(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ローズマリーの植物体またはその一部を、粉砕処理を行うことなく、低級アルコールにより45℃〜70℃で1〜4時間処理して抽出液を取得し、それを濃縮し、生じた析出物を回収することを含む、白色度が61以上でありカルノシン酸およびトリテルペン酸を含むローズマリー抽出物の製造方法であって、低級アルコールが、85％以上95％未満の濃度のエタノールである、方法。
【請求項２】
前記析出物を洗浄することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
低級アルコールでの前記処理を50℃〜70℃で実施する、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
低級アルコールでの前記処理を45℃〜55℃で実施する、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項５】
低級アルコールでの前記処理を60℃〜70℃で実施する、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項６】
ローズマリーの植物体またはその一部が、ローズマリーの葉を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
ローズマリー抽出物中のカルノシン酸含有量が乾燥重量で30mg/g以上であり、総トリテルペン酸含有量が乾燥重量で300mg/g以上である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法によりローズマリー抽出物を製造し、それを飲食品に添加または配合することを含む、飲食品の製造方法。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法によりローズマリー抽出物を製造し、それを化粧料に添加または配合することを含む、化粧料の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は白色度の高いローズマリー抽出物およびその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
シソ科植物であるローズマリー（Rosmarinus officinalis）は、直線状で芳香性のある葉をもつ常緑の低木であり、一般的にスパイスとして、肉、スープ、シチューなどの香り付けに用いられることで知られている。【０００３】
また、ローズマリーの抽出物は、消臭効果（特許文献１、特許文献２）、皺予防効果（特許文献３）等を有し、飲食品や化粧料に配合されている。【０００４】
さらにローズマリーは、トリテルペン酸であるオレアノール酸、ベツリン酸、ウルソール酸や、ジテルペン酸であるカルノシン酸を含有している。オレアノール酸、ウルソール酸、ベツリン酸は転写因子であるNF-κBを阻害し、糖尿病、心血管系疾患、アテローム性動脈硬化などに有用であることが知られている（非特許文献１）。また、カルノシン酸は、神経細胞の維持に重要な役割を果たす神経成長因子の生成を促進することが知られている（非特許文献１、非特許文献２）。【０００５】
このため、ローズマリー抽出物を飲食品や化粧料に配合することにより消臭効果を付与した商品や健康に寄与する商品が数多く提供されている。【０００６】
特許文献１には、ローズマリー抽出物をチューインガムなどの飲食品に添加した際に発生する苦味の原因であるカルノソールの含有量を、０．５質量％以下に調整したローズマリー抽出物の製造方法が記載されている。また特許文献３には、皺予防効果を有するウルソール酸の含有量を高めることができる、ローズマリー抽出物の製造方法が記載されている。【０００７】
しかしながら、特許文献１の方法では、苦味成分のカルノソールは低減できるものの、生体にとって有用なトリテルペン酸もまた、噴霧乾燥前のろ過工程で除去されている可能性があり、得られる抽出物のトリテルペン酸含有量は健康に寄与する商品を提供するには不十分である。また、特許文献３の方法では、得られる抽出物は緑色であり、飲食品や化粧料に添加する際に商品価値が下がってしまう。【０００８】
このように、従来のローズマリー抽出物は通常、緑色をしており、飲食品や化粧料に添加すると望ましくない色が発生し、商品価値が低下する問題点があった。また、従来知られているローズマリー抽出物は、生体にとって有用なトリテルペン酸やカルノシン酸の含有量が低いため、健康に寄与する飲食品を提供する場合に、その添加量が多くなるという問題があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開２００８−２９２２１号公報
【特許文献２】特開平９−２３８６４８号公報
【特許文献３】特開２００９−２４９３０６号公報
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Yadav. VR. et al., Toxins (2010) 2(10),p.2428-2466
【非特許文献２】Kosaka. K. and Yokoi T., Biol. Pharm. Bull., (2003) 26(11):1620-1622
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、白色度の高いローズマリー抽出物を提供することを課題とする。さらに本発明は、ローズマリー由来のカルノシン酸やトリテルペン酸の含有量の高いローズマリー抽出物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、ローズマリーから低級アルコールを用いて好適な条件で抽出した抽出液を濃縮し析出させることにより、白色度の高いローズマリー抽出物が得られることを見出した。さらに、本製造方法で得られる白色度の高いローズマリー抽出物は、カルノシン酸やトリテルペン酸含有量が高いことも見出し、本発明を完成した。【００１３】
すなわち、本発明は、以下の［１］〜［１１］を提供するものである。【００１４】
［１］白色度が６１以上であるローズマリー抽出物。【００１５】
［２］カルノシン酸含有量が乾燥重量で30mg/g以上である前記［１］に記載のローズマリー抽出物。【００１６】
［３］総トリテルペン酸含有量が乾燥重量で300mg/g以上である、前記［１］または［２］に記載のローズマリー抽出物。【００１７】
［４］ローズマリーの植物体またはその一部を低級アルコールにより45℃〜70℃で処理して抽出液を取得し、それを濃縮し、生じた析出物を回収することを含む方法によって調製される、前記［１］〜［３］のいずれかに記載のローズマリー抽出物。【００１８】
［５］前記方法が前記析出物を洗浄することをさらに含む、前記［４］に記載のローズマリー抽出物。【００１９】
［６］前記［１］〜［５］のいずれかに記載のローズマリー抽出物を含む、食品、化粧料、または医薬品用の添加剤。【００２０】
［７］前記［１］〜［５］のいずれかに記載のローズマリー抽出物を含む食品。【００２１】
［８］前記［１］〜［５］のいずれかに記載のローズマリー抽出物を含む化粧料。【００２２】
［９］前記［１］〜［５］のいずれかに記載のローズマリー抽出物を含む医薬品。【００２３】
［１０］ローズマリーの植物体またはその一部を低級アルコールにより45℃〜70℃で処理して抽出液を取得し、それを濃縮し、生じた析出物を回収することを含む、前記［１］〜［５］のいずれかに記載のローズマリー抽出物の製造方法。【００２４】
［１１］  前記析出物を洗浄することをさらに含む、前記［１０］に記載の方法。
【発明の効果】
【００２５】
本発明によれば、白色度が高く、かつ、カルノシン酸やトリテルペン酸などの有効成分の含有量が高いローズマリー抽出物を提供できる。【００２６】
本明細書は本願の優先権主張の基礎となる日本国特願2013-059133の内容を包含する。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】図１は、本発明のローズマリー抽出物を製造する工程の例を説明するためのフローチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
以下、本発明の実施形態について説明する。しかしながら、以下で説明する形態はあくまで例示であって、当業者にとって自明な範囲で適宜修正することができる。
【００２９】
本発明では、ローズマリーから低級アルコールを用いて抽出した抽出液を濃縮し析出させることにより、白色度の高いローズマリー抽出物を得る方法に関する。本発明の方法によって得られる白色度の高いローズマリー抽出物はまた、高いカルノシン酸含有量及び総トリテルペン酸含有量を有する。本発明の白色度の高いローズマリー抽出物の製造方法は、概略的には、ローズマリー、例えばローズマリー葉乾燥物から、ローズマリーエキスを抽出するものである。本発明では、ローズマリーの植物体またはその一部を低級アルコールで処理して抽出液を取得し、それを濃縮し、生じた析出物を回収することを含む方法により、ローズマリー抽出物を得ることが好ましい。図１は、本発明のローズマリー抽出物の製造方法を説明するためのフローチャートである。白色度の高いローズマリーエキスの製造方法の例は、図１に例示されているように、低級アルコールによる抽出工程と、ろ過・濃縮工程と、析出物の洗浄工程と、乾燥工程とを含んでいる。本発明では、例えば、ローズマリーの葉の乾燥物を低級アルコールで抽出した抽出液を濃縮し、その濃縮物を精製水で洗浄することにより、本発明に係るローズマリー抽出物を製造することもできる。
【００３０】
本発明の白色度の高いローズマリー抽出物の原料としては、ローズマリーの植物体またはその一部を用いることができる。ローズマリーの植物体の一部としては、通常、ローズマリー（Rosmarinus officinalis L.）の葉、枝、茎、またはそれらの組み合わせなどが挙げられるが、葉を含むことが好ましい。ローズマリーの植物体またはその一部は生であっても乾燥物であってもよい。ローズマリーの葉、特に葉の乾燥物が原料としてより好ましい。本発明で使用する原料をパワーミルで粉砕する等により粉砕したローズマリー葉を用いて抽出物を得ると白色度が低くなるため、本発明ではローズマリーの植物体またはその一部、特にローズマリーの葉を、粉砕処理を行うことなく、低級アルコールを用いた抽出処理に用いることが好ましい。ローズマリーの原産地は、アルバニア、モロッコ、スペインなど様々であるが本発明では原産地を問わない。
【００３１】
低級アルコールによる抽出工程では、ローズマリーの植物体またはその一部を低級アルコールで処理して抽出液を取得する。例えば、ローズマリーの葉の乾燥物に低級アルコールを1:10〜1:100の重量割合で添加して抽出を行うことができる。本発明において低級アルコールとしては、炭素数５個以下のアルコールをいい、例えばメタノール、エタノール、プロパノール（1-プロパノールまたは2-プロパノール）、ブタノール（1-ブタノール、2-メチル-1-プロパノール、2-ブタノール、2-メチル-2-プロパノール）、ペンタノール等が挙げられる。抽出工程における溶媒として、メタノール、エタノール、プロパノールおよびブタノール等の低級アルコールがいずれも好適に使用可能であるが、その中でもエタノールがより好ましい。低級アルコールは無水アルコールであっても含水アルコールであってもよい。含水アルコールの場合、濃度は80％以上が好ましく、85％以上がより好ましく、90%以上がさらに好ましい。エタノールの場合には少量の水との混液を好適に使用に供することができ、エタノール濃度で80％以上が好ましく、85％以上がより好ましく、90%以上がさらに好ましい。白色度をより向上させる目的では、低級アルコールの濃度は80％以上95％未満が特に好ましい。カルノシン酸含有量及び総トリテルペン酸含有量を増加させる目的では、低級アルコールの濃度は高い方がよく、80％以上が好ましく、85％以上がより好ましく、90%以上がさらに好ましい。
【００３２】
低級アルコールによる抽出工程での抽出温度と時間は、白色度や有効成分であるカルノシン酸およびトリテルペン酸の抽出効率を考えて適宜調整することができる。例えば、抽出工程での溶媒を90%エタノールとし、常温の温度帯で抽出する場合では、抽出処理時間は1または2時間以上、好ましくは3時間以上、より好ましくは4時間以上であり、24時間以内、好ましくは18時間以内、より好ましくは13時間以内であれば、ローズマリー葉からの色素流出が抑制でき、白色度の観点から望ましい。本発明の方法において、白色度をより高める目的では、抽出温度は常温により近い方がよく、例えば70℃以下、より好ましくは55℃以下、例えば5℃〜55℃とすることができる。一方、カルノシン酸含有量をより増加させる目的では、抽出温度はより高い方がよく、好ましくは45℃以上、より好ましくは60℃以上とすることができる。また総トリテルペン酸含有量をより増加させる目的では、抽出温度は高すぎない方がよく、好ましくは70℃以下、より好ましくは60℃以下とすることができる。本発明の方法では、抽出の温度や時間を調整することにより、カルノシン酸含有量や総トリテルペン酸含有量のバランスを調整することが可能である。例えば、高い白色度を保ちつつ、カルノシン酸含有量を増加させる目的では、低級アルコールによる抽出温度（すなわち、抽出処理に用いる低級アルコールの温度）は45℃以上、特に45℃〜70℃が好ましい。またその場合の抽出時間は、以下に限定するものではないが、より高い白色度の抽出物を得る目的では、好ましくは1〜24時間、より好ましくは1〜18時間、さらに好ましくは1〜13時間または1〜8時間、例えば1〜4時間とすることができる。また高い白色度を保ちつつ、総トリテルペン酸含有量を増加させる目的では、低級アルコールによる抽出温度は60℃以下、例えば30℃〜55℃が好ましい。さらに、高い白色度を保ちつつ、カルノシン酸含有量と総トリテルペン酸含有量をバランスよく増加させる目的では、低級アルコールによる抽出温度は45℃〜55℃が好ましい。低級アルコールによる45℃〜55℃での抽出は、例えば1〜24時間または1〜13時間、好ましくは1〜8時間、より好ましくは1〜4時間、例えば2時間行えばよい。また、抽出は抽出開始から抽出終了まで一定温度で行ってもよく、段階的に加温したり冷却したりしてもよい。
【００３３】
なお、本発明における常温とは、日本工業規格（JIS Z8703）で規定されている20℃±15℃の温度帯である。
【００３４】
低級アルコールによる抽出工程では、攪拌しながら抽出するのが好ましい。攪拌条件は特に限定するものではないが、攪拌しすぎると、ローズマリーの葉などからの色素が抽出されすぎて白色度が低くなるので好ましくない。一実施形態では、例えば50rpm〜300rpmで攪拌することが好ましい。なお攪拌せずに抽出する場合は抽出時間をより長くする必要がある。
【００３５】
以上のようにして、低級アルコールを用いてローズマリーから抽出液を調製することができる。
【００３６】
抽出工程後、抽出液を濃縮し、それにより生成した析出物を回収する。抽出液の濃縮に先立ち、ろ過を行うことも好ましい。そのようなろ過・濃縮工程では、先の低級アルコールによる抽出工程で得られた抽出液をろ過して、不要な固形成分（夾雑物など）を除去することができる。ろ過工程は、漏斗によるろ過、ろ紙やフィルターによるろ過など任意のろ過方法によって行うことができる。あるいは、抽出液の濃縮に先立ち、抽出液を遠心分離等にかけて固形成分（夾雑物など）を沈降させ分離除去しても構わない。
【００３７】
濃縮工程では、上記で得られた抽出液、またはそれをろ過して得られたろ液や遠心分離して得られた上清等を、析出物が十分量で生成するまで濃縮する。本発明において濃縮とは、水分を除去して含有成分の濃度を増加させることを意味し、以下に限定するものではないが、例えば、減圧濃縮や加熱濃縮などが挙げられる。
【００３８】
回収した析出物は、そのままローズマリー抽出物として使用することができるが、さらにろ過、洗浄等の処理を行ってもよい。例えば、析出物を水等に懸濁し、ろ過することにより、不要な固形成分（夾雑物など）をさらに除去することも好ましい。析出物を、洗浄液で洗浄することも好ましい。洗浄液は、水（例えば、ろ過水、蒸留水、脱イオン水、超純水などの精製水、井戸水、湧水、地下水など）、緩衝液等であってよい。析出物の洗浄工程では、例えば、先のろ過・濃縮工程で得られた析出物を精製水等の洗浄液で洗浄することができる。あるいは析出物を直接洗浄液で洗浄してもよい。洗浄工程で使用する精製水等の洗浄液は、常温でも加温したものでも構わないが、白色度をより高める観点からは、常温の洗浄液を用いることが好ましい。一方、ある程度の高い白色度を保ちつつ、カルノシン酸含有量をさらに高める目的では、加温した洗浄液、例えば35℃〜70℃、好ましくは45℃〜55℃の洗浄液を用いることもできる。
【００３９】
以上のようにして得られた析出物を、さらに乾燥させてもよい。乾燥方法は特に限定されず、任意の乾燥方法を用いることができ、例えば、低湿度・高温度の条件下に置く方法、乾燥空気・高温乾燥空気を接触させる方法、噴霧乾燥方法、凍結乾燥方法などが挙げられる。乾燥物は粉末化、固形化等を行ってもよい。
【００４０】
このようにして製造されたローズマリー抽出物は、原材料であるローズマリー葉等に由来する緑色〜黄緑色が消失し、顕著に高い白色度を示す。このため本発明に係るローズマリー抽出物は、白色度の点で他の商品に添加する上で有用な素材となり得る。本発明に係るローズマリー抽出物の白色度は、L*a*b*表色系におけるハンター白色度で評価する。この白色度は、分光式測色計（例えばCM-5、コニカミノルタ社製）を用いて反射モードでL*a*b*値を測定し、白色度（W）を計算することにより決定することができる。用いる白色度の計算式は実施例で後述している。本発明のローズマリー抽出物は、白色度が61以上のものであり、白色度70以上が好ましく、白色度75以上がさらに好ましい。本発明のローズマリー抽出物の白色度が70以上であれば、白色の製品に添加しても、ローズマリー抽出由来の色素が最終製品に影響を与えることがない。本発明は、このようなローズマリー抽出物も提供する。
【００４１】
本発明のローズマリー抽出物は、白色度が高いだけでなく、抽出物1gあたりの総トリテルペン酸含有量が高いという利点も有する。本発明における「総トリテルペン酸含有量」とは、ローズマリー抽出物に含まれる、ベツリン酸、オレアノール酸、ウルソール酸の合計量を意味する。ローズマリー抽出物中の総トリテルペン酸含有量は、公知の方法により測定することができるが、例えば、後述の実施例に記載されたHPLC法に基づくトリテルペン酸の定量方法を用いて測定することができる。本発明のローズマリー抽出物は、白色度が高いことが第一の特徴であるが、総トリテルペン酸含有量が乾燥重量でローズマリー抽出物1gあたり例えば300mg以上、好ましくは350mg以上、さらに好ましくは400mg以上であり得る。本発明のローズマリー抽出物は、高い総トリテルペン酸含有量を有するため、健康に寄与する素材として食品、化粧料等の商品に配合して商品の付加価値を高めるために用いることができる。
【００４２】
さらに、本発明のローズマリー抽出物は、白色度が高いだけでなく、抽出物1gあたりのカルノシン酸含有量が高いという利点も有する。ローズマリー抽出物中のカルノシン酸含有量は、公知の方法により測定することができるが、例えば、後述の実施例に記載されたHPLC法に基づくカルノシン酸の定量方法を用いて測定することができる。本発明のローズマリー抽出物は、白色度が高いことが第一の特徴であるが、カルノシン酸含有量が乾燥重量でローズマリー抽出物1gあたり例えば30mg以上、好ましくは60mg以上、さらに好ましくは70mg以上、例えば80mg以上であり得る。本発明のローズマリー抽出物は、高いカルノシン酸含有量を有するため、健康に寄与する素材として食品、化粧料等の商品に配合して商品の付加価値を高めるために用いることができる。
【００４３】
好適な一実施形態では、本発明のローズマリー抽出物は、高い白色度（例えば70〜85）を有し、かつ乾燥重量で300mg/g〜600mg/gの総トリテルペン酸含有量および30mg/g〜200mg/gのカルノシン酸含有量を有する。別の一実施形態では、本発明のローズマリー抽出物は、高い白色度（例えば70〜85）を有し、かつ乾燥重量で400mg/g〜500mg/gの総トリテルペン酸含有量および60mg/g〜150mg/gのカルノシン酸含有量を有する。
【００４４】
本発明のローズマリー抽出物は、白色度が高く、使用目的に応じて、健康に寄与する成分（カルノシン酸、及びトリテルペン酸）の含有量もさらに高めることができるため、飲食品、化粧料、医薬品などに素材として添加して使用することができる。カルノシン酸は、強力な抗酸化作用、神経成長因子の生成促進作用等を有し、光保護や皺予防、記憶力改善等に効果があることが報告されている。オレアノール酸、ベツリン酸、ウルソール酸は、NF-κB阻害作用を有し、糖尿病、心血管系疾患、アテローム性動脈硬化などの症状改善に効果があることが報告されている。したがって本発明のローズマリー抽出物は、これらの有効成分の作用を、飲食品、化粧料、医薬品などの商品に付与するために用いることができる。カルノシン酸はまた、抗酸化作用に基づいて抗酸化剤として、また抗菌作用に基づいて防腐剤として、また消臭剤として、食品、化粧料、および医薬品等に使用されている。したがって本発明のローズマリー抽出物は、抗酸化剤、防腐剤、消臭剤等のような食品、化粧料、または医薬品用の添加剤として使用することもできる。
【００４５】
本発明のローズマリー抽出物を含む食品添加剤、食品、化粧料、及び医薬品は、例えば、安定化剤、緩衝剤、界面活性剤、pH調整剤、甘味料、香料、保存剤、着色剤、賦形剤、増粘剤、担体、溶媒、キレート剤、滑沢剤、コーティング剤などをさらに含んでもよい。
【００４６】
例えば、本発明のローズマリー抽出物を含む飲食品の形態としては、栄養ドリンク、清涼飲料水、紅茶、緑茶などの飲料、キャンデー、クッキー、錠菓、チューインガム、ゼリー状などの菓子の他、麺、パン、米飯、ビスケットなどの穀類加工品、ソーセージ、ハム、かまぼこ等の練り製品、バター、ヨーグルトなどの乳製品、粉末たんぱく飲料、粉末タンパク食品、栄養補助食品やサプリメント（スポーツ用プロテインパウダー、美容サプリメントなど）などの機能性食品、ふりかけ、調味料などが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の飲食品は、固形、液状、流動食状、ゼリー状、タブレット状、顆粒状、カプセル状などの任意の形状であってよい。本発明の飲食品は、糖質、タンパク質、脂質、食物繊維、ビタミン類、ミネラル類等をさらに含んでもよい。タンパク質としては、例えば全脂粉乳、脱脂粉乳、部分脱脂粉乳、カゼイン、ホエイ粉、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物、ホエイタンパク質分離物、α−カゼイン、β−カゼイン、κ−カゼイン、β−ラクトグロブリン、α−ラクトアルブミン、ラクトフェリン、大豆タンパク質、鶏卵タンパク質、肉タンパク質等の動植物性タンパク質、これらの加水分解物、バター、乳清ミネラル、クリーム、ホエイ、非タンパク態窒素、シアル酸、リン脂質、乳糖等の各種乳由来成分などが挙げられる。糖質としては一般の糖類、加工澱粉（デキストリンのほか、可溶性澱粉、ブリティッシュスターチ、酸化澱粉、澱粉エステル、澱粉エーテル等）などが挙げられる。脂質としては、例えば、ラード、魚油等、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油等の動物性油脂；パーム油、サフラワー油、コーン油、ナタネ油、ヤシ油、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油等の植物性油脂などが挙げられる。食物繊維としては、イヌリン食物繊維、ポリデキストロース、難消化性デキストリン、フコイダン等が挙げられる。ビタミン類としては、例えば、ビタミンＡ、カロチン類、ビタミンＢ群、ビタミンＣ、ビタミンＤ群、ビタミンＥ、ビタミンＫ群、ビタミンＰ、ビタミンＱ、ナイアシン、ニコチン酸、パントテン酸、ビオチン、イノシトール、コリン、葉酸などが挙げられ、ミネラル類としては、例えば、カルシウム、カリウム、マグネシウム、ナトリウム、銅、鉄、マンガン、亜鉛、セレン、乳清ミネラルなどが挙げられる。
【００４７】
本発明のローズマリー抽出物を含む化粧料は、例えば、洗顔料、化粧水、乳液、クリーム、ジェル、クレンジングクリーム、美容液、パック、マスク、ファンデーション、アイライナー、マスカラ、アイシャドウ、軟膏等であってよい。本発明の化粧料は、液剤、懸濁剤、シロップ剤などの液体製剤、ジェル剤、錠剤、顆粒剤、散剤、丸剤、カプセル剤などの固形製剤、粉剤等の剤形であってよい。本発明の化粧料は、他の薬効成分、例えば、その他の抗酸化剤、保湿剤、紫外線吸収剤、抗炎症剤、収斂剤等を含んでもよい。
【００４８】
本発明のローズマリー抽出物を含む医薬品は、例えば錠剤、被覆錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、溶液、シロップ剤、乳剤等の任意の剤形であってよい。本発明の医薬品は、経口用であっても非経口用であってもよい。
【００４９】
本発明のローズマリー抽出物を飲食品、化粧料、および医薬品等へ添加または配合し組成物とする場合は、その剤形や形態により異なるが、通常、全組成物中乾燥重量で0.1〜100重量％、好ましくは1〜95重量％程度加えることができる。
【００５０】
本発明のローズマリー抽出物は、カルノシン酸および／またはトリテルペン酸を高い含有量で有するため、本発明のローズマリー抽出物またはそれを含む飲食品、化粧料、および医薬品を用いて、カルノシン酸および／またはトリテルペン酸の薬効を被験体にもたらすことができる。具体的には、本発明のローズマリー抽出物、またはそれを含む飲食品、化粧料、もしくは医薬品を被験体に経口または非経口投与することにより、カルノシン酸による強力な抗酸化効果、抗菌効果、消臭効果等を被験体において発揮させることができる。その結果、当該投与は、例えば光老化防止（皺予防など）、癌予防、除菌、臭気除去等に有効であり得る。また本発明のローズマリー抽出物またはそれを含む飲食品、化粧料、または医薬品を被験体に経口または非経口投与することにより、トリテルペン酸によるNF-κB阻害効果等を被験体において発揮させることができる。その結果、当該投与は、例えば糖尿病、心血管系疾患、アテローム性動脈硬化等の症状を改善する上で有効であり得る。本発明の飲食品、化粧料、または医薬品の投与量は、本発明のローズマリー抽出物の含有量（乾燥重量）で例えば0.01mg〜0.5mg／回となる量に設定することができる。
【実施例】
【００５１】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれにより限定されるものではない。なお、実施例において「％」表示は特に明記する場合を除き、重量％を示すものとする。【００５２】
［原材料］
アルバニア産ローズマリー乾燥物（大津屋商店社製（日本））を用いた。【００５３】
［トリテルペン酸の定量方法］
以下の試験で、乾燥粉末中に含まれるオレアノール酸、ウルソール酸、ベツリン酸の含有量はHPLC法で測定した。具体的には、5mgのサンプル（ローズマリー抽出物）、または、各成分の標準品を76%エタノールに懸濁し、50mLにメスアップした。標準品については、さらに2〜16倍希釈した。それらを下記の条件でHPLC法で分析し、作成した検量線から抽出物1gあたりの総トリテルペン酸の含有量を求めた。【００５４】
分析条件
LC（液体クロマトグラフ）: HPLC（アジレント社）
カラム： XDB-C18     3.0 mm × 150 mm   2本連結して使用
カラム温度： 50℃
移動相：  A  0.2% 酢酸アンモニウム水溶液
B  メタノール
流速：  0.5  mL/min
インジェクション量： 10 μL
UV検出：215 nm
【表１】
0006454266.tif 000002
【００５５】
［カルノシン酸の定量方法］
以下の試験で、乾燥粉末中に含まれるカルノシン酸の含有量はHPLC法で測定した。具体的には、5mgのサンプル（ローズマリー抽出物）、または、標準品を100％エタノールに懸濁し、5mLにメスアップした。標準品については、さらに2〜64倍希釈した。それらを以下の条件でHPLC法で分析し、作成した検量線から抽出物1gあたりのカルノシン酸の量を求めた。【００５６】
分析条件
LC： HPLC（アジレント社）
カラム： XDB-C18     3.0mm × 50mm
カラム温度： 40℃
移動相： A  0.1% ギ酸水溶液
B  アセトニトリル
流速： 0.6 mL/min
インジェクション量： 10 μL
UV検出： 215nm
【表２】
0006454266.tif 000003
【００５７】
［白色度の測定方法］
以下の試験では、乾燥粉末のL*a*b*表色系におけるハンター白色度を測定した。なお、明度をL*、色相と彩度を示す色度をa*、b*で表す。具体的には分光式色差計（分光測色計）（CM-5、コニカミノルタ社製）を用い、粉末をガラスセルに隙間がないように入れ、反射モードでL*a*b*値を測定した。その結果をもとに、以下の式から白色度を計算した。
Ｗ（白色度）＝100-sqr〔（100-L）2+(a2+b2)〕【００５８】
［総合評価の判定方法］
総合評価は、表３に示す通りに評価した。まず、白色度が61未満のものは総合評価を「Ｄ」とした。白色度が61以上のものについて、抽出物1gあたりのカルノシン酸含有量が30 mg未満であり、かつ、抽出物1gあたりの総トリテルペン酸含有量が300 mg未満であるものについては、白色度としては満足でき、原材料に添加しても商品価値に与える影響は低いが、健康に寄与する成分が足りないことから「Ｃ」と評価した。また、抽出物1gあたりのカルノシン酸含有量が30 mg以上か、または、抽出物1gあたりの総トリテルペン酸含有量が300 mg以上であるものは、健康に寄与する成分が含まれているため「Ｂ」と評価し、両者の成分を規定以上満たしているものは、付加価値の高い素材となりうるため「Ａ」と評価した。
【表３】
0006454266.tif 000004
【００５９】
［比較例］特開2009-249306号公報に記載されている抽出法の検討
特開2009-249306の段落［0018］〜［0019］に記載の方法に従い、ローズマリー抽出物を得た。すなわち、ローズマリーの葉を熱水で抽出した後に、残渣を回収し、乾燥した。その後、乾燥物を粉砕した。95%エタノール400mLに20gの乾燥物を添加し、40℃で2時間、スターラーを用いて200rpmで攪拌しながら抽出した。その抽出液をろ過して得たろ液（310g）に、その液量の半分量の精製水(155g）、あるいは倍量の精製水（620g）を添加して攪拌した。約2時間静置した後、析出した成分を遠心分離して沈渣を回収し、８０℃で乾燥させてローズマリー抽出物を得た。【００６０】
このようにして得た各サンプルの白色度、固形分回収率、抽出物1gあたりのカルノシン酸含有量、抽出物1gあたりの総トリテルペン酸含有量を測定し、総合評価を行った。【００６１】
結果を表４に示す。特開2009-249306号公報に記載されている方法で得られるローズマリー抽出物は、白色度が低く、目視においても緑色であった。
【表４】
0006454266.tif 000005
【００６２】
［実施例１］  抽出工程の低級アルコール濃度の検討
95、90、85、および80％エタノール400mLにそれぞれ20gの乾燥ローズマリー葉を添加し、50℃で2時間、スターラーを用いて200rpmで攪拌しながら抽出した。抽出液をキリヤマ漏斗でろ過後、減圧濃縮した。得られた析出物を100mLの精製水に懸濁し、凍結乾燥によって粉末化した。このようにして得た各サンプルの白色度、固形分回収率、抽出物1gあたりのカルノシン酸含有量、抽出物1gあたりの総トリテルペン酸含有量を測定し、総合評価を行った。【００６３】
表５に結果を示す。上記比較例のローズマリー抽出物と比べ、いずれのエタノール濃度でも白色度が顕著に高く、特に、エタノール濃度90%での抽出により72.4と最大に達した。カルノシン酸含有量、および、総トリテルペン酸含有量は、溶媒のエタノール濃度が高くなるにつれて、含有量が増加する傾向が認められた。
【表５】
0006454266.tif 000006
【００６４】
［実施例２］  抽出温度の検討
90％エタノール400mLに20gの乾燥ローズマリー葉を添加した。30、40、60、または70℃で2時間、スターラーを用いて200rpmで攪拌しながら抽出した。抽出液をキリヤマ漏斗でろ過後、減圧濃縮した。得られた析出物を200mLの精製水に懸濁し、ろ過した。さらにろ紙上に残った析出物に常温の精製水400mLをかけてろ過し、洗浄した。得られた析出物を100mLの精製水に懸濁し、凍結乾燥によって粉末化した。このようにして得た各サンプルの白色度、固形分回収率、抽出物1gあたりのカルノシン酸含有量、抽出物1gあたりの総トリテルペン酸含有量を測定し、総合評価を行った。【００６５】
表６に結果を示す。いずれの抽出温度でも白色度は61を超えていた。特に、抽出温度が30℃や40℃では白色度が80を超えていた。一方、抽出温度が40℃および30℃の条件で抽出したサンプルではカルノシン酸含有量が少なく、抽出温度が70℃や60℃では、カルノシン酸含有量は顕著に増加した。よって、本発明のローズマリー抽出物の製造方法では、抽出温度を制御することでカルノシン酸量を制御できることが明らかとなった。
【表６】
0006454266.tif 000007
【００６６】
［実施例３］  抽出時間の検討
90％エタノール400mLに20gの乾燥ローズマリー葉を添加した。40℃で4、8、13、または24時間、スターラーを用いて200rpmで攪拌しながら抽出した。抽出液をキリヤマ漏斗でろ過後、減圧濃縮した。得られた析出物を200mLの精製水に懸濁し、ろ過した。さらにろ紙上に残った析出物に常温の精製水400mLをかけてろ過し、洗浄した。得られた析出物を100mLの精製水に懸濁し、凍結乾燥によって粉末化した。このようにして得た各サンプルの白色度、固形分回収率、抽出物1gあたりのカルノシン酸含有量、抽出物1gあたりの総トリテルペン酸含有量を測定し、総合評価を行った。【００６７】
表７に結果を示す。いずれの抽出時間でも白色度は61を越えていたが、90％エタノールの溶媒を用いて、40℃で抽出した場合、抽出時間が短くなるにつれて、白色度が高く、総トリテルペン酸含有量も増加する傾向が認められた。一方、カルノシン酸含有量は、90％エタノールの溶媒を用いて、40℃で抽出した場合では、抽出時間が長くなるにつれて、その含有量が増加する傾向が認められた。
【表７】
0006454266.tif 000008
【００６８】
［実施例４］  攪拌方法および回転数の検討
90％エタノール400mLに20gの乾燥ローズマリー葉を添加した。50℃で2時間、スリーワンモーターを用いて50、200、または300rpmで攪拌しながら抽出した。抽出液をキリヤマ漏斗でろ過後、減圧濃縮した。得られた析出物を200mLの精製水に懸濁し、ろ過した。さらにろ紙上に残った析出物に常温の精製水400mLをかけてろ過し、洗浄した。得られた析出物を100mLの精製水に懸濁し、凍結乾燥によって粉末化した。このようにして得た各サンプルの白色度、固形分回収率、抽出物1gあたりのカルノシン酸含有量、抽出物1gあたりの総トリテルペン酸含有量を測定し、総合評価を行った。【００６９】
結果を表８に示す。抽出時の攪拌方法および回転数によらず、白色度が高く、カルノシン酸含有量、総トリテルペン酸含有量は高かった。
【表８】
0006454266.tif 000009
【００７０】
［実施例５］  常温抽出時の洗浄の有無の検討
90％エタノール400mLに20gの乾燥ローズマリー葉を添加した。常温で18時間、スターラーを用いて200rpmで攪拌しながら抽出した。抽出液をキリヤマ漏斗でろ過後、減圧濃縮した。得られた析出物を200mLの精製水に懸濁し、ろ過した。さらにろ紙上に残った析出物に常温の精製水400mLをかけてろ過し、洗浄した。また、洗浄しないものも作成し、ともに析出物を100mLの精製水に懸濁して凍結乾燥によって粉末化した。このようにして得た各サンプルの白色度、固形分回収率、抽出物1gあたりのカルノシン酸含有量、抽出物1gあたりの総トリテルペン酸含有量を測定し、総合評価を行った。【００７１】
結果を表９に示す。常温で18時間抽出した場合では洗浄の有無による白色度、カルノシン酸含有量、総トリテルペン酸量への影響は無かった。
【表９】
0006454266.tif 000010
【００７２】
［実施例６］  洗浄方法の検討
90％エタノール400mLに20gの乾燥ローズマリー葉を添加した。50℃で2時間、スターラーを用いて200rpmで攪拌しながら抽出した。抽出液をキリヤマ漏斗でろ過後、減圧濃縮した。得られた析出物を200mLの精製水に懸濁し、ろ過した。さらにろ紙上に残った析出物に常温の精製水または50℃に加温した精製水をかけてろ過し、洗浄した。精製水の量は400ｍLまたは1200mLとした。以上の処理によって得られた析出物を100mLの精製水に懸濁し、凍結乾燥によって粉末化した。このようにして得た各サンプルの白色度、固形分回収率、抽出物1gあたりのカルノシン酸含有量、抽出物1gあたりの総トリテルペン酸含有量を測定し、総合評価を行った。【００７３】
結果を表１０に示す。いずれの濃度でも白色度は顕著に高く、特に、常温の精製水で洗浄した場合では、白色度が80を超えていた。洗浄する精製水の量の違いによる、白色度の程度、カルノシン含有量、総トリテルペン酸含有量の違いは認められなかった。
【表１０】
0006454266.tif 000011
【００７４】
［実施例７］  粉砕原料を使用した抽出の検討
90％エタノール400mLに、乾燥ローズマリー葉をミルで粉砕して10メッシュ篩を通過（10mesh pass）させた粉末20gを添加した。50℃で2時間、スターラーを用いて200rpmで攪拌しながら抽出した。抽出液をキリヤマ漏斗でろ過後、減圧濃縮した。得られた析出物を200mLの精製水に懸濁し、ろ過した。さらにろ紙上に残った析出物に常温の精製水400mLをかけてろ過し、洗浄した。得られた析出物を100mLの精製水に懸濁し、凍結乾燥によって粉末化した。このようにして得た各サンプルの白色度、固形分回収率、抽出物1gあたりのカルノシン酸含有量、抽出物1gあたりの総トリテルペン酸含有量を測定し、総合評価を行った。【００７５】
結果を表１１に示す。原料を粉砕してから抽出工程を行うことによって、カルノシン酸含有量は高まったが、白色度が顕著に低くなった。
【表１１】
0006454266.tif 000012
【００７６】
［実施例８］  錠菓の製造
90％エタノール400mLに、乾燥ローズマリー葉20gを添加した。50℃で2時間、スターラーを用いて200rpmで攪拌しながら抽出した。抽出液をキリヤマ漏斗でろ過後、減圧濃縮した。得られた析出物を200mLの精製水に懸濁し、ろ過した。さらにろ紙上に残った析出物に常温の精製水400mLをかけてろ過し、洗浄した。得られた析出物を100mLの精製水に懸濁し、凍結乾燥によって粉末化してローズマリー抽出物を調製した。固形分回収率は9.8%であり、得られたローズマリー抽出物の白色度は79.4、抽出物1gあたりの総トリテルペン酸含有量は431.2mgであった。このローズマリー抽出物を用いて、下記の配合で錠菓を製造した。
本発明のローズマリー抽出物                0.1
ショ糖                                   95.9
クエン酸                                  2.0
アラビアガム                              1.0
ステアリン酸カルシウム                    1.0
計                                 100.0【００７７】
製造した錠菓は、ローズマリー抽出物由来の着色が無く、白色のものであった。
【産業上の利用可能性】
【００７８】
本発明のローズマリー抽出物は、従来のローズマリー抽出物よりも白色度が高く、飲食品や化粧料に添加した場合に、ローズマリー抽出物由来の望ましくない着色がないため、商品価値を損なうことなく使用できるものである。また、本発明のローズマリー抽出物は、カルノシン酸やトリテルペン酸の含有量が高いため、飲食品や化粧料に添加・配合することで、健康に寄与する高付加価値の商品を提供するための有用な原材料として利用できる。【００７９】
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
【図１】
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