(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記図１に示されるＸＲＰＤパターンを有する、
0006538711.tif 000004
【化１】
0006538711.tif 000005
上記式（Ｉ）の化合物のアモルファス形状。
【請求項２】
１０℃／分の線形加熱速度において測定される、１８６．９℃の立ち上がりと１９４．５℃の立下りを有するガラス転移により特徴付けられるＤＳＣ特性を有する、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物のアモルファス形状。
【請求項３】
１０℃／分の線形加熱速度において測定される、１８５．４℃から１９５．４℃の間の吸熱的シグナルにより特徴付けられるＴＧ／ＤＴＡ特性を有する、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物のアモルファス形状。
【請求項４】
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物のアモルファス形状を調製する方法であって、
該方法は、下記の工程を含む
（ａ）ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に、粗製の式（Ｉ）の化合物を溶解する工程；
（ｂ）減圧下、６５℃に加熱して、合成プロセスに起因する、想定される残留溶媒を除去する工程；
（ｃ）工程ｂ）で得られる溶液を、２０〜２５℃の水中に、滴下することで、式（Ｉ）の化合物のアモルファス形状を沈殿させる工程
ことを特徴とする、方法。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物のアモルファス形状、ならびに、薬理学的に許容されるキャリアおよび／または希釈剤を含む、医薬組成物。
【請求項６】
非経口的投与、または、経口的投与用の、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
注射用調製物用の、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
固形腫瘍の治療において使用される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物のアモルファス形状。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アモルファス形状のチオコルヒチン誘導体、ＩＤＮ  ５４０４、その製造方法、ならびに、その医薬組成物に関連している。
【背景技術】
【０００２】
下記式（Ｉ）の構造を有するＩＤＮ  ５４０４は、Ｎ−デアセチルチオコルヒチノイド誘導体である：
【０００３】
【化１】
0006538711.tif 000002
【０００４】
ＩＤＮ  ５４０４は、血管構造の急速な崩壊と壊死を引き起こすことが可能な化合物群である、血管破壊剤（vascular disrupting agent）として、機能する。腫瘍の内皮細胞は、未成熟であるので、正常組織の内皮細胞よりも、血管破壊剤の作用に対して、一層鋭敏である。ＩＤＮ  ５４０４は、特に、その他の細胞毒性薬と組み合わせる場合、固形腫瘍の治療に有用である。
【０００５】
ＩＤＮ  ５４０４は、ＥＰ  １２６３７１９  Ｂ１中に開示されている。ＥＰ  １２６３７１９  Ｂ１の例２に記載される手順に従って、生成物（Ｔｉｏｃｏｌ  ５４）は、まず、ＥｔＯＡｃ中で、（ＥｔＯＡｃ溶媒和物として）結晶化され、その後、カラムクロマトグラフィ（溶出液：酢酸エチル／ヘキサン、あるいは、ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＨ）により、さらに精製される。該特許は、溶液から該生成物を最終的に回収する方法、ならびに、最終製品の形状は、記載していない。通常、カラムクロマトグラフィによる精製を施された生成物は、ただ、乾固するまで、溶媒を除去することで、回収される。一般に、アモルファス形状の生成物は、この製造方法で生産される。ＩＤＮ  ５４０４の、溶媒との共結晶化の性向、ならびに、高い不溶解性に起因して、記載されている二つの溶出系から濃縮した際、ＩＤＮ  ５４０４は、ＥｔＯＡｃ溶媒和物あるいはＥｔＯＨ溶媒和物として、結晶性形状で得られる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
前記の製造方法により得られる結晶性形態は、ジクロロメタンならびにヘキサン等の、合成プロセス中に使用される、毒性を有する溶媒の残留を含んでおり、かつ、極めて低い溶解性しか有していない。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の対象は、図１に示されるＸＲＰＤパターンを有する、下記式（Ｉ）のアモルファス形状の化合物である。
【０００８】
【化２】
0006538711.tif 000003
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】アモルファス形状のＩＤＮ  ５４０４の粉末Ｘ線回折パターンを示す。
【図２】アモルファス形状のＩＤＮ  ５４０４のＤＳＣ特性を示す。
【図３】アモルファス形状のＩＤＮ  ５４０４のＦＴＩＲ−ＡＴＲスペクトル（４０００〜５５０ｃｍ−１のスペクトル範囲）を示す。
【図４】アモルファス形状のＩＤＮ  ５４０４のＴＧ／ＤＴＡ特性を示す。
【図５】ＩＤＮ  ５４０４（ＡｃＯＥｔ溶媒和物）のＴＧ／ＤＴＡ特性を示す。
【図６】ＩＤＮ  ５４０４（ＡｃＯＥｔ溶媒和物）のＸＲＰＤ回折を示す。
【図７】ＩＤＮ  ５４０４（ＥｔＯＨ溶媒和物）のＴＧ／ＤＴＡ特性を示す。
【図８】ＩＤＮ  ５４０４（ＥｔＯＨ溶媒和物）のＸＲＰＤ回折を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
上述のアモルファス形状の化合物は、下記する特徴の少なくとも一つにより、特徴付けられる：
−１０℃／分の線形加熱速度において測定される、１８６．９℃の立ち上がりと１９４．５℃の立下りを有するガラス転移により特徴付けられるＤＳＣ特性；
−１０℃／分の線形加熱速度において測定される、１８５．４℃から１９５．４℃の間の吸熱的シグナルにより特徴付けられるＴＧ／ＤＴＡ特性。
【００１１】
本発明のアモルファス形状の化合物は、下記の工程を含む方法により、得ることができる：
（ａ）ＤＭＳＯ中に、粗製の式（Ｉ）の化合物を溶解する工程；
（ｂ）減圧下、６５℃に加熱して、合成プロセスに起因する、想定される残留溶媒を除去する工程；
（ｃ）工程ｂ）で得られる溶液を、２０〜２５℃の水中に、滴下することで、式（Ｉ）のアモルファス形状の化合物を沈殿させる工程。
【００１２】
工程ａ）においては、１ｋｇのＩＤＮ  ５４０４に対して、１Ｌ〜８ＬのＤＭＳＯを使用することが好ましい。
【００１３】
工程ｃ）においては、１ｋｇのＩＤＮ  ５４０４に対して、８Ｌ〜６４Ｌの水を使用することが好ましい。
【００１４】
上述のアモルファス形状の化合物（Ｉ）は、その他の結晶性形状よりも、水中において安定であり、そして、化学的、かつ、物理的に安定である。これらの特質は、本発明にかかる化合物を含む、固形形状の調製を可能としている。
【００１５】
さらにまた、上に記載する方法により得られる化合物中には、ジクロロメタンならびにヘキサン等の、合成プロセス中に使用される、毒性を有する溶媒は含まれていない。
【００１６】
アモルファス形状の生成物中に存在する、唯一の残留溶媒は、Ｃｌａｓｓ  ３の溶媒（低毒性）である、ＤＭＳＯである。
【００１７】
多形探索によって特定された、いずれも溶媒和物の形態である、結晶性形状とは異なり、上述のアモルファス形状は、溶媒和物の形態ではない。
【００１８】
アモルファス形状のＩＤＮ  ５４０４は、上昇した溶解性、向上した生体利用効率、化学処理の容易性、および／または医薬製剤化の容易性、等の、医薬組成物の調製において、有利な特質を有している。
【００１９】
従って、本発明の更なる対象は、上述の式（Ｉ）のアモルファス形状の化合物、ならびに、薬理学的に許容されるキャリアおよび／または希釈剤を含む、医薬組成物、ならびに、薬理学的に許容される希釈剤および／またはキャリアを含む、医薬組成物である。
【００２０】
薬理学的に許容される希釈剤および／またはキャリアは、意図する投与経路と、標準的な薬理学的手法に基づき、選択する。本発明にかかる、医薬製剤は、好ましくは、経口的、あるいは、非経口的に投与される。
【００２１】
ここで使用される、用語「非経口的」には、皮下注射、静脈内、筋肉内注射、あるいは、点滴方法を含んでいる。
【００２２】
本発明のアモルファス形状は、例えば、タブレット剤、丸薬、懸濁液、エマルジョン、細粒、カプセル剤、ならびに、注射薬、等の、通常の剤形に製剤化することもできる。
【００２３】
本発明の化合物において、好ましい剤形は、注射用調製物である。上述の式（Ｉ）の化合物は、単独で、あるいは、細胞毒性薬と組み合わせて、固形腫瘍の治療に使用することができる。
【実施例】
【００２４】
例１
粗製のＩＤＮ  ５４０４（１ｋｇ）を、ＤＭＳＯ（８Ｌ）中に溶解した。合成プロセスに起因する溶媒を完全に除去する目的で、該溶液を６５℃に加熱し、そして、減圧下、２時間維持した。攪拌下、２０〜２５℃の水（６４Ｌ）中に、該溶液を滴下して、アモルファス形状の固体として、ＩＤＮ  ５４０４の沈殿を起こさせた。生成物を濾別し、減圧下で乾燥させることで、定量的収率でＩＤＮ  ５４０４が生成された。
【００２５】
アモルファス形状の特性評価
粉末Ｘ線回折（Ｘ−ＲＰＤ）
Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ２−Ｐｈａｓｅｒ  回折装置により、Ｘ−ＲＰＤパターンを採取した。Ｘ線発生器は、３０ｋＶ、１０ｍＡで作動させ、ＣｕＫα線を照射源として使用した。試料を、適合するスリット上に挿入し、そして、照射距離は、１０ｍｍとした。２θ  ２°〜５０°の間、２θのステップ・サイズ  ０．０２°、各ステップ当たりの計数時間  ３秒間で、データを採った。アモルファス形状の粉末Ｘ線回折パターン（図１）は、回折ピークを示さず、アモルファス形状のサンプルに特有の、幅広いノイズを示す。
【００２６】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
Ｍｅｔｔｌｅｒ  ＤＳＣ１  システムを使用して、解析を実施した。５０ｍＬ／分の窒素気流下、線形加熱速度（１０℃／分）において、３０℃から３００℃まで、熱流を測定した。ピンホールを具えた、閉されたアルミニウムるつぼ（４０μＬ容）中において、約５ｍｇの粉末を、測定に使用した。
【００２７】
ＤＳＣ特性（図２）は、水分の離脱に因る、約１００℃に極大を有する、広い吸熱的シグナル、ならびに、１８６．９℃の立ち上がりと１９４．５℃の立下りを有するガラス転移により、特徴付けられる。
【００２８】
フーリエ変換赤外分光（ＦＴＩＲ）
赤外スペクトルは、Ｓｐｅｃａｃ  ＡＴＲ  Ｇｏｌｄｅｎ  Ｇａｔｅ  アクセサリーを取り付けた、フーリエ変換型分光計  Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｏｎｅを使用して、減衰全反射 (attenuated total reflection, ATR) モードで、採取した。該スペクトルは、４０００〜５５０ｃｍ−１のスペクトル範囲内で、分画して、１６の同時に収録したスキャンを、取り込みと変換を加えることで得られた結果である。
【００２９】
ＦＴＩＲ−ＡＴＲスペクトルを、図３（４０００〜５５０ｃｍ−１のスペクトル範囲）に示す。該スペクトルは、３２８６，２９３６，２８３６，１６６９，１６０６，１５３５，１４８４，１４０３，１３４７，１３２０，１２８３，１２３５，１１９４，１１３５，１０９３，１０１９，９８３，９２２，８４１，７９５，７７７，５７５  ｃｍ−１±２ｃｍ−１に、吸収周波数を示している。
【００３０】
熱重量分析（ＴＧ）および示差熱分析（ＤＴＡ）
開放アルミニウム皿（４０μＬ容）を使用する、Ｓｅｉｋｏ  ＴＧ／ＤＴＡ７２００  同時測定システムを採用して、分析を行った。２００ｍｌ／分の窒素気流中で、線形加熱速度（１０℃／分）で、３０℃から３００℃まで、ＴＧ／ＤＴシグナルを採取した。約１０ｍｇの粉末を、測定に使用した。
【００３１】
ＴＧ／ＤＴＡ特性（図４）は、残留水分の離脱に因る、約６０℃に極大を有する、広い吸熱的ピーク（１００℃における質量損失＝１．５５％）、ならびに、その直後の発熱的な分解を伴う、ガラス転移に起因する、１８５．４℃から１９５．４℃の間の吸熱的シグナルにより特徴付けられる。
【００３２】
例２（対比例）
粗製のＩＤＮ  ５４０４（５００ｍｇ）を、溶出液として、ＡｃＯＥｔ−ヘキサン  ７：３を使用する、フラッシュクロマトグラフィにより、精製した。ＩＤＮ  ５４０４を含む画分をプールし、そして、乾固するまで、溶媒を除去した。下記の特性を具える、結晶性黄色固形物として、ＩＤＮ  ５４０４（３５０ｍｇ）が得られた。
【００３３】
残留有機溶媒を特定するため、該生成物をＧＣ（ガスクロマトグラフィ）により分析した：Ａｃ°、ＯＥｔの含有量は、１１．１％（２２ｐｐｍのヘキサン）であり、すなわち、生成物は、ＡｃＯＥｔ溶媒和物であると、推測された。
【００３４】
例１と同じ条件で、ＴＧ／ＤＴＡならびにＸＲＰＤ分析を実施した。
【００３５】
ＩＤＮ  ５４０４（ＡｃＯＥｔ溶媒和物）のＴＧ／ＤＴＡ特性は、図５中に示される。
【００３６】
分析は、約２０８℃の立ち上がりと、それぞれ、２２１．３℃と２３１．２℃の二つの極大を有する、強いが、分離は完全ではない、二つの吸熱的ピークにより特徴付けられる、ＤＴ特性を示す。
【００３７】
引き続き、融解に続く、結晶溶媒の離脱に起因する、前記ピークは、２００℃から２４０℃までの間の５．９４％の質量損失を伴っている。
【００３８】
また、ＴＧ特性は、最初の吸熱的ピークと一致する、シャープな質量損失に繋がる、３０℃から２００℃までに、約３．１％の漸進的な質量損失を示す。
【００３９】
３０℃から２４０℃までの、質量損失の総和は、９．０％である。
【００４０】
ＩＤＮ  ５４０４（ＡｃＯＥｔ溶媒和物）のＸＲＰＤ回折は、図６中に示される。
【００４１】
該回折スペクトルは、強い回折ピーク、ならびに、高い結晶性を示唆する、鋭いピーク形状により特徴付けられる；該ＸＲＰＤパターンは、２θの値（°）として表記される、
５．６°、１０．２°、１０．５°、１１．１°、１３．３°、１４．４°、１４．７°、１７．５°、１７．９°、１８．５°、１８．９°、１９．４°、２０．０°、２０．８°、２１．６°、２２．２°、２２．４°、２２．６°、２３．４°、２５．２°、２５．５°、２５．９°、２６．７°、２７．８°、２８．５°、２９．１°、２９．７°、３０．８°、３１．２°、３２．１°の個別の反射を示している。
【００４２】
例３（対比例）
粗製のＩＤＮ  ５４０４（５００ｍｇ）を、溶出液として、ＣＨ２Ｃｌ２−ＥｔＯＨ  ９５：５を使用する、フラッシュクロマトグラフィにより、精製した。ＩＤＮ  ５４０４を含む画分をプールし、そして、乾固するまで、溶媒を除去した。下記の特性を具える、結晶性黄色固形物として、ＩＤＮ  ５４０４（３１５ｍｇ）が得られた。
【００４３】
残留有機溶媒を特定するため、該生成物をＧＣ（ガスクロマトグラフィ）により分析した：ＥｔＯＨの含有量は、１０．７％（２６９ｐｐｍのＣＨ２Ｃｌ２）であり、すなわち、生成物は、ＥｔＯＨ溶媒和物であると、推測された。
【００４４】
例１と同じ条件で、ＴＧ／ＤＴＡならびにＸＲＰＤ分析を実施した。
【００４５】
ＩＤＮ  ５４０４（ＥｔＯＨ溶媒和物）のＴＧ／ＤＴＡ特性は、図７中に示される。
【００４６】
分析は、約１９８℃の立ち上がりと、２１０．６℃の極大を具える、吸熱的ピークにより特徴付けられる、ＤＴ特性を示す。
【００４７】
結晶溶媒の離脱を伴う、融解に起因する、このピークは、１９５℃から２３０℃までの間の５．３４％の質量損失を伴っている。
【００４８】
また、ＴＧ特性は、３０℃から１９５℃までに、約６．７％の漸進的な質量損失を示す。
【００４９】
３０℃から２３０℃までの、質量損失の総和は、１２．１％である。
【００５０】
ＩＤＮ  ５４０４（ＥｔＯＨ溶媒和物）のＸＲＰＤ回折は、図８中に示される。
【００５１】
該回折スペクトルは、強い回折ピーク、ならびに、高い結晶性を示唆する、鋭いピーク形状により特徴付けられる；該ＸＲＰＤパターンは、２θの値（°）として表記される、
６．３°、１０．４°、１０．６°、１１．２°、１２．５°、１３．３°、１４．４°、１４．８°、１６．９°、１７．８°、１８．８°、１９．３°、１９．７°、２０．３°、２０．９°、２１．８°、２２．５°、２３．０°、２３．３°、２４．９°、２５．５°、２６．０°、２７．１°、２７．９°、２８．９°、２９．４°、２９．７°、３２．２°の個別の反射を示している。
【００５２】
安定性データ
アモルファス形状の化合物（Ｉ）は、２５±２℃／相対湿度６０±５％において、少なくとも３年間、４０±２℃／相対湿度７５±５％において、少なくとも６カ月間、その当初のＴ０値から、何らの不純物も生成することなく、化学的に安定であることが見いだされた。ＨＰＬＣにより、分析を実施した。
【００５３】
また、アモルファス形状の化合物（Ｉ）は、２５±２℃／相対湿度６０±５％において、少なくとも３年間、４０±２℃／相対湿度７５±５％において、少なくとも６か月間、図１〜４中に報告される特徴的な性質を保持しており、化学的にも安定であることが見いだされた。
【００５４】
例２において得られた、結晶性のＩＤＮ  ５４０４は、４０±２℃／相対湿度７５±５％において、１カ月後、７％の化学的組成の変動を示す。
【００５５】
例３において得られた、結晶性のＩＤＮ  ５４０４は、４０±２℃／相対湿度７５±５％において、１カ月後、４．１％の化学的組成の変動を示す。
【図１】
0006538711.tif 000006
【図２】
0006538711.tif 000007
【図３】
0006538711.tif 000008
【図４】
0006538711.tif 000009
【図５】
0006538711.tif 000010
【図６】
0006538711.tif 000011
【図７】
0006538711.tif 000012
【図８】
0006538711.tif 000013