(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウシ初乳をβ−ガラクトシダーゼと緩衝液中接触させる工程によりウシ初乳酵素処理物として得ることを特徴とする、当該ウシ初乳酵素処理物を含有する皮膚改善剤の製造方法。
【請求項２】
ウシ初乳酵素処理物を得るに際して、シアリダーゼと接触させる工程をさらに含む請求項１記載の皮膚改善剤の製造方法。
【請求項３】
１回の投与用として、０．０２μｇ〜４０ｍｇ／ｋｇの範囲の量のタンパク質を含むウシ初乳酵素処理物である請求項１または２記載の皮膚改善剤の製造方法。
【請求項４】
ウシ初乳酵素処理物が、消化管内から吸収させる剤形である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の皮膚改善剤の製造方法。
【請求項５】
皮膚改善が、皮膚の美白化、色素沈着抑制若しくは改善、角質除去若しくは角質ターンオーバー促進、老化防止、しわ抑制若しくは改善、保湿化、または再生である請求項１〜４のいずれか１項に記載の皮膚改善剤の製造方法。
【請求項６】
皮膚の色素沈着が、シミ、そばかす、肌のくすみ、老人性色素斑、ホクロ、母斑、およびダークサークルからなる群から選ばれる少なくも一つである請求項５記載の皮膚改善剤の製造方法。
【請求項７】
ウシ初乳をβ−ガラクトシダーゼと緩衝液中接触させる工程によりウシ初乳酵素処理物として得ることを特徴とする、当該ウシ初乳酵素処理物を含有する、皮膚改善のための飲食品または医薬品の製造方法。
【請求項８】
ウシ初乳酵素処理物を得るに際して、シアリダーゼと接触させる工程をさらに含む請求項７記載の飲食品または医薬品の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウシ初乳酵素処理物を含んでなる皮膚改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトの肌色は、メラニン色素を作るメラノサイト（ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ）の活動性、血管分布、皮膚の厚さ、またはカロチノイド、ビリルビンなどの色素含有の有無などの様々な要因によって決定される。中でも、チロシナーゼなどの酵素によってメラノサイトで生成されるメラニン（黒色の色素）の形成度合いは、肌色を決める最も重要な要因の一つである。皮膚に存在するメラニンは紫外線などから身体を保護する重要な機能を有するが、過剰に存在する場合、しみ、そばかす、ホクロなどの皮膚色素沈着を生じさせるのみならず、皮膚老化を促進し、皮膚癌を誘発する因子としても作用することが知られている。メラニンの過剰産生による皮膚色素沈着を治療または軽減するために、コウジ酸、アスコルビン酸、アルブチン、ハイドロキノン、グルタチオン、またはこれらの誘導体などの、皮膚美白効果を示す様々な物質が用いられてきたが（例えば、特許文献１）、効果面、安全性面、剤形化の容易性もしくは安定性などの面で、種々課題があった。
【０００３】
皮膚は光に直接露出することから紫外線に最も脆弱な部分である。紫外線に露出した皮膚はその度合いによっては焼けど、色素沈着、ＤＮＡ損傷、結合組織の変化、癌化といった生物学的反応を示すようになる。また、紫外線への繰り返し暴露は、皮膚の老化を早め、さらにこのような皮膚の老化は、しわの生成、色素沈着、結合組織の変異および表皮細胞の厚さの変化などを生じさせる。皮膚の結合組織は、主にコラーゲンとエラスチンとからなる。コラーゲンとエラスチンは皮膚に弾力を与えるものであるので、これらが弱くなると皮膚が損傷され易くなり老化する。前記コラーゲンの分解に関与する酵素がＭＭＰ（Ｍａｔｒｉｘ−Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ）である。皮膚老化が進むにつれ、ＭＭＰの発現が増加し、増加したＭＭＰが皮膚のコラーゲンを分解するようになる。このようなメカニズムが繰り返されると、皮膚のしわが生成し、早期の老化が進む。
【０００４】
皮膚組織が水分を保つためには、皮膚内の天然保湿因子（Ｎａｔｕｒａｌ−Ｍｏｉｓｔｕｒｉｎｇ−Ｆａｃｔｏｒ）が増加することが必要である。天然保湿因子の主な成分はアミノ酸であるので、その供給を確保することで、皮膚の保湿を保つことができる。
【０００５】
ヒト血清の酵素処理物（β−ガラクトシダーゼ、または、β−ガラクトシダーゼとシアリダーゼ）がマクロファージ活性化作用を有することは、特許文献２に記載がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特表平１１−５１０８２０号公報
【特許文献２】国際公開第２０１３／０３８９９７号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、ウシ初乳酵素処理物を含んでなる皮膚改善剤、それを含んでなる飲食品および医薬品を提供しようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、鋭意検討した結果、ウシ初乳を特定の酵素、すなわち、β−ガラクトシダーゼ、または、β−ガラクトシダーゼおよびシアリダーゼと接触させる工程を含んでなる製造方法により得られるウシ初乳酵素処理物が、皮膚改善剤として優れた効果を奏することを見出し、さらに検討を重ねて本発明を完成した。
【０００９】
すなわち、本発明は、
［１］ウシ初乳をβ−ガラクトシダーゼと接触させる工程を含んでなる製造方法により得られるウシ初乳酵素処理物を含んでなる皮膚改善剤、
［２］ウシ初乳酵素処理物の製造方法が、シアリダーゼと接触させる工程をさらに含む上記［１］記載の皮膚改善剤、
［３］１回の投与用として、０．０２μｇ〜４０ｍｇの範囲の量のタンパク質を含む上記［１］または［２］記載の皮膚改善剤、
［４］消化管内から吸収させる剤形である上記［１］〜［３］のいずれかに記載の皮膚改善剤、
［５］皮膚改善が、皮膚の美白化、色素沈着抑制若しくは改善、角質除去若しくは角質ターンオーバー促進、老化防止、しわ抑制若しくは改善、保湿化、または再生である上記［１］〜［４］のいずれかに記載の皮膚改善剤、
［６］皮膚の色素沈着が、シミ、そばかす、肌のくすみ、老人性色素斑、ホクロ、母斑、およびダークサークルからなる群から選ばれる少なくも一つである上記［５］記載の皮膚改善剤、
［７］皮膚改善のための飲食品であって、
上記［１］〜［６］のいずれかに記載の皮膚改善剤を含んでなる飲食品、
［８］皮膚改善のための医薬品であって、
上記［１］〜［６］のいずれかに記載の皮膚改善剤を含んでなる医薬品、
に関する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明に係るウシ初乳酵素処理物は、皮膚改善剤として優れた効果を奏するので、皮膚の美白化、色素沈着（例えば、シミ、そばかす、肌のくすみ、老人性色素斑、ホクロ、母斑、ダークサークル）の抑制若しくは改善、角質除去若しくは角質ターンオーバー促進、老化防止、しわ抑制若しくは改善、保湿化、または再生など、皮膚の諸症状の改善に有用である。したがって、該ウシ初乳酵素処理物を用いれば、これら皮膚の諸症状の改善のための飲食品、および、これら皮膚の諸症状の改善のための医薬品を提供することができる。
【００１１】
さらに、本発明に係るウシ初乳酵素処理物は、ウシ初乳をβ−ガラクトシダーゼ、または、β−ガラクトシダーゼおよびシアリダーゼで処理することによって調製できるため、簡便かつ低コストであるという利点を有する。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
＜ウシ初乳＞
本発明で使用するウシ初乳とは、子牛の分娩後、母牛が１０日目までに分泌する乳汁をいい、好ましくは７日目まで、より好ましくは５日目までに分泌する乳汁である。本発明において、ウシ初乳は、ホルスタイン種、黒毛和種などのウシの種類にかかわらず、いずれの種のものをも使用することができる。
【００１３】
＜酵素＞
本発明で使用するβ−ガラクトシダーゼは、特に限定なく、周知のいずれの種類のものも使用することができる。そのようなものとしては、例えば、大腸菌（Escherichia coli）由来のもの、ウシ肝臓（bovine liver）由来のものなどが挙げられる。市販されたものとしては、例えば、和光純薬工業（株）のカタログＮｏ．０７２−０４１４１、ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社のＧ１８７５などが挙げられる。本発明において、β−ガラクトシダーゼは、単独で用いてもよく、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００１４】
本発明で使用するシアリダーゼは、特に限定なく、周知のいずれの種類のものも使用することができる。そのようなものとしては、例えば、ウェルシュ菌（Clostridium perfringenes）由来のもの、レンサ球菌（Streptococcus 6646K）由来のもの、コレラ菌（Vibrio cholerae）由来のもの、アースロバクター・ウレアファシエンス（Arthrobacter ureafaciens）由来のものなどが挙げられる。市販されたものとしては、例えば、ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社の製品番号（Sigma Prod. Nos.）Ｎ２８７６、Ｎ２１３３、Ｎ２９０４、Ｎ３００１、Ｎ５６３１、生化学バイオビジネス社のコード番号（Code Number）１２００５２、ＢｉｏＬａｂｓ社のカタログ番号（Catalog#）Ｐ０７２０Ｌ、Ｐ０７２０Ｓなどが挙げられる。本発明において、シアリダーゼは、単独で用いてもよく、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００１５】
＜酵素処理＞
本発明において、ウシ初乳と、β−ガラクトシダーゼ若しくはシアリダーゼとの接触（酵素処理）は、それぞれ、十分な量の酵素を用いて十分な時間接触させることにより、それ以上実質的に酵素反応が進行しない程度まで行うのが好ましい。このような目的には、酵素の種類にもよるが、例えば、β−ガラクトシダーゼとして和光純薬工業（株）のカタログＮｏ．０７２−０４１４１を用いる場合、ウシ初乳１００μｌに対して、酵素を６５ｍＵ使用すれば十分である。また、例えば、シアリダーゼとしてＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社の製品番号（Ｎ２８７６）を用いる場合、ウシ初乳１００μｌに対して、酵素を６５ｍＵ使用すれば十分である。この場合の酵素処理の時間としては、３時間行えば十分である。
【００１６】
酵素処理は、任意の容器中で、これら酵素を、ウシ初乳に添加して実施することができるが、所望により、ウシ初乳中の総タンパク質濃度を調整するために、この分野で通常用いられる緩衝液を加えてもよい。そのような緩衝液としては、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水（ＳＰＢ）、リンゲル液などが挙げられる。酵素処理の温度は、酵素が活性を示す温度であれば特に限定はないが、通常酵素が高い活性を示す３７℃付近の温度である。
【００１７】
酵素処理は、加熱（熱処理）により、酵素を失活させることにより終了する。かかる熱処理は、酵素を失活させることができる限り特に限定されないが、例えば、６０℃付近の温度で、約１０分間加熱することにより、実施することができる。熱処理後の検体は、所望により、濃縮してもよい。当該濃縮は、市販の機器、例えば遠心濃縮器（例えば、ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ社製の１００００ＭＷＣＯ  ＹＭ−１０）を用いて行うことができる。
【００１８】
また、酵素処理は、固相に固定した酵素（固定化酵素）を用いて行うこともできる。酵素を固相に固定させる方法は、当業者に知られており、例えば、β−ガラクトシダーゼおよび／またはシアリダーゼを、シアンブロマイドの如きカップリング剤により、アガロースビーズに固定することができる。そのような固定化酵素としては、例えば、イモビライズド  β−ガラクトシダーゼ  Ｇ３Ｍ（Ｍｏ  Ｂｉ  Ｔｅｃ社、＃Ａ３１０２）、ノイラミニダーゼアガロース  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ（ウェルシュ菌）由来（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社製、製品番号（Product Number)：Ｎ５２５４）などが市販されている。固定化酵素を用いる利点は、酵素処理後、酵素を熱処理により失活させることなく回収することが可能なこと、および、そのような回収により夾雑物（熱処理により失活した酵素などのタンパク質等）の存在を減じることができることである。
【００１９】
＜ウシ初乳酵素処理物＞
こうして得られる本発明のウシ初乳酵素処理物は、さらに、凍結乾燥して、固体ないし粉体状としてもよい。このようなウシ初乳酵素処理物は、皮膚改善剤として皮膚の諸症状の改善に有用な新規組成物である。
【００２０】
＜皮膚改善剤＞
該ウシ初乳酵素処理物は、食品分野または薬学分野で許容される補助剤（担体）を、所望により配合することにより、皮膚改善剤とすることができる。そして、該皮膚改善剤は、これを含んでなる飲食品または医薬品とすることができる。
【００２１】
＜医薬品＞
本発明のウシ初乳酵素処理物は、そのまま、もしくは、適宜、薬学的に許容しうる補助剤（担体）を配合することにより、医薬組成物として調製することができる。このような薬学的に許容し得る補助剤としては、この分野で通常用いられるものをいずれも好適に使用することができ、具体例としては、例えば、希釈剤、安定剤、保存剤、緩衝剤、賦形剤、結合剤、防腐剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味剤等が挙げられる。これら補助剤は、医薬組成物の剤型に応じて、適宜配合される。
【００２２】
上記医薬組成物は、適当な剤型に製剤化して、医薬品とすることができる。本発明の医薬組成物や医薬品は、皮膚の諸症状の予防、治療等に効果を奏する。そのような剤型としては特に制限されず、経口製剤であっても非経口製剤であってもよい。非経口製剤としては、注射剤、輸液剤、点鼻剤、点耳剤、坐剤、経腸栄養剤などが挙げられる。例えば、注射剤としては、静脈内注射、皮下注射、皮内注射、筋肉内注射、腹腔内注射などの投与形態のものが挙げられ、このうち、筋肉内注射が好ましい。一方、経口製剤としては、散剤、顆粒剤、錠剤（舌下錠などを含む）、カプセル剤、丸剤、腸溶剤、内用液剤（懸濁剤、乳剤、シロップ剤などを含む）、吸入剤などが挙げられる。
【００２３】
本発明に係るウシ初乳酵素処理物の投与量は、投与対象の年齢、性別、体重および症状、投与方法などにより異なるが、典型的な例としては、例えば、本ウシ初乳酵素処理物に含まれるタンパク質の総量として、成人に対し、１回の投与あたり、約０．０２μｇ以上、好ましくは約０．２μｇ以上、より好ましくは約２μｇ以上、より好ましくは約２０μｇ以上、より好ましくは約５０μｇ以上であり、かつ、約４０ｍｇ以下、好ましくは約２０ｍｇ以下、より好ましくは約１３ｍｇ以下、より好ましくは約１０ｍｇ以下、より好ましくは２ｍｇ以下である。好ましい投与量の範囲としては、例えば、約０．０２μｇ〜約４０ｍｇ、好ましくは約０．２μｇ〜約２０ｍｇ、より好ましくは約２μｇ〜約１３ｍｇ、より好ましくは約２０μｇ〜約１０ｍｇ、より好ましくは約５０μｇ〜約２ｍｇの範囲にあるのがよい。なお、本明細書において、タンパク質の量は、波長５７０ｎｍでの吸光度により決定したタンパク質濃度をもとに、算定するものである。
【００２４】
本発明に係るウシ初乳酵素処理物を、上記の如き１回あたりの投与量で投与する場合の、典型的な投与間隔および投与回数は、１〜２回／日である。なお、投与量および投与間隔は、医薬組成物中に含まれるタンパク質の総量を指標として、投与されるタンパク質の総量が同等となるような範囲内で、適宜変更することができる。また、予防目的での投与は、改善ないし治療目的と同じ投与量で行ってもよいし、あるいは、概ね半量程度を目安として行ってもよい。
【００２５】
本発明に係るウシ初乳酵素処理物は、他の皮膚改善剤とともに併用することができる。併用する場合には、当該他の皮膚改善剤の効能、効果、投与量を考慮の上、本発明に係るウシ初乳酵素処理物の投与量を適宜調節する。
【００２６】
＜医薬部外品＞
本発明に係るウシ初乳酵素処理物は、必要に応じて、上記補助剤を配合することにより、医薬部外品用組成物とすることができ、さらには、該医薬部外品用組成物をさらに加工して、これを含んでなる医薬部外品とすることができる。該医薬部外品用組成物または医薬部外品は、溶液状、懸濁液状、シロップ状、顆粒状、クリーム状、ペースト状、ゼリー状等の種々の形態をとり得るものであり、必要に応じ、所望の形状に成形することもできる。医薬部外品用組成物および医薬部外品の調製はいずれも常法にのっとり実施することができる。本発明の医薬部外品用組成物または医薬部外品におけるウシ初乳酵素処理物の使用量は、特に限定されるものではないが、上記医薬品の場合の投与量と同じもの、あるいは、上記を参考にして適宜設定したものを採用することができる。
【００２７】
＜飲食品＞
本発明に係るウシ初乳酵素処理物は、必要に応じて、上記補助剤や、甘味料、香辛料、調味料、防腐剤、保存料、殺菌剤、酸化防止剤などの飲食品に通常用いられる各種添加剤を適宜配合することにより飲食品用組成物とすることができ、さらには、該飲食品用組成物をさらに加工して、これを含んでなる飲食品とすることができる。該飲食品用組成物または飲食品は、溶液状、懸濁液状、シロップ状、顆粒状、クリーム状、ペースト状、ゼリー状等の種々の形態をとり得るものであり、必要に応じ、所望の形状に成形することもできる。また、該飲食品は、パン、麺、菓子、飲料、スープ、加工食品など様々な形態をとることができる。飲食品用組成物および飲食品の調製はいずれも常法にのっとり実施することができる。
【００２８】
本発明のウシ初乳酵素処理物は、皮膚改善剤として効果を奏するものであるので、本発明の飲食品用組成物や飲食品は、皮膚の諸症状の予防、改善等に効果を奏する。この場合において、本発明の飲食品用組成物または飲食品におけるウシ初乳酵素処理物の使用量は、特に限定されるものではないが、上記医薬品の場合の投与量と同じもの、あるいは、上記を参考にして適宜設定したものを採用することができる。
【００２９】
かかる本発明の飲食品は、いわゆる健康食品、健康飲料、機能性食品、栄養機能食品、健康補助食品、栄養補助食品（サプリメント）、特別用途食品、特定保健用食品等の経口投与可能なものであったり、その他ヒト以外の動物（作業用家畜、猟犬、競走馬、愛玩動物、その他の動物）に対する飼料であり得る。
【００３０】
このような本発明の医薬品、医薬部外品、および飲食品は、活性成分であるウシ初乳酵素処理物を、消化管内、好ましくは口腔内または腸管内から吸収させる剤形（例えば、上述の舌下錠や腸溶剤の形態）であることが好ましい。
【００３１】
＜皮膚改善＞
本発明において、皮膚改善とは、皮膚の美白化、色素沈着（例えば、シミ、そばかす、肌のくすみ、老人性色素斑、ホクロ、母斑、ダークサークル）の抑制若しくは改善、角質除去若しくは角質ターンオーバー促進、老化防止、しわ抑制若しくは改善、保湿化、または再生などをいう。このうち、皮膚の美白化、色素沈着の抑制若しくは改善、しわ抑制若しくは改善が好ましい。
【実施例】
【００３２】
実施例にもとづいて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらのみに限定されるものではない。
【００３３】
＜ウシ初乳酵素処理物の調製＞
固体のウシ初乳（ｃｏｌｏｓｔｒｕＭｕｎｅ２５５０）１ｇを、１００ｍｌの５０ｍＭ  ＳＰＢ（１５．６０１ｇのＮａＨ2ＰＯ4・２Ｈ2Ｏおよび３５．８１４ｇのＮａ2ＨＰＯ4・１２Ｈ2Ｏを、５００ｍｌの蒸留水に溶解して、２００ｍＭ  ＳＰＢ（ｐＨ７．０）を調製し、これを希釈して、５０ｍＭ  ＳＰＢとした。）で撹拌溶解し、１％溶液を調製した。その初乳液を８，０００ｒｐｍ、４℃で１時間遠心した。上清を、Ｇ２膜、８μｍ、５μｍ、１．２μｍ、０．２μｍ（ミリポア社、ニトロセルロースフィルター）で順次、ろ過処理した。ろ液を中空糸膜（旭化成ケミカルズ社、ペンシル型モジュールＳＥＰ−００１３）で透析処理した。
【００３４】
初乳１ｍｇあたり、ホルミル樹脂（ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ社、ＡＦ−Ｆｏｒｍｙ−６５０Ｍ）で固定化したβ−ガラクトシダーゼ（和光純薬工業（株）製、カタログＮｏ．０７２−０４１４１）を１Ｕ添加し、３７℃で１時間インキュベートした。インキュベート後、反応液をＧ２膜でろ過し、反応液中の固定化した酵素を除去した。ろ液は、０．２μｍでフィルター処理を行った。タンパク質濃度を、波長５７０ｎｍでの吸光度測定により決定したところ（ＢＳＡ（ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ  ａｌｂｕｍｉｎ、ＳＩＧＭＡ、Ａ４５０３）について作成した検量線を使用）、ウシ初乳１ｇから０．７４７ｇのタンパク質が回収されていた（検体１）。
【００３５】
かかる検体１を、冷却メタノールで急速凍結した後、−８０℃で静置して完全に凍結させた。これを真空乾燥して粉末化し、ウシ初乳酵素処理物とした。その一部を再溶解し、タンパク質濃度を、波長５７０ｎｍでの吸光度測定により決定したところ（ＢＳＡ（ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ  ａｌｂｕｍｉｎ、ＳＩＧＭＡ、Ａ４５０３）について作成した検量線を使用）、ウシ初乳１ｇから０．６２８ｇのタンパク質が回収されていた。
【００３６】
＜試験例＞
上記で調製したウシ初乳酵素処理物を用いて、その中に含まれるタンパク質の量が１．０ｍｇとなるよう調整した腸溶性カプセルを、常法により調製した。該腸溶性カプセルを朝、晩の１日２回、被験者に投与した。結果を表１に示す。
【００３７】
【表１】
0006579605.tif 000002
【産業上の利用可能性】
【００３８】
本発明によれば、ウシ初乳酵素処理物を含んでなる皮膚改善剤、それを含んでなる飲食品および医薬品を提供することができる。