(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
水性液体と、前記水性液体中に分散した、ガスを含むナノサイズのバブルとを有する第１の液体と混合してバブル含有液体を製造するのに用いられ、
前記バブルを前記水性液体中に安定的に保持するように作用するバブル保持剤を含むバブル保持剤含有液体であって、
前記バブル保持剤含有液体は、前記バブル保持剤としてアルブミンを含有するアルブミン含有水であり、
前記ガスは、酸素および窒素のうちの少なくとも一種を含み、
前記第１の液体と前記バブル保持剤含有液体とを混合して製造された前記バブル含有液体において、前記アルブミンの含有量は、０．０６〜０．２５ｗｔ％となることを特徴とするバブル保持剤含有液体。
【請求項２】
前記バブル保持剤は、さらに、塩類、糖類および前記アルブミン以外のタンパク質のうちの少なくとも１種を含む請求項１に記載のバブル保持剤含有液体。
【請求項３】
前記糖類は、グルコースを含む請求項２に記載のバブル保持剤含有液体。
【請求項４】
前記第１の液体と前記バブル保持剤含有液体とを混合して製造された前記バブル含有液体において、前記水性液体の含有量［ｗｔ％］と、前記バブル保持剤の含有量［ｗｔ％］との比率は、５０：５０〜９９．９９９：０．００１となる請求項１ないし３のいずれかに記載のバブル保持剤含有液体。
【請求項５】
水性液体と、前記水性液体中に分散した、ガスを含むナノサイズのバブルと、前記バブルを前記水性液体中に安定的に保持するように作用するバブル保持剤とを有するバブル含有液体の製造方法であって、
前記水性液体と、前記水性液体中に分散した前記バブルとを有する第１の液体と、前記バブル保持剤を含む第２の液体とを準備する工程と、
前記第１の液体と前記第２の液体とを混合して、前記バブル含有液体を得る工程と、を有し、
前記第２の液体は、前記バブル保持剤としてアルブミンを含有するアルブミン含有水であり、
前記ガスは、酸素および窒素のうちの少なくとも一種を含み、
前記第１の液体と前記第２の液体とを混合して製造された前記バブル含有液体において、前記アルブミンの含有量は、０．０６〜０．２５ｗｔ％となることを特徴とするバブル含有液体の製造方法。
【請求項６】
前記第１の液体は、前記水性液体を、容器の所定の高さまで注入する工程と、前記水性液体が前記容器の内面に繰り返し衝突するように、所定の回転数で前記容器を振動させる工程と、を経て得られる請求項５に記載のバブル含有液体の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、マイクロバブルまたはナノバブルを含有するバブル含有液体、およびそのバブル含有液体の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、医療、食品、魚介類の養殖、排水処理等の様々な分野において、マイクロサイズ（数百マイクロメートル程度）、または、ナノサイズ（数百ナノメートル以下）のバブルの利用が検討されている。【０００３】
特に、医療分野では、かかるバブルを超音波造影剤として用いて、胸部や腹部等の診断対象部位を診断する超音波診断が知られている。超音波診断では、バブルを血管内へ注入し、バブルが集積した診断対象部位に超音波を照射して、診断対象部位からの反射波（反射エコー）を画像化して診断する。超音波造影剤として用いられるバブルは、例えば、特許文献１に記載されたバブルの製造方法によって製造することができる。【０００４】
また、近年では、バブルを用いた超音波治療も検討されている（例えば、特許文献２）。超音波治療では、遺伝子や薬剤（薬物）を封入したバブルを体内へ注入し、血流により患部にまで搬送する。そして、バブルが患部付近に到達した際に、超音波をバブルに照射して、バブルを破裂させる。そうすることにより、バブルに封入された薬物を患部に集中的に投与することができる。【０００５】
このバブルは、水性液体中にバブルが分散したバブル含有液体の状態で使用される。しかしながら、水性液体中でバブルを安定的に保存することは難しかった。例えば、バブル含有液体を調整後、長期間経過したバブル含有液体中のバブルの数は、バブル含有液体が晒される温度、圧力、振動等の外的要因により、調整直後のバブル含有液体中のバブルの数よりも著しく減少することがあった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特許第５９２７３２５号公報
【特許文献２】特開２００２−２０９８９６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、上記従来の問題点を鑑みたものであり、その目的は、水性液体中に分散したバブルの経時安定性に優れたバブル含有液体を提供することである。また、別の目的は、かかるバブル含有液体を安定かつ容易に製造することができるバブル含有液体の製造方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
このような目的は以下の（１）〜（８）の本発明により達成される。
（１）  水性液体と、前記水性液体中に分散した、ガスを含むバブルとを有するバブル含有液体であって、
前記バブルを前記水性液体中に安定的に保持するように作用するバブル保持剤をさらに含むことを特徴とするバブル含有液体。【０００９】
（２）  前記バブル保持剤は、塩類、糖類およびタンパク質のうちの少なくとも１種を含む上記（１）に記載のバブル含有液体。【００１０】
（３）  前記糖類は、グルコースを含む上記（２）に記載のバブル含有液体。【００１１】
（４）  前記ガスは、酸素、水素、窒素、ヘリウム、パーフルオロプロパン、パーフルオロブタン、パーフルオロペンタンからなる群から選択される少なくとも１種を含む上記（１）ないし（３）のいずれかに記載のバブル含有液体。【００１２】
（５）  前記バブル含有液体中の前記水性液体の含有量［ｗｔ％］と、前記バブル含有液体中の前記バブル保持剤の含有量［ｗｔ％］との比率は、５０：５０〜９９．９９９：０．００１である上記（１）ないし（４）のいずれかに記載のバブル含有液体。【００１３】
（６）  水性液体と、前記水性液体中に分散した、ガスを含むバブルとを有するバブル含有液体の製造方法であって、
前記水性液体と、前記バブルを前記水性液体中に安定的に保持するように作用するバブル保持剤とを含む混合液を準備する工程と、
前記混合液を、容器の所定の高さまで注入する工程と、
前記混合液が前記容器の内面に繰り返し衝突するように、所定の回転数で前記容器を振動させることにより、前記バブル含有液体を得る工程と、を有することを特徴とするバブル含有液体の製造方法。【００１４】
（７）  水性液体と、前記水性液体中に分散した、ガスを含むバブルと、前記バブルを前記水性液体中に安定的に保持するように作用するバブル保持剤とを有するバブル含有液体の製造方法であって、
前記水性液体と、前記水性液体中に分散した、ガスを含むバブルとを有する第１の液体と、前記バブル保持剤を含む第２の液体とを準備する工程と、
前記第１の液体と前記第２の液体とを混合して、前記バブル含有液体を得る工程と、を有することを特徴とするバブル含有液体の製造方法。【００１５】
（８）  前記第１の液体は、前記水性液体を、容器の所定の高さまで注入する工程と、前記水性液体が前記容器の内面に繰り返し衝突するように、所定の回転数で前記容器を振動させる工程と、を経て得られる上記（７）に記載のバブル含有液体の製造方法。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、バブル保持剤の作用により、水性液体中にバブルを安定的に保持（保存）することができる。そのため、本発明のバブル含有液体は、長期間保存した場合でも、含まれるバブルの数およびサイズの変動を抑え、バブルの経時安定性に優れている。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は、本発明のバブル含有液体を説明するための模式図である。
【図２】図２は、本発明のバブル含有液体中に含まれるバブルの一例について、その一部を切断した状態を示す斜視図である。図２（ａ）は、ガスが封入されたバブルの一部を切断した状態を示しており、図２（ｂ）および図２（ｃ）は、ガスおよび薬物が封入されたバブルの一部を切断した状態を示す。
【図３】図３は、本発明のバブル含有液体の製造方法の第１実施形態を説明するためのフローチャートである。
【図４】図４（ａ）〜（ｄ）は、本発明のバブル含有液体の製造方法の第１実施形態を説明するための断面図である。
【図５】図５は、図４（ｃ）に示す容器を振動させる工程において、水性液体と容器の内面（上面）とが激しく衝突した状態を説明するための部分拡大図である。
【図６】図６は、本発明のバブル含有液体の製造方法の第２実施形態を説明するためのフローチャートである。
【図７】図７（ａ）〜（ｄ）は、実施例１〜３および比較例１で得られたサンプルの、製造直後、５日後、および１０日後のバブル径分布を示すグラフである。
【図８】図８（ａ）〜（ｃ）は、実施例４、５および比較例２で得られたサンプルの、製造直後および１０日後のバブル径分布を示すグラフである。
【図９】図９（ａ）は、実施例６〜８で得られたサンプルの製造直後のバブル径分布を示すグラフである。図９（ｂ）は、実施例６〜８で得られたサンプルの１２日後のバブル径分布を示すグラフである。
【図１０】図１０（ａ）は、実施例９で得られたサンプルの製造直後のバブル径分布を示すグラフである。図１０（ｂ）は、実施例９で得られたサンプルを４℃で５日間保管した後のバブル径分布である。図１０（ｃ）は、実施例９で得られたサンプルを室温で５日間保管した後のバブル径分布である。図１０（ｄ）は、実施例９で得られたサンプルを３７℃で５日間保管した後のバブル径分布である。
【図１１】図１１は、実施例１０〜１２および比較例４で得られたサンプルにおける２００〜１０００ｎｍのバブル径を有するバブルの濃度の経時変化を示すグラフである。
【図１２】図１２は、実施例１３〜１５および比較例５で得られたサンプルにおける２００〜１０００ｎｍのバブル径を有するバブルの濃度の経時変化を示すグラフである。
【図１３】図１３は、実施例１６〜１８および比較例６で得られたサンプルにおける２００〜１０００ｎｍのバブル径を有するバブルの濃度の経時変化を示すグラフである。
【図１４】図１４（ａ）〜（ｃ）は、実施例１９〜２４および比較例４〜６で得られたサンプルにおける、バブル径が２００ｎｍ未満のバブルの濃度およびバブル径が２００ｎｍより大きいバブルの濃度の比率の経時変化を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、本発明のバブル含有液体およびバブル含有液体の製造方法を添付図面に示す好適な実施形態に基づいて説明する。
【００１９】
１．バブル含有液体
まず、バブル含有液体について説明する。
図１は、本発明のバブル含有液体を説明するための模式図である。
図１に示すように、本実施形態のバブル含有液体１００は、水性液体と、水性液体中に分散した、ガス３を含むバブル１（気泡）とを有する。
【００２０】
このバブル含有液体１００は、医療、食品、魚介類の養殖、排水処理等の様々な分野に用いることができる。本実施形態では、バブル含有液体１００を体内に注入して、バブル含有液体１００中のバブル１を超音波診断または超音波治療に用いる場合について説明する。
【００２１】
水性液体としては、例えば、蒸留水、純水、超純水、イオン交換水、ＲＯ水等の水、Ｓａｌｉｎｅ（塩化ナトリウム濃度が０．９％程度の生理食塩水）、ＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ）、ＫＣｌ点滴液等の塩水溶液、グルコース、スクロース等の糖水溶液、アミノ酸水溶液、タンパク質水溶液、銅、鉄、金、プラチナ等の金属イオンを含む金属イオン水溶液、ナトリウム、マグネシウム、リン、カリウム、カルシウム、マンガン、クロム、亜鉛等の各種ミネラルを含むミネラル水溶液、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ等の水溶性ビタミンおよび／またはビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ等の脂溶性ビタミンを含むビタミン水溶液、炭水化物水溶液、抗体水溶液、ＲＮＡ、ＤＮＡおよびこれらの誘導体等を含む核酸を含む核酸水溶液、各種色素を含む色素水溶液、塩化ガドリニウム、硫化ガドリニウム等のガドリニウム化合物を含むガドリニウム水溶液等が挙げられる。これらは、１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００２２】
バブル含有液体１００中の水性液体の含有量は、５０ｗｔ％以上であるのが好ましい。これにより、バブル保持剤を水性液体に十分に分散または溶解させることができ、より均一な混合液１０を得ることができる。
【００２３】
ガス３は、バブル１を製造する際の温度（２０℃程度）において、気体状の物質である。また、ガス３は、バブル１を体内に注入した状態において、すなわち、体内の温度（３７℃程度）においても、気体状の物質である。
【００２４】
ガス３としては、特に限定されないが、例えば、空気、亜酸化窒素、酸素、二酸化炭素、水素等のガスや、窒素、ヘリウム、アルゴン、キセノン、クリプトンのような不活性ガス、六フッ化硫黄、十フッ化二硫黄、トリフルオロメチル硫黄ペンタフルオリドのようなフッ化硫黄、メタン、エタン、プロパン、ブタン、ペンタン、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、エチレン、プロピレン、プロパジエン、ブテン、アセチレン、プロピン、パーフルオロプロパン、パーフルオロブタン、パーフルオロペンタンのような低分子量炭化水素類またはこれらのハロゲン化物、ジメチルエーテルのようなエーテル類、ケトン類、エステル類等が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。これらの物質の中でも、特に、酸素、水素、窒素、ヘリウム、パーフルオロプロパン、パーフルオロブタン、パーフルオロペンタンからなる群から選択される少なくとも１種が好ましい。バブル１中にこれらのガスが封入されることにより、バブル１の水性液体中での安定性を向上させることができる。また、これらのガスが封入されたバブル１は、体内において安定性が高く、血管を通して患部（治療対象部位）または診断対象部位までより確実に運搬される。
【００２５】
なお、バブル含有液体１００中のバブル１は、所定量のガス３が微分散または溶解している水性液体を用いることにより形成される。ここで、水性液体中のガス３の含有量が多いほど、水性液体中に、十分に多量のバブル１を存在させつつ、バブル１同士の衝突による合体や消滅を抑制することができる。これにより、バブル含有液体１００中に、バブル１を多量に含ませることができるとともに、バブル１の経時安定性をより向上させることができる。
【００２６】
ところで、水性液体中のバブル１は、その表面（ガス３と水性液体との間の気液界面）に存在する水分子のクラスター構造に起因して、安定化が図られると考えられる。水分子のクラスター構造は、水分子の一部が電離することで生じた若干量の水素イオン（Ｈ＋）および水酸化物イオン（ＯＨ−）を含んでいる。これらのイオン（特に、水酸化物イオン）の影響で、バブル１は帯電している。これにより、バブル１同士は、電気的な反発力により合体（付着）することが抑制されると考えられる。
【００２７】
そこで、本発明者は、バブル１同士の電気的な反発力に加え、バブル１の表面付近や、隣接するバブル１同士の間に何らかの分子、イオンを安定的に存在させることが、水性液体中でのバブル１の経時安定性を向上させると考え、検討を重ねた。その結果、バブル含有液体中に、糖類、塩類およびタンパク質等のバブル保持剤を含ませることにより、水性液体中でのバブルの経時安定性が飛躍的に向上することが明らかとなった。
これは、水性液体中の糖類やタンパク質が、バブル１表面付近やバブル１同士の間に存在し、その立体障害作用により、バブル１同士が付着することを長期間にわたって抑制するからであると考えられる。また、水性液体中の塩類が、イオン化して、バブル１の表面に吸着し、バブル１の帯電性が長期間にわたって維持されるからであると考えられる。
【００２８】
このように、本発明のバブル含有液体は、バブル保持剤をさらに含んでいる。このバブル保持剤は、水性液体中に分散または溶解しており、バブル１を水性液体中に安定的に保持するように作用する。したがって、バブル含有液体１００では、水性液体中にバブル１を安定的に保持（保存）することができる。そのため、バブル含有液体１００は、長期間保存した場合でも、含まれるバブル１の数およびサイズの変動を抑え、バブル１の経時安定性に優れる。
【００２９】
バブル保持剤は、糖類、塩類およびタンパク質のうちの少なくとも一種を含む。
糖類（多糖類を含む）としては、例えば、グルコース、スクロース、デキストリン等が挙げられる。また、タンパク質としては、例えば、アルブミン、グロブリン等が挙げられる。塩類としては、例えば、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４、ＫＨ２ＰＯ４およびＣ３Ｈ５ＮａＯ３や、鉄イオン、金イオン、銅イオン等の各種金属イオンの塩化物等が挙げられる。これらの物質の中でも、バブル保持剤としては、糖類が好ましく、グルコースが特に好ましい。
【００３０】
バブル含有液体１００中のバブル保持剤の含有量は、特に限定されないが、使用する水性液体の種類に応じて、適宜変更することが好ましい。例えば、バブル含有液体１００中のバブル保持剤の含有量は、０．００１〜５０ｗｔ％であることが好ましく、０．００５〜５０ｗｔ％であることがより好ましい。バブル保持剤の含有量が上記範囲内であれば、バブル含有液体１００は、長期間保存した場合でも、含まれるバブル１の数およびサイズの変動をより確実に抑えることができ、バブル１の経時安定性をより向上させることができる。
【００３１】
なお、バブル含有液体１００中の水性液体の含有量［ｗｔ％］と、バブル含有液体１００中のバブル保持剤の含有量［ｗｔ％］との比率は、５０：５０〜９９．９９９：０．００１であることが好ましい。水性液体とバブル保持剤との含有比率が上記範囲内であれば、バブル含有液体１００を長期間保存した場合でも、含まれるバブル１の数およびサイズの変動をより確実に抑えることができ、バブル１の経時安定性をより向上させることができる。
特に、バブル保持剤として糖類（グルコース等）を用いるとともに、水性液体として生理食塩水を用いる場合には、バブル含有液体１００中の生理食塩水の含有量［ｗｔ％］と、バブル含有液体１００中の糖類の含有量［ｗｔ％］との比率は、５０：５０〜８５：１５であることが好ましく、５０：５０〜８０：２０であることがより好ましい。
また、バブル保持剤として糖類（グルコース等）を用いるとともに、水性液体として水を用いる場合には、バブル含有液体１００中の水の含有量［ｗｔ％］と、バブル含有液体１００中の糖類の含有量［ｗｔ％］との比率は、５０：５０〜９７：３であることが好ましく、５０：５０〜９６：４であることがより好ましい。
また、バブル保持剤としてタンパク質（アルブミン等）を用いる場合には、バブル含有液体１００中の水性液体の含有量［ｗｔ％］と、バブル含有液体１００中のタンパク質の含有量［ｗｔ％］との比率は、５０：５０〜９９．９９９：０．００１であることが好ましく、５０：５０〜９９．９９５：０．００５であることがより好ましい。
【００３２】
このような成分で構成されたバブル１の径は、後述する本発明のバブル含有液体の製造方法の各工程の条件を変更することにより変化する。すなわち、製造されるバブル１は、ミクロンサイズ（数百マイクロメートル程度）、または、ナノサイズ（数百ナノメートル程度）を有することとなる。
【００３３】
具体的に、バブル１の平均径は、特に限定されないが、１０ｎｍ〜１０００μｍ程度であるのが好ましく、１０ｎｍ〜１００μｍ程度であるのがより好ましく、５０〜２０００ｎｍ程度であるのがさらに好ましい。バブル１の平均径が上記範囲内であれば、バブル１を静脈注射により体内に注入した際に、バブル１の径が十分に小さいため、血流によりバブル１が血管内を滑らかに移動することができる。また、このような径のバブルは、血管内での安定性が高く、血管内を移動している間に消滅することなく、目的の部位まで確実に運ばれる。特に、ナノバブルは、血管内での安定性が高いため、ほぼ消滅することなく、目的の部位まで確実に搬送される。
【００３４】
一般的に、気体を内包するバブルは、液体と気体との界面において効率良く超音波を反射する性質を有している。そのため、上記範囲の平均径を有するバブル１は、液体（水性液体、または、超音波造影剤として体内に注入された際には、血液）とガス３との界面の面積が十分に大きく、超音波造影剤として有効に用いられる。
【００３５】
また、上述したような構成のバブル１は、食品、魚介類の養殖、排水処理等の医療分野以外の分野にも用いることができる。特に、上記範囲の平均径を有するバブル１は、その安定性を十分に高くすることができ、取扱いが容易なため、様々な分野に適用することができる。
【００３６】
なお、バブル含有液体１００中のバブル１としては、図２（ａ）〜（ｃ）に示す構成のバブルであってもよい。
図２は、本発明のバブル含有液体中に含まれるバブルの一例について、その一部を切断した状態を示す斜視図である。図２（ａ）は、ガスが封入されたバブルの一部を切断した状態を示しており、図２（ｂ）および図２（ｃ）は、ガスおよび薬物が封入されたバブルの一部を切断した状態を示す。
なお、上述した図１に示すバブル１との相違点を中心に説明し、同様の事項については、その説明を省略する。
【００３７】
図２（ａ）に示すバブル１（気泡）は、バブル１の殻を構成する外殻２（球状の膜）と、外殻２内に封入されたガス３とを有している。
このような外殻２は、主として１つの分子中に疎水性と親水性との両方の性質（置換基）を有する、アルブミンのような両親媒性材料（外殻材料）から構成されている。
両親媒性材料としては、特に限定されないが、例えば、アルブミンのような各種タンパク質が挙げられ、そのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。
また、バブル含有液体１００中のバブル保持剤の含有量は、外殻材料および水性液体の各種類の組み合わせによって変わるが、０．００１〜３５ｗｔ％であることが好ましく、０．００５〜２０ｗｔ％であることがより好ましい。
図２（ｂ）および図２（ｃ）に示すバブル１は、バブル１の殻を構成する外殻２と、外殻２内に封入されるガス３および薬物４を有している。このバブル１は、超音波治療および超音波診断に用いられる。なお、図２（ｂ）では、薬物４が気体状態あるいは固体状態で外殻２内に封入されているバブル１を示しており、図２（ｃ）では、薬物４が液体状態で外殻２内に封入されているバブル１を示している。
【００３８】
外殻２は、その内側に封入されるガス３や薬物４をバブル１内に保持する機能を有し、バブル１が患部に運ばれるまで薬物４を保護する機能を有している。
【００３９】
また、図２（ｂ）および図２（ｃ）に示すバブル１において、薬物４は、前立腺癌、子宮筋腫、心筋梗塞、脳梗塞等の様々な疾病の治療に有効な成分である。薬物４は、バブル１に包含された状態で患部に運搬され、超音波照射により患部付近で外殻２を破裂させることにより、患部に投与される。なお、図示しないが、薬物４は、外殻２自体に含有されてもよいし、外殻２の外表面に吸着されていてもよい。
なお、薬物４とガス３との体積比率は、１：９９〜９０：１０程度であるのが好ましく、１０：９０〜７０：３０程度であるのがより好ましく、４０：６０〜６０：４０程度であるのがさらに好ましい。薬物４とガス３との体積比率が上記範囲内であれば、バブル１の安定性が向上し、患部付近までより確実にバブル１を運搬することができる。また、患部付近で外殻２を破裂させた際に、患部に対して、十分な量の薬物を投与することができる。そのため、患部をより効率良く治療することができる。
【００４０】
薬物４としては、疾病の治療に有効であれば特に限定されないが、遺伝子、薬剤等を含む。具体的には、ペプチド、抗体、オリゴ糖、多糖、遺伝子、オリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、リボザイム、トリプルヘリックス分子、ウイルスベクター、プラスミド、低分子有機化合物、抗癌剤、金属等が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。
また、バブル含有液体１００中の薬物４の含有量は、０．１〜３５ｗｔ％であることが好ましく、２０〜３５ｗｔ％であることがより好ましい。
なお、バブル含有液体１００中のバブル１の含有量は、１．０×１０５／ｍｌ以上であることが好ましく、１．０×１０６／ｍｌ以上であることがより好ましく、１．０×１０７／ｍｌ以上であることがさらに好ましい。このようなバブル含有液体１００を超音波造影剤として用いることにより、少量のバブル含有液体１００の使用でより明確な超音波診断画像を得ることができる。また、このようなバブル含有液体１００を超音波治療に用いることにより、少量のバブル含有液体１００の使用でより効率よく患部を治療することができる。
【００４１】
ここで、癌細胞が存在する患部では、その周囲の血管から癌細胞へと、正常血管よりも細径の新生血管が伸びている。平均径が２００〜３００ｎｍ程度のバブル１であれば、バブル１が、新生血管内にも円滑に搬送され、癌細胞にまで到達することができる。すなわち、かかるバブル１は、癌治療に好適に用いられることができる。また、一部のバブル１を、血管壁を通過させて、癌細胞に取り込ませることもできる。
また、バブル１の平均径が６００〜９００ｎｍ程度のバブル１は、脳の血管内を円滑搬送されるとともに、その位置を超音波画像において確実に特定することができる。そのため、脳治療（例えば、脳血管内治療等）に好適に用いることができる。
なお、図１および図２（ａ）〜（ｃ）に示すバブル１の平均径は、例えば、レーザー回折・散乱法、ナノ粒子トラッキング解析法、電気抵抗法、ＡＦＭ（Ａｔｏｍｉｃ  Ｆｏｒｃｅ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）、レーザー顕微鏡による観測等により測定することができる。なお、レーザー回折・散乱法によるバブルの平均径を測定する装置としては、ベックマン・コールター社製のフローサイトメーター（商品名；ＣｙｔｏＦｌｅｘ）を用いることができる。また、ナノ粒子トラッキング解析法によるバブルの平均径を測定する装置としては、Ｍａｌｖｅｒｎ社製のナノ粒子解析システム（商品名：ｎａｎｏｓｉｇｈｔ）を用いることができる。また、ＡＦＭを測定する装置としては、Ｍａｌｖｅｒｎ社製の共振式粒子計測システム（商品名：アルキメデス）を用いることができる。
【００４２】
上述したようなバブル含有液体１００は、以下に記載する本発明のバブル含有液体の製造方法により製造することができる。以下、本発明のバブル含有液体の製造方法について、詳細に説明する。
【００４３】
２．バブル含有液体の製造方法
＜第１実施形態＞
次に、本発明のバブル含有液体の製造方法の第１実施形態について説明する。
図３は、本発明のバブル含有液体の製造方法の第１実施形態を説明するためのフローチャートである。図４（ａ）〜（ｄ）は、本発明のバブル含有液体の製造方法の第１実施形態を説明するための断面図である。図５は、図４（ｃ）に示す容器を振動させる工程において、水性液体と容器の内面（上面）とが激しく衝突した状態を説明するための部分拡大図である。
【００４４】
なお、以下の説明では、図４（ａ）〜（ｄ）および図５中の上側を「上」と言い、図４（ａ）〜（ｄ）および図５中の下側を「下」と言う。
【００４５】
本実施形態のバブル含有液体の製造方法は、図３に示すように、工程（Ｓ１）〜（Ｓ５）の５つの工程を有する。工程（Ｓ１）は、水性液体とバブル保持剤とを含む混合液、および混合液が注入されるバブル製造用容器（以下、単に「製造容器」という）を準備する工程である。工程（Ｓ２）は、混合液を製造容器の所定の高さまで注入する工程である。工程（Ｓ３）は、製造容器内にガスを充填して、製造容器内を加圧した状態で製造容器を密閉する工程である。工程（Ｓ４）は、混合液が容器の内面に繰り返し衝突するように、所定の回転数で製造容器を振動させる工程である。工程（Ｓ５）は、製造容器を静置する工程である。
本実施形態のバブル含有液体の製造方法では、あらかじめ、水性液体中にバブル保持剤を分散または溶解させて混合液とし、この混合液中にバブルを生成させることにより、バブル含有液体を得ることができる。以下、これらの工程について順次説明する。
【００４６】
［Ｓ１］  準備工程
図１に示すバブル１を含有するバブル含有液体１００を製造する際には、まず、水性液体およびバブル保持剤を調製容器に入れて、バブル保持剤を水性液体に分散または溶解させる。これにより、混合液１０を調製する。すなわち、調製容器内にバブル保持剤および水性液体を所定量加えた後、攪拌して、バブル保持剤を水性液体に分散または溶解させる。
なお、バブル保持剤、水性液体を調製容器に入れる順番は、特に限定されない。バブル保持剤を水性液体に分散または溶解させる方法としては、例えば、攪拌子による攪拌、超音波処理等を用いることができる。
【００４７】
水性液体およびバブル保持剤としては、それぞれ、前述した水性液体およびバブル保持剤が使用される。
【００４８】
また、図２（ａ）のバブル１を含有するバブル含有液体１００を製造する際には、上述した水性液体およびバブル保持剤に加え、前述した外殻材料をさらに含有する混合液１０を調製する。
また、図２（ｂ）および（ｃ）のバブル１を含有するバブル含有液体１００を製造する際には、上述した水性液体およびバブル保持剤に加え、前述した外殻材料および薬物４をさらに含有する混合液１０を調製する。
【００４９】
次に、製造容器２０を準備する。
製造容器２０は、開口部を備え、混合液１０を収容する容器本体２１と、容器本体２１を密閉するための蓋２２とを有している。
【００５０】
容器本体２１は、特に限定されないが、図４（ａ）に示すような外形が有底円筒状をなしていることが好ましい。本実施形態では、容器本体２１として、容量が０．５〜２０ｍｌ程度のバイアル瓶を用いる。本発明のバブル含有液体の製造方法では、容器本体２１として、このような容量の小さなバイアル瓶を用いた場合であっても、容器本体２１を蓋２２で密閉した際に、容器本体２１内の密閉空間で適切な圧力が混合液１０に付与されるので、均一なサイズのバブル１を安定的に得ることができる。特に、容量が０．５〜２．５ｍｌ程度のバイアル瓶であれば、１つの製造容器２０内に、１回の超音波診断に必要となる０．３〜０．６ｍｌ程度のバブル含有液を製造することができる。この場合、超音波診断の際に、１つの製造容器２０内のバブル含有液体１００を使い切ることができるため、製造されるバブル含有液体１００の無駄をなくすことができる。
【００５１】
このように容量の小さいバイアル瓶（容量：０．５〜２０ｍｌ程度）の寸法は、長手方向の長さＸが、３５〜６０ｍｍ程度であり、外径Ｒが、１０〜４０ｍｍ程度である。
【００５２】
蓋２２は、図４（ｂ）〜（ｄ）に示すように、容器本体２１の瓶口に密着する円盤状のゴム栓（セプタム）２２１と、ゴム栓２２１を容器本体２１の瓶口に固定する締付部２２２とを備えている。
【００５３】
［Ｓ２］混合液を製造容器に注入する工程
調製された混合液１０を容器本体２１（製造容器２０）の所定の高さまで注入する。本実施形態では、図４（ａ）に示すように、Ｙ［ｍｍ］まで注入する。したがって、図４（ａ）に示すように、混合液１０が注入された状態の容器本体２１は、その上部に空隙部１１を有する。
【００５４】
本実施形態では、混合液１０が注入された容器本体２１（製造容器２０）を水平に静置した状態において、容器本体２１の高さ（長手方向の長さ）をＸ［ｍｍ］とし、容器本体２１における混合液１０の液面の高さをＹ［ｍｍ］としたとき、０．２≦Ｙ／Ｘ≦０．７の関係を満足するのが好ましい。上記関係を満足することにより、十分な大きさの空隙部１１が存在するので、工程（Ｓ４）において、混合液１０を製造容器２０の上下面および側面（特に、上下面）により勢いよく衝突させることができる。この衝突により、混合液１０中に衝撃波が生じ、混合液１０中にバブル１を容易に形成することができる。
【００５５】
なお、前記関係は、０．３≦Ｙ／Ｘ≦０．５の関係を満足するのがより好ましく、０．３５≦Ｙ／Ｘ≦０．４の関係を満足するのがさらに好ましい。これにより、工程（Ｓ４）において、混合液１０中にバブル１をより容易に形成することができる。
【００５６】
［Ｓ３］製造容器を密閉する工程
次に、容器本体２１にガス３を充填させて、製造容器２０内を加圧した状態で密閉する（図４（ｂ）参照）。具体的には、混合液１０が注入された容器本体２１の空隙部１１を、ガス３でパージした後、蓋２２を容器本体２１の開口部（瓶口）に締付ける。これにより、製造容器２０内に混合液１０とガス３とが密閉される。
【００５７】
容器本体２１の空隙部１１をガス３でパージする方法としては、例えば、混合液１０が注入された容器本体２１をチャンバー内に移動させる。次に、チャンバー内の空気をガス３で置換する。その後、蓋２２を容器本体２１の開口部に締付けることにより、製造容器２０内に混合液１０とガス３とを密閉することができる。
ガス３としては、前述した各種ガスが使用される。
【００５８】
次に、ガス３が充填された注射器を準備する。そして、注射器の注射針をゴム栓２２１に刺通する。その後、注射器から製造容器２０内にさらにガス３を加えることにより、製造容器２０内が加圧される。その後、ゴム栓２２１から注射針を抜去する。これにより、製造容器２０内がガス３により加圧された状態で密閉された製造容器２０を得ることができる。
【００５９】
本実施形態のバブル含有液体の製造方法では、製造容器２０内の圧力（空隙部１１に充填されたガス３の圧力）を１．０ａｔｍより大きくする。特に、製造容器２０内の圧力は、１．５〜１０ａｔｍであるのが好ましく、２〜５ａｔｍであるのがより好ましい。これにより、ガス３の一部が混合液１０に微分散または溶解する。
【００６０】
混合液１０にガス３が微分散または溶解することにより、工程（Ｓ４）において、混合液１０と製造容器２０とが衝突して衝撃波が発生する際に、バブル１が発生し易くなる。これにより、工程（Ｓ４）において、混合液１０中により多くのバブル１を生成させることができる。
【００６１】
また、製造容器２０中の圧力を１．０ａｔｍよりも大きい任意の値に設定することにより、混合液１０中に生成するバブル１の径および含有量をより容易に調整することができる。
なお、本実施形態では、製造容器２０内を加圧した状態（製造容器２０内の圧力を１．０ａｔｍよりも大きくした状態）としているが、製造容器２０内を加圧することなく、次工程（Ｓ４）を行ってもよい。
【００６２】
［Ｓ４］製造容器を振動させる工程
次に、混合液１０が、製造容器２０の上下面および側面（特に、上下面）に繰り返し衝突するように、製造容器２０を振動させる。本実施形態では、図４（ｃ）に示すように、製造容器２０が、ほぼその長手方向（図４（ｃ）では、鉛直方向）に往復運動するように、製造容器２０を振動させる。
【００６３】
本工程では、工程（Ｓ３）で密閉した製造容器２０（図４（ｃ）の下図）を上方向に振動させる（図４（ｃ）の真中の図）。これにより、混合液１０は、製造容器２０の中間付近に移動する。更に製造容器２０を上方向に振動させると、混合液１０が製造容器２０の上部に移動して、蓋２２の下面（ゴム栓２２１）に衝突する（図４（ｃ）の上図）。この際に、図５に示すように、衝撃波が発生する。この衝撃波の圧力により、ガス３が混合液１０中に微分散し、バブル１が形成する。このバブル１内には、振動により混合液１０に微分散または溶解したガス３が含まれる。
【００６４】
一方、製造容器２０（図４（ｃ）の上図）を下方向に振動させる（図４（ｃ）の真中の図）。これにより、混合液１０は、製造容器２０の中間付近に移動する。更に製造容器２０を下方向に振動させると、混合液１０が製造容器２０の下部に移動して、製造容器２０の下面に衝突する（図４（ｃ）の下図）。この時も、図５に示すように、衝撃波が発生する。
【００６５】
また、製造容器２０を鉛直方向に振動させる際に、混合液１０は、製造容器２０の内側の側面とも衝突する。この時も、図５に示すように、衝撃波が発生する。
【００６６】
以上の操作を繰り返し行うことによって、混合液１０中に均一なサイズのバブル１を多量に安定的に生成させることができる。
【００６７】
本実施形態のバブル含有液体の製造方法では、十分に微細で、均一なサイズのバブル１を得るために、製造容器２０を５０００ｒｐｍ以上で振動させるのが好ましい。これにより、混合液１０と製造容器２０とが衝突する際に発生する衝撃波の大きさ（圧力）が十分に大きくなり、混合液１０中に生じるバブル１が微細化され、そのサイズを均一にすることができる。また、製造容器２０の回転数を上記範囲内で低めに設定した場合には、発生する衝撃波の大きさが小さくなるので、比較的径の大きなバブル１を生成することができる。また、回転数を高めに設定した場合には、発生する衝撃波の大きさが大きくなるので、比較的径の小さいバブル１を生成することができる。なお、本明細書において、製造容器２０の「回転数」とは、単位時間当たりに、製造容器２０がその全振動経路を移動する回数を意味する。例えば、製造容器２０が５０００ｒｐｍで振動するとは、製造容器２０が、１分間に全振動経路を５０００回移動（振動）することを意味する。
【００６８】
また、製造容器２０の回転数は、５５００ｒｐｍ以上であることがより好ましく、６０００〜２００００ｒｐｍであることがさらに好ましい。製造容器２０の回転数を上記範囲内とすることにより、振動により生成したバブル１同士が、衝突により崩壊したり、合体して粗大化するのをより確実に防止することができる。これにより、バブル１の径を微細化しつつ、より均一なサイズのバブル１を多量に混合液１０中に生成させることができる。
【００６９】
上記のような回転数で製造容器２０を振動させることができる装置としては、例えば、ビーズ方式の高速細胞破砕システム（ホモジナイザー）を用いることができる。具体例としては、バーティンテクノロジーズ（ｂｅｒｔｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）社製のプレセリーズ（Ｐｒｅｃｅｌｌｙｓ）等を用いることができる。
【００７０】
また、混合液１０と製造容器２０とが衝突する際に発生する衝撃波の圧力は、４０ｋＰａ〜１ＧＰａとなることが好ましい。混合液１０と製造容器２０との衝突時に発生する衝撃波の圧力が上記範囲内となることにより、混合液１０中に生じるバブル１をより微細化し、そのサイズをより均一にすることができる。特に、混合液１０と製造容器２０との衝突時に発生する衝撃波の圧力が大きくなるほど、より微細なバブル１を生成することができる。
【００７１】
製造容器２０を振動させる際に、製造容器２０の長手方向の振動幅は、０．７Ｘ〜１．５Ｘ［ｍｍ］程度であるのが好ましく、０．８Ｘ〜１Ｘ［ｍｍ］程度であるのがより好ましい。これにより、製造容器２０の振動時に、混合液１０と製造容器２０の下面および蓋２２とを確実に衝突させることができ、混合液１０と製造容器２０の下面および蓋２２との衝突回数を十分に多くすることができる。また、このように十分な振動幅で製造容器２０を振動させることにより、混合液１０が製造容器２０内を移動する速度が大きくなる。そのため、混合液１０と製造容器２０の下面および蓋２２との衝突時に発生する衝撃波の大きさが十分に大きくなる。結果として、混合液１０中に微細なバブル１を多量に生成させることができる。
【００７２】
また、製造容器２０を鉛直方向に往復運動させる際に、製造容器２０は、その短手方向（水平方向）にも振動させるのが好ましい。これにより、製造容器２０の内側の側面にも混合液１０が衝突するので、混合液１０に衝撃波をより多く発生させることができる。製造容器２０の短手方向への振動幅は、０．３Ｘ〜０．８Ｘ［ｍｍ］程度であるのが好ましく、０．５Ｘ〜０．７Ｘ［ｍｍ］程度であるのがより好ましい。これにより、上述した効果はより顕著となる。
なお、製造容器２０を振動させる方向は、その短手方向のみであってもよい。この場合、製造容器２０の短手方向（水平方向）への振動幅は、上述した短手方向への振動幅と同じであることが好ましい。かかる振動幅であれば、製造容器２０の内側の側面に混合液１０が確実に衝突するので、混合液１０に衝撃波をより多く発生させることができる。その結果、混合液１０中に微細なバブル１を多量に生成させることができる。
【００７３】
また、本工程では、混合液１０を製造容器２０の上下面および側面に衝突させる際における製造容器２０と製造容器２０内の混合液１０との瞬間相対速度が４０ｋｍ／ｈ以上となるように製造容器２０を振動させることが好ましい。また、かかる瞬間相対速度が５０ｋｍ／ｈ以上となるように製造容器２０を振動させることがより好ましい。上記条件を満足することにより、混合液１０と製造容器２０とが衝突する際に生じる衝撃波の圧力を十分に大きくすることができる。その結果、混合液１０中に生じるバブル１をより微細化し、そのサイズをより均一にすることができる。
【００７４】
なお、製造容器２０を上記条件で振動させる時間は、１０〜１２０秒程度であるのが好ましく、３０〜６０秒程度であるのがより好ましい。製造容器２０の振動時間を上記範囲内とすることにより、混合液１０が製造容器２０と衝突する回数が十分に多くなるため、混合液１０中に、多量のバブル１を生成させることができる。なお、製造容器２０の振動時間を上記範囲内で長く設定することにより、混合液１０中に生成されるバブル１の量をより多くすることができる。
【００７５】
なお、混合液１０中に生成されるバブル１の平均径は、製造容器２０の回転数を前述した範囲内で変更することにより調整することができる。本実施形態では、おおよそ数十〜数百ナノメーターサイズのナノバブルを安定的に生成することができる。
【００７６】
なお、本実施形態では、製造容器２０が、ほぼその長手方向に往復運動するように、製造容器２０を振動させているが、製造容器２０を振動させる方法は、これに限定されない。例えば、製造容器２０が、主として、その短手方向および／または長手方向に回転運動するように、製造容器２０を振動させてもよい。この場合であっても、製造容器２０内の混合液１０は、製造容器２０の上下面および側面に繰り返し衝突することにより、衝撃波が発生する。このような振動方法を用いても、混合液１０中に、均一なサイズのバブル１を多量に安定的に生成することができる。
【００７７】
［Ｓ５］製造容器を静置する工程
上記条件で製造容器２０を振動させた後、製造容器２０を静置する（図４（ｄ）参照）。これにより、製造容器２０内に、均一なサイズのバブル１（図１参照）を多量に含有するバブル含有液体１００を製造することができる。また、同時に、バブル含有液体１００が封入されたバブル含有容器（以下、単に「バブル含有容器」という）を得ることができる。
【００７８】
なお、上述した工程（Ｓ２）〜（Ｓ４）は、一定の温度下で行われるのが好ましい。製造過程における温度条件が一定であれば、各工程（Ｓ２）〜（Ｓ４）において、混合液１０（水性液体）の特性（粘性等）が安定するため、混合液１０中にバブル１を安定的に生成することができる。各溶液の温度を一定に維持するための方法としては、例えば、上述した各工程（Ｓ２）〜（Ｓ４）をグローブボックスや恒温槽内で行う方法が挙げられる。特に、工程（Ｓ４）において、製造容器２０を高速で振動させるため、混合液１０と製造容器２０の内面との衝突により製造容器２０が発熱し易い。しかし、恒温槽内で製造容器２０を振動させることにより、混合液１０の温度が上昇するのを確実に防止することができる。その結果、混合液１０中に均一な径のバブル１を安定的に生成することができる。
【００７９】
以上の工程（Ｓ１）〜（Ｓ５）を経て、平均径が１０ｎｍ〜１０００μｍ程度のバブル１を含有するバブル含有液体１００が製造される。
【００８０】
なお、従来のバブルの製造方法では、大掛かりな還流装置や、バブルの製造装置を構成する様々なシステム（チューブ、ノズル、コンプレッサ等）が必要であった。そのため、食品分野や医療分野等に用いられるバブルを製造する際に、清潔で、かつ無菌環境を維持するのが困難であった。これに対して、本発明では、バブル含有液体１００の製造に気密性の高い製造容器２０を用いるため、混合液１０およびガス３を製造容器２０内に含有した状態で、例えば、γ線滅菌等による滅菌処理を製造容器２０混合液１０に施せばよい。これにより、製造容器２０内が滅菌されるため、バブル含有液体１００を滅菌環境下で製造することができる。
【００８１】
上記のようにして得られたバブル含有液体１００中において、バブル１は安定的に存在することができる。そのため、得られたバブル含有液体１００は、室温にて長期保存することができる。具体的には、１０〜３６か月間もの期間にわたって保存することができる。また、これだけ長期間保存した後でも、混合液１０中でのバブル１の安定性が高いため、再度バブル含有容器を振動させたりする必要なく、使用することが可能である。また、製造容器として、容量が小さい製造容器２０を用いることができるので、バブル含有容器の単価を抑えることができる。そのため、上記のようにして得られたバブル含有容器は、医療機関等にとっては、取扱い易いというメリットがある。
【００８２】
［Ｓ６］遠心分離処理工程
本実施形態のバブル含有液体の製造方法は、工程（Ｓ４）後、工程（Ｓ５）前に、または、工程（Ｓ５）後に、製造容器２０に対して、遠心分離処理を行ってもよい。この処理により、製造容器２０内に生成されたバブル１を、所望の径別に分離することができる。
具体的には、バブル含有容器に対して遠心分離処理を行うことにより、径の大きいバブル１が製造容器２０の上層へ移動する傾向があり、径の小さいバブル１が製造容器２０の下層へ移動する傾向がある。したがって、製造容器２０の上層の液体（上澄み液）を吸引手段（注射器、ピペット等）により除去すれば、製造容器２０内に残存するバブル含有液中のバブル１の平均径は、工程（Ｓ５）後に得られたバブル含有液体１００中のバブル１の平均径よりも小さくなる。また、吸引手段により吸引したバブル含有液体（上澄み液）中のバブル１の平均径は、工程（Ｓ５）後に得られたバブル含有液体１００中のバブル１の平均径よりも大きくなる。このように、遠心分離処理を用いることにより、より単分散なバブル径分布を有するバブル１を得ることができる。
また、混合液１０と比重の異なる物質をバブル含有液体１００に加えて、遠心分離処理することにより、径の大きいバブル１がより上層へと移動し易くなり、径の小さいバブル１がより下層へと移動し易くなる、その結果、より単分散なバブル径分布を有するバブル１を得ることができる。
【００８３】
工程（Ｓ１）〜（Ｓ４）を経て、例えば、平均径が６００ｎｍのバブル１を含有するバブル含有液体１００を経た場合、遠心分離の条件を適宜設定することにより、平均径が２００〜３００ｎｍのバブル１を含有するバブル含有液を得ることができる。このバブル含有液体１００を超音波造影剤として用いた場合には、比較的径が大きいバブル１が存在しないため、解像度が高く、より高精細な画像を得ることができる。
【００８４】
遠心分離処理の条件は、分離するバブル１の平均径によって適宜設定され、例えば、バブル含有液体１００に１×ｇ〜２２０００×ｇ程度の遠心加速度が３０秒〜２４時間程度かかるようにする。遠心加速度を小さく設定（１×ｇ〜１００×ｇ程度）する場合には、長時間（１２時間〜２４時間程度）にわたって処理することにより、より単分散なバブル径分布を有するバブル１を得ることができる。また、遠心加速度を大きく設定（１００×ｇ〜２２０００×ｇ）する場合には、比較的短時間（３０秒〜１２時間程度）の処理により、より単分散なバブル径分布を有するバブル１を得ることができる。遠心分離処理を上記条件で行うことにより、所望の平均径を有するバブル１を効率良く分離することができる。
上記のような遠心加速度でバブル含有容器に遠心分離処理を行うことができる遠心分離機としては、特に限定されないが、例えば、商品名「ＴＯＭＹ  ＭＸ−３０１」（トミー精工社製）等の微量高速冷却遠心機を用いることができる。なお、上記微量高速冷却遠心機を用いる場合には、その回転数が５０〜２０００ｒｐｍ程度に設定することにより、上記範囲の遠心加速度（遠心力）がバブル含有液に負荷される。
また、遠心分離処理は、１回でもよいし、複数回にわたって行ってもよい。
【００８５】
上述したように、本実施形態では、工程（Ｓ１）〜（Ｓ５）を行うことにより、均一なサイズのバブル１を多量に安定的に含有するバブル含有液体１００を製造することができる。ただし、本実施形態のバブル含有液体の製造方法は、これに限定されない。例えば、前述した工程（Ｓ６）を、工程（Ｓ４）を行った後に行い、その後、工程（Ｓ５）を経て、バブル含有液体１００を得てもよい。また、工程（Ｓ５）の後に、工程（Ｓ４）を少なくとも１回以上繰り返し行うようにしてもよい。
【００８６】
＜第２実施形態＞
次に、本発明のバブル含有液体の製造方法およびバブル製造容器の第２実施形態について説明する。
図６は、本発明のバブル含有液体の製造方法の第２実施形態を説明するためのフローチャートである。
【００８７】
以下、第２実施形態のバブル含有液体の製造方法について、前記第１実施形態のバブル含有液体の製造方法との相違点を中心に説明し、同様の事項については、その説明を省略する。
【００８８】
本実施形態のバブル含有液体の製造方法は、図６に示すように、工程（Ｓ１）〜（Ｓ５）の５つの工程を有する。工程（Ｓ１）は、水性液体を含む第１の液体と、バブル保持剤を含む第２の液体（バブル保持剤含有液体）と、第１および第２の液体が注入される製造容器とを準備する工程である。工程（Ｓ２）は、第１の液体を製造容器の所定の高さまで注入する工程である。工程（Ｓ３）は、製造容器内にガスを充填して、製造容器内を加圧した状態で製造容器を密閉する工程である。工程（Ｓ４）は、第１の液体が容器の内面に繰り返し衝突するように、所定の回転数で製造容器を振動させる工程である。工程（Ｓ５）は、振動後の製造容器内に第２の液体を注入し、第１の液体と第２の液体とを混合して、バブル含有液体を得る工程である。
すなわち、本実施形態のバブル含有液体の製造方法では、バブル保持剤を含まない水性液体（第１の液体）中にバブル１を生成させた後、工程（Ｓ５）においてバブル保持剤を含むバブル保持剤含有液体（第２の液体）を添加する以外は、前述した第１実施形態のバブル含有液体の製造方法と同様である。
【００８９】
［Ｓ１］  準備工程
まず、前述した水性液体を含む第１の液体、バブル保持剤を含む第２の液体、および製造容器を準備する。
第１の液体は、前述した水性液体が用いられる。なお、図２（ａ）〜（ｃ）に示すバブル１を含有するバブル含有液体１００を製造する場合には、第１の液体として、水性液体と、外殻材料等（外殻材料、または、外殻材料および薬物４）とを調製容器に入れて、外殻材料等を水性液体に溶解させる。これにより、第１の液体を調製する。外殻材料等を水性液体に溶解させる方法としては、例えば、攪拌子による攪拌、超音波処理等を用いることができる。
また、第２の液体は、前述したバブル保持剤を、水性液体中に分散または溶解させることにより得られる。なお。第２の液体を構成する水性液体は、第１の液体で用いる水性液体と同じ水性液体が好ましいが、異なる種類の水性液体を用いることもできる。
【００９０】
このようにして調整された第１の液体を用いて、前述した第１実施形態と同様に、工程（Ｓ２）〜（Ｓ４）を行う。これにより、第１の液体中に、均一なサイズのバブル１を多量に生成することができる。
【００９１】
［Ｓ５］第１の液体と第２の液体とを混合する工程
次に、工程（Ｓ４）で振動させた後の製造容器２０の蓋２２を外し、第２の液体を容器本体２１に注入する。これにより、第１の液体と第２の液体とが混合されて、バブル含有液体１００を得る。
【００９２】
なお、第２の液体を容器本体２１に注入した後、第１の液体と第２の液体とを、例えば、撹拌子による撹拌、超音波処理等を用いて混合してもよい。
【００９３】
また、製造容器２０内は加圧されている。そのため、製造容器２０の蓋２２を外す際に、製造容器２０内を急激に減圧すると、第１の液体中のバブル１の粒径が変化し、含有量が減少する等の現象が生じる可能性がある。そのため、本工程において、製造容器２０の蓋２２を外す際に、あらかじめ、製造容器２０内の圧力を大気圧まで減圧しておくことが好ましい。
【００９４】
例えば、製造容器２０内を減圧するための減圧用注射器を用意し、その注射針をゴム栓２２１に刺通する。その際に、減圧用注射器の注射針が第１の液体に接触しないようにする。次に、減圧用注射器のプランジャーを操作して、製造容器２０内のガス３を吸引することにより、製造容器２０内の圧力を大気圧まで減圧する。その後、製造容器２０から蓋２２を外す。かかる方法を用いれば、生成されたバブル１に上述したような現象が生じない。
【００９５】
以上の工程（Ｓ１）〜（Ｓ５）を経て、平均径が１０ｎｍ〜１０００μｍ程度のバブル１を含有するバブル含有液体１００が製造される。
また、工程（Ｓ５）を行った後に、前述した第１実施形態の工程（Ｓ６）を行うこともできる。これにより、製造容器２０内により均一なサイズのバブル１を多量に安定的に含有するバブル含有液体１００を得ることができる。
【００９６】
なお、上記の説明では、バブル１が生成された第１の液体にバブル保持剤が含まれる第２の液体を添加し、その後混合してバブル含有液体を得ているが、これに限定されない。第１の液体として、上記工程（Ｓ１）〜（Ｓ４）以外の方法を用いてナノバブルが分散した第１の液体を用いることもできる。例えば、市販されている平均径が１０ｎｍ〜１０００ｎｍ程度のナノバブルを含有するナノバブル（ウルトラファインバブル）水等を第１の液体として用いることができる。
【００９７】
かかる第２実施形態のバブル含有液体の製造方法によっても、前記第１実施形態のバブル含有液体の製造方法と同様の作用・効果を生じる。
【００９８】
以上、本発明のバブル含有液体およびバブル含有液体の製造方法を図示の実施形態に基づいて説明したが、本発明は、これに限定されるものではなく、各工程は、同様の機能を発揮し得る任意の工程と置換することができる。
【実施例】
【００９９】
次に、本発明の具体的実施例について説明する。【０１００】
（実施例１）
［準備工程］
まず、調整容器としての１５ｍｌのバイアル瓶に、生理食塩水（０．９ｗ／ｖ％ＮａＣｌ水溶液）６ｍｌと、生理食塩水２０ｍｌに対して１０ｇのブドウ糖が溶解した５０％ブドウ糖液（大塚製薬社製、大塚糖液５０％）４ｍｌとを入れた。その後、生理食塩水と５０％ブドウ糖液とを撹拌することにより、混合液を得た。なお、混合液中のブドウ糖（グルコース）の含有量は、２０ｗｔ％であった。また、製造容器としての２ｍｌのバイアル瓶（高さＸ：４５ｍｍ、外径Ｒ：１３ｍｍ）を準備した。なお、このバイアル瓶は、図４に示す製造容器２０と同様の形状をなしている。【０１０１】
［混合液を容器に注入する工程］
２ｍｌバイアル瓶内に、混合液７００μｌを注入した。なお、混合液の液面の高さＹは、２５ｍｍであった。【０１０２】
［容器を密閉する工程］
次に、混合液が注入されたバイアル瓶内の空隙をパーフルオロプロパンでパージした後、バイアル瓶の瓶口に図４に示す蓋２２と同様の形状の蓋を挿着した。次に、パーフルオロプロパンが充填された注射器を準備した。注射器の注射針で蓋のゴム栓を刺通して、注射器からバイアル瓶内にさらに２ｍｌのパーフルオロプロパンを加えた。これにより、内部の圧力が１．３ａｔｍの密閉バイアル瓶を得た。【０１０３】
［容器を振動させる工程］
次に、ｂｅｒｔｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製のＰｒｅｃｅｌｌｙｓ（高速細胞破砕システム）を用いて、密閉バイアル瓶を、６５００ｒｐｍで１２０秒間振動させた後に２０秒間静置させた。本工程において、密閉バイアル瓶は、上下方向および左右方向に往復運動し、混合液がバイアル瓶の上下面および側面に繰り返し衝突することを確認した。なお、密閉バイアル瓶を振動させる際に、密閉バイアル瓶の長手方向（鉛直方向）の振動幅は、４０ｍｍであり、密閉バイアル瓶の短手方向（水平方向）の振動幅は、２０ｍｍであった。上記条件に設定することにより、いずれのバイアル瓶についても、バイアル瓶と混合液との瞬間相対速度が４０ｋｍ／ｈ以上となるようにした。【０１０４】
［容器を静置させる工程］
振動後、密閉バイアル瓶を静置させ、バブル含有液体を得た。【０１０５】
（実施例２）
実施例１の混合液を、生理食塩水２ｍｌと、５０％ブドウ糖液８ｍｌとの混合液に代えた以外は、前記実施例１と同様にして、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のブドウ糖の含有量は、４０ｗｔ％であった。【０１０６】
（実施例３）
実施例１の混合液を、５０％ブドウ糖液１０ｍｌにした以外は、前記実施例１と同様にして、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のブドウ糖の含有量は、５０ｗｔ％であった。【０１０７】
（実施例４）
実施例１の混合液を、蒸留水２ｍｌと、生理食塩水２０ｍｌに対して１ｇのブドウ糖が溶解した５％ブドウ糖液（大塚製薬社製、大塚糖液５％）８ｍｌとの混合液に代えた以外は、前記実施例１と同様にして、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のブドウ糖の含有量は、４ｗｔ％であった。【０１０８】
（実施例５）
実施例１の混合液を、蒸留水４ｍｌと、５％ブドウ糖液６ｍｌとの混合液に代えた以外は、前記実施例１と同様にして、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のブドウ糖の含有量は、３ｗｔ％であった。【０１０９】
（実施例６）
使用するガスとして、パーフルオロプロパンの代わりに窒素（Ｎ２）を用いた以外は、前記実施例１と同様にして、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のブドウ糖の含有量は、２０ｗｔ％であった。【０１１０】
（実施例７）
使用するガスとして、パーフルオロプロパンの代わりに窒素を用いた以外は、前記実施例２と同様にして、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のブドウ糖の含有量は、４０ｗｔ％であった。【０１１１】
（実施例８）
使用するガスとして、パーフルオロプロパンの代わりに窒素を用いた以外は、前記実施例３と同様にして、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のブドウ糖の含有量は、５０ｗｔ％であった。【０１１２】
（実施例９）
実施例１の混合液を、生理食塩水１２ｍｌと、アルブミンが２５０ｍｇ／ｍｌ含まれるアルブミン溶液（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ社製  アルブミナー２５％）３０μｌとの混合液に代えた以外は、前記実施例１と同様にして、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．０６ｗｔ％であった。【０１１３】
（実施例１０）
蒸留水中に、酸素を含む平均バブル径１００ｎｍ程度の酸素ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ社製  アルブミナー２５％）３０μｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．０６ｗｔ％であった。【０１１４】
（実施例１１）
蒸留水中に、酸素ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ社製  アルブミナー２５％）５７μｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．１２ｗｔ％であった。【０１１５】
（実施例１２）
蒸留水中に、酸素ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ社製  アルブミナー２５％）１２１μｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．２５ｗｔ％であった。【０１１６】
（実施例１３）
蒸留水中に、窒素を含む平均バブル径１００ｎｍ程度の窒素ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ社製  アルブミナー２５％）３０μｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．０６ｗｔ％であった。【０１１７】
（実施例１４）
蒸留水中に、窒素ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ社製  アルブミナー２５％）５７μｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．１２ｗｔ％であった。【０１１８】
（実施例１５）
蒸留水中に、窒素ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ社製  アルブミナー２５％）１２１μｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．２５ｗｔ％であった。【０１１９】
（実施例１６）
蒸留水中に、空気を含む平均バブル径１００ｎｍ程度の空気ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ社製  アルブミナー２５％）３０μｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．０６ｗｔ％であった。【０１２０】
（実施例１７）
蒸留水中に、空気ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ社製  アルブミナー２５％）５７μｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．１２ｗｔ％であった。【０１２１】
（実施例１８）
蒸留水中に、空気ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ社製  アルブミナー２５％）１２１μｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．２５ｗｔ％であった。【０１２２】
（実施例１９）
蒸留水中に、酸素ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ社製  アルブミナー２５％）２４５μｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．５ｗｔ％であった。【０１２３】
（実施例２０）
蒸留水中に、酸素ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ社製  アルブミナー２５％）３ｍｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、５ｗｔ％であった。【０１２４】
（実施例２１）
蒸留水中に、窒素ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ社製  アルブミナー２５％）２４５μｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．５ｗｔ％であった。【０１２５】
（実施例２２）
蒸留水中に、窒素ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ社製  アルブミナー２５％）３ｍｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、５ｗｔ％であった。【０１２６】
（実施例２３）
蒸留水中に、空気ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ社製  アルブミナー２５％）２４５μｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．５ｗｔ％であった。【０１２７】
（実施例２４）
蒸留水中に、空気ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ社製  アルブミナー２５％）３ｍｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、５ｗｔ％であった。【０１２８】
（比較例１）
実施例１の混合液を、生理食塩水１０ｍｌのみに代えた以外は、前記実施例１と同様にして、バブル含有液体を得た。【０１２９】
（比較例２）
実施例１の混合液を、水１０ｍｌのみに代えた以外は、前記実施例１と同様にして、バブル含有液体を得た。【０１３０】
（比較例３）
使用するガスとして、パーフルオロプロパンの代わりに窒素を用いた以外は、前記比較例１と同様にして、バブル含有液体を得た。【０１３１】
（比較例４）
バブル含有液体として、酸素ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）を用いた。【０１３２】
（比較例５）
バブル含有液体として、窒素ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）を用いた。【０１３３】
（比較例６）
バブル含有液体として、空気ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）を用いた。【０１３４】
＜バブルの経時安定性評価＞
上記のようにして得られた実施例１〜９および比較例１〜３のバブル含有液体を含むバブル含有容器に対して、微量高速冷却遠心機（トミー精工社製、「ＴＯＭＹ  ＭＸ−３０１」）を用いて、１２００ｒｐｍで５分間遠心分離処理を行った。この遠心分離処理により、バブル含有液体は、バブル含有容器の上側に濃い白濁部分と、バブル含有容器の中間に淡い白濁部分と、バブル含有容器の下側にほぼ透明な部分との３つの部分に分離された。次に、マイクロピペットにより、バブル含有容器の上側の濃い白濁部分を吸引して除去した。その後、他のマイクロピペットを、その先端がバブル含有容器の底付近に到達するように、バブル含有容器に挿入し、バブル含有容器の下側のほぼ透明な部分を吸引した。次に、吸引したバブル含有液体をエッペンドルフテストチューブ内に吐出して、サンプルを得た。【０１３５】
実施例１〜３および比較例１のサンプルについては、大気圧下、４℃の条件で容器の蓋を開けた状態で保管し、バブル含有液体の製造直後、５日後、および１０日後のサンプル中のバブルの径分布を、ナノ粒子解析システム（商品名：ｎａｎｏｓｉｇｈｔ）を用いて測定した。
また、実施例４、５および比較例２のサンプルについては、大気圧下、４℃の条件で容器の蓋を開けた状態で保管し、バブル含有液体の製造直後および１０日後のサンプル中のバブルの径分布を、上記と同様にして測定した。
また、実施例６〜８および比較例３のサンプルについては、大気圧下、４℃の条件で容器の蓋を開けた状態で保管し、バブル含有液体の製造直後および１２日後のサンプル中のバブルの径分布を、上記と同様にして測定した。
さらに、実施例９については、３つのサンプルを準備した。各サンプルを、大気圧下にて、４℃、室温（２０℃程度）および３７℃のそれぞれの温度下で、容器の蓋を開けた状態で保管し、バブル含有液体の製造直後および５日後のサンプル中のバブルの径分布を、上記と同様にして測定した。
これらの結果を、図７〜図１０に示す。【０１３６】
図７（ａ）〜（ｄ）は、実施例１〜３および比較例１で得られたサンプルの、製造直後、５日後、および１０日後のバブル径分布を示すグラフである。図８（ａ）〜（ｃ）は、実施例４、５および比較例２で得られたサンプルの、製造直後および１０日後のバブル径分布を示すグラフである。図９（ａ）は、実施例６〜８で得られたサンプルの製造直後のバブル径分布を示すグラフである。また、図９（ｂ）は、実施例６〜８で得られたサンプルの１２日後のバブル径分布を示すグラフである。図１０（ａ）は、実施例９で得られたサンプルの製造直後のバブル径分布を示すグラフである。図１０（ｂ）は、実施例９で得られたサンプルを４℃で５日間保管した後のバブル径分布である。図１０（ｃ）は、実施例９で得られたサンプルを室温で５日間保管した後のバブル径分布である。図１０（ｄ）は、実施例９で得られたサンプルを３７℃で５日間保管した後のバブル径分布である。【０１３７】
まず、図７（ａ）〜（ｃ）に示すように、実施例１〜３のサンプルは、５日後のサンプル中のバブルの含有量が、製造直後のサンプル中のバブルの含有量よりも減少していることが分かった。具体的には、実施例１のサンプルでは、バブル径が１００〜３００ｎｍの範囲において、約７０％減少していた。また、実施例２のサンプルでは、バブル径が１００〜３００ｎｍの範囲において、約３３％減少していた。また、実施例３のサンプルでは、バブル径が１００〜３００ｎｍの範囲において、約３０％減少していた。しかし、そのバブル径分布曲線の形状は、大きく変わっていなかった（図７（ａ）〜（ｃ）参照）。すなわち、実施例１〜３のサンプルでは、製造してから５日間経っても、含まれるバブルの粒径の変動が抑えられていた。【０１３８】
また、実施例１のサンプルでは、１０日後のサンプル中のバブルの含有量が、５日後のサンプル中のバブルの含有量とほとんど変わらず、そのバブル径分布曲線の形状もほぼ変わらなかった。また、実施例２のサンプルでは、１０日後のサンプル中のバブルの含有量は、バブル径が１００〜２００ｎｍの範囲において、５日後のサンプル中のバブルの含有量よりも減少するものの、バブル径が２００ｎｍよりも大きい範囲において、ほとんど変わらなかった。また、実施例３のサンプルでは、１０日後のサンプル中のバブルの含有量は、バブル径が０〜２００ｎｍの範囲において、製造直後のサンプル中のバブルの含有量よりも減少するものの、バブル径が２００ｎｍよりも大きい範囲において、ほとんど変わらなかった。【０１３９】
これに対して、比較例１のサンプルでは、５日後の時点でサンプル中のバブルの含有量が約９５％も減少しており、１０日後の時点では、ほとんどのバブルが消失していた（図７（ｄ）参照）。
したがって、本発明のバブル含有液体では、含まれるバブルの経時安定性が優れており、バブル径の変動も小さいことが分かった。【０１４０】
また、図８（ａ）および（ｂ）に示すように、蒸留水と低濃度のブドウ糖溶液（５％ブドウ糖溶液）とを混合して得られた実施例４および５のサンプルでは、実施例１〜３のサンプルよりも低濃度のブドウ糖が、バブルの経時安定性を向上させることが分かった。なお、実施例４のサンプルでは、バブル径が１００〜３００ｎｍの範囲において、１０日後のサンプル中のバブルの含有量が、製造直後のサンプル中のバブルの含有量よりも約９０％減少していた。また、実施例５のサンプルでは、バブル径が１００〜３００ｎｍの範囲において、１０日後のサンプル中のバブルの含有量が、製造直後のサンプル中のバブルの含有量よりも約９０％減少していた。また、比較例２のサンプルでは、１０日後のサンプル中のバブルが、バブル径が１００〜３００ｎｍの範囲において、完全に消失していた。
また、上記実施例１〜５のサンプルについて、ガスをヘリウム（Ｈｅ）および酸素（Ｏ２）に代えてバブル含有液体を作製し、上記のバブルの経時安定性評価を行ったところ、上記実施例１〜５のバブル含有液体と同様の評価結果が得られた。【０１４１】
また、図９に示すように、バブル保持剤を含有する実施例６〜８のバブル含有液体では、上記実施例１〜５と同様に、含まれるバブルの経時安定性が高いことが確認された。具体的には、実施例６のサンプルでは、１２日後のサンプル中のバブルの含有量が、製造直後のサンプル中のバブルの含有量よりも約２０％減少していた。また、実施例７および８のサンプルでは、１２日後のサンプル中のバブルの含有量が、製造直後のサンプル中のバブルの含有量とほぼ同じであった。一方、比較例３のサンプルでは、１２日後のサンプル中のバブルの含有量が、製造直後のサンプル中のバブルの含有量よりも約９４％減少していた（図９（ｂ）参照）。【０１４２】
また、図１０に示すように、実施例９のバブル含有液体では、含まれるバブル保持剤の含有量が少ない（アルブミン含有量：０．０６ｗｔ％）のにもかかわらず、上記実施例１〜５と同様に、含まれるバブルの経時安定性が高いことが確認された。また、低温（４℃）で保管されたバブル含有液体は、室温および室温よりも高い温度（３７℃）で保管されたバブル含有液体に比べ、より単分散なバブル径分布を有していた。【０１４３】
次に、市販のナノバブルを含む水（ウルトラファインバブル水）にバブル保持剤としてのアルブミンを添加して得られたバブル含有液体について、バブルの経時安定性を評価した。
実施例１０〜１８および比較例４〜６のバブル含有液体（サンプル）について、大気圧下、４℃の条件で容器の蓋を開けた状態で保管し、バブル含有液体の製造直後（０ｄａｙ）、１日後（１ｄａｙ）、３日後（３ｄａｙ）および７日後（７ｄａｙ）のサンプル中のバブルの径分布を、ベックマン・コールター社製のフローサイトメーター（商品名；ＣｙｔｏＦｌｅｘ）を用いて測定した。【０１４４】
また、実施例１９〜２４および比較例４〜６のバブル含有液体（サンプル）について、４℃の条件で容器の蓋を開けた状態で保管し、以下の条件で保管したバブルの径分布を、ナノ粒子解析システム（商品名：ｎａｎｏｓｉｇｈｔ）を用いて測定した。
実施例１９：３日後（３ｄａｙ）
実施例２０：１３日後（１３ｄａｙ）
実施例２１：１３日後（１３ｄａｙ）、１４日後（１４ｄａｙ）、３５日後（３５ｄａｙ）
実施例２２：１３日後（１３ｄａｙ）、１４日後（１４ｄａｙ）、３８日後（３８ｄａｙ）
実施例２３：製造直後（０ｄａｙ）
実施例２４：１０日後（１０ｄａｙ）
比較例４：３日後（３ｄａｙ）
比較例５：製造直後（０ｄａｙ）
比較例６：製造直後（０ｄａｙ）
これらの結果を、図１１〜図１４に示す。【０１４５】
図１１は、実施例１０〜１２および比較例４で得られたサンプルにおける２００〜１０００ｎｍのバブル径を有するバブルの濃度の経時変化を示すグラフである。図１２は、実施例１３〜１５および比較例５で得られたサンプルにおける２００〜１０００ｎｍのバブル径を有するバブルの濃度の経時変化を示すグラフである。図１３は、実施例１６〜１８および比較例６で得られたサンプルにおける２００〜１０００ｎｍのバブル径を有するバブルの濃度の経時変化を示すグラフである。図１４（ａ）〜（ｃ）は、実施例１９〜２４および比較例４〜６で得られたサンプルにおける、バブル径が２００ｎｍ未満のバブルの濃度およびバブル径が２００ｎｍより大きいバブルの濃度の比率の経時変化を示すグラフである。【０１４６】
図１１〜１３に示すように、市販のウルトラファインバブル水にバブル保持剤としてのアルブミンを添加した場合でも、２００〜１０００ｎｍのバブルの濃度が経時的に減少するのを抑制する効果が確認された。また、バブルに含まれるガスとして、酸素（Ｏ２）や窒素（Ｎ２）を用いた場合には、ガスとして空気を用いたバブルよりもバブルの経時安定性が優れていることが分かった。さらに、アルブミンの添加量が多くなるに従い、バブルの経時安定性が向上することも確認された。【０１４７】
さらに、図１４に示すように、２００ｎｍ未満のバブル径を測定することが可能なナノ粒子解析システム（商品名：ｎａｎｏｓｉｇｈｔ）によるバブル径分布測定では、長期間にわたって保管した場合でも、２００ｎｍ未満の極小バブルがバブル含有液体中に十分な量存在していることが確認された。【０１４８】
なお、上記評価は、バブル含有液体を保管する容器の蓋を開けた状態で保管した場合の評価であり、短期間でバブルの経時安定性を評価するために行った。したがって、製造後、製造容器の蓋を開けずに各実施例のバブル含有液体を保管した場合には、数年の長期間にわたって、バブル含有液体中に含まれるバブルの数およびバブル径の変動が抑えられた、バブルの経時安定性に優れるバブル含有液体となると思われる。
【産業上の利用可能性】
【０１４９】
本発明のバブル含有液体は、医療、食品、魚介類の養殖、排水処理等の様々な分野に用いることができる。本発明によれば、バブル含有液体が、バブルを水性液体中に安定的に保持するように作用するバブル保持剤を含むことにより、バブル保持剤の作用により、水性液体中にバブルを安定的に保持（保存）することができる。そのため、本発明のバブル含有液体は、長期間保存した場合でも、含まれるバブルの数およびサイズの変動を抑え、バブルの経時安定性に優れている。すなわち、長期間にわたって品質が維持されたバブル含有液体を提供することができる。したがって、本発明の分子標的薬バブルは、産業上の利用可能性を有する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図７−１】
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【図８】
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【図８−１】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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