(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジオバチルス・ステアロサーモフィルスの１６Ｓ ｒＲＮＡをコードする遺伝子に由来する配列番号１に記載された配列からなるフォワードプライマーと、配列番号２に記載された配列からなるリバースプライマーとの組み合わせであるプライマー対を使用して、
被検体試料中に含まれる細菌から抽出した核酸を鋳型として前記プライマー対を使用して前記核酸の増幅をリアルタイムＰＣＲ法により行なう核酸増幅工程を含むジオバチルス・ステアロサーモフィルスを検出する方法。
【請求項２】
配列番号１に記載された配列からなるフォワードプライマーと、配列番号２に記載された配列からなるリバースプライマーとの組み合わせからなる、リアルタイムＰＣＲ法で使用するジオバチルス・ステアロサーモフィルス検出用プライマー対。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ジオバチルス・ステアロサーモフィルスを特異的に検出する方法およびジオバチルス・ステアロサーモフィルス検出用プライマー対に関する。
【背景技術】
【０００２】
微生物の中には、芽胞を形成する細菌が存在する。芽胞形成細菌は、生存に良好な環境では活発に分裂し増殖するが、環境の栄養分が減少したり、乾燥するなど、増殖に不利な環境になると芽胞を形成する。芽胞は極めて高い耐久性を持っており、さらに環境が悪化して通常の細菌が死滅する状況に陥っても生き残ることが可能である。しかし、芽胞の状態では細菌は新たに分裂することはできず、その代謝も限られている。
【０００３】
芽胞は栄養細胞の中に形成される耐久型細胞であり、水分が非常に低く、殆ど代謝せず、いわば休眠状態にある。この状態のときは種々のストレスに強い耐性を示し、加熱に対する抵抗性も強く、殺滅には１００℃以上で所定時間以上の加熱が必要である。休眠状態にある芽胞は、生き残った芽胞が再びその細菌の増殖に適した環境に置かれると、当該芽胞が発芽して、通常の増殖・代謝能を有する菌体が作られる。
【０００４】
芽胞は耐熱性が強いために、加熱殺菌によって微生物の制御をしている容器詰め食品では、その存在が問題となる。芽胞は、容器詰め食品にとって最も重要な生物学的危害要因で、加熱殺菌の指標となっている。
【０００５】
食品材料の炭水化物や脂肪等が分解されて風味が悪くなり食用に適さなくなることを変敗というが、高温下に放置された容器詰め食品（例えば飲料缶詰）の中には、フラットサワー様の変敗を引き起こす事例が認められることがあった。この変敗の原因菌として、モーレラ属菌、ジオバチルス属菌、サーモアナエロバクテリウム属菌などの高温芽胞菌による汚染であるとの報告がある（非特許文献１〜４）。
【０００６】
これら細菌は、何れも形成する芽胞の耐熱性が極めて高く、制御の難しい微生物とされており、低酸性飲料や缶詰などの変敗サンプルから高頻度で検出されている。
【０００７】
容器詰め食品のうち飲料製造において、例えば乳成分含有飲料は通常レトルト加熱殺菌処理が行なわれるが、この加熱殺菌処理の通常の条件では耐熱性芽胞形成細菌の芽胞が残存する虞がある。乳成分含有飲料が自動販売機などにおいて低温保存状態で販売ないし貯蔵される場合には、残存した耐熱性芽胞形成細菌の芽胞は発芽・増殖し難く、品質上の問題が生じることは殆どない。しかし、例えば５５℃の加温状態に置かれた場合には、残存した高温耐熱性芽胞形成菌の芽胞が発芽・増殖して、飲料内容物に変敗を生じさせる結果、飲食適性（商品性）が失われる虞がある。
【０００８】
従って、上述した高温芽胞菌の制御については、食品業界において非常に重要な菌種であると考えられる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】中山昭彦（２００４）「食品のストレス環境と微生物」第4節  ホットベンダーで問題となる腐敗性高温細菌、伊藤武、森地敏樹編、株式会社サイエンスフォーラム出版
【非特許文献２】松田典彦、駒木勝、松縄桂子（１９８１）「缶・びん詰およびレトルト食品製造用副原料の耐熱性嫌気性細菌胞子による汚染状況」缶詰時報  ６０  ｐ２０７−２１２
【非特許文献３】Nakayama,A. and Shinya,R.(1981), New Type of Flat Sour Spoilage of Commercial Canned Coffee. 食衛誌２２、ｐ２５−３２
【非特許文献４】Andre,S., Zuber,F., Remize,F.(2013), Thermophilic spore-forming bacteria isolated from spoiled canned food and their heat resistance. Results of French ten-years survey. International Journal of Food Microbiology. 165, p134-143.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
微生物学の分野においても分子生物学的手法が盛んに用いられるようになり、細菌の検出に核酸増幅法による検出のためのプライマーが提案されている。リアルタイムＰＣＲ法は、高感度で定性・定量が可能となる方法である。しかし、これまでに上述した高温芽胞菌、特にジオバチルス・ステアロサーモフィルス（Geobacillus stearothermophilus）を対象とした核酸増幅法による検出は知られていなかった。
【００１１】
従って、本発明の目的は、核酸増幅法を使用したジオバチルス・ステアロサーモフィルスの検出方法、および、ジオバチルス・ステアロサーモフィルス検出用プライマー対を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
即ち、上記目的を達成するため、以下の［１］〜［２］に示す発明を提供する。
［１］ジオバチルス・ステアロサーモフィルスの１６Ｓ ｒＲＮＡをコードする遺伝子に由来する配列番号１に記載された配列からなるフォワードプライマーと、配列番号２に記載された配列からなるリバースプライマーとの組み合わせであるプライマー対を使用して、被検体試料中に含まれる細菌から抽出した核酸を鋳型として前記プライマー対を使用して前記核酸の増幅をリアルタイムＰＣＲ法により行なう核酸増幅工程を含むジオバチルス・ステアロサーモフィルスを検出する方法。
［２］配列番号１に記載された配列からなるフォワードプライマーと、配列番号２に記載された配列からなるリバースプライマーとの組み合わせからなる、リアルタイムＰＣＲ法で使用するジオバチルス・ステアロサーモフィルス検出用プライマー対。
【００１３】
上記［１］によれば、ジオバチルス・ステアロサーモフィルスの検出を核酸増幅法（リアルタイムＰＣＲ法）で簡便に行なうことができる。特に、プライマー対を、ジオバチルス・ステアロサーモフィルスの１６Ｓ ｒＲＮＡをコードする遺伝子においてジオバチルス・ステアロサーモフィルスに特徴的な配列に基づいて設計したため、当該プライマー対を使用して増幅した増幅産物は、ジオバチルス・ステアロサーモフィルス由来のものとなる。従って、本構成の核酸増幅工程を行なって得られた増幅産物を検出することで、確実にジオバチルス・ステアロサーモフィルスの検出を行なうことができる。
【００１４】
また、本構成によれば、高感度で定性・定量が可能となる核酸増幅方法（リアルタイムＰＣＲ法）によってジオバチルス・ステアロサーモフィルスを検出することができる。
【００１５】
上記［２］のプライマー対は、１６Ｓ ｒＲＮＡをコードする遺伝子においてジオバチルス・ステアロサーモフィルスに特徴的な配列である配列番号１，２に記載された核酸配列を有する。そのため、本構成のプライマー対は、特異的にジオバチルス・ステアロサーモフィルスをリアルタイムＰＣＲ法で検出できるプライマーと成り得る。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】１６Ｓ ｒＲＮＡをコードする遺伝子領域を示した図である。
【図２】ジオバチルス・ステアロサーモフィルス ＮＢＲＣ １２５５０ＴのリアルタイムＰＣＲの融解曲線解析を示した図である。
【図３】ジオバチルス・ステアロサーモフィルス ＮＢＲＣ １２５５０ＴのリアルタイムＰＣＲの増幅産物の電気泳動の結果を示した写真図である。
【図４】３４菌株のリアルタイムＰＣＲの増幅産物の電気泳動の結果を示した写真図である。
【図５】リアルタイムＰＣＲを行って得られた検量線結果を示したグラフである（コーンの缶詰）。
【図６】リアルタイムＰＣＲを行って得られた検量線結果を示したグラフである（小豆の水煮の缶詰）。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明の実施形態を図面に基づいて説明する。
本発明のジオバチルス・ステアロサーモフィルスの検出方法では、容器入り食品中から採取した食品サンプルを被検体試料とし、当該被検体試料にジオバチルス・ステアロサーモフィルスが含まれるか否かを判断する。本方法は、ジオバチルス・ステアロサーモフィルスの１６Ｓ ｒＲＮＡをコードする遺伝子に由来する配列番号１に記載された配列からなるフォワードプライマーと、配列番号２に記載された配列からなるリバースプライマーとの組み合わせであるプライマー対を使用して、被検体試料中に含まれる細菌から抽出した核酸を鋳型として前記プライマー対を使用して前記核酸の増幅を行なう核酸増幅工程を含むジオバチルス・ステアロサーモフィルスを検出する方法である。
【００１８】
「被検体試料」は、食品・飲料などの対象物を収容容器に収容したレトルト食品・缶詰・ＰＥＴボトル飲料等の容器入り食品からその一部又は全部を採取した食品サンプルである。しかし、これに限定されるものではなく、ジオバチルス・ステアロサーモフィルスを含有する可能性のあるサンプルであればよい。
【００１９】
本方法では、被検体試料中に含まれる細菌（ジオバチルス・ステアロサーモフィルス）の１６Ｓ ｒＲＮＡをコードする遺伝子に存在する特異的な配列を有するオリゴヌクレオチドをプライマーとし、被検体試料中に含まれる細菌から抽出した核酸を鋳型としてＰＣＲ法を適用し、特定のサイズのＰＣＲ増幅産物が得られたことを指標として細菌の同定を行う。
【００２０】
「オリゴヌクレオチド」は、数塩基〜数十塩基からなる核酸断片をいい、天然の核酸分子、遺伝子組換えによって得られた核酸分子、化学合成によって得られた核酸分子などが該当する。「プライマー」は、例えばＰＣＲなどの核酸増幅法などにおける酵素的重合の開始のための決められた条件下で、１本鎖の核酸又は核酸断片とハイブリダイズし、重合酵素であるポリメラーゼによる塩基伸長反応を誘導し得る数塩基〜数十塩基のオリゴヌクレオチドである。
【００２１】
ＰＣＲ法はリアルタイムＰＣＲとする。リアルタイムＰＣＲは、ＰＣＲの増幅量をリアルタイムでモニターし解析する方法であり、電気泳動が不要で迅速性と定量性に優れている。リアルタイムＰＣＲは、サーマルサイクラーと分光蛍光光度計を一体化したリアルタイムＰＣＲ専用の装置で行うことができる。リアルタイムＰＣＲのモニターは蛍光試薬を用いて行う。このような蛍光モニター法として、二本鎖ＤＮＡに結合することで蛍光を発する試薬（インターカレーター）をＰＣＲ反応系に加えるインターカレーター法などを適用することができるが、これに限定されるものではない。
【００２２】
インターカレーターは、ＰＣＲ反応によって合成された二本鎖ＤＮＡに結合し、励起光の照射により蛍光を発する。この蛍光強度を検出することにより、増幅産物の生成量をモニターでき、また、増幅ＤＮＡの融解温度を測定することができる。
【００２３】
使用できる蛍光色素としては、例えばサイバーグリーン（SYBR GREEN）Ｉ（２−［Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ−プロピルアミノ］−４−［２，３−ジヒドロ−３−メチル−（ベンゾ−１，３−チアゾール−２−イル）−メチリデン］−１−フェニル−キノリニウム）、エチジウムブロマイド、ヘキスト３３２５８等を使用することができるが、これらに限定されるものではない。
【００２４】
ＰＣＲ法等の分子生物学的手法は細菌の遺伝的多様性を分析する手法として用いられる。例えばｒＤＮＡは保存性が高い遺伝子と多様性が高い遺伝子領域を含むため、生物の系統・分類に利用される。以下に、核酸増幅法を利用したジオバチルス・ステアロサーモフィルスの検出方法について詳述する。
【００２５】
即ち、図１に示したジオバチルス・ステアロサーモフィルスの１６Ｓ ｒＲＮＡをコードする遺伝子領域を特定のプライマーを使用してＰＣＲ法により増幅し、特定のサイズのＰＣＲ増幅産物が得られたことを指標としてジオバチルス・ステアロサーモフィルスの同定を行う。
【００２６】
プライマーは、重合酵素であるポリメラーゼ存在下で核酸増幅のために使用される。
本発明で適用するリアルタイムＰＣＲでは、１６Ｓ ｒＲＮＡをコードする遺伝子の所望領域を特異的に増幅するため、配列番号１に記載された配列からなるフォワードプライマーと、配列番号２に記載された配列からなるリバースプライマーとの組み合わせであるプライマー対を使用する。１６Ｓ ｒＲＮＡをコードする遺伝子を鋳型としてこれらプライマー対を使用することにより、１６３ ｂｐのＰＣＲ産物が増幅される。
【００２７】
使用したプライマーは、以下の通りである。
5′-GAT TGG GGC TTG CCT TGA-3′（Ｇｖ１Ｆ：配列番号１）
5′-GCA AGT GAC AGC CCA AAG G-3′（Ｇｖ３Ｒ：配列番号２）
【００２８】
これらプライマー対は、１６ＳｒＲＮＡをコードする遺伝子の所望領域の核酸配列に基づき、当該所望領域が増幅できるように、プライマー３プラス（http://www.bioinformatics.nl/cgi-bin/primer3plus/primer3plus.cgi）等、公知のプライマー設計プログラム等により設計するとよい（プライマー設計工程）。
【００２９】
尚、１６Ｓ ｒＲＮＡをコードする遺伝子の所望領域の核酸配列は、ＮＣＢＩ（National Center for Biotechnology Information）が提供しているＧｅｎＢａｎｋ（ジェンバンク）、および、NITE Biological Resource Center（ＮＢＲＣ）から得たものを使用すればよい。これらより得た配列はClustalX（Thompson et al.,1997）を使用してアライメントを行い、このアライメントの結果に基づいてプライマーを設計するのがよい。
【００３０】
一対のプライマーは、数塩基〜数十塩基の断片長を有するように設計し、好ましくはターゲットとなるＰＣＲ増幅産物のＴｍ値がプライマーダイマー自体の値より高くなるようにプライマーを設計し、化学合成等の手法により合成する。当該化学合成は、公知のＤＮＡ合成手法により行なうことができる。尚、配列番号１のフォワードプライマーの断片長は１８塩基、Ｔｍ値は６６．１であり、配列番号２のリバースプライマーの断片長は１９塩基、Ｔｍ値は６５．８である。Ｔｍ値は最近接塩基対法（Nearest Neighbor method）を使用して計算している。
【００３１】
このようにして抽出した核酸を鋳型として前記プライマー対を使用して前記核酸の増幅を行なう（核酸増幅工程）。
核酸増幅の条件（変性温度、アニール温度およびアニール時間、サイクル数、伸延温度および伸延時間）は、設計したプライマーの長さやＧＣ含有量等によって適宜決定する。ＰＣＲに使用するポリメラーゼは、ＤＮＡポリメラ−ゼ・Ｔａｑポリメラ−ゼのようなＤＮＡ依存型ＤＮＡポリメラ−ゼ等、公知の重合酵素を使用すればよい。
【００３２】
ＰＣＲ反応が終了した後、増幅したＰＣＲ増幅産物を確認するため、反応液を採取して電気泳動を行なう（電気泳動工程）。電気泳動工程では、適切な緩衝液およびゲルを使用して行なう。電気泳動時間・電圧は適宜設定する。電気泳動工程の後、所定濃度のエチジウムブロマイド等の染色剤によりＰＣＲ増幅産物を所定時間染色して紫外線の照射等によって可視化することでＰＣＲ増幅産物を検出する（ＰＣＲ検出工程）。
【実施例】
【００３３】
〔実施例１〕
以下に、ＰＣＲ法を利用したジオバチルス・ステアロサーモフィルスの検出方法の実施例について説明する。ジオバチルス・ステアロサーモフィルスおよびコントロールに使用した細菌についての一覧を表１に示した。
【００３４】
【表１】
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【００３５】
表１で示した菌株において、ＡＴＣＣと付してある菌株については、国際寄託機関であるAmerican Type Culture Collection（ＡＴＣＣ）より入手でき、ＮＢＲＣと付してある菌株については、独立行政法人製品評価技術基盤機構生物遺伝資源部門（ＮＢＲＣ）より入手でき、ＤＳＭと付してある菌株については、国際寄託機関であるDeutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH（ＤＳＭ）より入手でき、ＪＣＭと付してある菌株については、独立行政法人理化学研究所バイオリソースセンター （Japan Collection of Microorganisms）より入手できる。
【００３６】
ジオバチルス・ステアロサーモフィルスおよびコントロールに使用した細菌についてゲノムＤＮＡを調製した。
【００３７】
ジオバチルス・ステアロサーモフィルス ＮＢＲＣ １２５５０ＴをスタンダードサンプルとしてゲノムＤＮＡを抽出した。ゲノムＤＮＡの抽出は、Ultra clean DNA isolation kit（MO Bio Laboratories社）を使用した。
【００３８】
個々の缶詰のサンプルは、５分の間超音波処理を行い、微生物ペレットを、４０分の間７８００ｇの遠心分離によって集めた。上澄みを除去し、ペレットは１ｍＬのＰＢＳによって３回洗浄した。次に、３００μＬのマイクロビーズ溶液と、５０μＬのＭＤ１溶液を添加してペレットを懸濁し、２０分間９５℃で加温した後、１００００ｇで２分間の遠心分離を行った。上清の３００μＬに１００μＬのＭＤ２溶液を添加し、数回の転倒混和を行った後、４℃で１０分間インキュベートし、１００００ｇで２分間の遠心分離を行った。上清の３００μＬに９００μＬのＭＤ３溶液を添加し、スピンカラムにて１００００ｇで３０秒間の遠心分離を行った。フロースルー液を捨てた後、３００μＬのＭＤ４溶液をスピンカラムに添加して同様の遠心分離を行ってフロースルー液を捨てた。その後、１００μＬのＭＤ５溶液をスピンカラムに添加して１００００ｇで１分間の遠心分離を行い、フロースルー液を回収してＰＣＲ分析に使用した。
【００３９】
〔実施例２〕
抽出したゲノムＤＮＡは濃度を測定して段階希釈（１２．５ｎｇ/μＬ〜１．２５ｆｇ/μＬ）を行い、リアルタイムＰＣＲの鋳型に供した。本実施例ではジオバチルス・ステアロサーモフィルス ＮＢＲＣ １２５５０ＴのゲノムＤＮＡを使用してリアルタイムＰＣＲを行った。
【００４０】
ジオバチルス・ステアロサーモフィルスの１６Ｓ ｒＲＮＡをコードする遺伝子に由来する配列番号１に記載された配列からなるフォワードプライマーと、配列番号２に記載された配列からなるリバースプライマーとの組み合わせであるプライマー対を使用して、増幅される１６３ ｂｐのＰＣＲ産物を検出した。
【００４１】
ＰＣＲ反応は、サイバーグリーン（SYBR GREEN）を使用して行った。即ち、２５μＬの２×SYBRプレミックスExTaq（Tli RNaseH）（タカラバイオ株式会社製）、０．２μＭの各プライマー、１μＬのゲノムＤＮＡを反応液組成とし、リアルタイムＰＣＲ装置Thermal Cycler Dice Real Time System（タカラバイオ株式会社製）を用いて反応を行った。反応サイクルは、９４℃で３０秒間の変性を行なった後、９５℃１０秒−６２℃３０秒−７２℃１分の反応サイクルを３６サイクル繰り返した。最後の増幅サイクル（温度域５４〜９５℃）の後に融解曲線が生成された。ＰＣＲ産物の電気泳動を常法に従って行い、増幅産物のバンドおよびサイズの確認を行った。融解曲線の結果を図２、電気泳動の結果を図３に示した。図３の左端のレーンにおけるマーカーは１００ ｂｐラダーサイズマーカーを使用した。レーン１〜８は鋳型となるゲノムＤＮＡを順に１２．５ｎｇ/μＬ〜１．２５ｆｇ/μＬまで１０倍の段階希釈をしたものである。
【００４２】
融解曲線を確認した結果、８７．３℃でピークを示したことが認められた。また、電気泳動による確認では、増幅されたバンドのサイズは１６３ ｂｐであると認められた。また、ジオバチルス・ステアロサーモフィルスのゲノムＤＮＡの濃度が１２．５ｆｇ/μＬの場合（レーン７）であってもバンドが確認できたことから、１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子をターゲットとする特異的プライマー（配列番号１、配列番号２）の検出限界は１２．５ｆｇ/μＬであると認められた。
【００４３】
〔実施例３〕
本発明のプライマー対（配列番号１、配列番号２）がジオバチルス・ステアロサーモフィルスを特異的に検出できるプライマーであることを確認するため、実施例２で使用したジオバチルス・ステアロサーモフィルス ＮＢＲＣ １２５５０Ｔ以外の３株（ＮＢＲＣ １２９８３、ＮＢＲＣ １３７３７、ＮＢＲＣ １００８６２）、および、同属菌株・近縁株・非近縁株を用いてリアルタイムＰＣＲを行った。リアルタイムＰＣＲで用いた菌株は表１に示した３４菌株とした。リアルタイムＰＣＲの条件は実施例２の条件に準じて行った。
【００４４】
これら３４菌株のリアルタイムＰＣＲを行った後、ＰＣＲ産物の電気泳動を常法に従って行い、増幅産物のバンドおよびサイズの確認を行った。結果を図４に示した。マーカーは１００ ｂｐラダーサイズマーカーを使用した。レーン３６，３７はネガティブコントロールである。
【００４５】
この結果、レーン１のジオバチルス・ステアロサーモフィルス ＮＢＲＣ １２５５０Ｔ、および、レーン２〜４の同種菌株の３株（ＮＢＲＣ １２９８３、ＮＢＲＣ １３７３７、ＮＢＲＣ １００８６２）において、増幅されたバンドのサイズは１６３ ｂｐであると認められ、これら菌株は陽性であると認められた。一方、他の近縁株、非近縁株では増幅されたバンドは確認できなかったため、これら菌株は陰性であると認められた。従って、本発明のプライマー対（配列番号１、配列番号２）を用いることで、ジオバチルス・ステアロサーモフィルスのみを特異的に検出できると認められた。
【００４６】
〔実施例４〕
容器詰め食品からジオバチルス・ステアロサーモフィルスのみを特異的に検出できることを確認するため、容器詰め食品からゲノムＤＮＡの抽出、リアルタイムＰＣＲ法を用いてスパイク試験を行った。容器詰め食品として、コーンの缶詰（殺菌温度１１６℃、７５分）および小豆の水煮（殺菌温度１１５℃、７０分）を使用した。これら容器詰め食品には、フラットサワー様の変敗を引き起こす原因菌として、ジオバチルス・ステアロサーモフィルス以外の菌株も含まれると考えられる。従って、本実施例のスパイク試験は、複数種類の前記原因菌を含む細菌ゲノムＤＮＡが混在したゲノムＤＮＡを使用した。ゲノムＤＮＡの抽出、リアルタイムＰＣＲは上述した実施例に準じて行った。
【００４７】
リアルタイムＰＣＲを行って得られたＣｔ値（ＰＣＲ増幅産物がある一定量に達したときのサイクル数）をプロットして得られた検量線の結果を図５（コーンの缶詰）、図６（小豆の水煮の缶詰）に示した。図５,６における黒丸のデータは、ジオバチルス・ステアロサーモフィルス ＮＢＲＣ １２５５０ＴのみのゲノムＤＮＡをリアルタイムＰＣＲで増幅したときに得られた検量線である。このときの回帰方程式はｙ＝−１．４８（±０．１）Ｉｎ（ｘ）＋３３．３５６（±０．３０２）であった。
【００４８】
この結果、図５（コーンの缶詰）より得られた回帰方程式はｙ＝−１．３０９（±０．０５７）Ｉｎ（ｘ）＋３４．１７６（±０．５０５）であり、図６（小豆の水煮の缶詰）より得られた回帰方程式はｙ＝−０．８９３（±０．０１１）Ｉｎ（ｘ）＋２８．８５（±０．０４９）であった。これらの結果より、ジオバチルス・ステアロサーモフィルスの菌数が１０６〜１０１ＣＦＵ/ｍＬの範囲で高い直線性が得られた。従って、本発明のジオバチルス・ステアロサーモフィルスを検出する方法は、容器詰め食品において共存する他の菌株が存在した場合であっても、感度よく、特異的にジオバチルス・ステアロサーモフィルスを検出することができると認められた。
【産業上の利用可能性】
【００４９】
本発明のジオバチルス・ステアロサーモフィルスを検出する方法およびジオバチルス・ステアロサーモフィルス検出用プライマー対は、容器詰め食品からジオバチルス・ステアロサーモフィルスを特異的に検出するために利用することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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