(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタン又はその薬理学的に許容しうる酸付加塩を有効成分として含有する注意欠如・多動性障害の予防又は治療剤。
【請求項２】
有効成分が、（−）−１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタン又はその薬理学的に許容しうる酸付加塩である請求項１に記載の注意欠如・多動性障害の予防又は治療剤。
【請求項３】
有効成分が、更に他の注意欠如・多動性障害の予防又は治療のための薬物から選択される薬物との組み合わせに係るものである請求項１又は２に記載の注意欠如・多動性障害の予防又は治療剤。
【請求項４】
他の注意欠如・多動性障害の予防又は治療のための薬物が、メチルフェニデ−ト、アトモキセチン、アンフェタミン、デキストロアンフェタミン、リスデキサンフェタミン、グアンファシン、クロニジン又はブプロピオンである、請求項３に記載の注意欠如・多動性障害の予防又は治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタンまたはその薬理学的に許容しうる酸付加塩を有効成分として含有する注意欠如・多動性障害の予防および治療剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
注意欠如・多動性障害（attention-deficit/hyperactivity disorder、以下「ＡＤＨＤ」と言う場合がある）は、注意力の低下による注意散漫、活動過多、衝動性を中核症状とする発達障害に分類される精神疾患である。米国精神医学会の精神疾患の診断・統計マニュアル改訂第四版(ＤＳＭ-ＩＶ-ＴＲ)では、推定有病率は学齢期の３〜７％、成人期の２〜４％で、男女比は２〜９：１と記載されている。このＤＳＭ−ＩＶを基にした疫学調査によると、日本人の有病率は５．６％と報告されている。また、ＡＤＨＤでは、学習障害、うつ病、アスペルガー症候群、反抗挑戦性障害等の併存障害が認められる。神経生物学的基盤としては、小脳、脳梁膨大部、大脳皮質、線条体等の容積減少（形態的異常）あるいはモノアミン神経機能の不均衡（機能的異常）等が報告されているが、病因の詳細は不明である。【０００３】
ＡＤＨＤの発病原因としては、神経伝達物質であるドーパミンとＡＤＨＤとの間に関連性があるとされ（非特許文献１)、ＡＤＨＤの感受性関連遺伝子の探索研究では、ドーパミントランスポーターなどのドーパミン関連遺伝子の関与が示唆された。
しかしながら、更に、周産期異常あるいは家庭環境等の後天的要因等や、ドーパミン遺伝子以外の種々の遺伝子の関与が報告され、現在では、ＡＤＨＤの発病原因には、複数の遺伝的素因に加え、多様な神経化学的要因および環境的要因が複雑に関連していると考えられている（非特許文献２、非特許文献３）。【０００４】
ＡＤＨＤの治療は、行動療法（社会性の発達促進）と薬物療法（症状のコントロール）により行われている。現在のところ、薬物療法において使用される薬物は、中枢刺激薬のアンフェタミン、デキストロアンフェタミン，リスデキサンフェタミンなどのアンフェタミン類およびメチルフェニデート、非中枢刺激薬のアトモキセチン、グアンファシンおよびクロニジンに大別される（日本ではメチルフェニデートおよびアトモキセチンが承認済、２０１３年現在）。アンフェタミン類、メチルフェニデートおよびアトモキセチンは、脳内の細胞膜モノアミントランスポーターをターゲット分子とする薬物である。【０００５】
現在ＡＤＨＤ治療薬としてメチルフェニデートが最も有効性が高く、第一選択薬として使用されている。メチルフェニデートは、ノルエピネフリン（ＮＥＴ）およびドーパミントランスポーター（ＤＡＴ）への親和性が強く、中核症状に対して迅速に効果を発揮する。【０００６】
しかし、その第一選択薬であるメチルフェニデートであっても、無効あるいは不寛容の症例が多く、ＡＤＨＤの患者の約３割に対しては無効であることが報告されている。また、中枢刺激性が強く、食欲不振、頭痛、不眠等の副作用がみられる。ＡＤＨＤ患者の多くは学齢期の児童であり、長期の服用による薬物依存性の形成、薬物乱用のリスクなどの悪影響も懸念される。更に、メチルフェニデートは、利用可能な経口投与用錠剤の型が即時放出型錠剤と徐放型錠剤の二つしかなく、患者の覚醒時間中の重要な部分の行動抑制障害（Behavioral Inhibition Disorder; ＢＩＤ）の治療を有効にするような投薬ができないことなどの問題が指摘されている（特許文献２）。また、メチルフェニデートと同様に中枢刺激薬であるアンフェタミン、デキストロアンフェタミン，リスデキサンフェタミンなどのアンフェタミン類がＡＤＨＤの治療に用いられるが、これらアンフェタミン類は、薬物依存性などの副作用が強く、覚せい剤として厳しい規制を受ける薬剤であり、その取り扱いが難しい。【０００７】
一方、中枢刺激薬無効例あるいは依存、乱用傾向、併存障害、副作用等がみられる患者に対しては非中枢刺激薬のアトモキセチンが処方される。
アトモキセチンは、ＮＥＴへの選択性が高く、乱用傾向を認めず、また、副作用は比較的少ない。しかし、１日１〜２回の服用を数週間以上継続しなければ安定した効果の発現には至らない。また、効力[ＡＤＨＤ評価スケールに基づく改善効果の大きさである効果サイズ＝（薬物処置群の平均値−対象群の平均値）／対象群の標準偏差]はメチルフェニデートと比較して低いことが臨床試験により示唆されている。従って中枢刺激薬での無効例、依存・乱用のリスクが懸念される場合、副作用、併存障害等が懸念される場合に選択されている。【０００８】
アトモキセチンは、ＡＤＨＤ症状の改善を示し、メチルフェニデートで危惧される依存形成や中枢刺激作用に基づく副作用発現の可能性が低いものの、効力が弱く、薬効発現の遅さが臨床上の隘路になっている。そして、メチルフェニデートより低いとされる副作用であっても、小児を対象とした国内臨床試験における安全性評価対象例２７８例中２０９例（７５．２％）に副作用が報告され（主なものは頭痛（２２．３％）、食欲減退（１８．３％）、傾眠（１４．０％）、腹痛（１２．２％）、悪心（９．７％））で、日本人およびアジア人の成人を対象とした臨床試験における安全性評価対象例３９２例（日本人患者２７８例を含む）中３１５例（８０．４％）に副作用が報告され、主なものは悪心（４６．９％）、食欲減退（２０．９％）、傾眠（１６．６％）、口渇（１３．８％）、頭痛（１０．５％））、と依然として高頻度に副作用が表れている（医薬品添付文書）。また、ＡＤＨＤモデルラット、あるいは正常ラットにおいて、メチルフェニデートは投与量依存的に行動量の増加を示すが、アトモキセチンは投与量を増加しても行動量は増加せず、また、探索期の行動量の抑制、すなわち鎮静作用を示すことが示唆されている。【０００９】
グアンファシンおよびクロニジンは、上記のようなモノアミントランスポーターに親和性を有する薬物とは薬理作用が異なり、シナプス前膜および後膜のアドレナリンα2受容体アゴニスト作用を介して薬効を発揮するが、持続性製剤での効力はアトモキセチンと同程度であることが示されている。さらに、既存のＡＤＨＤ治療薬で効果が不十分な場合は、症状に合わせて気分安定薬、抗うつ薬、抗精神病薬、抗不安薬等が処方されているものの、ＡＤＨＤの病態に合わせた治療設計はされておらず、中核症状に対する効果は部分的である。【００１０】
ブプロピオンは、ノルエピネフリンおよびドーパミン再取り込み阻害薬（ＤＮＲＩ）として作用する抗うつ薬の一種であり、メチルフェニデートやアトモキセチンが効かないＡＤＨＤ患者、またはかえって悪化するようなタイプの患者に応急的に処方されているが、やはりＡＤＨＤの中核症状を改善する効力は足りない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】特開２００３−８９６４３号公報
【特許文献２】特開２０１３−５６９４４号公報
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Swanson JM et al. Neuropsychology Revieｗ 17:39-59(2007)
【非特許文献２】Franke B et al. Human Genetics 126:13-50(2009)
【非特許文献３】株式会社じほう発行、斉藤 万比古等編、注意欠如・多動性障害−ＡＤＨＤ−の診断・治療ガイドライン、第３版、２００８年
【非特許文献４】Shimazu S et al. Life Science 72:2785-92(2003)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
既存のＡＤＨＤ治療薬には薬物依存性などの副作用発現、覚醒時間内における効果が不充分、効力が不充分等の問題点があった。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本願発明者は、ＡＤＨＤモデル動物のうち、不注意、多動、衝動性の臨床実態をより反映したモデルである脳卒中易発性自然発症高血圧ラット（stroke-prone spontaneously hypertensive rats：SHRSP）の亜系であるSHRSP/Ezo (Japanese Journal of Pharmacology 82 (Suppl 1): 230P (2000), Japanese Journal of Pharmacology 85 (Suppl 1):249P (2001))を用いて、ＡＤＨＤ様症状に対する効果について数多くの薬物の行動薬理学的な検討を鋭意行った結果、１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタン（以下「本発明に使用の化合物」と言うことがある）がＡＤＨＤの予防または治療剤として優れた作用を有することを見出し、この発明を完成するに至った。【００１５】
すなわち、本発明は、
（１）１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタンまたはその薬理学的に許容しうる酸付加塩を有効成分として含有する注意欠如・多動性障害の予防または治療剤、
（２）１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタンが（−）−１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタンである（１）に記載の注意欠如・多動性障害の予防または治療剤、
（３）更に他の注意欠如・多動性障害の予防または治療剤から選択される１種以上の薬剤を組み合わせて用いることを特徴とする（１）または（２）に記載の注意欠如・多動性障害の予防または治療剤、
（４）組み合わせて用いられる他の注意欠如・多動性障害の予防または治療剤が、メチルフェニデート、アトモキセチン、アンフェタミン、デキストロアンフェタミン、リスデキサンフェタミン、グアンファシン、クロニジンまたはブプロピオンである（３）に記載の注意欠如・多動性障害の予防または治療剤、
（５）注意欠如・多動性障害の予防または治療のための１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタンまたはその薬理学的に許容しうる酸付加塩の使用、
（６）１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタンまたはその薬理学的に許容しうる酸付加塩有効量を注意欠如・多動性障害患者に投与する注意欠如多動性障害の治療法、
である。【００１６】
本発明に用いられる本発明に使用の化合物は、以下の化学構造式で表される既知の化合物である(国際公開ＷＯ１９９９／００７６６７号パンフレット参照)。【００１７】
【化１】
0006518397.tif 000002
【００１８】
この本発明に使用の化合物については、それが知られる以前から用いられていたモノアミンオキシダーゼ阻害薬、カテコールアミン取り込み阻害薬、アンフェタミン等の覚醒剤等のカテコールアミン置換型放出促進作用と異なる膜電位依存性エキソサイトーシスの増強に基づくカテコールアミン作動系の活性増強効果（ＣＡＥ／ＳＡＥ（Catecholaminergic and Serotoninergic Activity Enhancer）に優れていることから、過剰なカテコールアミンの放出やカテコールアミン神経終末でのアミン枯渇を誘導しにくいという特徴を有し、行動量異常増加（興奮作用）、中枢神経に対する神経毒性等の副作用および患者に対する応答性低下等の問題が少なく、安全で且つ有用な抗うつ薬、向精神薬、抗パーキンソン病薬、抗アルツハイマー病薬として、優れた作用効果を示すことが知られている。しかしこの本発明に使用の化合物がＡＤＨＤの予防、治療に有効であることは、全く知られていない。【００１９】
この本発明に使用の化合物のＲ配置の(−)体については、Ｓ配置の(＋)体もしくはラセミ体に比して特に優れた薬理活性を有し（国際公開ＷＯ２０００／０２６２０４号パンフレット）、更には、薬物依存症に対する治療剤としての用途（国際公開ＷＯ２００６／０５７２１１号パンフレット）、細胞保護または細胞死抑制の優れた抗アポトーシス作用を有すること（前出の特許文献１）、および脳由来神経栄養因子(ＢＤＮＦ)シグナル活性化作用等を示すことが明らかになっている（前出の非特許文献４）。【００２０】
また、本発明に使用の化合物の製造法は、ラセミ体の製造方法（国際公開ＷＯ１９９９／００７６６７号パンフレット）、Ｒ配置の(−)体およびＳ配置の(＋)体の製造方法（国際公開ＷＯ２０００／０２６２０４号パンフレット、国際公開ＷＯ２００１／００７７０４号パンフレットおよび国際公開ＷＯ２００７／００１０１５号パンフレット）が知られている。【００２１】
ヒトモノアミントランスポーターに対する親和性に関して、本発明に使用の化合物およびメチルフェニデートはＤＡＴ＞ＮＥＴ＞セロトニントランスポーター（ＳＥＲＴ）の順で親和性が高く、ＮＥＴ／ＤＡＴはほぼ同等であるが、ＳＥＲＴに対する親和性(ＳＥＲＴ／ＤＡＴ)は本発明に使用の化合物の方が高い。一方、アトモキセチンはＮＥＴ＞ＳＥＲＴ＞ＤＡＴの順で親和性が高い(Neuropsychopharmacology.27: 699-711(2002))。各モノアミントランスポーターに対する親和性の相対的比の相違から、本発明に使用の化合物は既存のＡＤＨＤ治療薬と異なる薬理学的スペクトラムあるいは特性を有することが示された。【００２２】
本発明に使用の化合物は本発明者らのSHRSP/Ezoを用いた実験により、ＡＤＨＤ様症状に対して改善作用を示し、ＡＤＨＤ治療薬として有用性が示された。さらに、メチルフェニデートは同モデルでの衝動性に対し無効であるのに対し、本発明に使用の化合物は高架式十字迷路試験およびオープンフィールド試験でのインナーゾーン滞在時間の解析結果から、衝動性に対する潜在的な抑制効果を有することが示された。衝動性への寄与が強く示唆されているＳＥＲＴに対する本発明に使用の化合物の親和性がメチルフェニデートと比較して相対的に高いことからも、衝動性への有効性が示された。さらに、ＢＤＮＦヘテロ欠損マウスでは衝動性の亢進が示されており、ＢＤＮＦシグナル活性化作用を有する本発明に使用の化合物は、モノアミン非依存的なメカニズムを介した衝動性の制御機構の可能性が示された。【００２３】
高用量の本発明に使用の化合物が正常ラットの自発運動量を増加させること、また、ＤＡＴならびにＮＥＴへの親和性の相対比のメチルフェニデートの類似性から、本発明に使用の化合物はアトモキセチンとは異なる薬効スペクトラムおよび薬効発現の迅速性を示す。この結果から、本発明に使用の化合物はＡＤＨＤモデル動物SHRSP/Ezoにおける多動性、衝動性および不注意行動に対して、既存薬と同等かそれ以上の有効性を示すことが明らかになった。【００２４】
本発明に使用の化合物である１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタンには、Ｒ配置の(−)体と、Ｓ配置の(＋)体の光学活性体が存在する。本発明においては、光学活性体またはラセミ体あるいはそれらの混合体でもよいが、純粋なＲ配置の(−)体がより好ましい。【００２５】
本発明に使用の化合物の薬理学的に許容しうる酸付加塩としては、塩酸、硫酸、臭化水素酸、硝酸またはメタンスルホン酸等の無機酸、あるいは、グルコン酸、酒石酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸、リンゴ酸、クエン酸またはマンデル酸等の有機酸の付加塩が挙げられる。【００２６】
本発明に使用の化合物は、遊離塩基でもまたは薬理学的に許容しうる塩でも使用可能である。また、通常用いられる無機または有機のｐＨ調整剤を用いて、投与剤中で、塩を遊離塩基の状態に保持してもよいし、遊離塩基を塩の状態に保持してもよく、また、塩と遊離塩基が混合されたものでもよい。
例えば、本発明に使用の化合物の塩を原薬に使用する場合、製剤化前後にｐＨ調整剤として水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、リン酸三ナトリウム、リン酸三カルシウムなどの無機塩基類や、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジイソプロパノールアミン、メチルエタノールアミンなどの有機塩基類などの塩基性化合物を加えることで、投与剤中に遊離塩基として含有させることができる。また、本発明に使用の化合物の原薬に有機塩基を使用する場合、製剤化前後にｐＨ調整剤として塩酸、硫酸、臭化水素酸、硝酸、メタンスルホン酸などの無機酸類やグルコン酸、酒石酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸、リンゴ酸、クエン酸、マンデル酸などの有機酸類などの酸性化合物を加えることで、投与剤中に塩として含有させることができる。【００２７】
本発明に使用の化合物をＡＤＨＤの予防または治療剤として用いる場合、必要に応じて、担体、賦形剤、その他の薬理学的に許容される添加剤とともに調製される。本発明のＡＤＨＤの予防または治療剤は、製剤技術分野において慣用されている添加剤、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、ｐＨ調整剤、等張化剤、界面活性剤、安定化剤、矯味剤、香料、甘味料、溶解補助剤、流動化剤などを用いることが出来る。これら添加剤は、製剤技術分野において慣用の量が用いられ、２種以上を適宜混合してもよい。
本発明のＡＤＨＤの予防または治療剤の投与に際しては、通常の製剤化技法を用い、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤、注射剤、軟膏剤、点眼剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、ローション剤、坐剤、パップ剤、プラスター剤、テープ剤などの形態として、経口的または非経口投与することができる。【００２８】
本発明のＡＤＨＤの予防または治療剤を経口投与剤とする場合は、公知の方法に従い、例えば、賦形剤、崩壊剤、結合剤または滑沢剤等を添加・混合し、必要に応じて圧縮成形や、糖衣または腸溶性その他のコーティングなどを加え、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等にすることができる。賦形剤としては、乳糖、デンプン、結晶セルロース等が挙げられる。崩壊剤としては、デンプン、炭酸水素ナトリウム、カルボキシメチルセルロース等が挙げられる。結合剤としては、デンプン、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースナトリウム等が、滑沢剤としては、ステアリン酸とそのマグネシウムまたはカルシウム塩、タルクなどが挙げられる。【００２９】
本発明のＡＤＨＤの予防または治療剤を口腔内投与剤とする場合には、口腔内に適用できる形態であれば特に限定されず、賦形剤、結合剤、崩壊剤、もしくはそのほかの適切な添加剤を加え、舌下錠、バッカル錠、油脂性タイプ、乳剤性タイプもしくは水溶性タイプなどの軟膏剤、トローチ剤等とすることができる。賦形剤としては、例えば、無水ケイ酸、マンニトール、ソルビトール、無水リン酸カルシウム等が、結合剤としては、トラガント、またはアルギン酸ナトリウム等が挙げられる。滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸とそのマグネシウムまたはカルシウム塩、タルク等が挙げられる。【００３０】
本発明に使用の化合物を坐剤にする場合、用いられるビヒクルとしては、通常坐剤に使用されるものであればいかなるものでもよく、油性ビヒクル、水性ビヒクルなどが挙げられる。油性ビヒクルとしては、中鎖脂肪酸エステルトリグリセライド、グリセリン脂肪酸エステル、カカオ脂、ラウリン脂、牛脂もしくはハードファットなどが挙げられ、水性ビヒクルとしては、マクロゴール、ポリプロピレングリコール、グリセリンなどが挙げられる。【００３１】
本発明のＡＤＨＤの予防または治療剤をテープ剤などの貼付剤とする場合、粘着剤としては、常温で粘着性を有し、皮膚に接した際に皮膚刺激性が少ない（メタ）アクリル系粘着剤、ゴム系粘着剤、シリコン系粘着剤などの粘着剤が望ましい。テープ剤などの経皮吸収製剤は、急激な血中濃度変化が少なく、有効量を長時間安定して持続投与する場合に特に望ましい。【００３２】
本発明のＡＤＨＤの予防または治療剤を注射剤とする場合、必要に応じ、溶剤に、等張化剤、ｐＨ調整剤、緩衝剤、キレート剤、保存剤等を添加し、常法により、静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、皮下注射剤とすることができる。
溶剤としては、注射用水、生理食塩水、植物油、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール等が挙げられる。等張化剤としては、塩化ナトリウムまたはデキストロースが挙げられる。ｐＨ調整剤としては、アルカリもしくは酸性化剤または緩衝剤が挙げられる。また、緩衝剤としては、酢酸塩、クエン酸塩、およびリン酸塩等が挙げられる。キレート剤としては、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）等が挙げられる。保存剤としては、ベンジルアルコールおよびメチルパラベン等が挙げられる。注射剤は、たとえばアンプル、注射器、または、ガラス、プラスチック製のバイアルに任意に収容することができる。【００３３】
投与量は患者の症状、年齢、体重等により変わり得るが、通常成人１日当たり０．１〜１０００mg、好ましくは１〜５００mgを、１回から複数回に分けて投与するか、数日間に１回投与することができる。
【発明の効果】
【００３４】
本発明のＡＤＨＤの予防または治療剤は、メチルフェニデートやアトモキセチンなどの既存のＡＤＨＤ治療薬と異なる薬効スペクトラムを有するものであり、単独でまたは他のＡＤＨＤ治療薬と組み合わせるなども含め、ＡＤＨＤにおける薬物治療の選択肢を拡大するものとして期待される。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】Ｙ字迷路試験におけるSHRSP/Ezoでの交替行動率（左）と総アーム進入回数（右）に対する本発明に使用の化合物の効果を示す図である。          平均値±標準誤差（ｎ＝１０〜１８）、＊（ｐ＜０．０５）、＊＊（ｐ＜０．０１）v.s.ビヒクル（交替行動率）あるいはＹ１試行時(総アーム進入回数）。    ----（破線）は別に実施した遺伝的対照動物のWistar-Kyotoラット（WKY）の交替行動率および進入回数の平均値を表す。
【図２】６０分間のオープンフィールド試験におけるSHRSP/Ezoでの多動性に対する本発明に使用の化合物の効果を示す図である。                        平均値±標準誤差（ｎ＝７）、＊（ｐ＜０．０５）、＊＊（ｐ＜０．０１）v.s.ビヒクル。    ----（破線）は別に実施したWKYの範囲時間における行動量の平均値を表す。
【図３】上段にオープンフィールド試験におけるSHRSP/Ezoでのインナーゾーン（inner zone）滞在時間延長に対する本発明に使用の化合物の効果を示し、下段に行動量当たりの滞在時間を示した。                                平均値±標準誤差（ｎ＝６〜７）、＊（ｐ＜０．０５）、＊＊（ｐ＜０．０１）v.s.ビヒクル。    ----（破線）は別に実施したWKYの範囲時間におけるインナーゾーン滞在時間および行動量当たりの滞在時間の平均値を表す。
【図４】SHRSP/Ezoを用いた１０分間の高架式十字迷路試験における総アーム進入回数（上段左）、オープンアーム進入回数（上段右）、オープンアーム滞在時間（下段左）およびオープンアーム進入回数/総アーム進入回数（下段右）に対する本発明に使用の化合物の効果を示す図である。                  平均値±標準誤差（ｎ＝８〜９）、＊（ｐ＜０．０５）v.s.ビヒクル。    ----（破線）は、別に実施したWKYの総アーム進入回数、オープンアーム進入回数および滞在時間、オープンアーム進入回数/総アーム進入回数の平均値を表す。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
以下、実験等を用いて本発明を更に説明するが、本発明はこれらに実験例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００３７】
１．実験方法
ＡＤＨＤ動物モデルとしては、高血圧自然発症ラット(SHR)が広く用いられている。１９６３年に本態性高血圧モデルとして開発されたSHRは、幼若期に多動性、衝動性、不注意等のＡＤＨＤ症状に類似した行動学的変化を示すことが明らかになった。しかし、雄性優勢性が認められないことやメチルフェニデートの薬効用量が高いこと等から、ＡＤＨＤモデルとしての特徴を十分に反映していない。SHRで認められるＡＤＨＤ様行動異常に関する遺伝子および染色体領域について十分な解明には至っていないが、亜系およびコンジェニックラットを基にした表現型の解析により、異常行動と高血圧とは独立因子であることが示唆されている。その他のＡＤＨＤモデルとして、新生仔期に6-hydroxydopamineを脳内に投与されたラット、ＤＡＴノックアウトマウス、naples high−excitability(NHE)ラット等、いくつかのモデルが報告されているが、いずれの動物モデルも症状の発現、治療薬に対する反応性等から、ＡＤＨＤモデルとしての妥当性が十分であるとは言えない。【００３８】
そこで、本発明者はSHRの亜種である脳卒中易発症高血圧自然発症ラット(SHRSP)を用いて、ＡＤＨＤモデルとしての妥当性を検討してきた。このうち、１９７４年にSHRから作出されたSHRSPの一亜系であるSHRSP/Ezoは、若齢期に多動性、衝動性および不注意といったＡＤＨＤモデルとしての行動薬理学的特徴を有しており、症状の雄性優勢性やメチルフェニデートの有効用量が臨床用量範囲と近似していること等から、臨床実態をより反映したモデルであると考えられている。そこで、本実験では、SHRSP/Ezoを用いて、本発明に使用の化合物のＡＤＨＤ様症状に対する効果について行動薬理学的な評価を行った。
本明細書に記載のすべての試験において、被験物質として本発明に使用する化合物のＲ配置(−)体塩酸塩（以下「ＢＰＡＰ」と言うことがある）および比較対照薬としてメチルフェニデート塩酸塩（SIGMA Aldrich）を生理食塩水に溶解し、投与前に２ml/kgの容量になるよう希釈し、６週齢の雄性SHRSP/Ezoに行動試験の３０分前に全身投与した。尚、ＢＰＡＰは皮下投与（s.c.）とし、メチルフェニデートは皮下投与（s.c.）と腹腔内投与（i.p.）の両ルート間に差がないことを確認したうえで皮下投与（s.c.）または腹腔内投与（i.p.）とした。【００３９】
１）Ｙ字迷路試験による不注意行動の評価
短期作業記憶は、Ｙ字迷路（長さ４５×幅１０×壁高３５cm）を用いた自発的交替行動法により評価した。自発的交替行動とは、げっ歯類がＹ字迷路内の探索において、直前とは異なるアームに進入する習性に基づく行動である。異なる３本のアームを連続して選択するためには、以前に選択したアームを記憶している必要があることから、その遂行には短期作業記憶が不可欠であると考えられている。短期作業記憶の処理効率は、課題遂行に対する適度な注意量と密接に関連するため、短期作業記憶は注意力の側面を包含する。そこで、SHRSP/Ezoの不注意行動の評価を目的にＹ字迷路試験を実施した。
自発的交替行動の測定は、Sarterらの方法に準じ（Psychopharmacology (Berl). 94:491-5(1988)）、以下の手順で行った。２００lux照度条件下、３つのアームの交差点中央にラットを置き、８分間自由に探索させた際に進入したアームを順に記録した。その中で、連続して異なる３つのアームを選択した組み合わせを調べ、その数を自発的交替行動量とした。自発的交替行動量を各アームに進入した総回数(total arm entries)から２を引いた数で割った百分率を自発的交替行動率(alternation rate)とした。例えば、Ｙ字迷路の各アームをＡ、Ｂ、Ｃとし、ラットがACBABACBABの順でアームに進入した場合、自発的交替行動量は５(ACB, CBA, BAC, ACB, CBA）、各アームに進入した総回数は１０、自発的交替行動率は６２．５％となる。なお、ベースライン(薬物未処置)時の群間の自発的交替行動率のばらつきによる薬効評価への影響を考慮するため、薬物評価の３日前に第１回目のＹ字迷路試験を実施し、得られた自発的交替行動率に基づいて群わけを行った。【００４０】
２）オープンフィールド試験による多動行動の評価
新奇環境における自発運動量は、オープンフィールド(幅９０×奥行９０×壁高４０cm,８１区画)を用いて評価した。新奇環境に曝露された動物は、歩行や立ち上がり行動を繰り返して探索行動を示すことから、オープンフィールド試験は動物の活動性、情動性や一般行動の評価に汎用されている。
本実験では、２００lux照度条件下、オープンフィールドの中央にラットを置き、６０分間自由に探索させた際の水平運動量(Crossings:区画移動数)を行動解析システム(Limelight Actimetrics, USA)により解析した。【００４１】
３）高架式十字迷路試験による衝動行動の評価
不安関連行動は、高架式十字迷路(オープンアーム:長さ５０×幅１０cm,エンクローズドアーム:長さ５０×幅１０×壁高４０cm,床上高さ５０cm)を用いて評価した。装置は、床上高さ５０cmで壁のないオープンアームと壁で囲まれたエンクローズドアームが十字型に交差している。オープンアームにいる動物は、高さのある壁のない開放状態により不安に晒されるため、通常の動物ではオープンアームへの滞在は少ない。高架式十字迷路試験は、動物の接近行動(好奇心)と不安が動因となった回避行動との平衡状態を反映しており、動物の不安水準の評価に汎用されている。ＡＤＨＤ患者において不安水準の衝動性への関与が示唆されており、衝動性は不安水準の低下を背景とする側面を包含すると考えられる。
本実験では、２００lux照度条件下、２組のアームの交差点中央にラットを置き、１０分間自由に探索させた際の各アームに進入した総回数(total arm entries）、オープンアーム滞在時間あるいは滞在率（open arm spent time or rate）を行動解析システム(Limelight Actimetrics)により解析した。【００４２】
４）統計解析
得られたデータは平均値±標準誤差として表した。統計解析にはStudent's t-testを用い、危険率５％未満を以って統計学的に有意とした。【００４３】
２．実験結果
１）ＡＤＨＤの第一選択薬メチルフェニデートを比較対照薬とする際の用量の妥当性
オープンフィールド試験による自発運動量の評価の結果、SHRSP/Ezoでは、遺伝的対照動物のWistar-Kyoto(WKY)ラットと比較して１５〜６０分の順応期の水平運動量の有意な増加が認められた。一方で、０〜１５分の探索期においては、SHRSP/EzoとWKYラットとの間で差異は認められなかった。メチルフェニデート(０．０１〜３０mg/kg)の腹腔内投与は、０．０１および０．１mg/kgの用量においてSHRSP/Ezoで認められる多動を有意に抑制したが、１mg/kgでは抑制されなかった。一方で、３および３０mg/kgでは自発運動量の亢進を増悪させた。
高架式十字迷路試験による衝動性の評価において、SHRSP/EzoではWKYラットと比較してオープンアームへの進入回数の増加およびオープンアーム上での滞在時間の延長を示した。一方、エンクローズドアームへの進入回数においてはSHRSP/EzoとWKYラットとの間で差異は認められなかった。メチルフェニデート(０．０１〜１mg/kg)の腹腔内投与は、SHRSP/Ezoで認められるオープンアームへの進入回数の増加およびオープンアーム上での滞在時間の延長に対して統計学的に有意な変化を示さなかった。
Ｙ字迷路試験による不注意行動の評価では、SHRSP/Ezoの交替行動率はWKYラットのそれと比較して有意に低下しており、注意機能低下を包含する短期記憶障害が認められた。また、SHRSP/Ezoでは総アーム進入回数の増加、すなわち多動性も観察された。メチルフェニデート(０．０１〜１mg/kg)の腹腔内投与は、SHRSP/Ezoで認められる交替行動率の低下に対して用量依存的に改善作用を示した。１mg/kgのメチルフェニデートでは、SHRSP/Ezoの交替行動率の低下を改善する一方で、総アーム進入回数の増加に対する有意な亢進が認められた。０．０１および０．１mg/kgではSHRSP/Ezoの総アーム進入数の増加に対する影響は認められなかった。
これらの結果から、SHRSP/Ezoは多動性、衝動性および不注意といったＡＤＨＤ様症状を示し、ＡＤＨＤモデルとしての表面妥当性が確認された。また、これらのＡＤＨＤ様症状に対しメチルフェニデートが有効であったことから予測妥当性も満たしていた。以降の本発明に使用の化合物の薬効評価の際に比較対照薬として用いるメチルフェニデートの用量としては、Ｙ字迷路試験で不注意行動の改善が認められ、かつ、多動性の悪化のリスクが検出できる１mg/kgを用いることにした。【００４４】
２）SHRSP/Ezoでの多動性、衝動性および不注意行動に対する本発明に使用の化合物の薬効評価
２−１）Ｙ字迷路試験
Ｙ字迷路試験による不注意行動の評価の結果、メチルフェニデート（１mg/kg）では、総アーム進入回数を増加させることなく、SHRSP/Ezoで認められる交替行動率の低下に対して改善作用を示した。本発明に使用の化合物(０．０３〜０．３mg/kg)の皮下投与は、０．１〜０．３mg/kgの用量でSHRSP/Ezoの交替行動率の低下を有意に改善したが、０．０３mg/kgでは改善作用は認められなかった。また、０．０３〜０．３mg/kgは1回目の試行(Ｙ１)と比較して、総アーム進入回数を有意に減少させた（図１）。【００４５】
２−２）オープンフィールド試験
比較対照薬メチルフェニデート(１mg/kg)では、SHRSP/Ezoの探索期(０〜１５分)および順応期（１５〜６０分）における多動を悪化させた。ＢＰＡＰ(０．０１〜０．３mg/kg)の皮下投与では、０．０１〜０．１mg/kgにおいて探索期の行動量に影響することなく、順応期の行動量の増加を有意に抑制した。一方、０．３mg/kgでは探索期および順応期の行動量に対する作用は認められなかった（図２）。
また、オープンフィールド試験におけるインナーゾーン(中央の９区画)での滞在時間(inner zone spent time)は不安水準の評価に用いられているため、オープンフィールド試験での副次的評価として単位時間毎(Sec/15min)および行動量(Total crossings)で補正した単位行動当たり（Sec/Count）の滞在時間を解析した（図３）。通常、動物は不安に基づき、装置の側壁に触れながら周辺部を歩行する性質(接触走性)を示すことから、インナーゾーンへの探索行動は少ない。SHRSP/Ezoでは、多動の認められる順応期におけるインナーゾーンでの滞在時間の延長が認められ、順応期での不安水準の低下が示された。メチルフェニデート(１mg/kg)では、探索期のインナーゾーンでの滞在時間が有意に延長し、順応期の不安水準の低下に対する効果は認められなかった。ＢＰＡＰ(０．０１〜０．３mg/kg)では、０．０１〜０．１mg/kgにおいて順応期のインナーゾーンでの滞在時間の有意な短縮が認められ、不安水準の低下を抑制する可能性が示唆された。一方、０．３mg/kgでは順応期の不安水準の低下に対する効果は認められなかった。【００４６】
２−３）高架式十字迷路試験
高架式十字迷路試験による不安関連行動に基づいた衝動性の評価において、メチルフェニデート(１mg/kg)では、SHRSP/Ezoでの総アーム進入回数の増加に対する有意な悪化、すなわち多動の増悪が認められた。オープンアームへの進入回数の増加およびオープンアーム上での滞在時間の延長に対して統計学的に有意な改善作用を示さなかった。本発明に使用の化合物(０．０１〜０．３mg/kg)では、オープンアーム上での滞在時間の延長に対する効果は認められなかったものの、オープンアームへの進入回数に対しては０．１mg/kgにおいて減少傾向(Ｐ＝０．０８)が認められた。副次的な解析として、アーム進入当たりのオープンアーム上での滞在時間を評価したところ、０．１mg/kgにおいて有意な短縮が認められた（図４）。
【産業上の利用可能性】
【００４７】
本試験結果から、本発明のＡＤＨＤの予防または治療剤は衝動性に対してメチルフェニデートより効果を発揮する可能性が示され、メチルフェニデート無効例に対しても治療効果を発揮する可能性が期待される。また、本発明のＡＤＨＤの予防または治療剤は、ラットでのメタンフェタミン探索行動(薬物関連刺激およびメタンフェタミンプライミングによる)に対する抑制作用を示し、その効果用量の本発明に使用の化合物によりメタンフェタミン探索行動が誘発されないことが明らかになっている。本発明のＡＤＨＤの予防または治療剤の依存形成能に関しては、少なくとも治療用量において強い依存形成を惹起しない可能性が示された。また、アトモキセチンは安定した薬効発現までに時間を要するのに対し、中枢刺激作用を有する本発明のＡＤＨＤの予防または治療剤はメチルフェニデートと同等以上に迅速な薬効発現タイプの薬剤として有望である。
これらのことから、本発明のＡＤＨＤの予防または治療剤は、メチルフェニデートやアトモキセチンなどの既存のＡＤＨＤ治療薬と異なる薬効スペクトラムを有するものであり、単独でまたは他のＡＤＨＤ治療薬との組み合わせなども含め、ＡＤＨＤにおける薬物治療の選択肢を拡大するものと期待される。
【符号の説明】
【００４８】
図１におけるＹ１は第１回試行を表す。
図１におけるＹ２は第２回試行を表す。
図１〜４における＊は危険率p＜０．０５を表し、＊＊は危険率ｐ＜０．０１を表す。
図１〜4における棒グラフの識別は、次の通りである。
0006518397.tif 000003
図４におけるＶＥＨはビヒクル（生理食塩水）、ＭＰＨはメチルフェニデートを意味する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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