(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
0006487333.tif 000028
（上式中、
ｍは、０又は１であり；
ｎは、０又は１であり；
Ｒ１は、
直鎖状又は分枝状Ｃ１−Ｃ５アルキル；
フッ素で置換されている直鎖状又は分枝状Ｃ１−Ｃ５アルキル；
Ｃ３−Ｃ６飽和もしくは不飽和のシクロアルキルで置換されている直鎖状又は分枝状Ｃ１−Ｃ３アルキル；
Ｃ３−Ｃ６飽和もしくは不飽和のシクロアルキル；
ＣＮ；
ＣＨ２ＣＮ；
ＣＨ２Ｎ３；
フェニル；
Ｃｌ又はＦで置換されているフェニル；
ベンジル；
Ｃｌ又はＦで置換されているベンジル；
−Ｏ−フェニル；及び
チオフェニル；
からなる群から選択され；
Ｒ２は、
フェニル；
任意選択的にＣｌ又はＦで置換されているベンジル；
ナフタレニル；
直鎖状又は分枝状Ｃ１−Ｃ４アルキルで置換されているフェニル；
フッ素で置換されている直鎖状又は分枝状Ｃ１−Ｃ４アルキルで置換されているフェニル；
ＯＣＨ３、ＯＣＦ３、Ｃｌ、Ｆ、ＣＨ３ＳＯ２及びＣＦ３から選択される１以上の置換基で置換されているフェニル；
Ｏ−ＣＨ２−Ｏ基で置換されている二つの連続炭素原子を有するフェニル；
シクロプロピル；
シクロブチル；
シクロペンチル；
シクロヘキシル；並びに
Ｓ、Ｎ及びＯから選択される１以上の複素原子を含む、五又は六員複素環
からなる群から選択される）
の化合物。
【請求項２】
ｍが１であり、かつｎが１である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が、−ＣＨ２ＣＦ３、−ＣＦ２ＣＦ３、−（ＣＨ２）２ＣＦ３、−ＣＨ２−イソプロピル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、−ＣＨ２−シクロプロピル、−ＣＨ２−シクロブチル、−ＣＨ２−シクロペンチル、Ｃｌ又はＦによって置換されているフェニル、ベンジル、Ｃｌ又はＦによって置換されているベンジル、−Ｏ−フェニル及びチオフェニルから選択される、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１が−ＣＨ２ＣＦ３又は−（ＣＨ２）２ＣＦ３である、請求項１から３の何れか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２が、フェニル、あるいはＯＣＨ３、ＯＣＦ３、Ｃｌ、Ｆ又はＣＦ３によりオルト位で置換されているフェニルである、請求項１から４の何れか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２が、Ｓ、Ｎ及びＯから選択される１以上の複素原子を含む五又は六員複素環であり、１の複素原子が、式（Ｉ）の環
0006487333.tif 000029
の窒素原子に対してα位の炭素原子に結合する複素環原子に隣接する、請求項１から４の何れか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ２が、
0006487333.tif 000030
であり、矢印が、式（Ｉ）の環
0006487333.tif 000031
の窒素原子に対してα位の炭素原子との結合を示す、請求項１から４の何れか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ２が、
0006487333.tif 000032
から選択され、結合が式（Ｉ）の環
0006487333.tif 000033
の窒素原子に対してα位の炭素原子との結合を示す、請求項１から４の何れか一項に記載の化合物。
【請求項９】
0006487333.tif 000034
0006487333.tif 000035
0006487333.tif 000036
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
医薬として使用するための、請求項１から９の何れか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
細菌及びマイコバクテリア感染症の治療に使用するための、請求項１から９の何れか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
結核、ハンセン病及び非定型マイコバクテリア感染症の治療に使用するための、請求項１から９の何れか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
活性成分として請求項１から９の何れか一項に記載の化合物と薬学的に許容される賦形剤を含む、ＥｔｈＡ酵素経路を介して活性化可能な抗生物質の活性を増強するための薬学的組成物。
【請求項１４】
活性成分として請求項１から９の何れか一項に記載の化合物と薬学的に許容される賦形剤を含む、エチオナミド、プロチオナミド、イソキシル及びチアセタゾンから選択される抗生物質の活性を増強するための薬学的組成物。
【請求項１５】
活性成分として、請求項１から９の何れか一項に記載の化合物、薬学的に許容される賦形剤、及びＥｔｈＡ酵素経路を介して活性化可能な抗生物質を含む薬学的組成物。
【請求項１６】
活性成分として、請求項１から９の何れか一項に記載の化合物、薬学的に許容される賦形剤、及びエチオナミド、プロチオナミド、イソキシル及びチアセタゾンから選択される抗生物質を含む薬学的組成物。
【請求項１７】
エチオナミド、プロチオナミド、イソキシル及びチアセタゾンから選択される抗生物質を含む、請求項１から９の何れか一項に記載の化合物と組み合わせて結核、ハンセン病又は非定型マイコバクテリア感染症を治療するための医薬。
【請求項１８】
請求項１から９の何れか一項に記載の化合物を含む、エチオナミド、プロチオナミド、イソキシル及びチアセタゾンから選択される抗生物質と組み合わせて結核、ハンセン病又は非定型マイコバクテリア感染症を治療するための医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、例えば結核、ハンセン病及び非定型マイコバクテリア感染症のような、細菌及びマイコバクテリア感染症の治療に使用されるスピロイソオキサゾリン型化合物に関する。
本発明は、また、医薬として、特に例えば結核、ハンセン病及び非定型マイコバクテリア感染症のような細菌及びマイコバクテリア感染症の治療における医薬として使用することができる新規化合物に関する。
本発明は、また、活性成分として上述の化合物の少なくとも一つと、場合によっては細菌及び／又はマイコバクテリアに対して活性な抗生物質、特にＥｔｈＡ経路を介して活性化可能な抗生物質を含有する薬学的組成物に関する。
【０００２】
本発明は、また、上述の化合物の少なくとも一つと、細菌及び／又はマイコバクテリアに対して活性な少なくとも一つの抗生物質、特にＥｔｈＡ経路を介して活性化可能な抗生物質を、結核、ハンセン病又は一般的なマイコバクテリア感染症の治療において、同時に、別々に、又は時間的に広がりをもって使用される併用品として含む製品（キット）に関する。
【背景技術】
【０００３】
世界中で毎年２００万の人々が結核で死亡する。エイズの流行や抗生物質多剤耐性株の出現がこの病気の影響の深刻化をもたらしており、世界保健機関は、危険性が増している世界的流行病の原因であり、世界的な規模での健康の異常事態としてとらえている。
ますます増加する結核菌（マイコバクテリウム・ツベルクローシス）株は、イソニアジド（ＩＮＨ）やリファンピシン（ＲＩＦ）等の第一選択抗生物質に対して多耐性であることが今や特徴となっている。そこで、これらの抗生物質は、株が耐性ではないが、低い治療指数（活性成分の治療指数は、毒性用量に対する治療用量の比である）という欠点があるエチオナミド（ＥＴＨ）等の第二選択抗生物質と置き換えられなければならない。
【０００４】
特定の化合物に組み合わせることによってエチオナミド（ＥＴＨ）の活性を増大させることからなる一方策は既に検討されている。実際、ＥＴＨはＥｔｈＡ酵素によって治療的に活性な形にインビボ（in vivo）で変換されるプロドラッグである（文献“Activation of the prodrug ethionamide is regulated in mycobacteria”, A.R. Baulardら, Journal of Biological Chemistry, 2000, 275, 28326-28331を参照）。ＥＴＨに対して観察される耐性は、結核菌の転写抑制因子ＥｔｈＲがＥｔｈＡ酵素の発現を制御し、治療的に活性な物質へのＥＴＨの転換を制限するという事実から生じている。
【発明の概要】
【０００５】
本発明の一つの目的は、特にマイコバクテリアに対して活性な抗生物質、特にマイコバクテリアに対して活性でＥｔｈＡ経路を介して活性化可能な抗生物質、例えばチオアミドファミリーの全抗生物質、特にエチオナミド及びプロチオナミドの活性を増強する可能性が高い新規化合物を提案することである。
本発明の他の目的は、細菌及び／又はマイコバクテリアに対して活性な抗生物質、特にマイコバクテリアに対して活性でＥｔｈＡ経路を介して活性化可能な抗生物質と組み合わせて、同一の抗生物質の投薬量で、より高い効力を達成することを可能にし、あるいは所定の効力を達成しながら上述の抗生物質投薬量を低減させることを可能にする、先に述べられたような化合物を提案することである。
本発明の他の目的は、製造が簡単で安価である先に述べられたような化合物を提案することである。
本発明の他の目的は、生体液に満足できる程度に可溶性である先に述べられたような化合物を提案することである。
本発明の他の目的は、特に経口的に、活性であり、及び／又は引き起こす副作用がより少ない、先に述べられたような化合物を提供することである。
【０００６】
上述の目的の少なくとも一つを達成するために、本発明は、一般式（Ｉ）：
0006487333.tif 000002
（上式中、
ｍ＝０又は１；
ｎ＝０又は１；
Ｒ１は、次の群：
直鎖状又は分枝状Ｃ１−Ｃ５アルキル鎖；
直鎖状又は分枝状で置換されたＣ１−Ｃ５アルキル鎖；
特に少なくとも一つのフッ素原子（Ｆ）で置換されたもの、
特に少なくとも一つのフッ素原子（Ｆ）によって又はＣ３−Ｃ６飽和もしくは不飽和の環式基で置換された直鎖状又は分枝状Ｃ１−Ｃ３アルキル鎖；
Ｃ３−Ｃ６飽和もしくは不飽和の環式基；及び
ＣＮ、ＣＨ２ＣＮ、ＣＨ２Ｎ３基
から選択される基を表し；
Ｒ２は、次の群：
フェニル；
置換されていてもよいベンジル、特にＣｌ又はＦ原子で置換されたベンジル；
ナフタレニル；
置換フェニル、特に少なくとも一つの直鎖状又は分枝状Ｃ１−Ｃ４アルキル鎖で置換されたフェニル、
少なくとも一つの直鎖状又は分枝状の置換Ｃ１−Ｃ４アルキル鎖によって置換されたフェニル、特に少なくとも一つのフッ素原子（Ｆ）で置換されたもの、
ＯＣＨ３、ＯＣＦ３、Ｃｌ、Ｆ、ＣＨ３ＳＯ２及びＣＦ３から選択される少なくとも一つの基で置換されたフェニル；
同一のＯ−ＣＨ２−Ｏ基で置換された二つの連続炭素原子を有するフェニル基；
シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル又はシクロヘキシル基；及び
Ｓ、Ｎ及びＯから選択される少なくとも１個の原子を環中に含む５又は６の頂点を有する飽和又は不飽和の複素環、特にＳ、Ｎ及びＯから選択される少なくとも１個の原子を環中に含む５又は６頂点を有する芳香族複素環
から選択される）
の化合物をこのように提案する。
【０００７】
本発明によれば、ｍ及びｎは互いに同一でも異なっていてもよい。有利には、ｍ＝ｎ＝１である。エチオナミドと組み合わせたこのような成分は、マイコバクテリア、特に結核菌に特に活性があることが証明されている。
Ｒ１は、次の基から選択される基を表し得る：
−ＣＨ２ＣＦ３、−ＣＦ２ＣＦ３、−（ＣＨ２）２ＣＦ３、−ＣＨ２−イソプロピル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、−ＣＨ２−シクロプロピル、−ＣＨ２−シクロブチル、−ＣＨ２−シクロペンチル、置換されていてもよいフェニル、特に塩素（Ｃｌ）又はフッ素（Ｆ）原子によって置換されたフェニル、置換されていてもよいベンジル、特にＣｌ又はＦ原子によって置換されたベンジル、−Ｏ−フェニル及びチオフェニル。
【０００８】
前述の置換Ｒ１基は、一置換又は多置換であり得る。一実施態様によれば、上述の基は、一置換である；フェニル又はベンジル基はその場合Ｃｌ原子によってのみ又はＦ原子によってのみ置換される。フェニル又はベンジル基が一置換であるか多置換であるかに関わらず、このＣｌ又はＦ原子の位置は本発明では限定されない。従って、Ｃｌ又はＦ原子は、一般式（Ｉ）を有する分子の残りの部分に結合しているベンゼン環の炭素に対して、あるいはベンジル基の場合には、一般式（Ｉ）を有する分子の残りの部分に結合しているＣＨ２基に結合しているベンゼン環の炭素に対して、オルト、メタ又はパラ位に位置し得る。
【０００９】
有利には、Ｒ１は−ＣＨ２ＣＦ３及び−（ＣＨ２）２ＣＦ３から選択される。このような２種の基は本発明の化合物に増加した効果をもたらす。特にＲ１＝ＣＨ２ＣＦ３である場合、本発明の化合物はマイコバクテリア、特に結核菌に対するエチオナミドの活性を増強するのに特に効果的であると思われる。
【００１０】
一実施態様によれば、Ｒ２は、次の基から選択される：フェニル基、ＯＣＨ３、ＯＣＦ３、Ｃｌ、Ｆ又はＣＦ３によりオルト置換されたフェニル基、特にＯＣＨ３又はＣｌでオルト位が置換されたもの。有利には、フェニル基は、ＯＣＨ３、ＯＣＦ３、Ｃｌ、Ｆ又はＣＦ３から選択される基によってオルト位で一置換され、特にＯＣＨ３又はＣｌでオルト位が一置換される。このような基は、本発明の化合物のエチオナミドの増強活性を改善する。置換基のオルト位は本発明の化合物のエチオナミドの増強活性を改善する。
【００１１】
他の実施態様によれば、Ｒ２は、５又は６個の原子を有する芳香族複素環であって、本発明の一般式（Ｉ）を有する化合物の環
0006487333.tif 000003
の窒素に対してα位に結合した複素環原子に隣接するその少なくとも一つの原子が硫黄原子、酸素原子又は窒素原子であるものから選択される。本発明によれば、５又は６個の原子を有する複素環は、よってＳ、Ｎ及びＯ原子から選択される二つの原子を含み得る。この場合、Ｓ、Ｎ及びＯから選択される二つの原子は、式（Ｉ）中の環
0006487333.tif 000004
の窒素のα位の炭素環に結合した複素環原子の何れの側にも位置され得、後者に直接隣接し得る。
上述の環に結合した複素環原子は、有利には炭素原子である。
【００１２】
有利には、Ｒ２は、次の基から選択される：
0006487333.tif 000005
このような化合物は、マイコバクテリア、特に結核菌に抗するためにエチオナミドとの組み合わせで特に効果的である。
【００１３】
他の実施態様によれば、Ｒ２は、次の基から選択される：
0006487333.tif 000006
【００１４】
本発明の化合物は、有利には次の化合物から選択される：
0006487333.tif 000007
0006487333.tif 000008
0006487333.tif 000009
【００１５】
本発明は、また、医薬としての使用のため、特に細菌及びマイコバクテリア感染症の治療、特に結核、ハンセン病又は非定型マイコバクテリア感染症の治療におけるその使用のための上記化合物にも関する。
本発明は、また、活性成分として、先に述べた一般式（Ｉ）の少なくとも一つの化合物と一種の薬学的に許容される賦形剤を含有する薬学的組成物に関する。
【００１６】
本発明に係る薬学的組成物において、活性成分（類）として使用される化合物又は化合物群は、およそ０．３ｍｇから１ｇの間に含まれる単位用量の投与を可能にする量で使用され得る。本発明に係る薬学的組成物中において、マイコバクテリアに対して活性な抗生物質又は抗生物質群は、存在する場合、世界保健機関（ＷＨＯ、結核の治療：国家プログラムのためのガイドライン２００３；ＷＨＯ／ＣＤＳ／ＴＢ２００３．３１３．）、国立又は非政府保健機関又は適格な製薬研究所によって通常推奨される用量に等しいか又はそれよりも少ない単位用量の投与を可能にする量で有利には使用される。
【００１７】
当業者は、薬学的組成物の投与経路に応じて、一つ又は数種の薬学的に許容される賦形剤を選択することができる。当業者は、勿論、使用される賦形剤が、本発明に係る組成物に付与される固有の性質と適合性があるようにするであろう。更に、医薬又は薬学的組成物の形態（例えば溶液、懸濁液、エマルジョン、錠剤、カプセル剤、坐剤等々）は選択される投与経路に依存するであろう。
【００１８】
従って、本発明の意味において、医薬又は薬学的組成物は、任意の適切な経路によって、例えば経口、肛門、局所（例えば、外用）、全身、静脈内、筋肉内又は粘膜経路によって、あるいは他にパッチを使用することによって、あるいは他にリポソーム、マイクロパーティクル、マイクロカプセルにカプセル化された形態で、あるいはこれらに固定されて、ナノ粒子と類似物に結合されて、投与され得る。経口経路による投与に適した賦形剤の非限定的な例として、特にタルク、ラクトース、デンプンとその誘導体、セルロースとその誘導体、ポリエチレングリコール、アクリル酸ポリマー、ゼラチン、ステアリン酸マグネシウム、動物、植物又は合成脂肪、パラフィン誘導体、グリコール類、安定剤、保存料、抗酸化剤、湿潤剤、固結防止剤、分散剤、乳化剤、味覚修飾剤、浸透剤、可溶化剤等々を挙げることができる。医薬及び薬学的組成物のための製剤化及び投与技術は、当該技術分野でよく知られており、当業者は、特にＲｅｍｉｎｇｔｏｎのＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（最新版）を参照することができる。
【００１９】
本発明は、また、細菌感染症、好ましくはマイコバクテリア感染症、より詳細には結核、ハンセン病又は非定型マイコバクテリア感染症の予防及び／又は治療を意図する医薬の製造のために本発明に係る少なくとも一つの化合物を使用することを目的とする。
有利には、薬学的組成物は、活性成分として、細菌及び／又はマイコバクテリアに対して活性な少なくとも一つの抗生物質、特にＥｔｈＡ経路を介して活性化可能な抗生物質、特にＥｔｈＡ経路を介して活性化可能な抗生物質の例であるエチオナミド、プロチオナミド、イソキシル及びチオアセタゾンを更に含む。しかし、本発明は、これらの抗生物質に限定されるものではない。
【００２０】
本発明は、また、式（Ｉ）の少なくとも一つの化合物と、特に細菌及び／又はマイコバクテリアに対して活性な少なくとも一つの抗生物質、特にＥｔｈＡ経路を介して活性化可能な少なくとも一つの抗生物質を、結核、ハンセン病又は一般的マイコバクテリア感染症の治療において、同時に、別個に又は時間をあけて分けて使用される併用品として含むキット又は製品に関する。
【００２１】
定義
本発明の意味において、チオフェニル基は、４個の炭素原子と１個の硫黄原子を含む環状基として定義される。
ある基が置換されることが示されていない場合、後者は本発明の意味において、置換されない。
置換基の位置が示されていない場合、置換フェニルという用語は、少なくとも一つの水素原子が、示されたような基又は原子で置換されている任意のフェニル基に関する。好ましくは、Ｒ２では、フェニル基は一置換、好ましくはＯＣＨ３基、塩素原子又はフッ素原子による一置換である。しかし、少なくとも二つの置換基を含み得る。
フェニルが担持する置換基のオルト位とは、本発明の化合物の環
0006487333.tif 000010
の窒素に対してα位の炭素原子に結合しているフェニル基の炭素原子を意味する。
【００２２】
５又は６個の原子を有する複素環は飽和もしくは不飽和であり得る。それらは一つ又は数個の二重結合を含み得る。それらはまた芳香族環であり得る。従って、本発明の意味において、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される少なくとも一つの原子を環中に含む５又は６頂点を有する芳香族複素環との用語は、環中に少なくとも１個の窒素原子と環中にヘテロ原子として１個だけ又は数個のＮ原子を含む５又は６頂点の芳香族複素環、環中に少なくとも１個のＯ原子と環中にヘテロ原子として１個だけ又は数個のＯ原子を含む５又は６頂点、特に５頂点の芳香族複素環、環中に少なくとも１個のＳ原子と環中にヘテロ原子として１個だけ又は数個のＳ原子を含む５又は６頂点の芳香族複素環、環中に少なくとも１個の窒素原子と環中にヘテロ原子として少なくとも１個のＯ又はＳ原子を含む５又は６頂点、特に５頂点の芳香族複素環を特に含む。特に、Ｓ、Ｎ及びＯから選択される二つの異なる又は同一のヘテロ原子を含む５又は６の頂点の芳香族複素環は、本発明に係る５又は６の頂点の芳香族複素環に属する。
【００２３】
非定型マイコバクテリア感染は、結核菌以外の少なくとも一つのマイコバクテリアによって引き起こされるマイコバクテリア感染症、特にマイコバクテリウム・カンサシ（M. Kansasii）に関与するマイコバクテリア感染症としてここでは定義される。
本発明によれば、「治療」という用語は、上述の感染症の治癒的処置及び／又は予防的処置を指す。「治療」という用語は、患者の状態のあらゆる改善、特に患者の少なくとも一つの感染部位に存在する細菌の数の何らかの削減を含む。
本発明において、ＥｔｈＡ経路を介して活性化可能な抗生物質とは、ＥｔｈＡ酵素と少なくともインビトロ（in vitro）で反応して抗菌性を有する物質を生成する任意の物質と定義される。当業者は、例えば次の刊行物に記載された方法を適用することによって、ある抗生物質が、ＥｔｈＡ経路によって活性化可能であるかどうかを決定することができる：“Activation of the prodrug ethionamide is regulated in mycobacteria” A.R. Baulardら, Journal of Biological Chemistry, 2000, 275, 28326-28331。
【００２４】
本発明の意味において、細菌及び／又はマイコバクテリアに対して活性な抗生物質は、細菌及び／又はマイコバクテリウム、特に結核菌の増殖を少なくともインビトロで制限するか又は減少させることができる任意の薬剤として定義される。マイコバクテリウム、特に結核菌を少なくともインビトロで破壊することができる薬剤はまた本発明の意味においてマイコバクテリアに対して活性な抗生物質である。マイコバクテリアに対して活性で、ＥｔｈＡ酵素経路を介して活性化可能な抗生物質のなかで、エチオナミド、プロチオナミド、イソキシル、チアセタゾン及びこれらの抗生物質の少なくとも２種の混合物を挙げることができる。
本発明の意味における抗生物質はまた上記のもの以外の他の生理活性化経路を介して活性化可能な抗生物質であり得る。
【実施例】
【００２５】
実験セクション
合成法
核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）１Ｈ及び１３Ｃを３００ＭＨｚでＢｒｕｋｅｒＴＭのＤＰＸ３００分光計で、周囲温度で実施した。ケミカルシフトは百万分率（ｐｐｍ）で表される。帰属は、１Ｈ及び１３Ｃ一次元（１Ｄ）又は二次元（２Ｄ）ＨＳＱＣ−ＣＯＳＹ実験を用いて実施された。質量スペクトルは、三連四重極型システム（Ｖａｒｉａｎ １２００ｗｓ）を備えたＬＣＭＳ質量分析計あるいはＬＣＭＳ Ｗａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＺＱ２０００システムで実施された。市販の試薬及び溶媒は、後で精製することなく使用された。
【００２６】
化合物１から３の合成法のフロー図
0006487333.tif 000011
【００２７】
中間生成物１、２及び３の合成。  カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１．５ｍｍｏｌ）を、無水エーテル（２．０ｍＬ）中のトリフェニルメチルホスホニウムヨージド（１．５ｍｍｏｌ）のアルゴン下の懸濁液に添加する。混合物を１時間還流させると、次いで黄色に変わる。ケトン化合物をその後、分けて添加する。周囲温度での３０分の撹拌後、ＴＬＣ分析は反応が完了したことを示す。次いで、反応媒体を、蒸留水（１ｍＬ）を使用して加水分解し、エーテルを使用して２回抽出する。合わせた有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮乾固させる。得られた残留物をシリカゲルカラム（シクロヘキサン／酢酸エチル溶出液）で精製して、予想した生成物を無色の油の形態で得る。
【００２８】
１−Ｎ−Ｂｏｃ−４−メチレンピペリジン（１）。1H NMR (CDCl3, 300 MHz) d(ppm) 1.47 (s, 9H, CH3 Boc), 2.18 (t, 4H, J=5.9 Hz, CH2), 3.42 (t, 4H, J=5.8 Hz, CH2N), 4.74 (s, 2H, =CH2)。収率70%。[(M-tBu),H]+ 142.1。純度>95%。
１−Ｎ−Ｂｏｃ−３−メチレンピロリジン（２）。1H NMR (CDCl3, 300 MHz) d (ppm) 1.48 (s, 9H, CH3 Boc), 2.55 (t, 2H, J=7.2 Hz, CH2), 3.48 (m, 2H, CH2), 3.93 (m, 2H, CH2), 4.98 (m, 2H, =CH2)。収率83%。[(M-tBu),H]+ 128.1。純度>95%。
１−Ｎ−Ｂｏｃ−３−メチレンアゼチジン（３）。1H NMR (CDCl3, 300 MHz) d (ppm) 1.46 (s, 9H CH3 Boc), 4.49 (t, 4H, J=2.7 Hz, CH2), 4.99 (q, 2H, J=2.4 Hz, CH2)。収率69%。[(M-tBu),H]+ 114.3。純度>95%。 
【００２９】
化合物４、５及び１０の合成法のフロー図
0006487333.tif 000012
化合物６から９の合成法のフロー図
0006487333.tif 000013
化合物１１から５９の合成法のフロー図
0006487333.tif 000014
操作条件：（ａ）ＮＨ２ＯＨ．ＨＣｌ、ＣＨ２Ｃｌ２、ピリジン、ＲＴ；（ｂ）１３％のＮａＯＣｌ、ＣＨ２Ｃｌ２、０℃からＲＴ；（ｃ）（ｉ）１，４−ジオキサン中のＨＣｌ（４Ｍ）、（ｉｉ）Ｒ’−ＣＯ２Ｈ、ＨＯＢｔ、ＥＤＣＩ．ＨＣｌ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ；（ｄ）ＮＣＳ、ＤＭＦ、ＲＴ、（ｅ）１−Ｎ−Ｂｏｃ−４−メチレン−ピペリジン、Ｅｔ３Ｎ、ＴＨＦ、ＲＴ；（ｆ）（ｉ）１，４−ジオキサン中のＨＣｌ（４Ｍ）、（ｉｉ）ＣＦ３（ＣＨ２）２−ＣＯ２Ｈ、ＨＯＢｔ、ＥＤＣＩ．ＨＣｌ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ。
【００３０】
工程１：オキシム合成：  ヒドロキシルアミン塩酸塩（１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（８６０μＬ）及びピリジン（８０μＬ）中のアルデヒド溶液（１ｍｍｏｌ）に添加する。次いで、混合物を周囲温度で撹拌する。反応の進行と終了を薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によって追跡する。ジクロロメタンを加えた後、有機相を、蒸留水を使用して洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮乾固させる。このようにして得られたオキシムは、その後の如何なる精製も必要とせずに使用される。
【００３１】
工程２：中間生成物８ｃから２９ｃの合成プロセス。  次亜塩素酸ナトリウム（１３％の塩素溶液、３．４ｍＬ）溶液を、０℃に冷却されたＣＨ２Ｃｌ２中のオキシム溶液（１ｍｍｏｌ）及びアルケン１、２又は３（０．８ｍｍｏｌ）に加える。反応が完了するまで混合物を周囲温度で撹拌する。二相を分離した後、有機相を、１ＮのＨＣｌ（２回）、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液及びブラインを使用して逐次的に洗浄した後、減圧下で蒸発させる。必要に応じて、得られたスピロイソオキサゾリン誘導体を、分取ＨＰＬＣ又はフラッシュクロマトグラフィー（シクロヘキサン／酢酸エチル溶出液）を使用して精製する。
【００３２】
工程２’及び２”：誘導体６ｂ−６ｃ及び７ｂ−７ｃの合成プロセス。  Ｎ−クロロスクシンイミド（１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．９ｍＬ）中のオキシム溶液（１ｍｍｏｌ）に加える。周囲温度で１時間撹拌した後（ＬＣ／ＭＳコントロールが反応の終わりを示す）、ＤＭＦを減圧下で蒸発させる。得られた残留物をＣＨ２Ｃｌ２に取った後、ブラインを使用して２回洗浄する。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮乾固させる。ＴＨＦ（３２ｍＬ）中のトリエチルアミン溶液（２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３２ｍＬ）中のクロロ−オキシム及び１−Ｎ−Ｂｏｃ−４−メチレン−ピペリジン（１．３ｍｍｏｌ）の溶液に４時間かけて滴下して加える。反応媒体を周囲温度で撹拌する。このようにして生成されたトリエチルアミン塩酸塩を濾過により除去し、ＴＨＦを減圧下で蒸発させる。得られた残留物をジクロロメタンに取り、１ＮのＨＣｌ溶液及びブラインを使用して逐次洗浄する。次いで、有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮乾固させる。収集した残留物をシリカゲルカラム（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃの溶出液）で精製する。
【００３３】
工程３：Ｎ−Ｂｏｃ基の脱保護。  ジオキサン（２．２ｍＬ）中の４ＮのＨＣｌ溶液をジオキサン（４．４ｍＬ）中のＮ−Ｂｏｃ−アミン（１ｍｍｏｌ）の溶液に加える。反応媒体を周囲温度で撹拌する。反応が完了したところで（ＴＬＣが続く）、生成された沈殿物を焼結ガラス上で遠心分離し、その後の精製をすることなくカップリング工程において使用する。
【００３４】
カルボン酸とのカップリング：  ＤＭＦ中のカルボン酸（１．５ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ．ＨＣｌ（１．５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．５ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（４ｍｍｏｌ）の溶液を１５分間周囲温度で撹拌する。スピロイソオキサゾリン塩酸塩（１ｍｍｏｌ）を加える。２時間の攪拌後（ＬＣ／ＭＳが続く）に反応が完了したところで、溶媒を減圧下で蒸発させる。得られた残留物をジクロロメタンに取り、１ＮのＨＣｌ（２回）、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液及びブラインを逐次的に使用して洗浄する。次いで、有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮乾固する。次いで、化合物を、分取ＨＰＬＣを使用して精製する。
【００３５】
化合物の活性の評価
エチオナミド増強の細胞試験
使用される試験は、これらの化合物が結核菌に対するエチオナミドの殺菌活性を増強することができることを確認することを可能にする。この試験は「ハイコンテントスクリーニング」（ＨＣＳ）又は高密度コンテントスクリーニング試験である。ＨＣＳ試験は、与えられた環境において微生物（例えば細菌）の所定の表現型の特徴を研究することを可能にする細胞培養上で実施される。観察される表現型の変化は、所定の標識タンパク質の産生の増加（又は減少）から考慮中の微生物の形態の変形までの範囲でありうる。該方法は次の刊行物に記載されている：“Ethionamide Boosters: Synthesis, Biological Activity, and Structure-Activity Relationships of a Series of 1,2,4-Oxadiazole EthR Inhibitors”, M. Flipoら, Journal of Medicinal Chemistry, 2011, 54(8), 2994-3010。
【００３６】
この試験は、エチオナミド（ＥＴＨ）の活性を１０倍増強するために必要なリガンド濃度を決定することを目的とする。
ＥＴＨの活性を１０倍増強するために必要なリガンド濃度を測定するために、一定濃度のエチオナミド（そのＣＭＩ９９の１／１０に相当する０．１μｇ／ｍＬ）が選択される。リガンド濃度を変化させることにより、細菌増殖を５０％阻害するのに必要な濃度、すなわち、エチオナミドの活性を１０倍増強するために必要な濃度を決定され得る。この濃度はＥＣ５０で示される。
【００３７】
溶解度の測定
サンプルのＤＭＳＯ中の１０ｍＭの溶液４０μＬをｐＨ７．４の１．９６ｍＬのＭｅＯＨ又はＰＢＳに添加する。次いで、サンプルを室温で２４時間攪拌し、５分間遠心分離し、その後、０．４５μｍサイズのフィルターで濾過する。次いで２０μＬの各溶液を１８０μＬのＭｅＯＨに添加し、次いでＬＣ−ＭＳにより分析する。溶解度は、質量シグナルＰＢＳ／ＭｅＯＨの表面の比として決定される。
【００３８】
測定された生物学的活性
以下の表ＩからＩＩＩは、試験された本発明の化合物の化学式と上述のプロトコルに従って実験的に測定されたＥＣ５０の値をまとめたものである。
0006487333.tif 000015
0006487333.tif 000016
0006487333.tif 000017
0006487333.tif 000018
0006487333.tif 000019
0006487333.tif 000020
0006487333.tif 000021
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0006487333.tif 000023
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0006487333.tif 000025
0006487333.tif 000026
0006487333.tif 000027
測定された溶解度の例を挙げると、化合物１０（ＢＤＭ４１４２０）は、上記のプロトコルに従って測定して、１５０μＭに等しい溶解度を示す。