(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
カルムスチンおよびｔ−ブタノールを含む凍結乾燥用医薬製剤であって、ｔ−ブタノールが８５％（ｖ／ｖ）〜９５％（ｖ／ｖ）存在し、
メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノールおよびｎ−ブタノールからなる群から選択される少なくとも１以上のアルコールが５％（ｖ／ｖ）〜１５％（ｖ／ｖ）存在することを特徴とする、医薬製剤。
【請求項２】
前記カルムスチンが、約３ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在することを特徴とする、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項３】
前記カルムスチンが、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在することを特徴とする、請求項２に記載の医薬製剤。
【請求項４】
前記少なくとも１以上のアルコールが脱水アルコールであり、ｔ−ブタノールと前記脱水アルコールとが９０：１０（ｖ／ｖ）の割合であることを特徴とする、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項５】
前記少なくとも１以上のアルコールが脱水エチルアルコールであることを特徴とする、請求項４に記載の医薬製剤。
【請求項６】
前記医薬製剤が、約３０時間、２〜８℃の温度に維持された後、約０．１％以下の１，３−ビス（２−クロロエチル）尿素を含むことを特徴とする、請求項５に記載の医薬製剤。
【請求項７】
凍結乾燥医薬組成物を調製するプロセスであって、少なくとも１つのアルコールにカルムスチンを溶解して溶液を得、前記溶液を冷凍し、一次凍結乾燥温度での凍結乾燥および、任意選択による二次凍結乾燥温度での二次乾燥による前記少なくとも１つのアルコールを除去する工程を含む前記プロセスにおいて、前記二次凍結乾燥温度が、前記一次凍結乾燥温度よりも高く、
前記少なくとも１つのアルコールがｔ−ブタノールと、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノールおよびブタノールからなる群から選択される第２アルコールとを含み、
カルムスチンが、前記第２アルコールに溶解されて、ｔ−ブタノールが添加される前に最初に溶液を形成し、
ｔ−ブタノールが８５％（ｖ／ｖ）〜９５％（ｖ／ｖ）存在し、
前記第２アルコールが５％（ｖ／ｖ）〜１５％（ｖ／ｖ）存在することを特徴とする、プロセス。
【請求項８】
ｔ−ブタノールおよび前記第２アルコールが、９０：１０（ｖ／ｖ）の割合で存在することを特徴とする、請求項７に記載のプロセス。
【請求項９】
前記溶液冷凍工程が、約−５０℃以下の温度で行われ、約２時間を超えて維持され、前記一次乾燥工程が、約−４５℃〜約−３０℃の温度で行われ、前記二次乾燥工程が、約−１０℃〜約２５℃の温度で行われることを特徴とする、請求項７に記載の凍結乾燥医薬組成物を調製するプロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腫瘍および自己免疫疾患などの様々な疾患の治療のための医薬組成物に関する。特に、本発明は、カルムスチンなどのナイトロジェンマスタードを含む医薬製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ナイトロジェンマスタードは、腫瘍および自己免疫疾患などの様々な疾患の治療のための細胞傷害性化学療法剤である。ナイトロジェンマスタードは、水溶液でのその高い反応性のために、医薬品として製剤化することは困難であり、多くの場合、投与のためには熟練した病院職員による投与前の再構成を必要とする凍結乾燥形で供給される。ナイトロジェンマスタードは水溶液中で分解しやすい。したがって、この生成物は、再構成後に速やかに患者に投与されなければならない。
【０００３】
カルムスチンはナイトロジェンマスタードの１種である。これは、特に、特定の腫瘍の化学療法に有用なβ−クロロニトロソウレア化合物の１つである。カルムスチンは、１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソウレアという化学名を有し、分子量は２１４．０６であり、以下の構造（式Ｉ）を有する。
【０００４】
【化１】
0006542888.tif 000002
【０００５】
カルムスチンは、２つのアルキル化基を提供してもよいためジアルキル化剤とも呼ばれる。カルムスチンは、第三級ブタノール（別名２−メチルプロパン−２−オール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ｔ−ブタノール、ｔ−ブチルアルコールまたはＴＢＡ）、ジクロロメタンおよびエーテルなどのアルコールに溶解性が大変高く、水には、溶解性は４ｍｇ／ｍＬで、わずかに溶ける。カルムスチンは、水中、ｐＨ６より上で容易に加水分解される。カルムスチンは、１．５３のＬｏｇ  Ｐ値を有する。その抗新生物活性は、主に、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ミトコンドリアグルタチオン還元酵素およびシトクロムＰ４５０酵素に対するその作用による。
【０００６】
カルムスチンは、ＢｉＣＮＵ（登録商標）という商品名で注射用滅菌凍結乾燥粉末として市販されている。ＢｉＣＮＵ（登録商標）（カルムスチン注射用）は、脳腫瘍、多発性骨髄腫、ホジキン病および非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）に必要とされる。このカルムスチン凍結乾燥投与製剤は、一般的には、保存薬を含まず、複数回量バイアルとしての使用を目的としない。ＢｉＣＮＵ（登録商標）（カルムスチン注射用）は、各バイアルにカルムスチン凍結乾燥粉末を１００ｍｇ含む単回投与バイアルで入手可能である。ＢｉＣＮＵ（登録商標）（カルムスチン注射用）の構成のための滅菌希釈剤は、凍結乾燥物の構成に使用するための活性医薬品（すなわち凍結乾燥カルムスチン）に同時パッケージングされる。凍結乾燥カルムスチンは、淡黄色乾燥フレークまたは乾燥凝結塊の外観を有する。注射の前に、この凍結乾燥カルムスチンは、エタノールを含む希釈剤で再構成され、この溶液は水でさらに希釈される。この再構成によって、透明で、無色から黄色がかった溶液が得られるが、これは５％デキストロース注射液（ＵＳＰ）でさらに希釈してもよい。
【０００７】
カルムスチンは、３０．５℃〜３２．０℃という低融点を有し、この温度以上へのカルムスチンの暴露によってこの薬物は液化し、そのバイアルには油膜が発生する。これは分解のサインであるとしてもよく、バイアルは廃棄される必要があるとしてもよい。したがって、カルムスチンは、一般的には、シールバイアル中、２〜８℃で保存される。未開封のＢｉＣＮＵ（登録商標）バイアルは、３年まで安定した生成物を提供するとしてもよい。再構成後、ＢｉＣＮＵ（登録商標）は、２〜８℃の冷蔵下で２４時間安定である。再構成されたバイアルは、使用前に、結晶生成を検査しなければならない。結晶が観察される場合、そのバイアルを撹拌しながら室温まで加温することによってその結晶を再溶解してもよい。
【０００８】
カルムスチンの製剤、薬学的に許容されるその塩および／またはそれらの組成物は先行技術に開示されている。たとえば、Ｆｌａｍｂｅｒｇらは、エタノールを唯一の溶媒とするエタノール溶液から滅菌カルムスチンを調製するための低温真空乾燥プロセスを開示している（Ｆｌａｍｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｌｏｗ  ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  ｖａｃｕｕｍ  ｄｒｙｉｎｇ  ｏｆ  ｓｔｅｒｉｌｅ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌｓ  ｆｒｏｍ  ｅｔｈａｎｏｌ，  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ｏｆ  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｄｒｕｇ  Ａｓｓｏｃ．  １９７０  Ｓｅｐ−Ｏｃｔ．  ２４  （５）：２０９−１７）。この論文に記載されている生成物の性質は、市販品ＢｉＣＮＵ（登録商標）として現在市販されているものの性質とよく似ている。
【０００９】
市販品ＢｉＣＮＵ（登録商標）の製造方法における問題点の１つは、ガラス容器に沈着する凍結乾燥カルムスチンが、ガラス容器の頸状部にまで到達する傾向があるということである。その結果、凍結乾燥チャンバにおいて、オペレーターへの薬物暴露のリスク、生成物の潜在的損失および効力の潜在的損失が存在する。市販品ＢｉＣＮＵ（登録商標）はまた、該生成物に存在する望ましくない微粒子物質の徴候、溶融の徴候または液化の徴候を示す場合もある。
【００１０】
改善された確固としたカルムスチン製剤化プロセスが必要とされている。現在市販されているカルムスチンの凍結乾燥粉末よりも、質の良い粉末ケーキ、改善された安定性および改善された不純物プロファイルを生じるカルムスチンの凍結乾燥製剤もまた必要とされている。
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、凍結乾燥に適したカルムスチンの安定した医薬組成物および、様々な腫瘍の治療に有用な凍結乾燥カルムスチン製剤に関する。
【００１２】
一側面において、本発明は、ｔ−ブタノール中にカルムスチンを含む新規医薬組成物を提供する。医薬組成物のいくつかの実施形態において、ｔ−ブタノールは、約５％（ｖ／ｖ）〜約１００％（ｖ／ｖ）の濃度で存在する。医薬組成物は、約３〜約４００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは約１０〜約２００ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは約２５〜約１５０ｍｇ／ｍＬ、よりさらに好ましくは約５０〜約１００ｍｇ／ｍＬの濃度のカルムスチンを含んでいてもよい。
【００１３】
医薬組成物は、１以上の他のアルコールをさらに含んでいてもよい。適切なアルコールは、限定するものではないが、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノールおよびｎ−ブタノールを含む。
【００１４】
他の側面において、本発明は、アルコール中にカルムスチンを含む新規医薬組成物であって、前記アルコールが、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノールおよびそれらの混合物からなる群から選択されることを特徴とする前記医薬組成物を提供する。
【００１５】
アルコール溶液のカルムスチン医薬組成物は、改善された不純物および安定性プロフィールを有する凍結乾燥カルムスチンを製造するための凍結乾燥に特に適している。この文脈において、医薬組成物は凍結乾燥前組成物である。いくつかの実施形態によれば、カルムスチン組成物は、調製後、時間ゼロにおいて、カルムスチンの分解産物である１，３−ビス（２−クロロエチル）尿素を、約０．３％以下、より好ましくは約０．２％以下、よりさらに好ましくは約０．１％以下含む。
【００１６】
本願において、１，３−ビス（２−クロロエチル）尿素は、カルムスチン関連物質Ａ（「ＲＳ  Ａ」）と呼ばれる。これは、式ＩＩで示される以下の化学構造を有する。
【００１７】
【化２】
0006542888.tif 000003
【００１８】
他の側面において、本発明は、凍結乾燥用カルムスチン医薬溶液を調製する方法を提供する。本発明は、さらに、カルムスチンの分解不純物のレベルを抑制する凍結乾燥医薬組成物を製造する新規凍結乾燥プロセスを提供する。最終生成物におけるカルムスチン総不純物は、既知および未知の総不純物の約１．０％未満である。
【００１９】
凍結乾燥プロセスは、アルコールまたはアルコール混合物にカルムスチンを溶解し、このカルムスチン溶液を冷凍し、一次凍結乾燥温度で凍結乾燥することによってアルコールまたはアルコール混合物を除去し、任意選択で、一次凍結乾燥温度より上の温度で二次凍結乾燥して、凍結乾燥医薬組成物を得る工程であって、アルコールまたはアルコール混合物がｔ−ブタノールを含むことを特徴とする前記工程を含む。得られた凍結乾燥カルムスチンは、改善されたケーキの外観を有していてもよい。
【００２０】
凍結乾燥プロセスに用いられるアルコール混合物は、ｔ−ブタノールと、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノールおよびｎ−ブタノールからなる群から選択される他のアルコールとの混合物であってもよい。
【００２１】
さらに他の側面において、本発明は、それを必要とする患者を治療する方法であって、凍結乾燥カルムスチン組成物を水溶液に再構成し、続いて得られた溶液を任意選択で希釈し、このカルムスチン水性溶液の有効量を、それを必要とする哺乳動物に投与する工程を含む前記方法を提供する。それを必要とする患者は、脳腫瘍、多発性骨髄腫、ホジキン病および非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を患っていてもよい。
【００２２】
発明の詳細な説明
本発明は、カルムスチンの、安定した、薬学的に許容される組成物を提供する。特に、本発明は、カルムスチンの凍結乾燥用製剤を提供する。このような製剤から得られる凍結乾燥粉末は、現在入手可能なカルムスチンの凍結乾燥粉末よりもより容易に再構成される。さらにまた、本発明の凍結乾燥品は、特定の不純物、特に、再構成前、凍結乾燥品の貯蔵後または再構成後の１，３−ビス（２−クロロエチル）尿素（ＲＳ  Ａ）に関しては、ＢｉＣＮＵ（登録商標）よりも優れた不純物プロファイルを有する。本発明はさらに、腫瘍の治療に有用なカルムスチン製剤を提供する。本明細書に記載の製剤は、単独で、またはさらなる抗新生物剤および／または放射線治療と組み合わせて投与することができる。
【００２３】
本明細書に記載されるように、カルムスチンの凍結乾燥製剤は、凍結乾燥用カルムスチン医薬組成物（すなわち凍結乾燥前組成物）における有機溶媒（単数または複数）を除去することによって得られる。凍結乾燥用医薬組成物は、有機溶媒（単数または複数）に溶解したカルムスチンを含む。カルムスチンが高い溶解性を有し、カルムスチン濃厚液が得られるような有機溶媒を選択することが好ましい。カルムスチン溶液から、たとえば、凍結乾燥または真空乾燥によって、溶媒が容易に除去できることもまた好ましい。この溶液は、約３〜約４００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは約１０〜約２００ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは約２５〜約１５０ｍｇ／ｍＬ、よりさらに好ましくは約５０〜約１００ｍｇ／ｍＬの濃度でカルムスチンを含む。
【００２４】
用語「凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ）」（フリーズドライ［ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｙｉｎｇ］、ｌｙｏｐｈｉｌｉｓａｔｉｏｎまたはｃｒｙｏｄｅｓｉｃｃａｔｉｏｎとしても知られている）は、水および／または他の溶媒を含む物質を冷凍し、次いで周囲の圧力を低下させて、その物質中の凍結した水および／または他の溶媒を、その固相から気相へ直接的に昇華させることによって、水または他の溶媒を除去するプロセスを意味する。
【００２５】
凍結乾燥前医薬組成物を調製するための最も適切な溶媒系の１つは、１００：０（ｖ／ｖ）〜５：９５（ｖ／ｖ）、好ましくは９０：１０（ｖ／ｖ）の割合のｔｅｒｔ−ブタノール：脱水アルコールであり、ここで脱水アルコールはｔｅｒｔ−ブタノール以外のアルコールである。脱水アルコールは無水アルコールを意味する。医薬品グレードの無水エタノールもまた、脱水エタノールと呼んでもよい。本発明に用いられるｔｅｒｔ−ブタノールは、好ましくは無水である。すなわち、ｔｅｒｔ−ブタノール：脱水アルコールが１００：０の容積比である場合、このｔｅｒｔ−ブタノールは１００容量％であり、ｔｅｒｔ−ブタノール：脱水アルコールが９５：５の容積比である場合、このｔｅｒｔ−ブタノールは９５容量％である。用語「ｖ／ｖ％」は、溶液の全容量における溶質の容量を意味する。当業者には明らかなように、その溶質が時により液体である場合、その濃度を容量／容量パーセント（ｖ／ｖ％）で表示するのが便利である。ｖ／ｖ％の算出法は、
【００２６】
【数１】
0006542888.tif 000004
【００２７】
である。
【００２８】
他の溶媒もまた、医薬組成物の凍結乾燥前に用いてもよい。適切な溶媒は、その溶媒中でカルムスチンが比較的安定であり、活性医薬成分（すなわち「ＡＰＩ」、この場合はカルムスチン）を顕著には分解または不活化しない溶媒である。このような溶媒には、エタノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノール、イソプロパノール、酢酸エチル、炭酸ジメチル、アセトニトリル  ジクロロメタン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、アセトン、１−ペンタノール、酢酸メチル、メタノール、四塩化炭素、ジメチルスルホキシド、ヘキサフルオロアセトン、クロロブタノール、ジメチルスルホン、酢酸およびシクロヘキサンが含まれていてもよい。上記溶媒は、個々に用いられてもよく、組み合わせで用いられてもよい。
【００２９】
凍結乾燥前溶液には、１以上の薬学的に許容される賦形剤を存在させることができる。本発明に用いてもよい賦形剤の例は、限定するものではないが、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸、酒石酸、ゼラチン、グリシンならびに、ラクトース、ショ糖、マルトース、マンニトール、グリセリン、デキストロース、デキストラン、トレハロースおよびヘタスターチなどの炭水化物を含む。用いてもよい他の賦形剤は、限定するものではないが、アスコルビン酸、アセチルシステイン、システイン、チオグリセロール  亜硫酸水素ナトリウム、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、α−酢酸トコフェロールおよびキレート化剤などの抗酸化物質を含む。
【００３０】
凍結乾燥は、凍結乾燥または真空乾燥のための標準的装置を用いて行ってもよい。凍結乾燥サイクルは、用いる装置および設備によって異なっていてもよい。
【００３１】
一般に、薬学的に許容される混合容器中で、凍結乾燥前アルコール性溶液または分散体が最初に製剤化される。この溶液は、無菌的に滅菌容器に濾過され、バイアルに充填され、半打栓され、凍結乾燥機（すなわち凍結乾燥装置）にローディングされる。バイアル中の湿度が約０．１〜約８．０％に到達するまで、溶媒または溶媒混合物が凍結乾燥される。得られた凍結乾燥粉末（すなわち凍結乾燥物）は、約２℃〜約８℃で３年間までは安定である。この凍結乾燥物は、投与（たとえば非経口注射）に適したカルムスチン液剤を提供するために、希釈剤または他の適切な担体で容易に再構成されてもよい。
【００３２】
凍結乾燥前溶液または分散体は、１）周囲温度でアルコール（たとえば最終総容量の約１０％）、好ましくは脱水アルコールにカルムスチンを溶解／分散し、２）室温、好ましくは約２５℃で共溶媒、好ましくはアルコール、最も好ましくはＴＢＡを最終容量になるまで添加してよく混合し、３）約１℃〜約８℃、好ましくは約５℃にこの溶液を冷却する、ことによって製剤化してもよい。前述の工程は特定の順序で記載されているが、必要に応じてこれらの工程の順序および各成分の量を変更してもよいことは、当業者には明らかであろう。
【００３３】
凍結乾燥前溶液は、凍結乾燥前に滅菌してもよい。滅菌は、たとえば０．２２μのフィルターを用いる無菌濾過によって行ってもよい。複数の滅菌フィルターを用いてもよい。
【００３４】
滅菌後、この溶液は凍結乾燥の準備が整っている。濾過されたこの溶液を滅菌受け入れ容器に入れ、次いでこの製剤を凍結乾燥するための任意の適切な容器に移す。この製剤はまた、この生成物が最終的に梱包され販売される、たとえばバイアルなどの容器中で凍結乾燥してもよい。
【００３５】
凍結乾燥前溶液の凍結乾燥に使用するための典型的な手順を以下に示す。しかしながら、凍結乾燥前溶液、凍結乾燥装置および凍結乾燥パラメータなどの要素に応じて手順またはプロセスを改変してもよいことは、当業者には明らかであろう。
【００３６】
初めに、凍結乾燥前溶液を凍結乾燥チャンバに入れ、この凍結乾燥前溶液の凝固点をはるかに下回る温度で数時間冷却する。好ましくは、温度は約−６０℃以下であり、少なくとも２時間維持する。凍結乾燥前溶液が十分に凍結した後、チャンバおよび冷却器を真空ポンプで排気する。真空排気の前に、循環冷却剤によって冷却器表面を前もって冷却しておく。好ましくは、冷却器は、溶媒（単数または複数）の凝固点より低く、好ましくは約−４０℃、より好ましくは約−５０℃以下、よりさらに好ましくは約−６０℃以下に冷却する。さらに、チャンバの排気は、圧力が約７５〜約１６００ｍＴ、好ましくは約７５〜約９００ｍＴ、よりさらに好ましくは約１００〜約５００ｍＴになるまで続ける。
【００３７】
次いで、凍結生成物（すなわち凍結された凍結乾燥前組成物）を、チャンバおよび冷却器中、減圧下で加温する。通例、これは、凍結乾燥プロセスにおいて凍結生成物を載せる凍結乾燥機内の棚を加温することによって行う。この加温プロセスは、最適には、数時間にわたって大変徐々に行う。たとえば、この生成物の温度は、初めに約−５０℃から約１０℃に増加させ、約５〜約７０時間維持してもよい。さらに、必要に応じて、この生成物の温度を、さらに、約１〜約１００時間にわたって、冷凍温度から約１０℃〜約４０℃まで増加してもよい。凍結乾燥ケーキの破壊およびこの生成物を含むバイアルからのこの生成物の減損を防ぐために、有機溶媒（単数または複数）の完全除去は、好ましくは、最初の乾燥フェーズ中に行う。真空度、冷却器温度および生成物棚温度が安定した時に、完全乾燥を示してもよい。最初の乾燥後に、生成物温度を約１０℃〜約４０℃に増加させ、約５〜約４０時間維持してもよい。
【００３８】
乾燥サイクルが完了すれば、滅菌、乾燥した窒素ガスまたは他の不活性ガスを導入することによって、大気圧（またはわずかにそれを下回る）まで徐々にチャンバ圧力を増加させることができる。生成物組成物がバイアルなどの容器中で凍結乾燥されている場合、そのバイアルに栓をつけ、取り出し、シールしてもよい。
【００３９】
バイアル入り凍結乾燥カルムスチン組成物は、医薬剤形として市販してもよい。本発明の医薬剤形は、一般的にはバイアル入りであるが、それらが無菌環境を維持することができる限り、アンプル、シリンジ、共バイアル（ｃｏ−ｖｉａｌ）などの任意の適切な容器に入れてもよい。このような容器は、その容器材料がカルムスチンと反応しない限り、ガラス製またはプラスチック製であってもよい。蓋は、一般的には栓であり、好ましくは密封シールすることができる滅菌ゴム栓である。
【００４０】
カルムスチンが大きな容器で凍結乾燥される場合、この凍結乾燥カルムスチン粉末を、凍結乾燥の完了後に、バイアルなどの容器に充填してもよい。本発明の凍結乾燥製剤は、投与のためのカルムスチンの適切な溶液を提供するために、脱水アルコールまたは他の滅菌液体などの滅菌希釈剤で再構成してもよい。あるいは、この溶液は、最終投与溶液を調製するために、水、生理食塩水などでさらに希釈される。
【００４１】
実施例を用いて、本発明をさらに詳細に説明する。
【００４２】
Ａ．溶解性
ＴＢＡおよび脱水エタノールなどのアルコール溶媒へのカルムスチンの溶解性を行い、記録した。カルムスチンの溶解性は、室温で１ｍＬの溶媒にカルムスチンの固体試料の少量のアリコートを添加することによって視覚的に決定した。得られたカルムスチンの溶解性は、ＴＢＡおよび脱水エタノールのそれぞれにおいて、室温でｍＬあたり１ｇを超える。したがって、ＴＢＡおよび脱水エタノールの両方において、カルムスチンは大変溶解性が高く、その飽和限度は作用濃度よりかなり上である。凍結乾燥前溶液を約２〜約８℃で保存した時、そのどちらの溶液も沈殿の徴候を示さなかった。
【００４３】
Ｂ．安定性
カルムスチンのＴＢＡ溶液または脱水エタノール溶液の安定性を試験した。これらのカルムスチン溶液は、どちらの溶媒においても、室温貯蔵で少なくとも２４時間安定であった。
【００４４】
Ｃ．凍結乾燥サイクルの創出
様々な濃度のカルムスチンアルコール溶液で種々の凍結乾燥前製剤を調製した。種々の凍結乾燥サイクルを創出した。
【００４５】
溶解性および安定性試験から得られた情報および凍結乾燥の容易さに関する情報に基づいて、本発明の凍結乾燥前組成物の好ましい一実施形態は以下の製剤を有する。
【００４６】
【表１】
0006542888.tif 000005
【００４７】
上記製剤におけるアルコールは、メタノール、エタノール、脱水エタノール、ｎ−プロパノールまたはイソプロパノールから選択されてもよい。
【００４８】
上記の凍結乾燥前組成物を以下のように調製した。カルムスチンの必要量を計量し、適切な容器に移した。一定分量の脱水アルコールを添加し、１５分間撹拌することによって、このカルムスチンを溶解した。透明な黄色溶液が得られた後、ＴＢＡを用いてこの溶液を必要量に希釈し、よく混合した。得られた溶液を０．２２μのフィルターを用いて濾過し、バイアルに充填するまで２〜８℃または周囲温度で保存した。
【００４９】
凍結乾燥前組成物の他の好ましい一実施形態は、以下の製剤を有する。
【００５０】
【表２】
0006542888.tif 000006
【００５１】
上記製剤におけるアルコールは、メタノール、エタノール、ｔ−ブタノール、ｎ−プロパノールまたはイソプロパノールおよびそれらの混合物から選択されてもよい。
【００５２】
上記の凍結乾燥前組成物を以下のように調製した。カルムスチンの必要量を計量し、適切な容器に移した。必要量の脱水アルコールを添加し、よく混合されるまで撹拌することによって、このカルムスチンを溶解した。得られた溶液を０．２２μのフィルターを用いて濾過し、バイアルに充填するまで２〜８℃または周囲温度で保存した。
【００５３】
凍結乾燥前組成物のさらに好ましい一実施形態は、以下の製剤を有する。
【００５４】
【表３】
0006542888.tif 000007
【００５５】
上記凍結乾燥前組成物が液体形であることを確実にするためにｔ−ブタノールが少し加温されることを必要としてもよいということを除いて、カルムスチンおよびアルコールを含む組成物に関して記載したものと同様に調製した。しかしながら、ＴＢＡおよび溶液の温度は、カルムスチンの分解を引き起こすほど高くしてはならない。透明な黄色溶液が得られた後、０．２２μのフィルターを用いてそれを濾過し、バイアルに充填するまで２〜８℃または周囲温度で保存した。
【００５６】
Ｄ．溶媒の選択
適切な溶媒比を選択するために、種々の割合でＴＢＡとエタノールとを混合し、結晶化を観察した。ＴＢＡ：アルコールの割合が９８：２および９５：５からなる２つの１ｍＬ溶液をそれぞれ調製し、この溶液を２０℃、１０℃、８℃および２℃の各温度で２時間放置した。観察された結果を以下の表形式で示す。
【００５７】
【表４】
0006542888.tif 000008
【００５８】
ｔ−ブチルアルコールは、２５℃より少し上の融点を有する。したがって、ｔ−ブチルアルコールは、周囲温度に応じて、透明な液体であってもよく無色の固体であってもよい。ｔ−ブチルアルコールは、水に溶解性が大変高く、エタノールとジエチルエーテルとに混和性である。ｔ−ブタノールは、物質から水を除去するのに有用である。ｔ−ブタノールは、エタノールの認可された変性剤である。上記の表から、ｔ−ブタノールの凝固点（２５℃より少し上）は、アルコールの添加によって降下する。
【００５９】
カルムスチンの有り無しでの、ＴＢＡとアルコールとの混合物およびＴＢＡと水との混合物を調製し、それらの凝固点を求めた。この混合物をそれぞれ１ｍＬ調製し、その凝固点温度を測定した。観察された結果を以下の表に示す。
【００６０】
【表５】
0006542888.tif 000009
【００６１】
上記の表は、水またはアルコールの添加がＴＢＡの凝固点を降下させるが、カルムスチンの添加が、溶媒混合物に含まれるＴＢＡの凝固点を０℃超まで顕著に上昇させることを示している。
【００６２】
実施例１：溶解性および溶液安定性
ＴＢＡおよび他のアルコール中でのカルムスチン溶解性試験を、前記の手順に従って行った。
【００６３】
溶液安定性試験のために、アルコール：ｔ−ブタノール（１０：９０）の溶媒混合物中にカルムスチン濃度１００ｍｇ／ｍＬで薬物溶液を調製した。ここでアルコールはエタノールである。この薬物溶液を密閉したステンレススチール３１６容器中、室温に維持した。２〜８℃、３０時間までの安定性について、この溶液を試験した。この溶液は、試験期間にわたって許容しうる安定性を示した。この試験の結果を表６に示す。この結果は、凍結乾燥前溶液が大変安定であることを示している。調製後ゼロ時点において、この溶液は０．１％未満のＲＳ  Ａ不純物レベルを有する。２〜８℃で３０時間の貯蔵後でもなお、ＲＳ  Ａ不純物レベルは０．１％未満である。
【００６４】
【表６】
0006542888.tif 000010
【００６５】
実施例２：製剤の最適化および凍結乾燥サイクルの創出
実施例２−Ａ
前記の手順に従ってカルムスチンアルコール溶液を調製した。この溶液を−４０℃〜−２０℃で凍結し、次いでこれを、一次乾燥において−３０℃〜約０℃、二次乾燥において約５℃〜約２０℃で、凍結乾燥チャンバを約２５０ｍＴ〜５０ｍＴの圧力に排気することによって減圧下で乾燥した。このプロセスにおいて液体がすべて昇華し、凍結乾燥サイクル終了時には、空のバイアルのみが得られた。
【００６６】
実施例２−Ｂ
この凍結乾燥プロセスには、実施例２−Ａとは異なる乾燥アプローチを用いた。一次乾燥は、５００ｍＴまでの真空圧力下、実施例２−Ａより５℃高い温度で行った。このプロセスもまた成功ではなかった。このプロセスによって、空のバイアルが生じるか、またはバイアルの底に薄いフィルムを有するバイアルがほんの少ししかないかだった。
【００６７】
実施例２−Ｃ
この凍結乾燥プロセスは、圧力が上限（約９００ｍＴ）までにセットされること以外は実施例２−Ｂと同様であった。すべての他のパラメータは、実施例２−Ａのパラメータと同様であった。すなわち、冷凍温度は約−４０℃〜−２０℃であり、一次乾燥は−３０℃〜約０℃で行い、二次乾燥は約５℃〜約２０℃で行った。凍結乾燥サイクル終了時に、すべてのバイアルは、バイアル内部に液体飛沫を含んでいた。
【００６８】
実施例２−Ｄ
アルコール溶媒で凍結乾燥前溶液を調製し、凍結した。乾燥プロセスの間、凍結生成物を−６０℃に４〜１０時間維持し、次いで、バイアル内に乾燥塊が形成されるまで（８〜４８時間後）、チャンバを減圧しながら約−５５℃〜約−４５℃の温度まで加温した。この凍結乾燥プロセスに用いた凍結乾燥前溶液は、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコールおよびｎ−ブタノールなどの単一アルコール溶媒、より好ましくは、それらの脱水アルコールで調製した。脱水エタノールを用いたとき、このプロセスによって、ガラスバイアルの底および側壁に、許容されるが理想的とはいえない乾燥塊が生じた。
【００６９】
実施例２−Ｄの記載に従って調製した凍結乾燥カルムスチン製剤の分析結果を表７に示す。
【００７０】
【表７】
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【００７１】
表７は、脱水アルコールのみを有する凍結乾燥前製剤から調製されたカルムスチン凍結乾燥物が許容される不純物プロファイルを有していることを示している。試験１において、再構成後時間ゼロでわずかに０．０３％のＲＳ  Ａが観察された。
【００７２】
実施例２−Ｅ
実施例２−Ｅにおいて、凍結乾燥前組成物はＴＢＡとのアルコール溶媒混合物を用いて調製された。凍結乾燥前組成物を凍結乾燥するために、実施例２−Ｄと同じ凍結乾燥手順を用いた。しかしながら、得られた凍結乾燥物は完全には乾燥されておらず、また室温で融解した。
【００７３】
実施例２−Ｆ
この凍結乾燥プロセスにおいて、カルムスチン溶液はＴＢＡと無水エタノール（別名脱水アルコール）との混合物である。カルムスチン溶液は、−４０℃より低く、より好ましくは−５０℃以下の温度で凍結させた。次いで、この凍結生成物を、約−４５℃〜−３０℃の一次乾燥温度、約−１０℃〜２５℃の二次乾燥温度で、９００ｍＴの圧力を用いて乾燥した。意外にも、このプロセスは、すべてのバイアルにおいて、優れた品質および均一性を有する凍結乾燥ケーキを生じる。
【００７４】
実施例２−Ｆの凍結乾燥物の分析試験結果が表８に示されており、脱水アルコール（たとえばエタノール）：ＴＢＡ（１０：９０）の溶媒混合物を有する凍結乾燥前製剤から調製したカルムスチン凍結乾燥物は、２５℃／６０％ＲＨでの１ヶ月の貯蔵後であっても、優れた不純物プロファイルを示したことを表８は示す。再構成後ゼロ時点において、凍結乾燥カルムスチン製剤は０．１％未満のＲＳ  Ａ不純物レベルを有している。２５℃／６０％ＲＨでの１ヶ月の貯蔵後において、ＲＳ  Ａ不純物レベルおよび総不純物レベルはともに０．２％未満であった。
【００７５】
【表８】
0006542888.tif 000012
【００７６】
上記実施例に加えて、唯一の溶媒として純粋なｔ−ブタノールでカルムスチン組成物もまた調製し、凍結乾燥した。１００％ブタノール（ｖ／ｖ）でのカルムスチン組成物の凝固点温度は−３０℃より低く、好ましくは約−６０℃より低い。次いで、減圧下、−３０℃より高く、好ましくは約０℃の温度でｔ−ブタノールを除去した。任意選択で、約１０℃〜２５℃の二次乾燥温度を用いて、凍結した固体をさらに乾燥（すなわちブタノールをさらに除去する）してもよい。
【００７７】
以下の表９に分析試験結果をまとめる。
【００７８】
【表９】
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【００７９】
実施例３：凍結乾燥サイクル
カルムスチンの必要量を計量し、容器に移した。このＡＰＩを所定量の溶媒に溶解し、１５分間撹拌した。透明な黄色溶液が得られた後、この溶液をＴＢＡで最終容量まで希釈し、よく混合した。この溶媒は、脱水アルコールが約５％〜約９９％（ｖ／ｖ）、より好ましくは約５％〜約５０％（ｖ／ｖ）、よりさらに好ましくは約５％〜約１５％（ｖ／ｖ）であり、残りのパーセントがＴＢＡで構成されたものであってもよい。この溶液を０．２２μ以下のフィルターで濾過し、それをバイアルに充填するまで２〜８℃で保存した。この溶液を約−６０℃で凍結し、約２時間〜４０時間維持した。一試験において、棚を約−５５℃に加温しながら、凍結乾燥チャンバを９００Ｍｔの圧力まで排気した。その固体を８〜７２時間維持し、次いでさらに、約２０℃で約４〜７２時間二次乾燥した。本明細書に記載の手順に従ってさらなる試験を行った。これらの試験において、一次乾燥に用いた圧力、温度および、任意選択で二次乾燥に用いた圧力、温度は多様にした。
【００８０】
表１０は、種々のサイクルパラメータを用いたときの、カルムスチン注射用１００ｍｇの脱水アルコール：ＴＢＡ（１０：９０）溶液の試験結果を示す。
【００８１】
【表１０】
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【００８２】
一次乾燥温度が−５５〜−３２℃であり、任意選択での二次乾燥温度が０〜２５℃である、実施例３に記載の凍結乾燥プロセスにおいて、得られた凍結乾燥カルムスチン製剤は優れた不純物プロファイルを有しているということを表１０は示している。
【００８３】
本発明は、そのより広い側面において、特定の詳細、代表的組成物、方法およびプロセスならびに好ましい実施形態および好ましい方法と関連して記載された具体例に限定されないことに留意すべきである。改変および等価物は当業者には明らかであり、添付の特許請求の範囲の精神および範囲に含まれる。