(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体において癌を治療するための、プログラム死１タンパク質（ＰＤ−１）のアンタゴニストと組合せて使用されるジナシクリブ化合物を含む医薬であって、ジナシクリブ化合物が式Ｉ
【化１】
0006586087.tif 000009
の化合物または式Ｉの化合物の医薬上許容される塩であり、
ここで、ＰＤ−１アンタゴニストが、重鎖および軽鎖を含む抗ＰＤ−１モノクローナル抗体であり、重鎖および軽鎖が、それぞれ配列番号２１および配列番号２２を含む、医薬。
【請求項２】
癌が固形腫瘍である、請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
癌がヘム悪性疾患である、請求項１又は２に記載の医薬。
【請求項４】
ＰＤ−１アンタゴニストがＭＫ−３４７５である、請求項１〜３のいずれか１項記載の医薬。
【請求項５】
ＭＫ−３４７５が、２５ｍｇ／ｍｌ  ＭＫ−３４７５、７％（ｗ／ｖ）スクロース、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０を１０ｍＭ  ヒスチジンバッファー（ｐＨ５．５）中に含む液体医薬として製剤化される、請求項４記載の医薬。
【請求項６】
ジナシクリブ化合物が、５ｍｇ／ｍＬの式Ｉの化合物をｐＨ３．０〜４．２の無菌水性クエン酸緩衝溶液中に含む液体医薬として製剤化される、請求項１記載の医薬。
【請求項７】
癌が、膀胱癌、乳癌、明細胞腎癌、頭／頸部扁平上皮癌、肺扁平上皮癌、悪性黒色腫、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎細胞癌、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、三重陰性乳癌、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、骨髄性細胞白血病−１タンパク質（Ｍｃｌ−１）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）または小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）である、請求項１〜６のいずれか１項記載の医薬。
【請求項８】
第１容器、第２容器およびパッケージインサートを含む癌の治療用のキットであって、第１容器が、プログラム死１タンパク質（ＰＤ−１）のアンタゴニストを含む医薬の少なくとも１用量を含み、第２容器が、ジナシクリブ化合物を含む医薬の少なくとも１用量を含み、パッケージインサートが医薬を使用して癌に対して個体を治療するための指示書を含み、ジナシクリブ化合物が式Ｉ
【化２】
0006586087.tif 000010
の化合物であり、
ここで、ＰＤ−１アンタゴニストが、重鎖および軽鎖を含む抗ＰＤ−１モノクローナル抗体であり、重鎖および軽鎖が、それぞれ配列番号２１および配列番号２２を含み、
そしてここで、指示書が、医薬が、免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイによりＰＤ−Ｌ１発現に関して陽性試験結果を示す癌を有する個体の治療における使用を意図したものであることを示している、癌の治療用のキット。
【請求項９】
ＰＤ−１アンタゴニストがＭＫ−３４７５である、請求項８記載のキット。
【請求項１０】
癌が、膀胱癌、乳癌、明細胞腎癌、頭／頸部扁平上皮癌、肺扁平上皮癌、悪性黒色腫、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎細胞癌、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、三重陰性乳癌、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、骨髄性細胞白血病−１タンパク質（Ｍｃｌ−１）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）または小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）である、請求項８又は９記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は癌の治療に有用な組合せ療法（併用療法）に関する。特に、本発明は、プログラム死１タンパク質（ＰＤ−１）アンタゴニストと、ｐａｎサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）インヒビターであるジナシクリブ（ｄｉｎａｃｉｃｌｉｂ）とを含む組合せ療法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＰＤ−１は免疫調節および末梢性免疫寛容の維持における重要な担い手として認識されている。ＰＤ−１は、ナイーブＴ、ＢおよびＮＫＴ細胞上で中等度に発現され、リンパ球、単球および骨髄性細胞上のＴ／Ｂ細胞受容体シグナリングによりアップレギュレーションされる（１）。
【０００３】
種々の組織において生じるヒト癌において、ＰＤ−１に対する２つの公知リガンド、すなわち、ＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１）およびＰＤ−Ｌ２（Ｂ７−ＤＣ）が発現される。例えば卵巣、腎臓、結腸直腸、膵臓、肝臓癌およびメラノーマの大きなサンプルセットにおいて、ＰＤ−Ｌ１発現が、後続治療には無関係に、予後不良および全体的な生存の低下と相関することが示された（２−１３）。同様に、腫瘍浸潤性リンパ球上のＰＤ−１発現は乳癌およびメラノーマにおける機能不全Ｔ細胞の指標となり（１４−１５）、腎臓癌における予後不良と相関することが判明した（１６）。したがって、ＰＤ−Ｌ１を発現する腫瘍細胞は、ＰＤ−１を発現するＴ細胞と相互作用して、Ｔ細胞活性化の低減および免疫監視の回避をもたらし、それにより腫瘍に対する免疫応答の低下に寄与することが提示されている。
【０００４】
ＰＤ−１とそのリガンドであるＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の一方または両方との間の相互作用を阻害する幾つかのモノクローナル抗体は癌治療のために臨床開発中である。そのような抗体の有効性は、他の承認された又は実験的な癌治療、例えば放射線、手術、化学療法剤、標的化療法、腫瘍において調節不全となる他のシグナリング経路を阻害する物質および他の免疫増強剤と組合されて投与された場合に増強されうると提案されている。
【０００５】
細胞周期制御の調節不全は全てのヒト癌の特徴であり、サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）の異常活性化／調節にしばしば関連している。しかし、ＣＤＫカスケードは、コンテクスト依存的にＴ細胞の適切な機能を維持するのに重要である。よって、抗癌剤としてのＣＤＫインヒビター（ＣＫＤＩ）の開発は免疫細胞毒性およびそれによる免疫抑制効果の可能性により複雑化されている（１７）。ＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ５およびＣＤＫ９を選択的に阻害するｐａｎ−ＣＤＫインヒビターであるジナシクリブは種々の癌における潜在的療法として研究されており、好中球減少が、臨床試験において観察される最もよく見られる用量制限性毒性である（１７，１８）。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、一部には、担癌マウスへのジナシクリブとマウス化抗マウスＰＤ−１抗体との併用投与がいずれかの物質の単独の場合と比較して有意に高い抗腫瘍効果をもたらしたという驚くべき知見に基づくものである。この知見は予想外であった。なぜなら、転写および細胞増殖を強く阻害するジナシクリブの公知の活性は、腫瘍に存在しリクルートされるＴ細胞の活性化および増殖に主に関わっていると考えられる抗ＰＤ−１療法の有効性を相殺すると予想されたからである。
【０００７】
したがって、１つの実施形態において、本発明は、ＰＤ−１アンタゴニストとジナシクリブ（ｄｉｎａｃｉｃｌｉｂ）化合物とを含む組合せ療法を個体に投与することを含む、個体における癌の治療方法を提供する。
【０００８】
もう１つの実施形態において、本発明は、癌を治療するための、ジナシクリブ化合物と組合せて使用されるＰＤ−１アンタゴニストを含む医薬を提供する。
【０００９】
更にもう１つの実施形態において、本発明は、癌を治療するための、ＰＤ−１アンタゴニストと組合せて使用されるジナシクリブ化合物を含む医薬を提供する。
【００１０】
他の実施形態は、ジナシクリブ化合物と組合せて投与される場合の、個体において癌を治療するための医薬の製造におけるＰＤ−１アンタゴニストの使用、およびＰＤ−１アンタゴニストと組合せて投与される場合の、個体において癌を治療するための医薬の製造におけるジナシクリブ化合物の使用を提供する。
【００１１】
更にもう１つの実施形態において、本発明は、個体において癌を治療するための医薬の製造におけるＰＤ−１アンタゴニストおよびジナシクリブ化合物の使用を提供する。幾つかの好ましい実施形態において、医薬はキットを含み、キットは、個体において癌を治療するためのジナシクリブ化合物と組合されたＰＤ−１アンタゴニストを使用するための指示書を含むパッケージインサートをも含む。
【００１２】
前記治療方法、医薬および使用の全てにおいて、ＰＤ−１アンタゴニストはＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合を阻害し、好ましくは、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合を阻害する。前記治療方法、医薬および使用の幾つかの好ましい実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に特異的に結合しＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合を遮断するモノクローナル抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの特に好ましい実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、重鎖および軽鎖を含む抗ＰＤ−１抗体であり、ここで、重鎖および軽鎖は、図６（配列番号２１および配列番号２２）に示されているアミノ酸配列を含む。
【００１３】
治療方法、医薬および使用の前記実施形態の全てにおいて、ジナシクリブ化合物は式Ｉ
【化１】
0006586087.tif 000002
【００１４】
の化合物または式Ｉの化合物の医薬上許容される塩である。
【００１５】
本発明の前記治療方法、医薬および使用の幾つかの実施形態において、個体はヒトであり、癌は固形腫瘍であり、幾つかの好ましい実施形態において、固形腫瘍は、膀胱癌、乳癌、明細胞腎癌、頭／頸部扁平上皮癌、肺扁平上皮癌、悪性黒色腫、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎細胞癌、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）または三重陰性乳癌である。幾つかの好ましい実施形態においては、癌はイピリムマブ（ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）ナイーブ進行性黒色腫であり、他の好ましい実施形態において、ヒトはイピリムマブ難治性進行性黒色腫を有する。
【００１６】
本発明の前記治療方法、医薬および使用の他の実施形態において、個体はヒトであり、癌はヘム（Ｈｅｍｅ）悪性疾患であり、幾つかの好ましい実施形態において、ヘム悪性疾患は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、ＥＢＶ陽性ＤＬＢＣＬ、縦隔原発Ｂ細胞性大細胞型リンパ腫、Ｔ細胞／組織球リッチ（ｒｉｃｈ）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、骨髄性細胞白血病−１タンパク質（Ｍｃｌ−１）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）または小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）である。
【００１７】
また、前記治療方法、医薬および使用のいずれかの好ましい実施形態においては、癌はＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の一方または両方を発現する。特に好ましい実施形態においては、ＰＤ−Ｌ１の発現が癌において上昇している。
【００１８】
前記治療方法、医薬および使用の特に好ましい実施形態の１つにおいては、個体はヒトであり、癌は、ヒトＰＤ−Ｌ１を発現する慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）である。
【００１９】
詳細な説明
略語
本発明の詳細な説明および実施例の全体にわたって、以下の略語を用いる：
ＣＤＲ      相補性決定領域
ＣＨＯ      チャイニーズハムスター卵巣
ＦＦＰＥ    ホルマリン固定パラフィン包埋
ＦＲ        フレームワーク領域
ＩｇＧ      免疫グロブリンＧ
ＩＨＣ      免疫組織化学または免疫組織化学的
Ｑ２Ｗ      ２週間ごとに１用量
Ｑ３Ｗ      ３週間ごとに１用量
ＶＨ        免疫グロブリン重鎖可変領域
ＶＫ        免疫グロブリンカッパ軽鎖可変領域
Ｉ．定義
本発明がより容易に理解されうるように、ある科学技術用語を以下に明確に定義する。本明細書中の他の箇所において特に示されていない限り、本明細書中で用いられる全ての他の科学技術用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解されている意味を有する。
【００２０】
添付の特許請求の範囲を含む本明細書において用いる、”ａ”、”ａｎ”および”ｔｈｅ”のような単数形の単語は、文脈に明らかに矛盾しない限り、それらの複数形対象物を含む。
【００２１】
「投与」および「治療（処理）」は、それが動物、ヒト、実験対象、細胞、組織、器官または生物学的流体に適用される場合には、外因性医薬、治療用物質、診断剤または組成物の、動物、ヒト、対象、細胞、組織、器官または生物学的流体との接触を意味する。細胞の処理は、細胞との試薬の接触、および細胞に接触している流体との試薬の接触を含む。「投与」および「処理（治療）」は、試薬、診断薬、結合性化合物または別の細胞による、例えば細胞の、インビトロおよびエクスビボ（ｅｘ  ｖｉｖｏ）処理をも意味する。「対象（被験者）」なる語は、任意の生物、好ましくは動物、より好ましくは哺乳動物（例えば、ラット、マウス、イヌ、ネコ、ウサギ）、最も好ましくはヒトを含む。
【００２２】
本明細書中で用いる「抗体」なる語は、所望の生物活性または結合活性を示す抗体の任意の形態を意味する。したがって、それは最も広い意味で用いられ、特に、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ヒト化、完全ヒト抗体、キメラ抗体およびラクダ化単一ドメイン抗体を含むが、これらに限定されるものではない。「親抗体」は、ヒト用治療用物質として使用される抗体のヒト化のような意図される使用のための抗体の修飾前の、抗原への免疫系の曝露により得られる抗体である。
【００２３】
一般に、基本的な抗体構造単位は四量体を含む。各四量体は、ポリペプチド鎖の、２つの同一ペアから構成され、各ペアは１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識をもたらす約１００〜１１０個またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。重鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を主にもたらす定常領域を定めうる。典型的には、ヒト軽鎖はカッパおよびラムダ軽鎖として分類される。更に、ヒト重鎖は、典型的には、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファまたはイプシロンとして分類され、それぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥとして抗体のイソタイプを定める。軽鎖および重鎖においては、可変領域および定常領域は約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域により連結されており、重鎖は約１０個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域をも含む。全般的には、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．編，２ｎｄ  ｅｄ．Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい。
【００２４】
各軽／重鎖ペアの可変領域は抗体結合部位を形成する。したがって、一般に、無傷抗体は２つの抗原結合部位を有する。二官能性または二重特異性抗体の場合を除き、それらの２つの結合部位は一般に同じである。
【００２５】
典型的には、重鎖および軽鎖の両方の可変ドメインは、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）内に位置する、相補性決定領域（ＣＤＲ）とも称される３つの超可変領域を含む。ＣＤＲは、通常、特定のエピトープへの結合が可能になるように、フレームワーク領域により整列されている。一般に、Ｎ末端からＣ末端方向に、軽鎖および重鎖可変ドメインの両方はＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の帰属は、一般に、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｋａｂａｔら；Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．；５ｔｈ  ｅｄ．；ＮＩＨ  Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１−３２４２（１９９１）；Ｋａｂａｔ（１９７８）Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１−７５；Ｋａｂａｔら（１９７７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−６６１６；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８７）Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７またはＣｈｏｔｈｉａら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８８３の定義に基づいている。
【００２６】
本明細書中で用いる「超可変領域」なる語は、抗原結合をもたらす、抗体のアミノ酸残基を意味する。超可変領域は「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」（すなわち、軽鎖可変ドメイン内のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３ならびに重鎖可変ドメイン内のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３）からのアミノ酸残基を含む。Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（配列により抗体のＣＤＲ領域を定めている）を参照されたい。また、ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（構造により抗体のＣＤＲ領域を定めている）も参照されたい。本明細書中で用いる「フレームワーク」または「ＦＲ」残基なる語は、ＣＤＲ残基として本明細書中で定義されている超可変領域残基以外の可変ドメイン残基を意味する。
【００２７】
本明細書中で用いる「抗体フラグメント」または「抗原結合性フラグメント」は、特に示されていない限り、抗体の抗原結合性フラグメント、すなわち、完全長抗体により結合される抗原に特異的に結合する能力を保有する抗体フラグメント、例えば、１以上のＣＤＲ領域を保有するフラグメントを意味する。抗体結合性フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖフラグメント；ダイアボディ；直鎖状抗体；一本鎖抗体分子、例えばｓｃＦｖ；ナノボディ、ならびに抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００２８】
特定の標的タンパク質に「特異的に結合する」抗体は、他のタンパク質と比較してその標的への優先的結合を示す抗体であるが、この特異性は絶対的な結合特異性を要しない。抗体がその意図される標的に「特異的」だとみなされるのは、その結合が、例えば偽陽性のような望ましくない結果をもたらすことなく、サンプル中の標的タンパク質の存在を決定するものである場合である。本発明において有用な抗体またはその結合性フラグメントは、非標的タンパク質に対するアフィニティより少なくとも２倍大きな、好ましくは少なくとも１０倍大きな、より好ましくは少なくとも２０倍大きな、最も好ましくは少なくとも１００倍大きなアフィニティで標的タンパク質に結合するであろう。本明細書中で用いる抗体が、与えられたアミノ酸配列、例えば成熟ヒトＰＤ−１またはヒトＰＤ−Ｌ１分子のアミノ酸配列を含むポリペプチドに特異的に結合すると言えるのは、それが、その配列を含むポリペプチドには結合するが、その配列を欠くタンパク質には結合しない場合である。
【００２９】
「キメラ抗体」は、所望の生物活性を示す限り、重鎖および／または軽鎖の一部分が、特定の種（例えば、ヒト）に由来する又は特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応配列と同一または相同である一方で、鎖の残部が、別の種（例えば、マウス）に由来する又は別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応配列と同一または相同であるタンパク質抗体、ならびにそのような抗体のフラグメントを意味する。
【００３０】
「ヒト抗体」は、ヒト免疫グロブリンタンパク質配列のみを含む抗体を意味する。ヒト抗体は、マウスにおいて、またはマウス細胞において、またはマウス細胞由来のハイブリドーマにおいて産生された場合には、マウス炭水化物鎖を含有しうる。同様に、「マウス抗体」または「ラット抗体」は、それぞれ、マウスまたはラット免疫グロブリン配列のみを含む抗体を意味する。
【００３１】
「ヒト化抗体」は、非ヒト（例えば、マウス）抗体およびヒト抗体からの配列を含有する抗体の形態を意味する。そのような抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有する。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、超可変ループの全て又は実質的に全ては非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全て又は実質的に全てはヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）（典型的にはヒト免疫グロブリンのもの）の少なくとも一部分を含んでいてもよい。接頭辞「ｈｕｍ」、「ｈｕ」または「ｈ」は、ヒト化抗体を親げっ歯類抗体から区別するために、必要に応じて抗体クローンの名称に付加される。アフィニティを増加させるため、ヒト化抗体の安定性を増強するためまたは他の理由により、あるアミノ酸置換が含まれうるが、げっ歯類抗体のヒト化形態は、一般に、親げっ歯類抗体の同一ＣＤＲ配列を含む。
【００３２】
「癌」、「癌性」または「悪性」なる語は、無制御な細胞増殖により典型的に特徴づけられる、哺乳動物における生理的状態を意味し又は示す。癌の例には、癌腫、リンパ腫、白血病、芽腫および肉腫が含まれるが、これらに限定されるものではない。そのような癌の更に詳細な例には、扁平上皮癌、骨髄腫、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、神経膠腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、胃腸（管）癌、腎臓癌、卵巣癌、肝臓癌、リンパ芽球性白血病、リンパ性白血病、結腸直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、前立腺癌、甲状腺癌、メラノーマ（黒色腫）、軟骨肉腫、神経芽細胞腫、膵臓癌、多形性膠芽腫、子宮頸癌、脳の癌、胃癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、結腸癌および頭頸部癌が含まれる。本発明に従い治療されうる特に好ましい癌には、被検組織サンプルにおけるＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の一方または両方の発現の上昇により特徴づけられる癌が含まれる。
【００３３】
「生物療法剤」は、腫瘍の維持および／もしくは成長を支持する又は抗腫瘍免疫応答を抑制する生物学的経路におけるリガンド／受容体シグナリングを遮断する生物学的分子、例えば抗体または融合タンパク質を意味する。
【００３４】
本明細書中で用いる「ＣＤＲ」または「ＣＤＲｓ」は、特に示されていない限り、Ｋａｂａｔ（カバト）の番号付け系を用いて定められる、免疫グロブリン可変領域内の相補性決定領域を意味する。
【００３５】
「化学療法剤」は癌の治療において有用な化合物である。化学療法剤のクラスには、限定的なものではないが以下のものが含まれる：アルキル化剤、代謝拮抗剤、キナーゼ阻害剤、紡錘体毒植物アルカロイド、細胞毒性／抗腫瘍抗生物質、トポイソメラーゼインヒビター、光増感剤、抗エストロゲンおよび選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）、抗プロゲステロン、エストロゲン受容体ダウンレギュレーター（ＥＲＤ）、エストロゲン受容体アンタゴニスト、黄体形成ホルモン放出ホルモンアゴニスト、抗アンドロゲン、アロマターゼインヒビター、ＥＧＦＲインヒビター、ＶＥＧＦインヒビター、異常な細胞増殖または腫瘍成長に関連した遺伝子の発現を抑制するアンチセンスオリゴヌクレオチド。本発明の治療方法において有用な化学療法剤には、静細胞剤および／または細胞毒性剤が含まれる。
【００３６】
本明細書中で用いる「Ｃｌｏｔｈｉａ（クロチア）」は、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉら，ＪＭＢ  ２７３：９２７−９４８（１９９７）に記載されている抗体の番号付け系を意味する。
【００３７】
「保存的に修飾された変異体」または「保存的置換」は、タンパク質中のアミノ酸が、類似特性（例えば、電荷、側鎖サイズ、疎水性／親水性、バックボーンコンホメーションおよび剛性など）を有する他のアミノ酸により置換されることを意味し、この場合、この変化は、しばしば、タンパク質の生物活性または他の所望の特性を変化させずに施されうる。一般に、ポリペプチドの非必須領域における単一アミノ酸置換は生物活性を実質的に変化させない、と当業者は認識している（例えば、Ｗａｔｓｏｎら（１９８７）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅ，Ｔｈｅ  Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，ｐ．２２４（４ｔｈ  Ｅｄ．）を参照されたい）。また、構造的または機能的に類似したアミノ酸の置換は、生物活性を損なう可能性が低い。典型的な保存的置換を表３に記載する。
【表１】
0006586087.tif 000003
【００３８】
本明細書および特許請求の範囲の全体にわたって用いる「からなる」またはその変形、例えば「実質的にからなる」もしくは「実質的にからなり」は、任意の列挙されている要素または要素群の包含、および特定されている投与レジメ（投与計画）、方法または組成物の基本的または新規特性を実質的に変化させない、列挙されている要素と類似した又は異なる性質の他の要素の随意的包含を示す。非限定的な例としては、列挙されているアミノ酸配列から実質的になるＰＤ−１アンタゴニストは、結合性化合物の特性に実質的に影響を及ぼさない、１以上のアミノ酸残基の置換を含む、１以上のアミノ酸をも含みうる。
【００３９】
「診断用抗ＰＤ−Ｌモノクローナル抗体」は、ある哺乳類細胞の表面上で発現される示されているＰＤ−Ｌ（ＰＤ−Ｌ１またはＰＤＬ２）の成熟形態に特異的に結合するｍＡｂを意味する。成熟ＰＤ−Ｌは、リーダーペプチドとも称される前分泌リーダー配列を欠いている。「ＰＤ−Ｌ」および「成熟ＰＤ−Ｌ」なる語は本明細書中では互換的に用いられ、特に示されている又は文脈から容易に理解される場合を除き、同一分子を意味すると理解されるものとする。
【００４０】
本明細書中で用いる診断用抗ヒトＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂまたは抗ｈＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂは、成熟ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するモノクローナル抗体を意味する。成熟ヒトＰＤ−Ｌ１分子は以下の配列のアミノ酸１９−２９０からなる：ＭＲＩＦＡＶＦＩＦＭＴＹＷＨＬＬＮＡＦＴＶＴＶＰＫＤＬＹＶＶＥＹＧＳＮＭＴＩＥＣＫＦＰＶＥＫＱＬＤＬＡＡＬＩＶＹＷＥＭＥＤＫＮＩＩＱＦＶＨＧＥＥＤＬＫＶＱＨＳＳＹＲＱＲＡＲＬＬＫＤＱＬＳＬＧＮＡＡＬＱＩＴＤＶＫＬＱＤＡＧＶＹＲＣＭＩＳＹＧＧＡＤＹＫＲＩＴＶＫＶＮＡＰＹＮＫＩＮＱＲＩＬＶＶＤＰＶＴＳＥＨＥＬＴＣＱＡＥＧＹＰＫＡＥＶＩＷＴＳＳＤＨＱＶＬＳＧＫＴＴＴＴＮＳＫＲＥＥＫＬＦＮＶＴＳＴＬＲＩＮＴＴＴＮＥＩＦＹＣＴＦＲＲＬＤＰＥＥＮＨＴＡＥＬＶＩＰＥＬＰＬＡＨＰＰＮＥＲＴＨＬＶＩＬＧＡＩＬＬＣＬＧＶＡＬＴＦＩＦＲＬＲＫＧＲＭＭＤＶＫＫＣＧＩＱＤＴＮＳＫＫＱＳＤＴＨＬＥＥＴ（配列番号２５）。
【００４１】
ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）腫瘍組織切片におけるＰＤ−Ｌ１発現の免疫組織化学（ＩＨＣ）検出のための診断用ｍＡｂとして有用な診断用抗ヒトＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂの具体例としては、抗体２０Ｃ３および抗体２２Ｃ３が挙げられ、これらは２０１２年１２月出願の同時係属米国仮特許出願第６１／７４５３８６号に記載されている。これらの抗体は、以下の表２に示されている軽鎖および重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
【表２】
0006586087.tif 000004
【００４２】
ＦＦＰＥ組織切片におけるＰＤ−Ｌ１発現のＩＨＣ検出に有用であると報告されているもう１つの抗ヒトＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂ（Ｃｈｅｎ，Ｂ．Ｊ．ら，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １９：３４６２−３４７３（２０１３））は、Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，Ｉｎｃ．（Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ；カタログ番号１００８４−Ｒ０１５）から公に入手可能なウサギ抗ヒトＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂである。
【００４３】
「ジナシクリブ化合物」は式Ｉの化合物および式Ｉの化合物の医薬上許容される塩を意味する。ジナシクリブの化学名は、１−［３−エチル−７−［［（１−オキシド−３−ピリジニル）メチル］アミノ］ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−５−イル］−２−（Ｓ）−ピペリジンエタノールである。この化合物は、米国特許第７，１１９，２００号に記載されているとおりに、あるいは当業者に容易に理解されるいずれかの他の合成経路で合成されうる。
【００４４】
特に示されていない限り、本明細書における式Ｉの化合物に対する言及はその塩に対する言及を含むと理解される。本明細書中で用いる「塩」なる語は、無機酸および／または有機酸で形成される酸性塩、ならびに無機塩基および／または有機塩基で形成される塩基性塩を示す。また、式Ｉの化合物が塩基部分（限定的なものではないが例えば、ピリジンまたはイミダゾール）と酸性部分（限定的なものではないが例えば、カルボン酸）との両方を含む場合、両性イオン（「内部塩」）が形成されることがあり、本明細書中で用いる「塩」なる語に含まれる。式Ｉの化合物の医薬上許容される塩は、例えば、塩が沈殿する媒体のような媒体または水性媒体中で、式Ｉの化合物を酸または塩基の或る量（例えば、同等量）と反応させ、ついで凍結乾燥させることにより形成されうる。
【００４５】
式Ｉの化合物の典型的な酸付加塩には、酢酸塩、アスコルビン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、硫酸水素塩、ホウ酸塩、酪酸、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、カンファースルホン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフタレンスルホン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、リン酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩（トシル酸塩としても公知である）などが含まれる。また、塩基性医薬化合物からの医薬上有用な塩の形成に適していると一般にみなされる酸は、例えば、Ｓ．Ｂｅｒｇｅら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９７７）６６（１）１−１９；Ｐ．Ｇｏｕｌｄ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊ．ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ（１９８６）３３  ２０１−２１７；Ａｎｄｅｒｓｏｎら，Ｔｈｅ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９６），Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；およびＴｈｅ  Ｏｒａｎｇｅ  Ｂｏｏｋ（Ｆｏｏｄ  ＆  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．（そのウェブサイト上））に記載されている。これらの開示を参照により本明細書に組み入れることとする。
【００４６】
式Ｉの化合物の典型的な塩基性塩には、アンモニウム塩、アルカリ金属塩、例えばナトリウム、リチウムおよびカリウム塩、アルカリ土類金属塩、例えばカルシウムおよびマグネシウム塩、有機塩基（例えば、有機アミン）、例えばジシクロヘキシルアミン、ｔ−ブチルアミンとの塩、ならびにアミノ酸、例えばアルギニン、リジンなどとの塩が含まれる。塩基性窒素含有基は、ハロゲン化低級アルキル（例えば、塩化、臭化およびヨウ化メチル、エチルおよびブチル）、硫酸ジアルキル（例えば、硫酸ジメチル、ジエチルおよびジブチル）、長鎖ハロゲン化物（例えば、塩化、臭化およびヨウ化デシル、ラウリルおよびステアリル）、ハロゲン化アラルキル（例えば、臭化ベンジルおよびフェネチル）などのような物質で四級化されうる。
【００４７】
全てのそのような酸塩および塩基塩は、本発明において使用されるジナシクリブ化合物の範囲内の医薬上許容される塩であると意図され、全ての酸および塩基塩は本発明の目的において対応化合物の遊離形態と同等であるとみなされる。
【００４８】
式Ｉの化合物のプロドラッグも、本発明の方法、医薬および使用における使用に想定される。本明細書中で用いる「プロドラッグ」なる語は、対象への投与に際して代謝的または化学的過程により化学的変換を受けて式Ｉの化合物またはその塩を与える薬物前駆体である化合物を示す。プロドラッグの考察はＴ．ＨｉｇｕｃｈｉおよびＶ．Ｓｔｅｌｌａ，Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９８７）１４  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  ＳｅｒｉｅｓならびにＢｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，（１９８７）Ｅｄｗａｒｄ  Ｂ．Ｒｏｃｈｅ編，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ（それらを共に参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されている。
【００４９】
本明細書中で用いる「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、ＣＤＲ領域以外の免疫グロブリン可変領域を意味する。
【００５０】
「相同性」は、最適にアライメント（整列）された２つのポリペプチド配列の間の配列類似性を意味する。それらの２つの比較される配列の両方における位置が同一アミノ酸単量体サブユニットにより占拠されている場合、例えば、２つの異なるＡｂの軽鎖ＣＤＲがアラニンにより占拠されている場合、それらの２つのＡｂはその位置において相同である。相同性の割合（％）は、２つの配列により共有される相同位置の数を、比較される位置の総数で割り算し、１００を掛け算したものである。例えば、２つの配列における位置の１０個中８個が、それらの配列が最適にアライメントされた場合に一致（マッチ）している又は相同である場合、それらの２つの配列は８０％相同である。一般に、比較は、最大相同性（％）を与えるように２つの配列がアライメントされた場合に行われる。例えば、比較はＢＬＡＳＴアルゴリズムにより実施可能であり、この場合、アルゴリズムのパラメータは、それぞれの参照配列の全長にわたってそれぞれの配列間で最大マッチが得られるように選択される。
【００５１】
以下の参考文献は、配列分析にしばしば使用されるＢＬＡＳＴアルゴリズムに関するものである：ＢＬＡＳＴ  ＡＬＧＯＲＩＴＨＭＳ：Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０；Ｇｉｓｈ，Ｗ．ら（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．３：２６６−２７２；Ｍａｄｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．ら（１９９６）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：１３１−１４１；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２；Ｚｈａｎｇ，Ｊ．ら（１９９７）Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．７：６４９−６５６；Ｗｏｏｔｔｏｎ，Ｊ．Ｃ．ら（１９９３）Ｃｏｍｐｕｔ．Ｃｈｅｍ．１７：１４９−１６３；Ｈａｎｃｏｃｋ，Ｊ．Ｍ．ら（１９９４）Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．１０：６７−７０；ＡＬＩＧＮＭＥＮＴ  ＳＣＯＲＩＮＧ  ＳＹＳＴＥＭＳ：Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．ら，“Ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｃｈａｎｇｅ  ｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ”，Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（１９７８）ｖｏｌ．５，ｓｕｐｐｌ．３．Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ（編），ｐｐ．３４５−３５２，Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ；Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｒ．Ｍ．ら，“Ｍａｔｒｉｃｅｓ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｄｉｓｔａｎｔ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ”．Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，（１９７８）ｖｏｌ．５，ｓｕｐｐｌ．３”．Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ（編），ｐｐ．３５３−３５８，Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．，（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１９：５５５−５６５；Ｓｔａｔｅｓ，Ｄ．Ｊ．ら（１９９１）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３：６６−７０；Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｓ．ら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１０９１５−１０９１９；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら（１９９３）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．３６：２９０−３００；ＡＬＩＧＮＭＥＮＴ  ＳＴＡＴＩＳＴＩＣＳ：Ｋａｒｌｉｎ，Ｓ．ら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：２２６４−２２６８；Ｋａｒｌｉｎ，Ｓ．ら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：５８７３−５８７７；Ｄｅｍｂｏ，Ａ．ら（１９９４）Ａｎｎ．Ｐｒｏｂ．２２：２０２２−２０３９；およびＡｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．“Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｌｏｃａｌ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ”．Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓ．Ｓｕｈａｉ編），（１９９７）ｐｐ．１−１４，Ｐｌｅｎｕｍ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ。
【００５２】
「単離された抗体」および「単離された抗体フラグメント」は精製状態を指し、そのような文脈において、挙げられている分子が、他の生物学的分子、例えば核酸、タンパク質、脂質、炭水化物、または他の物質、例えば細胞残渣および増殖培地を実質的に含有しないことを意味する。一般に、「単離（された）」なる語は、そのような物質の完全な非存在、または水、バッファーもしくは塩の非存在を意味するものではないが、それらは、本明細書に記載されている結合性化合物の実験用途または治療用途を実質的に妨げる量で存在してはならない。
【００５３】
本明細書中で用いる「Ｋａｂａｔ（カバト）」は、Ｅｌｖｉｎ  Ａ．Ｋａｂａｔ（（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）により開拓された免疫グロブリンのアライメントおよび番号付け系を意味する。
【００５４】
本明細書中で用いる「モノクローナル抗体」または「ｍＡｂ」または「Ｍａｂ」なる語は実質的に均一な抗体の集団を意味し、すなわち、集団を構成する抗体分子は、僅かな量で存在しうる考えられうる自然突然変異以外は、アミノ酸配列において同一である。これとは対照的に、通常の（ポリクローナル）抗体調製物は、典型的には、異なるエピトープに対して特異的であることが多い可変ドメイン、特にＣＤＲ内に異なるアミノ酸配列を有する多数の異なる抗体を含む。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体集団から得られるという抗体の特性を示しており、いずれかの特定の方法による抗体の製造を要するとは解釈されない。例えば、本発明に従い使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６，４９５により最初に記載されたハイブリドーマ法により製造可能であり、あるいは組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）により製造可能である。また、「モノクローナル抗体」は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８およびＭａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ  ２２２：５８１−５９７に記載されている技術を用いて、ファージ抗体ライブラリーから単離されうる。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１も参照されたい。
【００５５】
「患者」または「対象」は、治療が望まれる又は臨床試験、疫学調査に参加している又は対照として用いられるいずれかの単一の対象を意味し、ヒトおよび哺乳類獣医患者、例えばウシ、ウマ、イヌおよびネコを含む。
【００５６】
「ＰＤ−１アンタゴニスト」は、免疫細胞（Ｔ細胞、Ｂ細胞またはＮＫＴ細胞）上で発現されるＰＤ−１への、癌細胞上で発現されるＰＤ−Ｌ１の結合を遮断する、そして好ましくはまた、免疫細胞により発現されるＰＤ−１への、癌細胞上で発現されるＰＤ−Ｌ２の結合を遮断する任意の化合物または生物学的分子を意味する。ＰＤ−１およびそのリガンドの別名または同義語には、ＰＤ−１に関するＰＤＣＤ１、ＰＤ１、ＣＤ２７９およびＳＬＥＢ２；ＰＤ−Ｌ１に関するＰＤＣＤ１Ｌ１、ＰＤＬ１、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７−４、ＣＤ２７４およびＢ７−Ｈ；ならびにＰＤ−Ｌ２に関するＰＤＣＤ１Ｌ２、ＰＤＬ２、Ｂ７−ＤＣ、ＢｔｄｃおよびＣＤ２７３が含まれる。ヒト個体が治療される本発明の治療方法、医薬および使用のいずれにおいても、ＰＤ−１アンタゴニストはヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１の結合を遮断し、そして好ましくは、ヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の両方の結合を遮断する。ヒトＰＤ−１アミノ酸配列はＮＣＢＩローカス（Ｌｏｃｕｓ）番号：ＮＰ ００５００９において見出されうる。ヒトＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２アミノ酸配列は、それぞれ、ＮＣＢＩローカス番号ＮＰ ０５４８６２およびＮＰ ０７９５１５において見出されうる。
【００５７】
本発明の治療方法、医薬および使用のいずれかにおいて有用なＰＤ−１アンタゴニストには、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する、そして好ましくは、ヒトＰＤ−１またはヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）またはその抗原結合性フラグメントが含まれる。ｍＡｂはヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体であることが可能であり、ヒト定常領域を含みうる。幾つかの実施形態において、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４定常領域からなる群から選択され、好ましい実施形態において、ヒト定常領域はＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常領域である。幾つかの実施形態において、抗原結合性フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖおよびＦｖフラグメントからなる群から選択される。
【００５８】
ヒトＰＤ−１に結合し、本発明の治療方法、医薬および使用において有用なｍＡｂの例は、ＵＳ７５２１０５１、ＵＳ８００８４４９およびＵＳ８３５４５０９に記載されている。本発明の治療方法、医薬および使用におけるＰＤ−１アンタゴニストとして有用な具体的な抗ヒトＰＤ−１  ｍＡｂには、ＷＨＯ  Ｄｒｕｇ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．２７，Ｎｏ．２，ｐｐ．１６１−１６２（２０１３）に記載されている構造を有し図６に示されている重鎖および軽鎖アミノ酸配列を含むヒト化ＩｇＧ４  ｍＡｂであるＭＫ−３４７５、ＷＨＯ  Ｄｒｕｇ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．２７，Ｎｏ．１，ｐｐ．６８−６９（２０１３）に記載されている構造を有し図７に示されている重鎖および軽鎖アミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ４  ｍＡｂであるニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）（ＢＭＳ−９３６５５８）；ピジリズマブ（ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）（ｈＢＡＴまたはｈＢＡＴ−１としても公知であるＣＴ−０１１）；ならびにＷＯ２００８／１５６７１２に記載されているヒト化抗体ｈ４０９Ａ１１、ｈ４０９Ａ１６およびｈ４０９Ａ１７が含まれる。
【００５９】
ヒトＰＤ−Ｌ１に結合し、本発明の治療方法、医薬および使用において有用なｍＡｂの例は、ＷＯ２０１３／０１９９０６、ＷＯ２０１０／０７７６３４  Ａ１およびＵＳ８３８３７９６に記載されている。本発明の治療方法、医薬および使用においてＰＤ−１アンタゴニストとして有用な具体的な抗ヒトＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂには、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、ならびにＷＯ２０１３／０１９９０６のそれぞれ配列番号２４および配列番号２１の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗体が含まれる。
【００６０】
本発明の治療方法、医薬および使用のいずれかにおいて有用な他のＰＤ−１アンタゴニストには、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する、そして好ましくは、ヒトＰＤ−１またはヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するイムノアドヘシンが含まれ、例えば、免疫グロブリン分子のＦｃ領域のような定常領域に融合したＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２の細胞外またはＰＤ−１結合性部分を含有する融合タンパク質が含まれる。ＰＤ−１に特異的に結合するイムノアドヘシン分子の例は、ＷＯ２０１０／０２７８２７およびＷＯ２０１１／０６６３４２に記載されている。本発明の治療方法、医薬および使用におけるＰＤ−１アンタゴニストとして有用な特定の融合タンパク質には、ＰＤ−Ｌ２−ＦＣ融合タンパク質でありヒトＰＤ−１に結合するＡＭＰ−２２４（Ｂ７−ＤＣＩｇとしても公知）が含まれる。
【００６１】
本発明の治療方法、医薬および使用の幾つかの好ましい実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、（ａ）軽鎖ＣＤＲ  配列番号１、２および３ならびに重鎖ＣＤＲ  配列番号４、５および６、または（ｂ）軽鎖ＣＤＲ  配列番号７、８および９ならびに重鎖ＣＤＲ  配列番号１０、１１および１２、を含むモノクローナル抗体またはその抗原結合性フラグメントである。
【００６２】
本発明の治療方法、医薬および使用の他の好ましい実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ヒトＰＤ−１に特異的に結合し、（ａ）配列番号１３またはその変異体を含む重鎖可変領域と（ｂ）配列番号１５またはその変異体、配列番号１６またはその変異体および配列番号１７またはその変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含むモノクローナル抗体またはその抗原結合性フラグメントである。重鎖可変領域配列の変異体は、フレームワーク領域内（すなわち、ＣＤＲの外部）に１７個までの保存的アミノ酸置換を有すること、そして好ましくは、フレームワーク領域内に１０、９、８、７、６または５個未満の保存的アミノ酸置換を有すること以外は、参照配列と同一である。軽鎖可変領域配列の変異体は、フレームワーク領域内（すなわち、ＣＤＲの外部）に５個までの保存的アミノ酸置換を有すること、そして好ましくは、フレームワーク領域内に４、３または２個未満の保存的アミノ酸置換を有すること以外は、参照配列と同一である。
【００６３】
本発明の治療方法、医薬および使用のもう１つの好ましい実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ヒトＰＤ−１に特異的に結合し、（ａ）配列番号１４を含む重鎖と（ｂ）配列番号１８、配列番号１９または配列番号２０を含む軽鎖とを含むモノクローナル抗体である。
【００６４】
本発明の治療方法、医薬および使用の更にもう１つの好ましい実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ヒトＰＤ−１に特異的に結合し、（ａ）配列番号１４を含む重鎖と（ｂ）配列番号１８を含む軽鎖とを含むモノクローナル抗体である。
【００６５】
以下の表３は、本発明の治療方法、医薬および使用において使用される典型的な抗ＰＤ−１  ｍＡｂのアミノ酸配列の一覧を示し、配列は図１〜５に示されている。
【表３】
0006586087.tif 000005
【００６６】
本明細書中で用いる「ＰＤ−Ｌ１」または「ＰＤ−Ｌ２」発現は、細胞表面における示されているＰＤ−Ｌタンパク質の、または細胞もしくは組織内の示されているＰＤ−Ｌ  ｍＲＮＡのいずれかの検出可能なレベルの発現を意味する。ＰＤ−Ｌタンパク質発現は、腫瘍組織切片のＩＨＣアッセイにおける診断用ＰＤ−Ｌ抗体で、またはフローサイトメトリーにより検出されうる。あるいは、腫瘍細胞によるＰＤ−Ｌタンパク質発現は、所望のＰＤ−Ｌ標的、例えばＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２に特異的に結合する結合剤（例えば、抗体フラグメント、アフィボディなど）を使用して、ＰＥＴイメージングにより検出されうる。ＰＤ−Ｌ  ｍＲＮＡ発現を検出し測定するための技術には、ＲＴ−ＰＣＲおよびリアルタイム定量ＲＴ−ＰＣＲが含まれる。
【００６７】
腫瘍組織切片のＩＨＣアッセイにおけるＰＤ−Ｌ１タンパク質発現を定量するための幾つかのアプローチが記載されている。例えば、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｒ．Ｈ．ら，ＰＮＡＳ  １０１（４９）；１７１７４−１７１７９（２００４）；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｒ．Ｈ．ら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６６：３３８１−３３８５（２００６）；Ｇａｄｉｏｔ，Ｊ．ら，Ｃａｎｃｅｒ  １１７：２１９２−２２０１（２０１１）；Ｔａｕｂｅ，Ｊ．Ｍ．ら，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ４，１２７ｒａ３７（２０１２）；およびＴｏｐｌｉａｎ，Ｓ．Ｌ．ら，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ  Ｍｅｄ．３６６（２６）：２４４３−２４５４（２０１２）を参照されたい。
【００６８】
１つのアプローチは、ＰＤ−Ｌ１発現に関する陽性または陰性の単純な二成分（バイナリー）エンドポイントを用いるものであり、陽性結果は、細胞表面膜染色の組織学的証拠を示す腫瘍細胞の割合に関して定められる。腫瘍組織切片がＰＤ−Ｌ１発現に関して陽性とみなされるのは、全腫瘍細胞の少なくとも１％、好ましくは５％である場合である。
【００６９】
もう１つのアプローチにおいては、腫瘍組織切片におけるＰＤ−Ｌ１発現は、リンパ球を主に含む浸潤性免疫細胞および腫瘍細胞において定量される。膜染色を示す腫瘍細胞および浸潤性免疫細胞の割合は＜５％、５〜９％、そしてついで１０％の増量で１００％までとして別々に定量される。腫瘍細胞の場合、スコアが＜５％スコアであればＰＤ−Ｌ１発現は陰性とみなされ、スコアが＞５％であれば陽性とみなされる。免疫浸潤物におけるＰＤ−Ｌ１発現は、補正（ａｄｊｕｓｔｅｄ）炎症スコア（ＡＩＳ）と称される半定量的測定値として示され、これは膜染色細胞の百分率に浸潤物の強度を掛け算することにより決定され、これは、無し（０）、軽度（１のスコア、希少リンパ球）、中等度（２のスコア、リンパ組織球凝集物による腫瘍の病巣浸潤）または重度（３のスコア、びまん性浸潤）として評価される。ＡＩＳが＞５であれば、腫瘍組織切片は免疫浸潤物によるＰＤ−Ｌ１発現に関して陽性とみなされる。
【００７０】
診断用ＰＤ−Ｌ１抗体でＩＨＣにより染色された腫瘍からの組織切片は、２０１３年４月２日付け出願の同時係属出願第６１／８０７５８１号に記載されている新規評価法を用いて、組織切片における腫瘍細胞および浸潤性免疫細胞の両方におけるＰＤ−Ｌ１発現を評価することにより、ＰＤ−Ｌ１タンパク質発現に関しても評価されうる。このＰＤ−Ｌ１評価法は、染色のために組織切片中の各腫瘍巣を検査し、修飾Ｈスコア（ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｈ  ｓｃｏｒｅ）（ＭＨＳ）および修飾比率スコア（ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ  ｓｃｏｒｅ）（ＭＰＳ）の一方または両方を組織切片に帰属させることを含む。ＭＨＳを帰属させるために、被検腫瘍巣の全てにおける生存腫瘍細胞および染色単核炎症細胞の全てにわたって４つの別々の比率（百分率）を評価する：（ａ）染色を示さない細胞（強度＝０）、（ｂ）弱い染色（強度＝１＋）、（ｃ）中等度の染色（強度＝２＋）および（ｄ）強い染色（強度＝３＋）。細胞は、弱い、中等度または強い染色比率に含まれるためには、少なくとも部分的な膜染色を有していなければならない。ついで、総和が１００％となる評価比率を１×（弱い染色細胞の百分率）＋２×（中等度の染色細胞の百分率）＋３×（強い染色細胞の百分率）の式に代入し、結果をＭＨＳとして組織切片に帰属させる。被検腫瘍巣の全てにおける生存腫瘍細胞および染色単核炎症細胞の全てにわたって、いずれかの強度の少なくとも部分的な膜染色を有する細胞の比率（百分率）を評価し、得られた百分率をＭＰＳとして組織切片に帰属させることにより、ＭＰＳを帰属する。幾つかの実施形態において、ＭＨＳまたはＭＰＳが正（陽性）であれば、腫瘍はＰＤ−Ｌ１発現に関して陽性とみなされる。
【００７１】
ＰＤ−Ｌ１  ｍＲＮＡ発現のレベルは、定量的ＲＴ−ＰＣＲにおいて頻繁に使用される１以上の参照遺伝子（例えば、ユビキチンＣ）のｍＲＮＡ発現レベルと比較されうる。
【００７２】
幾つかの実施形態において、悪性細胞による及び／又は腫瘍内の浸潤性免疫細胞によるＰＤ−Ｌ１発現（タンパク質および／またはｍＲＮＡ）のレベルは、適当な対照によるＰＤ−Ｌ１発現（タンパク質および／またはｍＲＮＡ）のレベルとの比較に基づいて、「過剰発現」または「上昇」していると判定される。例えば、対照ＰＤ−Ｌ１タンパク質またはｍＲＮＡ発現レベルは、同じタイプの非悪性細胞においてまたは釣り合わされた正常組織からの切片において、定量されたレベルでありうる。幾つかの好ましい実施形態においては、腫瘍サンプルにおけるＰＤ−Ｌ１発現は、サンプル中のＰＤ−Ｌ１タンパク質（および／またはＰＤ−Ｌ１  ｍＲＮＡ）が対照の場合より少なくとも１０％、２０％または３０％大きいならば、上昇していると判定される。
【００７３】
「持続的応答」は、治療用物質または組合せ療法（本明細書に記載されているもの）での治療の中止の後の持続的治療効果を意味する。幾つかの実施形態においては、持続的応答は、治療持続期間と少なくとも同じ、または治療持続期間より少なくとも１．５、２．０、２．５もしくは３倍長い持続期間を示す。
【００７４】
「組織切片」は、組織サンプルの単一の部分または断片、例えば、正常組織または腫瘍のサンプルから切断された組織の薄片を意味する。
【００７５】
本明細書中で用いる、癌を「治療」または「治療する」は、ＰＤ−１アンタゴニストとジナシクリブ化合物との組合せ療法を、癌を有する又は癌を有すると診断された対象に投与して、少なくとも１つの陽性（正）の治療効果、例えば、癌細胞数の減少、腫瘍サイズの減少、末梢器官内への癌細胞浸潤の速度の低下、または腫瘍転移もしくは腫瘍成長の速度の低下を達成することを意味する。癌における陽性の治療効果は幾つかの方法で測定されうる（Ｗ．Ａ．Ｗｅｂｅｒ，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．５０：１Ｓ−１０Ｓ（２００９）を参照されたい）。例えば、腫瘍成長抑制に関しては、ＮＣＩ標準に従い、Ｔ／Ｃ＜４２％が抗腫瘍活性の最小レベルである。Ｔ／Ｃ＜１０％は高い抗腫瘍活性とみなされ、ここで、Ｔ／Ｃ（％）＝治療された腫瘍体積中央値／対照の腫瘍体積中央値×１００である。幾つかの実施形態において、治療的有効量により達成される治療は、無進行生存（ＰＦＳ）、無疾患生存（ＤＦＳ）または全生存（ＯＳ）のいずれかである。ＰＦＳは「腫瘍進行までの時間」とも称され、癌が成長（増殖）しない、治療中または治療後の時間の長さを示し、完全な応答または部分的な応答を患者が経験した時間の長さ、および安定な疾患を患者が経験した時間の長さを含む。ＤＦＳは、患者が無疾患状態のままである、治療中または治療後の時間の長さを意味する。ＯＳは、無処置または未治療の個体または患者と比較した場合の寿命の延長を意味する。癌患者を治療するのに有効な本明細書に記載されている組合せ療法の投与レジメは、患者の病態、年齢および体重ならびに対象において抗癌応答を惹起する療法の能力のような要因に応じて変動しうる。本発明の治療方法、医薬および使用は、全ての対象において陽性治療効果を達成するのに有効だとは限らないが、当技術分野で公知の任意の統計的検定、例えばスチューデントｔ検定、カイ２乗検定、マンおよびホイットニーによるＵ検定、クラスカル・ウォリス検定（Ｈ検定）、ヨンケーレ−テルプストラ検定およびウィルコクソン検定により判定された場合に、統計的に有意な数の対象においては有効であるはずである。
【００７６】
「腫瘍」は、癌を有すると診断された又は癌を有する疑いのある対象に適用される場合には、任意のサイズの悪性または潜在的に悪性の新生物または組織塊を意味し、原発腫瘍または続発性新生物を含む。固形（充実性）腫瘍は、嚢胞または液体領域を通常は含有しない、組織の異常成長または塊を意味する。種々のタイプの固形腫瘍が、それらを形成する細胞のタイプにちなんで命名されている。固形腫瘍の例としては、肉腫、癌腫およびリンパ腫が挙げられる。白血病（血液の癌）は、一般に、固形腫瘍を形成しない（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｅｒｍｓ）。
【００７７】
「腫瘍量」は「腫瘍負荷」とも称され、全身に分布する腫瘍物質の総量を意味する。腫瘍負荷は、リンパ節および骨髄を含む身体全体にわたる癌細胞の総数または腫瘍の全サイズを意味する。腫瘍負荷は当技術分野で公知の種々の方法により測定可能であり、例えば、被験者からの摘除に際して例えばカリパスを使用して、あるいはイメージング技術、例えば超音波、骨スキャン、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）または磁気共鳴撮像（ＭＲＩ）スキャンを用いて、全身において腫瘍の寸法を測定することにより決定されうる。
【００７８】
「腫瘍サイズ」なる語は、腫瘍の長さおよび幅として測定されうる腫瘍の全サイズを意味する。腫瘍サイズは技術分野で公知の種々の方法により決定可能であり、例えば、被験者からの摘除に際して例えばカリパスを使用して、あるいはイメージング技術、例えば骨スキャン、超音波、ＣＴまたはＭＲＩスキャンを用いて、全身において腫瘍の寸法を測定することにより決定されうる。
【００７９】
本明細書中で用いる「可変領域」または「Ｖ領域」は、異なる抗体間で配列において可変性である、ＩｇＧ鎖のセグメントを意味する。それは軽鎖においてはＫａｂａｔ残基１０９まで、そして重鎖においては１１３まで伸長している。
【００８０】
ＩＩ．方法、使用および医薬
本発明の１つの態様においては、本発明は、ＰＤ−１アンタゴニストとジナシクリブ化合物とを含む組合せ療法を個体に投与することを含む、個体における癌の治療方法を提供する。
【００８１】
組合せ療法は１以上の追加的な治療用物質（治療剤）を含みうる。そのような追加的な治療用物質は、例えば、ジナシクリブ化合物以外の化学療法剤、生物療法剤（ＶＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＶＥＧＦ受容体、他の増殖因子受容体、ＣＤ２０、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＴＬＡ−４、ＯＸ−４０、４−ＩＢＢおよびＩＣＯＳに対する抗体を含むが、これらに限定されるものではない）、免疫原性剤（例えば、弱毒化癌細胞、腫瘍抗原、腫瘍由来抗原または核酸でパルスされた樹状細胞のような抗原提示細胞、免疫刺激性サイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＦＮα２、ＧＭ−ＣＳＦ）、および免疫刺激性サイトカイン、例えばＧＭ−ＣＳＦ（これに限定されるものではない）をコードする遺伝子でトランスフェクトされた細胞）でありうる。
【００８２】
化学療法剤の例には以下のものが含まれる：アルキル化剤、例えばチオテパ（ｔｈｉｏｔｅｐａ）およびシクロスホスファミド（ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）；アルキルスルホナート、例えばブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）、イムプロスルファン（ｉｍｐｒｏｓｕｌｆａｎ）およびピポスルファン（ｐｉｐｏｓｕｌｆａｎ）；アジリジン、例えばベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン（ｃａｒｂｏｑｕｏｎｅ）、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）およびウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）；エチレンイミンおよびメチルアメルアミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）、例えばアルトレタミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド（ｔｒｉｅｔｈｉｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）およびトリメチロロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｍｅ）；アセトゲニン（ａｃｅｔｏｇｅｎｉｎ）（特にブルラタシン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎ）およびブルラタシノン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎｏｎｅ））；カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）（合成類似体トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）を含む）；ブリオスタチン（ｂｒｙｏｓｔａｔｉｎ）；カリスタチン（ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎ）；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン（ａｄｏｚｅｌｅｓｉｎ）、カルゼレシン（ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎ）およびビゼレシン（ｂｉｚｅｌｅｓｉｎ）合成類似体を含む）；クリプトフィシン（ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ）（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ）；ドュオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎ）（合成類似体ＫＷ−２１８９およびＣＢ  １−ＴＭ１を含む）；エリューテロビン（ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｂｉｎ）；パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；サルコジクチイン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンジスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；窒素マスタード、例えばクロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、クロルナファジン（ｃｈｌｏｒｎａｐｈａｚｉｎｅ）、クロロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン（ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ）、イフォスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、メクロルエタミン（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、メクロルエタミンオキシド塩酸塩、メルファラン（ｍｅｌｐｈａｌａｎ）、ノベムビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、トロフォスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ウラシルマスタード（ｕｒａｃｉｌ  ｍｕｓｔａｒｄ）；ニトロソウレア、例えばカルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）、クロロゾトシン（ｃｈｌｏｒｏｚｏｔｏｃｉｎ）、フォテムスチン（ｆｏｔｅｍｕｓｔｉｎｅ）、ロムスチン（ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ）、ニムスチン（ｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）およびラニムスチン（ｒａｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）；抗生物質、例えばエンジイン抗生物質［例えば、カリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、特にカリケアマイシン・ガンマ１Ｉおよびカリケアマイシン・ファイＩ１（例えば、��ｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４）を参照されたい）；ダイネマイシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）、例えばダイネマイシンＡ；ビスホスホナート、例えばクロドロナート（ｃｌｏｄｒｏｎａｔｅ）；エスペラマイシン（ｅｓｐｅｒａｍｉｃｉｎ）；ならびにネオカルチノスタチン（ｎｅｏｃａｒｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）クロモファーおよび関連クロモタンパク質エンジイン抗生物質クロモファー］、アクラシノマイシン（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎ）、アクチノマイシン（ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン（ａｚａｓｅｒｉｎｅ）、ブレオマイシン（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ）、カクチノマイシン（ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カミノマイシン（ｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎ）、ダクチノマイシン（ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ）、例えばマイトマイシンＣ、ミコフェノール酸（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ノガラマイシン（ｎｏｇａｌａｍｙｃｉｎ）、オリボマイシン（ｏｌｉｖｏｍｙｃｉｎ）、ペプロマイシン（ｐｅｐｌｏｍｙｃｉｎ）、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン（ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ）、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン（ｓｔｒｅｐｔｏｎｉｇｒｉｎ）、ストレプトゾシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ）、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ウベニメックス（ｕｂｅｎｉｍｅｘ）、ジノスタチン（ｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、ゾルビシン（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ）；代謝拮抗物質、例えばメトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）および５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸類似体、例えばデノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、トリメトレキセート（ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）；プリン類似体、例えばフルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、６−メルカプトプリン、チアミプリン（ｔｈｉａｍｉｐｒｉｎｅ）、チオグアニン（ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ）；ピリミジン類似体、例えばアンシタビン（ａｎｃｉｔａｂｉｎｅ）、アザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、６−アザウリジン、カルモフール（ｃａｒｍｏｆｕｒ）、シタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）、ジデオキシウリジン（ｄｉｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ）、ドキシフルリジン（ｄｏｘｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ）、エノシタビン（ｅｎｏｃｉｔａｂｉｎｅ）、フロクスリジン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）；アンドロゲン、例えばカルステロン（ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）、ドロモスタノロン（ｄｒｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｅ）プロピオナート、エピチオスタノール（ｅｐｉｔｉｏｓｔａｎｏｌ）、メピチオスタン（ｍｅｐｉｔｉｏｓｔａｎｅ）、テストラクトン（ｔｅｓｔｏｌａｃｔｏｎｅ）；抗アドレナール、例えばアミノグルテチミド（ａｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）、ミトタン（ｍｉｔｏｔａｎｅ）、トリロスタン（ｔｒｉｌｏｓｔａｎｅ）；葉酸補充物、例えばフロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；アセグラトン（ａｃｅｇｌａｔｏｎｅ）；アルドホスファミド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）グリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル（ｅｎｉｌｕｒａｃｉｌ）；アムサクリン（ａｍｓａｃｒｉｎｅ）；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン（ｄｅｍｅｃｏｌｃｉｎｅ）；ジアジクオン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；エルフォルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ）；エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）；エトグルシド（ｅｔｏｇｌｕｃｉｄ）；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン（ｌｅｎｔｉｎａｎ）；ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｍｉｎｅ）；メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）、例えばメイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）およびアンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎ）；ミトグアゾン（ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）；ミトザントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン（ｐｅｎｔｏｓｔａｔｉｎ）；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン（ｐｉｒａｒｕｂｉｃｉｎ）；ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン（ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ）；ラゾキサン（ｒａｚｏｘａｎｅ）；リゾキシン（ｒｈｉｚｏｘｉｎ）；シゾフラン（ｓｉｚｏｆｕｒａｎ）；スピロゲルマニウム（ｓｐｉｒｏｇｅｒｍａｎｉｕｍ）；テヌアゾン酸（ｔｅｎｕａｚｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）；トリアジクオン（ｔｒｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｅｎｅ）（特にＴ−２毒素、ベルラクリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロリジン（ｒｏｒｉｄｉｎ）Ａおよびアングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン；ビンデシン（ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）；ダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）；マンノムスチン（ｍａｎｎｏｍｕｓｔｉｎｅ）；ミトブロニトール（ｍｉｔｏｂｒｏｎｉｔｏｌ）；ミトラクトール（ｍｉｔｏｌａｃｔｏｌ）；ピポブロマン（ｐｉｐｏｂｒｏｍａｎ）；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（ａｒａｂｉｎｏｓｉｄｅ）（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）；チオテパ（ｔｈｉｏｔｅｐａ）；タキソイド、例えばパクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）およびドキセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）；クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）；ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）；６−チオグアニン；メルカプトプリン（ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ）；メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）；白金類似体、例えばシスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）およびカルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）；ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）；白金；エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）（ＶＰ−１６）；イフォスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）；ミトザントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）；ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）；エダトレキセート（ｅｄａｔｒｅｘａｔｅ）；ダウノマイシン（ｄａｕｎｏｍｙｃｉｎ）；アミノプテリン（ａｍｉｎｏｐｔｅｒｉｎ）；キセローダ（ｘｅｌｏｄａ）；イバンドロネート（ｉｂａｎｄｒｏｎａｔｅ）；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ｄｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えばレチノイン酸；カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）；ならびに前記のいずれかの医薬上許容される塩、酸または誘導体。また、例えば以下のような、腫瘍に対するホルモン作用を調節または抑制するよう作用する抗ホルモン剤も含まれる：抗エストロゲンおよび選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）、例えばタモキシフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、ラロキシフェン（ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）、ドロロキシフェン（ｄｒｏｌｏｘｉｆｅｎｅ）、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン（ｔｒｉｏｘｉｆｅｎｅ）、ケオキシフェン（ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅ）およびトレミフェン（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ）（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）；副腎におけるエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼインヒビター、例えば４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド（ａｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）、酢酸メゲストロール（ｍｅｇｅｓｔｒｏｌ）、エキセメスタン（ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ）、フォルメスタン（ｆｏｒｍｅｓｔａｎ）、ファドロ
ゾール（ｆａｄｒｏｚｏｌｅ）、ボロゾール（ｖｏｒｏｚｏｌｅ）、レトロゾール（ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）およびアナストロゾール（ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）；ならびに抗アンドロゲン、例えばフルタミド（ｆｌｕｔａｍｉｄｅ）、ニルタミド（ｎｉｌｕｔａｍｉｄｅ）、ビカルタミド（ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）、ロイプロリド（ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ）およびゴセレリン（ｇｏｓｅｒｅｌｉｎ）；ならびに前記のいずれかの医薬上許容される塩、酸または誘導体。
【００８３】
本発明の組合せ療法における各治療用物質は、単独で、または治療用物質と１以上の医薬上許容される担体、賦形剤および希釈剤を含む医薬（本明細書においては医薬組成物とも称される）中で、標準的な医薬慣例に従い投与されうる。
【００８４】
本発明の組合せ療法における各治療用物質は、同時に（すなわち同一医薬中で）、共に（すなわち任意の順序で次々と投与される別々の医薬中で）、または任意の順序で連続的に投与されうる。組合せ療法における治療用物質が異なる剤形である（１つの物質は錠剤またはカプセル剤であり、もう１つの物質は無菌液体である）、および／または異なる投与スケジュールで投与される（例えば、少なくとも毎日投与される化学療法剤、および週１回、２週間に１回または３週間に１回のようにそれほど頻繁には投与されない生物療法剤）場合には、連続的投与が特に有用である。
【００８５】
幾つかの実施形態において、ジナシクリブ化合物はＰＤ−１アンタゴニストの投与の前に投与され、他の実施形態において、ジナシクリブ化合物はＰＤ−１アンタゴニストの投与の後で投与される。
【００８６】
幾つかの実施形態において、組合せ療法における治療用物質の少なくとも１つは、物質が同じ癌の治療のための単独療法として使用される場合に典型的に用いられるのと同じ投与レジメ（治療の用量、頻度および持続期間）を用いて投与される。他の実施形態において、患者は、組合せ療法における治療用物質の少なくとも１つの物質が単独療法として使用される場合より低い総量（例えば、より小さい用量、より低い頻度の投与および／またはより短い治療持続期間）の投与を受ける。
【００８７】
本発明の組合せ療法における各治療用物質は、経口的または非経口的（静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、直腸、局所および経皮投与経路を含む）に投与されうる。
【００８８】
本発明の組合せ療法は、腫瘍を摘出するための手術の前または後で使用されることが可能であり、放射線療法の前、途中または後で使用されうる。
【００８９】
幾つかの実施形態において、本発明の組合せ療法は、生物療法剤または化学療法剤で未だ治療されていない（すなわち、未治療）患者に投与される。他の実施形態において、組合せ療法は、生物療法剤または化学療法剤での過去の療法の後で持続的応答が得られなかった（すなわち、治療経験）患者に投与される。
【００９０】
本発明の組合せ療法は、典型的には、触診により又は当技術分野でよく知られているイメージング技術、例えばＭＲＩ、超音波もしくはＣＡＴスキャンにより見出されるのに十分な程度に大きな腫瘍を治療するために用いられる。幾つかの好ましい実施形態において、本発明の組合せ療法は、少なくとも約２００ｍｍ３、３００ｍｍ３、４００ｍｍ３、５００ｍｍ３、７５０ｍｍ３、または１０００ｍｍ３までの寸法を有する進行期腫瘍を治療するために用いられる。
【００９１】
本発明の組合せ療法は、好ましくは、ＰＤ−Ｌ１発現に関して陽性の試験結果を示す癌を有するヒト患者に投与される。幾つかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ１発現は、患者から摘出された腫瘍サンプルのＦＦＰＥまたは凍結組織切片上のＩＨＣアッセイにおいて、診断用抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合性フラグメントを使用して検出される。典型的には、ＰＤ−１アンタゴニストおよびジナシクリブ化合物での治療の開始の前に、患者から摘出された腫瘍組織サンプルにおけるＰＤ−Ｌ１発現を決定するための診断試験を患者の医師が指示するであろう。しかし、医師は、治療開始後の任意の時点（例えば、治療サイクルの完了の後）で最初または後続の診断試験を指示しうると予想される。
【００９２】
本発明の組合せ療法のための投与計画（本明細書においては投与レジメとも称される）の選択は、物質の血清または組織代謝回転速度、症状の程度、物質の免疫原性、および治療される個体における標的細胞、組織または器官の接近可能性を含む幾つかの要因に左右される。好ましくは、投与計画は、許容可能なレベルの副作用と調和して患者に運搬される各治療用物質の量を最大にする。したがって、組合せにおける各生物療法剤および化学療法剤の用量および投与頻度は、部分的には、個々の治療用物質、治療される癌の重症度、および患者の特性に左右される。抗体、サイトカインおよび小分子の適当な用量を選択する際の指針が入手可能である。例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ（１９９６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（編）（１９９１）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｃｈ（編）（１９９３）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｅｒｔら（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１−６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍら（１９９９）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６−１９７３；Ｓｌａｍｏｎら（２００１）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３−７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚら（２０００）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３−６１９；Ｇｈｏｓｈら（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４−３２；Ｌｉｐｓｋｙら（２０００）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４−１６０２；Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ２００３（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，５７ｔｈ  Ｅｄ）；Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ；ＩＳＢＮ：１５６３６３４４５７；第５７版（２００２年１１月）を参照されたい。適当な投与計画の決定は、例えば、治療に影響を及ぼすことが当技術分野で知られている若しくは疑われている又は治療に影響を及ぼすと予想されるパラメータまたは因子を用いて臨床家によりなされることが可能であり、例えば、患者の臨床履歴（例えば、過去の治療）、治療される癌のタイプおよび病期、ならびに組合せ療法における治療用物質の１以上に対する応答のバイオマーカーに左右されるであろう。
【００９３】
本発明の組合せ療法における生物療法剤は、連続的注入により、または例えば、毎日、隔日、週３回、または毎週、２週間、３週間、毎月、隔月などの間隔での投与により投与されうる。毎週の全用量は、一般に、少なくとも０．０５μｇ／ｋｇ、０．２μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ体重以上である。例えば、Ｙａｎｇら（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４９：４２７−４３４；Ｈｅｒｏｌｄら（２００２）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４６：１６９２−１６９８；Ｌｉｕら（１９９９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈ．６７：４５１−４５６；Ｐｏｒｔｉｅｌｊｉら（２０００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：１３３−１４４を参照されたい。
【００９４】
組合せ療法におけるＰＤ−１アンタゴニストとして抗ヒトＰＤ−１  ｍＡｂを使用する幾つかの実施形態においては、投与計画は、治療経過の全体にわたって約１４日（±２日）または約２１日（±２日）または約３０日（±２日）の間隔で１、２、３、５または１０ｍｇ／ｋｇの用量で抗ヒトＰＤ−１  ｍＡｂを投与することを含むであろう。
【００９５】
組合せ療法におけるＰＤ−１アンタゴニストとして抗ヒトＰＤ−１  ｍＡｂを使用する他の実施形態においては、投与計画は、約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの用量で、患者内用量増加を伴って、抗ヒトＰＤ−１  ｍＡｂを投与することを含むであろう。他の増加用量実施形態においては、投与間隔は次第に短縮され、例えば、第１投与と第２投与の間で約３０日（±２日）、第２投与と第３投与との間で約１４日（±２日）となるであろう。ある実施形態においては、投与間隔は第２投与の後の投与に関しては約１４日（±２日）であろう。
【００９６】
ある実施形態においては、対象は、本明細書に記載されている任意のＰＤ−１アンタゴニストを含む医薬の静脈内（ＩＶ）注入の投与を受けるであろう。
【００９７】
本発明の１つの好ましい実施形態においては、組合せ療法におけるＰＤ−１アンタゴニストはニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）であり、これは、１ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ、２ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ、３ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ、５ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ、１０ｍｇ  Ｑ２Ｗ、１ｍｇ／ｋｇ  Ｑ３Ｗ、２ｍｇ／ｋｇ  Ｑ３Ｗ、３ｍｇ／ｋｇ  Ｑ３Ｗ、５ｍｇ／ｋｇ  Ｑ３Ｗおよび１０ｍｇ  Ｑ３Ｗからなる群から選択される用量で静脈内投与される。
【００９８】
本発明のもう１つの好ましい実施形態においては、組合せ療法におけるＰＤ−１アンタゴニストはＭＫ−３４７５であり、これは、１ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ、２ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ、３ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ、５ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ、１０ｍｇ  Ｑ２Ｗ、１ｍｇ／ｋｇ  Ｑ３Ｗ、２ｍｇ／ｋｇ  Ｑ３Ｗ、３ｍｇ／ｋｇ  Ｑ３Ｗ、５ｍｇ／ｋｇ  Ｑ３Ｗおよび１０ｍｇ  Ｑ３Ｗからなる群から選択される用量で液体医薬中で投与される。幾つかの特に好ましい実施形態においては、ＭＫ−３４７５は、２５ｍｇ／ｍｌ  ＭＫ−３４７５、７％（ｗ／ｖ）スクロース、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０を１０ｍＭ  ヒスチジンバッファー（ｐＨ５．５）中に含む液体医薬として投与され、医薬の選択された用量は３０分にわたってＩＶ注入により投与される。ジナシクリブと組合されたＭＫ−３４７５の最適用量は、ジナシクリブに関して選択された投与頻度に合致した投与頻度での２ｍｇ／ｋｇから開始し１０ｍｇ／ｋｇまで進める用量増加により特定されうる。
【００９９】
幾つかの実施形態においては、ジナシクリブ化合物を含む液体医薬を、２８日周期の第１日、第８日および第１５日のそれぞれの１時間〜２４時間の期間にわたって、１〜１００ｍｇ／ｍ２の用量で治療される個体内に注入する。幾つかの実施形態においては、ＩＶ注入のための期間は２時間、８時間または２５時間である。他の実施形態においては、ジナシクリブ医薬は、２１日に１回、５０ｍｇ／ｍ２の用量で２時間の注入により投与される。癌がＣＬＬである幾つかの実施形態においては、ジナシクリブ医薬に関する投与計画は少なくとも２つの２８日周期を含み、第１周期においては、ジナシクリブは第１日、第８日および第１５日にそれぞれ７ｍｇ／ｍ２、１０ｍｇ／ｍ２および１４ｍｇ／ｍ２の用量で２時間の注入にわたって投与され、第２周期および任意の後続周期においては、ジナシクリブは第１日、第８日および第１５日に１４ｍｇ／ｍ２の用量で２時間の注入にわたって投与される。癌がヘム悪性または固形腫瘍である幾つかの実施形態においては、ジナシクリブは２または３週間に１回投与され、達成される用量は５０ｍｇ／ｍ２までを含む。幾つかの実施形態においては、ジナシクリブの５０ｍｇ／ｍ２までの最高定常状態用量は、約１４日または２１日により隔てられた２時間の注入における用量増加により達成される。
【０１００】
本発明はまた、前記のＰＤ−１アンタゴニストと医薬上許容される賦形剤とを含む医薬を提供する。ＰＤ−１アンタゴニストが生物療法剤、例えばｍＡｂである場合、アンタゴニストは、通常の細胞培養および回収／精製技術を用いてＣＨＯ細胞内で製造されうる。
【０１０１】
幾つかの実施形態においては、ＰＤ−１アンタゴニストとして抗ＰＤ−１抗体を含む医薬は液体製剤として提供されることが可能であり、あるいは使用前に注射用無菌水で凍結乾燥粉末を再構成することにより調製されうる。ＷＯ２０１２／１３５４０８は、本発明における使用に適したＭＫ−３４７５を含む液体および凍結乾燥医薬の製剤を記載している。幾つかの好ましい実施形態においては、ＭＫ−３４７５を含む医薬は、約５０ｍｇのＭＫ−３４７５を含有するガラスバイアル中で提供される。
【０１０２】
本発明はまた、ジナシクリブ化合物と医薬上許容される賦形剤とを含む医薬を提供する。ジナシクリブ化合物は、米国特許第７，１１９，２００号に記載されているとおりに製造可能であり、ＷＯ２００９／０３８７０１に記載されているとおりにＩＶ注入用の水性医薬として製剤化されうる。幾つかの好ましい実施形態においては、ジナシクリブはｐＨ３．０〜４．２の無菌水性クエン酸緩衝溶液中で５ｍｇ／ｍＬで製剤化される。この医薬は、冷凍条件（２℃〜８℃）で貯蔵され遮光された場合に安定である。ついで無菌緩衝化ジナシクリブ溶液は、ＩＶ投与用の種々の用量を調製するために０．９％塩化ナトリウム注射液（２５０ｍＬ）米国薬局方（ＵＳＰ，重量／重量）で希釈され、これは、制御された室温（２０℃〜２５℃、すなわち、６８°Ｆ〜７７°Ｆ）で貯蔵された場合に２４時間以内に投与されるべきである。
【０１０３】
本明細書に記載されている抗ＰＤ−１およびジナシクリブ医薬は、第１容器および第２容器およびパッケージインサートを含むキットとして提供されうる。第１容器は、抗ＰＤ−１アンタゴニストを含む医薬の少なくとも１用量を含有し、第２容器は、ジナシクリブ化合物を含む医薬の少なくとも１用量を含有し、パッケージインサートまたはラベルは、医薬を使用して癌に対して患者を治療するための指示書を含む。第１容器および第２容器は同じまたは異なる形状（例えば、バイアル、シリンジおよびボトル）および／または材質（例えば、プラスチックまたはガラス）から構成されうる。キットは更に、医薬の投与において有用でありうる他の物質、例えば希釈剤、フィルター、ＩＶバッグおよびライン、針ならびにシリンジを含みうる。キットの幾つかの好ましい実施形態においては、抗ＰＤ−１アンタゴニストは抗ＰＤ−１抗体であり、指示書は、医薬が、ＩＨＣアッセイによりＰＤ−Ｌ１発現に関して陽性試験結果を示す癌を有する患者の治療における使用を意図したものであることを示している。
【０１０４】
以下に列挙する典型的な特定の実施形態を含む本発明のこれらの及び他の態様は、本明細書に含まれる教示から明らかであろう。
【０１０５】
本発明の典型的な特定の実施形態
１．ＰＤ−１アンタゴニストとジナシクリブ（ｄｉｎａｃｉｃｌｉｂ）化合物とを含む組合せ療法を個体に投与することを含む、個体における癌の治療方法であって、ジナシクリブ化合物が式Ｉ
【化２】
0006586087.tif 000006
【０１０６】
の化合物または式Ｉの化合物の医薬上許容される塩である、方法。
【０１０７】
２．個体において癌を治療するための、ジナシクリブ化合物と組合せて使用されるＰＤ−１アンタゴニストを含む医薬。
【０１０８】
３．個体において癌を治療するための、ＰＤ−１アンタゴニストと組合せて使用されるジナシクリブ化合物を含む医薬。
【０１０９】
４．医薬上許容される賦形剤を更に含む、実施形態３または４記載の医薬。
【０１１０】
５．ジナシクリブ化合物と組合せて投与される場合の、個体において癌を治療するための医薬の製造におけるＰＤ−１アンタゴニストの使用。
【０１１１】
６．ＰＤ−１アンタゴニストと組合せて投与される場合の、個体において癌を治療するための医薬の製造におけるジナシクリブ化合物の使用。
【０１１２】
７．個体において癌を治療するための医薬の製造におけるＰＤ−１アンタゴニストおよびジナシクリブ化合物の使用。
【０１１３】
８．第１容器、第２容器およびパッケージインサートを含むキットであって、第１容器が、抗ＰＤ−１アンタゴニストを含む医薬の少なくとも１用量を含み、第２容器が、ジナシクリブ化合物を含む医薬の少なくとも１用量を含み、パッケージインサートが医薬を使用して癌に対して個体を治療するための指示書を含む、キット。
【０１１４】
９．指示書が、医薬が、免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイによりＰＤ−Ｌ１発現に関して陽性試験結果を示す癌を有する個体の治療における使用を意図したものであることを示している、実施形態８記載のキット。
【０１１５】
１０．個体がヒトであり、ＰＤ−１アンタゴニストが、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合しヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１の結合を遮断するモノクローナル抗体またはその抗原結合性フラグメントである、実施形態１〜９のいずれか１項記載の方法、医薬、使用またはキット。
【０１１６】
１１．ＰＤ−１アンタゴニストがＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、ならびにＷＯ２０１３／０１９９０６のそれぞれ配列番号２４および配列番号２１の重鎖および軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体である、実施形態９記載の方法、医薬、使用またはキット。
【０１１７】
１２．個体がヒトであり、ＰＤ−１アンタゴニストが、ヒトＰＤ−１に特異的に結合しヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１の結合を遮断するモノクローナル抗体またはその抗原結合性フラグメントである、実施形態１〜９のいずれか１項記載の方法、医薬、使用またはキット。
【０１１８】
１３．ＰＤ−１アンタゴニストがヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ２の結合をも遮断する、実施形態１２記載の方法、医薬、使用またはキット。
【０１１９】
１４．モノクローナル抗体またはその抗原結合性フラグメントが、（ａ）配列番号１、２および３の軽鎖ＣＤＲならびに配列番号４、５および６の重鎖ＣＤＲ、または（ｂ）配列番号７、８および９の軽鎖ＣＤＲならびに配列番号１０、１１および１２の重鎖ＣＤＲを含む、実施形態１３記載の方法、医薬、使用またはキット。
【０１２０】
１５．モノクローナル抗体またはその抗原結合性フラグメントが、配列番号７、８および９の軽鎖ＣＤＲならびに配列番号１０、１１および１２の重鎖ＣＤＲを含む、実施形態１３記載の方法、医薬、使用またはキット。
【０１２１】
１６．ＰＤ−１アンタゴニストが、重鎖および軽鎖を含む抗ＰＤ−１モノクローナル抗体であり、重鎖が配列番号２１を含み、軽鎖が配列番号２２を含む、実施形態１３記載の方法、医薬、使用またはキット。
【０１２２】
１７．ＰＤ−１アンタゴニストが、重鎖および軽鎖を含む抗ＰＤ−１モノクローナル抗体であり、重鎖が配列番号２３を含み、軽鎖が配列番号２４を含む、実施形態１３記載の方法、医薬、使用またはキット。
【０１２３】
１８．癌が固形腫瘍である、実施形態１０〜１７のいずれか１項記載の方法、医薬、使用またはキット。
【０１２４】
１９．癌が膀胱癌、乳癌、明細胞腎癌、頭／頸部扁平上皮癌、肺扁平上皮癌、悪性黒色腫、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎細胞癌、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）または三重陰性乳癌である、実施形態１０〜１７のいずれか１項記載の方法、医薬、使用またはキット。
【０１２５】
２０．癌がイピリムマブ（ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）ナイーブ進行性黒色腫であり、他の好ましい実施形態において、ヒトがイピリムマブ難治性進行性黒色腫を有する、実施形態１０〜１７のいずれか１項記載の方法、医薬、使用またはキット。
【０１２６】
２１．癌がヘム（Ｈｅｍｅ）悪性疾患である、実施形態１０〜１７のいずれか１項記載の方法、医薬、使用またはキット。
【０１２７】
２２．癌が、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、骨髄性細胞白血病−１タンパク質（Ｍｃｌ−１）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）または小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）である、実施形態１０〜１７のいずれか１項記載の方法、医薬、使用またはキット。
【０１２８】
２３．癌が慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）である、実施形態１０〜１７のいずれか１項記載の方法、医薬、使用またはキット。
【０１２９】
２４．癌がヒトＰＤ−Ｌ１を発現する、実施形態１０〜２３のいずれか１項記載の方法、医薬、使用またはキット。
【０１３０】
２５．ヒトＰＤ−Ｌ１の発現が上昇している、実施形態２５記載の方法、医薬、使用またはキット。
【０１３１】
２６．ヒトＰＤ−Ｌ１の発現が、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）とを含む診断用抗ｈＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂを使用して検出され、ＬＣＶＲが配列番号２８を含み、ＨＣＶＲが配列番号２９を含む、実施形態２４または２５記載の方法、医薬、使用またはキット。
【０１３２】
２７．ＰＤ−１アンタゴニストがＭＫ−３４７５またはニボルマブであり、ジナシクリブ化合物が式Ｉの化合物である、実施形態１６記載の方法、医薬、使用またはキット。
【０１３３】
２８．ＭＫ−３４７５が、２５ｍｇ／ｍｌ  ＭＫ−３４７５、７％（ｗ／ｖ）スクロース、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０を１０ｍＭ  ヒスチジンバッファー（ｐＨ５．５）中に含む液体医薬として製剤化され、ジナシクリブ化合物が、５ｍｇ／ｍＬの式Ｉの化合物をｐＨ３．０〜４．２の無菌水性クエン酸緩衝溶液中に含む液体医薬として製剤化される、実施形態２７記載の方法、医薬、使用またはキット。
【０１３４】
２９．癌がＣＬＬである、実施形態２７または２８記載の方法、医薬、使用またはキット。
【０１３５】
３０．ヒトＰＤ−Ｌ１の発現が、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）とを含む診断用抗ｈＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂを使用して検出され、ＬＣＶＲが配列番号２８を含み、ＨＣＶＲが配列番号２９を含む、実施形態２７〜２９のいずれか１項記載の方法、医薬、使用またはキット。
【０１３６】
一般的方法
分子生物学における標準的な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ（１９８２  ＆  １９８９  ２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１  ３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，３ｒｄｅｄ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ｗｕ（１９９３）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ，Ｖｏｌ．２１７，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ．に記載されている。標準的な方法は、Ａｕｓｂｅｌら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ＶｏＩｓ．１−４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹにも記載されており、これは、細菌細胞におけるクローニングおよびＤＮＡ突然変異誘発（Ｖｏｌ．１）、哺乳類細胞および酵母におけるクローニング（Ｖｏｌ．２）、複合糖質およびタンパク質発現（Ｖｏｌ．３）、ならびにバイオインフォマティクス（Ｖｏｌ．４）を記載している。
【０１３７】
免疫沈降、クロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離および結晶化を含むタンパク質精製のための方法が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。化学分析、化学修飾、翻訳後修飾、融合タンパク質の製造、タンパク質のグリコシル化が記載されている（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ａｕｓｕｂｅｌら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．３，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ，ｐｐ．１６．０．５−１６．２２．１７；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃｏ．（２００１）Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｆｏｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ；ｐｐ．４５−８９；Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（２００１）ＢｉｏＤｉｒｅｃｔｏｒｙ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．，ｐｐ．３８４−３９１を参照されたい）。ポリクローナルおよびモノクローナル抗体の製造、精製およびフラグメント化が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９９９）Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，前掲）。リガンド／受容体相互作用を特徴づけるための標準的な技術が利用可能である（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい）。
【０１３８】
モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体およびヒト化抗体は製造可能である（例えば、ＳｈｅｐｅｒｄおよびＤｅａｎ（編）（２０００）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ（編）（２００１）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ｐｐ．１３９−２４３；Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：６２０５；Ｈｅら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：１０２９；Ｔａｎｇら（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：２７３７１−２７３７８；Ｂａｃａら（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３；ＦｏｏｔｅおよびＷｉｎｔｅｒ（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７−４９９；米国特許第６，３２９，５１１号を参照されたい）。
【０１３９】
ヒト化に代わる手段は、ファージ上で提示されるヒト抗体ライブラリー、またはトランスジェニックマウスにおけるヒト抗体ライブラリーを使用することである（Ｖａｕｇｈａｎら（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：３０９−３１４；Ｂａｒｂａｓ（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １：８３７−８３９；Ｍｅｎｄｅｚら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−１５６；ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＣｈａｍｅｓ（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ２１：３７１−３７７；Ｂａｒｂａｓら（２００１）Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｋａｙら（１９９６）Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；ｄｅ  Ｂｒｕｉｎら（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：３９７−３９９）。
【０１４０】
抗原の精製は抗体の製造に必要ではない。関心のある抗原を含有する細胞で動物を免疫化することが可能である。ついで免疫化動物から脾細胞を単離し、脾細胞を骨髄腫細胞系と融合させてハイブリドーマを得ることが可能である（例えば、Ｍｅｙａａｒｄら（１９９７）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７：２８３−２９０；Ｗｒｉｇｈｔら（２０００）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：２３３−２４２；Ｐｒｅｓｔｏｎら，前掲；Ｋａｉｔｈａｍａｎａら（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：５１５７−５１６４を参照されたい）。
【０１４１】
抗体は、例えば小薬物分子、酵素、リポソーム、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）にコンジュゲート化されうる。抗体は、治療、診断、キットまたは他の目的に有用であり、例えば色素、放射性同位体、酵素または金属、例えばコロイド金に結合した抗体を包含する（例えば、Ｌｅ  Ｄｏｕｓｓａｌら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：１６９−１７５；Ｇｉｂｅｌｌｉｎｉら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：３８９１−３８９８；ＨｓｉｎｇおよびＢｉｓｈｏｐ（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：２８０４−２８１１；Ｅｖｅｒｔｓら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：８８３−８８９を参照されたい）。
【０１４２】
蛍光標識細胞分取検出系（ＦＡＣＳ）を含むフローサイトメトリーのための方法が利用可能である（例えば、Ｏｗｅｎｓら（１９９４）Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｇｉｖａｎ（２００１）Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，２ｎｄ  ｅｄ．；Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｓｈａｐｉｒｏ（２００３）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪを参照されたい）。例えば診断試薬としての使用のための、核酸プライマーおよびプローブを含む核酸、ポリペプチドおよび抗体を修飾するのに適した蛍光試薬が利用可能である（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓｙ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。
【０１４３】
免疫系の標準的な組織学的方法が記載されている（例えば、Ｍｕｌｌｅｒ−Ｈａｒｍｅｌｉｎｋ（編）（１９８６）Ｈｕｍａｎ  Ｔｈｙｍｕｓ：Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｈｉａｔｔら（２０００）Ｃｏｌｏｒ  Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ，ＰＡ；Ｌｏｕｉｓら（２００２）Ｂａｓｉｃ  Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ：Ｔｅｘｔ  ａｎｄ  Ａｔｌａｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい）。
【０１４４】
例えば抗原フラグメント、リーダー配列、タンパク質フォールディング、機能的ドメイン、グリコシル化部位および配列アライメントを決定するためのソフトウェアパッケージおよびデータベースが利用可能である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ，Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ（登録商標）Ｓｕｉｔｅ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）；ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）；ＤｅＣｙｐｈｅｒ（登録商標）（ＴｉｍｅＬｏｇｉｃ  Ｃｏｒｐ．，Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｂａｙ，Ｎｅｖａｄａ）；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  １６：７４１−７４２；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｎｏｔｅ  １６：７４１−７４２；Ｗｒｅｎら（２００２）Ｃｏｍｐｕｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｐｒｏｇｒａｍｓ  Ｂｉｏｍｅｄ．６８：１７７−１８１；ｖｏｎ  Ｈｅｉｊｎｅ（１９８３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３３：１７−２１；ｖｏｎ  Ｈｅｉｊｎｅ（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：４６８３−４６９０を参照されたい）。
【図面の簡単な説明】
【０１４５】
【図１】図１は、本発明において有用な典型的な抗ＰＤ−１モノクローナル抗体の軽鎖および重鎖ＣＤＲのアミノ酸配列（配列番号１〜６）を示す。
【図２】図２は、本発明において有用なもう１つの典型的な抗ＰＤ−１モノクローナル抗体の軽鎖および重鎖ＣＤＲのアミノ酸配列（配列番号７〜１２）を示す。
【図３】図３は、本発明において有用な典型的な抗ＰＤ−１モノクローナル抗体の重鎖可変領域および完全長重鎖のアミノ酸配列（配列番号１３および配列番号１４）を示す。
【図４】図４は、本発明において有用な典型的な抗ＰＤ−１モノクローナル抗体の別の軽鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号１５〜１７）を示す。
【図５Ａ】図５は、本発明において有用な典型的な抗ＰＤ−１モノクローナル抗体の別の軽鎖のアミノ酸配列（配列番号１８〜２０）を示す。
【図５Ｂ】図５は、本発明において有用な典型的な抗ＰＤ−１モノクローナル抗体の別の軽鎖のアミノ酸配列（配列番号１８〜２０）を示す。
【図６】図６はＭＫ−３４７５の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列（それぞれ配列番号２１および２２）を示す。
【図７】図７はニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列（それぞれ配列番号２３および２４）を示す。
【図８Ａ】図８は、ＰＤ−１アンタゴニストとジナシクリブとの併用投与の抗腫瘍効果が、担癌マウスにおいて、いずれかの物質のみでの単独療法より優れていることを示しており、図８Ａは、対照、マウス抗マウスＰＤ−１  ｍＡｂ（抗ＰＤ１）、ジナシクリブ、または抗ＰＤ１とジナシクリブとの両方での処理中の種々の日における平均腫瘍体積を示し、図８Ｂは、処理の最初の日（左グラフ、第０日）または２５日間の処理の後（右グラフ、第２５日）における各処理群における個々のマウスの腫瘍体積値を示す。実験の詳細は後記実施例１に記載されている。
【図８Ｂ】図８は、ＰＤ−１アンタゴニストとジナシクリブとの併用投与の抗腫瘍効果が、担癌マウスにおいて、いずれかの物質のみでの単独療法より優れていることを示しており、図８Ａは、対照、マウス抗マウスＰＤ−１  ｍＡｂ（抗ＰＤ１）、ジナシクリブ、または抗ＰＤ１とジナシクリブとの両方での処理中の種々の日における平均腫瘍体積を示し、図８Ｂは、処理の最初の日（左グラフ、第０日）または２５日間の処理の後（右グラフ、第２５日）における各処理群における個々のマウスの腫瘍体積値を示す。実験の詳細は後記実施例１に記載されている。
【０１４６】
実施例
実施例１．担癌マウスへのＰＤ−１アンタゴニストおよびジナシクリブの共投与の抗腫瘍応答
この実験は、以下の３つのレジメの１つでの処理（治療）に対する担癌マウスの抗腫瘍応答を比較した：マウス抗マウスＰＤ−１モノクローナル抗体（抗ＰＤ−１）での単独療法、ジナシクリブでの単独療法、および共投与されるこれらの２つの物質での組合せ療法。
【０１４７】
ヒト腫瘍細胞または腫瘍外植片は異種移植片として免疫欠損動物において成長しうるが、それらは、機能的免疫系の欠損ゆえに、免疫療法を試験するためには使用され得ない。免疫療法剤または他の物質との免疫療法剤の組合せの有意義な評価のためには、無傷免疫系を有する動物において同系腫瘍が成長する同系モデルを使用することが必要である。ＭＣ３８はＣ５７ＢＬ／６系統と同系のマウス結腸直腸腺癌である。これは、抗ＰＤ−１療法後のこの腫瘍の翻訳可能な分子プロファイルゆえに、抗ＰＤ−１の作用メカニズムを評価するための妥当なモデル系である。
【０１４８】
２０グラムの平均体重を有する８週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスの右下背側脇腹に１×１０６個の対数期およびサブコンフルエントＭＣ３８細胞を移植することにより、この研究のための担癌マウスを準備した。これらのマウスにおける平均腫瘍体積が〜１５０立方ｍｍに達したら（図８Ｂ左パネルにおいて第０日と表示）、担癌マウスを１群１２匹の以下の４つの処理群に無作為化した：（１）アイソタイプ＋ビヒクル対照群；（２）抗ＰＤ１＋ビヒクル対照；（３）ジナシクリブ＋アイソタイプ対照、および（４）抗ＰＤ１＋ジナシクリブ。ビヒクル対照は、トラップソール（Ｔｒａｐｐｓｏｌ）（Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｉｎｃ．，Ａｌａｃｈｕａ，ＦＬ）を注射等級水中に溶解することにより調製された２０％  ヒドロキシプロピルβ−ｄ−シクロデキストリンであった。アイソタイプ対照は、アデノウイルスヘキソンに特異的なマウスモノクローナル抗体であり、アイソタイプＩｇＧ１のものであった。抗ＰＤ１を５サイクルのそれぞれに関して５日ごとに５ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．で、治療群２および４に投与した。ジナシクリブを５サイクルのそれぞれに関して５日ごとに４０ｍｇ／ｋｇで治療群３および４に投与した。
【０１４９】
図８Ａおよび８Ｂに示されている結果により実証されているとおり、ＰＤ−１アンタゴニストおよびジナシクリブでの組合せ療法の平均抗腫瘍応答は、単独療法としてのいずれかの物質で観察される抗腫瘍応答より大きかった（ｐ＜０．０５）。図８Ａに示されているとおり、これらの２つの物質の組合せは、抗ＰＤ−１で４２％ＣＲであった最良の単一物質応答と比較して、測定可能な腫瘍が残存しないほどの有意に高い完全な退縮（ＣＲ）をもたらした。一元配置ＡＮＯＶＡを使用して研究の終了時の平均腫瘍体積を比較したところ（図８Ｂ、右パネル）、ジナシクリブ＋抗ＰＤ１の組合せで処理されたマウスの腫瘍体積は、ジナシクリブのみで処理されたものより有意に小さかった。
【０１５０】
種々の処理に対する応答の統計的有意性を、フィッシャー直接ペアワイズ検定を用いて決定した。その結果を以下の表４に示す。
【表４】
0006586087.tif 000007
【０１５１】
表５は配列表における配列の簡潔な説明を示す。
【表５】
0006586087.tif 000008
【０１５２】
参考文献
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５．Ｈａｍａｎｉｓｈｉ  Ｊら，Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  １  ｌｉｇａｎｄ  １  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒ−ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ａｒｅ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（２００７）：１０４：３３６０−３３６５．
６．Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ＲＨら，Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｏｆ  Ｂ７−Ｈ１  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｋｉｄｎｅｙ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｇｅｎｉｔｏｕｒｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ（２００６）：５：２０６−２１１．
７．Ｎｏｍｉ，Ｔ．Ｓｈｏ，Ｍ．，Ａｋａｈｏｒｉ，Ｔ．ら，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−  １  ｌｉｇａｎｄ／ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−１  ｐａｔｈｗａｙ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００７）；１３：２１５１−２１５７．
８．Ｏｈｉｇａｓｈｉ  Ｙら，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｏｆ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−１  ｌｉｇａｎｄ−１  ａｎｄ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−１  ｌｉｇａｎｄ  ２  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００５）：１１：２９４７−２９５３．
９．Ｉｎｍａｎら，ＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ｕｒｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｌａｄｄｅｒ  ａｎｄ  ＢＣＧ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔａ：ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  ｌｏｃａｌｉｚｅｄ  ｓｔａｇｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ．Ｃａｎｃｅｒ（２００７）：１０９：１４９９−１５０５．
１０．Ｓｈｉｍａｕｃｈｉ  Ｔら，Ａｕｇｍｅｎｔｅｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−１  ｉｎ  ｂｏｔｈ  ｎｅｏｐｌａｓｍａｔｉｃ  ａｎｄ  ｎｏｎｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ＣＤ４＋  Ｔ−ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ａｄｕｌｔ  Ｔ−ｃｅｌｌ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ／  Ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ（２００７）：１２１：２５８５−２５９０．
１１．Ｇａｏら，Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＰＤ−Ｌ１  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ｔｕｍｏｒ  ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅｎｅｓｓ  ａｎｄ  ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００９）１５：９７１−９７９．
１２．Ｎａｋａｎｉｓｈｉ  Ｊ．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｂ７−Ｈ１（ＰＤ−Ｌ１）ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ｔｕｍｏｒ  ｇｒａｄｅ  ａｎｄ  ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｕｒｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃａｎｃｅｒｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．（２００７）５６：１１７３−  １１８２．
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本明細書中に引用されている全ての参考文献を、各個の刊行物、データベースエントリー（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願または特許が参照により本明細書に組み入れられると具体的かつ個別に示されている場合と同様に、参照により本明細書に組み入れることとする。参照により組み入れるというこの陳述は、そのような引用が、参照により組み入れるという宣誓陳述の直前直後にない場合であっても、３７  Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．５７（ｂ）（１）に従い、各個の刊行物、データベースエントリー（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願または特許［それらのそれぞれは３７  Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．５７（ｂ）（２）に従い明らかに特定されるものである］に関連づけることを出願人が意図しているものである。参照により組み入れるという宣誓陳述が明細書中に含まれている場合、それは、参照により組み入れるというこの一般的（ｇｅｎｅｒａｌ）陳述を何ら弱めるものではない。本明細書における参考文献の引用は、参考文献が関連先行技術であると自認するものではなく、また、それは、これらの刊行物または文書の内容または日付に関して何ら自認するものでもない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【配列表】
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