(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アレルギー性鼻炎や喘息のアレルギー性気道炎症マウスモデルを用いた気道抵抗測定方法であって、
前記マウスモデルの喉頭及び咽頭を剖出後、後鼻孔に後鼻孔カニューレを挿入して、上気道における鼻腔抵抗を測定し、
前記後鼻孔への後鼻孔カニューレの挿入は、スクリュー状のチューブを該後鼻孔に挿入してパッキングし、かつ、排気のためのスペースを確保するものであることを特徴とする気道抵抗測定方法。
【請求項２】
アレルギー性鼻炎や喘息のアレルギー性気道炎症マウスモデルを用いた気道抵抗測定方法であって、
前記マウスモデルの喉頭及び咽頭を剖出後、後鼻孔に後鼻孔カニューレを挿入し、かつ、下気道方向にカニューレを挿入して、上気道における鼻腔抵抗と下気道における肺気道抵抗を独立して並行的に測定し、
前記後鼻孔への後鼻孔カニューレの挿入は、スクリュー状のチューブを該後鼻孔に挿入してパッキングし、かつ、排気のためのスペースを確保することを特徴とする気道抵抗測定方法。
【請求項３】
前記チューブは、上気道方向に留置するものである請求項１または２に記載の気道抵抗測定方法。
【請求項４】
前記上気道における鼻腔抵抗と前記下気道における肺気道抵抗を独立して並行的に行う測定は、前記上気道及び／または前記下気道を刺激することにより生じるものである請求項２に記載の気道抵抗測定方法。
【請求項５】
前記上気道、前記下気道への刺激は、それぞれ、メサコリンの負荷によるものである請求項４に記載の気道抵抗測定方法。
【請求項６】
アレルギー性鼻炎や喘息のアレルギー性気道炎症マウスモデルを用いた気道抵抗測定装置であって、
前記気道抵抗測定装置は、上気道方向への刺激と鼻腔抵抗を測定する鼻腔抵抗測定部と、
下気道方向への刺激と肺気道抵抗を測定する肺気道抵抗測定部と、
ネブライザーと、換気装置と、該後鼻孔に挿入してパッキングし、かつ、排気のためのスペースを確保するスクリュー状のチューブである後鼻孔カニューレとからなり、
前記鼻腔抵抗測定部及び前記肺気道抵抗測定部は、独立して並行的に測定することができることを特徴とする気道抵抗測定装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アレルギー性鼻炎や喘息等の気道炎症疾患マウスモデルにおける上・下気道の過敏性を評価する測定方法と測定装置に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
現在、喘息マウスモデルにおける気道過敏性の評価として、メサコリン負荷による下気道（肺）の気道抵抗とコンプライアンスを指標にした評価法が行われており、その評価は、喘息の機序解明と新しい治療法を確立するための必須の方法となっている。
【０００３】
例えば、非特許文献１には、マウス用にオシレーション法による呼吸抵抗測定装置を作製し、卵白アルブミン（ｏｖａｌｂｕｍｉｎ：以下、ＯＶＡという）に感作したマウスと非感作マウスにメサコリンを負荷して、その気道過敏性を検討した結果が示されている。
【０００４】
また、非特許文献２、３には、肺の換気を行いながら上気道方向にチューブをセットし、ＯＶＡに対するアレルギー性鼻炎マウスモデルに該ＯＶＡを経鼻投与し、２４時間後の鼻腔抵抗（ｎａｓａｌ  ａｉｒｗａｙ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ：以下、Ｒｎａという）を測定した結果が開示されている。
【０００５】
一般に、気道抵抗の測定法としては、非侵襲性のｗｈｏｌｅ  ｂｏｄｙ  ｐｌｅｔｈｙｓｍｏｒｇｒａｐｈｙ(以下、ＷＰＧという)法と、気管切開後に気管挿管を行って測定する侵襲性のｉｎｖａｓｉｖｅ  ｐｌｅｔｈｙｓｍｏｒｇｒａｐｈｙ（以下、ＩＰＧという）法がある。しかし、近年、データの信頼性から後者による方法が主流となっており、ＷＢＰ法による実験結果の評価は、一流誌に受理されづらい状況となっている。現在、ＩＰＧ法の測定装置としては、フランスのＥＭＫＡ社から販売されているＳｃｉｒｅｑ  Ｆｌｅｘｉ  Ｖｅｎｔシステムと米国のＤＳＩ社から販売されているＢｕｘｃｏ  Ｆｉｎｅ  Ｐｏｉｎｔｅシステムが販売されており、多くの製品がアカデミアや製薬企業に販売されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】須甲松伸他、アレルギー３９（１２）、１６２９−１６３２（１９９０）
【非特許文献２】Ｍｉｙａｈａｒａ  Ｓ.  ｅｔ  ａｌ、ＪＡＣＩ２００５；１１６：１０２０−７
【非特許文献３】宮原聡子他、日薬理誌２０１１；１３７：１４１−１４５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
非特許文献１に記載の呼吸抵抗測定装置は、下気道（肺気道）のみ評価できるもので、アレルギー性鼻炎の機序解明と創薬開発において、動物実験レベルでの鼻腔抵抗の測定は確立されておらず、下気道の気道抵抗による測定結果等で代用されているのが現状である。
【０００８】
また、非特許文献２には、肺の換気を行いながら、上気道方向にチューブをセットした方法が開示されている。しかし、ＯＶＡに対するアレルギー性鼻炎マウスモデルに該ＯＶＡを経鼻投与し、２４時間後の鼻腔抵抗を測定した結果が開示されているものの、詳細な方法や鼻の過敏性に関しては記載されていない。
【０００９】
さらに、非特許文献３では、気管切開を行って測定するＩＰＧ法による鼻腔抵抗（Ｒｎａ）測定は、麻酔や外科的侵襲の影響を受ける可能性があり、実験効率の点でも課題があるため、非侵襲性のＷＰＧ法を用いた呼吸回数の変化で評価することを選択しており、該ＩＰＧ法は実用化されていない。
【００１０】
アレルギー性鼻炎では喘息と同様に鼻腔の過敏性が亢進しており、上気道における鼻腔抵抗の測定が必要であり、該測定を行うことが可能な装置の開発が急務となっている。
【００１１】
本発明は、以上のような従来の課題や医療現場からの要望を考慮してなされたものであり、アレルギー性鼻炎や喘息等のアレルギー性気道炎症マウスモデルにおける上・下気道過敏性を評価する測定方法、及び該測定方法を用いた測定装置を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上記課題を解決し得た本発明の気道抵抗測定方法は、アレルギー性鼻炎や喘息等のアレルギー性気道炎症マウスモデルを用いた気道抵抗測定方法であり、該マウスモデルの喉頭及び咽頭を剖出後、後鼻孔に後鼻孔カニューレを挿入して上気道における鼻腔抵抗を測定する点に特徴を有する。
【００１３】
また、上記課題を解決し得た本発明の気道抵抗測定方法は、上気道における鼻腔抵抗と下気道における肺気道抵抗を独立して並行的に測定することに道を開いた点に特徴を有する。
【００１４】
後鼻孔への後鼻孔カニューレの挿入は、チューブを該後鼻孔に挿入してパッキングし、鼻腔内への掃気ルートを確保し鼻腔への掃気を容易にするものであることが好ましい。
【００１５】
上記後鼻孔に挿入してパッキングしたチューブ（挿管チューブ）は、上気道方向に向けて掃気できるように留置するものであることが好ましい。
【００１６】
上気道に対する鼻腔抵抗と下気道に対する肺気道抵抗を独立して並行的に行う測定は、上気道及び／または下気道を刺激することにより生じるものであることが好ましい。
【００１７】
上気道への負荷、下気道への負荷による過敏性の測定は、それぞれ、メサコリンの負荷によって評価されるものであることが好ましい。
【００１８】
また、上記課題を解決し得た本発明の気道抵抗測定装置は、アレルギー性鼻炎や喘息等のアレルギー性気道炎症マウスモデルを用いた気道抵抗測定装置であり、該気道抵抗測定装置の構成は、上気道方向への負荷による鼻腔抵抗を測定する鼻腔抵抗測定部と、下気道方向への負荷による肺抵抗を測定する肺抵抗測定部からなる。また、それぞれの経路には負荷するためのネブライザーと換気装置で構成されているため、該鼻腔抵抗測定部及び該肺抵抗測定部は独立しており、上気道と下気道の抵抗を独立して並行的に正しく判別して測定することができる点に特徴を有する。
【発明の効果】
【００１９】
本発明の気道抵抗測定方法を用いることで、上気道における鼻腔抵抗の測定を直接行うことができるため、これまで実証することができなかった鼻過敏性を検討するためのプロトコルを確立することが可能となる。
【００２０】
また、本発明の気道抵抗測定方法は、上気道に対する鼻腔抵抗と下気道に対する肺気道抵抗を独立して並行的に測定することに資することができるため、上気道の過敏性を指標にしたアレルギー性鼻炎の機序解明に寄与するだけなく、上気道と下気道の関連性の機序解明も寄与する測定法となる。
【００２１】
さらに、本発明の気道抵抗測定装置を用いることで、上気道における鼻腔抵抗を下気道における肺気道抵抗から独立して測定して解析することができるので、アレルギー性鼻炎の創薬開発に繋がる成果が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
図面を説明する上で必要な本発明の実施形態について、以下定義する。
【００２３】
本発明の実施形態は、測定方法発明として把握されるものであって、アレルギー性鼻炎や喘息等のアレルギー性気道炎症マウスモデルを用いた気道抵抗測定方法であると定義する。なお、本発明の実施形態には、該気道抵抗測定方法として、マウスモデルの喉頭及び咽頭を剖出後、後鼻孔に後鼻孔カニューレを挿入して、上気道における鼻腔抵抗を測定する態様と、下気道方向にも別のカニューレを挿入して、上気道における鼻腔抵抗と下気道における肺気道抵抗を独立して並行的に測定する態様を含む。
【００２４】
また、本発明の実施形態は、上記気道抵抗測定方法を行う際に用いる気道抵抗測定装置を含む。該気道抵抗測定装置は、上気道方向への負荷と鼻腔抵抗を測定する鼻腔抵抗測定部と、下気道方向への負荷と肺気道抵抗を測定する肺気道抵抗測定部からなり、それぞれ、ネブライザーと、換気装置で構成され、該鼻腔抵抗測定部と該肺気道抵抗測定部が独立して並行的に測定できる。
【００２５】
【図１】本発明の実施形態に係る気道抵抗測定方法における、上気道での鼻腔抵抗と下気道での肺気道抵抗の測定を示す全体概念図である。
【図２】本発明の実施形態に係る気道抵抗測定装置を示す図面代用写真である。右上の写真は、マウスを該気道抵抗測定装置に装着した状態を示す。
【図３】本発明の実施形態に係る気道抵抗測定方法において使用するカニューレの後鼻孔カニューレの縦断面図（ａ）、後鼻孔カニューレの横断面図（ｂ）、後鼻孔カニューレと下気道方向に挿入するカニューレの図面代用写真（ｃ）を示す。
【図４】本発明の実施形態に係る気道抵抗測定方法における、後鼻孔へのチューブ留置の位置と挿入法の模式図を示す。（ａ）と（ｂ）は、それぞれマウス頭部の矢状断図、及び喉頭を切開し後鼻孔を剖出した図を示す。
【図５】本発明の実施形態に係る気道抵抗測定方法にあたって、実際にマウスの後鼻孔を剖出した図面代用写真（ａ）、後鼻孔に後鼻孔カニューレを挿入した図面代用写真（ｂ）、上気道方向と下気道方向に各々別のカニューレを挿入した図面代用写真（ｃ）を示す。
【図６】本発明の実施形態に係る気道抵抗測定方法にしたがって、鼻腔方向にメサコリンの負荷を行って、上気道の鼻腔抵抗と下気道の肺気道抵抗を独立して測定した時の測定結果の一例を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
以下、本発明の実施形態に係る気道抵抗測定方法と気道抵抗測定装置について、図面を参照しながら説明する。なお、以下の説明では、同一の部品には同一の符号を付してある。
【００２７】
本発明の気道抵抗測定方法及び気道抵抗測定装置は、アレルギー性鼻炎や喘息等のアレルギー性気道炎症マウスモデルに対する測定方法及び測定装置である。疾患マウスモデルとは、疾患の病態解明に繋がる研究やその予防法または治療法を開発するために用いられるマウスのことであり、本発明で用いられるマウスでは、アレルギー性気道炎症が惹起されている。アレルギー性鼻炎や喘息等を発症するマウスモデルとして、ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、６−１２週齢）を用いており、プロトコルに関して以下に説明する。
【００２８】
（マウスモデルの作製）
アレルギー性鼻炎と喘息マウスは、それぞれ以下の手順で作製した。
（ｉ）ＯＶＡの感作：正常ＢＡＬＢ／ｃマウスにＯＶＡ（５０μg／匹）と水酸化アルミニウム（２ｍｇ／匹）を腹腔内投与しＯＶＡに対して全身感作を行った（０日目と１４日目）。
（ii）気道へのＯＶＡチャレンジ：気道へのＯＶＡチャレンジを行うことで、喘息を伴ったアレルギー性鼻炎モデルを作製することが出来る。投与期間やタイミングに関しては、実験デザインや目的を考慮する必要があるため、決まった方法はない。具体例としては、０．５％ＯＶＡの経鼻投与（左右の鼻腔：１０μｇ×２)を行う。投与期間は、急性モデルでは８日間（２１日目〜２８日目まで）の０．５％ＯＶＡの連続経鼻投与をしたり、慢性モデルでは週１回の０．５％ＯＶＡの経鼻投与を５週以上投与したりして作製する（２１、２８、３５、４２、４９日目の５回以上）。
【００２９】
（気道抵抗測定）
マウスモデルを用いた気道抵抗測定は、Ｂｕｘｃｏ気道分析システムＭａｘＩＩ（ＤＳＩ社製）を用いて行う。具体的な手順を以下に示す。
（Ａ）マウスの麻酔：１０％メデトミジンと１０％ケタミンのカクテル（５ｍＬ／ｋｇ・ｂｏｄｙ・ｗｅｉｇｈｔ）で麻酔を行い、鎮静不動化後に外科的処置を行う。
（Ｂ）下気道への挿管：まず、マウス前頸部の皮膚を切開し、喉頭と気管を十分に剖出する。換気を確保するため、２０ゲージの径の大きさのカニューレを下気道方向に気管内挿管し、脱落しないよう縫合糸で固定する。
（Ｃ）上気道への挿管：図４、５に示すように喉頭前壁に割面を加え、舌骨の一部を切除して咽頭腔を明視下におき、声帯や喉頭後壁の一部を切除し、後鼻孔を完全に剖出する。後鼻孔を確認した後、後鼻孔カニューレを回転させながら挿入し（外周面をスクリュー状に加工している）、後鼻孔を完全にパッキングする。また、チューブが脱落しないように前頸部とカニューレを縫合糸で固定する。外科的操作は、微細な外科的操作が必要なため、実体顕微鏡下で行う。
（Ｄ）気道抵抗装置への固定：マウスを測定台に置き上気道方向と下気道方向に挿入したカニューレを測定装置と接続し、換気を開始する。非特異的な動き（体動）による影響を避けるため、筋弛緩剤（５ｍＬ／ｋｇ；１％臭化パンクロニウム）を腹腔内投与し、安定化するまで様子を観察する（５分前後）。後鼻孔のパッキング成功の有無が実験結果に大きく影響するため、上気道方向へ試験的なネブライザーを行い、煙状の霧が鼻腔方向から外鼻孔へ抜け出ることを確認してから（気流のスペース確保とリークがないことを確認する）、測定を開始する。
（Ｅ）換気条件の設定：下気道方向への換気条件は、一般的な条件で行う（具体的な条件は、換気数１５０回／ｍｉｎ、ｖｏｌｕｍｅ  １０μＬ／ｇ、ＰＥＥＰ ２ｃｍＨ２Ｏとなる）。一方、上気道方向は、換気数１００回／ｍｉｎ、ｖｏｌｕｍｅ  ２．５−５μＬ／ｇ、ＰＥＥＰなしの条件下で測定する。下気道方向への換気は、後鼻孔に後鼻孔カニューレを挿入して、上気道における鼻腔抵抗を測定する場合や、上気道における鼻腔抵抗と下気道における肺気道抵抗を独立して並行的に測定する場合にも必要である。なお、上気道方向へは、下気道（肺）と違い換気する必要がないため、単に排気するだけで十分である。
（Ｆ）気道過敏性の測定：気道過敏性の判定に関しては、メサコリンを負荷して検討する。鼻腔の過敏性の測定と下気道への影響に関しては、鼻腔方向にネブライザーを用いて１０μＬの各濃度のメサコリン（０、３．１２５、６．２５、１２．５、２５、５０、１００、２００ｍｇ／ｍＬ）で負荷し、それぞれ２分間測定して鼻腔抵抗と肺気道抵抗を測定して検討を行う。一方、肺の過敏性と上気道への影響に関しても同様に、肺方向に各濃度のメサコリン（０、１．５、３．１２５、６．２５、１２．５、２５、５０ｍｇ／ｍＬ）を負荷して検討を行う。過敏性に関しては、メサコリンを用いて検討しているが、試薬を変えることで様々なアプリケーションを選択することができる。
（Ｇ）解析法：ＦｉｎｅＰｏｉｎｔｓ解析ソフト（Ｂｕｘｃｏ製）を用いて各濃度における気道抵抗値を評価する。負荷後、２秒間隔で２分間測定を行い、その平均値を気道抵抗値として計算する。正常マウスにくらべ、低濃度で気道抵抗が上昇している場合は、気道過敏性があると判定する。したがって、疾患マウスモデルでは、正常マウスにくらべてより低濃度で気道抵抗が増加する。
【００３０】
（実施形態）
図１は、本発明の実施形態に係る気道抵抗測定方法を示した全体概念図である。当該気道抵抗測定は、上記（Ａ）〜（Ｇ）で説明したとおり、マウス１の喉頭及び咽頭を剖出した後、鼻腔方向の後鼻孔に後鼻孔カニューレ２を挿入し、下気道方向の肺気道に下気道カニューレ３を挿入して気道抵抗を測定するものである。図１で示す気道抵抗測定装置１１、ネブライザー１４、換気装置１５、及びセンサ１６については、図２に基づいて説明する。
【００３１】
図２は、本発明の実施形態に係る気道抵抗測定装置を示す図面代用写真である。右上にマウス１を装置に装着した状態を示す。気道抵抗測定装置１１は、上気道方向への刺激による鼻腔抵抗を測定する鼻腔抵抗測定部１２と、下気道方向への刺激による肺気道抵抗を測定する肺気道抵抗測定部１３と、ネブライザー１４と、換気装置１５から構成されている。
【００３２】
鼻腔抵抗測定部１２は、後鼻孔カニューレ２と接続されており、該上気道をメサコリンにより負荷することでセンサ１６を介して鼻腔抵抗を測定することができるようになっている。一方、肺気道抵抗測定部１３は、下気道方向に留置された下気道カニューレ３と接続されており、該下気道をメサコリンにより負荷することで、センサ１６を介して肺気道抵抗を測定することができるようになっている。なお、メサコリンは、一般に、肺の過敏性を調べるために使用される試薬であり、気管支の収縮の敏感さを客観的に評価することができる。例えば、喘息の人は健康な人に比べてはるかに少ない量のメサコリンに反応する。
【００３３】
ネブライザー１４は、刺激物質であるメサコリンをマウス１の気道に噴霧供給するものであり、性能や大きさに関して特に限定されず、市販の噴霧器を用いることができる。また、ネブライザー１４の設置箇所は、気道抵抗測定装置１１に対して上気道方向と下気道方向の各々１箇所設置してもよいが、上気道方向及び下気道方向の両方向を兼ねて１箇所のみ設置することも可能である。
【００３４】
換気装置１５は、メサコリンのマウス１の気道への噴霧供給に対して、上気道や下気道の排気を促すものであり、性能や大きさに関して特に限定されるものではなく、市販の換気装置を用いることができる。
【００３５】
当該気道抵抗測定は、上気道に対してメサコリンを局所的に負荷させて、マウス１の鼻腺からの鼻汁増大と粘膜腫脹に伴う鼻腔抵抗の変化を測定することが可能である。また、下気道方向へのメサコリン負荷による上気道（鼻腔）抵抗及び下気道（肺気道）抵抗の並行的測定を行うこともできる。つまり、上気道に対して、メサコリンを負荷させることで、マウス１の鼻腺からの鼻汁増大に伴う鼻腔抵抗の変化を測定したり、マウス１の下気道における平滑筋の収縮に伴う肺気道抵抗の変化も測定したりすることができる。
【００３６】
また、本発明の気道抵抗測定装置１１は、上気道の負荷をすることによる下気道抵抗への影響と、下気道の負荷をすることによる上気道抵抗への影響を、それぞれ個別に調べることもできる。これらの測定により、通常では考察する機会のない上気道負荷による下気道抵抗への影響や、下気道負荷による上気道抵抗への影響を調べることも可能である。また、本発明の気道抵抗測定装置１１は、上気道方向と下気道方向を同時に負荷することにより、上気道抵抗、下気道抵抗の測定を同時に測定することも可能である。この測定により、上気道及び下気道に生じる炎症状況を即時に評価することが可能である。
【００３７】
図３は、使用するカニューレを示す。（ａ）は後鼻孔カニューレ２の縦断面図、（ｂ）は後鼻孔カニューレ２の横断面図、（ｃ）は後鼻孔カニューレ２と下気道方向の肺気道に挿入する下気道カニューレ３の図面代用写真を示す。カニューレの材質や形状は、後鼻孔に対して容易に挿入可能であり、十分な強度を保持するものであれば特に限定されないが、後鼻孔カニューレ２の後鼻孔への挿入の作業性を向上させる観点から、（ａ）に示す様な形状の後鼻孔カニューレ２を用いることが好ましい。具体的には、一般に用いられている気管挿管用の２０Ｇのメタル製カニューレに小児滲出性中耳炎の鼓膜切開処置の際に用いるシリコン製のパパレラＩＩ型チューブを取り付けたものを用いることが好ましい。パッキングの材質は弾性を有するものであれば一切の制限はない。後鼻孔への挿入操作を安定しておこなえるようにするため、スクリュー状の螺旋溝を形成したものであることが望ましい。なお、カニューレとは、一般に、体腔・血管内などに挿入し、薬液の注入や体液の排出、気管切開の際の空気の通路とする場合などに用いるパイプ状の医療器具のことである。
【００３８】
図４は、本発明の実施形態に係る気道抵抗測定方法における、後鼻孔への後鼻孔カニューレ２と下気道への下気道カニューレ３を留置するための外科的な概略図である。（ａ）はマウス頭部の矢状断面、（ｂ）は後鼻孔剖出後の正面を示す。喉頭前壁に割面を加え、舌骨の一部を切除して咽頭腔を明視下におき、声帯や喉頭後壁の一部を切除し、後鼻孔を完全に剖出する。
【００３９】
図５は、後鼻孔への後鼻孔カニューレ留置を行う実際の様子を示したものである。（ａ）は、実際にマウスの後鼻孔を剖出した図面代用写真、（ｂ）は、後鼻孔に後鼻孔カニューレ２を挿入した図面代用写真、（ｃ）は、上気道方向と下気道方向に各々別のカニューレ２、３を挿入した図面代用写真である。具体的な外科的手順は、下気道の換気を確保するため、下気道の気管内挿管（カニューレ３）を行う（図では、わかりやすくするため手順が逆となっている）。後鼻孔の確認に関しては、マウスの喉頭前面に縦方向に割面を加えて、喉頭及び咽頭の一部組織を切除して後鼻孔を剖出する。後鼻孔を明視下に置くことで、チューブ挿入（後鼻孔カニューレ２の挿入）を簡単に行うことができる。剖出後、後鼻孔に後鼻孔カニューレ２を挿入することで、後鼻孔内周面と後鼻孔カニューレ２の外周面との間の気密性を確保することができ、後鼻孔の気密状態と掃気のためのスペース確保（虚脱しないための）が可能となるという点で有効に作用し、安定したデータを得ることが可能となる。
【００４０】
図６（ａ）、（ｂ）は、上気道方向へのメサコリン負荷による上気道（鼻腔）抵抗及び下気道（肺気道）抵抗の測定結果を示す。鼻腔方向にメサコリンを負荷し、鼻腔抵抗（ａ）と肺気道抵抗（ｂ）の同時測定を行った。正常マウスモデル（ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｃｏｎｔｒｏｌ：ＮＣ）と気道アレルギー炎症マウスモデル（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｃｏｎｔｒｏｌ：ＰＣ）とＰＣマウスにＣｏｍｐｏｕｎｄ  Ｘ（開発中の薬剤）で前処置をおこなった３群間で比較検討している。（ｃ）では、メサコリンを負荷する前後での鼻腔の組織像の変化を示す。負荷後では、粘膜の腫脹と鼻汁によって鼻腔容積が減少している状態を示す。
【００４１】
気道アレルギー炎症マウス（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｃｏｎｔｒｏｌ：ＰＣ）における、鼻腔へのメサコリン負荷は、鼻腔抵抗を増大させるだけでなく、肺気道抵抗も増大することが明らかとなった。また、喘息マウスに化合物Ｘで前処理を行うことで、鼻腔抵抗及び肺気道抵抗の上昇が抑えられた。つまり、鼻過敏性が証明されただけでなく、上気道と下気道の相互作用の存在が確認された。これらの総合的所見により、本発明の気道抵抗測定方法の創薬研究における有用性は、化合物Ｘの前処理が鼻過敏症に対して軽減効果を示すことが確認されただけでなく、上気道の下気道への影響が軽減されることが認められた。なお、（ｃ）では、メサコリンの負荷により、メサコリン負荷前と比べてマウスの鼻腔容積が減少して鼻腔抵抗値が増大したと推察することができる。つまり、これらの結果は、メサコリン負荷による鼻過敏性を実証するものである。
【００４２】
本発明の実施形態に係る気道抵抗測定方法は、上気道及び下気道の両方を負荷することも、あるいは、上気道または下気道のどちらかを負荷することも選択可能である。この測定方法により、上気道、下気道に生じる炎症状況を同時に、あるいは個別に評価することができる。
【００４３】
また、上気道への負荷、下気道への負荷は、上気道や下気道における過敏性を測定するために、メサコリンを上気道、下気道に対して、それぞれ局所的に負荷させることが好ましい。
【符号の説明】
【００４４】
１  マウス
２  後鼻孔カニューレ
３  下気道カニューレ
１１  気道抵抗測定装置
１２  鼻腔抵抗測定部
１３  肺気道抵抗測定部
１４  ネブライザー
１５  換気装置
１６  センサ
【図１】
0006532034.tif 000002
【図２】
0006532034.tif 000003
【図３】
0006532034.tif 000004
【図４】
0006532034.tif 000005
【図５】
0006532034.tif 000006
【図６】
0006532034.tif 000007