(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト被験体の皮膚表面におけるシワまたは窪みを処置または予防するための組成物であって、
上記組成物は、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの短縮化されたファイバー（ｓＮＡＧナノファイバー）を含有するとともに、上記ヒト被験体のシワまたは窪みへの直接的若しくは近接した局所投与、または直接的な局所注射のために処方され、
上記ｓＮＡＧナノファイバーは、７０％以上のＮ−アセチルグルコサミン単糖類を含み、
上記ｓＮＡＧナノファイバーは、１から１５μｍの長さである組成物。
【請求項２】
前記皮膚表面におけるシワまたは窪みに対し近接した局所投与のために処方される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記皮膚表面におけるシワまたは窪みに対する直接的な局所投与のために処方される、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記皮膚表面におけるシワまたは窪みに対する直接的な局所注射のために処方され、
上記局所注射が、皮内注射、皮下注射または筋肉内注射である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
直接的な局所注射のために処方され、
前記シワは、皮膚の内部へ数マイクロメートルから数ミリメートルまでである、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
ヒトの被験体において組織を再生するかまたは組織にボリュームを加えるための組成物であって、
上記組成物は、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの短縮化されたファイバー（ｓＮＡＧナノファイバー）を含有するとともに、上記ヒト被験体の組織への局所投与または局所注射のために処方され、
上記ｓＮＡＧナノファイバーは、７０％以上のＮ−アセチルグルコサミン単糖類を含み、
上記ｓＮＡＧナノファイバーは、１から１５μｍの長さである組成物。
【請求項７】
前記組織への局所注射のために処方され、上記局所注射が、皮内注射、皮下注射または筋肉内注射である、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
上記被験体の粘膜表面への局所投与のために処方される、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
口腔粘膜への局所投与のために処方される、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
皮膚フィラーとして処方される、請求項６または７に記載の組成物。
【請求項１１】
上記組織は、結合組織である、請求項６〜１０の何れか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
上記組織は、骨である、請求項６〜９の何れか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
上記組成物は、クリーム、膜、フィルム、液体溶液、懸濁物、パウダー、ペースト、軟膏、噴霧剤、ゲルまたはスプレーとして処方されている、請求項１〜６および８〜１２の何れか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
上記組成物は、（ｉ）上記被験体への局所送達に好適な形態にて、組成物の用量／適用あたり、０．２〜２０ｍｇ／ｃｍ2のｓＮＡＧナノファイバーを含むか、あるいは（ｉｉ）上記被験体へ患者への局所送達に好適な形態にて、組成物の用量／適用あたり、５〜５０ｍｇ／ｍＬのｓＮＡＧナノファイバーを含む、請求項１〜６および８〜１３の何れか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが、２〜１０μｍの間の長さであるか、または４〜７μｍの間の長さである、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ｓＮＡＧナノファイバーは、平均の長さが４〜７μｍである、請求項１〜１５の何れか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記ｓＮＡＧナノファイバーが、放射線照射されていないポリ−β−Ｎ−アセチルグルコサミンファイバーの微細構造を有する、請求項１〜１６の何れか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記ｓＮＡＧナノファイバーは、８０％よりも多い、９０％よりも多い、９５％よりも多い、または１００％のＮ−アセチルグルコサミン単糖類を含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
上記ｓＮＡＧナノファイバーの赤外線スペクトルは、放射線照射されていない、微細藻類のポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンの赤外線スペクトルとおよそ同じである、または同等である、請求項１〜１８の何れか１項に記載の組成物。
【請求項２０】
上記組成物は、１週間またはそれ以上に等しいかまたはそれよりも長い期間にわたって、一日に１回または２回、上記被験体に投与されるために、処方される、請求項１〜１９の何れか１項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記ｓＮＡＧナノファイバーは、甲殻類のポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンから生成されない、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記ｓＮＡＧナノファイバーは、微細藻類のポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンから生成された、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記ｓＮＡＧナノファイバーは、筋肉内への移植試験にて試験された場合に反応性でない、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記ｓＮＡＧナノファイバーは、ＭＴＴアッセイにおいて、血清を枯渇させたヒト臍帯静脈内皮細胞の代謝速度を増加させる、および／または、トリパンブルー排除試験において、血清を枯渇させたヒト臍帯静脈内皮細胞のアポトーシスを救助しない、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２５】
前記ｓＮＡＧナノファイバーの投与は、以下の効果
（ａ）被験体における組織の抗張力の向上、
（ｂ）被験体の組織における弾性の向上、
（ｃ）被験体の組織におけるエラスチン含量または生産の増加、
（ｄ）被験体の組織における総コラーゲン含量の減少、
（ｅ）被験体の組織におけるＩ型コラーゲン発現または含量の減少、
（ｆ）被験体の組織におけるＩＩＩ型コラーゲン発現または含量の増加、
（ｇ）被験体の組織における、より整列したコラーゲンの誘導、
（ｈ）被験体の組織における平滑筋アクチン含量もしくは発現の減少、および
（ｉ）被験体の組織における筋線維芽細胞含量の減少、
の少なくとも１つ以上を達成するために有効である、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンおよび／またはその誘導体の短縮化された繊維（「ｓＮＡＧナノファイバー」）を含む組成物、ならびに、種々の状態および疾患（特に、組織の引っ張り強さの低下、組織の伸縮性の低下、組織におけるコラーゲン含有量もしくは異常コラーゲン含有量の増加、組織におけるコラーゲンの異常な整列、および／または組織における筋線維芽細胞の増加、に関連するもの）の処置における上記組成物の使用が、本明細書中に記載される。
【背景技術】
【０００２】
本願は、２０１３年３月１４日に出願された米国仮出願番号第６１／７８４，７６５号（その全体が参考として本明細書中に援用される。）の権利を主張する。
【０００３】
現時点で手の施しようがない数多くの状態および疾患は、利用可能な処置を有するが、そのような処置は部分的にのみ有効であること、またはそのような処置に関連する副作用に起因して、最適には及ばない。例えば、組織の引っ張り強さの低下、組織の伸縮性の低下、組織におけるコラーゲン含有量もしくは異常コラーゲン含有量の増加、組織におけるコラーゲンの異常な整列、および／または組織における筋線維芽細胞の増加に関連する、手の施しようがないか部分的に治癒可能である状態および疾患が数多く存在する。このような状態および疾患としては、特に、エーラー・ダンロス症候群、表皮水疱症、強皮症、骨粗鬆症、椎間板障害（intervertebral disc disorder）、椎間板変性（degenerative disc disorder）、変形性関節症、線維症、皮膚のシワ、および創傷に関連する瘢痕が挙げられる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
これらは、単独で、あるいは安全かつ効果的な標準的な治療と組み合わせて使用され得る、これらの状態および疾患に効果的な処置の必要性が残されている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
［要旨］
組織の引っ張り強さの低下、組織の伸縮性の低下、組織におけるコラーゲン含有量もしくは異常コラーゲン含有量の増加、組織におけるコラーゲンの異常なもしくはまとまりのない整列、および／または組織における筋線維芽細胞の増加に関連する種々の疾患を処置する方法が、本明細書中に提供される。さらに、組織におけるＩ型コラーゲン含有量（例えば発現）の増加、組織におけるＩＩＩ型コラーゲン含有量（例えば発現）の低下、組織におけるエラスチン含有量（例えば発現）の低下、または組織におけるα平滑筋アクチン含有量の増加に関連する種々の疾患の処置の方法が、本明細書中に提供される。
【０００６】
特定の実施形態において、被験体（例えばヒト被験体）におけるエーラー・ダンロス症候群の症状を処置する方法が本明細書中に提供され、本方法は、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記被験体に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。一実施形態において、上記症状は、皮膚に関連する症状である。さらなる実施形態において、上記皮膚に関連する症状は、柔らかい皮膚、もろい皮膚、容易に傷つく皮膚、過剰に瘢痕化する皮膚、または皮膚における鈍い創傷治癒である。特定の実施形態において、上記組成物は、上記被験体に局所的に投与される。なお別の実施形態において、上記組成物は、上記皮膚に関連する症状に冒された皮膚に直接的に投与される。
【０００７】
特定の実施形態において、被験体（例えばヒト被験体）における強皮症の症状を処置する方法が本明細書中に提供され、本方法は、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記被験体に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。一実施形態において、上記症状は、皮膚に関連する症状である。別の実施形態において、上記皮膚に関連する症状は、腫れた皮膚、肥厚した皮膚、てかてかした皮膚、皮膚の変色または皮膚のしびれである。特定の実施形態において、上記組成物は、上記被験体に局所的に投与される。別の実施形態において、上記組成物は、上記皮膚に関連する症状に冒された皮膚に直接的に投与される。
【０００８】
特定の実施形態において、被験体（例えばヒト被験体）における表皮水疱症の症状を処置する方法が本明細書中に提供され、本方法は、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記被験体に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。一実施形態において、上記症状は、皮膚に関連する症状または粘膜に関連する症状である。別の実施形態において、上記皮膚に関連する症状または粘膜に関連する症状は、水疱である。特定の実施形態において、上記組成物は、上記被験体に局所的に投与される。なお別の実施形態において、上記組成物は、上記皮膚に関連する症状または粘膜に関連する症状に冒された皮膚に直接的に投与される。
【０００９】
特定の実施形態において、再生用医薬中にｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を使用するための方法が、本明細書中に提供され、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。特定の実施形態において、被験体（例えばヒト被験体）における組織を再生するための方法が本明細書中に提供され、本方法は、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記被験体に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。上記組織は、軟組織（例えば皮膚または筋肉）でも硬組織（例えば骨）でもあり得る。いくつかの実施形態において、上記組成物は、再生の必要性がある組織に局所的に投与される。他の実施形態において、上記組成物は、再生の必要性がある組織に、その組織中への局所注射によって投与される。いくつかの実施形態において、上記組成物は、皮内、皮下または筋肉内で投与される。一実施形態において、上記組成物は皮下に投与される。いくつかの実施形態において、上記組成物は、美容手順または外科手順の観点で組織を再生するために使用される。一実施形態において、上記組成物は、形成外科手順の観点で組織を再生するために使用される。これらの適用のいくつかにおいて、ｓＮＡＧナノファイバーは、組織フィラーとして処方される、および／または使用される。これらの適用のいくつかにおいて、ｓＮＡＧナノファイバーは、別の組織フィラーと一緒に処方される、および／または組み合わせて使用される。
【００１０】
特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物が本明細書中に提供され、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さであり、上記組成物は、組織フィラーとして（例えば美容適用および／または外科適用のために）処方される。一実施形態において、上記組成物は、フィラーとして形成外科適用のために処方される。例えば、上記組成物は、軟組織フィラーまたは硬組織フィラーとして処方され得る。特定の例において、上記組成物は、皮膚フィラーとして処方される。ｓＮＡＧナノファイバーを含む組織フィラー組成物は、任意の美容手順または外科手順に使用され得、これらの手順としては、皮膚におけるシワまたは窪みを低減させるため、唇のボリュームを増すおよび／または形状を変更するため、顔（頬を含む。）の任意の領域にボリュームを加えるかもしくは若さに満ちた表情を復元するため、ヒト身体の任意の部位（例えば頸部）にボリュームを加えるかもしくは豊かさを復元するためのものが挙げられるが、これらに限定されない。
【００１１】
特定の実施形態において、被験体（例えばヒト被験体）における組織にボリュームを加えるための方法が本明細書中に提供され、本方法は、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記被験体における組織に（例えば組織への注射によって）投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。上記組織は、軟組織（例えば皮膚または筋肉）でも硬組織（例えば骨）でもあり得る。例えば、本方法は、美容手順または形成外科手順の観点で行われ得る。いくつかの実施形態において、上記組成物は、組織に局所的に投与される。いくつかの実施形態において、上記組成物は、皮内、皮下または筋肉内で投与される。一実施形態において、上記組成物は皮下に投与される。他の実施形態において、上記組成物は、例えば、外科（例えば形成外科）の観点で、組織に局所的に投与され、ここで、上記組成物は、曝露された組織に局所的に投与される。
【００１２】
特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、美容適用および／または外科適用のための組織フィラーとして有用であることが当該分野にて知られている別の因子とともに処方される。例えば、上記組成物は、ヒアルロン酸、コラーゲン、ヒドロキシアパタイトカルシウム、脂質（例えば、ヒト脂質、特に、自己脂質）、ポリ乳酸、死体の真皮（例えばヒト）、ポリメチルメタクリレート、および／またはポリアルキルイミドとともに処方され得るか、あるいはこれらと組み合わせて使用され得る。特定の実施形態において、上記組成物は、ヒアルロン酸とともに処方されるか、あるいはヒアルロン酸と組み合わせて使用される。別の実施形態において、上記組成物は、コラーゲンとともに処方されるか、あるいはコラーゲンと組み合わせて使用される。なお別の実施形態において、上記組成物は、ヒト自己脂質とともに処方され得るか、あるいは、ヒト自己脂質と組み合わせて使用される。一実施形態において、上記組成物は、ボツリヌス毒素とともに処方されるか、あるいはボツリヌス毒素と組み合わせて使用される。なお別の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、別の組織フィラーとともに処方されないか、あるいは別の組織フィラーと組み合わせて使用されない。
【００１３】
特定の実施形態において、被験体（例えばヒト被験体）の皮膚表面におけるシワまたは窪みを処置または予防するための方法が、本明細書中に提供され、本方法は、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記被験体に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。特定の実施形態において、上記組成物は、上記被験体に局所的に投与される。別の実施形態において、上記組成物は、局所注射によって投与される。いくつかの実施形態において、上記組成物は、皮内、皮下または筋肉内に投与される。一実施形態において、上記組成物は、皮下に投与される。特定の実施形態において、上記組成物は、被験体（例えばヒト被験体）の皮膚表面におけるシワまたは窪みを処置または予防するための皮膚フィラーとして処方される、および／または使用される。
【００１４】
特定の実施形態において、ヒト被験体の皮膚表面におけるシワまたは窪みを処置するための方法が、本明細書中に提供され、本方法は、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、シワまたは窪みを有するヒト被験体に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。いくつかの実施形態において、上記組成物は、ヒト被験体の皮膚表面におけるシワまたは窪みに直接的に投与される。別の特定の実施形態において、ヒト被験体の皮膚表面におけるシワまたは窪みを処置するための方法が、本明細書中に提供され、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物が、上記皮膚の表面の下の領域へ局所注射によって投与され、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。いくつかの実施形態において、上記組成物は、皮内、皮下または筋肉内によって投与される。いくつかの実施形態において、上記組成物は、ヒト被験体におけるシワまたは窪みを有する皮膚表面の下の領域に直接的に皮内、皮下または筋肉内に投与される。いくつかの実施形態において、被験体の皮膚表面上の領域におけるシワまたは窪みを低減または除去するための方法が、本明細書中に提供され、本方法は、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記領域中（すあんわち上記皮膚表面の下）に注入する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、ヒト被験体の皮膚表面におけるシワまたは窪みを処置または予防するに効果的である。例えば、ｓＮＡＧナノファイバーは、被験体の皮膚表面上の領域におけるシワまたは窪みを低減または除去するに効果的であり得る。
【００１５】
特定の実施形態において、被験体（例えばヒト被験体）における創傷に関連する瘢痕を低減するための方法が、本明細書中に提供され、本方法は、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記被験体における創傷に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。一実施形態において、上記創傷は手術創である。別の実施形態において、上記創傷は皮膚の外傷である。特定の実施形態において、上記組成物は、上記被験体に局所的に投与される。一実施形態において、上記被験体は、創傷に由来する瘢痕を有しており、上記ｓＮＡＧナノファイバーは瘢痕の領域に局所的に投与される。いくつかの実施形態において、上記組成物は、少なくとも１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日または３０日、あるいは、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日または３０日よりも長く（例えば、少なくとも２１日または２１日よりも長く）局所的に投与される。別の実施形態において、上記被験体は、創傷に由来する瘢痕を有しており、上記ｓＮＡＧナノファイバーは、瘢痕の領域内への局所注射によって投与される。本明細書中に記載される特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、被験体における創傷に関連する瘢痕を低減させるに効果的である。例えば、ｓＮＡＧナノファイバーは、被験体における皮膚の外傷に関連する瘢痕を低減するに効果的であり得る。
【００１６】
特定の実施形態において、ヒト被験体における皮膚の外傷に関連する瘢痕を低減するための方法が、本明細書中に提供され、本方法は、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記ヒト被験体における皮膚の外傷に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。特定の実施形態において、上記組成物は、上記被験体に局所的に投与される。一実施形態において、上記被験体は、皮膚の外傷に由来する癒着を有しており、上記ｓＮＡＧナノファイバーは瘢痕の領域に局所的に投与される。いくつかの実施形態において、上記組成物は、少なくとも１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日または３０日、あるいは、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日または３０日よりも長く局所的に投与される。特定の実施形態において、上記組成物は、２１日間にわたって局所的に投与される。別の実施形態において、上記被験体は、皮膚の外傷に由来する瘢痕を有しており、上記ｓＮＡＧナノファイバーは、瘢痕の領域内への局所注射によって投与される。
【００１７】
特定の実施形態において、被験体（例えばヒト被験体）における創傷に関連する癒着を処置または予防するための方法が、本明細書中に提供され、本方法は、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記被験体における創傷に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。一実施形態において、上記創傷は手術創である。別の実施形態において、上記創傷は皮膚の外傷である。特定の実施形態において、上記組成物は、上記被験体に局所的に投与される。一実施形態において、上記被験体は、創傷に由来する癒着を有しており、上記ｓＮＡＧナノファイバーは癒着の領域に局所的に投与される。いくつかの実施形態において、上記組成物は、少なくとも１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日または３０日、あるいは、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日または３０日よりも長く（例えば、少なくとも２１日または２１日よりも長く）局所的に投与される。別の実施形態において、上記被験体は、創傷に由来する癒着を有しており、上記ｓＮＡＧナノファイバーは、癒着の領域内への局所注射によって投与される。
【００１８】
特定の実施形態において、被験体（例えばヒト被験体）における創傷に関連する線維化を処置または予防するための方法が、本明細書中に提供され、本方法は、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記被験体における創傷に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。一実施形態において、上記創傷は手術創である。別の実施形態において、上記創傷は皮膚の外傷である。特定の実施形態において、上記組成物は、上記被験体に局所的に投与される。一実施形態において、上記被験体は、創傷に関連する線維化を有しており、上記ｓＮＡＧナノファイバーは線維化の領域に局所的に投与される。いくつかの実施形態において、上記組成物は、少なくとも１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日または３０日、あるいは、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日または３０日よりも長く（例えば、少なくとも２１日または２１日よりも長く）局所的に投与される。別の実施形態において、上記被験体は、創傷に関連する線維化を有しており、上記ｓＮＡＧナノファイバーは、線維化の領域内への局所注射によって投与される。
【００１９】
一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは創傷に投与されない。
【００２０】
特定の実施形態において、被験体（例えばヒト被験体）における骨粗鬆症の症状を処置する方法が、本明細書中に提供され、本方法は、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記被験体に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。一実施形態において、上記組成物は、被験体（例えばヒト被験体）における骨密度の低い領域に投与される。別の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、局所注射によって投与される。特定の実施形態において、上記組成物は、上記被験体に局所的に投与される。
【００２１】
特定の実施形態において、被験体（例えばヒト被験体）における椎間板の障害または椎間板の変性の症状を処置する方法が、本明細書中に提供され、本方法は、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記被験体に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。一実施形態において、上記組成物は、被験体（例えばヒト被験体）における腰痛の領域の上記椎間板に投与される。別の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、局所注射によって投与される。特定の実施形態において、上記組成物は、上記被験体に局所的に投与される。
【００２２】
特定の実施形態において、被験体（例えばヒト被験体）における変形性関節症の症状を処置するための方法が、本明細書中に提供され、本方法は、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記被験体に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。一実施形態において、上記ｓＮＡＧナノファイバーは、被験体（例えばヒト被験体）の関節に局所的に投与される。特定の実施形態において、上記組成物は、上記被験体に局所的に投与される。一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、上記被験体（例えばヒト被験体）の関節に局所注射によって投与される。
【００２３】
特定の実施形態において、被験体（例えばヒト被験体）における線維症または線維症の症状を処置するための方法が、本明細書中に提供され、本方法は、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記被験体に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、線維症の危険性があるかまたは線維症である器官または組織に直接的に投与される。一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、線維性組織に（例えば皮膚上に）直接的に投与される。特定の実施形態において、上記組成物は、上記被験体に局所的に投与される。
【００２４】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される方法に従って処置される被験体（例えばヒト）は、組織（例えば皮膚）における、Ｉ型コラーゲンの含有量および発現の増加、ＩＩＩ型コラーゲンの含有量および発現の低下、エラスチンの含有量および発現の低下、および／または、平滑筋アクチンの含有量および発現の増加を有している。さらなる実施形態において、本明細書中に記載される方補に従って処置される被験体（例えばヒト）は、組織（例えば皮膚）の引っ張り強さの低下、および／または組織（例えば皮膚）の伸縮性の低下を有している。さらなる実施形態において、本明細書中に記載される方補に従って処置される被験体（例えばヒト）は、組織（例えば皮膚）における筋線維芽細胞の含有量の増加を有している。
【００２５】
特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、筋肉内への移植試験にて試験された場合に反応性でない。他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、ＭＴＴアッセイにおいて、血清を枯渇させたヒト臍帯静脈内皮細胞の代謝速度を増加させる、および／または、トリパンブルー排除試験において、血清を枯渇させたヒト臍帯静脈内皮細胞のアポトーシスを救助しない。上記方法のさらなる実施形態において、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが、約２〜１０μｍの間の長さである。他の実施形態において、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが、約４〜７μｍの間の長さである。他の実施形態において、上記ｓＮＡＧナノファイバーの１００％が約１〜１５μｍの間の長さである。
【００２６】
本明細書中に記載される方法の特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、リ−Ｎ−アセチルグルコサミンおよび／またはその誘導体のγ線照射によって生成され、ポリ−β−Ｎ−アセチルグルコサミンおよび／またはその誘導体は、乾燥した繊維の形態にて５００〜２０００ｋｇｙで照射されるか、あるいは、上記ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンは、湿った繊維の形態にて１００〜５００ｋｇｙで照射される。特定の実施形態において、上記ｓＮＡＧナノファイバーは、微細藻類のポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンから生成されている。さらなる実施形態において、上記ｓＮＡＧナノファイバーは、Ｎ−アセチルグルコサミン単糖類および／またはグルコサミン単糖類を含み、上記ｓＮＡＧナノファイバーの上記単糖類の７０％よりも多くが、Ｎ−アセチルグルコサミン単糖類である。他の実施形態において、上記ｓＮＡＧナノファイバーは、Ｎ−アセチルグルコサミン単糖類および／またはグルコサミン単糖類を含み、上記ｓＮＡＧナノファイバーの上記単糖類の９０％よりも多くが、Ｎ−アセチルグルコサミン単糖類である。さらに他の実施形態において、上記ｓＮＡＧナノファイバーは、Ｎ−アセチルグルコサミン単糖類および／またはグルコサミン単糖類を含み、上記ｓＮＡＧナノファイバーの上記単糖類の９５％よりも多くが、Ｎ−アセチルグルコサミン単糖類である。
【００２７】
本明細書中で企図される特定の実施形態は、限定されることなく以下を含む（以下の参照番号は、そのような番号で特定される上述した１つ以上に記載される特定事項をいう）：
１．ヒト被験体におけるエーラー・ダンロス症候群の症状を処置するための方法であって、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記ヒト被験体に局所的に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである、方法。
２．上記症状が皮膚に関連する症状である、１に記載の方法。
３．上記皮膚に関連する症状が、柔らかい皮膚、もろい皮膚、容易に傷つく皮膚、過剰に瘢痕化する皮膚、または皮膚における鈍い創傷治癒である、１に記載の方法。
４．上記ｓＮＡＧナノファイバーが、上記皮膚に関連する症状によって冒される皮膚に直接的に投与される、２または３に記載の方法。
５．ヒト被験体における強皮症の症状を処置するための方法であって、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記ヒト被験体に局所的に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである、方法。
６．上記症状が皮膚に関連する症状である、５に記載の方法。
７．上記皮膚に関連する症状が、腫れた皮膚、肥厚した皮膚、てかてかした皮膚、皮膚の変色または皮膚のしびれである、６に記載の方法。
８．上記ｓＮＡＧナノファイバーが、上記皮膚に関連する症状によって冒される皮膚に直接的に投与される、６または７に記載の方法。
９．ヒト被験体における表皮水疱症の症状を処置するための方法であって、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、ヒト被験体に局所的に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである、方法。
１０．上記症状が皮膚に関連する症状または粘膜に関連する症状である、９に記載の方法。
１１．上記皮膚に関連する症状または粘膜に関連する症状が、水疱である、１０に記載の方法。
１２．上記ｓＮＡＧナノファイバーが、上記皮膚に関連する症状または粘膜に関連する症状によって冒される皮膚に直接的に投与される、１０または１１に記載の方法。
１３．ヒト被験体の皮膚表面におけるシワまたは窪みを処置または予防するための方法であって、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記ヒト被験体に局所的に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである、方法。
１４．ヒト被験体の皮膚表面におけるシワまたは窪みを処置するための方法であって、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、シワまたは窪みを有するヒト被験体に局所的に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである、方法。
１５．ヒト被験体における皮膚の外傷に関連する瘢痕を低減ための方法であって、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記ヒト被験体における皮膚の外傷に局所的に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである、方法。
１６．上記被験体が、皮膚の外傷に由来する瘢痕を有し、上記ｓＮＡＧナノファイバーが、上記瘢痕の領域へ局所的に投与される、１５に記載の方法。
１７．上記ｓＮＡＧナノファイバーが２１日間にわたって局所的に投与される、１５または１６に記載の方法。
１８．ヒト被験体における骨粗鬆症を処置するための方法であって、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記ヒト被験体に局所的に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである、方法。
１９．上記ｓＮＡＧナノファイバーが、上記ヒト被験体における骨密度の低い領域に投与される、１８に記載の方法。
２０．ヒト被験体における椎間板の障害または椎間板の変性を処置するための方法であって、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記ヒト被験体に局所的に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである、方法。
２１．上記ｓＮＡＧナノファイバーが、上記ヒト被験体における腰痛の領域の上記椎間板に投与される、２０に記載の方法。
２２．上記ｓＮＡＧナノファイバーが、局所注射によって局所的に投与される、１８〜２１のいずれか１つに記載の方法。
２３．ヒト被験体における変形性関節症を処置するための方法であって、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記ヒト被験体に局所的に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである、方法。
２４．上記ｓＮＡＧナノファイバーが、上記ヒト被験体の関節に局所的に投与される、２３に記載の方法。
２５．上記被験体は、総コラーゲン含有量の増加、Ｉ型コラーゲンの発現の増加、ＩＩＩ型コラーゲンの発現の低下、エラスチンの発現の低下、および／または平滑筋アクチンの発現の増加を有している、１〜２４のいずれか１つに記載の方法。
２６．上記被験体は、皮膚の引っ張り強さの低下、および／または皮膚の伸縮性の低下を有している、１〜２５のいずれか１つに記載の方法。
２７．上記ｓＮＡＧナノファイバーは、筋肉内への移植試験にて試験された場合に反応性でない、１〜２６のいずれか１つに記載の方法。
２８．上記ｓＮＡＧナノファイバーは、ＭＴＴアッセイにおいて、血清を枯渇させたヒト臍帯静脈内皮細胞の代謝速度を増加させる、および／または、トリパンブルー排除試験において、血清を枯渇させたヒト臍帯静脈内皮細胞のアポトーシスを救助しない、１〜２７のいずれか１つに記載の方法。
２９．上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが、約２〜１０μｍの間の長さである、１〜２８のいずれか１つに記載の方法。
３０．上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが、約４〜７μｍの間の長さである、１〜２８のいずれか１つに記載の方法。
３１．上記ｓＮＡＧナノファイバーの１００％が約１〜１５μｍの間の長さである、１〜２８のいずれか１つに記載の方法。
３２．上記ｓＮＡＧナノファイバーが、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンおよび／またはその誘導体のγ線照射によって生成され、ポリ−β−Ｎ−アセチルグルコサミンおよび／またはその誘導体は、乾燥した繊維の形態にて５００〜２０００ｋｇｙで照射されるか、あるいは、上記ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンは、湿った繊維の形態にて１００〜５００ｋｇｙで照射される、１〜３１のいずれか１つに記載の方法。
３３．上記ｓＮＡＧナノファイバーは、微細藻類のポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンから生成された、１〜３２のいずれか１つに記載の方法。
３４．上記ｓＮＡＧナノファイバーは、Ｎ−アセチルグルコサミン単糖類および／またはグルコサミン単糖類を含み、上記ｓＮＡＧナノファイバーの上記単糖類の７０％よりも多くが、Ｎ−アセチルグルコサミン単糖類である、１〜３３のいずれか１つに記載の方法。
３５．上記ｓＮＡＧナノファイバーは、Ｎ−アセチルグルコサミン単糖類および／またはグルコサミン単糖類を含み、上記ｓＮＡＧナノファイバーの上記単糖類の９０％よりも多くが、Ｎ−アセチルグルコサミン単糖類である、１〜３４のいずれか１つに記載の方法。
３６．上記ｓＮＡＧナノファイバーは、Ｎ−アセチルグルコサミン単糖類および／またはグルコサミン単糖類を含み、上記ｓＮＡＧナノファイバーの上記単糖類の９５％よりも多くが、Ｎ−アセチルグルコサミン単糖類である、１〜３５のいずれか１つに記載の方法。
【００２８】
本明細書中で企図される他の特定の実施形態は、限定されることなく以下を含む（以下の参照番号は、そのような番号で特定される上述した１つ以上に記載される特定事項をいう：
１．ヒト被験体の皮膚表面におけるシワまたは窪みを処置または予防するための方法であって、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記ヒト被験体に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである、方法。
２．前記皮膚表面におけるシワまたは窪みを処置する方法であり、前記ヒト被験体は上記皮膚表面上の領域にシワまたは窪みを有し、前記組成物が該領域に投与される、１に記載の方法。
３．前記組成物が局所的に投与される、１または２に記載の方法。
４．前記組成物が、前記皮膚表面の下の領域へ局所注射によって投与され、上記局所注射が、皮内注射、皮下注射または筋肉内注射である、２に記載の方法。
５．ヒト被験体において組織を再生するかまたは組織にボリュームを加えるための方法であって、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記ヒト被験体における上記組織に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである、方法。
６．前記投与する工程が、前記組織への局所注射によって行われ、上記局所注射が、皮内注射、皮下注射または筋肉内注射である、５に記載の方法。
７．ヒト被験体における創傷に関連する瘢痕を低減するか、線維化を低減するか、または癒着を低減するための方法であって、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記ヒト被験体における上記創傷に局所的に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである、方法。
８．前記被験体が、創傷に由来する瘢痕、線維化または癒着を有し、前記ｓＮＡＧナノファイバーが、上記瘢痕、線維化または癒着の領域へ局所的に投与される、７に記載の方法。
９．前記創傷が皮膚の外傷であるかまたは手術創である、７または８に記載の方法。
１０．前記ｓＮＡＧナノファイバーが２１日間にわたって局所的に投与される、７〜９のいずれか１つに記載の方法。
１１．瘢痕を低減させるための、７〜１０のいずれか１つに記載の方法。
１２．ヒト被験体における疾患の症状を処置するための方法であって、
上記疾患は、エーラー・ダンロス症候群、強皮症、表皮水疱症、骨粗鬆症、椎間板障害（intravertebral disc disorder）、椎間板変性、または変形性関節症であり、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、上記ヒト被験体に局所的に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである、方法。
１３．前記疾患が、エーラー・ダンロス症候群、強皮症、または表皮水疱症であり、前記症状が皮膚に関連する症状である、１２に記載の方法。
１４．前記疾患がエーラー・ダンロス症候群であり、前記皮膚に関連する症状が、柔らかい皮膚、もろい皮膚、容易に傷つく皮膚、過剰に瘢痕化する皮膚、または皮膚における鈍い創傷治癒である、１３に記載の方法。
１５．前記疾患が強皮症であり、前記皮膚に関連する症状が、腫れた皮膚、肥厚した皮膚、てかてかした皮膚、皮膚の変色または皮膚のしびれである、１３に記載の方法。
１６．前記疾患が表皮水疱症であり、前記症状が粘膜に関連する症状、必要に応じて水疱である、１２に記載の方法。
１７．前記ｓＮＡＧナノファイバーが前記症状に冒される領域に直接的に投与される、１２〜１６のいずれか１つに記載の方法。
１８．前記疾患が骨粗鬆症であり、前記ｓＮＡＧナノファイバーが、前記ヒト被験体における骨密度の低い領域に投与される、１２に記載の方法。
１９．前記疾患が、椎間板の障害または椎間板の変性であり、前記ｓＮＡＧナノファイバーが、前記ヒト被験体における腰痛の領域の上記椎間板に投与される、１２に記載の方法。
２０．前記ｓＮＡＧナノファイバーが局所注射によって投与される、１８または１９に記載の方法。
２１．前記疾患が変形性関節症であり、前記ｓＮＡＧナノファイバーが、前記ヒト被験体の関節に局所的に投与される、１２に記載の方法。
２２．前記被験体は、総コラーゲン含有量の増加、Ｉ型コラーゲンの発現の増加、ＩＩＩ型コラーゲンの発現の低下、エラスチンの発現の低下、平滑筋アクチンの発現の増加、皮膚の引っ張り強さの低下、および／または皮膚の伸縮性の低下を有している、１〜２１のいずれか１つに記載の方法。
２３．前記ｓＮＡＧナノファイバーは、筋肉内への移植試験にて試験された場合に反応性でない、１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
２４．前記ｓＮＡＧナノファイバーは、ＭＴＴアッセイにおいて、血清を枯渇させたヒト臍帯静脈内皮細胞の代謝速度を増加させる、および／または、トリパンブルー排除試験において、血清を枯渇させたヒト臍帯静脈内皮細胞のアポトーシスを救助しない、１〜２３のいずれか１つに記載の方法。
２５．前記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが、約２〜１０μｍの間の長さであるか、または約４〜７μｍの間の長さであるか、あるいは上記ｓＮＡＧナノファイバーの１００％が約１〜１５μｍの間の長さである、１〜２４のいずれか１つに記載の方法。
２６．前記ｓＮＡＧナノファイバーが、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンおよび／またはその誘導体のγ線照射によって生成され、ポリ−β−Ｎ−アセチルグルコサミンおよび／またはその誘導体は、乾燥した繊維の形態にて５００〜２０００ｋｇｙで照射されるか、あるいは、上記ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンは、湿った繊維の形態にて１００〜５００ｋｇｙで照射される、１〜２５のいずれか１つに記載の方法。
２７．前記ｓＮＡＧナノファイバーは、微細藻類のポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンから生成された、１〜２６のいずれか１つに記載の方法。
２８．前記ｓＮＡＧナノファイバーは、Ｎ−アセチルグルコサミン単糖類および／またはグルコサミン単糖類を含み、上記ｓＮＡＧナノファイバーの上記単糖類の７０％よりも多く、９０％よりも多く、または９５％よりも多くが、Ｎ−アセチルグルコサミン単糖類である、１〜２７のいずれか１つに記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１Ａ】ｓＮＡＧナノファイバーは、組織の抗張力（相対的応力）および弾性を向上させる。損傷を与えた後２１日目における、処置済みおよび未処置の創傷の両方、および損傷を与えていないコントロールの皮膚を回収し、Ｉｎｓｔｒｏｎ５９４２歪みゲージ伸長計およびＢｌｕｅｈｉｌｌ  ３試験ソフトウェアを用いた抗張力および弾性試験に供した。皮膚の抗張力を、皮膚が２０％破壊される前に耐え得る相対的応力を測定することによって決定し、弾性を、ｍｍ伸長によって測定し、抗張力測定結果を図に示した。
【図１Ｂ】ｓＮＡＧナノファイバーは、組織の抗張力（相対的応力）および弾性を向上させる。損傷を与えた後２１日目における、処置済みおよび未処置の創傷の両方、および損傷を与えていないコントロールの皮膚を回収し、Ｉｎｓｔｒｏｎ５９４２歪みゲージ伸長計およびＢｌｕｅｈｉｌｌ  ３試験ソフトウェアを用いた抗張力および弾性試験に供した。皮膚の抗張力を、皮膚が２０％破壊される前に耐え得る相対的応力を測定することによって決定し、弾性を、ｍｍ伸長によって測定し、弾性測定結果を図に示した。
【図２】ｓＮＡＧナノファイバーは、組織のエラスチン生成を増加させる。損傷を与えたのち１０日目における、ｓＮＡＧで処置した創傷動物および（処置していない）コントロールの組織切片のエラスチンファイバーを、ワンギーソン（Van Geison）染色法によって染色した。
【図３】ｓＮＡＧナノファイバーは、組織の瘢痕サイズを縮小させる。損傷を与えた後２１日目における、ｓＮＡＧ処置した創傷動物の瘢痕とコントロール（処置していない）の瘢痕とを、キャリパーを用いて測定した。
【図４Ａ】ｓＮＡＧナノファイバーは、コラーゲンの量を増加させ、コラーゲンの整列を誘導する。損傷を与えた後１０日目の、ｓＮＡＧで処置した創傷およびコントロール（処置していない）の創傷からの組織切片のＭａｓｓｏｎトリクロム染色を示す。
【図４Ｂ】ｓＮＡＧナノファイバーは、コラーゲンの量を増加させ、コラーゲンの整列を誘導する。損傷を与えた後１０日目の、ｓＮＡＧで処置した創傷およびコントロール（処置していない）の創傷におけるコラーゲンの堆積量を定量的に分析したヒドロキシプロリン試験の結果を示す。
【図５】ｓＮＡＧナノファイバーは、Ｉ型コラーゲンの発現を減少させ、ＩＩＩ型コラーゲンの発現を増加させる。損傷を与えた後５日目の、ｓＮＡＧで処置した創傷およびコントロール（処置していない）の創傷から単離したＲＮＡについて、ＲＴ−ＰＣＲによってＩ型コラーゲンおよびＩＩＩ型コラーゲンの発現を試験した。
【図６Ａ】ｓＮＡＧナノファイバーは、α−平滑筋アクチンを減少させる。α−平滑筋アクチンに対する抗体で標識した、ｓＮＡＧで処置した創傷部位または処置していない創傷部位を示す。
【図６Ｂ】ｓＮＡＧナノファイバーは、α−平滑筋アクチンを減少させる。ｓＮＡＧで処置した創傷部位または処置していない創傷部位における、α−平滑筋アクチンの発現を定量化した結果を示す。
【図７Ａ】ｓＮＡＧ処置は、瘢痕サイズの縮小およびより整列したコラーゲンをもたらす。野生型オスマウス（ｎ＝３）において、ｓＮＡＧ膜で処置した切除創傷または処置せずに放置した切除創傷からの瘢痕の大きさを定量化した結果を示す。瘢痕は、治癒の２１日後に測定した。
【図７Ｂ】ｓＮＡＧ処置は、瘢痕サイズの縮小およびより整列したコラーゲンをもたらす。未処置ＷＴマウス（ｎ＝３）およびｓＮＡＧ処置マウス（ｎ＝３）の両方から回収した、損傷を与えた後１０日目の皮膚創傷のパラフィン包埋切片のＭａｓｓｏｎトリクロム染色した結果を示す。２０倍拡大図が創傷領域直下の再生組織に焦点を合わせている一方で、４倍の拡大図は、皮膚部位の全体を示す。矢印は、コラーゲン繊維の配列を示している。
【図７Ｃ】ｓＮＡＧ処置は、瘢痕サイズの縮小およびより整列したコラーゲンをもたらす。ヒドロキシプロリン試験（ｐ＜０．０５）を用いて、ＷＴマウスにおいて行った、未処置の創傷と比較したｓＮＡＧ処置された創傷におけるコラーゲン含量の定量化試験の結果を示す。
【図８Ａ】ｓＮＡＧ処置は、アルファ平滑筋発現を減少させる。損傷を与えてから１０日目に回収した、ｓＮＡＧで処置したＷＴマウス（ｎ＝３）および未処置のＷＴマウス（ｎ＝３）の両方の皮膚創傷のパラフィン包埋切片を示す。α−ＳＭＡおよびＴＯＰＲＯに対する抗体を用いて、免疫蛍光検査（２０倍）を行った。白矢印は、α−ＳＭＡ抗体によって陽染した脈管構造を示す。
【図８Ｂ】ｓＮＡＧ処置は、アルファ平滑筋発現を減少させる。ＮＩＨ  ＩｍａｇｅＪソフトウェアを用いて行った、パラフィン包埋切片からのα−ＳＭＡ発現の定量化の結果を示す（＊ｐ＜．０５）。
【図９Ａ】ｓＮＡＧ処置は、損傷を受けた皮膚の抗張力および弾性の向上を誘導する。ｓＮＡＧ処置したＷＴマウス（ｎ＝３）および未処置のＷＴマウス（ｎ＝３）から得た、損傷を受けた皮膚が耐え得る相対的応力の定量化の結果を示す。組織を、損傷を与えた後２１日目に回収し、機械試験に供した。測定結果は、ＷＴ動物（ｎ＝３）の損傷を与えられていない組織由来のコントロールの皮膚（ＣＴＲＬ）と相対的である。
【図９Ｂ】ｓＮＡＧ処置は、損傷を受けた皮膚の抗張力および弾性の向上を誘導する。損傷を与えてから２１日目のＷＴ動物から回収した、ｓＮＡＧ処置した創傷（ｎ＝３）および未処置の創傷（ｎ＝３）からの皮膚の弾性を定量化した結果を示す。
【図９Ｃ】ｓＮＡＧ処置は、損傷を受けた皮膚の抗張力および弾性の向上を誘導する。損傷を与えていない皮膚（コントロール）、並びに損傷を与えてから１０日目のＷＴ動物の、ｓＮＡＧで処置した創傷および未処置の創傷から得たパラフィン包埋切片のワンギーソン（Van Geison）染色の結果を示す（＊ｐ＜．０５、＊＊ｐ＜．０１）。矢印は、濃く染色されたエラスチン繊維を示す。
【図１０Ａ】ｓＮＡＧ処置は、線維芽細胞の整列を向上させる。パラフィン包埋フィブリンゲルのヘマトキシリン染色部位およびエオシン染色部位の代表的な画像を示す。線維芽細胞を、フィブリンゲルに包埋する前に一晩、血清を枯渇させた状態にし、そして、ｓＮＡＧ（５０μｇ／ｍＬ）で処置しないまたは刺激するのいずれかに供した。黒丸は、フィブリンゲルに設けた、ゲルの収縮に沿う張力点として機能する虫ピンを示している。
【図１０Ｂ】ｓＮＡＧ処置は、線維芽細胞の整列を向上させる。パラフィン包埋フィブリンゲルの免疫蛍光染色の結果を示す。切片をファロイジンおよびＤＡＰＩで標識する。
【図１１Ａ】線維芽細胞のｓＮＡＧに依存した整列は、Ａｋｔ１を必要とする。血清を枯渇させた線維芽細胞、ｓＮＡＧで処置した線維芽細胞、または、ｓＮＡＧによる刺激（５０μｇ／ｍＬ）の前にＡｋｔ１に対するレンチウイルスに形質導入した線維芽細胞、を包埋したフィブリンゲルの収縮を定量化した結果を示す。
【図１１Ｂ】線維芽細胞のｓＮＡＧに依存した整列は、Ａｋｔ１を必要とする。パラフィン包埋フィブリンゲルのヘマトキシリンおよびエオシン染色部位の代表的な画像である。線維芽細胞を、血清を枯渇させた状態とし、そしてｓＮＡＧ刺激（５０μｇ／ｍＬ）の前にスクランブルコントロールまたはＡｋｔ１レンチウイルスのいずれかによって形質導入した。
【図１１Ｃ】線維芽細胞のｓＮＡＧに依存した整列は、Ａｋｔ１を必要とする。ホスホ−ＡｋｔおよびＤＡＰＩに対する抗体を用いた、血清を枯渇させた（未処置）またはｓＮＡＧで処置したフィブリン包埋線維芽細胞の免疫蛍光の結果を示す。
【図１１Ｄ】線維芽細胞のｓＮＡＧに依存した整列は、Ａｋｔ１を必要とする。ｓＮＡＧで処置したＡｋｔ１ヌル動物（ｎ＝３）および未処置のＡｋｔ１ヌル動物（ｎ＝３）からの持ちこたえた皮膚創傷の相対的応力の定量化の結果を示す。組織を、損傷を与えた後２１日目に回収し、機械試験に供した。測定は、Ａｋｔ１−／−動物（ｎ＝３）の損傷を受けていない組織由来のコントロール（ＣＴＲＬ）の皮膚に関連する（＊ｐ＜．０５）。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
［３．１  用語定義］
本明細書中で使用される場合、用語「ｓＮＡＧナノファイバー」、「ｓＮＡＧ」、「タリデルム（Taliderm）」または「タリム（Talymed）」（以前は「タリデルム」として知られた）は、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンおよび／またはその誘導体の短縮化された繊維に関して、交換可能に使用される。好ましい実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンおよび／またはその誘導体の短縮化された繊維の全体からなる。タリデルムまたはタリムは、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンおよび／またはその誘導体の短縮化されたファイバーの全体からなる膜である、ｓＮＡＧナノファイバーの例である。
【００３１】
本明細書中で使用される場合、用語「約」は、所定の値の周辺の範囲を意味しており、得られた値が、明白に記載された値と同一または実質的に同一（例えば、１０％、５％または１％以内）であることを意味している。一実施形態において、用語「約」は、所定の値または範囲の１０％以内であることを意味している。他の実施形態において、用語「約」は、所定の値または範囲の５％以内であることを意味している。他の実施形態において、用語「約」は、所定の値または範囲の１％以内であることを意味している。
【００３２】
本明細書中で使用される場合、用語「疾患」および「障害」は、被験体の状態に関して交換可能に用いられる。ここに記載した方法に基づき治療または予防可能な疾患／障害の例としては、エーラー・ダンロス症候群、表皮水疱症、強皮症、骨粗鬆症、椎間板障害、椎間板変性、変形性関節症、線維症、皮膚のシワ形成、および創傷に伴う瘢痕化が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３３】
本明細書中で使用される場合、用語「被験体」および「患者」は、動物（例えば、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、トリ、シチメンチョウ、ウズラ、ネコ、イヌ、ネズミ、ラット、ウサギ、ギニーピッグ等）に関して、交換可能に用いられる。いくつかの実施形態において、被験体は、非霊長類および霊長類のような哺乳動物である（例えば、サルおよびヒト）。特定の実施形態において、被験体はヒトである。
【００３４】
本明細書中で使用される場合、用語「有効量」は、ｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物を被験体に投与することとの関連でｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物の量に関し、有益な効果または治療効果が得られる量である。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物の「有効量」は、ｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物の量に関し、以下に示す効果のうち、少なくとも１、２、３、４またはそれ以上を達成するために十分な量である：（ｉ）被験体もしくは被験体集団における、疾患またはそれに関連する症状の重大性の縮小または回復；（ｉｉ）疾患に関連する症状の持続期間の短縮；（ｉｉｉ）被験体もしくは被験体集団における、疾患またはそれに関連する症状の進行阻止；（ｉｖ）疾患に関連する症状の後退；（ｖ）疾患に関連する症状の発生または攻撃阻止；（ｖｉ）疾患に関連する症状の再発防止；（ｖｉｉ）被験体もしくは被験体集団の入院発生の減少；（ｖｉｉｉ）被験体もしくは被験体集団の入院期間の短縮；（ｉｘ）被験体もしくは被験体集団の生存率の上昇；（ｘ）被験体もしくは被験体集団の症状の排除；（ｘｉ）被験体もしくは被験体集団の他の療法における予防または治療効果の強化または改善；（ｘｉｉ）被験体もしくは被験体集団における疾患の症状数の減少；（ｘｉｉｉｉ）被験体における組織の抗張力の向上；（ｘｉｖ）被験体の組織における弾性の向上；（ｘｖ）被験体の組織におけるエラスチン含量または生産の増加；（ｘｖｉ）被験体の組織における瘢痕サイズの縮小；（ｘｖｉｉ）被験体の組織における総コラーゲン含量の減少；（ｘｖｉｉｉ）被験体の組織におけるＩ型コラーゲン発現または含量の減少；（ｘｉｘ）被験体の組織におけるＩＩＩ型コラーゲン発現または含量の増加；（ｘｘ）被験体の組織における、より整列したコラーゲンの誘導；（ｘｘｉ）被験体の組織における平滑筋アクチン含量もしくは発現の減少、または筋線維芽細胞含量の減少；（ｘｘｉｉ）組織の抗張力の低下、組織の弾性の低下、組織のコラーゲン含量もしくは異常コラーゲン含量の増加、組織のＩ型コラーゲン発現の増加、組織のＩＩＩ型コラーゲン発現の減少、組織のコラーゲン配列の異常、組織の平滑筋アクチン含量の増加、および組織の筋線維芽細胞含量の増加のうちの、１つ以上が原因となるもしくは１つ以上に関連する症状の攻撃、発生もしくは再発の予防；並びに／または（ｘｘｉｉｉ）例えば、アンケート等のような当業者に公知の方法によって評価した生活の質の向上。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーの「有効量」は、例えば、以下の５．６の項目に記載した特定のｓＮＡＧナノファイバー組成物の量に関連する。
【００３５】
本明細書中で使用される場合、用語「早産のヒト乳児」は、妊娠期間３７週未満で生まれたヒト乳児に関する。
【００３６】
本明細書中で使用される場合、用語「ヒト乳児」は、１歳までのヒトの新生児に関する。
【００３７】
本明細書中で使用される場合、用語「早産のヒト乳児」は、妊娠期間３７週未満（例えば、妊娠３７週、３６週、３５週、３４週、３３週、３２週、３１週、３０週、２９週、２８週、または、２８週よりも少ない週数未満）で生まれた１歳までのヒトの新生児に関する。
【００３８】
本明細書中で使用される場合、用語「ヒト幼児」は、１歳から３歳までのヒトに関する。
【００３９】
本明細書中で使用される場合、用語「ヒト小児」は、１歳から１８歳までのヒトに関する。
【００４０】
本明細書中で使用される場合、用語「ヒト成人」は、１８歳以上のヒトに関する。
【００４１】
本明細書中で使用される場合、用語「高齢のヒト成人」は、６５歳以上のヒトに関する。
【００４２】
本明細書中で使用される場合、１以上の遺伝子産物の「正常」な発現は：（ｉ）処置される症状を示していない被験体、または処置される状態および障害の診断を受けていない被験体において見られることが知られている平均的発現レベル；（ｉｉ）処置される症状を示していない被験体、または処置される病状および障害の診断を受けていない被験体の、３、５、１０、２０、２５、５０またはそれ以上において検出される平均的発現レベル；並びに／または（ｉｉｉ）病状および障害の攻撃前に、ここに記載された組成物を投与した患者において検出される発現レベル、である。
【００４３】
本明細書中で使用される場合、用語「低発現」または「低レベルの発現」は、（例えば、遺伝子によって生成されるタンパク質、ペプチドおよび／またはｍＲＮＡのレベルに基づく）遺伝子発現との関連で、「正常」な遺伝子発現よりも発現が少ないことに関する。特定の実施形態において、「低発現」は、「正常」な遺伝子発現の、９９％未満、９５％未満、９０％未満、８５％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０%未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、または２０％未満の遺伝子発現に関する。他の特定の実施形態において、「低発現」は、「正常」な遺伝子発現の、約２０倍、約１５倍、約１０倍、約５倍、約４倍、約３倍、約２倍、または、約１．５倍少ない遺伝子発現に関する。さらなる実施形態において、「低発現」は、「正常」な遺伝子発現よりも、約１．２５倍、約１、５倍、約２倍、約２．５倍、約３倍、約３．５倍、約４倍、約４．５倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍以上少ない遺伝子発現に関する。
【００４４】
本明細書中で使用される場合、用語「高発現」または「高レベルの発現」は、（例えば、遺伝子によって生成されるタンパク質、ペプチドおよび／またはｍＲＮＡのレベルに基づく）遺伝子発現との関連で、「正常」な遺伝子発現よりも発現が多いことに関する。特定の実施形態において、「高発現」は、「正常」な遺伝子発現の、９９％以上、９５％以上、９０％以上、８５％以上、７５％以上、７０％以上、６５％以上、６０%以上、５５％以上、５０％以上、４５％以上、４０％以上、３５％以上、３０％以上、２５％以上、または２０％以上の遺伝子発現に関する。他の特定の実施形態において、「高発現」は、「正常」な遺伝子発現よりも、約２０倍、約１５倍、約１０倍、約５倍、約４倍、約３倍、約２倍、または、約１．５倍多い遺伝子発現に関する。さらなる実施形態において、「高発現」は、「正常」な遺伝子発現よりも、約１．２５倍、約１、５倍、約２倍、約２．５倍、約３倍、約３．５倍、約４倍、約４．５倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍以上多い遺伝子発現に関する。
【００４５】
本明細書中で使用される場合、用語「変化した発現」または「レベルが変化した発現」は、遺伝子産物に関し、正常な遺伝子発現レベルと異なる（例えば、２０％、２５％、３０％、５０％、７５％、１００％、１５０％、２００％、２５０％、３００％以上）レベルである。
【００４６】
本明細書中で使用される場合、用語「大多数」は、例えば、５０．５％、５１％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％等を含む、５０％を超えることに関する。
【００４７】
本明細書中で使用される場合、用語「治療」は、組織の抗張力もしくは弾性の低下、組織の総コラーゲン含量の増加、組織のＩ型コラーゲン含量（例えば、発現）の増加、組織のＩＩＩ型コラーゲン含量の減少、組織の異常な（例えば、乱れた）コラーゲンの配列、組織のエラスチン含量（例えば、発現）の減少、組織の筋線維芽細胞含量の増加、並びに／またはアルファ平滑筋アクチン含量（例えば、発現）の増加が関連するいずれかの障害または疾患の予防および／または処置において用いられ得る、いずれかの手順、方法、組成物、処方物、および／または物質に関連し得る。障害または疾患の例には、エーラー・ダンロス症候群、表皮剥離、水疱症、強皮症、骨粗鬆症、椎間板障害、椎間板変性、変形性関節症、線維症、皮膚のシワ形成、および創傷に伴う瘢痕が含まれるが、これに限定されない。特定の実施形態において、用語「治療」は、ここに列挙した障害または疾患の処置および／または予防に有益な、薬物治療、アジュバント治療、放射線、手術、生物学的治療、支持療法、および／または他の治療に関する。特定の実施形態において、用語「治療」は、ｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物以外の治療に関する。特定の実施形態において、「さらなる治療」は、ｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物を用いた処置以外の治療に関する。特定の実施形態において、治療は、アジュバント治療としてのｓＮＡＧナノファイバーの使用を含む。例えば、薬物治療、生物学的治療、手術、および／または支持療法と同時に、ｓＮＡＧナノファイバーを用いる。
【００４８】
［４．図面の簡単な説明］
図１：ｓＮＡＧナノファイバーは、組織の抗張力（相対的応力）および弾性を向上させる。損傷を与えた後２１日目における、処置済みおよび未処置の創傷の両方、および損傷を与えていないコントロールの皮膚を回収し、Ｉｎｓｔｒｏｎ５９４２歪みゲージ伸長計およびＢｌｕｅｈｉｌｌ  ３試験ソフトウェアを用いた抗張力および弾性試験に供した。皮膚の抗張力を、皮膚が２０％破壊される前に耐え得る相対的応力を測定することによって決定し、弾性を、ｍｍ伸長によって測定した。（Ａ）は抗張力測定結果であり、（Ｂ）は弾性測定結果である。
【００４９】
図２：ｓＮＡＧナノファイバーは、組織のエラスチン生成を増加させる。損傷を与えたのち１０日目における、ｓＮＡＧで処置した創傷動物および（処置していない）コントロールの組織切片のエラスチンファイバーを、ワンギーソン（Van Geison）染色法によって染色した。
【００５０】
図３：ｓＮＡＧナノファイバーは、組織の瘢痕サイズを縮小させる。損傷を与えた後２１日目における、ｓＮＡＧ処置した創傷動物の瘢痕とコントロール（処置していない）の瘢痕とを、キャリパーを用いて測定した。
【００５１】
図４：ｓＮＡＧナノファイバーは、コラーゲンの量を増加させ、コラーゲンの整列を誘導する。（Ａ）は、損傷を与えた後１０日目の、ｓＮＡＧで処置した創傷およびコントロール（処置していない）の創傷からの組織切片のＭａｓｓｏｎトリクロム染色を示し、（ｂ）は、損傷を与えた後１０日目の、ｓＮＡＧで処置した創傷およびコントロール（処置していない）の創傷におけるコラーゲンの堆積量を定量的に分析したヒドロキシプロリン試験の結果を示す。
【００５２】
図５：ｓＮＡＧナノファイバーは、Ｉ型コラーゲンの発現を減少させ、ＩＩＩ型コラーゲンの発現を増加させる。損傷を与えた後５日目の、ｓＮＡＧで処置した創傷およびコントロール（処置していない）の創傷から単離したＲＮＡについて、ＲＴ−ＰＣＲによってＩ型コラーゲンおよびＩＩＩ型コラーゲンの発現を試験した。
【００５３】
図６：ｓＮＡＧナノファイバーは、α−平滑筋アクチンを減少させる。（Ａ）は、α−平滑筋アクチンに対する抗体で標識した、ｓＮＡＧで処置した創傷部位または処置していない創傷部位を示す。（Ｂ）は、ｓＮＡＧで処置した創傷部位または処置していない創傷部位における、α−平滑筋アクチンの発現を定量化した結果を示す。
【００５４】
図７：ｓＮＡＧ処置は、瘢痕サイズの縮小およびより整列したコラーゲンをもたらす。（Ａ）は、野生型オスマウス（ｎ＝３）において、ｓＮＡＧ膜で処置した切除創傷または処置せずに放置した切除創傷からの瘢痕の大きさを定量化した結果を示す。瘢痕は、治癒の２１日後に測定した。（Ｂ）は、未処置ＷＴマウス（ｎ＝３）およびｓＮＡＧ処置マウス（ｎ＝３）の両方から回収した、損傷を与えた後１０日目の皮膚創傷のパラフィン包埋切片のＭａｓｓｏｎトリクロム染色した結果を示す。２０倍拡大図が創傷領域直下の再生組織に焦点を合わせている一方で、４倍の拡大図は、皮膚部位の全体を示す。矢印は、コラーゲン繊維の配列を示している。（Ｃ）は、ヒドロキシプロリン試験（ｐ＜０．０５）を用いて、ＷＴマウスにおいて行った、未処置の創傷と比較したｓＮＡＧ処置された創傷におけるコラーゲン含量の定量化試験の結果を示す。
【００５５】
図８：ｓＮＡＧ処置は、アルファ平滑筋発現を減少させる。（Ａ）は、損傷を与えてから１０日目に回収した、ｓＮＡＧで処置したＷＴマウス（ｎ＝３）および未処置のＷＴマウス（ｎ＝３）の両方の皮膚創傷のパラフィン包埋切片を示す。α−ＳＭＡおよびＴＯＰＲＯに対する抗体を用いて、免疫蛍光検査（２０倍）を行った。白矢印は、α−ＳＭＡ抗体によって陽染した脈管構造を示す。（Ｂ）は、ＮＩＨ  ＩｍａｇｅＪソフトウェアを用いて行った、パラフィン包埋切片からのα−ＳＭＡ発現の定量化の結果を示す（＊ｐ＜．０５）。
【００５６】
図９：ｓＮＡＧ処置は、損傷を受けた皮膚の抗張力および弾性の向上を誘導する。（Ａ）は、ｓＮＡＧ処置したＷＴマウス（ｎ＝３）および未処置のＷＴマウス（ｎ＝３）から得た、損傷を受けた皮膚が耐え得る相対的応力の定量化の結果を示す。組織を、損傷を与えた後２１日目に回収し、機械試験に供した。測定結果は、ＷＴ動物（ｎ＝３）の損傷を与えられていない組織由来のコントロールの皮膚（ＣＴＲＬ）と相対的である。（Ｂ）は、損傷を与えてから２１日目のＷＴ動物から回収した、ｓＮＡＧ処置した創傷（ｎ＝３）および未処置の創傷（ｎ＝３）からの皮膚の弾性を定量化した結果を示す。（Ｃ）は、損傷を与えていない皮膚（コントロール）、並びに損傷を与えてから１０日目のＷＴ動物の、ｓＮＡＧで処置した創傷および未処置の創傷から得たパラフィン包埋切片のワンギーソン（Van Geison）染色の結果を示す（＊ｐ＜．０５、＊＊ｐ＜．０１）。矢印は、濃く染色されたエラスチン繊維を示す。
【００５７】
図１０：ｓＮＡＧ処置は、線維芽細胞の整列を向上させる。（Ａ）は、パラフィン包埋フィブリンゲルのヘマトキシリン染色部位およびエオシン染色部位の代表的な画像を示す。線維芽細胞を、フィブリンゲルに包埋する前に一晩、血清を枯渇させた状態にし、そして、ｓＮＡＧ（５０μｇ／ｍＬ）で処置しないまたは刺激するのいずれかに供した。黒丸は、フィブリンゲルに設けた、ゲルの収縮に沿う張力点として機能する虫ピンを示している。（Ｂ）は、パラフィン包埋フィブリンゲルの免疫蛍光染色の結果を示す。切片をファロイジンおよびＤＡＰＩで標識する。
【００５８】
図１１：線維芽細胞のｓＮＡＧに依存した整列は、Ａｋｔ１を必要とする。（Ａ）は、血清を枯渇させた線維芽細胞、ｓＮＡＧで処置した線維芽細胞、または、ｓＮＡＧによる刺激（５０μｇ／ｍＬ）の前にＡｋｔ１に対するレンチウイルスに形質導入した線維芽細胞、を包埋したフィブリンゲルの収縮を定量化した結果を示す。（Ｂ）は、パラフィン包埋フィブリンゲルのヘマトキシリンおよびエオシン染色部位の代表的な画像である。線維芽細胞を血清を枯渇させた状態とし、そしてｓＮＡＧ刺激（５０μｇ／ｍＬ）の前にスクランブルコントロールまたはＡｋｔ１レンチウイルスのいずれかによって形質導入した。（Ｃ）は、ホスホ−ＡｋｔおよびＤＡＰＩに対する抗体を用いた、血清を枯渇させた（未処置）またはｓＮＡＧで処置したフィブリン包埋線維芽細胞の免疫蛍光の結果を示す。（Ｄ）ｓＮＡＧで処置したＡｋｔ１ヌル動物（ｎ＝３）および未処置のＡｋｔ１ヌル動物（ｎ＝３）からの持ちこたえた皮膚創傷の相対的応力の定量化の結果を示す。組織を、損傷を与えた後２１日目に回収し、機械試験に供した。測定は、Ａｋｔ１−／−動物（ｎ＝３）の損傷を受けていない組織由来のコントロール（ＣＴＲＬ）の皮膚に関連する（＊ｐ＜．０５）。
【００５９】
［５．発明の詳細な説明］
本発明の発明者らは、ｓＮＡＧナノファイバーが、組織における抗張力の向上、組織における弾性の向上、組織における総コラーゲン含量または異常なコラーゲンの含量の減少、組織におけるＩ型コラーゲン発現の減少、組織におけるＩＩＩ型コラーゲン発現の増加、組織におけるコラーゲンの整列の誘導、組織におけるエラスチン生成の増加、組織における平滑筋アクチン発現の減少、および／または組織における筋線維芽細胞含量の減少、を可能にすることを見出した。特に、以下の項目６に挙げた実施例において実証しているように、本発明の発明者らは、ｓＮＡＧナノファイバーが、皮膚の創傷治癒中の、抗張力の向上、弾性の向上、エラスチン生成の増加、総コラーゲン含量の減少、Ｉ型コラーゲン発現の減少、ＩＩＩ型コラーゲン発現の増加、コラーゲンの整列の誘導、およびアルファ平滑筋アクチンの減少、を可能にすることを見出した。
【００６０】
それゆえに、いずれの作用メカニズムにも拘束されることなく、ｓＮＡＧナノファイバーは、組織の抗張力の低下、組織の弾性の低下、組織におけるエラスチン含量（例えば、発現）の減少、組織における総コラーゲン含量もしくは異常なコラーゲンの含量の増加、組織におけるＩ型コラーゲン発現の増加、組織におけるＩＩＩ型コラーゲン発現の減少、組織におけるコラーゲン配列の異常、組織における平滑筋アクチンの増加、および／または組織における筋線維芽細胞含量の増加、に関連する病状、疾患および障害のいずれかの処置において作用し得る。ある局面において、ｓＮＡＧナノファイバーは、皮膚の抗張力の低下、皮膚の弾性の低下、皮膚におけるエラスチン含量（例えば、発現）の減少、皮膚における総コラーゲン含量もしくは異常なコラーゲンの含量の減少、皮膚におけるＩ型コラーゲン含量（例えば、発現）の増加、皮膚におけるＩＩＩ型コラーゲン含量（例えば、発現）の減少、皮膚におけるコラーゲンの異常な（例えば、乱れた）配列、皮膚における平滑筋アクチン発現の増加、および／または皮膚における筋線維芽細胞含量の増加、に関連する病状、疾患および障害のいずれかの処置において機能し得る。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、抗張力の増強、細胞におけるコラーゲン整列の媒介、弾性の増強、および／または皮膚におけるエラスチン生成の増加させるように作用し得る。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、皮膚創傷治癒に関連する、病状、疾患および障害のいずれかの処置において作用し得る。一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、皮膚創傷治癒中の、瘢痕の縮小、抗張力の向上、および／または細胞もしくは細胞中のコラーゲンの整列の媒介に作用し得る。
【００６１】
したがって、組織の抗張力の低下、組織の弾性の低下、組織におけるエラスチン含量（例えば、発現）の減少、組織における総コラーゲン含量もしくは異常なコラーゲンの含量の増加、組織におけるＩ型コラーゲン含量（例えば、発現）の増加、組織におけるＩＩＩ型コラーゲン含量（例えば、発現）の減少、組織におけるコラーゲンの異常な（例えば、乱れた）配列、組織における平滑筋アクチン含量（例えば、発現）の増加（例えば、組織におけるアルファ平滑筋アクチン含量の増加）、および／または組織における筋線維芽細胞含量の増加、に関連する病状および障害のいずれかを予防および／または処置する方法におけるｓＮＡＧナノファイバーの使用について、ここに記載する。特に、組織の抗張力の低下、組織の弾性の低下、組織におけるエラスチン含量（例えば、発現）の減少、組織における総コラーゲン含量もしくは異常なコラーゲンの含量の増加、組織におけるＩ型コラーゲン含量（例えば、発現）の増加、組織におけるＩＩＩ型コラーゲン含量（例えば、発現）の減少、組織におけるコラーゲンの異常な（例えば、乱れた）配列、組織における平滑筋アクチン（例えば、アルファ平滑筋アクチン）含量（例えば、発現）の増加、および／または組織における筋線維芽細胞含量の増加、に関連する病状、疾患または障害のいずれかを予防および／または処置する方法におけるｓＮＡＧナノファイバーの原則的な使用について、ここに記載する。また、瘢痕の縮小、弾性の向上、または皮膚の抗張力の向上のための方法におけるｓＮＡＧナノファイバーの使用について、ここに記載する。また、ヒト被験体において、組織の再生または組織容積の増加（例えば、組織フィラーとしてのｓＮＡＧナノファイバーの使用）のための方法におけるｓＮＡＧナノファイバーの使用について、ここに記載する。
【００６２】
特定の実施形態において、患者の皮膚におけるシワまたは瘢痕形成を予防または処置するための方法におけるｓＮＡＧナノファイバーの使用について、ここに記載する。他の実施形態において、皮膚の創傷に関連する瘢痕を、ｓＮＡＧナノファイバーを用いて縮小させる方法におけるｓＮＡＧナノファイバーの使用について、ここに記載する。いくつかの実施形態において、患者におけるシワ、瘢痕または皮膚創傷を処置する方法におけるｓＮＡＧナノファイバーの使用についてここに記載し、この患者は、組織の抗張力が低下、組織の弾性が低下、組織におけるエラスチン含量が減少、組織における総コラーゲン含量もしくは異常なコラーゲンの含量が増加、組織におけるＩ型コラーゲン発現が増加、組織におけるＩＩＩ型コラーゲン発現が減少、組織におけるコラーゲンの異常な配列、アルファ平滑筋アクチンが増加、または筋線維芽細胞含量が増加している。他の実施形態において、エーラー・ダンロス症候群、表皮剥離、水疱症、強皮症、骨粗鬆症、椎間板障害、椎間板変性、変形性関節症、または線維症を処置する方法におけるｓＮＡＧナノファイバーの使用について、ここに記載する。例えば、ｓＮＡＧナノファイバーは、上述した疾患または障害の１以上の症状を低減させるために用いられ得る。
【００６３】
［５．１  ｓＮＡＧナノファイバー］
ｓＮＡＧナノファイバー組成物をここに記載する。ｓＮＡＧナノファイバーは、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンおよび／またはその誘導体のファイバーを含んでおり、例えば、走査型電子顕微鏡（「ＳＥＭ」）のような、当業者に公知のいずれかの方法によって測定した長さは概ね３０μｍよりも短く、少なくとも１μｍである。このようなｓＮＡＧナノファイバーは、例えば、本明細書に記載したように得ることができる。
【００６４】
特定の実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバー（さらに、特定の実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％もしくは１００％、または、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％もしくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバー）は、例えばＳＥＭのような、当業者に公知の何れかの方法によって測定した長さが、約３０、２５、２０、１５、１２、１０、９、８、７、６、５、４または３μｍよりも短く、少なくとも１μｍである。特定の実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバー（さらに、特定の実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％もしくは１００％、または、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％もしくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバー）は、例えばＳＥＭのような、当業者に公知の何れかの方法によって測定した長さが、約１５μｍまたは約１２μｍよりも短く、少なくとも１μｍである。特定の実施形態において、全て（１００％）のｓＮＡＧナノファイバーは、例えばＳＥＭのような、当業者に公知の何れかの方法によって測定した長さが、約１５μｍまたは約１０μｍよりも短く、少なくとも１μｍである。特定の実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバー（さらに、特定の実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％もしくは１００％、または、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％もしくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバー）は、例えばＳＥＭのような、当業者に公知の何れかの方法によって測定した長さが、１４、１３、１２、１１、１０、９、８または７μｍ以下であり、少なくとも１μｍである。特定の実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバー（さらに、特定の実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％もしくは１００％、または、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％もしくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバー）は、例えばＳＥＭのような、当業者に公知の何れかの方法によって測定した長さが、１〜１５、２〜１５、２〜１４、１〜１２、２〜１２、１〜１０、２〜１０、３〜１２、３〜１０、４〜１２、４〜１０、５〜１２、５〜１０、１〜９、２〜９、３〜９、１〜８、２〜８、３〜８、４〜８、１〜７、２〜７、３〜７、４〜７、１〜６、１〜５、１〜４、または、１〜３μｍである。
【００６５】
特定の実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバー（さらに、特定の実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％もしくは１００％、または、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％もしくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバー）は、例えばＳＥＭのような、当業者に公知の何れかの方法によって測定した長さが、約８、７、６、５、４、３または２μｍである。他の特定の実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバー（さらに、特定の実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％もしくは１００％、または、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％もしくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバー）は、例えばＳＥＭのような、当業者に公知の何れかの方法によって測定した長さが、約２〜１０μｍ、約３〜８μｍ、約４〜７μｍ、約４〜１０μｍ、または、約５〜１０μｍである。他の特定の実施形態において、全て（１００％）のｓＮＡＧナノファイバーは、例えばＳＥＭのような、当業者に公知の何れかの方法によって測定した長さが、約２〜１０μｍ、約３〜８μｍ、約４〜７μｍ、約４〜１０μｍ、または、約５〜１０μｍである。
【００６６】
特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、電子顕微鏡によって決定した厚みおよび／または直径が０．００５〜５μｍの範囲である。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、平均またはいずれかの範囲（例えば、０．０２〜２μｍ、０．０２〜１μｍ、０．０２〜０．７５μｍ、０．０２〜０．５μｍ、０．０２〜０．５μｍ、０．０５〜１μｍ、０．０５〜０．７５μｍ、０．０５〜０．５μｍ、０．１〜１μｍ、０．１〜０．７５μｍ、０．１〜０．５μｍ等）における厚みおよび／または直径が、約０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．２５、０．３、０．３５、０．４、０．４５、０．５、０．５５、０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．２、２．４、２．６、２．８、３または４μｍである。特定の実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバー（さらに、特定の実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％もしくは１００％、または、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％もしくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバー）は、厚みまたは直径が、約０．０２〜１μｍである。他の特定の実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバー（さらに、特定の実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％もしくは１００％、または、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％もしくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバー）は、厚みまたは直径が、約０．０５〜０．５μｍである。特定の実施形態において、全て（１００％）のｓＮＡＧナノファイバーは、厚みまたは直径が、約０．０２〜１μｍまたは約０．０５〜０．５μｍである。特定の実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバー（さらに、特定の実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％もしくは１００％、または、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％もしくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバー）は、厚みまたは直径が、約０．０２〜２μｍ、０．０２〜１μｍ、０．０２〜０．７５μｍ、０．０２〜０．５μｍ、０．０２〜０．５μｍ、０．０５〜１μｍ、０．０５〜０．７５μｍ、０．０５〜０．５μｍ、０．１〜１μｍ、０．１〜０．７５μｍ、または、０．１〜０．５μｍである。
【００６７】
特定の実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバー（さらに、特定の実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％もしくは１００％、または、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％もしくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバー）は、長さが１〜１５μｍの間である、または、長さが１〜１０μｍ、２〜１０μｍ、３〜１０μｍ、４〜１０μｍ、４〜７μｍ、５〜１０μｍもしくは５〜１５μｍの間（もしくはその範囲内）であり、そして、厚みまたは直径が、約０．０２〜１μｍである。
【００６８】
特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーの分子量は、１００ｋＤａ、９０ｋＤａ、８０ｋＤａ、７５ｋＤａ、７０ｋＤａ、６５ｋＤａ、６０ｋＤａ、５５ｋＤａ、５０ｋＤａ、４５ｋＤＡ、４０ｋＤａ、３５ｋＤａ、３０ｋＤａまたは２５ｋＤａよりも小さい。特定の実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバー（さらに、特定の実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％もしくは１００％、または、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％もしくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバー）は、分子量が、１００ｋＤａ、９０ｋＤａ、８０ｋＤａ、７５ｋＤａ、７０ｋＤａ、６５ｋＤａ、６０ｋＤａ、５５ｋＤａ、５０ｋＤａ、４５ｋＤａ、４０ｋＤａ、３５ｋＤａ、３０ｋＤａまたは２５ｋＤａよりも小さい。他の実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバー（さらに、特定の実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％もしくは１００％、または、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％もしくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバー）は、分子量が、約５ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜８０ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜８０ｋＤａ、２０ｋＤａ〜７５ｋＤａ、約２５ｋＤａ〜約７５ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜約８０ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜約７５ｋＤａ、約４０ｋｄａ〜約８０ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜約７５ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜約７０ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜約７０ｋＤａまたは約５５ｋＤａ〜約６５ｋＤａの間である。特定の実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバー（さらに、特定の実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％もしくは１００％、または、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％もしくは９５％〜９９％のｓＮＡＧナノファイバー）は、分子量が、約６０ｋＤａである。
【００６９】
特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーの１％〜５％、５％〜１０％、５％〜１５％、２０％〜３０％または２５％〜３０％は、脱アセチル化されている。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーの１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％または３０％は、脱アセチル化されている。他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーの３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満は、脱アセチル化されている。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーの１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％以上、または、全て（１００％）は、脱アセチル化されている。の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーの１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％未満は、脱アセチル化されている。
【００７０】
特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーの７０％〜８０％、７５％〜８０％、７５％〜８５％、８５％〜９５％、９０％〜９５％、９０％〜９９％または９５％〜１００％は、アセチル化されている。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーの７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％または１００％は、アセチル化されている。他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーの７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％よりも多くは、アセチル化されている。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーの１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％もしくは９９％以上、または、全て（１００％）は、アセチル化されている。他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーの１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％未満は、アセチル化されている。
【００７１】
特定の実施形態において、大多数のｓＮＡＧナノファイバー（さらに、特定の実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％もしくは１００％のｓＮＡＧナノファイバー）は、２〜１２μｍ、２〜１０μｍ、４〜１５μｍ、４〜１０μｍ、５〜１５μｍもしくは５〜１０μｍの間（またはその範囲内）であり、このようなｓＮＡＧナノファイバーの少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％は、アセチル化されている。
【００７２】
特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、少なくとも１つのグルコサミン単糖類を含んでおり、さらに、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％のＮ−アセチルグルコサミン単糖類を含んでいてもよい。他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、少なくとも１つのＮ−アセチルグルコサミン単糖類を含んでおり、さらに、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％のグルコサミン単糖類をさらに含んでいてもよい。
【００７３】
ある局面において、ｓＮＡＧナノファイバーは、ＭＴＴアッセイにおいて、血清を枯渇させたヒト臍帯静脈内皮細胞（「ＥＣ」）の代謝速度を上昇させる。ＭＴＴアッセイは、細胞増殖（細胞成長）を測定するための、臨床試験および標準比色分析（色の変化を測定する分析）である。簡単に言うと、黄色ＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム臭化物、テトラゾール）は、生細胞のミトコンドリアにおいて、紫ホルマザンに変換される。ミトコンドリア還元酵素が活性であるときにのみこの変換は生じ、それゆえに、この変換は、細胞の生存数（生細胞の数）に直接関連する。ＭＴＴアッセイは、WO2011/130646およびWO2012/142581に記載されており、これらの全体が参考として本明細書中に援用される。細胞の代謝速度は、また、当業者に周知の他の技術によって決定してもよい。
【００７４】
他の局面において、ｓＮＡＧナノファイバーは、トリパンブルー排除試験において、血清を枯渇させたＥＣのアポトーシスを救助しない。トリパンブルー排除試験は、細胞懸濁液に存在する生存細胞数を決定するために用いられる、色素排除試験である。生細胞が、トリパンブルー、エオシンまたはプロピジウムのような特定の色素を排除する完全細胞膜を有している一方で、死亡細胞が有していないという原理に基づいている。トリパンブルー分析は、WO2011/130646およびWO2012/142581に記載されており、これらの全体が参考として本明細書中に援用される。細胞の生存能力は、また、当業者に周知の他の技術によって決定してもよい。
【００７５】
特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを含む組成物を記載しており、このｓＮＡＧナノファイバーは、ＭＴＴアッセイにおける血清を枯渇させたヒト臍帯静脈内皮細胞の代謝速度を上昇させる、および／または、トリパンブルー排除試験における血清を枯渇させたヒト臍帯静脈内皮細胞のアポトーシスを救助しない。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、ＭＴＴアッセイにおける血清を枯渇させたヒト臍帯静脈内皮細胞の代謝速度を上昇させ、そして、トリパンブルー排除試験における血清を枯渇させたヒト臍帯静脈内皮細胞のアポトーシスを救助しない。
【００７６】
特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは生体適合性がある。溶出試験、筋肉注入、または、動物被験体への皮内もしくは全身投与のような処置を含むが、これらに限定されない種々の技術により、生体適合性を決定してもよい。このような試験は、米国特許番号6,686,342（例えば実施例１０参照）に記載されており、これらの全体が参考として本明細書中に援用される。生体適合性試験のいくつかは、WO2011/130646およびWO2012/142581にも記載されており、これらの全体が参考として本明細書中に援用される。
【００７７】
特定の実施形態において、ここに記載した方法において使用されるｓＮＡＧナノファイバーは、生体適合性試験または試験群において、反応性ではない。例えば、ここに記載した方法において使用されるｓＮＡＧナノファイバーは、溶出試験、筋肉注入試験、皮内試験、および／または、全身性試験において試験した場合に、反応性ではない。他の実施形態において、ここに記載した方法において使用されるｓＮＡＧナノファイバーは、溶出試験、筋肉注入試験、皮内試験または全身性試験において試験した場合に、試験結果がグレード０またはグレード１である。さらに他の実施形態において、ここに記載した方法において使用されるｓＮＡＧナノファイバーは、溶出試験、筋肉注入試験、皮内試験、および／または全身性試験において試験した場合に、最も穏やかに反応する。特定の実施形態において、ここに記載した組成物は、アレルギー反応または炎症を引き起こさない。他の実施形態において、ここに記載した組成物が、例えば適用部位において引き起こすアレルギー反応または炎症は、最も穏やかである。試験結果に関連する試験および評価は、米国特許番号6,686,342、WO2011/130646およびWO2012/142581に記載されており、これらの全体が参考として本明細書中に援用される。
【００７８】
具体的な実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、筋肉内への移植試験において試験された場合に反応性でない。一局面において、筋肉内への移植試験は、後出の項６．８．３に記載されているような、筋肉内への移植試験（ＩＳＯ  ４週間の移植）である。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、溶出試験によって決定される生物反応性を示さない（溶出試験グレード＝０）。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、皮内注射試験によって決定される試験スコアが「０」に等しく、および／または、最大でも無視できる程度の刺激性である。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、クライン試験において皮内での反応を誘発せず（すなわち、グレードＩの反応）、および／または、クライン試験によって決定される弱いアレルギーポテンシャル（allergenic potential）を有する。ＷＯ２０１１／１３０６４６およびＷＯ２０１２／１４２５８１（各々の全体が参考として本明細書中に援用される。）は、ｓＮＡＧナノファイバーが、筋肉内への移植試験、皮内注射試験およびクライン試験において反応性でないことを示している。
【００７９】
特定の局面において、ｓＮＡＧナノファイバーは、免疫的に中性である（すなわち、これらは、免疫反応を誘発しない。）。
【００８０】
いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、生分解性である。ｓＮＡＧナノファイバーは、患者に投与した後または移植した後、好ましくは、約１日間、２日間、３日間、５日間、７日間（１週間）、８日間、１０日間、１２日間、１４日間（２週間）、１７日間、２１日間（３週間）、２５日間、２８日間（４週間）、３０日間、１か月間、３５日間、４０日間、４５日間、５０日間、５５日間、６０日間、２か月間、６５日間、７０日間、７５日間、８０日間、８５日間、９０日間、３か月間、９５日間、１００日間または４か月間以内に分解される。
【００８１】
特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、検出可能な異物反応を引き起こさない。異物反応は、創傷治癒の間に起こり得るものであり、外傷部位における滲出液の蓄積、当該部位を清浄化する炎症細胞の浸潤、および肉芽組織の形成を含む。異物が持続的に存在することは、完全な治癒を阻害し得る。異物反応は、創傷治癒において発生する再吸収および再構築よりも、異物巨細胞の形成、異物の被包（encapsulation）、および慢性炎症によって特徴付けられる。被包とは、異物の周囲に堆積した、固く、一般的に無血管性のコラーゲンのシェルが宿主組織から異物を効果的に隔離することを指す。一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを用いた部位（例えば、創傷、または創傷において細菌感染した部位）の処置は、処置後、１日間、３日間、５日間、７日間、１０日間または１４日間は異物反応を引き起こさない。一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを用いた部位（例えば、創傷）の処置は、処置後１日間、３日間、５日間、７日間、１０日間または１４日間、異物の被包を誘発しない。
【００８２】
いくつかの実施形態において、（ｉ）ｓＮＡＧナノファイバーは、繊維を含有しており、当該繊維の大多数は、長さが約１ミクロンと約１５ミクロンとの間であり、そして、（ｉｉ）（ａ）ｓＮＡＧファイバーは、ＭＴＴアッセイにおいて血清飢餓ＥＣの代謝速度を増加させ、および／または、トリパンブルー排除試験において血清飢餓ＥＣのアポトーシスを救助せず、そして、（ｉｉ）（ｂ）ｓＮＡＧファイバーは、筋肉内への移植試験において試験された場合に反応性でない。特定の実施形態において、（ｉ）ｓＮＡＧナノファイバーは、繊維を含有しており、当該繊維の大多数は長さが約１ミクロンと約１２ミクロンとの間であり、そして、（ｉｉ）（ａ）ｓＮＡＧナノファイバーは、ＭＴＴアッセイにおいて血清飢餓ＥＣの代謝速度を増加させ、および／または、トリパンブルー排除試験において血清飢餓ＥＣのアポトーシスを救助せず、そして、（ｉｉ）（ｂ）ｓＮＡＧナノファイバーは、筋肉内への移植試験において試験された場合に反応性でない。いくつかの実施形態において、（ｉ）ｓＮＡＧナノファイバーは、繊維を含有しており、当該繊維の大多数は、長さが、１ミクロンから１０ミクロン、２ミクロンから１０ミクロン、４ミクロンから１０ミクロン、５ミクロンから１０ミクロン、または５ミクロンから１５ミクロン、までの間（または、の範囲）であり、そして、（ｉｉ）（ａ）ｓＮＡＧナノファイバーは、ＭＴＴアッセイにおいて血清飢餓ＥＣの代謝速度を増加させ、および／または、トリパンブルー排除試験において血清飢餓ＥＣのアポトーシスを救助せず、そして、（ｉｉ）（ｂ）ｓＮＡＧナノファイバーは、筋肉内への移植試験において試験された場合に反応性でない。いくつかの実施形態において、（ｉ）ｓＮＡＧナノファイバーは、繊維を含有しており、当該繊維の大多数は、長さが約４ミクロンと約１０ミクロンとの間であり、そして、（ｉｉ）（ａ）ｓＮＡＧファイバーは、ＭＴＴアッセイにおいて血清飢餓ＥＣの代謝速度を増加させ、および／または、トリパンブルー排除試験において血清飢餓ＥＣのアポトーシスを救助せず、そして、（ｉｉ）（ｂ）ｓＮＡＧファイバーは、筋肉内への移植試験において試験された場合に反応性でない。特定の実施形態において、（ｉ）ｓＮＡＧナノファイバーは、繊維を含有しており、当該繊維の大多数は長さが約４ミクロンと約７ミクロンとの間であり、そして、（ｉｉ）（ａ）ｓＮＡＧナノファイバーは、ＭＴＴアッセイにおいて血清飢餓ＥＣの代謝速度を増加させ、および／または、トリパンブルー排除試験において血清飢餓ＥＣのアポトーシスを救助せず、そして、（ｉｉ）（ｂ）ｓＮＡＧナノファイバーは、筋肉内への移植試験において試験された場合に反応性でない。
【００８３】
特定の実施形態において、上記ｓＮＡＧナノファイバーは、当業者によって決定されるS. aureus等の細菌の増殖または生存に対して直接的な影響を与えない。他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、ＷＯ２０１１／１３０６４６（その全体が参考として本明細書中に援用される。）に記載されている方法によって決定されるように、S. aureus等の細菌の増殖または生存に対して直接的な影響を与えない。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、インビトロにおいて細菌の増殖または生存に対して直接的な影響を与えない。一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、（例えば、インビトロにおいて）グラム陰性細菌の増殖または生存に対して直接的な影響を与えない。別の実施形態において、上記ｓＮＡＧナノファイバーは、（例えば、インビトロにおいて）グラム陽性細菌の増殖または生存に対して直接的な影響を与えない。さらに別の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、（例えば、インビトロにおいて）グラム陽性細菌またはグラム陰性細菌のどちらの増殖または生存に対しても直接的な影響を与えない。
【００８４】
いくつかの実施形態において、（ｉ）ｓＮＡＧナノファイバーは、繊維を含有し、ファイバーの大多数は、長さが、約１ミクロンおよび約１５ミクロン、約１ミクロンおよび約１２ミクロン、約１ミクロンおよび約１０ミクロン、約４ミクロンおよび約１０ミクロン、約４ミクロンおよび約１５ミクロン、約５ミクロンおよび約１０ミクロン、約５ミクロンおよび約１５ミクロン、または約４ミクロンおよび約７ミクロン、の間（または、の範囲）であり、（ｉｉ）ｓＮＡＧナノファイバーは、インビトロにおける黄色ブドウ球菌の細菌培養の、細菌成長または細菌生存に対して影響を与えなくて、そして（ｉｉｉ）ｓＮＡＧナノファイバーは、生体適合性試験において試験された場合に反応性でない（例えば、筋肉内への移植試験）。
【００８５】
特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、ｓＮＡＧナノファイバー組成物を用いて処置された、または、ｓＮＡＧナノファイバー組成物に曝された、細胞、組織または器官において、特定のパターンの遺伝子の発現（例えば、ＲＴ−ＰＣＲ、マイクロアレイまたはＥＬＩＳＡによって決定されるＲＮＡまたはタンパク質の発現）を誘導する。
【００８６】
特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー、またはｓＮＡＧナノファイバーを含有している組成物は、Ｉ型コラーゲンの発現を減少させる。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー、またはｓＮＡＧナノファイバーを含有している組成物は、ＩＩＩ型コラーゲンの発現を増加させる。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー、またはｓＮＡＧナノファイバーを含有している組成物は、コラーゲンタンパク質の全体の発現を減少させる。
【００８７】
特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー、またはｓＮＡＧナノファイバーを含有している組成物は、エラスチンタンパク質の発現を増加させる。
【００８８】
特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー、またはｓＮＡＧナノファイバーを含有している組成物は、１つ以上のアクチンタンパク質の発現を減少させる。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー、またはｓＮＡＧナノファイバーを含有している組成物は、平滑筋細胞における１つ以上のアクチンタンパク質（例えば、α平滑筋アクチンタンパク質）の発現を減少させる。
【００８９】
いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー、またはｓＮＡＧナノファイバーを含有している組成物は、ｓＮＡＧナノファイバーで処置する前の被験体の細胞、組織または器官における、上に列挙した１つ以上のタンパク質の発現レベル（例えば、上に列挙した１つ以上のタンパク質の公知の平均レベル）と比較して、約０．２５倍、約０．５倍、約１倍、約１．５倍、約２倍、約２．５倍、約３倍、約３．５倍、約４倍、約４．５倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍、約１２倍、約１５倍もしくは約２０倍と等しい量、または、それら以上の量の、上に列挙した１つ以上のタンパク質の発現を、減少させる。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー、またはｓＮＡＧナノファイバーを含有している組成物は、ｓＮＡＧナノファイバーで処置する前の被験体の細胞、組織または器官における、上に列挙した１つ以上のタンパク質の発現レベル（例えば、上に列挙した１つ以上のタンパク質の公知の平均レベル）の、約１０％、約２５％、約５０％、約７５％もしくは約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２２５％、約２５０％、約２７５％、約３００％、約３５０％、約４００％、約４５０％、約５００％、約５５０％、約６００％、約６５０％、約７００％、約７５０％、約８００％、約９００％または約１０００％以上の量の、上に列挙した１つ以上のタンパク質の発現を、減少させる。
【００９０】
いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー、またはｓＮＡＧナノファイバーを含有している組成物は、１つ以上のディフェンシンタンパク質の発現、１つ以上のディフェンシン様タンパク質の発現、および／または１つ以上のＴｏｌｌ様レセプターの発現を誘導する。
【００９１】
特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー、またはｓＮＡＧナノファイバーを含有している組成物は、１つ以上のα−ディフェンシン（例えば、ＤＥＦＡ１（すなわち、α−ディフェンシン１）、ＤＥＦＡ１Ｂ、ＤＥＦＡ３、ＤＥＦＡ４、ＤＥＦＡ５、ＤＥＦＡ６）、１つ以上のβ−ディフェンシン（例えばＤＥＦＢ１（すなわち、β−ディフェンシン１）、ＤＥＦＢ２、ＤＥＦＢ４、ＤＥＦＢ１０３Ａ、ＤＥＦＢ１０４Ａ、ＤＥＦＢ１０５Ｂ、ＤＥＦＢ１０７Ｂ、ＤＥＦＢ１０８Ｂ、ＤＥＦＢ１１０、ＤＥＦＢ１１２、ＤＥＦＢ１１４、ＤＥＦＢ１１８、ＤＥＦＢ１１９、ＤＥＦＢ１２３、ＤＥＦＢ１２４、ＤＥＦＢ１２５、ＤＥＦＢ１２６、ＤＥＦＢ１２７、ＤＥＦＢ１２８、ＤＥＦＢ１２９、ＤＥＦＢ１３１、ＤＥＦＢ１３６）、および／または、１つ以上のθ−ディフェンシン（例えば、ＤＥＦＴ１Ｐ）、の発現を、誘導する／増加させる。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー、またはｓＮＡＧナノファイバーを含有している組成物は、１つ以上の、ＤＥＦＡ１、ＤＥＦＡ３、ＤＥＦＡ４、ＤＥＦＡ５、ＤＥＦＢ１、ＤＥＦＢ３、ＤＥＦＢ１０３Ａ、ＤＥＦＢ１０４Ａ、ＤＥＦＢ１０８Ｂ、ＤＥＦＢ１１２、ＤＥＦＢ１１４、ＤＥＦＢ１１８、ＤＥＦＢ１１９、ＤＥＦＢ１２３、ＤＥＦＢ１２４、ＤＥＦＢ１２５、ＤＥＦＢ１２６、ＤＥＦＢ１２８、ＤＥＦＢ１２９およびＤＥＦＢ１３１の発現を、誘導する／増加させる。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー、またはｓＮＡＧナノファイバーを含有している組成物は、１つ以上のＴｏｌｌレセプター（例えば、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１および／またはＴＬＲ１２）の発現を、誘導する／増加させる。他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー、またはｓＮＡＧナノファイバーを含有している組成物は、１つ以上の、ＩＬ−１、ＣＥＡＣＡＭ３、ＳＰＡＧ１１、ＳＩＧＩＲＲ（ＩＬ１様レセプター）、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＩＲＡＫ４、ＴＢＫ１、ＴＲＡＦ６およびＩＫＫｉの発現を、誘導する／増加させる。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー、またはｓＮＡＧナノファイバーを含有している組成物は、１つ以上の、ＩＲＡＫ２、ＳＩＧＩＲＲ、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ１０およびＴＲＡＦ６の発現を、誘導する／増加させる。一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー、またはｓＮＡＧナノファイバーを含有している組成物は、上に列挙した遺伝子産物の少なくとも１つの発現を、誘導する／増加させる。
【００９２】
いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー、またはｓＮＡＧナノファイバーを含有している組成物は、ｓＮＡＧナノファイバーで処置する前の被験体の細胞、組織または器官における、上に列挙した１つ以上の遺伝子産物の発現レベル（例えば、上に列挙した１つ以上の遺伝子産物の公知の平均レベル）と比較して、約０．２５倍、約０．５倍、約１倍、約１．５倍、約２倍、約２．５倍、約３倍、約３．５倍、約４倍、約４．５倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍、約１２倍、約１５倍もしくは約２０倍以上の量の、上に列挙した１つ以上の遺伝子産物の発現を、誘導する／減少させる。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー、またはｓＮＡＧナノファイバーを含有している組成物は、ｓＮＡＧナノファイバーで処置する前の被験体の細胞、組織または器官における、上に列挙した１つ以上の遺伝子の発現レベル（例えば、上に列挙した１つ以上のタンパク質の公知の平均レベル）の、約１０％、約２５％、約５０％、約７５％もしくは約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２２５％、約２５０％、約２７５％、約３００％、約３５０％、約４００％、約４５０％、約５００％、約５５０％、約６００％、約６５０％、約７００％、約７５０％、約８００％、約９００％または約１０００％以上の量の、上に列挙した１つ以上の遺伝子産物の発現を、誘導する／増加させる。
【００９３】
いくつかの実施形態において、長いポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン、キチンおよび／またはキトサンではない、ｓＮＡＧナノファイバーは、当業者に公知の方法、または本明細書中に記載される方法によって決定した場合、上に列挙した１つ以上の遺伝子産物の発現を、誘導する／増加させる。これら実施形態のいくつかにおいて、長いポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン、キチンおよび／またはキトサンは、当業者に公知の方法、または本明細書中に記載される方法によって決定した場合、上記列挙した１つ以上の遺伝子産物の発現を誘導しないか／増加させないか、または、長いポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン、キチンおよび／またはキトサンは、当業者に公知の方法、または本明細書中に記載される方法によって決定した場合、ｓＮＡＧナノファイバーによって誘導される１つ以上の上に列挙した遺伝子産物の発現レベルと比較して、上に列挙した１つ以上の遺伝子産物の、より低い発現レベル（例えば、１．２５倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍または１０倍以上低い）を引き起こす。
【００９４】
特定の実施形態において、長いポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン、キチンおよび／またはキトサンではない、ｓＮＡＧナノファイバーは、当業者に公知の方法、または本明細書中に記載される方法によって決定した場合、上に列挙した１つ以上の遺伝子産物の発現を、縮小させる／減少させる。これら実施形態のいくつかにおいて、長いポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン、キチンおよび／またはキトサンは、当業者に公知の方法、または本明細書中に記載される方法によって決定した場合、上記列挙した１つ以上の遺伝子産物の発現を、縮小させないか／減少させないか、または、長いポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン、キチンおよび／またはキトサンは、当業者に公知の方法、または本明細書中に記載される方法によって決定した場合、ｓＮＡＧナノファイバーによって縮小される１つ以上の上に列挙した遺伝子産物の発現レベルと比較して、上に列挙した１つ以上の遺伝子産物の、より低い発現レベル（例えば、１．２５倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍または１０倍以上低い）を引き起こす。
【００９５】
特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー、またはｓＮＡＧナノファイバーを含有している組成物は、ＷＯ２０１１／１３０６４６およびＷＯ２０１２／１４２５８１（各々の全体が参考として本明細書中に援用される。）に開示されている１つ以上の遺伝子発現プロファイルに、一致している、類似している、およそ同じである、または同等である、遺伝子発現プロファイルを誘導する（表１、表２、表３、表５、表８および表９、項６.２〜６．５を参照のこと）。
【００９６】
特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー、またはｓＮＡＧナノファイバーを含有している組成物は、長いポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンポリマーまたは長いポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンファイバーによって誘導されるプロファイルとは異なる遺伝子発現プロファイルを誘導する。具体的な実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーによって誘導される遺伝子発現プロファイルは、ＷＯ２０１１／１３０６４６およびＷＯ２０１２／１４２５８１（表１、表２、表３、表５、表８および表９、項６．２〜６．５を参照のこと）に示された遺伝子発現プロファイルに一致する、同様である、およそ同じである、または同等である。一方で、長いポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンポリマーまたは長いポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンファイバーによって誘導される遺伝子発現プロファイルは、ＷＯ２０１２／１４２５８１の、表８および／または表９、項６．５に示された遺伝子発現プロファイルに一致する、同様である、およそ同じである、または同等である。他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー、またはｓＮＡＧナノファイバーを含む組成物は、キチンまたはキトサンによって誘導される遺伝子発現プロファイルとは異なる遺伝子発現プロファイルを誘導する。
【００９７】
具体的な実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンおよび／またはその誘導体に放射線を照射することによって得られる。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンおよびその誘導体に関しては、後出の項５．１．１を参照し、放射線照射を用いたｓＮＡＧナノファイバーを生成するための方法に関しては、後出の項５．２を参照のこと。短縮したポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンファイバーおよび／または短縮したポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン誘導体ファイバー（すなわち、ｓＮＡＧナノファイバー）を形成するために、放射線照射は、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンナノファイバーおよびポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン誘導体ファイバーの長さを短縮するために用いられてもよい。具体的には、放射線照射は、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンまたはその誘導体の長さおよび分子量を、その微細構造を乱すことなく減じるために用いられてもよい。ｓＮＡＧナノファイバーの赤外線スペクトル（ＩＲ）は、放射線照射されていないポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンまたはその誘導体の赤外線スペクトルと同様である、およそ同じである、または同等である。
【００９８】
一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、キチンまたはキトサン由来ではない。一方で、別の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、キチンもしくはキトサン由来であってもよいか、またはｓＮＡＧナノファイバーは、キチンもしくはキトサン由来であってもよい。
【００９９】
［５．１．１  ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンおよびその誘導体］
米国特許番号５，６２２，８３４、５，６２３，０６４、５，６２４，６７９、５，６８６，１１５、５，８５８，３５０、６，５９９，７２０、６，６８６，３４２、７，１１５，５８８、および米国特許公開番号２００９／０１１７１７５（各々の全体が参考として本明細書中に援用される。）は、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンおよびその誘導体、並びに、これらの生成方法について記載されている。いくつかの実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンは、β−１→４配置を有する。他の実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンは、α−１→４配置を有する。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンおよびその誘導体は、ポリマー形態またはファイバー形態であり得る。
【０１００】
ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンを、例えば、微細藻類、好ましくは珪藻類よりも、生成することが可能であり、また、精製してもよい。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの生成のための最初の原料として使用される珪藻類は、Ｃｏｓｃｉｎｏｄｉｓｃｕｓ  ｇｅｎｕｓ、Ｃｙｃｌｏｔｅｌｌａ  ｇｅｎｕｓおよびＴｈａｌａｓｓｉｏｓｉｒａ  ｇｅｎｕｓのメンバーを含むが、これらに限定されない。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンは、公知の機械的な力による方法および化学／生物学的方法（例えば、米国特許番号５，６２２，８３４、５，６２３，０６４、５，６２４，６７９、５，６８６，１１５、５，８５８，３５０、６，５９９，７２０、６，６８６，３４２および７，１１５，５８８（各々の全体が参考として本明細書中に援用される。）を参照のこと）を含む多くの異なる方法を介して、珪藻類の培養菌から得てもよい。特定の実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンは、アワビ、甲殻類、昆虫、真菌または酵母のうちの１つ以上に由来していない。
【０１０１】
一実施形態において、ポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンは、ａ）細胞体およびポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンポリマーファイバーを含む微細藻類を、十分な時間でＮ−アセチルグルコサミンポリマーファイバーを細胞体から分離することができる生物学的薬剤（フッ化水素など）で処置することにより、ポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンポリマーファイバーを細胞体から解放させること、ｂ）ポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンポリマーファイバーを細胞体から分離すること、および、ｃ）ポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンポリマーが単離され、そして精製されるように、分離ポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンポリマーファイバーから不純物を除去すること、を含む処置によって得られる。
【０１０２】
他の実施形態において、ポリ−β−１→４−Ｎ−アセチルグルコサミンは、アワビ、甲殻類、昆虫、真菌または酵母の１つ以上に由来してもよい。特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、キチンまたはキトサンを含有しない。
【０１０３】
ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの単糖類単位の１つ以上は、脱アセチル化されていてもよい。特定の実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの１％〜５％、５％〜１０％、５％〜１５％、２０％〜３０％または２５％〜３０％は、脱アセチル化されている。いくつかの実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％または３０％は、脱アセチル化されている。他の実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満は、脱アセチル化されている。いくつかの実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％以上、または、全て（１００％）は、脱アセチル化されている。他の実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％未満は、脱アセチル化されている。
【０１０４】
特定の実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン組成物は、アセチル化グルコサミン（すなわち、Ｎ−アセチルグルコサミン）単糖類を、７０％〜８０％、７５％〜８０％、７５％〜８５％、８５％〜９５％、９０％〜９５％、９０％〜９９％または９５％〜１００％含有している。いくつかの実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン組成物は、アセチル化グルコサミン（すなわち、Ｎ−アセチルグルコサミン）単糖類を、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％含有している。他の実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン組成物は、アセチル化グルコサミンを、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％よりも多く含有している。いくつかの実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン組成物は、アセチル化グルコサミンを、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％もしくは９９％以上含有している、または、全て（１００％）において含有している。他の実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン組成物は、アセチル化グルコサミンを、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％未満含有している。
【０１０５】
いくつかの実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン組成物は、少なくとも１つのグルコサミン単糖類を含有し、さらに、Ｎ−アセチルグルコサミン単糖類を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％含有してもよい。他の実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン組成物は、少なくとも１つのＮ−アセチルグルコサミン単糖類を含有し、さらに、グルコサミン単糖類を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％含有してもよい。
【０１０６】
また、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン誘導体は、本明細書中に記載される組成物に用いられてもよい。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン誘導体およびこのような誘導体を生成する方法は、米国特許番号５，６２３，０６４（例えば、項５．４を参照のこと）に記載されており、その全体が参考として本明細書中に援用される。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン誘導体は、部分的にもしくは完全に、脱アセチル化されたポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン、または、脱アセチル化されたその誘導体を含有してもよいが、これらに限定されない。さらに、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンは、硫酸化、リン酸化および／または硝酸化されることにより、誘導体化されてもよい。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン誘導体は、例えば、硫酸化ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン誘導体、リン酸化ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン誘導体、または硝酸化ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン誘導体を含む。さらに、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの単糖類単位の１つ以上は、１つ以上のスルホニル基、１つ以上のＯ−アシル基を有してもよい。さらに、脱アセチル化ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの１つ以上の単糖類は、Ｎ−アシル基を有してもよい。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンまたはその脱アセチル化誘導体の１つ以上の単糖類は、Ｏ−アルキル基を有してもよい。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの単糖類単位の１つ以上は、アルカリ誘導体であってもよい。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの脱アセチル化誘導体の単糖類単位の１つ以上は、Ｎ−アルキル基を有してもよい。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの脱アセチル化誘導体の単糖類単位の１つ以上は、少なくとも１つのデオキシハロゲン誘導体を有してもよい。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの脱アセチル化誘導体の単糖類単位の１つ以上は、塩を形成してもよい。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの脱アセチル化誘導体の単糖類単位の１つ以上は、金属キレートを形成してもよい。特定の実施形態において、金属は亜鉛である。ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンの脱アセチル化誘導体の単糖類単位の１つ以上は、Ｎ−アルキリデン基またはＮ−アリ−リデン基を有してもよい。一実施形態において、上記の誘導体は酢酸塩誘導体である。別の実施形態において、上記の誘導体は酢酸塩誘導体ではない。一実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンまたは脱アセチル化ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンは、乳酸によって誘導体化される。別の実施形態において、上記の誘導体は、乳酸によって誘導体化されない。
【０１０７】
［５．２  ｓＮＡＧナノファイバーの生成方法］
ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンポリマーまたはポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンファイバー、および、上記のいずれかのポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンポリマー誘導体またはポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンファイバー誘導体は、乾燥ポリマーもしくは乾燥ファイバー、または、ポリマー膜もしくはファイバー膜として、放射線照射され得る。あるいは、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンポリマーまたはポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンファイバー、および、上記のいずれかのポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンポリマー誘導体またはポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンファイバー誘導体は、湿った状態で放射線照射され得る。放射線照射によってｓＮＡＧナノファイバーを生成する方法、および、そのように生成されたｓＮＡＧナノファイバーは、米国特許公開番号２００９／０１１７１７５に記載されており、その全体が参考として本明細書中に援用される。
【０１０８】
特定の実施形態において、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンポリマーまたはポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンファイバーは、放射線照射のために、懸濁物／スラリーまたはウエットケーキに処方される。放射線照射は、外傷用医薬材料のような最終的な処方物に上記のポリマーまたはファイバーを処方する前、同時または後に、行われ得る。一般的に、懸濁物／スラリーおよびウエットケーキの、上記のポリマー含有量またはファイバー含有量は、様々であり、例えば、蒸留水１ｍＬあたり約０．５ｍｇ〜約５０ｍｇのポリマーまたはファイバーが、スラリーのために用いられ、蒸留水１ｍＬあたり約５０ｍｇ〜約１０００ｍｇのポリマーまたはファイバーが、ウエットケーキの処方のために用いられる。上記のポリマーまたはファイバーは、それが懸濁物／スラリーまたはウエットケーキをより形成しやすくするために、まず、凍結乾燥され、液体窒素凍結され、そして粉砕されてもよい。また、ウエットケーキが形成されるように、懸濁物／スラリーは、ろ過され、水が取り除かれ得る。特定の局面において、上記のポリマーまたはファイバーは、蒸留水１ｍＬあたり約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１２ｍｇ、約１５ｍｇ、約１８ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇもしくは約５０ｍｇ、または、上記の実施形態のいずれかの範囲（例えば１〜１０ｍｇ／ｍＬ、５〜１５ｍｇ／ｍＬ、２〜８ｍｇ／ｍＬ、２０〜５０ｍｇ／ｍＬ等）のポリマーまたはファイバーを含有する懸濁物として、放射線照射される。他の局面において、上記のポリマーまたはファイバーは、蒸留水１ｍＬあたり約５０〜約１０００ｍｇのポリマーまたはファイバーを含有するウエットケーキとして、放射線照射される。具体的な実施形態において、ウエットケーキは、蒸留水１ｍＬあたり約５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００もしくは１，０００ｍｇ、または、いずれかの範囲（例えば、１００〜５００ｍｇ／ｍＬ、３００〜６００ｍｇ／ｍＬ、５０〜１，０００ｍｇ／ｍＬ等）のポリマーまたはファイバーを含有する。
【０１０９】
放射線照射は、好ましくは、γ線、電子ビーム線またはＸ線の形態である。２つの放射線照射発生源が、好ましく、それらは、放射性核種および電気である。特定の実施形態において、放射性核種は、コバルト６０およびセシウム１３７である。これらの核種の両方は、γ線を放出し、それは、質量を有していない光子である。γ線は、０．６６ＭｅＶから１．３ＭｅＶまでのエネルギーを有する。電気を用いる場合、電子は生成され、そしてエネルギーが１０ＭｅＶ以上になるまで加速される。ポリマーまたはファイバーのサイズを縮小させるためにこれらに放射線照射する場合に、考慮すべきことは、１０ＭｅＶの電子による、水と同様の密度を有する材料の浸透深度は、一方向照射では約３、７ｃｍ、または、二方向照射では約８．６ｃｍに限定されることである。浸透深度は、より低い電子エネルギーでは減少する。電子ビーム経路に金属ターゲット（通常、タングステンまたはタンタル）を配置することにより、電子エネルギーをＸ線に変換することができる。Ｘ線への変換は、５ＭｅＶまでのエネルギーを有する電子に限定される。Ｘ線は、質量を有していない光子であり、γ線と同様に、ポリマーまたはファイバーに浸透することができる。電子エネルギーからＸ線エネルギーへの変換は、わずか約８％の効率である。低い変換効率を補うために、Ｘ線生成設備では、高出力の電子ビーム装置が必要である。
【０１１０】
具体的な実施形態において、放射線照射はγ線照射である。
【０１１１】
放射線の吸収線量は、生成物の単位質量あたりの吸収エネルギーであり、グレイ（ｇｙ）またはキログレイ（ｋｇｙ）で測定される。乾燥ポリマーまたは乾燥ファイバーに対する、好ましい吸収線量は、約５００ｋｇｙ〜約２，０００ｋｇｙの放射線であり、最も好ましくは、約７５０ｋｇｙ〜１，２５０ｋｇｙの放射線、または約９００〜１，１００ｋｇｙの放射線である。ウエットポリマーまたはウエットファイバーに対する、好ましい吸収線量は、約１００ｋｇｙ〜約５００ｋｇｙの放射線であり、最も好ましくは、約１５０ｋｇｙ〜約２５０ｋｇｙ、または約２００ｋｇｙ〜約２５０ｋｇｙの放射線である。
【０１１２】
放射線照射量は、上記のポリマーまたはファイバーの長さに対するその効果の点で記載されることが可能である。具体的な実施形態において、使用される放射線照射量は、好ましくは、それぞれ、上記のポリマーまたはファイバーの最初の長さの約１０％〜約９０％のいずれかまで、上記のポリマーまたはファイバーの長さを縮小させる。具体的な実施形態において、平均の長さは、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％もしくは約９０％、または、いずれかの範囲（例えば、２０％〜４０％、３０％〜７０％等）、まで縮小される。あるいは、使用される放射線照射量は、好ましくは、ポリマーまたはファイバーの長さを、１ミクロンから１００ミクロンまでのいずれかまで縮小させる。具体的な実施形態において、また、最初のファイバーの長さに応じて、上記のポリマーまたはファイバーの長さは、約１５μｍ未満、約１４μｍ未満、約１３μｍ未満、約１２μｍ未満、約１１μｍ未満、約１０μｍ未満、約８μｍ未満、約７μｍ未満、約５μｍ未満、約４μｍ未満、約３μｍ未満、約２μｍ未満または約１μｍ未満まで縮小される。特定の実施形態において、大多数の（また、特定の実施形態において、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％もしくは１００％、または、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％もしくは９５％〜９９％の）ポリマーまたはファイバーの長さは、約２０μｍ以下、約１５μｍ以下、約１２μｍ以下、約１０μｍ以下、約８μｍ以下、約７μｍ以下または約５μｍ以下まで縮小される。特定の実施形態において、ポリマーまたはファイバーの放射線照射は、大多数の（また、特定の実施形態において、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％もしくは１００％、または、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％もしくは９５％〜９９％の）ファイバーの長さを、約１μｍ〜約２０μｍ、約１μｍ〜約１５μｍ、約２μｍ〜約１５μｍ、約１μｍ〜約１２μｍ、約２μｍ〜約１２μｍ、約１μｍ〜約１０μｍ、約２μｍ〜約１０μｍ、約１μｍ〜約８μｍ、約２μｍ〜約８μｍ、約１μｍ〜約７μｍ、約２μｍ〜約７μｍ、約３μｍ〜約８μｍ、約４μｍ〜約１０μｍ、約４μｍ〜約７μｍ、約５μｍ〜約１０μｍ、約１μｍ〜約５μｍ、約２μｍ〜約５μｍ、約３μｍ〜約５μｍ、約４μｍ〜約１０μｍまたは上述の長さの間のいずれかの範囲（それらも同様に含まれる）まで縮小させる。
【０１１３】
また、放射線照射量は、上記のポリマーまたはファイバーの分子量に対するその効果の点で記載され得る。具体的な実施形態において、使用される放射線照射量は、好ましくは、上記のポリマーまたはファイバーの初期分子量の約１０％〜約９０％のいずれかにまで、当該ポリマーまたはファイバーの分子量を減少させる。具体的な実施形態において、平均分子量は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％もしくは約９０％、または、いずれかの範囲（例えば、２０〜４０％、３０〜７０％等）にまで減少させられる。あるいは、使用される放射線照射量は、好ましくは、ポリマーまたはファイバーの分子量を、１，０００〜１，０００，０００ダルトンのいずれかにまで減少させる。具体的な実施形態において、また、ポリマーまたはファイバーの平均分子量は、初期分子量に応じて、１，０００，０００ダルトン未満、７５０，０００ダルトン未満、５００，０００ダルトン未満、３００，０００ダルトン未満、２００，０００ダルトン未満、１００，０００ダルトン未満、９０，０００ダルトン未満、８０，０００ダルトン未満、７０，０００ダルトン未満、６０，０００ダルトン未満、５０，０００ダルトン未満、２５，０００ダルトン未満、１０，０００ダルトン未満または５０００ダルトン未満にまで減少させられる。特定の実施形態において、平均分子量は、少なくとも、５００ダルトン、１，０００ダルトン、２，０００ダルトン、３，５００ダルトン、５，０００ダルトン、７，５００ダルトン、１０，０００ダルトン、２５，０００ダルトン、５０，０００ダルトン、６０，０００ダルトンまたは１００，０００ダルトンにまで減少させられる。また、上記の平均分子量の何れの範囲も含まれ、例えば、特定の実施形態において、ポリマーまたはファイバーの放射線照射は、１０，０００〜１００，０００ダルトン、１，０００〜２５，０００ダルトン、５０，０００〜５００，０００ダルトン、２５，０００〜１００，０００ダルトン、３０，０００〜９０，０００ダルトン、約４０，０００〜約８０，０００ダルトン、約２５，０００〜約７５，０００ダルトン、約５０，０００〜約７０，０００ダルトンまたは約５５，０００〜約６５，０００ダルトン等のいずれかにまで、平均分子量を減少させる。特定の実施形態において、上記のポリマーまたはファイバーの放射線照射は、大多数のファイバーの分子量を、また、特定の実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％もしくは１００％、または、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％もしくは９５％〜９９％のファイバーの分子量を、約２０，０００〜約１００，０００ダルトン、約２５，０００〜約７５，０００ダルトン、約３０，０００〜約９０，０００ダルトン、約４０，０００〜約８０，０００ダルトン、約５０，０００〜約７０，０００ダルトンまたは約５５，０００〜約６５，０００ダルトンの範囲の何れかにまで減少させる。特定の実施形態において、上記のポリマーまたはファイバーの放射線照射は、大多数のファイバーの分子量を、また、特定の実施形態においては、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．８％、９９．９％もしくは１００％、または、５５％〜６５％、５５％〜７５％、６５％〜７５％、７５％〜８５％、７５％〜９０％、８０％〜９５％、９０％〜９５％もしくは９５％〜９９％のファイバーの分子量を、約６０，０００ダルトンに減少させる。
【０１１４】
本発明の実施に有用な組成物（例えば、外傷用医薬材料、および本明細書中に記載される他の組成物）を形成するために、放射線照射に続いて、スラリーは、ろ過され、乾燥され得て、また、ウエットケーキは、乾燥され得る。
【０１１５】
［５．３  ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物］
ｓＮＡＧナノファイバーは、本明細書中に記載されるように、任意の投与経路（例えば、局所（topical）、経口、筋肉内、静脈内、直腸、皮下、全身、または局所（local））を経る種々の組成物に処方されてもよい。
【０１１６】
ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、クリーム、膜、フィルム、液体溶液、懸濁物（例えば、濃い懸濁物）、パウダー、ペースト、軟膏、座薬、ゼラチン状組成物、噴霧剤、ゲルまたはスプレーとして処方されてもよい。一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、極薄膜として処方される。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、外傷用医薬材料、マットまたは包帯(bandage)として処方される。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、マスクまたはピールとして処方される。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、硬くないか、または、隔膜が形成されていない。別の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、硬いか、または隔膜が形成されている。投与前の液体中の溶液もしくは懸濁物に適した硬い剤形も想定される。また、上記の組成物は、（臀部、膝、肩のための）整形インプラント（ピン、ネジ等）、心臓血管インプラント（ステント、カテーテル等）、およびその抗菌活性が有益になるであろう同様のものなどの、移植可能なデバイスに組み込まれるか、または移植可能なデバイス上に被覆されることも考えられる。
【０１１７】
特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、全身投与のために処方される（例えば、非経口投与）。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、経口投与、筋肉内投与、静脈内投与、直腸投与、または皮下投与のために処方される。他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、局所（全身ではない）投与のために処方される。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、皮内投与、皮下投与または筋肉内投与のために処方される。一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、皮内投与のために処方される（例えば、皮内注射のための懸濁物として）。一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、皮下投与のために処方される（例えば、皮下注射のための懸濁物として）。一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、筋肉内投与のために処方される（例えば、筋肉内注射のための懸濁物として）。具体的な実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、局所投与のために処方される。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、ゲル、スプレー、クリーム、懸濁物、軟膏またはペーストとして、局所投与のために処方される。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、美容用途のためのマスクまたはピールとして、局所投与のために処方される。
【０１１８】
ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、１つ以上の医薬的に許容される賦形剤を含んでもよい。好適な賦形剤は、水、生理食塩水、食塩水、ぶどう糖、グリセロース、エタノールなど、または、これらの組み合わせを含んでもよい。また、好適な賦形剤は、でんぷん、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、米、小麦、石灰粉末、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロール・モノステアレート、油（ピーナツ油、大豆油、鉱物油、ゴマ油などのような、石油由来の油、動物由来の油、野菜由来の油または合成物由来の油を含む）、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、プロピレン、グリコール等も含む。さらに、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、１つ以上の湿潤剤、乳化剤、ｐＨ緩衝化剤および他の薬剤を含んでもよい。ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、生理学的に許容されるキャリアに、例えば、局所的な使用に適した生理学的に許容されるキャリアに組み込まれてもよい。用語「薬学的に許容される」は、動物における使用について、また、より具体的には、ヒトにおける使用について、連邦もしくは州政府の規制当局によって承認されていること、または、米国薬局方もしくは一般的に認識された他の薬局方に列挙されていることを意味する。好適な薬学的キャリアは、E.W. Martinによる“Remington’s Pharmaceutical Sciences”に記載されている。
【０１１９】
組成物中のｓＮＡＧナノファイバーの終量は異なってもよい。例えば、（例えば、患者への投与のために調製された）組成物中のｓＮＡＧナノファイバーの量は、約５０ｗ／ｖ％以上、約６０ｗ／ｖ％以上、約７０ｗ／ｖ％以上、約７５ｗ／ｖ％以上、約８０ｗ／ｖ％以上、約８５ｗ／ｖ％以上、約９０ｗ／ｖ％以上、約９５ｗ／ｖ％以上、約９８ｗ／ｖ％以上または約９９ｗ／ｖ％以上であってもよい。一実施形態において、組成物中のｓＮＡＧナノファイバーの量は、約９５％、約９８％、約９９％または約１００％である。また、（例えば、患者への投与のために調製された）組成物中のｓＮＡＧナノファイバーの量は、約５０ｗ／ｖ％〜約１００ｗ／ｖ％、約６０ｗ／ｖ％〜約１００ｗ／ｖ％、約７０ｗ／ｖ％〜約１００ｗ／ｖ％、約７５ｗ／ｖ％〜約１００ｗ／ｖ％、約８０ｗ／ｖ％〜約１００ｗ／ｖ％、約９０ｗ／ｖ％〜約１００ｗ／ｖ％、約９５ｗ／ｖ％〜約１００ｗ／ｖ％、約７０ｗ／ｖ％〜約９５ｗ／ｖ％、約７５ｗ／ｖ％〜約９５ｗ／ｖ％、約８０ｗ／ｖ％〜約９５ｗ／ｖ％、約９０ｗ／ｖ％〜約９５ｗ／ｖ％、約７０ｗ／ｖ％〜約９０ｗ／ｖ％、約７５ｗ／ｖ％〜約９０ｗ／ｖ％または約８０ｗ／ｖ％〜約９０ｗ／ｖ％であってもよい。組成物は、ｓＮＡＧナノファイバーの、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％または９９％よりも高い溶液を含有してもよい。
【０１２０】
ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、０．１ｍｇ／ｍＬから５０ｍｇ／ｍＬまでのｓＮＡＧナノファイバーを含有するように処方されてもよい。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、０．５ｍｇ／ｍＬから３０ｍｇ／ｍＬまでの、５ｍｇ／ｍＬから３０ｍｇ／ｍＬまでの、５ｍｇ／ｍＬから２５ｍｇ／ｍＬまでの、７．５ｍｇ／ｍＬから２０ｍｇ／ｍＬまでの、または１０ｍｇ／ｍＬから２０ｍｇ／ｍＬまでの、ｓＮＡＧナノファイバーを含有するように処方されてもよい。具体的な実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、約１ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬまたは約３０ｍｇ／ｍＬのｓＮＡＧナノファイバーを含有するように処方されてもよい。ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、局所的な注入（例えば、懸濁物の形態での、例えば、皮内（intradermal）注射、皮内（intracutaneous）注射、筋肉内注射）による投与のために、５ｍｇ／ｍＬから３０ｍｇ／ｍＬまでのｓＮＡＧナノファイバー（例えば、５ｍｇ／ｍＬ、６ｍｇ／ｍＬ、７ｍｇ／ｍＬ、７．５ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ、９ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１１ｍｇ／ｍＬ、１２ｍｇ／ｍＬ、１２．５ｍｇ／ｍＬ、１３ｍｇ／ｍＬ、１４ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、１６ｍｇ／ｍＬ、１７ｍｇ／ｍＬ、１７．５ｍｇ／ｍＬ、１８ｍｇ／ｍＬ、１９ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、２２ｍｇ／ｍＬ、２３ｍｇ／ｍＬ、２４ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、２６ｍｇ／ｍＬ、２７ｍｇ／ｍＬ、２８ｍｇ／ｍＬ、２９ｍｇ／ｍＬまたは３０ｍｇ／ｍＬ）を含有するように処方されてもよい。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、局所的な注入（例えば、懸濁物の形態での、例えば、皮内（intradermal）注射、皮内（intracutaneous）注射、筋肉内注射）による投与のために、７．５ｍｇ／ｍＬから２５ｍｇ／ｍＬまでのｓＮＡＧナノファイバーを含有するように処方されてもよい。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、局所的な注入（例えば、懸濁物の形態での、例えば、皮内（intradermal）注射、皮内（intracutaneous）注射、筋肉内注射）による投与のために、１０ｍｇ／ｍＬから２０ｍｇ／ｍＬまでのｓＮＡＧナノファイバーを含有するように処方されてもよい。一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、局所的な注入（例えば、懸濁物の形態での、例えば、皮内（intradermal）注射、皮内（intracutaneous）注射、筋肉内注射）による投与のために、約１２．５ｍｇ／ｍＬから約１７．５ｍｇ／ｍＬまでのｓＮＡＧナノファイバー、または約１５ｍｇ／ｍＬのｓＮＡＧナノファイバーを含有するように処方されてもよい。ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、局所的な投与（例えば、懸濁物またはスプレーの形態での、皮膚への投与、粘膜表面への投与、創傷への投与）のために、０．１ｍｇ／ｍＬから５０ｍｇ／ｍＬまでのｓＮＡＧナノファイバー（例えば、０．１ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、３ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、６ｍｇ／ｍＬ、７ｍｇ／ｍＬ、７．５ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ、９ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１１ｍｇ／ｍ��、１２ｍｇ／ｍＬ、１２．５ｍｇ／ｍＬ、１３、ｍｇ／ｍＬ、１４ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、１６ｍｇ／ｍＬ、１７ｍｇ／ｍＬ、１７．５ｍｇ／ｍＬ、１８ｍｇ／ｍＬ、１９ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、２２ｍｇ／ｍＬ、２３ｍｇ／ｍＬ、２４ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、２６ｍｇ／ｍＬ、２７ｍｇ／ｍＬ、２８ｍｇ／ｍＬ、２９ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、３１ｍｇ／ｍＬ、３２ｍｇ／ｍＬ、３３ｍｇ／ｍＬ、３４ｍｇ／ｍＬ、３５ｍｇ／ｍＬ、３６ｍｇ／ｍＬ、３７ｍｇ／ｍＬ、３８ｍｇ／ｍＬ、３９ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、４１ｍｇ／ｍＬ、４２ｍｇ／ｍＬ、４３ｍｇ／ｍＬ、４４ｍｇ／ｍＬ、４５ｍｇ／ｍＬ、４６ｍｇ／ｍＬ、４７ｍｇ／ｍＬ、４８ｍｇ／ｍＬ、４９ｍｇ／ｍＬまたは５０ｍｇ／ｍＬ）を含有するように処方されてもよい。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、局所的な投与のために、０．５ｍｇ／ｍＬから５０ｍｇ／ｍＬまでの、０．５ｍｇ／ｍＬから３０ｍｇ／ｍＬまでの、１ｍｇ／ｍＬから５０ｍｇ／ｍＬまでの、１ｍｇ／ｍＬから４０ｍｇ／ｍＬまでの、１ｍｇ／ｍＬから３０ｍｇ／ｍＬまでの、５ｍｇ／ｍＬから３０ｍｇｌまでの、５ｍｇ／ｍＬから２０ｍｇ／ｍＬまでの、ｓＮＡＧナノファイバーを含有するように処方されてもよい。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、局所的な投与のために、１ｍｇ／ｍＬから３０ｍｇ／ｍＬまでのｓＮＡＧナノファイバーを含有するように処方されてもよい。一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、局所的な投与のために、約５ｍｇ／ｍＬから約２５ｍｇ／ｍＬまでのｓＮＡＧナノファイバー、約１０ｍｇ／ｍＬから約２０ｍｇ／ｍＬまでのｓＮＡＧナノファイバー、または約１５ｍｇ／ｍＬのｓＮＡＧナノファイバーを含有するように処方されてもよい。ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、局所的な投与（例えば、ゲル、クリームまたはペーストの形態での、皮膚への投与、粘膜表面への投与または創傷への投与）のために、０．１ｍｇ／ｃｍ２から１０ｍｇ／ｃｍ２までのｓＮＡＧナノファイバー（例えば、０．１ｍｇ／ｃｍ２、０．２５ｍｇ／ｃｍ２、０．５ｍｇ／ｃｍ２、０．７５ｍｇ／ｃｍ２、１ｍｇ／ｃｍ２、２ｍｇ／ｃｍ２、２．５ｍｇ／ｃｍ２、３ｍｇ／ｃｍ２、４ｍｇ／ｃｍ２、５ｍｇ／ｃｍ２、６ｍｇ／ｃｍ２、７ｍｇ／ｃｍ２、７．５ｍｇ／ｃｍ２、８ｍｇ／ｃｍ２、９ｍｇ／ｃｍ２、または１０ｍｇ／ｃｍ２）を含有するように処方されてもよい。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、局所的な投与のために、０．５ｍｇ／ｃｍ２から１０ｍｇ／ｃｍ２までの、０．７５ｍｇ／ｃｍ２から７．５ｍｇ／ｃｍ２までの、１ｍｇ／ｃｍ２から７．５ｍｇ／ｃｍ２までの、または１ｍｇ／ｃｍ２から５ｍｇ／ｃｍ２までの、ｓＮＡＧナノファイバーを含有するように処方されてもよい。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、局所的な投与のために、約１ｍｇ／ｃｍ２から約５ｍｇ／ｃｍ２までのｓＮＡＧナノファイバー、または約１ｍｇ／ｃｍ２のｓＮＡＧナノファイバー、約２．５ｍｇ／ｃｍ２のｓＮＡＧナノファイバー、もしくは約５ｍｇ／ｃｍ２のｓＮＡＧナノ��ァイバーを含有するように処方されてもよい。
【０１２１】
ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、創傷被覆材中に処方されてもよい。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、隔膜、膜またはフィルムの形態の創傷被覆材として処方される。あるいは、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、隔膜、膜またはフィルムなどの、外傷用医薬材料の基材に添加されてもよい。隔膜、膜またはフィルムは、種々の標準サイズで供給され得て、それは、さらに切断され、処置される領域の大きさに合わせられ得る。上記の基剤は、患者に適用する前に、ポリマーまたはファイバーが添加されたか、または被覆された包袋（bandage）またはガーゼなどの、従来の外傷用医薬材料であり得る。あるいは、ｓＮＡＧナノファイバーは、糸、マイクロビーズ、微粒子または微小線維によって作製された隔膜、膜またはフィルムとして処方され得て、また、上記の組成物は、隔膜を形成するマットとして処方され得る。特定の実施形態において、外傷用医薬材料の少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％は、ｓＮＡＧナノファイバーによって構成されている。特定の局面において、外傷用医薬材料は、ガーゼまたは包帯（bandage）などの従来の外傷用医薬材料を含まない。そのような実施形態においては、ｓＮＡＧナノファイバー自体が、創傷被覆材として処方される。
【０１２２】
具体的な実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、創傷被覆材中に処方されない。
【０１２３】
ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、クリーム、膜、フィルム、溶液、懸濁物（例えば、濃厚な懸濁物）、パウダー、ペースト、軟膏、座薬、ゼラチン状組成物、噴霧剤、ゲルまたはスプレーに処方されてもよい。特定の実施形態において、処方物の、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％は、ｓＮＡＧナノファイバーによって構成されている。
【０１２４】
ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、さらに、任意の好適な、天然ポリマーもしくは天然ファイバーまたは合成ポリマーもしくは合成ファイバーを含んでもよい。好適なポリマーまたはファイバーの例は、セルロースポリマー、キサン、ポリアラミド、ポリアミド、ポリイミド、ポリアミド／イミド、ポリアミドヒドラジド、ポリヒドラジド、ポリイミダゾール、ポリベンゾオキサゾール、ポリエステル／アミド、ポリエステル／イミド、ポリカーボネート／アミド、ポリカーボネート／イミド、ポリスルホン／アミド、ポリスルホンイミドなど、ならびに、これらのコポリマーおよび混合物を含む。他の好適な種類のポリマーまたはファイバーは、ポリフッ化ビニリデンおよびポリアクリロニトリルを含む。これらのポリマーまたはファイバーの例は、米国特許番号ＲＥ３０，３５１、４，７０５，５４０、４，７１７，３９３、４，７１７，３９４、４，９１２，１９７、４，８３８，９００、４，９３５，４９０、４，８５１，５０５、４，８８０，４４２、４，８６３，４９６、４，９６１，５３９、ならびに、欧州特許出願０  ２１９  ８７８に記載されたものを含み、各々の全体が参考として本明細書中に援用される。上記のポリマーまたはファイバーは、セルロースポリマー、ポリアミド、ポリアラミド、ポリアミド／イミドまたはポリイミドのいずれか少なくとも１つを含み得る。特定の実施形態において、上記のポリマーまたはファイバーは、ポリアラミド、ポリエステル、ウレタンおよびポリテトラフルオロエチレンを含む。一実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、一種類以上のポリマー（例えば、ｓＮＡＧナノファイバーおよびセルロース）を含有する。
【０１２５】
特定の局面において、ｓＮＡＧナノファイバーは、組成物中で、唯一の活性成分である。一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、別の抗菌剤を含有しておらず、例えば、抗生物質を含有しない。一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、亜鉛を含有しない。
【０１２６】
他の実施形態において、組成物は、例えば、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗酵母剤、化学療法薬剤または他の任意の薬剤のような、１つ以上のさらなる活性成分を含有する。いくつかの実施形態において、さらなる活性成分は、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗酵母剤、ディフェンシンペプチド、ディフェンシン様ペプチドもしくはＴｏｌｌ様レセプターペプチドまたは増殖因子の１つ以上である。具体的な実施形態において、さらなる活性成分は、ＰＤＧＦ−ＡＡ、ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＣＣ、ＰＤＧＦ−ＤＤ、ＦＧＦ−１、ＦＧＦ−２、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−７、ＦＧＦ−１０、ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、（ＨＢ−ＥＧＦ）、アンフィレグリン（ａｍｐｈｉｒｅｇｕｌｉｎ）、エピレグリン（ｅｐｉｒｅｇｕｌｉｎ）、ベータセルリン（ｂｅｔａｃｅｌｌｕｌｉｎ）、ニューレグリン（ｎｅｕｒｅｇｕｌｉｎｓ）、エピゲン（ｅｐｉｇｅｎ）、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ｅ、胎盤増殖因子（ＰＬＧＦ）、アンジオポイエチン（ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ）−１、アンジオポイエチン−２、ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）およびマクロファージ刺激タンパク質（ＭＳＰ）の１つ以上などの、増殖因子である。他の実施形態において、さらなる活性成分は、免疫システム、痛み止め剤または解熱剤を増強する薬剤である。当該技術分野において知られている１つ以上の任意のさらなる活性成分が、ｓＮＡＧナノファイバーと組み合わせて用いられ得る。例えば、ＷＯ２０１１／１３０６４６およびＷＯ２０１２／１４２５８１（各々の全体が参考として本明細書中に援用される。）に記載されているさらなる活性成分のいずれかが、ｓＮＡＧナノファイバーと組み合わせて用いられ得る。
【０１２７】
特定の実施形態において、さらなる活性成分は、抗ウイルス剤である。当業者によく知られている任意の抗ウイルス剤（例えば、ＷＯ２０１１／１３０６４６およびＷＯ２０１２／１４２５８１（各々の全体が参考として本明細書中に援用される。）に記載されている）が、ｓＮＡＧナノファイバー組成物中に用いられてもよい。
【０１２８】
いくつかの実施形態において、さらなる活性成分は、抗炎症剤である。抗炎症剤の非限定的な例は、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤｓ）（例えば、セレコキシブ（ＣＥＬＥＢＲＥＸＴＭ）、ジクロフェナク（ＶＯＬＴＡＲＥＮＴＭ）、エトドラク（ＬＯＤＩＮＥＴＭ）、フェノプロフェン（ＮＡＬＦＯＮＴＭ）、インドメタシン（ＩＮＤＯＣＩＮＴＭ）、ケトララック（ＴＯＲＡＤＯＬＴＭ）、オキサプロジン（ＤＡＹＰＲＯＴＭ）、ナブメントン（ＲＥＬＡＦＥＮＴＭ）、スリンダック（ＣＬＩＮＯＲＩＬＴＭ）、トルメンチン（ＴＯＬＥＣＴＩＮＴＭ）、ロフェコキシブ（ＶＩＯＸＸＴＭ）、ナプロセン（ＡＬＥＶＥＴＭ、ＮＡＰＲＯＳＹＮＴＭ）、ケトプロフェン（ＡＣＴＲＯＮＴＭ）およびナブメトン（ＲＥＬＡＦＥＮＴＭ））、ステロイド抗炎症剤（例えば、グルココルチコイド、デキサメタゾン（ＤＥＣＡＤＲＯＮＴＭ）、コルチコステロイド（例えば、メチルプレドニゾロン（ＭＥＤＲＯＬＴＭ））、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン（ＰＲＥＤＮＩＳＯＮＥＴＭおよびＤＥＬＴＡＳＯＮＥＴＭ）およびプレドニゾロン（ＰＲＥＬＯＮＥＴＭおよびＰＥＤＩＡＰＲＥＤＴＭ））、抗コリン作動薬（例えば、硫酸アトロピン、硝酸メチルアトロピンおよびイプラトロピウムブロミド（ＡＴＲＯＶＥＮＴＴＭ））、β２−アゴニスト（例えば、アブテロール（ＶＥＮＴＯＬＩＮＴＭおよびＰＲＯＶＥＮＴＩＬＴＭ）、ビトルテロール（ＴＯＲＮＡＬＡＴＥＴＭ）、レバルブテロール（ＸＯＰＯＮＥＸＴＭ）、メタプロテレノール（ＡＬＵＰＥＮＴＴＭ）、ピルブテロール（ＭＡＸＡＩＲＴＭ）、ターブトライン（ＢＲＥＴＨＡＩＲＥＴＭおよびＢＲＥＴＨＩＮＥＴＭ）、アルブテロール（ＰＲＯＶＥＮＴＩＬＴＭ、ＲＥＰＥＴＡＢＳＴＭおよびＶＯＬＭＡＸＴＭ）、フォルモテロール（ＦＯＲＡＤＩＬ  ＡＥＲＯＬＩＺＥＲＴＭ）およびサルメテロール（ＳＥＲＥＶＥＮＴＴＭおよびＳＥＲＥＶＥＮＴ  ＤＩＳＫＵＳＴＭ））、ならびに、メチルキサンチン（例えば、テオフィリン（ＵＮＩＰＨＹＬＴＭ、ＴＨＥＯ−ＤＵＲＴＭ、ＳＬＯ−ＢＩＤＴＭおよびＴＥＨＯ−４２ＴＭ））を含む。
【０１２９】
ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、例えば、ヒアルロン酸、コラーゲン、カルシウムヒドロキシアパタイト、脂質（例えば、ヒトの脂質、特に、自己由来の脂質）、ポリ乳酸、死体の真皮（例えば、ヒト）、ポリメタクリル酸メチル、および／またはポリアルキルイミドなどの、さらなる組織充填剤を含有してもよい。他の局面において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、さらなる組織充填剤を含有しない。ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、ボツリヌス毒素を含有してもよい。他の局面において、ｓＮＡＧナノファイバーは、ボツリヌス毒素を含有しない。
【０１３０】
ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、コラーゲンを含有してもよいが、特定の局面においては、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、コラーゲンを含有しない。別の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、ヒアルロン酸を含有してもよいが、特定の局面においては、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、ヒアルロン酸を含有しない。別の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、ヒトの脂質を含有してもよいが、特定の局面においては、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、ヒトの脂質を含有しない。
【０１３１】
特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、さらなる治療を含まない。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、さらなる抗ウイルス剤、抗ガン剤、抗菌剤、抗酵母剤、抗炎症剤、化学療法薬剤、抗血管形成剤、ディフェンシンペプチド、ディフェンシン様ペプチド、Ｔｏｌｌ様レセプターペプチドまたは増殖因子を含有しない。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、亜鉛を含有しない、および／または、亜鉛と組み合わせて投与されない。
【０１３２】
いくつかの実施形態において、さらなる活性成分は、抗菌剤（例えば、抗生物質、ディフェンシンペプチド、ディフェンシン様ペプチド、Ｔｏｌｌ様レセプターペプチド）または増殖因子ではない。具体的な実施形態において、さらなる活性成分は、ＰＤＧＦ−ＡＡ、ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＣＣ、ＰＤＧＦ−ＤＤ、ＦＧＦ−１、ＦＧＦ−２、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−７、ＦＧＦ−１０、ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、（ＨＢ−ＥＧＦ）、アンフィレグリン、エピレグリン、ベータセルリン、ニューレグリン、エピゲン、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ｅ、胎盤増殖因子（ＰＬＧＦ）、アンジオポイエチン−１、アンジオポイエチン−２、ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）およびマクロファージ刺激タンパク質（ＭＳＰ）のような増殖因子ではない。特定の実施形態において、さらなる活性成分は、免疫システム、鎮痛剤または解熱剤を増強する薬剤ではない。
【０１３３】
特定の実施形態において、さらなる活性成分は、抗生物質ではない。
【０１３４】
他の局面において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、有意な量のタンパク質材料を含有していない。具体的な実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物のタンパク質含有量は、０．１ｗ％、０．５ｗ％または１ｗ％以下である。他の実施形態において、上記の組成物のタンパク質含有量は、クマシー染色によって検出されない。
【０１３５】
また、一実施形態において、亜鉛は、ｓＮＡＧナノファイバー組成物に含まれている。また、亜鉛は、その抗微生物特性に加えて、創傷治癒においても機能する（Andrews et al.,1999,Adv Wound Care 12:137-8を参照のこと）。亜鉛は、好ましくは、酸化亜鉛、硫酸亜鉛、酢酸亜鉛またはグルコン酸亜鉛のような、塩の形態で添加される。
【０１３６】
［５．４  予防的な使用および治療的な使用］
特定の実施形態において、疾患、障害または症状を有する症候群を妨げるおよび／または処置するために、ｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物が使用され得る。これらは、引っ張り強さおよび伸縮性の増加、コラーゲンの減少、コラーゲンの組織化、および／または平滑筋アクチン発現の減少、または筋線維芽細胞の含有量の減少に優れている。これらの疾患は、組織の引っ張り強さの低下、組織の伸縮性の低下、組織におけるエラスチン含有量の低下、組織における総コラーゲン含有量もしくは異常コラーゲン含有量の増加、組織におけるＩ型コラーゲン含有量の増加、組織におけるＩＩＩ型コラーゲン含有量の低下、組織におけるコラーゲンの異常な整列、組織におけるα平滑筋アクチン含有量の増加、および／または、組織における筋線維芽細胞の増加を含む症状に関連するか、あるいはこのような症状を有する。
【０１３７】
［引っ張り強さの増加］
本発明者らは、驚くべきことに、ｓＮＡＧナノファイバーが組織の引っ張り強さおよび伸縮性を増加し得ることを見出した。よって、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーは、組織の引っ張り強さの低下または組織伸縮性の低下に関連する疾患および／または症状を処置および／または予防するために使用され得る。
【０１３８】
特定の実施形態において、被験体におけるエーラー・ダンロス症候群の症状を処置および／または予防するための方法が、本明細書中に提供され、本方法は、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物を上記被験体に投与する工程を包含する。エーラー・ダンロス症候群は、欠陥を有するコラーゲンによって生じる、コラーゲンまたは結合組織の遺伝性の障害の一群である。エーラー・ダンロス症候群には主要な６つのタイプが存在し、各タイプが、その独特な症状および症状に基づいて分類される。特に、エーラー・ダンロス症候群の主要な６つのタイプは、運動機能亢進のタイプ３、古典的なタイプ１および２、脈管系のタイプ４、脊椎後弯側弯症、関節弛緩症、および皮膚口内炎である。上記症状および症状は、患者が有するエーラー・ダンロス症候群のタイプに依存して変化し得るが、この症候群の主要な症状および症状としては以下が挙げられる：筋骨格の症状（例えば、捻挫、崩壊、亜脱臼および過伸展の傾向がある不安定な関節、進行した骨関節炎の早期の発症、慢性変形性関節症、指のスワンネック（swan neck）変形、使用によって増加する筋疲労、幼少期の弱い筋緊張、骨減少症、伸縮性の靭帯および腱、ならびに、腱または筋肉の断裂）；皮膚の症状（例えば、ビロードのようなテクスチャーを有する伸縮性の皮膚、容易に裂けるもろい皮膚、容易な打撲（bruising）、異常な創傷治癒および瘢痕形成、広げられた萎縮性瘢痕への誘導（leading）、冗長なしわ、軟体動物のような腫瘍、皮下スフェロイド（spheroid）、前腕または皮膚の脂質の増殖、ならびに、血管形成（angioplasia））；心脈管の症状（例えば、もろい血管、頸動脈海綿洞（carotoid- cavernous fistula）、心弁膜症、起立性頻脈症候群、起立性調節障害、上行大動脈の拡大および／または断裂、嚢胞性中膜壊死、静脈瘤、ならびに、脈管皮膚状態（例えば、レイノー症候群またはリベド血管炎）。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、エーラー・ダンロス症候群の１つ、２つ、３つまたはそれ以上の症状を処置および／または予防するために使用される。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧファイバーまたはその組成物は、エーラー・ダンロス症候群の主要なタイプの１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは全ての、１つ、２つ、３つまたはそれ以上の症状を処置および／または予防するために使用される。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、エーラー・ダンロス症候群に共通する、皮膚に関連する症状（例えば、柔らかい皮膚、もろい皮膚、容易に傷つく皮膚、過剰な瘢痕化、鈍い創傷治癒、および身体の組織における柔らかい（tender）部位にわたる肉芽腫瘍（eshy tumors）の発達を含む。）の１つ、２つまたはそれ以上を処置および／または予防するために使用される。他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、エーラー・ダンロス症候群の関節関連症状（例えば、緩んだもしくは不安定な関節、関節の頻繁な脱臼、関節痛、および変性性の関節疾患の早期開始を含む。）の１つ以上を処置および／または予防するために使用される。
【０１３９】
別の特定の実施形態において、被験体における、過度に脆弱な皮膚によって特徴付けられる遺伝性結合組織疾患である表皮水疱症（ＥＢ）の症状を処置および／または予防するための方法が、本明細書中に提供され、本方法は、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物を上記被験体に投与する工程を包含する。表皮水疱症は、発生率が１／５００００であり、その重篤度は軽いものから致死的なものにまで至る。表皮水疱症は３つのタイプ（単純型表皮水疱症、接合型表皮水疱症および栄養障害型表皮水疱症）に分けられる。特定の実施形態において、被験体における表皮水疱症の１つ、２つまたは全てのタイプの症状を処置および／または予防するための方法が、本明細書中に提供され、本方法は、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物を上記被験体に投与する工程を包含する。
【０１４０】
健康な皮膚を有する被験体において、タンパク質アンカーが互いに独立して動く（例えば通り抜ける）ことを妨げる層の間に上記タンパク質アンカーが存在する。しかし、表皮水疱症を伴うこれらの発生（ｂｏｒｎ）において、これらの皮膚層の最表層は皮膚層を一緒に保持するタンパク質アンカーを欠き、これらの層の間での摩擦を生成する（擦りまたは押圧のような）任意の作用が皮膚層を分離し、皮膚および粘膜において、水疱および激しい痛みを生じさせる。よって、一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、表皮水疱症の症状（例えば水疱）を、皮膚上および粘膜表面上で予防および／または処置するために使用される。
【０１４１】
別の特定の実施形態において、被験体の皮膚におけるシワまたは窪みを処置および／または予防するための方法が、本明細書中に提供され、本方法は、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーを上記被験体に投与する工程を包含する。上記シワまたは窪みは、その深さに依存して粗いか微細であり得、数μｍから数ｍｍまで皮膚の内部へ伸びている。具体的には、粗いシワはしばしば表情線といわれ、額、目尻（例えばカラスの足跡）、および口のいずれかの側の縦線（例えば笑い皺）としてあらわれるが、微細なシワは、皮膚上に（特に顔の動く領域（例えば眼、口、上唇など）において）現れる線またはギザギザの、より浅いネットワークを含む。皮膚におけるシワまたは窪みは、筋肉質量および皮膚の厚みの減少、真皮におけるコラーゲンおよびエラスチンのクロスリンク、および角質層（ＳＣ）の感想の１つ以上の結果として生じる。皮膚におけるこれらの構造的な変化は、機械的強度および伸縮性の喪失を引き起こし、皮膚の表面への目に見えるシワの出現に至る。よって、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物を局所的に適用して、皮膚における機械的強度および伸縮性の喪失を処置および／または予防し、その結果として、構造的な変化に関連する上記シワまたは窪みを処置および／または予防し得る。
【０１４２】
［コラーゲンの減少］
本発明者らはまた、ｓＮＡＧナノファイバーがコラーゲンレベルを低減し得ることを見出した。よって、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーは、コラーゲン形成の増加に関連する症状を有する疾患および／または症候群を処置および／または予防するために使用され得る。
【０１４３】
特定の実施形態において、被験体において結合組織傷害である強皮症の症状を処置および／または予防するための方法が、本明細書中に提供され、本方法は、ｓＮＡＧ何御ファーバーまたはその組成物を上記被験体に投与する工程を包含する。作用の任意のメカニズムによって結合されることなく、強皮症を有する被験体の線維芽細胞（結合組織において最も一般的な細胞）が過剰量のコラーゲンを産生すると信じられている。この過剰量のコラーゲンは、皮膚および内部器官の内側に集積する結合組織の堅いバンドを形成し得、器官の機能を損なわし得る。さらに、過剰量のコラーゲンの産生は、血管および関節に影響を及ぼし得、そして疾患（例えばレイノー症候群）および／または指足のしびれ、痛みおよび変色、胃食道逆流疾患（すなわちＧＥＲＤ）、ならびに皮膚の変化（例えば、指および手の膨張、てかてかした皮膚、および皮膚継ぎ目の肥厚）の症状となり得る。したがって、ｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、コラーゲン関連症状である強皮症および／またはその関連疾患もしくは症候群を予防および／または処置するために使用され得る。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、皮膚の理解した領域に局所的に適用されるか、コラーゲンレベルおよび関連する症状を低減させるために局所的に注射される。
【０１４４】
強皮症のいくつかのタイプは皮膚の実に影響を及ぼし、他のタイプの強皮症は身体全体に影響を及ぼす。一般に、局在性の強皮症は、手および顔の皮膚のみに影響を及ぼす。対照的に、全身性の強皮症（硬化症）は、広い範囲の皮膚および器官（例えば、心臓、肺、または腎臓）に影響を及ぼし得る。全身性の強皮症には２つのタイプがある：限定的な疾患（ＣＲＥＳＴ症候群）および拡散性疾患。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、全身性の強皮症の１つ、２つまたはそれ以上を予防および／または処置するために使用される。他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、局在性の強皮症の１つ、２つまたはそれ以上を予防および／または処置するために使用される。
【０１４５】
強皮症の症状としては、以下が挙げられる：皮膚の症状（例えば、高温および低温に応答して青色または白色に変色する指またはつま先（レイノー症候群参照）；脱毛；皮膚の硬化；異常に暗いまたは明るい皮膚；指、手および前腕の皮膚の肥厚化、硬化および圧迫；皮膚の下の小さな白いこぶ；指先またはつま先の腫れ（潰瘍）；および、顔面のこわばったマスクのような皮膚）、骨および筋肉の症状（例えば、関節痛；脚のしびれおよび痛み；指および関節の痛み、凝りおよび腫れ）、呼吸の問題（例えば、乾いた咳、呼吸の短縮および喘鳴）、ならびに消火器の問題（例えば、食事の後の膨満、便秘、下痢、嚥下困難、および食堂の逆流または胸焼け）。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、強皮症のこれらの症状の１つ、２つまたはそれ以上を処置および／または予防するために使用される。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、強皮症の皮膚症状の１つ、２つまたはそれ以上を処置および／または予防するために使用される。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、強皮症の骨および筋肉の症状の１つ、２つまたはそれ以上を処置および／または予防するために使用される。
【０１４６】
［組織化したコラーゲンの表現型］
本発明者らはさらに、ｓＮＡＧナノファイバーがコラーゲンファイバーの組織化および／または配向を増加し得ることを見出した。したがって、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーは、コラーゲンファイバーの不完全な組織化に関連する症状を有する疾患および／または症候群を処置または予防するために使用され得る。
【０１４７】
別の実施形態において、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、被験体における低い骨密度を処置するために使用される。骨格の脆弱性（skeletal fragility）および骨の脆弱性（bone brittleness）の増加は、骨マトリクスの強度の低下に起因するようである。骨マトリクスにおけるこの低下した強度は、部分的には、コラーゲンファイバーの貧弱な組織化によると考えられる。よって、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、低い骨密度によって特徴付けられる疾患および／または障害（例えば骨粗鬆症）を処置するために使用され得る。ｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、コラーゲンファイバーの組織化または配向を増加または修正するために、骨密度が低い領域へ注入され得る。
【０１４８】
特定の実施形態において、被験体における骨粗鬆症の症状を処置および／または予防するための方法が、本明細書中に提供され、本方法は、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物を上記被験体に投与する工程を包含する。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、骨密度の低い領域に注入される。ｓＮＡＧナノファイバーは、例えばゲルまたは懸濁物の形態で投与され得る。
【０１４９】
特定の実施形態において、被験体における椎間板障害および／または椎間板変性の症状を処置および／または予防するための方法が、本明細書中に提供され、本方法は、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物を上記被験体に投与する工程を包含する。椎間板障害の形態学は、存在する成分のタイプおよびアセンブリされる様式に依存する。このことは、その組織が、負荷についてのその初期の生理学的機能をどのように実行するのかを決定して、他の堅い脊柱の全ての方向への移動を可能にする。椎間板の成分は、歳を重ねるにつれて、中央の膠様の核髄質（central gelatinous nucleus pulposus）の周りにコラーゲンファイバーの規則的な一連の同心円のバンドからなる線維性の外輪を有して、規則的に始まるが、層状のバンドの数およびサイズにおいて、より多くの分岐、鉗合および不同を伴って層の複雑性が増加する。椎間板のコラーゲンの組織化における変化は、変更された負荷を導き得、そして、椎間板の形態学の崩壊について、自己永続的な（self-perpetuating）サイクルを達成し得る。これはいったん開始されると不可逆的である。疾患および変性を伴う椎間板の細胞組織化にも変更がある。したがって、ｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、ｓＮＡＧナノファイバーを局所的に投与する（例えば、椎間板の周りまたは傍に、ｓＮＡＧナノファイバー組成物を注射する）ことによって椎間板障害または椎間板変性を処置および／または予防するために使用され得る。特に、ｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、頸椎Ｌ４とＬ５との間の椎間板に注入され得る。
【０１５０】
特定の実施形態において、被験体における変形性関節症の症状を処置および／または予防するための方法が、本明細書中に提供され、本方法は、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物を上記被験体に投与する工程を包含する。関節軟骨の分解が主に、変形性関節症の原因であり、この関節軟骨の９５％までをコラーゲンが占める。変形性関節症の進行の間のコラーゲンに関連するプロテオグリカン含有量の迅速な喪失は、間接におけるコラーゲン組織化の激しい混乱、および変形性関節症を特徴付ける痛みと凝りを導く。よって、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、変形性関節症を処置および／または予防し、コラーゲンの構造／組織化を修復するために使用され得る。本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、変形性関節症に罹患した個々の関節にｓＮＡＧナノファイバーを注入することによって局所的に適用され得る。
【０１５１】
［平滑筋アクチン発現の低下／筋線維芽細胞含有量の低下］
本発明者らはまた、ｓＮＡＧナノファイバーが、平滑筋アクチンの発現を低減し得る、および／または筋線維芽細胞の含有量を低減し得る、ということを見出した。したがって、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーは、平滑筋アクチン発現の増加または筋線維芽細胞含有量の増加に関連する症状を有する疾患および／または症候群を処置および／または予防するために使用され得る。
【０１５２】
特定の実施形態において、被験体において線維症および／または瘢痕を処置および／または予防するための方法が、本明細書中に提供され、本方法は、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物を上記被験体に投与する工程を包含する。線維症は、器官または組織の修復または反応のプロセスにおける線維性の結合組織の過剰な形成である。瘢痕は、コンフルエントな線維症であり、これは、潜在的な器官または組織の構造を破壊する。器官の線維症による組織の破壊は、心臓、肺、肝臓、腎臓および皮膚の疾患に関連する致死的な帰結に寄与する。有害な線維性組織の拘縮を引き起こす細胞は、筋線維芽細胞であり、これは、コラーゲン様の細胞外マトリクス（ＥＣＭ）および張力の過剰な産生によって特徴付けられる表現型を有している。筋線維芽細胞は、組織における線維性状態の成立に極めて重要な役割を担い、さらに、組織における線維性のストレスファイバーを形成するためにα平滑筋アクチンの発現に依存する。よって、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、多くの疾患および状態を特徴付ける線維症を処置するために使用され得る。ｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、皮膚上に局所的に投与されるか、罹患した組織および／または器官の中、周りまたは傍に注入されることによって投与され得る。一実施形態において、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、炎症性の腸疾患に関連する線維症を処置するために使用されず、および／または炎症性の腸疾患を処置するために使用されない。
【０１５３】
特定の実施形態において、被験体における創傷に関連する瘢痕（例えば皮膚の創傷）を処置および／または予防するための方法が、本明細書中に提供され、本方法は、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物を上記被験体に投与する工程を包含する。と会問えば、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、被験体における創傷に関連する瘢痕を処置するために、新鮮な創傷、あるいは創傷を負わせた１時間、６時間、１２時間、２４時間、５日、１週間、２週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、またはそれよりも長く経過した後の創傷に投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、被験体における創傷に関連する瘢痕を処置するために、部分的に治癒したかまたは完全に治癒した創傷に投与される。特定の実施形態において、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、創傷に直接的に、創傷の近傍に、または創傷によって残された瘢痕に投与され得る。本明細書中で企図される創傷は、任意の創傷（例えば、手術創、銃創、裂傷、切創、貫通、すり傷またはやけど）であり得る。創傷は開放した創傷であり得る。創傷は、瘢痕を生じる危険性が高い創傷であり得る。
【０１５４】
特定の実施形態において、被験体（例えばヒト）における創傷に関連する瘢痕を低減させる方法が、本明細書中に提供され、本方法は、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を上記被験体に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。一実施形態において、上記創傷は手術創である。別の実施形態において、上記創傷は皮膚の外傷である。特定の実施形態において、上記組成物は、上記被験体に局所的に投与される。一実施形態において、上記被験体は、創傷に由来する瘢痕を有し、ｓＮＡＧナノファイバーが上記瘢痕の領域に局所的に投与される。特定の実施形態において、上記組成物は、少なくとも２１日間にわたって局所的に投与される。別の実施形態において、上記被験体は、創傷に由来する瘢痕を有し、上記ｓＮＡＧナノファイバーは、上記瘢痕の領域内への局所注射によって投与される。
【０１５５】
特定の実施形態において、被験体（例えばヒト）における創傷に関連する線維症または癒着を処置または予防するための方法が、本明細書中に提供され、本方法は、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を上記被験体に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。一実施形態において、上記創傷は手術創である。別の実施形態において、上記創傷は皮膚の外傷である。特定の実施形態において、上記組成物は、上記被験体に局所的に投与される。一実施形態において、上記被験体は、創傷に由来する癒着または線維症を有し、ｓＮＡＧナノファイバーが上記癒着または線維症の領域に局所的に投与される。特定の実施形態において、上記組成物は、少なくとも２１日間にわたって局所的に投与される。別の実施形態において、上記被験体は、創傷に由来する癒着または線維症を有し、上記ｓＮＡＧナノファイバーは、上記癒着または線維症の領域内への局所注射によって投与される。
【０１５６】
［再生性の適用］
本発明者らは、ｓＮＡＧナノファイバーがコラーゲンファイバーの組織化および／または配向を増加し得ること、引っ張り強度を増加し得ること、ならびに組織の伸縮性およびエラスチン含有量を増加し得ることを見出したので、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーは、被験体における組織を再生および／または充填するために使用され得る。
【０１５７】
したがって、特定の実施形態において、組織を再生するかまたは組織にボリュームを加えるための、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を使用するための方法が本明細書中に提供され、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。特定の実施形態において、被験体における組織を再生するための方法が本明細書中に提供され、本方法は、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を上記組織に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。上記組織は軟組織（例えば皮膚または筋肉）であっても硬組織（例えば骨）であってもよい。いくつかの実施形態において、上記組成物は、美容手順または外科手順の観点で組織を再生するために使用される。一実施形態において、上記組成物は、形成外科手順の観点で組織を再生するために使用される。これらの適用のいくつかにおいて、ｓＮＡＧナノファイバーは、組織フィラーとして処方される、および／または使用される。特定の実施形態において、上記組織は、ヒト被験体の顔の軟組織である（例えば、組成物が、唇、頬、瞼、顎、または顔のシワもしくは窪みを膨らませるため、持ち上げるため、またはボリュームを加えるために使用され得る。）。これらの適用のいくつかにおいて、ｓＮＡＧナノファイバーは、別の組織フィラーと一緒に処方される、および／または組み合わせて使用される。特定の実施形態において、組成物は、上記被験体における組織に局所的に投与される。他の実施形態において、組成物は、上記組織に局所的な注射によって投与される。他の実施形態において、組成物は、上記組織内への局所注射によって投与される。いくつかの実施形態において、組成物は、皮内へ、皮下へまたは筋肉内へ投与される。
【０１５８】
ｓＮＡＧナノファイバーを含む組織フィラー組成物は、以下の目的を含むがこれらに限定されない任意の美容手順または外科手順にて使用される：皮膚表面におけるシワまたは窪みを低減するため、皮膚表面にボリュームを加えるかおよび／または皮膚表面の下の組織の形状を変更するため。ｓＮＡＧナノファイバーを含む組織フィラー組成物はまた、疾患または手術の影響を受けたか疾患または手術に起因する喪失の影響を受けた組織を修復または再生するために使用され得る。
【０１５９】
特定の実施形態において、被験体の皮膚の表面におけるシワまたは窪みを処置または予防するための方法が本明細書中に提供され、本方法は、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を上記被験体に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。特定の実施形態において、上記組成物は、被験体の皮膚表面におけるシワまたは窪みを処置または予防するための真皮フィラーとして処方および／または使用される。いくつかの実施形態において、美容または形成外科の手順の間の、被験体の皮膚表面上の領域におけるシワまたは窪みを低減させるための方法が本明細書中に提供され、本方法は、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を、皮膚表面の下の領域へ局所的に注射する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。
【０１６０】
別の特定の実施形態において、美容手順または形成外科手順の間に被験体における組織にボリュームを加えるための方法が本明細書中に提供され、本方法は、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を上記組織に投与する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。いくつかの実施形態において、美容手順または形成外科手順の間に被験体における組織にボリュームを加えるための方法が本明細書中に提供され、本方法は、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物を上記組織に局所的に注射する工程を包含し、上記ｓＮＡＧナノファイバーの５０％よりも多くが約１〜１５μｍの間の長さである。
【０１６１】
特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物が、美容適用および／または外科適用のための組織フィラー（例えば真皮フィラー）として有用であることが当該分野にて知られている別の因子と一緒に処方される。例えば、上記組成物は、ヒアルロン酸、コラーゲン、ヒドロキシアパタイトカルシウム、脂質（例えば、ヒト脂質、特に、自己脂質）、ポリ乳酸、死体の真皮（例えばヒト）、ポリメチルメタクリレート、および／またはポリアルキルイミドとともに処方され得るか、あるいはこれらと組み合わせて使用され得る。なお別の実施形態において、上記ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、別の組織フィラー（例えば真皮フィラー）と一緒に処方されないか、あるいは、これと組み合わせて使用されない。一実施形態において、上記ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、ボツリヌス毒素と一緒に処方されるか、あるいは、これと組み合わせて使用される。
【０１６２】
［ディフェンシン］
特定の実施形態において、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、１つ以上のディフェンシンペプチドが発現していないかまたは発現が低レベルであるかに関連する、あるいは、１つ以上のディフェンシンペプチドをコードする遺伝子における変異／欠失／低い遺伝子コピー数（ＧＣＮ）に関連する疾患を処置および／または予防するために使用される。変異しているか／欠失しているか／有しているＧＣＮが低いか／発現していないか／発現が低いかもしくは変更されているディフェンシン遺伝子の例としては、α−ディフェンシンのいずれかが挙げられる。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、１つ以上のトール様レセプター（例えば、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、および／またはＴＬＲ１２）が、発現していない／発現レベルが低いかもしくは変更されていることに関連する、あるいは、該トール様レセプターの変異／欠失／低ＧＣＮに関連する疾患を処置および／または予防するために使用される。なお別の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、ＩＬ−１、ＣＥＡＣＡＭ３、ＳＰＡＧ１１、ＳＩＧＩＲＲ（ＩＬ１様レセプター）、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＩＲＡＫ４、ＴＢＫ１、ＴＲＡＦ６およびＩＫＫｉの１つ以上が、発現していない／発現レベルが低いかもしくは変更されていることに関連する、あるいは、ＩＬ−１、ＣＥＡＣＡＭ３、ＳＰＡＧ１１、ＳＩＧＩＲＲ（ＩＬ１様レセプター）、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＩＲＡＫ４、ＴＢＫ１、ＴＲＡＦ６およびＩＫＫｉの１つ以上の変異／欠失／低ＧＣＮに関連する疾患を処置および／または予防するために使用される。
【０１６３】
［５．５  患者集団］
特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、ナイーブな被験体（すなわち疾患または障害を有していない被験体）に投与され得る。一実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、疾患または障害に罹患する危険性があるナイーブな被験体に投与される。
【０１６４】
一実施形態において、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバー組成物は、疾患または障害を有すると診断されたことがある患者に投与され得る。別の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、疾患または障害の症状を１つ以上示す患者に投与され得る。特定の実施形態において、患者は、本明細書中に記載される組成物の投与の前に疾患または障害を有すると診断されている。
【０１６５】
他の特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、本明細書中に記載される疾患の症状（例えば、エーラー・ダンロス症候群、表皮水疱症、強皮症、骨粗鬆症、椎間板障害、椎間板変性、変形性関節症または線維症）の１つ以上を有すると診断された患者または該症状を示す患者に投与され得る。他の特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、皮膚の引っ張り強さの低下および／または皮膚の伸縮性の低下（例えば、皮膚表面におけるシワまたは窪み）と関連する状態を有する患者に投与され得る。一実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、瘢痕を有する患者に投与され得る。別の実施形態において、本明細書中に記載される粗背負物は、創傷を有さない患者に投与される。特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、創傷（例えば皮膚創傷）を有する患者に、例えば、回復の際に瘢痕化を生じる危険性がある創傷に投与され得る。特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、瘢痕化の危険性が増加している患者に投与され得る。特定の実施形態において、患者は、状態および疾患（例えば上述したように列挙される疾患の１つ）を有すると診断されるか、あるいは、本明細書中に記載される組成物の投与の前に状態および疾患の症状の１つ以上を示す。疾患は、患者の症状の評価および／または（例えば上述したような）患者の生物学的サンプルにおける病原体の検出を含む、当業者に公知の任意の方法によって診断され得る。１つの例において、本明細書中に記載される組成物は、外科医または他の医学専門家によって疾患または状態を有すると診断された患者に投与され得る。別の例において、患者は、疾患または状態の１つ以上の症状を検出の際に、本明細書中に記載される組成物を使用し得る。
【０１６６】
特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物が投与されるべき被験体は、Ｉ型コラーゲンおよび平滑筋アクチン（例えばα平滑筋アクチン）の高レベルでの発現（あるいは、他の理由、これらの高い細胞内含有量または組織含有量）を有する被験体である。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される組成物が投与されるべき被験体は、Ｉ型コラーゲン（コラーゲン含有量の総量によって測定されたもの）の高レベルでの発現（あるいは、他の理由、これらの高い細胞内含有量または組織含有量）を有する被験体である。特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物が投与されるべき被験体は、エラスチンタンパク質またはＩＩＩ型コラーゲンが発現していない被験体か、これらのタンパク質の発現が低レベルである被験体か、あるいはこれらのタンパク質における変異／欠失（あるいは、他の理由、これらの高い細胞内含有量または組織含有量）を有する被験体である。
【０１６７】
特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物が投与されるべき被験体は、１つ以上のディフェンシンペプチドが発現していない被験体か、このタンパク質の発現が低レベルである被験体か、１つ以上のディフェンシンペプチドをコードする遺伝子における変異／欠失を有する被験体である。一実施形態において、本明細書中に記載される組成物が投与されるべき被験体は、１つ以上のα−ディフェンシン（例えばＤＥＦＡ１、ＤＥＦＡ１Ｂ、ＤＥＦＡ３、ＤＥＦＡ４、ＤＥＦＡ５、ＤＥＦＡ６）、１つ以上のβ−ディフェンシン（例えばＤＥＦＢ１、ＤＥＦＢ２、ＤＥＦＢ４、ＤＥＦＢ１０３Ａ、ＤＥＦＢ１０４Ａ、ＤＥＦＢ１０５Ｂ、ＤＥＦＢ１０７Ｂ、ＤＥＦＢ１０８Ｂ、ＤＥＦＢ１１０、ＤＥＦＢ１１２、ＤＥＦＢ１１４、ＤＥＦＢ１１８、ＤＥＦＢ１１９、ＤＥＦＢ１２３、ＤＥＦＢ１２４、ＤＥＦＢ１２５、ＤＥＦＢ１２６、ＤＥＦＢ１２７、ＤＥＦＢ１２８、ＤＥＦＢ１２９、ＤＥＦＢ１３１、ＤＥＦＢ１３６）、および／または１つ以上のθ−ディフェンシン（例えばＤＥＦＴ１Ｐ）が発現していない被験体か、これらのタンパク質の発現が低レベルである被験体か、これらのタンパク質の発現レベルが変更された被験体である。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される組成物が投与されるべき被験体は、ＤＥＦＡ１、ＤＥＦＡ３、ＤＥＦＡ４、ＤＥＦＡ５、ＤＥＦＢ１、ＤＥＦＢ３、ＤＥＦＢ１０３Ａ、ＤＥＦＢ１０４Ａ、ＤＥＦＢ１０８Ｂ、ＤＥＦＢ１１２、ＤＥＦＢ１１４、ＤＥＦＢ１１８、ＤＥＦＢ１１９、ＤＥＦＢ１２３、ＤＥＦＢ１２４、ＤＥＦＢ１２５、ＤＥＦＢ１２６、ＤＥＦＢ１２８、ＤＥＦＢ１２９およびＤＥＦＢ１３１の１つ以上が発現していない被験体か、これらの発現が低レベルである被験体か、これらの発現レベルが変更された被験体である。特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物が投与されるべき被験体は、トールレセプター（例えばＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１および／またはＴＬＲ１２）の１つ以上が発現していない被験体か、これらの発現が低レベルである被験体か、これらの発現レベルが変更された被験体である。なお他の実施形態において、本明細書中に記載される組成物が投与されるべき被験体は、ＩＬ−１、ＣＥＡＣＡＭ３、ＳＰＡＧ１１、ＳＩＧＩＲＲ（ＩＬ１様レセプター）、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＩＲＡＫ４、ＴＢＫ１、ＴＲＡＦ６およびＩＫＫｉの１つ以上が発現していない被験体か、これらの発現が低レベルである被験体か、これらの発現レベルが変更された被験体である。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される組成物が投与されるべき被験体は、ＩＲＡＫ２、ＳＩＧＩＲＲ、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ１０およびＴＲＡＦ６の１つ以上が発現していない被験体か、これらの発現が低レベルである被験体か、これらの発現レベルが変更された被験体である。
【０１６８】
特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物が投与されるべき被験体は、ＡＫＴ１の発現レベルが低いか、正常であるか、または高い被験体である。特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物が投与されるべき被験体は、ＡＫＴ１の発現レベルが正常であるか、または高い被験体である。特定の実施形態において、明細書中に記載される組成物が投与されるべき被験体は、検出可能なレベルのＡｋｔ１タンパク質を有する被験体である。特定の実施形態において、明細書中に記載される組成物が投与されるべき被験体は、ＡＫＴ１の発現またはＡｋｔ１タンパク質のレベルを減少させることが知られている因子を用いる治療を行っていない被験体である。
【０１６９】
特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物が投与されるべき被験体は、組織（例えば皮膚）の引っ張り強さの低下、組織（例えば皮膚）の伸縮性の低下、組織（例えば皮膚）におけるコラーゲンの異常な（例えばまとまりのない）整列、および／または組織（例えば皮膚）における筋線維芽細胞含有量の増加を有する被験体である。一実施形態において、上記被験体は、組織（例えば皮膚）の引っ張り強さが低下している。一実施形態において、上記被験体は、組織（例えば皮膚）の伸縮性が低下している。一実施形態において、上記被験体は、組織（例えば皮膚）におけるコラーゲンの異常な（例えばまとまりのない）整列を有している。一実施形態において、上記被験体は、組織（例えば皮膚）における筋線維芽細胞含有量が増加している。組織の特徴または特性における増加または減少は、その組織の正常な特徴または特性の１．２５倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍または１０倍の差異である。ここで、組織の「正常な」特徴または特性は、以下である：（ｉ）症状を示さないかまたは処置されるべき状態および疾患を有すると診断されていない被験体において見出されることが知られている組織の特徴または特性の平均；（ｉｉ）症状を示さないかまたは処置されるべき状態および疾患を有すると診断されていない、３名、５名、１０名、２０名、２５名、５０名またはそれ以上の被験体において検出される組織の特徴または特性の平均；および／または（ｉｉｉ）上記状態および疾患の開始前に本明細書中に記載される組成物が投与される被験体において検出される組織の特徴または特性。
【０１７０】
特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、エーラー・ダンロス症候群を有する（例えばエーラー・ダンロス症候群を有すると診断された）患者、あるいは、エーラー・ダンロス症候群の１つ、２つまたはそれ以上の症状を示す患者に投与される。
【０１７１】
特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、表皮水疱症を有する（例えば表皮水疱症を有すると診断された）患者、あるいは、表皮水疱症の１つ、２つまたはそれ以上の症状を示す患者に投与される。
【０１７２】
特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、シワおよび／または皮膚の窪みを有する患者に投与される。
【０１７３】
特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、美容手順または形成外科を受けている患者に投与される。特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、組織フィラー（例えば柔組織フィラーまたは硬組織フィラー）の必要性がある患者に投与される。特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、真皮フィラーの必要性がある患者に投与される。特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、組織再生の必要性がある（例えば、手術または疾患に起因して欠失または喪失した組織を修復する必要性がある）患者に投与される。
【０１７４】
特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、組織再生（例えば、軟組織の再生または硬組織の再生）の必要性がある患者に投与される。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、軟組織（例えば皮膚、結合組織または筋肉）の再生の必要性がある患者に投与される。一実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、硬組織（例えば骨）の再生の必要性がある患者に投与される。
【０１７５】
特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、瘢痕（例えば皮膚創傷のような創傷によって生じる瘢痕）を有する患者に投与される。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、皮膚創傷（例えば治癒の際に瘢痕化が生じる危険性のある創傷）のような創傷を有する患者に投与される。
【０１７６】
他の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、創傷（例えば皮膚創傷）を有する患者に投与されない。
【０１７７】
特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、強皮症を有する（例えば強皮症を有すると診断された）患者、あるいは強皮症の症状の１つ、２つまたはそれ以上を示す患者に投与される。
【０１７８】
特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、骨粗鬆症を有する（例えば骨粗鬆症を有すると診断された）患者、あるいは骨粗鬆症の症状の１つ、２つまたはそれ以上を示す患者に投与される。
【０１７９】
特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、椎間板障害を有する（例えば椎間板障害を有すると診断された）患者、あるいは椎間板障害の症状の１つ、２つまたはそれ以上を示す患者に投与される。
【０１８０】
特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、椎間板変性を有する（例えば椎間板変性を有すると診断された）患者、あるいは椎間板変性の症状の１つ、２つまたはそれ以上を示す患者に投与される。
【０１８１】
特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、変形性関節症を有する（例えば変形性関節症を有すると診断された）患者、あるいは変形性関節症の症状の１つ、２つまたはそれ以上を示す患者に投与される。
【０１８２】
特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、線維症を有する（例えば線維症を有すると診断された）患者、あるいは線維症の症状の１つ、２つまたはそれ以上を示す患者に投与される。いくつかの実施形態において、処置された患者は、炎症性腸疾患、あるいは炎症性腸疾患と関連する線維症を有さない。
【０１８３】
特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、創傷と関連する癒着を有する（例えば創傷と関連する癒着を有すると診断された）患者、あるいは創傷と関連する癒着の危険性がある患者に投与される。創傷は、皮膚創傷でも手術創でもあり得る。
【０１８４】
特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、創傷と関連する線維症を有する（例えば創傷と関連する線維症を有すると診断された）患者、あるいは創傷と関連する線維症の危険性がある患者に投与される。創傷は、皮膚創傷でも手術創でもあり得る。
【０１８５】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、免疫不全の患者、および／または、急性もしくは慢性の疾患もしくは感染症にかかりやすい患者（例えばＨＩＶ陽性患者、または癌処置もしくは移植手順の結果として免疫不全になった患者）に投与される。一実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、嚢胞性線維症を有すると診断された患者に投与される。
【０１８６】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、状態および疾患を有する患者に、その状態および疾患が明示される前、またはその状態および疾患が重篤になる前（例えば、その患者が処置または入院を必要とする前）に、投与される。一実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、疾患を有する患者に、その疾患、障害または状態が明示された後、またはその状態および疾患が重篤になった後（例えば、その患者が処置または入院を必要とする後）に、投与される。
【０１８７】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、動物に投与される。特定の実施形態において、上記動物はトリである。特定の実施形態において、上記動物はイヌである。特定の実施形態において、上記動物はネコである。特定の実施形態において、上記動物はウマである。特定の実施形態において、上記動物はウシである。特定の実施形態において、上記動物は哺乳動物（例えば、ウマ、ブタ、マウスまたは霊長類（好ましくはヒト））である。
【０１８８】
特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、ヒト成人に投与される。特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、５０歳を超えたヒト成人に投与される。特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物が投与されるべき被験体は、高齢のヒト成人である。
【０１８９】
特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、ヒト幼児に投与される。特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、ヒト小児に投与される。特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、ヒト乳児に投与される。特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、早産のヒト乳児に投与される。
【０１９０】
特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、創傷（例えば開放創（切開、裂傷、貫通、すり傷または火傷））を処置するために被験体に投与されない。
【０１９１】
［５．６  投与の様式］
特定の実施形態において、状態および疾患またはその症状を処置および／または予防する方法が、本明細書中に記載され、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物が、そのような処置の必要性がある患者に局所的に投与される。
【０１９２】
他の実施形態において、状態および疾患またはその症状を処置および／または予防する方法が、本明細書中に記載され、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物が、そのような処置の必要性がある患者の器官または組織に局所的に（すなわち、非全身性に）注射される。上記組成物は、軟組織または硬組織に局所的に注射され得る。例えば、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、骨に（例えば骨密度が低い領域に）、あるいは椎間板に（例えばＬ４とＬ５との間に）注射され得る。他の例において、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、骨の表面に、椎間板の表面に投与され得る。いくつかの実施形態において、組織を再生するため、組織にボリュームを加えるため、あるいは、皮膚の表面におけるシワまたは窪みを処置または予防するための方法が本明細書中に記載される。
【０１９３】
いくつかの実施形態において、状態および疾患またはその症状を処置および／または予防する方法が、本明細書中に記載され、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物が、そのような処置の必要性がある患者における表面組織（例えば皮膚表面または粘膜表面）に局所的に投与される。別の実施形態において、状態および疾患またはその症状を処置および／または予防する方法が、本明細書中に記載され、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物が、そのような処置の必要性がある患者における（例えば手術の後の）内部の器官または組織に局所的に投与される。
【０１９４】
いくつかの実施形態において、有効量のｓＮＡＧナノファイバーおよび／またはｓＮＡＧナノファイバー組成物が被験体に投与される。
【０１９５】
いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、皮膚に（例えば、状態および疾患の症状がある部位に）局所的に投与される。なお他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、状態および疾患の部位（例えば状態および疾患の症状がある部位）に、あるいはその部位の周囲に、局所的に投与される。なお他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、状態および疾患の部位（例えば状態および疾患の症状がある部位）に近接して適用される。なお他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、状態および疾患の危険性が高い部位（例えば状態および疾患の症状がある部位）に局所的に投与される。
【０１９６】
本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバー組成物は、局所投与に好適な多くの手段のいずれかによって投与され得る。このような手段は当業者によく知られており、吸入、経鼻腔、経膣、経直腸、経頬、もしくは経舌下による、皮膚に局所的なもの、身体の他の表面（例えば粘膜表面）に局所的なものに限定されない。局所投与の様式は、処置または予防されるべき状態および疾患に依存して変動し得る。ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、種々のタイプの局所投与のために処方され得る。
【０１９７】
特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、局所的に、例えば、そのような処置の必要性がある患者の皮膚に、または、そのような処置の必要性がある患者の別の組織に、適用される。いくつかの実施形態において、上記組成物は、状態および疾患（またはその症状）の部位に、および／または、状態および疾患（またはその症状）の部位に近接して、直接的に適用され得る。いくつかの実施形態において、上記組成物は、状態および疾患が潜在的に発達している部位（例えば開放創）に、直接的に適用され得る。
【０１９８】
いくつかの実施形態において、状態および疾患またはその症状を処置および／または予防するための方法が本明細書中に記載され、ここで、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物が、そのような処置の必要性がある患者に全身性に（例えば非経口で）投与される。
【０１９９】
特定の実施形態において、状態および疾患またはその症状を処置および／または予防するための方法が本明細書中に記載され、ここで、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物が、そのような処置の必要性がある患者に、経口投与される。
【０２００】
特定の実施形態において、状態および疾患またはその症状を処置および／または予防するための方法が本明細書中に記載され、ここで、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物が、そのような処置の必要性がある患者に筋肉内投与される。特定の実施形態において、組織を再生するため、組織にボリュームを加えるため、あるいは、皮膚表面におけるシワまたは窪みを処置および／または予防するための方法が本明細書中に記載され、ここで、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物が、そのような処置の必要性がある患者に筋肉内投与される。
【０２０１】
特定の実施形態において、状態および疾患またはその症状を処置および／または予防するための方法が本明細書中に記載され、ここで、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物が、そのような処置の必要性がある患者に静脈内投与される。
【０２０２】
特定の実施形態において、状態および疾患またはその症状を処置および／または予防するための方法が本明細書中に記載され、ここで、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物が、そのような処置の必要性がある患者に直腸内投与される。
【０２０３】
特定の実施形態において、状態および疾患またはその症状を処置および／または予防するための方法が本明細書中に記載され、ここで、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物が、そのような処置の必要性がある患者に皮下に投与される。特定の実施形態において、組織を再生するため、組織にボリュームを加えるため、あるいは、皮膚表面におけるシワまたは窪みを処置および／または予防するための方法が本明細書中に記載され、ここで、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物が、そのような処置の必要性がある患者に皮下に投与される。
【０２０４】
特定の実施形態において、状態および疾患またはその症状を処置および／または予防するための方法が本明細書中に記載され、ここで、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物が、そのような処置の必要性がある患者に皮内に投与される。特定の実施形態において、組織を再生するため、組織にボリュームを加えるため、あるいは、皮膚表面におけるシワまたは窪みを処置および／または予防するための方法が本明細書中に記載され、ここで、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物が、そのような処置の必要性がある患者に皮内に投与される。
【０２０５】
他の実施形態において、状態および疾患またはその症状を処置および／または予防するための方法が本明細書中に記載され、ここで、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物が、そのような処置の必要性がある患者に全身性に（例えば非経口で）投与されない。
【０２０６】
他の実施形態において、状態および疾患またはその症状を処置および／または予防するための方法が本明細書中に記載され、ここで、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物が、そのような処置の必要性がある患者に局所的に注射される。特定の実施形態において、組織を再生するため、組織にボリュームを加えるため、あるいは、皮膚表面におけるシワまたは窪みを処置および／または予防するための方法が本明細書中に記載され、ここで、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物が、そのような処置の必要性がある患者に局所注射によって投与される。他の実施形態において、皮膚表面におけるシワまたは窪みを処置または予防するための方法が本明細書中に記載され、ここで、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物が、そのような処置の必要性がある患者の皮膚表面の下のシワまたは窪みへの直接的な局所注射によって投与される。
【０２０７】
一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、患者の皮膚に適用される。例えば、このような組成物は、皮膚の状態および疾患を処置または予防するために、患者の皮膚に局所的に適用され得る。別の実施形態において、上記組成物は、患者の皮膚の下の領域への直接的な（例えば、再生するためまたはボリュームを加えるための、皮膚の下の領域への直接的な）注射によって適用され得る。
【０２０８】
別の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、患者の粘膜表面に局所的に提供され得る。例えば、このような組成物は、口腔または歯茎の状態および疾患を処置または予防するために口腔粘膜に局所的に適用され得る。
【０２０９】
局所投与のための、上に列挙された方法は、懸濁物（例えば、濃厚な懸濁物）、クリーム、軟膏、ゲル、溶液、膜、スプレー、ペースト、パウダー、もしくは本明細書中に記載される他の任意の処方物または当該分野で公知のものの形態でのｓＮＡＧナノファイバーの投与を含み得る。ｓＮＡＧナノファイバーはまた、例えば、患者の皮膚上に局在する疾患または感染を処置するために、着衣または包帯に適用され得る。特定の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーを含有する組成物は、硬くないか、または、隔膜が形成されていない。
【０２１０】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、スプレーとして適用され得る。
【０２１１】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、シリンジ、あるいは該組成物の患者への局所送達に好適な別のタイプのアプリケータ（例えば、スパーテル、綿棒、スクイーズチューブのようなチューブ）を用いて局所的に適用され得る。例えば、本明細書中に記載される組成物は、懸濁物（例えば濃厚な懸濁物）、溶液、クリーム、軟膏、またはゲルとして処方され、患者の皮膚、粘膜または他の組織表面に、アプリケータ（例えばシリンジ）を介して、局所的に投与され得る。
【０２１２】
別の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、外科手順の部位で適用され得る。例えば、このような組成物は、スプレーされても、クリーム、懸濁物（例えば濃厚な懸濁物）、溶液、軟膏、ゲル、膜またはパウダーとして適用されても、外科手順に適用されるか外科手順に適用された組織または器官の表面上にコートされてもよい。一実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、外科的な切開の部位で、摘出された組織の部位で、あるいは外科的な縫い目または縫合の部位で適用される。本明細書中に記載される組成物のこのような投与は、例えば、組織の線維化を処置または予防し得る。例えば、本明細書中に記載される組成物は、線維症の高い危険性をもたらすことが知られている外科手順の間または後に使用され得る。本明細書中に記載される組成物は、上に列挙したかまたは他の外科手順の部位で適用され得る。
【０２１３】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、シリンジを用いる注射によって適用され得る。
【０２１４】
なお他の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、患者における状態および疾患を処置または予防するために、患者においてまたは患者に挿入されて使用されるデバイス（例えば、口腔衛生製品、カテーテル、外科用器具または他の製品）の上にコーティングされ得る。
【０２１５】
いくつかの実施形態において、本明細書にて企図される方法は、患者における疾患の検出／診断を含む工程を包含する。いくつかの実施形態において、検出／診断は、患者の生物学的サンプルにおける疾患についての試験またはアッセイを含む。他の実施形態において、診断は、患者が疾患の１つ以上の症状を有するか否かを評価することを含む。
【０２１６】
本明細書中に記載される組成物は、徐放性特性を示し得る、および／または、そのような組成物の持続的放出を生じる処方物中にて投与され得る。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、前出の５．１の項で記載したような時間にわたって生分解し、ｓＮＡＧナノファイバーのこれらの特性は、本明細書中に記載される組成物の徐放性を導き得るか、そのような徐放性に寄与し得る。なお別の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、徐放能を示すように、当該分野で公知の任意の方法を用いて処方される。本明細書中に記載される組成物は、この組成物の患者への投与の後の６時間、１２時間、１８時間、２４時間（１日間）、２日間、３日間、５日間、７日間（１週間）、１０日、１４日（２週間）、３週間または４週間に等しいかまたはそれよりも長い期間にわたって徐放性を示し得る。
【０２１７】
企図される処置レジメンは、ｓＮＡＧナノファイバー組成物の単回用量もしくは単回適用、ｓＮＡＧナノファイバー組成物の二回用量もしくは二回適用、またはｓＮＡＧナノファイバー組成物の複数回用量もしくは複数回適用のレジメンを含む。単回用量もしくは単回適用は、時間ごと、日ごと、週ごとまたは月ごとに投与され得る。例えば、単回用量のｓＮＡＧナノファイバー組成物は、一日に１回、２回、３回、４回、週に１回、２回、３回、１日おきに、２週に１回、３週に１回、４週に１回、月に１回、あるいは２月に１回投与され得る。
【０２１８】
ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、２日間、３日間、４日間、５日間、１週間、２週間、３週間、１ヶ月間、２ヶ月間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、９ヶ月間、１年間、１．５年間、２年間、２．５年間、３年間、４年間、５年間、７年間、１０年間、またはそれ以上に等しいかまたはそれよりも長い期間にわたって投与され得る。一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、処置の持続時間の間に、副作用を何ら引き起こさないか、軽度な副作用のみを引き起こす。別の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、過敏（例えば中程度または重篤な過敏）またはアレルギー（例えば中程度または重篤なアレルギー）を引き起こさない。
【０２１９】
上記組成物中のｓＮＡＧナノファイバーの濃度は、変動してもよい。一般に、有効量のｓＮＡＧナノファイバーが、本明細書中に記載される状態または疾患を処置するために本明細書中に記載される組成物において使用される。有効量は、本明細書中に記載される１つ以上の硬化を達成するに十分な量であり、例えば、状態および疾患の１つ以上の症状を低減させるか全滅させるに十分な量である。例えば、組成物は、患者への局所送達に好適な形態にて、組成物の用量／適用あたり、約０．２〜２０ｍｇ／ｃｍ２のｓＮＡＧナノファイバーを含み得る。特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、患者への局所送達に好適な形態にて、組成物の用量／適用あたり、約０．２５〜２０ｍｇ／ｃｍ２、約０．５〜２０ｍｇ／ｃｍ２、約１〜２０ｍｇ／ｃｍ２、約１〜１５ｍｇ／ｃｍ２、約１〜１２ｍｇ／ｃｍ２、約１〜１０ｍｇ／ｃｍ２、約１〜８ｍｇ／ｃｍ２、約１〜５ｍｇ／ｃｍ２、約２〜８ｍｇ／ｃｍ２、または約２〜６ｍｇ／ｃｍ２のｓＮＡＧナノファイバーを含み得る。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、患者への局所送達に好適な形態にて、組成物の用量／適用あたり、約５〜５０ｍｇ／ｍＬのｓＮＡＧナノファイバーを含み得る。特定の実施形態において、本明細書中に記載の組成物は、患者への局所送達に好適な形態にて、組成物の用量／適用あたり、約５〜４０ｍｇ／ｍＬ、約５〜３５ｍｇ／ｍＬ、約１０〜５０ｍｇ／ｍＬ、約１０〜４０ｍｇ／ｍＬ、約１０〜３５ｍｇ／ｍＬ、約１０〜３０ｍｇ／ｍＬ、約１５〜４０ｍｇ／ｍＬ、約１５〜３５ｍｇ／ｍＬ、約１５〜３０ｍｇ／ｍＬ、または約２０〜３０ｍｇ／ｍＬのｓＮＡＧナノファイバーを含み得る。特定の実施形態において、本明細書中に記載の組成物は、患者への局所送達に好適な形態にて、組成物の用量／適用あたり、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬまたは約３０ｍｇ／ｍＬのｓＮＡＧナノファイバーを含み得る。特定の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、患者において処置されるべき表面（例えば皮膚、粘膜表面または他の組織の表面）の０．５ｃｍ２〜１ｃｍ２あたり、約５０〜１００μＬ、約５０〜２００μＬ、約５０〜２５０μＬ、約５０〜３００μＬ、約５０〜３５０μＬ、約５０〜４００μＬ、約５０〜４５０μＬ、約５０〜５００μＬ、約１００〜２００μＬ、約１００〜３００μＬ、約１００〜４００μＬ、約１００〜５００μＬの範囲の量の、全体の溶液または懸濁物（ｓＮＡＧナノファイバーを含む）を含み得る。全体の溶液または懸濁物は、生理食塩水、緩衝液、溶液（例えばＨａｎｋ緩衝化溶液）、または任意の他の生理学的に適合性な溶液を含み得る。
【０２２０】
他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、患者への局所注射（例えば皮内（intradermal）注射、皮内（intracutaneous）注射または筋肉内注射）による投与に好適な形態にて、組成物の用量／適用あたり、約５ｍｇ／ｍＬのｓＮＡＧナノファイバーを含み得る。特に、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、局所注射による投与に好適な形態にて、組成物の用量／適用あたり、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約７．５ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１２．５ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約１６ｍｇ／ｍＬ、約１７ｍｇ／ｍＬ、約１７．５ｍｇ／ｍＬ、約１８ｍｇ／ｍＬ、約１９ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２１ｍｇ／ｍＬ、約２２ｍｇ／ｍＬ、約２３ｍｇ／ｍＬ、約２４ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２７ｍｇ／ｍＬ、約２８ｍｇ／ｍＬ、約２９ｍｇ／ｍＬ、または約３０ｍｇ／ｍＬのｓＮＡＧナノファイバーを含み得る。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、患者への局所注射による投与に好適な形態にて、組成物の用量／適用あたり、約７．５ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬのｓＮＡＧナノファイバーを含み得る。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、患者への局所注射による投与に好適な形態にて、組成物の用量／適用あたり、約１０ｍｇ／ｍＬ〜２０ｍｇ／ｍＬのｓＮＡＧナノファイバーを含み得る。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、患者への局所注射による投与に好適な形態にて、組成物の用量／適用あたり、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、または約２０ｍｇ／ｍＬのｓＮＡＧナノファイバーを含み得る。
【０２２１】
他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、患者への局所送達に好適な形態にて、組成物の用量／適用あたり、約１０ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬのｓＮＡＧナノファイバーを含み得る。特に、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、患者への局所送達に好適な形態にて、組成物の用量／適用あたり、約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約７．５ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１２．５ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約１６ｍｇ／ｍＬ、約１７ｍｇ／ｍＬ、約１７．５ｍｇ／ｍＬ、約１８ｍｇ／ｍＬ、約１９ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２１ｍｇ／ｍＬ、約２２ｍｇ／ｍＬ、約２３ｍｇ／ｍＬ、約２４ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２７ｍｇ／ｍＬ、約２８ｍｇ／ｍＬ、約２９ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約３１ｍｇ／ｍＬ、約３２ｍｇ／ｍＬ、約３３ｍｇ／ｍＬ、約３４ｍｇ／ｍＬ、約３５ｍｇ／ｍＬ、約３６ｍｇ／ｍＬ、約３７ｍｇ／ｍＬ、約３８ｍｇ／ｍＬ、約３９ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約４１ｍｇ／ｍＬ、約４２ｍｇ／ｍＬ、約４３ｍｇ／ｍＬ、約４４ｍｇ／ｍＬ、約４５ｍｇ／ｍＬ、約４６ｍｇ／ｍＬ、約４７ｍｇ／ｍＬ、約４８ｍｇ／ｍＬ、約４９ｍｇ／ｍＬ、または約５０ｍｇ／ｍＬのｓＮＡＧナノファイバーを含み得る。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、患者への局所送達に好適な形態にて、組成物の用量／適用あたり、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜３０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜４０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜３０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜３０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜２０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬ、または約１０ｍｇ／ｍＬ〜２０ｍｇ／ｍＬのｓＮＡＧナノファイバーを含み得る。
【０２２２】
他の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、患者への局所送達に好適な形態にて、組成物の用量／適用あたり、約０．１ｍｇ／ｃｍ２〜１０ｍｇ／ｃｍ２のｓＮＡＧナノファイバーを含み得る。特に、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、患者への局所送達に好適な形態にて、組成物の用量／適用あたり、約０．１ｍｇ／ｃｍ２、約０．５ｍｇ／ｃｍ２、約０．７５ｍｇ／ｃｍ２、約１ｍｇ／ｃｍ２、約２ｍｇ／ｃｍ２、約２．５ｍｇ／ｃｍ２、約３ｍｇ／ｃｍ２、約４ｍｇ／ｃｍ２、約５ｍｇ／ｃｍ２、約６ｍｇ／ｃｍ２、約７ｍｇ／ｃｍ２、約７．５ｍｇ／ｃｍ２、約８ｍｇ／ｃｍ２、約９ｍｇ／ｃｍ２、または約１０ｍｇ／ｃｍ２のｓＮＡＧナノファイバーを含み得る。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、患者への局所送達に好適な形態にて、組成物の用量／適用あたり、約０．５ｍｇ／ｃｍ２〜１０ｍｇ／ｃｍ２、約０．７５ｍｇ／ｃｍ２〜７．５ｍｇ／ｃｍ２、約１ｍｇ／ｃｍ２〜７．５ｍｇ／ｃｍ２、または約１ｍｇ／ｃｍ２〜５ｍｇ／ｃｍ２のｓＮＡＧナノファイバーを含み得る。
【０２２３】
［５．７  組合せ療法］
種々の実施形態において、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、１つ以上の他の治療と組み合わせて被験体に投与され得る。この１つ以上の他の治療は、疾患の処置または予防に有利であり得、あるいは、症状、または状態および疾患と関連する症状を改善し得る。特定の実施形態において、上記治療は、少なくとも５分間空けて、少なくとも３０分間空けて、１時間空けて、約１時間空けて、約１時間〜約２時間空けて、約２時間〜約３時間空けて、約３時間〜約４時間空けて、約４時間〜約５時間空けて、約５時間〜約６時間空けて、約６時間〜約７時間空けて、約７時間〜約８時間空けて、約８時間〜約９時間空けて、約９時間〜約１０時間空けて、約１０時間〜約１１時間空けて、約１１時間〜約１２時間空けて、約１２時間〜１８時間空けて、１８時間〜２４時間空けて、２４時間〜３６時間空けて、３６時間〜４８時間空けて、４８時間〜５２時間空けて、５２時間〜６０時間空けて、６０時間〜７２時間空けて、７２時間〜８４時間空けて、８４時間〜９６時間空けて、９６時間〜１２０時間空けて、投与される。特定の実施形態において、２つ以上の治療が同一の特許出願（patent visit）内で投与される。
【０２２４】
特定の実施形態において、１つ以上の治療は手術である。特定の実施形態において、手術が、患者における器官または組織に対して実施され、本明細書中に記載される組成物が、手術の前、最中および／または後に操作部位（例えば創傷部位）に投与される。
【０２２５】
特定の実施形態において、手術は、固形腫瘍または皮膚がんの全てまたは一部を取り除くために実施され、本明細書中に記載される組成物が、手術の前、最中および／または後に腫瘍の部位に投与される。特定の実施形態において、１つ以上の治療は放射線療法である。
【０２２６】
特定の実施形態において、１つ以上の治療は抗ウイルス剤または抗菌剤である。当業者によく知られている任意の抗ウイルス剤は、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物と組み合わせて使用され得る。ｓＮＡＧナノファイバーと組み合わせて使用され得る抗ウイルス剤および抗菌剤は、ＷＯ ２０１１／１３０６４６およびＷＯ ２０１２／１４２５８１に記載されており、これらの各々はその全体が本明細書中に参考として援用される。
【０２２７】
他の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、任意のさらなる抗ウイルス剤および抗菌剤を含まない。一実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、抗生物質を含まない。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、１つ以上の抗ウイルス剤および／または抗菌剤と組み合わせて被験体に投与されない。一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、１つ以上の抗生物質と組み合わせて被験体に投与されない。一実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、亜鉛を含まない、および／または、亜鉛と組み合わせて被験体に投与されない。
【０２２８】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物と組み合わせて使用される治療は、抗炎症剤である。抗炎症剤の非限定的な例としては、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤｓ）（例えば、セレコキシブ（ＣＥＬＥＢＲＥＸＴＭ）、ジクロフェナク（ＶＯＬＴＡＲＥＮＴＭ）、エトドラク（ＬＯＤＩＮＥＴＭ）、フェノプロフェン（ＮＡＬＦＯＮＴＭ）、インドメタシン（ＩＮＤＯＣＩＮＴＭ）、ケトララック（ＴＯＲＡＤＯＬＴＭ）、オキサプロジン（ＤＡＹＰＲＯＴＭ）、ナブメントン（ＲＥＬＡＦＥＮＴＭ）、スリンダック（ＣＬＩＮＯＲＩＬＴＭ）、トルメンチン（ＴＯＬＥＣＴＩＮＴＭ）、ロフェコキシブ（ＶＩＯＸＸＴＭ）、ナプロセン（ＡＬＥＶＥＴＭ、ＮＡＰＲＯＳＹＮＴＭ）、ケトプロフェン（ＡＣＴＲＯＮＴＭ）およびナブメトン（ＲＥＬＡＦＥＮＴＭ））、ステロイド抗炎症剤（例えば、グルココルチコイド、デキサメタゾン（ＤＥＣＡＤＲＯＮＴＭ）、コルチコステロイド（例えば、メチルプレドニゾロン（ＭＥＤＲＯＬＴＭ））、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン（ＰＲＥＤＮＩＳＯＮＥＴＭおよびＤＥＬＴＡＳＯＮＥＴＭ）およびプレドニゾロン（ＰＲＥＬＯＮＥＴＭおよびＰＥＤＩＡＰＲＥＤＴＭ））、抗コリン作動薬（例えば、硫酸アトロピン、硝酸メチルアトロピンおよびイプラトロピウムブロミド（ＡＴＲＯＶＥＮＴＴＭ））、β２−アゴニスト（例えば、アブテロール（ＶＥＮＴＯＬＩＮＴＭおよびＰＲＯＶＥＮＴＩＬＴＭ）、ビトルテロール（ＴＯＲＮＡＬＡＴＥＴＭ）、レバルブテロール（ＸＯＰＯＮＥＸＴＭ）、メタプロテレノール（ＡＬＵＰＥＮＴＴＭ）、ピルブテロール（ＭＡＸＡＩＲＴＭ）、ターブトライン（ＢＲＥＴＨＡＩＲＥＴＭおよびＢＲＥＴＨＩＮＥＴＭ）、アルブテロール（ＰＲＯＶＥＮＴＩＬＴＭ、ＲＥＰＥＴＡＢＳＴＭおよびＶＯＬＭＡＸＴＭ）、フォルモテロール（ＦＯＲＡＤＩＬ  ＡＥＲＯＬＩＺＥＲＴＭ）およびサルメテロール（ＳＥＲＥＶＥＮＴＴＭおよびＳＥＲＥＶＥＮＴ  ＤＩＳＫＵＳＴＭ））、ならびに、メチルキサンチン（例えば、テオフィリン（ＵＮＩＰＨＹＬＴＭ、ＴＨＥＯ−ＤＵＲＴＭ、ＳＬＯ−ＢＩＤＴＭおよびＴＥＨＯ−４２ＴＭ））が挙げられる。
【０２２９】
いくつかの実施形態において、本命視書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーと組み合わせて使用される治療またはさらなる因子は、組織フィラー（例えば真皮フィラー）である。さらなる組織フィラーは、ヒアルロン酸、コラーゲン、ポリ乳酸、ヒドロキシアパタイトカルシウム、ｐｐリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）、またはポリアルキルイミドであり得る。組織フィラーはまた、ヒト脂肪（例えば自己のヒト脂肪）であり得る。いくつかのこれらの実施形態において、さらなる組織フィラーは、ｓＮＡＧナノファイバーと一緒に１つの組成物（すなわち、ｓＮＡＧナノファイバーおよびさらなる組織フィラーを含む組成物）の中に処方され得る。一実施形態において、コラーゲンが、ｓＮＡＧナノファイバーと一緒に処方される。一実施形態において、ヒアルロン酸が、ｓＮＡＧナノファイバーと一緒に処方される。一実施形態において、ヒト脂肪が、ｓＮＡＧナノファイバーと一緒に処方される（このような実施形態において、組合せ処方物が、患者への投与の前に医師によって調製されてもよい。）。なお別の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーは、別の組織フィラーと組み合わせて（例えば、別の組織フィラーの前に、同時に、または後に）、別の組織フィラーとともに１つの組成物中に処方されることなく投与され得る。
【０２３０】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物と組み合わせて使用される治療またはさらなる因子は、ボツリヌス毒素（例えば、ＢＯＴＯＸＴＭまたはＤＴＳＰＯＲＴＴＭ）である。いくつかの実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバーはボツリヌス毒素と組み合わせて（例えばボツリヌス毒素の前に、同時にまたは後に）、ボツリヌス毒素とともに１つの組成物中に処方されることなく投与され得る。
【０２３１】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物と組み合わせて使用される治療は、美容手順である。例えば、美容手順は、ケミカルピールまたはレーザー処置であり得る。一実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、ケミカルピールまたはレーザー処置（例えばレーザーでの皮膚再表面化（resurfacing））の後に適用され得る。別の実施形態において、ｓＮＡＧナノファイバー組成物は、ケミカルピールまたはレーザー処置（例えばレーザーでの皮膚再表面化）と同時に、あるいはその間に適用され得る。
【０２３２】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物と組み合わせて使用される治療は、形成外科手順である。例えば、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、組織フィラー処置を必要とする形成外科手順における組織フィラーとして使用され得る。別の例において、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物は、瘢痕化、癒着または線維化を防ぐための形成外科手順の後に局所的に適用され得る。
【０２３３】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物と組み合わせて使用される治療は、痛みに対する医薬（例えば鎮痛剤）である。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバーまたはその組成物と組み合わせて使用される治療は、熱に対する医薬である。
【０２３４】
［５．８  キット］
本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバー組成物の１つ以上を備える薬学的なパックまたはキットがまた、本明細書中に提供される。パックまたはキットは、本明細書中に記載される組成物を含む１以上の成分で充填された１つ以上の容器を備えている。上記組成物は、好ましくは、シールされた、防水の、滅菌されたパッケージ内に含まれ、これは、夾雑が生じることなく組成物の取り出しを容易にする。容器を構成する材料は、アルミホイル、プラスチック、または容易に滅菌される別の慣用的な材料であり得る。キットは、組成物の単回の投与または複数回の投与のための材料を含み得、好ましくは、各投与のための材料は、別々で、防水で滅菌されたパッケージにて提供される。
【０２３５】
別の実施形態において、二重の区画を有する容器が提供される。第１の区画は、上述した本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバー組成物のいずれかを含み、第２の区画は、別の活性因子（例えば、ｓＮＡＧナノファイバー組成物と組み合わせて使用されるべき別の因子）を含む（例えば、ｓＮＡＧナノファイバーと組み合わせて使用され得るさらなる因子について記載された、上の項５．７を参照のこと。）。当該分野または医療分野において、第１の区画における組成物は、患者への連続的な投与のために、第２の区画におけるさらなる因子と容易に組み合わせられる。
【０２３６】
キットはまた、本明細書中に記載されるｓＮＡＧナノファイバー組成物の１つ以上の投与のための、あるいは、別の活性因子（例えばｓＮＡＧナノファイバー組成物と組み合わせて使用される別の因子）の投与のための、アプリケータ―を備え得る。一実施形態において、キットは、ｓＮＡＧナノファイバー組成物の局所投与のためのアプリケータ―を備える。ｓＮＡＧナノファイバー組成物の局所投与のためのアプリケータ―の例としては、シリンジ、スパーテル、チューブ（スクイーズチューブ）および綿棒が挙げられるがこれらに限定されない。別の実施形態において、キットは、局所注射によるｓＮＡＧナノファイバー組成物の投与のためのアプリケータ―（例えばシリンジ）を備える。
【０２３７】
さらに、緊急用または軍事用に設計されたキットはまた、予め滅菌された、使い捨て可能な器具（例えば、ハサミ、メス、クランプ、圧迫帯、弾性の包帯、非弾性の包帯など）を備え得る。
【０２３８】
通知書が、必要に応じて、製薬学または生理学の製品の製造、使用または販売を統括する政府機関によって定められた形態にて、このようなキットまたはパックに添付され。この通知書は、ヒト投与のための製造、使用または販売の期間による承認を反映している。例えば、キットは、ＦＤＡ承認に関する通知書および／または使用のための指示書を備え得る。
【０２３９】
本明細書中に含まれるキットは、上述した適用および方法に使用され得る。
【０２４０】
［６．実施例］
以下の実施例は、ポリ−Ｎ−アセチル−グルコサミンナノファイバー（ｓＮＡＧ）による皮膚創傷の処置が、未処置の創傷と比較した瘢痕サイズの縮小、並びに抗張力および弾性の向上をもたらすことを明らかにする。本発明者らによるＭａｓｓｏｎトリクロム染色を用いたコラーゲン含量の可視化は、ｓＮＡＧで処置した創傷が、コラーゲン含量の減少、および損傷を受けていない組織と同様にコラーゲン小繊維が整列したコラーゲン表現型を示すこと、を示唆した。さらに、以下の実施例は、ｓＮＡＧの処置が、創傷内の平滑筋アクチンの発現を減少させることを明らかにし、筋線維芽細胞含量の減少を示唆している。総合すれば、以下の実施例１から５に示したデータは、ｓＮＡＧナノファイバーによる組織の処置は、コラーゲン含量の減少、コラーゲン小繊維の適切な配列およびＩＩＩ型コラーゲン発現の増加、並びに組織弾性の向上およびエラスチン含量の増加をもたらすメカニズムにより、瘢痕形成を低減させることを示唆する。
【０２４１】
さらに、本発明者らは、インビトロおよびインビボのｓＮＡＧナノファイバーによる処置が、上皮／間質性相互作用に関与する新規のタンパク質である、上皮間質性相互作用タンパク質１（ＥＰＳＴＩ１）のＡｋｔ１に依存した発現の増加をもたらすことを見出した。ＯＰＳＴＩ１、Ｈｓｐ４７（コラーゲンシャペロン）およびビメンチンの共染色は、適切に配列したコラーゲンを生成する細胞において、このタンパク質がアップレギュレートされることを明らかにした。本発明者らは、インビトロでの線維芽細胞の配列の調節を評価するためのフィブリンゲルを作製した。ゲル様マトリクスを２つの「ピン」を含むウエル内に形成し、これにより、ポールとポールの間に細胞を並べるようにゲルが力を付与できる中心点を提供する。本発明者らは、包埋線維芽細胞のｓＮＡＧ刺激が、Ａｋｔ１に依存したプロセスにより、未処置のコントロールと比較してより良い整列をもたらすことを見出した。さらに、本発明者らは、Ａｋｔ１ヌル動物におけるｓＮＡＧ処置は、抗張力または弾性の向上をもたらさないことを見出した。総合すると、これらのデータは、ｓＮＡＧナノファイバーはＡｋｔ１依存性経路を刺激することで、皮膚創傷治癒中の、線維芽細胞の適切な配列、瘢痕の減少、および抗張力の向上をもたらすことを示唆する。
【０２４２】
以下に提供する実施例において用いたｓＮＡＧナノファイバー（タリデルムとしても知られる）は、珪藻由来のより長い型のファイバー（ＮＡＧとして知られる）から得られる、短い、生物分解性のｐＧｌｃＮＡｃファイバーであり、その平均の長さは４から７μｍであり、そのポリマー分子量は約６０，０００Ｄａである。以下に提供する実施例において用いたｓＮＡＧナノファイバーは、Ｍａｒｉｎｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓによって製造されたものであり、処置のための適切なパッチに成形した。
【０２４３】
［６．１  実施例１：ｓＮＡＧナノファイバーによる組織の抗張力および弾性の向上］
この実施例は、ｓＮＡＧナノファイバーが組織の抗張力および弾性を向上させることを明らかにする。特に、この実施例は、ｓＮＡＧナノファイバーによって処置した皮膚創傷が損傷を受けていない組織と同様の抗張力を示したことを実証する。この実施例はさらに、ｓＮＡＧナノファイバーによる皮膚創傷の処置により、未処置の皮膚創傷と損傷を受けていないコントロールの皮膚との両方と比較して、組織の弾性が向上したことを実証する。
【０２４４】
［材料および方法］
８週齢〜１２週齢の野生型Ｃ５７Ｂ１／６マウスのオス成体８匹を、実験に用いた。そのうちの４匹に２１日間損傷を与えず、コントロール群とし（野生型マウスの損傷を受けていない正常な皮膚の代表的なサンプル）、残りの４匹を実験群とした。実験群（４匹のマウス）において、脱毛によって毛を除去し、その部位を洗浄して、７０％  エタノールを用いて殺菌した。実験群のマウスを、Ｏ２／イソフルレン気化麻酔器(VetEquip, Inc.)を用いて麻酔した。イソフルレンは、誘発のために４％を、手術のために２％を用いた。４ｍｍ生検パンチ(Miltex)を用いて２つの完全厚皮膚創傷を形成することで、脇腹それぞれに同一の２つの創傷を形成した。一方の脇腹を、蒸留水で湿らせたｓＮＡＧ薄膜(Marine Polymer Technologies, Inc.)によって処置し、また、他方の脇腹を処置せずに放置した。創傷部位をポリウレタン透明包帯(Tegaderm, 3M)で覆い、治癒するまで２１日間放置した。２１日目に、創傷部位（処置済および未処置）を回収し、皮膚を切り取って（１５ｍｍ×７ｍｍ）均一な張力を保証した。損傷を与えていないコントロール動物からの脇腹組織を同様の方法で回収した（未処置コントロール）。
【０２４５】
処置済みおよび未処置の創傷の両方、ならびに損傷を与えていないコントロールの皮膚を、Ｉｎｓｔｒｏｎ５９４２歪みゲージ伸長計およびＢｌｕｅｈｉｌｌ  ３試験ソフトウェアを用いた抗張力および弾性試験に供した。皮膚の抗張力を、皮膚の２０％が破壊される前に耐え得る相対的応力を測定することによって決定し、弾性を、ｍｍ伸長によって測定した。
【０２４６】
［結果および結論］
図１Ａおよび１Ｂは、抗張力（相対的応力）および弾性の結果を示す。機械試験の分析は、ＷＴ動物のｓＮＡＧで処置した皮膚創傷の抗張力が、未処置の創傷と比較して、約４０％増強したことを示す（図１Ａ）。さらに、ｓＮＡＧで処置した創傷は、損傷を受けていないコントロールの皮膚と同レベルまで抗張力の回復を示した（図１Ａ）。抗張力の測定中、ＷＴ動物のｓＮＡＧで処置した皮膚創傷は、コントロールまたは未処置の対応物よりも弾性があったことに、注目した。図１Ｂは、ｓＮＡＧ処置が、治癒組織の弾性を、未処置の皮膚創傷および損傷を与えていないコントロールの皮膚の両方と比較して、顕著に向上させたことを示す。
【０２４７】
［６．２  実施例２：ｓＮＡＧナノファイバーによる組織のエラスチン生成の増加］
この実施例は、ｓＮＡＧナノファイバーがエラスチン生成を増加させることを示す。特に、この実施例は、ｓＮＡＧナノファイバーによって処置した皮膚創傷がエラスチン生成を示した一方で、未処置の創傷はエラスチン生成を示さなかったことを実証する。
【０２４８】
［材料および方法］
８週齢〜１２週齢の野生型Ｃ５７Ｂ１／６マウスのオス成体４匹を実験に用いた。脱毛によって毛を除去し、その部位を洗浄して、７０％  エタノールを用いて殺菌した。マウスを、Ｏ２／イソフルレン気化麻酔器(VetEquip, Inc.)を用いて麻酔した。イソフルレンは、誘発のために４％を、手術のために２％を用いた。４ｍｍ生検パンチ(Miltex)を用いて２つの完全厚皮膚創傷を形成することで、脇腹それぞれに同一の２つの創傷を形成した。一方の脇腹を、蒸留水で湿らせたｓＮＡＧ薄膜 (Marine Polymer Technologies, Inc.)によって処置し、また、他方の脇腹を処置せずに放置した。創傷部位をポリウレタン透明包帯(Tegaderm, 3M)で覆い、治癒するまで１０日間放置した。１０日目に、創傷を４℃で一晩、４％  パラホルムアルデヒド中に固定し、パラフィン包埋して、分析のために切片化した。
【０２４９】
損傷を与えた動物からの組織切片において、上述したように、ワンギーソン（Van Geison）染色手順によってエラスチンファイバーを染色した。簡単に言えば、切片をキシレンで清浄し、一連のグレードのアルコールから蒸留水までを通して再水和し、ヘマトキシリン(Sigma-Aldrich)で染色し、２％塩化第二鉄中で差別化し、そして洗浄した。それから、組織切片を、脱水前にワンギーソン（Van Geison）対比染色によって染色し、キシレンで清浄し、Ｃｙｔｏｓｅａｌ−ＸＹＬ(Richard-Allan Scientific)で標本した。区分化した組織切片を、オリンパスＢＸ４０顕微鏡を用いて可視化し、オリンパスカメラ(Model DP25)およびＤＰ２−ＢＳＷ入力ソフトウェアを用いて記録した。
【０２５０】
［結果および結論］
図２は、処置した動物からの創傷が、新たに治癒した部分においてエラスチン生成（薄い黒の構造によって可視化した）を示した一方で、処置していない創傷はエラスチン生成を示さなかったことを示す。
【０２５１】
［６．３  実施例３：ｓＮＡＧナノファイバーによる組織の瘢痕の縮小］
この実施例は、ｓＮＡＧナノファイバーが組織の瘢痕を縮小させることを示す。特に、この実施例は、ｓＮＡＧナノファイバーによって処置した皮膚創傷の瘢痕サイズが、未処置の創傷の瘢痕サイズと比較して、約２倍の縮小を示したことを実証する。
【０２５２】
［材料および方法］
８週齢〜１２週齢の野生型Ｃ５７Ｂ１／６マウスのオス成体５匹を、実験に用いた。脱毛によって毛を除去し、その部位を洗浄して、７０％  エタノールを用いて殺菌した。マウスを、Ｏ２／イソフルレン気化麻酔器(VetEquip, Inc.)を用いて麻酔した。イソフルレンは、誘発のために４％を、手術のために２％を用いた。４ｍｍ生検パンチ(Miltex)を用いて２つの完全厚皮膚創傷を形成することで、脇腹それぞれに同一の２つの創傷を形成した。一方の脇腹を、蒸留水で湿らせたｓＮＡＧ薄膜(Marine Polymer Technologies, Inc.)によって処置し、また、他方の脇腹を処置せずに放置した。創傷部位をポリウレタン透明包帯(Tegaderm, 3M)で覆い、治癒するまで２１日間放置した。２１日目に、動物を安楽死させ、キャリパーを用いて瘢痕を測定した。
【０２５３】
［結果および結論］
図３に示すように、ｓＮＡＧによって処置した創傷は、未処置の創傷と比較して、瘢痕サイズの約２倍の縮小を示す。
【０２５４】
［６．４  実施例４：ｓＮＡＧナノファイバーによる組織のコラーゲン含量の減少および整列したコラーゲンの実現］
この実施例は、ｓＮＡＧナノファイバーが、組織におけるコラーゲン含量を減少させ、整列したコラーゲンの配列形成を誘導することを示す。特に、この実施例は、ｓＮＡＧナノファイバーによって処置した皮膚創傷が、未処置の創傷と比較して、コラーゲン含量の減少と、より整列したコラーゲンの配列とを示すことを実証する。
【０２５５】
［６．４．１  Ｍａｓｓｏｎトリクロム染色を用いたコラーゲン含量および配列の分析］
［材料および方法］
８週齢〜１２週齢の野生型Ｃ５７Ｂ１／６マウスのオス成体４匹を実験に用いた。脱毛によって毛を除去し、その部位を洗浄して、７０％  エタノールを用いて殺菌した。マウスを、Ｏ２／イソフルレン気化麻酔器(VetEquip, Inc.)を用いて麻酔した。イソフルレンは、誘発のために４％を、手術のために２％を用いた。４ｍｍ生検パンチ(Miltex)を用いて２つの完全厚皮膚創傷を形成することで、脇腹それぞれに同一の２つの創傷を形成した。一方の脇腹を、蒸留水で湿らせたｓＮＡＧ薄膜(Marine Polymer Technologies, Inc.)によって処置し、また、他方の脇腹を処置せずに放置した。創傷部位をポリウレタン透明包帯(Tegaderm, 3M)で覆い、治癒するまで１０日間放置した。１０日目に、創傷を４℃で一晩、４％パラホルムアルデヒド中に固定し、パラフィン包埋して、分析のために切片化した。
【０２５６】
組織切片のＭａｓｓｏｎトリクロム染色(Sigma-Aldrich)を、製造者の取扱説明書に従って行った。簡単に言うと、切片を水に脱パラフィン化し、ブアン（Bouin）液中でインキュベートした。スライドを、上述した製造者の取扱説明書に記載された通り、ヘマトキシレン、ビーブリッヒスカーレット−酸フクシン（Biebrich Scarlet-Acid Fucshin）、リンタングステン／リンモリブデン酸溶液、アニリンブルー溶液および酢酸を用いた一連のインキュベートの被験体とした後、組織切片を脱水し、キシレン中で清浄し、Ｃｙｔｏｓｅａｌ−ＸＹＬ(Richard-Allan Scientific)を用いて標本した。Ｍａｓｓｏｎトリクロム切片を、オリンパスＢＸ４０顕微鏡を用いて可視化し、画像をオリンパスカメラ(Model DP25)およびＤＰ２−ＢＳＷ入力ソフトウェアを用いて記録した。
【０２５７】
［結果および結論］
処置済および未処置の創傷におけるコラーゲンの量および質を試験するために、損傷を与えてから１０日目の組織切片においてＭａｓｓｏｎトリクロム染色を行った。図４Ａに示すように、皮膚創傷のｓＮＡＧによる処置が、青色の染色が少ないことによって示されたコラーゲン含量の減少をもたらし、また、皮膚創傷のｓＮＡＧによる処置が、新しいコラーゲンが既存のコラーゲンに対して適切に配列し、特に創傷の輪郭において、より整列したコラーゲンの配列をもたらす。
【０２５８】
［６．４．２  ヒドロキシプロリン分析を用いたコラーゲン含量の分析］
処置済みおよび未処置の創傷において、コラーゲン堆積量を定量分析することにより、ヒドロキシプロリン分析を行った。
【０２５９】
［材料および方法］
８週齢〜１２週齢の野生型Ｃ５７Ｂ１／６マウスのオス成体４匹を実験に用いた。脱毛によって毛を除去し、その部位を洗浄して、７０％  エタノールを用いて殺菌した。マウスを、Ｏ２／イソフルレン気化麻酔器(VetEquip, Inc.)を用いて麻酔した。イソフルレンは、誘発のために４％を、手術のために２％を用いた。４ｍｍ生検パンチ(Miltex)を用いて２つの完全厚皮膚創傷を形成することで、脇腹それぞれに同一の２つの創傷を形成した。一方の脇腹を、蒸留水で湿らせたｓＮＡＧ薄膜(Marine Polymer Technologies, Inc.)によって処置し、また、他方の脇腹を処置せずに放置した。創傷部位をポリウレタン透明包帯(Tegaderm, 3M)で覆い、治癒するまで１０日間放置した。１０日目に以下の処置を行った：
１．組織を凍結乾燥した。組織の乾燥重量を確認するために、組織を重量測定した；
２．凍結乾燥組織を粉砕し（粉末が細かいほど好ましく、例えば、小さい秤量スパチュラを有するチューブの中で細かくする）、加水分解管（例えば、パイレックス（登録商標）チューブ−Fisher cat. #14-932A）中に載置した。５ｍＬの６Ｎ  ＨＣｌをヒュームフードに添加した。チューブを窒素ガス雰囲気下で保持し、空気を放出させた（ほぼ表面の真下に２０秒までの秒数の間Ｎ２を吹き付ける）。チューブに堅く栓をした。渦を形成しないようにチューブをゆっくりと攪拌した。チューブをオーブン中に載置し、１２０度で３時間（または一晩中）加水分解した；
３．インキュベートの後、サンプルを、１０ｍＬのＨ２Ｏおよび２ｍＬの実験用緩衝液を含む５０ｍＬの円錐チューブに移した；
４．４Ｎ  ＮａＯＨを用いてｐＨを７〜８に調整し、６Ｎ  ＨＣｌを補正に用いた。ｐＨ調整後の量が、サンプル間で顕著に異なり得ることに注目した。量の差は、結果を分析する際に正確な量を得るために補正した；
５．５０ｍｇまでの活性炭を各サンプルに添加し、炭が懸濁するように強く攪拌し、３０００ｒｐｍまでの回転数で１０分間遠心分離機にかけた；
６．この間に、標準液を作製した。組織の標準液は、０（ブランク）、１、２、３、４、５、７および１０μｇ／ｍＬのヒドロキシプロリン溶液になる。分析は０．１２５μｇ／ｍＬに感度がよく、組織培養におけるコラーゲンレベルを定量化することもできた（例えば）。標準液を、１０００μｇ／ｍＬの凍結ストックを等分したものから溶解させて、サンプルの各セットにフレッシュを作製した。標準液を１５ｍＬチューブ中で作製した；
７．サンプル上清の２ｍＬまたは標準液の２ｍＬを、フレッシュの１５ｍＬチューブに添加した（各サンプルに１つのチューブが必要とされ、そして各標準液に１つ必要とされた）。ブランク：２ｍＬの作用溶液；
８．１ｍＬのクロラミンＴをチューブに添加し、強く攪拌して、２０分間室温に立たせた；
９．１ｍＬのエールリッヒ試薬を、反応チューブに添加し、強く攪拌して、６０℃のウォーターバス中で１５分間インキュベートした；
１０．反応チューブを水道水中で冷却し、分光光度計において５５８ｎｍを読み取った；
１１．溶液を適切なハザード容器中に廃棄した；
１２．標準曲線からμｇ／ｍＬに関して読み取った。総ヒドロキシプロリン量のために、ｐＨ調整後の終量によって乗じた。μｇ  ヒドロキシプロリン／ｍｇ  組織のために、乾燥重量で割った。
【０２６０】
［使用したヒドロキシプロリンストック］
１０ｍｇのＬ−ヒドロキシプロリン(Sigma)を測量し、ｄＨ２Ｏ中に載置して、１ｍｇ／ｍＬの濃縮液を作製し、１ｍＬ等分を凍結させた。
【０２６１】
［標準液の希釈］
１ｍＬの１０００ｕｇ／ｍＬ（ストック）：９ｍＬ  ｄＨ２Ｏ＝１００ｕｇ／ｍＬ
１．２ｍＬの１００ｕｇ／ｍＬ：１０．８ｍＬ  ｄＨ２Ｏ＝１０ｕｇ／ｍＬ（１１ｍＬ必要）
１ｍＬの１０ｕｇ／ｍＬ：９ｍＬ  ｄＨ２Ｏ＝１ｕｇ／ｍＬ
７ｕｇ／ｍＬ……………３．５ｍＬの１０ｕｇ／ｍＬ：１．５ｍＬ  ｄＨ２Ｏ
５ｕｇ／ｍＬ……………２ｍＬの１０ｕｇ／ｍＬ：２ｍＬ  ｄＨ２Ｏ
４ｕｇ／ｍＬ……………２ｍＬの１０ｕｇ／ｍＬ：３ｍＬ  ｄＨ２Ｏ
３ｕｇ／ｍＬ……………１．５ｍＬの１０ｕｇ／ｍＬ：３．５ｍＬ  ｄＨ２Ｏ
２ｕｇ／ｍＬ……………１ｍＬの１０ｕｇ／ｍＬ：４ｍＬ  ｄＨ２Ｏ
１ｕｇ／ｍＬ……………１ｍＬの１０ｕｇ／ｍＬ：９ｍＬ  ｄＨ２Ｏ
０．７５ｕｇ／ｍＬ…………３ｍＬの１ｕｇ／ｍＬ：１ｍＬ  ｄＨ２Ｏ
０．５０ｕｇ／ｍＬ…………２ｍＬの１ｕｇ／ｍＬ：２ｍＬ  ｄＨ２Ｏ
０．２５ｕｇ／ｍＬ…………１ｍＬの１ｕｇ／ｍＬ：３ｍＬ  ｄＨ２Ｏ
０．１２５ｕｇ／ｍＬ…………０．５ｍＬの１ｕｇ／ｍＬ：３．５ｍＬ  ｄＨ２Ｏ
ブランク
［酢酸（０．５Ｍ）］
１４．４ｍＬ  酢酸
４８５．６  ｄＨ２Ｏ
［緩衝液ストック調製（５００ｍＬ）］
２５ｇ  無水クエン酸
６ｍＬ  ０．５Ｍ  酢酸
６０ｇ  酢酸ナトリウム
１７ｇ  水酸化ナトリウム
試薬をｄＨ２Ｏ中に、総量５００ｍＬになるように溶解させた．
［実験用緩衝液］
５００ｍＬ  緩衝液ストック
１００ｍＬ  ｄＨ２Ｏ
１５０ｍＬ  １−プロパノール
必要に応じて、酢酸を用いてｐＨ７から８に調整。
４℃で数か月安定．
［クロラミンＴ］
１．４１ｇ  クロラミンＴ
１０ｍＬ  ｄＨ２Ｏ
１０ｍＬ  １−プロパノール
８０ｍＬ  実験用緩衝液
ｐＨ６から７の間，黒っぽいボトル中に保管．
［エールリッヒ試薬］
７．５ｇ  ｐ−ジメチルーアミノーベンズアルデヒド
３０ｍＬ  １−プロパノール
１３ｍＬ  過塩素酸  （６０％）
５０ｍＬ作製
数時間のみ安定，各測定セットの前に作製．
すべての試薬をＳｉｇｍａ社から購入した。
【０２６２】
［結果および結論］
ヒドロキシプロリン分析を、処置済みおよび未処置の創傷におけるコラーゲン堆積の量を定量分析するために行った。図４Ｂに示すように、ｓＮＡＧ処置した創傷は、全体のコラーゲン含量が約３倍減少した。
【０２６３】
［６．５  実施例５：ｓＮＡＧナノファイバーによるＩ型コラーゲン発現の減少およびＩＩＩ型コラーゲン発現の増加］
この実施例は、ｓＮＡＧナノファイバーがＩ型コラーゲン発現を減少させ、ＩＩＩ型コラーゲン発現を増加させることを示す。特に、この実施例は、ｓＮＡＧナノファイバーによって処置した創傷において、未処置の創傷と比較して、Ｉ型コラーゲンの発現が減少し、そしてＩＩＩ型コラーゲンの発現が増加することを証明する。
【０２６４】
［材料および方法］
８週齢〜１２週齢の野生型Ｃ５７Ｂ１／６マウスのオス成体４匹を実験に用いた。脱毛によって毛を除去し、その部位を洗浄して、７０％  エタノールを用いて殺菌した。マウスをＯ２／イソフルレン気化麻酔器(VetEquip, Inc.)を用いて麻酔した。イソフルレンは、誘発のために４％を、手術のために２％を用いた。４ｍｍ生検パンチ(Miltex)を用いて２つの完全厚皮膚創傷を形成することで、脇腹それぞれに同一の２つの創傷を形成した。一方の脇腹を、蒸留水で湿らせたｓＮＡＧ薄膜(Marine Polymer Technologies, Inc.)によって処置し、また、他方の脇腹を処置せずに放置した。創傷部位をポリウレタン透明包帯(Tegaderm, 3M)で覆い、治癒するまで５日間放置した。５日目に、創傷（処置済みおよび未処置）から単離したＲＮＡについて、Ｉ型コラーゲンおよびＩＩＩ型コラーゲンの発現を試験した。
【０２６５】
半定量ＲＴ−ＰＣＲのために、Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬから購入したＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  Ｆｉｒｓｔ  Ｓｔｒａｎｄ合成キットを用いて、製造者の取扱説明書に従って、オリゴ（ｄＴ）を用いることにより、ｃＤＮＡをトータルＲＮＡ（２から５μｇ）から合成し、ＲＮＡ−ＳＴＡＴ６０(Tel-Test, Inc.)を用いて製造者によって示された手順に従って単離した。ＰＣＲ反応は、同量のｃＤＮＡおよび１．２５μＭの適切なプライマー対(Proligo, Inc.)を含んでいた。プライマー配列は以下のとおりである：Ｉ型コラーゲン；フォワード5’  ACGGCTGCACGAGTCACAC  3’、リバース 5’ GGCAGGCGGGAGGTCTT  3’、ＩＩＩ型コラーゲン；フォワード5’  GTTCTAGAGGATGGCTGTACTAAACACA  3’、リバース5’  TTGCCTTGCGTGTTTGATATTC  3’および HPRT；フォワード5’  AAGGACCTCTCGAAGTGTTGGATA  3’、リバース5’  CATTTAAAAGGAACTGTTGACAACG  3’。サイクルの条件は、９４℃で５分間、９４℃で１分間を２０から３５サイクル、５０から６５℃（プライマーＴｍに基づく）で１分間、７２℃で１分４５秒間＋２秒／サイクル、７２℃で７分間、および４℃で冷却、であった。サイクル数は、使用した各プライマー対に対する分析の線形範囲内になるように経験的に決定した。全ての半定量ＲＴ−ＰＣＲを、内部コントロールとしてのＨＰＲＴプライマーと共に行った。
【０２６６】
［結果および結論］
ｓＮＡＧが、発現するコラーゲンの型の変化を誘導するか否かを試験するために、損傷を与えた後５日目の創傷（処置済みおよび未処置）から単離したＲＮＡについて、ＰＣＲによってＩ型コラーゲンおよびＩＩＩ型コラーゲンの発現を試験した。
【０２６７】
図５に示すように、ｓＮＡＧ処置した創傷は、Ｉ型コラーゲン発現が減少し、ＩＩＩ型コラーゲン発現が増加する。
【０２６８】
［６．６  実施例６：平滑筋アクチンの減少］
この実施例は、ｓＮＡＧナノファイバーが、アルファ平滑筋アクチンを測定することによって評価する筋線維芽細胞含量を減少させることを証明する。特に、ｓＮＡＧナノファイバーで処置した皮膚創傷においては、未処置の皮膚創傷と比較して、アルファ平滑筋アクチンが少なくとも２倍減少する。
【０２６９】
［材料および方法］
８週齢〜１２週齢の野生型Ｃ５７Ｂ１／６マウスのオス成体４匹を実験に用いた。脱毛によって毛を除去し、その部位を洗浄して、７０％  エタノールを用いて殺菌した。マウスをＯ２／イソフルレン気化麻酔器(VetEquip, Inc.)を用いて麻酔した。イソフルレンは、誘発のために４％を、手術のために２％を用いた。４ｍｍ生検パンチ(Miltex)を用いて２つの完全厚皮膚創傷を形成することで、脇腹それぞれに同一の２つの創傷を形成した。一方の脇腹を、蒸留水で湿らせたｓＮＡＧ薄膜(Marine Polymer Technologies, Inc.)によって処置し、また、他方の脇腹を処置せずに放置した。創傷部位をポリウレタン透明包帯(Tegaderm, 3M)で覆い、治癒するまで１０放置した。１０日目に、創傷を４℃で一晩、４％パラホルムアルデヒド中に固定し、パラフィン包埋して、分析のために切片化した。
【０２７０】
パラフィン包埋組織切片を、キシレンおよび一連のグレードのアルコールを通して再水和した。切片を０．０１％  Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００で処置し、圧力調理器中で５分間、抗原脱マスキング溶液(Vector Laboratories)を用いて抗原回復の被験体とし、冷却させた。サンプルを、抗体標識前に、バックグラウンドバスター(Innovex Biosciences)中で３０分間インキュベートした。皮膚切片を、マウスモノクローナル抗アクチンα−平滑筋抗体(Sigma)を用いて標識した。切片を４℃で一晩、一次抗体中においてインキュベートし、洗浄し、さらに適切な二次免疫蛍光抗体(Invitrogen)と共に室温で一時間インキュベートした。各抗体に対するコントロールの切片を、一次抗体を用いずに染色した。組織切片をＯｌｙｍｐｕｓ  ＦｌｕｒｏＶｉｅｗレーザースキャニング共焦点顕微鏡(Model IX70)を用いて可視化し、大気温度でオリンパスカメラ(Model FV5-ZM)およびＦｌｕｏｖｉｅｗ  ５．０入力ソフトウェアを用いて記録した。
【０２７１】
［結果および結論］
筋線維芽細胞は、組織修復における重要な細胞型であり、コラーゲン生成を介した瘢痕の形成に関係している。筋線維芽細胞群は、瘢痕のない胎児の創傷治癒中に減少する。筋線維芽細胞の集合体の分布を可視化するために、α−平滑筋アクチンに対する抗体で創傷切片を標識した。図６Ａに示し、図６Ｂに定量化したように、ｓＮＡＧで処置した創傷においては、未処置の創傷と比較して、α−平滑筋アクチンの発現が少なくとも２倍減少する。図６Ｂにおいて、蛍光赤色に含まれるピクセルは、Ｙ軸における「任意単位」として表されており、そのような単位は組織の領域ごとであり、アルファ平滑筋アクチンの発現および筋線維芽細胞含量の定量的評価を提供する。
【０２７２】
［６．７  実施例６．７：ｓＮＡＧナノファイバーによる瘢痕サイズの縮小、並びに組織の抗張力および弾性の増強］
この実施例は、ｓＮＡＧナノファイバーによる皮膚創傷の処置が、抗張力および弾性が向上し、コラーゲン含量が減少し、コラーゲンの整列が向上し、そして筋線維芽細胞含量が減少した、より小さい瘢痕をもたらすことを示す。フィブリンゲルアッセイを、インビトロでの線維芽細胞配列の調整を評価するために用いた。この評価において、フィブリン格子を２つのピンを用いて形成し、細胞をポールとポールとの間に並べる力をゲルが付与できる中心点を提供する。張力点を提供する格子内の線維芽細胞配列を評価するためのフィブリンゲルアッセイを用いて、この実施例は、ｓＮＡＧナノファイバーによる刺激が、Ａｋｔ１がまた必要とされる方法により、未処置のコントロールと比較して、線維芽細胞の配列を向上させることを示す。この実施例はさらに、ｓＮＡＧが誘導する抗張力および弾性の向上に、インビボでＡｋｔ１が必要とされることを示す。総合すれば、これらの知見は、ｓＮＡＧナノファイバーがＡｋｔ１依存性経路を刺激することにより、皮膚創傷治癒中の、線維芽細胞の適切な配列、瘢痕の縮小、および抗張力の向上をもたらすことを示す。それゆえに、ｐＧｌｃＮＡナノファイバーによる処置が、修復された創傷のより良い組織構成をもたらし得る。
【０２７３】
［序論］
成体の創傷治癒においては、外科的および外傷性の損傷の両方に続く瘢痕の形成が避けられない。皮膚創傷に続く瘢痕形成は、正常な皮膚組織に変わる過剰なコラーゲンおよび線維性の組織の未整列の堆積のためである。瘢痕は、多くの場合、組織運動の制限、機能の喪失、審美性の貧しさ、および精神的苦痛をもたらす、主要な医学的副反応である［１］。瘢痕反応（組織再建）を伴わない治癒に対する哺乳動物の能力は、成長のある段階で制限され、その後の創傷治癒は瘢痕形成を伴い進行する。組織再建と瘢痕形成との間の主要な差異の１つは、コラーゲンの整列および堆積である。胎児の再建組織と成体の瘢痕との比較は、それぞれが極めて同様の成分を含むことを示し、組織構造の調節における差異であり、瘢痕の異常な分子組成における差異ではないことを示唆している。それゆえに、組織再建および瘢痕形成組織の修復は、制御が異なり得る共通のメカニズムを共有する［２］。瘢痕形成、並びにシリコンによる手当およびヒドロコルチゾンの注入のような現在の処置の制限された効果に影響を与えるために、新規の処置の開発および特徴付けが必要とされている［３］。
【０２７４】
［材料および方法］
［切除創傷治癒モデル、瘢痕定量化、抗張力測定］
野生型Ｃ５７Ｂ１／６およびＡｋｔ１ヌルマウスモデル［４］を、全ての実験において用いた。Ａｋｔ１ヌル動物を、全タンパク質の発現を阻害する翻訳開始部位における挿入突然変異を用いて作製した［１４］。混合した１２９／Ｃ５７Ｂ１６環境におけるＡｋｔ１ヌル動物を、Ｃ５７Ｂ１／６に８世代戻し交配した。麻酔した８週齢〜１２週齢のマウスのオス成体に損傷を与えた。４ｍｍ生検パンチ(Miltex)を用いて２つの完全厚皮膚創傷を形成することで、脇腹それぞれに同一の２つの創傷を形成した。マウスをＯ２／イソフルレン気化麻酔器(VetEquip, Inc.)を用いて麻酔した。イソフルレンは、誘発のために４％を、手術のために２％を用いた。手術の前に脱毛によって毛を除去し、その部位を洗浄して、７０％  エタノールを用いて殺菌した。創傷を、Ｍａｒｉｎｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｉｎｃ．から入手したｐＧｌｃＮＡｃの乾燥形態の薄膜を、蒸留水で湿らせたものによって処置するか、処置せずに放置するかのいずれかにした。目的の日に、動物を安楽死させ、８ｍｍ生検パンチ(Miltex)を用いて、創傷全体を周囲の皮膚と共に回収した。創傷を４℃で一晩、４％パラホルムアルデヒド中に固定し、パラフィン包埋して、分析のために切片化した。
【０２７５】
瘢痕の測定のために、野生型マウスに上述した通り損傷を与えるか、または１ｃｍ２の損傷を与え、創傷を収縮させないようにして、２１日間治癒させた。２１日目に、動物を安楽死させ、キャリパーを用いて瘢痕を測定した。
【０２７６】
抗張力のために、損傷を与えた動物を２１日後に犠牲にし、創傷を回収した。処置済みおよび未処置の両方の創傷、並びに損傷を与えていないコントロールの皮膚を、Ｉｎｓｔｒｏｎ５９４２歪みゲージ伸長計およびＢｌｕｅｈｉｌｌ  ３試験ソフトウェアを用いた抗張力および弾性試験の被験体とした。皮膚の抗張力を、皮膚が２０％破壊される前に耐え得る相対的応力を測定することによって決定し、弾性をｍｍ伸長によって測定した。
【０２７７】
［ヘマトキシリンおよびエオシン染色（Ｈ＆Ｅ）、Ｍａｓｓｏｎトリクロム染色、ピクロシリウスレッド染色］
Ｈ＆Ｅ染色のために、切片をキシレンで清浄し、一連のグレードのアルコールを通して再水和し、ヘマトキシリン中において後、酸アルコール中においた。サンプルを、それからアンモニア水中におき、エタノールでリンスして、エオシンにさらした後、一連のグレードのアルコールを通して再水和し、キシレンで清浄した。切片を、Ｃｙｔｏｓｅａｌ−ＸＹＬ(Richard-Allan Scientific)を用いて標本したＨ＆Ｅ切片を、オリンパスＢＸ４０顕微鏡を用いて可視化し、オリンパスカメラ(Model DP25)およびＤＰ２−ＢＳＷ入力ソフトウェアを用いて記録した。
【０２７８】
組織切片についてのＭａｓｓｏｎトリクロム染色(Sigma-Aldrich)を、製造者の取扱説明書に従って行った。簡単に言うと、切片を水に脱パラフィン化し、ブアン（Bouin）液中でインキュベートした。スライドを、上述した製造者の取扱説明書に記載された通り、ヘマトキシレン、ビーブリッヒスカーレット−酸フクシン（Biebrich Scarlet-Acid Fucshin）、リンタングステン／リンモリブデン酸溶液、アニリンブルー溶液および酢酸を用いた一連のインキュベートの被験体とした後、組織切片を脱水し、キシレン中で清浄し、Ｃｙｔｏｓｅａｌ−ＸＹＬ(Richard-Allan Scientific)を用いて標本した。Ｍａｓｓｏｎトリクロム切片を、オリンパスBX40顕微鏡を用いて可視化し、画像をオリンパスカメラ(Model DP25)およびＤＰ２−ＢＳＷ入力ソフトウェアを用いて記録した。
【０２７９】
［コラーゲンの抽出および生化学的定量化］
ヒドロキシプロリン分析を記述の通りに行った［１５］。簡単に言うと、同量の創傷組織（８ｍｍ生検パンチ）を、損傷を与えてから２１日目の処置済みまたは未処置の野生型マウス（それぞれｎ＝４）から回収した。組織を、凍結乾燥させて、一定の乾燥重量を測定し、細かく砕いた。組織コラーゲンについて、１２０℃で１８時間の、６Ｎ  ＨＣｌを用いた酸加水分解を完了し、４Ｎ  ＮａＯＨを用いてｐＨ７に中和した。１ｍＬのクロラミンＴを、コラーゲンサンプルの２ｍＬ量に添加し、室温で２０分間インキュベートした。１ｍＬのエールリッヒ試薬（２５ｍＬ中の、６０％過塩素酸、１５ｍＬ  １−プロパノールおよび３．７５ｇ  ｐ−ジメチルーアミノーベンズアルデヒド）を添加し、サンプルを６０℃で２０分間インキュベートした。５５８の波長における吸収を分光光度計において読み取った。コラーゲンを、創傷組織の乾燥重量グラム当たりのヒドロキシプロリンのミリグラムとして定量化した。
【０２８０】
［エラスチン染色］
損傷を与えた動物からの組織切片を、上述したように、ワンギーソン（Van Geison）染色手順を用いてエラスチンファイバーを染色した。簡単に言えば、切片をキシレンで清浄し、一連のグレードのアルコールから蒸留水を通して再水和し、ヘマトキシリン(Sigma-Aldrich)で染色し、２％塩化第二鉄中で差別化し、洗浄した。それから、組織切片を、脱水前にワンギーソン（Van Geison）対比染色によって染色し、キシレンで清浄し、Ｃｙｔｏｓｅａｌ−ＸＹＬ(Richard-Allan Scientific)で標本した。区分化した組織切片を、オリンパスＢＸ４０顕微鏡を用いて可視化し、オリンパスカメラ(Model DP25)およびＤＰ２−ＢＳＷ入力ソフトウェアを用いて記録した。
【０２８１】
［免疫蛍光、顕微鏡］
パラフィン包埋組織切片を、キシレンから一連のグレードのアルコールを通して再水和した。切片を０．０１％  Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００で処置し、圧力調理器中で５分間、抗原脱マスキング溶液(Vector Laboratories)を用いて抗原回復の被験体とし、冷却した。サンプルを、抗体標識前に、バックグラウンドバスター(Innovex Biosciences)中で３０分間インキュベートした。皮膚切片を、マウスモノクローナル抗アクチンα−平滑筋抗体(Sigma)、ビメンチンマウスモノクローナル抗体(Dako)、ファロイジン(Molecular Probes)およびＤＡＰＩ(Molecular Probes)を用いて標識した。切片を４℃で一晩一次抗体中においてインキュベートし、洗浄し、さらに適切な二次免疫蛍光抗体(Invitrogen)と共に室温で一時間インキュベートした。各抗体に対するコントロールの切片を、一次抗体を用いずに染色した。組織切片をＯｌｙｍｐｕｓ  ＦｌｕｒｏＶｉｅｗレーザースキャニング共焦点顕微鏡(Model IX70)を用いて可視化し、大気温度でオリンパスカメラ(Model FV5-ZM)およびＦｌｕｏｖｉｅｗ  ５．０入力ソフトウェアを用いて記録した。
【０２８２】
［組織培養、フィブリンゲルアッセイ］
Ｃ３Ｈ１０線維芽細胞を、１％  ペニシリン／ストレプトマイシン(Invitrogen)を補ったＥａｒｌｅ平衡塩類溶液(MEM/EBSS, Thermo)を含む最小必須培地において、５％ＣＯ２、３７℃に維持した。正常ヒト線維芽細胞(ATCC)を、２０％  ＦＣＳを補ったＭＥＭ中に維持した。血清飢餓を、０．１％ウシ胎仔血清(Valley Biomedical)を補ったＭＥＭ／ＥＢＳＳ中で８０から９０％コンフルエントで２４時間行った後、殺菌水(Marine Polymer Technologies, Inc.)中において、高度に精製されたpGlcNAc（５０μｇ／ｍＬ）ナノファイバースラリー（ｓＮＡＧ）を用いて刺激した。
【０２８３】
フィブリンゲルアッセイを、２４ウエル組織培養プレート(Becton Dickinson)中で行った。ウエルの底に３００ｍＬのＳｙｌｇａｒｄ  １８４エラストマー(Dow Corning)を添加し、５％ＣＯ２、３７℃で一晩載置して、プレートを準備した。０．１ｍｍの虫ピン２つを、ウエルの底の直径（１６ｍｍ）に沿って各縁から３ｍｍ離れたＳｙｌｇａｒｄ中に挿入した。ウエルをＰＢＳ中の３％ＢＳＡを用いて３０分間封鎖した。細胞の数を数え、１０μＬ／ｍＬのアスコルビン酸塩を添加した冷たいＭＥＭ／ＥＢＳＳ培地中に溶解させた５％ヒトフィブリノゲン(Sigma)を含むフィブリノゲン溶液中に再懸濁し、ウエル当たり２５０，０００個の細胞濃度で覆った。ヒト血漿(Sigma)由来のトロンビン（１００ユニット／ｍＬ）を、５ｍｇ／ｍＬフィブリノゲンおよび細胞溶液に添加した。ゲルを、５％ＣＯ２、３７℃で３０分間インキュベートした後、５％ウシ胎仔血清を補充したＭＥＭ／ＥＢＳＳを１ｍＬ添加した。小さいピペットチップを用いて、ウエルの壁から徐々にゲルを剥がした。その後、ゲルの自然な収縮を観察した。インキュベートの６から８時間後に、培地を除去し、ゲルをＰＢＳで３回、各５分間洗浄し、４％パラホルムアルデヒドで３０分間固定した後、組織分析またはファロイジン染色のいずれかのために、パラフィン包埋した。ファロイジン染色のために、フィブリンゲルを０．３％  Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００で処理し、室温で１時間ファロイジン中においてインキュベートし、ＤＡＰＩで１０分間対応染色した。切片を、フルオロゲルを用いて標本した。組織分析のために、固定されたフィブリンゲル切片を、上述したＨ＆Ｅ染色の被験体とした。
【０２８４】
［レンチウイルス感染］
Ａｋｔ１に対するＭｉｓｓｉｏｎ  ｓｈＲＮＡレンチウイルスコンストラクトを、Ｓｉｇｍａ／Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入した。レンチウイルスを２９３Ｔ細胞中で増殖させ、上述したように補充されたＤＭＥＭ中に維持した。レンチウイルス生産を、Ａｄｄｇｅｎｅ社からのレンチウイルス粒子生産のための手順にしたがって、Ａｄｄｇｅｎｅ社から購入したｐｓＰＡＸ２およびｐＭＤ２．Ｇパッケージングベクターを用いて行った。標的細胞の感染のために、１００ｍｍ２プレート上を７．５×１０５個の細胞で覆い、一晩インキュベートした。次の日、細胞を、最終濃度１ｍｇ／ｍＬのポリブレンおよびＡｋｔ１  ｓｈＲＮＡレンチウイルスを用いて、形質転換した。形質導入の後、一晩血清を枯渇させた線維芽細胞を、ｓＮＡＧ（５０ｍｇ／ｍＬ）で刺激した。適切でない効果はいずれも、非相同のＡｋｔ１配列に対するＲＮＡｉ(Dharmacon)を用いて表現型を検証することによって制御した（データ示さず）。
【０２８５】
［結果］
［ｓＮＡＧ処置は瘢痕サイズの縮小およびコラーゲン配列の向上をもたらす］
この調査において、瘢痕形成におけるｓＮＡＧの効果を分析した。切除創傷を野生型動物に形成し、膜状のｓＮＡＧによって処置する、または処置せずに放置する、のいずれかを行った。損傷を与えてから２１日目に、動物を犠牲にし、瘢痕サイズを測定した。図７Ａに定量して示すように、ｓＮＡＧで処置した創傷は、未処置の創傷と比較して、瘢痕サイズが約２倍縮小したことを示す。処置済みおよび未処置の創傷においてコラーゲンの量および質を調査するために、損傷を与えてから１０日目の組織切片においてＭａｓｓｏｎトリクロム染色を行った。図７Ｂにおいて見られるように、皮膚創傷のｓＮＡＧ処置が、特に創傷の境界部分において見られるように、青色染色部分が少ないことによって示されるコラーゲン含量の減少、および、新規のコラーゲンと既存のコラーゲンとが適切に配列し、より整列したコラーゲン配列をもたらす。ヒドロキシプロリン分析を、処置済みおよび未処置の創傷におけるコラーゲン堆積量を定量的に分析するために行った。図７Ｃに示すように、ｓＮＡＧで処置した創傷は、全体的なコラーゲン含量を約３倍減少させた。
【０２８６】
筋線維芽細胞は、組織修復における重要な細胞型であり、コラーゲン生成を介した瘢痕の形成に関係している［１６、１７］。筋線維芽細胞群は、瘢痕のない胎児の創傷治癒中に減少する。筋線維芽細胞群の分布を可視化するために、創傷切片を、アルファ平滑筋アクチン（αＳＭＡ）に対する抗体で標識した。図８Ａに示し、図８Ｂに定量化したように、処置済みの創傷は、αＳＭＡの発現を少なくとも２倍減少させることを示し、コラーゲン含量の減少が筋線維芽細胞数の減少のためであることを示唆している。
【０２８７】
［ｓＮＡＧ処置は、損傷を受けた皮膚の抗張力および弾性の向上を引き起こす］
コラーゲンが強度および機械的特性を付与すること［１８］、並びに処置済みおよび未処置の皮膚創傷の間で、コラーゲン堆積および瘢痕形成が異なること、を考慮し、ｓＮＡＧ処置が抗張力および弾性の向上をもたらすか否かを評価した。抗張力および弾性を測定するために、皮膚創傷を、野生型動物に形成した皮膚創傷の、未処置および処置済みの両方を２１日後に回収し、歪みゲージ伸長計を用いて機械試験の被験体にした。野生型マウスからの損傷を与えていない正常な皮膚を、コントロールとして用いた。機械試験の分析は、ＷＴ動物のｓＮＡＧ処置した皮膚創傷が、未処置の創傷と比較して、抗張力の約４０％の向上を表すことを示す（図９Ａ）。さらに、ｓＮＡＧ処置した創傷は、損傷を与えていないコントロールの皮膚と同等レベルの抗張力回復を表した（図９Ａ）。抗張力測定中に、ＷＴ動物からのｓＮＡＧ処置した皮膚創傷が、コントロールまたは未処置の対応物よりも伸縮性が高いことに注目した。図９Ｂは、ｓＮＡＧ処置が、未処置の皮膚創傷および損傷を与えていないコントロールの皮膚の両方と比較して、治癒組織の弾性の顕著な向上をもたらすことを示す。皮膚創傷のｓＮＡＧ処置がエラスチン生成を増加させるか否かを評価するために、ワンギーソン（Van Geison）染色を分析した。図９Ｃにおいて、処置済み動物由来の創傷は、新たに治癒した創傷においてエラスチン生成を示すが（薄い黒い構造によって表す）、未処置の創傷は示さない。これらの知見は、ｓＮＡＧ処置が弾性の向上と同様に抗張力の向上をもたらし、皮膚創傷のナノファイバー処置が、治癒中の皮膚の機械特性を共に向上させる一方で、瘢痕化を低減するという仮説を支持する。
【０２８８】
［ｓＮＡＧ処置が、線維芽細胞の配列とフィブリンゲルの収縮との向上をもたらす］
コラーゲンファイバーの配列および整列は線維芽細胞の適切な配列に関連すると思われるため、ｓＮＡＧ処置がインビトロの線維芽細胞の配列をもたらすか否かを評価するために、フィブリンゲルアッセイを用いた［１９］。この仮説を試験するために、線維芽細胞をｓＮＡＧで処置または未処置で放置した後、フィブリンゲルに包埋した。フィブリンゲルを一晩収縮可能にした後、収縮を分析し、細胞配列の分析のために切片化した。細胞配列を可視化するために、ゲルを切片化してファロイジンまたはＨ＆Ｅのいずれかで染色した。Ｈ＆Ｅ染色したゲル切片の代表的な画像は、ｓＮＡＧ処置が配列した線維芽細胞をもたらすことを示す（図１０Ａ）。黒丸は、ゲルの収縮に沿う張力点として機能するピンの位置を示す。ｓＮＡＧ処置した線維芽細胞は、未処置の細胞の散乱した整列されていない構成と比較して、編制された方式で、ピンから線形に放射状に広がる。ゲル切片のファロイジン染色を、また、ｓＮＡＧ処置細胞の整列した配列を可視化するために行った（図４Ｂ）。ｓＮＡＧ依存性線維芽細胞配列を、ヒト皮膚線維芽細胞において確認した（図示せず）。さらに、ｓＮＡＧ処置した線維芽細胞は、未処置のコントロールと比較して向上したゲル収縮と相互に関連がある（以下を参照のこと）。総合すれば、これらのデータは、線維芽細胞のｓＮＡＧ処置が整理された細胞配列をもたらすことを示す。線維芽細胞のこの配列は、図７から９に示すように、ｓＮＡＧ処置した皮膚創傷において見られる、より整列したコラーゲンファイバーおよび向上した抗張力をもたらすと思われる。
【０２８９】
［ｓＮＡＧ依存性線維芽細胞の配列はＡｋｔ１を必要とする］
Ａｋｔ１も線維芽細胞の配列のｓＮＡＧに依存した向上に必要とされるか否かを決定するために、線維芽細胞をＡｋｔ１に対するレンチウイルスを発現するｓｈＲＮＡを用いて形質導入し、フィブリンゲルに包埋した。図１１Ａに示すように、ｓＮＡＧ処置した線維芽細胞は、未処置の線維芽細胞を含むゲルと比較して約４０％ゲル収縮した。ｓＮＡＧ処置したｓｈＡｋｔ１発現する線維芽細胞を含むゲルは、ｓＮＡＧ処置したコントロールよりも収縮が極めて小さかった。フィブリンゲルからのＨ＆Ｅ染色切片の分析は、Ａｋｔ１の発現が阻害された場合に配列が抑制されることを示す（図１１Ｂ）。図１１に示すように、ｓＮＡＧ処置した線維芽細胞は、未処置のコントロールと比較して、促進したＡｋｔのリン酸化を有し、Ａｋｔ経路の活性化を示唆している。Ａｋｔ１のノックダウンがインビトロで線維芽細胞の配列の低下をもたらすため、Ａｋｔ１ヌル動物由来の皮膚創傷の抗張力がｓＮＡＧの処置によって影響を受けるか否かを評価した。ｓＮＡＧで処置したまたは処置せずに放置した皮膚創傷を、上述したように、歪みゲージ伸長計を用いる抗張力試験の被験体とした。図１１Ｄに示すように、ｓＮＡＧ処置した創傷と未処置の創傷との間に顕著な差はなかった。総合すれば、これらの知見は、インビボで、ｓＮＡＧに依存した抗張力の向上と同様に、ｓＮＡＧに依存した線維芽細胞の配列にＡｋｔ１が必要とされることを示している。
【０２９０】
［考察］
上述した知見は、高度に精製されたｐＧｌｃＮＡナノファイバー（ｓＮＡＧ）による皮膚創傷の処置が、瘢痕形成を低減させることを示す。この瘢痕形成の低減は、コラーゲンの整列、抗張力および弾性の向上と、相互に関連がある。Ａｋｔ１の除去は、ｓＮＡＧ処置によって誘導される抗張力の向上を阻害する。抗張力は、創傷治癒の成熟段階中におけるコラーゲンの再編によって決定され、この再編により、コラーゲンは、生成と代謝との間のバランスによってますます整理される［２０］。一般に、瘢痕形成は、コラーゲン生成の増加と、コラーゲンの交差連結および配列の低下とによって特徴付けられ、抗張力の全体的な低下の原因となる。確かに、元々の抗張力の７０％のみが、創傷回復および組織再編後に回復する［２１］。
【０２９１】
処置済み創傷のＭａｓｓｏｎトリクロム染色およびヒドロキシプロリン定量化によって示されたように、ｓＮＡＧ処置は、全体的なコラーゲン含量の減少をもたらす。処置済み創傷のＭａｓｓｏｎトリクロム染色は、ｓＮＡＧ処置が、より分散したコラーゲン、運動性の向上、および創傷境界におけるコラーゲンの整列を導くことを示す。ピクロシリウスレッド染色は、ｓＮＡＧで処置した創傷が、より均一なコラーゲンファイバーの配列を有し、ｓＮＡＧ処置による創傷の解決および再編の運動性の向上を示唆することを示す。コラーゲン含量の減少の支持において、α−平滑筋アクチン（αＳＭＡ）染色の低下をこの実施例において証明し、このことは、創傷における筋線維芽細胞数の減少を示唆している。筋線維芽細胞は、組織修復中の線維反応を担う異常な線維芽細胞であり、αＳＭＡの発現の効力によって不活化された線維芽細胞から区別される。筋線維芽細胞は、皮膚創傷治癒におけるコラーゲンの主要な生産者であり、収縮中に活性であり、そしてアポトーシスによって創傷から取り除かれる［１７］。筋線維芽細胞の持続性は、瘢痕の増大またはケロイド形成をもたらし得る［２２、２３］。損傷を受けてから１０日目に、ｓＮＡＧ処置は、αＳＭＡ発現のほぼ３倍の減少をもたらした。例えば、収縮性の平滑筋表現型の減少、上皮の分化導入、間質または循環からの線維芽細胞の補充のような、筋線維芽細胞が分化し得る非常に多くの方向があるので、この実施例において見られた結果は、創傷治癒中のｓＮＡＧ刺激が、その分化に影響し得ること、またはその除去を促進し得ることを示唆している。
【０２９２】
コラーゲン配列におけるｓＮＡＧの役割を理解するために、フィブリンゲルアッセイを用いた。フィブリンゲルアッセイは、配列し得る細胞における割線を提供する。コラーゲンを適切に堆積させるために、線維芽細胞自身が配列されなければならないという仮説を立てた。細胞配列は、適切な組織構造の形成のために重要なものであり、適切な機械的機能を提供する。インビボの状況をよりそっくりに模倣する三次元環境の使用が、これらの細胞反応の研究におけるインビトロシステムを提供する。このシステムは、正常な創傷治癒中に生じるのと同様の、フィブリンの凝塊、格子構造を伴う線維芽細胞を提供する。この三次元システムを用いて、上述した結論は、血清を枯渇させた条件下におけるｓＮＡＧによる線維芽細胞の前処置が、Ｈ＆Ｅおよびファロイジン染色によって可視化したように、張力ポールへの著しい細胞の配列をもたらすことを示す（図１０）。配列のより定量的な測定として、上述した結論は、配列した細胞がフィブリンの凝塊を機械的に収縮させること（図１１）、並びに、収縮および配列の両方が、Ａｋｔ１ノックダウンの条件下において排除されることを示す。興味深いことに、配列した細胞において、わずかではあるが再現可能なＡｋｔリン酸化反応の増加が観察された。これらの結果は、Ａｋｔ１が、インビトロのｓＮＡＧ誘引細胞配列に必要とされることを示す。Ａｋｔ１ヌル動物は、このモデルにおいて損傷を受けた皮膚の抗張力がｓＮＡＧ処置によって影響を受けないので、これらの結果が正しいこと証明する。
【０２９３】
Ａｋｔ１ヌル動物および野生型動物において、損傷を受けていない皮膚の抗張力は同様であることは、注目すべきである。このことは、皮膚の発達を制御する細胞プログラムが、Ａｋｔ１不在でも無傷であることを示唆する。Ａｋｔ１／Ａｋｔ２ダブルヌル動物は、小人症および早期の新生児致死性に加えて、薄皮表現型を示し、各皮膚層内の細胞数の著しい減少によって特徴付けられる。この表現型は、Ａｋｔ３単独では補填できない増殖の欠如が原因である［１４］。Ａｋｔ２またはＡｋｔ３のいずれかの存在は、上述したようなｓＮＡＧ刺激創傷修復および抗張力に影響せず、または、以前に報告されたような感染の除去および創傷の封鎖にも影響しない［４］。このことは、これらの２つの酵素が、ｓＮＡＧが誘導する組織修復または抗菌効果に、機能的に重複しないことを証明する。
【０２９４】
Ａｋｔは、ＧＴＰアーゼのＲｈｏファミリーを介して細胞骨格に信号を送り、中でも、細胞骨格修復を制御する［２４］。Ａｋｔは、ビメンチンを直接リン酸化可能であり、細胞の形および運動性の変化に関与する中間体フィラメントタンパク質である［２５］。運動型の細胞において、リン酸化Ａｋｔ１は、先端／底部に二極化される細胞であるのに対して、細胞前縁に局在し、リン酸化Ａｋｔは細胞周囲に局在されがちである。これらの結果は、Ａｋｔが、細胞極性、細胞骨格の編制、および方向付けられた細胞移動において役割を果たすことを示唆する。線維芽細胞における一般的な合意は、ノックダウンおよび過発現分析の両方によって決定され、Ａｋｔ２が移動を阻害する一方で、Ａｋｔ１が移動を積極的に方向付けることである［２６］。上皮細胞においては逆が正しい。上述したフィブリンゲルアッセイにおいて、Ａｋｔ１は、２つの張力点の間の細胞のｓＮＡＧ誘導配列に必要とされる。Ａｋｔ１は、そして、細胞骨格再編成および細胞の位置決めに必要とされるはずであり、前後細胞極性に影響し得る。
【０２９５】
この実施例は、ｓＮＡＧ刺激が、損傷を受けていない皮膚および損傷を受けた皮膚の両方と比較して、弾性を向上させることを示す。弾性は、発達中に形成されるエラスチンファイバーによって付与される。エラスチン生成は成体においては見られないが、負傷後に、例えば、インスリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）およびインターロイキン１（ＩＬ−１）のような特定のサイトカインおよび成長因子のアップレギュレートを通して誘導され得るが、異常に堆積し、そして治癒後数か月するまで検出されない。エラスチンの異常な堆積は、瘢痕の弾性および柔軟性の低下を引き起こす［２７、２８］。上述した結果は、損傷を受けてから２１日後のｓＮＡＧ処置が、未処置の創傷と比較して、エラスチンファイバー染色の増加を引き起こすことを示した。この染色の増加は、皮膚弾性の顕著な向上（図９）および栄養エラスチンタンパク質発現の向上に相互に関連する。少なくともインビトロでは、ｓＮＡＧ刺激が、ＩＬ−１の発現を増加させ、このサイトカインとエラスチンファイバー染色との間の関連を示唆することを示している［１２］。Ａｋｔ１は、ＩＬ−１およびＩＧＦ−１の両方の下流で機能する主要な酵素であることは、よく立証されている。
【０２９６】
内皮細胞において、本発明者らは、ｓＮＡＧナノファイバー処置に応じたエラスチン発現の増加を見出した。Ａｋｔ１は、β１インテグリンの活性化を介した細胞外マトリクスアセンブリおよびフィブロネクチン編制を連結している［２９］。ｓＮＡＧは特にインテグリン依存性情報伝達を活性化し、これによってＡｋｔ１活性化を導くことが証明されている［３０］。それゆえに、ｓＮＡＧによって刺激した創傷におけるエラスチン堆積が、インテグリン／Ａｋｔ１依存性経路によるものである可能性がある。エラスチンファイバー堆積は、一般に、成体においては生じない。それゆえに、ｓＮＡＧが、皮膚修復および組織生体工学適用のための弾性生成を刺激するメカニズムを理解することが重要である。
【０２９７】
この実施例に記載した結果は、ｓＮＡＧが、組織構造の回復をもたらす細胞プログラムを刺激することを示唆する。胎児の創傷治癒と成体の創傷治癒との間の正確な機械的相違は未知のままである一方で、胎児の創傷および出生後の創傷の、炎症性反応、細胞外マトリクス、細胞中間体、および遺伝子発現プロファイルに共通して存在する顕著な相違は示されている［３１］。免疫システムの発達のために、胎児の創傷が有する炎症細胞は遥かに少なく、そして炎症細胞の存在はあまり識別されず［３２］、胎児の創傷の成長因子プロファイルにおいて著しい相違を有する。
【０２９８】
以前に報告された結果は、ｓＮＡＧナノファイバー刺激が代謝を向上させ［１３］、内皮細胞の運動性および脈管形成を向上させ［１２］、さらに重要なことに、抗菌活性を導く先天性免疫反応を増強させ［１４］、この抗菌活性は少なくとも一部がＡｋｔ１活性に依存している、ことを示している。この実施例は、ｓＮＡＧ刺激が、皮膚創傷治癒中のコラーゲンおよび線維芽細胞配列の向上、抗張力および弾性の向上をもたらすことを示す。これらの結果は、ｓＮＡＧナノファイバーが、張力を受けた細胞の配列を制御するＡｋｔ１の活性化、およびＩ型コラーゲン堆積および瘢痕形成の低減をもたらすインテグリン情報伝達を裏返しに刺激するモデルを示唆する。瘢痕化は、主要な医学的副反応であり、組織機能および審美性の低下、並びに現状の処置選択の制限の原因となり、そして、この実施例は、ｓＮＡＧナノファイバーによる皮膚創傷の処置が瘢痕化を低減させるため用いられ得ることを示す。
【０２９９】
［実施例７に記載した参考文献および他の参考文献］
1. Ferguson, M.W. and S. O'Kane, Scar-free healing: from embryonic mechanisms to adult therapeutic intervention. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci, 2004. 359(1445): p. 839-50.
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【０３００】
［７．参考としての援用］
本明細書に記載した、学術論文、特許および特許出願のような全ての参考文献の開示内容は、個別の論文または特許出願のそれぞれが、特におよび個別に参考として援用されることを示すように、これらの全体が参考として本明細書中に援用され、前述の発明は、明確な理解を目的として図面および実施例の手段により、一部詳細に説明されているけれども、本発明の教示の観点において当該技術分野における通常の知識を有する者に容易に明らかになり、特定の変更および修正は、本発明の特許請求の範囲の精神または範囲から一脱しないようにそこに加え得る。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【配列表】
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