(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式（Ｉ）で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩であって、
【化１】
0006473518.tif 000039
そのうち、Ｒ１、Ｒ２はそれぞれ独立した水素であり、Ｒ３は水素又はＣ１〜Ｃ３アルキルであり、Ａｒはナフタレン環、ピリジン環、チオフェン環、フラン環及び置換若しくは非置換のベンゼン環から選択される芳香環又はヘテロ芳香環であり、
前記置換若しくは非置換のベンゼン環は、下記構造を有し、
【化２】
0006473518.tif 000040
そのうち、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は、水素、Ｃ１〜Ｃ７アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ハロゲンによって任意に置換されるＣ１〜Ｃ３アルコキシ、ハロゲンによって任意に置換されるＣ１〜Ｃ３アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ及びフェニルからなる群からそれぞれ独立に選択される、化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
前記薬学的に許容可能な塩は、塩基付加塩である、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３】
前記化合物は、下記化学式（ＩＩ）で表される構造を有し、
【化３】
0006473518.tif 000041
そのうち、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は水素、Ｃ１〜Ｃ７アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ハロゲンによって任意に置換されるＣ１〜Ｃ３アルコキシ、ハロゲンによって任意に置換されるＣ１〜Ｃ３アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ及びフェニルからなる群からそれぞれ独立に選択される、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４】
前記化合物は、下記化合物１〜化合物２４からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【表１】
0006473518.tif 000042
【請求項５】
請求項１に記載の化合物の製造方法であって、下記ステップ１〜ステップ６を含み、
ステップ１：下記化合物と、
【化４】
0006473518.tif 000043
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタールを加熱還流して縮合させ、下記式（ＩＩＩ）の化合物を生成し、
【化５】
0006473518.tif 000044
ステップ２：アンモニウム塩、触媒及び溶媒の存在下で、ステップ１で得られた中間体（ＩＩＩ）と下記構造を有するＲ３置換のアシル酢酸メチルエステルを縮合させて中間体（ＩＶ）を生成し、
【化６】
0006473518.tif 000045
【化７】
0006473518.tif 000046
ステップ３：臭素化反応の開始剤及び溶媒の存在下で、ステップ２で得られた中間体（ＩＶ）のメチル又はメチレン基を臭素化して、臭化物中間体（Ｖ）を生成し、
【化８】
0006473518.tif 000047
ステップ４：塩基の触媒作用及び溶媒の存在下で、ステップ３で得られた中間体（Ｖ）を、トシルグリシンメチルエステルを用いて置換させ、ｐ−トルエンスルホニル中間体（ＶＩ）を生成し、
【化９】
0006473518.tif 000048
ステップ５：ステップ４で得られた中間体（ＶＩ）をアルカリ性条件下で環化させ、５−ヒドロキシ−１，７−ナフチリジンギ酸メチルエステル中間体（ＶＩＩ）を生成し、
【化１０】
0006473518.tif 000049
ステップ６：密閉加熱、アルカリ性条件下で、ステップ５で得られた中間体（ＶＩＩ）のギ酸メチルエステルをグリシンに置換することで化学式（Ｉ）の化合物を生成し、
そのうち、Ｒ３及びＡｒは請求項１と同じである、化合物の製造方法。
【請求項６】
前記ステップ１において、溶媒としてトルエン、キシレンを使用し、
前記ステップ２において、アンモニウム塩は炭酸アンモニウム、炭酸水素アンモニウム、塩化アンモニウム、酢酸アンモニウムから選択され、触媒は塩化セリウム（ＩＩＩ）、Ｓｎ（ＩＶ）Ｃｌ４、Ｔｉ（ＩＶ）Ｃｌ４、Ｚｎ（ＩＩ）Ｃｌ２、Ａｌ（ＩＩＩ）Ｃｌ３、トリフッ化ホウ素エチルエーテルから選択され、反応溶媒はエタノール、メタノール、イソプロパノール、ｔ−ブタノールから選択され、
前記ステップ３において、臭素化試薬はＮ−ブロモスクシンイミド、ジブロモヒダントイン、臭化銅（ＩＩ）、液体臭素から選択され、臭素化反応の開始剤はアゾビスイソニトリル、過酸化ベンゾイルから選択され、臭素化反応の溶媒はテトラクロロメタン、ジクロロメタン及びクロロホルムからなる群より選択され、
前記ステップ４において、塩基は炭酸カリウム、炭酸セシウム、炭酸ナトリウムから選択され、反応溶媒はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシドから選択され、反応温度は２０〜８０℃であり、
前記ステップ５において、塩基はナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムｔ−ブトキシド、ナトリウムｔ−ブトキシドから選択され、反応溶媒はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、メタノール、エタノール及びテトラヒドロフランからなる群より選択され、反応温度は０℃〜４０℃であり、反応時間は０．５時間〜３時間であり、
前記ステップ６において、塩基はナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムｔ−ブトキシド及びナトリウムｔ−ブトキシドからなる群から選択され、反応溶媒はメタノール、エタノール、イソプロパノール及びブタノールからなる群から選択され、反応温度は８０℃〜１４０℃である、請求項５に記載の化合物の製造方法。
【請求項７】
治療有効量で請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩、及び薬学的に許容可能な担体を含んでなる、医薬組成物。
【請求項８】
ＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼを阻害するための医薬品の製造における、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
【請求項９】
内因性ＥＰＯの生成を促進するための医薬品の製造における、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
【請求項１０】
低酸素誘導因子αを安定させるための医薬品の製造における、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
【請求項１１】
慢性疾患に伴う貧血を治療するための医薬品の製造における、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
【請求項１２】
前記慢性疾患に伴う貧血が、リウマチ性関節炎、リウマチ熱又は炎症性腸疾患である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
炎症性サイトカインの生成を促進するための医薬品の製造における、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
【請求項１４】
前記炎症性サイトカインが、腫瘍壊死因子、インターロイキン又はインターフェロンである、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
貧血対象に対して外部からエリスロポエチンを投与する際の抵抗性を改善する医薬品の製造における、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用であって、
前記化合物の投与によって造血前駆細胞のエリスロポエチンに対する応答を改善する、使用。
【請求項１６】
鉄摂取、鉄輸送及び鉄利用率向上に必須な因子の生成を促進するための医薬品の製造における、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用であって、
前記因子は、赤芽細胞アミノレブリン酸シンターゼ、トランスフェリン、トランスフェリン受容体及びセルロプラスミンからなる群より選択される、使用。
【請求項１７】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、ＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼを阻害する方法（但し、ヒトに対する医療行為を除く）。
【請求項１８】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、内因性ＥＰＯの生成を促進する方法（但し、ヒトに対する医療行為を除く）。
【請求項１９】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、低酸素誘導因子αを安定させるための方法（但し、ヒトに対する医療行為を除く）。
【請求項２０】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、慢性疾患に伴う貧血を治療するための方法（但し、ヒトに対する医療行為を除く）。
【請求項２１】
前記慢性疾患に伴う貧血がリウマチ性関節炎、リウマチ熱又は炎症性腸疾患である、請求項２０に記載の方法（但し、ヒトに対する医療行為を除く）。
【請求項２２】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、炎症性サイトカインの生成を促進する方法（但し、ヒトに対する医療行為を除く）。
【請求項２３】
前記炎症性サイトカインが腫瘍壊死因子、インターロイキン又はインターフェロンである、請求項２２に記載の方法（但し、ヒトに対する医療行為を除く）。
【請求項２４】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を投与すること含み、
前記投与によって造血前駆細胞のエリスロポエチンに対する応答を改善する、貧血対象に対して外部からエリスロポエチンを投与する際の抵抗性を改善する方法（但し、ヒトに対する医療行為を除く）。
【請求項２５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を投与することを含み、
前記投与によって鉄摂取、鉄輸送及び鉄利用率向上に必須な因子の生成を促進し、
前記因子は、赤芽細胞アミノレブリン酸シンターゼ、トランスフェリン、トランスフェリン受容体及びセルロプラスミンからなる群より選択される、鉄摂取、鉄輸送及び鉄利用率向上に必須な因子の生成を促進する方法（但し、ヒトに対する医療行為を除く）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医薬品の分野に関わり、具体的には、ＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼに対して阻害作用を示す新規なアリール又はヘテロアリール置換の５−ヒドロキシ−１，７−ナフチリジン化合物、その製造方法及び医薬用途に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
低酸素誘導因子（ｈｙｐｏｘｉａ  ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｆａｃｔｏｒ，ＨＩＦ）は塩基性ヘリックス−ループ−ヘリックス（ｂａｓｉｃ  ｈｅｌｉｘ−ｌｏｏｐ−ｈｅｌｉｘ，ｂＨＬＨ）及びＰＡＳ（Ｐｅｒ／Ａｒｎｔ／Ｓｉｍ）を含む活性化転写因子であり、生物細胞内において一連の遺伝子調節を経て細胞の低酸素状態に適応するものである（Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｒ．，Ｈａｒｄｙ，Ａ及びＳｃｈｏｆｉｅｌｄ，Ｃ．Ｊ．，人体酸素感知装置及びその操作（Ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓｅｎｓｉｎｇ  ｍａｃｈｉｎｅｒｙ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ）、Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｒｅｖ．，２００８，３７，１３０８〜１３１９頁；Ｋａｅｌｉｎ，Ｗ．Ｇ．，Ｊｒ．，及びＲａｔｃｌｉｆｆｅ，Ｐ．Ｊ．，後生動物による酸素センサー：ＨＩＦヒドロキシラーゼ経路における中心的役割（Ｏｘｙｇｅｎ  ｓｅｎｓｉｎｇ  ｂｙ ｍｅｔａｚｏａｎｓ：ｔｈｅ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＨＩＦ  ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ  ｐａｔｈｗａｙ）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ，２００８，３０，３９３〜４０２頁；Ｓｃｈｏｆｉｅｌｄ，Ｃ．Ｊ．，及びＲａｔｃｌｉｆｆｅ，Ｐ．Ｊ．，ＨＩＦヒドロキシラーゼを利用する酸素センサー（Ｏｘｙｇｅｎ  ｓｅｎｓｉｎｇ  ｂｙ  ＨＩＦ  ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅｓ）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，２００４，５，３４３〜３５４頁）。
【０００３】
１９９２年、Ｗａｎｇらがエリスロポエチン（ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｎｔｉｎ，ＥＰＯ）を研究する際に、低酸素状態となった細胞においてＥＰＯ生成を促進する活性化転写因子を発見し、後に該因子を低酸素誘導因子（以下、「ＨＩＦ」とも略称する）と名づけた。ＨＩＦは細胞の低酸素状態における適応性と生存率に極めて重要であり、細胞の酸素量が通常の２０％から１％に低下した場合であっても、ＨＩＦの作用下では細胞が生き残ることが、後の研究により実証されている。
【０００４】
ＨＩＦはＨＩＦ−αとＨＩＦ−βの２つの単位で構成され、ＨＩＦ−αは酸素依存性の分解ドメイン（ｏｘｙｇｅｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ｄｏｍａｉｎ，ＯＤＤＤ）を含み、該ドメインは細胞の酸素量を特定するために必須な構成単位である。ＨＩＦ−αはＨＩＦ−βと安定なダイマーを形成することができ、該ダイマーが細胞の核内に移行して糖代謝関連酵素、ＧＬＵＴ−１、エリスロポエチン及び血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）等といった重要な酵素又は酵素系の発現を促し、細胞が低酸素状態に適応できるようにする。ＨＩＦ−βは芳香族炭化水素受容体核内輸送体（ａｒｙｌ  ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｏｒ，ＡＲＮＴ）の一種であり、ＨＩＦ−αと結合してヘテロダイマーを形成し、下流遺伝子の転写を促進する。
【０００５】
現在、ＨＩＦ−１α、ＨＩＦ−２α、ＨＩＦ−３αの３種類のＨＩＦ−αサブタイプが発見されている。ＨＩＦ−１αは１９９５年にＷａｎｇらによって同定されたサブタイプであり、ヒトとマウスの複数箇所で発現する。ＨＩＦ−２αは１９９７年に単離、同定され、タンパク質配列がＨＩＦ−１αと４８％の類似性を示すと共に、ＨＩＦ−１αと似た機能を果たし、肺、内皮細胞及び頸動脈のみに発現する。ＨＩＦ−３αは最近になって新たに発見されたＨＩＦ−αサブタイプであり、該サブタイプに関する研究は未だ不十分である。
【０００６】
細胞内におけるＨＩＦ−αの発現は酸素含有量の影響を受けないが、通常の酸素量である場合であっても、細胞内におけるＨＩＦ−αの半減期は５分程度であり、安定に存在することができない。ＨＩＦ−αは低酸素状態に限って安定に存在し、下流の転写因子を活性化する役割を果たすことができる。一方、通常の酸素量の細胞内において、ＨＩＦ−αのＯＤＤＤ領域内における４０２番目と５６４番目の２つのプロリン残基が、プロリルヒドロキシラーゼによって４−ヒドロキシプロリンに酸化されることによってＨＩＦ−αとＨＩＦ−βとのダイマー形成を阻害すると同時に、ｐＶＨＬタンパク質と結合して速やかに分解され、低酸素環境に抵抗する機能を失ってしまう。ＨＩＦ−αの分解過程で重要な役割を果たすプロリルヒドロキシラーゼ（Ｐｒｏｌｙｌ  ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ、以下、「ＰＨＤ」又は「ＥＧＬＮ」とも略称する）は、２−ケトグルタル酸（２−ｏｘｏｇｌｕｔａｒａｔｅ，２−ＯＧ）依存性の酸素添加酵素である。ＰＨＤは２−ＯＧと二価鉄イオンを補因子とし、１個の酸素原子をプロリン分子の４位に結合させてヒドロキシプロリンを形成し、同時に２−ＯＧを１分子の二酸化炭素とコハク酸に変換する。２−ＯＧ類似体又は二価ニッケル、コバルト、マンガンイオンは、ＰＨＤによるＨＩＦ−αプロリン残基の酸化過程に拮抗してＨＩＦ−αの分解を抑制することができるため、ＨＩＦ−αとＨＩＦ−βとのダイマー形成を促して下流の転写因子を活性化させ、結果として低酸素環境に抵抗する機能を果たすことができる。ＰＨＤは３種のサブタイプに分けられ、それぞれＰＨＤ１、ＰＨＤ２及びＰＨＤ３である。更に、研究によってＰＨＤ１の抑制が骨格筋細胞の衰退の治療に有用であり、虚血状態において筋線維芽細胞を温存することにより炎症性腸疾患と大腸炎を治療することができ、並びに、心臓病及び腎臓病患者の心不全と虚血を治療できることが実証されている。一方、他の２種類のＰＨＤサブタイプについては、その機能において区分があるかどうかは未だ不明である。
【０００７】
ＨＩＦの１つの重要な役割は、生体内においてエリスロポエチン（ＥＰＯ）の発現を促進することである。ＥＰＯは糖タンパク質ホルモンであり、赤血球の増殖、分化及び成熟を刺激することができる。更に、ＥＰＯは、骨髄の造血機能を刺激して、赤血球数を適時且つ効果的に増加させ、血液の酸素運搬能を向上させることができ、同時に、生体の酸素に対する結合、輸送と供給能力を高めて低酸素状態を改善することができる。正常な生理状況においては、ＥＰＯは主に腎臓組織で合成されて放出されるため、腎不全患者は体内でＥＰＯを普通に合成できず、常に虚血症状に苦しめられる。ＥＰＯは、２０世紀の１９８０年代末にＡｍｇｅｎ社によって初めて製品化され、その後、慢性腎不全、エイズ、癌及び化学療法に起因する貧血の治療に利用されるようになっている。現在、ＥＰＯの製造と応用面で大きな進展を成し遂げているが、外因性ＥＰＯの供給応用は依然として幾つかの問題を抱えている。かかる問題として、例えば、１）ＥＰＯの使用費用が高く、長期使用の患者にとっては相当重い負担を強いられ、２）ＥＰＯは大分子量の糖タンパク質であるため生体利用度が低く、さらに生体内における半減期が短く、消化管内の酵素系によって分解されやすいといった特徴があり、ＥＰＯ注射によって頻繁に投与せざるを得ず、患者自らが適宜決めうる服用形態が制限され、患者に不便を感じさせ、３）産業規模で合成したＥＰＯは免疫原性の問題を回避できず、薬品使用に一定のリスクがある等が挙げられる。
【０００８】
外因性大分子量のＥＰＯは使用面において上記の多くの問題を抱えているため、低分子量のＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼ阻害剤の開発が急務となっている。よって、外因性ＥＰＯの使用の代わりにＨＩＦ−αの分解の抑制と、更に、生体内における内因性ＥＰＯの生成の促進により、患者により多くの選択肢をもたらすことが期待されている。
【０００９】
現在、Ａｋｅｂｉａ社のＡＫＢ−６５４８、Ｆｉｂｒｏｇｅｎ社のＦＧ−４５９２の２種類のＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼが既に第ＩＩ段階の試験段階に入っている（ＷＯ２０１２１７０３７７Ａ１，ＵＳ２０１０３３１３７４Ａ１，ＵＳ２０１０３０５０９７Ａ１，Ｐ＆ＧＵＳ２００７２９９０８６Ａ１，ＵＳ２００４２５４２１５Ａ１，ＵＳ２００７２９８１０４Ａ１，ＵＳ２００９０８２３５７Ａ１，ＵＳ２０１０１１３４４４Ａ１，ＷＯ２０１３１３４６６０，ＷＯ２０１００５９５５２Ａ１）。
【化１】
0006473518.tif 000002
【化２】
0006473518.tif 000003
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
したがって、本発明の１つの目的は、ＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼを阻害するアリール又はヘテロアリール置換の５−ヒドロキシ−１，７−ナフチリジン化合物及びその塩を提供することである。
【００１１】
本発明のもう１つの目的は、上記化合物の製造方法を提供することである。
【００１２】
本発明のもう１つの目的は、上記化合物又はその塩を含んでなる医薬組成物を提供することである。
【００１３】
更に、本発明のもう１つの目的は、上記化合物又はその塩の医薬品製造における用途を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明の目的は、以下の技術思想によって実現される。すなわち、下記化学式（Ｉ）で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩であって、
【化３】
0006473518.tif 000004
そのうち、Ｒ１、Ｒ２はそれぞれ独立した水素であり、Ｒ３は水素又はＣ１〜Ｃ３アルキルであり、Ａｒはナフタレン環、ピリジン環、チオフェン環、フラン環及び置換ベンゼン環から選択される芳香環又はヘテロ芳香環である。
【００１５】
Ａｒが置換ベンゼン環である場合、本発明に係る化合物は下記化学式（ＩＩ）で表される構造を有する。
【化４】
0006473518.tif 000005
そのうち、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は、水素、Ｃ１〜Ｃ７アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ハロゲンによって任意に置換されるＣ１〜Ｃ３アルコキシ、ハロゲンによって任意に置換されるＣ１〜Ｃ３アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ及びフェニルからなる群よりそれぞれ独立に選択される。
【００１６】
また、本発明は、上記の式（Ｉ）、（ＩＩ）で表される本発明に係る化合物の薬学的に許容可能な塩を提供する。本発明に係る化合物の薬学的に許容可能な塩としては、好ましくは、前記化合物と薬学的に許容可能な塩基とが反応して生成した薬学的に許容可能な塩基付加塩である。前記薬学的に許容可能な塩基としては、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸カリウム、水酸化マグネシウム、酸化マグネシウム、水酸化カルシウム、酸化カルシウム、ジエタノールアミン、リシン、エタノールアミン、ジエチルアミン、ピペラジン等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１７】
本発明において、特に好ましい化合物は、下記表１に示される化合物である。
【００１８】
【表１】
0006473518.tif 000006
【００１９】
本発明のもう１つの側面では、上記化学式（Ｉ）、（ＩＩ）で表される化合物の製造方法を提供し、該製造方法は、以下に示す反応経路で上記化学式（Ｉ）、（ＩＩ）の５−ヒドロキシ−１，７−ナフチリジン化合物を合成する。
【００２０】
【化５】
0006473518.tif 000007
【００２１】
具体的には、上記化学式（Ｉ）の化合物の製造方法は、以下のステップを含む。
【００２２】
ステップ１：下記化合物と、
【化６】
0006473518.tif 000008
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタールとを加熱還流して縮合させ、下記式（ＩＩＩ）の化合物を生成する。
【化７】
0006473518.tif 000009
【００２３】
ステップ２：ステップ１で得られた中間体（ＩＩＩ）と下記構造を有するＲ３置換のアシル酢酸メチルとを縮合させて中間体（ＩＶ）を生成する。
【化８】
0006473518.tif 000010
【化９】
0006473518.tif 000011
【００２４】
ステップ３：ステップ２で得られた中間体（ＩＶ）のメチル又はメチレン基を臭素化し、臭化物中間体（Ｖ）を生成する。
【化１０】
0006473518.tif 000012
【００２５】
ステップ４：ステップ３で得られた中間体（Ｖ）を、トシルグリシンメチルエステルを用いて置換させ、ｐ−トルエンスルホニル中間体（ＶＩ）を生成する。
【化１１】
0006473518.tif 000013
【００２６】
ステップ５：ステップ４で得られた中間体（ＶＩ）に対して、アルカリ性条件下でメチレン基を脱プロトン化させて炭素陰イオンを形成し、そして、炭素陰イオンを分子内におけるピリジン環上のカルボメトキシ基に接触させてケトンを形成し、並びに、アルカリ性条件下で速やかにｐ−トルエンスルホニル基を除去することで５−ヒドロキシ−１，７−ナフチリジンギ酸メチル中間体（ＶＩＩ）を生成する。
【化１２】
0006473518.tif 000014
【００２７】
ステップ６：ステップ５で得られた中間体（ＶＩＩ）のギ酸メチルをグリシンに置換することで化学式（Ｉ）の化合物を生成する。
【００２８】
以下、実施例の化合物２−｛５−ヒドロキシ−［２−（４−クロロ）フェニル］−１，７−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸を例示して上記反応を詳述する。
【００２９】
上記ステップ１において、置換基を有する４−クロロアセトフェノンとＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタールを加熱して２分子のメタノールを脱離することで縮合させ、３−ジメチルアミノ−１−（４−メトキシフェニル）プロペニルケトン（ＩＩＩ）を生成する。このとき、好ましい溶媒はトルエン、キシレンであり、反応は還流条件下で行う。
【００３０】
上記ステップ２において、３−ジメチルアミノ−１−（４−メトキシフェニル）プロペニルケトン（ＩＩＩ）とアセト酢酸メチルを、アンモニウム塩及び触媒の存在下で加熱縮合して６−（４−クロロフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステル（ＩＶ）を生成する。このとき、好ましいアンモニウム塩としては炭酸アンモニウム、炭酸水素アンモニウム、塩化アンモニウム、酢酸アンモニウム等が挙げられ、好ましい触媒としては塩化セリウム（ＩＩＩ）、Ｓｎ（ＩＶ）Ｃｌ４、Ｔｉ（ＩＶ）Ｃｌ４、Ｚｎ（ＩＩ）Ｃｌ２、Ａｌ（ＩＩＩ）Ｃｌ３、トリフッ化ホウ素エチルエーテル等のルイス酸が挙げられ、好ましいルイス酸促進剤はヨウ化ナトリウムであり、好ましい反応溶媒としてはエタノール、メタノール、イソプロパノール、ｔ−ブタノール等が挙げられ、反応は還流条件下で行う。
【００３１】
上記ステップ３において、６−（４−クロロフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステル（ＩＶ）のピリジン２位のメチルをラジカル反応によって臭素化する。このとき、臭素化試薬としてＮ−ブロモスクシンイミド、ジブロモヒダントイン、臭化銅（ＩＩ）、液体臭素などが好ましく、臭素化反応の開始剤としてアゾビスイソニトリル（ＡＩＢＮ）、過酸化ベンゾイル等が好ましく、臭素化反応の溶媒としてテトラクロロメタン、ジクロロメタン及びクロロホルムが好ましい。反応は還流しながら行い、臭化物中間体２−ブロモメチル−６−（４−クロロフェニル）ニコチン酸メチルエステル（Ｖ）を生成する。
【００３２】
上記ステップ４において、２−ブロモメチル−６−（４−クロロフェニル）ニコチン酸メチルエステル（Ｖ）を塩基の触媒作用下でＮ−トシルグリシンメチルエステルで置換し、６−（４−クロロフェニル）−２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝ニコチン酸メチル（ＶＩ）を生成する。このとき、好ましい塩基として炭酸カリウム、炭酸セシウム、炭酸ナトリウムが挙げられ、好ましい反応溶媒としてＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド等が挙げられ、好ましい反応温度は２０〜８０℃である。
【００３３】
上記ステップ５において、６−（４−クロロフェニル）−２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝ニコチン酸メチル（ＶＩ）をアルカリ性条件下で分子内環化させ、同時にｐ−トルエンスルホニル基を除去して２−（４−クロロフェニル）−５−ヒドロキシ−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステル（ＶＩＩ）を生成する。このとき、好ましい塩基としてはナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムｔ−ブトキシド、ナトリウムｔ−ブトキシドが挙げられ、好ましい反応溶媒としてはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、メタノール、エタノール、テトラヒドロフラン等が挙げられ、好ましい反応温度は０〜４０℃であり、好ましい反応時間は０．５〜３時間である。
【００３４】
上記ステップ６において、２−（４−クロロフェニル）−５−ヒドロキシ−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステル（ＶＩＩ）を密閉状態、アルカリ性条件下で加熱してグリシンと反応させ、２−（４−クロロフェニル）−５−ヒドロキシ−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルにおけるカルボン酸メチルエステルを直接ホルミルアミノアセトキシ基に置き換え、実施例１の目的産物である２−｛５−ヒドロキシ−［２−（４−クロロ）フェニル］−１，７−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸を生成する。このとき、好ましい塩基としてナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムｔ−ブトキシド、ナトリウムｔ−ブトキシド等が挙げられ、好ましい反応溶媒としてメタノール、エタノール、イソプロパノール、ブタノールが挙げられ、好ましい反応温度は８０〜１４０℃である。
【００３５】
また、本発明は、上記化学式（Ｉ）の５−ヒドロキシ−［１，７］ナフチリジン化合物を含んでなるＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼを抑制し、内因性ＥＰＯの生成を促進する、医薬組成物を提供する。本発明に係る組成物は、少なくとも１種の上記化学式（Ｉ）で表される５−ヒドロキシ−［１，７］ナフチリジン化合物又はその塩を含む。
【００３６】
本発明は、更に、上記化学式（Ｉ）、（ＩＩ）で表される本発明の化合物又はその薬学的に許容可能な塩のＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼを阻害するための医薬品、並びに、前記化合物の内因性ＥＰＯの生成を促進するための医薬品の製造における用途を提供する。また、本発明は、上記化学式（Ｉ）、（ＩＩ）で表される本発明の化合物の低酸素誘導因子αを安定させるための医薬品、上記化学式（Ｉ）、（ＩＩ）で表される本発明の化合物の慢性疾患に伴う貧血を治療するための医薬品の製造における用途を提供し、そのうち、前記慢性疾患に伴う貧血とはリウマチ性関節炎、リウマチ熱又は炎症性腸疾患を指す。また、本発明は、上記化学式（Ｉ）、（ＩＩ）で表される本発明の化合物の炎症性サイトカイン生成を促進するための医薬品の製造における用途を提供し、そのうち、前記炎症性サイトカインとは腫瘍壊死因子、インターロイキン又はインターフェロンを指すものである。また、本発明は、上記化学式（Ｉ）、（ＩＩ）で表される本発明の化合物の貧血の対象に対して、外部からエリスロポエチンを投与する際の抵抗性を改善する医薬品の製造における用途を提供し、そのうち、前記化合物の投与によって、造血前駆細胞の前記エリスロポエチンに対する反応を改善することができる。また、本発明は、上記化学式（Ｉ）、（ＩＩ）で表される本発明の化合物の鉄摂取、鉄輸送及び鉄利用率向上に必須な因子の生成を促進するための医薬品の製造における用途を提供し、そのうち、前記因子としては、赤芽細胞アミノレブリン酸シンターゼ、トランスフェリン、トランスフェリン受容体及びセルロプラスミンが挙げられる。
【００３７】
本発明は、更に、上記化学式（Ｉ）、（ＩＩ）で表される本発明の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を投与することによりＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼを阻害する方法、上記化学式（Ｉ）、（ＩＩ）で表される本発明の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を投与して内因性ＥＰＯの生成を促進する方法、上記化学式（Ｉ）、（ＩＩ）で表される本発明の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を投与することにより低酸素誘導因子αを安定させる方法、及び上記化学式（Ｉ）、ＩＩ）で表される本発明の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を投与して慢性疾患に伴う貧血を治療する方法を提供し、そのうち、前記慢性疾患に伴う貧血とは、リウマチ性関節炎、リウマチ熱又は炎症性腸疾患を指すものである。
【００３８】
本発明は、更に、上記化学式（Ｉ）、（ＩＩ）で表される本発明の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を投与することにより、炎症性サイトカイン生成を促進する方法を提供し、そのうち、前記炎症性サイトカインとは、腫瘍壊死因子、インターロイキン又はインターフェロンを指すものである。
【００３９】
本発明のもう１つの側面において、上記化学式（Ｉ）、（ＩＩ）で表される本発明の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を投与することにより、貧血対象に対して外部からエリスロポエチンを投与する際の抵抗性を改善する方法を提供し、そのうち、前記化合物の投与によって造血前駆細胞の前記エリスロポエチンに対する反応を改善することができる。本発明は、更に、上記化学式（Ｉ）、（ＩＩ）で表される本発明の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を投与することにより鉄摂取、鉄輸送及び鉄利用率の向上に必須な因子の生成を促進する方法を提供し、そのうち、前記因子として、赤芽細胞アミノレブリン酸シンターゼ、トランスフェリン、トランスフェリン受容体及びセルロプラスミンが挙げられる。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
以下、実施例を挙げて本発明を詳述する。以下の実施例は本発明を例示したに過ぎず、本発明の範囲を制限するものでなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲で種々の変更を加えることが可能である。
【００４１】
実施例１：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（４−クロロ）フェニル］−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の合成
【化１３】
0006473518.tif 000015
ステップ１：３−ジメチルアミノ−１−（４−メトキシフェニル）プロペニルケトンの製造
４−クロロアセトフェノン１０．０ｇ（６４．７ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール２３．１ｇ（１９４．１ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）及びキシレン５０ｍＬを還流しながら一晩（２１時間）反応させ、原料が完全に反応せずに少し残ったまま反応を停止させた。反応液を冷却してからキシレンを濃縮し、残留物に石油エーテル１５０ｍＬを加えて撹拌しながら固形物を析出させ、濾過して３−ジメチルアミノ−１−（４−メトキシフェニル）プロペニルケトンの黄色固形物を７．５ｇ、収率５５．５％で得た。
【００４２】
ステップ２：６−（４−クロロフェニル）−２−エチルニコチン酸メチルエステルの製造
３−ジメチルアミノ−１−（４−メトキシフェニル）プロペニルケトン３．８５ｇ（２０．０ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、プロピオニル酢酸メチル２．７９ｇ（２４．０ｍｍｏｌ，１．２Ｎ）、酢酸アンモニウム３．０８ｇ（４０．０ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水合物１．５ｇ（４．０ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）、ヨウ化ナトリウム６００ｍｇ（４．０ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）及びイソプロパノール３０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら一晩反応させた。反応液を冷却してから減圧濾過し、濾液を濃縮してカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより６−（４−クロロフェニル）−２−エチルニコチン酸メチルエステルの淡黄色結晶体を２．８ｇ、収率５８．３％で得た。
【００４３】
ステップ３：２−（１−ブロモエチル）−６−（４−クロロフェニル）ニコチン酸メチルエステルの製造
６−（４−クロロフェニル）−２−エチルニコチン酸メチル３．２ｇ（１２．２ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド２．３ｍｇ（１２．８ｍｍｏｌ，１．０５Ｎ）、アゾビスイソブチロニトリル２００．１ｍｇ（１．２２ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びテトラクロロメタン１５ｍＬを混合し、還流撹拌しながら６時間反応させた。反応液をそのままカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、２−（１−ブロモエチル）−６−（４−クロロフェニル）ニコチン酸メチルエステルの白色固形物を２．５ｇ、収率６０．２％で得た。
【００４４】
ステップ４：６−（４−クロロフェニル）−２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝ニコチン酸メチルエステルの製造
２−（１−ブロモエチル）−６−（４−クロロフェニル）ニコチン酸メチル１．５ｇ（４．４ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−トシルグリシンメチルエステル１．０ｇ（４．１８ｍｍｏｌ，０．９５Ｎ）、炭酸カリウム１．２２ｇ（８．８１ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、ヨウ化ナトリウム６７ｍｇ（０．４４ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド８ｍＬを混合し、５０℃で８時間反応させた。反応液に水１０ｍＬを入れて希釈し、酢酸エチル６０ｍＬで３回抽出した後、有機相を濃縮して得られた濃縮物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：１０〜１：１である溶出液を用いて溶出することにより、６−（４−クロロフェニル）−２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝ニコチン酸メチルエステルの白色固形物を１．５ｇ、収率６７．６％で得た。
【００４５】
ステップ５：２−（４−クロロフェニル）−５−ヒドロキシ−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの製造
室温において、ナトリウムメトキシド濃度が３０％のメタノール溶液１ｍＬを、６−（４−クロロフェニル）−２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝ニコチン酸メチル（３．０ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）１．５ｇを含むＤＭＳＯ溶液１０ｍＬに滴下し、室温下で完全に反応させた。反応液に１Ｍの希塩酸を滴下してｐＨ値が３〜４となるようにし、反応液を酢酸エチル３０ｍＬで３回抽出し、酢酸エチル層を濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルとジクロロメタンとが１：１０の混合液で溶出して、２−（４−クロロフェニル）−５−ヒドロキシ−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの黄色固形物を６００ｍｇ、収率６３．７％で得た。
【００４６】
ステップ６：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（４−クロロ）フェニル］−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の製造
２−（４−クロロフェニル）−５−ヒドロキシ−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステル１５０ｍｇ（０．４８ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、グリシン１０８ｍｇ（１．４４ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）、ナトリウムメトキシド濃度が５Ｍのメタノール溶液２５０μＬ及びメタノール５ｍＬを混合し、密閉反応器において１２０℃、２４時間反応させた。反応液を冷却した後、１Ｍの塩酸を用いてｐＨ値を酸性に調整することにより固形物を析出させ、減圧濾過し、残留物を少量の水及びメタノールで洗浄し、残留物を回収、乾燥して２−｛５−ヒドロキシ−［２−（４−クロロ）フェニル］−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の類白色固形物を１２０ｍｇ、収率６９．８％で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６５（ｓ，１Ｈ），１２．８３（ｓ，１Ｈ），９．４３（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），８．７２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．４７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），４．０６（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．９２（ｓ，３Ｈ）。
【００４７】
実施例２：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（４−メトキシ）フェニル］−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の合成
【化１４】
0006473518.tif 000016
ステップ１：３−ジメチルアミノ−１−（４−メトキシフェニル）プロペニルケトンの製造
４−メトキシアセトフェノン（９９．０ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール３５．４ｇ（２９７ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）及びキシレン１００ｍＬを還流しながら一晩（２１時間）反応させ、原料が完全に反応せずに少し残ったまま反応を停止させた。反応液を冷却してからキシレンを濃縮し、残留物に石油エーテル１５０ｍＬを加えて撹拌しながら固形物を析出させ、濾過して３−ジメチルアミノ−１−（４−メトキシフェニル）プロペニルケトンの黄色固形物を１６．０ｇ、収率７８．８％で得た。
【００４８】
ステップ２：６−（４−メトキシフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステルの製造
３−ジメチルアミノ−１−（４−メトキシフェニル）プロペニルケトン３．０ｇ（１５．９ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、アセト酢酸メチル２．２ｇ（１９．０ｍｍｏｌ，１．２Ｎ）、酢酸アンモニウム２．４５ｇ（３１．８ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水合物１．２ｇ（３．２ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）、ヨウ化ナトリウム４８０ｍｇ（３．２ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）及びイソプロパノール３０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら一晩反応させた。反応液を冷却してから減圧濾過し、濾液を濃縮してカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、６−（４−メトキシフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステルの白色固形物を２．０ｇ、収率５３．１％で得た。
【００４９】
ステップ３：２−ブロモメチル−６−（４−メトキシフェニル）ニコチン酸メチルエステルの製造
６−（４−メトキシフェニル）−２−メチルニコチン酸メチル１．３ｇ（４．７８ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド８９４ｍｇ（５．０２ｍｍｏｌ，１．０５Ｎ）、アゾビスイソブチロニトリル７８．６ｍｇ（０．４８ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びテトラクロロメタン１０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら６時間反応させた。反応液をそのままカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、２−ブロモメチル−６−（４−メトキシフェニル）ニコチン酸メチルエステルの黄色固形物を１．１４ｇ、収率６７．４％で得た。
【００５０】
ステップ４：２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝−６−（４−メトキシフェニル）ニコチン酸メチルエステルの製造
２−ブロモメチル−６−（４−メトキシフェニル）ニコチン酸メチル１．１ｇ（３．２７ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−トシルグリシンメチルエステル７５３ｍｇ（３．１１ｍｍｏｌ，０．９５Ｎ）、炭酸カリウム９０２．５ｍｇ（６．５４ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、ヨウ化ナトリウム４９．５ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド８ｍＬを混合し、５０℃で８時間反応させた。反応液に水１０ｍＬを入れて希釈し、酢酸エチル６０ｍＬで３回抽出した後、有機相を濃縮して得られた濃縮物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：１０〜１：１である溶出液を用いて溶出することにより、２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝−６−（４−メトキシフェニル）ニコチン酸メチルエステルの黄色油状物を５００ｍｇ、収率３１．６％で得た。
【００５１】
ステップ５：５−ヒドロキシ−２−（４−メトキシフェニル）−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの製造
室温において、ナトリウムメトキシド濃度が３０％のメタノール溶液２００μＬを、２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝−６−（４−メトキシフェニル）ニコチン酸メチル５００ｍｇ（１．０２ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）を含むＤＭＳＯ溶液７ｍＬに滴下し、室温下で完全に反応させた。反応液に１Ｍの希塩酸を滴下してｐＨ値が３〜４となるようにし、反応液を酢酸エチル３０ｍＬで３回抽出し、酢酸エチル層を濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルとジクロロメタンとが１：１０の混合液で溶出することにより５−ヒドロキシ−２−（４−メトキシフェニル）−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの黄色固形物を２００ｍｇ、収率６３．２％で得た。
【００５２】
ステップ６：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（４−メトキシ）フェニル］−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の製造
５−ヒドロキシ−２−（４−メトキシフェニル）−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステル１３０ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、グリシン９５ｍｇ（１．２６ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）、ナトリウムメトキシド濃度が５Ｍのメタノール溶液２５０μＬ及びメタノール５ｍＬを混合し、密閉反応器において１２０℃、２４時間反応させた。反応液を冷却した後、１Ｍの塩酸を用いてｐＨを酸性に調整して固形物を析出させた。減圧濾過し、残留物を少量の水及びメタノールで洗浄し、残留物を回収、乾燥して２−｛５−ヒドロキシ−［２−（４−メトキシ）フェニル］−１，７−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の類白色固形物を７０ｍｇ、収率４７．１％で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．５９（ｓ，１Ｈ），９．４１（ｂｒｓ，１Ｈ），８．９２（ｓ，１Ｈ），８．６６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．４２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３７−８．２８（ｍ，２Ｈ），７．１９−７．１０（ｍ，２Ｈ），４．０５（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ）。
【００５３】
実施例３：２−｛５−ヒドロキシ−８−メチル−［２−（４−メトキシ）フェニル］−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の合成
【化１５】
0006473518.tif 000017
ステップ１：３−ジメチルアミノ−１−（４−メトキシフェニル）プロペニルケトンの製造
４−メトキシアセトフェノン１５ｇ（９９．０ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール３５．４ｇ（２９７ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）及びキシレン１００ｍＬを還流しながら一晩（２１時間）反応させ、原料が完全に反応せずに少し残ったまま反応を停止させた。反応液を冷却してからキシレンを濃縮し、残留物に石油エーテル１５０ｍＬを加えて撹拌しながら固形物を析出させ、濾過して３−ジメチルアミノ−１−（４−メトキシフェニル）プロペニルケトンの黄色固形物を１６．０ｇ、収率７８．８％で得た。
【００５４】
ステップ２：２−エチル−６−（４−メトキシフェニル）ニコチン酸メチルエステルの製造
３−ジメチルアミノ−１−（４−メトキシフェニル）プロペニルケトン３．７８ｇ（２０．０ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、プロピオニル酢酸メチル３．１２ｇ（２４．０ｍｍｏｌ，１．２Ｎ）、酢酸アンモニウム３．０８ｇ（４０．０ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水合物９００ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）、ヨウ化ナトリウム３６０ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）及びイソプロパノール３０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら一晩反応させた。反応液を冷却してから減圧濾過し、濾液を濃縮してカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、２−エチル−６−（４−メトキシフェニル）ニコチン酸メチルエステルの白色固形物を３．０ｇ、収率５５．４％で得た。
【００５５】
ステップ３：２−（１−ブロモエチル）−６−（４−メトキシフェニル）ニコチン酸メチルエステルの製造
２−エチル−６−（４−メトキシフェニル）ニコチン酸メチル５００ｍｇ（１．８５ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド３４５ｍｇ（１．９４ｍｍｏｌ，１．０５Ｎ）、アゾビスイソブチロニトリル３０．４ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びテトラクロロメタン１０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら６時間反応させた。反応液をそのままカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、２−（１−ブロモエチル）−６−（４−メトキシフェニル）ニコチン酸メチルエステルの白色固形物を４７０ｍｇ、収率７２．７％で得た。
【００５６】
ステップ４：２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝−６−（４−メトキシフェニル）ニコチン酸メチルエステルの製造
２−（１−ブロモエチル）−６−（４−メトキシフェニル）ニコチン酸メチル４７０ｍｇ（１．３４ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−トシルグリシンメチルエステル３０８ｍｇ（１．２７ｍｍｏｌ，０．９５Ｎ）、炭酸カリウム３７０ｍｇ（２．６８ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、ヨウ化ナトリウム２０ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド８ｍＬを混合し、５０℃で８時間反応させた。反応液に水１０ｍＬを入れて希釈し、酢酸エチル６０ｍＬで３回抽出した後、有機相を濃縮して得られた濃縮物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：１０〜１：１の溶出液を用いて溶出することにより、２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝−６−（４−メトキシフェニル）ニコチン酸メチルエステルの淡黄色油状物を３５０ｍｇ、収率５１％で得た。
【００５７】
ステップ５：５−ヒドロキシ−２−（４−メトキシフェニル）−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの製造
室温において、ナトリウムメトキシド濃度が３０％のメタノール溶液３００μＬを、２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝−６−（４−メトキシフェニル）ニコチン酸メチルエステル（０．６８ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）３５０ｍｇを含むＤＭＳＯ溶液５ｍＬに滴下し、室温下で完全に反応させた。反応液に１Ｍの希塩酸を滴下してｐＨ値が３〜４となるようにし、反応液を酢酸エチル３０ｍＬで３回抽出し、酢酸エチル層を濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルとジクロロメタンとが１：１０の混合液で溶出することにより、５−ヒドロキシ−２−（４−メトキシフェニル）−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの白色固形物を１７０ｍｇ、収率７６．９％で得た。
【００５８】
ステップ６：２−｛５−ヒドロキシ−８−メチル−［２−（４−メトキシ）フェニル］−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の製造
５−ヒドロキシ−２−（４−メトキシフェニル）−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステル１７０ｍｇ（０．５２ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、グリシン９５ｍｇ（１．２６ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）、ナトリウムメトキシド濃度が５Ｍのメタノール溶液１．０ｍＬ及びメタノール５ｍＬを混合し、密閉反応器において１２０℃、２４時間反応させた。反応液を冷却した後、１Ｍの塩酸を用いてｐＨを酸性に調整して固形物を析出させた。減圧濾過し、残留物を少量の水及びメタノールで洗浄し、残留物を回収、乾燥して、２−｛５−ヒドロキシ−８−メチル−［２−（４−メトキシ）フェニル］−１，７−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の淡黄色固形物を１３０ｍｇ、収率６８．１％で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．３０（ｓ，１Ｈ），１２．８５（ｓ，１Ｈ），９．１９（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．４２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３９−８．３０（ｍ，２Ｈ），７．２０−７．１１（ｍ，２Ｈ），４．０８（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），２．９６（ｓ，３Ｈ）。
【００５９】
実施例４：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（３−メトキシ）フェニル］−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の合成
【化１６】
0006473518.tif 000018
ステップ１：３−ジメチルアミノ−１−（３−メトキシフェニル）プロペニルケトンの製造
３−メトキシアセトフェノン１０．０ｇ（６６．６ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール２３．８ｇ（１９９．８ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）及びキシレン５０ｍＬを還流しながら一晩（２１時間）反応させ、原料が完全に反応せずに少し残ったまま反応を停止させた。反応液を冷却してからキシレンを濃縮し、残留物に石油エーテル１５０ｍＬを加えて撹拌しながら固形物を析出させ、濾過して、３−ジメチルアミノ−１−（３−メトキシフェニル）プロペニルケトンの茶褐色油状物を１０．０ｇ、収率７３．２％で得た。
【００６０】
ステップ２：２−エチル−６−（３−メトキシフェニル）ニコチン酸メチルエステルの製造
３−ジメチルアミノ−１−（３−メトキシフェニル）プロペニルケトン３．７８ｇ（２０．０ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、プロピオニル酢酸メチル３．１２ｇ（２４．０ｍｍｏｌ，１．２Ｎ）、酢酸アンモニウム３．０８ｇ（４０．０ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水合物１．５ｇ（４．０ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）、ヨウ化ナトリウム６００ｍｇ（４．０ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）及びイソプロパノール３０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら一晩反応させた。反応液を冷却してから減圧濾過し、濾液を濃縮してカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、２−エチル−６−（３−メトキシフェニル）ニコチン酸メチルエステルの黄色液状物を３ｇ、収率５５．３％で得た。
【００６１】
ステップ３：６−（１−ブロモエチル）−２−（３−メトキシフェニル）−５−カルボン酸メチルエステルの製造
２−エチル−６−（３−メトキシフェニル）ニコチン酸メチル２．０ｇ（８．２３ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド１．５４ｇ（８．６４ｍｍｏｌ，１．０５Ｎ）、アゾビスイソブチロニトリル１３５ｍｇ（０．８２ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びテトラクロロメタン１５ｍＬを混合し、還流撹拌しながら６時間反応させた。反応液をそのままカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、６−（１−ブロモエチル）−２−（３−メトキシフェニル）−５−カルボン酸メチルエステルの淡黄色固形物を１．５ｇ、収率５７．０％で得た。
【００６２】
ステップ４：６−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝−２−（３−メトキシフェニル）−５−カルボン酸メチルエステルの製造
６−（１−ブロモエチル）−２−（３−メトキシフェニル）−５−カルボン酸メチルエステル１．１ｇ（３．４３ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−トシルグリシンメチルエステル７９０ｍｇ（３．２６ｍｍｏｌ，０．９５Ｎ）、炭酸カリウム９４６．７ｍｇ（６．８６ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、ヨウ化ナトリウム５１ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド８ｍＬを混合し、５０℃で８時間反応させた。反応液に水１０ｍＬを入れて希釈し、酢酸エチル６０ｍＬで３回抽出した後、有機相を濃縮して得られた濃縮物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：１０〜１：１の溶出液を用いて溶出することにより、６−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝−２−（３−メトキシフェニル）−５−カルボン酸メチルエステルの黄色固形物を４５０ｍｇ、収率２７．２％で得た。
【００６３】
ステップ５：５−ヒドロキシ−２−（３−メトキシフェニル）−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの製造
室温においてナトリウムメトキシド濃度が３０％のメタノール溶液３００μＬを、６−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝−２−（３−メトキシフェニル）−５−カルボン酸メチルエステル４５０ｍｇを含むＤＭＳＯ溶液５ｍＬに滴下し、室温下で完全に反応させた。反応液に１Ｍの希塩酸を滴下してｐＨ値が３〜４となるようにして、反応液を酢酸エチル３０ｍＬで３回抽出し、酢酸エチル層を濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルとジクロロメタンとが１：１０の混合液で溶出することにより、５−ヒドロキシ−２−（３−メトキシフェニル）−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの白色固形物を１００ｍｇ、収率３６．４％で得た。
【００６４】
ステップ６：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（３−メトキシ）フェニル］−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の製造
５−ヒドロキシ−２−（３−メトキシフェニル）−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステル１００ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、グリシン７６ｍｇ（１．０２ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）、ナトリウムメトキシド濃度が５Ｍのメタノール溶液０．５ｍＬ及びメタノール５ｍＬを混合し、密閉反応器において１２０℃、２４時間反応させた。反応液を冷却した後、１Ｍの塩酸を用いてｐＨを酸性に調整して固形物を析出させた。減圧濾過し、残留物を少量の水及びメタノールで洗浄し、残留物を回収、乾燥して、２−｛５−ヒドロキシ−［２−（３−メトキシ）フェニル］−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の黄褐色固形物を７０ｍｇ、収率６１．６％で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６７（ｓ，１Ｈ），１２．８３（ｓ，１Ｈ），９．４６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．４９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９８−７．８９（ｍ，２Ｈ），７．５３（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２０−７．１６（ｍ，１Ｈ），４．０７（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ）。
【００６５】
実施例５：２−｛５−ヒドロキシ−８−メチル−［２−（４−ｔ−ブチル）フェニル］−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の合成
【化１７】
0006473518.tif 000019
ステップ１：１−（４−ｔ−ブチルフェニル）−３−ジメチルアミノプロペニルケトンの製造
４−ｔ−ブチルアセトフェノン１０ｇ（５６．７ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール２０．３ｇ（１７０ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）及びキシレン５０ｍＬを還流しながら一晩（２１時間）反応させ、原料が完全に反応せずに少し残ったまま反応を停止させた。反応液を冷却してからキシレンを濃縮し、残留物に石油エーテル１５０ｍＬを加えて撹拌しながら固形物を析出させ、濾過して、１−（４−ｔ−ブチルフェニル）−３−ジメチルアミノプロペニルケトンの淡黄色固形物を７．０ｇ、収率５３．４％で得た。
【００６６】
ステップ２：６−（４−ｔ−ブチルフェニル）−２−エチルニコチン酸メチルエステルの製造
１−（４−ｔ−ブチルフェニル）−３−ジメチルアミノプロペニルケトン３．０ｇ（１２．９ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、プロピオニル酢酸メチル２．０ｇ（１５．４ｍｍｏｌ，１．２Ｎ）、酢酸アンモニウム２．０ｇ（２５．８ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水合物４８３ｍｇ（１．２９ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）、ヨウ化ナトリウム１９４ｍｇ（１．２９ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）及びイソプロパノール３０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら一晩反応させた。反応液を冷却してから減圧濾過し、濾液を濃縮してカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、６−（４−ｔ−ブチルフェニル）−２−エチルニコチン酸メチルエステルの黄色液状物を２．０ｇ、収率５２．２％で得た。
【００６７】
ステップ３：２−（１−ブロモエチル）−６−（４−ｔ−ブチルフェニル）ニコチン酸メチルエステルの製造
６−（４−ｔ−ブチルフェニル）−２−エチルニコチン酸メチル１．８ｇ（６．０６ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド１．１３ｇ（６．３６ｍｍｏｌ，１．０５Ｎ）、アゾビスイソブチロニトリル１００ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びテトラクロロメタン１０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら６時間反応させた。反応液をそのままカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、２−（１−ブロモエチル）−６−（４−ｔ−ブチルフェニル）ニコチン酸メチルエステルの黄色液状物を１．５ｇ、収率６６．８％で得た。
【００６８】
ステップ４：６−（４−ｔ−ブチルフェニル）−２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝ニコチン酸メチルエステルの製造
２−（１−ブロモエチル）−６−（４−ｔ−ブチルフェニル）ニコチン酸メチル１．５ｇ（４．０ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−トシルグリシンメチルエステル９１９ｍｇ（３．７８ｍｍｏｌ，０．９５Ｎ）、炭酸カリウム１．１ｇ（８．０ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、ヨウ化ナトリウム６０ｍｇ（０．４ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１０ｍＬを混合し、５０℃で８時間反応させた。反応液に水１０ｍＬを入れて希釈し、酢酸エチル６０ｍＬで３回抽出した後、有機相を濃縮して得られた濃縮物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：１０〜１：１の溶出液を用いて溶出することにより、６−（４−ｔ−ブチルフェニル）−２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝ニコチン酸メチルエステルの黄色油状物を６００ｍｇ、収率２７．９％で得た。
【００６９】
ステップ５：２−（４−ｔ−ブチルフェニル）−５−ヒドロキシ−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの製造
室温において、ナトリウムメトキシド濃度が３０％のメタノール溶液３００μＬを、６−（４−ｔ−ブチルフェニル）−２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝ニコチン酸メチル６００ｍｇ（０．６８ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）を含むＤＭＳＯ溶液５ｍＬに滴下し、室温下で完全に反応させた。反応液に１Ｍの希塩酸を滴下してｐＨ値が３〜４となるようにし、反応液を酢酸エチル３０ｍＬで３回抽出し、酢酸エチル層を濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルとジクロロメタンとが１：１０の混合液で溶出することにより、２−（４−ｔ−ブチルフェニル）−５−ヒドロキシ−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの白色固形物を２００ｍｇ、収率８４％で得た。
【００７０】
ステップ６：２−｛５−ヒドロキシ−８−メチル−［２−（４−ｔ−ブチル）フェニル］−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の製造
２−（４−ｔ−ブチルフェニル）−５−ヒドロキシ−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステル２００ｍｇ（０．５７ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、グリシン１２９ｍｇ（１．７１ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）、ナトリウムメトキシド濃度が５Ｍのメタノール溶液０．５ｍＬ及びメタノール５ｍＬを混合し、密閉反応器において１２０℃、２４時間反応させた。反応液を冷却した後、１Ｍの塩酸を用いてｐＨを酸性に調整して固形物を析出させた。減圧濾過し、残留物を少量の水及びメタノールで洗浄し、残留物を回収、乾燥して、２−｛５−ヒドロキシ−８−メチル−［２−（４−ｔ−ブチル）フェニル］−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の黄色固形物を１５０ｍｇ、収率６６．０％で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．３７（ｓ，１Ｈ），９．２１（ｂｒｓ，１Ｈ），８．７０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．４４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３２−８．２５（ｍ，２Ｈ），７．６６−７．５９（ｍ，２Ｈ），４．０６（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），２．９７（ｓ，３Ｈ），１．３７（ｓ，９Ｈ）。
【００７１】
実施例６：２−｛５−ヒドロキシ−８−メチル−２−（３−ピリジン）−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の合成
【化１８】
0006473518.tif 000020
ステップ１：３−ジメチルアミノ−１−ピリジン−３−イル−プロペニルケトンの製造
３−アセチルピリジン１０ｇ（８２ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール２９．３ｇ（２４６ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）及びキシレン５０ｍＬを還流しながら一晩（２１時間）反応させ、原料が完全に反応せずに少し残ったまま反応を停止させた。反応液を冷却してからキシレンを濃縮し、残留物に石油エーテル１５０ｍＬを加えて撹拌しながら固形物を析出させ、濾過して、３−ジメチルアミノ−１−ピリジン−３−イル−プロペニルケトンの黄色固形物を１２．０ｇ、収率８３．３％で得た。
【００７２】
ステップ２：６−エチル−［２，３’］ジピリジル−５−カルボン酸メチルエステルの製造
３−ジメチルアミノ−１−ピリジン−３−イル−プロペニルケトン４．８３ｇ（３０．０ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、プロピオニル酢酸メチル４．６８ｇ（３６．０ｍｍｏｌ，１．２Ｎ）、酢酸アンモニウム４．６２ｇ（６０．０ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水合物２．２５ｇ（６．０ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）、ヨウ化ナトリウム９００ｍｇ（６．０ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）及びイソプロパノール３０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら一晩反応させた。反応液を冷却してから減圧濾過し、濾液を濃縮してカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、６−エチル−［２，３’］ジピリジル−５−カルボン酸メチルエステルの黄色固形物を４．５ｇ、収率６１．９％で得た。
【００７３】
ステップ３：６−（１−ブロモエチル）−［２，３’］ジピリジル−５−カルボン酸メチルエステルの製造
６−エチル−［２，３’］ジピリジル−５−カルボン酸メチルエステル３．０ｇ（１１．１ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド２．０７ｇ（１１．６６ｍｍｏｌ，１．０５Ｎ）、アゾビスイソブチロニトリル１８２ｍｇ（１．１２ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びテトラクロロメタン１５ｍＬを混合し、還流撹拌しながら６時間反応させた。反応液をそのままカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、６−（１−ブロモエチル）−［２，３’］ジピリジル−５−カルボン酸メチルエステルの黄色液状物を２．５ｇ、収率６４．６％で得た。
【００７４】
ステップ４：６−（１−（Ｎ−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−４−メチルベンゼンスルホニルアミノ）プロパン−２−イル）−［２，３’］ジピリジル−５−カルボン酸メチルエステルの製造
６−（１−ブロモエチル）−［２，３’］ジピリジル−５−カルボン酸メチルエステル２．５ｇ（７．１６ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−トシルグリシンメチルエステル１．６５ｇ（６．８ｍｍｏｌ，０．９５Ｎ）、炭酸カリウム１．９８ｇ（１４．３ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、ヨウ化ナトリウム１０８ｍｇ（０．７２ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１５ｍＬを混合し、５０℃で８時間反応させた。反応液に水１０ｍＬを入れて希釈し、酢酸エチル６０ｍＬで３回抽出した後、有機相を濃縮して得られた濃縮物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：１０〜１：１の溶出液を用いて溶出することにより、６−（１−（Ｎ−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−４−メチルベンゼンスルホニルアミノ）プロパン−２−イル）−［２，３’］ジピリジル−５−カルボン酸メチルエステルの黄色油状物を１．０ｇ、収率２７．３％で得た。
【００７５】
ステップ５：５−ヒドロキシ−８−メチル−２−（３−ピリジン）−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの製造
室温において、ナトリウムメトキシド濃度が３０％のメタノール溶液６００μＬを、６−（１−（Ｎ−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−４−メチルベンゼンスルホニルアミノ）プロパン−２−イル）−［２，３’］ジピリジル−５−カルボン酸メチルエステル１．０ｇ（１．９５ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）を含むＤＭＳＯ溶液５ｍＬに滴下し、室温下で完全に反応させた。反応液に１Ｍの希塩酸を滴下してｐＨ値が３〜４となるようにし、反応液を酢酸エチル３０ｍＬで３回抽出し、酢酸エチル層を濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルとジクロロメタンとが１：１０の混合液で溶出することにより、５−ヒドロキシ−８−メチル−２−（３−ピリジン）−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの淡黄色固形物を２００ｍｇ、収率３１．６％で得た。
【００７６】
ステップ６：２−｛５−ヒドロキシ−８−メチル−２−ピリジン−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の製造
ヒドロキシ−８−メチル−２−（３−ピリジン）−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステル２００ｍｇ（０．６２ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、グリシン１４０ｍｇ（１．８６ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）、ナトリウムメトキシド濃度が５Ｍのメタノール溶液０．５ｍＬ及びメタノール５ｍＬを混合し、密閉反応器において１２０℃、２４時間反応させた。反応液を冷却した後、１Ｍの塩酸を用いてｐＨを酸性に調整して固形物を析出させた。減圧濾過し、残留物を少量の水及びメタノールで洗浄し、残留物を回収、乾燥して、２−｛５−ヒドロキシ−８−メチル−２−ピリジン−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の類白色固形物を１３０ｍｇ、収率５７．０％で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．３９（ｓ，１Ｈ），１２．８３（ｓ，１Ｈ），９．５７−９．５２（ｍ，１Ｈ），９．２５（ｂｒｓ，１Ｈ），８．８０−８．７６（ｍ，２Ｈ），８．７５−８．７０（ｍ，１Ｈ），８．５８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄｄ，Ｊ＝８．０，４．８Ｈｚ，１Ｈ），４．０７（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．００（ｓ，３Ｈ）。
【００７７】
実施例７：２−｛５−ヒドロキシ−２−（３−ブロモフェニル）−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の合成
【化１９】
0006473518.tif 000021
ステップ１：１−（３−ブロモフェニル）−３−ジメチルアミノプロペニルケトンの製造
３−ブロモアセトフェノン１０．０ｇ（５０．２ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール１８．０ｇ（１５０．７ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）及びキシレン５０ｍＬを還流しながら一晩（２１時間）反応させ、原料が完全に反応せずに少し残ったまま反応を停止させた。反応液を冷却してからキシレンを濃縮し、残留物に石油エーテル１５０ｍＬを加えて撹拌しながら固形物を析出させ、濾過して、１−（３−ブロモフェニル）−３−ジメチルアミノプロペニルケトンの黄色固形物を７．０ｇ、収率５５．１％で得た。
【００７８】
ステップ２：６−（３−ブロモフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステルの製造
１−（３−ブロモフェニル）−３−ジメチルアミノプロペニルケトン２．６ｇ（１０．２ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、アセト酢酸メチル１．５９ｇ（１２．２ｍｍｏｌ，１．２Ｎ）、酢酸アンモニウム１．５７ｇ（２０．４ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水合物７６５ｍｇ（２．０４ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）、ヨウ化ナトリウム３０６ｍｇ（２．０４ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）及びイソプロパノール３０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら一晩反応させた。反応液を冷却してから減圧濾過し、濾液を濃縮してカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、６−（３−ブロモフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステルの黄色液状物を２．２ｇ、収率６７．７％で得た。
【００７９】
ステップ３：２−ブロモメチル−６−（３−ブロモフェニル）ニコチン酸メチルエステルの製造
６−（３−ブロモフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステル２．０ｇ（６．２５ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド１．１７ｇ（６．５６ｍｍｏｌ，１．０５Ｎ）、アゾビスイソブチロニトリル１０３ｍｇ（０．６２ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びテトラクロロメタン１０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら６時間反応させた。反応液をそのままカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、２−ブロモメチル−６−（３−ブロモフェニル）ニコチン酸メチルエステルの黄色液状物を１．８ｇ、収率７２．６％で得た。
【００８０】
ステップ４：６−（３−ブロモフェニル）−２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝ニコチン酸メチルエステルの製造
２−ブロモメチル−６−（３−ブロモフェニル）ニコチン酸メチル２．０ｇ（５．０ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−トシルグリシンメチルエステル１．１５ｍｇ（４．７５ｍｍｏｌ，０．９５Ｎ）、炭酸カリウム１．３８ｇ（１０．０ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、ヨウ化ナトリウム７５ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１０ｍＬを混合し、５０℃で８時間反応させた。反応液に水１０ｍＬを入れて希釈し、酢酸エチル６０ｍＬで３回抽出した後、有機相を濃縮して得られた濃縮物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：１０〜１：１の溶出液を用いて溶出することにより、６−（３−ブロモフェニル）−２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝ニコチン酸メチルエステルの黄色油状物を１．０ｇ、収率３５．７％で得た。
【００８１】
ステップ５：２−（３−ブロモフェニル）−５−ヒドロキシ−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの製造
室温において、ナトリウムメトキシド濃度が３０％のメタノール溶液６００μＬを、６−（３−ブロモフェニル）−２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝ニコチン酸メチル１．０ｇ（１．７８ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）を含むＤＭＳＯ溶液５ｍＬに滴下し、室温下で完全に反応させた。反応液に１Ｍの希塩酸を滴下してｐＨ値が３〜４となるようにし、反応液を酢酸エチル３０ｍＬで３回抽出し、酢酸エチル層を濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルとジクロロメタンとが１：１０の混合液で溶出することにより、２−（３−ブロモフェニル）−５−ヒドロキシ−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの淡黄色固形物を２００ｍｇ、収率３０．２％で得た。
【００８２】
ステップ６：２−｛５−ヒドロキシ−２−（３−ブロモフェニル）−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の製造
２−（３−ブロモフェニル）−５−ヒドロキシ−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステル２００ｍｇ（０．５４ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、グリシン１２１．５ｍｇ（１．６２ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）、ナトリウムメトキシド濃度が５Ｍのメタノール溶液０．５ｍＬ及びメタノール５ｍＬを混合し、密閉反応器において１２０℃、２４時間反応させた。反応液を冷却した後、１Ｍの塩酸を用いてｐＨを酸性に調整して固形物を析出させた。減圧濾過し、残留物を少量の水及びメタノールで洗浄し、残留物を回収、乾燥して、２−｛５−ヒドロキシ−２−（３−ブロモフェニル）−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の黄褐色固形物を１４０ｍｇ、収率８２．４％で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．４２（ｓ，１Ｈ），９．４６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．５６−８．４９（ｍ，２Ｈ），８．３６−８．３０（ｍ，１Ｈ），７．８１−７．７５（ｍ，１Ｈ），７．６０−７．５３（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０５（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）．
【００８３】
実施例８：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（３−クロロ）フェニル］−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の合成
【化２０】
0006473518.tif 000022
ステップ１：１−（３−クロロフェニル）−３−ジメチルアミノプロペニルケトンの製造
３−クロロアセトフェノン１０．０ｇ（６４．７ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール２３．１ｇ（１９４．１ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）及びキシレン５０ｍＬを還流しながら一晩（２１時間）反応させ、原料が完全に反応せずに少し残ったまま反応を停止させた。反応液を冷却してからキシレンを濃縮し、残留物に石油エーテル１５０ｍＬを加えて撹拌しながら固形物を析出させ、濾過して、１−（３−クロロフェニル）−３−ジメチルアミノプロペニルケトンの黄色固形物を１２ｇ、収率８８．７％で得た。
【００８４】
ステップ２：６−（３−クロロフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステルの製造
１−（３−クロロフェニル）−３−ジメチルアミノプロペニルケトン４．５ｇ（２１．５ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、アセト酢酸メチル３．３６ｇ（２５．８ｍｍｏｌ，１．２Ｎ）、酢酸アンモニウム３．３１ｇ（４３．０ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水合物１．６１ｇ（４．３ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）、ヨウ化ナトリウム６４５ｍｇ（４．３ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）及びイソプロパノール４０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら一晩反応させた。反応液を冷却してから減圧濾過し、濾液を濃縮してカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、６−（３−クロロフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステルの淡黄色固形物を２．９ｇ、収率４９．１％で得た。
【００８５】
ステップ３：２−ブロモメチル−６−（３−クロロフェニル）ニコチン酸メチルエステルの製造
６−（３−クロロフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステル２．９ｇ（１０．７ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド２．０ｇ（１１．２４ｍｍｏｌ，１．０５Ｎ）、アゾビスイソブチロニトリル１８０．６ｍｇ（１．１ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びテトラクロロメタン１５ｍＬを混合し、還流撹拌しながら６時間反応させた。反応液をそのままカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、２−ブロモメチル−６−（３−クロロフェニル）ニコチン酸メチルエステルの黄色液状物を２．８ｇ、収率７４．１％で得た。
【００８６】
ステップ４：６−（３−クロロフェニル）−２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝ニコチン酸メチルエステルの製造
２−ブロモメチル−６−（３−クロロフェニル）ニコチン酸メチルエステル２．８ｇ（７．９１ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−トシルグリシンメチルエステル１．８２ｇ（７．５１ｍｍｏｌ，０．９５Ｎ）、炭酸カリウム２．１８ｇ（１５．８２ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、ヨウ化ナトリウム１１８．５ｍｇ（０．７９ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１５ｍＬを混合し、５０℃で８時間反応させた。反応液に水１０ｍＬを入れて希釈し、酢酸エチル６０ｍＬで３回抽出した後、有機相を濃縮して得られた濃縮物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：１０〜１：１の溶出液を用いて溶出することにより、６−（３−クロロフェニル）−２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝ニコチン酸メチルエステルの黄色油状物を１．３ｇ、収率３１．９％で得た。
【００８７】
ステップ５：２−（３−クロロフェニル）−５−ヒドロキシ−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの製造
室温においてナトリウムメトキシド濃度が３０％のメタノール溶液１ｍＬを、６−（３−クロロフェニル）−２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝ニコチン酸メチル１．３ｇ（２．５２ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）を含むＤＭＳＯ溶液６ｍＬに滴下し、室温下で完全に反応させた。反応液に１Ｍの希塩酸を滴下してｐＨ値が３〜４となるようにし、反応液を酢酸エチル３０ｍＬで３回抽出し、酢酸エチル層を濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルとジクロロメタンとが１：１０の混合液で溶出することにより、２−（３−クロロフェニル）−５−ヒドロキシ−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの白色固形物を４００ｍｇ、収率４８．４％で得た。
【００８８】
ステップ６：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（３−クロロ）フェニル］−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の製造
２−（３−クロロフェニル）−５−ヒドロキシ−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステル２００ｍｇ（０．６１ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、グリシン１３７ｍｇ（１．８３ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）、ナトリウムメトキシド濃度が５Ｍのメタノール溶液０．５ｍＬ及びメタノール５ｍＬを混合し、密閉反応器において１２０℃、２４時間反応させた。反応液を冷却した後、１Ｍの塩酸を用いてｐＨを酸性に調整して固形物を析出させた。減圧濾過し、残留物を少量の水及びメタノールで洗浄し、残留物を回収、乾燥して、２−｛５−ヒドロキシ−［２−（３−クロロ）フェニル］−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の類白色固形物を１３０ｍｇ、収率６５．０％で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６６（ｓ，１Ｈ），９．４５（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），８．９９（ｓ，１Ｈ），８．７２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．５０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３８（ｓ，１Ｈ），８．３０−８．２８（ｍ，１Ｈ），７．６５−７．６１（ｍ，２Ｈ），４．０６（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）。
【００８９】
実施例９：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（３−ブロモ）フェニル］−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の合成
【化２１】
0006473518.tif 000023
ステップ１：１−（３−ブロモフェニル）−３−ジメチルアミノプロペニルケトンの製造
３−ブロモアセトフェノン１０．０ｇ（５０．２ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール１８．０ｇ（１５０．７ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）及びキシレン５０ｍＬを還流しながら一晩（２１時間）反応させ、原料が完全に反応せずに少し残ったまま反応を停止させた。反応液を冷却してからキシレンを濃縮し、残留物に石油エーテル１５０ｍＬを加えて撹拌しながら固形物を析出させ、濾過して、１−（３−ブロモフェニル）−３−ジメチルアミノプロペニルケトンの黄色固形物を７．０ｇ、収率５５．１％で得た。
【００９０】
ステップ２：６−（３−ブロモフェニル）−２−エチルニコチン酸メチルエステルの製造
１−（３−ブロモフェニル）−３−ジメチルアミノプロペニルケトン４．２ｇ（２０．１ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、プロピオニル酢酸メチル２．７５ｇ（２４．１ｍｍｏｌ，１．２Ｎ）、酢酸アンモニウム３．１ｇ（４０．２ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水合物１．５１ｍｇ（４．０２ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）、ヨウ化ナトリウム６０３ｍｇ（４．０２ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）及びイソプロパノール４０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら一晩反応させた。反応液を冷却してから減圧濾過し、濾液を濃縮してカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、６−（３−ブロモフェニル）−２−エチルニコチン酸メチルエステルの黄色液状物を３．７ｇ、収率６０．４％で得た。
【００９１】
ステップ３：２−（１−ブロモエチル）−６−（３−ブロモフェニル）ニコチン酸メチルエステルの製造
６−（３−ブロモフェニル）−２−エチルニコチン酸メチルエステル４．０ｇ（１３．３ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド２．４８ｇ（１４．０ｍｍｏｌ，１．０５Ｎ）、アゾビスイソブチロニトリル２２０ｍｇ（１．３４ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びテトラクロロメタン２０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら６時間反応させた。反応液をそのままカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、２−（１−ブロモエチル）−６−（３−ブロモフェニル）ニコチン酸メチルエステルの淡黄色固形物を１．９ｇ、収率７２．６％で得た。
【００９２】
ステップ４：６−（３−ブロモフェニル）−２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝ニコチン酸メチルエステルの製造
２−（１−ブロモエチル）−６−（３−ブロモフェニル）ニコチン酸メチルエステル１．９ｇ（５．０ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−トシルグリシンメチルエステル１．１５ｍｇ（４．７５ｍｍｏｌ，０．９５Ｎ）、炭酸カリウム１．３８ｇ（１０．０ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、ヨウ化ナトリウム７５ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１０ｍＬを混合し、５０℃で８時間反応させた。反応液に水１０ｍＬを入れて希釈し、酢酸エチル６０ｍＬで３回抽出した後、有機相を濃縮して得られた濃縮物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：１０〜１：１の溶出液を用いて溶出することにより、６−（３−ブロモフェニル）−２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝ニコチン酸メチルエステルの黄色油状物を２．５ｇ、収率９１．６％で得た。
【００９３】
ステップ５：２−（３−ブロモフェニル）−５−ヒドロキシ−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの製造
室温においてナトリウムメトキシド濃度が３０％のメタノール溶液３ｍＬを、６−（３−ブロモフェニル）−２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝ニコチン酸メチルエステル２．５ｇ（４．５８ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）を含むジメチルスルホキシド溶液６ｍＬに滴下し、室温下で完全に反応させた。反応液に１Ｍの希塩酸を滴下してｐＨ値が３〜４となるようにし、反応液を酢酸エチル３０ｍＬで３回抽出し、酢酸エチル層を濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルとジクロロメタンとが１：１０の混合液で溶出することにより、２−（３−ブロモフェニル）−５−ヒドロキシ−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの淡黄色固形物を７３０ｍｇ、収率４４．５％で得た。
【００９４】
ステップ６：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（３−ブロモ）フェニル］−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の製造
２−（３−ブロモフェニル）−５−ヒドロキシ−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステル２００ｍｇ（０．５６ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、グリシン１２９ｍｇ（１．６８ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）、ナトリウムメトキシド濃度が５Ｍのメタノール溶液０．５ｍＬ及びメタノール５ｍＬを混合し、密閉反応器において１２０℃、２４時間反応させた。反応液を冷却した後、１Ｍの塩酸を用いてｐＨを酸性に調整して固形物を析出させた。減圧濾過し、残留物を少量の水及びメタノールで洗浄し、残留物を回収、乾燥して、２−｛５−ヒドロキシ−［２−（３−ブロモ）フェニル］−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の黄褐色固形物を１７０ｍｇ、収率７５．７％で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．３５（ｓ，１Ｈ），１２．８３（ｓ，１Ｈ），９．２７−９．２０（ｍ，１Ｈ），８．７２（ｄ，Ｊ＝８．８，１Ｈ），８．５５−８．４９（ｍ，２Ｈ），８．４０−８．３４（ｍ，１Ｈ），７．８０−７．７８（ｍ，１Ｈ），７．５８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），４．０８（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．９８（ｓ，３Ｈ）。
【００９５】
実施例１０：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（３−クロロ）フェニル］−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の合成
【化２２】
0006473518.tif 000024
ステップ１：１−（３−クロロフェニル）−３−ジメチルアミノプロペニルケトンの製造
３−クロロアセトフェノン１０．０ｇ（６４．７ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール２３．１ｇ（１９４．１ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）及びキシレン５０ｍＬを還流しながら一晩（２１時間）反応させ、原料が完全に反応せずに少し残ったまま反応を停止させた。反応液を冷却してからキシレンを濃縮し、残留物に石油エーテル１５０ｍＬを加えて撹拌しながら固形物を析出させ、濾過して、１−（３−クロロフェニル）−３−ジメチルアミノプロペニルケトンの黄色固形物を１２ｇ、収率８８．７％で得た。
【００９６】
ステップ２：６−（３−クロロフェニル）−２−エチルニコチン酸メチルエステルの製造
１−（３−クロロフェニル）−３−ジメチルアミノプロペニルケトン４．３ｇ（１６．９ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、プロピオニル酢酸メチル２．３１ｇ（２０．２ｍｍｏｌ，１．２Ｎ）、酢酸アンモニウム２．６ｇ（３３．８ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水合物１．２７ｇ（３．３８ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）、ヨウ化ナトリウム５０７ｍｇ（３．３８ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）及びイソプロパノール４０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら一晩反応させた。反応液を冷却してから減圧濾過し、濾液を濃縮してカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、６−（３−クロロフェニル）−２−エチルニコチン酸メチルエステルの淡黄色固形物を３．５ｇ、収率７９．５％で得た。
【００９７】
ステップ３：２−（１−ブロモエチル）−６−（３−クロロフェニル）ニコチン酸メチルエステルの製造
６−（３−クロロフェニル）−２−エチルニコチン酸メチルエステル３．５ｇ（１３．６ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド２．５４ｇ（１４．３ｍｍｏｌ，１．０５Ｎ）、アゾビスイソブチロニトリル２２３．５ｍｇ（１．３６ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びテトラクロロメタン１５ｍＬを混合し、還流撹拌しながら６時間反応させた。反応液をそのままカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、２−（１−ブロモエチル）−６−（３−クロロフェニル）ニコチン酸メチルエステルの黄色液状物を３．４ｇ、収率８５％で得た。
【００９８】
ステップ４：６−（３−クロロフェニル）−２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝ニコチン酸メチルエステルの製造
２−（１−ブロモエチル）−６−（３−クロロフェニル）ニコチン酸メチルエステル３.４ｇ（１０．１ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−トシルグリシンメチルエステル２．３２ｇ（９．６ｍｍｏｌ，０．９５Ｎ）、炭酸カリウム２．７９ｇ（２０．２ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、ヨウ化ナトリウム１５１．５ｍｇ（１．０１ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１５ｍＬを混合し、５０℃で８時間反応させた。反応液に水１０ｍＬを入れて希釈し、酢酸エチル６０ｍＬで３回抽出した後、有機相を濃縮して得られた濃縮物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：１０〜１：１の溶出液を用いて溶出することにより、６−（３−クロロフェニル）−２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝ニコチン酸メチルエステルの黄色固形物を２．４ｇ、収率３１．９％で得た。
【００９９】
ステップ５：２−（３−クロロフェニル）−５−ヒドロキシ−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの製造
室温においてナトリウムメトキシド濃度が３０％のメタノール溶液４ｍＬを、６−（３−クロロフェニル）−２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝ニコチン酸メチルエステル２．４ｇ（４．８０ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）を含むＤＭＳＯ溶液１０ｍＬに滴下し、室温下で完全に反応させた。反応液に１Ｍの希塩酸を滴下してｐＨ値が３〜４となるようにし、反応液を酢酸エチル３０ｍＬで３回抽出し、酢酸エチル層を濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルとジクロロメタンとが１：１０の混合液で溶出することにより、２−（３−クロロフェニル）−５−ヒドロキシ−８−メチル［１，７］ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの淡黄色固形物を１．１ｇ、収率７２．８％で得た。
【０１００】
ステップ６：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（３−クロロ）フェニル］−８−メチル［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の製造
２−（３−クロロフェニル）−５−ヒドロキシ−８−メチル［１，７］ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステル２００ｍｇ（０．６４ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、グリシン１４３ｍｇ（１．９２ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）、ナトリウムメトキシド濃度が５Ｍのメタノール溶液１．０ｍＬ及びメタノール５ｍＬを混合し、密閉反応器において１２０℃、２４時間反応させた。反応液を冷却した後、１Ｍの塩酸を用いてｐＨを酸性に調整して固形物を析出させた。減圧濾過し、残留物を少量の水及びメタノールで洗浄し、残留物を回収、乾燥して、２−｛５−ヒドロキシ−［２−（３−クロロ）フェニル］−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の黄褐色固形物を１５０ｍｇ、収率６５．６％で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．２９（ｓ，１Ｈ），９．１６（ｂｒｓ，１Ｈ），８．６３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．４４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３３（ｓ，１Ｈ），８．３１−８．２２（ｍ，１Ｈ），７．６２−７．５９（ｍ，２Ｈ），４．０６（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．９２（ｓ，３Ｈ）。
【０１０１】
実施例１１：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（４−ｔ−ブチル）フェニル］−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の合成
【化２３】
0006473518.tif 000025
ステップ１：１−（４−ｔ−ブチルフェニル）−３−ジメチルアミノプロペニルケトンの製造
４−ｔ−ブチルアセトフェノン１０ｇ（５６．７ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール２０．３ｇ（１７０ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）及びキシレン５０ｍＬを還流しながら一晩（２１時間）反応させ、原料が完全に反応せずに少し残ったまま反応を停止させた。反応液を冷却してからキシレンを濃縮し、残留物に石油エーテル１５０ｍＬを加えて撹拌しながら固形物を析出させ、濾過して、１−（４−ｔ−ブチルフェニル）−３−ジメチルアミノプロペニルケトンの淡黄色固形物を７．０ｇ、収率５３．４％で得た。
【０１０２】
ステップ２：６−（４−ｔ−ブチルフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステルの製造
１−（４−ｔ−ブチルフェニル）−３−ジメチルアミノプロペニルケトン５．５ｇ（２３．８ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、アセト酢酸メチル３．２５ｇ（２８．６ｍｍｏｌ，１．２Ｎ）、酢酸アンモニウム３．６７ｇ（４７．６ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水合物１．７８ｇ（４．７６ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）、ヨウ化ナトリウム７１４ｍｇ（４．７６ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）及びイソプロパノール５０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら一晩反応させた。反応液を冷却してから減圧濾過し、濾液を濃縮してカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、６−（４−ｔ−ブチルフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステルの黄色液状物を５．４ｇ、収率８０．０％で得た。
【０１０３】
ステップ３：２−ブロモメチル−６−（４−ｔ−ブチルフェニル）ニコチン酸メチルエステルの製造
６−（４−ｔ−ブチルフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステル５．４ｇ（１９．１ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド３．５６ｇ（２０．０ｍｍｏｌ，１．０５Ｎ）、アゾビスイソブチロニトリル３１２ｍｇ（１．９ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びテトラクロロメタン２０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら６時間反応させた。反応液をそのままカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、２−ブロモメチル−６−（４−ｔ−ブチルフェニル）ニコチン酸メチルエステルの黄色油状物を４．０ｇ、収率５８％で得た。
【０１０４】
ステップ４：６−（４−ｔ−ブチルフェニル）−２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝ニコチン酸メチルエステルの製造
２−ブロモメチル−６−（４−ｔ−ブチルフェニル）ニコチン酸メチルエステル４．０ｇ（１１．１ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−トシルグリシンメチルエステル２．５５ｇ（１０．５ｍｍｏｌ，０．９５Ｎ）、炭酸カリウム３．０６ｇ（２２．２ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、ヨウ化ナトリウム１６６．５ｍｇ（１．１１ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１５ｍＬを混合し、５０℃で８時間反応させた。反応液に水１０ｍＬを入れて希釈し、酢酸エチル６０ｍＬで３回抽出した後、有機相を濃縮して得られた濃縮物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：１０〜１：１の溶出液を用いて溶出することにより、６−（４−ｔ−ブチルフェニル）−２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝ニコチン酸メチルエステルの黄色油状物を４ｇ、収率６８．７％で得た。
【０１０５】
ステップ５：２−（４−ｔ−ブチルフェニル）−５−ヒドロキシ−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの製造
室温において、ナトリウムメトキシド濃度が３０％のメタノール溶液４ｍＬを、６−（４−ｔ−ブチルフェニル）−２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝ニコチン酸メチルエステル３．０ｇ（５．７２ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）を含むＤＭＳＯ溶液１０ｍＬに滴下し、室温下で完全に反応させた。反応液に１Ｍの希塩酸を滴下してｐＨ値が３〜４となるようにし、反応液を酢酸エチル３０ｍＬで３回抽出し、酢酸エチル層を濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルとジクロロメタンとが１：１０の混合液で溶出することにより、２−（４−ｔ−ブチルフェニル）−５−ヒドロキシ−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの黄色固形物を１．４ｍｇ、収率７０％で得た。
【０１０６】
ステップ６：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（４−ｔ−ブチル）フェニル］−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の製造
２−（４−ｔ−ブチルフェニル）−５−ヒドロキシ−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステル２５０ｍｇ（０．７４ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、グリシン１６７ｍｇ（２．２３ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）、ナトリウムメトキシド濃度が５Ｍのメタノール溶液１．０ｍＬ及びメタノール５ｍＬを混合し、密閉反応器において１２０℃、２４時間反応させた。反応液を冷却した後、１Ｍの塩酸を用いてｐＨを酸性に調整して固形物を析出させた。減圧濾過し、残留物を少量の水及びメタノールで洗浄し、残留物を回収、乾燥して、２−｛５−ヒドロキシ−［２−（４−ｔ−ブチル）フェニル］−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の類白色固形物を２５０ｍｇ、収率８９．１％で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６４（ｓ，１Ｈ），１２．８５（ｓ，１Ｈ），９．４３（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），８．９６（ｓ，１Ｈ），８．７０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．４４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２９−８．２２（ｍ，２Ｈ），７．６５−７．５８（ｍ，２Ｈ），４．０６（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），１．３６（ｓ，９Ｈ）。
【０１０７】
実施例１２：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（４−ブロモ）フェニル］−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の合成
【化２４】
0006473518.tif 000026
ステップ１：１−（４−ブロモフェニル）−３−ジメチルアミノプロペニルケトンの製造
４−ブロモアセトフェノン１０．０ｇ（５０．２ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール１８．０ｇ（１５０．７ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）及びキシレン５０ｍＬを還流しながら一晩（２１時間）反応させ、原料が完全に反応せずに少し残ったまま反応を停止させた。反応液を冷却してからキシレンを濃縮し、残留物に石油エーテル１５０ｍＬを加えて撹拌しながら固形物を析出させ、濾過して、１−（４−ブロモフェニル）−３−ジメチルアミノプロペニルケトンの黄色固形物を１０．４ｇ、収率８２．２％で得た。
【０１０８】
ステップ２：６−（４−ブロモフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステルの製造
１−（４−ブロモフェニル）−３−ジメチルアミノプロペニルケトン５．０ｇ（１９．６ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、アセト酢酸メチル２．６８ｇ（２３．５ｍｍｏｌ，１．２Ｎ）、酢酸アンモニウム３．０２ｇ（３９．２ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水合物８８１ｍｇ（２．３５ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）、ヨウ化ナトリウム３５２ｍｇ（２．３５ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）及びイソプロパノール４０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら一晩反応させた。反応液を冷却してから減圧濾過し、濾液を濃縮してカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、６−（４−ブロモフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステルの黄色固形物を４．７ｇ、収率７８．３３％で得た。
【０１０９】
ステップ３：２−ブロモメチル−６−（４−ブロモフェニル）ニコチン酸メチルエステルの製造
６−（４−ブロモフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステル４．６ｇ（１５．３ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド２．８６ｇ（１６．０６ｍｍｏｌ，１．０５Ｎ）、アゾビスイソブチロニトリル２５１．２ｍｇ（１．５３ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びテトラクロロメタン２０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら６時間反応させた。反応液をそのままカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、２−ブロモメチル−６−（４−ブロモフェニル）ニコチン酸メチルエステルの黄色液状物を３．０ｇ、収率５１．３％で得た。
【０１１０】
ステップ４：６−（４−ブロモフェニル）−２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝ニコチン酸メチルエステルの製造
２−ブロモメチル−６−（４−ブロモフェニル）ニコチン酸メチルエステル３．０ｇ（７．８９ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−トシルグリシンメチルエステル１．８１ｍｇ（７．５０ｍｍｏｌ，０．９５Ｎ）、炭酸カリウム２．１２ｇ（１５．７８ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、ヨウ化ナトリウム１１８．５ｍｇ（０．７９ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１５ｍＬを混合し、５０℃で８時間反応させた。反応液に水１０ｍＬを入れて希釈し、酢酸エチル６０ｍＬで３回抽出した後、有機相を濃縮して得られた濃縮物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：１０〜１：１の溶出液を用いて溶出することにより、６−（４−ブロモフェニル）−２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝ニコチン酸メチルエステルの黄色油状物を１．１ｇ、収率２５．５％で得た。
【０１１１】
ステップ５：２−（４−ブロモフェニル）−５−ヒドロキシ−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの製造
室温においてナトリウムメトキシド濃度が３０％のメタノール溶液１ｍＬを、６−（４−ブロモフェニル）−２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝ニコチン酸メチルエステル１．１ｇ（２．０ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）を含むＤＭＳＯ溶液６ｍＬに滴下し、室温下で完全に反応させた。反応液に１Ｍの希塩酸を滴下してｐＨ値が３〜４となるようにし、反応液を酢酸エチル３０ｍＬで３回抽出し、酢酸エチル層を濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルとジクロロメタンとが１：１０の混合液で溶出することにより、２−（４−ブロモフェニル）−５−ヒドロキシ−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの淡黄色固形物を１５０ｍｇ、収率２０．９％で得た。
【０１１２】
ステップ６：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（４−ブロモ）フェニル］−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の製造
２−（４−ブロモフェニル）−５−ヒドロキシ−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステル１２０ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、グリシン７６．５ｍｇ（１．０２ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）、ナトリウムメトキシド濃度が５Ｍのメタノール溶液０．５ｍＬ及びメタノール５ｍＬを混合し、密閉反応器において１２０℃、２４時間反応させた。反応液を冷却した後、１Ｍの塩酸を用いてｐＨを酸性に調整して固形物を析出させた。減圧濾過し、残留物を少量の水及びメタノールで洗浄し、残留物を回収、乾燥して、２−｛５−ヒドロキシ−［２−（４−ブロモ）フェニル］−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の黄褐色固形物を１２０ｍｇ、収率８７．８％で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６５（ｓ，１Ｈ），１２．９５（ｓ，１Ｈ），９．４４（ｂｒｓ，１Ｈ），８．９６（ｓ，１Ｈ），８．７２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．４６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３０−８．２２（ｍ，２Ｈ），７．９５−７．６５（ｍ，２Ｈ），４．０６（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）
【０１１３】
実施例１３：［（５−ヒドロキシ−２−ナフタレン−１−イル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボニル）アミノ］酢酸の合成
【化２５】
0006473518.tif 000027
ステップ１：３−ジメチルアミノ−１−ナフタレン−１−イル−プロペニルケトンの製造
１−アセチルナフタレン１０．０ｇ（５８．８ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール２１．０ｇ（１７６．２ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）及びキシレン５０ｍＬを還流しながら一晩（２１時間）反応させ、原料が完全に反応せずに少し残ったまま反応を停止させた。反応液を冷却してからキシレンを濃縮し、残留物に石油エーテル１５０ｍＬを加えて撹拌しながら固形物を析出させ、濾過して、３−ジメチルアミノ−１−ナフタレン−１−イル−プロペニルケトンの茶褐色油状物を１０．０ｇ、収率７９．２％で得た。
【０１１４】
ステップ２：２−メチル−６−ナフタレン−１−イル−ニコチン酸メチルエステルの製造
３−ジメチルアミノ−１−ナフタレン−１−イル−プロペニルケトン７．５ｇ（３３．３ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、アセト酢酸メチル４．６ｇ（４０．０ｍｍｏｌ，１．２Ｎ）、酢酸アンモニウム５．１３ｇ（６６．６ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水合物２．５ｇ（６．６６ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）、ヨウ化ナトリウム９９９ｍｇ（６．６６ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）及びイソプロパノール３０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら一晩反応させた。反応液を冷却してから減圧濾過し、濾液を濃縮してカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、２−メチル−６−ナフタレン−１−イル−ニコチン酸メチルエステルの茶褐色液状物を７．０ｇ、収率７５．８％で得た。
【０１１５】
ステップ３：２−ブロモメチル−６−ナフタレン−１−イル−ニコチン酸メチルエステルの製造
２−メチル−６−ナフタレン−１−イル−ニコチン酸メチルエステル４．０ｇ（１４．４ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド２．６９ｇ（１５．１ｍｍｏｌ，１．０５Ｎ）、アゾビスイソブチロニトリル２３６．２ｍｇ（１．４４ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びテトラクロロメタン３０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら６時間反応させた。反応液をそのままカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、２−ブロモメチル−６−ナフタレン−１−イル−ニコチン酸メチルエステルの黄色液状物を３．０ｇ、収率５８．７％で得た。
【０１１６】
ステップ４：２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝−６−ナフタレン−１−イル−ニコチン酸メチルエステルの製造
２−ブロモメチル−６−ナフタレン−１−イル−ニコチン酸メチルエステル３．０ｇ（９．８ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−トシルグリシンメチルエステル２．２５ｇ（９．３１ｍｍｏｌ，０．９５Ｎ）、炭酸カリウム２．７０ｇ（１９．６ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、ヨウ化ナトリウム１４７ｍｇ（０．９８ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１５ｍＬを混合し、５０℃で８時間反応させた。反応液に水１０ｍＬを入れて希釈し、酢酸エチル６０ｍＬで３回抽出した後、有機相を濃縮して得られた濃縮物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：１０〜１：１の溶出液を用いて溶出することにより、２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝−６−ナフタレン−１−イル−ニコチン酸メチルエステルの白色固形物を１．２ｇ、収率２３．６％で得た。
【０１１７】
ステップ５：５−ヒドロキシ−２−ナフタレン−１−イル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの製造
室温においてナトリウムメトキシド濃度が３０％のメタノール溶液０．６ｍＬを、２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝−６−ナフタレン−１−イル−ニコチン酸メチルエステル０．６ｇ（１．１６ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）を含むＤＭＳＯ溶液４ｍＬに滴下し、室温下で完全に反応させた。反応液に１Ｍの希塩酸を滴下してｐＨ値が３〜４となるようにし、反応液を酢酸エチル３０ｍＬで３回抽出し、酢酸エチル層を濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルとジクロロメタンとが１：１０の混合液で溶出することにより、５−ヒドロキシ−２−ナフタレン−１−イル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの白色固形物を２３０ｍｇ、収率６０．１％で得た。
【０１１８】
ステップ６：［（５−ヒドロキシ−２−ナフタレン−１−イル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボニル）アミノ］酢酸の製造
５−ヒドロキシ−２−ナフタレン−１−イル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステル１５０ｍｇ（０．４５ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、グリシン１５０ｍｇ（０．４５ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）、ナトリウムメトキシド濃度が５Ｍのメタノール溶液１．０ｍＬ及びメタノール５ｍＬを混合し、密閉反応器において１２０℃、２４時間反応させた。反応液を冷却した後、１Ｍの塩酸を用いてｐＨを酸性に調整して固形物を析出させた。減圧濾過し、残留物を少量の水及びメタノールで洗浄し、残留物を回収、乾燥して、２−［（５−ヒドロキシ−２−ナフタレン−１−イル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボニル）アミノ］酢酸の白色固形物を１３０ｍｇ、収率７６．５％で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．７４（ｓ，１Ｈ），９．５６−９．４６（ｍ，１Ｈ），９．０１（ｓ，１Ｈ），８．８３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２３−８．１５（ｍ，２Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．０９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７２−７．７０（ｍ，１Ｈ），７．６７−７．５４（ｍ，２Ｈ），４．０９（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）。
【０１１９】
実施例１４：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（４−メトキシ）フェニル］−１，７−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の合成
【化２６】
0006473518.tif 000028
ステップ１：３−ジメチルアミノ−１−（３−メトキシフェニル）プロペニルケトンの製造
３−メトキシアセトフェノン１０．０ｇ（６６．６ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール２３．８ｇ（１９９．８ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）及びキシレン５０ｍＬを還流しながら一晩（２１時間）反応させ、原料が完全に反応せずに少し残ったまま反応を停止させた。反応液を冷却してからキシレンを濃縮し、残留物に石油エーテル１５０ｍＬを加えて撹拌しながら固形物を析出させ、濾過して、３−ジメチルアミノ−１−（３−メトキシフェニル）プロペニルケトンの茶褐色油状物を１０．０ｇ、収率７３．２％で得た。
【０１２０】
ステップ２：６−（３−メトキシフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステルの製造
３−ジメチルアミノ−１−（３−メトキシフェニル）プロペニルケトン６．１ｇ（２９．３ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、アセト酢酸メチル４．１ｇ（３５．１ｍｍｏｌ，１．２Ｎ）、酢酸アンモニウム４．５２ｇ（５８．６ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水合物２．２ｇ（５．８６ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）、ヨウ化ナトリウム８７９ｍｇ（５．８６ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）及びイソプロパノール４０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら一晩反応させた。反応液を冷却してから減圧濾過し、濾液を濃縮してカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、６−（３−メトキシフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステルの黄褐色液状物を６．０ｇ、収率８０．０％で得た。
【０１２１】
ステップ３：２−ブロモメチル−６−（４−メトキシフェニル）ニコチン酸メチルエステルの製造
６−（３−メトキシフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステル６．０ｇ（２３．３ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド４．３６ｇ（２４．５ｍｍｏｌ，１．０５Ｎ）、アゾビスイソブチロニトリル３８２．６ｍｇ（２．３３ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びテトラクロロメタン３０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら６時間反応させた。反応液をそのままカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、２−ブロモメチル−６−（４−メトキシフェニル）ニコチン酸メチルエステルの黄色液状物を５．５ｇ、収率７０．５％で得た。
【０１２２】
ステップ４：２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝−６−（３−メトキシフェニル）ニコチン酸メチルエステルの製造
２−ブロモメチル−６−（４−メトキシフェニル）ニコチン酸メチルエステル４．０ｇ（１１．７ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−トシルグリシンメチルエステル２．６９ｇ（１１．１ｍｍｏｌ，０．９５Ｎ）、炭酸カリウム３．２３ｇ（２３．４ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、ヨウ化ナトリウム１６０．５ｍｇ（１．１７ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１０ｍＬを混合し、５０℃で８時間反応させた。反応液に水１０ｍＬを入れて希釈し、酢酸エチル６０ｍＬで３回抽出した後、有機相を濃縮して得られた濃縮物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：１０〜１：１の溶出液を用いて溶出することにより、２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝−６−（３−メトキシフェニル）ニコチン酸メチルエステルの黄色油状物を４．８ｇ、収率８２．３％で得た。
【０１２３】
ステップ５：５−ヒドロキシ−２−（３−メトキシフェニル）−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの製造
室温においてナトリウムメトキシド濃度が３０％のメタノール溶液４ｍＬを、２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝−６−（３−メトキシフェニル）ニコチン酸メチルエステル４．８ｇ（９．６４ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）を含むＤＭＳＯ溶液１０ｍＬに滴下し、室温下で完全に反応させた。反応液に１Ｍの希塩酸を滴下してｐＨ値が３〜４となるようにし、反応液を酢酸エチル３０ｍＬで３回抽出し、酢酸エチル層を濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルとジクロロメタンとが１：１０の混合液で溶出することにより、５−ヒドロキシ−２−（３−メトキシフェニル）−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの淡黄色固形物を１．１ｍｇ、収率３６．７％で得た。
【０１２４】
ステップ６：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（４−メトキシ）フェニル］−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の製造
５−ヒドロキシ−２−（３−メトキシフェニル）−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステル２００ｍｇ（０．６４ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、グリシン１６７ｍｇ（２．２３ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）、ナトリウムメトキシド濃度が５Ｍのメタノール溶液１．０ｍＬ及びメタノール５ｍＬを混合し、密閉反応器において１２０℃、２４時間反応させた。反応液を冷却した後、１Ｍの塩酸を用いてｐＨを酸性に調整して固形物を析出させた。減圧濾過し、残留物を少量の水及びメタノールで洗浄し、残留物を回収、乾燥して、２−｛５−ヒドロキシ−［２−（４−メトキシ）フェニル］−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の類白色固形物を１５０ｍｇ、収率６５．８％で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６７（ｓ，１Ｈ），１２．８３（ｓ，１Ｈ），９．４１−９．４９（ｍ，１Ｈ），８．８９（ｓ，１Ｈ），８．７３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．５０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９５−７．８８（ｍ，１Ｈ），７．５３（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．０７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）。
【０１２５】
実施例１５：［（５−ヒドロキシ−２−チオフェン−２−イル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボニル）アミノ］酢酸の合成
【化２７】
0006473518.tif 000029
ステップ１：３−ジメチルアミノ−１−チオフェン−２−イル−プロペニルケトンの製造
１−アセチルチオフェン１２．８ｇ（１００．０ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール３５．８ｇ（３００．０ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）及びキシレン５０ｍＬを還流しながら一晩（２１時間）反応させ、原料が完全に反応せずに少し残ったまま反応を停止させた。反応液を冷却してからキシレンを濃縮し、残留物に石油エーテル１５０ｍＬを加えて撹拌しながら固形物を析出させ、濾過して、３−ジメチルアミノ−１−チオフェン−２−イル−プロペニルケトンの黄褐色固形物を７．０ｇ、収率３８．７％で得た。
【０１２６】
ステップ２：２−メチル−６−チオフェン−２−イル−ニコチン酸メチルエステルの製造
３−ジメチルアミノ−１−チオフェン−２−イル−プロペニルケトン５．５ｇ（３０．０ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、アセト酢酸メチル４．１０ｇ（３６．０ｍｍｏｌ，１．２Ｎ）、酢酸アンモニウム４．６０ｇ（６０．０ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水合物２．２５ｇ（６．０ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）、ヨウ化ナトリウム９００ｍｇ（６．０ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）及びイソプロパノール５０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら一晩反応させた。反応液を冷却してから減圧濾過し、濾液を濃縮してカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、２−メチル−６−チオフェン−２−イル−ニコチン酸メチルエステルの白色固形物を２．０ｇ、収率２８．６％で得た。
【０１２７】
ステップ３：２−ブロモメチル−６−チオフェン−２−イル−ニコチン酸メチルエステルの製造
２−メチル−６−チオフェン−２−イル−ニコチン酸メチルエステル２．０ｇ（８．７ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド１．６３ｇ（９．１３ｍｍｏｌ，１．０５Ｎ）、アゾビスイソブチロニトリル２８５．７ｍｇ（０．８７ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びテトラクロロメタン１５ｍＬを混合し、還流撹拌しながら６時間反応させた。反応液をそのままカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、２−ブロモメチル−６−チオフェン−２−イル−ニコチン酸メチルエステルの黄色液状物を２．０ｇ、収率７４．１％で得た。
【０１２８】
ステップ４：２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝−６−チオフェン−２−イル−ニコチン酸メチルエステルの製造
２−ブロモメチル−６−チオフェン−２−イル−ニコチン酸メチルエステル２．０ｇ（６．４３ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−トシルグリシンメチルエステル１．４８ｇ（６．１１ｍｍｏｌ，０．９５Ｎ）、炭酸カリウム１．７７ｇ（１２．８６ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、ヨウ化ナトリウム９６ｍｇ（０．６４ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１０ｍＬを混合し、５０℃で８時間反応させた。反応液に水１０ｍＬを入れて希釈し、酢酸エチル６０ｍＬで３回抽出した後、有機相を濃縮して得られた濃縮物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：１０〜１：１の溶出液を用いて溶出することにより、２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝−６−チオフェン−２−イル−ニコチン酸メチルエステルの黄色固形物を２ｇ、収率６５．６％で得た。
【０１２９】
ステップ５：５−ヒドロキシ−２−チオフェン−２−イル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの製造
室温においてナトリウムメトキシド濃度が３０％のメタノール溶液３ｍＬを、２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝−６−チオフェン−２−イル−ニコチン酸メチルエステル２．０ｇ（４．２１ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）を含むＤＭＳＯ溶液１０ｍＬに滴下し、室温下で完全に反応させた。反応液に１Ｍの希塩酸を滴下してｐＨ値が３〜４となるようにし、反応液を酢酸エチル３０ｍＬで３回抽出し、酢酸エチル層を濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルとジクロロメタンとが１：１０の混合液で溶出することにより、５−ヒドロキシ−２−チオフェン−２−イル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの黄色固形物を１．０ｇ、収率８３．３％で得た。
【０１３０】
ステップ６：［（５−ヒドロキシ−２−チオフェン−２−イル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボニル）アミノ］酢酸の製造
５−ヒドロキシ−２−チオフェン−２−イル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステル１４０ｍｇ（０．４９ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、グリシン１１０ｍｇ（１．４７ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）、ナトリウムメトキシド濃度が５Ｍのメタノール溶液１．０ｍＬ及びメタノール５ｍＬを混合し、密閉反応器において１２０℃、２４時間反応させた。反応液を冷却した後、１Ｍの塩酸を用いてｐＨを酸性に調整して固形物を析出させた。減圧濾過し、残留物を少量の水及びメタノールで洗浄し、残留物を回収、乾燥して、２−［（５−ヒドロキシ−２−チオフェン−２−イル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボニル）アミノ］酢酸の黄褐色固形物を１１８ｍｇ、収率７３．０％で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６２（ｓ，１Ｈ），１２．８６（ｓ，１Ｈ），９．４５−９．４２（ｍ，１Ｈ），８．８５（ｓ，１Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．４０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３１−７．２５（ｍ，１Ｈ），４．０５（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）。
【０１３１】
実施例１６：［（５−ヒドロキシ−２−ナフタレン−２−イル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボニル）アミノ］酢酸の合成
【化２８】
0006473518.tif 000030
ステップ１：３−ジメチルアミノ−１−ナフタレン−２−イル−プロペニルケトンの製造
２−アセチルナフタレン１０．０ｇ（５８．８ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール２１．０ｇ（１７６．２ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）及びキシレン５０ｍＬを還流しながら一晩（２１時間）反応させ、原料が完全に反応せずに少し残ったまま反応を停止させた。反応液を冷却してからキシレンを濃縮し、残留物に石油エーテル１５０ｍＬを加えて撹拌しながら固形物を析出させ、濾過して、３−ジメチルアミノ−１−ナフタレン−２−イル−プロペニルケトンの黄褐色固形物を１１．５ｇ、収率８７．１％で得た。
【０１３２】
ステップ２：２−メチル−６−ナフタレン−２−イル−ニコチン酸メチルエステルの製造
３−ジメチルアミノ−１−ナフタレン−２−イル−プロペニルケトン５．０ｇ（２２．１ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、アセト酢酸メチル３．０ｇ（２６．５ｍｍｏｌ，１．２Ｎ）、酢酸アンモニウム３．４ｇ（４４．２ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水合物１．６５ｇ（４．４ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）、ヨウ化ナトリウム６６０ｍｇ（４．４ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）及びイソプロパノール３０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら一晩反応させた。反応液を冷却してから減圧濾過し、濾液を濃縮してカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、２−メチル−６−ナフタレン−２−イル−ニコチン酸メチルエステルの黄色固形物を２．０ｇ、収率２８．６％で得た。
【０１３３】
ステップ３：２−ブロモメチル−６−ナフタレン−２−イル−ニコチン酸メチルエステルの製造
２−メチル−６−ナフタレン−２−イル−ニコチン酸メチルエステル２．０ｇ（７．２ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド１．３５ｇ（７．５８ｍｍｏｌ，１．０５Ｎ）、アゾビスイソブチロニトリル１１８．２ｍｇ（０．７２ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びテトラクロロメタン１５ｍＬを混合し、還流撹拌しながら６時間反応させた。反応液をそのままカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、２−ブロモメチル−６−ナフタレン−２−イル−ニコチン酸メチルエステルの黄色液状物を２．０ｇ、収率７８．１％で得た。
【０１３４】
ステップ４：２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝−６−ナフタレン−２−イル−ニコチン酸メチルエステルの製造
２−ブロモメチル−６−ナフタレン−２−イル−ニコチン酸メチルエステル２．０ｇ（５．６３ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−トシルグリシンメチルエステル１．３０ｇ（５．３５ｍｍｏｌ，０．９５Ｎ）、炭酸カリウム１．５５ｇ（１１．２６ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、ヨウ化ナトリウム８４ｍｇ（０．５６ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１０ｍＬを混合し、５０℃で８時間反応させた。反応液に水１０ｍＬを入れて希釈し、酢酸エチル６０ｍＬで３回抽出した後、有機相を濃縮して得られた濃縮物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：１０〜１：１の溶出液を用いて溶出することにより、２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝−６−ナフタレン−２−イル−ニコチン酸メチルエステルの黄色固形物を１．０ｇ、収率３４．２％で得た。
【０１３５】
ステップ５：５−ヒドロキシ−２−ナフタレン−２−イル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの製造
室温において、ナトリウムメトキシド濃度が３０％のメタノール溶液１ｍＬを、２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝−６−ナフタレン−２−イル−ニコチン酸メチルエステル０．８ｇ（１．５４ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）を含むＤＭＳＯ溶液５ｍＬに滴下し、室温下で完全に反応させた。反応液に１Ｍの希塩酸を滴下してｐＨ値が３〜４となるようにし、反応液を酢酸エチル３０ｍＬで３回抽出し、酢酸エチル層を濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルとジクロロメタンとが１：１０の混合液で溶出することにより、５−ヒドロキシ−２−ナフタレン−２−イル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの黄色固形物を１５０ｍｇ、収率２９．５％で得た。
【０１３６】
ステップ６：［（５−ヒドロキシ−２−ナフタレン−２−イル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボニル）アミノ］酢酸の製造
５−ヒドロキシ−２−ナフタレン−２−イル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステル１５０ｍｇ（０．４５ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、グリシン１０２ｍｇ（１．３６ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）、ナトリウムメトキシド濃度が５Ｍのメタノール溶液１．０ｍＬ及びメタノール５ｍＬを混合し、密閉反応器において１２０℃、２４時間反応させた。反応液を冷却した後、１Ｍの塩酸を用いてｐＨを酸性に調整して固形物を析出させた。減圧濾過し、残留物を少量の水及びメタノールで洗浄し、残留物を回収、乾燥して２［（５−ヒドロキシ−２−ナフタレン−２−イル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボニル）アミノ］酢酸の黄褐色固形物を１３０ｍｇ、収率７７．２％で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６６（ｓ，１Ｈ），９．４７−９．４１（ｍ，１Ｈ），９．０２（ｂｒｓ，１Ｈ），８．９２（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），８．７６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．５０（ｄｄ，Ｊ＝８．８，１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．１５−８．０８（ｍ，２Ｈ），８．０５−７．９７（ｍ，１Ｈ），７．６８−７．５７（ｍ，２Ｈ），４．０７（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）。
【０１３７】
実施例１７：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（３−フルオロ）フェニル］−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の合成
【化２９】
0006473518.tif 000031
ステップ１：３−ジメチルアミノ−１−（３−フルオロフェニル）プロペニルケトンの製造
３−フルオロアセトフェノン１０．０ｇ（７２．４ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール２５．９ｇ（２１７．２ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）及びキシレン５０ｍＬを還流しながら一晩（２１時間）反応させ、原料が完全に反応せずに少し残ったまま反応を停止させた。反応液を冷却してからキシレンを濃縮し、残留物に石油エーテル１５０ｍＬを加えて撹拌しながら固形物を析出させ、濾過して、３−ジメチルアミノ−１−（３−フルオロフェニル）プロペニルケトンの黄褐色固形物を１２．０ｇ、収率８５．７％で得た。
【０１３８】
ステップ２：６−（３−フルオロフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステルの製造
３−ジメチルアミノ−１−（３−フルオロフェニル）プロペニルケトン５．０ｇ（２５．８ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、アセト酢酸メチル３．５２ｇ（３０．９ｍｍｏｌ，１．２Ｎ）、酢酸アンモニウム３．９８ｇ（５１．６ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水合物１．９３ｇ（５．１６ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）、ヨウ化ナトリウム７７４ｍｇ（５．１６ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）及びイソプロパノール３０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら一晩反応させた。反応液を冷却してから減圧濾過し、濾液を濃縮してカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、６−（３−フルオロフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステルの白色固形物を４．８ｇ、収率７５．９％で得た。
【０１３９】
ステップ３：２−ブロモメチル−６−（３−フルオロフェニル）ニコチン酸メチルエステルの製造
６−（３−フルオロフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステル４．７ｇ（１９．２ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド３．５８ｇ（２０．１ｍｍｏｌ，１．０５Ｎ）、アゾビスイソブチロニトリル３１５ｍｇ（１．９２ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びテトラクロロメタン２０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら６時間反応させた。反応液をそのままカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、２−ブロモメチル−６−（３−フルオロフェニル）ニコチン酸メチルエステルの黄色固形物を４．５ｇ、収率７２．６％で得た。
【０１４０】
ステップ４：６−（３−フルオロフェニル）−２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝ニコチン酸メチルエステルの製造
２−ブロモメチル−６−（３−フルオロフェニル）ニコチン酸メチルエステル４．５ｇ（１３．９ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、Ｎ−トシルグリシンメチルエステル３．２ｇ（１３．２ｍｍｏｌ，０．９５Ｎ）、炭酸カリウム３．８４ｇ（２７．８ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、ヨウ化ナトリウム２０８．５ｍｇ（１．３９ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１５ｍＬを混合し、５０℃で８時間反応させた。反応液に水１０ｍＬを入れて希釈し、酢酸エチル６０ｍＬで３回抽出した後、有機相を濃縮して得られた濃縮物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：１０〜１：１の溶出液を用いて溶出することにより、６−（３−フルオロフェニル）−２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝ニコチン酸メチルエステルの白色固形物を３．５ｇ、収率５１．８％で得た。
【０１４１】
ステップ５：２−（３−フルオロフェニル）−５−ヒドロキシ−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの製造
室温において、ナトリウムメトキシド濃度が３０％のメタノール溶液３ｍＬを、６−（３−フルオロフェニル）−２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝ニコチン酸メチルエステル２．０ｇ（４．１１ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）を含むＤＭＳＯ溶液１０ｍＬに滴下し、室温下で完全に反応させた。反応液に１Ｍの希塩酸を滴下してｐＨ値が３〜４となるようにし、反応液を酢酸エチル３０ｍＬで３回抽出し、酢酸エチル層を濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルとジクロロメタンとが１：１０の混合液で溶出することにより、２−（３−フルオロフェニル）−５−ヒドロキシ−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの淡黄色固形物を１．０ｇ、収率８２．０％で得た。
【０１４２】
ステップ６：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（３−フルオロ）フェニル］−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の製造
２−（３−フルオロフェニル）−５−ヒドロキシ−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステル２００ｍｇ（０．６７ｍｍｏｌ，１．０Ｎ）、グリシン１５１ｍｇ（２．０１ｍｍｏｌ，３．０Ｎ）、ナトリウムメトキシド濃度が５Ｍのメタノール溶液０．５ｍＬ及びメタノール５ｍＬを混合し、密閉反応器において１２０℃で２４時間反応させた。反応液を冷却した後、１Ｍの塩酸を用いてｐＨを酸性に調整して固形物を析出させた。減圧濾過し、残留物を少量の水及びメタノールで洗浄し、残留物を回収、乾燥して、２−｛５−ヒドロキシ−［２−（３−フルオロ）フェニル］−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の黄褐色固形物を２３０ｍｇ、収率８９．１％で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６６（ｓ，１Ｈ），１２．８５（ｓ，１Ｈ），９．４２−９．４７（ｍ，１Ｈ），８．９７（ｓ，１Ｈ），８．８２−８．６８（ｍ，２Ｈ），８．６２−８．３１（ｍ，１Ｈ），８．２１−８．０９（ｍ，２Ｈ），７．６７−７．６０（ｍ，１Ｈ），７．４４−７．４０（ｍ，１Ｈ），４．０６（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）。
【０１４３】
実施例１８：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（３−ニトロ）フェニル］−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の合成
【化３０】
0006473518.tif 000032
ステップ１：３−ジメチルアミノ−１−（３−ニトロフェニル）プロペニルケトンの製造
３−ニトロアセトフェノン１０ｇ（６０．６ｍｍｏｌ，１Ｎ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール３５．６３ｇ（１８１ｍｍｏｌ，３Ｎ）及びキシレン５０ｍＬを還流しながら一晩（２１時間）反応させ、原料が完全に反応せずに少し残ったまま反応を停止させた。反応液を冷却してからキシレンを濃縮し、残留物に石油エーテル１５０ｍＬを加えて撹拌しながら固形物を析出させ、濾過して、３−ジメチルアミノ−１−（３−ニトロフェニル）プロペニルケトンの黄色固形物１１．３４ｇを得た。
【０１４４】
ステップ２：６−（３−ニトロフェニル）−２−エチルニコチン酸メチルエステルの製造
３−ジメチルアミノ−１−（３−ニトロフェニル）プロペニルケトン６．３１ｇ（２８．７ｍｍｏｌ，１Ｎ）、プロピオニル酢酸メチル４．４７ｇ（３４．４ｍｍｏｌ，１．２Ｎ）、酢酸アンモニウム４．４２ｇ（５７．４ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水合物２．１４ｇ（５．７ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）、ヨウ化ナトリウム８６０ｍｇ（５．７ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）及びイソプロパノール３５ｍＬを混合し、還流撹拌しながら一晩反応させた。反応液を冷却してから減圧濾過し、濾液を濃縮してカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、６−（３−ニトロフェニル）−２−エチルニコチン酸メチルエステルの黄色固形物１．５５ｇを得た。
【０１４５】
ステップ３：２−（１−ブロモエチル）−６−（３−ニトロフェニル）ニコチン酸メチルエステルの製造
６−（３−ニトロフェニル）−２−エチルニコチン酸メチルエステル１．５５ｇ（５．４ｍｍｏｌ，１Ｎ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド１．１６ｇ（６．５ｍｍｏｌ，１．２Ｎ）、アゾビスイソブチロニトリル４５ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ，０．０５Ｎ）及びテトラクロロメタン４０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら６時間反応させた。反応液をそのままカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、２−（１−ブロモエチル）−６−（３−ニトロフェニル）ニコチン酸メチルエステルの固形物１．５１ｇを得た。
【０１４６】
ステップ４：６−（３−ニトロフェニル）−２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝ニコチン酸メチルエステルの製造
２−（１−ブロモエチル）−６−（３−ニトロフェニル）ニコチン酸メチルエステル１．５１ｇ（４．１ｍｍｏｌ，１Ｎ）、Ｎ−トシルグリシンメチルエステル９９６ｍｇ（４．１ｍｍｏｌ，１Ｎ）、炭酸カリウム１．２ｇ（８．２ｍｍｏｌ，２Ｎ）、ヨウ化ナトリウム６０ｍｇ（０．４ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド３０ｍＬを混合し、５０℃で８時間反応させた。反応液に水１０ｍＬを入れて希釈し、酢酸エチル６０ｍＬで３回抽出した後、有機相を濃縮して得られた濃縮物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：１０〜１：１の溶出液を用いて溶出することにより、６−（３−ニトロフェニル）−２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝ニコチン酸メチルエステルの固形物６７０ｍｇを得た。
【０１４７】
ステップ５：２−（３−ニトロフェニル）−５−ヒドロキシ−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの製造
室温において、ナトリウムメトキシド濃度が３０％のメタノール溶液３０μＬを、６−（３−ニトロフェニル）−２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝ニコチン酸メチルエステル６７０ｍｇを含むＤＭＳＯ溶液５ｍＬに滴下し、室温下で完全に反応させた。反応液に１Ｍの希塩酸を滴下してｐＨ値が３〜４となるようにし、反応液を酢酸エチル３０ｍＬで３回抽出し、酢酸エチル層を濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルとジクロロメタンとが１：１０の混合液で溶出することにより、２−（３−ニトロフェニル）−５−ヒドロキシ−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの固形物２８０ｍｇを得た。
【０１４８】
ステップ６：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（３−ニトロ）フェニル］−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の製造
２−（３−ニトロフェニル）−５−ヒドロキシ−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステル８０ｍｇ（０．２４ｍｍｏｌ，１Ｎ）、グリシン５４ｍｇ（０．７２ｍｍｏｌ，３Ｎ）、ナトリウムメトキシド濃度が５Ｍのメタノール溶液０．５ｍＬ及びメタノール５ｍＬを混合し、密閉反応器において１２０℃、２４時間反応させた。反応液を冷却し、１Ｍの塩酸を用いてｐＨを酸性に調整して固形物を析出させた。減圧濾過し、残留物を少量の水及びメタノールで洗浄し、残留物を回収、乾燥して、２−｛５−ヒドロキシ−［２−（３−ニトロ）フェニル］−８−メチル−［１，７−］ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の固形物６０ｍｇを得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．３７（ｓ，１Ｈ），９．２４（ｂｒｓ，１Ｈ），９．１２（ｔ，Ｊ＝  ２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．８３−８．７２（ｍ，２Ｈ），８．６２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．４３−８．４１（ｍ，１Ｈ），７．９１（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０７（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），２．９８（ｓ，３Ｈ）。
【０１４９】
実施例１９：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（４−シアノ）フェニル］−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の合成
【化３１】
0006473518.tif 000033
ステップ１：３−ジメチルアミノ−１−（４−シアノフェニル）プロペニルケトンの製造
４−アセチルベンゾニトリル１４．５ｇ（１００ｍｍｏｌ，１Ｎ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール３５．７ｇ（３００ｍｍｏｌ，３Ｎ）及びキシレン８０ｍＬを還流しながら一晩（２１時間）反応させ、原料が完全に反応せずに少し残ったまま反応を停止させた。反応液を冷却してからキシレンを濃縮し、残留物に石油エーテル１５０ｍＬを加えて撹拌しながら固形物を析出させ、濾過して、３−ジメチルアミノ−１−（４−シアノフェニル）プロペニルケトンの褐色固形物１８．３６ｇを得た。
【０１５０】
ステップ２：６−（４−シアノフェニル）−２−エチルニコチン酸メチルエステルの製造
３−ジメチルアミノ−１−（４−シアノフェニル）プロペニルケトン１８．３６ｇ（９１．８ｍｍｏｌ，１Ｎ）、プロピオニル酢酸メチル１１．３ｇ（１１０ｍｍｏｌ，１．２Ｎ）、酢酸アンモニウム１４．１ｇ（１８３ｍｍｏｌ，２Ｎ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水合物７．５ｇ（２０ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）、ヨウ化ナトリウム３ｇ（２０ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）及びイソプロパノール１００ｍＬを混合し、還流撹拌しながら一晩反応させた。反応液を冷却してから減圧濾過し、濾液を濃縮してカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、６−（４−シアノフェニル）−２−エチルニコチン酸メチルエステルの黄色固形物８００ｍｇを得た。
【０１５１】
ステップ３：２−（１−ブロモエチル）−６−（４−シアノフェニル）ニコチン酸メチルエステルの製造
６−（４−シアノフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステル８００ｍｇ（３ｍｍｏｌ，１Ｎ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド６４０ｍｇ（３．６ｍｍｏｌ，１．２Ｎ）、アゾビスイソブチロニトリル２５ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ，０．０５Ｎ）及びテトラクロロメタン３０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら６時間反応させた。反応液をそのままカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、２−（１−ブロモエチル）−６−（４−シアノフェニル）ニコチン酸メチルエステルの黄色固形物９６０ｍｇを得た。
【０１５２】
ステップ４：６−（４−シアノフェニル）−２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝ニコチン酸メチルエステルの製造
２−（１−ブロモエチル）−６−（４−シアノフェニル）ニコチン酸メチルエステル９６０ｍｇ（２．７ｍｍｏｌ，１Ｎ）、Ｎ−トシルグリシンメチルエステル６５６ｍｇ（２．７ｍｍｏｌ，１Ｎ）、炭酸カリウム７５９ｍｇ（５．５ｍｍｏｌ，２Ｎ）、ヨウ化ナトリウム４５ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２０ｍＬを混合し、５０℃で８時間反応させた。反応液に水１０ｍＬを入れて希釈し、酢酸エチル６０ｍＬで３回抽出した後、有機相を濃縮して得られた濃縮物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：１０〜１：１の溶出液を用いて溶出することにより、６−（４−シアノフェニル）−２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝ニコチン酸メチルエステルの黄色固形物７２０ｍｇを得た。
【０１５３】
ステップ５：２−（４−シアノフェニル）−５−ヒドロキシ−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの製造
室温において、ナトリウムメトキシド濃度が３０％のメタノール溶液３０μＬを、６−（４−シアノフェニル）−２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝ニコチン酸メチルエステル７２０ｍｇを含むＤＭＳＯ溶液６ｍＬに滴下し、室温下で完全に反応させた。反応液に１Ｍの希塩酸を滴下してｐＨ値が３〜４となるようにし、反応液を酢酸エチル３０ｍＬで３回抽出し、酢酸エチル層を濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルとジクロロメタンとが１：１０の混合液で溶出することにより、２−（４−シアノフェニル）−５−ヒドロキシ−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの固形物１９０ｍｇを得た。
【０１５４】
ステップ６：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（４−シアノ）フェニル］−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の製造
２−（４−シアノフェニル）−５−ヒドロキシ−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステル６４ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ，１Ｎ）、グリシン４５ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ，３Ｎ）、ナトリウムメトキシド濃度が５Ｍのメタノール溶液０．５ｍＬ及びメタノール５ｍＬを混合し、密閉反応器において１２０℃、２４時間反応させた。反応液を冷却し、１Ｍの塩酸を用いてｐＨを酸性に調整して固形物を析出させた。減圧濾過し、残留物を少量の水及びメタノールで洗浄し、残留物を回収、乾燥して、２−｛５−ヒドロキシ−［２−（４−シアノ）フェニル］−８−メチル［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の固形物４０ｍｇを得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．３２（ｓ，１Ｈ），１２．８５（ｓ，１Ｈ），９．２１（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），８．７０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），８．５３−８．４７（ｍ，３Ｈ），８．１０−８．０３（ｍ，２Ｈ），４．０７（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），２．９４（ｓ，３Ｈ）。
【０１５５】
実施例２０：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（４−トリフルオロメチル）フェニル］−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の合成
【化３２】
0006473518.tif 000034
ステップ１：３−ジメチルアミノ−１−（４−トリフルオロメチルフェニル）プロペニルケトンの製造
４−トリフルオロメチルアセトフェノン１５ｇ（８０ｍｍｏｌ，１Ｎ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール２８．６ｇ（２４０ｍｍｏｌ，３Ｎ）及びキシレン６０ｍＬを還流しながら一晩（２１時間）反応させ、原料が完全に反応せずに少し残ったまま反応を停止させた。反応液を冷却してからキシレンを濃縮し、残留物に石油エーテル１５０ｍＬを加えて撹拌しながら固形物を析出させ、濾過して、３−ジメチルアミノ−１−（４−トリフルオロメチルフェニル）プロペニルケトンの黄色固形物１２．１２ｇを得た。
【０１５６】
ステップ２：６−（４−トリフルオロメチルフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステルの製造
３−ジメチルアミノ−１−（４−トリフルオロメチルフェニル）プロペニルケトン１２．１ｇ（５０ｍｍｏｌ，１Ｎ）、アセト酢酸メチル８．７ｇ（７５ｍｍｏｌ，１．５Ｎ）、酢酸アンモニウム７．７ｇ（１００ｍｍｏｌ，２．０Ｎ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水合物３．７５ｇ（１０ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）、ヨウ化ナトリウム１．５ｇ（１０ｍｍｏｌ，０．２Ｎ）及びイソプロパノール７０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら一晩反応させた。反応液を冷却してから減圧濾過し、濾液を濃縮してカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、６−（４−トリフルオロメチルフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステルの固形物１２．９ｇを得た。
【０１５７】
ステップ３：２−ブロモメチル−６−（４−トリフルオロメチルフェニル）ニコチン酸メチルエステルの製造
６−（４−トリフルオロメチルフェニル）−２−メチルニコチン酸メチルエステル１２．９ｇ（４３．７ｍｍｏｌ，１Ｎ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド９．３４ｇ（５２．５ｍｍｏｌ，１．２Ｎ）、アゾビスイソブチロニトリル３５８ｍｇ（２．２ｍｍｏｌ，０．０５Ｎ）及びテトラクロロメタン５０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら６時間反応させた。反応液をそのままカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、２−ブロモメチル−６−（４−トリフルオロメチルフェニル）ニコチン酸メチルエステルの油状物１４．４７ｇを得た。
【０１５８】
ステップ４：６−（４−トリフルオロメチルフェニル）−２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝ニコチン酸メチルエステルの製造
２−ブロモメチル−６−（４−トリフルオロメチルフェニル）ニコチン酸メチルエステル１４．４ｇ（３８．８ｍｍｏｌ，１Ｎ）、Ｎ−トシルグリシンメチルエステル９．４２ｇ（３８．８ｍｍｏｌ，１Ｎ）、炭酸カリウム１０．７ｇ（７７．６ｍｍｏｌ，２Ｎ）、ヨウ化ナトリウム５７８ｍｇ（３．９ｍｍｏｌ，０．１Ｎ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１００ｍＬを混合し、５０℃で８時間反応させた。反応液に水１０ｍＬを入れて希釈し、酢酸エチル６０ｍＬで３回抽出した後、有機相を濃縮して得られた濃縮物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：１０〜１：１の溶出液を用いて溶出することにより、６−（４−トリフルオロメチルフェニル）−２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝ニコチン酸メチルエステルの油状物７．８７ｇを得た。
【０１５９】
ステップ５：２−（４−トリフルオロメチルフェニル）−５−ヒドロキシ−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの製造
室温において、ナトリウムメトキシド濃度が３０％のメタノール溶液５ｍＬを、６−（４−トリフルオロメチルフェニル）−２−｛［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］メチル｝ニコチン酸メチルエステル７．８７ｇを含むＤＭＳＯ溶液５０ｍＬに滴下し、室温下で完全に反応させた。反応液に１Ｍの希塩酸を滴下してｐＨ値が３〜４となるようにし、反応液を酢酸エチル３０ｍＬで３回抽出し、酢酸エチル層を濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルとジクロロメタンとが１：１０の混合液で溶出することにより、２−（４−トリフルオロメチルフェニル）−５−ヒドロキシ−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの黄色固形物１．２３ｇを得た。
【０１６０】
ステップ６：２−｛５−ヒドロキシ−［２−（４−トリフルオロメチル）フェニル］−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の製造
２−（４−トリフルオロメチルフェニル）−５−ヒドロキシ−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステル２００ｍｇ（０．５８ｍｍｏｌ，１Ｎ）、グリシン１３０ｍｇ（１．７３ｍｍｏｌ，３Ｎ）、ナトリウムメトキシド濃度が５Ｍのメタノール溶液０．５ｍＬ及びメタノール５ｍＬを混合し、密閉反応器において１２０℃で２４時間反応させた。反応液を冷却した後、１Ｍの塩酸を用いてｐＨを酸性に調整して固形物を析出させた。減圧濾過し、残留物を少量の水及びメタノールで洗浄し、残留物を回収、乾燥して、２−｛５−ヒドロキシ−［２−（４−トリフルオロメチル）フェニル］−１，７−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の固形物１２０ｍｇを得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６１（ｓ，１Ｈ），１２．９４（ｓ，１Ｈ），９．４４（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），８．９８（ｓ，１Ｈ），８．７５（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），８．５６−８．５２（ｍ，３Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ），４．０６（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ）。
【０１６１】
実施例２１：２−｛５−ヒドロキシ−８−メチル−２−フェニル−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の合成
【化３３】
0006473518.tif 000035
ステップ１：３−ジメチルアミノ−１−フェニルプロペニルケトンの製造
アセトフェノン５ｇ、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール１５ｇ及びキシレン６０ｍＬを還流しながら一晩（２１時間）反応させ、原料が完全に反応せずに少し残ったまま反応を停止させた。反応液を冷却してからキシレンを濃縮し、残留物に石油エーテル１５０ｍＬを加えて撹拌しながら固形物を析出させ、濾過して、３−ジメチルアミノ−１−フェニルプロペニルケトンの黄色固形物を４．５ｇ、収率６２％で得た。
【０１６２】
ステップ２：６−フェニル−２−エチルニコチン酸メチルエステルの製造
３−ジメチルアミノ−１−フェニルプロペニルケトン４．２ｇ、アセト酢酸メチル４．６８ｇ、酢酸アンモニウム４．２９ｇ、塩化セリウム（ＩＩＩ）七水合物１．９７ｇ、ヨウ化ナトリウム１．０ｇ及びイソプロパノール５０ｍＬを混合し、還流撹拌しながら一晩反応させた。反応液を冷却してから減圧濾過し、濾液を濃縮してカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：５０の混合液を用いて溶出することにより、６−フェニル−２−エチルニコチン酸メチルエステルの固形物を２．９７ｇ、収率７１％で得た。
【０１６３】
ステップ３：２−（１−ブロモエチル）−６−フェニルニコチン酸メチルエステルの製造
６−フェニル−２−エチルニコチン酸メチルエステル２．９ｇ、Ｎ−ブロモスクシンイミド２ｇ、アゾビスイソブチロニトリル１ｇ及びテトラクロロメタン１００ｍＬを混合し、還流撹拌しながら６時間反応させた。反応液を減圧濾過して不溶物を除去し、濾液を濃縮してそのままステップ４に用いた。
【０１６４】
ステップ４：６−フェニル−２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝ニコチン酸メチルエステルの製造
２−（１−ブロモエチル）−６−フェニルニコチン酸メチルエステル粗品、Ｎ−トシルグリシンメチルエステル２．６ｇ、炭酸カリウム４．０ｇ、ヨウ化ナトリウム３２０ｍｇ及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１００ｍＬを混合し、５０℃で８時間反応させた。反応液に水１０ｍＬを入れて希釈し、酢酸エチル６０ｍＬで３回抽出した後、有機相を濃縮して得られた濃縮物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルと石油エーテルとが１：１０〜１：１の溶出液を用いて溶出することにより、６−フェニル−２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝ニコチン酸メチルエステル１．０ｇを得た。
【０１６５】
ステップ５：２−フェニル−５−ヒドロキシ−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの製造
室温においてナトリウムメトキシド濃度が５Ｍのメタノール溶液２ｍＬを、６−フェニル−２−｛１−［メトキシカルボニルメチル−（４−メチルフェニルスルホニル）アミノ］エチル｝ニコチン酸メチルエステル１ｇを含むジメチルスルホキシド溶液５０ｍＬに滴下し、室温下で完全に反応させた。反応液に１Ｍの希塩酸を滴下してｐＨ値が３〜４となるようにし、反応液を酢酸エチル３０ｍＬで３回抽出し、酢酸エチル層を濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルとジクロロメタンとが１：１０の混合液で溶出することにより、２−フェニル−５−ヒドロキシ−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステルの黄色固形物５００ｍｇを得た。
【０１６６】
ステップ６：２−［５−ヒドロキシ−２−フェニル−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ］酢酸の製造
２−フェニル−５−ヒドロキシ−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−カルボン酸メチルエステル２００ｍｇ、グリシン２０９ｍｇ、ナトリウムメトキシド濃度が５Ｍのメタノール溶液０．５ｍＬ及びメタノール５ｍＬを混合し、密閉反応器において１２０℃で２４時間反応させた。反応液を冷却した後、１Ｍの塩酸を用いてｐＨを酸性に調整して固形物を析出させた。減圧濾過し、残留物を少量の水及びメタノールで洗浄し、残留物を回収、乾燥して、２−｛５−ヒドロキシ−２−フェニル−８−メチル−［１，７］−ナフチリジン−６−ホルミルアミノ｝酢酸の固形物３０ｍｇを得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．３６（ｓ，１Ｈ），９．２２（ｂｒｓ，１Ｈ），８．７１（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．４８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．４１−８．３３（ｍ，２Ｈ），７．６７−７．５３（ｍ，３Ｈ），４．０６（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），２．９８（ｓ，３Ｈ）．
【０１６７】
測定例１：体外におけるＨＩＦ−ＰＨＤ２阻害剤系化合物の肝癌細胞Ｈｅｐ３Ｂのエリスロポエチン発現に対する促進作用
実験用肝癌細胞Ｈｅｐ３Ｂ（中国典型培養物保存センター、ＣＣＴＣＣ）の培養に必要な完全培地として、ＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ社製、Ｃａｔ番号ＧＮＭ４１５００、杭州吉諾生物医薬技術有限会社より購入）に１０％血清ＦＢＳ（ＧＩＢＣＯ社製、Ｃａｔ番号１００９９−１４１）及び１％のペニシリン−ストレプトマイシン（Ｃａｔ番号ＧＮＭ１５１４０、杭州吉諾生物医薬技術有限会社より購入）を加えたものを使用し、細胞培養には３７℃でＣＯ２が５％のインキュベーターを用いた。実験用試薬として、ジメチルスルホキシド（分子生物学実験用、純度＞＝９９．９％、Ｃａｔ番号Ｄ８４１８）はシグマ社製であり、測定用ＥＬＩＳＡキット（ヒトエリスロポエチン定量用ＩＶＤ  ＥＬＩＳＡ、商品コードＤＥＰ００）はＲ＆Ｄシステムズ社製であった。測定用対照物としてのＡＫＢ−６５４８は、自ら作製するか、商業ルートで購入した。測定試料は、遮光密封して−２０℃に保存した。
【０１６８】
測定試料及びポジティブコントロールを、遮光条件下で、滅菌水又はジメチルスルホキシドに完全に溶かし、濃度がそれぞれ１０−１ｍｏｌ／Ｌ、１０−２ｍｏｌ／Ｌの保存液を調製して−２０℃に保存した。ＦＢＳ濃度が０．５％のＭＥＭ培地を希釈液として、前記測定試料の保存液を希釈し、濃度がそれぞれ１００μｍｏｌ／Ｌ、１０μｍｏｌ／Ｌの測定用希釈液を調製した。９６ウェルプレートに２００μＬ／ウェル（１．５又は２．０×１０４細胞／ウェル）の量で、肝癌細胞Ｈｅｐ３Ｂの完全培地懸濁液を加え、温度３７℃、ＣＯ２濃度５％のインキュベーターで一晩培養した。９６ウェルプレート中の古い培養液を捨て、細胞をＦＢＳ０．５％のＭＥＭ培地で１回洗った後、遮光条件下で、２００μＬ／ウェルの量で測定試料を加えて、濃度がそれぞれ１００μｍｏｌ／Ｌ、１０μｍｏｌ／Ｌとなるようにし、各濃度には２つのウェルを設けてそれぞれ測定用ウェル及び予備用ウェルとした。また、測定液の代わりに希釈液を加えて細胞対照ウェル（測定試料と溶媒を含まず）とした。また、測定液の代わりに同じ濃度の溶媒（ジメチルスルホキシド）を含む希釈液を用い、溶媒対照ウェル（測定試料を含まず）とした。温度３７℃、ＣＯ２濃度５％のインキュベーターで２４時間培養した後、上清を捨てサンプルとして−２０℃に冷凍保存した。停止液を１００μＬ／ウェルの量で加えた後、マイクロプレートリーダーを用いてＡ４５０ｎｍ〜Ａ６００ｎｍの範囲でＯＤ値を測定し、検量線に基づいて測定試料のＥＰＯ発現に対する促進活性（ｍＩＵ／ｍＬ）を算出した。測定結果を下記表２に示す。
【０１６９】
【表２】
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【０１７０】
表２に示すように、ポジティブコントロールであるＦＧ−４５９２に比べて、本発明に係る化合物は細胞内のＥＰＯ発現に対してより顕著な促進作用を示し、本発明に係る化合物の細胞内におけるＥＰＯの発現レベルがポジティブコントロールであるＦＧ−４５９２のほぼ１．５倍以上であった。
【０１７１】
測定例２：本発明に係る化合物のＰＨＤ２に対する抑制効果（ＩＣ５０）の測定
蛍光偏光法（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ，ＦＰ）により低酸素誘導因子ＨＩＦ−１αとＶＢＣ複合体（ｖｏｎ  Ｈｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ＥｌｏｎｇｉｎＢ−ＥｌｏｎｇｉｎＣ，ＶＢＣ）との相互作用を測定し、ＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼ（ｐｒｏｌｙｌ  ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅｓ２，ＰＨＤ２）阻害剤化合物の酵素抑制活性を測定した。
【０１７２】
アスコルビン酸２００μＭ、α−ケトグルタル酸２０μＭ、ＦｅＣｌ２１００μＭを含むＮＥＴＮ（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．５％  ＮＰ−４０、１ｍＭ  ＰＭＳＦ）緩衝液に、遮光条件下で、終濃度が１μＭのＦＡＭ−ＨＩＦ（５５６−５７５）を加えた。そして、特定の濃度の測定化合物及び陽性化合物（ネガティブコントロール及びポジティブコントロールとして、化合物の代わりに緩衝液を用いる）を加え、最後に終濃度が０．５μｇ／μＬのＰＨＤ２（ネガティブコントロールとしてＰＨＤ２の代わりに緩衝液を用いる）を加えた。十分混合した後、室温、遮光条件にて静置することにより３０分間反応させた後、９５℃のウォーターバスに１分間置いて反応を停止させた。温度が室温に戻るまで待ち、試料を次の測定に備えて一時保存した。黒色の９６ウェルプレートにＥＢＣ緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１２０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．５％  ＮＰ−４０）を加え、更に終濃度が３００ｎＭのＧＳＴ−ＶＢＣ複合体（ブランク対照としてウェルにＥＢＣ緩衝液のみを入れる）を加えた。そして、遮光して適量のＰＨＤ２プロリンヒドロキシル化反応のサンプルを終濃度が１００ｎＭとなるように加え、反応基質とした。十分混合した後、全波長マルチモードプレートリーダー（ＴＥＣＡＮ  ｉｎｆｉｎｉｔｅ  Ｍ１０００）を用いて励起波長４０７ｎＭ、発光波長５１８ｎＭの条件下で横手方向及び長手方向の蛍光強度値を測定した。蛍光偏光度（ｍＰ）は、下記式１に従って算出した。
【０１７３】
＜式１＞  蛍光偏光度（ｍＰ）：
ｍＰ＝１０００×（横手方向の蛍光強度値−Ｇ因子×長手方向の蛍光強度値）／（横手方向の蛍光強度値＋Ｇ因子×長手方向の蛍光強度値）
そのうち、横手方向の蛍光強度値＝測定ウェルの横手方向における蛍光強度値−ブランク対照の横手方向における蛍光強度値
長手方向の蛍光強度値＝測定ウェルの長手方向における蛍光強度値−ブランク対照の長手方向における蛍光強度値
【０１７４】
また、下記式２に従って測定化合物のＰＨＤ２抑制率（％）を算出した。
【０１７５】
＜式２＞
抑制率（％）＝１−（ｍＰ測定ウェル−ｍＰネガティブコントロールウェル）／（ｍＰポジティブコントロールウェル−ｍＰネガティブコントロールウェル）
【０１７６】
ＩＣ５０はＧｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ４．０ソフト（Ｇｏｌｄｅｎ  ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｇｏｌｄｅｎ，Ｃｏｌｏｒａｄｏ，ＵＳＡ）を利用し、非線形回帰法を用いて算出した。測定結果から、本発明に係る化合物がＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼ阻害活性を示すことを確認できた。
【０１７７】
【表３】
0006473518.tif 000037
【０１７８】
測定例３：本発明に係る化合物の正常マウスにおける赤血球形成の促進効果
オスのＢＡＬＢ／ｃマウス８０匹を１１群に分け、各投与群あたり８匹ずつに分け、ブランク対照群は１０匹に分けた。ポジティブコントロール群として、ＡＫＢ−６５４８投与群は、経口投与で、１日１回１００ｍｇ／ｋｇを３回投与し、ＦＧ−４５９２投与群は、経口投与で、１日１回２５ｍｇ／ｋｇを３回投与し、ＥＰＯ投与群は、１日目と３日目に皮下注射で１００ＩＵ／ｋｇを投与した。本発明に係る化合物は経口投与で、１日１回２５ｍｇ／ｋｇを３回投与した。最終投与から４時間経った時点でマウスの眼窩から採血し、ＥＤＴＡ−Ｋ２法を利用して抗凝固処理を行い、自動血球分析装置を用いて網状赤血球（ＲＥＴＩＣ）を計数した。下記表４に示すように、対照化合物及び本発明に係る化合物の場合は何れも正常マウスを超えることが確認できた（ｐ＜０．０１）。
【０１７９】
【表４】
0006473518.tif 000038