(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍の治療における使用のための（９Ｚ，９’Ｚ）−（２Ｒ）−３−（（（２−（６−（（３−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−３−アセトアミド−５−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−３，５−ジヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）−４−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−４−ヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）プロピル）アミノ）−６−オキソヘキサンアミド）エトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルビス（オクタデカ−９−エノエート）を含む医薬組成物。
【請求項２】
前記腫瘍が固体腫瘍、骨髄腫またはリンパ腫である、請求項１に記載の使用のための組成物。
【請求項３】
前記腫瘍が、腹膜、肝臓、膵臓、肺、膀胱、前立腺、子宮、子宮頸部、膣、骨髄、乳房、皮膚、脳、リンパ節、頭頸部、胃、腸、結腸、腎臓、精巣、及び卵巣から選択される臓器から生じる腫瘍である、請求項１または請求項２に記載の使用のための組成物。
【請求項４】
前記腫瘍が原発腫瘍及び／または転移を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項５】
前記腫瘍が黒色腫、肉腫、神経膠腫または癌細胞を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項６】
注射による投与用である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項７】
１回投与または複数回投与により投与される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項８】
局所軟膏、局所ローションまたは局所溶液などの局所適用である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項９】
１つ以上の薬学的に許容される担体（複数を含む）、希釈剤（複数を含む）及び／または賦形剤（複数を含む）を更に含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１０】
１つ以上の追加の治療薬を更に含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１１】
前記１つ以上の追加の治療薬が、抗ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１及びＰＤ−Ｌ１抗体、特に抗ＰＤ−１抗体などの免疫系ダウンレギュレーションの１つ以上の全身性阻害剤を含む、請求項１０に記載の使用のための組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腫瘍治療で使用するためのα−Ｇａｌ糖脂質（９Ｚ，９’Ｚ）−（２Ｒ）−３−（（（２−（６−（（３−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−３−アセトアミド−５−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−３，５−ジヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）−４−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−４−ヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）プロピル）アミノ）−６−オキソヘキサンアミド）エトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルビス（オクタデカ−９−エノエート）（α−ＧａｌＢＯＥＬ）を含む、医薬組成物に関する。本発明は、前記組成物を使用する腫瘍治療の方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
複数の転移は切除不能及び／またはいかなる治療も無効であるので、固体腫瘍のある癌患者の主な死因は手術後の癌の再発である。このような患者の大部分は、末期癌疾患を有すると考えられている。いかなる治療も利用できないので、多くのこれらの患者は、転移性腫瘍病変の発見後数週間以内または数か月以内に死亡する。
【０００３】
免疫系が破壊されるべきである細胞として腫瘍細胞を検出できないので、腫瘍が癌患者で発生する。腫瘍細胞は、癌患者の大部分の自己腫瘍抗原を発現する。このような自己腫瘍抗原は、保護抗腫瘍免疫応答を誘発できる。腫瘍細胞または腫瘍細胞膜は、抗腫瘍免疫応答の発現を誘発するために、抗原提示細胞によって内部移行される必要がある。しかし癌患者の免疫系は、「知らぬ間」の腫瘍の初期発生と関連する腫瘍抗原に対して「無視」を示すので、それは抗原提示細胞では「見えない」（Ｐａｒｄｏｌｌ  Ｄ  Ｍ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００；９５：Ｓ４４−４９；ａｎｄ  Ｄｕｎｎ  Ｇ  ＰらＮａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００２；３：９９１−８）。
【０００４】
加えて腫瘍微環境及び局所サイトカイン環境は、多くの場合免疫機能に対して抑圧性であり、及び免疫細胞アネルギー及びその死を能動的に誘発できる（Ｍａｌｍｂｅｒｇ  Ｋ  Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００４；５３：８７９−９２；  ＬｕｇａｄｅらＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５；１７４：７５１６−２３）。前記転移性腫瘍病変の効果的な治療は、２つの要素を必要とする。
１．目視でまたは画像技術により検出されるほど十分に大きい病変の破壊。
２．腫瘍抗原に対する保護性抗腫瘍免疫応答の誘発。
【０００５】
前記免疫応答は、目視で検出できない及び画像により検出可能でない微小転移の免疫介在性検出、退縮及び／または破壊という結果をもたらす。
【０００６】
保護性抗腫瘍免疫応答の誘発は、抗原提示細胞及びその輸送による流入領域リンパ節への腫瘍細胞または細胞膜の取り込みを必要としており、抗原提示細胞は腫瘍抗原分子をプロセシングする。このような腫瘍抗原の大部分は、個々の患者に特有である。免疫原性腫瘍抗原ペプチドは、腫瘍特異的ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞それぞれの活性化のためのクラスＩまたはクラスＩＩ  ＭＨＣ分子と共に抗原提示細胞により発現される。これらのＴ細胞がプロセシングされ及び提示された腫瘍抗原ペプチドにより活性化した後にのみ、これらのリンパ球はリンパ節を増殖させ、それを放置し、体内を循環して、腫瘍抗原を発現している転移性腫瘍細胞を探し、及びそれを破壊する。加えて、それらが活性化された後にのみだが、ヘルパーＴ細胞は腫瘍抗原に対して抗体を産生するためＢ細胞にヘルプを提供できる。しかし腫瘍細胞は抗原提示細胞へ「不可視に」自然に発生するので、転移性腫瘍細胞がリンパ節内でさえ増殖できるような程度まで、発現中の腫瘍転移は通常免疫系により無視される。したがって有効な抗腫瘍免疫応答を誘発することは、腫瘍細胞を抗原提示細胞の有効な標的にすることを必要とする。
【０００７】
求められているものは、組成物、ならびに非外科的または外科的方法により化合物が腫瘍細胞膜内に入り、及び導入された化合物と天然起源抗体が相互作用するような条件下で、腫瘍内に化合物を導入する方法である。前記相互作用は、腫瘍、ならびに標的腫瘍細胞及び／もしくは腫瘍細胞膜の後縮ならびに／または破壊における局所炎症を抗原提示細胞に誘発すると考えられる。目視でまたは画像により検出されることができず、したがって切除により除去できない微小転移の腫瘍抗原を発現する腫瘍細胞に対するホストの保護性免疫応答を、本工程は誘発する。
【０００８】
米国特許第２００６／２５１６６１号は、天然抗Ｇａｌ抗体と相互作用する腫瘍内のα−Ｇａｌエピトープの局所発現を誘発する腫瘍病変に、天然糖脂質化合物を投与する方法について記載する。
【０００９】
したがって、腫瘍に対する抗Ｇａｌ媒介免疫反応を活性化するために、α−Ｇａｌ分子を腫瘍内に組み込む改良された方法を提供する必要性があり、及び前記方法を容易にする新規医薬組成物の必要性もある。
【発明の概要】
【００１０】
本発明の第１の態様に従って、腫瘍の治療に使用のための（９Ｚ，９’Ｚ）−（２Ｒ）−３−（（（２−（６−（（３−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−３−アセトアミド−５−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−３，５−ジヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）−４−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−４−ヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）プロピル）アミノ）−６−オキソヘキサンアミド）エトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルビス（オクタデカ−９−エノエート）（α−ＧａｌＢＯＥＬ）を含む、医薬組成物が提供される。
【００１１】
本発明の更なる態様に従って、１つ以上の追加の治療薬と組み合わせたα−ＧａｌＢＯＥＬを含む、医薬組成物が提供される。
【００１２】
本発明の更なる態様に従って、対象の腫瘍を治療する方法が提供されており、該方法は、
ａ）ｉ）細胞表面を有する複数の癌細胞を含む、少なくとも１つの腫瘍を含む対象と、
ｉｉ）本明細書で定義される医薬組成物と、を提供することと、
ｂ）前記医薬組成物を前記腫瘍内に導入することと、を含む、方法である。
【００１３】
α−ＧａｌＢＯＥＬの治療上の使用は、当該技術分野において及び腫瘍を治療する特定用途においてもこれまで記載されていなかった。免疫応答を誘発するために、錯体及び長い糖鎖を備えるα−Ｇａｌ糖脂質は必要であると以前は考えられていた（例えば、Ｇａｌｉｌｉらへの米国特許第２００６／２５１６６１号の実施例、及びＴｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００７，１７８：４６７６−４６８７に記載のとおり）。
【００１４】
自然源のウサギ赤血球に由来するこのような複合糖質は、それぞれα−Ｇａｌエピトープを含有するα−Ｇａｌ糖脂質の未分画混合物を含む。抽出から生じる化合物の非分離可能混合物と一体となったグリカン生合成から生じる微小不均一性は、材料の測定を複雑かつ困難にする（上述のＧａｌｉｌｉら（２００７））。
【００１５】
しかし、短い糖鎖を備えるα−Ｇａｌ糖脂質（α−ＧａｌＢＯＥＬの短い糖「官能」基など）は腫瘍の治療に効果的であり、かつ製造、保管及び投与の容易さという追加の利点を有することを発明者らは驚くべきことに見いだした。
【００１６】
α−ＧａｌＢＯＥＬはそれにより注射用構造を容易にする水溶性増大を有すると更に考えられている。理論に束縛されるものではないが、α−ＧａｌＢＯＥＬのスペーサ成分は分子の可溶性を改善すると考えられている。
【００１７】
腫瘍治療にα−ＧａｌＢＯＥＬを使用することにおける多くの有益な特性を示すデータを本明細書に提示する。例えばα−ＧａｌＢＯＥＬは抗Ｇａｌ抗体と効果的に結合することを示す（実施例１及び図２を参照）。更にα−ＧａｌＢＯＥＬは、癌細胞の補体介在性細胞溶解を誘発することにより効果的な特性を示し（実施例２及び図３を参照）、ならびに細胞の生存度は補体の不存在下で影響を受けないことを示し（実施例２及び図４を参照）、ならびにα−ＧａｌＢＯＥＬは腫瘍細胞内に効果的に組み込まれることができることを示す（実施例２及び図５を参照）。更にα−ＧａｌＢＯＥＬの組み込みは、腫瘍細胞上に補体タンパク質の沈着をもたらす（実施例３及び図６）。更にα−ＧａｌＢＯＥＬは、ｉｎ  ｖｉｖｏ有効性モデルの遠隔転移の発現に対する保護性抗腫瘍免疫応答の誘発を示す。この効果は、治療された対象の抗Ｇａｌの存在に依存する。抗Ｇａｌの不存在下で、著しい保護性抗腫瘍免疫応答は観察されない（実施例４、ならびに図７及び図８を参照）。更にα−ＧａｌＢＯＥＬ及び抗ＰＤ−１抗体の組み合わせは、抗ＰＤ−１抗体単独上に優れたｉｎ  ｖｉｖｏ活性を示す（実施例５及び図９を参照）。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】α−ＧａｌＢＯＥＬの構造である。
【図２】α−ＧａｌＢＯＥＬが抗Ｇａｌ抗体と結合することを示すデータである。
【図３】データα−ＧａｌＢＯＥＬが癌細胞の補体介在性細胞溶解を誘発することを示すデータである。
【図４】α−ＧａｌＢＯＥＬの組み込みが補体の不存在下で細胞に明白な細胞毒性を生じさせないことを示すデータである。
【図５】α−ＧａｌＢＯＥＬが腫瘍細胞内に組み込まれることを示すデータである。
【図６】α−ＧａｌＢＯＥＬの組み込みが腫瘍細胞上へヒト血清からの補体タンパク質Ｃ３ｂ及びＭＡＣの沈着をもたらすことを示すデータである。
【図７】α−ＧａｌＢＯＥＬを用いた用量漸増実験である。抗Ｇａｌ産生ＧＴ  ＫＯマウスの右脇腹に原発腫瘍の増殖のため１×１０６Ｂ１６−Ｆ１０メラノーマ細胞を、及びその左脇腹に二次性／遠位腫瘍の注入のため１×１０４Ｂ１６−Ｆ１０細胞を注射した。５日後、主腫瘍は腫瘍内で、ＰＢＳ（○）で、または０．１ｍｇのα−ＧａｌＢＯＥＬ（△）で、または０．５ｍｇのα−ＧａｌＢＯＥＬ（▲）、または１ｍｇのα−ＧａｌＢＯＥＬ（●）で治療された。転移発現のモデルとしての可視遠位腫瘍の発現は、最高３２日後だった。可視遠位腫瘍のないマウスのパーセンテージは、グラフにプロットされる。前記群の統計学的な差は、ログランク検定で測定された。
【図８】α−Ｇａｌ産生マウス（すなわちブタ腎臓膜により免疫感作したマウス）の抗ＧａｌＢＯＥＬ活性、または抗Ｇａｌを欠くマウス（すなわち非免疫感作マウス）である。超免疫感作または非免疫感作ＧＴ  ＫＯマウスの右脇腹に原発腫瘍の増殖のため１×１０６Ｂ１６−Ｆ１０細胞を、及びその左脇腹に二次性／遠位腫瘍の注入のため１×１０４Ｂ１６−Ｆ１０細胞を注射した。４日後、主腫瘍は腫瘍内で、超免疫感作マウスにおいてＰＢＳ（○）で、または１ｍｇのα−ＧａｌＢＯＥＬ（超免疫感作マウスには●、非免疫感作マウスは□）で治療された。転移発現のモデルとしての可視遠位腫瘍の発現は、最高２８日後だった。可視遠位腫瘍のないマウスのパーセンテージは、グラフにプロットされる。前記群の統計学的な差は、ログランク検定で測定された。
【図９】α−ＧａｌＢＯＥＬと抗ＰＤ−１との組み合わせは、Ｂ１６−Ｆ１０黒色腫モデルでおいて優れた活性を示す。抗Ｇａｌ産生ＧＴ  ＫＯマウスの右脇腹に原発腫瘍の増殖のため１×１０６Ｂ１６−Ｆ１０細胞を、及びその左脇腹に二次性／遠位腫瘍の注入のため１×１０４Ｂ１６−Ｆ１０細胞を注射した。５日後、主腫瘍は腫瘍内で（ｉ．ｔ．）、ＰＢＳ１００μＬので、またはＰＢＳ１００μＬ中のα−ＧａｌＢＯＥＬ０．１及び０．２５ｍｇで治療された。８日目または１０日目にマウスは腹腔内で（ｉ．ｐ．）、ＰＢＳ２００μＬ、またはＰＢＳ２００μＬ中の２５０μｇの抗ＰＤ−１で治療された。腹腔内治療は、３〜４日の間隔で３回繰り返された。転移発現のモデルとしての可視的二次性／遠位腫瘍の発現は、最高３２日後だった。可視的遠位腫瘍のないマウスのパーセンテージは、グラフにプロットされる。前記治療群の統計学的な差は、ログランク検定で測定された。α−ＧａｌＢＯＥＬ腫瘍内／抗ＰＤ−１腹腔内の組み合わせ（◆）は、α−ＧａｌＢＯＥＬ腫瘍内／ＰＢＳ腹腔内上で（●、＊、ｐ＜０．０５）、ＰＢＳ腫瘍内／抗ＰＤ−１腹腔内で（▲、＊＊＊、ｐ＝０．０００３）及びＰＢＳ腫瘍内／ＰＢＳ腹腔内で（○、＊＊＊、ｐ＜０．０００１）上で統計学的に有意な優れた活性を示した。２つの独立実験の結果をグラフで組み合わせた。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本明細書に記載される本発明は、α−Ｇａｌ糖脂質（すなわちα−ＧａｌなＢＯＥＬ）が治療した腫瘍内で腫瘍細胞の細胞膜に挿入され得るようにする、組成物及び方法を提供する。腫瘍病変のα−Ｇａｌ糖脂質の存在は、対象に存在する天然抗Ｇａｌ抗体とα−ＧａｌＢＯＥＬのα−Ｇａｌエピトープとの間の相互作用により誘発される、免疫介在性炎症性工程による腫瘍の破壊または退縮という結果を生じる。更にこの治療は治療された腫瘍を、転移腫瘍細胞の免疫破壊によって遠隔転移の発現を防止する全身性保護性抗腫瘍免疫応答を誘発するワクチンに変換する。
【００２０】
本明細書に記載される本発明は、α−Ｇａｌエピトープを輸送し、したがって「α−Ｇａｌ糖脂質」と呼ばれることもある、α−ＧａｌＢＯＥＬと称される特定の糖脂質を含む腫瘍内投与を含む治療法を含むが、これらに限定されない。α−Ｇａｌ糖脂質は、治療した病変内の腫瘍細胞の細胞膜の外葉内へ入る。腫瘍病変におけるα−Ｇａｌ糖脂質の存在は、２つの目標を達成する。
１．天然反Ｇａｌ抗体と腫瘍細胞膜に挿入されるα−Ｇａｌ糖脂質のα−Ｇａｌエピトープとの間の相互作用によって腫瘍病変内で誘発される、炎症性工程による腫瘍病変の免疫介在性破壊。
２．挿入されたα−Ｇａｌ糖脂質を備える腫瘍細胞及び腫瘍細胞膜の、抗原提示細胞による効果的な取り込み、そうして抗Ｇａｌ抗体とｉｎ  ｓｉｔｕ結合するα−Ｇａｌエピトープの発現、それにより治療した腫瘍病変の自己腫瘍ワクチンへの変換。
【００２１】
発明のメカニズムを理解する必要はないが、この取り込みは、腫瘍細胞発現α−Ｇａｌエピトープ上に存在する、またはその範囲内に存在する腫瘍抗原に対する有効な免疫応答を結果としてもたらすと考えられる。この免疫応答は、α−Ｇａｌエピトープを発現しないが、腫瘍抗原を発現する転移性腫瘍細胞の免疫介在性破壊をもたらすことができると更に考えられている。
【００２２】
本発明は、治療した腫瘍内の細胞上のα−Ｇａｌエピトープの発現を誘発する腫瘍内への注射または任意の他の手段により、化合物を投与することを意図する。α−Ｇａｌ糖脂質の前記投与は以下の目的を達成する。
１．天然抗Ｇａｌ抗体をα−Ｇａｌエピトープのα−Ｇａｌ糖脂質に結合することは局所補体活性化を結果としてもたらし、それによりＣ５ａ及びＣ３ａを含む走化性因子を生成するが、これらに限定されない。これらの走化性因子は、腫瘍組織内への樹状細胞及びマクロファージなど抗原提示細胞の広範囲な移動を誘発するが、これらに限定されない。
２．α−Ｇａｌ糖脂質の脂質尾部は治療した病変内の腫瘍細胞膜に自発的に挿入し、結果として腫瘍細胞上にα−Ｇａｌエピトープの発現をもたらす。これらのエピトープと結合する抗Ｇａｌは、腫瘍細胞を含む腫瘍の後縮及び／または破壊を誘発すると考えられている。
３．抗Ｇａｌによる腫瘍細胞膜のオプソニン作用は、それらを腫瘍内に移動する抗原提示細胞による効果的な取り込みの目標とする。このような抗原提示細胞の移動は、治療した腫瘍内のα−Ｇａｌ糖脂質への抗Ｇａｌ結合後に生成される走化性補体開裂ペプチドによって導かれる。
【００２３】
特定のメカニズムに束縛されるものではないが、腫瘍細胞膜結合型抗ＧａｌＩｇＧ分子のＦｃ部は抗原提示細胞上のＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）と結合して、抗原提示細胞による腫瘍細胞の取り込みを誘発すると考えられる。取り込みの類似の誘発は、抗Ｇａｌ結合腫瘍細胞上の補体沈着物のＣ３ｂ成分と抗原提示細胞上のＣ３ｂ受容体との間の相互作用の結果として生じ得る。抗原提示細胞に対する腫瘍膜のこの抗Ｇａｌ媒介ターゲティングは、流入領域リンパ節への自己腫瘍抗原の効果的な輸送、ならびにリンパ節内の抗原提示細胞による免疫原性腫瘍抗原ペプチドのプロセシング及び提示を可能にする。
【００２４】
したがってα−Ｇａｌ糖脂質の腫瘍内注入は、治療した腫瘍病変を、腫瘍抗原を免疫系に提供するｉｎ  ｓｉｔｕ自己腫瘍ワクチンへ変換し、それにより保護性抗腫瘍免疫応答を誘発する。この免疫応答は、個々の腫瘍細胞または腫瘍細胞の小さな凝集体（すなわち例えば微小転移）の破壊を含む、腫瘍後縮を誘発できる。このような微小転移は目視でまたは画像によって通常検出不可能であり、及び従来の外科的または放射線療法技術によって到達可能ではない（すなわち小さなサイズのため切除不能である）。したがって本方法は、それが目視でまたは画像によって通常検出不可能であり、ならびに従来の外科的及び放射線療法技術によって到達可能ではない、微小転移を治療し得る追加利点を有する。
【００２５】
定義
本明細書で「α−ＧａｌＢＯＥＬ」という用語の意味は、図１に示す構造、及び完全な化学名（ＩＵＰＡＣ命名法による）（９Ｚ，９’Ｚ）−（２Ｒ）−３−（（（２−（６−（（３−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−３−アセトアミド−５−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−３，５−ジヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）−４−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−４−ヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）プロピル）アミノ）−６−オキソヘキサンアミド）エトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルビス（オクタデカ−９−エノエート）を有する、α−Ｇａｌ架橋ビス−オクタデセノエート脂質などα−Ｇａｌ糖脂質の具体例を指す。
【００２６】
α−ＧａｌＢＯＥＬは、製品名「ＦＳＬ−Ｇａｌｉｌｉ（トリ）（商標）」（カタログ番号Ｆ９４３２）でＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから市販されている。本構造は機能性（Ｆ）、スペーサ（Ｓ）及び脂質（Ｌ）成分からなり、ならびに細胞が機能性（Ｆ）成分をその表面に発現するように細胞膜内に挿入するために使用することができる。α−ＧａｌＢＯＥＬの機能性成分は、Ｇａｌ−α１−３−Ｇａｌ−β１−４ＧｌｃＮＡｃ（すなわちα−Ｇａｌエピトープ）の三糖基である。スペーサ成分はＯ（ＣＨ２）３ＮＨ基であり、及び脂質成分はジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）のアジパート誘導体（すなわちＯＯＣ（ＣＨ２）４ＣＯＯ、アジピン酸のイオン化形態）である。
【００２７】
本明細書で使用する場合「α−Ｇａｌエピトープ」という用語は、Ｇａｌα１−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ−Ｒ、Ｇａｌα１−３Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃ−Ｒもしくは非還元末端にＧａｌα１−３Ｇａｌを有する任意の糖鎖を含む末端構造を備える、任意の分子または分子の一部を指す。α−ガラクトシル（「アルファ−Ｇａｌ」または「α−Ｇａｌ」とも称される）エピトープ、すなわちガラクトシル−α−１，３−ガラクトシル−β−１，４−Ｎ−アセチルコサミンについて、Ｇａｌｉｌｉ，Ｕ．ａｎｄ  Ａｖｉｌａ，Ｊ．Ｌ．，Ａｌｐｈａ−Ｇａｌ  ａｎｄ  Ａｎｔｉ−Ｇａｌ，Ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．３２，１９９９．に記載されている。異種移植研究は、ヒトがα−ガラクトシルエピトープに免疫応答を開始すると結論づけており、α−ガラクトシルエピトープ自体通常ヒトでは見いだせず、他の動物及び多くの微生物で見つかる。
【００２８】
本明細書で使用する場合「糖脂質」という用語は、セラミド、脂肪酸鎖または他の任意の脂質と連結する、少なくとも１つの糖鎖を有する任意の分子を指す。あるいは糖脂質は、グリコスフィンゴリピドと呼ばれる場合もある。一実施形態において糖脂質は、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）のアジパート誘導体である。
【００２９】
本明細書で使用する場合「抗Ｇａｌ」という用語は、α−Ｇａｌエピトープと結合する天然起源抗体を意味する。
【００３０】
本明細書で使用する場合「α−１，３−ガラクトシルトランスフェラーゼ」という用語は、α−Ｇａｌエピトープを合成することが可能な任意の酵素を意味する。
【００３１】
本明細書で使用する場合「抗Ｇａｌ結合エピトープ」という用語は、天然抗Ｇａｌ抗体とｉｎ  ｖｉｖｏもしくはｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合することができる、任意の分子または分子の一部を指す。
【００３２】
本明細書で使用する場合「切除不能な」という用語は、外科的に除去することができない臓器または身体上の構造の任意の部分を意味する。例えば「切除不能な腫瘍」は、従来の外科的技術によって物理的に到達不可能な腫瘍、その除去が患者の癌疾患全体もしくは福祉を改善しない腫瘍、またはその除去が重要臓器に有害であり得る腫瘍であり得る。
【００３３】
本明細書で使用する場合「膜結合型」という用語は、安定してリン脂質二層に付着する、またはその内部に埋め込まれる任意の分子を指す。前記付着または埋め込みは、イオン結合、共有結合、疎水性力またはファンデルワース力などを含むが、これらに限定されない。例えば疎水性アミノ酸領域を含むタンパク質はそれ自体をリン脂質二層膜に挿入できる、または脂質尾部を含有する分子はそれ自体を細胞のリン脂質二層に挿入することができ、及び埋め込まれることができる。α−ＧａｌＢＯＥＬの脂質成分は腫瘍の細胞膜に挿入して、α−Ｇａｌエピトープの細胞表面上に示す腫瘍を生成するために使用される。
【００３４】
本明細書で使用する場合「サブセット」という用語は、数が全群より少ない特定群を意味する。例えば患者は、複数の切除不能な固体腫瘍を示すことができる。この複数の中で、サブセットは非外科的技術によって到達可能であり得るのに対して、他のサブセットは非外科的技術によって到達可能でない場合がある。
【００３５】
本明細書で使用する場合「到達可能である」という用語は、非外科的技術によって固体腫瘍を治療する任意の能力を意味する。前記技術は、ローション、軟膏もしくは粉による、皮膚への注射、または内視鏡、気管支鏡、膀胱鏡、結腸鏡、腹腔鏡、カテーテル法もしくは局所適用を介した注入を含むが、これらに限定されない。例えば、卵巣の固体腫瘍は腹腔鏡によって到達可能であり得る。別の例では、結腸の固体腫瘍は結腸鏡よって到達可能であり得る。
【００３６】
本明細書で使用する場合「導入する」という用語は、化合物を組織内に、続いて前記組織内の細胞内に伝達する任意の方法を意味する。導入の前記方法は、ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、バイオバリスティック、リポフェクション、及び当該技術分野において既知の多くの市販のＤＮＡベクターを含むが、これらに限定されない。あるいは生理機構（すなわち、例えば疎水性相互作用または能動輸送）によって細胞内に組み込まれるように、化合物は細胞に隣接して配置されることができる。導入の一方法は注入を含んでおり、化合物は注入された組織内で直接細胞間隙内に配置される。臓器部、増殖（すなわち、例えば固体腫瘍）または体腔が「到達可能である」とき、前記注入は可能である。
【００３７】
本明細書で使用する場合「内」という用語は、細胞膜を通して、またはその内部への分子の成功した浸透を意味する。例えばウイルスベクターは、腫瘍細胞がトランスフェクトされるような条件下で、固体腫瘍細胞内に導入されることができる。別の例では、糖脂質が細胞のリン脂質二層膜内に挿入されるような条件下で、糖脂質は腫瘍細胞内に導入されることができる。
【００３８】
本明細書で使用する場合「後縮」という用語は、少なくとも部分的に大きさが減少した、または「縮小した」ことであり、固体腫瘍など身体の増殖の減少を指す。前記減少は、直径、質量（すなわち重量）または容積など測定パラメータの減少で決定されることができるが、これらに限定されない。減少はサイズが完全に縮小したことを決して示さず、測定パラメータが以前の測定より量的に少ないことのみを示す。
【００３９】
本明細書で使用する場合「破壊」という用語は、固体腫瘍など身体の増殖の完全な細胞破壊を意味する。身体の増殖が完全に破壊されて身体から排除されるように、前記破壊は細胞内アポトーシス、Ｔ細胞が媒介する細胞の死滅、補体が媒介する細胞崩壊、及び／またはマクロファージ食作用を含むことができる。用語「腫瘍の破壊」は、診断手段によって検出可能でない程度までの腫瘍の減少を意味する。
【００４０】
本明細書で使用する場合「治療すること」、「治療」及び「治療する」という用語はすべて、固体腫瘍など身体の増殖のサイズが少なくとも部分的に減少すること、またはサイズの減少を結果として生じる手順を指すことを目的とする。
【００４１】
本明細書で使用する場合「すべてより少ない」という用語は、群のサブセットを意味する。本発明の一実施形態との関係において、すべてより少ない患者の腫瘍の治療が考察される。換言すれば一実施形態において、α−Ｇａｌエピトープ導入による（例えばα−ＧａｌＢＯＥＬの導入による）あらゆる腫瘍の治療は必要ではなく、むしろサブセットへの導入は、すべての腫瘍（直接治療されないものを含む）への免疫応答を結果として生じる。このように、固体腫瘍転移など複数の身体の腫瘍の集団的な減少を達成することができる。前記減少は数など測定パラメータの減少で決定されることができるが、これに限定されない。減少はパラメータがゼロに縮小したことを決して示さず、測定パラメータが以前の測定より量的に少ないことのみを示す。
【００４２】
本明細書で使用する場合「増殖」という用語は、異常な繁殖を表すために考慮される細胞塊を含む任意の組織または臓器を意味する。前記増殖は、癌性、非癌性、悪性、または非悪性であり得る。増殖は癌を含む場合、それは腫瘍でもよい。
【００４３】
本明細書で使用する場合「腫瘍」という用語は、細胞の異常増殖または分割から生じる組織の異常な腫瘤を意味する。前記腫瘍は、固体（すなわち、腹膜、肝臓、膵臓、肺、膀胱、前立腺、子宮、子宮頸部、膣、乳房、皮膚、脳、リンパ節、頭頸部、胃、腸、結腸もしくは卵巣上など特定の臓器、組織、もしくは腺の細胞塊）または非固体（すなわち、白血病など血液で発現する液性腫瘍）であり得る。
【００４４】
本明細書で使用する場合「対象」という用語は、腫瘍を発現することができる任意の生物を意味する。前記生物は、哺乳動物、ヒト、非霊長類哺乳動物、原猿及び新世界ザルなどを含むが、これらに限定されない。
【００４５】
本明細書で使用する場合「分子」という用語は、組成物の特性すべてを保持しかつ１つ以上の原子からなる組成物の最も小さい粒子を意味する。分子が他の分子と相互作用して（すなわちイオン結合的に、共有結合的に、非共有結合的になど）付着及び／または会合を形成できるように、このような１つ以上の原子は配置される。例えば分子は、抗Ｇａｌ抗体と相互作用する能力を提供するように配置される１つ以上の原子を有することができる。
【００４６】
天然抗Ｇａｌ抗体、α−Ｇａｌエピトープ及び異種移植拒絶反応
抗Ｇａｌはすべてのヒトに存在し得る天然抗体であると考えられており、血清免疫グロブリンの０．１〜２％を構成する（Ｂｏｖｉｎ  Ｎ．Ｖ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｍｏｓｃｏｗ），２０１３；７８（７）：７８６−７９７，ＧａｌｉｌｉらＪ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９８４；１６０：１５１９−３１，ａｎｄ  Ｈａｍａｄｅｈ  Ｒ  ＭらＣｌｉｎ．Ｄｉａｇｎｏｓ．Ｌａｂ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５，２：１２５−３１）。抗Ｇａｌ抗体は具体的には、細胞表面または遊離糖脂質及び糖タンパク質上のα−Ｇａｌエピトープと相互作用する可能性があることを示すデータを研究は提示した（Ｇａｌｉｌｉ  ＵらＪ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９８５，１６２：５７３−８２，ａｎｄ  Ｇａｌｉｌｉ  Ｕ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｅｍｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．１９９３；１５：１５５−１７１）。胃腸管内フローラのバクテリアによる抗原刺激の結果として、抗Ｇａｌ抗体は生涯にわたって生成されることができると更に報告されている（Ｇａｌｉｌｉ  ＵらＩｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．１９８８；５６：１７３０−３７）。
【００４７】
α−Ｇａｌエピトープは、非霊長類哺乳動物、原猿及び新世界ザルの細胞のゴルジ体内のグリコシル化酵素α１，３ガラクトシルトランスフェラーゼによって、糖脂質及び糖タンパク質に大量に生合成され得る（Ｇａｌｉｌｉ  ＵらＢｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９８８；２６３：１７７５５−６２）。これに対し、ヒト、類人猿及び旧世界ザルはα−Ｇａｌエピトープを欠いているが、かなり大量の天然反Ｇａｌ抗体を産生する（Ｇａｌｉｌｉ  ＵらＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１９８７，８４：１３６９−７３）。サル及び類人猿のα１，３ガラクトシルトランスフェラーゼ偽遺伝子の配列に基づき、α１，３ガラクトシルトランスフェラーゼ遺伝子は、およそ２千万年前の先祖の旧世界霊長類で不活性したと推定された（Ｇａｌｉｌｉ  Ｕ，Ｓｗａｎｓｏｎ  Ｋ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１９９１，８８：７４０１−０４）。この進化の過程は、旧世界（すなわち現在のヨーロッパ、アジア及びアフリカ）に固有な感染性微生物物質の出現と関連していることが示唆されており、それは霊長類に有害でかつα−Ｇａｌエピトープを発現した。α１，３ガラクトシルトランスフェラーゼ遺伝子の不活性化、したがってα−Ｇａｌエピトープへの免疫寛容の消失の選択圧下で進化した後だけ、霊長類は前記推定上の有害物質に対する防御抗体として抗Ｇａｌを産生することができた（Ｇａｌｉｌｉ  Ｕ，Ａｎｄｒｅｗｓ  Ｐ．Ｊ．Ｈｕｍａｎ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ２９：４３３−４２，１９９５）。
【００４８】
天然抗Ｇａｌ抗体の強力な防御活性は、ヒト及びサルにおいて進化的に保存された。α−Ｇａｌエピトープを発現するブタ臓器に関する異種移植研究から、これを推定できる。ブタを含む種々の哺乳動物の細胞はα−Ｇａｌエピトープを発現するので、ヒトまたは旧世界ザルに移植されたブタからの臓器は、抗Ｇａｌ抗体をブタ細胞上のこれらのエピトープにｉｎ  ｖｉｖｏ結合するため、拒絶される（Ｇａｌｉｌｉ，Ｕ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ１９９３，１４：４８０−８２）。ブタ組織のヒト内または旧世界ザル内への移植は、生体内移植上のα−Ｇａｌエピトープへの結合性抗Ｇａｌの結合、及びその後の異種移植拒絶反応の誘発を結果として生じる。抗Ｇａｌ抗体分子とブタ内皮細胞上のα−Ｇａｌエピトープとの結合、補体の活性化、内皮細胞の分解、及び血管床の崩壊の結果として、血管新生化異種移植片（例えばブタ心臓）はほとんどの場合３０〜６０分以内にサルの即時拒絶（超急性拒絶と呼ばれる）が起きる（Ｃｏｌｌｉｎｓ  Ｂ  ＨらＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５；１５４：５５００−１０）。更に血管外領域の異種移植細胞の破壊の多くは、種々の細胞上の抗Ｇａｌ  ＩｇＧのα−Ｇａｌエピトープへの結合により媒介される。抗Ｇａｌ  ＩｇＧのＦｃ部を顆粒球、マクロファージ及びＮＫ細胞上で細胞結合Ｆｃγ受容体に結合した後、この結合は抗体依存性細胞性細胞溶解（ＡＤＣＣ）を結果として生じる。
【００４９】
異種移植の抗Ｇａｌ媒介崩壊は、アカゲザル（すなわち抗Ｇａｌ抗体を自然に産生するサル）内に移植されたブタ軟骨（無血管性異種移植組織）によってモニターされ得る。抗Ｇａｌをブタ組織のα−Ｇａｌエピトープに結合することは、２か月以内の組織の漸進的破壊につながる広範囲な炎症反応の誘発を結果として生じることが研究によりわかった（Ｓｔｏｎｅ  Ｋ  ＲらＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ１９９８，６５：１５７７−８３）。抗Ｇａｌを軟骨細胞及び細胞外マトリックス糖タンパク質上のα−Ｇａｌエピトープに結合することはそれらを更にオプソニン化して（すなわち、それらを有する免疫複合体を形成する）、したがって免疫−複合型抗ＧａｌのＦｃ部を抗原提示細胞上のＦｃγ受容体に結合することによって抗原提示細胞を標的とする。それにより抗原提示細胞はこれらのブタ糖タンパク質を流入領域リンパ節に輸送し、それは複数のブタゼノペプチドに特有の多くのＴ細胞を活性化させる。このような活性化されたＴ細胞は続いて軟骨異種移植組織片内に移動して、浸潤性単核球細胞の約８０％を含む。この炎症反応が抗Ｇａｌとα−Ｇａｌエピトープとの相互作用により主に媒介されることは、ブタ軟骨異種移植を免疫応答をモニターすることから推定でき、そこからα−Ｇａｌエピトープは酵素処理（例えば、組換えα−ガラクトシダーゼを使用する）によって除去された。α−ガラクトシダーゼは、末端α−ガラクトシル単位を切断する（加水分解する）ことによって軟骨糖タンパク質上のα−Ｇａｌエピトープを破壊する。ブタ軟骨糖タンパク質上のα−Ｇａｌエピトープの非存在下で、異種移植片と結合する抗Ｇａｌはなく、したがってゼノ糖タンパク質の効果的な抗原提示細胞仲介輸送は生じない。これは、異種移植片の著しいＴ細胞浸潤の不足により示される。
【００５０】
本発明は、α−Ｇａｌエピトープを発現するため治療された腫瘍病変の後縮及び／または破壊のために、ならびに抗Ｇａｌ抗体によって抗原提示細胞を腫瘍細胞膜の標的にするために、ブタ軟骨異種移植拒絶反応で示される天然抗Ｇａｌ抗体の免疫可能性を利用することを意図する。サルのブタ軟骨の拒絶で観察される類似のメカニズムによって、転移性腫瘍細胞に対する全身性保護性免疫応答を誘発するｉｎ  ｓｉｔｕ自己腫瘍ワクチンに、前記治療が腫瘍病変を変えると考えられている。腫瘍細胞発現α−Ｇａｌエピトープに結合する抗ＧａｌＩｇＧ分子は、治療した病変の腫瘍細胞上に発現する及び転移性腫瘍細胞上にも発現する自己腫瘍抗原に対する保護性抗腫瘍免疫応答を誘発するため、腫瘍細胞膜を抗原提示細胞の標的にすると更に考えられている。
【００５１】
医薬組成物
本発明の第１の態様に従って、腫瘍の治療に使用するためのα−ＧａｌＢＯＥＬを含む、医薬組成物が提供される。
【００５２】
一実施形態において、腫瘍は、固体腫瘍、骨髄腫またはリンパ腫である。更なる実施形態では、腫瘍は固体腫瘍である。代替的実施形態では、腫瘍は非固体腫瘍である。
【００５３】
一実施形態において、腫瘍は、腹膜、肝臓、膵臓、肺、膀胱、前立腺、子宮、子宮頸部、膣、骨髄、乳房、皮膚、脳、リンパ節、頭頸部、胃、腸、結腸、腎臓、精巣、及び卵巣から選択される臓器から生じる腫瘍である。更なる実施形態では、腫瘍は、腹膜、肝臓、膵臓、肺、膀胱、前立腺、子宮、子宮頸部、膣、乳房、皮膚、脳、リンパ節、頭頸部、胃、腸、結腸、及び卵巣から選択される臓器から生じる腫瘍である。
【００５４】
一実施形態において、腫瘍は原発腫瘍及び／または転移を含む。更なる実施形態では、腫瘍は原発腫瘍を含む。代替的実施形態では、腫瘍は二次性腫瘍を含む。
【００５５】
一実施形態において、腫瘍は、黒色腫、肉腫、神経膠腫または癌細胞を含む。更なる実施形態では、腫瘍は、黒色腫もしくは癌細胞、または転移を含む。
【００５６】
前記組成物は、α−ＧａｌＢＯＥＬを含む水溶性糖脂質製剤として調製されることができる、前記製剤は糖脂質ミセルを含む。
【００５７】
一実施形態において前記組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体（複数を含む）、希釈剤（複数を含む）及び／または賦形剤（複数を含む）を更に含む。担体、希釈剤及び／または賦形剤は組成物の他の成分と相溶性があり及びそのレシピエントに有害であってはならないという意味で「薬学的に許容され」なければならない。当業者は、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ；第２２版；Ａｌｌｅｎ，Ｌｏｙｄ  Ｖ．Ｅｄ．２０１２，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ．で例示される製剤処方の態様を理解するであろう。
【００５８】
本発明の組成物は、当該技術分野において周知の従来の手順によりα−ＧａｌＢＯＥＬと標準的な薬学的担体または希釈剤を組み合わさることにより調製されることができる。このような手順は、所望の製剤に適合するように、混合する、造粒する及び圧縮する、または成分を溶解することを含有することができる。
【００５９】
一実施形態において医薬組成物は、デオキシコール酸塩または細胞膜内への糖脂質の浸透を増加させることができる他の中性界面活性剤も含むことができる。
【００６０】
本発明の医薬組成物は任意の経路による投与のために調製されることができて、ヒトを含む哺乳動物への経口、局所または非経口投与用に適応する形状のものを含む。
【００６１】
したがって一実施形態において、組成物は注射による投与用である。代替実施形態では組成物は、局所軟膏、局所ローションまたは局所溶液など局所適用である。
【００６２】
一実施形態において組成物は、１回投与または反復投与など複数回投与で投与される。更なる実施形態では複数回投与は、同時に投与される（すなわち一度に）。更なる代替的実施形態において複数回投与は、順次投与される（すなわち例えば別々の治療中など２回以上の別々の機会に）。
【００６３】
投与が経時的で（すなわち別々の機会で）あるとき、適切な時間が投与の間で、例えば、３日、５日、１週、２週、１か月、２か月、３か月、６か月または１２か月経過したとき組成物を投与できる。
【００６４】
非経口投与において、液体単位投与形態は組成物及び水など無菌ビヒクルを利用して調製される。溶液の調製において、組成物は注入用に水に溶解されることができて、適切なバイアルまたはアンプル内に充填され、密封される前に濾過滅菌されることができる。
【００６５】
組成物は、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、トローチ剤、クリーム、または経口もしくは滅菌非経口液もしくは懸濁液など液状製剤の形態であってよい。
【００６６】
本発明の局所製剤は例えば、軟膏、クリームまたはローション、眼軟膏、及び点眼剤または点耳剤、含浸包帯剤及びエアゾールとして提示することができ、ならびに軟膏及びクリームの防腐剤及び皮膚軟化剤など適切な従来型添加剤を含むことができる。
【００６７】
製剤は、クリームまたは軟膏ベース及びローション用のエタノールまたはオレイルアルコールなど従来の相溶性担体も含有することができる。
【００６８】
組み合わせ
本発明の化合物は唯一の治療薬剤として投与されることができる、または腫瘍の治療のための他の多くの化合物（または治療法）のうちの１つと併せた併用療法において投与され得ることは理解されるであろう。
【００６９】
このように本発明の更なる態様に従って、１つ以上の追加の治療薬と組み合わせたα−ＧａｌＢＯＥＬを含む、医薬組成物が提供される。
【００７０】
腫瘍の治療において本発明の化合物は１つ以上の他の薬剤と、より具体的には癌治療の１つ以上の抗癌剤または補助剤（治療の補助剤）と組み合わせて都合よく用いられることができる。
【００７１】
本発明の化合物と一緒に投与することができる（同時に、または異なる時間間隔で）他の治療薬または治療は以下を含むが、これらに限定されない。
・トポイソメラーゼＩ阻害剤、
・代謝拮抗剤、
・チューブリン標的剤、
・ＤＮＡ結合剤及びトポイソメラーゼＩＩ阻害剤、
・アルキル化剤、
・モノクローナル抗体、
・抗ホルモン剤、
・シグナル伝達阻害剤、
・プロテアソーム阻害剤、
・ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ、
・サイトカイン及びレチノイド、
・クロマチン標的治療、
・放射線療法、及び
・他の治療剤または予防剤
【００７２】
抗癌剤または補助剤（もしくはその塩）の特定例は、以下の群（ｉ）〜（ｘｌｖｉ）、及び任意に群（ｘｌｖｉｉ）から選択される薬剤のいずれかを含むが、これらに限定されない。
（ｉ）白金化合物、例えばシスプラチン（任意にアミホスチンと結合）、カルボプラチンまたはオキサリプラチン、
（ｉｉ）タキサン化合物、例えばパクリタキセル、パクリタキセルタンパク質結合粒子（Ａｂｒａｘａｎｅ（商標））、ドセタキセル、カバジタキセルまたはラロタキセル、
（ｉｉｉ）トポイソメラーゼＩ阻害剤、例えばカンプトテシン化合物、例えばカンプトテシン、イリノテカン（ＣＰＴ１１）、ＳＮ−３８またはトポテカン、
（ｉｖ）トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、例えば抗腫瘍エピポドフィロトキシンまたはポドフィロトキシン誘導体、例えばエトポシドまたはテニポシド、
（ｖ）ビンカアルカロイド、例えばビンブラスチン、ビンクリスチン、リポソーム型ビンクリスチン（腫瘍ＴＣＳ）、ビノレルビン、ビンデシン、ビンフルニンまたはビンベシル、
（ｖｉ）ヌクレオシド誘導体、例えば５−フルオロウラシル（５−ＦＵ、任意にロイコボリンと結合）、ゲムシタビン、カペシタビン、テガフール、ＵＦＴ、Ｓ１、クラドリビン、シタラビン（Ａｒａ−Ｃ、シトシンアラビノシド）、フルダラビン、クロファラビンまたはネララビン、
（ｖｉｉ）代謝拮抗剤、例えばクロファラビン、アミノプテリンまたはメトトレキサート、アザシチジン、シタラビン、フロクスウリジン、ペントスタチン、チオグアニン、チオプリン、６‐メルカプトプリンまたはヒドロキシ尿素（ヒドロキシカルバミド）、
（ｖｉｉｉ）ナイトロジェンマスタードまたはニトロソ尿素などのアルキル化剤、例えばシクロホスファミド、クロラムブシル、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ベンダムスチン、チオテパ、メルファラン、トレオスルファン、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、アルトレタミン、ブスルファン、ダカルバジン、エストラムスチン、ホテムスチン、イホスファミド（任意にメスナと結合）、ピポブロマン、プロカルバジン、ストレプトゾシン、テモゾロミド、ウラシル、メクロレタミン、メチルシクロヘキシルクロロエチルニトロソ尿素またはニムスチン（ＡＣＮＵ）、
（ｉｘ）アントラサイクリン、アントラセンジオン及び関連薬、例えばダウノルビシン、ドキソアンルビシン（任意にデクスラゾキサンと結合）、ドキソルビシンのリポソーム型製剤（例えばＣａｅｌｙｘ（商標）、Ｍｙｏｃｅｔ（商標）、Ｄｏｘｉｌ（商標））、イダルビシン、ミトキサントロン、エピルビシン、アムサクリンまたはバルルビシン、
（ｘ）エポチロン、例えばイクサベピロン、パツピロン、ＢＭＳ−３１０７０５、ＫＯＳ−８６２及びＺＫ−ＥＰＯ、エポチロンＡ、エポチロンＢ、デスオキシエポチロンＢ（別名エポチロンＤもしくはＫＯＳ−８６２）、アザ−エポチロンＢ（別名ＢＭＳ−２４７５５０）、ラウリマリド、イソラウリマリドまたはエリュテロビン、
（ｘｉ）ＤＮＡメチル転移酵素阻害剤、例えばテモゾロミド、アザシチジンまたはデシタビン、
（ｘｉｉ）抗葉酸剤、例えばメトトレキサート、ペメトレキセド二ナトリウムまたはラルチトレキセド、
（ｘｉｉｉ）細胞毒性抗生物質、例えばアンチノマイシンＤ、ブレオマイシン、マイトマイシンＣ、ダクチノマイシン、カルミノマイシン、ダウノマイシン、レバミゾール、プリカマイシンまたはミトラマイシン、
（ｘｉｖ）チューブリン結合剤、例えばコンブレスタチン、コルヒチンまたはノコダゾール、
（ｘｖ）キナーゼ阻害剤（例えばＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）阻害剤、ＶＥＧＦＲ（血管内皮成長因子受容体）阻害剤、ＰＤＧＦＲ（血小板由来成長因子受容体）阻害剤、ＭＴＫＩ（多標的キナーゼ阻害剤）、Ｒａｆ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、例えばメシル酸イマチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ダサチニブ、ラパチニブ、ドボチニブ、アキシチニブ、ニロチニブ、バンデタニブ、バタリニブ、パゾパニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、テムシロリムス、エベロリムス（ＲＡＤ００１）またはベムラフェニブ（ＰＬＸ４０３２／ＲＧ７２０４）などのシグナル伝達阻害剤、
（ｘｖｉ）オーロラキナーゼ阻害剤、例えばＡＴ９２８３、ｂａｒａｓｅｒｔｉｂ（ＡＺＤ１１５２）、ＴＡＫ−９０１、ＭＫ０４５７（ＶＸ６８０）、ｃｅｎｉｓｅｒｔｉｂ（Ｒ−７６３）、ｄａｎｕｓｅｒｔｉｂ（ＰＨＡ−７３９３５８）、ａｌｉｓｅｒｔｉｂ（ＭＬＮ−８２３７）またはＭＰ−４７０、
（ｘｖｉｉ）ＣＤＫ阻害剤、例えばＡＴ７５１９、ロスコビチン、セリシクリブ、アルボシジブ（フラボピリドール）、ジナシクリブ（ＳＣＨ−７２７９６５）、７−ヒドロキシ−スタウロスポリン（ＵＣＮ−０１）、ＪＮＪ−７７０６６２１、ＢＭＳ−３８７０３２（別名ＳＮＳ−０３２）、ＰＨＡ５３３５３３、ＰＤ３３２９９１、ＺＫ−３０４７０９またはＡＺＤ−５４３８、
（ｘｖｉｉｉ） ＰＫＡ／Ｂ阻害剤及びＰＫＢ（ａｋｔ）経路阻害剤、例えばＡＴ１３１４８、ＡＺ−５３６３、セマフォ、ラパマイシン類似体などＳＦ１１２６及びＭＴＯＲ阻害剤、ＡＰ２３８４１及びＡＰ２３５７３、カルモジュリン阻害剤（フォークヘッド転写阻害剤）、ＡＰＩ−２／ＴＣＮ（トリシリビン）、ＲＸ−０２０１、エンザスタウリンＨＣｌ（ＬＹ３１７６１５）、ＮＬ−７１−１０１、ＳＲ−１３６６８、ＰＸ−３１６またはＫＲＸ−０４０１（ペリホシン／ＮＳＣ６３９９６６）、
（ｘｉｘ）Ｈｓｐ９０阻害剤、例えばＡＴ１３３８７、ハービマイシン、ゲルダナマイシン（ＧＡ）、１７−アリルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン（１７ＡＡＧ）、例えばＮＳＣ−３３０５０７、Ｋｏｓ−９５３及びＣＮＦ−１０１０、１７−ジメチルアミノエチルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン塩酸塩（１７−ＤＭＡＧ）、例えばＮＳＣ−７０７５４５及びＫｏｓ−１０２２、ＮＶＰ−ＡＵＹ９２２（ＶＥＲ−５２２９６）、ＮＶＰ−ＢＥＰ８００、ＣＮＦ−２０２４（ＢＩＩＢ−０２１経口プリン）、ガネテスピブ（ＳＴＡ−９０９０）、ＳＮＸ−５４２２（ＳＣ−１０２１１２）またはＩＰＩ−５０４）、
（ｘｘ）モノクローナル抗体（放射性同位体元素、毒素または他の薬剤と非共役型または共役型）、抗ＣＤ、抗ＶＥＧＦＲ、抗ＨＥＲ２または抗ＥＧＦＲ抗体など抗体誘導体及び関連剤、例えばリツキシマブ（ＣＤ２０）、オファツムマブ（ＣＤ２０）、イブリツモマブチウキセタン（ＣＤ２０）、ＧＡ１０１（ＣＤ２０）、トシツモマブ（ＣＤ２０）、エプラツズマブ（ＣＤ２２）、リンツズマブ（ＣＤ３３）、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＣＤ３３）、アレムツズマブ（ＣＤ５２）、ガリキシマブ（ＣＤ８０）、トラスツズマブ（ＨＥＲ２抗体）、ペルツズマブ（ＨＥＲ２）、トラスツズマブ−ＤＭ１（ＨＥＲ２）、エルツマキソマブ（ＨＥＲ２及びＣＤ３）、セツキシマブ（ＥＧＦＲ）、パニツムマブ（ＥＧＦＲ）、ネシツムマブ（ＥＧＦＲ）、ニモツズマブ（ＥＧＦＲ）、ベバシズマブ（ＶＥＧＦ）、イピリムマブ（ＣＴＬＡ４）、カツマキソマブ（ＥｐＣＡＭ及びＣＤ３）、アバゴボマブ（ＣＡ１２５）、ファーレツズマブ（葉酸受容体）、エロツズマブ（ＣＳ１）、デノスマブ（ＲＡＮＫリガンド）、フィギツムマブ（ＩＧＦ１Ｒ）、ＣＰ７５１，８７１（ＩＧＦ１Ｒ）、マパツズマブ（ＴＲＡＩＬ受容体）、ｍｅｔＭＡＢ（ｍｅｔ）、ミツモマブ（ＧＤ３ガングリオシド）、ナプツモマブエスタフェナトクス（５Ｔ４）またはシルツキシマブ（ＩＬ６）、
（ｘｘｉ）エストロゲン受容体アンタゴニストまたは選択的エストロゲン受容体モジュレータ（ＳＥＲＭｓ）、またはエストロゲン合成阻害剤、例えばタモキシフェン、フルベストラント、トレミフェン、ドロロキシフェン、フェソロデックスまたはラロキシフェン、
（ｘｘｉｉ）エキセメスタン、アナストロゾール、レトラゾール、テストラクトンアミノグルテチミド、ミトタンまたはボロゾールなどアロマターゼ阻害剤及び関連医薬品、
（ｘｘｉｉｉ）抗アンドロゲン（すなわちアンドロゲン受容体アンタゴニスト）及び関連薬剤、例えばビカルタミド、ニルタミド、フルタミド、シプロテロンまたはケトコナゾール、
（ｘｘｉｖ）メドロキシプロゲステロン、ジエチルスチルベストロール（別名ジエチルスチルベストロール）またはオクトレオチドなどホルモン及びその類似体、
（ｘｘｖ）ステロイド、例えばプロピオン酸ドロモスタノロン、酢酸メゲストロール、ナンドロロン（デカノエート、フェンプロピオネート）、フルオキシメステロンまたはゴシポル、
（ｘｘｖｉ）ステロイド性シトクロムＰ４５０  １７α−ヒドロキシラーゼ−１７，２０−リアーゼ阻害剤（ＣＹＰ１７）、例えばアビラテロン、
（ｘｘｖｉｉ） 性腺刺激ホルモン放出ホルモンアゴニストまたはアンタゴニスト（ＧｎＲＡｓ）、例えばアバレリックス、酢酸ゴセレリン、酢酸ヒストレリン、酢酸ロイプロリド、トリプトレリン、ブセレリンまたはデスロレリン、
（ｘｘｖｉｉｉ）グルココルチコイド、例えばプレドニゾン、プレドニゾロン、デキサメタゾン、
（ｘｘｉｘ）レチノイド、レキシノイド、ビタミンＤ、またはレチノイン酸及びレチノイン酸代謝遮断剤（ＲＡＭＢＡ）など分化誘導剤、例えばアキュテイン、アリトレチノイン、ベキサロテンまたはトレチノイン、
（ｘｘｘ）ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、例えばチピファルニブ、
（ｘｘｘｉ）ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤などクロマチン標的治療、例えば酪酸ナトリウム、スベロイルアニリドヒドロキシアミド酸（ＳＡＨＡ）、デプシペプチド（ＦＲ９０１２２８）、ダシノスタット（ＮＶＰ−ＬＡＱ８２４）、Ｒ３０６４６５／ＪＮＪ−１６２４１１９９、ＪＮＪ−２６４８１５８５、トリコスタチンＡ、ボリノスタット、クラミドシン、Ａ−１７３、ＪＮＪ−ＭＧＣＤ−０１０３、ＰＸＤ−１０１またはアピシジン、
（ｘｘｘｉｉ）プロテアソーム阻害剤、例えばボルテゾミブ、カーフィルゾミブ、ＣＥＰ−１８７７０、ＭＬＮ−９７０８またはＯＮＸ−０９１２、
（ｘｘｘｉｉｉ）光力学性薬剤、例えばポルフィマーナトリウムまたはテモポルフィン、
（ｘｘｘｉｖ）トラベクテジンなどの海洋生物由来抗癌剤、
（ｘｘｘｖ）β粒子放出同位元素、例えばヨウ素−１３１、イットリウム−９０）を用いる、またはα粒子放出同位元素（例えばビスマス−２１３もしくはアクチニウム−２２５）を用いる放射免疫治療用放射性同位元素標識薬物、例えばイブリツモマブまたはヨウ素トシツモマブ、
（ｘｘｘｖｉ）テロメラーゼ阻害剤、例えばテロメスタチン、
（ｘｘｘｖｉｉ）マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、例えばバチマスタット、マリマスタット、プリノスタットまたはメタスタット、
（ｘｘｘｖｉｉｉ）組換えインターフェロン（インターフェロン−γ及びインターフェロンαなど）及びインターロイキン（例えばインターロイキン２）、例えばアルデスロイキン、デニロイキンジフチトクス、インターフェロンα２ａ、インターフェロンα２ｂまたはペグインターフェロンα２ｂ、
（ｘｘｘｉｘ）選択的免疫応答モジュレータ、例えばサリドマイドまたはレナリドマイド、
（ｘｌ）シプロイセルＴ（プロベンジ）またはＯｎｃｏＶｅｘなど治療用ワクチン、
（ｘｌｉ）ピシバニール、ロムルチド、シゾフィラン、ビルリジンまたはチモシン含有サイトカイン活性化剤、
（ｘｌｉｉ）三酸化ヒ素、
（ｘｌｉｉｉ）Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）阻害剤、例えばアトラセンタン、
（ｘｌｉｖ）Ｌ−アスパラギナーゼ、ペガスパルガーゼ、ラスブリカーゼまたはペガデマーゼなどの酵素、
（ｘｌｖ）ＰＡＲＰ阻害剤などＤＮＡ修理阻害剤、例えばオラパリブ、ベラパリブ、イニパリブ、ＩＮＯ−１００１、ＡＧ−０１４６９９またはＯＮＯ−２２３１、
（ｘｌｖｉ）マパツズマブ（以前はＨＧＳ−ＥＴＲ１）、コナツムマブ（以前ＡＭＧ６５５）、ＰＲＯ９５７８０、レクサツムマブ、ドゥラネルミン、ＣＳ−１００８、アポマブ、組換えヒトＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２リガンドなど組換えＴＲＡＩＬリガンドなど死受容体アゴニスト（例えばリガンド（ＴＲＡＩＬ）受容体を含むＴＮＦ関連アポトーシス）、
（ｘｌｖｉｉ）予防剤品（補助剤）、すなわち例えば化学療法剤に付随するいくつかの副作用を除去する、または緩和する薬剤、
−抗嘔吐剤、
−化学療法に不随する好中球減少期間を防止または減少させる、及び血小板、赤血球または白血球のレベル低下から生じる合併症を防ぐ薬剤、例えばインターロイキン−１１（例えばオプレルベキン、エリトロポエチン（ＥＰＯ）及びその類似体（例えばダルベポエチンアルファ）、顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）などコロニー刺激因子類似体（例えばサルグラモスチム）、ならびに顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）及びその類似体（例えばフィルグラスチム、ペグフィルグラスチム）、
−デノスマブまたはビスホスホネートなど骨吸収を阻害する薬剤、例えばゾレドロネート、ゾレドロン酸、パミドロネート及びイバンドロネート、
−デキサメタゾン、プレドニゾン及びプレドニゾロンなど炎症反応を抑制する薬剤、
−ホルモンソマトスタチンの合成型など、先端巨大症または他の稀なホルモン産生腫瘍を有する患者の成長ホルモン及びＩＧＦ‐Ｉ（及び他のホルモン）の血中濃度を低減するために用いる薬剤、例えば酢酸オクトレオチド、
−ロイコボリンまたはフォリン酸など葉酸濃度を低下させる薬品に対する解毒剤、
−疼痛用薬剤、例えばモルヒネ、ヘロイン及びフェンタニルなどのアヘン剤、
−ＣＯＸ−２阻害剤など非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、例えばセレコキシブ、エトリコキシブ及びルミラコキシブ、
−粘膜炎用薬剤、例えばパリフェルミン、
−酢酸メゲストロールなど、食欲不振、悪液質、浮腫または血栓塞栓症発作を含む副作用治療のための薬剤
【００７３】
１つの特定の実施形態において、医薬組成物は免疫系ダウンレギュレーションの１つ以上の全身性阻害剤を更に含む。免疫系ダウンレギュレーションの好適な全身性阻害剤の例は米国特許第２０１２／２６３６７７号に記載されており、抗ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１及びＰＤ−Ｌ１抗体を含む。
【００７４】
更に別の実施形態では、免疫系ダウンレギュレーションの１つ以上の全身性阻害剤は抗ＰＤ−１抗体から選択される。α−ＧａｌＢＯＥＬ及び抗ＰＤ−１単独と比較して転移増殖を防ぐことに関する、本発明の化合物（α−ＧａｌＢＯＥＬ）及び抗ＰＤ−１抗体の組み合わせの相乗特性を示すデータを実施例５及び図９で本明細書に提示する。
【００７５】
更なる実施形態では、医薬組成物は免疫系アップレギュレーションの１つ以上の促進剤を更に含む。免疫系アップレギュレーションの好適な促進剤の例は、米国特許第２０１２／２６３６７７号に記載されており、インターロイキン−１、−２または−６（ＩＬ−１、ＩＬ−２またはＩＬ−６）、アルデスロイキンなど好適な非特異的サイトカイン；インターフェロン−αまたはγ（ＩＦＮ−ａ及びＩＦＮ−γ）、インターフェロンα−２ｂ及びペグ化インターフェロン（ペグ化インターフェロンα−２ａ及びペグ化インターフェロンα−２ｂを含む）；顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ、モルグラモスチムまたはサルグラモスチム）；ＧＭ−ＣＳＦをコード化する腫瘍溶解性ヘルペスウイルス（ＯｎｃｏＶｅｘ（登録商標））、または同種異系ＭＨＣクラスＩ抗原を発現するように設計されたヒト白血球抗原−Ｂ７及びβ−２ミクログロブリン剤をコード化するプラスミド（Ａｌｌｏｖｅｃｔｉｎ−７（登録商標））を含有する病巣内ワクチンを含む、樹状細胞ワクチンならびに他の同種異系または自己治療癌ワクチン；ならびに特定の腫瘍抗原に対する抗体を含む。更に別の実施形態では、免疫系アップレギュレーションの１つ以上の促進剤は、ＩＬ−２及びインターフェロンガンマから選択される。
【００７６】
本発明の組み合わせ中に存在する化合物のそれぞれは、個々に様々な投与量スケジュールで、かつ異なる経路を介して与えられることが可能である。例えば本発明のα−ＧａｌＢＯＥＬは直接腫瘍に投与されることを目的としているが、これに対して抗ＰＤ−１抗体など免疫系ダウンレギュレーションの全身性阻害剤は通常全身的に、すなわち静脈注射によって注入される。したがって２つ以上の薬剤のそれぞれの薬量は異なり得る。それぞれは、同時にまたは異なる時間に投与されることができる。当業者はその共通一般知識により、投与計画及び使用される併用療法を知っている。例えば本発明の化合物は、その既存の組み合わせ投与計画に従って投与される１つ以上の他の薬剤と組み合わせて使用することができる。
【００７７】
治療方法
本発明の更なる態様に従って対象の腫瘍を治療する方法が提供されており、該方法は、
ａ）ｉ）細胞表面を有する複数の癌細胞を含む、少なくとも１つの腫瘍を含む対象と、
ｉｉ）本明細書で定義される医薬組成物と、を提供することと、
ｂ）医薬組成物を腫瘍内に導入することと、を含む、方法である。
【００７８】
一実施形態において医薬組成物は腫瘍に免疫応答を誘発し、それによって腫瘍を治療する。
【００７９】
一実施形態において本発明は、対象の腫瘍に免疫応答を誘発する方法を提供しており、該方法は、
ａ）少なくとも１つの腫瘍を含む対象にα−ＧａｌＢＯＥＬを含む医薬組成物の有効量を投与して、少なくとも１つの腫瘍に免疫応答を誘発することを含む。
【００８０】
一実施形態において本発明は、対象の腫瘍に治療する方法を提供しており、該方法は、
ａ）少なくとも１つの腫瘍を含む対象にα−ＧａｌＢＯＥＬを含む医薬組成物の有効量を投与して、少なくとも１つの腫瘍に免疫応答を誘発することを含んでおり、
腫瘍に免疫応答を誘発することは、結果として腫瘍を縮小させて、それにより対象の腫瘍を治療することになる。
【００８１】
一実施形態において組成物は、免疫系ダウンレギュレーションの少なくとも１つの全身性阻害剤を更に含む。
【００８２】
一実施形態において、免疫系ダウンレギュレーションの少なくとも１つの全身性阻害剤は、抗ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１及びＰＤ−Ｌ１抗体から選択される。
【００８３】
一実施形態において、腫瘍の大きさが減少するまで、前記方法は１〜５回繰り返される。
【００８４】
一実施形態において、腫瘍が検出不可能になるまで、前記方法は１〜５回繰り返される。
【００８５】
一実施形態において医薬組成物は原発腫瘍内に注入されて、原発腫瘍から生じた少なくとも１つの二次性腫瘍の治療に効果的である免疫応答を誘発する。
【００８６】
一実施形態において医薬組成物は原発腫瘍内に注入されて、原発腫瘍から生じた少なくとも１つの二次性腫瘍の大きさの減少に効果的である免疫応答を誘発する。
【００８７】
一実施形態において前記方法は、腫瘍に免疫応答を誘発した後、腫瘍の外科的除去を更に含む。
【００８８】
一実施形態において前記方法は、医薬組成物の投与後、腫瘍の外科的除去を更に含む。
【００８９】
一実施形態において腫瘍の外科的除去は、医薬組成物の投与後、約１〜２１日の間に生じる。
【００９０】
一実施形態において腫瘍の外科的除去は、医薬組成物の投与後、約１〜１４日の間に生じる。
【００９１】
一実施形態において腫瘍の外科的除去は、医薬組成物の投与後、約１〜７日の間に生じる。
【００９２】
一実施形態において腫瘍の外科的除去は、医薬組成物の投与後、約７〜１４日の間に生じる。
【００９３】
一実施形態において腫瘍の外科的除去は、医薬組成物の投与後、約１４〜２１日の間に生じる。
【００９４】
本発明の方法は、癌細胞の細胞表面上にα−Ｇａｌエピトープを発現するためにα−ＧａｌＢＯＥＬの投与を提供する。
【００９５】
一実施形態において前記方法は、前記腫瘍細胞上に膜結合型α−Ｇａｌエピトープを発現することを更に含む。
【００９６】
一実施形態において、本発明は対象を治療する方法を意図しており、該方法は、
ａ）ｉ）内因性抗Ｇａｌ抗体及び複数の切除不能な腫瘍を有する対象であって、少なくとも前記腫瘍のサブセットは直接注入、内視鏡、気管支鏡、膀胱鏡、結腸鏡、腹腔鏡及びカテーテル法による注入からなる群から選択される手順を介して到達可能である、対象と、
ｉｉ）本明細書で定義される医薬組成物と、を提供することと、
ｂ）前記手順を使用して前記組成物を腫瘍内に注入することと、を含む。
【００９７】
一実施形態において、α−ＧａｌＢＯＥＬのα−Ｇａｌエピトープはオプソニン化される。一実施形態においてオプソニン化α−Ｇａｌエピトープは、抗原提示細胞を腫瘍細胞及び腫瘍細胞膜の標的にすることにより、前記腫瘍に対する自己ワクチンの産生を誘発する。
【００９８】
一実施形態では、対象はヒトまたはマウスである。一実施形態では、対象はヒトである。代替実施形態では、対象はマウスである。
【００９９】
本発明の別の態様に従ってα−ＧａｌＢＯＥＬをマウスの腫瘍内へ導入する方法が提供されており、該方法は、
ａ）ｉ）（１）α１，３ガラクトシルトランスフェラーゼ遺伝子を欠いている（２）抗Ｇａｌ抗体を有する、及び（３）細胞表面を有する複数の癌細胞を含む少なくとも１つの腫瘍を含む、マウスと、
ｉｉ）α−ＧａｌＢＯＥＬと、を提供することと、
ｂ）癌細胞の細胞表面上にα−Ｇａｌエピトープを発現するために、α−ＧａｌＢＯＥＬを少なくとも１つの前記腫瘍内に導入することと、を含む。
【０１００】
抗原提示細胞に対する自己腫瘍ワクチンの抗Ｇａｌターゲティング
腫瘍細胞とα−Ｇａｌ糖脂質をインキュベートすることによって、α−Ｇａｌエピトープは腫瘍細胞膜内にｉｎ  ｖｉｔｒｏ挿入され得ることが示されている。腫瘍細胞または腫瘍細胞膜と前記α−Ｇａｌ糖脂質とのコインキュベーションにより、腫瘍細胞膜内へのその自発的ｉｎ  ｖｉｔｒｏ挿入、及びこれらの細胞膜上のα−Ｇａｌエピトープ発現を結果として生じる。α１，３ガラクトシルトランスフェラーゼ遺伝子に関する種々の分子生物学的方法によって、α−Ｇａｌエピトープを発現するように遺伝子操作された腫瘍細胞は自己腫瘍ワクチンとして研究された。皮内注入後、抗ＧａｌＩｇＧ抗体は、ワクチン接種している腫瘍細胞膜のα−Ｇａｌエピトープに対して接種部位でｉｎ  ｓｉｔｕ結合し、及び抗原提示細胞をワクチンの標的にする。発明のメカニズムを理解する必要はないが、複合型抗ＧａｌのＦｃ部を抗原提示細胞上のＦｃγ受容体に結合することは、オプソニン化されたワクチン接種している腫瘍細胞膜の抗原提示細胞内への効果的な取り込みを誘発すると考えられる。したがって自己腫瘍の性質不明の腫瘍抗原は、抗原提示細胞内にも内在化される。ワクチン接種している自己腫瘍膜を流入領域リンパ節に輸送した後、抗原提示細胞は、腫瘍特異的細胞傷害性細胞及びヘルパーＴ細胞（すなわち、ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞それぞれ）の活性化のための腫瘍抗原ペプチドをプロセッシングし、かつ提示する。
【０１０１】
α−Ｇａｌエピトープを発現する腫瘍ワクチンの有効性の原理の証明は、α−Ｇａｌエピトープを発現するメラノーマ細胞により免疫感作されたマウス、及び同じメラノーマ細胞だがα−Ｇａｌエピトープを欠如する細胞でチャレンジするマウスの実験モデルの研究で達成されている（ＬａＴｅｍｐｌｅ  ＤＣらＣａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９９，５９：３４１７−２３，ａｎｄ  Ｄｅｒｉｙ  ＬらＣａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ２００５；１２：５２８−３９）。その研究で使用するマウスは、α１，３ガラクトシルトランスフェラーゼ遺伝子のノックアウトマウスであった（すなわちこれらのマウスはα−Ｇａｌエピトープを欠き、及び抗Ｇａｌ抗体を産生する）。α−Ｇａｌエピトープを発現するために遺伝子操作されたメラノーマ細胞により免疫感作されたマウスは、同じ腫瘍細胞だがα−Ｇａｌエピトープを欠如する細胞でのチャレンジに対して有効な免疫防御を示した。これに対してα−Ｇａｌエピトープを欠如する腫瘍細胞により免疫感作したマウスは、α−Ｇａｌエピトープを欠如する生きた腫瘍細胞によるチャレンジに対して保護性免疫応答を示さなかった。
【０１０２】
腫瘍治療のα−Ｇａｌ糖脂質
本発明は、固体腫瘍塊を有する患者の治療を意図する。本発明の特定の実施形態は、患者自身の腫瘍を自己腫瘍ワクチンに変換することにより、個々の患者に自分自身の腫瘍病変に対するワクチン接種をすることを意図する、癌患者の新規の免疫療法治療を考察する（参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，８７９，６７５号を参照）。例えば前記６７５号の特許は、腫瘍細胞及び／または細胞膜のｉｎ  ｖｉｔｒｏプロセッシングを教示する。これらの細胞の患者内への注入の際、ワクチンはＡＰＣに対して抗Ｇａｌ抗体の標的とされて、自己腫瘍抗原に対して保護性免疫応答を誘発する。しかし本発明とは異なり、前記’６７５号の特許は、 ｉ）天然抗Ｇａｌ抗体による腫瘍の炎症、後縮及び／もしくは破壊の誘発のためのｉｎ  ｖｉｖｏ腫瘍内治療、または ｉｉ）癌患者内へのα−Ｇａｌ糖脂質の腫瘍内注入後、ｉｎ  ｖｉｖｏ腫瘍細胞でのα−Ｇａｌエピトープの発現、を教示しない。
【０１０３】
本発明の一実施態様ではα−Ｇａｌ糖脂質は、非外科的腫瘍内注入によって（すなわち例えば内視鏡、カテーテル法などによって）、または種々の分子上のα−Ｇａｌ糖脂質もしくは抗Ｇａｌ結合エピトープの腫瘍内へのｉｎ  ｖｉｖｏ導入のための他の任意の方法によって、腫瘍細胞を含む腫瘍病変に送達され得る。
【０１０４】
化学療法不応の転移の術後再発は、固体腫瘍を有する患者の最も一般的な死因であると考えられている。前記再発性転移の高い発現率（８０％）は、膵臓及び卵巣癌腫を有する患者で、ならびにいくぶん少ない程度で黒色腫、結腸癌、肺癌及び乳癌など他の固体腫瘍で報告されている。この再発患者の多くはいかなる治療も利用できない末期疾患を有しており、及び転移の発見後数週間以内または数か月以内に死亡すると考えられる。
【０１０５】
一実施形態において本発明は、すべてのヒトはその免疫グロブリンのおよそ１％の抗Ｇａｌ抗体を自然に産生するという事実を利用することによって、腫瘍転移の後縮及び／または破壊のための治療法を考察する。抗Ｇａｌ抗体の免疫可能性を利用して、いかなる腫瘍病変も退縮及び／または破壊して、α−Ｇａｌエピトープ（すなわちα−ＧａｌＢＯＥＬ）を運搬する糖脂質の腫瘍内注入によってそれらをｉｎ  ｓｉｔｕ自己腫瘍ワクチンに変換することができる。
【０１０６】
したがって本明細書に記載される本発明は、治療された腫瘍病変の後縮及び／または破壊を誘発できる。したがって一実施形態において、治療された腫瘍は退縮を起こす。代替実施形態では、治療された腫瘍は破壊される。
【０１０７】
更なる態様において、腫瘍（すなわちα−Ｇａｌエピトープを発現する）は後退を起こしており、前記腫瘍は黒色腫または肝転移など臓器転移から選択される。更なる代替的実施形態において、腫瘍（すなわちα−Ｇａｌエピトープを発現する）は破壊されており、前記腫瘍は黒色腫または肝転移など臓器転移から選択される。
【０１０８】
一実施形態において導入する工程は、治療された腫瘍の自己腫瘍ワクチンへの変化の結果として、対象の二次性腫瘍の後退を引き起こす。更なる実施形態では、前記二次性腫瘍は黒色腫または肝転移から選択される。
【０１０９】
一実施形態において、導入する工程は対象の二次性腫瘍の破壊を引き起こす。更なる実施形態では、前記二次性腫瘍は黒色腫または肝転移から選択される。
【０１１０】
水に取り囲まれたミセルコアと比較して、細胞膜の脂質二層の外葉に埋め込まれたときα−Ｇａｌ糖脂質の疎水性（すなわち親油性）脂質尾部はより安定した精力的形態であるので、多くのα−Ｇａｌ糖脂質は自発的に腫瘍細胞膜に挿入する。ガングリオシドと呼ばれる糖脂質の他の種類の細胞膜内への自発的な挿入（取り込み）は、以前に示されている（Ｋａｎｄａ  ＳらＪ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．（Ｔｏｋｙｏ）．１９８２；９１：１７０７−１８，ａｎｄ  Ｓｐｉｅｇｅｌ  ＳらＪ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１９８５；１００：７２１−２６）。α−Ｇａｌ糖脂質の腫瘍細胞膜内への挿入は、細胞膜表面にα−Ｇａｌエピトープのｄｅ  ｎｏｖｏ発現をもたらすと予想される。α−Ｇａｌエピトープ発現は、補体介在性細胞溶解（ＣＤＣ）及び抗体依存性細胞性細胞溶解（ＡＤＣＣ）を含むがこれらに限定されないメカニズムによる、腫瘍細胞の抗Ｇａｌ抗体媒介後縮及び／または破壊を促進することができ、及び更に腫瘍壊死をもたらし得る。抗Ｇａｌオプソニン化腫瘍細胞膜は次に、抗原提示細胞によって効果的に標的とされて、それにより治療した腫瘍病変を自己腫瘍ワクチンに変換する。次いでこの自己ワクチンは免疫系を刺激して腫瘍抗原に対して反応させて、治療患者の他の腫瘍病変及び／または微小転移巣内でこれらの抗原を発現する腫瘍細胞の更なる後縮及び／または破壊を結果としてもたらす。
【０１１１】
一実施形態において対象は、外科的に腫瘍を除去するために以前に治療された。
【０１１２】
代替実施形態では対象は、外科的に腫瘍を除去するために以前に治療されておらず、すなわち本明細書において記載されている方法は、原発腫瘍切除の数週間前に新補助療法として実行され得る。一実施形態においてα−ＧａｌＢＯＥＬの腫瘍内注入は腫瘍のサイズを減少させ、かつ治療した腫瘍を自己腫瘍ワクチンに変換する。前記腫瘍は最終的に切除されるが、その切除の前に、治療された腫瘍は同じ腫瘍抗原を発現する微小転移に対して免疫応答を誘発すると考えられる。
【０１１３】
抗Ｇａｌ抗体の腫瘍後縮及び／または破壊のメカニズム
発明のメカニズムを理解する必要はないが、注入されるα−Ｇａｌ糖脂質による後縮及び／または破壊は生化学及び生理学的基礎を含むことができる。
【０１１４】
一実施形態では本方法は、腫瘍内炎症を誘発することを更に含む。
【０１１５】
腫瘍内注入は腫瘍関連の毛細管の局所破壊をもたらして、それによって腫瘍内部へ到達する天然抗ＧａｌＩｇＭ及び抗ＧａｌＩｇＧ抗体分子を提供することができる。抗Ｇａｌ抗体は次に、α−Ｇａｌ糖脂質ミセルまたは個々のα−Ｇａｌ糖脂質分子のα−Ｇａｌエピトープと相互作用して、それにより補体の局所活性化及び補体開裂走化性因子Ｃ５ａ及びＣ３ａの生成を誘発することが可能である。更にＣ３ｂは、標的細胞上へ共有結合的に付着する。それから補体活性化は、治療した腫瘍病変内でｄｅ  ｎｏｖｏ産生されたＣ５ａ及びＣ３ａ走化因子によって導かれる、腫瘍内顆粒球、単球、マクロファージ及び樹状細胞遊走を促進する局所炎症過程を開始する。炎症過程は、内皮細胞の抗Ｇａｌ活性化を引き起こす細胞膜内へのα−Ｇａｌ糖脂質の挿入の結果として更に増幅され得る（Ｐａｌｍｅｔｓｈｏｆｅｒ  ＡらＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．１９９８；６５：８４４−５３；Ｐａｌｍｅｔｓｈｏｆｅｒ  ＡらＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．１９９８；６５：９７１−８）。内皮細胞活性化及び腫瘍細胞全体の損傷は、追加の炎症誘発性サイトカイン及びケモカインの局所産生をもたらす可能性がある。このような局所分泌型サイトカイン及びケモカインは、マクロファージ、樹状細胞の更なる遊走、及びα−Ｇａｌな糖脂質を注入した病変内へのリンパ球のその後の遊走を誘発する。この細胞遊走は、抗原提示細胞上及びリンパ球上の炎症誘発性サイトカインならびにケモカインへの受容体により媒介される（Ｃｒａｖｅｎｓ  Ｐ  Ｄ  ａｎｄ  Ｌｉｐｓｋｙ  Ｐ  Ｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．２００２；８０：４９７−５０５）。炎症反応のこの初期誘発により、腫瘍病変を増殖するという「内密の性質」を検出する能力の全般的な欠如を免疫系が解決することを可能にする。この炎症により更に、局所サイトカイン環境により誘発され、かつ通常リンパ球が腫瘍内を通り抜けるのを防ぐ、固体腫瘍病変内の免疫抑制微環境を免疫系が解決することを可能にする（Ｍａｌｍｂｅｒｇ  Ｋ  Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００４；５３：８７９−９２；  ＬｕｇａｄｅらＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５；１７４：７５１６−２３）。
【０１１６】
腫瘍細胞の破壊は、細胞膜内に挿入したα−Ｇａｌ糖脂質と結合する抗Ｇａｌにより生じる。腫瘍内に注入されるα−Ｇａｌ糖脂質は、腫瘍細胞膜のリン脂質二層の外葉に自発的に挿入できる。挿入されたα−Ｇａｌ上のα−Ｇａｌエピトープへの抗ＧａｌＩｇＭ及び抗ＧａｌＩｇＧのその後の結合は、補体依存性細胞溶解（ＣＤＣ）を介する治療腫瘍の後縮及び／または破壊を誘発する。このようなα−Ｇａｌエピトープへの抗ＧａｌＩｇＧ分子の結合は、腫瘍細胞の抗体依存性細胞性細胞溶解（ＡＤＣＣ）も促進する。
【０１１７】
一実施形態において腫瘍は、補体依存性細胞溶解（ＣＤＣ）を介して後縮及び／または破壊が起きる。
【０１１８】
一実施形態において腫瘍は、補体依存性細胞性細胞溶解（ＡＤＣＣ）を介して後縮及び／または破壊が起きる。
【０１１９】
補体依存性細胞溶解において、α−Ｇａｌエピトープを発現する腫瘍細胞と結合する（α−Ｇａｌ糖脂質挿入による）抗ＧａｌＩｇＧ及び／またはＩｇＭ分子は、補体系を活性化すると考えられている。その後補体Ｃ５ｂ−９膜侵襲複合体はこの補体活性化の結果として形成されて、次いで腫瘍細胞膜に孔を「突きあけて」、その結果腫瘍細胞溶解が生じる。この補体依存性細胞溶解はブタ内皮細胞が溶解するとき同様に見いだされて、異種移植の超急性拒絶をもたらす（Ｃｏｌｌｉｎｓ  Ｂ  ＨらＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５；１５４：５５００−１０）。ＡＤＣＣにおいてエフェクター細胞は、顆粒球、マクロファージ及びＮＫ細胞である。これらの細胞は、抗Ｇａｌの誘発した炎症過程のため病変に引きつけられる。それらはＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）を介して、腫瘍細胞膜内に挿入されるα−Ｇａｌ糖脂質と結合する抗ＧａｌＩｇＧ分子のＦｃ部に結合される。一旦腫瘍細胞に結合すると、これらのエフェクター細胞は腫瘍細胞膜に穴を生成する膜接触領域内にそのグランザイム小胞を分泌して、次いでこれらの腫瘍細胞の破壊を誘発する。α−Ｇａｌエピトープを発現する細胞のＡＤＣＣ破壊を誘発する際の抗ＧａｌＩｇＧの有効性は、そのα−Ｇａｌエピトープを介して抗Ｇａｌバイアと結合する異種移植ブタ細胞によって示された（Ｇａｌｉｌｉ，Ｕ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ１９９３，１４：４８０−８２）。腫瘍細胞がその細胞表面膜上に発現したα−Ｇａｌエピトープを介して抗Ｇａｌと結合したとき、類似の抗Ｇａｌ媒介ＡＤＣＣ工程は発生する（Ｔａｎｅｍｕｒａ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．２０００；１０５：３０１−１０）。
【０１２０】
抗原提示細胞による腫瘍細胞膜の取り込みは、化学療法不応微小転移を退縮及び／または破壊するために、自己腫瘍抗原に対する保護性免疫応答の誘発をもたらす場合がある。抗Ｇａｌ依存性補体活性化を介して標的細胞上に付着するα−Ｇａｌ糖脂質またはＣ３ｂを挿入した膜上の、α−Ｇａｌエピトープと結合した抗ＧａｌＩｇＧ抗体は、抗原提示細胞を刺激して、腫瘍抗原（すなわち例えば腫瘍関連抗原、ＴＡＡ）を発現する細胞膜を内在化する。次いで内在化された腫瘍抗原は、治療腫瘍病変から流入領域リンパ節へ抗原提示細胞により輸送されることができる。次にこれらの腫瘍抗原は、抗原提示細胞によって更にプロセッシングされることができて、腫瘍特異的Ｔ細胞を活性化する免疫原性腫瘍ペプチドとして提示されることができる。このプロセスは、全身性保護性抗腫瘍免疫応答（すなわち例えば自己腫瘍ワクチン）の誘導をもたらす。したがってα−Ｇａｌ糖脂質を注入された腫瘍病変は、治療した腫瘍病変のそれとして腫瘍抗原を発現する微小転移に対する免疫応答を誘発する、ｉｎ  ｓｉｔｕ自己腫瘍ワクチンに最終的に変換する。
【０１２１】
臨床的治療法として、α−Ｇａｌ糖脂質は、皮内注射（すなわち例えば黒色腫瘍内）、内視鏡注入（すなわち例えば結腸転移内）、腹腔鏡注入（すなわち例えば腹腔の卵巣、結腸、胃、肝臓もしくは膵臓癌転移（例えば腹膜上もしくは肝臓内）内）、経皮的画像誘導針注射（すなわち例えば肺腫瘍内）、気管支鏡注入（すなわち例えば肺腫瘍内）、結腸鏡注入、または膀胱鏡注入（すなわち例えば膀胱癌腫内）を含むがこれらに限定されない種々の方法によって癌病変へ投与されることができる。
【０１２２】
したがって一実施形態において導入することは、注射、画像誘導注射、内視鏡、気管支鏡、膀胱鏡、結腸鏡、腹腔鏡及びカテーテル法を含有する手順を含むがこれらに限定されない。
【０１２３】
一実施形態において導入することは、非外科的腫瘍内注入を含む。例えば導入することは、皮内注射、経皮的画像誘導注射、内視鏡注入、気管支鏡注入、膀胱鏡注入、結腸鏡注入及び腹腔鏡注入から選択される手順を含む。
【０１２４】
一実施形態においてα−Ｇａｌ糖脂質（すなわちα−ＧａｌＢＯＥＬ）は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、生理食塩水、他の水溶液、または安全であると認められる（ＧＲＡＳ）他の賦形剤を含む群から選択されるがこれらに限定されない、薬学的に許容される溶液（すなわち滅菌溶液）で注入される。一実施形態においてα−Ｇａｌ糖脂質の溶液は、デオキシコール酸塩または細胞膜内への糖脂質の浸透を増加させることができる他の中性界面活性剤も含むことができる。
【０１２５】
一実施形態において本発明は、腫瘍切除手術前に提供される新補助療法としてのα−Ｇａｌ糖脂質（すなわちα−ＧａｌＢＯＥＬ）の原発腫瘍内への腫瘍内注入を考察する。一実施形態において、α−Ｇａｌ糖脂質による術前注入によって誘発される即時炎症反応は、腫瘍病変サイズを縮小させて、ならびにそれをｉｎ  ｓｉｔｕ自己腫瘍ワクチンに変換することをもたらす。発明のメカニズムを理解する必要はないが、治療した腫瘍に対する免疫応答は、原発腫瘍の外科的切除時に検出可能でない微小転移の免疫破壊を誘発するのを最終的に助けることができると考えられる。術前投与は、従来の補助療法（すなわち例えば化学療法及び放射線）への微小転移の抵抗性の免疫学的破壊により疾患の再発を防止するのを助けることができ、及びそれは原発腫瘍のように腫瘍抗原を発現すると更に考えられている。前記新補助療法は、直接もしくは導入画像によって、または他の任意の周知の方法によって注射されることができる任意の固体腫瘍またはリンパ腫にも適用することができる。
【０１２６】
本発明の更なる態様に従って、本明細書で定義される医薬組成物を含むキット、及び任意に本明細書で定義される方法に従って前記キットを使用するための指示書が提供される。
【０１２７】
一実施形態においてキットは、腫瘍内投与装置など投与装置を更に含む。
【０１２８】
本明細書に引用されるすべての出版物及び特許は、あたかもそれぞれの出版物または特許が具体的かつ個々に参照により組み込まれると示されるがごとく、参照により本明細書に組み込まれており、出版物が引用されたことに関連する方法及び／または材料を開示かつ記載するために参照により本明細書に組み込まれるものとする。いかなる出版物の引用も出願日前のその開示のためであり、本発明が先行開示であるがゆえに前記出版物に先行する権利を有しない容認として解釈されるべきでない。
【０１２９】
以下の実施例は、本発明の実施形態の例示的実施例としてのみ意図される。それらは、本発明を制限するものとして見なされるべきではない。
【０１３０】
合成
以下に記載する合成方法の説明において及び出発材料を調製するために用いる参照合成方法において、溶媒、反応雰囲気、反応温度、実験の継続時間を含むすべての反応条件及び精密検査手順は、当業者により選択され得ることを理解すべきである。分子の種々の部分に存在する官能基は利用される試薬及び条件と適合しなければならないことは、有機合成の当業者によって理解される。必要な出発材料は有機化学の標準方法によって得られることができ、及びその中で例示された及び／または参照されたものに類似する手順によって入手できる。
【０１３１】
反応は市販の試薬（Ａｃｒｏｓ、Ａｌｄｒｉｃｈ及びＦｌｕｋａ）を用いて実施した。無水溶媒は標準法に従って精製された。カラムクロマトグラフィは０．０４０〜０．０６３ｍｍシリカゲル６０（Ｍｅｒｃｋ）上で実施した。ゲル濾過はＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）カラム上で実施した。溶媒を３０〜４０℃の真空で除去した。薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）は、Ｓｉｌｉｃａゲル６０Ｆ２５４アルミニウム製プレート（Ｍｅｒｃｋ）上で実施した。化合物のスポットはＴＬＣプレートをＨ３ＰＯ４水溶液（８％）に浸漬して、続いて加熱する（＞１５０℃）ことによって視覚化された。
【０１３２】
１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＢｉｏＳｐｉｎ  ＧｍｂＨ（７００ＭＨｚ）分光計で３０℃で記録した。ケミカルシフト（δ、ｐｐｍ）は、内部Ｄ２Ｏ（δ４．７５０）、ＣＤＣｌ３（δ７．２７０）またはＣＤ３ＯＤ（δ３．５００）のピークを参照した。結合定数（Ｊ）はＨｚで測定された。１Ｈ  ＮＭＲの信号。糖類のＮＭＲスペクトルの単糖残基の記号：Ｉ−β−ＧｌｃＮＡｃ（還元末端）、ＩＩ−β−Ｇａｌ、ＩＩＩ−α−Ｇａｌ。ＭＡＬＤＩ  ＴＯＦ  ＭＳスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ  Ｕｌｔｒａｆｌｅｘ  ＭＡＬＤＩ  ＴＯＦ／ＴＯＦ質量分析計（独国）で記録した。
【０１３３】
後述する合成法は、（９Ｚ，９Ｚ）−（２Ｒ）−３−（（（２−（６−（（３−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−３−アセトアミド−５−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−３，５−ジヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）−４−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−４−ヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）プロピル）アミノ）−６−オキソヘキサンアミド）エトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルビス（オクタデカ−９−エノエート）（α−ＧａｌＢＯＥＬ）を調製するため当業者によって使用され得る。
【０１３４】
合成スキーム：
【化１】
0006490195.tif 000002
【０１３５】
（９Ｚ，９’Ｚ）−（２Ｒ）−３−（（（２−（６−（（３−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−３−アセトアミド−５−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−３，５−ジヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）−４−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−４−ヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）プロピル）アミノ）−６−オキソヘキサンアミド）エトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルビス（オクタデカ−９−エノエート）の調製。
【化２】
0006490195.tif 000003
【０１３６】
乾燥ＤＭＦ（２ｍＬ）の３−アミノプロピル４−Ｏ［３−Ｏ（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル］−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（ＩＩ）（Ｍｅｎｄｅｌｅｅｖ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２００２，（１４３−１４５）  ｏｒ  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，６１，（２００５），４３１３−４３２１、５２ｍｇ、０．０８６ｍｍｏｌ）の溶液にＥｔ３Ｎ  １５μＬを添加し、続いてＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）のＤＯＰＥ−Ａｄ−ＯＮＳｕ（ＩＩＩ）（米国特許第８，０１３、１３１Ｂ２号、１００．６ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）を添加した。反応物は室温で２時間撹拌されて、その後カラムクロマトグラフィが続き（最初にＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ−２０で、第２にＣＨ２Ｃｌ２−ＥｔＯＨ−Ｈ２Ｏ；６：５：１で溶出するシリカゲル上で）表題の化合物（Ｉ）を得た（１０５．６ｍｇ、８４％）。
Ｒｆ０．５（ＣＨ２Ｃｌ２−ＥｔＯＨ−Ｈ２Ｏ、６：５：１）
１Ｈ  ＮＭＲ（７００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３−ＣＤ３ＯＤ１：１、３０℃）、δ、ｐｐｍ、選択：５．４５−５．５４（ｍ、４Ｈ、２×−ＣＨ＝ＣＨ−）、５．３４−５．４３（ｍ、１Ｈ、−ＯＣＨ２−ＣＨＯ−ＣＨ２Ｏ−）、５．１８（ｄ、１Ｈ、Ｊ１，２２．５２、Ｈ−１ＩＩＩ）、４．６１（ｄ、１Ｈ、Ｊ１，２７．５７、Ｈ−１ＩＩ）、４．６０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ２．８７、Ｊ１２．００、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨＨＣＨＯＣＨ２Ｏ−）、４．５６（ｄ、１Ｈ、Ｊ１，２８．３９、Ｈ−１Ｉ）、４．３６（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ６．８、Ｊ１２．００、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨＨＣＨＯＣＨ２Ｏ−）、４．１９（ｄ、１Ｈ、Ｊ３，４２．４８、Ｈ−４ＩＩ）、４．１３−４．１８（ｍ、２Ｈ、−ＣＨＯ−ＣＨ２ＯＰ−）、３．５２−３．６２（ｍ、３Ｈ、ＰＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ、−ＣＨ２−ＣＨＨ−ＮＨ）、３．２９−３．３５（ｍ、１Ｈ、−ＣＨ２−ＣＨＨ−ＮＨ）、２．４５−２．５２（ｍ、４Ｈ、２×−ＣＨ２−ＣＯ）、２．３６−２．４５（ｍ、４Ｈ、２×−ＣＨ２−ＣＯ）、２．１４−２．２２（ｍ、１１Ｈ、２×（−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−）、ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３）、１．８５−１．９６（ｍ、２Ｈ、Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−ＮＨ）、１．７３−１．８４（ｍ、８Ｈ、ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ及び２×（ＣＯＣＨ２ＣＨ２−）、１．３６−１．５５（ｍ、４０Ｈ、２０ＣＨ２）、１．０５（ｔ、６Ｈ、Ｊ６．９８、２ＣＨ３）。
Ｃ７０Ｈ１２６Ｎ３Ｏ２６Ｐ；ＭＡＬＤＩ  ＭＳ：ｍ／ｚ１４８０（Ｍ  Ｎａ＋Ｈ）；１４９６（ＭＫ＋Ｈ）；１５０２（ＭＮａ＋Ｎａ）、１５１８（Ｍ  Ｎａ＋Ｋ）
【実施例】
【０１３７】
実施例１：抗Ｇａｌ抗体への結合を示すためのＥＬＩＳＡ
９６ウェルプレートを最初にα−ＧａｌＢＯＥＬ（ＦＳＬ−Ｇａｌｉｌｉ（トリ）（商標）としてＳｉｇｍａ製から入手、カタログ番号Ｆ９４３２）でコーティングする。５０μＬのＰＢＳを各ウェルに添加する。α−ＧａｌＢＯＥＬは２ｍｇ／ｍｌの濃度までＰＢＳで再懸濁して、５０μＬをウェルを添加した。移動前に各ウェルが十分に混合されるように、プレート全体のウェル内に５０μＬを移すことによって連続希釈を実施する。プレートは終夜放置して、乾燥する。これによって、この分子のＬ（脂質）部分によるα−ＧａｌＢＯＥＬのウェルへの強力な接着をもたらす。
【０１３８】
１５０μＬのブロッキング緩衝液（１×ＰＢＳ／１％ＢＳＡ）を乾燥したウェルに加える。プレートはカバーされて、３７℃で２時間インキュベートする。ウェル内容物を廃棄して、ウェルをＰＢＳで洗浄した。５０μＬの一次抗Ｇａｌ抗体（本実施例のモノクローナルマウス抗ＧａｌＩｇＭ、Ｍ８６ハイブリドーマ上清）を各ウェルに加える。プレートを室温で２時間インキュベートする。プレートを２００μＬ洗浄緩衝液で３回洗浄する（１×ＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ）。
【０１３９】
５０μＬの二次ヤギ抗マウスＩｇＭ−ＨＲＰ溶液（Ａｃｃｕｒａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、カタログ番号ＪＧＭ０３５０２０）を各ウェルに加える。プレートをカバーして、室温で１時間インキュベートして、その後２００μＬ洗浄緩衝液で３回洗浄する。１００μＬの標準ＯＰＤ（ｏ−フェニレンジアミンジヒドロクロリド）溶液（例えばＳｉｇｍａ、カタログ番号Ｐ８２８７）を各ウェルに加えて、５分間インキュベートし、次いで５０μＬの停止液（１Ｍ硫酸）を加える。ウェル吸光度を、４９２ｎｍ（Ａ４９２）で直ちに読み取る（図２を参照）。
【０１４０】
α−ＧａｌＢＯＥＬの量はＥＬＩＳＡプレート全体で増加するので、図２はＡ４９２の増加を示す。ＥＬＩＳＡウェルに結合するα−ＧａｌＢＯＥＬの増加量とこれらのＥＬＩＳＡウェルへのモノクローナル抗Ｇａｌ抗体の増加する結合との間の直接相関関係は、ウェルで乾燥したα−ＧａｌＢＯＥＬ分子上のα−Ｇａｌエピトープにこの抗体が結合することを示す。
【０１４１】
実施例２：補体依存性細胞障害、及び取り込みアッセイ
細胞形質膜内に挿入されるα−ＧａｌＢＯＥＬの量、及び抗Ｇａｌ媒介補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）を刺激することにおける、α−ＧａｌＢＯＥＬ挿入の機能的影響の両方とも、下記のアッセイは定量化する。α−ＧａｌＢＯＥＬは滴定されて、ＣＨＯ−Ｋ１細胞によってインキュベートされる。これらの細胞を全細胞ＥＬＩＳＡアッセイで固定して使用し、膜内へのα−Ｇａｌの取り込みを測定する、または抗Ｇａｌ抗体及びヒト血清によってインキュベートしてＣＤＣ（またはヒト血清からの補体の非存在下での一般的な細胞毒性）を測定する。
【０１４２】
α−ＧａｌＢＯＥＬ滴定及びＣＨＯ−Ｋ１細胞調製
α−ＧａｌＢＯＥＬは以下のとおり滴定される。α−ＧａｌＢＯＥＬの４０μＬアリコート１つ（２ｍｇ／ｍｌ（ＦＳＬ−Ｇａｌｉｌｉ（トリ）（商標）としてＳｉｇｍａから入手可能、カタログ番号Ｆ９４３２）を解凍して、３０秒間超音波処理する。４０μｌのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を管に加えて、１０秒間ボルテックスする。２５μｌのこの混合物を、５５μｌのＰＢＳに加えて、よく混合する。これらの希釈は繰り返されて、所望の濃度範囲のα−ＧａｌＢＯＥＬの完全な滴定を得る。
【０１４３】
α−Ｇａｌエピトープを欠如するＣＨＯ−Ｋ１細胞を３７℃でＤｕｌｂｅｃｃｏのＰＢＳ（ＤＰＢＳ）で再懸濁して、５分間１０００ｒｐｍで遠心分離する。上清を吸引して、細胞沈殿物を４５０μｌＤＰＢＳ（３７℃）に１×１０７細胞／ｍｌまで再懸濁する。細胞沈殿物を再び洗浄して、血清のあらゆる痕跡を除去する。
【０１４４】
ＣＨＯ−Ｋ１細胞とα−ＧａｌＢＯＥＬのインキュベーション
細胞懸濁液のアリコート（４５μｌ）をα−ＧａｌＢＯＥＬの全管へ移して、ゆっくり反転混合し、３７℃で３０分間インキュベートする。細胞を十分に洗浄して、組み込まれていない過剰のα−ＧａｌＢＯＥＬを除去する。管を５分間２００×ｇで遠心分離して、細胞沈殿物を暖かいＤＰＢＳ９００μｌで洗浄し、再び５分間２００×ｇで再び遠心分離して、暖かい溶媒２５０μｌに再懸濁する。細胞懸濁液（２５μｌ）をアッセイプレート（発光読み取り（Ｃｏｒｎｉｎｇ製）用標準白色９６ウェルプレート）に移して、ＣＤＣアッセイ（Ａ）を実行する、またはｉｎ  ｃｅｌｌ  ＥＬＩＳＡ用（Ｂ）にポリ−ｄ−リシンコーティングプレート（Ｓｉｇｍａ製）に５０μｌ移して、細胞膜内への取り込みを測定する。
【０１４５】
補体依存性細胞障害／細胞溶解（ＣＤＣ）アッセイ
抗Ｇａｌ抗体（供給源内から、本実施例ではプラズマ含有マウス抗Ｇａｌ）をＣＤＣアッセイプレート（Ａ）に加えて（２５μｌ／ウェル）、次に３７℃で３０分間インキュベートする。アッセイプレートを加熱遠心管ブロック上で更に３７℃で３０分間インキュベートする。ヒト血清（活性補体を含む）を暖かい溶媒で希釈し（アッセイの滴定による所定濃度まで）、各ウェルに５０μｌを加える。プレートを３７℃で３０分間インキュベートする。プレートをインキュベータから取り出して、１５分間室温で平衡化する。１００μｌのＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ７５７２）をプレートの各ウェルに加える。この試薬発光は、溶解細胞から放出されるＡＴＰの量と比例する。プレートを箔で覆い、２分間のプレートシェーカ（４００ｒｐｍ）でインキュベートする。発光出力を標準９６ウェルプレート読み取り機を使用して測定する（図３を参照）。
【０１４６】
一般的の細胞毒性を上述のＣＤＣアッセイ手順に従って測定するが、ヒト血清を予め温めた培地に置き換える。細胞死のレベルを、厳密に上記のＣＤＣアッセイに関する同じ方法で１００μｌのＣｅｌｌＴｉｔｒｅＧｌｏ試薬を各ウェルに加えることで測定した（図４を参照）。
【０１４７】
図３は、α−ＧａｌＢＯＥＬの用量を増加させることによる補体依存性細胞溶解の抑制を示す。α−ＧａｌＢＯＥＬ容量が増加するにつれて、細胞と結合する及びそれらを溶解させることからの補体成分のブロッキングにより、ＣｅｌｌＴｉｔｒｅＧｌｏで測定されるように細胞生存度は増加する。α−ＧａｌＢＯＥＬミセルにより媒介される中の本ブロッキングは、溶液の抗Ｇａｌを結合し、溶液の補体カスケードを活性化して、補体消費を生じさせて、それによりα−Ｇａｌエピトープを発現する細胞の補体介在性溶解を阻害する。補体が不活性化した場合、細胞死は発生しない。ヒト血清がない場合、α−ＧａｌＢＯＥＬは５００μｇ／ｍｌまで細胞生存度（図４）に影響を及ぼさない。表１は、４つの独立実験に関するα−ＧａｌＢＯＥＬによるＣＤＣ抑制におけるＥＣ５０値（半最大応答をするα−ＧａｌＢＯＥＬ濃度）を記載する。平均ＥＣ５０値は、１．３５μｇ／ｍｌ＋／−１．４８である明白な細胞毒性は、５００μｇ／ｍｌまで観察されない。
表１： ＣＤＣアッセイの結果
【表１】
0006490195.tif 000004
【０１４８】
細胞内へのα−ＧａｌＢＯＥＬの取り込みを測定するためのｉｎ−ｃｅｌｌＥＬＩＳＡ
ＣＨＯ−Ｋ１細胞内へのα−ＧａｌＢＯＥＬの取り込みを測定するために、α−ＧａｌＢＯＥＬ含有ＣＨＯ−Ｋ１細胞懸濁液５０μｌを、ポリ−Ｄ−リシンでコーティングした透明９６ウェルプレート（Ｂ）へ移す。プレートを１，０００ｒｐｍで５分間回転する。細胞を固定するために培地を除去して、１００μｌの４％のホルムアルデヒドを各ウェルに加える。プレートを、室温で１５分間ドラフトチャンバ内でインキュベートする。ホルムアルデヒドを除去して、プレートを２度１×トリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）１００μＬ／ウェルで洗浄する。ｉｎ  ｃｅｌｌ  ＥＬＩＳＡキット（Ｉｎ  Ｃｅｌｌ  ＥＬＩＳＡアッセイキット、６２２００Ｐｉｅｒｃｅ  Ｌｔｄ）を使用して、α−ＧａｌＢＯＥＬの取り込み濃度を測定する。
【０１４９】
ＴＢＳを除去して、１００μＬ／ウェルのクエンチ溶液を加えて、２０分間室温でインキュベートする。クエンチ溶液を除去して、プレートを１度１×ＴＢＳの１００μＬ／ウェルで洗浄した。
【０１５０】
１００μＬ／ウェルのブロッキング緩衝液を加えて、３０分間室温でインキュベートする。ブロッキング緩衝液を除去して、希釈された一次抗体の５０μＬ／ウェルを加える（本実施例のＭ８６ハイブリドーマ上清は最適濃度を見つけるために滴定される）。プレートシーラーを適用して、プレートを終夜４℃でインキュベートする。一次抗体溶液を除去して、プレートを１×洗浄緩衝液１００μＬ／ウェルで３回洗浄する。
【０１５１】
ＨＲＰ抱合型ヤギ抗ヒト（またはマウス）ＩｇＧ＋ＩｇＭ＋ＩｇＡ二次抗体１００μＬ／ウェルを添加する。プレートを室温で３０分間インキュベートする。プレートを１×洗浄緩衝液２００μＬ／ウェルで３回洗浄する。
【０１５２】
ＴＭＢ基質１００μＬ／ウェルを添加して、プレートを室温でインキュベートして、光から保護する。１５分以内に（または所望の青色が得られたときに）ＴＭＢ停止溶液１００μＬ／ウェルを添加することにより、反応を停止する。４５０ｎｍの吸収度を、反応停止の３０分以内に測定する（図５を参照）。
【０１５３】
上記のとおりインキュベーション後α−ＧａｌＢＯＥＬはＣＨＯ−Ｋ１細胞表面上に検出され得ることが、図５からわかる。
【０１５４】
実施例３：補体付着アッセイ
１×１０６Ｂ１６−Ｆ１０及びＣＨＯ−Ｋ１細胞を成長する培養物から収集して、１時間３７℃でＰＢＳのαＧａｌＢＯＥＬ５００μｇ／ｍｌでインキュベートし、その後細胞を３回ＰＢＳで洗浄した。ＣＨＯ−Ｋ１を洗浄した後、細胞を３７℃１０分間、２．５％通常（ＮＨＳ）または熱不活性（ＨＩ  ＮＨＳ）ヒト血清でインキュベートした。Ｂ１６−Ｆ１０細胞を１０分間３７℃で、通常ＧＴ−／−マウス（ＮＭＳ）からの２．５％血清で、またはブタ腎臓ホモジネート免疫感作マウス（Ｉ  ＮＭＳ）からの２．５％血清でインキュベートした。細胞を氷上に置き、氷冷細胞染色緩衝液（ＰＢＳ＋０．１％ＢＳＡ）で２回洗浄した。抗Ｃ３ｂ（Ｃ３ｂ、Ｐｉｅｒｃｅ  ＭＡＩ−７００５４、細胞染色緩衝液で１：１０００希釈）または抗ＳＣ５ｂ−９（ＭＡＣ、ＱｕｉｄｅｌＡ２３９、細胞染色緩衝液で１：１００希釈）で、３０分間氷上で細胞をインキュベートした。細胞を２回氷冷細胞染色緩衝液で洗浄して、ＦＩＴＣヤギ抗マウス抗ＩｇＧ（Ａｂｃａｍａｂ９７０２２、細胞染色緩衝液１：２０００で希釈）で３０分間氷上でインキュベートした。氷冷細胞染色緩衝液で更に２回洗浄した後、細胞を氷冷細胞染色緩衝液プラス７-ＡＡＤ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ４２０４０３）で再懸濁する。細胞をＢｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｃｙｔｏｍｉｃｓ  ＦＣ５００フローサイトメータを使用して分析し、データをＦＬ−１ｃｈａｎｎｅｌで捕獲した。ヒストグラムで示すデータは、生きた細胞でゲート制御される。
【０１５５】
α−ＧａｌＢＯＥＬの取り込みが、ＣＨＯ  Ｋ１（Ａ＆Ｂ）及びＢ１６マウス黒色腫細胞（Ｃ＆Ｄ）の表面上へヒトまたはマウス血清からの補体タンパク質Ｃ３ｂ及びＭＡＣの沈着を導くことを、図６は示す。
【０１５６】
実施例４：α１，３−ガラクトシルトランスフェラーゼノックアウト（ＧＴ  ＫＯ）マウス黒色腫モデルのｉｎ  ｖｉｖｏ活性α−ＧａｌＢＯＥＬ
ｉｎ  ｖｉｖｏ薬力学実験を実施して、Ｂ１６−Ｆ１０黒色腫細胞を有するＧＴ  ＫＯマウス黒色腫モデルのα−ＧａｌＢＯＥＬを評価した。ヒトのようにα−Ｇａｌ抗原を発現しないので、ＧＴ  ＫＯマウス株が選択された。その結果、ＧＴ  ＫＯマウスはブタ腎臓膜ホモジネートで免疫感作して、自然にヒトに見られるものと類似するＩｇＧ及びＩｇＭ抗Ｇａｌ抗体の力価を産生した。ブタ腎臓膜が細胞膜上及び細胞間マトリックス内の高濃度のa−Ｇａｌエピトープを含有するので、前記免疫応答は誘発される。α−Ｇａｌエピトープを発現しない唯一周知のマウス細胞であるので、Ｂ１６−Ｆ１０細胞が用いられた。
【０１５７】
Ｂ１６−Ｆ１０黒色腫モデルにおいて、マウスは両脇腹に培養Ｂ１６−Ｆ１０細胞を注射されて、原発腫瘍を産生するために片側に１×１０６黒色腫細胞を注射されて原発腫瘍を産生し、二次性腫瘍とも呼ばれる「遠隔転移」モデルを産生するために反対の脇腹に減少した細胞数（１×１０４黒色腫細胞）を注射した。原発腫瘍は腫瘍内でα−ＧａｌＢＯＥＬを注射されて、または既定の腫瘍直径に到達したとき溶媒コントロールを注射される。記録される臨界点は「遠隔」腫瘍の増殖であり、これを使用して、体全体の有効な保護性抗腫瘍免疫応答を誘発する薬剤の能力を測定する。α−ＧａｌＢＯＥＬ０．１〜２．５ｍｇ用量を試験した。１００μＬ溶媒中α−ＧａｌＢＯＥＬ０．１ｍｇ〜１ｍｇ用量をＢ１６−Ｆ１０モデルで並べて試験したとき、α−ＧａｌＢＯＥＬの用量依存性活性応答を観察した。図７に例示されるように、１ｍｇのα−ＧａｌＢＯＥＬは、０．１ｍｇ及び０．５ｍｇの用量より高いレベルの保護を一貫して与えた。
【０１５８】
ブタ腎臓膜ホモジネートを有するＧＴ  ＫＯマウスの免疫化は、Ｂ１６−Ｆ１０黒色腫モデルの遠位腫瘍発現からのα−ＧａｌＢＯＥＬ介在保護を付与するのに必要である、抗ＧａｌＩｇＧ及びＩｇＭ抗体の産生を誘発することも示されている。図８でわかるように、１ｍｇのα−ＧａｌＢＯＥＬは、二次性腫瘍発現から抗Ｇａｌ発現ＧＴ  ＫＯマウスの８０％を保護した。これに対して、１ｍｇのα−ＧａｌＢＯＥＬは、非免疫感作ＧＴ  ＫＯマウス（すなわち抗Ｇａｌを欠如するマウス）の保護活性化を欠いた。これらの観察は、遠隔転移の発現に対する保護性抗腫瘍免疫応答のα−ＧａｌＢＯＥＬ介在誘発は治療対象の抗Ｇａｌの存在に依存していることを示す。抗Ｇａｌの不存在下で、著しい保護性抗腫瘍免疫応答は観察されない。
【０１５９】
実施例５：α−ＧａｌＢＯＥＬ及び抗ＰＤ−１抗体の組み合わせは、抗ＰＤ−１抗体単独上に優れたｉｎ  ｖｉｖｏ活性を示す。
チェックポイントが抗腫瘍免疫応答を負に調整する際、Ｔ細胞上の２つの受容体ＰＤ−１及びＣＴＬＡ−４が機能することを、数々の証拠は示唆する。同時に、ＰＤ−１及びＣＴＬＡ−４を標的とする治療抗体薬剤の基準は、臨床試験の進行性黒色腫の治療用の見込みを示している。合成糖脂質α−ＧａｌＢＯＥＬの抗腫瘍効果は、免疫学的チェックポイント阻害剤、すなわち上述のＧＴＫＯマウス黒色腫モデルの抗ＰＤ−１モノクローナル抗体（ｍＡｂ）と結合して強化され得るか試験された。プロセシングされた腫瘍抗原ペプチドを示す抗原提示細胞により誘発される腫瘍特異的Ｔ細胞の初期増殖は、抗ＰＤ１モノクローナル抗体など免疫学的チェックポイントの阻害により強化されることができると推定される。したがって、α−ＧａｌＢＯＥＬ及び抗ＰＤ１抗体の両方を有する、腫瘍を保持する対象の複合治療は、これらの２つの治療のうちの１つだけで治療される対象より効果的であると考えられる。
【０１６０】
この仮定を研究するために、原発腫瘍を作成するため１つの脇腹に１０６Ｂ１６−Ｆ１０腫瘍細胞を、転移状二次腫瘍を誘発するために反対の脇腹に１０４Ｂ１６−Ｆ１０細胞を、マウスはチャレンジされた。腫瘍細胞注入の５日後、原発腫瘍は、α−ＧａｌＢＯＥＬ０．１ｍｇ及び０．２５ｍｇ（図７の実験の１．０ｍｇの代わりに）またはＰＢＳ（＝溶媒コントロール）のみで腫瘍内で治療された。８日目または１０日目にマウスは、２５０μｇの抗ＰＤ−１モノクローナル抗体ＲＭＰ１−１４（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ（カタログ番号１１４１０２））で、またはＰＢＳで腹腔内で治療された。注目すべきは、クローンＲＭＰ１−１４は、腫瘍モデルの抗ＰＤ−１効果を調査するためにいくつかの研究で使用された。抗ＰＤ−１または溶媒での治療は、各実験で３回繰り返された（マウスは合計４回の２５０μｇ用量を受けた）。図９でわかるように、α−ＧａｌＢＯＥＬと抗ＰＤ−１の組み合わせは、α−ＧａｌＢＯＥＬ及び抗ＰＤ−１抗体単独と比較して、遠隔転移の増殖を防止することに関して優れた活性を有した。抗ＰＤ−１はα−ＧａｌＢＯＥＬと相乗作用して、α−ＧａｌＢＯＥＬまたは抗ＰＤ１抗体を単独で使用する治療で観察されるより強力な保護性抗腫瘍免疫応答を誘発することを示した。
本件出願は、以下の構成の発明を提供する。 
（構成１）
腫瘍の治療に使用のための（９Ｚ，９’Ｚ）−（２Ｒ）−３−（（（２−（６−（（３−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−３−アセトアミド−５−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−３，５−ジヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）−４−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−４−ヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）プロピル）アミノ）−６−オキソヘキサンアミド）エトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルビス（オクタデカ−９−エノエート）を含む医薬組成物。
（構成２）
前記腫瘍が固体腫瘍、骨髄腫またはリンパ腫である、構成１に記載の使用のための組成物。
（構成３）
前記腫瘍が、腹膜、肝臓、膵臓、肺、膀胱、前立腺、子宮、子宮頸部、膣、骨髄、乳房、皮膚、脳、リンパ節、頭頸部、胃、腸、結腸、腎臓、精巣、及び卵巣から選択される臓器から生じる腫瘍である、構成１または構成２に記載の使用のための組成物。
（構成４）
前記腫瘍が原発腫瘍及び／または転移を含む、構成１〜３のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
（構成５）
前記腫瘍が黒色腫、肉腫、神経膠腫または癌細胞を含む、構成１〜３のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
（構成６）
注射による投与用である、構成１〜５のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
（構成７）
１回投与または複数回投与より投与される、構成１〜６のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
（構成８）
局所軟膏、局所ローションまたは局所溶液など局所適用である、構成１〜５のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
（構成９）
１つ以上の薬学的に許容される担体（複数を含む）、希釈剤（複数を含む）及び／または賦形剤（複数を含む）を更に含む、構成１〜８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
（構成１０）
１つ以上の追加の治療薬を更に含む、構成１〜９のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
（構成１１）
前記１つ以上の追加の治療薬が、抗ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１及びＰＤ−Ｌ１抗体、特に特定の抗ＰＤ−１抗体など免疫系ダウンレギュレーションの１つ以上の全身性阻害剤を含む、構成１０に記載の使用のための組成物。
（構成１２）
対象の腫瘍を治療する方法であって、
ａ）ｉ）細胞表面を有する複数の癌細胞を含む、少なくとも１つの腫瘍を含む対象と、
ｉｉ）構成１〜１１のいずれか１つに記載の医薬組成物と、を提供することと、
ｂ）前記医薬組成物を前記腫瘍内に導入することと、を含む、前記方法。
（構成１３）
前記対象がヒトなどヒトまたはマウスである、構成１２に記載の方法。
（構成１４）
前記導入する工程が、注射、画像誘導注射、内視鏡、気管支鏡、膀胱鏡、結腸鏡、腹腔鏡、及びカテーテルから選択される方法を含む、構成１２または構成１３に記載の方法。
（構成１５）
腫瘍内炎症を誘発することを更に含む、構成１２〜１４のいずれか一項に記載の方法。
（構成１６）
前記対象が、外科的に腫瘍を除去するために以前治療された、構成１２〜１５のいずれか一項に記載の方法。
（構成１７）
前記対象が、腫瘍を除去するために以前治療されていない、構成１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
（構成１８）
前記腫瘍が退縮を起こす、または破壊される、構成１２〜１７のいずれか一項に記載の方法。
（構成１９）
前記導入する工程が対象の二次性腫瘍の退縮または破壊をさらに含む、構成１２〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【図１】
0006490195.tif 000005
【図２】
0006490195.tif 000006
【図３】
0006490195.tif 000007
【図４】
0006490195.tif 000008
【図５】
0006490195.tif 000009
【図６−０１】
0006490195.tif 000010
【図６−０２】
0006490195.tif 000011
【図７】
0006490195.tif 000012
【図８】
0006490195.tif 000013
【図９】
0006490195.tif 000014