(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ナロキソン及びナルトレキソンから成る群から選択される医薬的に活性な作用物質のホモ二量体化合物であって、ここで、２つの斯かる作用物質が、エチレン残基によって該作用物質のフェノール性ヒドロキシル基を介して共有結合によりエーテル結合されるホモ二量体化合物、或いは医薬的に許容され得るその塩又は溶媒和物。
【請求項２】
前記化合物が医薬的に許容され得る塩の形態である、請求項１に記載のホモ二量体化合物。
【請求項３】
医薬的に許容し得る担体又は賦形剤、及び請求項１又は２に記載の二量体化合物を含む医薬組成物。
【請求項４】
前記組成物が、経口錠剤又は持続放出経口錠剤として処方される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
以下の式：
【化２】
0006466970.tif 000011
を有するナロキソン二量体化合物、或いは医薬的に許容され得るその塩又は溶媒和物。
【請求項６】
以下の式：
【化３】
0006466970.tif 000012
を有するナルトレキソン二量体化合物、或いは医薬的に許容され得るその塩又は溶媒和物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１４年４月２８日に出願された米国仮出願第６１／９８５，２０７号；２０１５年１月９日に出願された同第６２／１０１，７６８号；及び２０１５年１月９日に出願された同第６２／１７６，８８３号に対して合衆国法典第３５巻第１１９条（ｅ）の下で優先権の利益を主張するものであり、それぞれの開示を参照によって本明細書中に援用する。
米国政府の研究開発支援によってなされた発明の権利に関する記載
【０００２】
該当なし
コンパクトディスクによって提出される「配列表」、表、又はコンピュータプログラム一覧付録に関する言及
【０００３】
該当なし
【背景技術】
【０００４】
ブプレノルフィン（式１）はテバインの半合成オピオイド誘導体である。それは、より高い投薬量においてオピオイド依存症を処置するのに使用され、より低い投薬量において非オピオイド抵抗性のヒトの中程度の急性疼痛を制御するのに使用され、及びさらに低い用量において中程度の慢性疼痛を制御するのに使用される混成アゴニスト−アンタゴニストオピオイド受容体モジュレーターである。ブプレノルフィンは消化管から吸収され、そして、全身に作用する。
【化１】
0006466970.tif 000002
【０００５】
ナロキソン（式２）は純粋なオピオイドアンタゴニストである。ナロキソンは、オピオイド誘発性の中枢神経系、呼吸器系、及び低血圧の抑制を回復させるのに使用される薬剤である。ナロキソンは経口摂取されるオピオイドと組み合わせられて、それらの乱用リスクを低減し得る。ナロキソンは、消化管で吸収され、全身に作用し、オピオイド禁断症状につながる可能性がある。
【化２】
0006466970.tif 000003
【０００６】
ナルトレキソン（式３）は、主にアルコール依存及びオピオイド依存の管理に使用されるオピオイドアンタゴニストである。それはその塩酸塩である塩酸ナルトレキソンとして一般的な形態で販売されている。これもまた、消化管で吸収されて、全身に作用する。ナロキソン同様、ナルトレキソンもオピオイド禁断症状を引き起こす可能性がある。
【化３】
0006466970.tif 000004
【０００７】
Ｏ−デスメチルベンラファキシンとしても知られているデスベンラファキシン（式４）はセロトニン−ノルエピネフリン再取り込み阻害剤クラスの抗うつ剤である。それは慢性特発性便秘及び胃不全麻痺の治療における使用が検討されているが、それが全身に作用し、且つ、そのＣＮＳ効果には性機能障害が含まれる可能性があるので、うつ病に罹患していないヒトにおいてそれらの目的でそれを使用することは禁忌である。
【化４】
0006466970.tif 000005
【０００８】
化学的にＮ−アセチル−ｐ−アミノフェノールと名付けられたアセトアミノフェン（式５）は合衆国で最も幅広く使用されている薬剤の１つである。それは、Ｔｙｌｅｎｏｌ（登録商標）という商品名で一般的に販売されている店頭販売の鎮痛及び解熱薬である。アセトアミノフェンは弱い鎮痛剤として分類される。それは、頭痛、並びに他の軽いうずき及び疼痛の緩和のために一般的に使用され、及び数多くの風邪及び流行性感冒の治療薬の主成分である。オピオイド鎮痛薬と併用し、アセトアミノフェンはまた、術後疼痛などのより激しい疼痛の管理にも使用されるので、進行癌患者に苦痛緩和ケアを提供することもできる。アセトアミノフェンのキノン代謝物には肝毒性がある。アセトアミノフェンの通常の投薬量が無害であると見なされる一方で、急性及び慢性の過剰摂取は共に死に到る可能性がある。
【化５】
0006466970.tif 000006
【０００９】
アルブテロール（式６）は、喘息や慢性閉塞性肺疾患などの病態における気管支痙攣の緩和に使用される短時間作用性β２−アドレナリン受容体アゴニストである。それは、気道の筋肉を弛緩させ、肺への気流を増大させる。アルブテロールはまた、運動誘発性気管支痙攣を予防するのにも使用される。それは、肝臓における高い初回通過代謝を回避するために吸入法によって通常投与される。その非常に多様な生物学的利用能はそのフェノール性ヒドロキシル基に起因した。
【化６】
0006466970.tif 000007
【００１０】
これらの作用物質に共通するのは、単一のフェノール性ヒドロキシル基を有している点である。斯かる基は、光学不安定性を付与するので、消化管において急速な全身循環以前の（presystemic）代謝又は初回通過代謝を受けて、硫酸エステル又はグルコウリニド（glucourinide）エステルをさまざまに形成する。ブプレノルフィン及びデスベンラファキシンもまた、酵素分解（ＣＹＰ３Ａ４及びＣＹＰ２Ａ６）を受ける。結果として起こる生物学的利用能の縮小を回避するために、ブプレノルフィンやナロキソンのような作用物質は最も一般的には注射又は舌下にて投与される。
下痢を伴う（Diarrhea-predominant）過敏性腸症候群（ＩＢＳ−Ｄ）
【００１１】
ＩＢＳ−Ｄは、下痢に加えて、内臓の痛覚過敏（結腸直腸の刺激からの増強された疼痛）、不快症状、腹部膨満及び腸内ガスの両方をしばしば伴う、非常に有病率の高い胃腸の機能障害である。
【００１２】
エルキサドリン（登録商標）（Forest Laboratories, Inc.）は、痛覚過敏をもたらす結腸の過感受性の軽減に対する明らかな効果は伴わないが、第ＩＩＩ相試験において便の粘度の改善及び腹痛の軽減に関する主要エンドポイントを達成したμオピオイド受容体アゴニスト及びδオピオイド受容体アゴニストである。そのうえ、第ＩＩ相治験において、潜在的な致死的疾患である膵炎に関するいくつかの症例が報告された。胆汁疾患の既知の既往歴がある患者を臨床試験登録から除外した後でさえ、膵炎の症例が報告された。通常、μアゴニストは、胆管から十二指腸内への胆汁及び膵液の流量を調整する筋肉弁であるオッディ括約筋に対して収縮効果を有する。μ受容体アゴニスト活性を有する薬剤がオッディ括約筋の収縮を導くことなく長期使用のために処方されることが非常に重要である。
【００１３】
従って、腸管運動を減少させ、それによって、下痢の発生を減少させる、鎮痛剤であって、膵炎を伴うことのない、そして、単に症状を処置するのではなく、ＩＢＳ−Ｄに関連している潜在的な過敏症、及び痛覚過敏に至る原因に対処するＩＢＳ−Ｄの長期治療法が長い間希求されている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１４】
我々は、活性物質残基がエチレンリンカーによって架橋されるような、それらのフェノール性ヒドロキシル基を介したＯ−アルキル化による医薬的作用物質の規定された基の二量体化が、それらの受容体薬理を保存する一方で、その活性単量体と比較して明確な利点をもたらすことを発見した。
【００１５】
単一のフェノール性ヒドロキシル基を特徴とするオピオイド及び他の医薬剤では、エチレンリンカーによる斯かる基を介した２つの斯かる作用物質の共有結合は、それらの親分子よりも全身循環以前の代謝に対して実質的に抵抗性であるホモ二量体をもたらす。エチレン連結は、非常に安定していて、その上、特定の場合には、他の異なった利点をもたらす。
【００１６】
オピオイド化合物ブプレノルフィン、ナロキソン、及びナルトレキソンの場合、対応する二量体は、変換すること、例えば、依存性薬剤へのキッチンケミストリー変換に対して抵抗性であり；かつ、ＧＩ管において実質的に非吸収なので、常用癖又はオピオイド離脱などの必然的な有害影響を伴う中枢神経系への侵入なしに、それらの末梢使用を可能にする。
【００１７】
デスベンラファキシンの二量体化は、血液脳関門を越える活性物質の通過を妨げ、該二量体は、ＣＮＳ侵入を必要とするうつ病治療においてもはや有効ではないが、その機能的リガンドは活性を維持し、且つ、腸管において局所的に作用し、これにより、性機能障害を含めたすべての中枢神経を介した有害事象を回避する。そのため、二量体化は、作用物質が胃不全麻痺及び慢性特発性便秘の治療において安全に利用されることを可能にする。デスベンラファキシン二量体が末梢セロトニン−ノルエピネフリン再取り込み阻害剤として機能すると予想される。デスベンラファキシンと異なって、該二量体は消化管において末梢にのみ作用すると予想される。セロトニンは生得的に、消化管に対して推進効果を有するので、該二量体は胃不全麻痺、慢性特発性便秘及び偽性腸閉塞（腸閉塞）などの腸の病態の処置に使用できるであろう。
【００１８】
本発明の、アセトアミノフェンを二量化する効果は、急性及び慢性使用において肝毒性である、親化合物のキノン代謝物の形成を予防することである。加えて、単量体のフェノール性ヒドロキシル基を妨げる二量体化は、脳血液関門を通過する移動し、それにより、痛覚消失を潜在的に促進する、活性物質のイオンの性質を低減する。
【００１９】
アルブテロールの二量体化は胃腸及び肝臓の代謝に対する抵抗性を高め、喘息や慢性閉塞性肺疾患を含めた様々な肺の病態において起こる気管支痙攣の治療のために経口摂取されたときの薬剤の生物学的利用能を増強する。
【００２０】
少なくともモルフィナン化合物の場合において、及び現在まで、従来の考えでは、例えばプロドラッグ活性の探索において活性物質を誘導体化するとき、受容体結合性が悪影響を受けないように、フェノール性ヒドロキシル基は避けることになっていた。驚いたことに、本発明の化合物は、対応する単量体のフェノール性ヒドロキシル基にかかわる誘導体化にもかかわらず、それらの特徴的な活性を保持していると考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１はブプレノルフィン二量体ＨＣｌ塩への合成経路を提供する。
【図２】図２はナロキソン二量体ＨＣｌ塩への合成経路を提供する。
【図３】図３はナルトレキソン二量体ＨＣｌ塩への合成経路を提供する。
【図４】図４はデスベンラファキシン二量体ＨＣｌ塩への合成経路を提供する。
【図５】図５はアセトアミノフェン二量体への合成経路を提供する。
【図６】図６はアルブテロール二量体への合成経路を提供する。図６では、ＤＨＰはジヒドロピランであり、ｔ−ＢｕＮＨ２はｔｅｒｔ−ブチルアミンであり、ＴＢＳＣＩはｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロライドであり；ＬＡＨは水素化アルミニウムリチウムであり；（Ｂｏｃ）２Ｏは二炭酸ｔｅｒｔ−ブチルであり；及びＡｃＯＨは酢酸である。
【図７】図７は、補因子の存在下及び非存在下でＣＹＰ酵素に晒されたときのブプレノルフィン二量体の安定性を例証する棒グラフを提供する。
【図８】図８は、それぞれ室温及び指示期間にわたる１４０°Ｆにて水性条件、並びに酸性及び塩基性条件に対するブプレノルフィン二量体の安定性を示す棒グラフを提供する。
【図９】図９は、ブプレノルフィン二量体受容体結合実験−μ受容体の結果を提供する。
【図１０】図１０は、ブプレノルフィン二量体受容体結合実験−κ受容体の結果を提供する。
【図１１】図１１は、ブプレノルフィン二量体に関するμアゴニスト機能アッセイの結果を提供する。
【図１２】図１２は、ブプレノルフィン二量体に関するμアンタゴニスト機能アッセイの結果を提供する。
【図１３】図１３は、ブプレノルフィン二量体の経口及びＩＶ生物学的利用能の結果を提供する。
【図１４】図１４は、実施例７の評価による雄ＣＤ−１マウスのストレス誘発性糞便排出量に関するグラフを提供する。
【図１５】図１５は、ブプレノルフィン二量体が用量依存様式で糞便排出量を減少させることを示す。
【図１６】図１６は、実施例７による炎症後モデルにおける消化管運動に対するブプレノルフィン二量体の効果を示す。
【図１７】図１７は、補因子の存在下及び非存在下でＣＹＰ酵素に晒されたときのナロキソン二量体塩の安定性を例証する棒グラフを提供する。
【図１８】図１８は、それぞれ室温及び指示期間にわたる１４０°Ｆにて水性条件、並びに酸性及び塩基性条件に対するナロキソン二量体塩の安定性を示す棒グラフを提供する。
【図１９】図１９は、ナロキソン二量体及びナロキソンのヒトμオピオイド受容体結合アッセイの結果を提供する。
【図２０】図２０は、マウスのロペラミド誘発性便秘の緩和におけるナロキソン二量体塩の効果を示す棒グラフを提供する。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明の詳細な説明
二量体の医薬組成物−通則
特定の実施形態において、二量体を含む医薬組成物が本明細書中に提供される。医薬組成物は医薬的に許容し得る担体をさらに含み得る。実例となる医薬的に許容し得る担体及び配合物を以下に記載する。
【００２３】
理解されるように、二量体の医薬的に許容され得る塩は、本明細書中で考察されたいずれか又はすべての組成物及び処置方法において二量体の代わりに又は二量体に加えて使用されてもよい。従って、特定の実施形態において、二量体の医薬的に許容され得る塩（すなわち、任意の二量体のあらゆる医薬的に許容され得る塩）は本発明の方法で使用される。これらの塩は、例えば、化合物の最終的な単離及び精製中に現場で、又は精製された化合物をその塩基不含形態で、好適な有機又は無機酸と別々に反応させ、そして、こうして形成された塩を単離することによって調製され得る。いくつかの実施形態において、二量体の医薬的に許容され得る塩は、酢酸、アルギン酸、アントラニル酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エテンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、フロ酸、ガラクツロン酸、グルコン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、グリコール酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、硝酸、パモ酸、パントテン酸、フェニル酢酸、リン酸、プロピオン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、スルファニル酸、硫酸、酒石酸、又はｐ−トルエンスルホン酸を使用して調製される。本明細書中に記載した方法で使用される医薬的に許容され得る塩の更なる説明に関しては、例えばS.M. Berge et al, "Pharmaceutical Salts," 1977, J. Pharm. Sci. 66: 1-19を参照のこと（その全体を参照により本明細書中に援用する）。
【００２４】
本発明の二量体は、非溶媒和形態、並びに水、エタノール及び同類のものなどの医薬的に許容される溶媒を用いた溶媒和形態で存在し得る。一般的に、溶媒和形態は本発明の目的のための非溶媒和形態と同等であると見なされる。具体的な実施形態において、二量体の溶媒和形態は水和物である。
【００２５】
一般的に、塩形成は結果として生じる治療薬の貯蔵期限を改善し得る。適当な塩の合成は、結晶性であり、酸化しにくい及び扱いやすい生成物を提供し得る。安定した結晶性の化合物を提供する様々な塩が調製され得る。いくつかの例は、塩酸塩、硫酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、マロン酸塩、フマル酸塩、及びアスコルビン酸塩である。
【００２６】
特定の具体的な実施形態において、斯かる医薬組成物は、経口錠剤又はカプセル剤、持続放出経口錠剤又はカプセル剤（硬ゼラチンカプセル剤、軟ゼラチンカプセル剤）、舌下錠又はフィルム、或いは持続放出舌下錠又はフィルムとして処方される。実例となる医薬的に許容し得る担体及び配合物を以下により詳細に記載する。
医薬組成物、投薬、及び投与経路
【００２７】
本明細書中に提供された二量体は、カプセル剤、マイクロカプセル剤、錠剤、顆粒剤、散剤、トローチ、丸薬、坐剤、経口懸濁剤、シロップ、経口ゲル、スプレー、溶液及び乳濁液などの従来の調製形態で経口的に対象に投与され得る。好適な配合物は、賦形剤（例えば、スクロース、デンプン、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、グルコース、セルロース、タルク、リン酸カルシウム又は炭酸カルシウム）、結合剤（例えば、セルロース、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ポリプロピルピロリドン、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、スクロース又はデンプン）、崩壊剤（例えば、デンプン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルデンプン、低置換ヒドロキシプロピルセルロース、重炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム又はクエン酸カルシウム）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、軽質無水ケイ酸、タルク又はラウリル硫酸ナトリウム）、着香料（例えば、クエン酸、メントール、グリシン又はオレンジパウダー）、保存料（例えば、安息香酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、メチルパラベン又はプロピルパラベン）、安定化剤（例えば、クエン酸、クエン酸ナトリウム又は酢酸）、懸濁化剤（例えば、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン又はステアリン酸アルミニウム）、分散剤（例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、希釈剤（例えば、水）、及びベースワックス（例えば、ココアバター、白色ワセリン又はポリエチレングリコール）などの従来の有機又は無機添加剤を使用した一般的に利用される方法によって調製され得る。
【実施例】
【００２８】
以下の実施例は、例示するために提供されるが、請求の範囲に記載されている発明を制限するものではない。
実施例１
ブプレノルフィン二量体ＨＣｌ塩
【００２９】
ブプレノルフィン二量体を図１に示したように合成した。
中間体２の合成：
【００３０】
ブプレノルフィンＨＣｌ塩（５．０ｇ、１０．６８ｍｍｏｌ、１当量）及び炭酸カリウム（４２．７３ｍｍｏｌ、４当量）を三つ首丸底フラスコに入れ、続いて無水ＤＭＳＯ（５０ｍｌ、１０倍量）を入れた。混合物を６０℃まで加熱し、そして、１,２−ジブロモエタン（３．７ｍＬ、４２．７２ｍｍｏｌ、４当量）をゆっくり加えた。反応混合物を、６０℃にて１６時間撹拌し、次に、室温に冷まし、水で希釈し、そしてジクロロメタンで抽出した。有機層を塩水で洗浄し、乾燥させ（無水Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、そして減圧下で濃縮して粘性液体を得た。未精製の生成物を０〜５％のＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して黄色がかった白色の泡沫状固形物として４．２ｇ（６９％）の中間体２を得た。
中間体３の合成：
【００３１】
ブプレノルフィンＨＣｌ塩（１．７４ｇ、３．７２ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（２．０ｇ、１４．８７ｍｍｏｌ、４当量）を三つ首丸底フラスコに入れ、続いて無水ＤＭＳＯ（１０ｍＬ）を入れた。混合物を６０℃まで加熱し、そして７ｍＬの無水ＤＭＳＯ中に溶解した中間体２（３ｇ、５．２２ｍｍｏｌ、１．４当量）を２時間にわたって滴下して加えた。反応混合物を、６０℃にて１６時間撹拌し、次に、室温に冷まし、水で希釈し、そしてジクロロメタンで抽出した。有機層を塩水で洗浄し、乾燥させ（無水Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、そして減圧下で濃縮して粘性液体を得た。未精製の生成物を０〜５％のＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して泡沫状固形物として二量体３を得た（２．８ｇ、７７％）。
二量体ＨＣｌ塩の合成：
【００３２】
５．５ｇ（５．７ｍｍｏｌ）のビ−コンジュゲート３を窒素下、室温にて５０ｍＬの酢酸エチル中で溶解した。エーテル中の２Ｎ ＨＣｌ、３．４３ｍＬ（６．９ｍｍｏｌ、１．２当量）を室温にて滴下して加えた。反応混合物を室温にて更に１時間撹拌し、濾過して固形物を得た。固形物を、１００ｍＬの酢酸エチルによって更に洗浄し、減圧下で乾燥させて白色の固形物（５．８ｇ、９８％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．７５（ｂｒ，２Ｈ）、６．８８（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ）、６．６７（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ）、４．６６（ｓ，２Ｈ）、４．２３−４．４２（ｍ，４Ｈ）、３．８４−３．９２（ｍ，２Ｈ）、３．４０（ｓ，６Ｈ）、３．２１−３．３５（ｍ，５Ｈ）、２．９８−３．２０（ｍ，７Ｈ）、２．６４−２．８５（ｍ，４Ｈ）、２．１２−２．２６（ｍ，４Ｈ）、１．７２−１．９４（ｍ，４Ｈ）、１．３８−１．５２（ｍ，４Ｈ）、１．２６（ｓ，６Ｈ）、０．９９（ｓ，２０Ｈ）、０．４８−０．７６（ｍ，１０Ｈ）、０．３２−０．４２（ｍ，４Ｈ）；ＭＳ：ｍ／ｚ９６２（Ｍ＋１）＋。
実施例２
インビトロアッセイ：ブプレノルフィン二量体の代謝安定性
【００３３】
ヒト肝ミクロソーム（例えば、１ｍｇタンパク質／ｍＬ）と二量体（例えば、１μΜ）のインキュベーションを、９６ウェルプレート形式で示された終濃度にて、補因子であるＮＡＤＰＨ産生系を伴って又はそれなしに、リン酸カリウム緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ７．４）、ＭｇＣｌ２（３ｍＭ）及びＥＤＴＡ（１ｍＭ、ｐＨ７．４）を含む０．２ｍＬのインキュベーション混合物（終量）中、３７±１℃にて、Tecan Liquid Handling System（Tecan）又は同等物を使用して実施した。ＮＡＤＰＨ産生系は、ＮＡＤＰ（１ｍＭ、ｐＨ７．４）、グルコース−６−ホスファート（５ｍＭ、ｐＨ７．４）及びグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ（１ユニット／ｍＬ）から成った。ブプレノルフィン二量体をメタノール水溶液（メタノール ０．５％のｖ／ｖ、又はそれ以下）中に溶解した。反応を補因子の添加によって典型的に開始し、４つの指定した時点（例えば、最長１２０分）において等容積の停止剤（例えば、アセトニトリル、内部標準を含めて０．２ｍＬ）の添加によって停止した。ゼロ時間インキュベーションは、基質の損失パーセントを決定するための１００％値としての役目を果たした。ゼロ時間サンプル（４連にてインキュベートした）を例外として、インキュベーションを三連で実施した。無補因子（ＮＡＤＰＨなし）インキュベーションをゼロ時間及び最長の時点において実施した。サンプルを遠心分離（例えば、１０℃にて９２０×ｇ、１０分間）にかけ、上清画分をＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって分析した。ミクロソーム及び正の対照としてのマーカー基質（例えば、基質損失を観察するためのデキストロメトルファン）と一緒に追加のインキュベーションを実施して、試験系が代謝的に適格であるか否かを判断した。
【００３４】
上記サンプルをＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法によって分析した。それぞれのインキュベーション溶液でのサンプルに関して分析を実施した。結果を実験のタイムコースにわたるピーク率の比較によって決定した（「親維持率（％）」として主に報告する）。
【００３５】
データを、LIMS（Galileo、Thermo Fisher Scientific Inc.及び報告ツール、Crystal Reports, SAPを含む）、スプレッドシートコンピュータプログラムMicrosoft Excel（Microsoft Corp.）又は同等物で計算した。変化しない親化合物の量を、LIMS、Analyst Instrument Control and Data Processing Software（AB SCIEX）又は同等物を使用して（各インキュベーションにおける大体の基質残存パーセントを決定するために）検体／内部標準（ＩＳ）ピーク面積比に基づいて推定した。
【００３６】
結果：結果を図７に示し、そしてそれは、ブプレノルフィン二量体がアッセイの継続期間中、ミクロソーム酵素の存在下で比較的安定していたことを示す。ミクロソーム酵素はブプレノルフィンなどの薬剤の代謝に主に関与する。
【００３７】
該二量体は、補因子の有無に関わらずミクロソームの存在下で安定していた。通常、酵素は３７℃のインキュベーション温度にて２時間以上安定していないので、アッセイを２時間で終了した。
実施例３
ブプレノルフィン二量体のストレス安定性アッセイ
【００３８】
この試験は、潜在的悪用者がふくらし粉、酸又は水中での簡単な加熱などの家庭用化学製品を使用して二量体を容易に切断できることを理解する助けとなった。ブプレノルフィン二量体の安定性を、未処理の水道水中、及び酸（１Ｎ ＨＣｌ）又は塩基（５％の重炭酸ナトリウム水溶液）の存在下で室温にて評価した。該二量体はそれらの条件下で比較的安定しており、これらの条件ではブプレノルフィンに分解しなかった。図８を参照のこと。
【００３９】
結果：図８に示したように、ブプレノルフィン二量体は安定した状態を維持し、３０分間もの間、極端なｐＨ条件下にて室温であっても高い温度であっても分解してブプレノルフィンを放出することはなかった。
【００４０】
これらの試験はまた、ＩＢＳ−Ｄに罹患している患者及び健常被験者の両者でその全長に沿ってｐＨ勾配を呈する消化管内での二量体の安定性を理解する助けともなった。ｐＨは、胃の壁細胞からの塩酸の分泌によるｐＨ１から結腸のｐＨ８までの範囲に及んだ。消化管の近位部が最も酸性であり、遠位端が最も酸性が弱い。
実施例４
ブプレノルフィン二量体のレセプター結合活性
【００４１】
この実施例では、以下の受容体：μ−オピオイド受容体；κ−オピオイド受容体；及びδ−オピオイド受容体、に対する本明細書中に提供したブプレノルフィン二量体の結合を例証する。
ヒトμオピオイド受容体結合アッセイ
【００４２】
ヒトμオピオイド受容体を発現するチャイニーズハムスター卵巣細胞（Perkin Elmer #RBHOMM 400UA）からの膜を、ガラス製の組織グラインダー、テフロン（登録商標）乳棒、及びSteadfast Stirrer（Fisher Scientific）を使用して、アッセイバッファー（５ｍＭのＭｇＣｌ２を含む５０ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ７．５）中で均質化した。膜の濃度を、アッセイプレートである９６ウェル丸底ポリプロピレンプレート内で３００μｇ／ｍＬに調整した。試験すべき化合物を、ＤＭＳＯ（Pierce）、１０ｍＭ中で可溶化し、次に、アッセイバッファーにより３．６ｎＭに希釈した。プレミックスプレートとして知られている第二の９６ウェル丸底ポリプロピレンプレートにおいて、６０μＬの６×化合物を６０μＬの３．６ｎＭ ３Ｈ−ナロキソンと組み合わせた。プレミックスプレートから、二連で、５０μＬを膜の入ったアッセイプレートに移した。アッセイプレートを室温にて２時間インキュベートした。ＧＦ／Ｃ ９６ウェルフィルタープレート（Perkin Elmer #6005174）を０．３％のポリエチレンイミンによって３０分間前処理した。アッセイプレートの内容物を、Packard Filtermate Harvesterを使用してフィルタープレートを通して濾過し、４℃にて０．９％の生理的食塩水で３回洗浄した。フィルタープレートを乾燥させ、下側を閉じ、そしてそれぞれのウェルに３０μＬのMicroscint20（Packard #6013621）を加えた。Topcount-NXT Microplate Scintillation Counter（Packard）を使用して、２．９〜３５ＫｅＶの範囲で放出されたエネルギーを計測した。結果を、最大結合量である阻害を受けていないウェルと比較した。非特異的結合を、５０μΜの非標識ナロキソンの存在下で測定した。ブプレノルフィン二量体の生物学的活性を図９に示す。
【００４３】
結果：図９のグラフは、該二量体がオピオイドμ受容体に対して有意な親和性を有することを示す。オピオイド、１０−８Ｍ（〜１０ｎｇ）におけるブプレノルフィン二量体のμ受容体親和性は、ブプレノルフィンのものと同様であった。
ヒトκオピオイド受容体結合アッセイ
【００４４】
ヒトκオピオイド受容体を発現するクローン化ＨＥＫ−２９３細胞（Amersham Biosciences UK Ltd. 6110558 200U）からの膜を、ガラス製の組織グラインダー、テフロン（登録商標）乳棒、及びSteadfast Stirrer（Fisher Scientific）を使用して、アッセイバッファー（５ｍＭのＭｇＣｌ２を含む５０ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ７．５）中で均質化した。膜の濃度を、アッセイプレートである９６ウェル丸底ポリプロピレンプレート内で３００μｇ／ｍＬに調整した。試験すべき化合物を、ＤＭＳＯ（Pierce）、１０ｍＭ中で可溶化し、次に、アッセイバッファーにより３．６ｎＭに希釈した。プレミックスプレートとして知られている第二の９６ウェル丸底ポリプロピレンプレートにおいて、６０μＬの６×化合物を６０μＬの３．６ｎＭ ３Ｈ−ジプレノルフィン（ＤＰＮ）と組み合わせた。プレミックスプレートから、二連で、５０μＬを膜の入ったアッセイプレートに移した。アッセイプレートを室温にて１８時間インキュベートした。ＧＦ／Ｃ ９６ウェルフィルタープレート（Perkin Elmer #6005174）を０．３％のポリエチレンイミンによって３０分間前処理した。アッセイプレートの内容物を、Packard Filtermate Harvesterを使用してフィルタープレートを通して濾過し、４℃にて０．９％の生理的食塩水で３回洗浄した。フィルタープレートを乾燥させ、下側を閉じ、そしてそれぞれのウェルに３０μＬのMicroscint20（Packard #6013621）を加えた。Topcount-NXT Microplate Scintillation Counter（Packard）を使用して、２．９〜３５ＫｅＶの範囲で放出されたエネルギーを計測した。結果を、最大結合量である阻害を受けていないウェルと比較した。非特異的結合を、５０μΜの非標識ナロキソンの存在下で測定した。ブプレノルフィン二量体の生物学的活性を図１０に示す。
【００４５】
結果：図１０には、ブプレノルフィン二量体のオピオイドκ受容体アゴニスト特性を記載する。ブプレノルフィンの単量体も二量体もκ受容体に対する親和性を失わなかった。質的には、ブプレノルフィンと同様に、オピオイドκ受容体へのブプレノルフィン二量体の結合は、濃度に従って増強される。約１μｇでは、該二量体のオピオイドκ受容体親和性はブプレノルフィンのものと同様であったと評価される。
ヒトδオピオイド受容体結合アッセイ
【００４６】
ヒトδサブタイプ２オピオイド受容体への三重水素化ナルトリンドールの結合を妨げる化合物の能力を試験するために該アッセイを設計した。ヒトδサブタイプ２オピオイド受容体を発現するチャイニーズハムスター卵巣細胞（Perkin Elmer#RBHODM 400UA）からの膜を、ガラス製の組織グラインダー、テフロン（登録商標）乳棒、及びSteadfast Stirrer（Fisher Scientific）を使用して、アッセイバッファー（５ｍＭのＭｇＣｌ２を含む５０ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ７．５）中で均質化した。膜の濃度を、アッセイプレートである９６ウェル丸底ポリプロピレンプレート内で１００μｇ／ｍＬに調整した。試験すべき化合物を、ＤＭＳＯ、１０ｍＭ中で可溶化し、次に、アッセイバッファーにより６×所望の終濃度に希釈した。リガンドである３Ｈ−ナルトリンドール（natrindole）（Perkin Elmer#NET-1065）もまた、アッセイバッファーで６ｎＭに希釈した。３Ｈ−ナルトリンドール（natrindole）のアリコート（５０μＬ）を、二連で、５０μＬを膜の入ったアッセイプレートに移した。アッセイプレートを室温にて３０分間インキュベートした。ＧＦ／Ｃ ９６ウェルフィルタープレート（Perkin Elmer #6005174）を０．３％のポリエチレンイミンによって３０分間前処理した。アッセイプレートの内容物を、Packard Filtermate Harvesterを使用してフィルタープレートを通して濾過し、４℃にて０．９％の生理的食塩水で３回洗浄した。フィルタープレートを乾燥させ、下側を閉じ、そしてそれぞれのウェルに３０μＬのMictoS=scint20（Packard #6013621）を加えた。Topcount-NXT Microplate Scintillation Counter（Packard）を使用して、２．９〜３５ＫｅＶの範囲で放出されたエネルギーを計測した。結果を、最大結合量である阻害剤を含んでいないウェルと比較する。非特異的結合を、１μΜの非標識ナルトリンドール（Natrindole）の存在下で測定した。ブプレノルフィン二量体の生物学的活性は７．６ｎＭ（ＩＣ５０）及び２．８７（Ｋｉ）である。μ及びκオピオイド受容体と比較した場合、該二量体はδ受容体に対して親和性が低かった。
実施例５−受容体刺激活性
μオピオイド受容体アゴニスト及びアンタゴニスト機能アッセイ：ヒトμ受容体発現チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ−ｈＭＯＲ）細胞膜における［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ結合アッセイ
【００４７】
この実施例は、μ−オピオイド受容体媒介性シグナル伝達を刺激する本明細書中に提供したブプレノルフィン二量体の能力を例証する。簡単に言えば、Receptor Biology Inc.（Baltimore Md）からＣＨＯ−ｈＭＯＲ細胞膜を購入した。約１０ｍｇ／ｍｌの膜タンパク質を１０ｍＭのＴＲＩＳ−ＨＣｌ ｐＨ７．２、２ｍＭのＥＤＴＡ、１０％のスクロース中に懸濁し、そして懸濁液を氷上に保持した。１ｍＬの膜を、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．６、５ｍＭのＭｇＣｌ２、１００ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＤＴＴ及び１ｍＭのＥＤＴＡを含んでいる１５ｍＬの冷たい結合アッセイバッファーに加えた。膜懸濁液をポリトロンで均質化し、そして３０００ｒｐｍにて１０分間遠心分離した。次に、上清を１８,０００ｒｐｍにて２０分間遠心分離した。ペレットを、ポリトロンを用いて１０ｍＬのアッセイバッファー中に再懸濁した。
【００４８】
膜を、アッセイバッファー中でコムギ胚芽凝集素を用いてコートしたＳＰＡビーズ（Amersham）と共に２５℃にて４５分間プレインキュベートした。次に、膜（１０μｇ／ｍｌ）と結合させたＳＰＡビーズ（５ｍｇ／ｍｌ）をアッセイバッファー中で０．５ｎＭの［３５Ｓ］ＧＴＰγＳと共にインキュベートした。基礎結合は添加した試験化合物の不存在下で起こる結合であり；この非調節結合を１００％とみなし、アゴニストで刺激すれば、結合はこの値を有意に超えるレベルまで上昇する。さまざまな濃度の受容体アゴニストＳＮＣ８０を使用して［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ結合を刺激した。基礎結合及び非特異的結合の両方をアゴニストの不存在下で試験した；非特異的結合の決定では１０μΜの非標識ＧＴＰγＳを伴った。
【００４９】
標準としてＤ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｏｒｎ−Ｔｈｒ−Ｐｅｎ−Ｔｈｒ−ＮＨ２（ＣＴＯＰ）を使用したアゴニスト刺激ＧＴＰγＳ結合を阻害する能力を評価することによってアンタゴニストとしての機能に関してブプレノルフィン二量体を試験した。放射能をPackard Top Countで定量化した。以下のパラメーターを計算する：
％刺激＝［（試験化合物のｃｐｍ−非特異的ｃｐｍ）／（基礎ｃｐｍ−非特異的ｃｐｍ）］＊１００
％阻害＝（１μΜのＳＮＣ８０による％刺激−試験化合物の存在下での１μΜのＳＮＣ８０による％刺激）＊１００／（１μΜのＳＮＣ８０による％刺激−１００）
【００５０】
GraphPad Prismを使用してＥＣ５０を計算した。試験した化合物に関するグラフを図１１及び１２に示す。
【００５１】
結果：図１１に示したデータは、ブプレノルフィン二量体が強力なμアゴニストであることを示す。該結果はまた、オピオイド、１０−６Ｍ（〜１μｇ）における二量体のμ受容体活性がブプレノルフィンのものと同様であることも示す。図１２のデータは、ブプレノルフィン二量体がμ−アンタゴニストとして機能しないことを示す。
実施例６
インビボ薬物動態試験
【００５２】
これらの動物薬物動態試験に使用した動物はＣＤ−１マウス（約３５グラム、１時点あたりｎ＝３）であった。試験した薬剤は、ブプレノルフィン及びブプレノルフィン二量体であった。１０ｍｇ／ｋｇをＩＶ及び経口強制飼養により投与した。血液を、０、３０分、並びに１、２、６及び２４時間の時点にて採取した。血漿を収集した後に、薬剤に関して血液サンプルを以下のようにＬＣ／ＭＳ／ＭＳによって分析した：
【００５３】
検量線を、いずれかの被験薬（１０〜２５０００ｎＭ）で添加したマウス血漿で作成した。血漿サンプル（５０μＬ）を、内部標準としてロサルタン又はブプレノルフィン−ｄ４を含んでいる３００μＬのアセトニトリルで抽出した。抽出物を１６０００×ｇで４℃にて５分間遠心分離した。上清（２５０μＬ）を新しいチューブに移し、Ｎ２下、４５℃にて１時間乾燥させた。サンプルを、１００μＬの３０％のアセトニトリルで再構成し、ボルテックス処理し、そして遠心分離した。上清（９０μＬ）をＬＣバイアルに移し、そして１０μＬをＬＣ／ＭＳに注入する。
【００５４】
結果：図１３は、１０ｍｇの経口及びＩＶ投与後の該二量体の血漿濃度プロライルを示す。グラフは、経口及びＩＶ投与後の血中濃度曲線下面積の比として計測される絶対生物学的利用能が該二量体に関して１％以下であったのに対して、単量体のものが約３０％であることを示す。
実施例７
インビボアッセイ：ストレス誘発性糞便排出量
【００５５】
試験に使用した動物は雄ＣＤ−１マウス、平均体重約３０〜３５ｇであり、１投与群当たり平均５匹のマウスであった。通例、マウスは、飼料及び水を自由に摂取できるポリカーボネートケージに１ケージあたり３匹を収容するコロニーハウスに収容した。
【００５６】
実験日に、試験化合物の胃内投与後にワイヤーメッシュ製の底を備えた幅２０ｃｍ×奥行２０ｃｍ×高さ１５ｃｍのケージ内に個別にマウスを収容する処置室に、マウスを移した。試験中、動物には水だけを自由摂取させた。ワイヤーメッシュ製の底を備えた背の高いケージが、マウスにストレスを誘発する新しい環境を作り出す。排出されたペレット数を１時間単位で測定した。結果を図１４に示す。
【００５７】
結果：図１４は、該二量体の経口投与がプラセボ（溶媒）に対してマウスの糞便排出量を有意に低減したことを示す。調査した用量は、マウス１ｋｇあたり２５〜５０ｍｇであった。結果は、異常な感受性が示唆される糞便排出量ゼロの動物を除外した場合でさえ変化しない。図１５は、用量に従ってマウスの糞便排出量が減少することを示し、そしてそれは本当の薬理効果を示す。
インビボアッセイ：炎症後に変化したＧＩ通過時間に対する効果
【００５８】
この試験を、炎症後の胃腸の過敏症に対する試験物質の効果を評価するために設計した。炎症後に変化したＧＩ通過を、新たに開封したマスタードのオイル（０．５％のエタノール中、９５％の純粋なイソチオシアン酸アリル）を注射することによって雄ＣＤ−１マウスで誘発した。炎症後のＧＩ管に対するストレスの効果を投薬の３〜４週間後に試験した。この時点で、ＧＩ管は過敏な状態にあった、すなわち、刺激に対して有意に大きい応答をした（痛覚過敏）。試験物質の効果を、経口投与（胃内強制飼養）及びワイヤーメッシュ製の底を備えたケージ（幅２０ｃｍ×奥行２０ｃｍ×高さ１５ｃｍ）内にそれらを収容することによって環境的ストレスに動物を晒した後に評価した。試験中、動物には水を自由摂取させた。ワイヤーメッシュ製の底を備えた背の高いケージが、マウスにストレスを誘発する新しい環境を作り出す。排出されたペレットの数を１時間〜２時間単位で測定した。図１６を参照のこと。
【００５９】
結果：図１６に示したように、１ｋｇあたり２５ｍｇのブプレノルフィン二量体は糞便排出量によって評価されるこのモデルにおいて消化管運動を有意に減少させる。グラフはまた、マスタードオイルで処理しなかったマウスの糞便ペレット排出量は一過性であり、１時間を超えて持続しないことも示す。マスタードオイル処理動物におけるペレット排泄物の増加は２時間の時点でさえ持続する。該二量体は、２時間の時点でさえ統計的に有意な結果を伴って消化管運動を阻害し続ける。
実施例８
ナロキソン及びナルトレキソン二量体ＨＣｌ塩
【００６０】
ナロキソン二量体ＨＣｌ塩を図２に示すように合成した。
中間体３の合成：
【００６１】
ナロキソン（５．０ｇ、１５．２７ｍｍｏｌ、１当量）及び炭酸カリウム（６．３２ｇ、４５．８ｍｍｏｌ、３当量）を５００ｍＬ容の三つ首丸底フラスコに入れ、続いて無水ＤＭＦ（５０ｍｌ、１０倍量）を入れた。混合物を６０℃まで加熱し、そして１,２−ジブロモエタン（６．５７ｍＬ、７６．３５ｍｍｏｌ、５当量）をシリンジを介して反応混合物に加えた。反応混合物を１１０℃にて１６時間撹拌した。ＴＬＣ分析は大部分が中間体３であることを示す。反応完了後に、混合物を水（１５０ｍＬ、３０倍量）で希釈し、酢酸エチル（１００ｍＬ、２０倍量）で抽出した。水層を酢酸エチル（１００ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機部分を、塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、そして減圧下で濃縮した。未精製の生成物を０〜５％のＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して粘性オイルとして中間体３を得た（１．２５ｇ）。
中間体４の合成：
【００６２】
中間体３（１．２５ｇ、２．８７ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１．５９ｇ、１１．５２ｍｍｏｌ、４当量）を、化合物１（１５ｍＬのＤＭＦ中、０．５７ｇ）の入った三つ首丸底フラスコ中に加えた。混合物を６０℃にて加熱し、そして、反応進行をＴＬＣによって観察した。混合物を室温に冷まし、水で希釈し、そして酢酸エチルで抽出した（５０ｍＬ×２）。組み合わせた有機部分を、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、そして減圧下で濃縮して、黄色のシロップを得た。未精製の生成物を、０−４％のＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、乳白色の固体としてナロキソン二量体４を得た（０．５５ｇ）。
ナロキソン二量体ＨＣｌ塩５の合成：
【００６３】
０．５５ｇ（０．８ｍｍｏｌ）のビ−コンジュゲート４を窒素下、室温にて１０ｍＬの酢酸エチル中に溶解した。０．８ｍｌ（３．２ｍｍｏｌ、４．０当量）の４Ｍ ＨＣｌ中のジオキサンを室温にて滴下して加えた。反応混合物を、室温にて更に１時間撹拌し、濾過して、固形物を得た。固形物を、２０ｍＬのＭＴＢＥで更に洗浄し、減圧下で乾燥させて、白色の固体を得た（０．５ｇ）。ＨＰＬＣ分析法は、２３５Ｎｍにて９８．２％の純度（ＡＵＣ）を示す。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：１．４１−１．６３（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２）、１．９８（ｄ，２Ｈ，ＣＨ２）、２．１４（ｄ，２Ｈ，ＣＨ２）、２．６３（ｄｔ，２Ｈ，ＣＨ２）、２．８８−３．１９（ｍ，６Ｈ，ＣＨ２）、３．２６−３．４４（ｍ，６Ｈ，ＣＨ２）、３．６２（ｄ，２Ｈ，ＣＨ）、３．７２−３．８４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、３．８５−３．９８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ）、４．４１（ｄｄ，４Ｈ，ＣＨ２）、５．０９（ｓ，２Ｈ，ＯＨ）、５．５８（ｄｄ，４Ｈ，ＣＨ２）、５．８２−６．０２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ）、６．７８（ｄ，２Ｈ，Ａｒ）、６．９０（ｄ，２Ｈ，Ａｒ）、９．４２（ｓ，２Ｈ，ＮＨＣｌ）。
【００６４】
ナルトレキソン二量体ＨＣｌ塩を、図３に示すように、ナロキソンをモル等量のナルトレキソンに置換して同様に合成する。
実施例９
ナロキソン二量体の代謝安定性
【００６５】
ナロキソン二量体の代謝安定性を、実施例３で考察したブプレノルフィン二量体実験に類似したプロトコールを使用して調査した。約１μΜの二量体を、ヒト肝ミクロソーム（１ｍｇタンパク質／ｍｌ）と共に最長１時間インキュベートした。インキュベーション媒質を、経時的ナロキソン形成に関してＬＣ／ＭＳ／ＭＳによってアッセイした。図１７に示すとおり、経時的なナロキソンの形成に関する証拠はなかった。
実施例１０
ナロキソン二量体のストレス安定性
【００６６】
ナロキソン二量体安定性を、未処理の水道水中、酸（１Ｎ ＨＣｌ）又は塩基（５％の重炭酸ナトリウム水溶液）の存在下で室温にて評価した。プロトコールは、実施例３に記載のブプレノルフィン二量体ストレス安定性実験と同様であった。図１８に示すように、二量体は、それらの条件下及び記載した条件下で比較的安定していて、感知できるほどナロキソンに分解されることはなかった。
実施例１１
ナロキソン二量体ＨＣｌ塩のμ受容体結合アッセイ
【００６７】
実験は、ラットオピエートμ受容体に対するトレーサーＤＡＭＧＯ（［チロシル−３,５−３Ｈ（Ｎ）］−［Ｄ−Ａｌａ２、Ｎ−Ｍｅ−Ｐｈｅ、Ｇｌｙ５−ｏｌ］−エンケファリンアセタート）のナロキソン（１０−１０、１０−９、１０−８、１０−７、１０−６、及び１０−５ｍｏｌ／Ｌ）及びナロキソン二量体（１０−１０、１０−９、１０−８、１０−７、１０−６、及び１０−５ｍｏｌ／Ｌ）による阻害を判断するために設計した。試験物質を２５℃にて６０分間インキュベートした。実験を、前もって［３Ｈ］Ｎ−ＤＡＭＧＯに結合させたヒトμオピオイド受容体を用いて実施した。ＤＡＭＧＯはヒトμオピオイド受容体に対して高い親和性を有するペプチドである。ナロキソン又はナロキソン二量体の濃度が上昇するに従って、それは、ＤＡＭＧＯ結合を受容体へと徐々に置換するので、それにより図１９に示すように曲線が下方に下がる。ナロキソン、ナロキソン二量体、及び他の同様のアンタゴニストの結合親和性を表１に提供する。
【表１】
0006466970.tif 000008
実施例１２
ナロキソン二量体ＨＣｌ塩に関する便秘アッセイ
【００６８】
ナロキソン二量体は、図２０に示すように、オピオイドμアゴニストであるロペラミドの便秘効果を覆した。該試験では、１群のマウスを軽度のストレスに晒し、そしてそれは、通常、１時間当たりの糞便ペレット排出数によって計測される下痢及び消化管運動を誘発する。ロペラミドで処理した群によって排出されるペレットの数は、対照（溶媒）動物によって１時間あたりに排出されるペレットより有意に少ない。この観察ではロペラミドの便秘効果を確認する。ロペラミドの効果がナロキソン二量体によって覆された群では、１時間あたりに排出されるペレットの数は、ロペラミド処理動物によって排出されるペレットより多く、且つ、３時間以降の対照動物のものに匹敵している。結果は、ナロキソン二量体がヒトμオピオイドアゴニストであるロペラミドの便秘効果を効果的に覆したことを実証する。
【００６９】
ナロキソン二量体は、概してオピオイド腸管疾患、特にオピオイド誘発便秘を処置するために吸収されることなく消化管受容体に作用すると予想されるので、ナロキソン、ナルトレキソン、ペグ化ナロキソン、及びメチルナルトレキソンを超える顕著な利益を提供する。ナロキソン二量体はまた、腹部膨満、胃運動性の低下、腹筋痙攣、及びＧＥＲＤ（ｇａｓｔｒｏｅｓｏｐｈａｇａｅｌの反射的な疾患）の処置などの他の治療用途も見つけることができた。
実施例１３
デスベンラファキシン二量体ＨＣｌ塩
【００７０】
該化合物を図４に示すように合成した。
【００７１】
化合物２の合成：ＤＭＦ中の化合物１（１当量）を、無水炭酸カリウム（３当量）の存在下、６０℃にて１５時間、１，２−ジブロムエタン（２当量）と反応させた。ＴＬＣ分析は出発化合物の完全な消費を示す。混合物を、ＭＴＢＥで希釈し、水で洗浄した。有機相を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。未精製の生成物をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、純粋な生成物２を得た。収率：６１％。
【００７２】
化合物３の合成：化合物２（１当量）を５℃にてメタノール（５当量）中のナトリウムメトキシドに加え、０〜５℃にて２時間撹拌した。シクロヘキサノン（２．５当量）を加え、そして混合物を０〜５℃にて４時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液によってクエンチし、そして濃縮した。得られた残渣を酢酸エチル及び水で溶解した。有機相を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。未精製の生成物をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、純粋な生成物３を得た。収率：７４％。
【００７３】
化合物４の合成：レーニーニッケル（３０ｗｔ％）を、酢酸（６倍量）中の化合物３（１当量）の混合物に加えた。混合物を水素（３０ｐｓｉ）でフラッシュし、次に、１４０〜１５０ｐｓｉの水素下、５５℃にて３時間撹拌し、次に、室温に冷ました。混合物をセライトのパッドを通して濾過し、そして濾液を濃縮した。残渣を水中に溶解し、ＭＴＢＥで洗浄し、すべての未反応材料を取り除いた。生成物を重炭酸塩溶液で中和した後に、酢酸エチル中に抽出した。酢酸エチル層を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。未精製の生成物をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、純粋な生成物４を得た。収率：８５％。
【００７４】
化合物５の合成：水中の４（１当量）の撹拌溶液に、３７〜４０％のホルムアルデヒド（１２当量）及びギ酸（６当量）を加えた。反応混合物を１００℃にて２２時間加熱し、次に、室温に冷ました。混合物をＭＴＢＥで洗浄し、次に、２０％のＮａＯＨ溶液を使用してｐＨ８〜９に塩基性化した。有機層を、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。未精製の生成物をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、純粋な生成物５を得た。生成物を酢酸エチル中で溶解し、そして酢酸エチル中の２Ｎ ＨＣｌを加えた。スラリーを３０分間撹拌し、濾過し、乾燥させて、生成物５を得た。収率：７９％。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：０．９６−１．５８（ｍ，２０Ｈ，ＣＨ２）、２．６２（ｓ，１２Ｈ，ＣＨ３）、２．９４（ｄｄ，２Ｈ，ＣＨ）、３．４５（ｄｄ，２Ｈ，ＣＨ）、３．６３（ｄｄ，２Ｈ，ＣＨ）、４．２２（ｓ，２Ｈ，ＯＨ）、４．３６（ｔ，４Ｈ，ＣＨ２）、６．７６（ｄ，４Ｈ，Ａｒ）、７．０６（ｄ，４Ｈ，Ａｒ）。
実施例１４
アセトアミノフェン二量体
【００７５】
該化合物を図５に示すように合成した。
中間体３の合成：
【００７６】
三つ首丸底フラスコ内でアセトアミノフェン（１当量）及び炭酸カリウム（４当量）を無水ＤＭＦ（１０倍量）中に溶解した。混合物を６０℃に加熱し、１，２−ジブロモエタン（４当量）を加えた。反応混合物を６０℃にて１６時間撹拌し、そしてＴＬＣ分析はアセトアミノフェンの消費を示した。混合物をＭＴＢＥで希釈し、１０℃に冷まし、そして水で洗浄した。有機相を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。未精製の生成物をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、純粋な生成物３を得た。収率：６５％。
化合物４の合成：
【００７７】
化合物３（１当量）、アセトアミノフェン（１．２当量）及び炭酸カリウム（３当量）を無水ＤＭＦ（１０倍量）中に溶解し、そして混合物を６０℃にて加熱し、１４時間撹拌した。ＴＬＣ分析は中間体３の消費を示した。混合物をＭＴＢＥで希釈し、１５〜２０℃にて水で洗浄した。有機相を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。未精製の生成物をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、純粋な生成物４を得た。収率：７８％。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：２．１４（ｓ，６Ｈ，ＣＨ３）、４．３８（ｔ，４Ｈ，ＣＨ２）、６．８０（ｄ，４Ｈ，Ａｒ）、７．４４（ｄ，４Ｈ，Ａｒ）、９．１５（ｓ，２Ｈ，ＮＨ）。
実施例１５
アルブテロール二量体
【００７８】
該化合物を図６に示すように合成した。
【００７９】
化合物２の合成：化合物１（１当量）を、ＤＣＭ中、１０ｍｏｌ％のＰＰＴＳの存在下で１．２当量のジヒドロピランと室温にて反応させた。反応をＴＬＣ分析で観察した。反応混合物を重炭酸塩溶液で洗浄し、有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。未精製の生成物２を、更なる精製なしで次の工程に用いた。収率：９５％。
【００８０】
化合物３の合成：ＤＣＭ中の化合物２（１当量）を、１．２当量の塩化アルミニウムで処理し、続いて、室温にてクロロアセチルクロリド（１．５当量）を滴下して加えた。反応混合物を室温にて１６時間撹拌し、そしてＴＬＣ分析は出発物質の完全な消費を示した。反応混合物を重炭酸塩溶液でクエンチした。有機相を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。未精製の生成物３をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、純粋な生成物３を得た。収率：７２％。
【００８１】
化合物４の合成：化合物３（１当量）を、室温にてＴＨＦ中の２当量のブチルアミンと反応させた。１５時間後のＴＬＣ分析では出発物質の完全な消費を示した。反応混合物を濃縮して、そして残渣をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、純粋な生成物４を得た。収率：９６％。
【００８２】
化合物５の合成：化合物４（１当量）をＴＨＦ中に溶解し、０℃に冷ました。ＴＨＦ（１当量）中の水素化アルミニウムリチウム（ＬＡＨ）を滴下して加え、そして混合物を室温にて３時間撹拌した。ＴＬＣ分析は出発物質の消費を示す。白色の沈殿物を形成するまで飽和硫酸ナトリウム水溶液を加えた。固形物を濾過し、そして濾液を減圧下で濃縮して、生成物５を得た。収率（７８％）。
【００８３】
化合物６の合成：ＤＣＭ中の化合物５（１当量）を、室温にて１．２当量のＢＯＣ無水物で処理し、続いて、飽和重炭酸ナトリウム液（２当量）で処理した。反応混合物を１５時間撹拌し、そしてＴＬＣ分析は出発化合物の完全な消費を示した。有機相を分離し、濃縮して、生成物６を得た。収率（９４％）。
【００８４】
化合物７の合成：ＤＣＭ中の化合物６（１当量）をイミダゾール（１．５当量）で処理し、続いて、ＴＢＤＭＳＣｌ（１．２当量）で処理した。反応混合物を室温にて１２時間撹拌し、そしてＴＬＣ分析は出発化合物の完全な消費を示した。水を反応混合物に加え、有機相を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。未精製の生成物をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、純粋な生成物７を得た。収率：８５％。
【００８５】
化合物８の合成：７：３の酢酸／水中の化合物７（１当量）を６０℃にて１０時間加熱した。ＴＬＣ分析は出発化合物の完全な消費を示した。混合物を濃縮し、ＭＴＢＥ中に溶解し、そして重炭酸塩溶液で洗浄した。有機相を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。未精製の生成物をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、純粋な生成物８を得た。収率：６８％。
【００８６】
化合物９の合成：ＤＭＳＯ中の化合物８（１当量）を、無水炭酸カリウム（３当量）の存在下、６０℃にて１５時間、１，２−ジブロムエタン（５当量）と反応させた。ＴＬＣ分析は出発化合物の完全な消費を示した。混合物をＭＴＢＥで希釈し、水で洗浄した。有機相を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。未精製の生成物をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、純粋な生成物９を得た。収率：６２％。
【００８７】
化合物１０の合成：ＤＭＳＯ中の化合物９（１当量）を、無水炭酸カリウム（２当量）の存在下、５０℃にて１５時間、化合物８（１．２当量）と反応させる。ＴＬＣ分析は出発化合物９の完全な消費を示した。混合物を、ＭＴＢＥで希釈し、水で洗浄した。有機相を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。未精製の生成物をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、純粋な生成物１０を得た。収率：７４％。
【００８８】
化合物１１の合成：ＭＴＢＥ中の化合物１０（１当量）を、室温にて１２時間、酢酸エチル（１０当量）中の２Ｎ ＨＣｌと反応させる。ＴＬＣ分析は固形物の沈殿を伴った出発化合物の完全な消費を示した。固形物を濾過し、酢酸エチルと共に粉砕し、生成物１１を得た。収率：８８％。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：１．０４（ｓ，１８Ｈ，ＣＨ３）、２．５７（ｄ，４Ｈ，ＣＨ２）、４．４２（ｔ，２Ｈ，ＣＨ）、４．４５（ｔ，４Ｈ，ＣＨ２）、４．４９（ｓ，４Ｈ，ＣＨ２）、４．６３（ｓ，６Ｈ，ＯＨ及びＮＨ）、６．７１（ｄ，２Ｈ，Ａｒ）、７．０１（ｄ，２Ｈ，Ａｒ）、７．２９（ｓ，２Ｈ，Ａｒ）。
実施例１６
実例となる医薬組成物
【００８９】
表２中の医薬組成物を本発明の二量体の経口錠剤のために使用できる。
【表２】
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実施例１７
実例となる用量
【００９０】
患者に投与されるべき本明細書中に提供した二量体の用量は、かなり幅広く変更できるので、医療関係者の判断対象となり得る。投薬量は、対象の年齢、体重及び医学的状態、並びに投与タイプによって適切に変更され得る。一実施形態において、１日ごとに１つの用量が投与される。どんな場合でも、投与される本明細書中に提供した二量体の量は、活性成分の溶解性、使用される処方及び投与経路といった要因に依存する。「治療的有効量」とは、我々は、統計的に有意の数の患者において容易に判断でき、且つ、有益な効果をもたらす用量を意味する。特定の実施形態において、患者は哺乳動物である。より具体的な実施形態において、患者はヒトである。特定の具体的な実施形態において、患者はイヌ、ネコ、又はウマなどの家畜哺乳類であり得る。
【００９１】
例えば、ＩＢＳ−Ｄ患者に好ましい投薬量は、経口投与のための単位容量中に約０．１５ｍｇ／ＩＢＳ−Ｄ患者の体重ｋｇ〜約７．２ｍｇ／ＩＢＳ−Ｄ患者の体重ｋｇ、より好ましくは約０．７ｍｇ／患者の体重ｋｇ〜約３．０ｍｇ／患者の体重ｋｇ、更により好ましくは約１．５ｍｇ／患者の体重ｋｇである。あるいは、約１０〜約５００ｍｇ、好ましくは約５０〜約２００ｍｇ、より好ましくは約１００ｍｇがＩＢＳ−Ｄ患者に投与される。
表３において、我々は、それら自体の適応症に関する単量体の投薬量と比較して、好ましい適応症に関する本発明による二量体の推定投薬量を提供する。これらの活性物質の範囲を拡大する際の二量体化の変形効果は表から明らかになる。
【表３】
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【００９２】
本明細書中に記載した実施例及び実施形態が説明の目的のみのものであり、その範囲内での様々な修飾又は変更が当業者に対して示唆され、そしてそれは本出願の要旨及び範囲内、並びに添付の請求項の範囲内に含まれるべきであることは、理解される。先の出願と本願との間に争いがある限り、あらゆる矛盾事項が本願に有利に解決されるべきである。本明細書中に引用したすべての刊行物及び特許は、あらゆる目的のためにその全体を参照によって本明細書中に援用する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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