(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
減圧機構を備えた乾留装置を用いて含水状態にある植物原料を６０〜２０℃の温度かつ−９６〜−１００ｋＰａの圧力条件下に乾留したときに留出する成分を「低温減圧乾留留出分（Ｄ）」としかつその低温減圧乾留操作後にその乾留装置内に残る乾燥状態の粉末ないしフレーク状の残渣を「低温減圧乾留残渣（Ｒ）」と称するとき、
前記の植物原料が月桃葉であること、
その月桃葉の「低温減圧乾留残渣（Ｒ）そのもの」またはその「低温減圧乾留残渣（Ｒ）からの溶媒による抽出物（Ｅ）」を有効成分とするものであること、および、
前記の残渣（Ｒ）または抽出物（Ｅ）が、「ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニドとケンフェロール−３−Ｏ−グルクロニドとの双方」を含有するものであること、
を特徴とするメイラード反応抑制機能または／および抗酸化機能を有する機能剤。
【請求項２】
前記の機能剤がメイラード反応抑制剤である請求項１記載の機能剤。
【請求項３】
前記のメイラード反応抑制剤がペントシジン生成阻害剤である請求項２記載の機能剤。
【請求項４】
前記の機能剤が抗酸化剤である請求項１記載の機能剤。
【請求項５】
前記の低温減圧乾留操作が、水分率が９０重量％以下の含水状態にある月桃葉に対する乾留操作であることを特徴とする請求項１記載の機能剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ショウガ科の植物である「月桃」の「葉部」から分離取得した特定の成分を有効成分とする「メイラード反応抑制機能または／および抗酸化機能を有する機能剤」（すなわち「メイラード反応抑制剤または／および抗酸化剤」）に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
[月桃について]
月桃は、ショウガ科ハナミョウガ属の多年草であり、我が国においては、主として琉球諸島（沖縄諸島や奄美諸島）や九州南部において、民家の庭先でもよく見かけるなじみの植物である。成長した月桃の高さはたとえば３ｍにも達し、葉の長さは４０〜６０ｃｍ程度、葉の巾は１５ｃｍ程度である。
月桃の葉（月桃葉）に含まれる成分には、防虫、防カビ、抗菌、消臭、鎮静作用などの作用があることも知られている。
【０００３】
[その１]
「月桃の蒸留液」については、次のような文献がある。
【０００４】
（特許文献１）
−１−
特開２００２−３２２０２３（特許文献１）の請求項１には、「月桃の地上部から、乾留法、減圧蒸留法、水蒸気蒸留法などの手法により月桃蒸留液を抽出した後、分液ロート又はオイルセパレーター等で精油分を分離除去し、残った成分をろ過して、化粧品などの製造に利用することを特徴とする月桃精油除去液の製造方法が示されている。この精油除去液の用途は、化粧水、美容液、脂肪酸クリーム、シャンプーなどである。
−２−
月桃を蒸留したときの蒸留液（留出液のこと）には精油分が含まれるので、通常であればその精油分を有効成分として利用するのであるが、この特許文献１の発明においては、蒸留液から精油分を除去した残りの液を利用するという逆の発想を採用している。
【０００５】
[その２]
「ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニド」の記載のある文献
特許電子図書館による公報全文の検索において、「ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニド」の記載のある文献は３件ある。
【０００６】
（特許文献２）
そのうちの１件の特開２００４−０１０４８８（特許文献２）はアレルゲンの腸管透過抑制剤にかかるものであって、その請求項６には香辛料からの抽出物であるケルセチン−３−Ｏ−グルクロニドにつき記載がある。
また、この文献の段落００１７にはケルセチン−３−Ｏ−グルクロニドの化学式が示されており、段落００４５にはこの化合物の１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲも示されている。
【０００７】
[その３]
「ケルセチン、グルクロニド、抗酸化、メイラード」の記載のある文献
特許電子図書館による公報全文の検索において、「ケルセチン  クエルセチン」×「グルクロニド  グルクロナイド」×「抗酸化  メイラード」の検索式による検索によれば、たとえば次のような文献がある。
【０００８】
（特許文献３）
特開２００９−１０６２６５（特許文献３）の段落０００７には、「抗酸化性の高いフラボンの７位グルクロン酸抱合体が蓄積している」旨の記載がある。
【０００９】
（特許文献４）
特開２００７−１０６６９６（特許文献４）の段落０００２には、「ケルセチン抱合体は抗酸化作用、抗炎症作用、脂質吸収抑制作用、脳細胞伝達物質の強化作用等を有することが知られている」旨の記載がある。
【００１０】
（特許文献５）
特開２００１−１２２７９１（特許文献５）には、「ケルセチン−３−β−Ｄ−グルクロナイドのインビトロ研究は抗酸化および抗炎症性を有すること、および血小板凝縮およびヒアルニダーゼを阻止し、毛細血管透過性を減らすことにより浮腫を縮小することを示す」旨の記載がある。
【００１１】
（特許文献６）
再表２０１０／０８４８７９（特許文献６）には、「ケルセチンの３位グルクロン酸配糖体はミケリアンと呼ばれ、抗鬱剤として用いられるセントジョーンズワートの薬理種成分の一つとして知られており、・・・」、「ケルセチンの３位グルクロン酸配糖体は、ＬＤＬ分解阻害活性や、Ｈ２Ｏ２による細胞内酸化ストレスの軽減効果や、アンジオテンシンによる血管肥大の抑制効果等が知られている」旨の記載がある。
【００１２】
[その４]
「ケンフェロール−３−Ｏ−グルクロニド」の記載のある文献
特許電子図書館による公報全文の検索において、「ケンフェロール−３−Ｏ−グルクロニド」の記載のある文献はヒットしなかった。
（従って、「ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニド」と「ケンフェロール−３−Ｏ−グルクロニド」との双方について記載のある文献もヒットしなかった。）
【００１３】
[その５]
「ケンフェロール」×「グルクロニド  グルクロナイド」×「抗酸化  メイラード」の記載のある文献
【００１４】
（特許文献７）
特開２００９−１０６２６５（特許文献７）の段落０００７には、「抗酸化性の高いフラボンの７位グルクロン酸抱合体が蓄積している」旨の記載がある。
【００１５】
（特許文献８）
再表２０１０−０２６６６６（特許文献８）の段落０００７のすぐ前の個所には、「このようにして得られるグルクロン酸抱合体（フラボノイドの）は、機能性食品の材料、その生体内での機能を調べるための試薬、あるいは、抗酸化剤などとして有用である」旨の記載がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】特開２００２−３２２０２３
【特許文献２】特開２００４−０１０４８８
【特許文献３】特開２００９−１０６２６５
【特許文献４】特開２００７−１０６６９６
【特許文献５】特開２００１−１２２７９１
【特許文献６】再表２０１０／０８４８７９
【特許文献７】特開２００９−１０６２６５
【特許文献８】再表２０１０／０２６６６６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
（特許文献１について）
特許文献１においては、「月桃の地上部から、乾留法、減圧蒸留法、水蒸気蒸留法などの手法により月桃蒸留液を抽出した後、その蒸留液につき、分液ロート又はオイルセパレーター等で精油分を分離除去し、残った成分をろ過して、化粧品などの製造に利用している。
つまり、特許文献１の発明においては、月桃蒸留液は「精油分」と「精油分以外の部分（水分や、水に懸濁している精油分）」とからなるところ、その蒸留液のうちの「精油分以外の部分」に着目している。
特許文献１においては、蒸留操作による蒸留液以外の部分である「缶残」については何の注目もしていない。
【００１８】
（特許文献２〜６について）
特許文献２〜６には、ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニドあるいはその類似物質の作用効果（抗酸化作用など）についての記載があるにとどまる。
【００１９】
（特許文献７〜８について）
特許文献７〜８には、ケンフェロール−３−Ｏ−グルクロニドあるいはその類似物質の作用効果（抗酸化作用など）についての記載があるにとどまる。
【００２０】
（特許文献１、２〜６、７〜８についてのまとめ）
−１−
上述の特許文献１においては、月桃葉の蒸留液に着目しているが、上述のように、蒸留液以外の部分である「缶残」については何らの注目も払っていない。
【００２１】
−２−
上記の特許文献２〜６にはケルセチン−３−Ｏ−グルクロニドの抗酸化作用などにつき記載があり、上記の特許文献７〜８にはケンフェロール−３−Ｏ−グルクロニドの抗酸化作用などにつき記載があるが、本願発明のように、
・植物原料として月桃葉に着目すること、
・「低温減圧乾留残渣（Ｒ）そのもの」またはその「低温減圧乾留残渣（Ｒ）からの溶媒による抽出物（Ｅ）」を有効成分とすること、
・ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニドとケンフェロール−３−Ｏ−グルクロニドとの双方」を含有するものであること、
については、いずれも記載がない。
【００２２】
−３−
これらの特許文献１〜８に記載の発明は、本願発明とは着眼点や技術思想が相違しているのである。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
本発明のメイラード反応抑制機能または／および抗酸化機能を有する機能剤は、
減圧機構を備えた乾留装置を用いて含水状態にある植物原料を低温かつ減圧条件下に乾留したときに留出する成分を「低温減圧乾留留出分（Ｄ）」としかつその低温減圧乾留操作後にその乾留装置内に残る乾燥状態の粉末ないしフレーク状の残渣を「低温減圧乾留残渣（Ｒ）」と称するとき、
前記の植物原料が月桃葉であること、
その月桃葉の「低温減圧乾留残渣（Ｒ）そのもの」またはその「低温減圧乾留残渣（Ｒ）からの溶媒による抽出物（Ｅ）」を有効成分とするものであること、および、
前記の残渣（Ｒ）または抽出物（Ｅ）が、「ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニドとケンフェロール−３−Ｏ−グルクロニドとの双方」を含有するものであること、
を特徴とするものである。
【００２４】
ここで、上記のメイラード反応抑制機能を有する機能剤は、メイラード反応抑制剤、特にそのメイラード反応抑制剤の範疇の中のペントシジン生成阻害剤であることが特に好ましい。
【００２５】
また、上記の抗酸化機能を有する機能剤は、抗酸化剤であることが特に好ましい。
【００２６】
そして、上記の低温減圧乾留操作は、より具体的には、水分率が９０重量％以下の含水状態にある月桃葉を、６０〜２０℃の低温条件下にかつゲージ圧で−８８ｋＰａ以下の減圧条件下に行う乾留操作であることが特に好ましい。
【発明の効果】
【００２７】
（着想の特異性と作用効果について）
−１−
本発明者らは、植物原料として月桃葉に着目している。
月桃葉を蒸留したときの留分（蒸留エキス）の良い香りの成分はテルピネン−４−オールであることが知られており、本発明者らもそのことを確認しているが、本発明者らは、月桃葉については、その蒸留エキス以外の部分に何らかの未知の可能性があるとの予感を抱いていたのである。
【００２８】
−２−
特許文献１のように、植物中の着目成分（Ａとする）は、蒸留により留出する留分に含まれるとするのが技術上の通念であり、乾留装置内に残る固体状の残渣（缶残）は、本来は廃棄物として処理されるべきものである。
蒸留操作により留分中に移行するはずの着目成分Ａの一部が残渣（缶残）側に残るので、その着目成分Ａを残渣側から少しでも回収しようとすることは考えられるが、残渣から回収した着目成分Ａは純度が劣りかつ不純物や着色物が入り込むおそれがあるので、化粧品原料に使用するようなケースにおいてはそのような回収はしないのが通常である。たとえ回収するときでも、その回収物につき精製処理を施すことが必要となるので、かえってコスト的に割高になってしまうのである。
【００２９】
−３−
しかるに、本発明者らは、その月桃葉について「常温程度の低温での減圧乾留」を行ったときに乾留装置内に残る固体状の残渣（低温減圧乾留残渣（Ｒ））に着目し、
その残渣（Ｒ）そのもの、および、
その残渣（Ｒ）からの溶媒による抽出物（Ｅ）
が、抗酸化機能または／およびペントシジン生成阻害率の点ですぐれた作用効果を示すという予想外の事実を見い出すに至ったのである。
ここで「予想外」と形容したのは、植物原料に含まれる有効成分は減圧乾留液（留出液）の方に移行しかつ減圧乾留操作中に分解ないし変性により生じた有効成分も減圧乾留液（留出液）の方に移行し、減圧乾留残渣の側には有効成分は余り残らないと考えるのが常識的であるからである。
【００３０】
−４−
そして、前記の低温減圧乾留操作は、水分率が９０重量％以下の含水状態にある月桃葉を、６０〜２０℃の低温条件下にかつゲージ圧で−８８ｋＰａ以下の減圧条件下に行う乾留操作であることが望ましい。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】実施例にかかる「（第４）２０％エタノール溶出液のＨＰＬＣ分析」の「（２）ＨＰＬＣクロマトグラム」の個所において言及の「波長２８０ｎｍにおけるＨＰＬＣクロマトグラム」である。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
（月桃葉）
本発明においては、植物原料として月桃葉（つまり「月桃の葉部」）を用いる。月桃葉を用いたときに、本発明の目的に沿う有効成分を含む目的物が得られるからである。
月桃葉の減圧乾留を行うにあたっては、月桃の葉が極めて大きいことから、必要な大きさにまで裁断しておく。なお、月桃の葉部以外に月桃の他の部位が混在していても、特に支障とはならない。
【００３３】
（低温減圧乾留時の水分率の条件）
本発明においては、減圧機構を備えた乾留装置を用いて含水状態にある月桃葉を低温かつ減圧条件下に乾留する。ただし、水分率が余りに高いときは乾留に長時間を要し、工業性を欠くことになるので、水分率は９０重量％以下にとどめることが望ましい。
【００３４】
（低温減圧乾留時の温度条件と圧力条件）
−１−
低温減圧乾留を行うときの温度条件としては、６０〜２０℃程度の範囲内の低温が適当であり、より好ましい範囲は５５〜２５℃、さらに好ましい範囲は５０〜３０℃である。
温度条件が６０℃を越えるような条件で減圧乾留を行うと、乾留装置内に残る固体状の残渣を溶媒で抽出してもその抽出物（Ｅ）中の有効成分の量が少なくなる上、取得した抽出物（Ｅ）を用いたときのメイラード反応抑制機能や抗酸化機能が不足するようになる傾向がある。
−２−
低温減圧乾留を行うときの圧力条件（減圧条件）としては、ゲージ圧表記で、−８８ｋＰａ以下（−６６０ｍｍＨｇ以下）、通常は−９６〜−１００ｋＰａ（−７２０〜−７５０ｍｍＨｇ）とすることが好ましい。
絶対圧表記では、１３．３ｋＰａ以下（１００ｍｍＨｇ以下）、通常は１．３〜５．３ｋＰａ（１０〜４０ｍｍＨｇ）とすることが好ましい。
減圧の度合いが上記範囲よりも緩くなると（減圧度が不足すると）乾留に長時間を要することになり、一方、減圧の度合いを余りに大きくすることは真空装置上の制約があるので、いずれも工業性を欠くことになる。
−３−
上述のような条件下での低温減圧乾留により、所期の目的物を工業的に効率良く取得できる。
【００３５】
（低温減圧乾留残渣（Ｒ））
−１−
上記のようにして低温減圧乾留を行ったときに乾留装置内に残る固体状の残渣である「低温減圧乾留残渣（Ｒ）そのもの」が本発明の目的物である。
また、その「低温減圧乾留残渣（Ｒ）からの溶媒による抽出物（Ｅ）」も本発明の目的物である。ここで溶媒としては種々の溶媒が使用できるが、水、エタノール、これらの混合物が特に好適である。
−２−
前者の「低温減圧乾留残渣（Ｒ）」はそれ自体が製品となるが、その製品の購入業者はいずれその残渣（Ｒ）を用いて溶媒による抽出を行って抽出物（Ｅ）となし、その抽出物（Ｅ）を自ら使用して二次製品や三次製品を製造・販売したり、その抽出物（Ｅ）をさらに第三者に販売することになる。
−３−
後者の「低温減圧乾留残渣（Ｒ）からの溶媒による抽出物（Ｅ）」は、メイラード反応抑制機能または抗酸化機能としての好ましい性能を有するので（ちなみにこれら双方の機能を併せ有することも多い）、極めて有用である。
【００３６】
（低温減圧乾留留出分（Ｄ））
一方、上記の低温減圧乾留による「低温減圧乾留留出分（Ｄ）」は、本発明の目的物ではないが、抗菌成分や香気成分を含むので、無駄にはならない。
【実施例】
【００３７】
次に実施例をあげて本発明をさらに説明する。
【００３８】
（第１）月桃葉乾燥粉末の５０％エタノール抽出
月桃葉乾燥粉末１０ｇを秤り、５０体積％エタノール水（以下「５０％エタノール」というように略称する）１００ｍＬを加え、２時間室温で攪拌抽出した。抽出液を遠心分離し、上清を濾紙濾過した。残渣に５０％エタノール５０ｍＬを加え、室温で更に１時間抽出した。抽出液を遠心分離し、上清を濾紙濾過した。濾液を合わせて減圧濃縮し、残渣１．２２ｇを得た。
【００３９】
（第２）残渣のＯＤＳカラム精製
残渣に１０％エタノール２０ｍＬを加え、撹拌抽出した。不溶物を遠心濾過で除き、上清を濾紙濾過した。
濾液をＯＤＳカラム（１７５ｍＬ，２．５ｘ３５ｃｍ）にチャージした。１０％エタノール、２０％エタノール、３０％エタノール、５０％エタノールの順で溶出液をそれぞれ２５０ｍＬ得た。
【００４０】
（第３）各溶出液の抗酸化活性とメイラード反応抑制活性（ペントシジン生成阻害活性）の測定
（１）方法
（その１）抗酸化活性
（１−１）４００μＭ  ＤＰＰＨ（１，１−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ）エタノール溶液の調製
ＤＰＰＨ  ３．９４ｍｇを秤量し、エタノール２５ｍＬに攪拌溶解する。
【００４１】
（１−２）検量線の作成
ア：４００μＭ  ＤＰＰＨエタノール溶液をエタノールで３倍に希釈し、その希釈液０．９ｍＬを試験管に分注する。
イ：希釈液の入った試験管にエタノール３００，２５０，２００，１５０，１００μＬをｎ＝２で添加する。
ウ：０．２ｍＭ  α−トコフェロールエタノール溶液（８．６ｍｇ→エタノール１００ｍＬ）をイで加えたエタノールと０．２ｍＭ  α−トコフェロールエタノール溶液の合計が３００μＬになるよう試験管（ｎ＝２）に添加し、攪拌する。このとき、α−トコフェロールの量は０，１０，２０，３０，４０ｎｍｏｌ／ａｓｓａｙとなる。
エ：添加２０分後に５１６ｎｍで吸光度を測定する。
オ：横軸にα−トコフェロール量（ｎｍｏｌ／ａｓｓａｙ）、縦軸に吸光度をプロットし、最小二乗法により、検量線を作成する。
【００４２】
（１−３）試験液の測定
ア：ＤＰＰＨ希釈液０．９ｍＬを試験管に分注し、それにエタノール２５０μＬを添加する。
イ：試験液５０μＬを試験管（ｎ＝２）に添加し、攪拌する。
ウ：添加２０分後に５１６ｎｍで吸光度を測定する。
エ：得られた吸光度より、検量線を用いてα−トコフェロール相当量を算出する。
【００４３】
（その２）メイラード反応抑制活性（ペントシジン生成阻害）
下記の表に示す組成の反応液を１．５ｍＬ容量のプラスチックチューブに調製し、６０℃、２４時間ヒートブロック上でインキュベートした。
【００４４】
【表１】
0006468745.tif 000002
【００４５】
反応終了後、反応液１００μＬに４００μＬの精製水を加え、その希釈液をＨＰＬＣ分析することにより得られるペントシジンのピーク面積を測定し、阻害率を求めた。
また、アミノグアニジン塩酸塩の１０ｍＭ液を陽性コントロールとした。
【００４６】
・ＨＰＬＣ分析条件
カラム：  ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ  Ａ−３１２  １５０×６ｍｍＩ．Ｄ．
溶出液：  ３％ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ
流量：    １．０ｍＬ／ｍｉｎ、カラム温度  ４０℃
検出器：  分光蛍光検出器  ＥＸ３３５ｎｍ、ＥＭ３８０ｎｍ
注入量：  ２０μＬ
保持時間：約１２分
【００４７】
・阻害率
阻害率（％）＝１００−[（試料溶液のペントシジンのピーク面積／ブランクのペントシジンのピーク面積）×１００]
【００４８】
（その３）結果
結果を次の表２に示す。
【００４９】
【表２】
0006468745.tif 000003
【００５０】
上記の結果から、抗酸化活性物質およびメイラード反応抑制活性物質は、主として２０％エタノール溶出液中に含まれていることが示された。
【００５１】
（第４）２０％エタノール溶出液のＨＰＬＣ分析
（１）分析条件
・カラム：    ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ  Ａ−３１２  １５０×６ｍｍＩ．Ｄ．
・カラム温度：４０℃
・移動相：    ０．１％ＴＦＡ−０．１％ＴＦＡ  ｉｎ  エタノール
グラジエント溶出
・検出器：    ＵＶ  波長２８０ｎｍ
・流量：      ０．８ｍＬ／ｍｉｎ． 
・注入量：    ２０μＬ
（２）ＨＰＬＣクロマトグラム
図１を参照
【００５２】
（第５）２０％エタノール溶出液のＨＰＬＣ分取
２０％エタノール溶出液を減圧濃縮し、残渣１４０ｍｇを得た。これを５０％エタノール８ｍＬに溶解し、上記クロマトグラムで保持時間１５分から２５分のブロードな山の部分をフラクション１、保持時間約２８分の鋭いピークをフラクション２、保持時間約３０分の鋭いピークをフラクション３としてＨＰＬＣ分取を行った。
【００５３】
（１）分取条件
・カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−Ａ  ２φ×２０ｃｍ
・移動相：０．５％ギ酸  ｉｎ  ３０％エタノール
・カラム温度：４０℃
・流量：５ｍＬ／ｍｉｎ．
・検出：２８０ｎｍ
・注入量：０．５ｍＬ
【００５４】
（２）結果
フラクション１を３００ｍＬ、単一ピークのフラクション２を１００ｍＬ、単一ピークのフラクション３を１２５ｍＬ得た。各フラクションを減圧濃縮し、フラクション１〜３からそれぞれ１１０ｍｇ、１６ｍｇ、１９ｍｇを得た。
【００５５】
（第６）フラクション１〜３のメイラード反応抑制（ペントシジン生成阻害）活性の測定
（１）結果
結果を次の表３に示す。
【００５６】
【表３】
0006468745.tif 000004
【００５７】
上記の結果から、フラクション２のピークとフラクション３のピークがメイラード反応抑制活性物質であることが示された。また、抗酸化活性物質も同様であることが推定された。
【００５８】
（第７）フラクション２および３の残渣のＮＭＲ測定
フラクション２および３の残渣のＮＭＲ測定を行い、それらの構造を検討した結果、フラクション２は下記の化１のケルセチン−３−Ｏ−グルクロニドであり、フラクション３は下記の化２のケンフェロール−３−Ｏ−グルクロニドであった。
【００５９】
【化１】
0006468745.tif 000005
【００６０】
（ＮＭＲデータ）
−１−
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）
δ3.45-3.61(3H,2”,3”,4”), 3.76(1H,d,J=10Hz,5”), 5.35(1H,d,J=8Hz,1”),
6.19(1H,d,J=4Hz,6), 6.39(1H,d,J=4Hz,8), 6.85(1H,d,J=8Hz,5’), 
7.63(1H,dd,J=4Hz,8Hz,6’), 7.65(1H,d,J=4Hz,2’)
−２−
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）
δ72.9(C-4”), 75.5(C-2”), 77.2(C-5”), 77.7(C-3”), 94.8(C-8), 
100.0(C-6), 104.4(C-1”), 105.7(C-10), 116.1(C-5’), 117.3(C-2’),
122.9(C-1’), 123.5(C-6’), 135.5(C-3), 146.0(C-3’), 149.9(C-4’),
158.5(C-9), 159.1(C-2), 163.1(C-5), 166.1(C-7), 172.5(C-6’’), 
179.3(C-4) 
−３−
これらのデータは、文献値（Phytochemistry, 1985, 24, 465-467）と一致していた。
【００６１】
【化２】
0006468745.tif 000006
【００６２】
（ＮＭＲデータ）
−１−
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）
δ3.45-3.60(3H,2”,3”,4”), 3.75(1H,d,J=10Hz,5”), 5.33(1H,d,J=7Hz,1”),
6.19(1H,d,J=4Hz,6), 6.38(1H,d,J=4Hz,8), 6.86(2H,d,J=8Hz,3’,5’),
8.05(2H,d,J=8Hz,2’,6’) 
−２−
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）
δ72.9(C-4”), 75.5(C-2”), 77.1(C-5”), 77.6(C-3”), 94.9(C-8), 100.0(C-6),
104.5(C-1”), 105.7(C-10), 116.2(C-3’,C-5’), 122.6(C-1’), 132.4(C-2’,C-6’),
135.4(C-3), 158.5(C-9), 159.3(C-2), 161.6(C-4’), 163.1(C-5), 166.1(C-7),
172.2(C-6”), 179.3(C-4)
【００６３】
（第８）「抗酸化活性」および「メイラード反応抑制活性」の強さの検討
上述のケルセチン−３−Ｏ−グルクロニドおよびケンフェロール−３−Ｏ−グルクロニドの「抗酸化活性」および「メイラード反応抑制活性」の強さを検討した。
【００６４】
（１）抗酸化活性
ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニドの１．０ｍＭ，０．５ｍＭ，０．２５ｍＭ，０．１２５ｍＭ，０．０６３ｍＭ−５０％ＥｔＯＨ溶液およびケンフェロール−３−Ｏ−グルクロニドの１０ｍＭ，５ｍＭ，２．５ｍＭ，１．２５ｍＭ，０．０６３ｍＭ−５０％ＥｔＯＨ溶液をそれぞれ調製し、抗酸化活性を測定した。
結果を次の表４に示す。
【００６５】
【表４】
0006468745.tif 000007
【００６６】
上記の結果から、ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニドは、α−トコフェロールの１．６倍の抗酸化活性を有していることがわかる（下記の計算基礎を参照）。
一方、ケンフェロール−３−Ｏ−グルクロニドの抗酸化活性は、α−トコフェロールの２％程度にすぎず（下記の計算基礎を参照）、事実上、抗酸化活性が認められなかったことがわかる。
【００６７】
[α−トコフェロールとの対比における抗酸化活性能の計算基礎]
−０−
念のため、上記の表４における「抗酸化活性」の計算基礎を、以下に項を改めて説明する。
後述の表５は、α−トコフェロールとの対比におけるケルセチン−３−Ｏ−グルクロニドの抗酸化活性能の計算基礎を示すためのものである。
後述の表６は、α−トコフェロールとの対比におけるケンフェロール−３−Ｏ−グルクロニドの抗酸化活性能の計算基礎を示すためのものである。
【００６８】
−１−
（ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニドに関して）
上記の表４の左欄の上半分の「試料（ｍＭ）」の欄が下記の表５の（Ａ）欄に対応し、上記の表４の右欄の上半分の「抗酸化活性（注１）」の欄が下記の表５の（Ｃ）欄に対応する。
【００６９】
−２−
下記の表５の（Ｄ）欄（抗酸化活性能の比率（Ｃ）/（Ｂ）を示す）における５個の比率のうち最大値（２．２０）と最小値（０．８６）とをカットし、残りの３個の値（１．２８と１．６８と１．９０）の平均値（１．６）を、ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニドのα−トコフェロールとの対比における抗酸化活性能の値とした。
この結果から、ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニドは、α−トコフェロールの約１．６倍の抗酸化活性を有していることがわかる。
【００７０】
【表５】
0006468745.tif 000008
【００７１】
−３−
（ケンフェロール−３−Ｏ−グルクロニドに関して）
上記の表４の左欄の下半分の「試料（ｍＭ）」の欄が下記の表６の（Ａ）欄に対応し、上記の表４の右欄の下半分の「抗酸化活性（注１）」の欄が下記の表６の（Ｃ）欄に対応する。
【００７２】
【表６】
0006468745.tif 000009
【００７３】
−４−
上記の表６の（Ｄ）欄（抗酸化活性能の比率（Ｃ）/（Ｂ）を示す）における５個の比率のうち最大値（０．０６３）と最小値（０．０１４）とをカットし、残りの３個の値（０．０１６と０．０２４と０．０３２）の平均値（０．０２４）を、ケンフェロール−３−Ｏ−グルクロニドのα−トコフェロールとの対比における抗酸化活性能の値とした。
この結果から、ケンフェロール−３−Ｏ−グルクロニドは、α−トコフェロールの０．０２４倍（約０．０２倍、つまり２％）の抗酸化活性を有しているにすぎなかったことがわかる。
すなわち、ケンフェロール−３−Ｏ−グルクロニドについては、ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニドとは異なり、抗酸化活性は奏されなかった。
【００７４】
−５−
しかしながら、本発明の「低温減圧乾留残渣（Ｒ）そのもの」またはその「低温減圧乾留残渣（Ｒ）からの溶媒による抽出物（Ｅ）」は、ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニドとケンフェロール−３−Ｏ−グルクロニドとの双方を含むので、結局は抗酸化活性についても好ましい作用を示すことになる。
【００７５】
（その２）メイラード反応抑制活性（ペントシジン生成阻害活性）
（２−１）ペントシジン生成阻害活性の測定
ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニドの１．０ｍＭ，０．５ｍＭ，０．２５ｍＭ，０．１２５ｍＭ，０．０６３ｍＭ−５０％ＥｔＯＨ溶液と、およびケンフェロール−３−Ｏ−グルクロニドの１０ｍＭ，５ｍＭ，２．５ｍＭ，１．２５ｍＭ，０．０６３ｍＭ−５０％ＥｔＯＨ溶液とをそれぞれ調製し、メイラード反応抑制活性（ペントシジン生成阻害率）を測定した。
結果を表７および表８に示す。
【００７６】
（２−２）測定結果
測定結果を次の表７と表８に示す。
【００７７】
【表７】
0006468745.tif 000010
【００７８】
【表８】
0006468745.tif 000011
【００７９】
（２−４）解析
−１−
上記の表７の結果から、ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニドの５０％阻害率濃度は０．５ｍＭであり、一方、陽性コントロールであるアミノグアニジン塩酸塩の５０％阻害率濃度は１０ｍＭ強であるので、ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニドはアミノグアニジン塩酸塩のおよそ２０倍（１０ｍＭ／０．５ｍＭ≒２０）の強さのメイラード反応抑制活性を示したことがわかる。（なお、５０％阻害率濃度は、表７の濃度と阻害率とをプロットすることにより求めることができる。）
【００８０】
−２−
また、上記の表８の結果から、ケンフェロール−３−Ｏ−グルクロニドの５０％阻害率濃度は３ｍＭであり、一方、陽性コントロールであるアミノグアニジン塩酸塩の５０％阻害率濃度は１０ｍＭ強となるので（１０ｍＭの場合の阻害率が４５％なのでそれよりも数％大きくなる）、ケンフェロール−３−Ｏ−グルクロニドはアミノグアニジン塩酸塩の３．５倍程度の強さのメイラード反応抑制活性を示したことがわかる。（なお、５０％阻害率濃度は、表８の濃度と阻害率とをプロットすることにより求めることができる。）
【産業上の利用可能性】
【００８１】
月桃葉の「低温減圧乾留残渣（Ｒ）そのもの」またはその「低温減圧乾留残渣（Ｒ）からの溶媒による抽出物（Ｅ）」を有効成分とし、かつ、前記の残渣（Ｒ）または抽出物（Ｅ）が「ケルセチン−３−Ｏ−グルクロニドとケンフェロール−３−Ｏ−グルクロニドとの双方」を含有する本発明の機能剤は、メイラード反応抑制剤としても抗酸化剤としてもすぐれた作用を示すので、化粧品をはじめとする外用剤、食品、医薬部外品などへの添加剤として有用である。
【図１】
0006468745.tif 000012