(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
黒大豆種皮の含水低級アルコール抽出物を２価の鉄イオン存在下で酸性アルコール中で加熱処理することにより得られる生成物を有効成分とすることを特徴とする抗酸化剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、経口摂取する抗酸化剤、特に黒大豆種皮抽出物の抗酸化作用の増強に関する。
【背景技術】
【０００２】
酸素で呼吸する生物の体内では、呼吸した酸素のうち１〜２％が活性酸素になるといわれている。それだけでなく、大気汚染や、紫外線などの外的刺激によっても活性酸素による酸化ストレスを受けている。体内で生成された活性酸素は不飽和脂肪酸と反応して、過酸化脂質を生じる。肌の老化からアルツハイマー病やガンなどの重篤な疾病に至るまで、活性酸素の影響は極めて大きく、一説には全疾病の８５％に活性酸素が関与しているといわれる。通常、発生した活性酸素は生体に備わる抗酸化酵素の働きによって除去されるが、抗酸化酵素の活性が弱まったり、過剰に活性酸素が発生すると、消去しきれなくなった活性酸素が有害な物質として生体の様々な部位に傷害を与える。このような活性酸素によるダメージや各種疾患を抑止するためには、活性酸素自体の生成を抑えることが有効である。
【０００３】
そこで、抗酸化力を有する植物抽出物に1価又は2価の金属イオンを併用することにより、抗酸化作用を強め、かつ安定性を高める方法（特許文献1）や、カテキン類やプロシアニジン類を高温で加熱処理することにより、すぐれた抗酸化作用をもつ抗酸化剤を提供する方法（特許文献2）が知られている。また、黒大豆抽出物を加水分解することで、抗酸化作用を改善する方法（特許文献3）も開示されている。この文献については酵素だけでなく、酸又はアルカリを用いた加水分解処理の方法も示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００１−１３９４８４
【特許文献２】特開２００７−２５４５０８
【特許文献３】特開２００６−２９０７４２
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
植物成分であるカテキン類やプロシアニジン類をはじめとするポリフェノール類は化学構造中のOH基により活性酸素を捕捉し、強い抗酸化作用を有していることが知られている。黒大豆のような植物中にはプロシアニジン類が多く含まれており、種皮の抽出物は強い抗酸化作用をもつことが知られている。ポリフェノール類のもつ抗酸化作用を利用した健康食品や医薬品は数多く存在し、世界中で広く使用されている。しかしながら、ポリフェノール類は生体吸収率が低く、また滞留時間も短いため、効果的に抗酸化作用を得るためには、頻繁かつ多量の摂取が必要となる。従って、それらの欠点を解決するためには、より抗酸化性を高めたものの開発が望まれる。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは鋭意検討を行った結果、黒大豆種皮又は黒大豆種皮抽出物を２価の鉄イオン存在下で酸性アルコール中で加熱処理することにより得られる生成物に高い抗酸化力があることを見出した。
【０００７】
（Ｉ）抗酸化剤
Ｉ−１．黒大豆種皮又は黒大豆種皮抽出物を２価の鉄イオン存在下で酸性アルコール中で加熱処理することにより得られる生成物を有効成分とすることを特徴とする抗酸化剤。
Ｉ−２．経口投与形態を有するものであるＩ−１に記載する抗酸化剤。
Ｉ−３．錠剤、丸剤、カプセル剤（硬質カプセル、軟質カプセル）、散剤、顆粒剤、トローチ剤、液剤、及びゼリー剤から選択される製剤形態を有するＩ−１又はＩ−２のいずれかに記載する抗酸化剤。
Ｉ−４．飲食物、好ましくは水または清涼水と組み合わせて使用されるＩ−１〜Ｉ−３のいずれかに記載する抗酸化剤。
【０００８】
（ＩＩ）抗酸化作用を有する経口組成物用添加剤
ＩＩ−１．黒大豆種皮又は黒大豆種皮抽出物を２価の鉄イオン存在下で酸性アルコール中で加熱処理することにより得られる生成物を有効成分とすることを特徴とする経口組成物用添加物。
ＩＩ−２．飲食品用の添加剤であるＩＩ−１に記載する経口組成物用添加剤。
ＩＩ−３．錠剤、丸剤、カプセル剤（硬質カプセル、軟質カプセル）、散剤、顆粒剤、トローチ剤、液剤、及びゼリー剤から選択される製剤形態を有するＩＩ−１又はＩＩ−２のいずれかに記載する経口組成物用添加剤。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の抗酸化剤は、黒大豆種皮又は黒大豆種皮抽出物を２価の鉄イオン存在下で酸性アルコール中で加熱処理することにより、高い抗酸化力を有する生成物を得ることができる。また、本発明の抗酸化作用を有する経口組成物用添加物は、経口組成物に対して抗酸化作用を強化するために用いることができる。つまり、本発明の添加剤は、抗酸化作用を有する経口組成物の調製に使用することができ、斯くして、老化やストレス、偏った食生活等によって生じる酸化ストレスを抑制するかまた改善する効果に優れた抗酸化作用を有する経口組成物（経口医薬品、経口医薬部外品、飲食品）を調製することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
（Ｉ）抗酸化剤
本発明の抗酸化剤は、黒大豆種皮又は黒大豆種皮抽出物を２価の鉄イオンを加えて酸性アルコール中で加熱処理することによって得られる生成物を有効成分とすることを特徴とする。
【００１１】
本発明において用いられる黒大豆とは、植物分類学上はマメ科ダイズ属（Glycine max(L.)Merrill）に分類されるが、種子の外見が黒色を呈し、アントシアニン系の色素を含むことにより強い抗酸化性をもつ点で大豆とは峻別される。黒大豆には、例えば丹波黒、紫ずきん、中生光黒、トカチクロ、いわいくろ、玉大黒、丹波黒、信濃黒などの品種があるが、黒大豆であればどの品種の種子を使用してもよい。
【００１２】
本発明では黒大豆をそのまま加工原料として使用できる。また、それを破砕、粉砕等により粉末状にしたものでも良い。黒大豆から抽出物を調製するにあたっては、強い抗酸化作用を持つという観点から種皮のみの使用が最も好ましい。種皮は必要であれば、予め水で洗って異物を取り除いた状態（生または乾燥物）でも、さらに必要ならば破砕もしくは粉砕を経た状態（破砕物、粉砕物、及び粉末状物を含む）でもよい。
【００１３】
（Ａ）黒大豆種皮抽出物を用いる場合
黒大豆種皮から有効成分を抽出する方法は特に限定されないが、抽出溶媒と接触させることで行うことができる。具体的には溶媒中で浸漬し、攪拌させるなどの方法により有効成分を抽出できる。
抽出に使用する温度条件に特に制限はなく、低温、常温、加温条件（高温を含む）のいずれの条件でもよいが、好ましくは加温条件（高温を含む）である。より具体的には、後述の含水低級アルコールで抽出する場合は３０℃以上、好ましくは４０℃〜６０℃の範囲である。また、かかる温度条件での抽出時間についても制限はないが、６０分以上、好ましくは９０分〜１２０分程度行なうのがよい。水または酸性水溶液で抽出する場合には、温度は４０℃以上、好ましくは６０〜８０℃の範囲であり、抽出はかかる温度条件で１０分以上、好ましくは２０分〜１２０分程度行う。
【００１４】
抽出に使用する水溶性溶媒としては、特に制限はされないが、水、低級アルコール、またはこれらの混合物を挙げることができる。低級アルコールとしては、メタノール、エタノール、プロパノール及びイソプロピルアルコール、ブタノール等の炭素数１〜４の低級アルコールを例示することができる。低級アルコールとして好ましくはエタノールを挙げることができる。水溶性溶媒として好ましくは、含水低級アルコール（特に含水エタノール）、又は水である。尚、含水低級アルコールを溶媒として使用する場合、それに含まれる低級アルコール量は８０容量％以下であることが好ましい。
【００１５】
抽出に使用する水溶性溶媒は酸性に調整してもよい。特に制限されないが、水溶性溶媒のｐＨ範囲は、好ましくはｐＨ１〜５程度の範囲である。水溶性溶媒のｐＨを、かかる範囲になるように調整するため、通常、無機酸や有機酸などの適当な酸性物質を用いることができる。
【００１６】
酸性物質として、具体的には、塩酸、硫酸、硝酸などの無機酸；並びにメタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、（以上、スルホン酸）、ギ酸、酢酸、（以上、カルボン酸）などの有機酸を挙げることができる。好ましくはスルホ基を有する酸であり、中でも好ましくは硫酸である。なお、水溶性溶媒における酸の規定度は、水溶性溶媒が上記ｐＨ範囲になるような範囲であれば特に制限されないものの、好ましくは０．０１〜０．５Ｎの範囲、より好ましくは０．０３〜０．５Ｎの範囲である。
【００１７】
本発明の効果を奏することを限度として、得られた黒大豆種皮抽出物を必要に応じて、さらに濾過、共沈又は遠心分離による固形物の除去、抽出処理、吸着処理等の精製処理を行ってもよい。
【００１８】
得られた黒大豆種皮抽出物は、必要であれば中和、更に希釈或いは濃縮により適当な濃度とした上で、濾過等により不溶物を除去し、凍結乾燥や噴霧乾燥、低温乾燥などの常法に従って粉末化してもよい。
【００１９】
以上の如くして調製される黒大豆種皮抽出物から、２価の鉄イオンを含む加熱処理物を調製するにあたっては、黒大豆種皮抽出物を酸性アルコール中で分散又は溶解させ、２価の鉄イオン存在下で加熱する。その際の酸性アルコールの用量に特に制限は無いものの、好ましくは黒大豆種皮抽出物の重量に対して１０〜１０００倍量程度である。
【００２０】
使用する溶媒は酸性に調整する。酸として、具体的には、塩酸、硫酸、硝酸、などの無機酸；並びにメタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸（以上、スルホン酸）、ギ酸、酢酸（以上、カルボン酸）などの有機酸を挙げることができる。中でも好ましくは塩酸である。尚、溶媒における塩酸の濃度は特に制限されないものの、その後の中和を鑑み、好ましくは０．１％以上１０％以下である。
【００２１】
使用するアルコールとしては低級アルコール類、多価アルコール類などが挙げられ、上述の酸を混合して用いることができる。具体的には低級アルコール類としては、メタノール、エタノール、プロパノールなど、多価アルコール類としては、エチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリンなどが挙げられる。
本発明においては、なかでも低級アルコールが好適に用いられ、好ましくはメタノール又はエタノールであり、食品への使用を鑑み、より好ましくはエタノールである。尚、低級アルコールを溶媒として使用する場合、濃度は特に制限されないものの１０％以上、好ましくは５０％以上である。
【００２２】
添加する２価の鉄イオンとしては硫酸鉄（ＩＩ）や硫酸鉄（ＩＩ）アンモニウム等が挙げられるが、食品への使用を鑑み、好ましくは硫酸鉄（ＩＩ）である。使用する際の濃度は特に制限されないものの、経口の場合は鉄の過剰な摂取を防ぐためにも０．０１〜１％程度であることが好ましい。
【００２３】
加熱温度は、常圧下で５０〜１００℃の範囲、好ましくは８０〜１００℃程度である。また加熱時間に特に制限はないが、加熱時間が長すぎる場合、抗酸化作用の低下を引き起こす可能性があるため、３０分以上６時間以下が好ましい。
【００２４】
上記加熱処理により得られた生成物は、必要に応じて希釈或いは濃縮により適当な濃度とした上で、濾過等により不溶物を除去し、凍結乾燥や噴霧乾燥、低温乾燥などの常法に従って粉末化してもよい。
【００２５】
（Ｂ）黒大豆種皮を用いる場合
黒大豆種皮から２価の鉄イオンを含む加熱処理物を調製するにあたっては、黒大豆種皮を酸性アルコール中で分散し、２価の鉄イオン存在下で加熱する。その際の酸性アルコールの用量に特に制限は無いものの、好ましくは黒大豆種皮の重量に対して１０〜１０００倍量程度である。
【００２６】
使用する黒大豆の種類、黒大豆種皮の取得方法、酸性アルコールの調製方法、鉄イオンの種類、加熱条件（温度や時間）、加熱処理物の調製方法は、上記（А）で説明した通りであり、本欄（Ｂ）において援用することができる。
【００２７】
上記（Ａ）又は（Ｂ）で調製した加熱処理物は、経口投与形態であれば、その形態を特に問わず、本発明の抗酸化剤として使用することができる。また、経口投与（経口摂取）形態を有するものである限り、その用途の別（医薬品、医薬部外品、飲食物［特定保健用食品や栄養機能性食品などの保健機能食品やサプリメントを含む］）は特に制限されるものではない。
【００２８】
経口投与形態としては、液剤（エキス形態やシロップを含む）又はゼリー剤の形態に調製したもの；上記加熱処理により得られた生成物を常法により粉末状又は顆粒状に製剤化した散剤、細粒剤、又は顆粒剤；液剤や散剤又は顆粒剤をカプセルに充填したカプセル剤（硬質カプセル剤、軟質カプセル剤）；又は粉末又は顆粒をさらに打錠して錠剤形態としたものなどを挙げることができる（固形製剤）
【００２９】
本発明の抗酸化剤は、上記黒大豆種皮抽出物と薬学的に又は食品として許容される従来公知の可食性の担体、賦形剤等を組み合わせて各種剤型（経口投与形態）に調整することもできる。
【００３０】
（ＩＩ）抗酸化作用を有する経口組成物用添加剤
本発明の抗酸化作用を有する経口組成物用添加剤は、黒大豆種皮又は黒大豆種皮抽出物に２価の鉄イオンを加えて酸性アルコール中で加熱処理することにより得られる生成物を有効成分とすることを特徴とする。
【００３１】
本発明の当該添加剤は、その有効成分である黒大豆種皮又は黒大豆種皮抽出物を、２価の鉄イオン存在下で酸性アルコール中で加熱処理することにより得られる生成物によって、対象とする経口組成物に抗酸化作用を付与するために用いられる添加剤である。また、本発明の添加剤は、抗酸化作用を有する経口組成物に対して、その作用をさらに強化するためにも用いることができる。
【００３２】
ここで、本発明が対象とする経口組成物には、人に対して経口的に投与する組成物又は人が摂取する組成物、具体的には経口医薬品組成物、経口医薬部外品組成物、及び食品組成物（飲料を含む。以下、同じ）が含まれる。好ましくは食品組成物である。
【００３３】
本発明の添加剤の原料として使用する黒大豆の種類、黒大豆種皮の取得方法、黒大豆種皮抽出物の調製方法、酸性アルコールの調製方法、鉄イオンの種類、加熱条件（温度や時間）、黒大豆種皮抽出物の加熱処理物の調製方法は、上記（Ｉ）で説明した通りであり、本欄（ＩＩ）において援用することができる。
【００３４】
本発明の添加剤は、黒大豆種皮又は黒大豆種皮抽出物を２価の鉄イオン存在下で酸性アルコール中で加熱処理することによって得られる生成物そのものであってもよいし、また薬学的にまた食品として許容される従来公知の可食性の担体、賦形剤等を組み合わせて調製されたものであってもよい。本発明の添加剤は、上記経口薬品、経口医薬部外品、及び／又は飲食物に添加配合して、抗酸化作用を有する組成物（経口組成物）を調製するために用いられる。このため、その限りにおいて、その形態を特に問わず、液剤（エキス形態やシロップを含む）やゼリー剤の形態を有していても、また当該液剤を常法により粉末状又は顆粒状に製剤化した散剤、細粒剤、顆粒剤；液剤や散剤又は顆粒剤をカプセルに充填したカプセル剤（硬質カプセル剤、軟質カプセル剤）、又は粉末又は顆粒をさらに打錠して錠剤形態としたものを使用してもよい（固形製剤）。
【００３５】
経口医薬品、経口医薬部外品、及び／又は飲食物に添加配合して用いられる本発明の添加剤の量は、本発明の添加剤を配合することで調製される抗酸化作用を有する経口組成物の一日投与（摂取）を、任意に定めることができる。
【００３６】
なお、本発明の添加剤は、上記経口組成物（経口医薬品、経口医薬部外品、及び／又は飲食物）を調製する工程で他の原料とともに原料の一つとして使用されるか、或いは経口組成物を服用（投与又は摂取）する際に、当該経口組成物に用時配合して使用することができる。
【実施例】
【００３７】
以下に実験例を挙げて、本発明をさらに詳しく説明する。尚、抗酸化作用についてはＰОＶで示したが、本発明の範囲がこれのみに限定されるものではない。
【００３８】
実験例  黒大豆種皮抽出物の、２価の鉄イオンを含む加熱処理物の抗酸化作用の評価
具体的な実験の概要を以下に示す。
【００３９】
（１）  試料の調製
（ａ）黒大豆種皮抽出物の調製
黒大豆種皮抽出物は、下記の方法で調製した。
(1)  黒大豆種皮（生）５００ｇを抽出溶媒として４０％濃度のエタノール水溶液１５Ｌに浸漬し、４０℃に加温しながら９０分間攪拌抽出した。
(2) 抽出後、黒大豆種皮と液とを固液分離し、液を回収した。
(3) 回収した液を遠心分離し、固液分離では取り除けない浮遊固形物を除去した。
(4) 得られた抽出液を減圧下で加熱することにより蒸発させ、濃縮した。
(5) 得られた濃縮液に、賦形剤としてデキストリンを添加した。
(6) これを加熱殺菌後、乾燥して粉末（合計１１９．８ｇ、黒大豆種皮抽出物３１．９ｇ含有）にした。
【００４０】
（ｂ）黒大豆種皮抽出物の２価の鉄イオンを含む加熱処理物の調製
上記の抽出物１０００ｍｇを０．５％塩酸／エタノール１Ｌに溶解し、この溶液に２価の鉄イオンとして２％硫酸鉄（ＩＩ）水溶液又は２％硫酸鉄（ＩＩ）アンモニウム６水和物水溶液を３０ｍｌ添加した。よく攪拌して混合させた後、１００℃で２時間加熱した。さらに、濃縮して凍結乾燥することにより粉末状にしたものを試料（実施例１、２）とした。
また比較対照として、黒大豆種皮抽出物の加熱処理物を比較例１、黒大豆種皮抽出物と硫酸鉄（ＩＩ）の混合物を比較例２、無処理の黒大豆種皮抽出物を比較例３、硫酸鉄（ＩＩ）を酸性アルコール中で加熱したものを比較例４とした。
【００４１】
（２）実験方法
本試験は、リノール酸のPOV測定による過酸化脂質抑制法により抗酸化作用を評価した。
【００４２】
５００ｍｇのリノール酸を含むエタノール２０ｍｌに、予めｐＨ７．０に調整した０．１Ｍリン酸緩衝液を２６ｍｌ加えた。ここに実施例１〜２、比較例１〜４の各試料を０．５％塩酸メタノール溶液に溶解したものを２ｍｌを添加した。０．０５％塩化マグネシウム水溶液２ｍｌを添加し、４５℃の暗所で７日間インキュベートした。インキュベート終了後のサンプルに、６Ｎ塩酸２ｍｌを加え、クロロホルム１０ｍｌで２回抽出し、クロロホルム層を得た。得られたクロロホルム層１０ｍｌに酢酸５ｍｌ、飽和ヨウ化カリウム水溶液１ｍｌを加えて暗所で５分間放置した。１％でんぷん液を加え、０．０１Ｍチオ硫酸ナトリウム液で滴定し、色が消えた時点を終点とした。空試験区として被験試料を加えていないサンプルを用意し、インキュベートせずにＰＯＶを分析した。ＰＯＶは以下の式により算出した。結果は図１に示す。
ＰＯＶ（ｍｅｑ／ｋｇ）＝（Ａ−Ｂ）×Ｆ×１０／油脂試料量
Ａ：滴定量（ｍｌ）
Ｂ：空試験区の滴定量（ｍｌ）
Ｆ：チオ硫酸ナトリウム力価
【００４３】
（３）  実験結果
図１に実施例１〜２及び比較例１〜４のＰＯＶ分析結果を示す。
【００４４】
本発明の抗酸化剤の抗酸化性について、リノール酸の酸化による過酸化脂質生成量をＰОＶ法により測定した。ＰＯＶの値は数字の小さいものほど酸化が抑制されていることを示す。
図１が示すように、実施例１と２では、比較例１と比較して、明らかにリノール酸の酸化による過酸化脂質生成抑制効果が優れていることがわかる。つまり、黒大豆種皮抽出物を２価の鉄イオン存在下で加熱処理することにより、高い抗酸化力を有する生成物を得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】黒大豆種皮抽出物の２価の鉄イオンを含む加熱処理物の抗酸化作用
【図１】
0006538395.tif 000002