(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アポトーシス誘導ドメインを含む人工細胞死ポリペプチドを含むTリンパ球であって、該人工細胞死ポリペプチドが、CD20エピトープを含む細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、該アポトーシス誘導ドメインを含む細胞内ドメインとを含む膜貫通タンパク質であり、該アポトーシス誘導ドメインが、カスパーゼ3、カスパーゼ8又はカスパーゼ9であり、該ポリペプチドが、該CD20エピトープに結合する抗CD20抗体を用いて二量体化可能であり、かつ、該抗体が該ポリペプチドを二量体化させたとき、アポトーシス誘導シグナルが該Tリンパ球で生成する、前記Tリンパ球。
【請求項２】
前記抗体が、任意の用途について米国食品医薬品局による承認を受けている、請求項1記載のTリンパ球。
【請求項３】
前記抗体がリツキシマブであり、かつ、前記細胞外ドメインが、該リツキシマブが結合するCD20エピトープを含むか；
前記抗体がトシツムマブであり、かつ、前記細胞外ドメインが、該トシツムマブが結合するCD20エピトープを含むか；
前記抗体がイブリツモマブであり、かつ、前記細胞外ドメインが、該イブリツモマブが結合するCD20エピトープを含むか；又は
前記抗体がオファツムマブであり、かつ、前記細胞外ドメインが、該オファツムマブが結合するCD20エピトープを含む、請求項1記載のTリンパ球。
【請求項４】
Tリンパ球を死滅させるための医薬組成物であって、該Tリンパ球が、アポトーシス誘導ドメインを各々含む複数の人工細胞死ポリペプチドを含み、該人工細胞死ポリペプチドが、CD20エピトープを含む細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、該アポトーシス誘導ドメインを含む細胞内ドメインとを含む膜貫通タンパク質であり、該アポトーシス誘導ドメインが、カスパーゼ3、カスパーゼ8又はカスパーゼ9であり、該ポリペプチドが、該CD20エピトープに結合する抗CD20抗体を用いて二量体化可能であり、かつ、該抗体が該ポリペプチドを二量体化させたとき、アポトーシス誘導シグナルが該Tリンパ球で生成することを特徴とし、該複数の人工細胞死ポリペプチドが二量体化し、該Tリンパ球を死滅させるのに十分な集合的アポトーシス誘導シグナルを生成させるのに十分な量の該抗体を含む、前記医薬組成物。
【請求項５】
前記抗体が、任意の用途について米国食品医薬品局による承認を受けている、請求項4記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記抗体がリツキシマブであり、かつ、前記細胞外ドメインが、該リツキシマブが結合するCD20エピトープを含むか；
前記抗体がトシツムマブであり、かつ、前記細胞外ドメインが、該トシツムマブが結合するCD20エピトープを含むか；
前記抗体がイブリツモマブであり、かつ、前記細胞外ドメインが、該イブリツモマブが結合するCD20エピトープを含むか；又は
前記抗体がオファツムマブであり、かつ、前記細胞外ドメインが、該オファツムマブが結合するCD20エピトープを含む、請求項4記載の医薬組成物。
【請求項７】
腫瘍細胞上の抗原を認識するキメラ抗原受容体(CAR)をさらに含む、請求項1〜3のいずれか１項記載のTリンパ球。
【請求項８】
前記腫瘍細胞が固形腫瘍の細胞である、請求項7記載のTリンパ球。
【請求項９】
前記腫瘍細胞が血液癌の細胞である、請求項7記載のTリンパ球。
【請求項１０】
前記抗原が、Her2、前立腺幹細胞抗原、α-フェトタンパク質、癌胎児性抗原、癌抗原-125、CA19-9、カルレチニン、MUC-1、上皮膜タンパク質、上皮腫瘍抗原、チロシナーゼ、メラノーマ関連抗原、CD34、CD45、CD99、CD117、クロモグラニン、サイトケラチン、デスミン、グリア線維性酸性タンパク質、肉眼的嚢胞性疾患液タンパク質、HMB-45抗原、タンパク質メラン-A、myo-D1、筋特異的アクチン、ニューロフィラメント、ニューロン特異的エノラーゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、シナプトフィシス(synaptophysis)、チログロブリン、甲状腺転写因子-1、又は二量体形態のピルビン酸キナーゼアイソザイムM2型である、請求項7〜9のいずれか１項記載のTリンパ球。
【請求項１１】
前記Tリンパ球が、腫瘍細胞上の抗原を認識するキメラ抗原受容体(CAR)をさらに含む、請求項4〜6のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記抗原が、Her2、前立腺幹細胞抗原、α-フェトタンパク質、癌胎児性抗原、癌抗原-125、CA19-9、カルレチニン、MUC-1、上皮膜タンパク質、上皮腫瘍抗原、チロシナーゼ、メラノーマ関連抗原、CD34、CD45、CD99、CD117、クロモグラニン、サイトケラチン、デスミン、グリア線維性酸性タンパク質、肉眼的嚢胞性疾患液タンパク質、HMB-45抗原、タンパク質メラン-A、myo-D1、筋特異的アクチン、ニューロフィラメント、ニューロン特異的エノラーゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、シナプトフィシス(synaptophysis)、チログロブリン、甲状腺転写因子-1、又は二量体形態のピルビン酸キナーゼアイソザイムM2型である、請求項11記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記抗体がリツキシマブであり、かつ、前記細胞外ドメインが、該リツキシマブが結合するCD20エピトープを含む、請求項3記載のTリンパ球。
【請求項１４】
前記抗体がリツキシマブであり、かつ、前記細胞外ドメインが、該リツキシマブが結合するCD20エピトープを含む、請求項6記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、その開示が引用により完全に本明細書中に組み込まれる、2013年3月15日に出願された米国仮特許出願第61/794,294号に対する優先権を主張する。
【０００２】
(1.分野)
本明細書における開示は免疫学の分野に関するものであり、より具体的には、Tリンパ球又は他の免疫細胞の修飾に関するものである。
【背景技術】
【０００３】
(2.背景)
Tリンパ球は、腫瘍関連抗原又は腫瘍特異的抗原を含む特異的抗原を認識し、それと相互作用する。Tリンパ球は腫瘍細胞を死滅させることができるので、ここ25年の間、抗原特異的Tリンパ球、又は1以上のキメラ抗原受容体(CAR;例えば、Eshharの米国特許第7,741,465号; Eshharの米国特許出願公開第2012/0093842号を参照)を発現するように遺伝子修飾されたTリンパ球のどちらかのTリンパ球による腫瘍細胞の標的化に対する大きな関心が見られた。しかしながら、Tリンパ球が、特定の抗原を提示する腫瘍細胞だけでなく、同じ抗原を提示する正常な細胞をも死滅させることができることを考慮して、万一、オフターゲット効果が患者にとって有害であることが証明された場合、Tリンパ球に、患者への投与後の該細胞の迅速な死滅を可能にする安全機構を組み込むことが望ましい。
【０００４】
T細胞を死滅させるシステムが記載されているが(Straathofらの文献(2005)、Blood 105(11):4247-4254)、このシステムは、特異的かつ実施困難なタンパク質修飾に依存的であったため、このシステムは実用的用途に望ましくないものとなっている。したがって、治療用Tリンパ球を迅速に死滅させるための、比較的簡単でかつ構築しやすい安全システムの必要性が当技術分野に存在する。そのような安全システムを含むTリンパ球が、本明細書に提供される。
【発明の概要】
【０００５】
(3.概要)
本明細書に提供されるのは、多量体化因子、例えば、二量体化因子によって多量体化、例えば、二量体化されたとき、アポトーシス誘導シグナルを、該ポリペプチドを発現する細胞、例えば、Tリンパ球で生成させ、例えば、アポトーシスによる細胞死をもたらす、多量体化可能な、例えば、二量体化可能な人工ポリペプチド(本明細書では「細胞死ポリペプチド」と呼ばれる)を含む、遺伝子修飾された細胞、例えば、免疫細胞、例えば、Tリンパ球、例えば、ヒトTリンパ球である。任意の特定の機構又は理論に束縛されることを望まないが、該細胞の十分な数の複数の細胞死ポリペプチドが、多量体化、例えば、二量体化されたとき、それにより生成される集合的アポトーシス誘導シグナルは、該細胞を死滅させ、例えば、該細胞にアポトーシスを受けさせるのに十分であると考えられる。
【０００６】
本明細書に提供される細胞死ポリペプチドは、任意の細胞、特に、任意の哺乳動物細胞、例えば、任意のヒト細胞とともに使用することができる。例えば、そのような細胞死ポリペプチドは、例えば、細胞性治療薬(cell therapeutic)に有用な安全特性を与える。したがって、該細胞死ポリペプチドは、例えば、細胞性治療薬、例えば、キメラ抗原受容体発現CAR Tリンパ球を含む薬物製品にとって重要であり得る。なぜなら、該細胞死ポリペプチドは、万一、細胞性治療薬、例えば、Tリンパ球の迅速な死滅が望ましくなる場合、例えば、該細胞の投与が、それを受容する患者で何らかの望ましくないもしくは有害な効果をもたらす場合、又は対象における細胞性治療薬、例えば、Tリンパ球の存在がもはや必要でない場合、そのような迅速な死滅を可能にするからである。したがって、ある実施態様において、本明細書に提供される細胞死ポリペプチドは、任意の投与可能な細胞、例えば、細胞性治療薬、例えば、哺乳動物細胞性治療薬、例えば、ヒト細胞性治療薬とともに使用することができる。該細胞死ポリペプチド及び多量体化又は二量体化因子を使用し得る細胞の非限定的な例としては、ナチュラルキラー(NK)細胞、樹状細胞(DC)、胎盤幹細胞(例えば、その開示が引用により完全に本明細書中に組み込まれる、米国特許第7,468,276号;第8,057,788号、及び第8,202,703号に開示されている胎盤幹細胞)、臍帯血、胎盤血、末梢血、骨髄、歯髄、脂肪組織、骨軟骨組織などに由来する間葉様幹細胞;胚性幹細胞、胚性生殖細胞、神経堤幹細胞、神経幹細胞、及び分化細胞(例えば、線維芽細胞など)が挙げられるが、これらに限定されない。該細胞死ポリペプチド及び多量体化又は二量体化因子は、例えば、動物モデル実験を目的として、腫瘍細胞株で使用することもできる。
【０００７】
通常、該細胞死ポリペプチドは、投与可能な多量体化又は二量体化因子、例えば、小分子、ポリペプチド(細胞死ポリペプチド以外のもの)、例えば、抗体、オリゴヌクレオチド、又は多糖を用いて多量体化又は二量体化可能である。該細胞死ポリペプチドは、FK506結合タンパク質(FKBP)、その機能性断片、又はその修飾形態を含まず、該多量体化因子又は二量体化因子は、FKBPリガンドではない。
【０００８】
第一の態様において、本明細書に提供されるのは、アポトーシス誘導ドメインを含む細胞死ポリペプチドを含む細胞、例えば、Tリンパ球であり、ここで、該細胞死ポリペプチドは、多量体化因子を用いて多量体化可能であり、該多量体化因子が該ポリペプチドを二量体化させたとき、アポトーシス誘導シグナルが該細胞で生成する。具体的な実施態様において、該多量体化因子は、二量体化因子である;すなわち、該多量体化因子は、該細胞死ポリペプチドを二量体化させる。別の具体的な実施態様において、該二量体化因子が該ポリペプチドを二量体化させたとき、アポトーシス誘導シグナルが該細胞で生成する。
【０００９】
ある実施態様において、該細胞死ポリペプチドは、細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、該アポトーシス誘導ドメインを含む細胞内ドメインとを含む膜貫通ポリペプチドである。特定の実施態様において、該細胞死ポリペプチドのアポトーシス誘導ドメインは、カスパーゼ、例えば、カスパーゼ9、カスパーゼ8、もしくはカスパーゼ3、例えば、ヒトカスパーゼ9、カスパーゼ8、もしくはカスパーゼ3であるか、又はこれらを含む。
【００１０】
ある実施態様において、該二量体化因子は、細胞死ポリペプチド、例えば、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインに特異的に結合する少なくとも2つの部位を含むポリペプチドである。特定の実施態様において、該ポリペプチドは、抗体、例えば、少なくとも2つのエピトープ又はミモトープ結合部位を含む抗体である。ある実施態様において、抗体の抗原結合ドメインのみが多量体化又は二量体化因子として使用される。ある実施態様において、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、抗体が特異的に結合する少なくとも1つのエピトープ又はミモトープを含む。特定の実施態様において、該抗体は、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメイン上に存在する2つの異なるエピトープ又はミモトープに結合する2つの異なるエピトープ又はミモトープ結合部位を含む二重特異性抗体である。ある実施態様において、該抗体は、IgG又はIgM抗体である。特定の実施態様において、多量体化又は二量体化因子として有用な抗体は、任意の用途について米国食品医薬品局による承認を受けている抗体である。
【００１１】
一実施態様において、多量体化又は二量体化因子として有用な抗体は、CD20エピトープ又はミモトープ、例えば、ヒトCD20エピトープ又はミモトープに特異的に結合する抗体であり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該抗体が特異的に結合するCD20エピトープ又はミモトープを含む。ある具体的な実施態様において、該抗体はリツキシマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該リツキシマブに特異的に結合するCD20エピトープ又はCD20ミモトープを含む。別の具体的な実施態様において、該抗体はトシツムマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該トシツムマブに特異的に結合するCD20エピトープ又はCD20ミモトープを含む。また別の実施態様において、該抗体はイブリツモマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該イブリツモマブに特異的に結合するCD20エピトープ又はCD20ミモトープを含む。さらに別の実施態様において、該抗体はオファツムマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該オファツムマブに特異的に結合するCD20エピトープ又はCD20ミモトープを含む。
【００１２】
別の具体的な実施態様において、該抗体はアレムツズマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該アレムツズマブに特異的に結合するCD52エピトープ又はCD52ミモトープを含む。また別の実施態様において、該抗体はバシリキシマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該バシリキシマブに特異的に結合するCD25エピトープ又はCD25ミモトープを含む。別の実施態様において、該抗体はダクリズマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該ダクリズマブに特異的に結合するCD25エピトープ又はCD25ミモトープを含む。さらに別の実施態様において、該抗体はブレンツキシマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該ブレンツキシマブに特異的に結合するCD30エピトープ又はCD30ミモトープを含む。別の実施態様において、該抗体はベリムマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該ベリムマブに特異的に結合するB細胞活性化因子(BAFF)エピトープ又はBAFFミモトープを含む。別の実施態様において、該抗体はセツキシマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該セツキシマブに特異的に結合する上皮成長因子受容体(EGFR)エピトープ又はEGFRミモトープを含む。また別の実施態様において、該抗体はパニツムマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該パニツムマブに特異的に結合する上皮成長因子受容体(EGFR)エピトープ又はEGFRミモトープを含む。別の実施態様において、該抗体はエファリズマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該エファリズマブに特異的に結合するCD11aのエピトープ又はCD11aのミモトープを含む。さらに別の実施態様において、該抗体はイピリムマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該イピリムマブに特異的に結合するCD152エピトープ又はCD152ミモトープを含む。さらに別の実施態様において、該抗体はナタリズマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該ナタリズマブに特異的に結合するα4インテグリンのエピトープ又はα4インテグリンのミモトープを含む。別の実施態様において、該抗体はバシリキシマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該バシリキシマブに特異的に結合するCD25エピトープ又はCD25ミモトープを含む。
【００１３】
ある実施態様において、多量体化因子又は二量体化因子が少なくとも2つの細胞死ポリペプチドに結合したとき、該細胞死ポリペプチドの二量体化又は多量体化が起こり、例えば、該細胞死ポリペプチドの二量体化又は多量体化が起こる。ある実施態様において、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、受容体もしくはそのリガンド結合部分であるか、又はこれらを含む。具体的な実施態様において、多量体化因子又は二量体化因子は、該受容体もしくはそのリガンド結合部分の少なくとも2つのリガンドであるか、又はこれらを含む。別の具体的な実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子は、2つの該細胞死ポリペプチド上の該受容体又は該そのリガンド結合部分に結合し、該ポリペプチドは多量体化又は二量体化され、例えば、該ポリペプチドの細胞内ドメインは多量体化又は二量体化される。特定の実施態様において、該細胞死ポリペプチドは、カスパーゼドメインを含む細胞内ドメインを含み、該カスパーゼドメインの多量体化又は二量体化が起こる。具体的な実施態様において、該多量体化又は二量体化、例えば、細胞内ドメインの多量体化又は二量体化、例えば、カスパーゼドメインの多量体化又は二量体化は、アポトーシス誘導シグナルを、該細胞、例えば、Tリンパ球で惹起する。
【００１４】
具体的な実施態様において、抗体が、少なくとも2つの細胞死ポリペプチドのエピトープ又はミモトープに特異的に結合したとき、該細胞死ポリペプチドの二量体化が起こり、例えば、該細胞死ポリペプチドの細胞内ドメインの二量体化が起こる。特定の実施態様において、該細胞死ポリペプチドは、カスパーゼドメインを含む細胞内ドメインを含み、該カスパーゼドメインの二量体化が起こる。具体的な実施態様において、該二量体化、例えば、細胞内ドメインの二量体化、例えば、カスパーゼドメインの二量体化は、アポトーシス誘導シグナルを、該細胞、例えば、Tリンパ球で惹起する。
【００１５】
細胞、例えば、Tリンパ球のある他の実施態様において、該細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、受容体のリガンドを含む。具体的な実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子は、該リガンドに結合する少なくとも2つの受容体又はそれらのリガンド結合部分を含む。具体的な実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子が、少なくとも2つの該細胞死ポリペプチド上の該受容体又は該そのリガンド結合部分に結合したとき、該ポリペプチドは多量体化又は二量体化される。具体的な実施態様において、該細胞死ポリペプチドが多量体化又は二量体化されたとき、アポトーシス誘導シグナルが該細胞で生成する。
【００１６】
ある他の実施態様において、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、人工オリゴヌクレオチド配列を含む。例えば、特定の実施態様において、修飾された細胞、例えば、Tリンパ球は、人工オリゴヌクレオチド配列を含む細胞外ドメインを含む細胞死ポリペプチドを含む。具体的な実施態様において、多量体化又は二量体化因子は、リンカーによって任意に接続された、第一のオリゴヌクレオチドと第二のオリゴヌクレオチドを含む少なくとも1つの多量体化もしくは二量体化オリゴヌクレオチドであるか、又は該多量体化もしくは二量体化オリゴヌクレオチドを含み、ここで、該第一のオリゴヌクレオチドと該第二のオリゴヌクレオチドは、該人工オリゴヌクレオチド配列に相補的である。ある具体的な実施態様において、該第一のオリゴヌクレオチドと該第二のオリゴヌクレオチドは同じ配列を有する。具体的な実施態様において、該第一のオリゴヌクレオチドと該第二のオリゴヌクレオチドは、頭部と頭部又は尾部と尾部の形状で接続されている。具体的な実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子の該多量体化又は二量体化オリゴヌクレオチドが、2つの該細胞死ポリペプチドの人工オリゴヌクレオチド配列にハイブリダイズしたとき、該細胞死ポリペプチド は多量体化又は二量体化される。別の具体的な実施態様において、該細胞死ポリペプチドが多量体化又は二量体化されたとき、アポトーシス誘導シグナルが該細胞で生成する。特定の実施態様において、該細胞死ポリペプチドは細胞内カスパーゼドメインを含み、該細胞内カスパーゼドメインが多量体化又二量体化されたとき、アポトーシス誘導シグナルが該細胞で生成する。
【００１７】
細胞、例えば、Tリンパ球のある他の実施態様において、該多量体化又は二量体化因子は、1以上のリンカーによって接続された2以上の結合ドメインを含む人工ポリペプチドである。
【００１８】
具体的な実施態様において、本明細書に提供されるのは、エピトープを含む細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、カスパーゼ9、例えば、ヒトカスパーゼ9、又はその機能性断片を含む細胞内ドメインとを含む細胞死ポリペプチドを含む、細胞、例えば、Tリンパ球である。別の具体的な実施態様において、本明細書に提供されるのは、受容体又はそのリガンド結合部分を含む細胞外ドメインと、カスパーゼ9、例えば、ヒトカスパーゼ9、又はその機能性断片を含む細胞内ドメインとを含む人工ポリペプチドを含む、細胞、例えば、Tリンパ球である。別の具体的な実施態様において、本明細書に提供されるのは、リガンド又はその受容体結合部分を含む細胞外ドメイン(ここで、該リガンドは、受容体又はそのリガンド結合部分に結合する)と、カスパーゼ9、例えば、ヒトカスパーゼ9、又はその機能性断片を含む細胞内ドメインとを含む人工ポリペプチドを含む、細胞、例えば、Tリンパ球である。具体的な実施態様において、該細胞は、Tリンパ球である。
【００１９】
別の態様において、本明細書に提供されるのは、(a)エピトープを含む細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、カスパーゼ又はその機能性部分を含む細胞内ドメインとを含む細胞死ポリペプチド;及び(b)2つの該細胞死ポリペプチドと接触させたときに該ポリペプチドを二量体化させる2つのエピトープ結合又はミモトープ結合ドメインを含む二量体化因子を含む細胞を含み、ここで、該カスパーゼは、カスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9、例えば、ヒトカスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9であり、及び該二量体化は、アポトーシス誘導シグナルを該細胞で生成させる、細胞、例えば、Tリンパ球の安全システムである。具体的な実施態様において、該細胞は、Tリンパ球である。
【００２０】
別の実施態様において、本明細書に提供されるのは、(a)受容体又はそのリガンド結合部分を含む細胞外ドメインとカスパーゼ又はその機能性部分を含む細胞内ドメインとを含む人工ポリペプチドを含む細胞;及び(b)該受容体又はそのリガンド結合部分に結合する2つのリガンドを含む二量体化因子を含み、ここで、該二量体化因子を2つの該ポリペプチドと接触させたとき、該二量体化因子は該ポリペプチドを二量体化させ、該カスパーゼは、カスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9、例えば、ヒトカスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9であり、及び該二量体化は、アポトーシス誘導シグナルを該細胞で生成させる、細胞、例えば、Tリンパ球の安全システムである。具体的な実施態様において、該細胞は、Tリンパ球である。
【００２１】
別の実施態様において、本明細書に提供されるのは、(a)リガンド又はその受容体結合部分を含む細胞外ドメインとカスパーゼ又はその機能性部分を含む細胞内ドメインを含む人工細胞死ポリペプチドを含む細胞;及び(b)該リガンド又はその受容体結合部分に結合する2つの受容体又はそれらのリガンド結合部分を含む二量体化因子を含み、ここで、該二量体化因子を2つの該ポリペプチドと接触させたとき、該二量体化因子は該ポリペプチドを二量体化させ、該カスパーゼは、カスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9、例えば、ヒトカスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9であり、及び該二量体化は、アポトーシス誘導シグナルを該細胞で生成させる、細胞、例えば、Tリンパ球の安全システムである。具体的な実施態様において、該細胞は、Tリンパ球である。
【００２２】
本明細書中の実施態様のいずれかの具体的な実施態様において、複数の該アポトーシス誘導シグナルが、該細胞、例えば、Tリンパ球で生成するとき、該シグナルは、該細胞を死滅させるのに十分である。具体的な実施態様において、該細胞は、Tリンパ球である。
【００２３】
別の態様において、さらに本明細書に提供されるのは、細胞、例えば、Tリンパ球を死滅させる方法であって、該細胞が、アポトーシス誘導ドメインを各々含む複数の人工細胞死ポリペプチドを含み、該細胞死ポリペプチドが、FK506結合タンパク質(FKBP)リガンドではない多量体化因子又は二量体化因子を用いて多量体化又は二量体化可能であり、及び該多量体化因子又は二量体化因子が該ポリペプチドを多量体化又は二量体化させたとき、アポトーシス誘導シグナルが該Tリンパ球で生成することを特徴とし、該細胞を、該複数の該細胞死ポリペプチドが多量体化又は二量体化して、該細胞を死滅させるのに十分な集合的アポトーシス誘導シグナルを生成させるのに十分な量の該多量体化因子又は二量体化因子と接触させることを含む、方法である。ある実施態様において、該細胞死ポリペプチドは、細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、該アポトーシス誘導ドメインを含む細胞内ドメインとを含む膜貫通ポリペプチドである。具体的な実施態様において、該ポリペプチドの該アポトーシス誘導ドメインは、カスパーゼ、例えば、カスパーゼ3、カスパーゼ8、もしくはカスパーゼ9、例えば、ヒトカスパーゼ9、カスパーゼ8、もしくはカスパーゼ3であるか、又はこれらを含む。具体的な実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子は、タンパク質、オリゴヌクレオチド、又は多糖である。具体的な実施態様において、該細胞は、Tリンパ球である。
【００２４】
ある実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子は、タンパク質、オリゴヌクレオチド、又は多糖である。具体的な実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子は、細胞死ポリペプチド、例えば、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインに特異的に結合する少なくとも2つの部位を含むポリペプチドである。特定の実施態様において、該ポリペプチドは、抗体、例えば、少なくとも2つのエピトープ結合部位又は少なくとも2つのミモトープ結合部位を含む抗体である。ある実施態様において、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、抗体が特異的に結合する少なくとも1つのエピトープ又はミモトープを含む。特定の実施態様において、該抗体は、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメイン上に存在する2つの異なるエピトープ又はミモトープに結合する2つの異なるエピトープ又はミモトープ結合部位を含む二重特異性抗体である。ある実施態様において、該抗体は、IgG又はIgM抗体である。具体的な実施態様において、多量体化又は二量体化因子として有用な抗体は、任意の用途について米国食品医薬品局による承認を受けている抗体である。
【００２５】
具体的な実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子が抗体であるとき、該抗体は、CD20エピトープ又はミモトープ、例えば、ヒトCD20エピトープ又はミモトープに特異的に結合する抗体であり、細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該抗体が特異的に結合するCD20エピトープ又はミモトープを含む。ある具体的な実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子が抗体であるとき、該抗体はリツキシマブであり、かつ細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該リツキシマブに結合するCD20エピトープもしくはCD20ミモトープを含むか;該抗体はトシツムマブであり、かつ細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該トシツムマブに結合するCD20エピトープもしくはCD20ミモトープを含むか;該抗体はイブリツモマブであり、かつ細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該イブリツモマブに結合するCD20エピトープもしくはCD20ミモトープを含むか;該抗体はオファツムマブであり、かつ細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該オファツムマブに結合するCD20エピトープもしくはCD20ミモトープを含むか;該抗体はアレムツズマブであり、かつ細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該アレムツズマブに結合するCD52エピトープもしくはCD52ミモトープを含むか;該抗体はバシリキシマブであり、かつ細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該バシリキシマブに結合するCD25エピトープもしくはCD25ミモトープを含むか;該抗体はダクリズマブであり、かつ細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該ダクリズマブに結合するCD25エピトープもしくはCD25ミモトープを含むか;該抗体はブレンツキシマブであり、かつ細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該ブレンツキシマブに結合するCD30エピトープもしくはCD30ミモトープを含むか;該抗体はベリムマブであり、かつ細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該ベリムマブに結合するB細胞活性化因子(BAFF)エピトープもしくはBAFFミモトープを含むか;該抗体はセツキシマブであり、かつ細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該セツキシマブに結合する上皮成長因子受容体(EGFR)エピトープもしくはEGFRミモトープを含むか;該抗体はパニツムマブであり、かつ細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該パニツムマブに結合する上皮成長因子受容体(EGFR)エピトープもしくはEGFRミモトープを含むか;該抗体はエファリズマブであり、かつ細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該エファリズマブに結合するCD11aのエピトープもしくはCD11aのミモトープを含むか;該抗体はイピリムマブであり、かつ細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該イピリムマブに結合するCD152エピトープもしくはCD152ミモトープを含むか;該抗体はナタリズマブであり、かつ細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該ナタリズマブに結合するα4インテグリンのエピトープもしくはα4インテグリンのミモトープを含むか;又は該抗体はバシリキシマブであり、かつ細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該バシリキシマブに結合するCD25エピトープもしくはCD25ミモトープを含む。上記の実施態様のいずれかの具体的な実施態様において、該抗体が、少なくとも2つの該細胞死ポリペプチド上の該エピトープ又はミモトープに結合したとき、該ポリペプチドの細胞内ドメイン、及び/又��該細胞内ドメイン内のそれぞれのカスパーゼは多量体化又は二量体化する。具体的な実施態様において、該抗体が、少なくとも2つの細胞死ポリペプチドのエピトープ又はミモトープに特異的に結合したとき、該細胞死ポリペプチドの二量体化が起こり、例えば、該細胞死ポリペプチドの細胞内ドメインの二量体化が起こる。特定の実施態様において、該細胞死ポリペプチドは、カスパーゼドメインを含む細胞内ドメインを含み、該カスパーゼドメインの二量体化が起こる。具体的な実施態様において、該二量体化、例えば、細胞内ドメインの二量体化、例えば、カスパーゼドメインの二量体化は、アポトーシス誘導シグナルを、該細胞、例えば、Tリンパ球で惹起する。
【００２６】
ある具体的な実施態様において、該細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、受容体もしくはそのリガンド結合部分であるか、又はこれらを含む。そのような実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子は、該受容体又はそのリガンド結合部分の少なくとも2つのリガンドを含む。具体的な実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子が、少なくとも2つの該細胞死ポリペプチド上の該受容体又は該そのリガンド結合部分に結合したとき、該ポリペプチドは多量体化又は二量体化される。具体的な実施態様において、該ポリペプチドの該多量体化又は二量体化は、アポトーシス誘導シグナルを、該細胞、例えば、Tリンパ球で惹起する。
【００２７】
ある具体的な実施態様において、該細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、受容体のリガンドを含む。そのような実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子は、該リガンドに結合する少なくとも2つの受容体又はそれらのリガンド結合部分を含む。具体的な実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子が、2以上の該ポリペプチド上の該受容体又は該そのリガンド結合部分に結合したとき、該ポリペプチドの細胞内ドメイン及び/又は該ポリペプチドのカスパーゼドメインは多量体化又は二量体化される。具体的な実施態様において、該細胞内ドメイン及び/又はカスパーゼドメインの該多量体化又は二量体化は、該細胞、例えば、Tリンパ球で生成するアポトーシス誘導シグナルを惹起する。
【００２８】
ある実施態様において、該細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、人工オリゴヌクレオチド配列を含む。例えば、特定の実施態様において、該細胞死ポリペプチドは、人工オリゴヌクレオチド配列を含む細胞外ドメインを含む。具体的な実施態様において、多量体化又は二量体化因子は、リンカーによって任意に接続された、第一のオリゴヌクレオチドと第二のオリゴヌクレオチドを含む少なくとも1つの多量体化もしくは二量体化オリゴヌクレオチドであるか、又は該多量体化もしくは二量体化オリゴヌクレオチドを含み、ここで、該第一のオリゴヌクレオチドと該第二のオリゴヌクレオチドは、該人工オリゴヌクレオチド配列に相補的である。ある具体的な実施態様において、該第一のオリゴヌクレオチドと該第二のオリゴヌクレオチドは同じ配列を有する。具体的な実施態様において、該第一のオリゴヌクレオチドと該第二のオリゴヌクレオチドは、頭部と頭部又は尾部と尾部の形状で接続されている。具体的な実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子の該多量体化又は二量体化オリゴヌクレオチドが、2つの該細胞死ポリペプチドの人工オリゴヌクレオチド配列にハイブリダイズしたとき、該細胞死ポリペプチドは多量体化又は二量体化される。別の具体的な実施態様において、該細胞死ポリペプチドが多量体化又は二量体化されたとき、アポトーシス誘導シグナルが該細胞で生成する。特定の実施態様において、該細胞死ポリペプチドは、細胞内カスパーゼドメインを含み、該細胞内カスパーゼドメインが多量体化又二量体化されたとき、アポトーシス誘導シグナルが該細胞で生成する。具体的な実施態様において、該細胞は、Tリンパ球である。
【００２９】
本明細書中の実施態様のいずれかの具体的な実施態様において、複数の該アポトーシス誘導シグナルが該Tリンパ球で生成するとき、該シグナルは、該細胞、例えば、Tリンパ球を死滅させるのに十分である。
【００３０】
他の実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子は、1以上のリンカーによって接続された2以上の結合ドメインを含む人工ポリペプチドである。
【００３１】
具体的な実施態様において、本明細書に提供されるのは、細胞、例えば、Tリンパ球を死滅させる方法であって、該細胞が、カスパーゼ又はその機能性部分を各々含む複数の人工細胞死ポリペプチドを含み、該カスパーゼが、カスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9(例えば、ヒトカスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9)であり、該細胞死ポリペプチドが抗体を用いて二量体化可能であり、及び該抗体が該ポリペプチドを二量体化させたとき、アポトーシス誘導シグナルが該細胞で生成することを特徴とし、該細胞を、二量体化するのに十分な数の該複数の人工ポリペプチドを二量体化させ、該細胞を死滅させるのに十分な集合的アポトーシス誘導シグナルを生成させるのに十分な量の該抗体と接触させることを含む、方法である。具体的な実施態様において、該細胞は、Tリンパ球である。
【００３２】
別の具体的な実施態様において、本明細書に提供されるのは、細胞、例えば、Tリンパ球を死滅させる方法であって、該細胞が、カスパーゼ又はその機能性部分を各々含む複数の人工細胞死ポリペプチドを含み、該カスパーゼが、カスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9(例えば、ヒトカスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9)であり、該複数の人工ポリペプチドが、各々、リガンドに結合する受容体又はそのリガンド結合部分を含む細胞外ドメインを含み、該ポリペプチドが、2つの該リガンドを含む二量体化因子を用いて二量体化可能であり、及び該二量体化因子が2つの該ポリペプチドを二量体化させたとき、アポトーシス誘導シグナルが細胞で生成することを特徴とし、該細胞を、二量体化するのに十分な数の該複数の人工細胞死ポリペプチドを二量体化させ、該細胞を死滅させるのに十分な集合的アポトーシス誘導シグナルを生成させるのに十分な量の該抗体と接触させることを含む、方法である。具体的な実施態様において、該細胞は、Tリンパ球である。
【００３３】
別の具体的な実施態様において、本明細書に提供されるのは、細胞、例えば、Tリンパ球を死滅させる方法であって、該細胞が、カスパーゼ又はその機能性部分を各々含む複数の人工細胞死ポリペプチドを含み、該カスパーゼが、カスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9(例えば、ヒトカスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9)であり、該複数の人工ポリペプチドが、各々、受容体又はそのリガンド結合部分に結合するリガンド又はその受容体結合部分を含む細胞外ドメインを含み、該ポリペプチドが、2つの該受容体又はそのリガンド結合部分を含む二量体化因子を用いて二量体化可能であり、及び該二量体化因子が2つの該ポリペプチドを二量体化させたとき、アポトーシス誘導シグナルが該細胞で生成することを特徴とし、該細胞を、二量体化するのに十分な数の該複数の人工ポリペプチドを二量体化させ、該細胞を死滅させるのに十分な集合的アポトーシス誘導シグナルを生成させるのに十分な量の該二量体化因子と接触させることを含む、方法である。具体的な実施態様において、該細胞は、Tリンパ球である。
【００３４】
別の具体的な実施態様において、本明細書に提供されるのは、細胞、例えば、Tリンパ球を死滅させる方法であって、該細胞が、カスパーゼ又はその機能性部分を各々含む複数の人工細胞死ポリペプチドを含み、該カスパーゼが、カスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9(例えば、ヒトカスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9)であり、該複数の人工ポリペプチドが、各々、人工オリゴヌクレオチドを含む細胞外ドメインを含み、該複数のポリペプチドが、第一のオリゴヌクレオチドと第二のオリゴヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドを含む二量体化因子を用いて二量体化可能であり、該第一のオリゴヌクレオチドと該第二のオリゴヌクレオチドが同じヌクレオチド配列を有しており、該第一のオリゴヌクレオチドと第二のオリゴヌクレオチドが任意にリンカーによって接続されており、該第一のオリゴヌクレオチドと該第二のオリゴヌクレオチドが該ポリペプチドの該細胞外ドメイン内の該人工オリゴヌクレオチドに相補的であり、及び該二量体化因子が2つの該細胞死ポリペプチドを二量体化させたとき、アポトーシス誘導シグナルが該細胞で生成することを特徴とし、該細胞を、二量体化するのに十分な数の該複数の人工ポリペプチドを二量体化させ、該細胞を死滅させるのに十分な集合的アポトーシス誘導シグナルを生成させるのに十分な量の該二量体化因子と接触させることを含む、方法である。具体的な実施態様において、該細胞は、Tリンパ球である。
【００３５】
ある実施態様において、本明細書に記載の方法に従って死滅させられる細胞(例えば、Tリンパ球)は、該細胞を、特定の抗原、例えば、腫瘍関連抗原又は腫瘍特異的抗原に標的化するように作用するポリペプチドを含み、ここで、該ポリペプチドは、該抗原に結合したとき、該細胞に、該抗原、例えば、キメラ抗原受容体(CAR)を提示する細胞を死滅させる。CARを含むTリンパ球は、本明細書において、CAR-Tリンパ球と呼ばれる。キメラ抗原受容体は、通常、(i)リンパ球の表面に発現され、該リンパ球の活性化及び/又は増殖を誘発する内在性タンパク質の細胞内ドメイン(例えば、細胞質ドメイン)、(ii)膜貫通ドメイン、並びに(iii)対象となる抗原、例えば、腫瘍関連抗原又は腫瘍特異的抗原に結合する細胞外ドメインを含む。CAR-Tリンパ球は、通常、1以上の共刺激ドメインも含む。ある実施態様において、CAR-Tリンパ球は、少なくとも2つのCARポリペプチドを含み、その少なくとも1つは、CAR-Tリンパ球に対して一次刺激シグナルを提供し、その少なくとも1つは、CAR-Tリンパ球に対して共刺激シグナルを提供する。細胞死ポリペプチドを含み、かつCARの特定の実施態様を含むCAR-Tリンパ球が以下に提供されている。
【００３６】
別の態様において、本明細書に提供されるのは、疾患又は障害を有する個体を治療する方法であって、該疾患又は障害が、抗原を発現する細胞によって特徴付けられるか、又は特徴付け可能であることを特徴とし、該個体に、本明細書に記載のポリペプチドを発現する細胞、例えば、Tリンパ球を投与することを含む、方法である。ある実施態様において、本明細書に記載の修飾された細胞、例えば、修飾されたTリンパ球が、それを必要としている対象に投与されるとき、選択される多量体化因子と細胞死ポリペプチドの組合せは、それらが、該細胞、例えば、Tリンパ球が投与された患者集団(又は亜集団)に適合するように選択される。ほんの一例として、選択される多量体化因子が抗体のリツキシマブである場合、ある実施態様において、該患者集団は、B細胞の癌、例えば、B細胞リンパ腫を有する個体である。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
(4.詳細な説明)
(4.1.細胞死ポリペプチドを含む細胞)
本明細書に提供されるのは、多量体化因子、例えば、二量体化因子によって多量体化、例えば、二量体化されたとき、アポトーシス誘導シグナルを、該ポリペプチドを発現する細胞、例えば、Tリンパ球で生成させ、例えば、アポトーシスによる細胞死をもたらす、多量体化可能な、例えば、二量体化可能な人工ポリペプチド(本明細書では「細胞死ポリペプチド」と呼ばれる)を含む、遺伝子修飾された細胞、例えば、免疫細胞、例えば、Tリンパ球、例えば、ヒトTリンパ球である。任意の特定の機構又は理論に束縛されることを望まないが、該細胞の十分な数の複数の細胞死ポリペプチドが、多量体化、例えば、二量体化されたとき、それにより生成される集合的アポトーシス誘導シグナルは、該細胞を死滅させ、例えば、該細胞にアポトーシスを受けさせるのに十分であると考えられる。具体的な実施態様において、本明細書に提供される遺伝子修飾された細胞は、Tリンパ球である。
【００３８】
ある実施態様において、該細胞死ポリペプチドは、投与可能な多量体化因子又は二量体化因子、例えば、タンパク質(例えば、抗体、受容体又はそのリガンド結合部分、リガンド又はその受容体結合部分)、オリゴヌクレオチドなどによって多量体化又は二量体化させることができる。ある実施態様において、該多量体化因子は小分子ではない。該多量体化又は二量体化因子を用いて、該細胞死ポリペプチドを含むTリンパ球を、インビトロ又はインビボのどちらかで死滅させることができる。
【００３９】
したがって、第一の態様において、本明細書に提供されるのは、アポトーシス誘導ドメインを含む人工ポリペプチド(細胞死ポリペプチド)を含むTリンパ球であり、ここで、該細胞死ポリペプチドは、多量体化因子を用いて多量体化可能であり、該多量体化因子はFK506結合タンパク質(FKBP)リガンドではなく、及び該多量体化因子が該ポリペプチドを多量体化させたとき、アポトーシス誘導シグナルが該Tリンパ球で生成する。具体的な実施態様において、該多量体化因子は、二量体化因子である;すなわち、該多量体化因子は、細胞死ポリペプチドを二量体化させる。別の具体的な実施態様において、該二量体化因子が該細胞死ポリペプチドを二量体化させたとき、アポトーシス誘導シグナルが該Tリンパ球で生成する。該細胞死ポリペプチドは、FK506結合タンパク質、その機能性断片、又はその修飾形態を含まない。
【００４０】
ある実施態様において、該細胞死ポリペプチドは、細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、該アポトーシス誘導ドメインを含む細胞内ドメインとを含む膜貫通ポリペプチドである。ある実施態様において、該細胞死ポリペプチドのアポトーシス誘導ドメインは、例えば、二量体化されたときにアポトーシス誘導シグナルを細胞で惹起する任意のタンパク質又はその部分であることができる。ある実施態様において、該アポトーシス誘導ドメインは、ホモ二量体化する任意のカスパーゼであり、好ましくは、カスパーゼ、例えば、カスパーゼ9、カスパーゼ8、もしくはカスパーゼ3(例えば、ヒトカスパーゼ9、カスパーゼ8、もしくはカスパーゼ3)であるか、又はこれらを含む。ヒトカスパーゼ9、ヒトカスパーゼ8、及びヒトカスパーゼ3を含むヒトカスパーゼのアミノ酸配列は、当技術分野で周知である。例えば、ヒトカスパーゼ3は、NCBI遺伝子ID: 836に割り当てられており;ヒトカスパーゼ8は、NCBI遺伝子ID: 841に割り当てられており;ヒトカスパーゼ9は、NCBI遺伝子ID: 842に割り当てられている。ある実施態様において、カスパーゼドメインであるか又はカスパーゼドメインを含む細胞内ドメインとエピトープ又はミモトープを含む細胞外ドメインは、その少なくとも一部が膜貫通ドメインとして機能することができるCD8αストーク又はCD8βストークによって接続されている。
【００４１】
ある実施態様において、該二量体化因子は、細胞死ポリペプチド、例えば、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインに特異的に結合する少なくとも2つの部位を含むポリペプチドである。特定の実施態様において、該ポリペプチドは、抗体、例えば、少なくとも2つのエピトープ又はミモトープ結合部位を含む抗体である。ある実施態様において、抗体の抗原結合ドメインのみが、多量体化又は二量体化因子として使用される。ある実施態様において、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、抗体が特異的に結合する少なくとも1つのエピトープ又はミモトープを含む。特定の実施態様において、該抗体は、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメイン上に存在する2つの異なるエピトープ又はミモトープに結合する2つの異なるエピトープ又はミモトープ結合部位を含む二重特異性抗体である。ある実施態様において、該抗体は、IgG又はIgM抗体である。任意に1以上のリンカーによって接続された、抗体由来のエピトープ結合又はミモトープ結合ドメインを含む人工抗体コンストラクトを使用することもできる。
【００４２】
具体的な実施態様において、多量体化又は二量体化因子として有用な該抗体は、任意の用途について、政府の規制当局、例えば、米国食品医薬品局による承認を受けている。このことは、例えば、該抗体が、二量体化又は多量体化因子として使用される場合、既知の毒性及び患者安全性プロファイルを有することを保証する。抗体と関連標的の任意の組合せを本明細書に提供されるTリンパ球で使用することができる。一実施態様において、多量体化又は二量体化因子として有用な抗体は、CD20エピトープ又はミモトープ、例えば、ヒトCD20エピトープ又はミモトープに特異的に結合する抗体であり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該抗体が特異的に結合するCD20エピトープ又はミモトープを含む。ある具体的な実施態様において、該抗体はリツキシマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該リツキシマブに特異的に結合するCD20エピトープ又はCD20ミモトープを含む。別の具体的な実施態様において、該抗体はトシツムマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該トシツムマブに特異的に結合するCD20エピトープ又はCD20ミモトープを含む。また別の実施態様において、該抗体はイブリツモマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該イブリツモマブに特異的に結合するCD20エピトープ又はCD20ミモトープを含む。さらに別の実施態様において、該抗体はオファツムマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該オファツムマブに特異的に結合するCD20エピトープ又はCD20ミモトープを含む。
【００４３】
別の具体的な実施態様において、該抗体はアレムツズマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該アレムツズマブに特異的に結合するCD52エピトープ又はCD52ミモトープを含む。また別の実施態様において、該抗体はバシリキシマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該バシリキシマブに特異的に結合するCD25エピトープ又はCD25ミモトープを含む。別の実施態様において、該抗体はダクリズマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該ダクリズマブに特異的に結合するCD25エピトープ又はCD25ミモトープを含む。さらに別の実施態様において、該抗体はブレンツキシマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該ブレンツキシマブに特異的に結合するCD30エピトープ又はCD30ミモトープを含む。別の実施態様において、該抗体はベリムマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該ベリムマブに特異的に結合するB細胞活性化因子(BAFF)エピトープ又はBAFFミモトープを含む。別の実施態様において、該抗体はセツキシマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該セツキシマブに特異的に結合する上皮成長因子受容体(EGFR)エピトープ又はEGFRミモトープを含む。また別の実施態様において、該抗体はパニツムマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該パニツムマブに特異的に結合する上皮成長因子受容体(EGFR)エピトープ又はEGFRミモトープを含む。別の実施態様において、該抗体はエファリズマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該エファリズマブに特異的に結合するCD11aのエピトープ又はCD11aのミモトープを含む。さらに別の実施態様において、該抗体はイピリムマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該イピリムマブに特異的に結合するCD152エピトープ又はCD152ミモトープを含む。さらに別の実施態様において、該抗体はナタリズマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該ナタリズマブに特異的に結合するα4インテグリンのエピトープ又はα4インテグリンのミモトープを含む。別の実施態様において、該抗体はバシリキシマブであり、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該バシリキシマブに特異的に結合するCD25エピトープ又はCD25ミモトープを含む。
【００４４】
リガンド及び受容体を、本明細書に提供される細胞死ポリペプチドの構築において利用することができ、該受容体のそれぞれのリガンドを含む多量体化因子又は二量体化因子を用いて、該ポリペプチドを多量体化又は二量体化させることができる。ある実施態様において、多量体化因子又は二量体化因子が少なくとも2つの細胞死ポリペプチドに結合したとき、該細胞死ポリペプチドの二量体化又は多量体化が起こり、例えば、該細胞死ポリペプチドの二量体化又は多量体化が起こる。ある実施態様において、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、受容体もしくはそのリガンド結合部分であるか、又はこれらを含む。具体的な実施態様において、多量体化因子又は二量体化因子は、該受容体もしくはそのリガンド結合部分の少なくとも2つのリガンドであるか、又はこれらを含む。別の具体的な実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子は、2つの該細胞死ポリペプチド上の該受容体又は該そのリガンド結合部分に結合し、該ポリペプチドは多量体化又は二量体化され、例えば、該ポリペプチドの細胞内ドメインは多量体化又は二量体化される。特定の実施態様において、該細胞死ポリペプチドは、カスパーゼドメインを含む細胞内ドメインを含み、該カスパーゼドメインの多量体化又は二量体化が起こる。具体的な実施態様において、該多量体化又は二量体化、例えば、細胞内ドメインの多量体化又は二量体化、例えば、カスパーゼドメインの多量体化又は二量体化は、アポトーシス誘導シグナルを、該細胞、例えば、Tリンパ球で惹起する。
【００４５】
具体的な実施態様において、抗体が、少なくとも2つの細胞死ポリペプチドのエピトープ又はミモトープに特異的に結合したとき、該細胞死ポリペプチドの二量体化が起こり、例えば、該細胞死ポリペプチドの細胞内ドメインの二量体化が起こる。特定の実施態様において、該細胞死ポリペプチドは、カスパーゼドメインを含む細胞内ドメインを含み、該カスパーゼドメインの二量体化が起こる。具体的な実施態様において、該二量体化、例えば、細胞内ドメインの二量体化、例えば、カスパーゼドメインの二量体化は、アポトーシス誘導シグナルを、該細胞、例えば、Tリンパ球で惹起する。
【００４６】
細胞、例えば、Tリンパ球のある他の実施態様において、該細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、受容体のリガンドを含む。具体的な実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子は、該リガンドに結合する少なくとも2つの受容体又はそれらのリガンド結合部分を含む。具体的な実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子が、少なくとも2つの該細胞死ポリペプチド上の該受容体又は該そのリガンド結合部分に結合したとき、該ポリペプチドは多量体化又は二量体化される。具体的な実施態様において、該細胞死ポリペプチドが多量体化又は二量体化されたとき、アポトーシス誘導シグナルが該細胞で生成する。具体的な実施態様において、該細胞は、Tリンパ球である。
【００４７】
ある他の実施態様において、細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、人工オリゴヌクレオチド配列を含む。例えば、特定の実施態様において、修飾された細胞、例えば、Tリンパ球は、人工オリゴヌクレオチド配列を含む細胞外ドメインを含む細胞死ポリペプチドを含む。具体的な実施態様において、多量体化又は二量体化因子は、リンカーによって任意に接続された、第一のオリゴヌクレオチドと第二のオリゴヌクレオチドを含む少なくとも1つの多量体化もしくは二量体化オリゴヌクレオチドであるか、又は該多量体化もしくは二量体化オリゴヌクレオチドを含み、ここで、該第一のオリゴヌクレオチドと該第二のオリゴヌクレオチドは、該人工オリゴヌクレオチド配列に相補的である。ある具体的な実施態様において、該第一のオリゴヌクレオチドと該第二のオリゴヌクレオチドは同じ配列を有する。具体的な実施態様において、該第一のオリゴヌクレオチドと該第二のオリゴヌクレオチドは、頭部と頭部又は尾部と尾部の形状で接続されている。具体的な実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子の該多量体化又は二量体化オリゴヌクレオチドが、2つの該細胞死ポリペプチドの人工オリゴヌクレオチド配列にハイブリダイズしたとき、該細胞死ポリペプチドは多量体化又は二量体化される。別の具体的な実施態様において、該細胞死ポリペプチドが多量体化又は二量体化されたとき、アポトーシス誘導シグナルが該細胞で生成する。特定の実施態様において、該細胞死ポリペプチドは細胞内カスパーゼドメインを含み、該細胞内カスパーゼドメインが多量体化又二量体化されたとき、アポトーシス誘導シグナルが該細胞で生成する。具体的な実施態様において、該細胞は、Tリンパ球である。
【００４８】
Tリンパ球のある他の実施態様において、該多量体化又は二量体化因子は、1以上のリンカーによって接続された2以上の結合ドメインを含む人工ポリペプチドである。
【００４９】
具体的な実施態様において、本明細書に提供されるのは、エピトープを含む細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、カスパーゼ9、例えば、ヒトカスパーゼ9、又はその機能性断片を含む細胞内ドメインとを含む細胞死ポリペプチドを含む、細胞、例えば、Tリンパ球である。別の具体的な実施態様において、本明細書に提供されるのは、受容体又はそのリガンド結合部分を含む細胞外ドメインと、カスパーゼ9、例えば、ヒトカスパーゼ9、又はその機能性断片を含む細胞内ドメインとを含む人工ポリペプチドを含む、細胞、例えば、Tリンパ球である。別の具体的な実施態様において、本明細書に提供されるのは、リガンド又はその受容体結合部分を含む細胞外ドメイン(ここで、該リガンドは、受容体又はそのリガンド結合部分に結合する)と、カスパーゼ9、例えば、ヒトカスパーゼ9、又はその機能性断片を含む細胞内ドメインとを含む人工ポリペプチドを含む、細胞、例えば、Tリンパ球である。具体的な実施態様において、該細胞は、Tリンパ球である。
【００５０】
該修飾された細胞がTリンパ球である本明細書中の実施態様のいずれかにおいて、該Tリンパ球は、CD4+ Tリンパ球又はCD8+ Tリンパ球であり得る。該Tリンパ球は、遺伝子修飾なしで、特定の抗原(例えば、腫瘍関連抗原、腫瘍特異的抗原、ウイルス抗原など)に特異的であり得る。該Tリンパ球は、Tリンパ球を特異的抗原に標的化する1以上のポリペプチド、例えば、キメラ抗原受容体を発現するように遺伝子修飾することができる。
【００５１】
(4.2.細胞死ポリペプチドを含む細胞を死滅させる方法)
本明細書に提供される細胞死ポリペプチドは、該細胞死ポリペプチドを含む細胞、例えば、Tリンパ球を死滅させる方法で使用することができる。本明細書に提供される細胞死ポリペプチドは、任意の細胞、特に、任意の哺乳動物細胞、例えば、任意のヒト細胞とともに使用することができる。そのような細胞死ポリペプチドは、例えば、細胞性治療薬に有用な安全特性を与える。したがって、該細胞死ポリペプチドは、例えば、細胞性治療薬、例えば、キメラ抗原受容体発現CAR Tリンパ球を含む薬物製品にとって重要であり得る。なぜなら、該細胞死ポリペプチドは、万一、細胞性治療薬、例えば、Tリンパ球の迅速な死滅が望ましくなる場合、例えば、該細胞の投与が、それを受容する患者で何らかの望ましくないもしくは有害な効果をもたらす場合、又は対象における細胞性治療薬、例えば、Tリンパ球の存在がもはや必要ない場合、そのような迅速な死滅を可能にするからである。したがって、ある実施態様において、本明細書に提供される細胞死ポリペプチドは、任意の投与可能な細胞、例えば、細胞性治療薬、例えば、哺乳動物細胞性治療薬、例えば、ヒト細胞性治療薬とともに使用することができる。該細胞死ポリペプチド及び多量体化又は二量体化因子を使用し得る細胞の非限定的な例としては、ナチュラルキラー(NK)細胞、樹状細胞(DC)、胎盤幹細胞(例えば、その開示が引用により完全に本明細書中に組み込まれる、米国特許第7,468,276号;第8,057,788号、及び第8,202,703号に開示されている胎盤幹細胞)、臍帯血、胎盤血、末梢血、骨髄、歯髄、脂肪組織、骨軟骨組織などに由来する間葉様幹細胞;胚性幹細胞、胚性生殖細胞、神経堤幹細胞、神経幹細胞、及び分化細胞(例えば、線維芽細胞など)が挙げられるが、これらに限定されない。該細胞死ポリペプチド及び多量体化又は二量体化因子は、例えば、動物モデル実験を目的として、腫瘍細胞株で使用することもできる。
【００５２】
本明細書に記載の細胞死ポリペプチドによる細胞の死滅は、インビボで、例えば、該細胞、例えば、Tリンパ球が投与された個体で、又はインビトロで、例えば、実験室で、例えば、品質管理実験の一部として行われることができる。一実施態様において、本明細書に提供されるのは、細胞、例えば、Tリンパ球を死滅させる方法であって、該細胞が、アポトーシス誘導ドメインを各々含む複数の人工細胞死ポリペプチドを含み、該ポリペプチドが、FK506結合タンパク質(FKBP)リガンドではない多量体化因子又は二量体化因子を用いて多量体化又は二量体化可能であり、及び該多量体化因子又は二量体化因子が該ポリペプチドを多量体化又は二量体化させたとき、アポトーシス誘導シグナルが該細胞で生成することを特徴とし、該細胞を、該複数の人工ポリペプチドが二量体化し、該細胞を死滅させるのに十分な集合的アポトーシス誘導シグナルを生成させるのに十分な量の該多量体化因子又は二量体化因子と接触させることを含む、方法である。ある実施態様において、該細胞死ポリペプチドは、細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、該アポトーシス誘導ドメインを含む細胞内ドメインとを含む膜貫通ポリペプチドである。ある実施態様において、カスパーゼドメインであるか又はカスパーゼドメインを含む細胞内ドメインとエピトープ又はミモトープを含む細胞外ドメインは、その少なくとも一部が膜貫通ドメインとして機能することができるCD8αストーク又はCD8βストークによって接続されている。本方法のある具体的な実施態様において、該ポリペプチドのアポトーシス誘導ドメインは、カスパーゼ、例えば、カスパーゼ3、カスパーゼ8、もしくはカスパーゼ9(例えば、ヒトカスパーゼ9、カスパーゼ8、もしくはカスパーゼ3)であるか、又はこれらを含む。
【００５３】
本方法で使用される多量体化因子又は二量体化因子は、細胞死ポリペプチドを二量体化又は多量体化することができる、小分子以外の任意の化合物、例えば、タンパク質、オリゴヌクレオチド、又は多糖であることができる。ある実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子は、抗体、例えば、少なくとも2つのエピトープ結合部位又は少なくとも2つのミモトープ結合部位を含む抗体である。ある実施態様において、抗体の抗原結合ドメインのみが、多量体化又は二量体化因子として使用される。そのような実施態様において、該細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、該抗体が結合するエピトープ又はミモトープを含む。該抗体は、任意の結合価の抗体であることができるが、好ましくは、IgG又はIgM抗体である。
【００５４】
具体的な実施態様において、多量体化又は二量体化因子として有用な該抗体は、任意の用途について、政府の規制当局、例えば、米国食品医薬品局による承認を受けている。抗体と関連標的の任意の組合せを、本明細書に提供されるTリンパ球を死滅させる方法で使用することができる。
【００５５】
具体的な実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子が抗体であるとき、該抗体は、CD20エピトープ又はミモトープ、例えば、ヒトCD20エピトープ又はミモトープに特異的に結合する抗体であり、細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該抗体が特異的に結合するCD20エピトープ又はミモトープを含む。ある具体的な実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子が抗体であるとき、該抗体はリツキシマブであり、該細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該リツキシマブに結合するCD20エピトープもしくはCD20ミモトープを含むか;該抗体はトシツムマブであり、該細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該トシツムマブに結合するCD20エピトープもしくはCD20ミモトープを含むか;該抗体はイブリツモマブであり、該細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該イブリツモマブに結合するCD20エピトープもしくはCD20ミモトープを含むか;該抗体はオファツムマブであり、該細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該オファツムマブに結合するCD20エピトープもしくはCD20ミモトープを含むか;又は該抗体はアレムツズマブであり、該細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該アレムツズマブに結合するCD52エピトープもしくはCD52ミモトープを含む。
【００５６】
ある具体的な実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子が抗体であるとき、該抗体はバシリキシマブであり、かつ該細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該バシリキシマブに結合するCD25エピトープもしくはCD25ミモトープを含むか;該抗体はダクリズマブであり、該細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該ダクリズマブに結合するCD25エピトープもしくはCD25ミモトープを含むか;該抗体はブレンツキシマブであり、該細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該ブレンツキシマブに結合するCD30エピトープもしくはCD30ミモトープを含むか;該抗体はベリムマブであり、該細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該ベリムマブに結合するB細胞活性化因子(BAFF)エピトープもしくはBAFFミモトープを含むか;該抗体はセツキシマブであり、該細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該セツキシマブに結合する上皮成長因子受容体(EGFR)エピトープもしくはEGFRミモトープを含むか;該抗体はパニツムマブであり、該細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該パニツムマブに結合する上皮成長因子受容体(EGFR)エピトープもしくはEGFRミモトープを含むか;該抗体はエファリズマブであり、該細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該エファリズマブに結合するCD11aのエピトープもしくはCD11aのミモトープを含むか;該抗体はイピリムマブであり、該細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該イピリムマブに結合するCD152エピトープもしくはCD152ミモトープを含むか;該抗体はナタリズマブであり、該細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該ナタリズマブに結合するα4インテグリンのエピトープもしくはα4インテグリンのミモトープを含むか;又は該抗体はバシリキシマブであり、かつ該細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、該バシリキシマブに結合するCD25エピトープもしくはCD25ミモトープを含む。
【００５７】
上記の実施態様のいずれかの具体的な実施態様において、該抗体が、少なくとも2つの該細胞死ポリペプチド上の該エピトープ又はミモトープに結合したとき、該ポリペプチドの細胞内ドメイン及び/又は該細胞内ドメイン内のそれぞれのカスパーゼは多量体化又は二量体化する。具体的な実施態様において、該抗体が、少なくとも2つの細胞死ポリペプチドのエピトープ又はミモトープに特異的に結合したとき、該細胞死ポリペプチドの二量体化が起こり、例えば、該細胞死ポリペプチドの細胞内ドメインの二量体化が起こる。特定の実施態様において、該細胞死ポリペプチドは、カスパーゼドメインを含む細胞内ドメインを含み、該カスパーゼドメインの二量体化が起こる。具体的な実施態様において、該二量体化、例えば、細胞内ドメインの二量体化、例えば、カスパーゼドメインの二量体化は、アポトーシス誘導シグナルを、該細胞、例えば、Tリンパ球で惹起する。
【００５８】
理論によって制限されるつもりはないが、該抗体が、少なくとも2つの該ポリペプチド上のそれぞれのエピトープ又はミモトープに結合したとき、該ポリペプチドの細胞内ドメインが、多量体化、例えば、又は二量体化し、その時に、該細胞内ドメイン内のそれぞれのカスパーゼが二量体化する。該ポリペプチドの二量体化は、アポトーシス誘導シグナルを該Tリンパ球で惹起する。
【００５９】
上記のように、受容体及びそのそれぞれのリガンドを用いて、細胞死ポリペプチドを多量体化又は二量体化させ、それにより、該ポリペプチドを含む細胞、例えば、Tリンパ球の死滅を達成することができる。例えば、該細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、受容体もしくはそのリガンド結合部分であるか、又はこれらを含む。そのような実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子は、該細胞死ポリペプチドの多量体化又は二量体化を可能にする、該受容体又はそのリガンド結合部分の少なくとも2つのリガンドを含み、該多量体化因子又は二量体化因子が、少なくとも2つの該ポリペプチド上の該受容体又は該そのリガンド結合部分に結合したとき、該ポリペプチドが二量体化される。好ましい実施態様において、該ポリペプチドの二量体化は、該アポトーシス誘導シグナルを該細胞で惹起する。
【００６０】
細胞、例えば、Tリンパ球を死滅させる方法の他の実施態様において、該細胞死ポリペプチドの細胞外ドメインは、受容体のリガンドを含む。該方法のそのような実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子は、該リガンドに結合する少なくとも2つの受容体又はそれらのリガンド結合部分を含む。該多量体化二量体化因子が、2つの該細胞死ポリペプチド上の該受容体又は該そのリガンド結合部分に結合したとき、該ポリペプチドの細胞内ドメイン、したがって、好ましくはカスパーゼドメインが二量体化される。該細胞内ドメイン、及び該カスパーゼドメインの二量体化は、好ましくは、該細胞で生成するアポトーシス誘導シグナルを惹起する。
【００６１】
細胞、例えば、Tリンパ球を死滅させる方法のある他の実施態様において、該細胞死ポリペプチドの該細胞外ドメインは、人工オリゴヌクレオチド配列を含む。例えば、特定の実施態様において、該細胞死ポリペプチドは、人工オリゴヌクレオチド配列を含む細胞外ドメインを含む。具体的な実施態様において、多量体化又は二量体化因子は、リンカーによって任意に接続された、第一のオリゴヌクレオチドと第二のオリゴヌクレオチドを含む少なくとも1つの多量体化もしくは二量体化オリゴヌクレオチドであるか、又は該多量体化もしくは二量体化オリゴヌクレオチドを含み、ここで、該第一のオリゴヌクレオチドと該第二のオリゴヌクレオチドは、該人工オリゴヌクレオチド配列に相補的である。ある具体的な実施態様において、該第一のオリゴヌクレオチドと該第二のオリゴヌクレオチドは同じ配列を有する。具体的な実施態様において、該第一のオリゴヌクレオチドと該第二のオリゴヌクレオチドは、頭部と頭部又は尾部と尾部の形状で接続されている。具体的な実施態様において、該多量体化因子又は二量体化因子の該多量体化又は二量体化オリゴヌクレオチドが、2つの該細胞死ポリペプチドの人工オリゴヌクレオチド配列にハイブリダイズしたとき、該細胞死ポリペプチドは多量体化又は二量体化される。別の具体的な実施態様において、該細胞死ポリペプチドが多量体化又は二量体化されたとき、アポトーシス誘導シグナルが該細胞で生成する。特定の実施態様において、該細胞死ポリペプチドは細胞内カスパーゼドメインを含み、該細胞内カスパーゼドメインが多量体化又二量体化されたとき、アポトーシス誘導シグナルが該細胞で生成する。具体的な実施態様において、該細胞は、Tリンパ球である。
【００６２】
Tリンパ球を死滅させる方法のある他の実施態様において、該多量体化又は二量体化因子は、1以上のリンカーによって接続された2以上の結合ドメインを含む人工ポリペプチドである。
【００６３】
具体的な実施態様において、本明細書に提供されるのは、細胞、例えば、Tリンパ球を死滅させる方法であって、該細胞が、カスパーゼ又はその機能性部分を各々含む複数の人工細胞死ポリペプチドを含み、該カスパーゼが、カスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9(例えば、ヒトカスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9)であり、該細胞死ポリペプチドが抗体を用いて二量体化可能であり、及び該抗体が該ポリペプチドを二量体化させたとき、アポトーシス誘導シグナルが該細胞で生成することを特徴とし、該細胞を、二量体化するのに十分な数の該複数の人工ポリペプチドを二量体化させ、該細胞を死滅させるのに十分な集合的アポトーシス誘導シグナルを生成させるのに十分な量の該抗体と接触させることを含む、方法である。具体的な実施態様において、該細胞は、Tリンパ球である。
【００６４】
別の具体的な実施態様において、本明細書に提供されるのは、細胞、例えば、Tリンパ球を死滅させる方法であって、該細胞が、カスパーゼ又はその機能性部分を各々含む複数の人工細胞死ポリペプチドを含み、該カスパーゼが、カスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9(例えば、ヒトカスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9)であり、該複数の人工ポリペプチドが、各々、リガンドに結合する受容体又はそのリガンド結合部分を含む細胞外ドメインを含み、該ポリペプチドが、2つの該リガンドを含む二量体化因子を用いて二量体化可能であり、及び該二量体化因子が2つの該ポリペプチドを二量体化させたとき、アポトーシス誘導シグナルが細胞で生成することを特徴とし、該細胞を、二量体化するのに十分な数の該複数の人工細胞死ポリペプチドを二量体化させ、該細胞を死滅させるのに十分な集合的アポトーシス誘導シグナルを生成させるのに十分な量の該抗体と接触させることを含む、方法である。具体的な実施態様において、該細胞は、Tリンパ球である。
【００６５】
別の具体的な実施態様において、本明細書に提供されるのは、細胞、例えば、Tリンパ球を死滅させる方法であって、該細胞が、カスパーゼ又はその機能性部分を各々含む複数の人工細胞死ポリペプチドを含み、該カスパーゼが、カスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9(例えば、ヒトカスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9)であり、該複数の人工ポリペプチドが、各々、受容体又はそのリガンド結合部分に結合するリガンド又はその受容体結合部分を含む細胞外ドメインを含み、該ポリペプチドが、2つの該受容体又はそのリガンド結合部分を含む二量体化因子を用いて二量体化可能であり、及び該二量体化因子が2つの該ポリペプチドを二量体化させたとき、アポトーシス誘導シグナルが該細胞で生成することを特徴とし、該細胞を、二量体化するのに十分な数の該複数の人工ポリペプチドを二量体化させ、該細胞を死滅させるのに十分な集合的アポトーシス誘導シグナルを生成させるのに十分な量の該二量体化因子と接触させることを含む、方法である。具体的な実施態様において、該細胞は、Tリンパ球である。
【００６６】
別の具体的な実施態様において、本明細書に提供されるのは、細胞、例えば、Tリンパ球を死滅させる方法であって、該細胞が、カスパーゼ又はその機能性部分を各々含む複数の人工細胞死ポリペプチドを含み、該カスパーゼが、カスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9(例えば、ヒトカスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9)であり、該複数の人工ポリペプチドが、各々、人工オリゴヌクレオチドを含む細胞外ドメインを含み、該複数のポリペプチドが、第一のオリゴヌクレオチドと第二のオリゴヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドを含む二量体化因子を用いて二量体化可能であり、該第一のオリゴヌクレオチドと該第二のオリゴヌクレオチドが同じヌクレオチド配列を有しており、該第一のオリゴヌクレオチドと第二のオリゴヌクレオチドが任意にリンカーによって接続されており、及び該第一のオリゴヌクレオチドと該第二のオリゴヌクレオチドが該ポリペプチドの該細胞外ドメイン内の該人工オリゴヌクレオチドに相補的であり、及び該二量体化因子が2つの該細胞死ポリペプチドを二量体化させたとき、アポトーシス誘導シグナルが該細胞で生成することを特徴とし、該細胞を、二量体化するのに十分な数の該複数の人工ポリペプチドを二量体化させ、該細胞を死滅させるのに十分な集合的アポトーシス誘導シグナルを生成させるのに十分な量の該二量体化因子と接触させることを含む、方法である。具体的な実施態様において、該細胞は、Tリンパ球である。
【００６７】
具体的な実施態様において、本明細書に記載の方法に従って死滅させられるTリンパ球は、CAR-Tリンパ球である。
【００６８】
(4.3.キメラ抗原受容体)
本明細書に提供される細胞が、本明細書に記載の細胞死ポリペプチドを含むTリンパ球であるとき、そのようなTリンパ球は、ある実施態様において、Tリンパ球を抗原に誘導し、該抗原を提示する細胞を死滅させるように該Tリンパ球を刺激する人工膜結合型タンパク質であるキメラ抗原受容体(CAR)を含むことができる。例えば、Eshharの米国特許第7,741,465号を参照されたい。最低でも、該CARは、抗原、例えば、細胞上の抗原に結合する細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、一次活性化シグナルを免疫細胞に伝達する細胞内(細胞質)シグナル伝達ドメインとを含む。他の全ての条件が満たされ、該CARが、例えば、Tリンパ球の表面に発現され、該CARの細胞外ドメインが抗原に結合したとき、該細胞内シグナル伝達ドメインは、シグナルをTリンパ球に伝達して、活性化及び/又は増殖させ、該抗原が細胞表面に存在する場合、該抗原を発現する細胞を死滅させる。Tリンパ球は、活性化するために、一次活性化シグナルと共刺激シグナルという2つのシグナルを必要とするので、細胞外ドメインへの抗原の結合が一次活性化シグナルと共刺激シグナルの両方の伝達をもたらすように、通常、CARは、共刺激ドメインも含む。
【００６９】
(4.3.1.一般的なCAR構造の細胞内ドメイン)
ある実施態様において、CARの細胞内ドメインは、Tリンパ球の表面に発現され、該Tリンパ球の活性化及び/もしくは増殖を誘発するタンパク質の細胞内ドメインもしくはモチーフであるか、又は該細胞内ドメインもしくはモチーフを含む。そのようなドメイン又はモチーフは、CARの細胞外部分への抗原の結合に応答したTリンパ球の活性化に必要となる一次抗原結合シグナルを伝達することができる。通常、このドメイン又はモチーフは、ITAMを含むか、又はITAM(免疫受容体チロシンに基づく活性化モチーフ)である。CARに好適なITAM含有ポリペプチドとしては、例えば、ゼータCD3鎖(CD3ζ)又はそのITAM含有部分が挙げられる。具体的な実施態様において、該細胞内ドメインは、CD3ζ細胞内シグナル伝達ドメインである。他の具体的な実施態様において、該細胞内ドメインは、リンパ球受容体鎖、TCR/CD3複合体タンパク質、Fc受容体サブユニット、又はIL-2受容体サブユニットに由来するものである。
【００７０】
ある実施態様において、該CARは、例えば、該ポリペプチドの細胞内ドメインの一部として、1以上の共刺激ドメイン又はモチーフをさらに含む。該1以上の共刺激ドメイン又はモチーフは、共刺激CD27ポリペプチド配列、共刺激CD28ポリペプチド配列、共刺激OX40(CD134)ポリペプチド配列、共刺激4-1BB(CD137)ポリペプチド配列、もしくは共刺激性誘導性T細胞共刺激性(co-stimulatory inducible T-cell costimulatory)(ICOS)ポリペプチド配列、又は他の共刺激ドメインもしくはモチーフのうちの1つ又は複数であることができるか、或いはこれらを含むことができる。
【００７１】
膜貫通領域は、機能的なCARに組み込まれることができる任意の膜貫通領域、通常、CD4又はCD8分子由来の膜貫通領域であることができる。
【００７２】
(4.3.2. CTLA4又はPD-1由来のCAR膜貫通ドメイン)
ある実施態様において、CARの膜貫通ドメイン、例えば、CTLA4(細胞傷害性Tリンパ球抗原4もしくは細胞傷害性Tリンパ球関連タンパク質4)又はPD-1(プログラム死-1)由来の膜貫通ドメインは、抑制シグナルをそのような免疫系細胞に通常伝達する免疫系タンパク質に由来するものである。
【００７３】
ある実施態様において、複数の細胞死ポリペプチドを含む本明細書に提供されるTリンパ球のいずれかは、CTLA4又はPD-1(プログラム細胞死1)由来の膜貫通ドメインを含む。具体的な実施態様において、該ポリペプチド、又は本明細書に記載のそのようなポリペプチドのいずれかを発現するTリンパ球は、該ポリペプチドが該抗原に結合したとき、増殖するように活性化又は刺激される。具体的な実施態様において、該ポリペプチドは、Tリンパ球の表面に発現されたとき、該抗原を発現する細胞を死滅させるように該Tリンパ球を誘導する。
【００７４】
ポリペプチドの膜貫通ドメインがCTLA4に由来するものである本明細書中のポリペプチドのいずれかの具体的な実施態様において、CTLA4膜貫通ドメインは、哺乳動物CTLA4、例えば、ヒト、霊長類、又は齧歯類、例えば、マウスCTLA4に由来するものである。好ましくは、該膜貫通ドメインは、CTLA4又はPD-1の細胞内ドメイン、細胞外ドメイン、又は細胞内もしくは細胞外ドメインのどちらか由来のアミノ酸を含まない。CTLA4又はPD-1膜貫通ドメイン配列の具体的で非限定的な例は、以下に提供されている。
【００７５】
具体的な実施態様において、CTLA4膜貫通ドメインは、ヒトCTLA4遺伝子のエキソン3によってコードされるポリペプチド配列である。別の具体的な実施態様において、CTLA4膜貫通ドメインは、アミノ酸配列
【化１】
0006493692.tif 000002
であるか、又は該アミノ酸配列を含む。別の具体的な実施態様において、CTLA4膜貫通ドメインは、GenBank受託番号NM_005214.4のヌクレオチド610〜722によってコードされるポリペプチド配列であるか、又は該ポリペプチド配列を含む。別の具体的な実施態様において、CTLA4膜貫通ドメインは、アミノ酸配列
【化２】
0006493692.tif 000003
であるか、又は該アミノ酸配列を含む。別の具体的な実施態様において、CTLA4膜貫通ドメインは、GenBank受託番号NM_005214.4のヌクレオチド636〜699によってコードされるポリペプチド配列であるか、又は該ポリペプチド配列を含む。別の具体的な実施態様において、CTLA4膜貫通ドメインは、アミノ酸配列
【化３】
0006493692.tif 000004
であるか、又は該アミノ酸配列を含む。例えば、Ensemblタンパク質参照番号ENSP00000303939.3を参照されたい。別の具体的な実施態様において、CTLA4膜貫通ドメインは、ポリペプチド配列
【化４】
0006493692.tif 000005
であるか、又は該ポリペプチド配列を含む。例えば、UNIPROT受託番号P16410を参照されたい。別の具体的な実施態様において、CTLA4膜貫通ドメインは、ポリペプチド配列
【化５】
0006493692.tif 000006
であるか、又は該ポリペプチド配列を含む。例えば、Shinの文献、Blood 119:5678-5687(2012)を参照されたい。別の具体的な実施態様において、PD-1膜貫通ドメインは、アミノ酸配列
【化６】
0006493692.tif 000007
であるか、又は該アミノ酸配列を含む。Fingerの文献、Gene 197(1-2):177-187(1997)を参照されたい。別の具体的な実施態様において、PD-1膜貫通ドメインは、アミノ酸配列
【化７】
0006493692.tif 000008
であるか、又は該アミノ酸配列を含む。例えば、UNIPROT受託番号Q15116を参照されたい。別の具体的な実施態様において、PD-1膜貫通ドメインは、アミノ酸配列
【化８】
0006493692.tif 000009
であるか、又は該アミノ酸配列を含む。例えば、GenBank受託番号NM_005018.2を参照されたい。ある実施態様において、本明細書に開示される膜貫通ポリペプチドのうちの1つをコードするヌクレオチド配列は、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、又は配列番号8に開示されるアミノ酸配列のいずれかをコードするヌクレオチド配列を含む。別の具体的な実施態様において、PD-1膜貫通ドメインは、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、もしくは配列番号8に開示される少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、もしくは21個の連続するアミノ酸であるか、又は該アミノ酸を含む。ある実施態様において、本明細書に開示されるポリペプチドのうちの1つをコードするヌクレオチド配列は、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、又は配列番号8に開示される少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、又は21個の連続するアミノ酸をコードするヌクレオチド配列を含む。該ポリペプチド、例えば、CARを構築する際、ある実施態様において、ヒト配列を非ヒト配列と組み合わせることができる。例えば、ヒトの細胞外及び細胞内ドメインのアミノ酸配列を含むポリペプチド、例えば、CARは、非ヒト種由来の膜貫通ドメインを含むことができ;例えば、マウスCTLA4膜貫通ドメイン又はマウスPD-1膜貫通ドメインを含むことができる。より具体的な実施態様において、該ポリペプチド、例えば、CARは、ヒトの細胞外及び細胞内ドメインのアミノ酸配列を含み、かつ配列番号5のアミノ酸配列を有するか、又は配列番号5のアミノ酸配列からなる膜貫通ドメインを含む。
【００７６】
(4.3.3. CAR細胞内ドメイン)
該ポリペプチドの細胞外ドメインは、対象となる抗原に結合する。本明細書に記載のポリペプチドのいずれかのある実施態様において、該細胞外ドメインは、該抗原に結合する受容体又は受容体の一部を含む。該細胞外ドメインは、例えば、該抗原に結合する受容体又は受容体の一部であることができる。ある実施態様において、該細胞外ドメインは、抗体もしくはその抗原結合部分を含むか、又は抗体もしくはその抗原結合部分である。具体的な実施態様において、該細胞外ドメインは、単鎖Fvドメインを含むか、又は単鎖Fvドメインである。該単鎖Fvドメインは、例えば、柔軟なリンカーによってVHに連結されたVLを含むことができ、ここで、該VL及びVHは、該抗原に結合する抗体に由来するものである。
【００７７】
該ポリペプチドの細胞外ドメインが結合する抗原は、対象となる任意の抗原であることができ、例えば、腫瘍細胞上の抗原であることができる。該腫瘍細胞は、例えば、固形腫瘍の細胞、又は血液癌の細胞であることができる。該抗原は、任意の腫瘍型又は癌型の細胞、例えば、リンパ腫、肺癌、乳癌、前立腺癌、副腎皮質癌、甲状腺癌、鼻咽頭癌、黒色腫、例えば、悪性黒色腫、皮膚癌、結腸直腸癌、類腱腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、内分泌腫瘍、ユーイング肉腫、末梢未分化神経外胚葉性腫瘍、固形胚細胞腫瘍、肝芽腫、神経芽腫、非横紋筋肉腫軟部組織肉腫、骨肉腫、網膜芽腫、横紋筋肉腫、ウィルムス腫瘍、膠芽腫、粘液腫、線維腫、脂肪腫などの細胞上に発現される任意の抗原であることができる。より具体的な実施態様において、該リンパ腫は、慢性リンパ球性白血病(小リンパ球性リンパ腫)、B細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、脾臓辺縁帯リンパ腫、形質細胞骨髄腫、形質細胞腫、節外性辺縁帯B細胞リンパ腫、MALTリンパ腫、節性辺縁帯B細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、縦隔(胸腺)大細胞型B細胞リンパ腫、血管内大細胞型B細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、バーキットリンパ腫、Tリンパ球前リンパ球性白血病、Tリンパ球大型顆粒リンパ球性白血病、侵襲性NK細胞白血病、成人Tリンパ球白血病/リンパ腫、節外NK/Tリンパ球リンパ腫、鼻腔型、腸症型Tリンパ球リンパ腫、肝脾Tリンパ球リンパ腫、芽球性NK細胞リンパ腫、菌状息肉腫、セザリー症候群、皮膚原発未分化大細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症、血管免疫芽球性Tリンパ球リンパ腫、末梢Tリンパ球リンパ腫(特定不能型)、未分化大細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、又は非ホジキンリンパ腫であることができる。
【００７８】
癌が慢性リンパ球性白血病(CLL)である具体的な実施態様において、該CLLのB細胞は、正常な核型を有する。癌が慢性リンパ球性白血病(CLL)である他の具体的な実施態様において、該CLLのB細胞は、17p欠失、11q欠失、12qトリソミー、13q欠失、又はp53欠失を保有する。
【００７９】
ある実施態様において、該抗原は、腫瘍関連抗原又は腫瘍特異的抗原である。様々な具体的な実施態様において、限定するものではないが、該腫瘍関連抗原又は腫瘍特異的抗原は、Her2、前立腺幹細胞抗原(PSCA)、α-フェトタンパク質(AFP)、癌胎児性抗原(CEA)、癌抗原-125(CA-125)、CA19-9、カルレチニン、MUC-1、上皮膜タンパク質(EMA)、上皮腫瘍抗原(ETA)、チロシナーゼ、メラノーマ関連抗原(MAGE)、CD19、CD34、CD45、CD99、CD117、クロモグラニン、サイトケラチン、デスミン、グリア線維性酸性タンパク質(GFAP)、肉眼的嚢胞性疾患液タンパク質(GCDFP-15)、HMB-45抗原、タンパク質メラン-A(Tリンパ球によって認識されるメラノーマ抗原; MART-1)、myo-D1、筋特異的アクチン(MSA)、ニューロフィラメント、ニューロン特異的エノラーゼ(NSE)、胎盤アルカリホスファターゼ、シナプトフィシス(synaptophysis)、チログロブリン、甲状腺転写因子-1、二量体形態のピルビン酸キナーゼアイソザイムM2型(腫瘍M2-PK)、異常なrasタンパク質、又は異常なp53タンパク質である。
【００８０】
ある実施態様において、該TAA又はTSAは、癌/精巣(CT)抗原、例えば、BAGE、CAGE、CTAGE、FATE、GAGE、HCA661、HOM-TES-85、MAGEA、MAGEB、MAGEC、NA88、NY-ESO-1、NY-SAR-35、OY-TES-1、SPANXB1、SPA17、SSX、SYCP1、又はTPTEである。
【００８１】
ある他の実施態様において、該TAA又はTSAは、炭水化物又はガングリオシド、例えば、fuc-GM1、GM2(腫瘍胎児抗原-免疫原性-1; OFA-I-1); GD2(OFA-I-2)、GM3、GD3などである。
【００８２】
ある他の実施態様において、該TAA又はTSAは、α-アクチニン-4、Bage-1、BCR-ABL、Bcr-Abl融合タンパク質、β-カテニン、CA 125、CA 15-3(CA 27.29＼BCAA)、CA 195、CA 242、CA-50、CAM43、Casp-8、cdc27、cdk4、cdkn2a、CEA、coa-1、dek-can融合タンパク質、EBNA、EF2、エプスタインバーウイルス抗原、ETV6-AML1融合タンパク質、HLA-A2、HLA-A11、hsp70-2、KIAAO205、Mart2、Mum-1、Mum-2、及びMum-3、neo-PAP、ミオシンクラスI、OS-9、pml-RARα融合タンパク質、PTPRK、K-ras、N-ras、トリオースリン酸イソメラーゼ、Gage 3,4,5,6,7、GnTV、Herv-K-mel、Lage-1、NA-88、NY-Eso-1/Lage-2、SP17、SSX-2、TRP2-Int2、、gp100(Pmel 17)、チロシナーゼ、TRP-1、TRP-2、MAGE-1、MAGE-3、RAGE、GAGE-1、GAGE-2、p15(58)、RAGE、、SCP-1、Hom/Mel-40、PRAME、p53、H-Ras、HER-2/neu、E2A-PRL、H4-RET、IGH-IGK、MYL-RAR、ヒトパピローマウイルス(HPV)抗原E6及びE7、TSP-180、MAGE-4、MAGE-5、MAGE-6、p185erbB2、p180erbB-3、c-met、nm-23H1、PSA、TAG-72-4、CA 19-9、CA 72-4、CAM 17.1、NuMa、K-ras、13-カテニン、Mum-1、p16、TAGE、PSMA、CT7、テロメラーゼ、43-9F、5T4、791Tgp72、13HCG、BCA225、BTAA、、CD68＼KP1、CO-029、FGF-5、G250、Ga733(EpCAM)、HTgp-175、M344、MA-50、MG7-Ag、MOV18、NB＼70K、NY-CO-1、RCAS1、SDCCAG16、TA-90、TAAL6、TAG72、TLP、TPS、CD19、CD22、CD27、CD30、CD70、GD2(ガングリオシドG2)、EGFRvIII(上皮成長因子変異体III)、精子タンパク質17(Sp17)、メソテリン、PAP(前立腺酸ホスファターゼ)、プロステイン、TARP(T細胞受容体γ代替リーディングフレームタンパク質)、Trp-p8、STEAP1(前立腺の6回膜貫通上皮抗原1)、異常なrasタンパク質、又は異常なp53タンパク質である。別の具体的な実施態様において、該腫瘍関連抗原又は腫瘍特異的抗原は、インテグリンαvβ3(CD61)、ガラクチン(galactin)、K-Ras(V-Ki-ras2カーステンラット肉腫ウイルス癌遺伝子)、又はRal-Bである。他の腫瘍関連及び腫瘍特異的抗原は、当業者に公知である。
【００８３】
TSA及びTAAに結合する、抗体、及びscFvは、それらをコードするヌクレオチド配列と同様に、当技術分野で公知である。
【００８４】
ある具体的な実施態様において、該抗原は、TSAともTAAともみなされないが、それにもかかわらず、腫瘍細胞、又は腫瘍によって引き起こされる損傷と関連がある抗原である。ある実施態様において、例えば、該抗原は、例えば、成長因子、サイトカイン、又はインターロイキン、例えば、血管新生もしくは脈管形成と関連する成長因子、サイトカイン、又はインターロイキンである。そのような成長因子、サイトカイン、又はインターロイキンとしては、例えば、血管内皮成長因子(VEGF)、塩基性線維芽細胞成長因子(bFGF)、血小板由来成長因子(PDGF)、肝細胞成長因子(HGF)、インスリン様成長因子(IGF)、又はインターロイキン-8(IL-8)を挙げることができる。腫瘍は、腫瘍の近くに低酸素環境を作り出すこともできる。したがって、他の具体的な実施態様において、該抗原は、低酸素関連因子、例えば、HIF-1α、HIF-1β、HIF-2α、HIF-2β、HIF-3α、又はHIF-3βである。腫瘍は、正常組織に対する局部損傷を引き起こし、損傷関連分子パターン分子(DAMP;別名、アラーミン)として知られる分子の放出を引き起こすこともできる。ある他の具体的な実施態様においては、したがって、該抗原は、DAMP、例えば、熱ショックタンパク質、クロマチン関連タンパク質高移動度群ボックス1(HMGB1)、S100A8(MRP8、カルグラニュリンA)、S100A9(MRP14、カルグラニュリンB)、血清アミロイドA(SAA)であり、又はデオキシリボ核酸、アデノシン三リン酸、尿酸、もしくはヘパリン硫酸(heparin sulfate)であることができる。
【００８５】
本明細書に記載のポリペプチドのある実施態様において、該細胞外ドメインは、リンカー、スペーサー、又はヒンジポリペプチド配列、例えば、CD28由来の配列又はCTLA4由来の配列によって、該膜貫通ドメインに接続されている。
【００８６】
(4.3.4.二重特異性CAR)
本明細書に記載のTリンパ球又は方法のある実施態様において、該Tリンパ球は、細胞死ポリペプチドを含むことに加えて、一次シグナル伝達機構と共刺激機構が2以上のポリペプチドに分かれている2以上のCARを含む。
【００８７】
ある実施態様において、例えば、該Tリンパ球は、細胞死ポリペプチドと、少なくとも2つの異なるポリペプチド、例えば、キメラ受容体とを含み、この少なくとも2つの異なるポリペプチドにおいては、第一の抗原への、一次シグナル伝達ポリペプチド、例えば、キメラ受容体の結合に由来する免疫シグナルが、共刺激ポリペプチド、例えば、キメラ受容体によって産生される共刺激シグナルから分離されており、ここで、該共刺激シグナルは、第二のキメラ受容体による第二の抗原の抗原結合に依存する。
【００８８】
一実施態様において、該Tリンパ球は、第一の抗原に結合する第一の細胞外抗原結合ドメインと第一の細胞内シグナル伝達ドメインとを含む一次シグナル伝達ポリペプチド(ここで、該一次シグナル伝達ポリペプチドは共刺激ドメインを含まない);及び第二の抗原に結合する第二の細胞外抗原結合ドメイン、又は該第二の抗原に結合する受容体と;第二の細胞内シグナル伝達ドメインとを含む共刺激ポリペプチドを含み;ここで、該Tリンパ球は、該第一のシグナル伝達ドメインと該第二のシグナル伝達ドメインが両方とも、それぞれ、該第一の抗原と該第二の抗原によって活性化されたときにのみ、最大限に細胞傷害性となる。具体的な実施態様において、該第二の抗原の該第二の結合ドメインへの結合を伴わない該第一の抗原の該第一の抗原結合ドメインへの結合、又は第一の第二の抗原の該第一の結合ドメインへの結合を伴わない該第二の抗原の該第二の抗原結合ドメインへの結合は、該Tリンパ球のアネルギー、又は該T-リンパ球の該第一の抗原もしくは該第二の抗原に対する非応答性を誘導する。
【００８９】
別の具体的な実施態様において、該第一の抗原結合ドメイン及び該第二の抗原結合ドメインは、独立に、受容体の抗原結合部分、抗体の抗原結合部分、又は他のペプチドベースの巨大分子抗原結合因子である。ある具体的な実施態様において、該第一の抗原結合ドメイン又は該第二の抗原結合ドメインのどちらか又は両方は、scFv抗体断片である。具体的な実施態様において、該一次シグナル伝達ポリペプチド又は該共刺激ポリペプチドのどちらか又は両方は、膜貫通ドメインをさらに含む。他の具体的な実施態様において、該一次シグナル伝達ポリペプチド又は該共刺激ポリペプチドは、Tリンパ球生存モチーフを含む。具体的な実施態様において、該Tリンパ球生存モチーフは、CD28 Tリンパ球生存モチーフである。他の具体的な実施態様において、該Tリンパ球生存モチーフは、IL-7受容体(IL-7R)の細胞内シグナル伝達ドメイン、IL-12受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、IL-15受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、IL-21受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、又は形質転換成長因子β(TGFβ)受容体の細胞内シグナル伝達ドメインである。別のより具体的な実施態様において、該一次シグナル伝達ポリペプチド又は該共刺激ポリペプチドは、Tリンパ球生存モチーフを含むCD28分子の一部を含む。より具体的な実施態様において、該一次シグナル伝達ポリペプチド又は該共刺激ポリペプチドは、Tリンパ球生存モチーフを含むCD28分子を含む。ある具体的な実施態様において、該第一の細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンに基づく活性化モチーフ(ITAM)を含むポリペプチド配列を含む。より具体的な実施態様において、該ポリペプチド配列は、CD3ζシグナル伝達ドメインである。
【００９０】
ある具体的な実施態様において、該第一の抗原は、腫瘍細胞上の抗原である。より具体的な実施態様において、該腫瘍細胞は、固形腫瘍の細胞である。別のより具体的な実施態様において、該腫瘍細胞は、血液癌細胞である。別の具体的な実施態様において、該抗原は、腫瘍関連抗原又は腫瘍特異的抗原である。より具体的な実施態様において、該腫瘍関連抗原又は腫瘍特異的抗原は、Her2、前立腺幹細胞抗原(PSCA)、α-フェトタンパク質(AFP)、癌胎児性抗原(CEA)、癌抗原-125(CA-125)、CA19-9、カルレチニン、MUC-1、上皮膜タンパク質(EMA)、上皮腫瘍抗原(ETA)、チロシナーゼ、メラノーマ関連抗原(MAGE)、CD34、CD45、CD99、CD117、クロモグラニン、サイトケラチン、デスミン、グリア線維性酸性タンパク質(GFAP)、肉眼的嚢胞性疾患液タンパク質(GCDFP-15)、HMB-45抗原、タンパク質メラン-A(Tリンパ球によって認識されるメラノーマ抗原; MART-1)、myo-D1、筋特異的アクチン(MSA)、ニューロフィラメント、ニューロン特異的エノラーゼ(NSE)、胎盤アルカリホスファターゼ、シナプトフィジン、チログロブリン、甲状腺転写因子-1、二量体形態のピルビン酸キナーゼアイソザイムM2型(腫瘍M2-PK)、異常なrasタンパク質、又は異常なp53タンパク質である。
【００９１】
別の具体的な実施態様において、該第二の抗原は、成長因子、サイトカイン、又はインターロイキンである。該第二の抗原は、血管新生又は脈管形成と関連する成長因子、サイトカイン、又はインターロイキンである。より具体的な実施態様において、該第二の抗原は、血管内皮成長因子(VEGF)、塩基性線維芽細胞成長因子(bFGF)、血小板由来成長因子(PDGF)、肝細胞成長因子(HGF)、インスリン様成長因子(IGF)、又はインターロイキン-8(IL-8)である。
【００９２】
別の具体的な実施態様において、該第二の抗原によってもたらされるシグナル伝達活性化は、非抗原性であるが、低酸素と関連する。より具体的な実施態様において、該刺激は、低酸素誘導性因子-1α(HIF-1α)、HIF-1β、HIF-2α、HIF-2β、HIF-3α、又はHIF-3βの活性化によって誘導される。
【００９３】
別の具体的な実施態様において、該第二の抗原は、インターロイキンである。
【００９４】
別の具体的な実施態様において、該第二の抗原は、損傷関連分子パターン分子(DAMP;別名、アラーミン)である。より具体的な実施態様において、該DAMPは、熱ショックタンパク質、クロマチン関連タンパク質高移動度群ボックス1(HMGB1)、S100A8(別名、MRP8、又はカルグラニュリンA)、S100A9(別名、MRP14、又はカルグラニュリンB)、血清アミロイドA(SAA)、デオキシリボ核酸、アデノシン三リン酸、尿酸、又はヘパリン硫酸(heparin sulfate)である。
【００９５】
ある具体的な実施態様において、該第二の抗原は、腫瘍細胞によって提示される抗原に結合する抗体上の抗原である。
【００９６】
本明細書中の実施態様のいずれかの具体的な実施態様において、該共刺激ポリペプチドは、1以上の共刺激ドメインを含む。具体的な実施態様において、該1以上の共刺激ドメインは、共刺激CD27ポリペプチド配列、共刺激CD28ポリペプチド配列、共刺激OX40(CD134)ポリペプチド配列、共刺激4-1BB(CD137)ポリペプチド配列、又は共刺激誘導性T細胞共刺激(ICOS)ポリペプチド配列のうちの1つ又複数を含む。
【００９７】
具体的な実施態様において、該一次シグナル伝達ポリペプチドは、細胞外腫瘍抗原結合ドメイン及びCD3ζシグナル伝達ドメインを含み、その場合、該共刺激ポリペプチドは、抗原結合ドメイン(ここで、該抗原は、血管新生又は脈管形成因子である)及び1以上の共刺激分子シグナル伝達ドメインを含む。該血管新生因子は、例えば、VEGFであることができる。該1以上の共刺激分子シグナル伝達モチーフは、例えば、CD28、OX40、及び4-1BBの各々に由来する共刺激シグナル伝達ドメインを含むことができる。より具体的な実施態様において、該一次シグナル伝達ポリペプチドは、細胞外腫瘍抗原結合ドメイン及びCD3ζシグナル伝達ドメインを含み、その場合、該共刺激ポリペプチドは、抗原結合ドメイン(ここで、該抗原はVEGFである)、並びにCD28、OX40、及び4-1BBの各々に由来する共刺激シグナル伝達ドメインを含む。
【００９８】
より具体的な実施態様において、該一次シグナル伝達ポリペプチド又は該共刺激ポリペプチドは、Tリンパ球生存モチーフを含む。より具体的な実施態様において、該Tリンパ球生存モチーフは、IL-7受容体(IL-7R)の細胞内シグナル伝達ドメイン、IL-12受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、IL-15受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、IL-21受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、もしくは形質転換成長因子β(TGFβ)受容体の細胞内シグナル伝達ドメインであるか、又はこれらの細胞内シグナル伝達ドメインに由来する。該Tリンパ球のより具体的な実施態様においては、したがって、該一次シグナル伝達ポリペプチドは、細胞外腫瘍抗原結合ドメイン及びCD3ζシグナル伝達ドメインを含み、その場合、該共刺激ポリペプチドは、抗原結合ドメイン(ここで、該抗原はVEGFである)、IL-7受容体細胞内Tリンパ球生存モチーフ、並びにCD28、OX40、及び4-1BBの各々に由来する共刺激シグナル伝達ドメインを含む。
【００９９】
該Tリンパ球の別の具体的な実施態様において、該第一の抗原は、腫瘍特異的抗原又は腫瘍関連抗原であり、該第一の細胞内シグナル伝達ドメインは、CD3ζシグナル伝達ドメインを含み;その場合、該共刺激ポリペプチドは、該第二の抗原に結合する抗原結合ドメイン、並びにCD28、OX40、及び4-1BBの各々に由来する共刺激シグナル伝達ドメインを含む。より具体的な実施態様において、該共刺激ポリペプチドは、細胞内Tリンパ球生存モチーフ、例えば、IL-7受容体(IL-7R)の細胞内シグナル伝達ドメイン、IL-12受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、IL-15受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、IL-21受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、もしくは形質転換成長因子β(TGFβ)受容体の細胞内シグナル伝達ドメインであるか、又はこれらの細胞内シグナル伝達ドメインに由来するTリンパ球生存モチーフをさらに含む。
【０１００】
本明細書に提供されるTリンパ球のいずれかの具体的な実施態様において、該第二の抗原は、VEGF又はIL-4である。
【０１０１】
別の態様において、本明細書に提供されるのは、細胞死ポリペプチド、第一の抗原に結合する第一の細胞外抗原結合ドメインと第一の細胞内シグナル伝達ドメインとを含む共刺激ポリペプチド;及び第二の抗原に結合する第二の細胞外抗原結合ドメイン、又は該第二の抗原に結合する受容体と;第二の細胞内シグナル伝達ドメインとを含む一次シグナル伝達ポリペプチド(ここで、該一次シグナル伝達ポリペプチドは、共刺激ドメインを含まない)を含むTリンパ球であり;ここで、該修飾されたリンパ球は、該第一のシグナル伝達ドメインと該第二のシグナル伝達ドメインが両方とも、それぞれ、該第一の抗原と該第二の抗原によって活性化されたときにのみ、最大限に細胞傷害性となる。具体的な実施態様において、該第二の抗原の該第二の結合ドメインへの結合を伴わない該第一の抗原の該第一の抗原結合ドメインへの結合、又は第一の第二の抗原の該第一の結合ドメインへの結合を伴わない該第二の抗原の該第二の抗原結合ドメインへの結合は、該Tリンパ球のアネルギー、又は該第一の抗原に対する該Tリンパ球の非応答性を誘導する。具体的な実施態様において、該第一の抗原結合ドメイン及び該抗原結合ドメインは、独立に、受容体の抗原結合部分又は抗体の抗原結合部分である。別の具体的な実施態様において、該第一の抗原結合ドメイン又は該第二の抗原結合ドメインのどちらか又両方は、scFv抗体断片である。具体的な実施態様において、該共刺激ポリペプチド及び/又は該一次シグナル伝達ポリペプチドは、膜貫通ドメインをさらに含む。より具体的な実施態様において、該共刺激ポリペプチド又は該一次シグナル伝達ポリペプチドは、Tリンパ球生存モチーフ、例えば、本明細書に記載のTリンパ球生存モチーフのいずれかを含む。別の具体的な実施態様において、該第一の抗原は、腫瘍細胞、例えば、固形腫瘍の細胞又は血液癌細胞上の抗原である。具体的な実施態様において、該第一の抗原は、腫瘍関連抗原又は腫瘍特異的抗原、例えば、Her2、前立腺幹細胞抗原(PSCA)、α-フェトタンパク質(AFP)、癌胎児性抗原(CEA)、癌抗原-125(CA-125)、CA19-9、カルレチニン、MUC-1、上皮膜タンパク質(EMA)、上皮腫瘍抗原(ETA)、チロシナーゼ、メラノーマ関連抗原(MAGE)、CD34、CD45、CD99、CD117、クロモグラニン、サイトケラチン、デスミン、グリア線維性酸性タンパク質(GFAP)、肉眼的嚢胞性疾患液タンパク質(GCDFP-15)、HMB-45抗原、タンパク質メラン-A(Tリンパ球によって認識されるメラノーマ抗原; MART-1)、myo-D1、筋特異的アクチン(MSA)、ニューロフィラメント、ニューロン特異的エノラーゼ(NSE)、胎盤アルカリホスファターゼ、シナプトフィジン、チログロブリン、甲状腺転写因子-1、二量体形態のピルビン酸キナーゼアイソザイムM2型(腫瘍M2-PK)、異常なrasタンパク質、異常なp53タンパク質、CD19、CD22、CD27、CD30、CD70、GD2(ガングリオシドG2)、EGFRvIII(上皮成長因子変異体III)、精子タンパク質17(Sp17)、メソテリン、PAP(前立腺酸ホスファターゼ)、プロステイン、TARP(T細胞受容体γ代替リーディングフレームタンパク質)、Trp-p8、又はSTEAP1(前立腺の6回膜貫通上皮抗原1)である。別の具体的な実施態様において、該腫瘍関連抗原又は腫瘍特異的抗原は、インテグリンαvβ3(CD61)、ガラクチン(galactin)、K-Ras(V-Ki-ras2カーステンラット肉腫ウイルス癌遺伝子)、又はRal-Bであ��。
【０１０２】
ある具体的な実施態様において、該第二の細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンに基づく活性化モチーフ(ITAM)を含むポリペプチド配列、例えば、CD3ζシグナル伝達ドメインを含む。具体的な実施態様において、該第二の抗原は、成長因子、サイトカイン、又はインターロイキンである。別の具体的な実施態様において、該第二の抗原は、血管新生又は脈管形成と関連する成長因子、サイトカイン、又はインターロイキン、例えば、VEGF、bFGF、PDGF、HGF、IGF、又はIL-8である。他のより具体的な実施態様において、該第二のキメラ受容体によるシグナル伝達は、低酸素関連因子、例えば、HIF-1α、HIF-1β、HIF-2α、HIF-2β、HIF-3α、又はHIF-3βの活性化によって誘導される。他の具体的な実施態様において、該第二の抗原は、インターロイキンである。他の具体的な実施態様において、該第二の抗原は、DAMP、例えば、熱ショックタンパク質、HMGB1、S100A8、S100A9、SAA、DNA、ATP、尿酸、又はヘパリン硫酸(heparin sulfate)である。他の具体的な実施態様において、該第二の抗原は、投与されるペプチド、例えば、抗体又は合成ポリペプチドである。他の具体的な実施態様において、該第二の抗原は、腫瘍細胞によって提示される抗原に結合する抗体上の抗原である。ある具体的な実施態様において、該共刺激ポリペプチドは、1以上の共刺激ドメイン、例えば、共刺激CD27ポリペプチド配列、共刺激CD28ポリペプチド配列、共刺激OX40(CD134)ポリペプチド配列、共刺激4-1BB(CD137)ポリペプチド配列、又は共刺激誘導性T細胞共刺激(ICOS)ポリペプチド配列のうちの1つ又複数を含む。上記の実施態様のいずれかにおいては、具体的な実施態様において、該共刺激ポリペプチド又は該一次シグナル伝達ポリペプチドは、Tリンパ球生存モチーフを含み、例えば、該Tリンパ球生存モチーフは、IL-7受容体(IL-7R)の細胞内シグナル伝達ドメイン、IL-12受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、IL-15受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、IL-21受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、もしくは形質転換成長因子β(TGFβ)受容体の細胞内シグナル伝達ドメインであるか、又はこれらの細胞内シグナル伝達ドメインに由来する。
【０１０３】
(4.4.単離されたポリペプチド)
本明細書に提供される、CTLA4又はPD-1膜貫通ドメインを含む、ポリペプチドのいずれかを、例えば、アシル化、アミド化、グリコシル化、メチル化、リン酸化、硫酸化、sumo化、ユビキチン化などによって修飾することができる。該ポリペプチドは、検出可能なシグナルを提供することができる標識で、例えば、放射性同位体及び蛍光化合物で標識することができる。第一の又は第二のポリペプチドの1以上の側鎖を誘導体化することができ、例えば、コハク酸もしくは他のカルボン酸無水物によるリジニル残基及びアミノ末端残基の誘導体化、又は例えば、イミドエステル、例えば、メチルピコリニミデート;リン酸ピリドキサール;ピリドキサール;クロロボロヒドリド;トリニトロベンゼンスルホン酸; O-メチルイソウレア; 2,4ペンタンジオン;及びトランスアミナーゼによって触媒されるグリオキシレートとの反応による誘導体化がある。カルボキシル側基のアスパルチル又はグルタミルは、カルボジイミド(R-N=C=N-R')、例えば、1-シクロヘキシル-3-(2-モルホリニル-(4-エチル)カルボジイミド又は1-エチル-3-(4-アゾニア-4,4-ジメチルペンチル)カルボジイミドとの反応によって選択的に修飾することができる。
【０１０４】
(4.5.単離された核酸)
本明細書に記載のポリペプチド(例えば、キメラ受容体)は、当技術分野で周知の方法に従って、ポリヌクレオチド配列によってコードされることができる。該ポリヌクレオチドは、免疫細胞、例えば、Tリンパ球の形質転換に好適な任意のポリヌクレオチドベクターに含めることができる。例えば、Tリンパ球は、第一及び第二のポリペプチド(例えば、キメラ受容体)をコードするポリヌクレオチドを含む、合成ベクター、レンチウイルス又はレトロウイルスベクター、自律複製プラスミド、ウイルス(例えば、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、又はヘルペスウイルス)などを用いて形質転換することができる。Tリンパ球の形質転換に好適なレンチウイルスベクターとしては、例えば、その開示が引用により完全に本明細書中に組み込まれる、米国特許第5,994,136号;第6,165,782号;第6,428,953号;第7,083,981号;及び第7,250,299号に記載されているレンチウイルスベクターが挙げられるが、これらに限定されない。Tリンパ球の形質転換に好適なHIVベクターとしては、例えば、その開示が引用により完全に本明細書中に組み込まれる米国特許第5,665,577号に記載されているベクターが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０５】
例えば、Tリンパ球における、第一及び第二のポリペプチドの産生において有用な核酸としては、DNA、RNA、又は核酸類似体が挙げられる。核酸類似体は、塩基部分、糖部分、又はリン酸エステル骨格において修飾されることができ、デオキシチミジンに代わるデオキシウリジン置換、デオキシシチジンに代わる5-メチル-2'-デオキシシチジン又は5-ブロモ-2'-デオキシシチジン置換を含むことができる。糖部分の修飾は、2'-O-メチル又は2'-O-アリル糖を形成させるためのリボース糖の2'ヒドロキシルの修飾を含むことができる。デオキシリボースリン酸エステル骨格は、各々の塩基部分が6員モルホリノ環に結合しているモルホリノ核酸、又はデオキシリン酸エステル骨格がシュードペプチド骨格によって置換され、4つの塩基が保持されるペプチド核酸を生成させるように修飾することができる。例えば、Summerton及びWellerの文献(1997)、Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 7:187-195;及びHyrupらの文献(1996)、Bioorgan. Med. Chain. 4:5-23を参照されたい。さらに、デオキシリン酸エステル骨格を、例えば、ホスホロチオエートもしくはホスホロジチオエート骨格、ホスホロアミダイト、又はアルキルホスホトリエステル骨格と置換することができる。
【０１０６】
(4.6.細胞)
細胞死ポリペプチド及び多量体化又は二量体化因子を使用し得る細胞の非限定的な例としては、ナチュラルキラー(NK)細胞、樹状細胞(DC)、胎盤幹細胞(例えば、その開示が引用により完全に本明細書中に組み込まれる、米国特許第7,468,276号;第8,057,788号、及び第8,202,703号に開示されている胎盤幹細胞)、臍帯血、胎盤血、末梢血、骨髄、歯髄、脂肪組織、骨軟骨組織などに由来する間葉様幹細胞;胚性幹細胞、胚性生殖細胞、神経堤幹細胞、神経幹細胞、及び分化細胞(例えば、線維芽細胞など)が挙げられるが、これらに限定されない。該細胞死ポリペプチド及び多量体化又は二量体化因子は、例えば、動物モデル実験を目的として、腫瘍細胞株で使用することもできる。
【０１０７】
具体的な実施態様において、本明細書に提供されるポリペプチドを含む細胞は、Tリンパ球である。本明細書に提供されるポリペプチドを含むTリンパ球は、ナイーブTリンパ球又はMHC拘束Tリンパ球であってもよい。ある実施態様において、該Tリンパ球は、腫瘍浸潤リンパ球(TIL)である。ある実施態様において、該Tリンパ球は、腫瘍生検から単離されたものであるか、又は腫瘍生検から単離されたTリンパ球から拡大されたものである。ある他の実施態様において、該Tリンパ球は、末梢血、臍帯血、もしくはリンパ液から単離されたものであるか、又は末梢血、臍帯血、もしくはリンパ液から拡大されたTリンパ球から拡大されるものである。
【０１０８】
本方法で使用される免疫細胞、例えば、Tリンパ球は、該Tリンパ球が投与されることになる個体にとって自己のものであることが好ましい。ある他の実施態様において、該Tリンパ球は、該Tリンパ球が投与されることになる個体にとって同種異系のものである。同種異系Tリンパ球を用いてTリンパ球を調製する場合、個体における移植片対宿主病(GVHD)の可能性を低下させるTリンパ球を選択することが好ましい。例えば、ある実施態様において、ウイルス特異的Tリンパ球がTリンパ球の調製に選択され;そのようなリンパ球は、任意のレシピエント抗原に結合し、その結果、該抗原によって活性化されるようになる本来の能力が大きく低下していると考えられる。ある実施態様において、レシピエントによる同種異系Tリンパ球の拒絶は、宿主への、1以上の免疫抑制剤、例えば、シクロスポリン、タクロリムス、シロリムス、シクロホスファミドなどの共投与によって軽減することができる。
【０１０９】
一実施態様において、Tリンパ球を個体から入手し、任意にその後拡大し、その後、細胞死ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及び任意に1以上のCARをコードする1以上のポリヌクレオチドで形質転換し、任意にその後拡大する。別の実施態様において、Tリンパ球を個体から入手し、任意にその後拡大し、その後、細胞死ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及び任意に1以上のCARをコードする1以上のポリヌクレオチドで形質転換し、任意にその後拡大する。該ポリヌクレオチドのいずれかを含む細胞を、1以上の選択可能マーカーを用いて選択することができる。
【０１１０】
ある実施態様において、本明細書に提供されるTリンパ球のいずれかは、CTLA4又はPD-1膜貫通ドメイン含有ポリペプチドの他に、天然のTCR複合体を形成することができる天然のTCRタンパク質、例えば、TCR-α及びTCR-βを発現するか、又はこれらを含む。ある他の実施態様において、該Tリンパ球のTCR-α及びTCR-βをコードする天然の遺伝子のどちらか又両方を機能的でないように修飾し、例えば、一部又は全てを欠失させる、突然変異を挿入する、などを行う。
【０１１１】
ある実施態様において、本明細書に提供されるTリンパ球のいずれかは、腫瘍病変から単離され、例えば、腫瘍浸潤リンパ球であり;そのようなTリンパ球は、TSA又はTAAに特異的であると考えられる。
【０１１２】
Tリンパ球、並びにCD3ζシグナル伝達ドメイン及びCD28共刺激ドメインを含むポリペプチドを含むTリンパ球は、CD3及びCD28に対する抗体、例えば、ビーズ、又は細胞培養プレートの表面に付着した抗体を用いて拡大することができる;例えば、米国特許第5,948,893号;第6,534,055号;第6,352,694号;第6,692,964号;第6,887,466号;及び第6,905,681号を参照されたい。
【０１１３】
上記の実施態様のいずれかにおいて、該抗原及び/又は抗体は、Tリンパ球が培養される培地中に遊離した状態で存在することができるか、又はどちらかもしくは両方を、固体支持体、例えば、組織培養プラスチック表面、ビーズなどに付着させることができる。
【０１１４】
本明細書に提供されるTリンパ球は、細胞死ポリペプチドの他に、第二のタイプの「自殺遺伝子」又は「安全スイッチ」を任意に含むことができる。例えば、該Tリンパ球は、ある実施態様において、ガンシクロビルと接触したときにTリンパ球の死を引き起こすHSVチミジンキナーゼ遺伝子(HSV-TK)を含むことができる。別の実施態様において、該Tリンパ球は、誘導性カスパーゼ、例えば、誘導性カスパーゼ9(iカスパーゼ9)、例えば、カスパーゼ9と特定の低分子医薬を用いた二量体化を可能にするヒトFK506結合タンパク質との融合タンパク質を発現するか、又はこれらを含む。Straathofらの文献、Blood 105(11):4247-4254(2005)を参照されたい。
【０１１５】
(4.7.細胞死ポリペプチドを含む細胞の使用方法)
本明細書中の別所に記載されている、細胞死ポリペプチド及び任意に1以上のCARを含む、本明細書に提供される細胞、例えば、Tリンパ球を用いて、本明細書に記載の細胞によって標的とされることが所望される1以上のタイプの細胞、例えば、死滅させるべき1以上のタイプの細胞を有する個体を治療することができる。ある実施態様において、該死滅させるべき細胞は、癌細胞、例えば、腫瘍細胞である。具体的な実施態様において、該癌細胞は、固形腫瘍の細胞である。具体的な実施態様において、該細胞は、リンパ腫、肺癌、乳癌、前立腺癌、副腎皮質癌、甲状腺癌、鼻咽頭癌、黒色腫、例えば、悪性黒色腫、皮膚癌、結腸直腸癌、類腱腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、内分泌腫瘍、ユーイング肉腫、末梢未分化神経外胚葉性腫瘍、固形胚細胞腫瘍、肝芽腫、神経芽腫、非横紋筋肉腫 軟部組織肉腫、骨肉腫、網膜芽腫、横紋筋肉腫、ウィルムス腫瘍、膠芽腫、粘液腫、線維腫、脂肪腫などの細胞である。より具体的な実施態様において、該リンパ腫は、慢性リンパ球性白血病(小リンパ球性リンパ腫)、B細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、脾臓辺縁帯リンパ腫、形質細胞骨髄腫、形質細胞腫、節外性辺縁帯B細胞リンパ腫、MALTリンパ腫、節性辺縁帯B細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、縦隔(胸腺)大細胞型B細胞リンパ腫、血管内大細胞型B細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、バーキットリンパ腫、Tリンパ球前リンパ球性白血病、Tリンパ球大型顆粒リンパ球性白血病、侵襲性NK細胞白血病、成人Tリンパ球白血病/リンパ腫、節外NK/Tリンパ球リンパ腫、鼻腔型、腸症型Tリンパ球リンパ腫、肝脾Tリンパ球リンパ腫、芽球性NK細胞リンパ腫、菌状息肉腫、セザリー症候群、皮膚原発未分化大細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症、血管免疫芽球性Tリンパ球リンパ腫、末梢Tリンパ球リンパ腫(特定不能型)、未分化大細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、又は非ホジキンリンパ腫であることができる。
【０１１６】
ある実施態様において、本明細書に記載の修飾された細胞、例えば、修飾されたTリンパ球が、それを必要としている対象に投与された場合、選択される多量体化因子と細胞死ポリペプチドの組合せは、それらが、該細胞、例えば、Tリンパ球が投与された患者集団(又は亜集団)に適合するように選択される。ほんの一例として、選択される多量体化因子が抗体のリツキシマブである場合、ある実施態様において、該患者集団は、B細胞の癌、例えば、B細胞リンパ腫を有する個体である。
【０１１７】
そのような細胞、例えば、Tリンパ球によって治療可能な疾患又は障害を有する個体、例えば、癌を有する個体への投与後の、該細胞、例えば、Tリンパ球の効力は、特定の疾患又は障害に固有の、該疾患又は障害の進行を示すものであることが当業者に知られている、1以上の基準によって評価することができる。一般に、そのような個体への該細胞の投与は、該基準のうちの1つ又複数が、疾患状態の値もしくは範囲から正常な値もしくは範囲に、又はその方向に向かって、検出可能な程度に、例えば、有意に移行するとき、有効である。
【０１１８】
該細胞、例えば、Tリンパ球は、任意の医薬として許容し得る溶液、好ましくは、生細胞の送達に好適な溶液、例えば、塩類溶液(例えば、リンガー溶液)、ゼラチン、炭水化物(例えば、ラクトース、アミロース、デンプンなど)、脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリジンなどに入れて製剤化することができる。そのような調製物は、該細胞に添加する前に滅菌することが好ましく、また、滑沢剤、防腐剤、安定化剤、乳化剤、浸透圧に影響を及ぼす塩類、緩衝剤、及び着色料などの助剤と混合することができる。該細胞の製剤化において使用するのに好適な医薬担体は当技術分野で公知であり、例えば、WO 96/05309号に記載されている。
【０１１９】
ある実施態様において、該細胞、例えば、Tリンパ球は、個別用量に製剤化され、ここで、該個別用量は、少なくとも、多くとも、又は約1×104、5×104、1×105、5×105、1×106、5×106、1×107、5×107、1×108、5×108、1×109、5×109、1×1010、5×1010、又は1×1011個のTリンパ球を含む。ある実施態様において、該細胞は、静脈内、動脈内、非経口、筋肉内、皮下、髄腔内、もしくは眼内投与、又は特定の器官もしくは組織内への投与用に製剤化される。
【実施例】
【０１２０】
(5.実施例)
(5.1.実施例1: B細胞リンパ腫の治療)
個体は、B細胞慢性リンパ球性白血病のB細胞リンパ腫の症状を呈している。該個体由来のB細胞の検査により、該B細胞が17p欠失を保有することが判明する。Tリンパ球を該個体から入手し、これに、キメラ抗原受容体(CAR)をコードするヌクレオチド配列を含むレンチウイルスベクターをトランスフェクトし、抗体リツキシマブによって結合され得るミモトープを含む細胞外ドメインと、カスパーゼ9ドメインを含む細胞内ドメインとを含む二量体化可能な細胞死ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第二のレンチウイルスベクターをトランスフェクトする。該Tリンパ球を、CD3+CD28-コーティングビーズを用いて、投与に十分な数まで拡大する。該キメラ受容体は、CD19に結合する細胞外抗原結合領域; CTLA4由来の膜貫通ドメイン; CD28由来の細胞内共刺激ドメイン;及び細胞内CD3ζドメインを含む。該個体に、200mLの生理食塩水溶液中の109〜1010個の該Tリンパ球を、静脈内注入によって、30分間かけて投与する。該個体の血液中のCD19+ B細胞少なくとも90％の低下を確立するために、該個体をその後2週間モニタリングする。Tリンパ球の投与後、患者が、該Tリンパ球が原因で苦しそうな様子(例えば、呼吸困難、発熱、血清サイトカインレベルの異常、発疹など)を示した場合、200〜500mg/m2の投薬量で、又は症状が緩和されるまで、リツキシマブを投与する。
【０１２１】
(5.2.実施例2: B細胞リンパ腫の治療)
個体は、B細胞慢性リンパ球性白血病のB細胞リンパ腫の症状を呈している。該個体由来のB細胞の検査により、該B細胞が17p欠失を保有することが判明する。約106個のTリンパ球を該個体から入手し、これに、抗体リツキシマブによって結合され得るミモトープを含む細胞外ドメインと、カスパーゼ8ドメインを含む細胞内ドメインとを含む細胞死ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むレンチウイルスベクターをトランスフェクトし、CARをコードするヌクレオチド配列を含むレンチウイルスベクターをトランスフェクトする。該CARは、CD19に結合する細胞外抗原結合領域; PD-1由来の膜貫通ドメイン; CD28由来の細胞内共刺激ドメイン;及び細胞内CD3ζドメインを含む。CARを発現するTリンパ球を、該Tリンパ球を事前に拡大することなく、該個体に投与する。該個体に、200mLの生理食塩水溶液中の105〜106個の該Tリンパ球を、静脈内注入によって、30分間かけて投与する。該個体の血液中のCD19+ B細胞少なくとも90％の低下を確立するために、該個体をその後2週間モニタリングする。Tリンパ球の投与後、患者が、該Tリンパ球が原因で苦しそうな様子(例えば、呼吸困難、発熱、血清サイトカインレベルの異常、発疹など)を示した場合、200〜500mg/m2の投薬量で、又は症状が緩和されるまで、リツキシマブを投与する。
【０１２２】
(5.3.実施例3: B細胞リンパ腫の治療)
個体は、B細胞慢性リンパ球性白血病のB細胞リンパ腫の症状を呈している。該個体由来のB細胞の検査により、該B細胞がp53欠失を保有することが判明する。Tリンパ球を該個体から入手し、これに、抗体リツキシマブによって結合され得るエピトープを含む細胞外ドメインと、カスパーゼ3ドメインを含む細胞内ドメインとを含む細胞死ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むレンチウイルスベクターをトランスフェクトし、CARをコードするヌクレオチド配列を含むレンチウイルスベクターをトランスフェクトする。該Tリンパ球を、CD3+CD28-コーティングビーズを用いて、投与に十分な数まで拡大する。該CARは、CD19に結合する細胞外抗原結合領域; CTLA4由来の膜貫通ドメイン; CD28、4-1BB、及びOX40の各々に由来する細胞内共刺激ドメイン;並びに細胞内CD3ζドメインを含む。該個体に、200mLの生理食塩水溶液中の109〜1010個の該Tリンパ球を、静脈内注入によって、30分間かけて投与する。該個体の血液中のCD19+ B細胞少なくとも90％の低下を確立するために、該個体をその後2週間モニタリングする。Tリンパ球の投与後、患者が、該Tリンパ球が原因で苦しそうな様子(例えば、呼吸困難、発熱、血清サイトカインレベルの異常、発疹など)を示した場合、200〜500mg/m2の投薬量で、又は症状が緩和されるまで、リツキシマブを投与する。
【０１２３】
(5.4.実施例4: B細胞リンパ腫の治療)
個体は、B細胞慢性リンパ球性白血病のB細胞リンパ腫の症状を呈している。該個体由来のB細胞の検査により、該B細胞がp53欠失を保有することが判明する。約106個のTリンパ球を該個体から入手し、これに、抗体リツキシマブによって結合され得るエピトープを含む細胞外ドメインと、カスパーゼ9ドメインを含む細胞内ドメインとを含む細胞死ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むレンチウイルスベクターをトランスフェクトし、CARをコードするヌクレオチド配列を含むレンチウイルスベクターをトランスフェクトする。該CARは、CD19に結合する細胞外抗原結合領域; PD-1由来の膜貫通ドメイン; CD28、4-1BB、及びOX40の各々に由来する細胞内共刺激ドメイン;並びに細胞内CD3ζドメインを含む。CARを発現するTリンパ球を、該Tリンパ球を事前に拡大することなく、該個体に投与する。該個体に、200mLの生理食塩水溶液中の105〜106個の該Tリンパ球を、静脈内注入によって、30分間かけて投与する。該個体の血液中のCD19+ B細胞少なくとも90％の低下を確立するために、該個体をその後2週間モニタリングする。Tリンパ球の投与後、患者が、該Tリンパ球が原因で苦しそうな様子(例えば、呼吸困難、発熱、血清サイトカインレベルの異常、発疹など)を示した場合、200〜500mg/m2の投薬量で、又は症状が緩和されるまで、リツキシマブを投与する。
【０１２４】
(5.5.実施例5:前立腺癌の治療)
個体は、所属リンパ節又は他のリンパ節に拡大していない(N0、M0)ステージT2の前立腺癌の症状を呈している。組織学的悪性度はG2と判明する。全体的に見て、該個体は、ステージIIの前立腺癌を有することが判明する。該個体に、200mLの生理食塩水溶液中の、CARを含む109〜1010個のTリンパ球を、静脈内注入によって、30分間かけて投与する。該CARは、PSCAに結合する細胞外抗原結合領域、CTLA4由来の膜貫通ドメイン、CD28由来の細胞内共刺激ドメイン、及び細胞内CD3ζドメインを含む。該Tリンパ球は、抗体リツキシマブによって結合され得るエピトープを含む細胞外ドメインと、カスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9ドメインを含む細胞内ドメインとを含む細胞死ポリペプチドも含む。該個体を前立腺癌のステージ及びリンパ節への拡大について再評価し、生検した前立腺組織の組織学的検査を、投与から30、60、及び90日後に実施する。Tリンパ球の投与後、患者が、該Tリンパ球が原因で苦しそうな様子(例えば、呼吸困難、発熱、血清サイトカインレベルの異常、発疹など)を示した場合、200〜500mg/m2の投薬量で、又は症状が緩和されるまで、リツキシマブを投与する。
【０１２５】
(5.6.実施例6:前立腺癌の治療)
個体は、所属リンパ節又は他のリンパ節に拡大していない(N0、M0)ステージT2の前立腺癌の症状を呈している。組織学的悪性度はG2と判明する。全体的に見て、該個体は、ステージIIの前立腺癌を有することが判明する。該個体に、200mLの生理食塩水溶液中の、CARを含む109〜1010個のTリンパ球を、静脈内注入によって、30分間かけて投与する。該CARは、PSCAに結合する細胞外抗原結合領域、PD-1由来の膜貫通ドメイン、CD28由来の細胞内共刺激ドメイン、及び細胞内CD3ζドメインを含む。該Tリンパ球は、抗体リツキシマブによって結合され得るエピトープを含む細胞外ドメインと、カスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9ドメインを含む細胞内ドメインとを含む細胞死ポリペプチドも含む。該個体を前立腺癌のステージ及びリンパ節への拡大について再評価し、生検した前立腺組織の組織学的検査を、投与から30、60、及び90日後に実施する。Tリンパ球の投与後、患者が、該Tリンパ球が原因で苦しそうな様子(例えば、呼吸困難、発熱、血清サイトカインレベルの異常、発疹など)を示した場合、200〜500mg/m2の投薬量で、又は症状が緩和されるまで、リツキシマブを投与する。
【０１２６】
(5.7.実施例7:前立腺癌の治療)
個体は、所属リンパ節又は他のリンパ節に拡大していない(N0、M0)ステージT2の前立腺癌の症状を呈している。組織学的悪性度はG2と判明する。全体的に見て、該個体は、ステージIIの前立腺癌を有することが判明する。該個体に、200mLの生理食塩水溶液中の、CARを含む109〜1010個のTリンパ球を、静脈内注入によって、30分間かけて投与する。該CARは、PSCAに結合する細胞外抗原結合領域、CTLA-4由来の膜貫通ドメイン、CD28、4-1BB、及びOX40の各々に由来する細胞内共刺激ドメイン、並びに細胞内CD3ζドメインを含む。該Tリンパ球は、抗体リツキシマブによって結合され得るエピトープを含む細胞外ドメインと、カスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9ドメインを含む細胞内ドメインとを含む細胞死ポリペプチドも含む。該個体を前立腺癌のステージ及びリンパ節への拡大について再評価し、生検した前立腺組織の組織学的検査を、投与から30、60、及び90日後に実施する。Tリンパ球の投与後、患者が、該Tリンパ球が原因で苦しそうな様子(例えば、呼吸困難、発熱、血清サイトカインレベルの異常、発疹など)を示した場合、200〜500mg/m2の投薬量で、又は症状が緩和されるまで、リツキシマブを投与する。
【０１２７】
(5.8.実施例8:前立腺癌の治療)
個体は、所属リンパ節又は他のリンパ節に拡大していない(N0、M0)ステージT2の前立腺癌の症状を呈している。組織学的悪性度はG2と判明する。全体的に見て、該個体は、ステージIIの前立腺癌を有することが判明する。該個体に、200mLの生理食塩水溶液中の、CARを含む109〜1010個のTリンパ球を、静脈内注入によって、30分間かけて投与する。該CARは、PSCAに結合する細胞外抗原結合領域、PD-1由来の膜貫通ドメイン、CD28、4-1BB、及びOX40の各々に由来する細胞内共刺激ドメイン、並びに細胞内CD3ζドメインを含む。該Tリンパ球は、抗体リツキシマブによって結合され得るエピトープを含む細胞外ドメインと、カスパーゼ3、カスパーゼ8、又はカスパーゼ9ドメインを含む細胞内ドメインとを含む細胞死ポリペプチドも含む。該個体を前立腺癌のステージ及びリンパ節への拡大について再評価し、生検した前立腺組織の組織学的検査を、投与から30、60、及び90日後に実施する。Tリンパ球の投与後、患者が、該Tリンパ球が原因で苦しそうな様子(例えば、呼吸困難、発熱、血清サイトカインレベルの異常、発疹など)を示した場合、200〜500mg/m2の投薬量で、又は症状が緩和されるまで、リツキシマブを投与する。
【０１２８】
(等価物)
本開示は、本明細書に記載の具体的な実施態様によって範囲が限定されるべきではない。実際、記載されているものに加えて、本明細書に提供される主題の様々な変更が、前述の説明から当業者に明白になるであろう。そのような変更は、添付の特許請求の範囲の範囲に含まれることが意図される。
【０１２９】
様々な刊行物、特許、及び特許出願が本明細書に引用されており、それらの開示は、引用により完全に組み込まれる。
【配列表】
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