(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
碁石茶（登録商標）抽出物を含有することを特徴とする青色光による皮膚細胞増殖阻害抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は太陽光・室内外の照明・各種ディスプレイなどが発する光を構成する青色光による真皮線維芽細胞や表皮細胞の細胞増殖阻害に関する。
【背景技術】
【０００２】
室内外の照明の光源は、省エネの観点から徐々に変化が進行していたが、照明器具の出荷数量の推移（非特許文献１）を見ると、２０１１年３月に発生した東日本大震災をきっかけとする電力供給状況の変化を受け、日本国内の多くの企業や店舗、家屋で使用される照明は、蛍光灯や白熱灯から発光ダイオード（Ｌｉｇｈｔ  Ｅｍｉｔｔｉｎｇ  Ｄｉｏｄｅ，  ＬＥＤ）を用いるものに変更されてきていることが伺われる。また、既に普及していたテレビに加え、商業的インターネットサービスが開始された１９９０年代から、仕事や家庭においてパーソナルコンピュータを使用する機会が格段に増加したが、２０００年代に入って発売されたタブレット型端末やスマートフォンの普及により、それらのディスプレイを備えた機器に対面する時間はさらに長くなっている。テレビの出荷台数推移（非特許文献２）によれば、テレビディスプレイのタイプはブラウン管から液晶への変化が見られ、スマートフォンのディスプレイについては液晶タイプと有機エレクトロルミネッセンス（Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｅｌｅｃｔｒｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ、ＯＥＬ）タイプに二分されるとされている。すなわち、ヒトが生活の中で種々の光に接触する時間が増加しており、またその種類は近年、蛍光灯や白熱灯、ブラウン管からＬＥＤや液晶、ＯＥＬに変化しているということができる。
【０００３】
分光放射照度計により照明やディスプレイから発せられる光の分光データを取得したところ、室内照明である蛍光灯と白色ＬＥＤの比較では、白色ＬＥＤの方が青色・緑色の強度が強く、赤色の強度が弱いことが示された。一方、ディスプレイについてはブラウン管でも蛍光灯に比べると青色の強度が強かったが、ＯＥＬで青色・緑色の強度がさらに強くなっていることがわかった。
【０００４】
光に触れる機会が増大するにつれ、光の人体への影響が懸念されるようになってきている。特に青色光については、目に入ることにより、網膜へのダメージやサーカディアンリズムの乱れへの関与が報告されており、近年青色光の透過率が低い眼鏡が販売されて注目を集めている。皮膚に関して言えば、アクネ治療や創傷治癒など、強度や照射時間の制御下においてはポジティブな作用が報告されている一方、照射時間の制御がなされない、ディスプレイに長時間向かうヒトではscreen dermatitisという皮膚炎が生じる、というネガティブな作用が報告されており（非特許文献３、４、５）、皮膚を青色光の影響から保護する方法が求められていた。
【０００５】
青色光照射に起因する皮膚老化予防・改善剤として、ビルベリー抽出物を有効成分とする青色光による細胞生育阻害抑制剤が知られているが（特許文献１）、該文献では真皮線維芽細胞に対する作用を報告しており、より青色光からの皮膚保護作用を高めるために、特に表皮細胞に対しても有用な青色光による細胞成育阻害抑制剤が期待されていた。
【０００６】
一方、碁石茶は、チャノキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）の葉を収穫後、蒸して自然発酵を停止させ、その後、むしろの中で寝かす間に好気性カビ、桶に浸ける間に嫌気性バクテリアによって発酵を行う、二段発酵茶である。碁石茶中に含まれる成分としては、アスコルビン酸やカテキン化合物が他の茶類と比較して少なく、特有の活性成分を含む可能性が指摘されており、抗酸化作用、高脂血症及び動脈硬化抑制効果（非特許文献６）、血圧上昇抑制効果（特許文献２）が知られているが青色光照射による細胞生育阻害抑制作用については全く知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２０１５−４４７７３号公報
【特許文献２】特開２０１４-４３４０６号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】(一社)日本照明器具工業会. 照明器具自主統計 ２０１０−２０１２年度．
【非特許文献２】永井知美. 薄型テレビ業界の現状と課題 -成長続くも視界不良、海外市場をどう攻略するか-. 経営センサー 36−48, 2008.
【非特許文献３】Gangi S, Johansson O. Skin changes in "screen dermatitis" versus classical UV- and ionizing irradiation-related damage--similarities and differences. Experimental Dermatology 6: 283-91, 1997.
【非特許文献４】Johansson O, Hilliges M, Bjornhagen V, Hall K. Skin changes in patients claiming to suffer from "screen dermatitis": a two-case open-field provocation study. Experimental Dermatology 3: 234-8, 1994.
【非特許文献５】Johansson O, Hilliges M, Han SW. A screening of skin changes, with special emphasis on neurochemical marker antibody evaluation, in patients claiming to suffer from "screen dermatitis" as compared to normal healthy controls. Experimental Dermatology 5: 279-85, 1996.
【非特許文献６】宮村充彦，森山洋憲， 邑田修三，横田淳子，吉岡三郎，宅間大祐， 濱田篤秀，西岡 豊.  コレステロール負荷家兎における後醗酵茶「碁石茶」の高脂血症及び動脈硬化抑制効果. YAKUGAKU ZASSHI l28:1037-44, 2008.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、暴露時間や強度が共に上昇している青色光が皮膚に与える影響を軽減するため、青色光照射による細胞増殖阻害抑制剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、鋭意研究の結果、碁石茶（登録商標。以下、本願発明において同じ。）抽出物が青色光照射による細胞増殖阻害抑制作 用を有することを見出した。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によると、碁石茶抽出物が近年暴露時間や強度が共に上昇している青色光の照射による細胞増殖阻害を抑制することにより、青色光から皮膚を保護し、種々の皮膚トラブルや老化の予防・改善効果が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】碁石茶抽出物の青色光照射による表皮細胞増殖阻害抑制作用を示す図である。
【図２】碁石茶抽出物の青色光照射による表皮細胞増殖阻害抑制作用のほかの茶類との比較を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明で使用する碁石茶は、チャノキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）の葉を収穫後、蒸して自然発酵を停止させ、その後、むしろの中で寝かす間に好気性カビ、桶に浸ける間に嫌気性バクテリアによって発酵を行う、二段発酵茶である。
高知県で伝統的に製造されているので市販品を利用することができる他、特開2014-43406号や、特開2009-183272号等に記載の方法で製造して得ることもできる。
【００１４】
碁石茶抽出物の調製は特に限定されないが、例えば種々の適当な有機溶媒を用いて、低温下から加温下で抽出される。抽出溶媒としては、例えば、水；メチルアルコール、エチルアルコール等の低級１価アルコール；グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の液状多価アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン；酢酸エチルなどのアルキルエステル；ベンゼン、ヘキサン等の炭化水素；ジエチルエーテル等のエーテル類；ジクロルメタン、クロロホルム等のハロゲン化アルカン等の１種または２種以上を用いることが出来る。就中、水、エチルアルコール、１，３−ブチレングリコールの１種または２種以上の混合溶媒が特に好適である。  
【００１５】
本発明に用いることのできる碁石茶抽出物の抽出方法は特に限定されないが、例えば乾燥したものであれば重量比で１〜１０００倍量、特に１０〜１００倍量の溶媒を用い、常温抽出の場合には、０℃以上、特に２０℃〜４０℃で１時間以上、特に３〜７日間行うのが好ましい。また、６０〜１００℃で１時間、加熱抽出しても良い。また、１０℃以下の抽出溶媒が凍結しない程度の温度で、１時間以上、特に１〜７日間抽出を行なっても良い。
【００１６】
以上のような条件で得られる碁石茶抽出物は、抽出された溶液のまま用いても良いが、さらに必要により、濾過等の処理をして、濃縮、粉末化したものを適宜使い分けて用いることが出来る。
【００１７】
本発明の皮膚細胞増殖阻害抑制剤における碁石茶抽出物の配合量は、蒸発乾燥分に換算して０．００００１〜２０．０重量％が好ましく、特に０．００１〜１０．０重量％の範囲が最適である。
【００１８】
本発明の皮膚細胞増殖阻害抑制剤は、本発明の効果を損なわない範囲でその他の成分を配合することができる。
【実施例１】
【００１９】
以下、本発明を実施例について具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。また、特記しない限り配合量は質量％で示す。また、特記しない限りエタノールは試薬特級（９９．５％）を用いた。
【００２０】
＜被験物質の調製＞ 
乾燥植物原体に１０倍の重量の５０Ｖ／Ｖ％エタノール水溶液を加えて６０℃、４時間加熱抽出した。抽出物の乾燥残分に対して、エタノール、水を重量比で１：２．５：９６．５となるように加えて希釈したものを被験物質とした。
【００２１】
＜青色光による細胞増殖阻害の抑制作用評価＞
表皮細胞ＮＨＥＫ（Ｎｅｗ  Ｂｏｒｎ，  Ｐ２−３，  ＫＵＲＡＢＯ）５−１０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬをＨｕｍｅｄｉａ−ＫＧ２培地（ＫＵＲＡＢＯ）に分散し、４８ｗｅｌｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｐｌａｔｅ（ＦＡＬＣＯＮ）の各ｗｅｌｌに０．２５ｍＬずつ播種した。３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間インキュベートした後、被験物質の終濃度が乾燥残分として１０ｐｐｍになるように添加し、比較のために同量の溶媒のみを添加した細胞を用意した。  さらに３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間インキュベートした後、被験物質を含む培地を除去し、ＰＢＳ（−）２００μＬを添加後、３７℃  に調整したインキュベータ中で青色ＬＥＤ  ３．６Ｊ（２ｍＷ×３０分）を照射した。その後再びＨｕｍｅｄｉａ−ＫＧ２に培地を交換して上記同様に被験物質を添加した。３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間インキュベートした。被験物質を含む培地の除去と青色光の照射、被験物質を添加した培地での培養を１日に１回、２日繰り返し、その後細胞増殖度を測定した。細胞増殖度の測定では、まず、培地を除去し、ＰＢＳ（−）で洗浄した後、Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（ＤＯＪＩＮＤＯ）１０％を配合した５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭを各ｗｅｌｌに２５０μＬずつ添加した。次に、３７℃、５％ＣＯ２下で３０分インキュベートし、マイクロプレートリーダー（ＢｉｏＲａｄ）にて６５５ｎｍと４５０ｎｍの吸光度を測定し、式１により細胞増殖度を算出した。式１中のＢｌａｎｋは細胞を播種していない４８ｗｅｌｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  ＰｌａｔｅにＣｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８  １０％を配合した５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭを２５０μＬとって、細胞を播種した４８ｗｅｌｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｐｌａｔｅと同時に同条件下でインキュベートしたものを指す。
【式１】
【００２２】
0006557165.tif 000002
【００２３】
図１に示したように、碁石茶抽出物は青色光の照射による細胞増殖阻害を抑制した。また、図２に示したように、一般に抗酸化効果が知られている他の茶類抽出物では青色光照射時の細胞増殖度が小さすぎて正の測定値が得られず、碁石茶抽出物のみに当該の作用が認められることがわかる。また、図には示していないが、図２に示した茶類抽出物では、青色光非照射の細胞に対しても細胞増殖を抑制する傾向が認められた一方、碁石茶抽出物では青色光非照射時の細胞増殖抑制が見られず、このことからも碁石茶抽出物が他の茶類とは異なる性質を有することが示唆された。また、結果は示していないが、真皮線維芽細胞を用いた場合にも、同様の結果が得られた。
【００２４】
以下、本発明に係る処方例を示す。なお、含有量は質量％である。製法は、常法による。なお、処方は代表例であり、これに限定されない。また、処方例中の碁石茶抽出物の濃度は乾燥残分としての濃度である。
【００２５】
＜処方例１：軟膏＞
碁石茶抽出物（１，３ブチレングリコール５０ｖ／ｖ％溶媒・６０℃・４時間抽出）                                         ０.１
レゾルシン                                            ０.５
パラジメチルアミノ安息香酸オクチル                    ４.０
ブチルメトキシベンゾイルメタン                        ４.０
ステアリルアルコール                                １８.０
モクロウ                                            ２０.０
グリセリンモノステアリン酸エステル                    ０.３
ワセリン                                            ３３.０
香料                                                  適 量
防腐剤・酸化防止剤                                    適 量
精製水                                                残 部
合  計                                            １００.０
【００２６】
＜処方例２：ファンデーション＞
碁石茶抽出物（エタノール溶媒・２５℃・１日抽出）                                        ０.０５
タルク                                                ５.０
セリサイト                                            ８.０
酸化チタン                                            ５.０
色顔料                                                適 量
モノイソステアリン酸ポリグリセリル                    ３.０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                        １.５
イソノナン酸イソトリデシル                          １０.０
１，３−ブチレングリコール                            ５.０
酸化防止剤                                            適 量
防腐剤                                                適 量
精製水                                                残 部
合  計                                            １００.０
【００２７】
＜処方例３：錠剤＞
碁石茶抽出物 （エタノール５０ｖ／ｖ％水溶液溶媒・２５℃・３日抽出）                                                 ５．０
卵殻カルシウム                                            １０．０
乳糖                                                      ２０．０
澱粉                                                        ７．０
デキストリン                                                ８．０
硬化油                                                      ５．０
セルロース                                                  残部
【００２８】
＜処方例４：化粧水＞  
碁石茶抽出物（エタノール溶媒・５℃・１日抽出）                      ０．０１
ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（２０Ｅ．Ｏ．）       １．５
１，３−ブチレングリコール                                      ４．５
グリセリン                                                      ３．０
エタノール                                                      ２．０
ヒアルロン酸ナトリウム（１％水溶液）                            ５．０
エデト酸三ナトリウム                                            ０．１
防腐剤                                                          適量
ｐＨ調整剤                                                      適量
精製水                                                          残部
合計                                                        １００．０
【産業上の利用可能性】
【００２９】
本発明によれば、碁石茶抽出物を配合することにより、太陽光・室内外の照明・各種ディスプレイなどが発する光を構成する青色光による真皮線維芽細胞や表皮細胞の増殖阻害を予防・改善することができ、青色光による細胞増殖阻害剤として利用することができる。
【図１】
0006557165.tif 000003
【図２】
0006557165.tif 000004