(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）野生型、弱毒化もしくは組み換えポックスウイルスおよびポックスウイルス粒子からなる群から選択される少なくとも一つのポックスウイルス由来材料、（ｉｉ）ポリビニルピロリドンおよびコポビドンならびにそれらの混合物の群から選択される少なくとも一つのポリマー、（ｉｉｉ）少なくとも一つの二糖、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、ならびに、（ｖ）少なくとも一つの薬学的に許容されるリン酸塩および少なくとも一つの薬学的に許容される一価の塩を含む、製剤。
【請求項２】
薬学的に許容される緩衝剤をさらに含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
水性製剤である、請求項１または２に記載の製剤。
【請求項４】
前記（ｉｉ）少なくとも一つのポリマーが、ポリビニルピロリドンである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項５】
前記ポリビニルピロリドンまたはコポビドンの分子量が１０ｋＤａ〜４０ｋＤａである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項６】
前記製剤が、１０ｇ／Ｌ〜５０ｇ／Ｌのポリビニルピロリドンまたはコポビドンもしくは混合物を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項７】
前記二糖が、スクロース、ラクツロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、セロビオース、イソマルトースおよびマルツロースからなる群から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項８】
前記製剤が、２０ｇ／Ｌ〜８０ｇ／Ｌの糖を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項９】
前記製剤が、５０ｇ／Ｌのスクロースを含む、請求項８に記載の製剤。
【請求項１０】
前記製剤が、５ｇ／Ｌ〜１００ｇ／Ｌのアルギニンを含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１１】
前記製剤が、１ｇ／Ｌ〜１０ｇ／Ｌのグルタミン酸塩を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１２】
前記リン酸塩が、ナトリウム塩およびカリウム塩ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１３】
前記リン酸塩が、一塩基性リン酸塩、二塩基性リン酸塩および三塩基性リン酸塩からなる群から選択される、請求項１２に記載の製剤。
【請求項１４】
前記薬学的に許容される一価の塩が、ＮａＣｌおよびＫＣｌからなる群から選択される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１５】
前記製剤が、１ｇ／Ｌ〜５ｇ／Ｌの前記薬学的に許容される一価の塩を含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１６】
前記野生型、弱毒化もしくは組み換えポックスウイルスまたはポックスウイルス粒子が、ワクシニアウイルス（ＶＶ）および改変ワクシニアウイルスアンカラ（ＭＶＡ）からなる群から選択される、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１７】
前記野生型、弱毒化もしくは組み換えポックスウイルスまたはポックスウイルス粒子が、
ＨＣＶ  ＮＳ３、ＮＳ４およびＮＳ５Ｂ抗原を発現するＭＶＡ、ＭＵＣ−１抗原およびＩＬ−２を発現するＭＶＡ、ならびに、ＨＰＶ−１６の非腫瘍形成性Ｅ６およびＥ７抗原およびＩＬ−２を発現するＭＶＡからなる群から選択される組み換えＭＶＡ、または、
顆粒球マクロファージコロニー刺激因子である免疫刺激性サイトカインを発現するチミジンキナーゼ（ＴＫ）不活性化ワクシニアウイルス、および、チミジンキナーゼ（ＴＫ）およびリボヌクレオチドレダクターゼ（Ｉ４Ｌ）が不活性化された、自殺遺伝子を発現するワクシニアウイルスからなる群から選択される組み換えワクシニアウイルスである、請求項１６に記載の製剤。
【請求項１８】
前記製剤中のウイルス力価が、１．１０６Ｐｆｕ／ｍＬ〜１．１０１０Ｐｆｕ／ｍＬである、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１９】
前記製剤が、下記ａ）〜ｈ）：
ａ）（ｉ）ポックスウイルス、（ｉｉ）ポリビニルピロリドン、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、ならびに（ｖ）リン酸二ナトリウム塩およびリン酸一カリウム塩の混合物、
ｂ）（ｉ）ポックスウイルス、（ｉｉ）ポリビニルピロリドン、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）リン酸二ナトリウム塩およびリン酸一カリウム塩の混合物、ならびに（ｖｉ）薬学的に許容される緩衝剤、
ｃ）（ｉ）ＭＶＡおよびＶＶからなる群から選択されるポックスウイルス、（ｉｉ）ポリビニルピロリドン、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）リン酸二ナトリウム塩およびリン酸一カリウム塩の混合物ならびにＮａＣｌ、ならびに（ｖｉ）ＴＲＩＳ、ＢＥＳ、ＴＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＭＯＢＳ、ＴＡＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、ＰＯＰＳＯ、ＭＯＰＳ、ＨＥＰＥＳおよび重炭酸塩の群から選択される薬学的に許容される緩衝剤を含む製剤、
ｄ）（ｉ）ＭＶＡおよびＶＶからなる群から選択されるポックスウイルス、（ｉｉ）ポリビニルピロリドン、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）リン酸二ナトリウム塩およびリン酸一カリウム塩の混合物ならびにＮａＣｌ、ならびに（ｖｉ）ＴＲＩＳ緩衝剤、
ｅ）（ｉ）ポックスウイルス、（ｉｉ）ポリビニルピロリドン、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）少なくとも一つのリン酸塩および少なくとも一つの一価の塩、ならびに（ｖｉ）薬学的に許容される緩衝剤、
ｆ）（ｉ）ポックスウイルス、（ｉｉ）ポリビニルピロリドン、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）リン酸二ナトリウム塩および少なくとも一つの一価の塩、ならびに（ｖｉ）薬学的に許容される緩衝剤、
ｇ）（ｉ）ポックスウイルス、（ｉｉ）ポリビニルピロリドン、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）リン酸二ナトリウム塩およびＮａＣｌ、ならびに（ｖｉ）薬学的に許容される緩衝剤、および、
ｈ）（ｉ）ポックスウイルス、（ｉｉ）ポリビニルピロリドン、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）リン酸二ナトリウム塩およびＮａＣｌ、ならびに（ｖｉ）ＴＲＩＳ緩衝剤
のいずれかを含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項２０】
請求項３〜１９のいずれか一項に記載の水性製剤を凍結乾燥する工程を含む、凍結乾燥製剤の製造方法。
【請求項２１】
請求項２０に記載の方法により製造される、凍結乾燥製剤。
【請求項２２】
適切な量の薬学的に許容される溶媒を、請求項２１に記載の凍結乾燥製剤に添加することにより製造される、再構成製剤。
【請求項２３】
請求項１〜１９のいずれか一項に記載の製剤または請求項２２に記載の再構成製剤を含む、癌、感染性疾患および／または自己免疫疾患の中から選択される病態の治療および／または予防のためのワクチンを製造するための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウイルス由来材料（例えば、ウイルス、ウイルス粒子、ウイルスワクチンなど）等の生物活性材料の製剤分野に関し、より正確にはそれらの保管に適した製剤に関する。本発明は、そのような製剤の製造にも関する。より正確には、本発明は、（ｉ）ウイルス由来材料、（ｉｉ）ポリビニルピロリドンおよびその誘導体の群から選択される少なくとも一つのポリマー、（ｉｉｉ）少なくとも一つの糖、（ｉｖ）少なくとも二つの異なるアミノ酸、（ｖ）少なくとも二つの薬学的に許容される塩であって、前記塩の少なくとも１つがリン酸塩である塩、ならびに任意に（ｖｉ）薬学的に許容される緩衝剤を含む製剤に関する。より具体的には、本発明の製剤は、乾燥プロセス、より具体的には凍結乾燥プロセスに適する。本発明は、さらに、得られた乾燥生成物、より具体的には得られた凍結乾燥生成物に関する。本発明の製剤および乾燥生成物は、癌、自己免疫疾患および感染性疾患等の疾患の予防および／または治療用のワクチンとして有用である。
【背景技術】
【０００２】
例えば、製薬業界で使用される生物活性材料の保管および輸送は、これらの材料が分解、特に熱分解する傾向があるので、問題になっている。これは、世界中に流通し得、そのため流通国に応じて異なる温度または輸送中の温度変化を受けるであろうワクチン等の生物活性材料の場合において特に当てはまる。これは、インフラが限られた途上国への生物材料の流通をさらに制限する。
【０００３】
ウイルス、ウイルス粒子、ウイルスワクチンを含むウイルス由来材料の治療活性は、感染性および／または生物活性を保つために、保管および／または輸送中にそれらの構造的完全性を維持することを必要とする。
【０００４】
ウイルス由来材料のこの構造的完全性は、しばしば製剤プロセス中に損なわれ、したがってその治療的使用を妨げる。前記治療活性は、ウイルス力価の低下、特に感染力価の低下が制限されることをさらに必要とする。
【０００５】
それゆえ、ワクチン等の産業的利用のために生物活性材料を安定化して、これらの生物材料の保管および輸送能を改善するための新たな方法または製剤の開発は、製薬業界の継続的な目的である。
【０００６】
提案された解決方法の一つは、特定の温度範囲内、より具体的には低温、すなわち０℃未満、より具体的には−３０℃まで、さらにより好ましくは−８０℃までで生物活性材料を維持することである。この超低温保管は、非常に高価であるだけでなく、保管、輸送および臨床使用において重大な不都合を生じさせる。したがって、冷蔵条件で保管できる製剤の開発が必要であった。
【０００７】
したがって、一つの代替法によれば、生物活性材料をアルブミン、ペプトン、ゼラチンまたはヘマクセル等の動物またはヒト由来の添加物とともに製剤化することが提案された。しかしながら、そのような成分の使用は、アレルギー反応のリスク、感染性因子（例えば、ＢＳＥ（牛海綿状脳症））による汚染または伝染のリスク等の安全性の問題によって制限される。加えて、この解決方法は通常高価であり、そのため産業上の開発と両立できない。
【０００８】
さらに、液体形状で長期間冷蔵条件で保管した場合、ウイルス由来材料はその感染力を維持しないだろうと推測される。その結果、製剤化し、液体形状で冷蔵条件でウイルスを保管する研究の報告はない。したがって、長期間保管の保管時に安定なウイルス調製物の製剤に対する必要性が残されている。
【０００９】
他の代替法は、生物活性材料、特にウイルス由来材料を乾燥形状で保存するものであった。生物材料を乾燥する利用可能な技術のうち、凍結乾燥（freeze-drying）（凍結乾燥（lyophilization）ともいう）は、ワクチン等の生物医薬品を製造するための重要な工程である。凍結乾燥（freeze-drying）は、約４℃〜８℃において、場合によっては約２５℃までにおいて安定な、乾燥された生物学的生成物をもたらす。凍結乾燥（lyophilization）は、各種のウイルスワクチンおよび組み換えタンパク質生成物の安定性を向上するために幅広く使用されている。
【００１０】
凍結乾燥プロセスは、生物材料の溶液または懸濁液を凍結する一連の工程、続く第一および第二乾燥工程を含む（説明として、Adams, 2007, Methods Mol. Biol. 368, 15-38参照）。基本的に、当該技術は、真空下氷点下温度において、溶液が融解せずに水が昇華することに基づく。しかしながら、凍結した生物材料からの水蒸気拡散速度は非常に遅く、そのため当該プロセスは多大な時間を必要とする。加えて、凍結および乾燥の両段階は、生物材料に重大な化学的および物理的変化をもたらし、ウイルス由来材料等の一部の生物材料を大きく損傷するストレス（例えば、塩の濃縮、沈殿／結晶化、せん断応力、極度のｐＨ、凍結乾燥プロセス中を通じて残存する残留水分など）を引き起こす。したがって、乾燥工程中、さらに有利には保管／輸送工程中において、生物活性材料を保存できるような製剤に適応させる必要がある。
【００１１】
先行技術は、生物材料、より正確にはウイルス由来材料の凍結乾燥に使用される製剤の例を提供する。
【００１２】
ポリオウイルス調製物の感染力価低下を制限するために、ＷＯ８９／０６５４２は、唯一の保護剤として１０％トレハロースで構成された安定化溶液の存在下、３７℃でウイルス貯蔵液を乾燥することを提案した。しかしながら、感染力価の低下は大きいままで、非乾燥ワクチンで認められたものよりも大きいままである。
【００１３】
ＥＰ０８７２２４９は、グルタミン酸またはそのナトリウム塩およびグルコースの組み合わせを含む組み換えウイルスベクター調製物を記載している。
ＷＯ９５／１０６０１は、糖類、高分子量構造添加剤、アミノ酸、緩衝剤および水を含む組み換えウイルス水溶液を開示する。
ＷＯ０３／０５３４６３は、スクロース、デキストラン、グルタミン酸およびリン酸塩フリーの緩衝剤を含むワクシニアウイルス製剤を開示する。
ＷＯ２００５／０６６３３３は、尿素、糖、塩、緩衝剤、分散剤ならびに必須および非必須アミノ酸の混合物を含むウイルス組成物を記載している。
ＷＯ２００７／０５６８４７は、スクロース、ソルビトール、ポリビニルピロリドン、尿素、ＴＲＩＳ緩衝剤、グルタミン酸ナトリウムおよびアルギニン、アラニン、セリンまたはグリシン等の他のアミノ酸を含むウイルス含有製剤を開示する。
ＷＯ２００８／１１４０２１およびＷＯ２０１１／１２１３０６は、ポリエチレンイミン化合物を、任意に一つ以上の糖と組み合わせて含むウイルス組成物を記載している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
それでもなお、生物材料、具体的にはウイルス由来材料を安定化し、産業上利用され、生成物の生物活性に悪影響を与えず、より具体的にはウイルス力価の低下を回避して保管される、新たな製剤の必要性が残されている。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明は、ウイルス由来材料を含有する製剤、より具体的には凍結乾燥に適した水性製剤を提供する。好ましい態様によれば、本発明の製剤は、以下に定義する長期安定性試験において、より具体的には、０℃を超える温度、具体的には約４℃〜約３０℃、好ましくは約４℃〜約２５℃、より好ましくは約２℃〜約８℃、さらにより好ましくは約４℃〜約５℃（例えば、冷蔵温度）での保管時に安定である。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、リン酸塩の不存在下（黒色のバー）または濃度が増加したリン酸塩存在下（薄灰色〜濃灰色）で製剤化され、５℃（図１Ａ）または４５℃（図１Ｂ）で表示された期間保管されたＭＶＡベクター（ＴＧ４００１）の感染力価の累積低下を示す。薄灰色のバーは組成物Ｉを示し、中間の灰色のバーは組成物ＩＩを示し、濃灰色のバーは組成物ＩＩＩを示し、黒のバーは以下に記載の参考サンプルＲＳ１を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
製剤
第一の態様によれば、本発明は、（ｉ）少なくとも一つのウイルス由来材料、（ｉｉ）ポリビニルピロリドンおよびその誘導体の群から選択される少なくとも一つのポリマー、（ｉｉｉ）少なくとも一つの糖、（ｉｖ）少なくとも二つの異なるアミノ酸、（ｖ）少なくとも二つの薬学的に許容される塩であって、塩の少なくとも１つがリン酸塩である塩、ならびに任意に（ｖｉ）薬学的に許容される緩衝剤を含む製剤に関する。
【００１８】
特に明記しない限り、本明細書全体にわたって使用される以下の用語は、以下の意味を有する。
【００１９】
本明細書の「および／または」は、「および」、「または」および「前記用語で結ばれた要素のすべてまたは他の任意の組み合わせ」の意味を含む。
【００２０】
「含む（comprising）」および「含む（comprise(s)）」は、材料、生成物、製剤、組成物および方法が、言及された成分または工程を含むが、他を排除しないことを意味することが意図される。「から本質的になる（consisting essentially of）」または「から本質的になる（consist(s) essentially of）」は、生成物、組成物、および方法を定義するために使用される場合、任意の本質的に重要な他の成分または工程を排除することを意味するものとする。したがって、例えば、列挙された成分から本質的になる組成物は、ごくわずかな汚染物質および薬学的に許容される担体を排除しない。「からなる（consisting of）」または「からなる（consist(s) of）」は、他の成分または工程のごくわずかを上回る要素を排除することを意味するものとする。
【００２１】
本明細書で使用される「約」または「およそ」は、所定の値または範囲の１０％以内、より好ましくは５％以内を意味する。当該定義の特定の態様によれば、「約ｘ」はｘも含む。
【００２２】
好ましい態様によれば、本発明の製剤は水性製剤である。そのような製剤は、冷蔵温度での保管、または特に凍結乾燥における非冷蔵温度（例えば、室温）での保管に適する。
【００２３】
本発明によれば、「ウイルス由来材料または生成物」は、ウイルス、ウイルス粒子、ウイルスベクターおよびウイルスワクチンを意味する。これらの用語は同義語であり、互いに置換可能である。当該用語は、野生型ウイルス、死滅ウイルス、弱毒化生ウイルス、不活性化ウイルスおよび組み換えウイルスを含む。当該用語は、ウイルスベクター等のウイルス由来生成物、ウイルス様粒子（ＶＬＰｓ）またはヌクレオカプシド等のウイルス粒子をさらに含む。
【００２４】
本発明によれば、「ウイルス」は、好ましくはワクチンに使用されるもの、より好ましくはアデノウイルス科、ヘルペスウイルス科およびポックスウイルス科等のＤＮＡウイルスに関する。
【００２５】
より好ましい態様によれば、「ウイルス」は、ポックスウイルスベクターを指定することを意図する。本発明のポックスウイルスは、より好ましくは、コードポックスウイルス（脊椎動物ポックスウイルス）を示す。コードポックスウイルスとして、オルソポックスウイルス、パラポックスウイルス、アビポックスウイルス、カプリポックスウイルス、レプリポックスウイルス、スイポックスウイルス、モルシポックスウイルスまたはヤタポックスウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の好ましいコードポックスウイルスはオルソポックスウイルスである。他の好ましい態様によれば、ワクシニアウイルスからなる群から選択され、好適なワクシニアウイルスとしては、コペンハーゲン株（Goebelら, 1990, Virol. 179, 247-266および517-563；Johnsonら, 1993, Virol. 196, 381-401）、ワイス株、エルストリー、ウェスタン・リザーブ（ＷＲ）、ＩＨＤＪ、ならびに、ＭＶＡ、ＮＹＶＡＣを含むこれら由来の高度に弱毒化されたウイルス（ＷＯ９２／１５６７２，Tartagliaら, 1997, Virology, 188, 217-232参照）が挙げられるが、これらに限定されない。ベクターは、任意の他のポックスウイルス科のメンバー、特に鶏痘（例えば、TROVAC, Paolettiら, 1995, Dev Biol Stand., 84, 159-163参照）、カナリア痘（例えば、ALVAC,ＷＯ９５／２７７８０，Paolettiら, 1995, Dev Biol Stand., 84, 159-163）；鳩痘；豚痘等から入手してもよい。
【００２６】
一つの態様によれば、ウイルスベクターは、哺乳動物細胞、特に分裂細胞に感染する能力がある複製能を有するベクター（すなわち腫瘍崩壊性ベクター）であり、より具体的には、ワクシニアウイルスコペンハーゲン株またはＷＲ株からなる群から選択される複製能を有するポックスウイルスベクターである（例えば、ＷＯ２００９／０６５５４７，ＷＯ２００９／０６５５４６またはＷＯ９５／３１１０５参照）。
【００２７】
他の態様によれば、ウイルスベクターは弱毒化ポックスウイルスであり、ヒト細胞株中で増殖的に複製する能力の低下によって特徴付けられる。
【００２８】
好ましい態様によれば、本発明のウイルス由来材料は、ワクシニアウイルス（ＶＶ）および改変ワクシニアウイルスアンカラ（ＭＶＡ）からなる群から選択されるウイルスまたはウイルス粒子である。
【００２９】
好ましいＶＶは、特許出願ＷＯ２００９／０６５５４６、ＷＯ２００９／０６５５４７またはＷＯ９５／３１１０５に記載されたＶＶ、すなわちＧＭ−ＣＳＦである免疫刺激性サイトカインまたは自殺遺伝子を持つＶＶであってもよい。
【００３０】
本発明は、好ましくは、改変ワクシニアウイルスアンカラ（ＭＶＡ）（Ｓｕｔｔｅｒら，１９９４，Ｖａｃｃｉｎｅ，１２，１０３２−４０）を用いて実施される。典型的なＭＶＡ株は、受託番号ＥＣＡＣＣ  Ｖ００１２０７０７としてヨーロピアン・コレクション・オブ・アニマル・セル・カルチャーズに寄託されたＭＶＡ５７５である。本発明で使用可能なＭＶＡ株の他の例は、番号Ｎｏ．Ｉ−７２１としてＣＮＣＭに寄託されたＭＶＡ株、番号Ｖ０００８３００８としてＥＣＡＣＣに寄託されたＭＶＡ−ＢＮ、ＭＶＡ  ＩＩ／８５、受託番号Ｖ９４０１２７０７としてＥＣＡＣＣに寄託されたＭＶＡ−５７２、またはこのような任意のウイルスの誘導体である。
【００３１】
上記で定義したように、本発明のウイルスは、野生型ウイルス、弱毒化または組み換えウイルスであってよく、より好ましくは組み換えポックスウイルスであってよい。
【００３２】
用語「組み換え」ウイルスは、そのゲノムに挿入された外因性配列を含むウイルス、より具体的にはポックスウイルスを示す。本明細書で使用される外因性配列は、親ウイルス中に天然には存在しない核酸を示す。
【００３３】
そのような組み換えウイルスの例はＪＸ−５９４／ＴＧ６００６であって、これは顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、すなわちＧＭ−ＣＳＦである免疫刺激性サイトカインを発現するチミジンキナーゼ不活性化ワクシニアウイルス（ワイス株）である（ＷＯ９５／３１１０５，ＷＯ２００７／０３０６６８およびＷＯ２００８／１１３０７８参照）。他の例は、ＦＣＵ１自殺遺伝子等の自殺遺伝子を発現する、チミジンキナーゼ（ＴＫ）およびリボヌクレオチドレダクターゼ（Ｉ４Ｌ）が不活性化されたワクシニアウイルス（a doubly thymidine kinase (TK-) and ribonucleotide reductase (I4L-) inactivated vaccinia virus）ＴＧ６００２（コペンハーゲン株）である（ＷＯ２００９／０６５５４６参照）。
【００３４】
外因性配列は標的細胞中の欠陥遺伝子の機能と置換し得る。ヒトを含む哺乳動物には数千の遺伝による遺伝的疾患が存在し、これらは、例えば線維症、デュシェンヌ型筋ジストロフィーまたは鎌状赤血球病を含む疾患のように欠陥遺伝子によって引き起こされる。多くのタイプの癌もまた欠陥遺伝子、特に、例えば癌原遺伝子ｒａｓ、ｓｒｃ、ｂｃｌ等のような、癌原遺伝子および変異を受けた腫瘍抑制遺伝子によって引き起こされる。腫瘍抑制遺伝子の例は、ｐ５３およびＲｂである。
【００３５】
他の可能性によれば、外因性配列は腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）をコードすることができる。ＴＡＡは同じ組織型の非腫瘍細胞よりも腫瘍細胞中で高い頻度または密度で検出される分子を示す。ＴＡＡの例としては、参照によって本明細書に組み込まれるＷＯ９２／０７０００、ＷＯ９５／０９２４１に記載されているような、ＣＥＡ、ＭＡＲＴ１、ＭＡＧＥ１、ＭＡＧＥ３、ＧＰ−１００、ＭＵＣ１が挙げられるがこれらに限定されず、より好ましくはＭＵＣ１である。
【００３６】
外因性遺伝子は、さらに抗原をコードしてもよい。好ましくは、抗原は、例えば、ＨＩＶ−１（ｇｐ１２０またはｇｐ１６０等）、任意の猫免疫不全ウイルス、ｇＤもしくはその誘導体またはＨＳＶ１もしくはＨＳＶ２からのＩＣＰ２７等の前初期タンパク質等のヒトまたは動物のヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス（ｇＢもしくはその誘導体等）、水痘帯状ヘルペスウイルス（ｇｐＩ、ＩＩまたはＩＩＩ等）に由来するか、またはＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、例えばＢ型肝炎の表面抗原またはその誘導体（ＷＯ２０１１／０１５６５６およびＷＯ２０１３／００７７７２参照）、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ；ＷＯ０４／１１１０８２参照；遺伝子型１ｂ株からの優先的非構造性ＨＣＶタンパク質）およびＥ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）等の肝炎ウイルス等のウイルスに由来するか、あるいは、呼吸器合胞体ウイルス、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ；ＷＯ９０／１０４５９、ＷＯ９５／０９２４１、ＷＯ９８／０４７０５、ＷＯ９９／０３８８５およびＷＯ０７／１２１８９４参照；ＨＰＶ１６株からのＥ６およびＥ７タンパク質が好ましい；Liuら, Proc Natl Acad Sci USA. 2004 Oct 5；１０１Ｓｕｐｐｌ  ２：１４５６７−７１も参照）またはインフルエンザウイルス等の他のウイルス抗原に由来するか、あるいは、サルモネラ、ナイセリア、ボレリア（例えば、ＯｓｐＡもしくはＯｓｐＢまたはそれらの誘導体）、クラミジアまたはボルデテラ、例えば、Ｐ．６９、ＰＴおよびＦＨＡ等の細菌性病原菌に由来するか、あるいは、マラリア原虫またはトキソプラズマ等の寄生生物に由来する。本発明によれば、前記抗原はより好ましくはＨＣＶまたはＨＰＶから選択される。これに関連して、本発明の製剤で使用されるそのような好ましい組み換えウイルスはＭＶＡ−ＨＣＶ（ＷＯ０４／１１１０８２参照）であって、ＨＣＶ  ＮＳ３、ＮＳ４およびＮＳ５Ｂ抗原を発現する（ＮＳ３およびＮＳ４は融合タンパク質として発現し、ＮＳ５Ｂは独立して発現する）ＭＶＡであるＴＧ４０４０ともいう。
【００３７】
組み換えウイルスは二以上の外因性配列を含むことができ、各外因性配列は二以上の分子をコードすることができる。同じ組み換えウイルス中で、例えばＴＡＡ（前述したとおり）または抗原（前述したとおり）をコードする外因性配列と、サイトカイン（例えば、インターロイキン（ＩＬ、例えばＩＬ２）；腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）；インターフェロン（ＩＦＮ）；コロニー刺激因子（ＣＳＦ））をコードする外因性配列とを結びつけることは有用となり得る。
【００３８】
これに関連して、本発明で使用される好ましい組み換えウイルスは、
ＭＵＣ−１抗原およびＩＬ−２を発現するＭＶＡであるＭＶＡ−［ＭＵＣ１−ＩＬ２］（ＷＯ９２／０７０００およびＷＯ９５／０９２４１参照）、ＴＧ４０１０ともいう；ならびに
ＨＰＶ−１６の非腫瘍形成性Ｅ６およびＥ７抗原ならびにＩＬ−２を発現するＭＶＡであるＭＶＡ−［ＨＰＶ−ＩＬ２］（ＷＯ９０／１０４５９、ＷＯ９５／０９２４１、ＷＯ９８／０４７０５、ＷＯ９９／０３８８５およびＷＯ０７／１２１８９４参照）、ＴＧ４００１ともいう
である。
【００３９】
好ましい態様によれば、本発明のウイルス由来材料は、ポックスウイルス由来生成物、より具体的には、ＪＸ−５９４／ＴＧ６００６およびＴＧ６００２と呼ばれるようなＶＶ由来生成物、またはＴＧ４０４０、ＴＧ４０１０およびＴＧ４００１と呼ばれるようなＭＶＡ由来生成物である。
【００４０】
本発明の製剤に含有されるポックスウイルスは、天然に存在するポックスウイルス、弱毒化ポックスウイルスまたは組み換えポックスウイルスであってよい。
【００４１】
ウイルス由来材料、特に、本発明で使用されるウイルスベクターおよび／またはウイルスを製造および精製する方法は当業者に公知である。より具体的には、ポックスウイルスに関しては、可能な製造方法は、細胞株（例えば、ＨｅｌａＳ３またはｄｕｃｋ細胞株）中や、胚含有卵中またはニワトリ胚線維芽細胞（ＣＥＦ）中でのウイルスの複製を含む。より具体的にはＣＥＦ細胞はＭＶＡ由来生成物を産生するために供される。それらは当業者に公知の条件下で培養することができる。ＷＯ０７／１４７５２８によれば、ＣＥＦまたは細胞株の上清から製造されたウイルスは、深層ろ過、精密ろ過および透析ろ過によって精製することができる。
【００４２】
ＷＯ２０１０／１３０７５３は、ヌクレアーゼを使用するポックスウイルスの製造方法およびさらに陰イオン交換吸着剤を使用するウイルスの精製方法を記載している。
【００４３】
それにもかかわらず、本発明の製剤で観察された結果は、製剤中のウイルスが未精製ウイルス、精製されたウイルスまたは部分的に精製されたウイルスであるかどうかに関わりなく得られる。精製されたまたは部分的に精製されたウイルスが好ましい。本明細書で使用される「精製された」は、粗ウイルス調製物のタンパク質含有量と比較してタンパク質含有量の少なくとも９０％の減少を示すのに対して、「部分的に精製された」は、粗ウイルス調製物のタンパク質含有量に対して著しい減少（例えば、少なくとも２０％）を意味する。
【００４４】
本発明の一つの態様によれば、前記製剤はウイルスである少なくとも一つのウイルス由来材料を含み、前記製剤におけるウイルス力価は、１．１０６Ｐｆｕ／ｍＬ〜１．１０１０Ｐｆｕ／ｍＬであり、より好ましくは１．１０７Ｐｆｕ／ｍＬ〜１．１０９Ｐｆｕ／ｍＬであり、より好ましくは１．１０７Ｐｆｕ／ｍＬ〜５．１０８Ｐｆｕ／ｍＬであり、より好ましくは１．１０８Ｐｆｕ／ｍＬ〜５．１０８Ｐｆｕ／ｍＬである。
【００４５】
本発明の製剤は、（ｉｉ）ポリビニルピロリドンおよびその誘導体ならびにそれらの混合物の群から選択される少なくとも一つのポリマーをさらに含む。
【００４６】
本明細書で使用される用語「ポリビニルピロリドン」は、Ｎ−ビニルピロリドンモノマーから作られる水溶性ポリマーを示す。当該用語および略語ＰＶＰ、ポビドン、プラスドン、ポリビドン、クロスポビドン、コリドンは同意語として使用される。
【００４７】
本明細書で使用される用語「ＰＶＰ誘導体」およびその変形物は、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）およびその置換された態様を含む物質を意味することが意図され、コポビドン（例えば、プラスドンＳ−６３０およびコリドンＶＡ−６４）ならびに架橋ＰＶＰ（例えば、ポリビニルポリピロリドンまたはＰＶＰＰともいうクロスポビドン）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４８】
本発明によれば、ＰＶＰおよびその誘導体は、５ｋＤａ〜４００ｋＤａの範囲、より好ましくは５ｋＤａ〜７０ｋＤａの範囲の分子量を有する。有利な態様によれば、ＰＶＰおよびその誘導体は、低分子量、すなわち５５ｋＤａを超えない分子量であり、好ましくは１０ｋＤａ〜４０ｋＤａであり、好ましくは１５ｋＤａ〜３０ｋＤａであり、より好ましくは２５ｋＤａである。低分子量ＰＶＰポリマーは、高分子量よりも免疫原性が低く、注射中の耐容性も良好である。
【００４９】
好ましい態様によれば、本発明の製剤は、５ｇ／Ｌ〜８０ｇ／ＬのＰＶＰもしくは誘導体またはその混合物を含み、好ましくは１０ｇ／Ｌ〜５０ｇ／Ｌ、より好ましくは１５ｇ／Ｌ〜４０ｇ／Ｌ、より好ましくは２０ｇ／Ｌ〜３５ｇ／Ｌの上記定義のＰＶＰもしくはその誘導体を含む。一つの特定の態様によれば、本発明の製剤は３３．２５ｇ／ＬのＰＶＰ、より具体的には一つの分子量が２５ｋＤａのＰＶＰを含む。
【００５０】
本発明の製剤は（ｉｉｉ）少なくとも一つの糖をさらに含む。
【００５１】
前記糖は、より好ましくは単糖、二糖、三糖および四糖ならびにそれらの誘導体から選択される。
【００５２】
グルコース、ガラクトースおよびマンノース等の単糖が本発明において好ましく選択される。
【００５３】
本発明の二糖は、スクロース（サッカロースともいう）、ラクツロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、セロビオース、イソマルトースおよびマルツロースの中から好ましく選択される。
【００５４】
ラフィノース等の三糖が本発明において好ましく選択される。
【００５５】
スタキオース等の四糖も本発明において想定される。
【００５６】
好ましい態様によれば、本発明の製剤は少なくとも一つの二糖を含む。さらにより好ましい態様によれば、前記二糖は、スクロース、ラクツロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、セロビオース、イソマルトースおよびマルツロースからなる群から選択され、有利にはスクロースである。
【００５７】
好ましい態様によれば、本発明の製剤は、１０ｇ／Ｌ〜１００ｇ／Ｌの糖、好ましくは２０ｇ／Ｌ〜８０ｇ／Ｌ、より好ましくは３０ｇ／Ｌ〜７０ｇ／Ｌ、さらにより好ましくは４０ｇ／Ｌ〜６０ｇ／Ｌの糖を含む。本発明のより好ましい態様によれば、前記製剤は５０ｇ／Ｌの糖、有利には５０ｇ／Ｌのスクロースを含む。
【００５８】
好ましい態様によれば、本発明の製剤のＰＶＰに対する糖の重量比（糖／ＰＶＰ（ｗ／ｗ））は少なくとも１であり、より好ましくは１〜５であり、より好ましくは１〜２であり、好ましくは１．５である。
【００５９】
本発明の製剤は（ｉｖ）少なくとも二つの異なるアミノ酸をさらに含む。
【００６０】
より好ましくは、前記アミノ酸は、両立体異性体を含む、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸塩、システイン、グルタミン、グルタミン酸塩、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、ピロリシン、セレノシステイン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリン、ならびにそれらの誘導体の中から選択される。
【００６１】
グルタミン酸塩は、グルタミン酸の薬学的に許容される塩の形状を示し、好ましくはグルタミン酸の１価の塩、より好ましくはグルタミン酸のナトリウム塩、すなわち、グルタミン酸ナトリウム（ＭＳＧ）である。
【００６２】
一つの好ましい態様によれば、本発明の製剤は、Ｌ−立体異性体からなる群から選択される少なくとも一つのアミノ酸、例えばＬ−アルギニンを含む。
【００６３】
一つの好ましい態様によれば、本発明の製剤は、アルギニン、ヒスチジンおよびリジンからなる群から選択される少なくとも一つのアミノ酸を含む。
【００６４】
他の好ましい態様によれば、本発明の製剤は、アスパラギン酸塩およびグルタミン酸塩からなる群から選択される少なくとも一つのアミノ酸を含む。
【００６５】
好ましい態様によれば、本発明の製剤はアルギニンおよびグルタミン酸塩を含む。
【００６６】
好ましい態様によれば、本発明の製剤は、合計量で１０ｇ／Ｌ〜２００ｇ／Ｌ、より好ましくは１０ｇ／Ｌ〜１５０ｇ／Ｌ、より好ましくは１０ｇ／Ｌ〜１００ｇ／Ｌのアミノ酸を含む。
【００６７】
他の好ましい態様によれば、本発明の製剤は、５ｇ／Ｌ〜１００ｇ／Ｌ、より好ましくは５ｇ／Ｌ〜８０ｇ／Ｌのアルギニンを含む。５ｇ／Ｌ〜２０ｇ／Ｌのアルギニン濃度は高いウイルス力価（例えば、約１．１０８ＰＦＵ／ｍＬ以上）のウイルス製剤により適しており、より高いアルギニン濃度はより低いウイルス力価（例えば、１．１０８ＰＦＵ／ｍＬ未満）のウイルス製剤により適している。
【００６８】
より好ましい態様によれば、本発明の製剤は、１ｇ／Ｌ〜５０ｇ／Ｌ、より好ましくは１ｇ／Ｌ〜２０ｇ／Ｌ、より好ましくは１ｇ／Ｌ〜１０ｇ／Ｌ、より好ましくは１ｇ／Ｌ〜５ｇ／Ｌのグルタミン酸塩を含む。本発明のより好ましい態様によれば、前記製剤は２．４９ｇ／Ｌのグルタミン酸塩を含む。
【００６９】
本発明の一つの特定の態様によれば、前記製剤は、２．４９ｇ／Ｌのグルタミン酸塩および８．４３ｇ／Ｌのアルギニンを含む。
【００７０】
本発明のより好ましい態様によれば、前記製剤は、２．４９ｇ／Ｌのグルタミン酸塩および４２．１３ｇ／Ｌのアルギニンを含む。
【００７１】
本発明のより好ましい態様によれば、前記製剤は、２．４９ｇ／Ｌのグルタミン酸塩および５６．０４ｇ／Ｌのアルギニンを含む。
【００７２】
本発明の製剤は（ｖ）少なくとも二つの薬学的に許容される塩であって、前記塩の少なくとも１つがリン酸塩である塩をさらに含む。
【００７３】
リン酸塩はｐＨシフトを引き起こすことが知られており、製剤中でのそれらの使用は問題があると考えられていた（例えば：Freeze Drying of Pharmaceuticals & Biologicals Conference, August 6-9, 2008, Great Divide Lodge Breckenridge, Colorado参照）。同様に、ＥＰ１４１８９４２は、ウイルス由来材料、特にポックスウイルスを含有する製剤中のリン酸塩の存在が、特に乾燥プロセス中に、ウイルスの凝集および沈殿を引き起こすことを示す。驚くべきことに、本発明の発明者らは、本発明に関連して、リン酸緩衝剤が特許請求の範囲に記載された製剤の安定化特性に関与することを見出した。
【００７４】
一つの態様によれば、本発明の少なくとも一つの薬学的に許容される塩は、ナトリウム塩およびカリウム塩ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００７５】
好ましい態様によれば、本製剤の少なくとも一つの薬学的に許容される塩はリン酸塩であって、一塩基性リン酸塩、二塩基性リン酸塩および三塩基性リン酸塩からなる群から選択される。
【００７６】
一つの態様によれば、本製剤の少なくとも一つの薬学的に許容される塩はリン酸塩であって、リン酸一ナトリウム（ＮａＨ２ＰＯ４）およびリン酸一カリウム（ＫＨ２ＰＯ４）からなる群から選択される。
【００７７】
他の態様によれば、本製剤の少なくとも一つの薬学的に許容される塩はリン酸塩であって、リン酸二ナトリウム（Ｎａ２ＨＰＯ４）およびリン酸二カリウム（Ｋ２ＨＰＯ４）からなる群から選択される。
【００７８】
他の態様によれば、本製剤の少なくとも一つの薬学的に許容される塩は、リン酸塩であって、リン酸三カリウム（Ｋ３ＰＯ４）およびリン酸三ナトリウム（Ｎａ３ＰＯ４）からなる群から選択される。
【００７９】
本発明の一つの好ましい態様によれば、本製剤の少なくとも一つの薬学的に許容される塩は、リン酸二ナトリウムＮａ２ＨＰＯ４である。
【００８０】
他の態様によれば、本発明の製剤は（ｖ）リン酸緩衝剤を形成する少なくとも二つのリン酸塩を含む。前記リン酸緩衝剤は、より好ましくは、少なくとも一つの一塩基性リン酸塩および少なくとも一つの二塩基性リン酸塩を含む混合物である。前記リン酸緩衝剤は、より好ましくはリン酸二カリウム（ＫＨ２ＰＯ４）およびリン酸二ナトリウム（Ｎａ２ＨＰＯ４）を含む混合物である。したがって、一つの好ましい態様によれば、本発明の製剤は（ｖ）リン酸二カリウム（ＫＨ２ＰＯ４）およびリン酸二ナトリウム（Ｎａ２ＨＰＯ４）を含む。
【００８１】
一つの特定の態様によれば、本発明の製剤は（ｖ）リン酸二カリウム（ＫＨ２ＰＯ４）およびリン酸二ナトリウム（Ｎａ２ＨＰＯ４）をそれぞれ約１：５の比で含む。
【００８２】
他の好ましい態様によれば、本発明の製剤は、少なくとも０．１ｇ／Ｌ、より好ましくは０．１ｇ／Ｌ〜１０ｇ／Ｌ、さらにより好ましくは０．１ｇ／Ｌ〜５ｇ／Ｌのリン酸塩を含む。
【００８３】
本発明の一つの特定の態様によれば、前記製剤は、少なくとも０．１ｇ／Ｌ、好ましくは０．１９ｇ／Ｌのリン酸塩を含む。
【００８４】
他の好ましい態様によれば、本発明の製剤は、少なくとも０．１ｇ／ＬのＮａ２ＨＰＯ４、好ましくは０．１ｇ／Ｌ〜５ｇ／ＬのＮａ２ＨＰＯ４を含む。
【００８５】
本発明の一つの特定の態様によれば、前記製剤は、０．１９ｇ／Ｌのリン酸塩、さらにより具体的には０．１９ｇ／ＬのＮａ２ＨＰＯ４を含む。
【００８６】
他の好ましい態様によれば、本発明の製剤は、少なくとも０．１ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４、好ましくは０．１ｇ／Ｌ〜５ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４、さらに好ましくは０．１ｇ／Ｌ〜１ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４、より好ましくは０．１ｇ／Ｌ〜０．６ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４を含む。
【００８７】
本発明の他の特定の態様によれば、前記製剤は、０．９４ｇ／Ｌのリン酸塩、さらにより具体的には０．７９ｇ／ＬのＮａ２ＨＰＯ４および０．１５ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４を含む。
【００８８】
本発明の他の特定の態様によれば、前記製剤は、１．８８ｇ／Ｌのリン酸塩、さらにより具体的には１．５９ｇ／ＬのＮａ２ＨＰＯ４および０．２９ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４を含む。
【００８９】
本発明の他の特定の態様によれば、前記製剤は、３．７５ｇ／Ｌのリン酸塩、さらにより具体的には３．１７ｇ／ＬのＮａ２ＨＰＯ４および０．５８ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４含む。
【００９０】
本発明の状況において、前記製剤は、少なくとも１ｇ／Ｌのリン酸緩衝剤（例えば、少なくとも１．２、１．５、１．６、１．７または１．８ｇ／Ｌ）を含むことが好ましい。好ましい製剤は、上記定義のリン酸緩衝剤（例えば、１．５９ｇ／ＬのＮａ２ＨＰＯ４および０．２９ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４、または３．１７ｇ／ＬのＮａ２ＨＰＯ４および０．５８ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４）および上記定義のアルギニン（例えば、約８．４３ｇ／Ｌ以上）の両方を含む。
【００９１】
他の特定の態様によれば、本発明の製剤は、（ｖ）リン酸塩ではない、少なくとも一つの追加の薬学的に許容される塩を含む。
【００９２】
一つの態様によれば、前記追加の薬学的に許容される塩は一価の塩である。一つの好ましい態様によれば、前記追加の薬学的に許容される塩は、ＮａＣｌおよびＫＣｌからなる群から選択され、好ましくはＮａＣｌである。
【００９３】
一つの態様によれば、本発明の製剤は、１ｇ／Ｌ〜１０ｇ／Ｌ、好ましくは５ｇ／Ｌを超えず、より好ましくは１ｇ／Ｌ〜５ｇ／Ｌの前記追加の薬学的に許容される塩を含む。
【００９４】
本発明の一つの特定の態様によれば、前記製剤は３．８９ｇ／ＬのＮａＣｌを含む。
【００９５】
本発明の一つの特定の態様によれば、前記製剤は１．９４ｇ／ＬのＮａＣｌを含む。
【００９６】
本発明の製剤は（ｖｉ）薬学的に許容される緩衝剤をさらに含んでいてよい。
【００９７】
一つの態様によれば、本発明の製剤は薬学的に許容される緩衝剤をさらに含む。
【００９８】
一つの態様によれば、本発明の製剤のｐＨは、約７〜約８．５が含まれ、好ましくは７．５±０．５であり、より好ましくは７．５である。ｐＨは、ソーレンセン・イン・ハヤット（Sorensen in Hayat），１９８６等の当業者に周知の方法に従って、リン酸塩、より好ましくはＫＨ２ＰＯ４およびＮａ２ＨＰＯ４のそれぞれの量で調整できる。
【００９９】
前記薬学的に許容される緩衝剤は、ＴＲＩＳ、ＢＥＳ、ＴＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＭＯＢＳ、ＴＡＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、ＰＯＰＳＯ、ＭＯＰＳ、ＨＥＰＥＳおよび重炭酸塩からなる群から選択することができる。好ましい態様によれば、前記緩衝剤はＴＲＩＳまたはＨＥＰＥであり、さらにより好ましくはＴＲＩＳである。
【０１００】
一つの好ましい態様によれば、本発明の製剤は約１ｍＭから約１００ｍＭ、より好ましくは約１ｍＭ〜約５０ｍＭの前記薬学的に許容される緩衝剤を含む。
【０１０１】
本発明の一つの特定の態様によれば、前記製剤は、約１０ｍＭのＴＲＩＳ、より具体的には１．６１ｇ／ＬのＴＲＩＳを含む。
【０１０２】
有利な態様によれば、本発明は（ｉ）少なくとも一つのウイルス由来材料、（ｉｉ）ポリビニルピロリドンおよびその誘導体の群から選択される少なくとも一つのポリマー、（ｉｖ）少なくとも二つの異なるアミノ酸、（ｖ）少なくとも二つの薬学的に許容される塩であって、前記塩の少なくとも１つがリン酸塩であり、前記リン酸塩がリン酸二ナトリウム塩である塩、ならびに任意に（ｖｉ）ＴＲＩＳまたはＨＥＰＥＳからより好ましく選択される薬学的に許容される緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１０３】
有利な態様によれば、本発明は（ｉ）少なくとも一つのウイルス由来材料、（ｉｉ）ポリビニルピロリドンおよびその誘導体の群から選択される少なくとも一つのポリマー、（ｉｖ）少なくとも二つの異なるアミノ酸、（ｖ）リン酸二ナトリウム塩およびリン酸一カリウム塩の混合物、ならびに任意に（ｖｉ）ＴＲＩＳまたはＨＥＰＥＳからより好ましく選択される薬学的に許容される緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１０４】
有利な態様によれば、本発明は（ｉ）少なくとも一つのウイルス由来材料、（ｉｉ）ポリビニルピロリドンおよびその誘導体の群から選択される少なくとも一つのポリマー、（ｉｖ）少なくとも二つの異なるアミノ酸、（ｖ）リン酸二ナトリウム塩、リン酸一カリウム塩およびＮａＣｌの混合物、ならびに任意に（ｖｉ）ＴＲＩＳまたはＨＥＰＥＳからより好ましく選択される薬学的に許容される緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１０５】
有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）少なくとも二つの薬学的に許容される塩であって、前記塩の少なくとも１つがリン酸塩である塩、ならびに任意に（ｖｉ）薬学的に許容される緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１０６】
他の有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）少なくとも一つの一価のリン酸塩および／または少なくとも一つの二価のリン酸塩の混合物、ならびに任意に（ｖ）薬学的に許容される緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１０７】
他の有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）リン酸二ナトリウム塩およびリン酸一カリウム塩の混合物、ならびに任意に（ｖｉ）薬学的に許容される緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１０８】
有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）少なくとも一つのリン酸塩および少なくとも一つの一価の塩、好ましくはＮａＣｌ、ならびに任意に（ｖｉ）薬学的に許容される緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１０９】
他の有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）少なくとも一つの一価のリン酸塩および／または少なくとも一つの二価のリン酸塩ならびに少なくとも一つの一価の塩、好ましくはＮａＣｌ、ならびに任意に（ｖ）薬学的に許容される緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１１０】
有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）リン酸二ナトリウム塩および少なくとも一つの一価の塩、好ましくはＮａＣｌ、ならびに任意に（ｖｉ）薬学的に許容される緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１１１】
有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）リン酸二ナトリウム塩およびリン酸一カリウムの混合物ならびに少なくとも一つの一価の塩、好ましくはＮａＣｌ、ならびに任意に（ｖｉ）薬学的に許容される緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１１２】
有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ＭＶＡおよびＶＶからなる群から選択されるポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）少なくとも二つの薬学的に許容される塩であって、前記塩の少なくとも１つがリン酸塩である塩、ならびに任意に（ｖｉ）薬学的に許容される緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１１３】
他の有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ＭＶＡおよびＶＶからなる群から選択されるポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）少なくとも一つの一価のリン酸塩および／または少なくとも一つの二価のリン酸塩の混合物、ならびに任意に（ｖ）薬学的に許容される緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１１４】
他の有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ＭＶＡおよびＶＶからなる群から選択されるポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）リン酸二ナトリウム塩およびリン酸一カリウム塩の混合物、ならびに任意に（ｖｉ）薬学的に許容される緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１１５】
有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ＭＶＡおよびＶＶからなる群から選択されるポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）少なくとも一つのリン酸塩および一つの一価の塩、好ましくはＮａＣｌ、ならびに任意に（ｖｉ）薬学的に許容される緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１１６】
有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ＭＶＡおよびＶＶからなる群から選択されるポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）リン酸二ナトリウム塩および少なくとも一つの一価の塩、好ましくはＮａＣｌ、ならびに任意に（ｖｉ）薬学的に許容される緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１１７】
有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ＭＶＡおよびＶＶからなる群から選択されるポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）リン酸二ナトリウム塩およびリン酸一カリウムの混合物ならびに少なくとも一つの一価の塩、好ましくはＮａＣｌ、ならびに任意に（ｖｉ）薬学的に許容される緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１１８】
他の有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）リン酸二ナトリウム塩およびリン酸一カリウム塩の混合物、ならびに（ｖｉ）ＴＲＩＳ、ＢＥＳ、ＴＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＭＯＢＳ、ＴＡＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、ＰＯＰＳＯ、ＭＯＰＳ、ＨＥＰＥＳおよび重炭酸塩の群から選択される薬学的に許容される緩衝剤、好ましくはＴＲＩＳ緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１１９】
有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）少なくとも一つのリン酸塩および一つの一価の塩、ならびに（ｖｉ）ＴＲＩＳ、ＢＥＳ、ＴＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＭＯＢＳ、ＴＡＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、ＰＯＰＳＯ、ＭＯＰＳ、ＨＥＰＥＳおよび重炭酸塩の群から選択される薬学的に許容される緩衝剤、好ましくはＴＲＩＳ緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１２０】
有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）リン酸二ナトリウム塩および少なくとも一つの一価の塩、好ましくはＮａＣｌ、ならびに（ｖｉ）ＴＲＩＳ、ＢＥＳ、ＴＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＭＯＢＳ、ＴＡＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、ＰＯＰＳＯ、ＭＯＰＳ、ＨＥＰＥＳおよび重炭酸塩の群から選択される薬学的に許容される緩衝剤、好ましくはＴＲＩＳ緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１２１】
有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）リン酸二ナトリウム塩およびリン酸一カリウムの混合物ならびに少なくとも一つの一価の塩、好ましくはＮａＣｌ、ならびに（ｖｉ）ＴＲＩＳ、ＢＥＳ、ＴＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＭＯＢＳ、ＴＡＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、ＰＯＰＳＯ、ＭＯＰＳ、ＨＥＰＥＳおよび重炭酸塩の群から選択される薬学的に許容される緩衝剤、好ましくはＴＲＩＳ緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１２２】
有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）リン酸二ナトリウム塩およびリン酸一カリウムの混合物ならびにＮａＣｌ、ならびに（ｖｉ）ＴＲＩＳ、ＢＥＳ、ＴＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＭＯＢＳ、ＴＡＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、ＰＯＰＳＯ、ＭＯＰＳ、ＨＥＰＥＳおよび重炭酸塩の群から選択される薬学的に許容される緩衝剤、好ましくはＴＲＩＳ緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１２３】
有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ＭＶＡおよびＶＶからなる群から選択されるポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）少なくとも二つの薬学的に許容される塩であって、前記塩の少なくとも１つがリン酸塩である塩、ならびに（ｖｉ）ＴＲＩＳ、ＢＥＳ、ＴＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＭＯＢＳ、ＴＡＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、ＰＯＰＳＯ、ＭＯＰＳ、ＨＥＰＥＳおよび重炭酸塩の群から選択される薬学的に許容される緩衝剤、好ましくはＴＲＩＳ緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１２４】
他の有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ＭＶＡおよびＶＶからなる群から選択されるポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）少なくとも一つの一価のリン酸塩および／または少なくとも一つの二価のリン酸塩の混合物、ならびに（ｖｉ）ＴＲＩＳ、ＢＥＳ、ＴＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＭＯＢＳ、ＴＡＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、ＰＯＰＳＯ、ＭＯＰＳ、ＨＥＰＥＳおよび重炭酸塩の群から選択される薬学的に許容される緩衝剤、好ましくはＴＲＩＳ緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１２５】
他の有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ＭＶＡおよびＶＶからなる群から選択されるポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）リン酸二ナトリウム塩およびリン酸一カリウム塩の混合物、ならびに（ｖｉ）ＴＲＩＳ、ＢＥＳ、ＴＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＭＯＢＳ、ＴＡＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、ＰＯＰＳＯ、ＭＯＰＳ、ＨＥＰＥＳおよび重炭酸塩の群から選択される薬学的に許容される緩衝剤、好ましくはＴＲＩＳ緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１２６】
有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ＭＶＡおよびＶＶからなる群から選択されるポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）少なくとも一つのリン酸塩および一つの一価の塩、好ましくはＮａＣｌ、ならびに（ｖｉ）ＴＲＩＳ、ＢＥＳ、ＴＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＭＯＢＳ、ＴＡＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、ＰＯＰＳＯ、ＭＯＰＳ、ＨＥＰＥＳおよび重炭酸塩の群から選択される薬学的に許容される緩衝剤、好ましくはＴＲＩＳ緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１２７】
有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ＭＶＡおよびＶＶからなる群から選択されるポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）リン酸二ナトリウム塩および少なくとも一つの一価の塩、好ましくはＮａＣｌ、ならびに（ｖｉ）ＴＲＩＳ、ＢＥＳ、ＴＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＭＯＢＳ、ＴＡＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、ＰＯＰＳＯ、ＭＯＰＳ、ＨＥＰＥＳおよび重炭酸塩の群から選択される薬学的に許容される緩衝剤、好ましくはＴＲＩＳ緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１２８】
有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ＭＶＡおよびＶＶからなる群から選択されるポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）リン酸二ナトリウム塩およびリン酸一カリウムの混合物ならびに少なくとも一つの一価の塩、好ましくはＮａＣｌ、ならびに（ｖｉ）ＴＲＩＳ、ＢＥＳ、ＴＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＭＯＢＳ、ＴＡＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、ＰＯＰＳＯ、ＭＯＰＳ、ＨＥＰＥＳおよび重炭酸塩の群から選択される薬学的に許容される緩衝剤、好ましくはＴＲＩＳ緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１２９】
有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ＭＶＡおよびＶＶからなる群から選択されるポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）リン酸二ナトリウム塩およびリン酸一カリウムの混合物ならびにＮａＣｌ、ならびに（ｖｉ）ＴＲＩＳ、ＢＥＳ、ＴＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＭＯＢＳ、ＴＡＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、ＰＯＰＳＯ、ＭＯＰＳ、ＨＥＰＥＳおよび重炭酸塩の群から選択される薬学的に許容される緩衝剤、好ましくはＴＲＩＳ緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１３０】
他の有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ＭＶＡおよびＶＶからなる群から選択されるポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）約０．１ｇ／Ｌ〜約１ｇ／Ｌのリン酸二ナトリウム塩および約１ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／Ｌ、好ましくは約１ｇ／Ｌ〜約５ｇ／Ｌの一価の塩、好ましくはＮａＣｌを含む製剤に関する。
【０１３１】
他の有利な態様によれば、本発明は（ｉ）ＭＶＡおよびＶＶからなる群から選択されるポックスウイルス、（ｉｉ）ＰＶＰ、（ｉｉｉ）スクロース、（ｉｖ）アルギニンおよびグルタミン酸塩、（ｖ）約０．１ｇ／Ｌ〜約１ｇ／Ｌのリン酸二ナトリウム塩および約１ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／Ｌ、好ましくは約１ｇ／Ｌ〜約５ｇ／Ｌの一価の塩、好ましくはＮａＣｌ、ならびに（ｖｉ）約１ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／Ｌ、より好ましくは約１ｇ／Ｌ〜約５ｇ／ＬのＴＲＩＳ緩衝剤を含む製剤に関する。
【０１３２】
凍結乾燥に適する典型的なウイルス含有製剤は（ｉｉ）３３．２５ｇ／ＬのＰＶＰ  ２５ｋＤａ、（ｉｉｉ）５０ｇ／Ｌのスクロース、（ｉｖ）２．４９ｇ／Ｌのグルタミン酸塩および８．４３ｇ／Ｌのアルギニン、（ｖ）０．７９ｇ／ＬのＮａ２ＨＰＯ４および０．１５ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４を含む。
【０１３３】
本発明の他の特定の態様によれば、前記製剤は１．８８ｇ／Ｌのリン酸塩、さらにより具体的には１．５９ｇ／ＬのＮａ２ＨＰＯ４および０．２９ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４を含む。
【０１３４】
本発明の他の特定の態様によれば、前記製剤は３．７５ｇ／Ｌのリン酸塩、さらにより具体的には３．１７ｇ／ＬのＮａ２ＨＰＯ４および０．５８ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４を含む。
【０１３５】
本発明の他の特定の態様によれば、前記製剤は３．８９ｇ／ＬのＮａＣｌを含む。
【０１３６】
本発明の一つの特定の態様によれば、前記製剤は１．９４ｇ／ＬのＮａＣｌを含む。
【０１３７】
本発明の他の特定の態様によれば、前記製剤は３．８９ｇ／ＬのＮａＣｌおよび１．６１ｍＭのＴＲＩＳを含む。
【０１３８】
本発明の一つの特定の態様によれば、前記製剤は１．９４ｇ／ＬのＮａＣｌおよび１．６１ｇ／ＬのＴＲＩＳを含む。
【０１３９】
乾燥生成物
本発明は、さらに、乾燥形状、好ましくは凍結乾燥形状の上記開示の製剤を含む安定なウイルス由来材料含有ワクチンに関する。
【０１４０】
用語「乾燥」は、残留水分含有量が、生成物の３重量％未満、好ましくは２％未満、より好ましくは１％以下を示す、製剤、組成物、生成物、ワクチン等を意味する。具体的な態様によれば、乾燥材料（乾燥製剤、乾燥組成物、乾燥生成物、乾燥ワクチン、乾燥ウイルス由来材料含有ワクチンを含む）は、約５℃、室温および約４５℃までの両方で、結晶またはアモルファス形状の固体である。
【０１４１】
一つの特定の態様によれば、前記残留水分含有量は、カールフィッシャー法によって決定される。
【０１４２】
本発明によれば、「乾燥材料」（乾燥製剤、乾燥組成物、乾燥生成物、乾燥ワクチン、乾燥ウイルス由来材料含有ワクチンを含む）は、上記で定義されたような残留水分を有する。
【０１４３】
一つの態様によれば、前記乾燥材料は、上記開示の製剤、好ましくは水性製剤を凍結乾燥することによって得ることができる。したがって、好ましい態様によれば、乾燥材料（特に、本発明の乾燥製剤または乾燥ウイルス由来材料含有ワクチン）は、「凍結乾燥された（freeze-dried）」または「凍結乾燥された（lyophilized）」材料（特に、本発明の凍結乾燥された（freeze-dried）または凍結乾燥された（lyophilized）製剤、あるいは凍結乾燥された（freeze-dried）または凍結乾燥された（lyophilized）ウイルス由来材料含有ワクチン）を示す。
【０１４４】
用語「凍結乾燥された（freeze-dried）」および「凍結乾燥された（lyophilized）」は、用語「凍結乾燥（lyophilization）」および「凍結乾燥（freez-drying）」と同様に等価である。
【０１４５】
好ましい態様によれば、凍結乾燥後のウイルス力価の低下、すなわち凍結乾燥プロセスに起因する低下は、０．３ｌｏｇを超えず、好ましくは０．２ｌｏｇを超えず、より好ましくは０．１ｌｏｇを超えない。
【０１４６】
また、前記「乾燥材料」は、有利に安定（下記参照）であり、すなわちそのウイルス力価の累積低下は限定的である。
【０１４７】
また、リン酸水素二ナトリウム十二水塩（Ｎａ２ＨＰＯ４，［１２Ｈ２Ｏ］）等のリン酸塩が低温で沈殿し、それによって生成物のｐＨが著しく低下する可能性があることが文献中で公知であるのに対して（Croyleら, 「Factors that influence stability of recombinant adenoviral preparations for human gene therapy, Pharmaceutical development and technology」, 3(3), 373-383, 1998）、本発明の製剤のｐＨは、凍結の間すべての温度において予想外に維持されたことに留意しなければならない。
【０１４８】
生成物を不安定化し、保存期間を短くする恐れがある、保管中の水分への暴露が安定性の指標となることは当業者に公知であるので、本発明の「乾燥材料」は低い残留水分（ＲＭ）含有量であることがさらに求められる。ＲＭは凍結乾燥された生成物中に残存する結合水の量である。残留水分を試験するための公知の比色カールフィッシャー法は、定量滴定によって水分含有量を決定するために使用することができる（Jennings, T.A., 「Lyophilization, Introduction and Basic Principles」, Interpharm Press, Denver, CO, US, 1999, ISBN1-57491-081-7, 415-418頁）。これは乾燥生成物の全重量に対して残存する水の重量％として測定される。ヨーロッパ薬局方（第５版）はＲＭが生成物の３重量％未満であることを推奨している。
【０１４９】
より具体的には、本発明の「乾燥材料」中において、ＲＭは、生成物の３重量％未満、より好ましくは２％未満、より好ましくは生成物の１重量％以下である。
【０１５０】
本発明の「乾燥材料」は使い勝手の良い性状を示すことも予想される。実際に、適切な乾燥組成物は、凍結乾燥後のバイアルの側面から縮まない滑らかな白層または「ケーキ」で存在する。あまり適切でない「乾燥材料」は、「融解した」、「沸騰した」またはそうではない異常形状を示し、保管後にバイアルの側面から縮む。
【０１５１】
「乾燥材料」は、乾燥粉末形状で得ることができる。例えば、凍結乾燥から生じたケーキを粉末形状に粉砕することができる。したがって、本発明の固体の「乾燥材料」は、自由流動性粒子の形状をとってもよい。固体組成物は、典型的には、密封されたバイアル、アンプルまたはシリンジ中で粉末として提供される。代替として、固体マトリックスをパッチとして提供することができる。粉末は錠剤形状に圧縮されてもよい。
【０１５２】
凍結乾燥プロセス
上述のとおり、本発明の製剤、好ましくは水性製剤は、乾燥、好ましくは凍結乾燥に適する。好ましくは、凍結乾燥に付される製剤中に含まれるウイルス由来材料は、上記定義のとおり、精製され、または少なくとも部分的に精製される。
【０１５３】
一つの特別な態様によれば、本発明は、「乾燥材料」の製造方法に関し、前記方法は、（ｉ）少なくとも一つのウイルス由来材料、（ｉｉ）ポリビニルピロリドンおよびその誘導体の群から選択される少なくとも一つのポリマー、（ｉｉｉ）少なくとも一つの糖、（ｉｖ）少なくとも二つの異なるアミノ酸、（ｖ）少なくとも二つの薬学的に許容される塩であって、前記塩の少なくとも１つがリン酸塩である塩、ならびに任意に（ｖｉ）薬学的に許容される緩衝剤を含む水性製剤を凍結乾燥する工程を含む。
【０１５４】
凍結乾燥の方法は通常当業者に公知である（Day, J.およびMcLellan, M., Methods in Molecular Biology, Humana Press, (1995), vol. 38）。
【０１５５】
凍結乾燥の方法には、通常３つの主要な段階、すなわち凍結、第一乾燥および第二乾燥がある。凍結は、典型的には凍結乾燥機を使用して行われる。当該工程の間、生物材料を、単純な結晶生成物の場合におけるその共融点（Ｔｅｕ）またはアモルファス生成物の場合におけるガラス転移温度（Ｔｇ’）より下、すなわち材料の固相および液相が共存できる最も低い温度より下に冷却することが重要である。これは、続く第一乾燥段階において、融解よりもむしろ昇華がおこることを確かにする。
【０１５６】
第一乾燥の間、水の昇華を可能にするために十分な熱が供給されると同時に、真空度を適切にするにより圧力が制御される。少なくとも５０％、典型的には６０〜７０％の材料中の水がこの段階で昇華する。過剰な熱は生物材料を分解またはその構造を変化させる恐れがあるため、第一の乾燥は遅くしてもよい。低温の冷却室および／または冷却プレートは、再凝固によって水蒸気が吸着された表面を提供する。
【０１５７】
第二乾燥プロセスにおいて、さらに熱を適用することによって水和水を除去する。典型的には、さらなる乾燥を促進するために圧力も低下させる。凍結乾燥プロセスの終了後、真空は密封する前に窒素等の不活性ガスで解除することができ、または材料を真空下で密封することができる。
【０１５８】
本発明に関連して、ウイルスを損なうことなく凍結乾燥プロセスを速めるために、高温、すなわち５０℃までを第二乾燥工程に適用できることが驚くべきことに見いだされた。
【０１５９】
したがって、本発明は、より好ましくは第二乾燥工程が５０℃±５℃までの、より好ましくは３０℃〜４５℃の様々な温度で行われ、好ましくは４０℃±５℃で行われる、本発明の液状組成物の乾燥からなる凍結乾燥プロセスに関する。
【０１６０】
また、同じ力価パラメーターの乾燥生成物が、低い容積で、例えば、充填容積が３分の１のものとして製造でき、したがって、３分の１の濃度を増加させることができ、さらにポックスウイルス等のウイルスの分野の公知事実と比較して凍結乾燥サイクルの時間を減少させることができるに留意すべきである。
【０１６１】
再構成材料
本発明はさらに再構成材料に関する。「再構成材料」（再構成製剤、再構成組成物、再構成生成物、再構成ワクチン、再構成ウイルス由来材料含有ワクチンを含む）は、適切な量の薬学的に許容される溶媒の添加によって再構成された「乾燥材料」（乾燥製剤、乾燥組成物、乾燥生成物、乾燥ワクチン、乾燥ウイルス由来材料含有ワクチンを含む）に相当する。特別な態様によれば、薬学的に許容される溶媒は、注射用水（ＷＦＩ）、生理学的血清またはＮａＣｌ溶液等の生理食塩水からなる群から選択される。
【０１６２】
本発明の製剤の場合、含有される追加の塩、より好ましくはＮａＣｌ等の一価の塩は、より具体的には、必要に応じて再構成材料の浸透圧の調整のために供される。より正確には、本発明の再構成材料の浸透圧は、注射用途に適応しなければならず、すなわち２８０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜９００ｍＯｓｍ／ｋｇ、より具体的には２８０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜６００ｍＯｓｍ／ｋｇ、より好ましくは２８０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜３５０ｍＯｓｍ／ｋｇを含む。
【０１６３】
ウイルス力価
乾燥プロセス、より具体的には凍結乾燥プロセスの主要な欠点の一つは、それらが不安定で、保管中に増加できるウイルスにおいてウイルスの全力価が低下し得ることである。
【０１６４】
本発明の一つの目的は、安定な製剤、好ましくは水性製剤を提供することであった。本発明は、安定な、上記開示の乾燥製剤、好ましくは凍結乾燥製剤にさらに関する。より具体的には、前記安定性は、本発明に従って製剤化した場合に、本発明の製剤（水性または乾燥形状を含む）に含有されるウイルス由来材料または生成物が、生物学的に活性で、その生物活性を維持する（すなわち、ウイルス由来材料、例えばポックスウイルスが感染性を保持する）ことを意味する。本発明によれば、本発明に従って製剤化した場合、所定の時点におけるウイルス由来材料の生物活性が、製剤を製造した時点で示した生物活性の約１０％以内（アッセイのエラー内）であるならば、ウイルス由来材料はその生物活性を維持している。ウイルスの場合においては、製剤のウイルス力価が最初の力価の１ｌｏｇ以内である場合、生物活性が維持されていると考えることができる。具体的な態様によれば、培養温度＋５℃±３℃で、少なくとも６０日間の（例えば、９０日または数か月もしくは数年のようにさらに長く）ウイルス力価の全低下が０．７ｌｏｇ未満、好ましくは０．５ｌｏｇ未満、より好ましくは０．４ｌｏｇ未満、さらにより好ましくは０．３ｌｏｇ未満である場合、本発明のウイルス由来材料含有製剤は安定である。
【０１６５】
本発明の「ウイルス力価の全低下」は、乾燥工程後に測定されたウイルス力価および乾燥製剤の保管中に測定されたウイルス力価の累積低下として定義される（水で材料を再構成後、測定が行われる）。
【０１６６】
「乾燥工程後のウイルス力価の低下」は、製剤が製造された時点と乾燥工程後の間のウイルス力価の低下に相当し、すなわち、そのような乾燥プロセスに起因するウイルス力価の低下である。以下の実験において、これは−１日と対比して０日で測定されたウイルス力価の低下に相当する（実施例の項参照）。
【０１６７】
「乾燥工程後のウイルス力価の低下」は、温度に関係なく、好ましくは０．３ｌｏｇ未満であり、より好ましくは０．２ｌｏｇ未満である。
【０１６８】
前記乾燥製剤の「保管中のウイルス力価の低下」は、乾燥工程後、所定の保管温度で「ｎ」日の所定の保管期間中のウイルス力価の低下に相当する。
【０１６９】
「保管中のウイルス力価の低下」は、好ましくは＋５℃±３℃、少なくとも６０日で０．４ｌｏｇ未満であり、より好ましくは＋５℃±３℃、少なくとも６０日（例えば、９０日またはそれより長く）で０．３ｌｏｇ未満である。
【０１７０】
代替法として、昇温して加速安定性試験を行うことによって、本発明の製剤の安定性評価を短くすることが可能である。実際に、そのような加速安定性試験は、安定性データの実時間、すなわち、通常＋５℃±３℃で１〜３年を待つことなく（対して、例えば３７±５℃で約１週間、および４５±５℃で約３〜５日）、低温での結果を予想できるようにする。この目的のために、異なる数学的モデルが技術水準に記載されており、低温での結果を推定するために使用することができる。これらのモデルの一つは、周知の原理であるアレニウスの原理に基づく多変数モデルであって、以下に示す：
【０１７１】
【数１】
0006466332.tif 000002
【０１７２】
［式中、Ｃ０は最初の力価（ＰＦＵ／ｍＬ）であり、Ｔはケルビン温度であり、ｔは時間（日）であり、Ｃは時間ｔに対応する力価（ＰＦＵ／ｍＬ）であり、β０、β１およびβ２は当該モデルのパラメーター（変更可能で、当該モデルの具体的なデータに依存する）である］。
【０１７３】
通常、加速安定性試験は３７±５℃で約１週間行われる（世界保健機関の推奨）。本ケースにおいては、このような加速試験を４５±５℃で異なる期間行った（実施例の項参照）。
【０１７４】
本明細書で使用される「室温」（ＲＴ）は、約２０℃〜約２５℃の間に含まれる温度に相当する。
【０１７５】
ポックスウイルスの力価を決定するために使用されるアッセイは、例えばプラークアッセイ法である（例えば、KaufmannおよびKabelitz, 2002, Methods in Microbiology, Vol.32：Immunology of Infection. Academic Press. ISBN0125215320参照）。このアッセイによる力価は１ｍＬ当たりのプラーク形成単位（ＰＦＵ／ｍＬ）として報告される。ウイルス力価、したがってウイルス力価の全低下を決定するための詳細な手順を実施例の項に示す。しかしながら、ウイルス力価を決定するための任意の代替手順も使用することができる。
【０１７６】
本発明のウイルス由来材料を含む製剤または再構成材料は、それを必要とする患者または動物に、より好ましくは治療的または予防的な使用のためのワクチンとして投与されてもよい。
【０１７７】
他の態様によれば、本発明は、ワクチンとしての使用のための、上記で定義したウイルス由来材料を含む製剤または再構成材料に関する。これは異なる経路によって投与されてもよく、例えば、静脈内、腫瘍内、筋肉内、皮内、皮下または腹腔内の経路であってよい。ポックスウイルスを含有するこのような製剤、特に水性製剤をどのようにして適切に投与できるかは、施術者の技能の範囲内である。投与は単回投与としてまたは所定の時間間隔の後一度もしくは複数回行ってもよい。適切な投与経路および用量は、各種パラメーター、例えば、個体、治療される疾患、または導入される目的遺伝子の作用によって変化する。
【０１７８】
本発明は、上記で定義したウイルス由来材料を含む製剤または再構成材料を、それを必要とする宿主に投与する方法にも関し、乾燥生成物を、生理学的に許容される溶媒、好ましくは水、ＰＰＩ、ＷＦＩ、生理学的血清またはＮａＣｌ溶液等の生理食塩水の中で再構成し、次いで、それを必要とする前記宿主に投与することを特徴とする。
【０１７９】
本発明は、疾患、より好ましくは、癌、感染性疾患および／または自己免疫疾患の中から選択される病態の治療および／または予防のための、上記で定義したウイルス由来材料を含む製剤または再構成材料にも関する。
【０１８０】
本明細書で使用される「癌」としては、肺癌（例えば、小細胞肺癌および非小細胞肺癌）、気管支癌、食道癌、咽頭癌、頭頸部癌（例えば、喉頭癌、口唇癌、鼻腔および副鼻腔癌ならびに咽頭癌）、口腔癌（例えば、舌癌）、胃癌（gastric cancer）（例えば、胃癌（stomach cancer））、腸癌、消化管癌、結腸癌、直腸癌、大腸癌、肛門癌、肝臓癌、膵臓癌、尿路癌、膀胱癌、甲状腺癌、腎臓癌、上皮性悪性腫瘍、腺癌、肝臓癌、肝細胞癌（ＨＣＣ）もしくは遠隔転移を有する大腸癌（ｍＣＲＣ）、皮膚癌（例えば、黒色腫）、眼癌（例えば、網膜芽細胞腫）、脳腫瘍（例えば、神経膠腫、髄芽腫および大脳星細胞腫）、中枢神経系の癌、リンパ腫（例えば、皮膚Ｂ細胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫、ホジキン症候群および非ホジキンリンパ腫）、骨肉腫、白血病、乳癌、生殖管癌、子宮頸癌（例えば、子宮頚部上皮内腫瘍）、子宮癌（例えば、子宮内膜癌）、卵巣癌、膣癌、外陰癌、前立腺癌、精巣癌が挙げられるが、これらに限定されない。「癌」は、ウイルスが誘発する腫瘍も示し、パピローマウイルス誘発癌、ヘルペスウイルス誘発腫瘍、ＥＢＶ誘発Ｂ細胞性リンパ腫、Ｂ型肝炎誘発腫瘍、ＨＴＬＶ−１誘発リンパ腫およびＨＴＬＶ−２誘発リンパ腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８１】
癌の場合において、本発明の組成物のこのような投与は、さらに、最初に行われる化学療法と関連していてもよい。
【０１８２】
本明細書で使用される「感染性疾患」は、感染性微生物に起因する任意の疾患を示す。感染性微生物としては、ウイルス（例えば、一本鎖ＲＮＡウイルス、一本鎖ＤＮＡウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ａ型、Ｂ型およびＣ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）またはヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ））、寄生生物（例えば、マラリア原虫種、リーシュマニア種、住血吸虫種またトリパノソーマ種等の原生動物および後生動物の病原体）、細菌（例えば、マイコバクテリウム属、特に結核菌、サルモネラ菌、連鎖球菌、大腸菌またはブドウ球菌）、真菌類（例えば、カンジダ種またはアスペルギルス種）、ニューモシスティス・カリニおよびプリオンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８３】
本明細書で使用される「自己免疫疾患」は、二つの一般的なタイプ：「全身性自己免疫疾患」（すなわち多くの臓器または組織を損なう疾患）および「局所性自己免疫疾患」（すなわち単一の臓器または組織のみを損なう疾患）を示す。しかしながら、「局所性自己免疫疾患」の作用は、他の体の臓器およびシステムに間接的に悪影響を与えることによって全身性となり得る。「全身性自己免疫疾患」としては、関節ならびにおそらくは肺および皮膚に影響を及ぼし得る関節リウマチ；皮膚、関節、腎臓、心臓、脳、赤血球ならびに他の組織および臓器に影響を及ぼし得る、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を含む狼瘡；皮膚、腸および肺に影響を及ぼし得る強皮症；唾液腺、涙腺および関節に影響を及ぼし得るシェーグレン症候群；肺および腎臓に影響を及ぼし得るグッドパスチャー症候群；静脈洞、肺および腎臓に影響を及ぼし得るウェゲナー肉芽腫症；大きな筋肉群に影響を及ぼし得るリウマチ性多発筋痛；ならびに頭頸部の動脈に影響を及ぼし得る側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎が挙げられるが、これらに限定されない。「局所性自己免疫疾患」としては、膵島に影響を及ぼすＩ型糖尿病；甲状腺に影響を及ぼす、橋本病およびバセドウ病；消化管に影響を及ぼす、セリアック病、クローン病および潰瘍性大腸炎；中枢神経系に影響を及ぼす、多発性硬化症（ＭＳ）およびギラン・バレー症候群；副腎に影響を及ぼすアジソン病；肝臓に影響を及ぼす、原発性硬化性胆管炎、硬化性胆管炎、および自己免疫性肝炎；ならびに手指、足指、鼻、耳に影響を及ぼし得るレイノー症候群が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８４】
また、本発明は、さらに、上記で定義したウイルス由来材料を含む製剤または再構成材料を使用する上述の病態を治療または予防する方法に関する。このような方法は、より好ましくは、上記定義の凍結乾燥生成物を再構成すること、およびそれを必要とする宿主に相当する再構成材料を投与することを含む。
【０１８５】
また、本発明の他の態様は、上記で定義したウイルス由来材料を含む製剤または再構成材料を用いて、それを必要とするヒトを含む動物へのワクチン接種方法に関する。
【０１８６】
必要に応じて、本発明の組成物は、さらに、当業者に周知の従来のワクチン賦形剤とともに製剤化されてもよい。
【０１８７】
本発明を例示的に説明してきたが、使用されている用語は限定ではなく、説明した用語の性質であることを意図していることが理解されるべきである。明らかに、上記教示の観点から本発明の多くの改変および変形が可能である。したがって、添付の特許請求の範囲内において、本発明は、本明細書に具体的に記載されているものとは異なる方法で実施することができることを理解されるべきである。
【０１８８】
上述の特許、公表文献およびデーターベースエントリーのすべての開示は、個々の特許、公表文献またはエントリーのそれぞれが具体的かつ個別的に参照として組み込まれることが示されるのと同じ程度まで、それらの全体が参照として本明細書に具体的に組み込まれる。
【０１８９】
特に定めない限り、以下の実施例を達成するために使用されるすべての材料は市販品が利用できる。
【実施例】
【０１９０】
材料
Ｌ−アルギニン塩酸塩粉末（Ｊ．Ｔ  ＢＡＣＫＥＲ−ＳＩＧＭＡ）；
ＳＶＦ（ＰＡＡ）；
ＴＲＩＳ＝トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン粉末（Ｊ．Ｔ  ＢＡＣＫＥＲ）；
塩酸（ＨＣｌ）１Ｍ（ＭＥＲＣＫ）；
水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）１Ｎ（ＶＷＲ）；
スクロース粉末（ＭＥＲＣＫ）；
塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）粉末（ＭＥＲＣＫ）；
ＰＶＰ２５粉末（ＭＥＲＣＫ）；
Ｌ−グルタミン酸一ナトリウム塩（ＭＥＲＣＫ）；
リン酸水素二ナトリウム無水粉末（ＭＥＲＣＫ）；
リン酸二水素カリウム無水粉末（ＭＥＲＣＫ）；
注射用水（ＣＯＯＰＥＲ）；
バイアル＝ＴｏｐＬｙｏ（登録商標）バイアル（ＳＣＨＯＴＴ）；
Ｓｔｏｐｐｅｒｓ（ＳＴＥＬＭＩ）；
ＤＡＢ＝３，３’−ジアミノベンジジン（ＳＩＧＭＡ）；
宿主細胞  ＢＨＫ−２１（ＡＴＣＣ、ＣＣＬ１０）；
抗ワクチン抗体（Ｍｅｒｉｄｉａｎ  Ｌｉｆｅ  ｓｃｉｅｎｃｅ）；
ペルオキシダーゼ結合抗ウサギ抗体（ＤＡＫＯ）；
ＭｉｌｌｉＱ水（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）；
ＰＢＳ（ＤＵＬＢＥＣＣＯ  ＳＩＧＭＡ）；
Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（ＳＩＧＭＡ）；
ＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ）
Ｃａｔｉｏｎｓ  １００Ｘ（１０ｇ／Ｌ酢酸マグネシウム４水和物（ＭＥＲＣＫ）および１０ｇ／Ｌ塩化カルシウム二水和物（ＪＴ  ＢＡＣＫＥＲ））
【０１９１】
以下の表において、「−」が示されている場合、相当する成分が相当する組成物中に存在しないことを意味することに留意すべきである。
【０１９２】
方法
凍結乾燥中および長期間保管中の本発明の製剤の安定性を評価するためのウイルス滴定方法を以下詳述する。
【０１９３】
ウイルス安定性における凍結乾燥プロセスの効果を評価するために、いくつかの乾燥サンプルを凍結乾燥後すぐに再構成し、滴定した（すなわち、以下の実施例における０日でのウイルス力価の低下）。
【０１９４】
凍結乾燥後、凍結乾燥プロセスに起因するウイルス力価の低下を含む保管中のウイルス力価の低下を評価する滴定のための再構成まで、異なる温度で（例えば、５℃および４５℃）、他の乾燥サンプルを保管した（すなわち、以下の実施例における、４日、７日、２８日、６０日および／または９０日でのウイルス力価の低下）。
【０１９５】
前記のとおり、本発明の目的は、０℃を超える温度、より好ましくは４℃〜２５℃、より好ましくは約４℃または５℃で長期間のウイルスの全力価の低下が制限された乾燥生成物を得ることである。安定性データの実時間（２〜８℃で１〜２年）を待つために多大な時間を必要としていたが、安定性試験は、典型的には、４５℃等に昇温して約３〜５日行ってもよく、それらの結果はアレニウスの式を用いて低温で予想できるものと相関した。
【０１９６】
凍結乾燥前の製剤および再構成組成物のウイルス滴定に使用される手順は、プラークアッセイ法を使用して、ＢＨＫ−２１細胞で行った。そのような方法において、プラーク形成単位（ｐｆｕ／ｍＬ）の数をサンプル中で決定する。固定化された細胞単層内でウイルスが細胞に感染する時にウイルスプラークが形成される（Kaufmann and Kabelitz, 2002, Methods in Microbiology Vol.32：Immunology of Infection. Academic Press. ISBN0125215320）。以下に例示する本発明の製剤それぞれで行われた具体的な工程を以下の「実施例」の項において詳述する。
【０１９７】
実施例１：凍結乾燥されるポックスウイルス含有液状製剤の製造
以下で参照される液状製剤Ｉ〜Ｖを以下の工程に従って製造した。これらの製剤はＭＶＡ−由来生成物を含む。より正確には、製剤Ｉ〜ＩＩＩはＴＧ４００１を含み、製剤ＩＶおよびＶはＴＧ４０４０を含む。
【０１９８】
ａ）ＴＧ４００１およびＴＧ４０４０を、最初、溶液Ａ１および溶液Ａ２中でそれぞれ、凍結状態で維持した。溶液Ａ１（ＴＧ４００１含有）およびＡ２（ＴＧ４０４０含有）それぞれの含有量を以下の表１に詳述する。
【０１９９】
【表１】
0006466332.tif 000003
【０２００】
必要に応じて、溶液Ａ１およびＡ２は、当業者に周知の方法に従ってさらに希釈することができる。例えば、溶液Ａ１はさらに希釈することなく製剤Ｉ〜ＩＩＩを製造するために使用した。溶液Ａ２に関して、該溶液は、最終ウイルス力価６．７０Ｅ＋０７ｐｆｕ／ｍＬを得るために、上記記載の溶液Ａ２に相当する溶液Ａ’２（ＴＧ４０４０を含有しない）で希釈された。
【０２０１】
次いで、得られたウイルス懸濁液を簡単に撹拌することによって均質化した。
【０２０２】
ｂ）次いで、１７０μｌの以下の溶液Ｂを、３４０μｌの工程ａ）で得られたウイルス溶液Ａ１およびＡ２にそれぞれ添加した。
より正確には：
製剤Ｉ〜ＩＩＩを製造するために、１７０μｌの溶液Ｂ１〜Ｂ３を、３４０μＬのＴＧ４００１を含む工程ａ）のウイルス溶液Ａ１に添加した；ならびに
製剤ＩＶおよびＶを製造するために、１７０μｌの溶液Ｂ４およびＢ５を、３４０μＬのＴＧ４０４０を含む工程ａ）のウイルス溶液Ａ’２に添加した。
【０２０３】
次いで、混合物を簡単に撹拌することによって均質化した。
【０２０４】
溶液Ｂ１〜Ｂ５の詳細な組成を以下の表２に示す。
【０２０５】
【表２】
0006466332.tif 000004
【０２０６】
ｃ）凍結乾燥前の得られた液状組成物Ｉ〜Ｖ（５１０μＬ）を以下の表３に詳述する。
【０２０７】
【表３】
0006466332.tif 000005
【０２０８】
実施例２：相当する凍結乾燥製剤Ｉ〜Ｖの製造
以下の実施例において、すべての凍結乾燥は凍結乾燥機ＴＥＬＳＴＡＲ  ＬＹＯＢＥＴＡ  ２５で行った。
【０２０９】
凍結乾燥の手順は以下のとおりであった。
ａ）乾燥生成物Ｉ〜ＩＩＩの製造
実施例１で得た液状製剤Ｉ〜ＩＩＩをＴｏｐＬｙｏ（登録商標）バイアル（ＳＣＨＯＴＴ）に充填し、凍結乾燥プロセスを以下のとおり行った。
【０２１０】
【表４】
0006466332.tif 000006
【０２１１】
ｂ）乾燥生成物ＩＶおよびＶの製造
実施例１で得た液状製剤ＩＶおよびＶをＴｏｐＬｙｏ（登録商標）バイアル（ＳＣＨＯＴＴ）に充填し、凍結乾燥プロセスを以下のとおり行った。手順は製剤Ｉ〜ＩＩＩで行ったものと同様であるが、このケースにおいてはさらなる真空工程が行われた。
【０２１２】
【表５】
0006466332.tif 000007
【０２１３】
得られた乾燥生成物Ｉ〜Ｖは、適切な外観のケーキ、すなわち、凍結乾燥後のバイアルの側面から縮まない平滑な白色「ケーキ」を形成した。
【０２１４】
凍結乾燥後の前記生成物Ｉ〜Ｖそれぞれのウイルス力価を以下の表４に詳述する。
【０２１５】
【表６】
0006466332.tif 000008
【０２１６】
前記ケーキを粉砕し、次いで、上記のウイルス滴定方法に従ってウイルス力価を決定するために、得られた粉末を再構成した。
【０２１７】
実施例３：安定性試験：ウイルス力価の全低下の評価、すなわち凍結乾燥プロセスに起因する低下を含む、長期保管中の評価
３．ａ）乾燥生成物Ｉ〜Ｖの再構成
凍結乾燥後すぐに、最終容積６８０μＬにＷＦＩで調製した再構成材料（Ｒｅｃｏｎｓｔｉｔ．Ｃｏｍｐｏ．）Ｉ〜Ｖを以下の表５に詳述する（すなわち、ｔ０の保管期間なし）。
【０２１８】
【表７】
0006466332.tif 000009
【０２１９】
５℃または４５℃で所定の期間保管後の乾燥生成物Ｉ〜Ｖのウイルス力価を評価するために、乾燥生成物Ｉ〜Ｖは最初に再構成が必要であった。以下の実施例において、それらはＷＦＩで最終容積６８０μＬに再構成され、それぞれのウイルス力価を上記で詳述したプラークアッセイ方法に従って評価した。
【０２２０】
再構成材料Ｉ〜Ｖも本発明の一部である。
【０２２１】
３．ｂ）５℃における乾燥組成物Ｉ〜Ｖのウイルス力価の低下の評価
上記で示したように、各乾燥生成物のウイルス力価の累積低下（すなわち、凍結乾燥プロセスに起因する低下を含む長期保管中の低下）をＢＨＫ−２１細胞でプラークアッセイ方法を使用して評価した。
【０２２２】
組成物Ｉ〜Ｖそれぞれに関して行われた工程を以下に詳述する。
【０２２３】
１．細胞播種
宿主細胞ＢＨＫ−２１をＤＭＥＭ中単層で培養した。コンフルエントになった状態で、細胞を１０ｍｌのＰＢＳで洗浄し、次いでトリプシン処理した。トリプシンを除去後、次いで、細胞を３７℃で１０％ＳＦＶを含む１０ｍＬのＤＭＥＭで再懸濁した。
【０２２４】
次いで、細胞懸濁液を均質化し、マルチウェルプレート（プレートの６ウェルそれぞれが２ｍＬ）に分配した。次いで、前記プレートを３７℃、５％ＣＯ２で培養した。
【０２２５】
２．細胞感染
細胞播種の約１日後、ウイルス懸濁液の一定分量を工程１のＢＨＫ−２１細胞を含む各ウェルに添加した。必要に応じて、当業者に周知の方法に従って、最初に前記懸濁液をＰＢＳ、ｃａｔｉｏｎｓ  １００Ｘおよび１％ＳＶＦで連続的に希釈した。場合に応じて、工程１のＢＨＫ−２１細胞に添加されたウイルス懸濁液は、凍結乾燥前のウイルス含有液状組成物であるか、またはウイルス含有再構成組成物であった（すなわち、凍結乾燥後、異なる期間と温度における）。
【０２２６】
次いで培養培地を除去し、６０分間室温で撹拌後、２ｍＬの感染培地（ＤＭＥＭ＋５％ＳＶＦ）を各ウェルに分配した。次いで、プレートを３７℃、５％ＣＯ２で培養した。
【０２２７】
３．細胞固定
培地を除去後、細胞をＰＢＳ（ウェル当たり約１ｍＬ）で洗浄した。次いで、１ｍＬのメタノール／アセトン（５０／５０）溶液を添加し、得られた混合物を室温で穏やかに撹拌した。
【０２２８】
次いで、プレートを室温で乾燥させた。
【０２２９】
４．検出および力価決定
ウイルス力価の決定は、抗ワクチン抗体と、ペルオキシダーゼに結合する抗ウサギ抗体とを使用する周知のペルオキシダーゼ反応に従って行った。より正確には、反応前、抗ワクチン抗体をＰＢＳ＋２％ＳＶＦで１００倍希釈した。次いで５００μＬの前記抗体を各ウェルに添加し、３７℃で約３０分間培養し、次いで１ｍＬのＰＢＳ＋１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００で３回洗浄した。
【０２３０】
ペルオキシダーゼに結合する抗ウサギ抗体との反応を、反応前に前記抗体をＰＢＳ＋２％ＳＶＦで２００倍希釈する以外は同様にして行った。
【０２３１】
市販のＤＡＢ錠剤を１５ｍＬの０．０５ＭのＴＲＩＳに溶解することによってＤＡＢ溶液を調製した。次いで、得られた溶液を２μｍのろ過ユニットＮＡＬＧＥＮＥでろ過し、得られたろ過液を１５μＬの３０％Ｈ２Ｏ２水溶液に添加した。準備しておいた１ｍＬのＤＡＢ溶液を各ウェルに添加し、茶色の着色が現れるまで置いた。その後、着色した溶液を除去し、結果を視覚的に読み取った。
【０２３２】
次いで、以下の式を使用して感染力価をＰＦＵ／ｍＬで計算した。
【０２３３】
［ウイルスプラークの数の平均×４］×希釈倍数＝ＰＦＵ／ｍＬの数
【０２３４】
結果
５℃での安定性試験の結果を以下の表６に示す。
ＳＤは標準偏差である。
−１日のウイルス力価は、凍結乾燥前の液状組成物Ｉ〜Ｖのウイルス力価に相当する。
０日のウイルス力価は、凍結乾燥直後の乾燥組成物Ｉ〜Ｖのウイルス力価に相当する。凍結乾燥前の液状組成物Ｉ〜Ｖのウイルス力価との比較により凍結乾燥中のウイルス力価の低下が決定される。
２８日、６０日および９０日のウイルス力価は、それぞれ２８日、６０日および９０日保管後の乾燥組成物Ｉ〜Ｖのウイルス力価に相当する。凍結乾燥直後（すなわち、０日）の再構成組成物Ｉ〜Ｖウイルス力価との比較により、５℃保管中のウイルス力価の低下が決定される。
【０２３５】
【表８】
0006466332.tif 000010
【０２３６】
予想通り、乾燥生成物Ｉ〜Ｖは５℃で安定であった。実際に、少なくとも９０日、５℃で保管後、これらのウイルス力価の累積低下は０．６ｌｏｇを超えなかった。
【０２３７】
３．ｃ）４５℃における乾燥生成物Ｉ〜Ｖのウイルス力価の低下の評価
乾燥生成物Ｉ〜Ｖの安定性をさらに評価するために、４５℃で安定性試験を行った。上記で説明したように、このような昇温は加速的な方法におけるウイルスの分解を予測させる。
【０２３８】
各乾燥生成物Ｉ〜Ｖを、４５℃で、４日、２８日、６０日および９０日保管した。
【０２３９】
各乾燥生成物のウイルス力価の累積低下（すなわち、凍結乾燥プロセスに起因する低下を含む長期保管中の低下）は、上記記載の滴定方法（ＢＨＫ−２１細胞でのプラークアッセイ方法）を使用して評価した。
【０２４０】
結果
４５℃での加速安定性試験の結果を以下の表７に示す。
ＳＤ、−１日のウイルス力価および０日のウイルス力価は、上記表６と同様の意味を示す。
４日、７日、２８日および６０日のウイルス力価は、それぞれ４日、７日、２８日および６０日保管後の乾燥組成物Ｉ〜Ｖのウイルス力価に相当する。凍結乾燥直後（すなわち、０日）の再構成組成物Ｉ〜Ｖのウイルス力価との比較により４５℃保管中のウイルス力価の低下が決定される。
【０２４１】
【表９】
0006466332.tif 000011
【０２４２】
上記表７中、４５℃で、３日、３．５日および４日の組成物ＩＶおよびＶで示される結果は、下記記載の統計分析に従って見積もられたことに留意すべきであり、すなわちソフトウェアＳＡＳ９．２、および、指示１の以下の式で定義されるアレニウスの原理に基づく多変数モデルを用いた。
【０２４３】
【数２】
0006466332.tif 000012
【０２４４】
［式中：
Ｃ０は最初の力価（ＰＦＵ／ｍＬ）（凍結乾燥後）であり、
Ｔは温度（ケルビン温度）であり、
ｔは時間（日）であり、
Ｃは時間ｔに対応する力価（ＰＦＵ／ｍＬ）である］
【０２４５】
本実施例において一つの温度のみ、すなわち４５℃を使用しているので、式は単純化できる。
【０２４６】
【数３】
0006466332.tif 000013
【０２４７】
モデルのパラメーターを推定する場合、所定の時点の力価は以下の式により推定できる。
【０２４８】
【数４】
0006466332.tif 000014
【０２４９】
また、推定される低下は、次いで、次によって推定される。
【０２５０】
【数５】
0006466332.tif 000015
【０２５１】
組成物ＩＶに関して、調整されたＲ２は０．９９５に等しく、モデルがデータに正確に適合することを意味する。
【０２５２】
組成物ＩＶに関して、調整されたＲ２は０．９９９に等しく、モデルがデータに正確に適合することを意味する。
【０２５３】
したがって、上記記載の結果は、液状製剤Ｉ〜Ｖが凍結乾燥プロセス中に生じる熱の負荷後のウイルス安定性を維持し、さらにウイルスの安定性が長期安定性試験中にさらに維持されたことを示す。
【０２５４】
結論として、本発明の製剤において、凍結乾燥プロセス中（すなわち、凍結、凍結乾燥および融解工程に起因する）および０℃を超える温度、より具体的には約５℃での保管中の両方で、ウイルスは熱ストレスに起因する損傷から保護された。
【０２５５】
実施例４：リン酸塩を含有しないウイルス調製物の製剤
三つの参考サンプル（ＲＳ２〜ＲＳ４）をＴＧ４０４０の精製バッチから、および一つ（ＲＳ１）を精製ＴＧ４００１ウイルスバッチから生成した。参考サンプルは、ＲＳサンプルをリン酸塩を使用せずに製剤化した以外は、実施例１〜３に記載の組成物Ｉ〜Ｖと一緒に処理した。ＡｒｇおよびＮａＣｌの濃度もサンプルに応じて変更した。
【０２５６】
上記記載のように、３４０μＬのウイルス溶液を１７０μＬの安定化溶液と混合した。各参考生成物Ｓ１〜Ｓ４用の安定化溶液の詳細な組成を以下の表８に示す。
【０２５７】
【表１０】
0006466332.tif 000016
【０２５８】
凍結乾燥前の得られた液状の参考生成物ＲＳ１〜ＲＳ４を以下の表９に詳述する。
【０２５９】
【表１１】
0006466332.tif 000017
【０２６０】
次いで参考生成物ＲＳ１〜ＲＳ４を上記記載のように凍結乾燥し、ＷＦＩで最終容積６８０μＬに再構成した。
【０２６１】
凍結乾燥プロセス直後（すなわち、保管期間なし）に調製された再構成参考生成物ＲＳ１〜ＲＳ４（６８０μＬ）の詳細な組成を以下の表１０に詳述する。
【０２６２】
【表１２】
0006466332.tif 000018
【０２６３】
安定性試験を実施例３で記載したように５℃および４５℃で行った。この目的のために、各乾燥参考生成物ＲＳ１〜ＲＳ４を一定期間５℃または４５℃で保管し、ウイルス力価の累積低下（すなわち、凍結乾燥プロセスに起因する低下を含む長期保管中の低下）を上記記載の滴定方法を使用して各時点で評価した。
【０２６４】
５℃におけるＴＧ４００１およびＴＧ４０４０製剤の安定性の結果を以下の表１１に示す。
【０２６５】
【表１３】
0006466332.tif 000019
【０２６６】
４５℃におけるＴＧ４００１およびＴＧ４０４０製剤の安定性の結果を以下の表１２に示す。
【０２６７】
【表１４】
0006466332.tif 000020
【０２６８】
図１ならびに表６および１１に示したように、リン酸塩の存在はウイルス調製物の安定性に有益である。実際に、５℃での２８日、６０日または９０日後のＴＧ４００１の感染力価の累積低下は、リン酸緩衝剤が存在しないものと比較してリン酸緩衝剤の存在によって減少した（図１Ａ参照）。例えば、５℃、６０日後の累積低下は、リン酸塩不存在中で製剤化した参考サンプルＲＳ１の−０．２５ｌｏｇと比較すると、０．９４ｇ／Ｌのリン酸緩衝剤を含む組成物Ｉは−０．２５であり、１．８８ｇ／Ｌおよび３．７５ｇ／Ｌのリン酸緩衝剤を含む組成物ＩＩおよびＩＩＩは−０．０３ｌｏｇである。リン酸緩衝剤を含む製剤によって提供される安定性の向上は加速安定性試験においても認められ、リン酸塩存在中での４５℃、６０日後の力価の累積低下の結果は、リン酸塩不存在では−３ｌｏｇより大きかったのに対して（ＲＳ１は−３．２４ｌｏｇ）、約−２ｌｏｇ（組成物Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩはそれぞれ−２．４０ｌｏｇ、−２．３１ｌｏｇおよび−１．９８ｌｏｇ）であった。
【０２６９】
同じ傾向はＴＧ４０４０製剤でも認められる。例えば、ＲＳ４サンプルの＋５℃、９０日後に測定された累積低下は、製剤Ｖ（それぞれ−０．１７ｌｏｇおよび−０．０７ｌｏｇ）で認められたものよりさらに重要である。この効果は４５℃、６０日後でも認められる（それぞれ−２．０８ｌｏｇ対−１．８１ｌｏｇ）。
【０２７０】
実施例５：長期安定性
ＴＧ４０４０ウイルス調製物を上記のように製剤化した。さらに具体的には、二つの異なる濃度、高用量（約１．７０×１０８ｐｆｕ／ｍＬ）および低用量（約７．００×１０７ｐｆｕ）のそれぞれで試験し、ウイルス調製物を、１ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４および１０ｍＭのＴｒｉｓ、１０ｍＭのグルタミン酸Ｎａ塩、３．７５％のスクロース、５０ｍＭのＮａＣｌ、２．５％のＰＶＰ２５ｋＤａならびに３０ｍＭのＡｒｇを含有する製剤に製剤化した。１５０ｍＭのＡｒｇを有する製剤も低用量のＴＧ４０４０調製物とともに試験した。
【０２７１】
３種類のＴＧ４０４０製剤を上記のように処理し、準工業的プロセス（ＩＤＴ）に従って凍結乾燥した。凍結乾燥生成物を再構成し、ウイルス安定性を５℃で１年間評価した（凍結乾燥前、再構成直後（ｔ０）および５℃で２８日、９０日、１８０日、２７０日および３６５日にウイルス低下を評価した）。
【０２７２】
５℃で１年後に、−０．６０ｌｏｇより低い全ウイルス低下が各ＴＧ４０４０製剤で認められた（それぞれ、３０ｍＭのＡｒｇの高用量製剤で−０．３３ｌｏｇ；３０ｍＭのＡｒｇの低用量製剤で−０．４２ｌｏｇ；１５０ｍＭのＡｒｇの低用量製剤で−０．２４ｌｏｇ）。
【０２７３】
同時に、これらの結果は、リン酸塩の存在がウイルス調製物の安定性に有益であることを強調する。Ａｒｇはまた、凍結乾燥前のウイルス濃度が１０８ＰＦＵ／ｍＬよりも低い場合に特にウイルス安定性において役割を果たす。残存タンパク質を含有する生成物マトリックスを同様にして低ウイルス濃度に希釈し、これらのタンパク質は高濃度におけるウイルスの安定化に寄与した。Ａｒｇは、凍結乾燥操作中のマトリックス中における残存タンパク質の安定化の役割に置き換えられるだろう。
【０２７４】
上記明細書中において引用された全ての文献（例えば、特許、特許出願、公表文献）は、参照として本明細書に組み込まれる。本発明の各種の改変および変形は、本発明の範囲および精神から逸脱することなく当業者には明らかであろう。具体的に好ましい態様に関連して本発明を記載してきたが、特許請求の範囲に記載された本発明はそのような具体的な態様に不当に限定されるべきではないことが理解されるべきである。実際に、当業者に明らかである本発明を実施するために記載された方法の各種の改変は、以下の特許請求の範囲内にあることが意図される。
【図１Ａ】
0006466332.tif 000021
【図１Ｂ】
0006466332.tif 000022