(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
痛み、ストレス及び不眠症の状態の１つ又はそれ以上を軽減するための、ブラシカ・カンペストリス（Brassica campestris）油を組成物の４０〜７５重量部、蜜蝋を組成物の１５〜５０重量部、及びドリオバラノプス・カンフォラ（Dryobalanops camphora）を組成物の１〜２０重量部、含有する組成物。
【請求項２】
ドリオバラノプス・カンフォラが、結晶の形態又は油状の形態である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ブラシカ・カンペストリス油が組成物の５５〜６５重量部であり、蜜蝋が組成物の２５〜３５重量部であり、及びドリオバラノプス・カンフォラが組成物の３〜１３重量部である、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
１つ又はそれ以上のオイル、香料、又はこれらの組合せをさらに含む、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
１つ又はそれ以上の天然の若しくは合成の活性成分、薬学上許容される賦形剤、又はこれらの組合せをさらに含む、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
痛み、ストレス及び不眠症の状態の１つ又はそれ以上を軽減するための、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物を含む製剤。
【請求項７】
４０〜７５重量部のブラシカ・カンペストリス油を６０〜２２５℃の温度で特定の時間、加熱する工程；
１５〜５０重量部の蜜蝋を温かいブラシカ・カンペストリス油中で、蜜蝋が溶解するまで混合して、混合物を得る工程；
前記混合物を熱源から取り出す工程；及び
前記混合物に１〜２０重量部のドリオバラノプス・カンフォラを添加し、混合する工程
を含む、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物を含む製剤を調製する方法。
【請求項８】
ブラシカ・カンペストリス油を６０〜１００℃の温度で加熱する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ブラシカ・カンペストリス油が組成物の５５〜６５重量部である、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
蜜蝋が組成物の２５〜３５重量部である、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
ドリオバラノプス・カンフォラが組成物の３〜１３重量部である、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
１つ又はそれ以上の他の天然の若しくは合成の活性成分、薬学上許容される賦形剤又はこれらの組合せを添加する工程をさらに含む、請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
痛み、ストレス及び不眠症の状態の少なくとも１つを軽減するための医薬の調製のための、ブラシカ・カンペストリス油を組成物の４０〜７５重量部、蜜蝋を組成物の１５〜５０重量部、及びドリオバラノプス・カンフォラを組成物の１〜２０重量部、含有する組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、痛み、ストレス及び不眠症の状態の少なくとも１つを軽減するための組成物、その調製方法、その使用、並びにその治療方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
様々な薬剤及び製剤が、痛み、ストレス及び睡眠障害を治療するために利用可能である。痛みは、多くの健康状態の中で主たる症状であり、人の生活の質と一般的な機能を著しく妨げうるものである。痛みは、軽度の不快感や鈍い苦痛から、急性でしばしば耐え難い激しい苦痛まで広い範囲があり、全身に又は局所的に生じ得る。アスピリン、イブプロフェン及びナプロキセン等のＮＳＡＩＤ（非ステロイド性抗炎症薬）は、痛みを含む急性及び慢性の炎症状態で症状を軽減するために使用され、最も頻繁に使用される処方薬及び市販薬の１つである。しかし、患者は、それらによる胃腸及び腎臓の副作用のような重篤な問題の重大な挑戦に直面し続けている。
【０００３】
ストレスは、特に都市部の住民の間で猛烈に増加しており、その結果、様々な種類のストレス関連障害が生じている。アロマセラピーから治療薬投与までの多数の治療が、ストレスを克服するために用いられている。アロマセラピーは、エッセンシャルオイルの吸入を含む。しかし、吸入が感受性の高い粘膜に刺激を引き起こし、鼻の内部の匂い受容体に損傷を与えうるために、吸入がすべての人に適するか、又は適していないことがあることが認められている。濃縮されたエッセンシャルオイルの長期吸入は、頭痛、めまい、眩暈、吐き気及び無気力を引き起こしうる。従って、ストレスを軽減するためのこのような治療は、むしろストレスを悪化させるか、他の望ましくない作用を引き起こしうる。経口又は静脈内経路による治療薬の投与は、それらの適用の制限を設ける医師の監督及び介入を必要とする。さらに、それらの治療薬は、作用及び有害な副作用の開始を遅らせる。というのも、ストレスの治療に用いられる例えばベンゾジアゼピンは患者に潜在的な習慣性の作用を有しているためである。
【０００４】
ストレス若しくは他の病因による不眠症、不眠、又は睡眠障害は非常に流行しており、一般大衆の約３０％が冒されている。慢性的に制限された睡眠は、今日、我々の社会におて広範で深刻な問題となっている。不眠症は、認識機能及び身体機能を損ない、多数の感情的、社会的及び物理的な領域にわたる広い範囲の日中の機能の傷害に伴われ、他の疾患及び健康上のリスクにつながる可能性がある。不眠症のための現時点の第一線の治療は、抗ヒスタミン薬、ベンゾジアゼピン及び非ベンゾジアゼピンである。これらの薬剤はいろいろな有害な作用を有しており、例えば不眠症の薬剤は習慣性があり、従って患者に有害である。より新しい睡眠導入薬にゾルピデムが含まれるが、重ねて多くの副作用を示す。最も重要な副作用は、翌日の眠気、不眠症のリバウンド、薬物依存、及び薬物の乱用である。
【０００５】
さらに、薬剤の持続的な使用によって、患者がそのような薬剤に対する耐性を発現し、さらなる治療に対する応答が減少する。
痛み、ストレス及び不眠症の治療のために利用可能な局所製剤は、いかなる有害な副作用がないわけでもない。例えば、痛みの治療のためのサリチル酸及びカプサイシンを主とする局所製剤は、皮膚刺激性があり、両方の薬剤は好ましくは微量でも避けられる。ストレスの治療のためのセントジョーンズワートの局所製剤は、日光に対する皮膚感受性を増加させ、発疹を引き起こし得る。不眠症を治療するための局所製剤は、あまり一般的ではなく、試験された少数の製剤が非常に有効であることは一般的には見出されていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
従って、利用可能な局所製剤は、痛み、ストレス及び不眠症を軽減するためにあまり有効ではない。逆に、利用可能な局所製剤は、副作用を有するか、又は痛み、ストレス及び不眠症を効果的に軽減することができない。
従って、局所送達のために製剤化することができ、痛み、ストレス及び不眠症から選択される状態の１つ又はそれ以上を軽減することができるより安全な組成物が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
従って、１つの側面において、本発明は、痛み、ストレス及び不眠症の状態の１つ又はそれ以上を軽減するための組成物を提供する。
１つの実施態様において、本発明は、ブラシカ・カンペストリス（Brassica campestris）、蜜蝋及びドリオバラノプス・カンフォラ（Dryobalanops camphora）を含有する組成物を提供する。
１つの実施態様において、本発明の組成物は、ブラシカ・カンペストリス油、蜜蝋及びドリオバラノプス・カンフォラ油を含有する。
【０００８】
いくつかの実施態様において、本発明は、痛み、ストレス及び不眠症の状態の少なくとも１つ又はそれ以上を軽減するための、ブラシカ・カンペストリス油、蜜蝋及びドリオバラノプス・カンフォラを含有する組成物を提供する。
いくつかの実施態様において、本発明は、４０〜７５重量部のブラシカ・カンペストリス油、１５〜５０重量部の蜜蝋、及び１〜２０重量部のドリオバラノプス・カンフォラを含有する組成物を提供する。
他の側面において、本発明は、痛み、ストレス及び不眠症の状態の１つ又はそれ以上を軽減するための組成物を調製する方法を提供する。
【０００９】
１つの実施態様において、本発明は、４０〜７５重量部のブラシカ・カンペストリス油を６０〜２２５℃の温度で特定の時間、加熱する工程；１５〜５０重量部の蜜蝋を温かいブラシカ・カンペストリス油中で、少なくとも蜜蝋が溶解するまで混合する工程；ブラシカ・カンペストリス油と蜜蝋の混合物に１〜２０重量部のドリオバラノプス・カンフォラを混合する工程を含む、痛み、ストレス及び不眠症の状態の少なくとも１つを軽減するための製剤を調製する方法を提供する。
【００１０】
１つの実施態様において、本発明は、４０〜７５重量部のブラシカ・カンペストリス油を６０〜２２５℃の温度で特定の時間、加熱する工程；１５〜５０重量部の蜜蝋を温かいブラシカ・カンペストリス油中で、少なくとも蜜蝋が溶解するまで混合する工程；前記混合物を熱から取り出す工程；１〜２０重量部のドリオバラノプス・カンフォラを混合する工程を含む、痛み、ストレス及び不眠症の状態の少なくとも１つを軽減するための製剤を調製する方法を提供する。
１つの実施態様において、ブラシカ・カンペストリス油の加熱時間が、６０〜２２５℃の温度を達成するのに十分な時間である。
１つの実施態様において、ブラシカ・カンペストリス油の加熱が６０〜１００℃の温度で実施される。そのような実施態様において、ブラシカ・カンペストリス油の加熱時間が６０〜１００℃の温度を達成するのに十分な時間である。
【００１１】
１つの実施態様において、本発明は、痛み、ストレス及び不眠症の状態の少なくとも１つ又はそれ以上又はすべてを軽減するための、ブラシカ・カンペストリス油、蜜蝋及びドリオバラノプス・カンフォラ油を含有する組成物の使用を提供する。
１つの実施態様において、本発明は、本発明の組成物を、患部、炎症領域、頭部又は全身に適用することを含む、痛み、ストレス及び不眠症の状態の少なくとも１つを治療する方法を提供する。
本発明の他の目的、特徴及び利点は、添付の図面を参照して読むことで、以下の記載から明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】ＮＭ−２（本発明の製剤）の個々の成分であるカラシ油、樟脳、蜜蝋、及び市販のジクロフェナク製剤と比較した、ＮＭ−２のラットのカラゲニン誘発足浮腫における効果を示す図である。
【図２】ＮＭ−２（本発明の製剤）の個々の成分であるカラシ油、樟脳、蜜蝋、及び市販のジクロフェナク製剤と比較した、ジクロフェナク、ＮＭ−２のカラゲニン誘発足浮腫の体積変化率における効果を示す図である。
【図３】ＮＭ−２（本発明の製剤）の個々の成分であるカラシ油、樟脳、蜜蝋、及び市販のジクロフェナク製剤と比較した、ジクロフェナク、ＮＭ−２のレム睡眠遮断誘発性痛覚過敏（REM sleep deprivation induced hyperalgesia）における足引き込み時間（paw withdrawal time）における効果を示す図である。
【図４】ＮＭ−２（本発明の製剤）の個々の成分であるカラシ油、樟脳、蜜蝋、及び市販のジクロフェナク製剤と比較した、ジクロフェナク、ＮＭ−２のレム睡眠遮断誘発性痛覚過敏における足引き込み時間の増加における効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本開示又はその好ましい実施態様における要素を紹介する際、冠詞「a」、「an」、「the」及び「前記（said）」は、要素の１つ又はそれ以上が存在することを意味することが意図されている。用語「含有する」、「含む」、「有する」は、包括的であり、列記された要素以外の追加の要素が存在してもよいことを意味することが意図されている。
本発明は、痛み、ストレス及び不眠症の状態の少なくとも１つを軽減することができる組成物を開示する。
実施態様において、本発明は、ブラシカ・カンペストリス（Brassica campestris）、蜜蝋及びドリオバラノプス・カンフォラ（Dryobalanops camphora）を含有する組成物を提供する。
【００１４】
ブラシカ・カンペストリスは、本発明の組成物中に、結晶の形態又は油状の形態のいずれかで含まれてもよい。ブラシカ・カンペストリス油、及び結晶の形態のブラシカ・カンペストリスは、本発明の組成物中で互換的に用いることができる。
１つの実施態様において、本発明の組成物は、ブラシカ・カンペストリス油、蜜蝋及びドリオバラノプス・カンフォラ油を含有する。
いくつかの実施態様において、本発明は、痛み、ストレス及び不眠症の状態の少なくとも１つ又はそれ以上又はすべてを軽減するための、ブラシカ・カンペストリス油、蜜蝋及びドリオバラノプス・カンフォラを含有する組成物を提供する。
【００１５】
本組成物の活性成分は、所望の効果を最適化するために、いくつもの方法で組み合わせることができる。いくつかの実施態様に従って、本発明の組成物は、４０〜７５重量部のブラシカ・カンペストリス油、１５〜５０重量部の蜜蝋、及び１〜２０重量部のドリオバラノプス・カンフォラを含有する。
さらなる実施態様に従って、本発明の組成物は、５５〜６５重量部のブラシカ・カンペストリス油、２５〜３５重量部の蜜蝋、及び３〜１３重量部のドリオバラノプス・カンフォラを含有する。
１つの実施態様において、ブラシカ・カンペストリス油、蜜蝋及びドリオバラノプス・カンフォラの比がほぼ約１：０．５：０．１である。
しかし、本明細書の教示に基づいて当業者が認識することができるように、正確な組成物は変化させることができ、その活性成分の相対的な割合は特別な効果の増加又は減少を提供する任意の方法で変化させることができる。
【００１６】
上記の実施態様の組成物は、付加的な軽減又は他の利点を提供するために、必要に応じて１つ又はそれ以上の他の成分を含んでもよい。例えば、本組成物は、例えば抽出物、チンキ剤、エッセンシャルオイル、浸出油（infused oil）、又は他の任意のオイル等の天然活性成分のような他の活性成分を１つ又はそれ以上、さらに含んでもよい。好ましくは、このような天然の活性成分は、チョウジ油、ショウガ抽出物若しくはショウガ油、ゴマ油、ヒマシ油、グッグル、天然香料、又はこれらの組み合わせから選択される。他の活性成分は、合成活性成分であってもよい。本発明の組成物に含まれ得る天然又は合成の活性成分は、循環増加剤（circulation increasing agent）、関節又は筋肉の緩和剤（joint or muscle soothing agent）、及び筋膜安定剤（muscle membrane stabilizer）からなる群から選択されてもよいが、これらに限定されるものではない。
【００１７】
追加の実施態様において、本組成物は、必要に応じて、１つ又はそれ以上の薬学上許容される賦形剤を含むことができる。このような任意の薬学上許容される賦形剤の例としては、担体；例えば、水、プロピレングリコール、グリセロール、ポリエチレングリコール、シリコーン、並びに／又は、植物油、落花生油、ヒマシ油、カカオバター及び液体パラフィン等のオイルの基本成分；界面活性剤；例えばステアリン酸アルミニウム及び水素化ラノリンの増粘剤；ゲル化剤；安定化剤；乳化剤；分散剤；懸濁剤；保湿剤；皮膚軟化剤；冷却剤、循環増加剤、酸性又はアルカリ性物質；緩衝剤；結晶化阻害剤；潤滑剤；着色剤；香水又はフレグランス；発泡剤；希釈剤；充填剤；結合剤又は防腐剤が含まれる。
さらなる実施態様において、本発明は、上記の実施態様の組成物を含む製剤を提供する。いくつかの実施態様において、本製剤は、水性製剤、シリコーン系製剤、石油系製剤及び天然油系製剤からなる群の１つ又はそれ以上から選択される局所製剤に、本組成物を製剤化するための許容される賦形剤を含んでもよい。好ましい実施態様において、本製剤は、天然の油系製剤のための賦形剤を含む。
【００１８】
他の実施態様に従って、安定性、テクスチャー、色彩、臭気及びその他の特性を向上させるために、さらなる添加剤を本製剤に添加してもよい。
いくつかの実施態様において、上記の実施態様の組成物を含む製剤は、油状、ゲル、クリーム、ローション、香膏又はスプレーの形態で製剤化することができる。
他の側面において、本発明は、痛み、ストレス及び不眠症の状態の１つ又はそれ以上を軽減するための組成物を調製する方法を提供する。
１つの実施態様において、本発明は、４０〜７５重量部のブラシカ・カンペストリス油を６０〜２２５℃の温度で特定の時間、加熱する工程；１５〜５０重量部の蜜蝋を温かいブラシカ・カンペストリス油中で、少なくとも蜜蝋が溶解するまで混合する工程；１〜２０重量部のドリオバラノプス・カンフォラを混合する工程を含む、痛み、ストレス及び不眠症の状態の少なくとも１つを軽減するための製剤を調製する方法を提供する。
【００１９】
１つの実施態様において、本発明は、４０〜７５重量部のブラシカ・カンペストリス油を６０〜２２５℃の温度で特定の時間、加熱する工程；１５〜５０重量部の蜜蝋を温かいブラシカ・カンペストリス中で、少なくとも蜜蝋が溶解するまで混合する工程；前記混合物を熱から取り出す工程；１〜２０重量部のドリオバラノプス・カンフォラを混合する工程を含む、痛み、ストレス及び不眠症の状態の少なくとも１つを軽減するための製剤を調製する方法を提供する。
１つの実施態様において、ブラシカ・カンペストリス油の６０〜２２５℃の温度での加熱が、約１〜約１５分間の時間で実施される。本製剤が製造される量とスケールに応じて、そのような時間は６０〜２２５℃の温度を達成するように変更してもよい。
１つの実施態様において、ブラシカ・カンペストリス油の加熱は６０〜１００℃の温度で実施される。そのような実施態様において、ブラシカ・カンペストリス油の加熱時間は、６０〜１００℃の温度を達成するのに十分な時間である。
【００２０】
１つの実施態様において、ブラシカ・カンペストリス油は本製剤の５５〜６５重量部である。
１つの実施態様において、蜜蝋は本製剤の２５〜３５重量部である。
１つの実施態様において、結晶の形態のドリオバラノプス・カンフォラ又はドリオバラノプス・カンフォラ油は本製剤の３〜１３重量部である。
他の実施態様において、本方法は、防腐剤、乳化剤、他の添加物、及び薬学上許容される剤及び／又は賦形剤を添加する工程をさらに含む。
１つの実施態様において、本発明は、痛み、ストレス及び不眠症の状態の少なくとも１つ又はそれ以上又はすべてを軽減するための、ブラシカ・カンペストリス油、蜜蝋及びドリオバラノプス・カンフォラを含有する組成物の使用を提供する。
【００２１】
１つの実施態様において、本発明は、本発明の組成物を、対象の必要性に従って、患部、炎症領域、頭部又は全身をカバーするのに十分な量、適用することを含む、痛み、ストレス及び不眠症の状態の少なくとも１つを治療する方法を提供する。本組成物は、必要に従って、要望に従って、又は医師、薬剤師、主治医、漢方医、自然療法士若しくは獣医師の助言に従って、対象に投与される。
理解されるように、投与量は、投与期間、及び一般的な投与計画は、症状の重症度、対象の年齢及び／又は一般的健康状態等の不確定要素に応じて、対象の間で異なりうる。一般に、本組成物が局所投与に適した製剤に変換された場合、局所治療のための投与計画は、痛み、ストレス及び不眠症の重症度に応じて、１日に若しくは多数の日の間で、１回、２回、３〜４回若しくは４回以上、患部に適用することである。
痛みを有する対象の場合の１つの実施態様において、約２〜約１０分間の、又は患部で暖かさが感じられる時までの、患部又はその近傍への本製剤の穏やかなマッサージである。
【００２２】
ストレスを軽減するための１つの実施態様において、１０秒〜１分間の額への本製剤の穏やかなマッサージ、又は／及び約５〜２０分間の膝下の脚部、特に足の裏へのマッサージが実施される。
不眠症を有する対象の場合の１つの実施態様において、約５〜２０分間の膝下の脚部、特に足の裏への本製剤の穏やかなマッサージが実施される。同じことが対象の睡眠を導入することが見出された。
いくつかの実施態様において、本製剤又は本組成物は、就寝前に適用される。
本製剤又は本組成物は、ストレスから身体と精神を緩和し、熟睡を得ることに役立つ。本製剤又は本組成物は、痛み及び炎症を軽減するのに有効であることが見出された。本発明の組成物又は製剤は、炎症領域を治療して、肉離れ、捻挫、関節炎、関節リウマチ、滑液包炎、神経痛、筋肉炎、手根管症候群、内部損傷、及び痛みを与える他の状態に伴われる、痛み及び腫脹を軽減するために用いることができる。本発明の組成物又は製剤は、スポーツ、他の活動又は事故の際の痛めた筋肉にも用いることができる。
【００２３】
他の実施態様に従って、本組成物は、マラソン、レース、長時間の歩行若しくは運転、激しい仕事、又は痛み、ストレス若しくは結果として生じる不眠症を引き起こしうる他の激しい活動等の激しい身体活動を行う前に適用される。従って、本組成物は、痛み、ストレス又は不眠症に関係する痛み、ストレス及び不眠症、それ自体を予防するために用いることができる。
本発明の組成物は、痛み、ストレス及び不眠症を軽減するのに有効であり、非常に少数の成分を含有する。すなわち、１つの実施態様では、本発明の組成物は、３つの成分だけを含有する。また、本製剤を調製する方法は、複雑な工程、設備、機械、組み立て、又は非常に大きなエネルギーを必要としない。従って、本発明の組成物及び方法は、非常に単純で経済的であり、痛み、ストレス及び不眠症の１つ以上の状態の治療のために有効であるから、本発明の組成物及び方法は非常に有利である。
【００２４】
ところで、本発明の特定の実施態様に参照が詳細になされる。本発明は、列挙された実施例と共に説明されているが、それらは単に本発明を説明しているだけであって、本発明をそれらの実施態様に限定することを意図していないことが理解されるであろう。それどころか、本発明は、特許請求の範囲で定義された本発明の範囲内に含まれ得る、全ての代替物、改変物及び等価物を包含することを、意図している。本発明の精神及び実質を組み込んで本発明の実施に用いることができる、開示された実施態様の改変物、並びに本明細書に記載された方法及びマテリアルに類似又は均等である多くの方法及びマテリアルは、当業者に想起されうるから、本発明は本開示の範囲内でのすべてを含むと解釈されるべきである。記載された方法及びマテリアルに本発明が決して限定されないことを、当業者は認識するであろう。
【実施例】
【００２５】
実施例１
局所油状製剤の調製
代表的な実施態様として、局所油状製剤を以下の通り、調製した。
ブラシカ・カンペストリス（Brassica campestris）油６２．５０ｍｌを１００℃の温度で、約３〜１０分間、加熱した。蜜蝋３１．２５ｇを温かいブラシカ・カンペストリス油中で、蜜蝋を完全に溶解するように混合した。混合物を熱から取り出し、ドリオバラノプス・カンフォラ（Dryobalanops camphora）６．２５ｇを添加し、混合した。混合物を室温まで放冷した。その後、混合物を瓶詰めした。
【００２６】
実施例２
局所油状製剤の個々の成分と比較した、局所油状製剤の抗炎症及び鎮痛効果の評価
本研究の目的は、実施例１で調製された局所油状製剤（本明細書でＮＭ‐２と言う）と、その個々の成分を、痛み及び随伴する炎症の軽減について評価することである。
［材料および方法］
カラゲニン誘発足浮腫が、ＮＭ−２及びその個々の成分の急性抗炎症及び鎮痛特性を試験するために用いられた。
［理論的根拠］
このモデルは、カラゲニン等の催炎性薬剤（刺激剤）を注射した後にラットの後肢で生成される浮腫を阻害する薬剤の能力を試験する。注射された足の体積が刺激剤の適用の前と後に測定されて、処理された動物の足の体積が疾患コントロール群の足の体積と比較される。
【００２７】
［手順］
体重１５０〜２００ｇの雄性アルビノウィスター（ａｌｂｉｎｏ Ｗｉｓｔａｒ）ラットを本研究に用いた。動物は、殻皮の床材、ステンレス製の蓋付きのポリプロピレン製ケージで維持された。ラットは、市販のラット用飼料とＡｑｕａｇｕａｒｄ（登録商標）水を自由摂取させた。本実験は、インド政府の社会正義貸与省によって承認された動物の倫理規範に従って、ムンバイのＴＮ医科大学及びＢＹＬナイル病院の施設内動物倫理委員会の承認の後に、設計し、行った。
ケタミン／キシラジン麻酔下、滅菌カミソリを用いてラットの背部の毛を除去した。その後、動物を、以下の表１に示した通り、各々６匹を含む６つの異なる群に無作為化した。個々の成分であるブラシカ・カンペストリス油（カラシ油）、蜜蝋、ドリオバラノプス・カンフォラ（樟脳）及び市販の製剤ボベラン  エマルジェル（Ｖｏｖｅｒａｎ ｅｍｕｌｇｅｌ）と比較して、局所油状製剤ＮＭ−２の効果を評価した。
【００２８】
【表１】
0006529189.tif 000002
【００２９】
研究薬剤を、局所的に動物の毛を剃った背中に７日間連続して適用した。８日目に、試験薬剤を通常通り適用し、その３０分後にカラゲニン溶液（１％ｗ／ｖ溶液０．１ｍｌ）を、すべての群の動物の右後足の足の裏に皮下注射した。外くるぶしの高さで足にインクで印を付け、この印まで水銀に浸漬した。足の体積は、カラゲニン注射の直前（０時間）、１時間後、２時間後、３時間後、４時間後、５時間後、及び２４時間後にプレチスモグラフィーで測定した。抗炎症活性の値を、以下に示す足の体積の変化率（％）として表した。
「足の体積の変化率（％）」＝（（Ｖｔ−Ｖ０）／Ｖ０）×１００
（式中、Ｖｔ＝カラゲニン注射から５時間後の足の体積
Ｖ０＝０時間の足の体積）
［統計分析］
すべての値は平均±ＳＤで表される。統計分析は、Ｇｒａｐｈ ｐａｄ ＰＲＩＳＭ ５ソフトウェア（Ｇｒａｐｈ ｐａｄ ソフトウェア社，カリフォルニア州サンディエゴ）を用いて適用した。足の体積の変化率（％）の測定には、群の間で有意差を同定するために、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）と、それに続いてテューキーのポストホックテストを行った。
【００３０】
【表２】
0006529189.tif 000003
値は平均±ＳＤ（ｎ＝６／群）で表される。
＊ Ｐ＜０．０５、＊＊ Ｐ＜０．０１、及び＊＊＊ Ｐ＜０．００１（疾患コントロールと比較した場合）。
♯♯♯ ｐ＜０．００１（ＮＭ−２群と比較した場合）。
＠ Ｐ＜０．０５、＠＠ Ｐ＜０．０１、＠＠＠ Ｐ＜０．００１（ジクロフェナク群と比較した場合）。
上記の表２、及び図１は、動物の足の最大の炎症がカラゲニン注射の２時間後に見られたことを示す。疾病コントロール（Ｐ＜０．０５）、ジクロフェナク、及びＮＭ−２製剤の個々の成分と比較すると、ＮＭ−２製剤を投与したラットの足の体積は有意に減少した。
【００３１】
【表３】
0006529189.tif 000004
値は平均±ＳＤ（ｎ＝６／群）で表される。
＊ Ｐ＜０．０５、＊＊ Ｐ＜０．０１、及び＊＊＊ Ｐ＜０．００１（疾患コントロールと比較した場合）。
♯♯ ｐ＜０．０１（ＮＭ−２群と比較した場合）。
＠ Ｐ＜０．０５、＠＠ Ｐ＜０．０１、＠＠＠ Ｐ＜０．００１（ジクロフェナク群と比較した場合）。
上記の表３、及び図２は、疾病コントロール、ジクロフェナク（Ｐ＜０．０５）、及び個々の成分と比較すると、ＮＭ−２群（Ｐ＜０．００１）では足の体積の体積変化率が有意であったことを示す。また、ＮＭ−２製剤で最大で最も早い利益が見られた。
【００３２】
［概要］
ＮＭ−２製剤は、鎮痛効果として明らかにされた炎症の減少を表す足の体積の顕著な減少を示した。ＮＭ−２の３つの成分の中で、唯一のカラシ油は統計的に有意な抗炎症効果を示した。しかし、この効果、並びにカラシ油、蜜蝋及び樟脳の３つのすべての成分の効果を合わせたものは、ＮＭ−２製剤で見られた効果に比べるとはるかに低かった。従って、ＮＭ−２の抗炎症及び鎮痛活性は、その個々の成分の相乗効果に起因している。結論として、ＮＭ−２製剤は、炎症及び鎮痛の軽減にかなりの有望性を示す。
【００３３】
実施例３
局所油状製剤の個々の成分と比較した、レム睡眠遮断誘発性痛覚過敏（REM sleep deprivation induced hyperalgesia）における局所油状製剤の効果の評価
慢性的に制限された睡眠は、今日、我々の社会の広範で深刻な問題となっている。様々な研究が、古典的なストレス系の活性化、及びアドレナリン、コルチゾール等のストレスホルモンの血漿レベルの上昇を示しているため、睡眠遮断は、極めて頻繁にストレッサーと考えられている。睡眠はそれ自体、ストレス系の抑制作用を有すると思われており、その結果、睡眠遮断によって覚醒時に発生するより高いレベルでのストレス系の活性が維持される。ストレスは、痛み関連現象に関する双務的な効果を有することができる。急性ストレスは、動物及びヒトに無痛覚を発生させることができるが、慢性又は反復性ストレスはまた、痛覚過敏（痛み刺激に対する感受性の増大）や異痛症（無害な刺激をきっかけとする痛み）を発生させることが報告されている。急速眼球運動（ＲＥＭ）睡眠遮断ラットモデルは、睡眠遮断の結果、ストレスの間接的な指標である痛みを伴う電気刺激に対する痛み反応が増加することが示されている、１つのモデルである。
従って、本実験研究は、ＮＭ‐２製剤とその個々の成分の、レム睡眠遮断（不眠症）関連ストレス誘導性痛覚過敏を改善又は減少させる可能性を評価することを目的とした。
【００３４】
［材料および方法］
本研究に、２つの技術：修正されたフラワーポット技術、及びホットプレート法が用いられた。
［修正されたフラワーポット技術の理論的根拠］
修正されたフラワーポット技術は、レム睡眠遮断を誘導するために用いられた。この方法では、ラットが水タンク内の高架プラットフォーム上に９６時間、置かれた。レム睡眠の間、筋肉が無緊張になる。その結果、動物がレム睡眠に入ると、動物はプラットフォームから水に落下する。そこで、動物は目を覚まし、再びプラットフォームに登る。この方法は、レム睡眠を妨げて、他の睡眠ステージを許容する。睡眠遮断された動物が、ホットプレート等の有害な刺激にさらされると、睡眠遮断されていない動物と比べると、痛みの閾値が減少し、痛みに対する感受性が増加する。
［ホットプレート法の理論的根拠］
ラットの足は、皮膚に損傷を与えない温度の熱にも非常に敏感である。ホットプレート上に置かれたラットが示す反応は、ジャンプ、足の引き込み、及び足を舐めることである。従って、この試験は、痛みの閾値、及び軽度の痛みを伴う刺激に対する動物の反応を評価するために用いられる。
【００３５】
［研究手順］
体重１５０〜２００ｇの雄性アルビノウィスター（ａｌｂｉｎｏ  Ｗｉｓｔａｒ）ラットを本研究に用いた。動物は、殻皮の床材、ステンレス製の蓋付きのポリプロピレン製ケージで維持された。ラットは、市販のラット用飼料とＡｑｕａｇｕａｒｄ（登録商標）水を自由摂取させた。動物収容施設の温度条件は、２５±２℃及び相対湿度６５±５％で維持された。本実験は、インド政府の社会正義貸与省によって承認された動物の倫理規範に従って、ムンバイのＴＮ医科大学及びＢＹＬナイル病院の施設内動物倫理委員会の承認の後に、設計し、行った。
ケタミン／キシラジン麻酔下、滅菌カミソリを用いてラットの背部の毛を除去した。その後、動物を、以下の表４に示した通り、各々６匹を含む６つの異なる群に無作為化した。非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）のジクロフェナクは、以下の２つの理由で陽性コントロールとして用いた。１つ目の理由は、利用可能な局所用の抗ストレス剤又は不眠剤が知られていないことであり、２つ目の理由は、評価されるパラメーターが有害刺激に対する反応であることである。
本研究は、ＮＭ−２製剤の個々の成分であるカラシ油、蜜蝋、樟脳及び市販のジクロフェナク製剤と比較して、ＮＭ−２製剤の効果を評価するために行われた。
【００３６】
【表４】
0006529189.tif 000005
【００３７】
睡眠遮断を誘導するために、高さ９ｃｍ、直径６ｃｍの複数のプラットフォームを有するアクリルボックス（２４ｃｍ×１８ｃｍ×１８ｃｍ）を用いた。ボックス内にプラットフォームの下１ｃｍの高さまで水を充填した。６匹の動物を各プラットフォーム上に９６時間置いた。拘束ストレスを減らすために、１つのプラットフォームは空いた状態に保った。９６時間の終わりに、動物をボックスから取り出し、ホットプレートを用いる試験に供した。ホットプレートの温度を５０±２℃に設定した。痛みを伴う刺激に対する動物の反応（足を舐めること、ジャンプ、足の引き込み）を観察し、動物がホットプレート上に残ることができた時間の長さを記録した。その後、試験物質をそれぞれの動物の背中に適用した。試験物質の適用から１時間後、動物を再びホットプレートにかけて、反応を評価した。カットオフ時間は６０秒に設定した。結果は、試験物質の適用の前と後の足引き込み時間、及び以下の計算式に従って計算された痛みの閾値の変化率（％）として、報告される。
「痛みの閾値の変化率（％）」＝（（Ｒｔ−Ｒ０）／Ｒ０）×１００
（式中、Ｒｔ＝試験物質の適用後の足引き込み時間
Ｒ０＝試験物質の適用前の足引き込み時間）
【００３８】
［統計分析］
すべての値は平均±ＳＤで表される。統計分析は、Ｇｒａｐｈ ｐａｄ ＰＲＩＳＭ ５ソフトウェア（Ｇｒａｐｈ ｐａｄ ソフトウェア社，カリフォルニア州サンディエゴ）を用いて適用した。痛みの閾値の変化（％）の測定には、群の間で有意差を同定するために、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）と、それに続いてテューキーのポストホックテストを行った。足引き込み時間を測定するために、二元ＡＮＯＶＡと、それに続いてボンフェローニのポストホックテストを、２変数として処置と時間で用いた。ｐ＜０．０５の値は統計的に有意と考えた。
［結果］
【００３９】
【表５】
0006529189.tif 000006
【００４０】
値は平均±ＳＤ（ｎ＝６／群）で表される。
＊ Ｐ＜０．０５、＊＊ Ｐ＜０．０１、及び＊＊＊ Ｐ＜０．００１（疾患コントロールと比較した場合）。
＠ Ｐ＜０．０５、＠＠ Ｐ＜０．０１、＠＠＠ Ｐ＜０．００１（ジクロフェナク群と比較した場合）。
♯ ｐ＜０．０５、♯♯ ｐ＜０．０１、♯♯♯ ｐ＜０．００１（ＮＭ−２群と比較した場合）。
上記の表５、及び図３と図４から以下のことが示される。コントロール、ジクロフェナク（Ｐ＜０．０５）、及び個々の成分と比較すると、ＮＭ−２群（Ｐ＜０．００１）のラットの痛みの閾値は有意に増加した（参照：表５及び図３）。さらに、足引き込み時間の増加の点で明らかにされたＮＭ−２群の痛みの閾値の増加率は、ジクロフェナク群及び個々の成分の群と比較してＮＭ−２群で著しく最も高かった（参照：表５及び図４）。
【００４１】
［概要］
ＮＭ−２製剤を用いた治療は、疾患コントロール群と比較して、足引き込み時間の顕著な増加、従って痛み閾値の変化率での顕著な増加を示した。ＮＭ−２製剤で見られた効果は、その個々の成分のそれぞれよりも大きかった。このことから、レム睡眠遮断誘発性痛覚過敏を克服するＮＭ−２の活性は、その個々の成分の相乗効果に起因していることが示された。従って、睡眠遮断誘発性痛覚過敏を軽減するＮＭ−２製剤の効果は、ＮＭ−２製剤がストレスを軽減する特性を有することを示している。
上記の結果を考慮すれば、達成された本発明の製剤の様々な効果は、その個々の成分の相乗的活性に起因することが分かる。
【００４２】
本開示を詳細に記載した通り、添付の特許請求の範囲で定義される本開示の範囲から逸脱することなく、上記の組成物、製品及び方法において改良及び変更が可能であることは明らかであろう。
【図１】
0006529189.tif 000007
【図２】
0006529189.tif 000008
【図３】
0006529189.tif 000009
【図４】
0006529189.tif 000010