(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
グリセリンを２０〜６０質量％含有し、且つ２５％圧縮硬さが２００ｋＰａ〜８００ｋＰａである乾燥フィブロイン多孔質体を圧縮率１０％〜４０％で圧縮し、バンドソーでスライスすることによるフィブロイン多孔質シートの製造方法であって、
前記フィブロイン多孔質シートが、シートの両表面が全面にわたり非多孔皮膜を有さず、２５％圧縮硬さが２００ｋＰａ〜８００ｋＰａであり、厚さが０．２５ｍｍ〜２．５ｍｍのフィブロイン多孔質シートであり、且つ、前記の全面にわたり非多孔皮膜を有さない表面において孔の面積比率が６０％〜９９％である、フィブロイン多孔質シートの製造方法。
【請求項２】
前記乾燥フィブロイン多孔質体がシルクフィブロイン多孔質体である、請求項１に記載のフィブロイン多孔質シートの製造方法。
【請求項３】
前記フィブロイン多孔質シートの厚さが０．２５ｍｍ〜１ｍｍである、請求項１又は２に記載のフィブロイン多孔質シートの製造方法。
【請求項４】
前記フィブロイン多孔質シートの面積が１５ｃｍ２〜１２００ｃｍ２である、請求項１〜３のいずれか１項に記載のフィブロイン多孔質シートの製造方法。
【請求項５】
前記フィブロイン多孔質シートにおいて、以下の式（１）で示される正の厚さばらつき及び以下の式（２）で示される負の厚さばらつきが、いずれも１５％以内である、請求項１〜４のいずれか１項に記載のフィブロイン多孔質シートの製造方法。
正の厚さばらつき（％）＝｛（厚さの最大値（ｍｍ））／（厚さの平均値（ｍｍ））×１００｝−１００  ・・・（１）
負の厚さばらつき（％）＝１００−｛（厚さの最小値（ｍｍ））／（厚さの平均値（ｍｍ）×１００｝  ・・・（２）
【請求項６】
色差が０．５０〜７．９４である、請求項３〜５のいずれか１項に記載のフィブロイン多孔質シートの製造方法。
【請求項７】
単位厚さあたりの色差が２．１〜７．８である、請求項３〜６のいずれか１項に記載のフィブロイン多孔質シートの製造方法。
【請求項８】
前記フィブロインがシルクフィブロインである、請求項１〜７のいずれか１項に記載のフィブロイン多孔質シートの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、フィブロイン多孔質シート、医療用シート、創傷被覆材、及びフィブロイン多孔質シートの製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質、糖類等の生物由来物質を利用して作製される多孔質体は、エステティックサロン又は個人での使用による保湿等を目的とした化粧品及びエステ分野；創傷被覆材、薬剤徐放担体等の医療分野；紙おむつ、生理用品等の生活日用品分野；微生物、細菌等の住処になる支持体などとして活用し得る浄水分野；組織工学、再生医療工学等における細胞培養支持体（足場材料）及び組織再生支持体など、産業上幅広い分野で利用可能である。【０００３】
多孔質体を構成する生体由来物質として、セルロース、キチン等の糖類、コラーゲン、ケラチン、シルクフィブロイン等のタンパク質群が知られている。これらの中で、フィブロイン、特にシルクフィブロインは、原料の安定供給及び価格の安定性に優れるため、工業的に利用される。さらに、衣類用途以外に、手術用縫合糸として長く使用されてきた実績があり、近年、食品及び化粧品の添加物としても利用されている。シルクフィブロインは人体に対する安全性にも問題が無いことから、多孔質体の利用分野への使用が検討されている。【０００４】
シルクフィブロイン多孔質体を作製する手法に関しては、いくつか報告がある。例えば、シルクフィブロイン水溶液を急速冷凍した後、結晶化溶媒に浸漬し、融解と結晶化を同時進行することによって得る方法（特許文献１参照）、シルクフィブロイン水溶液を冷凍した後に長時間凍結状態を維持することで多孔質体を作製する手法（特許文献２参照）、シルクフィブロイン水溶液に対して少量の水溶性有機溶媒を添加した後に、一定時間冷凍して融解することによってシルクフィブロイン多孔質体を得る手法（特許文献３及び非特許文献１参照）等が知られている。また、特許文献３の手法を用いて、容器内壁に紙のような多孔質な素材を使用することで、吸水性に優れる均質な構造の多孔質体が得られるとの報告がある（特許文献４参照）。さらに、スライス装置を用いてシルクフィブロイン多孔質体を加工した例の報告がある（特許文献５参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平８−４１０９７号公報
【特許文献２】特開２００６−２４９１１５号公報
【特許文献３】特許第３４１２０１４号公報
【特許文献４】特開２００８−２５５２９８号公報
【特許文献５】特開２０１２−８２２４６号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，６，ｐ．３１００−３１０６（２００５）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
特許文献１〜３に記載の手法によって作製した多孔質体は、表面に非多孔皮膜を有するため、吸水速度に改善の余地があった。
また、特許文献４に記載の手法によって作製した多孔質体は、多孔質体表面に形成される非多孔皮膜の一部が容器表面の多孔質な素材によって剥離されるものの、表面に形成される非多孔皮膜を完全に除去することはできず、また、容器表面の多孔質な素材とシルクフィブロイン多孔質体とが強固に固着するため、薄い（例えば、厚さ２．５ｍｍ以下、好ましくは厚さ１ｍｍ以下の）シルクフィブロイン多孔質体を作製する場合には、容器から破らずに取り出すことが困難であるという課題があった。
さらに、特許文献５には、作製した多孔質体をスライス装置で加工した例について記載があるが、含水状態での加工では加工精度が悪く、また、２５％圧縮硬さが２００ｋＰａ〜８００ｋＰａのような柔軟な多孔質体の場合には、薄い（例えば、厚さ２．５ｍｍ以下、好ましくは厚さ１ｍｍ以下の）シートへの加工は極めて困難であるという課題があった。
また、例えば創傷被覆材用途等においては、薄いシートの場合においても、十分な吸水速度及び保水性が求められる。
そこで、本発明は、シートの少なくとも一方の表面が全面にわたり非多孔皮膜を有さない、薄く、吸水速度、保水性及び密着性に優れるフィブロイン多孔質シート、該フィブロイン多孔質シートを用いてなる医療用シート、該フィブロイン多孔質シートを用いてなる創傷被覆材、及び該フィブロイン多孔質シートの製造方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、前記課題を達成するために鋭意研究を重ねた結果、下記の発明により当該課題を解決できることを見出した。
すなわち、本発明は下記［１］〜［１６］に関するものである。
［１］シートの少なくとも一方の表面が全面にわたり非多孔皮膜を有さない、２５％圧縮硬さが２００ｋＰａ〜８００ｋＰａであり、厚さが０．２５ｍｍ〜２．５ｍｍのフィブロイン多孔質シート。
［２］厚さが０．２５ｍｍ〜１ｍｍである、上記［１］に記載のフィブロイン多孔質シート。
［３］シートの両表面が全面にわたり非多孔皮膜を有さない、上記［１］又は［２］に記載のフィブロイン多孔質シート。
［４］全面にわたり非多孔皮膜を有さない表面において、孔の面積比率が６０％〜９９％である、上記［１］〜［３］のいずれかに記載のフィブロイン多孔質シート。
［５］シートの面積が１５ｃｍ２〜１２００ｃｍ２である、上記［１］〜［４］のいずれかに記載のフィブロイン多孔質シート。
［６］以下の式（１）で示される正の厚さばらつき及び以下の式（２）で示される負の厚さばらつきが、いずれも１５％以内である、上記［１］〜［５］のいずれかに記載のフィブロイン多孔質シート。
正の厚さばらつき（％）＝｛（厚さの最大値（ｍｍ））／（厚さの平均値（ｍｍ））×１００｝−１００  ・・・（１）
負の厚さばらつき（％）＝１００−｛（厚さの最小値（ｍｍ））／（厚さの平均値（ｍｍ）×１００｝  ・・・（２）
［７］水酸基含有化合物を含む、上記［１］〜［６］のいずれかに記載のフィブロイン多孔質シート。
［８］前記水酸基含有化合物がグリセリンである、上記［７］に記載のフィブロイン多孔質シート。
［９］色差が０．５０〜７．９４である、上記［２］〜［８］のいずれかに記載のフィブロイン多孔質シート。
［１０］単位厚さあたりの色差が２．１〜７．８である、上記［２］〜［９］のいずれかに記載のフィブロイン多孔質シート。
［１１］前記フィブロインがシルクフィブロインである、上記［１］〜［１０］のいずれかに記載のフィブロイン多孔質シート。
［１２］上記［１］〜［１１］のいずれかに記載のフィブロイン多孔質シートを用いてなる、医療用シート。
［１３］上記［１］〜［１１］のいずれかに記載のフィブロイン多孔質シートを用いてなる、創傷被覆材。
［１４］２５％圧縮硬さが２００ｋＰａ〜８００ｋＰａである乾燥フィブロイン多孔質体を圧縮率７％〜４０％で圧縮し、バンドソーでスライスすることを特徴とするフィブロイン多孔質シートの製造方法。
［１５］前記乾燥フィブロイン多孔質体が水酸基含有化合物を２０質量％〜６０質量％含有する、上記［１４］に記載のフィブロイン多孔質シートの製造方法。
［１６］前記乾燥フィブロイン多孔質体がシルクフィブロイン多孔質体である、上記［１４］又は［１５］に記載のフィブロイン多孔質シートの製造方法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明に係る多孔質シートは、２５％圧縮硬さが２００ｋＰａ〜８００ｋＰａであって柔軟であるにも関わらず、作製が困難である厚さ０．２５ｍｍ〜２．５ｍｍの薄いシートとなっており、且つ、シートの少なくとも一方の表面が全面にわたり非多孔皮膜を有さない。そのため、薄いながらも、吸水速度及び保水性に優れ、且つ密着性にも優れる。さらに、本発明に係る多孔質シートは、吸水時の透明性に優れるものも含まれる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】多孔質体のスライスに使用するスライス装置の一例である。
【図２】多孔質体のスライスに使用する他のスライス装置の一例である。
【図３】圧縮率を示す図である。
【図４】上ロールとバンドソーの高さ距離を示す図である。
【図５】厚さの測定点を示す図である。
【図６】シルクフィブロイン多孔質体の表面の非多孔皮膜の電子顕微鏡写真である。
【図７】スライス加工により表面の非多孔皮膜が切除されたシルクフィブロイン多孔質体のスライス面の電子顕微鏡写真である。
【図８】比較例１２の厚さ測定点を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
（フィブロイン多孔質シート）
本発明に係るフィブロイン多孔質シートは、シートの少なくとも一方の表面が全面にわたり非多孔皮膜を有さない、２５％圧縮硬さが２００ｋＰａ〜８００ｋＰａであり、厚さが０．２５ｍｍ〜２．５ｍｍのフィブロイン多孔質シートである。シートの両表面、すなわち表面と裏面の両方が全面にわたり非多孔皮膜を有さないことが好ましい。ここで、「全面にわたり非多孔皮膜を有さない」とは、着目する表面の任意の縦５ｃｍ×横５ｃｍにおいて、縦横に２５分割したときに、いずれの区画においても孔が存在する状態を言う。
シートの少なくとも一方の表面が全面にわたり非多孔皮膜を有さないため、吸水速度及び保湿性に優れ、また厚さが０．２５〜２．５ｍｍと薄いため、密着性に優れる。特に、厚さが１ｍｍ以下であると、吸水時の透明性に優れる。なお、２５％圧縮硬さを８００ｋＰａ以下にして柔軟性を付与することにより、加工し難くなるため、通常は厚さを２．５ｍｍ以下にすることが困難となるが、本発明では両者を両立させている。
通常、フィブロイン多孔質体はその表面の全面に非多孔皮膜を有するが、上述のように本発明のフィブロイン多孔質シートは、シートの少なくとも一方の表面が全面にわたり非多孔皮膜を有さない。本発明のフィブロイン多孔質シートを製造する方法については、後に詳述するが、例えば、水酸基含有化合物を含む乾燥フィブロイン多孔質体を加工することで得られる。
【００１２】
本発明のフィブロイン多孔質シートの厚さは０．２５ｍｍ〜２．５ｍｍである。シートの厚さが０．２５ｍｍ以上であれば、シルクフィブロイン多孔質シートの強度が足りてハンドリングが可能となり、また、加工することも可能となる。一方、シートの厚さが２．５ｍｍ以下であれば、密着性に優れ、特に１ｍｍ以下であれば、吸水時の透明性にも優れる。同様の観点から、フィブロイン多孔質シートの厚さは０．２５ｍｍ〜２．０ｍｍが好ましく、０．２５ｍｍ〜１ｍｍがより好ましく、０．４ｍｍ〜０．８ｍｍがさらに好ましい。
【００１３】
本発明のフィブロイン多孔質シートの全面にわたり非多孔皮膜を有さない表面において、細孔の面積比率は好ましくは６０％〜９９％、より好ましくは８０％〜９９％、さらに好ましくは８５％〜９８％である。細孔の面積比率が６０％以上であることにより、吸水速度、保水性及び密着性が十分となる傾向にあり、９９％以下であることにより、十分な保水性を保持できる傾向にある。なお、該面積比率は、走査型電子顕微鏡写真を、画像解析ソフトＩｍａｇｅＪ（アメリカ国立衛生研究所製）を用いて画像処理することで測定したものである。
また、フィブロイン多孔質シートが有する細孔の大きさ（平均細孔径）は、好ましくは１μｍ〜３００μｍ、より好ましくは５μｍ〜２００μｍ、さらに好ましくは１０μｍ〜１００μｍ、特に好ましくは１５μｍ〜５０μｍである。
さらに、空孔率は、好ましくは８０％以上であり、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上である。ここで、空孔率は、次のようにして得られる値である。まず、得られた多孔質体を純水中に１日静置し完全に吸水させ、秤量した後（湿潤質量）、凍結乾燥して多孔質体中の水分を完全に除去し、再度秤量する（乾燥質量）。次いで、水の密度を１ｇ／ｃｍ3、フィブロインの密度を１．２ｇ／ｃｍ3、含水状態のフィブロイン多孔質体の密度を１ｇ／ｃｍ3と仮定し、次式に従って得られる値をシルクフィブロイン多孔質体の空孔率とした。
空孔率＝{（湿潤質量−乾燥質量／１．２）／湿潤質量}×１００
【００１４】
また、本発明のフィブロイン多孔質シートの面積については、用途に応じて適宜決定することができ、特に制限はないが、１５ｃｍ２〜１２００ｃｍ２であることが好ましい。この範囲であると、フェイスマスク、アイマスク、創傷被覆材等の各用途に使用し易くなる。以上の観点から、フィブロイン多孔質シートの面積は１５ｃｍ２〜１０００ｃｍ２であることがより好ましい。
なお、このようなサイズで０．２５ｍｍ〜２．５ｍｍのような薄いフィブロイン多孔質シートを、厚さのばらつきを抑えて加工することは、フィブロイン多孔質体の加工し難さも相まって通常の方法では困難であり、後に詳述する方法によって加工することで初めて達成されたものである。
【００１５】
本発明のフィブロイン多孔質シートの正の厚さばらつき及び負の厚さばらつきは、いずれも１５％以内であることが好ましく、１０％以内であることがより好ましい。なお、厚さばらつきは、以下の方法により決定される。
（厚さばらつき）
図５に示すようにシートの１２点の厚さを測定し、その最大値、最小値、平均値から厚さのばらつきを次式に従って算出した。
正の厚さばらつき（％）＝｛（厚さの最大値（ｍｍ））／（厚さの平均値（ｍｍ））×１００｝−１００  ・・・（１）
負の厚さばらつき（％）＝１００−｛（厚さの最小値（ｍｍ））／（厚さの平均値（ｍｍ）×１００｝  ・・・（２）
これらの厚さばらつきは、小さい方が好ましいが、特に１５％以下であると、加工時に薄くなった部分が破断しにくいという利点がある。また、厚い箇所の密着性が低くなりにくく、装着時に剥がれにくいという利点がある。以上の観点から、厚さばらつきは、１０％以下であることがさらに好ましい。
厚さばらつきの下限値については、上述のように小さいほど好ましいが、製造上、１％程度である。
【００１６】
本発明のフィブロイン多孔質シートは、水酸基含有化合物を含むことが好ましい。水酸基含有化合物を、後に詳述するフィブロイン多孔質シートの製造過程で含有させることにより、凍結乾燥による割れの発生を抑制すると共に、ある程度の柔軟性を付与することで加工時の割れを抑制し、また、２５％圧縮硬さが２００ｋＰａ〜８００ｋＰａのシートを得ることができる。
【００１７】
上記水酸基含有化合物としては、１分子当り１つ以上の水酸基を有するものであればよく、１分子当り１〜１０の水酸基を有するものが好ましく、１分子当り１〜４の水酸基を有するものがより好ましく、１分子当り２〜４の水酸基を有するものがさらに好ましい。
また、水酸基含有化合物の分子量は、１０００以下であることが好ましく、８００以下あることがさらに好ましく、５００以下であることがより好ましく、２００以下であることがさらに好ましく、１５０以下であることが特に好ましい。一方、水酸基含有化合物の分子量の下限値に特に制限はないが、３０以上であることが好ましく、５０以上であることがより好ましく、７０以上であることがさらに好ましい。
【００１８】
水酸基含有化合物の具体例としては、例えば、グリセリン、ポリグリセリン、ポリエチレングリコール、クエン酸トリエチル、乳酸、ポリビニルアルコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、アルコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル等が挙げられる。このうち、１種を単独で使用、又は２種以上を併用することができる。
これらの中でも、ハンドリング性、スライス加工性及び安全性の観点から、グリセリン、ポリエチレングリコール、クエン酸トリエチル、ポリグリセリン、乳酸、プロピレングリコール、ブチレングリコールが好ましい。特に、グリセリンは肌を保湿する効果があるため、スキンケア材料及び創傷被覆材等の肌に貼付して使用する用途において、より好ましい。
【００１９】
本発明のフィブロイン多孔質シートの色差に特に制限はないが、色差は０．５０〜７．９４であることが好ましい。該色差は、実施例に記載の測定方法により求めた値である。当該色差が０．５０以上であると、シートを視認し易い点で有利であり、色差が７．９４以下であると、肌に貼付した際に色の変化が小さいため、顔、腕又は足等に装着した際の違和感を緩和し易い点で有利である。以上の観点から、フィブロイン多孔質シートの色差は、０．５〜５．０であることがより好ましく、０．８〜５．０であることがさらに好ましい。
また、単位厚さ当たりの色差に特に制限はないが、２．１／ｍｍ〜７．８／ｍｍであることが好ましい。単位厚さ当たりの色差が２．１／ｍｍ以上であると、シートを視認し易い点で有利であり、７．８／ｍｍ以下であると、肌に貼付した際に色の変化が小さいため、顔、腕又は足等に装着した際の違和感を緩和し易い点で有利である。以上の観点から、単位厚さ当たりの色差が、２．１／ｍｍ〜５．０／ｍｍであることがより好ましく、２．５／ｍｍ〜５．０／ｍｍであることがさらに好ましい。
【００２０】
本発明のフィブロイン多孔質シートを構成するフィブロインは、優れた吸水速度、優れた保水性、柔軟性、肌触り等の質感が得られる点から、シルクフィブロインであることが好ましい。
【００２１】
（フィブロイン多孔質シートの製造方法）
本発明のフィブロイン多孔質シートは、フィブロイン多孔質体を加工することで得られる。具体的には、２５％圧縮硬さが２００ｋＰａ〜８００ｋＰａである乾燥フィブロイン多孔質体を圧縮率７％〜４０％で圧縮し、バンドソーでスライスすることで得られる。以下、フィブロイン多孔質シートの製造方法について、より詳細に説明する。
【００２２】
＜フィブロイン多孔質体＞
フィブロイン多孔質体は、フィブロインにより構成される多孔質体であれば特に制限はなく、優れた吸水速度、優れた保水性、柔軟性、肌触り等の質感を得る観点から、シルクフィブロイン多孔質体であることが好ましい。
フィブロイン多孔質体は、例えば、フィブロイン水溶液に、カルボン酸類、アミノ酸、水溶性液状有機物質等の添加剤を添加したフィブロイン水溶液を凍結して凍結体を得て、次いで該凍結体中の凍結した水分を融解して得る手法が挙げられる。この手法によれば、形状安定性及び強度に優れるフィブロイン多孔質体が得られる傾向がある。
【００２３】
フィブロインとしては、例えば家蚕、野蚕、天蚕等の天然蚕、トランスジェニック蚕等から産生されるシルクフィブロイン等が挙げられる。特に製造工程の簡便性を考え、家蚕の繭から得られるシルクフィブロインが好ましい。以下、シルクフィブロインを例にとって説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００２４】
（シルクフィブロイン多孔質体）
シルクフィブロイン多孔質体の原料として用いられるシルクフィブロインは、上述のように、家蚕、野蚕、天蚕等の蚕から産生されるものであればいずれでもよく、その製造方法も問わない。シルクフィブロイン多孔質体は、シルクフィブロイン溶液から得られるが、水に溶解させる場合、シルクフィブロインは水に対する溶解性が低く、直接水に溶解することは困難である。シルクフィブロイン水溶液を得る方法としては、公知のいかなる手法を用いてもよいが、高濃度の臭化リチウム水溶液にシルクフィブロインを溶解後、透析による脱塩、風乾による濃縮を経る手法が簡便である。
【００２５】
本発明で用いられるシルクフィブロイン多孔質体は、その製造方法は問わないが、再現性や得られる多孔質体の強度の高さから、シルクフィブロイン水溶液に特定の添加剤を加えて、該水溶液を凍結させ、次いで融解させることにより製造することが好ましい。
シルクフィブロイン多孔質体の製造において、シルクフィブロインの濃度は、シルクフィブロイン溶液中で１〜１０質量／体積％であることが好ましく、１．５〜８質量／体積％であることがより好ましく、２．０〜６質量／体積％であることがさらに好ましい。この範囲内に設定することで、十分な強度を持ち、かつ、スライス加工時に割れにくいシルクフィブロイン多孔質体を効率的に製造することができる。
【００２６】
＜添加剤＞
添加剤としては、カルボン酸類、アミノ酸、水溶性液状有機物質等が挙げられる。これらの添加剤は、１種を単独で使用、又は２種以上を併用することもできる。
【００２７】
前記カルボン酸類は、少なくとも分子中に一つのカルボキシ基を有する有機酸であれば特に制限はなく、例えば、モノカルボン酸、ジカルボン酸、トリカルボン酸等が挙げられる。また、ｐＫａが、５．０以下のものが好ましく、３．０〜５．０のものがより好ましく、３．５〜５．０のものがさらに好ましい。
カルボン酸類としては、脂肪族カルボン酸が好ましく、例えば、炭素数１〜６の飽和又は不飽和の、モノカルボン酸、ジカルボン酸、トリカルボン酸を好ましく用いることができる。具体的には、蟻酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、コハク酸、乳酸、アクリル酸、２−ブテン酸、３−ブテン酸等が挙げられる。これらの脂肪族カルボン酸は、１種を単独で使用、又は２種以上を併用することができる。これらの中でも、人体への安全性の観点から、酢酸、乳酸、コハク酸がより好ましく、酢酸がさらに好ましい。
【００２８】
前記アミノ酸としては、特に制限はなく、例えば、バリン、ロイシン、イソロイシン、グリシン、アラニン、セリン、スレオニン、メチオニン等のモノアミノカルボン酸；アスパラギン酸、グルタミン酸等のモノアミノジカルボン酸（酸性アミノ酸）などの脂肪族アミノ酸が挙げられる。また、フェニルアラニン等の芳香族アミノ酸、ヒドロキシプロリン等の複素環を有するアミノ酸なども挙げられる。これらの中でも、形状の調整の容易性の観点から、酸性アミノ酸、並びにヒドロキシプロリン、セリン及びスレオニン等のオキシアミノ酸が好ましい。
同様の観点（形状の調整が容易）から、酸性アミノ酸の中でもモノアミノジカルボン酸がより好ましく、アスパラギン酸やグルタミン酸が特に好ましく、オキシアミノ酸の中でもヒドロキシプロリンがより好ましい。これらのアミノ酸は、１種を単独で使用、又は２種以上を併用することができる。
なお、アミノ酸には、Ｌ型とＤ型の光学異性体があるが、Ｌ型とＤ型を用いた場合に、得られる多孔質体に違いが見られないため、どちらのアミノ酸を用いてもよい。
【００２９】
前記水溶性液状有機物質は、常温（２０℃）で液状であり、常温（２０℃）で水と混合した際に、分離せずに溶解又は混和するものをいう。水溶性液状有機物質としては、例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ブタノール等のアルコール類；グリセリン、プロピレングリコール等の多価アルコール類；ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）；ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）；ピリジン；アセトン；アセトニトリルなどが好ましく挙げられる。これらは１種を単独で使用、又は２種以上を併用することができる。これらの中でも、人体に対する安全性の観点から、エタノール、ジメチルスルホキシド、グリセリン、アセトンを使用することが好ましい。
【００３０】
シルクフィブロイン水溶液に添加剤を用いる場合の添加剤の含有量は、０．１〜１８体積％であることが好ましく、０．１〜５．０体積％であることがより好ましく、０．５〜４．０体積％であることがさらに好ましい。この範囲内に設定することで、十分な強度を持った多孔質体を製造し易くなる傾向にある。
また、アミノ酸の含有量は、シルクフィブロイン１００質量部に対して、１〜５００質量部であることが好ましく、５〜５０質量部であることがより好ましく、１０〜３０質量部であることがさらに好ましい。
【００３１】
前記添加剤が加えられたシルクフィブロイン多孔質体は、前記添加剤が加えられたシルクフィブロイン溶液を型あるいは容器に流し込み、低温恒温槽中に入れて凍結させ、次いで融解することによって製造することができる。凍結温度は、添加剤を含有させたシルクフィブロイン溶液が凍結する温度であれば特に制限されないが、−３０℃〜−１０℃が好ましく、−２５℃〜−１５℃がより好ましい。また、凍結時間は、十分に凍結し、かつ凍結状態を一定時間保持できるよう、所定の凍結温度で４時間以上であることが好ましい。
なお、凍結の方法としては、シルクフィブロイン溶液を一気に凍結温度まで下げて凍結してもよいが、一旦、−５℃程度に２時間程度保持して過冷却状態とし、その後、凍結温度まで下げて凍結することが、力学的強度の高い多孔質体を得る上で好ましい。また、−５℃から凍結温度までにかける時間を調整することで、多孔質体の構造や強度をある程度制御することが可能である。
その後に、凍結したシルクフィブロイン溶液を、融解することによってシルクフィブロイン多孔質体が得られる。融解の方法は特に制限はなく、自然融解、恒温槽内に保持する方法等が挙げられる。
【００３２】
こうして得られたシルクフィブロイン多孔質体には添加剤が含まれるが、用途に応じて、添加剤を除去する必要がある場合には、適当な方法でシルクフィブロイン多孔質体から添加剤を除去して用いることができる。たとえば、シルクフィブロイン多孔質体を、純水又は超純水中に浸漬して、添加剤を除去することが最も簡便な方法として挙げられる。
【００３３】
シルクフィブロイン多孔質体は、スポンジ状の多孔質構造を有しており、通常、このシルクフィブロイン多孔質体には乾燥により水除去を行わなければ水が含まれ、含水状態で柔軟な構造物である。
一方、シルクフィブロイン多孔質体を乾燥することにより、シルクフィブロイン多孔質体の乾燥品を得ることができる。乾燥方法に特に制限はないが、乾燥に伴う収縮を抑制する観点から、凍結乾燥が好ましい。凍結乾燥を行う場合、水分を完全に昇華させずに乾燥を終えると、残った水分の表面張力の影響で空孔が潰れてしまうため、水分が完全に昇華するまで乾燥することが好ましい。
【００３４】
＜水酸基含有化合物の導入＞
上記凍結乾燥を行う前にシルクフィブロイン多孔質体に前記水酸基含有化合物を含有させることが好ましい。前記水酸基含有化合物を含有させることで、凍結乾燥による割れの発生を抑制すると共に、ある程度の柔軟性を付与することで加工時の割れを抑制し、また、２５％圧縮硬さが２００ｋＰａ〜８００ｋＰａの柔軟なシートを得ることができる。
上記のような手法で乾燥することで、スライス加工に適した硬さのシルクフィブロイン多孔質体が得られる。一方、濡れた状態では加工の際に軟らかすぎるため加工精度が低くなる傾向にあり、スライス刃に当てるためにシルクフィブロイン多孔質体を押さえる際に、シルクフィブロイン多孔質体内部の水が搾り出されて潰れてしまうため加工が難しくなる傾向にある。
なお、水や美容液等で濡れた状態のシルクフィブロイン多孔質シートが必要な場合には、加工後に水や美容液等に浸漬することで簡単に濡れた状態とすることもできる。
【００３５】
シルクフィブロイン多孔質体に前記水酸基含有化合物を含有させる方法は特に限定されず、シルクフィブロイン多孔質体を製造する際に、シルクフィブロイン溶液に配合する方法や、シルクフィブロイン多孔質体作製後に、その全体が浸る程度の水酸基含有化合物を含む溶液に浸漬させてもよい。浸漬時間も特に限定はないが、浸漬時間が短いと、シルクフィブロイン多孔質体中に導入される水酸基含有化合物の量が少ない、又はシルクフィブロイン多孔質体内での場所による濃度のばらつきが出る等の問題が発生する可能性がある。
【００３６】
水酸基含有化合物を含むシルクフィブロイン多孔質体中、前記水酸基含有化合物の含有率は２０〜６０質量％であることが好ましく、２５〜５０質量％であることがより好ましく、２５〜４５質量％であることがさらに好ましい。上記範囲に水酸基含有化合物濃度を設定することで、柔軟性、加工性、ハンドリング性に優れるシルクフィブロイン多孔質材料を得易くなる傾向にある。より具体的には、２０質量％以上であると、柔軟性に優れ、乾燥時に割れにくく、脆くなることがなく、スライス加工時に割れにくく、また優れたハンドリング性が得られる傾向にある。一方、６０質量％以下であると、適度な柔軟性に抑えることができ、凍結乾燥前後での収縮が小さく、多孔質材料の表面のタックが良好であり、スライス加工時にロールに巻きつきにくく、優れたハンドリング性が得られる傾向にある。
また、上記範囲において、水酸基含有化合物濃度を変化させることで、得られる多孔質材料の硬さを調節することができる。例えば、水酸基含有化合物の濃度が２０質量％の多孔質材料と４０質量％の多孔質材料を比較すると、４０質量％の多孔質材料の方が柔軟である。
【００３７】
シルクフィブロイン多孔質体は、シルクフィブロイン多孔質体作製時の型や容器を適宜選択することにより、フィルム状、シート状、ブロック状、管状、球状等、目的に応じた形状とすることができる。スライス加工のし易さから、凹凸の無いシート状のものを使用することが好ましい。型や容器としては、シルクフィブロイン溶液が流出しない形状及び形態のものであれば制限はなく、その素材としては、均一な構造のシルクフィブロイン多孔質体を得る観点から、鉄、ステンレス、アルミニウム、金、銀、銅等の熱伝導率が高い素材を用いることが好ましい。また、型や容器の壁の厚さは、その機能と凍結の際の膨張等による変形などを防止する観点から、０．５ｍｍ以上であることが好ましく、取り扱いが容易で、且つ冷却効率性の観点から、より好ましくは１〜３ｍｍである。
【００３８】
また、ここで用いられる型や容器は、シルクフィブロイン多孔質体の固着の予防を目的として、その内側のシルクフィブロイン溶液と接する内壁面に、離型層を設けることができる。
離型層には、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、テトラフルオロエチレン−ヘキサフルオロプロピレン共重合体（ＦＥＰ）、テトラフルオロエチレン−パーフルオロアルキルビニルエーテル共重合体（ＰＦＡ）等のフッ素樹脂からなるシート；ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリプロピレン（ＰＰ）等からなる離型処理されたシート；ＰＴＦＥ、ＦＥＰ、ＰＦＡ等のフッ素樹脂からなるコーティングなどが好ましく挙げられる。これらの離型層を用いた場合、シルクフィブロイン多孔質体を容器から容易に取り出すことができる。
また、離型層の厚さは、熱伝導を阻害し難い点から、１０００μｍ以下が好ましく、５００μｍ以下であることがより好ましく、２００μｍ以下であることがさらに好ましい。
【００３９】
シルクフィブロイン多孔質体に、上記した乾燥工程に次いで、スライス加工を施すことでシルクフィブロイン多孔質シートを得ることができる。
本発明のフィブロイン多孔質シートの製造に用いられるスライス加工の方法としては、例えば、図１に示すように、上下ロールで挟み込んだシルクフィブロイン多孔質体を、バンドソーにあててスライスする方法、図２に示すように、フィブロイン多孔質体を吸引チャック又は摩擦力等で固定し、水平方向に刃を動作させることでスライスする方法等が挙げられる。これらの方法でスライス加工を行うことで、薄く、密着性に優れるフィブロイン多孔質シートを厚さの精度良く得ることができる。また、厚さを１．０ｍｍ以下とすることにより、吸水時の透明性に優れるフィブロイン多孔質シートが得られる。
また、スライス加工においてシルクフィブロイン多孔質体の少なくとも一方の面、好ましくは全面に形成された非多孔皮膜を切除することが、吸水速度及び透明性の観点から好ましい。以下では図１に示した上下ロールで挟み込んだシルクフィブロイン多孔質体を、バンドソーにあててスライスする方法について具体的に記載する。
【００４０】
図１に示した上下ロールで挟み込んだシルクフィブロイン多孔質体を、バンドソーにあててスライスする装置は、上下方向の位置を調節可能な上下ロールの間に回転するバンドソーが設置されており、コンベアで搬送されたシルクフィブロイン多孔質体を上下ロールではさんで送り、回転するバンドソーに押し当てて切削することでフィブロイン多孔質シートを得ることができる。本装置は、上下ロールの位置を調節することで、任意の厚さのフィブロイン多孔質シートを得ることができる。また、好ましい圧縮率、及び上ロールとバンドソーの高さ距離に設定することで、薄く、密着性及び場合によっては吸水時の透明性にも優れるフィブロイン多孔質シートを厚さの精度良く得ることができる。
シルクフィブロイン多孔質シートの正の厚さばらつき及び負の厚さばらつきは、前述の通り、いずれも１５％以下であることが好ましく、１０％以下であることがより好ましい。好ましい硬さのシルクフィブロイン多孔質体を用いて、好ましい圧縮率、上ロールとバンドソーの高さ距離に設定してスライス加工することで、このような厚さのばらつきの小さいシルクフィブロイン多孔質シートが得られる。なお、圧縮率、及び上ロールとバンドソーの高さ距離は、それぞれ図３及び図４に示すように定義される。つまり、圧縮率は、シルクフィブロイン多孔質シートの厚さを「Ａ」、上ロールと下ロールの距離を「Ｂ」としたとき、（Ａ−Ｂ）／Ａ［但し、％表示する場合は、１００を乗ずる。］と定義される（図３参照）。また、上ロールとバンドソーの高さ距離は、上ロールと下ロールの最短距離を示す直線と、バンドソーの刃の先端の延長線との交点から上ロールまでの距離と定義される（図４参照）。
【００４１】
スライス加工に供するシルクフィブロイン多孔質体の硬さは、前述の通り、２５％圧縮硬さが２００ｋＰａ〜８００ｋＰａであり、２５０ｋＰａ〜８００ｋＰａであることが好ましく、３００ｋＰａ〜６００ｋＰａであることがより好ましい。２５％圧縮硬さが２００ｋＰａ以上であることにより、加工の精度が向上すると共に、２．５ｍｍ以下の厚さへのスライス加工をし易くなる。２５％圧縮硬さが８００ｋＰａ以下であることにより、スライス加工時に多孔質体が割れてしまうことを抑制でき、且つ十分な柔軟性を有することとなる。
なお、２５％圧縮硬さが上記範囲であるシルクフィブロイン多孔質体をスライス加工して得られる、シルクフィブロイン多孔質シートの２５％圧縮硬さは、同質の多孔質体で構成されているため、上記と同等の値となる。
【００４２】
スライス加工に供するシルクフィブロイン多孔質体の厚さに特に制限は無いが、１ｍｍ〜５０ｍｍであることが好ましく、２ｍｍ〜４０ｍｍであることがより好ましく、２．５ｍｍ〜２０ｍｍであることがさらに好ましい。この範囲の厚さの多孔質体を使用することで高い精度で加工することができる。
スライス加工に供するシルクフィブロイン多孔質体の形状に特に制限は無いが、シルクフィブロイン多孔質シートを得ることが目的の場合、平らな向かい合わせの２面を有する形状であることが好ましい。具体的には、直方体、立方体、円柱、三角柱等が挙げられる。
【００４３】
スライス加工における圧縮率は７〜４０％とし、１０〜４０％が好ましく、１０〜３０％がより好ましい。圧縮率は、下記の式の通り、スライス前のシルクフィブロイン多孔質体の厚さと、スライス機の上下ロールの設定距離から算出される。
圧縮率＝{（シルクフィブロイン多孔質体厚さ−上下ロール間距離）／シルクフィブロイン多孔質体厚さ}×１００
４０％を超える圧縮率でシルクフィブロイン多孔質体を圧縮すると、シルクフィブロイン多孔質体が上下ロールで潰されてしまい、形状を維持できない。また、７％未満の圧縮率でシルクフィブロイン多孔質体を圧縮すると、シルクフィブロイン多孔質体を上下ロールが挟みきれず、バンドソーにあたったシルクフィブロイン多孔質体がバンドソーの回転方向に流されてしまうためスライスできない。
【００４４】
上記の様に、例えばシルクフィブロイン多孔質体に水酸基含有化合物を含有させることで得られる適切な硬さ（２５％圧縮硬さ２００ｋＰａ〜８００ｋＰａ）の乾燥シルクフィブロイン多孔質体を使用して、圧縮率、及び上ロールとバンドソーの距離等を適宜調整した上記バンドソースライサーでスライス加工することで、初めて０．２〜２．５ｍｍのような薄い厚さを有し、少なくとも一方の面に非多孔皮膜を有しないシルクフィブロイン多孔質シートへの加工が可能となった。また、シート内での厚さのばらつきも適切な硬さの乾燥シルクフィブロイン多孔質体を使用して、圧縮率、及び上ロールとバンドソーの距離等を適切な値に設定することで最小限とすることができる。
【００４５】
スライス加工において上ロールとバンドソーの高さ距離は０．２ｍｍ〜１．０ｍｍであることが好ましく、０．２ｍｍ〜０．９ｍｍであることがより好ましい。この範囲に設定することで薄いシートを低い厚さばらつきでスライス加工することができる。
【００４６】
スライス加工によりシルクフィブロイン多孔質体表面の非多孔皮膜を切除するためには、シルクフィブロイン多孔質体の非多孔皮膜を有する表面の少なくとも１面を、好ましくは２面をスライス加工により切除することが必要である。シルクフィブロイン多孔質体の非多孔皮膜の切除を目的にスライス加工を行う際、切除する厚さは非多孔皮膜が除去可能な厚さであれば特に制限は無いが０．１ｍｍ〜２ｍｍであることが好ましく、０．２ｍｍ〜１．５ｍｍであることがより好ましく、０．３ｍｍ〜１ｍｍであることがさらに好ましい。
通常、シルクフィブロイン多孔質体は、その表面の全面に非多孔皮膜を有するが、該非多孔皮膜の除去は、その全てをスライス加工によって行う必要はない。例えば、直方体の向かい合わせの２面をスライス加工し、該非多孔皮膜を除去した後に、さらに打ち抜き加工又は手作業による切り出しを行うことで、全面の該非多孔皮膜が除去された、任意の形状のシルクフィブロイン多孔質シートを得ることもできる。
ただし、広い面を、加工精度良く打ち抜き加工又は手作業で加工することは困難なため、少なくとも２０ｃｍ２以上の面積の非多孔皮膜を除去する場合には、前記スライス加工で行うことが好ましい。また、加工の順番に特に制限は無く、例えば打ち抜き加工後に、スライス加工を行ってもよいし、その逆でもよい。
打ち抜き加工の方法に特に制限は無く、例えばトムソン刃を使用したハンドプレスや油圧プレスによる打ち抜きが挙げられる。
【００４７】
スライス加工を行う際、一つの多孔質体から作製するシートの枚数に特に制限はない。
例えば、シートの両表面が全面にわたり非多孔皮膜を有しないシルクフィブロイン多孔質シートであれば、一つのシルクフィブロイン多孔質体の全面から非多孔皮膜を切除して１枚のシルクフィブロイン多孔質シートを作製する方法を利用できる。また、厚さ１０ｍｍの直方体のシルクフィブロイン多孔質体の向かい合わせの２面を１ｍｍずつスライスし、非多孔皮膜を切除した後に、残された２面の非多孔皮膜を除去した厚さ８ｍｍの直方体のシルクフィブロイン多孔質体から１ｍｍのシルクフィブロイン多孔質シートを７回スライスして取ることで向かい合わせの２面が非多孔皮膜を有しない厚さ１ｍｍのシルクフィブロイン多孔質シートを８枚作製し、非多孔皮膜を切除した面からトムソン刃等で打ちぬき加工を行うことで全面に非多孔皮膜を有しない厚さ１ｍｍのシルクフィブロイン多孔質シート８枚を得る方法等が挙げられる。
また、このように一つのシルクフィブロイン多孔質体から複数枚のシルクフィブロイン多孔質シートを得る場合、そのスライス加工の順番に特に制限は無く、例えば上から順に１枚ずつスライス加工してもよいし、上下交互にスライス加工してもよい。
【００４８】
通常シルクフィブロイン多孔質体はその両面に非多孔皮膜を有するが、上記のようにスライス加工することでシートの両表面が全面にわたり非多孔皮膜を有しないことを特徴とするシルクフィブロイン多孔質シートを得ることができる。また、さらに打ち抜き加工を行うことで全面の非多孔皮膜が除去されたシルクフィブロイン多孔質シートを得ることができる。
また、通常、湿潤状態の多孔質体は柔軟性が高すぎるため薄いシートへの加工は困難であるが、水酸基含有化合物を含む乾燥シルクフィブロイン多孔質体であれば、スライスすることで厚さが０．２５ｍｍ〜２．５ｍｍという薄いシートへの加工が可能となる。また、このように薄いシート、特に厚さが１ｍｍ以下のシートは、吸水時の透明度が高く、透明性を活かすことのできる用途に好適に使用することができる。例えば、フェイスマスク、アイマスク等のスキンケア材料用途、創傷被覆材等の医療用途においては装着時にシートが目立たず、違和感がないため好ましい。
本発明のフィブロイン多孔質シートは、前述の通り薄いため、しなやかであり、創傷部に追従し易く、且つ指尖部等の曲率の高い曲面にも使用し易い。また、フィブロイン多孔質体の両表面に存在していた非多孔性皮膜を加工により除去しているため、薄いにも関わらず空孔が露出している。そのため、吸水速度が大きく、創傷部の浸出液を素早く吸収することができ、周囲の皮膚等を過度に浸軟させ難く、適度な湿潤環境を保つことができる。さらに、本発明のフィブロイン多孔質シートは保水性にも優れるため、薄くても多くの浸出液を保持することが可能である。よって、本発明は、本発明のフィブロイン多孔質シートを用いてなる医療用シートも提供する。また、本発明は、本発明のフィブロイン多孔質シートを用いてなる創傷被覆材をも提供する。
【００４９】
（医療用シート、創傷被覆材）
本発明の医療用シート及び創傷被覆材は、本発明のフィブロイン多孔質シートを用いてなるものである。
フィブロイン多孔質シートを創傷被覆材として用いる場合、創傷部に貼付することによる痛みの緩和に加え、傷口等から滲み出してくる滲出液を吸収して創傷面に保持し、該滲出液に含まれる成分を積極的に活用することで、創傷を治癒させる湿潤療法に活用し得るための保水性も望まれる。
本発明のフィブロイン多孔質シートは、柔軟性、肌触り等の質感の長所を損なうことなく、密着性に優れ、さらに吸水速度及び保水性にも優れる。
そのため、本発明の医療用シート及び創傷被覆材は、創傷部に貼付することによる痛みを緩和し、また、傷口等から滲み出してくる滲出液を吸収して創傷部に保持し、該滲出液に含まれる成分を積極的に活用し得る特性、腕や肘といった稼動部に用いる得る特性に優れており、湿潤療法にも好適に用いることができる。
【００５０】
本発明の医療用シート及び創傷被覆材は、吸水速度に優れた特性をいかし、薬剤を含ませることができる。薬剤を含ませることにより、本発明の医療用シート及び創傷被覆材に創傷の治癒を促進する機能を付与することができる。薬剤を含ませる場合、例えば、殺菌剤、抗生物質、生理活性物質等の薬剤を、本発明の医療用シート又は創傷被覆材に含浸又は塗布すればよい。これらの薬剤は、１種を単独で使用、又は２種以上を併用することができる。
【００５１】
本発明の医療用シート及び創傷被覆材は、本発明のフィブロイン多孔質シートを、ドレッシングフィルム、包帯、粘着テープ等で固定する態様とすることができる。
フィブロイン多孔質シートは、乾燥状態でも柔らかいため、そのまま医療用シート及び創傷被覆材として用いることもできるし、また保湿剤を含ませて医療用シート及び創傷被覆材として用いることもできる。該保湿剤としては、グリセリン、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール等が挙げられる。なお、保湿剤を含ませた医療用シート又は創傷被覆材の場合、使用直前まで、水分量を保った状態で、医療用シート又は創傷被覆材を密閉状態で保管しておき、乾燥を防ぐことが好ましい。
【００５２】
本発明の医療用シート及び創傷被覆材は、本発明のフィブロイン多孔質シートのみからなるものであることも好ましく、また、本発明のフィブロイン多孔質シートからなる多孔質層と、一方の面に細孔を有しないフィルム層からなるものであることも好ましい。その使用方法としては、創傷面に多孔質層（の非多孔皮膜を有さない面）が接し、創傷面とは反対側の対向面にフィルム層を有することが好ましい。このような創傷被覆材を湿潤療法に適用すると、創傷面からの滲出液を吸収及び保持することができ、該滲出液の蒸発や拡散を抑える効果があるためである。
さらに、前述したように、多孔質層中に薬剤を含ませることで、創傷の治癒を促進する機能を持たせることができる。例えば、殺菌剤、抗生物質、生理活性物質などを、多孔質層に含浸もしくは塗布することで、治癒を促進させることができる。これらの薬剤は、１種を単独で使用、又は２種以上を併用することができる。
なお、フィルム層の細孔の数は制御することができ、必要に応じて少量の細孔を有するフィルム層とすることもできる。
一方、フィルム層は、細孔が極めて少ないために、表面が平滑である。そのため、該フィルム層を創傷面側として使用することで、癒着を防止する機能を持たせることや、フィルム層の液透過性を制御することで薬剤の放出速度を制御することができる。
【００５３】
本発明の創傷被覆材が、前記多孔質層と、両面に細孔を有しないフィルム層とからなる場合には、上述のような創傷面からの滲出液を吸収する速度が低下する場合があるが、滲出液の蒸発を抑制する機能と、創傷面への癒着を防止する機能を有するものであり、有用である。
また、本発明の創傷被覆材が、多孔質層のみからなる場合には、創傷面からの滲出液が該多孔質層を通過して、反対側に滲出することが想定されるが、該創傷被覆材は、多孔質層自体も十分な保水性を有するため、本発明の効果を十分に奏するものであり、有用である。また、水分透過性の低いドレッシングフィルムを用いることでも蒸発を抑えることができる。
【実施例】
【００５４】
以下に、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明は、これらの実施例によってなんら限定されるものではない。
実施例１
（シルクフィブロイン溶液の調製）
シルクフィブロイン水溶液は、精練済み切繭（ながすな繭株式会社製）を９Ｍ臭化リチウム水溶液に溶解し、遠心分離で不溶物を除去したのち、超純水に対して透析を繰り返すことによって得た。得られたシルクフィブロイン水溶液を透析チューブ中で風乾し濃縮した。この濃縮液に添加剤として酢酸を添加し、シルクフィブロイン濃度が３質量／体積％、酢酸濃度が２体積％であるシルクフィブロイン溶液を調製した。【００５５】
（シルクフィブロイン多孔質体の製造）
このシルクフィブロイン溶液をアルミ板で作製した型（内側サイズ；４００ｍｍ×３００ｍｍ×１０ｍｍ）に流し込み、予め−５℃に冷却しておいた液冷式低温恒温槽（株式会社前川製作所製）に入れて−５℃で２時間静置した。冷媒としてはナイブラインＺ１（丸善石油化学株式会社製）を使用した。
その後−３℃／時間の速度で−２０℃まで冷却し、そのままの温度で５時間保持して凍結した。
凍結した試料を自然解凍で室温に戻してから、型から取り出し、超純水に浸漬し、超純水を１日２回、３日間交換することによって、使用した酢酸を除去した。【００５６】
（水酸基含有化合物（グリセリン）の導入）
上記のようにして作製したシルクフィブロイン多孔質体を１０Ｌの２体積％グリセリン水溶液中で９６時間静置した状態で浸漬させ、その後、これを凍結乾燥機「ＦＤ−５５０Ｐ」（型番、東京理化器械株式会社製）を使用して３日間凍結乾燥し、乾燥シルクフィブロイン多孔質体を得た。また、この乾燥シルクフィブロイン多孔質体の質量を測定した。
乾燥シルクフィブロイン多孔質体の水酸基含有化合物の濃度は、乾燥シルクフィブロイン多孔質体に導入された水酸基含有化合物量を水酸基化合物導入後の多孔質材料の乾燥質量で割ったものとし、以下の式で算出した。
{（水酸基化合物導入後の乾燥シルクフィブロイン多孔質体の質量）−（水酸基含有化合物未導入の乾燥シルクフィブロイン多孔質体の質量）}／（水酸基化合物導入後の乾燥シルクフィブロイン多孔質体の質量）【００５７】
（スライス加工）
上記のようにして作製したシルクフィブロイン多孔質体を、上下ロールの圧縮率を１５％、上ロールとバンドソーの高さ距離を０．６５ｍｍの条件に設定したバンドソースライサー「ＫＭＫ−０９−０００５−ＨＴ」（有限会社北島マシンナイフ製）を用いて、図１に示されるようにスライスし、該多孔質体の４００ｍｍ×３００ｍｍ面の１面の非多孔皮膜を除去した後、上下ロールの圧縮率を１０％、上ロールとバンドソーの高さ距離を０．２０ｍｍに設定し、非多孔皮膜を除去した面を再度バンドソースライサーでスライスし、シルクフィブロイン多孔質シートを得た。【００５８】
シルクフィブロイン多孔質シートの厚さ、大きさ、加工性及び２５％圧縮硬さの評価を下記の手法で行った。
（スライス可否）
設定した条件でスライスを行い、割れや巻きつき等の不具合が無くシートが得られた場合を可とし、割れが発生した場合を割れ、巻きつきが発生した場合を巻き、バンドソーの回転方向にシルクフィブロイン多孔質体が流れてスライスできない場合を流れとした。
（大きさ測定）
シルクフィブロイン多孔質シートの大きさを定規で測定したところ３８２ｍｍ×２８６ｍｍであり切削前のシルクフィブロイン多孔質体のサイズと同等であった。
（厚さ測定）
シルクフィブロイン多孔質シートの厚さはシックネスゲージ「５４７−３２１」（株式会社ミツトヨ製）で図４のようにシート内の１２ヶ所の厚さを測り、１２ヶ所の厚さの平均値をシルクフィブロイン多孔質シートの厚さとした。
（２５％圧縮硬さ）
フィブロイン多孔質シートについて、万能試験機「ＥＺ−（Ｎ）Ｓ」（型番、株式会社島津製作所製）を用い、ロードセルは５０Ｎ、治具として直径８ｍｍの円形の圧縮板を用いて、圧縮速度１ｍｍ／ｍｉｎ、室温２２℃の条件下で、材料の厚さの２５％を圧縮板で押し込んだときのロードを測定し、以下の式により算出した値を２５％圧縮硬さ（ｋＰａ）とした。
２５％圧縮硬さ（ｋＰａ）＝（材料の厚さの２５％を圧縮板で押し込んだときのロード（Ｎ）／圧縮板の面積（ｍｍ２））×１０００
（電子顕微鏡観察）
スライス加工前の非多孔皮膜及びスライス加工後の非多孔皮膜が除去された面の構造を、走査型電子顕微鏡を用いて観察した結果を図６及び図７に示す。走査型電子顕微鏡「ＸＬ３０−ＦＥＧ」（Ｐｈｉｌｉｐｓ社製）を使用して、低真空Ｐｔ蒸着モード、加速電圧１０ｋＶで測定を行った。図６及び図７より非多孔性皮膜がスライス加工により除去されていることが分かった。【００５９】
実施例２〜１４
容器に流し込むシルクフィブロイン溶液のシルクフィブロイン濃度、添加剤種類、容器サイズ、浸漬するグリセリン溶液の濃度、多孔質シートを作製する際のスライサーの設定（圧縮率及び上ロールとバンドソーの高さ距離）を第１表に記載のものに変えた以外は実施例１と同様にしてシルクフィブロイン多孔質シートを得た。【００６０】
【表１】
0006551403.tif 000002
【００６１】
対応する容器サイズは下記の通りである（縦×横×厚さ）。
※１：４００ｍｍ×３００ｍｍ×１０ｍｍ
※２：４００ｍｍ×３００ｍｍ×５ｍｍ
※３：４００ｍｍ×３００ｍｍ×２０ｍｍ
※４：１５０ｍｍ×５０ｍｍ×１０ｍｍ【００６２】
第１表の実施例１〜６より圧縮率及び上ロールとバンドソーの高さ距離を変えることで任意の厚さのシルクフィブロイン多孔質シートが得られることが分かった。
第１表の実施例７〜９よりシルクフィブロイン多孔質体の厚さ、大きさが異なっても同様に加工可能であることが分かった。
第１表の実施例１０〜１４より、水酸基化合物含有量（表中の浸漬するグリセリン濃度及び乾燥多孔質中のグリセリン質量比）や添加剤の種類、フィブロインの濃度等を変えても同様に加工可能であることが分かった。【００６３】
実施例１５
実施例１と同様の方法でシルクフィブロイン溶液の調製、シルクフィブロイン多孔質体の製造、水酸基含有化合物の導入を行い、得られた水酸基化合物を導入した乾燥シルクフィブロイン多孔質体を上下ロールの圧縮率を１５％、上ロールとバンドソーの高さ距離を０．４ｍｍの条件に設定したバンドソースライサー「ＫＭＫ−０９−０００５−ＨＴ」（有限会社北島マシンナイフ製）を用いて図１に示されるようにスライスし、該多孔質体の４００ｍｍ×３００ｍｍ面の１面の非多孔皮膜を除去した後、第２表に記載した条件で非多孔皮膜を除去した面をさらにスライス加工し、シルクフィブロイン多孔質シートを得た。【００６４】
実施例１６
実施例１５においてシルクフィブロイン多孔質シートを得る際に使用したシルクフィブロイン多孔質体の残りを使用して、第２表に記載の条件で実施例１５においてスライス加工した面に対してさらにスライス加工を行い、シルクフィブロイン多孔質シートを得た。【００６５】
実施例１７
実施例１６においてシルクフィブロイン多孔質シートを得る際に使用したシルクフィブロイン多孔質体の残りを使用して、第２表に記載の条件で実施例１６においてスライス加工した面に対してさらにスライス加工を行い、シルクフィブロイン多孔質シートを得た。【００６６】
実施例１８〜２３
実施例１６及び１７と同様に一つ前の実施例で用いたシルクフィブロイン多孔質体の残りを使用して、第２表に記載の条件でスライス加工を行い、シルクフィブロイン多孔質シートを得た。【００６７】
【表２】
0006551403.tif 000003
【００６８】
対応する容器サイズは下記の通りである（縦×横×厚さ）。
※１：４００ｍｍ×３００ｍｍ×１０ｍｍ
第２表の実施例１５〜２３より、１つのシルクフィブロイン多孔質体を繰り返しスライスすることで、１つのブロックから複数枚のシートを得られることが分かった。また、スライスを繰り返したシルクフィブロイン多孔質体からでも、上ロールとバンドソーの高さ距離を変えることで任意の厚さのシルクフィブロイン多孔質シートを得ることができることが分かった。【００６９】
実施例２４、比較例１〜５
浸漬するグリセリン溶液の濃度、スライサーの設定（圧縮率及び上ロールとバンドソーの高さ距離）を変更したこと以外は実施例１と同様にしてシルクフィブロイン多孔質シートの作製を試みた。結果を第３表に示す。【００７０】
比較例１より厚さ０．２ｍｍより薄い厚さへのスライスが困難であることが分かった。比較例２及び比較例３より適切な圧縮率に設定しない場合にはスライス加工できないことが分かった。比較例４においては作製したシルクフィブロイン多孔質体は乾燥後には既にクラックが入っており、スライス加工を行うとさらにそれが割れ、シートを得ることができなかったことから、水酸基含有化合物（グリセリン）を添加しない場合にはスライス加工で良好な多孔質シートを得ることができないことが分かった。比較例５より、水酸基含有化合物（グリセリン）を多量に添加してしまうと多孔質体がスライス加工時にロールに巻きついてしまいスライスできないことが分かった。【００７１】
比較例６
実施例１において、シルクフィブロイン多孔質シートに代えて、スパンレースコットン不織布（目付け３０ｇ／ｍ２、丸三産業株式会社製）を用いてシートを作製した。シート厚さは０．２４ｍｍとした。【００７２】
比較例７
実施例１において、シルクフィブロイン多孔質シートに代えて、スパンレースコットン不織布（目付け７０ｇ／ｍ２、丸三産業株式会社製）を用いてシートを作製した。シート厚さは０．４０ｍｍとした。【００７３】
【表３】
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【００７４】
※５：シルクフィブロイン多孔質体
※６：スパンレースコットン不織布（目付け３０ｇ／ｍ２）
※７：スパンレースコットン不織布（目付け７０ｇ／ｍ２）【００７５】
下記手法で実施例１〜６、実施例２４、比較例６及び７の透明感及び密着性を評価した結果を第４表に示す。
（透明性評価）
日本人肌標準色プレート（バイオスキンプレート（バイオカラー）、株式会社ビューラックス製）上に完全に吸水させたシルクフィブロイン多孔質シート（実施例１〜６及び実施例２４）及び比較例６及び７の不織布を載せ、色差計「ＣＭ−７００ｄ」（コニカミノルタ製）を用いて多孔質シート上からＳＣＥモードで色差ΔE*ab(D65)を測定した。基準色は上記日本人肌標準色プレートとした。透明性は基準色と比較した色差が小さいほど高い。また、単位厚さあたりの色差を下式で算出し、１０以下を透明であると規定した。
（単位厚さあたりの色差，ｍｍ−１）＝（色差ΔE*ab）／（厚さ，ｍｍ）【００７６】
（密着性評価）
シルクフィブロイン多孔質シート（実施例１〜６及び実施例２４）及び比較例６及び７の不織布を、下記使用方法で顔面に貼付した場合の密着性について、パネラー１０名（日本人男性５名及び日本人女性５名）により、下記評価基準により評価し、平均点（小数点以下は四捨五入した。）を求めた。
室温２３．６℃、相対湿度４０％の室内で完全に吸水させたシルクフィブロイン多孔質シート（実施例１〜６及び実施例２４）及び比較例６及び７の不織布を顔面に貼付し、動作前の密着性を評価した後に、「あいうえお」と言葉を発し、表情を変化させた後の密着性を評価した。評価の基準は下記の通りとした。
５点：密着感に大変優れ凹凸に沿って完全に密着する、また表情を変えてもよれない。
４点：密着感に優れ凹凸に沿って密着する、また表情を変えてもよれない。
３点：密着感に優れ凹凸に沿って密着するが、表情を変えるとよれる。
２点：密着感に劣り、凹凸部が浮き上がってしまう。
１点：密着感がなく、貼付が困難である。【００７７】
【表４】
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【００７８】
第４表より、厚さが０．２〜１ｍｍである実施例１〜６のシルクフィブロイン多孔質シートは、色差、単位厚さあたりの色差が小さいため透明であり、また実施例１〜６の単位厚さあたりの色差はいずれも１０ｍｍ−１以下であった。また、実施例１〜６のシルクフィブロイン多孔質体はフェイスマスク材料として広く使用されているコットン不織布と比較して単位厚さあたりの色差が低く、同一の厚さであれば透明であることが分かった。また実施例１〜６のシルクフィブロイン多孔質シート及び実施例２４のシルクフィブロイン多孔質シートは、比較例６及び７の不織布と比較して密着性に優れていることが分かった。【００７９】
比較例８
実施例１と同様の条件でシルクフィブロイン溶液を調製し、シルクフィブロイン多孔質体を製造した後に、水酸基含有化合物の導入及び凍結乾燥を行わずに、湿潤状態のままの多孔質体の実施例１と同様の条件でバンドソースライサーでの切削を試みたが、水分が絞られ、潰れた多孔質体が刃と下ロールの間を通過してしまい加工することができなかった。【００８０】
比較例９
比較例８と同様の操作で調製した湿潤状態のままの多孔質体をカッターで切削し、多孔質シートの作製を試みた。０．２５ｍｍ間隔で刃を当てて切削を試みたが、多孔質体がカッターを押し当てた際の圧で潰れて変形してしまう上、軟らかすぎて多孔質体が刃から逃げてしまうため、シート状に加工することは困難であった。【００８１】
比較例１０
比較例８と同様の操作で調製した湿潤状態のままの多孔質体をカッターで切削し、多孔質シートの作製を試みた。１ｍｍ間隔で刃を当てて切削を試みたが、多孔質体がカッターを押し当てた際の圧で潰れて変形してしまう上、軟らかすぎて多孔質体が刃から逃げてしまうため、シート状に加工することは困難であった。【００８２】
比較例８〜比較例１０より、湿潤状態の多孔質体を使用して１ｍｍ以下の多孔質シートに加工するのは困難であることが分かった。【００８３】
比較例１１
実施例１と同様の操作でシルクフィブロイン溶液の調製、シルクフィブロイン多孔質体の製造、水酸基含有化合物の導入、及び凍結乾燥を行い作製したシルクフィブロイン多孔質体をカッターで切削し、多孔質シートの作製を試みた。０．２５ｍｍ間隔で刃を当てて切削を試みたが、多孔質体がカッターを押し当てた際の圧で潰れて変形してしまう上、軟らかすぎて多孔質体が刃から逃げてしまうため、シート状に加工することは困難であった。【００８４】
比較例１２
実施例１と同様の操作でシルクフィブロイン溶液の調製、シルクフィブロイン多孔質体の製造、水酸基含有化合物の導入、凍結乾燥を行い作製したシルクフィブロイン多孔質体をカッターで切削し、多孔質シートの作製を試みた。１ｍｍ間隔で刃を当てて切削を試みた結果、約３ｃｍ×４ｃｍの大きさで厚さ約１ｍｍのシルクフィブロイン多孔質シートを得ることはできたが、それ以上の大きさのシートを得ることは厚さの精度が悪いため困難であった。【００８５】
比較例１１及び１２より適切な硬さのシルクフィブロイン多孔質体であればカッター等の簡便な手法で加工することは可能ではあるが、大きなサイズや厚さの精度の高いシルクフィブロイン多孔質シートを得ることは困難であることが分かった。【００８６】
下記手法で実施例１、実施例６及び比較例１２の厚さのばらつきを評価した結果を第５表に示す。なお、厚さのばらつきは明細書本文中に記載された方法により求めた。また、比較例１２で得られたシルクフィブロイン多孔質シートは不定形の上サイズが小さく１２点の測定が困難であったため図８のように５点の測定を行った。【００８７】
【表５】
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【００８８】
第５表よりカッターで切削したシルクフィブロイン多孔質シートは厚さのばらつきが大きいことが分かった。このことから適切な加工手法且つ適切な条件で適切な硬さのシルクフィブロイン多孔質体を加工することで初めて大面積且つ厚さのばらつきの小さいシルクフィブロイン多孔質シートが得られることが分かった。【００８９】
比較例１３
アルミ板で作製した型のサイズを４００ｍｍ×３００ｍｍ×１ｍｍとし、型の内壁に硬質ろ紙Ｎｏ．４Ａ（ＡＤＶＡＮＴＥＣ製）を貼り付けた以外は実施例１と同様にしてシルクフィブロイン溶液の調製、シルクフィブロイン多孔質体の製造を行った。
その結果、アルミ板で作製した型に貼り付けたろ紙とシルクフィブロイン多孔質体が強固に固着して剥がれず、強引に引き剥がそうとしても破片しか得られなかった。【００９０】
比較例１３より厚さが薄い場合、ろ紙を使用して表面の非多孔皮膜を除去することは困難であることが分かった。【００９１】
実施例２５
アルミ板で作製した型のサイズを１００ｍｍ×１００ｍｍ×６．０ｍｍとし、浸漬するグリセリン水溶液の濃度を３体積％とした以外は実施例１と同様にして乾燥シルクフィブロイン多孔質体を得た。
得られたシルクフィブロイン多孔質体をスライス加工し、厚さ３．０ｍｍのシルクフィブロイン多孔質シートを得た。このシルクフィブロイン多孔質シートを用いて、下記方法に従って吸水速度試験を行った。結果を第６表に示す。
（吸水速度試験）
多孔質材料の１００ｍｍ×１００ｍｍの面の中心付近にプッシュボタン式液体用微量体積計「ピペットマン  Ｐ−１０００」（Ｇｉｌｓｏｎ社製）を用いて超純水を１ｍＬ滴下し、吸収されるまでの時間を測定し、次式に従って吸水速度を算出した。測定は５回行い、その平均値を求めた。
吸水速度（μｌ／秒）＝純水滴下量（１０００μｌ）／吸水に要した時間（秒）【００９２】
比較例１４
アルミ板で作製した型のサイズを１００ｍｍ×１００ｍｍ×３．０ｍｍとし、浸漬するグリセリン水溶液の濃度を３体積％とした以外は実施例１と同様にして乾燥シルクフィブロイン多孔質体を得た。この乾燥シルクフィブロイン多孔質体を用いて、実施例２５と同様にして吸水速度試験を行った。結果を第６表に示す。【００９３】
比較例１５
アルミ板で作製した型のサイズを内径１００ｍｍ×１００ｍｍ×３．０ｍｍとし、得られたシルクフィブロイン多孔質体をグリセリン水溶液に浸漬しなかったこと以外は実施例１と同様にして乾燥シルクフィブロイン多孔質体を得た。この乾燥シルクフィブロイン多孔質体を用いて、実施例２５と同様にして吸水速度試験を行った。結果を第６表に示す。【００９４】
【表６】
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【００９５】
実施例２５、比較例１４及び１５の結果から、本発明の創傷被覆材は、通常、フィブロイン多孔質体の両表面に存在する非多孔性皮膜が加工により除去されているため、空孔が露出しており、吸液速度に優れることが分かった。【００９６】
実施例２６
実施例１と同様の操作でシルクフィブロイン多孔質シートを作製し、下記方法に従って保水性試験を行った。
その結果、保水率は１７１０％と大きく、多量の浸出液を吸収することができるため、創傷被覆材として有用であることが分かった。
（保水性試験）
乾燥シルクフィブロイン多孔質体を秤量後（この時の質量を「乾燥質量」とする）、超純水中に３０秒間浸漬した。次いで３０秒間空気中で保持し表面の水分を落として、再度秤量し（この時の質量を「湿潤質量」とする）、下式に従って保水率を算出した。
保水率（％）＝（湿潤質量（ｇ）−乾燥質量（ｇ））／乾燥質量（ｇ）
【産業上の利用可能性】
【００９７】
本発明のシルクフィブロイン多孔質シートは、エステティックサロン又は個人での使用による保湿等を目的とした化粧品及びエステ分野；フェイスマスク、アイマスク等のスキンケア分野；創傷被覆材、薬剤徐放担体、止血スポンジ等の医療分野；紙おむつ、生理用品等の生活日用品分野；微生物、細菌等の住処になる支持体などとして活用し得る浄水分野及び環境分野；組織工学、再生医療工学等における細胞培養支持体（足場材料）及び組織再生支持体など、種々の産業に適用が可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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