(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（３）：
【化１】
0006556448.tif 000024
［式中、Ｙは、エチニル基、ビニル基、アジド基、エポキシ基、アルデヒド基、又はオキシルアミノ基を示し、ｎは１〜１０の整数を示す。］
で表される化合物の製造方法であって、ガラクトース及び／又はメリビオースと、一般式（２）：
【化２】
0006556448.tif 000025
［式中、Ｙは、エチニル基、ビニル基、アジド基、エポキシ基、アルデヒド基、又はオキシルアミノ基を示し、ｎは１〜１０の整数を示す。］
で表される化合物とを、アスペルギルスニガー由来α‐ガラクトシダーゼの存在下で反応させることを特徴とする製造方法。
【請求項２】
前記一般式（２）で表される化合物と反応させる対象が前記メリビオースを含む、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
一般式（５）：
【化３】
0006556448.tif 000026
［式中、Ｒ１は有機基を示し、ｎは１〜１０の整数を示す。］
で表される化合物の製造方法であって、
（工程１）ガラクトース及び／又はメリビオースと、一般式（２’）：
【化４】
0006556448.tif 000027
［式中、ｎは１〜１０の整数を示す。］
で表される化合物とを、アスペルギルスニガー由来α‐ガラクトシダーゼの存在下で反応させ、一般式（３’）：
【化５】
0006556448.tif 000028
［式中、ｎは１〜１０の整数を示す。］
で表される化合物を得る工程、並びに
（工程２）一般式（３’）：
【化６】
0006556448.tif 000029
［式中、ｎは１〜１０の整数を示す。］
で表される化合物と、一般式（４）：
【化７】
0006556448.tif 000030
［式中、Ｒ１は有機基を示す。］
で表される化合物とを反応させる工程を含むことを特徴とする製造方法。 
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、反応性基導入α‐ガラクトース及びその製造方法、さらには該反応性基導入α‐ガラクトースを利用したα‐ガラクトシルセラミド類縁体の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
α‐ガラクトシルセラミドは、樹状細胞の表面に発現するCD1dによって提示され、ナチュラルキラーT細胞（NKT細胞）を活性化する。活性化されたNKT細胞は、様々な免疫反応を賦活し、例えば長期的な抗腫瘍効果を発揮することが明らかになっている（非特許文献1）。また、がん治療においては、多くの場合、放射線治療が行われるが、NKT細胞は放射線の影響を受けないことが知られている（非特許文献2〜5）。このため、α‐ガラクトシルセラミドによるNKT細胞活性化は、がん治療方法、特に放射線治療と併用する治療方法として、非常に有用であると考えられている。
【０００３】
α‐ガラクトシルセラミドは、ガラクトースのアノマー炭素とセラミドの水酸基とがα‐グリコシド結合した構造を有している。上記抗腫瘍活性等の生理活性の観点からは、この結合がβ‐グリコシド結合ではなく、α‐グリコシド結合であることが重要であると考えられている。
【０００４】
α‐ガラクトシルセラミドにおいてセラミド構造の一部を他の構造に置換すると、NKT細胞活性化による抗腫瘍効果が顕著に高まることが報告されている。このことから、より抗腫瘍効果の高いα‐ガラクトシルセラミド類縁体の開発が望まれている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Cancer. Sci., 99, 638-645, 2008.
【非特許文献２】Clin. Cancer. Res., 11, 1910-1917, 2005.
【非特許文献３】J. Immunol., 182, 2492-2501, 2009.
【非特許文献４】Int. J. Cancer., 102,159-165, 2002.
【非特許文献５】Cancer. Immunol. Immunother., 59, 1503-1509, 2010.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明者等は、ガラクトースと反応性基含有化合物とがα‐グリコシド結合した化合物（反応性基導入α‐ガラクトース）が得られれば、この反応性基とセラミド類似化合物を反応させることにより、簡便にα‐ガラクトシルセラミド類縁体が合成できると考えた。
【０００７】
しかし、この反応性基導入α‐ガラクトースを有機合成すべく、ガラクトースの水酸基を保護し、１位にイミデート基などの脱離基を導入し、その１位炭素と、反応性基含有化合物とを反応させることを試みたが、ガラクトースと該化合物とがα結合したものとβ結合したものの混合物が得られ、それらの精製が容易ではなく収率も芳しくなかった。またさらに、この方法は、目的化合物を得るために煩雑な脱保護の過程が必要であるので、効率的ではなかった。
【０００８】
そこで、本発明は、ガラクトースと反応性基含有化合物とがα‐グリコシド結合した反応性基導入α‐ガラクトースの、より簡便且つ効率的な製造方法を提供することを課題とする。なお、本発明において、「より効率的」とは、有機合成法における水酸基等の保護、脱離基の導入、又は合成最終段階における保護基の脱保護が不要であること、さらには反応性基導入α‐ガラクトースの収率がより高いこと、及び／又は反応性基導入β‐ガラクトースの生成がより低減されており、反応性基導入α‐ガラクトースがより選択的に生成されること（すなわち生成物中、反応性基導入β‐ガラクトースに対する反応性基導入α‐ガラクトースの比がより高いこと）を意味する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者等は、上記課題を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、ガラクトース供与体と反応性基含有化合物とを、α‐グリコシダーゼの存在下で反応させることにより、反応性基導入α‐ガラクトースを簡便且つ効率的に製造できることを見出した。即ち、本発明は、以下の態様を包含する。
【００１０】
項１．  一般式（３）：
【００１１】
【化１】
0006556448.tif 000002
【００１２】
［式中、Ｙは、エチニル基、ビニル基、アジド基、エポキシ基、アルデヒド基、又はオキシルアミノ基を示し、ｎは１〜１０の整数を示す。］
で表される化合物の製造方法であって、ガラクトース及び／又は一般式（１）：
【００１３】
【化２】
0006556448.tif 000003
【００１４】
［式中、Ｘは、単糖又はオリゴ糖から一つの水酸基が除かれた基を示す。］
で表される化合物と、一般式（２）：
【００１５】
【化３】
0006556448.tif 000004
【００１６】
［式中、Ｙは、エチニル基、ビニル基、アジド基、エポキシ基、アルデヒド基、又はオキシルアミノ基を示し、ｎは１〜１０の整数を示す。］
で表される化合物とを、α‐ガラクトシダーゼの存在下で反応させることを特徴とする製造方法。
【００１７】
項２．  前記Ｘが、六炭糖又は少なくとも１つの六炭糖残基を含むオリゴ糖の六炭糖残基から一つの水酸基が除かれた基である、項１に記載の製造方法。
【００１８】
項３．  前記Ｘが、六炭糖又は少なくとも１つの六炭糖残基を含むオリゴ糖の六炭糖残基から６位の水酸基が除かれた基である、項２に記載の製造方法。
【００１９】
項４．  前記一般式（１）で表される化合物がメリビオース、メリビウロース、ガラビオースα(1-6)、メリビオサミン、及びN−アセチルメリビオサミンからなる群より選択される少なくとも１種である、項３に記載の製造方法。
【００２０】
項５．  前記α‐ガラクトシダーゼがアスペルギルス属生物由来である、項１〜４のいずれかに記載の製造方法。
【００２１】
項６．  一般式（３）：
【００２２】
【化４】
0006556448.tif 000005
【００２３】
［式中、Ｙは、エチニル基、ビニル基、アジド基、エポキシ基、アルデヒド基、又はオキシルアミノ基を示し、ｎは１〜１０の整数を示す。］
で表される化合物。
【００２４】
項７．  一般式（５）：
【００２５】
【化５】
0006556448.tif 000006
【００２６】
［式中、Ｒ１は有機基を示し、ｎは１〜１０の整数を示す。］
で表される化合物の製造方法であって、
（工程１）ガラクトース及び／又は一般式（１）：
【００２７】
【化６】
0006556448.tif 000007
【００２８】
［式中、Ｘは、単糖又はオリゴ糖から一つの水酸基が除かれた基を示す。］
で表される化合物と、一般式（２’）：
【００２９】
【化７】
0006556448.tif 000008
【００３０】
［式中、ｎは１〜１０の整数を示す。］
で表される化合物とを、α‐ガラクトシダーゼの存在下で反応させ、一般式（３’）：
【００３１】
【化８】
0006556448.tif 000009
【００３２】
［式中、ｎは１〜１０の整数を示す。］
で表される化合物を得る工程、並びに
（工程２）一般式（３’）：
【００３３】
【化９】
0006556448.tif 000010
【００３４】
［式中、ｎは１〜１０の整数を示す。］
で表される化合物と、一般式（４）：
【００３５】
【化１０】
0006556448.tif 000011
【００３６】
［式中、Ｒ１は有機基を示す。］
で表される化合物とを反応させる工程を含むことを特徴とする製造方法。
【００３７】
項８．  
一般式（５）：
【００３８】
【化１１】
0006556448.tif 000012
【００３９】
［式中、Ｒ１は有機基を示し、ｎは１〜１０の整数を示す。］
で表される化合物。
【発明の効果】
【００４０】
本発明によれば、ガラクトースと反応性基含有化合物とがα‐グリコシド結合した反応性基導入α‐ガラクトースを簡便且つ効率的に製造することができる。本発明の製造方法は、ガラクトースと反応性基含有化合物とがβ‐グリコシド結合した反応性基導入β‐ガラクトースの生成が低減されているので、その後の精製を簡略化することができる。
【００４１】
本発明の製造方法によって得られる反応性基導入α‐ガラクトースをセラミド類似化合物と反応させることにより、多種多様なα‐ガラクトシルセラミド類縁体を簡便に製造することができる。このようにして得られたα‐ガラクトシルセラミド類縁体は、αガラクトシルセラミドの生理活性に重要なα‐グリコシド結合を有していることから、これと同様の生理活性を発揮することが期待できる。
【００４２】
また、反応性基導入α‐ガラクトースと疎水性化合物とを反応させることにより得られる化合物は、親水性を有する部位（ガラクトース残基）と疎水性を有する部位（疎水性化合物）とを両方有しているので、界面活性剤として用いることも可能である。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
１．反応性基導入α‐ガラクトースの製造方法
本発明は、一般式（３）：
【００４４】
【化１２】
0006556448.tif 000013
【００４５】
［式中、Ｙは、エチニル基、ビニル基、アジド基、エポキシ基、アルデヒド基、又はオキシルアミノ基を示し、ｎは１〜１０の整数を示す。］
で表される化合物（本明細書において、「反応性基導入α‐ガラクトース」と示すこともある）の製造方法であって、ガラクトース及び／又は一般式（１）：
【００４６】
【化１３】
0006556448.tif 000014
【００４７】
［式中、Ｘは、単糖又はオリゴ糖から一つの水酸基が除かれた基を示す。］
で表される化合物（本明細書において、「ガラクトース供与体」と示すこともある）と、一般式（２）：
【００４８】
【化１４】
0006556448.tif 000015
【００４９】
［式中、Ｙは、エチニル基、ビニル基、アジド基、エポキシ基、アルデヒド基、又はオキシルアミノ基を示し、ｎは１〜１０の整数を示す。］
で表される化合物（本明細書において、「反応性基含有化合物」と示すこともある）とを、α‐ガラクトシダーゼの存在下で反応させることを特徴とする製造方法（本明細書において、「本発明の製造方法」と示すこともある）に関する。以下、これについて説明する。
【００５０】
Ｘは、単糖又はオリゴ糖から一つの水酸基が除かれた基を示す。Ｘとして、好ましくは単糖から一つの水酸基が除かれた基が挙げられる。
【００５１】
単糖又はオリゴ糖から除かれる水酸基は、ガラクトースの１位炭素とα‐グリコシド結合を形成し得る水酸基である限り特に限定されない。例えば、除かれる水酸基を含む単糖が六炭糖である場合、又はオリゴ糖において除かれる水酸基を含む糖残基が六炭糖残基である場合であれば、反応性基導入α‐ガラクトースをより効率的に製造できるという観点から、除かれる水酸基としては好ましくは６位の水酸基が挙げられる。
【００５２】
単糖としては、ガラクトースの１位炭素とα‐グリコシド結合を形成し得る単糖である限り特に限定されない。例えば、七炭糖、六炭糖、五炭糖、四炭糖、三炭糖等が挙げられ、これらの中でも、反応性基導入α‐ガラクトースをより効率的に製造できるという観点から六炭糖が好ましく挙げられる。六炭糖としては、ガラクトース、グルコース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、マンノース、フルクトース、アロース、タロース、グロース、アルトロース、イドース、プシコース、ソルボース、タガトース等が挙げられ、これらの中でも、グルコース、フルクトース等が好ましく挙げられ、グルコースがより好ましく挙げられる。これらはＤ体又はＬ体のいずれでもよい。また、これらは一部の水酸基が水素元素等の元素、保護基、官能基（例えば硫酸基）等で置換されていてもよい。
【００５３】
オリゴ糖は、２分子以上の単糖がグリコシド結合により１分子に連結された糖である。オリゴ糖は、ガラクトースの１位炭素とα‐グリコシド結合を形成し得る単糖残基を含む限り特に限定されない。反応性基導入α‐ガラクトースをより効率的に製造できるという観点から、オリゴ糖は少なくとも１つの六炭糖残基を含むことが好ましい。また、反応性基導入α‐ガラクトースをより効率的に製造できるという観点から、オリゴ糖において除かれる水酸基を含む糖残基は六炭糖残基であることが好ましい。オリゴ糖を構成する単糖の分子数としては、例えば２〜２０が挙げられ、好ましくは２〜１０が挙げられ、より好ましくは２〜５が挙げられ、さらに好ましくは２〜３が挙げられる。オリゴ糖を構成する単糖の種類としては、特に限定されず、上記に示した単糖を採用することができる。またオリゴ糖を構成する単糖の組み合わせも特に限定されない。オリゴ糖の具体例としては、構成する単糖の分子数が２であるオリゴ糖（例えばラクトース、Galβ(1→3)GalNAc、Galβ(1→4)GlcNAc、Galβ(1→6)GlcNAc、スクロース、マルトース、トレハロース、ツラノース、セロビオース等）、構成する単糖の分子数が３であるオリゴ糖（例えばラフィノース、メレジトース、マルトトリオース等）、構成する単糖の分子数が４であるオリゴ糖（例えばアカルボース、スタキオース等）が挙げられる。
【００５４】
一般式（１）で表される化合物の具体例としては、メリビオース、メリビウロース、ガラクトスクロース、α(1-2)ガラビオース、α(1-3)ガラビオース、α(1-6)ガラビオース、α(1-4)ガラビオース、メリビオサミン、N−アセチルメリビオサミン等が挙げられる。これらの中でも、反応性基導入α‐ガラクトースをより効率的に製造できるという観点から、好ましくはメリビオース、メリビウロース、α(1-2)ガラビオース、α(1-3)ガラビオース、α(1-6)ガラビオース、α(1-4)ガラビオース、メリビオサミン、N−アセチルメリビオサミン等が挙げられ、より好ましくはメリビオース、メリビウロース、α(1-6)ガラビオース、メリビオサミン、N−アセチルメリビオサミン等が挙げられ、よりさらに好ましくはメリビオースが挙げられる。
【００５５】
ガラクトース供与体としては、反応性基導入α‐ガラクトースをより効率的に製造できるという観点から、好ましくは一般式（１）で表される化合物が挙げられる。
【００５６】
Ｙは、エチニル基、ビニル基、アジド基、エポキシ基、アルデヒド基、又はオキシルアミノ基を示す。これらの中でも好ましくはエチニル基が挙げられる。
【００５７】
ｎは１〜１０の整数である。好ましくは１〜５であり、より好ましくは１〜３であり、さらに好ましくは１又は２であり、特に好ましくは１である。
【００５８】
ガラクトース供与体及び反応性基含有化合物としては、それぞれ１種単独を用いてもよいし、２種以上の組み合わせを用いてもよい。
【００５９】
α‐ガラクトシダーゼは、EC番号EC 3.2.1.22に分類される酵素であり、その限りにおいて特に限定されない。α‐ガラクトシダーゼとしては、種々の生物由来のものを使用することができる。例えば、アスペルギルス属生物（好ましくはアスペルギルスニガー）、コーヒー豆、Xanthomonas属生物（好ましくはXanthomonas manihotis）等に由来するα‐ガラクトシダーゼが挙げられる。これらの中でも、反応性基導入α‐ガラクトースをより効率的に製造できるという観点から、好ましくはアスペルギルス属生物由来、より好ましくはアスペルギルスニガー由来のα‐ガラクトシダーゼが挙げられる。また、α‐ガラクトシダーゼは、ガラクトース供与体の種類に応じて、適切なものを選択することもできる。例えば、ガラクトース供与体がメリビオースである場合であれば、α‐ガラクトシダーゼとしてメリビアーゼを用いることが好ましい。α‐ガラクトシダーゼとしては１種単独を用いてもよいし、２種以上の組み合わせを用いてもよい。
【００６０】
α‐ガラクトシダーゼは、担体に固定化されたα‐ガラクトシダーゼであってもよい。α‐ガラクトシダーゼを担体に固定化する方法は、公知の方法を採用することができる。担体は、α‐ガラクトシダーゼを固定化できる限りにおいて特に限定されず、例えばα‐ガラクトシダーゼに含まれるアミノ基とアミド結合できるカルボキシル基を有する担体が挙げられる。具体例としては、カルボキシル基をＮ‐ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）でエステル化したセファロース（担体）の活性化エステル基と、α‐ガラクトシダーゼのアミノ基とをアミド結合させることにより、担体にα‐ガラクトシダーゼを固定化することができる。また、他の具体例としては、担体を臭化シアンで活性化して、α‐ガラクトシダーゼのアミノ基とアミド結合させる固定化方法等が挙げられる。
【００６１】
反応は、適当な溶媒中で行う。溶媒としては、ガラクトース供与体及び反応性基含有化合物を溶解させることができ、且つα‐ガラクトシダーゼが失活しない溶媒であれば特に限定されない。このような溶媒としては、例えば、水、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、酒石酸緩衝液、トリス緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等が挙げられ、好ましくは酢酸緩衝液が挙げられる。
【００６２】
反応温度は、α‐ガラクトシダーゼが失活しない温度であれば特に限定されず、α‐ガラクトシダーゼの反応至適温度に従って適宜選択される。例えば、２０℃〜６０℃、好ましくは２０〜４５℃、より好ましくは２５〜３５℃であることができる。
【００６３】
反応時間は、α‐ガラクトシダーゼの酵素活性が十分に発揮できる限り特に限定されない。例えば、１〜１００時間、好ましくは１５〜８０時間、より好ましくは３０〜６０時間であることができる。
【００６４】
反応ｐＨは、α‐ガラクトシダーゼの酵素活性が十分に発揮される限り特に限定されない。例えば、ｐＨ３〜１０、好ましくはｐＨ４〜６であることができる。
【００６５】
反応における、ガラクトース供与体及び反応性基含有化合物のモル比は、α‐ガラクトシダーゼによる酵素反応が起こる限り特に限定されないが、例えば、ガラクトース供与体１モルに対して、反応性基含有化合物０.１〜１００、好ましくは０．５〜５０、より好ましくは１〜３０、さらに好ましくは２〜２０モルであることができる。
【００６６】
上記反応後、反応によって得られた反応性基導入α‐ガラクトースを含む溶液を、さらに精製工程に供してもよい。精製手段は、公知の方法（分液、蒸留、クロマトグラフィー、再結晶等）を採用できる。
【００６７】
上記反応により、簡便且つ効率的に反応性基導入α‐ガラクトースを製造することができる。
【００６８】
２．反応性基導入α‐ガラクトースの用途
得られた反応性基導入α‐ガラクトースは、エチニル基、ビニル基、アジド基、エポキシ基、アルデヒド基、オキシルアミノ基等の反応性基を有する。アルキニル基は、アジド基と１，３‐双極子付加環化反応することにより、１，２，３‐トリアゾール環を形成することが知られている。ビニル基は、チオール基と反応して結合を形成する。エポキシ基はアミノ基やチオール基と反応し結合を形成する。アルデヒド基はアミノ基と反応し、シッフ塩基を形成し、それを還元すると結合を形成する。オキシルアミノ基はケトン基、アルデヒド基と反応し、オキシムを形成する。アジド基は、アルキニル基と１，３‐双極子付加環化反応することにより、１，２，３‐トリアゾール環を形成することが知られている。反応性基のこれら性質を利用すれば、反応性基導入α‐ガラクトースと、該反応性基と反応する基（例えば、アジド基、アミノ基、チオール基、ヒドロキシ基、ケトン基、アルデヒド基）を有する化合物とを、容易に連結させることができる。このように、反応性基導入α‐ガラクトースは、上記反応性基と反応する基を有する化合物であればどのような化合物とも連結させることができるので、反応性基導入α‐ガラクトースを用いることにより多種多様なα‐ガラクトシルセラミド類縁体や界面活性剤を簡便に製造することができる。
【００６９】
例えば、反応性基がエチニル基である場合であれば、以下の反応スキームに従って、一般式（３’）で表される化合物と、一般式（４）で表される化合物とを反応させることによって、α‐ガラクトシルセラミド類縁体や界面活性剤（一般式（５）で表される化合物）を簡便に製造することができる。
【００７０】
【化１５】
0006556448.tif 000016
【００７１】
［式中、ｎは前記に同じであり、Ｒ１は有機基を示す。］
Ｒ１で示される有機基は、有機化合物から１つの水素が除かれた基であれば特に限定されない。有機化合物としては、アルキニル基と反応する基を有し、且つ一般式（５）で表される化合物がα‐ガラクトシルセラミド類縁体や界面活性剤となり得るものであれば特に限定されない。
【００７２】
Ｒ１で示される有機基の具体例としては、例えば一般式（６）：
【００７３】
【化１６】
0006556448.tif 000017
【００７４】
［式中、Ｒ２及びＲ３は同一又は異なって置換基及び／又は不飽和結合を有していてもよい炭化水素鎖を示し、ｍは０又は１〜３の整数を示す。］
炭化水素鎖は直鎖又は分枝鎖のいずれでもよいが、好ましくは直鎖であることができる。炭化水素鎖の炭素数は、特に限定されないが、例えば１〜３０、好ましくは５〜２５、より好ましくは１０〜２０であることができる。
【００７５】
置換基としては、例えば、ビニル基、アリル基、フェニル基、ナフチル基、ベンジル基、フェネチル基、メトキシ基、エトキシ基、水酸基、硫酸基等が挙げられる。これらの置換基は、フッ素原子等のハロゲン原子等で置換されていてもよい。
【００７６】
炭化水素が有していてもよい不飽和結合の数は、例えば１〜３、好ましくは１〜２であることができる。
【００７７】
ｍは、好ましくは０、１、又は２、より好ましくは０又は１であることができる。
【００７８】
Ｒ１で示される有機基の別の具体例としては、例えば一般式（７）：
【００７９】
【化１７】
0006556448.tif 000018
【００８０】
［式中、ｑは１〜４０の整数である］
で表される基が挙げられる。一般式（７）で表される基は、直鎖又は分枝鎖でもよい。
【００８１】
ｑは、好ましくは５〜３０、より好ましくは８〜２５であり、更に好ましくは１０〜２０である。
【００８２】
一般式（７）の好ましい態様としては、例えば一般式（７ａ）：
【００８３】
【化１８】
0006556448.tif 000019
【００８４】
［式中、ｒは１〜３９の整数である］
で表される基が挙げられる。
【００８５】
ｒは、好ましくは４〜２９、より好ましくは７〜２４であり、更に好ましくは９〜１９である。
【００８６】
反応は、１，３‐双極子付加反応である。反応は溶媒存在下でも非存在下でも行うことができるが、溶媒存在下で行う場合、溶媒は、反応に悪影響を与えない限り特に限定されない。例えば、蒸留水、メタノール、テトラヒドロフラン、ジオキサン、及び／又はジメチルスルフォキシドを使用することができる。好ましくは適当な触媒の存在下で反応を行うことが好ましい。触媒としては、例えば銅（Ｉ）触媒が挙げられる。銅（Ｉ）触媒を使用する場合は、例えば、硫酸銅などの２価の銅と、還元剤（例えばヒドロキノン、アスコルビン酸ナトリウム）を系内に導入し、一価の銅を反応させる方法が挙げられる。
【００８７】
反応温度は、溶媒の沸点以下であれば特に限定されないが、例えば１５〜８０℃、好ましくは２０〜４０℃、より好ましくは２７〜３３℃であることができる。
【００８８】
反応時間は、特に限定されないが、例えば、１〜４８時間、好ましくは１２〜３６時間であることができる。
【００８９】
反応における、一般式（３’）で表される化合物と、一般式（４）で表される化合物とのモル比は、特に限定されないが、例えば、一般式（３’）で表される化合物１モルに対して、一般式（４）で表される化合物１モル〜５モル、好ましくは１モル〜３モルであることができる。
【００９０】
上記反応後、反応によって得られた、一般式（３’）で表される化合物を含む溶液を、さらに精製工程に供してもよい。精製手段は、公知の方法（分液、蒸留、クロマトグラフィー、再結晶等）を採用できる。
【００９１】
一般式（５）で表される化合物は、α‐ガラクトシルセラミド類縁体として種々の生理活性、例えば抗腫瘍活性を発揮することが期待できる。また、一般式（５）で表される化合物は、界面活性剤としての利用も期待できる。
【実施例】
【００９２】
以下に、実施例に基づいて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。
【００９３】
実施例１．プロパルギル基導入α‐ガラクトースの合成１
ガラクトース供与体としてメリビオース（化合物1）を用いて、下記反応式に従ってプロパルギル基導入α‐ガラクトース（化合物 3）を合成した。詳細を以下に説明する。
【００９４】
【化１９】
0006556448.tif 000020
【００９５】
メリビオース（化合物 1）（500 mg, 1.46 mmol）を酢酸ナトリウムバッファー（pH= 5.0, 50 mM, 4.5 mL）に溶解した。続いて、アスペルギルス ニガー由来α‐ガラクトシダーゼ（スミチームAGS（新日本化学工業株式会社製））2 mg（60 U）、及びプロパルギルアルコール（化合物2） 1 mLを加え、30℃にて 48 h インキュベートした。反応終了後、減圧濃縮し、得られたシラップをフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Fuji Silysia 300 mesh, l = 17 cm）に供し、溶出液（CHCl3：MeOH＝ 10 : 1）にて化合物 3（128.4 mg, 0.59 mmol, 40％）を得た。一方、化合物 3のβ体は検出されなかった。NMRデータを以下に示す。
【００９６】
1H-NMR (CD3OD)  5.01 (d, 1 H, J = 3.6 Hz), 4.28 (t, 1 H), 3.89 (d, 1 H, J = 3.2 Hz), 3.81-3.64 (m), 2.84 (br-d).。
【００９７】
実施例２．プロパルギル基導入α‐ガラクトースの合成２
ガラクトース供与体としてガラクトース（化合物4）を用いて、下記反応式に従ってプロパルギル基導入α‐ガラクトース（化合物 3）を合成した。詳細を以下に説明する。
【００９８】
【化２０】
0006556448.tif 000021
【００９９】
ガラクトース（化合物 4）（500 mg, 2.78 mmol）を酢酸ナトリウムバッファー （pH= 5.0, 50 mM, 4.5 mL）に溶解した。続いて、α‐ガラクトシダーゼ（スミチームＡＧＳ（新日本化学工業株式会社製））2 mg（60 U）、プロパルギルアルコール（化合物2） 1 mLを加え、30℃にて 48 h インキュベートした。反応終了後、減圧濃縮し、得られたシラップをフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Fuji Silysia 300 mesh, l = 17 cm）に供し、溶出液（CHCl3：MeOH＝ 10 : 1 ）にて化合物 3（133.3 mg, 0.61 mmol, 22 %）を得た。一方、化合物 3のβ体は検出されなかった。
【０１００】
実施例３．プロパルギル基導入α‐ガラクトースの合成３
α‐ガラクトシダーゼとして、生コーヒー豆由来α‐ガラクトシダーゼ（シグマアルドリッチ社製）10μL（10 Unit）を用いた以外は、実施例１と同様にプロパルギル基導入α‐ガラクトース（化合物 3）を合成した。その結果、化合物3（75 mg, 0.34 mmol, 12 %）を得た。また、同時に化合物 3のβ体（8 mg, 0.04 mmol, 1.3 %）も得られた。すなわち生成物のα／βの比率は約10：1であった。
【０１０１】
実施例４．α‐ガラクトシルセラミド類縁体の合成
下記の反応式に従って、α‐ガラクトシルセラミド類縁体を合成した。
【０１０２】
【化２１】
0006556448.tif 000022
【０１０３】
プロパルギル基導入α‐ガラクトース（化合物 3）（231.2 mg, 1.06 mmol）と化合物 5 （387.6 mg, 1.62 mmol）をメタノール（5 mL）に溶解し、ヨウ化銅（204mg, 1.07mmol）、DIPEA（2.98mL, 21.2 mmol）を加え、窒素雰囲気下、室温にて24 時間撹拌した。反応終了後、減圧濃縮し、得られたシラップをフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Fuji Silysia 300 mesh, l = 22 cm）に供し、溶出液（CHCl3：MeOH＝ 10 : 1）にて化合物 6（480 mg, 1.05 mmol, 99 %）を得た。NMRデータを以下に示す。
【０１０４】
1H-NMR (CD3OD)  δ7.99 (s, 1 H), 4.91 (d, 1 H, J = 3.2 Hz), 4.37 (t,1 H), 3.86-3.64 (m), 1.91-1.86 (m), 1.36-1.26 (m), 0.87 (t, 3 H, J = 6.8 Hz).。
【０１０５】
比較例１．プロパルギル基導入α−グルコースの合成
下記の反応式に従ってプロパルギル基導入α−グルコース（化合物８）を合成した。詳細を以下に説明する。
【０１０６】
【化２２】
0006556448.tif 000023
【０１０７】
マルトース（化合物7）（500 mg, 1.46 mmol）をクエン酸バッファー（pH= 6.0, 50mM,4.5 mL）に溶解した。続いて、α‐グルコシダーゼであるトランスグルコシダーゼ（天野エンザイム製）1 mL、及びプロパルギルアルコール（化合物 2） 1 mLを加え、 30℃にて 48 h インキュベートした。反応終了後、減圧濃縮し、得られたシラップをフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Fuji Silysia 300 mesh, l = 17 cm）に供し、溶出液（CHCl3：MeOH＝ 5 : 1）にて化合物 8（146 mg, 0.67 mmol, 46 %）を得た。また、同時に化合物 8のβ体（52.1 mg, 0.24 mmol, 16 %）も得られた。すなわち生成物のα／βの比率は約3：1であった。