(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
液体クロマトグラフ分析で時間方向に成分分離させた試料を検出器とフラクションコレクタに導入し、該検出器の検出結果に基づき該フラクションコレクタで各成分を分画して採取する分取液体クロマトグラフ装置において、
a)分取用のカラムを用いた液体クロマトグラフ分析を実行する分取モードと、前記分取用のカラムとは容量が異なる分取条件探索用のカラムを用いた液体クロマトグラフ分析を実行する分取条件探索モードとを備えたクロマトグラフ実行手段と、
b)前記検出器からの検出信号に基づいてクロマトグラムを生成するクロマトグラム生成手段と、
c)各種標準試料について、探索用条件の下で前記分取条件探索モードの液体クロマトグラフ分析を実行したときに得られたクロマトグラムデータと、前記各種標準試料について１ないし複数の分取条件の下で前記分取モードの液体クロマトグラフ分析を実行したときに得られたクロマトグラムデータ及びそのときの分取条件を、試料毎或いは成分毎にデータベース化し、記憶する記憶手段と、
d)目的試料について、前記分取モードの液体クロマトグラフ分析により成分分離し、各成分を分取するときの分取条件を決定するための、クロマトグラムに関する指標を使用者に入力させる指標入力手段と、
e)前記目的試料について前記分取条件探索モードの液体クロマトグラフ分析を前記クロマトグラフ実行手段に実行させ、そのとき得られたクロマトグラムデータと前記指標とに基づき、前記データベースを参照して、該目的試料に含まれる成分の分取条件を決定する分取条件決定手段と
を備えることを特徴とする分取液体クロマトグラフ装置。
【請求項２】
前記記憶手段は、各種標準試料について実行された前記分取モードの液体クロマトグラフ分析で得られたクロマトグラムデータから求まる各成分の溶出開始時間及びそのときの分取条件を、データベース化して記憶しており、
前記指標入力手段は、目標溶出開始時間を指標として使用者に入力させることを特徴とする請求項１に記載の分取液体クロマトグラフ装置。
【請求項３】
前記記憶手段は、各種標準試料について実行された前記分取条件探索モードの液体クロマトグラフ分析で得られたクロマトグラムデータから求まる各成分の保持時間と前記溶出開始時間から該溶出開始時間に対応する分取条件を求めるための演算式を記憶しており、
前記分取条件決定手段は、前記目的試料について実行された前記分取条件探索モードの液体クロマトグラフ分析で得られたクロマトグラムデータから該目的試料中の各成分の保持時間を求め、該保持時間及び前記指標から前記演算式を用いて該目的試料の分取条件を決定することを特徴とする請求項２に記載の分取液体クロマトグラフ装置。
【請求項４】
前記分取条件が、試料と共にカラムに導入される移動相の初期条件であることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の分取液体クロマトグラフ装置。
【請求項５】
液体クロマトグラフ分析で時間方向に成分分離させた試料を検出器とフラクションコレクタに導入し、該検出器の検出結果に基づき該フラクションコレクタで各成分を分画して採取するための分取条件を探索する分取条件探索方法において、
a)各種標準試料について、分取用のカラムを用いた分取モードの液体クロマトグラフ分析を実行したときに得られるクロマトグラムデータと、前記分取用のカラムとは容量が異なる分取条件探索用のカラムを用いた分取条件探索モードの液体クロマトグラフ分析を実行したときに得られるクロマトグラムデータを、試料毎或いは成分毎にデータベース化して記憶する記憶工程と、
b)目的試料について、前記分取モードの液体クロマトグラフ分析により成分分離して各成分を分取するときの分取条件を決定するための、クロマトグラムに関する指標を使用者に入力させる指標入力工程と、
c)前記目的試料について前記分取条件探索モードの液体クロマトグラフ分析を実行して該目的試料のクロマトグラムデータを取得するデータ取得工程と、
d)前記目的試料のクロマトグラムデータと前記指標とに基づき、前記データベースを参照して、該目的試料に含まれる成分の分取条件を決定する条件決定工程と
を含むことを特徴とする分取条件探索方法。
【請求項６】
前記記憶工程において、各種標準試料について前記分取モードの液体クロマトグラフ分析を実行したときに得られるクロマトグラムから求まる各成分の溶出開始時間及びそのときの分取条件をデータベース化して記憶しており、
前記指標入力工程が、目標溶出開始時間を指標として使用者に入力させるものであることを特徴とする請求項５に記載の分取条件探索方法。
【請求項７】
前記記憶工程において、各種標準試料について前記分取条件探索モードの液体クロマトグラフ分析を実行したときに得られるクロマトグラムデータから求まる各成分の保持時間と前記溶出開始時間から該溶出開始時間に対応する分取条件を求めるための演算式を記憶しており、  前記条件決定工程が、前記目的試料について実行された前記分取条件探索モードの液体クロマトグラフ分析で得られた該目的試料のクロマトグラムデータから、該目的試料中の各成分の保持時間を求め、該保持時間及び前記指標から前記演算式を用いて該目的試料の分取条件を決定することを特徴とする請求項６に記載の分取条件探索方法。
【請求項８】
前記分取条件が、試料と共にカラムに導入される移動相の初期条件であることを特徴とする請求項５〜７のいずれかに記載の分取条件探索方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、試料に含まれる１乃至複数の成分を液体クロマトグラフを利用して分離し、採取する分取液体クロマトグラフ装置及び分取条件探索方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
液体クロマトグラフ（以下、ＬＣという）の応用技術のひとつに、ＬＣ流路の後段にフラクションコレクタを設け、試料に含まれる１乃至複数の目的成分を分離し、各成分を選択的に採取するようにした分取液体クロマトグラフ装置がある（例えば特許文献１参照）。
【０００３】
分取液体クロマトグラフ装置では、試料を移動相とともにカラムに流すことにより目的成分を時間的に分離する。分離された目的成分は、カラム後段に設けられた分光光度計等の検出器によって検出され、その検出信号に基づいてクロマトグラムが作成される。そして、クロマトグラムの波形から該クロマトグラフ上に出現するピークを求め、該ピークの開始及び終了に合わせてフラクションコレクタの電磁弁等を開閉することによって、各目的成分がそれぞれ異なるバイアル瓶に分取される。
【０００４】
こうした分取液体クロマトグラフ装置で目的成分を分取するためには、試料毎あるいは目的成分毎に、カラムの種類や移動相の種類、移動相の流量・流速等の分取条件を適切に設定する必要がある。そのため、試料毎あるいは目的成分毎に様々な条件でＬＣ分析を行い、最適な分取条件を探索することが行われる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開2000-214151号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
分取条件の探索に用いる試料を少なく抑えるため、従来は、分取用のカラムよりも容量の小さいカラムを用いたＬＣ分析において最適な条件を求め、その結果を分取用カラムを用いた分析系に合わせて調整し、最終的な分取条件を決定するという方法がとられている。この際、容量の小さいカラムを用いて得られた分析条件を単純にスケールアップするわけではなく、該分析条件を少しずつ変更しながら分取用カラムによるＬＣ分析を行い、その結果に基づき条件を調整するといった作業を繰り返しながら分取条件を決定する。このため、上記した従来の方法では、カラム（固定相）や移動相の性質、カラム・移動相と試料（目的成分）の相性といったＬＣ分析に関する知識が豊富な熟練者でなければ分取条件を決定することが難しい。
【０００７】
また、製薬分野等において化学合成により得られた各種の化合物（目的成分）を溶液（試料）から分取する場合、対象とする化合物は多種多様であり、各化合物について適切な条件を見いだす作業は熟練者であっても非常に面倒で手間がかかるという問題があった。
【０００８】
本発明が解決しようとする課題は、液体クロマトグラフ分析に関する知識が豊富でない使用者であっても分取条件の設定を容易に行うことができる分取液体クロマトグラフ装置及び分取条件探索方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記課題を解決するために成された本発明の第１態様は、
液体クロマトグラフ分析で時間方向に成分分離させた試料を検出器とフラクションコレクタに導入し、該検出器の検出結果に基づき該フラクションコレクタで各成分を分画して採取する分取液体クロマトグラフ装置において、
a)分取用のカラムを用いた液体クロマトグラフ分析を実行する分取モードと、前記分取用のカラムとは容量が異なる分取条件探索用のカラムを用いた液体クロマトグラフ分析を実行する分取条件探索モードとを備えたクロマトグラフ実行手段と、
b)前記検出器からの検出信号に基づいてクロマトグラムを生成するクロマトグラム生成手段と、
c)各種標準試料について、探索用条件の下で前記分取条件探索モードの液体クロマトグラフ分析を実行したときに得られたクロマトグラムデータと、前記各種標準試料について１ないし複数の分取条件の下で前記分取モードの液体クロマトグラフ分析を実行したときに得られたクロマトグラムデータ及びそのときの分取条件を、試料毎或いは成分毎にデータベース化し、記憶する記憶手段と、
d)目的試料について、前記分取モードの液体クロマトグラフ分析により成分分離し、各成分を分取するときの分取条件を決定するための、クロマトグラムに関する指標を使用者に入力させる指標入力手段と、
e)前記目的試料について前記分取条件探索モードの液体クロマトグラフ分析を前記クロマトグラフ実行手段に実行させ、そのとき得られたクロマトグラムデータと前記指標とに基づき、前記データベースを参照して、該目的試料に含まれる成分の分取条件を決定する分取条件決定手段と
を備えることを特徴とする。
【００１０】
また、本発明の第２態様は、液体クロマトグラフ分析で時間方向に成分分離させた試料を検出器とフラクションコレクタに導入し、該検出器の検出結果に基づき該フラクションコレクタで各成分を分画して採取するための分取条件を探索する分取条件探索方法であって、
a)各種標準試料について、分取用のカラムを用いた分取モードの液体クロマトグラフ分析を実行したときに得られるクロマトグラムデータと、前記分取用のカラムとは容量が異なる分取条件探索用のカラムを用いた分取条件探索モードの液体クロマトグラフ分析を実行したときに得られるクロマトグラムデータを、試料毎或いは成分毎にデータベース化して記憶する記憶工程と、
b)目的試料について、前記分取モードの液体クロマトグラフ分析により成分分離して各成分を分取するときの分取条件を決定するための、クロマトグラムに関する指標を使用者に入力させる指標入力工程と、
c)前記目的試料について前記分取条件探索モードの液体クロマトグラフ分析を実行して該目的試料のクロマトグラムデータを取得するデータ取得工程と、
d)前記目的試料のクロマトグラムデータと前記指標とに基づき、前記データベースを参照して、該目的試料に含まれる成分の分取条件を決定する条件決定工程と
を含むことを特徴とする。
【００１１】
本発明において「クロマトグラムデータ」は、クロマトグラムを生成するためのデータを指す他、クロマトグラムそのものも指す。
【００１２】
分取条件探索用のカラムとしては、通常、分取用カラムよりも容量の小さいカラムが用いられるが、分取用カラムよりも容量の大きいカラムであっても本発明は適用可能である。
【００１３】
探索用条件及び分取条件としては、移動相の種類や移動相の流量、移動相の液圧などが挙げられる。また、水と有機溶媒といった性質の異なる複数の溶媒を混合し、これらの混合比率を時間経過に伴って変化させた移動相をカラムに送り、液体クロマトグラフ分析を行う、いわゆるグラジエント分析を行う場合は、複数の溶媒の混合比率や特定の溶媒の初期濃度等が探索用条件や分取条件となる。
【００１４】
分取条件を決定するためのクロマトグラムに関する指標には例えばクロマトグラムから求まる各成分の保持時間、溶出開始時間、溶出終了時間等が含まれる。また、指標は一つに限らず複数でも良い。複数の指標に基づき分取条件を抽出するようにすると、試料中の成分により適した分取条件を決定することができる。
【００１５】
溶出開始時間を指標とする場合は、記憶手段に、各種試料について実行された前記分取モードの液体クロマトグラフ分析で得られたクロマトグラムデータから求まる各成分の溶出開始時間及びそのときの分取条件を、データベース化して記憶させると良い。
このような構成においては、前記指標入力手段により使用者から溶出開始時間が指標として入力されると、分取条件決定手段は、目的試料の分取条件探索モードの液体クロマトグラフ分析により得られたクロマトグラムデータと前記溶出開始時間から、データベースを参照して最適な分取条件を抽出する。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、目的試料について分取条件探索モードの液体クロマトグラフ分析を行うことにより、そのときに得られたクロマトグラムに基づいて該目的試料に適した分取条件を決定することができるため、液体クロマトグラフ分析や化合物に関する知識が無くても、容易に分取条件を設定することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明の一実施例による分取ＬＣの概略構成図。
【図２】分取条件探索モードのＬＣ分析の条件（ａ）及び送液スケジュール（ｂ）。
【図３】分取条件探索モードによるＬＣ分析の結果を示すクロマトグラム（ａ）、各化合物の保持時間（ｂ）。
【図４】分取条件探索モードで得られた保持時間と分取モードにおける移動相の初期濃度の関係を表す演算式及び該演算式を表すグラフ。
【図５】分取条件探索モードで得られた保持時間と分取モードにおける移動相の初期濃度の関係を表す演算式を求めるために行われる分取モードにおけるＬＣ分析の条件（ａ）及び送液スケジュール（ｂ）。
【図６】フェノールを試料としたときの移動相の初期濃度と保持時間の関係を示す表（ａ）及びクロマトグラム（ｂ）。
【図７】ジメチルアニリンを試料としたときの移動相の初期濃度と保持時間の関係を示す表（ａ）及びクロマトグラム（ｂ）。
【図８】ベンゼンを試料としたときの移動相の初期濃度と保持時間の関係を示す表（ａ）及びクロマトグラム（ｂ）。
【図９】ベラパミルを試料としたときの移動相の初期濃度と保持時間の関係を示す表（ａ）及びクロマトグラム（ｂ）。
【図１０】エチルベンゼンを試料としたときの移動相の初期濃度と保持時間の関係を示す表（ａ）及びクロマトグラム（ｂ）。
【図１１】ニカルジピンを試料としたときの移動相の初期濃度と保持時間の関係を示す表（ａ）及びクロマトグラム（ｂ）。
【図１２】各化合物の保持時間、分取モードにおける移動相の初期濃度及び溶出時間、近似式係数、推定した移動相の初期濃度を示す図。
【図１３】変形例を示し、水に対する親和性に応じて化合物を３つに分類し、それぞれについて異なる演算式を設定した場合の、分取条件探索モードで得られた保持時間と分取モードにおける移動相の初期濃度の関係を表す演算式及び該演算式を表すグラフ。
【図１４】５種類の化合物について、分取条件探索モードのＬＣ分析で得られた保持時間と、図１３に示す演算式から求められた移動相の初期濃度と、該初期濃度で分取モードのＬＣ分析を実行したしたときの各化合物のクロマトグラムとの関係を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明の一実施例である分取液体クロマトグラフ装置（以下、分取ＬＣという。）について、添付図面を参照して説明する。図１は本実施例に係る分取ＬＣの概略構成図である。
【００１９】
分取ＬＣ１は、第１及び第２送液ポンプ４、５、インジェクタ７、分離カラム８、第１検出器９、フラクションコレクタ１０、第２検出器１１などを含む。第１送液ポンプ４は第１移動相容器２に用意された例えば水や緩衝液などの第１移動相を吸引して送出し、第２送液ポンプ５は第２移動相容器３に用意された例えばアセトニトリルなどの有機溶媒である第２移動相を吸引して送出する。第１及び第２移動相は混合器６により混合されてインジェクタ７を介して分離カラム８に供給される。分離カラム８は、試料中の各種成分（化合物）を分離するためのものであり、分取条件探索モードのＬＣ分析に用いられるカラム８ａ、分取モードのＬＣ分析に用いられるカラム８ｂを含む複数種のカラムと、流路切換バルブ８ｃ、８ｄから成る。分取条件探索モードで用いられるカラム（以下、「分取条件探索用カラム」という）８ａには、分取モードで用いられるカラム（以下、「分取用カラム」という）８ｂよりも低容量の分離カラムが用いられる。
【００２０】
また、本実施例では、第１及び第２送液ポンプ４、５の流速は時間経過に伴ってそれぞれ変化するように制御することが可能であり、これによって第１及び第２移動相の成分比率が時間的に変化する高圧グラジエント方式の送液を行うことができる。もちろん、グラジエント送液を行わずに単一の移動相を用いてもよいし、一定の成分比率の移動相を用いてもよい。
【００２１】
インジェクタ７では、オートサンプラにより選択された液体試料が所定のタイミングで移動相に自動注入される。液体試料は移動相に乗って分離カラム８に導入され、分離カラム８を通過する間に液体試料中の各種成分（化合物）は時間的に分離されて、分離カラム８の出口端から溶出する。分離カラム８の下流に設けられた第１検出器９としては、例えば紫外可視分光検出器を用いることができる。フラクションコレクタ１０は第１検出器７の出口側に接続されている。フラクションコレクタ１０は、目的とする化合物が含まれる溶出液をそれぞれ分けて回収するものであり、分取バルブ１０２、分取ノズル１０３等を含む分取部１０１と、分取制御部１０５と、Ａ／Ｄ変換器１０６とを含む。
【００２２】
第２検出器１１は分取バルブ１０２を通過した後の溶液に目的化合物が含まれているか否かを調べることにより、分取条件を検証するものである。第２検出器１１としては、紫外可視分光検出器のほか、質量分析計を用いることができる。
【００２３】
また、分取ＬＣ１は、各部の動作を統括的に制御するため及びデータ処理を行うための制御・処理部２０を備え、該制御・処理部２０にはキーボードなどの表示部２１や操作部２２が接続されている。
ＣＰＵなどを含む制御・処理部２０は、予め設定されたプログラムに従って、第１検出器９からの検出信号を監視しつつ、送液ポンプ４、５のオンオフ動作や送液速度、インジェクタ７の動作、分離カラム８の流路切換バルブ８ｃ、８ｄの動作などを制御する。詳しくは後述するが、本実施例では、制御・処理部２０がクロマトグラフ実行手段、クロマトグラム生成手段、記憶手段、分取条件決定手段として機能する。
【００２４】
なお、フラクションコレクタ１０において、分取制御部１０５は第１検出器９で得られる検出信号（クロマトグラム信号）に基づいて分取部１０１の動作を制御する機能を有しているが、この機能は制御・処理部２０に内蔵させることも可能である。また、本実施例では、分取容量を算出する機能も分取制御部１０５が有しているが、これについても制御・処理部２０に内蔵させることができる。
【００２５】
以下、本実施例の分取ＬＣ１の特徴的な動作について説明する。
使用者による操作部２２の操作により分取条件探索モードが設定されると、表示部２１の画面上に分取条件設定画面（図示せず）が表示される。この分取条件設定画面上で分取する化合物の名称や目標とする溶出時間が設定され、分析の開始が指示されると、移動相と共に試料が分取条件探索用カラム８ａに導入される。分取条件探索用カラム８ａで分離された試料成分は第１検出器９によって検出され、その検出信号を基にクロマトグラムが作成される。
【００２６】
なお、本実施例では、分取条件探索モードのＬＣ分析の条件（分離カラムや移動相の種類、送液ポンプ４、５の動作条件（送液スケジュールや流量）等の各種パラメータ）は、様々な化合物のＬＣ分析に適用可能な包括的な条件に設定されているが、複数の分析条件の中から分取したい化合物に応じた条件を選択するようにしても良い。図２の（ａ）は分取条件探索モードのＬＣ分析の条件の一例、（ｂ）は送液スケジュールの一例を示す。
【００２７】
続いて制御・処理部２０は、得られたクロマトグラムから各化合物のピークを抽出して保持時間（Ｒ．Ｔ．）を求め、該保持時間と分取条件設定画面で設定された目標溶出時間から分取条件を設定する。設定された分取条件は分取条件設定画面に表示される。
図３（ａ）は、６種類の化合物（ニカルジピン（Nicardipine）、ベラパミル（Verapamil）、フェノール（Phenol）、ベンゼン（Benzene）、エチルベンゼン（Ethylbenzene）、ジメチルアニリン（2,6-Dimethylaniline））を含む試料について図２に示す条件で分取条件探索モードのＬＣ分析を行った結果、得られたクロマトグラムを示し、図３（ｂ）は、該クロマトグラムから求められた各化合物の保持時間を示す。
【００２８】
制御・処理部２０には分取条件を決定するために必要な情報がデータベース化されて記憶されており、制御・処理部２０は該データベースを参照して分取条件を決定する。分取条件を決定するために必要な情報は、標準試料について分取ＬＣ１を用いて過去に行われた分取条件探索モードのＬＣ分析のクロマトグラムデータと、同じく標準試料について分取ＬＣ１を用いて過去に行われた分取モードのＬＣ分析のクロマトグラムデータとが分取条件に対応付けて、標準試料毎に或いは化合物毎にデータベース化されたものである。例えば、分取条件の一つである移動相の初期濃度については、分取条件探索モードのＬＣ分析で得られたクロマトグラムデータから求められた各成分の保持時間から演算で求めるための演算式が、目標溶出時間に対応づけて記憶されている。制御・処理部２０は、目的試料の分取条件探索モードのＬＣ分析で得られた保持時間から演算式を使って移動相の初期濃度を求める。
【００２９】
図４は、ある目的試料に含まれる成分の分取条件探索モードのＬＣ分析における保持時間と、該目的試料の分取モードのＬＣ分析における移動相の初期濃度の関係を表す演算式及び該演算式を表すグラフである。
図４の演算式：Ｙ＝89.161Ｘ−79.11において、Ｘは分取条件探索モードにおける該目的試料に含まれるある成分の保持時間、Ｙは分取モードにおける移動相の初期濃度を示す。当該演算式から、目的試料の分取条件探索モードでのＬＣ分析における目的成分の保持時間から、分取モードにおける移動相の初期濃度を求めることができる。当該演算式の求め方は後述する。
【００３０】
このように、分取条件が決定され、さらに、使用者による操作部２２の操作により分取モードが設定され、ＬＣ分析の開始が指示されると、流路切換バルブ８ｃ、８ｄが切換えられると共に設定された分取条件に従って送液ポンプ４、５等が駆動され、移動相と共に試料が分取用カラム８ｂに導入される。分取用カラム８ｂで分離された試料成分は第１検出器９によって検出され、その検出信号を基にフラクションコレクタの動作が制御され、試料中の各成分が分取される。
【００３１】
次に、分取条件探索モードのＬＣ分析で得られた保持時間から分取条件である移動相の初期条件（アセトニトリルの初期濃度）を決定するために用いられる演算式の求め方について説明する。ここでは、図３（ｂ）に例示した６成分を含む標準試料について分取条件探索モードのＬＣ分析を行った結果、図３に示すクロマトグラム及び保持時間が得られたこととして説明する。
【００３２】
まず、上記の標準試料について、分取モードによるＬＣ分析を図５（ａ）に示す分取条件、及び図５（ｂ）に示す送液スケジュールで実行する。図５（ｂ）中、Ｘは移動相に含まれるアセトニトリルの初期濃度を示す。分取条件及び送液スケジュールは、使用者が設定しても良く、或いは制御・処理部２０に予め記憶されていても良い。
このとき、アセトニトリルの初期濃度を数点変更してＬＣ分析を実行し、それぞれ第１検出部９の検出信号からクロマトグラムを作成して保持時間が予め設定した目標溶出時間前後となるときのデータを採取する。保持時間は任意で決めることができるが、保持時間が大きくなると分取時に消費する移動相量が多くなり、また分離向上も期待できないため、クロマトグラムにおける保持指標であるk値が１０以下の値になるように分取モードで用いるカラムに合わせて設定することが望ましい。実施例では保持指標であるk値が５となる場合を想定し、保持時間は４分と設定している。
【００３３】
図６〜図１１に、各化合物の溶出時間が４分前後となるときの移動相の初期濃度を示す表（ａ）及びクロマトグラム（ｂ）を示す。これらの結果から、溶出時間が４分となるような移動相（アセトニトリルの初期濃度）を以下の近似式（１）から算出する。
近似式：Ｙ＝αＸ＋β      ・・・（１）
ここで、Ｘは溶出時間、Ｙはそのときの移動相の初期濃度を示す。また、α、βは、各化合物について取得された溶出時間及び初期濃度を代入することにより求まる数値を示す。各化合物について少なくとも２点、溶出時間及び初期濃度のデータがあれば、α、βは求められる。
【００３４】
図１２に、６個の化合物の分取条件探索モードのＬＣ分析で得られた保持時間、分取モードのＬＣ分析で得られた溶出時間及びそのときのアセトニトリルの初期濃度、近似式（１）のα及びβの値、該近似式から求められた、目標溶出時間（４分）が得られるアセトニトリルの初期濃度を示す。
【００３５】
次に、６個の化合物の分取条件探索モードのＬＣ分析で得られた保持時間と、近似式（１）から求められた目標溶出時間が得られるアセトニトリルの初期濃度の関係を示す演算式を求める。この演算式は、保持時間をＸ座標、アセトニトリルの初期濃度をＹ座標とするグラフを作成し、このグラフにフィッティングする関数を求めることにより推定することができる。図４は、このようにして求められたグラフ及び演算式である。図４中、Ｒ２（決定係数（相関係数Ｒの二乗））は演算式の妥当性を示す指標であり、１に近いほど分取条件探索モードから分取モードへの正確な移行が可能であることを意味する。
【００３６】
なお、本発明は上記した実施例に限定されない。
例えば、上記の実施例では分取条件探索モードで保持時間が得られると、該保持時間を図４に示す演算式に代入することにより分取モードのＬＣ分析における移動相の初期濃度を求め、これから図５（ｂ）に示す送液スケジュールを設定するようにしたが、分取条件探索モードで得られた保持時間の大きさ（長さ）によっては分取条件である例えば移動相組成や送液スケジュールを変更するようにしても良い。
【００３７】
具体的には、上記実施例において分取条件探索モードで得られた保持時間が1.78分よりも大きい成分は、図４に示す演算式から求められる、分取モードのＬＣ分析における移動相初期濃度が８０％を超えてしまう。この場合、図５に示す送液スケジュールでは目標溶出時間（４分）における移動相濃度が上限値である１００％を超えることになり、適切ではない。また、このような場合は、目標溶出時間における移動相濃度を１００％に設定することとしても、目標溶出時間では目的成分がカラムから溶出しない可能性がある。そこで、このような場合は、図５に示す分取条件及び送液スケジュールよりも溶出力が強くなるように、送液スケジュールや移動相組成を変更するようにしても良い。
【００３８】
また、上記実施例において分取条件探索モードで得られた保持時間が0.88分よりも小さい成分は、図４に示す演算式から求められる、分取モードのＬＣ分析における移動相の初期濃度が下限値である０％を下回ってしまい、やはり適切ではない。この場合に、図５に示す送液スケジュールにおける移動相の初期濃度を０％として分取モードのＬＣ分析を実行することも考えられるが、この場合は目標溶出時間よりも早く目的成分がカラムから溶出してしまう可能性が高い。そこで、このような場合は、図５に示す分取条件及び送液スケジュールよりも溶出力が弱くなるように、送液スケジュールや移動相組成を変更するようにしても良い。
【００３９】
上記のように、分取条件探索モードで得られた保持時間の大きさに応じて、送液スケジュールや移動相組成を変更することも、本発明の「目的試料のクロマトグラムデータと指標とに基づき、データベースを参照して、該目的試料に含まれる成分の分取条件を決定する」ことの実施態様に含まれる。このような実施態様によれば、疎水性の高い成分から低い成分まで広い範囲の目的成分の分取が可能となる。
【００４０】
なお、上記では、送液スケジュールや移動相組成を変更する例について説明したが、これ以外に、例えば移動相の流量や試料の注入量、カラムの容量等を変更するようにしても良い。また、複数種の分取条件を変更するようにしても良い。
【００４１】
また、演算式を用いるのではなく、目的試料について得られた分取条件探索モードのクロマトグラムと類似するクロマトグラムデータの標準試料を、制御・処理部２０に記憶されているデータベースを参照して求め、その標準試料の分取モードのクロマトグラムデータから目標溶出時間の分取条件を抽出し、それを該目的試料の分取条件としても良い。
【００４２】
さらに、上記実施例では分取条件探索モードのＬＣ分析における保持時間と分取モードのＬＣ分析における移動相の初期濃度の関係を一つの演算式で表したが（図４参照）、目的成分である化合物の性質に応じて複数の演算式を設定しても良い。この場合の「性質」とは、クロマトグラフ分析による成分分離に影響を及ぼすような性質をいう。
【００４３】
その一例として、水との間の親和性の大きさに応じて化合物を３種類に分類し、これら３種類の化合物についてそれぞれ異なる演算式を設定した場合について説明する。図１３は、３種類の化合物の、分取条件探索モードのＬＣ分析における保持時間（横軸）と分取モードのＬＣ分析における移動相の初期濃度（縦軸）との関係を表す演算式及びその演算式を表すグラフである。図１３に示すグラフのうち左側の領域が極めて親水性が高い化合物の演算式を、右側の領域が極めて疎水性が高い化合物の演算式を、中央領域がその中間の性質の化合物の演算式を表している。なお、図１３の中央領域の演算式は、水に対する親和性が標準的な多くの化合物に適用され、左側領域及び右側領域の演算式は標準的な化合物から外れる化合物に適用される
【００４４】
図１４に５種類の化合物（ニカルジピン（Nicardipine）、ビフォナゾール（Bifonazole）、ニフェジピン（Nifedipine）、インダパミド（Indapamide）、トリメトプリム（Trimethoprim））について、分取条件探索モードのＬＣ分析で得られた保持時間と、図１３に示す演算式から求められた移動相の初期濃度と、該初期濃度で分取モードのＬＣ分析を実行したしたときの各化合物のクロマトグラムとの関係を示す。これら５種類の化合物は、いずれも図１３の中央領域に含まれる化合物である。図１４から、いずれの化合物も、保持時間が４分前後であることが分かる。
【００４５】
上述した実施例のように、全ての化合物に一つの演算式を適用する場合は、演算式から求められる移動相の初期濃度が上限値（１００％）を超えたり、下限値（０％）を下回ったりすることがあった。これに対して、ＬＣ分析の成分分離に影響を与える性質に基づいて化合物を分類し、性質毎に適切な演算式を設定すれば、そのような不具合を減らすことができ、広範な化合物について、分取モードのＬＣ分析における移動相の初期濃度を高精度に算出することができる。
【符号の説明】
【００４６】
４…第１送液ポンプ
５…第２送液ポンプ
７…インジェクタ
８…分離カラム
８ａ…分取条件探索用カラム
８ｂ…分取用カラム
８ｃ、８ｄ…流路切換バルブ
９…第１検出器
１０…フラクションコレクタ
１１…第２検出器
２０…制御・処理部
２１…表示部
２２…操作部
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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