(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（I）に示される糖類であって、
Ｖ＊−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｏ−Ｌ−ＮＨ２  （Ｉ）
この式において
ｘは１，２，３及び４から選択される整数であり
【化１】
0006524218.tif 000127
Ｖ＊−は、Ｈ−、Ｈ−Ｕｘ−、あるいはＨ−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−を示し、
Ｒ＃は、−ＣＯＯＨ、あるいは−ＣＨ２ＯＨを示し、
Ｌは、−（ＣＨ２）ｏ−を示し、ｏは１から１０までの間の整数である、
糖類、あるいは薬学的に許容されるその塩。
【請求項２】
Ｒ＃は、−ＣＯＯＨを示している、請求項１記載の糖類。
【請求項３】
Ｖ＊−は、Ｈ−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−を示している、請求項１または２記載の糖類。
【請求項４】
Ｖ＊−は、Ｈ−Ｕｘ−を示している、請求項１または２記載の糖類。
【請求項５】
Ｖ＊−は、Ｈ−を示している、請求項１または２記載の糖類。
【請求項６】
ｘは、３を示している、請求項１から５いずれか１項に記載の糖類。
【請求項７】
以下で構成される群から選ばれる請求項１記載の糖類：
α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→１）−（２−アミノ）エタノール（１０）
β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２−アミノ）エタノール（１８）
５−アミノ・ペンタニル  β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（１９）
５−アミノ・ペンタニル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（６０）
５−アミノ・ペンタニル  α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド（２０）
５−アミノ・ペンタニル  α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ―ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（２１）
５−アミノ・ペンタニル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸（２２）
α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロネート−（１→４）−β−Ｄ−グルコイラノシル−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２−アミノ）エタノール（５５）
α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロネート−（１→４）−β−Ｄ−グルコイラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２−アミノ）エタノール（５７）
５−アミノ・ペンタニル  α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（６３）
５−アミノ・ペンタニル  ガラクトピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド（６４）
５−アミノ・ペンタニル  β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（６５）
５−アミノ・ペンタニル  α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−  グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸（６６）
５−アミノ・ペンタニル  α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（６７）
５−アミノ・ペンタニル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド（６８）
５−アミノ・ペンタニル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（６９）
５−アミノ・ペンタニル  α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（７０）
３−アミノプロピル  α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−  α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（７１）
５−アミノ・ペンタニル  α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド（７２）
３−アミノプロピル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（７３）
５−アミノ・ペンタニル  β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸（７４）
４−アミノブチル  α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（７５）
６−アミノ・ヘキサニル  α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド（７６）  
３−アミノプロピル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ―グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（７７）
５−アミノ・ペンタニル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（７８）
４−アミノブチル  α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ―グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド（７９）
３−アミノプロピル  α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ―グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（８０）
６−アミノ・ヘキサニル  β−Ｄ―グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（８１）
【請求項８】
請求項１に記載の一般式（Ｉ）の糖類を含む、−Ｏ−Ｌ−ＮＨ２基の窒素原子を介して免疫原性担体に共有結合されている接合体。
【請求項９】
請求項８に記載の接合体であって、前記接合体は、一般式（Ｘ）で示され、
［Ｖ＊−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｏ−Ｌ−ＮＨ−Ｗ］ｍ−ＣＲＭ１９７  （Ｘ）
この式において、
ｍは２から１８までの範囲であり、
−Ｗ−は以下から選択され
【化２】
0006524218.tif 000128
ａは１から１０の範囲の整数を示し、
ｂは１から４までの範囲の整数を示し、及び、
Ｖ＊、Ｕｘ＋３、Ｕｘ＋２、Ｕｘ＋１、Ｕｘ、ｘ及びＬは、請求項８が引用する請求項１に定義されている意味を有する、接合体。
【請求項１０】
ヒト及び／又は動物宿主に防御免疫応答を発生させるために使用する請求項１から７のいずれか１項に記載の糖類、あるいは請求項８または９記載の接合体。
【請求項１１】
莢膜多糖類に以下の糖フラグメントの１つを含むバクテリアを伴う疾病の予防及び／又は治療に使用するための請求項１から７のいずれか１項に記載の糖類、あるいは請求項８または９記載の接合体：
α−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇａｌｐ−（１→４）−β−Ｄ−ＧｌｃＡｐ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃｐ、
β−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇａｌｐ−（１→４）−β−Ｄ−ＧｌｃＡｐ、
β−Ｄ−ＧｌｃＡｐ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇａｌｐ、
α−Ｄ−Ｇａｌｐ−（１→４）−β−Ｄ−ＧｌｃＡｐ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇｌｃｐ。
【請求項１２】
前記バクテリアは肺炎連鎖球菌血清タイプ８である、請求項１１に記載の使用するための糖類あるいは使用するための接合体。
【請求項１３】
前記バクテリアを伴う疾病は、肺炎、髄膜炎、中耳炎、菌血症並びに慢性気管支炎、慢性副鼻腔炎、慢性関節炎、及び慢性結膜炎の急性悪化を含む群から選ばれる、請求項１１に記載の使用するための糖類あるいは使用するための接合体。
【請求項１４】
薬学的に許容されるアジュバント、抗凍結剤、凍結乾燥防止剤、賦形剤及び／又は希釈剤の少なくとも１つと共に使用される、請求項１から７のいずれか１項に記載の糖類あるいは請求項８または９に記載の接合体を含むワクチン。
【請求項１５】
肺炎連鎖球菌血清タイプ８に対する抗体を検出するための免疫学的アッセイのマーカーとして使用するための請求項１から７のいずれか１項に記載の糖類。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は肺炎連鎖球菌血清型８莢膜多糖類に関連した一般式（Ｉ）で示される合成多糖類、その接合体、及びヒトおよび／または動物性宿主内で防御的な免疫応答を発生させるための上記多糖類およびその接合体類の使用に関するものである。さらに、一般式（Ｉ）で示される上記合成多糖類構造は肺炎連鎖球菌に対する抗体検出のための免疫学的アッセイにおけるマーカーとして有用である。
【発明の背景】
【０００２】
肺炎連鎖球菌はグラム陽性で、呼吸器系の感染の主要な原因であり重篤な侵入性肺炎球菌疾患（ＩＰＤ）を発症させる可能性のある莢膜細菌である。今日までに、９０種以上の異なった肺炎血清型が知られている。これらは、それぞれの血清型に特有なその莢膜多糖類（ＣＰＳ）の構造によって分類される。従って、ＣＰＳに対して起こされる免疫応答は異なった血清型の間に違いがある。このことはウサギにおいて各血清型に対する特殊な抗原を発生させるために用いられている。異なった血清型のＣＰＳの構造的な類似性の故に、これらの特殊な抗体とそれらが意図されて発生させられた他の血清型との間の交差反応性がしばしば観察される。その免疫学的な特性の故に、ＣＰＳは肺炎連鎖球菌ワクチンの主成分として用いられる。
【０００３】
４つの異なった血清型のＣＰＳを含んだ最初の効果的なワクチンについては１９４５年に最初に記述されている。１４の血清型に対応できるワクチンが導入されるまでにほぼ三十年間かかったが、そのすぐ後に、２３価ワクチンが導入された。しかしながら、これらの多糖類ワクチンはいくつかの欠陥を有していた。それらは、長期間継続する保護を引き出すことが出来なかったし、最も感染しやすい人口部分、つまり、二歳以下の子ども達と年配の親達に対しては効果がなかった。これらの欠陥は炭水化物の免疫性によるものであり、炭水化物―タンパク質接合体ワクチンの導入によって、その欠陥は克服された。最初の肺炎球菌接合体ワクチンは７価（ＰＣＶ−７）及び１０価（ＰＣＶ−１０）ワクチンであった。ＰＣＶ−７は後日最も最近のワクチン（ＰＣＶ−１３）に取り換えられたが、このワクチンは１３の異なった血清型のＣＰＳ−糖接合体を含んでいる。
【０００４】
現在販売されているワクチンは特定の年齢層の個人に対して、北米とヨーロッパで効果を発揮している。これらのワクチンの製造工程は複雑で、従って、価格が高価である。従って、これらのワクチンはほとんどの開発途上国では利用することができない。本発明の目的は発展途上地域で最も広く見られる血清型の１つを含んだ一般的に利用可能な合成糖類ワクチンを提供することである。
【０００５】
肺炎連鎖球菌血清型８は血清型置換との関係性が認められており、ここ数十年間において、侵入性肺炎球菌疾患の症例は徐々に増大した。
肺炎連鎖球菌血清型８は広く見られる肺炎連鎖球菌血清型の１つである。天然のＳｐ８（肺炎連鎖球菌血清型８）莢膜多糖類反復単位の構造は、→４）−Ｇｌｃα−（１→４）−Ｇａｌα−（１→４）−ＧｌｃＡβ−（１４）−Ｇｌｃβ（１→  の配列を有する四糖である（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９５７，  ７９（１１），  ２７８７）。
【０００６】
【化１】
0006524218.tif 000002
【０００７】
興味深いことに、天然の血清型８四糖反復単位は血清型３の二糖反復単位を内包している。その結果、血清型３と８との間には交差反応が認められるが、対応する異種多糖類による抗体の沈降反応は不完全である。不完全なエピトープ重複は、両方の血清型からの莢膜多糖類（ＣＰＳ）が、このワクチンの製造を開始する前の交差反応性に関する広範な考察が行われたにも拘わらず２３価多糖類ワクチンに含まれてしまったことがその理由である。
【０００８】
ＷＯ９６４０２２５Ａ１では、ＥＤＣを用いて破傷風トキソイドに結合された２から４の反復単位の混合物からなる肺炎連鎖球菌血清型８オリゴ糖タンパク質接合体を提供している。２から４の反復単位の混合体は莢膜多糖類の非選択的切断とそれに続くサイズ排除クロマトグラフィーによって得られる。莢膜多糖類の分解によって得られるオリゴ糖類が、共分離された不純物と、分解中に、あるいは病原体による免疫回避戦術の一部として取り込まれた新しいエピトープのために高度の不均質性を示すことはよく知られている。ＷＯ９６４０２２５Ａ１の場合、この不均質性は上記の非選択的切断（ＴＦＡ、１００℃）によって増大され、２つの反復単位を含むフラクションのために少なくとも４つの糖類の混合体がつくられてしまう。従って、莢膜多糖類から分離されたオリゴ糖類は、宿主免疫系によって「非自己」と認識されてしまう構造的な決定基に従う一連の潜在的な免疫原性の抗原決定基を含んでいるのである。従って、ＷＯ９６４０２２５Ａ１の接合体などのような単離されたオリゴ糖類の接合体に基づくワクチンを伴う免疫の１つの欠陥は、その一部が非防御性（つまり、惹起される抗体が肺炎連鎖球菌血清型８に関連した疾病を防御しない）であるか、あるいは免疫優性であるようなものの中で複数の免疫源性エピトープに向けられる多クローン免疫応答の発生である。そうした多クローン免疫応答は、健康な（多くは幼い）人々に予防的に投与されるワクチンにとっては受け入れられない毒性につながる。この欠陥は、本発明の純粋な糖によって克服され、この糖は、よく定義された構造を有し、臨床応用に適した純度を示し、そして、バッチ毎の変差を含まない。
【０００９】
さらに、ＷＯ９６４０２２５Ａ１は１つの反復単位を含むオリゴ糖類の混合体、つまり、四糖類の混合体が免疫源性エピトープを含んでおらず、肺炎連鎖球菌血清型８に対する接合体をつくるために、少なくとも八糖類の混合体が必要であることを示している。驚くべきことに、本発明者らは、ここに述べられているような短糖類でも防御性のグリカン・エピトープを含んでおり、ヒト及び／あるいは動物の宿主内の肺炎連鎖球菌血清型８バク
テリアに対する防御的な免疫応答を示すことを見出した。
【００１０】
従って、本発明の目的は、肺炎連鎖球菌血清型８莢膜多糖類に関する一般式（Ｉ）に示される純粋な合成糖類を提供することであり、それは防御的な免疫源性グリカン・エピトープ、即ち肺炎連鎖球菌血清型８が引き起こす疾病を防御する抗体により顕在化し認識されるグリカン・エピトープを含んでいる。連鎖球菌肺炎より限定的には肺炎連鎖球菌血清型８関連した疾患の予防及び／又は措置に有用な接合体とその医薬品組成物を調製するために、上記の糖は、免疫原性担体に接合されるのに適している。さらに、一般式（Ｉ）に示されるこの合成糖類は、連鎖球菌肺炎バクテリアに対する抗体を検出するための免疫学的アッセイにおけるマーカーとして有用である。
【００１１】
本発明の目的は独立請求項に記載されている教示内容によって解決される。さらに、本発明のさらなる好適な特徴、側面、及び詳細事項は本願の独立請求項、明細書、図面、及び実施例から明らかである。
【発明の概要】
【００１２】
定義
本明細書で用いられる「リンカー」という用語は、場合によって少なくとも１つの連結分子に結合することによって、免疫原性担体あるいは固体基質と糖の還元性末端単糖を接続させることが出来る分子フラグメントを、その意味として含んでいる。従って、このリンカーの機能は、それ自体あるいは上記接続分子と共に、上記還元性末端単糖と免疫原性担体あるいは固体支持体との間の特定の距離を確立、保持及び／又は架橋することである。より具体的に言うと、上記リンカーの１つの末端は上記還元性末端単糖のアノマー中心で上記環外酸素と結合されているのであり、他方の末端は窒素原子を介して相互接続分子と接続されているか、あるいは、直接に上記免疫原担体あるいは固体支持体と直接に接続されている。
【００１３】
本明細書で用いられている意味合いでは、上記の「相互接続分子」とは、機能基Ｘと機能基Ｙを含んでいる二機能性分子を意味しており、機能基Ｘは上記リンカーＬの末端アミノ基と反応することができ、機能基Ｙは免役原性担体上、あるいは固体支持体上に存在している機能性と反応することが出来る。図１は市販されている相互接続分子の例を示しているが、本発明に従って利用できる相互接続分子を図示されている例に限定するものではない。
【００１４】
本明細書で用いられている「アジュバント」という用語は免疫学的なアジュバント、例えば、それと抗原的に関連せずにそのワクチン内に含まれている任意の抗原に対する免疫応答を増強することで上記ワクチンの効果を修正あるいは補強するワクチン組成物内で用いられる物質を意味している。当業者のために言うとすれば、従来から認識されているアジュバントの例としては、以下のものがある。
【００１５】
−カルシウム塩及びアルミニウム塩（あるいはそれらの混合物）を含むミネラル含有組成物。カルシウム塩はリン酸カルシウムを含む。アルミニウム塩は水酸化物、リン酸塩、硫酸塩などを含み、いずれの適切な形態をとる塩（例えば、ゲル、結晶、あるいは非結晶性など）も含まれている。これらの塩類に対する吸着が好ましい。ミネラル含有組成物は金属塩の粒子として規定されてもよい。水酸化アルミニウム及びリン酸アルミニウムとして知られているアジュバントも用いることができる。本発明においては、アジュバントとして一般に用いられている「水酸化」あるいは「リン酸」アジュバントのいずれでも用いることができる。「水酸化アルミニウム」として知られているアジュバントは、通常少なくとも部分的に結晶性の典型的なアルミニウム酸水素塩である。「リン酸アルミニウム」として知られているアジュバントは典型的にはアルミニウムヒドロキシホスフェートであ
り、少量の硫酸塩（例えば、アルミニウム硫酸ヒドロキシホスフェート）を含んでいる場合もしばしばある。それらは沈殿で得ることが出来、沈殿中の反応条件と濃度が上記塩中での水酸基へのリン酸の置換の程度に影響を及ぼす。水酸化アルミニウムとリン酸アルミニウム双方の混合物は、本発明による規定を適用することができる。
【００１６】
−広い範囲の植物種の樹皮、葉、幹、根、さらには花の中にさえ見られるステロールグリコシドとトリテルペルペノイド・グルコシドの異種基であるサポニン類。キラヤ・サボンソウ（シャボンノキ）の樹皮から得られるサポニン類はアジュバントとして広く研究されている。スミラックス・オルナタ（サルサ根）、ジプソフィラ・パニキュラタ（ブライド・ヴェール）、及びサポナリア・オフィシアナリス（かすみ草）からもサポニン類か商業ベースで入手することができる。サポニン・アジュバント製剤は、ＩＳＣＯＭなどの液体製剤とともに、ＱＳ２１などの純製製剤を含む。サポニン組成物はＨＰＬＣ及びＲＰ−ＨＰＬＣを用いて精製されてきた。これらの技術を用いた特殊な精製フラクションも確認されており、ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−Ｂ及びＱＨ−Ｃが含まれる。サポニン製剤は、コレステロールなどのステロールを含んでいてもよい。免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）と呼ばれる特殊な粒子を形成するためにサポニン類とコレステロールの組み合わせを用いることもできる。ＩＳＣＯＭは、通常、ホスファチジルエタノールアミンやホスファチジルコリンなどのリン脂質を含んでいる。ＩＳＣＯＭにおいては、既知のどのサポニンでも使用することができる。ＩＳＣＯＭはＱｕｉＬＡ、ＱＨＡ及びＱＨＣの１種以上を含むことが好ましい。
【００１７】
−生体分解性があって非毒性の物質から形成される微粒子（例えば、直径が１００ｎｍから１５０ｐｍ、より好ましくは直径が２００ｎｍから３０ｐｍ、あるいは直径が５００ｎｍから１０ｐｍの範囲のもの）。そうした非毒性で生体分解性のある物質には以下のようなものがあるが、必ずしもこれらに限定されない。ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリカプロラクトン。
【００１８】
−α−グリコシルセラミド、フィトスフィンゴシン含有α−グリコシルセラミド、ＯＣＨ、ＫＲＮ７０００［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２−（Ｎ−ヘキサコサノイルアミノ）−１，３，４−オクタデカントリオール］、ＣＲＯＮＹ−１０１、３”−スルフォ−ガラクトシル−セラミドなどのＣＤ１ｄリガンド。
【００１９】
−ＣｐＧモチーフ含有のもの（リン酸塩結合でグアノシン残基に結合された非メチル化シトシン残基を含むジヌレオチド配列）、あるいはＣＰｌモチーフ含有のもの（イノシンに結合されたシトシンを含有するジヌクレオチド配列）、あるいは、二本鎖ＲＮＡ、あるいはパリンドローム配列を含むオリゴヌクレオチド、あるいはポリ（ｄＧ）配列を含むオリゴヌクレオチド。免疫刺激性のオリゴヌクレオチドはホスホロチオエート修正物等のヌクレオチド修正物／その類似物などを含んでいてもよく、二本鎖あるいは（ＲＮＡを除いて）一本鎖であってもよい。
【００２０】
−ＴＬＲ４アンタゴニストＥ５５６４などのリン酸塩含有非環式構造に結合された脂質を含む化合物。
−（例えば、フロイド・アジュバント）油乳剤。
【００２１】
理論的には、一連の免疫事象において特定の状態を有利に働かせたりそれを増強させたりして、最終的にはより深い免疫応答に導くことができる各分子や物質は、アジュバントとして定義することができる。
【００２２】
原則として、ワクチン製剤でアジュバントを用いることで、以下のようなことが可能となる。
−  ワクチンに適した、あるいは望ましい免疫応答を指定し、最適化する。
【００２３】
−  例えば、ワクチンを口や胃腸や肺上皮及び関連のリンパ系組織などの粘膜表面に接触させるようにするワクチンの粘膜投与を可能にする。
−  細胞媒介免疫応答を促進する。
【００２４】
−  高度に純化された、あるいは組み換え抗原などの効力が弱い免疫原の免疫原性を強化する。
−  防御的な免疫を提供するために必要な抗原の量あるいは免疫化の頻度を減らす。そして、
−  新生児や老人や免疫低下状態のワクチン受容者などの免疫応答が低下あるいは弱体化した個人におけるワクチンの効果を増強する。
【００２５】
作用の機序についてはあまりよく知られていないが、現在の段階では、アジュバント補強免疫は、以下のメカニズムの１つによって応答すると考えられている。
−  抗原の生物学的あるいは免疫学的半減期を増大させる。
【００２６】
−  例えば、ＡＰＣによる抗原―アジュバント複合体が内に取り込まれた後にエンドソーム膜を横切って細胞基質内に取り込まれるようにすることによって、抗原提示細胞（ＡＰＣ）への抗原伝達と、抗原プロセス及び提示を改善させる。  
【００２７】
−  ストレスや損傷を受けた細胞からの危険誘発信号を擬似的に発生させて、免疫応答を開始させる。
−  免疫調整サイトカインの生産を促す。
【００２８】
−  免疫系の特定のサブセットの方向に免疫応答の偏向させる。
−  抗原攻撃の急速な拡散を阻止する。
糖類は当業者にはＴＩ−２（Ｔ細胞独立−２）抗原及び劣性の免疫源として知られている。従って、糖類に基づいたワクチンを生産するためには、元の糖類と比較してより増強された免疫原性を示す接合体を発生させるために、上記の糖類を免疫原性担体に接合させる。この文脈で、「免疫原性担体」とは、上記の糖類に接合されて、元の糖類と比較してより増強された免疫原性を示す接合体を形成するために、上記の糖類に接合される構造と定義される。従って、その糖類の免疫原性担体への接合は、上記の免疫原性担体に対する免疫応答を起こさずに上記の糖類に対する免疫応答を刺激させるという効果を持っている。
【００２９】
驚くべきことに、本発明による一般式（Ｉ）で示される１つの純粋な糖は防御的な免疫原性グリカン・エピトープを含んでおり、ヒト及び／又は動物宿主内で、肺炎連鎖球菌血清型８バクテリアに対して防御的な免疫応答を誘発することができる。一般式（Ｉ）で示される上記糖は肺炎連鎖球菌血清型８莢膜多糖類と交差反応する抗体を放出し、肺炎連鎖球菌血清型８バクテリアを特異的に認識し、食細胞の貪食のためにそれらをオプソニン化する。
【００３０】
本発明は一般式（Ｉ）で示される糖類、あるいは薬学的に許容されるその塩を提供する。
Ｖ＊-Ｕｘ＋３-Ｕｘ＋２-Ｕｘ＋１-Ｕｘ-Ｏ-Ｌ-ＮＨ２ 
（Ｉ）
この式では、Ｘは１、２、３、及び４から選ばれる整数である。
【００３１】
【化２】
0006524218.tif 000003
【００３２】
これらの式で、
Ｖ＊−は、Ｈ−、Ｈ−Ｕｘ−あるいはＨ−Ｕｘ＋１−Ｕｘを示し、
Ｒ＃は、ＣＯＯＨあるいはＣＨ２ＯＨを示し、
Ｌはリンカーを示している。
【００３３】
−Ｌ−はリンカーであり、フラグメント−Ｏ−Ｌ−ＮＨ２の部分として定義される。従って、このリンカー−Ｌ−は酸素原子及びＮＨ２の窒素原子と結合している。このリンカーの少なくとも２つの炭素原子は上記の酸素原子とＮＨ２  基との間にあって、−Ｏ−Ｃ−Ｃ−ＮＨ２のようになっているのが好ましい。このリンカー−Ｌ−は脂肪鎖であってよく、この場合、上記の脂肪鎖はオプションとして、その中に挿入された芳香鎖、あるいは０−１０の範囲で増減する多数のヘテロ原子を含んでいてもよい。
【００３４】
リンカーＬは好ましくは２から４０までの範囲の炭素原子（いずれかの側鎖の炭素原子を含む）、より好ましくは２から３０の範囲、さらに好ましくは２から２０の範囲、さらに好ましくは２から１４の範囲、さらに好ましくは２から１２の範囲、そしてさらに好ましくは２から１０の範囲の炭素原子を含んでいることが好ましい。
【００３５】
酸素原子（例えば、−Ｏ−Ｌ−ＮＨ２  の酸素）とＮＨ２基の間の最短の原子鎖は、好ましくは２から１４の範囲の原子、より好ましくは２から１２の範囲の原子、より好ましくは２から１０の範囲の原子、さらに好ましくは２から８の範囲の原子で構成されていることが好ましい。その最短の鎖（そのアノマーの中心の酸素とＮＨ２基の間で可能な最短の接続）が２から６の範囲の原子で構成されている場合は、これらの原子が炭素原子であることが好ましい。その最短の鎖が４から８の範囲の原子で構成されている場合、その鎖はＯ、Ｎ及びＳから選択される１、２あるいは３個のヘテロ原子を含んでいてもよい。その最短の鎖が９から１４個の原子で構成されている場合は、その鎖は、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１、２、３、４、５あるいは６個のヘテロ原子を含んでいても差し支えない。
【００３６】
リンカー−Ｌ−あるいは上記の最短の鎖が完全に、あるいは部分的にフッ素化されていることも好ましい。このリンカー−Ｌ−は構成原子数が３個か４個か５個か６個の飽和炭素環、構成原子数が５個の部分的に不飽和な（そして芳香族でない）炭素環、あるいは構成原子数が４個か５個か６個の飽和酸素ヘテロ環、あるいは、構成原子数が４個か５個かあるいは６個の飽和窒素ヘテロ環あるいは構成原子数が６個の芳香族炭素環を含んでいてもよい。
【００３７】
リンカー−Ｌ−はアミド（−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−）及び／又は尿素（−ＮＨ
−ＣＯ−ＮＨ−）残基を含んでいてもよく、アミドあるいは尿素残基が１個であることが好ましい。またこのリンカーは置換基を含んでいてもよく、Ｒ１０、Ｒ１１などの２つの置換基、あるいはＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１５及びＲ１４などの４つの置換基を含んでいてもよく、このことは本明細書で定義されている意味を有し、これらの置換基は−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ３Ｈ７、−Ｃ５Ｈ９、−Ｃ６Ｈ１３、−ＯＣＨ３、−ＯＣ２Ｈ５、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨＦ２、−ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２、−ＳＣＨ３、−ＳＣ２Ｈ５、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、及び−Ｎ（Ｃ２Ｈ５）２から選択されるのが好ましい。
【００３８】
リンカー−Ｌ−がフッ化物であった場合、２つ以上の置換基−Ｆが含まれていることが好ましい。
より好ましくは、リンカー−Ｌ−は以下のもの、つまり、−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）２−、−（ＣＨ２）３−、−（ＣＨ２）４−、−（ＣＨ２）５−、−（ＣＨ２）６−、−（ＣＨ２）７−、−（ＣＨ２）８−、−（ＣＨ２）９−、−（ＣＨ２）１０−、−ＣＦ２−、−（ＣＦ２）２−、−（ＣＦ２）３−、−（ＣＦ２）４−、−（ＣＦ２）５−、−（ＣＦ２）６−、−（ＣＦ２）７−、−（ＣＦ２）８−、−（ＣＦ２）９−、−（ＣＦ２）１０−、−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−、−ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２）３−、−（ＣＨ２）３-Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２）２−、−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）３−Ｏ−（ＣＨ２）２−、−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）３−、−（ＣＨ２）４−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２）４−、−Ｌａ−、−Ｌａ−Ｌｅ−、−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−、−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｄ−Ｌｃ−Ｌｅ−、−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−から選択され、
この場合、−Ｌａ−は−（ＣＨ２）ｏ−、−（ＣＦ２）ｏ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−ＣＨ２−、−（ＣＲ１０Ｒ１１）ｏ−、
【００３９】
【化３】
0006524218.tif 000004
【００４０】
から選択される。  
−Ｌｂ−及び−Ｌｃ−は、相互に無関係に、−Ｏ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｓ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−ＮＲ９−、−ＮＲ１８−、−ＳＯ２−、
【００４１】
【化４】
0006524218.tif 000005
から選択される。
【００４２】
−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＦ２）ｑ−、−（ＣＲ１２Ｒ１３）ｑ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−、
【００４３】
【化５】
0006524218.tif 000006
で示される。
【００４４】
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＦ２）ｐ１−、−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−、−（ＣＲ１４Ｒ１５）ｐ１−、−（ＣＲ１４Ｒ１５）ｐ１−Ｏ−（ＣＲ
２１Ｒ２２）ｐ２−
【００４５】
【化６】
0006524218.tif 000007
【００４６】
から選択される。
Ｒ９とＲ１８は相互に無関係に、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ３Ｈ７、及び−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３から選択され、
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１及びＲ２２はそれぞれ相互に無関係に−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ３Ｈ７、−Ｃ５Ｈ９、−Ｃ６Ｈ１３、−ＯＣＨ３、−ＯＣ２Ｈ５、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨＦ２、−ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２、−ＳＣＨ３、−ＳＣ２Ｈ５、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２及び−Ｎ（Ｃ２Ｈ５）２から選択され、
ｏ、ｑ、ｐ１及びｐ２はそれぞれ相互に無関係に、１、２、３、４、５、６、７、８、９及び１０から選択される整数である。
【００４７】
本発明による糖類は塩基性及び／又は酸性の置換基を有しており、それらは有機あるいは無機の酸や塩基と塩を形成している場合もある。
そうした酸付加塩形成のために適切な酸の例としては、塩酸、臭酸、硫酸、リン酸、酢酸、クエン酸、シュウ酸、マロン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、リンゴ酸、フマル酸、コハク酸、アスコルビン酸、マレイン酸、スルホン酸、ホスホン酸、過塩素酸、硝酸、蟻酸、プロピオン酸、グルコン酸、乳酸、酒石酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、フェニル酢酸、安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、亜硝酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、エチレンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフチルスルホン酸、スルファニル酸、カンファースルホン酸、チャイナ酸（ｃｈｉｎａ  ａｃｉｄ）、マンデル酸、ｏ−メチルマンデル酸、ハイドロゲン−ベンゼンスルホン酸、ピクリン酸、アジピン酸、ｄ−ｏ−トリル酒石酸、タルトロン酸、（ｏ，ｍ，ｐ）−トルイル酸、ナフチルアミンスルホン酸、及び当業者によく知られているその他の鉱物性あるいはカルボキシル酸がある。その塩はこれらの遊離塩基形態を通常の方法で塩を発生させるのに十分な量の望ましい酸と接触させることで調製される。
【００４８】
適切な無機塩基あるいは有機塩基の例は、例えば、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＮＨ４ＯＨ、テトラアルキルアンモニウム水酸化物、リシン及びアルギニンなどである。塩は、業界でよく知られた方法を伴う従来の方法、例えば、一般式（Ｉ）の化合物の溶液を、上に述べたグループから選択した塩基の溶液で処理することによって調製することができる。
【００４９】
一般式（Ｉ）の糖類は、−Ｏ−Ｏ−結合、及び／又はそのアノマーあるいはＣ−１炭素
経由で相互に接続されている、あるいは結合されている糖フラグメント（Ｕｘ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２、Ｕｘ＋３）を含んでいないことは炭水化物化学分野の当業者には明らかである。グリコシド結合の立体化学が上記の一般式の糖フラグメントの立体的な中心を示していることも当業者には周知の事実である。従って、糖フラグメントＵ１及びＵ５に対するアノマー中心の立体化学はβであり、糖フラグメントＵ２及びＵ６に対してはβであり、糖フラグメントＵ３及びＵ７に対してはαであり、糖フラグメントＵ４に対してはαである。
【００５０】
一般式（Ｉ）で示される糖類は防御的な免疫原性エピトープを含んでおり、ヒト及び／又は動物宿主内で、肺炎連鎖球菌血清型８に対する防御的な免疫応答を誘発することができる。一般式（Ｉ）で示される糖類は抗体を放出し、抗体は肺炎連鎖球菌血清型８莢膜多糖類と交差反応し、肺炎連鎖球菌血清型８を特異的に識別し、食細胞の貪食のためにそれらをオプソニン化する。
【００５１】
一般式（Ｉ）で示される本発明の化合物は、例えば、ＷＯ９６４０２２５Ａ１に開示されている分離された糖類の混合物が、必ずしも十分に特徴づけられておらず、分離源にしたがってオリゴ糖類の組成に変化が多く、ＧＭＰ規制を遵守するのがやっかいであるのに対して、一般式（Ｉ）で示される本発明の化合物はＧＭＰ規制に合致して簡単に製造できる純粋な合成化合物であるという利点を有している。
【００５２】
従って、本発明のワクチンは一般式（Ｉ）あるいは以下に開示されている他の一般式（Ｉ−ａ）−（Ｉ−ｃ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）−（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）−（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）−（ＩＶ−ｇ）、（Ｖ）、（Ｖ−ａ）−（Ｖ−ｃ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）−（ＶＩ−ｃ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩ−ａ）−（ＶＩＩ−ｃ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩ−ａ）−（ＶＩＩＩ−ｃ）、（ＩＸ）あるいは（ＩＸ−ａ）−（ＩＸ−ｃ）のうちの１つだけ化合物を含むのが最も好ましく、最も好ましいのは化合物１０、１８−２２、５５、５７、６０及び６２−８９のうちの１つだけが免疫原性担体、好ましくは担体タンパク質、より好ましくはＣＲＭ１９７  に結合している形態である。
【００５３】
従って、一般式（Ｉ）あるいは以下に開示されている他の一般式（Ｉ−ａ）−（Ｉ−ｃ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）−（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）−（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）−（ＩＶ−ｇ）、（Ｖ）、（Ｖ−ａ）−（Ｖ−ｃ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）−（ＶＩ−ｃ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩ−ａ）−（ＶＩＩ−ｃ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩ−ａ）−（ＶＩＩＩ−ｃ）、  （ＩＸ）あるいは（ＩＸ−ａ）−（ＩＸ−ｃ）によって示される化合物は、よく定義され、よく特徴づけがなされた純粋なワクチンの調製に用いられ、このワクチンはたただ１つの、人為的に合成され、よく特徴づけがなされた三糖類、四糖類、五糖類、あるいは六糖類のうちの１つだけを含んでいる。これらの糖は、好ましくは免疫原性担体、好ましくは担体タンパク質、さらに好ましくはＣＲＭ１９７に結合している。
【００５４】
その結果、本発明のワクチンは、一般式（Ｉ）あるいは以下に開示されている他の一般式（Ｉ−ａ）−（Ｉ−ｃ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）−（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）−（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）−（ＩＶ−ｇ）、（Ｖ）、（Ｖ−ａ）−（Ｖ−ｃ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）−（ＶＩ−ｃ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩ−ａ）−（ＶＩＩ−ｃ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩ−ａ）−（ＶＩＩＩ−ｃ）、（ＩＸ）あるいは（ＩＸ−ａ）−（ＩＸ−ｃ）のうちの１つで示され、免疫原性担体、好ましくは担体タンパク質、もっと好ましくはＣＲＭ１９７  に結合しているただ１つの人為的に合成された化合物を含んでいる。
【００５５】
こうしたワクチンは分離された（そして合成されたものではない）肺炎連鎖球菌血清型
８莢膜多糖類の非選択的な分裂で得られる糖の混合体を含んでいるワクチンと比較して、副作用及び／又は非防御的な免疫応答を起こすことが少ない。さらに、この本発明によるワクチンは非選択的な分裂莢膜多糖類の分離された混合体を含んでいるワクチンと比較してＧＭＰ規制に合致してより簡単に製造することができ、簡単に特徴づけられるので、不純物の種類と量の検出とともに安定性および純度管理がより容易になる。
【００５６】
残基Ｒ＃は−ＣＯＯＨを示すのが好ましい。
本発明の１つの実施例は一般式（Ｉ）
Ｖ＊−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｏ−Ｌ−ＮＨ２
（Ｉ）
の糖類に関し、この式で、Ｖ＊−はＨ−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−を示し、ｘ、Ｌ、Ｕｘ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２、Ｕｘ＋３及びＲ＃は、本明細書で定義する意味を有する。
【００５７】
このように、本発明の１つの実施形態は、一般式（ＩＩ）
Ｈ−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｏ−Ｌ−ＮＨ２
（ＩＩ）
で示される六糖類に関し、この式でｘは１，２，３及び４から選択される整数である。
【００５８】
【化７】
0006524218.tif 000008
【００５９】
Ｒ＃は、−ＣＯＯＨ又はーＣＨ２ＯＨを示し、
Ｌは、リンカー、あるいは薬学的に許容できるその塩を示す。
さらに好ましいのは一般式（ＩＩ）で示される六糖類で、Ｒ＃は−ＣＯＯＨを示す。
【００６０】
従って、一般式（ＩＩ−ａ）の六糖類は以下の構造を有し、この式のＲ＃とＬは上に定義した意味を有している。
【００６１】
【化８】
0006524218.tif 000009
【００６２】
また、一般式（ＩＩ−ｂ）の糖類は以下の構造を有し、この式のＲ＃とＬは本明細書で定義する意味を有している。
【００６３】
【化９】
0006524218.tif 000010
【００６４】
また、一般式（ＩＩ−ｃ）の糖類は以下の構造を有しており、この式のＲ＃とＬは本明細書で定義する意味を有している。
【００６５】
【化１０】
0006524218.tif 000011
【００６６】
さらに、一般式（ＩＩ−ｄ）の糖類は以下の構造を有しており、この式のＲ＃とＬは本明細書で定義する意味を有しており、これもまた好ましい。
【００６７】
【化１１】
0006524218.tif 000012
【００６８】
別の好ましい実施態様は、一般式（Ｉ）  
Ｖ＊−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｏ−Ｌ−ＮＨ２
（Ｉ）
で示される糖類に関し、この式で、Ｖ＊−はＨ−Ｕｘ−を示し、ｘ、Ｌ、Ｕｘ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２、Ｕｘ＋３及びＲ＃は、本明細書で定義されている意味を有する。
【００６９】
別の好ましい実施形態は、一般式（ＩＩＩ）
Ｈ−Ｕｘ−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｏ−Ｌ−ＮＨ２
（ＩＩＩ）
で示される五糖類に関し、この式でｘは１、２、３、及び４から選択される整数である。
【００７０】
【化１２】
0006524218.tif 000013
【００７１】
Ｒ＃は、−ＣＯＯＨ又はーＣＨ２ＯＨを示し、
Ｌは、リンカー、あるいは薬学的に許容できるその塩を示す。
好ましくは、一般式（ＩＩＩ）では、残基Ｒ＃は−ＣＯＯＨを示す。
【００７２】
従って、一般式（ＩＩＩ−ａ）の五糖類は以下の構造を有し、Ｒ＃とＬは本明細書に定義する意味を有している。
【００７３】
【化１３】
0006524218.tif 000014
【００７４】
また、一般式（ＩＩI−ｂ）の糖類は以下の構造を有し、この式のＲ＃とＬは本明細書に定義する意味を有している。
【００７５】
【化１４】
0006524218.tif 000015
【００７６】
また、一般式（ＩＩI−ｃ）の糖類は以下の構造を有し、この式のＲ＃とＬは本明細書に定義する意味を有している。
【００７７】
【化１５】
0006524218.tif 000016
【００７８】
また、一般式（ＩＩI−ｄ）の糖類は以下の構造を有し、この式のＲ＃とＬは本明細書に定義する意味を有しており、これもまた好ましい。
【００７９】
【化１６】
0006524218.tif 000017
【００８０】
本発明のさらに好ましい実施形態は一般式（Ｉ）
Ｖｘ−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｏ−Ｌ−ＮＨ２
（Ｉ）
で示される糖類に関し、この式でＶ＊−はＨ−を示し、ｘ、Ｌ、Ｕｘ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２、Ｕｘ＋３及びＲ＃は、本明細書に定義する意味を有する。
【００８１】
従って、本発明のさらに好ましい実施形態は一般式（ＩＶ）
Ｈ−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｏ−Ｌ−ＮＨ２
（ＩＶ）
で示される四糖類、あるいは薬学的に許容されるその塩に関し、この式でｘは１、２、３、及び４から選択される整数である。
【００８２】
【化１７】
0006524218.tif 000018
【００８３】
Ｒ＃は、−ＣＯＯＨ又はーＣＨ２ＯＨを示し、
Ｌは、リンカーを示す。
好ましくは、一般式（ＩＩＩ）において、残基Ｒ＃は−ＣＯＯＨを示す。
【００８４】
従って、一般式（ＩＶ−ａ）の四糖類は以下の構造を有し、Ｒ＃とＬは本明細書に定義する意味を有している。
【００８５】
【化１８】
0006524218.tif 000019
【００８６】
また、一般式（ＩＶ−ｂ）で示される糖類は以下の構造を有し、この式のＲ＃とＬは本明細書に定義する意味を有している。
【００８７】
【化１９】
0006524218.tif 000020
【００８８】
また、一般式（ＩＶ−ｃ）で示される糖類は以下の構造を有し、この式のＲ＃とＬは本明細書に定義する意味を有している。
【００８９】
【化２０】
0006524218.tif 000021
【００９０】
また、一般式（ＩＶ−ｄ）で示される糖類は以下の構造を有し、この式のＲ＃とＬは本明細書に定義する意味を有し、これもまた好ましい。
【００９１】
【化２１】
0006524218.tif 000022
【００９２】
特に好ましいのは一般式（Ｉ）の糖類、式（ＩＩ）の六糖類、式（ＩＩＩ）の五糖類、式（ＩＶ）の四糖類で、防御的な免疫原エピトープβ−Ｄ−Ｇｌｐｃ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇａｌｐを含んでいる。従って、六糖類（ＩＩ−ａ）、（ＩＩ−ｃ）、（ＩＩ−ｄ）、五糖類（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ−ｃ）、（ＩＩＩ−ｄ）及び四糖類（ＩＶ−ａ）、（ＩＶ−ｄ）が特に好ましい。防御的な免疫原エピトープβ−Ｄ−Ｇｌｐｃ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇａｌｐを含んでいる糖類は、抗体の力価を上昇させることができ、抗体は、肺炎連鎖球菌タイプ８を選択的に認識し、それらを食細胞の貪食のためにオプソニン化することが出来る。
【００９３】
さらに好ましいのは一般式（Ｉ）の糖類、あるいは薬学的に許容されるその塩で、この式ではｘは３を表わす。
従って、一般式（Ｖ）の糖類は
Ｖ＊−Ｕ６−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｏ−Ｌ−ＮＨ２
（Ｖ）
で示され、
【００９４】
【化２２】
0006524218.tif 000023
【００９５】
の構造を有し、この式で、
Ｖ＊−はＨ−、Ｈ−Ｕ３−、あるいはＨ−Ｕ４−Ｕ３−を示し、
Ｒ＃は−ＣＯＯＨあるいは−ＣＨ２ＯＨを示し、
Ｌはリンカーで、特に好ましい。一般式（Ｖ）の糖類は、連鎖球菌血清タイプ８肺炎球菌の感染でマウスを守ることで知られているヒト抗血清肺炎連鎖球菌血清タイプ８莢膜多糖類及び肺炎連鎖球菌血清タイプ８莢膜多糖類に対して発生するマウス抗体と非常に頑強に相互作用する。付け加えると、一般式（Ｖ）の糖類は抗体を放出し、抗体は、肺炎連鎖球菌血清タイプ８莢膜多糖類と交差反応し、特に、肺炎連鎖球菌血清タイプ８を識別して、食細胞の貪食のためにそれらをオプソニン化する。
【００９６】
同様に好ましいのは一般式（Ｉ）の糖類で、ｘが２を表わす場合である。従って、一般式（ＶＩ）
Ｖ＊−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｕ２−Ｏ−Ｌ−ＮＨ２
（ＶＩ）
【００９７】
【化２３】
0006524218.tif 000024
【００９８】
で示される構造を有し、
Ｖ＊−はＨ−、Ｈ−Ｕ２−、あるいはＨ−Ｕ３−Ｕ２−を示し、
Ｒ＃は−ＣＯＯＨあるいは−ＣＨ２ＯＨを示し、
Ｌはリンカーあるいは薬学的に許容されるその塩で、その場合も好ましい。
【００９９】
好ましくは、リンカー−Ｌ−は−Ｌａ−、−Ｌａ−Ｌｅ−、−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−、−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−、から選択され、この場合、
−Ｌａ−は−（ＣＨ２）ｏ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−Ｃ２Ｈ４−、及び−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｂ−は−Ｏ−を表わし、
−Ｌｄ−は−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＦ２）ｑ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−及び−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｅ−は−（ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＦ２）ｐ１−、−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、及び−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され、
ｏ、ｑ、ｐ１及びｐ２は、１、２、３、４、５、及び６から相互に無関係に選択される整数である。
【０１００】
従って、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）、（ＩＩ−ｂ）、（ＩＩ−ｃ）、（ＩＩ−ｄ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ−ｂ）、（ＩＩＩ−ｃ）、（ＩＩＩ−ｄ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）、（ＩＶ−ｂ）、（ＩＶ−ｃ）、（ＩＶ−ｄ）、（Ｖ）あるいは（ＶＩ）で示される糖類においては、
−Ｌ−は−Ｌａ−、−Ｌａ−Ｌｅ−、−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−、−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−から選択され、
−Ｌａ−は−（ＣＨ２）ｏ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−Ｃ２Ｈ４−、及び−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｂ−は−Ｏ−を表わし、
−Ｌｄ−は−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＦ２）ｑ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−及び−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｅ−は−（ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＦ２）ｐ１−、−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、及び−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され、
Ｏ、ｑ、ｐ１及びｐ２は、１、２、３、４、５、及び６から相互に無関係に選択される整数である場合が特に好ましい。
【０１０１】
さらにより好ましいのは、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）、（ＩＩ−ｂ）、（ＩＩ−ｃ）、（ＩＩ−ｄ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ−ｂ）、（ＩＩＩ−ｃ）、（ＩＩＩ−ｄ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）、（ＩＶ−ｂ）、（ＩＶ−ｃ）、（ＩＶ−ｄ）、（Ｖ）あるいは（ＶＩ）で示される糖類であり、−Ｌ−が−（ＣＨ２）ｏ−を示し、ｏが２、３、４、５及び６から選択される整数である場合である。
【０１０２】
さらに好ましいのは一般式（Ｉ−ａ）の糖類で、
Ｖ＊−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｏ−Ｌａ−Ｌｅ−ＮＨ２  （Ｉ−ａ）で示され、
−Ｌａ−は−（ＣＨ２）ｏ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−Ｃ２Ｈ４−、及び−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−ＣＨ２−から選択され
−Ｌｅ−は−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＨ２）ｐ１−、及び−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され、
Ｖ＊、ｘ、ｏ、ｐ１、ｐ２、Ｕｘ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２及びＵｘ＋３は本明細書で定義する意味を有している場合である。
【０１０３】
また、より好ましいのは一般式（ＩＩ−ｅ）の糖類で、
Ｈ−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｏ−Ｌａ−Ｌｅ−ＮＨ２（ＩＩ−ｅ）
で示され、
−Ｌａ−は−（ＣＨ２）ｏ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−Ｃ２Ｈ４−、及び−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−ＣＨ２−から選択され
−Ｌｅ−は−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＨ２）ｐ１−、及び−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され、
ｘ、ｏ、ｐ１、ｐ２、Ｕｘ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２及びＵｘ＋３は本明細書で定義する意味を有している場合である。
【０１０４】
また、より好ましいのは、一般式（ＩＩＩ−ｅ）の糖類で、
Ｈ−Ｕｘ−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｏ−Ｌａ−Ｌｅ−ＮＨ２（ＩＩＩ−ｅ）
で示され、
−Ｌａ−は−（ＣＨ２）ｏ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−Ｃ２Ｈ４−、及び−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｅ−は−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＨ２）ｐ１−、及び−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され、
ｘ、ｏ、ｐ１、ｐ２、Ｕｘ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２及びＵｘ＋３は本明細書で定義する意味を有している場合である。
【０１０５】
また、さらに好ましいのは、一般式（ＩＶ−ｅ）の糖類で
Ｈ−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｏ−Ｌａ−Ｌｅ−ＮＨ２（ＩＶ−ｅ）
で示され、
−Ｌａ−は−（ＣＨ２）ｏ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−Ｃ２Ｈ４−、及び−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−ＣＨ２−から選択され
−Ｌｅ−は−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＨ２）ｐ１−、及び−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され、
ｘ、ｏ、ｐ１、ｐ２、Ｕｘ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２及びＵｘ＋３は本明細書で定義する意味を有している場合である。
【０１０６】
また、さらに好ましいのは、一般式（Ｖ−ａ）の糖類で
Ｖ＊−Ｕ６−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｏ−Ｌａ−Ｌｅ−ＮＨ２  （Ｖ−ａ）
で示され、
−Ｌａ−は−（ＣＨ２）ｏ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−Ｃ２Ｈ４−、及び−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−ＣＨ２−から選択され
−Ｌｅ−は−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＨ２）ｐ１−、及び−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され、
Ｖ＊、ｏ、ｐ１、ｐ２、Ｕ６、Ｕ５、Ｕ４及びＵ３は本明細書で定義する意味を有している場合である。
【０１０７】
また、さらに好ましいのは、一般式（ＶＩ−ａ）の糖類で
Ｖ＊−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｕ２−Ｏ−Ｌａ−Ｌｅ−ＮＨ２  （ＶＩ−ａ）で示され、
−Ｌａ−は−（ＣＨ２）ｏ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−Ｃ２Ｈ４−、及び−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−ＣＨ２−から選択され
−Ｌｅ−は−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＨ２）ｐ１−、及び−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され、
Ｖ＊、ｏ、ｐ１、ｐ２、Ｕ５、Ｕ４、Ｕ３及びＵ２は本明細書で定義する意味を有している場合である。
【０１０８】
さらにより好ましいのは、一般式（Ｉ−ｂ）の糖類で
Ｖ＊−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−ＵＸ＋１−Ｏ−Ｌａ−ＮＨ２  （Ｉ−ｂ）
で示され、
−Ｌａ−は−（ＣＨ２）ｏ１−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ２−Ｃ２Ｈ４−、及び−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ２−ＣＨ２−を表わし、
ｏ１は２、３、４、５、及び６から選択される整数であり、
ｏ２は１、２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
Ｖ＊、ｘ、Ｕｘ、ＵＸ＋１、Ｕｘ＋２及びＵｘ＋３は本明細書で定義する意味を有している場合である。
【０１０９】
また、より好ましいのは、一般式（ＩＩ−ｆ）の糖類で
Ｈ−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｏ−Ｌａ−ＮＨ２  （ＩＩ−ｆ）
で示され、
−Ｌａ−は−（ＣＨ２）ｏ１−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ２−Ｃ２Ｈ４−、及び−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ２−ＣＨ２−を表わし、
ｏ１は２、３、４、５、及び６から選択される整数であり、
ｏ２は１、２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
ｘ、Ｕｘ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２及びＵｘ＋３は本明細書で定義する意味を有している場合である。
【０１１０】
また、より好ましいのは一般式（ＩＩＩ−ｆ）の糖類で
Ｈ−Ｕｘ−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｏ−Ｌａ−ＮＨ２  （ＩＩＩ−ｆ）
で示され、
−Ｌａ−は−（ＣＨ２）ｏ１−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ２−Ｃ２Ｈ４−、及び−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ２−ＣＨ２−を表わし、
ｏ１は２、３、４、５、及び６から選択される整数であり、
ｏ２は１、２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
ｘ、Ｕｘ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２及びＵｘ＋３は本明細書で定義する意味を有している場合である。
【０１１１】
さらに好ましいのは、一般式（ＩＶ−ｆ）の糖類で
Ｈ−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｏ−Ｌａ−ＮＨ２    （ＩＶ−ｆ）  で示され、
−Ｌａ−は−（ＣＨ２）ｏ１−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ２−Ｃ２Ｈ４−、及び−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ２−ＣＨ２−を表わし、
ｏ１は２、３、４、５、及び６から選択される整数であり、
ｏ２は１、２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
ｘ、Ｕｘ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２及びＵｘ＋３は本明細書で定義する意味を有している場合である。
【０１１２】
また、さらに好ましいのは一般式（Ｖ−ｂ）の糖類で
Ｖ＊−Ｕ６−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｏ−Ｌａ−ＮＨ２      （Ｖ−ｂ）
で示され、
−Ｌａ−は−（ＣＨ２）ｏ１−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ２−Ｃ２Ｈ４−、及び−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ２−ＣＨ２−を表わし、
ｏ１は２、３、４、５、及び６から選択される整数であり、
ｏ２は１、２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
Ｖ＊、Ｕ６、Ｕ５、Ｕ４及びＵ３は本明細書で定義する意味を有している場合である。
【０１１３】
また、より好ましいのは一般式（ＶＩ−ｂ）の糖類で
Ｖ＊−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｏ−Ｌａ−ＮＨ２      （ＶＩ−ｂ）
で示され、
−Ｌａ−は−（ＣＨ２）ｏ１−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ２−Ｃ２Ｈ４−、及び−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ２−ＣＨ２−を表わし、
ｏ１は２、３、４、５、及び６から選択される整数であり、
ｏ２は１、２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
Ｖ＊、Ｕ５、Ｕ４及びＵ３は本明細書で定義する意味を有している場合である。
【０１１４】
さらにより好ましいのは一般式（Ｉ−ｃ）の糖類で
Ｖ＊−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｏ−（ＣＨ２）ｏ−ＮＨ２  （Ｉ−ｃ）
で示され、
ｏが２、３、４、５及び６から選択される整数で、
Ｖ＊、ｘ、Ｕｘ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２及びＵｘ＋３は本明細書で定義する意味を有している場合である。
【０１１５】
また、より好ましいのは一般式（ＩＩ−ｇ）の糖類で
Ｈ−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｏ−（ＣＨ２）ｏ−ＮＨ２        （ＩＩ−ｇ）
で示され、
ｏが２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
ｘ、Ｕｘ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２及びＵｘ＋３は本明細書で定義する意味を有している場合である。
【０１１６】
また、より好ましいのは一般式（ＩＩＩ−ｇ）の糖類で
Ｈ−Ｕｘ−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｏ−（ＣＨ２）ｏ−ＮＨ２ 
（ＩＩＩ−ｇ）
で示され、
ｏが２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
ｘ、Ｕｘ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２及びＵｘ＋３は本明細書で定義する意味を有している場合である。
【０１１７】
また、さらに好ましいのは一般式（ＩＶ−ｇ）の糖類で
Ｈ−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｏ−（ＣＨ２）ｏ−ＮＨ２  （ＩＶ−ｇ）
で示され、
ｏが２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
ｘ、Ｕｘ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２及びＵｘ＋３は本明細書で定義する意味を有している場合である。
【０１１８】
また、より好ましいのは一般式（Ｖ−ｃ）の糖類で
Ｖ＊−Ｕ６−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｏ−（ＣＨ２）ｏ−ＮＨ２      （Ｖ−ｃ）
で示され、
ｏが２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
Ｖ＊、Ｕ６、Ｕ５、Ｕ４及びＵ３は本明細書で定義する意味を有している場合である。
【０１１９】
また、より好ましくいのは一般式（ＶＩ−ｃ）の糖類で
Ｖ＊−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｕ２−Ｏ−（ＣＨ２）ｏ−ＮＨ２    （ＶＩ−ｃ）
で示され、
ｏが２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
Ｖ＊、Ｕ５、Ｕ４、Ｕ３及びＵ２は本明細書で定義する意味を有している場合である。
【０１２０】
またさらに、別の好ましい実施例では、本発明による上記糖類は、以下のもので構成される群から選択される。
α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→１）−（２−アミノ）エタノール（１０）、
β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２−アミノ）エタノール（１８）、
５−アミノ・ペンタニル  β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（１９）、
５−アミノ・ペンタニル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（６０）、
５−アミノ・ペンタニル  α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド（２０）、
５−アミノ・ペンタニル  α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（２１）、
５−アミノ・ペンタニル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸（２２）、
α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロネート−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２−アミノ）エタノール（５５）、
α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロネート−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２−アミノ）エタノール（５７）
５−アミノ・ペンタニル  α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（６３）
５−アミノ・ペンタニル  ガラクトピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド（６４）
５−アミノ・ペンタニル  β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グ
ルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄーグルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（６５）
５−アミノ・ペンタニル  α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸（６６）
５−アミノ・ペンタニル  α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（６７）
５−アミノ・ペンタニル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド（６８）
５−アミノ・ペンタニル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（６９）
５−アミノ・ペンタニル  α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（７０）
３−アミノプロピル  α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（７１）
５−アミノ・ペンタニル  α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド（７２）
３−アミノプロピル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（７３）
５−アミノ・ペンタニル  β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸（７４）
４−アミノブチル  α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（７５）
６−アミノ・ヘキサニル  α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド（７６）
３−アミノプロピル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（７７）
５−アミノ・ペンタニル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（７８）
４−アミノブチル  α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド（７９）
３−アミノプロピル  α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（８０）
６−アミノ・ヘキサニル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（８１）。
【０１２１】
驚くべきことに、さらに、一般式（ＶＩＩ）の純粋な糖が防御的な免疫原性グリカン・エピトープβ−Ｄ−Ｇｌｐｃ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇａｌｐを含んでおり、ヒト及び／又は動物宿主において肺炎連鎖球菌血清型８バクテリアに対する防御的な免疫応答を誘発することができることが見いだされた。防御性免疫原性グリカン・エピトープβ−Ｄ−Ｇｌｐｃ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇａｌｐを含む一般式（ＶＩＩ）の糖類は、抗体を放出する。抗体は肺炎連鎖球菌血清型８莢膜多糖類と交差反応し、肺炎連鎖球菌血清型８バクテリアを個別的に識別して、食細胞の貪食のためにそれらをオプソニン化する。
【０１２２】
こうした理由で、本発明の別の側面は一般式（ＶＩＩ）の糖類に関連している。
Ｓ＊−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｓ−Ｏ−Ｌ−ＮＨ２        （ＶＩＩ）
【０１２３】
【化２４】
0006524218.tif 000025
【０１２４】
この構造において、
Ｒ＃は−ＣＯＯＨあるいは−ＣＨ２ＯＨを表わし、
−Ｓ−は−Ｓａ−あるいは−Ｓｂ−を表わし、
−Ｓａ−は−（Ｕ５）ｎ１−、−（Ｕ５−Ｕ４）ｎ２−あるいは−（Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３）ｎ３−を表わし、
−Ｓｂ−は−（Ｕ２）ｎ１−、−（Ｕ２−Ｕ５）ｎ２−あるいは−（Ｕ２−Ｕ５−Ｕ４）ｎ３−を表わし、
Ｓ＊−はＳ＊ａ−あるいはＳ＊ｂ−を表わし、
Ｓ＊ａ−はＨ−（Ｕ３）ｎ４−あるいはＨ−（Ｕ４−Ｕ３）ｎ５−を表わし、
Ｓ＊ｂ−はＨ−（Ｕ２）ｎ４−、Ｈ−（Ｕ３−Ｕ２）ｎ５−あるいはＨ−（Ｕ４−Ｕ３−Ｕ２）ｎ６−を表わし、
ｎ１、ｎ２、ｎ３、ｎ４、ｎ５及びｎ６は０及び１から選択され、
Ｌはリンカーであるが、以下のことを前提にしている。
【０１２５】
−Ｓ−が−Ｓａ−を表わしているのであれば、Ｓ＊−はＳ＊ａ−を表わし、
−Ｓ−が−Ｓｂ−を表わしているのであれば、Ｓ＊−はＳ＊ｂ−を表わし、
ｎ１＝１であれば、ｎ６＝０であり、
ｎ２＝１であれば、ｎ５＝ｎ６＝０であり、
ｎ３＝１であれば、ｎ４＝ｎ５＝ｎ６＝０であり、
ｎ４＝１であれば、ｎ３＝０であり、
ｎ５＝１であれば、ｎ２＝ｎ３＝０であり、
ｎ６＝１であれば、ｎ１＝ｎ２＝ｎ３＝０であり、
あるいは、それらの薬学的に供される塩である。
【０１２６】
−Ｌ−はリンカーとして定義され、フラグメント−Ｏ−Ｌ−ＮＨ２の一部である。従って、リンカー−Ｌ−は酸素原子とＮＨ２基の窒素原子と結合している。このリンカーの少なくとも２つの炭素原子は、−Ｏ−Ｃ−Ｃ−ＮＨ２のように、酸素原子とＮＨ２基の間にあることが好ましい。リンカー−Ｌ−は脂肪鎖でもよく、その場合、その脂肪鎖はオプションとしてそれに挿入されている芳香鎖、あるいは０−１０までの範囲のヘテロ原子を含んでいてもよい。
【０１２７】
リンカーＬは、２から４０個（任意の側鎖の炭素を含む）、より好ましくは２から３０個、より好ましくは２から２０個、より好ましくは２から１４個、より好ましくは２から１２個、そしてもっと好ましくの２から１０個の範囲の炭素を含んでいるのが好ましい。
【０１２８】
上記酸素元素（例えば、−Ｏ−Ｌ−ＮＨ２の酸素）とＮＨ２基の間の最短の分子鎖は、好ましくは２−１２の範囲、より好ましくは２−１０の範囲、そしてより好ましくは２−８の間の範囲の個数の原子で構成されているのが好ましい。その最短の鎖（つまり、そのアノマーの中心の酸素とＮＨ２基との間で可能な最短の接続）が２個から６個の原子で構成されている場合、これらは炭素原子であることが好ましい。その最短の鎖が４個から８個の原子で構成されている場合、その鎖は、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１、２、あるいは３個のヘテロ原子を含んでいてもよい。その最短の鎖が９個から１４個の原子で構成されている場合、その鎖はＯ、Ｎ及びＳから選択される１、２、３、４、５、あるいは６個のヘテロ原子を含んでいてもよい。
【０１２９】
リンカー−Ｌ−あるいは最短の鎖が完全に、あるいは部分的にフッ化されているのも好ましい。このリンカー−Ｌ−は構成原子が３個か４個か５個あるいは６  個の飽和炭素環を含んでいてもよいし、構成原子が５個の部分的に不飽和の（そして芳香族でない）炭素環、あるいは構成原子数が４個か５個か６個の飽和酸素ヘテロ環、あるいは、構成原子数が４個か５個か６個の飽和窒素ヘテロ環、あるいは構成原子が６個の芳香族炭素環を含んでいるのが好ましい。
【０１３０】
リンカー−Ｌ−はアミド（−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−）及び／又は尿素（−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−）残基を含んでいてもよいし、１個だけのアミドあるいは尿素残基を含んでいるのが好ましい。このリンカーは置換基を含んでいてもよく、Ｒ１０及びＲ１１のような２つの置換基、あるいはＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１５及びＲ１４の４つの置換基を含んでいるのが好ましく、これらは、ここで定義されているような意味を有し、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ３Ｈ７、−Ｃ５Ｈ９、−Ｃ６Ｈ１３、−ＯＣＨ３、−ＯＣ２Ｈ５、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨＦ２、−ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２、−ＳＣＨ３、−ＳＣ２Ｈ５、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、及び−Ｎ（Ｃ２Ｈ５）２から選択されるのが好ましい。
【０１３１】
リンカー−Ｌ−がフッ化している場合、３個以上の置換基が好ましい。
好ましくは、リンカー−Ｌ−は、−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）２−、−（ＣＨ２）３−、−（ＣＨ２）４−、−（ＣＨ２）５−、−（ＣＨ２）６−、−（ＣＨ２）７−、−（ＣＨ２）８−、−（ＣＨ２）９−、−（ＣＨ２）１０−、−ＣＦ２−、−（ＣＦ２）２−、−（ＣＦ２）３−、−（ＣＦ２）４−、−（ＣＦ２）５−、−（ＣＦ２）６−、−（ＣＦ２
）７−、−（ＣＦ２）８−、−（ＣＦ２）９−、−（ＣＦ２）１０−、−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−、−ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２）３−、−（ＣＨ２）３−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−（ＣＦ２）２−、−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）３−Ｏ−（ＣＨ２）２−、−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）３−、−（ＣＨ２）４−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２）４−、−Ｌａ−、−Ｌａ−Ｌｅ−、−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−、−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｄ−Ｌｃ−Ｌｅ−、−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅから選択される。
【０１３２】
この場合、−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）ｏ−、−（ＣＦ２）ｏ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−ＣＨ２−、−（ＣＲ１０Ｒ１１）ｏ−
【０１３３】
【化２５】
0006524218.tif 000026
【０１３４】
から選択される。
−Ｌｂ−と−Ｌｃ−は、−Ｏ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｓ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−ＮＲ９−、−ＮＲ１８−、−ＳＯ２−  
【０１３５】
【化２６】
0006524218.tif 000027
【０１３６】
から相互に無関係に選択される。
−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＦ２）ｑ−、−（ＣＲ１２Ｒ１３）ｑ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−  
【０１３７】
【化２７】
0006524218.tif 000028
【０１３８】
から相互に無関係に選択される。 
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＦ２）ｐ１−、−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−、−（ＣＲ１４Ｒ１５）ｐ１−、−（ＣＲ１４Ｒ１５）ｐ１−Ｏ−（ＣＲ２１ＣＲ２２）ｐ２−  
【０１３９】
【化２８】
0006524218.tif 000029
【０１４０】
から相互に無関係に選択される。
Ｒ９とＲ１８は、−ＣＨ３−、−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ３Ｈ７、及び−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３から相互に無関係に選択される。
【０１４１】
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１及びＲ２２は、それぞれ相互とは無関係に、−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ３Ｈ７、−Ｃ５Ｈ９、−Ｃ６Ｈ１３、−ＯＣＨ３、−ＯＣ２Ｈ５、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨＦ２、−ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２、−ＳＣＨ３、−ＳＣ２Ｈ５、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２及び−Ｎ（Ｃ２Ｈ５）２から選択され、
ｏ、ｑ、ｐ１及びｐ２は、１、２、３、４、５、６、７、８、９及び１０から相互とは無関係に選択される整数である。
【０１４２】
本発明による糖類は塩基性及び／又は酸性の置換基を含んでいてもよく、それらが有機あるいは無機の酸あるいは塩基と塩を形成していてもよい。
そうした酸付加塩形成に適した酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、クエン酸、蓚酸、マロン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、リンゴ酸、フマル酸、コハク酸、アスコルビン酸、マレイン酸、スルホン酸、亜燐酸、過塩素酸、硝酸、蟻酸、プロピオン酸、グルコン酸、乳酸、酒石酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、フェニル酢酸、安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、亜硝酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、エチレンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフチルスルホン酸、スルファニル酸、カンファースルフォン酸、チャイナ酸（ｃｈｉｎａ  ａｃｉｄ）（キナ酸）、マンデル酸、ｏ―メチルマンデル酸、ハイドロゲン−ベンゼンスルホン酸、ピクリン酸、アジピン酸、ｄ−ｏ−トリル酒石酸、タルトロン酸、（ｏ，ｍ，ｐ）−トルイル酸、ナフチルアミンスルホン酸、及び当業者によく知られているその他の鉱酸あるいはカルボキシル酸である。それらの塩は、通常の方法で塩をつくるために、遊離塩基を十分な量の望ましい酸と接触させることで作製される。
【０１４３】
適切な無機あるいは有機塩基は、例えば、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＮＨ４ＯＨ、テトラアルキルアンモニウム水酸化物、リシンあるいはアルギニンなどである。塩は当業者に周知の方法を用いる通常のやり方で調製してもよく、例えば、一般式（I）の化合物の溶液を上に列記したグループから選択した塩基の溶液で処理する方法がある。
【０１４４】
一般式（ＶＩＩ）の糖類が−Ｏ−Ｏ−結合及び／又はアノマーあるいはＣ−１炭素経由
で相互に接続しているか結合している糖フラグメント（Ｕ２、Ｕ３、Ｕ４、Ｕ５）を含んでいないことは、炭水化物化学分野の当業者には明らかである。グリコシド結合の立体化学が一般式においては糖フラグメントのアノマー中心に示される立体化学であることもこの分野の当業者には明らかである。従って、糖フラグメントＵ１及びＵ５のアノマー中心の立体化学はβであり、糖フラグメントＵ２及びＵ６についてもβであり、糖フラグメントＵ３及びＵ７についてαであり、糖フラグメントＵ４  についてはαである。
【０１４５】
−Ｓ−が−Ｓａ−を表わし、Ｓ＊−がＳ＊ａ−を表わす一般式（ＶＩＩ）の糖類が好ましい。従って、一般式（ＶＩＩＩ）
Ｓ＊ａ−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｓａ−Ｏ−Ｌ−ＮＨ２          （ＶＩＩＩ）
の糖類が好ましく、この場合、
【０１４６】
【化２９】
0006524218.tif 000030

【０１４７】
の構造を有しており、上の式で
−Ｓａ−は−（Ｕ５）ｎ１−、−（Ｕ５−Ｕ４）ｎ２−あるいは−（Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３）ｎ３−を表わしており、
Ｓ＊ａ−はＨ−（Ｕ３）ｎ４−あるいはＨ−（Ｕ４−Ｕ３）ｎ５−を表わしており、
ｎ１、ｎ２、ｎ３、ｎ４、ｎ５は０と１から選択され、
Ｌはリンカーであり、以下のことを前提としている。つまり
ｎ２＝１であれば、ｎ５＝０であり、
ｎ３＝１であれば、ｎ４＝ｎ５＝０であり、
ｎ４＝１であれば、ｎ３＝０であり、
ｎ５＝１であれば、ｎ２＝ｎ３＝０であり、
さらに、薬学的に許容されるそれらの塩も好ましい。
【０１４８】
特に好ましいのは一般式（ＶＩＩ）の糖類で、この場合、−Ｓ−は−Ｓｂ−を表わし、Ｓ＊−がＳ＊ｂ−を表わす。従って、一般式（ＩＸ）
Ｓ＊ｂ−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｓｂ−Ｏ−Ｌ−ＮＨ２     （ＩＸ）
で示される糖類が好ましく、この糖類の場合以下の構造を有しており、
【０１４９】
【化３０】
0006524218.tif 000031
【０１５０】
この構造では、
Ｒ＃は−ＣＯＯＨあるいは−ＣＨ２ＯＨを表わし、
−Ｓｂ−は−（Ｕ２）ｎ１−、−（Ｕ２−Ｕ５）ｎ２−、あるいは−（Ｕ２−Ｕ５−Ｕ４）ｎ３−を表わし、
Ｓ＊ｂ−はＨ−（Ｕ２）ｎ４−、Ｈ−（Ｕ３−Ｕ２）ｎ５−あるいはＨ−（Ｕ４−Ｕ３−Ｕ２）ｎ６−を表わし、
ｎ１、ｎ２、ｎ３、ｎ４、ｎ５、ｎ６は０と１から選択され、
Ｌはリンカーであり、しかも
ｎ１＝１であれば、ｎ６＝０であり、
ｎ２＝１であれば、ｎ５＝ｎ６＝０であり、
ｎ３＝１であれば、ｎ４＝  ｎ５＝ｎ６＝０であり、
ｎ４＝１であれば、ｎ３＝０であり、
ｎ５＝１であれば、ｎ２＝ｎ３＝０であり、
ｎ６＝１であれば、ｎ１＝  ｎ２＝ｎ３＝０であるという条件付きである。
あるいは薬学的に許容されるこれらの塩であってもよい。
【０１５１】
好ましくは、リンカー−Ｌ−は−Ｌａ−、−Ｌａ−Ｌｅ−、−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−、−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−から選択され、この場合、
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）ｏ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｂ−は、−Ｏ−を表わし、
−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＦ２）ｑ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＦ２）ｐ１−、−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−及び−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され、
ｏ、ｑ、ｐ１及びｐ２は相互に無関係に、１、２、３、４、５、及び６から選択される。
【０１５２】
従って、一般式（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、あるいは（ＩＸ）の糖類においては、
−Ｌ−は、−Ｌａ−、−Ｌａ−Ｌｅ−、−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−、−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−から選択され、
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）ｏ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｂ−は、−Ｏ−を表わし、
−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＦ２）ｑ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２
Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＦ２）ｐ１−、−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−及び−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され、
ｏ、ｑ，ｐ１及びｐ２は相互に無関係に、１、２、３、４、５、及び６から選択されるのが特に好ましい。
【０１５３】
さらに好ましいのは一般式（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、あるいは（ＩＸ）の糖類において、−Ｌ−が−（ＣＨ２）ｏ−を表わし、ｏが２、３、４、５、６から選択される場合である。
【０１５４】
そして、さらに好ましいのは、一般式（ＶＩＩ−ａ）の糖類で、
Ｓ＊−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｓ−Ｏ−Ｌａ−Ｌｅ−ＮＨ２        （ＶＩＩ−ａ）
で示され、この場合、
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）ｏ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｅ−は、−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＨ２）ｐ１−及び−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され、
Ｓ＊、Ｓ、ｏ、ｐ１、ｐ２、Ｕ５、Ｕ４、及びＵ３は本明細書で定義する意味を有している。
【０１５５】
さらに好ましいのは一般式（ＶＩＩＩ−ａ）の糖類で、
Ｓａ＊−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｓａ−Ｏ−Ｌａ−Ｌｅ−ＮＨ２  （ＶＩＩＩ−ａ）
で示され、この場合、
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）ｏ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｅ−は、−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＨ２）ｐ１−、及び−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され、
Ｓａ＊、Ｓａ、ｏ、ｐ１、ｐ２、Ｕ５、Ｕ４、及びＵ３は本明細書で定義する意味を有している。
【０１５６】
また、さらに好ましいのは一般式（ＩＸ−ａ）の糖類で、
Ｓｂ＊−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｓｂ−Ｏ−Ｌａ−Ｌｅ−ＮＨ２  （ＩＸ−ａ）
で示され、この場合、
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）０−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｅ−は、−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＨ２）ｐ１−、及び−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され、
Ｓｂ＊、Ｓｂ、ｏ、ｐ１、ｐ２、Ｕ５、Ｕ４、及びＵ３は本明細書で定義する意味を有している。
【０１５７】
さらに好ましいのは、一般式（ＶＩＩ−ｂ）の糖類で、
Ｓ＊−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｓ−Ｏ−Ｌａ−ＮＨ２            （ＶＩＩ−ｂ）
で示され、この場合、
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）０１−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ２−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ２−ＣＨ２−から選択され、
ｏ１は、２、３、４、５、及び６から選択される整数であり、
ｏ２は、１、２、３、４、５、及び６から選択される整数であり、
Ｓ＊、Ｓ、Ｕ５、Ｕ４、及びＵ３は本明細書で定義する意味を有している。
【０１５８】
さらに好ましいのは、一般式（ＶＩＩＩ−ｂ）の糖類で、
Ｓａ＊−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｓａ−Ｏ−Ｌａ−ＮＨ２ （ＶＩＩＩ−ｂ）
で示され、この場合、
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）０１−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ２−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ２−ＣＨ２−から選択され、
ｏ１は、２、３、４、５、及び６から選択される整数であり、
ｏ２は、１、２、３、４、５、及び６から選択される整数であり、
Ｓ＊、Ｓａ、Ｕ５、Ｕ４、及びＵ３は本明細書で定義する意味を有している。
【０１５９】
さらに好ましいのは、一般式（ＩＸ−ｂ）の糖類で、
Ｓｂ＊−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｓｂ−Ｏ−Ｌａ−ＮＨ２ （ＩＸ−ｂ）
で示され、この場合、
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）０１−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ２−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ２−ＣＨ２−から選択され、
ｏ１は、２、３、４、５、及び６から選択される整数であり、
ｏ２は、１、２、３、４、５、及び６から選択される整数であり、
Ｓｂ＊、Ｓｂ、Ｕ５、Ｕ４、及びＵ３は本明細書で定義する意味を有している。
【０１６０】
さらにより好ましいのは、一般式（ＶＩＩ−ｃ）の糖類で、
Ｓ＊−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｓ−Ｏ−（ＣＨ２）ｏ−ＮＨ２      （ＶＩＩ−ｃ）
で示され、この場合、
ｏは２、３、４、５、及び６から選択される整数であり、
Ｓ＊、Ｓ、Ｕ５、Ｕ４、及びＵ３は本明細書で定義する意味を有している。
【０１６１】
また、より好ましいのは一般式（ＶＩＩＩ−ｃ）の糖類で、
Ｓａ＊−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｓａ−Ｏ−（ＣＨ２）ｏ−ＮＨ２  （ＶＩＩＩ−ｃ）
で示され、この場合、
ｏは２、３、４、５、及び６から選択される整数であり、
Ｓａ＊、Ｓａ、Ｕ５、Ｕ４、及びＵ３は本明細書で定義する意味を有している。
【０１６２】
また、より好ましいのは一般式（ＩＸ−ｃ）の糖類で、
Ｓｂ＊−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｓｂ−Ｏ−（ＣＨ２）o−ＮＨ２    （ＩＸ−ｃ）
で示され、この場合、
ｏは２、３、４、５、及び６から選択される整数であり、
Ｓｂ＊、Ｓｂ、Ｕ５、Ｕ４、及びＵ３は本明細書で定義する意味を有している。
【０１６３】
さらに別の好ましい実施形態においては、本発明による糖類は、以下のもので構成される群から選択される。
β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２−アミノ）エタノール（６０）
β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２−アミノ）エタノール（１８）
５−アミノ・ペンタニル  β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−  Ｄ−ガラ
クトピラノシド（１９）
β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシルー（１→１）−（２−アミノ）エタノール（６２）
５−アミノ・ペンタニル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸（２２）
α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロネート−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２−アミノ）エタノール（５５）
α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロネート−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２−アミノ）エタノール（５７）
４−アミノ・ブチル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（８２）
３−アミノプロピル  α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド（８３）
３−アミノプロピル  α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（８４）
６−アミノ・ヘキサニル  α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（８５）
３−アミノプロピル  α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（８６）
４−アミノブチル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド（８７）
４−アミノブチル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（８８）
６−アミノヘキサニル  α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド（８９）
化学合成
本発明による糖類はいくつかの合成ルートで合成することができる。
【０１６４】
例えば、自動化固相合成によって、本発明の糖類はチオグリコシド構築ブロックＢＢ２（糖フラグメントＵ１、Ｕ５、Ｕ２、及びＵ６の前駆体）、ＢＢ３（糖フラグメントＵ２、及びＵ６の前駆体）、ＢＢ４（糖フラグメンＵ３、及びＵ７の前駆体）、及びＢＢ５（糖フラグメンＵ４の前駆体）、そして、機能化された固体支持体ＢＢ１（Ａｎｇｒｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１３，５２，５８５８）（スキーム１参照）から開始することで合成することができる。
【０１６５】
スキーム１に要約的に示してある合成プロセスは以下の工程を含んでいる。
・  望ましいオリゴ糖類の調製は、
・    ＮＳ／ＴｆＯＮで活性化されることによる適切なチオグリコシド（ＢＢ２、ＢＢ３、ＢＢ４あるいはＢＢ５）によるグリコシル化、
・    その後に、Ｅｔ３Ｎによる処理で一時的な保護基Ｅｍｏｃの除去、
・  固体支持体からの切断、及び
・  恒常的な保護基の除去を含む。
【０１６６】
【化３１】
0006524218.tif 000032
【０１６７】
スキーム１：一般式（I）の糖類の自動固相合成
別の方式として、一般式（I）の糖類を得るために、オリゴ糖の液相合成を用いることもできる。この合成プロセスを速めるために、ＢＢ６及びＢＢ７などの二糖類形成ブロックを延長ユニットとして用いるのが好ましい。
【０１６８】
【化３２】
0006524218.tif 000033
【０１６９】
一般式（Ｉ）のより高級な糖類を得るためには、スキーム２に従って、二糖類ＢＢ６及びＢＢ７から開始して容易に得られる四糖類ＢＢ８などのより延長されたユニットを用いるのが便利であることは、当業者なら理解出来るであろう。従って、二糖類ＢＢ７のベンジリデンアセタールはＥｔＳＨ、ｐ−ＴｓＯＨを用いた処理で除去して中間的なジオールを得て、それをさらにＢＡＩＢ及びＴｅｍｐｏを用いた位置選択的な酸化を行い、さらに、新しく形成されたカルボン酸をエステル化して二次アルコールＢＢ９を得る。アルコールＢＢ９はさらに二糖類ＢＢ６を用いてグルコシル化反応をさせて、延長ユニットとして用いることが出来る四糖類ＢＢ８を得ることが出来る。都合がよいことに、α−グルコシド構成単位のＣ−４位置のヒドロキシル基を直交Ｆｍｏｃ保護基で防御してさらなるグルコシル化反応を期待して選択的除去を可能にすることができる。しかしながら、α−グルコシド構成単位が非還元性で末端の単糖を構成する場合には、ベンゾエート・エステルとしてＣ−４位のヒドロキシ基を保護することで合成がより迅速に行われるであろう。
【０１７０】
【化３３】
0006524218.tif 000034
【０１７１】
スキーム２：  四糖類反復単位ＢＢ８．ａ．ｉ．ＥｔＳＨ、ｐ−ＴｓＯＨ；ｉｉ．ＢＡＩＢ、Ｔｅｍｐｏ；ｉｉｉ．ＴＭＳ−ＣＨＮ２；ｂ．ＢＢ６、ＴＭＳＯＴｆ、Ｅｔ２Ｏ／ＤＣＭの合成。
【０１７２】
マイクロアレイ
図４に示すように、式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）−（Ｉ−ｃ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）−（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）−（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）−（ＩＶ−ｇ）、（Ｖ）、（Ｖ−ａ）−（Ｖ−ｃ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）−（ＶＩ−ｃ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩ−ａ）−（ＶＩＩ−ｃ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩ−ａ）−（ＶＩＩＩ−ｃ）、（ＩＸ）、（ＩＸ−ａ）−  （ＩＸ−ｃ）の新しい化合物、特に糖類１０、１８、１９、２０、２１、２２、５５、５７、６０及び６２−８９の糖類は、ＳＰ−８天然多糖類と共にエピトープを含んでいる。これらの合成オリゴ糖類をＮ−ヒドロキシサクシンイミド−機能化ガラス・スライド上に印刷して、天然のＳｐ８バクテリア（タイプ８抗血清、ＳＳＩ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ，  図４（Ｄ））に対するウサギ抗血清あるいはＰｎｅｕｍｏｖａｘ２３（登録商標）（「００７ｓｐ」、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌ（国立生物基準管理研究所）、図４（Ｂ）、（Ｃ））によってワクチン化され
たヒトの結合血清によって培養した。ウサギ抗血清の方は、すべてのプリントされた四糖類の認識を示したが（図４（Ｄ）、Ｐｎｅｕｍｏｖａｘ２３（登録商標）でワクチン化されたヒトからの抗血清は、化合物１９、２０、２２及び１８を認識しただけであった（図４（Ｂ）及び４（Ｃ）参照  ）。糖類１９及び１８とＰｎｅｕｍｏｖａｘ２３（登録商標）でワクチン化されたヒトからの抗血清との間では、しっかりした相互作用が認められる。ＳＰ−８天然多糖類による培養は、結合を抑制した（図４（Ｂ）及び４（Ｃ）参照）。これらのデータは抗ＳＰ−８  ＣＰＳ抗体への結合に向けて四糖類１８、１９、及び２０の特殊性及び交差反応性を示している。
【０１７３】
マイクロアレイ分析は糖類１９、２０、２１及び２２に対するｍＡｂ  ２８Ｈ１１（防御的なマウスＩｇＭ）の結合の評価も可能にする（図１２参照）。ＭＡｂ  ２８Ｈ１１は、天然の肺炎連鎖球菌タイプ８に対して発生したマウスＩｇＭであって、マウスを種々の状況で生きた肺炎連鎖球菌タイプ８肺炎球菌の感染から防御する（Ｙａｎｏ  ａｎｄ  Ｐｉｒｏｆｓｋｉ（２０１１），Ｃｌｉｎ．Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｉｎｍｍｕｎｏｌ．１８（１）．５９−６６）。グリカン・マイクロアレイ分析は、天然の肺炎連鎖球菌タイプ８ＣＰＳｓにより最大で１０μｇ／ｍＬの濃度で結合が切断されることに示されるように、ｍＡｂ  ２８Ｈ１１が肺炎連鎖球菌タイプ８に特有の糖類１９と強い相互作用をすることを明らかにした。（図１２参照）
グリコ接合体
本発明の別の側面は、−Ｏ−Ｌ−ＮＨ２基の窒素原子を通じて免役原性担体に結合した、あるいは共有結合した一般式（Ｉ）の合成糖類を含んだ接合体に向けられている。言い換えれば、本発明の別の側面は、−Ｏ−Ｌ−ＮＨ２基の窒素原子を通じて免役原性担体に結合した、一般式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）−（Ｉ−ｃ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）−（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）−（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）−（ＩＶ−ｇ）、（Ｖ）、（Ｖ−ａ）−（Ｖ−ｃ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）−（ＶＩ−ｃ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩ−ａ）−（ＶＩＩ−ｃ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩ−ａ）−（ＶＩＩＩ−ｃ）、（ＩＸ）及び（ＩＸ−ａ）−（ＩＸ−ｃ）のいずれかの糖類に向けられている。従って、−Ｏ−Ｌ−ＮＨ２基の窒素原子を通じて免役原性担体と結合した、あるいは共有結合した一般式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）−（Ｉ−ｃ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）−（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）−（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）−（ＩＶ−ｇ）、（Ｖ）、（Ｖ−ａ）−（Ｖ−ｃ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）−（ＶＩ−ｃ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩ−ａ）−（ＶＩＩ−ｃ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩ−ａ）−（ＶＩＩＩ−ｃ）、（ＩＸ）または（ＩＸ−ａ）−（ＩＸ−ｃ）は、また一般式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）−（Ｉ−ｃ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）−（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）−（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）−（ＩＶ−ｇ）、（Ｖ）、（Ｖ−ａ）−（Ｖ−ｃ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）−（ＶＩ−ｃ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩ−ａ）−（ＶＩＩ−ｃ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩ−ａ）−（ＶＩＩＩ−ｃ）、（ＩＸ）及び（ＩＸ−ａ）−（ＩＸ−ｃ）のいずれかの糖類を免疫原性担体と反応させて得られる接合体と定義することもできる。上記の接合体は、肺炎連鎖球菌血清タイプ８バクテリアに関連した疾病に対する免疫化のためのワクチンとして効果的であることが分かった。
【０１７４】
糖類は当業者には一般にＴＩ−２（Ｔ細胞独立−２）抗原及び弱免疫原として知られている。ＴＩ−２抗原は、表面が露出されている免疫グロブリンの交差結合を通じて成熟Ｂ細胞によってのみ認識される抗原である。Ｔ細胞の助けなしでは、免疫的記憶は発生されず、ＩｇＭから他のＩｇＧサブクラスへのアイソタイプ交換もＢ細胞親和性成熟も起きない。さらに、糖類はヒトの糖脂質及び糖タンパク質との構造的な類似性の故に、ヒトにおける弱免疫原として知られている。それらの弱免疫原性の故に、糖類はＢ細胞による抗体生産と記憶細胞の形成の両方を発生させる能力が弱く、これらの特徴は強力なワクチンを生産するためには必須である。
【０１７５】
従って、糖類を基にした強力なワクチンを生産するために、一般式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）−（Ｉ−ｃ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）−（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）−（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）−（ＩＶ−ｇ）、（Ｖ）、（Ｖ−ａ）−（Ｖ−ｃ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）−（ＶＩ−ｃ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩ−ａ）−（ＶＩＩ−ｃ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩ−ａ）−（ＶＩＩＩ−ｃ）、（ＩＸ）または（ＩＸ−ａ）−（ＩＸ−ｃ）のいずれかの糖類を免疫原性担体と接合させて、それらの糖類と比較して免疫原性が増強された接合体をつくりだす。
【０１７６】
そうした接合体は、一般式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）−（Ｉ−ｃ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）−（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）−（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）−（ＩＶ−ｇ）、（Ｖ）、（Ｖ−ａ）−（Ｖ−ｃ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）−（ＶＩ−ｃ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩ−ａ）−ＶＩＩ−ｃ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩ−ａ）−（ＶＩＩＩ−ｃ）、（ＩＸ）または（ＩＸ−ａ）−（ＩＸ−ｃ）の少なくとも１つの合成糖類と、一般式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）−（Ｉ−ｃ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）−（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）−（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）−（ＩＶ−ｇ）、（Ｖ）、（Ｖ−ａ）−（Ｖ−ｃ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）−（ＶＩ−ｃ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩ−ａ）−ＶＩＩ−ｃ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩ−ａ）−（ＶＩＩＩ−ｃ）、（ＩＸ）または（ＩＸ−ａ）−（ＩＸ−ｃ）の少なくとも１つの合成糖類が共有結合で結合された免疫原性担体で構成されている。
【０１７７】
驚くべきことに、本発明による接合体で免疫化を行うと、本発明による糖類の炭水化物部分に特異的に力価の抗体が形成されることが見いだされた。こうした抗体は自然のＳＰ−８多糖類と交差反応してオプソニン作用及び殺菌活性を示し、従って、肺炎連鎖球菌血清タイプ８バクテリアに対する防御性を発生させる。本発明の接合体によって放出されるモノクローナル抗体と肺炎連鎖球菌血清タイプ８バクテリアの間の相互作用は特殊なもので、それは、抗体アイソタイプ制御あるいは肺炎連鎖球菌血清タイプ１あるいは３に対しては結合は観察できないからである（図８、９及び１０参照）
本明細書の文脈においては、「免疫原性担体」とは糖類に接合されて、その糖自体と比較して免疫原性が増強された接合体を形成する構造と定義される。従って、一般式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）−（Ｉ−ｃ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）−（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）−（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）−（ＩＶ−ｇ）、（Ｖ）、（Ｖ−ａ）−（Ｖ−ｃ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）−（ＶＩ−ｃ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩ−ａ）−（ＶＩＩ−ｃ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩ−ａ）−（ＶＩＩＩ−ｃ）、（ＩＸ）または（ＩＸ−ａ）−（ＩＸ−ｃ）で示される糖類の上記免疫原性担体との接合は、上記免疫原性担体に対する免疫応答を起こさずに、一般式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）−（Ｉ−ｃ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）−（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）−（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）−（ＩＶ−ｇ）、（Ｖ）、（Ｖ−ａ）−（Ｖ−ｃ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）−（ＶＩ−ｃ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩ−ａ）−（ＶＩＩ−ｃ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩ−ａ）−（ＶＩＩＩ−ｃ）、（ＩＸ）または（ＩＸ−ａ）−（ＩＸ−ｃ）で示される糖類に対する免疫応答を刺激するという効果を有している。
【０１７８】
好ましい免疫原性担体は免疫調整能力を有する担体タンパク質あるいは糖スフィンゴ脂質である。当業者にとっては、担体タンパク質は以下などを含む、あるいはそれらから構成される群から選ばれたタンパク質である：ジフテリア・トキソイド、変異したジフテリア・トキソイド、修正されたジフテリア・トキソイド、変異修正させたジフテリア・トキソイド、破傷風トキソイド、修正破傷風トキソイド、変異破傷風トキソイド、外膜タンパク質（ＯＭＰ）、仔ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、キイホール・リンペット・ヘモシアニン（ＫＬＨ）あるいはコレラ・トキソイド（ＣＴ）。本明細書で使われている「トキソイド」という用語は細菌性毒素（通常はエキソトキシンと表現される）を指しており、それらの毒性は化学（ホルマリン）あるいは熱処理で非活性化あるいは抑制されているが、
その他の特性、通常は免疫原性は維持されている。本明細書で用いられている変異トキソイドとは遺伝子組み換え細菌性毒素のことであり、野生タイプのアミノ酸配列を修正して、毒性を低くするかあるいは無毒性にされている。そうした変異は１つか２つのアミノ酸の置換でもよい。そうした変異トキソイドはその表面で相互接続分子の機能基Ｙと反応して修正トキソイドを提供することができる機能性を有している。そうした機能性は当業者には知られており、還元剤の存在の下で活性化されたエステル、イソシアネート基あるいはアルデヒドと反応することができるリシン残基の主要アミノ機能性、カルボジイミドによって活性化させることがきるグルタメートやアスパルテートのカルボキシレート機能性、あるいはシステイン残基のチオール機能性などがあるが、これらの機能性だけに限定されるものではない。
【０１７９】
活性化エステルは、Ｎ−（ｙ−マレイミドブチリロキシ）スルフォサクシンイミド・エステル（スルホ−ＧＭＢＳ）、サクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート（スルホ−ＳＩＡＢ）、サクシンイミジル−３−（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）、ジサクシンイミジル・グルタネート（ＤＳＧ）、ジサクシンイミジル・アジペート（ＤＳＡ）、２−ピリジルジチオール−テトラオキサテトラデカン−Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド（ＰＥＧ−４−ＳＰＤＰ）、ビス−（４−ニトロフェニル）アジペート及びビス−（４−ニトロフェニル）サクシネートなどがあるが、これらに限定されない（図１参照）。好ましい活性化エステルは、ジサクシンイミジル・アジペート（ＤＳＡ）、ジサクシンイミジル・グルタネート（ＤＳＧ）、ビス−（４−ニトロフェニル）アジペート及びビス−（４−ニトロフェニル）サクシネートである。
【０１８０】
担体タンパク質上のシステイン残基は対応するデヒドロアラニンに変換することができ、これをさらに適切な中間接続分子と反応させて、その表面に中間接続分子の機能基Ｘを有する修正担体タンパク質を提供することができる。
【０１８１】
本明細書に述べられている本発明の糖類は機能性としてリシン残基の主要アミン機能性を示す非毒性変異ジフテリア毒素ＣＲＭ１９７に接合されるのが特に好ましい。
ＣＲＭ１９７のような野生タイプのジフテリア毒素は、５３５個のアミノ酸（５８ｋＤ）の単一ポリペプチド鎖であり、この単一ポリペプチド鎖は、グルタミン酸をグリシンに置換した単一のアミノ酸置換を有するジスルフィド架橋によって連結された２つのサブユニットで構成される。Ｐｒｅｖｎａｒなど多数の公認の混合ワクチンにおいて、それは担体タンパク質として利用されている。
【０１８２】
このように、本発明の好ましい実施形態では、上記担体タンパク質は、その表面においてリシン残基の主要アミノ機能性を示し、リシン残基の主要アミノ機能性は、中間接続分子の機能基Ｙと反応して中間接続分子の前記機能基Ｘを表面上に有する修正担体タンパク質を提供することができ、それはリンカーの端末アミノ基と反応して、本発明の糖類を機能化することができる。
【０１８３】
中間接続分子の上記機能基Ｘは、マレイミド、α−ヨードアセチル、α−ブロモアセチル、及びＮ−ヒドロキシサクシンイミド・エステル（ＮＨＳ）、アルデヒド、イミドエステル、カルボキシル酸、アルキル・スルホネート、スルホニル塩化物、エポキシド、無水物、炭酸塩などを含む、あるいはそれらから構成される群から選択される。（図２参照）
一般式（Ｘ）の接合体が好ましく、
［Ｖ＊−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｏ−Ｌ−ＮＨ−Ｗ］ｍ−ＣＲＭ１９７（Ｘ）
この場合、ｍは２から１８の間であり、
−Ｗ−は以下から選択され、
【０１８４】
【化３４】
0006524218.tif 000035
【０１８５】
ａは１から１０までの整数であり、
ｂは１から４の整数であり、
Ｖ＊、Ｕｘ＋３、Ｕｘ＋２、Ｕｘ＋１、Ｕｘ、ｘ、Ｌは本明細書で定義されている意味を有する。
【０１８６】
好ましくは、リンカー−Ｌ−は、−Ｌａ−、−Ｌａ−Ｌｅ−、Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−及びＬａ−Ｌｄ−Ｌｅ−から選択され、
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）ｏ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｂ−は、−Ｏ−を表わし、
−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＦ２）ｑ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−、及び−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＦ２）ｐ１−、−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−及び−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され、
ｏ、ｑ、ｐ１及びｐ２は相互に無関係に１、２、３、４、５及び６から選択される整数である。
【０１８７】
また、−Ｗ−は、以下を表すのが好ましく、
【０１８８】
【化３５】
0006524218.tif 000036
【０１８９】
さらにａが、２，３，４，５及び６から選択される整数であることが特に好ましい。
従って、一般式（Ｘ）の接合体で、この場合、
リンカー−Ｌ−は、−Ｌａ−、−Ｌａ−Ｌｅ−、Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−及びＬａ−Ｌｄ−Ｌｅ−から選択され、
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）ｏ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｂ−は、−Ｏ−を表わし、
−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＦ２）ｑ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２
Ｈ４−、及び−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＦ２）ｐ１−、−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−及び−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され、
ｏ、ｑ、ｐ１及びｐ２は相互に無関係に１、２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
−Ｗ−は、以下を表すのが好ましく、
【０１９０】
【化３６】
0006524218.tif 000037
【０１９１】
さらにａが、２，３，４，５及び６から選択される整数であることが特に好ましい。
さらにより好ましいのは一般式（Ｘ）の接合体で、この場合、ｘは３を表す。従って、一般式（ＸＩ）の接合体で、
［Ｖ＊−Ｕ６−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｏ−Ｌ−ＮＨ−Ｗ］ｍ−ＣＲＭ１９７
（ＸＩ）
この場合、ｍは２から１８の間であり、
−Ｗ−は以下から選択され、
【０１９２】
【化３７】
0006524218.tif 000038
【０１９３】
ａは１から１０までの整数であり、
ｂは１から４の整数であり、
【０１９４】
【化３８】
0006524218.tif 000039
【０１９５】
Ｖ＊―はＨ−、Ｈ−Ｕ３−あるいはＨ−Ｕ４−Ｕ３−を示し、
Ｒ＃は−ＣＯＯＨあるいは−ＣＨ２ＯＨを示し、そして
Ｌはａリンカーであることが特に好ましい。
【０１９６】
好ましくは、一般式（ＸＩ）では、
リンカー−Ｌ−は、−Ｌａ−、−Ｌａ−Ｌｅ−、−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−及び−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−から選択され、
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）ｏ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｂ−は、−Ｏ−を表わし、
−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＦ２）ｑ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−、及び−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＦ２）ｐ１−、−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−及び−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され、
ｏ、ｑ、ｐ１及びｐ２は相互に無関係に１、２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
−Ｗ−は、以下を表すのが好ましく、
【０１９７】
【化３９】
0006524218.tif 000040
【０１９８】
さらにａが、２，３，４，５及び６から選択される整数である。
特に好ましいのは一般式（Ｘ）あるいは（ＸＩ）の接合体で、
−Ｌ−は−（ＣＨ２）ｏ−を示し、
ｏは、２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
−Ｗ−は、以下を表すのが好ましく、
【０１９９】
【化４０】
0006524218.tif 000041
【０２００】
さらにａが、２，３，４，５及び６から選択される整数である。
好ましくはｍは２から１８の範囲であり、さらに好ましくは５から１５の範囲、さらに好ましくは８から１２の範囲である。
【０２０１】
本発明の別の側面では、一般式（ＸＩＩ）の接合体に関し、
［Ｓ＊−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｓ−Ｏ−Ｌ−ＮＨ−Ｗ］ｍ−ＣＲＭ１９７
（ＸＩＩ）
この場合、ｍは２から１８の範囲であり、
−Ｗ−は、以下から選択され、
【０２０２】
【化４１】
0006524218.tif 000042
【０２０３】
さらに、ａは、１から１０までの整数であり、
ｂは、１から４までの整数であり、
【０２０４】
【化４２】
0006524218.tif 000043
【０２０５】
Ｒ＃は、−ＣＯＯＨ−あるいは−ＣＨ２ＯＨを表わし、
−Ｓ−は、−Ｓａ−あるいは−Ｓｂ−を表わし、
−Ｓａ−は、−（Ｕ５）ｎ１−、−（Ｕ５−Ｕ４）ｎ２−あるいは−（Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３）ｎ３−を表わし、
−Ｓｂ−は、−（Ｕ２）ｎ１−、−（Ｕ２−Ｕ５）ｎ２−あるいは−（Ｕ２−Ｕ５−Ｕ４）ｎ３−を表わし
Ｓ＊−は、Ｓ＊ａ  −あるいはＳ＊ｂ− を表わし、
Ｓ＊ａ  −は、Ｈ−（Ｕ３）ｎ４−、あるいはＨ−（Ｕ４−Ｕ３）ｎ５−を表わし、
Ｓ＊ｂ  −は、Ｈ−（Ｕ２）ｎ４−、Ｈ−（Ｕ３−Ｕ２）ｎ５−、あるいはＨ−（Ｕ４−Ｕ３−Ｕ２）ｎ６−  を表わし、
ｎ１、ｎ２、ｎ３、ｎ４、ｎ５、及びｎ６は、０及び１から選択され、
Ｌはリンカーであるが、以下のことを前提にしている。
−Ｓ−が−Ｓａ−を示す場合、Ｓ＊−はＳ＊ａ  −を表わし、
−Ｓ−が−Ｓｂ−を示す場合、Ｓ＊−はＳ＊ｂ  −を表わし、
ｎ１＝１であれば、ｎ６＝０であり、
ｎ２＝１であれば、ｎ５＝ｎ６＝０であり、
ｎ３＝１であれば、ｎ４＝ｎ５＝ｎ６＝０であり、
ｎ４＝１であれば、ｎ３＝０であり、
ｎ５＝１であれば、ｎ２＝ｎ３＝０であり、
ｎ６＝１であれば、ｎ１＝ｎ２＝ｎ３＝０である。
【０２０６】
さらに好ましい接合体は、一般式（ＸＩＩＩ）  の接合体で、
［Ｓｂ＊−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｓｂ−Ｏ−Ｌ−ＮＨ−Ｗ］ｍ−ＣＲＭ１９７ 
（ＸＩＩＩ）
この場合、ｍは２から１８の範囲であり、
−Ｗ−は、以下から選択され、
【０２０７】
【化４３】
0006524218.tif 000044
【０２０８】
さらに、ａは、１から１０までの整数であり、
ｂは、１から４までの整数であり、
【０２０９】
【化４４】
0006524218.tif 000045
【０２１０】
Ｒ＃は、−ＣＯＯＨ−あるいは−ＣＨ２ＯＨを表わし、
−Ｓｂ−は、−（Ｕ２）ｎ１−、−（Ｕ２−Ｕ５）ｎ２−あるいは−（Ｕ２−Ｕ５−Ｕ４）ｎ３−を表わし
Ｓ＊ｂ  −は、Ｈ−（Ｕ２）ｎ４−、Ｈ−（Ｕ３−Ｕ２）ｎ５−、あるいはＨ−（Ｕ４−Ｕ３−Ｕ２）ｎ６−  を表わし、
ｎ１、ｎ２、ｎ３、ｎ４、ｎ５、及びｎ６は、０及び１から選択され、
Ｌはリンカーであるが、以下のことを前提にしている。
ｎ１＝１であれば、ｎ６＝０であり、
ｎ２＝１であれば、ｎ５＝ｎ６＝０であり、
ｎ３＝１であれば、ｎ４＝ｎ５＝ｎ６＝０であり、
ｎ４＝１であれば、ｎ３＝０であり、
ｎ５＝１であれば、ｎ２＝ｎ３＝０であり、
ｎ６＝１であれば、ｎ１＝ｎ２＝ｎ３＝０である。
【０２１１】
好ましくは、リンカー−Ｌ−は、−Ｌａ−、−Ｌａ−Ｌｅ−、−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−及び−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−から選択され、
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）０−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｂ−は、−Ｏ−を表わし、
−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＦ２）ｑ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−、及び−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＦ２）ｐ１−、−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−及び−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され、
ｏ、ｑ、ｐ１及びｐ２は相互に無関係に１、２、３、４、５及び６から選択される整数である。
【０２１２】
また−Ｗ−は、以下を表すのが好ましく、
【０２１３】
【化４５】
0006524218.tif 000046
【０２１４】
さらにａが、２，３，４，５及び６から選択される整数であることが特に好ましい。
従って、一般式（ＸＩＩ）あるいは（ＸＩＩＩ）の接合体では、
リンカー−Ｌ−は、−Ｌａ−、−Ｌａ−Ｌｅ−、−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−及び−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−から選択され、
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）０−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｂ−は、−Ｏ−を表わし、
−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＦ２）ｑ−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−、及び−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＦ２）ｐ１−、−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−及び−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され、
ｏ、ｑ、ｐ１及びＰ２は相互に無関係に１、２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
また、−Ｗ−が以下を表わし、
【０２１５】
【化４６】
0006524218.tif 000047
【０２１６】
さらに、ａが２、３、４、５、及び６から選択される整数であることが特に好ましい。
一般式（ＸＩＩ）あるいは（ＸＩＩＩ）の接合体が特に好ましく、
この場合、リンカー−Ｌ−は−（ＣＨ２）ｏ−を表わし、
ｏは、２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
また、−Ｗ−が以下を表わし、
【０２１７】
【化４７】
0006524218.tif 000048
【０２１８】
さらに、ａが２、３、４、５、及び６から選択される整数であることが特に好ましい。
さらにより好ましくは、一般式（Ｘ−ａ）の接合体で、
［Ｖ＊−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｏ−Ｌａ−Ｌｅ−ＮＨ−Ｗ］ｍ−ＣＲＭ１９７      （Ｘ−ａ）
この場合、
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）０−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｅ−は、−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＨ２）ｐ１−及び−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され、
Ｖ＊、ｘ、ｍ、ｏ、ｐ１、ｐ２、Ｕｘ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２、Ｕｘ＋３及びＣＲＭ１９７は、本明細書で定義する意味を有する。
【０２１９】
また、さらに好ましくは、一般式（ＸＩ−ａ）の接合体で、
［Ｖ＊−Ｕ６−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｏ−Ｌａ−Ｌｅ−ＮＨ−Ｗ］ｍ−ＣＲＭ１９７    （ＸＩ−ａ）
この場合、
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）０−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｅ−は、−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＨ２）ｐ１−及び−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され、
Ｖ＊、ｘ、ｍ、ｏ、ｐ１、ｐ２、Ｕ６、Ｕ５、Ｕ４、Ｕ３及びＣＲＭ１９７は、本明細書で定義する意味を有する。
【０２２０】
また、より好ましくは、一般式（ＸＩＩ−ａ）の接合体で、
［Ｓ＊−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｓ−Ｏ−Ｌａ−Ｌｅ−ＮＨ−Ｗ］ｍ−ＣＲＭ１９７ 
（ＸＩＩ−ａ）
この場合、
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）o−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｅ−は、−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＨ２）ｐ１−及び−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され、
Ｓ＊、Ｓ、ｍ、ｏ、ｐ１、ｐ２、Ｕ５、Ｕ４、Ｕ３とＣＲＭ１９７は、本明細書で定義する意味を有する。
【０２２１】
また、より好ましくは、一般式（ＸＩＩＩ−ａ）の接合体で、
［Ｓｂ＊−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｓｂ−Ｏ−Ｌａ−Ｌｅ−ＮＨ−Ｗ］ｍ−ＣＲＭ１９７ 
（ＸＩＩＩ−ａ）
この場合、
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）o−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ−ＣＨ２−から選択され、
−Ｌｅ−は、−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＨ２）ｐ１−及び−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され、
Ｓｂ＊、Ｓｂ、ｍ、ｏ、ｐ１、ｐ２、Ｕ５、Ｕ４、Ｕ３とＣＲＭ１９７は、本明細書で定義する意味を有する。
【０２２２】
さらに好ましくは、一般式（Ｘ−ｂ）  の接合体で、
［Ｖ＊−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｏ−Ｌａ−ＮＨ−Ｗ］ｍ−ＣＲＭ１９
７ 
（Ｘ−ｂ）
この場合、
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）o１−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ２−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ２−ＣＨ２−から選択され、
ｏ１は２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
ｏ２は１、２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
Ｖ＊、ｘ、ｍ、Ｕｘ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２、Ｕｘ＋３及びＣＲＭ１９７は、本明細書で定義する意味を有する。
【０２２３】
さらに好ましくは、一般式（ＸＩ−ｂ）の接合体で、
［Ｖ＊−Ｕ６−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｏ−Ｌａ−ＮＨ−Ｗ］ｍ−ＣＲＭ１９７ 
（ＸＩ−ｂ）
この場合、
−Ｌａ−は−（ＣＨ２）o１−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）o２−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）o２−ＣＨ２−を表わし、
ｏ１は２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
ｏ２は１、２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
Ｖ＊、ｘ、ｍ、Ｕ６、Ｕ５、Ｕ４、Ｕ３及びＣＲＭ１９７は、本明細書で定義する意味を有する。
【０２２４】
また、さらに好ましくは、一般式（ＸＩＩ−ｂ）の接合体で、
［Ｓ＊−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｓ−Ｏ−Ｌａ−ＮＨ−Ｗ］ｍ−ＣＲＭ１９７ 
（ＸＩＩ−ｂ）
この場合、
−Ｌａ−は−（ＣＨ２）ｏ１−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ２−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ２−ＣＨ２−を表わし、
ｏ１は２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
ｏ２は１、２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
Ｓ＊、Ｓ、ｍ、Ｕ５、Ｕ４、Ｕ３及びＣＲＭ１９７は、本明細書で定義する意味を有する。
【０２２５】
さらに好ましくは、一般式（ＸＩＩＩ−ｂ）の接合体で、
［Ｓｂ＊−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｓｂ−Ｏ−Ｌａ−ＮＨ−Ｗ］ｍ−ＣＲＭ１９７
（ＸＩＩＩ−ｂ）
この場合、
−Ｌａ−は−（ＣＨ２）ｏ１−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ２−Ｃ２Ｈ４−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｏ２−ＣＨ２−を表わし、
ｏ１は２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
ｏ２は１、２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
Ｓｂ＊、Ｓｂ、ｍ、Ｕ５、Ｕ４、Ｕ３及びＣＲＭ１９７は、本明細書で定義する意味を有する。
【０２２６】
さらに好ましくは、一般式（Ｘ−ｃ）の接合体で、
［Ｖ＊−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ−Ｏ−（ＣＨ２）ｏ−ＮＨ−Ｗ］ｍ−ＣＲＭ１９７
（Ｘ−ｃ）
この場合、
ｏは、２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
Ｖ＊、ｘ、ｍ、Ｕｘ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２、Ｕｘ＋３及びＣＲＭ１９７は、本明細書で定
義する意味を有する。
【０２２７】
さらに好ましくは、一般式（ＸＩ−ｃ）の接合体で、
［Ｖ＊−Ｕ６−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｏ−（ＣＨ２）ｏ−ＮＨ−Ｗ］ｍ−ＣＲＭ１９７ 
（ＸＩ−ｃ）
この場合、
ｏは、２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
Ｖ＊、ｘ、ｍ、Ｕ６、Ｕ５、Ｕ４、、及びＵ３とＣＲＭ１９７は、本明細書で定義する意味を有する。
【０２２８】
また、さらに好ましくは、一般式（ＸＩＩ−ｃ）の接合体で、
［Ｓ＊−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｓ−Ｏ−（ＣＨ２）ｏ−ＮＨ−Ｗ］ｍ−ＣＲＭ１９７
（ＸＩＩ−ｃ）
この場合、
ｏは、２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
Ｓ＊、Ｓ、ｍ、Ｕ５、Ｕ４、Ｕ３及びＣＲＭ１９７は、本明細書で定義する意味を有する。
また、さらに好ましくは、一般式（ＸＩＩＩ−ｃ）の接合体で、
［Ｓｂ＊−Ｕ５−Ｕ４−Ｕ３−Ｓｂ−Ｏ−（ＣＨ２）ｏ−  ＮＨ−Ｗ］ｍ−ＣＲＭ１９７
（ＸＩＩＩ−ｃ）
この場合、
ｏは、２、３、４、５及び６から選択される整数であり、
Ｓｂ＊、Ｓｂ、ｍ、Ｕ５、Ｕ４、Ｕ３及びＣＲＭ１９７は、本明細書で定義する意味を有する。  
【０２２９】
別の実施例で、上記の免疫原性担体は好ましくは免疫調節的な性質を持つスフィンゴ糖脂質であり、より好ましくは、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２−ヘキサコサノイルアミノオクタデカン−３−４−ジオールである。本明細書で用いられる免疫調節的な性質を持つスフィンゴ糖脂質という用語は、標的の抗原に対しての免疫系の応答を刺激することができるが、それ自体では上記で定義されたような免疫性を与えることはしない適切なスフィンゴ糖脂質である。
【０２３０】
本明細書で用いられるスフィンゴ糖脂質とは、スフィンゴ脂質にα位結合で結合した炭水化物（多糖体）構成部分を含んでいる化合物のことである。好ましくは、この炭水化物部分はヘキサピラノースであり、最も好ましくは、α−Ｄ−ガラクトピラノースである。当業者には、スフィンゴ脂質とはアミド結合を通じて脂肪酸に接続されているＣ１８アミノアルコールを含んだ一連の脂質であることは自明であろう。このＣ１８アミノアルコールは、好ましくは水酸基とモノ、ジ、あるいは多数の置換がされているのが好ましい。Ｃ１８アミノアルコールはフィトスフィンゴシンであることが特に好ましい。この脂肪酸は、好ましくは、炭素の個数が１６から２８個の範囲、より好ましくは、１８から２６個の範囲の飽和アルキル鎖を有するモノカルボン酸である。免疫調節的な性質を有するスフィンゴ糖脂質には、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２−ヘキサコサノイルアミノオクタデカン−３，４−ジオールがあり、これはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞によリナチュラルキラー（ＮＴ）活性とサイトカイン生産を刺激することができ、ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗癌活性を示す。（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ，  １９９８，９５，５６９０）。ただし、これは上に限定されるものではない。
【０２３１】
免疫調節的な性質を有するスフィンゴ糖脂質を有する本発明による糖類の接合体は、熱に対して安定しているという利点を有している。接合に適するようにするためには、免疫調節的性質を有するスフィンゴ糖脂質上に、１つの機能性が導入される。この機能性は本発明のリンカーの端末アミノ基と直接に反応して、上記糖類の接合体をもたらしたり、あるいは中間接続分子の機能基Ｙと反応して免疫調整的属性を有する修正スフィンゴ糖脂質をもたらす傾向を有している。
【０２３２】
好ましくは、上記の機能性は免疫調整的特性を有するスフィンゴ糖脂質の炭水化物部分のＣ６に導入される。このようにして、免疫調整的特性を有するスフィンゴ糖脂質は１つの機能性を持って機能化され、これは上記糖類の端末アミノ基あるいは中間接続分子の機能基Ｙと反応する傾向を有している。１つの機能性は、アミノ基と反応する傾向があり、活性化エステル、イソシアネート基、アルデヒド、エポキシド、イミドエステル、カルボン酸、アルキルスルホン酸、塩化スルホニルなどを含むが、これらに限らない。１つの機能性は、中間接続分子の機能基Ｙと反応する傾向があるので、中間接続分子の機能基Ｘをもつ免疫調節特性を有する修正スフィンゴ糖脂質を提供するために、１つの機能性は、アミン、アルコール、チオール、活性化エステル、イソシアネート基、アルデヒド、エポキシド、ビニル、イミドエステル、カルボン酸、アルキルスルホン酸、塩化スルホニル、ビニル基、アルキニル基、及びアジド基を対象とするが、それだけには限定されない。
【０２３３】
好ましくは、免疫調節特性を有するスフィンゴ糖脂質の炭水化物部分のＣ−６位に導入された機能性は、アミン、チオール、アルコール、カルボン酸、ビニル、マレイミド、α−ヨードアセチル、α−ブロモアセチル、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド・エステル（ＮＨＳ）、２−ピリジルジチオールなどを含む、あるいはそれらから構成される群から選択される。
【０２３４】
中間接続分子の上記機能基Ｘは、マレイミド、α−ヨードアセチル、α−ブロモアセチル、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド・エステル（ＮＨＳ）、アルデヒド、カルボン酸、エポキシド、スルホン酸アルキル、塩化スルホニル、無水物、炭酸塩などを含む、あるいはそれらから構成される群から選択される。
【０２３５】
好ましくは、ジ（Ｎ−サクシンイミジル）アジピン酸あるいはビス（４−ニトロフェニル）アジピン酸を最初に一次アミノ基を有する合成糖類と反応させる。次に、活性化された糖類をスフィンゴ糖脂質で濃縮して、接合体（図３（Ｂ））を提供するために、端末アミノ機能性を有する中間接続分子によりＣ−６位で修飾される。
【０２３６】
本明細書で用いられる場合、「中間接続分子」とは機能基Ｘと機能基Ｙを含んでいる二重機能性分子を意味しており、この場合、機能基Ｘはリンカー−Ｌ−上の端末アミノ基と反応することが出来、機能基Ｙは免疫原性担体あるいは固体支持体上に存在している機能性と反応することができる。
【０２３７】
Ｏ−Ｌ−ＮＨ２基の窒素原子を介して免疫原性担体と共有結合で連結あるいは結合している一般式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）−（Ｉ−ｃ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）−（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）−（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）−（ＩＶ−ｇ）、（Ｖ）、（Ｖ−ａ）−（Ｖ−ｃ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）−（ＶＩ−ｃ）  、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩ−ａ）−（ＶＩＩ−ｃ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩ−ａ）−（ＶＩＩＩ−ｃ）、（ＩＸ）、あるいは（ＩＸ−ａ）−（ＩＸ−ｃ）の糖類、言い換えれば、免疫原性担体を有する一般式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）−（Ｉ−ｃ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）−（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）−（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）−（ＩＶ−ｇ）、（Ｖ）、（Ｖ−ａ）−（Ｖ−ｃ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）−（ＶＩ−ｃ）
、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩ−ａ）−（ＶＩＩ−ｃ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩ−ａ）−
（ＶＩＩＩ−ｃ）、（ＩＸ）、あるいは（ＩＸ−ａ）−（ＩＸ−ｃ）の糖類との反応によって得られた接合体、特に、（Ｘ）、（Ｘ−ａ）−（Ｘ−ｃ）、（ＸＩ）、（ＸＩ−ａ）−（ＸＩ−ｃ）、（ＸＩＩ）、（ＸＩＩ−ａ）−（ＸＩＩ−ｃ）、（ＸＩＩＩ）、（ＸＩＩＩ−ａ）−（ＸＩＩＩ−ｃ）の接合体はヒト及び／又は動物宿主において免疫応答を発現させるので、細菌に起因する疾病の予防、及び／又は治療に役立ち、莢膜多糖類に以下の糖フラグメントの１つを含む：
α−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇａｌｐ−（１→４）−β−Ｄ−ＧｌｃＡｐ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃｐ
β−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇａｌｐ−（１→４）−β−Ｄ−ＧｌｃＡｐ
β−Ｄ−ＧｌｃＡｐ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｃｌｐ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇａｌｐ
α−Ｄ−Ｇａｌｐ−（１→４）−β−Ｄ−ＧｌｃＡｐ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃｐ−（１→４）−α−Ｄ−Ｇｌｃｐ
好ましくは、その莢膜多糖類内に上記の糖フラグメントの１つを含んでいる細菌は肺炎性連鎖球菌血清タイプ８である。肺炎性連鎖球菌血清タイプ８に関連した疾病には、肺炎、髄膜炎、中耳炎、慢性気管支炎の細菌性あるいは急性激化、副鼻腔炎、リュウマチ及び結膜炎などがある。
【０２３８】
薬学的組成
本発明の１つの側面は薬学的組成、特に、本発明による少なくとも１つの合成糖類及び／又は薬学的に許容できるその塩を有するワクチン、及び／又は、Ｏ−Ｌ−ＮＨ２の窒素原子を通じて免役原性担体に、薬学的に許容されるアジュバアント、寒冷保護剤、凍結保護剤、賦形剤及び／又は希釈剤のうちの少なくとも１つと共に共有結合された本発明の糖類を含んだ接合体に関係している。
【０２３９】
本発明の別の側面で、上記の薬学的組成物あるいはワクチンは、莢膜多糖類及び／又は莢膜多糖類フラグメント、及び／又は肺炎連鎖球菌血清タイプ４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ及び２３Ｆ、より好ましくは血清タイプ１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ及び２３Ｆ、さらに好ましくは血清タイプ１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ｆ、１９Ａ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ及び３３Ｆなどを含む、あるいはそれらから構成される群から選択される肺炎連鎖球菌のたんぱく質接合体で構成されている。
【０２４０】
このワクチンは懸濁液の形態で調製することもできるし、凍結乾燥してもよい。懸濁液形態は凍結して保存しておいてもよい。凍結乾燥の場合、１つか複数の安定剤を付加するのが好ましい。ワクチン化はどの年齢段階でも可能である。このワクチンは皮下注射でも、スプレイでも、注射でも、経口でも、眼球経由でも、気管経由でも、鼻腔経由でも投与することができる。ヒトや動物に対して投与される本発明の量と投与方式は、特定の抗原、アジュバント（存在しているのであれば）、年齢、性別、体重、人種、特定の動物やヒトの宿主の健康状態、あるいは投与経路などの要因を考慮に入れて薬学及び獣医学の分野で、通常の技術に通じている人々に知られている標準的な技術に従って決められる。
【０２４１】
本発明の別の側面は、ヒト及び／又は動物の宿主における肺炎性連鎖球菌に対して免疫応答を誘発する方法に向けられており、この方法は、上記のヒト及び／又は動物宿主に対して、−Ｏ−Ｌ−ＮＨ２基及び／又はその薬学的組成物の混合物の窒素原子を介して免疫原性担体に共有結合で連結された本発明の糖類及び／又は塩を含む接合体を投与するステップを含んでいる。本発明に従って、ヒトや動物の宿主における肺炎性連鎖球菌によって引き起こされる疾病を治療あるいは予防するための方法は、少なくとも１つの本発明による糖類、及び／又はその塩、及び／又は−Ｏ−Ｌ−ＮＨ２基の窒素原子を介して免疫原性
担体に共有結合で連結された本発明の糖類を含んでいる接合体をヒト及び／又は動物宿主に投与するステップを含んでいる。
【０２４２】
静脈注射及び経口投与が好ましい。そうした組成物は適切な担体、希釈剤、滅菌水、生理食塩水、グルコースなどと混ぜ合わせていてもよい。例えば、本発明の凍結乾燥された糖類をヒト及び／又は動物宿主に投与するのに適した物質を得るために液体成分を用いて最終的に再構成することも可能である。その再構成は典型的には使用箇所で行われるであろう。従って、本発明の糖類と水中油型エマルジョンアジュバントあるいはアジュバントの緩衝液を、使用時に最終的な形態を準備するために、パッケージ化された、あるいは分散ワクチンキットに入れて個別に保管することもできる。２つの容器を含んだキットの場合、１つには再構成のための液体を入れており、二番目の容器には凍結乾燥された物質を入れておくことになるだろう。安定性を確保するために、本発明の冷凍乾燥された成分はラクトース、スクロース及び／又はマニトール、あるいはそれらの混合物などの安定剤を入れておいてもよい。スクロースとマンニトールの混合物を用いると、乾燥プロセスがスピードアップされる。冷凍乾燥された成分は塩化ナトリウムを含んでいてもよい。冷凍乾燥された物質内の可溶性成分は再構成後もその成分中にとどまるから、最終的な液体ワクチンはラクトース及び／又はスクロースを含むことになる。
【０２４３】
本発明のワクチンの形成は当業者に周知の方法を用いて行うことができる。明らかに、適切な担体とその他の添加物の選択は、正確な投与経路と特定の投与形態の性状に依存することになるであろう。
【０２４４】
本発明のワクチン組成物は１つかそれ以上のアジュバントを含んでいてもよい。本明細書で用いられる「アジュバント」という用語は免疫アジュバント、つまり、そのワクチン内に含まれている任意の抗原に対する免疫応答を強化するとともにそれに対して抗原的には関係性がなくそのワクチンの効果を修正あるいは補強するワクチン組成物内で用いられる物質を指している。当業者にとっては、典型的に認められている免疫アジュバントの例としては、オイルエマルジョン（例えば、フロイドアジュバント）、サポニン類、アルミニウムあるいはカルシウムの塩（例えばアルム）、非ヨード性ブロック・ポリマー表面活性剤、α−ガラクトシルセラミドその他があり、上に列挙したもののみに限定されることはない。
【０２４５】
本発明のワクチンは、投与経路や望ましい調剤形態に応じて、加湿あるいは乳化剤、ｐＨ緩衝剤、ゲル化あるいは粘性増加用添加物、保存剤、香料、色素などの補助的な物質を含むこともできる。本発明の組成物は、特に複数の投与形態でパッケージされる場合、抗菌剤を含んでいてもよい。チオメルサル及び２−フェノキシエタノールなどの抗菌剤がワクチンでは一般的に使用されているが、水銀非含有保存剤を用いるか、あるいは保存剤は用いないのが好ましい。
【０２４６】
さらに、本発明のワクチンは温度保護剤を含んでいてもよい。その例としては、グリセリン、プロピレン・グリコール、あるいはポリエチレン・グリコール（ＰＥＧ）などがある。
【０２４７】
本発明の医薬品組成物は、液体製剤、例えば、等張水溶液、懸濁液、エマルジョン、あるいは目標のｐＨに調整することができる粘着性組成物などの形態で提供することができる。液体形状のために薬学的に許容される担体は水性あるいは非水性溶液、懸濁液、乳化剤あるいはオイルである。非水性溶剤の例としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、及びオレイン酸エチルのような注入可能な有機エステルがある。水性担体は水、アルコール性溶液、乳剤や懸濁液などを含み、食塩水及び緩衝液なども含まれる。
【０２４８】
再構成後の組成物のｐＨは好ましくは６から８の範囲であり、より好ましくは、６．５から７．５（例えば約７）の範囲である。本発明の組成物はトリス緩衝液、酢酸、グルタミン酸塩、酪酸塩、マレイン酸塩、酒石酸、リン酸塩、クエン酸塩、炭酸塩、グリシネート、ヒスチジン、グリシン、コハク酸、及びトリエタノールアミン緩衝液などの緩衝液を用いて保存することができる。従って、本発明の組成物は、緩衝液を含んでいるのが好ましい。上記の等張液は塩などのイオン性等張液であってもよいし、炭酸塩などのような非イオン性等張剤であってもよい。イオン性の等張剤の例は、例えば、ＮａＣｌ、ＣａＣｌ２、ＫＣｌ及びＭｇＣｌ２を含むが、これだけに限定されない。非イオン性等張剤の例はソルビトールやグリセロールを含むが、これらだけには限定されない。
【０２４９】
本発明の好ましい実施形態では、上記ワクチン組成物は、無菌液で、発熱因子非含有のリン酸緩衝生理食塩水として定型化され、保存剤は含んでいてもよいし、含んでいなくてもよい。
【０２５０】
薬学的に許容できる保存剤を、上記組成物の保存期間を増加させるために用いることが出来る。ベンジルアルコールが適しているが、例えば、パラベン、チオメロサール、クロロブタノール、あるいは塩化ベンザルアルコニウムを用いることもできる。上記保存剤の適切な濃度は全重量に対して０．０２％から２％の範囲であるが、選択された薬剤に応じて、濃度は適当に変更してもよい。
【０２５１】
本発明の薬学的組成物は一回の使用分を小ビンに入れて保存してもよいし、複数回の使用分をまとめて保存してもよいし、注射器に事前に充填しておいてもよい。
さらに好ましくは、上記の薬学組成物は凍結乾燥物あるいは液体緩衝液の形状で調製される。
【０２５２】
本発明のワクチンあるいは医薬品組成物は、通常知られている適切な投与量レベルで、通常の固体あるいは液体の担体あるいはその希釈物及び通常の薬学的につくられたアジュバントの形態で構成される。好ましい調剤及び形態は経口投与可能な形態で調製される。これらの投与可能な形態とは丸薬、錠剤、フィルム錠剤、コーティングされた錠剤、カプセル、粉末、及び沈殿物などである。経口投与形態以外の形態も可能である。この発明のワクチンあるいは医薬品組成物はどのような適切な手段で投与されてもよく、その手段には、上皮あるいは皮膚粘膜内層（口腔粘膜、直腸、子宮、上皮内層、腸管粘膜、鼻腔粘膜、及び腸粘膜）を通じての吸収による吸入、注射（静脈内、腹腔内、筋肉内、あるいは皮下）；経口、直腸、経皮、局所、皮内、胃内、皮内、子宮内、管内、鼻腔内、口腔内、経皮、舌下、あるいは薬学的技術において利用できるすべてのその他の手段で投与することができる。
【０２５３】
一般式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）−（Ｉ−ｃ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）−（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）−（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）−（ＩＶ−ｇ）、（Ｖ）、（Ｖ−ａ）−（Ｖ−ｃ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）−（ＶＩ−ｃ）  、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩ−ａ）−（ＶＩＩ−ｃ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩ−ａ）−  （ＶＩＩＩ−ｃ）、（ＩＸ）及び（ＩＸ−ａ）−（ＩＸ−ｃ）の合成糖類の少なくとも１つを含んでいる本発明のワクチンあるいは医薬品組成物、好ましくは糖類１０、１８、１９、２０、２１、２２、５５、５７、６０、及び６２、あるいは、薬学的に許容できるその塩、あるいは有効成分として-Ｏ−Ｌ−ＮＨ２基の窒素原子を介して免疫原性担体に共有結合で結合されている一般式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）−（Ｉ−ｃ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）−（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）−（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）−（ＩＶ−ｇ）、（Ｖ）、（Ｖ−ａ）−（Ｖ−ｃ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）−（ＶＩ−ｃ）  、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩ−ａ）−（ＶＩＩ−ｃ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩ−ａ）−（ＶＩＩＩ−ｃ）、（ＩＸ）及び（ＩＸ−ａ）−（ＩＸ−ｃ）の糖類を含んでいる接合体は
、意図されている投与形態に合わせて適宜選択される適切な担体物質、例えば、経口錠剤、カプセル（固体充填、半固体充填、あるいは液体充填）、組成用粉末、経口ゲル、エリキシル剤、分散可能な粒、シロップ、懸濁液等と混ぜ合わせ、さらに、通常の薬学的実施方法に従って典型的に投与される。例えば、錠剤やカプセルで経口投与するためには、その有効成分は、ラクトース、澱粉、スクロース、セルロース、マグネシウム、ステアリン酸塩，リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、タルク、マンニトール、エチルアルコール（液体形状）などの経口非毒性の薬学的に許容される不活性担体などと組み合わせることもできる。さらに、望ましければ、あるいは必要があれば、適切な結合剤、潤滑油、崩壊剤あるいは染色剤をその混合物に加えても差し支えない。粉末や錠剤には本発明による糖類を約５から約９５パーセントの割合で加えることもできる。
【０２５４】
適切な結合剤には澱粉、ゼラチン、天然の砂糖、トウモロコシ甘味剤、アカシア、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチル―セルロース、ポリエチレングリコール及び蝋などの天然及び合成ゴムなどがある。これらの投与形態で挙げてもよい潤滑剤には、ホウ酸、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどがある。崩壊剤は、澱粉、メチルセルロース、グアーガムなどがある。必要な場合は、甘未剤、芳香剤、保存剤を使用してもよい。上に使用した用語のなかのいくつか、つまり、崩壊剤、希釈剤、潤滑剤、結合剤などについては、以下により詳細に述べる。
【０２５５】
さらに付け加えると、本発明のワクチンあるいは医薬品組成物は、治療効果を最大にするために、１つあるいは複数の成分あるいは有効成分が制御された割合で放出されるように、持続した放出形態で定型化されてもよい。放出の持続に適した投与形態は、有効成分を含浸し崩壊速度が様々であるか、または放出が制御された高分子マトリックスを有する層を含む層状の錠剤、あるいは、そのような含浸またはカプセル化された多孔性高分子マトリックスを含むカプセルを含んでいる。
【０２５６】
液状形態製剤は、溶液、懸濁液、及び乳剤を含む。例として述べれば、非経口投与用の水あるいは水―プロピレングリコール溶液、あるいは、経口投与用の溶液、懸濁液あるいは乳化剤のための甘味剤及び乳白剤の添加などがある。液体形状の製剤も鼻腔内投与のための液体を含んでいてもよい。
【０２５７】
吸入に適したエアゾール製剤は溶液や粉末状態の固体を含んでいてもよく、これらは例えば窒素など、不活性圧縮ガスなどの薬学的に許容される担体との組み合わせで用いることができる。
【０２５８】
坐薬をつくるためには、ココアバターなどのような脂肪酸グリセリドの混合物のような低温度で溶融するワックスを最初に溶かして、攪拌や同様の混合法で有効成分を均一に分散する。溶融された均一の混合物は、適当なサイズの型に入れられて、冷却され、固化される。
【０２５９】
使用直前に経口あるいは非経口投与のための液体形状の製剤に変えられることを意図した固体形態調剤も含まれる。そうした液体形状は溶液、懸濁液、及び乳剤が含まれる。
本発明のワクチンあるいは医薬品組成物は経皮的に投与することもでき、本発明のワクチンあるいは医薬品組成物は、一般式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）−（Ｉ−ｃ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）−（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）−（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）−（ＩＶ−ｇ）、（Ｖ）、（Ｖ−ａ）−（Ｖ−ｃ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）−（ＶＩ−ｃ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩ−ａ）−（ＶＩＩ−ｃ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩ−ａ）−（ＶＩＩＩ−ｃ）、（ＩＸ）及び（ＩＸ−ａ）−（ＩＸ−ｃ）の合成糖類好ましくは糖類１０、１８、１９、２０、２１、２２、５５、５７、６０、及び６２−８０、あるいは、薬学的に許容できるその塩、あるいは-Ｏ−Ｌ−ＮＨ２基の窒素原子を介し
て共有結合で免疫原性担体に結合されている連結あるいは結合されている糖類を含んだ接合体の少なくとも１つを含んでいる。経皮的組成物はクリーム、ローション、エアロゾル、及び／又は乳化剤の形態を採ることができ、この目的のために通常用いられているマトリックスあるいは容器の経皮パッチに入れておくこともできる。
【０２６０】
カプセルという用語は、有効成分を含んだ組成物を保持あるいは含むためにメチルセルロース、ポリビニルアルコールあるいは変性ゼラチンや澱粉などでつくられた特殊な容器あるいは梱包を意味している。表面が固いカプセルは通常はゲル強度が比較的高い骨状物質と豚皮膚ゼラチンをブレンドしたものでつくられる。カプセルそのものは少量の染料、オペーク剤、可塑剤及び保存剤をを含んでいてもよい。
【０２６１】
錠剤とは有効成分と適切な希釈剤を合わせて含んでいる圧縮あるいは成形された固体投与形状を意味する。錠剤は、湿式造粒法あるいは乾式造粒法、当業者にはよく知られている圧縮法によってつくることができる。
【０２６２】
経口ゲルとは親水性の準固体基質に分散あるいは可溶化された有効成分を意味する。
構成用粉末とは有効成分と水あるいは果汁に懸濁させることができる適切な希釈剤とを含んだ粉末ブレンドを意味する。
【０２６３】
適切な希釈剤とは組成物あるいいは投与形態の主要な部分を通常構成している物質のことである。適切な希釈剤にはラクトースやスクロース、マンニトール、ソルビトール、小麦やコーンライス及びジャガイモから得られる澱粉及び微結晶セルロースなどのセルロースなどが用いられる。この組成物内での希釈剤の量は組成物全体の約５−約９５重量パーセント、好ましくは約２５−約７５重量パーセント、より好ましくは約３０−約６０重量パーセント、そして最も好ましくは約４０−約５０重量パーセントの範囲である。
【０２６４】
崩壊剤とは医薬成分の分解（崩壊）と放出を促進するためにその組成物に添加される物質を指している。適切な崩壊剤には、澱粉、カルボキシメチルナトリウム澱粉などの冷水可溶性修飾澱粉；イナゴマメ、カラヤ、ガウア、トラガント及び寒天などの天然及び合成ガム；メチルセルロース及びカルボキシセルロースナトリウム、微結晶性セルロース及びクロスカルメロースナトリウムなどの架橋微結晶セルロースのセルロース誘導体、セルロース、アルギン酸やアルギン酸ナトリウムなどのアルギン酸塩；ベントナイトなどの粘土；そして発泡性の混合物を含む。組成物中の崩壊剤の量はその組成物全体の重量に対して、約１から約４０％、好ましくは約２から約３０％、より好ましくは、約３から約２０％、そして最も好ましくは、約５から約１０％の割合である。
【０２６５】
結合剤とは粉末を結合あるいは糊づけして粒状を形成することでそれらを結合させ、調剤での接着性に寄与する物質を意味している。結合剤は希釈剤や充填剤にすでにある結合力を追加するものである。適切な結合剤は、スクロース；コムギ、トウモロコシ、ジャガイモなどから得られる澱粉；アカシア、ゼラチン、トラガントなどの天然ゴム；アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸アンモニウム、カルシウムなど海藻由来の誘導体；メチルセルロース、カルボキシセルロースナトリウム及びヒドロキシプロピル−メチルセルロースなどのセルロース物質；ポリビニルピロリドン、そしてマグネシウム・アルミニウムのケイ酸塩などの無機物を含む。組成物中の結合剤の量は、その組成物の重量に対して、約１から約３０％、好ましくは約２から約２０％、より好ましくは、約３から約１０％、そしてさらに好ましくは、約３から約６％の割合である。
【０２６６】
潤滑剤とは、錠剤や粉粒が、例えばそれが圧縮された後に、摩擦あるいは摩損を提言させることによって鋳型やダイス型から離型されるように投与形態に添加される物質のことである。適切な潤滑剤はステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリ
ン酸カリウムなどの金属ステアリン酸塩；ステアリン酸；高融点ワックス、そして、塩化ナトリウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、オレイン酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、そしてｄ’ｌ―ロイシンなどの水溶性潤滑剤がある。潤滑剤は通常圧縮前の最終段階で付加されるが、それは、潤滑剤が粒の表面、さらに粒と錠剤プレス機の部品との間に存在しなければならないからである。組成物内での潤滑剤の量は、組成物の重量に対して、約０．０５から約１５％、好ましくは約０．２から約５％、より好ましくは、約０．３から約３％、そし最も好ましくは、約０．３から１．５％の割合である。
【０２６７】
滑剤とは凝結を防いで粒の流動性を改善し、流動が滑らかに、そして均一に行われるようにするための物質である。適切な滑剤は二酸化珪素とタルクを含む。組成物中の滑剤の量は、組成物の重量に対して、約０．０１から約１０％、好ましくは約０．１から約７％、より好ましくは、約０．２から約５％、そし最も好ましくは、約０．５から約２％の割合である。
【０２６８】
発色剤とは組成物あるいは投与錠剤に発色を与える賦形剤である。そうした賦形剤は食品用染料や粘土や酸化アルミニウムなどの適切な吸着剤に吸着された食品用染料を含んでいてもよい。発色剤の量は、組成物全体の重量に対して、約０．０１から約１０％、好ましくは約０．０５から約６％、より好ましくは、約０．１から約４％、そし最も好ましくは、約０．１から１％の割合である。
【０２６９】
本発明のワクチンの形成と投与の技術は、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  ＣＯ．，Ｅａｓｔｏｎ  ＰＡから出版されている“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”に記載されている。適切なワクチン組成物は、一般式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）−（Ｉ−ｃ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）−（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）−（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）−（ＩＶ−ｇ）、（Ｖ）、（Ｖ−ａ）−（Ｖ−ｃ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）−（ＶＩ−ｃ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩ−ａ）−（ＶＩＩ−ｃ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩ−ａ）−（ＶＩＩＩ−ｃ）、（ＩＸ）及び（ＩＸ−ａ）−（ＩＸ−ｃ）の糖類、好ましくは糖類１０、１８、１９、２０、２１、２２、５５、５７、６０、及び６２−８９、あるいは薬学的に許容できるその塩、あるいは-Ｏ−Ｌ−ＮＨ２基の窒素原子を介して共有結合で免疫原性担体に結合されている糖類を含んだ接合体の少なくとも１つを含んでおり、上記ワクチン組成物は、適切な液体医薬品担体中のそうした糖類の溶液でもよいし、錠剤、丸薬、フィルム錠剤、コーティングされた錠剤、糖衣錠、カプセル、粉末及び沈殿物、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液、乳化剤などの他の形態であってもよい。
【０２７０】
本発明による１つの接合体、あるいは本発明の１つの糖類の治療的に有効な投与量とは、疾病に対して少なくとも部分的にでも免疫化をもたらすその化合物の量を意味している。そうした化合物の毒性及び治療効果は細胞培養液や実験動物において、標準的な製剤学、薬学及び毒性学的手順で判定することができる。毒性効果と治療的効果との間の投与比率は治療指数である。投与される組成物の実際の量は措置の対象となる個人、その個人の体重、疾病の状況、投与形態、及び医師の判断による。
【０２７１】
抗体及び免疫学的分析（アッセイ）
本発明は、本発明による少なくとも１つの合成糖類に対する抗体とも関係している。その抗体はモノクローナル・ハイブリドーマによってつくり出される。この抗体は、肺炎、髄膜炎、中耳炎、菌血症、並びに慢性気管支炎、慢性副鼻腔炎、慢性関節炎、及び慢性結膜炎の急性悪化の診断、予防及び措置にとって有益である。本発明の別の実施形態は、肺炎連鎖球菌、好ましくは肺炎連鎖球菌血清タイプ８によって引き起こされる肺炎、髄膜炎、中耳炎、菌血症、並びに慢性気管支炎、慢性副鼻腔炎、慢性関節炎、及び慢性結膜炎の急性悪化の診断、予防及び措置のための医薬品あるいは装置を製造するための抗体の使用
に関係している。
【０２７２】
本明細書で用いられる「抗体」という用語は、ポリクローナル及びモノクローナル抗体の調剤、及びハイブリッド抗体、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆ（ａｂ）分子、単一ドメイン抗体及びその機能性フラグメントの調製をその意味範囲に含んでおり、親抗体分子の免疫学的結合特性を示す。
【０２７３】
本発明による抗体はポリクローナル性あるいはモノクローナル性であってもよい。
一般式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）−（Ｉ−ｃ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）−（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）−（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）−（ＩＶ−ｇ）、（Ｖ）、（Ｖ−ａ）−（Ｖ−ｃ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）−（ＶＩ−ｃ）  、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩ−ａ）−（ＶＩＩ−ｃ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩ−ａ）−  （ＶＩＩＩ−ｃ）、（ＩＸ）及び（ＩＸ−ａ）−（ＩＸ−ｃ）のいずれか１つの糖類好ましくは糖類１０、１８、１９、２０、２１、２２、５５、５７、６０、及び６２−８９、あるいは-Ｏ−Ｌ−ＮＨ２基の窒素原子を介して共有結合で免疫原性担体に結合されている上記の糖類を含んだ接合体は、肺炎連鎖球菌、好ましくは肺炎連鎖球菌血清タイプ８によって引き起こされる疾病の治療と予防のための、医薬品組成物、特にワクチンを調製するために用いることができる。本発明の糖類、あるいは本発明の糖類に対して発生され、それを認識する抗体糖類は、肺炎連鎖球菌、好ましくは肺炎連鎖球菌血清タイプの治療と予防のために用いることができる。
【０２７４】
さらに、本発明は、本発明による一般式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）−（１−ｃ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）−（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）−（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）−（ＩＶ−ｇ）、（Ｖ）、（Ｖ−ａ）−（Ｖ−ｃ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）−（ＶＩ−ｃ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩ−ａ）−（ＶＩＩ−ｃ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩ−ａ）−（ＶＩＩＩ−ｃ）、（ＩＸ）及び（ＩＸ−ａ）−（ＩＸ−ｃ）の糖類による少なくとも１つの糖類、あるいは、本発明の糖類の少なくとも１つに対する少なくとも１つの抗体を肺炎連鎖球菌、好ましくは肺炎連鎖球菌血清タイプ８によって引き起こされる肺炎、髄膜炎、中耳炎、菌血症、並びに、慢性気管支炎、慢性副鼻腔炎、慢性関節炎、及び慢性結膜炎の急性悪化の診断、予防及び措置のための使用に関係している。
【０２７５】
そうしたアッセイは、例えば、肺炎連鎖球菌、好ましくは肺炎連鎖球菌血清タイプ８によって引き起こされる疾病の診断に有用なミクロアレイあるいはＥＬＩＳＡの使用を含んでいる。従って、本発明の別の側面は、肺炎連鎖球菌、好ましくは肺炎連鎖球菌血清タイプ８によって引き起こされる疾病の診断のための一般式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）−（Ｉ−ｃ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）−（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）−（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）−（ＩＶ−ｇ）、（Ｖ）、（Ｖ−ａ）−（Ｖ−ｃ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）−（ＶＩ−ｃ）  、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩ−ａ）−（ＶＩＩ−ｃ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩ−ａ）−（ＶＩＩＩ−ｃ）、（ＩＸ）及び（ＩＸ−ａ）−（ＩＸ−ｃ）の糖類による少なくとも１つの糖類使用に関係している。
【０２７６】
一般式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）−（Ｉ−ｃ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）−（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）−（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）−（ＩＶ−ｇ）、（Ｖ）、（Ｖ−ａ）−（Ｖ−ｃ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）−（ＶＩ−ｃ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩ−ａ）−（ＶＩＩ−ｃ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩ−ａ）−（ＶＩＩＩ−ｃ）、（ＩＸ）及び（ＩＸ−ａ）−（ＩＸ−ｃ）の糖類のいずれか１つ、あるいはそれらの糖類の混合物はマイクロアレイ表面あるいはその他の表面上に固定して、肺炎連鎖球菌血清タイプ８を検出するためのイン・ビトロ方法として使用することもできるであろう。肺炎連鎖球菌血清タイプ８を同定する方法は、本発明による糖類の少なくとも１つを使用することを含んでいる。さらに、一般式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）−（Ｉ−ｃ）、（ＩＩ）、（Ｉ
Ｉ−ａ）−（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）−（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）−（ＩＶ−ｇ）、（Ｖ）、（Ｖ−ａ）−（Ｖ−ｃ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）−（ＶＩ−ｃ）  、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩ−ａ）−（ＶＩＩ−ｃ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩ−ａ）−（ＶＩＩＩ−ｃ）、（ＩＸ）及び（ＩＸ−ａ）、（ＩＸ−ｃ）の合成糖類あるいはそれらの混合物は、免疫アッセイの分析標準として用いることもできる。
【０２７７】
従って、一般式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）−（Ｉ−ｃ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）−（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）−（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）−（ＩＶ−ｇ）、（Ｖ）、（Ｖ−ａ）−（Ｖ−ｃ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）−（ＶＩ−ｃ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩ−ａ）−（ＶＩＩ−ｃ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩ−ａ）−（ＶＩＩＩ−ｃ）、（ＩＸ）及び（ＩＸ−ａ）−（ＩＸ−ｃ）の糖類は、肺炎連鎖球菌血清タイプ８に対する抗体を検出するための免疫学的アッセイにおいてマーカーとして使用することができる。
【０２７８】
さらに、本発明の別の側面は、本発明による糖類の少なくとも１つを含んでいる固体支持体に関係している。
この固体支持体は診断装置の一部として用いられるのが好ましい。この固体支持体及び診断装置は肺炎連鎖球菌、好ましくは肺炎連鎖球菌血清タイプ８によって引き起こされる肺炎、髄膜炎、中耳炎、菌血症、並びに；慢性気管支炎、慢性副鼻腔炎、慢性関節炎、及び慢性結膜炎の急性悪化の診断のために用いられ、本発明の糖類の少なくとも１つが好ましくは共有結合によって、その固体支持体上に固定される。
【０２７９】
好ましくは、上記の固体支持体はガラススライド、ガラスプレート、マイクロタイタープレート、微小球体あるいはビーズから選択される。
本発明の糖類は、好ましくは中間接続分子を使用する固体支持体に共有結合で結合されている。
【０２８０】
さらに、本発明は、この発明の糖類が、肺炎連鎖球菌好ましくは肺炎連鎖球菌血清タイプ８によって起こされる肺炎、髄膜炎、中耳炎、菌血症、並びに慢性気管支炎、慢性副鼻腔炎、慢性関節炎、及び慢性結膜炎の急性悪化に関する免疫学的分析検知に使えることを示している。そうした分析には、例えば、肺炎連鎖球菌好ましくは肺炎連鎖球菌血清タイプ８によって起こされる肺炎、髄膜炎、中耳炎、菌血症、並びに慢性気管支炎、慢性副鼻腔炎、慢性関節炎、及び慢性結膜炎の急性悪化に関する診断に有用なマイクロアレイ及びＥＬＩＳＡの使用が含まれる。
【０２８１】
従って、本発明の別の側面は、肺炎連鎖球菌好ましくは肺炎連鎖球菌血清タイプ８によって起こされる肺炎、髄膜炎、中耳炎、菌血症、並びに慢性気管支炎、慢性副鼻腔炎、慢性関節炎、及び慢性結膜炎の急性悪化に関する診断のために本発明による糖類の使用に関係している。
【０２８２】
肺炎連鎖球菌好ましくは肺炎連鎖球菌血清タイプ８によって起こされる肺炎、髄膜炎、中耳炎、菌血症、並びに；慢性気管支炎、慢性副鼻腔炎、慢性関節炎、及び慢性結膜炎の急性悪化に関する診断のために本発明の糖類が用いられる分析システムの選択にはいろいろな選択の余地がある。本発明により診断目的のために行われる分析は、固相酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）、酵素連結免疫吸収分析（ＥＬＩＳＡ）、特に「間接」ＥＬＩＳＡあるいは放射免疫分析（ＲＩＡ）のような免疫分析が含まれる。
【０２８３】
好ましくは、本発明による糖類は中間接続分子を介して固体支持体に共有結合で連結されている。従って、本発明による糖類を−Ｏ−Ｌ−ＮＨ２基の窒素原子を介して、直接あるいは間接的に上記固体支持体に共有結合で連結できる（図３（Ｃ）参照）。
【０２８４】
上記の固体支持体はガラススライド、マイクロタイタープレート、テストチューブ、微小球体、ナノ粒子あるいはビーズなどを含む、あるいはそれらから構成される群から選択されるのが好ましい。
【０２８５】
上記の固体支持体はガラス・スライドあるいはマイクロタイタープレートであることが特に好ましい。マイクロタイタープレートあるいはマイクロウェルプレートは、小さなテストチューブとして用いられる多数の「ウェル」を有するフラットプレートである。通常は、６個、２４個、９６個、３８４個あるいは１５３６個の試料ウェルを有するマイクロタイタープレートを用いることができる。マイクロプレートはＰＣＲに用いられるマイクロプレート用のポリカーボネートなど、多くの異なった素材でつくられる。最も一般的なのは、ほとんど光学探知用のマイクロプレート用に用いられるポリスチレンである。光の吸収や発光検出するために二酸化チタンを加えて白色にしたり、蛍光生物学的分析を行うために炭素を加えて黒色にしたりすることも可能である。
【図面の簡単な説明】
【０２８６】
【図１Ａ】本発明による商業的に入手可能な中間接続分子。
【図１Ｂ】本発明による商業的に入手可能な中間接続分子。
【図２】本発明による中間接続分子の機能基Ｘ。
【図３】（Ａ）担体タンパク質によって接合された四糖類、（Ｂ）スフィンゴ糖脂質で接合された四糖類、（Ｃ）固体支持体上に接合された四糖類、の例。四糖類は単に例示として示してあり、一般式（Ｉ）のどの糖類に置き換えることもできる。
【図４Ａ】糖類記号。
【図４Ｂ】商業的に入手可能な血清００７ｓｐを用いて行われたグリカン・アレイ・分析。検出は蛍光ラベル抗ヒトＩｇＭ二次抗体（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８ヤギ抗ヒトＩｇＭ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ａ２１２１５）を用いて行われた。
【図４Ｃ】商業的に入手可能な血清００７ｓｐを用いて行われたグリカン・アレイ・分析。検出は蛍光ラベル抗ヒトＩｇＧ二次抗体（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ａ２１４４５）を用いて行われた。
【図４Ｄ】ＳＰ−８特殊ウサギ・タイプ血清を用いたグリカン・アレイ分析。検出は蛍光ラベル抗ウサギＩｇＧ二次抗体（ヤギ抗ウサギＩｇＧ−ＦＩＴＣ，ａｂｃａｍ  ａｂ６７１７）を用いて行った。
【図５Ａ】マウス１１６０の免疫応答。マイクロ・プリント・パターン。
【図５Ｂ】マウス１１６０の免疫応答（日数は０−３５日目まで）。検出は蛍光ラベル抗マウスＩｇＧ二次抗体（ウサギ抗マウスＩｇＧ−ＦＩＴＣ，Ｆ９１３７，Ｓｉｇｍａ）を用いて行った。
【図６】抗ＳＰ−８モノクローナル抗体の発生。検出は蛍光ラベル抗マウス二次抗体（Ａｌｅｘａ  ６３５ヤギ抗マウスＩｇＧ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ａ３１５７４）を用いて行った。
【図７】表面プラズモン共鳴。モノクローナル抗体ｍＡｂ  １Ｈ８は合成糖類１８と天然のＳｐ８多糖類の両方をそれぞれ識別する。
【図８】免疫蛍光染色の結果。接合体５９による免疫化は天然のＳｐ８多糖類及びＳＴ８バクテリアを識別する免疫応答を誘発する。バクテリアはＦＩＴＣでラベルして、図示されている一次抗体と共に培養した。抗体結合は、Ａｌｅｘａ  ６３５でラベルしたヤギ抗マウスＩｇＧ二次抗体（Ａ３１５７４，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で培養した後、視覚化された。（Ａ）肺炎連鎖球菌ＳＴ８，ｍＡｂ  １Ｈ８；（Ｂ）肺炎連鎖球菌ＳＴ８，  ｍＡｂアイソタイプ・コントロール（抗ＹペストＬＰＳコア）；（Ｃ）肺炎連鎖球菌ＳＴ１；ｍＡｂ  １Ｈ８。
【図９Ａ】蛍光ラベルした肺炎連鎖球菌のフローサイトメトリー。ｍＡｂ  １Ｈ８あるいはアイソタイプ・コントロール（比較対象）を用いてラベルした後の代表的なフローサイトメトリー結果。
【図９Ｂ】蛍光ラベルした肺炎連鎖球菌のフローサイトメトリー。ｍＡｂ  １Ｈ８あるいは１Ｆ１を用いて少なくとも３回、個別的にラベリング実験をした結果をまとめたもの。ヒストグラムは結合の平均値±ＳＤを示している。＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。モノクローナル抗体１Ｈ８及び１Ｆ１は両方とも肺炎連鎖球菌血清タイプ８と結合するが、肺炎連鎖球菌血清タイプ１あるいは３とは結合しない。モノクローナル抗体と肺炎連鎖球菌血清タイプ８の間の相互作用は特殊な場合で、それは、抗体アイソタイプ・コントロールあるいは肺炎連鎖球菌血清タイプ１あるいは３に対する結合性は認められないからである。
【図１０】ｍＡｂ  １Ｈ８の存在下での肺炎連鎖球菌血清タイプ８バクテリアのオプソニン貪食作用による殺菌。すなわち、アイソタイプ抗体ではなく、ｍＡｂ  １Ｈ８は、Ｐｎｅｕｍｏｖａｘ２３(登録商標) ワクチン化ヒト（００７ｓｐ，１：４希釈）及びウサギＳＴ８タイプ血清（１：４希釈）からプールされた血清と同様の有効性を持つすべての試験量で、食細胞により生きたバクテリアにオプソニンを作用させて殺菌する。
【図１１Ａ】ｍＡｂ  １Ｈ８及び１Ｆ１の糖類１９、４９、９０、６０、６２、５５、及び５７に対する結合のマイクロアレイ分析。ヒストグラムは、４スポットのバックグラウンドに対して標準化された蛍光強度の平均値±ＳＤを示している。ＭＦＩ：平均蛍光強度：三糖類６２、四糖類１９、四糖類６０、五糖類５５及び六糖類５７は、より小さい構造４９及び９０がない場合に、ｍＡｂ  １Ｈ８及び１Ｆ１で同様の強度が認められた。
【図１１Ｂ】ＳＰ８  ＣＰＳ（１０μｇ／ｍＬ濃度）で予備吸着されたｍＡｂ及び１Ｆ１（１００μｇ／ｍＬ）との結合の抑制。ウェルチ是正を伴うノンパラメトリック片側ｔ検定。＊＊Ｐ＜０．０１；  ＊＊＊Ｐ＜０．００１：ｍＡｂｓ及び１Ｆ１の五糖類５５及び六糖類５７との結合は、天然のＳＰ８多糖類による抑制で押さえられた。
【図１１Ｃ】構造化合物９０。
【図１２】糖類１９、２０、２１及び２２へのｍＡｂ  ２８Ｈ１１（防御的なマウスＩｇＭ）の結合に関するマイクロアレイ分析。（Ａ）ｍＡｂ  ２８Ｈ１１の異なる濃度での結合。（Ｂ）天然の肺炎連鎖球菌血清タイプ８ＣＰＳ（１０μｇ／ｍＬ）の付加による化合物１９へのｍＡｂ  ２８Ｈ１１の結合の抑制。
【図１３】接合体ＣＲＭ１９７−１８、ＣＲＭ１９７−６０及びＣＲＭ１９７−５７のＭＡＬＤＩ−ＭＳによる特徴づけ。
【図１４】ウサギにおける接合体ＣＲＭ１９７−１８、ＣＲＭ１９７−６０及びＣＲＭ１９７−５７に対する免疫応答の評価。（Ａ）−（Ｄ）肺炎連鎖球菌血清タイプ８関連グリカン（１：５０希釈）に対する免疫応答のグリカン・マイクロアレイ分析。（Ａ）２１日目での血清のグリカン・マイクロアレイ分析。接合体で免疫化されたすべてのウサギは肺炎連鎖球菌血清タイプ８関連オリゴ糖及びＳＴ８  ＣＰＳに対して著しい免疫応答を示す。（Ｂ）ＣＲＭ１９７−１８あるいはＣＲＭ１９７だけで免疫化されたウサギの四糖類１９に対する免疫応答の時間経過。（Ｃ）ＣＲＭ１９７−６０あるいはＣＲＭ１９７だけで免疫化されたウサギの四糖類６０に対する免疫応答の時間経過。（Ｄ）ＣＲＭ１９７−５７あるいはＣＲＭ１９７だけで免疫化されたウサギ六糖類５７に対する免疫応答の時間経過（Ｅ）多糖類ＥＬＩＳＡ（１：５０の希釈）で評価した場合の、免疫化されたウサギの肺炎連鎖球菌ＣＰＳに対する免疫応答の時間経過。数値は免疫化される前の血清の数値に対して何倍かを示す。（Ｆ）多糖類ＥＬＩＳＡで評価した場合の、２１日目での肺炎連鎖球菌タイプ８  ＣＰＳに対する免疫応答の比較。統計的比較を行い（一方向ＡＮＯＶＡ，Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ補正）、アスタリスクはＰ値を示す。ｎ．ｓは意味なし。＊Ｐ＜０．０５；  ＊＊Ｐ＜０．００５。（Ｇ）希釈度を変えて多糖類ＥＬＩＳＡで評価した場合の、２１日目での肺炎連鎖球菌タイプ８  ＣＰＳに対する免疫応答の比較。参照として、ウサギから誘導された肺炎連鎖球菌タイプ８血清が用いられた。
【０２８７】
以下の実施例は本発明の好ましい実施形態を示すためのものである。当業者に理解されるべき点は、本発明者によって発見された代表的な技術とそれに続く実施例で紹介されている技術は、本発明では効果的に機能し、従って、その実践の好ましい様式（モード）を構成すると考えることができることである。しかしながら、当業者であれば、本開示の内容に照らして、個々の実施形態では多くの変更が可能であり、本発明の精神及び範囲から逸脱せずに同様の、あるいは類似した結果が得られることを理解すべきである。
【０２８８】
本明細書に開示されている記述の内容に照らせば、本発明の種々の側面のさらなる修正及び変更した実施形態が可能であることも、当業者には自明であろう。従って、以下の記述は説明のみを目的としたものであり、本発明の一般的な実施方法を当業者に教示するためのものである。ここに図示・説明されている本発明の諸形態は実施形態の実施例として理解されるべきである。ここに図示・説明されている要素や物質は別のものと取り替えることも可能であり、部分やプロセスは順序を逆にしてもよいし、本発明の一定の特徴は単独で用いられてもよいし、これらのことはすべて、本発明の記述を理解した当業者には自明であろう。特許請求の範囲で述べられている本発明の精神と範囲を逸脱せずに本明細書に開示されている種々の要素は変更可能である。
【発明を実施するための形態】
【０２８９】
実施例
１．化学合成実験
化学的合成のための一般事項
別段の記載がない限り、商業的に入手できる出発物質と試薬はそのまま用いられた。すべての反応はアルゴン雰囲気内で行われた。溶液は乾燥させた。高解像度質量スペクトル（ＨＲＭＳ）はＡｇｉｌｅｎｔ  ６２１０  ＥＳＩ−ＴＯＦ質量スペクトロメータを用いて、ベルリンのＦｒｅｉｅ大学で記録された。
略語
以下の説明で用いられている略語はそれぞれ以下のことを意味している。Ａｃ（アセチル）、ＢＡＩＢ（［ビス（アセトキシ）ヨード］ベンゼン）、Ｂｎ（ベンジル）、ｔ−Ｂｕ（ｔｅｒｔ−ブチル）、Ｂｚ（ベンゾイル）、Ｃｂｚ（カルボキシベンジル）、ＤＣＭ（ジクロロメタン）、ＤＤＱ（２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン）、Ｉｍ（イミダゾール）、ＮＡＰ（２−ナフチルメチル）、ＮＩＳ（Ｎ−ヨードスクシンイミド）、Ｐｙ／Ｐｙｒ（ピリジン）、ＴＥＭＰＯ（（２，２，６，６−テトラメチル−１−ピペリジニル）オキシ）、Ｔｆ（トリフルオロメタンスルホニル）、ＴＨＦ（テトラハイドロフラン）、ＴＭＳ（トリメチルシリル）、ＴＭＳＯＴｆ（トリメチルシリル・トリフルオロメタン・スルホネート）、ｐ−Ｔｓ（パラ−トリスルホニル）。
【０２９０】
［２＋２］グリコシル化方式による糖類の合成
【０２９１】
【化４８】
0006524218.tif 000049
【０２９２】
実施例１−１：化合物３の合成
【０２９３】
【化４９】
0006524218.tif 000050
【０２９４】
チオグリコシド・ドナー基質１（６．０ｇ，１１．５３ｍｍｏｌ）とＣ−２リンカー２を有する受容体（ロータリーエバポレーター内でトルエンを用いて共沸状態で乾燥したもの、３．９３ｇ，１３．８３ｍｍｏｌ）を乾燥したＤＣＭ（１００ｍＬ）内に入れて、それにＭＷ乾燥４ÅＭＳ５ｇを加えて室温で１５分間攪拌してから、−１０℃に冷却した。次に、ＮＩＳ（３．８３ｇ，１７．２９ｍｍｏｌ）とＴｆＯＨ（０．１５ｍＬ、１．７３ｍｍｏｌ）をＲＭ（反応混合物）に加えて、−１０℃から−５℃の温度で１時間攪拌した。反応の終了はＴＬＣでモニターした。次に、ＲＭを１０％のＮａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（５０ｍＬ）で冷却して、ＥｔＯＡｃ（２５ｍｌｘ３）を用い抽出を行った。結合した有機層を次に塩水（１０ｍＬ）で洗浄して、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥して、真空中で濾過・濃縮して青黄色の油状の化合物を得た。粗生成物をヘキサン内で２０−３０％のＥｔＯＡｃを用いてシリカゲル・カラム・クロマトグラフィーで精製するとスポットが得られ、そのスポットを蒸発させると、青黄色の透明性のガム状の液体（７．６０ｇ、８９％）の望ましい生成物３が得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝７．９７（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．２Ｈｚ，４Ｈ），７．５９-６．９０（ｍ，２１Ｈ），５．９１-５．７１（ｍ，１Ｈ），５．６２-５．４１（ｍ，２Ｈ），５．２２-４．９５（ｍ，２Ｈ），４．８０（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，０．５Ｈ），４．６７（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，０．５Ｈ），４．５６-４．２２（ｍ，３Ｈ），４．１０-３．５２（ｍ，５Ｈ），３．５０-３．３３（ｍ，２Ｈ）．１３Ｃ
ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝１６５．７，１６５．４，１５６．３５，１５６．２，１３７．９，１３６．９，１３３．４，１３３．２，１２９．９，１２９．５，１２９．３，１２９．１，１２８．７，１２８．５，１２８．４，１２８．３，１２８．１，１２７．８，１２７．４，１２７．２，１２６．２，１０１．９，１０１．６，７８．９，７２．６，７２．１，６９．１，６８．７，６７．４，６７．２，６６．７，５１．７，４６．９，４５．８。
【０２９５】
実施例１−２：化合物４の合成
【０２９６】
【化５０】
0006524218.tif 000051
【０２９７】
基質３（７．５０ｇ，１０．０８ｍｍｏｌ）をアルゴン下で、活性化された３Å  ＭＳと共にＤＣＭ（７５ｍＬ）内に入れて、１０分間置き冷却して０℃にした。トリエチルシラン（１２．８８ｍＬ，８１．０ｍｍｏｌ）を加えて、ＴＦＡ（４．６６ｍＬ，６０．５ｍｍｏｌ）を滴下し、１６時間室温でを攪拌して、水（１００ｍＬ）で冷却した。その溶液をＤＣＭ（３０ｍＬｘ３）で抽出して、結合した有機物は水（２０ｍＬｘ３）及び塩水（２０ｍＬ）で徹底的に洗浄して、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、濾過し、真空中で蒸発させて、無色ガム状の固体を得た。粗生成物をヘキサン内で３０−１００％のＥｔＯＡｃを用いてシリカゲル・カラム・クロマトグラフィーで精製し、生成物４を得て、真空中で蒸発させて、無色のオイル（６．１ｇ、８１％）を得た。
【０２９８】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝８．０４-７．８４（ｍ，４Ｈ），７．６０-６．８７（ｍ，２１Ｈ），５．５５-５．３６（ｍ，２Ｈ），５．２２-４．９０（ｍ，２Ｈ），４．７７-４．５３（ｍ，３Ｈ），４．５１-４．３０（ｍ，２Ｈ），４．０６−３．９３（ｍ，２Ｈ），３．８７-３．５３（ｍ，４Ｈ），３．４６-３．２０（ｍ，３Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝１６７．３，１６５．５，１３８．０，１３７．７，１３３．６，１３０．１，１２９．９，１２８．６，１２８．５，１２８．１，１２７．９，１２７．８，１２７．４，１０１．３，１０１．２，７６．７，７４．７，７３．９，７１．６，７１．５，７１．２，７０．０，６９．０，６７．４，６７．２，５１．７，４６．８，４５．８。
【０２９９】
実施例１−３：化合物５の合成
【０３００】
【化５１】
0006524218.tif 000052
【０３０１】
受容体４（２．０ｇ、２．６８ｍｍｏｌ）を活性化４Å  ＡＷＭＳと共にＤＣＭ（３０ｍＬ）に入れて、３０分間攪拌してから０℃に冷却した。その後、ＴＭＳＯＴｆ（０．４９μＬ、０．２７ｍｍｏｌを加えて、さらにＤＣＭ（５ｍＬ）内にイミデート・ドナー６（糖類  Ｒｅｓ２００８，３４４，４３９−４４７）（２．２０ｇ、３．８９ｍｎｏｌ）を加え、５分間入れたものを加え、反応混合物を０℃で３０分間攪拌した。その反応混合物をＥｔ３Ｎ（１ｍＬ）で冷却して、濾過し、真空中で溶媒を除去した。粗生成物をヘキサン内でＥｔＯＡｃを用いてフラッシュ・クロマトグラフィーで精製して、生成物５（３．２ｇ、９８％）を得た。
【０３０２】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝８．１３-６．８８（ｍ，３５Ｈ），５．６７−５．５２（ｍ，１Ｈ），５．４６-５．３１（ｍ，１Ｈ），５．２０（ｓ，１Ｈ），５．１６-４．８９（ｍ，３Ｈ），４．６８（ｔ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．５５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１．５Ｈ），４．４７-４．２４（ｍ，３．５Ｈ），４．２０-３．８９（ｍ，１．５Ｈ），３．８９-３．１９（ｍ，９．５Ｈ），３．１３（ｔｄ，Ｊ＝９．７，４．９Ｈｚ，１Ｈ），２．６３（ｔ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ），０．６３（ｓ，９Ｈ），−０．１２（ｓ，３Ｈ），−０．１９（ｓ，３Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝１６５．４，１６５．３６，１６４．７，１３８．２，１３７．１，１３３．４，１３３．２，１２９．９４，１２９．９，１２９．２，１２８．７，１２８．６，１２８．５，１２８．４，１２８．２，１２８．０，１２７．８，１２７．３，１２６．４，１０１．７，１０１．２，１０１．１，８１．２，７５．５，７５．１，７４．６，７３．７，７３．４，７３．０，６８．９，６８．０，６７．３，６６．１，５１．７，４６．９，２５．６，１８．０，−４．１，−４．８。 
【０３０３】
実施例１−４：化合物７の合成
【０３０４】
【化５２】
0006524218.tif 000053
【０３０５】
基質５（１．６ｇ、１．３１７ｍｍｏｌ）をピリジン（１０ｍＬ）に０℃で入れて、それに、ＨＦ−ピリジン（３．５６ｍＬ、３９．５ｎｎｏｌ）を加えて、室温で２４時間攪拌した。その反応混合物を水で洗浄して、ＤＣＭ（２０ｍＬｘ３）で抽出を行った。結合した有機物を希釈ＨＣｌ（５０ｍＬｘ２）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（５０ｍＬ）、塩水（１０ｍＬ）で洗浄してＮａ２ＳＯ４で乾燥させて、濾過し、真空中で濃縮させて粗生成物を得て、それをヘキサン内で３５−４０％のＥｔＯＡｃを用いてシリカ・カラム・クロマトグラフィーを用いて精製し、色のついたフォーム（１．３ｇ、９０％）を得た。
【０３０６】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝８．１５-６．９２（ｍ，１Ｈ），５．６５-５．５１（ｍ，１Ｈ），５．４４−５．３０（ｍ，１Ｈ），５．２３（ｓ，１Ｈ），５．１１−５．０４（ｍ，３Ｈ），４．７７-４．４９（ｍ，３Ｈ），４．４９-４．２４（ｍ，４Ｈ），４．２５-３．９１（ｍ，２Ｈ），３．９１-３．５９（ｍ，４Ｈ），３．５７-３．００（ｍ，７Ｈ），２．６８（ｔ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，１Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝１６５．４，１６５．３，１５６．４，１５６．２，１３８．２，１３６．９，１３３．６，１３３．２，１３０．３，１３０．０，１２９．９，１２９．４，１２８．７，１２８．７，１２８．５，１２８．５，１２８．４，１２８．１，１２８．１，１２７．８，１２７．４，１２６．４，１０１．８，１０１．２，１０１．１，８０．６，７５．９，７４．９，７４．７，７３．７，７３．５，７２．６，７２．０，７１．９，６８．９，６７．９，６７．４，６７．２，６６．０，５１．７，４６．９，４５．９。
【０３０７】
実施例１−５：  化合物８の合成
【０３０８】
【化５３】
0006524218.tif 000054
【０３０９】
（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−６−（ベンジルオキシ）メチル）−２−（エチルチオ）−５−ヒドロキシテトラヒドロ）−２Ｈ−ピラン−３，４−ジイル・ジベンゾエート９（Ｊ  Ｃａｒｂｏｎｈｙｄｒａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９３，１２，３０９）（４．００ｇ、７．６５４ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）と（４ａＲ、６Ｒ、７Ｒ、８ａＲ）−８−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フェニル−６−（２，２，２−トリクロロ−１−イミノエトキシ）ヘキサヒドロピラノ［３，２−ｄ］［１，３］ジオキシン−７−イルベンゾエート１１（糖質  Ｒｅｓ、２００８，３４４，４３９）（６．２８ｇ、９．９５ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ．）との混合物をアルゴン雰囲気下で３０分間撹拌した。その反応混合物をー２０℃で冷却して、ＴＭＳＯＴｆ（０．１６ｍＬ，０．８８０ｍｍｏｌ，０．１１５ｅｑ．）を添加した。４５分間撹拌した後、その反応混合物にＥＴ３Ｎ（１．０ｍＬ）を添加して急冷した。その有機溶液を真空下で濃縮した。
【０３１０】
得られた暗黄色オイルをシリカ・ゲル（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１／３，  ｖ／ｖ）上でフラッシュ・クロマトグラフィーを用いて精製して、（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−（（（４ａＲ，６Ｓ，７Ｒ，８Ｓ，８ａＲ）−７−（ベンゾイルオキシ）−８−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−フェニルヘキサヒドロ・ピラノフェニルヘキサヒドロピラノ［３，２−ｄ］［１，３］ジオキシン−６−イル）オキシ）−６−（ベンジルオキシ）メチル）−２−（エチルチオ）テトラヒドロー２Ｈ−ピラン−３，４−ジイル・ジベンゾエート８（６ｇ、７９％）が無色の固体で得られた。
【０３１１】
Ｒｆ＝０．５（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン，３／７，ｖ／ｖ）．１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝−０．１９（ｓ，３Ｈ），−０．１１（ｓ，３Ｈ），０．６３（ｓ，９Ｈ），１．２０（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ），２．６７（ｍ，２Ｈ），３．１５（ｔｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，４．９Ｈｚ，２Ｈ），３．２８（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），３．５３-３．３７（ｍ，１Ｈ），３．７４-３．５５（ｍ，１Ｈ），３．７９（ｔ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），４．１９（ｔ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），４．３７（ｄ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ，１Ｈ），４．５７（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ），４．５９（ｄｄ，Ｊ＝１５．１，９．０Ｈｚ，２Ｈ），４．６７（ｄ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ，１Ｈ），５．１２（ｄｄ，Ｊ＝８．９，８．２Ｈｚ，１Ｈ），５．２１（ｓ，１Ｈ），５．４１（ｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，１Ｈ），５．６３（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），７．２９-７．７２（ｍ，１９Ｈ），７．８８-８．０３（ｍ，６Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝１６５．２７，１６５．０７，１６４．４５，１３８．１６，１３７．００，１３３．１４，１３３．１０，１３２．９７，１３０．２１，１２９．７９，１２９．７７，１２９．７５，１２９．３４，１２８．９９，１２８．５１，１２８．３８，１２８．２８，１２８．２２，１２８．０５，１２８．０２，１２７．９９，１２６．２１，１０１．５７，１０１．０６，８３．３９，８１．０５，７８．７０，７７．４３，７７．１１，７６．８０，７５．４１，７４．９３，７４．５２，７３．４９，７２．９０，７０．５９，６７．８６，６７．４５，６５．９７，２５．４３，２４．０８，１７．８０，１４．８５，−４．２０，−４．９７。
【０３１２】
実施例１−６：化合物１２の合成
【０３１３】
【化５４】
0006524218.tif 000055
【０３１４】
ＴＢＳ基質８（２．０ｇ、２．０１８ｍｍｏｌ、１ｅｑ．）を０℃でピリジン（１０ｍＬ）に入れて、それに７０％ＨＦ−ピリジン（５．４５ｍＬ、６０．５ｍｍｏｌ、３０ｅｑ．）を加え、室温で３６時間攪拌した。
【０３１５】
反応混合物を水（５０ｍＬ）で洗浄して、ＤＣＭ（５０ｍＬｘ３）で抽出した。結合した有機物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（５０ｍＬ）、塩水（２０ｍＬ）で洗浄して、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、真空中で濾過・濃縮して、粗生成物を得て、それを３５−４０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いたシリカ・カラム・クロマトグラフィーを用いて精製したところ、白色のフォーム１３（１．７ｇ，９６％）が生じた。
【０３１６】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝８．０８-７．８５（ｍ，６Ｈ），７．６９-７．２８（ｍ，１９Ｈ），５．６２（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），５．４１（ｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，１Ｈ），５．２２（ｓ，１Ｈ），５．０８（ｄｄ，Ｊ＝９．２，７．９Ｈｚ，１Ｈ），４．７０（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），４．６３（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５８（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４０（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．１９（ｔ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），３．８２（ｔｄ，Ｊ＝９．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７０（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．４Ｈｚ，１Ｈ），３．６３（ｄｄ，Ｊ＝１０．６，５．０Ｈｚ，１Ｈ），３．５９-３．５５（ｍ，１Ｈ），３．５４-３．４８（ｍ，１Ｈ），３．３２（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），３．１５（ｔｄ，Ｊ＝９．７，５．０Ｈｚ，１Ｈ），２．７８-２．６０（ｍ，３Ｈ），２．５０（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），１．２２（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝１６５．３８，１６５．２９，１６５．１３，１３８．０２，１３６．７０，１３３．４３，１３３．１４，１３３．０９，１３０．０８，１２９．８７，１２９．８１，１２９．７１，１２９．３０，１２９．２８，１２９．２３，１２８．５０，１２８．４８，１２８．２９，１２７．９５，１２７．８６，１２６．１９，１０１．５９，１００．８８，８３．４２，８０．４２，７８．７１，７５．７１，７４．６７，７４．５１，７３．４６，７２．４２，７０．４８，６７．７０，６７．５１，６５．７６，２４．１１，１４．８５。
【０３１７】
基質１３（１．６ｇ，１．８２４ｍｍｏｌ，１ｅｑ）を０℃の温度で無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）に入れて、それに、ピリジン（１０ｍＬ）とＢｚＣｌ（０．６３５ｍＬ、５．４７
ｍｍｏｌ、３ｅｑ）を滴下して加え、その反応混合物を１６時間攪拌した。
【０３１８】
次に、その反応混合物を真空中で蒸発させて溶媒を取り除き、再び、ＤＣＭ（２５ｍＬ）内に入れて、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（５ｍＬｘ２）で洗浄した。そして、有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥して、濾過して、駿空中で蒸発させ、オフホワイトの固体（１２）を得るためにメタノールを用いてすリつぶし、真空中で濾過・乾燥した（１．５ｇ、８４％）。
【０３１９】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．９５（ｄｄｄ，Ｊ＝１６．９，１２．１，７．３Ｈｚ，８Ｈ），７．６０-７．１２（ｍ，２２Ｈ），５．６６（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），５．５８（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），５．４３（ｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，１Ｈ），５．３６（ｄｄ，Ｊ＝９．５，７．９Ｈｚ，１Ｈ），５．２０（ｓ，１Ｈ），４．７７（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），４．６０（ｔ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，２Ｈ），４．３９（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．２３（ｔ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），３．７４-３．４３（ｍ，５Ｈ），３．２９（ｔｄ，Ｊ＝９．７，４．９Ｈｚ，１Ｈ），２．８３-２．５５（ｍ，３Ｈ），１．２２（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６５．４６，１６５．２５，１６５．１６，１６４．７２，１３７．８２，１３６．６２，１３３．３１，１３３．１２，１３３．０２，１３０．０５，１２９．８０，１２９．７３，１２９．７０，１２９．２７，１２９．２４，１２８．９９，１２８．９７，１２８．６３，１２８．４３，１２８．２９，１２８．２２，１２８．１７，１２８．１０，１２７．９８，１２６．０３，１０１．１２，８３．３９，７８．６５，７８．２９，７５．８５，７４．４４，７３．４４，７２．４３，７１．９６，７０．４７，６７．７１，６７．３１，６６．１６，２４．０４，１４．８４．
実施例１−７：２，３−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２，３−ジ−Ｏ−ベンゾイル−６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコイラノシル−（１→１）−（２−Ｎ−ベンジル−Ｎ−べンジルオキシカルボニルアミノ）エタノール（１４）の合成
【０３２０】
【化５５】
0006524218.tif 000056
【０３２１】
アルコール１３（４００ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）をピリジン（５．０ｍＬ）に混ぜて攪拌した溶液に、０℃で塩化ベンゾイル（６３μＬ、０．５５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を室温までゆっくり温めて、その温度で１６時間攪拌した。０．５当量（ｅｑ）のＢｚＣｌを加えて反応を加速させて、完了させた。この混合物を室温で２時間攪拌して、水（３０ｍｌ）で冷却し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈した。分離後に、有機部分を０．１Ｍ塩酸（２０ｍｌ）で洗浄して、水性部分をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で再抽出した。結合した有機部分を飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）と塩水（１０ｍＬ）で洗浄して、ＮａＳＯ４上で乾燥させ、濃縮したところ、黄色のオイル状の中間テトラベンゾエートを得た。その中間テトラベンゾエートをＣＨ２Ｃｌ２（６５ｍｌ）に混ぜて攪拌した溶液に室温でエタンチオール（０．３６ｍＬ、４．９ｍｍｏｌ）とｐ−トルエンスルホン酸（１２ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で２時間攪拌して、Ｅｔ３Ｎ（５０μＬ）で冷却して、濃縮させた。残渣をフラッシュ・クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／
ヘキサン０：１から１：１０さらに１：８）で精製すると、ジオール１４（３８９ｍｇ、０．３４９ｍｍｏｌ）が白色のフォーム形状で得られた。Ｃ６４Ｈ６１ＮＯ１７（Ｍ＋Ｎａ）＋実測値１１３８．３８３７についてＨＲＭＳ（ＥＳＩ）を計算したところ、１１３８．３８５０ｍ／ｚであった。
【０３２２】
実施例１−８：メチル（２，３−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラノシル）ウロネート−（１→４）−２，３−ジ−Ｏ−ベンゾイル−６−Ｏ−ベンジルーβ−Ｄ−グルコイラノシル−（１→１）−（２−Ｎ−ベンジル−Ｎ−べンジルオキシカルボニルアミノ）エタノール（１５）の合成
【０３２３】
【化５６】
0006524218.tif 000057
【０３２４】
アルコール１４（９０ｍｇ、０．０８１ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（２．０ｍＬ）と水（０．８ｍＬ）を混ぜて攪拌した溶液に、０℃で、ＴＥＭＰＯ（２．５ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）とＢＡＩＢ（５５ｍｇ、０．１７０ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物をその温度で２０分間攪拌して、室温まで温めた。この混合物をその温度で２時間攪拌して、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）と水（１０ｍＬ）で希釈した。分離後に、水性部分をＥｔＯＡｃ（２ｘ２０ｍＬ）で抽出して、結合した有機部分はＮａ２ＳＯ４上で乾燥して、濃縮した。残渣をフラッシュ・クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：２から１：１、ついで１：１＋５％  ＡｃＯＨ）で精製したところ、白色フォーム状の中間カルボン酸を得た。
【０３２５】
この中間カルボン酸をトルエン（１．６ｍＬ）とＭｅＯＨ（０．８ｍＬ）に入れて攪拌した溶液に室温でＴＭＳ−ジアゾメタン（０．０４ｍＬ、０．０８１ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を室温で２時間攪拌した。さらに０．２５当量のＴＭＳ−ジアゾメタンを加えて、反応を終了させた。この混合物を室温で１時間攪拌した後、ＡｃＯＨ（０．１ｍＬ）で冷却して、濃縮させた。残渣をフラッシュ・クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン０：１から１：１）で精製して、メチル・エステル１５（７３ｍｇ，０．０６４ｍｍｏｌ，７９％、２ステップ以上）が透明なオイルとして得られた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）はＣ６５Ｈ６１ＮＯ１８（Ｍ＋Ｎa）＋に関して１１６６．３７８６と計算されたが、実測値では１１６６．３７６２ｍ／ｚであった。
【０３２６】
実施例１−９：ｔ−ヘキシル２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（１７）の合成
【０３２７】
【化５７】
0006524218.tif 000058
【０３２８】
活性化されたＭＳ（３Å−ＡＷ）を用いてベンジルデン・アセタール１６（Ｊ  Ｃａｒｂｏｈｙｄ  Ｃｈｅｍ  １９９６，１５（２），２４１）（１．６８ｇ、２．８４ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）に加えて攪拌した溶液に、０℃でトリエチルシラン（２．７２ｍＬ，１７．０６ｍｍｏｌ）とトリフルオロ酢酸（１．８１ｍＬ、１７．０６ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を室温までゆっくり加温して、その温度で１６時間攪拌した。その反応物をＥｔ３Ｎ（２ｍＬ）で急冷して、セライトで濾過して、濃縮した。その残渣をフラッシュ・クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：２０から１：７）で精製して、アルコール１７（１．４６ｇ，２．４６ｍｍｏｌ，８７％）が得られた。Ｃ３５Ｈ４８Ｏ６Ｓｉ（Ｍ＋Ｎａ）＋に関してＨＲＭＳは６１５．３１１７と計算されたが、実測値は６１５．３１０４ｍ／ｚであった。
【０３２９】
実施例１−１０：ｔヘキシル  ４−Ｏ−ベンゾイル−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジルーβ−Ｄ−ガラクトピラノシド（４４）の合成
【０３３０】
【化５８】
0006524218.tif 000059
【０３３１】
トリグリコシド４３（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ  ２０１２，７７（１），２９１）（６６７ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）とアルコール１７（５５０ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）を乾燥トルエン（３ｘ１０ｍＬ）で共蒸発させて、３０分間、高度の真空下に保存した。この混合物をＥｔ２Ｏ（１４ｍＬ）とＣＨ２Ｃｌ２（２．８ｍＬ）内に溶解して、活性化分子ふるい（３Å−ＡＷ）上で室温で３０分間攪拌した。この溶液を−２０℃に冷却して、ＮＩＳ（２５０ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）とトリフリン酸（１６μＬ、０．１９ｍｍｏｌ）で処理した。この混合物を１時間攪拌してから、−１０℃までゆっくりと加温した。この反応物をＥｔ３Ｎ（０．０５ｍＬ）で急冷して、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、セライトで濾過して、濃縮した。残渣をフラッシュ・クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン０１から１：８さらに１：６）で精製して、ニ糖類４４（５５３ｍｇ、０．４９０ｍｍｏｌ、５３％）が対応するβ−アロマー（２３１ｍｇ、０．２０５ｍｍｏｌ、２２％）と共に得られた。７：透明なオイルの分析データ。Ｃ６９Ｈ８０Ｏ１２Ｓｉ（Ｍ＋Ｎａ）＋に対する計算値は１１５１．５３１６であったが、実測値は１１５１．５２９３ｍ／ｚであった。
【０３３２】
実施例１−１１：４−Ｏ−ベンゾイル−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−αβ−Ｄ−ガラクトピラノシル・トリフルオロ−（Ｎ−フェニル）アセトイミデート（４５）の合成
【０３３３】
【化５９】
0006524218.tif 000060
【０３３４】
シリル・エーテル４４（４７０ｍｇ、０４１６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（８．３ｍＬ）に加えて攪拌した溶液に０℃の温度で酢酸（０．２４ｍＬ、４．１９ｍｍｏｌ）とＴＢＡＦ（ＴＨＦ中に１．０Ｍ溶液、４．２ｍＬ、４．２０ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。その反応物を室温までゆっくり加温して、その温度で２時間攪拌した。酢酸（０．２４ｍＬ、４．１９ｍｍｏｌ）とＴＢＡＦ（ＴＨＦ中に１．０Ｍを加えた溶液、４．２ｍＬ、４．２０ｍｍｏｌ）を加え、その反応混合物を室温で１６時間攪拌した。その混合物をＥｔ２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈して、水（３ｘ３０ｍＬ）で洗浄して、その水相をＥｔ２Ｏ（２ｘ２０ｍＬ）で再抽出した。結合有機部分をＮａ２ＳＯ４上で乾燥して濃縮した。残渣をシリカ・ゲル（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：３から１：１）のショートプラグを通じて濾過したところ、中間的なラクトール混合物が透明なオイルとして得られた。
【０３３５】
ＣＨ２Ｃｌ２（７．８ｍＬ）にラクトール混合物を加えた溶液を攪拌して、室温で、炭酸セシウム（３１８ｍｇ、０．９７５ｍｍｏｌ）とＦ３ＣＣ（ＮＰｈ）Ｃｌ（２０２ｍｇ，０．９７５ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物をその温度で２．５時間攪拌して、ヘキサン（０．５％（ｖ／ｖ）Ｅｔ３Ｎ，１０ｍＬ）で希釈して、セライトで濾過した。その残渣をフラッシュ・クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン０：１＋０．５％Ｅｔ３Ｎから１：３＋０．５％Ｅｔ３Ｎ）で精製したところ、イミデート混合物４５（４０４ｍｇ，０．３４９ｍｍｏｌ，８４％，２ステップで）が透明なオイルとして得られた。Ｃ６９Ｈ６６Ｆ３ＮＯ１２（Ｍ＋Ｎａ）＋に対する計算値は１１８０．４４３４であったが、実測値は１１８０．４４５８ｍ／ｚであった。
【０３３６】
実施例１−１２：４−Ｏ−ベンゾイル−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−メチル［２−３−ジ-Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラノシル］ウロネート−（１→４）−２，３−ジ−Ｏ−ベンゾイル−６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコイラノシル−（１→１）−（２−Ｎ−ベンジル−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）エタノール（４６）の合成
【０３３７】
【化６０】
0006524218.tif 000061
【０３３８】
アルコール１５（１００ｇ、８７μｍｏｌ）とイミデート４５（１２１ｍｇ、１０５μｍｏｌ）を乾燥トルエン（３ｘ１０ｍＬ）で共蒸発させて、高真空下に３０分間置いた。この混合物をＥｔ２Ｏ（３．３ｍＬ）とＣＨ２Ｃｌ２（１．１ｍＬ）に溶解して、活性化した分子ふるい（３Å−ＡＷ）上で室温で３０分間攪拌した。この溶液を−２０℃に冷却して、ＴＭＳＯＴｆ（３．２μＬ，１７μｍｏｌ）で処理した。この混合物を１時間攪拌して、０℃までゆっくり加温した。この反応物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１０ｍＬ）で急冷して、ＣＨ２Ｃｌ２（３Ｘ２０ｍＬ）で抽出し、結合した有機物をＮａ２ＳＯ４で乾燥して、濃縮した。残渣をフラッシュ・クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン／トルエン１：３：３から１：２：２）で精製して、四糖類４６（１３０ｍｇ、６２μｍｏｌ，７１％）が透明なオイルとして得られた。Ｃ１２６Ｈ１２１ＮＯ２９（Ｍ＋Ｎａ）に対するＨＲＭＳ（ＥＳＩ）の計算値は２１３４．７９２１であったが、実測値は２１３４．７８７９ｍ／ｚであった。
【０３３９】
実施例１−１３：α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコイラノシル−（１→１）−（２−アミノ）エタノール（１０）の合成
【０３４０】
【化６１】
0006524218.tif 000062
【０３４１】
エステル４６（５６ｍｇ，２６μｍｏｌ）をＴＨＦ（５ｍＬ）に入れたものとＭｅＯＨ（１ｍＬ）を混ぜて攪拌した溶液に０℃で過酸化水素（６％水溶液、２６５μＬ、５３０μｍｏｌ）とＬｉＯＨ（１Ｍ水溶液、２６５μＬ、１３２μｍｏｌ）を加えた。この反応物を１時間攪拌して、室温まで加温した。その反応物を室温に保ち、２時間後に、過酸化水素（６％水溶液、２６５μＬ、５３０μｍｏｌ）とＬｉＯＨ（１Ｍ水溶液、２６５μＬ、１３２μｍｏｌ）で処理した。２時間後にＮａＯＨ（１５％水溶液、１ｍＬ）を加えて、その混合物を室温で７２時間攪拌した。その溶媒を減圧状態で蒸発させて、残渣はトルエン（２ｘ５ｍＬ）で共蒸発させ、ＭｅＯＨ（５ｍＬ）内に溶かした。その溶液をナトリウムメトキシド（１４３ｍｇ、２．６５ｍｍｏｌ）で室温で処理して、その温度で９６時間攪拌した。溶媒を蒸発させて、残渣は水（５ｍＬ）に溶かした。その溶液を０℃で０．５ＭのＮａＨＳＯ４水溶液で中和させて、ＥｔＯＡｃ（５ｘ５ｍＬ）で抽出させた。結合した有機物部分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させて、中間の酸が白色フォームとして得られた。
【０３４２】
その中間体の酸をＭｅＯＨ（２ｍＬ）に溶かしたものを室温で、Ｐｄ／Ｃ（５０ｍｇ）をＭｅＯＨ（１ｍＬ）、水（１ｍＬ）、及びＡｃＯＨ（５滴）を混ぜた懸濁液に加えた。その反応物をＨ２雰囲気内で４８時間攪拌して濾過し濃縮させた。残渣を固相抽出（クロマボンド（Ｃｈｒｏｍａｂｏｎｄ）Ｃ１８，Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ）で精製して、凍結乾燥したところ、四糖類１０（酢酸塩、１３．６ｍｇ、１８μｍｏｌ，３ステップで６９％）が白い固体として得られた。Ｃ２６Ｈ４５ＮＯ２２（Ｍ＋Ｎａ）＋に関するＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）計算値は７４６．２３３０で、実測値は７４６．２３２３ｍ／ｚであった。
【０３４３】
実施例１−１４：４−Ｏ−ベンゾイル−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２−Ｎ−ベンジル−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）エタノール（４７）の合成
【０３４４】
【化６２】
0006524218.tif 000063
【０３４５】
イミデート４５（２００ｍｇ、０．１７３ｍｍｏｌ）とアルコール２（７４ｍｇ、０．２５９ｍｍｏｌ）を乾燥トルエン（２ｘ５ｍＬ）で共蒸発させて、高真空下に３０分間置いた。この混合物をＥｔ２Ｏ（２．８ｍＬ）とＣＨ２Ｃｌ２（０．７ｍＬ）に溶解して、活性化した分子ふるい（３Å−ＡＷ）上で３０分間、室温で攪拌した。この溶液を−４０℃まで冷却して、ＴＭＳＯＴｆ（６．２μＬ，３５μｍｏｌ）で処理した。この混合物をその温度で１０分間攪拌して、−１０℃までゆっくりと加温した。この反応物を飽和ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）で急冷して、ＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ２０ｍＬ）で抽出し、結合した有機物部分はＮａ２ＳＯ４で乾燥して、濃縮させた。残渣はフラッシュ・クロマトグラフィー（ＥｔＯＡ／ヘキサン０：１から１：６更に１：４）で精製したところ、カルバメート４７（１６０ｍｇ、０．１２８ｍｍｏｌ、７４％）が対応するβ−アノマー（３２ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ、１５％）と共に得られた。４７に関する分析値：透明なオイル  Ｃ７８Ｈ７９ＮＯ１４（Ｍ＋Ｎａ）＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ）の計算値は１２７６．５３９８で、実測値は１２７６．５４０５ｍ／ｚであった。
【０３４６】
実施例１−１５：２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２−Ｎ−ベンジル−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）エタノール（４８）の合成
【０３４７】
【化６３】
0006524218.tif 000064
【０３４８】
エステル４７（１２６ｍｇ、０．１００ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５ｍＬ）とＭｅＯＨ（５ｍＬ）に入れて攪拌した溶液に０℃でナトリウム・メトキシド（ＭｅＯＨ、１ｍＬ、０．５００ｍｍｏｌ内に０．５Ｍ）を加えて、その反応混合物を室温までゆっくり加温して、その温度で２４時間保存した。ナトリウム・メトキシド（ＭｅＯＨ、１ｍＬ、０．５００ｍｍｏｌ内に０．５Ｍ）を加えて、その反応物を３７℃に加温した。その混合物をその温度で７時間攪拌し、アンバーライトＩＲ１２０（Ｈ＋形状）で中和して、濾過し、濃縮し
た。残渣をフラッシュ・クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン０：１から１：６更に１：４）で精製したところ、アルコール４８（９８ｍｇ、８５μｍｏｌ，８５％）が透明なオイル形状で得られた。Ｃ７１Ｈ７５ＮＯ１３（Ｍ＋Ｎａ）＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ）の計算値は１１７２．５１３６で、実測値は１１７２．５１０３ｍ／ｚであった。
【０３４９】
実施例１−１６：α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２−アミノ）エタノール（４９）の合成
【０３５０】
【化６４】
0006524218.tif 000065
【０３５１】
ベンジル・エーテル４８をＥｔＯＡｃ（１ｍＬ）に加えたものを室温で、Ｐｄ／Ｃ（３０ｍｇ）をＭｅＯＨ（１ｍＬ）に加えたもの、水（０．５ｍＬ）及びＡｃＯＨ（３滴）を懸濁させたものに加えた。その反応混合物をＨ２の雰囲気下で２４時間攪拌して、濾過・濃縮したところ、二糖類４９（２．９ｍｇ，１８μｍｏｌ，８７％）が白色の固体として得られた。Ｃ１４Ｈ２７ＮＯ１１（Ｍ＋Ｎａ）＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ）の計算値は４０８．１４８１で、実測値は４０８．１４９９ｍ／ｚであった。
【０３５２】
実施例１−１７：２，３−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２，３−ジ−Ｏ−ベンゾイル−６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコイラノシル−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジルーα−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２−Ｎ−ベンジル−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）エタノール（５０）の合成
【０３５３】
【化６５】
0006524218.tif 000066
【０３５４】
アルコール４８（４７ｍｇ、４１μｍｏｌ）とチオグリコシド１２（６０ｍｇ、６１μｍｏｌ）を乾燥トルエン（２ｘ５ｍＬ）で共蒸発させ、高真空下で３０分間保存した。この混合物をＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）に溶解して、活性化された分子ふるい（３Å−ＡＷ）上で室温で３０分間攪拌した。この溶液を−１０℃に冷却して、ＮＩＳ（１３．８ｍｇ、６１μｍｏｌ）とトリフリン酸（１μＬ、１１μｍｏｌ）で処理した。この混合物をその温度で１時間保存してから、０℃までゆっくり加温した。この反応物をＥｔ３Ｎ（５０μＬ）で急冷して、濾過・濃縮したところ、中間体のベンジリデン・アセタールが黄色のオイルとして得られた。
【０３５５】
この中間体ベンジリデン・アセタールをＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）に入れて攪拌した溶液に、室温で、エタンチオール（０．３ｍＬ、４．０６ｍｍｏｌ）とｐ−トルエンスルホン酸（１０ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物をその温度で１時間攪拌してから、Ｅｔ３Ｎ（２０μＬ）で急冷して、濃縮させた。残渣をフラッシュ・クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン０：１から１：３更に１：２）で精製したところ、ジオール５０（７８ｍｇ、３９μｍｏｌ、９６％）が透明なオイルとして得られた。Ｃ１１８Ｈ１１７ＮＯ２７（Ｍ＋Ｎａ）＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ）の計算値は２００２．７７１０で、実測値は２００２．７７３１ｍ／ｚであった。
【０３５６】
実施例１−１８：２，３−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロネート−（１→４）−２，３−ジ−Ｏ−ベンゾイル−６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコイラノシル−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２−Ｎ−ベンジル−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）エタノール（５１）の合成
【０３５７】
【化６６】
0006524218.tif 000067
【０３５８】
アルコール５０（４５ｍｇ、２３μｍｏｌ、７３％）をＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）と水（０．８ｍＬ）に溶かしたものに、０℃の温度で、ＴＥＭＰＯ（３結晶）とＢＡＩＢ（１５．４ｍｇ、４８μｍｏｌ）を加えた。この反応混合物をその温度で２０分間攪拌して、室温までゆっくり加温した。１時間後、ＴＥＭＰＯ（２結晶）とＢＡＩＢ（１０ｍｇ、３１μｍｏｌ）を加えて、その混合物を室温で２時間攪拌した。その反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍL)で希釈し、１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（５ｍＬ）で急冷した。分離後に、その水相をＥｔＯＡｃ（２ｘ１０ｍＬ）で抽出し、結合した有機物部分をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮させた。その残渣をフラッシュ・クロマトグラフィーで２回（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン０：１から１：２更に８：１、次にＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：１＋１％  ＡｃＯＨ）精製してから、ヘプタンで繰り返し共蒸発させたところ、酸５１（３３ｍｇ、１７μｍｏｌ、７４％）が透明なオイルとして得られた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）はＣ１１８Ｈ１１５ＮＯ２８（Ｍ＋Ｎａ）＋に関して２０１６．７５０３と計算されたが、実測値では２０１６．７５５８ｍ／ｚであった。
【０３５９】
実施例１−１９：β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコイラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２−アミノ）エタノール（１８）の合成
【０３６０】
【化６７】
0006524218.tif 000068
【０３６１】
ＴＨＦ（４ｍＬ）とＭｅＯＨ（０．５ｍＬ）にエステル５１（４５ｍｇ、２３μｍｏｌ）を加えて攪拌した溶液に、０℃の温度でＮａＯＨ（１Ｍ水溶液、１ｍＬ）を加えた。その反応混合物を室温までゆっくり加温して、その温度で１６時間攪拌した。その溶液を０．５ＭＮａＨＳＯ４水溶液で中和して、ＥｔＯＡｃ（５ｘ５ｍＬ）で抽出を行った。結合した有機部分をＮａ２ＳＯ４で乾燥して、濃縮したところ、中間体アルコールが白色フォームとして得られた。
【０３６２】
この中間体アルコールをＭｅＯＨ（３ｍＬ）に溶かしたものを室温でＰｄ／Ｃ（２０ｍｇ）をＭｅＯＨ（６ｍＬ）、水（６滴）及びＡｃＯＨ（３滴）の懸濁液に加えた。この反応混合物をＨ２雰囲気内で９６時間攪拌して、濾過・濃縮した。反応が完了しなかったので、残渣を同じ条件下に置いて、室温で７２時間攪拌した。この反応混合物を固相抽出（クロマボンド（Ｃｈｒｏｍａｂｏｎｄ）  Ｃ１８，Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇａｌ）で精製して、凍結乾燥したところ、四糖類１８（１１．３ｍｇ、１６μｍｏｌ、２ステップで６８％）が白色の固体として得られた。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）はＣ２６Ｈ４５ＮＯ２２（Ｍ＋Ｎａ）＋に関して７４６．２３３０と計算されたが、実測値では７４６．２４１６ｍ／ｚであった。
【０３６３】
実施例１−２０：メチル［２，３−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラノシル］ウロネート−（１→４）−２，３−ジ−Ｏ−ベンゾイル−６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコイラノシル−（１→４）−  ２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２−Ｎ−ベンジル−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）エタノール（５２）の合成
【０３６４】
【化６８】
0006524218.tif 000069
【０３６５】
カルボン酸５１（１００ｍｇ、５０μｍｏｌ）をＤＭＦ（２．５ｍＬ）に入れて攪拌した溶液に、室温で、Ｃｓ２Ｃｏ３（２４．５ｍｇ、７５μｍｏｌ）とヨウ化メチル（１０．７ｍｇ、７５μｍｏｌ）を室温で加えて、その反応混合物をその温度で攪拌した。２時間後に、ヨウ化メチル（１０．７ｍｇ、７５μｍｏｌ）を加えて、その混合物を室温でさらに２時間攪拌した。この反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（５ｍＬ）で急冷して、ＥｔＯＡｃ（４ｘ１０ｍＬ）で抽出し、結合した有機性抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥して、濃縮した。残渣をフラッシュ・クロマトグラフィーで（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン０：１から２：３）で精製したところ、メチル・エステル５２（８１ｍｇ、４０μｍｏｌ、８０％）が白色のフォームとして得られた。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）はＣ１１９Ｈ１１７ＮＯ２８（Ｍ＋Ｎa）＋に関して２０３０，７６５９と計算されたが、実測値では２０３０．７６６０．ｍ／ｚであった。
【０３６６】
実施例１−２１：２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−メチル［２，３−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラノシル］ウロネート−（１→４）−２，３−ジ−Ｏ−ベンゾイル−６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコイラノシル−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピランシル−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２−Ｎ−ベンジル−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）エタノール（５３）の合成
【０３６７】
【化６９】
0006524218.tif 000070
【０３６８】
アルコール５２（１４ｍｇ、７μｍｏｌ）とチオグリコシド５４（Ｊ  Ｏｒｇ  Ｃｈｅｍ  １９９０，５５，２８６０）（１６．３ｍｇ、２８μｍｏｌ）を乾燥トルエン（３ｘ１０ｍＬ）で共蒸発させて、高度の真空下で３０分間保存した。この混合物をＥｔ２Ｏ（１．０５ｍＬ）とＣＨ２Ｃｌ２（０．３５ｍＬ）に溶解して、活性化された分子ふるい（３Å−ＡＷ）で室温で３０分間攪拌した。この溶液を−２０℃に冷却して、ＮＩＳ（６．３ｍｇ、２８μｍｏｌ）とＴＭＳＯＴｆ（１μＬ、５．５μｍｏｌ）で処理した。この混合物を、１時間攪拌して、０℃までゆっくり加温した。この反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）と１０％（ｗ／ｖ）Ｎａ２ＳＯ３（５ｍＬ）の１：１（ｖ／ｖ）混合物で急冷して、ＣＨ２Ｃｌ２（４ｘ１０ｍＬ）で抽出を行った。結合した有機部分をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣をフラッシュ・クロマトグラフィーで（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン０：１−１：４−１：３）で精製したところ、五糖類５３（１２．５ｍｇ、４．９μｍｏｌ、７１％）が透明なオイルとして得られた。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）はＣ１２６Ｈ１２１ＮＯ２９（Ｍ＋Ｎａ）＋に関して２５５３．００６６と計算されたが、実測値では２５５３．００６６ｍ／ｚであった。
【０３６９】
実施例１−２２：α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロネート−（１→４）−β−Ｄ−グルコイラノシル−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２−アミノ）エタノール（５５）の合成
【０３７０】
【化７０】
0006524218.tif 000071
【０３７１】
エステル５３（２６ｍｇ、１０．３μｍｏｌ）をＴＨＦ（１ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１ｍＬ）に入れた溶液を攪拌して、それに０℃の温度で過酸化水素（６％（ｖ／ｖ）水溶液、３９７μｍｏｌ）とＬｉＯＨ（０．５Ｍ水溶液、１１３μｍｏｌ）の１：１（ｖ／ｖ）混合液（４５０μＬ）を加えた。この反応混合物を室温まで加温して、その温度で１時間攪拌した。反応混合物をＮａＯＨ（０.５Ｍ水溶液、１ｍＬ）で処理し、室温で１６時間攪拌した。溶媒を減圧状態で蒸発させて、残渣をトルエン（２ｘ５ｍＬ）で共蒸発させて、ＭｅＯＨ（１ｍＬ）内に溶解した。この溶液を室温でＮａＯＭｅ（ＭｅＯＨ、１ｍＬ内に０．５Ｍ）で室温で処理して、その温度で１６時間攪拌した。反応混合物を水（０．５ｍＬ）とＣＨ２Ｃｌ２（０．５ｍＬ）で希釈し、アンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）  ＩＲ−１２０（Ｈ＋形態）で中和して、濾過・濃縮した。残渣をフラッシュ・クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン０：１から１：４更に１：２更に１：２＋１％（ｖ／ｖ）ＡｃＯＨ更に１：１＋１％（ｖ／ｖ）ＡｃＯＨ）で精製したところ、中間体カルボン酸が透明なオイルとして得られた。
【０３７２】
ＣＨ２Ｃｌ２／ｔＢｕＯＨ／水（１：１６：８、１ｍＬ）内に中間体カルボン酸をアルゴンでパージして０℃の温度で、Ｐｄ（ＯＨ）２を炭素（２０％（ｗ／ｗ、２０ｍｇ）上に負荷したものを同じ溶媒混合体（０．５ｍＬ）に入れた懸濁液で処理した。この懸濁液を水素でパージして、水素雰囲気内で１６時間攪拌して、濾過・濃縮した。反応が完了しなかったので、残渣を同じ状態に入れて、室温で２４時間攪拌した。この混合物を濾過・濃縮して、残渣を固相抽出（クロマボンド（Ｃｈｒｏｍａｂｏｎｄ）  Ｃ１８，  Ｍａｒｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ）で精製して凍結乾燥したところ、五糖類５５（８．１ｍｇ、９．１μｍｏｌ、２ステップで８８％）が白色の固体として得られた。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）はＣ３２Ｈ５５ＮＯ２７（Ｍ＋Ｎａ）＋に関して８８４．２８８３と計算されたが、実測値では８８４．２９４２ｍ／ｚであった。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ５．４８（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１Ｈ），５．０２（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．８８（ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，１Ｈ），４．５１（ｍ，２Ｈ），４．２０（ｄ，Ｊ＝９．９
Ｈｚ，１Ｈ），４．０４（ｍ，１Ｈ），４．０２-３．５２（ｍ，２６Ｈ），３．４３-３．１９（ｍ，４Ｈ）。
【０３７３】
実施例１−２３：４−Ｏ−ベンゾイル−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−メチル［２，３−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラノシル］ウロネート−（１→４）−２，３−ジ−Ｏ−ベンゾイル−６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコイラノシル−（１→４）−２，３，６−トリーＯ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２，３，６−トリーＯ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２−Ｎ−ベンジル−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）エタノール（５６）の合成
【０３７４】
【化７１】
0006524218.tif 000072
【０３７５】
アルコール５２（５０ｍｇ、２５μｍｏｌとイミデート４５（７２．１ｍｇ、６２ｍｏｌ）を乾燥トルエン（３ｘ１０ｍＬ）で共蒸発させて、高真空下に３０分間保存した。この混合物をＥｔ２Ｏ（２ｍＬ）とＣＨ２Ｃｌ２（０．６７ｍＬ）に溶解して、活性化された分子ふるい（３Å−ＡＷ）上で、室温で３０分間攪拌した。その溶液を−２０℃に冷却して、ＴＭＳＯＴｆ（２μＬ，１１μｍｏｌ）で処理した。この混合物を１時間攪拌して、０℃までゆっくり加温した。その反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）で急冷して、ＣＨ２Ｃｌ２（４ｘ１０ｍＬ）で抽出を行った。結合した有機物部分はＮａ２ＳＯ４上で乾燥・濃縮した。残渣をフラッシュ・クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン０：１から１：３更に３：７更に１：２）で精製したところ、六糖類５６（５１ｍｇ、１７μｍｏｌ、６９％）が透明なオイルとして得られた。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）はＣ１８０Ｈ１７７ＮＯ３９（Ｍ＋２Ｎａ）２＋に関して１５１１．０８４７と計算されたが
、実測値では１５１１．０５７６ｍ／ｚであった。
【０３７６】
実施例１−２４：α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロネート−（１→４）−β−Ｄ−グルコイラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２−アミノ）エタノール（５７）の合成
【０３７７】
【化７２】
0006524218.tif 000073
【０３７８】
エステル５６（２２ｍｇ、７．４μｍｏｌ）をＴＨＦ（１ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１ｍＬ）に加えて攪拌した溶液に、０℃で、過酸化水素（６％（ｖ／ｖ）水溶液、２９５μｍｏｌ）とＬｉＯＨ（０．５Ｍ水溶液、７４μｍｏｌ）の１：１（ｖ／ｖ）混合物（２９６μＬ）を加えた。この反応混合物を室温まで加温して、２９４μＬの同じＬｉＯＯＨ溶液で、それぞれ２時間後と４時間後に処理した。この混合物を室温で１６時間攪拌してから、ＮａＯＨ（１Ｍ水溶液、０．５ｍＬ）とＭｅＯＨ（０．５ｍＬ）で処理した。この反応混合物をその温度で２０時間攪拌して、１０％Ｎａ２ＳＯ３水溶液（０．８ｍＬ）で急冷して、減圧下で濃縮した。残渣を水（４ｍＬ）に溶解しＮａＨＳＯ４水溶液（０．５Ｍ水溶液）で中和して、ＥｔＯＡｃ（４ｘ１０ｍＬ）で抽出した。結合した有機部分はＮａ２ＳＯ４上で乾燥され、濃縮された。残渣をＮａＯＭｅ（ＭｅＯＨの０．５Ｍ溶液、１ｍＬ）で処理して、４０℃に加温し、その温度で５時間攪拌した。その反応混合物を室温まで冷却して、その温度でさらに１６時間攪拌し、水（０．５ｍＬ）で処理した。その混合物をアンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）  ＩＲ−１２０（Ｈ＋形態）で中和して、濾過・濃縮させた。残渣をフラッシュ・クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン０：１：０から１：４＋２％（ｖ／ｖ）ＡｃＯＨ更に１：１＋２％（ｖ／ｖ）ＡｃＯＨ）で精製して、中間体カルボン酸を透明なオイルとして得た。
【０３７９】
ＣＨ２Ｃｌ２／ＢｕＯＨ／水（１．５：１６：８、３ｍＬ）内の中間体カルボン酸をアルゴンでパージして、同じ溶媒混合体（１ｍＬ）内の炭素（２０％（Ｗ／Ｗ）装填、３０ｍｇ）上のＰｄ（ＯＨ）２の懸濁液で０℃で処理した。この懸濁液を水素でパージして、水素雰囲気下で１８時間攪拌し、濾過・濃縮した。残渣を固相抽出（クロマバンド（Ｃｈｒｏｍａｂｏｎｄ）  Ｃ１８，  Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ）で精製して、冷凍乾燥したところ、六糖類５７（７ｍｇ、６．７μｍｏｌ、３ステップで８６％）を白色の固体で得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）はＣ３８Ｈ６５ＮＯ３２（Ｍ＋Ｎａ）＋に関して１０７０．３３８７と計算されたが、実測値では１０７０．３３９１ｍ／ｚであった。
【０３８０】
実施例１−２５：β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコイラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２−アミノ）エタノール（６０）の合成
【０３８１】
【化７３】
0006524218.tif 000074
【０３８２】
エステル５０（２０ｍｇ、１０．１μｍｏｌ）をＴＨＦ（１ｍＬ）及びＭｅＯＨ（０．３３ｍＬ）に加えて攪拌した溶液に、室温でＮａＯＭｅ（ＭｅＯＨ中の０．５Ｍ溶液、０．５ｍＬ）を室温で加えた。この反応混合物を４０℃まで加温して、その温度で５時間攪拌した。この混合物を室温まで冷やして、その温度で１６時間攪拌した。この反応混合物をＡｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＩＲ−１２０（Ｈ＋形態）で中和し、濾過・濃縮した。残渣をサイズ排除クロマトグラフィー（Ｓｅｐｈａｄｅｘ，ＬＨ−２０  ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ２：１）で精製したところ、中間体ヘキサオールが白色フォームとして得られた。
【０３８３】
ＣＨ２Ｃｌ２／ｔＢｕＯＨ／水（１：１６：８、１ｍＬ）内に中間体ヘキサオルを加え
たものをアルゴンでパージして、０℃の温度で、同じ溶媒混合物（１ｍＬ）の炭素（２０％（ｗ／ｗ）装填、２０ｍｇ）上のＰｄ（ＯＨ）２の懸濁液で処理した。この懸濁液を水素でパージして、水素雰囲気内で１８時間攪拌して、濾過・濃縮した。残渣を固相抽出（Ｃｈｒｏｍａｂｏｎｄ  Ｃ１８、Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇａｌ）で精製して、凍結乾燥したところ、四糖類６０（６．８ｍｇ、９．０μｍｏｌ、２ステップで８９％）が白色固体として得られた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）はＣ２６Ｈ４７ＮＯ２１（Ｍ＋Ｎａ）＋に関して７３２．２５３８と計算されたが、実測値では７３２．２５０４ｍ／ｚであった。
【０３８４】
実施例１−２６：２，３−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコイラノシル−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２−Ｎ−ベンジルーＮ−ベンジロキシカルボニルアミノ）エタノール（６１）の合成
【０３８５】
【化７４】
0006524218.tif 000075
【０３８６】
アルコール４８（１５ｍｇ、１３μｍｏｌ）とチオグリコシド１（２０．４ｍｇ、３９μｍｏｌ）を乾燥トルエン（２ｘ５ｍＬ）で共蒸発させて、高真空下に１０分間置いた。この混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１．３ｍＬ）に溶解して活性化した分子ふるい（３Å−ＡＷ）上で室温で３０分間攪拌した。この溶液を−２０℃に冷却して、ＮＩＳ（８．８ｍｇ、３９μｍｏｌ）とＴｆＯＨ（１μＬ，１１μｍｏｌ）で処理した。この混合物をその温度で１時間攪拌してから０℃までゆっくり加温した。この反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）と１０％（ｗ／ｖ）Ｎａ２ＳＯ３（５ｍＬ）の１：１（ｖ／ｖ）混合物で急冷して、ＣＨ２Ｃｌ２（４ｘ１０ｍＬ）で抽出した。結合した有機性抽出物Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて、濃縮した。残渣はフラッシュ・クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：５から１：４更に１：３）で精製して、べンジリデン・アセタールが黄色のオイルとして得られた。
【０３８７】
中間体べンジリデン・アセタールをＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）に入れて攪拌した溶液に、室温でエタンチオール（０．２ｍＬ、２．８ｍｍｏｌ）とｐ−トルエンスルホン酸（６ｍｇ、３２μｍｏｌ）を加えた。この混合物をその温度で１時間攪拌してから、Ｅｔ３Ｎ（１００μＬ）で急冷して、濃縮した。残渣をフラッシュ・クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン０：１−１：３−２：３）で精製して、ジオール６１（１４．７ｍｇ、９．７μｍｏｌ）を透明なオイルとして得た。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）はＣ２６Ｈ４７ＮＯ２１（Ｍ＋Ｎａ）＋に関して１５４２．６１８８と計算されたが、実測値では１５４２．６１４５ｍ／ｚであった。
【０３８８】
実施例１−２７：β−Ｄ−グルコイラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２−アミノ）エタノール（６２）の合成
【０３８９】
【化７５】
0006524218.tif 000076
【０３９０】
エステル６１（２６ｍｇ、１７μｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）とＭｅＯＨ（１ｍＬ）に入れて攪拌した溶液に、室温でＮａＯＭｅ（ＭｅＯＨ内に０．５Ｍ，０．５ｍＬ）を室温で加えた。この反応混合物を室温で２時間攪拌して、アンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）  ＩＲ−１２０（Ｈ＋形態）で０℃で中和して、濾過・濃縮した。残渣をフラッシュ・クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：３から２：１）で精製して、テトラオールが白色のフォームとして得られた。
【０３９１】
この中間体テトラオールをＣＨ２Ｃｌ２／ｔＢｕＯＨ／水（１：６：２，５ｍＬ）に入
れて、アルゴンでパージし、０℃の温度で、同じ溶媒混合体（１ｍｌ）内で炭素（２０％（ｗ／ｗ）負荷、３０ｍｇ）上のＰｄ（ＯＨ）２で処理した。この懸濁液を水素でパージし、水素雰囲気内で２４時間攪拌して、濾過・濃縮した。反応が終了しなかったので、残渣を同じ条件下に再度置いて、室温で４８時間攪拌した。この混合物を濾過・濃縮して、残渣を固相抽出（クロマボンド（Ｃｈｒｏｍａｂｏｎｄ）  Ｃ１８，Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ）で精製して、凍結乾燥を行ったところ、三糖類６２（７．３ｍｇ、１３μｍｏｌ，２ステップで７８％）が白色の固体として得られた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）はＣ２６Ｈ４７ＮＯ２１（Ｍ＋Ｎａ）＋に関して５７０．２０１０と計算されたが、実測値では５７０．２０００ｍ／ｚであった。
【０３９２】
段階的に自動化されたグリコシル化による糖類の合成
実施例１−２８：グルコース構成ブロック３２の合成
【０３９３】
【化７６】
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【０３９４】
（２−メチル−５−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）  ２−Ｏ−ベンゾイル−３−Ｏ−ベンジル−４，６−Ｏ−ベンジリデン−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノース（３０）
（２−  メチル−５−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−ベンジル−１−チオ−β−Ｄグルコピラノース（２９）をＭｅＯＨに溶解して、ＮａＯＭｅ（１．０ｅｑ）を加え、その反応混合物を一晩攪拌した。この混合物をＩＲ−１２０−Ｈ＋アンバーライト樹脂で中和して、濾過・濃縮して、トルエンで共蒸発させた。その粗トリオールをＤＭＦに溶解した。ベンズアルデヒド・ジメチル・アセタール（２．０ｅｑ）と触媒的な量のパラ―トルエンスルホン酸を加えて、その混合物を８０℃の温度で２時間攪拌した。この混合物が室温まで冷却された後、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を加えた。相分離後に、有機相を酢酸エチルを用いて三度抽出した。結合した有機層を塩水で洗浄して、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過・濃縮した。この粗製物をＤＣＭに溶解して、Ｏ℃まで冷却し、Ｂｚ２Ｏ（２．０ｅｑ）、ＤＭＡＰ（０．５ｅｑ）とトリエチルアミン（４．０ｅｑ）を加えた。変換が完全に終了した後、この反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で急冷し、結合した有機層は塩水で洗浄して、ＭｇＳＯ４で濾過・濃縮した。残渣はシリカ・ゲル上でフラッシュ・クロマトグラフィーで精製したところ、化合物（３ステップで８８％）が得られた。Ｒｆ：０．２５（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝９：１）．［a］Ｄ＝６８．９６（ｃ＝３．１８，ＣＨＣｌ３）．）；ＩＲ（薄層，クロロフォルム）：υ＝２９６２，１７２９，１２６５，１０９３ｃｍ−１；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝８．０１（ｄｄｄ，Ｊ＝５．８，５．３，０．８Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒ），７．６０（ｄｄｄ，Ｊ＝７．１，２．６，１．３Ｈｚ，１Ｈ，ＨＡｒ），７．５１（ｄｄｄ，Ｊ＝６．０，５．６，２．３Ｈｚ，３Ｈ，ＨＡｒ），７．４９-７．４３（ｍ，２Ｈ，ＨＡｒ），７．４３-７．３５（ｍ，３Ｈ，ＨＡｒ），７．１９（ｄｔ，Ｊ＝６．３，３．１Ｈｚ，１Ｈ，ＨＡｒ），７．１３（ｄｄ，Ｊ＝６．７，４．０Ｈｚ，３Ｈ，ＨＡｒ），７．１０-７．０４（ｍ，３Ｈ，ＨＡｒ），５．６３（ｓ，１ＨＣＨＯ２Ｐｈ），５．４２-５．３２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２），４．８２（ｄ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨＨＰｈ），４．８１（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１），４．６９（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨＨＰｈ），４．３９（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，５．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６’），３．９４-３．８６（ｍ，３Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−４，Ｈ−６），３．５６（ｄｔ，Ｊ＝１４．６，４．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−５），２．１９（ｓ，３Ｈ），１．２７（ｓ，９Ｈ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６５．２３（Ｃ＝Ｏ），１４９．６６，１３７．８４，１３７．２８，１３７．０３，１３３．３４，１３２．３７，１３０．０７，１３０．０４，１２９．９３，１２９．９０，１２９．１９，１２８．５１，１２８．４３，１２８．２９，１２８．２２，１２７．７１，１２６．１３，１２５．３８（Ａｒ），１０１．４４（ＣＨＯ２Ｐｈ），８８．０３（Ｃ−１），８１．６４（Ｃ−３），７９．４３（Ｃ−４），７４．３６（ＣＨ２Ｐｈ），７２．２５（Ｃ−２），７０
．６６（Ｃ−５），６８．８１（Ｃ−６），３４．５６（ＣｑｔＢｕチオ），３１．３６（ｔＢｕ），２０．３６（ＣＨ３チオ）；ＭＳＥＳＩ＋−ＨＲＭＳｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］＋は、Ｃ３８Ｈ４０Ｏ６ＳＮａに関して６４７．２４６２と計算されたが、実測値では，６４７であった。
【０３９５】
（２−メチル−５−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）２−Ｏ−ベンゾイル−３，６-ジ−Ｏ−ベンジルー１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノース（３１）
化合物１の溶液をトルエンで共蒸発させて、アルゴン雰囲気下でＤＣＭ（６．５ｍＬ）内に溶解した。トリエチルシラン（０．６２ｍＬ，３．８８ｍｍｏｌ）とトリフルオロ酢酸無水物（０．２７ｍＬ、１．９４ｍｍｏｌ）を加え、溶液を０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸（０．３０ｍＬ、３．８８ｍｍｏｌ）を滴下で加えて、反応混合物を攪拌して、室温まで加温した。出発物質が完全に転換された後、溶液をＤＣＭで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で急冷した。結合有機層はＭｇＳＯ４上で乾燥して、溶媒を真空中で除去した。残渣をシリカ・ゲル（ヘキサン／酢酸エチル、９：１−７：３）上でカラム・クロマトグラフィーで精製して、白色フォーム（９２％）を得た。ＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］＋は、Ｃ３８Ｈ４２Ｏ６ＳＮａに関して６４９．２６００と計算されたが、実測値では６４９．２５８５であった。
【０３９６】
（２−メチル−５−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）  ２−Ｏ−ベンゾイル−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−フルオレニルメトキシカルボニル−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド（３２）
化合物３１をアルゴン雰囲気下でＤＣＭ（６．５ｍＬ）内に溶解した。フルオレニルメチル・クロロフォルメート（８．３ｇ、３１．９ｍｍｏｌ）とピリジン（３．４４ｍＬ、４２．５ｍｍｏｌ）をその溶液に０℃の温度で加えた。出発物質が完全に転換された後、その溶液をＤＣＭで希釈して、１Ｍ  ＨＣｌ水溶液及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で抽出した。結合有機相はＭｇＳＯ４上で乾燥して、真空中で溶剤を除去した。その粗生成物をシリカ・ゲル・フラッシュ・カラム・クロマトグラフィーで精製したところ、標記の化合物が得られた。ＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］＋はＣ５３Ｈ５２Ｏ８ＳＮａに関して８７１．３２８１と計算されたが、実測値では８７１．３３１１であった。
【０３９７】
実施例１−２９：グルコース構成ブロック３５の合成
【０３９８】
【化７７】
0006524218.tif 000078
【０３９９】
（２−メチル−５−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）  ２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−４，６−Ｏ−ベンジリデン−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド（３４）
（２−メチル−５−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）４，６−Ｏ−ベンジリデン−１−  チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド（３３）をアルゴン雰囲気下でＤＣＭ（６．５ｍＬ）に溶解した。その溶液に、臭化ベンジルとＮａＨを０℃の温度でその溶液に加えた。出発物質が完全に転換された後、反応混合物をメタノールで急冷して、エーテルで希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌで抽出させた。結合された有機相をＭｇＳＯ４で乾燥して、溶媒は真空中で取り除いた。この粗生成物をシリカ・ゲル・フラッシュ・カラム・クロマトグラフィーで精製して、標記の化合物を得た。ＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］＋はＣ３８Ｈ４２Ｏ５ＳＮａに関して６３３．２６５１と計算されたが、観測値では６３３．２６４４であった。
【０４００】
（２−メチル−５−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）６−Ｏ−アセチル−２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−フルオレニルメトキシカルボニル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（３５）
（２−メチル−５−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−４，６−
Ｏ−ベンジリデン−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド（３４）をＤＣＭに溶かした溶液に、ＴＦＡと水を加えた。完了後、粗生成物をヘキサンで上澄みを移して、副産物を取り除いた。粗生成物は次の反応に用いた。粗生成物の溶液に−１５℃の温度で、酢酸、２−クロロ−１−メチルピリジウムヨウ化物及びＤＡＢＣＯを加えた。出発物質が完全に転換された後、その溶液をＤＣＭで希釈し、１Ｍ  ＨＣｌ水溶液と飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で抽出を行った。結合有機相はＭｇＳＯ４上で乾燥され、溶媒は真空中で取り除かれた。粗生成物をシリカ・ゲル・カラム・クロマトグラフィーで精製したところ、標記の化合物が得られた。粗生成物をアルゴン雰囲気内でＤＣＭ（６．５ｍＬ）に溶解した。その溶液に、０℃の温度で、９−フルオレニルメチル・クロロ炭酸塩（８．３ｇ、３１．９ｍｍｏｌ）とピリジン（３．４４ｍＬ、４２．４ｍｍｏｌ）を加えた。出発物質が完全に転換した後、その溶液をＤＣＭで希釈し、１Ｍ塩酸水溶液と飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で抽出した。結合有機相はＭｇＳＯ４上で乾燥させ、溶媒は真空中で取り除いた。粗生成物をシリカ・ゲル・フラッシュ・カラム・クロマトグラフィーで精製したところ、標記の化合物が得られた。ＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］＋はＣ４８Ｈ５０Ｏ８ＳＮａに関して８０９．３１２４と計算されたが、実測値では８０９．３１３７であった。
【０４０１】
実施例１−３０：（２−メチル−５−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）３，６−ジ−Ｏ−アセチル−２，４−ジ−Ｏ−ベンジル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（３７）
【０４０２】
【化７８】
0006524218.tif 000079
【０４０３】
（２−メチル−５−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−Ｏ−ベンジル−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド（３６）（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒ，１９９９，４０  ６５２３）をトルエンで共蒸発させて、アルゴン雰囲気下でＤＣＭ（１７０ｍＬ）内に溶解した。ＢＨ３をＴＨＦ（１０８ｍＬ，１０８ｍｍｏｌ）に溶かした１Ｍ溶液を加えて、その溶液をＯ℃に冷却した。１０分後に、トリメチルシリル・トリフレート（１．６６ｍＬ，９．２ｍｍｏｌ）を加えて、反応混合物を攪拌した。完了後、その溶液をＤＣＭで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を滴下して急冷した。有機相はＭｇＳＯ４で乾燥して、溶剤は真空中で取り除いた。粗生成物はさらに精製せず、そのまま次のステップで使用した。
【０４０４】
その粗生成物をＤＣＭに溶かした溶液に、無水酢酸（８．３ｇ、３１．９ｍｍｏｌ）とピリジン（３．４４ｍＬ，４２．５ｍｍｏｌ）を加えた。出発物質が完全に転換された後に、その溶液をＤＣＭで希釈して、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で抽出した。結合した有機相はＭｇＳＯ４で乾燥し、溶媒は真空中で取り除いた。粗生成物をシリカ・ゲル・フラッシュ・カラム・クロマトグラフィーで精製したところ、標記の化合物（３７）が得られた。ＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］＋はＣ３５Ｈ４２Ｏ７ＳＮａに関して６２９．２５４６と計算されたが、実測値では６２９．２５５２であった。
【０４０５】
実施例１−３１：保護されたガラクトース構成ブロックの合成
【０４０６】
【化７９】
0006524218.tif 000080
【０４０７】
エチル  ２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−４，６−Ｏ−ベンジリデン−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（３８）をトルエンで共蒸発させ、アルゴン雰囲気内でＤＣＭ（６．５ｍＬ）内に溶解した。トリエチルシラン（０．６２ｍＬ、３．８８ｍｍｏｌ）とトリフルオロ酢酸無水物（０．２７ｍＬ、１．９４ｍｍｏｌ）を加えて、その溶液を０℃まで冷却した。トリフルオロ酢酸（０．３０ｍＬ、３．８８ｍｍｏｌ）を滴下で加えて、その反応混合物を攪拌し、室温に戻るまで放置した。出発物質が完全に転換された後、その溶液をＤＣＭで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で急冷した。結合有機層をＭｇＳＯ４上で乾
燥して、溶媒は真空中で取り除いた。残渣をシリカ・ゲル（ヘキサン／酢酸エチル、９：１−７：３）上でカラム・クロマトグラフィーで精製したところ、白色のフォームが得られた（９４％）。［Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ  Ｅ．  Ｍａｒｔｉｎ，  Ｍａｒｋｕｓ  Ｗ．Ｗｅｉｓｈａｕｐｔ及びＰｅｔｅｒ  Ｈ．Ｓｅｅｂｅｒｇｅｒ，  Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２０１１，４７，１０２６０−１０２６２］。
【０４０８】
エチル  ２，３，６−トリ−０−ベンジル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシドをアルゴン雰囲気内でＤＣＭ（６．５ｍＬ）内に溶解した。無水酢酸（８．３ｇ、３１．９ｍｍｏｌ）とピリジン（３．４４ｍＬ、４２．５ｍｍｏｌ）を０℃の温度でその溶液に加えた。出発物質が完全に転換された後、その溶液をＤＣＭで希釈し、１Ｍ  ＨＣｌ水溶液と飽和ＮａＨＣＯ３で抽出した。結合した有機相はＭｇＳＯ４上で乾燥し、溶媒は真空中で取り除いた。粗生成物をシリカ・ゲル・フラッシュ・クロマトグラフィーで精製して、標記の化合物（４０）を得た。（Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０１１，４７，１０２６０）
エチル  ２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−フルオレニルメトキシカルボニル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（４１）
化合物（３９）の溶液に９−フルオレニルメチル・クロロギ酸エステル（８．３ｇ、３１．９ｍｍｏｌ）とピリジン（３．４４ｍＬ、４２．５ｍｍｏｌ）を０℃で加える。出発物質が完全に転換された後、その溶液をＤＣＭで希釈して、１Ｍ  ＨＣｌ水溶液とＮａＨＣＯ３飽和水溶液で抽出を行った。結合した有機相はＭｇＳＯ４上で乾燥され、溶媒は真空中に取り除かれた。粗生成物をシリカ・ゲル・フラッシュ・クロマトグラフィーで精製して、標記の化合物を得た。ＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］＋はＣ４４Ｈ４４Ｏ７ＳＮａに関して７３９．２７０５と計算されたが、実測値では７３９．２６７３であった。
【０４０９】
実施例１−３２：グルクロン酸構成ブロック４２の調製
【０４１０】
【化８０】
0006524218.tif 000081
【０４１１】
メチル（２−メチル−５−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニル）−２−Ｏ−ベンゾイル−３−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−フルオレニルメトキシカルボニル−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシル・ウロネート（４２）はＡｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１３，５２，５８５８に述べられている手順に従って合成された。
【０４１２】
実施例１−３３：機能化された固体支持体の合成
機能化された樹脂はＡｎｇｒｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１３, ５２,５８５８に述べられている手順に従って合成された。
【０４１３】
【化８１】
0006524218.tif 000082
【０４１４】
実施例１−３４：基本手順  １：オートメーション・モジュール
保存液の調製
活性剤溶液：Ｎ−ヨードサクシンイミド（１．４８ｇ、６．６６ｍｍｏｌ）及びＴｆＯＨ（６０μＬ、０．６６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２０ｍＬ）とジオキサン（２０ｍＬ）の混合物に溶解した。
Fｍｏｃ脱保護溶液：  ＤＭＦ（ｖ/ｖ）内にトリエチルアミンを２０％の割合で溶かした溶液を調製した。
チオグリコシド構成ブロック溶液：０.２５ｍＭの構成ブロックを２ｍＬのＤＣＮに溶解した。
【０４１５】
モジュール１：グリコシル化：樹脂を２ｍＬ  ＤＣＭ内で膨張させて、反応容器の温度をＴ１に調整する。グリコシル化反応の場合、ＤＣＭは排出され、構成ブロックの溶液（１．０ｍＬのＤＣＭ内に５ｅｑ）の溶液だけが反応容器に送られる。設定された温度に到達したら、活性剤（１．０ｍＬの溶液に５ｅｑ）を加えることによって、反応が開始される。このグリコシル化は温度Ｔ１で５分間、Ｔ２で４５分間行われる。この手順は２度繰り返される。反応が完了すると、その溶液を排出して、樹脂をＤＣＭ（６回、各回２ｍＬで２５秒間）。この手順をさらに２回繰り返す。
【０４１６】
モジュール２：Ｆｍｏｃ脱保護：樹脂をＤＭＦで洗浄し（６回）、２ｍＬ  ＤＭＦ内で膨張させ、反応容器の温度は２５℃に調整する。Ｆｍｏｃ脱保護のために、ＤＭＦを排出して、ＤＭＦ内に２０％のトリエチルアミンの溶液２ｍＬを反応容器に移した。５分後に、反応溶液をオリゴ糖合成器のフラクション・コレクターに集めて２ｍＬの２０％トリエチルアミンをＤＭＦに入れた溶液を、その樹脂に与えた。この手順を３回繰り返す。次のグリシル化のために、その樹脂をＤＭＦ、ＴＨＦ、ＤＣＭで洗浄する（それぞれ６回）。Ｆｍｏｃ定量のためには、反応溶液を集め、１００μＬ画分をＤＭＦにトリエチルアミンを２０％含む溶液で希釈して５ｍＬとし、λ＝２９４ｎｍでの紫外線吸収を判定する。
【０４１７】
固体支持体からの裂開（Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１３，５２，  ５８５８−５８６１）：
継続的光切断フロー・リアクター−基本手順：フロー・リアクターのセットアップは、反応温度を２５℃に維持するための冷却器に接続された石英ガラス冷却システム内において、アーク長が２７．９ｃｍで電力が４５０Ｗの中間圧力水銀ランプ（Ｈａｎｏｖｉａ）を紫外線フィルター（Ｐｙｒｅｘ、３０５ｎｍで５０％の透過率）によって取り囲ませることを含んでいる。フッ化エチレン・プロピレン（ＦＥＰ）チューブ（内径：０．０３インチ、体積：１２ｍＬ）がこの冷却システムの周りに巻き付けられている。注入ポンプがこのＦＥＰチューブに接続されていて、リアクターを通じて取り入れ口経由で溶媒と樹脂をフラッシングするのに用いられる。固体支持体はフリットによって濾過・除外され製品溶液はプールされ、溶媒は真空中で除去される。紫外線ランプがファンで追加的に冷却されるボックス内に配置されている。
【０４１８】
この自動化された合成プロセスを終了させるためには、樹脂をＤＣＭで洗浄し（６回）、２ｍＬ  ＤＣＭ内で膨張させ、使い捨て注射器（２０ｍＬ）に移される。光リアクターを用意するために、ＦＥＰチューブを１５ｍＬ  ＭｅＯＨで洗浄して、その後、１５ｍＬ
ＤＣＭで毎分４ｍＬの流速で洗浄する。裂開を行うために、樹脂を使い捨て注射器（２０ｍＬ）からリアクター内に注入して、１５ｍＬ  ＤＣＭをチューブを通じて押し入れる（流量：毎分５００μＬ）。残った樹脂を洗い出すために、チューブを２０ｍＬ  ＤＣＭで洗浄する（流量：毎分５００ｍＬ）。リアクターを出た懸濁液はフィルターに入り、そこで、樹脂がフィルタリングで取り出され、ＤＣＭで洗浄される。チューブは１５ｍＬのＤＣＭを用いて流量毎分４ｍＬで再均衡化される。全体の手順は、２回行われる。得られた溶液は真空中で蒸発させられ、粗生成物はＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ  ｓｉｌｉｃａ、流量毎分５ｍＬ）で精製される。
【０４１９】
基本手順  ２：広域的な脱保護
精製された糖類をＴＨＦとＭｅＯＨ（１．２ｍＬ，ｖ／ｖ＝４：１）の混合物に入れた溶液に、１Ｍ  ＬｉＯＨ−３５％  Ｈ２Ｏ２（１５０μＬ、ｖ／ｖ＝２：１）を０℃の温度で加えた。この反応混合物を室温まで加温して、その状態で保存した。４時間後、１Ｍ
ＫＯＨ（０．５ｍＬ）を加えて、その混合物を攪拌した。反応終了後、その混合物をＩＲ−１２０−Ｈ＋アンバーライト樹脂で中和し、濾過し、濃縮した。粗生成物をＭｅＯＨ、酢酸エチル、及び酢酸（５ｍＬ：０．７５ｍＬ：０．２５ｍＬ）内に溶解し、その後でＰｄ／Ｃ（２０ｍｇ）で処理した。この混合物をアルゴン雰囲気下で３０分間、次にＨ２
雰囲気下で１２時間泡立てさせ、濾過・濃縮した。残渣をＨＰＬＣ（Ｈｙｐｅｒｃａｒｂｏｎ）で精製して凍結乾燥したところ、糖類（蟻酸塩）が白色の固体として得られた。
【０４２０】
自動化を行うための基本手順
実施例１−３３の機能化された樹脂（６５ｍｇ；装填０．３８５ｍｍｏｌ／ｇ；０．０２５ｍｍｏｌ）を合成器の反応容器内に入れて、２ｍＬ  ＤＣＭ内で膨張させた。合成シーケンスを開始するために樹脂をＤＭＦ、ＴＨＦ、そしてＤＣＭ（３回、各２ｍＬで２５秒間）連続的に洗浄した。各構成ブロックに対するモジュール１とＥｍｏｃ脱保護のためのモジュール２を行って、各糖構造を作成した。
【０４２１】
ＨＰＬＣ上での精製
所望の化合物を合成した後、その樹脂を固体支持体から開裂した。粗生成物は半予備的ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ−Ｓｉｌｉｃａ（２１ｘ２５０ｍｍ，５μｍ）を用いて流量５ｍＬ／分で精製し、溶出液はヘキサン／エチル酢酸塩で、勾配は２０％（５分間）→６０％（４５分間）→１００％（５分間）、検出は２１０及び２８０ｎｍ）で行われ、目標の二糖類を得た。
【０４２２】
所望の化合物の広域脱保護を実施した後、その粗生成物を半予備的ＨＰＬＣ（
カラム：Ｌｕｎａ−Ｈｙｐｅｒ−Ｃａｒｂｏｎ（２１ｘ２５０ｍｍ；５μｍ）を用いて流量５ｍＬ／分で精製し、溶出液は０．１蟻酸水溶液／蟻酸のアセトニトリル溶液で、勾配は１０％（５分間）→４０％（３０分間）→１００％（５分間）、検出はＥＬＳＤ）で行われ、目標のオリゴ糖が得られた。
【０４２３】
実施例１−３４：Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−５−アミノ−ペンタニル・メチル  ２−Ｏ−ベンゾイル−３−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロネート−（１→４）−２−Ｏ−ベンゾイル−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−６−Ｏ−アセチル−２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（１９ａ）
【０４２４】
【化８２】
0006524218.tif 000083
【０４２５】
四糖類２１ａは以下の反応シーケンスで調製された。
【０４２６】
【表１】
0006524218.tif 000084
【０４２７】
樹脂から８％。ＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］＋はＣ１１０Ｈ１１７ＮＯ２７に関して１９０６．７７１１と計算されたが、実測値は１９０６．７５９０であ
った。
【０４２８】
実施例１−３５：５−アミノ・ペンタニル−β−Ｄ−グルコピラノシル・ウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（１９）の調製
【０４２９】
【化８３】
0006524218.tif 000085
【０４３０】
四糖類１９ａを一般的な脱保護手順に処したところ、四糖類１９が得られた。３６％、
ＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋はＣ２９Ｈ５２ＮＯ２２に関して７６６．２９７５と計算されたが、実測値は７６６．２９８８であった。
【０４３１】
実施例１−３６：Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−５−アミノ−ペンタニル  ４−Ｏ−アセチル２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−メチル−２−Ｏ−ベンゾイル−３−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコピラノシル・ウロネート−（１→４）−２−Ｏ−ベンゾイル−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−６−Ｏ−アセチル−２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシド（２０ａ）の合成
【０４３２】
【化８４】
0006524218.tif 000086
【０４３３】
四糖類２０ａは以下の反応シーケンスに従って調製された。
【０４３４】
【表２】
0006524218.tif 000087
【０４３５】
樹脂から１６％。ＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］＋はＣ１１２Ｈ１１９ＮＯ２８Ｎａに関して１９４８．７８１６と計算されたが、実測値は１９４８．７７９６であった。
【０４３６】
実施例１−３７：５−アミノ−ペンタニル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル・ウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド（２０）の調製
【０４３７】
【化８５】
0006524218.tif 000088
【０４３８】
四糖類２０ａを一般的な脱保護手順で処理したところ、四糖類２０が得られた。４０％ＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋はＣ２９Ｈ５２ＮＯ２２に関して７６６．２９７５と計算されたが、実測値は７６６．２９６４であった。
【０４３９】
実施例１−３８：Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−５−アミノ−ペンタニル−３，６−ジ−Ｏ−アセチル−２，４−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−メチル−２−Ｏ−ベンゾイル−３−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコピラノシル・ウロネート−（１→４）−２−Ｏ−ベンゾイル−３，６−ジ−Ｏ−ベンジルーβ−Ｄ−グルコピラノシド（２１ａ）の調製
【０４４０】
【化８６】
0006524218.tif 000089
【０４４１】
【表３】
0006524218.tif 000090
【０４４２】
樹脂から２０％。ＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］＋はＣ１１２Ｈ１１９ＮＯ２８に関して１９４８．７８１６と計算されたが、実測値は１９５０．７９０６であった。
【０４４３】
実施例１−３９：５−アミノ・ペンタニル−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル・ウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（２１）の調製
【０４４４】
【化８７】
0006524218.tif 000091
【０４４５】
四糖類２１ａを一般的な脱保護手順で処理したところ、四糖類２１が得られた。４２％ＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋はＣ２９Ｈ５２ＮＯ２２に関して７６６．２９７５と計算されたが、実測値は７６６．２９７７であった。
【０４４６】
実施例１−４０：Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−５−アミノ−ペンタニル  ２−Ｏ−ベンゾイル−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−６−Ｏ−アセチル−３，４-ジ  −Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−メチル  ２−Ｏ−ベンゾイル−３−Ｏ−ベンジルーβ−Ｄ−グルコピラノシル・ウロネート（２２ａ）の合成
【０４４７】
【化８８】
0006524218.tif 000092
【０４４８】
四糖類２２ａは以下う反応シーケンスで合成された。
【０４４９】
【表４】
0006524218.tif 000093
【０４５０】
樹脂から２１％。  ＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］＋はＣ１１０Ｈ１１７ＮＯ２７Ｎａに関して１９０６．７７１１と計算されたが、実測値は１９０６．７６２４であった。
【０４５１】
実施例１−４１：５−アミノ・ペンタニル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸（２２）の合成
【０４５２】
【化８９】
0006524218.tif 000094
【０４５３】
四糖類２２ａを一般的な脱保護手順で処理したところ、四糖類２２が得られた。５２％
ＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋はＣ２９Ｈ５２ＮＯ２２に関して７６６．２９７５と計算されたが、実測値は７６６．２９８８であった。
【０４５４】
実施例１−２８から１−３４までに述べられた本発明による糖類のさらなる実施例：
【０４５５】
【化９０】
0006524218.tif 000095
【０４５６】
Ｃ４１Ｈ７１ＮＯ３２に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は、１０９０．３９５９
５−アミノ・ペンタニル−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α―Ｄ−  ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β―Ｄ−−グルコピラノシル−（１→４）−α―Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシド
【０４５７】
【化９１】
0006524218.tif 000096
【０４５８】
Ｃ４２Ｈ７５ＮＯ３１に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は、１１０４．４１１６
５−アミノ・ペンタニル・ガラクトピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α―Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル
ウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α―Ｄ−グルコピラノシド
【０４５９】
【化９２】
0006524218.tif 000097
【０４６０】
Ｃ４１Ｈ６９ＮＯ３３に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は１１０４．３７５２
５−アミノ・ペンタニル  β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α―Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシルー（１→４）−β−Ｄ―グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド
【０４６１】
【化９３】
0006524218.tif 000098
【０４６２】
Ｃ４１Ｈ６９ＮＯ３３に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は、１１０４．３７５２
５−アミノ・ペンタニル  α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸
【０４６３】
【化９４】
0006524218.tif 000099
【０４６４】
Ｃ４２Ｈ７５ＮＯ３１に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は、１０９０．４３２３
５−アミノ・ペンタニル  α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシド
【０４６５】
【化９５】
0006524218.tif 000100
【０４６６】
Ｃ４１Ｈ７３ＮＯ３１に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は、１０７６．４１６７
５−アミノ・ペンタニル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルー（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド
【０４６７】
【化９６】
0006524218.tif 000101
【０４６８】
Ｃ４１Ｈ７３ＮＯ３１に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は、１０７６．４１６７
５−アミノ・ペンタニル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド
【０４６９】
【化９７】
0006524218.tif 000102
【０４７０】
Ｃ４２Ｈ７５ＮＯ３１に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は、１０９０．４３２３
５−アミノ・ペンタニル  α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（７０）
【０４７１】
【化９８】
0006524218.tif 000103
【０４７２】
Ｃ３３Ｈ５７ＮＯ２７に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は、８９０．３１１８
３−アミノプロピル  α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシド
【０４７３】
【化９９】
0006524218.tif 000104
【０４７４】
Ｃ３４Ｈ５９ＮＯ２７に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は９１４．３２７４
５−アミノペンタニル  α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド
【０４７５】
【化１００】
0006524218.tif 000105
【０４７６】
Ｃ３３Ｈ５７ＮＯ２７に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は、８９０．３１１８
３−アミノプロピル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド
【０４７７】
【化１０１】
0006524218.tif 000106
【０４７８】
Ｃ３５Ｈ５９ＮＯ２８に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は、９４２．３２２４
５−アミノ・ペンタニル  β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸
【０４７９】
【化１０２】
0006524218.tif 000107
【０４８０】
Ｃ３４Ｈ６１ＮＯ２６に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は、８９０．３４８２
４−アミノブチル  α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシド
【０４８１】
【化１０３】
0006524218.tif 000108
【０４８２】
Ｃ３６Ｈ６５ＮＯ２６に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値
は、９２８．３７９５
６−アミノ・ヘキサニル  α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド
【０４８３】
【化１０４】
0006524218.tif 000109
【０４８４】
Ｃ３３Ｈ５９ＮＯ２６に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は、８８６．３３２５
３−アミノプロピル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド
【０４８５】
【化１０５】
0006524218.tif 000110
【０４８６】
Ｃ３５Ｈ６３ＮＯ２６に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は、９１４．３６３８
５−アミノ・ペンタニル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド
【０４８７】
【化１０６】
0006524218.tif 000111
【０４８８】
Ｃ２８Ｈ５１ＮＯ２１に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は、７３８．２９５４
４−アミノブチル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド
【０４８９】
【化１０７】
0006524218.tif 000112
【０４９０】
Ｃ２７Ｈ４９ＮＯ２１に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は、７２４．２７９７
３−アミノプロピル  α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド
【０４９１】
【化１０８】
0006524218.tif 000113
【０４９２】
Ｃ２９Ｈ５３ＮＯ２１に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は、７５２．３１１０
６−アミノ・ヘキサニル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド
【０４９３】
【化１０９】
0006524218.tif 000114
【０４９４】
Ｃ４０Ｈ７１ＮＯ３１に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は、１０６２．４０１０
４−アミノ・ブチル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル（１→４）−β−Ｄ−−グルコピラノシ
ル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシド
【０４９５】
【化１１０】
0006524218.tif 000115
【０４９６】
Ｃ３９Ｈ６９ＮＯ３１に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は、１０４８．３８５４
３−アミノプロピル−  α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド
【０４９７】
【化１１１】
0006524218.tif 000116
【０４９８】
Ｃ３９Ｈ６９ＮＯ３１に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は、１０４８．３８５４
３−アミノプロピル  α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド
【０４９９】
【化１１２】
0006524218.tif 000117
【０５００】
Ｃ３６Ｈ６５ＮＯ２６に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は、９２８．３７９５
６−アミノ・ヘキサニル  α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド
【０５０１】
【化１１３】
0006524218.tif 000118
【０５０２】
Ｃ３３Ｈ５９ＮＯ２６に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は、８８６．３３２５
３−アミノプロピル  α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシド
【０５０３】
【化１１４】
0006524218.tif 000119
【０５０４】
Ｃ３４Ｈ６１ＮＯ２６に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は、９００．３４８２
４−アミノブチル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド
【０５０５】
【化１１５】
0006524218.tif 000120
【０５０６】
Ｃ２８Ｈ５１ＮＯ２１に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は、７３８．２９５４
４−アミノブチル  β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド
【０５０７】
【化１１６】
0006524218.tif 000121
【０５０８】
Ｃ３０Ｈ５５ＮＯ２１に関するＭＳ  ＥＳＩ＋−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値は、７６６．３２６７
６−アミノヘキサニル  α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド
生物学的実験
実施例２−１：コードリンク（ＣｏｄｅＬｉｎｋ）  ＮＨＳスライドを用いたマイクロアレイの合成
自動圧電整列ロボット（Ｓｃｉｅｎｉｏｎ社，ベルリン，ドイツ）を用いて、コードリンク（ＣｏｄｅＬｉｎｋ）  ＮＨＳスライド上に意図されたグリカンをスポットし、室温で２４時間（ＰＢＳ内で１％ｗ／ｖ）培養した。スライドをブロック用緩衝液（１００ｍＭエタノールアミンを５０ｍＭ  Ｎａｐｉ  ｐＨ＞９に入れたもの）内で室温で３０分間培養し、毎回水とエタノールを用いて洗浄し、乾燥した。１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミンを有するスライドをリン酸緩衝食塩水で１時間、３７℃でブロッキングして、３回洗浄してから乾燥した。
【０５０９】
実施例２−２：実施例２−１で述べた手順により合成されたマイクロアレイを用いての結合実験
一般式（Ｉ）の糖類をウサギ抗ＳＰ８タイプ血清あるいはヒト肺炎球菌基準血清００７ｓｐ（英国の国立生物製品基準規制機構（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌ））から購入したＰｎｅｕｍｏｖａｘ（登録商標）ワクチンで免疫化した２８７人からプールされた血清）のいずれかで被覆したマイクロアレイ・スライドを培養することで、天然のＳＰ８多糖類が存在している状態と不在の状態のいずれかで、そして、蛍光的にラベルした抗ウサギ（ヤギ抗ウサギＩｇＧ−ＦＩＴＣ，aｂｃａｍ  ａｂ６７１７）あるいは抗ヒト二次抗体（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８ヤギ抗ヒトＩｇＭ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ａ２１２１５，Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７ヤギ抗ヒトＩｇＧ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ａ２１４４５））を用いて結合実験を行った。
【０５１０】
実施例２−３：アジビン酸ジサクシンイミジルを用いた合成四糖類１０及び１８のＣＲＭ１９７への接合
【０５１１】
【化１１７】
0006524218.tif 000122
【０５１２】
【化１１８】
0006524218.tif 000123
【０５１３】
アジピン酸ジサクシンイミジル（１０ｍｇ，  ２９μｍｏｌ）とトリエチルアミン（１０μＬ、７２μｍｏｌ）を無水ＤＭＳＯ（１５０μＬ）に入れて攪拌した溶液に、四糖類１０あるいは１８（約２ｍｇ、２．８μｍｏｌ）を無水ＤＭＳＯ（１５０μＬ）に加えた懸濁液を加えた。この反応混合物をその温度で、アルゴン雰囲気下で２時間攪拌して、１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ７．４（Ｎａｐｉ、２００μＬ）で処理した。この混合物をクロロホルム（１０ｍＬ）で抽出して、遠心分離法（２分、１８００ｇ、室温）で相分離した。有機相は廃棄して、抽出ステップを２度繰り返した。水相は１．５ｍＬ反応チューブ内で遠心分離され（１分、１４５００ｇ、室温）、ＣＲＭ１９７（１ｍｇ、１７．３ｎｍｏｌ）をＮａｐｉ（１ｍＬ）に加えて攪拌した溶液に加えた。この混合物を室温で１６時間攪拌して、遠心フィルター（１０ｋＤａ  ＭＷＣＯ，ミリポア社，ダルムシュタット、ドイツ）を用いて透析燥した。この接合体をＭＡＬＤＩ−ＭＳで解析した。
接合体５８：約６７０００ｍ／ｚ（平均で１０．７個の四糖分子の混和）
接合体５９：約６６０００ｍ／ｚ（平均で９．６個の四糖分子の混和）
実施例２−４：免疫化手順
マウス（生後６−８週間の雌Ｂａｌｂ／ｃマウス、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）を、フロイントアジュバント（シグマアルドリッチ社、セントルイス，米国）、Ａｌｕｍ（ミョウバン）（Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ，  Ｂｅｎｎｔａｇ）を用いるか、あるいはアジュバントを用いないで、１００μＬの総体積で、０、１４、２８日目に、実施例２−３で得られたＣＲＭ−Ｓｐ８接合体（４μｇ合成グリカンに相当）を用いて免疫化した。免疫応答をグリカン・アレイで観察した。接合体５９は、フロイントアジュバントを用いて調製された上記接合体を受領したマウスに、オリゴ糖特有の免疫応答を誘発した。重要なことは、天然のＳｐ８多糖類に対して、マウス＃１１６０からの免疫血清に強い免疫応答が観察されたことである（図５参照）。
【０５１４】
実施例２−５：モノクローナル抗体の発生
ＢＭ−Ｃｏｎｄｉｍｅｄ  Ｈ１（Ｒｏｃｈｅ社、ペンツベルク、ドイツ）を用いて、製造者の指示に従ってモノクローナル抗体を作成した。融合した後、限定希釈を行い、続いて２回のサブクローニングを行って、単一クローンを発生させた。グリカン・アレイとＥＬＩＳＡによって、抗体生成を観察した。３３個のクローンが最終的に分離され、これらは四糖類１９とＳｐ８天然多糖類の両方を識別するｍＡｂｓを生成した。
【０５１５】
クローン１Ｈ８及び１Ｆ１を血清を含まない媒体内で増殖させた。ＭＡｂ  １Ｈ８は、タンパク質  Ｇ抗体洗浄キット（Ｐｒｏｃｈｅｍ社、リトルトン，米国）を用いて、細胞培養上澄み液から分離された（図６参照）。Ｍａｂ  １Ｆ１は、ＨｉＬｏａｄ  １６／６０  Ｓｕｐｅｒｄｅｘカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社，リトルチャルフォント，英国）を用いたＰＳＢを緩衝液として用いるゲル濾過クロマトグラフィによって精製・分離された。
【０５１６】
実施例２−６：酵素結合免疫吸収分析（ＥＬＩＳＡ）
高結合ポリブチレン９６ウェル・プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ社，コーニング，米国）を用いてＥＬＩＳＡを行った。濃度１０μｇ／ｍＬの濃度でＰＢＳに入れた天然Ｓｐ８多糖類（ＳＳＩＤｉａｇｎｏｓｔｉｃａ社，  コペンハーゲン）を用いて、４℃の温度で２０時間、プレートをコーティングした。仔ウシ血清１０％（ｖ／ｖ）をＰＢＳに入れたもので３７℃の温度で１時間ブロッキングを行い、０．１（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳ−Ｔ）を含むＰＳＢで洗浄した。抗Ｓｐ８  ｍＡｂｓ（５０μＬ）の細胞培養上澄み液を用いた。プレートを３７℃の温度で１時間培養して、ＰＢＳ−Ｔで３回洗浄した後、セイヨウワサビ・ペロキシダーゼ（ＨＲＰ）でラベルした二次抗体（ヤギ抗マウスＩｇＧ  ＨＲＰ接合体、ｄｉａｎｏｖａ社，ハンブルク、ドイツ）で処理した。プレートをＰＢＳ−Ｔで３回洗浄して、製造者の指示に従って、ＴＭＢ基質（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社，サンノゼ，米国）を用いて、ＨＲＰ活性を測定した。ＥＬＩＳＡで検査したところ、＃１１６０から発生したモノクローナル抗体は、合成糖１９と天然Ｓｐｄ多糖類の両方を個別的に識別した。
【０５１７】
実施例２−７：表面プラズモン共鳴
Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ１００測定器（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）で、表面プラズモン共鳴を行った。不導体化に関して、マウス抗体捕捉キットとアミン結合キット（Ａｍｉｎｅ  Ｃｏｕｐｌｉｎｇキット）（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を用いて分析を行った。捕捉抗体の約１００００応答単位が不動体化された。市場で入手できるマウスＩｇＧ（ｃａｔ．  Ｎｏ０２６５０２，  Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  Ｃａｒｌｓｂａｄ，  ＵＳ）を比較セル内でダミーとして固定した（約１００００ＲＵ）。毎回の実験の前に、５０μｇ／ｍＬのｍＡｂ濃縮物を用いて、約８００ＲＵのｍＡｂ  １Ｈ８を捕捉した。毎回の実験操作はＰＢＳを実験用緩衝物として用い、流速を３０μＬとして、結合時間を６０秒
、分離時間を１２０時間にそれぞれ設定して行った。多糖類は１０μｇ／ｍＬの濃度で、そして糖類１８はＰＢＳに２０μＭで溶解して用いた。モノクローナル抗体ｍＡｂ  １Ｈ８は合成糖類１８と天然のＳｐ８多糖類の両方をそれぞれ個別的に識別した（図７参照）。
【０５１８】
実施例２−８：紫外線不活性化肺炎連射球菌の免疫蛍光
肺炎連鎖球菌血清タイプ８（ＡＴＣＣ  ６３０８）あるいは血清タイプ１（ＡＴＣＣ  ６３０１）（約４ｘ１０８Ｃｆｕ／ｍＬ）を、ＰＢＳ内で室温で１０分間２５４ｎｍの照射で不活性化した。細胞を遠心分離で集めて、ＰＢＳで一度洗浄した後、０．５％（ｗ／ｖ）イースト抽出物と２０％（ｖ／ｖ）グリセロールを含んでいるＴｏｄｄ  Ｈｅｗｉｔｔ  Ｂｒｏｔｈ内で凍結させた。免疫蛍光を調べるために、バクテリア（８ｘ１０８ｃｆｕ  ＳＴ８、あるいは４ｘ１０８ｃｆｕ  ＳＴ１）を解凍させて、遠心分離（１６８００ｇ、室温で１５分間）で集めて、緩衝液Ａ（５０ｍＭ  ＮａＨＣＯ３，１００ｍＭ  ＮａＣｌ，ｐＨ：７．５）で１度洗浄した。細胞を緩衝液Ａ（１ｍＬ）内に再懸濁して、フルオレセイン  イソチオシアネート（ＦＩＴＣ，  Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）溶液（ＤＭＳＯ内で１０ｍｇ／ｍＬ）で処理して、最終濃度を０．１ｍｇ／ｍＬとした。バクテリアを暗闇で３７℃の温度で１時間ラベルして、遠心分離で採集し、０．２５％（ｗ／ｖ）ＢＳＡをＰＢＳ（１ｍＬ）に溶解したもので２  度洗浄した。ラベリングは、ＬＳＭ７００共焦点レーザー・スカニング顕微鏡（Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  ＧｍｂＨ，イエナ，ドイツ）を備えたＡｘｉｏ  Ｉｍａｇｅｒ．Ｍ２システムを用いて、モニターした。１％（ｗ／ｖ）でＰＢＳ（ＳＴ８に対して１ｍＬ、ＳＴ１に対して０．５ｍＬ）にＢＳＡを溶解した溶液に細胞を懸濁させ、懸濁液を２つの画分に分けた。これらの懸濁液をアイソタイプ・コントロールとしてＹｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓリポ多糖類コア三糖類に対するｍＡｂ  １Ｈ８あるいはｍＡｂ  １Ｅ１２（ＩｇＧ１）を用いて処理し、最終ｍＡｂ濃度を１０μｇ／ｍＬとした。バクテリアを攪拌しながら暗闇で４℃の温度で１６時間培養して、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡをＰＢＳ（０．５ｍＬ）に入れたもので洗浄した。これらの細胞をヤギ抗マウスＩｇＧ−Ａｌｅｘａ６３５接合体（ＰＢＳ内に２００μＬの１％（ｗ／ｖ）で、１：１００に希釈したもの、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の溶液内で懸濁して、暗闇で、室温下１．５時間培養して、ＰＳＢ内に１％（ｗ／ｖ）で入れたＢＳＡとＰＢＳ（各０．５ｍＬ）で洗浄した。蛍光的にラベルされたバクテリアを蛍光顕微鏡で視覚化して、Ｚｅｎ  ２０１１ソフトウエア（Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  ＧｍｂＨ）を用いて画像を処理した。図８に示されているように、接合体５９による免疫化は天然のＳＰ−８多糖類とＳＴ８バクテリアを識別する抗体の形成を誘発する。
【０５１９】
実施例２−９：ｍＡｂｓ  １Ｈ８と１Ｆ１の肺炎連鎖球菌血清タイプ８バクテリアに対するフロー・サイトメトリー（細胞数測定）によるアセスメント
肺炎連鎖球菌血清タイプ８（ＡＴＣＣ  ６３０８）、あるいは血清タイプ１（ＡＴＣＣ
６３０１）あるいは血清タイプ３（ＰＮ３６，ＮＣＴＣ７９７８）を、ＵＶ不活性化し、ＦＩＴＣでラベルして、蛍光性二次抗体（抗マウスＩｇＧ−Ａｌｅｘａ６３５接合体あるいは抗マウスＩｇＭ−Ａｌｅｘａ６８０接合体、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で前記の通り処理した（実施例２−８参照）。フロー・サイトメトリーは、ＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩフロー・サイトメーター（ＢＤ  Ｐｈａｍｉｎｇｅｎ社，ハイデルベルク，ドイツ）を用いて行われ、ＦｌｏｗＪｏソフトウエア（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ  Ｉｎｃ．，アッシュランド，オレゴン，米国）を用いて分析が行われた。両方のモノクローナル抗体ＩＨ８及び１Ｆ１は肺炎連鎖球菌血清タイプ８と結合したが、肺炎連鎖球菌血清タイプ１あるいは３とは結合しなかった（図９参照）。モノクローナル抗体と肺炎連鎖球菌血清タイプ８との相互作用は特殊なものであるが、それはアイソタイプ・コントロール抗体により、あるいは肺炎連鎖球菌血清タイプ１あるいは３に対して結合が観察されないからである。
【０５２０】
実施例２−１０：オプソニン化貪食作用による殺菌アッセイ
オプソニン化貪食作用による殺菌アッセイは、Ｒｏｍｅｒｏ−Ｓｔｅｉｎｅｒ，などによる，Ｃｌｉｎ．Ｄｉａｇｎ．Ｌａｂ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９７，  ４．  に述べられているように行った。簡単に言うと、ＨＬ−６０細胞を、報告されている手順に従って（Ｒｏｍｅｒｏ−Ｓｔｅｉｎｅｒ等、１９９７）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを用いて一週間差別化し、ＯＰＫＡ緩衝液（Ｈａｎｋ緩衝液、０．１％（ｗ／ｖ）ゼラチン含有）で２回洗浄し、使用の直前に同じ緩衝液内で１０７細胞数ｓ／ｍＬに希釈した。バクテリアは成長培地（Ｔｏｄｄ−Ｈｅｗｉｔ  ｂｒｏｔｈ＋０．５（ｗ／ｖ）イースト抽出物）内で、５％ＣＯ２下、３７℃で対数期（ＯＤ  ０．２−０．３）まで成長させ、冷凍媒体（１５％（ｖ／ｖ）グリセロールを含む成長培地）内で、約１０６細胞／ｍＬの密度まで希釈し、−８０℃の温度で、０．５ｍＬ画分内で凍結させた。バクテリアはＯＰＫＡ緩衝液で希釈して、９６ウェル・プレートに分画した（各２０μＬに１０００個の細胞）。バクテリア懸濁物を適切な抗体あるいは抗血清（１：４）希釈液で処理して、３７℃の温度で、１５分間培養した。補足物ソース（生まれたばかりのウサギ補足物、ＣｅｄａｒＬａｎｅ、１０μＬ）と変異ＨＬ−６０細胞懸濁物（４０μＬ、食菌細胞／バクテリア比率４００：１）を加えて、それらの懸濁物を振動（２２０ｒｐｍ）を加えながら、３７℃の温度で４５分間培養した。オプソニン化貪食作用は３回行われた。各ウェルの内容物の１０％をＣｏｌｕｍｂｉａ  Ａｇａｒプレートに入れて、３７℃／５％  ＣＯ２の条件下でコロニー数をカウントした。コントロール（比較対象）ウェルには抗体や補足物ソースを用いなかった。
【０５２１】
モノクローナル抗体１Ｈ８は合成肺炎連鎖球菌血清タイプ８に対して四糖類１８を発生増殖させたが、アイソタイプ・コントロールｍＡｂではそうした現象は起きず、補助物と変異ＨＬ−６０細胞の存在下では、テストされたすべての濃度（ウサギ肺炎連鎖球菌タイプ８タイプ血清（１：４希釈）とヒト抗血清００７ｓｐ（１：４希釈））で、コントロール血清と同様のオプソニン化貪食作用による殺菌能力を示した（図１０参照）。
【０５２２】
実施例２−１１：モノクローナル抗体ｍＡｂｓ  １ＨＢ及び１Ｆ１を用いたグリカン・アレイ分析
化合物１９，４９、９０、６０、６２、５５及び５７を含めてＳＰ８莢膜多糖類が存在している場合と不在の場合の両方で、実施例２−１に示した様に合成されたマイクロアレイ・スライドを培養して、結合実験を行った。
【０５２３】
図１１に示すように、三糖類６２、四糖類１９、四糖類６０、五糖類５５及び六糖類５７はｍＡｂｓ  １Ｈ８と１Ｆ１によって同様の強度で認識されたが、より小さな構造４９と９０は識別されなかった。
【０５２４】
図１１に示すように、五糖類５５と六糖類５７に対するｍＡｂｓ  １Ｈ８及び１Ｆ１の結合は、天然のＳＰ８多糖類による抑制でなくなり、これらの糖類が重なっているエピトープを天然の多糖類と共に内包していることを示している。
【０５２５】
実施例２−１２：マイクロアレイによる本発明の糖類に対するｍＡｂ  ２８Ｈ１１の結合のアセスメント
天然Ｓｐ８多糖類（Ｙａｎｏ  ａｎｄ  Ｐｉｒｏｆｓｋｉ（２０１１），Ｃｌｉｎ，Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１８（１），５９−６６）に対して発生させたマウス・モノクローナル抗体２８Ｈ１１（ＩｇＭ）を結合のために、異なる希釈度で、１０μｇ／ｍＬの肺炎連鎖球菌タイプ８ＣＰＳを加える場合と加えない場合で用いたことを除けば、上に述べた様に（実施例２−１及び２−２参照）作製した。検出用に二次抗体として、ロバ抗マウスＩｇＭ  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５９４接合体（ｄｉａｎｏｖａ社，ハンブルク，ドイツ）を用いた。
【０５２６】
天然の肺炎連鎖球菌タイプ８ＣＰＳに対して発生させたマウスＩｇＭであるＭａｂ  ２８Ｈ１１は、その性質が良く理解されており、種々の状況で生きている肺炎連鎖球菌血清タイプ８による感染からマウスの感染を防ぐ（Ｙａｎｏ  ａｎｄ  Ｐｉｒｏｆｓｋｉ（２０１１），Ｃｌｉｎ，Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１８（１），  ５９−６６）。グリカン・マイクロアレイ分析を行ったところ、ｍＡｂ  ２８Ｈ１１の糖類１９との強力な相互作用が明らかになり、これは、天然の肺炎連鎖球菌タイプ８ＣＰＳによる最大１０μｇ／ｍＬまでの結合のアブレーション（融除）に示されるような肺炎連鎖球菌タイプ８固有の現象である（図１２参照）。
【０５２７】
実施例２−１３：アジピン酸ビス（４−ニトロフェニル）を用いたＣＲＭ１９７へのオリゴ糖類の接合
オリゴ糖（量は以下に記す通り。通常０．２μｍｏｌ）を無水ＤＭＳＯと無水ピリジン（１００−２００μＬ）の１：３（ｖ／ｖ）混合物に加えて攪拌した溶液に、アジピン酸ビス（４−ニトロフェニル）（糖分の量に対して１２当量、通常２．４μｍｏｌ）とトリエチルアミン（１０μＬ）を加えた。この反応混合物をアルゴン雰囲気下で室温で２時間攪拌した。この混合物をショック凍結し、凍結乾燥した。残渣をクロロフォルム（４ｘ０．５ｍＬ）とジクロロメタン（４ｘ０．５ｍＬ）と共に粉砕し、溶媒としてＤＭＳＯを用いて新しい反応チューブに移し、再度凍結乾燥を行った。ＣＲＭ１９７（３ｍｇ、５２ｎｍｏｌ）は、遠心フィルター（１０ｋＤａ  ＭＷＣＯ、Ｍｉｌｉｐｏｒｅ社，ダムシュタット，ドイツ）を用いて０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ８．０に対して２回透析し、約３００μＬに濃縮し、活性化されたオリゴ糖に加えた。この混合物を室温で１６時間攪拌して、水に対して４回透析を行った（上記参照）。解析のために１つの画分を取り出して、その混合物をリン酸緩衝生理食塩水に対して３回透析を行った。この複合糖質をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ（図１３参照）、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びＷｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔで解析した。
【０５２８】
使用オリゴ糖類の正確な量
四糖類１８：  ２．６μｍｏｌ  （１．９ｍｇ）
四糖類６０：  ２．１μｍｏｌ  （１．５ｍｇ）
六糖類５７：  １．９μｍｏｌ  （２．０ｍｇ）
接合体ＣＲＭ１９７−１８：  約６５５０３ｍ／ｚ（平均で８．８個の四糖類分子の混和）
接合体ＣＲＭ１９７−６０：約６８２８１ｍ／ｚ（平均で１２．９個の四糖類分子の混和）
接合体ＣＲＭ１９７−５７：  約６３５３５ｍ／ｚ（平均で４．６個の六糖類分子の混和）
【０５２９】
【化１１９】
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【０５３０】
【化１２０】
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【０５３１】
【化１２１】
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【０５３２】
実施例２−１４：ウサギにおける実施例２−１３の接合体に対する免疫応答の評価
ウサギ（グループあたりｎ＝３）を０日目と１４日目に複合糖質ＣＲＭ１９７−１８、ＣＲＭ１９７−６０あるいはＣＲＭ１９７−５７（１回の投与量：１０μｇグリカン）あるいはＣＲＭ１９７（１００μｇ）を用いて複数の箇所に皮下注射で免疫化を行った。血清は０、１４、２１目に採取された。免疫化検査の結果は図２５に要約して示す。
【０５３３】
接合体で免疫化されたすべてのウサギは、肺炎連鎖球菌タイプ８ＣＰＳ関連オリゴ糖及
び肺炎連鎖球菌タイプ８ＣＰＳに対して著しい免疫応答を示した。このように、全ての接合体はウサギにおける肺炎連鎖球菌に対する免疫性を誘発した。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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