(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗精神病薬処置に応答した被験体の体重変化を予測する方法であって、
被験体から入手したゲノムＤＮＡを含む生体試料において、被験体のＧＡＢＲＡ２遺伝子における１以上の多型またはその相補体の存在または非存在を判定することを含み、
ここで１以上の多型の存在が、抗精神病薬処置に対する被験体の体重増加の予測となるものであり、
ＧＡＢＲＡ２遺伝子における１以上の多型が
ａ)ｒｓ１６８５９２２７
【化１】
0006524073.tif 000007
ここで、２コピーのＣ対立遺伝子の存在が、被験体におけるより高い体重増加率と関連する；
ｂ）ｒｓ２７９８５８
【化２】
0006524073.tif 000008
ここで、２コピーのＴ対立遺伝子の存在が、被験体におけるより高い体重増加率と関連する；
ｃ）ｒｓ１４４２０６２
【化３】
0006524073.tif 000009
ここで、２コピーのＧ対立遺伝子の存在が、被験体におけるより高い体重増加率と関連する；
ｄ）ｒｓ１１５０３０１４
【化４】
0006524073.tif 000010
ここで、少なくとも１コピーのＧ対立遺伝子の存在が、被験体におけるより高い体重増加率と関連する；
ｅ）ｒｓ６８５６１３０
【化５】
0006524073.tif 000011
ここで、少なくとも１コピーのＧ対立遺伝子の存在が、被験体におけるより高い体重増加率と関連する；または、
ｆ）ｒｓ１３７２４７２
【化６】
0006524073.tif 000012
ここで、２コピーのＡ対立遺伝子の存在が、被験体におけるより高い体重増加率と関連する；
またはそれらの相補体に関するものであり、
多型部位がかっこ内の下線を施した太字にある、前記方法。
【請求項２】
被験体が、統合失調症もしくは統合失調感情障害を伴なうと診断されている、統合失調症もしくは統合失調感情障害を発症する可能性がある、または統合失調症もしくは統合失調感情障害の１以上の症状を示している、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
被験体が、１以上の精神病性症状を示している、または１以上の精神病性症状を示すリスクをもつ、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ＧＡＢＲＡ２における１以上の多型が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、もしくはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１と２の両方、またはそれらの相補体を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
１以上の多型が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、もしくは７〜９の１以上の多型、またはそれらの相補体をさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
多型のうち少なくとも１つが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１もしくは２、または多型部位を含むそれらのバリアントもしくはフラグメントにより定められる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
試料が血液試料である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[0001]  本発明は遺伝子マーカーの使用に関する。より具体的には、本発明は抗精神病薬誘導による体重増加に関連するＧＡＢＲＡ２における遺伝子マーカーおよびその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
[0002]  抗精神病薬を用いた精神病症状、たとえば統合失調症(schizophrenia)（ＳＣＺ）症状の処置は、有効性の乏しさと有害反応によって制限されている。これは、第２世代の抗精神病薬、たとえばクロザピン(clozapin)およびオランザピン(olanzapine)に特に当てはまり、それらにおいては処置した患者の約３０％が著しい体重増加を生じる。抗精神病薬は統合失調症、双極性障害および精神病性うつ病に一般的にみられる精神病性症状を処置するために用いられる。それらは、双極性躁狂性および混合性エピソード（非特許文献１）１、大うつ病性障害（非特許文献２、３）２，３、自閉症スペクトラム障害（非特許文献４，５）４，５、全般性不安障害、強迫性障害、認知症（非特許文献６〜８）６−８を含めた他の精神障害を管理するために使用が漸増している。
【０００３】
[0003]  抗精神病薬の応答および有害作用の基礎的機序は不明のままであるが、遺伝因子が顕著な役割を果たしていると思われる（非特許文献９〜１４）９−１４。
[0004]  摂食の調節におけるガンマ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）の役割に関する証拠が増加しつつある。ＧＡＢＡは、視床下部のプロオピオメラノコルチン(pro-opiomelanocortin)ＰＯＭＣニューロンおよびアグーチ（Agouti）関連ペプチド(Agouti-related peptide)（ＡＧＲＰ）ニューロンを含めた脳の多くの領域で産生される（非特許文献１５、１６）１５、１６。ジフテリア毒素仲介によるＧＡＢＡ分泌ＡＧＲＰニューロン除去は、マウスにおいて食欲低下表現型を誘導した（非特許文献１７に概説）１７。同様に、ＡＧＲＰニューロンからのＧＡＢＡ放出を遺伝的に欠失するマウスは、グレリンにより誘導される肥満症に対して抵抗性であった（非特許文献１８）１８。この抵抗性の機序は、これらのＡＧＲＰ−ＧＡＢＡ欠失マウスにおける摂食低減およびエネルギー消費増大によるものである可能性があった１８。逆に、ベンゾジアゼピンであるミダゾラム(midazolam)およびＬ−８３８４１７を含めたＧＡＢＡアゴニストを脳幹の傍小脳脚核(parabrachial nucleus)に投与すると、摂食が増大した（非特許文献１９）１９。ＧＡＢＡＡおよびＧＡＢＡＢ受容体アゴニストは両方とも、げっ歯類および他の動物モデルにおいて摂食を高めた（非特許文献２０〜２２）２０−２２。ＧＡＢＲＡ２遺伝子は特に、肥満症の最近のゲノムワイドメタ解析におけるトップ所見の１つであり（非特許文献２３）２３、これによりそれは肥満症および関連表現型におけるさらなる研究のための魅力的な候補遺伝子となった。
【０００４】
[0005]  各種の抗精神病薬によるＧＡＢＡ神経伝達の変異に関する証拠も蓄積しつつある（非特許文献２４〜２６）２４−２６。クロザピンおよびオランザピンは特に、ＧＡＢＡＡ受容体におけるアロプレグナノロン(allopregnanolone)を含めた神経活性ステロイドのアロステリック作用によりＧＡＢＡ作動性神経伝達（非特許文献２７）２７を増大させることによって、それらの抗不安活性を発揮している可能性がある（非特許文献２８）２８。オランザピン誘導による体重増加および脂肪蓄積は、ＧＡＢＡ合成酵素ＧＡＤ６５のレベル増大に関連づけられている（非特許文献２９）２９。
【０００５】
[0006]  染色体領域４ｐ１２にマッピングされるＧＡＢＲＡ２遺伝子（ＨＧＮＣ：４０７６）は、ＧＡＢＡＡ受容体、アルファ２サブユニットをコードする。このＧＡＢＲＡ２遺伝子は肥満症に関与することが示唆された（非特許文献２３）２３が、それは抗精神病薬誘導による体重増加に関しては研究されていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Correll CU, Sheridan EM, DelBello MP. Antipsychotic and mood stabilizer efficacy and tolerability in pediatric and adult patients with bipolar I mania: a comparative analysis of acute, randomized, placebo-controlled trials. Bipolar Disord 2010; 12(2): 116-141.
【非特許文献２】Komossa K, Depping AM, Gaudchau A, Kissling W, Leucht S. Second-generation antipsychotics for major depressive disorder and dysthymia. Cochrane Database Syst Rev 2010;(12): CD008121.
【非特許文献３】Spielmans GI, Berman MI, Linardatos E, Rosenlicht NZ, Perry A, Tsai AC. Adjunctive atypical antipsychotic treatment for major depressive disorder: a meta-analysis of depression, quality of life, and safety outcomes. PLoS Med 2013; 10(3): e1001403.
【非特許文献４】Nurmi EL, Spilman SL, Whelan F, Scahill LL, Aman MG, McDougle CJ, et al. Moderation of antipsychotic-induced weight gain by energy balance gene variants in the RUPP autism network risperidone studies. Transl Psychiatry 2013; 3: e274.
【非特許文献５】Zuddas A, Zanni R, Usala T. Second generation antipsychotics (SGAs) for non-psychotic disorders in children and adolescents: a review of the randomized controlled studies. Eur Neuropsychopharmacol 2011; 21(8): 600-620.
【非特許文献６】Ballard C, Waite J. The effectiveness of atypical antipsychotics for the treatment of aggression and psychosis in Alzheimer's disease. Cochrane Database Syst Rev 2006;(1): CD003476.
【非特許文献７】Maher AR, Maglione M, Bagley S, Suttorp M, Hu JH, Ewing B, et al. Efficacy and comparative effectiveness of atypical antipsychotic medications for off-label uses in adults: a systematic review and meta-analysis. JAMA 2011; 306(12): 1359-1369.
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【非特許文献１０】Muller DJ, Kennedy JL. Genetics of antipsychotic treatment emergent weight gain in schizophrenia. Pharmacogenomics 2006; 7(6): 863-887.
【非特許文献１１】Strange PG. Antipsychotic drugs: importance of dopamine receptors for mechanisms of therapeutic actions and side effects. Pharmacol Rev 2001; 53(1): 119-133.
【非特許文献１２】Vojvoda D, Grimmell K, Sernyak M, Mazure CM. Monozygotic twins concordant for response to clozapine. Lancet 1996; 347(8993): 61.
【非特許文献１３】Gebhardt S, Theisen FM, Haberhausen M, Heinzel-Gutenbrunner M, Wehmeier PM, Krieg JC, et al. Body weight gain induced by atypical antipsychotics: an extension of the monozygotic twin and sib pair study. J Clin Pharm Ther 2010; 35(2): 207-211.
【非特許文献１４】Lett TA, Wallace TJ, Chowdhury NI, Tiwari AK, Kennedy JL, Muller DJ. Pharmacogenetics of antipsychotic-induced weight gain: review and clinical implications. Mol Psychiatry 2011e.
【非特許文献１５】Cone RD. Anatomy and regulation of the central melanocortin system. Nat Neurosci 2005; 8(5): 571-578.
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【非特許文献２７】Marx CE, VanDoren MJ, Duncan GE, Lieberman JA, Morrow AL. Olanzapine and clozapine increase the GABAergic neuroactive steroid allopregnanolone in rodents. Neuropsychopharmacology 2003; 28(1): 1-13.
【非特許文献２８】Ugale RR, Hirani K, Morelli M, Chopde CT. Role of neuroactive steroid allopregnanolone in antipsychotic-like action of olanzapine in rodents. Neuropsychopharmacology 2004; 29(9): 1597-1609.
【非特許文献２９】Weston-Green K, Huang XF, Deng C. Alterations to melanocortinergic, GABAergic and cannabinoid neurotransmission associated with olanzapine-induced weight gain. PLoS One 2012; 7(3): e33548.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
[0007]  当技術分野では新規な遺伝子マーカーが求められている。さらに、当技術分野では、抗精神病薬誘導による体重増加に関連する新規な遺伝子マーカーが求められている。さらに、当技術分野では、精神病の処置のための薬物投与を処方するのに関して根拠ある判定を行なう機会を医師および他のヘルスケア専門家に提供する、抗精神病薬誘導による体重増加に関する遺伝子診断マーカーが求められている。さらに、当技術分野では、抗精神病薬誘導による体重増加ならびに糖尿病および心血管疾患などの関連疾患を発現するリスクを低減する個別化薬物療法が求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
[0008]  本発明は、遺伝子マーカーに関する。より具体的には、本発明は抗精神病薬誘導による体重増加に関連するＧＡＢＲＡ２における遺伝子マーカーおよびその使用に関する。
【０００９】
[0009]  慣例として、本明細書中のすべてのヌクレオチド配列をプラス鎖に関して列記する。当業者に理解されるように、ＧＡＢＲＡ２遺伝子はマイナス鎖から離れて転写される。したがって、本発明の主題は列記した概説に従って実施できること、あるいは本明細書に列記したヌクレオチド配列の相補体の使用／決定／分析により実施できることを十分に考慮する。
【００１０】
[0010]  この試験では下記のヌクレオチド配列を調べた。多型部位を下線付き太字で示す：
【００１１】
【化１】
0006524073.tif 000002
【００１２】
[0011]  本発明によれば、抗精神病薬処置に応答した被験体の体重変化を予測する方法であって、
ａ）被験体からゲノムＤＮＡを含む生体試料を入手し；
ｂ）被験体のＧＡＢＲＡ２遺伝子における１以上の多型またはその相補体の存在または非存在を判定し、その際、その１以上の多型の存在は抗精神病薬処置に応答した被験体の体重変化の予測となる
ことを含む方法が提供される。
【００１３】
[0012]  さらなる態様において、さらに、下記のものからなる群から選択される少なくとも１つの工程を含む、前記方法が提供される：ａ）ＧＡＢＲＡ２遺伝子における１以上の多型の存在または非存在の判定から得られた結果に基づいて、被験体を１以上の療法薬で処置する；ｂ）ＧＡＢＲＡ２遺伝子における１以上の多型の存在または非存在の判定結果に関して被験体にアドバイスおよび／またはカウンセリングする；ｃ）結果を医師、医療サービス提供者または他の第三者に伝達、アドバイスおよび／または送達する；ｄ）結果に基づいて１以上の特定の抗精神病薬処置で被験体を処置する；ｅ）抗精神病薬処置の前、処置と同時または処置の後に、体重増加を制御するための１以上の療法または療法薬で被験体を処置する；ｆ）被験体の体重をある期間にわたってモニタリングする；ｇ）患者または被験体に運動または食事変更を処方、推奨または指示する；ｈ）被験体をメタボリックシンドロームについてモニタリングする；ｉ）被験体を心血管疾患またはその症状についてモニタリングする；あるいはａ〜ｉ）のいずれかの組合わせ。
【００１４】
[0013]  本発明によれば、被験体が、統合失調症または統合失調感情障害(schizoaffective disorder)を伴なうと診断されているか、統合失調症または統合失調感情障害を発症する可能性があるか、あるいは統合失調症または統合失調感情障害の１以上の症状を示している、前記方法も提供される。さらなる態様において、決して限定するためのものではなく、本明細書に記載する方法を実施する前に被験体は統合失調症または統合失調感情障害を伴なうとまだ診断されていないことも考慮される。
【００１５】
[0014]  本発明のさらなる態様によれば、ＧＡＢＲＡ２遺伝子における１以上の多型が
【００１６】
【化２】
0006524073.tif 000003
【００１７】
に関係するものである方法が提供され、これらにおいて多型部位はかっこ内の下線を施した太字にある。
[0015]  さらなる態様において、多型のうち少なくとも１つがＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１または多型部位を含むそのバリアントもしくはフラグメントにより定められる前記方法が提供される。先に示したように、本方法はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１により定められるヌクレオチド配列の相補体（多型部位の相補体を含む）の存在または非存在を判定することによっても実施できる。
【００１８】
[0016]  さらなる態様において、多型のうち少なくとも１つがＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２または多型部位を含むそのバリアントもしくはフラグメントにより定められる前記方法が提供される。先に示したように、本方法はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２により定められるヌクレオチド配列の相補体（多型部位の相補体を含む）の存在または非存在を判定することによっても実施できる。
【００１９】
[0017]  ｒｓ１６８５９２２７多型（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）のＣ対立遺伝子（Ｃ／Ｃ遺伝子型）の存在が、被験体における、より高い体重増加率と関連する、前記方法も提供される。ｒｓ２７９８５８多型（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）の２コピーのＴ対立遺伝子（Ｔ／Ｔ遺伝子型）の存在が、被験体における、より高い体重増加率と関連する、前記方法も提供される。
【００２０】
[0018]  試料が血液試料である前記方法も提供される。
[0019]  さらに、下記のうち１以上を含むキットが提供される：
ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜９に定める多型またはその組合わせを含むヌクレオチド配列を増幅するための１以上のプライマー；
ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜９のいずれか１つに、多型部位を含むヌクレオチド領域上においてハイブリダイズする１以上のプローブであって、多型部位に示す多型の特定のバリアントにハイブリダイズするプローブ。決して限定することを望むわけではなく、プローブを適宜なグループ、たとえば蛍光性タグ、蛍光体、放射性標識などで標識することができる。さらに、１以上のプローブを、支持体、たとえば、それらに限定されないが、バイオチップ、アレイ、スライド、マルチウェルプレート、ビーズなどと共有結合または物理的会合させることができる。ある態様において、決して限定するためのものではなく、プローブは核酸のアレイを含むことができる；
ｃ）ＰＣＲもしくはプローブハイブリダイゼーションもしくは当業者に既知の方法におけるいずれかの工程を実施するための１以上の緩衝液、１以上のＤＮＡ増幅酵素、またはそのいずれかの組合わせを含む（ただし、これらに限定されない）、１以上の試薬および／または製品；
ｄ）エキソヌクレアーゼアッセイ、ヌクレオチド配列決定、またはそのそのいずれかの組合わせに用いるものを含む（ただし、これらに限定されない）、本明細書に記載する多型を遺伝子型判定するための１以上の試薬、構成要素および製品；
ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜９またはその組合わせのうちのいずれか１つを含むヌクレオチド配列の配列を決定するＤＮＡ配列決定反応を実施するための、１以上の試薬、構成要素または製品；
ｆ）本明細書に記載する構成要素を使用するための、本明細書に記載する本発明方法を実施するための、本発明方法の実施から得られたデータを解釈するための、またはそのいずれかの組合わせのための、１セット以上の指示。
【００２１】
[0020]  この発明の概要は必ずしも本発明のすべての特徴を記載したものではない。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
[0021]  以下の記載は具体的な態様の記載である。
[0022]  本発明は、抗精神病薬療法に応答した体重変化に対する被験体の感受性を予測するために使用できる遺伝子マーカーを提供する。より詳細に後記に述べるように、ＧＡＢＲＡ２遺伝子における特定の多型は、抗精神病薬療法に応答した被験体の体重変化を予測するために使用できる。第２態様において、ＧＡＢＲＡ２遺伝子における特定の多型は、統合失調症を伴なうと診断された被験体または統合失調症を発症する可能性のある被験体のための処置計画の決定を補助するのに使用できる。第３態様において、ＧＡＢＲＡ２遺伝子における特定の多型は統合失調症被験体を処置する際に使用できる。第４態様において、抗精神病薬投与で被験体を処置する方法が提供され、その際、その方法は処置計画の一部として１以上のＧＡＢＲＡ２遺伝子における特定の多型を同定することを含む。本明細書に記載する他の態様も提供される。
【００２３】
[0023]  本明細書に述べる実施例に記載する試験および本明細書全体において述べる試験は、ＧＡＢＲＡ２遺伝子全体における一塩基多型（ＳＮＰ）が抗精神病薬投与に対する体重応答に及ぼす影響を多数の別個の統合失調症集団において調べた。被験体には、統合失調症または統合失調感情障害のＤＳＭ−ＩＩＩＲ／ＩＶ診断を伴なうヨーロッパ人系の１６０人の患者が含まれていた。結果は、ｒｓ２７９８５８マーカーのＴ／Ｔ遺伝子型がＣ−対立遺伝子を保有する遺伝子型（たとえば、Ｔ／ＣまたはＣ／Ｃのいずれかの遺伝子型）より高い体重変化率に関連していたことを指摘する。ｒｓ１６８５９２２７マーカーも、クロザピンまたはオランザピンの投薬を受けた統合失調症または統合失調感情障害の被験体のサブサンプルにおける、より高い体重変化率と有意に関連していた。結果は、ｒｓ１６８５９２２７マーカーのＣ／Ｃ遺伝子型がＴ−対立遺伝子を保有する遺伝子型（たとえば、Ｔ／ＴまたはＴ／Ｃのいずれかの遺伝子型）より高い体重変化率に関連していたことを指摘する。他の興味深い結果も、本明細書、特に表１および２に提示する。
【００２４】
[0024]  本発明の態様によれば、抗精神病薬処置に応答した被験体の体重変化を予測する方法であって、
ａ）被験体からゲノムＤＮＡを含む生体試料を入手し；
ｂ）被験体のＧＡＢＲＡ２遺伝子における１以上の多型またはその相補体の存在または非存在を判定し、その際、その１以上の多型の存在は抗精神病薬処置に応答した体重変化に対する被験体の感受性の予測となる
ことを含む方法が提供される。
【００２５】
[0025]  さらなる態様において、決して限定するためのものではなく、本方法は１以上の追加工程を含むことができる；たとえば、それらに限定されないが、ＧＡＢＲＡ２遺伝子における１以上の多型の存在または非存在の判定結果に関して被験体にアドバイスおよび／またはカウンセリングする；結果を医師、医療サービス提供者または他の第三者に伝達、アドバイスおよび／または送達する；結果に基づいて１以上の特定の抗精神病薬処置で被験体を処置する；抗精神病薬処置の前、処置と同時または処置の後に、体重増加を制御するための１以上の療法で被験体を処置する；被験体の体重をある期間にわたってモニタリングする；被験体をメタボリックシンドロームまたはメタボリックシンドローム発症についてモニタリングする；それは血中脂質プロファイル（トリグリセロールおよびトリグリセリドを含む）、血糖値、肥満指数（ＢＭＩ）、および中心性肥満の測定を含むことができる。心血管疾患はメタボリックシンドロームから生じる可能性があるので、医師は心疾患の発症もモニタリングすることができる。下記の心疾患症状をモニタリングすることができる：血圧上昇、狭心症、心不全、息切れ、早いもしくは不規則な脈拍、咳および吐き気、または上記のいずれかの組合わせ。検査に基づいて、もしＳＣＺ被験体がｒｓ２７９８５８マーカーに関してＴ／Ｔ遺伝子型を示せば、より頻繁な体重モニタリング、および食欲抑制薬もしくは血糖低下薬、たとえば、それらに限定されないが、スルホニル尿素、チアゾリジンジオン、アルファグルコシダーゼ阻害薬もしくはメトホルミン(metformin)の投与、食事計画、運動計画、またはそれらの組合わせを、抗精神病薬投与に加えて推奨することができる。また、得られた結果から、ｒｓ２７９８５８マーカーに関してＴ／Ｔ遺伝子型を示す被験体は、好ましくは第２世代抗精神病薬（特に、体重増加傾向がより高いもの：たとえば、クロザピン、オランザピン）で処置せず、むしろ体重増加傾向がより低い抗精神病薬３０（フルフェナジン(fluphenazine)、アリピプラゾール(aripiprazole)、ジプラシドン(ziprasidone)、ハロペリドール(haloperidol)、ロキサピン(loxapine)、ルラシドン(lurasidone)、イロペリドン(iloperidone)、アセナピン(asenapine)、およびモリンドン(molindone)を含む）で処置すべきである。
【００２６】
[0026]  よって、患者の遺伝子型に基づいて、医師は高レベルまたは最高レベルの体重増加を引き起こす抗精神病薬の処方を避けるように要請できる；これらにはオランザピンおよびクロザピンが含まれる。中等度のリスクをもつ医薬、たとえば（パリペリドン(paliperidone)、ペルフェナジン(perphenazine)、チオリダジン(thioridazine)、クロルプロマジン(chlorpromazine)、リスペリドン(risperidone)、およびクエチアピン(quetiapine)）を、より頻繁なメタボリックシンドロームおよび心疾患指数のモニタリングと共に処方することができる。最終的に、医師は体重増加誘導のリスクがより低い薬物を選択するように要請できる；これらの薬物にはロキサピン、イロペリドン、アセナピン、ルラシドン、ジプラシドン、アリピプラゾール、フルフェナジン、およびハロペリドールが含まれる。
【００２７】
[0027]  前記のように、限定とみなすことを望まないが、ＧＡＢＲＡ２遺伝子における特定の多型は、統合失調症（または統合失調感情障害）を伴なうと診断された被験体または統合失調症（または統合失調感情障害）を発症する可能性のある被験体のための処置計画の決定を補助するのに使用できる。たとえば、決して限定とみなすことを望まないが、本発明は、統合失調症を伴なうと診断された被験体または統合失調症を発症する可能性のある被験体のための処置計画を決定する方法であって、
ａ）被験体からゲノムＤＮＡを含む生体試料を入手し；
ｂ）被験体のＧＡＢＲＡ２遺伝子における１以上の多型の存在または非存在を判定し、その際、その１以上の多型の存在は抗精神病薬処置に応答した被験体の体重変化の予測となり、
その際、本明細書に記載する１以上のＧＡＢＲＡ２多型の存在および／または本明細書に記載する１以上のＧＡＢＲＡ２多型の非存在により被験体のための処置計画を決定する
ことを含む方法を提供する。
【００２８】
[0028]  そのような態様において、この方法はさらに、前記、後記または本明細書の他のいずれかの箇所に記載したように被験体を処置する工程を含むことができる。
[0029]  さらに、前記のように、ＧＡＢＲＡ２遺伝子における特定の多型は、統合失調症被験体の処置に際して、または統合失調症の素因をもつ可能性のある被験体をどのように処置するかについて使用できる。そのような態様において、本発明は、統合失調症の被験体または統合失調症の素因をもつ可能性のある被験体を処置する方法であって、
ａ）被験体からゲノムＤＮＡを含む生体試料を入手し；
ｂ）被験体のＧＡＢＲＡ２遺伝子における１以上の多型の存在または非存在を判定し、その際、その１以上の多型の存在は抗精神病薬処置に応答した被験体の体重変化の予測となり、
その際、本明細書に記載する１以上のＧＡＢＲＡ２多型の存在および／または本明細書に記載する１以上のＧＡＢＲＡ２多型の非存在により被験体のための処置計画を決定する
ことを含む方法を提供する。
【００２９】
[0030]  そのような態様において、この方法はさらに、前記または本明細書の他のいずれかの箇所に記載したように被験体を処置する工程を含むことができる。
[0031]  用語“ＧＡＢＲＡ２遺伝子における１以上の多型”とは、下記により定めるヌクレオチド配列における１以上の多型を意味する：
【００３０】
【化３】
0006524073.tif 000004
【００３１】
これらにおいて、各配列中の多型部位を、その上流および下流のヌクレオチド配列に関して太字の下線を施したかっこ内に示す。特に好ましい態様において、ＧＡＢＲＡ２遺伝子における１以上の多型はｒｓ１６８５９２２７、ｒｓ２７９８５８または両方を含む。前記に示したように、本発明は前記のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯにより定められるヌクレオチド配列の相補体（多型部位の相補体を含む）の存在または非存在を判定することによっても実施できる。
【００３２】
[0032]  本発明は、ＧＡＢＲＡ２遺伝子における１以上の多型であって、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜９、好ましくはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、２またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１とＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の両方との約９０％〜１００％の配列同一性、たとえば、それらに限定されないが、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％または１００％の配列同一性を含みむものをも考慮し、その際、それらの配列は前記に太字の下線を施したかっこ内に示したそれぞれの多型をも含む。たとえば、決して限定とみなすべきではないが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に示す第１ヌクレオチドは“Ｃ”である。本発明は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１と実質的に同一であるけれども、たとえば、それらに限定されないが、位置番号１に“Ａ”、“Ｇ”または“Ｔ”を含む配列を含むものとする；そのバリアントヌクレオチド配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１との９０％を超える配列同一性を示し、かつ太字の下線を施したかっこ内に示す多型を含むからである。本発明は、前記のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯにより定めるヌクレオチド配列の相補体（多型部位の相補体を含む）の存在または非存在を判定することにより実施することもできる。
【００３３】
[0033]  ある核酸が本明細書に提示する配列との類似性またはある割合の同一性を示すかどうかを判定するために、たとえば、それらに限定されないが、下記のオリゴヌクレオチドアラインメントアルゴリズムを使用できる：ＢＬＡＳＴ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＵＲＬ：www.ncbi.nlm.nih.gov/cgi-bin/BLAST/，デフォルトパラメーターを使用：Ｐｒｏｇｒａｍ：ｂｌａｓｔｎ；Ｄａｔａｂａｓｅ：ｎｒ；Ｅｘｐｅｃｔ  １０；ｆｉｌｔｅｒ：ｄｅｆａｕｌｔ；Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ：ｐａｉｒｗｉｓｅ；Ｑｕｅｒｙ  ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｃｏｄｅｓ：Ｓｔａｎｄａｒｄ（１））、ＢＬＡＳＴ２（ＥＭＢＬ  ＵＲＬ：http://www.embl-heidelberg.de/Services/index.html，デフォルトパラメーターを使用：Ｍａｔｒｉｘ  ＢＬＯＳＵＭ６２；Ｆｉｌｔｅｒ：ｄｅｆａｕｌｔ，ｅｃｈｏｆｉｌｔｅｒ：ｏｎ，Ｅｘｐｅｃｔ：１０，ｃｕｔｏｆｆ：ｄｅｆａｕｌｔ；Ｓｔｒａｎｄ：ｂｏｔｈ；Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓ：５０，Ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ：５０）、またはＦＡＳＴＡ，ｓｅａｒｃｈ，デフォルトパラメーターを使用。ポリペプチドアラインメントアルゴリズム、たとえば、限定ではなく、ＢＬＡＳＴ  ２  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ(www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/bl2seq/bl2.html，デフォルトパラメーターを使用  Ｐｒｏｇｒａｍ：ｂｌａｓｔｐ；Ｍａｔｒｉｘ：ＢＬＯＳＵＭ６２；Ｏｐｅｎ  ｇａｐ（１１）およびｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  ｇａｐ（１）ペナルティー；ｇａｐ  ｘ＿ｄｒｏｐｏｆｆ：５０；Ｅｘｐｅｃｔ  １０；Ｗｏｒｄ  ｓｉｚｅ：３；ｆｉｌｔｅｒ：ｄｅｆａｕｌｔ）も使用できる。
【００３４】
[0034]  ２つの核酸配列が互いに実質的に相補的であるという別の指示は、それら２配列が中等度の緊縮条件下または好ましくは緊縮条件下で互いにハイブリダイズするということである。中等度の緊縮条件下でのフィルター結合配列へのハイブリダイゼーションは、たとえば０．５Ｍ  ＮａＨＰＯ４、７％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、１ｍＭ  ＥＤＴＡ中において６５℃で、０．２×ＳＳＣ／０．１％  ＳＤＳ中における４２℃での少なくとも１時間の洗浄により実施できる(参照：Ausubel, et al. (eds), 1989, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1, Green Publishing Associates, Inc., and John Wiley & Sons, Inc., New York, at p. 2.10.3)。あるいは、緊縮条件下でのフィルター結合配列へのハイブリダイゼーションは、たとえば０．５Ｍ  ＮａＨＰＯ４、７％  ＳＤＳ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ中において６５℃で、０．１×ＳＳＣ／０．１％  ＳＤＳ中における６８℃での少なくとも１時間の洗浄により実施できる。ハイブリダイゼーション条件は目的配列に応じて周知の方法に従って改変できる(参照：Tijssen, 1993, Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology -- Hybridization with Nucleic Acid Probes, Part I, Chapter 2 “Overview of principles of hybridization and the strategy of nucleic acid probe assays”, Elsevier, New York)。一般に、限定することを望まないが、緊縮条件は規定したイオン濃度およびｐＨで特定配列についての融点より約５℃低く選択される。本発明は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜９、好ましくはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜２を含むかまたはそれからなるヌクレオチド配列に緊縮ハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列をも考慮する。
【００３５】
[0035]  好ましい態様において、たとえば、それらに限定されないが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜２により提示される多型部位における特定の対立遺伝子の存在は、多型部位から上流および下流、たとえば、それらに限定されないが、多型部位の約３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５ヌクレオチド上流および約３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５ヌクレオチド下流にある隣接ヌクレオチド配列との関係で決定される。ただし、本発明は、特定の対立遺伝子の存在を、それぞれＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜９、より好ましくはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜２により提示される多型部位の約２０、２５、３０、５０ヌクレオチドまたはそれ以上（またはそれらの間のいずれかの数）上流ならびに約２０、２５、３０、５０ヌクレオチドおよび／またはそれ以上（またはそれらの間のいずれかの数）下流を含むヌクレオチド配列との関係で決定することも考慮する。用語“および／または”は、連続した上流および下流のヌクレオチドの数が同じである必要はないことを具体的に指示するために用いられる。特定の多型または特定グループの多型が被験体に存在するかを判定するためにヌクレオチド配列を比較する、当業者に既知の他の手段および方法を、本発明の実施に使用できる。
【００３６】
[0036]  用語“に応答した被験体の体重変化を予測する”とは、抗精神病薬処置全般で、または特定の抗精神病薬処置、たとえば、それらに限定されないが、クロザピンおよびオランザピンを含む抗精神病薬で、被験体の体重が増加する可能性があるかを予測することを意味する。
【００３７】
[0037]  本発明のある態様において、決して限定することを望まないが、本明細書に記載する方法は、抗精神病薬投与に応答した被験体の体重変化を判定するために使用でき、その際、スクリーニングの時点で被験体は健康に見える。この情報は、スクリーニングの時点では被験体が疾患の症状をほとんどまたは全くもたないとしても、統合失調症または統合失調症性もしくは精神病性の症状を伴なう他の障害の家族歴をもつ被験体をスクリーニングする場合に重要となる可能性がある。被験体が抗精神病薬投与にどのように応答する可能性があるかについての知識は、たとえば被験体が後に統合失調症または精神病性症状を発症して処置が必要になった場合に、処置計画を開発する際に有用となる可能性がある。
【００３８】
[0038]  本発明のある態様において、いずれかの人種、年齢、性別または医学的状態の被験体を検査またはスクリーニングして、抗精神病薬処置に応答した被験体の体重変化を予測することができる。これに関して、健康な被験体または何ら疾患の症状もしくは医学的状態をもたない被験体を検査して、抗精神病薬投与に応答した被験体の体重変化を予測することができる。この方法で、もし処置が必要になればいつでも、適正な薬物および／または処置計画を選択し、および／または被験体に施すことができる。好ましい態様において、１以上の精神病性症状をもつ障害、統合失調症または統合失調感情障害を伴なうと診断された被験体を検査して、抗精神病薬療法、たとえば、それらに限定されないが、クロザピン、オランザピン、リスペリドン、クエチアピン、ハロペリドール、ペルフェナジン、チオリダジン、ジプラシドン、アリピプラゾール、クロルプロマジン、アミスルプリド(amisulpride)、フルフェナジン、モリンドン、ロキサピン、パリペリドン、イロペリドン、アセナピン、ルラシドン、またはその組合わせによる処置に応答した被験体の体重変化を予測することができる。
【００３９】
[0039]  前記のように、決して限定することを望まないが、被験体は統合失調症または統合失調感情障害を伴なうと診断されている。しかし、検査される被験体は１以上の精神病性症状、統合失調症症状、統合失調感情障害症状、またはその組合わせ、たとえば、それらに限定されないが、ＤＳＭ−ＩＶ（本明細書に援用する）に記載されたものを伴なう個体を含むことができる。精神病性症状は、陽性症状、たとえば、それらに限定されないが、下記のゆがみもしくは誇張を含むことができる：推測的思考（すなわち、妄想）、知覚（すなわち、幻覚）、言語およびコミュニケーション（解体した会話）、ならびに行動モニタリング（ひどく解体したまたは緊張病性の行動）、またはその組合わせ。さらに、陽性症状は、別個の次元、たとえば精神病性次元（妄想および幻覚を含むが、これらに限定されない）、および解体次元（解体した会話および行動を含むが、これらに限定されない）を含むことができる。先に記載されたように、症状は１以上の陰性症状、たとえば、それらに限定されないが、正常な機能の減退または喪失（動機付けの喪失、社会的関心の喪失、コミュニケーションの喪失、またはその組合わせを含むが、これらに限定されない）を反映する症状を含む可能性があることも考慮される。さらに、被験体は陽性と陰性の両方の症状の組合わせを示す可能性がある。本発明のある態様において、検査される被験体は統合失調症または統合失調感情障害を伴なうと診断されているか、あるいはそれらを伴なう疑いがある。
【００４０】
[0040]  ゲノムＤＮＡを供給するいずれかのヒト組織または試料をＧＡＢＲＡ２多型の遺伝子型判定のために使用でき、これには血液、唾液、毛、髄液、脳生検材料、被験体から得た培養細胞、大便、尿、剖検試料、または組織検査の目的で採取した凍結切片が含まれるが、これらに限定されない。ある例において、ＧＡＢＲＡ２多型に関するアッセイのために被験体から血液を入手する。一例として、決して限定することを望まないが、静脈穿刺法を用いて被験体から静脈血を入手する。
【００４１】
[0041]  被験体のＤＮＡを、当技術分野で既知のいずれか適切な手法により一塩基多型（ＳＮＰ）の存在または非存在について検査することができる。使用できる代表的手法には、限定ではなく、ＰＣＲ分析、配列決定、５’エキソヌクレアーゼ蛍光アッセイ、プローブハイブリダイゼーション、またはその組合わせが含まれる。
【００４２】
[0042]  多型は常法を用いて遺伝子型判定することができる。たとえば、蛍光プローブを組み込んだプライマーを用いるＰＣＲは、適切な１手法である。さらに、限定とみなすことを望まないが、多型部位の上流および下流の適宜な配列をもつプライマーを用いて、多型を含むヌクレオチド領域を増幅することができる。
【００４３】
[0043]  一塩基多型（ＳＮＰ）分析は、ＧＡＢＲＡ２遺伝子の対立遺伝子間の相異を検出するために有用である。前記のように、当技術分野にはヌクレオチド配列を遺伝子型判定するための多様な方法があり、それには５’エキソヌクレアーゼアッセイ、配列決定などが含まれるが、これらに限定されない。そのような方法はすべて本発明に包含されるものとする。さらに、たとえばＴａｑｍａｎまたは分子ビーコン(molecular beacon)ベースのアッセイ法(U.S. Pat. No. 5,210,015; 5,487,972;およびPCT WO 95/13399)を含めて、ＳＮＰを検出するために使用できる多様なリアルタイムＰＣＲ法がＳＮＰの存在または非存在をモニターするために有用である。さらに他のＳＮＰ検出法が当技術分野で知られており、それには、限定ではなく、ＤＮＡ配列決定、ハイブリダイゼーションによる配列決定、ドットブロット法、オリゴヌクレオチドアレイ（ＤＮＡチップ）ハイブリダイゼーション分析が含まれる。
【００４４】
[0044]  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ（カリフォルニア州フォスターシティー）は、数種類の観点のＳＮＰ遺伝子型判定技術を開発した。よく利用される１プロトコルにおいて、目的ＳＮＰ領域のＰＣＲ増幅は、それぞれ異なる蛍光性レポーター色素および蛍光クエンチャーからなる２つの対立遺伝子特異的な発蛍光団プローブを含むターゲティングプライマーを用いて実施される。ＰＣＲ前には、蛍光体へのクエンチャーの近接により蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）が引き起こされて、レポーター色素からの蛍光が低減する。ＰＣＲに際して、Ｔａｑの５’ヌクレアーゼ活性がＳＮＰ領域に結合した対立遺伝子特異的プローブを消化して、蛍光色素をクエンチャーから開放し、蛍光信号を発生させる。
【００４５】
[0045]  試料を入手してそれのＤＮＡを分析する方法は本発明にとって決定的ではなく、いかなる方法も使用できる(たとえば、Ausubel, et al. (eds), 1989, Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishing Associates, Inc., and John Wiley & Sons, Inc., New York, at p. 2.10.3、またはManiatis et al., Molecular Cloning (A Laboratory Manual), Cold Spring Harbor Laboratory, 1982, p. 387 389)。たとえば、決して限定とみなすべきではなく、ＤＮＡは非酵素的な高塩法を用いて抽出することができる。あるいは、ＤＮＡを in situ で、あるいは体液および／または組織中に存在する状態で、分析することができる。当業者に既知である他のＤＮＡ分析法も使用できる。
【００４６】
[0046]  幾つかの科学共同研究により、下記を含めた幾つかの種のゲノムについてＳＮＰを同定および／または分類することが試みられた：ヒト(Homo sapiens)、シロイヌナズナ(Arabidopsis thaliana)、線虫(Caenorhabditis elegans)、シロエリヒタキ(Ficedula albicollis)、マダラヒタキ(Ficedula hypoleuca)、セキショクヤケイ(Gallus gallus)、ハツカネズミ(Mus musculus)、チンパンジー(Pan troglodytes)、熱帯熱マラリア原虫(Plasmodium falciparum)、およびドブネズミ(Rattus norvegicus)。たとえば、ＨａｐＭａｐプロジェクトはヒトＤＮＡ配列バリエーション（ハプロタイプ）の共通パターンの決定を試みている。ＳＮＰ遺伝子型、組換え率、および他のタイプの情報を、ＨａｐＭａｐウェブサイト(www.hapmap.org)でブラウジングし、またはそこからダウンロードすることができる。ＳＮＰは一般にヌクレオチド配列内の位置により、またはデータベースに割り当てられた照会ＳＮＰ  ＩＤ番号(reference SNP ID number)（“ｒｓ”番号）により同定される。ＨａｐＭａｐのほかに、ＳＮＰは他の多様な情報源を用いて検索できる。たとえば、目的配列中にあることが分かっているＳＮＰの個々のｒｓ番号は、ＵＣＳＣ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓウェブページ(www.genome.ucsc.edu)でＢｌａｓｔ検索を実施することにより入手できる。逆に、あるｒｓ番号と関連する配列および科学文献の情報は、ＮＣＢＩウェブページ(www.ncbi.nlm.nih.gov)により提供されるＥｎｔｒｅｚ  ＳＮＰ検索オプションのｄｂＳＮＰを検索することにより入手できる。
【００４７】
[0047]  本発明のある態様（限定とみなすべきではないものとする）において、抗精神病薬処置に応答した被験体の体重変化を予測する方法であって、
ａ）被験体から生体試料を入手し；
ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、またはその組合わせにおける１以上の多型の存在または非存在を判定し、その際、
クロザピンまたはオランザピンで処置したヨーロッパ人系の患者について、ｒｓ１６８５９２２７多型（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）のＣ／Ｃ遺伝子型の存在は、被験体における、より高い体重増加率と関連し；
ｒｓ２７９８５８多型（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）のＴ／Ｔ遺伝子型の存在は、被験体における、より高い体重増加率と関連する。
【００４８】
[0048]  本発明は、本発明方法を実施するための製品およびキットをも考慮する。たとえば、キットは下記のものを含むことができる：
ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜９のいずれか１つ、好ましくはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １もしくは２に定める多型、またはその組合わせを含むヌクレオチド配列を増幅するための１以上のプライマー；
ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜９のいずれか１つ、好ましくはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１もしくは２またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１とＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の両方に、多型部位を含むヌクレオチド領域上においてハイブリダイズする１以上のプローブであって、多型部位に示す多型の特定のバリアントにハイブリダイズするプローブ。決して限定することを望むわけではなく、プローブを適宜なグループ、たとえば蛍光性タグ、蛍光体、放射性標識などで標識することができる。さらに、１以上のプローブを、支持体、たとえば、それらに限定されないが、バイオチップ、アレイ、スライド、マルチウェルプレート、ビーズなどと共有結合または物理的会合させることができる。ある態様において、決して限定するためのものではなく、プローブは核酸のアレイを含むことができる；
ｃ）ＰＣＲもしくはプローブハイブリダイゼーションもしくは当業者に既知の方法におけるいずれかの工程を実施するための１以上の緩衝液、１以上のＤＮＡ増幅酵素、またはそのいずれかの組合わせを含む（ただし、これらに限定されない）、１以上の試薬および／または製品；
ｄ）エキソヌクレアーゼアッセイ、ヌクレオチド配列決定、またはそのそのいずれかの組合わせに用いるものを含む（ただし、これらに限定されない）、本明細書に記載する多型を遺伝子型判定するための１以上の試薬、構成要素および製品；
ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜９、好ましくはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１もしくは２または１と２の両方、またはその組合わせのうちのいずれか１つを含むヌクレオチド配列の配列を決定するＤＮＡ配列決定反応を実施するための、１以上の試薬、構成要素または製品；
ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜９、好ましくは１および２を含むかまたはそれからなる複数のヌクレオチド配列を含む、好ましくはＧＡＢＲＡ２遺伝子内のヌクレオチド配列のみを含む、遺伝子チップまたはアレイ；ならびに
ｇ）本明細書に記載する構成要素を使用するための、本明細書に記載する本発明方法を実施するための、本発明方法の実施から得られたデータを解釈するための、１セット以上の指示；あるいは
ｈ）そのいずれかの組合わせ。
【００４９】
[0049]  本発明はまた、キットの個々の構成要素、たとえば、それらに限定されないが、キットに記載するかまたは本明細書のいずれかの箇所に記載する、いずれかの製品、組成物を提供する。代表的な態様において、本発明は１以上の核酸プライマーまたはプローブを提供する。
【００５０】
[0050]  核酸プライマーおよびプローブは、本発明方法に使用するのに適したいずれかの長さのものであってよい。決して限定することを望むわけではなく、プライマーおよびプローブは約９〜約１００ヌクレオチド、たとえば、それらに限定されないが、約７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２３、２５、２７、２９、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、約１００ヌクレオチド、またはその間のいずれかの数量であることが一般に好ましい。プライマーおよびプローブの長さは、上記に示したいずれか２つの数値の範囲またはそれらの間のいずれか２つの数値の範囲により定めることもできる。プローブに関して、プローブは少なくとも１、より好ましくは３以上のヌクレオチドを多型部位のそれぞれの側に含むことが一般に好ましい。１以上のプライマーまたは核酸プローブを、当技術分野で知られているように、たとえば、それらに限定されないが、放射性元素またはタグ、蛍光体などで標識できることも考慮する。
【００５１】
[0051]  本発明はまた、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １〜９または多型部位を含むそのフラグメントにより定められる１以上のヌクレオチド配列を含むマイクロアレイ、遺伝子チップなど提供する。好ましくは、マイクロアレイまたは遺伝子チップは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、２、または１と２の両方により定められる１以上のヌクレオチド配列を含む。マイクロアレイは、多型部位を含むヌクレオチド配列またはそのフラグメントの相補体を含むこともできる。好ましくは、ヌクレオチド配列は、緊縮条件下での強いハイブリダイゼーションを可能にするために、たとえば、それらに限定されないが、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５以上の連続ヌクレオチドの長さのものである。好ましい態様において、マイクロアレイは本明細書に記載するＧＡＢＲＡ２遺伝子からの多型部位を含む１以上のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。ただし、マイクロアレイは他の遺伝子に関する追加ヌクレオチド配列、たとえば、それらに限定されないが、統合失調症、統合失調感情障害などの診断または発症に関与するかまたは関与を示唆するものを含むことができる。
【００５２】
[0052]  本発明を以下の実施例においてさらに説明する。
【実施例】
【００５３】
[0053]  臨床診断基準。精神病性症状を伴なう合計１６０人の参加者がこの試験に含まれた。統合失調症（ＳＣＺ）の診断は、ＤＳＭ−ＩＩＩＲおよび／またはＤＳＭ−ＩＶ診断のための構造化診断面接法(Structured Diagnostic Interviews)（ＳＣＩＤ−Ｉ，３１，３２）により査定された；ただし、サンプルＡの診断は、ＤＳＭおよびＩＣＤ両方の診断を査定する面接に基づいた。成人発端者(proband)の組み入れ基準(inclusion criteria)は、精神病性症状を伴なうＳＣＺまたは統合失調感情障害のＤＳＭ−ＩＩＩＲ／ＩＶ診断であった。完全な試験説明書を各患者に渡した後に書面によるインフォームドコンセントが得られ、試験は倫理審査委員会(Research Ethics Board)により承認されていた。すべての被験体はヨーロッパ系白人と自己報告し、彼らのうち９２人はこの試験期間中、クロザピンまたはオランザピンを処方された。
【００５４】
[0054]  被験体：ヨーロッパ人ＳＣＺ患者の全サンプル（Ｎ＝１６０）についての臨床および人口統計学的変数を表１に挙げる。サンプルＡ（Ｎ＝９３）はＣｈａｒｉｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（ドイツ、ベルリン）で集められた。ＤＳＭ−ＩＶおよびＩＣＤ−１０基準に従ってＳＣＺまたは統合失調感情障害を伴なうと診断された１８〜６０歳の患者が含まれていた。このグループの患者を下記のうち少なくとも１つの薬物投与で処置した：クロザピン、ハロペリドール、オランザピン、リスペリドン、フルフェナジン、アリピプラゾール、クエチアピン、ジプラシドンおよび／またはアミスルプリド（これ以上の詳細は他のいずれかに記載されている；３３）。サンプルＢからの患者（Ｎ＝５６）はＣａｓｅ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓｅｒｖｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（オハイオ州クリーブランド）またはＨｉｌｌｓｉｄｅ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ（ニューヨーク州グレンオークス）から動員された。これらの患者には、一般的な抗精神病薬療法に対する治療不応性または不耐性のために、いずれかに記載された基準に従ってクロザピンを投与した３４。治療コース中、クロザピンの血清レベルをモニタリングしてコンプライアンスを確認した。６週間後に簡易精神症状評価尺度(Brief Psychiatric Rating Scale)（ＢＰＲＳ）３５を用いて臨床応答を査定した。サンプル特性分析は他のいずれかに記載されている３６。サンプルＣ（Ｎ＝１１）は、主に過去２年間にわたる持続的な陽性症状および低レベルの機能性により判定してそれ以前の処置に対して最適下応答を示した入院患者からなる。これらの参加者は４か所の州立精神病院（ニューヨーク州の２か所およびノースカロライナ州の２か所）で動員され、１４週間のクロザピンまたはオランザピン二重盲検試験のいずれかに配属された。組み入れ基準、投薬計画、査定方法、および抗精神病薬有効性を記述する主な結果の詳細な臨床記載は、他のいずれかに発表された３７。
【００５５】
[0055]  遺伝子型判定。発端者から血液を２本の１０ｃｃ  ＥＤＴＡチューブに採取し、血中リンパ球から高塩法を用いてゲノムＤＮＡを抽出した３８。ＨａｐＭａｐ遺伝子型(Rel 28 Phase II+III, August10, on NCBI B36 assembly, dbSNP b126; URL: http://hapmap.ncbi.nlm.nih.gov)を用い、最小マイナー対立遺伝子頻度(minimum minor allele frequency)０．２０に基づいて一塩基多型（ＳＮＰ）を選択した。特定のＳＮＰは、以前の研究に基づいて強制導入された。ＳＮＰであるｒｓ２７９８２８  ３９−４２、ｒｓ５７３４００  ３９，４２，４３、ｒｓ１１５０３０１４  ４３、ｒｓ２７９８５８（Ｌｙｓ１３２Ｌｙｓ）４０，４３−４６、ｒｓ１６８５９２２７  ４３、およびｒｓ１３７２４７２  ４０は、アルコール中毒、ニコチン依存症および自閉症との関連の可能性について調べられている。ｒｓ２７９８７１マーカーはアルコール治療に応答した内側前頭脳活動と関連付けられている４７。全体として遺伝子型判定された１２のマーカーがＧＡＢＲＡ２遺伝子の１０ｋｂ上流および下流範囲内にカバレージ９９％を超える共通バリエーションを提供する。ｒｓ２７９８５８遺伝子型は本発明者らのサンプルにおけるｒｓ５７３４００、ｒｓ２７９８７１およびｒｓ２７９８２８マーカーの遺伝子型との相関性が高かった（ｒ２＞０．８０）ので、分析したＳＮＰの数を９に狭めた。
【００５６】
[0056]  統計解析。性別、動員時の年齢、および処置期間を含む人口統計学的変数の統計解析を、サンプル全体にわたってフィッシャーの直接検定(Fisher’s Exact test)、分散分析、またはクラスカル−ウォリスの検定(Kruskal-Wallis test)を用いて実施した（表１）。遺伝子解析に関しては、量的変数‘体重変化率(percent weight change)’をＡＮＣＯＶＡにより解析し、性別、処置期間、およびクロザピン／オランザピン（有／無）を共変量として含めた。また、３つの患者サンプルグループ間の不均一性を考慮に入れるために、ＳＴＡＴＡバージョン８（たとえば、４８）を用いてメタ解析法で‘体重変化率’変数を解析した。臨床／体重データが得られた１６０人の患者全員について、また次にクロザピンまたはオランザピン、すなわち有意の体重増加傾向が最高である２種類の抗精神病薬を投与されている９２人の患者について、解析を行なった。Ｈａｐｌｏｖｉｅｗ  ４．１  ４９を用いて決定したマーカー対間の連鎖不平衡およびｒ２。共変量によるハプロタイプ解析もＵＮＰＨＡＳＥＤバージョン３．１．５  ５０を用いて実施した。さらに、各個体についての再構築ハプロタイプを用いる追加のハプロタイプ解析をＰＨＡＳＥ  ５１で実施した。試験したＳＮＰ間の遺伝子型相関性に基づいて、独立マーカーの有効数を６と決定した；よって、この試験における多重検定についての有意性閾値を０．００８５に調整した５２。
【００５７】
結果：
[0057]  表２は、抗精神病薬投与したヨーロッパ人系のＳＣＺ患者における体重変化率の解析からの結果を示す。遺伝子型分布はハーディ−ワインベルク平衡(Hardy-Weinberg Equilibrium)から有意の偏差がなかった。
【００５８】
[0058]  ｒｓ２７９８５８マーカーは、ＡＮＣＯＶＡから体重増加率と正の関連性があった（ｐ＜０．０５）。より具体的には、Ｔ／Ｔ遺伝子型はＣ−対立遺伝子を保有する遺伝子型より高い体重変化率と関連性があった（ＡＮＣＯＶＡ  ｐ＝０．００９）。このメタ解析法から、ｒｓ２７９８５８マーカー（Ｔ／Ｔホモ接合体−対−Ｃ対立遺伝子遺伝子型キャリヤー）は統計的に有意であった（ｚ＝３．８０；ｐ＝１．４×１０−４）。ｒｓ１４４２０６２マーカーもメタ解析から有意であり、Ａ−対立遺伝子キャリヤーはＧ／Ｇホモ接合体より少ない体重増加と関連性があった（ｚ＝５．５５；ｐ＝２．８６×１０−８）。
【００５９】
[0059]  ハプロタイプ解析に関して、本発明者らはＵＮＰＨＡＳＥＤを用いて多数の有意ハプロタイプを見出した。ｒｓ１６８５９２２７およびｒｓ２７９８５８にわたる２マーカーハプロタイプウインドウが有意であり（ｐ＝０．０４５）、Ｃ−Ｔハプロタイプはより高い体重変化率と関連性があった（ｐ＝０．０１５；推定相加値：０．０５７［９５％信頼区間：０．０１１〜０．１０３］）。ｒｓ２７９８５８およびｒｓ１４４２０６０にわたる２マーカーハプロタイプウインドウも有意であり（ｐ＝０．０１４）、Ｔ−Ａハプロタイプはより高い体重変化率と関連性があり（ｐ＝０．０１４；推定相加値：０．０７０［９５％信頼区間：０．０１４〜０．１２６］）、Ｃ−Ｇハプロタイプはより低い体重変化率と関連性があった（ｐ＝０．０１２；推定相加値：−０．１１５［９５％信頼区間：−０．２０６〜−０．０２３２］）。個体レベルでは、少なくとも１コピーの（ｒｓ２７９８５８−ｒｓ１４４２０６０）Ｔ−Ａハプロタイプをもつ患者はより高い体重増加率を生じると思われ（ｐ＝０．００８；ｂ＝２．４７±０．９２）、少なくとも１コピーの（ｒｓ２７９８５８−ｒｓ１４４２０６０）Ｃ−Ｇハプロタイプをもつ患者はより低い体重増加率を生じると思われた（ｐ＝０．０１７；ｂ＝−２．９２±１．２１）。
【００６０】
[0060]  クロザピンまたはオランザピンで処置した患者について、ｒｓ２７９８５８についての結果は有意であった（ＡＮＣＯＶＡ  ｐ＝０．０１１）；これらの所見は全サンプルからのものと類似していた。３つの動員サイトにわたるｒｓ２７９８５８メタ解析により、統計的に有意の所見が得られ（ｚ＝６．７１；ｐ＝１．９５×１０−１１）、それは全サンプルからのものより有意であった。ＧＡＢＲＡ２マーカーｒｓ１６８５９２２７もメタ解析から陽性であり（ｚ＝９．３６；ｐ＝７．９７×１０−２１）、Ｔ−対立遺伝子キャリヤーはＣ／Ｃ遺伝子型キャリヤーより少ない体重増加と関連性があった。同様に、ｒｓ１４４２０６２  Ａ−対立遺伝子キャリヤーは平均してＧ／Ｇホモ接合体より体重増加が少なかった（ｚ＝５．７９；ｐ＝７．０４×１０−９）。ｒｓ１１５０３０１４における少なくとも１コピーのＧ対立遺伝子のキャリヤーはＣ／Ｃホモ接合体より体重増加が大きく（ｚ＝２．１０；ｐ＝０．０３６）、ｒｓ６８５６１３０  Ａ／Ａホモ接合体はＧ−対立遺伝子キャリヤーより体重増加が少なく（ｚ＝２．２０；ｐ＝０．０２８）、ｒｓ１３７２４７２  Ｔ−対立遺伝子キャリヤーはＡ／Ａ遺伝子型キャリヤーより体重増加が少なかった（ｚ＝３．３２；ｐ＝９．０×１０−４）。
【００６１】
[0061]  すべての単一マーカー試験のうち、ｒｓ２７９８５８マーカーが一貫して関連性が最も大きく、Ｔ／Ｔ遺伝子型はより高い体重増加率と関連性があった。ｒｓ１６８５９２２７およびｒｓ２７９８５８にわたる２マーカーハプロタイプウインドウは有意であり（ｐ＝０．０１９）、Ｃ−Ｔハプロタイプはより高い体重変化率と関連性があり（ｐ＝０．０１１；推定相加値：０．０７６［９５％信頼区間：０．０１６〜０．１３５］）、Ｔ−Ｃハプロタイプはより低い体重変化率と関連性があった（ｐ＝０．０１０；推定相加値：−０．０８９［９５％信頼区間：−０．１５８〜−０．０１９］）。ｒｓ２７９８５８およびｒｓ１４４２０６０にわたる２マーカーハプロタイプウインドウは公証上有意であり（ｐ＝０．０３４）、Ｔ−Ａハプロタイプはより高い体重変化率はより高い体重変化率と関連性があった（ｐ＝０．０３１；推定相加値：０．０７５［９５％信頼区間：０．００５７〜０．１４５］）。個体レベルでは、少なくとも１コピーの（ｒｓ１６８５９２２７−ｒｓ２７９８５８）Ｃ−Ｔハプロタイプをもつ患者はより高い体重増加率を生じると思われた（ｐ＝０．０１２；ｂ＝４．４５±１．７４）。少なくとも１コピーの（ｒｓ２７９８５８−ｒｓ１４４２０６０）Ｔ−Ａハプロタイプをもつ患者はより高い体重増加率を生じると思われた（ｐ＝０．００５；ｂ＝３．７５±１．７０）。
【００６２】
[0062]  表１．ヨーロッパ人系試験サンプルの人口統計学的情報
【００６３】
【表１】
0006524073.tif 000005
【００６４】
ｃ  ＡＮＯＶＡからのｐ−値
ａ  クラスカル−ウォリスの検定からのｐ−値
ｄ  フィッシャーの直接検定からのｐ−値
[0063]  表２．ヨーロッパ人系の統合失調症患者における抗精神病薬誘導による体重増加において９種類のＧＡＢＲＡ２  一塩基多型（ＳＮＰ）の解析の最も有意な所見
【００６５】
【表２】
0006524073.tif 000006
【００６６】
ｃ  性別、処置期間、およびクロザピン／オランザピン（有／無）を共変量とするＡＮＯＶＡからの体重変化率のｐ−値
Ｒ  用いたランダム効果モデル
[0064]  得られた結果は、多様なＧＡＢＲＡ２  ＳＮＰを抗精神病薬による体重増加の遺伝子マーカーとして使用できることを示唆する。
【００６７】
[0065]  すべての引用文献を本明細書に援用する。
[0066]  本発明を１以上の態様に関して記載した。しかし、特許請求の範囲に定めた本発明の範囲から逸脱することなく多数の変更および改変をなしうることは当業者に明らかであろう。
【００６８】
[0067]  参考文献：
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