(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
骨髄異形成症候群の治療を必要としている患者における骨髄異形成症候群の治療に用いるための医薬であって、
３−［１−（６−クロロピリジン−２−イル）ピロリジン−３−イル］−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル；
３−（１−［１，３］オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イルピロリジン−３−イル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル；
４−［（４−｛３−シアノ−２−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］−３−フルオロベンゾニトリル；
４−［（４−｛３−シアノ−２−［３−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピロール−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］−３−フルオロベンゾニトリル；
｛１−｛１−［３−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン−４−イル｝−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル；
４−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−Ｎ−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］ピペリジン−１−カルボキサミド；
［３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］−１−（１−｛［２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−イル］カルボニル｝ピペリジン−４−イル）アゼチジン−３−イル］アセトニトリル；
［トランス−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］−３−（４−｛［２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−イル］カルボニル｝ピペラジン−１−イル）シクロブチル］アセトニトリル；
｛トランス−３−（４−｛［４−［（３−ヒドロキシアゼチジン−１−イル）メチル］−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル；
｛トランス−３−（４−｛［４−｛［（２Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル］メチル｝−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル；
｛トランス−３−（４−｛［４−｛［（２Ｒ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル］メチル｝−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル；
４−（４−｛３−［（ジメチルアミノ）メチル］−５−フルオロフェノキシ｝ピペリジン−１−イル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ブタンニトリル；
５−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−Ｎ−イソプロピルピラジン−２−カルボキサミド；
４−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−２，５−ジフルオロ−Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−メチルエチル］ベンズアミド；
５−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−Ｎ−イソプロピルピラジン−２−カルボキサミド；
｛１−（シス−４−｛［６−（２−ヒドロキシエチル）−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル；
｛１−（シス−４−｛［４−［（エチルアミノ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル；
｛１−（シス−４−｛［４−（１−ヒドロキシ−１−メチルエチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル；
｛１−（シス−４−｛［４−｛［（３Ｒ）−３−ヒドロキシピロリジン−１−イル］メチル｝−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル；
｛１−（シス−４−｛［４−｛［（３Ｓ）−３−ヒドロキシピロリジン−１−イル］メチル｝−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル；
｛トランス−３−（４−｛［４−（｛［（１Ｓ）−２−ヒドロキシ−１−メチルエチル］アミノ｝メチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル；
｛トランス−３−（４−｛［４−（｛［（２Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル］アミノ｝メチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル；
｛トランス−３−（４−｛［４−（｛［（２Ｓ）−２−ヒドロキシプロピル］アミノ｝メチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル；及び
｛トランス−３−（４−｛［４−（２−ヒドロキシエチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル
から選択される、ＪＡＫ１選択的阻害剤、又はその薬学的に許容される塩を含む、医薬。
【請求項２】
前記ＪＡＫ１選択的阻害剤が、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３及びＴＹＫ２よりも、ＪＡＫ１に対して選択的である、請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
前記骨髄異形成症候群が、単一血球系統の異形成を伴う不応性血球減少症（ＲＣＵＤ）である、請求項１又は２に記載の医薬。
【請求項４】
前記骨髄異形成症候群が、環状鉄芽球を伴う不応性貧血（ＲＡＲＳ）である、請求項１又は２に記載の医薬。
【請求項５】
前記骨髄異形成症候群が、多血球系統の異形成を伴う不応性血球減少症である、請求項１又は２に記載の医薬。
【請求項６】
前記骨髄異形成症候群が、芽球増加を伴う不応性貧血−１（ＲＡＥＢ−１）である、請求項１又は２に記載の医薬。
【請求項７】
前記骨髄異形成症候群が、芽球増加を伴う不応性貧血−２（ＲＡＥＢ−２）である、請求項１又は２に記載の医薬。
【請求項８】
前記骨髄異形成症候群が、分類不能型骨髄異形成症候群（ＭＤＳ−Ｕ）である、請求項１又は２に記載の医薬。
【請求項９】
前記骨髄異形成症候群が、染色体異常ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｄｅｌ（５ｑ）を伴う骨髄異形成症候群である、請求項１又は２に記載の医薬。
【請求項１０】
前記骨髄異形成症候群が、赤血球造血刺激因子製剤に対して不応性である、請求項１又は２に記載の医薬。
【請求項１１】
前記患者が赤血球輸血依存である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項１２】
ＩＭｉＤ、抗ＩＬ−６剤、抗ＴＮＦ−α剤、メチル化抑制剤、及び生物学的修飾物質（ＢＲＭ）から選択される追加の治療薬を更に投与することができる、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項１３】
前記抗ＴＮＦ−α剤が、インフリキシマブ及びエタネルセプトから選択される、請求項１２に記載の医薬。
【請求項１４】
前記メチル化抑制剤がＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤である、請求項１２に記載の医薬。
【請求項１５】
前記ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤が、５アザシチジン及びデシタビンから選択される、請求項１４に記載の医薬。
【請求項１６】
前記ＩＭｉＤが、サリドマイド、レナリドミド、ポマリドミド、ＣＣ−１１００６、及びＣＣ−１００１５から選択される、請求項１２に記載の医薬。
【請求項１７】
抗胸腺細胞グロブリン、組み換えヒト顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ  ＣＳＦ）、顆粒球単球ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）、赤血球造血刺激因子製剤（ＥＳＡ）、及びサイクロスポリンから選択される追加の治療薬を更に投与することができる、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項１８】
ＪＡＫ１選択的阻害剤を含む、骨髄異形成症候群の治療を必要としている患者における骨髄異形成症候群の治療に用いるための医薬であって、ＪＡＫ１選択的阻害剤が、｛１−｛１−［３−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン−４−イル｝−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル又はその薬学的に許容される塩である、医薬。
【請求項１９】
前記骨髄異形成症候群が、単一血球系統の異形成を伴う不応性血球減少症（ＲＣＵＤ）である、請求項１８に記載の医薬。
【請求項２０】
前記骨髄異形成症候群が、環状鉄芽球を伴う不応性貧血（ＲＡＲＳ）である、請求項１８に記載の医薬。
【請求項２１】
前記骨髄異形成症候群が、多血球系統の異形成を伴う不応性血球減少症である、請求項１８に記載の医薬。
【請求項２２】
前記骨髄異形成症候群が、芽球増加を伴う不応性貧血−１（ＲＡＥＢ−１）である、請求項１８に記載の医薬。
【請求項２３】
前記骨髄異形成症候群が、芽球増加を伴う不応性貧血−２（ＲＡＥＢ−２）である、請求項１８に記載の医薬。
【請求項２４】
前記骨髄異形成症候群が、分類不能型骨髄異形成症候群（ＭＤＳ−Ｕ）である、請求項１８に記載の医薬。
【請求項２５】
前記骨髄異形成症候群が、染色体異常ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｄｅｌ（５ｑ）を伴う骨髄異形成症候群である、請求項１８に記載の医薬。
【請求項２６】
前記骨髄異形成症候群が、赤血球造血刺激因子製剤に対して不応性である、請求項１８に記載の医薬。
【請求項２７】
前記患者が赤血球輸血依存である、請求項１８〜２６のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項２８】
ＩＭｉＤ、抗ＩＬ−６剤、抗ＴＮＦ−α剤、メチル化抑制剤、及び生物学的修飾物質（ＢＲＭ）から選択される追加の治療薬を更に投与することができる、請求項１８〜２７のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項２９】
前記抗ＴＮＦ−α剤が、インフリキシマブ及びエタネルセプトから選択される、請求項２８に記載の医薬。
【請求項３０】
前記メチル化抑制剤がＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤である、請求項２８に記載の医薬。
【請求項３１】
前記ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤が、５アザシチジン及びデシタビンから選択される、請求項３０に記載の医薬。
【請求項３２】
前記ＩＭｉＤが、サリドマイド、レナリドミド、ポマリドミド、ＣＣ−１１００６、及びＣＣ−１００１５から選択される、請求項２８に記載の医薬。
【請求項３３】
抗胸腺細胞グロブリン、組み換えヒト顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ  ＣＳＦ）、顆粒球単球ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）、赤血球造血刺激因子製剤（ＥＳＡ）、及びサイクロスポリンから選択される追加の治療薬を更に投与することができる、請求項１８〜２７のいずれか一項に記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、２０１４年２月２８日出願の米国特許仮出願第６１／９４６，１２４号の優先権の利益を主張するものであり、これにより、この特許の内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、ＪＡＫ１選択的阻害剤及び骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）の治療におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）は、以前は前白血病として知られており、１つ以上の主要な骨髄性細胞系統における無効造血を特徴とする異種性及びクローン性の造血障害である。骨髄異形成症候群は、骨髄機能不全、末梢血球減少症、及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）へと発展する性質と関連する。更に、ＭＤＳでは約５０％の症例においてクローン性の細胞遺伝学的異常が検出される。一般集団において、ＭＤＳは１００，０００人あたり５人に発症し、その発症率は年齢と共に上昇し、７０歳を超える人々では１００，０００人あたり約２２〜４５人にまで達する（非特許文献１；非特許文献２）。ＭＤＳの病態生理学に関する知見の科学的進歩にも関わらず、とりわけ罹患患者が造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）の候補者ではない場合、利用可能な治療法の選択肢は少ししかなく、ほとんどが待期的である。
【０００４】
ＭＤＳの標準治療には、診察及び臨床モニタリングを伴う支持療法、社会心理学的補助療法、並びに生活の質の改善への取り組みが含まれる（非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５）。更に、症候性貧血に対する赤血球輸血及び血小板減少症による出血症状に対する血小板輸血が必要とされる。赤血球輸血を必要とする骨髄異形成症候群患者は、輸血の頻度を増やすことを必要とするアロ抗体の形成、血清フェリチンを１０００μｇ／Ｌ未満に維持するために鉄キレート化剤を必要とする、肝臓、心臓、及び内分泌器への末端器官障害を伴う鉄過剰などの合併症を引き起こすことがある（非特許文献４，非特許文献５）。治療抵抗性のある症候性血球減少症の症例では、感染性合併症を伴う好中球減少症ＭＤＳに対する組み換えヒト顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ  ＣＳＦ）又は顆粒球単球ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）の使用、症候性貧血に対する赤血球造血刺激因子製剤（ＥＳＡ）の使用など、造血サイトカイン補助療法が必要とされる（非特許文献３，非特許文献６；非特許文献７）。初期のＭＤＳ、即ち、ＩＰＳＳ  ｌｏｗ及びＩＰＳＳ  Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ−１の場合、治療的介入が必要となる最も一般的な原因は症候性貧血である。ＥＳＡは、これらの患者のごく一部に限り効果があり、赤血球輸血に依存していない患者又は内因性ＥＰＯ値が低い（＜５００ＩＵ）患者において最高の反応が得られている（非特許文献３，非特許文献６，非特許文献７，非特許文献８）。最終的には、患者はＥＳＡ療法に反応しなくなり、赤血球輸血補助療法が必要になるが、赤血球輸血が必要で、網赤血球数が低い場合であっても、通常はＥＳＡの使用が継続される。輸血の必要量は様々であり、アンギナ、赤血球に対するアロ抗体の形成、巨脾症、血小板減少症又は血小板機能異常症による潜在性消化管出血など、より高いＨｇｂ値を必要とする合併症の影響を受けることがある（非特許文献４，非特許文献５，非特許文献８）。
【０００５】
低強度療法には、低強度化学療法又は生物学的修飾物質（ＢＲＭ）が含まれる。ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤である５アザシチジン及びデシタビン（５−アザ−２’−デオキシシチジン）などのメチル化抑制剤は、無作為化第３相試験において白血病性形質転換のリスクを減少させ、一定割合の患者において全生存期間を改善させることが示されている（非特許文献８，非特許文献９；非特許文献１０）。同様に、デシタビンは、中リスク及び高リスクの疾患を有するＭＤＳ患者において、より高い疾患奏功率、寛解持続期間、ＡＭＬに発展するまでの時間、及び延命効果を実証している。更に、デシタビンは、疲労及び身体機能に関する患者報告ＱＯＬ（Ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｏｒｇａｎｉｓａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ［ＥＯＲＴＣ  ＱＬＱ  Ｃ３０］に準拠）において大幅な改善を実証した（非特許文献１１；非特許文献１２；非特許文献１３）。５−アザシチジン及びデシタビンは両方ともＭＤＳ治療用として承認されており、具体的には、ＩＰＳＳ  Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ  ２及び高リスクＭＤＳの患者に対して臨床的有用性を提供し、ＮＣＣＮ  ＭＤＳ委員会によって推奨されている（非特許文献１４）。
【０００６】
炎症性分子は、ＭＤＳにおいて造血前駆細胞の増殖及びアポトーシス死を促進する制御キューとして関係があるとされる。慢性の免疫刺激が、造血幹／前駆細胞（ＨＳＰＣ）とＢＭ微小環境の両方における老化依存の変化と組み合わさって、疾患の病因に対し決定的な役割を果たしていると考えられる。相次ぐ証拠は、造血の老化とＭＤＳの病理生物学の両方における自然免疫シグナル伝達の活性化を意味している（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。そのため、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）、サイクロスポリン、サリドマイドとその類似体レナリドミドなどのＴ細胞阻害剤を含む免疫療法剤（非特許文献１５；非特許文献１６；非特許文献１７；非特許文献１８；非特許文献１９）が低強度剤ＭＤＳとして使用される。ＭＤＳの高強度療法には、強化導入化学療法が含まれ、これは、ＡＭＬ及びＨＳＣＴを処置するために使用される。疾病の自然史を変化させる可能性を有する様々な強化化学療法レジメンが試されてきたが、比較試験でその有効性を示すことはできていない。この方法は依然として臨床試験段階であり、高リスク疾患のＭＤＳ患者のための可能な選択肢の１つである。同種ＨＳＣＴ（ＭＤＳの唯一の治癒的な治療方法であり、好ましくは適合血縁ドナーによる）は、高リスクＭＤＳ患者に対して好ましい選択肢であるが、好適なドナーの不足及び加齢に関連した並存疾患により、これらの患者がこの方法を受けられないことがよくある（非特許文献１４；非特許文献２０；非特許文献２１）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，「Ｔｈｅ  ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ  ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ」ｉｎ  Ｈｏｆｆｍａｎ，ｅｔ  ａｌ，ｅｄｓ．Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ：Ｂａｓｉｃ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ（３ｒｄ  ｅｄ．），Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ；２０００：１１０６〜１１２９
【非特許文献２】Ｌｉｅｓｖｅｌｄ  ａｎｄ  Ｌｉｃｈｔｍａｎ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ８８．「Ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ（Ｃｌｏｎａｌ  Ｃｙｔｏｐｅｎｉａｓ  ａｎｄ  Ｏｌｉｇｏｂｌａｓｔｉｃ  Ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ）」，ｉｎ  Ｐｒｃｈａｌ  ｅｔ  ａｌ，ｅｄｓ．Ｗｉｌｌｉａｍｓ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ．８ｔｈ  ｅｄ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ；２０１０
【非特許文献３】Ｃｈｅｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ  ２０００；９６：３６７１〜３６７４
【非特許文献４】Ｖｅｎｕｇｏｐａｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ  Ｒｅｓ  ２００１；１０８：２５７〜２６５
【非特許文献５】Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｅｄ  Ｈｅｍ−Ｏｎｃ  １９９７；４：２３１〜２３８
【非特許文献６】Ｊａｄｅｒｓｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ  ２００５；１０６：８０３〜８１１
【非特許文献７】Ｓｃｈｉｆｆｅｒ，Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｅｄｕｃ  Ｐｒｏｇｒａｍ  ２００６：２０５〜２１０
【非特許文献８】Ｆｅｎａｕｘ，ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ  ２００９；１０：２２３〜２３２
【非特許文献９】Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２００２；２０：２４２９〜２４４０
【非特許文献１０】Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２００６；２４：３８９５〜３９０３
【非特許文献１１】Ｋａｎｔａｒｊｉａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  ２００６；１０６：１７９４〜１８０３
【非特許文献１２】Ｌｕｂｂｅｒｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ  ２００１；１１４：３４９〜３５７
【非特許文献１３】Ｌｕｂｂｅｒｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２０１１；２９：１９８７〜１９９６
【非特許文献１４】Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｎｅｔｗｏｒｋ（ＮＣＣＮ）。Ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  １。２０１２。ｗｗｗ．ｎｃｃｎ．ｏｒｇ／ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌｓ／ｐｈｙｓｉｃｉａｎ＿ｇｌｓ／ｆ＿ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ．ａｓｐ
【非特許文献１５】Ｍｏｌｌｄｒｅｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ  １９９７；９９：６９９〜７０５
【非特許文献１６】Ｓｌｏａｎｄ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２００８；２６：２５０５〜２５１１
【非特許文献１７】Ｒａｚａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ２００８；１１１：８６〜９３
【非特許文献１８】Ｆｅｎａｕｘ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ２０１１；１１８：３７６５〜３７７６
【非特許文献１９】Ｌｉｓｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２００５；３５２：５４９〜５５７
【非特許文献２０】Ｌａｒｓｏｎ，Ｂｅｓｔ  Ｐｒａｃｔ  Ｒｅｓ  Ｃｌｉｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ  ２００６；１９：２９３〜３００
【非特許文献２１】Ｓｃｈｉｆｆｅｒ，Ｂｅｓｔ  Ｐｒａｃｔ  Ｒｅｓ  Ｃｌｉｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ  ２００７；２０：４９〜５５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
そこで、骨髄異形成症候群の治療のための新療法を開発する必要性がある。本願は、この必要性及びその他に対処する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本願は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）の治療を必要としている患者においてそれを行う方法を提供するものであり、治療的に有効な量のＪＡＫ１選択的阻害剤、又はその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む。
【００１０】
本願は、骨髄異形成症候群の治療を必要としている患者においてそれを行うためのＪＡＫ１選択的阻害剤を更に提供する。
本願はまた、骨髄異形成症候群の治療を必要としている患者においてその治療で使用する薬剤の製造のためにＪＡＫ１選択的阻害剤を使用する方法も提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本明細書に記載される方法は、ＪＡＫ１選択的阻害剤を利用する。ＪＡＫ１選択的阻害剤は、ＪＡＫ１活性を他のヤヌスキナーゼよりも優先的に阻害する化合物である。ＪＡＫ１は、無調節の場合に疾病状態をもたらし得る、又はその一因となり得る、幾つかのサイトカイン及び増殖因子シグナル伝達経路において中心的な役割を果たす。例えば、関節リウマチ（有害な影響を与えることが示唆されている疾病）ではＩＬ−６値が上昇する（Ｆｏｎｅｓｃａ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，８：５３８〜４２，２００９）。ＩＬ−６は、少なくとも部分的に、ＪＡＫ１を介してシグナルを送るため、ＪＡＫ１阻害によって直接的又は間接的にＩＬ−６を中和すると、臨床的有用性が得られることが期待される（Ｇｕｓｃｈｉｎ，ｅｔ  ａｌ  Ｅｍｂｏ  Ｊ  １４：１４２１，１９９５；Ｓｍｏｌｅｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｌａｎｃｅｔ  ３７１：９８７，２００８）。更に、一部の癌では、ＪＡＫ１が変異し、好ましくない腫瘍細胞の増殖と生存が構成される（Ｍｕｌｌｉｇｈａｎ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．１０６：９４１４〜８，２００９；Ｆｌｅｘ，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．２０５：７５１〜８，２００８）。他の自己免疫疾患及び癌では、ＪＡＫ１を活性化する全身の炎症性サイトカイン値の上昇もまた、疾病及び／又は関連症状の一因となり得る。したがって、そのような疾病を有する患者は、ＪＡＫ１阻害が有効な場合がある。ＪＡＫ１の選択的阻害剤は、他のＪＡＫキナーゼの阻害による不必要な潜在的に好ましくない効果を発生させることなく、効能を得ることができる。
【００１２】
ＪＡＫ１の（他のＪＡＫキナーゼに対する）選択的阻害剤は、より選択性の劣る阻害剤よりも多様な治療上の利点を有し得る。ＪＡＫ２に対する選択性に関しては、幾つかの重要なサイトカイン及び増殖因子がＪＡＫ２を介してシグナルを送っており、これには、例えば、エリスロポエチン（Ｅｐｏ）及びトロンボポエチン（Ｔｐｏ）が挙げられる（Ｐａｒｇａｎａｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ．９３：３８５〜９５，１９９８）。Ｅｐｏは、赤血球産生のための重要な増殖因子である。したがって、Ｅｐｏ依存性シグナル伝達が少ないと、赤血球の数が減少し、貧血が発症することがある（Ｋａｕｓｈａｎｓｋｙ，ＮＥＪＭ  ３５４：２０３４〜４５，２００６）。Ｔｐｏは、ＪＡＫ２依存性成長因子の別の例であり、巨核球（血小板が産生される細胞）の増殖及び成熟の制御において中心的な役割を果たす（Ｋａｕｓｈａｎｓｋｙ，ＮＥＪＭ  ３５４：２０３４〜４５，２００６）。そのため、Ｔｐｏシグナル伝達の減少は、巨核球の数を減少させ（巨核球減少症）、循環血小板数を減少させる（血小板減少症）であろう。結果として、好ましくない及び／又は制御できない出血が起こり得る。ＪＡＫ３、Ｔｙｋ２などの他のＪＡＫの阻害の減少もまた、これらのキナーゼの機能的なバージョンが不足しているヒトには重症複合免疫不全症、高ＩｇＥ症候群などの多数の疾患が発症することが証明されているので、好ましい場合がある（Ｍｉｎｅｇｉｓｈｉ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２５：７４５〜５５，２００６；Ｍａｃｃｈｉ，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，３７７：６５〜８，１９９５）。したがって、他のＪＡＫに対する結合性が低下しているＪＡＫ１阻害剤は、免疫抑制、貧血、及び血小板減少症を伴う副作用の減少に関して、より選択性の劣る阻害剤よりも非常に有利であろう。
【００１３】
炎症性サイトカインは、ＭＤＳの病因において重要な役割を果たし、結果的に血球減少症及び異形成造血（dysplastic hematopoiesis）を発症させる。これらの炎症性サイトカインの活性を抑制すると、正常な造血が促進され、骨髄前駆細胞が早期アポトーシスから救済されることが仮説として立てられている。炎症性サイトカインは、リガンド媒介受容体二量化及び転移／自己リン酸化からのＪＡＫの近位を伴うＪＡＫ活性化によって下流効果を媒介する。結果として生じるＪＡＫヘテロ二量体は、ＪＡＫ１とＪＡＫ２又はＪＡＫ１とＪＡＫ３から構成されており、シグナルを変換し、これらのサイトカインの細胞応答を媒介する。更に、ＪＡＫホモ二量体は、ＪＡＫ２のみで構成されており、ＥＰＯ（赤血球産生を活性化する役割を持つ）、ＴＰＯ（血小板産生を活性化する役割を持つ）などの骨髄増殖因子からのシグナルを変換する。したがって、選択的ＪＡＫ１阻害剤は、結果的にＪＡＫ２媒介の赤血球産生及び血小板産生を阻害することなく炎症性サイトカイン信号伝達を破棄し、それにより、正常な造血が回復され、骨髄性の血球減少が軽減されるであろう。
【００１４】
ＭＤＳの病態生理学に関する知見の科学的進歩にも関わらず、とりわけ罹患患者がＨＳＣＴの候補者ではない場合、利用可能な治療法の選択肢は少ししかなく、ほとんどが待期的である。幾つかの研究では、ＭＤＳはクローン性疾患であることが指摘されており、増殖したクローンは骨髄内の造血前駆細胞の過剰増殖の結果であることが実証されている。抹消血球減少症の原因となる骨髄内の過剰増殖状態のパラドックスについて調査が行われ、過剰な量の骨髄内プログラム細胞死又は造血細胞のアポトーシスが存在することが明らかになった。このアポトーシスは、全てのＦＡＢ分類の患者に見られたが、芽球数が増加している患者では減少した。クローン集団は、アポトーシスに対して徐々に耐性を示すようになり、正常な造血前駆細胞よりも増殖性が優位となって、芽球数の増加及びＡＭＬへの発展につながったことは明らかだった。更に、過剰なアポトーシスは、ＭＤＳ患者の骨髄内で過剰発現する複数の前炎症性サイトカインによって大部分が媒介されたことが明白になった。ＭＤＳの病理生物学に関係していたサイトカインには、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ  γ）、及びＩＬ  １βが挙げられる。高血漿濃度のＴＮＦ−α（典型的なアポトーシス促進性サイトカイン）がＭＤＳ患者の末梢血及び骨髄の中で観測されており、ＴＮＦ受容体及びメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）の高い発現がＭＤＳ患者由来の骨髄単核球の中で観測されている。同様に、ＩＦＮ  γ及びＩＬ  １βの量の増加がＭＤＳ骨髄単核球の中で発見されており、ＭＤＳからＡＭＳへの発展にＩＬ−１βが関係していると考えられている。ＩＬ−１βは、ＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−３を活性化することによって可変の調節作用を造血細胞に与えるが、炎症状態で見られるような高い濃度では、ＴＮＦ  α及びプロスタグランジンＥ２の誘発によって造血の抑制をもたらし、後者は骨髄性幹細胞増殖の強力な抑制剤である。更に、高い値のＩＬ−６、線維芽細胞増殖因子、肝細胞増殖因子、及びトランスフォーミング増殖因子βがＭＤＳ患者由来の骨髄性細胞の中で見られている。また更に、正常な造血増殖及び成熟を抑制するサイトカインですら、このアポトーシス促進作用を発展中の異常クローンに与えることに失敗し、結果的にこれらの異常細胞が選択的に増殖する。これらの前炎症性サイトカインの発生源は、正常には正常な造血細胞を育成して増殖及び分化させ、またＭＤＳの病理生物学に影響する免疫調節細胞の浸潤及び腫瘍起因性血管形成の原因でもあり得る、異常骨髄微小環境であることを示す証拠が存在する（Ｒａｚａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １９９５；８６：２６８〜２７６；Ｒａｚａ，ｅｔ  ａｌ，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｈｅｍａｔｏｌ  １９９６ａ；６３：２６５〜２７８；Ｒａｚａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋ  Ｒｅｓ  １９９６ｂ；２０：８８１〜８９０；Ｍｕｎｄｌｅ，ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｈｅｍａｔｏｌ  １９９９；６０：３６〜４７；Ｃｌａｅｓｓｅｎｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ２００２；９９：１５９４〜１６０１）。
【００１５】
サイトカイン媒介の前炎症性状態がＭＤＳの病因に関与しているという発想は、分化中の造血細胞を早期アポトーシスから保護することによってＭＤＳにおける血球減少症を改善する、抗サイトカイン療法という今までにない斬新なアプローチにつながった。サリドマイドとその類似体レナリドミド、インフリキシマブ、エタネルセプトなどの抗ＴＮＦ−α剤がＭＤＳ患者の血球減少症の改善において有効であることは実証済みである（ＮＣＣＮ  ２０１２（ｓｕｐｒａ），Ｌａｒｓｏｎ  ２００６（ｓｕｐｒａ），Ｓｃｈｉｆｆｅｒ  ２００７（ｓｕｐｒａ））。ＭＤＳ患者１４人の臨床試験において、エタネルセプトは、患者の２５％において赤血球系の血液改善を示すと共に、評価可能な患者の１２．５％において血小板数及びＡＮＣの改善を示した。更に、断続的なエタネルセプトとＡＴＧを組み合わせて投与すると、赤血球系の血液改善の効果が更に高まり、輸血を必要としているＭＤＳ患者１４人のうちの５人が赤血球及び血小板の輸血を２年以上にわたって必要としなくなった。ＭＤＳにおいてサリドマイドを調査した臨床試験では、患者８３人が登録され、５１人が１２週間の治療を完了し、患者１６人が血液の改善を示し、そのうちそれまで輸血に依存していた１０人が輸血に依存しなくなったと共に、奏功患者のほとんどがＩＰＰＳ低リスク又はＩｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ  １リスクのいずれかに分類された（ＮＣＣＮ  ２０１２  （ｓｕｐｒａ））。更に、より高いリスクに分類された患者、とりわけ高い芽球割合を有する患者は、早期に治療を中断する傾向があった。前炎症性サイトカインの影響を抑制する別の方法は、それらの細胞応答を阻害することである。相当数のサイトカイン及び増殖因子受容体が、ＪＡＫファミリーの非受容体ＴＹＫを利用して、細胞外リガンド結合を転写因子ＳＴＡＴシグナル伝達によって細胞応答に伝達する。
【００１６】
ＪＡＫには、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、及びＴＹＫ２の４つのメンバーが存在する。ＪＡＫは、サイトカイン及び増殖因子受容体と構成的に関連付けられ、リガンド誘導性受容体二量化の直接の結果として活性化状態になっており、ＪＡＫ活性化は、後続のＪＡＫの近位化及びＪＡＫ触媒ドメインの活性化ループで検出された保存チロシンの転移／自己リン酸化時に起こる。これらのチロシンのリン酸化時、ＪＡＫは高活性状態になり、次いでサイトカイン受容体上の特定のチロシン残基をリン酸化することができ、これらは複数のタンパク質（ＳＴＡＴタンパク質を含む）に対して接合部位として機能する。ＪＡＫは、ＳＴＡＴ活性化に関連付けられたキナーゼの主要ファミリーである。活性化されたＳＴＡＴは核に転座し、その場所で転写因子として機能し、細胞活性化、局在、生存、及び増殖に重要な複数の遺伝子の発現を促進する。
【００１７】
ルキソリチニブは、ＪＡＫ１及びＪＡＫ２阻害剤であり、骨髄線維症患者の脾臓の大きさの顕著な減少及び症状の改善を実証済みである。これらの改善は、ＪＡＫ２におけるＶ６１７Ｆ突然変異の存在の有無に関係なく被験者によく表れていたため、前炎症性サイトカインの阻害と結びついている可能性が高い。ルキソリチニブで観測される主要有害事象（ＡＥ）は、血小板減少症及び貧血である。両方ともまれに、二重盲式プラシーボ対照第３相試験において臨床試験中止の原因になったことがあり、両方とも少なくとも部分的に、ＪＡＫ２媒介の骨髄抑制によるものである。したがって、ＪＡＫ１の選択的阻害は、ＭＤＳ患者内で前炎症性サイトカインを阻害する有益な影響を与え、結果的に、造血前駆細胞の早期アトポーシスがもたらす血球減少症を寛解させるであろうことが仮説として立てられる。更に、ＪＡＫ２活性を残すことにより、造血サイトカイン、即ちＥＰＯ及びＴＰＯの生理活性が可能となり、正常な造血細胞の生理学的な増殖及び分化が可能となるであろう。
【００１８】
更に、ＭＤＳ患者には鉄過剰が高い頻度で発生し、最新のデータでは全生存期間と無白血病生存期間の両方に影響することが示唆されている。ヘプシジン（近年発見された鉄恒常性を調節する重要ホルモン）の異常産生がこの点に関与し、ＩＬ−６などの炎症性サイトカインによって調節されることが仮定されている。ＭＤＳにおいて、ヘプシジン及びＣＲＰの両方が、一般的炎症のマーカーとして増加することが近年発見された。Ｓａｎｔｉｎｉ，ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ，６（８），ｅ２３１０９，ｐａｇｅｓ  １〜８（２０１１）。これらのデータは、ＣＲＰ値及びヘプシジン値を減少させることができるＪＡＫ阻害は、ＭＤＳで発生する炎症及び鉄過剰を反転させ得ることを示唆している。
【００１９】
そこで、本願は、とりわけ、骨髄異形成症候群の治療を必要としている患者においてそれを行う方法を提供するものであり、治療的に有効な量のＪＡＫ１選択的阻害剤、又はその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む。本明細書で使用するとき、骨髄異形成症候群は、２００８年に世界保健機関によって提案されたＭＤＳの分類を指す（例えば、表１を参照）。特に、１９９７年において、世界保健機関（ＷＨＯ）は、Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｈｅｍａｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ（ＳＨ）及びＥｕｒｏｐｅａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｅｍａｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ（ＥＡＨＰ）と協力して、造血器新生物の新しい分類を提案した（Ｈａｒｒｉｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  １９９９；１７：３８３５〜３８４９；Ｖａｒｄｉｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ２００２；１００：２２９２〜２３０２）。ＭＤＳの場合、ＷＨＯは、Ｆｒｅｎｃｈ−Ａｍｅｒｉｃａｎ−Ｂｒｉｔｉｓｈ（ＦＡＢ）分類の形態学的基準だけでなく、取り込まれた使用可能な遺伝学的、生物学的、及び臨床的な特徴を利用してＭＤＳのサブセットを定義した（Ｂｅｎｎｅｔｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ  １９８２；５１：１８９〜１９９）。２００８年において、ＭＤＳのＷＨＯ分類（表１）は、新しい臨床的及び科学的な情報を取り込むことによって、単一血球系統異形成症の精密かつ予後的に関連した下位分類を可能にするように更に改良された（Ｖａｒｄｉｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ２００９；１１４：９３７〜９５１；Ｓｗｅｒｄｌｏｗ，ｅｔ  ａｌ．，ＷＨＯ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｕｒｓ  ｏｆ  Ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ａｎｄ  Ｌｙｍｐｈｏｉｄ  Ｔｉｓｓｕｅｓ．４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｌｙｏｎ  Ｆｒａｎｃｅ：ＩＡＲＣ  Ｐｒｅｓｓ；２００８：８８〜１０３；Ｂｕｎｎｉｎｇ  ａｎｄ  Ｇｅｒｍｉｎｇ，”Ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ  ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ／ｎｅｏｐｌａｓｍｓ”ｉｎ  Ｃｈａｐｔｅｒ  ５，Ｓｗｅｒｄｌｏｗ，ｅｔ  ａｌ，ｅｄｓ．ＷＨＯ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｕｒｓ  ｏｆ  Ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ａｎｄ  Ｌｙｍｐｈｏｉｄ  Ｔｉｓｓｕｅｓ．（ｅｄ．４ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ）：Ｌｙｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ：ＩＡＲＣ  Ｐｒｅｓｓ；２００８：８８〜１０３）。
【００２０】
【表１】
0006576941.tif 000002
【００２１】
幾つかの実施形態では、ＪＡＫ１選択的阻害剤は、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、及びＴＹＫ２よりもＪＡＫ１に対して選択的である。例えば、本明細書に記載の化合物、又はその製薬的に許容できる塩は、１つ以上のＪＡＫ２、ＪＡＫ３、及びＴＹＫ２よりもＪＡＫ１を優先的に阻害する。幾つかの実施形態では、この化合物はＪＡＫ１をＪＡＫ２よりも優先的に阻害する（例えば、ＪＡＫ１／ＪＡＫ２  ＩＣ５０比＞１を有する）。幾つかの実施形態では、この化合物又は塩は、ＪＡＫ２よりもＪＡＫ１に対して約１０倍選択的である。幾つかの実施形態では、この化合物又は塩は、１ｍＭ  ＡＴＰでのＩＣ５０を測定することによって計算されるように、ＪＡＫ２よりもＪＡＫ１に対して約３倍、約５倍、約１０倍、約１５倍、又は約２０倍選択的である（例えば、実施例Ａを参照）。
【００２２】
幾つかの実施形態では、ＪＡＫ１選択的阻害剤は、表２の化合物、又はその製薬的に許容できる塩である。
【００２３】
【表２−１】
0006576941.tif 000003
【００２４】
【表２−２】
0006576941.tif 000004
【００２５】
【表２−３】
0006576941.tif 000005
【００２６】
【表２−４】
0006576941.tif 000006
【００２７】
【表２−５】
0006576941.tif 000007
【００２８】
【表２−６】
0006576941.tif 000008
＋は、１０ｎＭ未満を意味する（アッセイ条件については実施例Ａを参照）
ａ鏡像異性体１のデータ
ｂ鏡像異性体２のデータ
【００２９】
幾つかの実施形態では、ＪＡＫ１選択的阻害剤は、｛１−｛１−［３−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン−４−イル｝−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルアジピン酸塩である。
【００３０】
幾つかの実施形態では、ＪＡＫ１選択的阻害剤は、（Ｒ）−３−［１−（６−クロロピリジン−２−イル）ピロリジン−３−イル］−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル、（Ｒ）−３−（１−［１，３］オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イルピロリジン−３−イル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル、（Ｒ）−４−［（４−｛３−シアノ−２−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］−３−フルオロベンゾニトリル、（Ｒ）−４−［（４−｛３−シアノ−２−［３−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピロール−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］−３−フルオロベンゾニトリル、若しくは（Ｒ）−４−（４−｛３−［（ジメチルアミノ）メチル］−５−フルオロフェノキシ｝ピペリジン−１−イル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ブタンニトリル、又は上記のいずれかの製薬的に許容できる塩から選択される。
【００３１】
幾つかの実施形態では、ＪＡＫ１選択的阻害剤は、（Ｓ）−３−［１−（６−クロロピリジン−２−イル）ピロリジン−３−イル］−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル、（Ｓ）−３−（１−［１，３］オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イルピロリジン−３−イル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル、（Ｓ）−４−［（４−｛３−シアノ−２−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］−３−フルオロベンゾニトリル、（Ｓ）−４−［（４−｛３−シアノ−２−［３−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピロール−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］−３−フルオロベンゾニトリル、若しくは（Ｓ）−４−（４−｛３−［（ジメチルアミノ）メチル］−５−フルオロフェノキシ｝ピペリジン−１−イル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ブタンニトリル、又は上記のいずれかの製薬的に許容できる塩から選択される。
【００３２】
幾つかの実施形態では、ＪＡＫ１選択的阻害剤は、ＧＬＰＧ０６３４（Ｇａｌａｐａｇｏｓ）である。
【００３３】
幾つかの実施形態では、表２に記載の化合物は、２０１０年５月２１日出願の米国特許出願公開第２０１０／０２９８３３４号、２０１０年８月３１日出願の同第２０１１／００５９９５１号、２０１１年３月９日出願の同第２０１１／０２２４１９０号、２０１１年１１月１８日出願の同第２０１２／０１４９６８１号、２０１１年１１月１８日出願の同第２０１２／０１４９６８２号、２０１２年６月１９日出願の同第２０１３／００１８０３４号、２０１２年８月１７日出願の同第２０１３／００４５９６３号、及び２０１３年５月１７日出願の同第２０１４／０００５１６６号に記載されている合成手順によって調製され、各特許の内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。
【００３４】
幾つかの実施形態では、ＪＡＫ１阻害剤は、２０１０年５月２１日出願の米国特許出願公開第２０１０／０２９８３３４号、２０１０年８月３１日出願の同第２０１１／００５９９５１号、２０１１年３月９日出願の同第２０１１／０２２４１９０号、２０１１年１１月１８日出願の同第２０１２／０１４９６８１号、２０１１年１１月１８日出願の同第２０１２／０１４９６８２号、２０１２年６月１９日出願の同第２０１３／００１８０３４号、２０１２年８月１７日出願の同第２０１３／００４５９６３号、及び２０１３年５月１７日出願の同第２０１４／０００５１６６号に記載の化合物から選択され、各特許の内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。
【００３５】
幾つかの実施形態では、骨髄異形成症候群は、単一血球系統の異形成を伴う不応性血球減少症（ＲＣＵＤ）である。
【００３６】
幾つかの実施形態では、骨髄異形成症候群は、環状鉄芽球を伴う不応性貧血（ＲＡＲＳ）である。
【００３７】
幾つかの実施形態では、骨髄異形成症候群は、多血球系統の異形成を伴う不応性血球減少症である。
【００３８】
幾つかの実施形態では、骨髄異形成症候群は、芽球増加を伴う不応性貧血−１（ＲＡＥＢ−１）である。
【００３９】
幾つかの実施形態では、骨髄異形成症候群は、芽球増加を伴う不応性貧血−２（ＲＡＥＢ−２）である。
【００４０】
幾つかの実施形態では、骨髄異形成症候群は、分類不能型骨髄異形成症候群（ＭＤＳ−Ｕ）である。
【００４１】
幾つかの実施形態では、骨髄異形成症候群は、染色体異常ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｄｅｌ（５ｑ）を伴う骨髄異形成症候群である。
【００４２】
幾つかの実施形態では、骨髄異形成症候群は、赤血球造血刺激因子製剤（ＥＳＡ）に対して不応性である。幾つかの実施形態では、ＥＳＡに対する不応性は、少なくとも４０，０００ＩＵ／週のエリスロポエチン（ＥＰＯ）（又は等価物）を８週間投与した後、少なくとも１．５ｇ／ｄＬのＨｇｂにおいて改善がないことを意味する。
【００４３】
幾つかの実施形態では、患者は、赤血球（ＲＢＣ）輸血依存である。幾つかの実施形態では、赤血球輸血依存とは、患者が治療前の８週間にわたってＨｇｂ  ９ｇ／ｄＬ未満に対して少なくとも４単位の赤血球濃厚液を必要とすることを意味する。
【００４４】
幾つかの実施形態では、患者は、健常人の対照群と比べて血清ヘプシジン値が上昇している。幾つかの実施形態では、患者は、健常人の対照群と比べて血清Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）濃度が上昇している。幾つかの実施形態では、上昇した血清ＣＲＰ濃度は、約１０μｇ／ｍＬ以上の濃度である。幾つかの実施形態では、健常人は、Ｓａｎｔｉｎｉ，ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ，６（８），ｅ２３１０９，ｐａｇｅｓ  １〜８（２０１１）で定義されるものであり、これにより、この文献の内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。
【００４５】
幾つかの実施形態では、患者は、１又は２の修正グラスゴー予後スコア（modified Glasgow Prognostic Score）を有する。修正グラスゴー予後スコア（ＧＰＳ）は、ＭｃＭｉｌｌｉａｎ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，３９（５）：５３４〜５４０（２０１３）に記載されており、これにより、この文献の内容全体（とりわけ、表１に示されているスコア）を参照によって本願明細書に引用したものとする。
【００４６】
幾つかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の化合物、又はその製薬的に許容できる塩を、本明細書のいずれかの実施形態に記載されているように、本明細書に記載のいずれかの疾患又は障害の治療方法で使用するために、提供する。幾つかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の化合物、又はその製薬的に許容できる塩の使用を、本明細書のいずれかの実施形態に記載されているように、本明細書に記載のいずれかの疾患又は障害の治療方法で使用するための薬剤の調製のために、提供する。
【００４７】
ＪＡＫ１選択的阻害剤はまた、本明細書に記載の化合物の製薬的に許容できる塩を含む。本明細書で使用するとき、「製薬的に許容できる塩」は開示される化合物の誘導体を指し、親化合物は、既存の酸部分又は塩基部分をその塩形態に転化することによって修正される。製薬的に許容できる塩の例には、アミンなどの塩基性残基の無機又は有機酸塩、カルボン酸などの酸性残基のアルカリ又は有機塩、及び同種のものが挙げられるが、これらに限定されない。製薬的に許容できる塩には、例えば、非毒性の無機又は有機酸から形成された親化合物の非毒性塩が含まれる。製薬的に許容できる塩は、塩基性部分又は酸性部分を含む親化合物から従来の化学的手法によって合成され得る。一般には、かかる塩は、これらの化合物の遊離酸性又は塩基性形態を適切な塩基又は酸の化学量論量と水中、有機溶媒中、又はそれら２つの混合物中で反応させることにより調製され得、一般には、エーテル、酢酸エチル、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、又はブタノール）、アセトニトリル（ＡＣＮ）などの非水性媒体が好ましい。好適な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５，ｐ．１４１８及びＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２（１９７７）に記載されており、各文献の内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。幾つかの実施形態では、本明細書に記載の化合物はＮ−酸化物形態を含む。
【００４８】
本明細書に記載の化合物は、非対称性であり得る（例えば、１つ以上の立体中心を有している）。別途記載のない限り、鏡像異性体、ジアステレオマーなど、全ての立体異性体を対象とする。非対称に置換された炭素原子を含有する本明細書に記載の化合物は、光学活性体又はラセミ体で単離され得る。光学不活性の出発原料から光学活性体を調製する方法は、ラセミ混合物の分割による方法、立体選択合成による方法など、当該技術分野において周知である。オレフィン、Ｃ＝Ｎ二重結合、及び同種のものの多くの幾何異性体もまた、本明細書に記載の化合物中に存在することができ、そのような安定異性体は全て、本発明において意図される。本発明の化合物のシス及びトランス幾何異性体が記述され、異性体の混合物として、又は別個の異性体として、単離され得る。
【００４９】
化合物のラセミ混合物の分割は、当該技術分野において周知である多数の方法のうちのいずれかによって実施され得る。方法の例には、光学活性の塩生成有機酸であるキラル分割酸を使用した分別再結晶が挙げられる。分別再結晶法の好適な分割剤は、例えば、光学活性酸であり、酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、乳酸、又はβ−カンファースルホン酸などの様々な光学活性カンファースルホン酸のＤ体及びＬ体などである。分別再結晶法に好適な他の分割剤には、α−メチルベンジルアミン（例えば、Ｓ及びＲ体、又は純粋なジアステレオマー体）、２−フェニルグリシノール、ノルエフェドリン、エフェドリン、Ｎ−メチルエフェドリン、シクロヘキシルエチルアミン、１，２−ジアミノシクロヘキサン、及び同種のものの純粋な立体異性体が挙げられる。
【００５０】
ラセミ混合物の分割はまた、光学活性分割剤（例えば、ジニトロベンゾイルフェニルグリシン）が充填されたカラムでの溶出により実施され得る。好適な溶出溶媒組成物は、当業者なら決定することができる。
【００５１】
本明細書に記載の化合物はまた、互変異性体も含む。互変異性体は、プロトンの同時移動と共に、単結合を隣接する二重結合と交換することから得られる。互変異性体には、同じ実験式及び総電荷を有している異性体プロトン化状態であるプロトトロピー互変異性体が含まれる。プロトトロピー互変異性体の例には、ケトン−エノールペア、アミド−イミド酸ペア、ラクタム−ラクチムペア、エナミン−イミンペア、及びプロトンが複素環系の２つ以上の位置を占め得る環状体、例えば、１Ｈ−及び３Ｈ−イミダゾール、１Ｈ−、２Ｈ−及び４Ｈ−１，２，４−トリアゾール、１Ｈ−及び２Ｈ−イソインドール、並びに１Ｈ−及び２Ｈ−ピラゾールが挙げられる。互変異性体は、適切な置換によって平衡的に又は立体的に１つの形態に固定され得る。
【００５２】
本発明の化合物はまた、中間体又は最終化合物に存在する原子の全ての同位体も含み得る。同位体には、原子番号は同じでも質量数が異なる原子が含まれる。例えば、水素の同位体には重水素が含まれる。
【００５３】
本明細書で使用するとき、用語「化合物」は、記載された構造の全ての立体異性体、幾何異性体、互変異性体、及び同位体を含むように意図されている。更に、名前又は構造によって１つの特定の互変異性体に識別される本明細書に記載の化合物は、特に明記しない限り、他の互変異性体を含むように意図されている。
【００５４】
全ての化合物及びその製薬的に許容できる塩は、水、溶媒などの他の物質と一緒に検出され得る（例えば、水和物及び溶媒和物）、又は単離され得る。
【００５５】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の化合物又はその塩は、実質的に単離される。「実質的に単離される」は、化合物がその形成又は検出環境から少なくとも部分的に又は実質的に分離されることを意味する。部分的な分離は、例えば、本発明の化合物中で濃縮された組成物を含み得る。実質的な分離は、本発明の化合物又はその塩の少なくとも約５０重量％、少なくとも約６０重量％、少なくとも約７０重量％、少なくとも約８０重量％、少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９７重量％、又は少なくとも約９９重量％を含有している組成物を含み得る。化合物及びその塩を単離する方法は、当該技術分野において常用されている。
【００５６】
本明細書で使用するとき、用語「個体」又は「患者」は、互換的に使用され、哺乳類、好ましくは、マウス、ラット、その他のげっ歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、又は霊長類、及び最も好ましくはヒトを含めて、任意の動物を指す。
【００５７】
本明細書で使用するとき、成句「治療的に有効な量」は、組織、系、動物、固体、又はヒトにおいて研究者、獣医、医師、又は他の臨床医によって探究されている生物学的応答又は薬物応答を引き出す活性化合物又は医薬品の量を指す。幾つかの実施形態では、治療的に有効な量は、約１ｍｇ〜約１００ｍｇ、約１ｍｇ〜約２０ｍｇ、約４ｍｇ〜約１０ｍｇ、約５ｍｇ〜約１０００ｍｇ、又は約１０ｍｇ〜約５００ｍｇである。幾つかの実施形態では、治療的に有効な量は、４ｍｇ、６ｍｇ、又は１０ｍｇ  ＱＤである。
【００５８】
成句「製薬的に許容できる」は、堅実な医学的判断の範囲内において、合理的な利益／リスク比に相応な毒性、刺激、アレルギー反応、又はその他の問題若しくは合併症が過剰に発生することなく、ヒト及び動物の組織に接触した状態での使用に適しているそれらの化合物、材料、組成物、及び／又は剤形を指すために本明細書で使用される。
【００５９】
本明細書で使用するとき、用語「治療する」又は「治療」は、（１）疾病を予防すること、例えば、疾病、容態、又は障害になりやすくなっている可能性があるが、まだその病状又は徴候を呈して又は示していない個体において疾病、容態、又は障害を予防すること、（２）疾病を抑制すること、例えば、疾病、容態、又は障害の病状又は徴候を呈して又は示している個体において疾病、容態、又は障害を抑制すること（即ち、病状及び／又は徴候の更なる発展を阻止すること）、及び（３）疾病を改善すること、例えば、疾病の重症度を減少させるなど、疾病、容態、又は障害の病状又は徴候を呈して又は示している個体において疾病、容態、又は障害を改善すること（即ち、病状及び／又は徴候を反転させること）のうちの１つ以上を指す。
【００６０】
併用療法
本明細書に記載の方法は、１つ以上の追加の治療薬を投与することを更に含み得る。この１つ以上の追加の治療薬は、同時に又は連続的に患者に投与され得る。
【００６１】
幾つかの実施形態では、この方法は、ＩＭｉＤ、抗ＩＬ−６剤、抗ＴＮＦ−α剤、メチル化抑制剤、及び生物学的修飾物質（ＢＲＭ）から選択される追加の治療薬を投与することを更に含む。
【００６２】
一般には、ＢＲＭは、疾病を治療するために生体から製造される物質であり、体内で自然に発生することも、実験室内で製造されることもある。ＢＲＭの例には、ＩＬ−２、インターフェロン、様々なタイプのコロニー刺激因子（ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ）、アブシキシマブなどのモノクローナル抗体、エタネルセプト、インフリキシマブ、リツキシマブ、トラスツズマブ、及び高用量アスコルビン酸塩が挙げられる。
【００６３】
幾つかの実施形態では、抗ＴＮＦ−α剤はインフリキシマブ及びエタネルセプトである。
【００６４】
幾つかの実施形態では、メチル化抑制剤は、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤である。幾つかの実施形態では、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤は、５アザシチジン及びデシタビンから選択される。
【００６５】
一般には、ＩＭｉＤは、免疫調節薬として存在する。幾つかの実施形態では、ＩＭｉＤは、サリドマイド、レナリドミド、ポマリドミド、ＣＣ−１１００６、及びＣＣ−１００１５から選択される。
【００６６】
幾つかの実施形態では、この方法は、抗胸腺細胞グロブリン、組み換えヒト顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ  ＣＳＦ）、顆粒球単球ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）、赤血球造血刺激因子製剤（ＥＳＡ）、及びサイクロスポリンから選択される追加の治療薬を投与することを更に含む。
【００６７】
幾つかの実施形態では、この方法は、追加のＪＡＫ阻害剤を患者に投与することを更に含む。幾つかの実施形態では、追加のＪＡＫ阻害剤は、トファシチニブ又はルキソリチニブである。
【００６８】
１つ以上の追加の治療薬には、化学療法薬、抗炎症薬、ステロイド、免疫抑制薬、並びに、例えば、国際公開第２００６／０５６３９９号に記載のものなど（これにより、この特許の内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする）、Ｂｃｒ−Ａｂｌ、Ｆｌｔ−３、ＲＡＦ、及びＦＡＫキナーゼ阻害剤が含まれてもよく、又は他の薬剤を本明細書に記載の化合物と組み合わせて使用することができる。
【００６９】
化学療法薬の例には、プロテオソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）、サリドマイド、レブラミド、並びにメルファラン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、エトポシド、カルムスチン、及び同種のものなどのＤＮＡ損傷剤が挙げられる。
【００７０】
ステロイドの例には、デキサメサゾン又はプレドニゾンなどの副腎皮質ホルモンが挙げられる。
【００７１】
Ｂｃｒ−Ａｂｌ阻害剤の例には、米国特許第５，５２１，１８４号、国際公開第０４／００５２８１号、及び米国特許出願６０／５７８，４９１に開示されている属及び種の化合物並びにその製薬的に許容できる塩が挙げられ、これにより、それら全ての特許の内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。
【００７２】
好適なＦｌｔ−３阻害剤の例には、国際公開第０３／０３７３４７号、同第０３／０９９７７１号、及び同第０４／０４６１２０号に開示されているような化合物並びにその製薬的に許容できる塩が挙げられ、これにより、それら全ての特許の内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。
【００７３】
好適なＲＡＦ阻害剤の例には、国際公開第００／０９４９５号及び同第０５／０２８４４４号に開示されているような化合物並びにその製薬的に許容できる塩が挙げられ、これにより、それら両方の特許の内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。
【００７４】
好適なＦＡＫ阻害剤の例には、国際公開第０４／０８０９８０号、同第０４／０５６７８６号、同第０３／０２４９６７号、同第０１／０６４６５５号、同第００／０５３５９５号、及び同第０１／０１４４０２号に開示されているような化合物並びにその製薬的に許容できる塩が挙げられ、これにより、それら全ての特許の内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。
【００７５】
幾つかの実施形態では、本発明の１つ以上の化合物が、とりわけイマチニブ又は他のキナーゼ阻害剤に耐性を示す患者を治療するために、イマチニブを含む１つ以上の他のキナーゼ阻害剤と組み合わせて使用され得る。
【００７６】
幾つかの実施形態では、好適な化学療法薬は、代謝拮抗薬、トポイソメラーゼ１阻害剤、白金アナログ、タキサン、アントラサイクリン、及びＥＧＦＲ阻害剤、並びにこれらの組み合わせから選択され得る。
【００７７】
幾つかの実施形態では、代謝拮抗薬には、カペシタビン、ゲムシタビン、及びフルオロウラシル（５−ＦＵ）が含まれる。
【００７８】
幾つかの実施形態では、タキサンには、パクリタキセル、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）（注射懸濁液用のパクリタキセル蛋白結合粒子）、及びＴａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）（ドセタキセル）が含まれる。
【００７９】
幾つかの実施形態では、白金アナログには、オキサリプラチン、シスプラチン、及びカルボプラチンが含まれる。
【００８０】
幾つかの実施形態では、トポイソメラーゼ１阻害剤には、イリノテカン及びトポテカンが含まれる。
【００８１】
幾つかの実施形態では、アントラサイクリンには、ドキソルビシン又はドキソルビシンのリポソーム製剤が含まれる。
【００８２】
幾つかの実施形態では、化学療法薬は、ＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸ（５−ＦＵ、ロイコボリン（lecovorin）、イリノテカン、及びオキサリプラチン）である。幾つかの実施形態では、化学療法薬は、ゲムシタビン及びＡｂｒａｘａｎｅ（登録商標）（注射懸濁液用のパクリタキセル蛋白結合粒子）である。
【００８３】
幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、メルファラン、メルファランとプレドニゾン［ＭＰ］、ドキソルビシン、デキサメサゾン、及びベルケイド（ボルテゾミブ）である。多発性骨髄腫の治療に使用される更に追加の薬剤には、Ｂｃｒ−Ａｂｌ、Ｆｌｔ−３、ＲＡＦ、及びＦＡＫキナーゼ阻害剤が含まれる。これらの薬剤は本化合物と単一又は連続した剤形で組み合わされ得る、又はこれらの薬剤は別個の剤形として同時に又は連続的に投与され得る。
【００８４】
幾つかの実施形態では、デキサメサゾンなどの副腎皮質ホルモンは、少なくとも１つのＪＡＫ１選択的阻害剤と組み合わせて患者に投与され、デキサメサゾンは連続的ではなく断続的に投与される。
【００８５】
更に幾つかの実施形態では、１つ以上のＪＡＫ１選択的阻害剤と他の治療薬との組み合わせが、骨髄移植又は幹細胞移植の前、施術中、及び／又は後に患者に投与され得る。
【００８６】
幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、フルオシノロンアセトニド（Ｒｅｔｉｓｅｒｔ（登録商標））、又はリメキソロン（ＡＬ−２１７８、Ｖｅｘｏｌ、Ａｌｃｏｎ）である。
【００８７】
幾つかの実施形態では、追加の治療薬はサイクロスポリン（Ｒｅｓｔａｓｉｓ（登録商標））である。
【００８８】
幾つかの実施形態では、追加の治療薬は副腎皮質ホルモンである。幾つかの実施形態では、副腎皮質ホルモンは、トリアムシノロン、デキサメサゾン、フルオシノロン、コルチゾン、プレドニゾロン、又はフルメトロンである。
【００８９】
幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、Ｄｅｈｙｄｒｅｘ（商標）（Ｈｏｌｌｅｓ  Ｌａｂｓ）、シバミド（Ｏｐｋｏ）、ヒアルロン酸ナトリウム（Ｖｉｓｍｅｄ、Ｌａｎｔｉｂｉｏ／ＴＲＢ  Ｃｈｅｍｅｄｉａ）、サイクロスポリン（ＳＴ−６０３、Ｓｉｒｉｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＡＲＧ１０１（Ｔ）（テストステロン、Ａｒｇｅｎｔｉｓ）、ＡＲＧ１０１２（Ｐ）（Ａｒｇｅｎｔｉｓ）、エカベトナトリウム（Ｓｅｎｊｕ−Ｉｓｔａ）、ゲファルナート（Ｓａｎｔｅｎ）、１５−（ｓ）−ヒドロキシエイコサテトラエン酸（１５（Ｓ）−ＨＥＴＥ）、セビメリン（cevilemine）、ドキシサイクリン（ＡＬＴＹ−０５０１、Ａｌａｃｒｉｔｙ）、ミノサイクリン、ｉＤｅｓｔｒｉｎ（商標）（ＮＰ５０３０１、Ｎａｓｃｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、サイクロスポリンＡ（Ｎｏｖａ２２００７、Ｎｏｖａｇａｌｉ）、オキシテトラサイクリン（Ｄｕｒａｍｙｃｉｎ、ＭＯＬＩ１９０１、Ｌａｎｔｉｂｉｏ）、ＣＦ１０１（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−［６−［（３−ヨードフェニル）メチルアミノ］プリン−９−イル］−Ｎ−メチル−オキソラン−２−カルバミル、Ｃａｎ−Ｆｉｔｅ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）、ボクロスポリン（ＬＸ２１２又はＬＸ２１４、Ｌｕｘ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＡＲＧ１０３（Ａｇｅｎｔｉｓ）、ＲＸ−１００４５（合成レゾルビンアナログ、Ｒｅｓｏｌｖｙｘ）、ＤＹＮ１５（Ｄｙａｎｍｉｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、リボグリタゾン（ＤＥ０１１、Ｄａｉｉｃｈｉ  Ｓａｎｋｏ）、ＴＢ４（ＲｅｇｅｎｅＲｘ）、ＯＰＨ−０１（Ｏｐｈｔａｌｍｉｓ  Ｍｏｎａｃｏ）、ＰＣＳ１０１（Ｐｅｒｉｃｏｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）、ＲＥＶ１−３１（Ｅｖｏｌｕｔｅｃ）、ラクリチン（Ｓｅｎｊｕ）、レバミピド（Ｏｔｓｕｋａ−Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＯＴ−５５１（Ｏｔｈｅｒａ）、ＰＡＩ−２（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ及びＴｅｍｐｌｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、ピロカルピン、タクロリムス、ピメクロリムス（ＡＭＳ９８１、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ロテプレドノールエタボナート、リツキシマブ、ジクアホソルテトラナトリウム（ＩＮＳ３６５、Ｉｎｓｐｉｒｅ）、ＫＬＳ−０６１１（Ｋｉｓｓｅｉ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、デヒドロエピアンドロステロン、アナキンラ、エファリズマブ、ミコフェノール酸ナトリウム、エタネルセプト（Ｅｍｂｒｅｌ（登録商標））、ヒドロキシクロロキン、ＮＧＸ２６７（ＴｏｒｒｅｙＰｉｎｅｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、アクテムラ、ゲムシタビン、オキサリプラチン、Ｌ−アスパラギナーゼ、又はサリドマイドから選択される。
【００９０】
幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、抗血管新生薬、コリン作動薬、ＴＲＰ−１受容体調節薬、カルシウムチャネル拮抗薬、ムチン分泌促進薬、ＭＵＣ１刺激薬、カルシニューリン阻害薬、副腎皮質ホルモン、Ｐ２Ｙ２受容体作動薬、ムスカリン受容体作動薬、ｍＴＯＲ阻害剤、別のＪＡＫ阻害剤、Ｂｃｒ−Ａｂｌキナーゼ阻害剤、Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害剤、ＲＡＦキナーゼ阻害剤、及びＦＡＫキナーゼ阻害剤、例えば、国際公開第２００６／０５６３９９号に記載のものなどであり、これにより、この特許の内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、テトラサイクリン誘導体（例えば、ミノサイクリン又はドキシサイクリン（doxycline））である。幾つかの実施形態では、追加の治療薬はＦＫＢＰ１２に結合する。
【００９１】
幾つかの実施形態では、追加の治療薬は、アルキル化剤又はＤＮＡ架橋剤；代謝拮抗薬／脱メチル化剤（例えば、５−フルオロウラシル（flurouracil）、カペシタビン、又はアザシチジン）；抗ホルモン療法（例えば、ホルモン受容体拮抗薬、ＳＥＲＭ、又はアロマターゼ阻害剤）；分裂阻害剤（例えば、ビンクリスチン又はパクリタキセル）；トポイソメラーゼ（Ｉ又はＩＩ）阻害剤（例えば、ミトキサントロン及びイリノテカン）；アポトーシス誘導剤（例えば、ＡＢＴ−７３７）；核酸療法（例えば、アンチセンス又はＲＮＡｉ）；核内受容体リガンド（例えば、作動薬及び／又は拮抗薬：オールトランスレチノイン酸又はベキサロテン）；ヒストン脱アセチル化酵素阻害薬（例えば、ボリノスタット）、メチル化抑制剤（例えば、デシタビン）などのエピジェネティック標的薬；Ｈｓｐ９０阻害剤、ユビキチン及び／又はユビキチン様共役若しくは脱共役分子などのタンパク質安定性の調整剤；又はＥＧＦＲ阻害剤（エルロチニブ）である。
【００９２】
製剤処方及び剤形
医薬品として使用されるとき、ＪＡＫ１選択的阻害剤は、医薬組成物の形態で投与され得る。これらの組成物は、製薬技術分野において周知の方法で調製され得、局所性の治療と全身性の治療のどちらが好ましいかの選択及び治療する領域に応じて、様々な経路で投与され得る。投与は、局所性でも（経皮投与、表皮投与、点眼、及び鼻腔内、膣、直腸送達などの粘膜への投与を含む）、肺でも（例えば、噴霧など、粉末又はエアロゾルの吸入又は送気による方法、気管内又は鼻腔内）、経口でも、非経口でもよい。非経口投与には、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内筋肉内又は（intraperitoneal intramuscular or）注射若しくは注入、又は頭蓋内（例えば、髄腔内又は脳室内）投与が含まれる。非経口投与は、単回ボーラス投与の形態で行うことができ、又は、例えば、連続注入ポンプによる方法でもよい。局所性投与の医薬組成物及び処方は、経皮貼付剤、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、点滴、座薬、噴霧剤、液体、及び粉末を含み得る。従来の製薬学的な担体である、水性、粉末性、又は油性の基剤、増粘剤、及び同種のものが、必要又は好ましい場合がある。
【００９３】
本発明はまた、１つ以上の製薬的に許容できる担体（賦形剤）と組み合わせて、本明細書に記載のＪＡＫ１選択的阻害剤又はその製薬的に許容できる塩を活性成分として含有する医薬組成物を含む。幾つかの実施形態では、この組成物は、局所性投与に適している。この組成物の製造において、活性成分は、典型的には賦形剤と混合されるか、賦形剤によって希釈されるか、又は、例えば、カプセル、袋、紙、又は他の容器の形態でかかる担体内に封入される。賦形剤が希釈剤として働く場合、その賦形剤は、固体、半固体、又は液体材料であり得、活性成分の媒介物、担体、又は媒体として機能する。そのため、この組成物は、錠剤、丸剤、散剤、菱形剤、袋、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、水剤、シロップ剤、エアロゾル（固体として又は液体媒質中）、例えば、最大１０重量％の活性化合物を含有している軟膏、軟質及び硬質ゼラチンカプセル、座薬、無菌注射溶液、並びに滅菌包装散剤の形態であり得る。
【００９４】
処方の調製において、活性化合物は、他の成分と組み合わせる前に適切な粒径となるように粉砕され得る。活性化合物が実質的に不溶性である場合、その活性化合物は２００メッシュ未満の粒径まで粉砕され得る。活性化合物が実質的に水溶性である場合、粒径は、処方内で実質的に一様分布、例えば、約４０メッシュとなるように粉砕によって調節され得る。
【００９５】
ＪＡＫ１選択的阻害剤は、錠剤形成及び他の処方タイプに対して適切な粒径となるように、湿式粉砕などの公知の粉砕方法を使用して粉砕されてもよい。ＪＡＫ１選択的阻害剤の超微粒子状（ナノ粒子状）調製物は、当該技術分野において周知のプロセスによって調製され得る（例えば、国際公開第２００２／０００１９６号を参照）。
【００９６】
好適な賦形剤の幾つかの例には、乳糖、ブドウ糖、ショ糖、ソルビトール、マンニトール、でんぷん、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、及びメチルセルロースが含まれる。処方には、滑石、ステアリン酸マグネシウム、鉱油などの平滑剤；湿潤剤；乳化剤及び懸濁化剤；メチル−及びプロピルヒドロキシ−ベンゾアートなどの保存剤；甘味剤；並びに着香剤が更に含まれる。組成物は、当該技術分野において周知の方法を使用して、患者に投与してから活性成分が急速に、持続的に、又は遅延して放出されるように処方され得る。
【００９７】
幾つかの実施形態では、医薬組成物は、ケイ化微結晶セルロース（ＳＭＣＣ）及び本明細書に記載の少なくとも１つの化合物又はその製薬的に許容できる塩を含む。幾つかの実施形態では、ケイ化微結晶セルロースは、約９８％の微結晶セルロース及び約２％の二酸化ケイ素（Ｗ／Ｗ）を含む。
【００９８】
幾つかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載の少なくとも１つのＪＡＫ１選択的阻害剤又はその製薬的に許容できる塩と少なくとも１つの製薬的に許容できる担体を含む持続放出組成物である。幾つかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載の少なくとも１つのＪＡＫ１選択的阻害剤又はその製薬的に許容できる塩と、微結晶セルロース、ラクトース一水和物、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、及びポリエチレンオキシドから選択される少なくとも１つの成分とを含む。幾つかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載の少なくとも１つのＪＡＫ１選択的阻害剤又はその製薬的に許容できる塩、微結晶セルロース、ラクトース一水和物、及びヒドロキシプロピルメチルセルロースを含む。幾つかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載の少なくとも１つのＪＡＫ１選択的阻害剤又はその製薬的に許容できる塩、微結晶セルロース、ラクトース一水和物、及びポリエチレンオキシドを含む。幾つかの実施形態では、組成物は、ステアリン酸マグネシウム又は二酸化ケイ素を更に含む。幾つかの実施形態では、微結晶セルロースは、Ａｖｉｃｅｌ  ＰＨ１０２（商標）である。幾つかの実施形態では、ラクトース一水和物は、Ｆａｓｔ−ｆｌｏ  ３１６（商標）である。幾つかの実施形態では、ヒドロキシプロピルメチルセルロースは、ヒドロキシプロピルメチルセルロース２２０８  Ｋ４Ｍ（例えば、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ  Ｋ４  Ｍ  Ｐｒｅｍｉｅｒ（商標））及び／又はヒドロキシプロピルメチルセルロース２２０８  Ｋ１００ＬＶ（例えば、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ  Ｋ００ＬＶ（商標））である。幾つかの実施形態では、ポリエチレンオキシドは、ポリエチレンオキシドＷＳＲ  １１０５（例えば、Ｐｏｌｙｏｘ  ＷＳＲ  １１０５（商標））である。
【００９９】
幾つかの実施形態では、組成物の製造に湿式造粒プロセスが使用される。幾つかの実施形態では、組成物の製造に乾式造粒プロセスが使用される。
【０１００】
組成物は単位剤形で処方され得、それぞれの用量は、約５〜約１，０００ｍｇ（１ｇ）、より一般には、約１００ｍｇ〜約５００ｍｇの活性成分を含む。幾つかの実施形態では、それぞれの容量は、約１０ｍｇの活性成分を含む。幾つかの実施形態では、それぞれの容量は、約５０ｍｇの活性成分を含む。幾つかの実施形態では、それぞれの容量は、約２５ｍｇの活性成分を含む。用語「単位剤形」は、ヒト被験体及び他の哺乳類に対する単位投与量として適する物理的に別個の単位を指し、それぞれの単位は、好適な医薬品賦形剤と併せて好ましい治療的効果が得られるように計算された所定の量の活性物質を含む。
【０１０１】
幾つかの実施形態では、組成物は、約２ｍｇ〜約１０ｍｇ、又は約５ｍｇ〜約５０ｍｇの活性成分を含む。これは、約２ｍｇ〜約１０ｍｇ、５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約１０ｍｇ〜約１５ｍｇ、約１５ｍｇ〜約２０ｍｇ、約２０ｍｇ〜約２５ｍｇ、約２５ｍｇ〜約３０ｍｇ、約３０ｍｇ〜約３５ｍｇ、約３５ｍｇ〜約４０ｍｇ、約４０ｍｇ〜約４５ｍｇ、又は約４５ｍｇ〜約５０ｍｇの活性成分を含む化合物又は組成物を具現することを、当業者なら理解するであろう。
【０１０２】
幾つかの実施形態では、組成物は、約５０ｍｇ〜約５００ｍｇの活性成分を含む。これは、約５０ｍｇ〜約１００ｍｇ、約１００ｍｇ〜約１５０ｍｇ、約１５０ｍｇ〜約２００ｍｇ、約２００ｍｇ〜約２５０ｍｇ、約２５０ｍｇ〜約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ〜約４００ｍｇ、又は約４５０ｍｇ〜約５００ｍｇの活性成分を含む化合物又は組成物を具現することを、当業者なら理解するであろう。
【０１０３】
幾つかの実施形態では、組成物は、約５００ｍｇ〜約１，０００ｍｇの活性成分を含む。これは、約５００ｍｇ〜約５５０ｍｇ、約５５０ｍｇ〜約６００ｍｇ、約６００ｍｇ〜約６５０ｍｇ、約６５０ｍｇ〜約７００ｍｇ、約７００ｍｇ〜約７５０ｍｇ、約７５０ｍｇ〜約８００ｍｇ、約８００ｍｇ〜約８５０ｍｇ、約８５０ｍｇ〜約９００ｍｇ、約９００ｍｇ〜約９５０ｍｇ、又は約９５０ｍｇ〜約１，０００ｍｇの活性成分を含む化合物又は組成物を具現することを、当業者なら理解するであろう。
【０１０４】
活性化合物は、幅広い投与量範囲にわたって有効であり得、一般には、製薬的に有効な量で投与される。しかし、実際に投与される化合物の量は、通常は、治療する容態、選択した投与経路、投与される実際の化合物、個々の患者の年齢、体重、及び応答、患者の症状の重症度、並びに同種のものを含め、関連する状況に応じて医師により決定されることは理解されるであろう。
【０１０５】
錠剤などの固形組成物を調製するために、主要活性成分は、医薬品賦形剤と混合されて、本明細書に記載の化合物又はその製薬的に許容できる塩の均質混合物を含有する固形の予備処方組成物を形成する。これらの予備処方組成物を均質と呼ぶ場合、活性成分は、典型的には、組成物全体にわたって均一に分散しているので、組成物は、錠剤、丸剤、カプセルなど、等しい効果の単位剤形に容易に分割することができる。次いで、この固形の予備処方組成物は、例えば、本発明の約０．１〜約１０００ｍｇの活性成分を含有している、前述のタイプの単位剤形に分割される。
【０１０６】
錠剤又は丸剤は、コーティングないし別の方法で調合されて、持続性作用の利点を有する剤形を提供する。例えば、錠剤又は丸剤は、内側の投与量構成要素及び外側の投与量構成要素を含むことができ、後者は前者の外皮となる。これら２つの構成要素は、胃の中での分解を阻止するように働く腸溶性の層によって隔てることができ、内側の構成要素が十二指腸内に無傷で届くように、又は遅れて放出されるようにすることができる。このような腸溶性の層又はコーティングには、様々な物質を使用することができ、そのような物質には、幾つかのポリマー酸、及びポリマー酸とセラック、セチルアルコール、酢酸セルロースなどの物質との混合物が挙げられる。
【０１０７】
化合物及び組成物を経口又は注射による投与のために混合させることができる液体形態には、水溶液、好適には、香味シロップ、水性又は油性懸濁液、及び綿実油、ゴマ油、ココナッツ油、ピーナッツ油などの食用油を含有する香味乳液、並びにエリキシル及び同種の賦形薬が挙げられる。
【０１０８】
吸入又は送気のための組成物には、製薬的に許容できる水性若しくは有機溶媒中又はその混合物中の溶液及び懸濁液並びに粉末が含まれる。液体又は固体の組成物は、上で説明したように、好適な製薬的に許容できる賦形剤を含有してもよい。幾つかの実施形態では、組成物は、局所的又は全身的な効果を得るために口又は鼻の呼吸経路によって投与される。内部の組成物は、不活性ガスの使用によって噴霧され得る。噴霧された溶液は噴霧装置から直接吸い込まれてもよく、又は噴霧装置をフェイスマスクテント、若しくは間欠陽圧呼吸機械装置に接続することができる。溶液、懸濁液、又は粉末の組成物は、処方を適切な方法で送達する装置から経口又は経鼻投与することができる。
【０１０９】
局所処方は、１つ以上の従来の担体を含有し得る。幾つかの実施形態では、軟膏は、水並びに、例えば、流動パラフィン、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、プロピレングリコール、白色ワセリン、及び同種のものから選択される１つ以上の疎水性の担体を含有し得る。クリームの担体組成物は、水を主成分とし、グリセロール並びに１つ以上の他の成分、例えば、モノステアリン酸グリセリン、ＰＥＧ−モノステアリン酸グリセリン、及びセチルステアリルアルコールと組み合わせられ得る。ゲルは、イソプロピルアルコール及び水を使用して、好適には、例えば、グリセロール、ヒドロキシエチルセルロース、及び同種のものなどの他の成分と組み合わされて、処方され得る。幾つかの実施形態では、局所処方は、少なくとも約０．１、少なくとも約０．２５、少なくとも約０．５、少なくとも約１、少なくとも約２、又は少なくとも約５重量％の本明細書に記載の化合物又はその製薬的に許容できる塩を含有する。局所処方は、好適には、特定の適応症、例えば、乾せん又は他の皮膚容態の治療のための手順と任意追加的に関連付けられている、例えば、１００ｇのチューブにパッケージ化され得る。
【０１１０】
患者に投与される化合物又は組成物の量は、投与されるもの、予防又は治療など、投与の目的、患者の状態、投与の方法、及び同種の要因によって変化する。治療的応用において、組成物は、既に疾病を発症している患者に、疾病及びその合併症の症状を治癒させる又は少なくとも部分的に停止させるのに十分な量で投与され得る。有効量は、治療される疾病の状態のみならず、疾病の重症度、患者の年齢、体重、及び一般容態、並びに同種のものなどの要因に応じて下される担当医師の判断によっても左右されることになる。
【０１１１】
患者に投与される組成物は、前述の医薬組成物の形態であり得る。これらの組成物は、従来の滅菌テクニックによって滅菌され得る、又は滅菌濾過されてもよい。水溶液は、そのまま使用するためにパッケージ化することも、凍結乾燥することもでき、凍結乾燥調製は投与の前に無菌水性担体と混合される。化合物調製物のｐＨは、典型的には３〜１１、より好ましくは５〜９、及び最も好ましくは７〜８になる。前述の賦形剤、担体、又は安定剤の一部の使用が製薬的な塩の形成をもたらすことは理解されるであろう。
【０１１２】
本明細書に記載のＪＡＫ１選択的阻害剤又はその製薬的に許容できる塩の治療用量は、例えば、治療が行われる特定の用途、化合物の投与方法、患者の健康状態及び容態、並びに処方医師の判断に応じて変化し得る。医薬組成物中の本明細書に記載の化合物又はその製薬的に許容できる塩の比率又は濃度は、投与量、化学的特徴（例えば、疎水性）、投与経路を含む幾つかの要因に応じて変化し得る。例えば、ＪＡＫ１選択的阻害剤は、非経口投与のために約０．１〜約１０％  ｗ／ｖの化合物を含有している生理的緩衝水溶液で提供され得る。幾つかの典型的な投与量範囲は、１日あたり体重の約１μｇ／ｋｇ〜約１ｇ／ｋｇである。幾つかの実施形態では、投与量範囲は、１日あたり体重の約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇである。投与量は、疾病又は障害の進行のタイプ及び範囲、特定患者の総合的な健康状態、選択した化合物の生物学的効果比、賦形剤の処方、並びに投与経路などの変数に左右されやすい。有効量は、インビトロ又は動物モデル試験システムから得られる用量反応曲線から外挿され得る。
【０１１３】
本発明の組成物は、化学療法薬、ステロイド、抗炎症化合物、又は免疫抑制薬などの１つ以上の追加の医薬品を更に含み得え、これらの例は、本明細書内に前述されている。
【０１１４】
キット
本発明はまた、例えば、骨髄異形成症候群の治療又は予防において有用な製薬キットを含み、これには、治療的に有効な量の本明細書に記載の化合物又はその製薬的に許容できる塩を含む医薬組成物を収容している１つ以上の容器が含まれる。当業者なら容易に理解するように、かかるキットは、例えば、１つ以上の製薬的に許容できる担体を含む容器、追加の容器など、従来の様々な製薬キット成分のうちの１つ以上を、所望により、更に含み得る。投与する成分の量、投与に関するガイドライン、及び／又は成分の混合に関するガイドラインを示している手順書もまた、挿入物又はラベルのいずれかの形式で、キットに含まれ得る。
【実施例】
【０１１５】
本発明は、具体的な実施例によってより詳細に説明される。次の実施例は、例示を目的として提供されるものであり、いかなる方法でも本発明を限定することは意図していない。当業者なら、本質的に同じ結果が得られるように変更又は修正することができる、様々な重要でないパラメーターを容易に認識するであろう。実施例の化合物は、本明細書に記載の少なくとも１つのアッセイによりＪＡＫ阻害剤になることがわかっている。
【０１１６】
実施例１．３−［１−（６−クロロピリジン−２−イル）ピロリジン−３−イル］−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル（単離された２つの異なる鏡像異性体）
【０１１７】
【化１】
0006576941.tif 000009
【０１１８】
工程１．ベンジル３−｛２−シアノ−１−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］エチル｝ピロリジン−１−カルボキシラート
ベンジル３−［２−シアノビニル］ピロリジン−１−カルボキシラート（４．３ｇ、０．０１７ｍｏｌ、国際公開第２００７／０７０５１４号Ｅｘ．７４２に記載されているように調製されるＥ及びＺ異性体の混合物）をアセトニトリル（２７０ｍＬ）に溶解した。１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（５．０２ｍＬ、０．０３３６ｍｏｌ）を加え、その後に４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（５．６ｇ、０．０１７ｍｏｌ、国際公開第２００７／０７０５１４，Ｅｘ．６５に記載されているように調製される）を加えた。この混合物をＲＴにおいて一晩中攪拌した。溶媒を回転蒸発によって除去し、残渣を酢酸エチルに再溶解した。この溶液を１Ｎ  ＨＣｌ、水、飽和重炭酸ナトリウム、及びブラインで連続して洗浄し、硫酸ナトリウムの上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。生成物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、ヘキサン中の０〜１００％酢酸エチルの勾配で溶離してジアステレオマー１（第１の溶離）（３．５ｇ、３６％）及びジアステレオマー２（第２の溶離）（２．５ｇ、２５％）を産出した。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：５７２．２。
【０１１９】
工程２．３−ピロリジン−３−イル−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル
ベンジル３−｛２−シアノ−１−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］エチル｝ピロリジン−１−カルボキシラート（３．５ｇ、６．１ｍｍｏｌ）（実施例１、工程１のジアステレオマー１）を１００ｍＬメタノールに溶解し、１０％Ｐｄ−Ｃの触媒量を加えた。この混合物を１．０ＭＰａ（５０ｐｓｉ）の水素下で２４時間振とうさせた。次いで、この混合物を濾過し、溶媒を減圧下で除去した。生成物を更に精製することなく使用した。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：４３８．２。
【０１２０】
工程３．３−［１−（６−クロロピリジン−２−イル）ピロリジン−３−イル］−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル
ＮＭＰ（１．６ｍＬ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（９６μＬ、０．５５ｍｍｏｌ）中の３−ピロリジン−３−イル−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル（１５０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）及び２，６−ジクロロピリジン（４８．７ｍｇ、０．３２９ｍｍｏｌ）の混合物をマイクロ波で１３５℃まで２０分間加熱した。シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーによる精製においてヘキサン中の０〜８０％酢酸エチルの勾配で溶離させ、表題生成物（２８ｍｇ、１８％）を産出した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ８．８５（ｓ，１Ｈ），８．３６（ｓ，１Ｈ），８．３６（ｓ，１Ｈ），７．４１（ｄ，１Ｈ），７．３７（ｄｄ，１Ｈ），６．７９（ｄ，１Ｈ），６．５７（ｄ，１Ｈ），６．２２（ｄ，１Ｈ），５．６８（ｓ，２Ｈ），４．４５（ｄｔ，１Ｈ），３．９１（ｄｄ，１Ｈ），３．５７−３．４６（ｍ，３Ｈ），３．３９−３．２９（ｍ，２Ｈ），３．２４（ｄｄ，１Ｈ），３．１３−３．０１（ｍ，１Ｈ），３．０１（ｄｄ，１Ｈ），１．９８−１．８８（ｍ，１Ｈ），１．８２−１．６９（ｍ，１Ｈ），０．９５−０．８８（ｍ，２Ｈ），−０．０６（ｓ，９Ｈ）；ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：５４９．１。
【０１２１】
このラセミ生成物をキラルＨＰＬＣ（Ｃｈｉｒａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＪ−Ｈ、５μ、３０×２５０ｍｍ、４５％  ＥｔＯＨ／ヘキサン、２０ｍＬ／分）によって鏡像異性体に分離して鏡像異性体１（第１の溶離、保持時間４０．７分）及び鏡像異性体２（第２の溶離、保持時間５１．６分）を産出し、これらを工程４ａ／４ｂで別々に脱保護した。
【０１２２】
工程４ａ．３−［１−（６−クロロピリジン−２−イル）ピロリジン−３−イル］−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル（鏡像異性体１）
３−［１−（６−クロロピリジン−２−イル）ピロリジン−３−イル］−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル（工程３の鏡像異性体１）を、１：１ＴＦＡ／ＤＣＭ（２ｍＬ）を含有している溶液中で２時間攪拌し、次いで濃縮した。残渣を１ｍＬのＭｅＯＨに溶解し、０．２ｍＬのＥＤＡを加えた。分取ＨＰＬＣ／ＭＳ（０．１５％  ＮＨ４ＯＨを含有しているＡＣＮ／Ｈ２Ｏの勾配で溶出するＣ１８カラム）による精製で生成物を産出した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ９．４４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），８．８４（ｓ，１Ｈ），８．３７（ｓ，２Ｈ），７．３９（ｄｄ，１Ｈ），７．３８（ｄｄ，１Ｈ），６．７９（ｄｄ，１Ｈ），６．５８（ｄ，１Ｈ），６．２２（ｄ，１Ｈ），４．４６（ｄｔ，１Ｈ），３．９２（ｄｄ，１Ｈ），３．５５−３．４８（ｍ，１Ｈ），３．３９−３．３１（ｍ，２Ｈ），３．２５（ｄｄ，１Ｈ），３．１３−３．０２（ｍ，１Ｈ），３．０２（ｄｄ，１Ｈ），２．００−１．８８（ｍ，１Ｈ），１．８４−１．７１（ｍ，１Ｈ）；ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：４１９．１。
【０１２３】
工程４ｂ．３−［１−（６−クロロピリジン−２−イル）ピロリジン−３−イル］−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル（鏡像異性体２）
工程３の鏡像異性体２を使用して、工程４ａと同じように実施した：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ９．５９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），８．８４（ｓ，１Ｈ），８．３７（ｓ，２Ｈ），７．４０（ｄｄ，１Ｈ），７．３８（ｄｄ，１Ｈ），６．７９（ｄｄ，１Ｈ），６．５８（ｄ，１Ｈ），６．２２（ｄ，１Ｈ），４．４６（ｄｔ，１Ｈ），３．９２（ｄｄ，１Ｈ），３．５５−３．４８（ｍ，１Ｈ），３．３９−３．３１（ｍ，２Ｈ），３．２５（ｄｄ，１Ｈ），３．１４−３．０２（ｍ，１Ｈ），３．０２（ｄｄ，１Ｈ），１．９９−１．９０（ｍ，１Ｈ），１．８３−１．７２（ｍ，１Ｈ）；ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：４１９．１。
【０１２４】
実施例２．３−（１−［１，３］オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イルピロリジン−３−イル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル（単離された１つの鏡像異性体）
【０１２５】
【化２】
0006576941.tif 000010
【０１２６】
工程１．３−（１−［１，３］オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イルピロリジン−３−イル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル
１，４−ジオキサン（３０ｍＬ）中のオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２（１Ｈ）−チオン（１．１７ｇ、７．６８ｍｍｏｌ、米国特許出願公開第２０１０／０２９８３３４号の実施例３３、工程４に記載されているように調製される）及び３−ピロリジン−３−イル−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル（実施例１５、工程３の２．８０ｇ、６．４０ｍｍｏｌ）を７０℃まで２時間加熱した。溶媒を減圧下で除去した。粗生成物をエタノール（４０ｍＬ）で還元し、硝酸銀（３ｇ、１５ｍｍｏｌ）及び水性水酸化アンモニウム（６ｍＬ）で２０時間にわたって少しずつ処理した。反応に水、１Ｎ  ＮａＯＨ、及びブラインを加えた。不溶性の物質を濾過により除去した。濾液の層を分離させた。水性部分を３部分の酢酸エチルで抽出した。抽出物を硫酸ナトリウムの上で乾燥させ、デカントし、濃縮した。粗生成物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、１０％  ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶離して、生成物を灰白色の発泡体として産出した（２．８４ｇ、８０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ８．８３（ｓ，１Ｈ），８．３７（ｓ，１Ｈ），８．３６（ｓ，１Ｈ），７．９２（ｄｄ，１Ｈ），７．５７（ｄｄ，１Ｈ），７．４０（ｄ，１Ｈ），７．１３（ｄｄ，１Ｈ），６．７８（ｄ，１Ｈ），５．６７（ｓ，２Ｈ），４．５２（ｄｔ，１Ｈ），４．０５（ｄｄ，１Ｈ），３．８２（ｄｄｄ，１Ｈ），３．６７−３．４４（ｍ，４Ｈ），３．２５（ｄｄ，１Ｈ），３．２４−３．０９（ｍ，１Ｈ），２．９８（ｄｄ，１Ｈ），２．０６−１．７４（ｍ，２Ｈ），０．９７−０．８８（ｍ，２Ｈ），−０．０６（ｓ，９Ｈ）；ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：５５６．１。
【０１２７】
工程２．３−（１−［１，３］オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イルピロリジン−３−イル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル
３−（１−［１，３］オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イルピロリジン−３−イル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル（５．３５ｇ、９．６３ｍｍｏｌ、工程１の方法によって調製される）をＤＣＭ及びＴＦＡの２：１混合物（６０ｍＬ）中で６時間攪拌した。溶媒を回転蒸発によって除去した。粗残渣を、ＥＤＡ（５．１５ｍＬ、７７．０ｍｍｏｌ）を含有しているメタノール（５０ｍＬ）に溶解し、一晩攪拌した。溶媒の除去後、生成物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、０〜１５％  ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（３．５９ｇ、８８％）の勾配で溶離した。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ８．７２（ｓ，１Ｈ），８．４０（ｓ，１Ｈ），８．３４（ｓ，１Ｈ），７．８９（ｄｄ，１Ｈ），７．５４（ｄｄ，１Ｈ），７．３６（ｄ，１Ｈ），７．１２（ｄｄ，１Ｈ），６．７５（ｄ，１Ｈ），４．５６（ｄｔ，１Ｈ），４．０１（ｄｄ，１Ｈ），３．８０（ｄｄｄ，１Ｈ），３．６０（ｄｄｄ，１Ｈ），３．４８（ｄｄ，１Ｈ），３．２６（ｄｄ，１Ｈ），３．２１−３．０６（ｍ，１Ｈ），３．０２（ｄｄ，１Ｈ），２．０３−１．７６（ｍ，２Ｈ）；ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：４２６．１。
【０１２８】
実施例３．４−［（４−｛３−シアノ−２−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］−３−フルオロベンゾニトリルトリフルオロアセタート塩（単離された単一鏡像異性体）
【０１２９】
【化３】
0006576941.tif 000011
【０１３０】
工程１．（Ｒ）−及び（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−｛３−シアノ−２−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−カルボキシラート
１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（５．５ｍＬ、０．０３７ｍｏｌ）をアセトニトリル（７０ｍＬ）中の（Ｅ）−及び（Ｚ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−シアノアリル）ピペラジン−１−カルボキシラート（１１．１ｇ、０．０４４１ｍｏｌ、米国特許出願公開第２０１１／００５９９５１号の実施例１、工程１〜２に記載されているように調製される）及び４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１１．６ｇ、０．０３６８ｍｏｌ、国際公開第２００７／０７０５１４号、実施例６５に記載されているように調製される）の溶液に加えた。この混合物を５０℃で１５時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去した。残渣を酢酸エチルに溶解し、水（３回）、ブライン（１回）で洗浄し、硫酸ナトリウムの上で乾燥させ、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー、分取ＨＰＬＣ−ＭＳを順に使用して（０．１５％  ＮＨ４ＯＨを含有しているＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏの勾配で溶離）、生成物を白色の発泡体として産出した（８．２０ｇ、３９％）。
【０１３１】
キラルＨＰＬＣを使用してラセミ混合物を単一鏡像異性体に分離した（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｘ−Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ−２、２１．２×２５０ｍｍ、５μｍ、３０％  ＥｔＯＨ／７０％ヘキサンにより２０ｍＬ／分で溶離）。ピーク１（第１の溶離）：４．０ｇ及びピーク２（第２の溶離）：４．０ｇ．１Ｈ  ＮＭＲピーク１（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ８．８４（ｓ，１Ｈ），８．３３（ｓ，１Ｈ），８．３１（ｓ，１Ｈ），７．４０（ｄ，１Ｈ），６．７９（ｄ，１Ｈ），５．６８（ｓ，２Ｈ），４．７０−４．６２（ｍ，１Ｈ），３．５８−３．５１（ｍ，２Ｈ），３．４４−３．３５（ｂｒ  ｍ，４Ｈ），３．１６（ｄｄ，１Ｈ），３．１０（ｄｄ，１Ｈ），２．９９（ｄｄ，１Ｈ），２．８９（ｄｄ，１Ｈ），２．５０−２．４０（ｂｒ  ｍ，４Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ），０．９５−０．８９（ｍ，２Ｈ），−０．０６（ｓ，９Ｈ）；ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：５６７．３。１Ｈ  ＮＭＲピーク２（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ８．８４（ｓ，１Ｈ），８．３２（ｓ，１Ｈ），８．３１（ｓ，１Ｈ），７．４０（ｄ，１Ｈ），６．７９（ｄ，１Ｈ），５．６８（ｓ，２Ｈ），４．７０−４．６２（ｍ，１Ｈ），３．５８−３．５１（ｍ，２Ｈ），３．４５−３．３４（ｂｒ  ｍ，４Ｈ），３．１６（ｄｄ，１Ｈ），３．１０（ｄｄ，１Ｈ），２．９９（ｄｄ，１Ｈ），２．９０（ｄｄ，１Ｈ），２．５０−２．４０（ｂｒ  ｍ，４Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ），０．９５−０．８９（ｍ，２Ｈ），−０．０６（ｓ，９Ｈ）；ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：５６７．３。
【０１３２】
工程２．４−ピペラジン−１−イル−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ブタンニトリル塩酸塩
ｔｅｒｔ−ブチル４−｛３−シアノ−２−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−カルボキシラート（４．０ｇ、７．０ｍｍｏｌ；工程１のピーク２）を１，４−ジオキサン（４０ｍＬ）に溶解し、ジオキサン中の４．０ＭのＨＣｌ（２５ｍＬ、１００ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で８０分間攪拌した。溶媒を減圧下で除去して、生成物を塩酸塩として産出した。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：４６７．３。
【０１３３】
工程３．４−［（４−｛３−シアノ−２−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］−３−フルオロベンゾニトリルトリフルオロアセタート塩
ＴＨＦ（１０．０ｍＬ）中の４−シアノ−２−フルオロ安息香酸（１３８ｍｇ、０．８３６ｍｍｏｌ、Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロホスファート（２５４ｍｇ、０．６６９ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．４６６ｍＬ、３．３４ｍｍｏｌ）の混合物を室温で１５分間攪拌した。４−ピペラジン−１−イル−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ブタンニトリル塩酸塩（０．３３ｇ、０．５６ｍｍｏｌ；工程２由来）を加えた。この反応を室温で１時間攪拌した。この反応を酢酸エチル及び水で希釈した。層を分離し、有機層を水、０．１Ｎ  ＮａＯＨ、及びブラインで連続して洗浄し、硫酸ナトリウムの上で乾燥させ、濃縮した。残渣をＤＣＭ：ＴＨＡの２：１混合物に溶解し、３時間攪拌し、濃縮し、次いで０．８ｍＬのエチレンジアミンを加えた８ｍＬメタノールの混合物に溶解した。１時間攪拌した後、生成物をＨＰＬＣ−ＭＳによって精製し、０．２％  ＴＦＡを含有しているＭｅＣＮ及びＨ２Ｏの勾配で溶離した。溶離液を凍結し、凍結乾燥して、白色の粉末を産出した（２００ｍｇ、４７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ６−ｄｍｓｏ）：δ  １２．６４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），８．９７（ｓ，１Ｈ），８．８３（ｓ，１Ｈ），８．５１（ｓ，１Ｈ），７．９９（ｄｄ，１Ｈ），７．８２−７．７６（ｍ，２Ｈ），７．６１（ｔ，１Ｈ），７．１５−７．１１（ｍ，１Ｈ），５．１３（ｂｒ  ｍ，１Ｈ），３．８２−２．３７（ｂｒ，１２Ｈ）；１９Ｆ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ６−ｄｍｓｏ）：δ  −７４．９７（ｓ，７．２Ｆ），−１１４．４９（ｂｒ  ｓ，１Ｆ）；ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：４８４．２。
【０１３４】
実施例４．４−［（４−｛３−シアノ−２−［３−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピロール−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］−３−フルオロベンゾニトリルトリフルオロアセタート塩（単離された単一鏡像異性体）
【０１３５】
【化４】
0006576941.tif 000012
【０１３６】
工程１．ｔｅｒｔ−ブチル４−｛３−シアノ−２−［３−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピロール−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−カルボキシラート
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２５ｍＬ）中の（Ｅ）−及び（Ｚ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−シアノアリル）ピペラジン−１−カルボキシラート（４．０ｇ、０．０１６ｍｏｌ；米国特許出願公開第２０１１／００５９９５１号の実施例１、工程１〜２に記載されているように調製される）及び４−（１Ｈ−ピロール−３−イル）−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（４．２ｇ、０．０１３ｍｏｌ、国際公開第２００９／１１４５１２号、実施例８２に記載されているように調製される）の混合物に炭酸カリウム（５．５４０ｇ、０．０４０１ｍｏｌ）を加えた。この混合物を６０℃で１７時間攪拌した。追加の（Ｅ）−及び（Ｚ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−シアノアリル）ピペラジン−１−カルボキシラート（４．０ｇ、０．０１６ｍｏｌ）を加え、この反応を６０℃で２４時間攪拌した。更なる部分の（Ｅ）−及び（Ｚ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−シアノアリル）ピペラジン−１−カルボキシラート（４．０ｇ、０．０１６ｍｏｌ）を加えた。３晩の加熱後、ＬＣＭＳによって判定したところ、出発原料のほとんどが所望の生成物に転化していた。次いで、この混合物を濾過し、ＥｔＯＡｃで希釈し、水（３回）、ブライン（１回）で洗浄し、硫酸ナトリウムの上で乾燥させ、デカントし、濃縮した。分取ＨＰＬＣ−ＭＳによる精製（０．１５％  ＮＨ４ＯＨを含有しているＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏの勾配で溶離）により、褐色の発泡体を産出した（４．２０ｇ、５５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ８．８１（ｓ，１Ｈ），７．６６（ｔ，１Ｈ），７．３４（ｄ，１Ｈ），６．９７（ｄｄ，１Ｈ），６．８９（ｔ，１Ｈ），６．８４（ｄ，１Ｈ），５．６６（ｓ，２Ｈ），４．４７−４．３６（ｍ，１Ｈ），３．５７−３．５０（ｍ，２Ｈ），３．４５−３．３７（ｍ，４Ｈ），３．０６（ｄｄ，１Ｈ），３．００−２．９０（ｍ，２Ｈ），２．８３（ｄｄ，１Ｈ），２．５７−２．３５（ｍ，４Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ），０．９６−０．８６（ｍ，２Ｈ），−０．０６（ｓ，９Ｈ）；ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：５６６．３。
【０１３７】
キラルＨＰＬＣを使用してラセミ化合物を単一鏡像異性体に分離した（Ｃｈｉｒａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＣｈｉｒａｌＰＡＫ  ＩＡ  ２０×２５０ｍｍ、５μｍ、移動相３０％  ＥｔＯＨ／７０％ヘキサン、流量１２ｍＬ／分）。ピーク１（第１の溶離鏡像異性体）、１．８ｇ；ピーク２（第２の溶離鏡像異性体）：１．９ｇ。
【０１３８】
工程２．４−ピペラジン−１−イル−３−［３−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピロール−１−イル］ブタンニトリル塩酸塩
１，４−ジオキサン（２０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−｛３−シアノ−２−［３−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピロール−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−カルボキシラート（１．９ｇ、０．００３４ｍｏｌ；工程１のピーク２）の溶液にｐ−ジオキサン中の４．０ＭのＨＣｌ（１２ｍＬ、４８ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で８０分間攪拌した。溶媒を減圧下で除去して、生成物を淡黄色の固体として産出した（１．９０ｇ、１００％）。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：４６６．３。
【０１３９】
工程３．４−［（４−｛３−シアノ−２−［３−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピロール−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］−３−フルオロベンゾニトリルトリフルオロアセタート塩
ＴＨＦ（２．４ｍＬ）中の４−シアノ−２−フルオロ安息香酸（４４ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ、Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロホスファート（９３ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１７１μＬ、１．２２ｍｍｏｌ）の混合物を室温で１５分間攪拌した。４−ピペラジン−１−イル−３−［３−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピロール−１−イル］ブタンニトリル塩酸塩（１１０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ；工程２由来）を加えた。この反応を２時間攪拌した。酢酸エチル及び水を加えた。層を分離し、有機層を水、１Ｎ  ＮａＯＨ、及びブラインで連続して洗浄し、硫酸ナトリウムの上で乾燥させ、濃縮した。残渣を最初にＤＣＭ：ＴＦＡの１：１混合物に１時間溶解してから濃縮し、次いでエチレンジアミン（０．２ｍＬ）を含有しているメタノール（２ｍＬ）中で１時間攪拌した。分取ＨＰＬＣ−ＭＳによる精製（０．１％  ＴＦＡを含有しているＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏの勾配で溶離）により、生成物を３．３×ＴＦＡ塩として産出した（８４ｍｇ、４８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ６−ｄｍｓｏ）：δ  １３．２２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），８．９０（ｓ，１Ｈ），８．３８（ｓ，１Ｈ），８．００（ｄｄ，１Ｈ），７．９７−７．９３（ｍ，１Ｈ），７．８０（ｄｄ，１Ｈ），７．６１（ｔ，１Ｈ），７．３５（ｓ，２Ｈ），７．１８−７．１３（ｍ，１Ｈ），５．００−４．８０（ｍ，１Ｈ），３．７５−３．４９（ｂｒ  ｍ，２Ｈ），３．３５−２．３３（ｍ，１０Ｈ）；１９Ｆ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ６−ｄｍｓｏ）：δ  −７４．８２（ｓ，１０Ｆ），−１１４．５３（ｓ，１Ｆ）；ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：４８３．２。
【０１４０】
実施例５．｛１−｛１−［３−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン−４−イル｝−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル
【０１４１】
【化５】
0006576941.tif 000013
【０１４２】
工程Ａ：ｔｅｒｔ−ブチル３−オキソアゼチジン−１−カルボキシラート
ｔｅｒｔ−ブチル３−ヒドロキシアゼチジン−１−カルボキシラート（１０．０ｇ、５７．７ｍｍｏｌ）、ジメチルスルホキシド（２４．０ｍＬ、３３８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（４０ｍＬ、３００ｍｍｏｌ）及び塩化メチレン（２．０ｍＬ）の混合物に三酸化イオウ−ピリジン錯体（４０ｇ、２００ｍｍｏｌ）を０℃にて少しずつ加えた。この混合物を３時間攪拌し、ブラインで急冷し、塩化メチレンで抽出した。混合抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４の上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラム（ヘキサン中の０〜６％酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ））によって精製して、ｔｅｒｔ−ブチル３−オキソアゼチジン−１−カルボキシラート（５．１ｇ、５２％収率）を得た。
【０１４３】
工程Ｂ：ｔｅｒｔ−ブチル３−（シアノメチレン）アゼチジン−１−カルボキシラート
攪拌子、セプタム、窒素入口、２５０ｍＬ添加漏斗、及び熱電対を備えた、オーブン乾燥された１Ｌの四口丸底フラスコに、水素化ナトリウム（５．６ｇ、０．１４ｍｏｌ）及びテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（１４０ｍＬ）を窒素雰囲気下で充填した。この混合物を３℃まで冷却した後、ジエチルシアノメチルホスホン酸塩（２２．４ｍＬ、０．１３８ｍｏｌ）を２０分かけて注射器で滴下充填した。この溶液は淡黄色のスラリーになった。次いで、この反応を１８．２℃まで温めながら７５分間攪拌した。テトラヒドロフラン（２８０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル３−オキソアゼチジン−１−カルボキシラート（２０ｇ、０．１ｍｏｌ）の溶液を、オーブン乾燥された丸底内で調製し、カニューレによって添加漏斗に充填した後、反応混合物に２５分かけて滴下した。この反応溶液の色は赤色になった。この反応を一晩中攪拌させた。この反応を２４時間後にＴＬＣ（７０％ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で検査し、反応が完了していることがわかった。この反応を２００ｍＬの２０％ブライン及び２５０ｍＬのＥｔＯＡｃで希釈した。この溶液を分配し、水相を２５０ｍＬのＥｔＯＡｃで抽出した。混合有機相をＭｇＳＯ４の上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させ、フラッシュクロマトグラフィー（０％〜２０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１５０ｇフラッシュカラム）によって精製して、所望の生成物、ｔｅｒｔ−ブチル３−（シアノメチレン）アゼチジン−１−カルボキシラート（１５ｇ、６６．１％収率）を得た。
【０１４４】
工程Ｃ：４−クロロ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
−５℃（氷／塩バス）のＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（１１８ｍＬ）中の水素化ナトリウム（３６．１４１ｇ、９０３．６２ｍｍｏｌ）の懸濁液に、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（２３７ｍＬ）中の４−クロロピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１１９．３７ｇ、７７７．３０ｍｍｏｌ）の暗色の溶液をゆっくりと加えた。フラスコ及び添加漏斗をＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（３０ｍＬ）ですすいだ。大量のガスが即座に発生した。この混合物はわずかに混濁した橙色の混合物になった。この混合物を０℃で６０分間攪拌して、淡褐色の混濁した混合物が得られた。この混合物に［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチルクロリド（１５２．４０ｇ、９１４．１１ｍｍｏｌ）をゆっくりと加え、反応を０℃にて１時間攪拌した。この反応を、１２ｍＬのＨ２Ｏをゆっくりと加えることにより急冷した。追加の水（１２０ｍＬ）を加え、その後にメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）（１２０ｍＬ）を加えた。この混合物を１０分間攪拌した。有機層を分離させた。水層を別の部分のＭＴＢＥ（１２０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を混合し、ブライン（１２０ｍＬ×２）で洗浄し、減圧下で濃縮して、粗生成物４−クロロ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンを暗色の油として得た。収量：８５．０７ｇ（９７％）；ＬＣ−ＭＳ：２８４．１（Ｍ＋Ｈ）＋。精製することなく次の反応に持ち越された。
【０１４５】
工程Ｄ：４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
１０００ｍＬ丸底フラスコに４−クロロ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１０．００ｇ、３５．２３ｍｍｏｌ）、１−ブタノール（２５．０ｍＬ）、１−（１−エトキシエチル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール（１５．６６ｇ、５２．８５ｍｍｏｌ）、水（２５．０ｍＬ）及び炭酸カリウム（１２．１７ｇ、８８．０８ｍｍｏｌ）を充填した。この溶液を４回脱気し、毎回窒素を充填した。この溶液にテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（４．０７１ｇ、３．５２３ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を４回脱気し、毎回窒素を充填した。この混合物を１００℃で一晩中攪拌した。室温まで冷却した後、この混合物をセライトのベッドで濾過し、セライトを酢酸エチル（４２ｍＬ）ですすいだ。濾液を混合し、有機層を分離させた。水層を酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を混合し、浴温（bath temerature）３０〜７０℃の真空下で濃縮して、最終化合物４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンを得た。収率：７８％。ＬＣ−ＭＳ：３１６．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４６】
工程Ｅ：ｔｅｒｔ−ブチル３−（シアノメチル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−カルボキシラート
オーバーヘッド攪拌機、セプタム、及び窒素入口を備えた２Ｌ丸底フラスコにｔｅｒｔ−ブチル３−（シアノメチレン）アゼチジン−１−カルボキシラート（９．１７ｇ、０．０４７２ｍｏｌ）、４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１４．９ｇ、０．０４７２ｍｏｌ）及びアセトニトリル（３００ｍＬ）を充填した。結果として生じた溶液は不均一であった。この溶液に１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（８．４８ｍＬ、０．０５６７ｍｏｌ）を室温にて３分かけて注射器により少しずつ加えた。この溶液はゆっくりと均一化し、黄色に変化した。この反応を室温で３時間攪拌させた。この反応をＨＰＬＣ及びＬＣ／ＭＳによって完了させ、回転蒸発により濃縮して、アセトニトリル（〜１５０ｍＬ）を除去した。ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）を加え、その後に１００ｍＬの２０％ブラインを加えた。２つの相を分配した。水相を１５０ｍＬのＥｔＯＡＣで抽出した。混合有機相をＭｇＳＯ４の上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、橙色の油を回収した。フラッシュクロマトグラフィー（１５０グラムのシリカ、６０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、ＣＨ２Ｃｌ２充填）による精製により、表題化合物ｔｅｒｔ−ブチル３−（シアノメチル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−カルボキシラートを黄色の油として回収した（２１．１ｇ、８８％収率）。ＬＣ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝５１０．３。
【０１４７】
工程Ｆ：｛３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルジヒドロクロリド
ＴＨＦ１０ｍＬ中のｔｅｒｔ−ブチル３−（シアノメチル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−カルボキシラート（２ｇ、３．９ｍｍｏｌ）の溶液にジオキサン中の４Ｎ  ＨＣｌ１０ｍＬを加えた。この溶液を室温で１時間攪拌し、減圧下で濃縮して、１．９ｇ（９９％）の表題化合物を白色の粉末固形として得た。この化合物は、精製することなく次の反応で使用された。ＬＣ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１０．３。
【０１４８】
工程Ｇ：ｔｅｒｔ−ブチル４−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝ピペリジン−１−カルボキシラート
ＴＨＦ（３０ｍＬ）中の｛３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルジヒドロクロリド（２．６ｇ、６．３ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル４−オキソ−１−ピペリジンカルボキシラート（１．３ｇ、６．３ｍｍｏｌ）の溶液にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４．４ｍＬ、２５ｍｍｏｌ）及びナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（２．２ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で一晩中攪拌した。ブライン２０ｍＬを加えた後、この溶液をＥｔＯＡｃで抽出した。抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４の上で乾燥させ、濃縮した。残渣をヘキサン中の３０〜８０％  ＥｔＯＡｃで溶離するコンビフラッシュカラムによって精製して、所望の生成物、ｔｅｒｔ−ブチル４−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝ピペリジン−１−カルボキシラートを得た。収量：３．２ｇ（８６％）；ＬＣ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝５９３．３。
【０１４９】
工程Ｈ：｛１−ピペリジン−４−イル−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルトリヒドロクロリド
ＴＨＦ１０ｍＬ中のｔｅｒｔ−ブチル４−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝ピペリジン−１−カルボキシラート（３．２ｇ、５．４ｍｍｏｌ）の溶液にジオキサン中の４Ｎ  ＨＣｌ１０ｍＬを加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去して、３．２５ｇ（１００％）の｛１−ピペリジン−４−イル−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルトリヒドロクロリドを白色の粉末固形として回収した。これは、次の反応においてそのまま使用された。ＬＣ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４９３．３。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ９．４２（ｓ  １Ｈ），９．２１（ｓ，１Ｈ），８．８９（ｓ，１Ｈ），８．６９（ｓ，１Ｈ），７．９７（ｓ，１Ｈ），７．３９（ｄ，１Ｈ），５．６８（ｓ，２Ｈ），４．９６（ｄ，２Ｈ），４．５６（ｍ，２Ｈ），４．０２−３．６３（ｍ，２Ｈ），３．５５（ｓ，２Ｈ），３．５３（ｔ，２Ｈ），３．４９−３．３１（３，３Ｈ），２．８１（ｍ，２Ｈ），２．１２（ｄ，２Ｈ），１．７９（ｍ，２Ｈ），０．８３（ｔ，２Ｈ），−０．１０（ｓ，９Ｈ）。
【０１５０】
工程Ｉ：｛１−｛１−［３−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン−４−イル｝−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル
ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（２０．０ｍＬ）中の｛１−ピペリジン−４−イル−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルトリヒドロクロリド（１．２２ｇ、２．０３ｍｍｏｌ）、３−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）イソニコチン酸（４６０ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（１．０７ｇ、２．４２ｍｍｏｌ）、及びトリエチルアミン（２．０ｍＬ、１４ｍｍｏｌ）の混合物を室温で一晩中攪拌した。ＬＳ−ＭＳは反応が完了したことを示した。ＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（６０ｍＬ）を反応混合物に加えた。室温で１０分間攪拌した後、有機相を分離させ、水層をＥｔＯＡｃで３回抽出した。混合有機相をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４の上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィーによる精製により、所望の生成物｛１−｛１−［３−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン−４−イル｝−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルを得た。ＬＣ−ＭＳ：６８４．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５１】
工程Ｊ：｛１−｛１−［３−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン−４−イル｝−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル
塩化メチレン（１．５ｍＬ）中の｛１−｛１−［３−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン−４−イル｝−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル（５６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）の溶液にトリフルオロ酢酸（１．５ｍＬ）を加えた。この混合物を室温で２時間攪拌した。溶媒を真空下で除去した後、残渣を、２０％エチレンジアミンを含有しているメタノール溶液に溶解した。室温で１時間攪拌した後、溶液をＨＰＬＣ（方法Ｂ）により精製して、表題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ：５５４．３（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：９．７１（ｓ，１Ｈ），８．８２（ｓ，１Ｈ），８．５５（ｄ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３９（ｓ，１Ｈ），８．３０（ｓ，１Ｈ），７．５２（ｔ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｄｄ，Ｊ１＝３．４Ｈｚ，Ｊ２＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），６．７７（ｄｄ，Ｊ１＝３．６Ｈｚ，Ｊ２＝０．７Ｈｚ，１Ｈ），４．１８（ｍ，１Ｈ），３．７５（ｍ，２Ｈ），３．６３（ｄｄ，Ｊ１＝７．８Ｈｚ，Ｊ２＝３．７Ｈｚ，２Ｈ），３．４５（ｍ，２Ｈ），３．３８（ｓ，２Ｈ），３．１１（ｍ，１Ｈ），２．５７（ｍ，１Ｈ），１．７２（ｍ，１Ｈ），１．６０（ｍ，１Ｈ），１．４８（ｍ，１Ｈ），１．４０（ｍ，１Ｈ）。
【０１５２】
実施例６．４−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−Ｎ−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］ピペリジン−１−カルボキサミド
【０１５３】
【化６】
0006576941.tif 000014
【０１５４】
工程Ａ：４−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−Ｎ−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］ピペリジン−１−カルボキサミド
テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）中の｛１−ピペリジン−４−イル−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルトリヒドロクロリド（５００ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（０．２９ｇ、２．８ｍｍｏｌ）及び４−フルオロ−１−イソシアナト−２−（トリフルオロメチル）ベンゼン（１９０ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で１時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去した。３０〜１００％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用したコンビフラッシュによる精製により、４−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−Ｎ−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］ピペリジン−１−カルボキサミドを粉末として得られた。ＬＣ−ＭＳ：６９８．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５５】
工程Ｂ：４−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−Ｎ−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］ピペリジン−１−カルボキサミド
４−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−Ｎ−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］ピペリジン−１−カルボキサミド（２１０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２０ｍＬ）中のトリフルオロ酢酸の５０Ｍ溶液に溶解した。室温で１時間攪拌した後、溶媒を減圧下で除去した。残渣をメタノール（２０ｍＬ）及びエチレンジアミン（１．０ｇ、１７ｍｍｏｌ）に溶解した。室温で１時間攪拌した後、混合物をＨＰＬＣ（方法Ｂ）により精製して、４−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−Ｎ−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］ピペリジン−１−カルボキサミドを白色の粉末として得られた。ＬＣ−ＭＳ：５６８．１（Ｍ＋Ｈ）＋。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １２．１０（ｓ，１Ｈ），８．７６（ｓ，１Ｈ），８．６３（ｓ，１Ｈ），８．３６（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｓ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｍ，１Ｈ），７．４３（ｍ，１Ｈ），７．３４（ｍ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７９（ｍ，２Ｈ），３．６７（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），３．５１（ｍ，４Ｈ），２．９２（ｍ，２Ｈ），２．３８（ｍ，１Ｈ），１．６２（ｍ，２Ｈ），１．０９（ｍ，２Ｈ）。
【０１５６】
実施例７．［３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］−１−（１−｛［２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−イル］カルボニル｝ピペリジン−４−イル）アゼチジン−３−イル］アセトニトリル
【０１５７】
【化７】
0006576941.tif 000015
【０１５８】
実施例５の調製に使用したのと類似の方法によって表題化合物を調製した。ＬＣ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：５３７．２。
【０１５９】
実施例８．［トランス−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］−３−（４−｛［２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−イル］カルボニル｝ピペラジン−１−イル）シクロブチル］アセトニトリル
【０１６０】
【化８】
0006576941.tif 000016
【０１６１】
テトラヒドロフラン（６ｍＬ）中の２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−カルボン酸（０．２２５ｇ、１．１７ｍｍｏｌ、国際公開第２００６／０６７４４５号に記載されているようにＡｐｏｌｌｏから得られるメチルエステルの加水分解によって調製される）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロホスファート（０．２９ｇ、０．７６ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）、及びトリエチルアミン（０．２６ｍＬ、１．９ｍｍｏｌ）の混合物を１５分間事前攪拌し、その後にテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中の｛トランス−３−ピペラジン−１−イル−１−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル（０．１８８ｇ、０．３８０ｍｍｏｌ、米国特許出願公開第２０１２／０１４９６８１の実施例１ｂ、工程１に記載されているように調製される）を加えた。この反応を一晩中攪拌した。ＴＨＦを減圧下で除去した。残渣を飽和重炭酸ナトリウムと酢酸エチルとの間で分配した。水性部分を合計３回抽出した。混合有機抽出物を硫酸ナトリウムの上で乾燥させ、デカントし、濃縮した。ＤＣＭ中の０〜１０％  ＭｅＯＨの勾配で溶離する、フラッシュクロマトグラフィーを使用して、ＳＥＭ保護中間体を精製した。最初に塩化メチレン（１０ｍＬ）中のトリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）と２時間攪拌し、その後に溶媒を減圧下で蒸発させ、次いでエチレンジアミン（０．５ｍＬ、７ｍｍｏｌ）を含有しているメタノール（６ｍＬ、２００ｍｍｏｌ）と一晩中攪拌することにより脱保護を達成した。反応混合物を水と酢酸エチルとの間で分配し、水性部分を酢酸エチルで更に２回抽出した。混合抽出物を硫酸ナトリウムの上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。ＤＣＭ中の０〜１０％  ＭｅＯＨの勾配で溶離する、フラッシュクロマトグラフィーを使用して生成物を精製した。生成物を分取ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｃ１８、０．１％  ＴＦＡを含有しているＨ２Ｏ／ＭｅＣＮの勾配で溶離）で再精製した。所望の物質を含有している溶離液から回転蒸発によってアセトニトリルを除去し、次いで残りの水溶液を重炭酸ナトリウムの添加によって中和し、酢酸エチルで数回抽出した。混合有機抽出物を硫酸ナトリウムの上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。生成物を分取ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｃ１８、０．１５％ＮＨ４ＯＨを含有しているＨ２Ｏ／ＭｅＣＮの勾配で溶離）で再精製した。所望の物質を含有している溶離液を凍結し、凍結乾燥して、生成物を遊離塩基として産出した（９９ｍｇ、４８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ  ９．１３（ｄ，１Ｈ），８．７１（ｓ，１Ｈ），８．６６（ｓ，１Ｈ），８．３９（ｓ，１Ｈ），７．８８（ｄ，１Ｈ），７．５０（ｄ，１Ｈ），６．９８（ｄ，１Ｈ），３．８９−３．８１（ｍ，２Ｈ），３．５９−３．５２（ｍ，２Ｈ），３．３４（ｓ，２Ｈ），３．１３−３．０３（ｍ，２Ｈ），２．９７（ｔｔ，１Ｈ），２．５９−２．４２（ｍ，６Ｈ）；１９Ｆ  ＮＭＲ（２８２ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ−７２．４３（ｓ，３Ｆ）；ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：５３７．０。
【０１６２】
実施例９．｛トランス−３−（４−｛［４−［（３−ヒドロキシアゼチジン−１−イル）メチル］−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル
【０１６３】
【化９】
0006576941.tif 000017
【０１６４】
置換工程でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（６４μＬ、０．３７ｍｍｏｌ）及びアゼチジン−３−オール塩酸塩（３０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ、Ｏａｋｗｏｏｄ）を使用して、米国特許出願公開第２０１２／０１４９６８１号の実施例１５３の手順に従った。室温で一晩中攪拌した後、メタノール（０．２０ｍＬ）を加えて均一な溶液を産出し、この溶液を室温で更に２．５時間攪拌し、米国特許出願公開第２０１２／０１４９６８１号の実施例１５３に記載されている脱保護及び精製条件に従って処理して、生成物を遊離塩基として産出した（９．７ｍｇ、４４％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄｍｓｏ）δ  １２．１２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），８．８１（ｓ，１Ｈ），８．６７（ｓ，１Ｈ），８．４０（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｓ，１Ｈ），７．０６（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），６．９３（ｓ，１Ｈ），５．３４（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），５．０５−４．７７（ｍ，１Ｈ），４．１９（ｈ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），３．６０（ｓ，２Ｈ），３．５０（ｔｄ，Ｊ＝６．１，２．０Ｈｚ，２Ｈ），３．４０（ｓ，２Ｈ），３．０６−２．９２（ｍ，２Ｈ），２．８６−２．７１（ｍ，３Ｈ），２．６８−２．５３（ｍ，２Ｈ），２．３８−２．２２（ｍ，２Ｈ），２．２２−２．０７（ｂｒ  ｍ，２Ｈ），２．０５−１．９５（ｂｒ  ｍ，２Ｈ），１．７５−１．４８（ｍ，２Ｈ）；１９Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ｄｍｓｏ）δ−６７．３６（ｓ）；ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：６０８．２。
【０１６５】
実施例１０．｛トランス−３−（４−｛［４−｛［（２Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル］メチル｝−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル
【０１６６】
【化１０】
0006576941.tif 000018
【０１６７】
室温にて一晩中、（２Ｓ）−ピロリジン−２−イルメタノール（２０μＬ、０．２ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用してメシラートをアミンで置換したことを除き、米国特許出願公開第２０１２／０１４９６８１号の実施例１５８に記載の方法に従った（８．３ｍｇ、５９％）。１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ  １２．０９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），８．８１（ｓ，１Ｈ），８．６９（ｓ，１Ｈ），８．４１（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｓ，１Ｈ），７．０６（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０３（ｓ，１Ｈ），５．００（ｔｔ，Ｊ＝８．４，３．９Ｈｚ，１Ｈ），４．４８（ｓ，１Ｈ），４．１２（ｄ，Ｊ＝１４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．４５（ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，１Ｈ），３．４１（ｓ，２Ｈ），３．４２−３．２５（ｍ，２Ｈ），３．０６−２．９７（ｍ，２Ｈ），２．８７−２．７７（ｍ，２Ｈ），２．６９−２．６２（ｍ，２Ｈ），２．５９（ｄｄｄｄ，Ｊ＝５．８，５．８，５．８，８．１Ｈｚ，１Ｈ），２．４１−２．３１（ｍ，２Ｈ），２．２２−２．０９（ｍ，３Ｈ），２．０８−１．９５（ｍ，２Ｈ），１．８３（ｄｄｄｄ，Ｊ＝８．１，８．１，８．３，１２．２Ｈｚ，１Ｈ），１．７５−１．４６（ｍ，５Ｈ）；１９Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ｄｍｓｏ）δ  −６７．２４（ｓ）；ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：６３６．３。
【０１６８】
実施例１１．｛トランス−３−（４−｛［４−｛［（２Ｒ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル］メチル｝−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル
【０１６９】
【化１１】
0006576941.tif 000019
【０１７０】
室温にて一晩中、（２Ｒ）−ピロリジン−２−イルメタノール（２０μＬ、０．２ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用してメシラートをアミンで置換したことを除き、米国特許出願公開第２０１２／０１４９６８１号の実施例１５８に記載の方法に従った（８．３ｍｇ、５９％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄｍｓｏ）δ  １２．１４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），８．８３（ｓ，１Ｈ），８．６９（ｓ，１Ｈ），８．４２（ｓ，１Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｓ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０３（ｓ，１Ｈ），５．０４−４．９４（ｍ，１Ｈ），４．５２（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），４．１２（ｄ，Ｊ＝１４．９Ｈｚ，１Ｈ），３．５２−３．２２（ｍ，５Ｈ），３．０９−２．９２（ｍ，２Ｈ），２．８６−２．７３（ｍ，２Ｈ），２．７０−２．５３（ｍ，３Ｈ），２．４２−２．２７（ｍ，２Ｈ），２．２２−２．０９（ｍ，３Ｈ），２．０６−１．８７（ｍ，２Ｈ），１．８２（ｄｄｄｄ，Ｊ＝８．０，８．０，８．４，１１．９Ｈｚ，１Ｈ），１．７７−１．３７（ｍ，５Ｈ）；１９Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ｄｍｓｏ）δ−６７．２４（ｓ）；ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：６３６．３。
【０１７１】
実施例１２．４−（４−｛３−［（ジメチルアミノ）メチル］−５−フルオロフェノキシ｝ピペリジン−１−イル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ブタンニトリル（キラル）
【０１７２】
【化１２】
0006576941.tif 000020
【０１７３】
工程１．３−フルオロ−５−ヒドロキシベンズアルデヒド
トルエン（６０．０ｍＬ、−７８℃）中の３−フルオロ−５−ヒドロキシベンゾニトリル（１．００ｇ、７．２９ｍｍｏｌ）の懸濁液に、トルエン（１８．２ｍＬ、１８．２ｍｍｏｌ）中の１．０Ｍ水素化ジイソブチルアルミニウムを加えた。結果として生じた混合物を−７８℃で１時間攪拌し、一晩で室温まで温まるのを待った。メタノールと水の１：１混合物（１０ｍＬ）を加え、３５分間攪拌した。固形物を濾過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を水及びブラインで洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４の上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムで精製して（１０〜５０％酢酸エチル／ヘキサンで溶離）、所望の生成物を得た（０．７７ｇ、７５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  １０．４９（ｓ，１Ｈ），９．８８（ｓ，１Ｈ），７．１０（ｍ，２Ｈ），６．８７（ｄ，１Ｈ）。
【０１７４】
工程２．３−［（ジメチルアミノ）メチル］−５−フルオロフェノール
塩化メチレン（９．０ｍＬ）中のジメチルアミン塩酸塩（１６０ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ）及び３−フルオロ−５−ヒドロキシベンズアルデヒド（２５０．０ｍｇ、１．７８４ｍｍｏｌ）の混合物に、トリエチルアミン（３２３μＬ、２．３２ｍｍｏｌ）及びトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムのレジン（１．１ｇ、２．７ｍｍｏｌ）を加えた。結果として生じた混合物を一晩中攪拌し、次いで濾過し、濃縮した。粗製物をシリカゲルカラムで精製して（０〜１５％メタノール／ＤＣＭで溶離）、所望の生成物を得た（０．２１ｇ、７０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ６．５５（ｍ，２Ｈ），６．４２（ｄ，１Ｈ），２．１５（ｓ，６Ｈ），１．８９（ｓ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：１７０．１。
【０１７５】
工程３．４−（４−｛３−［（ジメチルアミノ）メチル］−５−フルオロフェノキシ｝ピペリジン−１−イル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ブタンニトリル
塩化メチレン（９ｍＬ）中の３−［（ジメチルアミノ）メチル］−５−フルオロフェノール（１５８ｍｇ、０．９３４ｍｍｏｌ）の混合物に、トリフェニルホスフィンのレジン（５７８ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）及びジ−ｔｅｒｔ−ブチルアゾジカルボキシラート（２２９ｍｇ、０．９９６ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を２０分間攪拌した後、塩化メチレン（２ｍＬ）中の４−（４−ヒドロキシピペリジン−１−イル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ブタンニトリル（３００ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。この反応を室温で一晩中攪拌した。追加のトリフェニルホスフィンのレジン（０．５ｇ）、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルアゾジカルボキシラート（０．２３ｇ）、及びＤＣＭ（８ｍＬ）を加え、更に２時間攪拌した。バイアル瓶及びレジンをＤＣＭで洗浄し、濾過した。濾液を１０％  ＮａＯＨ水溶液で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４の上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物をシリカゲルカラムで精製して（０〜１５％メタノール／ＤＣＭで溶離）、ＳＥＭ保護生成物を得た。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：６３３．５。精製された生成物に塩化メチレン（１．５ｍＬ）及びトリフルオロ酢酸（１．５ｍＬ、１９ｍｍｏｌ）を加え、２時間攪拌した。溶媒を蒸発させた後、メタノール（３．５ｍＬ）及びエチレンジアミン（０．７０ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）を加えた。結果として生じた混合物を１時間攪拌し、次いで濃縮した。濃縮物をＤＣＭ中に入れ、水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４の上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、キラル分取ＨＰＬＣ（Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＪ−Ｈカラム、４．６×２５０ｍｍ、５μμ、６０％エタノール／Ｈｅｘ、０．５ｍＬ／分）によって精製されて２つの鏡像異性体を産出する粗生成物を得た。
【０１７６】
鏡像異性体１（第１の溶離）：ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：５０３．３。
【０１７７】
鏡像異性体２（第２の溶離）：１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．７８（ｓ，１Ｈ），８．６７（ｓ，１Ｈ），８．３５（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，１Ｈ），６．９６（ｄ，１Ｈ），６．６４（ｔ，３Ｈ），４．９４（ｍ，１Ｈ），４．３６（ｍ，１Ｈ），３．３９（ｍ，２Ｈ），３．１９（ｄ，３Ｈ），２．７７（ｍ，３Ｈ），２．６０（ｍ，１Ｈ），２．３２（ｍ，２Ｈ），２．１０（ｓ，６Ｈ），１．８３（ｍ，２Ｈ），１．５４（ｍ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：５０３．３。
【０１７８】
実施例１３．５−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−Ｎ−イソプロピルピラジン−２−カルボキサミド
【０１７９】
【化１３】
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【０１８０】
工程１：メチル５−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝ピラジン−２−カルボキシラート
（Ｒ）−（＋）−２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（０．０６５ｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を窒素下でトルエン（１５．０ｍＬ）中の｛３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルジヒドロクロリド（０．５０ｇ、１．０ｍｍｏｌ）、メチル５−クロロピラジン−２−カルボキシラート（０．１８ｇ、１．０ｍｍｏｌ）（Ａｒｋ  Ｐｈａｒｍ，Ｉｎｃ．，Ｃａｔ．＃：ＡＫ−２３９２０）、及び炭酸セシウム（１．０ｇ、３．１ｍｍｏｌ）の混合物に加え、その後に酢酸パラジウム（０．０２３ｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１２０℃で３時間攪拌した。室温まで冷却した後、反応混合物をセライトのパッドで濾過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラム上のフラッシュクロマトグラフィーによりジクロロメタン中の酢酸エチル（０〜７０％）で精製して、所望の生成物を産出した（０．３１ｇ、５５％）。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝５４６．３。
【０１８１】
工程２：５−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝ピラジン−２−カルボン酸
メタノール（６．０ｍＬ）及び水（２．５ｍＬ）中のメチル５−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］−メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝ピラジン−２−カルボキシラート（０．３１ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）、水酸化リチウム一水和物（０．０６０ｇ、１．４ｍｍｏｌ）の混合物を３０℃で一晩中攪拌した。この混合物をＨＣｌ水でｐＨ＝４に調整し、減圧下で濃縮してＭｅＯＨを除去した。結果として生じた固形物を濾過し、水及びエーテルで洗浄し、次いで真空下で乾燥させて所望の生成物を産出した（０．２５ｇ、８３＃）。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝５３２．３。
【０１８２】
工程３：５−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−Ｎ−イソプロピルピラジン−２−カルボキサミド
トリエチルアミン（１５μＬ、０．１１ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（１．３ｍＬ）中の５−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝ピラジン−２−カルボン酸（１９．４ｍｇ、０．０３６５ｍｍｏｌ）及びベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（１９ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）及び２−プロパンアミン（３．２ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。反応混合物を室温で一晩中攪拌した。反応混合物をＮａＨＣＯ３水でワークアップし、塩化メチレン（２ｘ２ｍＬ）で抽出した。混合有機層を水（１ｍＬ）で洗浄し、減圧下で濃縮した。残渣は更に精製することなく次の工程で使用された。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝５７３．３。
【０１８３】
塩化メチレン（１．３ｍＬ）及びトリフルオロ酢酸（０．６ｍＬ）を前述の中間体に加えた。反応混合物を室温で１．５時間攪拌した。この混合物を減圧下で濃縮した。残渣をメタノール（１．３ｍＬ）に溶解した。この溶液にエチレンジアミン（０．０８６ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌し、ＲＰ−ＨＰＬＣ（ｐＨ＝１０）によって精製して所望の生成物を産出した。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝４４３．２。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １２．１５（ｂｒ，１Ｈ），８．９７（ｓ，１Ｈ），８．６８（ｓ，１Ｈ），８．６３（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．４６（ｓ，１Ｈ），８．１２（ｄ，＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．９７（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．６０（ｄｄ，Ｊ＝３．３，２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｄｄ，Ｊ＝３．４，１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．８１（ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，２Ｈ），４．５３（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，２Ｈ），４．１３−４．０２（ｍ，１Ｈ），３．７８（ｓ，２Ｈ），１．１４（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１８４】
実施例１４．４−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−２，５−ジフルオロ−Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−メチルエチル］ベンズアミド
【０１８５】
【化１４】
0006576941.tif 000022
【０１８６】
工程１：４−クロロ−２，５−ジフルオロ−Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−メチルエチル］ベンズアミド
４−クロロ−２，５−ジフルオロベンゾイルクロリド（２９．６ｍｇ、０．１４０ｍｍｏｌ）（Ｏａｋｗｏｏｄ、Ｃａｔ．＃：００１６２８）を０℃のジクロロメチレン（４．０ｍＬ）中の（２Ｓ）−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−アミン塩酸塩（２０．０ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）（ＳｙｎＱｕｅｓｔ  Ｌａｂ、Ｃａｔ．＃：３１３０−７−Ｓ１）及びジイソプロピルエチルアミン（５８μＬ、０．３３ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。反応混合物を室温で３０分間攪拌し、飽和ＮａＨＣＯ３水でワークアップし、ジクロロメチレン（３ｘ１０ｍＬ）で抽出した。混合有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４の上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、次の工程の反応において更に精製することなくそのまま使用される所望の生成物を産出した。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝２８８．０／２９０．０。
【０１８７】
工程２：４−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−２，５−ジフルオロ−Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−メチルエチル］ベンズアミド
（Ｒ）−（＋）−２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（８．３ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）をＮ２下でトルエン（４．０ｍＬ）中の｛３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルジヒドロクロリド（６５ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）、４−クロロ−２，５−ジフルオロ−Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−メチルエチル］ベンズアミド（０．１４ｍｍｏｌ）、及び炭酸セシウム（０．１３ｇ、０．４０ｍｍｏｌ）の混合物に加え、その後に酢酸パラジウム（３．０ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１３０℃で５時間攪拌した。反応混合物が室温まで冷却された後、その混合物を水でワークアップし、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出した。混合有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４の上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、次の工程の反応において更に精製することなくそのまま使用される粗生成物を産出した。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝６６１．２。
【０１８８】
工程３：４−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−２，５−ジフルオロ−Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−メチルエチル］ベンズアミド
三フッ化ホウ素エーテラート（０．０５１ｍＬ、０．４０ｍｍｏｌ）をＮ２下で０℃のアセトニトリル（１．０ｍＬ）中の４−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−２，５−ジフルオロ−Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−メチルエチル］ベンズアミドの溶液に加えた。反応混合物を室温で３時間攪拌した。（ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝５６１．３）。次いで、この混合物を０℃まで冷却し、水（０．１３ｍＬ）を加えた。３０分後、水中の５．０Ｍ水酸化アンモニウム（０．２ｍＬ、１ｍｍｏｌ）を０℃で５分かけてゆっくりと加えた。反応混合物を室温で一晩中攪拌し、ＲＰ−ＨＰＬＣ（ｐＨ＝１０）によって精製して所望の生成物を産出した。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝５３１．０。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １２．６２（ｂｒ，１Ｈ），９．０７（ｓ，１Ｈ），８．８４（ｓ，１Ｈ），８．５５（ｓ，１Ｈ），８．５１（ｄｄ，Ｊ＝８．８，１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｂｒ，１Ｈ），７．３５（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，６．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），６．６５（ｄｄ，Ｊ＝１１．９，７．３Ｈｚ，１Ｈ），４．７６（ｍ，１Ｈ），４．７０（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２Ｈ），４．４４（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７６（ｓ，２Ｈ），１．３０（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１８９】
実施例１５．５−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−Ｎ−イソプロピルピラジン−２−カルボキサミド
【０１９０】
【化１５】
0006576941.tif 000023
【０１９１】
工程１：メチル５−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝ピラジン−２−カルボキシラート
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．０ｍＬ、６．０ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（１５ｍＬ）中の｛３−［４−（１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルジヒドロクロリド（０．９６ｇ、２．０ｍｍｏｌ）及びメチル５−クロロピラジン−２−カルボキシラート（０．３４ｇ、２．０ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。反応混合物を１２０℃で一晩中攪拌した。この混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水でワークアップし、ジクロロメチレン（３×２０ｍＬ）で抽出した。混合有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４の上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラム上のフラッシュクロマトグラフィーによりヘキサン中の酢酸エチル（０〜６０％）で精製して、所望の生成物を産出した（０．１３ｇ、１２％）。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝５４５．２。
【０１９２】
工程２：５−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝ピラジン−２−カルボン酸
メタノール（４．０ｍＬ）、ＴＨＦ（２．０ｍＬ）及び水（１．０ｍＬ）中のメチル５−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝ピラジン−２−カルボキシラート（０．１３ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、水酸化リチウム一水和物（０．０２５ｇ、０．６０ｍｍｏｌ）の反応混合物を４０℃で３時間攪拌した。この混合物を２．０Ｎ  ＨＣｌ水溶液でｐＨ＝４に調整し、減圧下で濃縮してＭｅＯＨ及びＴＨＦを除去した。形成された沈殿物を濾過し、水及びエーテルで洗浄し、真空下で乾燥させて所望の生成物を産出した（０．１００ｇ、７９％）。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝５３１．４。
【０１９３】
工程３：５−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−Ｎ−イソプロピルピラジン−２−カルボキサミド
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１９μＬ、０．１１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．０ｍＬ）中の５−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝ピラジン−２−カルボン酸（１９．４ｍｇ、０．０３６５ｍｍｏｌ）、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（１９ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）及び２−プロパンアミン（３．２ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。反応混合物を室温で一晩中攪拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水でワークアップし、ジクロロメチレン（３×２０ｍＬ）で抽出した。混合有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４の上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を塩化メチレン（１．３ｍＬ）及びＴＦＡ（１．３ｍＬ）で処理した。この混合物を室温で１．５時間攪拌し、減圧下で濃縮した。残渣をメタノール（１．３ｍＬ）に溶解し、エチレンジアミン（０．０８６ｍＬ、１．３ｍｍｏｌ）で処理した。結果として生じた混合物を室温で２時間攪拌し、次いでＲＰ−ＨＰＬＣ（ｐＨ＝１０）によって精製して所望の生成物を産出した。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝４４２．１。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １２．１９（ｂｒ，１Ｈ），８．９９（ｓ，１Ｈ），８．６６（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），８．４７（ｓ，１Ｈ），８．３２（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｄｄ，Ｊ＝３．２，２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｄｄ，Ｊ＝３．５，２．７Ｈｚ），４．８２（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，２Ｈ），４．５６（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，２Ｈ），４．１０（ｍ，１Ｈ），３．７９（ｓ，２Ｈ），１．１７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１９４】
実施例１６．｛１−（シス−４−｛［６−（２−ヒドロキシエチル）−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルトリス（トリフルオロアセタート）
【０１９５】
【化１６】
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【０１９６】
工程１：ジエチル［６−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−８−イルオキシ）−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４イル］マロナート
テトラヒドロフラン（４０ｍＬ）及び鉱油中のＮａＨ（１．１ｇ、２８ｍｍｏｌ）の０℃の混合物にマロン酸エチル（４．２ｍＬ、２８ｍｍｏｌ）を滴下した。次いで、４−クロロ−６−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−８−イルオキシ）−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン（米国特許出願公開第２０１３／００４５９６３号の実施例１、工程１に記載されている）（３．７５ｇ、１１．１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を６４℃で攪拌した。３時間後、ＨＰＬＣ及びＬＣＭＳ分析は７０％の反応完了を示した。更に６時間加熱し、次いで２０℃まで冷却した。脱炭酸化生成物のわずかな痕跡が形成された。反応を水性重炭酸塩で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４の上で乾燥させ、減圧下で蒸発させて８．５ｇの油を得た（過剰のマロン酸エチル及び鉱油を含む）。１２０ｇシリカゲルカラム上のクロマトグラフィーによって、溶媒Ａ＝ヘキサン、溶媒Ｂ＝ＥｔＯＡｃ、流量６０ｍＬ／分、Ａ３分、４０分の４０％Ｂへの勾配、２５４ｎｍに設定された検出器、収集された４７ｍＬフラクション、保持時間２８分を使用して、粗生成物を精製した。混合フラクションを蒸発させて、４．６ｇの無色の油を得た（９０％収率）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．０５（ｓ，１Ｈ）；５．３０（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ）；４．８５（ｓ，１Ｈ，ＣＨ）；４．２５（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ２）；３．９５（ｓ，４Ｈ，ＯＣＨ２）；１．６−２．１（ｍ，８Ｈ）；１．２８（ｔ，３Ｈ，ＣＨ３）。
【０１９７】
工程２：エチル［６−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−８−イルオキシ）−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−イル］アセタート
ジエチル［６−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−８−イルオキシ）−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−イル］マロナート（４．６０ｇ、９．９５ｍｍｏｌ）をエタノール（４６ｍＬ）に溶解した。水（１８μＬ、１．０ｍｍｏｌ）及びエタノール中の２１％ナトリウムエトキシド（０．３７ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を７５℃で１時間攪拌した。ＨＰＬＣ及びＬＣＭＳ分析は６０％の脱炭酸化を示した。加熱を更に２時間継続した（反応完了）。反応を水性重炭酸塩で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出物をブラインで洗浄し、次いで乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で蒸発させて３．４ｇの油を得た（８８％収率）。ＬＣＭＳ、ＨＰＬＣ、及びＮＭＲは、これが処理を進める上で十分純粋であることを示した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）：δ７．２０（ｓ，１Ｈ）；５．２０（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ）；４．１０（ｑ，２Ｈ，ＯＣＨ２）；３．８９（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）；３．８５（ｓ，４Ｈ，ＯＣＨ２）；１．５−２．０（ｍ，８Ｈ）；１．１５（ｔ，３Ｈ，ＣＨ３）。ＨＰＬＣは、これがＵＶｍａｘ  ２２２及び２５２ｎｍを有することを示した。
【０１９８】
工程３：２−［６−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−８−イルオキシ）−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−イル］エタノール
エチル［６−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−８−イルオキシ）−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−イル］アセタート（３．０ｇ）をテトラヒドロフラン（４０ｍＬ）に溶解し、氷浴で冷却した。ナトリウムテトラヒドロボラート（８８４ｍｇ、２３．４ｍｍｏｌ）及びその後にメタノール（４．８ｍＬ、１２０ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた。反応混合物を２０分間攪拌し、氷浴を取り外し、２１℃で０．５時間攪拌した。ＨＰＬＣ及びＬＣＭＳは、残留エステルが存在しないことを示し、所望のＭ＋Ｈ３４９への転換を示し、更には幾つかの過還元生成物の存在も示した（このうちの少なくとも１つはＵＶ吸光度を有しない）。反応混合物を水で急冷し、蒸発させた。反応混合物を水性重炭酸塩及びＥｔＯＡｃで希釈し、０．５時間攪拌した。ＥｔＯＡｃ層をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、蒸発させて、３．０ｇの油を得た。１２０ｇシリカゲルカラム上のクロマトグラフィーによって、溶媒Ａ＝ヘキサン；溶媒Ｂ＝３％ｉＰＡ／ＥｔＯＡｃ；流量６０ｍＬ／分；Ａ、３分；３０分の５０％Ｂへの勾配、次いで１５分の５０％Ｂ；２５４ｎｍに設定された検出器；収集された４７ｍＬフラクション；保持時間、３４分を使用して生成物を精製し、蒸発させて、１．５ｇの淡黄色の粘性油を回収した（５６％収率）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）：δ７．１０（ｓ，１Ｈ）；５．２０（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ）；４．７１（ｔ，１Ｈ，ＯＨ）；３．８５（ｓ，４Ｈ，ＯＣＨ２）；３．７２（ｑ，２Ｈ，ＯＣＨ２）；２．８５（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２）；１．５−２．０（ｍ，８Ｈ）。
【０１９９】
工程４：４−｛［６−（２−ヒドロキシエチル）−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝シクロヘキサノン
２−［６−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−８−イルオキシ）−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−イル］エタノール
をアセトン（６０ｍＬ，９００ｍｍｏｌ）に溶解し、水中の５．０Ｍ塩化水素（２０ｍＬ、９８ｍｍｏｌ）を加え、１７時間攪拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣ分析は、Ｍ＋Ｈ３０５へのほぼ完全な転換を示した。水性重炭酸塩を加え、反応混合物を攪拌し、次いで濃縮した。この混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。ＥｔＯＡｃを乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で蒸発させて、１．３ｇの淡黄色の粘性油を得た（次の工程の反応において、精製することなく使用される）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ６．８０（ｓ，１Ｈ）；５．６０（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ）；４．０６（ｔ，２Ｈ，ＯＣＨ２）；３．０４（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．６１（ｍ，２Ｈ）；２．４５（ｍ，２Ｈ）；２．２５（ｍ，２Ｈ）。
【０２００】
工程５：｛１−（４−｛［６−（２−ヒドロキシエチル）−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル
｛３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルジヒドロクロリド（１．９ｇ、３．９ｍｍｏｌ）、及び４−｛［６−（２−ヒドロキシエチル）−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝シクロヘキサノン（１．３ｇ、４．３ｍｍｏｌ）を、乾燥テトラヒドロフラン（３６ｍＬ）中で窒素下にて１５分間攪拌した。次いでトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１．７ｇ、８．２ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を２０℃で１６時間攪拌した。ＨＰＬＣ及びＬＣＭＳ分析は、トランス及びシス生成物への完全な転換を示した（Ｍ＋Ｈ６９８、１：１比）。この反応を水で急冷し、濃縮し、２０％  ＫＨＣＯ３と共に攪拌し、酢酸エチルで抽出し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させて、２．８ｇを得た。Ｗａｔｅｒｓ機器及び３０ｍｍ×１００ｍｍ  Ｘｂｒｉｄｇｅ  Ｃ１８カラム；６０ｍＬ／分；５５％  ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２Ｏ（０．１％ＮＨ４ＯＨ）；０．５分；７２％への４．５勾配；２４回実行；保持時間トランス異性体、４．６分；シス異性体、５．４分を使用した分取ＬＣＭＳによって異性体生成物を分離した。単離されたシス異性体は、１％未満の残留トランス異性体を含有していた。１．００ｇのシス異性体を回収する（３７％収率）。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３；更にまたＣＯＳＹ、ＨＳＱＣ、及びＨＭＢＣも）：δ８．８３（ｓ，１Ｈ）；８．４０（ｓ，１Ｈ）；８．２８（ｓ，１Ｈ）；７．４０（ｍ，１Ｈ）；６．８０（ｍ，１Ｈ）；６．６７（ｓ，１Ｈ）；５．６４（ｓ，２Ｈ，ＳＥＭ）；５．１７（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ）；４．０１（ｔ，２Ｈ，ＯＣＨ２）；３．７４（ｓ，２Ｈ，ＮＣＨ）；３．５９（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ）；３．５５（ｔ，２Ｈ，ＳＥＭ）；３．３８（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２ＣＮ）；２．９５（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．３０（ｍ，１Ｈ，ＮＣＨ）；２．１５（ｍ，２Ｈ）；１．８４（ｍ，２Ｈ）；１．５０（ｍ，２Ｈ）；１．３０（ｍ，２Ｈ）；０．９０（ｔ，２Ｈ，ＳＥＭ）；−０．９２（ｓ，９Ｈ，ＳＥＭ）。
【０２０１】
工程６：｛１−（シス−４−｛［６−（２−ヒドロキシエチル）−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルトリス（トリフルオロアセタート）
｛１−（４−｛［６−（２−ヒドロキシエチル）−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル異性体を塩化メチレン（１８ｍＬ）及びトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、１８ｍＬ、２３０ｍｍｏｌ）に溶解し、１．０時間攪拌した。この溶液を濃縮してＴＦＡを除去した。ＬＣＭＳは、ヒドロキシメチル中間体（Ｍ＋Ｈ５９８）、幾らかのそのＴＦＡエステル（Ｍ＋Ｈ６９４）、及び５％未満の残留ＳＥＭへの転換を示した。残渣をメタノール（３６ｍＬ）に溶解し、水中の１５．０Ｍ水酸化アンモニウム（９．０ｍＬ、１３０ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を２１℃で１８時間攪拌した。ＨＰＬＣ及びＬＣＭＳは、Ｍ＋Ｈ５９８ピークもＴＦＡエステルも残っていないことを示した。この溶液を蒸発させた。水性重炭酸塩を加え、生成物をＥｔＯＡｃで抽出することによって、アンモニウムトリフルオロアセタートを除去した。混合ＥｔＯＡｃ抽出物を蒸発させて、０．９６ｇを得た。これを１．５当量のＴＦＡ（１８０μＬ）を含有している７０ｍＬの１０％  Ｈ２Ｏ／ＡＣＮに溶解した。Ｗａｔｅｒｓ  Ｆｒａｃｔｉｏｎ−Ｌｉｎｘ機器及び３０ｍｍ×１００ｍｍ  Ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｃ１８カラム；６０ｍＬ／分；１５％  ＡＣＮ−Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）、０．５分；３３％への４．５分勾配；ｍ／ｚ５６８に設定された検出器；１４回実行；保持時間５．０分を使用した分取ＬＣＭＳによって生成物を単離した。ＨＰＬＣは、ＵＶｍａｘ  ２２４、２５２、２９４、及び３１８ｎｍを示した。混合フラクションを凍結乾燥した。１．０ｇの白色の固形物を回収する（８０％収率）。ＮＭＲは、それが２．５ＴＦＡ塩であることを示した。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＣＮ；更にまたＣＯＳＹ、ＨＳＱＣ、及びＨＭＢＣも）：δ１０．８４（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）；９．００（ｓ，１Ｈ）；８．９０（ｓ，１Ｈ）；８．５６（ｓ，１Ｈ）；７．６６（ｍ，１Ｈ）；７．１０（ｍ，１Ｈ）；６．８６（ｓ，１Ｈ）；５．３９（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ）；４．８６（ｂｒｓ，２Ｈ，ＮＣＨ）；４．６６（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ）；３．９０（ｔ，２Ｈ，ＯＣＨ２）；３．７８（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２ＣＮ）；３．３９（ｍ，１Ｈ，ＮＣＨ）；２．９２（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．２０（ｍ，２Ｈ）；１．９２（ｍ，２Ｈ）；１．７６（ｍ，４Ｈ）。１９Ｆ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）：δ−６９．８（ｓ）；−７４．８（ｓ，ＴＦＡ）；Ｃ２７Ｈ２９Ｆ３Ｎ９Ｏ２に対して計算されたＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝５６８．２４。
【０２０２】
実施例１７：｛１−（シス−４−｛［４−［（エチルアミノ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルトリス（トリフルオロアセタート）
【０２０３】
【化１７】
0006576941.tif 000025
【０２０４】
工程１：［２−［（シス−４−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝シクロヘキシル）オキシ］−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−４−イル］メチルメタンスルホナート
｛１−（シス−４−｛［４−（ヒドロキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル（米国特許出願公開第２０１３／００４５９６３号の実施例６４に記載のもの、１４５．０ｍｇ、０．２１２４ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２．９３ｍＬ）に溶解し、０℃まで冷却した。それにＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（６０．５μＬ、０．３４７ｍｍｏｌ）を加え、その後にメタンスルホニルクロリド（２３μＬ、０．３０ｍｍｏｌ）を加えた。この反応を０℃で１時間攪拌した。次いで、反応混合物をＥｔＯＡｃでワークアップし、次の反応で使用した。ＭＳ（ＥＳ）：７６１（Ｍ＋１）。
【０２０５】
工程２：｛１−（シス−４−｛［４−［（エチルアミノ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルトリス（トリフルオロアセタート）
［２−［（シス−４−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝シクロヘキシル）オキシ］−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−４−イル］メチルメタンスルホナート（５０ｍｇ、０．０６５７１ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（２．５ｍＬ）に溶解し、ＴＨＦ中の２．０Ｍエチルアミン（３００μＬ、０．６ｍｍｏｌ）を加えた。この反応を２５℃で１６時間攪拌し、この時点でＬＣＭＳ分析は主として生成物を示した。米国特許出願公開第２０１３／００４５９６３号の実施例１に記載されているように生成物をＬＣによって精製し、蒸発させ、脱保護した後、ＬＣによって精製して生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ９．０８（ｓ，１Ｈ），８．８７（ｓ，１Ｈ），８．５８（ｓ，１Ｈ），７．７８（ｄ，１Ｈ），７．５０（ｓ，１Ｈ），７．２５（ｄ，１Ｈ），７．１３（ｓ，１Ｈ），５．３８（ｍ，１Ｈ），５．０８（ｄ，２Ｈ），４．８０（ｄ，２Ｈ），４．２７（ｓ，２Ｈ），３．７４（ｓ，２Ｈ），３．５０（ｍ，１Ｈ），３．１６（ｑ，２Ｈ），２．２４（ｍ，２Ｈ），２．０１（ｍ，２Ｈ），１．７６（ｍ，４Ｈ），１．３４（ｔ，３Ｈ）。１９Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  −７０．５２（ｓ），−７７．４９（ｓ）。ＭＳ（ＥＳ）：５８０（Ｍ＋１）。
【０２０６】
実施例１８：｛１−（シス−４−｛［４−（１−ヒドロキシ−１−メチルエチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルビス（トリフルオロアセタート）
【０２０７】
【化１８】
0006576941.tif 000026
【０２０８】
工程１：２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）イソニコチン酸
２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）ピリジン（１．０ｇ、５．５１ｍｍｏｌ、Ｏａｋｗｏｏｄ製品）をテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）に溶解し、ＴＨＦ中の１．０Ｍリチウムクロリド−クロロ（２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−１−イル）マグネシウム（１：１）（６．６１０ｍＬ、６．６１０ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ．）を２５℃で加えた。この反応を２５℃で１時間攪拌し、
−７８℃まで冷却した。この反応を−７８℃で１時間攪拌し、室温まで温まるのを待ち、水で急冷し、１Ｎ  ＮａＯＨとエーテルとの間で分配した。相を分離し、水相を追加のエーテルで洗浄し、濃縮ＨＣｌでｐＨ〜１に酸性化し、エーテルで抽出した。混合有機相を水、飽和ＮａＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ４の上で乾燥させ、濾過し、蒸発乾燥固して、粗生成物を得た。ＮＭＲ分析は、これがパラ及びメタカルボン酸の〜２：１混合物からなることを示した。この混合物は次の反応に持ち越された。４４０ＭＨｚ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ８．１７（ｓ，１Ｈ），８．１１（ｓ，１Ｈ）。
【０２０９】
工程２：エチル２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）イソニコチナート及びエチル２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）ニコチナート
バイアル瓶内で、２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）ニコチン酸（０．９８ｇ、４．４ｍｍｏｌ）及び２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）イソニコチン酸（１．８５ｇ、８．２ｍｍｏｌ）をエチルオルトホルマート（５．０ｍＬ、３０．１ｍｍｏｌ）に溶解し、１２０℃で５時間加熱し、この時点でＴＬＣ分析は、出発原料のほとんどが消費され、生成物が形成されていることを示した。反応混合物を減圧下で蒸発させ、１０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用したシリカゲルクロマトグラフィーによって残渣を精製して、２つのエチルエステル生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ８．１４（ｓ，１Ｈ），８．０８（ｓ，１Ｈ），４．４７（ｑ，２Ｈ），１．４４（ｔ，３Ｈ）。
【０２１０】
工程３：２−［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−４−イル］プロパン−２−オール
エチル２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）イソニコチナート（０．３５ｇ、１．４ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１３．８ｍＬ）に溶解し、−７８℃まで冷却し、次いでエーテル中の３．０Ｍメチルマグネシウムブロミド（１．４ｍＬ、４．１ｍｍｏｌ）を加えた。この反応を−７８℃で３時間攪拌し、この時点でＬＣＭＳ分析は出発原料がなくなっていることを示した。この反応を飽和ＮＨ４Ｃｌで急冷し、水／１Ｎ  ＨＣｌとＥｔＯＡｃとの間で分配し、相を分離し、水相を追加のＥｔＯＡｃで洗浄した。混合有機相を水、飽和ＮａＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ４の上で乾燥させ、濾過し、蒸発乾燥固して、粗生成物を得た。ＮＭＲ分析は、これがアルコール及びメチルケトン中間体の〜１：１混合物からなることを示した。この粗材料は、次の反応において精製することなく使用された。ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ  ７．７０（ｓ，１Ｈ），７．６３（ｓ，１Ｈ），１．６０（ｓ，６Ｈ）。
【０２１１】
工程４：２−［２−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−８−イルオキシ）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−４−イル］プロパン−２−オール
１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−８−オール（０．２５ｇ、１．５８ｍｍｏｌ）及び２−［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−４−イル］プロパン−２−オール（０．２ｇ、０．８３５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２ｍＬ）に溶解し、０℃まで冷却し、鉱油中の水素化ナトリウム（７０．０ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ）の６０％混合物を加え、この反応を０℃で３０分間、２５℃で６０時間攪拌し、この時点でＴＬＣ分析は、幾らかの生成物の存在を示した。この反応を水で急冷し、酢酸エチルで抽出し、有機抽出物を水、飽和ＮａＣｌで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、減圧下で蒸発させた。残渣をＬＣ（ｐＨ２）によって精製して生成物を得た。ＭＳ（ＥＳ）：３６２（Ｍ＋１）。
【０２１２】
工程５：４−｛［４−（１−ヒドロキシ−１−メチルエチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝シクロヘキサノン
２−［２−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−８−イルオキシ）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−４−イル］プロパン−２−オール（０．０４９ｇ、０．１４ｍｍｏｌ）をアセトン（３．７ｍＬ）に溶解した。水中の１２．０Ｍ塩化水素の溶液（０．４３ｍＬ、５．２ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で１６時間攪拌し、この時点でＬＣＭＳは約７０％の反応が完了していることを示した。追加の水中の１２．０Ｍ塩化水素（０．４３ｍＬ、５．２ｍｍｏｌ）を加え、３時間攪拌し、ＬＣＭＳは〜９０％の反応が完了したことを示し、過剰ＮａＨＣＯ３の中に入れて急冷し、ＥｔＯＡｃで抽出し、有機抽出物を蒸発させて生成物を得た。これは、次の反応において精製することなく使用された。ＭＳ（ＥＳ）：３１８（Ｍ＋１）。
【０２１３】
工程５：｛１−（シス−４−｛［４−（１−ヒドロキシ−１−メチルエチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル
｛３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルジヒドロクロリド（５５．３ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）及び４−｛［４−（１−ヒドロキシ−１−メチルエチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝シクロヘキサノンを乾燥１，２−ジクロロエタン（１．３８ｍＬ）に溶解し、５分間攪拌し、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（８６．１ｍｇ、０．４０６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２５℃で１６時間攪拌し、この時点でＬＣＭＳ分析は主として２つのジアステレオマー生成物を示した。この反応を水で急冷し、ＮａＨＣＯ３で中和し、酢酸エチルで抽出し、溶媒を蒸発させた。残渣をＬＣＭＳ（ｐＨ１０）によって精製し、第２のピークを含有しているフラクションを混合し、蒸発させて、｛１−（シス−４−｛［４−（１−ヒドロキシ−１−メチルエチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルを得た。第１のピークもまた単離して、｛１−（トランス−４−｛［４−（１−ヒドロキシ−１−メチルエチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルを得た。ＭＳ（ＥＳ）：７１２（Ｍ＋１）。
【０２１４】
工程６：｛１−（シス−４−｛［４−（１−ヒドロキシ−１−メチルエチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルビス（トリフルオロアセタート）
｛１−（シス−４−｛［４−（１−ヒドロキシ−１−メチルエチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルを米国特許出願公開第２０１３／００４５９６３号の実施例１に記載されているように脱保護し、液体クロマトグラフィー（ｐＨ２）によって精製して、１−（シス−４−｛［４−（１−ヒドロキシ−１−メチルエチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルビス（トリフルオロアセタート）を得た。同様に、｛１−（トランス−４−｛［４−（１−ヒドロキシ−１−メチルエチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリルビス（トリフルオロアセタート）を調製し、特性化した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ９．０７（ｓ，１Ｈ），８．８７（ｓ，１Ｈ），８．５９（ｓ，１Ｈ），７．７８（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｓ，１Ｈ），７．２４（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｓ，１Ｈ），５．３５（ｓ，１Ｈ），５．０９（ｄ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ，２Ｈ），４．８２（ｄ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７２（ｓ，２Ｈ），３．５（ｍ，１Ｈ），２．２７（ｍ，２Ｈ），２．０（ｍ，２Ｈ），１．７４（ｍ，４Ｈ），１．５０（ｓ，６Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ）：５８１（Ｍ＋１）。
【０２１５】
以下の実施例１９及び２０は、実施例１７の手順と同様に調整された。
【０２１６】
【化１９】
0006576941.tif 000027
【０２１７】
【表３】
0006576941.tif 000028
【０２１８】
実施例２１．｛トランス−３−（４−｛［４−（｛［（１Ｓ）−２−ヒドロキシ−１−メチルエチル］アミノ｝メチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル
【０２１９】
【化２０】
0006576941.tif 000029
【０２２０】
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（９．４μＬ、０．０５４ｍｍｏｌ）及びメタンスルホン酸無水物（７．９ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（０．３０ｍＬ）中の｛トランス−３−（４−｛［４−（ヒドロキシメチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル（１０．０ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ、米国特許出願公開第２０１４／０００５１６６号の中間体実施例Ａ２、工程Ｆに記載されているピーク１）の溶液に加え、このメシラート形成を３０分間攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をテトラヒドロフラン（０．３０ｍＬ）及びメタノール（０．１０ｍＬ）の混合物に再溶解し、（２Ｓ）−２−アミノプロパン−１−オール（２０．μＬ、０．２７ｍｍｏｌ、Ａｃｒｏｓ）を加えた。反応混合物を４０℃で一晩中攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、１：１のＴＦＡ：ＤＣＭで１時間攪拌することによって粗生成物を脱保護し、その後、濃縮し、ＬＣＭＳによる判定で脱保護が完了するまでメタノール（１．０ｍＬ）中のエチレンジアミン（０．１０ｍＬ）と共に攪拌した。分取ＨＰＬＣ−ＭＳ（０．１５％  ＮＨ４ＯＨを含有するＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏの勾配で溶離するＣ１８）を使用して生成物を精製した。溶離液を凍結し、凍結乾燥して、生成物を遊離塩基として産出した（６．０ｍｇ、５４％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ８．７４（ｓ，１Ｈ），８．６７（ｓ，１Ｈ），８．４０（ｓ，１Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｓ，１Ｈ），７．００−６．９７（ｍ，２Ｈ），５．２３−５．００（ｍ，１Ｈ），３．９０（ｄ，Ｊ＝１４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８１（ｄ，Ｊ＝１４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．５０（ｄｄ，Ｊ＝１０．９，４．９Ｈｚ，１Ｈ），３．４１（ｄｄ，Ｊ＝１０．９，６．９Ｈｚ，１Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），３．１６−３．０５（ｍ，２Ｈ），２．９５（ｐ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），２．８３−２．６３（ｍ，３Ｈ），２．５６−２．４２（ｍ，２Ｈ），２．３９−２．２３（ｍ，２Ｈ），２．１９−２．０４（ｍ，２Ｈ），１．９３−１．７５（ｍ，２Ｈ），１．０５（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）。１９Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  −７０．３０（ｓ）。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：６１０．３。
【０２２１】
実施例２２．｛トランス−３−（４−｛［４−（｛［（２Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル］アミノ｝メチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル
【０２２２】
【化２１】
0006576941.tif 000030
【０２２３】
米国特許出願公開第２０１４／０００５１６６号の実施例９の手順に従い、その置換工程で（２Ｒ）−１−アミノプロパン−２−オール（１２μＬ、０．１５ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用し、これを５０℃で２時間実施した。生成物を遊離塩基として得た（８．７ｍｇ、４６％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ）δ  １２．１３（ｓ，１Ｈ），８．８３（ｓ，１Ｈ），８．６９（ｓ，１Ｈ），８．４２（ｓ，１Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｓ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｓ，１Ｈ），５．１１−４．９０（ｍ，１Ｈ），４．４９（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｓ，２Ｈ），３．６７（ｔｔ，Ｊ＝１０．３，５．６Ｈｚ，１Ｈ），３．４２（ｓ，２Ｈ），３．１１−２．９６（ｍ，２Ｈ），２．８１（ｐ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），２．７４−２．５６（ｍ，２Ｈ），２．４６−２．２５（ｍ，４Ｈ），２．２４−２．０９（ｍ，２Ｈ），２．０９−１．９０（ｍ，２Ｈ），１．８１−１．５１（ｍ，２Ｈ），１．０３（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，３Ｈ）。１９Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ）δ  −６７．２９（ｓ）。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：６１０．３。
【０２２４】
実施例２３．｛トランス−３−（４−｛［４−（｛［（２Ｓ）−２−ヒドロキシプロピル］アミノ｝メチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル
【０２２５】
【化２２】
0006576941.tif 000031
【０２２６】
米国特許出願公開第２０１４／０００５１６６号の実施例９の手順に従い、その置換工程で（２Ｓ）−１−アミノプロパン−２−オール（１２μＬ、０．１５ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用し、これを５０℃で２時間実施した（７．９ｍｇ、４２％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ）δ  １２．１３（ｓ，１Ｈ），８．８３（ｓ，１Ｈ），８．６９（ｓ，１Ｈ），８．４２（ｓ，１Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｓ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｓ，１Ｈ），５．２７−４．７１（ｍ，１Ｈ），４．４９（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｓ，２Ｈ），３．７２−３．６２（ｍ，１Ｈ），３．４２（ｓ，２Ｈ），３．０９−２．９６（ｍ，２Ｈ），２．８１（ｐ，Ｊ＝７．４  Ｈｚ，１Ｈ），２．７２−２．５５（ｍ，２Ｈ），２．４３−２．２５（ｍ，４Ｈ），２．２５−２．０８（ｍ，２Ｈ），２．０８−１．９６（ｍ，２Ｈ），１．７８−１．５７（ｍ，２Ｈ），１．０３（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，３Ｈ）。１９Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ）δ  −６７．２９（ｓ）。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：６１０．３。
【０２２７】
実施例２４．｛トランス−３−（４−｛［４−（２−ヒドロキシエチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル
【０２２８】
【化２３】
0006576941.tif 000032
【０２２９】
｛トランス−３−（４−｛［４−（２−ヒドロキシエチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル（９．０ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ、米国特許出願公開第２０１４／０００５１６６号の中間体実施例Ａ４、工程３に記載されているピーク２）を、塩化メチレン（０．５０ｍＬ）及びトリフルオロ酢酸（０．５０ｍＬ）の混合物中で１時間攪拌することによって脱保護し、精製した。溶媒を減圧下で除去し、エチレンジアミン（０．１ｍＬ）を含有しているメタノール（０．１ｍＬ）中で残渣を攪拌した。分取ＨＰＬＣ−ＭＳ（０．１５％  ＮＨ４ＯＨを含有するＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏの勾配で溶離するＣ１８）による精製により、生成物を遊離塩基として産出した（５．８ｍｇ、７９％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ）δ  １２．１２（ｓ，１Ｈ），８．８３（ｓ，１Ｈ），８．６９（ｓ，１Ｈ），８．４２（ｓ，１Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｓ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），４．９９（ｔｔ，Ｊ＝８．２，４．１Ｈｚ，１Ｈ），４．７３（ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），３．６６（ｑ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．４２（ｓ，２Ｈ），３．１１−２．９５（ｍ，２Ｈ），２．９０−２．７１（ｍ，３Ｈ），２．７１−２．５６（ｍ，２Ｈ），２．４４−２．３０（ｍ，２Ｈ），２．１５（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），２．０９−１．８２（ｍ，２Ｈ），１．８３−１．５８（ｍ，２Ｈ）。１９Ｆ  ＮＭＲ（２８２ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ）δ  −６７．２６（ｓ）。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：５６７．２。
【０２３０】
実施例Ａ：インビトロＪＡＫキナーゼアッセイ
本明細書に記載の化合物を、Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９９，２６９，９４−１０４に記載されている以下のインビトロアッセイに従って、ＪＡＫ標的の阻害活性について試験した。Ｎ末端Ｈｉｓタグを有するヒトＪＡＫ１（ａ．ａ．８３７〜１１４２）、ＪＡＫ２（ａ．ａ．８２８〜１１３２）、及びＪＡＫ３（ａ．ａ．７８１〜１１２４）の触媒ドメインを、昆虫細胞中のバキュロウイルスを使用して発現させ、精製した。ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、又はＪＡＫ３の触媒活性を、ビオチン化ペプチドのリン酸化を測定することによってアッセイした。リン酸化されたペプチドは、ホモジニアス時間分解蛍光法（ＨＴＲＦ）によって検出した。化合物のＩＣ５０を、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＤＴＴ、及び０．１ｍｇ／ｍＬ（０．０１％）ＢＳＡを含む５０ｍＭトリス（ｐＨ７．８）緩衝液中に酵素、ＡＴＰ、及び５００ｎＭペプチドを含有する４０μＬの反応液中でキナーゼごとに測定した。１ｍＭ  ＩＣ５０測定について、反応液中のＡＴＰ濃度は１ｍＭであった。反応を室温で１時間実行し、次いで２０μＬのアッセイ緩衝液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）中の４５ｍＭ  ＥＤＴＡ、３００ｎＭ  ＳＡ−ＡＰＣ、６ｎＭ  Ｅｕ−Ｐｙ２０で停止させた。ユーロピウム標識抗体への結合を４０分間行い、ＨＴＲＦシグナルをＦｕｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）上で測定した。実施例Ａのアッセイによって１ｍＭ  ＡＴＰで試験された、実施例の化合物のデータについては、表２を参照されたい。
【０２３１】
実施例Ｂ：細胞アッセイ
サイトカイン及びしたがってＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達に依存する癌細胞株は、増殖のために、ＲＰＭＩ１６４０、１０％  ＦＢＳ、及び１ｎＧ／ｍＬの適切なサイトカイン中にウェルあたり６０００個の細胞（９６ウェルプレート形式）でプレートに播くことができる。化合物は、ＤＭＳＯ／培地（最終濃度０．２％  ＤＭＳＯ）中の細胞に添加し、３７℃、５％  ＣＯ２にて７２時間培養することができる。細胞生存性に対する化合物の効果は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）、次いでＴｏｐＣｏｕｎｔ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）定量化を使用して評価される。化合物の潜在的なオフターゲット効果は、非ＪＡＫ駆動細胞株を同じアッセイ読み出しで使用して同時に測定される。全ての実験は、典型的には２連で実施される。
【０２３２】
上記の細胞株はまた、ＪＡＫキナーゼのリン酸化又はＳＴＡＴタンパク質、Ａｋｔ、Ｓｈｐ２、Ｅｒｋなどの潜在的な下流基質に対する化合物の効果を調べるために使用することもできる。これらの実験は、一晩のサイトカイン飢餓、次いで化合物との短時間の前培養（２時間以下）及び約１時間以下のサイトカイン刺激の後に実施することができる。その後、タンパク質が細胞から抽出され、ウエスタンブロット法、又はリン酸化タンパク質と総タンパク質とを区別することができる抗体を使用したＥＬＩＳＡを含め、当業者によく知られているテクニックによって分析される。これらの実験は、正常細胞又は癌細胞を利用して、腫瘍細胞の生存性生物学又は炎症性疾病の媒介物質に対する化合物の活性を調査することができる。例えば、後者に関しては、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＦＮなどのサイトカインを使用してＪＡＫ活性化を刺激し、ＳＴＡＴタンパク質のリン酸化、並びに潜在的には転写プロフィール（アレイ又はｑＰＣＲ技術によって評価される）又はＩＬ−１７などのタンパク質の産生及び／若しくは分泌をもたらすことができる。化合物がこれらのサイトカイン媒介効果を阻害する能力は、当業者に周知のテクニックを使用して測定することができる。
【０２３３】
本明細書に記載の化合物はまた、突然変異型ＪＡＫ、例えば、骨髄増殖性障害で検出されるＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ突然変異に対するそれらの効力及び活性を評価するように設計された細胞モデルにおいて試験することもできる。これらの実験は、多くの場合、野生型又は突然変異型ＪＡＫキナーゼが異所性発現する、血液学的系統のサイトカイン依存性細胞（例えばＢａＦ／３）を利用する（Ｊａｍｅｓ，Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ４３４：１１４４−１１４８；Ｓｔａｅｒｋ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．ＪＢＣ  ２８０：４１８９３−４１８９９）。エンドポイントには、細胞の生存、増殖、及びリン酸化ＪＡＫ、ＳＴＡＴ、Ａｋｔ、又はＥｒｋタンパク質に対する化合物の効果が含まれる。
【０２３４】
本明細書に記載の一部の化合物は、Ｔ細胞の増殖を阻害するそれらの活性について評価することができる。そのようなアッセイは、第２のサイトカイン（すなわちＪＡＫ）駆動増殖アッセイ、及び更に免疫抑制又は免疫活性化阻害の単純化したアッセイであるとみなすことができる。以下は、そのような実験がどのように実施され得るかの概要である。フィコールハイパック分離法を使用してヒト全血サンプルから末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を調製し、Ｔ細胞（フラクション２０００）をＰＢＭＣから水簸によって得ることができる。新鮮分離されたヒトＴ細胞は、培地（１０％ウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍＬペニシリン，１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンが補充されるＲＰＭＩ  １６４０）中に、密度２×１０６細胞／ｍＬ、３７℃にて、最長２日間維持することができる。ＩＬ−２刺激細胞増殖分析の場合、Ｔ細胞は、最初にフィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）で最終濃度１０μｇ／ｍＬにて７２時間処理される。ＰＢＳで１回洗浄した後、６０００細胞／ウェルが９６ウェルプレートに播かれ、１００Ｕ／ｍＬヒトＩＬ−２の存在下で培地中の様々な濃度の化合物で処理される（ＰｒｏＳｐｅｃ−Ｔａｎｙ  ＴｅｃｈｎｏＧｅｎｅ；Ｒｅｈｏｖｏｔ，Ｉｓｒａｅｌ）。これらのプレートは３７度で７２時間培養され、製造元（Ｐｒｏｍｅｇａ；Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）が提案するプロトコルに従ってＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ発光試薬を使用して増殖指数が評価される。
【０２３５】
アッセイＣ．Ｓ１００Ａ９トランスジェニックマウスモデル
Ｓ１００Ａ９トランスジェニックマウスが、ＭＤＳに類似した進行性の多血球系統血球減少症及び細胞学的異形成症の発展と共にＭＤＳＣの骨髄集積を示すことは、既に明らかにされている。更に、オールトランスレチノイン酸処理又はＣＤ３３シグナル伝達の活性免疫受容活性化チロシンモチーフ保有（ＩＴＡＭ保有）アダプタータンパク質（ＤＡＰ１２）分断のいずれかによるＭＤＳＣの早期の強制的な突然変異は、血液学的表現型を救済し、疾病を軽減した。このシステムは、前臨床的モデルにおいてＭＤＳ類似の疾病でのＪＡＫ１阻害に対する効果を試験するのに有用となり得る。Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１２３（１１）：４５９５〜４６１１（２０１３）、したがって、ＪＡＫ１選択的阻害剤は、経口胃管栄養法によって投与される。Ｓ１００Ａ９トランスジェニックマウスで観測された、化合物が血球減少症及び細胞学的異形成症を軽減する能力は、監視される。
【０２３６】
全ての特許、特許出願、学術論文及び書籍は、それらの内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。
また、本発明は、以下のものも包含される。
［発明１］
骨髄異形成症候群の治療を必要としている患者においてそれを行う方法であって、治療的に有効な量のＪＡＫ１選択的阻害剤、又はその薬学的に許容される塩を前記患者に投与することを含む、方法。
［発明２］
前記ＪＡＫ１選択的阻害剤が、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、及びＴＹＫ２よりもＪＡＫ１に対して選択的である、発明１に記載の方法。
［発明３］
前記ＪＡＫ１選択的阻害剤が、
３−［１−（６−クロロピリジン−２−イル）ピロリジン−３−イル］−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル；
３−（１−［１，３］オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イルピロリジン−３−イル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル；
４−［（４−｛３−シアノ−２−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］−３−フルオロベンゾニトリル；
４−［（４−｛３−シアノ−２−［３−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピロール−１−イル］プロピル｝ピペラジン−１−イル）カルボニル］−３−フルオロベンゾニトリル；
｛１−｛１−［３−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン−４−イル｝−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル；
４−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−Ｎ−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］ピペリジン−１−カルボキサミド；
［３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］−１−（１−｛［２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−イル］カルボニル｝ピペリジン−４−イル）アゼチジン−３−イル］アセトニトリル；
［トランス−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］−３−（４−｛［２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−イル］カルボニル｝ピペラジン−１−イル）シクロブチル］アセトニトリル；
｛トランス−３−（４−｛［４−［（３−ヒドロキシアゼチジン−１−イル）メチル］−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル；
｛トランス−３−（４−｛［４−｛［（２Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル］メチル｝−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル；
｛トランス−３−（４−｛［４−｛［（２Ｒ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル］メチル｝−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル；
４−（４−｛３−［（ジメチルアミノ）メチル］−５−フルオロフェノキシ｝ピペリジン−１−イル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ブタンニトリル；
５−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−Ｎ−イソプロピルピラジン−２−カルボキサミド；
４−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−２，５−ジフルオロ−Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−メチルエチル］ベンズアミド；
５−｛３−（シアノメチル）−３−［４−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−１−イル｝−Ｎ−イソプロピルピラジン−２−カルボキサミド；
｛１−（シス−４−｛［６−（２−ヒドロキシエチル）−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル；
｛１−（シス−４−｛［４−［（エチルアミノ）メチル］−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル；
｛１−（シス−４−｛［４−（１−ヒドロキシ−１−メチルエチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル；
｛１−（シス−４−｛［４−｛［（３Ｒ）−３−ヒドロキシピロリジン−１−イル］メチル｝−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル；
｛１−（シス−４−｛［４−｛［（３Ｓ）−３−ヒドロキシピロリジン−１−イル］メチル｝−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝シクロヘキシル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル｝アセトニトリル；
｛トランス−３−（４−｛［４−（｛［（１Ｓ）−２−ヒドロキシ−１−メチルエチル］アミノ｝メチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル；
｛トランス−３−（４−｛［４−（｛［（２Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル］アミノ｝メチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル；
｛トランス−３−（４−｛［４−（｛［（２Ｓ）−２−ヒドロキシプロピル］アミノ｝メチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル；
｛トランス−３−（４−｛［４−（２−ヒドロキシエチル）−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝ピペリジン−１−イル）−１−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］シクロブチル｝アセトニトリル；
又はその製薬的に許容できる塩から選択される、発明１に記載の方法。
［発明４］
前記骨髄異形成症候群が、単一血球系統の異形成を伴う不応性血球減少症（ＲＣＵＤ）である、発明１〜３のいずれか１つに記載の方法。
［発明５］
前記骨髄異形成症候群が、環状鉄芽球を伴う不応性貧血（ＲＡＲＳ）である、発明１〜３のいずれか１つに記載の方法。
［発明６］
前記骨髄異形成症候群が、多血球系統の異形成を伴う不応性血球減少症である、発明１〜３のいずれか１つに記載の方法。
［発明７］
前記骨髄異形成症候群が、芽球増加を伴う不応性貧血−１（ＲＡＥＢ−１）である、発明１〜３のいずれか１つに記載の方法。
［発明８］
前記骨髄異形成症候群が、芽球増加を伴う不応性貧血−２（ＲＡＥＢ−２）である、発明１〜３のいずれか１つに記載の方法。
［発明９］
前記骨髄異形成症候群が、分類不能型骨髄異形成症候群（ＭＤＳ−Ｕ）である、発明１〜３のいずれか１つに記載の方法。
［発明１０］
前記骨髄異形成症候群が、染色体異常ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｄｅｌ（５ｑ）を伴う骨髄異形成症候群である、発明１〜３のいずれか１つに記載の方法。
［発明１１］
前記骨髄異形成症候群が、赤血球造血刺激因子製剤に対して不応性である、発明１〜１０のいずれか１つに記載の方法。
［発明１２］
前記患者が赤血球輸血依存である、発明１〜１１のいずれか１つに記載の方法。
［発明１３］
ＩＭｉＤ、抗ＩＬ−６剤、抗ＴＮＦ−α剤、メチル化抑制剤、又は生物学的修飾物質（ＢＲＭ）から選択される追加の治療薬を投与することを更に含む、発明１〜１２のいずれか１つに記載の方法。
［発明１４］
前記抗ＴＮＦ−α剤が、インフリキシマブ及びエタネルセプトから選択される、発明１３に記載の方法。
［発明１５］
前記メチル化抑制剤がＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤である、発明１３に記載の方法。
［発明１６］
前記ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤が、５アザシチジン及びデシタビンから選択される、発明１５に記載の方法。
［発明１７］
前記ＩＭｉＤが、サリドマイド、レナリドミド、ポマリドミド、ＣＣ−１１００６、及びＣＣ−１００１５から選択される、発明１３に記載の方法。
［発明１８］
抗胸腺細胞グロブリン、組み換えヒト顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ  ＣＳＦ）、顆粒球単球ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）、赤血球造血刺激因子製剤（ＥＳＡ）、及びサイクロスポリンから選択される追加の治療薬を投与することを更に含む、発明１〜１２のいずれか１つに記載の方法。