(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液から調製された測定試料を流すためのフローセルと、
前記フローセル中を流れる前記測定試料に光を照射するための光源部と、
前記光が照射された、前記フローセル中を流れる前記測定試料中の各赤血球から発せられる自家蛍光を赤血球毎に検出するための蛍光検出部と、
前記蛍光検出部によって検出された自家蛍光を発する赤血球に関する自家蛍光情報を赤血球毎に取得するための情報処理部と、を備え、
前記情報処理部は、前記自家蛍光情報に基づいて、貧血に関する判定を行うように構成されている、
血液分析装置。
【請求項２】
前記情報処理部は、前記自家蛍光情報に基づいて、鉄欠乏性貧血に関する判定を行うように構成されている、
請求項１に記載の血液分析装置。
【請求項３】
前記情報処理部は、前記自家蛍光情報に基づいて、サラセミアに関する判定を行うように構成されている、
請求項１に記載の血液分析装置。
【請求項４】
前記自家蛍光情報は、自家蛍光を発する赤血球の数を示し、
前記情報処理部は、自家蛍光を発する赤血球の数が所定の閾値より多いときに、鉄欠乏性貧血の可能性が高いと判定するように構成されている、
請求項２に記載の血液分析装置。
【請求項５】
前記自家蛍光情報は、全赤血球数に対する自家蛍光を発する赤血球の数の比率を示し、
前記情報処理部は、全赤血球数に対する自家蛍光を発する赤血球の数の比率が所定の閾値より高いときに、鉄欠乏性貧血の可能性が高いと判定するように構成されている、
請求項２に記載の血液分析装置。
【請求項６】
前記自家蛍光情報は、自家蛍光を発しない赤血球の数に対する自家蛍光を発する赤血球の数の比率を示し、
前記情報処理部は、自家蛍光を発しない赤血球の数に対する自家蛍光を発する赤血球の数の比率が所定の閾値より高いときに、鉄欠乏性貧血の可能性が高いと判定するように構成されている、
請求項２に記載の血液分析装置。
【請求項７】
前記自家蛍光情報は、自家蛍光を発する赤血球の蛍光強度の分布の広がりを示す、
請求項１乃至３の何れか１項に記載の血液分析装置。
【請求項８】
前記情報処理部は、
自家蛍光を発する赤血球を少なくとも第１自家蛍光赤血球群と、前記第１自家蛍光赤血球群に含まれる赤血球よりも強い自家蛍光を発する第２自家蛍光赤血球群と、に分類し、
前記第１自家蛍光赤血球群に含まれる赤血球数と、前記第２自家蛍光赤血球群に含まれる赤血球数と、に基づいて貧血に関する判定を行うように構成されている、
請求項７に記載の血液分析装置。
【請求項９】
前記自家蛍光情報は、自家蛍光を発する赤血球の蛍光値の総和であり、
前記情報処理部は、自家蛍光を発する赤血球の蛍光値の総和が所定の閾値より高いときに、鉄欠乏性貧血の可能性が高いと判定するように構成されている、
請求項２に記載の血液分析装置。
【請求項１０】
前記光が照射された前記測定試料中の赤血球から、前記自家蛍光とは異なる波長帯域の光を検出するための光検出部をさらに備え、
前記情報処理部は、前記光検出部によって検出された前記光に基づいて、赤血球数を計数するように構成されている、
請求項１乃至９の何れか１項に記載の血液分析装置。
【請求項１１】
前記情報処理部は、前記自家蛍光情報と、前記被験者から採取された血液のヘモグロビン濃度および赤血球数に基づいて得られる情報とに基づいて、貧血に関する判定を行うように構成されている、
請求項１乃至１０の何れか１項に記載の血液分析装置。
【請求項１２】
出力部をさらに備え、
前記情報処理部は、前記自家蛍光情報に基づいて、貧血に関する情報を前記出力部に出力させるように構成されている、
請求項１乃至１１の何れか１項に記載の血液分析装置。
【請求項１３】
前記血液を溶血および染色せずに前記測定試料を調製するための試料調製部をさらに備える、
請求項１乃至１２の何れか１項に記載の血液分析装置。
【請求項１４】
血液試料と、網赤血球を特異的に染色する蛍光染料を含む染色試薬とを混合し、前記測定試料を調製する試料調製部をさらに備え、
前記光源部は、染色された網赤血球が第１波長の蛍光を発する第１の光を照射するための第１光源部と、赤血球が前記第１波長とは異なる第２波長の自家蛍光を発する第２の光を照射するための第２光源部とを備え、
前記蛍光検出部は、前記第１の光が照射された各網赤血球から発せられる前記第１波長の蛍光を網赤血球毎に検出するための第１蛍光検出部と、前記第２の光が照射された各赤血球から発せられる前記第２波長の自家蛍光を赤血球毎に検出するための第２蛍光検出部とを備え、
前記情報処理部は、前記第１蛍光検出部によって検出された前記第１波長の蛍光と、前記第２蛍光検出部によって検出された前記第２波長の自家蛍光とに基づいて、自家蛍光を発する網赤血球に関する前記自家蛍光情報を網赤血球毎に取得し、前記自家蛍光情報に基づいて、貧血に関する判定を行うように構成されている、
請求項１乃至３の何れか１項に記載の血液分析装置。
【請求項１５】
前記自家蛍光情報は、全網赤血球数に対する自家蛍光を発する網赤血球の数の比率を示す、
請求項１４に記載の血液分析装置。
【請求項１６】
前記光源部は、４００ｎｍ以上４３５ｎｍ以下の波長帯域の光を前記測定試料に照射するように構成されており、
前記蛍光検出部は、前記自家蛍光として、６００ｎｍ以上７００ｎｍ以下の波長帯域の光を検出するように構成されている、
請求項１乃至１５の何れか１項に記載の血液分析装置。
【請求項１７】
血液検体がスライドガラス上に塗抹された塗抹標本に光を照射するための光源部と、
前記光が照射された前記塗抹標本中の各赤血球から発せられる自家蛍光を検出するための蛍光検出部と、
前記蛍光検出部によって検出された自家蛍光を発する赤血球に関する自家蛍光情報を赤血球毎に取得するための情報処理部と、を備え、
前記情報処理部は、前記自家蛍光情報に基づいて、鉄欠乏性貧血であるかサラセミアであるかに関する判定を行うように構成されている、
血液分析装置。
【請求項１８】
前記塗抹標本を保持するためのステージをさらに備え、
前記光源部は、前記ステージに保持された前記塗抹標本に前記光を照射するように構成されており、
前記蛍光検出部は、前記ステージに保持された前記塗抹標本中の赤血球から発せられる前記自家蛍光を検出するように構成されている、
請求項１７の何れか１項に記載の血液分析装置。
【請求項１９】
情報処理部による貧血の診断支援方法であって、
前記情報処理部が、フローセル中を流れる血液から調製された測定試料に光が照射されたときに前記測定試料中の各赤血球から発せられる自家蛍光の検知結果から、自家蛍光を発する赤血球に関する自家蛍光情報を赤血球毎に取得し、
前記情報処理部が、前記自家蛍光情報に基づいて、貧血に関する判定を行う、
診断支援方法。
【請求項２０】
フローセル中を流れる血液から調製された測定試料に光を照射し、
前記光が照射された前記測定試料中の各赤血球から発せられる自家蛍光を検出し、
検出された自家蛍光を発する赤血球に関する自家蛍光情報を赤血球毎に取得し、
前記自家蛍光情報に基づいて、貧血に関する判定を行う、
貧血の診断を支援するための方法。
【請求項２１】
貧血の診断を支援するためのコンピュータプログラムであって、
コンピュータに、
フローセル中を流れる血液から調製された測定試料に光が照射されたときに前記測定試料中の各赤血球から発せられる自家蛍光の検知結果から、自家蛍光を発する赤血球に関する自家蛍光情報を赤血球毎に取得するステップと、
前記自家蛍光情報に基づいて、貧血に関する判定を行うステップと、
を実行させる、
コンピュータプログラム。
【請求項２２】
血液検体がスライドガラス上に塗抹された塗抹標本に光を照射し、
前記光が照射された前記塗抹標本中の各赤血球から発せられる自家蛍光を検出し、
検出された自家蛍光を発する赤血球に関する自家蛍光情報を赤血球毎に取得し、
前記自家蛍光情報に基づいて、鉄欠乏性貧血であるかサラセミアであるかに関する判定を行う、
貧血の診断を支援するための方法。
【請求項２３】
貧血の診断を支援するためのコンピュータプログラムであって、
コンピュータに、
血液検体がスライドガラス上に塗抹された塗抹標本に光が照射されたときに前記塗抹標本中の各赤血球から発せられる自家蛍光の検知結果から、自家蛍光を発する赤血球に関する自家蛍光情報を赤血球毎に取得するステップと、
前記自家蛍光情報に基づいて、鉄欠乏性貧血であるかサラセミアであるかに関する判定を行うステップと、
を実行させる、
コンピュータプログラム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液から調製された測定試料を用いて、貧血に関する診断を支援するための血液分析装置、診断支援方法、およびコンピュータプログラムに関する。
【背景技術】
【０００２】
小球性貧血の疾患として、鉄欠乏性貧血（ＩＤＡ）およびサラセミアが知られている。このうち鉄欠乏性貧血症は貧血症の約５０％を占めるといわれている。
【０００３】
被験者から採取した血液に含まれる血球を分類し、種類毎に血球数を計数する血球計数装置がある。特許文献１には、血球計数装置における基本的な測定項目であるＣＢＣ項目の測定値を用いて、鉄欠乏性貧血とサラセミアとを鑑別する方法が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平１１−３２６３１５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかし、鉄欠乏性貧血は、サラセミアと検査値が似ているため、ＣＢＣ項目の測定値を用いた鑑別方法では、鉄欠乏性貧血とサラセミアとの鑑別精度の向上は難しい。このため、貧血の鑑別精度について更なる向上が望まれている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本血液分析装置は、光源部と、蛍光検出部と、情報処理部とを備える。光源部は、血液から調製された測定試料に光を照射する。蛍光検出部は、光が照射された測定試料中の赤血球から発せられる自家蛍光を検出する。情報処理部は、蛍光検出部によって検出された自家蛍光を発する赤血球に関する自家蛍光情報を取得し、自家蛍光情報に基づいて、貧血に関する判定を行う。
【０００７】
本診断支援方法は、情報処理部による貧血の診断支援方法である。情報処理部は、血液から調製された測定試料に光が照射されたときに測定試料中の赤血球から発せられる自家蛍光の検知結果から、自家蛍光を発する赤血球に関する自家蛍光情報を取得する。情報処理部は、自家蛍光情報に基づいて、貧血に関する判定を行う。
【０００８】
本鉄欠乏性貧血の診断支援方法は、血液から調製された測定試料に光を照射し、光が照射された測定試料中の赤血球から発せられる自家蛍光を検出し、検出された自家蛍光を発する赤血球に関する自家蛍光情報を取得し、自家蛍光情報に基づいて、貧血に関する判定を行う。
【０００９】
本コンピュータプログラムは、貧血の診断を支援するためのコンピュータプログラムである。本コンピュータプログラムは、コンピュータに、血液から調製された測定試料に光が照射されたときに測定試料中の赤血球から発せられる自家蛍光の検知結果から、自家蛍光を発する赤血球に関する自家蛍光情報を取得するステップと、自家蛍光情報に基づいて、貧血に関する判定を行うステップとを実行させる。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、貧血に関する判定を精度よく行うことが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】実施の形態１に係る血液分析装置の構成を示す模式図。
【図２】情報処理部の構成を示すブロック図。
【図３】実施の形態１に係る血液分析装置の動作の流れを示すフローチャート。
【図４】測定試料調製処理の手順を示すフローチャート。
【図５】実施の形態１における測定データ解析処理の手順を示すフローチャート。
【図６Ａ】正常検体の測定結果を示すスキャッタグラム。
【図６Ｂ】鉄欠乏性貧血の患者から採取された血液検体の測定結果を示すスキャッタグラム。
【図６Ｃ】αサラセミアの患者から採取された血液検体の測定結果を示すスキャッタグラム。
【図６Ｄ】βサラセミアの患者から採取された血液検体の測定結果を示すスキャッタグラム。
【図７】血液検体におけるＭＣＨと全赤血球数に対する自家蛍光を発する赤血球数の比率との関係を示す図。
【図８】鉄欠乏性貧血の各ステージにおけるＭＣＨと全赤血球数に対する自家蛍光を発する赤血球数の比率との関係を示す図。
【図９】実施の形態１における分析結果の表示例を示す図。
【図１０】実施の形態２における測定データ解析処理の手順を示すフローチャート。
【図１１】鉄欠乏性貧血のステージと全赤血球数に対する自家蛍光を発する赤血球数の比率との関係を示すグラフ。
【図１２】実施の形態２における分析結果の表示例を示す図。
【図１３】実施の形態３に係る血液分析装置の構成を示す模式図。
【図１４】実施の形態３における情報処理部の動作の流れを示すフローチャート。
【図１５】実施の形態４に係る血液分析装置の構成を示す模式図。
【図１６Ａ】実施の形態１に係る血液分析装置の動作の流れを示すフローチャート。
【図１６Ｂ】実施の形態１に係る血液分析装置の動作の流れを示すフローチャート。
【図１７】第２測定試料調製処理の手順を示すフローチャート。
【図１８】染色された網赤血球から発せられる自家蛍光の検出結果と、染色されていない網赤血球から発せられる自家蛍光の検出結果とを比較するグラフ。
【図１９】実施の形態４における第２測定データ解析処理の手順を示すフローチャート。
【図２０】第１蛍光強度および第１前方散乱光強度の２次元座標空間における網赤血球の検出範囲を示す図。
【図２１】血液検体におけるＭＣＨと全網赤血球数に対する自家蛍光を発する網赤血球数の比率との関係を示す図。
【図２２】鉄欠乏性貧血のステージと全網赤血球数に対する自家蛍光を発する網赤血球数の比率との関係を示すグラフ。
【図２３】実施の形態４における分析結果の表示例を示す図。
【図２４】実施の形態５に係る血液分析装置の動作の流れを示すフローチャート。
【図２５】実施の形態５における測定データ解析処理の手順を示すフローチャート。
【図２６】実施の形態５における分析結果の表示例を示す図。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
（実施の形態１）
実施の形態１では、血液検体に含まれる赤血球からの自家蛍光を検出し、鉄欠乏性貧血およびサラセミアに関する判定を行うための血液分析装置について説明する。血液分析装置は、フローサイトメトリー法により血液に含まれる血球を種類毎に検出し、検出された血球を計数する。
【００１３】
＜血液分析装置の構成＞
図１を参照し、血液分析装置の構成について説明する。血液分析装置１は、測定部２と、情報処理部３とを備える。測定部２は、血液検体を取り込み、血液検体から測定試料を調製し、測定試料を光学測定する。情報処理部３は、測定部２の測定により得られた測定データを処理し、血液検体の分析結果を出力する。
【００１４】
測定部２は、検体吸引部４と、試料調製部５と、光学検出部６と、ＨＧＢ検出部７と、信号処理回路８１と、マイクロコンピュータ８２と、通信インターフェース８３とを備える。
【００１５】
検体吸引部４は、吸引管を有し、試験管に収容された血液検体を吸引管によって吸引する。
【００１６】
試料調製部５は、反応槽５３を有し、試薬容器５１，５２に接続されている。試薬容器５１は、血液検体を希釈するための希釈液を収容する。試薬容器５２は、溶血剤を収容する。検体吸引部４によって吸引された血液検体と、希釈液とが反応槽５３で混合され、第１測定試料が調製される。第１測定試料は、赤血球の測定に用いられる。検体吸引部４によって吸引された血液検体と、希釈液と、溶血剤とが反応槽５３で混合され、第２測定試料が調製される。第２測定試料は、ヘモグロビン濃度の測定に用いられる。
【００１７】
光学検出部６は、フローサイトメトリー法による赤血球および自家蛍光の測定に用いられる。光学検出部６は、フローセル６１と、光源部６２と、蛍光検出部６３と、散乱光検出部６４とを備える。フローセル６１は、試薬容器５１に収容された希釈液および試料調製部５により調製された第１測定試料が供給される。フローセル６１は、第１測定試料を希釈液であるシース液で包んだ流れを形成する。
【００１８】
光源部６２は、半導体レーザ光源であり、波長４０５ｎｍの青色レーザ光をフローセル６１へ照射する。
【００１９】
蛍光検出部６３の感度波長範囲は、４００ｎｍ以上、１０００ｎｍ以下である。散乱光検出部６４の感度波長範囲は、４００ｎｍ以上、１０００ｎｍ以下である。蛍光検出部６３および散乱光検出部６４として、アバランシェフォトダイオードが用いられている。蛍光検出部６３および散乱光検出部６４は、フローセル６１中の第１測定試料の流れに光が照射されたときに、第１測定試料から発せられる光を検出する。蛍光検出部６３および散乱光検出部６４は、受光強度を示すアナログ信号を出力する。以下、蛍光検出部６３から出力されるアナログ信号を「蛍光信号」といい、散乱光検出部６４から出力されるアナログ信号を「前方散乱光信号」という。
【００２０】
ＨＧＢ検出部７は、ＳＬＳ−ヘモグロビン法によるヘモグロビン濃度の測定に用いられる。ＨＧＢ検出部７には、試料調製部５から第２測定試料が供給される。ＨＧＢ検出部７は、セル中に収容された第２測定試料に波長５５５ｎｍの光を照射し、第２測定試料による吸光度を検出する。ＨＧＢ検出部７は、吸光度を反映したアナログ信号を出力する。
【００２１】
信号処理回路８１は、蛍光検出部６３、散乱光検出部６４、およびＨＧＢ検出部７が出力するアナログ信号に対して信号処理を行う。信号処理回路８１は、蛍光信号および前方散乱光信号に含まれるパルスのピーク値を特徴パラメータとして抽出する。以下、蛍光信号のピーク値を「蛍光強度」といい、前方散乱光信号のピーク値を「前方散乱光強度」という。信号処理回路８１は、ＨＧＢ検出部７の出力信号の強度を、特徴パラメータであるヘモグロビン濃度に変換する。
【００２２】
マイクロコンピュータ８２は、検体吸引部４、試料調製部５、光学検出部６、ＨＧＢ検出部７、信号処理回路８１、および通信インターフェース８３を制御する。
【００２３】
通信インターフェース８３は、通信ケーブルによって情報処理部３に接続される。測定部２は、通信インターフェース８３によって、情報処理部３とデータ通信を行う。通信インターフェース８３は、血液検体の測定が行われると、各特徴パラメータを含む測定データを情報処理部３へ送信する。
【００２４】
図２を参照し、情報処理部３の構成について説明する。情報処理部３は、本体３００と、入力部３０９と、出力部３１０とを備えている。本体３００は、ＣＰＵ（Central Processing Unit）３０１と、ＲＯＭ（Read Only Memory）３０２と、ＲＡＭ（Random Access Memory）３０３と、ハードディスク３０４と、読出装置３０５と、入出力インターフェース３０６と、画像出力インターフェース３０７と、通信インターフェース３０８とを有する。本実施の形態においては、出力部３１０として画像を表示するディスプレイを用いている。しかしながら、出力部３１０としては、印刷により紙等に出力するプリンタを用いてもよい。
【００２５】
ＣＰＵ３０１は、ＲＯＭ３０２に記憶されているコンピュータプログラムおよびＲＡＭ３０３にロードされたコンピュータプログラムを実行する。ＲＡＭ３０３は、ＲＯＭ３０２およびハードディスク３０４に記録されているコンピュータプログラムの読み出しに用いられる。ＲＡＭ３０３は、コンピュータプログラムを実行するときに、ＣＰＵ３０１の作業領域としても利用される。
【００２６】
ハードディスク３０４には、測定部２から与えられた測定データを解析し、分析結果を出力するためのコンピュータプログラム３２０がインストールされている。
【００２７】
読出装置３０５は、フレキシブルディスクドライブ、ＣＤ−ＲＯＭドライブ、またはＤＶＤ−ＲＯＭドライブ等であり、可搬型記録媒体３２１に記録されたコンピュータプログラムまたはデータを読み出すことができる。また、可搬型記録媒体３２１には、コンピュータを情報処理部３として機能させるためのコンピュータプログラム３２０が格納されている。可搬型記録媒体３２１から読み出されたコンピュータプログラム３２０は、ハードディスク３０４にインストールされる。
【００２８】
入力部３０９は、入出力インターフェース３０６に接続される。出力部３１０は、画像出力インターフェース３０７に接続される。通信インターフェース３０８は、測定部２の通信インターフェース８３に接続される。
【００２９】
＜血液分析装置の動作＞
図３を参照し、血液分析装置１の動作について説明する。
【００３０】
まず、ステップＳ１０１において、情報処理部３のＣＰＵ３０１が、ユーザからの測定実行の指示を、入力部３０９を介して受け付ける。測定実行の指示を受け付けると、ＣＰＵ３０１は、ステップＳ１０２において、測定部２に測定開始を指示する指示データを送信する。ステップＳ１０３において、測定部２が指示データを受信する。マイクロコンピュータ８２は、ステップＳ１０４において測定試料調製処理を実行し、ステップＳ１０５においてＲＢＣ測定処理を実行し、ステップＳ１０６においてＨＧＢ測定処理を実行する。
【００３１】
図４を参照して、測定試料調製処理について説明する。ステップＳ２０１において、マイクロコンピュータ８２が検体吸引部４を制御して、試験管から血液検体を所定量吸引させ、反応槽５３に５μＬの検体を供給する。次に、ステップＳ２０２において、マイクロコンピュータ８２が試料調製部５を制御して、試薬容器５１から反応槽５３に１０２０μＬの希釈液を供給する。
【００３２】
反応槽５３は、ヒータによって所定温度になるように加温されており、加温された状態で、ステップＳ２０３で反応槽５３内の混合物の撹拌が行われる。ステップＳ２０１〜Ｓ２０３の動作により、反応槽５３において第１測定試料が調製される。つまり、試料調製部５は、溶血および染色せずに第１測定試料を調製する。ステップＳ２０４において、光学検出部６へ供給するために、第１測定試料が反応槽５３から導出される。
【００３３】
ステップＳ２０５において、マイクロコンピュータ８２が検体吸引部４を制御して、反応槽５３に３μＬの検体を供給する。次に、ステップＳ２０６において、マイクロコンピュータ８２が試料調製部５を制御して、試薬容器５１から反応槽５３に９９７μＬの希釈液を供給し、試薬容器５２から反応槽５３に５００μＬの溶血剤を供給する。
【００３４】
ステップＳ２０７において、反応槽５３内の混合物の撹拌が行われる。ステップＳ２０５〜Ｓ２０７の動作により、反応槽５３において第２測定試料が調製される。つまり、試料調製部５は、染色せずに溶血を行い、第２測定試料を調製する。ステップＳ２０８において、ＨＧＢ検出部７へ供給するために、第２測定試料が反応槽５３から導出される。
【００３５】
ステップＳ２０８の処理が終了すると、マイクロコンピュータ８２は、メインルーチンへ処理をリターンする。
【００３６】
再び図３を参照する。ＲＢＣ測定処理では、光学検出部６による第１測定試料の測定が行われる。シース液と共に第１測定試料がフローセル６１に供給される。光源部６２がフローセル６１中の第１測定試料の流れに光を照射する。
【００３７】
第１測定試料がフローセル６１を流れると、赤血球がフローセル６１を順次通過する。健常者の赤血球におけるプロトポルフィンの存在量は少ないが、鉄欠乏性貧血の患者の赤血球には多くのプロトポルフィンが含まれる。プロトポルフィンが多く存在する赤血球に青紫色レーザ光を照射すると、自家蛍光が放出される。自家蛍光は、波長が６００ｎｍ以上７００ｎｍ以下の赤色光であるので、各赤血球から放出される自家蛍光が個別に蛍光検出部６３によって検出される。一方、プロトポルフィンがほとんど含まれない赤血球に青色レーザ光を照射しても、自家蛍光はほとんど生じない。したがって、蛍光検出部６３における受光レベルは低値となり、自家蛍光は検出されない。
【００３８】
赤血球に光が照射される都度、赤血球からは散乱光が発せられる。赤血球から発せられた散乱光は、波長が４０５ｎｍであるので、散乱光検出部６４によって検出される。
【００３９】
蛍光検出部６３および散乱光検出部６４は、受光レベルに応じた電気信号を、蛍光信号および前方散乱光信号として出力する。信号処理回路８１は、蛍光信号から蛍光強度を抽出し、前方散乱光信号から前方散乱光強度を抽出する。
【００４０】
ＲＢＣ測定処理は、所定時間実行される。
【００４１】
ＨＧＢ測定処理では、ＨＧＢ検出部７による第２測定試料の測定が行われる。第２測定試料がＨＧＢ検出部７に供給される。ＨＧＢ検出部７は、セル内の第２測定試料に波長５５５ｎｍの光を照射し、吸光度を検出し、アナログ信号を信号処理回路８１へ出力する。信号処理回路８１は、ＨＧＢ検出部７の出力信号をヘモグロビン濃度に変換する。
【００４２】
ＨＧＢ測定処理の後、ステップＳ１０７において、マイクロコンピュータ８２は、各特徴パラメータを含む測定データを情報処理部３へ送信し、処理を終了する。
【００４３】
ステップＳ１０８において、情報処理部３が測定データを受信すると、ステップＳ１０９において、ＣＰＵ３０１は、測定データ解析処理を実行し、血液検体の分析結果を生成して、分析結果をハードディスク３０４に格納する。
【００４４】
図５を参照し、測定データ解析処理について説明する。測定データ解析処理を開始すると、まずＣＰＵ３０１は、ステップＳ３０１において、小球性貧血の可能性を示す第１フラグ、鉄欠乏性貧血の可能性を示す第２フラグ、およびβサラセミアの可能性を示す第３フラグのそれぞれに初期値の０をセットする。第１フラグ、第２フラグ、および第３フラグは、ＲＡＭ３０３の特定の領域に設けられている。第１フラグに０がセットされている場合には、小球性貧血の可能性が低いことを示し、第１フラグに１がセットされている場合には、小球性貧血の可能性が高いことを示している。第２フラグに０がセットされている場合には、鉄欠乏性貧血の可能性が低いことを示し、第２フラグに１がセットされている場合には、鉄欠乏性貧血の可能性が高いことを示している。第３フラグに０がセットされている場合には、βサラセミアの可能性が低いことを示し、第３フラグに１がセットされている場合には、βサラセミアの可能性が高いことを示している。
【００４５】
ＣＰＵ３０１は、ステップＳ３０２において、赤血球を計数する。血液分析装置１では、シースフローセルを流れる測定試料に電圧を印加し、血球が通過することによる電圧の変化を捉えて血球を測定するシースフローＤＣ検出法により赤血球を検出する。測定データには赤血球の検出データが含まれている。ステップＳ３０２では、ＣＰＵ３０１は、赤血球の検出データに基づき、赤血球を計数する。
【００４６】
シースフローＤＣ検出法に代えて、測定データに含まれる前方散乱光強度を用いて赤血球を計数することもできる。赤血球は、直径が約７乃至８μｍである。前方散乱光強度は、血球の大きさを反映した特徴パラメータであり、赤血球の前方散乱光強度は特定の範囲の値を取る。したがって、赤血球が出現する特定範囲内の前方散乱光強度を有する粒子を赤血球とし、赤血球を計数してもよい。前方散乱光強度に代えて、前方散乱光のパルス幅、パルス面積を用いて、赤血球を検出することもできる。前方散乱光に代えて、側方散乱光を検出し、側方散乱光のパルスのピーク値、パルス幅、またはパルス面積を用いて、赤血球を検出することもできる。
【００４７】
次に、ＣＰＵ３０１は、ステップＳ３０３において、赤血球数とヘモグロビン濃度から、平均赤血球血色素量（以下、「ＭＣＨ」という）を算出する。ＭＣＨは、以下の式により定義される。但し、ＲＧＢは赤血球数であり、ＨＧＢはヘモグロビン濃度である。
【数１】
0006612050.tif 000002
【００４８】
ＣＰＵ３０１は、ステップＳ３０４において、ＭＣＨを所定の閾値と比較し、小球性貧血の可能性を判定する。ＭＣＨは、血液検体のヘモグロビン量を反映している。小球性貧血の検体は、正常検体に比較して、ＭＣＨの値が小さい。つまり、ＣＰＵ３０１は、ＭＣＨが閾値以下である場合には、小球性貧血の可能性が高いと判定する。一方、ＣＰＵ３０１は、ＭＣＨが閾値より大きい場合には、小球性貧血の可能性が低いと判定する。
【００４９】
ＭＣＨが所定値以下である場合、ＣＰＵ３０１は、ステップＳ３０５において、第１フラグに１をセットする。ＭＣＨが所定値より大きい場合、ＣＰＵ３０１は、測定データ解析処理を終了し、メインルーチンに処理を戻す。
【００５０】
ステップＳ３０６において、ＣＰＵ３０１は、赤血球とされた粒子集団中から、蛍光強度が所定の閾値以上の粒子を、自家蛍光を発する赤血球（以下、「自家蛍光赤血球」という）として抽出し、自家蛍光赤血球を計数する。つまり、ＣＰＵ３０１は、検出された自家蛍光の強度によって個々の自家蛍光赤血球を特定し、自家蛍光赤血球を計数する。以下、自家蛍光赤血球の数を「自家蛍光赤血球数」という。ここで、鉄欠乏性貧血の患者の赤血球が発する自家蛍光の値は、鉄欠乏性貧血ではない被検者の赤血球が発する自家蛍光に比べて高い値として検出される。本実施の形態では、鉄欠乏性貧血ではない被検者の赤血球が発する自家蛍光は、ノイズに隠れており検出することができない。本実施の形態では、閾値以上の蛍光強度が検知される赤血球を自家蛍光赤血球とし、閾値以上の蛍光強度が検知されない赤血球を、自家蛍光を発しない赤血球と定義する。
【００５１】
ＣＰＵ３０１は、ステップＳ３０７において、赤血球数に対する自家蛍光赤血球数の比率（以下、「自家蛍光比率」という）を自家蛍光情報として算出し、ステップＳ３０８において、自家蛍光比率と所定の第１閾値とを比較し、鉄欠乏性貧血の可能性を判定する。自家蛍光比率は、各赤血球から放出される自家蛍光が個別に検出されたことにより得られる情報である。
【００５２】
図６Ａ乃至図６Ｄにおいて、縦軸は前方散乱光強度を示し、横軸は蛍光強度を示している。図６Ａ乃至図６Ｄにおいて、領域４００に出現する粒子は、赤血球とされ、領域４１０に出現する粒子は、自家蛍光赤血球とされる。図６Ａに示すように、正常検体、即ち、健常者から採取された血液検体の測定結果では、領域４１０にほとんど粒子が出現していない。つまり、自家蛍光赤血球とされる粒子はほとんど検出されていない。一方、図６Ｂに示すように、鉄欠乏性貧血の患者から採取された血液検体（以下、「鉄欠乏性貧血検体」という）の測定結果では、領域４１０に多数の粒子が出現している。つまり、自家蛍光赤血球とされる粒子が多数検出される。
【００５３】
鉄欠乏性貧血と同じく小球性貧血に分類されるサラセミアは、鉄欠乏性貧血と症状およびＣＢＣ項目の検査値などが似ているため、サラセミアと区別して鉄欠乏性貧血の可能性を判定することは臨床上重要である。図６Ｃおよび図６Ｄに示すように、サラセミアの患者から採取された血液検体（以下、「サラセミア検体」という）の測定結果では、領域４１０にほとんど粒子が出現していない。つまり、自家蛍光赤血球とされる粒子はほとんど検出されていない。
【００５４】
図７を参照する。図７において、縦軸は自家蛍光比率を示し、横軸はＭＣＨを示している。図７における各点は、血液検体を示す。図７に示す領域４２０は、小球性貧血の可能性が高いとされる範囲である。鉄欠乏性貧血検体とサラセミア検体のほとんどが、領域４２０に出現している。領域４２０中の血液検体のうち、鉄欠乏性貧血検体の方がサラセミア検体よりも自家蛍光比率が大きく、自家蛍光比率が１％以上となる小球性貧血の検体のほとんどが鉄欠乏性貧血検体である。正常検体のほとんども、自家蛍光比率が１％未満である。以上より、自家蛍光比率または自家蛍光赤血球数の値を利用することで、サラセミアおよび正常検体から鉄欠乏性貧血を区別することができることが分かる。
【００５５】
図８を参照する。図８において、縦軸は自家蛍光比率を示し、横軸はＭＣＨを示している。図８における各点は、血液検体を示す。図８では、正常検体と、鉄欠乏性貧血のステージ１からステージ３の検体を、点の種類を変えて示している。ここで、鉄欠乏性貧血のステージについて説明する。ステージ１は、軽度の鉄欠乏性貧血である。生化学検査項目のＦｅｒｒｉｔｉｎにおける検査値が正常範囲より低く、生化学検査項目のＣＲＰ、ＺｎＰＰ、ｓＴｆＲ、ＴｆＳ並びに血球計数項目のヘモグロビン濃度およびＭＣＨにおける各検査値が正常範囲内の場合にステージ１に該当する。ステージ２は、中度の鉄欠乏性貧血である。Ｆｅｒｒｉｔｉｎにおける検査値が正常範囲より低く、ＣＲＰにおける検査値が正常範囲内であり、ＺｎＰＰ、ｓＴｆＲにおける各検査値が正常範囲より高く、ＴｆＳにおける検査値が正常範囲より低く、ヘモグロビン濃度およびＭＣＨにおける各検査値が正常範囲内の場合にステージ２に該当する。ステージ３は、重度の鉄欠乏性貧血である。Ｆｅｒｒｉｔｉｎにおける検査値が正常範囲より低く、ＣＲＰにおける検査値が正常範囲内であり、ＺｎＰＰ、ｓＴｆＲにおける各検査値が正常範囲より高く、ＴｆＳにおける検査値が正常範囲より低く、ヘモグロビン濃度、ＭＣＨを含むＣＢＣ項目における検査値の何れかが正常範囲外となる場合にステージ３に該当する。
【００５６】
図８において、正常検体は、自家蛍光比率が０．１％以上１％以下、ＭＣＨが２５以上３５以下の範囲に多く分布している。ステージ１の検体は、正常検体とほぼ同じ領域に分布する。ステージ２の検体は、自家蛍光比率が１％以上１０％以下、ＭＣＨが２２以上３２以下の範囲に多く分布している。ステージ３の検体は、自家蛍光比率が３％以上１００％以下、ＭＣＨが１５以上３０以下の範囲に多く分布している。図８より、第１閾値を３％以上１０％以下程度に設定すれば、少なくともステージ３の鉄欠乏性貧血検体と、正常検体とを区別することができる。
【００５７】
再び図７を参照する。サラセミア検体の中でも、特にβサラセミア検体の自家蛍光比率は小さい。したがって、小球性貧血の可能性が高い検体のうち、自家蛍光比率が小さい検体はβサラセミアの可能性が高いと判定することができる。
【００５８】
再び図５を参照する。自家蛍光比率が第１閾値以上である場合、ＣＰＵ３０１は、ステップＳ３０９において、第２フラグに１をセットし、測定データ解析処理を終了し、メインルーチンに処理を戻す。自家蛍光比率が第１閾値未満である場合、ＣＰＵ３０１は、ステップＳ３１０において、自家蛍光比率と所定の第２閾値とを比較し、βサラセミアの可能性を判定する。第２閾値は、第１閾値よりも小さい値である。自家蛍光比率が第２閾値未満である場合、ＣＰＵ３０１は、ステップＳ３１１において、第３フラグに１をセットし、測定データ解析処理を終了し、メインルーチンに処理を戻す。自家蛍光比率が第２閾値以上である場合、ＣＰＵ３０１は、測定データ解析処理を終了し、メインルーチンに処理を戻す。
【００５９】
自家蛍光比率が第２閾値未満の場合、αサラセミアおよびβサラセミアを含むサラセミアの可能性が高いと判定することも可能である。第２閾値を用いず、自家蛍光比率が第１閾値未満の場合に、サラセミアの可能性が高いと判定することも可能である。一方の座標軸を自家蛍光比率とし、他方の座標軸をＭＣＨとした２次元座標空間において、図７に示すようなβサラセミアの判定領域４３０を規定し、自家蛍光比率およびＭＣＨが判定領域４３０内に入る場合にβサラセミアの可能性が高いと判定することも可能である。
【００６０】
サラセミアに関する判定を行わず、自家蛍光比率を用いて鉄欠乏性貧血の判定を行う構成としてもよい。また、鉄欠乏性貧血の判定を行わず、自家蛍光比率を用いてサラセミアの判定を行う構成としてもよい。
【００６１】
測定データ解析処理では、白血球数（ＷＢＣ）、血小板数（ＰＬＴ）、ヘマトクリット値（ＨＣＴ）、平均赤血球容積（ＭＣＶ ）、平均赤血球血色素濃度（ＭＣＨＣ）、好中球数（ＮＥＵＴ）、リンパ球数（ＬＹＭＰＨ）、好酸球数（ＥＯ）、単球数（ＭＯＮＯ）、網赤血球数（ＲＥＴ）等も求められる。
【００６２】
再び図３を参照する。ＣＰＵ３０１は、ステップＳ１１０において、分析結果を出力部３１０に表示して、処理を終了する。分析結果には、赤血球数、ヘモグロビン濃度 、ＭＣＨ、自家蛍光赤血球数、自家蛍光比率の各測定結果と、診断の参考となる参考情報とが含まれる。第１フラグに１がセットされている場合は、参考情報には、小球性貧血の可能性が高いことを示す情報が含まれる。第２フラグに１がセットされている場合、参考情報には、鉄欠乏性貧血の可能性が高いことを示す情報が含まれる。第３フラグに１がセットされている場合、参考情報には、βサラセミアの可能性が高いことを示す情報が含まれる。
【００６３】
図９を参照し、表示される分析結果についてさらに説明する。出力部３１０には、分析結果画面５００が表示される。分析結果画面５００は、検体情報表示領域５１０と、患者情報表示領域５２０と、測定結果表示領域５３０と、参考情報表示領域５４０とを有する。測定結果表示領域５３０は、ＣＢＣ項目表示領域５３１と、自家蛍光項目表示領域５３２とを有する。
【００６４】
検体情報表示領域５１０には、分析結果画面５００に表示されている分析結果の元となった検体の情報が表示される。患者情報表示領域５２０には、検体を採取された被験者の情報が表示される。
【００６５】
測定結果表示領域５３０には、測定データ解析処理によって得られた各項目の測定値が表示される。ＣＢＣ項目表示領域５３１には、血球分析における基本的な測定項目の測定値が表示される。ＣＢＣ項目表示領域５３１に表示される測定値は、赤血球（ＲＢＣ）、ヘモグロビン濃度（ＨＧＢ）およびＭＣＨの測定値を含む。自家蛍光項目表示領域５３２には、自家蛍光に関する測定項目の測定値が表示される。自家蛍光項目表示領域５３２に表示される測定値は、自家蛍光赤血球数（ＡＦ−ＲＢＣ）および自家蛍光比率（ＡＦ）の測定値を含む。
【００６６】
参考情報表示領域５４０には、測定データ解析処理によって、検体の異常が考えられる等のユーザに報告すべき結果が得られた場合に、ユーザへの参考情報が表示される。測定データ解析処理において、第１フラグに１がセットされた場合、参考情報表示領域５４０に、小球性貧血の可能性が高いことを示す情報である「Ｍｉｃｒｏｃｙｔｉｃ  ａｎｅｍｉａ？」が表示される。測定データ解析処理において、第２フラグに１がセットされた場合、参考情報表示領域５４０に、鉄欠乏性貧血の可能性が高いことを示す情報である「Ｉｒｏｎ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ？」が表示される。測定データ解析処理において、第３フラグに１がセットされた場合、参考情報表示領域５４０に、βサラセミアの可能性が高いことを示す情報である「βＴｈａｌａｓｓｅｍｉａ？」が表示される。
【００６７】
以上のように構成した血液分析装置１では、次のような効果が得られる。赤血球に青色レーザを照射すると、プロトポルフィンの含有量が大きい赤血球からは自家蛍光が検出され、プロトポルフィンの含有量が小さい赤血球からは自家蛍光が検出されない。正常検体およびサラセミア検体の赤血球からはほとんど自家蛍光が検出されず、鉄欠乏性貧血検体の赤血球からは自家蛍光が検出される。したがって、自家蛍光を検出することにより、サラセミアではなく、鉄欠乏性貧血の可能性が高いと判定することができる。鉄欠乏性貧血の可能性が高いと判定された場合、鉄欠乏性貧血の可能性が高いことを示す情報が出力される。したがって、臨床上有用な情報である鉄欠乏性貧血の可能性が高いことを示す情報を、ユーザに提供することができる。
【００６８】
小球性貧血の可能性が高い検体のうち、赤血球からほとんど自家蛍光が検出されない検体は、βサラセミアの可能性が高い。したがって、自家蛍光比率を利用して、βサラセミアの可能性を判定することができる。βサラセミアの可能性が高いと判定された場合、βサラセミアの可能性が高いことを示す情報が出力される。したがって、臨床上有用な情報であるβサラセミアの可能性が高いことを示す情報を、ユーザに提供することができる。
【００６９】
血液分析装置１は、鉄欠乏性貧血およびβサラセミアだけでなく、小球性貧血に関する判定も行う。血液分析装置１は、小球性貧血に関する判定結果と、鉄欠乏性貧血又はβサラセミアに関する判定結果とを出力することで、きめ細かい貧血の診断を支援するための情報をユーザに提供することができる。
【００７０】
＜評価試験＞
本発明者は、実施の形態１に係る血液分析装置と同等の構成の評価装置を作成し、評価試験を実施した。評価試験では、７１の正常検体と、６７の鉄欠乏性貧血検体と、２６のαサラセミア検体と、３０のβサラセミア検体とについて、評価装置で測定を行い、鉄欠乏性貧血とサラセミアとの鑑別を行った。比較対象として、上記の検体について、Ｇｒｅｅｎ  ＆  Ｋｉｎｇ、Ｅｎｇｌａｎｄ  ＆  Ｆｒａｓｅｒ、Ｍｅｎｔｚｅｒの各鑑別式を用いて、鉄欠乏性貧血とサラセミアとの鑑別を行った。各鑑別式については、特許文献１を参照されたい。
【００７１】
評価装置での鑑別結果と、鑑別式での鑑別結果とについて、ＲＯＣ解析を行った。下表は、ＲＯＣ解析の結果を示している。
【表１】
0006612050.tif 000003
【００７２】
ＡＵＣ（Area Under the Curve）は、１に近いほど鑑別性能が高いことを示す。ＲＯＣ解析結果から、一般的に提唱されている鑑別式と比べ、評価装置での鑑別が良好な結果を得ることが分かる。
【００７３】
（実施の形態２）
実施の形態２では、被験者の鉄欠乏性貧血の状態をモニタリングするための血液分析装置について説明する。
【００７４】
＜血液分析装置の構成＞
実施の形態２に係る血液分析装置の構成は、実施の形態１に係る血液分析装置の構成と同様であるので、同一構成要素については同一符号を付し、説明を省略する。
【００７５】
＜血液分析装置の動作＞
実施の形態２に係る血液分析装置の動作は、測定データ解析処理および分析結果の表示を除き、実施の形態１に係る血液分析装置の動作と同様である。実施の形態２では、測定データ解析処理および分析結果の表示について説明し、その他の動作については説明を省略する。
【００７６】
図１０を参照する。測定データ解析処理を開始すると、まずＣＰＵ３０１は、ステップＳ４０１において、シースフローＤＣ検出法による赤血球の検出データを用いて、赤血球を計数する。
【００７７】
次に、ＣＰＵ３０１は、ステップＳ４０２において、赤血球数とヘモグロビン濃度から、ＭＣＨを算出する。
【００７８】
ＣＰＵ３０１は、ステップＳ４０３において、赤血球とされた粒子集団中から、蛍光強度が所定の閾値以上の粒子を、自家蛍光赤血球として抽出し、自家蛍光赤血球を計数する。
【００７９】
ＣＰＵ３０１は、ステップＳ４０４において、自家蛍光比率を算出する。ステップＳ４０４の処理を終えると、ＣＰＵ３０１は、測定データ解析処理を終了し、メインルーチンに処理を戻す。
【００８０】
図１１を参照し、自家蛍光比率の値について説明する。図１１において、横軸は鉄欠乏性貧血のステージを示し、縦軸は自家蛍光比率を示している。鉄欠乏性貧血の程度が重くなるにしたがい、自家蛍光比率は大きくなり、鉄欠乏性貧血の程度が軽くなるにしたがい、自家蛍光比率は小さくなる。したがって、自家蛍光比率の値により、鉄欠乏性貧血の程度を推定することができる。
【００８１】
測定データ解析処理で得られた分析結果は、出力部３１０に表示される。図１２を参照し、表示される分析結果について説明する。ＣＰＵ３０１は、分析結果として、同一の被験者について、複数日で測定された自家蛍光比率を時系列のグラフで出力部３１０に表示させる。図１２において横軸は日付を示し、縦軸は自家蛍光比率を示している。図１２では、鉄欠乏性貧血の治療を受けている被験者の分析結果を示している。
【００８２】
図１２に示す例では、時間の経過にしたがい、自家蛍光比率が小さくなっている。図１２に示す破線は、鉄欠乏性貧血に関する判断の基準線である。ユーザは、破線より上方に自家蛍光比率が存在する場合、鉄欠乏性貧血の可能性が高いと判断することができ、破線より下方に自家蛍光比率が存在する場合、鉄欠乏性貧血の可能性が低いと判断することができる。図１２に示す例では、自家蛍光比率が基準線よりも上方に位置する状態から、時間の経過とともに自家蛍光比率が減少し、最終的には自家蛍光比率が基準線付近に位置するまで鉄欠乏性貧血が改善している。
【００８３】
以上のように構成することで、実施の形態２に係る血液分析装置では、同一の被験者から継続して血液検体を採取し、それぞれの血液検体の測定を行うことで、ユーザが鉄欠乏性貧血の状態のモニタリングを行うことができる。
【００８４】
１台の血液分析装置に、フローサイトメトリー法を使用した鉄欠乏性貧血の状態のモニタリング機能だけでなく、実施の形態１で説明したような、フローサイトメトリー法を使用して、貧血に関する判定を行う機能も搭載することも可能である。
【００８５】
（実施の形態３）
実施の形態３では、血液検体をスライドガラスに塗抹した塗抹標本を顕微鏡で拡大して撮像し、血球の画像に基づいて血球を検出するための血液分析装置について説明する。
【００８６】
＜血液分析装置の構成＞
図１３を参照し、血液分析装置の構成について説明する。血液分析装置６００は、測定部６１０と、情報処理部６２０とを備える。測定部６１０は、塗抹標本中の血球を撮像することが可能であり、情報処理部６２０は、得られた画像を処理して血球を検出することが可能である。測定部６１０には、塗抹標本作製装置７００が接続されている。
【００８７】
塗抹標本作製装置７００は、試験管から血液検体を吸引し、血液検体を希釈して測定試料を調製し、スライドガラスに測定試料を滴下し、測定試料を薄く引き延ばして塗抹標本７１０を作製する。塗抹標本作製装置７００は、作製した塗抹標本７１０を測定部６１０に供給する。
【００８８】
測定部６１０は、光源部６１１と、フィルタ部６１２と、ステージ６１３と、レンズ部６１４と、蛍光検出部であるカメラ６１５と、メモリ６１６と、通信インターフェース６１７と、マイクロコンピュータ６１８とを備える。
【００８９】
光源部６１１は、白色光のような多波長光を照射することが可能である。フィルタ部６１２は、複数の狭帯域フィルタを有する。狭帯域フィルタには、中心波長が４０５ｎｍの第１フィルタ６３１と、中心波長が６４０ｎｍの第２フィルタ６３２とが含まれる。フィルタ部６１２は、第１フィルタ６３１および第２フィルタ６３２を選択する。選択された狭帯域フィルタを、光源部６１１から照射された光が透過する。
【００９０】
ステージ６１３は、塗抹標本作製装置７００から搬送された塗抹標本７１０を保持する。ステージ６１３に保持された塗抹標本７１０に、狭帯域フィルタを通過した光が照射される。
【００９１】
レンズ部６１４は、塗抹標本の像を拡大する。カメラ６１５は、塗抹標本７１０の透過光を、レンズ部６１４を経由して受光し、カラー画像を生成する。メモリ６１６は、カメラ６１５によって生成された画像を記録する。
【００９２】
通信インターフェース６１７は、情報処理部６２０に通信ケーブルを介して接続されている。通信インターフェース６１７は、メモリ６１６に記録されている画像を情報処理部６２０に送信可能である。
【００９３】
マイクロコンピュータ６１８は、光源部６１１と、フィルタ部６１２と、ステージ６１３と、レンズ部６１４と、カメラ６１５と、メモリ６１６と、通信インターフェース６１７とを制御する。
【００９４】
情報処理部６２０は、コンピュータであり、ＣＰＵ、ＲＯＭ、ＲＡＭ、ハードディスク、入力部、表示部、通信インターフェースを備える。ハードディスクには、カメラ６１５によって生成された画像を処理するためのコンピュータプログラムがインストールされている。
【００９５】
＜血液分析装置の動作＞
塗抹標本作製装置７００が塗抹標本７１０を作製し、測定部２へ供給する。測定部２では、ステージ６１３が塗抹標本７１０を保持する。光源部６１１が塗抹標本７１０へ光を照射し、フィルタ部６１２が第１フィルタ６３１を選択し、その後第２フィルタ６３２を選択する。光源部６１１からの光が第１フィルタ６３１を通過すると、青色光が塗抹標本７１０に照射される。光源部６１１からの光が第２フィルタ６３２を通過すると、赤色光が塗抹標本７１０に照射される。
【００９６】
多波長光を透過するフィルタを切り替える構成に代えて、中心波長４０５ｎｍの光を照射する光源と、中心波長６４０ｎｍの光を照射する光源とを設け、光源を切り替えて塗抹標本７１０に光を照射するようにしてもよい。
【００９７】
カメラ６１５は、塗抹標本７１０に青色光が照射されているときと、塗抹標本７１０に赤色光が照射されているときとの両方において、それぞれ画像を生成する。以下、青色光が照射されているときに生成された画像を第１画像といい、赤色光が照射されているときに生成された画像を第２画像という。第１画像および第２画像は、メモリ６１６に記録され、情報処理部６２０へ送信される。
【００９８】
図１４を参照し、情報処理部６２０の動作について説明する。情報処理部６２０は、ステップＳ５０１において、第１画像および第２画像を受信する。情報処理部６２０のＣＰＵは、ステップＳ５０２において、第１画像を用いて赤血球を検出し、赤血球数を計数する。赤血球は青色光を吸収し、白血球は青色光をほとんど吸収しない。したがって、第１画像を用いれば、赤血球を白血球と区別して検出することができる。
【００９９】
ＣＰＵは、ステップＳ５０３において、第１画像を用いて、赤血球体積を算出し、ヘモグロビン濃度を算出する。赤血球体積は、赤血球として認識された領域の画素数から求められる。ヘモグロビン濃度は、赤血球体積と、赤血球として認識された領域における各画素の濃度から求められる。
【０１００】
ＣＰＵは、ステップＳ５０４において、ＭＣＨを算出する。ＭＣＨの算出には、実施の形態１で説明した式が用いられる。
【０１０１】
ＣＰＵは、ステップＳ５０５において、自家蛍光赤血球を検出し、自家蛍光赤血球を計数する。ステップＳ５０５では、第１画像と第２画像の差分が取得され、差分に基づいて自家蛍光赤血球が検出される。
【０１０２】
ＣＰＵは、ステップＳ５０６において、自家蛍光比率を求め、処理を終了する。
【０１０３】
情報処理部６２０は、実施の形態１に係る血液分析装置１の情報処理部３と同様に、ＭＣＨに基づいて小球性貧血に関する判定を行い、自家蛍光比率に基づいて鉄欠乏性貧血に関する判定、およびサラセミアに関する判定を行う。情報処理部６２０の表示部に、赤血球数、ヘモグロビン濃度、ＭＣＨ、自家蛍光赤血球数、自家蛍光比率の各測定結果、小球性貧血に関する判定結果、および鉄欠乏性貧血又はサラセミアに関する判定結果が出力される。
【０１０４】
小球性貧血に関する判定、鉄欠乏性貧血に関する判定、およびサラセミアに関する判定の全てを行うのではなく、小球性貧血に関する判定を行わずに、血球の画像に基づいて自家蛍光赤血球を検出し、実施の形態２と同様に、自家蛍光比率値を時系列に表示して、鉄欠乏性貧血の状態のモニタリングを可能とする構成とすることもできる。１台の血液分析装置に、血球の画像を使用して、貧血に関する判定を行う機能と、鉄欠乏性貧血の状態のモニタリング機能とを搭載してもよい。
【０１０５】
以上のように構成することで、実施の形態３に係る血液分析装置６００では、血球を撮像して得られた画像を用いて、貧血に関する判定を行うことができる。鉄欠乏性貧血に関する情報と共に、検出された自家蛍光赤血球の画像を出力すれば、鉄欠乏性貧血の診断がさらに容易となるため、より効果的に診断の支援を行うことができる。
【０１０６】
（実施の形態４）
血液検体に含まれる網赤血球からの自家蛍光を検出し、鉄欠乏性貧血およびサラセミアに関する判定を行うための血液分析装置について説明する。以下、成熟した赤血球を「赤血球」といい、網赤血球と区別する。
【０１０７】
＜血液分析装置の構成＞
図１５を参照して、血液分析装置１００の構成について説明する。実施の形態１の血液分析装置１と同様の構成については、同一符号を付し、説明を省略する。
【０１０８】
測定部２００は、試料調製部８００を備える。試料調製部８００は、反応槽８３０を有し、試薬容器５１，５２，８２０に接続されている。試薬容器８２０は、網赤血球を特異的に染色する蛍光色素を含む染色試薬を収容する。染色試薬には、例えば特許第３４２５８３０号に開示されている試薬、又はシスメックス株式会社製の「フルオロセルＲＥＴ」を用いることができる。
【０１０９】
検体吸引部４によって吸引された血液検体と、希釈液とが反応槽８３０で混合され、第１測定試料が調製される。第１測定試料は、赤血球の測定に用いられる。検体吸引部４によって吸引された血液検体と、希釈液と、溶血剤とが反応槽８３０で混合され、第２測定試料が調製される。第２測定試料は、ヘモグロビン濃度の測定に用いられる。検体吸引部４によって吸引された血液検体と、希釈液と、染色試薬とが反応槽８３０で混合され、第３測定試料が調製される。第３測定試料は、網赤血球の測定に用いられる。
【０１１０】
光学検出部９００は、フローサイトメトリー法による赤血球、網赤血球および自家蛍光の測定に用いられる。光学検出部９００は、フローセル９１０と、第１光源部９２１と、第２光源部９２２と、第１蛍光検出部９３１と、第２蛍光検出部９３２と、第１散乱光検出部９４１と、第２散乱光検出部９４２とを備える。フローセル９１０の構成は、実施の形態１におけるフローセル６１の構成と同様であるので、説明を省略する。
【０１１１】
第１光源部９２１および第２光源部９２２のそれぞれは、半導体レーザ光源である。第１光源部９２１は、波長６４０ｎｍの赤色レーザ光をフローセル９１０へ照射する。第２光源部９２２は、波長４０５ｎｍの青色レーザ光をフローセル９１０へ照射する。第１光源部９２１と第２光源部９２２とは、フローセル９１０における上下に離れた２つの位置に光を照射する。
【０１１２】
第１蛍光検出部９３１の感度波長範囲は、４００ｎｍ以上、１０００ｎｍ以下である。第１蛍光検出部９３１として、アバランシェフォトダイオードが用いられている。第１蛍光検出部９３１の前方には、第１フィルタ９３３が設けられている。第１フィルタ９３３は、波長６１０ｎｍ以上６５０ｎｍ以下の光を透過せず、波長６６０ｎｍ以上の光を透過する。
【０１１３】
第２蛍光検出部９３２の感度波長範囲は、４００ｎｍ以上、１０００ｎｍ以下である。第２蛍光検出部９３２として、アバランシェフォトダイオードが用いられている。第２蛍光検出部９３２の前方には、第２フィルタ９３４が設けられている。第２フィルタ９３４は、波長４２０ｎｍ以上６３０ｎｍ以下および６５０ｎｍ以上の光を透過する。したがって、第２フィルタ９３４は、４０５ｎｍおよび６４０ｎｍのレーザ光を遮断する。
【０１１４】
第１散乱光検出部９４１および第２散乱光検出部９４２それぞれの感度波長範囲は、４００ｎｍ以上、１０００ｎｍ以下である。第１散乱光検出部９４１および第２散乱光検出部９４２として、フォトダイオードが用いられている。第１散乱光検出部９４１および第２散乱光検出部９４２のそれぞれは、上下に離れた２箇所に設置される。
【０１１５】
第１光源部９２１がフローセル９１０中の血球に第１の光である赤色レーザ光を照射すると、散乱光（以下、「第１前方散乱光」という）が発生し、第１散乱光受光部９４１が第１前方散乱光を受光する。第２散乱光受光部９４２は、第１散乱光受光部９４１と異なる位置に設けられているため、赤色レーザ光による第１前方散乱光を受光しない。第２光源部９２２がフローセル９１０中の血球に第２の光である青色レーザ光を照射すると、散乱光（以下、「第２前方散乱光」という）が発生し、第２散乱光受光部９４２が第２前方散乱光を受光する。第１散乱光受光部９４１は、第２散乱光受光部９４２と異なる位置に設けられているため、青色レーザ光による第２前方散乱光を受光しない。
【０１１６】
第１光源部９２１がフローセル９１０中に第１の光である赤色レーザ光を照射すると、試薬容器８２０に収容された染色試薬により染色された網赤血球がフローセル９１０中を通過したときに、６６０ｎｍ以上の第１の波長の蛍光が発生する。第１フィルタ９３３が第１の波長の蛍光を透過し、第１蛍光受光部９３１が受光する。第１の光は第２の光とは異なる方向に照射され、第２蛍光受光部９３２には結像されない。したがって、第２蛍光受光部９３２は、第１の波長の蛍光を受光しない。
【０１１７】
第２光源部９２２がフローセル９１０中に第２の光である青色レーザ光を照射すると、赤血球又は網赤血球がフローセル９１０中を通過したときに、６３０ｎｍ付近の第２の波長の自家蛍光が発生する。第２フィルタ９３４が自家蛍光を透過し、第２蛍光受光部９３２が受光する。第１蛍光受光部９３１は、自家蛍光を受光しない。
【０１１８】
第１蛍光検出部９３１、第２蛍光検出部９３２、第１散乱光検出部９４１、および第２散乱光検出部９４２のそれぞれは、受光強度を示すアナログ信号を出力する。以下、第１蛍光検出部９３１から出力されるアナログ信号を「第１蛍光信号」といい、第２蛍光検出部９３２から出力されるアナログ信号を「第２蛍光信号」といい、第１散乱光検出部９４１から出力されるアナログ信号を「第１前方散乱光信号」といい、第２散乱光検出部９４２から出力されるアナログ信号を「第２前方散乱光信号」という。
【０１１９】
信号処理回路８１０は、第１蛍光検出部９３１、第２蛍光検出部９３２、第１散乱光検出部９４１、および第２散乱光検出部９４２のそれぞれが出力するアナログ信号に対して信号処理を行う。信号処理回路８１０は、第１蛍光信号、第２蛍光信号、第１前方散乱光信号、および第２前方散乱光信号に含まれるパルスのピーク値を特徴パラメータとして抽出する。以下、第１蛍光信号のピーク値を「第１蛍光強度」といい、第２蛍光信号のピーク値を「第２蛍光強度」といい、第１前方散乱光信号のピーク値を「第１前方散乱光強度」といい、第２前方散乱光信号のピーク値を「第２前方散乱光強度」という。
【０１２０】
＜血液分析装置の動作＞
図１６Ａおよび図１６Ｂを参照し、血液分析装置１００の動作について説明する。ステップＳ６０１〜Ｓ６０３の処理は、実施の形態１におけるステップＳ１０１〜Ｓ１０３の処理と同様であるので、説明を省略する。ステップＳ６０４の第１測定試料調整処理は、反応槽８３０で第１測定試料および第２測定試料を調製することを除き、実施の形態１におけるステップＳ１０１の測定試料調整処理と同様であるので、説明を省略する。
【０１２１】
ステップＳ６０５におけるＲＢＣ測定処理では、光学検出部９００による第１測定試料の測定が行われる。シース液と共に第１測定試料がフローセル９１０に供給される。第２光源部９２２がフローセル９１０中の第１測定試料の流れに光を照射する。
【０１２２】
赤血球にプロトポルフィンが含有される場合、青色レーザ光を赤血球に照射すると、自家蛍光が放出される。自家蛍光は、波長が６３０ｎｍ付近の赤色光であるので、各赤血球から放出される自家蛍光が個別に第２蛍光検出部９３２によって検出される。一方、プロトポルフィンがほとんど含まれない赤血球に青色レーザ光を照射しても、自家蛍光はほとんど生じない。したがって、第２蛍光検出部９３２における受光レベルは低値となり、自家蛍光は検出されない。
【０１２３】
赤血球に光が照射される都度、赤血球からは散乱光が発せられる。赤血球から発せられた前方散乱光は、波長が４０５ｎｍの第２前方散乱光であるので、第２散乱光検出部９４２によって検出される。
【０１２４】
第２蛍光検出部９３２および第２散乱光検出部９４２は、受光レベルに応じた電気信号を、第２蛍光信号および第２前方散乱光信号として出力する。信号処理回路８１０は、第２蛍光信号から第２蛍光強度を抽出し、第２前方散乱光信号から第２前方散乱光強度を抽出する。
【０１２５】
ＲＢＣ測定処理は、所定時間実行される。
【０１２６】
ステップＳ６０６〜Ｓ６１０の処理は、実施の形態１におけるステップＳ１０６〜Ｓ１１０の処理と同様であるので、説明を省略する。但し、第２蛍光強度は、実施の形態１における蛍光強度に相当し、第２前方散乱光強度は、実施の形態１における前方散乱光強度に相当する。
【０１２７】
ＣＰＵ３０１は、ステップＳ６１１において、網赤血球の測定が必要か否かを判定する。ステップＳ６１１では、ＣＰＵ３０１が、第３フラグが１にセットされているか否か、つまり、測定データ解析処理において、βサラセミアの可能性が高いと判定されたか否かを判定する。第３フラグが１にセットされている場合、ＣＰＵ３０１は、網赤血球の測定が必要と判定し、ステップＳ６１２に処理を移す。第３フラグが０にセットされている場合、ＣＰＵ３０１は、網赤血球の測定が不要と判定し、処理を終了する。
【０１２８】
ＣＰＵ３０１は、ステップＳ６１２において、網赤血球の測定開始の指示データを測定部２００に送信する。ステップＳ６１３において、測定部２００が指示データを受信する。マイクロコンピュータ８２は、ステップＳ６１４において、第２測定試料調整処理を実行し、ステップＳ６１５において、網赤血球測定処理を実行し、ステップＳ６１６において、ＨＧＢ測定処理を実行する。
【０１２９】
図１７を参照して、第２測定試料調製処理について説明する。ステップＳ７０１において、マイクロコンピュータ８２が検体吸引部４を制御して、ステップＳ２０１で血液検体が吸引された試験管から再度血液検体を所定量吸引させ、反応槽８３０に所定量の検体を供給する。次に、ステップＳ７０２において、マイクロコンピュータ８２が試料調製部８００を制御して、試薬容器５１から所定量の希釈液と、試薬容器８２０から所定量の染色試薬とを反応槽８３０に供給する。
【０１３０】
反応槽８３０は、ヒータによって所定温度になるように加温されており、加温された状態で、ステップＳ７０３で反応槽８３０内の混合物の撹拌が行われる。ステップＳ７０１〜Ｓ７０３の動作により、反応槽８３０において第３測定試料が調製される。染色試薬により、第３測定試料中の網赤血球は染色される。ステップＳ７０４において、光学検出部９００へ供給するために、第３測定試料が反応槽８３０から導出される。
【０１３１】
ステップＳ７０４の処理が終了すると、ステップＳ７０５〜Ｓ７０８の処理により、試料調製部８００が第２測定試料を調製する。ステップＳ７０５〜Ｓ７０８の処理は、実施の形態１におけるステップＳ２０５〜Ｓ２０８の処理と同様であるので、説明を省略する。
【０１３２】
ステップＳ７０８の処理が終了すると、マイクロコンピュータ８２は、メインルーチンへ処理をリターンする。
【０１３３】
再び図１６Ｂを参照する。ステップＳ６１５の網赤血球測定処理では、光学検出部９００による第３測定試料の測定が行われる。シース液と共に第３測定試料がフローセル９１０に供給される。第１光源部９２１および第２光源部９２２がフローセル９１０中の第３測定試料の流れに同時に光を照射する。
【０１３４】
フローセル９１０を通過する網赤血球に第１光源部９２１から赤色レーザ光が照射されると、第１の波長の蛍光と、赤色の第１前方散乱光が発生する。第１蛍光受光部９３１が、第１の波長の蛍光を受光し、第１蛍光信号を出力する。第１散乱光受光部９４１が、第１前方散乱光を受光し、第１前方散乱光信号を出力する。
【０１３５】
フローセル９１０を通過する網赤血球および赤血球にプロトポルフィンが含まれていれば、第２光源部９２２から青色レーザ光が照射されると、第２の波長の自家蛍光と、青色の第２前方散乱光が発生する。第２蛍光受光部９３２が、自家蛍光を受光し、第２蛍光信号を出力する。第２散乱光受光部９４２が、第２前方散乱光を受光し、第２前方散乱光信号を出力する。フローセル９１０を通過する網赤血球および赤血球にプロトポルフィンがほとんど含まれていなければ、第２光源部９２２から青色レーザ光が照射されても、自家蛍光はほとんど発生せず、第２蛍光受光部９３２が自家蛍光を検出しない。第２前方散乱光は、網赤血球および赤血球にプロトプルフィンが含まれている場合と同様に発生し、第２散乱光受光部９４２が第２前方散乱光を受光し、第２前方散乱光信号を出力する。
【０１３６】
網赤血球測定処理では、染色試薬で染色された網赤血球の自家蛍光を検出する。この場合、網赤血球の染色によって自家蛍光の検出精度が低下しないかが問題となる。図１８を参照して、網赤血球の染色による自家蛍光の検出への影響について説明する。図１８において、縦軸は、染色試薬により網赤血球を特異的に染色した検体に青色レーザ光を照射したときに得られる、網赤血球数に対する自家蛍光を発する網赤血球の数の比率（後述する「第２自家蛍光比率」）を示し、横軸は、網赤血球を染色しない検体に青色レーザ光を照射したときに得られる第２自家蛍光比率を示す。図２０に示すように、網赤血球を染色した場合の第２自家蛍光比率は、網赤血球を染色しない場合の第２自家蛍光比率と強い相関がある。以上より、網赤血球の染色の有無による自家蛍光の検出への影響はほとんど見られないことが分かる。
【０１３７】
再び図１６Ｂを参照する。ステップＳ６１６のＨＧＢ測定処理は、実施の形態１におけるＨＧＢ測定処理と同様であるので、説明を省略する。
【０１３８】
ＨＧＢ測定処理の後、ステップＳ６１７において、マイクロコンピュータ８２は、各特徴パラメータを含む測定データを情報処理部３へ送信し、処理を終了する。
【０１３９】
ステップＳ６１８において、情報処理部３が測定データを受信すると、ステップＳ６１９において、ＣＰＵ３０１は、第２測定データ解析処理を実行し、血液検体の分析結果を生成して、分析結果をハードディスク３０４に格納する。
【０１４０】
図１９を参照し、第２測定データ解析処理について説明する。ステップＳ８０１〜Ｓ８０５の処理は、実施の形態１におけるステップＳ３０１〜Ｓ３０５の処理と同様であるので、説明を省略する。
【０１４１】
ステップＳ８０６において、ＣＰＵ３０１は、第１蛍光強度と第１前方散乱光強度とに基づいて、網赤血球を検出する。ステップＳ８０６の処理を、図２０を用いて説明する。第１蛍光強度を一方の座標軸とし、第１前方散乱光強度を他方の座標軸とする２次元空間に、測定データに含まれる各粒子の情報をプロットすると、図２０に示すようになる。図２０において、領域９５０に網赤血球が分布する。領域９５０の情報は、網赤血球の検出領域としてハードディスク３０４に記憶されている。ＣＰＵ３０１は、領域９５０に出現する粒子を、網赤血球として検出する。
【０１４２】
再び図１９を参照する。ステップＳ８０７において、ＣＰＵ３０１は、網赤血球とされた粒子集団中から第２蛍光強度が所定の閾値以上の粒子を、自家蛍光を発する網赤血球（以下、「自家蛍光網赤血球」という）として抽出し、自家蛍光網赤血球を計数し、結果を自家蛍光網赤血球数とする。つまり、ＣＰＵ３０１は、検出された自家蛍光の強度によって個々の自家蛍光網赤血球を特定し、自家蛍光網赤血球を計数する。具体的には、ＣＰＵ３０１は、第２蛍光強度を一方の座標軸とし、第２前方散乱光強度を他方の座標軸とする２次元空間において、第２蛍光強度が上記の閾値以上の検出領域を規定し、この検出領域に出現する粒子を、自家蛍光網赤血球として検出する。ここで、鉄欠乏性貧血の被験者の網赤血球が発する自家蛍光は、鉄欠乏性貧血ではない被検者の網赤血球が発する自家蛍光に比べて高い値として検出される。本実施の形態では、鉄欠乏性貧血ではない被検者の網赤血球が発する自家蛍光は、ノイズに隠れており検出することができない。本実施の形態では、閾値以上の第２蛍光強度が検知される網赤血球を自家蛍光網赤血球とし、閾値以上の第２蛍光強度が検知されない網赤血球を、自家蛍光を発しない網赤血球と定義する。第２蛍光強度を一方の座標軸とし、第１前方散乱光強度を他方の座標軸とする２次元空間において、第２蛍光強度が上記の閾値以上の検出領域を規定し、この検出領域に出現する粒子を、自家蛍光網赤血球として検出してもよい。この場合、第２前方散乱光受光部９４２を省略することができる。
【０１４３】
ＣＰＵ３０１は、ステップＳ８０８において、網赤血球数に対する自家蛍光網赤血球数の比率（以下、「第２自家蛍光比率」という）を、網赤血球の自家蛍光情報として算出する。ＣＰＵ３０１は、ステップＳ８０９において、第２自家蛍光比率と所定の第３閾値とを比較し、鉄欠乏性貧血の可能性を判定する。第２自家蛍光比率は、各網赤血球から放出される自家蛍光が個別に検出されたことにより得られる情報である。
【０１４４】
図２１を参照する。図２１において、縦軸は第２自家蛍光比率を示し、横軸はＭＣＨを示している。図２１における各点は、血液検体を示す。図２１に示す領域９６０は、小球性貧血の可能性が高いとされる範囲である。鉄欠乏性貧血検体とサラセミア検体のほとんどが、領域９６０に出現している。領域９６０中の血液検体のうち、鉄欠乏性貧血検体の方がサラセミア検体よりも第２自家蛍光比率が大きい。鉄欠乏性貧血検体は、第２自家蛍光比率が３０％以上の範囲に多く分布している。サラセミア検体は、第２自家蛍光比率が３０％未満の範囲に多く分布している。正常検体も、第２自家蛍光比率が３０％未満の範囲に多く分布している。以上より、第２自家蛍光比率を利用することで、サラセミアおよび正常検体から鉄欠乏性貧血を区別することができることが分かる。自家蛍光網赤血球数を利用して、鉄欠乏性貧血の可能性を判定してもよい。この場合も、サラセミアおよび正常検体から鉄欠乏性貧血を区別することができる。
【０１４５】
鉄欠乏性貧血の患者の網赤血球は、プロトポルフィンを豊富に含む。網赤血球は、発生後２、３日で細胞内小器官を失い、成熟した赤血球になる。網赤血球が赤血球に変化する過程において、網赤血球中のプロトプルフィンの多くが細胞内小器官と共に失われると考えられる。このため、網赤血球に含まれるプロトポルフィンの量は、赤血球に比べて多い。
【０１４６】
健常者およびサラセミア患者の網赤血球は、プロトポルフィンの含有量が少ない。したがって、鉄欠乏性貧血の患者の網赤血球に含まれるプロトポルフィンの量は、健常者およびサラセミア患者の網赤血球に比べて顕著に多い。したがって、第２自家蛍光比率を利用することで、赤血球の自家蛍光比率を利用する場合よりも精度よく鉄欠乏性貧血の可能性の判定を行うことができる。
【０１４７】
図２２を参照する。図２２において、縦軸は第２自家蛍光比率を示し、横軸はＭＣＨを示している。図２２における各点は、血液検体を示す。図２２では、正常検体と、鉄欠乏性貧血のステージ１からステージ３の検体を、点の種類を変えて示している。
【０１４８】
図２２において、正常検体は、第２自家蛍光比率が１０％以上３０％以下、ＭＣＨが２５以上３５以下の範囲に多く分布している。ステージ１の検体は、第２自家蛍光比率が１０％以上４０％以下、ＭＣＨが２５以上３５以下の範囲に多く分布している。つまり、ステージ１の検体は正常検体とほぼ同じ領域に分布する。ステージ２の検体は、第２自家蛍光比率が３０％以上８０％以下、ＭＣＨが２２以上３２以下の範囲に多く分布している。ステージ３の検体は、第２自家蛍光比率が５０％以上１００％以下、ＭＣＨが１５以上３０以下の範囲に多く分布している。図２２と図８とを比較すると、正常検体、各ステージの鉄欠乏性貧血検体の何れについても、赤血球の自家蛍光比率に比べて第２自家蛍光比率が大きくなっている。特に、ステージ２および３の検体における第２自家蛍光比率は、赤血球の自家蛍光比率よりも顕著に大きいことが分かる。
【０１４９】
鉄欠乏性貧血の患者から採取された網赤血球の多くは、プロトポルフィンを豊富に含むと考えられる。一方、網赤血球のときにはプロトポルフィンを多く含んでいても、赤血球に変化する過程において多くのプロトポルフィンを失ってしまい、プロトポルフィンの含有量が僅かな赤血球があると考えられる。プロトポルフィンの含有量が少ない赤血球からは微弱な自家蛍光しか発生せず、自家蛍光赤血球として検出されない。このような赤血球が一定の割合で存在するため、鉄欠乏性貧血の被験者における第２自家蛍光比率が赤血球の自家蛍光比率よりも大きくなると考えられる。
【０１５０】
鉄欠乏性貧血の患者の網赤血球には、赤血球に比べて豊富にプロトポルフィンが含まれるため、網赤血球から発せられる自家蛍光の光量は、赤血球から発せられる自家蛍光の光量に比べて大きい。したがって、自家蛍光の検出精度は、赤血球よりも網赤血球の方が高い。このため、第２自家蛍光比率は、赤血球の自家蛍光比率よりも精度が高い。このような第２自家蛍光比率を用いることで、赤血球の自家蛍光比率よりも貧血に関する判定の精度を向上させることができる。
【０１５１】
図２２より、第２閾値を３０％以上５０％以下程度に設定すれば、少なくともステージ３の鉄欠乏性貧血検体と、正常検体とを区別することができることが分かる。
【０１５２】
再び図１９を参照する。第２自家蛍光比率が第３閾値以上である場合、ＣＰＵ３０１は、ステップＳ８１０において、第２フラグに１をセットし、第２測定データ解析処理を終了し、メインルーチンに処理を戻す。第２自家蛍光比率が第３閾値未満である場合、ＣＰＵ３０１は、ステップＳ８１１において、第２自家蛍光比率と所定の第４閾値とを比較し、βサラセミアの可能性を判定する。第４閾値は、第３閾値よりも小さい値である。
【０１５３】
再び図２１を参照する。βサラセミア検体の第２自家蛍光比率は正常検体およびαサラセミア検体の第２自家蛍光比率よりも小さい。具体的には、βサラセミア検体は、第２自家蛍光比率が２０％以下の範囲に多く分布する。βサラセミアの患者の網赤血球に含まれるプロトポルフィンの量は、鉄欠乏性貧血の患者の網赤血球に比べて顕著に少ない。したがって、第２自家蛍光比率を利用することで、赤血球の自家蛍光比率を利用する場合よりも精度よくβサラセミアの可能性の判定を行うことができる。
【０１５４】
再び図１９を参照する。第２自家蛍光比率が第４閾値未満である場合、ＣＰＵ３０１は、ステップＳ８１２において、第３フラグに１をセットし、第２測定データ解析処理を終了し、メインルーチンに処理を戻す。第２自家蛍光比率が第４閾値以上である場合、ＣＰＵ３０１は、第２測定データ解析処理を終了し、メインルーチンに処理を戻す。
【０１５５】
第２自家蛍光比率が第４閾値未満の場合、αサラセミアおよびβサラセミアを含むサラセミアの可能性が高いと判定することも可能である。第４閾値を用いず、第２自家蛍光比率が第３閾値未満の場合に、サラセミアの可能性が高いと判定することも可能である。一方の座標軸を第２自家蛍光比率とし、他方の座標軸をＭＣＨとした２次元座標空間において、図２１に示すようなβサラセミアの判定領域９７０を規定し、第２自家蛍光比率およびＭＣＨが判定領域９７０内に入る場合にβサラセミアの可能性が高いと判定することも可能である。
【０１５６】
サラセミアに関する判定を行わず、第２自家蛍光比率を用いて鉄欠乏性貧血の判定を行う構成としてもよい。また、鉄欠乏性貧血の判定を行わず、第２自家蛍光比率を用いてサラセミアの判定を行う構成としてもよい。
【０１５７】
再び図１６Ｂを参照する。ＣＰＵ３０１は、ステップＳ６２０において、分析結果を出力部３１０に表示して、処理を終了する。分析結果には、赤血球数、ヘモグロビン濃度 、ＭＣＨ、自家蛍光赤血球数、赤血球の自家蛍光比率、自家蛍光網赤血球数、第２自家蛍光比率の各測定結果と、診断の参考となる参考情報とが含まれる。第１フラグに１がセットされている場合は、参考情報には、小球性貧血の可能性が高いことを示す情報が含まれる。第２フラグに１がセットされている場合、参考情報には、鉄欠乏性貧血の可能性が高いことを示す情報が含まれる。第３フラグに１がセットされている場合、参考情報には、βサラセミアの可能性が高いことを示す情報が含まれる。
【０１５８】
図２３を参照し、表示される分析結果についてさらに説明する。出力部３１０には、分析結果画面９８０が表示される。分析結果画面９８０は、検体情報表示領域５１０と、患者情報表示領域５２０と、測定結果表示領域９８１と、参考情報表示領域５４０とを有する。測定結果表示領域９８１は、ＣＢＣ項目表示領域５３１と、自家蛍光項目表示領域９８２とを有する。検体情報表示領域５１０、患者情報表示領域５２０、ＣＢＣ項目表示領域５３１、参考情報表示領域５４０については、実施の形態１と同様であるので、説明を省略する。
【０１５９】
自家蛍光項目表示領域９８２には、自家蛍光に関する測定項目の測定値が表示される。自家蛍光項目表示領域９８２に表示される測定値は、自家蛍光赤血球数（ＡＦ−ＲＢＣ）、赤血球の自家蛍光比率（ＡＦ）、自家蛍光網赤血球数（ＡＦ−ＲＥＴ）、および第２自家蛍光比率（ＡＦ２）の測定値を含む。
【０１６０】
第１測定データ解析処理の結果、網赤血球の測定が必要であると判定した場合に、自動的に網赤血球の自家蛍光を測定し、貧血に関する判定を行う構成でなくてもよい。事前に赤血球の自家蛍光を検出することなく、網赤血球の自家蛍光を検出し、貧血に関する判定を行う構成としてもよい。具体的には、上述したステップＳ６０２〜Ｓ６１１の動作を実行せず、ステップＳ６１１、Ｓ６１２〜６１９の動作のみを実行する構成とすることもできる。例えば、予め貧血が疑われる被験者から採取された検体の場合、赤血球の自家蛍光を検出せずに、網赤血球の自家蛍光を検出し、網赤血球の自家蛍光情報を用いて貧血に関する判定を行うことができる。これにより、赤血球の自家蛍光の検出を行わず、網赤血球の自家蛍光を直接検出するため、検体の消費量を抑制しながら、高精度に貧血に関する判定を行うことができる。東南アジア等の貧血の患者が多い地域では、このような構成が特に有用である。また、赤血球の自家蛍光を測定し、サラセミアの可能性が高いという分析結果が得られた場合に、ユーザが手動で血液分析装置を動作させ、網赤血球の自家蛍光を測定し、サラセミアに関して詳細な判定を行ってもよい。
【０１６１】
（実施の形態５）
実施の形態５では、被験者の鉄欠乏性貧血の状態をモニタリングするための血液分析装置について説明する。
【０１６２】
＜血液分析装置の構成＞
実施の形態５に係る血液分析装置の構成は、実施の形態４に係る血液分析装置の構成と同様であるので、同一構成要素については同一符号を付し、説明を省略する。
【０１６３】
＜血液分析装置の動作＞
実施の形態５に係る血液分析装置は、実施の形態４に係る血液分析装置の動作のうち、ステップＳ６０２〜Ｓ６１０の動作を行わない。つまり、血液分析装置は、赤血球の自家蛍光を検出することなく、網赤血球の自家蛍光を検出する。図２４を参照して、血液分析装置１００の動作について説明する。
【０１６４】
ステップＳ９５１において、情報処理部３のＣＰＵ３０１が、ユーザからの測定実行の指示を、入力部３０９を介して受け付ける。測定実行の指示を受け付けると、ＣＰＵ３０１は、ステップＳ９５２において、測定部２００に測定開始を指示する指示データを送信する。ステップＳ９５３において、測定部２００が指示データを受信する。マイクロコンピュータ８２は、ステップＳ９５４において、測定試料調整処理を実行し、ステップＳ９５５において、網赤血球測定処理を実行し、ステップＳ９５６において、ＨＧＢ測定処理を実行する。ステップＳ９５４〜Ｓ９５６の処理は、実施の形態４におけるステップＳ６１４〜Ｓ６１６の処理と同様であるので、説明を省略する。
【０１６５】
ＨＧＢ測定処理の後、ステップＳ９５７において、マイクロコンピュータ８２は、各特徴パラメータを含む測定データを情報処理部３へ送信し、処理を終了する。
【０１６６】
ステップＳ９５８において、情報処理部３が測定データを受信すると、ステップＳ９５９において、ＣＰＵ３０１は、測定データ解析処理を実行し、血液検体の分析結果を生成して、分析結果をハードディスク３０４に格納する。
【０１６７】
図２５を参照する。測定データ解析処理を開始すると、まずＣＰＵ３０１は、ステップＳ９７１において、シースフローＤＣ検出法による赤血球の検出データを用いて、赤血球を計数する。
【０１６８】
次に、ＣＰＵ３０１は、ステップＳ９７２において、赤血球数とヘモグロビン濃度から、ＭＣＨを算出する。
【０１６９】
ＣＰＵ３０１は、ステップＳ９７３において、第１蛍光強度と第１前方散乱光強度とに基づいて、網赤血球を検出する。ステップＳ９７３の処理は、実施の形態４におけるステップＳ８０６と同様である。
【０１７０】
ＣＰＵ３０１は、ステップＳ９７４において、網赤血球とされた粒子集団中から第２蛍光強度が所定の閾値以上の粒子を、自家蛍光網赤血球として抽出し、自家蛍光網赤血球を計数する。
【０１７１】
ＣＰＵ３０１は、ステップＳ９７５において、第２自家蛍光比率を算出する。ステップＳ９７５の処理を終えると、ＣＰＵ３０１は、測定データ解析処理を終了し、メインルーチンに処理を戻す。
【０１７２】
赤血球の自家蛍光比率と同様に、鉄欠乏性貧血の程度が重くなるにしたがい、第２自家蛍光比率は大きくなり、鉄欠乏性貧血の程度が軽くなるにしたがい、第２自家蛍光比率は小さくなる。したがって、第２自家蛍光比率の値により、鉄欠乏性貧血の程度を推定することができる。
【０１７３】
再び図２４を参照する。ＣＰＵ３０１は、ステップＳ９６０において、分析結果を出力部３１０に表示して、処理を終了する。
【０１７４】
図２６を参照し、表示される分析結果について説明する。ＣＰＵ３０１は、分析結果として、同一の被験者について、複数日で測定された第２自家蛍光比率を時系列のグラフで出力部３１０に表示させる。図２６において横軸は日付を示し、縦軸は第２自家蛍光比率を示している。図２６では、鉄欠乏性貧血の治療を受けている被験者の分析結果を示している。
【０１７５】
図２６に示す例では、時間の経過にしたがい、第２自家蛍光比率が小さくなっている。図２６に示す破線は、鉄欠乏性貧血に関する判断の基準線である。ユーザは、破線より上方に第２自家蛍光比率が存在する場合、鉄欠乏性貧血の可能性が高いと判断することができ、破線より下方に第２自家蛍光比率が存在する場合、鉄欠乏性貧血の可能性が低いと判断することができる。図２６に示す例では、第２自家蛍光比率が基準線よりも上方に位置する状態から、時間の経過とともに第２自家蛍光比率が減少し、最終的には第２自家蛍光比率が基準線付近に位置するまで鉄欠乏性貧血が改善している。
【０１７６】
赤血球の寿命は約１２０日間である。新しい赤血球から検出された自家蛍光は、現在の被験者の貧血に関する状態を反映するが、古い赤血球から検出された自家蛍光は、赤血球が誕生した当時の被験者の貧血に関する状態を反映する。つまり、赤血球の自家蛍光比率は、現在から約１２０日前迄の被験者の貧血に関する状態を反映している。このため、赤血球の自家蛍光比率は、被験者の鉄欠乏性貧血の長期的な傾向の把握に適しているが、現在における被験者の鉄欠乏性貧血の状態を必ずしも正確に反映していない。
【０１７７】
一方、網赤血球は発生してから赤血球に変化するまでの期間が２〜３日である。このため、網赤血球から検出された自家蛍光は、現在の被験者の貧血に関する状態を反映する。つまり、第２自家蛍光比率は、現在の被験者の鉄欠乏性貧血の状態を反映している。したがって、第２自家蛍光比率を時系列で表示することで、ユーザが被験者の鉄欠乏性貧血の状態をより一層正確にモニタリングすることができる。
【０１７８】
１台の血液分析装置に、フローサイトメトリー法を使用した鉄欠乏性貧血の状態のモニタリング機能だけでなく、実施の形態４で説明したような、フローサイトメトリー法を使用して、貧血に関する判定を行う機能も搭載することも可能である。
【０１７９】
（その他の実施の形態）
実施の形態１乃至５においては、自家蛍光比率を用いて貧血に関する判定を行う構成について述べたが、これに限定されない。赤血球の自家蛍光が、貧血に関連していることから、検出された自家蛍光赤血球に関する情報を利用することで、貧血に関する判定を行うことが可能である。具体的には、自家蛍光情報として自家蛍光赤血球数を利用し、自家蛍光を発する赤血球の数が所定の第１の閾値より多いときに、鉄欠乏性貧血の可能性が高いと判定してもよい。また、小球性貧血の可能性が高く、且つ、自家蛍光を発する赤血球の数が所定の第２の閾値より少ないときに、サラセミアの可能性が高いと判定してもよい。また、自家蛍光情報として自家蛍光を発しない赤血球数に対する自家蛍光を発する赤血球の比率を利用し、自家蛍光を発しない赤血球数に対する自家蛍光を発する赤血球の比率が所定の第１の閾値より高いときに、鉄欠乏性貧血の可能性が高いと判定してもよい。また、小球性貧血の可能性が高く、且つ、自家蛍光を発しない赤血球数に対する自家蛍光を発する赤血球の比率が所定の第２の閾値より低いときに、サラセミアの可能性が高いと判定してもよい。また、自家蛍光情報として自家蛍光赤血球の蛍光強度の総和を利用し、自家蛍光赤血球の蛍光強度の総和が所定の第１の閾値より大きいときに、鉄欠乏性貧血の可能性が高いと判定してもよい。小球性貧血の可能性が高く、且つ、自家蛍光赤血球の蛍光強度の総和が所定の第２の閾値より小さいときに、サラセミアの可能性が高いと判定してもよい。また、自家蛍光情報として自家蛍光赤血球の蛍光強度の分布、例えば、自家蛍光赤血球の蛍光強度の出現領域を蛍光強度の低いものから「低」、「中」、「高」と分け、それぞれの領域に出現する自家蛍光赤血球の割合に基づいて貧血の可能性の判定を行ってもよい。この場合、例えば「高」の領域に出現する自家蛍光赤血球の割合が所定の第１の閾値より高いときに、鉄欠乏性貧血の可能性が高いと判定してもよい。また、小球性貧血の可能性が高く、且つ、例えば「低」の領域に出現する自家蛍光赤血球の割合が所定の第２の閾値より高いときに、サラセミアの可能性が高いと判定することができる。または、自家蛍光赤血球の蛍光強度の分布に関する情報として、自家蛍光赤血球の蛍光強度の最大値を利用し、自家蛍光赤血球の蛍光強度の最大値が所定の第１の閾値より大きいときに、鉄欠乏性貧血の可能性が高いと判定してもよい。小球性貧血の可能性が高く、且つ、自家蛍光赤血球の蛍光強度の最大値が所定の第２の閾値より小さいときに、サラセミアの可能性が高いと判定してもよい。網赤血球の自家蛍光を検出し、上記と同様の自家蛍光網赤血球に関する情報を取得し、この自家蛍光網赤血球に関する情報を利用して貧血に関する判定を行うこともできる。ここで挙げた各実施形態において、第１の閾値は第２の閾値より大きい。また、第１の閾値と第２の閾値を同一としてもよい。
【０１８０】
実施の形態１乃至５においては、中心波長が４０５ｎｍの青色光を測定試料に照射して、自家蛍光の検出を行う構成について述べたが、これに限定されない。自家蛍光の検出に利用する青色光の波長帯域は、４００ｎｍ以上、４３５ｎｍ以下であればよい。
【０１８１】
実施の形態１、２、４、５においては、蛍光検出部が４００ｎｍ以上、１０００ｎｍ以下の感度波長帯域を有する構成について述べたが、これに限定されない。蛍光検出部は、６００ｎｍ以上、７００ｎｍ以下の範囲内であれば、上記以外の感度波長帯域を有していてもよい。
【０１８２】
実施の形態１、３、４においては、ＭＣＨを利用して小球性貧血に関する判定を行う構成について述べたが、これに限定されない。ＭＣＶまたはＭＣＨＣを利用して小球性貧血に関する判定を行うことも可能である。
【０１８３】
実施の形態１、３、４においては、小球性貧血に関する判定、鉄欠乏性貧血に関する判定、およびサラセミアに関する判定を行う構成について述べたが、これに限定されない。小球性貧血に関する判定を行わずに、自家蛍光赤血球を検出し、鉄欠乏性貧血に関する判定、およびサラセミアに関する判定を行う構成としてもよい。小球性貧血に関する判定を行わずに、自家蛍光網赤血球を検出し、鉄欠乏性貧血に関する判定、およびサラセミアに関する判定を行う構成としてもよい。
【符号の説明】
【０１８４】
１  血液分析装置
２  測定部
３  情報処理部
５  試料調製部
６  光学検出部
７  ＨＧＢ検出部
６１  フローセル
６２  光源部
６３  蛍光検出部
６４  散乱光検出部
３０１  ＣＰＵ
３１０  表示部
３２０  コンピュータプログラム
３２１  可搬型記録媒体
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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