(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
0006513076.tif 000052
［式中、
Ｒ１は、ピリジル、チエニルまたはフェニルであり、ここで、該ピリジル、チエニルおよびフェニルは、各々独立して、置換可能な位置で、ヒドロキシおよびＣ１−６アルコキシからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つの基で置換されていてもよく；
Ｒ２は、水素原子、アミノ、独立して選択される１もしくは２個のＣ１−６アルキルで置換されるアミノ、ヒドロキシまたはＣ１−６アルコキシであり；
ＯＲ３はベンゼン環の３位に結合し、Ｒ３はフェニルであり、フェニル基の３位および／または４位が独立して、ハロゲン、ヒドロキシおよびＣ１−６アルコキシからなる群から選択される基で置換され；
Ｒ４は、水素原子、ハロゲン、アミノ、独立して選択される１もしくは２個のＣ１−６アルキルで置換されるアミノ、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ハロアルキルであり；
Ｒ６およびＲ７は、各々独立して、水素原子またはＣ１−４アルキルであり；
ｎは０〜４であり；
ｍは１であり；
ｐは１であり； 
ＸはＯであり；および
ＹはＣＨ２またはＮＨである］
で表される化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２】
式（Ｉ）：
【化２】
0006513076.tif 000053
［式中、
Ｒ１は、シクロヘキシル、テトラヒドロピラニルまたはフェニルであり、ここで、該シクロヘキシル、テトラヒドロピラニルおよびフェニルは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノおよびＣ１−６アルコキシからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つの基で置換されていてもよく；
Ｒ２は、水素原子、アミノ、独立して選択される１もしくは２個のＣ１−６アルキルで置換されるアミノ、ヒドロキシまたはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ３は、フェニルであり、フェニル基の３位および／または４位が独立して、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキルおよびＣ１−６アルコキシからなる群から選択される基で置換され；
Ｒ４は、水素原子、ハロゲン、アミノ、独立して選択される１もしくは２個のＣ１−６アルキルで置換されるアミノ、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ハロアルキルであり；
ＸはＯであるか、またはＲ２がアミノもしくは置換アミノでベンゼン環の２位に結合する場合は、ＸがＣＨとしてＲ２の窒素原子と結合してピロール環を形成してもよい］
で表される化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３】
Ｒ２がベンゼン環の２位に結合し、水素原子、アミノまたはヒドロキシであり；および
Ｒ４が水素原子、ハロゲンまたはアミノである、
請求項１または２記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項４】
Ｒ４が水素原子である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項５】
４−ヒドロキシ−Ｎ−（２−（７−（４−ヒドロキシフェノキシ）−１Ｈ−インドール−３−イル）エチル）ベンズアミド；
Ｎ−（３−（２，３−ジヒドロキシフェニル）−３−オキソプロピル）−４−（４−ヒドロキシフェノキシ）ベンズアミド；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−メトキシベンズアミド；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−メトキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−メトキシベンズアミド；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−メトキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−３−メトキシベンズアミド；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−アセトアミド；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−フルオロベンズアミド；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−シクロヘキサンカルボキサミド；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）−カルボキサミド；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−メトキシフェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−ヒドロキシフェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−メチルフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−（トリフルオロメチル）フェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（３，４−ジメトキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−アミノベンズアミド；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−アセチルアミノベンズアミド；
Ｎ−（２−（３−（４−メトキシフェノキシ）ベンゾイルアミノ）エチル）−４−ヒドロキシベンズアミド；
Ｎ−（２−（２−（４−メトキシフェノキシ）ベンゾイルアミノ）エチル）−４−ヒドロキシベンズアミド；
Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）−４−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニルアミノ）−４−オキソブタンアミド；
Ｎ−（３−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド；
Ｎ−（２−（３−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミノ）−２−オキシエチル）−４−ヒドロキシベンズアミド；
Ｎ−（３−（３−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド；
Ｎ−（４−（３−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミノ）−４−オキソブチル）−４−ヒドロキシベンズアミド；
Ｎ−（２−（２−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミノ）−２−オキソエチル）−４−ヒドロキシベンズアミド；
Ｎ−（３−（２−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド；
Ｎ−（３−（４−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド；
Ｎ−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−１−（４−ヒドロキシフェニルカルボニル）アゼチジン−３−カルボキサミド；
Ｎ−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−１−（４−ヒドロキシフェニルカルボニル）ピロリジン−３−カルボキサミド；
Ｎ−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−１−（４−ヒドロキシフェニルカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド；
Ｎ−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−１−（４−ヒドロキシフェニルカルボニル）ピロリジン−２−カルボキサミド；
Ｎ−（３−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）チオフェン−２−カルボキサミド；
Ｎ−（３−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）チオフェン−３−カルボキサミド；
Ｎ−（３−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）ピリジン−４−カルボキサミド；または
Ｎ−（３−（３−（３，４−ジクロロフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド
から選択される化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩、および医薬的に許容される添加剤を含有する医薬組成物。
【請求項７】
オステオポンチン産生亢進に起因する疾患の治療に使用するための、請求項６記載の医薬組成物。
【請求項８】
式：
【化３】
0006513076.tif 000054
［式中、
Ｒ１は、ピリジル、チエニルまたはフェニルであり、ここで、該ピリジル、チエニルおよびフェニルは、各々独立して、置換可能な位置で、ヒドロキシおよびＣ１−６アルコキシからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つの基で置換されていてもよく；
Ｒ２は、水素原子、アミノ、独立して選択される１もしくは２個のＣ１−６アルキルで置換されるアミノ、ヒドロキシまたはＣ１−６アルコキシであり；
ＯＲ３はベンゼン環の３位に結合し、Ｒ３はフェニルであり、フェニル基の３位および／または４位が独立して、ハロゲン、ヒドロキシおよびＣ１−６アルコキシからなる群から選択される基で置換され；
Ｒ４は、水素原子、ハロゲン、アミノ、独立して選択される１もしくは２個のＣ１−６アルキルで置換されるアミノ、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ハロアルキルであり；
Ｒ６およびＲ７は、各々独立して、水素原子またはＣ１−４アルキルであり；
ｎは０〜４であり；
ｍは１であり；
ｐは１であり； 
ＸはＯであり；および
ＹはＣＨ２またはＮＨである］
で表される化合物またはその医薬的に許容される塩を有効成分として含む、オステオポンチン産生亢進に起因する疾患の治療剤。
【請求項９】
式（Ｉ）：
【化４】
0006513076.tif 000055
［式中、
Ｒ１は、シクロヘキシル、テトラヒドロピラニルまたはフェニルであり、ここで、該シクロヘキシル、テトラヒドロピラニルおよびフェニルは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノおよびＣ１−６アルコキシからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つの基で置換されていてもよく；
Ｒ２は、水素原子、アミノ、独立して選択される１もしくは２個のＣ１−６アルキルで置換されるアミノ、ヒドロキシまたはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ３は、フェニルであり、フェニル基の３位および／または４位が独立して、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキルおよびＣ１−６アルコキシからなる群から選択される基で置換され；
Ｒ４は、水素原子、ハロゲン、アミノ、独立して選択される１もしくは２個のＣ１−６アルキルで置換されるアミノ、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ハロアルキルであり；
ＸはＯであるか、またはＲ２がアミノもしくは置換アミノでベンゼン環の２位に結合する場合は、ＸがＣＨとしてＲ２の窒素原子と結合してピロール環を形成してもよい］
で表される化合物またはその医薬的に許容される塩を有効成分として含む、オステオポンチン産生亢進に起因する疾患の治療剤。
【請求項１０】
オステオポンチン産生亢進に起因する疾患が、癌、肝炎、動脈硬化、多発性硬化症、関節炎、リウマチ、肺繊維症、骨粗鬆症または尿路結石である、請求項８または９に記載の治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規アミド誘導体に関する。また、本発明は、癌を含む、オステオポンチン（OPN）産生亢進に起因する疾患の治療および／または予防に有用であり得る。
【背景技術】
【０００２】
近年、OPN発現が腫瘍の進行度と相関することが示され、OPNが癌の転移に関連することが示唆されている。例えば、肺癌、肝癌、乳癌または前立腺癌に罹患している患者の血漿からOPNが検出されたこと、そして、正常部と比較して癌部のOPN mRNAは上昇していることが報告されている（非特許文献１および２）。つまり、腫瘍細胞の転移および浸潤を促進するOPNの産生を抑制することにより癌の転移を防ぐことができ、ひいては癌治療における新たな戦略となりうる。以上のことから、OPN産生を阻害する化合物を開発することにより、癌を含む、種々の疾患の新規な治療が想定される。【０００３】
これまでに、OPN産生阻害作用を有する薬剤として、ＰＰＡＲ−γ（Peroxisome Proliferator-Activated Receptor-gamma）アゴニストである、インスリン抵抗性改善薬（トログリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン等）、非ステロイド性抗炎症剤（インドメタシン、イブプロフェン等）およびＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤である、スタチン系高コレステロール血症治療剤（ロスバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチン等）が知られているが、本発明の化合物と同様の構造を有する化合物は知られていない。【０００４】
一方、Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（以下、ブレフェラミド（brefelamide）と称することもある）は、細胞性粘菌から単離され、ヒト星状細胞腫細胞において上皮成長因子受容の減少によってＥＲＫリン酸化を阻害し、細胞増殖を阻害する活性が認められている（非特許文献３〜５）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Senger DR, Perruzzi CA, Gracey CF, Papadopoulos A, Tenen DG. (1988)  Secreted phosphoproteins associated with neoplastic transformation : close homology with plasma proteins cleaved during blood coagulation. Cancer Res 48, 5770 - 5774
【非特許文献２】Brown LF, PapadopoμLos-Seigiou A, Brygida B, Manseau EJ, Tognazzi K, Perruzzi CA, Dvorak HF, Senger DR. (1994) Osteopontin expression in human carcinoma. Am J Pathol. 145, 610 - 623
【非特許文献３】Kikuchi H. et al., J. Org. Chem., 70, 8854-8858 (2005)
【非特許文献４】Kikuchi H., YAKUGAKU ZASSHI 127(9) 1431-1439 (2007)
【非特許文献５】Shigeyoshi Honma et al., European Journal of Pharmacology, 616 (2009) 38-42
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、新規なOPN産生阻害作用を有する化合物を検討すると共に、癌を含む、OPN産生亢進に起因する疾患の治療および／または予防に有用な治療剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、細胞性粘菌から単離されたブレフェラミドがOPN産生阻害作用を有することを見出し、さらに、ブレフェラミドの誘導体として、下記式で表される化合物も強力なOPN産生の阻害作用を有することを見出し、本発明を完成させた。本発明によれば、下記式で表されるアミド誘導体（ブレフェラミドを含む）またはその医薬的に許容される塩（以下、「本発明の化合物」と称することもある）、およびそのOPN産生阻害作用による医薬用途発明が提供される。【０００８】
すなわち、本発明は、以下の態様の発明を提供するものである。
［１］  式：
【化１】
0006513076.tif 000002
［式中、
Ｒ１およびＲ３は、各々独立して、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−１０アリールまたは５〜１０員のヘテロアリールであり、ここで、該Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−１０アリールおよび５〜１０員のヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ１−４アシル、Ｃ１−４アシルアミノ、Ｃ１−４アルキルスルホニル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ハロアルコキシ、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニルおよび−ＯＲ５からなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよく；
Ｒ２は、水素原子、アミノ、独立して選択される１もしくは２個のＣ１−６アルキルで置換されるアミノ、ヒドロキシまたはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ４は、水素原子、ハロゲン、アミノ、独立して選択される１もしくは２個のＣ１−６アルキルで置換されるアミノ、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ハロアルキルであり；
Ｒ５は、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−１０アリールまたは５〜１０員のヘテロアリールであり、ここで、該Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−１０アリールおよび５〜１０員のヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ１−４アシル、Ｃ１−４アシルアミノ、Ｃ１−４アルキルスルホキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ハロアルコキシ、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよく；
Ｒ６およびＲ７は、各々独立して、水素原子またはＣ１−４アルキルであり；
ｎは０〜４であり、ただし、ｎが１〜４であり、Ｒ６がＣ１−４アルキルである場合、Ｒ６の末端の炭素原子がｎの括弧で示されたアルキレン基の１つの炭素と結合して４〜６員の環を形成してもよく；
ｍは０または１であり；
ｐは０または１であり； 
ＸはＯであるか、またはｐが０であり、Ｒ２がアミノもしくは置換アミノでベンゼン環の２位に結合する場合は、ＸがＣＨとしてＲ２の窒素原子と結合してピロール環を形成してもよく；および
ＹはＣＨ２またはＮＨである］
で表される化合物またはその医薬的に許容される塩、ただし、Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミドは除く。【０００９】
［２］  式（Ｉ）：
【化２】
0006513076.tif 000003
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＸは、［１］に定義されている通りである］
で表される、［１］記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。【００１０】
［３］  Ｒ１が、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−１０アリールまたは５〜１０員のヘテロアリールであり、ここで、該Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−１０アリールおよび５〜１０員のヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ１−４アシル、Ｃ１−４アシルアミノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびＣ１−６ハロアルコキシからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよく；
Ｒ２がベンゼン環の２位に結合し、水素原子、アミノまたはヒドロキシであり；
ＯＲ３がベンゼン環の３位に結合し、Ｒ３がフェニルであり、ここで、該フェニルは、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびＣ１−６ハロアルコキシからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよく；
Ｒ４が水素原子、ハロゲンまたはアミノである、
［１］または［２］記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。【００１１】
［４］  Ｒ１が、Ｃ３−８シクロアルキル、テトラヒドロピラニル、ピリジル、チエニルまたはフェニルであり、ここで、該Ｃ３−８シクロアルキル、テトラヒドロピラニル、ピリジル、チエニルおよびフェニルは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アシル、Ｃ１−４アシルアミノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシおよびＣ１−６ハロアルコキシからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つの基で置換されていてもよい、［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。【００１２】
［５］  Ｒ１がフェニルであり、フェニル基の３位および／または４位が独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アシルアミノまたはＣ１−６アルコキシで置換される、［１］〜［４］のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。【００１３】
［６］  Ｒ３がフェニルであり、フェニル基の３位および／または４位が独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシまたはＣ１−６ハロアルコキシで置換される、［１］〜［５］のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。【００１４】
［７］  Ｒ４が水素原子である、［１］〜［６］のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。【００１５】
［８］  ｍが１であり、ＸがＯである、［１］〜［７］のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。【００１６】
［９］  ｍが１であり、ＸがＯであり、ｐが１である、［１］〜［７］のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。【００１７】
［１０］  ｎが１〜４であり、Ｒ６がＣ１−４アルキルで、Ｒ６の末端の炭素原子がｎの括弧で示されたアルキレン基の１つの炭素と結合して４〜６員の環を形成する、［１］〜［９］のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。【００１８】
［１１］  ４−ヒドロキシ−Ｎ−（２−（７−（４−ヒドロキシフェノキシ）−１Ｈ−インドール−３−イル）エチル）ベンズアミド（化合物２）；
Ｎ−（３−（２，３−ジヒドロキシフェニル）−３−オキソプロピル）−４−（４−ヒドロキシフェノキシ）ベンズアミド（化合物３）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−メトキシベンズアミド（化合物４）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−メトキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−メトキシベンズアミド（化合物５）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−メトキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物６）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−３−メトキシベンズアミド（化合物７）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−アセトアミド（化合物８）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−フルオロベンズアミド（化合物９）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−シクロヘキサンカルボキサミド（化合物１０）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）−カルボキサミド（化合物１１）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−メトキシフェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物１２）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−ヒドロキシフェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物１３）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−メチルフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物１４）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−（トリフルオロメチル）フェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物１５）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（３，４−ジメトキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物１６）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物１７）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−アミノベンズアミド（化合物１９）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−アセチルアミノベンズアミド（化合物２０）；
Ｎ−（２−（３−（４−メトキシフェノキシ）ベンゾイルアミノ）エチル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物２１）；
Ｎ−（２−（２−（４−メトキシフェノキシ）ベンゾイルアミノ）エチル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物２２）；
Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）−４−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニルアミノ）−４−オキソブタンアミド（化合物２３）；
Ｎ−（３−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物２４）；
Ｎ−（２−（３−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミノ）−２−オキシエチル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物２５）；
Ｎ−（３−（３−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物２６）；
Ｎ−（４−（３−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミノ）−４−オキソブチル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物２７）；
Ｎ−（２−（２−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミノ）−２−オキソエチル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物２８）；
Ｎ−（３−（２−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物２９）；
Ｎ−（３−（４−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物３０）；
Ｎ−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−１−（４−ヒドロキシフェニルカルボニル）アゼチジン−３−カルボキサミド（化合物３１）；
Ｎ−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−１−（４−ヒドロキシフェニルカルボニル）ピロリジン−３−カルボキサミド（化合物３２）；
Ｎ−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−１−（４−ヒドロキシフェニルカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（化合物３３）；
Ｎ−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−１−（４−ヒドロキシフェニルカルボニル）ピロリジン−２−カルボキサミド（化合物３４）；
Ｎ−（３−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）チオフェン−２−カルボキサミド（化合物３５）；
Ｎ−（３−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）チオフェン−３−カルボキサミド（化合物３６）；
Ｎ−（３−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）ピリジン−４−カルボキサミド（化合物３７）；および
Ｎ−（３−（３−（３，４−ジクロロフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物３８）
からなる群から選択される、［１］〜［１０］のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。【００１９】
［１２］  ［１］〜［１１］のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩、および医薬的に許容される添加剤を含有する医薬組成物。【００２０】
［１３］  オステオポンチン産生亢進に起因する疾患の治療に使用するための、［１２］記載の医薬組成物。【００２１】
［１４］  式：
【化３】
0006513076.tif 000004
［式中、
Ｒ１およびＲ３は、各々独立して、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−１０アリールまたは５〜１０員のヘテロアリールであり、ここで、該Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−１０アリールおよび５〜１０員のヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ１−４アシル、Ｃ１−４アシルアミノ、Ｃ１−４アルキルスルホニル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ハロアルコキシ、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニルおよび−ＯＲ５からなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよく；
Ｒ２は、水素原子、アミノ、独立して選択される１もしくは２個のＣ１−６アルキルで置換されるアミノ、ヒドロキシまたはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ４は、水素原子、ハロゲン、アミノ、独立して選択される１もしくは２個のＣ１−６アルキルで置換されるアミノ、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ハロアルキルであり；
Ｒ５は、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−１０アリールまたは５〜１０員のヘテロアリールであり、ここで、該Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−１０アリールおよび５〜１０員のヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ１−４アシル、Ｃ１−４アシルアミノ、Ｃ１−４アルキルスルホキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ハロアルコキシ、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよく；
Ｒ６およびＲ７は、各々独立して、水素原子またはＣ１−４アルキルであり；
ｎは０〜４であり、ただし、ｎが１〜４であり、Ｒ６がＣ１−４アルキルである場合、Ｒ６の末端の炭素原子がｎの括弧で示されたアルキレン基の１つの炭素と結合して４〜６員の環を形成してもよく；
ｍは０または１であり；
ｐは０または１であり； 
ＸはＯであるか、またはｐが０であり、Ｒ２がアミノもしくは置換アミノでベンゼン環の２位に結合する場合は、ＸがＣＨとしてＲ２の窒素原子と結合してピロール環を形成してもよく；および
ＹはＣＨ２またはＮＨである］
で表される化合物またはその医薬的に許容される塩を有効成分として含む、オステオポンチン産生亢進に起因する疾患の治療剤。【００２２】
［１５］  式が、式（Ｉ）：
【化４】
0006513076.tif 000005
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＸは、［１４］に定義されている通りである］
で表される、［１４］記載の治療剤。【００２３】
［１６］  Ｒ１が、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−１０アリールまたは５〜１０員のヘテロアリールであり、ここで、該Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−１０アリールおよび５〜１０員のヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ１−４アシル、Ｃ１−４アシルアミノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびＣ１−６ハロアルコキシからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよく；
Ｒ２がベンゼン環の２位に結合し、水素原子、アミノまたはヒドロキシであり；
ＯＲ３がベンゼン環の３位に結合し、Ｒ３がフェニルであり、ここで、該フェニルは、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびＣ１−６ハロアルコキシからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよく；
Ｒ４が水素原子、ハロゲンまたはアミノである、
［１４］または［１５］記載の治療剤。【００２４】
［１７］  Ｒ１が、Ｃ３−８シクロアルキル、テトラヒドロピラニル、ピリジル、チエニルまたはフェニルであり、ここで、該Ｃ３−８シクロアルキル、テトラヒドロピラニル、ピリジル、チエニルおよびフェニルは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アシル、Ｃ１−４アシルアミノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシおよびＣ１−６ハロアルコキシからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つの基で置換されていてもよい、［１４］〜［１６］のいずれかに記載の治療剤。【００２５】
［１８］  Ｒ１がフェニルであり、フェニル基の３位および／または４位が独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アシルアミノまたはＣ１−６アルコキシで置換される、［１４］〜［１７］のいずれかに記載の治療剤。【００２６】
［１９］  Ｒ３がフェニルであり、フェニル基の３位および／または４位が独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシまたはＣ１−６ハロアルコキシで置換される、［１４］〜［１８］のいずれかに記載の治療剤。【００２７】
［２０］  Ｒ４が水素原子である、［１４］〜［１９］のいずれかに記載の治療剤。【００２８】
［２１］  ｍが１であり、ＸがＯである、［１４］〜［２０］のいずれかに記載の治療剤。【００２９】
［２２］  ｍが１であり、ＸがＯであり、ｐが１である、［１４］〜［２０］のいずれかに記載の治療剤。【００３０】
［２３］  ｎが１〜４であり、Ｒ６がＣ１−４アルキルで、Ｒ６の末端の炭素原子がｎの括弧で示されたアルキレン基の１つの炭素と結合して４〜６員の環を形成する、［１４］〜［２２］のいずれかに記載の治療剤。【００３１】
［２４］  化合物が、
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物１）；
４−ヒドロキシ−Ｎ−（２−（７−（４−ヒドロキシフェノキシ）−１Ｈ−インドール−３−イル）エチル）ベンズアミド（化合物２）；
Ｎ−（３−（２，３−ジヒドロキシフェニル）−３−オキソプロピル）−４−（４−ヒドロキシフェノキシ）ベンズアミド（化合物３）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−メトキシベンズアミド（化合物４）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−メトキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−メトキシベンズアミド（化合物５）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−メトキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物６）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−３−メトキシベンズアミド（化合物７）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−アセトアミド（化合物８）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−フルオロベンズアミド（化合物９）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−シクロヘキサンカルボキサミド（化合物１０）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）−カルボキサミド（化合物１１）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−メトキシフェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物１２）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−ヒドロキシフェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物１３）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−メチルフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物１４）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−（トリフルオロメチル）フェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物１５）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（３，４−ジメトキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物１６）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物１７）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−アミノベンズアミド（化合物１９）；
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−アセチルアミノベンズアミド（化合物２０）；
Ｎ−（２−（３−（４−メトキシフェノキシ）ベンゾイルアミノ）エチル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物２１）；
Ｎ−（２−（２−（４−メトキシフェノキシ）ベンゾイルアミノ）エチル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物２２）；
Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）−４−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニルアミノ）−４−オキソブタンアミド（化合物２３）；
Ｎ−（３−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物２４）；
Ｎ−（２−（３−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミノ）−２−オキシエチル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物２５）；
Ｎ−（３−（３−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物２６）；
Ｎ−（４−（３−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミノ）−４−オキソブチル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物２７）；
Ｎ−（２−（２−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミノ）−２−オキソエチル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物２８）；
Ｎ−（３−（２−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物２９）；
Ｎ−（３−（４−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物３０）；
Ｎ−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−１−（４−ヒドロキシフェニルカルボニル）アゼチジン−３−カルボキサミド（化合物３１）；
Ｎ−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−１−（４−ヒドロキシフェニルカルボニル）ピロリジン−３−カルボキサミド（化合物３２）；
Ｎ−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−１−（４−ヒドロキシフェニルカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（化合物３３）；
Ｎ−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−１−（４−ヒドロキシフェニルカルボニル）ピロリジン−２−カルボキサミド（化合物３４）；
Ｎ−（３−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）チオフェン−２−カルボキサミド（化合物３５）；
Ｎ−（３−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）チオフェン−３−カルボキサミド（化合物３６）；
Ｎ−（３−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）ピリジン−４−カルボキサミド（化合物３７）；および
Ｎ−（３−（３−（３，４−ジクロロフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物３８）
からなる群から選択される、［１４］〜［２３］のいずれかに記載の治療剤。【００３２】
［２５］  Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミドまたはその医薬的に許容される塩を含む、オステオポンチン産生亢進に起因する疾患の治療剤。【００３３】
［２６］  オステオポンチン産生亢進に起因する疾患が、癌、肝炎、動脈硬化、多発性硬化症、関節炎、リウマチ、肺繊維症、骨粗鬆症または尿路結石である、［１４］〜［２５］のいずれかに記載の治療剤。【００３４】
［２７］  治療が必要な患者に、治療上の有効量の［１］〜［１１］のいずれかに記載の化合物もしくはＮ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド、またはその医薬的に許容される塩を投与することを特徴とする、オステオポンチン産生亢進に起因する疾患の治療方法。【００３５】
［２８］  オステオポンチン産生亢進に起因する疾患の治療に使用する、［１］〜［１１］のいずれかに記載の化合物もしくはＮ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド、またはその医薬的に許容される塩。【００３６】
［２９］  オステオポンチン産生亢進に起因する疾患の治療剤を製造するための、［１］〜［１１］のいずれかに記載の化合物もしくはＮ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド、またはその医薬的に許容される塩の使用。【００３７】
［３０］  ［１］〜［１１］のいずれかに記載の化合物もしくはＮ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド、またはその医薬的に許容される塩を含む、オステオポンチン産生阻害剤。【００３８】
［３１］  治療が必要な患者に、治療上の有効量の［１］〜［１１］のいずれかに記載の化合物もしくはＮ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド、またはその医薬的に許容される塩を投与することを特徴とする、オステオポンチン産生阻害方法。【００３９】
［３２］  式（Ｉ）：
【化５】
0006513076.tif 000006
［式中、
Ｒ１およびＲ３は、各々独立して、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−１０アリールまたはＣ６−１０ヘテロアリールであり、ここで、該Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−１０アリールおよびＣ６−１０ヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ１−４アシル、Ｃ１−４アルキルスルホニル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ハロアルコキシ、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニルおよび−ＯＲ５からなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよく；
Ｒ２は、水素原子、アミノ、独立して選択される１もしくは２個のＣ１−６アルキルで置換されるアミノ、ヒドロキシまたはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ４は、水素原子、ハロゲン、アミノ、独立して選択される１もしくは２個のＣ１−６アルキルで置換されるアミノ、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ハロアルキルであり；
Ｒ５は、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−１０アリールまたはＣ６−１０ヘテロアリールであり、ここで、該Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−１０アリールおよびＣ６−１０ヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ１−４アシル、Ｃ１−４アルキルスルホキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ハロアルコキシ、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよく；および
ＸはＯであるか、またはＲ２がアミノもしくは置換アミノである場合は、ＸがＣＨとしてＲ２の窒素原子と結合してピロール環を形成してもよい］
で表される化合物またはその医薬的に許容される塩、ただし、Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミドは除く。
【発明の効果】
【００４０】
本発明の化合物は、オステオポンチン産生阻害作用を有しており、オステオポンチン産生亢進に起因する疾患、例えば、癌の新規な治療剤および／または予防剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】HepG2細胞における、対照群および化合物１（１０μＭおよび２０μＭ）添加群のＥＬＩＳＡ法によるOPN産生量を示す。
【図２】A549細胞における、対照群および化合物１（１２．５μＭおよび２５μＭ）添加群のＥＬＩＳＡ法によるOPN産生量を示す。
【図３】OUR-10細胞における、対照群および化合物１（２５μＭおよび５０μＭ）添加群のＥＬＩＳＡ法によるOPN産生量を示す。
【図４】QGP-1細胞における、対照群および化合物１（２０μＭおよび４０μＭ）添加群のＥＬＩＳＡ法によるOPN産生量を示す。
【図５】A549細胞における、対照群および化合物６（１０μＭおよび２０μＭ）添加群のＥＬＩＳＡ法によるOPN産生量を示す。
【図６】A549細胞における、対照群の創傷治癒率を１００％とした場合の化合物１（１２．５μＭおよび２５μＭ）における創傷治癒率を示す。
【図７】A549細胞における、対照群の浸潤細胞数を１００％とした場合の化合物１（１２．５μＭおよび２５μＭ）および化合物６（１０μＭ）における浸潤細胞数の割合を示す。
【図８】A549細胞における、対照群のOPN産生量を１００％とした場合における化合物１９（１２．５μＭおよび２５μＭ）添加群のＥＬＩＳＡ法によるOPN産生量の割合を示す。
【図９】A549細胞における、対照群のOPN産生量を１００％とした場合における化合物２６（１２．５μＭおよび２５μＭ）添加群のＥＬＩＳＡ法によるOPN産生量の割合を示す。
【図１０】A549細胞における、対照群のOPN産生量を１００％とした場合における化合物３８（１２．５μＭおよび２５μＭ）添加群のＥＬＩＳＡ法によるOPN産生量の割合を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
本発明の化合物は、水和物および／または溶媒和物の形で存在することもあるので、これらの水和物および／または溶媒和物もまた本発明の化合物に包含される。溶媒和物としてはエタノール溶媒和物等が挙げられる。
【００４３】
本発明の化合物は、１個または場合によりそれ以上の不斉炭素原子を有する場合があり、また幾何異性や軸性キラリティを生じることがあるので、数種の光学または立体異性体として存在することがある。本発明においては、これらの立体異性体、それらの混合物およびラセミ体は本発明の化合物に包含される。
また、本発明の化合物のいずれか１つまたは２つ以上の１Ｈを２Ｈ（Ｄ）に変換した重水素変換体も本発明の化合物に包含される。
結晶として得られる本発明の化合物およびその医薬上許容される塩には、結晶多形が存在する場合があり、その結晶多形も本発明に包含される。
【００４４】
次に、本明細書における用語について以下に説明する。
「Ｃ１−６アルキル」とは、１〜６個の炭素原子を有する、直鎖状または分枝鎖状の飽和炭化水素基を意味し、これらは、所望により本発明に含まれる１以上の置換基で置換されていてもよい。「Ｃ１−６アルキル」は、好ましくは炭素数が１〜５、１〜４、または１〜３であってもよい。かかる具体例として、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ぺンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル等が挙げられる。
【００４５】
「Ｃ２−６アルケニル」とは、２〜６個の炭素原子を有し、１以上の炭素−炭素二重結合を含有する、直鎖または分枝鎖状の脂肪族炭化水素基を意味し、これらは、所望により本発明に含まれる１以上の置換基で置換されていてもよい。「Ｃ２−６アルケニル」は、好ましくは炭素数が２〜５、２〜４、または２〜３であってもよい。かかる具体例として、エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル等が挙げられる。
【００４６】
「Ｃ２−６アルキニル」とは、２〜６個の炭素原子を有し、１以上の炭素−炭素三重結合を有する、直鎖状または分枝鎖状の脂肪族炭化水素基を意味し、これらは、所望により本発明に含まれる１以上の置換基で置換されていてもよい。「Ｃ２−６アルキニル」は、好ましくは炭素数が２〜５、２〜４、または２〜３であってもよい。かかる具体例として、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル等が挙げられる。
【００４７】
「Ｃ３−８シクロアルキル」とは、３〜８個の炭素原子を有する、単環または多環式飽和炭化水素基を意味し、これらは、所望により本発明に含まれる１以上の置換基で置換されていてもよい。かかる具体例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロへキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル等が挙げられる。
【００４８】
「Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル」とは、窒素原子、酸素原子および硫黄原子からなる群から独立して選ばれる１〜４個の原子を含む、３〜８個の炭素原子を有する単環または二環の非芳香族複素環基を意味し、これらは、所望により本発明に含まれる１以上の置換基で置換されていてもよい。窒素および硫黄原子は、所望により酸化されてもよく、窒素原子は、所望により四級化されてもよい。二環式基をもたらす縮合環は、一方の環が炭素原子のみを含有して構成されていてもよく、飽和、部分的飽和、または不飽和であってもよい。「Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル」は、好ましくは窒素原子または酸素原子を合わせて１または２個含む５〜７員の単環ヘテロシクロアルキルであってもよい。かかる具体例として、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、ホモピペリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル等が挙げられる。
【００４９】
「Ｃ６−１０アリール」とは、芳香族環に結合する１個の水素原子が除外された、６〜１０個の炭素原子を有する単環または二環の芳香族炭化水素基を意味し、これらは、所望により本発明に含まれる１以上の置換基で置換されていてもよい。かかる具体例として、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、アントラセニル等が挙げられる。
【００５０】
「ヘテロアリール」とは、窒素原子、酸素原子および硫黄原子からなる群から独立して選ばれる１〜４個のヘテロ原子を含む、単環または二環の芳香族複素環基を意味し、これらは、所望により本発明に含まれる１以上の置換基で置換されていてもよい。「ヘテロアリール」は、好ましくは窒素原子を１または２個含む５または６員の単環式芳香族複素環基であってもよい。かかる具体例として、ピリジル、ピリダジニル、イソチアゾリル、ピロリル、フリル、チエニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピリミジニル、チアジアゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピラジニル、トリアジニル、トリアゾリル、イミダゾリジニル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、インドリル、インダゾリル、クロメニル、キノリル、イソキノリル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンズイソオキサゾリル、ベンズイソチアゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンズイミダゾリル等が挙げられる。
【００５１】
「ハロゲン」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子を意味する。中でも好ましくは、フッ素原子または塩素原子である。
【００５２】
「モノ−もしくはジ−Ｃ１−６アルキルアミノ」とは、１個または２個の水素原子が１〜６個の炭素原子を有する上記のアルキル基によって置き換えられている、アミノ基を意味する。アルキル基によって２個置換される場合は、同一または異なるアルキル基で置換されていてもよい。かかる具体例として、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ等が挙げられる。
【００５３】
「Ｃ１−４アシル」とは、水素原子または１〜３個の炭素原子を有する上記のアルキル基が結合している、カルボニル基（−Ｃ（＝Ｏ））を意味する。かかる具体例として、ホルミル、アセチル、プロピオニル等が挙げられる。
【００５４】
「Ｃ１−４アシルアミノ」とは、上記のアシル基が結合している、アミノ基を意味する。具体例としては、アセチルアミノ、プロピオニルアミノ等が挙げられる。
【００５５】
「Ｃ１−４アルキルスルホニル」とは、１〜４個の炭素原子を有する上記のアルキル基が結合している、スルホニル基（−Ｓ（＝Ｏ）２）を意味する。かかる具体例として、メチルスルホニル、エチルスルホニル、プロピルスルホニル等が挙げられる。
【００５６】
「Ｃ１−６ハロアルキル」とは、１個以上の水素原子がハロゲン原子（複数可）によって置き換えられている、１〜６個の炭素原子を有する上記のアルキル基を意味する。置き換えられている水素原子の数は、１個から、最大で親アルキル基に他に存在しうる水素原子の総数の範囲まで及びうる。ハロゲン原子を複数有する場合は、同一または異なるハロゲン原子で置換されていてもよい。かかる具体例として、クロロメチル、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル等が挙げられる。
【００５７】
「Ｃ１−６アルコキシ」とは、１〜６個の炭素原子を有する上記のアルキル基が酸素原子を介して結合している基を意味する。かかる具体例として、限定されるものではないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブチルオキシ、ペンチルオキシ、イソペンチルオキシ、ネオペンチルオキシ、ヘキシルオキシ等が挙げられる。
【００５８】
「Ｃ１−６ハロアルコキシ」とは、１個以上の水素原子がハロゲン原子（複数可）によって置き換えられている、１〜６個の炭素原子を有する上記のアルコキシ基を意味する。置き換えられている水素原子の数は、１個から、最大で親アルキル基に他に存在しうる水素原子の総数の範囲まで及びうる。ハロゲン原子を複数有する場合は、同一または異なるハロゲン原子で置換されていてもよい。かかる具体例として、クロロメトキシ、トリフルオロメトキシ、２，２，２−トリフルオロエトキシ等が挙げられる。
【００５９】
「オステオポンチン」または「OPN」とは、カルシウムの沈着した骨組織のマトリックスを構成する主要な非コラーゲン性タンパク質として同定された、分子量約41kDaの分泌型酸性リン酸化糖タンパク質を意味する。オステオポンチンは、インテグリンと結合するＲＧＤ配列を有し、破骨細胞と骨芽細胞の両方を骨組織周辺に接着させる作用を有する。また、オステオポンチンは、強く陰性に荷電しており、ヒドロキシアパタイトを沈着させ、骨のカルシウムを保持する作用を有する。他にも、細胞遊走、一酸化窒素産生の制御、腫瘍、免疫系への関与等、様々な機能を有する。
【００６０】
「オステオポンチン産生亢進に起因する疾患」とは、癌、肝炎、動脈硬化、多発性硬化症、関節炎、リウマチ、肺繊維症、骨粗鬆症、尿路結石等が挙げられる。本発明における疾患としては、癌が好ましい。
【００６１】
「医薬的に許容される塩」とは、本発明の化合物と医薬的に許容される酸または塩基により形成される塩を意味する。本発明の化合物がアミノ基等の塩基性官能基を有する場合、各種の酸と塩を形成しうる。酸付加塩の具体例としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、過塩素酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、安息香酸塩、トリフルオロ酢酸塩、酢酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩等の有機酸塩、またはグルタミン酸塩、アスパラギン酸塩等のアミノ酸塩が挙げられる。
本発明の化合物が酸性官能基を有する場合、各種の塩基と塩を形成しうる。塩基付加塩の具体例としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、またはアンモニウム塩等が挙げられる。
これらの塩は、本発明の化合物を酸または塩基と混合した後、再結晶等の常法により得ることができる。
【００６２】
「治療」とは、哺乳動物、特にヒトにおける疾患および／または障害の治癒および／または改善を意味する。例えば、（ａ）疾患および／または障害を予防すること；および（ｂ）疾患および／または疾患を緩和および／または軽減すること等も含まれる。
【００６３】
「患者」とは、ヒトおよび動物、例えば、イヌ、ネコ、ウマ等を意味する。その中でも、ヒトが好ましい。
【００６４】
「治療上の有効量」とは、未治療対象と比べて、疾患、障害および／または副作用の改善、治癒、予防および／または軽減をもたらす量、あるいは疾患および／または障害の進行速度の遅延をもたらす量を意味する。該用語は、その範囲内に、正常な生理的機能を促進するのに有効な量も含む。療法における使用では、本発明の化合物ならびにその塩、溶媒和物および生理的に機能的な誘導体の治療上の有効量を、化合物原体として投与することが可能である。特に限定するものではないが、通常、本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩として、１日当たり０．００１〜１０００ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲が有効である。
かかる有効量として、本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩の単独の量、本発明の化合物の組み合わせの量および／または癌治療に有用な他の活性成分と組み合わせた本発明の化合物の量が挙げられる。
【００６５】
式（式（Ｉ）および式（ＩＩ）を含む）で表される本発明の化合物の中のＲ１〜Ｒ６、ｍ、ｎ、ｐ、ＸおよびＹに関して、好ましいものは以下のとおりであるが、本発明の技術的範囲は下記に挙げられた化合物の範囲に限定されるものではない。
【００６６】
Ｒ１としては、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−１０アリールおよび５〜１０員のヘテロアリールが挙げられ、該Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−１０アリールおよび５〜１０員のヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ１−４アシル、Ｃ１−４アシルアミノ、Ｃ１−４アルキルスルホニル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ハロアルコキシ、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニルおよび−ＯＲ５からなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよい。中でも好ましくは、置換されていてもよい、Ｃ３−８シクロアルキル、テトラヒドロピラニル、ピリジル、チエニルまたはフェニルが挙げられ、より好ましくは、３位および／または４位が独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキルまたはＣ１−６アルコキシで置換されていてもよいフェニルが挙げられ、さらに好ましくは、３位および／または４位が独立して、フルオロ、ヒドロキシまたはメトキシで置換されているフェニルが挙げられる。
【００６７】
Ｒ２としては、水素原子、アミノ、独立して選択される１もしくは２個のＣ１−６アルキルで置換されるアミノ、ヒドロキシおよびＣ１−６アルコキシが挙げられる。中でも好ましくは、アミノ、独立して選択される１もしくは２個のＣ１−６アルキルで置換されるアミノまたはヒドロキシが挙げられ、より好ましくは、アミノが挙げられる。また、Ｒ２は、ベンゼン環のいずれの位置に結合してもよいが、２位に結合することが好ましい。
【００６８】
Ｒ３としては、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−１０アリールおよび５〜１０員のヘテロアリールが挙げられ、該Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−１０アリールおよび５〜１０員のヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ１−４アシル、Ｃ１−４アシルアミノ、Ｃ１−４アルキルスルホニル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ハロアルコキシ、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニルおよび−ＯＲ５からなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよい。中でも好ましくは、３位および／または４位が独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキルまたはＣ１−６アルコキシで置換されていてもよいフェニルが挙げられ、より好ましくは、３位および／または４位が独立して、クロロ、ヒドロキシ、メチル、トリフルオロメチル、メトキシで置換されているフェニルが挙げられる。
また、ＯＲ３がベンゼン環の３位に結合する場合、Ｒ３はフェニルであり、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびＣ１−６ハロアルコキシからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されるのが好ましい。
【００６９】
Ｒ４としては、水素原子、ハロゲン、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ１−６アルキルおよびＣ１−６ハロアルキルが挙げられる。中でも好ましくは、水素原子、ハロゲンまたはアミノが挙げられ、より好ましくは、水素原子が挙げられる。
【００７０】
Ｒ５としては、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−１０アリール、および５〜１０員のヘテロアリールが挙げられ、該Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−１０アリールおよび５〜１０員のヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ１−４アシル、Ｃ１−４アシルアミノ、Ｃ１−４アルキルスルホキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ハロアルコキシ、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよい。中でも好ましくは、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキルまたはＣ１−６アルコキシで置換されていてもよいフェニルが挙げられ、より好ましくは、ヒドロキシで置換されているフェニルが挙げられる。
【００７１】
Ｒ６およびＲ７としては、水素原子およびＣ１−４アルキルが好ましい。
ｎは、０〜４であることが好ましい。ただし、ｎが１〜４であり、Ｒ６がＣ１−４アルキルである場合、Ｒ６の末端の炭素原子がｎの括弧で示されたアルキレン基の１つの炭素と結合して４〜６員の環を形成することが好ましい。
ｍは、０または１であることが好ましい。
ｐは、０または１であることが好ましい。
【００７２】
Ｘとしては、Ｏが好ましい。また、Ｘは、ｐが０であり、Ｒ２がアミノまたは置換アミノでベンゼン環の２位に結合する場合、ＣＨとしてＲ２の窒素原子と結合してピロール環を形成することが好ましい。
Ｙとしては、ＣＨ２またはＮＨが好ましい。
【００７３】
本発明の実施例化合物の製造方法について以下に説明する。
式（Ｉ）で表される本発明の化合物は、例えば下記スキーム１や非特許文献４に記載の方法により製造することができる。
【化６】
0006513076.tif 000007
【００７４】
ステップ１は、ノシル基（ｏ−ニトロベンゼンスルホニル基）で保護されているアミノアルコールＡのヒドロキシ基をジョーンズ試薬等の通常用いられる酸化剤を用いて酸化し、アルデヒドＢを得る工程である。
【００７５】
ステップ２は、得られたアルデヒドＢと芳香族ヒドラジンＣをメタノール等のプロトン性溶媒中で反応させて、ヒドラジドを得、続いてギ酸および酢酸等の弱酸性溶媒中で７０〜８０℃に加熱し、インドールＤを得る工程である。
【００７６】
ステップ３は、ジメチルホルムアミド等の非プロトン性溶媒下で、得られたインドールＤをｐ−メルカプト安息香酸等のチオールと反応させて、ｏ−ニトロベンゼンスルホニル基を脱保護し、続いて塩化アシルを加えてアミド化して、化合物Ｅを得る工程である。
【００７７】
ステップ４は，得られた化合物Ｅをアセトニトリル等の溶媒に溶解し、メタ過ヨウ素酸ナトリウム水溶液を加え、７０〜８０℃に加熱し、インドール環が酸化的開裂して、化合物Ｆを得る工程である。
【００７８】
また、式（Ｉ）で表される本発明の化合物において、種々所定の置換基で置換される場合は、例えば通常用いられる保護基で適宜保護・脱保護を行いながら、所定の置換基を上記スキーム１の芳香族ヒドラジンＣ、インドールＤの段階で導入することができ、またはステップ３で用いられる塩化アシルにおいて導入することができ、あるいは化合物Ｆにおいて導入することができる。
【００７９】
式（ＩＩ）：
【化７】
0006513076.tif 000008
（式中、Ｒ１〜Ｒ４、Ｒ６およびｎは、上記［１］に定義されている通りである）
で表される本発明の化合物は、例えば下記スキーム２に記載の方法により製造することができる。
【化８】
0006513076.tif 000009
【００８０】
ステップ１は、ジクロロメタンなどの非プロトン性溶媒中で，フェノキシアニリン誘導体Ａと、末端にｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル基で保護されたアミノ基を有するカルボン酸とでアミド化し、化合物Ｂを得る工程である。
【００８１】
ステップ２は，化合物Ｂのｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル基を脱保護し，続いて芳香族カルボン酸を加えてアミド化して，化合物Ｃを得る工程である。
【００８２】
また、式（ＩＩ）で表される本発明の化合物において、種々所定の置換基で置換される場合は、例えば通常用いられる保護基で適宜保護・脱保護を行いながら、所定の置換基を上記スキーム２のステップ１において導入することができ、または化合物Ｂまたは化合物Ｃの段階で導入することができる。
【００８３】
上記製造法の各ステップにおいて使用される溶媒は、反応や原料化合物の種類等によって適宜選択されるべきであるが、例えばメタノール、エタノール、イソプロパノール等のアルコール類、アセトン、メチルケトン等のケトン類、塩化メチレン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素類、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジオキサン等のエーテル類、トルエン、ベンゼン等の芳香族炭化水素類、ヘキサン、ヘプタン等の脂肪族炭化水素類、酢酸エチル、酢酸プロピル等のエステル類、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ−メチル−２−ピロリドン等のアミド類、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等のスルホキシド類、アセトニトリル等のニトリル類が挙げられ、これらの溶媒は単独または２種類以上混合して用いることができる。また反応の種類によっては、有機酸および有機塩基類を溶媒として用いてもよい。
【００８４】
本発明の化合物またはその中間体は、当業者にとって公知の方法で分離、精製することができる。例えば、抽出、分配、再沈殿、カラムクロマトグラフィー（例えば、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、イオン交換カラムクロマトグラフィー若しくは分取液体クロマトグラフィー）または再結晶等が挙げられる。再結晶溶媒としては例えば、メタノール、エタノール、２−プロパノール等のアルコール系溶媒、ジエチルエーテル等のエーテル系溶媒、酢酸エチル等のエステル系溶媒、ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素系溶媒、アセトン等のケトン系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン系溶媒、ヘキサン等の炭化水素系溶媒、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル等の非プロトン系溶媒、水、または上記溶媒から選択される２種以上の混合溶媒等を用いることができる。その他の精製方法としては、実験化学講座(日本化学会編、丸善)１巻等に記載された方法等を用いることができる。
【００８５】
本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩には、不斉が生じる場合または不斉炭素を有する置換基を有する場合があり、そのような化合物にあっては光学異性体が存在する。本発明の化合物にはこれらの各異性体の混合物や単離されたものも含まれ、通常の方法に従って製造することができる。製造方法としては例えば、不斉点を有する原料を用いる方法か、または途中の段階で不斉を導入する方法が挙げられる。例えば、光学異性体の場合、光学活性な原料を用いるか、製造工程の適当な段階で光学分割等を行うことで、光学異性体を得ることができる。光学分割法としては例えば、本発明の化合物またはその中間体が塩基性官能基を有する場合には、不活性溶媒中（例えばメタノール、エタノール、２−プロパノール等のアルコール系溶媒、ジエチルエーテル等のエーテル系溶媒、酢酸エチル等のエステル系溶媒、トルエン等の炭化水素系溶媒、アセトニトリル等の非プロトン系溶媒、または上記溶媒から選択される２種以上の混合溶媒）、光学活性な酸（例えば、マンデル酸、Ｎ−ベンジルオキシアラニン、乳酸等のモノカルボン酸、酒石酸、ｏ−ジイソプロピリデン酒石酸、リンゴ酸等のジカルボン酸、カンファースルフォン酸、ブロモカンファースルホン酸等のスルホン酸）を用いて塩を形成させるジアステレオマー法が挙げられる。本発明の化合物またはその中間体がカルボキシル基等の酸性官能基を有する場合には、光学活性なアミン（例えば１−フェニルエチルアミン、キニン、キニジン、シンコニジン、シンコニン、ストリキニーネ等の有機アミン）を用いて、塩を形成させることにより、光学分割を行うこともできる。
【００８６】
本発明の化合物は、オステオポンチン産生阻害活性を有しており、オステオポンチン産生亢進に起因する疾患、具体的には、癌、肝炎、動脈硬化、多発性硬化症、関節炎、リウマチ、肺繊維症、骨粗鬆症、尿路結石等の新規な治療剤および／または予防剤となり得る。
【００８７】
本発明の化合物の投与経路としては、限定されるものではないが、経口、舌下、口腔、非経口（例えば、皮下、筋肉内または静脈内）、直腸、局所、鼻腔内投与等が挙げられる。その一日投与量は、化合物の種類、投与方法、患者の症状・年齢等の様々な要因により異なる。例えば、経口投与の場合は、通常、ヒトまたは哺乳動物１ｋｇ体重当たり約０．００１〜１０００ｍｇ、好ましくは約０．１〜５００ｍｇを１〜数回に分けて投与することができる。静注等の非経口投与の場合は、例えば、ヒトまたは哺乳動物１ｋｇ体重当たり約０．００１ｍｇ〜３００ｍｇ、好ましくは約０．１ｍｇ〜１００ｍｇを投与することができる。
【００８８】
本発明の化合物の剤形は、対象の身体状況、健康状態等に応じて適宜選択することができ、調製することができる。例えば、錠剤（口腔内崩壊錠、チュアブル錠、発泡錠、分散錠、溶解錠）、カプセル剤、顆粒剤（発泡顆粒剤）、散剤、経口液剤（エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、リモナーデ剤）、シロップ剤（シロップ用剤）、経口ゼリー剤、口腔用錠剤（トローチ剤、舌下錠、バッカル錠、付着錠、ガム剤）、口腔用スプレー剤、口腔用半固形剤、含嗽剤、注射剤（輸液剤、埋め込み注射剤、持続性注射剤）、透析用剤（腹膜透析用剤、血液透析用剤）、吸入剤（吸入粉末剤、吸入液剤、吸入エアゾール剤）、坐剤、直腸用半固形剤、注腸剤、点眼剤、眼軟膏剤、点耳剤、点鼻剤（点鼻粉末剤、点鼻液剤）、膣錠、膣用坐剤、外用固形剤（外用散剤）、外用液剤（リニメント剤、ローション剤）、スプレー剤（外用エアゾール剤、ポンプスプレー剤）、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤（テープ剤、パップ剤）等が挙げられる。本発明の化合物は、その製剤の組成物に対して０．１〜７０重量％含まれる。
【００８９】
本発明の治療剤および／または予防剤は、本発明の化合物による疾患、例えば癌の治療および／または予防効果を妨げない範囲であれば、通常使用される各種医薬活性成分および医薬的に許容される添加剤を自体公知の方法により適宜配合してもよい。
【００９０】
本発明の治療剤および／または予防剤に配合される各種医薬活性成分としては、抗癌剤、抗炎症剤、生薬、天然物などが挙げられ、医薬的に許容される添加剤としては、安定化剤、界面活性剤、可溶化剤、緩衝剤、懸濁化剤、抗酸化剤、コーティング剤、湿潤剤、湿潤調整剤、清涼化剤、着色剤、着香剤、等張化剤、乳化剤、ｐＨ調節剤、皮膚保護剤、分散剤、噴射剤、芳香剤、防腐剤、溶剤等が挙げられる。
【実施例】
【００９１】
以下に実施例および試験例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、これらは本発明を限定するものではない。なお、化合物の同定は、ＮＭＲスペクトル法、質量分析法等により行った。【００９２】
明細書の記載を簡略化するために実施例において以下に示すような略号を用いることもある。ＮＭＲに用いられる記号としては、ｓは一重線、ｄは二重線、ｄｄは二重の二重線、ｄｄｄは二重の二重の二重線、ｔは三重線、ｄｔは二重の三重線、ｔｄは三重の二重線、ｔｔは三重の三重線、ｑは四重線、ｍは多重線、ｂｒは幅広い、ｂｒｓは幅広い一重線、ｂｒｔは幅広い三重線およびＪは結合定数を意味する。【００９３】
実施例１
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（ブレフェラミド、化合物１）
【化９】
0006513076.tif 000010
工程１．Ｎ−（４−ヒドロキシブチル）−２−ニトロベンゼンスルホンアミド（１．８０ｇ，６．２５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１２．５ｍＬ）に溶解し、ヨードベンゼンジアセテート（３．１１ｇ，９．６６ｍｍｏｌ）および２，２，６，６−テトラメチルピペリジン  １−オキシル（１４５ｍｇ，０．９４ｍｍｏｌ）を加え、室温で６時間撹拌した。ジオキサン（８ｍＬ）、水（４ｍＬ）および硫酸（０．２ｍＬ）を順次加え、続けて（２−（４−（ベンジルオキシ）フェノキシ）フェニル）ヒドラジン（２．０１ｇ，６．６６ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間撹拌した。続いて、ギ酸（１２ｍＬ）を加え、４０℃で９時間撹拌した。反応液に水（１５０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１００ｍＬ）で３回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、水（２００ｍＬ）、飽和重曹水（２００ｍＬ）および飽和食塩水（２００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル（３：２）で溶出）で精製し、Ｎ−（２−（７−（４−（ベンジルオキシ）フェノキシ）−１Ｈ−インドール−３−イル）エチル）−２−ニトロベンゼンスルホンアミドを得た（１．１１ｇ，１．９９ｍｍｏｌ，３２％（３工程））。【００９４】
工程２．Ｎ−（２−（７−（４−（ベンジルオキシ）フェノキシ）−１Ｈ−インドール−３−イル）エチル）−２−ニトロベンゼンスルホンアミド（１．１１ｇ，１．９９ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（１．１１ｇ，３．９８ｍｍｏｌ）およびｐ−メルカプト安息香酸（６１４ｍｇ，７．９７ｍｍｏｌ）を加え、４０℃で１０時間撹拌した。反応液に水（６０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（４０ｍＬ）で４回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、水（１００ｍＬ）、飽和重曹水（１００ｍＬ）および飽和食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。該残渣をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（１．３９ｍＬ，９．９６ｍｍｏｌ）および塩化４−（メトキシメトキシ）ベンゾイル（１．００ｇ，４．９８ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（１０ｍＬ）を加え，室温で２時間撹拌した。反応液に０．３Ｍ 塩酸（５０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（３０ｍＬ）で３回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、水（５０ｍＬ）、飽和重曹水（５０ｍＬ）および飽和食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル（２：３）で溶出）で精製し、Ｎ−（２−（７−（４−（ベンジルオキシ）フェノキシ）−１Ｈ−インドール−３−イル）エチル）−４−（メトキシメトキシ）ベンズアミドを得た（４３１ｍｇ，０．８２５ｍｍｏｌ，４１％（２工程））。【００９５】
工程３．Ｎ−（２−（７−（４−（ベンジルオキシ）フェノキシ）−１Ｈ−インドール−３−イル）エチル）−４−（メトキシメトキシ）ベンズアミド（３２１ｍｇ，０．６１４ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（５ｍＬ）およびメタノール（５ｍＬ）に溶解し、２０％水酸化パラジウム−炭素（１５０ｍｇ）を加え、水素雰囲気（１気圧）下室温で５時間撹拌した。反応液を濾過し、該濾液を減圧留去した。該残渣をジクロロメタン（８ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（２６０μＬ）および無水酢酸（１２０μＬ）を加え、室温で４時間攪拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液（３０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（２０ｍＬ）で３回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、水（３０ｍＬ）、飽和重曹水（３０ｍＬ）および飽和食塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル（１：１）で溶出）で精製し、４−（３−（２−（４−（メトキシメトキシ）フェニルアミド）エチル）−１Ｈ−インドール−７−イルオキシ）フェニル−エタノレートを得た（１４４ｍｇ，０．３０３ｍｍｏｌ，４９％（２工程））。【００９６】
工程４．４−（３−（２−（４−（メトキシメトキシ）フェニルアミド）エチル）−１Ｈ−インドール−７−イルオキシ）フェニル−エタノレート（１４４ｍｇ，０．３０３ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（４ｍＬ）および水（４ｍＬ）に溶解し、メタ過ヨウ素酸ナトリウム（２５９ｍｇ，１．２１ｍｍｏｌ）を加え、６０℃で１８時間撹拌した。反応液に水（２０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（２０ｍＬ）で３回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和食塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。該残渣をメタノール（２．５ｍＬ）に溶解し、塩酸−メタノール試薬（５〜１０％）（２．５ｍＬ）を加え、室温で４時間撹拌した。反応液に飽和重曹水（１５ｍＬ）を加え、酢酸エチル（２０ｍＬ）で３回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和食塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム−メタノール（４９：１）で溶出）で精製し、化合物１を得た（５０ｍｇ，０．１２７ｍｍｏｌ，４２％（２工程））。【００９７】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果は、J. Org. Chem. 2005, 70, 8854-8858に記載のものと完全に一致した。【００９８】
実施例２
４−ヒドロキシ−Ｎ−（２−（７−（４−ヒドロキシフェノキシ）−１Ｈ−インドール−３−イル）エチル）ベンズアミド（化合物２）
【化１０】
0006513076.tif 000011
Ｎ−（２−（７−（４−（ベンジルオキシ）フェノキシ）−１Ｈ−インドール−３−イル）エチル）−４−（メトキシメトキシ）ベンズアミド（８．２ｍｇ，０．０１６ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（０．５ｍＬ）およびメタノール（０．５ｍＬ）に溶解し、２０％ 水酸化パラジウム−炭素（３．０ｍｇ）を加え、水素雰囲気（１気圧）下室温で５時間撹拌した。反応液を濾過し、該濾液を減圧留去した。残渣をメタノール（０．５ｍＬ）に溶解し、塩酸−メタノール試薬（５〜１０％）（０．５ｍＬ）を加え、室温で３時間撹拌した。反応液に飽和重曹水（１０ｍＬ）を加え，酢酸エチル（１０ｍＬ）で３回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和食塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル（１：２）で溶出）で精製し、化合物２を得た（３．２ｍｇ，０．００８ｍｍｏｌ，５３％（２工程））。【００９９】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, アセトン-d6) δ 8.75 (1H, brs), 8.15 (1H, brs), 7.66 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.54 (1H, brs), 7.26 (1H, d, J = 7.9 Hz), 7.08 (1H, d, J = 2.4 Hz), 6.98 (1H, brs), 6.80 (1H, t, J = 7.9 Hz), 6.78 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.73 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.71 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.39 (1H, d, J = 7.9 Hz), 3.57 (2H, q, J = 5.8 Hz), 2.93 (2H, t, J = 5.8 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ 166.9, 160.8, 154.4, 150.4, 145.2, 131.3, 129.8 (2C), 129.0, 127.5, 123.6, 120.9 (2C), 119.9, 116.9 (2C), 115.6 (2C), 114.4, 114.2, 109.2, 41.2, 26.5.
EIMS m/z (rel. int) 388 [M]+ (18), 251 (100), 238 (11).
HREIMS m/z 388.1411 (C23H20O4N2の計算値388.1423).【０１００】
実施例３
Ｎ−（３−（２，３−ジヒドロキシフェニル）−３−オキソプロピル）−４−（４−ヒドロキシフェノキシ）ベンズアミド（化合物３）
【化１１】
0006513076.tif 000012
工程１．テトラヒドロフラン（５０ｍＬ）およびアセトニトリル（３．８ｍＬ，７２．２ｍｍｏｌ）を−７８℃で撹拌し、ｎ−ブチルリチウム（１．５６Ｍ ヘキサン溶液）（４６．０ｍＬ）を３０分間かけて滴下した。さらにJ. Org. Chem. 2005, 70, 7505-7511に記載の製法により合成された２，３−ビス（メトキシメトキシ）ベンズアルデヒド（３．９６ｇ，１７．５２ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（２５ｍＬ）を３０分間かけて滴下し、該温度を−７８℃に維持しながら１時間撹拌した。０℃に昇温し、反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液（１００ｍＬ）を加え、ジエチルエーテル（１００ｍＬ）で３回抽出した。得られたジエチルエーテル層を合わせて、水（５００ｍＬ）および飽和食塩水（５００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル（７：３）で溶出）で精製し、３−（２，３−ビス（メトキシメトキシ）フェニル）−３−ヒドロキシプロパンニトリルを得た（２．５６ｇ，９．５６ｍｍｏｌ，５５％）。【０１０１】
工程２．水素化リチウムアルミニウム（４２９ｍｇ，１１．３ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１５ｍＬ）に懸濁し、０℃で撹拌した。３−（２，３−ビス（メトキシメトキシ）フェニル）−３−ヒドロキシプロパンニトリル（１．２１ｇ，４．５２ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（５ｍＬ）を加え、７０℃で４時間撹拌した。０℃に冷却し、１Ｍ 水酸化ナトリウム水溶液（６０ｍＬ）を加えた。反応液をセライト濾過し、該濾液を酢酸エチル（５０ｍＬ）で３回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。該残渣をジクロロメタン（８．０ｍＬ）に溶解した。０℃でトリエチルアミン（１．０ｍＬ）およびクロロギ酸９−フルオレニルメチル（１．６７５ｇ，６．４７ｍｍｏｌ）を順次加え、２時間撹拌した。反応液に０．５Ｍ 塩酸（３０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（２０ｍＬ）で３回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和重曹水（５０ｍＬ）および飽和食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル（１：１）で溶出）で精製し、（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル  ３−（２，３−ビス（メトキシメトキシ）フェニル）−３−ヒドロキシプロピルカルバメートを得た（１．０１７ｇ，２．０６ｍｍｏｌ，４６％（２工程））。【０１０２】
工程３．（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル  ３−（２，３−ビス（メトキシメトキシ）フェニル）−３−ヒドロキシプロピルカルバメート（１１４ｍｇ，０．２３１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）に溶解した。イミダゾール（７８．４ｍｇ，１．１５２ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（８３．４ｍｇ，０．５５３ｍｍｏｌ）を順次加え、４５℃で８時間撹拌した。反応液に０．１Ｍ 塩酸（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１０ｍＬ）で３回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、水（１５ｍＬ）、飽和重曹水（１５ｍＬ）および飽和食塩水（１５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル（３：１）で溶出）で精製し、（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル  ３−（２，３−ビス（メトキシメトキシ）フェニル）−３−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチル−シリルオキシ）プロピルカルバメートを得た（１０５ｍｇ，０．１７３ｍｍｏｌ，７５％）。【０１０３】
工程４．（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル  ３−（２，３−ビス（メトキシメトキシ）フェニル）−３−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−プロピルカルバメート（８８．７ｍｇ，０．１４６ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）に溶解し、ピペリジン（５０μＬ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応液を減圧留去し、該残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム−メタノール（８：１）で溶出）で精製し、３−（２，３−ビス（メトキシメトキシ）フェニル）−３−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）プロパン−１−アミンを得た（４６．６ｍｇ，０．１２１ｍｍｏｌ，８３％）。【０１０４】
工程５．４−（４−（メトキシメトキシ）フェノキシ）安息香酸（３１．０ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２．０ｍＬ）に溶解し、０℃で撹拌した。１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（３２．８ｍｇ，０．１７１ｍｍｏｌ）、３−（２，３−ビス（メトキシメトキシ）フェニル）−３−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチル−シリルオキシ）プロパン−１−アミン（４３．８ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２５μＬ）を順次加え、２時間撹拌した。反応液に０．２Ｍ 塩酸（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１０ｍＬ）で３回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、水（１５ｍＬ）、飽和重曹水（１５ｍＬ）および飽和食塩水（１５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−クロロホルム（１：４）で溶出）で精製し、Ｎ−（３−（２，３−ビス（メトキシメトキシ）フェニル）−３−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）プロピル）−４−（４−（メトキシメトキシ）フェノキシ）ベンズアミドを得た（３８．３ｍｇ，０．０６０ｍｍｏｌ，５３％）。【０１０５】
工程６．Ｎ−（３−（２，３−ビス（メトキシメトキシ）フェニル）−３−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）プロピル）−４−（４−（メトキシメトキシ）フェノキシ）ベンズアミド（３５．０ｍｇ，０．０５５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２．０ｍＬ）に溶解した。０℃にて、フッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム（１．０Ｍ テトラヒドロフラン溶液）（５０μＬ）を加え、１時間撹拌した。反応液に０．２Ｍ 塩酸（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１０ｍＬ）で３回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、水（１５ｍＬ）、飽和重曹水（１５ｍＬ）および飽和食塩水（１５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．０ｍＬ）に溶解し、ピリジニウムジロメート（１０３ｍｇ，０．１８２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５時間撹拌した。反応液にジエチルエーテル（１５ｍＬ）を加え、セライト濾過し、該濾液を水（１０ｍＬ）、飽和重曹水（１０ｍＬ）および飽和食塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。該残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル（３：２）で溶出）で精製し、Ｎ−（３−（２，３−ビス（メトキシメトキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−（４−（メトキシメトキシ）フェノキシ）ベンズアミドを得た（１８．４ｍｇ，０．０３５ｍｍｏｌ，６４％（２工程））。【０１０６】
工程７．Ｎ−（３−（２，３−ビス（メトキシメトキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−（４−（メトキシメトキシ）フェノキシ）ベンズアミド（１３．２ｍｇ，０．０２５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１．４ｍＬ）に溶解した。０℃にて、トリフルオロ酢酸（０．６ｍＬ）を加え、２時間撹拌した。反応液を減圧留去し、該残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル（１：２）で溶出）で精製し、化合物３を得た（９．４ｍｇ，０．０２４ｍｍｏｌ，９５％）。【０１０７】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.62 (2H, d, J = 8.9 Hz), 7.24 (1H, dd, J = 8.2, 1.2 Hz), 7.05 (1H, dd, J = 8.2, 1.2 Hz), 7.01 (1H, t, J = 6.1 Hz), 6.86 (2H, d, J = 8.6 Hz), 6.84 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.76 (2H, d, J = 8.6 Hz), 6.75 (1H, t, J = 8.2 Hz), 3.77 (2H, q, J = 6.1 Hz), 3.31 (2H, t, J = 6.1 Hz).
13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ 205.9, 167.3, 161.8, 153.7, 149.6, 147.9, 145.6, 128.7 (2C), 127.5, 121.5 (2C), 121.4 (2C), 121.1, 120.6, 119.2, 116.3 (2C), 116.0, 38.1, 34.6.
EIMS m/z (rel. int) 393 [M]+ (37), 230 (20), 213 (100).
HREIMS m/z 393.1211 (C22H19O6Nの計算値393.1212).【０１０８】
実施例４
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−メトキシベンズアミド（化合物４）
【化１２】
0006513076.tif 000013
化合物１（９．４ｍｇ，０．０２４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（１０．６ｍｇ，０．０７７ｍｍｏｌ）およびヨウ化メチル（２．５μＬ，０．０４０ｍｍｏｌ）を加え、室温で６時間撹拌した。反応液に０．５Ｍ 塩酸（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１０ｍＬ）で３回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、水（１５ｍＬ）、飽和重曹水（１５ｍＬ）および飽和食塩水（１５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルムで溶出）で精製し、化合物４を得た（４．４ｍｇ，０．０１１ｍｍｏｌ，４５％）。【０１０９】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.72 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.46 (1H, dd, J = 8.3, 1.1 Hz), 6.89 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.87 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.82 (1H, dd, J = 8.3, 1.1 Hz), 6.79 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.51 (1H, t, J = 8.3 Hz), 3.86 (2H, q, J = 5.9 Hz), 3.82 (3H, s), 3.30 (2H, t, J = 5.9 Hz).
13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ 201.7, 166.9, 162.2, 151.9, 150.1, 145.6, 142.7, 128.7 (2C), 126.9, 125.3, 121.2, 119.9 (2C), 118.4, 116.4 (2C), 114.6, 113.7 (2C), 55.4, 39.0, 35.1.
EIMS m/z (rel. int) 406 [M]+ (100), 254 (88), 135 (79).
HREIMS m/z 406.1553 (C23H22O5N2の計算値406.1529).【０１１０】
実施例５
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−メトキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−メトキシベンズアミド（化合物５）
【化１３】
0006513076.tif 000014
化合物１（９．４ｍｇ，０．０２４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（１０．６ｍｇ，０．０７７ｍｍｏｌ）およびヨウ化メチル（２．５μＬ，０．０４０ｍｍｏｌ）を加え、室温で６時間撹拌した。反応液に０．５Ｍ 塩酸（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１０ｍＬ）で３回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、水（１５ｍＬ）、飽和重曹水（１５ｍＬ）および飽和食塩水（１５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム−メタノール（４９：１）で溶出）で精製し、化合物５を得た（４．８ｍｇ，０．０１１ｍｍｏｌ，４８％）。【０１１１】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.74 (2H, d, J = 8.9 Hz), 7.48 (1H, dd, J = 8.4, 1.2 Hz), 6.95 (2H, d, J = 9.1 Hz), 6.91 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.87 (2H, d, J = 9.1 Hz), 6.86 (1H, brs), 6.83 (1H, dd, J = 8.4, 1.2 Hz), 6.64 (2H, br. s), 6.53 (1H, t, J = 8.4 Hz), 3.86 (2H, q, J = 5.4 Hz), 3.83 (3H, s), 3.81 (3H, s), 3.32 (2H, t, J = 5.4 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ 201.7, 166.8, 162.1, 156.0, 145.7, 142.7, 128.7 (2C), 125.3, 121.2, 119.8 (2C), 118.3, 115.0 (2C), 114.6, 113.7 (2C), 55.7, 55.4, 39.0, 35.0.
EIMS m/z (rel. int) 420 [M]+ (61), 269 (100), 135 (48).
HREIMS m/z 420.1710 (C24H24O5N2の計算値420.1685).【０１１２】
実施例６
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−メトキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物６）
【化１４】
0006513076.tif 000015
化合物６は、（２−（４−（ベンジルオキシ）フェノキシ）フェニル）ヒドラジンの代わりに（２−（４−（メトキシフェノキシ）フェニル）ヒドラジンを用いること以外は、化合物１と同様の製法にしたがって合成された。【０１１３】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.64 (2H, d, J = 8.6 Hz), 7.45 (1H, dd, J = 8.3, 1.1 Hz), 6.93 (2H, d, J = 8.7 Hz), 6.86 (2H, d, J = 8.7 Hz), 6.85 (2H, d, J = 8.6 Hz), 6.82 (1H, dd, J = 8.3, 1.1 Hz), 6.63 (2H, brs), 6.52 (1H, t, J = 8.3 Hz), 3.86 (2H, q, J = 5.8 Hz), 3.79 (3H, s), 3.31 (2H, t, J = 5.8 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ 201.6, 167.5, 159.5, 155.9, 149.9, 145.6, 142.7, 128.9 (2C), 126.0, 125.2, 121.2, 119.7 (2C), 118.2, 115.5 (2C), 114.9 (2C), 114.7, 55.7, 38.9, 35.1.
EIMS m/z (rel. int) 406 [M]+ (3), 268 (100), 121 (29).
HREIMS m/z 406.1535 (C23H22O5N2の計算値406.1529).【０１１４】
実施例７
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−３−メトキシベンズアミド（化合物７）
【化１５】
0006513076.tif 000016
化合物７は、塩化４−（メトキシメトキシ）ベンゾイルの代わりに塩化３−メトキシベンゾイルを用いること以外は、化合物１と同様の製法にしたがって合成された。【０１１５】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.46 (1H, dd, J = 8.3, 1.0 Hz), 7.23-7.38 (3H, m), 7.00-7.08 (2H, m), 6.88 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.83 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.79-6.84 (1H, m), 6.64 (2H, brs), 6.52 (1H, t, J = 8.3 Hz), 6.30 (1H, brs), 3.87 (2H, q, J = 5.5 Hz), 3.83 (3H, s), 3.32 (2H, t, J = 5.5 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ 201.5, 167.6, 159.8, 152.5, 149.6, 145.8, 142.7, 135.8, 129.6, 125.1, 121.0, 120.0 (2C), 118.7, 118.2, 117.8, 116.5 (2C), 114.6, 112.3, 55.4, 38.8, 35.2.
EIMS m/z (rel. int) 406 [M]+ (95), 255 (100), 151 (54), 135 (44).
HREIMS m/z 406.1550 (C23H22O5N2の計算値406.1529).【０１１６】
実施例８
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−アセトアミド（化合物８）
【化１６】
0006513076.tif 000017
化合物８は、塩化４−（メトキシメトキシ）ベンゾイルの代わりに無水酢酸を用いること以外は、化合物１と同様の製法にしたがって合成された。【０１１７】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.44 (1H, dd, J = 8.3, 1.2 Hz), 6.89 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.83 (1H, dd, J = 8.3, 1.2 Hz), 6.82 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.63 (2H, brs), 6.53 (1H, t, J = 8.3 Hz), 6.22 (1H, brs), 5.47 (1H, brs), 3.68 (2H, q, J = 5.4 Hz), 3.22 (2H, t, J = 5.4 Hz), 1.97 (3H, s).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ 201.4, 170.4, 152.3, 149.7, 145.8, 142.6, 125.1, 121.0, 120.0 (2C), 118.2, 116.4 (2C), 114.6, 38.9, 34.6, 23.3.
EIMS m/z (rel. int) 314 [M]+ (98), 254 (100).
HREIMS m/z 314.1259 (C17H18O4N2の計算値314.1267).【０１１８】
実施例９
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−フルオロベンズアミド（化合物９）
【化１７】
0006513076.tif 000018
化合物９は、塩化４−（メトキシメトキシ）ベンゾイルの代わりに塩化４−フルオロベンゾイルを用いること以外は、化合物１と同様の製法にしたがって合成された。【０１１９】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ 7.79 (2H, dd, J = 8.5, 5.3 Hz), 7.50 (1H, dd, J = 8.3, 1.2 Hz), 7.11 (2H, dd, J = 9.0, 8.5 Hz), 6.87 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.82 (1H, dd, J = 8.3, 1.2 Hz), 6.81 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.54 (1H, t, J = 8.3 Hz), 3.82 (2H, t, J = 6.0 Hz), 3.34 (2H, t, J = 6.0 Hz).
13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ 201.8, 167.4, 166.6 (d, J = 229.9 Hz), 164.1, 153.5, 149.1, 146.3, 142.6, 129.5 (2C, d, J = 8.6 Hz), 125.1, 120.9, 120.2 (2C), 118.4, 116.4 (2C), 115.7 (2C, d, J = 21.5 Hz), 114.9, 38.9, 35.6.
EIMS m/z (rel. int) 394 [M]+ (46), 254 (100), 123 (39).
HREIMS m/z 394.1327 (C22H19O4N2Fの計算値394.1329).【０１２０】
実施例１０
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−シクロヘキサンカルボキサミド（化合物１０）
【化１８】
0006513076.tif 000019
化合物１０は、塩化４−（メトキシメトキシ）ベンゾイルの代わりに塩化シクロヘキサンカルボニルを用いること以外は、化合物１と同様の製法にしたがって合成された。【０１２１】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.44 (1H, d, J = 8.0 Hz), 6.90 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.78-6.87 (3H, m), 6.63 (2H, brs), 6.52 (1H, t, J = 8.0 Hz), 6.23 (1H, brs), 5.56 (1H, brs), 3.66 (2H, q, J = 5.7 Hz), 3.20 (2H, t, J = 5.7 Hz), 2.05 (1H, tt, J = 12.2, 3.9 Hz), 1.73-1.86 (4H, m), 1.35-1.48 (2H, m), 1.17-1.31 (4H, m).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ 201.6, 176.2, 152.2, 149.9, 145.7, 142.6, 125.2, 121.1, 120.0 (2C), 118.3, 116.5 (2C), 114.6, 45.5, 39.0, 34.4, 29.6 (2C), 25.7 (3C).
EIMS m/z (rel. int) 382 [M]+ (100), 254 (90).
HREIMS m/z 382.1854 (C22H26O4N2の計算値382.1893).【０１２２】
実施例１１
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）−カルボキサミド（化合物１１）
【化１９】
0006513076.tif 000020
化合物１１は、塩化４−（メトキシメトキシ）ベンゾイルの代わりに塩化テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボニルを用いること以外は、化合物１と同様の製法にしたがって合成された。【０１２３】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.68 (1H, brs), 7.45 (1H, dd, J = 8.3, 1.2 Hz), 6.87 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.83 (1H, dd, J = 8.3, 1.2 Hz), 6.80 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.76 (2H, brs), 6.62 (1H, brs), 6.54 (1H, t, J = 8.3 Hz), 3.99 (2H, ddd, J = 11.3, 3.8, 2.2 Hz), 3.65 (2H, q, J = 5.6 Hz), 3.41 (2H, td, J = 11.3, 3.4 Hz), 3.21 (2H, t, J = 5.6 Hz), 2.33 (1H, tt, J = 10.7, 5.0 Hz), 1.70-1.83 (4H, m).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ 201.8, 175.1, 153.4, 149.1, 146.2, 142.5, 125.1, 120.9, 120.2 (2C), 118.3, 116.4 (2C), 114.9, 67.4 (2C), 42.2, 38.8, 34.9, 29.2 (2C).
EIMS m/z (rel. int) 384 [M]+ (100), 328 (20), 254 (78).
HREIMS m/z 384.1673 (C21H24O5N2の計算値384.1685).【０１２４】
実施例１２
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−メトキシフェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物１２）
【化２０】
0006513076.tif 000021
化合物１２は、２−（４−（ベンジルオキシ）フェノキシ）フェニル）ヒドラジンの代わりに（２−メトキシフェニル）ヒドラジンを用いること以外は、化合物１と同様の製法にしたがって合成された。【０１２５】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3-CD3OD (4:1)) δ 7.63 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.37 (1H, d, J = 8.3 Hz), 6.86 (1H, d, J = 8.3 Hz), 6.83 (2H, d, J = 8.5 Hz), 6.60 (1H, t, J = 8.3 Hz), 3.88 (3H, s), 3.80 (2H, q, J = 5.7 Hz), 3.29 (2H, t, J = 6.6 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3-CD3OD (4:1)) δ 202.0, 168.2, 160.4, 147.5, 141.6, 129.0 (2C), 125.5, 122.6, 117.2, 115.4, 114.7, 113.3 (2C), 55.9, 39.0, 35.3.
EIMS m/z (rel. int) 314 [M]+ (41), 177 (100), 121 (67), 44 (77).
HREIMS m/z 314.1258 (C17H18O4N2の計算値314.1267).【０１２６】
実施例１３
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−ヒドロキシフェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物１３）
【化２１】
0006513076.tif 000022
化合物１３は、２−（４−（ベンジルオキシ）フェノキシ）フェニル）ヒドラジンの代わりに（２−（ベンジルオキシ）フェニル）ヒドラジンを用いること以外は、化合物１と同様の製法にしたがって合成された。【０１２７】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.68 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.35 (1H, d, J = 8.1 Hz), 6.78-6.84 (3H, m), 6.48 (1H, t, J = 8.1 Hz), 3.72 (2H, q, J = 6.6 Hz), 3.28 (2H, t, J = 6.6 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ 202.6, 170.2, 162.0, 146.3, 142.4, 130.2 (2C), 126.5, 122.9, 118.9, 118.0, 116.1 (2C), 115.7, 39.8, 37.2.
EIMS m/z (rel. int) 300 [M]+ (87), 163 (57), 121 (100), 44 (91).
HREIMS m/z 300.1128 (C16H16O4N2の計算値300.1110).【０１２８】
実施例１４
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−メチルフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物１４）
【化２２】
0006513076.tif 000023
化合物１４は、２−（４−（ベンジルオキシ）フェノキシ）フェニル）ヒドラジンの代わりに（２−（ｐ−トリルオキシ）フェニル）ヒドラジンを用いる以外は、化合物１と同様の製法にしたがって合成された。【０１２９】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.68 (2H, d, J = 8.7 Hz), 7.63 (1H, d, J = 8.2 Hz), 7.13 (2H, d, J = 8.2 Hz), 6.82-6.88 (3H, m), 6.80 (2H, d, J = 8.2 Hz), 6.55 (1H, t, J = 8.2 Hz), 3.74 (2H, t, J = 6.8 Hz), 3.31 (2H, t, J = 6.8 Hz), 2.30 (3H, s).
13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ 202.4, 170.2, 162.0, 156.2, 146.1, 144.6, 134.0, 131.3 (2C), 130.2 (2C), 127.4, 126.4, 123.5, 119.9, 118.9 (2C), 116.1 (2C), 115.4, 39.9, 37.1, 20.7.
EIMS m/z (rel. int) 390 [M]+ (100), 303 (16), 252 (82), 226 (25), 121 (17).
HREIMS m/z 390.1577 (C23H22O4N2の計算値390.1580).【０１３０】
実施例１５
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−（トリフルオロメチル）フェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物１５）
【化２３】
0006513076.tif 000024
化合物１５は、２−（４−（ベンジルオキシ）フェノキシ）フェニル）ヒドラジンの代わりに（２−（４−（トリフルオロメチル）フェノキシ）フェニル）ヒドラジンを用いる以外は、化合物１と同様の製法にしたがって合成された。【０１３１】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ 7.77 (1H, d, J = 8.2 Hz), 7.68 (2H, d, J = 8.7 Hz), 7.60 (2H, d, J = 9.0 Hz), 7.04-7.08 (3H, m), 6.81 (2H, d, J = 8.7 Hz), 6.65 (1H, t, J = 8.2 Hz), 3.74 (2H, t, J = 6.7 Hz), 3.33 (2H, t, J = 6.8 Hz).
13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ 202.4, 170.2, 162.0, 161.9, 145.1, 143.7, 130.2 (2C), 129.3, 128.2 (2C, q, J = 3.6 Hz), 126.7, 126.2, 125.8 (q, J = 32.2 Hz), 125.7 (q, J = 270.8 Hz), 120.5, 117.9 (2C), 116.1 (2C), 115.6, 39.9, 37.1.
EIMS m/z (rel. int) 444 [M]+ (100), 306 (90), 280 (41), 121 (30).
HREIMS m/z 444.1296 (C23H19O4N2F3の計算値444.1297).【０１３２】
実施例１６
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（３，４−ジメトキシフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物１６）
【化２４】
0006513076.tif 000025
化合物１６は、２−（４−（ベンジルオキシ）フェノキシ）フェニル）ヒドラジンの代わりに（２−（３，４−ジメトキシフェノキシ）フェニル）ヒドラジンを用いること以外は、化合物１と同様の製法にしたがって合成された。【０１３３】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.68 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.61 (1H, d, J = 8.3 Hz), 6.87 (1H, d, J = 8.0 Hz), 6.86 (1H, d, J = 8.3 Hz), 6.80 (2H, d, J = 8.5 Hz), 6.70 (1H, d, J = 2.7 Hz), 6.55 (1H, t, J = 8.3 Hz), 6.47 (1H, dd, J = 8.0, 2.7 Hz), 3.80 (3H, s), 3.77 (3H, s), 3.74 (2H, t, J = 6.6 Hz), 3.31 (2H, t, J = 6.6 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ 202.4, 170.2, 162.0, 152.4, 151.6, 146.8, 146.6, 144.4, 130.2, 127.1, 126.4, 122.9, 119.8, 116.1 (2C), 115.4, 113.9, 110.5 (2C), 104.9, 57.0, 56.5, 39.9, 37.1.
EIMS m/z (rel. int) 436 [M]+ (100), 299 (85), 284 (47), 272 (19), 121 (52).
HREIMS m/z 436.1656 (C24H24O6N2の計算値436.1634).【０１３４】
実施例１７
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物１７）
【化２５】
0006513076.tif 000026
化合物１７は、２−（４−（ベンジルオキシ）フェノキシ）フェニル）ヒドラジンの代わりに（２−（４−クロロフェノキシ）フェニル）ヒドラジンを用いること以外は、化合物１と同様の製法にしたがって合成された。【０１３５】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.70 (1H, d, J = 8.3 Hz), 7.67 (2H, d, J = 8.7 Hz), 7.30 (2H, d, J = 8.7 Hz), 6.97 (1H, d, J = 8.3 Hz), 6.93 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.80 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.60 (1H, t, J = 8.3 Hz), 3.74 (2H, t, J = 6.8 Hz), 3.30 (2H, t, J = 6.8 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ 202.4, 170.2, 162.1, 157.6, 144.9, 131.4, 130.8 (2C), 130.2 (2C), 129.0, 128.4, 126.4, 124.9, 120.2, 119.8 (2C), 116.0 (2C), 115.5, 39.9, 37.1.
EIMS m/z (rel. int) 412 [M+2]+ (38), 410 [M]+ (100), 274 (38), 272 (83), 246 (36), 121 (56).
HREIMS m/z 410.1046 (C22H19O4ClN2の計算値410.1033).【０１３６】
実施例１８
８−（４−ヒドロキシフェノキシ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン−１−オン（化合物１８）
【化２６】
0006513076.tif 000027
J. Org. Chem. 2005, 70, 8854-8858に記載の製法により合成された８−（４−ベンジルオキシフェノキシ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン−１−オン（２９９ｍｇ，０．７７８ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（３ｍＬ）およびエタノール（３ｍＬ）に溶解し、２０％ 水酸化パラジウム−炭素（６０ｍｇ）を加え、水素雰囲気（１気圧）下室温で４時間撹拌した。反応液を濾過し、該濾液を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム−メタノール（９：１）で溶出）で精製し、化合物１８を得た（１７１．７ｍｇ，０．５８３ｍｍｏｌ，７５％）。【０１３７】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.69 (1H, br.s), 9.23 (1H, br.s), 7.53 (1H, br.s), 7.30 (1H, d, J = 8.0 Hz), 6.97 (1H, t, J = 8.0 Hz), 6.88 (2H, d, J = 8.2 Hz), 6.77 (2H, d, J = 8.2 Hz), 6.59 (1H, d, J = 8.0 Hz), 3.51 (2H, t, J = 6.8 Hz), 2.92 (2H, t, J = 6.8 Hz).
13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ 161.4, 153.4, 148.7, 144.7, 128.8, 127.8, 127.4, 120.0 (2C), 119.9, 118.9, 115.9 (2C), 114.6, 110.8, 41.0, 20.5.
EIMS m/z (rel. int) 294 [M]+ (100), 265 (14), 237 (49).
HREIMS m/z 294.0992 (294.1004の計算値C17H14O3N2).【０１３８】
実施例１９および２０
Ｎ−（３−（２−アミノ−３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−アミノベンズアミド（化合物１９）およびＮ−（３−（２−アミノ−３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−３−オキソプロピル）−４−アセチルアミノベンズアミド（化合物２０）
化合物１９：
【化２７】
0006513076.tif 000028
化合物２０：
【化２８】
0006513076.tif 000029
工程１．Ｎ−（２−（７−（４−クロロフェノキシ）−１Ｈ−インドール−３−イル）エチル）−２−ニトロベンゼンスルホンアミド（１７２ｍｇ，０．３６４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（１００ｍｇ，０．７２８ｍｍｏｌ）およびｐ−メルカプト安息香酸（２２５ｍｇ，１．４６ｍｍｏｌ）を加え、４０℃で１０時間撹拌した。反応液に水（１５ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１０ｍＬ）で４回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、水（３０ｍＬ）、飽和重曹水（２０ｍＬ）および飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をジクロロメタン（４ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（０．３００ｍＬ，２．１６ｍｍｏｌ）および塩化４−アセトアミドベンゾイル（１９４ｍｇ，１．０８ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（５ｍＬ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液に０．３Ｍ 塩酸（２０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（２０ｍＬ）で３回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、水（３０ｍＬ）、飽和重曹水（３０ｍＬ）および飽和食塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル（９：１）で溶出）で精製し、Ｎ−（２−（７−（４−クロロフェノキシ）−１Ｈ−インドール−３−イル）エチル）−４−アセトアミドベンズアミドを得た（２９ｍｇ，０．０６５ｍｍｏｌ，１８％（２工程））。【０１３９】
工程２．Ｎ−（２−（７−（４−クロロフェノキシ）−１Ｈ−インドール−３−イル）エチル）−４−アセトアミドベンズアミド（２９ｍｇ，０．０６５ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１ｍＬ）および水（１ｍＬ）に溶解し、メタ過ヨウ素酸ナトリウム（６０ｍｇ，０．２８１ｍｍｏｌ）を加え、６０℃で４８時間撹拌した。反応液に水（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１０ｍＬ）で３回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和食塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をメタノール（１ｍＬ）に溶解し、塩酸−メタノール試薬（５〜１０％）（１ｍＬ）を加え、室温で４時間撹拌した。反応液に飽和重曹水（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１５ｍＬ）で３回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム−メタノール（９９：１）で溶出）で精製し、化合物１９を得た（３ｍｇ，０．００７ｍｍｏｌ，１０％（２工程））。また、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム−メタノール（４９：１）で溶出）で精製し、化合物２０を得た（２ｍｇ，０．００５ｍｍｏｌ，７％（２工程））。【０１４０】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
化合物１９：
1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ 7.71 (1H, dd, J = 8.2, 1.3 Hz), 7.57 (2H, d, J = 8.9 Hz), 7.31 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.97 (1H, dd, J = 8.2, 1.3 Hz), 6.94 (2H, d, J = 9.1 Hz), 6.66 (2H, d, J = 9.1 Hz), 6.60 (1H, t, J = 8.2 Hz), 3.73 (2H, t, J = 6.9 Hz), 3.32 (2H, t, J = 6.9 Hz).
13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ 202.5, 170.5, 157.6, 153.2, 144.9, 144.8, 130.8 (2C), 129.9 (2C), 129.0, 128.5, 124.9, 123.2, 120.2, 119.8 (2C), 115.5, 114.7 (2C), 40.0, 37.0.
EIMS m/z (rel. int) 411 [M+2]+ (4), 409 [M]+ (12), 274 (29), 272 (69), 136 (47), 120 (100).
HREIMS m/z 409.1219 (C22H20O3N3Clの計算値409.1193).
化合物２０：
1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.71 (2H, d, J = 8.9 Hz), 7.55 (2H, d, J = 8.9 Hz), 7.53 (1H, dd, J = 8.2, 1.2 Hz), 7.37 (1H, br.s), 7.25 (2H, d, J = 9.1 Hz), 6.92 (1H, dd, J = 8.2, 1.2 Hz), 6.88 (2H, d, J = 9.1 Hz), 6.87 (1H, t, J = 6.3 Hz), 6.56 (1H, t, J = 8.2 Hz), 6.53 (2H, br.s), 3.84 (2H, q, J = 5.7 Hz), 3.30 (2H, t, J = 5.7 Hz), 2.17 (3H, s).
13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ 201.6, 168.3, 166.6, 155.5, 143.8, 143.1, 140.8, 129.9, 129.8 (2C), 128.4, 128.0 (2C), 126.6, 123.4, 119.0 (2C), 118.9 (2C), 118.8, 114.8, 38.9, 35.0, 24.7.
EIMS m/z (rel. int) 453 [M+2] (2), 451 [M]+ (5), 274 (40), 272 (100), 136 (34), 120 (49).
HREIMS m/z 451.1278 (C24H22O4N3Clの計算値451.1299).【０１４１】
実施例２１
Ｎ−（２−（３−（４−メトキシフェノキシ）ベンゾイルアミノ）エチル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物２１）
【化２９】
0006513076.tif 000030
工程１．Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エチレンジアミン（２０２ｍｇ，１．２６ｍｏｌ）をジクロロメタン（３ｍＬ）に溶解し、３−（４−メトキシフェノキシ）安息香酸（３８５ｍｇ，１．５８ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（６６０μＬ，３．８０ｍｍｏｌ）および（１−シアノ−２−エトキシ−２−オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノモルホリノカルベニウム（８１０ｍｇ，１．８９ｍｍｏｌ）を加え、室温で１８時間撹拌した。反応液に０．３Ｍ 塩酸（２０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（２０ｍＬ）で３回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和重曹水（４０ｍＬ）および飽和食塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル（２：３）で溶出）で精製し、ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（３−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミド）エチルカルバメートを得た（４６７ｍｇ，１．３３ｍｍｏｌ，９６％）。【０１４２】
工程２．ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（３−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミド）エチルカルバメート（１０１ｍｇ，０．２６１ｍｍｏｌ）をメタノール（２．５ｍＬ）に溶解し、塩酸−メタノール試薬（５〜１０％）（２．５ｍＬ）を加え、室温で５時間撹拌した。反応液を減圧留去し、残渣をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解し、４−（メトキシメトキシ）安息香酸（６３ｍｇ，０．３４２ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２００μＬ，１．１５ｍｍｏｌ）、および（１−シアノ−２−エトキシ−２−オキソエチリデンアミドオキシ）ジメチルアミノモルホリノカルベニウム（１７３ｍｇ，０．４０４ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５時間撹拌した。反応液に０．３Ｍ 塩酸（２０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（２０ｍＬ）で３回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和重曹水（４０ｍＬ）および飽和食塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチルで溶出）で精製し、Ｎ−（２−（４−（メトキシメトキシ）フェニルアミド）エチル）−３−（４−メトキシフェノキシ）ベンズアミドを得た（８０ｍｇ，０．１７８ｍｍｏｌ，６８％（２工程））。【０１４３】
工程３．Ｎ−（２−（４−（メトキシメトキシ）フェニルアミド）エチル）−３−（４−メトキシフェノキシ）ベンズアミド（４９ｍｇ，０．１０９ｍｍｏｌ）をメタノール（１．５ｍＬ）に溶解し、塩酸−メタノール試薬（５〜１０％）（１．５ｍＬ）を加え、室温で５時間撹拌した。反応液を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム−メタノール（１９：１）で溶出）で精製し、化合物２１を得た（３９ｍｇ，０．０９６ｍｍｏｌ，８８％）。【０１４４】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳ及びＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.38 (1H, br.s), 8.00 (1H, br.s), 7.69 (1H, br.s), 7.63 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.44 (1H, ddd, J = 7.9, 2.0, 1.2 Hz), 7.40 (1H, dd, J = 2.0, 1.2 Hz), 7.29 (1H, t, J = 7.9 Hz), 7.02 (1H, ddd, J = 7.9, 2.0, 1.2 Hz), 6.93 (2H, d, J = 9.2 Hz), 6.86 (2H, d, J = 9.2 Hz), 6.79 (2H, d, J = 8.8 Hz), 3.77 (3H, s), 3.53-3.60 (4H, m).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ 169.0, 168.6, 160.2, 158.7, 156.0, 149.5, 135.5, 129.7, 129.0 (2C), 124.7, 120.8 (2C), 120.7, 120.5, 116.2 (2C), 115.2, 114.9 (2C), 55.5, 40.5, 40.2.
EIMS m/z (rel. int) 406 [M]+ (100), 269 (40), 256 (23), 227 (69), 121 (73).
HREIMS m/z 406.1505 (C23H22N2O5の計算値406.1529).【０１４５】
実施例２２
Ｎ−（２−（２−（４−メトキシフェノキシ）ベンゾイルアミノ）エチル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物２２）
【化３０】
0006513076.tif 000031
化合物２２は、３−（４−メトキシフェノキシ）安息香酸の代わりに、２−（４−メトキシフェノキシ）安息香酸を用いる以外は、化合物２１と同様の製法にしたがって合成された。【０１４６】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳ及びＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.87 (1H, dd, J = 7.8, 1.7 Hz), 7.57 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.37 (1H, td, J = 7.8, 1.7 Hz), 7.13 (1H, td, J = 7.8, 1.7 Hz), 6.92 (2H, d, J = 9.3 Hz), 6.85 (2H, d, J = 9.3 Hz), 6.71-6.80 (3H, m), 3.79 (3H, s), 3.62 (2H, t, J = 5.9 Hz), 3.55 (2H, t, J = 5.9 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ 170.4, 164.3, 162.0, 158.2, 157.8, 150.1, 133.6, 131.8, 130.2 (2C), 126.2, 123.8, 122.2 (2C), 121.9, 118.3, 116.1 (2C), 116.0 (2C), 56.1, 40.7, 40.6.
EIMS m/z (rel. int) 406 [M]+ (25), 215 (100).
HREIMS m/z 406.1549 (C23H22N2O5の計算値406.1529).【０１４７】
実施例２３
Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）−４−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニルアミノ）−４−オキソブタンアミド（化合物２３）
【化３１】
0006513076.tif 000032
４−（４−ヒドロキシフェニルアミノ）−４−オキソブタン酸（２６ｍｇ，０．１２２ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍＬ）に溶解し、３−（４−クロロフェノキシ）アニリン（２６ｍｇ，０．１３６ｍｍｏｌ）および４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリド（３７ｍｇ，０．１３４ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応液に０．３Ｍ 塩酸（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１０ｍＬ）で３回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和重曹水（２０ｍＬ）および飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム−メタノール（１９：１）で溶出）で精製し、化合物２３を得た（１１ｍｇ，０．０２６ｍｍｏｌ，２１％）。【０１４８】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳ及びＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.36 (1H, t, J = 1.5 Hz), 7.32 (2H, d, J = 9.0 Hz), 7.29 (2H, d, J = 8.9 Hz), 7.24-7.28 (2H, m), 6.97 (2H, d, J = 9.0 Hz), 6.73-6.70 (3H, m), 2.65-2.74 (4H, m).
13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ 173.1, 172.6, 158.7, 157.4, 155.3, 141.6, 131.7, 131.0, 130.8 (2C), 129.4, 123.4 (2C), 121.4 (2C), 116.2 (2C), 116.1, 115.2, 111.6, 32.8, 32.4.
EIMS m/z (rel. int) 412 [M+2]+ (4), 410 [M]+ (11), 303 (25), 301 (67), 221 (33), 219 (100), 191 (92), 109 (84).
HREIMS m/z 410.1019 (C22H19N2O4Clの計算値410.1033).【０１４９】
実施例２４
Ｎ−（３−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物２４）
【化３２】
0006513076.tif 000033
工程１．３−（４−クロロフェノキシ）アニリン（５５ｍｇ，０．２５０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３ｍＬ）に溶解し、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニン（５９ｍｇ，０．３１２ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１３０μＬ，０．７７６ｍｍｏｌ）および（１−シアノ−２−エトキシ−２−オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノモルホリノカルベニウム（１４５ｍｇ，０．３３９ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌した。反応液に０．３Ｍ 塩酸（２０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（２０ｍＬ）で３回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和重曹水（４０ｍＬ）および飽和食塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル（３：７）で溶出）で精製し、ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピルカルバメートを得た（６１ｍｇ，０．１５５ｍｍｏｌ，６２％）。【０１５０】
工程２．ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピルカルバメート（５３ｍｇ，０．１３５ｍｍｏｌ）をメタノール（１．５ｍＬ）に溶解し、塩酸−メタノール試薬（５〜１０％）（１．５ｍＬ）を加え、室温で４時間撹拌した。反応液を減圧留去し、残渣をジクロロメタン（３ｍＬ）に溶解し、４−（メトキシメトキシ）安息香酸（３２ｍｇ，０．１７５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１００μＬ，０．５７４ｍｍｏｌ）および（１−シアノ−２−エトキシ−２−オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノモルホリノカルベニウム（９０ｍｇ，０．２１０ｍｍｏｌ）を加え、室温で１２時間撹拌した。反応液に０．３Ｍ 塩酸（２０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（２０ｍＬ）で３回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせて、飽和重曹水（４０ｍＬ）および飽和食塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム−メタノール（３９：１）で溶出）で精製し、Ｎ−（３−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）−４−（メトキシメトキシ）ベンズアミドを得た（３８ｍｇ，０．０８２ｍｍｏｌ，６１％（２工程））。【０１５１】
工程３．Ｎ−（３−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）−４−（メトキシメトキシ）ベンズアミド（２８ｍｇ，０．０６３ｍｍｏｌ）をメタノール（１ｍＬ）に溶解し、塩酸−メタノール試薬（５〜１０％）（１ｍＬ）を加え、室温で５時間撹拌した。反応液を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム−メタノール（１９：１）で溶出）で精製し、化合物２４を得た（９ｍｇ，０．０２２ｍｍｏｌ，３５％）。【０１５２】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳ及びＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.66 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.32-7.36 (1H, m), 7.28 (2H, d, J = 9.0 Hz), 7.24-7.27 (2H, m), 6.95 (2H, d, J = 9.0 Hz), 6.83 (2H, J = 8.8 Hz), 6.70-6.74 (1H, m), 3.67 (2H, t, J = 6.5 Hz), 2.65 (2H, t, J = 6.5 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ 170.8, 168.4, 160.3, 157.2, 155.5, 139.6, 129.8, 129.5 (2C), 128.8 (2C), 128.2, 124.7, 120.0 (2C), 115.1 (2C), 114.8, 114.2, 110.4, 36.5, 36.0.
EIMS m/z (rel. int) 412 [M+2]+ (3), 410 [M]+ (8), 275 (6), 273 (20), 221 (24), 219 (73), 121 (100).
HREIMS m/z 410.1014 (C22H19N2O4Clの計算値410.1032).【０１５３】
実施例２５
Ｎ−（２−（３−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミノ）−２−オキシエチル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物２５）
【化３３】
0006513076.tif 000034
化合物２５は、３−（４−クロロフェノキシ）アニリンの代わりに３−（４−メトキシフェノキシ）アニリンを、また、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニンの代わりにＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）グリシンを用いる以外は、化合物２４と同様の製法にしたがって合成された。【０１５４】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳ及びＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, アセトン-d6) δ 7.74 (2H, d, J = 8.9 Hz), 7.18-7.27 (3H, m), 6.98 (2H, d, J = 9.2 Hz), 6.89 (2H, d, J = 9.2 Hz), 6.86 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.65-6.72 (1H, m), 4.14 (2H, s), 3.81 (3H, s).
13C-NMR (100 MHz, アセトン-d6) δ 167.8, 160.5, 158.8, 155.8, 149.7, 141.7, 138.9, 129.6, 129.0 (2C), 124.1, 120.7 (2C), 115.1 (2C), 114.7 (2C), 113.8, 113.1, 109.2, 55.4, 43.7.
EIMS m/z (rel. int) 392 [M]+ (44), 215 (100), 121 (27).
HREIMS m/z 392.1385 (C22H20N2O5の計算値392.1372).【０１５５】
実施例２６
Ｎ−（３−（３−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物２６）
【化３４】
0006513076.tif 000035
化合物２６は、３−（４−クロロフェノキシ）アニリンの代わりに３−（４−メトキシフェノキシ）アニリンを用いる以外は、化合物２４と同様の製法にしたがって合成された。【０１５６】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳ及びＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.67 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.24-7.19 (3H, m), 6.98 (2H, d, J = 9.3 Hz), 6.89 (2H, d, J = 9.3 Hz), 6.84 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.63-6.71 (1H, m), 3.80 (3H, s), 3.67 (2H, t, J = 6.6 Hz), 2.64 (2H, t, J = 6.6 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ 170.7, 168.5, 160.2, 158.6, 155.7, 149.6, 139.2, 129.4, 128.7 (2C), 124.6, 120.6 (2C), 114.9 (2C), 114.6 (2C), 113.7, 112.9, 109.1, 55.3, 36.3, 35.8.
EIMS m/z (rel. int) 406 [M]+ (55), 269 (23), 215 (100), 121 (28).
HREIMS m/z 406.1504 (C23H22N2O5の計算値406.1529).【０１５７】
実施例２７
Ｎ−（４−（３−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミノ）−４−オキソブチル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物２７）
【化３５】
0006513076.tif 000036
化合物２７は、３−（４−クロロフェノキシ）アニリンの代わりに３−（４−メトキシフェノキシ）アニリンを、また、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニンの代わりにＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−アミノブタン酸を用いる以外は、化合物２４と同様の製法にしたがって合成された。【０１５８】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳ及びＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.66 (2H, d, J = 8.3 Hz), 7.25-7.17 (3H, m), 6.97 (2H, d, J = 8.4 Hz), 6.88 (2H, d, J = 8.4 Hz), 6.81 (2H, d, J = 8.3 Hz), 6.61-6.66 (1H, m), 3.80 (3H, s), 3.44 (2H, t, J = 6.7 Hz), 2.40 (2H, t, J = 6.7 Hz), 1.95 (2H, quint, J = 6.7 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ 183.4, 172.4, 168.7, 160.1, 158.7, 155.8, 149.8, 139.5, 129.5, 128.8 (2C), 120.7 (2C), 115.0 (2C), 114.7 (2C), 113.8, 112.9, 109.2, 55.5, 39.2, 34.5, 25.4.
EIMS m/z (rel. int) 420 [M]+ (100), 270 (16), 257 (36), 215 (96), 121 (84).
HREIMS m/z 420.1693 (C24H24N2O5の計算値420.1684).【０１５９】
実施例２８
Ｎ−（２−（２−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミノ）−２−オキソエチル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物２８）
【化３６】
0006513076.tif 000037
化合物２８は、３−（４−クロロフェノキシ）アニリンの代わりに２−（４−メトキシフェノキシ）アニリンを、また、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニンの代わりにＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）グリシンを用いる以外は、化合物２４と同様の製法にしたがって合成された。【０１６０】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳ及びＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ 7.67 (2H, d, J = 8.9 Hz), 7.00-7.11 (2H, m), 6.90 (2H, d, J = 9.1 Hz), 6.83 (2H, d, J = 9.0 Hz), 6.80 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.77-6.86 (2H, m), 4.19 (2H, s), 3.77 (3H, s).
13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ 166.9, 160.8, 154.4, 150.4, 145.2, 131.3, 129.8 (2C), 129.0, 127.5, 123.6, 120.9 (2C), 119.9, 116.9 (2C), 115.6 (2C), 114.4, 114.2, 109.2, 41.2, 26.5.
EIMS m/z (rel. int) 392[M]+ (24), 215 (100).
HREIMS m/z 392.1385 (C22H20N2O5の計算値392.1372).【０１６１】
実施例２９
Ｎ−（３−（２−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物２９）
【化３７】
0006513076.tif 000038
化合物２９は、３−（４−クロロフェノキシ）アニリンの代わりに２−（４−メトキシフェノキシ）アニリンを用いる以外は、化合物２４と同様の製法にしたがって合成された。【０１６２】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳ及びＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ 8.15 (1H, dd, J = 7.8, 1.3 Hz), 7.66 (2H, d, J = 8.7 Hz), 7.04 (1H, td, J = 7.8, 1.3 Hz), 7.01 (1H, td, J = 7.8, 1.3 Hz), 6.93 (2H, d, J = 9.0 Hz), 6.88 (2H, d, J = 9.0 Hz), 6.82 (2H, d, J = 8.7 Hz), 6.73 (1H, dd, J = 7.8, 1.3 Hz), 3.80 (3H, s), 3.71 (2H, t, J = 6.2 Hz), 2.73 (2H, t, J = 6.2 Hz).
13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ 170.8, 168.2, 160.1, 155.9, 149.1, 148.1, 128.7 (2C), 127.8, 124.7, 124.6, 122.5, 122.0, 120.4 (2C), 116.1, 114.9 (2C), 114.7 (2C), 55.3, 36.3, 35.8.
EIMS m/z (rel. int) 406 [M]+ (25), 215 (100).
HREIMS m/z 406.1535 (C23H22N2O5の計算値406.1529).【０１６３】
実施例３０
Ｎ−（３−（４−（４−メトキシフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物３０）
【化３８】
0006513076.tif 000039
化合物３０は、３−（４−クロロフェノキシ）アニリンの代わりに４−（４−メトキシフェノキシ）アニリンを用いる以外は、化合物２４と同様の製法にしたがって合成された。【０１６４】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳ及びＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.68 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.47 (2H, d, J = 9.3 Hz), 6.94 (2H, d, J = 9.0 Hz), 6.90 (2H, d, J = 9.0 Hz), 6.87 (2H, d, J = 9.3 Hz), 6.84 (2H, d, J = 8.8 Hz), 3.80 (3H, s), 3.69 (2H, t, J = 6.5 Hz), 2.66 (2H, t, J = 6.5 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ 170.5, 168.4, 160.2, 155.5, 154.5, 150.3, 132.7, 128.8 (2C), 124.6, 121.5 (2C), 120.1 (2C), 117.9 (2C), 115.0 (2C), 114.6 (2C), 55.4, 36.2, 36.0.
EIMS m/z (rel. int) 406 [M]+ (48), 215 (100), 121(24).
HREIMS m/z 406.1542 (C23H22N2O5の計算値406.1527).【０１６５】
実施例３１
Ｎ−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−１−（４−ヒドロキシフェニルカルボニル）アゼチジン−３−カルボキサミド（化合物３１）
【化３９】
0006513076.tif 000040
化合物３１は、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニンの代わりに１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アゼチジン−３−カルボン酸を用いる以外は、化合物２４と同様の製法にしたがって合成された。【０１６６】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳ及びＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ 7.50 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.30-7.34 (1H, m), 7.29 (2H, d, J = 8.9 Hz), 7.21-7.27 (2H, m), 6.93 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.78 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.69 (1H, dt, J = 6.6, 2.7 Hz), 4.44-4.50 (2H, m), 4.25-4.31 (1H, m), 4.18-4.23 (1H, m), 3.55 (1H, tt, J = 8.6, 6.1 Hz).
13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ 172.5, 172.3, 162.0, 158.8, 157.2, 141.3, 131.2, 131.1 (2C), 130.9 (2C), 129.5, 124.5, 121.4 (2C), 116.2 (2C), 116.1, 115.5, 111.6, 56.9, 52.7, 35.5.
EIMS m/z (rel. int) 424 [M+2]+ (1), 422 [M]+ (3), 287 (1), 285 (4), 274 (20), 272 (41), 121 (100).
HREIMS m/z 422.1004 (C23H19O4N2Clの計算値422.1033).【０１６７】
実施例３２
Ｎ−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−１−（４−ヒドロキシフェニルカルボニル）ピロリジン−３−カルボキサミド（化合物３２）
【化４０】
0006513076.tif 000041
化合物３２は、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニンの代わりに１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−カルボン酸を用いる以外は、化合物２４と同様の製法にしたがって合成された。【０１６８】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＮＭＲスペクトルにおいて、標題化合物は２種の配座異性体の混合物（混合比１：１）として観測された。ＥＩＭＳ及びＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ 7.38 (2H, d, J = 8.2 Hz), 7.31-7.35 (1H, m), 7.19-7.29 (4H, m), 6.89-6.94 (2H, m), 6.77 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.65-6.71 (1H, m), 3.62-3.83 (3H, m), 3.52-3.61 (1H, m), 3.16-3.22 (0.5H, m), 3.04-3.11 (0.5H, m), 2.20-2.27 (0.5H, m), 2.04-2.20 (1.5H, m).
13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ 173.6 (0.5C), 172.8 (0.5C), 172.1 (0.5C), 171.9 (0.5C), 160.9, 158.8, 157.3, 141.5 (0.5C), 141.4 (0.5C), 131.1, 130.9 (2C), 130.4 (2C), 129.5, 128.2, 121.4 (2C), 116.1, 116.0 (2C), 115.4, 111.6 (0.5C), 111.5 (0.5C), 53.2 (0.5C), 50.5 (0.5C), 50.3 (0.5C), 47.2 (0.5C), 46.6 (0.5C), 44.8 (0.5C), 31.4 (0.5C), 29.5 (0.5C).
EIMS m/z (rel. int) 438 [M+2]+ (6), 436 [M]+ (17), 317 (4), 315 (12), 221 (3), 219 (9), 190 (100), 121 (85).
HREIMS m/z 436.1177 (C24H21O4N2Clの計算値436.1190).【０１６９】
実施例３３
Ｎ−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−１−（４−ヒドロキシフェニルカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（化合物３３）
【化４１】
0006513076.tif 000042
化合物３３は、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニンの代わりに１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−３−カルボン酸を用いる以外は、化合物２４と同様の製法にしたがって合成された。【０１７０】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳ及びＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ 7.29 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.18-7.27 (5H, m), 6.93 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.75-6.81 (2H, m), 6.66-6.70 (1H, m), 3.72-3.82 (1H, m), 3.25-3.36 (1H, m), 3.05-3.20 (2H, m), 2.49-2.61 (1H, m), 1.96-2.05 (1H, m), 1.66-1.85 (2H, m), 1.47-1.58 (1H, m).
13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ 174.1, 173.2, 160.7, 158.7, 157.3, 141.4, 131.1, 130.8 (2C), 130.2 (2C), 129.5, 127.3, 121.4 (2C), 116.2 (2C), 116.1, 115.4, 111.5, 46.3, 45.0, 44.0, 29.0, 26.2.
EIMS m/z (rel. int) 452 [M+2]+ (13), 450 [M]+ (35), 331 (9), 329 (24), 204 (100), 121 (85).
HREIMS m/z 450.1344 (C25H23O4N2Clの計算値450.1346).【０１７１】
実施例３４
Ｎ−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニル）−１−（４−ヒドロキシフェニルカルボニル）ピロリジン−２−カルボキサミド（化合物３４）
【化４２】
0006513076.tif 000043
化合物３４は、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニンの代わりにＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−ＤＬ−プロリンを用いる以外は、化合物２４と同様の製法にしたがって合成された。【０１７２】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳ及びＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ 7.45 (2H, d, J = 8.7 Hz), 7.35-7.38 (1H, m), 7.28 (2H, d, J = 8.9 Hz), 7.23-7.27 (2H, m), 6.93 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.77 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.68-6.71 (1H, m), 4.57 (1H, t, J = 7.3 Hz), 3.66-3.74 (1H, m), 3.55-3.62 (1H, m), 2.26-2.33 (1H, m), 1.92-2.07 (2H, m), 1.79-1.87 (1H, m).
13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ 173.2, 172.1, 161.1, 158.8, 157.3, 141.4, 131.1, 130.8 (2C), 130.7 (2C), 129.5, 127.8, 121.5 (2C), 116.1, 115.9 (2C), 115.4, 111.6, 62.9, 52.0, 31.1, 26.6.
EIMS m/z (rel. int) 438 [M+2]+ (1), 436 [M]+ (3), 218 (14), 190 (40), 121 (100).
HREIMS m/z 436.1153 (C24H21O4N2Clの計算値436.1190).【０１７３】
実施例３５
Ｎ−（３−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）チオフェン−２−カルボキサミド（化合物３５）
【化４３】
0006513076.tif 000044
化合物３５は、４−（メトキシメトキシ）安息香酸の代わりに２−チオフェンカルボン酸を用いる以外は、化合物２４と同様の製法にしたがって合成された。【０１７４】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳ及びＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 9.44 (1H, br.s), 7.74 (1H, br.t, J = 6.3 Hz), 7.48 (1H, dd, J = 3.8, 1.0 Hz), 7.41 (1H, dd, J = 4.9, 1.0 Hz), 7.25-7.27 (1H, m), 7.21 (2H, d, J = 9.0 Hz), 7.15-7.19 (2H, m), 6.99 (1H, dd, J = 4.9, 3.8 Hz), 6.87 (2H, d, J = 9.0 Hz), 6.62-6.66 (1H, m), 3.59 (2H, q, J = 6.3 Hz), 2.58 (2H, t, J = 6.3 Hz).
13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ 170.6, 163.1, 157.2, 155.5, 139.5, 138.4, 130.3, 129.9, 129.6 (2C), 128.4, 128.2, 127.7, 120.1 (2C), 114.8, 114.3, 110.4, 36.5, 36.1.
EIMS m/z (rel. int) 402 [M+2] (17), 400 [M]+ (41), 221 (37), 219 (100), 182 (27), 140 (20), 111 (46).
HREIMS m/z 400.0652 (C20H17O3N2ClSの計算値400.0648).【０１７５】
実施例３６
Ｎ−（３−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）チオフェン−３−カルボキサミド（化合物３６）
【化４４】
0006513076.tif 000045
化合物３６は、４−（メトキシメトキシ）安息香酸の代わりに３−チオフェンカルボン酸を用いる以外は、化合物２４と同様の製法にしたがって合成された。【０１７６】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳ及びＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 9.38 (1H, br.s), 7.85 (1H, dd, J = 3.0, 1.2 Hz), 7.65 (1H, br.t, J = 6.1 Hz), 7.34 (1H, dd, J = 5.1, 1.2 Hz), 7.25-7.27 (1H, m), 7.25 (1H, dd, J = 5.1, 3.0 Hz), 7.20 (2H, d, J = 8.9 Hz), 7.16-7.19 (2H, m), 6.87 (2H, d, J = 8.9 Hz), 6.62-6.66 (1H, m), 3.59 (2H, q, J = 6.1 Hz), 2.58 (2H, t, J = 6.1 Hz).
13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ 170.6, 164.0, 157.3, 155.5, 139.5, 136.7, 129.9, 129.6 (2C), 128.7, 128.3, 126.4, 126.0, 120.1 (2C), 114.8, 114.3, 110.4, 36.5, 35.8.
EIMS m/z (rel. int) 402 [M+2] (8), 400 [M]+ (21), 221 (36), 219 (100), 182 (24), 140 (21), 111 (46).
HREIMS m/z 400.0652 (C20H17O3N2ClSの計算値400.0648).【０１７７】
実施例３７
Ｎ−（３−（３−（４−クロロフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）ピリジン−４−カルボキサミド（化合物３７）
【化４５】
0006513076.tif 000046
化合物３７は、４−（メトキシメトキシ）安息香酸の代わりにイソニコチン酸を用いる以外は、化合物２４と同様の製法にしたがって合成された。【０１７８】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳ及びＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.93 (1H, br.s), 8.63 (2H, d, J = 5.7 Hz), 7.92 (1H, br.t, J = 6.1 Hz), 7.58 (2H, d, J = 5.7 Hz), 7.23 (1H, t, J = 2.2 Hz), 7.20 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.19 (1H, t, J = 7.9 Hz), 7.16 (1H, dd, J = 7.9, 2.2 Hz), 6.87 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.65 (1H, dd, J = 7.9, 2.2 Hz), 3.66 (2H, q, J = 6.2 Hz), 2.63 (2H, t, J = 6.2 Hz).
13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ 170.4, 166.1, 157.4, 155.5, 150.3 (2C), 141.2, 139.4, 130.0, 129.7 (2C), 128.4, 121.1 (2C), 120.2 (2C), 114.8, 114.4, 110.5, 36.2, 36.1.
EIMS m/z (rel. int) 397 [M+2]+ (12), 395 [M]+ (33), 221 (40), 219 (100).
HREIMS m/z 395.1041 (C21H18O3N3Clの計算値395.1037).【０１７９】
実施例３８
Ｎ−（３−（３−（３，４−ジクロロフェノキシ）フェニルアミノ）−３−オキソプロピル）−４−ヒドロキシベンズアミド（化合物３８）
【化４６】
0006513076.tif 000047
化合物３８は、３−（４−クロロフェノキシ）アニリンの代わりに３−（３，４−ジクロロフェノキシ）アニリンを用いる以外は、化合物２４と同様の製法にしたがって合成された。【０１８０】
生成物は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳ及びＮＭＲの結果を以下に示す。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.62 (2H, d, J = 9.0 Hz), 7.37 (1H, t, J = 1.9 Hz), 7.31 (1H, dd, J = 8.2, 2.2 Hz), 7.27-7.21 (2H, m), 7.01-7.08 (1H, m), 6.83-6.77 (3H, m), 6.65-6.73 (1H, m), 3.64 (2H, t, J = 5.1 Hz), 2.62 (2H, t, J = 5.1 Hz).
13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ 170.7, 168.4, 160.1, 156.1, 139.6, 132.7, 130.6, 129.8, 128.7 (2C), 128.6, 126.1, 124.5, 120.0, 117.7, 115.3, 114.9 (2C), 114.4, 110.7, 36.2, 35.8.
EIMS m/z (rel. int) 446 [M+2]+ (1), 444 [M]+ (2), 311 (4), 309 (27), 307 (42), 257 (9), 255 (63), 253 (100), 121 (85), 55 (93).
HREIMS m/z 444.0652 (C22H18N2O4Cl2の計算値444.0644).【０１８１】
試験例１：OPNプロモーター制御下におけるルシフェラーゼ発現阻害効果の確認方法
pGL-3ベクター basic （Promega）のマルチクローニング部位にヒトOPNプロモーター配列（−765から23）を組み込んだ、レポーターベクターpOPN1-lucは、動物細胞にトランスフェクションするとルシフェラーゼを発現する。該pOPN1-lucを、ピューロマイシン耐性遺伝子（ピューロマイシン−Ｎ−アセチル−トランスフェラーゼ遺伝子（puromycin-N-acetyl-transferase gene））を発現するpPUR（Clontech）と共にヒト非小細胞肺癌由来細胞株A549にトランスフェクトし、ピューロマイシン添加培地にて増殖可能である、ルシフェラーゼを発現する細胞を選択した。選択された細胞を「A549/OPNluc細胞」と称し、後述のOPNプロモーター制御下におけるルシフェラーゼ発現阻害効果の観察に使用した。【０１８２】
被験化合物をA549/OPNluc細胞の培養液中に添加し、細胞内のルシフェラーゼ発現量に対する影響を観察した。ここで、被験化合物が細胞毒性または細胞増殖抑制効果を有している場合には、被験化合物の濃度に依存した生細胞数の減少により総ルシフェラーゼ発現量が低下し、被験化合物のOPNプロモーター制御下でのルシフェラーゼ発現阻害効果を正しく評価できないことが考えられる。このため、細胞増殖能力または細胞生存能力を発色測定により定量する方法であるＷＳＴアッセイをまず実施し、被験化合物の細胞増殖に対するIC50（50％細胞増殖阻害濃度）を求めた。続いて、ルシフェラーゼ活性測定を実施し、被験化合物のOPNプロモーター制御下のルシフェラーゼ発現に対するEC50（50％ルシフェラーゼ発現抑制濃度）を求めた。【０１８３】
（１−１）ＷＳＴアッセイ
A549/OPNluc細胞を、10％ ウシ胎児血清（FCS）および1％ ペニシリン・ストレプトマイシン（P/S）を添加したDMEM培地に3×104細胞/mLとなるよう懸濁し、これを96ウェルプレートの各ウェルに100μLずつ分注した。試験をトリプリケートで実施することから、対照群および各濃度の被験化合物添加群を、それぞれ3ウェルずつ準備した。分注後、96ウェルプレートを炭酸ガス培養器（37℃, 5％ CO2条件下）で24±4時間培養した。【０１８４】
本発明の化合物をジメチルスルホキシド（DMSO）によって50 mmol/L溶液とし、−80℃で保存した。該化合物溶液を、DMSOによって2倍希釈系列として希釈し（通常は0.31 mmol/L〜20 mmol/Lの範囲）、2倍ずつ濃度の異なった被験化合物溶液をＷＳＴアッセイのために準備した。【０１８５】
細胞懸濁液を加えた各ウェルに、DMSOのみ（対照）または希釈した被験化合物（検体）の溶液を0.5μLずつ分注した（200倍希釈）。ボルテックスミキサーで混和した後、96ウェルプレートを炭酸ガス培養器（37℃, 5％ CO2条件下）で48±4時間培養した。続いて、Premix WST-1 Reagent（タカラバイオ）を10μLずつ各ウェルに添加した。ボルテックスミキサーで混和した後、96ウェルプレートを37℃, 5％ CO2条件下でインキュベートし、マイクロプレートリーダー（Bio-Rad；BenchmarkまたはThermo Scientific；Varioskan Flash）を用いて60分後または120分後の吸光値（450nm）を測定した。【０１８６】
対照のウェルおよび各濃度の検体ウェルの吸光値をそれぞれエクセルファイルに入力し、対照の平均吸光値に対する各濃度の検体ウェルの吸光値のパーセントを求めた。その値から最小二乗法により近似曲線式を求め、IC50値を計算した。【０１８７】
（１−２）ルシフェラーゼアッセイ
細胞懸濁液を加えた各ウェルに、DMSOのみ（対照）または希釈した被験化合物（検体）の溶液を0.5μLずつ加えて200倍希釈した。ボルテックスミキサーで混和した後、炭酸ガス培養器（37℃, 5％ CO2条件下）で48±4時間培養する工程まで、上述のWSTアッセイと同様の操作を行った。【０１８８】
Luciferase Assay Systems（Promega：Cat# E1500）に含まれるLuciferase Assay Substrate（以下、LASと表記する）をLuciferase Assay Buffer（LAB）で溶解し、ルシフェラーゼ試薬を調製した。5×Cell Culture Lysis Reagent（以下、CCLRと表記する）を水で5倍希釈し、1×CCLRを調製した。【０１８９】
培養48±4時間後、各ウェルの培地を完全に取り除き、1×CCLRを50μLずつ分注した。室温で30分間静置した後、各ウェル内の1×CCLRを測定用試料とした。化学発光測定用のチューブにルシフェラーゼ試薬を100μL加え、これに測定用試料20μLを添加して混和し、TD20/20（Promega）または、GloMax20/20（Promega）を用いて、化学発光（相対発光強度：RLU）を測定した。【０１９０】
対照のRLUおよび各濃度の検体のRLUをそれぞれエクセルファイルに入力し、対照のRLUの平均値に対する各濃度の検体のRLUのパーセントを求めた。その値から最小二乗法により近似曲線式を求め、EC50値を計算した。また、対照のRLUの平均値に対する各濃度の検体のRLUのパーセントを、化合物が同濃度の時のWSTアッセイの吸光値のパーセント（対照に対する）で割った値から、最小二乗法により近似曲線式を求め、補正EC50値を計算した。補正EC50値は、細胞毒性または細胞増殖抑制効果による被験化合物の濃度に依存した生細胞数の減少によるRLUの低下を補正したEC50値である。【０１９１】
被験化合物として化合物１〜３８を用いて得られたIC50値、EC50値及び補正EC50値を表１に示す。
【表１】
0006513076.tif 000048
【０１９２】
試験例２：ヒト癌細胞由来細胞株のOPN産生に対する化合物１、６、１９、２６および３８の抑制効果
ブレフェラミド（化合物１）を、ヒト肝癌由来細胞株HepG2、ヒト非小細胞肺癌由来細胞株A549、ヒト腎細胞癌由来OUR-10またはヒト膵癌由来QGP-1の培養液に加え、2日間培養後の培養上清中のOPN量を、Human Osteopontin Immunoassay kit（R&D systems）を使用して測定した。化合物１添加群のOPN量とDMSO添加群（対照）のOPN量を比較することにより、確認試験を行った。また、ブレフェラミド誘導体である化合物６、１９、２６および３８を非小細胞肺癌由来細胞株A549の培養液に加え、同様の確認試験を行った。【０１９３】
化合物１、６、１９、２６および３８は、細胞増殖抑制効果も有していることから、OPN産生量抑制効果を正しく評価するために、培養上清を除いてウェルに残った細胞に、ルシフェラーゼアッセイで使用した1×CCLR液を添加して細胞溶解液を調製し、その蛋白量をBCA Protein Assay Kit（Thermo Scientific）を使用して測定した。化合物１の添加によるOPN産生量への影響は、蛋白1mg量当たりのOPN量で比較した。【０１９４】
（２−１）細胞培養液の調製（図１、図２、図５および図８〜図１０）
HepG2細胞またはA549細胞を、それぞれ10％ FCSおよび1％ P/Sを添加したDMEM培地に4×104細胞/mLとなるよう懸濁し、24ウェルプレートの各ウェルに500μLずつ分注した。試験をトリプリケートで実施することから、対照群および各濃度の被験化合物添加群を、それぞれ3ウェルずつ準備した。24ウェルプレートを炭酸ガス培養器（37℃, 5％ CO2条件下）内で24±4時間培養した。【０１９５】
（２−２）細胞培養液の調製（図３および図４）
OUR-10細胞またはQGP-1細胞を、それぞれ10％ FCSおよび1％ P/Sを添加したRPMI1640培地に4×104細胞/mLとなるよう懸濁し、24ウェルプレートの各ウェルに500μLずつ分注した。試験をデュプリケートで実施するすることから、対照群および各濃度の被験化合物添加群を、それぞれ2ウェルずつ準備した。24ウェルプレートを炭酸ガス培養器（37℃, 5％ CO2条件下）内で24±4時間培養した。【０１９６】
（２−３）化合物の添加
被験化合物である化合物１、６、１９、２６および３８は、DMSOを用いて50 mmol/L溶液とし、−80℃で保存した。該化合物１溶液を、DMSOを用いて希釈し、2.5 mmol/Lおよび5 mmol/L（図１）、3.125 mmol/Lおよび6.25 mmol/L（図２）、6.25 mmol/Lおよび12.5 mmol/L（図３）または5 mmol/Lおよび10 mmol/L（図４）の濃度にそれぞれ調製した。HepG2、A549、OUR-10またはQGP-1細胞を培養している各ウェルに、それぞれ2種類の濃度の化合物１の溶液を2μLずつ添加した。対照ウェルには、DMSOのみ2μLずつ添加した。【０１９７】
同様に、−80℃で保存された化合物６の50 mmol/L溶液を、DMSOを用いて希釈し、2.5 mmol/Lおよび5 mmol/L（図５）の濃度にそれぞれ調製した。A549細胞を培養している各ウェルに、2種類の濃度の化合物６の溶液を2μLずつ添加した。対照ウェルには、DMSOのみ2μLずつ添加した。
また、−80℃で保存された化合物１９、２６および３８の50 mmol/L溶液を、DMSOを用いて希釈し、3.125 mmol/Lおよび6.25 mmol/L（図８〜図１０）の濃度にそれぞれ調製した。A549細胞を培養している各ウェルに、2種類の濃度の化合物１９、２６および３８の溶液を2μLずつ添加した。対照ウェルには、DMSOのみ2μLずつ添加した。【０１９８】
（２−４）細胞培養と試料の調製
24ウェルプレートを振揺し、ウェル内の溶液を混和した後、炭酸ガス培養器（37℃, 5％ CO2条件下）で48±4時間培養した。続いて、培養上清全量を1.5 mLチューブに移し、細胞を含むウェルに、D-PBS(-)を500μL添加した。【０１９９】
24ウェルプレートを軽く振揺してから、D-PBS(-)を除き、ルシフェラーゼアッセイで使用する5×CCLRを水で5倍希釈して1×CCLRを調製した。調製された1×CCLRを各ウェルに200μLずつ分注した。続いて、24ウェルプレートをロッキングシェーカーに置き、15分間ロッキングした。【０２００】
15分間ロッキングした後、24ウェルプレートの各ウェルから、細胞溶解液を1.5 mLチューブに移し、細胞破壊片等を除くために微量高速冷却遠心機にて4℃、15,000 rpmで1分間遠心分離した。得られた上清を蛋白量測定用試料とした。【０２０１】
一方、1.5 mLチューブに移した培養上清を、細胞破壊片等を除くために微量高速冷却遠心機にて4℃、15,000 rpmで1分間遠心分離した。得られた上清をELISA用試料とした。【０２０２】
（２−５）OPN蛋白量の測定
ELISA用試料は、QGP-1細胞の試料を除き（原液を使用）、以下のように希釈した。
A549細胞（20倍希釈）：試料5μL＋培養培地95μL
HepG2細胞（80倍希釈）：試料2μL＋培養培地158μL
OUR-10細胞（10倍希釈）：試料10μL＋培養培地90μL【０２０３】
ELISAキットに含まれているOPN standardのバイアルに水1 mLを加え、穏やかに混和し、室温で15分間静置して200 ng/mL OPN Standardを調製した。続いて、表２に示されるように、OPN standardをキットに含まれている希釈液RD5-24によって段階希釈した。
【表２】
0006513076.tif 000049
【０２０４】
キットに含まれる必要数のOPN MicroplateとRD1-6を準備し、RD1-6を100μLずつウェルに分注した。希釈したOPN standard（バイアルＡ〜Ｈ）および試料を、RD1-6を添加したウェルにさらに50μLずつ添加した。続いて、ウェル上部をシールでカバーし、室温で2時間静置した。この間に、キットに含まれているWash Buffer Concentrateを水で希釈し、Wash Bufferを調製した。【０２０５】
2時間静置した後、各ウェル内の液を除去した。各ウェルにWash Bufferを250μL分注した後、Wash Bufferを除去し、ウェルを洗浄した。該洗浄操作を4回行った。【０２０６】
OPN conjugateを各ウェルに200μLずつ分注した。続いて、ウェル上部をシールでカバーし、室温で2時間静置した。この間に、キットに含まれているColor Reagent AとColor Reagent Bを等量混和し、Substrate Solutionを調製した。【０２０７】
2時間静置した後、各ウェル内の液を除去した。各ウェルにWash Bufferを250μL分注した後、Wash Bufferを除去し、ウェルを洗浄した。該洗浄操作を４回行った。【０２０８】
Substrate Solutionを各ウェルに200μLずつ分注し、遮光して室温で30分間静置した。続いて、キットに含まれているStop Solutionを各ウェルに50μLずつ添加し、ウェルの液全体が青色から黄色になるまで、穏やかにボルテックスミキサーにて混和した。混和後、マイクロプレートリーダー（Bio-Rad；BenchmarkまたはThermo Scientific；Varioskan Flash）を用いて、吸光値（450 nmおよび570 nm）を測定した。全ての測定データのOD 450 nmからOD 570 nmの値を減算し、以下の計算ではこの値を用いた。【０２０９】
検量線サンプルの吸光値より、検量線を作成した。検量線の数式を用いて各サンプルの吸光値からOPN蛋白量を算出した。【０２１０】
（２−６）細胞中の総蛋白量測定
蛋白量測定用試料10μLと水90μLを混和し、10倍希釈した。検量線サンプルを、表３に示されるように、BSA溶液を水で希釈して調製した。【０２１１】
【表３】
0006513076.tif 000050
【０２１２】
蛋白測定用キットに含まれているBCA試薬ＡとBCA試薬Ｂ（50：1）を混和し、Working Reagentを調製した。96ウェルプレートに検量線サンプル（バイアルＡ〜Ｆ）および10倍希釈した蛋白測定用試料をそれぞれ25μL分注した。試験をデュプリケートで実施することから、対照群および各濃度の被験化合物添加群を、それぞれ2ウェルずつ準備した。【０２１３】
Working Reagentを各ウェルに200μLずつ添加し、ボルテックスミキサーで３０秒間混和した。60℃で30分間加温した後、室温で１５分間静置した。続いて、マイクロプレートリーダー（Bio-Rad；BenchmarkまたはThermo Scientific；Varioskan Flash）を用いて吸光値（550 nm）を測定した。【０２１４】
検量線サンプルの吸光値より、検量線を作成した。検量線の数式を用いて各ウェルの希釈した試料の総蛋白濃度を算出した。さらに、総タンパク濃度に希釈倍率（10倍）を乗算し、試料の総蛋白濃度を算出した。【０２１５】
（２−７）OPN（蛋白）量の表示
OPN量（培養上清1 mL当たりの量）は、ELISA測定用の試料の全量（0.5 mL）当たりに換算された。該換算値を、OPN量を求めた試料と同じウェルの蛋白測定用試料全量（0.2 mL）中の蛋白量で割って、OPN量を細胞総蛋白1mg当たりに換算した。該蛋白1mg当たりのOPN量で、化合物１投与の影響を検討した。【０２１６】
（２−８）統計処理
OPN量の統計処理には、エクセル統計Statcel 3を用いた。エクセルファイル上にて、被験化合物である化合物３を添加された試料のOPN量を、対照のOPN量との比較でDunnett検定した。【０２１７】
図１は、化合物１添加によるHepG2細胞のOPN産生抑制効果を表すグラフを示す。化合物１は、濃度10μmol/Lの場合には対照群との間でOPN産生量に違いが認められなかったが、濃度20μmol/Lの場合には、1％未満の危険率において、対照群と比較してHepG2細胞のOPN産生を有意に抑制することが確認された。【０２１８】
図２は、化合物１添加によるA549細胞のOPN産生抑制効果を表すグラフを示す。化合物１は、濃度を12.5μmol/Lから25μmol/Lに増加すると、濃度依存的にOPN産生を抑制することが確認された。濃度が12.5μmol/Lおよび25μmol/Lの場合、共に1％未満の危険率において、対照群と比較してA549細胞のOPN産生を有意に抑制することが確認された。【０２１９】
図３は、化合物１添加によるOUR-10細胞のOPN産生抑制効果を表すグラフを示す。OPN量は、対照群および化合物１添加群共にデュプリケートで実施した各2本の値はほぼ同じ値を示した。化合物１は、濃度25μmol/Lおよび濃度50μmol/Lの場合に、対照群と比較してOUR-10細胞のOPN産生を有意に抑制することが確認された。【０２２０】
図４は、化合物１添加によるQGP-1細胞のOPN産生抑制効果を表すグラフを示す。OPN量は、対照群および化合物１添加群共にデュプリケートで実施した各2本の値はほぼ同じ値を示した。化合物１は、濃度20μmol/Lの場合には対照群との間でOPN産生量に違いが認められなかったが、濃度40μmol/Lの場合には、対照群と比較してQGP-1細胞のOPN産生を有意に抑制することが確認された。【０２２１】
図５は、化合物６添加によるA549細胞のOPN産生抑制効果を表すグラフを示す。化合物６は、濃度を10μmol/Lから20μmol/Lに増加すると、濃度依存的にOPN産生を抑制することが確認された。濃度が10μmol/Lおよび20μmol/Lの場合、共に1％未満の危険率において、対照群と比較してA549細胞のOPN産生を有意に抑制することが確認された。【０２２２】
図８は、化合物１９添加によるA549細胞のOPN産生抑制効果を表すグラフを示す。化合物１９は、濃度を12.5μmol/Lから25μmol/Lに増加すると、濃度依存的にOPN産生を抑制することが確認された。濃度が12.5μmol/Lおよび25μmol/Lの場合、共に1％未満の危険率において、対照群と比較してA549細胞のOPN産生を有意に抑制することが確認された。【０２２３】
図９は、化合物２６添加によるA549細胞のOPN産生抑制効果を表すグラフを示す。化合物２６は、濃度を12.5μmol/Lから25μmol/Lに増加すると、濃度依存的にOPN産生を抑制することが確認された。濃度が12.5μmol/Lおよび25μmol/Lの場合、共に1％未満の危険率において、対照群と比較してA549細胞のOPN産生を有意に抑制することが確認された。【０２２４】
図１０は、化合物３８添加によるA549細胞のOPN産生抑制効果を表すグラフを示す。化合物３８は、濃度を12.5μmol/Lから25μmol/Lに増加すると、濃度依存的にOPN産生を抑制することが確認された。濃度が12.5μmol/Lおよび25μmol/Lの場合、共に1％未満の危険率において、対照群と比較してA549細胞のOPN産生を有意に抑制することが確認された。【０２２５】
図１〜図４より、化合物１が、ヒト肝癌由来細胞株HepG2、ヒト非小細胞肺癌由来細胞株A549、ヒト腎細胞癌由来細胞株OUR-10およびヒト膵癌由来QGP-1のOPN産生を抑制することが確認された。また、図５より、化合物６が、ヒト非小細胞肺癌由来細胞株A549のOPN産生を抑制することが確認され、そして、図８〜図１０より、化合物１９、２６および３８が、ヒト非小細胞肺癌由来細胞株A549のOPN産生を抑制することが確認された。【０２２６】
試験例３：ヒト非小細胞肺癌由来細胞株A549の創傷治癒能に対する化合物１の抑制効果
OPNプロモーター制御下でのルシフェラーゼ発現を抑制するブレフェラミド（化合物１）は、実際に蛋白としてのOPN産生を抑制することが、図１〜図４に示される実験結果から確認された。続いて、OPNが産生されたことにより細胞に生じる生理的な機能が、被験化合物である化合物１によって抑制されるか否かを確認した。確認方法の一つとして、細胞の創傷治癒試験（Wound-Healing assay）を行った。該試験は、細胞の遊走能を調べる方法として一般的に知られている方法である。単層培養した細胞をピペットの先等で部分的に細胞を剥がした際に、傷のまわりの細胞が移動（遊走）することで傷の部分を埋めていくが、培養液中に被験化合物を添加することより、該機能に影響を与えるかを観察した。【０２２７】
（３−１）創傷治癒試験（Wound-Healing assay）方法
ヒト非小細胞肺癌由来細胞株A549を、10％ FCSおよび1％ P/Sを添加したDMEM培地に3.5×105細胞/mLとなるように懸濁した。24ウェルプレートの各ウェルに、細胞懸濁液を500μL（1.75×105細胞）ずつ分注した。試験をトリプリケートで実施することから、対照群および各濃度の被験化合物添加群を、それぞれ3ウェルずつ準備した。分注後、24ウェルプレートを炭酸ガス培養器（37℃, 5％ CO2条件下）で24±4時間培養した。【０２２８】
培養後、全てのウェルから培地を除去した。DMEMに0.1％ ウシ血清アルブミン（BSA）および1％ P/Sを添加した培地（無血清培地）を全てのウェルに500μLずつ分注した。プレートを振揺した後、再度、全ウェルから培地を除去した。培地を除去した後、無血清培地を全てのウェルに500μLずつ分注した。【０２２９】
被験化合物である化合物１は、DMSOで50 mmol/L溶液とし、−80℃で保存した。該化合物１溶液をDMSOで希釈し、3.125 mmol/Lおよび6.25 mmol/Lの濃度にそれぞれ調製した。A549細胞を培養している各ウェルには、化合物１の3.125 mmol/Lまたは6.25 mmol/Lの溶液を2μLずつ添加した。対照ウェルには、DMSOのみ2μLずつ添加した。【０２３０】
24ウェルプレートを振揺し、ウェル内の溶液を混和した後、炭酸ガス培養器（37℃, 5％ CO2条件下）で24±4時間培養した。【０２３１】
24ウェルプレート内の細胞を顕微鏡下で観察し、100％密集（confluent）であることを確認した後、20μL用のマイクロピペットチップの先端で、プレート底面の細胞に、1ウェルにつき3箇所傷をつけた。顕微鏡として、CCDカメラシステムのRetiga-2000 Fast 1394 Color（QImaging）を取り付けた倒立型リサーチ顕微鏡IX71（オリンパス）を使用した。【０２３２】
顕微鏡で創傷部を観察し、創傷部が画像に収まるように調整して撮影した。倍率は40倍（接眼：×10、対物：×4）に設定した。撮影後、24ウェルプレートを炭酸ガス培養器（37℃, 5％ CO2条件下）で48±4時間培養した。【０２３３】
培養後、顕微鏡で創傷部を観察し、創傷部が画像に収まるように調整して撮影した。倍率は40倍（接眼：×10、対物：×4）に設定した。【０２３４】
Image-Pro Plus 7.0J（MediaCybernetics社）を用いて、撮影した画像に基づいて、創傷部の面積を確認した。そして、
創傷治癒率(％) ＝100 - [創傷2日後の創傷面積/創傷直後の創傷部面積]×100
という計算式に基づいて、創傷治癒率(％)を算出した。対照群および2種類の濃度の化合物１投与群それぞれの創傷治癒率（％）の平均値を算出した。また、対照群の創傷治癒率に対する化合物処理群の創傷治癒率（％）も算出した。【０２３５】
（３−２）統計処理
創傷治癒率の算出値の統計処理は、エクセル統計Statcel 3を用い、エクセルファイル上ですべての化合物１投与処理群の創傷治癒率を、対照との比較でDunnett検定を行うことにより実施された。【０２３６】
図６は、化合物１添加によるA549細胞の創傷治癒抑制効果を表すグラフを示す。化合物１は、濃度12.5μmol/Lの場合には対照群との間で創傷治癒率に違いが認められなかったが、濃度25μmol/Lの場合には、1％未満の危険率において、対照群の間で創傷治癒率に有意差が確認された。すなわち、化合物１は、濃度25μmol/Lの場合に、A549細胞の創傷治癒を有意に抑制するものと認められる。【０２３７】
試験例４：ヒト非小細胞肺癌由来細胞株A549の転移浸潤能に対する化合物１および化合物６の抑制効果
OPNが産生されたことにより細胞に生じる生理的な機能が、被験化合物によって抑制されるか否かを調べる2番目の試験として、マトリクス浸潤試験（Matrix-Invasion assay）を行った。該試験では、細胞外マトリクス成分であるコラーゲンまたはラミニン（マトリゲル、BD Bioscience社）をコーティングした、φ8μmの細孔（ポア）を有する膜が底部に張ってあるカップ（インサート）と、そのインサートを挿入する24ウェルプレートを準備した。無血清培地に懸濁した細胞を内側のインサートに入れ、外側の24ウェルプレートの各ウェルに細胞の転移および浸潤を誘引する物質（ここでは、ウシ胎児血清）を加えた培地を注入し、インサートのマトリゲルをコーティングした膜を通過して外側のウェルに現れる細胞数を観察した。【０２３８】
マトリゲルは、細胞培養用の人工基底膜マトリックスであり、細胞外マトリックスタンパク質を豊富に含むEngelbreth-Holm-Swarm（EHS）マウス肉腫から抽出された可溶性基底膜調製品である。マトリゲルの主成分は、ラミニン、コラーゲンIV、ヘパラン硫酸プロテオグリカン、およびエンタクチン/ニドジェンである。マトリゲルには、TGF-β、上皮細胞増殖因子、インシュリン様成長因子、線維芽細胞増殖因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、およびEHS腫瘍に自然に産生される他の増殖因子も含まれる。【０２３９】
具体的には膜の外側に浸潤してきたA549細胞に蛍光色素を取り込ませた後、膜から剥がし、その蛍光強度を測定した。同時に、数が既知である検量線作成用の細胞にも蛍光色素を取り込ませ、その蛍光強度から検量線を作成した。そして、近似曲線式から細胞数が未知である被験サンプルの浸潤細胞数を求めた。【０２４０】
癌細胞は、外側の培地に加えたウシ胎児血清の刺激によりOPNを産生する。培養液にOPNが存在すると、細胞はOPNと結合し、その作用でマトリックスメタプロテイナーゼ（Matrix Metalloproteinase: MMP）というコラーゲンを分解する酵素を産生してマトリゲルを溶解し、さらに遊走能が高まるので外側のウェルに移動してくる。OPNプロモーター制御下でのルシフェラーゼ発現を抑制する、ブレフェラミド
（化合物１）およびその誘導体である化合物６のA549細胞のマトリクス浸潤機能に対する抑制効果を観察した。【０２４１】
（４−１）マトリクス浸潤試験（Matrix-Invasion assay）方法
ヒト非小細胞肺癌由来細胞株A549を、10％ FCSおよび1％ P/Sを添加したDMEM培地に1.8×105細胞/mLとなるよう懸濁した。該懸濁液を75 cm2フラスコに10 mL分注し、炭酸ガス培養器（37℃, 5％ CO2条件下）で24±4時間培養した。同様に、検量線作成用にA549細胞の6×104細胞/mLの懸濁液を調製し、該懸濁液を25 cm2フラスコに5 mL分注し、炭酸ガス培養器（37℃, 5％ CO2条件下）で24±4時間培養した。この日を作業の0日目とした。【０２４２】
［翌日：作業1日目］
細胞をシードした75 cm2フラスコから培地を除去した。培地を除去したフラスコに0.1％ BSAおよび1％ P/S添加DMEM培地（無血清培地）を10 mL分注し、細胞表面に一様に培地が浸透するようにフラスコを傾けた。続いて、フラスコから培地を除去した。【０２４３】
培地を除去したフラスコに無血清培地を10 mL分注した。続いて、炭酸ガス培養器（37℃, 5％ CO2条件下）で24±4時間培養した。【０２４４】
［作業2日目］
マトリゲル（10 mg/mL：BD Biosciences）を氷上で融解した。セルカルチャーインサート（24ウェル用、8.0μmポア：BD Biosciences）および無血清培地を氷冷した。マトリゲルを氷冷した無血清培地で25倍希釈し、マトリゲル溶液を調製した。【０２４５】
24ウェルプレートに必要数のセルカルチャーインサートをセットし、マトリゲル溶液を50μLずつセルカルチャーインサートに分注し、チップの先でメンブレン全体にマトリゲル溶液を浸透させた。続いて、24ウェルプレートを炭酸ガス培養器（37℃, 5％ CO2条件下）に１〜２時間置いた。【０２４６】
前日に無血清培地に交換した75 cm2フラスコの細胞の培養上清を除去した。カルシウム・マグネシウム無添加リン酸緩衝生理食塩液（D-PBS（-））10 mLを分注し、細胞表面に一様にD-PBS(-)が浸透するようにフラスコを傾けた後、D-PBS（-）を除去した（該操作をD-PBS（-）による「洗浄操作」という。）。続いて、細胞剥離溶液（Cell Dissociation Solution／CDS：シグマ）を3〜5 mLフラスコに分注した。CDSを分注したフラスコを炭酸ガス培養器（37℃, 5％ CO2条件下）に入れて、約20分間加温（5分ごとにロッキング）し、細胞をフラスコ底部より剥離させる作業を行った（該操作をCDSによる「細胞剥離」という。）。【０２４７】
300×gで遠心分離した後、上清を除去し、5 mLの無血清培地を用いて細胞を懸濁した。懸濁液の一部（10μL）を分取し、0.4％トリパンブルー溶液を10μL添加して軽くピペッティングした後、Burker-Turk血球計算盤を用いて細胞数を計数し、細胞濃度を求めた（該操作を「細胞数カウント」という）。【０２４８】
無血清培地を用いて、2×105細胞/mLの細胞濃度の懸濁液を8 mL調製した。マトリゲル溶液によって表面をコートした後、炭酸ガス培養器で1〜2時間インキュベートしたカルチャーインサートに、調製した細胞懸濁液を0.5 mL（1×105細胞）ずつ穏やかに分注した。試験をトリプリケートで実施した。【０２４９】
15 mLチューブに10％ FCSおよび1％ P/Sを添加したDMEM培地を5 mL分注した。該チューブに化合物１の50 mmol/L DMSO溶液を1.25μL（最終濃度12.5μmol/L）または2.5μL（最終濃度25μmol/L）を分注し、化合物１添加培地を調製した。同様に、化合物６の50 mmol/L DMSO溶液の1μL（最終濃度10μmol/L）を分注し、化合物６添加培地を調製した。10％ FCSおよび1％ P/Sを添加したDMEM培地の5 mLにDMSOを5μL添加し、対照群用添加培地を調製した。【０２５０】
カルチャーインサートとプレートの隙間から、24ウェルプレートのウェルに化合物１添加培地、化合物６添加培地または対照群用添加培地を0.75 mLずつ分注した。続いて、24ウェルプレートを炭酸ガス培養器（37℃, 5％ CO2条件下）で48±4時間培養した。【０２５１】
［作業3日目］
25 cm2フラスコで培養していたA549細胞の培地を除去し、無血清培地5 mLに交換した。続いて、25 cm2フラスコを炭酸ガス培養器（37℃, 5％ CO2条件下）で24±4時間培養した。【０２５２】
［作業4日目］
カルセインAM（50μg/バイアル：BD Biosciences）のバイアルを室温まで冷却し、DMSOを30μL添加して混和し、カルセインAM溶液を調製した。15 mLチューブにCDSを5 mL分注し、これにカルセインAM溶液を6μL添加して混和し、1×カルセインAM溶液（被験インサート用カルセインAM溶液）を調製した。一方、15 mLチューブにCDSを1.5 mL分注し、カルセインAM溶液を3.6μL添加して混和し、2×カルセインAM溶液（検量線用カルセインAM溶液）を調製した。【０２５３】
（４−２）検量線用細胞の準備
前日に培地交換した25 cm2フラスコの細胞の培養上清を除去し、D-PBS（-）5 mLを用いて、上述の洗浄操作を行った。さらに、CDS 3 mLを用いて上述の細胞剥離を行った。続いて、上述の細胞数カウントを行い、CDSを用いて5×105細胞/mLの細胞懸濁液を調製した。そして、表４に示されるように、細胞懸濁液はCDSを用いて希釈した。96ウェルブラックプレート（コーニング）の各ウェルに、バイアルＡ〜Ｈ内の細胞懸濁液を50μLずつ分注した。試験をトリプリケートで実施した。
【表４】
0006513076.tif 000051
【０２５４】
（４−３）カルセインAM染色
新しい24ウェルプレートの各ウェルにD-PBS（-）を0.75 mLずつ分注した。各インサートをピンセットで持ち上げながら、インサート内の培地をピペットによって除去し、D-PBS（-）0.75 mLを分注したウェルに移した。各インサートにD-PBS（-）を0.5 mL分注し、インサートをD-PBS（-）によって洗浄した。【０２５５】
新しい24ウェルプレートを準備し、その各ウェルに1×カルセインAM溶液をそれぞれ0.35 mL分注した。D-PBS（-）によって洗浄したインサートをピンセットで持ち上げながら、インサート内のD-PBS（-）をピペットによって除去し、1×カルセインAM溶液を分注したウェルに移した（被験インサートの細胞の蛍光染色）。インサートを移した24ウェルプレートを、炭酸ガス培養器（37℃, 5％ CO2条件下）で１時間インキュベートした。30分おきにプレート側面を軽く叩いた。【０２５６】
インキュベーションの間、細胞懸濁液を分注した96ウェルブラックプレートの各ウェルに、2×カルセインAM溶液を50μLずつ分注し、アルミホイルで包んでから室温に静置した（検量線用の細胞の染色）。【０２５７】
（４−４）蛍光測定
１時間のインキュベーションが終了した後、インサートを含む24ウェルプレートを、内部の液がこぼれないように注意しながら振揺し、液を混和した。続いて、24ウェルプレートの各ウェルからピンセットを用いて各インサートを取り除いた。インサートを取り除いた各ウェルの液を、新しい96ウェルブラックプレートの各ウェルに100μLずつ3ウェルに移した（被験インサートの細胞用プレート）。【０２５８】
マイクロプレートリーダー（Molecular Device；SpectraMax M5またはThermo Scientific； Varioskan Flash）を用いて、検量線用細胞および被験インサートの細胞用の96ウェルブラックプレートの各ウェルの蛍光を測定した（励起波長：485 nm, 蛍光波長：520 nm）。【０２５９】
（４−５）総浸潤細胞数の算出
検量線用細胞の蛍光強度（RLU）をエクセルに入力し、最小二乗法により近似曲線（検量線）の数式を求めた。検量線の数式を用いて、96ウェルプレートの1ウェルあたりの蛍光強度から浸潤細胞数を算出した。その浸潤細胞数に3.5を乗じ、24ウェルプレートの1ウェル当たりの総浸潤細胞数を算出した。さらに、トリプリケートで実施しているので3ウェルの総浸潤細胞数の平均値を算出した。【０２６０】
（４−６）統計処理
統計処理は、エクセル統計Statcel 3を用いて、エクセルファイル上で、化合物１および化合物６処理群の総浸潤細胞数を、陰性対照（Control）値との比較でDunnett検定を行うことにより実施された。【０２６１】
図７は、化合物１または化合物６添加によるA549細胞のマトリクス浸潤抑制効果を表すグラフを示す。化合物１の濃度12.5μmol/Lおよび25μmol/Lと対照群の浸潤細胞数を比較すると、浸潤細胞数は化合物１の濃度に依存して減少した。濃度12.5μmol/Lの場合に5％未満の危険率、濃度25μmol/Lの場合には1％未満の危険率において、対照群と比較してA549の浸潤細胞数を有意に抑制することが確認された。また、化合物６の濃度10μmol/Lの場合にも5％未満の危険率において、対照群と比較してA549の浸潤細胞数を有意に抑制することが確認された。すなわち、化合物１は、濃度12.5μmol/Lおよび25μmol/Lの場合に、そして、化合物６は、濃度10μmol/L場合に、A549細胞のマトリクス浸潤を有意に抑制するものと認められる。
【産業上の利用可能性】
【０２６２】
本発明の化合物またはその医薬的に上許容される塩は、強力なオステオポンチン産生阻害作用を有し、癌を含む、オステオポンチン産生亢進に起因する疾患の治療および／または予防に有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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