(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンを含むアミノ酸混合物を含有し、かつアルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンをそれらの合計量で全アミノ酸量１００モルに対して６０モル以上のモル比で含む、脂質代謝促進剤。
【請求項２】
アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンを、全アミノ酸量１００モルに対し、アルギニン：アラニン：フェニルアラニン＝８〜５０モル：１８〜５０モル：１０〜７０モルのモル比で含有する、請求項１に記載の脂質代謝促進剤。
【請求項３】
アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンを、全アミノ酸量１００モルに対し、アルギニン：アラニン：フェニルアラニン＝２５〜３０モル：２５〜３０モル：１０〜１５モルのモル比で含有する、請求項１に記載の脂質代謝促進剤。
【請求項４】
アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンの配合量が、（ｉ）アルギニン：アラニン＝１．５：１〜１：１．５、（ｉｉ）アラニン：フェニルアラニン＝４：１〜１：４、及び（ｉｉｉ）アルギニン：フェニルアラニン＝１：１〜１：４の少なくとも１つの重量比を満たす、請求項１〜３のいずれか１項に記載の脂質代謝促進剤。
【請求項５】
アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンをそれらの合計量で全アミノ酸量１００モルに対して１００モルのモル比で含む、請求項１又は２に記載の脂質代謝促進剤。
【請求項６】
アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンの配合量が、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニン＝１：１：１〜１：１：３の重量比を満たす、請求項１〜５のいずれか１項に記載の脂質代謝促進剤。
【請求項７】
前記アミノ酸混合物が、グリシンをさらに含有し、アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、及びグリシンをそれらの合計量で全アミノ酸量１００モルに対して８５モル以上のモル比で含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の脂質代謝促進剤。
【請求項８】
前記アミノ酸混合物が他のアミノ酸としてプロリン、リジン、チロシン、スレオニン、ロイシン、バリン、イソロイシン、グルタミン酸、トリプトファン、ヒスチジン、セリン、メチオニン、及びアスパラギン酸のみをさらに含有する、請求項１〜４及び７のいずれか１項に記載の脂質代謝促進剤。
【請求項９】
前記アミノ酸混合物が、他のアミノ酸を、全アミノ酸量１００モルに対して下記のモル比で含む、請求項８に記載の脂質代謝促進剤。
プロリン  ０．０１〜４モル
リジン  ０．０１〜２モル
チロシン  ０．０１〜２モル
スレオニン  ０．０１〜２モル
ロイシン  ０．０１〜２モル
バリン  ０．０１〜２モル
イソロイシン  ０．０１〜２モル
グルタミン酸  ０．０１〜１モル
トリプトファン  ０．０１〜１モル
ヒスチジン  ０．０１〜１モル
セリン  ０．０１〜１モル
メチオニン  ０．０１〜０．２モル
アスパラギン酸  ０．０１〜０．１モル
【請求項１０】
アドレナリン分泌亢進状態で作用させるための、請求項１〜９のいずれか１項に記載の脂質代謝促進剤。
【請求項１１】
アドレナリン分泌亢進状態が、運動、ストレス、寒冷暴露、入浴、又は多食による刺激を受けた状態である、請求項１０に記載の脂質代謝促進剤。
【請求項１２】
血中グリセロール濃度上昇、体重増加抑制、血中遊離脂肪酸濃度上昇、血中グルカゴン濃度上昇、血中コルチゾール濃度低減、血中総ケトン体濃度上昇、血中３−ヒドロキシ酪酸濃度上昇、及び褐色脂肪組織中のＵＣＰ−１発現量増加からなる群から選択される少なくとも１つを伴う脂質代謝促進用の、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の脂質代謝促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルギニン、アラニン、及び／又はフェニルアラニンを有効成分として高濃度に含有する脂質代謝促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
食生活やライフスタイルの欧米化に伴い、肥満人口は増加の一途をたどっている。厚生労働省「国民健康・栄養調査結果の概要（２０１０）」によると、日本人の肥満の割合は男性３０．４％、女性２１．１％となっている。さらに、推計２３００万人に達している肥満人口のうち約半分にあたる１１００万人が、高血糖や高脂血症、高血圧症、といったメタボリックシンドローム（生活習慣病）を合併しており、生活の質（ＱＯＬ）を大きく低下させている。これらの疾患の予防・改善には、食事量の制限を介した摂取カロリーのコントロールだけではなく、食品中の栄養素による生体調節機能と運動によるエネルギー消費が、近年大いに注目されている（非特許文献１）。【０００３】
近年、アミノ酸の機能性が注目されている。例えば、スズメバチ成虫のエネルギー源となる幼虫の分泌する唾液中のアミノ酸組成を再現したアミノ酸組成物である「Ｖｅｓｐａ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｍｉｘｔｕｒｅ（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．）」は、摂取後に運動すると、血中リパーゼ活性が上昇して、血中遊離脂肪酸が上昇することなどが知られている（特許文献１〜３及び非特許文献２）。また、アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン及びグルタミンを特定のモル比で含有するアミノ酸組成物については、無酸素運動下での体脂肪を運動エネルギー生産に利用するプロセスを促進することなどが知られている（特許文献４）。さらに、インスリン分泌機能を有するアミノ酸を含有する組成物が、運動等による体力の消耗時におけるスタミナ回復や栄養補給に有用であることも知られている（特許文献５）。その他に、アルギニン、グルタミン、及び分岐鎖アミノ酸を一定量以上含有するアミノ酸組成物（特許文献６）や、アルギニン及びグルタミンを一定量以上含有する、乳幼児用体力増強剤及び運動能力向上剤（特許文献７）も知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平４−１１２８２５号公報
【特許文献２】特開平６−２４９７７号公報
【特許文献３】特開平５−１２７２５８号公報
【特許文献４】特開２００４−３５２６９６号公報
【特許文献５】特開昭６１−２１５３２３号公報
【特許文献６】特開２００５−２７５２４号公報
【特許文献７】特許第４５２６０４７号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】河田照雄ら編集、日本栄養・食料学会監修  「肥満と脂肪エネルギー代謝−メタボリックシンドロームへの戦略−」、建帛社、ｐｐ．２１７−２３８（２００８）
【非特許文献２】Ｔｓｕｃｈｉｔａ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ、Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ａ  Ｖｅｓｐａ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｍｉｘｔｕｒｅ  ｉｄｅｎｔｉｃａｌ  ｔｏ  ｈｏｒｎｅｔ  ｌａｒｖａｌ  ｓａｌｉｖａ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ  ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｉｎｄｉｃｅｓ  ｏｆ  ｒｕｎｎｉｎｇ  ｒａｔｓ．、Ｎｕｔｒ  Ｒｅｓ、１７（６）、ｐｐ．９９９−１０１２（１９９７）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、より効果的に脂質代謝を促進して体脂肪を効率的に減少させることができる脂質代謝促進剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、脂肪の代謝を促進し、体脂肪を効率的に減少させるような素材について鋭意研究を行ったところ、食経験のある主要なアミノ酸である、アルギニン、フェニルアラニン、及びアラニンを高濃度に含有するアミノ酸混合物に高い脂質代謝促進作用及び抗肥満作用があることを見出し、本発明を完成させた。【０００８】
具体的には、アドレナリンを投与した動物の血中グリセロール変化量をモニターしたところ、従来のアミノ酸組成物よりも、アルギニン、フェニルアラニン、及びアラニンの２つ以上の組合せを高濃度に含有する組成物が脂肪の分解を顕著に促進することを見出した。さらに、高脂肪食を給餌して運動負荷をかけた動物、及び運動負荷をかけたヒトにおいても、脂質代謝促進効果を確認することができた。【０００９】
すなわち、本発明は、以下の態様を包含する。【００１０】
［１］  アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンからなる群より選択される少なくとも２つのアミノ酸を含むアミノ酸混合物を含有し、かつ前記少なくとも２つのアミノ酸をそれらの合計量で全アミノ酸量１００モルに対して６０モル以上のモル比で含む、脂質代謝促進剤。【００１１】
［２］  前記アミノ酸混合物がアルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンを含有する、上記［１］に記載の脂質代謝促進剤。【００１２】
［３］  アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンを、全アミノ酸量１００モルに対し、アルギニン：アラニン：フェニルアラニン＝８〜３０モル：１８〜３０モル：１０〜２０モルのモル比で含有する、上記［１］又は［２］に記載の脂質代謝促進剤。【００１３】
［４］  アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンの配合量が、（ｉ）アルギニン：アラニン＝１．５：１〜１：１．５、（ｉｉ）アラニン：フェニルアラニン＝４：１〜１：４、及び（ｉｉｉ）アルギニン：フェニルアラニン＝１：１〜１：４の少なくとも１つの重量比を満たす、上記［１］〜［３］のいずれかに記載の脂質代謝促進剤。【００１４】
［５］  アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンをそれらの合計量で全アミノ酸量１００モルに対して１００モルのモル比で含む、上記［１］〜［４］のいずれかに記載の脂質代謝促進剤。【００１５】
［６］  前記アミノ酸混合物が、グリシンをさらに含有し、アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、及びグリシンをそれらの合計量で全アミノ酸量１００モルに対して８５モル以上のモル比で含む、上記［１］〜［４］のいずれかに記載の脂質代謝促進剤。【００１６】
［７］  前記アミノ酸混合物が他のアミノ酸としてプロリン、リジン、チロシン、スレオニン、ロイシン、バリン、イソロイシン、グルタミン酸、トリプトファン、ヒスチジン、セリン、メチオニン、及びアスパラギン酸のみをさらに含有する、上記［１］〜［４］及び［６］のいずれかに記載の脂質代謝促進剤。【００１７】
［８］  前記アミノ酸混合物が、他のアミノ酸を、全アミノ酸量１００モルに対して下記のモル比で含む、上記［７］に記載の脂質代謝促進剤。
プロリン  ０．０１〜４モル
リジン  ０．０１〜２モル
チロシン  ０．０１〜２モル
スレオニン  ０．０１〜２モル
ロイシン  ０．０１〜２モル
バリン  ０．０１〜２モル
イソロイシン  ０．０１〜２モル
グルタミン酸  ０．０１〜１モル
トリプトファン  ０．０１〜１モル
ヒスチジン  ０．０１〜１モル
セリン  ０．０１〜１モル
メチオニン  ０．０１〜０．２モル
アスパラギン酸  ０．０１〜０．１モル【００１８】
［９］  アドレナリン分泌亢進状態で作用させるための、上記［１］〜［８］のいずれかに記載の脂質代謝促進剤。【００１９】
［１０］  アドレナリン分泌亢進状態が、運動、ストレス、寒冷暴露、入浴、又は多食による刺激を受けた状態である、上記［９］に記載の脂質代謝促進剤。【００２０】
［１１］  血中グリセロール濃度上昇、体重増加抑制、血中遊離脂肪酸濃度上昇、血中グルカゴン濃度上昇、血中コルチゾール濃度低減、血中総ケトン体濃度上昇、血中３−ヒドロキシ酪酸濃度上昇、及び褐色脂肪組織中のＵＣＰ−１発現量増加からなる群から選択される少なくとも１つを伴う脂質代謝促進用の、上記［１］〜［１０］のいずれかに記載の脂質代謝促進剤。【００２１】
本発明はさらに、以下の態様も包含する。【００２２】
[ａ]  アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンを有効成分として含有し、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンのモル数の合計が、アミノ酸全てのモル数の合計１００モルに対して６０モル以上である、脂質代謝促進剤、
[ｂ]  アルギニンを８〜３０モル、アラニンを１８〜３０モル、フェニルアラニンを１０〜２０モル、のモル比で含有する、前記[ａ]に記載の脂質代謝促進剤、
[ｃ]  アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンのモル数の合計が、アミノ酸全てのモル数の合計１００モルに対して１００モルある、前記[ａ]又は[ｂ]に記載の脂質代謝促進剤、
[ｄ]  アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、及びグリシンを有効成分として含有し、アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、及びグリシンのモル数の合計が、アミノ酸全てのモル数の合計１００モルに対して８５モル以上である、脂質代謝促進剤、
[ｅ]  アルギニンを８〜３０モル、アラニンを１８〜３０モル、フェニルアラニンを１０〜２０モル、グリシンを２０〜２７モル、のモル比で含有する、前記[ｄ]に記載の脂質代謝促進剤、
[ｆ]  アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、及びグリシンのモル数の合計が、アミノ酸全てのモル数の合計１００モルに対して１００モルある、前記[ｄ]又は[ｅ]に記載の脂質代謝促進剤、
[ｇ]  さらに、他のアミノ酸としてプロリン、リジン、チロシン、スレオニン、ロイシン、バリン、イソロイシン、グルタミン酸、トリプトファン、ヒスチジン、セリン、メチオニン、及びアスパラギン酸のみを含有する、前記[ａ]又は[ｄ]に記載の脂質代謝促進剤、
[ｈ]  さらに、他のアミノ酸として下記のアミノ酸のみを、下記のモル比で含有する、前記[ｂ]又は[ｅ]に記載の脂質代謝促進剤、
プロリンを０．０１〜４モル
リジンを０．０１〜２モル
チロシンを０．０１〜２モル
スレオニンを０．０１〜２モル
ロイシンを０．０１〜２モル
バリンを０．０１〜２モル
イソロイシンを０．０１〜２モル
グルタミン酸を０．０１〜１モル
トリプトファンを０．０１〜１モル
ヒスチジンを０．０１〜１モル
セリンを０．０１〜１モル
メチオニンを０．０１〜０．２モル
アスパラギン酸を０．０１〜０．１モル
[ｉ]  アドレナリンの分泌が亢進する状態で摂取することを特徴とする、前記[ａ]〜[ｈ]のいずれか１つに記載の脂質代謝促進剤、
[ｊ]  アドレナリンの分泌が亢進する状態が、運動、ストレス、寒冷暴露、入浴、又は多食による刺激を受ける状態である、前記[ｉ]に記載の脂質代謝促進剤、
[ｋ]  褐色脂肪組織中のＵＣＰ−１の発現量を増加することを特徴とする、前記[ａ]〜[ｊ]のいずれか１つに記載の脂質代謝促進剤、
[ｌ]  脂肪から脂肪酸への分解を促進することを特徴とする、前記[ａ]〜[ｊ]のいずれか１つに記載の脂質代謝促進剤、
[ｍ]  脂肪酸から熱への変換を促進することを特徴とする、前記[ａ]〜[ｊ]のいずれか１つに記載の脂質代謝促進剤、
[ｎ]  脂肪酸からエネルギーへの変換を促進することを特徴とする、前記[ａ]〜[ｊ]のいずれか１つに記載の脂質代謝促進剤。
【発明の効果】
【００２３】
本発明の脂質代謝促進剤は、脂質代謝を促進する効果があり、とりわけアドレナリン分泌亢進状態で効率よく脂質代謝促進効果を示すことができる。【００２４】
本明細書は本願の優先権主張の基礎となる日本国特許出願特願2013-168690号の開示内容を包含する。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】実施例１で得られた血中グリセロール濃度の変化率（グリセロールＡＵＣ変化率；Ｇｌｙｃｅｒｏｌ  ＡＵＣ  ｃｈａｎｇｅ  （％  ｏｆ  Ｖｅｈｉｃｌｅ  ｇｒｏｕｐ）を示す。
【図２】実施例２で得られた血中グリセロール濃度の変化量（Δグリセロール）の推移を示す。＃：ｐ＜０．０５（ｖｓ．  Ｖｅｈｉｃｌｅ群、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ検定）。
【図３】実施例３で得られた血中グリセロール濃度の変化量（Δグリセロール）の推移を示す。平均値±標準誤差を表す。＊：ｐ＜０．０５（ｖｓ．  Ｖｅｈｉｃｌｅ群、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ検定）。
【図４】実施例４で測定した体重の推移（図４Ａ）及び試験期間中の摂餌量／体重（図４Ｂ）を示す。平均値±標準誤差を表す。Ｎｏｒｍａｌ群：３日目（ｄａｙ３）〜４２日目（ｄａｙ４２）で体重に有意差あり。製造例３群：３日目（ｄａｙ３）〜３９日目（ｄａｙ３９）で体重に有意差あり。（ｖｓ．  Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群、ｐ＜０．０５、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ検定）。
【図５】実施例４で測定した腎周囲の脂肪重量を示す。平均値±標準誤差を表す。＊：ｐ＜０．０５（ｖｓ．  Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ検定）。
【図６】実施例４で測定した褐色脂肪組織中のＵＣＰ−１発現量を示す。平均値±標準誤差を表す。＊：ｐ＜０．０５（ｖｓ．  Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ検定）。
【図７】実施例５で得られた経時的な呼吸交換比の測定結果（図７Ａ）及び呼吸交換比の変化量（Δ呼吸交換比）の結果（図７Ｂ）を示す。平均値±標準誤差を表す。＃：ｐ＜０．０５（ｖｓ．  プラセボ群、１標本ｔ検定）。
【図８】実施例５で得られた、血中グリセロール濃度（図８Ａ）及び血中遊離脂肪酸濃度（図８Ｂ）の経時的な測定結果を示す。平均値±標準誤差を表す。
【図９】実施例５で得られた、血中コルチゾール濃度（図９Ａ）、血中グルカゴン濃度（図９Ｂ）、血中インスリン濃度（図９Ｃ）、及び血糖（図９Ｄ）の経時的な測定結果を示す。平均値±標準誤差を表す。＃：ｐ＜０．０５、＃＃：ｐ＜０．０１（ｖｓ．  プラセボ群、１標本ｔ検定）。
【図１０】実施例５で得られた、血中総ケトン体濃度（図１０Ａ）、血中３−ヒドロキシ酪酸濃度（図１０Ｂ）、及び血中アセト酢酸濃度（図１０Ｃ）の経時的な測定結果を示す。平均値±標準誤差を表す。＃：ｐ＜０．０５（ｖｓ．  プラセボ群、１標本ｔ検定）。
【図１１】実施例５で得られた、血中成長ホルモン濃度（図１１Ａ）、血中アドレナリン濃度（図１１Ｂ）、及び血中ノルアドレナリン濃度（図１１Ｃ）の経時的な測定結果を示す。平均値±標準誤差を表す。
【図１２】実施例９で得られた、血中グルカゴン濃度の測定結果を示す。＊：ｐ＜０．０５（ｖｓ．  Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ検定）。
【図１３】実施例９で得られた、肝臓中のカルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ活性の測定結果を示す。＊：ｐ＜０．０５（ｖｓ．  Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ検定）。
【図１４】実施例９で得られた、肝臓中のアシルＣｏＡオキシダーゼ活性の測定結果を示す。＊：ｐ＜０．０５（ｖｓ．  Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ検定）。
【図１５】実施例１２で得られた、血中グリセロール濃度の変化量（Δグリセロール）を示す。
【図１６】実施例１３で得られた、血中グリセロールＡＵＣ（ｍｉｎ・ｍｇ／Ｌ）の測定結果を示す。＊：ｐ＜０．０５（ｖｓ．  コントロール群、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ検定）。
【図１７】実施例１４で得られた、血中グリセロールＡＵＣ（ｍｉｎ・ｍｇ／Ｌ）の測定結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
以下、本発明を詳細に説明する。ただし、本発明は以下の好ましい実施態様に限定されず、本発明の効果を発揮する範囲内で自由に変更できるものである。
【００２７】
本発明は、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンからなる群より選択される少なくとも２つのアミノ酸を含むアミノ酸混合物を含有し、かつ前記少なくとも２つのアミノ酸をそれらの合計量で全アミノ酸量１００モルに対して６０モル以上のモル比で含む、脂質代謝促進剤に関する。本発明は、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンからなる群より選択される少なくとも２つのアミノ酸に加えて、アミノ酸混合物の成分としてグリシンをさらに含有する脂質代謝促進剤にも関する。本発明の脂質代謝促進剤は、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニン、又はアルギニン、アラニン、フェニルアラニン及びグリシンを、有効成分として含有する。
【００２８】
本発明の有効成分であるアルギニン（Ａｒｇｉｎｉｎｅ）は、非必須アミノ酸の１つであり、それには、Ｄ体とＬ体とが存在する。Ｌ−アルギニンのＣａｓ  Ｎｏ．は、７４−７９−３であり、その別名は、（Ｓ）−２−アミノ−５−グアニジノペンタン酸、（Ｓ）−２−アミノ−５−（アミジノアミノ）吉草酸、Ｌ−（＋）−アルギニン、アルギＵである。アルギニンの略号として、Ａｒｇ、Ｒを用いる場合もある。アルギニンは、水や蟻酸に溶けやすく、希塩酸に溶け、エタノールにはほとんど溶けない（第十六改正日本薬局方）。アルギニンは、肉類等の多種のタンパク質などの様々な素材や食品に含まれていることが知られている。アルギニンは、尿素回路の中間体として生合成されるが、速やかに分解されるため子供では必須アミノ酸とされている。アルギニンは、成長ホルモンの分泌促進、免疫機能の向上に関与することが知られている。
【００２９】
本発明の有効成分であるアラニン（Ａｌａｎｉｎｅ）は、非必須アミノ酸の１つであり、それには、Ｄ体とＬ体とが存在する。Ｌ−アラニンのＣａｓ  Ｎｏ．は、５６−４１−７であり、その別名は、（Ｓ）−２−アミノプロピオン酸、（２Ｓ）−２−アミノプロパン酸、α−アラニン、Ｌ−（＋）−アラニンである。アラニンの略号として、Ａｌａ、Ａを用いる場合もある。アラニンは、水や蟻酸に溶けやすく、エタノールには、ほとんど溶けない（第十六改正日本薬局方）。アラニンは、多種のタンパク質などの様々な素材や食品に含まれていることが知られている。アラニンは、タンパク質の構成アミノ酸の一種であり、結合組織の材料であることが知られている。
【００３０】
本発明の有効成分であるフェニルアラニン（Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）は、必須アミノ酸の１つであり、それには、Ｄ体とＬ体とが存在する。Ｌ−フェニルアラニンのＣａｓ  Ｎｏ．は、６３−９１−２であり、その別名は、（Ｓ）−α−アミノベンゼンプロパン酸、（２Ｓ）−２−アミノ−３−フェニルプロパン酸、（Ｓ）−３−フェニル−２−アミノプロピオン酸、Ｌ−β−フェニルアラニン、Ｌ−（−）−フェニルアラニンである。フェニルアラニンの略号として、Ｐｈｅ、Ｆを用いる場合もある。フェニルアラニンは、蟻酸に溶けやすく、水にやや溶けにくく、希塩酸に溶け、エタノールにはほとんど溶けない（第十六改正日本薬局方）。フェニルアラニンは、多種のタンパク質などの様々な素材や食品に含まれていることが知られている。
【００３１】
グリシン（Ｇｌｙｃｉｎｅ）は、非必須アミノ酸の１つである。グリシンのＣａｓ  Ｎｏ．は、５６−４０−６であり、その別名は、２−アミノ酢酸、α−アミノ酢酸、グリコリキシル、グリココールである。グリシンの略号として、Ｇｌｙ、Ｇを用いる場合もある。グリシンは、水や蟻酸に溶けやすく、エタノールには、ほとんど溶けない（第十六改正日本薬局方）。グリシンは、コラーゲン、ゼラチン、魚貝類などの様々な素材や食品に含まれていることが知られている。グリシンは、糖原性を持ち、ヘモグロビン、肝臓中の酵素などの構成成分であることや、中枢神経における神経伝達物質であることが知られている。
【００３２】
本発明において、アルギニン、フェニルアラニン、アラニン、グリシン又は他のアミノ酸は、フリーベースや水和物であってもよく、また、有機酸（酢酸、酒石酸、脂肪酸など）、有機塩基、無機酸（塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、過塩素酸など）、無機塩基（カリウム、ナトリウム、亜鉛など）と塩を形成していても構わない。そして、アルギニン、フェニルアラニン、アラニン、グリシンは、Ｄ体とＬ体のいずれを用いてもよい。
【００３３】
本発明において、アルギニン、フェニルアラニン、アラニン、グリシン又は他のアミノ酸は、アルギニン、フェニルアラニン、アラニン、グリシン又は他のアミノ酸を多く含む素材や食品などから、搾汁、濃縮、精製、結晶化又は各種の溶媒で抽出するなどして得ることができる。各種の溶媒として、水や通常に用いられる溶媒、例えば、アルコール類、炭化水素類、有機酸、有機塩基、無機酸、無機塩基、超臨界流体等を単独で、あるいは複数を組み合わせて用いることが可能である。また、微生物で生産したものを用いることも可能である。そして、化学的に合成されたものを用いることも可能である。本発明において、アルギニン、フェニルアラニン、アラニン、グリシン又は他のアミノ酸は、それらの複数の由来のものを組み合わせて用いてもよい。
【００３４】
本発明の脂質代謝促進剤は、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンからなる群から選択される少なくとも２つのアミノ酸の組合せ、例えばアルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンを有効成分として含有する。本発明の脂質代謝促進剤は、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンのモル数の合計が、含有アミノ酸全てのモル数の合計（全アミノ酸量）１００モルに対して６０モル以上、７０モル以上、８０モル以上、９０モル以上、又は１００モルのモル比となる量で、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンからなる群から選択される少なくとも２つのアミノ酸を含有することができる。一実施形態では、本発明の脂質代謝促進剤において、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンの合計量は、含有アミノ酸全てのモル数の合計（全アミノ酸量）１００モルに対して９５モル以下、９０モル以下、８０モル以下、又は７５モル以下のモル比となる量であってもよい。なお「アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンのモル数の合計が、含有アミノ酸全てのモル数の合計（全アミノ酸量）１００モルに対して１００モルのモル比」とは、その脂質代謝促進剤に含まれるアミノ酸がアルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンのみであること、すなわちその脂質代謝促進剤に含まれるアミノ酸混合物がアルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンからなることを意味するが、本明細書中の他の類似の記載も同様に理解される。このような脂質代謝促進剤の組成例として、表２及び表３に示す構成の脂質代謝促進剤（製造例１、製造例２、製造例３）を挙げることができるが、この例に限定されない。
【００３５】
また、本発明の脂質代謝促進剤に含まれるアルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンのそれぞれの配合量に相当するモル比はいずれの値であってもよい。あえて挙げるなら、本発明の脂質代謝促進剤には、それに含まれる全アミノ酸量１００モルに対し、アルギニンを８〜３０モル、アラニンを１８〜３０モル、フェニルアラニンを１０〜２０モル、のモル比で含有せしめることができる。より好ましい一実施形態では、本発明の脂質代謝促進剤は、それに含まれる全アミノ酸量１００モルに対し、アルギニンを２５〜３０モル、アラニンを２５〜３０モル、フェニルアラニンを１０〜１５モル、のモル比で含有してもよい。あるいは、好ましい別の実施形態では、本発明の脂質代謝促進剤は、それに含まれる全アミノ酸量１００モルに対し、アルギニンを８〜５０モル、アラニンを１８〜５０モル、フェニルアラニンを１０〜７０モル、のモル比で含有してもよい。例えば、本発明の脂質代謝促進剤が、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンを含み、かつそれらの合計量が本発明の脂質代謝促進剤に含まれる全アミノ酸量１００モルに対して１００モルのモル比に相当する場合（すなわち、含有アミノ酸がアルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンのみからなる場合）、本発明の脂質代謝促進剤に、それに含まれる全アミノ酸量１００モルに対し、アルギニンを８〜５０モル、アラニンを１８〜５０モル、フェニルアラニンを１０〜７０モル、のモル比で含有せしめることができる。本発明の脂質代謝促進剤はまた、それに含まれる全アミノ酸量１００モルに対し、アルギニンを８〜３０モル、アラニンを２０〜３５モル、フェニルアラニンを１０〜５５モル、のモル比で含有してもよい。
【００３６】
本発明の脂質代謝促進剤中のアルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンの配合量は、以下に限定するものではないが、（ｉ）アルギニン：アラニン＝３：１〜１：３、より好ましくは１．５：１〜１：１．５、例えば１：１、（ｉｉ）アラニン：フェニルアラニン＝７：１〜１：７、より好ましくは４：１〜１：４、例えば１：３及び（ｉｉｉ）アルギニン：フェニルアラニン＝７：１〜１：７、より好ましくは１：１〜１：４、例えば１：３、のうち少なくとも１つの重量比を満たすことが好ましい。本発明の脂質代謝促進剤は、フェニルアラニンを相対的に多く含んでいてもよい。一実施形態では、本発明の脂質代謝促進剤中のアルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンの配合量は、以下に限定するものではないが、アルギニン：アラニン：フェニルアラニン＝１：１：１〜１：１：１０、より好ましくは１：１：１〜１：１：６、例えば１：１：１〜１：１：３となる重量比を満たすものでもよい。別の一実施形態では、本発明の脂質代謝促進剤中のアルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンの配合量は、以下に限定するものではないが、アルギニン：アラニン：フェニルアラニン＝２〜４：１〜２：１〜２、例えば２〜３：１〜１．５：１となる重量比を満たすものでもよい。
【００３７】
本発明の脂質代謝促進剤は、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンからなる群から選択される少なくとも２つのアミノ酸に加えてさらにグリシンを有効成分として含有することもでき、例えばアルギニン、アラニン、フェニルアラニン、及びグリシンを有効成分として含有することもできる。本発明の脂質代謝促進剤は、アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、及びグリシンのモル数の合計が、含有アミノ酸全てのモル数の合計（全アミノ酸量）１００モルに対して８５モル以上、９０モル以上、９５モル以上、又は１００モルのモル比となる量でアルギニン、アラニン、フェニルアラニンからなる群から選択される少なくとも２つのアミノ酸及びグリシンを含有することができる。一実施形態では、本発明の脂質代謝促進剤において、アルギニン、アラニン、フェニルアラニン及びグリシンの合計量は、含有アミノ酸全てのモル数の合計（全アミノ酸量）１００モルに対して９９モル以下、９５モル以下、９２モル以下、又は９０モル以下のモル比となる量であってもよい。
【００３８】
また、本発明の脂質代謝促進剤に含まれるアルギニン、アラニン、フェニルアラニン、及びグリシンのそれぞれの配合量に相当するモル比はいずれの値であってもよい。あえて挙げるなら、本発明の脂質代謝促進剤には、それに含まれる全アミノ酸量１００モルに対し、アルギニンを８〜３０モル、アラニンを１８〜３０モル、フェニルアラニンを１０〜２０モル、グリシンを２０〜２７モル、のモル比で含有せしめることができる。本発明の脂質代謝促進剤は、例えば、それに含まれる全アミノ酸量１００モルに対し、アルギニンを２５〜３０モル、アラニンを２５〜３０モル、フェニルアラニンを１０〜１５モル、グリシンを２２〜２７モル、のモル比で含有してもよい。
【００３９】
本発明の脂質代謝促進剤の組成例として、表３に示す構成の脂質代謝促進剤（製造例３）を挙げることができるが、この例に限定されない。アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、及びグリシンは、味や臭いが飲食や経口摂取に適しているため、これらを高濃度に含有する本発明の脂質代謝促進剤は風味に優れる。よって、本発明の脂質代謝促進剤には、これを添加した飲食品や医薬品の風味を損なわない利点がある。
【００４０】
さらに、本発明の脂質代謝促進剤は、さらに他のアミノ酸を含有してもよい。他のアミノ酸は、生体のタンパク質を通常構成する２０種のアミノ酸であってもよい。他のアミノ酸は、天然型アミノ酸であっても非天然型アミノ酸であってもよい。好ましい実施形態では、本発明の脂質代謝促進剤は、さらに他のアミノ酸としてプロリン、リジン、チロシン、スレオニン、ロイシン、バリン、イソロイシン、グルタミン酸、トリプトファン、ヒスチジン、セリン、メチオニン、及びアスパラギン酸のみを含有していてもよい。他のアミノ酸は、本発明の脂質代謝促進剤の脂質代謝促進効果を阻害しないものを優先的に使用することもできる。
【００４１】
また、本発明の脂質代謝促進剤に含まれる他のアミノ酸のそれぞれの配合量に相当するモル比はいずれの値であってもよい。あえて挙げるなら、本発明の脂質代謝促進剤には、それに含まれる全アミノ酸量１００モルに対し、プロリンを０．０１〜４モル、リジンを０．０１〜２モル、チロシンを０．０１〜２モル、スレオニンを０．０１〜２モル、ロイシンを０．０１〜２モル、バリンを０．０１〜２モル、イソロイシンを０．０１〜２モル、グルタミン酸を０．０１〜１モル、トリプトファンを０．０１〜１モル、ヒスチジンを０．０１〜１モル、セリンを０．０１〜１モル、メチオニンを０．０１〜０．２モル、アスパラギン酸を０．０１〜０．１モル、のモル比で含有せしめることができる。
【００４２】
本発明の脂質代謝促進剤のより好ましい例では、アルギニンを２５〜３０モル、アラニンを２５〜３０モル、フェニルアラニンを１０〜１５モル、グリシンを２２〜２７モル、プロリンを０．１〜４モル、リジンを０．１〜２モル、チロシンを０．１〜２モル、スレオニンを０．１〜２モル、ロイシンを０．１〜２モル、バリンを０．１〜２モル、イソロイシンを０．１〜２モル、グルタミン酸を０．１〜１モル、トリプトファンを０．１〜１モル、ヒスチジンを０．１〜１モル、セリンを０．１〜１モル、メチオニンを０．０１〜０．２モル、アスパラギン酸を０．０１〜０．１モル、のモル比で含有せしめることができる。本発明の脂質代謝促進剤のさらに好ましい例では、アルギニンを２７〜３０モル、アラニンを２５〜２８モル、フェニルアラニンを１０〜１３モル、グリシンを２３〜２６モル、プロリンを２〜３モル、リジンを０．６〜１．６モル、チロシンを０．１〜１．１モル、スレオニンを０．５〜１.５モル、ロイシンを０．３〜１．３モル、バリンを０．３〜１．３モル、イソロイシンを０．１〜２．１モル、グルタミン酸を０．１〜１モル、トリプトファンを０．１〜０．５モル、ヒスチジンを０．１〜０．６モル、セリンを０．１〜０．６モル、メチオニンを０．０１〜０．１５モル、アスパラギン酸を０．０１〜０．０５モル、のモル比で含有せしめてもよい。
【００４３】
本発明でいう「脂肪」は、中性脂肪を指す。中性脂肪の異化は、中性脂肪のグリセロールと脂肪酸への分解と脂肪酸の燃焼（β酸化）に分けられる。脂肪の分解メカニズムは、一般に、以下のように概説できる。
【００４４】
（１）運動負荷、入浴、寒冷刺激などによってアドレナリンの分泌が亢進する。
【００４５】
（２）アドレナリンが脂肪細胞膜上のβレセプターに結合すると、細胞膜内面に存在するアデニル酸シクラーゼが活性化されて、ＡＴＰからサイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）が合成される。
【００４６】
（３）細胞内ｃＡＭＰ濃度が上昇した結果、ｃＡＭＰ依存性のプロテインキナーゼＡが活性化され、このプロテインキナーゼＡにより脂肪細胞の中で、ホルモン感受性リパーゼがリン酸化されて活性化する。
【００４７】
（４）ホルモン感受性リパーゼが、トリアシルグリセロールを遊離脂肪酸とモノアシルグリセロールに変換する。
【００４８】
（５）モノアシルグリセロールリパーゼが、モノアシルグリセロールをグリセロールと遊離脂肪酸に変換する。
【００４９】
生成された脂肪酸の燃焼（β酸化）は、一般に以下のように概説される。
【００５０】
（１）脂肪酸は、肝臓に運ばれ、ミトコンドリア外膜の細胞質側に存在する酵素アシルＣｏＡシンテターゼにより触媒され活性化し、脂肪酸アシルＣｏＡとなる。
【００５１】
（２）生成した脂肪酸アシルＣｏＡはミトコンドリア内膜に運搬される。
【００５２】
（３）ミトコンドリア内膜はアシルＣｏＡを直接透過しない為、カルニチンと一時的に結合し、脂肪酸アシルカルニチンを生成する。脂肪酸アシルカルニチンはアシルカルニチン／カルニチントランスポーターを介する促進拡散によりミトコンドリア内膜を通過し、マトリックス内に移行する。そして酵素カルニチンアシルトランスフェラーゼＩＩの触媒により、カルニチンからミトコンドリア内に存在する補酵素Ａに転移されることで、脂肪酸アシルＣｏＡが再生する。
【００５３】
（４）ミトコンドリア内に入った脂肪酸アシルＣｏＡはマトリックス内の酵素によって酸化を受ける。β酸化反応は４段階の反応の繰り返しからなり、一順する毎に脂肪酸アシル鎖のカルボキシ末端から２炭素がアセチルＣｏＡとして分離していく。デヒドロゲナーゼによるα位とβ位の不飽和化、ヒドラターゼによるβ位のＯＨ付加が起こり、デヒドロゲナーゼによりβ位がケト基に、チオラーゼによってＣｏＡがβ位に結合し、α位とβ位が切断され短炭素鎖脂肪酸アシル−ＣｏＡとアセチルＣｏＡを生じる。
【００５４】
（５）アセチルＣｏＡの一部はアセトアセチルＣｏＡになり、３−ヒドロキシ３−メチルグルタリルＣｏＡ（ＨＭＧ−ＣｏＡ）を経てアセト酢酸が生成される。アセト酢酸は脱炭酸によってアセトンへ、あるいは還元されてβヒドロキシ酪酸へと変換される。
【００５５】
（６）肝臓で生成されたアセト酢酸・βヒドロキシ酪酸は肝臓以外の組織（中枢神経系、心筋、骨格筋、腎、副腎など）の細胞に運ばれミトコンドリアのＴＣＡ回路と電子伝達系でＡＴＰ産生に使われる。
【００５６】
さらに、脂肪酸は、褐色脂肪細胞内で分解を受け、ＵＣＰ−１（Ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １、ミトコンドリア脱共役タンパク質）の働きを受けて熱に変換される。より具体的には、ノルアドレナリンが褐色脂肪上のβ３受容体に結合すると、サーモゲニンとも呼ばれるＵＣＰ−１が開き、膜電位（ミトコンドリアのプロトンの濃度勾配）が解消され、ＡＴＰ合成は行われない一方、脂肪酸などの基質の酸化が著しく亢進して、熱産生が起こる。すなわち、脂肪酸のβ酸化が促進され、熱エネルギーが放出される。また、遊離脂肪酸は、体内でグルコース由来のエネルギーの代謝が不足すると、主として肝臓のミトコンドリア内でケトン体（アセト酢酸、β−ヒドロキシ酪酸、アセトン）に変換され、エネルギー源として代謝されるようになる。
【００５７】
後述の実験例（実施例２、実施例３及び実施例１０）では、アドレナリンを投与して人為的にアドレナリン分泌が亢進した状態にした動物を用い、血中グリセロール変化量をモニターすることにより、従来のアミノ酸組成物と比較して、アルギニン、フェニルアラニン、アラニン及びグリシンを高濃度に含有する本発明の脂質代謝促進剤や、アルギニン、フェニルアラニン、及びアラニンのうちの２つ以上を組み合わせた本発明の脂質代謝促進剤が脂質代謝を促進することがわかった。
【００５８】
さらに、高脂肪食を給餌した動物やヒトを使用し、実際に運動負荷を与えてアドレナリン分泌が亢進した状態で、本発明の脂質代謝促進剤の脂質代謝促進効果を確認することができた（実施例４、実施例５）。
【００５９】
つまり、本発明の脂質代謝促進剤は、特にアドレナリンの分泌が継続的に亢進した状態において、より効率的に脂肪を代謝せしめることができる。本発明の脂質代謝促進剤は、被験体においてアドレナリン分泌亢進状態で作用させるために好適に用いることができる。アドレナリン分泌亢進状態は、特に限定されないが、運動、ストレス、寒冷暴露、入浴、又は多食等による刺激を受けた状態であることが好ましい。本発明の脂質代謝促進剤を被験体にアドレナリン分泌亢進状態で作用させるためには、本発明の脂質代謝促進剤を、アドレナリン分泌亢進状態となっている被験体に投与するか、又はアドレナリン分泌亢進状態となることが予想される被験体（例えば、運動前の被験体）に投与すればよい。
【００６０】
実施例４に示すように、本発明の脂質代謝促進剤を投与した動物では、褐色脂肪組織中のＵＣＰ−１の発現量が増加した。このことから、本発明の脂質代謝促進剤は、脂肪の分解を高めると共に、脂肪酸から熱への変換効率を高めることがわかった。
【００６１】
また、実施例５に示すように、本発明の脂質代謝促進剤を投与したヒトにおいて、運動時のケトン体生成やグルカゴンの分泌が高まった。グルカゴンには、グリコーゲンの利用を促進すると共に、ケトン体の産生を促進する働きがある。このことから、本発明の脂質代謝促進剤は、グルコース由来のエネルギーの代謝が不足したときに脂肪酸からエネルギーへ変換する効率を高めることもわかった。ケトン体濃度の経時的推移に注目すると、運動負荷（ｔｉｍｅ３０〜ｔｉｍｅ９０）の後に、ケトン体の生成が大きく高まっている。このことから、運動中に亢進した脂肪酸からエネルギーへの変換が、運動終了後も引き続き高い状態を維持していることがわかった。
【００６２】
さらに、本発明の脂質代謝促進剤を投与したヒトにおいて、有酸素運動時の呼吸交換比の変化量が低下した。呼吸交換比はエネルギー代謝の指標の１つであり、この値が低下することは、エネルギー代謝における脂質の貢献が高まったことを示す。このことからも、本発明の脂質代謝促進剤が、脂肪酸からエネルギーへ変換する効率を高めることがわかった（実施例５）。
【００６３】
コルチゾールは糖質コルチコイドの一種であり、ストレスを受けると副腎皮質からの分泌が亢進されるホルモンである。コルチゾールの上昇は、グリコーゲンやタンパク質から糖への分解を促進する働きがあることから、その上昇は脂質代謝を亢進する。しかし、コルチゾールの高い分泌状態が続くと、筋グリコーゲンや肝グリコーゲンを早期に消耗し、運動パフォーマンスが低下する。さらに、免疫機能の低下や筋肉・臓器の萎縮といった体への悪影響を伴う。よって、運動時において、コルチゾールのレベルは早期に定常値に戻ることが好ましい。本発明の脂質代謝促進剤を摂取したヒト（アクティブ群）において、血中のコルチゾールは摂取直後（ｔｉｍｅ０）から上昇したが、摂取１５分後（ｔｉｍｅ１５）から速やかに下降し、その速度はプラセボ群より速やかであった。このことから、本発明の脂質代謝促進剤を摂取することによって、同じ運動負荷を与えても、より体に負担をかけずに運動を行なえることが明らかになった（実施例５）。
【００６４】
その一方で、本発明の脂質代謝促進剤を投与したヒトにおいて、血中のインスリン濃度や血糖に変化を認めなかった。よって、本発明の脂質代謝促進剤は、インスリンの分泌や血糖に影響を与えずに脂質代謝を促進することがわかった（実施例５）。インスリンの分泌が亢進した状態で運動を行うと、運動時中に低血糖を生じることがある。本発明の脂質代謝促進剤は、インスリンの分泌に影響を及ぼさないので、運動時に低血糖を来すことなく、脂質由来のエネルギーを効率的に産生することができる。
【００６５】
また、本発明の脂質代謝促進剤は、成長ホルモン、アドレナリン及びノルアドレナリンの分泌にも影響を与えずに、脂質代謝促進効果を奏することもわかった（実施例５）。
【００６６】
これらの結果から、本発明の脂質代謝促進剤は、脂肪から脂肪酸への分解、脂肪酸から熱への変換、及び脂肪酸からエネルギーへの変換のいずれの過程も促進することがわかった。
【００６７】
したがって本発明の脂質代謝促進剤は、脂肪の脂肪酸への分解、及び脂肪酸から熱への変換の両方を促進するために用いることができる。本発明の脂質代謝促進剤は、それらの脂質代謝の指標である、血中グリセロール濃度上昇、体重増加抑制、血中遊離脂肪酸濃度上昇、血中グルカゴン濃度上昇、血中コルチゾール濃度低減、血中総ケトン体濃度上昇、血中３−ヒドロキシ酪酸濃度上昇、及び褐色脂肪組織中のＵＣＰ−１発現量増加からなる群から選択される少なくとも１つ、好ましくは２つ以上、より好ましくはその全てを伴う脂質代謝促進用に用いることができる。本発明の脂質代謝促進剤はまた、さらなる指標として、肝臓中カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ活性上昇及び／又は肝臓中のアシルＣｏＡオキシダーゼ活性上昇を伴う脂質代謝促進用にも用いることができる。これらの指標は、常法により測定することができ、例えば後述の実施例の記載を参照することができる。なおこれらの脂質代謝の指標の上昇、低減、又は増加等は、本発明の脂質代謝促進剤を投与又は摂取しない点以外は同様の条件のコントロール群（例えば、プラセボ群）と比較して判断すればよく、一定の傾向が示されればそれらの効果があるものと判断できるが、統計学的に有意な差が示されることがより好ましい。
【００６８】
本発明の脂質代謝促進剤は、そのまま、あるいは、脂質代謝促進するための飲食品又は医薬品に添加するなど、いずれの態様で利用することもできる。
【００６９】
本発明において、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンの脂質代謝促進剤への配合量は、剤型、症状、体重、用途などによって異なるため、特に限定されないが、あえて挙げるなら、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンの合計で０．２〜１００ｗ／ｗ％（重量／重量％）の配合量に設定することができ、好ましくは０．３〜１００ｗ／ｗ％の配合量、さらに好ましくは０．４〜１００ｗ／ｗ％の配合量に設定することができる。
【００７０】
本発明はまた、本発明の脂質代謝促進剤を被験体に投与又は摂取させることを含む、被験体の脂質代謝を促進する方法も提供する。被験体としては、脂質代謝の促進が望まれる動物が好ましく、限定するものではないが、ヒト、家畜（ブタ、ウマなど）、愛玩動物（イヌ、ネコなど）、実験（試験）動物（マウス、ラットなどの齧歯動物やウサギなど）を含む哺乳動物が好ましい。好ましい被験体の例としては、脂質代謝異常若しくは肥満症の被験体、肥満の遺伝的素因、生活習慣的リスク若しくは環境リスクを有する被験体、体重低下若しくは体重維持が望まれる被験体、又は運動、ストレス等に起因するアドレナリン分泌亢進状態に置かれているか若しくは置かれる予定である被験体などが挙げられる。本発明の脂質代謝促進剤は、脂質代謝を効率よく促進する効果があるため、正常の人と比べて脂肪の分解が遅くかつ少ない傾向にある肥満気味の人であっても、脂肪を効率的に燃焼させるために用いることができる。
【００７１】
本発明において、脂質代謝促進剤の一日当たりの摂取量（投与量）は、年齢、症状、体重、用途などによって異なるため、特に限定されないが、あえて挙げるなら、脂質代謝促進剤に含まれるアミノ酸の合計が固形分として０．３〜３０ｇ、０．８〜８ｇ、１〜５ｇ、１．３〜３．５ｇ、１．５ｇ又は３ｇとなる摂取量に設定することができる。
【００７２】
本発明において、アルギニンの一日当たりの摂取量は、０．０６〜１２ｇ（又は０．４〜７０ミリモル）、０．２〜４ｇ（又は１〜２１ミリモル）、０．４〜２ｇ（又は２〜１１ミリモル）、１．２ｇ（７ミリモル）、１ｇ（６ミリモル）、又は０．６ｇ（４ミリモル）を例示することができる。
【００７３】
本発明において、アラニンの一日当たりの摂取量は、０．０３〜１０ｇ（又は０．３〜１１２ミリモル）、０．０９〜３ｇ（又は１〜３４ミリモル）、０．２〜２ｇ（又は２〜１７ミリモル）、１ｇ（１１ミリモル）、０．６ｇ（６ミリモル）、又は０．３ｇ（３ミリモル）を例示することができる。
【００７４】
本発明において、フェニルアラニンの一日当たりの摂取量は、０．０２〜１０ｇ（又は０．１〜６１ミリモル）、０．０８〜３ｇ（又は０．５〜１８ミリモル）、０．２〜２ｇ（又は０．９〜９ミリモル）、１ｇ（６ミリモル）、０．５ｇ（３ミリモル）、又は０．２ｇ（１ミリモル）を例示することができる。
【００７５】
本発明において、グリシンの一日当たりの摂取量は、４ｇ以下（又は５９ミリモル以下）、１．３ｇ以下（又は１８ミリモル以下）、０．７ｇ以下（又は９ミリモル以下）、０．０２〜４ｇ（又は０．３〜５９ミリモル）、０．０７〜１ｇ（又は１〜１８ミリモル）、０．１〜０．７ｇ（又は２〜９ミリモル）、０．４ｇ（６ミリモル）又は０．２ｇ（３ミリモル）を例示することができる。
【００７６】
例えば、後述の表２に示す脂質代謝促進剤（製造例１）を２．７ｇ摂取した場合、アミノ酸の合計２．７ｇ（２２ミリモル）のうち、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンを、それぞれ１．２ｇ（７．０ミリモル）、０．５７ｇ（６．４ミリモル）、及び０．４７ｇ（２．９ミリモル）の量で摂取したことになる。
【００７７】
例えば、表２に示す脂質代謝促進剤（製造例２）を３．０ｇ摂取した場合、アミノ酸の合計３．０ｇ（２３ミリモル）のうち、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンを、それぞれ１．０ｇ（５．７ミリモル）、１．０ｇ（１１ミリモル）、及び１．０ｇ（６．１ミリモル）の量で摂取したことになる。
【００７８】
例えば、表３に示す脂質代謝促進剤（製造例３）を３ｇ摂取した場合、アミノ酸の合計３ｇ（２４ミリモル）のうち、アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、及びグリシンを、それぞれ１．２ｇ（７．０ミリモル）、０．５７ｇ（６．４ミリモル）、０．４７ｇ（２．９ミリモル）、及び０．４５ｇ（５．９ミリモル）の量で摂取したことになる。
【００７９】
また、表３に示す脂質代謝促進剤（製造例３）を１．５ｇ摂取した場合、アミノ酸の合計１．５ｇ（２４ミリモル）のうち、アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、及びグリシンを、それぞれ０．６１ｇ（３．５ミリモル）、０．２８ｇ（３．２ミリモル）、０．２４ｇ（１．４ミリモル）、及び０．２２ｇ（３．０ミリモル）の量で摂取したことになる。
【００８０】
なお、本発明の脂質代謝促進剤は、従来公知の脂質代謝促進効果がある飲食品や医薬品の摂取と同時又は、それらの摂取の前後に併せて用いてもよい。
【００８１】
本発明の脂質代謝促進剤の実際の形態は、例えば、錠剤（タブレット）、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、水剤、懸濁剤、ドリンク、飲食品などに添加する形態を挙げることができ、これを経口、経管、経静脈などにより摂取あるいは投与することができる。本発明の脂質代謝促進剤は、例えば、特定保健用食品などの特別用途食品、栄養機能食品、栄養補助食品やサプリメントに添加してそれを摂取することにより、又は医薬品に添加して投与することにより、脂質代謝を促進することが期待される。なお、特定保健用食品などの特別用途食品、栄養機能食品、栄養補助食品やサプリメントに添加した場合、消費者にとって、一般食品と明確に区別しながら、脂質代謝の促進を期待することができる。ここで飲食品は、家畜や愛玩動物等の非ヒト動物による摂取用であってもよい。本発明は、本発明の脂質代謝促進剤を含む食品や医薬品、例えば脂質代謝促進用の飲食品や医薬品も提供する。
【００８２】
本発明の脂質代謝促進剤を用いて、本発明の脂質代謝促進剤及び製剤化のための補助剤のみからなる剤を製造することもできる。製剤化のための補助剤として、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などを挙げることができる。なお、これらは飲食品あるいは医薬品の製剤技術の分野において通常で用いうるものであればよい。また、これらに適当量のビタミン、ミネラル、有機酸、糖類、ペプチド類、前記に挙げられていないアミノ酸などを配合してもよい。他の構成成分は、本発明の脂質代謝促進剤の脂質代謝促進効果を阻害しないものを優先的に使用することができる。
【００８３】
本発明の脂質代謝促進剤は、各種の食品（牛乳、清涼飲料、発酵乳、ヨーグルト、チーズ、パン、ビスケット、クラッカー、ピッツァクラスト、調製粉乳、流動食、病者用食品、栄養食品、冷凍食品、加工食品その他の市販食品など）に配合して、これを摂取してもよい。これらの食品の形態として、液状、ペースト状、ゲル状、固形状、粉末状などを問わない。
【００８４】
本発明の脂質代謝促進剤を配合する食品は、水、タンパク質、糖質、脂質、ビタミン類、ミネラル類、有機酸、有機塩基、果汁、フレーバー類等を用いて製造することができる。タンパク質として、例えば、全脂粉乳、脱脂粉乳、部分脱脂粉乳、カゼイン、ホエイ粉、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物、ホエイタンパク質分離物、ホエイタンパク質加水分解物、α−カゼイン、β−カゼイン、κ−カゼイン、β−ラクトグロブリン、α−ラクトアルブミン、ラクトフェリン、大豆タンパク質、鶏卵タンパク質、肉タンパク質等の動植物性タンパク質、これらの分解物、バター、乳清ミネラル、クリーム、ホエイ、非タンパク態窒素、シアル酸、リン脂質、乳糖等の各種の乳由来成分等が挙げられる。カゼインホスホペプチド等のペプチドやアミノ酸を含んでいてもよい。糖質として、例えば、糖類、加工澱粉（テキストリンのほか、可溶性澱粉、ブリティッシュスターチ、酸化澱粉、澱粉エステル、澱粉エーテル等）、食物繊維等が挙げられる。脂質として、例えば、ラード、魚油等に、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油等の動物性油脂、パーム油、サフラワー油、コーン油、ナタネ油、ヤシ油等に、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油等の植物性油脂等が挙げられる。ビタミン類として、例えば、ビタミンＡ、カロチン類、ビタミンＢ群、ビタミンＣ、ビタミンＤ群、ビタミンＥ、ビタミンＫ群、ビタミンＰ、ビタミンＱ、ナイアシン、ニコチン酸、パントテン酸、ビオチン、イノシトール、コリン、葉酸等が挙げられる。ミネラル類として、例えば、カルシウム、カリウム、マグネシウム、ナトリウム、銅、鉄、マンガン、亜鉛、セレン等が挙げられる。有機酸として、例えば、リンゴ酸、クエン酸、乳酸、酒石酸、エリソルビン酸等が挙げられる。これらの成分は、単独で、あるいは複数種類を組み合わせて用いることができ、合成品及び／又はこれらを多く含む食品を用いてもよい。これらの食品の形態として、液状、ペースト状、ゲル状、固形状、粉末状などを問わない。
【００８５】
本発明の脂質代謝促進剤は、普段の生活や療養中はもとより、アドレナリンの分泌が継続して亢進する状態の前や途中に摂取することで、効率的に脂質代謝を促進することができる。例えば、運動負荷、寒冷暴露、ストレス負荷が加えられた時、入浴の時、多食の者などにおいて、アドレナリンの分泌が継続して亢進することが知られている。従って、本発明の脂質代謝促進剤は、運動負荷、寒冷暴露、ストレス負荷などが加わる前、又は運動負荷、寒冷暴露、ストレス負荷などが加わると共に摂取してもよい。あるいは、本発明の脂質代謝促進剤は、入浴の前や途中に摂取してもよい。多食傾向のある者が本発明の質代謝促進剤を摂取してもよい。
【００８６】
本発明は、脂質代謝促進剤を製造するための、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンからなる群から選択される少なくとも２つのアミノ酸の組合せ、例えばアルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンの組合せの使用（使用方法）であって、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンのモル数の合計が、アミノ酸全てのモル数の合計１００モルに対して６０モル以上である使用、も提供する。
【００８７】
また、本発明は、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンからなる群から選択される少なくとも２つのアミノ酸の組合せ、例えばアルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンを、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンのモル数の合計が、含有アミノ酸全てのモル数の合計（全アミノ酸量）１００モルに対して６０モル以上のモル比になるような量で含む組成物を摂取させることを特徴とする、脂質代謝の促進方法（医療行為を除く）、も提供する。
【００８８】
以下、本発明に関して、実施例を挙げて説明するが、本発明は、これにより限定されるものではない。
【実施例】
【００８９】
（実施例１）
脂質代謝促進効果における、各種アミノ酸と従来のアミノ酸組成物（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．）の比較
（１）材料及び方法
［被検試料］
・Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．：表１に示す組成のアミノ酸混合物（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．）を、１ｇ／１０ｍｌの濃度で注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製した。【００９０】
・各種アミノ酸：Ｌ−アラニン（Ａｌａ）、Ｌ−メチオニン（Ｍｅｔ）、Ｌ−フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、Ｌ−アルギニン（Ａｒｇ）、グリシン（Ｇｌｙ）を、それぞれ１ｇ／１０ｍｌの濃度で注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製した。
【表１】
0006518189.tif 000002
【００９１】
［動物実験］
６週齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（ＳＬＣ社）を１週間予備飼育して試験に用いた。体重に基づいて群分けし（Ｖｅｈｉｃｌｅ群、Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群、アラニン群、メチオニン群、フェニルアラニン群、アルギニン群、グリシン群の７群、各ｎ＝６）、１８時間絶食した（ただし、水は自由摂取とした）。【００９２】
尾静脈より採血を行い（ｔｉｍｅ−３０）、直ちに被検試料（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群、アラニン群、メチオニン群、フェニルアラニン群、アルギニン群、グリシン群）又は注射用水（Ｖｅｈｉｃｌｅ群）を１０ｍｌ／ｋｇ（被検試料の用量１ｇ／ｋｇ）経口投与した。３０分後、再度採血を行った（ｔｉｍｅ０）後、直ちにアドレナリン（（Ｒ）−（−）−Ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ、和光純薬工業）を腹腔内投与（０．２ｍｇ／ｋｇ、４ｍｌ／ｋｇ）した。その後、アドレナリン投与の７５分後まで、１５分おきに経時的な採血（ｔｉｍｅ１５、３０、４５、６０、７５）を行った。採取した血液より血漿を得て、血中のグリセロールを測定した。【００９３】
［測定］
血中グリセロール：グリセロールアッセイキット（Ｇｌｙｃｅｒｏｌ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ；Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃａｍｐａｎｙ）を用い、付属の手順書に従って、血漿中のグリセロールを測定した。各測定時における測定値からｔｉｍｅ−３０の測定値を差し引いた値を算出し、これを血中グリセロール濃度の変化量とした。次いで、血中グリセロール濃度の変化量について、ｔｉｍｅ０〜７５の曲線下面積（ＡＵＣ）を算出した。さらに、各アミノ酸群のＡＵＣについて、Ｖｅｈｉｃｌｅ群のＡＵＣに対する変化率（％）を算出した。【００９４】
（２）結果
図１に血中グリセロール濃度の変化率（グリセロールＡＵＣ変化率［Ｇｌｙｃｅｒｏｌ  ＡＵＣ  ｃｈａｎｇｅ］）を示す。アラニン群、メチオニン群、フェニルアラニン群、アルギニン群、グリシン群はいずれも、Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群より高い値を示した。【００９５】
このことから、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、アルギニン、グリシンは、従来のアミノ酸組成物よりも高い脂質代謝促進効果を示すことがわかった。【００９６】
しかし、各種アミノ酸の風味を確認したところ、メチオニンは、味や臭いが経口摂取に適しないことがわかった。【００９７】
（実施例２）
脂質代謝促進効果における、本発明の脂質代謝促進剤（製造例１）と単独のアミノ酸の比較
（１）材料及び方法
［被検試料］
・「製造例１」：表２に示す組成のアミノ酸混合物（製造例１）を、２．７ｇ／１０ｍｌの濃度で注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製した。１０ｍｌ中に、Ｌ−アルギニン１．２ｇ、Ｌ−アラニン０．５７ｇ及びＬ−フェニルアラニン０．４７ｇが含まれる。【００９８】
・アルギニン：Ｌ−アルギニンを１．２ｇ／１０ｍｌの濃度で注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製した。【００９９】
・アラニン：Ｌ−アラニンを０．５７ｇ／１０ｍｌの濃度で注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製した。【０１００】
・フェニルアラニン：Ｌ−フェニルアラニンを０．４７ｇ／１０ｍｌの濃度で注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製した。
【表２】
0006518189.tif 000003
【０１０１】
［動物実験］
６週齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（ＳＬＣ社）を１週間予備飼育して試験に用いた。体重に基づいて群分けし（Ｖｅｈｉｃｌｅ群、「製造例１」群、アルギニン群、アラニン群、フェニルアラニン群の５群、各ｎ＝６）、１８時間絶食した（ただし、水は自由摂取とした）。【０１０２】
尾静脈より採血を行い（ｔｉｍｅ−３０）、直ちに被検試料（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群、「製造例１」群、アルギニン群、アラニン群、フェニルアラニン群）又は注射用水（Ｖｅｈｉｃｌｅ群）を５ｍｌ／ｋｇ経口投与した。３０分後、再度採血を行った（ｔｉｍｅ０）後、直ちにアドレナリン（（Ｒ）−（−）−エピネフリン、和光純薬工業）を腹腔内投与（０．２ｍｇ／ｋｇ、８ｍｌ／ｋｇ）した。その後、アドレナリン投与の９０分後まで、１５分おきに経時的な採血（ｔｉｍｅ１５、３０、４５、６０、７５、９０）を行った。採取した血液より血漿を得て、血中のグリセロールを測定した。【０１０３】
［測定］
血中グリセロール：グリセロール蛍光アッセイキット（Ｇｌｙｃｅｒｏｌ  Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ；Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃａｍｐａｎｙ）を用い、付属の手順書に従って、血漿中のグリセロールを測定した。各測定時における測定値からｔｉｍｅ−３０の測定値を差し引いた値を算出し、これを血中グリセロール濃度の変化量とした。【０１０４】
［統計学的処理方法］
測定値は、平均値±標準誤差で示した。データは統計ソフトＳｔａｔ  Ｖｉｅｗ  ５．０−Ｊを使用して、Ｆ検定による等分散の検定後、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤによって検定した。有意水準は５％とした。【０１０５】
（２）結果
図２に血中グリセロール濃度の変化量（Δグリセロール）を示す。「製造例１」群は、Ｖｅｈｉｃｌｅ群よりも、血中グリセロール濃度の変化量が高水準で推移した。アドレナリン投与後１５分、３０分、４５分、６０分、及び７５分（ｔｉｍｅ１５、３０、４５、６０、７５）において、「製造例１」群はＶｅｈｉｃｌｅ群と比較して有意に高い（ｐ＜０．０５）な血中グリセロール濃度の変化量を示した。フェニルアラニン群はアドレナリン投与後３０分（ｔｉｍｅ３０）のみ、Ｖｅｈｉｃｌｅ群よりも血中グリセロール濃度の変化量が有意に高くなった。他の群はＶｅｈｉｃｌｅ群と有意な差を認めなかった。【０１０６】
このことから、アラニン、フェニルアラニン、アルギニンは、３種を併用して摂取した方が、単独で摂取するよりも高い脂質代謝促進効果を示すことがわかった。【０１０７】
（実施例３）
脂質代謝促進効果における、本発明の脂質代謝促進剤（製造例３）と従来のアミノ酸組成物（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．）の比較
（１）材料及び方法
［被検試料］
・Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．：表１に示す組成のアミノ酸混合物（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．）を、３ｇ／１０ｍｌの濃度で注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製した。【０１０８】
・「製造例３」：表３に示す組成のアミノ酸混合物（製造例３）を、３ｇ／１０ｍｌの濃度で注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製した。
【表３】
0006518189.tif 000004
【０１０９】
［動物実験］
６週齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（ＳＬＣ社）を１週間予備飼育して試験に用いた。体重に基づいて群分けし（Ｖｅｈｉｃｌｅ群、Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群、「製造例３」群の３群、各ｎ＝７）、１８時間絶食した（ただし、水は自由摂取とした）。【０１１０】
尾静脈より採血を行い（ｔｉｍｅ−３０）、直ちに被検試料（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群、「製造例３」群）又は注射用水（Ｖｅｈｉｃｌｅ群）を５ｍｌ／ｋｇ経口投与した（表４）。３０分後、再度採血を行った（ｔｉｍｅ０）後、直ちにアドレナリン（（Ｒ）−（−）−エピネフリン、和光純薬工業）を腹腔内投与（０．２ｍｇ／ｋｇ、８ｍｌ／ｋｇ）した。その後、アドレナリン投与の９０分後まで、１５分おきに経時的な採血（ｔｉｍｅ１５、３０、４５、６０、７５、９０）を行った。採取した血液より血漿を得て、血中のグリセロールを測定した。
【表４】
0006518189.tif 000005
【０１１１】
［測定］
血中グリセロール：Ｇｌｙｃｅｒｏｌ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ  （Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃａｍｐａｎｙ）を用い、付属の手順書に従って、血漿中のグリセロールを測定した。各測定時における測定値からｔｉｍｅ−３０の測定値を差し引いた値を算出し、これを血中グリセロール濃度の変化量とした。【０１１２】
［統計学的処理方法］
測定値は、平均値±標準誤差で示した。データは統計ソフトＳｔａｔ  Ｖｉｅｗ  ５．０−Ｊを使用して、Ｆ検定による等分散の検定後、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤによって検定した。有意水準は５％とした。【０１１３】
（２）結果
図３に血中グリセロール濃度の変化量を示す。「製造例３」群は、Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群よりも、血中グリセロール濃度の変化量が高水準で推移した。アドレナリン投与後３０分（ｔｉｍｅ３０）及び４５分（ｔｉｍｅ４５）において、「製造例３」群はＶｅｈｉｃｌｅ群と比較して有意に高い（ｐ＜０．０５）な血中グリセロール濃度の変化量を示した。【０１１４】
以上の結果から、アラニン、フェニルアラニン、及びアルギニンを高度に含有する本発明の脂質代謝促進剤は、従来のアミノ酸組成物よりも高い脂質代謝促進効果を示すことがわかった。【０１１５】
（実施例４）
高脂肪食を給餌して運動負荷をかけた動物における、本発明の脂質代謝促進剤（製造例３）の脂質代謝促進効果
（１）材料及び方法
［被検試料及び餌］
・０．１％ＣＭＣ溶液：カルボキシメチルセルロース（和光純薬）を０．１ｗ／ｖ％の濃度で注射用蒸留水に溶解して調製した。【０１１６】
・Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．：表１に示す組成のアミノ酸混合物（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．）を、１ｇ／１０ｍｌの濃度で０．１％ＣＭＣ溶液に懸濁して調製した。【０１１７】
・Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．＋ＣｏＱ１０＋Ｌ−Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ：表１に示す組成のアミノ酸混合物（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．）を１ｇ／１０ｍｌ、コエンザイムＱ１０（ＣｏＱ１０、太陽化学）をＣｏＱ１０として１０ｍｇ／１０ｍｌ、Ｌ−カルニチン（三栄源エフ・エフ・アイ）を６８ｍｇ／１０ｍｌの濃度になるように、０．１％ＣＭＣ溶液に懸濁して調製した。【０１１８】
・「製造例３」：表３に示す組成のアミノ酸混合物（製造例３）を、１ｇ／１０ｍｌの濃度で０．１％ＣＭＣ溶液に懸濁して調製した。【０１１９】
・ＡＩＮ−９３Ｍ（オリエンタル酵母工業）：組成を表５に示す。米国国立栄養研究所（ＡＩＮ）から１９９３年（ＡＩＮ−９３）に発表されたマウス・ラットを用いた栄養研究のための標準精製飼料である。【０１２０】
・ＨＦＤ−６０（オリエンタル酵母工業）：組成を表５に示す。脂肪分６０％カロリー比高脂肪飼料である。
【表５】
0006518189.tif 000006
【０１２１】
［動物実験］
３週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊ系雄性マウス（クレア社）を１週間予備飼育及び１週間のトレッドミルへの馴化をした後に試験に用いた。体重に基づいて群分けし（ｄａｙ０）（Ｎｏｒｍａｌ群（ｎ＝９）、Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群（ｎ＝１０）、Ｈ＋Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群（ｎ＝９）、Ｈ＋Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．＋ＣｏＱ１０＋Ｌ−Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ群（ｎ＝１０）、Ｈ＋「製造例３」群（ｎ＝１０）の５群）、以降、群分けから４２日後の試験最終日（ｄａｙ４２）までＡＩＮ−９３Ｍ（Ｎｏｒｍａｌ群）又はＨＦＤ−６０（Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群、Ｈ＋Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群、Ｈ＋Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．＋ＣｏＱ１０＋Ｌ−Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ群、Ｈ＋「製造例３」群）を自由摂取させた（ただし、水は自由摂取とした）。【０１２２】
［被験試料の投与］
被検試料（Ｈ＋Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群、Ｈ＋Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．＋ＣｏＱ１０＋Ｌ−Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ群、Ｈ＋「製造例３」群）又は０．１％ＣＭＣ溶液（Ｎｏｒｍａｌ群、Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群）を、試験最終日を除く４２日間毎日（ｄａｙ０〜ｄａｙ４１）、ゾンデを用いて強制経口投与した。被験試料又は０．１％ＣＭＣ溶液は１週間に１度調製して使用し、表６に示す用量（投与容量１０ｍＬ／ｋｇ）で投与した。
【表６】
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【０１２３】
［トレッドミルによる運動負荷］
群分け〜試験最終日（ｄａｙ０〜ｄａｙ４２）の期間中、１週間に３回の頻度で、トレッドミルによる運動負荷（１５ｍ／分〜２０ｍ／分、４０分間）を行った。【０１２４】
［体重測定］
群分け〜試験最終日（ｄａｙ０〜ｄａｙ４２）の期間中、３日に１回の頻度で、体重測定を行った。【０１２５】
［組織採取］
試験最終日（ｄａｙ４２）に解剖して腎周囲脂肪組織及び褐色脂肪組織の重量を測定し、褐色脂肪組織中のＵＣＰ−１発現量を測定した。【０１２６】
［測定］
褐色脂肪組織中のＵＣＰ−１発現量：Ｍｏｕｓｅ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｂｒｏｗｎ  ｆａｔ  ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １  （ＵＣＰ１）  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ  （ＣＵＳＡＢＩＯ）を用い、付属の手順書に従って、褐色脂肪組織中のＵＣＰ−１発現量を測定した。【０１２７】
［統計学的処理方法］
測定値は、平均値±標準誤差で示した。データは統計ソフトＳｔａｔ  Ｖｉｅｗ  ５．０−Ｊを使用して、Ｆ検定による等分散の検定後、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤによって検定した。有意水準は５％とした。【０１２８】
（２）結果
図４に、体重測定及び試験期間中の摂餌量／体重の結果を示す。Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群において、Ｎｏｒｍａｌ群と比較して投与３日目（ｄａｙ３）より有意に体重増加が見られた。「製造例３」群では、Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群と比較して投与３〜４２日目（ｄａｙ３〜ｄａｙ４２）にかけて有意な体重抑制効果が見られた。一方で、Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群及びＶ．Ａ．Ａ．Ｍ．＋ＣｏＱ１０＋Ｌ−Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ群はＨｉｇｈ−ｆａｔ群と比較して体重に差異を認めなかった。試験期間中の摂餌量／体重は、ＡＩＮ−９３Ｍを給餌した群よりもＨＦＤ−６０を給餌した各群の方が低い値を示したが、ＨＦＤ−６０を給餌した各群の間に差異は認められなかった。【０１２９】
図５に、腎周囲の脂肪重量を示す。Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群ではＮｏｒｍａｌ群と比較して有意に重量が増加した。製造例３群はＨｉｇｈ−ｆａｔ群と比較して有意に脂肪組織重量の増加を抑制した。一方で、Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群及びＶ．Ａ．Ａ．Ｍ．＋ＣｏＱ１０＋Ｌ−Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ群はＨｉｇｈ−ｆａｔ群と比較して脂肪組織重量に差異を認めなかった。【０１３０】
図６に、褐色脂肪組織中のＵＣＰ−１発現量を示す。Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群ではＮｏｒｍａｌ群と比較してＵＣＰ−１発現量に変化を認めなかった。製造例３群はＨｉｇｈ−ｆａｔ群と比較して有意にＵＣＰ−１発現量が増加した。一方で、Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群及びＶ．Ａ．Ａ．Ｍ．＋ＣｏＱ１０＋Ｌ−Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ群はＨｉｇｈ−ｆａｔ群と比較してＵＣＰ−１発現量に差異を認めなかった。【０１３１】
以上の結果から、本発明の脂質代謝促進剤について運動負荷時の脂質代謝促進効果を確認することができた。【０１３２】
（実施例５）
脂質代謝促進効果における、本発明の脂質代謝促進剤の効果確認
（１）材料及び方法
［試験食品］
内容物の有無を外観上識別不能なカプセル（日本薬局方セルロースホワイトカプセル（植物性）００号）を用い、下記２種類の試験食品を調製した。【０１３３】
・プラセボ：内容物を含まないカプセル。【０１３４】
・アクティブ：表３に記載の製造例３を３ｇ封入したカプセル。【０１３５】
［被験者］
被験者の選別をするために、２０歳以上の男性に対し、事前の血液生化学検査、血液学的検査及び自転車運動を実施した（ＶＳ０）。自転車運動では、運動開始から疲労困憊するまでに要する時間及び最大酸素摂取量（ＶＯ2ｍａｘ）の測定を行なった。さらに事前アンケートで生活習慣の確認を行い、これらの結果に基づいて、健康でかつ運動開始から疲労困憊するまでに要する時間とＶＯ2ｍａｘに偏りのないことを条件に、被験者の選抜を行なった。【０１３６】
今回の試験では、下記（１）〜（４）の判定基準を２つ以上満たしたときに、被験者が疲労困憊したと判断した。さらに、疲労困憊であると判断された直前に得られた最大の酸素摂取量をＶＯ2ｍａｘとした。【０１３７】
（１）酸素摂取量（ＶＯ2）の増加でプラトーの現象が出現した。【０１３８】
（２）呼吸交換比（ＶＣＯ2／ＶＯ2）が１．１以上に達した。【０１３９】
（３）心拍数（ＨＲ）が、２０歳で予想されている最高心拍数（ＨＲｍａｘ）である２００に達した。【０１４０】
（４）Ｂｏｒｇ  ｓｃａｌｅ日本語版（小野寺ら、全身持久性運動における主観的強度と客観的強度の対応性：Ｒａｔｉｎｇ  ｏｆ  ｐｅｒｃｅｉｖｅｄ  ｅｘｅｒｔｉｏｎの観点から、体育學研究、２１（４）、ｐ．１９１−２０３（１９７６））を用いた主観的運動強度（ＲＰＥ）が１９（非常にきつい（ｖｅｒｙ  ｖｅｒｙ  ｈａｒｄ））以上となった。【０１４１】
自転車運動は、自転車エルゴメータを使用し、回転数６０回転／分の条件で、運動開始０〜１分後は１００Ｗ、それ以降は１分経過毎２５Ｗずつ運動強度を上げ、疲労困憊となるまで運動を行った（多段階漸増運動負荷試験）。【０１４２】
こうして選抜された２０．５±０．２歳（平均値±標準誤差）、の被験者男性１２名にて、二重盲験クロスオーバー比較試験を行った。【０１４３】
［試験スケジュール］
ＶＳ０から１４日の間隔をあけて１回目の試験（ＶＳ１）を実施した。ＶＳ１では２種類の試験食品のうち一方を摂取し、自転車運動、採血、呼気ガスの採取・分析、及び心拍数の測定を行なった。さらに、ＶＳ１から７日の間隔をあけて２回目の試験（ＶＳ２）を行った。ＶＳ２ではＶＳ１とは異なる試験食品を摂取し、自転車運動、採血、呼気ガスの採取・分析、及び心拍数の測定を行なった。【０１４４】
なお、試験開始日（ＶＳ０）以降、検査終了時（ＶＳ２）まで、日常範囲を大きく逸脱する過度な運動、摂食や過食の制限するよう指導した。さらに、本試験に影響を及ぼす可能性があるサプリメント、健康食品、医薬品（一般用医薬品を含む）の使用、及び喫煙は禁止した。さらに、試験（ＶＳ０、ＶＳ１、ＶＳ２）前日は禁酒し、食事は２２時までに終え、深夜０時までに就寝するように指導し、当日は、自転車運動を開始する２時間前までに食事を終え、それ以降は検査が終了するまで飲食を禁止した（飲水は可）。また、検査当日は同じ時刻に起床し、試験の実施はできる限り同じ時間帯で行うように指導した。【０１４５】
［試験ＶＳ１及び試験ＶＳ２の実施］
・試験食品の摂取：前記の試験食品を、水又は白湯を用いて噛まずに飲み込んで摂取させた。【０１４６】
・自転車運動：自転車エルゴメータを使用して、試験食品摂取３０分後〜試験食品摂取９０分後（ｔｉｍｅ３０〜９０）の６０分間、回転数６０回転／分の条件で、ＶＳ０で測定したＶＯ2ｍａｘの５０％の運動強度にて継続的に実施した。【０１４７】
・採血：試験食品摂取前及び試験食品摂取の１５、３０、４５、６０、７５、９０、１２０、１５０分後（ｔｉｍｅ０、１５、３０、４５、６０、７５、９０、１２０、１５０）に実施した。【０１４８】
・呼気ガスの採取・分析：ブレス・バイ・ブレス法を用い、試験食品摂取直後〜試験食品摂取１５０分後（ｔｉｍｅ０〜ｔｉｍｅ１５０）までの１５０分間、継続的に実施した。【０１４９】
・心拍数の測定：試験食品摂取直後〜試験食品摂取１５０分後（ｔｉｍｅ０〜ｔｉｍｅ１５０）の１５０分間、継続的に実施した。【０１５０】
［測定］
・呼吸交換比：採取した呼気を呼吸毎にガス分析装置で測定し、呼気中のＯ2及びＣＯ2の濃度、呼気の流量を測定した。この測定値に基づいて、酸素摂取量（ＶＯ2）（ｍｌ／体重ｋｇ／ｍｉｎ））、二酸化炭素産生量（ＶＣＯ2（ｍｌ／体重ｋｇ／ｍｉｎ））及び呼吸交換比（ＶＣＯ2／ＶＯ2）を算出した。さらに、各時点の呼吸交換比からｔｉｍｅ０の呼吸交換比の各群平均値を差し引いて、呼吸交換比の変化量（ΔＶＣＯ2／ＶＯ2）を求めた。【０１５１】
・血中グリセロール：酵素法を用い、付属の手順書に従って、血清中のグリセロールを測定した。【０１５２】
・血中遊離脂肪酸：酵素−ＵＶ法を用いて、血清中の遊離脂肪酸濃度を測定した。【０１５３】
・血中コルチゾール：ＣＬＥＩＡ（Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）法を用いて、血漿中のコルチゾール濃度を測定した。【０１５４】
・血中グルカゴン：ＲＩＡ２抗体（Ｄｏｕｂｌｅ‐ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）法を用いて、血漿中のグルカゴン濃度を測定した。【０１５５】
・血中インスリン：ＣＬＩＡ（Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）法を用いて、血清中のインスリン濃度を測定した。【０１５６】
・血糖：酵素法を用いて、血糖値を測定した。【０１５７】
・血中総ケトン体：酵素法を用いて、血清中の総ケトン濃度（３−ヒドロキシ酪酸及びアセト酢酸の合計）を測定した。【０１５８】
・血中３−ヒドロキシ酪酸：酵素法を用いて、血清中の３−ヒドロキシ酪酸濃度を測定した。【０１５９】
・血中アセト酢酸：酵素法を用いて、血清中のアセト酢酸濃度を測定した。【０１６０】
・血中成長ホルモン：ＣＬＥＩＡ法を用いて、血清中の成長ホルモン濃度を測定した。【０１６１】
・血中アドレナリン：ＨＰＬＣ（Ｈｉｇｈ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）法を用いて、血漿中のアドレナリン濃度を測定した。【０１６２】
・血中ノルアドレナリン：ＨＰＬＣ法を用いて、血漿中のノルアドレナリン濃度を測定した。【０１６３】
［統計学的処理方法］
試験で得た各測定値、算出値又は換算値は１標本ｔ検定で評価した。【０１６４】
（２）結果
図７に、経時的な呼吸交換比の変化量（ΔＶＣＯ2／ＶＯ2）の結果を示す。ΔＶＣＯ2／ＶＯ2は、運動開始から運動終了後までアクティブ群の方が低い値で推移し、運動時ではｔｉｍｅ８５、９０（分）でプラセボ群に比べて有意な低下が認められた。運動終了時ではｔｉｍｅ９５、１００（分）に両群とも一旦上昇するが、その後ｔｉｍｅ１３５（分）まで急激に低下した。特にｔｉｍｅ１２５〜１３５（分）の間では、有意な差は見られなかったものの、アクティブ群の方が低い平均値を示した。【０１６５】
図８に、経時的な血中グリセロールの濃度及び遊離脂肪酸の濃度を測定した結果を示す。血中グリセロールの濃度は、運動時のｔｉｍｅ４５及び９０（分）において、有意な差は見られなかったものの、アクティブ群の方が高い平均値を示した。【０１６６】
血中遊離脂肪酸は、運動開始時（ｔｉｍｅ３０（分））から試験終了時（ｔｉｍｅ１５０（分））までアクティブ群の方が高い平均値を示し、運動時のｔｉｍｅ９０（分）において最も高い平均値を示した。【０１６７】
図９に、経時的な血中のコルチゾール、グルカゴン、インスリンの濃度、及び血糖を測定した結果を示す。【０１６８】
コルチゾールは、運動前のｔｉｍｅ０〜１５（分）まで上昇したが、その後減少した。ｔｉｍｅ１５〜７５（分）において、アクティブ群の値の方が低く、ｔｉｍｅ４５（分）で有意な差が認められた。【０１６９】
グルカゴンは、ｔｉｍｅ３０（分）の運動開始後から値が上昇し、運動時のｔｉｍｅ７５（分）ではアクティブ群は有意に高い値を示した。また、運動後のｔｉｍｅ１２０（分）においても、アクティブ群は有意に高い値を示した。【０１７０】
インスリン及び血糖は、アクティブ群とプラセボ群の間に差を認めなかった。【０１７１】
図１０に、経時的な血中の総ケトン体、３−ヒドロキシ酪酸、及びアセト酢酸の濃度を測定した結果を示す。総ケトン体及び３−ヒドロキシ酪酸は、運動時のｔｉｍｅ４５（分）（運動開始から１５分後）までアクティブ群、プラセボ群共に一旦低下するが、その後上昇を始め、ｔｉｍｅ４５〜１５０（分）まではアクティブ群の方が上昇量は大きく、ｔｉｍｅ１２０（分）で平均値が最大となった。ｔｉｍｅ６０（分）の測定値に有意な差が認められた。経時的推移に注目すると、運動負荷の後（ｔｉｍｅ１２０及びｔｉｍｅ１５０）に、アクティブ群のケトン体の生成が大きく高まっている傾向がみられた。【０１７２】
アセト酢酸は、両群に有意な差を認めなかったものの、総ケトン体と同様の推移を示した。【０１７３】
図１１に、血中の成長ホルモン、アドレナリン及びノルアドレナリンの濃度を測定した結果を示す。成長ホルモンは、試験開始時（ｔｉｍｅ０）から、アクティブ群とプラセボ群共に上昇し、ほぼ同様の推移を示した。アクティブ群とプラセボ群の間に有意な差は認められなかった。アドレナリン及びノルアドレナリンは、運動開始（ｔｉｍｅ３０）と共に値は上昇し、運動終了（ｔｉｍｅ９０）と共に値は低下した。いずれもアクティブ群とプラセボ群の間に有意な差は認められなかった。【０１７４】
以上の結果から、本発明の脂質代謝促進剤について運動負荷時の脂質代謝促進効果をヒトで確認することができた。さらに、本発明の脂質代謝促進剤は、インスリン、成長ホルモン、アドレナリン及びノルアドレナリンの分泌に影響を与えずに、脂質代謝促進効果を奏することもわかった。【０１７５】
（実施例６）
本発明の脂質代謝促進剤を配合した飲料の製造
表３に示す製造例３を１．５ｗ／ｖ％、甘味料１．０ｗ／ｖ％、酸味料０．９ｗ／ｖ％、及び増粘剤０．２ｗ／ｖ％の濃度で配合し、常法に従って飲料を製造した。飲料２００
ｍｌを摂取すると、製造例３を３ｇ摂取することができる。【０１７６】
（実施例７）
本発明の脂質代謝促進剤を配合したタブレットの製造
表３に示す製造例３を５０ｗ／ｗ％、賦形剤、結合剤、崩壊剤、及び滑沢剤を合わせて５０ｗ／ｗ％配合し、常法に従ってタブレットを製造した。【０１７７】
（実施例８）
本発明の脂質代謝促進剤を配合したサプリメントの製造
Ｌ−アルギニン１ｇ（５．７ミリモル）、Ｌ−アラニン１ｇ（１１ミリモル）、Ｌ−フェニルアラニン１ｇ（６．１ミリモル）の割合で混合し、これに賦形剤を添加して、カプセルに充填した。【０１７８】
（実施例９）
脂質代謝指標の測定
（１）材料及び方法
［被検試料］
被検試料は、表３に示す組成のアミノ酸混合物（製造例３）、及び表１に示す組成のアミノ酸混合物（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．）を、それぞれ蒸留水に懸濁することにより調製した。【０１７９】
［動物実験］
３週齢の雄マウスＣ５７ＢＬ／６Ｊ（日本クレア社）を５日間予備飼育し、さらに２日間トレッドミルへの馴化を行った後、実験に用いた。馴化期間終了後、体重を測定し各群の平均体重が同様となるように群分け（Ｎｏｒｍａｌ群、Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群、Ｈ＋Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群、及びＨ＋製造例３群）を行った。水は自由摂取とした。【０１８０】
試験系の概略及び群構成を以下の表７に示す。高脂肪食摂取下では脂質代謝が低下することに基づき、Ｎｏｒｍａｌ群以外の３群には高脂肪飼料ＨＦＤ−６０を摂取させた。
【表７】
0006518189.tif 000008
【０１８１】
被検試料は、馴化期間終了後より最終日を除く４日間毎日、ゾンデを用いてマウスに強制経口投与した。４日間の投与期間中は２日に一回の割合でトレッドミルにて強制的に運動（強制走行）を行わせた。トレッドミルによる運動負荷は１５  ｍ／分の速度で４０分間とした。トレッドミルによる運動負荷の３０分前に被検試料を投与した。投与開始後４日目から５日目にかけて１８時間絶食させた。【０１８２】
投与開始後５日目に解剖を行った。解剖日当日、投与時からの継時的変化を調べるため、各群を３つのグループに分けた。具体的には、投与前に解剖する群（投与前（０））、投与３０分後に解剖する群（運動前（３０））、投与３０分後から６０分間のトレッドミル運動後に解剖する群（運動後（９０））に分けて解剖日当日の被検試料の投与及び運動負荷を実施し、採血と解剖を行った。採取した肝臓は、重量を測定した後、直ちに液体窒素で凍結し、β酸化関連酵素の測定を行うまで−８０℃にて凍結保存した。【０１８３】
［測定］
得られた血液について、血清中のグルカゴン濃度（血中グルカゴン濃度）を、グルカゴン比色定量ＥＬＩＳＡキット Ｍｅｒｃｏｄｉａ  Ｇｌｕｃａｇｏｎ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（Ｍｅｒｃｏｄｉａ）を用いて付属の手順書に従って測定した。【０１８４】
また、肝臓のβ酸化関連酵素活性（カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ活性、アシルＣｏＡオキシダーゼ活性）は、以下の手順で測定を行った。まず、肝臓をホモジナイズし、遠心分離して上清を分取することにより、肝臓総ホモジネート画分を得た。この画分について、Ｍａｒｌｗｅｌｌらの方法を一部変更して用いることにより、カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ活性を測定した。具体的には、最終濃度０．０４ｍＭ  パルミトイルＣｏＡ、０．２５ｍＭ  ＤＴＮＢ（イールマン試薬）、１．２５ｍＭ  ＥＤＴＡ及び０．１％  Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００を含む５８ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）に得られた肝臓総ホモジネート画分を添加し、３０℃、４１２ｎｍでの吸光度測定により５分間反応を追跡し、その後、Ｌ−カルニチン（終濃度１．２５ｍＭ）を添加し、ＣｏＡの生成を５分間追跡し（総量２００μＬ）、それによりカルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ活性を測定した。【０１８５】
また、肝臓総ホモジネート画分について、Ｈａｓｈｉｍｏｔｏらの方法を一部改変して用いることにより、アシルＣｏＡオキシダーゼ活性を測定した。具体的には、最終濃度０．１ｍＭ  パルミトイルＣｏＡ、１０．６ｍＭ  フェノール、０．８２ｍＭ  ４−アミノアンチピリン、１０μＭ  ＦＡＤ、４Ｕペルオキシダーゼ（ホースラディッシュ）及び０．２ｍｇ  ウシアルブミンを含む５０ｍＭ  リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．４）に得られた肝臓総ホモジネート画分を添加し、３０℃、５００ｎｍで１１分間、吸光度を追跡した（総量２００μＬ）。【０１８６】
さらに、得られた肝臓総ホモジネート画分中のタンパク質量を、ＢＣＡ法を用いて測定した。測定にはＴａＫａＲａ  ＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ  Ｔ９３００Ａを用い、付属の手順書に従って測定した。【０１８７】
［統計学的処理方法］
各種測定値は、平均値±標準誤差で示した。データは統計ソフトＳｔａｔ  Ｖｉｅｗ  ５．０−Ｊを使用し、各群の分散の等質性をＦ検定にて確認後、多群の検定をＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤによって行った。有意水準は両側５％とした。【０１８８】
（２）結果
図１２に、血中グルカゴン濃度の測定結果を示す。Ｈ＋製造例３群は、Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群と比較して運動前（投与後３０分）において血中グルカゴン濃度の有意な上昇を示した。すなわち本発明の脂質代謝促進剤は、脂肪分解促進作用を有するグルカゴンの分泌を運動前に亢進させることにより、運動時の脂質代謝を効率的に促進できることが示された。【０１８９】
図１３に、カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ活性の測定結果を示す。Ｈ＋製造例３群は、Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群と比較して投与前及び運動前（投与後３０分）においてカルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ活性の有意な上昇を示した。【０１９０】
図１４に、アシルＣｏＡオキシダーゼ活性の測定結果を示す。Ｈ＋製造例３群は、Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群と比較して投与前においてアシルＣｏＡオキシダーゼ活性の有意な上昇を示した。【０１９１】
肝臓β酸化関連酵素であるカルニチンパルミトイルトランスフェラーゼやアシルＣｏＡオキシダーゼは、脂質代謝の律速段階となる酵素として知られていることから、本発明の脂質代謝促進剤が、これらβ酸化関連酵素活性の増強によっても脂質代謝を促進できることが示された。【０１９２】
以上の結果から、アラニン、フェニルアラニン、及びアルギニンを高度に含有する本発明の脂質代謝促進剤が、高い脂質代謝促進効果を示すことが示された。【０１９３】
（実施例１０）
脂質代謝指標の測定
（１）材料及び方法
［被検試料］
被検試料として、（ｉ）アラニン（アラニン：アルギニン＝１０：０）、（ｉｉ）アラニンとアルギニンの７．５：２．５混合物、（ｉｉｉ）アラニンとアルギニンの５：５混合物、（ｉｖ）アラニンとアルギニンの２．５：７．５混合物、（ｖ）アルギニン（アラニン：アルギニン＝０：１０）を、それぞれ注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製したものを使用した。【０１９４】
［動物実験］
６週齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（ＳＬＣ社）を予備飼育後、試験に用いた。試験前日の朝、ラットの体重を測定し、平均体重が同様となるように群分けした。試験系の概略及び群構成を以下の表８に示す。
【表８】
0006518189.tif 000009
【０１９５】
試験前日の夕方より１８時間の絶食を行った。ただし水は自由摂取とした。【０１９６】
試験当日、尾静脈より採血を行い（投与３０分前；ｔｉｍｅ−３０）、直ちに被検試料をラット体重に対し１ｇ／ｋｇの用量で経口投与（５ｍｌ／ｋｇ）した。採血の３０分後、再度採血を行った（ｔｉｍｅ０）後、直ちにアドレナリン（（Ｒ）−（−）−エピネフリン、和光純薬工業社）を０．２ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与（８ｍｌ／ｋｇ）した。その後、アドレナリン投与の９０分後まで、１５分おきに経時的に採血（ｔｉｍｅ  １５、３０、４５、６０、７５、９０）を行った。採取した血液より血漿を得て、血中グリセロールを測定した。【０１９７】
［測定］
グリセロールアッセイキット（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃａｍｐａｎｙ）を用い、付属の手順書に従って、血漿中のグリセロールを測定した。各測定時における測定値からｔｉｍｅ０の測定値を差し引いた値を算出し、これを血中グリセロール濃度の変化量とした。【０１９８】
（２）結果
アラニン（Ａｌａ）：アルギニン（Ａｒｇ）＝２．５：７．５群、５：５群、７．５：２．５群、１０：０群は、コントロール群よりも、血中グリセロール濃度の変化量が高水準で推移した。また、アラニンとアルギニンは、１：１で混合すると最も高い脂質代謝促進効果を示すことがわかった。【０１９９】
（実施例１１）
脂質代謝指標の測定
（１）材料及び方法
［被検試料］
被検試料として、（ｉ）アラニン（アラニン：フェニルアラニン＝１０：０）、（ｉｉ）アラニンとフェニルアラニンの７．５：２．５混合物、（ｉｉｉ）アラニンとフェニルアラニンの５：５混合物、（ｉｖ）アラニンとフェニルアラニンの２．５：７．５混合物、（ｖ）フェニルアラニン（アラニン：フェニルアラニン＝０：１０）を、それぞれ注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製したものを使用した。【０２００】
［動物実験］
６週齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（ＳＬＣ社）を予備飼育後、試験に用いた。試験前日の朝、ラットの体重を測定し、平均体重が同様となるように群分けした。試験系の概略及び群構成を以下の表９に示す。
【表９】
0006518189.tif 000010
【０２０１】
試験前日の夕方より１８時間の絶食を行った。ただし水は自由摂取とした。【０２０２】
試験当日、尾静脈より採血を行い（ｔｉｍｅ−３０）、直ちに被検試料をラット体重に対し１ｇ／ｋｇの用量で経口投与（５ｍｌ／ｋｇ）した。採血の３０分後、再度採血を行った（ｔｉｍｅ０）後、直ちにアドレナリン（（Ｒ）−（−）−エピネフリン、和光純薬工業社）を０．２ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与（８ｍｌ／ｋｇ）した。その後、アドレナリン投与の９０分後まで、１５分おきに経時的に採血（ｔｉｍｅ  １５、３０、４５、６０、７５、９０）を行った。採取した血液より血漿を得て、血中グリセロール濃度を測定した。【０２０３】
［測定］
グリセロールアッセイキット（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃａｍｐａｎｙ）を用い、付属の手順書に従って、血漿中のグリセロールを測定した。各測定時における測定値からｔｉｍｅ０の測定値を差し引いた値を算出し、これを血中グリセロール濃度の変化量とした。【０２０４】
（２）結果
アラニン（Ａｌａ）：フェニルアラニン（Ｐｈｅ）＝２．５：７．５群、５：５群、７．５：２．５群、１０：０群は、ｃｏｎｔｒｏｌ群よりも、血中グリセロール濃度の変化量が高水準で推移した。また、アラニンとフェニルアラニンは、１：３で混合すると最も高い脂質代謝促進効果を示すことがわかった。【０２０５】
（実施例１２）
脂質代謝指標の測定
（１）材料及び方法
［被検試料］
被検試料として、（ｉ）アルギニン（アルギニン：フェニルアラニン＝１０：０）、（ｉｉ）アルギニンとフェニルアラニンの７．５：２．５混合物、（ｉｉｉ）アルギニンとフェニルアラニンの５：５混合物、（ｉｖ）アルギニンとフェニルアラニンの２．５：７．５混合物、（ｖ）フェニルアラニン（アルギニン：フェニルアラニン＝０：１０）を、それぞれ注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製したものを使用した。【０２０６】
［動物実験］
６週齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（ＳＬＣ社）を予備飼育後、試験に用いた。試験前日の朝、ラットの体重を測定し、平均体重が同様となるように群分けした。試験系の概略及び群構成を以下の表１０に示す。
【表１０】
0006518189.tif 000011
【０２０７】
試験前日の夕方より１８時間の絶食を行った。ただし水は自由摂取とした。【０２０８】
試験当日、尾静脈より採血を行い（ｔｉｍｅ−３０）、直ちに被検試料をラット体重に対し１ｇ／ｋｇの用量で経口投与（５ｍｌ／ｋｇ）した。採血の３０分後、再度採血を行った（ｔｉｍｅ０）後、直ちにアドレナリン（（Ｒ）−（−）−エピネフリン、和光純薬工業社）を０．２ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与（８ｍｌ／ｋｇ）した。その後、アドレナリン投与の９０分後まで、１５分おきに経時的に採血（ｔｉｍｅ  １５、３０、４５、６０、７５、９０）を行った。採取した血液より血漿を得て、血中グリセロール濃度を測定した。【０２０９】
［測定］
グリセロールアッセイキット（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃａｍｐａｎｙ）を用い、付属の手順書に従って、血漿中のグリセロールを測定した。各測定時における測定値からｔｉｍｅ０の測定値を差し引いた値を算出し、これを血中グリセロール濃度の変化量とした。【０２１０】
（２）結果
図１５に血中グリセロール濃度の変化量（Δグリセロール）を示す。アルギニン（Ａｒｇ）：フェニルアラニン（Ｐｈｅ）＝２．５：７．５群と５：５群は、コントロール群よりも、血中グリセロール濃度の変化量が高水準で推移した。また、アルギニンとフェニルアラニンは、１：３で混合すると最も高い脂質代謝促進効果を示すことがわかった。【０２１１】
（実施例１３）
脂質代謝指標の測定
（１）材料及び方法
［被検試料］
被検試料として、実施例１０〜１２の中でそれぞれ高い脂肪分解能を示した、（ｉ）アラニンとアルギニンの１：１重量比混合物、（ｉｉ）アラニンとフェニルアラニンの１：３重量比混合物、（ｉｉｉ）アルギニンとフェニルアラニンの１：３重量比混合物、（ｉｖ）表３に示す組成のアミノ酸混合物（製造例３）を、それぞれ注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製したものを使用した。【０２１２】
［動物実験］
６週齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（ＳＬＣ社）を予備飼育後、試験に用いた。試験前日の朝、ラットの体重を測定し、平均体重が同様となるように群分けした。試験系の概略及び群構成を以下の表１１に示す。
【表１１】
0006518189.tif 000012
【０２１３】
試験前日の夕方より１８時間の絶食を行った。ただし水は自由摂取とした。【０２１４】
試験当日、尾静脈より採血を行い（ｔｉｍｅ−３０）、直ちに被検試料をラット体重に対し１ｇ／ｋｇの用量で経口投与（５ｍｌ／ｋｇ）した。採血の３０分後、再度採血を行った（ｔｉｍｅ０）後、直ちにアドレナリン（（Ｒ）−（−）−エピネフリン、和光純薬工業社）を０．２ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与（８ｍｌ／ｋｇ）した。その後、アドレナリン投与の９０分後まで、１５分おきに経時的に採血（ｔｉｍｅ  １５、３０、４５、６０、７５、９０）を行った。採取した血液より血漿を得て、血中グリセロールを測定した。【０２１５】
［測定］
グリセロールアッセイキット（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃａｍｐａｎｙ）を用い、付属の手順書に従って、血漿中のグリセロールを測定した。各測定時における測定値からｔｉｍｅ０の測定値を差し引いた値に基づいて、ｔｉｍｅ０〜ｔｉｍｅ９０の血中グリセロールＡＵＣ（血中濃度−時間曲線下面積）を算出した。【０２１６】
［統計学的処理方法］
測定値は、平均値±標準誤差で示した。データは統計ソフトＳｔａｔ  Ｖｉｅｗ  ５．０−Ｊを使用して、Ｆ検定による等分散の検定後、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤによって検定した。有意水準は５％とした。【０２１７】
（２）結果
図１６に算出された血中グリセロールＡＵＣ（ｍｉｎ・ｍｇ／Ｌ）を示す。Ａｌａ：Ａｒｇ＝１：１群、Ａｌａ：Ｐｈｅ＝１：３群、Ａｒｇ：Ｐｈｅ＝１：３群、及び製造例３群の全てにおいて、コントロール群と比較して、血中グリセロールＡＵＣが高かった。【０２１８】
（実施例１４）
脂質代謝指標の測定
（１）材料及び方法
［被検試料］
被検試料として、実施例１３で最も高い脂肪分解能を示した（ｉ）アラニンとアルギニンの１：１重量比混合物、実施例１０〜１２の結果を踏まえて配合比を定めた（ｉｉ）アラニンとアルギニンとフェニルアラニンの１：１：３重量比混合物、（ｉｉｉ）アラニンとアルギニンとフェニルアラニンの１：１：６重量比混合物を、それぞれ注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製したものを使用した。【０２１９】
［動物実験］
６週齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（ＳＬＣ社）を予備飼育後、試験に用いた。試験前日の朝、ラットの体重を測定し、平均体重が同様となるように群分けした。試験系の概略及び群構成を以下の表１２に示す。
【表１２】
0006518189.tif 000013
【０２２０】
試験前日の夕方より１８時間の絶食を行った。ただし水は自由摂取とした。【０２２１】
試験当日、尾静脈より採血を行い（ｔｉｍｅ−３０）、直ちに被検試料をラット体重に対し１ｇ／ｋｇの用量で経口投与（５ｍｌ／ｋｇ）した。採血の３０分後、再度採血を行った（ｔｉｍｅ０）後、直ちにアドレナリン（（Ｒ）−（−）−エピネフリン、和光純薬工業社）を０．２ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与（８ｍｌ／ｋｇ）した。その後、アドレナリン投与の９０分後まで、１５分おきに経時的に採血（ｔｉｍｅ  １５、３０、４５、６０、７５、９０）を行った。採取した血液より血漿を得て、血中グリセロールを測定した。【０２２２】
［測定］
グリセロールアッセイキット（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃａｍｐａｎｙ）を用い、付属の手順書に従って、血漿中のグリセロールを測定した。各測定時における測定値からｔｉｍｅ０の測定値を差し引いた値を算出し、これを血中グリセロール濃度の変化量とした。各測定時における測定値からｔｉｍｅ０の測定値を差し引いた値に基づいて、ｔｉｍｅ０〜ｔｉｍｅ９０の血中グリセロールＡＵＣ（血中濃度−時間曲線下面積）を算出した。【０２２３】
（２）結果
図１７に算出された血中グリセロールＡＵＣ（ｍｉｎ・ｍｇ／Ｌ）を示す。アラニン（Ａｌａ）：アルギニン（Ａｒｇ）＝１：１群と、アラニン（Ａｌａ）：アルギニン（Ａｒｇ）：フェニルアラニン（Ｐｈｅ）＝１：１：３群と１：１：６群は、コントロール群と比較して、血中グリセロールＡＵＣが高かった。【０２２４】
以上の結果から、アラニン、フェニルアラニン、及びアルギニンのうちの２つ又は３つの組み合わせを含む本発明の脂質代謝促進剤は、高い脂質代謝促進効果を示すことがさらに示された。
【産業上の利用可能性】
【０２２５】
本発明に係る脂質代謝促進剤によれば、効果的に脂肪消費を促進し、また同じ運動量においてもより高い体脂肪減少効果をもたらすことができ、そのような効果が期待できる脂質代謝促進剤やそれを用いた製品の開発が可能となる。【０２２６】
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願の全体を参照により本明細書に取り入れるものとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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