(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
４−（４−｛［２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エン−１−イル］メチル｝ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（｛３−ニトロ−４−［（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチル）アミノ］フェニル｝スルホニル）−２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）ベンズアミド（ＧＤＣ−０１９９、ＡＢＴ１９９）、及び４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸（ＲＧ７３８８）又はその塩と併用してＣＤ２０を発現するがんを治療するための、オビヌツズマブを含む医薬。
【請求項２】
前記ＣＤ２０を発現するがんがリンパ腫又はリンパ性白血病であることを特徴とする、請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
一又は複数の付加的な他の細胞傷害性剤、化学療法剤若しくは抗がん剤、又はかかる薬剤の効果を亢進する化合物若しくは電離放射線が投与されることを特徴とする、請求項１又は２に記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、がんの治療のための抗ＣＤ２０抗体とＢｃｌ−２阻害剤及びＭＤＭ２阻害剤との併用療法に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
アフコシル化抗体
モノクローナル抗体の細胞媒介性エフェクター機能は、Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180及び米国特許第６６０２６８４号に記載されているように、そのオリゴ糖成分を操作することによって亢進せしめることができる。がん免疫療法において最もよく使用される抗体であるＩｇＧ１型抗体は、保存されたＮ結合型グリコシル化部位を各ＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に有する糖タンパク質である。Ａｓｎ２９７に結合した２つの複合型二分岐オリゴ糖は、ＣＨ２ドメイン間に埋もれて、ポリペプチド主鎖との広範囲の接触面を形成し、その存在は、抗体が抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）のようなエフェクター機能を媒介するために必須である（Lifely, M.R., et al., Glycobiology 5 (1995) 813-822; Jefferis, R., et al., Immunol. Rev. 163 (1998) 59-76; Wright, A., and Morrison, S.L., Trends Biotechnol. 15 (1997) 26-32）。Umana, P., et al.. Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180及び国際公開第９９／１５４３４２号は、２つに分岐したオリゴ糖の形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼであるβ（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（「ＧｎＴＩＩＩ」）のチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞における過剰発現が、抗体のインビトロでのＡＤＣＣ活性を有意に増大せしめることを示している。Ｎ２９７炭水化物の組成の改変又はその除去もまたＦｃγＲ及びＣ１ｑへのＦｃ結合に影響を及ぼす（Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180; Davies, J., et al., Biotechnol. Bioeng. 74 (2001) 288-294; Mimura, Y., et al., J. Biol. Chem. 276 (2001) 45539-45547; Radaev, S., et al., J. Biol. Chem. 276 (2001) 16478-16483; Shields, R.L., et al., J. Biol. Chem. 276 (2001) 6591-6604; Shields, R.L., et al., J. Biol. Chem. 277 (2002) 26733-26740; Simmons, L.C., et al., J. Immunol. Methods 263 (2002) 133-147）。
【０００３】
抗ＣＤ２０抗体を含むアフコシル化抗体及びフコシル化抗体の活性を論じる研究が報告されている（例えば、Iida, S., et al., Clin. Cancer Res. 12 (2006) 2879-2887; Natsume, A., et al., J. Immunol. Methods 306 (2005) 93-103; Satoh, M., et al., Expert Opin. Biol. Ther. 6 (2006) 1161-1173; Kanda, Y., et al., Biotechnol. Bioeng. 94 (2006) 680-688; Davies, J., et al., Biotechnol. Bioeng. 74 (2001) 288-294）。
【０００４】
ＣＤ２０抗体及び抗ＣＤ２０抗体
ＣＤ２０分子（ヒトＢリンパ球限定分化抗原又はＢｐ３５とも称される）はプレＢ及び成熟Ｂリンパ球上に位置する疎水性膜貫通タンパク質であり、詳しく記述されている（Valentine, M.A., et al., J. Biol. Chem. 264 (1989) 11282-11287; and Einfeld, D.A., et al., EMBO J. 7 (1988) 711-717; Tedder, T.F., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (1988) 208-212; Stamenkovic, I., et al., J. Exp. Med. 167 (1988) 1975-1980; Tedder, T.F., et al., J. Immunol. 142 (1989) 2560-2568）。ＣＤ２０は９０％を超えるＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）に発現する（Anderson, K.C., et al., Blood 63(6) (1984) 1424-1433)）が、造血幹細胞、プロＢ細胞、正常な形質細胞、又はその他正常な組織には見られない（Tedder, T.F., et al., J. Immunol. 135(2) (1985) 973- 979）。
【０００５】
そのＣＤ２０結合の様式及び生物活性が有意に異なる２つの異なったタイプの抗ＣＤ２０抗体が存在する（Cragg, M.S., et al., Blood, 103 (2004) 2738-2743；及びCragg, M.S., et al., Blood, 101 (2003) 1045-1052）。例えばリツキシマブ（８５％以上のフコース量を有する非アフコシル化抗体）、オファツムマブ、ベルツズマブ、オクレリズマブなどのＩ型抗体は補体媒介性細胞傷害が強力である。
【０００６】
例えばトシツモマブ（Ｂ１）、１１Ｂ８、ＡＴ８０又はヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体などのＩＩ型抗体は、同時のホスファチジルセリン曝露でカスパーゼ非依存性細胞死を介して標的細胞死を効率的に開始せしめる。
【０００７】
ＭＤＭ２
タンパク質ｐ５３は、がんの発達に対する保護において中心的役割を果たす腫瘍抑制タンパク質である。ｐ５３は、細胞の完全性を保護し、増殖停止又はアポトーシスの誘導によって細胞の恒久的損傷を受けたクローンの増殖を防止する。分子レベルでは、ｐ５３は、細胞周期及びアポトーシスの調節に関係する遺伝子パネルを活性化することができる転写因子である。ｐ５３は、細胞レベルでＭＤＭ２により厳しく制御されている強力な細胞周期阻害因子である。ＭＤＭ２とｐ５３はフィードバック制御ループを形成する。ＭＤＭ２は、ｐ５３に結合し、ｐ５３制御遺伝子を転写活性化するその能力を阻害し得る。また、ＭＤＭ２は、ｐ５３のユビキチン依存性分解を媒介する。ｐ５３は、ＭＤＭ２遺伝子の発現を活性化することができ、それによってＭＤＭ２タンパク質の細胞レベルを上昇させる。このフィードバック制御ループは、ＭＤＭ２とｐ５３の両方が、正常な増殖細胞において低いレベルに維持されることを保証する。ＭＤＭ２は、細胞周期制御において中心的な役割を果たすＥ２Ｆのコファクターでもある。
【０００８】
ＭＤＭ２対ｐ５３（Ｅ２Ｆ）の比は、多くのがんにおいて調節不全である。ｐ１６ＩＮＫ４／ｐ１９ＡＲＦ遺伝子座において頻繁に生じる分子欠損は、例えば、ＭＤＭ２タンパク質分解に影響することが示されている。野生型ｐ５３を持つ腫瘍細胞におけるＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害は、ｐ５３の蓄積、細胞周期停止、及び／又はアポトーシスを生じる。従って、ＭＤＭ２アンタゴニストは、単剤として、又は幅広い他の抗腫瘍治療薬との組み合わせで、がん治療に対する新規なアプローチを提供できる。この戦略の実現可能性は、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用を阻害する様々な巨大分子ツール（例えば、抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ペプチド）の使用により示されている。ＭＤＭ２はまたｐ５３のように保存結合領域を通してＥ２Ｆに結合し、サイクリンＡのＥ２Ｆ依存性転写を活性化し、ＭＤＭ２アンタゴニストがｐ５３変異細胞に効果を有しているかもしれないことを示唆している。
【０００９】
Ｂｃｌ−２及びＢｃｌ−２阻害剤
Ｂｃｌ−２タンパク質は、多くの疾患、特にがん、白血病、免疫及び自己免疫疾患において役割を果たす。Ｂｃｌ−２タンパク質は、膀胱がん、脳がん、乳がん、骨髄がん、子宮頸がん、慢性リンパ性白血病、結腸直腸がん、食道がん、肝細胞がん、リンパ芽球性白血病、濾胞性リンパ腫、Ｔ細胞又はＢ細胞起源のリンパ系悪性腫瘍、メラノーマ、骨髄性白血病、骨髄腫、口腔がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、前立腺がん、小細胞肺がん、脾臓がんに関与していると言われている。Ｂｃｌ−２タンパク質の過剰発現は、様々ながん及び免疫系の障害における化学療法に対する耐性、臨床転帰、疾患の進行、全体的な予後、又はそれらの組み合わせと相関する。
【発明の概要】
【００１０】
我々は、Ｂｃｌ−２阻害剤及びＭＤＭ２阻害剤とのＩ型抗ＣＤ２０抗体又はアフコシル化ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の併用が、有意に増強された抗増殖効果を示したことを見出した。驚くべきことに、この組み合わせは相加的を上回り、すなわち相乗的である。
【００１１】
本発明の一態様は、Ｂｃｌ−２阻害剤及びＭＤＭ２阻害剤と併用されるがんの治療のための、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の６０％以下のフコース量を有するアフコシル化抗ＣＤ２０抗体である。
【００１２】
本発明の別の態様は、Ｂｃｌ−２阻害剤及びＭＤＭ２阻害剤と併用するがんの治療用医薬の製造のための、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の６０％以下のフコース量を有するアフコシル化抗ＣＤ２０抗体の使用である。
【００１３】
本発明の別の態様は、Ｂｃｌ−２阻害剤及びＭＤＭ２阻害剤と併用して、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の６０％以下のフコース量を有するアフコシル化抗ＣＤ２０抗体を、がんの治療を必要とする患者に投与することによる、がんに罹患している患者の治療方法である。
【００１４】
一実施態様では、フコースの量はＡｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の４０％から６０％の間である。別の実施態様では、フコースの量はＡｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の０％である。
【００１５】
一実施態様では、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体はリツキシマブである。一実施態様では、アフコシル化抗ＣＤ２０抗体はＩｇＧ１抗体である。別の実施態様では、前記がんはＣＤ２０を発現するがんであり、好ましくはリンパ腫又はリンパ性白血病である。一実施態様では、前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体は、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である。別の実施態様では、前記アフコシル化抗体はＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である。好ましい実施態様では、前記アフコシル化抗体は、オビヌツズマブである。
【００１６】
一実施態様では、前記Ｂｃｌ−２阻害剤は、国際公開第２０１０／１３８５８８号に記載の化合物から選択される化合物である。前記Ｂｃｌ−２阻害剤を製造する方法は、国際公開第２０１０／１３８５８８号にも開示されている。
【００１７】
最も好ましくは、Ｂｃｌ−２阻害剤は、下の式の４−（４−｛［２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エン−１−イル］メチル｝ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（｛３−ニトロ−４−［（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチル）アミノ］フェニル｝スルホニル）−２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）ベンズアミド、又はその塩、エステル若しくは多形体である。国際公開第２０１０／１３８５８８号の実施例５には、前記化合物の製造方法が記載されている。
【００１８】
前記Ｂｃｌ−２阻害剤はまた、以下の式で表される：
0006612362.tif 000002
【００１９】
前記化合物は、ＡＢＴ−１９９（ＧＤＣ−０１９９又はベネトクラクス（Ｖｅｎｅｔｏｃｌａｘ））とも命名される。
【００２０】
一実施態様では、前記ＭＤＭ２阻害剤は、国際公開第２０１１／０９８３９８号に記載の化合物から選択される化合物である。前記ＭＤＭ２阻害剤を製造する方法は、国際公開第２０１１／０９８３９８号にも開示されている。
【００２１】
最も好ましくは、ＭＤＭ２阻害剤は、下の式の４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸、又はその塩、エステル若しくは多形体である。国際公開第２０１１／０９８３９８号の実施例４４８には、前記化合物の製造方法が記載されている。
0006612362.tif 000003
【００２２】
一実施態様では、前記Ｉ型抗ＣＤ２０抗体はリツキシマブであり、前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体はヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体、好ましくはオビヌツズマブであり、Ｂｃｌ−２阻害剤は国際公開第２０１０／１３８５８８号に記載の化合物から選択され、ＭＤＭ２阻害剤は国際公開第２０１１／０９８３９８号に記載の化合物から選択される。前記ＭＤＭ２阻害剤は、好ましくは、上記の本明細書に開示される式Ｉに記載の化合物又は式Ｉ−１に記載の化合物である。好ましくは、ＭＤＭ２阻害剤は、下の式の４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸、又はその塩であり、前記がんは、ＣＤ２０を発現するがんであり、一実施態様では、リンパ腫又はリンパ性白血病である。
【００２３】
一実施態様では、アフコシル化抗ＣＤ２０抗体は、１０−８Ｍから１０−１３ＭのＫＤでＣＤ２０に結合する。
【００２４】
本発明の一実施態様は、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体（一実施態様ではリツキシマブ）又はＡｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の６０％以下のフコース量を有するアフコシル化抗ＣＤ２０抗体（一実施態様では、アフコシル化ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体又は好ましくはオビヌツズマブ）とＢｃｌ−２阻害剤（Ｂｃｌ−２阻害剤は国際公開第２０１０／１３８５８８号に記載の化合物から選択される）及びＭＤＭ２阻害剤（ＭＤＭ２阻害剤は国際公開第２０１１／０９８３９８号に記載の化合物から選択される）の組み合わせを含む薬学的組成物である。前記ＭＤＭ２阻害剤は、好ましくは、上記の本明細書に開示される式Ｉに記載の化合物又は式Ｉ−１に記載の化合物である。好ましくは、がんの治療のためのＭＤＭ２阻害剤は、４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸又はその塩、４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸、又はその塩である。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】２９日までの腫瘍体積の増加及びＩＱＲ値（実施例１）
【図２】３２日までの腫瘍体積の増加及びＴＧＩ値（実施例２）
【図３】１２５日までの時間事象分析（実施例２）
【発明を実施するための形態】
【００２６】
発明の詳細な説明
本発明は、Ｂｃｌ−２阻害剤及びＭＤＭ２阻害剤と併用するがんの治療のための、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体、又はＡｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の６０％以下のフコース量を有するＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプのアフコシル化抗ＣＤ２０抗体を含む。
【００２７】
本発明は、Ｂｃｌ−２阻害剤及びＭＤＭ２阻害剤と併用するがんの治療用医薬の製造のための、Ｉ型ＣＤ２０抗体、又はＡｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の６０％以下のフコース量を有するＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプのアフコシル化抗ＣＤ２０抗体の使用を含む。
【００２８】
一実施態様では、フコースの量はＡｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の４０％から６０％の間である。
【００２９】
用語「抗体」は、限定しないが、全抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、及びモノクローナル抗体、キメラ抗体又は組換え抗体のような遺伝子操作された抗体、並びに本発明による特徴的な特性を保持している限りそのような抗体の断片を含む、様々な形態の抗体を包含する。本明細書で使用される場合、用語「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」は、単一のアミノ酸組成物の抗体分子の調製物を指す。従って、用語「ヒトモノクローナル抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変及び定常領域を有する、単一の結合特異性を示す抗体を指す。一実施態様では、ヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞に融合させた、ヒト重鎖導入遺伝子及びヒト軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するトランスジェニック非ヒト動物、例えば、トランスジェニックマウスから得られるＢ細胞を含むハイブリドーマによって産生される。
【００３０】
用語「キメラ抗体」は、通常は組換えＤＮＡ技術によって調製される、一つの供給源又は種由来の可変領域、すなわち結合領域と、異なる供給源又は種由来の定常領域の少なくとも一部とを含む、モノクローナル抗体を指す。マウス可変領域及びヒト定常領域を含むキメラ抗体が特に好ましい。そのようなマウス／ヒトキメラ抗体は、マウス免疫グロブリン可変領域をコードするＤＮＡセグメントと、ヒト免疫グロブリン定常領域をコードするＤＮＡセグメントとを含む、発現された免疫グロブリン遺伝子の産物である。本発明によって包含される「キメラ抗体」の他の形態は、クラス又はサブクラスが元々の抗体のものから改変又は変化せしめられたものである。そのような「キメラ」抗体は、「クラススイッチ抗体」とも称される。キメラ抗体を作製するための方法は、一般的な組換えＤＮＡ及び当該技術分野で今はよく知られている遺伝子トランスフェクション技術を含む。例えば、Morrison, S.L., et al., Proc. Natl. Acad Sci. USA 81 (1984) 6851-6855；米国特許第５２０２２３８号及び同第５２０４２４４号を参照のこと。
【００３１】
用語「ヒト化抗体」は、フレームワーク又は「相補性決定領域」（ＣＤＲ）が、親免疫グロブリンのものと比較して異なった特異性を有する免疫グロブリンのＣＤＲを含むように改変された抗体を指す。好ましい実施態様では、ヒト抗体のフレームワーク領域中にマウスＣＤＲをグラフトさせて「ヒト化抗体」を調製する。例えば、Riechmann, L. et al., Nature 332 (1988) 323-327;及びNeuberger, M.S., et al., Nature 314 (1985) 268-270を参照のこと。特に好ましいＣＤＲは、キメラ及び二重又は多重特異性抗体に対して上述した抗原を認識する配列を表すものに対応する。
【００３２】
用語「ヒト抗体」は、本明細書で使用する場合、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する抗体を含むことが意図される。ヒト抗体は当技術分野で周知である（van Dijk, M.A., and van de Winkel, J.G., Curr. Opin. in Chem. Biol. 5 (2001) 368-374）。こうした技術に基づき、様々な標的に対するヒト抗体が産生され得る。ヒト抗体の例は、例えば、Kellermann, S.A., et al., Curr Opin Biotechnol. 13 (2002) 593-597に記載されている。
【００３３】
本明細書において使用される「組換えヒト抗体」という用語は、ＮＳＯ若しくはＣＨＯ細胞等の宿主細胞から、又はヒト免疫グロブリン遺伝子に関してトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体、或いは宿主細胞中にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを用いて発現された抗体等の組換え手段により調製、発現、作製又は単離される全てのヒト抗体を含むことが意図される。そのような組換えヒト抗体は、再配列された形態でヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変領域及び定常領域を有する。本発明による組換えヒト抗体はｉｎ  ｖｉｖｏ体細胞超変異に供されている。従って、組換え抗体のＶＨ領域及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨ配列及びＶＬ配列に由来し、かつそれらに関連しているが、ｉｎ  ｖｉｖｏでヒト抗体生殖系列レパートリー内には天然に存在しないであろう配列である。
【００３４】
本明細書において使用される用語「二重又は多重特異性抗体」は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。特定の実施態様では、結合特異性の一つはＣＤ２０に対してであり、他の一方は、任意の他の抗原に対してである。特定の実施態様では、二重特異性抗体は、ＣＤ２０の２つの異なるエピトープに結合することができる。二重特異性抗体はまた、ＣＤ２０を発現する細胞に対して細胞傷害性剤を局在化させるために用いてもよい。二重特異性抗体は、完全長抗体又は抗体断片として調製することができる。
【００３５】
本明細書で使用される場合、用語「結合」又は「特異的結合」は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ、好ましくは精製された野生型の抗原を用いたプラズモン共鳴アッセイ（ＢＩＡｃｏｒｅ、ＧＥ−Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）における、腫瘍抗原のエピトープに対する抗体の結合を指す。結合の親和性は、用語ｋａ（抗体／抗原複合体からの抗体の結合に対する速度定数）、ｋＤ（解離定数）、及びＫＤ（ｋＤ／ｋａ）によって定義される。結合又は特異的結合は、１０−８Ｍ以下、好ましくは１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ（一実施態様では１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の結合親和性（ＫＤ）を意味する。従って、本発明によるアフコシル化抗体は、１０−８ｍｏｌ／ｌ以下、好ましくは１０−８Ｍから１０−１３Ｍ（一実施態様では、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）の結合親和性（ＫＤ）で腫瘍抗原に特異的に結合している。
【００３６】
本明細書で使用される用語「核酸分子」は、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子を含むことが意図される。核酸分子は、一本鎖又は二本鎖であってよいが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。
【００３７】
「定常ドメイン」は、抗体の抗原への結合には直接関与しないが、エフェクター機能（ＡＤＣＣ、補体結合、及びＣＤＣ）に関与する。
【００３８】
本明細書で使用される「可変領域」（軽鎖の可変ドメイン（ＶＬ）、重鎖の可変領域（ＶＨ））は、抗原への抗体の結合に直接関与する軽鎖及び重鎖の各対を意味する。可変ヒト軽鎖及び重鎖のドメインは同じ一般構造を有し、各ドメインは、３つの「超可変領域」（又は相補性決定領域、ＣＤＲ）によって連結された、配列が広く保存されている４つのフレームワーク（ＦＲ）領域を含む。フレームワーク領域はβシート高次構造をとり、ＣＤＲはβシート構造を連結するループを形成し得る。各鎖におけるＣＤＲは、フレームワーク領域によりその三次元構造が保持され、もう一方の鎖からのＣＤＲと共に抗原結合部位を形成する。
【００３９】
用語「超可変領域」は、本明細書において使用される場合、抗原結合を担っている抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」に由来するアミノ酸残基を含む。「フレームワーク」又は「ＦＲ」領域は、本明細書で定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン領域である。よって、抗体の軽鎖及び重鎖は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４を含む。特に、重鎖のＣＤＲ３は、抗原結合に最も寄与する領域である。ＣＤＲ及びＦＲ領域は、Kabat, et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)の標準的な定義に従って決定され、及び／又は「超可変ループ」からの残基である。
【００４０】
用語「アフコシル化抗体」は、減少したレベルのフコース残基を有するＡｓｎ２９７においてＦｃ領域内の改変されたグリコシル化パターンを有するＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプ（好ましくはＩｇＧ１アイソタイプ）の抗体を指す。ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３のグリコシル化は、コアフコシル化二分岐複合型オリゴ糖グリコシル化としてＡｓｎ２９７で生じ、２個までのＧａｌ残基で終結する。これらの構造は、末端Ｇａｌ残基の量に応じて、Ｇ０、Ｇ１（α１，６又はα１，３）、又はＧ２グリカン残基と命名される（Raju, T.S., BioProcess Int. 1 (2003) 44-53）。抗体Ｆｃ部分のＣＨＯ型グリコシル化は、例えば、Routier, F. H., Glycoconjugate J. 14 (1997) 201-207に記載されている。非糖修飾ＣＨＯ宿主細胞中で組換え的に発現される抗体は、通常、少なくとも８５％の量がＡｓｎ２９７においてフコシル化されている。本明細書で使用されるアフコシル化抗体という用語は、そのグリコシル化パターンにフコースを有さない抗体を含むものと理解されたい。抗体中の典型的なグリコシル化残基位置はＥＵ番号付けシステムによる２９７位のアスパラギン（「Ａｓｎ２９７」）であることが一般に知られている。
【００４１】
「ＥＵ番号付けシステム」又は「ＥＵインデックス」は、通常、免疫グロブリン重鎖定常領域中の残基を指す場合に使用される（例えば、出典明示により本明細書に援用されるKabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)で報告されたＥＵインデックス）。
【００４２】
よって、本発明のアフコシル化抗体は、Ａｓｎ２９７においてフコースの量がオリゴ糖（糖類）の総量の６０％以下である（これはＡｓｎ２９７においてＦｃ領域のオリゴ糖の少なくとも４０％以上がアフコシル化されていることを意味する）ＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプ（好ましくはＩｇＧ１アイソタイプ）の抗体を意味する。一実施態様では、フコースの量は、Ａｓｎ２９７においてＦｃ領域のオリゴ糖の４０％から６０％である。別の実施態様では、フコースの量はＡｓｎ２９７においてＦｃ領域のオリゴ糖の５０％以下であり、更に別の実施態様では３０％以下である。本発明によれば、「フコースの量」は、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定され、平均値として算出される、Ａｓｎ２９７に結合した全てのオリゴ糖（糖類）（例えば、複合体構造物、ハイブリッド構造物及び高マンノース構造物）の合計に対するＡｓｎ２９７におけるオリゴ糖（糖類）鎖内の前記オリゴ糖（フコース）の量を意味する（フコースの量を決定する詳しい手順については、例えば国際公開第２００８／０７７５４６号を参照のこと）。更に、一実施態様ではＦｃ領域のオリゴ糖は二分されている。本発明によるアフコシル化抗体は、Ｆｃ領域におけるオリゴ糖を部分的にフコシル化するのに十分な量でＧｎＴＩＩＩ活性を有するポリペプチドをコードする少なくとも一の核酸を発現するように操作された糖修飾宿主細胞において発現させることができる。一実施態様では、ＧｎＴＩＩＩ活性を有するポリペプチドは融合ポリペプチドである。或いは、米国特許第６９４６２９２号に従って宿主細胞のα１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を低下させるか又は消失させて、糖修飾した宿主細胞を産生させることもできる。抗体フコシル化の量は、例えば発酵条件（例えば発酵時間）によって、又は異なったフコシル化量の少なくとも２種の抗体を組み合わせることによって、予め決定することができる。このようなアフコシル化抗体及び各糖鎖工学法は、国際公開第２００５／０４４８５９号、国際公開第２００４／０６５５４０号、国際公開第２００７／０３１８７５号、Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180、国際公開第９９／１５４３４２号、国際公開第２００５／０１８５７２号、国際公開第２００６／１１６２６０号、国際公開第２００６／１１４７００号、国際公開第２００５／０１１７３５号、国際公開第２００５／０２７９６６号、国際公開第９７／０２８２６７号、米国特許出願公開第２００６／０１３４７０９号、米国特許出願公開第２００５／００５４０４８号、米国特許出願公開第２００５／０１５２８９４号、国際公開第２００３／０３５８３５号、国際公開第２０００／０６１７３９号に記載されている。こうした糖鎖操作抗体は増加したＡＤＤＣを有している。本発明によるアフコシル化抗体を生じせしめる他の糖鎖工学法は、例えば、Niwa, R.. et al., J. Immunol. Methods 306 (2005) 151-160; Shinkawa, T., et al., J. Biol. Chem, 278 (2003) 3466-3473；国際公開第０３／０５５９９３号又は米国特許出願公開第２００５／０２４９７２２号に記載されている。
【００４３】
よって、本発明の一態様は、Ｂｃｌ−２阻害剤及びＭＤＭ２阻害剤と併用するがんの治療のための、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体、又はＡｓｎ２９７においてフコース量がオリゴ糖（糖類）全量の６０％以下である、ＣＤ２０に特異的に結合するＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプ（好ましくはＩｇＧ１アイソタイプ）のアフコシル化抗ＣＤ２０抗体である。本発明の別の態様は、Ｂｃｌ−２阻害剤及びＭＤＭ２阻害剤と併用するがんの治療用医薬の製造のための、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の６０％以下のフコース量を有する、ＣＤ２０に特異的に結合するＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプ（好ましくはＩｇＧ１アイソタイプ）のアフコシル化抗ＣＤ２０抗体の使用である。一実施態様では、フコースの量は、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の６０％から２０％である。一実施態様では、フコースの量は、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の６０％から４０％である。一実施態様では、フコースの量は、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の０％である。
【００４４】
ＣＤ２０（Ｂリンパ球抗原ＣＤ２０、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ１、Ｌｅｕ−１６、Ｂｐ３５、ＢＭ５及びＬＦ５としても知られており；配列はＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベースエントリー番号Ｐ１１８３６によって特徴付けられる）は、プレＢ及び成熟Ｂリンパ球上に位置する分子量がおよそ３５ｋＤの疎水性膜貫通タンパク質である（Valentine, M.A. et al., J. Biol. Chem. 264 (1989) 11282-11287; Tedder, T.F., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (1988) 208-212; Stamenkovic, I., et al., J. Exp. Med. 167 (1988) 1975-1980; Einfeld, D.A., et al., EMBO J. 7 (1988) 711-717; Tedder, T.F., et al., J. Immunol. 142 (1989) 2560-2568）。対応するヒト遺伝子は、ＭＳ４Ａ１としても知られている、膜貫通４ドメイン、サブファミリーＡ、メンバー１である。この遺伝子は膜貫通４Ａ遺伝子ファミリーのメンバーをコードする。この新生タンパク質ファミリーのメンバーは、共通の構造的特徴及び類似のイントロン／エクソンスプライス境界によって特徴付けられ、造血細胞及び非リンパ系組織間で固有の発現パターンを示す。この遺伝子はＢ細胞の発生及び形質細胞への分化において役割を果たしているＢリンパ球表面分子をコードする。このファミリーメンバーはファミリーメンバーのクラスター間の１１ｑ１２に局在化している。この遺伝子の選択的スプライシングは、同じタンパク質をコードする２つの転写変異体を生じる。
【００４５】
「ＣＤ２０」及び「ＣＤ２０抗原」という用語はここでは互換的に使用され、細胞により天然に発現されるか、又はＣＤ２０遺伝子を形質移入した細胞で発現されるヒトＣＤ２０の任意の変異体、アイソフォーム及び種ホモログを含む。本発明の抗体のＣＤ２０抗原への結合は、ＣＤ２０の不活性化によるＣＤ２０発現細胞（例えば腫瘍細胞）の死滅を媒介する。ＣＤ２０を発現する細胞の死滅は、以下の機序の一又は複数により生じ得る：細胞死／アポトーシス誘導、ＡＤＣＣ及びＣＤＣ。
【００４６】
当該技術分野で認識されているように、ＣＤ２０の同意語は、Ｂリンパ球抗原ＣＤ２０、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ１、Ｌｅｕ−１６、Ｂｐ３５、ＢＭ５及びＬＦ５を含む。
【００４７】
本発明による用語「抗ＣＤ２０抗体」は、ＣＤ２０抗原に特異的に結合する抗体である。抗ＣＤ２０抗原への抗ＣＤ２０抗体の結合特性及び生物活性に応じて、抗ＣＤ２０抗体の二つの型（Ｉ型及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体）がCragg, M.S., et al., Blood 103 (2004) 2738-2743；及びCragg, M.S., et al., Blood 101 (2003) 1045-1052により区別され得る。表１を参照のこと。
0006612362.tif 000004
【００４８】
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の例は、例えば、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体ＩｇＧ１（国際公開第２００５／０４４８５９号に開示のキメラヒト化ＩｇＧ１抗体）、１１Ｂ８  ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０３５６０７号に開示）及びＡＴ８０  ＩｇＧ１を含む。典型的には、ＩｇＧ１アイソタイプのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、特徴的なＣＤＣ特性を示す。ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプのＩ型抗体と比較して減少したＣＤＣ（ＩｇＧ１アイソタイプの場合）を有している。
【００４９】
Ｉ型抗ＣＤ２０抗体の例は、例えば、リツキシマブ、ＨＩ４７  ＩｇＧ３（ＥＣＡＣＣ、ハイブリドーマ）、２Ｃ６  ＩｇＧ１（国際公開第２００５／１０３０８１号に開示）、２Ｆ２  ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０３５６０７号及び同第２００５／１０３０８１号に開示）及び２Ｈ７  ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０５６３１２号に開示）を含む。
【００５０】
本発明によるアフコシル化抗ＣＤ２０抗体は、一実施態様ではＩＩ型の抗ＣＤ２０抗体であり、別の実施態様ではアフコシル化ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である。
【００５１】
本発明によるアフコシル化抗ＣＤ２０抗体は、フコースを減少させていない抗ＣＤ２０抗体とは異なり、増加した抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有している。
【００５２】
「増加した抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有するアフコシル化抗ＣＤ２０抗体」は、該用語がここで定義されるように、当業者に周知の任意の適切な方法により決定される増加したＡＤＣＣを有するアフコシル化抗ＣＤ２０抗体を意味する。一つの許容されるｉｎ  ｖｉｔｒｏＡＤＣＣアッセイは、次の通りである：
１）該アッセイは、抗体の抗原結合領域によって認識される標的抗原を発現することが知られている標的細胞を使用する；
２）該アッセイは、エフェクター細胞として、無作為に選択された健常なドナーの血液から単離されたヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用する；
３）該アッセイは、次のプロトコールに従って実施される：
ｉ）標準的な密度遠心分離手順を使用してＰＢＭＣを単離し、５ｘ１０６細胞／ｍｌでＲＰＭＩ細胞培養培地に懸濁させる；
ｉｉ）標準的な組織培養法により標的細胞を増殖させ、生存率が９０％を越える指数増殖期から回収し、ＲＰＭＩ細胞培養培地中で洗浄し、１００マイクロキュリーの５１Ｃｒで標識し、細胞培養培地で二回洗浄し、１０５細胞／ｍｌの密度で細胞培養培地に再懸濁させる；
ｉｉｉ）１００マイクロリットルの上記の最終標的細胞懸濁物を９６ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルに移す；
ｉｖ）抗体を細胞培養培地で４０００ｎｇ／ｍから０．０４ｎｇ／ｍｌに連続希釈し、５０マイクロリットルの得られた抗体溶液を９６ウェルマイクロタイタープレート中の標的細胞に添加し、上記の全濃度範囲をカバーする様々な抗体濃度で３回試験する。
ｖ）最大放出（ＭＲ）コントロールに対して、標識された標的細胞を含むプレート中の更なる３つのウェルに、抗体溶液（上記のｉｖ項）に代えて、５０マイクロリットルの非イオン性洗浄剤（Ｎｏｎｉｄｅｔ、Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）の２％（ＶＮ）水溶液を添加する；
ｖｉ）自然放出（ＳＰ）コントロールに対して、標識された標的細胞を含むプレート中の更なる３つのウェルに、抗体溶液（上記のｉｖ項）に代えて、５０マイクロリットルのＲＰＭＩ細胞培養培地を添加する；
ｖｉｉ）次いで、９６ウェルマイクロタイタープレートを５０ｘｇで１分間遠心分離し、１時間４℃でインキュベートする；
ｖｉｉｉ）エフェクター：標的細胞の比率が２５：１となるように各ウェルに５０マイクロリットルのＰＢＭＣ懸濁液（上記のｉ項）を添加して、該プレートを３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下で４時間インキュベーター内に配置する；
ｉｘ）各ウェルから無細胞の上清を回収し、ガンマカウンターを使用して、実験的に放出された放射能（ＥＲ）を定量する；
ｘ）特異的溶解の百分率を、各抗体濃度について、式（ＥＲ−ＭＲ）／（ＭＲ−ＳＲ）×１００［式中、ＥＲはその抗体濃度について定量された平均放射活性（上記ｉｘ項参照）であり、ＭＲはＭＲコントロール（上記ｖ項参照）について定量された平均放射活性（上記ｉｘ項参照）であり、ＳＲはＳＲコントロール（上記ｖｉ項参照）について定量された平均放射活性（上記ｉｘ項参照）である］に従って計算する。
４）「増加したＡＤＣＣ」は、上記の試験された抗体濃度範囲内で観察される特異的溶解の最大百分率の増加、及び／又は上記の試験された抗体濃度範囲内で観察される特異的溶解の最大百分率の半分を達成するのに必要な抗体濃度の低下の何れかとして定義される。ＡＤＣＣの増加は、上記アッセイで測定され、当該技術分野において当業者に知られている同じ標準的な生産、精製、製剤化及び保存の方法を使用して同じ型の宿主細胞により産生された同じ抗体によって媒介されるものであるがＧｎＴＩＩＩを過剰発現するように操作された宿主細胞により産生されたものではないＡＤＣＣと比較したものである。
【００５３】
前記「増加したＡＤＣＣ」は前記抗体の糖鎖操作により得ることができ、これは、Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180及び米国特許第６６０２６８４号に記載されているように、そのオリゴ糖成分を操作することによりモノクローナル抗体の前記の天然の細胞媒介性エフェクター機能を亢進させることを意味する。
【００５４】
用語「補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）」は、補体存在下での本発明の抗体によるヒト腫瘍標的細胞の溶解を意味する。ＣＤＣは、好ましくは、補体の存在下での本発明の抗ＣＤ２０抗体を用いたＣＤ２０発現細胞の調製物の処理により測定される。ＣＤＣは、抗体が、１００ｎＭの濃度で４時間後に２０％以上の腫瘍細胞の溶解（細胞死）を誘導する場合に見出される。該アッセイは好ましくは、５１Ｃｒ又はＥｕ標識腫瘍細胞で、放出された５１Ｃｒ又はＥｕの測定により実施される。コントロールは、補体を含むが抗体を含まない腫瘍標的細胞のインキュベーションを含む。
【００５５】
「リツキシマブ」抗体（Ｉ型抗ＣＤ２０抗体の例）は、ヒトＣＤ２０抗原に対する遺伝子操作キメラヒトガンマ１マウス定常ドメイン含有モノクローナル抗体である。
【００５６】
「リツキシマブ」抗体（Ｉ型抗ＣＤ２０抗体の例）は、ヒトＣＤ２０抗原に対する遺伝子操作キメラヒトガンマ１マウス定常ドメイン含有モノクローナル抗体である。このキメラ抗体は、ヒトガンマ１定常ドメインを含み、１９９８年４月１７日に発行され、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社に譲渡された米国特許第５７３６１３７号（Ａｎｄｅｒｓｏｎら）での「Ｃ２Ｂ８」という名称で特定される。リツキシマブは、再発性又は難治性の低悪性度又は濾胞性のＣＤ２０陽性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫の患者の治療に対して承認されている。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ作用機序研究は、リツキシマブがヒト補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を示すことを示している（Reff, M.E., et. al., Blood 83 (1994) 435-445）。加えて、リツキシマブは、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を測定するアッセイにおいて有意な活性を示す。リツキシマブはアフコシル化されない。
0006612362.tif 000005
【００５７】
用語「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、ＩｇＧ１由来のヒト定常ドメインとのキメラ化及びその後のヒト化によって、マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体Ｂ−Ｌｙ１（マウス重鎖の可変領域（ＶＨ）：配列番号１；マウス軽鎖の可変領域（ＶＬ）：配列番号２）（Poppema, S. and Visser, L., Biotest Bulletin 3 (1987) 131-139を参照）から得られた、国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号に開示されているようなヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体を指す（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号参照）。こうした「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号で詳細に開示されている。
【００５８】
一実施態様では、「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、配列番号３から配列番号１９（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ−ＨＨ２からＢ−ＨＨ９及びＢ−ＨＬ８からＢ−ＨＬ１７）の群から選択される重鎖の可変領域（ＶＨ）を有する。特定の一実施態様では、このような可変ドメインは、配列番号３、配列番号４、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、及び配列番号１５（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ−ＨＨ２、ＢＨＨ−３、Ｂ−ＨＨ６、Ｂ−ＨＨ８、Ｂ−ＨＬ８、Ｂ−ＨＬ１１及びＢ−ＨＬ１３）からなる群から選択される。特定の一実施態様では、「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、配列番号２０（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ−ＫＶ１）の軽鎖の可変領域（ＶＬ）を有する。特定の一実施態様では、「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、配列番号７（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ−ＨＨ６）の重鎖の可変領域（ＶＨ）と配列番号２０（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ−ＫＶ１）の軽鎖の可変領域（ＶＬ）とを有する。更に一実施態様では、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体はＩｇＧ１抗体である。本発明によれば、そのようなアフコシル化ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、国際公開第２００５／０４４８５９号、国際公開第２００４／０６５５４０号、国際公開第２００７／０３１８７５号、Umana, P. et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180及び国際公開第９９／１５４３４２号に記載の手順に従って、Ｆｃ領域において糖鎖操作（ＧＥ）されている。一実施態様では、アフコシル化糖鎖操作ヒト化Ｂ−Ｌｙ１はＢ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ＧＥである。一実施態様では、抗ＣＤ２０抗体はオビヌツズマブ（推奨国際一般名、WHO Drug Information, Vol. 26, No. 4, 2012, p. 453）である。本明細書で使用される場合、オビヌツズマブは、ＧＡ１０１と同義である。商標名は、ＧＡＺＹＶＡ又はＧＡＺＹＶＡＲＯである。ＷＨＯの薬物情報文書は、以前の全てのバージョン（例：Vol. 25, No. 1, 2011, p.75-76）に取って代わるものであり、元はアフツズマブ（推奨国際一般名、WHO Drug Information, Vol. 23, No. 2, 2009, p. 176;Vol. 22, No. 2, 2008, p. 124）として知られている。
【００５９】
本発明にかかる「ＭＤＭ２阻害剤」なる用語は、０．００１μＭから約２μＭ、一実施態様では０．００２μＭから約２μＭのＩＣ５０でＭＤＭ２の活性を阻害する薬剤を指す。
【００６０】
他の実施態様では、ＭＤＭ２阻害剤は１５００ダルトン（Ｄａ）未満の分子量（ＭＷ）を持つ小分子量化合物である。
【００６１】
一実施態様では、前記ＭＤＭ２阻害剤は、国際公開第２０１１／０９８３９８号に記載の化合物から選択される化合物である。前記ＭＤＭ２阻害剤を製造する方法は、国際公開第２０１１／０９８３９８号にも開示されている。前記ＭＤＭ２阻害剤は、好ましくは、本明細書に開示される式Ｉに記載の化合物又は式Ｉａに記載の化合物である（国際公開第２０１１／０９８３９８号の式ＩＩ又は式ＩＩａ）。
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［式中、
Ｘは、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、シアノ、ニトロ、エチニル、シクロプロピル、メチル、エチル、イソプロピル、ビニル及びメトキシからなる群より選択され、
Ｙは、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＯＨ、ニトロ、低級アルキル、シクロアルキル、低級アルコキシ、低級アルケニル、シクロアルケニル、低級アルキニル、アリール、ヘテロアリール、複素環、ＣＯＯＲ’、ＯＣＯＲ’、ＣＯＮＲ’Ｒ”、ＮＲ’ＣＯＲ”、ＮＲ”ＳＯ２Ｒ’、ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”及びＮＲ’Ｒ”からなる群より独立して選択される１つ〜４つの基であり、ここで
Ｒ’及びＲ”は、Ｈ、低級アルキル、置換低級アルキル、低級シクロアルキル、置換低級シクロアルキル、低級アルケニル、置換低級アルケニル、低級シクロアルケニル、置換低級シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環、又は置換複素環から独立して選択され、
Ｒ’とＲ”が独立して結合し、置換若しくは無置換シクロアルキル、置換若しくは無置換シクロアルケニル、置換若しくは無置換ヘテロアリール又は置換若しくは無置換複素環から選択される環状構造を形成する場合、
Ｒ１は、低級アルキル、置換低級アルキル、低級アルケニル、置換低級アルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環、置換複素環、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、及び置換シクロアルケニルからなる群より選択され、
Ｒ２は水素又は低級アルキルであり、
Ｒ３はＨ又は低級アルキルであり，
Ｒ５は、低級アルキル、置換低級アルキル、低級アルケニル、置換低級アルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環、置換複素環、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、及び置換シクロアルケニルからなる群より選択され、
Ｒ４は水素であり、
Ｒ６及びＲ７は、（ＣＨ２）ｎ−Ｒ’、（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’ＣＯＲ”、（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”、（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＲ’、（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２）ｎ−ＯＲ’、（ＣＨ２）ｎ−ＳＲ’、（ＣＨ２）ｎ−ＳＯＲ’、（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２Ｒ’、（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＲ’、（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、（ＣＨ２）ｎ−ＳＯＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ’、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＲ’、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’ＣＯＲ”、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＲ’、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２Ｒ’、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＲ’、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ’、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＲ’、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’ＣＯＲ”、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＲ’、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２Ｒ’、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＲ’、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”、−ＣＯＲ’、−ＳＯＲ’及びＳＯ２Ｒ’からなる群より選択され、
ここでＲ’及びＲ’’は上記の通りであり、
ｍ、ｎ及びｐは、独立して０から６である］、
及びその薬学的に許容される塩及びエステル。
【００６２】
特に好ましいのは、式Ｉの化合物であり、
［式中、
ＸはＦ、Ｃｌ又はＢｒであり、
Ｙは、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＯＨ、ニトロ、低級アルキル、シクロアルキル、低級アルコキシ、低級アルケニル、低級シクロアルケニル、及び低級アルキニルからなる群より独立して選択される１つ〜２つの基であり、
Ｒ１は、低級アルキル、置換低級アルキル、低級アルケニル、置換低級アルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環、置換複素環、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、及び置換シクロアルケニルからなる群より選択され、
Ｒ２は水素であり、
Ｒ３はＨであり、
Ｒ５は、アリール、置換アリール、ヘテロアリール及び置換ヘテロアリールからなる群より選択され、
Ｒ４は水素であり、
Ｒ６及びＲ７は、（ＣＨ２）ｎ−Ｒ’、（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’ＣＯＲ”、（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”、（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＲ’、（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２）ｎ−ＯＲ’、（ＣＨ２）ｎ−ＳＲ’、（ＣＨ２）ｎ−ＳＯＲ’、（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２Ｒ’、（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＲ’、（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、（ＣＨ２）ｎ−ＳＯＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ’、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＲ’、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’ＣＯＲ”、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＲ’、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２Ｒ’、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＲ’、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ’、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＲ’、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’ＣＯＲ”、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＲ’、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２Ｒ’、
（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＲ’、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”、−ＣＯＲ’、−ＳＯＲ’及びＳＯ２Ｒ’からなる群より選択され、ここで
Ｒ’及びＲ”は、Ｈ、低級アルキル、置換低級アルキル、低級シクロアルキル、置換低級シクロアルキル、低級アルケニル、置換低級アルケニル、低級シクロアルケニル、置換低級シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環、又は置換複素環から独立して選択され、Ｒ’とＲ”はまた独立して結合し、置換若しくは無置換シクロアルキル、置換若しくは無置換シクロアルケニル、置換若しくは無置換ヘテロアリール又は置換若しくは無置換複素環から選択される環状構造を形成する場合があり、
ｍ、ｎ及びｐは、独立して０から６である］、
及びその薬学的に許容される塩及びエステルである。
【００６３】
更に好ましいのは、式Ｉの化合物であり、
［式中、
ＸはＦ、Ｃｌ又はＢｒであり、
Ｙは、Ｈ又はＦから選択される一置換基であり、
Ｒ１は、低級アルキル、置換低級アルキル、低級アルケニル、置換低級アルケニル、複素環、置換複素環、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、及び置換シクロアルケニルからなる群より選択される。
【００６４】
更に好ましいＲ１は
0006612362.tif 000007
から選択される置換低級アルキルであり、
ここで、Ｒ８、Ｒ９は両方ともメチルであるか、又は結合してシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル又はシクロヘキシル基を形成し、
Ｒ１０は（ＣＨ２）ｍ−Ｒ１１であり、
ｍは、０、１又は２であり、
Ｒ１１は、水素、ヒドロキシル、低級アルキル、低級アルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環又は置換複素環から選択され、
Ｒ２はＨであり、
Ｒ３はＨであり、
Ｒ５は
0006612362.tif 000008
から選択される置換フェニルであり：
上式中、ＷはＦ、Ｃｌ又はＢｒであり、
ＶはＨ又はＦであり、
Ｒ４は水素であり、
Ｒ６及びＲ７の一方は水素であり、他方は（ＣＨ２）ｎ−Ｒ’であり、
ｎは、０又は１であり、
Ｒ’は、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環又は置換複素環から選択される。
【００６５】
更に別の実施態様では、本発明は式Ｉａの化合物を対象とし、
0006612362.tif 000009
ここで、Ｒ６及びＲ６についての定義において言及されている全ての変数及び置換基は、上記の式Ｉについて与えられた意味を有する。
【００６６】
更に別の実施態様では、式Ｉａの化合物が提供され、
ここで、Ｒ６は（ＣＨ２）ｎ−Ｒ’であり、
Ｒ’は、シクロヘキシルであるか、又は
１つ又は２つの炭素原子がＮ、Ｓ又はＯによって置換されてよく、かつ前述のシクロヘキシル又は芳香族炭化水素が、低級アルキル、低級−アルケニル、低級−アルキニル、ジオキソ−低級−アルキレン（例えば、ベンゾジオキシル基を形成する）、ハロゲン、ヒドロキシ、ＣＮ、ＣＦ３、ＮＨ２、Ｎ（Ｈ、低級−アルキル）、Ｎ（低級−アルキル）２、アミノカルボニル、カルボキシ、ＮＯ２、低級−アルコキシ、チオ−低級−アルコキシ、低級−アルキルスルホニル、アミノスルホニル、低級−アルキルカルボニル、低級−アルキルカルボニルオキシ、低級−アルコキシカルボニル、低級−アルキル−カルボニル−ＮＨ、フルオロ−低級−アルキル、フルオロ−低級−アルコキシ、低級−アルコキシ−カルボニル−低級−アルコキシ、カルボキシ−低級−アルコキシ、カルバモイル−低級−アルコキシ、ヒドロキシ−低級−アルコキシ、ＮＨ２−低級−アルコキシ、Ｎ（Ｈ、低級−アルキル）−低級−アルコキシ、Ｎ（低級−アルキル）２−低級−アルコキシ、低級−アルキル−１−オキシラニル−低級−アルコキシ−低級−アルキル、２−オキソ−ピロリジン−１−イル、（１，１−ジオキソ）−２−イソチアゾリジン、３−低級−アルキルスルフィニル、置換又は無置換複素環式環、置換又は無置換アリール環、置換又は無置換ヘテロアリール環、トリフルオロ−低級−アルキルスルホニルアミノ−アリール、低級−アルキルスルホニルアミノカルボニル、低級−アルキルスルホニルアミノカルボニル−アリール、ヒドロキシカルバモイル−フェニル、ベンジルオキシ−低級−アルコキシ、モノ−又はジ−低級アルキル置換アミノ−スルホニル及びハロゲン、ヒドロキシ、ＮＨ２、Ｎ（Ｈ、低級アルキル）又はＮ（低級アルキル）２で置換されてもよい低級−アルキルから独立に選択される基により一度又は二度置換可能である、５〜１０員の単環式又は二環式芳香族炭化水素であり；
ｎは、０又は１である。
【００６７】
更に別の好ましい実施態様では、式Ｉａの化合物が提供され、
ここで、
Ｒ６は（ＣＨ２）ｎ−Ｒ’であり、
Ｒ’は、それぞれ無置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシカルボニル、カルボキシ、カルボキシＣ１−６アルコキシ、オキソ及びＣＮから独立して選択される置換基により一度又は二度置換可能である、フェニル、ピリジニル、ピラジニル又はピリミジニルであり；
ｎは０である。
【００６８】
特に好ましいのは、式Ｉａの化合物であり、以下から選択される。
ｒａｃ−４−（｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−メチル）−シクロヘキサンカルボン酸メチルエステル、
ｒａｃ−４−（｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−メチル）−シクロヘキサンカルボン酸、
ｒａｃ−４−（｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−メチル）−２−メトキシ−安息香酸メチルエステル、
ｒａｃ−４−（｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−メチル）−２−メトキシ−安息香酸、
ｒａｃ−４−（｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−メチル）−２−フルオロ−安息香酸メチルエステル、
ｒａｃ−４−（｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−メチル）−２−フルオロ−安息香酸、
キラル５−（｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−メチル）−ピリジン−２−カルボン酸メチルエステル、
キラル５−（｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−メチル）−ピリジン−２−カルボン酸、
キラル６−（｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−メチル）−ニコチン酸エチルエステル、
キラル６−（｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−メチル）−ニコチン酸、
ｒａｃ−４−｛［（２Ｒ、３Ｓ、４Ｒ、５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−２，２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−２−エトキシ−安息香酸、
キラル（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸（４−ヒドラジノカルボニル−フェニル）−アミド、
キラル［２−（４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−フェニル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、
キラル（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸［４−（２−アミノ−エチル）−フェニル］−アミド、
キラル５−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−ピラジン−２−カルボン酸、
キラル４−（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−シアノ−５−ネオペンチルピロリジン−２−カルボキサミド）メチル）−２−メトキシ安息香酸、
キラル−４−（｛［（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−
シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−メチル）−２−メトキシ−安息香酸、
キラルメチル３−（４−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−シアノ−５−ネオペンチルピロリジン−２−カルボキサミド）フェニル）プロパノアート、
キラル３−（４−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−シアノ−５−ネオペンチルピロリジン−２−カルボキサミド）フェニル）プロパン酸、
キラル−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３−（３−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−シアノ−５−ネオペンチルピロリジン−２−カルボキサミド）メチル）−２−フルオロ安息香酸、
キラル４−（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−シアノ−５−ネオペンチルピロリジン−２−カルボキサミド）メチル）−２−フルオロ安息香酸、
キラル（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−シアノ−Ｎ−（２−モルホリノピリミジン−５−イル）−５−ネオペンチルピロリジン−２−カルボキサミド、
キラル（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−シアノ−５−ネオペンチル−Ｎ−（ピリミジン−５−イル）ピロリジン−２−カルボキサミド、
キラル（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸（４−ジメチルアミノメチル−フェニル）−アミド、（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸（４−ジメチルアミノメチル−フェニル）−アミド、
キラルメチル５−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−シアノ−５−ネオペンチルピロリジン−２−カルボキサミド）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−カルボキシラート、
キラル−５−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−シアノ−５−ネオペンチルピロリジン−２−カルボキサミド）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−カルボン酸、
キラル−メチル５−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−シアノ−５−ネオペンチルピロリジン−２−カルボキサミド）ベンゾフラン−２−カルボキシラート、
キラル−５−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−シアノ−５−ネオペンチルピロリジン−２−カルボキサミド）ベンゾフラン−２−カルボン酸、
キラル−メチル４−（４−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−シアノ−５−ネオペンチルピロリジン−２−カルボキサミド）フェニル）ブタノアート、
キラル−４−（４−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−シアノ−５−ネオペンチルピロリジン−２−カルボキサミド）フェニル）ブタン酸、
キラルメチル５−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−シアノ−５−ネオペンチルピロリジン−２−カルボキサミド）ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−カルボキシラート、
キラル−５−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−シアノ−５−ネオペンチルピロリジン−２−カルボキサミド）ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−カルボン酸、
キラル−（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−Ｎ−（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−５−イル）−３−（３−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−シアノ−５−ネオペンチルピロリジン−２−カルボキサミド、
ｒａｃ−（４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−ベンジル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、
ｒａｃ−（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸（４−アミノメチル−フェニル）−アミド、
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸［４−（メタンスルホニルアミノ−メチル）−フェニル］−アミド、
１−（４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−フェニル）−ピペリジン−４−カルボン酸エチルエステル、
１−（４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−フェニル）−ピペリジン−４−カルボン酸、
ｒａｃ−（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸（４−ジメチルアミノメチル−フェニル）−アミド、
ｒａｃ−５−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−２−ピロリジン−１−イル−安息香酸、
ｒａｃ−４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−４−メチル−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、
ｒａｃ−（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸（４−メチル−ピペリジン−４−イル）−アミド、
ｒａｃ−（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸（１−メタンスルホニル−４−メチル−ピペリジン−４−イル）−アミド、
メチル１−（４−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−シアノ−５−ネオペンチルピロリジン−２−カルボキサミド）フェニル）ピロリジン−２−カルボキシラート、
１−（４−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−シアノ−５−ネオペンチルピロリジン−２−カルボキサミド）フェニル）ピロリジン−２−カルボン酸、
キラル５−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸、
キラル５−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸エチルエステル、
キラル（Ｒ）−２−（４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−フェニル）−酪酸、
キラル（Ｓ）−２−（４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−フェニル）−酪酸、
キラル（Ｓ）−２−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−チアゾール−４−イル−プロピオン酸メチルエステル、
キラル（Ｓ）−２−｛［（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−チアゾール−４−イル−プロピオン酸メチルエステル、
キラル（Ｓ）−２−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−チアゾール−４−イル−プロピオン酸、
キラル（Ｓ）−２−｛［（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−チアゾール−４−イル−プロピオン酸、
キラル４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸、
ｒａｃ（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸（５−ヨード−ピリジン−２−イル）−アミド、
２−クロロ−４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−安息香酸、
６−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−ニコチン酸、
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸ピリジン−２−イルアミド、
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸ピリジン−４−イルアミド、
５−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−ピリジン−２−カルボン酸、
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸ピリジン−３−イルアミド、
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸（４−ヨード−３，５ジメチル−フェニル）−アミド、
４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−２−フルオロ−安息香酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、
４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−２−フルオロ−安息香酸、
４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−フルオロ−安息香酸、
４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−２−トリフルオロメチル−安息香酸、
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸（４−ヨード−２−トリフルオロメトキシ−フェニル）−アミド、
４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−トリフルオロメトキシ−安息香酸メチルエステル、
４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−トリフルオロメトキシ−安息香酸、
６−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−ニコチン酸、
６−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−ニコチン酸メチルエステル、
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸（６−ヨード−ピリジン−３−イル）−アミド、
５−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−ピリジン−２−カルボン酸メチルエステル、
４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸メチルエステル、
４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸、
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸（６−カルバモイル−ナフタレン−２−イル）−アミド、
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸（４−カルバモイル−３−クロロ−フェニル）−アミド、
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸（４−カルバモイル−３−トリフルオロメチル−フェニル）−アミド、
５−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−ピリジン−２−カルボン酸、
４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−フルオロ−安息香酸メチルエステル、
４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−クロロ−安息香酸メチルエステル、
４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−クロロ−安息香酸、
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸（４−カルバモイル−２−フルオロ−フェニル）−アミド、
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸（４−カルバモイル−２−メトキシ−フェニル）−アミド、
４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−２，５−ジフルオロ−安息香酸メチルエステル、
４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−２，５−ジフルオロ−安息香酸、
４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−２，５−ジフルオロ−安息香酸、
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸（４−カルバモイル−３−トリフルオロメチル−フェニル）−アミド、
４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−２，６−ジフルオロ−安息香酸、
４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−ヒドロキシ−安息香酸、
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸（４−カルバモイル−３−メトキシ−フェニル）−アミド、
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸（４−カルバモイル−３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−アミド、
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸（４−カルバモイル−３−フルオロ−フェニル）−アミド、
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸（４−カルバモイル−２−クロロ−フェニル）−アミド、
４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−２−フルオロ−５−メトキシ−安息香酸メチルエステル、
４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−２−フルオロ−５−メトキシ−安息香酸、
２−（４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−フェニル）−４−メチル−ペンタン酸、
キラル２−（４−｛［（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−フェニル）−２−メチル−プロピオン酸メチルエステル、
キラル２−（４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−フェニル）−２−メチル−プロピオン酸、
キラル（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸［４−（１−メチル−１−メチルカルバモイル−エチル）−フェニル］−アミド、
キラル（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸｛４−［１−（３−ヒドロキシ−プロピルカルバモイル）−１−メチル−エチル］−フェニル｝アミド、及び
キラル（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボン酸［４−（１−カルバモイル−１−メチル−エチル）−フェニル］−アミド。
【００６９】
本明細書において、様々な基が、低級アルキル、低級−アルケニル、低級−アルキニル、ジオキソ−低級−アルキレン（例えば、ベンゾジオキシル基を形成する）、ハロゲン、ヒドロキシ、ＣＮ、ＣＦ３、ＮＨ２、Ｎ（Ｈ、低級−アルキル）、Ｎ（低級−アルキル）２、アミノカルボニル、カルボキシ、ＮＯ２、低級−アルコキシ、チオ−低級−アルコキシ、低級−アルキルスルホニル、アミノスルホニル、低級−アルキルカルボニル、低級−アルキルカルボニルオキシ、低級−アルコキシカルボニル、低級−アルキル−カルボニル−ＮＨ、フルオロ−低級−アルキル、フルオロ−低級−アルコキシ、低級−アルコキシ−カルボニル−低級−アルコキシ、カルボキシ−低級−アルコキシ、カルバモイル−低級−アルコキシ、ヒドロキシ−低級−アルコキシ、ＮＨ２−低級−アルコキシ、Ｎ（Ｈ、低級−アルキル）−低級−アルコキシ、Ｎ（低級−アルキル）２−低級−アルコキシ、低級−アルキル−１−オキシラニル−低級−アルコキシ−低級−アルキル、２−オキソ−ピロリジン−１−イル、（１，１−ジオキソ）−２−イソチアゾリジン、３−低級−アルキルスルフィニル、置換又は無置換複素環式環、置換又は無置換アリール環、置換又は無置換ヘテロアリール環、トリフルオロ−低級−アルキルスルホニルアミノ−アリール、低級−アルキルスルホニルアミノカルボニル、低級−アルキルスルホニルアミノカルボニル−アリール、ヒドロキシカルバモイル−フェニル、ベンジルオキシ−低級−アルコキシ、モノ−又はジ−低級アルキル置換アミノ−スルホニル及びハロゲン、ヒドロキシ、ＮＨ２、Ｎ（Ｈ、低級アルキル）又はＮ（低級アルキル）２からなる群から独立に置換される１〜５個、好ましくは、１〜３個の置換基で置換されていてもよい。シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環の好ましい置換基は、ハロゲン、低級アルコキシ、低級アルキル、ヒドロキシカルボニル、カルボキシ、カルボキシ低級アルコキシ、オキソ及びＣＮである。アルキルの好ましい置換基は、アルコキシ及びＮ（低級アルキル）２である。
【００７０】
用語「アルキル」は、１から約７の炭素原子を有する基を含み、１から約２０の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖飽和炭化水素基を指す。特定の実施態様では、アルキル置換基は低級アルキル置換基であってもよい。用語「低級アルキル」は、１から６の炭素原子を有するアルキル基を指し、特定の実施態様においては１から４の炭素原子を有するアルキル基を指す。アルキル基の例には、限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、及びｓ−ペンチルが含まれる。
【００７１】
本明細書で使用される「シクロアルキル」は、炭素原子のみからなり、何れの環も飽和されている任意の安定な単環系又は多環系を指すことを意図しており、用語「シクロアルケニル」は、炭素原子のみからなり、その少なくとも一つの環が部分的に不飽和である任意の安定な単環系又は多環系を指すことを意図している。シクロアルキルの例には、限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、アダマンチル、シクロオクチル、［２．２．２］ビシクロオクタン又は［３．３．０］ビシクロオクタンなどのビシクロオクタン、［４．３．０］ビシクロノナンなどのビシクロノナン、及び［４．４．０］ビシクロデカン（デカリン）などのビシクロデカンを含むビシクロアルキル、又はスピロ化合物が含まれる。シクロアルケニルの例には、限定されないが、シクロペンテニル又はシクロヘキセニルが含まれる。
【００７２】
本明細書で使用される用語「アルケニル」は、一つの二重結合を含み、２から６の、好ましくは２から４の炭素原子を有する、直鎖又は分岐鎖不飽和脂肪族炭化水素基を意味する。このような「アルケニル基」の例として、ビニルエチニル、アリル、イソプロペニル、１−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、２−エチル−１−ブテニル、３−メチル−２−ブテニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、４−ペンテニル、４−メチル−３−ペンテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、４−ヘキセニル、及び５−ヘキセニルが挙げられる。
【００７３】
本明細書で使用される用語「アルキニル」は、一つの三重結合を含み、２から６の、好ましくは２から４の炭素原子を有する、直鎖又は分岐鎖不飽和脂肪族炭化水素基を意味する。このような「アルキニル基」の例として、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、３−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−ペンチニル、４−ペンチニル、１−ヘキシニル、２−ヘキシニル、３−ヘキシニル、４−ヘキシニル及び５−ヘキシニルが挙げられる。
【００７４】
定義において使用される用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素、好ましくはフッ素及び塩素を意味する。
【００７５】
「アリール」は、一価の単環又は二環式芳香族炭素環式炭化水素基、好ましくは６から１０員の芳香環系を意味する。好ましいアリール基には、限定されないが、フェニル、ナフチル、トリル、及びキシリルが含まれる。アリール基が二環式である場合、好ましい基は１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−イル基である。
【００７６】
「ヘテロアリール」は、２つ以下の環を含有する芳香族複素環系を意味する。好ましいヘテロアリール基には、限定されないが、チエニル、フリル、インドリル、ピロリル、ピリジニル、ピラジニル、オキサゾリル、チアキソリル（ｔｈｉａｘｏｌｙｌ）、キノリニル、ピリミジニル、イミダゾール、置換又は無置換のトリアゾリル、及び置換又は無置換のテトラゾリルが含まれる。
【００７７】
二環式のアリール又はヘテロアリールの場合、一つの環がアリールであり他方の環がヘテロアリールであり、且つ両方の環が置換又は無置換であり得る。
【００７８】
「ヘテロ環」又は「複素環」は、１から３の炭素原子が窒素、酸素又は硫黄原子から選択されるヘテロ原子により置き換えられている、置換又は無置換の５から８員の単環又は二環式の非芳香族炭化水素を意味する。例には、ピロリジン−２−イル；ピロリジン−３−イル；ピペリジニル；モルホリン−４−イルなどが含まれ、これらは順に置換することができる。「ヘテロ原子」は、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される原子を意味する。
【００７９】
「アルコキシ、アルコキシル又は低級アルコキシ」は、酸素原子に結合した上記低級アルキル基の何れかを指す。典型的な低級アルコキシ基には、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ又はプロポキシ、ブチルオキシなどが含まれる。アルコキシの意味に更に含まれるものとしては、複数のアルコキシ側鎖、例えばエトキシエトキシ、メトキシエトキシ、メトキシエトキシエトキシなど、及び置換アルコキシ側鎖、例えばジメチルアミノエトキシ、ジエチルアミノエトキシ、ジメトキシ−ホスホリルメトキシなどがある。
【００８０】
薬学的に許容される担体、賦形剤等の「薬学的に許容される」とは、特定の化合物が投与される対象に対して薬理学的に許容され、実質的に非毒性であることを意味する。
【００８１】
「薬学的に許容される塩」は、本発明の化合物の生物学的有効性及び特性を保持しており、かつ好適な非毒性の有機酸若しくは無機酸又は有機塩基若しくは無機塩基から形成される一般的な酸付加塩又は塩基付加塩を指す。酸付加塩の例には、無機酸、例えば塩化水素酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸及び硝酸から誘導されるもの、並びに、有機酸、例えばｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、トリフルオロ酢酸などから誘導されるものが含まれる。塩基付加塩の例には、アンモニウム、カリウム、ナトリウム及び第４級アンモニウム水酸化物、例えばテトラメチルアンモニウム水酸化物から誘導されるものが含まれる。薬学的化合物（すなわち薬物）の塩への化学的修飾は、化合物の物理的及び化学的安定性、吸湿性、流動性及び溶解性の向上を得るための、薬剤師にとって周知の技法である。例えば、Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (6th Ed. 1995)の196頁及び1456- 1457頁を参照。
【００８２】
少なくとも１つの不斉炭素原子を有する式Ｉ又はＩａの化合物並びにそれらの塩は、ラセミ混合物又は異なる立体異性体として存在してもよい。種々の異性体は、既知の分離方法、例えばクロマトグラフィーによって単離可能である。
【００８３】
本明細書に開示され、Ｉａ上記の式Ｉに包含される化合物は、互変異性又は構造異性を示すことがある。本発明は、これら化合物のあらゆる互変異性若しくは構造的異性形態又はこのような形態の混合物を包含し、上述の式で表される何れか一の互変異性又は構造異性形態に限定されない。
【００８４】
最も好ましくは、ＭＤＭ２阻害剤は、下の式の４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸、又はその塩、エステル若しくは多形体である。国際公開第２０１１／０９８３９８号の実施例４４８には、前記化合物の製造方法が記載されている。前記化合物はまた、本明細書中で同義語として使用されるＭＤＭ２（４）又はＲＧ７３８８又はＲＯ５５０３７８１と命名される。
0006612362.tif 000010
本発明によるＭＤＭ２阻害剤の調製は、国際公開第２０１１／０９８３９８号に開示されているように実施される。
【００８５】
「塩」は、薬学的に許容される塩としての化合物の塩を指す。このような塩は、アルカリ金属（カリウム、ナトリウムなど）との塩、アルカリ土類金属（カルシウム、マグネシウム等）との塩、アンモニウム塩、薬学的に許容される有機アミン（テトラメチルアンモニウム、トリエチルアミン、メチルアミン、ジメチルアミン、シクロペンチルアミン、ベンジルアミン、フェネチルアミン、ピペリジン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、リジン、アルギニン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミンなど）との塩、及び酸付加塩（無機酸塩（塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩など）、及び有機酸塩（酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、安息香酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、イセチオン酸塩、グルクロン酸塩、グルコン酸、など））により例示され得る。
【００８６】
「ＩＣ５０」は、測定された比活性の５０％を阻害するために必要な特定の化合物の濃度を指す。
【００８７】
オリゴ糖成分は、物理的安定性、プロテアーゼ攻撃に対する耐性、免疫系との相互作用、薬物動態及び特異的の生物活性を含む、治療用糖タンパク質の効果と関連する特性に有意に影響を及ぼし得る。このような特性は、オリゴ糖の存在又は非存在だけでなく、その特異的構造にも依存し得る。オリゴ糖構造と糖タンパク質機能との間で幾つかの一般化がなされ得る。例えば、あるオリゴ糖構造は、特異的な糖結合タンパク質との相互作用により血流からの糖タンパク質の急速なクリアランスを仲介するが、他のオリゴ糖構造は、抗体によって結合され、望ましくない免疫反応を誘発し得る（Jenkins, N., et al., Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981）。
【００８８】
哺乳動物細胞は、ヒトへの応用に最も適合する形態でタンパク質をグリコシル化する能力により、治療用糖タンパク質の製造のための優れた宿主である（Cumming, D.A., et al., Glycobiology 1 (1991) 115-130; Jenkins, N., et al., Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981）。細菌は非常に希にしかタンパク質をグリコシル化せず、酵母、糸状菌、昆虫及び植物細胞などの他の種類の一般的な宿主と同様に、血流からの迅速な排除、望ましくない免疫相互作用、及び何らかの特定の場合では、生物活性の低下に関与するグリコシル化パターンを生じる。哺乳類細胞のうちで、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞は、過去２０年間で最も一般的に用いられてきた。適切なグリコシル化パターンを与えることに加えて、こうした細胞は、遺伝子的に安定で高度に生産的なクローン性細胞株を一貫して生産することを可能にする。こうした細胞は、無血清培地を用いて単純なバイオリアクター中で高密度まで培養することが可能で、安全かつ再現可能なバイオプロセスの開発を可能にする。他の一般的に用いられる動物細胞は、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、ＮＳＯ−及びＳＰ２／０マウス骨髄腫細胞を含む。より最近では、トランスジェニック動物由来の生産も試験されている（Jenkins, N., et al., Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981）。
【００８９】
全ての抗体は重鎖定常領域の保存された位置に糖鎖構造を含有し、各アイソタイプはＮ結合型糖鎖構造の異なるアレイを保有し、これがタンパク質の集合、分泌又は機能活性に様々に影響する（Wright, A., and Morrison, S.L., Trends Biotech. 15 (1997) 26-32）。結合したＮ結合型糖鎖の構造は、プロセシングの程度によって相当に異なり、高マンノース型、多分岐型及び二分岐複合オリゴ糖を含み得る（Wright, A., and Morrison, S.L., Trends Biotech. 15 (1997) 26-32）。典型的には、モノクローナル抗体でさえ複数のグリコフォームとして存在するように、特定のグリコシル化部位にて結合したコアオリゴ糖構造の不均質なプロセシングが存在する。同様に、抗体のグリコシル化における主要な相違が細胞株間で生じ、異なる培養条件下で増殖した所定の細胞株については更に僅かな差異も見られる（Lifely, M.R., et al., Glycobiology 5 (1995) 813-822）。
【００９０】
単純な生産プロセスを維持し、有意な望ましくない副作用を潜在的に回避しながら、効力を大きく増加させる一つの方法は、Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180及び米国特許第６６０２６８４号に記載されるように、そのオリゴ糖成分を操作することにより、モノクローナル抗体の天然の細胞媒介性エフェクター機能を亢進させることである。がん免疫療法において最もよく使用される抗体であるＩｇＧ１型抗体は、保存されたＮ結合型グリコシル化部位を各ＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に有する糖タンパク質である。Ａｓｎ２９７と結合している二つの複合二分岐オリゴ糖はＣＨ２ドメインの間に埋もれて、ポリペプチド骨格との広範な接触を形成しており、該オリゴ糖の存在は、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）のようなエフェクター機能を抗体が媒介するために必須である（Lifely, M.R., et al., Glycobiology 5 (1995) 813-822; Jefferis, R., et al., Immunol. Rev. 163 (1998) 59-76; Wright, A. and Morrison, S.L., Trends Biotechnol. 15 (1997) 26-32）。
【００９１】
β（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（「ＧｎＴＩＩＩ７ｙ」）、すなわち二分されたオリゴ糖の形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼのチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞における過剰発現が、操作されたＣＨＯ細胞により産生される抗神経芽腫キメラモノクローナル抗体（ｃｈＣＥ７）のｉｎ  ｖｉｔｒｏＡＤＣＣ活性を有意に増加させることが以前に示された（内容全体が参照により本明細書に援用される、Umana, P. et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180；及び国際公開第９９／１５４３４２号を参照のこと）。抗体ｃｈＣＥ７は、高い腫瘍親和性及び特異性を有するが、ＧｎＴＩＩＩ酵素を欠く標準的な工業用細胞株において産生された場合、殆ど効力を有さず臨床的に有用ではない非コンジュゲートモノクローナル抗体の大きなクラスに属する（Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180）。その研究は、二分岐非フコシル化オリゴ多糖を含む、定常領域（Ｆｃ）に結合した二分岐オリゴ糖の割合の増加も引き起こす、ＧｎＴＩＩＩを発現するように、抗体産生細胞を操作することにより、天然に存在する抗体に見出されるレベルを超えて、ＡＤＣＣ活性の大幅な増加が達成され得ることを最初に示したものである。
【００９２】
本明細書で使用される用語「がん」は、リンパ腫、リンパ性白血病、肺がん、非小細胞肺（ＮＳＣＬ）がん、細気管支肺胞上皮細胞肺がん、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部がん、皮膚黒色腫又は眼球内黒色腫、子宮がん、卵巣がん、直腸がん、肛門領域のがん、胃がん（stomach cancer）、胃がん（gastric cancer）、結腸がん、乳がん、子宮がん、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、食道がん、小腸がん、内分泌系のがん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟組織の肉腫、尿道がん、陰茎がん、前立腺がん、膀胱がん、腎臓又は尿管のがん、腎細胞癌、腎盂癌、中皮腫、肝細胞がん、胆道がん、中枢神経系（ＣＮＳ）の腫瘍、脊椎腫瘍、脳幹神経膠腫、多形神経膠芽腫、星状細胞腫、シュワン腫、上衣腫、髄芽腫、髄膜腫、扁平上皮癌、下垂体腺腫（任意の上記がんの難治性型、又は上記がんの一又は複数の組み合せを含む）を含む。一実施態様では、がんという用語はＣＤ２０を発現するがんを指す。
【００９３】
用語「ＣＤ２０抗原の発現」とは、腫瘍又はがんにそれぞれ由来し、好ましくは非固形腫瘍に由来する、Ｔ細胞又はＢ細胞、より好ましくはＢ細胞の細胞内、好ましくは細胞表面での、ＣＤ２０抗原の発現の有意なレベルを示すことが意図されている。「ＣＤ２０を発現するがん」の患者は、当該技術分野において知られている標準的なアッセイにより決定され得る。例えば、ＣＤ２０抗原発現は、免疫組織化学的（ＩＨＣ）検出を用いて、ＦＡＣＳ又は対応するｍＲＮＡのＰＣＲに基づく検出により測定され得る。
【００９４】
用語「ＣＤ２０を発現するがん」は、本明細書で用いる場合、がん細胞がＣＤ２０抗原の発現を示す全てのがんを指す。本明細書において使用されるＣＤ２０を発現するがんは好ましくは、リンパ腫（好ましくはＢ−細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ））及びリンパ性白血病を指す。このようなリンパ腫及びリンパ性白血病は、例えば、ａ）濾胞性リンパ腫、ｂ）小型非切れ込み核細胞性リンパ腫／バーキットリンパ腫（地方病性バーキットリンパ腫、散発性バーキットリンパ腫及び非バーキットリンパ腫を含む）、ｃ）辺縁帯リンパ腫（節外性辺縁帯Ｂ細胞性リンパ腫（粘膜関連リンパ組織リンパ腫、ＭＡＬＴ）、節性辺縁帯Ｂ細胞性リンパ腫及び脾臓辺縁帯リンパ腫を含む）、ｄ）マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ｅ）大細胞型リンパ腫（Ｂ細胞びまん性大細胞型リンパ腫（ＤＬＣＬ）、びまん性混合細胞型リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、縦隔原発Ｂ細胞性リンパ腫、血管中心性リンパ腫−肺性Ｂ細胞性リンパ腫を含む）、ｆ）ヘアリー細胞白血病、ｇ）リンパ球性リンパ腫、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、ｈ）急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、Ｂ細胞性前リンパ性白血病、ｉ）形質細胞腫瘍、形質細胞性骨髄腫、多発性骨髄腫、形質細胞腫、ｊ）ホジキン病を含む。
【００９５】
一実施態様では、ＣＤ２０を発現するがんはＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。別の実施態様では、ＣＤ２０を発現するがんは、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞びまん性大細胞型リンパ腫（ＤＬＣＬ）、バーキットリンパ腫、ヘアリー細胞白血病、濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫、辺縁帯リンパ腫、移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、ＨＩＶ関連リンパ腫、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、又は原発性中枢神経系リンパ腫である。
【００９６】
用語「治療方法」、「治療の方法」又はこの同義語は、例えばがんに適用される場合、患者におけるがん細胞の数を減少又は消滅させるように、又はがんの症状を緩和するように設計された手順又は行動方針を指す。がん又は他の増殖性疾患の「治療方法」は、がん細胞若しくは他の疾患が実際に取り除かれること、細胞の数若しくは疾患が実際に低減されること、又はがん若しくは他の疾患の症状が実際に緩和されることを必ずしも意味しない。がんを治療する方法はしばしば、成功の可能性が低くても実施されるが、患者の病歴及び推定生存能力を考慮すると、それでも全体的に有利な作用過程を誘導するとみなされている。
【００９７】
用語『併用（combination）』、「共投与（co-administration）」又は「共投与すること（ｃo-administering）」は、前記Ｉ型抗ＣＤ２０抗体又は前記アフコシル化抗ＣＤ２０と、前記Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗体ＭＤＭ２阻害剤の、２つの別個の製剤として（又は単一の製剤として）の投与を指す。共投与は、同時であっても又は任意の順序で逐次的であってもよいが、両方（又は全て）の活性剤がそれらの生物活性を同時に発揮する期間があることが好ましい。前記Ｉ型抗ＣＤ２０抗体又は前記抗ＣＤ２０アフコシル化抗体と、前記Ｂｃｌ−２阻害剤及び前記ＭＤＭ２阻害剤は、同時に又は逐次的に（持続的な注入を通じて静脈内（ｉ．ｖ．）経由でに同時投与される（一つは抗ＣＤ２０抗体であり、最終的にもう一つは前記Ｂｃｌ−２阻害剤及び前記ＭＤＭ２阻害剤である；又は例えば抗ＣＤ２０抗体が持続注入を通じて静脈内（ｉ．ｖ．）投与され、前記Ｂｃｌ−２阻害剤及び前記ＭＤＭ２阻害剤が経口投与される）。両方の治療剤が逐次的に共投与される場合、用量は、同じ日に２回の別々の投与で投与されるか、又は一方の薬剤が１日目に投与され、第２の薬剤が  ２日目から７日目、好ましくは２日目から４日目に共投与される。よって一実施態様では、用語「逐次的に」なる用語は、第１の成分（抗ＣＤ２０抗体又は前記Ｂｃｌ−２阻害剤及び前記ＭＤＭ２阻害剤）の投薬後７日以内、好ましくは第１の成分の投薬後４日以内を意味し；用語「同時に」とは同じ時点でを意味する。前記Ｉ型抗ＣＤ２０抗体又は前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体と、前記Ｂｃｌ−２阻害剤及び前記ＭＤＭ２阻害剤の維持用量に関して「共投与」なる用語は、治療サイクルが双方の薬物に適している場合、例えば毎週、該維持用量が同時に共投与され得ることを意味する。あるいは、前記Ｂｃｌ−２阻害剤及び前記ＭＤＭ２阻害剤は、例えば１日から３日毎に投与され、上記アフコシル化抗体は毎週投与される。あるいは、維持用量が、１日以内か数日以内に、逐次的に共投与される。
【００９８】
抗体が、研究者、獣医師、医師、又は他の臨床医により求められる、組織、系、動物、又はヒトの生物学的又は医学的応答を誘発するであろう各化合物の量又は併用量である「治療的に有効な量」（又は単に「有効量」））で患者に投与されることは自明である。
【００９９】
前記Ｉ型抗ＣＤ２０抗体又は前記抗ＣＤ２０アフコシル化抗体と、前記Ｂｃｌ−２阻害剤及び前記ＭＤＭ２阻害剤との共投与の量並びに共投与のタイミングは、治療される患者のタイプ（人種、性別、年齢、体重等）及び状態、並びに治療される疾患又は状態の重症度に依存するであろう。前記Ｉ型抗ＣＤ２０抗体又は前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体と、前記Ｂｃｌ−２阻害剤及び前記ＭＤＭ２阻害剤は、適切には１回で又は一連の治療で、例えば同じ日に又は後の日に、患者に共投与される。
【０１００】
投与が静脈内である場合、前記Ｉ型抗ＣＤ２０抗体、前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体、又は前記Ｂｃｌ−２阻害剤及び前記ＭＤＭ２阻害剤の初期注入時間は、続く注入時間より長くてもよく、例えば初期注入が約９０分で、以後の注入が約３０分でもよい（初期注入が十分に許容される場合）。
【０１０１】
疾患のタイプと重篤度に応じて、約０．１ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ）の前記Ｉ型抗ＣＤ２０抗体又はアフコシル化抗ＣＤ２０抗体；及び約１μｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ）の前記Ｂｃｌ−２阻害剤及び前記ＭＤＭ２阻害剤が、患者への両薬物の共投与の初期候補投与量である。一実施態様では、前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体（好ましくはアフコシル化Ｂ−Ｌｙ１抗体、より好ましくはオビヌツズマブ）の好ましい投与量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇの範囲であろう。よって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、又は３０ｍｇ／ｋｇ（又はその任意の組み合わせ）の一又は複数の用量が患者に共投与され得る。
【０１０２】
一実施態様では、前記Ｂｃｌ−２阻害剤（好ましくは、４−（４−｛［２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エン−１−イル］メチル｝ピペラジン−ｌ−イル）−２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−Ｎ−（｛４−［（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチル）アミノ］−３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］フェニル｝スルホニル）ベンズアミド又はその塩若しくは多形体）の好ましい投与量は約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇの範囲であろう。よって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、又は３０ｍｇ／ｋｇ（又はその任意の組合せ）の一又は複数の用量が患者に共投与され得る。
【０１０３】
一実施態様では、前記ＭＤＭ２阻害剤（好ましくは、４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸又はその塩若しくは多形体）の好ましい投与量は約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇの範囲であろう。よって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、又は３０ｍｇ／ｋｇ（又はその任意の組合せ）の一又は複数の用量が患者に共投与され得る。
【０１０４】
患者のタイプ（種、性、年齢、体重など）と症状、及びＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはリツキシマブ、又はアフコシル化抗ＣＤ２０抗体のタイプ、好ましくはアフコシル化ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体、より好ましくはオビヌツズマブに応じて、前記Ｉ型抗ＣＤ２０抗体又は前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体の投与量及び投与スケジュールは、前記Ｂｃｌ−２阻害剤及び前記ＭＤＭ２阻害剤とは異なり得る。例えば、上Ｉ型抗ＣＤ２０抗体又は前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体は、例えば一週間毎から３週間毎に投与されてよく、前記Ｂｃｌ−２阻害剤及び前記ＭＤＭ２阻害剤は毎日又は２から１０日毎に投与されてもよい。初期の高用量後に一又は複数の低用量をまた投与してもよい。
【０１０５】
一実施態様では、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体（好ましくはリツキシマブ）の好ましい投与量は、８週間の投与サイクルの１日目、８日目、１５日目、２２日目、２９日目、３６日目、４３日目、５０日目、５７日目に約１００ｍｇ／ｍ２から約１０００ｍｇ／ｍ２の範囲であろう。
【０１０６】
一実施態様では、前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体（好ましくは、アフコシル化ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体、より好ましくは、オビヌツズマブ）の好ましい投与量は、３から６週投与サイクルの１、８、１５日目に８００から１６００ｍｇ（一実施態様では８００から１２００ｍｇ）、ついで９回までの３から４週投与サイクルの１日目に４００から１２００ｍｇ（一実施態様では８００から１２００ｍｇ）であろう。
【０１０７】
一実施態様では、前記Ｂｃｌ−２阻害剤は上記のＢｃｌ−２阻害剤からなる群から選択され、好ましくは、４−（４−｛［２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エン−１−イル］メチル｝ピペラジン−ｌ−イル）−２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−Ｎ−（｛４−［（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチル）アミノ］−３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］フェニル｝スルホニル）ベンズアミドであり、該Ｂｃｌ−２阻害剤の用量は以下の通りである。本発明による前記用量は、経口投与として１日１回又は１日おきに１０ｍｇ／ｋｇから７０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは２０ｍｇ／ｋｇから５５ｍｇ／ｋｇである。
【０１０８】
一実施態様では、前記ＭＤＭ２阻害剤は上記のＭＤＭ２阻害剤からなる群から選択され、好ましくは、４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸であり、該ＭＤＭ２阻害剤の用量は以下の通りである。本発明による前記用量は、経口投与として１日１回又は１日おきに１０ｍｇ／ｋｇから７０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは２０ｍｇ／ｋｇから５５ｍｇ／ｋｇである。
【０１０９】
推奨される用量は、更に化学療法剤が共投与されるかどうかによって、かつ化学療法剤の種類に基づいて変化し得る。
【０１１０】
特定の実施態様では、本発明は、がん、好ましくはＣＤ２０を発現するがんに罹患している患者における転移又は更なる播種性転移を予防又は低減するために有用である。本発明は、生存期間、無増悪生存期間、応答率又は奏功期間により測定して、このような患者の生存期間を延長するため、このような患者の無増悪生存期間を延長するため、奏功期間を延長するため、治療対象患者の統計的に有意かつ臨床的に意味のある改善をもたらすために有用である。好ましい一実施態様では、本発明は、一群の患者において応答率を上昇させるために有用である。
【０１１１】
本発明の文脈において、付加的な他の細胞傷害性剤、化学療法剤若しくは抗癌剤、又はかかる薬剤の作用を亢進させる化合物若しくは電離放射線（例えばサイトカイン）が、がんのＩ型抗ＣＤ２０抗体又は前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体とＢｃｌ−２阻害剤及び前記ＭＤＭ２阻害剤の併用治療において使用され得る。かかる分子は、適切には、意図される目的に対して効果的な量で組み合わされて存在する。一実施態様では、前記Ｉ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはリツキシマブ又は前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体、好ましくはアフコシル化ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体、より好ましくはオビヌツズマブ、及び前記Ｂｃｌ−２阻害剤及び前記ＭＤＭ２阻害剤の併用治療は、かかる付加的細胞傷害性剤、化学療法剤若しくは抗がん剤、又はかかる薬剤の効果を亢進する化合物なしで使用される。
【０１１２】
かかる付加的薬剤は、例えば、アルキル化剤又はアルキル化作用を有する薬剤；例えば、シクロホスファミド（ＣＴＸ；例：シトキサン（登録商標））、クロラムブシル（ＣＨＬ；例：ロイケラン（登録商標））、シスプラチン（ＣｉｓＰ；例：プラチノール（登録商標））、ブスルファン（例：ミレラン（登録商標））、メルファラン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ストレプトゾトシン、トリエチレンメラミン（ＴＥＭ）、マイトマイシンＣ、及び類似のもの；代謝拮抗剤、例えば、メトトレキサート（ＭＴＸ）、エトポシド（ＶＰ１６；例：べプシド（登録商標））、６−メルカプトプリン（６ＭＰ）、６−チオグアニン（ｔｈｉｏｃｇｕａｎｉｎｅ）（６ＴＧ）、シタラビン（Ａｒａ−Ｃ）、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、カペシタビン（例：ゼローダ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）及び類似のもの；抗生物質、例えばアクチノマイシンＤ、ドキソルビシン（ＤＸＲ；例：アドリアマイシン（登録商標））、ダウノルビシン（ダウノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン及び類似のもの；アルカロイド、例えば、ビンクリスチン（ＶＣＲ）、ビブラスチン等のビンカアルカロイド及び同類のもの；及び他の抗腫瘍剤、例えば、パクリタキセル（例：タキソール（登録商標））、及びパクリタキセル誘導体、細胞増殖抑制剤、デキサメタゾン（ＤＥＸ；例：デカドロン（登録商標））等のグルココルチコイド、及びプレドニゾン等のコルチコステロイド、ヒドロキシウレア等のヌクレオシド酵素阻害剤、アスパラギナーゼ等のアミノ酸除去酵素、ロイコボリン及び他の葉酸誘導体、並びに類似の様々な抗腫瘍剤を含む。以下の薬剤も、付加的薬剤として使用されてもよい：アミホスチン（ａｒｎｉｆｏｓｔｉｎｅ）（例：エチオール（登録商標））、ダクチノマイシン、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、ストレプトゾシン、シクロホスファミド、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、ドキソルビシン リポ（例：ドキシル（登録商標））、ゲムシタビン（例：ジェムザール（登録商標））、ダウノルビシン リポ（例：ダウノキソーム（登録商標））、プロカルバジン、マイトマイシン、ドセタキセル（例：タキソテール（登録商標））、アルデスロイキン、カルボプラチン、オキサリプラチン、クラドリビン、カンプトセシン、ＣＰＴ １１（イリノテカン）、１０−ヒドロキシ ７−エチル−カンプトセシン（ＳＮ３８）、フロクスウリジン、フルダラビン、イホスファミド、イダルビシン、メスナ、インターフェロンベータ、インターフェロン アルファ、ミトキサントロン、トポテカン、ロイプロリド、メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、プリカマイシン、ミトタン、ペグアスパルガーゼ、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、タモキシフェン、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、チオテパ、ウラシルマスタード、ビノレルビン、クロラムブシル。一実施態様では、アフコシル化抗ＣＤ２０抗体及び前記Ｂｃｌ−２阻害剤及び前記ＭＤＭ２阻害剤併用治療は、このような付加的薬剤なしで使用される。
【０１１３】
化学療法レジメンにおける上記細胞傷害性剤及び抗がん剤、並びにプロテインキナーゼ阻害剤のような抗増殖性標的特異的抗がん剤の使用は、一般に、がん治療の分野において特徴が明らかにされており、本明細書におけるその使用も、耐性及び有効性のモニタリング並びに投与経路及び投与量の制御について、いくらか調節した上で、同様に考慮される。例えば、細胞傷害性剤の実際の投与量は、組織培養法を用いて決定される患者の培養細胞応答に応じて変動し得る。一般的に、投与量は、付加的な他の薬剤の非存在下で使用される量と比較して低減される。
【０１１４】
有効な細胞傷害性剤の典型的な投与量は、製造者によって推奨される範囲であってよく、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ反応又は動物モデルにおける応答により示される場合最大約１桁までの範囲で濃度又は量を減らすことができる。従って、実際の投与量は、医師の判断、患者の状態、及び初代培養悪性細胞若しくは組織培養組織試料のｉｎ  ｖｉｔｒｏ応答性か、又は適切な動物モデルにおいて観察される応答に基づく治療法の効果に依存するであろう。
【０１１５】
本発明の文脈では、ＣＤ２０を発現するがんの、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体又はアフコシル化抗ＣＤ２０抗体と、前記Ｂｃｌ−２阻害剤及び前記ＭＤＭ２阻害剤の併用治療に加えて、電離放射線の有効量が実施されてよく、及び／又は放射性医薬品が使用されてもよい。放射線源は、治療される患者にとって外部にあっても、内部にあってもよい放射線源が患者にとって外部にある場合、その療法は体外照射療法（ＥＢＲＴ）として知られている。放射線源が患者にとって内部にある場合、その治療は近接照射療法（ＢＴ）と称される。本発明の文脈で使用される放射性原子は、ラジウム、イットリウム−９０、セシウム−１３７、イリジウム−１９２、アメリシウム−２４１、金−１９８、コバルト−５７、銅−６７、テクネチウム−９９、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１及びインジウム−１１１を含むがこれらに限定されない群から選択され得る。抗体をこのような放射性同位体で標識することも可能である。一実施態様では、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体又はアフコシル化抗ＣＤ２０抗体と、前記Ｂｃｌ−２阻害剤及び前記ＭＤＭ２阻害剤の併用治療は、このような電離放射線なしで使用される。
【０１１６】
放射線療法は、切除不可能若しくは手術不可能な腫瘍及び／又は腫瘍転移を抑制するための標準的な治療である。放射線療法が化学療法と併用される場合に、改善した結果が見出されている。放射線療法は、標的領域に送達された高線量の放射線が腫瘍組織及び正常組織の両方において生殖細胞の死をもたらすという原理に基づいている。放射線投与レジメンは、一般的に、放射線吸収用量（Ｇｙ）、時間及び細分化の観点から定義され、がん専門医によって注意深く定められる必要がある。患者が受ける放射線量は、様々な考慮事項に依拠するが、２つの最も重要な点は、体の他の重要な構造又は臓器に対する腫瘍の位置、及び腫瘍が広がっている範囲である。放射線療法を受けている患者の典型的な治療過程は、１〜６週間で、患者に投与される総線量が１０〜８０Ｇｙで、１日の割合が約１．８〜２．０Ｇｙで、週に５日間という治療スケジュールである。この発明の好適な実施態様では、ヒト患者の腫瘍が本発明の併用治療と放射線で治療される場合に相乗作用がある。換言すれば、本発明の併用を含む薬剤による腫瘍増殖の阻害は、放射線と、場合により付加的な化学療法剤又は抗がん剤と組み合わせると増強される。アジュバント放射線療法のパラメータは、例えば国際公開第９９／６００２３号に含まれている。
【０１１７】
Ｉ型抗ＣＤ２０抗体又はアフコシル化抗ＣＤ２０抗体は、既知の方法に従って、ボーラスとして静脈内投与により、又は一定期間にわたる連続注入により、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑膜内、又は髄腔内経路により患者に投与される。一実施態様では、抗体の投与は静脈内投与又は皮下投与である。
【０１１８】
Ｂｃｌ−２阻害剤及びＭＤＭ２阻害剤は、既知の方法に従って、ボーラスとして静脈内投与により、又は一定期間にわたる連続注入により、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑膜内、又は髄腔内経路により患者に投与される。一実施態様では、前記Ｂｃｌ−２阻害剤及び前記ＭＤＭ２阻害剤の投与は、静脈内又は経口である。
【０１１９】
本明細書で用いられる場合、「薬学的に許容可能な担体」は、溶媒、分散媒体、コーティング、抗細菌及び抗真菌剤、等張及び吸収遅延剤、及び薬剤投与に適合する他の材料や化合物を含む医薬の投与に適合性のある任意かつ全ての物質を含むことが意図される。任意の媒体又は薬剤が活性化合物と非適合性である場合以外は、本発明の組成物におけるその使用が考えられる。補充の活性化合物もまた組成物中に導入することができる。
【０１２０】
薬学的組成物：
薬学的組成物は、本発明による抗ＣＤ２０抗体及び／又はＢｃｌ−２阻害剤及びＭＤＭ２阻害剤を、薬学的に許容される無機又は有機の担体と共に加工することにより得ることができる。ラクトース、コーンスターチ又はその誘導体、タルク、ステアリン酸又はその塩などを、例えば、錠剤、コーティングされた錠剤、ドラフェ及び硬質ゼラチンカプセルのためのこのような担体として使用することができる。軟質ゼラチンカプセルに適した担体は、例えば、植物油、ワックス、油脂、半固体及び液体ポリオールなどである。しかしながら、活性物質の性質に応じて、軟質ゼラチンカプセルの場合、通常は担体は必要とされない。溶液及びシロップ剤生成ための適切な担体は、例えば、水、ポリオール、グリセロール、植物油などである。坐剤に適した担体は、例えば、天然油又は硬化油、ワックス、油脂、半液状又は液体ポリオールなどである。
【０１２１】
薬学的組成物は、保存料、可溶化剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、香味剤、浸透圧を変えるための塩、緩衝液、マスキング剤、又は抗酸化剤を更に含有することができる。それらは、更に他の治療的に価値のある物質を含有することもできる。
【０１２２】
本発明の一実施態様では、組成物は、前記Ｉ型抗ＣＤ２０抗体（好ましくはリツキシマブ）又はフコース量が６０％以下である前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体（好ましくは、アフコシル化ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体、より好ましくはオビヌツズマブ）、及びがん、特にＣＤ２０を発現するがん（好ましくは、リンパ腫又はリンパ性白血病、より好ましくは、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞びまん性大細胞型リンパ腫（ＤＬＣＬ）、バーキットリンパ腫、ヘアリー細胞白血病、濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫、辺縁帯リンパ腫、移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、ＨＩＶ関連リンパ腫、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、又は原発性中枢神経系リンパ腫）の治療に使用するための前記Ｂｃｌ−２阻害剤及び前記ＭＤＭ２阻害剤の両方を含む。
【０１２３】
前記薬学的組成物は、一又は複数の薬学的に許容される担体を更に含んでもよい。
【０１２４】
本発明は更に、例えばがんに使用される薬学的組成物を提供し、この薬学的組成物は、（ｉ）Ｉ型抗ＣＤ２０抗体（好ましくはリツキシマブ）又はフコースの量が６０％以下である−アフコシル化抗ＣＤ２０抗体（好ましくはアフコシル化されたヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体）の有効な第１の量、及び（ｉｉ）Ｂｃｌ−２阻害剤及びＭＤＭ２阻害剤の有効な第２の量を含む。このような組成物は、任意選択的に、薬学的に許容される担体及び／又は賦形剤を含む。
【０１２５】
本発明に従って使用されるＩ型抗ＣＤ２０抗体又はアフコシル化抗ＣＤ２０抗体の薬学的組成物は、貯蔵のために、所望の純度を有する抗体を、任意選択的な薬学的に許容される担体、賦形剤又は安定剤と混合することにより、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態に調製される（Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. (ed.) (1980)）。許容される担体、賦形剤又は安定剤は、用いられる投与量及び濃度にてレシピエントに対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸のような緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチオルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；ベンザルコニウムクロリド、ベンゼトニウムクロリド；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチル又はプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジン；グルコース、マンノース又はデキストリンを含む単糖類、二糖類及び他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖類、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム、金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／又はＴＷＥＥＮＴＭ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭ若しくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤を含む。
【０１２６】
Ｂｃｌ−２阻害剤及びＭＤＭ２阻害剤の薬学的組成物は、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体又はアフコシル化抗ＣＤ２０抗体について上記したものと同様であり得る。
【０１２７】
小分子Ｂｃｌ−２阻害剤及びＭＤＭ２阻害剤の薬学的組成物は、経口投与、鼻腔内投与、局所（頬側及び舌下を含む）投与、直腸内投与、膣内投与及び／又は非経口投与に適したものを含む。組成物は、単位剤形で簡便に提供されてもよく、薬学の分野において良く知られた何れかの方法によって調製され得る。単一剤形を製造するために担体物質と組み合わせることができる活性成分の量は、治療されている宿主及び特定の投与様式によって様々であろう。通常、単一剤形を製造するために担体物質と組合わせることができる活性成分の量は、治療効果を生じさせるＢｃｌ−２阻害剤及びＭＤＭ２阻害剤の化合物の量である。一般的に、この量は、１００パーセントのうち約１パーセントから約９９パーセント、好ましくは約５パーセントから約７０パーセント、最も好ましくは約１０パーセントから約３０パーセントの活性成分の範囲であろう。このような組成物を調製する方法は、Ｂｃｌ−２阻害剤及びＭＤＭ２阻害剤を担体と、また、任意選択的に一又は複数の副成分と会合させる工程を含む。一般的に、Ｂｃｌ−２阻害剤及びＭＤＭ２阻害剤の薬学的組成物は、Ｂｃｌ−２阻害剤及びＭＤＭ２阻害剤を均一かつ密接に、液体担体若しくは微粉固体担体又はその両方と会合させ、次いで、必要に応じて生成物を成形することにより調製される。経口投与に適した組成物は、カプセル剤、カシェ剤、サシェ剤、丸薬、錠剤、トローチ剤（風味基剤、通常、ショ糖及びアカシア又はトラガカントを使用）粉末、顆粒の形態でもよく、或いは水性若しくは非水性液体中の溶液又は懸濁液として、或いは水中油型エマルジョン又は油中水型液体エマルジョンとして、或いはエリキシル剤若しくはシロップ剤として、或いは香錠（不活性基剤、例えば、ゼラチン及びグリセリン、又はスクロース及びアカシアを使用）として、及び／又は洗口剤等としてのものでもよく、これらはそれぞれ所定量のＢｃｌ−２阻害剤及びＭＤＭ２阻害剤を活性成分として含有している。Ｂｃｌ−２阻害剤及びＭＤＭ２阻害剤は、ボーラス、舐剤又はペーストとして投与されてもよい。
【０１２８】
本発明の更なる一実施態様では、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体又はアフコシル化抗ＣＤ２０抗体及びＭＤＭ２阻害剤は２つの別々の薬学的組成物に製剤化される。
【０１２９】
また、活性成分は、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、ミクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）において、又はマクロエマルジョンにおいて、例えば、コアセルベーション法により、又は界面重合（interracial polymerization）により調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル、及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセルに封入されてもよい。これらの技術は、RemingtonのPharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. (ed.) (1980)に開示されている。
【０１３０】
徐放性製剤が調製されてもよい。徐放性製剤の好適な例は、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスを含み、そのマトリックスが成形品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例は、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリラート）又はポリ（ビニルアルコール））、ポリ乳酸（米国特許第３７７３９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とガンマ−エチル−Ｌ−グルタメートとのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮＤＥＰＯＴＴＭ（乳酸−グリコール酸コポリマー及び酢酸ロイプロリドからなる注射用ミクロスフェア）のような分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸を含む。
【０１３１】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に用いられる製剤は滅菌されていなければならない。これは、滅菌濾過膜を通した濾過により容易に達成される。
【０１３２】
好ましくは、前記Ｉ型抗ＣＤ２０抗体はリツキシマブであり、又は前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体はヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体であり、前記Ｂｃｌ−２阻害剤は、４−（４−｛［２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エン−１−イル］メチル｝ピペラジン−ｌ−イル）−２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−Ｎ−（｛４−［（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチル）アミノ］−３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］フェニル｝スルホニル）ベンズアミド又はその塩若しくは多形体であり、前記ＭＤＭ２阻害剤は、４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸又はその塩若しくは多形体であり、前記がんはＣＤ２０を発現するがん、好ましくはリンパ腫又はリンパ性白血病である。
【０１３３】
一実施態様は、がんの治療のための、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体又はＡｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の６０％以下のフコース量でアフコシル化されたヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体の、４−（４−｛［２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エン−１−イル］メチル｝ピペラジン−ｌ−イル）−２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−Ｎ−（｛４−［（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチル）アミノ］−３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］フェニル｝スルホニル）ベンズアミド又はその塩若しくは多形体、及び４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸又はその塩若しくは多形体との組み合わせを含む薬学的組成物であり、ここで前記がんはＣＤ２０を発現するがん、好ましくはリンパ腫又はリンパ性白血病である。
【０１３４】
本発明は更に、がんの治療のための方法を提供し、この方法は、そのような治療を必要とする患者に対し、（ｉ）Ｉ型抗ＣＤ２０抗体又はフコースの量が６０％以下であるアフコシル化抗ＣＤ２０抗体（好ましくはアフコシル化されたヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体）の有効な第１の量；及び（ｉｉ）Ｂｃｌ−２阻害剤及びＭＤＭ２阻害剤の有効な第２の量を投与することを含む。
【０１３５】
一実施態様では、フコースの量は４０％から６０％である。
【０１３６】
好ましくは、前記がんはＣＤ２０を発現するがんである。
【０１３７】
好ましくは、前記ＣＤ２０を発現するがんは、好ましくはリンパ腫又はリンパ性白血病である。
【０１３８】
好ましくは、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体はリツキシマブである。
【０１３９】
好ましくは、前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体はＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である。
【０１４０】
好ましくは、前記抗体は、本明細書に開示されるヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である。
【０１４１】
好ましくは、前記抗体はオビヌツズマブである。
【０１４２】
好ましくは、前記Ｂｃｌ−２阻害剤は、４−（４−｛［２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エン−１−イル］メチル｝ピペラジン−ｌ−イル）−２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−Ｎ−（｛４−［（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチル）アミノ］−３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］フェニル｝スルホニル）ベンズアミド又はその塩若しくは多形体である。
【０１４３】
好ましくは、前記ＭＤＭ２阻害剤は、下の式の４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸、又はその塩若しくは多形体である。
【０１４４】
好ましくは、前記Ｉ型抗ＣＤ２０抗体はリツキシマブであり、又は前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体はヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体であり、前記Ｂｃｌ−２阻害剤は、４−（４−｛［２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エン−１−イル］メチル｝ピペラジン−ｌ−イル）−２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−Ｎ−（｛４−［（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチル）アミノ］−３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］フェニル｝スルホニル）ベンズアミド又はその塩若しくは多形体であり、前記ＭＤＭ２阻害剤は、４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸又はその塩若しくは多形体であり、前記がんはＣＤ２０を発現するがん、好ましくはリンパ腫又はリンパ性白血病である。
【０１４５】
本明細書において使用される用語「患者」は、好ましくは何らかの目的でＩ型抗ＣＤ２０抗体又はアフコシル化抗ＣＤ２０抗体による治療を必要とするヒト（例えばＣＤ２０を発現するがんに罹患した患者）、より好ましくはがん又は前がん状態若しくは病変を治療するためにこのような治療を必要とするヒトを指す。しかしながら、用語「患者」は、非ヒト動物、中でも好ましくはイヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ及び非ヒト霊長類を指すこともできる。
【０１４６】
本発明は更に、がんの治療において使用のための、フコースの量が６０％以下であるアフコシル化抗ＣＤ２０抗体、及びＢｃｌ−２阻害剤及びＭＤＭ２阻害剤を含む。
【０１４７】
好ましくは、前記Ｉ型抗ＣＤ２０抗体はリツキシマブである。
【０１４８】
好ましくは、前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体はヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である。
【０１４９】
好ましくは、前記アフコシル化ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体はオビヌツズマブである。
【０１５０】
好ましくは、前記Ｂｃｌ−２阻害剤は、４−（４−｛［２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エン−１−イル］メチル｝ピペラジン−ｌ−イル）−２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−Ｎ−（｛４−［（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチル）アミノ］−３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］フェニル｝スルホニル）ベンズアミド又はその塩若しくは多形体であり、前記ＭＤＭ２阻害剤は、４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸又はその塩若しくは多形体である。
【０１５１】
好ましくは、前記Ｉ型抗ＣＤ２０抗体はリツキシマブであり、又は前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体はヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体、より好ましくは、オビヌツズマブであり、前記Ｂｃｌ−２阻害剤は、４−（４−｛［２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エン−１−イル］メチル｝ピペラジン−ｌ−イル）−２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−Ｎ−（｛４−［（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチル）アミノ］−３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］フェニル｝スルホニル）ベンズアミド又はその塩若しくは多形体であり、前記ＭＤＭ２阻害剤は、４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸又はその塩若しくは多形体であり、前記がんはＣＤ２０を発現するがん、好ましくはリンパ腫又はリンパ性白血病である。
【０１５２】
以下の実施例及び図面は、本発明の理解を助けるために提示されるが、本発明の真の範囲は添付の特許請求の範囲に記載されている。本発明の精神から逸脱することなく、記載された手順で改変がなされ得る。
【０１５３】
配列表
配列番号１  マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体Ｂ−Ｌｙ１の重鎖（ＶＨ）の可変領域のアミノ酸配列。
配列番号２  マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体Ｂ−Ｌｙ１の軽鎖（ＶＬ）の可変領域のアミノ酸配列。
配列番号３−１９  ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＨ２〜Ｂ−ＨＨ９、Ｂ−ＨＬ８、及びＢ−ＨＬ１０〜Ｂ−ＨＬ１７）の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
配列番号２０  ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体Ｂ−ＫＶ１の軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列
【実施例】
【０１５４】
実験手順
実施例１：
実施例
ｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効果
ｂｃｌ−２阻害剤ＧＤＣ−０１９９及びＭＤＭ２阻害剤ＲＧ７３８８と併用するＣＤ２０特異的抗体のオビヌツズマブのｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を、ＤＯＨＨ２  ＤＬＢＣＬ異種移植片（ＣＤ２０＋、ｐ５３ｗｔ）に対して評価した。本明細書中で使用される場合、オビヌツズマブは、ＲＯ５０７２７５９及びＢ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１  ＧＥと同義に使用される。本明細書中で使用される場合、前記ｂｃｌ−２阻害剤ＧＤＣ−０１９９は以下の化合物である：４−（４−｛［２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エン−１−イル］メチル｝ピペラジン−ｌ−イル）−２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−Ｎ−（｛４−［（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチル）アミノ］−３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］フェニル｝スルホニル）ベンズアミド又はその塩若しくは多形体。本明細書中で使用される場合、前記ＭＤＭ２阻害剤ＲＧ７３８８は以下の化合物である：４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸又はその塩若しくは多形体。
【０１５５】
試験薬剤
ＣＤ２０抗体であるオビヌツズマブは、Ｒｏｃｈｅ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄからストック溶液として提供された。抗体緩衝液ははヒスチジンが含んでいた。抗体溶液を注射前のストックから緩衝液で適切に希釈した。ＭＤＭ２（４）阻害剤は、Ｒｏｃｈｅ、Ｂａｓｅｌ、ＳｗｉｔｚｅｒｌａｎｄからＳＤＰ製剤として提供され、使用前に再懸濁された。Ｂｃｌ−２阻害剤ＧＤＣ−０１９９は、ＧＮＥ、ＳＳＦ、ＵＳＡによって提供され、使用前に処方された。
【０１５６】
細胞株及び培養条件
元のＤＯＨＨ−２ヒトＢ細胞ＮＨＬ細胞株（ＤＬＢＣＬ）はＮＣＩで樹立され、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ）から購入した。移植のための腫瘍細胞の増殖は、プロトコールに従ってＴＡＰ  ＣｏｍｐａｃＴ  ＣｅｌｌＢａｓｅ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｒｏｂｏｔｅｒによって行った。腫瘍細胞株を、常套的に、ＲＰＭＩ１６４０培地、ＦＣＳ１０％及びＬ−グルタミン２ｍＭ中、３７℃、５％ＣＯ２の水飽和雰囲気中で培養した。培養継代は、トリプシン／ＥＤＴＡ １ｘスプリットを週２回、継代２を移植に用いて行った。
【０１５７】
動物
到着時に６〜７週齢の雌ＳＣＩＤベージュマウスは、特異的病原体を含まない条件下で、確約されたガイドラインに従って１２時間明／１２時間暗のサイクルで保持された。実験研究プロトコールが審査され、地方自治体により承認された。動物は、到着後１週間、新しい環境への馴致及び観察のために動物施設で保持された。継続的な健康モニタリングが定期的に実施された。規制食及びオートクレーブ水は自由に与えられた。
【０１５８】
モニタリング
動物は、臨床症状及び副作用の検出のために毎日管理された。実験を通してのモニタリングのために、動物の体重を記録した。
【０１５９】
動物の治療
腫瘍サイズの中央値が約２００ｍｍ３のときに無作為化後に動物の治療が開始された。ＣＤ２０抗体オビヌツズマブを、週１回１３日目、２１日目及び２７日目に、１０ｍｇ／ｋｇを腹腔内に単剤及び組み合わせて投与した。対応するビヒクルを同じ日に投与した。ＭＤＭ２（４）阻害剤ＲＧ７３８８の３０ｍｇ／ｋｇでの経口治療は、１３〜１７、２０〜２４及び２７〜２９日に単剤として及び組み合わせて行った。最後に、ｂｃｌ−２阻害剤ＧＤＣ−０１９９を、１３〜２９日目に１００ｍｇ／ｋｇで単剤として及び組み合わせで経口投与した。
【０１６０】
抗腫瘍効果
ＤＯＨＨ−２ヒトびまん性大Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）細胞（ＣＤ２０＋、ｐ５３ｗｔ）を、雌のＳＣＩＤベージュマウスにマトリゲルとともに皮下接種した。腫瘍を有するマウスを、１３日後に示された研究グループに無作為化し、化合物による治療を開始した。腫瘍を有する動物は、単剤として、ビヒクルコントロールで、ＭＤＭ２（４）阻害剤ＲＯ５５０３７８１（ＲＧ７３８８）を３０ｍｇ／ｋｇで、抗ＣＤ２０抗体オビヌツズマブを１０ｍｇ／ｋｇで、又はｂｃｌ−２阻害剤ＧＤＣ−０１９９（１００ｍｇ／ｋｇ）で処置された。更に、１つの研究群は、ＭＤＭ２阻害剤ＲＧ７３８８、ＣＤ２０抗体オビヌツズマブ及びｂｃｌ−２阻害剤ＧＤＣ−０１９９の三重併用を受けた。その結果、単剤として与えられた全ての化合物は、ＤＯＨＨ−２異種移植片に対して有意な抗腫瘍効果を示した。より詳細には、ＭＤＭ２（４）阻害剤ＲＯ５５０３７８１（ＲＧ７３８８）による治療は、コントロールと比較してｐ５３ｗｔ  ＤＯＨＨ２異種移植片に対して５６％の腫瘍増殖阻害をもたらした。同様の効果が、ｂｃｌ−２阻害剤ＧＤＣ−０１９９による治療後に認められるが（６０％ＴＧＩ）、一方単剤としての最良の効果は、抗ＣＤ２０抗体であるオビヌツズマブによる治療後に達成され、ほぼ腫瘍停止（ＴＧＩ ９０％）に到達した。しかしながら、ＭＤＭ２阻害剤ＲＧ７３８８＋ＣＤ２０抗体オビヌツズマブ＋ｂｃｌ−２阻害剤ＧＤＣ−０１９９を含む三重併用群では、優れた効果が観察された。より詳細には、三重併用アプローチは、初期に実質的に腫瘍退縮を誘導し、これは最終的に９０％に達し、３０％が完全な腫瘍寛解に達した。三重併用治療群の強力な効果は、それぞれの単剤治療群と比較して相乗的に優れていた。
0006612362.tif 000011
【０１６１】
実施例２
ｂｃｌ−２阻害剤ＧＤＣ−０１９９及びＭＤＭ２阻害剤ＲＧ７３８８と併用するＣＤ２０特異的抗体オビヌツズマブ。
【０１６２】
この実施例においても、ＣＤ２０特異的抗体であるオビヌツズマブは、ｂｃｌ−２阻害剤ＧＤＣ−０１９９及びＭＤＭ２阻害剤ＲＧ７３８８と併用して使用される。本明細書中で使用される場合、オビヌツズマブは、ＲＯ５０７２７５９及びＢ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１  ＧＥと同義に使用される。本明細書中で使用される場合、前記ｂｃｌ−２阻害剤ＧＤＣ−０１９９は以下の化合物である：４−（４−｛［２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エン−１−イル］メチル｝ピペラジン−ｌ−イル）−２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−Ｎ−（｛４−［（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチル）アミノ］−３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］フェニル｝スルホニル）ベンズアミド又はその塩若しくは多形体。本明細書中で使用される場合、前記ＭＤＭ２阻害剤ＲＧ７３８８は以下の化合物である：４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸又はその塩若しくは多形体。
【０１６３】
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体ＲＯ５０７２７５９（Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１  ＧＥ）、Ｂｃｌ−２特異的阻害剤ＧＤＣ−０１９９（Ａｂｔ−１９９、ＲＧ７６０１）及びＭＤＭ２アンタゴニストＲＧ７３８８（ＲＯ５５０３７８１）の併用治療の抗腫瘍活性。
試験薬剤
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１  ＧＥ（＝ヒト化Ｂ−Ｌｙ１、糖鎖操作Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１、国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号を参照）は、ＧｌｙｃＡｒｔ、Ｓｃｈｌｉｅｒｅｎ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄからヒスチジン、トレハロース及びポリソルベート２０緩衝液中でストック溶液（ｃ＝９．４ｍｇ／ｍｌ）として提供される。抗体を、ｉｎ−ｖｉｖｏ適用の前にＰＢＳで希釈した。
Ｂｃｌ−２阻害剤ＧＤＣ−０１９９は、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．、ＣＡ、ＵＳＡから得た。
ＭＤＭ２（４）アンタゴニストＲＧ７３８８（ＲＯ５５０３７８１）は、Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄの小分子プロセス研究開発ユニット（Ｓｍａｌｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｕｎｉｔ）によって提供された。
【０１６４】
細胞株及び培養条件
ヒトＺ１３８マントル細胞リンパ腫細胞株を、１０％ウシ胎児血清（ＰＡＡ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ａｕｓｔｒｉａ）及び２ｍＭのＬ−グルタミンを補充したＤＭＥＭ中、３７℃、５％ＣＯ２の水飽和大気中で培養した。ｉｎ−ｖｉｖｏ異種移植実験のために、細胞にマトリゲルを同時注入した。
【０１６５】
動物
到着時に４〜５週齢の雌ＳＣＩＤベージュマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、Ｓｕｌｚｆｅｌｄ、Ｇｅｒｍａｎｙから購入）を動物施設の隔離部分で１週間保持し、その後ガイドライン（ＧＶ−Ｓｏｌａｓ；Ｆｅｌａｓａ；ＴｉｅｒｓｃｈＧ）に従って、１２時間明／１２時間暗の毎日のサイクルで特定の病原体を含まない条件下で保持した。Ｒｏｃｈｅと地方自治体が実験的研究プロトコールをレビューし承認した（Ｒｅｇｉｅｒｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｏｂｅｒｂａｙｅｒｎ、登録番号５５．２−１−５４−２５３１．２−２６−０９）。規制食（ＫＬＩＢＡ  ＮＡＦＡＧ  ３８０７）及び水（濾過）は自由に与えられた。
【０１６６】
モニタリング
動物は、臨床症状及び副作用の検出のために毎日モニターされた。実験の間、動物の体重を週に２回確認し、腫瘍体積をノギスで測定した。
【０１６７】
動物の治療
動物の治療は腫瘍細胞接種の１８日後の無作為化の日に開始された。ヒト化ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体ＲＯ５０７２７５９  Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１  ＧＥ（オビヌツズマブ）を、単剤として腹腔内に（ｉ．ｐ．）ｑ７ｄで３週間週１回（１８、２５、３２日目）、０．５ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した。ｂｃｌ−２阻害剤ＧＤＣ−０１９９を経口で（ｐ．ｏ．）１９日間にわたり１日１回（１８日目〜３６日目）１００ｍｇ／ｋｇの投与量で与えた。ＭＤＭ２アンタゴニストＲＧ７３８８（ＲＯ５５０３７８１）を経口で（ｐ．ｏ．）１８日目から２２日目まで５日間にわたり１日１回、１００ｍｇ／ｋｇ（活性化合物）の投与量で与え、２５日目〜３６日目まで１２日間にわたり８０ｍｇ／ｋｇ（活性化合物）の投与量で投与した。２３日目及び２４日目には治療はなかった。併用群において、ＲＯ５０７２７５９  Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１  ＧＥ、ＭＤＭ２（４）及びＧＤＣ−０１９９を同じ投与量で同じ日に投与した。対応するビヒクルを同じ日に投与した。
【０１６８】
３２日目の腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）
ＲＯ５０７２７５９、ＧＤＣ−０１９９又はＲＧ７３８８（ＲＯ５５０３７８１）を用いた単独療法は、それぞれ４７％、５３％又は６７％の腫瘍増殖阻害をもたらした。ＲＯ５０７２７５９とＧＤＣ−０１９９又はＲＧ７３８８（ＲＯ５５０３７８１）との組み合わせは、それぞれ８５％又は８６％の腫瘍増殖阻害をもたらした。ＲＧ７３８８（ＲＯ５５０３７８１）とＧＤＣ−０１９９との組み合わせ及び三重併用は、腫瘍細胞接種後３２日目に腫瘍退縮（ＴＧＩ＞１００％）を示した。
【０１６９】
様々な治療の長期間の効果を解明するために、腫瘍細胞接種後１２５日目まで事象までの時間の分析を行った。三重併用は、１２５日目（試験終了）までに全ての動物において完全な腫瘍寛解をもたらした。ＲＧ７３８８（ＲＯ５５０３７８１）とＲＯ５０７２７５９の組み合わせは、５匹の腫瘍のない動物をもたらした（１０匹のうち５匹）。０．５ｍｇ／ｋｇの準最適用量でのＲＯ５０７２７５９単独療法は、研究終了時に２匹の腫瘍のない動物をもたらした。
【０１７０】
各群のパラメータ「事象までの時間の中央値」を表３に示す。
0006612362.tif 000012
【０１７１】
本明細書に開示され、配列表に添付されるように、以下の配列は本発明の一部である：
【０１７２】
配列
配列番号１
マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体Ｂ−Ｌｙ１の重鎖（ＶＨ）の可変領域のアミノ酸配列
Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｐｈｅ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ａｌａ
【０１７３】
配列番号２
マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体Ｂ−Ｌｙ１の軽鎖（ＶＬ）の可変領域のアミノ酸配列
Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｌｙｓ  Ａｒｇ
【０１７４】
配列番号３
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＨ２）の重鎖の可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Ｇｌｎ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｐｈｅ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ
【０１７５】
配列番号４  
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＨ３）の重鎖の可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Ｇｌｎ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｐｈｅ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ
【０１７６】
配列番号５
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＨ４）の重鎖の可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Ｇｌｎ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｐｈｅ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ
【０１７７】
配列番号６
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＨ５）の重鎖の可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Ｇｌｎ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｐｈｅ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ
【０１７８】
配列番号７  
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＨ６）の重鎖の可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Ｇｌｎ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ａｓｎ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｐｈｅ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ
【０１７９】
配列番号８
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＨ７）の重鎖の可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Ｇｌｎ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｐｈｅ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ
【０１８０】
配列番号９
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＨ８）の重鎖の可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Ｇｌｎ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｐｈｅ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ
【０１８１】
配列番号１０
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＨ９）の重鎖の可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Ｇｌｎ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｐｈｅ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ
【０１８２】
配列番号１１
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＬ８）の重鎖の可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｐｈｅ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ
【０１８３】
配列番号１２
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＬ１０）の重鎖の可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｐｈｅ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ
【０１８４】
配列番号１３  
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＬ１１）の重鎖の可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Ｇｌｎ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｐｈｅ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ
【０１８５】
配列番号１４
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＬ１２）の重鎖の可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｐｈｅ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ
【０１８６】
配列番号１５
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＬ１３）の重鎖の可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｐｈｅ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ
【０１８７】
配列番号１６
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＬ１４）の重鎖の可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｐｈｅ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ
【０１８８】
配列番号１７
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＬ１５）の重鎖の可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｐｈｅ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ
【０１８９】
配列番号１８
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＬ１６）の重鎖の可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｐｈｅ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ
【０１９０】
配列番号１９
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＬ１７）の重鎖の可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列
Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｐｈｅ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ
【０１９１】
配列番号２０
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体Ｂ−ＫＶ１の軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列
Ａｓｐ  Ｉｌｅ  Ｖａｌ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｇｌｎ  Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｌｙｓ  Ａｒｇ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ
【図１】
0006612362.tif 000013
【図２】
0006612362.tif 000014
【図３】
0006612362.tif 000015
【配列表】
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