(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
0006470757.tif 000055
（式中、Ｒはハロゲン又はＣ1−Ｃ6アルキルである）で表される化合物。
【請求項２】
ＲはＦ、Ｃｌ又はＢｒであり、あるいはＲはＣ1−Ｃ3アルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒはメチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｓ１Ｐ１が媒介する疾患又は状態の治療のための薬物を製造するための化合物の使用であって、
前記疾患又は状態は、関節リウマチ、多発性硬化症、炎症性腸炎、自己免疫疾患、慢性炎症性疾患、喘息、炎症性ニューロパチー、関節炎、移植、クローン病、潰瘍性大腸炎、エリテマトーデス、乾癬、虚血再灌流障害、固形腫瘍、血管新生に関係する疾患、血管疾患、疼痛、急性ウイルス性疾患、炎症性腸疾患、インスリン及び非インスリン依存性糖尿病並びに他の関連免疫疾患から成る群から選択される、
請求項１から３のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項５】
前記疾患又は状態は、多発性硬化症、関節リウマチ、炎症性腸炎及び乾癬から成る群から選択される、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
請求項１から請求項３に記載の化合物及び任意で医薬的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
【請求項７】
錠剤、坐薬、分散錠、腸溶錠、咀嚼錠、口腔内崩壊錠、カプセル、糖衣製剤、顆粒、乾燥粉末、経口液、小型注射針、注射用凍結乾燥粉末又は大容量非経口液の形態である、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記医薬的に許容可能な担体は、希釈剤、可溶化剤、崩壊剤、懸濁剤、滑沢剤、バインダ、フィラー、香味料、甘味料、抗酸化剤、界面活性剤、防腐剤、ラッピング剤及び着色料から成る群から選択される、請求項６または７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
以下の：
（１）式１−３の３−フルオロ−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジンを式１−４の４−イソブチル安息香酸と縮合剤１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド及び１−ヒドロキシベンゾトリゾールの存在下で反応させることで式１−５：
【化２】
0006470757.tif 000056
の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールを生成するステップと、
（２）ステップ（１）で得られた式１−５の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールを二酸化マンガンと反応させることで式１−６：
【化３】
0006470757.tif 000057
の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドを生成するステップと、
（３）ステップ（２）で得られた式１−６の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドを式１−７のアゼチジン−３−カルボン酸と、触媒としての酢酸及び還元剤としてのナトリウムシアノボロヒドリドを使用して反応させることで式ＩＢ：
【化４】
0006470757.tif 000058
の化合物を生成するステップとを含む、１−｛２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸の合成方法。
【請求項１０】
ステップ（１）は、式１−５の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールの生成後に、得られた粗生成物を精製するステップも含む、
請求項９に記載の合成方法。
【請求項１１】
前記精製をカラムクロマトグラフィ又は結晶化で行う、請求項１０に記載の合成方法。
【請求項１２】
前記精製を結晶化により行う場合、利用する結晶化溶媒は、メタノール、エタノール、アセトン、ジクロロメタン、酢酸エチル及び水から選択される１種以上である、請求項１１に記載の合成方法。
【請求項１３】
利用する前記結晶化溶媒はメタノールと水との混合物である、請求項１２に記載の合成方法。  
【請求項１４】
前記結晶化溶媒は、体積基準で３：１の比のメタノールと水との混合物である、請求項１３に記載の合成方法。
【請求項１５】
前記粗生成物（ｇ、重量基準）の前記結晶化溶媒（ｍｌ、体積基準）に対する比は１：３〜２０である、請求項１２に記載の合成方法。
【請求項１６】
前記粗生成物（ｇ、重量基準）の前記結晶化溶媒（ｍｌ、体積基準）に対する比は１：５である、請求項１２に記載の合成方法。
【請求項１７】
前記結晶化を２０℃で行う、請求項１１に記載の合成方法。
【請求項１８】
ステップ（１）の前記反応は、アセトニトリル、Ｎ−メチルピロリドン及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドから選択される１種以上の反応溶媒中で行われ、前記反応は、８０〜１４０℃で行われ、式１−３の３−フルオロ−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジンの式１−４の４−イソブチル安息香酸に対するモル比は１：１〜２．０である、請求項９から１７のいずれか一項に記載の合成方法。
【請求項１９】
ステップ（１）において、前記反応溶媒はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドである、
請求項１８に記載の合成方法。
【請求項２０】
前記反応温度は１３０〜１４０℃である、
請求項１８に記載の合成方法。
【請求項２１】
式１−３の３−フルオロ−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジンの式１−４の４−イソブチル安息香酸に対するモル比は１：１〜１．５である、
請求項１８に記載の合成方法。
【請求項２２】
式１−３の３−フルオロ−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジンの式１−４の４−イソブチル安息香酸に対するモル比は１：１〜１．２である、
請求項１８に記載の合成方法。
【請求項２３】
ステップ（２）の前記反応は、トルエン、テトラヒドロフラン及び酢酸エチルから選択される１種以上の反応溶媒中で行われ、式１−５の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコール（ｇ、重量基準）の前記反応溶媒（ｍｌ、体積基準）に対する比は１：１０〜３０であり、前記反応は４０〜７０℃で行われ、式１−５の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールの二酸化マンガンに対するモル比は１：４〜１０である、請求項９に記載の合成方法。
【請求項２４】
ステップ（２）において、前記反応溶媒は酢酸エチルである、
請求項２３に記載の合成方法。
【請求項２５】
式１−５の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコール（ｇ、重量基準）の前記反応溶媒（ｍｌ、体積基準）に対する比は１：１０である、
請求項２３に記載の合成方法。
【請求項２６】
前記反応温度は６０〜７０℃である、
請求項２３に記載の合成方法。
【請求項２７】
式１−５の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールの二酸化マンガンに対するモル比は１：５〜６である、
請求項２３に記載の合成方法。
【請求項２８】
式１−５の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールの二酸化マンガンに対するモル比は
１：６である、
請求項２３に記載の合成方法。
【請求項２９】
ステップ（３）の前記反応は、テトラヒドロフラン及び／又はメタノールから選択される反応溶媒中で行われ、式１−６の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドの式１−７のアゼチジン−３−カルボン酸に対するモル比は１：１〜１．２であり、式１−６の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドのナトリウムシアノボロヒドリドに対するモル比は１：０．５〜６であり、前記反応は０〜３０℃で１〜１６時間の反応時間にわたって行われる、請求項９に記載の合成方法。
【請求項３０】
ステップ（３）において、前記反応溶媒はメタノールである、
請求項２９に記載の合成方法。
【請求項３１】
式１−６の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドの式１−７のアゼチジン−３−カルボン酸に対するモル比は１：１〜１．１である、
請求項２９に記載の合成方法。
【請求項３２】
式１−６の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドの式１−７のアゼチジン−３−カルボン酸に対するモル比は１：１である、
請求項２９に記載の合成方法。
【請求項３３】
ナトリウムシアノボロヒドリドをメタノールに溶解させ、０〜２０℃で反応系に滴下する、
請求項２９に記載の合成方法。
【請求項３４】
ナトリウムシアノボロヒドリドをメタノールに溶解させ、１５〜２０℃で反応系に滴下する、
請求項２９に記載の合成方法。
【請求項３５】
式１−６の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドのナトリウムシアノボロヒドリドに対するモル比は１：１である、
請求項２９に記載の合成方法。
【請求項３６】
前記反応温度は１０〜２０℃である、
請求項２９に記載の合成方法。
【請求項３７】
前記反応温度は１５〜２０℃である、
請求項２９に記載の合成方法。
【請求項３８】
前記反応時間は４〜１６時間である、
請求項２９に記載の合成方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医学分野に関わる。特には、本発明は、Ｓ１Ｐ１受容体アゴニストの活性を有する新規な化合物、この化合物を含む医薬組成物、Ｓ１Ｐ１受容体が媒介する疾患の治療のための薬物を製造するためのこの化合物及び医薬組成物の使用並びにＳ１Ｐ１受容体が媒介する関連疾患を治療するための化合物及び医薬組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
リンパ組織から末梢循環へのリンパ球の輸送にはスフィンゴシン−１−リン酸受容体−１（Ｓ１Ｐ１）の存在が必要とされることは当該分野で周知である。しかしながら、Ｓ１Ｐ１の内部移行はリンパ球のリンパ組織からの流出を妨げ得るため、これらの重要な免疫細胞がリンパ組織に閉じ込められてしまう。
【０００３】
数多くの研究が、リンパ球で発現する相同受容体に結合し、Ｓ１Ｐ１の内部移行を引き起こすことでリンパ球の輸送を妨げる複数のＳ１Ｐ１アゴニストの存在を示唆している。Ｓ１Ｐ１受容体アゴニストはリンパ球の輸送を妨げることでヒトが免疫応答を発動させる能力を低下させることができるため、様々な自己免疫疾患を治療するための免疫抑制剤として機能し得る。
【０００４】
数多くのＳ１Ｐ１アゴニストが文献に記載されてきたが、その中でも最も典型的な化合物はＦＴＹ７２０（「フィンゴリモド」としても知られる）である。現在、ＦＴＹ７２０は、多発性硬化症の治療用にＮｏｖａｒｔｉｓにより「Ｇｉｌｅｎｙａ（ジレニア）」の商品名で宣伝、販売されている。ＦＴＹ７２０は臨床的に有効であるものの非選択的Ｓ１Ｐ受容体アゴニストであり、複数のＳ１Ｐ受容体、例えばＳ１Ｐ１、Ｓ１Ｐ２、Ｓ１Ｐ３、Ｓ１Ｐ４、Ｓ１Ｐ５を活性化させ得る。ＦＴＹ７２０がＳ１Ｐ３に結合すると一連の副作用（例えば、徐脈、組織の線維化）が起きる場合がある。したがって、多くの製薬会社及びバイオテクノロジー団体が、ＦＴＹ７２０の副作用を克服するために、より特異性が高く安全な第２世代のＳ１Ｐ１アゴニストを探し求めている。
【０００５】
ターゲット特異性の改善に加えて、薬剤（すなわち、Ｓ１Ｐ１受容体アゴニスト）のインビボでの半減期の短縮が、第２世代のＳ１Ｐ１アゴニストを選定するにあたってのもう１つの重要な目的である（Ｐａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，ＡＣＳ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，４，ｐ３３３）。伝統的には、より長い半減期を有する低分子薬が望ましいとされてきたが、これは半減期が長いと薬剤を頻繁に投与せずに済むからである。しかしながら、免疫抑制剤にとって長い半減期は極めて不利なものになり得る。免疫抑制剤がリンパ球の輸送をいつまでも阻害して末梢血中のリンパ球数が減少する結果、免疫機能が低下し、薬剤使用者のウイルス感染リスクが上昇するからである。上記のデメリットは、現在臨床的に使用されている、ＦＴＹ７２０等のＳ１Ｐ１受容体アゴニストにもある。感染時、可能な限り迅速に末梢血中のリンパ球を正常なレベルに戻し、ヒトの身体の免疫機能を速やかに回復させるために投与を中断する必要があることが多い。体内でのＦＴＹ７２０の半減期は６〜９日であるため、患者が薬物摂取を停止したあとであっても、リンパ球を正常な状態に戻すには長い時間を必要とする（Ｂｕｄｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ，１３：１０７３−８３）。
【０００６】
したがって、既存の療法の短所を克服するために、Ｓ１Ｐ１に対する高い選択性及びより短い半減期を備えた新規なＳ１Ｐ１受容体アゴニストが依然として必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｐａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，ＡＣＳ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，４，ｐ３３３
【非特許文献２】Ｂｕｄｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ，１３：１０７３−８３
【発明の概要】
【０００８】
上記の技術的な問題を解決するために、発明者は製薬化学合成を行い、合成した多数の化合物を、免疫細胞制御等に関する研究と組み合わせたラットにおける薬物動態研究を通して選定した。研究中に、１−｛４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸と称される式ＩＡの化合物（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４８（２０）６１６９−６１７３；本明細書では「化合物１」とも称する）の２位にハロゲン又はアルキルを追加することで新規な化合物が得られることが判明した。これらの化合物はインビトロ、また静脈及び経口投与後にインビボで免疫を調節する効力を保ち続け、さらにハロゲンでの置換を通して得られる化合物は、これら２種の異なるやり方で投与した後の半減期が明らかに短縮されてもいる。
【０００９】
【化１】
0006470757.tif 000002
【００１０】
したがって、本発明の１つの目的は、新規な化合物を提供し、既存のＳ１Ｐ１受容体アゴニストの選択性及び半減期における短所を解決することである。本発明の別の目的は、薬物を製造するためにこの化合物の使用を提供することである。本発明のさらに別の目的は、この化合物を主要有効成分として含む医薬組成物を提供することである。本発明のさらに別の目的は、この化合物又は医薬組成物を使用して疾患を治療する方法を提供することである。本発明のさらに別の目的は、この化合物の合成方法を提供することである。
【００１１】
上記の目的を達成するために本発明で提供する技術的解決策は以下の通りである。
【００１２】
一態様において、本発明は、式Ｉ：
【００１３】
【化２】
0006470757.tif 000003
【００１４】
（式中、Ｒはハロゲン又はＣ1−Ｃ6アルキルである）で表される化合物を提供する。好ましくは、ＲはＦ、Ｃｌ又はＢｒであり、あるいはＲはＣ１−Ｃ３アルキル、より好ましくはメチルである。
【００１５】
この化合物は、ＲがＦである場合、１−｛２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸（本明細書では「化合物２」とも称する）であり、式ＩＢ：
【００１６】
【化３】
0006470757.tif 000004
【００１７】
で表される。
【００１８】
この化合物は、ＲがＣｌである場合、１−｛２−クロロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸（本明細書では「化合物３」とも称する）であり、式ＩＣ：
【００１９】
【化４】
0006470757.tif 000005
【００２０】
で表される。
【００２１】
この化合物は、ＲがＢｒである場合、１−｛２−ブロモ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸（本明細書では「化合物４」とも称する）であり、式ＩＤ：
【００２２】
【化５】
0006470757.tif 000006
【００２３】
で表される。
【００２４】
この化合物は、Ｒがメチルである場合、１−｛２−メチル−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸（本明細書では「化合物５」とも称する）であり、式ＩＥ：
【００２５】
【化６】
0006470757.tif 000007
【００２６】
で表される。
【００２７】
本発明で提供する化合物がＳ１Ｐ１アゴニスト活性を有することは多数の実験で示されており、本発明の化合物により誘発されたＳ１Ｐ１の内部移行の検出及び末梢血中のリンパ球の数の減少により確認されている。一方、本発明で提供する化合物はＳ１Ｐ１に対する選択的特異性も有し、特に、本発明の化合物はＳ１Ｐ３サブタイプを発現している細胞の内部移行を誘発しなかった。さらに、本発明で提供する化合物の薬物動態実験は、特定の化合物の半減期が、式ＩＡで表される化合物のものより大幅に短縮され、ＦＴＹ７２０のものよりはるかに短かったことを示した。
【００２８】
したがって、別の態様において、本発明は、Ｓ１Ｐ１が媒介する疾患又は状態の治療のための薬物を製造するための、上記の薬物の使用を提供する。特には、その疾患又は状態は、関節リウマチ、多発性硬化症、炎症性腸炎、自己免疫疾患、慢性炎症性疾患、喘息、炎症性ニューロパチー、関節炎、移植、クローン病、潰瘍性大腸炎、エリテマトーデス、乾癬、虚血再灌流障害、固形腫瘍、血管新生に関係する疾患、血管疾患、疼痛、急性ウイルス性疾患、炎症性腸疾患、インスリン及び非インスリン依存性糖尿病並びに他の関連免疫疾患から成る群から選択される。好ましくは、疾患又は状態は、多発性硬化症、関節リウマチ、炎症性腸炎及び乾癬から成る群から選択される。
【００２９】
本明細書において、「治療する」又は「治療」とは、Ｓ１Ｐ１が媒介する疾患又は状態を治すことに加えて、上記の疾患若しくは状態を予防する又は症状等を遅らせることも意味する。
【００３０】
さらに別の態様において、本発明は、本発明で提供する化合物及び任意で医薬的に許容可能な担体を含む医薬組成物を提供する。医薬組成物はそれだけで医薬製剤になり得る。あるいは、医薬製剤として又は他の賦形剤若しくは薬剤との混合医薬製剤として調製することができる。
【００３１】
具体的には、本発明で提供する医薬組成物は、錠剤、坐薬、分散錠、腸溶錠、咀嚼錠、口腔内崩壊錠、カプセル、糖衣製剤、顆粒、乾燥粉末、経口液、小型注射針、注射用凍結乾燥粉末又は大容量非経口液の形態になり得る。医薬的に許容可能な賦形剤は、希釈剤、可溶化剤、崩壊剤、懸濁剤、滑沢剤、バインダ、フィラー、香味料、甘味料、抗酸化剤、界面活性剤、防腐剤、ラッピング剤及び着色料等から成る群から選択し得る。
【００３２】
さらに別の態様において、本発明はＳ１Ｐ１が媒介する疾患又は状態を治療する方法を提供し、この方法は、被験者に、治療有効量の本発明の化合物又は医薬組成物を投与することを含む。好ましくは、被験者は哺乳動物である。
【００３３】
この方法において、疾患又は状態は、関節リウマチ、多発性硬化症、炎症性腸炎、自己免疫疾患、慢性炎症性疾患、喘息、炎症性ニューロパチー、関節炎、移植、クローン病、潰瘍性大腸炎、エリテマトーデス、乾癬、虚血再灌流障害、固形腫瘍、血管新生に関係する疾患、血管疾患、疼痛、急性ウイルス性疾患、炎症性腸疾患、インスリン及び非インスリン依存性糖尿病並びに他の関連免疫疾患から成る群から選択される。好ましくは、疾患又は状態は、多発性硬化症、関節リウマチ、炎症性腸炎及び乾癬から成る群から選択される。
【００３４】
本発明で提供する化合物又は医薬組成物は、他の療法又は治療薬と併用／同時投与することができる。さらに、治療、予防又は遅延の役割を果たすのに必要な化合物又は医薬組成物の用量は、投与する特定の化合物、患者、具体的な疾患又は障害及びその重症度、投与経路並びに投与頻度等に左右され、具体的な状態に合わせて主治医が決定する必要がある。
【００３５】
要約すると、本発明はＳ１Ｐ１アゴニストの活性を有する新規な化合物を提供し、この化合物は、式ＩＡで表される化合物の２位でハロゲン、特にはフッ素、塩素若しくは臭素又は低級アルキルでの置換を行うことで得られる。実験で検出されるＳ１Ｐ１の内部移行及び末梢血におけるリンパ球の数の減少により、本発明の化合物がＳ１Ｐ１アゴニストの活性を有することを証明することができる。加えて、Ｓ１Ｐ３サブタイプを発現している細胞を使用した内部移行誘導実験も、本発明の化合物がＳ１Ｐ１に対して選択的な特異性を有することを証明している。
【００３６】
特に、公知のＳ１Ｐ１アゴニスト及び式ＩＡの化合物と比較して、ハロゲンでの置換を通して得られる本発明の化合物は大幅に短縮された半減期を有する。薬物動態実験により、これらの化合物の半減期が約１１時間から５．５時間未満へと大幅に短縮されたことが証明された。静脈投与及び経口投与の両方の投与方法で半減期は大幅に短縮され、これは平均滞留時間のパラメータの低下と一致していた。さらに、特定の位置での特定の置換基による置換は進歩的である。さらに、同じ位置での低級アルキル、特にはメチルでの置換により得られる化合物（化合物５）の半減期は短縮されないものの、インビボでのリンパ球に対する効果はハロゲンで置換した化合物のものと同様である。これらの結果は、本発明で提供する化合物が可能性を秘めた第２世代Ｓ１Ｐ１アゴニストとして適任であることを示している。
【００３７】
さらに別の態様において、式ＩＢで表される化合物（化合物２）に関して、本発明は、単純な反応条件を伴う合成方法をさらに提供し、この合成方法は後処理に便利であり、また高収率で安定した工程の工業的製造に適している。
【００３８】
要約すると、本発明の合成スキームは以下の通りである。
【００３９】
【化７】
0006470757.tif 000008
【００４０】
具体的には、本発明は、式ＩＢの１−｛２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸（「化合物２」と称する場合もある）の合成方法を提供し、以下の：
（１）式１−３の３−フルオロ−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジンを式１−４の４−イソブチル安息香酸と縮合剤１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド及び１−ヒドロキシベンゾトリゾールの存在下で反応させることで式１−５：
【００４１】
【化８】
0006470757.tif 000009
【００４２】
の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールを生成するステップと、
（２）ステップ（１）で得られた式１−５の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールを二酸化マンガンと反応させることで式１−６：
【００４３】
【化９】
0006470757.tif 000010
【００４４】
の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドを生成するステップと、
（３）ステップ（２）で得られた式１−６の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドを式１−７のアゼチジン−３−カルボン酸と、触媒としての酢酸及び還元剤としてのナトリウムシアノボロヒドリドを使用して反応させることで式ＩＢ：
【００４５】
【化１０】
0006470757.tif 000011
【００４６】
の化合物を生成するステップとを含む。
【００４７】
本発明の好ましい実施形態において、ステップ（１）は、式１−５の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールの生成後に、得られた粗生成物を精製するステップも含む。好ましくは、この精製をカラムクロマトグラフィ又は結晶化で行う。
【００４８】
結晶化により精製を行う場合、利用する結晶化溶媒は、メタノール、エタノール、アセトン、ジクロロメタン、酢酸エチル及び水から選択される１種以上である。好ましくは、結晶化溶媒はメタノールと水との混合物である。より好ましくは、結晶化溶媒は、体積基準で３：１の比のメタノールと水との混合物である。好ましくは、粗生成物（ｇ、重量基準）の結晶化溶媒（ｍｌ、体積基準）に対する比は１：３〜２０、より好ましくは１：５である。好ましくは、結晶化を２０℃で行う。
【００４９】
本発明の好ましい実施形態において、ステップ（１）の反応は、アセトニトリル、Ｎ−メチルピロリドン及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドから選択される１種以上の反応溶媒中で行われる。反応は８０〜１４０℃で行われ、式１−３の３−フルオロ−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジンの式１−４の４−イソブチル安息香酸に対するモル比は１：１〜２．０である。
【００５０】
好ましくは、ステップ（１）において、反応溶媒はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドである。好ましくは、反応温度は１３０〜１４０℃である。好ましくは、式１−３の３−フルオロ−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジンの式１−４の４−イソブチル安息香酸に対するモル比は１：１〜１．５、より好ましくは１：１〜１．２である。
【００５１】
本発明の好ましい実施形態において、ステップ（２）の反応は、トルエン、テトラヒドロフラン及び酢酸エチルから選択される１種以上の反応溶媒中で行われる。式１−５の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコール（ｇ、重量基準）の反応溶媒（ｍｌ、体積基準）に対する比は１：１０〜３０である。反応は４０〜７０℃で行われる。式１−５の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールの二酸化マンガンに対するモル比は１：４〜１０である。
【００５２】
好ましくは、ステップ（２）において、反応溶媒は酢酸エチルである。好ましくは、式１−５の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコール（ｇ、重量基準）の反応溶媒（ｍｌ、体積基準）に対する比は１：１０である。好ましくは、反応温度は６０〜７０℃である。好ましくは、式１−５の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールの二酸化マンガンに対するモル比は１：５〜６、より好ましくは１：６である。
【００５３】
本発明の好ましい実施形態において、ステップ（３）の反応は、テトラヒドロフラン及び／又はメタノールから選択される反応溶媒中で行われる。式１−６の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドの式１−７のアゼチジン−３−カルボン酸に対するモル比は１：１〜１．２である。式１−６の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドのナトリウムシアノボロヒドリドに対するモル比は１：０．５〜６である。反応は０〜３０℃で１〜１６時間の反応時間にわたって行われる。
【００５４】
好ましくは、ステップ（３）において、反応溶媒はメタノールである。好ましくは、式１−６の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドの式１−７のアゼチジン−３−カルボン酸に対するモル比は１：１〜１．１、より好ましくは１：１である。好ましくは、ナトリウムシアノボロヒドリドをメタノールに溶解させ、０〜２０℃、より好ましくは１５〜２０℃で反応系に滴下する。好ましくは、式１−６の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドのナトリウムシアノボロヒドリドに対するモル比は１：１である。好ましくは、反応温度は１０〜２０℃、より好ましくは１５〜２０℃である。好ましくは、反応時間は４〜１６時間である。
【００５５】
本発明で提供する式ＩＢで表される化合物（化合物２）の合成方法のステップ（１）において、中間粗生成物の精製は、好ましくは、カラムクロマトグラフィではなく結晶化で行う。大量の溶媒を必要とするため環境にあまり優しくなく高コストなカラムクロマトグラフィをやめることで精製作業は簡略化され、大量の溶媒を使用せずに済む。一方、本発明で提供する方法の各ステップで使用する反応物、溶媒及びその量も調節する。例えば、ステップ（２）においては、より少ない量の二酸化マンガンを使用してコストを下げることができ、また起こり得る安全上のリスクを回避するために反応溶媒として使用するのはテトラヒドロフランではなく酢酸エチルである。ステップ（３）においては、メタノールを反応溶媒として使用し、メタノールは反応中の副生成物の発生を減少させ、反応収率を上昇させ、反応中に使用する溶媒を減量することができる。概して、コストは低下し、これらの改善を通して低コストで効率が良く、高い安全性レベルの大規模製造を実現できる。
【００５６】
本明細書で引用した特許及び特許出願を含めた（ただしこれらに限定するものではない）全ての出版物は、あたかも各出版物が具体的且つ個別に全て記載されたがごとく、参照により本明細書で援用される。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
以下、本発明の実施形態について添付の図面を参照しながら詳細に説明する。
【図１】実施例６における、本発明で提供した化合物の薬物動態実験の結果を示す。図１Ａは、化合物２、３、４を経口投与した後の、ラットにおける経時的に変化するインビボでの薬物濃度に関するデータを示し、図１Ｂは、化合物１、５を経口投与した後の、ラットにおける経時的に変化するインビボでの薬物濃度に関するデータを示す。
【図２】実施例８の実験結果であり、末梢血におけるリンパ球の数が本発明の化合物２により減少したことを示す。
【図３】実施例８の実験結果であり、末梢血におけるリンパ球の数が本発明の化合物３、４により減少したことを示し、化合物３、４は体重１ｋｇあたり０．１ｍｇでラットに投与した。
【図４】実施例８の実験結果であり、末梢血におけるリンパ球の数が本発明の化合物５により減少したことを示し、化合物５は体重１ｋｇあたり０．１ｍｇでラットに投与した。
【図５】実施例９の実験結果であり、関節炎における関節腫脹の発生が本発明で提供する化合物２により阻害されたことを示している。
【図６】実施例９の実験結果であり、関節炎における関節構造の損傷が本発明で提供する化合物２により抑制されたことを示している。
【図７】実施例１０の実験結果を示し、ＥＡＥの発生が本発明で提供する化合物２により阻害されたことを示している。
【図８Ａ】実施例１１の実験結果であり、本発明で提供する化合物２が心電図指標に及ぼす影響を示している。
【図８Ｂ】実施例１１の実験結果であり、本発明で提供する化合物２が心電図指標に及ぼす影響を示している。
【図８Ｃ】実施例１１の実験結果であり、本発明で提供する化合物２が心電図指標に及ぼす影響を示している。
【発明を実施するための形態】
【００５８】
以下、本発明について、実施形態と組み合わせてさらに詳細に説明していく。当業者ならば、ここで挙げる実施形態が本発明の例示に用いられたにすぎず、本発明の範囲をいかなる形でも限定しないことがわかる。
【００５９】
以下の実施形態の実験方法は、特別な指示がない限り全て慣用のものである。以下の実施例で使用する原料、試薬及び他の材料は、特別な指示がない限り商業的に入手可能である。
【実施例】
【００６０】
実施例１
１−｛４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸（化合物１）の合成
１．１：（Ｚ）−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジン（１−３）
【００６１】
【化１１】
0006470757.tif 000012
【００６２】
ヒドロキシルアミンヒドロクロリド（１−２、２０．９０３ｇ、３００．７６ｍｍｏｌ）及び炭酸水素ナトリウム（５０．５ｇ、６０１．５ｍｍｏｌ）を連続的にメタノール（２５０ｍＬ）中の４−ヒドロキシメチルベンゾニトリル（１−１、２０ｇ、１５０．３８ｍｍｏｌ）溶液に添加して懸濁液を得て、次にこれを還流するまで５時間にわたって加熱した。次に、懸濁液を室温まで冷却し、濾過した。濾過ケークをメタノール（１００ｍＬ）で洗浄し、得られた濾液を濃縮すると、白色の粗生成物である（Ｚ）−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジンが得られ（１−３、２４．８ｇの粗生成物、収率９９．３％）、これを直接次のステップで使用した。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  １６７．３［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ：７．６４（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．４０（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、４．６５（ｓ、２Ｈ）。
【００６３】
１．２：４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコール（１−５）
【００６４】
【化１２】
0006470757.tif 000013
【００６５】
室温で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２００ｍＬ）中の４−イソブチル安息香酸（１−４、２６．６ｇ、１４９．４ｍｍｏｌ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣＩ、２８．６８５ｇ、１４９．４ｍｍｏｌ）及び１−ヒドロキシベンゾトリゾール（２０．１６９ｇ、１４９．４ｍｍｏｌ）の溶液を３０分間にわたって撹拌してから（Ｚ）−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジン（１−３、２４．８ｇ、１４９．４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合系を１４０℃の油浴で２時間にわたって加熱した。ＬＣ−ＭＳは、反応が完了したことを示した。次に、混合系を室温まで冷却し、殆どのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを減圧下での蒸留により除去した。反応系を水及び酢酸エチルでの抽出に供し、得られた有機相を連続的に０．５Ｎ  ＨＣｌ溶液、飽和ＮａＨＣＯ3溶液及び水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、次に濾液を乾燥するまで濃縮した。次に、残留物をカラムクロマトグラフィで精製すると（溶出系：石油エーテル：酢酸エチル＝１０／１〜４／１）、白色の固形生成物である４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールが得られた（１−５、３４．５ｇ、収率７５％）。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３０９．０［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：８．１６（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、８．１２（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．５１（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．３３（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、４．７９（ｄ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．５７（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．９５（ｍ、１Ｈ）、１．８５（ｔ、１Ｈ）、０．９７（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、６Ｈ）。
【００６６】
１．３：４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒド（１−６）
【００６７】
【化１３】
0006470757.tif 000014
【００６８】
６０℃で、テトラヒドロフラン（３３０ｍＬ）中の４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコール（１−５、１７．７ｇ、５７．５ｍｍｏｌ）及び二酸化マンガン（５０ｇ、５７５ｍｍｏｌ）の懸濁系を２時間にわたって撹拌した。次に、懸濁系を室温まで冷却し、濾過し、乾燥するまで濃縮した。次に、残留物をカラムクロマトグラフィで精製すると（溶出系：石油エーテル：酢酸エチル＝２０／１）、白色の固形生成物である４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドが得られた（１−６、１６．４４ｇ、収率９３．５％）。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３０７．２［Ｍ＋Ｈ］+。
【００６９】
２：１−｛４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸
【００７０】
【化１４】
0006470757.tif 000015
【００７１】
室温で、メタノール−テトラヒドロフラン（２００ｍＬ／２００ｍＬ）中の４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒド（１−６、１０ｇ、３２．７ｍｍｏｌ）、アゼチジン−３−カルボン酸（１−７、３．６３ｇ、３６ｍｍｏｌ）及び酢酸（１５ｍＬ）の溶液を２時間にわたって撹拌した。次に、メタノール（６０ｍＬ）中のナトリウムシアノボロヒドリド（１．０３ｇ、１６．３５ｍｍｏｌ）溶液を反応混合物に添加し、得られた混合物を室温でさらに１６時間にわたって撹拌し、濾過した。濾過ケークをメタノール（９０ｍＬ）で洗浄し、次に乾燥させると、白色の固形生成物である１−｛４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸が得られた（５．５ｇ。化合物１−６からの還元生成物１−５を回収し、次に酸化及び還元的アミノ化に供すると５ｇの最終生成物が得られた。収率８２％）。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３９２．２［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ：８．２３（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、８．１５（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．６４（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．４４（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、４．３４（ｓ、２Ｈ）、４．１２（ｍ、４Ｈ）、３．４２（ｍ、１Ｈ）、２．６３（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．９７（ｍ、１Ｈ）、０．９７（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、６Ｈ）。
【００７２】
実施例２：１−｛２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸（化合物２）の合成
【００７３】
【化１５】
0006470757.tif 000016
【００７４】
１．１：４−ブロモ−２−フルオロベンジルアルコール（１−１）
【００７５】
【化１６】
0006470757.tif 000017
【００７６】
０℃で、リチウムアルミニウムヒドリド（１．１４ｇ、３０ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）中のメチル４−ブロモ−２−フルオロベンゾエート（４．６６ｇ、２０ｍｍｏｌ）溶液にゆっくりと滴下した。その滴下後に、使用した氷−塩浴を取り除いた。１時間にわたる室温での撹拌後に反応は完了した（ＬＣＭＳ及びＴＬＣで検出）。混合物を０℃まで再度冷却し、反応を水（１．１４ｍＬ）及び１０％ＮａＯＨ溶液（１１．４ｍＬ）でそれぞれクエンチした。１５分間にわたって室温で撹拌した後、混合物を濾過し、次に濾過ケークをテトラヒドロフラン（５０ｍＬｘ２）及び酢酸エチルＥＡ（５０ｍＬｘ２）で洗浄した。濾液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、次に濃縮すると無色のオイル生成物が得られた（３．４ｇ、収率８３％）。
【００７７】
１．２：３−フルオロ−４−ヒドロキシメチルベンゾニトリル（１−２）
【００７８】
【化１７】
0006470757.tif 000018
【００７９】
シアン化亜鉛（１．８５ｇ、１５．８５ｍｍｏｌ）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（Ｐｄ（ＰＰｈ3）4、０．９１６ｇ、０．７９ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（３５ｍＬ）中の４−ブロモ−２−フルオロベンジルアルコール（１−１、３．２５ｇ、１５．８５ｍｍｏｌ）溶液に添加した。アルゴンバブリングによる脱酸素後、反応混合物を１００℃で加熱し、１６時間にわたって反応させ、室温まで冷却し、酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、連続的に水（１００ｍＬｘ３）及び飽和塩水（１００ｍＬｘ３）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を濃縮すると粗生成物が得られた。次に、粗生成物をカラムクロマトグラフィで精製すると（溶出系：石油エーテル：酢酸エチル＝１５／１〜４／１）、白色の固形生成物が得られた（０．７２ｇ、収率３０％）。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  １５２．１［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：７．６３（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．４８（ｄｄ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．４８（ｄｄ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、９．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．８３（ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、２Ｈ）、２．００（ｔ、Ｊ＝１０Ｈｚ、１Ｈ）。
【００８０】
１．３：（Ｚ）−３−フルオロ−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジン（１−３）
【００８１】
【化１８】
0006470757.tif 000019
【００８２】
ヒドロキシルアミンヒドロクロリド（０．６４５ｇ、９．２８ｍｍｏｌ）及び炭酸水素ナトリウム（１．５６ｇ、１８．５６ｍｍｏｌ）を連続的に、メタノール（１５０ｍＬ）中の３−フルオロ−４−ヒドロキシメチルベンゾニトリル（１−２、０．７０ｇ、４．６４ｍｍｏｌ）溶液に添加すると懸濁液が得られ、次にこれを還流するまで５時間にわたって加熱した。次に、懸濁液を室温まで冷却し、濾過した。濾過ケークをメタノール（１０ｍＬ）で洗浄し、得られた濾液を濃縮すると、白色の粗生成物である３−フルオロ−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジンが得られ（１−３、０．８４６ｇ、収率９９％）、これを直接次のステップで使用した。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  １８５．０［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ：７．５１〜７．４５（ｍ、２Ｈ）、７．３７〜７．３４（ｍ、１Ｈ）、４．６７（ｓ、２Ｈ）。
【００８３】
１．４：２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコール（１−５）
【００８４】
【化１９】
0006470757.tif 000020
【００８５】
室温で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中の４−イソブチル安息香酸（１−４、０．８１９ｇ、４．６０ｍｍｏｌ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣＩ、０．８８２ｇ、４．６０ｍｍｏｌ）及び１−ヒドロキシベンゾトリゾール（０．６２１ｇ、４．６０ｍｍｏｌ）の溶液を３０分間にわたって撹拌してから（Ｚ）−３−フルオロ−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジン（１−３、０．８４６ｇ、４．６０ｍｍｏｌ）を添加した。混合系を１４０℃の油浴で２時間にわたって加熱した。ＬＣＭＳは、開始材料が完全に反応したことを示した。次に、混合系を室温まで冷却し、殆どのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを減圧下での蒸留により除去した。混合物を水及び酢酸エチルでの抽出に供し、得られた有機相を連続的に０．５Ｎ  ＨＣｌ溶液、飽和ＮａＨＣＯ3溶液及び水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、次に、濾液を乾燥するまで濃縮した。次に、残留物をカラムクロマトグラフィで精製すると（溶出系：石油エーテル：酢酸エチル＝１０／１〜４／１）、白色の固形生成物である２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールが得られた（１−５、０．９２ｇ、収率６１％）。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３２７．０［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：８．１１（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．９８（ｍ、１Ｈ）、７．８６（ｍ、１Ｈ）、７．５９（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．３３（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、４．８５（ｓ、２Ｈ）、２．５７（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、１．９３（ｍ、１Ｈ）、０．９３（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、６Ｈ）。
【００８６】
１．５：２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒド（１−６）
【００８７】
【化２０】
0006470757.tif 000021
【００８８】
６０℃で、テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）中の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコール（１−５、０．９１ｇ、２．７９ｍｍｏｌ）及び二酸化マンガン（２．４３ｇ、２７．９ｍｍｏｌ）の懸濁系を２時間にわたって撹拌した。次に、懸濁系を室温まで冷却し、濾過し、濃縮すると、白色の固形生成物である２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドが得られた（１−６、０．９０ｇ、収率９９．６％）。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３２５．０［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１０．４２（ｓ、１Ｈ）、８．１２〜７．９９（ｍ、５Ｈ）、７．３４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．５８（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．９３（ｍ、１Ｈ）、０．９３（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、６Ｈ）。
【００８９】
１．６：１−｛２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸（化合物２）
【００９０】
【化２１】
0006470757.tif 000022
【００９１】
室温で、メタノール−テトラヒドロフラン（２０ｍＬ／２０ｍＬ）中の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒド（１−６、０．９０ｇ、２．７８ｍｍｏｌ）、アゼチジン−３−カルボン酸（１−７、０．２８ｇ、２．７８ｍｍｏｌ）及び酢酸（１ｍＬ）の溶液を２時間にわたって撹拌した。次に、メタノール（６０ｍＬ）中のナトリウムシアノボロヒドリド（１．０３ｇ、１６．３５ｍｍｏｌ）溶液を反応混合物に添加し、得られた混合物を室温でさらに１６時間にわたって撹拌し、濾過した。濾過ケークをメタノール（１０ｍＬ）で洗浄し、次に乾燥させると、白色の固形生成物である１−｛２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸（化合物２）が得られた（０．２０ｇ、収率１８％）。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４１０．０［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ：８．１３（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、８．０５（ｍ、１Ｈ）、７．９７（ｍ、１Ｈ）、７．６８（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．４２（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、４．４０（ｓ、２Ｈ）、４．１５（ｍ、４Ｈ）、３．４１（ｍ、１Ｈ）、２．６１（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．９５（ｍ、１Ｈ）、０．９４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、６Ｈ）。
【００９２】
実施例３：１−｛２−クロロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸（化合物３）の合成
１．１：メチル４−ブロモ−２−クロロベンゾエート（１８５３１２−８２−７）
【００９３】
【化２２】
0006470757.tif 000023
【００９４】
０℃で、塩化チオニル（３．５７ｇ、３０ｍｍｏｌ）を、メタノール（１００ｍＬ）中の４−ブロモ−２−クロロ安息香酸（４．７１ｇ、２０ｍｍｏｌ）溶液にゆっくりと滴加した。その滴下後に、使用した氷−塩浴を取り除き、次に反応混合物を還流するまで３時間にわたって加熱した。ＴＬＣ及びＬＣＭＳは、開始材料が完全に反応したことを示した。溶媒及び過剰な塩化チオニルを回転蒸発により除去すると粗生成物が得られた。次に、粗生成物をジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶解させ、連続的に飽和炭酸水素ナトリウム溶液（１００ｍＬｘ２）及び飽和塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。黄色の固形生成物（４．７９ｇ、収率９６％）が回転蒸発により得られた。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ２４８．９．８／２５０．８／２５２．８［Ｍ＋Ｈ］+。
【００９５】
１．２：４−ブロモ−２−クロロベンジルアルコール（１−１）
【００９６】
【化２３】
0006470757.tif 000024
【００９７】
０℃で、リチウムアルミニウムヒドリド（１．０９ｇ、３０ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）中のメチル４−ブロモ−２−クロロベンゾエート（４．７８ｇ、１９．１６ｍｍｏｌ）溶液にゆっくりと滴下した。この滴下後に、使用した氷−塩浴を取り除いた。１時間にわたる室温での撹拌後に反応は完了した（ＬＣＭＳ及びＴＬＣで検出）。混合物を０℃まで再度冷却し、反応を水（１．０９ｍＬ）及び１０％ＮａＯＨ溶液（１０．９ｍＬ）でそれぞれクエンチした。１５分間にわたる室温での撹拌後、混合物を濾過し、次に濾過ケークをテトラヒドロフラン（５０ｍＬｘ２）及び酢酸エチルＥＡ（５０ｍＬｘ２）で洗浄した。濾液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、次に濃縮すると無色のオイル生成物が得られた（３．４ｇ、収率８０％）。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ２０２．９／２０４．９［Ｍ−ＯＨ］+。
【００９８】
１．３：３−クロロ−４−ヒドロキシメチルベンゾニトリル（１−２）
【００９９】
【化２４】
0006470757.tif 000025
【０１００】
シアン化亜鉛（０．６７ｇ、５．７３ｍｍｏｌ）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（Ｐｄ（ＰＰｈ3）4、０．３３ｇ、０．２８７ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１５ｍＬ）中の４−ブロモ−２−クロロベンジルアルコール（１−１、１．２７ｇ、５．７３ｍｍｏｌ）溶液に添加した。アルゴンバブリングによる脱酸素後、反応混合物を１００℃で加熱し、１６時間にわたって反応させ、室温まで冷却し、酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈し、連続的に水（５０ｍＬｘ３）及び飽和塩水（５０ｍＬｘ３）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を濃縮すると粗生成物が得られた。次に、粗生成物をカラムクロマトグラフィで精製すると（溶出系：石油エーテル：酢酸エチル＝１５／１〜４／１）、白色の固形生成物が得られた（０．３８７ｇ、収率４０％）。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  １６８．０／１７０．１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１０１】
１．４：（Ｚ）−３−クロロ−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジン（１−３）
【化２５】
0006470757.tif 000026
ヒドロキシルアミンヒドロクロリド（０．３２１ｇ、４．６２ｍｍｏｌ）及び炭酸水素ナトリウム（０．７７６ｇ、９．２４ｍｍｏｌ）を連続的に、メタノール（８０ｍＬ）中の３−クロロ−４−ヒドロキシメチルベンゾニトリル（１−２、０．３８７ｇ、２．３１ｍｍｏｌ）溶液に添加すると懸濁液が得られ、次にこれを還流するまで５時間にわたって加熱した。次に、懸濁液を室温まで冷却し、濾過した。濾過ケークをメタノール（１０ｍＬ）で洗浄し、得られた濾液を濃縮すると、白色の粗生成物として３−クロロ−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジンが得られ（１−３、０．３２４ｇ、収率７０％）、これを直接次のステップで使用した。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ２０１［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：９．７４（ｂｒ、１Ｈ）、７．６８（ｓ、１Ｈ）、７．６７（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．５４（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．８８（ｂｒ、２Ｈ）、５．４９（ｂｒ、１Ｈ）、４．２７（ｓ、２Ｈ）。
【０１０２】
１．５：２−クロロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコール（１−５）
【０１０３】
【化２６】
0006470757.tif 000027
【０１０４】
室温で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（８ｍＬ）中の４−イソブチル安息香酸（１−４、０．２８８ｇ、１．６２ｍｍｏｌ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣＩ、０．３１ｇ、１．６２ｍｍｏｌ）及び１−ヒドロキシベンゾトリゾール（０．２１９ｇ、１．６２ｍｍｏｌ）の溶液を３０分間にわたって撹拌してから（Ｚ）−３−クロロ−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジン（１−３、０．３２４ｇ、１．２１ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合系を１４０℃の油浴で２時間にわたって加熱した。ＬＣＭＳは、開始材料が完全に反応したことを示した。次に、混合系を室温まで冷却し、殆どのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを減圧下の蒸留により除去した。混合物を水及び酢酸エチルでの抽出に供し、得られた有機相を連続的に０．５Ｎ  ＨＣｌ溶液、飽和ＮａＨＣＯ3溶液及び水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、次に濾液を乾燥するまで濃縮した。次に、残留物をカラムクロマトグラフィで精製すると（溶出系：石油エーテル：酢酸エチル＝１０／１〜４／１）、白色の固形生成物である２−クロロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールが得られた（１−５、０．３６ｇ、収率６５％）。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３４３．０／３４５．０［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：８．１６（ｄ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．１０（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、８．０７（ｄｄ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．６６（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．３２（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、４．８５（ｓ、２Ｈ）、２．５７（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、０．９４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、６Ｈ）。
【０１０５】
１．６：２−クロロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒド（１−６）
【０１０６】
【化２７】
0006470757.tif 000028
【０１０７】
４０℃で、テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）中の２−クロロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコール（１−５、０．３６ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）及び二酸化マンガン（０．９１４ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）の懸濁系を２時間にわたって撹拌した。次に、懸濁系を室温まで冷却し、濾過し、濃縮すると粗生成物が得られた。粗生成物をカラムクロマトグラフィで精製すると（溶出系：石油エーテル：酢酸エチル＝２０／１〜１０／１）、２−クロロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドが得られた（１−６、０．３４ｇ、収率９５％）。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３４１．１［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１０．５２（ｓ、１Ｈ）、８．２８（ｄ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．１６（ｄｄ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、８．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．１０（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、８．０４（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．３３（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、２．５８（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、０．９４（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、６Ｈ）。
【０１０８】
１．７：１−｛２−クロロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸（化合物３）
【０１０９】
【化２８】
0006470757.tif 000029
【０１１０】
室温で、メタノール−テトラヒドロフラン（１０ｍＬ／１０ｍＬ）中の２−クロロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒド（１−６、０．３４ｇ、１．０ｍｍｏｌ）、アゼチジン−３−カルボン酸（１−７、０．１０１ｇ、１．０ｍｍｏｌ）及び酢酸（０．３５ｍＬ）の溶液を２時間にわたって撹拌した。次に、メタノール（２０ｍＬ）中のナトリウムシアノボロヒドリド（０．３７８ｇ、６．０ｍｍｏｌ）溶液を反応混合物に添加し、得られた混合物を室温でさらに１６時間にわたって撹拌し、濾過した。濾過ケークをメタノール（１０ｍＬ）で洗浄し、次に乾燥させると、白色の固形生成物である１−｛２−クロロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸（化合物３）が得られた（０．１０９ｇ、収率２６％）。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４２６．１／４２８．３［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ：８．３３（ｄ、Ｊ＝１．６Ｈｚ、１Ｈ）、８．２２（ｄｄ、Ｊ＝１．６Ｈｚ、８．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．１６（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．７６（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．４５（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、４．７２（ｓ、２Ｈ）、４．４６（ｍ、４Ｈ）、３．７４（ｍ、１Ｈ）、２．６３（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．９７（ｍ、１Ｈ）、０．９６（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、６Ｈ）。
【０１１１】
実施例４：１−｛２−ブロモ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸（化合物４）の合成
１．１：メチル２，４−ジブロモベンゾエート（５４３３５−３３−０）
【０１１２】
【化２９】
0006470757.tif 000030
【０１１３】
０℃で、塩化チオニル（３．５７ｇ、３０ｍｍｏｌ）を、メタノール（１００ｍＬ）中の２，４−ジブロモ安息香酸（５．６０ｇ、２０ｍｍｏｌ）溶液にゆっくりと滴加した。この滴下後に、使用した氷−塩浴を取り除き、次に反応混合物を還流するまで３時間にわたって加熱した。ＴＬＣ及びＬＣＭＳは、開始材料が完全に反応したことを示した。溶媒及び過剰な塩化チオニルを回転蒸発により除去すると粗生成物が得られた。次に、粗生成物をジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶解させ、連続的に飽和炭酸水素ナトリウム溶液（１００ｍＬｘ２）及び飽和塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。黄色の固形生成物（５．９２ｇ、収率１００％）が回転蒸発により得られた。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ２９２．８／２９４．７／２６９．９［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１１４】
１．２：２，４−ジブロモベンジルアルコール（１−１）
【０１１５】
【化３０】
0006470757.tif 000031
【０１１６】
０℃で、リチウムアルミニウムヒドリド（１．１４ｇ、３０ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（１２０ｍＬ）中のメチル２，４−ジブロモベンゾエート（５．９０ｇ、２０ｍｍｏｌ）溶液にゆっくりと滴下した。この滴下後に、使用した氷−塩浴を取り除いた。１時間にわたる室温での撹拌後に反応は完了した（ＬＣＭＳ及びＴＬＣで検出）。混合物を０℃まで再度冷却し、反応を水（１．１４ｍＬ）及び１０％ＮａＯＨ溶液（１１．４ｍＬ）でそれぞれクエンチした。１５分間にわたって室温で撹拌した後、混合物を濾過し、次に濾過ケークをテトラヒドロフラン（６０ｍＬｘ２）及び酢酸エチルＥＡ（６０ｍＬｘ２）で洗浄した。濾液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、次にカラムクロマトグラフィで精製すると（溶出系：石油エーテル：酢酸エチル＝１０／１〜４／１）、無色のオイル生成物が得られた（２．３ｇ、収率４３％）。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ２４６．９／２４８．９／２５０．９［Ｍ−ＯＨ］+。
【０１１７】
１．３：３−ブロモ−４−ヒドロキシメチルベンゾニトリル（１−２）
【化３１】
0006470757.tif 000032
シアン化亜鉛（１．０１ｇ、８．６５ｍｍｏｌ）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（Ｐｄ（ＰＰｈ3）4、０．５０ｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の２，４−ジブロモベンジルアルコール（１−１、２．３ｇ、８．６５ｍｍｏｌ）溶液に添加した。アルゴンバブリングによる脱酸素後、反応混合物を８０℃で加熱し、５時間にわたって反応させ、室温まで冷却し、酢酸エチル（８０ｍＬ）で希釈し、連続的に水（８０ｍＬｘ３）及び飽和塩水（８０ｍＬｘ３）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を濃縮すると粗生成物が得られた。次に、粗生成物をカラムクロマトグラフィで精製すると（溶出系：石油エーテル：酢酸エチル＝１５／１〜４／１）、白色の固形生成物が得られた（０．８１ｇ、収率４４％）。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ２１１．９／２１３．９［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：７．８２（ｓ、１Ｈ）、７．６９（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．６５（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．８０（ｓ、２Ｈ）。
【０１１８】
１．４：（Ｚ）−３−ブロモ−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジン（１−３）
【０１１９】
【化３２】
0006470757.tif 000033
【０１２０】
ヒドロキシルアミンヒドロクロリド（０．５２４ｇ、７．５４ｍｍｏｌ）及び炭酸水素ナトリウム（１．２７ｇ、１５．０８ｍｍｏｌ）を連続的に、メタノール（１２０ｍＬ）中の３−ブロモ−４−ヒドロキシメチルベンゾニトリル（１−２、０．８０ｇ、３．７７ｍｍｏｌ）溶液に添加すると懸濁液が得られ、次にこれを還流するまで５時間にわたって加熱した。次に、懸濁液を室温まで冷却し、濾過した。濾過ケークをメタノール（１０ｍＬ）で洗浄し、濾液を濃縮すると、白色の粗生成物である３−ブロモ−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジンが得られ（１−３、０．９０ｇ、収率９７％）、これを直接次のステップで使用した。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ２４５／２４７［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１２１】
１．５：２−ブロモ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコール（１−５）
【０１２２】
【化３３】
0006470757.tif 000034
【０１２３】
室温で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中の４−イソブチル安息香酸（１−４、０．６５３ｇ、３．６７ｍｍｏｌ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣＩ、０．７０４ｇ、３．６７ｍｍｏｌ）及び１−ヒドロキシベンゾトリゾール（０．４９５ｇ、３．７７ｍｍｏｌ）の溶液を３０分間にわたって撹拌してから（Ｚ）−３−ブロモ−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジン（１−３、０．９０ｇ、３．６７ｍｍｏｌ）を添加した。混合系を１４０℃の油浴で２時間にわたって加熱した。ＬＣＭＳは、開始材料が完全に反応したことを示した。次に、混合系を室温まで冷却し、殆どのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを減圧下での蒸留により除去した。混合物を水及び酢酸エチルでの抽出に供し、得られた有機相を連続的に０．５Ｎ  ＨＣｌ溶液、飽和ＮａＨＣＯ3溶液及び水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、次に濾液を乾燥するまで濃縮した。次に、残留物をカラムクロマトグラフィで精製すると（溶出系：石油エーテル：酢酸エチル＝１０／１〜４／１）、白色の固形生成物である２−ブロモ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールが得られた（１−５、０．３６ｇ、収率３６％）。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３８７．１／３８９．１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１２４】
１．６：２−ブロモ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒド（１−６）
【０１２５】
【化３４】
0006470757.tif 000035
【０１２６】
５０℃で、テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）中の２−ブロモ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコール（１−５、０．５１ｇ、１．３２ｍｍｏｌ）及び二酸化マンガン（１．１５ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）の懸濁系を２時間にわたって撹拌した。次に、懸濁系を室温まで冷却し、濾過し、濃縮すると粗生成物が得られた。粗生成物をカラムクロマトグラフィで精製すると（溶出系：石油エーテル：酢酸エチル＝２０／１〜１０／１）、２−ブロモ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドが得られた（１−６、０．３４ｇ、収率６７％）。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３８５．０／３８７．０［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１２７】
１．７：１−｛２−ブロモ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸（化合物４）
【０１２８】
【化３５】
0006470757.tif 000036
【０１２９】
室温で、メタノール−テトラヒドロフラン（１０ｍＬ／１０ｍＬ）中の２−ブロモ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒド（１−６、０．３４ｇ、０．８８ｍｍｏｌ）、アゼチジン−３−カルボン酸（１−７、０．０８９ｇ、０．８８ｍｍｏｌ）及び酢酸（０．３ｍＬ）の溶液を２時間にわたって撹拌した。次に、メタノール（２０ｍＬ）中のナトリウムシアノボロヒドリド（０．３３３ｇ、５．２８ｍｍｏｌ）溶液を反応混合物に添加し、得られた混合物を室温でさらに１６時間にわたって撹拌し、濾過した。濾過ケークをメタノール（１０ｍＬ）で洗浄し、次に乾燥させると、白色の固形生成物である１−｛２−ブロモ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸（化合物４）が得られた（０．１１１２ｇ、収率２７％）。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４６９．９／４７１．８［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：８．３９（ｄ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．１２（ｄｄ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、８．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．０８（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．７０（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．３１（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、４．２３（ｓ、２Ｈ）、４．０８（ｍ、２Ｈ）、３．９９（ｍ、２Ｈ）、３．４４（ｍ、１Ｈ）、２．５６（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、１．９１（ｍ、１Ｈ）、０．９３（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、６Ｈ）。
【０１３０】
実施例５：１−｛２−メチル−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸（化合物５）の合成
【０１３１】
【化３６】
0006470757.tif 000037
【０１３２】
１．１：４−ブロモ−２−メチルベンジルアルコール（１−１）
０℃で、リチウムアルミニウムヒドリド（１．４２５ｇ、３７．５ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（１２０ｍＬ）中のメチル４−ブロモ−２−メチルベンゾエート（５．７２５ｇ、２５ｍｍｏｌ）溶液にゆっくりと滴下した。この滴下後に、使用した氷−塩浴を取り除いた。１時間にわたる室温での撹拌後に反応は完了した（ＬＣＭＳ及びＴＬＣで検出）。混合物を０℃まで再度冷却し、反応を水（１．４３ｍＬ）及び１０％ＮａＯＨ溶液（１４．３ｍＬ）でそれぞれクエンチした。１５分間にわたる室温での撹拌後、混合物を濾過し、次に濾過ケークをテトラヒドロフラン（８０ｍＬｘ２）及び酢酸エチルＥＡ（８０ｍＬｘ２）で洗浄した。濾液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、次に濃縮すると無色のオイル生成物が得られた（４．５３５ｇ、収率９０％）。
【０１３３】
１．２：３−メチル−４−ヒドロキシメチルベンゾニトリル（１−２）
【０１３４】
【化３７】
0006470757.tif 000038
【０１３５】
シアン化亜鉛（２．６３ｇ、２２．５ｍｍｏｌ）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（Ｐｄ（ＰＰｈ3）4、１．３１ｇ、１．１３ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（５０ｍＬ）中の４−ブロモ−２−メチルベンジルアルコール（１−１、４．５３ｇ、２２．５ｍｍｏｌ）溶液に添加した。アルゴンバブリングによる脱酸素後、反応混合物を１００℃で加熱し、１６時間にわたって反応させ、室温まで冷却し、酢酸エチル（１２０ｍＬ）で希釈し、連続的に水（１２０ｍＬｘ３）及び飽和塩水（１２０ｍＬｘ３）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を濃縮すると粗生成物が得られた。次に、粗生成物をカラムクロマトグラフィで精製すると（溶出系：石油エーテル：酢酸エチル＝１５／１〜４／１）、白色の固形生成物が得られた（２．８ｇ、収率８４％）。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  １４８．１［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：７．５７（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．５２（ｄ、７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．４４（ｓ、１Ｈ）、４．７６（ｄ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、２Ｈ）、２．３４（ｓ、３Ｈ）。
【０１３６】
１．３：（Ｚ）−３−メチル−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジン（１−３）
【０１３７】
【化３８】
0006470757.tif 000039
【０１３８】
ヒドロキシルアミンヒドロクロリド（２．６４ｇ、３８ｍｍｏｌ）及び炭酸水素ナトリウム（６．３８ｇ、７６ｍｍｏｌ）を連続的に、メタノール（５００ｍＬ）中の３−メチル−４−ヒドロキシメチルベンゾニトリル（１−２、２．８ｇ、１９ｍｍｏｌ）溶液に添加すると懸濁液が得られ、次にこの懸濁液を還流するまで５時間にわたって加熱した。次に、懸濁液を室温まで冷却し、濾過した。濾過ケークをメタノール（１００ｍＬｘ２）で洗浄し、得られた濾液を濃縮すると、白色の粗生成物である３−メチル−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジンが得られ（１−３、３．４２５ｇの粗生成物、収率１００％）、これを直接次のステップで使用した。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  １８１．０［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１３９】
１．４：２−メチル−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコール（１−５）
【０１４０】
【化３９】
0006470757.tif 000040
【０１４１】
室温で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６０ｍＬ）中の４−イソブチル安息香酸（１−４、３．３８２ｇ、１９ｍｍｏｌ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣｌ、３．６４２ｇ、１９ｍｍｏｌ）及び１−ヒドロキシベンゾトリゾール（２．５６５ｇ、１９ｍｍｏｌ）の溶液を３０分間にわたって撹拌してから（Ｚ）−３−メチル−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジン（１−３、３．４２ｇ、１９ｍｍｏｌ）を添加した。混合系を１４０℃の油浴で２時間にわたって加熱した。ＬＣＭＳは、開始材料が完全に反応したことを示した。次に、混合系を室温まで冷却し、殆どのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを減圧下での蒸留により除去した。混合物を水及び酢酸エチルでの抽出に供し、得られた有機相を連続的に０．５Ｎ  ＨＣｌ溶液、飽和ＮａＨＣＯ3溶液及び水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、次に濾液を乾燥するまで濃縮した。次に、残留物をカラムクロマトグラフィで精製すると（溶出系：石油エーテル：酢酸エチル＝１０／１〜４／１）、白色の固形生成物である２−メチル−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールが得られた（１−５、２．５１ｇ、収率４１％）。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３２３．０［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：８．１２（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．９８（ｍ、２Ｈ）、７．５９（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．３２（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、４．７７（ｓ、２Ｈ）、２．５７（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．４２（ｓ、３Ｈ）、１．９３（ｍ、１Ｈ）、０．９２（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、６Ｈ）。
【０１４２】
１．５：２−メチル−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒド（１−６）
【０１４３】
【化４０】
0006470757.tif 000041
【０１４４】
６０℃で、テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）中の２−メチル−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコール（１−５、２．５ｇ、７．７６ｍｍｏｌ）及び二酸化マンガン（６．７５ｇ、７７．６ｍｍｏｌ）の懸濁系を２時間にわたって撹拌した。次に、懸濁系を室温まで冷却し、濾過し、濃縮すると、白色の固形生成物である２−メチル−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドが得られた（１−６、２．４ｇ、収率９７％）。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３２１．０［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１０．３８（ｓ、１Ｈ）、８．２０〜８．１３（ｍ、４Ｈ）、７．９７（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．３７（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、２．８０（ｓ、３Ｈ）、２．６１（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、１．９６（ｍ、１Ｈ）、０．９６（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、６Ｈ）。
【０１４５】
１．６：１−｛２−メチル−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸（化合物５）
【０１４６】
【化４１】
0006470757.tif 000042
【０１４７】
室温で、メタノール−テトラヒドロフラン（２０ｍＬ／２０ｍＬ）中の２−メチル−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒド（１−６、０．８８ｇ、２．７５ｍｍｏｌ）、アゼチジン−３−カルボン酸（１−７、０．２７８ｇ、２．７５ｍｍｏｌ）及び酢酸（１ｍＬ）の溶液を２時間にわたって撹拌した。次に、メタノール（６０ｍＬ）中のナトリウムシアノボロヒドリド（１．０４ｇ、１６．５ｍｍｏｌ）溶液を反応混合物に添加し、得られた混合物を室温でさらに１６時間にわたって撹拌し、濾過した。濾過ケークをメタノール（１０ｍＬｘ２）で洗浄し、次に乾燥させると、白色の固形生成物である１−｛２−メチル−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸が得られた（０．２３ｇ、収率２１％）。液体クロマトグラフィ−質量分析で見られた分子イオンピークは以下の通りであった：ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４０６．０［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ：８．１２（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、８．０８（ｓ、１Ｈ）、８．０４（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．５３（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．４２（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、４．４７（ｓ、２Ｈ）、４．２３（ｍ、４Ｈ）、３．４４（ｍ、１Ｈ）、２．６１（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．５２（ｓ、３Ｈ）、１．９５（ｍ、１Ｈ）、０．９４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、６Ｈ）。
【０１４８】
実施例６：本発明で提供する化合物のインビボ薬物動態実験
この実施例においては、化合物１、２、３、４、５の薬物動態特性をスプラーグ（Ｓｐｒａｑｕｅ）・ドーリーラットへの静脈及び経口投与により評価した。この実施例及び以降で用いる実験動物は、７〜９週齢、体重１８６〜２３１ｇのオスのＳＤラットであり、Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｖｉｔａｌ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入した。購入後５日間にわたって獣医師によるラットの検疫が行われ、次に検疫検査をパスしたラットをＳＰＥ条件下での試験用に選択し、試験したラットを以下のように１グループあたり３匹で割り当てた。
【０１４９】
経口投与グループ：２．７４ｍｇの各化合物１〜５をそれぞれ、９．１１３ｍＬの０．５％ＣＭＣ−Ｎａを希釈剤として使用して０．３ｍｇ／ｍＬの溶液に調製した。十分にかき混ぜてから各溶液を１〜２分間にわたってボルテックスにかけ、次に均一な懸濁液が得られるまで２０〜３０分間にわたって超音波処理した。均一な懸濁液を、経口投与グループに投与する薬物として使用し、投与は各ラットの体重１ｋｇあたり１０ｍＬの用量で行った。
【０１５０】
静脈投与グループ：１．６１ｍｇの各化合物１〜５をそれぞれ、１．６１０ｍＬの１０％ＨＰ−β−ＣＤを希釈剤として使用して１ｍｇ／ｍＬの溶液に調製した。十分にかき混ぜてから各溶液を１〜２分間にわたってボルテックスにかけ、次に２８〜３０分間にわたって超音波処理した。得られた溶液を、静脈投与グループに投与する薬物として使用し、投与は各ラットの体重１ｋｇあたり１ｍＬの用量で行った。
【０１５１】
経口投与グループ及び静脈投与グループの両方について、血液サンプルを、投与から０．０８３３時間（５分）、０．２５時間（１５分）、０．５時間、１時間、２時間、４時間、８時間及び２４時間後に採取した。イソフルラン麻酔後、０．３ｍＬの全血を各タイムポイントでラットの眼窩静脈叢から採取した。全てのサンプルを採取した後、ラットは安楽死させる。
【０１５２】
採取した血液サンプルをヘパリンナトリウム（約１０μＬ、１０００ＩＵ／ｍＬ）が入ったＥＰチューブに入れ、次に速やかに氷水に入れ、４５００ｒｐｍ、低温（４℃）で５分間にわたって遠心分離した。血漿を迅速に単離し、分析する時まで−２０℃で保管した。
【０１５３】
血液中の各化合物の濃度をＬＣ−ＭＳ／ＭＳ−００１（Ｑ−ｔｒａｐ−３２００）により、オサルミド（ｏｓａｌｍｉｄｅ）を内部標準物質として使用し、以下のように測定した。２４μＬのブランク血漿を６μＬの血漿サンプル（希釈５倍）に添加し、次に１５０μＬの内部標準物質（オサルミド、１００μｇ／ｍＬ）を含有するアセトニトリルの溶液を添加した。混合物を５分間にわたって振り混ぜ、次に１４０００ｒｐｍで５分間にわたって遠心分離した。分析のために、得られたサンプル２μＬをＬＣ−ＭＳ／ＭＳに装填した。希釈していない血漿サンプルについては、３０μＬを、１５０μＬの内部標準物質（オサルミド、１００μｇ／ｍＬ）を含有しているアセトニトリルの溶液に添加した。混合物を５分間にわたって振り混ぜ、次に１４０００ｒｐｍで５分間にわたって遠心分離した。分析のために、得られたサンプル２μＬをＬＣ−ＭＳ／ＭＳに装填した。
【０１５４】
データ分析に関しては、ＷｉｎＮｏｌｉｎ（Ｖ６．２）ノンコンパートメントモデル（ＮＣＡ）を、ｔ１／２、ＡＵＣ（０−ｔ）、ＡＵＣｉｎｆ、Ｖ、Ｃｌ、ＭＲＴ等を含めた主要代謝薬物動態パラメータの計算に使用し、マイクロソフトＯｆｆｉｃｅのエクセルを平均値、標準偏差及び変異係数の計算に使用した。
【０１５５】
表１のデータは、約１１時間である化合物１の消失半減期（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｈａｌｆ−ｌｉｆｅ）と比較して、化合物２、３、４のそれぞれの消失半減期は経口投与後、５．５時間未満であったことをはっきりと示している。したがって、ハロゲンで置換したこれら３種の化合物（化合物２、３、４）の半減期は、化合物１のものよりほぼ５０％短かった。
【０１５６】
静脈投与の場合の薬物動態に関する研究でも同様の半減期の変化が見られた。表２のデータは、化合物１の消失半減期及び平均滞留時間（ＭＲＴ）と比較して、ハロゲンで置換した化合物２、３、４のそれぞれの消失半減期及び平均滞留時間が大幅に短縮されたことをはっきりと示している。これらのデータは、化合物１の２位でのハロゲン置換が血中からの化合物の排除を加速させることを示している。さらに、クリアランス（Ｃｌ）に関する研究結果は、消失半減期及び平均滞留時間の短縮が化合物のクリアランスの上昇により引き起こされたものではないことを示している。
【０１５７】
化合物２、３、４の大幅に短縮されたインビボでの半減期は従来の理論では予期できない。化合物１の同位置での他の置換基での置換では同様の結果が得られないからである。例えば、メチルで置換すると（化合物５に対応する）、半減期は短縮されるどころかむしろ長くなった（表１、２を参照のこと）。さらに、経口投与後の血中化合物濃度対時間曲線から、化合物１、５と比較すると、化合物２、３、４の排出速度は最高濃度で明らかに加速したことがみてとれる（図１）。
【０１５８】
【表１】
0006470757.tif 000043
【０１５９】
実施例７：本発明で提供する化合物がＳ１Ｐ１及びＳ１Ｐ３の内部移行に及ぼす影響
（１）Ｓ１Ｐ１に対する内部移行作用実験
細胞表面のＳ１Ｐ１の内部移行を誘導することでＳ１Ｐ１小分子アゴニストが末梢循環へのリンパ球の進入を防止できることは周知である。本発明で提供する化合物がＳ１Ｐ１内部移行誘導活性を有するか否かを判定するため、リンパ球に代わる、ヒトＳ１Ｐ１を発現しているＣＨＯ−Ｓ細胞をＳ１Ｐ１内部移行の検出系として使用する。細胞表面上のＳ１Ｐ１をモニタし易くするため、ＭｙｃタグをＳ１Ｐ１のＮ末端に融合させ、Ｓ１Ｐ１の発現を、Ｍｙｃタグに対する蛍光標識抗体と細胞をインキュベートした後にフローサイトメトリで分析する
【０１６０】
本発明で提供する化合物２をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解させることで１０ｍＭの原液を調製し、次にＤＭＥＭで原液を所望の異なる濃度に希釈した。ＭｙｃタグがついたヒトＳ１Ｐ１を抱えるＣＨＯ−Ｓ細胞を収穫し、次にダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）により１ｍＬあたり１００万個の細胞密度に調節した。等体積で希釈した異なる濃度の化合物２を細胞懸濁物と混合し、次に３７℃で１時間にわたってインキュベートした。インキュベーション後、混合物を８００ＲＰＭで５分間にわたって遠心分離すると細胞が得られた。これらの細胞をＦＡＣＳバッファ（１％ＢＳＡを含有するＰＢＳ）に再度懸濁させ、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）で標識したＭｙｃ抗体
（Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａｎ  Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ  ＧｍｂＨ、米国）を添加し、１時間にわたって氷上でインキュベートした。細胞を洗浄し、予冷したＦＡＣＳバッファに再度懸濁させ、ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒフローサイトメトリで分析した。
【０１６１】
実験データは、化合物２がＳ１Ｐ１内部移行を用量依存的に誘導する活性を呈することを示した（表３）。Ｓ１Ｐ１内部移行を誘導する化合物３、４の活性も同じやり方で検出し、得られた結果は、化合物１のものと有意な差がないこと示している。このことは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒでの置換を通して得られた全化合物（化合物２、３、４）が、明らかに短くなった半減期を有しながらもＳ１Ｐ１を活性化する活性を依然として備えていることを示している。
【０１６２】
（２）Ｓ１Ｐ３の内部移行作用実験
ヒトＳ１Ｐ３を発現しているＣＨＯ−Ｓ細胞を使用して内部移行検出試験を行った。細胞に加え、実験方法も、Ｓ１Ｐ１の内部移行検出実験の方法と同じであった。
【０１６３】
実験結果は、化合物１のものと同様に、Ｓ１Ｐに対する化合物２、３、４の作用が特異的であること、つまり化合物がＳ１Ｐ１に対する内部移行活性化作用しか有さないこと、またＳ１Ｐ３サブタイプに対する内部移行活性化作用は有さないことを示した（表３）。このことは、Ｆ、Ｃｌ又はＢｒ置換基を有する化合物が化合物１より短いインビボ半減期を明らかに有していても、ターゲットＳ１Ｐ１に対する化合物の選択性は変化しないことを示している。この点で、本発明の化合物は、現在臨床の場で使用されている、非選択的なＳ１ＰアゴニストであるＦＴＹ７２０とは異なる。ＦＴＹ７２０は複数のＳ１Ｐ受容体、例えばＳ１Ｐ１、Ｓ１Ｐ２、Ｓ１Ｐ３、Ｓ１Ｐ４及びＳ１Ｐ５を活性化させ、結果的に一連の重い副作用、例えば徐脈が起きる場合がある。
【０１６４】
【表２】
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【０１６５】
実施例８：本発明で提供する化合物が末梢血中のリンパ球の数に及ぼす影響
リンパ球の表面上で発現するＳ１Ｐ１は、リンパ球が二次リンパ組織を出て末梢循環に進入するのに必須である。Ｓ１Ｐ１の小分子アゴニストは受容体を活性化させることができ、受容体に対する内部移行作用がもたらされる。このメカニズムが、リンパ球が二次リンパ組織から出られなくなることで末梢循環中のリンパ球の数が減少するという現在知られているメカニズムである。本発明で提供する化合物が末梢血中のリンパ球の数を減少させるか否かを判定するために、リンパ球に対するインビボでの作用実験を行う。
【０１６６】
適当な量の化合物２を、ナトリウムカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ−Ｎａ）との懸濁液として調製し、３匹のスプラーグ・ドーリー（ＳＤ）ラットに経口投与した。血液サンプル（０．５ｍｌ）を投与３０分前、また投与後の異なるタイムポイントで採取し（採取した血液サンプルは適当な量のＥＤＴＡ−２Ｋ溶液が入ったＥＰチューブに入れた）、ＡＤＶＩＡ２１２０血液細胞分析装置で直接分析した。
【０１６７】
実験結果は、化合物２により末梢血中のリンパ球の数が効果的に減少したことを示している。末梢血中のリンパ球の数は投与から３０分後に明らかに減少し、全てのサンプリングタイムポイント（３０、１２０、２４０、３６０及び４８０分後）でさらに減少した。評価した３つの用量の全てで化合物２は活性を示し、末梢血中のリンパ球は、用量０．０１ｍｇ／ｋｇでのみ５０％を超える減少が観察され、最大の減少は用量１ｍｇ／ｋｇで観察された（図２）。さらに、化合物２の作用はリンパ球に特異的であり、化合物２による末梢単核細胞及び他の白血球の数の変化は明白なものではなかった。
【０１６８】
本発明の化合物３、４、５を同じ方法で試験することで、化合物３、４、５がリンパ球に及ぼす影響が化合物２のものと同様であると判明した（図３及び図４）。
【０１６９】
実施例９：化合物２がルイスラットにおけるＩＩ型コラーゲン誘発関節炎の発症に及ぼす影響
ヒトにおける関節リウマチは自己免疫疾患であり、患者自身の免疫系が関節組織を攻撃する。Ｔ細胞及びＢ細胞を含めたリンパ球は、この疾患の病因において重要な役割を担っている。Ｔ細胞の活性化をブロックすることによるＴ細胞の機能の阻害が効果的な関節リウマチ治療法であることは知られている。化合物２はリンパ球が出ていくのをブロックするため、ラットＣＩＡモデルにおける関節炎の発症の阻害にこれが有効であるかを確認することは重要であった。試験を行うにあたって、以下のようにしてルイスラットに関節リウマチを発症させた。ラットにイソフルランで麻酔をかけ、全部で０．５ｍＬのＣＩＩ／ＣＦＡエマルションを皮内注射した。エマルションは３つの部位で注射し、１つ目は尾の付け根（０．１ｍＬ）、残りの２つは尾の付け根に近いラットの背面（０．２ｍＬ／部位）であった。同じブースター注射を、一次免疫から７日目に、前回の注射部位を避けて皮内投与した。
【０１７０】
化合物２を、０．５％ＣＭＣ−Ｎａ中の懸濁液として調製し、ＣＩＩ／ＣＦＡ注射時にラットに経口投与した。ポジティブコントロールグループには、感作から１２日目にＴＯＦＡＣＩＴＩＮＩＢを経口投与した。感作から７日目から開始して１週間に２回、四肢における関節炎の重症度をスコア付けした。判断基準は以下の通りであった：スコア０：紅斑及び腫脹が見られない；スコア１：紅斑及び軽度の腫脹が中足部（足根）又は足首関節に限定される；スコア２：紅斑及び軽度の腫脹が足首から中足部に広がっている；スコア３：紅斑及び中程度の腫脹が足首から中足部関節に広がっている；スコア４：紅斑及び重度の腫脹が足首、足及び足指に及ぶ。プレチスモメータにより後肢の体積で測定する関節の腫脹を０日目、次に７日目から２８日目まで１週間に２回判定した。関節の破壊を２８日目にＸ線検査で判定した。結果は、１ｍｇ／ｋｇで、化合物２が、関節の腫脹（図５）に基づいた関節炎の発症及び関節構造の破壊（図６）の阻害において効果的であることを示した。図５から、化合物２がＴＯＦＡＣＩＴＩＮＩＢと同様の機能を有するが、その用量は大幅に減少したことがみてとれる。
【０１７１】
実施例１０：化合物２が実験的自己免疫性脳炎（ＥＡＥ）の発症に及ぼす影響
Ｓ１Ｐ１アゴニストはヒト多発性硬化症及びＭＳの動物モデルにおいて効果的であると判明している。化合物２を、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、ヒト多発性硬化症のマウスモデルでのその有効性について評価した。この研究においては、８０匹のメスのＣ５７ＢＬ／６マウスを、体重に基づいて８つのグループにランダムに分け、免疫化した。各グループは１０匹のマウスから成る。疾患を誘導するために、ＭＯＧ３５−５５（ＭＯＧ、ミエリンオリゴ−デンドロサイト糖タンパク質）を生理食塩水に濃度２ｍｇ／ｍＬまで溶解させ、改変完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中で乳化した。イソフルランでマウスに麻酔をかけ、次に１００μＬのエマルションを、マウスの剃毛した背部の３つの部位（１つ目は両肩の間の背部を通る正中線に沿い、２つは腰部上の正中線の両側）に皮下注射した。百日咳毒素（ｐｅｒｔｕｘｕｓ  ｔｏｘｉｎ）（２００μＬのＰＢＳ中２００ｎｇ）の腹腔内投与を、免疫化を行った日及び４８時間後に全てのグループに行った。免疫化を行ってから０日目〜３０日目まで１日１回、マウスを臨床的にスコア付けすることでＥＡＥの発症を査定した。
【０１７２】
Ｎａ  ＣＭＣ懸濁液として調製した化合物２をＭＯＧ免疫化時から経口投与し、研究全体を通じて投与を継続した。データは、評価した３つの用量（０．０３、０．１、１ｍｇ／ｋｇ）全てで、化合物２が効果的にＥＡＥの発症を阻害したことを示した（図７）。
【０１７３】
実施例１１：化合物２がビーグル犬の心血管系機能に及ぼす影響
ＦＴＹ７２０は非選択的なＳ１Ｐ１アゴニストであり、ヒトにおける徐脈を含め、様々な心血管系作用を有すると判明している。化合物２が心拍数及びＱＴ間隔に影響するかを判定するために、化合物を意識があるビーグル犬におけるテレメトリアッセイにより評価した。
【０１７４】
適当な量のＣＭＣ−Ｎａを、注射用滅菌液で０．５％ＣＭＣ−Ｎａ（ｗ／ｖ）溶液として調製した。溶液は、投与１日前に調製した。
【０１７５】
濃度２、６、２０ｍｇ／ｍＬの化合物２の溶液（サンプル）を、以下のようにして投与１日前に調製した。適当な量の化合物２を適当な量の０．５％ＣＭＣ−Ｎａ溶液に添加した。得られた混合物を、等方乳化装置（ｅｍｕｌｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｉｓｏｔｒｏｐｉｃ  ｍａｃｈｉｎｅ）で乳化、ホモジナイズした。調製したサンプル溶液中の化合物２の理論濃度は２、６、２０ｍｇ／ｍＬであった。
【０１７６】
全部で８匹のラット及び二重ラテン方格実験デザインをこの実験で用いた。投与サイクルは３〜５日の間隔をあけた。各投与サイクルの１日前、ラットの体重を測り、一晩絶食させた。投与当日に、テレメトリシステム（インプラント型生理学的シグナルテレメトリシステム１、Ｄａｔａ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．、米国）をＯＮにし、試験パラメータを設定し、インプラントを作動させ、ラットの生理学的指標を記録した。システムをＯＮにしてから約２時間後、デザインしたサイクルにしたがってラットに投与を行った。ラットの血圧、心電図及び体温等の指標データを投与から２４時間以内に収集した。収集中、適切にシステムのＯＮ／ＯＦＦを切り替えることで、考えられ得るデータのオーバーフローを回避した。この切り換え工程は設定データポイントの値に影響せず、システム切り換え時間は記録された。記録が完了した次の日、テレメトリシステムをＯＦＦにした。検出タイムポイントは投与１時間前（−１時間）及び投与から０．５時間（±５分）、１時間（±１０分）、１．５時間（±１０分）、２時間（±１５分）、３時間（±１５分）、４時間（±１５分）、８時間（±４５分）、２４時間（±１時間）であった。全てのデータを自動的にＰＯＮＥＭＡＨバージョン４．８ソフトウェアにより収集した。パラメータは、データ収集完了後に人工データを用いて分析する。データをまずＰＯＮＥＭＡＨバージョン４．８ソフトウェアで自動的に分析し、次に選択した値について人工データでポイント毎にチェックした。心拍数、血圧、呼吸及び体温の指標に関しては、１分以内の連続的な波形の平均値を選択し、他の心電指標に関しては１０秒以内の連続的な波形の平均値を選択した。値を選択する際、検出タイムポイントでの即値データが好ましい。しかしながら、ノイズ障害が大きい、心拍数における異常又は検出タイムポイントではっきりとした波形が確認できない等の問題があった場合は、所与の範囲にある、シグナルがはっきりした波形を選択した。さらに、それでも所与の範囲に、分析できるようなはっきりした波形が見られない場合は、分析できるデータを値点付近で見つけなくてはならず、値点表で特別に説明する。値を選択した時間を記録した。
【０１７７】
この実験においては、統計ソフトウェアＳＰＳＳ１３．０を使用してデータを処理した。両側検定を行い、有意水準はｐ＜０．０５に設定した。血圧、心電図、呼吸及び体温の指標は「平均±標準誤差」として表し、以下の手順にしたがって分析した。まず、ルビーン検定を用いてデータの均一性検定を行った。データが均一（Ｐ＞０．０５）であるならば、１要因分散分析を行った。分散分析の結果が有意であるならば（Ｐ≦０．０５）、ダネットの多重比較検定をビヒクルグループとサンプルグループとの差について行った。ルビーン検定の結果が有意であるならば（Ｐ≦０．０５）、クラスカル−ワリスノンパラメトリック検定を行った。クラスカル−ワリスノンパラメトリック検定の結果が有意であるならば（Ｐ≦０．０５）、マン−ホイットニーのＵ検定によりペアワイズ比較を行った。
【０１７８】
有意な差又は有意な変化傾向がみられるタイムポイントで収集したデータを正規化した後、変化範囲を計算した。正規化の式は△％＝［（ｂ１−ｂ０）−（ａ１−ａ０）］／ａ１ｘ１００（ｂ１はサンプル投与後のタイムポイントの値を表し、ｂ０はサンプル投与前のタイムポイントの値を表し、ａ１はビヒクル投与後のタイムポイントの対応値を表し、ａ０はビヒクル投与前のタイムポイントの値を表し、△％は変化範囲を表す）であった。
【０１７９】
各用量のサンプルを投与したラットの心拍数、ＱＴ間隔及びＱＴｃＦ間隔をビヒクルを投与したラットの心電図指標と比較したが、有意な差（Ｐ＞０．０５）又は変化傾向はみられなかった（図８Ａ〜８Ｃ）。
【０１８０】
１−｛２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸（化合物２）の合成方法に関し、この方法及びその条件を最適化する実施例を以下に挙げる。
【０１８１】
化合物２の合成は、以下のステップを含む方法にしたがって行う。
【０１８２】
【化４２】
0006470757.tif 000045
【０１８３】
実施例１２：本発明の合成方法におけるステップ（１）のための選定
式１〜５で表される化合物の粗生成物を実施例２にしたがって調製し、キャラクタリゼーションを行った。ＬＣＭＳで測定した純度は７７．２５％であった。
【０１８４】
結晶化精製条件用の選定を、調製した粗生成物に行った。結晶化工程は以下の通りであった：粗生成物を結晶化溶媒に溶解させ、２０℃で結晶化し、真空で乾燥させると、ほぼ白色の固形生成物である、式１〜５で表される２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールが得られた。純度をＬＣＭＳで測定した。
【０１８５】
第１に、好ましい結晶化溶媒を選定するために、上記の結晶化工程を表４の内容にしたがって行った。
【０１８６】
【表３】
0006470757.tif 000046
【０１８７】
表４から、結晶化に単一の溶媒を使用する場合、メタノール又はエタノールを溶媒として使用することで生成物の純度がはっきりと上昇したことがみてとれる。メタノールを使用したほうがエタノールを使用するより収率はずっと高かったが、それでも５５．４％にすぎなかった。水を溶媒として使用すると生成物の純度は実質的に上昇しなかったが、収率の損失は少なかった。したがって、追跡調査においては、メタノールと水との混合溶媒を結晶化溶媒として使用することを試みた。
【０１８８】
第２に、混合溶媒におけるメタノールと水との好ましい比を選定するために、上記の結晶化工程を表５の内容にしたがって行った。結晶化のための、粗生成物（ｇ、重量基準）の混合溶媒（ｍｌ、体積基準）に対する比は１：５である。
【０１８９】
【表４】
0006470757.tif 000047
【０１９０】
表５から、混合溶媒中のメタノールを増量することで生成物の純度は上昇したものの収率は低下したこと、水を増量することで精製収率は上昇したものの生成物の純度は低下したことがみてとれる。全てを考慮し、混合溶媒におけるメタノール対水比として体積比３：１を選択した。
【０１９１】
第３に、混合溶媒の好ましい量を選定するために、上記の結晶化工程を表６の内容にしたがって行った。混合溶媒におけるメタノールの水に対する体積比は３：１である。
【０１９２】
【表５】
0006470757.tif 000048
【０１９３】
表６から、粗生成物の重量の溶媒の体積に対する比が１ｇ：５ｍＬである場合に高い収率及び純度が得られたことがみてとれる。しかしながら、粗生成物の重量の溶媒の体積に対する比が１：２０ｍＬである場合、比が１ｇ：５ｍＬである場合より高い純度が得られるものの、収率は低かった。したがって、比１ｇ：５ｍＬを、粗生成物の重量の、結晶化用の溶媒系として使用する溶媒の体積に対する比として選択した。
【０１９４】
実施例１３：本発明の合成方法におけるステップ（２）のための選定
本発明のステップ（２）を以下の手順にしたがって行った。実施例１で精製した、式１〜５で表される２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールを反応溶媒に溶解させ、次に活性二酸化マンガンを添加した。反応液を還流するまで加熱し、反応を継続させた。反応物を室温まで冷却し、濾過した。淡黄色の濾液を回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮すると、白色の固形生成物である、式１〜６で表される２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドが得られた。変換率はＬＣＭＳで測定した。
【０１９５】
第１に、好ましい反応溶媒を選定するために、上記の合成ステップを表７の内容にしたがって行った。式１〜５で表される２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールの二酸化マンガンに対するモル比は１：６であった。表７〜９における「原料」という表現は、式１〜５で表される２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールを意味する。
【０１９６】
【表６】
0006470757.tif 000049
【０１９７】
表７から、テトラヒドロフラン、酢酸エチル又はトルエンを反応溶媒として使用すると変換率及び収率にはあまり影響がなかったことがみてとれる。しかしながら、反応溶媒としてのテトラヒドロフランの使用には安全上のリスクがあり、反応溶媒としてのトルエンの使用では高い毒性が問題となるため、酢酸エチルを反応溶媒として選択した。
【０１９８】
第２に、溶媒の好ましい量を選定するために、上記の合成ステップを表８の内容にしたがって行った。酢酸エチルを反応溶媒として使用し、式１〜５で表される２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールの二酸化マンガンに対するモル比は１：６である。
【０１９９】
【表７】
0006470757.tif 000050
【０２００】
表８から、原料の重量の溶媒の体積に対する比が１ｇ：１０ｍｌ、１ｇ：２０ｍｌ及び１ｇ：３０ｍｌだと変換率及び収率にはあまり影響がなかったことがみてとれる。コストを考慮し、反応溶媒量として１ｇ：１０ｍｌの比を選択した。
【０２０１】
第３に、二酸化マンガンの好ましい量を選定するために、上記の合成ステップを表９の内容にしたがって行った。式１〜５で表される２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールの酢酸エチルに対する量１ｇ：１０ｍｌを用いた。
【０２０２】
【表８】
0006470757.tif 000051
【０２０３】
表９から、原料の二酸化マンガンに対するモル比が１：６だと高い変換率及び収率が得られたことがみてとれる。しかしながら、原料の二酸化マンガンに対するモル比を１：１０に上げても変換率及び収率にはあまり影響がなかった。したがって、コスト及び収率の両方を考慮し、原料及び二酸化マンガンの量としてモル比１：６を選択した。
【０２０４】
実施例１４：本発明の合成方法におけるステップ（３）のための選定
本発明のステップ（３）を、以下の手順にしたがって行った。室温で、式１〜６の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒド、式１〜７のアゼチジン−３−カルボン酸及び氷酢酸を反応溶媒に添加し、２時間にわたって２０℃で撹拌した。ＮａＢＨ３ＣＮをメタノールに溶解させ、次にメタノール中のＮａＢＨ３ＣＮ溶液を反応系に１時間以内に滴加した。滴下後、反応液を撹拌し、２０℃で反応させ、濾過した。濾過ケークをメタノールで洗浄し、次に乾燥させると、白色の固形生成物である、式ＩＢで表される１−｛２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸（化合物２）が得られた。変換率をＬＣＭＳで測定した。
【０２０５】
第１に、好ましい反応溶媒を選定するために、上記の合成ステップを表１０の内容にしたがって行った。式１〜６の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドの式１〜７のアゼチジン−３−カルボン酸に対するモル比は１：１．０５であった。式１〜６の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドのナトリウムシアノボロヒドリドに対するモル比は１：１である。メタノール中のＮａＢＨ３ＣＮ溶液の滴下温度は１５〜２０℃であった。表１０〜１２における「原料」という表現は、式１〜６で表される２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドを意味する。
【０２０６】
【表９】
0006470757.tif 000052
【０２０７】
表１０から、テトラヒドロフランを反応溶媒として使用すると変換率が極めて低かったことがみてとれる。一方、メタノール又はエタノールを反応溶媒として使用すると、変換率及び収率は共により高かった。
【０２０８】
第２に、還元剤の好ましい量を選定するために、上記の合成ステップを、表１１の内容にしたがって行った。式１〜６の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドの式１〜７のアゼチジン−３−カルボン酸に対するモル比は１：１．０５であった。反応溶媒はメタノールであり、メタノール中のＮａＢＨ３ＣＮ溶液の滴下温度は１５〜２０℃であった。
【０２０９】
【表１０】
0006470757.tif 000053
【０２１０】
表１１から、原料のナトリウムシアノボロヒドリドに対するモル比が１：１だと変換率、収率及び生成物の純度の全てがより高かったことがみてとれる。
【０２１１】
第３に、還元剤の好ましい滴下温度を選定するために、上記の合成ステップを表１２の内容にしたがって行った。式１〜６の２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドの式１〜７のアゼチジン−３−カルボン酸に対するモル比は１：１．０５であり、反応溶媒はメタノールであった。
【０２１２】
【表１１】
0006470757.tif 000054
【０２１３】
表１２から、ナトリウムシアノボロヒドリドの滴下温度が１５〜２０℃だと変換率及び生成物の純度が共により高かったことがみてとれる。
【０２１４】
実施例１５：本発明の合成方法
（１）室温で、４−イソブチル安息香酸（１−４、０．１４８Ｋｇ、０．８３ｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．７Ｌ）に溶解させ、次に１−ヒドロキシベンゾトリゾール（０．１１Ｋｇ、０．８３ｍｏｌ）及び１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（０．１６Ｋｇ、０．８３ｍｏｌ）を添加した。反応液を３０℃まで加熱し、３０分間にわたって撹拌し、次に３−フルオロ−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジン（１−３、０．１５３Ｋｇ、０．８３ｍｏｌ）を反応液に添加した。反応液を１４０℃まで加熱し、２時間にわたって反応させ、室温まで冷却し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを減圧下での濃縮により除去した。濃縮物を酢酸エチル（２．０Ｌ）に溶解させ、連続的に水（１．５Ｌｘ２）及び飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１．５Ｌ）で洗浄した。有機相を回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮すると２５６ｇの粗生成物が得られた。
【０２１５】
上で得られた粗生成物を、メタノールと水との１．２８Ｌの混合溶媒（体積比３：１）で再結晶化し、２０℃で結晶化し、濾過し、真空下で乾燥させると、ほぼ白色の固形生成物である２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールが得られた（１−５、１８２ｇ、収率７１％）。ＬＣＭＳで測定した純度は９３．１％であった。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３２７．０［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：８．１１（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．９８（ｍ、１Ｈ）、７．８６（ｍ、１Ｈ）、７．５９（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．３３（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、４．８５（ｓ、２Ｈ）、２．５７（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、１．９３（ｍ、１Ｈ）、０．９３（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、６Ｈ）
【０２１６】
（２）室温で、２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコール（１−５、０．１４Ｋｇ、０．４３ｍｏｌ）を酢酸エチル（１．４Ｌ）に溶解させ、次に活性二酸化マンガン（０．２１Ｋｇ、２．４２ｍｏｌ）を添加した。反応液を還流するまで加熱し、３時間にわたって反応させ、室温まで冷却し、濾過した。淡黄色の濾液を回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮すると、白色の固形生成物である２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドが得られた（１−６、１３９ｇ、収率９９．０％）。ＬＣＭＳで測定した純度は９７．６％であった。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３２５．０［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１０．４２（ｓ、１Ｈ）、８．１２〜７．９９（ｍ、５Ｈ）、７．３４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．５８（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．９３（ｍ、１Ｈ）、０．９３（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、６Ｈ）
【０２１７】
（３）室温で、２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒド（１−６、６０ｇ、０．１８５ｍｏｌ）、アゼチジン−３−カルボン酸（１−７、１９．５ｇ、０．１９３ｍｏｌ）及び氷酢酸（３６０ｍＬ、０．６３ｍｏｌ）をメタノール（１．６Ｌ）に添加し、２時間にわたって２０℃で撹拌した。ＮａＢＨ３ＣＮ（１１．５ｇ、０．１８５ｍｏｌ）をメタノール（２００ｍＬ）に溶解させ、次にメタノール中のＮａＢＨ３ＣＮ溶液を反応系に１時間以内に滴加した。滴下温度は１５〜２０℃に制御した。滴下後、反応液を１６時間にわたって２０℃で撹拌し、濾過した。濾過ケークを３００ｍＬのメタノールで洗浄し、次に乾燥させると、白色の固形生成物である１−｛２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸が得られた（化合物２、６７ｇ、収率８９．０％）。ＬＣＭＳで測定した純度は９８．８％であった。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４１０．２［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：８．１３（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、８．０５（ｍ、１Ｈ）、７．９７（ｍ、１Ｈ）、７．６８（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．４２（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、４．４０（ｓ、２Ｈ）、４．１５（ｍ、４Ｈ）、３．４１（ｍ、１Ｈ）、２．６１（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．９５（ｍ、１Ｈ）、０．９４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、６Ｈ）．
【０２１８】
実施例１６：本発明の合成方法
（１）室温で、４−イソブチル安息香酸（１−４、１．４７７Ｋｇ、８．３０ｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１７Ｌ）に溶解させ、次に１−ヒドロキシベンゾトリゾール（１．１２Ｋｇ、８．３０ｍｏｌ）及び１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（１．５８Ｋｇ、８．３０ｍｏｌ）を添加した。反応液を３０℃まで加熱し、３０分間にわたって撹拌し、次に３−フルオロ−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジン（１−３、１．５２７Ｋｇ、８．３０ｍｏｌ）を反応液に添加した。反応液を１４０℃まで加熱し、２時間にわたって反応させ、室温まで冷却し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを減圧下での濃縮により除去した。濃縮物を酢酸エチル（２０Ｌ）に溶解させ、連続的に水（１５Ｌｘ２）及び飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１５Ｌ）で洗浄した。有機相を回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮すると、２．６Ｋｇの粗生成物が得られた。
【０２１９】
上で得られた粗生成物をメタノールと水との１２．５Ｌの混合溶媒（体積比３：１）により再結晶化し、２０℃で結晶化し、濾過し、真空下で乾燥させると、ほぼ白色の固形生成物である２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールが得られた（１−５、１．９Ｋｇ、収率７３％）。ＬＣＭＳで測定した純度は９３．８９％であった。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３２７．０［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：８．１１（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．９８（ｍ、１Ｈ）、７．８６（ｍ、１Ｈ）、７．５９（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．３３（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、４．８５（ｓ、２Ｈ）、２．５７（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、１．９３（ｍ、１Ｈ）、０．９３（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、６Ｈ）
【０２２０】
（２）室温で、２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコール（１−５、１．４Ｋｇ、４．３０ｍｏｌ）を酢酸エチル（１４Ｌ）に溶解させ、次に活性二酸化マンガン（２．１Ｋｇ、２４．１５ｍｏｌ）を添加した。反応液を還流するまで加熱し、３時間にわたって反応させ、室温まで冷却し、濾過した。淡黄色の濾液を回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮すると、白色の固形生成物である２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドが得られた（１−６、１．３８Ｋｇ、収率９９．０％）。ＬＣＭＳで測定した純度は９３．９４％であった。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３２５．０［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１０．４２（ｓ、１Ｈ）、８．１２〜７．９９（ｍ、５Ｈ）、７．３４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．５８（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．９３（ｍ、１Ｈ）、０．９３（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、６Ｈ）
【０２２１】
（３）室温で、２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒド（１−６、０．６Ｋｇ、１．８５ｍｏｌ）、アゼチジン−３−カルボン酸（１−７、０．１９５Ｋｇ、１．９３ｍｏｌ）及び氷酢酸（０．３６０Ｌ、６．３ｍｏｌ）をメタノール（１６Ｌ）に添加し、２時間にわたって２０℃で撹拌した。ＮａＢＨ３ＣＮ（０．１１５Ｋｇ、１．８５ｍｏｌ）をメタノール（２Ｌ）に溶解させ、次にメタノール中のＮａＢＨ３ＣＮ溶液を反応系に１時間以内に滴加した。滴下温度は１５〜２０℃に制御した。滴下後、反応液を１６時間にわたって２０℃で撹拌し、濾過した。濾過ケークを３Ｌのメタノールで洗浄し、次に乾燥させると、白色の固形生成物である１−｛２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸が得られた（化合物２、０．７Ｋｇ、収率９２．６％）。ＬＣＭＳで測定した純度は９７．６％であった。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４１０．２［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：８．１３（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、８．０５（ｍ、１Ｈ）、７．９７（ｍ、１Ｈ）、７．６８（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．４２（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、４．４０（ｓ、２Ｈ）、４．１５（ｍ、４Ｈ）、３．４１（ｍ、１Ｈ）、２．６１（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．９５（ｍ、１Ｈ）、０．９４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、６Ｈ）
【０２２２】
実施例１７：本発明の合成方法
（１）室温で、４−イソブチル安息香酸（１−４、０．１４８Ｋｇ、０．８３ｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．７Ｌ）に溶解させ、次に１−ヒドロキシベンゾトリゾール（０．１１Ｋｇ、０．８３ｍｏｌ）及び１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（０．１６Ｋｇ、０．８３ｍｏｌ）を添加した。反応液を３０℃まで加熱し、３０分間にわたって撹拌し、次に３−フルオロ−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジン（１−３、０．１５３Ｋｇ、０．８３ｍｏｌ）を反応液に添加した。反応液を１４０℃まで加熱し、２時間にわたって反応させ、室温まで冷却し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを減圧下での濃縮により除去した。濃縮物を酢酸エチル（２．０Ｌ）に溶解させ、連続的に水（１．５Ｌｘ２）及び飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１．５Ｌ）で洗浄した。有機相を回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮すると２５１ｇの粗生成物が得られた。
【０２２３】
上で得られた粗生成物をメタノールと水との１．２８Ｌの混合溶媒（体積比１：１）により再結晶化し、２０℃で結晶化し、濾過し、真空下で乾燥させると、ほぼ白色の固形生成物である２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールが得られた（１−５、１５８ｇ、収率６３％）。ＬＣＭＳで測定した純度は９２．１％であった。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３２７．０［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：８．１１（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．９８（ｍ、１Ｈ）、７．８６（ｍ、１Ｈ）、７．５９（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．３３（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、４．８５（ｓ、２Ｈ）、２．５７（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、１．９３（ｍ、１Ｈ）、０．９３（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、６Ｈ
【０２２４】
（２）室温で、２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコール（１−５、０．１４Ｋｇ、０．４３ｍｏｌ）を酢酸エチル（１．４Ｌ）に溶解させ、次に活性二酸化マンガン（０．１９Ｋｇ、２．１５ｍｏｌ）を添加した。反応液を還流するまで加熱し、３時間にわたって反応させ、室温まで冷却し、濾過した。淡黄色の濾液を回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮すると、白色の固形生成物である２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドが得られた（１−６、１３８ｇ、収率９９．０％）。ＬＣＭＳで測定した純度は９８．５％であった。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３２５．０［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１０．４２（ｓ、１Ｈ）、８．１２〜７．９９（ｍ、５Ｈ）、７．３４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．５８（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．９３（ｍ、１Ｈ）、０．９３（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、６Ｈ）
【０２２５】
（３）室温で、２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒド（１−６、６０ｇ、０．１８５ｍｏｌ）、アゼチジン−３−カルボン酸（１−７、１９．５ｇ、０．１９３ｍｏｌ）及び氷酢酸（３６０ｍＬ、０．６３ｍｏｌ）をメタノール（１．６Ｌ）に添加し、２時間にわたって２０℃で撹拌した。ＮａＢＨ３ＣＮ（５．８ｇ、０．０９ｍｏｌ）をメタノール（２００ｍＬ）に溶解させ、次に、メタノール中のＮａＢＨ３ＣＮ溶液を反応系に１時間以内に滴加した。滴下温度は１５〜２０℃に制御した。滴下後、反応液を１６時間にわたって２０℃で撹拌し、濾過した。濾過ケークを３００ｍＬのメタノールで洗浄し、次に乾燥させると、白色の固形生成物である１−｛２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸が得られた（化合物２、６２ｇ、収率８１．９％）。ＬＣＭＳで測定した純度は９４．６％であった。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４１０．２［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：８．１３（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、８．０５（ｍ、１Ｈ）、７．９７（ｍ、１Ｈ）、７．６８（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．４２（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、４．４０（ｓ、２Ｈ）、４．１５（ｍ、４Ｈ）、３．４１（ｍ、１Ｈ）、２．６１（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．９５（ｍ、１Ｈ）、０．９４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、６Ｈ）
【０２２６】
実施例１８：本発明の合成方法
（１）室温で、４−イソブチル安息香酸（１−４、０．１４８Ｋｇ、０．８３ｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．７Ｌ）に溶解させ、次に１−ヒドロキシベンゾトリゾール（０．１１Ｋｇ、０．８３ｍｏｌ）及び１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（０．１６Ｋｇ、０．８３ｍｏｌ）を添加した。反応液を３０℃まで加熱し、３０分間にわたって撹拌し、次に３−フルオロ−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジン（１−３、０．１５３Ｋｇ、０．８３ｍｏｌ）を反応液に添加した。反応液を１４０℃まで加熱し、２時間にわたって反応させ、室温まで冷却し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを減圧下での濃縮により除去した。濃縮物を酢酸エチル（２．０Ｌ）に溶解させ、連続的に水（１．５Ｌｘ２）及び飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１．５Ｌ）で洗浄した。有機相を回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮すると２６０ｇの粗生成物が得られた。
【０２２７】
上で得られた粗生成物を、メタノールと水との１．３０Ｌの混合溶媒（体積比１：３）で再結晶化し、２０℃で結晶化し、濾過し、真空下で乾燥させると、ほぼ白色の固形生成物である２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールが得られた（１−５、１９６ｇ、収率７６％）。ＬＣＭＳで測定した純度は８８．７％であった。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３２７．０［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：８．１１（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．９８（ｍ、１Ｈ）、７．８６（ｍ、１Ｈ）、７．５９（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．３３（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、４．８５（ｓ、２Ｈ）、２．５７（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、１．９３（ｍ、１Ｈ）、０．９３（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、６Ｈ）
【０２２８】
（２）室温で、２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコール（１−５、０．１４Ｋｇ、０．４３ｍｏｌ）を酢酸エチル（１．４Ｌ）に溶解させ、次に活性二酸化マンガン（０．２１Ｋｇ、２．４２ｍｏｌ）を添加した。反応液を還流するまで加熱し、３時間にわたって反応させ、室温まで冷却し、濾過した。淡黄色の濾液を回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮すると、白色の固形生成物である２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドが得られた（１−６、１３９ｇ、収率９９．０％）。ＬＣＭＳで測定した純度は９７．７％であった。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３２５．０［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１０．４２（ｓ、１Ｈ）、８．１２〜７．９９（ｍ、５Ｈ）、７．３４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．５８（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．９３（ｍ、１Ｈ）、０．９３（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、６Ｈ）
【０２２９】
（３）室温で、２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒド（１−６、６０ｇ、０．１８５ｍｏｌ）、アゼチジン−３−カルボン酸（１−７、１９．５ｇ、０．１９３ｍｏｌ）及び氷酢酸（３６０ｍＬ、０．６３ｍｏｌ）をメタノール（１．６Ｌ）に添加し、２時間にわたって２０℃で撹拌した。ＮａＢＨ３ＣＮ（２３．０ｇ、０．３７ｍｏｌ）をメタノール（２００ｍＬ）に溶解させ、次にメタノール中のＮａＢＨ３ＣＮ溶液を反応系に１時間以内に滴加した。滴下温度は１５〜２０℃に制御した。滴下後、反応液を１６時間にわたって２０℃で撹拌し、濾過した。濾過ケークを３００ｍＬのメタノールで洗浄し、次に乾燥させると、白色の固形生成物である１−｛２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸が得られた（化合物２、６０ｇ、収率７９％）。ＬＣＭＳで測定した純度は９４．２％であった。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４１０．２［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：８．１３（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、８．０５（ｍ、１Ｈ）、７．９７（ｍ、１Ｈ）、７．６８（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．４２（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、４．４０（ｓ、２Ｈ）、４．１５（ｍ、４Ｈ）、３．４１（ｍ、１Ｈ）、２．６１（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．９５（ｍ、１Ｈ）、０．９４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、６Ｈ）
【０２３０】
実施例１９：本発明の合成方法
（１）室温で、４−イソブチル安息香酸（１−４、０．１４８Ｋｇ、０．８３ｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．７Ｌ）に溶解させ、次に１−ヒドロキシベンゾトリゾール（０．１１Ｋｇ、０．８３ｍｏｌ）及び１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（０．１６Ｋｇ、０．８３ｍｏｌ）を添加した。反応液を３０℃まで加熱し、３０分間にわたって撹拌し、次に３−フルオロ−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジン（１−３、０．１５３Ｋｇ、０．８３ｍｏｌ）を反応液に添加した。反応液を１４０℃まで加熱し、２時間にわたって反応させ、室温まで冷却し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを減圧下での濃縮により除去した。濃縮物を酢酸エチル（２．０Ｌ）に溶解させ、連続的に水（１．５Ｌｘ２）及び飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１．５Ｌ）で洗浄した。有機相を回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮すると２５０ｇの粗生成物が得られた。
【０２３１】
上で得られた粗生成物をメタノールと水との１．２５Ｌの混合溶媒（体積比２：１）で再結晶化し、２０℃で結晶化し、濾過し、真空下で乾燥させると、ほぼ白色の固形生成物である２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールが得られた（１−５、１６９ｇ、収率６８％）。ＬＣＭＳで測定した純度は９３．９％であった。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３２７．０［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：８．１１（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．９８（ｍ、１Ｈ）、７．８６（ｍ、１Ｈ）、７．５９（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．３３（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、４．８５（ｓ、２Ｈ）、２．５７（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、１．９３（ｍ、１Ｈ）、０．９３（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、６Ｈ）
【０２３２】
（２）室温で、２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコール（１−５、０．１４Ｋｇ、０．４３ｍｏｌ）を酢酸エチル（１．４Ｌ）に溶解させ、次に活性二酸化マンガン（０．３７Ｋｇ、４．３ｍｏｌ）を添加した。反応液を還流するまで加熱し、３時間にわたって反応させ、室温まで冷却し、濾過した。淡黄色の濾液を回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮すると、白色の固形生成物である２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドが得られた（１−６、１３９ｇ、収率９９．０％）。ＬＣＭＳで測定した純度は９９．２％であった。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３２５．０［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１０．４２（ｓ、１Ｈ）、８．１２〜７．９９（ｍ、５Ｈ）、７．３４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．５８（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．９３（ｍ、１Ｈ）、０．９３（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、６Ｈ）
【０２３３】
（３）室温で、２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒド（１−６、６０ｇ、０．１８５ｍｏｌ）、アゼチジン−３−カルボン酸（１−７、１９．５ｇ、０．１９３ｍｏｌ）及び氷酢酸（３６０ｍＬ、０．６３ｍｏｌ）をメタノール（１．６Ｌ）に添加し、２時間にわたって２０℃で撹拌した。ＮａＢＨ３ＣＮ（６９．０ｇ、１．１１ｍｏｌ）をメタノール（２００ｍＬ）に溶解させ、次にメタノール中のＮａＢＨ３ＣＮ溶液を反応系に１時間以内に滴加した。滴下温度は１５〜２０℃に制御した。滴下後、反応液を１６時間にわたって２０℃で撹拌し、濾過した。濾過ケークを３００ｍＬのメタノールで洗浄し、次に乾燥させると、白色の固形生成物である１−｛２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸が得られた（化合物２、２．５４ｇ、収率７１．２％）。ＬＣＭＳで測定した純度は９４．４％であった。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４１０．２［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：８．１３（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、８．０５（ｍ、１Ｈ）、７．９７（ｍ、１Ｈ）、７．６８（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．４２（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、４．４０（ｓ、２Ｈ）、４．１５（ｍ、４Ｈ）、３．４１（ｍ、１Ｈ）、２．６１（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．９５（ｍ、１Ｈ）、０．９４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、６Ｈ）
【０２３４】
実施例２０：本発明の合成方法
（１）室温で、４−イソブチル安息香酸（１−４、０．１４８Ｋｇ、０．８３ｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．７Ｌ）に溶解させ、次に１−ヒドロキシベンゾトリゾール（０．１１Ｋｇ、０．８３ｍｏｌ）及び１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（０．１６Ｋｇ、０．８３ｍｏｌ）を添加した。反応液を３０℃まで加熱し、３０分間にわたって撹拌し、次に３−フルオロ−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジン（１−３、０．１５３Ｋｇ、０．８３ｍｏｌ）を反応液に添加した。反応液を１４０℃まで加熱し、２時間にわたって反応させ、室温まで冷却し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを減圧下での濃縮により除去した。濃縮物を酢酸エチル（２．０Ｌ）に溶解させ、連続的に水（１．５Ｌｘ２）及び飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１．５Ｌ）で洗浄した。有機相を回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮すると２５６ｇの粗生成物が得られた。
【０２３５】
上で得られた粗生成物を、メタノールと水との１．２８Ｌの混合溶媒（体積比１：２）で再結晶化し、２０℃で結晶化し、濾過し、真空下で乾燥させると、ほぼ白色の固形生成物である２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールが得られた（１−５、１９０ｇ、収率７４％）。ＬＣＭＳで測定した純度は９２．６％であった。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３２７．０［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：８．１１（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．９８（ｍ、１Ｈ）、７．８６（ｍ、１Ｈ）、７．５９（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．３３（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、４．８５（ｓ、２Ｈ）、２．５７（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、１．９３（ｍ、１Ｈ）、０．９３（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、６Ｈ）
【０２３６】
（２）室温で、２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコール（１−５、０．１４Ｋｇ、０．４３ｍｏｌ）を酢酸エチル（１．４Ｌ）に溶解させ、次に活性二酸化マンガン（０．１５Ｋｇ、１．７２ｍｏｌ）を添加した。反応液を還流するまで加熱し、３時間にわたって反応させ、室温まで冷却し、濾過した。淡黄色の濾液を回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮すると、白色の固形生成物である２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドが得られた（１−６、１３９ｇ、収率９９．０％）。ＬＣＭＳで測定した純度は９６．９％であった。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３２５．０［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１０．４２（ｓ、１Ｈ）、８．１２〜７．９９（ｍ、５Ｈ）、７．３４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．５８（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．９３（ｍ、１Ｈ）、０．９３（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、６Ｈ）
【０２３７】
（３）室温で、２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒド（１−６、６０ｇ、０．１８５ｍｏｌ）、アゼチジン−３−カルボン酸（１−７、１９．５ｇ、０．１９３ｍｏｌ）及び氷酢酸（３６０ｍＬ、０．６３ｍｏｌ）をメタノール（１．６Ｌ）に添加し、２時間にわたって２０℃で撹拌した。ＮａＢＨ３ＣＮ（１１．５ｇ、０．１８５ｍｏｌ）をメタノール（２００ｍＬ）に溶解させ、次にメタノール中のＮａＢＨ３ＣＮ溶液を反応系に１時間以内に滴加した。滴下温度は１５〜２０℃に制御した。滴下後、反応液を１６時間にわたって２０℃で撹拌し、濾過した。濾過ケークを３００ｍＬのメタノールで洗浄し、次に乾燥させると、白色の固形生成物である１−｛２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸が得られた（化合物２、６４ｇ、収率８４．４％）。ＬＣＭＳで測定した純度は９５．５％であった。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４１０．２［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：８．１３（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、８．０５（ｍ、１Ｈ）、７．９７（ｍ、１Ｈ）、７．６８（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．４２（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、４．４０（ｓ、２Ｈ）、４．１５（ｍ、４Ｈ）、３．４１（ｍ、１Ｈ）、２．６１（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．９５（ｍ、１Ｈ）、０．９４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、６Ｈ）
【０２３８】
実施例２１：本発明の合成方法
（１）室温で、４−イソブチル安息香酸（１−４、０．１４８Ｋｇ、０．８３ｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．７Ｌ）に溶解させ、次に１−ヒドロキシベンゾトリゾール（０．１１Ｋｇ、０．８３ｍｏｌ）及び１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（０．１６Ｋｇ、０．８３ｍｏｌ）を添加した。反応液を３０℃まで加熱し、３０分間にわたって撹拌し、次に３−フルオロ−Ｎ’−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチルベンズアミジン（１−３、０．１５３Ｋｇ、０．８３ｍｏｌ）を反応系に添加した。反応液を１４０℃まで加熱し、２時間にわたって反応させ、室温まで冷却し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを減圧下での濃縮により除去した。濃縮物を酢酸エチル（２．０Ｌ）に溶解させ、連続的に水（１．５Ｌｘ２）及び飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１．５Ｌ）で洗浄した。有機相を回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮すると２５８ｇの粗生成物が得られた。
【０２３９】
上で得られた粗生成物を、メタノールと水との１．２９Ｌの混合溶媒（体積比３：１）で再結晶化し、２０℃で結晶化し、濾過し、真空下で乾燥させると、ほぼ白色の固形生成物である２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコールが得られた（１−５、１８６ｇ、収率７２％）。ＬＣＭＳで測定した純度は９３．８％であった。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３２７．０［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：８．１１（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．９８（ｍ、１Ｈ）、７．８６（ｍ、１Ｈ）、７．５９（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．３３（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、４．８５（ｓ、２Ｈ）、２．５７（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、１．９３（ｍ、１Ｈ）、０．９３（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、６Ｈ）
【０２４０】
（２）室温で、２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアルコール（１−５、０．１４Ｋｇ、０．４３ｍｏｌ）を酢酸エチル（２．８Ｌ）に溶解させ、次に活性二酸化マンガン（０．２１Ｋｇ、２．４２ｍｏｌ）を添加した。反応液を還流するまで加熱し、３時間にわたって反応させ、室温まで冷却し、濾過した。淡黄色の濾液を回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮すると、白色の固形生成物である２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒドが得られた（１−６、１３８ｇ、収率９９％）。ＬＣＭＳで測定した純度は９８．８％であった。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ３２５．０［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１０．４２（ｓ、１Ｈ）、８．１２〜７．９９（ｍ、５Ｈ）、７．３４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．５８（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．９３（ｍ、１Ｈ）、０．９３（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、６Ｈ）
【０２４１】
（３）室温で、２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンズアルデヒド（１−６、６０ｇ、０．１８５ｍｏｌ）、アゼチジン−３−カルボン酸（１−７、１９．５ｇ、０．１９３ｍｏｌ）及び氷酢酸（３６０ｍＬ、０．６３ｍｏｌ）をメタノール（１．６Ｌ）に添加し、２時間にわたって２０℃で撹拌した。ＮａＢＨ３ＣＮ（１１．５ｇ、０．１８５ｍｏｌ）をメタノール（２００ｍＬ）に溶解させ、次にメタノール中のＮａＢＨ３ＣＮ溶液を反応系に１時間以内に滴加した。滴下温度は１５〜２０℃に制御した。滴下後、反応液を１６時間にわたって２０℃で撹拌し、濾過した。濾過ケークを３００ｍＬのメタノールで洗浄し、次に乾燥させると、白色の固形生成物である１−｛２−フルオロ−４−［５−（４−イソブチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−３−アゼチジンカルボン酸が得られた（化合物２、６４ｇ、収率８４．５％）。ＬＣＭＳで測定した純度は９６．９％であった。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ４１０．２［Ｍ＋Ｈ］+、ＮＭＲ：1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：８．１３（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、８．０５（ｍ、１Ｈ）、７．９７（ｍ、１Ｈ）、７．６８（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．４２（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、４．４０（ｓ、２Ｈ）、４．１５（ｍ、４Ｈ）、３．４１（ｍ、１Ｈ）、２．６１（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．９５（ｍ、１Ｈ）、０．９４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、６Ｈ）
【０２４２】
本発明の実施形態に関するこれまでの説明は本発明を限定することを意図したものではなく、当業者ならば、本発明に沿って様々な変更を加え、変化形を作り出すことができ、これらは本発明の趣旨から逸脱することなく本発明の保護範囲内に含まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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