノ粒子とすることが企図される。特に、本明細書で使用される場合の粒子直径は、Ｍａｌｖｅｎ  Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ  ２０００によって測定可能であるような直径である。粒子は、それらの具体的な構造、大きさ、または組成によって、様々な異なるやり方で、定義および分類され得る（例えば、Ｅｎｃｙｃｌｏｐａｅｄｉａ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｖｏｌ２  Ｍ−Ｚ  Ｉｎｄｅｘ，Ｃｈａｐｔｅｒ：Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，ｐａｇｅ  ４９３−４９６を参照されたい）。ナノ粒子に（それらの光学的性質のため）当てはまり得る、粒子が小さすぎる、または光散乱によっては分析不可能である場合は、走査型電子顕微鏡法（ＳＥＭ）または透過型電子顕微鏡法（ＴＥＭ）が、粒子直径を測定するために使用され得る。微粒子は、１種以上の鎮痛薬を含み得る。鎮痛薬は、微粒子内にほぼ均一に分散させ得る。鎮痛薬はまた、微粒子のコアまたはシェル内に位置し得る。
【００３９】
式（Ｉ）により表されるような生分解性ポリエステルアミドに加えて、当該微粒子は、生体適合性ポリマーの群から選択される１種以上の他のポリマーをさらに含み得る。
【００４０】
生体適合性ポリマーの例は、ポリ（オルトエステル）、ポリ（無水物）、ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸）、ポリ（Ｌ−乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸）（ｐｏｌｙ（ｌａｃｔｉｃ））およびグリコール酸のコポリマー、ポリ（Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（ホスホエステル）、ポリ（トリメチレンカルボナート）、ポリ（オキサ−エステル）、ポリ（オキサ−アミド）、ポリ（エチレンカルボナート）、ポリ（プロピレンカルボナート）、ポリ（ホスホエステル）、ポリ（ホスファゼン）、ポリ（チロシン由来カルボナート）、ポリ（チロシン由来アリラート）（ｐｏｌｙ（ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ａｒｙｌａｔｅ））、ポリ（チロシン由来イミノカルボナート）、これらのポリマーとポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）とのコポリマー、またはそれらの組み合わせである。
【００４１】
原則的に、微粒子は、当該技術分野において知られている様式で調製され得るが、ただし、先行技術で使用されるポリマーは、式（Ｉ）の生分解性ポリエステルアミドに置き換えられる。一般的に、粒子は、例えば、熱もしくはｐＨ調整による凝集により、コアセルベーション（相分離）により、噴霧乾燥により、または溶媒抽出により、調製され得る。調製方法の概略は、２００５年にＦｒｅｉｔａｓ  ＳらによりＪ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ，１０２：３１３−３３２に開示されている。本発明の処方物において使用される微粒子は、好ましくは、水中油型エマルジョン法によって調製される。この方法は、実施例１に詳細に開示される。
【００４２】
所望される場合は、微粒子は、１種以上の鎮痛薬と共に配合され得る。配合は、鎮痛薬の存在下で微粒子を形成することによって、またはその後に達成され得る。多量の鎮痛薬を含む微粒子を達成するためには、一般的に、鎮痛薬の存在下で微粒子を調製することが好ましい。特に、鎮痛薬の感受性が高い場合は、微粒子またはナノ粒子は、それらを形成した後に配合することが好ましい。これは、微粒子を鎮痛薬と接触させ、かつ鎮痛薬を微粒子中に拡散させ、かつ／またはその表面に付着／吸着させることによって達成され得る。
【００４３】
本発明によれば、１種以上の鎮痛薬を含む微粒子を、良好な封入効率（すなわち、使用した鎮痛薬の量で粒子中の鎮痛薬の量を除した値）を伴って提供することが可能である。配合効率は、使用する鎮痛薬によって決まる。
【００４４】
数種類の微粒子構造体が調製され得、これらは実質的に均一な構造体を含む。しかしながら、２種以上の鎮痛薬が放出されなければならない場合または１つ以上の機能性が必要とされる場合は、内部コアおよび外部シェルを含む構造を有する微粒子が提供されることが好ましい。コア／シェル構造は、例えば不適合化合物の薬物送達において、または画像化において、さらに多様な作用様式を可能にする。シェルは、コアの形成後に噴霧乾燥機を用いて適用され得る。コアおよびシェルは、異なる活性薬剤を含む、同じまたは異なるポリマーを含み得る。この場合、異なる速度で生物活性薬剤を放出することが可能である。生物活性薬剤がコア内にのみ存在し、シェルがポリマーからなることも可能である。
【００４５】
微粒子はまた、遊離した形態で懸濁液として、またはインサイチュー形成性ゲル処方物として、噴霧可能形態で存在し得る。
【００４６】
当該処方物は、関節障害、好ましくは関節炎、より好ましくは変形性関節症、最も好ましくは膝の変形性関節症の処置のために使用される。関節障害の処置のために使用される処方物は、好ましくは、１年に１回または２回の注射で投与される。
【００４７】
本発明はまた、ヒトまたは獣医学的患者における疼痛または炎症を処置する方法であって、治療有効量の処方物を前記患者に投与することを含む方法に関する。
【００４８】
本発明はさらに、ヒトまたは獣医学的患者における慢性炎症性疾患と関係する進行性構造的組織損傷を緩慢化する、阻止するまたは逆転させる方法であって、治療有効量の処方物を前記患者に投与することを含む方法に関する。当該処方物は、好ましくは、１年に１回または２回の注射で投与される。
【００４９】
次に、以下の非限定的な図および実施例を参照して本発明を詳細に説明する。これらの図および実施例は、例示のみを目的とするものである。
【図面の簡単な説明】
【００５０】
【図１】微粒子のＳＥＭ写真。
【図２】複数の微粒子の粒度分布。
【図３】図３は、生物学的効果を炎症軽減について示すものである（細胞アッセイに基づくインビトロ実験。ＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚ粒子の存在下におけるヒト軟骨細胞からのＰＧＥ−２レベル。
【図４】ＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚフィルムからの累積フルオレセイン放出。炎症細胞溶解産物の影響：段階１は拡散駆動放出、段階２は溶解産物（破壊された炎症細胞の溶液が溶解産物を提供する）の存在下、段階３は溶解産物による部分的分解後の拡散駆動放出。
【図５】フルオレセイン放出速度。炎症細胞溶解産物の影響。
【図６】１０分間水に浸漬した後のＰＥＡ−Ｉ−Ｂｚ微粒子の光散乱による粒度分布。粒度分布の第２のピーク（ｐｉｃ）は、粒子の凝集の徴候である。
【図７】４００分間水に浸漬した後のＰＥＡ−Ｉ−Ｂｚ微粒子の光散乱による粒度分布。本発明者らは、浸漬後１０分の時点で行った測定と比べた大型粒子の増加および粒度分布の拡大を認め得た。
【図８】１０分間水に浸漬した後のＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚ微粒子の光散乱による粒度分布。
【図９】４００分間水に浸漬した後のＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚ微粒子の光散乱による粒度分布。
【図１０】１０分間水に浸漬した後のＰＥＡ−Ｉ−Ｂｚ微粒子の（光学）顕微鏡図。凝集体を丸で囲んでいる。
【図１１】４００分間水に浸漬した後のＰＥＡ−Ｉ−Ｂｚ微粒子の（光学）顕微鏡図。凝集体を丸で囲んでいる。
【図１２】１０分間水に浸漬した後のＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚ微粒子の（光学）顕微鏡図。粒子の凝集体は何ら認められない。
【図１３】４００分間水に浸漬した後のＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚ微粒子の（光学）顕微鏡図。粒子の凝集体は何ら認められない。
【００５１】
［資料］
−  ＰＧＥ−２濃度を自然な状態（コントロール−実験）で産生されるレベルと比較する。
−  ＴｎＦ−αの存在は、軟骨細胞からのＰＧＥ−２の産生を、３００％に増加させる（実験コントロール＋）。
−  空粒子の存在は、コントロール＋実験と比較して、軟骨細胞からのＰＧＥ−２の産生に影響を与えない。
−  ０．１μＭのＴＡＡが軟骨細胞によるＰＧＥ−２の産生を停止させる。これは、トリアムシノロンアセトニドが炎症を軽減することを示している。
−  ＴＡＡ配合微粒子と共にインキュベートされる軟骨細胞は、ＰＧＥ−２を産生しない。この条件は、ヒト軟骨細胞の炎症をＴｎＦ−αにより刺激される場合でさえも制限する活性薬剤を、微粒子が放出することを明らかにする。
−  ＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚポリマーを、以下の実施例で使用する。ＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚのより詳細な説明は、ポリ−８−［（Ｌ−Ｌｅｕ−ＤＡＳ）０．４５（Ｌ−Ｌｅｕ−６）０．３−［Ｌ−Ｌｙｓ（Ｂｚ）］０．２５である。構造を式ＩＩＩに示す。割合は、スキーム１に示される合成における各モノマーの全体的な割合を示す。
−  ＰＥＡ−Ｉ−Ｂｚポリマーが、ＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚ微粒子との比較のために微粒子中で使用される。ＰＥＡ−Ｉ−Ｂｚポリエステルアミドの構造を、以下の式（ＩＶ）に示す。
【化３】
0006460540.tif 000004
（式中、ｍは、０．１〜０．９の間で変動し；ｐは、０．９〜０．１の間で変動し；ｎは、５０〜１５０の間で変動し；
−  各Ｒ１は、独立して、（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレンであり；各Ｒ２は、独立して、水素、または（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル（例えば、ベンジル）であり、
−  各Ｒ３は、独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、または（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり；そして各Ｒ４は、独立して、（Ｃ２〜Ｃ２０）アルキレンである。）
【００５２】
ＰＥＡ−Ｉは、脂肪族ジカルボン酸およびリジンと共重合された、α−アミノ酸、ジオールおよび脂肪族ジカルボン酸を含むコポリマーである。
【化４】
0006460540.tif 000005
【００５３】
［ＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚの合成］
トリエチルアミン（３０．９ｍＬ、０．２２２モル、２．２当量）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５３．０７ｍＬ、０．６８９モル）を、室温でオーバーヘッドスターラーを備えた窒素フラッシュした５００ｍＬ丸底フラスコ中のジ−ＯＳｕ−セバシナート（ｓｅｂａｃｉｎａｔｅ）（３９．９４０ｇ、０．１００８モル、１．０当量）、Ｌ−ロイシン（６）−２ＴｏｓＯＨ（２０．８２３ｇ、０．０３０２モル、０．３０当量）、Ｌ−ロイシン−（ＤＡＳ）−２ＴｏｓＯＨ（３２．５０３ｇ、０．０４５３モル、０．４５当量）およびＬ−リジン（Ｂｚ）−２ＴｏｓＯＨ（１４．６２８ｇ、０．０２５２モル、０．２５当量）の混合物に添加した。結果として生じた混合物を、反応を進行させるために６０℃に加熱し、ＴＨＦ中でのＧＰＣ分析によりモニタリングした。３６時間後に安定した分子量を得、次いで、トリエチルアミン（１．７６ｍＬ、０．０１２６モル）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４．５４ｍＬ、０．０５９０モル）と一緒に少しばかりのＬ−ロイシン（６）−２ＴｏｓＯＨ（４．３３８ｇ、０．００６３モル）を添加して、重合反応を停止させた。混合物をさらに２４時間加熱し、その後、その粘稠溶液をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４０７．８５ｇ、５．３０１モル）でさらに希釈し、室温まで冷却させた。室温で無水酢酸（１．８９ｍＬ、０．０１９９モル）を添加して、ポリマーのアミノ官能性末端基をアシル化した。混合物を室温で２４時間撹拌した。スキーム１に、全体的な反応を示す。
【００５４】
得られた粗ポリマー混合物を、１０：１比（水：反応混合物）で水に沈殿させた。ポリマーを収集してエタノール（５００ｍＬ、８．５７モル）に溶解させ、手順をもう一度繰り返した。ポリマーを再度エタノール（５００ｍＬ、８．５７モル）に溶解させ、撹拌溶液への滴下によりエチルアセタート（５０００ｍＬ、５０．９１モル）に沈殿させた。沈殿させたポリマーを、エチルアセタート（１００ｍＬ、１．００モル）２回分で洗浄し、乾燥させ、エタノール（５００ｍＬ、８．５７モル）に溶解させ、０．２μｍのＰＴＦＥ膜フィルターを介して濾過した。濾過したポリマー溶液を、減圧下にて６５℃で乾燥させた。
【００５５】
収率７５％、Ｍｎ＝５０ｋＤａ（ポリスチレン標準を基準としたＴＨＦ中でのゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）。示差走査熱分析（ＤＳＣ）によりガラス転移温度を測定した。第２の加熱から１０℃／分の加熱速度で測定した（Ｔｇ＝４８℃）。
【化５】
0006460540.tif 000006
【００５６】
［分解制御放出の原理］
薬物としてＴＡＡを含む薬物配合微小球をこの調査で使用する。対照として、拡散駆動放出を、細胞培養培地中で行った。予想放出曲線は、仮説に基づく図３Ａに酷似することが予想される。
【００５７】
同じ粒子バッチの第２および第３の系（同じく三重反復試験）が同時に開始される。放出の第１相は、コントロール実験と同様に行われる（図３Ｂ中の段階１）。段階２では、細胞培養培地が、ＨＬ−６０好中球様細胞溶解産物を含有する細胞培養培地に置き換えられる。系２には純粋な溶解産物が添加され、系３には１０×希釈溶解産物が添加される。溶解産物中に存在する酵素がＰＥＡ微粒子の表面分解を引き起こすであろうことから、その結果として、ＡＰＩの放出の増加が予想される。
【００５８】
［実施例］
［実施例１］
［ＴＡＡ配合ＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚ微粒子の製造］
３００ｍｇのＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚをジクロロメタンに溶解させた。７５ｍｇのＴＡＡを溶液に添加し、超音波によりホモジナイズした。この懸濁液を、ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘ（登録商標）を用いて、高剪断下で、１重量％のポリ（ビニルアルコール）を含有する２０ｍｌの冷水に添加した。安定した懸濁液が得られた後に、１重量％のポリ（ビニルアルコール）を含有する１００ｍｌの水中で、粒子を１２時間硬化させた。水および界面活性剤の過剰分を、水洗および遠心分離により除去した。最後に粒子を凍結させ、真空下で乾燥させた。微粒子の写真を図１に示す。微粒子の粒度分布を図２に示す。
【００５９】
［実施例２］
［ＴＡＡ配合ＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚ微粒子の存在下での軟骨細胞の培養］
３人のヒトドナーからのＯＡ軟骨細胞を、膝関節全置換から採取し、培養した。細胞を、トランスウェル中で、５μｇの実施例１で作製した微粒子と共にインキュベートした。３日置きに、細胞および培地を収集し、トランスウェルを、新たにプレートされた同じドナーからのＯＡ軟骨細胞を含むウェルに移した。インキュベーションの時間の間に細胞によって産生されたＰＧＥ−２（プロスタグランジン−Ｅ２）の量を、ＥＬＩＳＡにより測定した。全実験期間は２８日であった。
【００６０】
以下の条件で細胞を培養した。
１．コントロール実験；粒子なし。
２．陽性コントロール。ＴＮＦ−αによって刺激された軟骨細胞。粒子なし。
３．ＴＮＦ−αによって刺激された軟骨細胞。５μｇの空ＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚ粒子と共にインキュベートした。
４．ＴＮＦ−αによって刺激された軟骨細胞。２０重量％のトリアムシノロンアセトニドが配合された５μｇのＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚ粒子と共にインキュベートした。
５．ＴＮＦ−αによって刺激された軟骨細胞。０．１μＭの一定濃度のトリアムシノロンアセトニドと共にインキュベートした。
結果を図３に示す。
【００６１】
［実施例３］
［ＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚフィルムからのフルオレセインの累積放出］
原理証明調査を、フィルムからゆっくりと放出される色素としてフルオレセインを用いて実施した。
【００６２】
急性炎症において、多形核好中球細胞（ＰＭＮ）が、最初に炎症部位に遊走する細胞種であるが、そこで、それらは、他のＰＭＮならびに他の細胞種（単球−マクロファージおよびリンパ球など）を呼び寄せるケモカインをはじめとする数種の炎症促進性メディエーターを産生し、これは、慢性炎症に相当する。好中球およびマクロファージは生体材料と相互作用することが知られている２つの細胞種であり、生体材料の分解の可能性に繋がり得るであろう。好中球様細胞と生体材料との相互作用のモデル化は、分化したＨＬ６０好中球様細胞を用いて行われ得る。好中球は、炎症部位に向かって遊走する炎症細胞のうちの最初の応答細胞であり、異物（例えば、生体材料）との高レベルの相互作用を有することが知られている。
【００６３】
フルオレセインの放出に対する急性炎症の影響を、１０重量％のフルオレセインを配合したＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚフィルムについて評価した。比較放出系は、０．０５重量％のアジ化ナトリウムを含むＰＢＳ緩衝液中で行ったのであるが、アジ化ナトリウムは、殺生物薬として添加したものである。分化したＨＬ６０好中球様細胞からの細胞溶解産物の添加によって、色素（フルオレセイン）の放出に対する炎症の影響を実証した。
【００６４】
［試料調製］
１０１．３ｍｇのフルオレセインおよび９９９．３ｍｇのＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚを、１９ｍｌのエタノールに溶解させた。この溶液を、オービタルシェーカー上での穏やかな撹拌下で一晩溶解させておいた。
【００６５】
８ｍｌのポリマーフルオレセイン溶液を、デシケーター中に入れた直径５ｃｍのＴｅｆｌｏｎ金型内にピペットで移した。穏やかな窒素流下で、溶媒を１８時間エバポレートさせた。窒素流により乾燥させたフィルムを取り出し、真空下で７０℃にて４８時間さらに乾燥させた。ＣＤＣｌ３中での１Ｈ−ＮＭＲ分析によりフィルム試料を残留エタノールについて分析したところ、エタノールピークは何ら検出されなかった。６ｍｍ円形ディスクを乾燥フィルムから打ち抜き、放出実験のために使用した。
【００６６】
［放出実験］
２つの放出系を、共に三重反復試験にて開始した。各時間点で溶液を新しくした。結果を図４および図５に示す。
【００６７】
［炎症誘導放出の原理］
系１は、全期間にわたってＰＢＳ緩衝液中で放出した（拡散駆動放出）。系２におけるフルオレセインの放出を、４つの異なる相に分割した。
【００６８】
相１  系１と同様に、ＰＢＳ緩衝液中で放出を行った。この相において、両方の放出曲線は、互いに酷似している。
【００６９】
相２  ２６日間の放出後に、ＨＬ６０好中球様細胞溶解産物を系２の試料に添加した。溶解産物の添加は、フルオロセインの放出速度の上昇を結果としてもたらす。
【００７０】
相３  ３３日後に、溶解産物の作用を、４−（２−アミノエチル）ベンゼンスルホニルフルオリドヒドロクロリドでの前処理によって排除した。この相における放出速度は、ＰＢＳ緩衝液中での放出に酷似していた。相４において、再度新しい溶解産物を添加すると、放出されるべき全フルオレセイン配合量の前に、放出速度が上昇した。フルオレセインの累積放出については図４、放出速度については図５を参照されたい。
【００７１】
この実験は、ポリマーマトリックスからの放出速度に対する炎症細胞溶解産物の驚くべき影響を明確に示している。このモデル系の結果は、ＰＥＡ  ＩＩＩ  Ａｃ  ＢｚからのＡＰＩの放出が、患者の利益のために炎症レベルによって相互作用的に調整され得ることを示唆している。
【００７２】
強い炎症→放出速度の上昇→炎症の緩和→放出速度の低下。
【００７３】
［実施例４］
［実施例１で説明したとおりのＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚ微粒子の製造］
［ＰＥＡ−Ｉ微粒子の製造］
３００ｍｇのＰＥＡ−Ｉ−Ｂｚを、ジクロロメタンに溶解させた。この懸濁液を、ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘ（登録商標）を用いて高剪断下で、１重量％のポリ（ビニルアルコール）を含有する２０ｍｌの冷水に添加した。安定した懸濁液が得られた後に、１重量％のポリ（ビニルアルコール）を含有する１００ｍｌの水中で、粒子を１２時間硬化させた。水および界面活性剤の過剰分を、水洗および遠心分離によって除去した。最後に粒子を凍結させ、真空下で乾燥させた。
【００７４】
［室温での水中でのＰＥＡ微粒子の安定性：ＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚと比較したＰＥＡ−Ｉ−Ｂｚの凝集］
３０ｍｇのＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚ微小球およびＰＥＡ−Ｉ−Ｂｚ微小球を、０．５ｍｌの水で懸濁させ、２０℃で１２０ｒｐｍにて振盪機にかけた。微粒子の大きさおよび凝集を、１０分間および４００分間の水への浸漬後に、両方の種類の粒子について、粒度分布測定（光散乱技術を使用）および目視評価（光学顕微鏡技術）によってモニタリングした。
【００７５】
ＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚが実験の過程の間に凝集しなかったのに対して、ＰＥＡ−Ｉ−Ｂｚ粒子は、わずか１０分間の水への浸漬後に凝集を示しているのが認められ得た。凝集した粒子は、細い針を通るそれらの粒子の注射針通過性（ｓｙｒｉｎｇｅ−ａｂｉｌｉｔｙ）を低下させる。
【００７６】
［１０分および４００分後の光散乱による粒径測定］
粒度分布は、Ｄ１０、Ｄ５０、Ｄ９０およびＳＰＡＮにより定義される。図６〜９に見られ得るように、Ｄ１０は累積分布の１０％のところの粒子直径の値に相当し、Ｄ５０は累積分布の５０％のところの粒子直径の値に相当し、Ｄ９０は累積分布の９０％のところの粒子直径の値に相当する。
【００７７】
ＳＰＡＮは、ＳＰＡＮ＝（Ｄ９０−Ｄ１０）／Ｄ５０として算出される。
【００７８】
［ＰＥＡ−Ｉ−Ｂｚ］
【００７９】
【表１】
0006460540.tif 000007
【００８０】
凝集は、時間における全ての値の上昇によっていずれは明確に認識できる。
【００８１】
［ＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚ］
【００８２】
【表２】
0006460540.tif 000008
【００８３】
実験精度に関連し、ＰＥＡ−ＩＩＩ−Ｂｚ微粒子は、４００分間の水への浸漬後に、凝集の形跡を示してはいない。
【図１】
0006460540.tif 000011
【図２】
0006460540.tif 000012
【図３】
0006460540.tif 000013
【図４】
0006460540.tif 000014
【図５】
0006460540.tif 000015
【図６】
0006460540.tif 000016
【図７】
0006460540.tif 000017
【図８】
0006460540.tif 000018
【図９】
0006460540.tif 000019
【図１０】
0006460540.tif 000020
【図１１】
0006460540.tif 000021
【図１２】
0006460540.tif 000022
【図１３】
0006460540.tif 000023