(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）又は式（ＩＩ）で示す化合物又はその薬用塩であり、
【化１】
0006545254.tif 000041
式（Ｉ）において、
Ｘは塩素又はＯＲ３であり、Ｒ３は水素、−Ｃ（Ｏ）−（炭素数１〜６のアルキル）、−ＰＯ（ＯＨ）２又は−ＣＨ２ＯＰＯ（ＯＨ）２から選択され、
Ｒ１、Ｒ２は別々に独立に水素、炭素数１〜６のアルキル、−ＣＨ２ＯＣＯ−（炭素数１〜６のアルキル）又は−ＣＨ２ＯＣＯＯ−（炭素数１〜６のアルキル）から選択され、
又はＲ１、Ｒ２は以下の式のように一緒に接続された基であり、
【化２】
0006545254.tif 000042
その中において、Ｙはアリール又はヘテロアリールであり、
【化３】
0006545254.tif 000043
式（ＩＩ）において、
Ｚは水素又は−ＣＨ２ＯＰＯ（ＯＨ）２から選択され、
Ｒ１、Ｒ２は別々に独立に水素、炭素数１〜６のアルキル、−ＣＨ２ＯＣＯ−（炭素数１〜６のアルキル）又は−ＣＨ２ＯＣＯＯ−（炭素数１〜６のアルキル）から選択され、
又はＲ１、Ｒ２は以下の式のように一緒に接続された基であり、
【化４】
0006545254.tif 000044
その中において、Ｙはアリール又はヘテロアリールである式（Ｉ）又は式（ＩＩ）で示す化合物又はその薬用塩。
【請求項２】
式（Ｉ）において、Ｘは−ＯＨ、−ＯＰＯ（ＯＨ）２又は−ＯＣＨ２ＯＰＯ（ＯＨ）２であることを特徴とする請求項１に記載の化合物又はその薬用塩。
【請求項３】
式（Ｉ）において、Ｒ１、Ｒ２は全て水素であり、
又は、式（Ｉ）において、Ｒ１、Ｒ２は以下の式のように一緒に接続された基であり、
【化５】
0006545254.tif 000045
その中において、Ｙはアリールであり、
又は、式（Ｉ）において、Ｒ１、Ｒ２は以下の式のように一緒に接続された基であり、
【化６】
0006545254.tif 000046
その中において、Ｙはヘテロアリールであることを特徴とする請求項１に記載の化合物又はその薬用塩。
【請求項４】
前記化合物は以下の構造から選択されることを特徴とする請求項１に記載の化合物又はその薬用塩。
【化７】
0006545254.tif 000047
【請求項５】
前記化合物は以下の構造を有することを特徴とする請求項４に記載の化合物又はその薬用塩。
【化８】
0006545254.tif 000048
【請求項６】
前記化合物は以下の構造から選択されることを特徴とする請求項５に記載の化合物又はその薬用塩。
【化９】
0006545254.tif 000049
【請求項７】
前記化合物は以下の構造から選択されることを特徴とする請求項４に記載の化合物又はその薬用塩。
【化１０】
0006545254.tif 000050
【請求項８】
前記化合物は以下の構造から選択されることを特徴とする請求項７に記載の化合物又はその薬用塩。
【化１１】
0006545254.tif 000051
【請求項９】
前記化合物は以下の構造から選択されることを特徴とする請求項７に記載の化合物又はその薬用塩。
【化１２】
0006545254.tif 000052
【請求項１０】
式（ＩＩ）において、Ｚは−ＯＣＨ２ＯＰＯ（ＯＨ）２であことを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
式（ＩＩ）において、Ｒ１、Ｒ２は全て水素であり、
又は、式（ＩＩ）において、Ｒ１、Ｒ２は以下の式のように一緒に接続された基であり、
【化１３】
0006545254.tif 000053
その中において、Ｙはアリールであり、
又は、式（ＩＩ）において、Ｒ１、Ｒ２は以下の式のように一緒に接続された基であり、
【化１４】
0006545254.tif 000054
その中において、Ｙはヘテロアリールであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
前記化合物は以下の構造を有することを特徴とする請求項１に記載の化合物又はその薬用塩。
【化１５】
0006545254.tif 000055
【請求項１３】
前記化合物は以下の構造から選択されることを特徴とする請求項１２に記載の化合物又はその薬用塩。
【化１６】
0006545254.tif 000056
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載された化合物又はその薬用塩のコラーゲンプロリル−４−ヒドロキシラーゼ阻害剤の調製における使用。
【請求項１５】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載された化合物又はその薬用塩のコラーゲンプロリル−４−ヒドロキシラーゼに関する疾患を予防又は治療する薬物の調製における使用。
【請求項１６】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載された化合物又はその薬用塩の線維症を予防又は治療する薬物の調製における使用。
【請求項１７】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載された化合物又はその薬用塩の肝線維症を予防又は治療する薬物の調製における使用。
【請求項１８】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載された化合物又はその薬用塩の肝機能を保護する薬物の調製における使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、製薬分野に関するものであり、具体的に新しいリン含有フェナントロリン化合物及びその薬用塩、前記化合物の調製方法、前記化合物及びその薬用塩をコラーゲンプロリル−４−ヒドロキシラーゼ阻害剤としてコラーゲンプロリル−４−ヒドロキシラーゼに関する疾患を予防又は治療する薬物を調製する時に応用することに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
以下、本発明に関する背景紹介は本発明を理解するために用いられるが、本発明の先行技術であると見なされるべきではない。全ての引用刊行物は全文に参考される。
【０００３】
肝線維症の発症基礎は過剰なコラーゲン（特にI型コラーゲン、ｃｏｌｌａｇｅｎI）が肝臓によって合成されそれが細胞外媒質（ＥＣＭ）（Ｃｌｉｎ．Ｓｃｉ．１９９７，９２，１０３）に沈着されるためである。コラーゲンの生物学的合成は一連のプロコラーゲン（ｐｒｏｃｏｌｌａｇｅｎ）の翻訳後修飾を含み、その中において、細胞修飾過程は５種類の酵素の参与を必要として、３種類のコラーゲンヒドロキシラーゼと２種類のコラーゲングリコシルトランスフェラーゼを含む。これらのヒドロキシラーゼにおいて、プロリル−４−ヒドロキシラーゼ（Ｐ４Ｈ）は２つのαサブユニット（Ｐ４Ｈα１，Ｐ４Ｈα２）と２つのβサブユニット（Ｐ４Ｈβ１，Ｐ４Ｈβ２）を有する四量体である。βサブユニットはジスルフィドイソメラーゼであり、触媒作用を発揮する主要部位はβサブユニットに存在し、αサブユニットの主要作用は酵素活性を決定する。プロリル−４−ヒドロキシラーゼは全ての既知の２１種類のコラーゲン合成過程で重要な役割を果たす酵素（Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ２０１０，４５，１０６）であり、コラーゲンの合成における重要な律速酵素である。Ｐ４Ｈは細胞の小胞体に位置し、鉄イオン、酸素分子、α-ケトグルタル酸とアスコルビン酸の参与下で、触媒コラーゲンＸ-Ｐｒｏ−Ｇｌｙ配列のプロリン残基の水酸化によって、４-ヒドロキシプロリンを形成する。
【０００４】
Ｐ４Ｈはプロコラーゲンの特定部位のプロリンを水酸化することによって４-ヒドロキシプロリン（４−ＨＹＰ）を生成するので、生理条件におけるコラーゲン三螺旋構造の安定性を増加する。これに反して、コラーゲン構造において４−ＨＹＰが減少すると、コラーゲンは正常に三螺旋に折り畳むことはできなく、機体生理温度で安定ではないので分解される（Ｍａｔｒｉｘ  Ｂｉｏｌ.２００３，２２，１５）。だから、Ｐ４Ｈ酵素活性に対する薬理学的介入は過剰のコラーゲン（即ち線維症である）を抑制する効果的な方法であると認識される（Ｈｅｐａｔｏｌ．１９９８，２８，４０４）。化学的に合成された小分子Ｐ４Ｈ阻害剤は体外と体内実験でコラーゲン合成を防止する作用があると確認した（ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ．１９９７，２７，１８５；Ｈｅｐａｔｏｌ．１９９６，２３，７５５；Ｈｅｐａｔｏｌ．１９９８，２８，４０４；Ｂｉｏｃｈｅｍ．ｊ．１９９４，３００，５２５；ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ．１９９１，１３，Ｓ３５）。例えば、Ｐ４Ｈ阻害剤ＨＯＥ０７７はプロコラーゲンｍＲＮＡ発現を阻害し且つ肝星状細胞の増殖を低減し（Ｈｅｐａｔｏｌ．Ｒｅｓ．２００２，２３，１；Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ．１９９７，２７，１８５）、且つ肝星状細胞の活性化を阻害する（Ｈｅｐａｔｏｌ．１９９６，２３，７５５）。ＨＯＥ０７７がコラーゲン遺伝子とタンパク質に対する阻害作用は用量関係を呈するが、細胞の総タンパク質合成に影響しない。ＨＯＥ０７７の阻害作用はＴＩＭＰ遺伝子の発現を阻害することによって、コラーゲン分解を促進するからであろう（ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１９９９，３４，３７６）。様々なＰ４Ｈ阻害剤は幾つの種類の動物の肝硬変モデル（ＣＣｌ４，ＴＡＡなどである）で肝線維症を阻害する作用がある（Ｈｅｐａｔｏｌ．１９９８，２８，４０４；Ｈｅｐａｔｏｌ．１９９６，２３，７５５；ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ．１９９７，２７，１８５）。また、別のＰ４Ｈ阻害剤ＦＧ−０４１（１，４−ジヒドロフェナントロリン−４−ケトン−３−カルボン酸）は動物実験で心筋梗塞を阻害することができると報告された（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ２００１，１０４，２２１６）。他の報告はＰ４Ｈ阻害剤が膀胱ブロックを阻害することができるなどを含むことを明らかにしている（Ｕｒｏｌｏｇｙ２０１２，８０，１３９０）。
【０００５】
体内のどこにもＰ４Ｈがあるので、Ｐ４Ｈ阻害剤を疾患臓器へ標的送達するとともに他の正常臓器を影響しないことは、安全有効なＰ４Ｈ阻害剤を開発するキーポイントである。９０年代にドイツのＨｏｅｃｈｓｔＭａｒｉｏｎ  Ｒｏｕｓｓｅｌ会社（今はフランスのＳＡＮＯＦＩである）が最初にＨＯＥ０７７を開発して肝硬変を治療し（Ｈｅｐａｔｏｌ．１９９６，２３，７５５；ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ．１９９７，２７，１８５）、臨床実験で著しい効果があるが、臨床実験で白内障などの厳重な副作用が出現した。また、コラーゲン合成を阻害することは目、腎臓などの重要な臓器に大きく影響を与える可能性があるという文献報告がある（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０１０，２８５，４２０２３）。コラーゲン合成は細胞マトリックスに広く存在するので、臓器細胞マトリックスのコラーゲン形成の抑制は、大分子の滲出を招き、従って臓器機能変化を引き起こす。したがって、Ｐ４Ｈ阻害剤をどのように指定された臓器に輸送することは臓器線維症（例えば、肝線維症である）を治療するために用いられるＰ４Ｈ阻害剤を開発するキーポイントになった。前薬物投与療法は標的治療方面に広く使用され（Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２００５，３１２，５５４）、１，３−グリコールとホスホン酸によって形成されたホスホン酸エステルで肝臓標的薬物送達を実現するという文献報告がある（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００８，５１，６６６）。本発明が採用する肝臓前薬物投与は、薬物の有効成分を修飾して不活性な前薬物を形成する。上記前薬物は、肝臓特異的酵素（例えば、シトクロムＰ４５０，ＣＹＰである）の触媒作用によってのみ代謝され有効成分を肝臓に放出し、従って肝臓で薬物効果を発揮する。  
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、新しいリン含有フェナントロリン化合物及びその薬用塩を提供する。本発明の別の目的は、前記化合物及びその薬用塩の調製方法を提供する。本発明のさらに別の目的は、前記化合物及びその薬用塩をコラーゲンプロリル−４−ヒドロキシラーゼ阻害剤としてコラーゲンプロリル−４−ヒドロキシラーゼに関する疾患を予防又は治療する薬物を調製する時の応用を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
１つの態様において、本発明は式Ｉ又は式ＩＩの化合物及びその薬用塩を提供し、
【化１】
0006545254.tif 000002
式Ｉにおいて、Ｘは塩素又はＯＲ３基であり；Ｒ３は水素、−Ｃ（Ｏ）−（炭素数１〜６のアルキル）、−ＰＯ（ＯＨ）２又は−ＣＨ２ＯＰＯ（ＯＨ）２であり；
Ｒ１、Ｒ２は別々に独立に水素、炭素数１〜６のアルキル、−ＣＨ２ＯＣＯ−（炭素数１〜６のアルキル）と−ＣＨ２ＯＣＯＯ−（炭素数１〜６のアルキル）から選択され、Ｒ１、Ｒ２は以下の式のように一緒に接続された基であることもでき、
【化２】
0006545254.tif 000003
その中において、Ｙはアリール又はヘテロアリールであり、
一方で、Ｘは塩素及びＯＲ３基から選択することができ、Ｒ３は水素、−Ｃ（Ｏ）−（炭素数１〜６のアルキル）、−ＰＯ（ＯＨ）２又は−ＣＨ２ＯＰＯ（ＯＨ）２であり、
もう一方で、Ｒ１、Ｒ２は別々に独立に水素、炭素数１〜６のアルキル、−ＣＨ２ＯＣＯ−（炭素数１〜６のアルキル）と−ＣＨ２ＯＣＯＯ−（炭素数１〜６のアルキル）から選択することができ、Ｒ１、Ｒ２は以下の式のように一緒に接続された基であることもでき、
【化３】
0006545254.tif 000004
その中において、Ｙはアリール又はヘテロアリールであり、
式ＩＩにおいて、Ｚは水素又は−ＣＨ２ＯＰＯ（ＯＨ）２であり、Ｒ１、Ｒ２は別々に独立に水素、炭素数１〜６のアルキル、−ＣＨ２ＯＣＯ−（炭素数１〜６のアルキル）と−ＣＨ２ＯＣＯＯ−（炭素数１〜６のアルキル）から選択され、Ｒ１、Ｒ２は以下の式のように一緒に接続された基であることもでき、
【化４】
0006545254.tif 000005
その中において、Ｙはアリール又はヘテロアリールであり、
一方で、Ｚは水素又は−ＣＨ２ＯＰＯ（ＯＨ）２から選択することができる。
もう一方で、Ｒ１、Ｒ２は別々に独立に水素、炭素数１〜６のアルキル、−ＣＨ２ＯＣＯ−（炭素数１〜６のアルキル）と−ＣＨ２ＯＣＯＯ−（炭素数１〜６のアルキル）から選択することができ、Ｒ１、Ｒ２は以下の式のように一緒に接続された基であることもでき、
【化５】
0006545254.tif 000006
その中において、Ｙはアリール又はヘテロアリールである。
【０００８】
好ましい実施方式において、前記化合物は以下の式を有する化合物である。
【化６】
0006545254.tif 000007
【０００９】
別の好ましい実施方式において、前記化合物は以下の式を有する化合物である。
【化７】
0006545254.tif 000008
【００１０】
別の好ましい実施方式において、前記化合物は以下の式を有する化合物である。
【化８】
0006545254.tif 000009
【００１１】
第２態様において、本発明は上述したリン含有フェナントロリン化合物及びその薬用塩の調製方法を提供する。
【００１２】
第３態様において、本発明は上述したリン含有フェナントロリン化合物及びその薬用塩をコラーゲンプロリル−４−ヒドロキシラーゼ阻害剤としてコラーゲンプロリル−４−ヒドロキシラーゼに関する疾患を予防又は治療する薬物を調製する時の応用を提供する。  
【００１３】
本発明は式I又は式ＩＩの化合物又はその薬用塩をコラーゲンプロリル−４−ヒドロキシラーゼに関する疾患を予防又は治療する薬物を調製する時の応用を提供する。
【００１４】
本発明は式I又は式ＩＩの化合物又はその体内代謝物又はその薬用塩をコラーゲンプロリル−４−ヒドロキシラーゼ阻害剤としての応用を提供する。
【００１５】
本発明において、治療上有効な用量の式I又は式ＩＩの化合物又はその薬用塩を慢性肝臓損傷の患者に服用させて、肝機能を保護することができる。
【００１６】
本発明において、治療上有効な用量の式I又は式ＩＩを有する化合物又はその薬用塩を慢性肝臓損傷の患者に服用させて、肝線維症を予防し且つ治療することができる。
【００１７】
本発明において、治療上有効な用量の式I又は式ＩＩを有する化合物又はその薬用塩を糖尿病の危険がある患者に服用させて、肝線維症を防止することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】化合物９ｃがＰ４Ｈ酵素に対する５０％抑制濃度（ＩＣ５０）。
【図２】化合物２７（３９ｍｇ/ｋｇ）を経口投与し且つ化合物１６ｃ（３ｍｇ/ｋｇ）を静脈注射投与してから、血漿中の化合物１６ｃの時間 - 濃度曲線である。
【図３】偽手術ラットの肝臓ＨＥ染色を示す。
【図４】胆管結紮（ＢＤＬ）線維症モデルラットの肝臓（２週間）ＨＥ染色を示す。
【図５】化合物２７（３０ｍｇ/ｋｇ）を経口投与してから、胆管結紮（ＢＤＬ）線維症モデルラットの肝臓（２週間）ＨＥ染色を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
用語の定義
以下の用語を本発明に応用し、特殊な説明がない限り、以下の定義に従う。
【００２０】
用語「アルキル」は２０個の炭素原子を含む直鎖、分岐鎖、環状の飽和脂肪炭化水素基（ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ）を意味する。適切なアルキルはメチル、エチル、ｎ-プロピル、イソプロピル及びシクロプロピルなどが挙げられる。アルキルは１〜３個の置換基を有することができる。
【００２１】
用語「アリール」は５〜１４個の環原子を含み、少なくとも1つの環が共役電子系を有する芳香族基を意味し、炭素環式アリール、複素環式アリール、縮合アリール、ビアリールアリール結合したものを含み、置換基を有してもよい。アリールは１〜６個の置換基を有することができる。
【００２２】
ヘテロ芳香環は５〜１４個の環原子を含む基であり、その中の１〜４個のヘテロ原子は芳香環の原子であり、残りの環原子は炭素原子である。適切なヘテロ原子は酸素、硫黄、窒素及びセレン原子が挙げられる。適切なヘテロ芳香環はフラン、チオフェン、ピリジン、ピロリジン、窒素に低炭素数アルキル置換基を有するピロリジン、ピリジン窒素酸化物、ピリミジン、ピラジン、イミダゾール及び他の類似のヘテロ環が挙げられ、且つ全て置換基を有することができる。
【００２３】
用語「任意に置換される」又は「置換される」は基が１〜４個の異なる置換基を有することを意味し、別々に低炭素数アルキル、低炭素数アリール、低炭素数アラルキル、低炭素数環状アルキル、低炭素数ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシ、低炭素数アルコキシ、低炭素数アリールオキシ、マルチハロゲンアルコキシ、アリールアルコキシ、低炭素数ヘテロアリール、低炭素数ヘテロアリールオキシ、低炭素数ヘテロアラルキル、低炭素数ヘテロアリールアルコキシ、アジド、アミノ、ハロゲン、低炭素数アルキルチオ、オキシ、低炭素数アシルアルキル、低炭素数カルボキシレート、カルボン酸、アミド基、ニトロ基、低炭素数アシルオキシ、低炭素数アルキルアミン、低炭素数アルキルアリールアミン、低炭素数アルキルアリール、低炭素数アルキルアミンアルキル、低炭素数アルコキシアリール、低炭素数アリールアミノ、低炭素数アラルキルアミン、スルホニル、低炭素数アルキルアリールアミド、低炭素数アリールアミド、低炭素数ヒドロキシアルキル、低炭素数ハロゲンアルキル、低炭素数アルキルアミンアルキルカルボキシル、低炭素数アルキルウレア、シアノ、低炭素数アルコキシアルキル、低炭素数マルチハロゲンアルキル又は低炭素数アリールアルコキシアルキルであることができる。
【００２４】
用語「アリールを置換する」及び「ヘテロアリールを置換する」は芳香環又はヘテロ芳香環基に１〜６個の置換基を有することを意味する。これらの置換基は低炭素数アルキル、低炭素数アルコキシ、低炭素数マルチハロゲンアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ又はアミノであることができる。
【００２５】
用語「ハロゲン」はフッ素、塩素、臭素又はヨウ素を意味する。
【００２６】
「治療上有効な用量」という語句は特定の疾患状態の１つ又は複数の症状を改善、軽減、除去又は予防、改変、遅延することに必要とする１つの化合物又は組合物の用量を意味する。
【００２７】
用語「薬用塩」は式I又は式ＩＩの化合物及びそのプロドラッグと有機酸又はアルカリ又は無機酸又はアルカリが混合して生成する塩である。適切な酸は、酢酸、アジピン酸、ベンゼンスルホン酸、カンファースルホン酸、クエン酸、１，２−エタンスルホン酸、ドデシルスルホン酸、フマル酸、グルコンギ酸、グルコン酸、グルクロン酸、馬尿酸、半グリコール酸塩酸、臭化水素酸、塩酸、ヨウ化水素酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、メチルボロン酸、硫酸モノメチルエステル、２−ナフタレンスルホン酸、硝酸、オレイン酸、パルミチン酸、リン酸、ポリガラクツロン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、スルホサリチル酸、タンニン酸、酒石酸、ｐ−フタル酸、ｐ-トルエンスルホン酸を含み含む。適切なアルカリと混合して生成した塩はナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、リチウム塩、セシウム塩、アミノ酸塩を含む。
【００２８】
用語「患者」は治療を受ける雄性及び雌性の哺乳類動物を意味し、例えば、犬、猫、牛、馬、羊及び人である。
【００２９】
用語「プロドラッグ」は生物体に薬物を投与してから自発的化学反応、酵素触媒化学反応、代謝化学反応又はこれらの反応の総合作用によって生物活性化合物を釈放することができる物質を意味する。一般的なプロドラッグは特定の基と薬物分子の官能基、例えば、ヒドロキシ、メルカプト、カルボキシル、アミノなどが連ねて形成され、これらが生物体内に接続すると切断される。一般的なプロドラッグはエステルを含むが、それに限定されるものではなく、その中の基はカルボキシルに結合したアルキル、アリール、アラルキル、アシルオキシアルキル、アルコキシカルボニルオキシアルキルであることができ、ヒドロキシ、チオール、アミノに結合したアシル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、ホスフェート又は硫酸エステルであることもできる。前記した基はただ例を挙げただけで、全部ではなく、いかなる精通している人は全て他の既知の様々な種類のプロドラッグを調製することができる。式I及び式ＩＩの化合物のプロドラッグもこの範囲内にある。プロドラッグは必ずある化学反応によって生物活性を有する化合物又は活性化合物の前駆体に変換される。ある場合、プロドラッグも生物活性を有するが、一般的に薬物自身の活性より弱く、このような場合、プロドラッグは経口生物学的利用度又は薬物動態学的半減期などの性質を高めることにより薬物の薬効や安全性を向上させる。プロドラッグは薬物の生物学的利用度を高めるために用いられ、さらに不快な特性（例えば、苦味又は胃腸刺激である）をカバーするか又は低減することにより薬物の受容性を向上し、溶解性を改変して静脈内注射に用いられ、釈放及び薬物送達を延長又は保留し、フォーミュラ難度を低減し、又は確定位置に薬物を投与する。プロドラッグは以下のいくつかの論文に詳細に記載されており、Ｔｈｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｃｔｉｏｎ，サンディエゴ学術出版社，Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｂ．Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ，１９９２．第８章：「Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ」ｐｐ．３５２−４０１；Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９８５；Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｓ，ワシントン米国医薬協会Ｅ．Ｂ．Ｒｏｃｈｅが編集、１９７７；Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，オックスフォード市オックスフォード大学出版社Ｒ．Ｌ．Ｊｕｌｉａｎｏが編集、１９８０。
【００３０】
用語「鏡像異性体過量百分率（％ｅｅ）」は光学純度を表示するために用いられる。％ｅｅ値は以下の式によって得る。
【数１】
0006545254.tif 000010
式中の［Ｒ］はＲ異性体の量を表し、［Ｓ］はＳ異性体の量を表す。上記の式によってＲ異性体が主要な異性体である時の％ｅｅ値を計算することができる。
【００３１】
用語疾患を「治療する」は以下の状況を含み、即ち疾患の発生を予防し（予防療法）、疾患を制止し（疾患の発展速度を落とす又は疾患の発展を停止する）、疾患の症状及び副作用を軽減し（保守療法）、疾患を軽減する（病気が快復する）。
【００３２】
本発明の化合物の製剤
【００３３】
本発明の化合物は毎日０．０１〜２５００ｍｇの用量で服用することができる。一方で、この用量範囲は約５ｍｇ〜約５００ｍｇである。投与量は自由に分配することができる。
【００３４】
本発明の化合物は他の薬剤と共同に使用することができ、正常な用量を使用することができ、適切な比例を用いてもよい。本発明の化合物は併用療法の一部分とすることができ、連合投与又はＨＡＡＲＴ（ｈｉｇｈｌｙ  ａｃｔｉｖｅ  ａｎｔｉｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ  ｔｈｅｒａｐｙ）と呼ばれ、複数の薬剤は一緒に服用することができ、同時又は別々に単独に服用することもでき、又は順番に服用する。本発明の化合物は、他の薬剤を一定期間使用してから再び使用することができ、他の薬剤とともに1つの治療コース内に使用することができ、併用療法の一部分とすることができ、又は１つの治療過程において他の薬剤で治療する前に先ず服用することができる。
【００３５】
治療目的を実現するために、本発明の化合物は薬学的に適切な担体、アクセサリ及び媒質製剤とともにいろいろな経路によって薬物を投与することができ、経口、非経口、気道スプレー、局部又は直腸投与を含む。用語「非経口」は皮下注射、静脈注射、筋肉注射及び動脈注射などのいろいろな注射方式を含む。動脈注射と静脈注射は全てカテーテルを通して投与し、一般的に静脈注射が好ましい。
【００３６】
本発明の化合物の薬用塩は、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、リチウム塩、セシウム塩、アミノ酸塩、酢酸塩、アジピン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、臭化水素酸塩、カンファースルホン酸塩、塩酸塩、クエン酸塩、エタンスルホン酸塩、プロピオン酸エチルラウリル硫酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、馬尿酸塩、ヒクラート、臭化物、塩化物、ヨウ化物、２-ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、臭化メチル、メタンスルホン酸塩、ナフタレンスルホン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、スルホサリチル酸塩、酒石酸塩、ｐ−フタル酸塩、ｐ-トルエンスルホン酸塩及びヨウ化トリエチルを含む。
【００３７】
薬物中の有効成分は異なる投与方式によって異なる状態がある。例えば、経口投与薬物は、錠剤、糖衣錠剤、菱形錠剤、水性懸濁液又は油性懸濁液、分散性粉末又は顆粒、エマルジョン、硬質カプセル又は軟質カプセル、シロップ及びエリキシル剤に調製することができる。経口製剤の調製方法は、既知薬物の調製プロセスを参照することができる。口当たりの良い調製物を提供するために、調製物に甘味剤、香味剤、着色剤及び防腐剤などの成分を添加することができる。便利に生産するために、錠剤に非毒性且つ薬物標準に符合する賦形剤を添加することができる。例えば、これらの賦形剤は、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム及びリン酸ナトリウムの不活性希釈剤であることができ、コーンスターチ、アルギン酸などのような粉砕剤と顆粒剤であることができ、デンプン、ゼラチン、プラスチックなどのような架橋剤であることができ、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸等のような潤滑剤であることもできる。錠剤は既知の方法で糖衣を被覆又は剥離することができ、マイクロカプセル化技術によって胃腸管における薬剤の化学分解、吸収時間を延長して、さらに長い作用時間を得る。例えば、モノステアリン酸グリセリル又はジステアリン酸グリセリルのような時間延長剤は単独又はワックスと併用することができる。
【００３８】
経口製剤は有効成分を固体不活性希釈剤（例えば、リン酸カルシウム、カオリンである）と混合してから硬質ジェルカプセル内に封入することができ、有効成分を水又は油性媒体（例えば、ピーナッツ油、流動パラフィン、オリーブ油である）と混合してから軟質ジェルカプセルに封入することもできる。
【００３９】
本発明の活性物質は工業生産に適した賦形剤と混合して水懸濁液に調製されることができる。このような賦形剤は、メチルカルボン酸ナトリウムセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、葉ゴム及びアラビアゴムのようなフロアブル剤を含み、天然リン脂質（例えば、レシチンである）、アルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物（例えば、ポリエチレングリコールステアレートである）、エチレンオキシドと長鎖脂肪アルコールとの縮合生成物（例えば、ヘプタデカンビニルオキシエタノールである）、エチレンオキシドと脂肪酸部分エステル化されたヘキシトールの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートである）の分散剤及び湿潤剤である。水懸濁液の中にエチル又はｐ−プロピルｐ−ヒドロキシベンゾエートといった一種又は多種の防腐剤、着色剤、香味剤、ショ糖及びサッカリンといった甘味剤を含むことができる。
【００４０】
活性成分を植物油（例えば、ラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油、ココナッツ油である）又は鉱物油（例えば、流動パラフィンである）に加入して油性懸濁液製剤を調製する。経口懸濁液製剤は増粘剤（例えば、蜜蝋、固形パラフィン、セチルアルコール）があることもできる。甘味剤（前記したものである）、香味剤も製剤に加入して服用し易いことにする。製剤にアスコルビン酸などの抗酸化剤を加入して保存することができる。
【００４１】
本発明の分散性粉末及び顆粒は水懸濁液を調製するために用いられることができ、活性成分を水に加入し、且つ分散剤、湿潤剤、フロアブル剤、防腐剤を加入する。上述の説明で適切な分散剤、湿潤剤及びフロアブル剤を公開した。他の賦形剤、例えば、甘味剤、香味剤及び着色剤を加入することもできる。
【００４２】
本発明の薬学成分は油−水エマルションの形式に調製することができる。油相は植物油（例えば、オリーブ油とラッカセイ油である）、鉱物油（例えば、流動パラフィンである）又は混合油であることができる。適切な乳化剤は天然ゴム（例えば、アラビアゴム、トラガカントゴムである）、天然リン脂質（例えば、大豆レシチンである）、脂肪酸とヘキシトールの縮合エステル又は部分縮合エステル（例えば、ソルビタンモノオレエート）、部分縮合エステルとエチレンオキシドの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートである）を含む。乳化液に甘味剤及び香味剤を加入することもできる。
【００４３】
シロップ及びエリキシル剤は甘味剤（グリセロール、ソルビトール、スクロース）とともに製剤を調製することができる。このような製剤に鎮痛剤、防腐剤、香味剤及び着色剤を含むことができる。
【００４４】
本発明の薬剤形式は無菌水懸濁液又は油性懸濁液に調製することができ、無菌注射に応用される。現有の方法を応用して、上述した適切な分散剤、湿潤剤又はフロアブル剤を使用して懸濁液を調製する。無菌注射液は注射用の非毒性の希釈剤又は溶媒で調製した溶液又はて懸濁液であることができ、例えば、凍結乾燥粉末を調製して、１，３−ブタンジオールに溶解する。使用できる担体及び溶媒は水、リンガー溶液、生理食塩水である。無菌処理を行った油も溶媒又は懸濁媒質に用いられることができる。使用できるいかなるマイルドオイルは、合成モノグリセリド及びジグリセリドを含む。又、オレイン酸などの脂肪酸も注射製剤に用いられることができる。
【００４５】
担体と混合して調製された薬剤の活性成分の投与量は治療を受ける主体及び投与方式によって変化する。例えば、経口ＳＲＰは２０〜２０００マイクロモル（約１０〜１０００ｍｇである）の活性成分及び適切な担体（総成分の５％〜９５％を占める）を含む。精確な投与量を提供することができる製剤方式がさらに適合である。例えば、静脈注射用水溶液は一時間当たり３０ｍｌの注入量を満足するために、１ｍｌ当たり約０．０５〜５０マイクロモル（約０．０２５〜２５ｍｇである）の活性成分を含むことを必要とする。
【００４６】
上述したように、経口製剤は分離されたユニット、例えば、カプセル、偏平剤、錠剤に調製されることができ、ユニット毎は固定投与量の活性成分を含み；粉末又は顆粒に調製されることができ；水又は非水液体の溶液及び懸濁液に調製されることができ；水性エマルション又は油−水エマルションに調製されることができる。活性成分は大丸薬、薬糖剤及びペーストの形態で服用することもできる。
【００４７】
選択的に一種又は多種の付加成分と混合して、打錠と錠剤充填することにより錠剤を製作することができる。打錠は自由に流動する活性成分（粉末又は顆粒）を架橋剤（ポリエチレンピリジンケトン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、分解剤（デンプングリコール酸ナトリウム、架橋ポリエチレンピリジンケトン、架橋セルロースメチルカルボン酸ナトリウム）、表面活性剤又は分散剤と選択的に混合してから適当な機械で圧密して作ることである。錠剤充填は粉末状化合物を不活性液体希釈剤で湿潤してから金型に充填して作ることである。錠剤を作っているところその有効成分の釈放速度を落とす又は制御するために着衣や刻紋を選択することができ、例えば、異なる比例のヒドロキシプロピルメチルセルロースは異なる釈放速度を提供することができる。錠剤は腸衣を加えることができ、それが胃ではなく腸で釈放することにする。式Iの化合物は酸中加水分解されることができるので、このような製剤方式は非常に大きい優勢がある。
【００４８】
口腔内局所投与に適した製剤は、活性成分を調味基（通常は、スクロース、アラビアゴム、又はトラガカントゴムである）に入れたトローチ、活性成分を不活性基（ゼラチン、グリセロール、スクロース及びアラビアゴムである）に入れたトローチ、活性成分を液体担体に適したマウスウォッシュに置いたものを含む。
【００４９】
直腸投与する製剤は、活性化合物を適切なベース（例えばココア、バター、サリチル酸塩）に置いた座薬であることができる。
【００５０】
膣内投与する製剤は、ペッサリー、止血タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム又はスプレーに活性成分及び他の公知の適切な担体を添加することができる。
【００５１】
注射投与する製剤は、水性無菌注射溶液又は非水性等浸透圧無菌注射溶剤を含み、その中に抗酸化剤、緩衝塩、殺菌剤、製剤とレシピエントの血液を等浸透圧させる溶質を含み、水性及び非水性無菌懸濁液の中に懸濁剤と粘稠剤を含むことができる。製剤は単位投与量で包装することができ、多投与量で包装することもでき、例えば、アンプルと小瓶、氷干貯蔵することができ、使用する前に無菌液体担体（例えば、注射用水である）を加入する。注射用溶液及び懸濁液は前述したように無菌粉末、顆粒及び錠剤で調製することができる。
【００５２】
注射用製剤は内部ポンプと薬袋を使用して連続注入方式で投与することができる。注入はＨｉｃｋｍａｎ方法又はＰＩＣＣ方法又は注射及び静脈注射に適用するいかなる他の投与方式を採用することができる。
【００５３】
推薦薬剤単位用量は、毎日用量又は単位、毎回用量及び毎日投与回数を含む。
【００５４】
明確にしなければならないことは、いかなる単独患者の特定薬用量は多い要因によって決まれ、使用される特定化合物の活性、年齢、体重、健康状況、性別及び栄養状況；投与時間及び経路；排泄速度；その前に使用した他の薬物；疾患の厳重程度を含む。これはいかなる当業者が全て理解することができる。
【００５５】
式I及び式ＩＩの化合物の合成方法
本発明の化合物は以下の手順によって調製することができ、経験豊富な人々によって公開文献の類似方法で合成することもできる。以下の方法は調製過程を説明するために用いられ、本発明の特許請求範囲はそれに限定されるものではない。式Iの代表的な合成方法は基本的な５つのステップに要約することができ（後から前の順番）：（１）プロドラッグの調製；（２）ホスホン酸エステル脱保護；（３）キノリン環の修飾；（４）キノリン環の合成；（５）重要な中間体の合成である。式ＩＩの化合物は式Iの化合物と適当な基が反応して得ることができる。保護と脱保護の具体的な操作は既知文献を参考することができる（例えば、“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”  ３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ，１９９９）。
【００５６】
本発明に係わる化合物のあらゆる立体異性体は全て独特な作用を有し、混合物、大体純粋品、純粋品にかかわりない。本発明の化合物はリン原子及びいかなる炭素原子（いかなるＲ置換基を含む）の上にキラル中心を有することができる。だから、式Iの化合物は鏡像異性体又は非鏡像異性体の形式で存在することができ、又は二者の混合物である。調製過程で使用する開始剤はラセミ体、鏡像異性体又は非鏡像異性体であることができる。従来の方法で生成した鏡像異性体又は鏡像異性体を分離することができる。例えば、クロマトグラフィーまたは分別結晶（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ  ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ）作用で非鏡像異性体を分離することができ、クロマトグラフィーで鏡像異性体の誘導体を分離することができる。
【００５７】
１）プロドラッグの調製
【００５８】
プロドラッグは合成の異なる段階に導入することができる。異なるプロドラッグの不安定性に起因して、一般的に合成の末期段階に導入するが、他の原因で合成の初期段階に導入する場合もある。
【００５９】
式Iの化合物はホスホン酸（Ｒ１及びＲ２は全て水素である）であることができ、適切に保護された状態であることもできる。ホスホン酸は、求電子剤（例えば、ハロゲン化アルキル及び硫酸アルキルエステルである）によって、求核反応条件でホスホン酸エステルに生成されることができる。例えば、Ｒ１及びＲ２がアシルオキシアルキルである場合、式Iの化合物はＲ１及びＲ２が水素である時の化合物と適切なアシルオキシアルキルハロゲン（例えば、塩素、臭素、ヨウ素；Ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ  Ｓｕｌｆｕｒ１９９０，５４，１４３；Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ１９８８，６２である）が適切なアルカリ（例えば、ピリジン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンである）の作用によって適切な溶剤（例えば、ＤＭＦ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９４，３７，１８７５）の中で反応して調製される。アシルオキシアルキルハロゲンの中のカルボン酸エステルは酢酸メンチル、プロピオン酸エチル、イソ酪酸エチル、トリメチル酢酸エステル、安息香酸メチル、炭酸エステル及び他のカルボン酸エステルであることができるが、それに限定されるものではない。
【００６０】
活発なホスホン酸ジクロリドは対応するホスホン酸と塩素化試薬（例えば、塩化チオニル、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９４，１８５７；塩化オキサリル、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９９０，３１，３２６１；五塩化リン、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  １９７４，４９０）が反応して生成することができる。又、ホスホン酸ジクロリドは対応するジシリルホスホン酸エステル（Ｓｙｎｔｈ．Ｃｏｍｍｕ．１９８７，１７，１０７１）及びジアルキルホスホン酸エステル（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９８３，２４，４４０５；Ｂｕｌｌ．Ｓｏｃ．Ｃｈｉｍ．１９９３，１３０，４８５）で調製することもできる。
【００６１】
環状のホスホン酸１，３−プロピレングリコールエステルは対応するホスホン酸ジクロリドと置換された１，３−プロピレングリコールが反応して生成することができ（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００８，５１，６６６）、適切なカップリング試薬（例えば、ＤＣＣ，ＥＤＣＩ，ＰｙＢＯＰ；Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ１９８８，６２）を使用してカップリング反応を行うこともできる。
【００６２】
環状のホスホン酸１，３−プロピレングリコールエステルはホスホン酸とグリコールが光延反応条件でカップリングして生成することができ（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  １９８１，１；Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９２，５２，６３３１）、他の酸カップリング試薬はカルボニルジイミン（Ｃｏｌｌｅｃｔ．Ｃｚｅｃｈ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９９４，５９，１８５３；Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１９９２，２，１４５；Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９８８，２９，１１８９）及びＰｙＢＯＰ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９９３，３４，６４７３）を含むが、それに限定されるものではない。
【００６３】
一方で、本発明は式Iのホスホン酸プロドラッグモノマーを合成及び分離する方法を公開した。リン原子はキラル中心であるため、置換１，３−プロピレングリコールのラセミ体を使用して調製したプロドラッグは異性体の混合物である。例えば、ラセミ化１−Ｙ置換の１，３−プロピレングリコールを使用するとラセミシスプロドラッグ混合物及びラセミ化トランス体プロドラッグ混合物を生成する。もう一方で、Ｒ鏡像異性体が豊富な置換１，３−プロピレングリコールを使用すると鏡像異性体豊富なＲ−シスプロドラッグ及びＲ−トランスプロドラッグを得る。これらの化合物はカラムクロマトグラフィー及び（又は）分別結晶（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ  ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ）方式を使用して分離することができる。
【００６４】
第二プロドラッグ基を導入することにより所望の特性を得ることができる。式Iの化合物（ＸがＯＨである）はヒドロキシピリジン環の酸素原子又は窒素原子に異なる保護基を接続することができる。例えば、Ｒ３がアシルである場合、式Iの化合物は、Ｒ３が水素である時の化合物が適切な条件で適切なハロゲン化アシルと反応して得ることができ（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８９，５４，１６６）；Ｘが塩素である場合、式Iの化合物は、ＸがＯＨである時の化合物が適切な条件で適切な塩素化試薬と反応して得ることができる（例えば、オキシ塩化リン、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９５０，１５，１２２４；トリクロロアセトニトリル、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２０１２，５３，６７４）。
【００６５】
ホスホン酸エステル脱保護
【００６６】
Ｒ１は水素である式Iの化合物は既知のホスフェートとホスホン酸エステルの切断条件を使用してホスホン酸エステルを反応調製することができる。ハロゲン化シランは常に異なるホスホン酸エステルを切断するために用いられ、獲得したシリコンホスホン酸エステルは穏やかな加水分解処理によって目標ホスホン酸を得ることができる。需要によって酸切断された化合物を合成する時に酸除去剤を使用することができる（例えば、ヘキサメチルジシラザン、２，６−ルチジンである）。これらのハロゲン化シランは、トリメチルクロロシラン（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｎ．１９６３，２８，２９７５）、ブロモトリメチルシラン（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９７７，１５５）、ヨードトリメチルシラン（Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９７８，８７０）を含む。又、ホスホン酸エステルは強酸条件で切断することもできる（例えば、臭化水素酸又は塩酸、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ３，５２４，８４６，  １９７０）。これらのホスホン酸エステルはハロゲン化試薬（五塩化リン、塩化チオニル、三臭化ホウ素；Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９６１，２３８）を使用することによりジクロロホスホネート（Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌ  ｄｉｃｈｌｏｒｉｄｅ)に転化されてから加水分解処理によってホスホン酸になる。アリール及びベンジルホスホン酸エステルは水素化分解条件（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ１９８２，４１２；Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９８５，２８，１２０８；Ｎａｔｕｒｅ１９５３，１７１，７６）又は金属還元条件（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９７７，９９，５１１８）で切断することもできる。電気化学（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９７９，４４，４５０８）及び高温熱分解（Ｓｙｎｔｈ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９８０，１０，２９９）条件も異なるホスホン酸エステルを切断するために用いられることができる。
【００６７】
３）リン含有フェナントロリンの合成
【００６８】
フェナントロリン母核（ｍｏｔｈｅｒ  ｎｕｃｌｅｕｓ）の構築は文献確立の条件を使用することができる。例えば、以下に示された熱環化法がある。
【化９】
0006545254.tif 000011
【００６９】
アリールアミン１は３−ニトロベンゼンスルホン酸ナトリウム、硫酸及びグリセリンの条件下でキノリン２を生成する。キノリン２は酢酸中でＮＢＳに臭素化されて化合物３を獲得してから、水酸化鉄で還元して化合物４を獲得する。化合物４はホスホン酸化されてホスホン酸エステル５を獲得し、そして化合物１７と反応してから熱環化反応によってＲが水素であるフェナントロリン７（式Iにおいて、Ｘはヒドロキシであり、Ｒ１及びＲ２はエチルである）を獲得する。化合物７は水酸化ナトリウムと反応してＲが水素である化合物８を獲得する（式Iにおいて、Ｘはヒドロキシであり、Ｒ１は水素であり、Ｒ２はエチルである）。又、化合物７は４８％臭化水素酸と反応してＲが水素である化合物９を獲得する（式Iにおいて、Ｘはヒドロキシであり、Ｒ１及びＲ２は水素である）。ある場合に所望の置換基は次の反応に適しなく、この時に既存のフェナントロリン環に対して既知化学で修飾を行う（Ｌａｒｏｃｋ， Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ,１９８９；Ｔｒｏｓｔ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ； Ｐｅｒｇａｍｏｎ  ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ,１９９１）
【００７０】
プロドラッグは通常合成の末期段階に導入するが、他の原因でプロドラッグ合成の初期段階に導入する場合もある。例えば、環状ホスホン酸ジエステルプロドラッグは以下の方法に示されたように合成することができる。
【化１０】
0006545254.tif 000012
【００７１】
化合物３はホスホン酸化されてホスホン酸エステル１０を獲得し、ホスホン酸エステル１０は４８％臭化水素酸で脱保護してからホスホン酸１１を獲得する。ホスホン酸１１はオキシ塩化リンと反応して活発なジクロロホスホネート１２を獲得し、且つ迅速にジオール２０とカップリングして（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ２００４，５１５４）化合物１３を獲得する。化合物１３のナイトロは還元してから化合物１７と反応し、それから熱環化反応によってＲが水素であるフェナントロリン１６（式Iにおいて、Ｘはヒドロキシであり、Ｒ１及びＲ２は一緒に環状グループを構成する）を獲得する。
【００７２】
第二プロドラッグ基を導入することにより所望の特性を得ることができる。例えば、化合物１６ｃとクロロホスフェートが適切なアルカリ（例えば、トリエチルアミンである）及び触媒（４−ジメチルアミノピリジンである）の作用下で適切な溶媒（例えば、ジクロロメタンである）の中で反応してホスフェート２１を獲得する。リン酸ジエチルの脱保護は一般的なホスフェート脱保護試薬を使用して実現することができる。例えば、化合物２１はブロモトリメチルシランの処理によってホスフェート２２を得ることができ、その後にさらに所望の塩に転化することができる。例えば、化合物２２は炭酸ナトリウムの水とメタノールの混合溶液の処理によってジナトリウム塩を得ることができる。
【化１１】
0006545254.tif 000013
【００７３】
他の例において、他の類型のプロドラッグを導入することにより所望の特性を得ることができる。例えば、化合物１６ｃは適切な溶媒（例えば、ジメチルスルホキシドである）の中で適切なアルカリ（例えば、炭酸カリウムである）によって処理されてからジ-ｔｅｒｔ−ブチルリン酸クロロメチルと反応してホスフェート２４、２５を得ることができる。一般的なｔｅｒｔ−ブチル脱保護試薬を使用してジ-ｔｅｒｔ−ブチル基の脱保護を実現することができる。例えば、化合物２４及び２５はジクロロメタンの中でトリフルオロ酢酸の処理によって別々にリン酸２６及び２７を得ることができ、その後にさらに所望の塩に転化される。
【化１２】
0006545254.tif 000014
【００７４】
実施例
【００７５】
本発明の化合物及びその調製方法は以下の実施例でさらに明確に説明することができる。これらの実施例は本発明に対する限定であると見なされるべきではなく、現在に既知のもの又は将来に開発したこれらの化合物の変化体も本発明の保護範囲に属すべきだ。
【００７６】
実施例１、化合物の調製
【００７７】
８−ニトロキノリン（２ｃ）の調製
【化１３】
0006545254.tif 000015
２０ｍｌの水、４７ｇの濃硫酸、２３．４ｇの３−ニトロベンゼンスルホン酸ナトリウム、２２ｍｌのグリセロールを順次に反応フラスコに加入する。溶液が形成されるまでゆっくり加熱し（８５℃）、１１ｇの２−ニトロアニリン１ｃを順次に加入する。還流して５時間反応し、室温に冷却し、氷浴条件で６００ｍｌの水にゆっくり注ぎ、アンモニアでｐＨ６〜７に調整し、濾過し、フィルタケーキは乾燥してからカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：石油エーテル＝１：５）で６．１７７ｇの黄色固体２ｃを獲得し、収率は４４％である。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．０９（ｄｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，４．５Ｈｚ，１Ｈ），８．２８（ｄｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．０５（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，２Ｈ），７．６６−７．５５（ｍ，２Ｈ）。
【００７８】
３−ブロモ−８−ニトロキノリン（３ｃ）の調製
【化１４】
0006545254.tif 000016
６．１７７ｇ（３５．５ｍｍｏｌ）の化合物２ｃを１１０ｍｌの氷酢酸に加入してから、６．６５１ｇのＮ−ブロモスクシンイミド（３５．５ｍｍｏｌ）を加入する。５０℃で２時間反応し、反応液を冷却してから撹拌しながら６００ｍｌの水に注ぎ、濾過し、フィルタケーキは乾燥してからカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：石油エーテル＝１：１５）で２．６２５ｇの黄色固体３ｃを獲得し、収率は２９％である。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．０６（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），８．４４（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．０６（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）。
【００７９】
３−ブロモキノリン−８−アミン（４ｃ）の調製
【化１５】
0006545254.tif 000017
１３．０ｇの化合物３ｃを１５０ｍｌのエタノールに加入してから、１１．６ｇの鉄粉、１１．０ｇの塩化アンモニウムを順次に加入し、還流して一晩反応する。反応液を冷却してから珪藻土で濾過し、濾液を乾燥するまで蒸発させてからカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：石油エーテル＝１：５）で８．２３ｇの黄色固体４ｃを獲得し、収率は７２％である。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．７２（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），８．２１（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｄｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｄｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，７．５Ｈｚ，１Ｈ），４．９８（ｓ，２Ｈ）。
【００８０】
８−アミノキノリン−３−ホスホン酸ジエチル（５ｃ）の調製
【化１６】
0006545254.tif 000018
窒素保護環境で４．０ｇの化合物４ｃを５３ｍｌのエタノールに加入してから、３．０ｍｌの亜リン酸ジエチル、３．７ｍｌのトリエチルアミン、１．２７ｇのトリフェニルホスフィン、８００ｍｇの酢酸パラジウムを順次に加入する。還流して一晩反応し、反応液の温度を室温に降下してから１００ｍｌの水を加入し、酢酸エチルで抽出し、有機相を合併し、飽和塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥する。有機相を濃縮してからカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：石油エーテル＝１：１）で１．４ｇの黄色油５ｃを獲得し、収率は２５％である。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．９８（ｄｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，４．２Ｈｚ，１Ｈ），８．５９（ｄｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１５．３Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），４．２０−４．０７（ｍ，４Ｈ），１．３５（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ）。
【００８１】
８−（（２，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−４，６−ジオキソ）−５−メチレンアミノ）キノリン−３−ホスホン酸ジエチル（６ｃ）の調製
【化１７】
0006545254.tif 000019
窒素雰囲気で１．４ｇの化合物５ｃを４０ｍｌのエタノールに加入してから、１．３ｇの化合物１７を加入する。還流して一晩反応し、反応液の温度を室温に降下し、溶剤を蒸留し、カラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：石油エーテル＝１：１）で１．１２５ｇの黄色固体６ｃを獲得し、収率は５２％である。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１２．８（ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，１Ｈ），９．２０（ｄｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，４．２Ｈｚ，１Ｈ），８．９１（ｄ，Ｊ＝１４．７Ｈｚ，１Ｈ），８．７４（ｄｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１５．３Ｈｚ，１Ｈ），７．８０−７．７６（ｍ，２Ｈ），７．６７（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），４．３０−４．０９（ｍ，４Ｈ），１．８１（ｓ，６Ｈ），１．３５（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ）。
【００８２】
７−ヒドロキシ−１，１０−フェナントロリン−３−ホスホン酸ジエチル（７ｃ）の調製
【化１８】
0006545254.tif 000020
１．１ｇの化合物６ｃを沸騰したジフェニルエーテルに迅速に加入し、還流して２分間撹拌し、反応液の温度を１００℃に降下してから撹拌しながら６４０ｍｌの石油エーテルに注ぎ、濾過し、フィルタケーキはカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝２０：１）で６５０ｍｇの黄色固体７ｃを獲得し、収率は７７％である。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１０．８（ｓ，１Ｈ），９．３１（ｄｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，５．１Ｈｚ，１Ｈ），８．７２（ｄｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１４．７Ｈｚ，１Ｈ），８．４９（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ），６．６２（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），４．３５−４．１４（ｍ，４Ｈ），１．３９（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ）。
【００８３】
７−ヒドロキシ−１，１０−フェナントロリン−３−ホスホン酸（９ｃ）の調製
【化１９】
0006545254.tif 000021
６５０ｍｇの化合物７ｃを４８％臭化水素酸に加入し、還流して一晩反応する。反応液の温度を室温に降下し、溶媒を蒸発させ、少量の水を加えて攪拌し、濾過し、乾燥して５１３ｍｇの灰色固体９ｃを獲得し、収率は９５％である。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ８．９９（ｄｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｄｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），６．１９（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）。
【００８４】
８−ニトロキノリン−３−ホスホン酸ジエチル（１０ｃ）の調製
【化２０】
0006545254.tif 000022
Ｎ２雰囲気で反応フラスコに３０ｇの化合物３ｃ、２３．４ｇの酢酸カリウム、１８．４ｍｌの亜リン酸ジエチル、３００ｍｌのメチルベンゼン、１ｇの［１，１’− ビス（ジフェニルホスフィン）フェロセン］ジクロロパラジウムジクロロメタン配位錯体を順次に加入し、還流して３時間反応し、酢酸エチルを加入して希釈し、シリカゲルで濾過し、濾液を乾燥するまで蒸発させて４６ｇの１０ｃを獲得する。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．２８（ｄｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，４．２Ｈｚ，１Ｈ），８．８２（ｄｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１５Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），４．３３−４．１１（ｍ，４Ｈ），１．３７（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ）。
【００８５】
８−ニトロキノリン−３−ホスホン酸（１１ｃ）の調製
【化２１】
0006545254.tif 000023
４４．５ｇの化合物１０ｃを２３０ｍｌの４８％臭化水素酸に加入し、還流して４時間反応し、温度を降下して溶媒を蒸発させ、エタノールと酢酸エチルを混合して固体を２時間洗浄し、濾過し、３１．５ｇの黄色固体１１ｃを獲得し、収率は７９％である（ツーステップ）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ９．１８（ｄｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，６Ｈｚ，１Ｈ），８．９８（ｄｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１３．２Ｈｚ，１Ｈ），８．５４（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）。
【００８６】
８−ニトロキノリン−３−ジクロロホスホネート（１２ｃ）の調製
【化２２】
0006545254.tif 000024
５０．３ｇの化合物１１ｃを６５０ｍｌのジクロロエタンに加入し、３．６ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを加入し、氷浴条件で４２ｍｌの塩化オキサリルを滴下してから、還流して一晩反応する。温度を降下してから蒸発させて、獲得した１２ｃは直接に次の反応に用いられる。
【００８７】
（４Ｓ）−４−（３−クロロフェニル）−２−（８−ニトロキノリン−３−イル）−１，３，２−ジオキサホスフィナン−２−オンの調製
【化２３】
0006545254.tif 000025
３６．９５ｇの（ｓ）−１−（３−クロロフェニル）プロパン−１，３−ジオール２０を５４０ｍｌのジクロロメタンに加入し、−７８℃温度で２２ｍｌの四塩化チタンを滴下してから５分間撹拌し、氷浴に移送して５分間撹拌し、１１０ｍｌのトリエチルアミンを滴下する。前記溶液を化合物１２ｃのジクロロメタン溶液に滴下してから、室温環境で一晩反応する。７００ｍｌのジクロロメタンを加入して希釈してから、２１０ｍｌの１０％酒石酸を加入して２分間撹拌する。珪藻土で濾過し、ジクロロメタンで抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥するまで蒸発させてからアセトニトリルで二回再結晶化して、３５．５ｇの黄色固体１３ｃを獲得し、収率は４４％である。
ｍ/ｚ：４０５．１[Ｍ＋１]
【００８８】
（４Ｓ）−４−（３−クロロフェニル）−２−（８−アミノキノリン−３−イル）−１，３，２−ジオキサホスフィナン−２−オン（１４ｃ）の調製
【化２４】
0006545254.tif 000026
６２．９ｇの化合物１３ｃを１６０ｍｌ/１６０ｍｌのエタノール/氷酢酸に加入してから、４３．６ｇの鉄粉を加入して、４０℃で１０分間反応し、温度を降下し、飽和炭酸ナトリウム溶液でＰＨ６に調整し、ジクロロメタンで抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥するまで蒸発させてから５０ｇの黄色固体１４ｃを獲得し、収率は８６％である。
ｍ/ｚ：３７５．０[Ｍ＋１]
【００８９】
（４Ｓ）−４−（３−クロロフェニル）−２−（８−（（２，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン）−５−メチレン）アミノキノリン−３−イル）−１，３，２−ジオキサホスフィナン−２−オン（１５ｃ）の調製
【化２５】
0006545254.tif 000027
４９ｇの化合物１４ｃを３２０ｍｌのエタノールに加入してから、３１．４ｇの化合物５−（エトキシメチレン）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン１７を加入し、還流して２時間反応し、温度を降下し、濾過し、６０ｇの黄色固体１５ｃを獲得し、収率は８７％である．
ｍ/ｚ：５２９．０[Ｍ＋１]、４７１を見つけた。
【００９０】
（４Ｓ）−４−（３−クロロフェニル）−２−（７−ヒドロキシ−１，１０−フェナントロリン−３−イル）−１，３，２−ジオキサホスフィナン−２−オン（１６ｃ）の調製
【化２６】
0006545254.tif 000028
３ｇの化合物１５ｃを沸騰したジフェニルエーテルに迅速に加入し、５０秒還流し、１００℃に降下してから５００ｍｌの石油エーテルに注ぎ、濾過し、フィルタケーキはカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝３０：１）で１．６７６ｇの黄色固体１６ｃを獲得し、収率は７０％である。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ１２．５３（ｓ，１Ｈ），９．３４（ｄｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，５．１Ｈｚ，１Ｈ），９．１５（ｄｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１５．３Ｈｚ，１Ｈ），８．２７（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），８．１２−７．９８（ｍ，２Ｈ），７．５６（ｓ，１Ｈ），７．４７−７．４３（ｍ，３Ｈ），６．３６（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），５．９６（ｄ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ，１Ｈ），４．８８−４．７６（ｍ，１Ｈ），４．６５−４．５５（ｍ，1Ｈ），２．６８−２．５４（ｍ，１Ｈ），２．３４−２．２２（ｍ，１Ｈ）。
【００９１】
３−（３−クロロフェニル）３−オキソプロピオン酸メチル（１８）の調製
【化２７】
0006545254.tif 000029
窒素雰囲気で１５ｇのカリウムｔｅｒｔ-ブトキシドを５０ｍｌのテトラヒドロフランに加入し、室温で１５分間撹拌し、氷浴条件で１０ｇの１−（３−クロロフェニル）エタノンと１１ｍｌの炭酸ジメチルを反応フラスコにゆっくり滴下し、室温で１．５時間撹拌する。反応液に４０ｍｌの水及び１．３ｍｌの希塩酸溶液を加入して、１５分間撹拌し、有機相を分離し、水相はメチルベンゼンで抽出し、有機相を合併し、飽和塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、乾燥するまで蒸発させて１３．２２ｇの褐色油１８を獲得し、収率は９６％である。
【００９２】
３−（３−クロロフェニル）３−ヒドロキシ−プロピオン酸３Ｓ−メチル（１９）の調製
【化２８】
0006545254.tif 000030
窒素雰囲気氷浴条件で５．３８ｇのトリエチルアミンを９．８ｇのギ酸にゆっくり滴下してから２０分間撹拌し、室温で１時間反応する。１１．３ｇの化合物１８、４５ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド及び６８ｍｇの（Ｓ，Ｓ）−Ｎ−（ｐ−トルエンスルホニル）−１，２−ジフェニルエタンジアミン（ジイソプロピルベンゼン）塩化ルテニウム（II）を反応フラスコにに加入し、６０℃で一晩反応する。室温に冷却し、１００ｍｌの水を加入し、酢酸エチルで抽出し、有機相を飽和塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過してから乾燥するまで蒸発させ、カラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：石油エーテル＝１：１０）で１０．４３４ｇのオレンジ油１９を獲得し、収率は９１％である。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．４５（ｓ，１Ｈ），７．３７−７．２７（ｍ，３Ｈ），５．１６（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），２．７８（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），２．７６（ｓ，１Ｈ）。
【００９３】
１Ｓ−１−（３−クロロフェニル）プロパン−１，３−ジオール（２０）の調製
【化２９】
0006545254.tif 000031
窒素雰囲気で１．８４ｇのホウ素水素化ナトリウム及び０．６２ｍｌの水を３７．５ｍｌのブチルアルコールに加入し、氷浴条件で１０．４ｇの化合物１９のブチルアルコール溶液を滴下してから０．５時間撹拌し、それから９０℃で４時間反応する。室温に冷却し、炭酸カリウム溶液（１０％、２３ｍｌ）を加入して１０分間撹拌する。有機相を分離し、有機相を炭酸カリウム溶液（１０％、８ｍｌ）で洗浄し、飽和塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過してから乾燥するまで蒸発させ、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝３０：１）で７．７５ｇの黄色油２０を獲得し、収率は８５．５％である。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３６（ｓ，１Ｈ），７．３０−７．２０（ｍ，３Ｈ），４．９２（ｑ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，７．８Ｈｚ，１Ｈ），３．９０−３．７９（ｍ，２Ｈ），２．８２（ｓ，２Ｈ），２．０３−１．８５（ｍ，２Ｈ）。
【００９４】
３−（４Ｓ−４−（３−クロロフェニル）−１，３，２−ジオキサホスフィナン−２−オン−２−イル）−１，１０−フェナントロリン−７−リン酸（２２）の調製
【化３０】
0006545254.tif 000032
２ｇの化合物１６ｃを１００ｍｌのジクロロメタンに溶解してから、２ｍｌのトリエチルアミン及び５７ｍｇの４−ジメチルアミノピリジンを反応液に加入し、反応液を氷浴に放置する。２ｍｌのクロロリン酸ジエチルを２０ｍｌのジクロロメタンに溶解してから反応液にゆっくり滴下し、氷浴条件で１時間反応してから温度を室温に上げて２時間反応する。それから反応液を２００ｍｌの飽和塩化ナトリウム溶液に注ぎ、有機相を分離し、水相はジクロロメタンで抽出し、有機相を合併し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、スピンドライしてからカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１００：１）で１．７ｇの２１を獲得する。１．７ｇの２１を２ｍｌのジクロロメタンに溶解し、氷浴条件で４gの臭化トリメチルシリルを一度に加入し、氷浴条件を保持して１時間反応し、５０ｍｌのエーテルを反応フラスコに加入し、沈殿した固体を濾過し、フィルタケーキを収集し、フィルタケーキを２０ｍｌのメタノールに溶解して１０分間撹拌する。反応液をスピンドライしてからカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール：酢酸＝２０：１：０．０５〜ジクロロメタン：メタノール＝４：１）で６００ｍｇの白色固体２２を獲得し、収率は２５％である。
ｍ/ｚ：５０７．０［Ｍ＋１］；
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄｍｓｏ）δ１３．８４（ｍ，１Ｈ），９．２７（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１．８Ｈｚ，１Ｈ），８．９９（ｄｄ，Ｊ＝１４．３，１．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），８．１３（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｓ，１Ｈ），７．４５−７．３８（ｍ，１Ｈ），７．３５−７．２５（ｍ，２Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），５．３５（ｄｄ，Ｊ＝９．０，５．９Ｈｚ，１Ｈ），４．１１−３．９８（ｍ，２Ｈ），２．６８−２．５５（ｍ，１Ｈ），２．５０−２．３４（ｍ，１Ｈ）。
【００９５】
３−（４Ｓ−４−（３−クロロフェニル）−１，３，２−ジオキサホスフィナン−２−オン−２−イル）−１，１０−フェナントロリン−７−リン酸ジナトリウムの調製
【化３１】
0006545254.tif 000033
５００ｍｇの化合物２２を１０ｍｌのメタノールに懸濁し、室温で２ｍｌの１Ｎ炭酸水素ナトリウム溶液を反応液にゆっくり滴下し、２０分間撹拌してから反応液を減圧排水（温度を３０℃以下に保持する）して、５４０ｍｇの白色固体２３を獲得し、収率は１００％である。
ｍ/ｚ：５５０．０［Ｍ＋１］、５０７を見つけた；
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄｍｓｏ）δ９．２７（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１．８Ｈｚ，１Ｈ），８．９９（ｄｄ，Ｊ＝１４．３，１．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），８．１３（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｓ，１Ｈ），７．４５−７．３８（ｍ，１Ｈ），７．３５−７．２５（ｍ，２Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），５．３５（ｄｄ，Ｊ＝９．０，５．９Ｈｚ，１Ｈ），４．１１−３．９８（ｍ，２Ｈ），２．６８−２．５５（ｍ，１Ｈ），２．５０−２．３４（ｍ，１Ｈ）。
【００９６】
（３−（４Ｓ−４−（３−クロロフェニル）−１，３，２−ジオキサホスフィナン−２−オン−２−イル）−１，１０−フェナントロリン−７−オキシ）−７−メチルリン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２４）と（３−（４Ｓ−４−（３−クロロフェニル）−１，３，２−ジオキサホスフィナン−２−オン−２−イル）−１，１０−フェナントロリン−７−オン）−１０（７Ｈ）−メチルリン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２５）の調製
【化３２】
0006545254.tif 000034
化合物１６ｃ（２００ｍｇ，０．４７ｍｍｏｌ）を２ｍｌのジメチルスルホキシドに溶解してから、炭酸カリウム（１９５ｍｇ，１．４１ｍｍｏｌ）を反応液に加入し、反応液を３０℃に加熱して１５分間撹拌してから、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルクロロメチルホスフェート（１４６ｍｇ，０．５６ｍｍｏｌ）を反応液に加入し、３０℃を保持して一晩反応する。それから反応液を２０ｍｌの飽和塩化ナトリウム溶液に注ぎ、有機相を分離し、水相はジクロロメタンで抽出し、有機相を合併し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、スピンドライしてからカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル）で中間体２４及び２５を獲得する。
ｍ/ｚ：６４９．２［Ｍ＋１］；
化合物２４：
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄｍｓｏ）δ９．４８（ｄｄ，Ｊ＝４．９，１．９Ｈｚ，１Ｈ），９．１４（ｄｄ，Ｊ＝１５．４，１．９Ｈｚ，１Ｈ），９．１０（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），８．３１（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６３−７．５８（ｍ，２Ｈ），７．５５−７．４１（ｍ，３Ｈ），６．１１−５．９１（ｍ，３Ｈ），４．９２−４．７５（ｍ，１Ｈ），４．７１−４．５３（ｍ，１Ｈ），２．７３−２．５５（ｍ，１Ｈ），２．３６−２．１９（ｍ，１Ｈ），１．３７（ｓ，１８Ｈ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ｄｍｏｓ）δ１５８．５９，１５１．３７，１５０．７１，１５０．５４，１４７．１５，１４６．１８，１４２．１２，１４２．０１，１４１．７１，１３３．２９，１３０．５７，１２８．４１，１２６．２６，１２５．７９，１２４．５９，１２１．５３，１２０．８３，１０６．９７，８７．５９，８２．９８，７７．５６，６６．２４，３３．３０，２９．３８。
化合物２５：
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄｍｓｏ）δ９．３９（ｄｄ，Ｊ＝４．６，２．１Ｈｚ，１Ｈ），９．１９（ｄｄ，Ｊ＝１５．６，２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．４３（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），８．２２（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．１８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｓ，１Ｈ），７．５０−７．４４（ｍ，３Ｈ），７．１８−６．９９（ｍ，２Ｈ），６．４９（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），５．９８（ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．９３−４．７２（ｍ，１Ｈ），４．６９−４．４９（ｍ，１Ｈ），２．７２−２．５２（ｍ，１Ｈ），２．３４−２．１９（ｍ，１Ｈ），１．２１（ｓ，９Ｈ），１．１９（ｓ，９Ｈ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ｄｍｏｓ）δ１７６．２２，１４８．５２，１４７．５０，１４２．９１，１４１．９９，１４１．８８，１３６．２３，１３３．２８，１３０．５４，１２９．０８，１２８．９１，１２８．４６，１２５．７２，１２５．００，１２４．６０，１２４．０８，１２１．５２，１１２．５３，８２．３０，８０．３８，７７．５４，６６．５２，３３．２１，２９．１６。
【００９７】
（３−（４Ｓ−４−（３−クロロフェニル）−１，３，２−ジオキサホスフィナン−２−オン−２−イル）−１，１０−フェナントロリン−７−オキシ）−７−メチルリン酸（２６）の調製
【化３３】
0006545254.tif 000035
化合物２４（５０ｍｇ，０．０８ｍｍｏｌ）を３ｍｌのジクロロメタンに溶解してから、室温条件で反応液に１ｍｌのトリフルオロ酢酸を加入し、室温で３０分間撹拌し、反応液をスピンドライしてから、１ｍｌのメタノールを加入し、濾過して化合物２６を獲得する。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄｍｓｏ）δ９．４６（ｄｄ，Ｊ＝５．０，１．８Ｈｚ，１Ｈ），９．２３−９．０５（ｍ，２Ｈ），８．３７−８．２１（ｍ，２Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｓ，１Ｈ），７．５１−７．３６（ｍ，３Ｈ），６．１２−５．９０（ｍ，３Ｈ），４．９０−４．７４（ｍ，１Ｈ），４．７１−４．５０（ｍ，１Ｈ），２．７１−２．５４（ｍ，１Ｈ），２．３３−２．２１（ｍ，１Ｈ）。
【００９８】
（３−（４Ｓ−４−（３−クロロフェニル）−１，３，２−ジオキサホスフィナン−２−オン−２−イル）−１，１０−フェナントロリン−７−オン）−１０（７Ｈ）−メチルリン酸（２７）の調製
【化３４】
0006545254.tif 000036
化合物２５（５０ｍｇ，０．０８ｍｍｏｌ）を３ｍｌのジクロロメタンに溶解してから、室温条件で反応液に１ｍｌのトリフルオロ酢酸を加入し、室温で３０分間撹拌し、反応液をスピンドライしてから、１ｍｌのメタノールを加入し、濾過して化合物２７を獲得する。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄｍｓｏ）δ９．３８（ｄｄ，Ｊ＝４．５，２．０Ｈｚ，１Ｈ），９．１３（ｄｄ，Ｊ＝１５．６，２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．４０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），８．１９（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），８．１３（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｓ，１Ｈ），７．５４−７．３５（ｍ，３Ｈ），７．０４（ｔ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，１Ｈ），６．４３（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），５．９５（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ），４．８８−４．７６（ｍ，１Ｈ），４．６９−４．４５（ｍ，１Ｈ），２．７４−２．５６（ｍ，１Ｈ），２．３１−２．２２（ｍ，１Ｈ）。
【００９９】
実施例２、Ｐ４Ｈの発現と精製
【０１００】
組換えヒトＰ４Ｈ発現は大腸桿菌発現系で完成する。エンコード全長Ｐ４Ｈタンパク質のヌクレオチド配列をｐＥＴ２８＿Ｎ−Ｈｉｓ＿ＴＥＶプラスミド発現システムにクローンして、ｐＥＴ２８＿Ｎ−Ｈｉｓ＿ＴＥＶ＿Ｐ４ＨＡ１/ＰＤＩを獲得し、それから大腸桿菌Ｏｒｉｇａｍｉ２（ＤＥ３）に転化して共発現を行う。ＭｏｎｏＱイオン交換カラムで酵素タンパク質の精製を行ってから、ＴＥＶで消化及び質量スペクトル鑑定し、且つＨｉｓｔｒａｐＨＰ及びゲル濾過クロマトグラフィー（Ｈｉｌｏａｄ  １６/６０  ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００）でさらに溶離精製鑑定する。
【０１０１】
実施例３、Ｐ４Ｈ酵素活性鑑定及び本発明の化合物が酵素活性に対する影響
【０１０２】
精製のＰ４Ｈ酵素タンパク質は以下のようなカップリング酵素反応系において酵素活性試験を行い且つ化合物が酵素活性に対する影響を鑑定し、１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．０）、０．１ｍＭ（ＮＨ４）２Ｆｅ（ＳＯ４）２、０．１ｍＭアスコルビン酸、０．２ｍＭ  ＣｏＡ、０．２ｍＭ  ＡＴＰ、０．５ｕＭ  スクシニルコエンザイムＡ合成酵素、１００ｕＭ  ２−ケトグルタル酸、１００ｕＭ  （Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ）１０  ペプチド、５０ｎＭ  Ｐ４Ｈタンパク質、合計５０ｕｌである。２５℃条件で４５ｍｉｎ反応し、１０ｕｌのＭＬＧ  Ｒ１を加入して１０ｍｉｎ反応し、１０ｕｌのＭＬＧ  Ｒ２を加入して２０ｍｉｎ反応する。Ｐ４Ｈはコエンザイム及び適切な酵素反応環境において２−ケトグルタル酸及びポリペプチドに対して触媒作用を行って琥珀酸を形成し、琥珀酸はスクシニルコエンザイム合成酵素の作用によってスクシニルコエンザイム及びリン酸（Ｐｉ）を生成する。リン酸を生成するレベルはＭＬＧキットで測定して、Ｐ４Ｈのレベルを反映する。生成したグリーン産物(ＭＧ＋)（Ｈ２ＰＭＯ１２Ｏ４０）はＯＤ６３０ｎｍにおいて吸収ピーク鑑定を行う。
【０１０３】
化合物がＰ４Ｈ酵素阻害に対する評価は９６穴プレートで行う。濃度毎は２つのパラレルサンプル（ｎ＝２）を有する。化合物９ｃを以下の濃度で酵素反応系に加入し（Ｐ４Ｈ酵素タンパク質の前に順番に加入する）、０．０１、０．０３、０．１、０．３、１、３、３０、１００、３００ｎＭである。データ分析及び統計はＰｒｉｓｍソフトウェアで行う。化合物９ｃが酵素に対する５０％阻害濃度（ＩＣ５０）は８．１μＭである（図１を参照してください）。図１に示されたように、ヒトＰ４Ｈ酵素活性に対する化合物９ｃの阻害作用は化合物９ｃ濃度の向上にしたがって増強する。
【０１０４】
実施例４、体内薬物動力学の研究
【０１０５】
体重は２００±２０ｇであるＷｉｓｔａｒラットを２組に分けて、各組は６匹であり、雌雄半々であり、自由に飲水飲食する。薬物投与量：第一組は化合物１６ｃを３ｍｇ・ｋｇ−１で尾ＩＶ投与し、第二組は化合物２７のジナトリウム塩を３９ｍｇ・ｋｇ−１でＩＧ投与する。薬物を投与する前（０ｈ）及び薬物を投与してから０．０８ｈ、０．１７ｈ、０．３３ｈ、０．５ｈ、０．７５ｈ、１ｈ、１．５ｈ、２ｈ、３ｈ、５ｈ、７ｈの後にポストグローバル静脈を介して（ｖｉａ  ｐｏｓｔ−ｇｌｏｂａｌ  ｖｅｉｎｓ）０．３ｍＬの全血を採集して予冷ヘパリン化ＥＰチューブに放置し、４℃で５ｍｉｎ遠心分離して、１００μＬのプラズマを分離し、すぐ−８０℃で保存してテストを待つ。
【０１０６】
別々にジアゼパムとＭｉｌｄｒｏｎａｔｅを内部標準として、ラットの血漿中の化合物９ｃ、プロドラッグ１６ｃのＬＣ−ＭＳ/ＭＳ定量分析法（プロドラッグ２７は実験条件下で血漿から検出しなかった）を確立し、且つ血漿サンプルに対して試験分析を行う（結果は表１、表２を参照してください）。
【表１】
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【０１０７】
経口吸収利用度：
経口吸収利用度は血液中の化合物１６ｃで計算する。計算方法は、経口投与（ｐｏ）してから血薬濃度−時間曲線下面積（ａｒｅａ  ｕｎｄｅｒ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ−ｔｉｍｅ  ｃｕｒｖｅ，ＡＵＣ）と同じ用量のこの薬を静脈注射（ｉｖ）してから血薬濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）の比、即ち吸収パーセンテージで示し、生物利用度（Ｆ）＝ＡＵＣｐｏ・Ｍｉｖ/ＡＵＣｉｖ・Ｍｐｏ×１００％。その中において、Ｍｉｖは静脈注射した薬物のモル濃度を示し、Ｍｐｏは経口投与した薬物のモル濃度を示す。
化合物１６ｃを静脈注射（３ｍｇ/ｋｇ）し且つ化合物２７を経口投与（３９ｍｇ/ｋｇ）してから血液中の化合物１６ｃのＡＵＣ０−ｔは別々に２０６４．５８ｇ・ｈ/ｍＬ及び５２３５．７０ｇ・ｈ/ｍＬである。だから、血液中の化合物１６ｃに基づいて計算した化合物２７の生物利用度（Ｆ）は２５．４％（即ち５２３５．７０/（２０６４．５８×１０）×１００％）である。
【０１０８】
肝臓中の化合物１６ｃ及び９ｃの濃度：
体重は２００±２０ｇである１６匹のＷｉｓｔａｒラットを４組に分けて、雌雄半々であり、試験の前に自由に飲水飲食する。化合物２７をＩＧ投与（３９ｍｇ・ｋｇ−１）し、投与した後の４つの時間点（１５ｍｉｎ，４５ｍｉｎ，８ｈ，２４ｈ）に殺してから、すぐ解剖して肝臓組織を採集する。生理塩水で血液及び内容物を洗浄する。先ずハサミで組織を小片に切断し且つ均一に撹拌してから、１ｇを取って１ｍＬのメタノール/水溶液を加入し、ホモジネートしてから再び１ｍＬのメタノール/水溶液を加入し、１５ｓ超音波し、１０ｍｉｎ遠心分離（４５００ｒｐｍ）し、上の澄み液を取り、ＬＣ−ＭＳ/ＭＳ法を採用して、ラットに薬物投与してから異なる時間の後の肝臓組織中の化合物１６ｃ及び９ｃの薬物濃度を測定する（表２を参照してください）。結果に示されたように、経口投与したプロドラッグ２７は体内で化合物１６ｃに転化され、化合物１６ｃは肝臓中で化合物９ｃに転化される。
【表２】
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【０１０９】
実施例５、体内薬効研究
【０１１０】
本実験は胆管結紮（ＢＤＬ）の方法でラットの肝線維症疾病モデルを誘導して、プロドラッグ化合物２７の経口投与がＢＤＬ型肝線維症に対する治療作用を観察する。
【０１１１】
体重は２００±２０ｇであるＷｉｓｔａｒラットを３組に分け、雌雄半々である。
偽手術組（ＳＨＡＭ組）：６匹のラットを麻酔し、腹部皮膚の毛を剃ってから日常消毒し、無菌操作により腹部正中線に沿って腹腔をカットし、胆管を遊離し、筋肉と皮膚を別々に縫合する。
肝線維症モデル組（ＭＯＤＥＬ組）：１２匹のラットを麻酔し、腹部皮膚の毛を剃ってから日常消毒し、無菌操作により腹部正中線に沿って腹腔をカットし、胆管を遊離し且つ結紮し、筋肉と皮膚を別々に縫合する。
経口投与組：１２匹のラットを麻酔し、腹部皮膚の毛を剃ってから日常消毒し、無菌操作はにより腹部正中線に沿って腹腔をカットし、胆管を遊離し且つ結紮し、筋肉と皮膚を別々に縫合する。手術してから篭に戻って化合物２７のジナトリウム塩を投与し始め、３０ｍｇ/ｋｇであり、水に溶解して毎日に一回ＩＧ投与する。
【０１１２】
検出指標：
ＢＤＬ２週の後に血清及び肝臓ホモジェネート標本のグルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）を測定する
ＢＤＬ２週の後にラットを殺して、肝臓組織をＨＥ染色し、Ｍａｓｓｏｎ染色する。
【０１１３】
経口投与した化合物２７がＢＤＬ肝線維症ラットの血清及び肝臓ホモジェネート中のグルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）に対する影響：
ＡＬＴとＡＳＴは現在臨床で最も常用する肝機能検出指標である。ＡＬＴは主に肝細胞質内に存在し、ＡＳＴは主に肝細胞ミトコンドリア内に存在する。肝細胞が損傷された場合、血清中のＡＬＴ、ＡＳＴレベルが向上して、肝細胞の損傷程度を反映することができる。ＢＤＬ後のモデル組のラットの血清及び肝臓ホモジェネートのＡＬＴ、ＡＳＴレベルは大幅に増加するが、化合物２７を投与してから１４日の後に動物を殺すと、血清及び肝臓ホモジェネートのＡＬＴ、ＡＳＴレベルは大幅に減少し、モデル組に比べて著しい差異があり（＊＊Ｐ＜０．０１）、表３及び表４を参照してください。化合物２７は、ＢＤＬ後の肝機能の損傷程度を減少し、胆汁逆流による肝臓損傷に対して保護作用がある。
【表３】
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【表４】
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【０１１４】
経口投与した化合物２７がＢＤＬ肝線維症ラットのＨＥ染色に対する影響：
ＨＥ染色：
ｓｈａｍ組：図３を参照すると、肝小葉構造は正常であり、肝細胞は中央静脈を中心として放射状に配列され、小葉内の肝細胞索はきちんと配列され、肝細胞大きさは均一であり、変性及び壊死はない。
Ｍｏｄｅｌ組：図４を参照すると、肝小葉構造は乱雑であり、肝細胞が腫脹し、細胞質はゆるく、繊維結合組織が増殖する。
経口投与組：図５を参照すると、治療組は肝組織の病理変化を変えた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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