(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
炭水化物を含む凍結乾燥保護剤、および
複数の蛍光ナノ粒子であって、
該複数の蛍光ナノ粒子における蛍光ナノ粒子が、それぞれが少なくとも１種の縮合共役ポリマーを含む、複数の蛍光ナノ粒子を含み、
凍結乾燥後の該複数の蛍光ナノ粒子が、凍結乾燥されていない該複数の蛍光ナノ粒子の量子収率の８０％より大きい量子収率を有する、
凍結乾燥した組成物。
【請求項２】
前記炭水化物が、単糖、二糖、オリゴ糖、多糖、またはこれらの組合せを含む、請求項１に記載の凍結乾燥した組成物。
【請求項３】
前記炭水化物が、スクロース、トレハロース二水和物、マルトース一水和物、およびラクトース一水和物からなる群から選択される二糖である、請求項１に記載の凍結乾燥した組成物。
【請求項４】
前記凍結乾燥保護剤が、アルジトール、ヒドロキシプロピル−シクロデキストリン、またはこれらの組合せを含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
【請求項５】
前記複数の蛍光ナノ粒子における前記蛍光ナノ粒子が、動的光散乱によって測定して、３０ｎｍ未満の平均直径を有する、請求項１から４のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
【請求項６】
前記複数の蛍光ナノ粒子における前記蛍光ナノ粒子が、動的光散乱によって測定して、３０ｎｍ〜１００ｎｍの平均直径を有する、請求項１から４のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
【請求項７】
前記複数の蛍光ナノ粒子における前記蛍光ナノ粒子が、動的光散乱によって測定して、１００ｎｍ未満の平均直径を有する、請求項１から４のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
【請求項８】
凍結乾燥後の前記複数の蛍光ナノ粒子が、水溶液に分散したときに、凍結乾燥の前の前記複数の蛍光ナノ粒子と比較して、同じまたは増加した量子収率を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
【請求項９】
前記複数の蛍光ナノ粒子のうちの少なくともいくつかの蛍光ナノ粒子が、生体分子に共役している、請求項１から８のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
【請求項１０】
前記生体分子が、タンパク質、核酸分子、脂質、またはペプチドである、請求項９に記載の凍結乾燥した組成物。
【請求項１１】
前記生体分子が、一次抗体、二次抗体、ストレプトアビジン、アビジン、またはアプタマーである、請求項９または１０に記載の凍結乾燥した組成物。
【請求項１２】
前記複数の蛍光ナノ粒子における前記蛍光ナノ粒子が、それぞれが複数のポリマーを含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
【請求項１３】
前記複数の蛍光ナノ粒子における前記蛍光ナノ粒子が、水溶液に分散したときに、凍結乾燥の前の平均粒子直径と比較して、同様の平均粒子直径を有する、請求項１から１２のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
【請求項１４】
前記少なくとも１種の縮合共役ポリマーが、半導体ポリマーを含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記少なくとも１種の縮合共役ポリマーが、フルオレンポリマー、フルオレンをベースとするポリマーまたはコポリマー、フェニレンビニレンをベースとするポリマーまたはコポリマー、フェニレンエチニレンをベースとするポリマーまたはコポリマー、およびＢＯＤＩＰＹをベースとするポリマーまたはコポリマーからなる群から選択される、請求項１から１４のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
【請求項１６】
前記凍結乾燥した組成物は、
凍結乾燥保護剤および複数の蛍光ナノ粒子を含む懸濁液を凍結乾燥して、それによって該凍結乾燥した組成物を形成すること
を含む方法によって調製され、該複数の蛍光ナノ粒子における蛍光ナノ粒子は、それぞれが少なくとも１種の縮合共役ポリマーを含む、請求項１から１５のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
【請求項１７】
凍結乾燥した組成物を生成する方法であって、該方法は、
凍結乾燥保護剤および複数の蛍光ナノ粒子を含む懸濁液を凍結乾燥して、それによって該凍結乾燥した組成物を形成すること
を含み、該複数の蛍光ナノ粒子における蛍光ナノ粒子が、それぞれが少なくとも１種の縮合共役ポリマーを含み、凍結乾燥後の該複数の蛍光ナノ粒子が、凍結乾燥されていない該複数の蛍光ナノ粒子の量子収率の８０％より大きい量子収率を有する、方法。
【請求項１８】
前記凍結乾燥保護剤が、炭水化物である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記炭水化物が、単糖、二糖、オリゴ糖、多糖、またはこれらの組合せを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記炭水化物が、スクロース、トレハロース二水和物、マルトース一水和物、およびラクトース一水和物からなる群から選択される二糖である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記凍結乾燥保護剤が、アルジトール、ヒドロキシプロピル−シクロデキストリン、ウシ血清アルブミンまたはこれらの組合せを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
前記少なくとも１種の縮合共役ポリマーが、生体分子に共役している、請求項１７から２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記生体分子が、タンパク質、核酸分子、脂質、またはペプチドである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記生体分子が、一次抗体、二次抗体、ストレプトアビジン、アビジン、またはアプタマーである、請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記少なくとも１種の縮合共役ポリマーが、半導体ポリマーを含む、請求項１７から２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記少なくとも１種の縮合共役ポリマーが、フルオレンポリマー、フルオレンをベースとするポリマーまたはコポリマー、フェニレンビニレンをベースとするポリマーまたはコポリマー、フェニレンエチニレンをベースとするポリマーまたはコポリマー、およびＢＯＤＩＰＹをベースとするポリマーまたはコポリマーからなる群から選択される、請求項１７から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記凍結乾燥した組成物を水溶液と混合し、それによって該水溶液に分散した前記複数の蛍光ナノ粒子を含む懸濁液を形成することをさらに含む、請求項１７から２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記複数の蛍光ナノ粒子における前記蛍光ナノ粒子が、前記水溶液に分散したときに、凍結乾燥する前の平均粒子直径と比較して、同様の平均粒子直径を有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記水溶液中に分散した前記複数の蛍光ナノ粒子が、凍結乾燥する前の前記複数の蛍光ナノ粒子と比較して、同様のまたは増加した量子収率を有する、請求項２７から２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
ａ）凍結乾燥した凍結乾燥保護剤および複数の凍結乾燥した蛍光ナノ粒子を含む組成物であって、
該複数の凍結乾燥した蛍光ナノ粒子における蛍光ナノ粒子が、それぞれが少なくとも１種の縮合共役ポリマーを含み、
凍結乾燥後の該複数の凍結乾燥蛍光ナノ粒子が、凍結乾燥されていない該複数の蛍光ナノ粒子の量子収率の８０％より大きい量子収率を有する、
組成物、ならびに
ｂ）該組成物と水溶液とを合わせることについて記載した一式の説明書
を含む、キット。
【請求項３１】
前記凍結乾燥した凍結乾燥保護剤が炭水化物である、請求項３０に記載のキット。
【請求項３２】
前記凍結乾燥した凍結乾燥保護剤が、アルジトール、ヒドロキシプロピル−シクロデキストリン、ウシ血清アルブミン、またはこれらの組合せを含む、請求項３０に記載のキット。
【請求項３３】
前記複数の蛍光ナノ粒子のうちの少なくともいくつかの蛍光ナノ粒子が、生体分子に共役している、請求項３０から３２のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３４】
前記少なくとも１種の縮合共役ポリマーが、フルオレンポリマー、フルオレンをベースとするポリマーまたはコポリマー、フェニレンビニレンをベースとするポリマーまたはコポリマー、フェニレンエチニレンをベースとするポリマーまたはコポリマー、およびＢＯＤＩＰＹをベースとするポリマーまたはコポリマーからなる群から選択される、請求項３０から３３のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３５】
凍結乾燥後の前記複数の蛍光ナノ粒子が、凍結乾燥されていない前記複数の蛍光ナノ粒子の量子収率と等しいか、またはこれより高い量子収率を有する、請求項１に記載の凍結乾燥した組成物。
【請求項３６】
凍結乾燥後の前記複数の蛍光ナノ粒子が、凍結乾燥されていない前記複数の蛍光ナノ粒子の量子収率と等しいか、またはこれより高い量子収率を有する、請求項１７に記載の方法。
【請求項３７】
凍結乾燥後の前記複数の蛍光ナノ粒子が、凍結乾燥されていない前記複数の蛍光ナノ粒子の量子収率と等しいか、またはこれより高い量子収率を有する、請求項３０に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本願は、その全体において、全ての目的のために参考として本明細書において援用される、２０１３年３月１４日に出願された、米国仮特許出願第６１／７８５，２９３号明細書の利益を主張する。
【０００２】
連邦政府の助成を受けた研究についての陳述
本開示は、認可番号ＧＭ０８５４８５の下で米国国立衛生研究所の支援によって行われた。政府は本開示に対して権利を有し得る。
【背景技術】
【０００３】
蛍光をベースとする技術は、生体系の研究においてますます重要な役割を果たしている。小さな有機フルオロフォアから、ナノ粒子、例えば、量子ドット（Ｑｄｏｔ）までに亘る新規な蛍光プローブ、および様々な形態の遺伝的にコードされた緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）が開発されてきた。これらの蛍光プローブは新規な測定および進展を可能としてきたが、これらはその制限、例えば、低い輝度、不十分な光安定性、または毒性の懸念を有する。その結果、現存する蛍光標識を改良し、または現存する蛍光標識を少なくとも補完するプローブが依然として必要とされている。
【０００４】
ポリマードット（発色団ポリマードット）は、新規なクラスの蛍光ナノ粒子として開発されてきた。有機色素および蛍光タンパク質と比較して、発色団ポリマードットは、数桁高い輝度を有することができ、光退色に対してより耐性である。量子ドット（Ｑｄｏｔ）と比較したとき、例えば、発色団ポリマードットは、一桁より明るいことがあり得る。さらに、発色団ポリマードットの寸法は、これらの分光特性に影響を与えることなく数ナノメートルから数十ナノメートルまで調整することができる。大きなナノ粒子による標識化がタグ付き生体分子の自然の挙動を撹乱し得る場合、小さなサイズを有する発色団ポリマードットが望ましい。小さな発色団ポリマードットはまた、密集している細胞空間または細胞間隙において有用であり得、ここでは小さな発色団ポリマードットはより良好に浸透し、分布することできる。発色団ポリマードットの表面特性および生体共役反応を制御する様々なスキームが開発されてきており、これは細胞表面および細胞内の標識化のための発色団ポリマードットの使用が実現されてきた。さらに、ｐＨ、温度、ならびにイオン、例えば、鉄および銅のためのものを含めて、発色団ポリマードットをベースとするレシオメトリックセンサーが開発されてきた。
【０００５】
発色団ポリマードットは有望な新規なクラスの蛍光プローブを表すが、発色団ポリマードットの使用が関与する方法および組成物、例えば、発色団ポリマードットを貯蔵するための方法および組成物を開発することが依然として求められている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、例えば、以下を提供する：
（項目１）
蛍光ナノ粒子を含む凍結乾燥した組成物であって、該蛍光ナノ粒子が、少なくとも１種の縮合共役ポリマーを含む、凍結乾燥した組成物。
（項目２）
蛍光ナノ粒子を含む凍結乾燥した組成物であって、前記蛍光ナノ粒子が凍結乾燥されている、凍結乾燥した組成物。
（項目３）
前記蛍光ナノ粒子が、少なくとも１種の縮合共役ポリマーをさらに含む、項目１または２に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目４）
炭水化物をさらに含む、項目１から３のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目５）
前記炭水化物が、単糖、二糖、オリゴ糖、多糖、またはこれらの組合せを含む、項目４に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目６）
アルジトール、ヒドロキシプロピル−シクロデキストリン、ＢＳＡ、またはこれらの組合せをさらに含む、項目１から５のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目７）
二糖をさらに含む、項目１から６のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目８）
前記二糖が、約１％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖで存在する、項目７に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目９）
前記二糖が、約１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在する、項目７または８に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目１０）
前記二糖が、スクロース、トレハロース二水和物、マルトース一水和物、およびラクトース一水和物からなる群から選択される、項目７から９のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目１１）
前記二糖が、スクロースである、項目７から１０のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目１２）
スクロースが、約１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在する、項目１１に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目１３）
前記蛍光ナノ粒子の少なくともいくつかが、生体分子に共役している、項目１から１２のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目１４）
前記生体分子が、タンパク質、抗体、核酸分子、脂質、ペプチド、アプタマー、薬物、またはこれらの組合せを含む、項目１３に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目１５）
前記生体分子が、ストレプトアビジンを含む、項目１３から１４のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目１６）
前記生体分子が、抗体を含む、項目１３から１５のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目１７）
前記生体分子が、核酸を含む、項目１３に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目１８）
前記生体分子が、アプタマーを含む、項目１３または１７のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目１９）
前記蛍光ナノ粒子が、水溶液に分散したときに、凍結乾燥の前の前記蛍光ナノ粒子と比較して、同じまたは増加した量子収率を含む、項目１から１８のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目２０）
前記蛍光ナノ粒子が、水溶液に分散したときに、凍結乾燥の前の蛍光ナノ粒子の粒子直径と比較して、同様の粒子直径を含む、項目１から１９のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目２１）
前記少なくとも１種の縮合共役ポリマーが、半導体ポリマーを含む、項目１または３のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目２２）
前記少なくとも１種の縮合共役ポリマーが、フルオレンポリマー、フルオレンをベースとするポリマーまたはコポリマー、フェニレンビニレンポリマーまたはコポリマー、フェニレンエチニレンポリマーまたはコポリマー、ＢＯＤＩＰＹをベースとするポリマーまたはコポリマーから選択される、項目１、３、または２１のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目２３）
前記少なくとも１種の縮合共役ポリマーが、ポリ（９，９−ジヘキシルフルオレニル−２，７−ジイル）（ＰＤＨＦ）、ポリ（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）（ＰＦＯ）、ポリ［｛９，９−ジオクチル−２，７−ジビニレン−フルオレニレン｝−ａｌｔ−ｃｏ−｛２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−フェニレン｝］（ＰＦＰＶ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（１，４−ベンゾ−｛２，１，３｝−チアジアゾール）］（ＰＦＢＴ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（４，７−ジ−２−チエニル−２，１，３−ベンゾチアジアゾール）］（ＰＦＴＢＴ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−９−ｃｏ−（４，７−ジ−２−チエニル−２，１，３−ベンゾチアジアゾール）］（ＰＦ−０．１ＴＢＴ））、およびポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−フェニレンビニレン］（ＭＥＨ−ＰＰＶ）、ポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−（１−シアノビニレン−１，４−フェニレン）］（ＣＮ−ＰＰＶ）、ＢＯＤＩＰＹ５７０、ＢＯＤＩＰＹ５９０、またはＢＯＤＩＰＹ６９０から選択される、項目１、３、２１または２２に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目２４）
前記少なくとも１種の縮合共役ポリマーが、ＢＯＤＩＰＹ誘導体を含む、項目１、３、２１から２３のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目２５）
前記ＢＯＤＩＰＹ誘導体が、式（Ｉ）の構造を有し、
【化２１】
0006587605.tif 000002
式中、Ｒ１、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ４ＡおよびＲ４Ｂのそれぞれは、水素、アルキル、アラルキル、アリール、およびアルコキシ−アリールから独立に選択され、前記ＢＯＤＩＰＹ誘導体は、Ｒ１、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ４ＡおよびＲ４Ｂ、またはこれらの組合せへの付着によって発色団ポリマー中に統合されている、項目２２から２４のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目２６）
前記蛍光ナノ粒子が、半導体ポリマーを含む、項目１から２５のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目２７）
前記蛍光ポリマーが、フルオレンポリマー、フルオレンをベースとするポリマーまたはコポリマー、フェニレンビニレンポリマーまたはコポリマー、フェニレンエチニレンポリマーまたはコポリマー、Ｂｏｄｉｐｙをベースとするポリマーまたはコポリマーからなる群から選択される、項目１から２６のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目２８）
蛍光ポリマーを含み、前記蛍光ポリマーが、ポリ（９，９−ジヘキシルフルオレニル−２，７−ジイル）（ＰＤＨＦ）、ポリ（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）（ＰＦＯ）、ポリ［｛９，９−ジオクチル−２，７−ジビニレン−フルオレニレン｝−ａｌｔ−ｃｏ−｛２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−フェニレン｝］（ＰＦＰＶ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（１，４−ベンゾ−｛２，１，３｝−チアジアゾール）］（ＰＦＢＴ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（４，７−ジ−２−チエニル−２，１，３−ベンゾチアジアゾール）］（ＰＦＴＢＴ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−９−ｃｏ−（４，７−ジ−２−チエニル−２，１，３−ベンゾチアジアゾール）］（ＰＦ−０．１ＴＢＴ））、およびポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−フェニレンビニレン］（ＭＥＨ−ＰＰＶ）、ポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−（１−シアノビニレン−１，４−フェニレン）］（ＣＮ−ＰＰＶ）、ＢＯＤＩＰＹ５７０、ＢＯＤＩＰＹ５９０、およびＢＯＤＩＰＹ６９０からなる群から選択される、項目１から２７のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目２９）
前記蛍光ナノ粒子が、動的光散乱によって測定して、約３０ｎｍ未満の平均直径を有する、項目１から２８のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目３０）
前記蛍光ナノ粒子が、動的光散乱によって測定して、３０ｎｍ〜１００ｎｍの平均直径を有する、項目１から２８のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目３１）
前記蛍光ナノ粒子が、動的光散乱によって測定して、約１００ｎｍ未満の平均直径を有する、項目１から３０のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目３２）
前記蛍光ナノ粒子が、複数のポリマーを含む、項目１から３１のいずれかに記載の凍結乾燥した組成物。
（項目３３）
前記蛍光ナノ粒子が、ポリマーを含み、該ポリマーが、複数のポリマーを含む、項目１から３２のいずれかに記載の凍結乾燥した組成物。
（項目３４）
前記複数のポリマーの少なくとも５０％が、共役ポリマーを含む、項目３３に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目３５）
溶液への分散の後の前記蛍光粒子の量子収率が、凍結乾燥していない蛍光粒子と同様でありまたはそれより高い、項目１から３４のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目３６）
溶液への分散の後の前記蛍光粒子の発光帯域幅の半値全幅が、前記凍結乾燥していない蛍光粒子の半値全幅発光帯域幅と同様である、項目１から３５のいずれかに記載の凍結乾燥した組成物。
（項目３７）
凍結乾燥した組成物を生成する方法であって、該方法は、
蛍光粒子を含む懸濁液を凍結乾燥して、それによって蛍光ナノ粒子の凍結乾燥した組成物を形成すること
を含み、該蛍光ナノ粒子が、それぞれが少なくとも１種の縮合共役ポリマーを含む発色団ポリマードットである、方法。
（項目３８）
凍結乾燥した組成物を生成する方法であって、該方法は、
蛍光粒子を含む懸濁液を凍結乾燥して、それによって蛍光ナノ粒子の凍結乾燥した組成物を形成すること
を含み、該蛍光ナノ粒子が、ポリマーを含む発色団ポリマードットである、方法。
（項目３９）
前記ポリマーが、縮合共役ポリマーである、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
凍結乾燥が、約−１０℃未満、約−２０℃未満、約−３０℃未満、または約−４０℃未満の温度にて前記懸濁液を冷凍することを含む、項目３７から３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目４１）
凍結乾燥が、−８０℃または概ね−８０℃の温度にて前記懸濁液を冷凍することを含む、項目３７から３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目４２）
前記方法は、凍結乾燥の前に、（ｉ）蛍光ナノ粒子を含む液体と（ｉｉ）第１の水溶液とを合わせ、それによって蛍光ナノ粒子を含む前記懸濁液を形成することを含む、項目３７から４１のいずれか一項に記載の方法。
（項目４３）
前記方法は、（ｉ）蛍光ナノ粒子を含む液体と（ｉｉ）第１の水溶液とを合わせ、それによって蛍光ナノ粒子を含む前記懸濁液を形成することをさらに含む、項目３７から４２のいずれか一項に記載の方法。
（項目４４）
前記第１の水溶液が、凍結乾燥剤を含む、項目４２から４３のいずれか一項に記載の方法。
（項目４５）
前記懸濁液が、炭水化物を含む、項目３７から４４のいずれか一項に記載の方法。
（項目４６）
前記炭水化物が、単糖、二糖、オリゴ糖、多糖、またはこれらの組合せを含む、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
前記炭水化物が、単糖、二糖、オリゴ糖、多糖、またはこれらの組合せから選択される、項目４５に記載の方法。
（項目４８）
前記懸濁液が、アルジトール、ヒドロキシプロピル−シクロデキストリン、ウシ血清アルブミンまたはこれらの組合せを含む、項目３７から４７に記載の方法。
（項目４９）
前記懸濁液が、二糖を含む、項目３７から４８のいずれか一項に記載の方法。
（項目５０）
前記二糖が、約１％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖで存在する、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
前記二糖が、約１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在する、項目４９に記載の方法。
（項目５２）
前記二糖が、スクロース、トレハロース二水和物、マルトース一水和物、およびラクトース一水和物からなる群から選択される、項目４９から５１のいずれか一項に記載の方法。
（項目５３）
前記二糖が、スクロースである、項目４９から５２のいずれか一項に記載の方法。
（項目５４）
スクロースが、約１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在する、項目５３に記載の方法。
（項目５５）
前記凍結乾燥した組成物を第２の水溶液と混合し、それによって前記第２の水溶液に分散した前記蛍光ナノ粒子を含む第２の懸濁液を形成することをさらに含む、項目３７から５４のいずれか一項に記載の方法。
（項目５６）
前記第２の水溶液中の前記分散した蛍光ナノ粒子が、凍結乾燥していない蛍光ナノ粒子と比較して、同様のまたは増加した量子収率を有する、項目５５に記載の方法。
（項目５７）
前記第２の水溶液中の前記分散した蛍光ナノ粒子が、凍結乾燥していない蛍光ナノ粒子の粒子直径と比較して、同様の粒子直径を有する、項目５５から５６のいずれか一項に記載の方法。
（項目５８）
前記分散した蛍光ナノ粒子が、動的光散乱によって測定して、約３０ｎｍ未満の平均直径を有する、項目５５から５７のいずれか一項に記載の方法。
（項目５９）
前記蛍光ナノ粒子が、動的光散乱によって測定して、３０ｎｍ〜１００ｎｍの平均直径を有する、項目３７から５７のいずれか一項に記載の方法。
（項目６０）
前記蛍光ナノ粒子が、動的光散乱によって測定して、約１００ｎｍ未満の平均直径を有する、項目３７から５７のいずれか一項に記載の方法。
（項目６１）
前記少なくとも１種の縮合共役ポリマーが、半導体ポリマーを含む、項目３７および３９から６０のいずれか一項に記載の方法。
（項目６２）
前記少なくとも１種の縮合共役ポリマーが、フルオレンポリマー、フルオレンをベースとするポリマー、フェニレンビニレンポリマー、およびフェニレンエチニレンポリマーからなる群から選択される、項目３７および３９から６１のいずれか一項に記載の方法。
（項目６３）
前記少なくとも１種の縮合共役ポリマーが、ポリ（９，９−ジヘキシルフルオレニル−２，７−ジイル）（ＰＤＨＦ）、ポリ（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）（ＰＦＯ）、ポリ［｛９，９−ジオクチル−２，７−ジビニレン−フルオレニレン｝−ａｌｔ−ｃｏ−｛２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−フェニレン｝］（ＰＦＰＶ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（１，４−ベンゾ−｛２，１，３｝−チアジアゾール）］（ＰＦＢＴ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（４，７−ジ−２−チエニル−２，１，３−ベンゾチアジアゾール）］（ＰＦＴＢＴ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−９−ｃｏ−（４，７−ジ−２−チエニル−２，１，３−ベンゾチアジアゾール）］（ＰＦ−０．１ＴＢＴ））、およびポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−フェニレンビニレン］（ＭＥＨ−ＰＰＶ）、ポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−（１−シアノビニレン−１，４−フェニレン）］（ＣＮ−ＰＰＶ）、ＢＯＤＩＰＹ５７０、ＢＯＤＩＰＹ５９０、およびＢＯＤＩＰＹ６９０からなる群から選択される、項目３７および３９から６２のいずれか一項に記載の方法。
（項目６４）
溶液への分散の後の前記蛍光粒子の量子収率が、凍結乾燥していない蛍光粒子より高い、項目３７から６３のいずれか一項に記載の方法。
（項目６５）
溶液への分散の後の前記蛍光粒子の発光帯域幅の半値全幅が、前記凍結乾燥していない蛍光粒子の半値全幅発光帯域幅と同様である、項目３７から６４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６６）
前記少なくとも１種の縮合共役ポリマーが、生体分子に共役している、項目３７および３９から６５のいずれか一項に記載の方法。
（項目６７）
前記生体分子が、タンパク質、抗体、核酸分子、脂質、ペプチド、アプタマー、薬物、またはこれらの組合せを含む、項目６６に記載の方法。
（項目６８）
前記生体分子が、ストレプトアビジンを含む、項目６６または６７に記載の方法。
（項目６９）
前記生体分子が、アプタマーを含む、項目６６または６７に記載の方法。
（項目７０）
前記生体分子が、核酸を含む、項目６６または６７に記載の方法。
（項目７１）
前記生体分子が、抗体を含む、項目６６または６７に記載の方法。
（項目７２）
ナノ粒子の凍結乾燥した組成物を分散させる方法であって、
ａ）蛍光ナノ粒子を含む凍結乾燥した組成物と水溶液とを合わせることと、
ｂ）ａ）の組合せをかき混ぜて、蛍光ナノ粒子の分散した試料を生成することと
を含む、方法。
（項目７３）
前記ポリマーが、縮合共役ポリマーである、項目に記載の方法。
（項目７４）
項目３７から７３のいずれか一項によって調製される、蛍光ナノ粒子の凍結乾燥した組成物。
（項目７５）
蛍光粒子を含む懸濁液を凍結乾燥して、それによって蛍光ナノ粒子の凍結乾燥した組成物を形成すること
を含み、前記蛍光ナノ粒子が、ポリマーを含む発色団ポリマードットである、方法によって調製される、凍結乾燥した組成物。
（項目７６）
凍結乾燥が、約−１０℃未満、約−２０℃未満、約−３０℃未満、または約−４０℃未満の温度にて前記懸濁液を冷凍することを含む、項目７５に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目７７）
凍結乾燥が、−８０℃または概ね−８０℃の温度にて前記懸濁液を冷凍することを含む、項目７５に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目７８）
凍結乾燥の前に、前記方法が、（ｉ）蛍光ナノ粒子を含む液体と（ｉｉ）第１の水溶液とを合わせ、それによって蛍光ナノ粒子を含む前記懸濁液を形成することを含む、項目７５から７７のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目７９）
前記方法が、（ｉ）蛍光ナノ粒子を含む液体と（ｉｉ）第１の水溶液とを合わせ、それによって蛍光ナノ粒子を含む前記懸濁液を形成することをさらに含む、項目７５から７７のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目８０）
前記第１の水溶液が、凍結乾燥剤を含む、項目７８から７９に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目８１）
前記懸濁液が、炭水化物を含む、項目７８から８０に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目８２）
前記炭水化物が、単糖、二糖、オリゴ糖、多糖、またはこれらの組合せを含む、項目８１に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目８３）
前記懸濁液が、アルジトール、ヒドロキシプロピル−シクロデキストリン、ウシ血清アルブミンまたはこれらの組合せをさらに含む、項目７５から８２に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目８４）
前記懸濁液が、二糖を含む、項目７５から８３に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目８５）
前記二糖が、約１％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖで存在する、項目８４に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目８６）
前記二糖が、約１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在する、項目８４に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目８７）
前記二糖が、スクロース、トレハロース二水和物、マルトース一水和物、およびラクトース一水和物からなる群から選択される、項目８４から８５のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目８８）
前記二糖が、スクロースである、項目８４から８７のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目８９）
スクロースが、約１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在する、項目８８に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目９０）
前記凍結乾燥した組成物を第２の水溶液と混合し、それによって前記第２の水溶液に分散した前記蛍光ナノ粒子を含む第２の懸濁液を形成することをさらに含む、項目７５から８９のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目９１）
前記第２の水溶液中の前記分散した蛍光ナノ粒子が、凍結乾燥していない蛍光ナノ粒子と比較して、同様のまたは増加した量子収率を有する、項目９０に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目９２）
前記第２の水溶液中の前記分散した蛍光ナノ粒子が、凍結乾燥していない蛍光ナノ粒子の粒子直径と比較して、同様の粒子直径を有する、項目９０から９１のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目９３）
前記分散した蛍光ナノ粒子が、動的光散乱によって測定して、約３０ｎｍ未満の平均直径を有する、項目９０から９２のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目９４）
前記蛍光ナノ粒子が、動的光散乱によって測定して、３０ｎｍ〜１００ｎｍの平均直径を有する、項目７５から９３のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目９５）
前記蛍光ナノ粒子が、動的光散乱によって測定して、約１００ｎｍ未満の平均直径を有する、項目７５から９３のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目９６）
前記ポリマーが、半導体ポリマーを含む、項目７５から９５のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目９７）
前記ポリマーが、フルオレンポリマー、フルオレンをベースとするポリマー、フェニレンビニレンポリマー、およびフェニレンエチニレンポリマーからなる群から選択される、項目７５から９６のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目９８）
前記ポリマーが、ポリ（９，９−ジヘキシルフルオレニル−２，７−ジイル）（ＰＤＨＦ）、ポリ（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）（ＰＦＯ）、ポリ［｛９，９−ジオクチル−２，７−ジビニレン−フルオレニレン｝−ａｌｔ−ｃｏ−｛２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−フェニレン｝］（ＰＦＰＶ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（１，４−ベンゾ−｛２，１，３｝−チアジアゾール）］（ＰＦＢＴ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（４，７−ジ−２−チエニル−２，１，３−ベンゾチアジアゾール）］（ＰＦＴＢＴ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−９−ｃｏ−（４，７−ジ−２−チエニル−２，１，３−ベンゾチアジアゾール）］（ＰＦ−０．１ＴＢＴ））、およびポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−フェニレンビニレン］（ＭＥＨ−ＰＰＶ）、ポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−（１−シアノビニレン−１，４−フェニレン）］（ＣＮ−ＰＰＶ）、ＢＯＤＩＰＹ５７０、ＢＯＤＩＰＹ５９０、およびＢＯＤＩＰＹ６９０からなる群から選択される、項目７５から９７のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目９９）
前記ポリマーが、ＢＯＤＩＰＹ誘導体を含む、項目７５から９９に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目１００）
前記ＢＯＤＩＰＹ誘導体が、式（Ｉ）の構造を有し、
【化２２】
0006587605.tif 000003
式中、Ｒ１、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ４ＡおよびＲ４Ｂのそれぞれは、水素、アルキル、アラルキル、アリール、およびアルコキシ−アリールから独立に選択され、前記ＢＯＤＩＰＹ誘導体は、Ｒ１、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ４ＡおよびＲ４Ｂ、またはこれらの組合せへの付着によって前記発色団ポリマー中に統合されている、項目９８から９９のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目１０１）
溶液への分散の後の前記蛍光粒子の量子収率が、凍結乾燥していない蛍光粒子より高い、項目７５から１００のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目１０２）
溶液への分散の後の前記蛍光粒子の発光帯域幅の半値全幅が、前記凍結乾燥していない蛍光粒子の半値全幅発光帯域幅より狭い、項目７５から１０１のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目１０３）
前記蛍光ナノ粒子が、生体分子に共役している、項目７５から１０２のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目１０４）
前記生体分子が、タンパク質、抗体、核酸分子、脂質、ペプチド、アプタマー、薬物、またはこれらの組合せを含む、項目１０３に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目１０５）
前記生体分子が、ストレプトアビジンを含む、項目１０３に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目１０６）
前記生体分子が、アプタマーを含む、項目１０３に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目１０７）
前記生体分子が、核酸を含む、項目１０３に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目１０８）
前記生体分子が、抗体を含む、項目１０３に記載の凍結乾燥した組成物。
（項目１０９）
項目１から３６および７５から１０８のいずれか一項に記載の凍結乾燥した組成物を含むキット。
（項目１１０）
凍結乾燥した組成物を含むキットであって、
ａ）蛍光ナノ粒子、
ｂ）ａ）の該凍結乾燥した組成物を分散させるのに適した水溶液、
ｃ）ｉ）ａ）の凍結乾燥した組成物とｂ）の水溶液とを合わせること、および
ｉｉ）該凍結乾燥した組成物が該水溶液に分散されるように、ｉ）の組合せをかき混ぜること
について記載した一式の説明書
を含む、キット。
（項目１１１）
前記蛍光ナノ粒子が、縮合共役ポリマーを含む、項目１０９から１１０のいずれか一項に記載のキット。
（項目１１２）
炭水化物をさらに含む、項目１０９から１１１のいずれか一項に記載のキット。
（項目１１３）
前記炭水化物が、単糖、二糖、オリゴ糖、多糖、またはこれらの組合せを含む、項目１１２に記載のキット。
（項目１１４）
アルジトール、ヒドロキシプロピル−シクロデキストリン、ＢＳＡ、またはこれらの組合せをさらに含む、項目１０９から１１３のいずれか一項に記載のキット。
（項目１１５）
二糖をさらに含む、項目１０９から１１４のいずれか一項に記載のキット。
（項目１１６）
前記二糖が、約１％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖで存在する、項目１１５に記載のキット。
（項目１１７）
前記二糖が、約１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在する、項目１１５に記載のキット。
（項目１１８）
前記二糖が、スクロース、トレハロース二水和物、マルトース一水和物、およびラクトース一水和物からなる群から選択される、項目１１５から１１７のいずれか一項に記載のキット。
（項目１１９）
前記二糖が、スクロースである、項目１１５から１１８のいずれか一項に記載のキット。
（項目１２０）
スクロースが、約１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在する、項目１１９に記載のキット。
（項目１２１）
前記蛍光ナノ粒子が、生体分子に共役している、項目１０９から１２０のいずれか一項に記載のキット。
（項目１２２）
前記生体分子が、タンパク質、抗体、核酸分子、脂質、ペプチド、アプタマー、薬物、またはこれらの組合せから選択される、項目１２１に記載のキット。
（項目１２３）
前記生体分子が、抗体を含む、項目１２１から１２２のいずれか一項に記載のキット。
（項目１２４）
前記生体分子が、ストレプトアビジンである、項目１２１から１２２のいずれか一項に記載のキット。
（項目１２５）
前記生体分子が、核酸である、項目１２１から１２２のいずれか一項に記載のキット。
（項目１２６）
前記生体分子が、アプタマーを含む、項目１２１から１２２のいずれか一項に記載のキット。
本開示は、凍結乾燥した発色団ポリマードットの組成物および関連する方法を提供する。例えば、本開示は、蛍光ナノ粒子を含む凍結乾燥した組成物を含み、蛍光ナノ粒子は、少なくとも１種の縮合共役ポリマーを含む。本開示はまた、蛍光ナノ粒子を含む凍結乾燥した組成物を含み、蛍光ナノ粒子は、凍結乾燥されている。さらに、本開示はまた、凍結乾燥した組成物を生成する方法を含み、この方法は、蛍光粒子を含む懸濁液を凍結乾燥して、それによって蛍光ナノ粒子の凍結乾燥した組成物を形成することを含み、蛍光ナノ粒子は、それぞれが少なくとも１種の縮合共役ポリマーを含む発色団ポリマードットである。例えば、本開示はまた、凍結乾燥した組成物を生成する方法を含み、この方法は、蛍光粒子を含む懸濁液を凍結乾燥して、それによって蛍光ナノ粒子の凍結乾燥した組成物を形成することを含み、蛍光ナノ粒子は、ポリマーを含む発色団ポリマードットである。本開示はまた、蛍光ナノ粒子を含む凍結乾燥した組成物と水溶液とを合わせることと、組合せをかき混ぜて、蛍光ナノ粒子の分散した試料を生成することとを含む、ナノ粒子の凍結乾燥した組成物を分散させる方法を含む。本開示はまた、蛍光粒子を含む懸濁液を凍結乾燥して、それによって蛍光ナノ粒子の凍結乾燥した組成物を形成することを含み、蛍光ナノ粒子が、ポリマーを含む発色団ポリマードットである、方法によって調製される凍結乾燥した組成物を含む。本開示はまた、凍結乾燥した組成物を含むキットであって、蛍光ナノ粒子、凍結乾燥した組成物を分散させるのに適した水溶液、凍結乾燥した組成物と水溶液とを合わせることおよび凍結乾燥した組成物が水溶液に分散されるように組合せをかき混ぜることについて記載した一式の説明書を含む、キットを含む。
【０００７】
参照による組込み
本明細書において記述する全ての公開資料、特許、および特許出願は、それぞれの個々の公開資料、特許、または特許出願が具体的および個々に参照により組み込まれていることが示されるのと同じ程度に参照により本明細書に組み込まれている。
【０００８】
本開示の新規な特徴を、添付の特許請求の範囲において詳細に記載する。この中で本開示の原理が利用されている具体例について記載する下記の詳細な説明、および添付図面を参照することによって、本開示のフィーチャおよび利点についてより良好な理解が得られる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、本開示のいくつかの態様による実験手順を示す略図を示す。
【００１０】
【図２】図２Ａ〜２Ｄは、ストレプトアビジン共役ＰＦＢＴ発色団ポリマードットのサイズ分布を示す例示的な動的光散乱測定を提供する。図２Ａは、凍結乾燥前の発色団ポリマードットのサイズ分布を示す。図２Ｂ〜２Ｄは、（Ｂ）０％、（Ｃ）１％、および（Ｄ）１０％スクロースと共に凍結乾燥した後の再水和した発色団ポリマードットのサイズ分布を提供する。
【００１１】
【図３】図３Ａ〜３Ｅは、６カ月まで貯蔵した、凍結乾燥したポリマードット、および溶液中の凍結乾燥の前の発色団ポリマードットの正規化された吸収スペクトルおよび蛍光発光スペクトルを示す。発色団ポリマードットは、ＰＦＢＴ（Ａ）、ＣＮＰＰＶ（Ｂ）、ＰＦＢＴ−ＣＯＯＨ（Ｃ）、ＰＦＯ（Ｄ）およびＰＦ１０ＢＴ（Ｅ）でできていた。発色団ポリマードットＡ、Ｂ、ＤおよびＥは、−８０℃にて６カ月間貯蔵した。発色団ポリマードットＣを、−８０℃にて１カ月間貯蔵した。実線の曲線は、吸収に対応する。点線の曲線は、蛍光発光に対応する。ｘ軸は、単位がナノメートル（ｎｍ）の波長である。
【００１２】
【図４】図４は、６カ月まで貯蔵した、凍結乾燥したポリマードット、および溶液中の凍結乾燥の前の発色団ポリマードットで標識した細胞のフローサイトメトリー測定を示す。カラムＡは、ｓｔｒｅｐ−ＣＮＰＰＶ  Ｐｄｏｔを利用した。カラムＢは、ｓｔｒｅｐ−ＰＦＢＴ  Ｐｄｏｔを利用した。カラムＣは、ｓｔｒｅｐ−ＰＦＢＴ−ＣＯＯＨ  Ｐｄｏｔを利用した。ｘ軸は、相対的蛍光強度に対応する。上の図において使用される発色団ポリマードットは、１日間貯蔵した。下の図において使用した発色団ポリマードットは、より長い期間貯蔵した。ｓｔｒｅｐ−ＣＮＰＰＶ（図４Ａ、下）は、６カ月間貯蔵した。ｓｔｒｅｐ−ＰＦＢＴ（図４Ｂ、下）は、６カ月間貯蔵した。ｓｔｒｅｐ−ＰＦＢＴ−ＣＯＯＨ（図４Ｃ、下）は、１カ月間貯蔵した（１Ｄ：１日；１Ｍ：１カ月；６Ｍ：６カ月）。
【００１３】
【図５】図５は、５つの異なる共役ポリマーからなる試験した発色団ポリマードットの例示的な主鎖構造を示す。
【００１４】
【図６】図６ＡおよびＢは、スクロースの存在下および非存在下での、細胞標識化の間の発色団ポリマードットタグ付きＭＣＦ−７細胞のフローサイトメトリー研究からの結果を示す。図６Ａは、側方散乱対前方散乱プロットによって示されるアクティブゲートに属するＭＣＦ−７細胞の集団を示す。図６Ｂは、１０％および０％スクロースの存在下での、細胞標識化のために使用される発色団ポリマードット溶液中の発色団ポリマードット−ストレプトアビジンで標識したＭＣＦ−７細胞の蛍光強度分布を示す。使用した一次抗体は、ビオチン化抗ＥｐＣＡＭであった。陰性対照は、細胞標識化実験におけるのと同一の条件下で、しかしビオチン化一次抗体の非存在下で行った。
【００１５】
【図７】図７は、新鮮なポリマードット、凍結乾燥したポリマードット、および凍結乾燥していないポリマードットについての発光帯域幅を比較する。ポリマードット組成物のそれぞれは、トレハロース二水和物を含んだ。発色団ポリマードットは、５９０ｎｍでの発光ピークを有するＢＯＤＩＰＹをベースとする共役ポリマー（ＢＯＤＩＰＹ−５９０）でできていた。１週間の貯蔵後に示されるように、凍結乾燥プロセスを経てこなかった発色団ポリマードットの発光帯域幅は、発色団ポリマードットが新たに調製されたときより広範となった。しかし、凍結乾燥した発色団ポリマードットは、より狭い発光帯域幅を示した。
【００１６】
【図８】図８は、発色団ポリマードットのために使用される凍結乾燥剤の化学構造を示す。
【００１７】
【図９】図９は、３つの異なるＢＯＤＩＰＹをベースとする共役ポリマーであるＢＯＤＩＰＹ−５７０、５９０および６９０からなる試験した発色団ポリマードットの例示的な主鎖成分の構造を示す。
【００１８】
【図１０】図１０は、共役していない／共役している、および凍結乾燥していない／凍結乾燥したＢＯＤＩＰＹ−６９０発色団ポリマードットの光学特性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本開示の好ましい場合を本明細書において示して、記載してきた一方で、本開示は、下に記載する本開示の特定の場合に限定されないことを理解すべきである。これは、特定の場合のバリエーションを作製してもよく、添付の特許請求の範囲内にやはり入るためである。用いる用語法は、本開示の特定の場合を記載する目的のためであり、限定する目的ではないことをまた理解すべきである。代わりに、本開示の範囲は添付の特許請求の範囲によって確立される。本明細書および添付の特許請求の範囲において、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈によって明らかにそれ以外のことの指示がない限り、複数の参照を含む。
【００２０】
値の範囲が提供されている場合、文脈によって明らかにそれ以外のことの指示がない限り、下限の単位の１０分の１までの、その範囲の上限および下限の間の、それぞれの介在する値、ならびにその記述した範囲内の任意の他の記述した値または介在する値は、本明細書において提供する本開示内に包含されることが理解される。これらのより小さな範囲の上限および下限は、このより小さな範囲内に独立に含まれてもよく、また本開示内に包含されるが、記述された範囲における任意の具体的に除外された限度があることを前提とする。記述された範囲が限度の１つまたは両方を含む場合、これらの含まれた限度のいずれかまたは両方を除外する範囲はまた、本明細書において提供する本開示に含まれる。
【００２１】
他に定義しない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと同様または同等である任意の方法、装置および材料を本開示の実施または試験において使用することができるが、好ましい方法、装置および材料をこれから記載する。
【００２２】
本明細書においてさらに記載するように、本開示は、独特の特性を有する新規なクラスの蛍光ナノ粒子または発色団ポリマードットの凍結乾燥した組成物に関する。本開示は、凍結乾燥した発色団ポリマードット組成物および関連する方法を提供する。本開示はまた、このようなポリマーを使用する方法、このようなポリマーを合成する方法、およびこのようなポリマーを含有するキットを提供する。
【００２３】
本明細書において使用する場合、「ポリマー」は、典型的には共有結合的化学結合によって接続している少なくとも２つの繰り返し構造単位からなる分子である。繰り返し構造単位は、１タイプのモノマーであってもよく、このように得られたポリマーは、ホモポリマーである。いくつかの場合において、ポリマーは、２つの異なるタイプのモノマー、または３つの異なるタイプのモノマー、またはそれを超えるタイプのモノマーを含むことができる。共役ポリマーを合成するためのモノマーの例には、これらに限定されないが、ベンゼン、フルオレン、ベンゾチアジアゾール；チオフェン、ＢＯＤＩＰＹ；ポルフィリン、ペリレン（ｐｅｒｙｅｎｅ）、スクアライン、およびこれらの誘導体が含まれる。
【００２４】
本明細書において使用する場合、「発色団ポリマードット」は、ルミネセンス特性を有するパイ共役種である。発色団ポリマードットは、固定された、順序付けされた、またはランダムな配置および比で合わせることができる、１つまたは複数の繰り返し単位を有するポリマーを含む。繰り返し単位は、ポリマーを通して生じるモノマーまたは化学モチーフ、例えば、芳香族または複素環単位でよい。ポリマーは、ハロゲン化、例えば、フッ化、クロル化、ブロム化、またはヨウ化することができる。ポリマー、繰り返し単位、またはモノマーは、１つまたは複数の部位においてハロゲン化することができる。ハロゲン化ポリマー、例えば、フッ化ポリマーは、ハロゲン化されていない類似のポリマーが実現することができるよりもより大きなレベルの蛍光を実現することができる。発色団ポリマードットはまた、安定的なサブミクロンサイズの粒子に崩壊した１つまたは複数の共役ポリマー（例えば、半導体ポリマー）を含む構造を指す。発色団ポリマードットは、少なくとも１種の縮合共役ポリマーを有する蛍光ナノ粒子を含む。
【００２５】
本開示はまた、ポリマーのバリアントを提供する。いくつかの場合において、ポリマーのバリアントは、共役ポリマーである。共役発色団ポリマードットはまた、発色団ポリマードットと称し得る。いくつかの場合において、ハライド（例えば、フッ素）は、発色団ポリマードット構造に付着し、または発色団ポリマードット構造中に組み込まれている。発色団ポリマードットの粒径は、Ｑｄｏｔの粒径と匹敵し、例えば、Ｑｄｏｔのサイズの８０％超であり得る。発色団ポリマードット中の半導体ポリマーは、粒子毎容量の少なくとも５０％、好ましくは８０％超である総容量で存在し得る。発色団ポリマードット中の半導体ポリマーは、粒子毎重量の少なくとも５０％、好ましくは８０％超である重量濃度で存在し得る。発色団ポリマードットは、疎水性ポリマー内部を有することができる。いくつかの場合において、発色団ポリマードットは、質量によって５０％未満のハライド（例えば、フッ素）含量を有する。いくつかの場合において、重量濃度は、４０％超、５０％超、６０％超、７０％超、８０％超、９０％超または９９％超である。いくつかの場合において、重量濃度は、約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超または約９９％超である。いくつかの場合において、重量濃度は、４０％〜５０％、４５％〜５５％、５０％〜６０％、５５％〜６５％、６０％〜７０％、６５％〜７５％、７０％〜８０％、７５％〜８５％、８０％〜９０％、８５％〜９５％または９０％〜１００％の範囲内であり得る。いくつかの場合において、重量濃度は、約４０％〜５０％、約４５％〜５５％、約５０％〜６０％、約５５％〜６５％、約６０％〜７０％、約６５％〜７５％、約７０％〜８０％、約７５％〜８５％、約８０％〜９０％、約８５％〜９５％または約９０％〜１００％の範囲内であり得る。
【００２６】
本明細書において使用する場合、発色団コポリマーは、主要な発色団種のアイデンティティーを記載することによって表される。例えば、ＰＦＢＴは、特定の比でフルオレンおよびベンゾチアゾール単位を含有する発色団ポリマーである。いくつかの場合において、ダッシュ記号は微量の発色団種の百分率、次いで、微量の発色団種のアイデンティティーを示すために使用される。例えば、ＰＦ−０．１ＢＴは、９０％のＰＦおよび１０％のＢＴを含有する発色団コポリマーである。
【００２７】
本明細書において使用する場合、「単糖」という用語は、例えば、一般式：Ｃｘ（Ｈ２Ｏ）ｙ、ｘ≧３を有する分子を指す。単糖の例には、これらに限定されないが、グルコース、フルクトース、ガラクトース、キシロース、リボースなどが含まれ得る。
【００２８】
本明細書において使用する場合、「オリゴ糖」という用語は、例えば、例えば２〜３０の単糖単位を含有する短い単糖ポリマーを指す。オリゴ糖は、例えば、例えば２つの単糖が一緒に接合し、例えば水の分子が除去されるときに形成される分子を指す「二糖」を含むことができる。二糖の例には、これらに限定されないが、スクロース、ラクツロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、セロビオースなどが含まれ得る。他のオリゴ糖には、これらに限定されないが、三糖（例えば、ラフィノース）、四糖（例えば、スタキオース）、および五糖（例えば、ベルバスコース（ｖｅｒｂａｃｏｓｅ））が含まれ得る。
【００２９】
本明細書において使用する場合、「多糖」という用語は、例えば、オリゴ糖の長さを超えた単糖ポリマー、例えば、３０超の単糖単位を含むポリマーを指す。
【００３０】
本明細書において使用する場合、「糖アルコール」という用語は、例えば、そのカルボニル基（アルデヒドまたはケトン、還元糖）が第一級または第二級ヒドロキシル基に還元されている、水素化された形態の炭水化物を指す。糖アルコールは、一般式Ｈ（ＨＣＨＯ）ｎ＋１Ｈを有する。例としての糖アルコールには、これらに限定されないが、アルジトール（例えば、キシリトール、マンニトールまたはソルビトール）が含まれ得る。
【００３１】
本明細書において使用する場合、「アルキル」という用語は、示した数の炭素原子を有する直鎖状または分岐状の飽和脂肪族ラジカルを指す。例えば、Ｃ１〜Ｃ６アルキルには、これらに限定されないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシルなどが含まれる。他のアルキル基には、これらに限定されないが、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシルなどが含まれる。アルキルは、任意の数、例えば、１〜２、１〜３、１〜４、１〜５、１〜６、１〜７、１〜８、１〜９、１〜１０、２〜３、２〜４、２〜５、２〜６、３〜４、３〜５、３〜６、４〜５、４〜６および５〜６の炭素を含むことができる。アルキル基は典型的には一価であるが、例えば、アルキル基が２つの部分を一緒に連結するとき、二価でよい。本明細書において使用する場合、「ヘテロアルキル」という用語は、炭素原子の直鎖状または分岐状の飽和脂肪族ラジカルを指し、炭素原子の少なくとも１個は、ヘテロ原子、例えば、Ｎ、ＯまたはＳで置き換えられている。これらに限定されないが、Ｂ、Ａｌ、ＳｉおよびＰを含めたさらなるヘテロ原子はまた有用であり得る。
【００３２】
それぞれ、有機ラジカルまたは化合物に関連して本明細書の上記および下記で言及する「低級」という用語は、７個を含めて７個までの、好ましくは４個を含めて４個までの、および（枝分かれしていないものとして）１個または２個の炭素原子を有する、分岐状または枝分かれしていなくてもよい化合物またはラジカルを定義する。
【００３３】
本明細書において使用する場合、「アルキレン」という用語は、少なくとも２個の他の基を連結する上記に定義されているアルキル基、すなわち、二価の炭化水素ラジカルを指す。アルキレンに連結した２つの部分は、アルキレンの同じ原子または異なる原子に連結することができる。例えば、直鎖アルキレンは、−（ＣＨ２）ｎ（式中、ｎは、１、２、３、４、５または６である）の二価のラジカルでよい。アルキレン基には、これらに限定されないが、メチレン、エチレン、プロピレン、イソプロピレン、ブチレン、イソブチレン、ｓｅｃ−ブチレン、ペンチレンおよびヘキシレンが含まれる。
【００３４】
本明細書に記載されている基は、置換されていても置換されていなくてもよい。アルキルおよびヘテロアルキルラジカル（アルキレン、アルケニル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルケニル、およびヘテロシクロアルケニルと称されることが多いこれらの基を含めた）についての置換基は、種々の基、例えば、アルキル、アリール、シアノ（ＣＮ）、アミノ、スルフィド、アルデヒド、エステル、エーテル、酸、ヒドロキシルまたはハライドでよい。置換基は、これらに限定されないが、クロロ、ブロモ、ヨード、ヒドロキシル、またはアミノなどの反応性基でよい。適切な置換基は、０から（２ｍ’＋１）（式中、ｍ’は、このようなラジカル中の炭素原子の総数である）の範囲の数で、−ＯＲ’、＝Ｏ、＝ＮＲ’、＝Ｎ−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ’’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）２Ｒ’、−ＮＨ−Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＨ、−ＮＲ’Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＨ、−ＮＨ−Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＲ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、−ＣＮおよび−ＮＯ２から選択することができる。Ｒ’、Ｒ’’およびＲ’’’は、それぞれ独立に、水素、非置換（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルおよびヘテロアルキル、非置換アリール、アルコキシまたはチオアルコキシ基、またはアリール−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を指す。Ｒ’およびＲ’’が同じ窒素原子に付着しているとき、これらは窒素原子と合わさり、５員、６員、または７員環を形成することができる。例えば、−ＮＲ’Ｒ’’は、１−ピロリジニルおよび４−モルホリニルを含むことを意味する。置換基の上記の考察から、「アルキル」という用語は、基、例えば、ハロアルキル（例えば、−ＣＦ３および−ＣＨ２ＣＦ３）、ならびにアシル（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＯＣＨ３など）を含むことを意味すると当業者は理解する。
【００３５】
本明細書において使用する場合、「アルコキシ」という用語は、アルコキシ基を付着点に接続させ、またはアルコキシ基の２個の炭素に連結している酸素原子を有するアルキル基を指す。アルコキシ基には、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソ−プロポキシ、ブトキシ、２−ブトキシ、イソ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペントキシ、ヘキソキシなどが含まれる。アルコキシ基は、本明細書に記載されている種々の置換基でさらに置換することができる。例えば、アルコキシ基は、ハロゲンで置換して、「ハロ−アルコキシ」基を形成することができる。
【００３６】
本明細書において使用する場合、「アルケニル」という用語は、少なくとも１つの二重結合を有する２〜６個の炭素原子の直鎖または分岐状の炭化水素を指す。アルケニル基の例には、これらに限定されないが、ビニル、プロペニル、イソプロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、イソブテニル、ブタジエニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、イソペンテニル、１，３−ペンタジエニル、１，４−ペンタジエニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、１，３−ヘキサジエニル、１，４−ヘキサジエニル、１，５−ヘキサジエニル、２，４−ヘキサジエニル、または１，３，５−ヘキサトリエニルが含まれる。
【００３７】
本明細書において使用する場合、「アルケニレン」という用語は、少なくとも２個の他の基を連結する上記に定義されているアルケニル基、すなわち、二価の炭化水素ラジカルを指す。アルケニレンに連結した２つの部分は、アルケニレンの同じ原子または異なる原子に連結することができる。アルケニレン基には、これらに限定されないが、エテニレン、プロペニレン、イソプロペニレン、ブテニレン、イソブテニレン、ｓｅｃ−ブテニレン、ペンテニレンおよびヘキセニレンが含まれる。
【００３８】
本明細書において使用する場合、「アルキニル」という用語は、少なくとも１つの三重結合を有する２〜６個の炭素原子の直鎖または分岐状の炭化水素を指す。アルキニル基の例には、これらに限定されないが、アセチレニル、プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、イソブチニル、ｓｅｃ−ブチニル、ブタジイニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、イソペンチニル、１，３−ペンタジイニル、１，４−ペンタジイニル、１−ヘキシニル、２−ヘキシニル、３−ヘキシニル、１，３−ヘキサジイニル、１，４−ヘキサジイニル、１，５−ヘキサジイニル、２，４−ヘキサジイニル、または１，３，５−ヘキサトリイニルが含まれる。
【００３９】
本明細書において使用する場合、「アルキニレン」という用語は、上記に定義されている少なくとも２個の他の基を連結するアルキニル基、すなわち、二価の炭化水素ラジカルを指す。アルキニレンに連結した２つの部分は、アルキニレンの同じ原子または異なる原子に連結することができる。アルキニレン基には、これらに限定されないが、エチニレン、プロピニレン、イソプロピニレン、ブチニレン、ｓｅｃ−ブチニレン、ペンチニレンおよびヘキシニレンが含まれる。
【００４０】
本明細書において使用する場合、「アルキルアミン」という用語は、１個または複数のアミノ基を有する、本明細書で定義されているアルキル基を指す。アミノ基は、第一級、第二級または第三級でよい。アルキルアミンは、ヒドロキシ基でさらに置換することができる。アルキルアミンには、これらに限定されないが、エチルアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミン、エチレンジアミンおよびエタノールアミンが含まれ得る。アミノ基は、アルキルアミンを付着点に連結させることができ、化合物の残りの部分は、アルキル基のオメガ位にあり、またはアルキル基の少なくとも２個の炭素原子を一緒に連結させることができる。
【００４１】
本明細書において使用する場合、「ハロゲン」または「ハライド」という用語は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を指す。本明細書において使用する場合、「ハロアルキル」という用語は、水素原子のいくつかまたは全てがハロゲン原子で置換されている上記に定義されているアルキルを指す。ハロゲン（ハロ）は、クロロまたはフルオロを好ましくは表すが、またブロモまたはヨードであり得る。本明細書において使用する場合、「ハロ−アルコキシ」という用語は、少なくとも１個のハロゲンを有するアルコキシ基を指す。ハロ−アルコキシは、アルコキシについて定義されている通りであり、水素原子のいくつかまたは全ては、ハロゲン原子で置換されている。アルコキシ基は、１個、２個、３個、またはそれを超えるハロゲンで置換することができる。全ての水素がハロゲン、例えば、フッ素で置き換えられているとき、化合物は、ペル置換、例えば、過フッ素化されている。ハロ−アルコキシには、これらに限定されないが、トリフルオロメトキシ、２，２，２，−トリフルオロエトキシ、ペルフルオロエトキシなどが含まれる。
【００４２】
本明細書において使用する場合、「シクロアルキル」という用語は、３〜１２個の環原子、または示した原子の数を含有する、飽和または部分不飽和の、単環式、縮合二環式または架橋多環式環アセンブリーを指す。単環式環には、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびシクロオクチルが含まれる。二環式および多環式環には、例えば、ノルボルナン、デカヒドロナフタレンおよびアダマンタンが含まれる。例えば、Ｃ３〜８シクロアルキルには、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロオクチル、およびノルボルナンが含まれる。
【００４３】
本明細書において使用する場合、「シクロアルキレン」という用語は、少なくとも２個の他の基を連結する上記に定義されているシクロアルキル基、すなわち、二価の炭化水素ラジカルを指す。シクロアルキレンに連結した２つの部分は、シクロアルキレンの同じ原子または異なる原子に連結することができる。シクロアルキレン基には、これらに限定されないが、シクロプロピレン、シクロブチレン、シクロペンチレン、シクロへキシレン、およびシクロオクチレンが含まれる。
【００４４】
本明細書において使用する場合、「ヘテロシクロアルキル」という用語は、３環員〜約２０環員および１〜約５個のヘテロ原子、例えば、Ｎ、ＯおよびＳを有する環系を指す。これらに限定されないが、Ｂ、Ａｌ、ＳｉおよびＰを含めた、さらなるヘテロ原子はまた有用であり得る。これらに限定されないが、−Ｓ（Ｏ）−および−Ｓ（Ｏ）２−などのヘテロ原子はまた、酸化することができる。
【００４５】
本明細書において使用する場合、「ヘテロシクロアルキレン」という用語は、少なくとも２個の他の基を連結する上記に定義されているヘテロシクロアルキル基を指す。ヘテロシクロアルキレンに連結した２つの部分は、ヘテロシクロアルキレンの同じ原子または異なる原子に連結することができる。
【００４６】
本明細書において使用する場合、「アリール」という用語は、６〜１６個の環炭素原子を含有する、単環式または縮合二環式、三環式もしくはそれを超える芳香族環アセンブリーを指す。例えば、アリールは、フェニル、ベンジル、アズレニルまたはナフチルであり得る。「アリーレン」とは、アリール基に由来する二価のラジカルを意味する。アリール基は、アルキル、アルコキシ、アリール、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ、アミノ、アミノ−アルキル、トリフルオロメチル、アルキレンジオキシおよびオキシ−Ｃ２〜Ｃ３−アルキレン（これらの全ては、例えば、本明細書の上に定義されているように任意選択でさらに置換されている）から選択される１個、２個または３個のラジカルで一置換、二置換または三置換することができ、あるいは１−もしくは２−ナフチル；または１−もしくは２−フェナントレニルである。アルキレンジオキシは、フェニルの２個の隣接する炭素原子に付着している二価の置換基、例えば、メチレンジオキシまたはエチレンジオキシである。オキシ−Ｃ２〜Ｃ３−アルキレンはまた、フェニルの２個の隣接する炭素原子に付着している二価の置換基、例えば、オキシエチレンまたはオキシプロピレンである。オキシ−Ｃ２〜Ｃ３−アルキレン−フェニルについての一例は、２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イルである。
【００４７】
アリール基には、これらに限定されないが、ナフチル、フェニル；あるいはアルコキシ、フェニル、ハロゲン、アルキルまたはトリフルオロメチルで一置換または二置換されているフェニル；フェニル；あるいはアルコキシ、ハロゲンまたはトリフルオロメチルで一置換または二置換されているフェニル、特に、フェニルが含まれ得る。
【００４８】
本明細書において使用する場合、「アリーレン」という用語は、少なくとも２個の他の基を連結する、上記に定義されているアリール基を指す。アリーレンに連結した２つの部分は、アリーレンの異なる原子に連結する。アリーレン基には、これらに限定されないが、フェニレンが含まれる。
【００４９】
本明細書において使用する場合、「アルコキシ−アリール」または「アリールオキシ」という用語は、アリールに連結している部分の１つが、酸素原子を介して連結している、上記に定義されているアリール基を指す。アルコキシ−アリール基には、これらに限定されないが、フェノキシ（Ｃ６Ｈ５Ｏ−）が含まれる。本開示はまた、アルコキシ−ヘテロアリールまたはヘテロアリールオキシ基を含む。
【００５０】
本明細書において使用する場合、「ヘテロアリール」という用語は、環原子の１〜４個がそれぞれＮ、ＯまたはＳのヘテロ原子である、５〜１６個の環原子を含有する単環式または縮合二環式もしくは三環式の芳香族環アセンブリーを指す。例えば、ヘテロアリールは、ピリジル、インドリル、インダゾリル、キノキサリニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、フラニル、ピロリル、チアゾリル、ベンゾチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チエニル、または例えば、アルキル、ニトロもしくはハロゲンで置換されている、特に、一置換もしくは二置換されている任意の他のラジカルを含む。本開示に適した基はまた、アリーレンおよびアリーレン−オキシ基について上記のものと同様のヘテロアリーレンおよびヘテロアリーレン（ｈｅｔｅｒａｒｙｌｅｎｅ）−オキシ基を含むことができる。
【００５１】
同様に、本明細書に記載されているアリールおよびヘテロアリール基は、置換されていても置換されていなくてもよい。アリールおよびヘテロアリール基についての置換基は、アルキル、アリール、ＣＮ、アミノ、スルフィド、アルデヒド、エステル、エーテル、酸、ヒドロキシルまたはハライドなど様々である。置換基は、これらに限定されないが、クロロ、ブロモ、ヨード、ヒドロキシル、またはアミノなどの反応性基でよい。置換基は、０から芳香族環系上のオープン原子価の総数までの範囲の数で、−ハロゲン、−ＯＲ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−Ｒ’、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ’’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）２Ｒ’、−ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＨ−Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＨ、−ＮＲ’Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＨ、−ＮＨ−Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＲ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、−Ｎ３、−ＣＨ（Ｐｈ）２から選択することができ、式中、Ｒ’、Ｒ’’およびＲ’’’は、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルおよびヘテロアルキル、非置換アリールおよびヘテロアリール、（非置換アリール）−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、および（非置換アリール）オキシ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから独立に選択される。
【００５２】
本明細書において使用する場合、「アルキル−アリール」という用語は、アルキル成分およびアリール成分を有するラジカルを指し、アルキル成分は、アリール成分を付着点に連結する。アルキル成分が、アリール成分に連結し、かつ付着点に連結するために、少なくとも二価であることを除いて、アルキル成分は、上記で定義されている通りである。いくつかの場合において、アルキル成分は、存在しなくてよい。アリール成分は、上記で定義されている通りである。アルキル−アリール基の例には、これらに限定されないが、ベンジルが含まれる。本開示はまた、アルキル−ヘテロアリール基を含む。
【００５３】
本明細書において使用する場合、「アルケニル−アリール」という用語は、アルケニル成分およびアリール成分の両方を有するラジカルを指し、アルケニル成分は、アリール成分を付着点に連結する。アルケニル成分がアリール成分に連結し、かつ付着点に連結するために少なくとも二価であることを除いて、アルケニル成分は、上記で定義されている通りである。アリール成分は、上記で定義されている通りである。アルケニル−アリールの例は、数ある中でも、エテニル−フェニルを含む。本開示はまた、アルケニル−ヘテロアリール基を含む。
【００５４】
本明細書において使用する場合、「アルキニル−アリール」という用語は、アルキニル成分およびアリール成分の両方を有するラジカルを指し、アルキニル成分は、アリール成分を付着点に連結する。アルキニル成分がアリール成分に連結し、かつ付着点に連結するために少なくとも二価であることを除いて、アルキニル成分は、上記で定義されている通りである。アリール成分は、上記で定義されている通りである。アルキニル−アリールの例は、数ある中でも、エチニル−フェニルを含む。本開示はまた、アルキニル−ヘテロアリール基を含む。
ポリマードットのためのポリマー
【００５５】
本開示は、ポリマーを使用した方法および組成物を提供する。ポリマーは、共有結合的化学結合によって典型的には接続している少なくとも２個の繰り返し構造単位からなる分子である。繰り返し構造単位は、１タイプのモノマーであり得、このように得られたポリマーはホモポリマーである。いくつかの場合において、ポリマーは、２つの異なるタイプのモノマー、または３つの異なるタイプのモノマー、またはそれを超えるタイプのモノマーを含むことができる。共役ポリマーを合成するためのモノマーの例には、これらに限定されないが、ベンゼン、フルオレン、ベンゾチアジアゾール；チオフェン、ＢＯＤＩＰＹ；ポルフィリン、ペリレン、スクアライン、およびこれらの誘導体が含まれる。
【００５６】
発色団ポリマードットは、種々のポリマーを使用して形成することができる。半導体ポリマーの非限定的例には、フルオレンポリマー（例えば、ポリ（９，９−ジヘキシルフルオレニル−２，７−ジイル）（ＰＤＨＦ）、ポリ（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）（ＰＦＯ））、フルオレンをベースとするコポリマー（例えば、ポリ［｛９，９−ジオクチル−２，７−ジビニレン−フルオレニレン｝−ａｌｔ−ｃｏ−｛２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−フェニレン｝］（ＰＦＰＶ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（１，４−ベンゾ−｛２，１，３｝−チアジアゾール）］（ＰＦＢＴ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（４，７−ジ−２−チエニル−２，１，３−ベンゾチアジアゾール）］（ＰＦＴＢＴ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−９−ｃｏ−（４，７−ジ−２−チエニル−２，１，３−ベンゾチアジアゾール）］（ＰＦ−０．１ＴＢＴ））、フェニレンビニレンポリマー（例えば、ポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−フェニレンビニレン］（ＭＥＨ−ＰＰＶ））、ポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−（１−シアノビニレン−１，４−フェニレン）］（ＣＮ−ＰＰＶ）、ＢＯＤＩＰＹ５７０、ＢＯＤＩＰＹ５９０、ＢＯＤＩＰＹ６９０、および狭帯域発色団ポリマードット（例えば、ＢＯＤＩＰＹをベースとする発色団ポリマードット）を作製するために使用される他のポリマー、例えば、参照により本明細書中にその全体が組み込まれているＰＣＴ／ＵＳ１２／７１７６７に記載されているものが含まれる。他の適切なポリマーおよび発色団ポリマードットは、例えば、参照により本明細書中にその全体が組み込まれているＷＯ２０１１／０５７２９５において提供されている。例えば、ＷＯ２０１１／０５７２９５において提供するように、発色団ポリマードット中のポリマーは、物理的にブレンドし、または化学的に結合（または化学的に架橋）することができる。例えば、物理的にブレンドされた発色団ポリマードットは、発色団ポリマードット中でブレンドされ、非共有結合性相互作用によって一緒に保持されるポリマーを含むことができる。化学的に結合された発色団ポリマードットは、発色団ポリマードット中で互いに共有結合的に付着するポリマーを含むことができる。化学的に結合されたポリマーは、発色団ポリマードットの形成の前に互いに共有結合的に付着することができる。いくつかの場合において、ポリマーおよび発色団ポリマードットは、例えば、ＰＣＴ／ＵＳ１１／５６７６８において開示および特許請求されているものを含むことができる。例えば、発色団ポリマードットは、直接的に官能化されており、かつ／または低密度の官能化を有するものを含むことができる。
【００５７】
本開示のポリマーは、一連のサブユニット、例えば、モノマーまたは繰り返し単位を有することができる。ポリマー中のサブユニットの数は、例えば、約２〜約１００，０００、約２〜約１０，０００、約２〜約１，０００、約２〜約１００、約１０〜約１００，０００、約１０〜約１０，０００、約１０〜約１，０００、約１００〜約１００，０００、または約１００〜約１０，０００でよい。ポリマー中のサブユニットの数は、例えば、２〜１００，０００、２〜１０，０００、２〜１，０００、２〜１００、１０〜１００，０００、１０〜１０，０００、１０〜１，０００、１００〜１００，０００、または１００〜１０，０００でよい。ポリマー中のサブユニットの数は、例えば、２超、１０超、１００超、１，０００超、１０，０００超、または１００，０００超でよい。ポリマー中のサブユニットの数は、例えば、２未満、１０未満、１００未満、１，０００未満、１０，０００未満、または１００，０００未満でよい。ポリマー中のサブユニットの数は、例えば、約２、約１０、約１００、約１，０００、約１０，０００、または約１００，０００でよい。ポリマー中のサブユニットの数は、例えば、２、１０、１００、１，０００、１０，０００、または１００，０００でよい。
【００５８】
本開示のポリマーは、異なる種類のサブユニット、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０の異なる種類のサブユニットを有することができる。個々のサブユニットは、全体的な質量の百分率または、ポリマーの単位もしくはモノマーの数の百分率として、例えば、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１００％を実現することができる。個々のサブユニットは、全体的な質量の百分率または、ポリマーの単位もしくはモノマーの数の百分率として、例えば、５％超、１０％超、１５％超、２０％超、２５％超、３０％超、３５％超、４０％超、４５％超、５０％超、５５％超、６０％超、６５％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、９５％超、または１００％超を実現することができる。個々のサブユニットは、全体的な質量の百分率または、ポリマーの単位もしくはモノマーの数の百分率として、例えば、５％未満、１０％未満、１５％未満、２０％未満、２５％未満、３０％未満、３５％未満、４０％未満、４５％未満、５０％未満、５５％未満、６０％未満、６５％未満、７０％未満、７５％未満、８０％未満、８５％未満、９０％未満、９５％未満、または１００％未満を実現することができる。個々のサブユニットは、全体的な質量の百分率または、ポリマーの単位もしくはモノマーの数の百分率として、例えば、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％を実現することができる。
発色団ポリマードットおよび半導体発色団ポリマードット
【００５９】
本開示はまた、発色団ポリマードットを形成するポリマーおよびそのバリアントを使用した方法および組成物を提供する。発色団ポリマードットは、安定的なサブミクロンサイズの粒子に崩壊した１つまたは複数の共役ポリマー（例えば、半導体ポリマー）を含む構造である。発色団ポリマードットは、少なくとも１種の縮合共役ポリマーを有する蛍光ナノ粒子を含む。
【００６０】
本開示は、半導体、非半導体、またはこれらの組合せである発色団ポリマードットを提供する。任意のポリマー組成物は、例えば、ウエスタンブロット分析、フローサイトメトリー、組織学的検査などの過程で、タンパク質およびペプチドを検出するのに適している限り、本開示によって使用することができる。
【００６１】
本開示は、本明細書に記載されている方法、組成物およびキットによって、凍結乾燥に特に良好に適したものとさせるような望ましい表面化学および光学特性を有する発色団ポリマードットを提供する。発色団ポリマードットの集団についての光学特性および官能化の程度は、発色団ポリマードットの生成の間に調節することができる。特に、発色団ポリマードットの性状は、種々の光物理的特性（例えば、吸光度、発光輝度および／または発光の色）を調整するために、必要に応じて調節することができる。特定の場合において、ポリマードットは、予想外の輝度および／または光安定性を実現する。著しく、いくつかの場合において、蛍光のクエンチングは、粒子形成によって増加しない。さらに、低いばらばらの数のポリマードットの表面上の官能基は、生物学的に関連性のある分子および／または細胞への発色団ポリマードットの非特異的吸収を低減させることがあり得る。高い輝度および特異的結合性能を有するポリマードットは、化学的および生物学的分析物および系を研究するためのイメージングおよび検出技術のさらなる領域への重要な事例を実現することを認識されたい。
【００６２】
本明細書において使用される発色団ポリマードットは、これらに限定されないが、沈殿に依存する方法、エマルジョン（例えば、ミニまたはミクロエマルジョン）の形成に依存する方法、および縮合に依存する方法を含めた、ポリマーを崩壊させるための当技術分野において公知の任意の方法によって形成することができる。
【００６３】
いくつかの場合において、発色団ポリマードットは、沈殿によって形成することができる。この技術は、過剰な容量の非溶媒（しかし有機溶媒と混和性）、例えば、水または別の生理学的に関連性のある水溶液への希薄な発色団ポリマー溶液（例えば、有機溶媒に溶解した発色団ポリマー）の急速な添加（例えば、超音波処理または激しい撹拌によって促進される）が関与する。例えば、本明細書に記載されている手順のいくつかにおいて、発色団ポリマーを、溶解性が良好である有機溶媒（良溶媒）、例えば、ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）に最初に溶解することができ、この後、ＴＨＦ中の溶解したポリマーを、過剰な容量の水または緩衝溶液に加え、これは疎水性発色団ポリマーについて貧溶媒であるが、これは良溶媒（ＴＨＦ）と混和性である。このように得られた混合物を超音波処理し、または激しく撹拌し、発色団ポリマードットの形成を補助し、次いで、有機溶媒を除去し、良好に分散した発色団ナノ粒子が残る。この手順の使用において、発色団ポリマーは、有機溶媒（例えば、ＴＨＦ）に溶解するように十分に疎水性であるべきである。生体分子へのカップリングのための側鎖上の高密度の親水性官能基の導入、または高密度の親水性側鎖の導入によって、このように得られたポリマーは、高分子電解質の挙動と同様または同一の様式で、有機溶媒（例えば、ＴＨＦ）中で不溶性または難溶性となる。
【００６４】
いくつかの場合において、これらに限定されないが、エマルジョン（例えば、ミニもしくはミクロエマルジョン）または沈殿または縮合に基づいた様々な方法を含めた他の方法によって形成された発色団ポリマードットの使用のための方法、組成物およびキットを提供する。疎水性官能基を有する他のポリマーをまた用いることができ、ここで疎水性官能基は、発色団ポリマードットの崩壊および安定性に影響を与えない。次いで、ナノ粒子の表面上の疎水性官能基は、生体共役反応のための親水性官能基に変換することができ（例えば、官能化後によって）、または疎水性官能基を生体分子に直接的に連結することができる。この後者のアプローチは、これらに限定されないが、アルキン、歪んだアルキン、アジド、ジエン、アルケン、シクロオクチン、およびホスフィン基を含めた、疎水性およびクリック可能（すなわち、クリックケミストリーのフレームワーク内に入る化学反応）の両方である官能基を使用して、特に良好に作動することができる。
【００６５】
いくつかの場合において、一価、二価、または多価でよい単一分子ポリマードットを形成するために修飾された、官能化された発色団ポリマードットの使用のための方法、組成物およびキットを提供する。修飾は、ドットからいくつかのポリマー分子を除去するが、１個のみの官能基、２個またはそれを超える官能基を有することができる１個のみの分子を残すことである。１つの場合において、工学的に作製された表面を使用して、修飾を促進することができる。工学的に作製された表面は、特定の官能基、例えば、アルデヒド、アルケン、アルキル、アルキン、歪んだアルキン、アミノ、アジド、カルボニル、カルボキシル、シアノ、シクロオクチン、ジエノ、エステル、スクシンイミジルエステル、ハロアルキル、ヒドロキシル、イミド、ケトン、マレイミド、メルカプト、ホスフェート、ホスフィン、スルフェート、スルホネート、置換されたその誘導体、およびこれらの組合せを有することができる。一般に、生体共役反応に適した任意の他の官能基を使用することができる。このような官能基は、当業者によって、例えば、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９６年またはその後のバージョン）において見出すことができる。表面は、平らな表面、例えば、カバーガラス、または任意の粒子からの曲がった表面でよい。表面は、シリカ、金属、半導体、ケイ素、および異なるポリマー表面でよい。上記の官能化された多分子発色団ポリマードットは、任意の安定的な物理的または化学的会合を介して１個のみの発色団ポリマー分子によって表面に付着している。発色団ポリマードット中の全ての遊離分子（表面と会合しているものを除いて）を、例えば、表面と会合している分子のみが保持されるように、表面を有機溶媒で洗浄することによって除去することができる。次いで、単一分子発色団ドットは、任意の物理的または化学的方法によって表面から放出させることができる。このように得られた単一分子ドットは、当初のポリマー分子中の官能基の数によって一価、二価、または多価でよい。
ポリマードット
【００６６】
いくつかの半導体ポリマーは、本開示による凍結乾燥と共に使用するのに適している。全可視スペクトルを含めた、ＵＶから赤外までの範囲の発光波長を有する半導体ポリマーが開発されてきた。様々な場合において、方法、組成物およびキットを、これらに限定されないが、下記を含めた半導体ポリマーの使用のために提供する。これらに限定されないが、ポリ（９，９−ジヘキシルフルオレニル−２，７−ジイル）（ＰＤＨＦ）およびポリ（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）（ＰＦＯ）を含めたポリフルオレンポリマー；これらに限定されないが、ポリ［｛９，９−ジオクチル−２，７−ジビニレン−フルオレニレン｝−ａｌｔ−ｃｏ−｛２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−フェニレン｝］（ＰＦＰＶ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（１，４−ベンゾ−｛２，１，３｝−チアジアゾール）］（ＰＦＢＴ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（４，７−ジ−２−チエニル−２，１，３−ベンゾチアジアゾール）］（ＰＦＴＢＴ）、およびポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（４，７−ジ−２−チエニル−２，１，３−ベンゾチアジアゾール）］（ＰＦ−０．１ＴＢＴ）を含めたフルオレンをベースとするコポリマー；これらに限定されないが、ポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−フェニレンビニレン］（ＭＥＨ−ＰＰＶ）およびポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−（１−シアノビニレン−１，４−フェニレン）］（ＣＮ−ＰＰＶ）を含めたフェニレンビニレンポリマー；これらに限定されないが、ポリ（２，５−ジ（３’，７’−ジメチルオクチル）フェニレン−１，４−エチニレン（ＰＰＥ）を含めたフェニレンエチニレンポリマー。いくつかの場合において、ポリスチレンをベースとする櫛様ポリマーを含有する発色団ポリマードットを使用することができる。ポリスチレンをベースとする櫛様ポリマーの非限定的例には、ポリスチレングラフトアクリル酸、ポリスチレングラフトエチレンオキシド、ポリスチレングラフトブチルアルコールなどが含まれる。
【００６７】
いくつかの場合において、ポリ（メタクリル酸メチル）をベースとする櫛様ポリマーを含有する発色団ポリマードットを使用することができる。ポリ（メタクリル酸メチル）をベースとする櫛様ポリマーの非限定的例には、ポリ（メタクリル酸メチル）グラフトアクリル酸、ポリ（メタクリル酸メチル）グラフトエチレンオキシドなどが含まれる。
【００６８】
いくつかの場合において、カルボキシル、アミン、チオール、エステル、スクシンイミジルエステル、アジド、アルキン、シクロオクチン、またはホスフィン基を含む櫛様ポリマーを含有する発色団ポリマードットを使用することができる。
【００６９】
いくつかの場合において、末端モノマー単位上にて、例えば、カルボキシル、アミン、チオール、エステル、スクシンイミジルエステル、アジド、アルキン、シクロオクチン、ホスフィン、または同様の官能基で官能化されたポリマーを含有する発色団ポリマードットを使用することができる。使用することができるポリマーの例には、これらに限定されないが、ポリ（メタ）アクリレートポリマー、ポリアクリルアミドポリマー、ポリイソブチレン、ポリジエン、ポリフェニレン、ポリエチレン、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド、ポリスチレン、ポリシロキサン、ポリ（ビニルピリジン）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリウレタン、そのブロックコポリマー、そのランダムまたは交互コポリマーなどが含まれる。
【００７０】
いくつかの場合において、１つまたは複数の官能化されたモノマー単位を有するコポリマー、例えば、これらに限定されないが、ポリ（（メタ）アクリル酸）をベースとするコポリマー、例えば、ポリ（アクリル酸−ｂ−アクリルアミド）、ポリ（アクリル酸−ｂ−メタクリル酸メチル）、ポリ（アクリル酸−ｂ−Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）、ポリ（ｎ−ブチルアクリレート−ｂ−アクリル酸）、ポリ（アクリル酸ナトリウム−ｂ−メタクリル酸メチル）、ポリ（メタクリル酸−ｂ−メタクリル酸ネオペンチル）、ポリ（メタクリル酸メチル−ｂ−アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸メチル−ｂ−メタクリル酸）、ポリ（メタクリル酸メチル−ｂ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド）、ポリ（メタクリル酸メチル−ｂ−アクリル酸ナトリウム）、ポリ（メタクリル酸メチル−ｂ−メタクリル酸ナトリウム）、ポリ（メタクリル酸ネオペンチル−ｂ−メタクリル酸）、ポリ（メタクリル酸ｔ−ブチル−ｂ−エチレンオキシド）、ポリ（２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸−ｂ−アクリル酸）；ポリジエンをベースとするコポリマー、例えば、ポリ（ブタジエン（１，２付加）−ｂ−エチレンオキシド）、ポリ（ブタジエン（１，２付加）−ｂ−メチルアクリル酸、ポリ（ブタジエン（１，４付加）−ｂ−アクリル酸）、ポリ（ブタジエン（１，４付加）−ｂ−エチレンオキシド、ポリ（ブタジエン（１，４付加）−ｂ−アクリル酸ナトリウム）、ポリ（ブタジエン（１，４付加）−ｂ−Ｎ−メチル４−ビニルピリジニウムヨージド）、ポリ（イソプレン−ｂ−エチレンオキシド）、ポリ（イソプレン−ｂ−エチレンオキシド）、およびポリ（イソプレン−ｂ−Ｎ−メチル２−ビニルピリジニウムヨージド）；ポリ（エチレンオキシド）をベースとするコポリマー、例えば、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−アクリル酸）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−アクリルアミド）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−ブチレンオキシド）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−ｃ−カプロラクトン）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−ラクチド）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−ラクチド）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−メタクリル酸）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−アクリル酸メチル）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−メタクリル酸メチル）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−ニトロベンジルメタクリレート）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリレート）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−酸化プロピレン）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−アクリル酸ｔ−ブチル）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−メタクリル酸ｔ−ブチル）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−テトラヒドロフルフリルメタクリレート）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−２−エチルオキサゾリン）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−２−メタクリル酸ヒドロキシエチル）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−２−メチルオキサゾリン）；ポリイソブチレンをベースとするコポリマー、例えば、ポリ（イソブチレン−ｂ−アクリル酸）、ポリ（イソブチレン−ｂ−エチレンオキシド）、ポリ（イソブチレン−ｂ−メタクリル酸）；ポリスチレンをベースとするコポリマー、例えば、ポリ（スチレン−ｂ−アクリルアミド）、ポリ（スチレン−ｂ−アクリル酸）、ポリ（スチレン−ｂ−セシウムアクリレート）、ポリ（スチレン−ｂ−エチレンオキシド）、ポリ（スチレン−ｂ−エチレンオキシド）ブロック接合部において切断可能な酸、ポリ（スチレン−ｂ−メタクリル酸）、ポリ（４−スチレンスルホン酸−ｂ−エチレンオキシド）、ポリ（スチレンスルホン酸−ｂ−メチルブチレン）、ポリ（スチレン−ｂ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド）、ポリ（スチレン−ｂ−Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）、ポリ（スチレン−ｂ−Ｎ−メチル２−ビニルピリジニウムヨージド）、ポリ（スチレン−ｂ−Ｎ−メチル−４−ビニルピリジニウムヨージド）、ポリ（スチレン−ｂ−プロピルアクリル酸）、ポリ（スチレン−ｂ−アクリル酸ナトリウム）ポリ（スチレン−ｂ−メタクリル酸ナトリウム）、ポリｐ−クロロメチルスチレン−ｂ−アクリルアミド）、ポリ（スチレン−ｃｏ−ｐ−クロロメチルスチレン−ｂ−アクリルアミド）、ポリ（スチレン−ｃｏ−ｐ−クロロメチルスチレン−ｂ−アクリル酸）、ポリ（スチレン−ｂ−メチルブチレン−ｃｏ−イソプレンスルホネート）；ポリシロキサンをベースとするコポリマー、例えば、ポリ（ジメチルシロキサン−ｂ−アクリル酸）、ポリ（ジメチルシロキサン−ｂ−エチレンオキシド）、ポリ（ジメチルシロキサン−ｂ−メタクリル酸）；ポリ（フェロセニルジメチルシラン）をベースとするコポリマー、例えば、ポリ（フェロセニルジメチルシラン−ｂ−エチレンオキシド）；ポリ（２−ビニルナフタレン）をベースとするコポリマー、例えば、ポリ（２−ビニルナフタレン−ｂ−アクリル酸）、ポリ（ビニルピリジンおよびＮ−メチルビニルピリジニウムヨージド）をベースとするコポリマー、例えば、ポリ（２−ビニルピリジン−ｂ−エチレンオキシド）、ポリ（２−ビニルピリジン−ｂ−メチルアクリル酸）、ポリ（Ｎ−メチル２−ビニルピリジニウムヨージド−ｂ−エチレンオキシド）、ポリ（Ｎ−メチル４−ビニルピリジニウムヨージド−ｂ−メタクリル酸メチル）、ポリ（４−ビニルピリジン−ｂ−エチレンオキシド）ＰＥＯ末端官能性ＯＨ；ならびにポリ（ビニルピロリドン）をベースとするコポリマー、例えば、ポリ（ビニルピロリドン−ｂ−Ｄ／Ｌ−ラクチド）などを含めた両親媒性ポリマーを含有する発色団ポリマードットを使用することができる。
【００７１】
本開示のいくつかの場合において、検出のために使用される発色団ポリマードットは、また、ポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−（１−シアノビニレン−１，４−フェニレン）］として公知である明るくコンパクトでオレンジ色を発光する半導体ポリマードットであるポリマー、ＣＮ−ＰＰＶを含むことができる。ＣＮ−ＰＰＶは、優れた蛍光特性、例えば、大きな吸収断面積、高量子収率、および速い発光速度を有する。
【００７２】
いくつかの場合において、タンパク質およびペプチドを検出するために使用される発色団ポリマードットは、ＣＮ−ＰＰＶから本質的になるポリマーを含むことができる。いくつかの場合において、ナノ粒子は、ＣＮ−ＰＰＶおよび少なくとも１種の他の材料を含む。例えば、ＣＮ−ＰＰＶは、さらなる官能性を実現するコポリマーまたは他の材料と混合することができる。
【００７３】
いくつかの場合において、タンパク質およびペプチドの検出のために使用されるポリマードットは、少なくとも２個の異なる発色団単位を有する半導体コポリマーを含むことができる。例えば、共役コポリマーは、所与の比で存在するフルオレンおよびベンゾチアゾール発色団単位の両方を含有することができる。半導体コポリマーを合成するために使用される典型的な発色団単位には、これらに限定されないが、フルオレン単位、フェニレンビニレン単位、フェニレン単位、フェニレンエチニレン単位、ベンゾチアゾール単位、チオフェン単位、カルバゾールフルオレン単位、ホウ素−ジピロメテン単位、およびその誘導体が含まれる。異なる発色団単位は、ブロックコポリマーにおけるように隔離し、または混ぜることができる。本明細書において使用する場合、発色団コポリマーは、主要な発色団種のアイデンティティーを記載することによって表される。例えば、ＰＦＢＴは、特定の比でフルオレンおよびベンゾチアゾール単位を含有する発色団ポリマーである。いくつかの場合において、ダッシュ記号を使用して、微量の発色団種の百分率、次いで、微量の発色団種のアイデンティティーを示す。例えば、ＰＦ−０．１ＢＴは、９０％のＰＦおよび１０％のＢＴを含有する発色団コポリマーである。
【００７４】
特定の場合において、ポリマードットは、半導体ポリマーのブレンドを含むことができる。ブレンドは、ホモポリマー、コポリマー、およびオリゴマーの任意の組合せを含むことができる。ポリマードットを形成するために使用されるポリマーブレンドは、このように得られたポリマードットの特性を調整し、例えば、ポリマードットについての所望の励起スペクトルまたは発光スペクトルを達成するために選択し得る。
【００７５】
いくつかの場合において、発色団ポリマードットは、ルミネセンス特性を有するパイ共役種である。発色団ポリマードットは、固定された、順序付けされた、またはランダムな配置および比で合わせることができる、１つまたは複数の繰り返し単位を有するポリマーを含み得る。いくつかの場合において、繰り返し単位は、ポリマーを通じて生じるモノマーまたは化学モチーフ、例えば、芳香族または複素環単位でよい。
【００７６】
ポリマーは、ハロゲン化、例えば、フッ化、クロル化、ブロム化、またはヨウ化することができる。いくつかの場合において、ポリマー、繰り返し単位、またはモノマーは、１つまたは複数の部位においてハロゲン化することができる。ハロゲン化ポリマー、例えば、フッ化ポリマーは、ハロゲン化されていない類似のポリマーよりも大きなレベルの蛍光を実現することができる。
【００７７】
発色団ポリマードットのために使用される有機ポリマーの大部分は、絶縁体である。有機ポリマーがπ共役構造を有するとき、電子は、ホッピング、トンネリング、および関連する機序によって、π−電子雲における重なりを通してポリマー骨格に沿って動くことができる。いくつかの場合において、これらのπ−共役ポリマーは、ワイドバンドギャップ半導体、例えば、半導体ポリマーを含む。
【００７８】
いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、小さな有機色素分子、金属錯体、フォトクロミック（ｐｈｏｔｏｃｈｏｔｏｃｈｒｏｍｉｃ）色素、および任意のこれらの組合せのポリマー担持単位、例えば、小さな有機色素、金属錯体、フォトクロミック色素、および任意のこれらの組合せに共有結合的に連結またはグラフトしている光学不活性ポリマー、例えば、ポリスチレンを含む。これらの色素または金属錯体は、タンパク質検知性能を有し得る。
【００７９】
半導体ポリマーを含む発色団ポリマードットは、発光単位として小さな有機色素分子、金属錯体、フォトクロミック色素、および任意のこれらの組合せと共有結合的に連結した。このような発光単位は、発光色を調整し、量子収率を増加させ、発色団ポリマードットの光安定性を改善させることができる。
【００８０】
半導体ポリマーは、直接のバンドギャップを示すことができ、これはバンド端において効率的な（許容された）吸収または発光をもたらす。ポリマー種によって、半導体ポリマーは、強い蛍光を示すことができ、これは半導体バンド理論に関して記載することができる。光励起によって、電子は最高被占のエネルギーバンド（πバンド）から最低空のエネルギーバンド（π＊バンド）に励起され、このようにπバンドにおける励起電子および正孔の結合状態（励起子）を形成する。励起電子と正孔の再結合は、蛍光光子をもたらす。吸収された光の波長はπ−π＊エネルギーギャップによって決定され、ポリマーの分子構造を変化させることによって調整することができる。
【００８１】
半導体ポリマーは、可視スペクトルの完全な範囲に及ぶ発光色を有することができる。例えば、蛍光半導体ポリマーは、ポリフルオレン（例えば、ＰＤＨＦおよびＰＦＯ）、ポリ（フェニレンエチニレン）（例えば、ＰＰＥ）、ポリ（フェニレンビニレン）（例えば、ＭＥＨ−ＰＰＶおよびＣＮ−ＰＰＶ）、フルオレンをベースとするコポリマー（例えば、ＰＦＰＶ、ＰＦＢＴ、およびＰＦ−ＤＢＴ５）、ＢＯＤＩＰＹをベースとするコポリマー、ならびに関連する誘導体を含み得る。
【００８２】
多くの場合において、光生成された電子−正孔対は、解離して自由キャリアを形成することができ、これは系を通して移動する。自由キャリアは、合わさってトリプレットを形成し、または他の無放射プロセス（蛍光についての望まれないプロセス）によって不活性化することができる。これらをまた集めて、電流を生成することができる（光起電力のための望ましいプロセス）。
【００８３】
いくつかの場合において、発色団ポリマードットは、少なくとも２個の異なる発色団単位を有する半導体コポリマーを含むことができる。例えば、共役コポリマーは、所与の比で存在するフルオレンおよびベンゾチアゾール発色団単位の両方を含有し得る。半導体コポリマーを合成するために使用される典型的な発色団単位には、これらに限定されないが、フルオレン単位、フェニレンビニレン単位、フェニレン単位、フェニレンエチニレン単位、ベンゾチアゾール単位、チオフェン単位、カルバゾールフルオレン単位、ホウ素−ジピロメテン単位、およびその誘導体が含まれる。異なる発色団単位は、ブロックコポリマーにおけるように隔離し、または混ぜてもよい。
【００８４】
特定の場合において、発色団ポリマードットは、半導体ポリマーのブレンドを含むことができる。ブレンドは、ホモポリマー、コポリマー、およびオリゴマーの任意の組合せを含み得る。発色団ポリマードットを形成するために使用されるポリマーブレンドは、このように得られた発色団ポリマードットの特性を調整し、例えば、発色団ポリマードットについての所望の励起スペクトルまたは発光スペクトルを達成するために選択し得る。
【００８５】
本明細書において提供するナノ粒子のサイズは、ナノ粒子の最も小さな寸法を指す「限界寸法」に関して定義される。多くのナノ粒子は、形状がおおよそ球状であり、これは限界寸法が球状粒子の半径または直径であることをもたらす。典型的なナノ粒子、例えば、ナノ球体およびナノ立方体は、サイズが完全にナノスケールである一方、ナノ粒子の全ての寸法がナノスケールである必要はない。例えば、ナノ円柱は、ナノスケールの直径ではあるが、マイクロスケールの長さを有し得る。
【００８６】
いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットの限界寸法は、２００ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットの限界寸法は、１８０ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、１７０ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、１６０ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、１５０ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、１５５ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、１５０ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、１４５ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、１４０ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、１３５ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、１３０ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、１２５ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、１２０ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、１１５ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、１１０ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、１０５ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、１００ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、９５ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、９０ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、８５ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、８０ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、７５ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、７０ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、６５ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、６０ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、５５ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、５０ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、４５ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、４０ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、３５ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、３０ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、２５ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、２０ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、１５ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、１０ｎｍまたはそれ未満である。いくつかの場合において、限界寸法は、５ｎｍまたはそれ未満である。
【００８７】
いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットの限界寸法は、２００ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットの限界寸法は、１８０でありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、１７０ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、１６０ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、１５０ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、１５５ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、１５０ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、１４５ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、１４０ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、１３５ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、１３０ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、１２５ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、１２０ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、１１５ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、１１０ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、１０５ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、１００ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、９５ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、９０ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、８５ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、８０ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、７５ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、７０ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、６５ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、６０ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、５５ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、５０ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、４５ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、４０ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、３５ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、３０ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、２５ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、２０ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、１５ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、１０ｎｍでありまたはそれを超える。いくつかの場合において、限界寸法は、５ｎｍでありまたはそれを超える。
【００８８】
いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットの限界寸法は、約２００ｎｍである。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットの限界寸法は、約１８０ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約１７０ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約１６０ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約１５５ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約１５０ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約１４５ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約１４０ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約１３５ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約１３０ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約１２５ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約１２０ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約１１５ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約１１０ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約１０５ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約１００ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約９５ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約９０ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約８５である。いくつかの場合において、限界寸法は、約８０ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約７５ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約７０ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約６５ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約６０ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約５５ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約５０ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約４５ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約４０ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約３５ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約３０ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約２５ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約２０ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約１５ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約１０ｎｍである。いくつかの場合において、限界寸法は、約５ｎｍである。
【００８９】
いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、１ｎｍ超および１０００ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、１０ｎｍ超および１０００ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、２０ｎｍ超および１０００ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、３０ｎｍ超および１０００ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、４０ｎｍ超および１０００ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、５０ｎｍ超および１０００ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、１ｎｍ超および１００ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、１ｎｍ超および９０ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、１ｎｍ超および８０ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、１ｎｍ超および７０ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、１ｎｍ超および６０ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、１ｎｍ超および５０ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、１ｎｍ超および４０ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、１ｎｍ超および３０ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、１ｎｍ超および２０ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、１ｎｍ超および１０ｎｍ未満の限界寸法を有する。
【００９０】
いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、約１ｎｍ超および約１０００ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、約１０ｎｍ超および約１０００ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、約２０ｎｍ超および約１０００ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、約３０ｎｍ超および約１０００ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、約４０ｎｍ超および約１０００ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、約５０ｎｍ超および約１０００ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、約１ｎｍ超および約１００ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、約１ｎｍ超および約９０ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、約１ｎｍ超および約８０ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、約１ｎｍ超および約７０ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、約１ｎｍ超および約６０ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、約１ｎｍ超および約５０ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、約１ｎｍ超および約４０ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、約１ｎｍ超および約３０ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、約１ｎｍ超および約２０ｎｍ未満の限界寸法を有する。いくつかの場合において、使用される発色団ポリマードットは、約１ｎｍ超および約１０ｎｍ未満の限界寸法を有する。
【００９１】
ナノ粒子の可能な形状は、本質的に無制限である。しかし、特定の場合において、形状は、球体、円柱、楕円体、多面体、角柱、ロッド、およびワイヤーから選択される。ナノ粒子の形状は、当業者が認識するように、検出特性に寄与することができる（例えば、ナノロッドは、ナノ球体とは異なる光学特性を有し得る）。
【００９２】
大きな粒径によって提示される問題を迂回するために、ナノスケールサイズのナノ粒子が必須である。例えば、光ルミネセンスイメージングのためにナノ粒子を標的分子（例えば、タンパク質）に付着させるとき、相対的に大きな粒子は、標的以外の分子への非特異的結合、または表面への吸着のために利用可能であるより大きな表面積を有する。
【００９３】
提供するナノ粒子は、分析方法、システムまたはキットの一部として標的分子に付着することができる光ルミネセンスレポーターとして使用するために最適化される。ナノ粒子は、光ルミネセンスを使用して容易に検出可能であるべきであり、これらの標的分子のための特異性を有するべきである。
【００９４】
所与の発色団ポリマードットについての光学特性、例えば、吸収波長は、その組成および幾可学的形状を修飾することによって調整することができる。全可視スペクトルを含めた、ＵＶから赤外までの範囲の吸収波長を有する半導体ポリマーが開発されてきた。いくつかの場合において、２００ｎｍ〜３００ｎｍ、２５０ｎｍ〜３５０ｎｍ、３００ｎｍ〜４００ｎｍ、３５０ｎｍ〜４５０ｎｍ、４００ｎｍ〜５００ｎｍ、４５０ｎｍ〜５５０ｎｍ、５００ｎｍ〜６００ｎｍ、５５０ｎｍ〜６５０ｎｍ、６００ｎｍ〜７００ｎｍ、６５０ｎｍ〜７５０ｎｍ、７００ｎｍ〜８００ｎｍ、７５０ｎｍ〜８５０ｎｍ、８００ｎｍ〜９００ｎｍ、８５０ｎｍ〜９５０ｎｍ、または９００ｎｍ〜１０００ｎｍのピーク吸収波長を有する発色団ポリマードットを使用する。
【００９５】
他の場合において、約２００ｎｍ〜約３００ｎｍ、約２５０ｎｍ〜約３５０ｎｍ、約３００ｎｍ〜約４００ｎｍ、約３５０ｎｍ〜約４５０ｎｍ、約４００ｎｍ〜約５００ｎｍ、約４５０ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約５００ｎｍ〜約６００ｎｍ、約５５０ｎｍ〜約６５０ｎｍ、約６００ｎｍ〜約７００ｎｍ、約６５０ｎｍ〜約７５０ｎｍ、約７００ｎｍ〜約８００ｎｍ、約７５０ｎｍ〜約８５０ｎｍ、約８００ｎｍ〜約９００ｎｍ、約８５０ｎｍ〜約９５０ｎｍ、または約９００ｎｍ〜約１０００ｎｍのピーク吸収波長を有する発色団ポリマードットを使用する。
【００９６】
全可視スペクトルを含めた、ＵＶから赤外までの範囲の発光波長を有する半導体ポリマーが開発されてきた。いくつかの場合において、２００ｎｍ〜３００ｎｍ、２５０ｎｍ〜３５０ｎｍ、３００ｎｍ〜４００ｎｍ、３５０ｎｍ〜４５０ｎｍ、４００ｎｍ〜５００ｎｍ、４５０ｎｍ〜５５０ｎｍ、５００ｎｍ〜６００ｎｍ、５５０ｎｍ〜６５０ｎｍ、６００ｎｍ〜７００ｎｍ、６５０ｎｍ〜７５０ｎｍ、７００ｎｍ〜８００ｎｍ、７５０ｎｍ〜８５０ｎｍ、８００ｎｍ〜９００ｎｍ、８５０ｎｍ〜９５０ｎｍ、９００ｎｍ〜１０００ｎｍ、９５０ｎｍ〜１０５０ｎｍ、１０００ｎｍ〜１１００ｎｍ、１１５０ｎｍ〜１２５０ｎｍ、または１２００ｎｍ〜１３００ｎｍのピーク発光波長を有する発色団ポリマードットを使用する。
【００９７】
他の場合において、約２００ｎｍ〜約３００ｎｍ、約２５０ｎｍ〜約３５０ｎｍ、約３００ｎｍ〜約４００ｎｍ、約３５０ｎｍ〜約４５０ｎｍ、約４００ｎｍ〜約５００ｎｍ、約４５０ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約５００ｎｍ〜約６００ｎｍ、約５５０ｎｍ〜約６５０ｎｍ、約６００ｎｍ〜約７００ｎｍ、約６５０ｎｍ〜約７５０ｎｍ、約７００ｎｍ〜約８００ｎｍ、約７５０ｎｍ〜約８５０ｎｍ、約８００ｎｍ〜約９００ｎｍ、約８５０ｎｍ〜約９５０ｎｍ、約９００ｎｍ〜約１０００ｎｍ、約９５０ｎｍ〜約１０５０ｎｍ、約１０００ｎｍ〜約１１００ｎｍ、約１１５０ｎｍ〜約１２５０ｎｍ、または約１２００ｎｍ〜約１３００ｎｍのピーク発光波長を有する発色団ポリマードットを使用する。
【００９８】
いくつかの場合において、提供される方法、組成物およびキットは、狭帯域発光を有する発色団ポリマードットを使用する。狭帯域発光は、これらに限定されないが、多重化用途を含めた特定の用途のために有利である。ポリマードットの発光波長は、紫外線から近赤外領域で変化することができる。発光帯域の半値全幅（ＦＷＨＭ）は、７０ｎｍ未満である。いくつかの場合において、ＦＷＨＭは、６５ｎｍ未満である。いくつかの場合において、ＦＷＨＭは、６０ｎｍ未満である。いくつかの場合において、ＦＷＨＭは、５５ｎｍ未満である。いくつかの場合において、ＦＷＨＭは、５０ｎｍ未満である。いくつかの場合において、ＦＷＨＭは、４５ｎｍ未満である。いくつかの場合において、ＦＷＨＭは、４０ｎｍ未満である。いくつかの場合において、ＦＷＨＭは、３５ｎｍ未満である。いくつかの場合において、ＦＷＨＭは、３０ｎｍ未満である。いくつかの場合において、ＦＷＨＭは、２５ｎｍ未満である。いくつかの場合において、ＦＷＨＭは、２０ｎｍ未満である。いくつかの場合において、ＦＷＨＭは、１０ｎｍ未満である。いくつかの場合において、本明細書に記載されているポリマードットのＦＷＨＭは、５ｎｍ〜７０ｎｍ、１０ｎｍ〜６０ｎｍ、２０ｎｍ〜５０ｎｍ、または３０ｎｍ〜４５ｎｍの範囲でよい。
【００９９】
他の場合において、提供される方法、組成物およびキットは、狭帯域発光を有する発色団ポリマードットを使用する。狭帯域発光は、これらに限定されないが、多重化用途を含めた特定の用途のために有利である。ポリマードットの発光波長は、紫外線から近赤外領域で変化することができる。発光帯域の半値全幅（ＦＷＨＭ）は、７０ｎｍ未満である。いくつかの場合において、ＦＷＨＭは、約６５ｎｍ未満である。いくつかの場合において、ＦＷＨＭは、約６０ｎｍ未満である。いくつかの場合において、ＦＷＨＭは、約５５ｎｍ未満である。いくつかの場合において、ＦＷＨＭは、約５０ｎｍ未満である。いくつかの場合において、ＦＷＨＭは、約４５ｎｍ未満である。いくつかの場合において、ＦＷＨＭは、約４０ｎｍ未満である。いくつかの場合において、ＦＷＨＭは、約３５ｎｍ未満である。いくつかの場合において、ＦＷＨＭは、約３０ｎｍ未満である。いくつかの場合において、ＦＷＨＭは、約２５ｎｍ未満である。いくつかの場合において、ＦＷＨＭは、約２０ｎｍ未満である。いくつかの場合において、ＦＷＨＭは、約１０ｎｍ未満である。いくつかの場合において、本明細書に記載されているポリマードットのＦＷＨＭは、約５ｎｍ〜約７０ｎｍ、約１０ｎｍ〜約６０ｎｍ、約２０ｎｍ〜約５０ｎｍ、または約３０ｎｍ〜約４５ｎｍの範囲でよい。
【０１００】
いくつかの場合において、発色団ポリマードットを作製するための狭帯域発光ポリマーは、狭帯域モノマーとしてホウ素−ジピロメテン（４，４−ジフルオロ−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン、ＢＯＤＩＰＹ）および／もしくはこれらの誘導体、ならびに／または他のホウ素含有モノマーおよびこれらの誘導体を含む。ＢＯＤＩＰＹおよび他のホウ素含有モノマーならびにこれらの誘導体には、これらに限定されないが、これらのアルキル誘導体、アリール誘導体、アルキン誘導体、芳香族誘導体、アルコキシド誘導体、アザ誘導体、ＢＯＤＩＰＹ伸長型および他のＢＯＤＩＰＹ誘導体が含まれる。狭帯域発光ポリマーはまた、任意の他のモノマーを含むことができる。ＢＯＤＩＰＹをベースとするモノマーは、最終の発色団ポリマードットが狭帯域発光を示すことができるように、エネルギーアクセプターでよく、他のモノマーは、エネルギードナーでよい。良溶媒中の狭帯域発光発色団ポリマーは、広範な発光または狭い発光を示し得る。ＢＯＤＩＰＹおよび他のホウ素含有モノマーならびにこれらの誘導体を含めた狭帯域発光を有する発色団ポリマードットについての包括的な記載は、参照により本明細書中にその全体が組み込まれているＷＯ２０１３／１０１９０２に記載されている。
【０１０１】
当業者が認識するように、本明細書において定義する様々な化学用語は、本開示のポリマーおよびモノマーの化学構造を記載するために使用することができる。例えば、種々のモノマー誘導体（例えば、ＢＯＤＩＰＹ誘導体）は、種々の化学的置換基および本明細書に記載されている基を含むことができる。例えば、いくつかの場合において、様々なモノマーの誘導体は、水素、重水素、アルキル、アラルキル、アリール、アルコキシ−アリール、Ｎ−ジアルキル−４−フェニル、Ｎ−ジフェニル−４−フェニル、Ｎ−ジアルコキシフェニル−４−フェニル、アミノ、スルフィド、アルデヒド、エステル、エーテル、酸、および／またはヒドロキシルで置換することができる。
【０１０２】
本開示は、ポリマードット、例えば、狭帯域発光発色団ポリマードットを含むことができる。本明細書においてさらに記載するように、本開示は、狭帯域発光特性（例えば、７０ｎｍ未満のＦＷＨＭ）を示す多種多様のポリマードットを含む。本明細書においてさらに記載するように、様々な本開示のポリマードットは、狭帯域発光単位（例えば、狭帯域モノマーおよび／または狭帯域単位）を有するポリマーを含むことができる。例えば、本開示は、狭帯域モノマー、例えば、ＢＯＤＩＰＹおよび／またはＢＯＤＩＰＹ誘導体モノマー、スクアラインおよび／またはスクアライン誘導体、金属錯体および／または金属錯体誘導体モノマー、ポルフィリンおよび／またはポルフィリン誘導体モノマー、フタロシアニンおよび／またはフタロシアニン（ｐｈｔｈａｌｏｃｙｎａｎｉｎｅ）誘導体モノマー、ランタニド錯体および／またはランタニド錯体誘導体モノマー、ペリレンおよび／またはペリレン誘導体モノマー、シアニンおよび／またはシアニン誘導体モノマー、ローダミンおよび／またはローダミン誘導体モノマー、クマリンおよび／またはクマリン誘導体モノマー、ならびに／あるいはキサンテンおよび／またはキサンテン誘導体モノマーを含めたホモポリマーまたはヘテロポリマーを含むことができる。狭帯域単位は、例えば、ポリマードット中に包埋された、またはポリマードットに付着した狭帯域モノマーまたは蛍光ナノ粒子でよい。蛍光ナノ粒子は、例えば、量子ドットでよい。狭帯域単位はまた、本開示のポリマードット中で狭い発光を生じさせるポリマーまたは蛍光色素分子を含むことができる。
【０１０３】
種々の他のＢＯＤＩＰＹ誘導体を、本開示のために使用することができる。ＢＯＤＩＰＹおよびＢＯＤＩＰＹ誘導体は、重合して、ポリマー（例えば、ホモポリマーまたはヘテロポリマー）を形成することができ、かつ／あるいはポリマー骨格、側鎖および／または末端に付着（例えば、共有結合的に付着する）することができる。いくつかの場合において、本開示の発色団ポリマードットは、式（Ｉ）の構造を有する狭帯域モノマーを含むポリマーを含むことができ、
【化１】
0006587605.tif 000004
【０１０４】
式中、Ｒ１、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４ＡおよびＲ４Ｂのそれぞれは、これらに限定されないが、水素（Ｈ）、重水素（Ｄ）、ハロゲン、直接または分岐状のアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキレン、アルコキシ、アリール、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、エーテルおよびその誘導体、エステルおよびその誘導体、アルキルケトン、アルキルエステル、アリールエステル、アルキニル、アルキルアミン、フルオロアルキル、フルオロアリール、およびポリアルキレン（ｐｏｌｙａｌｋａｌｅｎｅ）（例えば、メトキシエトキシエトキシ（ｍｅｈｔｏｘｙｅｔｈｏｘｙｅｔｈｏｘｙ）、エトキシエトキシ、および−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＨ、ｎ＝１〜５０）、フェニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フェニル、ピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピリジル、ビピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ビピリジルトリピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換トリピリジル、フリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フリル、チエニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換チエニル、ピロリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピロリル、ピラゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピラゾリル、オキサゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換オキサゾリル、チアゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換チアゾリル、イミダゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換イミダゾリル、ピラジニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピラジニル、ベンゾオキサジゾリル（ｂｅｎｚｏｏｘａｄｉｚｏｌｙｌ）、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ベンゾオキサジゾリル、ベンゾチアジゾリル（ｂｅｎｚｏｔｈｉａｄｉｚｏｌｙｌ）、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ベンゾチアジゾリル、フルオレニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フルオレニル、トリフェニルアミニル−置換フルオレニル、ジフェニルアミニル−置換フルオレニル、アルキル−置換カルバゾリル、アルキル−置換トリフェニルアミニルおよびアルキル−置換チオフェニルからなる群から独立に選択される。例示的な場合として、アルキル置換フェニルは、２−アルキルフェニル、３−アルキルフェニル、４−アルキルフェニル、２，４−ジアルキルフェニル、３，５−ジアルキルフェニル、３，４−ジアルキルフェニルを含むことができる。アルキル−置換フルオレニルは、９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、７−アルキル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、６−アルキル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、７−トリフェニルアミニル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニルおよび７−ジフェニルアミニル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニルを含むことができる。アルキル−置換カルバゾリルは、Ｎ−アルキル−置換カルバゾリル、６−アルキル−置換カルバゾリルおよび７−アルキル−置換カルバゾリルを含むことができる。アルキル−置換トリフェニルアミニルは、４’−アルキル−置換トリフェニルアミニル、３’−アルキル−置換トリフェニルアミニル、３’，４’−ジアルキル−置換トリフェニルアミニルおよび４’，４’’−アルキル−置換トリフェニルアミニルを含むことができる。アルキル−置換チオフェニルは、２−アルキルチオフェニル、３−アルキルチオフェニル、および４−アルキルチオフェニル、Ｎ−ジアルキル−４−フェニル、Ｎ−ジフェニル−４−フェニル、およびＮ−ジアルコキシフェニル−４−フェニルを含むことができる。狭帯域モノマーは、ポリマーの骨格中に統合し（例えば、ポリマー中に重合し）、かつ／あるいはＲ１、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４Ａ、Ｒ４Ｂまたはこれらの組合せへの少なくとも１つの付着を介して、ポリマーの骨格、末端、もしくは側鎖に共有結合的に付着することができる。
【０１０５】
いくつかの場合において、本開示の発色団ポリマードットは、式（ＩＩ）の構造を有する狭帯域モノマーを含むポリマーを含むことができ、
【化２】
0006587605.tif 000005
【０１０６】
式中、Ｒ１、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４ＡおよびＲ４Ｂのそれぞれは、これらに限定されないが、水素（Ｈ）、重水素（Ｄ）、ハロゲン、直接または分岐状のアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキレン、アルコキシ、アリール、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、エーテルおよびその誘導体、エステルおよびその誘導体、アルキルケトン、アルキルエステル、アリールエステル、アルキニル、アルキルアミン、フルオロアルキル、フルオロアリール、およびポリアルキレン（例えば、メトキシエトキシエトキシ、エトキシエトキシ、および−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＨ、ｎ＝１〜５０）、フェニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フェニル、ピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピリジル、ビピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ビピリジルトリピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換トリピリジル、フリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フリル、チエニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換チエニル、ピロリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピロリル、ピラゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピラゾリル、オキサゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換オキサゾリル、チアゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換チアゾリル、イミダゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換イミダゾリル、ピラジニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピラジニル、ベンゾオキサジゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ベンゾオキサジゾリル、ベンゾチアジゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ベンゾチアジゾリル、フルオレニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フルオレニル、トリフェニルアミニル−置換フルオレニル、ジフェニルアミニル−置換フルオレニル、アルキル−置換カルバゾリル、アルキル−置換トリフェニルアミニルおよびアルキル−置換チオフェニルからなる群から独立に選択される。例示的な場合として、アルキル置換フェニルは、２−アルキルフェニル、３−アルキルフェニル、４−アルキルフェニル、２，４−ジアルキルフェニル、３，５−ジアルキルフェニル、３，４−ジアルキルフェニルを含むことができる。アルキル−置換フルオレニルは、９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、７−アルキル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、６−アルキル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、７−トリフェニルアミニル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニルおよび７−ジフェニルアミニル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニルを含むことができる。アルキル−置換カルバゾリルは、Ｎ−アルキル−置換カルバゾリル、６−アルキル−置換カルバゾリルおよび７−アルキル−置換カルバゾリルを含むことができる。アルキル−置換トリフェニルアミニルは、４’−アルキル−置換トリフェニルアミニル、３’−アルキル−置換トリフェニルアミニル、３’，４’−ジアルキル−置換トリフェニルアミニルおよび４’，４’’−アルキル−置換トリフェニルアミニルを含むことができる。アルキル−置換チオフェニルは、２−アルキルチオフェニル、３−アルキルチオフェニル、および４−アルキルチオフェニル、Ｎ−ジアルキル−４−フェニル、Ｎ−ジフェニル−４−フェニル、およびＮ−ジアルコキシフェニル−４−フェニルを含むことができる。狭帯域モノマーは、ポリマーの骨格中に統合し（例えば、ポリマー中に重合し）、かつ／あるいはＲ１、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４Ａ、Ｒ４Ｂまたはこれらの組合せへの少なくとも１つの付着を介して、ポリマーの骨格、末端、もしくは側鎖に共有結合的に付着することができる。モノマーは、例えば、Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂ基への付着によってポリマーの骨格と統合することができる。
【０１０７】
いくつかの場合において、本開示の発色団ポリマードットは、式（ＩＩＩ）の構造を有する狭帯域モノマーを含むポリマーを含むことができ、
【化３】
0006587605.tif 000006
式中、Ｒ１、Ｒ２ＡおよびＲ２Ｂのそれぞれは、これらに限定されないが、水素（Ｈ）、重水素（Ｄ）、ハロゲン、直接または分岐状のアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキレン、アルコキシ、アリール、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、エーテルおよびその誘導体、エステルおよびその誘導体、アルキルケトン、アルキルエステル、アリールエステル、アルキニル、アルキルアミン、フルオロアルキル、フルオロアリール、およびポリアルキレン（例えば、メトキシエトキシエトキシ、エトキシエトキシ、および−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＨ、ｎ＝１〜５０）、フェニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フェニル、ピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピリジル、ビピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ビピリジルトリピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換トリピリジル、フリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フリル、チエニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換チエニル、ピロリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピロリル、ピラゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピラゾリル、オキサゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換オキサゾリル、チアゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換チアゾリル、イミダゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換イミダゾリル、ピラジニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピラジニル、ベンゾオキサジゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ベンゾオキサジゾリル、ベンゾチアジゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ベンゾチアジゾリル、フルオレニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フルオレニル、トリフェニルアミニル−置換フルオレニル、ジフェニルアミニル−置換フルオレニル、アルキル−置換カルバゾリル、アルキル−置換トリフェニルアミニルおよびアルキル−置換チオフェニルからなる群から独立に選択される。例示的な場合として、アルキル置換フェニルは、２−アルキルフェニル、３−アルキルフェニル、４−アルキルフェニル、２，４−ジアルキルフェニル、３，５−ジアルキルフェニル、３，４−ジアルキルフェニルを含むことができる。アルキル−置換フルオレニルは、９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、７−アルキル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、６−アルキル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、７−トリフェニルアミニル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニルおよび７−ジフェニルアミニル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニルを含むことができる。アルキル−置換カルバゾリルは、Ｎ−アルキル−置換カルバゾリル、６−アルキル−置換カルバゾリルおよび７−アルキル−置換カルバゾリルを含むことができる。アルキル−置換トリフェニルアミニルは、４’−アルキル−置換トリフェニルアミニル、３’−アルキル−置換トリフェニルアミニル、３’，４’−ジアルキル−置換トリフェニルアミニルおよび４’，４’’−アルキル−置換トリフェニルアミニルを含むことができる。アルキル−置換チオフェニルは、２−アルキルチオフェニル、３−アルキルチオフェニル、および４−アルキルチオフェニル、Ｎ−ジアルキル−４−フェニル、Ｎ−ジフェニル−４−フェニル、およびＮ−ジアルコキシフェニル−４−フェニルを含むことができる。狭帯域モノマーは、ポリマーの骨格中に統合し（例えば、ポリマー中に重合し）、かつ／あるいは例えば、Ｒ１、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂまたはこれらの組合せへの少なくとも１つの付着を介して、ポリマーの骨格、末端、もしくは側鎖に共有結合的に付着することができる。括弧は、ポリマーの骨格へのモノマーの付着点を示す。
【０１０８】
いくつかの場合において、本開示の発色団ポリマードットは、式（ＩＶ）の構造を有する狭帯域モノマーを含むポリマーを含むことができ、
【化４】
0006587605.tif 000007
式中、Ｒ１、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂのそれぞれは、これらに限定されないが、水素（Ｈ）、重水素（Ｄ）、ハロゲン、直接または分岐状のアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキレン、アルコキシ、アリール、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、エーテルおよびその誘導体、エステルおよびその誘導体、アルキルケトン、アルキルエステル、アリールエステル、アルキニル、アルキルアミン、フルオロアルキル、フルオロアリール、およびポリアルキレン（例えば、メトキシエトキシエトキシ、エトキシエトキシ、および−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＨ、ｎ＝１〜５０）、フェニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フェニル、ピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピリジル、ビピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ビピリジルトリピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換トリピリジル、フリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フリル、チエニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換チエニル、ピロリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピロリル、ピラゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピラゾリル、オキサゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換オキサゾリル、チアゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換チアゾリル、イミダゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換イミダゾリル、ピラジニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピラジニル、ベンゾオキサジゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ベンゾオキサジゾリル、ベンゾチアジゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ベンゾチアジゾリル、フルオレニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フルオレニル、トリフェニルアミニル−置換フルオレニル、ジフェニルアミニル−置換フルオレニル、アルキル−置換カルバゾリル、アルキル−置換トリフェニルアミニルおよびアルキル−置換チオフェニルからなる群から独立に選択される。例示的な場合として、アルキル置換フェニルは、２−アルキルフェニル、３−アルキルフェニル、４−アルキルフェニル、２，４−ジアルキルフェニル、３，５−ジアルキルフェニル、３，４−ジアルキルフェニルを含むことができる。アルキル−置換フルオレニルは、９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、７−アルキル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、６−アルキル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、７−トリフェニルアミニル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニルおよび７−ジフェニルアミニル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニルを含むことができる。アルキル−置換カルバゾリルは、Ｎ−アルキル−置換カルバゾリル、６−アルキル−置換カルバゾリルおよび７−アルキル−置換カルバゾリルを含むことができる。アルキル−置換トリフェニルアミニルは、４’−アルキル−置換トリフェニルアミニル、３’−アルキル−置換トリフェニルアミニル、３’，４’−ジアルキル−置換トリフェニルアミニルおよび４’，４’’−アルキル−置換トリフェニルアミニルを含むことができる。アルキル−置換チオフェニルは、２−アルキルチオフェニル、３−アルキルチオフェニル、および４−アルキルチオフェニル、Ｎ−ジアルキル−４−フェニル、Ｎ−ジフェニル−４−フェニル、およびＮ−ジアルコキシフェニル−４−フェニルを含むことができる。狭帯域モノマーは、ポリマーの骨格中に統合し（例えば、ポリマー中に重合し）、かつ／あるいはＲ１、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ３Ｂまたはこれらの組合せへの少なくとも１つの付着を介して、ポリマーの骨格、末端、もしくは側鎖に共有結合的に付着することができる。
【０１０９】
いくつかの場合において、本開示の発色団ポリマードットは、式（Ｖ）の構造を有する狭帯域モノマーを含むポリマーを含むことができ、
【化５】
0006587605.tif 000008
式中、Ｒ１、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４Ａ、Ｒ４Ｂ、Ｒ５ＡおよびＲ５Ｂのそれぞれは、これらに限定されないが、水素（Ｈ）、重水素（Ｄ）、ハロゲン、直接または分岐状のアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキレン、アルコキシ、アリール、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、エーテルおよびその誘導体、エステルおよびその誘導体、アルキルケトン、アルキルエステル、アリールエステル、アルキニル、アルキルアミン、フルオロアルキル、フルオロアリール、およびポリアルキレン（例えば、メトキシエトキシエトキシ、エトキシエトキシ、および−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＨ、ｎ＝１〜５０）、フェニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フェニル、ピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピリジル、ビピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ビピリジルトリピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換トリピリジル、フリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フリル、チエニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換チエニル、ピロリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピロリル、ピラゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピラゾリル、オキサゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換オキサゾリル、チアゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換チアゾリル、イミダゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換イミダゾリル、ピラジニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピラジニル、ベンゾオキサジゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ベンゾオキサジゾリル、ベンゾチアジゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ベンゾチアジゾリル、フルオレニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フルオレニル、トリフェニルアミニル−置換フルオレニル、ジフェニルアミニル−置換フルオレニル、アルキル−置換カルバゾリル、アルキル−置換トリフェニルアミニルおよびアルキル−置換チオフェニルからなる群から独立に選択される。例示的な場合として、アルキル置換フェニルは、２−アルキルフェニル、３−アルキルフェニル、４−アルキルフェニル、２，４−ジアルキルフェニル、３，５−ジアルキルフェニル、３，４−ジアルキルフェニルを含むことができる。アルキル−置換フルオレニルは、９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、７−アルキル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、６−アルキル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、７−トリフェニルアミニル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニルおよび７−ジフェニルアミニル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニルを含むことができる。アルキル−置換カルバゾリルは、Ｎ−アルキル−置換カルバゾリル、６−アルキル−置換カルバゾリルおよび７−アルキル−置換カルバゾリルを含むことができる。アルキル−置換トリフェニルアミニルは、４’−アルキル−置換トリフェニルアミニル、３’−アルキル−置換トリフェニルアミニル、３’，４’−ジアルキル−置換トリフェニルアミニルおよび４’，４’’−アルキル−置換トリフェニルアミニルを含むことができる。アルキル−置換チオフェニルは、２−アルキルチオフェニル、３−アルキルチオフェニル、および４−アルキルチオフェニル、Ｎ−ジアルキル−４−フェニル、Ｎ−ジフェニル−４−フェニル、およびＮ−ジアルコキシフェニル−４−フェニルを含むことができる。狭帯域モノマーは、ポリマーの骨格中に統合し（例えば、ポリマー中に共重合し）、かつ／あるいはＲ１、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４Ａ、Ｒ４Ｂ、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂまたはこれらの組合せへの少なくとも１つの付着を介して、ポリマーの骨格、末端、もしくは側鎖に共有結合的に付着することができる。特定の場合において、狭帯域モノマーは、Ｒ５ＡおよびＲ５Ｂ基への付着によって骨格中に統合することができる。
【０１１０】
いくつかの場合において、本開示の発色団ポリマードットは、式（ＶＩ）の構造を有する狭帯域モノマーを含むポリマーを含むことができ、
【化６】
0006587605.tif 000009
式中、Ｒ１、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂのそれぞれは、これらに限定されないが、水素（Ｈ）、重水素（Ｄ）、ハロゲン、直接または分岐状のアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキレン、アルコキシ、アリール、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、エーテルおよびその誘導体、エステルおよびその誘導体、アルキルケトン、アルキルエステル、アリールエステル、アルキニル、アルキルアミン、フルオロアルキル、フルオロアリール、およびポリアルキレン（例えば、メトキシエトキシエトキシ、エトキシエトキシ、および−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＨ、ｎ＝１〜５０）、フェニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フェニル、ピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピリジル、ビピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ビピリジルトリピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換トリピリジル、フリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フリル、チエニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換チエニル、ピロリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピロリル、ピラゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピラゾリル、オキサゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換オキサゾリル、チアゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換チアゾリル、イミダゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換イミダゾリル、ピラジニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピラジニル、ベンゾオキサジゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ベンゾオキサジゾリル、ベンゾチアジゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ベンゾチアジゾリル、フルオレニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フルオレニル、トリフェニルアミニル−置換フルオレニル、ジフェニルアミニル−置換フルオレニル、アルキル−置換カルバゾリル、アルキル−置換トリフェニルアミニルおよびアルキル−置換チオフェニルからなる群から独立に選択される。例示的な場合として、アルキル置換フェニルは、２−アルキルフェニル、３−アルキルフェニル、４−アルキルフェニル、２，４−ジアルキルフェニル、３，５−ジアルキルフェニル、３，４−ジアルキルフェニルを含むことができる。アルキル−置換フルオレニルは、９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、７−アルキル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、６−アルキル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、７−トリフェニルアミニル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニルおよび７−ジフェニルアミニル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニルを含むことができる。アルキル−置換カルバゾリルは、Ｎ−アルキル−置換カルバゾリル、６−アルキル−置換カルバゾリルおよび７−アルキル−置換カルバゾリルを含むことができる。アルキル−置換トリフェニルアミニルは、４’−アルキル−置換トリフェニルアミニル、３’−アルキル−置換トリフェニルアミニル、３’，４’−ジアルキル−置換トリフェニルアミニルおよび４’，４’’−アルキル−置換トリフェニルアミニルを含むことができる。アルキル−置換チオフェニルは、２−アルキルチオフェニル、３−アルキルチオフェニル、および４−アルキルチオフェニル、Ｎ−ジアルキル−４−フェニル、Ｎ−ジフェニル−４−フェニル、およびＮ−ジアルコキシフェニル−４−フェニルを含むことができる。狭帯域モノマーは、ポリマーの骨格中に統合し（例えば、ポリマー中に重合し）、かつ／あるいはＲ１、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ３Ｂまたはこれらの組合せへの少なくとも１つの付着を介して、ポリマーの骨格、末端、もしくは側鎖に共有結合的に付着することができる。
【０１１１】
いくつかの場合において、本開示の発色団ポリマードットは、式（ＶＩＩ）の構造を有する狭帯域モノマーを含むポリマーを含むことができ、
【化７】
0006587605.tif 000010
式中、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４Ａ、Ｒ４Ｂ、Ｒ５ＡおよびＲ５Ｂのそれぞれは、これらに限定されないが、水素（Ｈ）、重水素（Ｄ）、ハロゲン、直接または分岐状のアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキレン、アルコキシ、アリール、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、エーテルおよびその誘導体、エステルおよびその誘導体、アルキルケトン、アルキルエステル、アリールエステル、アルキニル、アルキルアミン、フルオロアルキル、フルオロアリール、およびポリアルキレン（例えば、メトキシエトキシエトキシ、エトキシエトキシ、および−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＨ、ｎ＝１〜５０）、フェニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フェニル、ピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピリジル、ビピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ビピリジルトリピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換トリピリジル、フリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フリル、チエニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換チエニル、ピロリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピロリル、ピラゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピラゾリル、オキサゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換オキサゾリル、チアゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換チアゾリル、イミダゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換イミダゾリル、ピラジニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピラジニル、ベンゾオキサジゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ベンゾオキサジゾリル、ベンゾチアジゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ベンゾチアジゾリル、フルオレニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フルオレニル、トリフェニルアミニル−置換フルオレニル、ジフェニルアミニル−置換フルオレニル、アルキル−置換カルバゾリル、アルキル−置換トリフェニルアミニルおよびアルキル−置換チオフェニルからなる群から独立に選択される。例示的な場合として、アルキル置換フェニルは、２−アルキルフェニル、３−アルキルフェニル、４−アルキルフェニル、２，４−ジアルキルフェニル、３，５−ジアルキルフェニル、３，４−ジアルキルフェニルを含むことができる。アルキル−置換フルオレニルは、９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、７−アルキル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、６−アルキル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、７−トリフェニルアミニル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニルおよび７−ジフェニルアミニル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニルを含むことができる。アルキル−置換カルバゾリルは、Ｎ−アルキル−置換カルバゾリル、６−アルキル−置換カルバゾリルおよび７−アルキル−置換カルバゾリルを含むことができる。アルキル−置換トリフェニルアミニルは、４’−アルキル−置換トリフェニルアミニル、３’−アルキル−置換トリフェニルアミニル、３’，４’−ジアルキル−置換トリフェニルアミニルおよび４’，４’’−アルキル−置換トリフェニルアミニルを含むことができる。アルキル−置換チオフェニルは、２−アルキルチオフェニル、３−アルキルチオフェニル、および４−アルキルチオフェニル、Ｎ−ジアルキル−４−フェニル、Ｎ−ジフェニル−４−フェニル、およびＮ−ジアルコキシフェニル−４−フェニルを含むことができる。狭帯域モノマーは、ポリマーの骨格中に統合し（例えば、ポリマー中に重合し）、かつ／あるいはＲ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４Ａ、Ｒ４Ｂ、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂまたはこれらの組合せへの少なくとも１つの付着を介して、ポリマーの骨格、末端、もしくは側鎖に共有結合的に付着することができる。
【０１１２】
いくつかの場合において、本開示の発色団ポリマードットは、式（ＶＩＩＩ）の構造を有する狭帯域モノマーを含むポリマーを含むことができ、
【化８】
0006587605.tif 000011
式中、Ｒ１、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４Ａ、Ｒ４Ｂ、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂ、Ｒ６ＡおよびＲ６Ｂのそれぞれは、これらに限定されないが、水素（Ｈ）、重水素（Ｄ）、ハロゲン、直接または分岐状のアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキレン、アルコキシ、アリール、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、エーテルおよびその誘導体、エステルおよびその誘導体、アルキルケトン、アルキルエステル、アリールエステル、アルキニル、アルキルアミン、フルオロアルキル、フルオロアリール、およびポリアルキレン（例えば、メトキシエトキシエトキシ、エトキシエトキシ、および−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＨ、ｎ＝１〜５０）、フェニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フェニル、ピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピリジル、ビピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ビピリジルトリピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換トリピリジル、フリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フリル、チエニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換チエニル、ピロリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピロリル、ピラゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピラゾリル、オキサゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換オキサゾリル、チアゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換チアゾリル、イミダゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換イミダゾリル、ピラジニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピラジニル、ベンゾオキサジゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ベンゾオキサジゾリル、ベンゾチアジゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ベンゾチアジゾリル、フルオレニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フルオレニル、トリフェニルアミニル−置換フルオレニル、ジフェニルアミニル−置換フルオレニル、アルキル−置換カルバゾリル、アルキル−置換トリフェニルアミニルおよびアルキル−置換チオフェニルからなる群から独立に選択される。例示的な場合として、アルキル置換フェニルは、２−アルキルフェニル、３−アルキルフェニル、４−アルキルフェニル、２，４−ジアルキルフェニル、３，５−ジアルキルフェニル、３，４−ジアルキルフェニルを含むことができ、アルキル−置換フルオレニルは、９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、７−アルキル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、６−アルキル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、７−トリフェニルアミニル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニルおよび７−ジフェニルアミニル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニルを含むことができ、アルキル−置換カルバゾリルは、Ｎ−アルキル−置換カルバゾリル、６−アルキル−置換カルバゾリルおよび７−アルキル−置換カルバゾリルを含むことができ、アルキル−置換トリフェニルアミニルは、４’−アルキル−置換トリフェニルアミニル、３’−アルキル−置換トリフェニルアミニル、３’，４’−ジアルキル−置換トリフェニルアミニルおよび４’，４’’−アルキル−置換トリフェニルアミニルを含むことができ、アルキル−置換チオフェニルは、２−アルキルチオフェニル、３−アルキルチオフェニル、および４−アルキルチオフェニル、Ｎ−ジアルキル−４−フェニル、Ｎ−ジフェニル−４−フェニル、およびＮ−ジアルコキシフェニル−４−フェニルを含むことができ、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂ、Ｒ６ＡおよびＲ６Ｂのそれぞれは、これらに限定されないが、水素（Ｈ）、重水素（Ｄ）、ハロゲン、直接または分岐状のアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキレン、アルコキシ、アリール、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、エーテルおよびその誘導体、エステルおよびその誘導体、アルキルケトン、アルキルエステル、アリールエステル、アルキニル、アルキルアミン、フルオロアルキル、フルオロアリール、およびポリアルキレン（例えば、メトキシエトキシエトキシ、エトキシエトキシ、および−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＨ、ｎ＝１〜５０）、フェニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フェニル、ピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピリジル、ビピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ビピリジルトリピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換トリピリジル、フリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フリル、チエニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換チエニル、ピロリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピロリル、ピラゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピラゾリル、オキサゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換オキサゾリル、チアゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換チアゾリル、イミダゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換イミダゾリル、ピラジニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピラジニル、ベンゾオキサジゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ベンゾオキサジゾリル、ベンゾチアジゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ベンゾチアジゾリル、フルオレニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フルオレニル、トリフェニルアミニル−置換フルオレニル、ジフェニルアミニル−置換フルオレニル、アルキル−置換カルバゾリル、アルキル−置換トリフェニルアミニルおよびアルキル−置換チオフェニルからなる群から独立に選択される。例示的な場合として、アルキル置換フェニルは、２−アルキルフェニル、３−アルキルフェニル、４−アルキルフェニル、２，４−ジアルキルフェニル、３，５−ジアルキルフェニル、３，４−ジアルキルフェニルを含むことができる。アルキル−置換フルオレニルは、９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、７−アルキル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、６−アルキル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、７−トリフェニルアミニル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニルおよび７−ジフェニルアミニル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニルを含むことができる。アルキル−置換カルバゾリルは、Ｎ−アルキル−置換カルバゾリル、６−アルキル−置換カルバゾリルおよび７−アルキル−置換カルバゾリルを含むことができる。アルキル−置換トリフェニルアミニルは、４’−アルキル−置換トリフェニルアミニル、３’−アルキル−置換トリフェニルアミニル、３’，４’−ジアルキル−置換トリフェニルアミニルおよび４’，４’’−アルキル−置換トリフェニルアミニルを含むことができる。アルキル−置換チオフェニルは、２−アルキルチオフェニル、３−アルキルチオフェニル、および４−アルキルチオフェニル、Ｎ−ジアルキル−４−フェニル、Ｎ−ジフェニル−４−フェニル、およびＮ−ジアルコキシフェニル−４−フェニルを含むことができる。狭帯域モノマーは、ポリマーの骨格中に統合し（例えば、ポリマー中に共重合し）、かつ／あるいはＲ１、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４Ａ、Ｒ４Ｂ、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂ、Ｒ６Ａ、Ｒ６Ｂまたはこれらの組合せへの少なくとも１つの付着を介して、ポリマーの骨格、末端、もしくは側鎖に共有結合的に付着することができる。
【０１１３】
いくつかの場合において、本開示の発色団ポリマードットは、式（ＩＸ）の構造を有する狭帯域モノマーを含むポリマーを含むことができ、
【化９】
0006587605.tif 000012
式中、Ｘは、式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）、もしくは（ＸＩＩＩ）の任意の１つの構造を有し、またはこれらの誘導体であり、
【化１０】
0006587605.tif 000013
式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）、および（ＸＩＩＩ）中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５のそれぞれは、水素（Ｈ）、重水素（Ｄ）、ハロゲン、直接または分岐状のアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキレン、アルコキシ、アリール、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、エーテルおよびその誘導体、エステルおよびその誘導体、アルキルケトン、アルキルエステル、アリールエステル、アルキニル、アルキルアミン、フルオロアルキル、フルオロアリール、およびポリアルキレン（例えば、メトキシエトキシエトキシ、エトキシエトキシ、および−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＨ、ｎ＝１〜５０）、フェニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フェニル、ピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピリジル、ビピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ビピリジルトリピリジル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換トリピリジル、フリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フリル、チエニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換チエニル、ピロリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピロリル、ピラゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピラゾリル、オキサゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換オキサゾリル、チアゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換チアゾリル、イミダゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換イミダゾリル、ピラジニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ピラジニル、ベンゾオキサジゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ベンゾオキサジゾリル、ベンゾチアジゾリル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換ベンゾチアジゾリル、フルオレニル、アルキル−（アルコキシ−、アリール−、フルオロアルキル−、フルオロアリール−）置換フルオレニル、トリフェニルアミニル−置換フルオレニル、ジフェニルアミニル−置換フルオレニル、アルキル−置換カルバゾリル、アルキル−置換トリフェニルアミニルおよびアルキル−置換チオフェニルからなる群から独立に選択される。例示的な場合として、アルキル置換フェニルは、２−アルキルフェニル、３−アルキルフェニル、４−アルキルフェニル、２，４−ジアルキルフェニル、３，５−ジアルキルフェニル、３，４−ジアルキルフェニルを含むことができる。アルキル−置換フルオレニルは、９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、７−アルキル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、６−アルキル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニル、７−トリフェニルアミニル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニルおよび７−ジフェニルアミニル−９，９−ジアルキル−置換フルオレニルを含むことができる。アルキル−置換カルバゾリルは、Ｎ−アルキル−置換カルバゾリル、６−アルキル−置換カルバゾリルおよび７−アルキル−置換カルバゾリルを含むことができる。アルキル−置換トリフェニルアミニルは、４’−アルキル−置換トリフェニルアミニル、３’−アルキル−置換トリフェニルアミニル、３’，４’−ジアルキル−置換トリフェニルアミニルおよび４’，４’’−アルキル−置換トリフェニルアミニルを含むことができる。アルキル−置換チオフェニルは、２−アルキルチオフェニル、３−アルキルチオフェニル、および４−アルキルチオフェニル、Ｎ−ジアルキル−４−フェニル、Ｎ−ジフェニル−４−フェニル、およびＮ−ジアルコキシフェニル−４−フェニルを含むことができる。Ｘが、ナフタレンおよびその誘導体を表すとき、狭帯域モノマーは、骨格中に統合され（例えば、ポリマー中に重合され）、かつ／あるいはＲ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２またはこれらの組合せへの少なくとも１つの付着を介してポリマーの骨格、末端、または側鎖に共有結合的に付着することができる。Ｘが、アントラセンおよびその誘導体を表すとき、狭帯域モノマーは、ポリマーの骨格中に統合することができ、かつ／あるいはＲ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５またはこれらの組合せへの少なくとも１つの付着を介して、ポリマーの骨格、末端、または側鎖に共有結合的に付着することができる。
【０１１４】
本明細書に記載されている例、ならびに例えば、これらのそれぞれが参照により、その全体が、ならびに特に、ここに記載されているように特定の発色団ポリマードット組成物およびこれらを作製するそれぞれの方法に関して本明細書に組み込まれているＷＯ２０１１／０５７２９５およびＷＯ２０１３／１０１９０２において開示されている他のものなど、多種多様のポリマードットを使用することができる。例えば、ＷＯ２０１１／０５７２９５において提供するように、ポリマードット中のポリマーは、物理的にブレンドし、または化学的に結合（もしくは化学的に架橋）させることができる。例えば、物理的にブレンドされたポリマードットは、ポリマードット中でブレンドされ、非共有結合性相互作用によって一緒に保持されるポリマーを含むことができる。化学的に結合されたポリマードットは、ポリマードット中で互いに共有結合的に付着しているポリマーを含むことができる。化学的に結合されたポリマーは、ポリマードットの形成の前に互いに共有結合的に付着することができる。
【０１１５】
例えば、ポリマードットは、直接的に官能化され、かつ／または低密度の官能化を有するものを含むことができる。
【０１１６】
共役ポリマードットおよび官能化されたポリマードット
本開示はまた、ポリマードットおよびその組成物を使用した方法、組成物およびキットを提供する。いくつかの場合において、ポリマーのバリアントは、本明細書において官能化された発色団ポリマードットとまた称される共役ポリマーである。
【０１１７】
電子、正孔、または電子エネルギーは、共役ポリマーの共役構造に沿って伝導することができる。いくつかの場合において、ポリマー骨格の大きな部分は共役することができる。いくつかの場合において、全ポリマー骨格は共役することができる。いくつかの場合において、ポリマーは、これらの側鎖または末端において共役構造を含むことができる。いくつかの場合において、共役ポリマーは伝導特性を有することができ、例えば、ポリマーは、電気を伝導することができる。いくつかの場合において、共役ポリマーは、半導体特性を有することができ、例えば、ポリマーは直接のバンドギャップを示すことができ、これはバンド端における効率的な吸収または発光をもたらす。いくつかの場合において、発色団ポリマードットは、ナノ粒子構造を形成する少なくとも１種の縮合した（または崩壊した）共役ポリマー（例えば、半導体ポリマー）を含むナノ粒子として記載することができる。
【０１１８】
ポリマー、またはポリマーを含むドットは、治療、診断、イメージング、または研究のために有用な特性を有する別の部分に共役することができる。例えば、ポリマーまたはドットは、リンカーを介してさらなる部分に共役することができる。リンカーは、親水性または疎水性でよい。リンカーの非限定的例には、化学結合、小分子、例えば、アミノ酸、官能基、例えば、エステル、およびアミド、カルバメート、エーテル、アルキレン基、アルケニレン基、およびアルキニレン基、もしくはアリーレン基、またはポリマー、例えば、ポリエーテル、ポリエステル、ポリアミド、ポリカルバメート、ポリアリール、ポリスチレン、もしくはポリオレフィンが含まれる。いくつかの場合において、リンカーは、ポリエチレングリコールまたはポリスチレンポリエチレングリコールである。
【０１１９】
いくつかの場合において、ポリマーは、親水性部分、例えば、親水性官能基に共役することができる。親水性官能基の非限定的例には、カルボキシル基、ヒドロキシル基、アミノ基、アミド基、スルフヒドリル基、硫酸基、リン酸基、および任意の水素結合ドナーまたはアクセプターが含まれる。
【０１２０】
ポリマーは、反応性部分、例えば、酸無水物、酸ハロゲン化物、求核試薬、求電子試薬、電子ドナー、電子アクセプター、オレフィン、アルキン、酸性基、塩基性基、酸化基（ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ  ｇｒｏｕｐ）、還元基（ｒｅｄｕｃｉｎｇ  ｇｒｏｕｐ）、電子移動剤、または光化学的反応種に共役することができる。酸無水物の非限定的例には、無水マレイン酸および無水コハク酸が含まれ、これらのいずれも置換されており、または置換されていない。
【０１２１】
様々な場合において、本開示は、特に、発色団ポリマードットの表面を修飾するための手段として、「官能化された」ポリマードットの使用を提供する。本明細書において使用する場合、「官能化された」という用語は、発色団ポリマードットとの関連で、１個または複数の官能基に連結（例えば、共有結合）している発色団ポリマードットを指す。本明細書において使用する場合、「官能基」という用語は、例えば、任意の安定的な物理的または化学的会合によって、発色団ポリマーに付着し、それによって、発色団ポリマードットの表面を変化させ、例えば、表面を共役（例えば、生体共役反応）のために利用可能なものとすることができる任意の化学単位を指す。官能基は、発色団ポリマーの骨格、側鎖、または終端単位の１つに共有結合的に連結することができる。官能基は、これらに限定されないが、下記のいずれかでよい。アルデヒド、アルケン、アルキル、アルキン、歪んだアルキン、アミノ、アジド、カルボニル、カルボキシル、シアノ、シクロオクチン、ジエノ、エステル、スクシンイミジルエステル、ハロアルキル、ヒドロキシル、イミド、ケトン、マレイミド、メルカプト、ホスフェート、ホスフィン、スルフェート、スルホネート、置換されたその誘導体、またはこれらの組合せ。一般に、生体共役反応に適した任意の他の官能基を使用し得る。このような官能基は、当業者によって、例えば、全ての目的のために参照により本明細書中にその全体が組み込まれているＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９６年またはその後のバージョン）において見出すことができる。
【０１２２】
いくつかの場合において、本開示の官能基は、アルデヒド、アルケン、アルキル、アルキン、歪んだアルキン、アミノ、アジド、カルボニル、カルボキシル、シアノ、シクロオクチン、ジエノ、エステル、スクシンイミジルエステル、ハロアルキル、ヒドロキシル、イミド、ケトン、マレイミド、メルカプト、ホスフェート、ホスフィン、スルフェート、スルホネート、置換されたその誘導体、またはこれらの組合せから選択される。
【０１２３】
いくつかの場合において、官能化されている発色団ポリマードットの使用のための方法、組成物およびキットを提供する。本開示によると、発色団ポリマードットは、任意の様式で官能化することができ、これによって発色団ポリマードットは、さらなる修飾、例えば、生体共役反応のために、またはタンパク質もしくはペプチドの検出におけるそれに続く使用のために適したものとなる。例えば、官能基は、発色団ポリマーの骨格、側鎖、または末端単位の１つに連結（例えば、共有結合）することができる。いくつかの場合において、一価のポリマードットは、例えば、単一の直鎖状ポリマー分子の２個の末端単位の１つにおいて１個のみの官能基を含む、単一のポリマー分子を含むことができる。二価のポリマードットは、例えば、単一の直鎖状ポリマー分子の２個の末端単位のそれぞれにおいて２個の官能基を含む、単一のポリマー分子を含むことができる。三価のポリマードットは、３個の官能基、例えば、３アームの分岐ポリマーの３個の末端単位のみへの官能基の付着を含む単一のポリマー分子を含むことができる。同様に、分岐ポリマーは、例えば、４アーム、５アーム、６アームの末端単位において付着した官能基を有する他の多価のポリマードットの調製において使用することができ、より大きな数の分岐を有する分岐ポリマーを使用することができる。
【０１２４】
いくつかの場合において、末端単位において少なくとも１個の官能基を有する単一のポリマー分子を含むポリマードットを使用することから利益が生じ得る。例えば、発色団ポリマーの末端単位への１個のみの官能基の付着は、ポリマー合成において良好に制御することができる。例えば、官能基を含む化学単位は、ポリマー合成において重合開始剤および成長触媒としての役割を果たすことができ、このようにして、各ポリマー分子は、末端において１個のみの官能基を含む。直鎖状発色団ポリマーの２個の末端単位のみへの官能基の付着はまた、ポリマー合成において良好に制御することができる。例えば、官能基を含む化学単位は、ポリマー合成におけるポリマー成長を終了させるキャッピング剤として使用することができ、それによって２個の末端単位において２個のみの官能基を含む各直鎖状ポリマー分子がもたらされる。同様に、多価のポリマードットについての官能基の付着は、ポリマー合成において良好に制御することができ、例えば、官能基は、３アームの分岐ポリマーの３個の末端単位にのみ加えることができる。
【０１２５】
様々な場合において、ポリマードットは、ポリマードットに付着した官能基を含む。特定の場合において、官能基は、疎水性官能基、親水性官能基、またはこれらの組合せから選択される。いくつかの場合において、官能基は、生体共役反応に適している。
【０１２６】
特定の場合において、官能基は、アルデヒド、アルケン、アルキル、アルキン、歪んだアルキン、アミノ、アジド、カルボニル、カルボキシル、シアノ、シクロオクチン、ジエノ、エステル、スクシンイミジルエステル、ハロアルキル、ヒドロキシル、イミド、ケトン、マレイミド、メルカプト、ホスフェート、ホスフィン、スルフェート、スルホネート、またはこれらの組合せから選択される。
【０１２７】
様々な場合において、生体分子は、タンパク質である。さらなる場合において、生体分子は、抗体またはアビジンである。いくつかの場合において、ハライド（例えば、フッ素）は、発色団ポリマードット構造に付着しており、または発色団ポリマードット構造中に組み込まれている。発色団ポリマードットの粒径は、Ｑｄｏｔの粒径に匹敵し、例えば、Ｑｄｏｔのサイズの８０％超であり得る。発色団ポリマードット中の半導体ポリマーは、粒子毎容量の少なくとも５０％、好ましくは８０％超である総容量で存在し得る。発色団ポリマードット中の半導体ポリマーは、粒子毎重量の少なくとも５０％、好ましくは８０％超である重量濃度で存在し得る。発色団ポリマードットは、疎水性ポリマー内部を有することができる。いくつかの場合において、発色団ポリマードットは、質量によって５０％未満のハライド（例えば、フッ素）含量を有する。いくつかの場合において、重量濃度は、４０％超、５０％超、６０％超、７０％超、８０％超、９０％超または９９％超である。いくつかの場合において、重量濃度は、４０％〜５０％、４５％〜５５％、５０％〜６０％、５５％〜６５％、６０％〜７０％、６５％〜７５％、７０％〜８０％、７５％〜８５％、８０％〜９０％、８５％〜９５％または９０％〜１００％の範囲内であり得る。
【０１２８】
発色団ポリマードットの粒径は、Ｑｄｏｔの粒径に匹敵し、例えば、Ｑｄｏｔのサイズの約８０％超であり得る。発色団ポリマードット中の半導体ポリマーは、粒子毎容量の少なくとも５０％、好ましくは約８０％超である総容量で存在し得る。発色団ポリマードット中の半導体ポリマーは、粒子毎重量の少なくとも５０％、好ましくは約８０％超である重量濃度で存在し得る。発色団ポリマードットは、疎水性ポリマー内部を有することができる。いくつかの場合において、発色団ポリマードットは、質量によって約５０％未満のハライド（例えば、フッ素）含量を有する。いくつかの場合において、重量濃度は、約４０％超、５０％超、６０％超、７０％超、８０％超、９０％超または９９％超である。いくつかの場合において、重量濃度は、約４０％〜約５０％、約４５％〜約５５％、約５０％〜約６０％、約５５％〜約６５％、約６０％〜約７０％、約６５％〜約７５％、約７０％〜約８０％、約７５％〜約８５％、約８０％〜約９０％、約８５％〜約９５％または約９０％〜約１００％の範囲内であり得る。
ポリマードットの生体共役体
【０１２９】
様々な場合において、本開示のポリマードットは生体共役反応して、タンパク質またはペプチドの検出を促進することができる。いくつかの場合において、生体分子に共役している発色団ポリマードットの使用のための、例えば、生体分子が、直接的にまたは官能基によって間接的に発色団ポリマードットに付着している発色団ポリマードットの官能化のための、方法、組成物およびキットを提供する。
【０１３０】
「生体分子」という用語は、合成または天然のタンパク質、糖タンパク質、ペプチド、アミノ酸、代謝物、薬物、毒素、核酸（ｎｕｃｌｅａｒ  ａｃｉｄ）、ヌクレオチド、炭水化物、糖、脂質、脂肪酸などを記述するために使用される。生体分子に共役している発色団ポリマードットは、本明細書において「生体共役体」と称されることがある。生体共役体はまた、生物学的粒子、例えば、ウイルス、細菌、細胞、および天然または合成小胞、例えば、リポソームと会合している官能化された発色団ポリマードットを含むことができる。官能化された発色団ポリマードットは、１個もしくは２個の終端官能基、または低密度の側鎖官能基を有する発色団ポリマーから形成される１個または複数の官能基を含むことができる。
【０１３１】
特定の場合において、生体共役体は、一価の発色団ポリマードットおよび生体分子を含み、生体分子は、直接的にまたは官能基によって間接的にポリマードットに付着している。生体共役体はまた、生物学的粒子、例えば、ウイルス、細菌、細胞、および天然または合成小胞、例えば、リポソームと会合している一価の発色団ポリマードットを含むことができる。
【０１３２】
いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードット組成物は、官能化された発色団ポリマードットを含むことができる。官能化された発色団ポリマードットは、共役（例えば、生体共役反応）のために利用可能な少なくとも１個の官能基を有することができる。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードット組成物は、発色団ポリマードット／生体分子共役体を含むことができ、生体分子は、タンパク質、抗体、核酸分子、脂質、ペプチド、アプタマー、および／または薬物を含む。生体分子は、任意の安定的な物理的または化学的会合によって発色団ポリマードットに付着することができる。
【０１３３】
本開示のいくつかの場合において、生体分子は、一価の発色団ポリマードットの官能基に共有結合によって付着している。例えば、ポリマードットの官能基がカルボキシル基である場合、タンパク質生体分子は、カルボキシル基とタンパク質分子のアミン基とを架橋することによってポリマードットに直接付着することができる。
【０１３４】
本開示の様々な場合において、架橋剤を利用して、発色団ポリマードットの生体共役反応を促進することができる。本明細書において使用する場合、「架橋剤」という用語は、分子を一緒に共有結合させるために、同様または同様でない分子上で分子の基の間に化学結合を形成することができる化合物または部分を記述するために使用される。一般の架橋剤の例は、当技術分野において公知である。例えば、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９６年またはその後のバージョン）を参照されたい。一価の発色団ポリマードットへの生体分子の間接的な付着は、「リンカー」分子、例えば、アビジン、ストレプトアビジン、ｎｅｕｔｒａｖｉｄｉｎ、ビオチンまたは同様の分子の使用によって起こることができる。
【０１３５】
いくつかの場合において、ポリマーは、生体分子、例えば、ペプチド、タンパク質、アプタマー、抗体、酵素、炭水化物、核酸、デオキシリボ核酸、リボ核酸、または脂質に共役することができる。いくつかの場合において、発色団ポリマードットは、小分子、薬物、バイオミメティックス、医薬化合物、同位体、放射性同位体、または化学物質に共役することができる。いくつかの場合において、ポリマーまたはドットは、ストレプトアビジンに共役している。いくつかの場合において、ポリマーまたはドットは、ビオチンに共役しており、またはストレプトアビジンを介してビオチンに間接的に連結している。いくつかの場合において、ポリマーまたはドットは、タグ、例えば、ヘマグルチニン（ｈｅｍａｇｇｌｕｔａｎｉｎ）（ＨＡ）、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、ヒスチジン（ｈｉｓｔａｄｉｎｅ）、複数のヒスチジン、６つのヒスチジン（６×Ｈｉｓ）またはｃ−ｍｙｃに共役している。
【０１３６】
いくつかの場合において、標的に特異的に結合する生体分子に共役しているポリマードットを使用した、標的分子（例えば、タンパク質）の分析のための方法、組成物およびキットを提供する。
【０１３７】
いくつかの場合において、蛍光発色団ポリマードットは、１つまたは複数の分子に共役しており、これによって機能、またはこれらに限定されないが、標的分子についての結合親和性を含めた他の利点が実現される。
【０１３８】
いくつかの場合において、標的分子は、対象とするタンパク質であり、発色団ポリマードットに共役している生体分子は、標的タンパク質に特異的に結合する一次抗体である。
【０１３９】
他の場合において、標的分子は、対象とするタンパク質についての一次抗体に結合した前記タンパク質であり、発色団ポリマードットに共役している生体分子は、一次抗体に特異的に結合する二次抗体である。
【０１４０】
本明細書において使用する場合、「ビオチン」という用語は、アビジン結合において有効である種々のビオチン誘導体および類似体の任意の１つを指す。適切なビオチン部分は、ビオチン化ペプチドフラグメントがアビジンおよび関連するアビジンタンパク質によって単離されることを可能とするこれらの部分を含む。代表的なビオチン部分には、ビオチン誘導体、例えば、イミノビオチン、ビオシチン、およびカプロイルアミドビオチン、およびビオチン類似体、例えば、デスチオビオチンおよびビオチンスルホンが含まれる。
【０１４１】
本明細書において使用する場合、「アビジン」という用語は、天然のタンパク質、ならびに組換えおよび遺伝子改変タンパク質の両方を含めたビオチンを結合する免疫グロブリン以外の、任意のビオチン結合タンパク質を指す。この用語は、「卵白」または「トリ」アビジンおよび「ストレプトアビジン」として公知である、２種の一般のビオチン結合タンパク質を含む。単純にアビジンと一般に称される卵白またはトリアビジンは、卵白の構成物であり、ビオチンと非共有結合的複合体を形成するタンパク質である。ストレプトアビジンは、ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ａｖｉｄｉｎｉｉから単離され、またビオチンと非共有結合的複合体を形成するアビジンタンパク質である。ビオチン結合タンパク質の他の細菌源はまた公知である。卵白アビジンおよびストレプトアビジンの両方は四量体タンパク質であり、ここではビオチン結合部位は、アビジン分子の反対面上にて対で配列されている。この用語はまた、スクシニルアビジン、フェリチンアビジン、酵素アビジン、および架橋されたアビジンを含めたアビジン誘導体を指す。
【０１４２】
いくつかの場合において、蛍光発色団ポリマードットは、発色団ポリマードットの他の特性、例えば、これらのサイズ、蛍光、疎水性、非特異的結合または吸着特性などを変化させる１つまたは複数の分子に共役し得る。
【０１４３】
いくつかの場合において、発色団ポリマードットへの生体分子の共役は、これらに限定されないが、発色団ポリマードットへのカルボキシル基の付着を含めた官能基の付着を含むことができる。いくつかの場合において、カルボキシル基は、カルボジイミド、例えば、１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）の存在下でＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）に反応し、特定の生体分子上に存在する第一級アミン基と架橋するためのカルボン酸基のアミン再活性エステルを生成することができる。
【０１４４】
いくつかの場合において、カルボキシル化された発色団ポリマードットは、例えば、０．１％ＰＥＧ（ＭＷ３３５０）を含有するＨＥＰＥＳ緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ＝７．４）溶液中で発色団ポリマードットおよび生体分子を混合することによって、生体分子、例えば、タンパク質に共役している。発色団ポリマードット上のカルボキシル基と生体分子のアミン基との間のペプチド結合の形成は、ＥＤＣによって触媒することができる。しかし、発色団ポリマードットの内因的に疎水性の性質によって、生体分子は、粒子表面上に非特異的に吸着する傾向がある。いくつかの場合において、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００および／またはウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を導入し、発色団ポリマードットの表面上への生体分子の非特異的吸着を低減させる。
【０１４５】
いくつかの場合において、ポリマードットは、複数の標識の１つまたは複数に共役し得る。例えば、ポリマードットは、標識剤、例えば、蛍光標識（例えば、蛍光色素）に共役し得る。特定の場合において、蛍光標識は、特定の用途のために望ましい発光特徴を有することができる。例えば、蛍光標識は、５００ｎｍ〜１１００ｎｍの範囲の間、６００ｎｍ〜１０００ｎｍの範囲の間、６００〜８００ｎｍの範囲の間、６５０ｎｍ〜８５０ｎｍの範囲の間、または７００ｎｍ〜８００ｎｍの範囲の間の最大発光波長を有する蛍光色素でよい。別の例として、蛍光標識は、約５００ｎｍ〜約１１００ｎｍの範囲の間、約６００ｎｍ〜約１０００ｎｍの範囲の間、約６００ｎｍ〜約８００ｎｍの範囲の間、約６５０ｎｍ〜約８５０ｎｍの範囲の間、または約７００ｎｍ〜約８００ｎｍの範囲の間の最大発光波長を有する蛍光色素でよい。当業者は、検出可能な標識として使用することができ、上記の発光特徴を有する、様々な色素を認識している。
【０１４６】
本開示において共役分子として使用することができる蛍光色素の非限定的例には、ローダミン、ロドール（ｒｈｏｄｏｌ）、フルオレセイン、チオフルオレセイン、アミノフルオレセイン、カルボキシフルオレセイン、クロロフルオレセイン、メチルフルオレセイン、スルホフルオレセイン、アミノロドール（ａｍｉｎｏｒｈｏｄｏｌ）、カルボキシロドール（ｃａｒｂｏｘｙｒｈｏｄｏｌ）、クロロロドール（ｃｈｌｏｒｏｒｈｏｄｏｌ）、メチルロドール（ｍｅｔｈｙｌｒｈｏｄｏｌ）、スルホロドール（ｓｕｌｆｏｒｈｏｄｏｌ）；アミノローダミン、カルボキシローダミン、クロロローダミン、メチルローダミン、スルホローダミン、およびチオローダミン、シアニン、インドカルボシアニン、オキサカルボシアニン、チアカルボシアニン、メロシアニン、シアニン色素（例えば、シアニン２、シアニン３、シアニン３．５、シアニン５、シアニン５．５、シアニン７）、オキサジアゾール誘導体、ピリジルオキサゾール、ニトロベンゾオキサジアゾール、ベンゾオキサジアゾール、ピレン誘導体、ｃａｓｃａｄｅ  ｂｌｕｅ、オキサジン誘導体、ナイルレッド、ナイルブルー、クレシルバイオレット、オキサジン１７０、アクリジン誘導体、プロフラビン（ｐｒｏｆｌａｖｉｎ）、アクリジンオレンジ、アクリジンイエロー、アリールメチン誘導体、キサンテン色素、スルホン化キサンテン色素、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（例えば、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５９４、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６３３、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ７００）、オーラミン、クリスタルバイオレット、マラカイトグリーン、テトラピロール誘導体、ポルフィリン、フタロシアニン（ｐｈｔａｌｏｃｙａｎｉｎｅ）、およびビリルビンが含まれる。いくつかの場合において、色素は、例えば、Ｃｙ５．５、ＩＲｄｙｅ８００、ＤｙＬｉｇｈｔ７５０またはインドシアニングリーン（ＩＣＧ）を含めて近赤外色素でよい。いくつかの場合において、近赤外色素は、シアニン色素（例えば、シアニン２、シアニン３、シアニン３．５、シアニン５、シアニン５．５、シアニン７）を含むことができる。特定の場合において、検出可能な標識は、キサンテン色素またはスルホン化キサンテン色素、例えば、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（例えば、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５９４、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６３３、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ７００）を含むことができる。
【０１４７】
いくつかの場合において、ポリマードットは、ペプチドに共役してもよく、しばしば、ペプチドは、検出可能な標識に共役してもよい。検出可能な標識は、蛍光標識（例えば、蛍光色素）でよい。特定の場合において、蛍光標識は、特定の用途のために望ましい発光特徴を有することができる。例えば、蛍光標識は、５００ｎｍ〜１１００ｎｍの範囲の間、６００ｎｍ〜１０００ｎｍの範囲の間、６００〜８００ｎｍの範囲の間、６５０ｎｍ〜８５０ｎｍの範囲の間、または７００ｎｍ〜８００ｎｍの範囲の間の最大発光波長を有する蛍光色素でよい。別の例として、蛍光標識は、約５００ｎｍ〜約１１００ｎｍの範囲の間、約６００ｎｍ〜約１０００ｎｍの範囲の間、約６００〜約８００ｎｍの範囲の間、約６５０ｎｍ〜約８５０ｎｍの範囲の間、または約７００ｎｍ〜約８００ｎｍの範囲の間の最大発光波長を有する蛍光色素でよい。当業者は、検出可能な標識として使用することができ、上記の発光特徴を有する、様々な色素を認識している。
【０１４８】
本開示において共役分子として使用することができる蛍光色素の非限定的例には、ローダミン、ロドール、フルオレセイン、チオフルオレセイン、アミノフルオレセイン、カルボキシフルオレセイン、クロロフルオレセイン、メチルフルオレセイン、スルホフルオレセイン、アミノロドール、カルボキシロドール、クロロロドール、メチルロドール、スルホロドール；アミノローダミン、カルボキシローダミン、クロロローダミン、メチルローダミン、スルホローダミン、およびチオローダミン、シアニン、インドカルボシアニン、オキサカルボシアニン、チアカルボシアニン、メロシアニン、シアニン色素（例えば、シアニン２、シアニン３、シアニン３．５、シアニン５、シアニン５．５、シアニン７）、オキサジアゾール誘導体、ピリジルオキサゾール、ニトロベンゾオキサジアゾール、ベンゾオキサジアゾール、ピレン誘導体、ｃａｓｃａｄｅ  ｂｌｕｅ、オキサジン誘導体、ナイルレッド、ナイルブルー、クレシルバイオレット、オキサジン１７０、アクリジン誘導体、プロフラビン、アクリジンオレンジ、アクリジンイエロー、アリールメチン誘導体、キサンテン色素、スルホン化キサンテン色素、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（例えば、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５９４、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６３３、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ７００）、オーラミン、クリスタルバイオレット、マラカイトグリーン、テトラピロール誘導体、ポルフィリン、フタロシアニン、およびビリルビンが含まれる。いくつかの場合において、色素は、例えば、Ｃｙ５．５、ＩＲｄｙｅ８００、ＤｙＬｉｇｈｔ７５０またはインドシアニングリーン（ＩＣＧ）を含めて近赤外色素でよい。いくつかの場合において、近赤外色素は、シアニン色素（例えば、シアニン２、シアニン３、シアニン３．５、シアニン５、シアニン５．５、シアニン７）を含むことができる。特定の場合において、検出可能な標識は、キサンテン色素またはスルホン化キサンテン色素、例えば、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（例えば、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５９４、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６３３、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ７００）を含むことができる。色素に対する抗体を見出すことができる場合、共役している色素は、トラッキング、検出または視覚化マーカーとして、および回収ハンドルとしての両方で使用することができる。
【０１４９】
本開示のライブラリー中のペプチドはまた、ビオチンに共役することができる。半減期の延長に加えて、ビオチンはまた、組織または他の場所からのペプチドの回収のための親和性ハンドルとして作用することができる。１つの場合において、ペプチドは、例えば、ＰＥＧリンカーを有するビオチニダーゼ耐性ビオチン（例えば、ＮＨＳ−ｄＰＥＧ４−ビオチニダーゼ耐性ビオチン）に共役することができる。いくつかの場合において、検出可能な標識および親和性ハンドルの両方として作用することができる蛍光ビオチン共役体を使用することができる。市販の蛍光ビオチン共役体の非限定的例には、Ａｔｔｏ４２５−ビオチン、Ａｔｔｏ４８８−ビオチン、Ａｔｔｏ５２０−ビオチン、Ａｔｔｏ−５５０ビオチン、Ａｔｔｏ５６５−ビオチン、Ａｔｔｏ５９０−ビオチン、Ａｔｔｏ６１０−ビオチン、Ａｔｔｏ６２０−ビオチン、Ａｔｔｏ６５５−ビオチン、Ａｔｔｏ６８０−ビオチン、Ａｔｔｏ７００−ビオチン、Ａｔｔｏ７２５−ビオチン、Ａｔｔｏ７４０−ビオチン、フルオレセインビオチン、ビオチン−４−フルオレセイン、ビオチン−（５−フルオレセイン）共役体、およびビオチン−Ｂ−フィコエリトリン、ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ４８８ビオシチン、ａｌｅｘａ  ｆｌｏｕｒ５４６、ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ５４９、ルシファーイエローカダベリンビオチン−Ｘ、ルシファーイエロービオシチン、Ｏｒｅｇｏｎ  ｇｒｅｅｎ４８８ビオシチン、ビオチン−ローダミンおよびテトラメチルローダミンビオシチンが含まれる。いくつかの他の例において、共役体は、化学ルミネセンス化合物、コロイド金属、ルミネセンス化合物、酵素、放射性同位体、および常磁性標識を含むことができる。
【０１５０】
本明細書に記載されている例に加えて、いくつかの場合において、例えば、ＷＯ２０１１／０５７２９５およびＷＯ２０１３／１０１９０２に開示されているものを含めて、発色団ポリマードットへの生体分子の共役のための他の戦略および方法を使用することができる。発色団ポリマードットへの生体分子の共役のための他の戦略および方法は、当業者によって、例えば、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９６年またはその後のバージョン）において見出すことができる。
【０１５１】
凍結乾燥剤
「凍結乾燥保護剤（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）」という用語は、本明細書において使用する場合、凍結乾燥した調製物中に存在する物質を指す。典型的には、これは凍結乾燥プロセスの前に存在し、このように得られた凍結乾燥した調製物において持続する。典型的には、凍結乾燥保護剤を、粒子の形成の後に加える。例えば、粒子の形成および凍結乾燥の間に濃縮ステップが存在する場合、凍結乾燥保護剤を、濃縮ステップの前または後に加えることができる。これを使用して、凍結乾燥の間にナノ粒子、リポソーム、および／またはミセルを保護し、例えば、凝集、粒子崩壊および／または他のタイプの損傷を低減または防止することができる。一態様において、凍結乾燥保護剤は、凍結防止剤（ｃｒｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）である。
【０１５２】
一態様において、凍結乾燥保護剤は、炭水化物である。「炭水化物」という用語は、本明細書において使用する場合、単糖、二糖、オリゴ糖および多糖を指し、包含する。
【０１５３】
一態様において、凍結乾燥保護剤は、単糖である。「単糖」という用語は、本明細書において使用する場合、より単純な炭水化物単位に加水分解することができない単一の炭水化物単位（例えば、単糖）を指す。例示的な単糖凍結乾燥保護剤には、グルコース、フルクトース、ガラクトース、キシロース、リボースなどが含まれる。
【０１５４】
一態様において、凍結乾燥保護剤は、二糖である。「二糖」という用語は、本明細書において使用する場合、グリコシド連結によって、例えば、１〜４つの連結または１〜６つの連結によって一緒に結合している、２の単糖単位によって形成される化合物または化学部分を指す。二糖は、２つの単糖に加水分解し得る。例示的な二糖凍結乾燥保護剤には、スクロース、トレハロース、ラクトース、マルトースなどが含まれる。
【０１５５】
一態様において、凍結乾燥保護剤は、オリゴ糖である。「オリゴ糖」という用語は、本明細書において使用する場合、グリコシド連結によって、例えば、１〜４つの連結または１〜６つの連結によって一緒に結合している、３〜約１５、好ましくは３〜約１０の単糖単位によって形成され、直鎖状、分岐状または環状の構造を形成する化合物または化学部分を指す。例示的なオリゴ糖凍結乾燥保護剤には、シクロデキストリン、ラフィノース、メレジトース、マルトトリオース、スタキオースアカルボースなどが含まれる。オリゴ糖は、酸化または還元することができる。
【０１５６】
一態様において、凍結乾燥保護剤は、環状オリゴ糖である。「環状オリゴ糖」という用語は、本明細書において使用する場合、グリコシド連結によって、例えば、１〜４つの連結または１〜６つの連結によって一緒に結合している、３〜約１５、好ましくは６、７、８、９、または１０の単糖単位によって形成され、環状構造を形成する化合物または化学部分を指す。例示的な環状オリゴ糖凍結乾燥保護剤には、別個の化合物である環状オリゴ糖、例えば、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、またはγ−シクロデキストリンが含まれる。
【０１５７】
他の例示的な環状オリゴ糖凍結乾燥保護剤は、より大きな分子構造、例えば、環状オリゴ糖部分を含有するポリマー中にシクロデキストリン部分を含む化合物を含む。環状オリゴ糖は、酸化または還元することができ、例えば、ジカルボニル形態に酸化することができる。「シクロデキストリン部分」という用語は、本明細書において使用する場合、より大きな分子構造、例えば、ポリマー中に組み込まれ、またはより大きな分子構造、例えば、ポリマーの一部であるシクロデキストリン（例えば、α−、β−、もしくはγ−シクロデキストリン）ラジカルを指す。シクロデキストリン部分は、１つまたは複数の他の部分に直接的に、または任意選択のリンカーを介して結合することができる。シクロデキストリン部分は酸化または還元することができ、例えば、ジカルボニル形態に酸化することができる。
【０１５８】
炭水化物凍結乾燥保護剤、例えば、環状オリゴ糖凍結乾燥保護剤は、誘導体化された炭水化物でよい。例えば、一態様において、凍結乾燥保護剤は、誘導体化された環状オリゴ糖、例えば、誘導体化されたシクロデキストリン、例えば、２ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、例えば、その内容が本明細書においてこの参照によって組み込まれている米国特許第６，４０７，０７９号において開示されている部分的にエーテル化されたシクロデキストリン（例えば、部分的にエーテル化されたβ−シクロデキストリン）である。誘導体化されたシクロデキストランの別の例は、β−シクロデキストランスルホブチルエーテルナトリウムである。
【０１５９】
例示的な凍結乾燥保護剤は、多糖である。「多糖」という用語は、本明細書において使用する場合、グリコシド連結によって、例えば、１〜４つの連結または１〜６つの連結によって一緒に結合している、少なくとも１６の単糖単位によって形成され、直鎖状、分岐状または環状の構造を形成する化合物または化学部分を指し、これらの骨格構造の一部として多糖を含むポリマーを含む。骨格において、多糖は、直鎖状または環状でよい。例示的な多糖凍結乾燥保護剤には、グリコーゲン、アミラーゼ、セルロース、デキストラン、マルトデキストリンなどが含まれる。
【０１６０】
「誘導体化された炭水化物」という用語は、対象の誘導体化されていない炭水化物と少なくとも１個の原子が異なる実体を指す。例えば、誘導体化されていない炭水化物上に存在する−ＯＨの代わりに、誘導体化された炭水化物は、−ＯＸを有することができ、式中、Ｘは、Ｈ以外の元素である。誘導体は、化学的官能化および／もしくは置換によって、または新規合成によって得てもよい。「誘導体」という用語は、プロセスに基づく制限がないことを暗示する。
【０１６１】
本明細書に記載されている粒子は、一般に冷凍乾燥として公知の凍結乾燥による乾燥貯蔵のために調製し得る。凍結乾燥は、水を溶液から抽出し、粒状固体または粉末を形成するプロセスである。溶液を冷凍し、それに続いて真空下での昇華によって水または水分を抽出することによってプロセスを行う。凍結乾燥の利点は、物質の品質の維持、および治療化合物の分解の最小化を含む。凍結乾燥は再構成され、注射によって患者に投与される医薬薬物製品、例えば、非経口薬物製品を開発するために特に有用であり得る。代わりに、凍結乾燥は、経口薬物製品、特に、高速融解物またはフラッシュ溶解配合物を開発するために有用である。
【０１６２】
凍結乾燥は、凍結乾燥保護剤、例えば、本明細書に記載されている凍結乾燥保護剤の存在下で起こり得る。いくつかの態様において、凍結乾燥保護剤は、炭水化物（例えば、本明細書に記載されている炭水化物、例えば、スクロース、シクロデキストリン、もしくはシクロデキストリンの誘導体（例えば、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン））、塩、ＰＥＧ、ＰＶＰまたはクラウンエーテルである。凝集物の形成は、粒子の表面の脱水によって凍結乾燥の間に起こることができる。この脱水は、凍結乾燥の前に、懸濁液中の凍結乾燥保護剤、例えば、二糖を使用することによって回避することができる。適切な二糖には、スクロース、ラクツロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、またはセロビオース、および／またはこれらの混合物が含まれる。他の意図する二糖は、コウジビオース、ニゲロース、イソマルトース、β，β−トレハロース、α，β−トレハロース、ソホロース、ラミナリビオース、ゲンチオビオース、ツラノース、マルツロース、パラチノーゼ、ゲンチオビオース（ｇｅｎｔｉｏｂｉｕｌｏｓｅ）、マンノビオース（ｍａｎｎｏｂｉａｓｅ）、メリビオース、メリビウロース、ルチノース、ルチヌロース（ｒｕｔｉｎｕｌｏｓｅ）、およびキシロビオースを含む。再構成は、開始懸濁液と比較したときに、等しいＤＬＳサイズ分布を示す。しかし、レーザー回折によって、いくつかの再構成された溶液中でサイズが＞１０μｍの粒子を検出することができる。さらに、ＳＰＯＳはまた、ＦＤＡガイドラインの濃度超の濃度で＞１０μｍのサイズの粒子を検出し得る（＞１０μｍの粒子について１０４〜１０５個の粒子／ｍＬ）。環状オリゴ糖を含む凍結乾燥保護剤は、これらの凍結乾燥および／または貯蔵の間に、親水性ポリマー、例えば、ＰＥＧを含む粒子の分子間凝集の速度を阻害し、したがって、延長された保存寿命を実現し得る。理論に束縛されるものではないが、環状オリゴ糖が粒子凝集を防止する機序は、環状オリゴ糖が凍結乾燥の間に粒子中に存在する化合物の結晶化を低減または防止することのためであり得る。これは、環状オリゴ糖および化合物の間の包接錯体の形成によって起こり得る。シクロデキストリンの内側空洞は親油性であり、一方、シクロデキストリンの外側は親水性である。これらの特性は、本明細書に記載されている粒子の他の成分との包接錯体の形成を可能とし得る。
【０１６３】
本開示は、環状オリゴ糖を含む液体配合物および凍結乾燥した調製物に注目する。いくつかの態様において、液体配合物または凍結乾燥した調製物は、少なくとも２種の炭水化物、例えば、環状オリゴ糖（例えば、シクロデキストランまたはその誘導体）および非環状オリゴ糖（例えば、長さが約１０未満、８未満、６未満、４未満の単糖の非環状オリゴ糖、例えば、単糖または二糖）を含むことができる。いくつかの態様において、液体配合物はまた、再構成試薬を含む。
【０１６４】
適切な環状オリゴ糖の例には、これらに限定されないが、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、例えば、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、β−シクロデキストリンスルホブチルエーテルナトリウム、γ−シクロデキストリン、任意のその誘導体、および任意のこれらの組合せが含まれる。
【０１６５】
ある特定の態様において、環状炭水化物、例えば、環状オリゴ糖は、より大きな分子構造、例えば、ポリマー中に含まれ得る。適切なポリマーは、粒子のポリマー組成に関して本明細書において開示されている。このような態様において、環状オリゴ糖をポリマーの骨格内に組込み得る。例えば、本発明によって使用することができるポリマー骨格中にシクロデキストリン部分を含有する例示的なポリマーについて開示している、米国特許第７，２７０，８０８号および米国特許第７，０９１，１９２号を参照されたい。米国特許第７，２７０，８０８号および米国特許第７，０９１，１９２号の全教示は、参照により本明細書中に組み込まれている。いくつかの態様において、環状オリゴ糖は、少なくとも１つの酸化型の発生を含有し得る。
【０１６６】
環状オリゴ糖は、本明細書に記載されている配合物中で変化する量で存在し得る。ある特定の態様において、環状オリゴ糖と液体配合物の比は、重量で約０．７５：１〜約３：１の範囲である。好ましい態様において、環状オリゴ糖と総ポリマーの比は、重量で約０．７５：１〜約３：１の範囲である。
【０１６７】
好ましい態様において、配合物は、２つまたはそれを超える炭水化物、例えば、環状オリゴ糖および非環状炭水化物、例えば、非環状オリゴ糖、例えば、１０、８、６、４またはそれ未満の単糖単位を有する非環状オリゴ糖を含有する。本明細書に記載のように、凍結乾燥する液体配合物中に非環状炭水化物、例えば、非環状オリゴ糖を含むことは、このように得られた凍結乾燥した調製物による水の取込みを促進し、凍結乾燥した調製物の崩壊を促進することができる。
【０１６８】
好ましい態様において、凍結乾燥した配合物または液体配合物は、環状オリゴ糖、例えば、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、任意のその誘導体、および任意のこれらの組合せ、ならびに非環状オリゴ糖、例えば、本明細書に記載されている非環状オリゴ糖を含む。いくつかの好ましい態様において、凍結乾燥保護剤は、環状オリゴ糖、例えば、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、任意のその誘導体、および任意のこれらの組合せを含み、非環状オリゴ糖は、二糖、例えば、スクロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、およびその誘導体、ならびに単糖、例えば、グルコースである。１つの好ましい態様において、凍結乾燥保護剤は、β−シクロデキストリンまたはその誘導体、例えば、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンまたはβ−シクロデキストリンスルホブチルエーテルを含み、非環状オリゴ糖は、二糖、例えば、スクロースである。β−シクロデキストリンまたはその誘導体、および非環状オリゴ糖は、任意の適切な相対量で存在することができる。好ましくは、環状オリゴ糖と非環状オリゴ糖の比（ｗ／ｗ）は、約０．５：１．５〜約１．５：０．５、より好ましくは０．７：１．３〜１．３：０．７である。いくつかの例において、環状オリゴ糖と非環状オリゴ糖の比（ｗ／ｗ）は、０．７：１．３、１：０．７、１：１、１．３：１または１．３：０．７である。液体配合物または凍結乾燥した配合物が本明細書に記載されている粒子を含むとき、環状オリゴ糖プラス非環状オリゴ糖とポリマーの比（ｗ／ｗ）は、約１：１〜約１０：１、好ましくは、約１．１〜約３：１である。
【０１６９】
本開示は、糖、例えば、スクロース、トレハロースまたはこれらの混合物へのさらなる凍結乾燥保護剤として、１種または複数のイオン性ハライド塩の使用に部分的に関する。糖は、二糖、単糖、三糖、および／または多糖を含み得、他の添加剤、例えば、グリセロールおよび／または界面活性剤を含み得る。任意選択で、シクロデキストリンを、さらなる凍結乾燥保護剤として含み得る。シクロデキストリンを、イオン性ハライド塩の代わりに加え得る。代わりに、シクロデキストリンを、イオン性ハライド塩に加えて加え得る。
【０１７０】
適切なイオン性ハライド塩は、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、塩化亜鉛、またはこれらの混合物を含み得る。さらなる適切なイオン性ハライド塩には、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化アンモニウム、臭化ナトリウム、臭化カルシウム、臭化亜鉛、臭化カリウム、臭化マグネシウム、臭化アンモニウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カルシウム、ヨウ化亜鉛、ヨウ化カリウム、ヨウ化マグネシウム、またはヨウ化アンモニウム、および／またはこれらの混合物が含まれる。一態様において、約１〜約１５重量パーセントのスクロースを、イオン性ハライド塩と共に使用し得る。一態様において、凍結乾燥した医薬組成物は、約１０〜約１００ｍＭの塩化ナトリウムを含み得る。別の態様において、凍結乾燥した医薬組成物は、約１００〜約５００ｍＭの二価のイオン性クロリド塩、例えば、塩化カルシウムまたは塩化亜鉛を含み得る。さらに別の態様において、凍結乾燥する懸濁液は、シクロデキストリンをさらに含んでもよく、例えば、約１〜約２５重量パーセントのシクロデキストリンを使用し得る。
【０１７１】
適切なシクロデキストリンは、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、またはこれらの混合物を含み得る。本明細書において開示されている組成物中での使用が意図される例示的なシクロデキストリンには、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰβＣＤ）、ヒドロキシエチル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、メチル−β−シクロデキストリン、ジメチル−β−シクロデキストリン、カルボキシメチル−β−シクロデキストリン、カルボキシメチルエチル−β−シクロデキストリン、ジエチル−β−シクロデキストリン、トリ−Ｏ−アルキル−β−シクロデキストリン、グルコシル（ｇｌｏｃｏｓｙｌ）−β−シクロデキストリン、およびマルトシル−β−シクロデキストリンが含まれる。
【０１７２】
いくつかの態様において、凍結乾燥に適した組成物は、本明細書において開示されているポリマードット、および凍結乾燥に適した化合物、糖、例えば、単糖、二糖、または多糖を含めて本明細書に記載されている。例えば、化合物は、スクロース、グルコース、マンニトール（ｍａｎｉｔｏｌ）、トレハロース（ｔｅｔｒａｈｅｌｏｓｅ）、マルトースまたはヒドロキシプロピルシクロデキストランであり得る。いくつかの態様において、１種の化合物を組成物中に含み得る。他の態様において、複数の化合物を組成物中に含み得る、例えば、２種の化合物、３種の化合物、４種の化合物、５種の化合物、６種の化合物、７種の化合物、８種の化合物、９種の化合物、１０種の化合物または１０種超の化合物を組成物中に含み得る。いくつかの態様において、凍結乾燥に適した化合物は、賦形剤を含む溶液中であり得る。例えば、溶液は、水、緩衝液、溶媒などであり得る。
【０１７３】
いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ超、１％ｗ／ｖ超、２％ｗ／ｖ超、３％ｗ／ｖ超、４％ｗ／ｖ超、５％ｗ／ｖ超、６％ｗ／ｖ超、７％ｗ／ｖ超、８％ｗ／ｖ超、９％ｗ／ｖ超、１０％ｗ／ｖ超、１５％ｗ／ｖ超、２０％ｗ／ｖ超、２５％ｗ／ｖ超、３０％ｗ／ｖ超、３５％ｗ／ｖ超、４０％ｗ／ｖ超、４５％ｗ／ｖ超、５０％ｗ／ｖ超、５５％ｗ／ｖ超または６０％ｗ／ｖ超でスクロースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ未満、１％ｗ／ｖ未満、２％ｗ／ｖ未満、３％ｗ／ｖ未満、４％ｗ／ｖ未満、５％ｗ／ｖ未満、６％ｗ／ｖ未満、７％ｗ／ｖ未満、８％ｗ／ｖ未満、９％ｗ／ｖ未満、１０％ｗ／ｖ未満、１５％ｗ／ｖ未満、２０％ｗ／ｖ未満、２５％ｗ／ｖ未満、３０％ｗ／ｖ未満、３５％ｗ／ｖ未満、４０％ｗ／ｖ未満、４５％ｗ／ｖ未満、５０％ｗ／ｖ未満、５５％ｗ／ｖ未満または６０％ｗ／ｖ未満でスクロースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０％ｗ／ｖ、約１％ｗ／ｖ、約２％ｗ／ｖ、約３％ｗ／ｖ、約４％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ、約６％ｗ／ｖ、約７％ｗ／ｖ、約８％ｗ／ｖ、約９％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ、約２０％ｗ／ｖ、約２５％ｗ／ｖ、約３０％ｗ／ｖ、約３５％ｗ／ｖ、約４０％ｗ／ｖ、約４５％ｗ／ｖ、約５０％ｗ／ｖ、約５５％ｗ／ｖまたは約６０％ｗ／ｖでスクロースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ、１％ｗ／ｖ、２％ｗ／ｖ、３％ｗ／ｖ、４％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ、６％ｗ／ｖ、７％ｗ／ｖ、８％ｗ／ｖ、９％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ、２５％ｗ／ｖ、３０％ｗ／ｖ、３５％ｗ／ｖ、４０％ｗ／ｖ、４５％ｗ／ｖ、５０％ｗ／ｖ、５５％ｗ／ｖまたは６０％ｗ／ｖでスクロースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ〜１０％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ〜１５％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ〜３０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ〜３０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ〜４０％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖ、２５％ｗ／ｖ〜６０％ｗ／ｖまたは３０％ｗ／ｖ〜６０％ｗ／ｖの範囲でスクロースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ〜約１５％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ〜約２０％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ〜約３０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ〜約３０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ〜約４０％ｗ／ｖ、約２０％ｗ／ｖ〜約５０％ｗ／ｖ、約２５％ｗ／ｖ〜約６０％ｗ／ｖまたは３０％ｗ／ｖ〜約６０％ｗ／ｖの範囲でスクロースを含み得る。
【０１７４】
いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ超、１％ｗ／ｖ超、２％ｗ／ｖ超、３％ｗ／ｖ超、４％ｗ／ｖ超、５％ｗ／ｖ超、６％ｗ／ｖ超、７％ｗ／ｖ超、８％ｗ／ｖ超、９％ｗ／ｖ超、１０％ｗ／ｖ超、１５％ｗ／ｖ超、２０％ｗ／ｖ超、２５％ｗ／ｖ超、３０％ｗ／ｖ超、３５％ｗ／ｖ超、４０％ｗ／ｖ超、４５％ｗ／ｖ超、５０％ｗ／ｖ超、５５％ｗ／ｖ超または６０％ｗ／ｖ超でグルコースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ未満、１％ｗ／ｖ未満、２％ｗ／ｖ未満、３％ｗ／ｖ未満、４％ｗ／ｖ未満、５％ｗ／ｖ未満、６％ｗ／ｖ未満、７％ｗ／ｖ未満、８％ｗ／ｖ未満、９％ｗ／ｖ未満、１０％ｗ／ｖ未満、１５％ｗ／ｖ未満、２０％ｗ／ｖ未満、２５％ｗ／ｖ未満、３０％ｗ／ｖ未満、３５％ｗ／ｖ未満、４０％ｗ／ｖ未満、４５％ｗ／ｖ未満、５０％ｗ／ｖ未満、５５％ｗ／ｖ未満または６０％ｗ／ｖ未満でグルコースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０％ｗ／ｖ、約１％ｗ／ｖ、約２％ｗ／ｖ、約３％ｗ／ｖ、約４％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ、約６％ｗ／ｖ、約７％ｗ／ｖ、約８％ｗ／ｖ、約９％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ、約２０％ｗ／ｖ、約２５％ｗ／ｖ、約３０％ｗ／ｖ、約３５％ｗ／ｖ、約４０％ｗ／ｖ、約４５％ｗ／ｖ、約５０％ｗ／ｖ、約５５％ｗ／ｖまたは約６０％ｗ／ｖでグルコースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ、１％ｗ／ｖ、２％ｗ／ｖ、３％ｗ／ｖ、４％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ、６％ｗ／ｖ、７％ｗ／ｖ、８％ｗ／ｖ、９％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ、２５％ｗ／ｖ、３０％ｗ／ｖ、３５％ｗ／ｖ、４０％ｗ／ｖ、４５％ｗ／ｖ、５０％ｗ／ｖ、５５％ｗ／ｖまたは６０％ｗ／ｖでグルコースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ〜１０％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ〜１５％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ〜３０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ〜３０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ〜４０％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖ、２５％ｗ／ｖ〜６０％ｗ／ｖまたは３０％ｗ／ｖ〜６０％ｗ／ｖの範囲でグルコースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ〜約１５％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ〜約２０％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ〜約３０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ〜約３０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ〜約４０％ｗ／ｖ、約２０％ｗ／ｖ〜約５０％ｗ／ｖ、約２５％ｗ／ｖ〜約６０％ｗ／ｖまたは３０％ｗ／ｖ〜約６０％ｗ／ｖの範囲でグルコースを含み得る。
【０１７５】
いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ超、１％ｗ／ｖ超、２％ｗ／ｖ超、３％ｗ／ｖ超、４％ｗ／ｖ超、５％ｗ／ｖ超、６％ｗ／ｖ超、７％ｗ／ｖ超、８％ｗ／ｖ超、９％ｗ／ｖ超、１０％ｗ／ｖ超、１５％ｗ／ｖ超、２０％ｗ／ｖ超、２５％ｗ／ｖ超、３０％ｗ／ｖ超、３５％ｗ／ｖ超、４０％ｗ／ｖ超、４５％ｗ／ｖ超、５０％ｗ／ｖ超、５５％ｗ／ｖ超または６０％ｗ／ｖ超でマンニトールを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ未満、１％ｗ／ｖ未満、２％ｗ／ｖ未満、３％ｗ／ｖ未満、４％ｗ／ｖ未満、５％ｗ／ｖ未満、６％ｗ／ｖ未満、７％ｗ／ｖ未満、８％ｗ／ｖ未満、９％ｗ／ｖ未満、１０％ｗ／ｖ未満、１５％ｗ／ｖ未満、２０％ｗ／ｖ未満、２５％ｗ／ｖ未満、３０％ｗ／ｖ未満、３５％ｗ／ｖ未満、４０％ｗ／ｖ未満、４５％ｗ／ｖ未満、５０％ｗ／ｖ未満、５５％ｗ／ｖ未満または６０％ｗ／ｖ未満でマンニトールを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０％ｗ／ｖ、約１％ｗ／ｖ、約２％ｗ／ｖ、約３％ｗ／ｖ、約４％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ、約６％ｗ／ｖ、約７％ｗ／ｖ、約８％ｗ／ｖ、約９％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ、約２０％ｗ／ｖ、約２５％ｗ／ｖ、約３０％ｗ／ｖ、約３５％ｗ／ｖ、約４０％ｗ／ｖ、約４５％ｗ／ｖ、約５０％ｗ／ｖ、約５５％ｗ／ｖまたは約６０％ｗ／ｖでマンニトールを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ、１％ｗ／ｖ、２％ｗ／ｖ、３％ｗ／ｖ、４％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ、６％ｗ／ｖ、７％ｗ／ｖ、８％ｗ／ｖ、９％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ、２５％ｗ／ｖ、３０％ｗ／ｖ、３５％ｗ／ｖ、４０％ｗ／ｖ、４５％ｗ／ｖ、５０％ｗ／ｖ、５５％ｗ／ｖまたは６０％ｗ／ｖでマンニトールを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ〜１０％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ〜１５％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ〜３０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ〜３０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ〜４０％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖ、２５％ｗ／ｖ〜６０％ｗ／ｖまたは３０％ｗ／ｖ〜６０％ｗ／ｖの範囲でマンニトールを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ〜約１５％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ〜約２０％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ〜約３０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ〜約３０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ〜約４０％ｗ／ｖ、約２０％ｗ／ｖ〜約５０％ｗ／ｖ、約２５％ｗ／ｖ〜約６０％ｗ／ｖまたは３０％ｗ／ｖ〜約６０％ｗ／ｖの範囲でマンニトールを含み得る。
【０１７６】
いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ超、１％ｗ／ｖ超、２％ｗ／ｖ超、３％ｗ／ｖ超、４％ｗ／ｖ超、５％ｗ／ｖ超、６％ｗ／ｖ超、７％ｗ／ｖ超、８％ｗ／ｖ超、９％ｗ／ｖ超、１０％ｗ／ｖ超、１５％ｗ／ｖ超、２０％ｗ／ｖ超、２５％ｗ／ｖ超、３０％ｗ／ｖ超、３５％ｗ／ｖ超、４０％ｗ／ｖ超、４５％ｗ／ｖ超、５０％ｗ／ｖ超、５５％ｗ／ｖ超または６０％ｗ／ｖ超でトレハロースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ未満、１％ｗ／ｖ未満、２％ｗ／ｖ未満、３％ｗ／ｖ未満、４％ｗ／ｖ未満、５％ｗ／ｖ未満、６％ｗ／ｖ未満、７％ｗ／ｖ未満、８％ｗ／ｖ未満、９％ｗ／ｖ未満、１０％ｗ／ｖ未満、１５％ｗ／ｖ未満、２０％ｗ／ｖ未満、２５％ｗ／ｖ未満、３０％ｗ／ｖ未満、３５％ｗ／ｖ未満、４０％ｗ／ｖ未満、４５％ｗ／ｖ未満、５０％ｗ／ｖ未満、５５％ｗ／ｖ未満または６０％ｗ／ｖ未満でトレハロースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０％ｗ／ｖ、約１％ｗ／ｖ、約２％ｗ／ｖ、約３％ｗ／ｖ、約４％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ、約６％ｗ／ｖ、約７％ｗ／ｖ、約８％ｗ／ｖ、約９％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ、約２０％ｗ／ｖ、約２５％ｗ／ｖ、約３０％ｗ／ｖ、約３５％ｗ／ｖ、約４０％ｗ／ｖ、約４５％ｗ／ｖ、約５０％ｗ／ｖ、約５５％ｗ／ｖまたは約６０％ｗ／ｖでトレハロースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ、１％ｗ／ｖ、２％ｗ／ｖ、３％ｗ／ｖ、４％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ、６％ｗ／ｖ、７％ｗ／ｖ、８％ｗ／ｖ、９％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ、２５％ｗ／ｖ、３０％ｗ／ｖ、３５％ｗ／ｖ、４０％ｗ／ｖ、４５％ｗ／ｖ、５０％ｗ／ｖ、５５％ｗ／ｖまたは６０％ｗ／ｖでトレハロースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ〜１０％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ〜１５％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ〜３０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ〜３０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ〜４０％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖ、２５％ｗ／ｖ〜６０％ｗ／ｖまたは３０％ｗ／ｖ〜６０％ｗ／ｖの範囲でトレハロースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ〜約１５％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ〜約２０％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ〜約３０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ〜約３０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ〜約４０％ｗ／ｖ、約２０％ｗ／ｖ〜約５０％ｗ／ｖ、約２５％ｗ／ｖ〜約６０％ｗ／ｖまたは３０％ｗ／ｖ〜約６０％ｗ／ｖの範囲でトレハロースを含み得る。
【０１７７】
いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ超、１％ｗ／ｖ超、２％ｗ／ｖ超、３％ｗ／ｖ超、４％ｗ／ｖ超、５％ｗ／ｖ超、６％ｗ／ｖ超、７％ｗ／ｖ超、８％ｗ／ｖ超、９％ｗ／ｖ超、１０％ｗ／ｖ超、１５％ｗ／ｖ超、２０％ｗ／ｖ超、２５％ｗ／ｖ超、３０％ｗ／ｖ超、３５％ｗ／ｖ超、４０％ｗ／ｖ超、４５％ｗ／ｖ超、５０％ｗ／ｖ超、５５％ｗ／ｖ超または６０％ｗ／ｖ超でマルトースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ未満、１％ｗ／ｖ未満、２％ｗ／ｖ未満、３％ｗ／ｖ未満、４％ｗ／ｖ未満、５％ｗ／ｖ未満、６％ｗ／ｖ未満、７％ｗ／ｖ未満、８％ｗ／ｖ未満、９％ｗ／ｖ未満、１０％ｗ／ｖ未満、１５％ｗ／ｖ未満、２０％ｗ／ｖ未満、２５％ｗ／ｖ未満、３０％ｗ／ｖ未満、３５％ｗ／ｖ未満、４０％ｗ／ｖ未満、４５％ｗ／ｖ未満、５０％ｗ／ｖ未満、５５％ｗ／ｖ未満または６０％ｗ／ｖ未満でマルトースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０％ｗ／ｖ、約１％ｗ／ｖ、約２％ｗ／ｖ、約３％ｗ／ｖ、約４％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ、約６％ｗ／ｖ、約７％ｗ／ｖ、約８％ｗ／ｖ、約９％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ、約２０％ｗ／ｖ、約２５％ｗ／ｖ、約３０％ｗ／ｖ、約３５％ｗ／ｖ、約４０％ｗ／ｖ、約４５％ｗ／ｖ、約５０％ｗ／ｖ、約５５％ｗ／ｖまたは約６０％ｗ／ｖでマルトースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ、１％ｗ／ｖ、２％ｗ／ｖ、３％ｗ／ｖ、４％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ、６％ｗ／ｖ、７％ｗ／ｖ、８％ｗ／ｖ、９％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ、２５％ｗ／ｖ、３０％ｗ／ｖ、３５％ｗ／ｖ、４０％ｗ／ｖ、４５％ｗ／ｖ、５０％ｗ／ｖ、５５％ｗ／ｖまたは６０％ｗ／ｖでマルトースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ〜１０％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ〜１５％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ〜３０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ〜３０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ〜４０％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖ、２５％ｗ／ｖ〜６０％ｗ／ｖまたは３０％ｗ／ｖ〜６０％ｗ／ｖの範囲でマルトースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ〜約１５％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ〜約２０％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ〜約３０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ〜約３０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ〜約４０％ｗ／ｖ、約２０％ｗ／ｖ〜約５０％ｗ／ｖ、約２５％ｗ／ｖ〜約６０％ｗ／ｖまたは３０％ｗ／ｖ〜約６０％ｗ／ｖの範囲でマルトースを含み得る。
【０１７８】
いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ超、１％ｗ／ｖ超、２％ｗ／ｖ超、３％ｗ／ｖ超、４％ｗ／ｖ超、５％ｗ／ｖ超、６％ｗ／ｖ超、７％ｗ／ｖ超、８％ｗ／ｖ超、９％ｗ／ｖ超、１０％ｗ／ｖ超、１５％ｗ／ｖ超、２０％ｗ／ｖ超、２５％ｗ／ｖ超、３０％ｗ／ｖ超、３５％ｗ／ｖ超、４０％ｗ／ｖ超、４５％ｗ／ｖ超、５０％ｗ／ｖ超、５５％ｗ／ｖ超または６０％ｗ／ｖ超でヒドロキシプロピルシクロデキストランを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ未満、１％ｗ／ｖ未満、２％ｗ／ｖ未満、３％ｗ／ｖ未満、４％ｗ／ｖ未満、５％ｗ／ｖ未満、６％ｗ／ｖ未満、７％ｗ／ｖ未満、８％ｗ／ｖ未満、９％ｗ／ｖ未満、１０％ｗ／ｖ未満、１５％ｗ／ｖ未満、２０％ｗ／ｖ未満、２５％ｗ／ｖ未満、３０％ｗ／ｖ未満、３５％ｗ／ｖ未満、４０％ｗ／ｖ未満、４５％ｗ／ｖ未満、５０％ｗ／ｖ未満、５５％ｗ／ｖ未満または６０％ｗ／ｖ未満でヒドロキシプロピルシクロデキストランを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０％ｗ／ｖ、約１％ｗ／ｖ、約２％ｗ／ｖ、約３％ｗ／ｖ、約４％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ、約６％ｗ／ｖ、約７％ｗ／ｖ、約８％ｗ／ｖ、約９％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ、約２０％ｗ／ｖ、約２５％ｗ／ｖ、約３０％ｗ／ｖ、約３５％ｗ／ｖ、約４０％ｗ／ｖ、約４５％ｗ／ｖ、約５０％ｗ／ｖ、約５５％ｗ／ｖまたは約６０％ｗ／ｖでヒドロキシプロピルシクロデキストランを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ、１％ｗ／ｖ、２％ｗ／ｖ、３％ｗ／ｖ、４％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ、６％ｗ／ｖ、７％ｗ／ｖ、８％ｗ／ｖ、９％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ、２５％ｗ／ｖ、３０％ｗ／ｖ、３５％ｗ／ｖ、４０％ｗ／ｖ、４５％ｗ／ｖ、５０％ｗ／ｖ、５５％ｗ／ｖまたは６０％ｗ／ｖでヒドロキシプロピルシクロデキストランを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ〜１０％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ〜１５％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ〜３０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ〜３０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ〜４０％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖ、２５％ｗ／ｖ〜６０％ｗ／ｖまたは３０％ｗ／ｖ〜６０％ｗ／ｖの範囲でヒドロキシプロピルシクロデキストランを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ〜約１５％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ〜約２０％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ〜約３０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ〜約３０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ〜約４０％ｗ／ｖ、約２０％ｗ／ｖ〜約５０％ｗ／ｖ、約２５％ｗ／ｖ〜約６０％ｗ／ｖまたは３０％ｗ／ｖ〜約６０％ｗ／ｖの範囲でヒドロキシプロピルシクロデキストランを含み得る。
【０１７９】
いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ超、１％ｗ／ｖ超、２％ｗ／ｖ超、３％ｗ／ｖ超、４％ｗ／ｖ超、５％ｗ／ｖ超、６％ｗ／ｖ超、７％ｗ／ｖ超、８％ｗ／ｖ超、９％ｗ／ｖ超、１０％ｗ／ｖ超、１５％ｗ／ｖ超、２０％ｗ／ｖ超、２５％ｗ／ｖ超、３０％ｗ／ｖ超、３５％ｗ／ｖ超、４０％ｗ／ｖ超、４５％ｗ／ｖ超、５０％ｗ／ｖ超、５５％ｗ／ｖ超または６０％ｗ／ｖ超でスクロースおよびトレハロースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ未満、１％ｗ／ｖ未満、２％ｗ／ｖ未満、３％ｗ／ｖ未満、４％ｗ／ｖ未満、５％ｗ／ｖ未満、６％ｗ／ｖ未満、７％ｗ／ｖ未満、８％ｗ／ｖ未満、９％ｗ／ｖ未満、１０％ｗ／ｖ未満、１５％ｗ／ｖ未満、２０％ｗ／ｖ未満、２５％ｗ／ｖ未満、３０％ｗ／ｖ未満、３５％ｗ／ｖ未満、４０％ｗ／ｖ未満、４５％ｗ／ｖ未満、５０％ｗ／ｖ未満、５５％ｗ／ｖ未満または６０％ｗ／ｖ未満でスクロースおよびトレハロースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０％ｗ／ｖ、約１％ｗ／ｖ、約２％ｗ／ｖ、約３％ｗ／ｖ、約４％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ、約６％ｗ／ｖ、約７％ｗ／ｖ、約８％ｗ／ｖ、約９％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ、約２０％ｗ／ｖ、約２５％ｗ／ｖ、約３０％ｗ／ｖ、約３５％ｗ／ｖ、約４０％ｗ／ｖ、約４５％ｗ／ｖ、約５０％ｗ／ｖ、約５５％ｗ／ｖまたは約６０％ｗ／ｖでスクロースおよびトレハロースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ、１％ｗ／ｖ、２％ｗ／ｖ、３％ｗ／ｖ、４％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ、６％ｗ／ｖ、７％ｗ／ｖ、８％ｗ／ｖ、９％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ、２５％ｗ／ｖ、３０％ｗ／ｖ、３５％ｗ／ｖ、４０％ｗ／ｖ、４５％ｗ／ｖ、５０％ｗ／ｖ、５５％ｗ／ｖまたは６０％ｗ／ｖでスクロースおよびトレハロースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ〜１０％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ〜１５％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ〜３０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ〜３０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ〜４０％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖ、２５％ｗ／ｖ〜６０％ｗ／ｖまたは３０％ｗ／ｖ〜６０％ｗ／ｖの範囲でスクロースおよびトレハロースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ〜約１５％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ〜約２０％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ〜約３０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ〜約３０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ〜約４０％ｗ／ｖ、約２０％ｗ／ｖ〜約５０％ｗ／ｖ、約２５％ｗ／ｖ〜約６０％ｗ／ｖまたは３０％ｗ／ｖ〜約６０％ｗ／ｖの範囲でスクロースおよびトレハロースを含み得る。
【０１８０】
いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ超、１％ｗ／ｖ超、２％ｗ／ｖ超、３％ｗ／ｖ超、４％ｗ／ｖ超、５％ｗ／ｖ超、６％ｗ／ｖ超、７％ｗ／ｖ超、８％ｗ／ｖ超、９％ｗ／ｖ超、１０％ｗ／ｖ超、１５％ｗ／ｖ超、２０％ｗ／ｖ超、２５％ｗ／ｖ超、３０％ｗ／ｖ超、３５％ｗ／ｖ超、４０％ｗ／ｖ超、４５％ｗ／ｖ超、５０％ｗ／ｖ超、５５％ｗ／ｖ超または６０％ｗ／ｖ超でスクロースおよびマルトースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ未満、１％ｗ／ｖ未満、２％ｗ／ｖ未満、３％ｗ／ｖ未満、４％ｗ／ｖ未満、５％ｗ／ｖ未満、６％ｗ／ｖ未満、７％ｗ／ｖ未満、８％ｗ／ｖ未満、９％ｗ／ｖ未満、１０％ｗ／ｖ未満、１５％ｗ／ｖ未満、２０％ｗ／ｖ未満、２５％ｗ／ｖ未満、３０％ｗ／ｖ未満、３５％ｗ／ｖ未満、４０％ｗ／ｖ未満、４５％ｗ／ｖ未満、５０％ｗ／ｖ未満、５５％ｗ／ｖ未満または６０％ｗ／ｖ未満でスクロースおよびマルトースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０％ｗ／ｖ、約１％ｗ／ｖ、約２％ｗ／ｖ、約３％ｗ／ｖ、約４％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ、約６％ｗ／ｖ、約７％ｗ／ｖ、約８％ｗ／ｖ、約９％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ、約２０％ｗ／ｖ、約２５％ｗ／ｖ、約３０％ｗ／ｖ、約３５％ｗ／ｖ、約４０％ｗ／ｖ、約４５％ｗ／ｖ、約５０％ｗ／ｖ、約５５％ｗ／ｖまたは約６０％ｗ／ｖでスクロースおよびマルトースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ、１％ｗ／ｖ、２％ｗ／ｖ、３％ｗ／ｖ、４％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ、６％ｗ／ｖ、７％ｗ／ｖ、８％ｗ／ｖ、９％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ、２５％ｗ／ｖ、３０％ｗ／ｖ、３５％ｗ／ｖ、４０％ｗ／ｖ、４５％ｗ／ｖ、５０％ｗ／ｖ、５５％ｗ／ｖまたは６０％ｗ／ｖでスクロースおよびマルトースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ〜１０％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ〜１５％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ〜３０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ〜３０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ〜４０％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖ、２５％ｗ／ｖ〜６０％ｗ／ｖまたは３０％ｗ／ｖ〜６０％ｗ／ｖの範囲でスクロースおよびマルトースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ〜約１５％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ〜約２０％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ〜約３０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ〜約３０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ〜約４０％ｗ／ｖ、約２０％ｗ／ｖ〜約５０％ｗ／ｖ、約２５％ｗ／ｖ〜約６０％ｗ／ｖまたは３０％ｗ／ｖ〜約６０％ｗ／ｖの範囲でスクロースおよびマルトースを含み得る。
【０１８１】
いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ超、１％ｗ／ｖ超、２％ｗ／ｖ超、３％ｗ／ｖ超、４％ｗ／ｖ超、５％ｗ／ｖ超、６％ｗ／ｖ超、７％ｗ／ｖ超、８％ｗ／ｖ超、９％ｗ／ｖ超、１０％ｗ／ｖ超、１５％ｗ／ｖ超、２０％ｗ／ｖ超、２５％ｗ／ｖ超、３０％ｗ／ｖ超、３５％ｗ／ｖ超、４０％ｗ／ｖ超、４５％ｗ／ｖ超、５０％ｗ／ｖ超、５５％ｗ／ｖ超または６０％ｗ／ｖ超でスクロースおよびグルコースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ未満、１％ｗ／ｖ未満、２％ｗ／ｖ未満、３％ｗ／ｖ未満、４％ｗ／ｖ未満、５％ｗ／ｖ未満、６％ｗ／ｖ未満、７％ｗ／ｖ未満、８％ｗ／ｖ未満、９％ｗ／ｖ未満、１０％ｗ／ｖ未満、１５％ｗ／ｖ未満、２０％ｗ／ｖ未満、２５％ｗ／ｖ未満、３０％ｗ／ｖ未満、３５％ｗ／ｖ未満、４０％ｗ／ｖ未満、４５％ｗ／ｖ未満、５０％ｗ／ｖ未満、５５％ｗ／ｖ未満または６０％ｗ／ｖ未満でスクロースおよびグルコースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０％ｗ／ｖ、約１％ｗ／ｖ、約２％ｗ／ｖ、約３％ｗ／ｖ、約４％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ、約６％ｗ／ｖ、約７％ｗ／ｖ、約８％ｗ／ｖ、約９％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ、約２０％ｗ／ｖ、約２５％ｗ／ｖ、約３０％ｗ／ｖ、約３５％ｗ／ｖ、約４０％ｗ／ｖ、約４５％ｗ／ｖ、約５０％ｗ／ｖ、約５５％ｗ／ｖまたは約６０％ｗ／ｖでスクロースおよびグルコースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ、１％ｗ／ｖ、２％ｗ／ｖ、３％ｗ／ｖ、４％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ、６％ｗ／ｖ、７％ｗ／ｖ、８％ｗ／ｖ、９％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ、２５％ｗ／ｖ、３０％ｗ／ｖ、３５％ｗ／ｖ、４０％ｗ／ｖ、４５％ｗ／ｖ、５０％ｗ／ｖ、５５％ｗ／ｖまたは６０％ｗ／ｖでスクロースおよびグルコースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ〜１０％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ〜１５％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ〜３０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ〜３０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ〜４０％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖ、２５％ｗ／ｖ〜６０％ｗ／ｖまたは３０％ｗ／ｖ〜６０％ｗ／ｖの範囲でスクロースおよびグルコースを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ〜約１５％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ〜約２０％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ〜約３０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ〜約３０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ〜約４０％ｗ／ｖ、約２０％ｗ／ｖ〜約５０％ｗ／ｖ、約２５％ｗ／ｖ〜約６０％ｗ／ｖまたは３０％ｗ／ｖ〜約６０％ｗ／ｖの範囲でスクロースおよびグルコースを含み得る。
【０１８２】
いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ超、１％ｗ／ｖ超、２％ｗ／ｖ超、３％ｗ／ｖ超、４％ｗ／ｖ超、５％ｗ／ｖ超、６％ｗ／ｖ超、７％ｗ／ｖ超、８％ｗ／ｖ超、９％ｗ／ｖ超、１０％ｗ／ｖ超、１５％ｗ／ｖ超、２０％ｗ／ｖ超、２５％ｗ／ｖ超、３０％ｗ／ｖ超、３５％ｗ／ｖ超、４０％ｗ／ｖ超、４５％ｗ／ｖ超、５０％ｗ／ｖ超、５５％ｗ／ｖ超または６０％ｗ／ｖ超でスクロースおよびマンニトールを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ未満、１％ｗ／ｖ未満、２％ｗ／ｖ未満、３％ｗ／ｖ未満、４％ｗ／ｖ未満、５％ｗ／ｖ未満、６％ｗ／ｖ未満、７％ｗ／ｖ未満、８％ｗ／ｖ未満、９％ｗ／ｖ未満、１０％ｗ／ｖ未満、１５％ｗ／ｖ未満、２０％ｗ／ｖ未満、２５％ｗ／ｖ未満、３０％ｗ／ｖ未満、３５％ｗ／ｖ未満、４０％ｗ／ｖ未満、４５％ｗ／ｖ未満、５０％ｗ／ｖ未満、５５％ｗ／ｖ未満または６０％ｗ／ｖ未満でスクロースおよびマンニトールを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０％ｗ／ｖ、約１％ｗ／ｖ、約２％ｗ／ｖ、約３％ｗ／ｖ、約４％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ、約６％ｗ／ｖ、約７％ｗ／ｖ、約８％ｗ／ｖ、約９％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ、約２０％ｗ／ｖ、約２５％ｗ／ｖ、約３０％ｗ／ｖ、約３５％ｗ／ｖ、約４０％ｗ／ｖ、約４５％ｗ／ｖ、約５０％ｗ／ｖ、約５５％ｗ／ｖまたは約６０％ｗ／ｖでスクロースおよびマンニトールを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ、１％ｗ／ｖ、２％ｗ／ｖ、３％ｗ／ｖ、４％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ、６％ｗ／ｖ、７％ｗ／ｖ、８％ｗ／ｖ、９％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ、２５％ｗ／ｖ、３０％ｗ／ｖ、３５％ｗ／ｖ、４０％ｗ／ｖ、４５％ｗ／ｖ、５０％ｗ／ｖ、５５％ｗ／ｖまたは６０％ｗ／ｖでスクロースおよびマンニトールを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ〜１０％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ〜１５％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ〜３０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ〜３０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ〜４０％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖ、２５％ｗ／ｖ〜６０％ｗ／ｖまたは３０％ｗ／ｖ〜６０％ｗ／ｖの範囲でスクロースおよびマンニトールを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ〜約１５％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ〜約２０％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ〜約３０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ〜約３０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ〜約４０％ｗ／ｖ、約２０％ｗ／ｖ〜約５０％ｗ／ｖ、約２５％ｗ／ｖ〜約６０％ｗ／ｖまたは３０％ｗ／ｖ〜約６０％ｗ／ｖの範囲でスクロースおよびマンニトールを含み得る。
【０１８３】
いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ超、１％ｗ／ｖ超、２％ｗ／ｖ超、３％ｗ／ｖ超、４％ｗ／ｖ超、５％ｗ／ｖ超、６％ｗ／ｖ超、７％ｗ／ｖ超、８％ｗ／ｖ超、９％ｗ／ｖ超、１０％ｗ／ｖ超、１５％ｗ／ｖ超、２０％ｗ／ｖ超、２５％ｗ／ｖ超、３０％ｗ／ｖ超、３５％ｗ／ｖ超、４０％ｗ／ｖ超、４５％ｗ／ｖ超、５０％ｗ／ｖ超、５５％ｗ／ｖ超または６０％ｗ／ｖ超でウシ血清アルブミンを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ未満、１％ｗ／ｖ未満、２％ｗ／ｖ未満、３％ｗ／ｖ未満、４％ｗ／ｖ未満、５％ｗ／ｖ未満、６％ｗ／ｖ未満、７％ｗ／ｖ未満、８％ｗ／ｖ未満、９％ｗ／ｖ未満、１０％ｗ／ｖ未満、１５％ｗ／ｖ未満、２０％ｗ／ｖ未満、２５％ｗ／ｖ未満、３０％ｗ／ｖ未満、３５％ｗ／ｖ未満、４０％ｗ／ｖ未満、４５％ｗ／ｖ未満、５０％ｗ／ｖ未満、５５％ｗ／ｖ未満または６０％ｗ／ｖ未満でウシ血清アルブミンを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０％ｗ／ｖ、約１％ｗ／ｖ、約２％ｗ／ｖ、約３％ｗ／ｖ、約４％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ、約６％ｗ／ｖ、約７％ｗ／ｖ、約８％ｗ／ｖ、約９％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ、約２０％ｗ／ｖ、約２５％ｗ／ｖ、約３０％ｗ／ｖ、約３５％ｗ／ｖ、約４０％ｗ／ｖ、約４５％ｗ／ｖ、約５０％ｗ／ｖ、約５５％ｗ／ｖまたは約６０％ｗ／ｖでウシ血清アルブミンを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ、１％ｗ／ｖ、２％ｗ／ｖ、３％ｗ／ｖ、４％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ、６％ｗ／ｖ、７％ｗ／ｖ、８％ｗ／ｖ、９％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ、２５％ｗ／ｖ、３０％ｗ／ｖ、３５％ｗ／ｖ、４０％ｗ／ｖ、４５％ｗ／ｖ、５０％ｗ／ｖ、５５％ｗ／ｖまたは６０％ｗ／ｖでウシ血清アルブミンを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ〜１０％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ〜１５％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ〜３０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ〜３０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ〜４０％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖ、２５％ｗ／ｖ〜６０％ｗ／ｖまたは３０％ｗ／ｖ〜６０％ｗ／ｖの範囲でウシ血清アルブミンを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ〜約１５％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ〜約２０％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ〜約３０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ〜約３０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ〜約４０％ｗ／ｖ、約２０％ｗ／ｖ〜約５０％ｗ／ｖ、約２５％ｗ／ｖ〜約６０％ｗ／ｖまたは３０％ｗ／ｖ〜約６０％ｗ／ｖの範囲でウシ血清アルブミンを含み得る。
【０１８４】
いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ超、１％ｗ／ｖ超、２％ｗ／ｖ超、３％ｗ／ｖ超、４％ｗ／ｖ超、５％ｗ／ｖ超、６％ｗ／ｖ超、７％ｗ／ｖ超、８％ｗ／ｖ超、９％ｗ／ｖ超、１０％ｗ／ｖ超、１５％ｗ／ｖ超、２０％ｗ／ｖ超、２５％ｗ／ｖ超、３０％ｗ／ｖ超、３５％ｗ／ｖ超、４０％ｗ／ｖ超、４５％ｗ／ｖ超、５０％ｗ／ｖ超、５５％ｗ／ｖ超または６０％ｗ／ｖ超でマンニトール、トレハロース、ヒドロキシプロピルシクロデキストランおよびウシ血清アルブミンを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ未満、１％ｗ／ｖ未満、２％ｗ／ｖ未満、３％ｗ／ｖ未満、４％ｗ／ｖ未満、５％ｗ／ｖ未満、６％ｗ／ｖ未満、７％ｗ／ｖ未満、８％ｗ／ｖ未満、９％ｗ／ｖ未満、１０％ｗ／ｖ未満、１５％ｗ／ｖ未満、２０％ｗ／ｖ未満、２５％ｗ／ｖ未満、３０％ｗ／ｖ未満、３５％ｗ／ｖ未満、４０％ｗ／ｖ未満、４５％ｗ／ｖ未満、５０％ｗ／ｖ未満、５５％ｗ／ｖ未満または６０％ｗ／ｖ未満でマンニトール、トレハロース、ヒドロキシプロピルシクロデキストランおよびウシ血清アルブミンを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０％ｗ／ｖ、約１％ｗ／ｖ、約２％ｗ／ｖ、約３％ｗ／ｖ、約４％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ、約６％ｗ／ｖ、約７％ｗ／ｖ、約８％ｗ／ｖ、約９％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ、約２０％ｗ／ｖ、約２５％ｗ／ｖ、約３０％ｗ／ｖ、約３５％ｗ／ｖ、約４０％ｗ／ｖ、約４５％ｗ／ｖ、約５０％ｗ／ｖ、約５５％ｗ／ｖまたは約６０％ｗ／ｖでマンニトール、トレハロース、ヒドロキシプロピルシクロデキストランおよびウシ血清アルブミンを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ、１％ｗ／ｖ、２％ｗ／ｖ、３％ｗ／ｖ、４％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ、６％ｗ／ｖ、７％ｗ／ｖ、８％ｗ／ｖ、９％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ、２５％ｗ／ｖ、３０％ｗ／ｖ、３５％ｗ／ｖ、４０％ｗ／ｖ、４５％ｗ／ｖ、５０％ｗ／ｖ、５５％ｗ／ｖまたは６０％ｗ／ｖでマンニトール、トレハロース、ヒドロキシプロピルシクロデキストランおよびウシ血清アルブミンを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０％ｗ／ｖ〜１０％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ〜１５％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ〜３０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ〜３０％ｗ／ｖ、１５％ｗ／ｖ〜４０％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖ、２５％ｗ／ｖ〜６０％ｗ／ｖまたは３０％ｗ／ｖ〜６０％ｗ／ｖの範囲でマンニトール、トレハロース、ヒドロキシプロピルシクロデキストランおよびウシ血清アルブミンを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ〜約１５％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ〜約２０％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ〜約３０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ〜約３０％ｗ／ｖ、約１５％ｗ／ｖ〜約４０％ｗ／ｖ、約２０％ｗ／ｖ〜約５０％ｗ／ｖ、約２５％ｗ／ｖ〜約６０％ｗ／ｖまたは３０％ｗ／ｖ〜約６０％ｗ／ｖの範囲でマンニトール、トレハロース、ヒドロキシプロピルシクロデキストランおよびウシ血清アルブミンを含み得る。
【０１８５】
本明細書に記載されているのは、複数の開示されたポリマードット、スクロース、イオン性ハライド、および水を含むポリマードット配合物である。いくつかの態様において、ポリマードット／スクロース／水／イオン性ハライドの組成物は、３〜４０％／１０〜４０％／２０〜９５％／０．１〜１０％（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）または５〜１０％／１０〜１５％／８０〜９０％／１〜１０％（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）であり得る。いくつかの態様において、ポリマードット／スクロース／水／イオン性ハライドの組成物は、約３〜４０％／１０〜４０％／２０〜９５％／０．１〜１０％（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）または約５〜１０％／１０〜１５％／８０〜９０％／１〜１０％（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）であり得る。いくつかの態様において、ポリマードット／スクロース／水の組成物は、３〜４０％／１０〜４０％／２０〜９５％／（ｗ／ｗ／ｗ）または５〜１０％／１０〜１５％／８０〜９０％（ｗ／ｗ／ｗ）であり得る。いくつかの態様において、ポリマードット／スクロース／水／イオン性ハライドの組成物は、約３〜４０％／１０〜４０％／２０〜９５％（ｗ／ｗ／ｗ）または約５〜１０％／１０〜１５％／８０〜９０％（ｗ／ｗ／ｗ）であり得る。いくつかの態様において、溶液は、０ｍＭ超、１ｍＭ超、２ｍＭ超、３ｍＭ超、４ｍＭ超、５ｍＭ超、６ｍＭ超、７ｍＭ超、８ｍＭ超、９ｍＭ超、１０ｍＭ超、１５ｍＭ超、２０ｍＭ超、２５ｍＭ超、３０ｍＭ超、３５ｍＭ超、４０ｍＭ超、４５ｍＭ超、５０ｍＭ超、５５ｍＭ超、６０ｍＭ超、６５ｍＭ超、７０ｍＭ超、７５ｍＭ超、８０ｎＭ超、８５ｍＭ超、９０ｍＭ超、９５ｍＭ超、１００ｍＭ超、１１０ｍＭ超、１２０ｍＭ超、１３０ｍＭ超、１４０ｍＭ超、１５０ｍＭ超、１６０ｍＭ超、１７０ｍＭ超、１８０ｍＭ超、１９０ｍＭ超または２００ｍＭ超でイオン性ハライドを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０ｍＭ未満、１ｍＭ未満、２ｍＭ未満、３ｍＭ未満、４ｍＭ未満、５ｍＭ未満、６ｍＭ未満、７ｍＭ未満、８ｍＭ未満、９ｍＭ未満、１０ｍＭ未満、１５ｍＭ未満、２０ｍＭ未満、２５ｍＭ未満、３０ｍＭ未満、３５ｍＭ未満、４０ｍＭ未満、４５ｍＭ未満、５０ｍＭ未満、５５ｍＭ未満、６０ｍＭ未満、６５ｍＭ未満、７０ｍＭ未満、７５ｍＭ未満、８０ｎＭ未満、８５ｍＭ未満、９０ｍＭ未満、９５ｍＭ未満、１００ｍＭ未満、１１０ｍＭ未満、１２０ｍＭ未満、１３０ｍＭ未満、１４０ｍＭ未満、１５０ｍＭ未満、１６０ｍＭ未満、１７０ｍＭ未満、１８０ｍＭ未満、１９０ｍＭ未満または２００ｍＭ未満でイオン性ハライドを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０ｍＭ、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｎＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１９０ｍＭまたは約２００ｍＭでイオン性ハライドを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０ｍＭ、１ｍＭ、２ｍＭ、３ｍＭ、４ｍＭ、５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、約６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｎＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、１００ｍＭ、１１０ｍＭ、１２０ｍＭ、１３０ｍＭ、１４０ｍＭ、１５０ｍＭ、１６０ｍＭ、１７０ｍＭ、１８０ｍＭ、１９０ｍＭまたは２００ｍＭでイオン性ハライドを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０ｍＭ〜１０ｍＭ、５ｍＭ〜１５ｍＭ、５ｍＭ〜２０ｍＭ、１０ｍＭ〜３０ｍＭ、１５ｍＭ〜３０ｍＭ、１５ｍＭ〜４０ｍＭ、２０ｍＭ〜５０ｍＭ、２５ｍＭ〜６０ｍＭ、３０ｍＭ〜６０ｍＭ、４０ｍＭ〜８０ｍＭ、５０ｍＭ〜１００ｍＭ、６０ｍＭ〜１２０ｍＭ、７０ｍＭ〜１３０ｍＭ、８０ｍＭ〜１４０ｍＭ、９０ｍＭ〜１５０ｍＭ、１００ｍＭ〜１６０ｍＭ、１１０ｍＭ〜１７０ｍＭ、１２０ｍＭ〜１８０ｍＭ、１３０ｍＭ〜１９０ｍＭまたは１４０ｍＭ〜２００ｍＭの範囲でイオン性ハライドを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０ｍＭ〜約１０ｍＭ、約５ｍＭ〜約１５ｍＭ、約５ｍＭ〜約２０ｍＭ、約１０ｍＭ〜約３０ｍＭ、約１５ｍＭ〜約３０ｍＭ、約１５ｍＭ〜約４０ｍＭ、約２０ｍＭ〜約５０ｍＭ、約２５ｍＭ〜約６０ｍＭ、３０ｍＭ〜約６０ｍＭ、４０ｍＭ〜８０ｍＭ、約５０ｍＭ〜１００ｍＭ、約６０ｍＭ〜１２０ｍＭ、約７０ｍＭ〜１３０ｍＭ、約８０ｍＭ〜１４０ｍＭ、約９０ｍＭ〜１５０ｍＭ、約１００ｍＭ〜１６０ｍＭ、約１１０ｍＭ〜１７０ｍＭ、約１２０ｍＭ〜１８０ｍＭ、約１３０ｍＭ〜１９０ｍＭまたは１４０ｍＭ〜２００ｍＭの範囲でイオン性ハライドを含み得る。
【０１８６】
いくつかの態様において、溶液は、０ｍＭ超、１ｍＭ超、２ｍＭ超、３ｍＭ超、４ｍＭ超、５ｍＭ超、６ｍＭ超、７ｍＭ超、８ｍＭ超、９ｍＭ超、１０ｍＭ超、１５ｍＭ超、２０ｍＭ超、２５ｍＭ超、３０ｍＭ超、３５ｍＭ超、４０ｍＭ超、４５ｍＭ超、５０ｍＭ超、５５ｍＭ超、６０ｍＭ超、６５ｍＭ超、７０ｍＭ超、７５ｍＭ超、８０ｎＭ超、８５ｍＭ超、９０ｍＭ超、９５ｍＭ超、１００ｍＭ超、１１０ｍＭ超、１２０ｍＭ超、１３０ｍＭ超、１４０ｍＭ超、１５０ｍＭ超、１６０ｍＭ超、１７０ｍＭ超、１８０ｍＭ超、１９０ｍＭ超または２００ｍＭ超で塩化ナトリウムを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０ｍＭ未満、１ｍＭ未満、２ｍＭ未満、３ｍＭ未満、４ｍＭ未満、５ｍＭ未満、６ｍＭ未満、７ｍＭ未満、８ｍＭ未満、９ｍＭ未満、１０ｍＭ未満、１５ｍＭ未満、２０ｍＭ未満、２５ｍＭ未満、３０ｍＭ未満、３５ｍＭ未満、４０ｍＭ未満、４５ｍＭ未満、５０ｍＭ未満、５５ｍＭ未満、６０ｍＭ未満、６５ｍＭ未満、７０ｍＭ未満、７５ｍＭ未満、８０ｎＭ未満、８５ｍＭ未満、９０ｍＭ未満、９５ｍＭ未満、１００ｍＭ未満、１１０ｍＭ未満、１２０ｍＭ未満、１３０ｍＭ未満、１４０ｍＭ未満、１５０ｍＭ未満、１６０ｍＭ未満、１７０ｍＭ未満、１８０ｍＭ未満、１９０ｍＭ未満または２００ｍＭ未満で塩化ナトリウムを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０ｍＭ、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｎＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１９０ｍＭまたは約２００ｍＭで塩化ナトリウムを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０ｍＭ、１ｍＭ、２ｍＭ、３ｍＭ、４ｍＭ、５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、約６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｎＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、１００ｍＭ、１１０ｍＭ、１２０ｍＭ、１３０ｍＭ、１４０ｍＭ、１５０ｍＭ、１６０ｍＭ、１７０ｍＭ、１８０ｍＭ、１９０ｍＭまたは２００ｍＭで塩化ナトリウムを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０ｍＭ〜１０ｍＭ、５ｍＭ〜１５ｍＭ、５ｍＭ〜２０ｍＭ、１０ｍＭ〜３０ｍＭ、１５ｍＭ〜３０ｍＭ、１５ｍＭ〜４０ｍＭ、２０ｍＭ〜５０ｍＭ、２５ｍＭ〜６０ｍＭ、３０ｍＭ〜６０ｍＭ、４０ｍＭ〜８０ｍＭ、５０ｍＭ〜１００ｍＭ、６０ｍＭ〜１２０ｍＭ、７０ｍＭ〜１３０ｍＭ、８０ｍＭ〜１４０ｍＭ、９０ｍＭ〜１５０ｍＭ、１００ｍＭ〜１６０ｍＭ、１１０ｍＭ〜１７０ｍＭ、１２０ｍＭ〜１８０ｍＭ、１３０ｍＭ〜１９０ｍＭまたは１４０ｍＭ〜２００ｍＭの範囲で塩化ナトリウムを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０ｍＭ〜約１０ｍＭ、約５ｍＭ〜約１５ｍＭ、約５ｍＭ〜約２０ｍＭ、約１０ｍＭ〜約３０ｍＭ、約１５ｍＭ〜約３０ｍＭ、約１５ｍＭ〜約４０ｍＭ、約２０ｍＭ〜約５０ｍＭ、約２５ｍＭ〜約６０ｍＭ、３０ｍＭ〜約６０ｍＭ、４０ｍＭ〜８０ｍＭ、約５０ｍＭ〜１００ｍＭ、約６０ｍＭ〜１２０ｍＭ、約７０ｍＭ〜１３０ｍＭ、約８０ｍＭ〜１４０ｍＭ、約９０ｍＭ〜１５０ｍＭ、約１００ｍＭ〜１６０ｍＭ、約１１０ｍＭ〜１７０ｍＭ、約１２０ｍＭ〜１８０ｍＭ、約１３０ｍＭ〜１９０ｍＭまたは１４０ｍＭ〜２００ｍＭの範囲で塩化ナトリウムを含み得る。
【０１８７】
いくつかの態様において、溶液は、０ｍＭ超、１ｍＭ超、２ｍＭ超、３ｍＭ超、４ｍＭ超、５ｍＭ超、６ｍＭ超、７ｍＭ超、８ｍＭ超、９ｍＭ超、１０ｍＭ超、１５ｍＭ超、２０ｍＭ超、２５ｍＭ超、３０ｍＭ超、３５ｍＭ超、４０ｍＭ超、４５ｍＭ超、５０ｍＭ超、５５ｍＭ超、６０ｍＭ超、６５ｍＭ超、７０ｍＭ超、７５ｍＭ超、８０ｎＭ超、８５ｍＭ超、９０ｍＭ超、９５ｍＭ超、１００ｍＭ超、１１０ｍＭ超、１２０ｍＭ超、１３０ｍＭ超、１４０ｍＭ超、１５０ｍＭ超、１６０ｍＭ超、１７０ｍＭ超、１８０ｍＭ超、１９０ｍＭ超または２００ｍＭ超で塩化マグネシウムを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０ｍＭ未満、１ｍＭ未満、２ｍＭ未満、３ｍＭ未満、４ｍＭ未満、５ｍＭ未満、６ｍＭ未満、７ｍＭ未満、８ｍＭ未満、９ｍＭ未満、１０ｍＭ未満、１５ｍＭ未満、２０ｍＭ未満、２５ｍＭ未満、３０ｍＭ未満、３５ｍＭ未満、４０ｍＭ未満、４５ｍＭ未満、５０ｍＭ未満、５５ｍＭ未満、６０ｍＭ未満、６５ｍＭ未満、７０ｍＭ未満、７５ｍＭ未満、８０ｎＭ未満、８５ｍＭ未満、９０ｍＭ未満、９５ｍＭ未満、１００ｍＭ未満、１１０ｍＭ未満、１２０ｍＭ未満、１３０ｍＭ未満、１４０ｍＭ未満、１５０ｍＭ未満、１６０ｍＭ未満、１７０ｍＭ未満、１８０ｍＭ未満、１９０ｍＭ未満または２００ｍＭ未満で塩化マグネシウムを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０ｍＭ、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｎＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１９０ｍＭまたは約２００ｍＭで塩化マグネシウムを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０ｍＭ、１ｍＭ、２ｍＭ、３ｍＭ、４ｍＭ、５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、約６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｎＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、１００ｍＭ、１１０ｍＭ、１２０ｍＭ、１３０ｍＭ、１４０ｍＭ、１５０ｍＭ、１６０ｍＭ、１７０ｍＭ、１８０ｍＭ、１９０ｍＭまたは２００ｍＭで塩化マグネシウムを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、０ｍＭ〜１０ｍＭ、５ｍＭ〜１５ｍＭ、５ｍＭ〜２０ｍＭ、１０ｍＭ〜３０ｍＭ、１５ｍＭ〜３０ｍＭ、１５ｍＭ〜４０ｍＭ、２０ｍＭ〜５０ｍＭ、２５ｍＭ〜６０ｍＭ、３０ｍＭ〜６０ｍＭ、４０ｍＭ〜８０ｍＭ、５０ｍＭ〜１００ｍＭ、６０ｍＭ〜１２０ｍＭ、７０ｍＭ〜１３０ｍＭ、８０ｍＭ〜１４０ｍＭ、９０ｍＭ〜１５０ｍＭ、１００ｍＭ〜１６０ｍＭ、１１０ｍＭ〜１７０ｍＭ、１２０ｍＭ〜１８０ｍＭ、１３０ｍＭ〜１９０ｍＭまたは１４０ｍＭ〜２００ｍＭの範囲で塩化マグネシウムを含み得る。いくつかの態様において、溶液は、約０ｍＭ〜約１０ｍＭ、約５ｍＭ〜約１５ｍＭ、約５ｍＭ〜約２０ｍＭ、約１０ｍＭ〜約３０ｍＭ、約１５ｍＭ〜約３０ｍＭ、約１５ｍＭ〜約４０ｍＭ、約２０ｍＭ〜約５０ｍＭ、約２５ｍＭ〜約６０ｍＭ、３０ｍＭ〜約６０ｍＭ、４０ｍＭ〜８０ｍＭ、約５０ｍＭ〜１００ｍＭ、約６０ｍＭ〜１２０ｍＭ、約７０ｍＭ〜１３０ｍＭ、約８０ｍＭ〜１４０ｍＭ、約９０ｍＭ〜１５０ｍＭ、約１００ｍＭ〜１６０ｍＭ、約１１０ｍＭ〜１７０ｍＭ、約１２０ｍＭ〜１８０ｍＭ、約１３０ｍＭ〜１９０ｍＭまたは１４０ｍＭ〜２００ｍＭの範囲で塩化マグネシウムを含み得る。いくつかの態様において、ポリマー−作用剤共役体、粒子または組成物を、凍結乾燥した形態で提供し、対象への投与の前に再構成する。凍結乾燥したポリマー−作用剤共役体、粒子または組成物は、賦形剤溶液、例えば、塩または食塩水、例えば、６〜９のｐＨを有する塩化ナトリウム溶液、乳酸加リンゲル注射液、または市販の賦形剤、例えば、ＰＬＡＳＭＡ−ＬＹＴＥ  Ａ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｐＨ７．４（登録商標）（Ｂａｘｔｅｒ、Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ、Ｉｌｌ）によって再構成することができる。
【０１８８】
いくつかの態様において、凍結乾燥した配合物は、冷凍乾燥の間の結晶形成および融合プロセスからの損傷から粒子および活性剤を保護することによって、物理的および化学的安定性を維持する凍結乾燥保護剤または安定剤を含む。凍結乾燥保護剤または安定剤は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＰＥＧ脂質共役体（例えば、ＰＥＧ−セラミドまたはＤ−アルファ−トコフェリルポリエチレングリコール１０００スクシネート）、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）、ポリ（ビニルピロリドン）（ＰＶＰ）、ポリオキシエチレンエステル、ポロキサマー、ポリソルベート、ポリオキシエチレンエステル、レシチン、糖、オリゴ糖、多糖、炭水化物、シクロデキストラン（例えば、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン）ならびにポリオール（例えば、トレハロース、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、スクロース、グルコースおよびデキストラン）、塩およびクラウンエーテルの１つまたは複数でよい。
【０１８９】
ある特定の態様において、凍結乾燥した調製物は、再構成試薬と共に再構成し得る。いくつかの態様において、適切な再構成試薬は、任意の生理学的に許容される液体であり得る。適切な再構成試薬には、これらに限定されないが、水、５％デキストロース注射液、乳酸リンゲル液およびデキストロース注射液、または商標Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬでＧＡＦ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍｏｕｎｔ  Ｏｌｉｖｅ、Ｎ．Ｊ．から入手可能である等しい容量部の無水アルコール、ＵＳＰおよび非イオン性界面活性剤、例えば、ポリオキシエチル化ヒマシ油界面活性剤の混合物が含まれる。再構成した溶液中の界面活性剤の量を最小化するために、十分な量のビヒクルのみを提供して、凍結乾燥した調製物の溶液を形成し得る。凍結乾燥した調製物の溶解が達成されると、このように得られた溶液は、適切な非経口賦形剤と共の注射の前にさらに希釈し得る。このような賦形剤は、当業者には周知である。これらの賦形剤は一般に、臨床施設において入手可能である。典型的な賦形剤の例には、これらに限定されないが、乳酸加リンゲル注射液、５％デキストロース注射液、注射用滅菌水などが含まれる。しかし、その狭いｐＨ範囲、ｐＨ６．０〜７．５によって、乳酸加リンゲル注射液が最も典型的である。１００ｍＬ毎に、乳酸加リンゲル注射液は、０．６ｇの塩化ナトリウムＵＳＰ、０．３１ｇの乳酸ナトリウム、０．０３ｇの塩化カリウムＵＳＰおよび０．０２ｇの塩化カルシウム２Ｈ２Ｏ  ＵＳＰを含有する。モル浸透圧濃度は２７５ｍＯｓｍｏｌ／Ｌであり、これは等張と非常に近い。
【０１９０】
したがって、液体配合物は、適切な再構成試薬中に再懸濁または再水和した凍結乾燥した調製物であってもよい。適切な再構成試薬は、生理学的に許容される担体、例えば、本明細書に記載のような生理学的に許容される液体を含む。好ましくは、凍結乾燥した調製物の再懸濁または再水和によって、凍結乾燥前の本発明の液体配合物中の当初の粒子の実質的に同じ特性（例えば、平均粒子直径、サイズ分布、多分散性、薬物濃度）および形態を有する粒子の溶液または懸濁液が形成され、凍結乾燥前の当初の液体配合物の治療剤とポリマーの比がさらに維持される。ある特定の態様において、再懸濁し、または再水和した凍結乾燥した調製物中の粒子の約５０％〜約１００％、好ましくは約８０％〜約１００％は、当初の液体配合物中の粒子のサイズ分布および／または薬物とポリマーの比を維持する。好ましくは、凍結乾燥した調製物を再懸濁させることによって生成した配合物中の粒子の特性および多分散性は、約５％超、約１０％超、約１５％超、約２０％超、約１５％超、約３０％超、約３５％超、約４０％超、約４５％超、または約５０％超で、凍結乾燥の前の当初の溶液または懸濁液中の粒子の特性、および多分散性と異ならない。
【０１９１】
好ましくは、この態様の液体配合物は粒子を含有し、１種または複数の炭水化物（例えば、環状オリゴ糖および／または非環状オリゴ糖）を含むいずれかの凍結乾燥保護剤を使用して凍結乾燥し、再懸濁することができるより高いポリマー濃度（粒子を形成するポリマー（複数可）の濃度）によって特徴付けられる。例えば、ポリマー濃度は、少なくとも約２０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約３０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約３１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約３２ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約３３ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約３４ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約３５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約３６ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約３７ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約３８ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約３９ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約４０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約４５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約５５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約６０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約６５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約７０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約７５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約８０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約８５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約９０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約９５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｍｇ／ｍＬでよい。例えば、液体配合物は、再構成した凍結乾燥した調製物でよい。
ポリマードットの凍結乾燥
【０１９２】
本開示は、発色団ポリマードットが、光学特性、コロイドの安定性、および発色団ポリマードット生体共役体については、貯蔵の間の細胞標的化性能をまだ保持する一方で、凍結乾燥し、貯蔵することができるという驚くべき発見に部分的に基づいている。任意の特定な理論に限定されない一方で、凍結乾燥の間に、凍結乾燥保護剤分子は、表面層を形成し、水が粒子から除去されるにつれ発色団ポリマードットおよび／または発色団ポリマードットシェル中に拡散することができると考えられる。その結果、粒子のコロイドの安定性および光物理的特性は保持することができ、いくつかの場合において、凍結乾燥、および貯蔵後に溶液中に再構成した後で改善することができる。
【０１９３】
本明細書に記載されている凍結乾燥した組成物および方法は、発色団ポリマードットに関する組成物および方法についてのいくつかの有用な結果を実現することができる。いくつかの場合において、発色団ポリマードットおよび／または発色団ポリマードットシェル中に凍結乾燥保護剤分子が存在することによって、例えば、鎖−鎖の相互作用を低減させることができる。本明細書においてさらに記載するように、鎖−鎖の相互作用の低減は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと比較して、蛍光量子収率を増加させ、かつ従前に凍結乾燥した発色団ポリマードットの発光帯域幅を狭くし得る。
【０１９４】
例えば、フローサイトメトリーを使用することによって、凍結乾燥した発色団ポリマードット生体共役体は、細胞の標識化の間に生物学的標的化特性を保持した。一例において、−８０℃にて６カ月間貯蔵したＰＦＢＴからなる凍結乾燥した発色団ポリマードット生体共役体で標識した細胞は、同一であるが凍結乾燥していない発色団ポリマードット生体共役体で標識したものより約２２％明るかった。凍結乾燥は、発色団ポリマードット生体共役体を貯蔵および運送するための有用なアプローチであり得、発色団ポリマードットを保証するための重要な実際的な考察は生物医学的研究における使用のために広範に採用される。
【０１９５】
凍結乾燥のプロセスは、一般に当技術分野で周知である種々の方法で行うことができる。凍結乾燥は、例えば、本明細書に記載されている発色団ポリマードットを保存し、例えば、輸送のためにこれらをより便利なものとするために使用される脱水プロセスを含むことができる。凍結乾燥は一般に、発色団ポリマードットを冷凍し、次いで、例えば、周囲の圧力を低減させ、材料中の冷凍した水を直接的に固相から気相に昇華させることを可能とすることによって作用する。
【０１９６】
本開示は、凍結乾燥した発色団ポリマードット組成物を調製する方法をさらに含む。方法は、本明細書に記載されている種々の溶液中の発色団ポリマードットを凍結乾燥することを含むことができる。溶液中の発色団ポリマードットを凍結乾燥することは、任意の適切な温度にて発色団ポリマードット溶液を冷凍し、凍結乾燥した発色団ポリマードット組成物を生成することを含むことができる。
【０１９７】
本開示は、発色団ポリマードットを凍結乾燥し、凍結乾燥した発色団ポリマードット組成物を形成するための方法を含む。凍結乾燥は、本明細書に記載されている種々の構成物を含む水溶液中で発色団ポリマードットを冷凍させることを含むことができる。冷凍は種々の温度で行うことができる。例えば、発色団ポリマードット組成物は、約−１０℃またはそれ未満、約−２０℃またはそれ未満、約−３０℃またはそれ未満、約−４０℃またはそれ未満、約−５０℃またはそれ未満、約−６０℃またはそれ未満、約−７０℃またはそれ未満、あるいは約−８０℃またはそれ未満の温度で冷凍することによって凍結乾燥することができる。冷凍は種々の温度で行うことができる。例えば、発色団ポリマードット組成物は、−１０℃またはそれ未満、−２０℃またはそれ未満、−３０℃またはそれ未満、−４０℃またはそれ未満、−５０℃またはそれ未満、−６０℃またはそれ未満、−７０℃またはそれ未満、あるいは−８０℃またはそれ未満の温度で冷凍することによって凍結乾燥することができる。
【０１９８】
溶液中の凍結乾燥の前の発色団ポリマードットの濃度はまた、広範な範囲に亘って変化することができる。特定の場合において、溶液中の凍結乾燥の前の発色団ポリマードットの濃度は、発色団ポリマードットのサイズによって決まることができる。より小さな発色団ポリマードットは、より大きな発色団ポリマードットより高い濃度を伴うことができる。いくつかの場合において、発色団ポリマードットは、ミリモル、マイクロモル、ナノモル、またはピコモル範囲で凍結乾燥の前に溶液中に存在することができる。いくつかの場合において、発色団ポリマードットは、約１ｎＭ〜１００μＭ、約１００ｎＭ〜１μＭ、約１００ｎＭ〜７５０ｎＭ、約１００ｎＭ〜５００ｎＭ、約１ｎＭ〜５００ｎＭ、１〜１００ｎＭ、約１〜７５ｎＭ、約１〜５０ｎＭ、約１〜２５ｎＭ、約１〜２０ｎＭ、約１〜１５ｎＭ、約１〜１０ｎＭ、または約１〜５ｎＭで存在することができる。いくつかの場合において、発色団ポリマードットは、１ｎＭ〜１００μＭ、１００ｎＭ〜１μＭ、１００ｎＭ〜７５０ｎＭ、１００ｎＭ〜５００ｎＭ、１ｎＭ〜５００ｎＭ、１〜１００ｎＭ、１〜７５ｎＭ、１〜５０ｎＭ、１〜２５ｎＭ、１〜２０ｎＭ、１〜１５ｎＭ、１〜１０ｎＭ、または１〜５ｎＭで存在することができる。
【０１９９】
いくつかの場合において、方法は、例えば、他の構成物と組み合わせた発色団ポリマードットを含む溶液を提供し、溶液を所望の温度にて、例えば、約−８０℃または−２０℃にてある期間冷凍することを含むことができる。
【０２００】
いくつかの場合において、本開示は、反応性官能基を有する発色団ポリマードットを含む凍結乾燥した組成物を生成する方法を含む。反応性官能基は、アミン反応性官能基、例えば、スクシンイミジルエステル、スルフヒドリル反応性官能基、例えば、マレイミド、またはクリックケミストリーのための反応性官能基、例えば、アルキン、アジド、歪んだアルキン、シクロオクチン、およびホスフィン基を含むことができる。
【０２０１】
いくつかの場合において、方法は、例えば、（ａ）（ｉ）良溶媒中の反応性官能基を有する共役ポリマーの溶液を（ｉｉ）貧溶媒と合わせ、それに続いて、貧溶媒を蒸発させ、それによって発色団ポリマードットを含む第１の懸濁液を形成することと、（ｂ）懸濁液を凍結乾燥し、それによって反応性官能基を有する発色団ポリマードットの凍結乾燥した組成物を形成することとを含むことができ、発色団ポリマードットは、少なくとも１種の縮合共役ポリマーを含む蛍光ナノ粒子である。
【０２０２】
良好な溶媒は、例えば、その中で発色団ポリマードットを形成することを伴わずに共役ポリマーが可溶性である溶媒を含むことができる。貧溶媒は、例えば、その中で共役ポリマーが難溶性であり、それによって貧溶媒中への導入の後に発色団ポリマードットを形成する溶媒を含むことができる。
【０２０３】
上記の凍結乾燥方法を使用して、例えば、アミン反応性発色団ポリマードット、例えば、スクシンイミジルエステルを有する発色団ポリマードットを生成することができる。これらの発色団ポリマードットは、例えば、生体分子（例えば、タンパク質）と直接混合し、発色団ポリマードット生体共役体を形成することができる。いくつかの場合において、ＥＤＣ／ＮＨＳを使用して、発色団ポリマードット−ＣＯＯＨを活性化し、発色団ポリマードット−ＮＨＳを形成することができ、この後で凍結乾燥を行うことができる。特定の場合において、ＮＨＳ−末端共役ポリマーを合成し、メタノールまたはエタノールの溶液中に注入し、発色団ポリマードットを形成することができる。次いで、発色団ポリマードットを凍結乾燥して、凍結乾燥した発色団ポリマードット−ＮＨＳを生成することができる。
【０２０４】
凍結乾燥した組成物は、種々の凍結乾燥剤（例えば、凍結防止剤および／または凍結乾燥保護剤）を含むことができる。構成物は、例えば、発色団ポリマードットの凍結乾燥を実現するのに十分な濃度で、水中で可溶性である分子を含むことができる。いくつかの場合において、炭水化物は、凍結防止剤として使用し得る。炭水化物の例は、単糖、オリゴ糖（例えば、二糖）、および多糖、ならびに単糖、オリゴ糖、および多糖に由来する化合物を含むことができる。
【０２０５】
いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードット組成物は、これらに限定されないが、単糖、オリゴ糖（例えば、二糖）、および／または多糖などの種々の構成物を含むことができる。糖アルコールならびに／または他の適切な凍結防止剤および／もしくは凍結乾燥保護剤を使用することができる。
【０２０６】
凍結乾燥を促進するために加える構成物（例えば、凍結防止剤および／または凍結乾燥保護剤）は、例えば、約１％〜約５０％、約５％〜約４０％、約１０％〜約３０％、約１％〜約２０％、および約１０％〜約２０％の範囲の濃度で凍結乾燥の前に発色団ポリマードット溶液中に存在することができる。いくつかの場合において、濃度は、１％〜５０％、５％〜４０％、１０％〜３０％、１％〜２０％、および１０％〜２０％の範囲であり得る。いくつかの場合において、凍結乾燥を促進するために加えられる構成物（例えば、凍結防止剤および／または凍結乾燥保護剤）は、例えば、１％〜５０％、５％〜４０％、１０％〜３０％、１％〜２０％、および１０％〜２０％の範囲の濃度で凍結乾燥の前に発色団ポリマードット溶液中に存在することができる。いくつかの場合において、濃度は、１％〜５０％、５％〜４０％、１０％〜３０％、１％〜２０％、および１０％〜２０％の範囲であり得る。いくつかの場合において、いくつかの異なるタイプ（例えば、２つまたはそれを超える）の凍結防止剤および／または凍結乾燥保護剤は、凍結乾燥の前に発色団ポリマードット溶液中に同じまたは異なる濃度で存在することができる。
【０２０７】
いくつかの場合において、単糖は、一般式：Ｃｘ（Ｈ２Ｏ）ｙ、ｘ≧３を有する分子でよい。単糖の例には、これらに限定されないが、グルコース、フルクトース、ガラクトース、キシロース、リボースなどが含まれ得る。
【０２０８】
いくつかの場合において、オリゴ糖は、例えば、２〜３０の単糖単位を含有する短い単糖ポリマーでよい。オリゴ糖は、例えば、例えば２つの単糖が一緒に接合し、例えば水の分子が除去されるときに形成される分子を指す二糖を含むことができる。二糖の例には、これらに限定されないが、スクロース、ラクツロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、セロビオースなどが含まれ得る。他のオリゴ糖には、これらに限定されないが、三糖（例えば、ラフィノース）、四糖（例えば、スタキオース）、および五糖（例えば、ベルバスコース）が含まれ得る。
【０２０９】
種々の濃度範囲を二糖のために使用することができる。二糖は、例えば、約１％〜約５０％、約５％〜約４０％、約１０％〜約３０％、約１％〜約２０％、および約１０％〜約２０％の範囲の濃度で凍結乾燥の前に発色団ポリマードット溶液中に存在することができる。いくつかの場合において、二糖は、例えば、１％〜５０％、５％〜４０％、１０％〜３０％、１％〜２０％、および１０％〜２０％の範囲の濃度で凍結乾燥の前に発色団ポリマードット溶液中に存在することができる。いくつかの場合において、例えば、スクロースは、約１０％ｗ／ｖ〜約２０％ｗ／ｖで凍結乾燥の前に発色団ポリマードット溶液中に存在することができる。いくつかの場合において、例えば、スクロースは、１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで凍結乾燥の前に発色団ポリマードット溶液中に存在することができる。様々な二糖の濃度は、本明細書に記載されている技術を使用して最適化することができる。例えば、発色団ポリマードット溶液は、調製し、凍結乾燥し、再懸濁することができ、次いで、発色団ポリマードットの特性（例えば、サイズ）を分析して、凍結乾燥によって凝集が起こらなかったことを確認することができる。いくつかの場合において、二糖は、例えば、１％〜５０％、５％〜４０％、１０％〜３０％、１％〜２０％、および１０％〜２０％の範囲の濃度で凍結乾燥の前に発色団ポリマードット溶液中に存在することができる。いくつかの場合において、例えば、スクロースは、１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで凍結乾燥の前に発色団ポリマードット溶液中に存在することができる。様々な二糖の濃度は、本明細書に記載されている技術を使用して最適化することができる。
【０２１０】
１つの場合において、本開示は、これらに限定されないが、スクロース、トレハロース、マルトース、ラクトースなどの二糖、および任意の許容される塩または水和形態を含めた、凍結乾燥した発色団ポリマードット組成物を含む。いくつかの場合において、１タイプの二糖を使用する（例えば、スクロース）。特定の場合において、少なくとも２つのタイプの二糖を使用することができる（例えば、トレハロースおよびスクロース）。二糖（複数可）を、凍結乾燥の前に発色団ポリマードットの溶液に加えることができる。
【０２１１】
いくつかの場合において、溶液中の二糖（複数可）の濃度は、広範な範囲に亘って変化させることができ、これは再構成されたときに、概ね同じ粒子直径を有する発色団ポリマードットを実現する有用な凍結乾燥した発色団ポリマードット組成物を生成するための公知の技術によって仕立てることができる。
【０２１２】
いくつかの場合において、多糖は、オリゴ糖の長さを超えた単糖ポリマー、例えば、上記の３０超の単糖単位を含むポリマーでよい。
【０２１３】
糖アルコールをまた、本明細書において提供する凍結乾燥した組成物と共に使用し得る。例えば、糖アルコールは、炭水化物の水素化された形態でよく、そのカルボニル基（アルデヒドまたはケトン、還元糖）は、第一級または第二級ヒドロキシル基に還元されている。糖アルコールは、一般式Ｈ（ＨＣＨＯ）ｎ＋１Ｈを有する。例としての糖アルコールには、これらに限定されないが、アルジトール（例えば、キシリトール、マンニトールまたはソルビトール）などが含まれ得る。
【０２１４】
本開示は、本明細書において提供する凍結乾燥した組成物中で使用することができる他の凍結防止剤および／または凍結乾燥保護剤をさらに含む。例としての凍結乾燥保護剤には、例えば、グリシン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、ゼラチンおよびａｅｒｏｓｉｌが含まれ得る。
【０２１５】
他の構成物をまた、本明細書に記載されている溶液および凍結乾燥した組成物中に含むことができる。例えば、ポリエチレングリコールまたは他の水溶性ポリマーを使用することができる。緩衝液（例えば、Ｔｒｉｓ、ＨＥＰＥＳ、および他の公知の緩衝液）ならびに塩（例えば、ＮａＣｌ）をまた使用することができる。
【０２１６】
いくつかの場合において、本開示は、発色団ポリマードットの懸濁液を凍結乾燥し、それによって発色団ポリマードットの凍結乾燥した組成物を形成することを含む、凍結乾燥した組成物を生成する方法を含み、発色団ポリマードットは、少なくとも１種の縮合共役ポリマーを含む蛍光ナノ粒子である。いくつかの場合において、方法は、例えば、（ａ）（ｉ）発色団ポリマードットを含む液体と（ｉｉ）第１の水溶液とを合わせ、それによって、発色団ポリマードットを含む第１の懸濁液を形成することと、（ｂ）懸濁液を凍結乾燥し、それによって発色団ポリマードットの凍結乾燥した組成物を形成することとを含むことができ、発色団ポリマードットは、少なくとも１種の縮合共役ポリマーを含む蛍光ナノ粒子である。
【０２１７】
例示的な場合において、本明細書に記載されている組成物は、蛍光ナノ粒子を含む凍結乾燥した組成物を含むことができ、蛍光ナノ粒子は、炭水化物を含むことが多い少なくとも１種の縮合共役ポリマーを含む。例えば、炭水化物は、単糖、二糖、オリゴ糖、多糖、またはこれらの組合せを含んでもよく、二糖を含むことが多い。例えば、二糖は、スクロース、トレハロース二水和物、マルトース一水和物、およびラクトース一水和物からなる群から選択してもよく、しばしば、二糖（ｄｉｓａｃｃｈａｒａｉｄｅ）は、スクロースである。例えば、スクロースは、約１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在し得る。いくつかの場合において、二糖は、約１％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖで存在する。他の場合において、二糖は、約１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在する。例えば、スクロースは、１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在し得る。例えば、スクロースは、１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在し得る。いくつかの場合において、二糖は、１％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖで存在する。他の場合において、二糖は、１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在する。例えば、スクロースは、１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在し得る。いくつかの場合において、二糖は、１％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖで存在する。他の場合において、二糖は、１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在する。
【０２１８】
いくつかの場合において、組成物は、アルジトール、ヒドロキシプロピル−シクロデキストリン、ＢＳＡ、またはこれらの組合せを含み得る。
【０２１９】
本明細書に記載されている組成物は、生体分子に共役し得る蛍光ナノ粒子を含み得る。しばしば、生体分子は、タンパク質、抗体、核酸分子、脂質、ペプチド、アプタマー、薬物、またはこれらの組合せを含む。例えば、生体分子は、ストレプトアビジンを含む。
【０２２０】
いくつかの場合において、本明細書に記載されている組成物は、凍結乾燥の前の蛍光ナノ粒子と比較して、水溶液に分散したときに同様のまたは増加した量子収率を含み得る蛍光ナノ粒子を含み得る。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットの量子収率は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットの量子収率は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットのおよその量子収率は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同様でよい。しばしば、蛍光ナノ粒子は、凍結乾燥の前の蛍光ナノ粒子の粒子直径と比較して、水溶液に分散したときに同様の粒子直径を含む。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットの粒子直径は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットの粒子直径は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットのおよその粒子直径は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同様でよい。
【０２２１】
いくつかの場合において、本明細書に記載されている組成物は、半導体ポリマーを含む少なくとも１種の縮合共役ポリマーであり得る。しばしば、１種の縮合共役ポリマーは、フルオレンポリマー、フルオレン（ｆｌｏｕｒｅｎｅ）をベースとするポリマーまたはコポリマー、フェニレンビニレンポリマーまたはコポリマー、フェニレンエチニレンポリマーまたはコポリマー、ＢＯＤＩＰＹをベースとするポリマーまたはコポリマーからなる群から選択される。例えば、少なくとも１種の縮合共役ポリマーは、ポリ（９，９−ジヘキシルフルオレニル−２，７−ジイル）（ＰＤＨＦ）、ポリ（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）（ＰＦＯ）、ポリ［｛９，９−ジオクチル−２，７−ジビニレン−フルオレニレン｝−ａｌｔ−ｃｏ−｛２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−フェニレン｝］（ＰＦＰＶ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（１，４−ベンゾ−｛２，１，３｝−チアジアゾール）］（ＰＦＢＴ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（４，７−ジ−２−チエニル−２，１，３−ベンゾチアジアゾール）］（ＰＦＴＢＴ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−９−ｃｏ−（４，７−ジ−２−チエニル−２，１，３−ベンゾチアジアゾール）］（ＰＦ−０．１ＴＢＴ））、およびポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−フェニレンビニレン］（ＭＥＨ−ＰＰＶ）、ポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−（１−シアノビニレン−１，４−フェニレン）］（ＣＮ−ＰＰＶ）、ＢＯＤＩＰＹ５７０、ＢＯＤＩＰＹ５９０、およびＢＯＤＩＰＹ６９０からなる群から選択される。
【０２２２】
しばしば、蛍光ナノ粒子は、複数のポリマーを含み、例えば、蛍光ナノ粒子は、ポリマーを含み、ポリマーは、複数のポリマーを含む。いくつかの場合において、複数のポリマーの少なくとも５０％は、共役ポリマーを含む。
【０２２３】
いくつかの場合において、本明細書に記載されている組成物は、動的光散乱によって測定して、約３０ｎｍ未満の平均直径を有する蛍光ナノ粒子を含み得る。いくつかの場合において、溶液への分散の後の蛍光粒子の量子収率は、凍結乾燥していない蛍光粒子より高い。いくつかの場合において、溶液への分散の後の蛍光粒子の発光帯域幅の半値全幅は、凍結乾燥していない蛍光粒子の半値全幅発光帯域幅より狭い。
【０２２４】
例示的な場合において、本明細書に記載されている組成物は、蛍光ナノ粒子を含む凍結乾燥した組成物を含んでもよく、蛍光ナノ粒子は、凍結乾燥している。しばしば、組成物は、炭水化物を含み得る。例えば、炭水化物は、単糖、二糖、オリゴ糖、多糖、またはこれらの組合せを含む。好ましい場合において、組成物は、二糖を含み得、例えば、二糖は、約１％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖまたは約１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在し得る。例えば、二糖は、スクロース、トレハロース二水和物、マルトース一水和物、およびラクトース一水和物からなる群から選択される。しばしば、二糖は、スクロースであり、例えば、スクロースは、約１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在する。別の好ましい場合において、組成物は、二糖を含み得、例えば、二糖は、１％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖまたは１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在し得る。例えば、二糖は、スクロース、トレハロース二水和物、マルトース一水和物、およびラクトース一水和物からなる群から選択される。しばしば、二糖は、スクロースであり、例えば、スクロースは、１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在する。
【０２２５】
組成物は、アルジトール、ヒドロキシプロピル−シクロデキストリン、ＢＳＡ、またはこれらの組合せをさらに含み得る。
【０２２６】
いくつかの場合において、本明細書に記載されている組成物は、生体分子に共役し得る蛍光ナノ粒子を含み得る。例えば、生体分子は、タンパク質、抗体、核酸分子、脂質、ペプチド、アプタマー、薬物、またはこれらの組合せを含み、しばしば、生体分子は、ストレプトアビジンを含む。
【０２２７】
いくつかの場合において、本明細書に記載されている組成物は、凍結乾燥の前の蛍光ナノ粒子と比較して、水溶液に分散したときに同様のまたは増加した量子収率を含み得る蛍光ナノ粒子を含み得る。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットの量子収率は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットの量子収率は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットのおよその量子収率は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同様でよい。しばしば、蛍光ナノ粒子は、凍結乾燥の前の蛍光ナノ粒子の粒子直径と比較して、水溶液に分散したときに同様の粒子直径を含む。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットの粒子直径は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットの粒子直径は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットのおよその粒子直径は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または１００％同様でよい。
【０２２８】
いくつかの場合において、組成物は、半導体ポリマーを含む少なくとも１種の縮合共役ポリマーを含み得る。しばしば、少なくとも１種の縮合共役ポリマーは、フルオレンポリマー、フルオレンをベースとするポリマーまたはコポリマー、フェニレンビニレンポリマーまたはコポリマー、フェニレンエチニレンポリマーまたはコポリマー、ＢＯＤＩＰＹをベースとするポリマーまたはコポリマーからなる群から選択される。例えば、少なくとも１種の縮合共役ポリマーは、ポリ（９，９−ジヘキシルフルオレニル−２，７−ジイル）（ＰＤＨＦ）、ポリ（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）（ＰＦＯ）、ポリ［｛９，９−ジオクチル−２，７−ジビニレン−フルオレニレン｝−ａｌｔ−ｃｏ−｛２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−フェニレン｝］（ＰＦＰＶ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（１，４−ベンゾ−｛２，１，３｝−チアジアゾール）］（ＰＦＢＴ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（４，７−ジ−２−チエニル−２，１，３−ベンゾチアジアゾール）］（ＰＦＴＢＴ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−９−ｃｏ−（４，７−ジ−２−チエニル−２，１，３−ベンゾチアジアゾール）］（ＰＦ−０．１ＴＢＴ））、およびポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−フェニレンビニレン］（ＭＥＨ−ＰＰＶ）、ポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−（１−シアノビニレン−１，４−フェニレン）］（ＣＮ−ＰＰＶ）、ＢＯＤＩＰＹ５７０、ＢＯＤＩＰＹ５９０、およびＢＯＤＩＰＹ６９０からなる群から選択される。
【０２２９】
しばしば、蛍光ナノ粒子は、複数のポリマーを含む。例えば、蛍光ナノ粒子は、ポリマーを含んでもよく、ポリマーは、複数のポリマーを含む。いくつかの場合において、複数のポリマーの少なくとも５０％は、共役ポリマーを含む。
【０２３０】
本明細書に記載されている組成物は、動的光散乱によって測定して約３０ｎｍ未満の平均直径を有し得る蛍光ナノ粒子をさらに含み得る。いくつかの場合において、溶液への分散の後の蛍光粒子の量子収率は、凍結乾燥していない蛍光粒子より高い。いくつかの場合において、溶液への分散の後の蛍光粒子の発光帯域幅の半値全幅は、凍結乾燥していない蛍光粒子の半値全幅発光帯域幅より狭い。
【０２３１】
本明細書に記載されている組成物は、本明細書に記載されている方法および／またはキットのいずれかの１つによって調製される蛍光ナノ粒子の凍結乾燥した組成物をさらに含み得る。いくつかの場合において、凍結乾燥した組成物は、蛍光粒子を含む懸濁液を凍結乾燥して、それによって蛍光ナノ粒子の凍結乾燥した組成物を形成することを含み、蛍光ナノ粒子が、ポリマーを含む発色団ポリマードットである、方法によって調製してもよい。
【０２３２】
いくつかの場合において、凍結乾燥をする方法の凍結乾燥した組成物は、約−１０℃未満、約−２０℃未満、約−３０℃未満、または約−４０℃未満の温度で懸濁液を冷凍することを含み得る。例示的な場合において、凍結乾燥は、−８０℃のまたは概ね−８０℃の温度にて懸濁液を冷凍することを含み得る。
【０２３３】
組成物は、凍結乾燥の前に、（ｉ）蛍光ナノ粒子を含む液体と（ｉｉ）第１の水溶液とを合わせ、それによって蛍光ナノ粒子を含む懸濁液を形成することをさらに含み得る。しばしば、方法は、（ｉ）蛍光ナノ粒子を含む液体と（ｉｉ）第１の水溶液とを合わせ、それによって蛍光ナノ粒子を含む懸濁液を形成することをさらに含む。
【０２３４】
いくつかの場合において、第１の水溶液は、凍結乾燥剤を含む。例えば、凍結乾燥剤は、炭水化物であり得る。いくつかの場合において、炭水化物は、単糖、二糖、オリゴ糖、多糖、またはこれらの組合せを含み得る。例えば、炭水化物は、単糖、二糖、オリゴ糖、多糖、またはこれらの組合せから選択し得る。しばしば、懸濁液は、二糖を含み、例えば、二糖は、約１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在してもよく、または二糖は、約１％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖで存在してもよい。いくつかの場合において、二糖は、スクロース、トレハロース二水和物、マルトース一水和物、およびラクトース一水和物からなる群から選択し得る。例えば、二糖は、スクロースである。いくつかの場合において、スクロースは、約１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在し得る。
【０２３５】
組成物は、アルジトール、ヒドロキシプロピル−シクロデキストリン、ウシ血清アルブミンまたはこれらの組合せをさらに含み得る。いくつかの場合において、凍結乾燥した組成物を、第２の水溶液とさらに混合し、それによって第２の水溶液に分散した蛍光ナノ粒子を含む第２の懸濁液を形成し得る。しばしば、第２の水溶液中の分散した蛍光ナノ粒子は、凍結乾燥していない蛍光ナノ粒子と比較して、同様のまたは増加した量子収率を有する。例えば、第２の水溶液中の分散した蛍光ナノ粒子は、凍結乾燥していない蛍光ナノ粒子の粒子直径と比較して、同様の粒子直径を有する。いくつかの場合において、分散した蛍光ナノ粒子は、動的光散乱によって測定して約３０ｎｍ未満の平均直径を有する。
【０２３６】
組成物は、半導体ポリマーを含むポリマーをさらに含み得る。しばしば、ポリマーは、フルオレンポリマー、フルオレンをベースとするポリマー、フェニレンビニレンポリマー、およびフェニレンエチニレンポリマーからなる群から選択される。例えば、ポリマーは、ポリ（９，９−ジヘキシルフルオレニル−２，７−ジイル）（ＰＤＨＦ）、ポリ（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）（ＰＦＯ）、ポリ［｛９，９−ジオクチル−２，７−ジビニレン−フルオレニレン｝−ａｌｔ−ｃｏ−｛２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−フェニレン｝］（ＰＦＰＶ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（１，４−ベンゾ−｛２，１，３｝−チアジアゾール）］（ＰＦＢＴ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（４，７−ジ−２−チエニル−２，１，３−ベンゾチアジアゾール）］（ＰＦＴＢＴ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−９−ｃｏ−（４，７−ジ−２−チエニル−２，１，３−ベンゾチアジアゾール）］（ＰＦ−０．１ＴＢＴ））、およびポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−フェニレンビニレン］（ＭＥＨ−ＰＰＶ）、ポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−（１−シアノビニレン−１，４−フェニレン）］（ＣＮ−ＰＰＶ）、ＢＯＤＩＰＹ５７０、ＢＯＤＩＰＹ５９０、およびＢＯＤＩＰＹ６９０からなる群から選択される。
【０２３７】
いくつかの場合において、組成物は、凍結乾燥していない蛍光粒子より高い、溶液への分散の後の蛍光粒子の量子収率を有し得る。いくつかの場合において、溶液への分散の後の蛍光粒子の発光帯域幅の半値全幅は、凍結乾燥していない蛍光粒子の半値全幅発光帯域幅より狭い。
【０２３８】
本明細書に記載されている凍結乾燥した組成物は、少なくとも１種の縮合共役ポリマーをさらに含む蛍光ナノ粒子を含み得る。いくつかの場合において、ポリマーは、縮合共役ポリマーである。いくつかの場合において、蛍光ナノ粒子は、半導体ポリマーを含む。他の場合において、蛍光（ｆｌｕｏｒｅｃｅｎｔ）ポリマーは、ＢＯＤＩＰＹ誘導体を含む。例えば、ＢＯＤＩＰＹ誘導体は、式（Ｉ）の構造を有し、
【化１１】
0006587605.tif 000014
式中、Ｒ１、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ４ＡおよびＲ４Ｂのそれぞれは、水素、アルキル、アラルキル、アリール、およびアルコキシ−アリールから独立に選択され、ＢＯＤＩＰＹ誘導体は、Ｒ１、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ４ＡおよびＲ４Ｂ、またはこれらの組合せへの付着によって発色団ポリマー中に統合されている。
【０２３９】
いくつかの場合において、蛍光ナノ粒子を含む凍結乾燥した組成物は、動的光散乱によって測定して１ｎｍ〜１００ｎｍの平均直径を有し得る。例えば、蛍光ナノ粒子は、動的光散乱によって測定して、約１００ｎｍ未満の平均直径を有する。別の例として、蛍光ナノ粒子は、動的光散乱によって測定して、約１００ｎｍ未満、約９０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満、約６０ｎｍ未満、約５０ｎｍ未満、約４０ｎｍ未満、約３０ｎｍ未満、約２０ｎｍ未満、約１０ｎｍ未満、約５ｎｍ未満または約１ｎｍ未満の平均直径を有する。例えば、蛍光ナノ粒子は、動的光散乱によって測定して、１００ｎｍ未満の平均直径を有する。別の例として、蛍光ナノ粒子は、動的光散乱によって測定して、１００ｎｍ未満、９０ｎｍ未満、８０ｎｍ未満、７０ｎｍ未満、６０ｎｍ未満、５０ｎｍ未満、４０ｎｍ未満、３０ｎｍ未満、２０ｎｍ未満、１０ｎｍ未満または５ｎｍ未満または１ｎｍ未満の平均直径を有する。例えば、蛍光ナノ粒子は、動的光散乱によって測定して、約１００ｎｍの平均直径を有する。別の例として、蛍光ナノ粒子は、動的光散乱によって測定して、約１００ｎｍ、９０ｎｍ、８０ｎｍ、７０ｎｍ、６０ｎｍ、５０ｎｍ、４０ｎｍ、３０ｎｍ、２０ｎｍ、１０ｎｍ、５ｎｍまたは約１ｎｍの平均直径を有する。例えば、蛍光ナノ粒子は、動的光散乱によって測定して、１００ｎｍの平均直径を有する。別の例として、蛍光ナノ粒子は、動的光散乱によって測定して、１００ｎｍ、９０ｎｍ、８０ｎｍ、７０ｎｍ、６０ｎｍ、５０ｎｍ、４０ｎｍ、３０ｎｍ、２０ｎｍ、１０ｎｍ、５ｎｍまたは１ｎｍの平均直径を有する。
【０２４０】
別の例として、蛍光ナノ粒子は、動的光散乱によって測定して、約１００ｎｍ未満〜約８０ｎｍ未満、約９０ｎｍ未満〜約７０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満〜約６０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満〜約５０ｎｍ未満、約６０ｎｍ未満〜約４０ｎｍ未満、約５０ｎｍ未満〜約３０ｎｍ未満、約４０ｎｍ未満〜約２０ｎｍ未満、約３０ｎｍ未満〜約１０ｎｍ未満、約２０ｎｍ未満〜約１ｎｍ未満、約３０ｎｍ未満〜約５ｎｍ未満、約１０ｎｍ未満〜約５ｎｍ未満、約１０ｎｍ未満〜約１ｎｍ未満の平均直径を有する。別の例として、蛍光ナノ粒子は、動的光散乱によって測定して、１００ｎｍ未満〜８０ｎｍ未満、９０ｎｍ未満〜７０ｎｍ未満、８０ｎｍ未満〜６０ｎｍ未満、７０ｎｍ未満〜５０ｎｍ未満、６０ｎｍ未満〜４０ｎｍ未満、５０ｎｍ未満〜３０ｎｍ未満、４０ｎｍ未満〜２０ｎｍ未満、３０ｎｍ未満〜１０ｎｍ未満、２０ｎｍ未満〜１ｎｍ未満、３０ｎｍ未満〜５ｎｍ未満、１０ｎｍ未満〜５ｎｍ未満、１０ｎｍ未満〜１ｎｍ未満の平均直径を有する。別の例として、蛍光ナノ粒子は、動的光散乱によって測定して、約１００ｎｍ〜約８０ｎｍ、約９０ｎｍ〜約７０ｎｍ、約８０ｎｍ〜約６０ｎｍ、約７０ｎｍ〜約５０ｎｍ、約６０ｎｍ〜約４０ｎｍ、約５０ｎｍ〜約３０ｎｍ、約４０ｎｍ〜約２０ｎｍ、約３０ｎｍ〜約１０ｎｍ、約２０ｎｍ〜約１ｎｍ、約３０ｎｍ〜約５ｎｍ、約１０ｎｍ〜約５ｎｍ、約１０ｎｍ〜約１ｎｍの平均直径を有する。別の例として、蛍光ナノ粒子は、動的光散乱によって測定して、１００ｎｍ〜８０ｎｍ、９０ｎｍ〜７０ｎｍ、８０ｎｍ〜６０ｎｍ、７０ｎｍ〜５０ｎｍ、６０ｎｍ〜４０ｎｍ、５０ｎｍ〜３０ｎｍ、４０ｎｍ〜２０ｎｍ、３０ｎｍ〜１０ｎｍ、２０ｎｍ〜１ｎｍ、３０ｎｍ〜５ｎｍ、１０ｎｍ〜５ｎｍ、１０ｎｍ〜１ｎｍの平均直径を有する。
【０２４１】
いくつかの場合において、少なくとも１種の縮合共役ポリマーは、生体分子に共役している。しばしば、生体分子は、タンパク質、抗体、核酸分子、脂質、ペプチド、アプタマー、薬物、またはこれらの組合せを含む。例えば、生体分子は、ストレプトアビジンを含み得る。別の例として、生体分子は、アプタマーを含み得る。別の例として、生体分子は、核酸を含み得る。別の例として、生体分子は、抗体を含み得る。
【０２４２】
本明細書に記載の方法は、蛍光粒子を含む懸濁液を凍結乾燥して、それによって蛍光ナノ粒子の凍結乾燥した組成物を形成することを含む、凍結乾燥した組成物を生成する方法を含んでもよく、蛍光ナノ粒子は、それぞれが少なくとも１種の縮合共役ポリマーを含む発色団ポリマードットである。しばしば、凍結乾燥は、約−１０℃未満、約−２０℃未満、約−３０℃未満、または約−４０℃未満の温度にて懸濁液を冷凍することを含む。いくつかの場合において、凍結乾燥は、−８０℃または概ね−８０℃の温度にて懸濁液を冷凍することを含む。しばしば、凍結乾燥は、−１０℃未満、−２０℃未満、−３０℃未満、または−４０℃未満の温度にて懸濁液を冷凍することを含む。いくつかの場合において、凍結乾燥は、−８０℃または概ね−８０℃の温度にて懸濁液を冷凍することを含む。
【０２４３】
いくつかの場合において、本明細書に記載の方法は、凍結乾燥の前に、（ｉ）蛍光ナノ粒子を含む液体と（ｉｉ）第１の水溶液とを合わせ、それによって蛍光ナノ粒子を含む懸濁液を形成することをさらに含み得る。いくつかの場合において、本明細書に記載の方法は、（ｉ）蛍光ナノ粒子を含む液体と（ｉｉ）第１の水溶液とを合わせ、それによって蛍光ナノ粒子を含む懸濁液を形成することをさらに含み得る。しばしば、水溶液は、凍結乾燥剤を含む。いくつかの場合において、懸濁液は、炭水化物を含み、炭水化物は、単糖、二糖、オリゴ糖、多糖、またはこれらの組合せを含むことが多い。例えば、炭水化物は、単糖、二糖、オリゴ糖、多糖、またはこれらの組合せから選択される。いくつかの場合において、二糖は、スクロース、トレハロース二水和物、マルトース一水和物、およびラクトース一水和物からなる群から選択し得る。
【０２４４】
いくつかの場合において、懸濁液は、アルジトール、ヒドロキシプロピル−シクロデキストリン、ウシ血清アルブミンまたはこれらの組合せを含む。しばしば、懸濁液は、二糖を含み、例えば、二糖は、約１％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖで存在してもよく、または約１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在してもよい。例えば、二糖は、スクロースであり、例えば、スクロースは、約１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在し得る。しばしば、懸濁液は、二糖を含み、例えば、二糖は、１％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖで存在してもよく、または１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在してもよい。例えば、二糖は、スクロースであり、例えば、スクロースは、１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在し得る。
【０２４５】
いくつかの場合において、本明細書に記載の方法は、凍結乾燥した組成物を第２の水溶液と混合し、それによって第２の水溶液に分散した蛍光ナノ粒子を含む第２の懸濁液を形成することをさらに含み得る。しばしば、第２の水溶液中の分散した蛍光ナノ粒子は、凍結乾燥していない蛍光ナノ粒子と比較して、同様のまたは増加した量子収率を有する。しばしば、第２の水溶液中の分散した蛍光ナノ粒子は、凍結乾燥していない蛍光ナノ粒子の粒子直径と比較して、同様の粒子直径を有する。いくつかの場合において、本明細書に記載されている組成物は、凍結乾燥の前の蛍光ナノ粒子と比較して、水溶液に分散したときに同様のまたは増加した量子収率を含み得る蛍光ナノ粒子を含み得る。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットの量子収率は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットの量子収率は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットのおよその量子収率は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同様でよい。しばしば、蛍光ナノ粒子は、凍結乾燥の前の蛍光ナノ粒子の粒子直径と比較して、水溶液に分散したときに同様の粒子直径を含む。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットの粒子直径は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットの粒子直径は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットのおよその粒子直径は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同様でよい。いくつかの場合において、分散した蛍光ナノ粒子は、動的光散乱によって測定して、約３０ｎｍ未満の平均直径を有する。
【０２４６】
本明細書に記載の方法は、半導体ポリマーを含む少なくとも１種の縮合共役ポリマーをさらに含み得る。しばしば、少なくとも１種の縮合共役ポリマーは、フルオレンポリマー、フルオレンをベースとするポリマー、フェニレンビニレンポリマー、およびフェニレンエチニレンポリマーからなる群から選択される。例えば、少なくとも１種の縮合共役ポリマーは、ポリ（９，９−ジヘキシルフルオレニル−２，７−ジイル）（ＰＤＨＦ）、ポリ（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）（ＰＦＯ）、ポリ［｛９，９−ジオクチル−２，７−ジビニレン−フルオレニレン｝−ａｌｔ−ｃｏ−｛２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−フェニレン｝］（ＰＦＰＶ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（１，４−ベンゾ−｛２，１，３｝−チアジアゾール）］（ＰＦＢＴ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（４，７−ジ−２−チエニル−２，１，３−ベンゾチアジアゾール）］（ＰＦＴＢＴ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−９−ｃｏ−（４，７−ジ−２−チエニル−２，１，３−ベンゾチアジアゾール）］（ＰＦ−０．１ＴＢＴ））、およびポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−フェニレンビニレン］（ＭＥＨ−ＰＰＶ）、ポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−（１−シアノビニレン−１，４−フェニレン）］（ＣＮ−ＰＰＶ）、ＢＯＤＩＰＹ５７０、ＢＯＤＩＰＹ５９０、およびＢＯＤＩＰＹ６９０からなる群から選択される。
【０２４７】
いくつかの場合において、溶液への分散の後の蛍光粒子の量子収率は、凍結乾燥していない蛍光粒子より高い。しばしば、溶液への分散の後の蛍光粒子の発光帯域幅の半値全幅は、凍結乾燥していない蛍光粒子の半値全幅発光帯域幅より狭い。
【０２４８】
本明細書に記載の方法は、蛍光粒子を含む懸濁液を凍結乾燥して、それによって蛍光ナノ粒子の凍結乾燥した組成物を形成することを含む、凍結乾燥した組成物を生成する方法を含み得、蛍光ナノ粒子は、ポリマーを含む発色団ポリマードットである。
【０２４９】
しばしば、凍結乾燥は、約−１０℃未満、約−２０℃未満、約−３０℃未満、または約−４０℃未満の温度にて懸濁液を冷凍することを含む。いくつかの場合において、凍結乾燥は、−８０℃または概ね−８０℃の温度にて懸濁液を冷凍することを含む。しばしば、凍結乾燥は、−１０℃未満、−２０℃未満、−３０℃未満、または−４０℃未満の温度にて懸濁液を冷凍することを含む。いくつかの場合において、凍結乾燥は、−８０℃または概ね−８０℃の温度にて懸濁液を冷凍することを含む。
【０２５０】
いくつかの場合において、本明細書に記載の方法は、凍結乾燥の前に、（ｉ）蛍光ナノ粒子を含む液体と（ｉｉ）第１の水溶液とを合わせ、それによって蛍光ナノ粒子を含む懸濁液を形成することをさらに含み得る。いくつかの場合において、本明細書に記載の方法は、（ｉ）蛍光ナノ粒子を含む液体と（ｉｉ）第１の水溶液とを合わせ、それによって蛍光ナノ粒子を含む懸濁液を形成することをさらに含み得る。しばしば、水溶液は、凍結乾燥剤を含む。いくつかの場合において、懸濁液は、炭水化物を含み、炭水化物は、単糖、二糖、オリゴ糖、多糖、またはこれらの組合せを含むことが多い。例えば、炭水化物は、単糖、二糖、オリゴ糖、多糖、またはこれらの組合せから選択される。いくつかの場合において、二糖は、スクロース、トレハロース二水和物、マルトース一水和物、およびラクトース一水和物からなる群から選択し得る。
【０２５１】
いくつかの場合において、懸濁液は、アルジトール、ヒドロキシプロピル−シクロデキストリン、ウシ血清アルブミンまたはこれらの組合せを含む。しばしば、懸濁液は、二糖を含み、例えば、二糖は、約１％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖで存在してもよく、または約１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在してもよい。例えば、二糖は、スクロースであり、例えば、スクロースは、約１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在し得る。いくつかの場合において、懸濁液は、アルジトール、ヒドロキシプロピル−シクロデキストリン、ウシ血清アルブミンまたはこれらの組合せを含む。しばしば、懸濁液は、二糖を含み、例えば、二糖は、１％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖで存在してもよく、または１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在してもよい。例えば、二糖は、スクロースであり、例えば、スクロースは、１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在し得る。
【０２５２】
いくつかの場合において、本明細書に記載の方法は、凍結乾燥した組成物を第２の水溶液と混合し、それによって第２の水溶液に分散した蛍光ナノ粒子を含む第２の懸濁液を形成することをさらに含み得る。しばしば、第２の水溶液中の分散した蛍光ナノ粒子は、凍結乾燥していない蛍光ナノ粒子と比較して、同様のまたは増加した量子収率を有する。しばしば、第２の水溶液中の分散した蛍光ナノ粒子は、凍結乾燥していない蛍光ナノ粒子の粒子直径と比較して、同様の粒子直径を有する。いくつかの場合において、本明細書に記載されている組成物は、凍結乾燥の前の蛍光ナノ粒子と比較して、水溶液に分散したときに同様のまたは増加した量子収率を含み得る蛍光ナノ粒子を含み得る。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットの量子収率は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットの量子収率は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットのおよその量子収率は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同様でよい。しばしば、蛍光ナノ粒子は、凍結乾燥の前の蛍光ナノ粒子の粒子直径と比較して、水溶液に分散したときに同様の粒子直径を含む。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットの粒子直径は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットの粒子直径は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットのおよその粒子直径は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同様でよい。いくつかの場合において、分散した蛍光ナノ粒子は、動的光散乱によって測定して、約３０ｎｍ未満の平均直径を有する。
【０２５３】
本明細書に記載の方法は、半導体ポリマーを含む少なくとも１種の縮合共役ポリマーをさらに含み得る。しばしば、少なくとも１種の縮合共役ポリマーは、フルオレンポリマー、フルオレンをベースとするポリマー、フェニレンビニレンポリマー、およびフェニレンエチニレンポリマーからなる群から選択される。例えば、少なくとも１種の縮合共役ポリマーは、ポリ（９，９−ジヘキシルフルオレニル−２，７−ジイル）（ＰＤＨＦ）、ポリ（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）（ＰＦＯ）、ポリ［｛９，９−ジオクチル−２，７−ジビニレン−フルオレニレン｝−ａｌｔ−ｃｏ−｛２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−フェニレン｝］（ＰＦＰＶ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（１，４−ベンゾ−｛２，１，３｝−チアジアゾール）］（ＰＦＢＴ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（４，７−ジ−２−チエニル−２，１，３−ベンゾチアジアゾール）］（ＰＦＴＢＴ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−９−ｃｏ−（４，７−ジ−２−チエニル−２，１，３−ベンゾチアジアゾール）］（ＰＦ−０．１ＴＢＴ））、およびポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−フェニレンビニレン］（ＭＥＨ−ＰＰＶ）、ポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−（１−シアノビニレン−１，４−フェニレン）］（ＣＮ−ＰＰＶ）、ＢＯＤＩＰＹ５７０、ＢＯＤＩＰＹ５９０、およびＢＯＤＩＰＹ６９０からなる群から選択される。
【０２５４】
いくつかの場合において、方法は、凍結乾燥していない蛍光粒子より高い溶液への分散の後の蛍光粒子の量子収率を含み得る。しばしば、溶液への分散の後の蛍光粒子の発光帯域幅の半値全幅は、凍結乾燥していない蛍光粒子の半値全幅発光帯域幅より狭い。
【０２５５】
本明細書に記載の方法は、蛍光ナノ粒子を含む凍結乾燥した組成物と水溶液とを合わせることと、上記の組合せをかき混ぜて、蛍光ナノ粒子の分散した試料を生成することとを含む、ナノ粒子の凍結乾燥したものを分散させる方法をさらに含み得る。しばしば、ポリマーは、半導体ポリマーを含む。いくつかの場合において、ポリマーは、フルオレンポリマー、フルオレンをベースとするポリマー、フェニレンビニレンポリマー、およびフェニレンエチニレンポリマーからなる群から選択される。例えば、ポリマーは、ポリ（９，９−ジヘキシルフルオレニル−２，７−ジイル）（ＰＤＨＦ）、ポリ（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）（ＰＦＯ）、ポリ［｛９，９−ジオクチル−２，７−ジビニレン−フルオレニレン｝−ａｌｔ−ｃｏ−｛２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−フェニレン｝］（ＰＦＰＶ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（１，４−ベンゾ−｛２，１，３｝−チアジアゾール）］（ＰＦＢＴ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（４，７−ジ−２−チエニル−２，１，３−ベンゾチアジアゾール）］（ＰＦＴＢＴ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−９−ｃｏ−（４，７−ジ−２−チエニル−２，１，３−ベンゾチアジアゾール）］（ＰＦ−０．１ＴＢＴ））、およびポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−フェニレンビニレン］（ＭＥＨ−ＰＰＶ）、ポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−（１−シアノビニレン−１，４−フェニレン）］（ＣＮ−ＰＰＶ）、ＢＯＤＩＰＹ５７０、ＢＯＤＩＰＹ５９０、およびＢＯＤＩＰＹ６９０からなる群から選択される。
【０２５６】
いくつかの場合において、方法は、ＢＯＤＩＰＹ誘導体を含み得るポリマーを含むことができる。しばしば、ＢＯＤＩＰＹ誘導体は、式（Ｉ）の構造を有してもよく、
【化１２】
0006587605.tif 000015
式中、Ｒ１、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ４ＡおよびＲ４Ｂのそれぞれは、水素、アルキル、アラルキル、アリール、およびアルコキシ−アリールから独立に選択され、ＢＯＤＩＰＹ誘導体は、Ｒ１、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ４ＡおよびＲ４Ｂ、またはこれらの組合せへの付着によって発色団ポリマー中に統合される。
【０２５７】
いくつかの場合において、少なくとも１種の縮合共役ポリマーは、生体分子に共役している。しばしば、生体分子は、タンパク質、抗体、核酸分子、脂質、ペプチド、アプタマー、薬物、またはこれらの組合せを含む。例えば、生体分子は、ストレプトアビジンを含み得る。別の例として、生体分子は、アプタマーを含み得る。別の例として、生体分子は、核酸を含み得る。別の例として、生体分子は、抗体を含み得る。
【０２５８】
いくつかの場合において、方法は、動的光散乱によって測定して３０ｎｍ〜１００ｎｍの平均直径を有し得る蛍光ナノ粒子をさらに含み得る。例えば、蛍光ナノ粒子は、動的光散乱によって測定して約１００ｎｍ未満の平均直径を有する。
凍結乾燥したポリマードットの貯蔵および凍結乾燥したポリマードットの分散
【０２５９】
本明細書に記載されている凍結乾燥した発色団ポリマードットの方法、キットおよび組成物は、発色団ポリマードットを長期間貯蔵する能力を含む。凍結乾燥した発色団ポリマードット組成物として長期間に亘る発色団ポリマードットの貯蔵の後に、発色団ポリマードットを溶液に再分散させ、種々の目的のために使用することができる。いくつかの場合において、発色団ポリマードットは、例えば、凝集を伴わずに再分散し、それによって、凍結乾燥の前の発色団ポリマードットと同様のサイズ（例えば、粒子直径）特徴を有することができる。いくつかの場合において、本明細書に記載されている組成物は、水溶液に分散したときに、凍結乾燥の前の蛍光ナノ粒子と比較して同様のまたは増加した量子収率を含み得る蛍光ナノ粒子を含み得る。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットの量子収率は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットの粒子直径は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットのおよその粒子直径は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同様でよい。
【０２６０】
いくつかの場合において、貯蔵期間には、これらに限定されないが、１日超、１週間超、１カ月超、２カ月超、３カ月超、６カ月超、または１年超が含まれ得る。いくつかの場合において、貯蔵期間は、約１日から約１年、約１日から約６カ月、約１日から約３カ月、約１日から約２カ月、または約１日から約１カ月の範囲でよい。
【０２６１】
凍結乾燥した組成物、キットおよび方法は、発色団ポリマードットについてのいくつかの有用な結果を実現することができる。例えば、フローサイトメトリーを使用することによって、凍結乾燥した発色団ポリマードット生体共役体は、これらの生物学的標的化特性を保持し、細胞を効果的に標識することができた。一例において、−８０℃にて６カ月間貯蔵した、ＰＦＢＴからなる凍結乾燥した発色団ポリマードット生体共役体で標識した細胞は、同一であるが凍結乾燥していない発色団ポリマードット生体共役体で標識したものより約２２％明るかった。これらの結果は、とりわけ、凍結乾燥が、発色団ポリマードット生体共役体を貯蔵および運送するための有用なアプローチであり得ることを示し、これは生物医学的研究において広範に採用される発色団ポリマードットを保証するための重要な実際的な考察である。
【０２６２】
凍結乾燥した組成物、キットおよび方法は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと比較して、発色団ポリマードットの凍結乾燥した組成物のコロイドの安定性を維持するためのいくつかの有用な結果を実現することができる。
凍結乾燥したポリマードットの特性
【０２６３】
発色団ポリマードットは蛍光ポリマーをベースとする粒子であり、疎水性コアを含有することができ、したがって水が発色団ポリマードットのコアから除去される場合、潜在的に凝集し得る。本開示のポリマーは、適切な疎水性化合物と凝集することができ、それによって好ましい疎水的相互作用によって一緒に保持される水中の複合体を形成する。本開示のポリマーと相互作用することができる疎水基の非限定的例には、ポリスチレン、ポリアリール、ポリオレフィン、ペプチド、炭化水素、およびハロゲン化炭化水素、例えば、フルオロカーボンが含まれる。
【０２６４】
疎水基は、別の基に接続することができる。ポリマーおよび疎水性化合物の凝集は、このように接続している他の基を発色団ポリマードットに付着させる。他の基は、親水基、例えば、ポリエチレングリコール、カルボン酸またはその塩でよい。親水基に接続した発色団ポリマードットと凝集する疎水性部分を有する化合物の非限定的例は、ポリスチレンポリエチレングリコールカルボン酸、またはその塩（ＰＳＰＥＧＣＯＯＨ）、ポリスチレンマレイン酸（ｍａｅｌｉｃ）無水物（ＰＳＭＡ）、およびポリスチレンポリエチレングリコール（ＰＳＰＥＧ）を含む。
【０２６５】
有機共役ポリマーおよびオリゴマーは、無機半導体化学反応に由来する用語である高濃度ドーピングによって金属性であり得る。共役ポリマーにおけるドーピングは、π−電子系の酸化または還元を含むことができ、それぞれ、ｐ−ドーピングおよびｎ−ドーピングと称される。
【０２６６】
本明細書において提供する発色団ポリマードットは、これらに限定されないが、沈殿に依存する方法、エマルジョン（例えば、ミニまたはミクロエマルジョン）の形成に依存する方法、および縮合に依存する方法を含めて、ポリマーを崩壊させるための当技術分野において公知の任意の方法によって形成し得る。いくつかの場合において、本明細書に記載されている発色団ポリマードットは、ナノ沈殿によって形成することができる。
【０２６７】
本明細書に記載されている凍結乾燥した組成物および方法は、凍結乾燥のプロセスによって発色団ポリマードットの光物理的特性を改善させることができる。例えば、発色団ポリマードットは、疎水性コアを含有することができ、したがって水が系から除去される場合、鎖の立体構造は変化し得る。凍結乾燥の間に凍結乾燥保護剤を使用する場合において、凍結乾燥保護剤分子は、表面層を形成し、水が除去されるにつれ発色団ポリマードットシェル中に拡散することができ、したがってポリマー鎖−鎖相互作用が低減する。その結果、凍結乾燥および貯蔵後の溶液への再構成の後で、発色団ポリマードットの光物理的特性は改善することができる。
【０２６８】
本開示は、蛍光ナノ粒子を含む凍結乾燥した組成物を含み、蛍光ナノ粒子は、少なくとも１種の縮合共役ポリマーを含む。様々な共役ポリマー（例えば、半導体ポリマー）を、本明細書においてさらに記載する。いくつかの場合において、蛍光ナノ粒子は、光学特性を有し得る。いくつかの場合において、蛍光量子収率を増加させることができる。いくつかの場合において、蛍光発光帯域幅を低減させることができる。いくつかの場合において、細胞標識化輝度を増加させることができる。
【０２６９】
特定の場合において、凍結乾燥した組成物中の発色団ポリマードットが再構成されるとき、光学特性は、凍結乾燥の前の溶液中の発色団ポリマードットと比較して、同様であるかまたは改善されている。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットの光学特性は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットのおよその光学特性は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同様でよい。
【０２７０】
例えば、二糖と組み合わせた凍結乾燥後、発色団ポリマードットは、同様のまたは増加した量子収率を予想外に示すことができる。
【０２７１】
量子収率。いくつかの場合において、発色団ポリマードットの蛍光量子収率は、凍結乾燥のプロセスによって改善する。量子収率は、例えば、分子によって吸収される光子に対する放出される光子の比でよい。しばしば、量子収率の百分率は、基底状態に緩和する総数を超える光子を放出することによって緩和する画分によって測定することができる。いくつかの場合において、発色団ポリマードットが励起状態に励起するとき、これは光子を放出することによって基底状態に緩和することができる。しばしば、組成物は、凍結乾燥した発色団ポリマードットを含んでもよく、凍結乾燥した発色団ポリマードットは、一度も凍結乾燥していない類似の発色団ポリマードットの量子収率よりも大きな量子収率を有する。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットの量子収率は、一度も凍結乾燥していない類似の発色団ポリマードットの量子収率の１倍より大きい。
【０２７２】
いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットの量子収率は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットの量子収率は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットのおよその量子収率は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットの量子収率超は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと８０％、８５％超、９０％超、９１％超、９２％超、９３％超、９４％超、９５％超、９６％超、９７％超、９８％超、９９％超または１００％同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットのおよその量子収率超は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと８０％、約８５％超、約９０％超、約９１％超、約９２％超、約９３％超、約９４％超、約９５％超、約９６％超、約９７％超、約９８％超、約９９％超または約１００％超同様でよい。
【０２７３】
いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットは、凍結乾燥していない発色団ポリマードットの蛍光量子収率と等しい、またはこれより高い蛍光量子収率を有する。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットは、凍結乾燥していない発色団ポリマードットの蛍光量子収率より１．５倍高い蛍光量子収率を有する。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットは、凍結乾燥していない発色団ポリマードットの蛍光量子収率より２倍高い蛍光量子収率を有する。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットは、凍結乾燥していない発色団ポリマードットの蛍光量子収率より２．５倍高い蛍光量子収率を有する。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットは、凍結乾燥していない発色団ポリマードットの蛍光量子収率より３倍高い蛍光量子収率を有する。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットは、凍結乾燥していない発色団ポリマードットの蛍光量子収率より３．５倍高い蛍光量子収率を有する。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットは、凍結乾燥していない発色団ポリマードットの蛍光量子収率より４倍高い蛍光量子収率を有する。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットは、凍結乾燥していない発色団ポリマードットの蛍光量子収率より４．５倍高い蛍光量子収率を有する。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットは、凍結乾燥していない発色団ポリマードットの蛍光量子収率より５倍高い蛍光量子収率を有する。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットは、凍結乾燥していない発色団ポリマードットの蛍光量子収率より５倍超高い蛍光量子収率を有する。
【０２７４】
いくつかの場合において、発色団ポリマードットは、凍結乾燥し得る。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットは、凍結乾燥していない発色団ポリマードットの量子収率の約４０％を超えもしくはそれと等しく、約３０％を超えもしくはそれと等しく、約２０％を超えもしくはそれと等しく、約１０％を超えもしくはそれと等しく、または約１％を超えもしくはそれと等しい量子収率を有し得る。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットの量子収率は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットの量子収率の３０％超、２０％超、１０％超、または１％超であり得る。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットは、下記の範囲内の量子収率を有し得る。凍結乾燥していない発色団ポリマードットの量子収率の１〜１０％、５〜１５％、１０〜２０％、１５〜２５％、２０〜３０％または３０％超。
【０２７５】
吸収波長。凍結乾燥した発色団ポリマードットは、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと比較して広範囲の吸収波長を有し得る。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットは、約１０００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約９００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約８００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約７５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約７００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約６５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約６００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約５５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約５００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、４５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約４００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約３５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約３００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約２５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約２００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約１５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、または約１００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しい吸収波長を有し得る。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットは、１０００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、９００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、８００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、７５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、７００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、６５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、６００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、５５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、５００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、４５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、４００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、３５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、３００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、２５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、２００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、１５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、または１００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しい吸収波長を有し得る。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットは、下記の範囲、１００〜３００ｎｍ、２００〜４００ｎｍ、３００ｎｍ〜５００ｎｍ、４００ｎｍ〜６００ｎｍ、５００〜７００ｎｍ、６００ｎｍ〜８００ｎｍまたは８００ｎｍ〜１０００ｎｍ内の吸収波長を有し得る。いくつかの場合において、およその凍結乾燥した発色団ポリマードットは、下記の範囲、約１００〜３００ｎｍ、約２００〜４００ｎｍ、約３００ｎｍ〜５００ｎｍ、約４００ｎｍ〜６００ｎｍ、約５００〜７００ｎｍ、６００ｎｍ〜８００ｎｍまたは８００ｎｍ〜１０００ｎｍ内の吸収波長を有し得る。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットの吸収波長は、４０５ｎｍ、４５０ｎｍ、４８８、５３２ｎｍ、６３３ｎｍまたは７００ｎｍであり得る。
【０２７６】
いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットの吸収波長は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットの吸収波長は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットのおよその吸収波長は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットの吸収波長超は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと８０％超、８５％超、９０％超、９１％超、９２％超、９３％超、９４％超、９５％超、９６％超、９７％超、９８％超、９９％超または１００％同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットのおよその吸収波長超は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと約８０％超、約８５％超、約９０％超、約９１％超、約９２％超、約９３％超、約９４％超、約９５％超、約９６％超、約９７％超、約９８％超、約９９％超または１００％同様でよい。
【０２７７】
光ルミネセンス波長。凍結乾燥した発色団ポリマードットは、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと比較して広範囲の光ルミネセンス波長を有し得る。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットは、約１０００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約９００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約８００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約７５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約７００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約６５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約６００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約５５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約５００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、４５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約４００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約３５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約３００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約２５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約２００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、約１５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、または約１００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しい光ルミネセンスを有し得る。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットは、１０００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、９００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、８００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、７５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、７００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、６５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、６００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、５５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、５００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、４５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、４００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、３５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、３００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、２５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、２００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、１５０ｎｍ未満でありもしくはそれと等しく、または１００ｎｍ未満でありもしくはそれと等しい光ルミネセンスを有し得る。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットは、下記の範囲、１００〜３００ｎｍ、２００〜４００ｎｍ、３００ｎｍ〜５００ｎｍ、４００ｎｍ〜６００ｎｍ、５００〜７００ｎｍ、６００ｎｍ〜８００ｎｍまたは８００ｎｍ〜１０００ｎｍ内の光ルミネセンスを有し得る。いくつかの場合において、およその凍結乾燥した発色団ポリマードットは、下記の範囲、約１００〜３００ｎｍ、約２００〜４００ｎｍ、約３００ｎｍ〜５００ｎｍ、約４００ｎｍ〜６００ｎｍ、約５００〜７００ｎｍ、約６００ｎｍ〜８００ｎｍまたは８００ｎｍ〜１０００ｎｍ内の光ルミネセンスを有し得る。いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットの光ルミネセンスは、４０５ｎｍ、４５０ｎｍ、４８８、５３２ｎｍ、６３３ｎｍまたは７００ｎｍであり得る。
【０２７８】
いくつかの場合において、凍結乾燥した発色団ポリマードットの光ルミネセンス波長は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットの光ルミネセンス波長は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットのおよその光ルミネセンス波長は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットの光ルミネセンス波長超は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと８０％超、８５％超、９０％超、９１％超、９２％超、９３％超、９４％超、９５％超、９６％超、９７％超、９８％超、９９％超または１００％同様でよい。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットのおよその光ルミネセンス波長超は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと約８０％超、約８５％超、約９０％超、約９１％超、約９２％超、約９３％超、約９４％超、約９５％超、約９６％超、約９７％超、約９８％超、約９９％超または１００％同様でよい。
用途
【０２７９】
発色団ポリマードットは、多くの検出および／またはイメージング用途のために有用である。検出および／またはイメージング用途は、単一細胞標識化、多細胞標識化、組織標識化、器官標識化、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの標識化、およびｉｎ  ｖｉｖｏでの標識化を含み得る。細胞の検出および／またはイメージングは、細胞が発現する分子、例えば、細胞外分子または細胞内分子を含み得る。検出および／またはイメージングは、細胞、例えば、タンパク質、糖、微粒子に付着した分子を含み得る。
【０２８０】
本開示の場合は、これらに限定されないが、フローサイトメトリー、蛍光活性化ソーティング、免疫蛍光法、免疫組織化学、蛍光多重化、単一分子イメージング、単一粒子トラッキング、タンパク質フォールディング、タンパク質回転力学、ＤＮＡおよび遺伝子分析、タンパク質分析、代謝物分析、脂質分析、ＦＲＥＴをベースとするセンサー、ハイスループットスクリーニング、細胞イメージング、ｉｎ  ｖｉｖｏのイメージング、生体直交型標識化、クリック反応、蛍光をベースとする生物学的アッセイ、例えば、免疫アッセイおよび酵素アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロット、ならびに生物学的アッセイおよび測定における種々の蛍光技術を含めた種々の用途のためのフッ化発色団ポリマードットおよびこれらの生体分子共役体に関する。
【０２８１】
本明細書に記載されている発色団ポリマードットは、医学的診断、医学的予測、生物学的研究、ならびに水および土壌試験を含めた多種多様の用途において使用することができる。同様に、発色団ポリマードットを使用して、多種多様の分析物、例えば、細胞、微生物、細菌、ウイルス、タンパク質、ペプチド、炭水化物、核酸またはその部分を検出し得る。
【０２８２】
本開示は、試料、例えば、混合された試料中の分析物を標識および検出するために発色団ポリマードットを使用する方法を提供する。いくつかの場合において、試料は、液体試料であり得る。液体試料は、体液試料、例えば、血液試料、血漿試料、唾液試料、尿試料、リンパ試料、または脊髄液試料であり得る。いくつかの場合において、試料は、例えば、湖、川、海、池、水流、泉、湿地、または貯水場からの環境液体試料であり得る。他の場合において、試料は、例えば、脱塩プラント、水処理プラント、貯水場、泉、水流、氷河の水流、給水塔、または飲料水の源として意図し得る他の水源からの水試料であり得る。
【０２８３】
いくつかの場合において、分析物、例えば、細胞が発現する分子は、本明細書において提供する発色団ポリマードットで検出し得る。例えば、細胞は、分子（例えば、細胞表面マーカー、細胞内マーカーなど）を認識する作用剤（例えば、抗体）と接触し得る。本明細書において実現されるいくつかの場合において、作用剤は発色団ポリマードットに接続している結合パートナーに結合または接続することができるように修飾される。例えば、作用剤は、作用剤をビオチンまたはストレプトアビジンに共役させることによって修飾し得る。いくつかの具体例において、作用剤は、発色団ポリマードットに共役しているストレプトアビジン分子を認識することができるようにビオチンに共役している。このような発色団ポリマードットは、細胞イメージング研究を含めた多種多様の用途において有用である。
【０２８４】
本明細書において提供する方法は、インキュベーション期間を含み得る。例えば、発色団ポリマードットは、作用剤（例えば、抗体）と共にインキュベートし得る。作用剤（発色団ポリマードットに共役している作用剤を含めた）は、分析物（例えば、細胞）と共にインキュベートし得る。インキュベーション期間は、１００時間未満でありもしくはそれと等しく、７５時間未満でありもしくはそれと等しく、６０時間未満でありもしくはそれと等しく、５０時間未満でありもしくはそれと等しく、２４時間未満でありもしくはそれと等しく、２０時間未満でありもしくはそれと等しく、１５時間未満でありもしくはそれと等しく、１０時間未満でありもしくはそれと等しく、５時間未満でありもしくはそれと等しく、３時間未満でありもしくはそれと等しく、２時間未満でありもしくはそれと等しく、または１時間未満でありもしくはそれと等しい、ある時間に亘って持続し得る。いくつかの場合において、インキュベーション期間は、５分超、１０分超、３０分超、１時間超、２時間超、５時間超、１０時間超、２４時間超、３０時間超、５０時間超、６０時間超、７５時間超または１００時間超であり得る。いくつかの場合において、インキュベーション期間は、５分、１０分、３０分、１時間、２時間、５時間、１０時間、２４時間、３０時間、５０時間、６０時間、７５時間または１００時間であり得る。いくつかの場合において、インキュベーション期間は、約５分、１０分、３０分、１時間、２時間、５時間、１０時間、２４時間、３０時間、５０時間、６０時間、７５時間または１００時間であり得る。
【０２８５】
液体試料中の分析物は、細胞、タンパク質、タンパク質複合体、核酸、核タンパク質複合体、炭水化物、代謝物、カタボライトなどであり得る。いくつかの場合において、分析物は、細胞であり得る。細胞の非限定的例には、哺乳動物細胞、ヒト細胞、ヒトではない哺乳動物細胞、真核細胞、原核細胞、動物細胞、昆虫細胞、細菌細胞、微生物細胞、真菌細胞、両生類細胞および魚の細胞が含まれる。細胞は、これらに限定されないが、神経堤組織、内胚葉組織、外胚葉組織、中胚葉組織、および間葉組織を含めた種々の組織に由来することができる。細胞型には、これらに限定されないが、乳腺細胞、脳細胞、神経細胞、膵臓細胞、肝細胞、胆嚢細胞、胃腸細胞、胃細胞、腎細胞、生殖器系の細胞、心臓細胞、皮膚細胞、結腸細胞、尿道細胞、内胚葉細胞、筋細胞、線維芽細胞、脂肪細胞、腫瘍細胞、がん細胞、ウイルス感染細胞、細菌感染細胞、幹細胞、分裂細胞、アポトーシス細胞、壊死細胞、血液細胞、白血球、およびストローマ細胞が含まれ得る。
【０２８６】
試料は、分析物の標識化に適した作用剤と接触し得る。いくつかの場合において、作用剤は、抗体、抗体フラグメント、ペプチド、Ｆａｂフラグメント、Ｆｃフラグメント、軽鎖、重鎖、免疫グロビン、または免疫グロビンフラグメントであり得る。いくつかの場合において、作用剤は、ペプチドまたは小分子である。いくつかの場合において、作用剤は、修飾されている。作用剤への修飾は、化学修飾、酵素修飾、親水性官能基、疎水性官能基および／または反応性部分の連結を含み得る。
【０２８７】
いくつかの場合において、細胞は、例えば、作用剤によって検出し得る抗原を発現し得る。例えば、作用剤は、抗体であり得る。抗体は、ＭＣＦ−７細胞を含めたいくつかのがん細胞上に発現しているＥｐＣＡＭであり得る。発色団ポリマードットに共役し得る抗体の他の例には、これらに限定されないが、汎サイトケラチン抗体Ａ４５Ｂ／Ｂ３、ＡＥ１／ＡＥ３、またはＣＡＭ５．２（サイトケラチン８（ＣＫ８）、サイトケラチン１８（ＣＫ１８）、またはサイトケラチン１９（ＣＫ１９）を認識する汎サイトケラチン抗体）、および乳がん抗原ＮＹ−ＢＲ−１に対するもの（Ｂ７２６Ｐ、ＡＮＫＲＤ３０Ａ、アンキリン反復ドメイン３０Ａとしてまた公知である）；Ｂ３０５ＤアイソフォームＡまたはＣ（Ｂ３０５Ｄ−ＡまたはＢ３０５Ｄ−Ｃ；抗原Ｂ３０５Ｄとしてまた公知である）；ヘルメス抗原（抗原ＣＤ４４、ＰＧＰ１としてまた公知である）；Ｅ−カドヘリン（ウボモルリン、カドヘリン−１、ＣＤＨ１としてまた公知である）；癌胎児性抗原（ＣＥＡ；ＣＥＡＣＡＭ５または癌胎児性抗原関連細胞接着分子５としてまた公知である）；β−ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｇｏｎａｄｏｔｏｐｈｉｎ）（β−ＨＣＧ；ＣＧＢ、絨毛性（ｃｈｒｏｎｉｃ）ゴナドトロピン、βポリペプチドとしてまた公知である）；カテプシン−Ｄ（ＣＴＳＤとしてまた公知である）；ニューロペプチドＹ受容体Ｙ３（ＮＰＹ３Ｒ；リポ多糖関連タンパク質３（ＬＡＰ３）融合体としてまた公知である）；ケモカイン（ＣＸＣモチーフ、受容体４；ＣＸＣＲ４）；癌遺伝子ＥＲＢＢ１（ｃ−ｅｒｂＢ−１、上皮増殖因子受容体、ＥＧＦＲとしてまた公知である）；Ｈｅｒ−２Ｎｅｕ（ｃ−ｅｒｂＢ−２またはＥＲＢＢ２としてまた公知である）；ＧＡＢＡ受容体Ａパイ（π）ポリペプチド（ＧＡＢＡＲＡＰ、ＧＡＢＡ−Ａ受容体パイ（π）ポリペプチド（ＧＡＢＡ  Ａ（π）、γ−アミノ酪酸Ａ型受容体パイ（π）サブユニット）、またはＧＡＢＲＰとしてまた公知である）；ｐｐＧａｌＮａｃ−Ｔ（６）（β−１−４−Ｎ−アセチル−ガラクトサミニル−トランスフェラーゼ６、ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼ６、ＧａｌＮＡｃＴ６、ＵＤＰ−Ｎ−アセチル−ｄ−ガラクトサミン：ポリペプチドＮ−アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ６、またはＧＡＬＮＴ６としてまた公知である）；ＣＫ７（サイトケラチン７、サルコレクチン、ＳＣＬ、ケラチン７、またはＫＲＴ７としてまた公知である）；ＣＫ８（サイトケラチン８、ケラチン８、またはＫＲＴ８としてまた公知である）；ＣＫ１８（サイトケラチン１８、ケラチン１８、またはＫＲＴ１８としてまた公知である）；ＣＫ１９（サイトケラチン１９、ケラチン１９、またはＫＲＴ１９としてまた公知である）；ＣＫ２０（サイトケラチン２０、ケラチン２０、またはＫＲＴ２０としてまた公知である）；Ｍａｇｅ（メラノーマ抗原ファミリーＡサブタイプまたはＭＡＧＥ−Ａサブタイプとしてまた公知である）；Ｍａｇｅ３（メラノーマ抗原ファミリーＡ３、またはＭＡＧＡ３としてまた公知である）；肝細胞増殖因子受容体（ＨＧＦＲ、乳頭状腎細胞癌２、ＲＣＣ  Ｐ２、癌原遺伝子ｍｅｔ、またはＭＥＴとしてまた公知である）；ムチン−１（ＭＵＣ１、癌抗原１５．��（ＣＡ１５．３）、癌抗原２７．２９（ＣＡ２７．２９）；ＣＤ２２７抗原、エピシアリン、上皮膜抗原（ＥＭＡ）、多形性上皮ムチン（ＰＥＭ）、ピーナッツ反応性尿ムチン（ＰＵＭ）、腫瘍関連糖タンパク質１２（ＴＡＧ１２）としてまた公知である）；総嚢胞性疾患液体タンパク質（ＧＣＤＦＰ−１５、プロラクチン誘導タンパク質、ＰＩＰとしてまた公知である）；ウロキナーゼ受容体（ｕＰＲ、ＣＤ８７抗原、プラスミノーゲンアクチベーター受容体ウロキナーゼ型、ＰＬＡＵＲとしてまた公知である）；ＰＴＨｒＰ（副甲状腺（ｐａｒａｔｈｙｒｏｌｄ）ホルモン関連タンパク質；ＰＴＨＬＨとしてまた公知である）；ＢＳ１０６（Ｂ５１１Ｓ、小乳房上皮ムチン、またはＳＢＥＭとしてまた公知である）；プロスタテイン様リポフィリンＢ（ＬＰＢ、ＬＰＨＢ；また抗原ＢＵ１０１、セクレトグロビンファミリー１−Ｄメンバー２、ＳＣＧＢ１−Ｄ２として公知である）；マンマグロビン２（ＭＧＢ２；またマンマグロビンＢ、ＭＧＢＢ、ラクリグロビン（ＬＧＢ）、リポフィリンＣ（ＬＰＣ、ＬＰＨＣ）、セクレトグロビンファミリー２Ａメンバー１、またはＳＣＧＢ２Ａ１として公知である）；マンマグロビン（ＭＧＢ；またマンマグロビン１、ＭＧＢ１、マンマグロビンＡ、ＭＧＢＡ、セクレトグロビンファミリー２Ａメンバー２、またはＳＣＧＢ２Ａ２として公知である）；乳房セリンプロテアーゼ阻害剤（マスピン、またセリン（またはシステイン）プロテイナーゼ阻害剤クレードＢ（オボアルブミン）メンバー５、またはＳＥＲＰＩＮＢ５として公知である）；前立腺上皮特異的Ｅｔｓ転写因子（ＰＤＥＦ；また不稔アルファモチーフ指向ドメイン含有ｅｔｓ転写因子、またはＳＰＤＥＦとして公知である）；腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー１（結腸直腸癌抗原ＣＯ１７−１Ａ、上皮糖タンパク質２（ＥＧＰ２）、上皮糖タンパク質４０ｋＤａ（ＥＧＰ４０）、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、上皮特異的抗原（ＥＳＡ）、胃腸腫瘍関連抗原７３３−２（ＧＡ７３３−２）、ＫＳ１／４抗原、染色体４表面マーカー１の膜成分（Ｍ４Ｓ１）、ＭＫ−１抗原、ＭＩＣ１８抗原、ＴＲＯＰ−１抗原、またはＴＡＣＳＴＤ１として公知である）；テロメラーゼリバーストランスクリプターゼ（テロメラーゼ触媒サブユニット、またはＴＥＲＴとしてまた公知である）；トレフォイルファクター１（乳がんエストロゲン誘発性配列、ＢＣＥＩ、胃腸トレフォイルタンパク質、ＧＴＦ、ｐＳ２タンパク質、またはＴＦＦ１としてまた公知である）；葉酸；あるいはトレフォイルファクター３（腸トレフォイルファクター、ＩＴＦ、ｐ１．Ｂ；またはＴＦＦ３としてまた公知である）が含まれる。
【０２８８】
いくつかの場合において、分析物を含有する試料は、標識化のために調製し得る。本明細書において提供する方法の任意の段階において、分析物（例えば、細胞）を、ブロッキング緩衝液と共にインキュベートし、作用剤の非特異的結合を防止または低減し得る。いくつかの場合において、非特異的結合は、例えば、別の化合物と比較した非特異的結合の百分率、倍数、変化によって測定し得る。例えば、非特異的結合の倍数は、１倍未満、２倍未満、３倍未満、４倍未満、５倍未満、６倍未満、７倍未満、８倍未満、９倍未満または１０倍未満であり得る。例えば、非特異的結合の倍は、１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍または１０倍であり得る。例えば、非特異的結合の倍は、約１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍または１０倍であり得る。
【０２８９】
本明細書において提供する方法の任意の段階において、分析物（例えば、細胞）は、適切な緩衝溶液で洗浄し得る。細胞は、これらに限定されないが、遠心分離または濾過を含めた当技術分野において公知の任意の方法によって濃縮し得る。いくつかの場合において、分析物（例えば、細胞）は、本明細書において提供する方法の一部として濃縮されない。いくつかの場合において、方法は、細胞を固定剤で固定することを含み得る。他の場合において、方法は、細胞を固定剤で固定することを含み得ない。いくつかの場合において、方法は、細胞を透過処理に適した作用剤で透過処理することを含み得る。他の場合において、細胞の調製は、細胞を透過処理に適した作用剤で透過処理することを含み得ない。
【０２９０】
本開示は、タンパク質およびペプチドの検出のための発色団ポリマードットの使用を提供する。いくつかの場合において、本開示は、対象とするタンパク質またはペプチドの分離および検出を含めた、ウエスタンブロッティングアッセイにおける使用のための生体共役反応した発色団ポリマードットの使用に関する。本開示の様々な場合によると、タンパク質またはペプチドは、クロマトグラフィー、濾過、キャピラリー電気泳動、沈殿、液体もしくは他の抽出方法、免疫沈降、またはこれらの組合せによって分離することができる。特定の場合において、これらに限定されないが、免疫染色、分光光度法、酵素アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）、およびこれらの組合せを含めて、発色団ポリマードットを使用して他のタンパク質検出アッセイを行うことができる。
【０２９１】
本開示は、発色団ポリマードットを使用したタンパク質またはペプチド分析物の検出を含む任意のアッセイと関連して使用することができる。様々な場合において、タンパク質またはペプチドは、検出の前に混合物から分離することができる。本方法は、免疫学的方法（例えば、ＥＬＩＳＡアッセイ、ＲＩＡアッセイ、ＥＬＩ−スポットアッセイ、フローサイトメトリーアッセイ、免疫組織化学アッセイ、免疫染色、ウエスタンブロット分析、およびタンパク質チップアッセイ）、物理的方法（例えば、一次元もしくは二次元ゲル電気泳動アッセイ、キャピラリー電気泳動アッセイ、ＦＲＥＴアッセイ、クロマトグラフアッセイ、または色素検出アッセイ、分光光度法アッセイ、沈殿方法）、あるいはこれらの組合せと共に使用することができる。
【０２９２】
様々な場合において、本開示の発色団ポリマードットを使用した検出の前に、タンパク質またはペプチドは、クロマトグラフィー方法、濾過方法、キャピラリー電気泳動方法、ゲル電気泳動方法、液体抽出方法、沈殿方法、または免疫沈降方法によって分離することができる。さらに、クロマトグラフィー方法は、逆相クロマトグラフィーでよい。様々な場合において、分析処理能力を改善するのと並行に複数のアッセイを行うことができる。
【０２９３】
様々な場合において、本開示は、タンパク質またはペプチドを検出するための方法を提供し、方法は、混合物からタンパク質またはペプチドを分離することと、分離したタンパク質またはペプチドと、分離したタンパク質またはペプチドの少なくともいくつかに対して特異的な生体分子に共役しているポリマードットを含む溶液とを接触させることと、ポリマードットから少なくとも１つのシグナルを検出することとを含み、少なくとも１つのシグナルは、分離したタンパク質またはペプチドに対応する。いくつかの場合において、本方法は、タンパク質またはペプチドを定量化する。
【０２９４】
いくつかの場合において、タンパク質またはペプチドの分離は、クロマトグラフィー方法、濾過方法、キャピラリー電気泳動方法、ゲル電気泳動方法、液体抽出方法、沈殿方法、免疫沈降方法、またはこれらの組合せを含む。
【０２９５】
いくつかの場合において、ポリマードットは、半導体ポリマー、非半導体ポリマー、またはこれらの組合せから選択されるポリマーを含む。
【０２９６】
いくつかの場合において、ポリマードットは、ポリ（（メタ）アクリル酸）をベースとするポリマー、ポリジエンをベースとするポリマー、ポリ（エチレンオキシド）をベースとするポリマー、ポリイソブチレンをベースとするポリマー、ポリスチレンをベースとするポリマー、ポリシロキサンをベースとするポリマー、ポリ（フェロセニルジメチルシラン）をベースとするポリマー、ポリ（２−ビニルナフタレン）をベースとするポリマー、ポリ（ビニルピリジン）をベースとするポリマー、ポリ（Ｎ−メチルビニルピリジニウムヨージド）をベースとするポリマー、またはポリ（ビニルピロリドン）をベースとするポリマーから選択されるポリマーを含む。
【０２９７】
いくつかの場合において、本開示は、ウエスタンブロットアッセイと併せて、タンパク質またはペプチドの検出を実現する。ウエスタンブロッティングは、タンパク質分析方法であり、ここではタンパク質を、典型的にはドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）を使用して質量および／または長さによって分離し、次いで、例えば、ニトロセルロースまたはフルオロポリマー、例えば、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）からなる膜上へと移動させ、標識化手順を使用して可視化する。本開示において、発色団ポリマードットは、ウエスタンブロット分析を使用して５０ピコグラムもの低い量でタンパク質の検出を実現することが示される（例えば、実施例５を参照されたい）。
【０２９８】
いくつかの場合において、本開示は、ポリマードットを使用したウエスタンブロットでのタンパク質の超高感度蛍光イメージングを可能とする。特定の場合において、明るくコンパクトでオレンジ色を発光する半導体ポリマードット、ＣＮ−ＰＰＶを使用する。
【０２９９】
特定の場合において、タンパク質またはペプチドは、ゲル電気泳動を使用して分離する。本開示のさらなる場合において、タンパク質およびペプチドは、キャピラリー電気泳動を使用して分離し、ここではタンパク質またはペプチドは、キャピラリー内で分離および標識される。方法は、標準的ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分離において行われることと同様であるが、キャピラリー空間内で起こる。
【０３００】
ゲル電気泳動の間に、タンパク質は、サイズによってゲルに亘って分離する。次いで、サイズ範囲、または「バンド」は、ゲル内から膜上へと移動することができる。いくつかの場合において、当技術分野においてエレクトロブロッティングとして公知の技術においてゲルから膜上へとタンパク質を引っ張る電流を使用して、タンパク質またはペプチドを膜に移動させる。他の場合において、毛管力を使用して、タンパク質はゲルから膜上へと動き得る。本開示の他の場合において、タンパク質をゲルから膜上へと移動させる他の方法を使用することができる。
【０３０１】
いくつかの場合において、タンパク質は、ニトロセルロース膜上に配置されている。他の場合において、タンパク質は、フルオロポリマー、例えば、ＰＶＤＦからなる膜上に配置されている。任意の適切な膜を、本開示によって使用することができる。
【０３０２】
他の場合において、ドットブロットアッセイにおいて発色団ポリマードットを使用して分子の超高感度蛍光イメージングのための方法を提供する。ドットブロットアッセイにおいて、検出されるタンパク質またはペプチドは、最初に分離されない。代わりに、分離していない試料を、ドットとして膜上に直接的に適用し、標識化手順を使用して可視化する。本開示において、発色団ポリマードットは、ドットブロット分析を使用して２ピコグラムより低い量でタンパク質の検出を実現することが示される。
【０３０３】
単一のピコグラムレベルでの検出限界が、通常のウエスタンブロッティングで観察されてきた。５０ピコグラムレベルでの検出が、ＰＶＤＦ膜上へのＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび移動の後にトランスフェリンおよびトリプシン阻害剤について観察されてきた。多くの利点の中で、本開示は、伝統的な蛍光プローブを伴う通常の手順と比較して、任意のさらなる機器または時間を必要としない方法を含む。
【０３０４】
本開示のいくつかの場合において、１種または複数の生体細胞、組織、液体、または他の試料中に含有される試料について分析を行う。他の場合において、分析は、１種または複数の生体細胞、組織、液体または他の試料から集めた後に、試料について行うことができる。タンパク質またはペプチドは、方法、例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって任意選択で分離することができ、この後、タンパク質またはペプチドは、対象とするタンパク質またはペプチドに対して特異的な生体共役反応した発色団ポリマードットで検出することができる。
【０３０５】
タンパク質またはペプチドは、これらに限定されないが、冷凍および解凍、超音波処理、高圧による均質化、濾過、透過処理、および遠心分離を含むことができる方法によって、組織、細胞、または液体試料から集めることができる。いくつかの場合において、集めたタンパク質またはペプチドはまた、分析の前に１つまたは複数の単離または精製ステップを受けることができる。
【０３０６】
いくつかの場合において、分析は、異なるタンパク質の異種起源のミックスを含有する試料で行うことができる。他の場合において、分析は、精製したタンパク質で行うことができる。
【０３０７】
いくつかの場合において、試料を、例えば、ゲル電気泳動または試料を分離するのに適した別の方法によって分析の前に分離する。いくつかの場合において、タンパク質またはペプチドは、分析前のこれらの質量および／または電荷に基づいて分離する。
【０３０８】
いくつかの場合において、発色団ポリマードットを液体に懸濁させ、この液体を試料と物理的接触させ、試料は第２の液体に懸濁させるか、または表面上に配置する。いくつかの場合において、試料を、膜を含む表面上に配置する。
【０３０９】
いくつかの場合において、発色団ポリマードットを表面上に配置し、この表面を試料と物理的接触させ、試料を液体に懸濁させる。いくつかの場合において、発色団ポリマードットが配置されている表面は、膜を含む。
【０３１０】
いくつかの場合において、免疫沈降アッセイを行い、ここでは発色団ポリマードットを表面上に配置し、液体に懸濁したタンパク質試料と物理的接触させる。この場合によると、タンパク質試料と対応する発色団ポリマードットとの間の接触によって、結合発色団ポリマードットを介してタンパク質が表面に接着することをもたらす。
【０３１１】
様々な場合において、現在記載する発色団ポリマードットは、励起源によって適正に誘発されたとき蛍光を発光する。特定の場合において、存在する発色団ポリマードットの量を決定し、引き続いて、所与の対象とする分析物、例えば、対象とするタンパク質の量と相関することができる。このように、現在記載する方法は、発色団ポリマードット蛍光を誘発する励起光源を利用し、次いで、発色団ポリマードット蛍光を測定し、試料濃度と相関させることができる。様々な場合において、電磁放射線（例えば、赤外線、可視光線、または紫外線）を使用して、発色団ポリマードットの電磁放出をトリガーし、放出されたシグナルを使用して、試料中に存在する標的分子の量を評価することができる。いくつかの場合において、電磁放射線の源は、レーザー、ＬＥＤ、ランプ、スペクトルフィルターまたは多色鏡を含むことができる。いくつかの場合において、光励起源は、ゲルイメージング器具、顕微鏡、または他の適切な器具の成分であり得る。所与の発色団ポリマードットの化学的および物理的特性は、他の光学特性の中で励起波長および発光波長を調整するために調節することができる。
【０３１２】
いくつかの場合において、発色団ポリマードットの励起を誘発する電磁放射線のピーク波長は、約２００ｎｍ〜約３００ｎｍ、約２５０ｎｍ〜約３５０ｎｍ、約３００ｎｍ〜約４００ｎｍ、約３５０ｎｍ〜約４５０ｎｍ、約４００ｎｍ〜約５００ｎｍ、約４５０ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約５００ｎｍ〜約６００ｎｍ、約５５０ｎｍ〜約６５０ｎｍ、約６００ｎｍ〜約７００ｎｍ、約６５０ｎｍ〜約７５０ｎｍ、約７００ｎｍ〜約８００ｎｍ、約７５０ｎｍ〜約８５０ｎｍ、約８００ｎｍ〜約９００ｎｍ、約８５０ｎｍ〜約９５０ｎｍ、または約９００ｎｍ〜約１０００ｎｍである。いくつかの場合において、例えば、マルチプレックス分析において、試料は複数の励起スペクトルに遭遇し得る。
【０３１３】
いくつかの場合において、発色団ポリマードットの励起を誘発する電磁放射線のピーク波長は、２００ｎｍ〜３００ｎｍ、２５０ｎｍ〜３５０ｎｍ、３００ｎｍ〜４００ｎｍ、３５０ｎｍ〜４５０ｎｍ、４００ｎｍ〜５００ｎｍ、４５０ｎｍ〜５５０ｎｍ、５００ｎｍ〜６００ｎｍ、５５０ｎｍ〜６５０ｎｍ、６００ｎｍ〜７００ｎｍ、６５０ｎｍ〜７５０ｎｍ、７００ｎｍ〜８００ｎｍ、７５０ｎｍ〜８５０ｎｍ、８００ｎｍ〜９００ｎｍ、８５０ｎｍ〜９５０ｎｍ、または９００ｎｍ〜１０００ｎｍである。いくつかの場合において、例えば、マルチプレックス分析において、試料は複数の励起スペクトルに遭遇し得る。
【０３１４】
いくつかの場合において、検出したシグナルのピーク波長は、約２００ｎｍ〜約３００ｎｍ、約２５０ｎｍ〜約３５０ｎｍ、約３００ｎｍ〜約４００ｎｍ、約３５０ｎｍ〜約４５０ｎｍ、約４００ｎｍ〜約５００ｎｍ、約４５０ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約５００ｎｍ〜約６００ｎｍ、約５５０ｎｍ〜約６５０ｎｍ、約６００ｎｍ〜約７００ｎｍ、約６５０ｎｍ〜約７５０ｎｍ、約７００ｎｍ〜約８００ｎｍ、約７５０ｎｍ〜約８５０ｎｍ、約８００ｎｍ〜約９００ｎｍ、約８５０ｎｍ〜約９５０ｎｍ、約９００ｎｍ〜約１０００ｎｍ、約９５０ｎｍ〜約１０５０ｎｍ、約１０００ｎｍ〜約１１００ｎｍ、約１０５０ｎｍ〜約１１５０ｎｍ、約１１００ｎｍ〜約１２００ｎｍ、約１１５０ｎｍ〜約１２５０ｎｍ、または約１２００ｎｍ〜約１３００ｎｍである。
【０３１５】
いくつかの場合において、検出したシグナルのピーク波長は、２００ｎｍ〜３００ｎｍ、２５０ｎｍ〜３５０ｎｍ、３００ｎｍ〜４００ｎｍ、３５０ｎｍ〜４５０ｎｍ、４００ｎｍ〜５００ｎｍ、４５０ｎｍ〜５５０ｎｍ、５００ｎｍ〜６００ｎｍ、５５０ｎｍ〜６５０ｎｍ、６００ｎｍ〜７００ｎｍ、６５０ｎｍ〜７５０ｎｍ、７００ｎｍ〜８００ｎｍ、７５０ｎｍ〜８５０ｎｍ、８００ｎｍ〜９００ｎｍ、８５０ｎｍ〜９５０ｎｍ、９００ｎｍ〜１０００ｎｍ、９５０ｎｍ〜１０５０ｎｍ、１０００ｎｍ〜１１００ｎｍ、１０５０ｎｍ〜１１５０ｎｍ、１１００ｎｍ〜１２００ｎｍ、１１５０ｎｍ〜１２５０ｎｍ、または１２００ｎｍ〜１３００ｎｍである。
【０３１６】
いくつかの場合において、アッセイは、５００ピコグラム未満、４００ピコグラム未満、３００ピコグラム未満、２００ピコグラム未満、１００ピコグラム未満、５０ピコグラム未満、４０ピコグラム未満、３０ピコグラム未満、２０ピコグラム未満、１０ピコグラム未満、５ピコグラム未満、４ピコグラム未満、３ピコグラム未満、２ピコグラム未満、または１ピコグラム未満の標的分子、例えば、タンパク質を検出するのに十分に感受性である。
【０３１７】
いくつかの場合において、アッセイは、約５００ピコグラム、約４００ピコグラム、約３００ピコグラム、約２００ピコグラム、約１００ピコグラム、約５０ピコグラム、約４０ピコグラム、約３０ピコグラム、約２０ピコグラム、約１０ピコグラム、約５ピコグラム、約４ピコグラム、約３ピコグラム、約２ピコグラム、または約１ピコグラムの標的分子、例えば、タンパク質を検出するのに十分に感受性である。
【０３１８】
いくつかの場合において、アッセイは、５００ピコグラム、４００ピコグラム、３００ピコグラム、２００ピコグラム、１００ピコグラム、５０ピコグラム、４０ピコグラム、３０ピコグラム、２０ピコグラム、１０ピコグラム、５ピコグラム、４ピコグラム、３ピコグラム、２ピコグラム、または１ピコグラムの標的分子、例えば、タンパク質を検出するのに十分に感受性である。
【０３１９】
多くの利点、例えば、改善された検出感受性および光安定性の中で、本開示は、伝統的な蛍光プローブによる通常の手順と比較して、任意のさらなる機器または時間を必要としない方法を含む。
【０３２０】
本明細書において使用する場合、「特異性」は、それが物理的接触している他の成分に対して有するより、その標的に対してより大きな結合親和性を有する共役発色団ポリマードットを指す。共役発色団ポリマードットは、共役発色団ポリマードットおよびその標的についての平衡定数が、共役発色団ポリマードットおよびそれが物理的接触している他の成分についての平衡定数の平均より大きい場合、その標的に対して特異的である。より大きな特異性は、他の成分と比較して標的に対するより大きな結合親和性を示し、これによって標的についてのアッセイにおける検出感受性の改善を生じさせる。有利なことには、本方法は、本開示の標的分子、例えば、タンパク質またはペプチドに対して非常に高い特異性を示す。
【０３２１】
いくつかの場合において、共役発色団ポリマードットの使用は、これらの発色団ポリマードットによる表面への、例えば、試料が配置されている膜への相対的に低レベルの非特異的吸着によって検出感受性を改善させる。特定の場合において、非特異的吸着は、発色団ポリマードットによる標的タンパク質またはペプチドの正確な検出を妨害することができる非特異的結合を遮断する任意の作用剤である遮断剤を使用することによって最小化される。例えば、遮断剤は、発色団ポリマードットおよび／または生体分子が物理的接触することができる表面上への発色団ポリマードットおよび／または生体分子の非特異的吸着を有利に遮断する。
【０３２２】
特定の場合において、検出は、ピコグラム量の分離したタンパク質を検出することを含む。さらなる場合において、検出は、２ピコグラム未満の分離したタンパク質を検出することを含む。特定の場合において、方法は、電磁放射線源でポリマードットを励起させることをさらに含む。いくつかの場合において、電磁放射線源は、レーザー、ランプ、ＬＥＤ、またはこれらの組合せを含む。さらなる場合において、電磁放射線は、ポリマードットを励起させる前に、スペクトルフィルター、多色鏡、またはこれらの組合せを通過する。
【０３２３】
いくつかの場合において、試料を励起させる電磁放射線のピーク波長は、約２００ｎｍ〜約３００ｎｍ、約２５０ｎｍ〜約３５０ｎｍ、約３００ｎｍ〜約４００ｎｍ、約３５０ｎｍ〜約４５０ｎｍ、約４００ｎｍ〜約５００ｎｍ、約４５０ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約５００ｎｍ〜約６００ｎｍ、約５５０ｎｍ〜約６５０ｎｍ、約６００ｎｍ〜約７００ｎｍ、約６５０ｎｍ〜約７５０ｎｍ、約７００ｎｍ〜約８００ｎｍ、約７５０ｎｍ〜約８５０ｎｍ、約８００ｎｍ〜約９００ｎｍ、約８５０ｎｍ〜約９５０ｎｍ、または約９００ｎｍ〜約１０００ｎｍである。いくつかの場合において、電磁放射線の２つまたはそれを超えるピーク波長は、試料を励起させる。
【０３２４】
いくつかの場合において、試料を励起させる電磁放射線のピーク波長は、２００ｎｍ〜３００ｎｍ、２５０ｎｍ〜３５０ｎｍ、３００ｎｍ〜４００ｎｍ、３５０ｎｍ〜４５０ｎｍ、４００ｎｍ〜５００ｎｍ、４５０ｎｍ〜５５０ｎｍ、５００ｎｍ〜６００ｎｍ、５５０ｎｍ〜６５０ｎｍ、６００ｎｍ〜７００ｎｍ、６５０ｎｍ〜７５０ｎｍ、７００ｎｍ〜８００ｎｍ、７５０ｎｍ〜８５０ｎｍ、８００ｎｍ〜９００ｎｍ、８５０ｎｍ〜９５０ｎｍ、または９００ｎｍ〜１０００ｎｍである。
【０３２５】
本開示は、試料中の分析物を検出するために、特に、本明細書において提供する発色団ポリマードットを検出するために使用し得る方法を提供する。分析物は、発色団ポリマードットで標識してもよい。あるいは、いくつかの場合において、分析物は、発色団ポリマードットと、他の標識剤、例えば、フルオロフォアとの組合せで標識してもよい。いくつかの場合において、試料からの標識した分析物は、発色団ポリマードットの存在について分析し得る。いくつかの場合において、フローサイトメーターを使用して、発色団ポリマードットを検出し得る（例えば、ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩ）。いくつかの場合において、フローサイトメーターは、レーザー（例えば、４０５ｎｍ）を備え得る。いくつかの場合において、発色団ポリマードットは、レーザー（例えば、４０５ｎｍ）、ならびにフィルター（例えば、５０２ｎｍのロングパスフィルターおよび５１０／５０ｎｍのバンドパスフィルター）を有する蛍光発光のための検出チャネルを使用して検出し得る。いくつかの場合において、散乱光および蛍光発光は、光電子増倍管アレイによって検出し得る。いくつかの場合において、フローサイトメトリー実験から得られるデータは、ソフトウェア（例えば、ＦｌｏｗＪｏ）を使用して分析し得る。
【０３２６】
いくつかの場合において、蛍光顕微鏡観察を使用して、発色団ポリマードットを検出し得る。例えば、カメラを備えた蛍光顕微鏡を使用して、細胞を画像化し得る。顕微鏡は、共焦点顕微鏡（例えば、Ｚｅｉｓｓ  ＬＳＭ５１０）であり得る。発色団ポリマードットは、レーザー（例えば、４０５ｎｍのダイオードレーザーまたは４８８ｎｍのアルゴンレーザー）によって励起し得る。いくつかの場合において、細胞は、ガラス底の培養皿を使用することによるなどで画像化し得る。
凍結乾燥したポリマードットを使用するための組成物およびキット
【０３２７】
別の場合において、本開示は、凍結乾燥した発色団ポリマードット組成物を含むキットを提供する。本開示の典型的なキットは、例えば、シール容器中の、本開示の凍結乾燥した発色団ポリマードット組成物の単位剤形を含む。１つの場合において、キットは、適切なビヒクルのシール容器をさらに含み、ここでは発色団ポリマードット組成物は溶解して、投与または使用に適した微粒子非含有の無菌溶液を形成することができる。
【０３２８】
本開示のいくつかの場合において、キットを、ポリマードットを使用した分析のために提供する。様々な場合において、本明細書において提供する組成物のそれぞれはまた、キットにおける使用のために構成することができる。いくつかの場合において、組成物またはキットは、アッセイを行うために生体分子に共役している発色団ポリマードットを含む。いくつかの場合において、キットによって、通常の研究室用機器および手順を使用したより感受性のアッセイを行うための方法および試薬が最終使用者に提供される。しばしば、キットは、標準および／または対照として使用するための物質を任意選択で含み得る。
【０３２９】
様々な場合において、本開示は、絶対濃度もしくは相対濃度を決定するための、または標的タンパク質もしくはペプチドの存在もしくは不存在を決定するためのキットを提供する。いくつかの場合において、本キットを使用して、対象からの試料を分析することができる。いくつかの場合において、キットは、分離方法、例えば、例えば、ゲル電気泳動、キャピラリー電気泳動、クロマトグラフィー、濾過、沈殿、液体もしくは他の抽出方法、免疫沈降、またはこれらの組合せと併せて使用することができる。
【０３３０】
さらなる場合において、本開示のキットは、本開示によるタンパク質またはペプチドを分離および／または検出するための説明書を任意選択で含むことができる。説明書はまた、キットの使用方法、試料の調製方法、使用する試料の種類、結果の分析および解釈方法についての説明書を含むことができる。
【０３３１】
特定の場合において、本開示の組成物およびキットは、半導体ポリマー、非半導体ポリマー、またはそのブレンドから選択される凍結乾燥したポリマーを含むポリマードットを含有する。
【０３３２】
いくつかの場合において、組成物およびキットにおけるポリマードットは、３０ｎｍ未満、２５ｎｍ未満、２０ｎｍ未満、１５ｎｍ未満、１０ｎｍ未満または５ｎｍ未満の限界寸法を有する。
【０３３３】
いくつかの場合において、組成物またはキットは、中間の官能化ステップ、例えば、カルボキシル化を受けてきた発色団ポリマードットを含む。
【０３３４】
特定の場合において、本開示のキットは、ポリマードットを生体分子に共役するための試薬をさらに提供する。
【０３３５】
いくつかの場合において、組成物またはキットは、機能または他の利点、例えば、標的分子についての結合親和性を実現する、１つまたは複数の生体分子に共役している発色団ポリマードットを含む。
【０３３６】
いくつかの場合において、本開示の組成物およびキットは、ポリマードットに共役している共役生体分子を有する。この共役生体分子は、タンパク質または他の適切な生体分子でよい。さらなる場合において、生体分子は、抗体またはアビジンでよい。
【０３３７】
いくつかの場合において、組成物またはキットは、標的タンパク質に特異的に結合する一次抗体に共役している発色団ポリマードットを含む。いくつかの場合において、キットは、標的一次抗体に特異的に結合する二次抗体に共役している発色団ポリマードットを含む。いくつかの場合において、キットは、ビオチンおよび／またはビオチン化標的に特異的に結合するアビジンに共役している発色団ポリマードットを含む。いくつかの場合において、キットは、発色団ポリマードットの他の特性、例えば、これらのサイズ、蛍光、疎水性、非特異的結合または吸着特性などを変化させる１つまたは複数の分子に共役している発色団ポリマードットを含む。
【０３３８】
いくつかの場合において、組成物またはキットは、最終使用者が、発色団ポリマードットを、アッセイを行うことにおける使用のためのタンパク質またはペプチドに共役させるために構成された試薬を含む。いくつかの場合において、キットは、発色団ポリマードット（例えば、本明細書およびＷＯ２０１３／１０１９０２に記載のようなＣＮ−ＰＰＶもしくはＢＯＤＩＰＹ誘導体）、生体分子（例えば、ストレプトアビジン）、ＰＥＧ、および／またはＥＤＬを含む。他の場合において、キットは、最終使用者が発色団ポリマードットを、アッセイを行うことにおける使用のための生体分子に共役させるために構成された他の発色団ポリマードット、生体分子、および試薬を含む。
【０３３９】
様々な場合において、本開示は、ウエスタンブロット分析のための共役ポリマードットを含む組成物を提供する。他の場合において、本開示は、ウエスタンブロット分析のための共役ポリマードットおよび少なくとも１種の遮断剤を含むキットを提供する。他の場合において、本開示は、ウエスタンブロット分析を行うためのキットを提供し、キットは、ポリマードット、共役生体分子、および遮断剤を含む。
【０３４０】
他の場合において、本開示は、タンパク質またはペプチド分析を行うためのキットを提供し、キットは、凍結乾燥したポリマードットおよび／または共役生体分子を含む。いくつかの場合において、ポリマードットは、半導体ポリマー、非半導体ポリマー、またはこれらの組合せから選択されるポリマーを含む。さらなる場合において、ポリマードットは、ＢＯＤＩＰＹ誘導体を含む。またさらなる場合において、ＢＯＤＩＰＹ誘導体は、式（Ｉ）の構造を有し、
【化１３】
0006587605.tif 000016
式中、Ｒ１、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４ＡおよびＲ４Ｂのそれぞれは、水素、アルキル、アラルキル、アリール、およびアルコキシ−アリールから独立に選択され、ＢＯＤＩＰＹ誘導体は、Ｒ１、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４ＡおよびＲ４Ｂ、またはこれらの組合せへの付着によって発色団ポリマー中に統合される。特定の場合において、ポリマードットは、ＣＮ−ＰＰＶからなるポリマーを含む。
【０３４１】
いくつかの場合において、ポリマードットは、ポリ（（メタ）アクリル酸）をベースとするポリマー、ポリジエンをベースとするポリマー、ポリ（エチレンオキシド）をベースとするポリマー、ポリイソブチレンをベースとするポリマー、ポリスチレンをベースとするポリマー、ポリシロキサンをベースとするポリマー、ポリ（フェロセニルジメチルシラン）をベースとするポリマー、ポリ（２−ビニルナフタレン）をベースとするポリマー、ポリ（ビニルピリジン）をベースとするポリマー、ポリ（Ｎ−メチルビニルピリジニウムヨージド）をベースとするポリマー、またはポリ（ビニルピロリドン）をベースとするポリマーから選択されるポリマーを含む。
【０３４２】
様々な場合において、ポリマードットは、ポリ（アクリル酸−ｂ−アクリルアミド）、ポリ（アクリル酸−ｂ−メタクリル酸メチル）、ポリ（アクリル酸−ｂ−Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）、ポリ（ｎ−ブチルアクリレート−ｂ−アクリル酸）、ポリ（アクリル酸ナトリウム−ｂ−メタクリル酸メチル）、ポリ（メタクリル酸−ｂ−メタクリル酸ネオペンチル）、ポリ（メタクリル酸メチル−ｂ−アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸メチル−ｂ−メタクリル酸）、ポリ（メタクリル酸メチル−ｂ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド）、ポリ（メタクリル酸メチル−ｂ−アクリル酸ナトリウム）、ポリ（メタクリル酸メチル−ｂ−メタクリル酸ナトリウム）、ポリ（メタクリル酸ネオペンチル−ｂ−メタクリル酸）、ポリ（メタクリル酸ｔ−ブチル−ｂ−エチレンオキシド）、ポリ（２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸−ｂ−アクリル酸）、ポリ（ブタジエン（１，２付加）−ｂ−エチレンオキシド）、ポリ（ブタジエン（１，２付加）−ｂ−メチルアクリル酸、ポリ（ブタジエン（１，４付加）−ｂ−アクリル酸）、ポリ（ブタジエン（１，４付加）−ｂ−エチレンオキシド、ポリ（ブタジエン（１，４付加）−ｂ−アクリル酸ナトリウム）、ポリ（ブタジエン（１，４付加）−ｂ−Ｎ−メチル４−ビニルピリジニウムヨージド）、ポリ（イソプレン−ｂ−エチレンオキシド）、ポリ（イソプレン−ｂ−エチレンオキシド）、およびポリ（イソプレン−ｂ−Ｎ−メチル２−ビニルピリジニウムヨージド）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−アクリル酸）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−アクリルアミド）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−ブチレンオキシド）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−ｃ−カプロラクトン）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−ラクチド）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−ラクチド）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−メタクリル酸）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−アクリル酸メチル）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−メタクリル酸メチル）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−ニトロベンジルメタクリレート）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリレート）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−酸化プロピレン）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−アクリル酸ｔ−ブチル）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−メタクリル酸ｔ−ブチル）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−テトラヒドロフルフリルメタクリレート）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−２−エチルオキサゾリン）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−２−メタクリル酸ヒドロキシエチル）、ポリ（エチレンオキシド−ｂ−２−メチルオキサゾリン）、ポリ（イソブチレン−ｂ−アクリル酸）、ポリ（イソブチレン−ｂ−エチレンオキシド）、ポリ（イソブチレン−ｂ−メタクリル酸）、ポリ（スチレン−ｂ−アクリルアミド）、ポリ（スチレン−ｂ−アクリル酸）、ポリ（スチレン−ｂ−セシウムアクリレート）、ポリ（スチレン−ｂ−エチレンオキシド）、ポリ（スチレン−ｂ−エチレンオキシド）ブロック接合部において切断可能な酸、ポリ（スチレン−ｂ−メタクリル酸）、ポリ（４−スチレンスルホン酸−ｂ−エチレンオキシド）、ポリ（スチレンスルホン酸−ｂ−メチルブチレン）、ポリ（スチレン−ｂ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド）、ポリ（スチレン−ｂ−Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）、ポリ（スチレン−ｂ−Ｎ−メチル２−ビニルピリジニウムヨージド）、ポリ（スチレン−ｂ−Ｎ−メチル−４−ビニルピリジニウムヨージド）、ポリ（スチレン−ｂ−プロピルアクリル酸）、ポリ（スチレン−ｂ−アクリル酸ナトリウム）ポリ（スチレン−ｂ−メタクリル酸ナトリウム）、ポリｐ−クロロメチルスチレン−ｂ−アクリルアミド）、ポリ（スチレン−ｃｏ−ｐ−クロロメチルスチレン−ｂ−アクリルアミド）、ポリ（スチレン−ｃｏ−ｐ−クロロメチルスチレン−ｂ−アクリル酸）、ポリ（スチレン−ｂ−メチルブチレン−ｃｏ−イソプレンスルホネート）、ポリ（ジメチルシロキサン−ｂ−アクリル酸）、ポリ（ジメチルシロキサン−ｂ−エチレンオキシド）、ポリ（ジメチルシロキサン−ｂ−メタクリル酸）、ポリ（フェロセニルジメチルシラン−ｂ−エチレンオキシド）、ポリ（２−ビニルナフタレン−ｂ−アクリル酸）、ポリ（２−ビニルピリジン−ｂ−エチレンオキシド）、ポリ（２−ビニルピリジン−ｂ−メチルアクリル酸）、ポリ（Ｎ−メチル２−ビニルピリジニウムヨージド−ｂ−エチレンオキシド）、ポリ（Ｎ−メチル４−ビニルピリジニウムヨージド−ｂ−メタクリル酸メチル）、ポリ（４−ビニルピリジン−ｂ−エチレンオキシド）、ポリ（ビニルピロリドン−ｂ−Ｄ／Ｌ−ラクチド）、ＰＤＨＦ、ＰＦＯ、ＰＦＰＶ、ＰＦＢＴ、ＰＦＴＢＴ、ＭＥＨ−ＰＰＶ、ＣＮ−ＰＰＶ、ＰＰＥ、またはこれらの組合せから選択されるポリマーを含む。
【０３４３】
いくつかの場合において、ポリマードットは、高分子電解質コーティングで囲まれている。いくつかの場合において、高分子電解質コーティングは、ポリ（スチレンスルホネート）、ポリホスフェート、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリレート−ｃｏ−マレエート、ポリアクリルアミド、キトサン、多糖、ポリリシン、ポリヒスチジン、およびポリペプチドからなる群から選択される高分子電解質を含む。さらなる場合において、高分子電解質コーティングは、高分子電解質ポリマーを含み、高分子電解質ポリマーの各繰り返し単位は、カルボキシル、スルホネート、ホスフェート、アミノ、ヒドロキシル、およびメルカプトからなる群から選択される電荷基を含む。
【０３４４】
いくつかの場合において、ポリマードットは、ポリマードットに付着している官能基を含む。特定の場合において、官能基は、疎水性官能基、親水性官能基、またはこれらの組合せから選択される。様々な場合において、官能基は、生体共役反応に適している。いくつかの場合において、官能基は、アルデヒド、アルケン、アルキル、アルキン、歪んだアルキン、アミノ、アジド、カルボニル、カルボキシル、シアノ、シクロオクチン、ジエノ、エステル、スクシンイミジルエステル、ハロアルキル、ヒドロキシル、イミド、ケトン、マレイミド、メルカプト、ホスフェート、ホスフィン、スルフェート、スルホネート、またはこれらの組合せから選択される。いくつかの場合において、共役生体分子は、ポリマードットに共役している。さらなる場合において、生体分子は、タンパク質である。またさらなる場合において、生体分子は、抗体またはアビジンである。
【０３４５】
いくつかの場合において、遮断剤は、共役ポリマードットの非特異的吸着特性を修飾し、または遮断剤は、ポリマードットの非特異的吸着特性を修飾する。さらなる場合において、遮断剤は、表面または膜上への吸着についてポリマードットと競合する。またさらなる場合において、遮断剤は、１つまたは複数の生体分子の結合についてポリマードットと競合する。
【０３４６】
いくつかの場合において、キットは、ポリマードットを生体分子に共役するための試薬をさらに含む。
【０３４７】
特定の場合において、キットは、ニトロセルロースまたはフルオロポリマー膜から選択される膜を含む。さらなる場合において、フルオロポリマーは、ＰＶＤＦである。
【０３４８】
いくつかの場合において、キットは、ＰＥＧ、ＥＤＬ、またはこれらの組合せをさらに含む。
【０３４９】
本明細書に記載のように、キットは、本明細書に記載されている任意の凍結乾燥した組成物を含み得る。いくつかの場合において、キットは、蛍光ナノ粒子、凍結乾燥した組成物を分散させるのに適した水溶液、凍結乾燥した組成物と水溶液とを合わせることおよび凍結乾燥した組成物が水溶液に分散されるように組成物と水溶液との組合せをかき混ぜることについて記載した一式の説明書を含み得る。
【０３５０】
いくつかの場合において、キットは、炭水化物をさらに含んでもよく、しばしば、炭水化物は、単糖、二糖、オリゴ糖、多糖、またはこれらの組合せを含む。いくつかの場合において、キットは、アルジトール、ヒドロキシプロピル−シクロデキストリン、ＢＳＡ、またはこれらの組合せをさらに含み得る。例えば、キットは、二糖をさらに含み得る。しばしば、二糖は、約１％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖで存在してもよく、または二糖は、約１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在してもよい。いくつかの場合において、二糖は、スクロース、トレハロース二水和物、マルトース一水和物、およびラクトース一水和物からなる群から選択される。しばしば、二糖は、スクロースである。例えば、スクロースは、約１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在し得る。しばしば、二糖は、１％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖで存在してもよく、または二糖は、１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在してもよい。いくつかの場合において、二糖は、スクロース、トレハロース二水和物、マルトース一水和物、およびラクトース一水和物からなる群から選択される。しばしば、二糖は、スクロースである。例えば、スクロースは、１０％ｗ／ｖ〜２０％ｗ／ｖで存在し得る。
【０３５１】
いくつかの場合において、キットは、生体分子に共役し得る蛍光ナノ粒子をさらに含み得る。いくつかの場合において、生体分子は、タンパク質、抗体、核酸分子、脂質、ペプチド、アプタマー、薬物、またはこれらの組合せから選択される。例えば、生体分子は、ストレプトアビジンである。別の例として、生体分子は、抗体である。別の例として、生体分子は、アプタマーである。別の例として、生体分子は、核酸である。別の例として、生体分子は、抗体を含む。
【０３５２】
本開示を今や完全に記載してきたが、本開示の精神または範囲を逸脱することなく様々な変更および修正を加えることができることは当業者には明らかである。
例示的な態様
【０３５３】
本開示の実施のための好ましいモードを含むことが見出され、または唱えられる特定の場合に関して本開示を記載してきた。本開示に照らして、例示される特定の場合において、本開示の意図する範囲から逸脱することなく多くの修正および変更を行うことができることを当業者は認識する。例えば、コドンの重複性によって、タンパク質配列に影響を与えることなく、根底にあるＤＮＡ配列において変化を起こすことができる。さらに、生物学的機能的な同等性の考察によって、種類および量において生物学的作用に影響を与えることなくタンパク質構造において変化を起こすことができる。全てのこのような修飾は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。
【０３５４】
分子および細胞生化学における一般方法は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第３版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、２００１年）；Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、第４版（Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、１９９９年）；Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ（Ｂｏｌｌａｇら、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、１９９６年）；Ｎｏｎｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ（Ｗａｇｎｅｒら編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９９９年）；Ｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ（ＫａｐｌｉｆｔおよびＬｏｅｗｙ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９９５年）；Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍａｎｕａｌ（Ｉ．  Ｌｅｆｋｏｖｉｔｓ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９９７年）；およびＣｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＤｏｙｌｅおよびＧｒｉｆｆｉｔｈｓ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、１９９８年）などの標準的なテキストにおいて見出すことができる。本開示において言及する遺伝子操作のための試薬、クローニングベクター、およびキットは、商業的供給業者、例えば、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、およびＣｌｏｎＴｅｃｈから入手可能である。
【実施例】
【０３５５】
下記の実施例は、当業者に本開示をどのように行い、使用するかについての完全な開示および記載を提供するために提示し、本開示として見なされるものの範囲を制限することを意図せず、下記の実験が行った全ての実験または唯一の実験であることを表すことも意図しない。使用する数（例えば、量、温度など）に関して正確性を確保するために努力をしてきたが、いくつかの実験誤差および偏差は説明すべきである。他に示さない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏温度であり、圧力は気圧または気圧付近である。
（実施例１）
凍結乾燥による発色団ポリマードットの調製
【０３５６】
この実施例は、長期間の貯蔵または運送のための発色団ポリマードット生体共役体を調製するために使用することができる凍結乾燥、冷凍乾燥／脱水技術を記載するが、ただし、正しい条件を使用する。凍結乾燥は、発色団ポリマードットを生物医学的研究における使用のために実際的なものとするために重要な実際的な進展である。
【０３５７】
材料。ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（１，４−ベンゾ−（２，１０，３）−チアジアゾール）］（ＰＦＢＴ；ＭＷ１５７０００Ｄａ；多分散性、３．０）、ジメチルフェニルでエンドキャップしたポリ（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）（ＰＦＯ、ＭＷ１２００００Ｄａ）、ポリ［（９，９−ジオクチルフルオレニル−２，７−ジイル）−ｃｏ−（１，４−ベンゾ−（２，１’，３）−チアジアゾール）］１０％ベンゾチアジアゾール（ＰＦ１０ＢＴ、ＭＷ１０００００Ｄａ）およびポリ［２−メトキシ−５−（２−エチルヘキシルオキシ）−１，４−（１−シアノビニレン−１，４−フェニレン）］（ＣＮＰＰＶ、ＭＷ１５０００Ｄａ）は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｄｙｅ  Ｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎｃ（Ｑｕｅｂｅｃ、Ｃａｎａｄａ）から購入した。カルボン酸基で直接的に官能化されたＰＦＢＴ（ＰＦＢＴ−ＣＯＯＨ）を、本発明者らの研究室において合成した。カルボキシル基で官能化されたポリスチレングラフトエチレンオキシド（ＰＳ−ＰＥＧ−ＣＯＯＨ；ＭＷ２１，７００ＤａのＰＳ部分；１２００ＤａのＰＥＧ−ＣＯＯＨ；多分散性、１．２５）は、Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎｃ．（Ｑｕｅｂｅｃ、Ｃａｎａｄａ）から購入した。スクロースは、Ａｖａｎｔｏｒ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ（Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ、ＮＪ、ＵＳＡ）に注文した。ストレプトアビジンは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ、ＵＳＡ）から購入した。ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）およびエチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）は、Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）から購入した。
【０３５８】
発色団ポリマードットのストレプトアビジン共役。発色団ポリマードットを、従前に報告されているようにナノ再沈殿方法を使用して調製した。Ｗｕら、Ｊ．  Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．１３２巻：１５４１０〜１５４１７頁（２０１０年）。手短に言えば、５０μｇ／ｍＬの半導体ポリマー（ＰＦＢＴ、ＣＮＰＰＶ、ＰＦＯまたはＰＦ１０ＢＴ）および１６μｇ／ｍＬのＰＳ−ＰＥＧ−ＣＯＯＨを含有するテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）溶液を調製した。５ｍＬ分量の混合物を、激しい超音波処理下で１０ｍＬの水中にすばやく注入した。窒素ガスを溶液中に９０℃にて吹き込むことによってＴＨＦを除去した。ＴＨＦ非含有発色団ポリマードット溶液を、１〜２分間超音波処理し、０．２μｍのセルロースメンブランフィルターを通して濾過した。ＰＦＢＴ−ＣＯＯＨ発色団ポリマードットについて、さらなるＰＳ−ＰＥＧ−ＣＯＯＨを加えなかった。５０μｇ／ｍＬのＰＦＢＴ−ＣＯＯＨのみを含有するＴＨＦ溶液を、水中に直接的に注入した。典型的な共役反応において、８０μＬのポリエチレングリコール（５％ｗ／ｖのＰＥＧ、ＭＷ３３５０）および８０μＬのＨＥＰＥＳ緩衝液（１Ｍ、ＰＨ７．３）を、４ｍＬの発色団ポリマードット溶液に加えた。次いで、ストレプトアビジン（１ｍｇ／ｍＬ、３０μＬ）を溶液に加え、よく混合した。最後に、８０μＬの新たに調製したＥＤＣ溶液（ＭｉｌｌｉＱ水中５ｍｇ／ｍＬ）を溶液に加え、混合物を室温にて４時間磁気によって撹拌した。このように得られた発色団ポリマードット共役体を、スピンカラム（１００Ｋ  ＭＷ）において最終的に濃縮し、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｅｃｏｎｏ−Ｐａｃ１０ＤＧカラム（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）で精製した。精製後、適正な量のＢＳＡを加え、１％（ｗ／ｖ）の最終濃度に達しさせた。発色団ポリマードットの水力学的サイズは、動的光散乱（ＤＬＳ）分光計（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳ、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ、Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ）で測定した。蛍光量子収率を、適正な波長励起を伴う積分球（モデルＣ９９２０−０２、浜松ホトニクス）を使用して集めた。発色団ポリマードットの蛍光スペクトルを、Ｆｌｕｏｒｏｌｏｇ−３フルオロ分光計（ＨＯＲＩＢＡ  ＪｏｂｉｎＹｖｏｎ、ＮＪ、ＵＳＡ）で取得した。
【０３５９】
凍結乾燥。ストレプトアビジン共役発色団ポリマードットまたは共役していない発色団ポリマードットの溶液を、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３）、０．１％（ｗ／ｖ）ＰＥＧおよび０．０５％（ｗ／ｖ）ＢＳＡからなった緩衝液で発色団ポリマードット溶液を希釈することによって、２つの異なる濃度（４ｎＭおよび２０ｎＭ）で調製した。ＰＦＢＴについて、１００ｎＭ濃度での発色団ポリマードットをまた調製した。スクロースを加え、所望の最終濃度（１０％、ｗ／ｖ）に達しさせた。ストック発色団ポリマードット溶液を、いくつかのバイアル中に一定分量を入れた。これらの半分を液体窒素中で２分間急速に冷凍し、真空下でＬａｂｃｏｎｃｏ  Ｆｒｅｅｚｏｎｅ６冷凍乾燥器（Ｋａｎｓａｓ  Ｃｉｔｙ、ＭＯ、ＵＳＡ）に直ちに入れた。約１８時間後、凍結乾燥した試料を冷凍乾燥器から取り出し、「凍結乾燥した発色団ポリマードット」とラベルし、−８０℃所望の時間（１日から６カ月）で貯蔵した。一定分量の残りの半分を「凍結乾燥していない」とラベルし、４℃の冷蔵庫中に入れた。
【０３６０】
細胞培養。乳がん細胞系、ＭＣＦ−７は、アメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ）に注文した。細胞は、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）および１％Ｐｅｎ  Ｓｔｒｅｐ（０．８５％ＮａＣｌ中の５０００単位／ｍＬのペニシリンＧ、５０μｇ／ｍＬのストレプトマイシン硫酸塩）を補充したイーグル最小必須培地中で３７℃、５％ＣＯ２で培養した。コンフルエンスに達するまでに実験の前に細胞を培養した。細胞は、培養培地による短時間のすすぎ、それに続く適正な量のトリプシン−ＥＤＴＡ溶液（０．２５％ｗ／ｖのトリプシン、０．５３ｍＭのＥＤＴＡ）との３７℃にて５分間のインキュベーションによって、培養フラスコから収集した。完全な剥離の後、細胞をすすぎ、遠心し、培養培地に再懸濁させた。これらの濃度を、血球計を使用した顕微鏡観察によって決定した。
【０３６１】
免疫蛍光法。細胞表面マーカーをＩｇＧ共役体で標識するために、１００μＬの標識化緩衝液（１×ＰＢＳ、２ｍＭのＥＤＴＡ、１％ＢＳＡ）中の百万個のＭＣＦ−７細胞を、０．３μＬの０．５ｍｇ／ｍＬのビオチン化一次抗ヒトＣＤ３２６ＥｐＣＡＭ抗体（ｅＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）と共に回転式振盪培養機上で暗中および室温にて３０分間インキュベートした。これに、標識化緩衝液を使用した洗浄ステップが続いた。細胞をＢｌｏｃｋＡｉｄＴＭブロッキング緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ、ＵＳＡ）中の４ｎＭのストレプトアビジン共役発色団ポリマードット（２０ｎＭの発色団ポリマードット溶液から希釈）と共に振盪培養機上で暗中および室温にて３０分間インキュベートし、それに続いて、標識化緩衝液による２回の洗浄ステップを行った。陰性対照は、一次ビオチン化抗体と共に従前にインキュベートすることなく、細胞をストレプトアビジン共役発色団ポリマードットと共にインキュベートすることによって得た。その後、遠心分離によって得た細胞ペレットを５００μＬの固定緩衝液に溶解することによって細胞の固定を行った（１×ＰＢＳ、２ｍＭのＥＤＴＡ、１％ＢＳＡ、１％パラホルムアルデヒド）。
【０３６２】
フローサイトメトリー実験。１０６個の細胞／０．５ｍｌを含有し、上記のように調製した標識した細胞試料で測定を行った。Ｗｕら、Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  ｃｈｅｍｉｅ−Ｉｎｔｌ．編、４９巻：９４３６〜９４４０頁（２０１０年）。フローサイトメーターＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用した。検出チャンバー中に流れる細胞を、４８８ｎｍのレーザー光によって励起した。側方散乱光および前方散乱光を集め、４８８／１０ｎｍのバンドパスフィルターによってフィルターをかけ、一方、蛍光発光を集め、５０２ｎｍのロングパスフィルターおよび５３０／３０ｎｍ（ＰＦＢＴおよびＰＦＢＴ−ＣＯＯＨについて）または５８２／４２ｎｍ（ＣＮＰＰＶについて）バンドパスフィルターによってフィルターをかけた。全てのシグナルは、光電子増倍管によって検出した。全てのフロー実験のために、適当なゲートを選択することによって、検出された細胞の代表的な集団を選択した。少なくとも１０４のイベントをアクティブゲートにおいて集めるまで細胞蛍光の検出を続けた。
【０３６３】
図１は、例の凍結乾燥手順を示す。−８０℃にて所望の時間（１日から６カ月）貯蔵した後、凍結乾燥した一定分量をフリーザーから取り出し、再分散のために適当な量の水を加えた。再構成した溶液の最終容量を、凍結乾燥前のものと同じに保持した。比較のために、４℃で貯蔵した凍結乾燥していない一定分量を使用した。両方の試料は同じ組成を有し、同じ計器類で測定した。様々な凍結乾燥条件を試験し、最適化された手順を選択した。水力学的サイズ、吸収スペクトル、発光スペクトル、量子収率、および標識化の効率性について、凍結乾燥した発色団ポリマードット生体共役体および凍結乾燥していない発色団ポリマードット生体共役体の間で比較を行った。水力学的サイズを測定し、４℃にて１日間貯蔵した（凍結乾燥していない、１日）発色団ポリマードットに対して新たに調製した発色団ポリマードットの吸収スペクトル、発光スペクトル、量子収率、および標識化の効率性を測定し、全ての測定した特性において同様であることが見出された。
【０３６４】
ポリマードットサイズ。ＰＦＢＴ発色団ポリマードットをストレプトアビジン（ｓｔｒｅｐａｖｉｄｉｎ）に共役（Ｓｔｒｅｐ−ＰＦＢＴ）し、凍結乾燥処方を最適化した。３２ｎｍの水力学的径を有する特定のＳｔｒｅｐ−ＰＦＢＴ発色団ポリマードットを調製したが（図２Ａ）、これはこれらを調製した後直ちに測定した。同じ発色団ポリマードット−ストレプトアビジン共役体を、任意の試薬を加えることなく凍結乾燥し、次いで、発色団ポリマードットを水で再水和した。激しい超音波処理の後でさえ、再水和した発色団ポリマードットの流体力学的径は２２０ｎｍに増加し、凍結乾燥プロセスが発色団ポリマードットの激しい凝集をもたらしたことを示した。凝集した発色団ポリマードット生体共役体は、生物学的研究のために適切ではない。
【０３６５】
異なる凍結乾燥方法を使用した。最初に、１％（ｗ／ｖ）スクロースを加え、再水和した発色団ポリマードットの流体力学的径は５０ｎｍに減少し（図２Ｃ）、これはスクロースを伴わずに得た２２０ｎｍより非常に小さかったが、３２ｎｍの当初のサイズよりまだ有意に大きかった。超音波処理は、凍結乾燥前のサイズ分布への再水和した発色団ポリマードットのサイズ分布をさらにシフトすることを助けなかった。したがって、発色団ポリマードット−ストレプトアビジン生体共役体はまだ部分的に凝集し、たとえスクロースを伴わないよりも非常に激しくはないが部分的に凝集した。スクロースの濃度を１０％（ｗ／ｖ）に上昇させた。図２Ｄは、再水和した発色団ポリマードットのサイズが３２ｎｍに戻ったことを示す。さらなる超音波処理が再水和手順の後に必要とされなかったことに留意すべきである。上記の測定において使用した凍結乾燥したｓｔｒｅｐ−ｐｆｂｔ発色団ポリマードットを、凍結乾燥後に−８０℃にて１日貯蔵した。−８０℃にてより長く（１〜６カ月）貯蔵した凍結乾燥したｓｔｒｅｐ−ｐｆｂｔ発色団ポリマードットを、２つの異なる濃度（４ｎｍおよび２０ｎｍ）で試験した。表１に示すように、６カ月後の濃度と無関係にサイズは概ね３２ｎｍのままであった。１００ｎｍの濃度をまた試験したが、結果は４ｎｍおよび２０ｎｍの結果と同様であった。この凍結乾燥処方をまた、ストレプトアビジン共役発色団ポリマードットおよび共役していない発色団ポリマードットの両方を含む、他の半導体ポリマー（ＣＮＰＰＶ、ＰＦＯ、ＰＦ１０ＢＴ）でできている発色団ポリマードットに適用した。試験したポリマーの構造を図５に含む。異なる期間（１〜６カ月）に亘って貯蔵した溶液中の凍結乾燥前の発色団ポリマードットの水力学的サイズを測定した。６カ月まで貯蔵した異なる凍結乾燥した発色団ポリマードットの水力学的サイズをまた測定し、これらの凍結乾燥していないカウンターパートの水力学的サイズと比較した。
【０３６６】
表１に示すように、全ての凍結乾燥した発色団ポリマードットは、凍結乾燥の前で再水和後の溶液中の発色団ポリマードットと同様のサイズを有した。水溶液中の生体共役反応および分散を促進するために、上記の発色団ポリマードットを、調製の間にｐｓ−ペグ−ｃｏｏｈでドープすることによってカルボン酸基で官能化した。同じポリマー鎖中の低密度カルボン酸基で直接的に官能化された新規なタイプの半導体ポリマーをまた、本発明者らの研究室において合成した（ｐｆｂｔ−ｃｏｏｈ、図５）。直接的に組み入れられたカルボン酸基を伴って、ｐｆｂｔ−ｃｏｏｈ発色団ポリマードットは、いくつかの重要な利点、例えば、より高い輝度およびより良好なコロイドの安定性を実現する。凍結乾燥後のこのような調製されたストレプトアビジン共役ｐｆｂｔ−ｃｏｏｈ発色団ポリマードットのサイズを測定した。１カ月間貯蔵した凍結乾燥したｓｔｒｅｐ−ｐｆｂｔ−ｃｏｏｈ発色団ポリマードットのサイズは、凍結乾燥していない発色団ポリマードットのサイズと同じであった。表１における結果は、最初の発色団ポリマードット溶液の濃度に関係なく、凍結乾燥した発色団ポリマードットが、６カ月まで貯蔵した後でさえこれらの単一の粒子形態へと再び容易に再分散されたことを示す。ストレプトアビジン共役発色団ポリマードットおよび共役していない発色団ポリマードットのコロイドの安定性は、１０％スクロースを伴う凍結乾燥プロセスの後で変化しなかったことをこれは示す。したがって、下記のセクションにおいて記載する凍結乾燥手順は、１０％スクロースを伴って行った。
【０３６７】
長期間の貯蔵の後の凍結乾燥したストレプトアビジン共役発色団ポリマードットおよび凍結乾燥していないストレプトアビジン共役発色団ポリマードット、ならびに凍結乾燥した共役していない発色団ポリマードットおよび凍結乾燥していない共役していない発色団ポリマードットの流体力学的径を、表１に示す。Ｓｔｒｅｐ−ｐｆｂｔ−ｃｏｏｈ発色団ポリマードットを、−８０℃にて１カ月間貯蔵した。全ての他の発色団ポリマードットを、６カ月間貯蔵した。全ての凍結乾燥した発色団ポリマードットを、水で再水和した。凍結乾燥したポリマードット、および溶液中の凍結乾燥前の発色団ポリマードットの両方を、超音波処理を伴わないで動的光散乱で測定した。（ｌｙｏｐｈ．：凍結乾燥した；ｕｎｌｙｏｐｈ．：凍結乾燥していない）。
【表１】
0006587605.tif 000017
【０３６８】
光学特性。凍結乾燥したポリマードット、および溶液中の凍結乾燥前の発色団ポリマードットの両方の光学特性を測定し、比較した。吸収スペクトル、発光スペクトル、および量子収率を測定し、６カ月の貯蔵後の凍結乾燥した発色団ポリマードットの吸収スペクトルおよび発光スペクトルの両方を測定した。これらの値を、これらの凍結乾燥していないカウンターパートの値と比較した。図３Ａ〜３Ｃに示すように、凍結乾燥したストレプトアビジン共役発色団ポリマードット（Ｓｔｒｅｐ−ＰＦＢＴ、Ｓｔｒｅｐ−ＣＮＰＰＶおよびＳｔｒｅｐ−ＰＦＢＴ−ＣＯＯＨ）の吸収スペクトルおよび発光スペクトルは、６カ月まで貯蔵した後のこれらの凍結乾燥していないカウンターパートと同一であった。同じ現象がまた、ＰＦＯ（図３Ｄ）およびＰＦ１０ＢＴ（図３Ｅ）でできている発色団ポリマードットにおいて観察された。これらの結果は、凍結乾燥が、これらの共役している発色団ポリマードットおよび共役していない発色団ポリマードットの吸収スペクトルおよび発光スペクトルを変化させなかったことを示す。
【０３６９】
発色団ポリマードットの輝度を測定し、凍結乾燥がこれらの蛍光強度に対してマイナスの効果を有するかを決定した。異なる濃度の凍結乾燥したポリマードット、および溶液中の凍結乾燥前の発色団ポリマードットの間の輝度比較を助けるために、これらの量子収率（ＱＹ）を測定した。量子収率は、下記の等式（１）において示すような蛍光強度より濃度に対してより依存していないためである。
Ｆ＝α＊Ｉ＊Ｑ＊ｎ（１）
【０３７０】
式中、Ｆは、蛍光発光強度であり、αは、機器要因であり、Ｉは、励起強度であり、Ｑは、量子収率であり、ｎは、発色団ポリマードットの濃度である。下記の表２は、凍結乾燥を受けてきた、および受けてこなかった様々な発色団ポリマードットの量子収率値を示す。最初に、共役ストレプトアビジン分子は、発色団ポリマードットの量子収率に影響を与えなかった。ストレプトアビジン共役ＣＮＰＰＶおよびＰＦＢＴ発色団ポリマードットの量子収率値は、これらの対応する共役していない発色団ポリマードットと同様のレベルに留まった。例えば、６カ月の貯蔵後の４ｎＭの凍結乾燥したＳｔｒｅｐ−ＰＦＢＴおよび共役していないＰＦＢＴ発色団ポリマードットのＱＹ値は、両方とも３３％であった。第２に、凍結乾燥した発色団ポリマードットの量子収率は、異なる濃度の発色団ポリマードットにおいてあまり変動しなかった。例えば、６カ月の貯蔵後の４ｎＭの凍結乾燥したＰＦＯ発色団ポリマードットおよび２０ｎＭの凍結乾燥したＰＦＯ発色団ポリマードットのＱＹ値は、両方とも４７％であった。
【０３７１】
より重要なことに、凍結乾燥前の溶液中の大部分の発色団ポリマードットの量子収率は長期間の貯蔵の後に減少したが、凍結乾燥した発色団ポリマードットの量子収率は貯蔵期間中は同じレベルのままであった。例えば、２０ｎＭの凍結乾燥したＳｔｒｅｐ−ＰＦＢＴ発色団ポリマードットの量子収率は、それぞれ、１日間の貯蔵後で３７％、および６カ月の貯蔵後で３６％であった。対照的に、凍結乾燥前の溶液中の大部分の発色団ポリマードットの量子収率は、小さくはあるが一貫した減少を示した。同じ発色団ポリマードット（２０ｎＭのＳｔｒｅｐ−ＰＦＢＴ発色団ポリマードット）を凍結乾燥せずに貯蔵したとき、量子収率は６カ月の貯蔵後に３３％から３０％に減少した。同様の量子収率の変化はまた、共役していないＰＦＢＴおよびＰＦＯ発色団ポリマードットにおいて見出された。量子収率を低減させるであろう半導体ポリマーの酸化は、発色団ポリマードットを凍結乾燥し、−８０℃にて貯蔵したときに最小化した可能性が高い。
【０３７２】
発色団ポリマードットの輝度が凍結乾燥プロセスによって確かに悪影響を受けず、注目すべきことには、凍結乾燥手順を経ることによって発色団ポリマードットの光学パフォーマンスが増強したことをこれらの結果は示す。例えば、凍結乾燥していないＳｔｒｅｐ−ＰＦＢＴ発色団ポリマードットを超える、１日の貯蔵の後の４ｎＭの凍結乾燥したＳｔｒｅｐ−ＰＦＢＴ発色団ポリマードットの量子収率の増強は、（０．３５−０．３２）／０．３２＝９．４％であった。凍結乾燥によってもたらされる量子収率の増加の根底にある機序は明らかでないが、凍結乾燥プロセスは、半導体ポリマーの骨格または内部充填物の内部再配列をもたらし得た。
【０３７３】
６カ月まで貯蔵した、凍結乾燥したポリマードット、および溶液中の凍結乾燥前の発色団ポリマードットの量子収率値。それぞれの発色団ポリマードットについて、２つの濃度（４ｎＭおよび２０ｎＭ）を有する試料を試験した（下記の表２を参照されたい）（１Ｄ：１日；１Ｍ：１カ月；６Ｍ：６カ月）
【表２−１】
0006587605.tif 000018
【表２−２】
0006587605.tif 000019
【０３７４】
標識化の効率性。発色団ポリマードットが凍結乾燥後にこれらのコロイドの安定性を保持し、凍結乾燥した発色団ポリマードットの輝度が減少しなかったことが確認される条件下で、発色団ポリマードット生体共役体の細胞標的化性能を試験して、これらがその生物学的特異性を維持していることを確保した。ストレプトアビジン共役発色団ポリマードットを使用して、循環性腫瘍細胞の検出のために現在使用されている上皮細胞接着マーカーである細胞表面受容体、ＥｐＣＡＭを標識した。フローサイトメトリーを使用して、細胞標識化の輝度および非特異的吸収の程度を定量化した。凍結乾燥した発色団ポリマードット−ストレプトアビジンおよび凍結乾燥していない発色団ポリマードット−ストレプトアビジンの間の比較のために、２０ｎＭのストレプトアビジン共役発色団ポリマードット（Ｓｔｒｅｐ−ＣＮＰＰＶ、Ｓｔｒｅｐ−ＰＦＢＴおよびＳｔｒｅｐ−ＰＦＢＴ−ＣＯＯＨ）を、１０％スクロースと共に使用した。６カ月まで貯蔵した凍結乾燥した発色団ポリマードット−ストレプトアビジン共役体および凍結乾燥していない発色団ポリマードット−ストレプトアビジン共役体の両方の標識化の効率性を試験した。
【０３７５】
凍結乾燥し、様々な時間に亘り貯蔵した発色団ポリマードット−ストレプトアビジン（ｓｔｒｅｐｔａｄｖｉｄｉｎ）による非特異的吸収および陽性細胞標識化を、凍結乾燥していない発色団ポリマードットと比較した。凍結乾燥後に１日間貯蔵した試料を最初に試験した。この実験は、凍結乾燥プロセスを受けることによってもたらされる潜在的な効果について報告する。図４における上のパネルに示すように、細胞を、一次抗体の非存在下（陰性）で、発色団ポリマードット−ストレプトアビジンと共にインキュベートしたときに、凍結乾燥した試料（実線）および凍結乾燥していない試料（破線）の両方の強度ピークは低く同程度であった。この結果は、凍結乾燥したポリマードット、および溶液中の凍結乾燥前の発色団ポリマードットの両方は、一次抗体の非存在下で非常に低い量の非特異的結合を生じさせたことを確認した。
【０３７６】
一次抗体の存在下（陽性）での凍結乾燥した発色団ポリマードット（実線）および凍結乾燥していない発色団ポリマードット（破線）の両方で標識した細胞についての強度ピークは、陰性対照試料の強度ピークから良好に分離したことをデータはまた示す。具体的には、Ｓｔｒｅｐ−ＣＮＰＰＶおよびＳｔｒｅｐ−ＰＦＢＴ−ＣＯＯＨ発色団ポリマードットについて、凍結乾燥した発色団ポリマードットの正のピーク強度値は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットの正のピーク強度値と同様であった。Ｓｔｒｅｐ−ＰＦＢＴ発色団ポリマードットについて、凍結乾燥した発色団ポリマードットのピーク強度値は、凍結乾燥していない発色団ポリマードットのピーク強度値より少し大きかった。標識化輝度の差異は、本発明者らの測定した量子収率値と一貫性がある。１日間貯蔵した２０ｎＭのＳｔｒｅｐ−ＣＮＰＰＶおよびＳｔｒｅｐ−ＰＦＢＴ−ＣＯＯＨについて、凍結乾燥した発色団ポリマードットのＱＹ値は、溶液中の凍結乾燥前の発色団ポリマードットのＱＹ値と同様であった（表２を参照されたい）。Ｓｔｒｅｐ−ＰＦＢＴについて、細胞標識化の増強は１０％であり、これは本発明者らの測定した量子収率増強（９％）と同様である。この結果は、凍結乾燥プロセスが発色団ポリマードット生体共役体のパフォーマンスを損なわず、いくつかの半導体ポリマーについて、これらのパフォーマンスを増強さえさせたことを示す。
【０３７７】
長期間の貯蔵の後の、凍結乾燥したポリマードット、および溶液中の凍結乾燥前の発色団ポリマードットの細胞標識化の効率性をさらに試験した。図４の下のパネルにおいて示すように、一次抗体の存在下（陽性）で６カ月まで貯蔵した、凍結乾燥したポリマードットまたは溶液中の凍結乾燥前の発色団ポリマードットで標識した細胞についての強度ピークは、陰性対照試料の強度ピークからまだ良好に分離した。具体的には、Ｓｔｒｅｐ−ＣＮＰＰＶ発色団ポリマードットについて、凍結乾燥した試料および凍結乾燥していない試料の正のピークは、重複した。Ｓｔｒｅｐ−ＰＦＢＴ−ＣＯＯＨ発色団ポリマードットについて、凍結乾燥した試料の正のピークは、凍結乾燥していない試料の正のピークより僅かに高かった。Ｓｔｒｅｐ−ＰＦＢＴ発色団ポリマードットについて、凍結乾燥した試料は２２％のより注目すべき輝度増強を示したが、これは２０％の本発明者らの測定した量子収率増強と一貫性がある。この結果は再び、凍結乾燥プロセスが発色団ポリマードット生体共役体のパフォーマンスを効果的に維持したことを示す。本発明者らのデータは、凍結乾燥が発色団ポリマードット生体共役体の長期間の貯蔵のための良好な戦略であることを示唆する。
【０３７８】
対照実験。フローサイトメトリーを使用して、発色団ポリマードットタグ付きＭＣＦ−７細胞の輝度を定量化し、細胞は、１０％または０％スクロースを含有した発色団ポリマードット溶液を使用して標識した。図６は、このように得られたフローサイトメトリーデータを示し、これは１０％スクロースの存在が標識した細胞の輝度に対して効果を有さず、このように細胞標識化に影響を与えなかったことを明らかに示す。陰性対照（一次抗体の非存在下であることを除いて同一の条件下で行う）はまた、これらの２つの試料の間で同様であったが、発色団ポリマードット溶液中にスクロースが存在することはまた、発色団ポリマードット生体共役体の非特異的結合特性に対して効果を有さなかったことをこれは示す。
【０３７９】
市販のＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩ血球計算器（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ、ＵＳＡ）でフローデータを集めた。細胞を４８８ｎｍのレーザー光によって照射し、光電子増倍管（ＰＭＴ）のアレイによって検出する前に、蛍光発光を５０２ｎｍのロングパスフィルターによってフィルターをかけた。
【０３８０】
コロイドの安定性、分光特性、輝度、および標識化の効率性を含めた発色団ポリマードット−ストレプトアビジン生体共役体の特性に対する凍結乾燥の効果を決定した。様々な濃度の試料を６カ月まで貯蔵した。１０％スクロースを伴う凍結乾燥は、発色団ポリマードット生体共役体を保存するのに良好な戦略であった。凍結乾燥後の再水和した発色団ポリマードットは、発色団ポリマードットの再分散を助ける超音波処理の非存在下でさえも、凍結乾燥前のものと同じサイズを有した。凍結乾燥手順は、発色団ポリマードットの光学特性に悪影響を与えなかった。スクロースを使用して凍結乾燥した発色団ポリマードットの量子収率値は、凍結乾燥後に量子収率のたとえ小さくても一貫性がある改善を示した。この現象は、凍結乾燥の間のポリマー骨格または内部充填物の再配列によってもたらされた可能性がある。スクロース以外の他の凍結乾燥保護剤分子の使用は、量子収率の非常により有意な増加をもたらすことができ（実施例２を参照されたい）、高量子を有する発色団ポリマードットは広範囲の用途のためのプローブの輝度を改善させるために高度に望ましいため、これは重要な知見である。量子収率を改善させることに加えて、適当な凍結乾燥保護剤分子の使用はまた、発色団ポリマードットの発光スペクトルが狭くなることをもたらすことができ（図７）、狭帯域発光発色団ポリマードットがこれらの多重化性能のために貴重であるためこれはまた望ましい。
【０３８１】
６カ月間貯蔵した凍結乾燥したＳｔｒｅｐ−ＰＦＢＴ発色団ポリマードットで標識した細胞の輝度は、凍結乾燥していないカウンターパートより２２％の増強を示した。これは、発色団ポリマードットが凍結乾燥され、−８０℃にて貯蔵されたときに、半導体ポリマーの酸化が最小化されたためである可能性がある。凍結乾燥は発色団ポリマードットの長期間の貯蔵のために好ましい経路であり、これによって凍結乾燥は、生物医学的研究における生体共役反応した発色団ポリマードットの広範な採用のための重要な実際的な考察となる。
（実施例２）
発色団ポリマードットの凍結乾燥に対するスクロース濃度の効果
【０３８２】
この実施例は、発色団ポリマードットの凍結乾燥に対するスクロース濃度の効果について記載する。一連のスクロース濃度（０％、１％、１０％、２０％、５０％）（ｗ／ｖ）を使用して、発色団ポリマードットを凍結乾燥した。２つのタイプの発色団ポリマードットを使用した。１つはＰＦＢＴ（Ｍｗ＝７３ｋ）＋３０％（ｗ／ｗ）ＰＳ−ＰＥＧ−ＣＯＯＨであり、他方は直接的に官能化されたＰＦＢＴ−ＣＯＯＨ２％である。実施例１において記載したようなナノ沈殿を使用して発色団ポリマードットを調製した。試料は、水溶液中の２０ｎＭの濃度で２１ｎｍのサイズを有した。異なる濃度のスクロースを、発色団ポリマードット水溶液に加えた。次いで、試料を凍結乾燥した。凍結乾燥後に、試料を−８０℃のフリーザー中で１日間貯蔵し、次いで、水溶液に再分散した。
【０３８３】
サイズおよび量子収率を測定し、凍結乾燥後に発色団ポリマードットに何らかの変化があるかどうかを記述した（図８を参照されたい）。スクロースの添加を伴わずに（０％）、凍結乾燥したＰＦＢＴ／ＰＳ−ＰＥＧ−ＣＯＯＨ発色団ポリマードットについて２２０ｎｍ、および凍結乾燥したＰＦＢＴ−ＣＯＯＨ２％について２３０ｎｍもの大きさのサイズが得られたが（これらの凍結乾燥していないカウンターパートは約２１ｎｍのサイズを有する）、これは凍結乾燥の間の重大な凝集を示す。０％スクロースと比較して、１％スクロースを伴う凍結乾燥は、相対的により小さな発色団ポリマードット、すなわち、約５０ｎｍ（表３を参照されたい）をもたらした。しかし、これはまだ２１ｎｍの当初のサイズより有意に大きかった。１０％または２０％スクロース濃度で、凍結乾燥した発色団ポリマードットは、当初の発色団ポリマードットのサイズと正確に同じサイズを示し、両方とも２１ｎｍのサイズを有した。しかし、スクロース濃度が５０％であったとき、試料は凍結乾燥の間に真空下で完全に乾燥させることができず、このスクロース濃度における凍結乾燥は成功しなかった。
【表３】
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（実施例３）
発色団ポリマードットの凍結乾燥のための様々な凍結乾燥剤の使用
【０３８４】
この実施例は、発色団ポリマードットの凍結乾燥の適用におけるいくつかの凍結乾燥剤の使用について記載する。実施例１に記載したようなナノ沈殿方法を使用して、直接官能化されたＰＦＢＴ−ＣＯＯＨ２％発色団ポリマードットおよびＢＯＤＩＰＹ−６９０を調製した。このように調製した発色団ポリマードットの両方は、水溶液中の２０ｎＭの濃度で約２０ｎｍのサイズを有した。５〜２０％（ｗ／ｖ）での異なる凍結乾燥剤を、発色団ポリマードット水溶液に加えた。凍結乾燥剤の組合せ中で、総作用剤濃度は、溶液中で１０％（ｗ／ｖ）であった。次いで、凍結乾燥剤を有する試料を凍結乾燥した。凍結乾燥後、試料を−８０℃のフリーザー中で１日貯蔵し、次いで、水溶液に再分散した。
【０３８５】
図８は、発色団ポリマードットのために使用した凍結乾燥剤の化学構造を示す。これらは、スクロース、グルコース、マンニトール、トレハロース、マルトース、ヒドロキシプロピル−シクロデキストリン、およびウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）である。さらに、２種の組合せ作用剤を使用した。これらは、５％スクロース＋５％トレハロースおよび５％スクロース＋５％マルトースである。
【０３８６】
サイズおよび量子収率を測定し、凍結乾燥後に発色団ポリマードットに何らかの変化があったかを記述した。結果を下記の表４に示す。結果は、本明細書において使用される作用剤は発色団ポリマードットを凍結乾燥することができたことを示す。例えば、凍結乾燥した発色団ポリマードットのサイズおよび量子収率は、これらの凍結乾燥剤の多くについてその凍結乾燥していないカウンターパートと同様であった。著しいことに、いくつかの作用剤は、凍結乾燥後に発色団ポリマードットの量子収率を有意に増加させる能力を示した。例えば、マンニトールが使用されたとき、凍結乾燥したＰＦＢＴ−ＣＯＯＨ２％発色団ポリマードットのサイズは、その凍結乾燥していない発色団ポリマードットと比較して変化しなかったが（上の表３を参照されたい）、その量子収率は、発色団ポリマードットについて凍結乾燥後に約５０％増加した。
【表４−１】
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【表４−２】
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【０３８７】
ＢＯＤＩＰＹ−６９０発色団ポリマードットについて、その量子収率は、下記の表５に示すように、その凍結乾燥していないカウンターパートと比較して約２０％の増加を示した。
【表５】
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【０３８８】
ヒドロキシプロピル−シクロデキストリンを使用したとき、それぞれ、これらの凍結乾燥していないカウンターパートと比較して、凍結乾燥したＰＦＢＴ−ＣＯＯＨ２％発色団ポリマードットの量子収率は、約７５％の増加を示し（表６を参照されたい）、凍結乾燥したＢＯＤＩＰＹ−６９０は、約３０％の増加を示した（表５を参照されたい）。
【表６】
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（実施例４）
ＢＯＤＩＹ共役発色団ポリマードットの凍結乾燥
【０３８９】
この実施例は、５７０ｎｍ、５９０ｎｍおよび６９０ｎｍでの中心発光を有する３つのタイプのＢＯＤＩＰＹをベースとする発色団ポリマードットの凍結乾燥を記述する。凍結乾燥したＢＯＤＩＰＹ発色団ポリマードットは、少なくとも６カ月貯蔵することができることをこれは示す。
【０３９０】
図９は、３つのＢＯＤＩＰＹをベースとするポリマー構造の構造を示す。発色団ポリマードットは、ナノ沈殿方法を使用してＢＯＤＩＰＹをベースとする共役ポリマーと３０％ＰＳ−ＰＥＧ−ＣＯＯＨ（ｗ／ｗ）とを混合することによって調製した。３つのタイプの発色団ポリマードットは、水溶液中で２０ｎＭの濃度にて約２３ｎｍのサイズを有した。ＢＯＤＩＰＹ−６９０発色団ポリマードットは、ストレプトアビジンを発色団ポリマードットに共有結合的に連結することによって生体共役反応し、これによって最終の発色団ポリマードットサイズまで約４ｎｍ増加した。全ての発色団ポリマードット（ストレプトアビジンに共役しているＢＯＤＩＰＹ−６９０発色団ポリマードットを含めた）を、１０％スクロース（ｗ／ｖ）中で凍結乾燥した。凍結乾燥後、試料を−８０℃のフリーザー中で６カ月まで貯蔵し、次いで、水溶液に再分散させ、サイズおよび量子収率を測定した。
【０３９１】
下記の表７は、凍結乾燥を受けてきた、または受けてこなかった様々なＢＯＤＩＰＹをベースとする発色団ポリマードットのサイズおよび量子収率値を示す。共役ストレプトアビジン分子は、ＢＯＤＩＰＹをベースとする発色団ポリマードットの量子収率に影響を与えなかった。ストレプトアビジン共役ＢＯＤＩＰＹ−６９０の量子収率値は、これらの対応する共役していない発色団ポリマードットと同様のレベルに留まった。第２に、これらの凍結乾燥していないカウンターパートと比較して、凍結乾燥した発色団ポリマードットのサイズおよび量子収率は、あまり変化しなかった。
【表７】
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【０３９２】
凍結乾燥したポリマードット、および溶液中の凍結乾燥前の発色団ポリマードットの両方の光学特性を測定し、比較した。凍結乾燥した発色団ポリマードットの吸収スペクトルおよび発光スペクトルを６カ月の貯蔵後に測定し、これらをそれらの凍結乾燥していないカウンターパートの吸収スペクトルおよび発光スペクトルと比較した。表７に示すように、凍結乾燥したストレプトアビジン共役ＢＯＤＩＰＹ−６９０発色団ポリマードットの吸収スペクトルおよび発光スペクトルは、６カ月まで貯蔵した後のこれらの凍結乾燥していないカウンターパートと同様であった。
【０３９３】
本開示の好ましい場合を本明細書において示し、記載してきた一方で、このような場合をほんの一例として提供することは当業者には明らかであろう。当業者は、本開示から逸脱することなしに多数のバリエーション、変更、および置換を思いつくであろう。本明細書に記載されている本開示の場合に対する様々な代替物を、本開示の実施において用い得ることを理解すべきである。下記の特許請求の範囲は、本開示の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲内の方法および構造ならびにこれらの同等物はそれによってカバーされることが意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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