(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アカネ科（Rubiaceae）のカギカズラ属植物の葉由来の抽出物を有効成分とするアセチルコリンエステラーゼ阻害剤。
【請求項２】
アカネ科（Rubiaceae）のカギカズラ属植物の葉由来の抽出物を有効成分とするアルツハイマー型老年痴呆症の治療・予防剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アセチルコリンエステラーゼ阻害作用を有する阻害剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
神経の伝達物質であるアセチルコリンは、標的細胞またはコリン作動性神経上の受容体に結合して重要な役割を果たしている。
【０００３】
このアセチルコリンは、合成酵素コリンアセチルトランスフェラーゼによって合成され、分解酵素アセチルコリンエステラーゼによって分解されることで体内に一定の濃度に保たれている。即ち、体内のアセチルコリンの濃度はアセチルコリンの合成酵素と分解酵素のバランスによってコントロールされている。アセチルコリンエステラーゼによるアセチルコリンの分解が促進されると、神経伝達部のアセチルコリンの量は減少する。アセチルコリンの濃度が低下すると、コリン作動性神経の伝達が弱くなる。これによってコリン作動性神経の伝達が不十分となることが学習機能の低下やアルツハイマー認知症発症の原因の一つと考えられている。
【０００４】
また、皮膚における非神経性アセチルコリンの作用については未だ完全に解明されていないが、皮膚表層に存在するアセチルコリンは、健やかな肌状態の維持や肌ダメージの修復促進に寄与していると報告されていた。紫外線照射を受けた表皮細胞のアセチルコリンエステラーゼ発現量が増加するとともにマトリクスメタロプロテアーゼも上昇した。アセチルコリンまたはアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を加えると、マトリクスメタロプロテアーゼの発現量が減少した。従って、紫外線ダメージにより誘導されるアセチルコリンエステラーゼ活性を阻害することを通じて肌ダメージの修復効果が期待される（非特許文献１）。
【０００５】
近年、アセチルコリンエステラーゼ活性を阻害してアセチルコリンの濃度を高めることを通じて、アルツハイマー認知症及びその周辺症状を改善したり、病態の進行を遅らさせることができることが報告されており、臨床的に用いられている。
【０００６】
アルツハイマーの治療薬として用いられているアセチルコリンエステラーゼ阻害剤がドネペジル、ガランタミン、リバスチグミンなどが知られている（非特許文献２）。
【０００７】
しかしながら、これらのアセチルコリンエステラーゼ阻害剤には嘔吐、悪心、下痢など消化器系副作用や皮膚乾燥などを有する点が問題である。
【０００８】
そこで、本発明者は、前記のアセチルコリンエステラーゼを標的として、アルツハイマー認知症のみならず、アセチルコリン低下による学習機能の低下、精神不安、うつ症状に対して治療及び/又は予防効果、またはアセチルコリンエステラーゼ活性の増加による皮膚トラブルに対する予防効果を示す、副作用が無いか少ない物質を求めるため、アセチルコリンエステラーゼ阻害作用を有する新規素材の探索を行った。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】末延則子、齋藤麻里絵：精油による表皮アセチルコリンエステラーゼ活性阻害と肌への効果、  FRAGRANCE JOURNAL、４、２０−２４、２０１４．
【非特許文献２】中村祐：アルツハイマー型認知症治療薬について、老年期認知症研究会誌、１９（７）、１０４−１０８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、このような事情に鑑みなされたものであって、安全性が高く、優れたアセチルコリンエステラーゼ阻害作用を有するアセチルコリンエステラーゼ阻害剤及びその用途に関する有効な医薬品組成物、化粧料、入浴剤または食品組成物を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、アカネ科カギカズラ属植物の葉由来の抽出物を有効成分とするアセチルコリンエステラーゼ阻害剤である。
また本発明は、アカネ科カギカズラ属植物の葉由来の抽出物を含有することを特徴とするアルツハイマー型老年痴呆症の治療・予防剤、またアセチルコリンエステラーゼ活性の上昇に起因する皮膚トラブルに対する治療・予防剤を提供するものでもある。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によって、安全性に優れ、アセチルコリンエステラーゼ活性に対しては高い阻害作用を示すアセチルコリンエステラーゼ阻害剤及びその用途に関する組成物を提供できる。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明者らは、アカネ科カギカズラ属カギカズラの葉の（以下、チョウトウヨウ（釣藤葉）と記す）抽出物について、アセチルコリンエステラーゼ阻害作用の実験を行い、これによってチョウトウヨウの抽出物が強いアセチルコリンエステラーゼ阻害作用を有することを明らかにすることによって本発明を完成したものである。
【００１４】
アカネ科（Rubiaceae）のカギカズラ属（Uncaria）植物がカギカズラ（Uncaria rhynchophylla(Miq.)Miq.）、華釣藤（Uncaria sinensis(Oliv.)Havil.）、大葉釣藤（Uncaria macrophylla Wall.）の一種又は二種以上から選ばれるものである。
【００１５】
上記チョウトウヨウは、中国産、日本産のカギカズラ属植物の葉である。本発明においては葉のみを使用する。本発明のアセチルコリンエステラーゼ剤に使用するカギカズラ属植物の葉は、生産地で収穫時に大量に廃棄されており、原料として容易に入手できる。さらに、葉には含水量が根や茎に比べて少なく、人工乾燥し易いため特別な設備も必要なく、容易に取り扱える。葉のみを用いることが、その他の根や茎の部位を用いたときよりも大量にかつ低コストで入手できるだけではなく、食品加工しやすい点においても好適である。
【００１６】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤として使用することができるチョウトウヨウの抽出物の抽出方法は特に限定されないが、例えば、チョウトウヨウを水又は水溶性溶媒の抽出溶媒を使用して抽出することができる。また、抽出溶媒を使用して抽出した後に、加水分解を行うこともできる。また、酵素を用いて分解した後に抽出溶媒を使用して抽出することもできる。
【００１７】
抽出溶媒としては、水、生理食塩水、アルコール類（例えば、メタノール、無水エタノール、エタノール等の低級アルコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の多価アルコール）、アセトン等のケトン類、エチルエーテル、ジオキサン、アセトニトリル、酢酸エチルエステル等のエステル類、キシレン、ベンゼン、クロロホルム等を挙げることができる。なかでも、水を使用することが好ましい。これらは、単独で用いてもよく、２種以上を併用してもよい。
【００１８】
上記抽出を行った後は、濾過、遠心分離又はデカンテーション等により固形物を除去し、目的とする抽出物を得ることができる。
【００１９】
上記チョウトウヨウの抽出物は、必要に応じてｐＨを調整し、ゲル濾過又は限外濾過にて高分子を除去しても活性は失われることはない。また、上記酵素分解物又はその分画成分は、減圧濃縮、限外濾過又は凍結濃縮等の方法により濃縮してもよく、凍結乾燥、噴霧乾燥又は平板乾燥等の方法により乾燥粉末化することもできる。
【００２０】
本発明のアセチルコリンエステラーゼ阻害剤は、アルツハイマー型老年認知症、学習機能の低下、うつ、精神不安の治療及び/又は予防への効果が期待されるものである。また、アセチルコリンエステラーゼに起因する皮膚トラブルに対して予防・改善できる組成物を提供するものでもある。
【００２１】
チョウトウヨウを配合したアセチルコリンエステラーゼ阻害剤は、例えば、医薬品、健康食品、ドリンク剤、皮膚化粧料、皮膚貼付用シート、皮膚外用剤、入浴剤等へ配合成分として使用できる。前記皮膚外用剤は、医薬部外品、指定医薬部外品、外用医薬品等を含むものであり、その剤形も目的に応じて任意に選択することができる。
【００２２】
本発明の剤型としては特に限定されず、経口投与でも非経口投与のいずれであっても構わない。具体的には、エキス剤、カプセル剤、顆粒剤、丸剤、散剤、注射剤、煎剤・浸剤、液剤、ドリンク剤などが挙げられる。これらの製剤は、製剤技術分野における慣用方法にて製造でき、例えば、日本薬局方記載の方法で製造することができる。これらの製剤は、ヒトを含む哺乳類動物に対して安全に投与することができるものである。
【実施例】
【００２３】
（チョウトウヨウ抽出物の調製方法）
チョウトウヨウ粉末５００ｇに対し、１０倍量の水を加えて、１００℃で３０分間加熱抽出した。抽出液を遠心分離したのち、濃縮した。濃縮液を噴霧乾燥にて乾燥し、チョウトウヨウ抽出物１６５．７ｇを得た。
【００２４】
（試験例） 〔アセチルコリンエステラーゼ阻害活性の測定〕 
アセチルコリンエステラーゼ阻害活性の測定は、アセチルコリンエステラーゼに高い選択性を持つ基質であるMATP+を用いて測定した。即ち、９６穴マイクロプレートを用い、リン酸緩衝液（ｐH７．４）で溶解した種々の濃度のチョウトウヨウ抽出物５０μＬ、アセチルコリンエステラーゼ酵素溶液５０μＬと基質MATP+溶液５０μＬ及び発色試薬DNTB（５，５−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸））溶液５０μＬを加え混合後、３７℃で３０分間反応させ、４１５ｎｍにてほたる吸光度を測定することによりチョウトウヨウのアセチルコリンエステラーゼ阻害率を求めた。なお、ブランクには、酵素溶液の代わりにリン酸緩衝液（ｐH7.4）５０μＬを添加した。アセチルコリンエステラーゼ阻害率は式１により算出した。
（式１）
アセチルコリンエステラーゼ阻害率（％）＝｛１−（Ａ−Ｂ）／Ａ｝×１００
Ａ＝（被検試料無添加の酵素反応後の吸光度−そのブランクの吸光度）
Ｂ＝（各濃度の被検試料の酵素反応後の吸光度−その各ブランクの吸光度）
【００２５】
【表１】
0006454592.tif 000002
【００２６】
表１に示すように、アセチルコリンエステラーゼ活性に対して、チョウトウヨウ抽出物（１２５０μｇ／ｍｌ）は、ポジディブコントロール（従来品）と同等の阻害作用を示した。
【００２７】
以下に、本発明のチョウトウヨウ抽出物のアセチルコリンエステラーゼ阻害作用を使用した含有する医薬品組成物、飲食品組成物、化粧料等の実施例を示す。組成は質量％で示す。
【００２８】
（実施例１）  ソフトカプセル剤              ｗｔ％
チョウトウヨウ抽出物                        １．０
ビタミンＥ                                ２０．０
小麦胚芽油                                １５．０
グリセリン脂肪酸エステル                    ５．０
ミツロウ                                    ２．０
大豆油                            ｔｏ  １００．０
上記成分を混合し、ゼラチン、グリセリンからなるセラチン皮膜に充填し常法に準じソフトカプセルとした。
【００２９】
（実施例２）  顆粒剤                        ｗｔ％
チョウトウヨウ抽出物                        １．０
デンプン                                  ３０．０
乳糖                                      ４９．０
結晶セルロース                    ｔｏ  １００．０
上記の各重量部を均一に混合し、常法により作製し顆粒剤とした。
【００３０】
（実施例 ３）  錠剤                        ｗｔ％
チョウトウヨウ抽出物                      １．０
結晶セルロース                            １．５
ビタミンＣ                              ２０．０
香料                                      １．３
グアガム                                  ０．０６
ＤＫエステル                              １．５
粉糖                            ｔｏ  １００．０ 
【００３１】
（実施例４）  ハードカプセル剤            ｗｔ％
チョウトウヨウ抽出物                      １．０
デキストリン                            ２４．０
グリセリン脂肪酸エステル                  １．０
粉糖                            ｔｏ  １００．０
上記成分を混合し、ゼラチンからなるカプセル容器に充填し常法に準じハードカプセルとした。
【００３２】
（実施例５）  パック                        ｗｔ％
チョウトウヨウ抽出物                        ０．５
タルク                                    ２５．０
プロピレングリコール                        ６．０
ＫＣｌ                                      ０．１
香料                                         適  量
カオリン                          ｔｏ  １００．０
【００３３】
（実施例６）  栄養クリーム                    ｗｔ％
チョウトウヨウ抽出物                          ０．１
ステアリン酸                                  ２．５
ステアリルアルコール                          ８．０
スクワラン                                    ５．０
オクチルドデカノール                          ７．０
グリセリルモノステアレート                    ４．０
防腐剤                                        適  量
香料                                          適  量
グリセリン                                    ６．０
ソルビトール                                １３．０
乳酸カリウム                                  ０．５
精製水                              ｔｏ  １００．０
【００３４】
（実施例７）  乳液                              ｗｔ％
チョウトウヨウ抽出物                            ０．１
ステアリン酸                                    ２．０
セタノール                                      ２．０
ワセリン                                        ２．０
ラノリンアルコール                              １．５
流動パラフィン                                  ９．０
スクワラン                                      ３．５
ソルビトール                                  １０．０
トリエタノールアミン                            １．０
プロピレングリコール                            ５．０
防腐剤                                          適  量
香料                                            適  量
精製水                                ｔｏ  １００．０
【００３５】
尚、実施例５から７の製法は通常の化粧料の方法に準じた。
【００３６】
（実施例８）  浴用剤組成                                  ｗｔ％
チョウトウヨウ葉抽出物                                    ０．５
炭酸水素ナトリウム                                      １０．０
塩化ナトリウム                                            ５．０
色素                                                      ０．２
香料                                                      ０．９５
１，３−ブチレングリコール                                ０．０２
モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０．Ｅ．０）０．０５
無水ケイ酸                                                ０．５
無水硫酸ナトリウム                              ｔｏ  １００．０
【００３７】
実施例８の製法は通常の浴用剤組成物の方法に準じた。
【００３８】
この結果から、チョウトウヨウ抽出物には優れたアセチルコリンエステラーゼ阻害作用を有し、アセチルコリンエステラーゼに起因するアルツハイマー型老年痴呆症症、学習機能の低下、うつ病、精神不安または紫外線による皮膚の光老化、肌のトラブルを遅らせることができることが期待できる。これによってチョウトウヨウ抽出物を含有する組成物が、アセチルコリンエステラーゼ阻害作用を有し、アセチルコリンエステラーゼに起因するアルツハイマー認知症、学習機能の低下、うつ症、精神不安または紫外線による皮膚の光老化、肌のトラブルの予防、改善を有するものであることが考えられる。
【産業上の利用可能性】
【００３９】
本発明によりアセチルコリンエステラーゼ阻害作用が見出されたチョウトウヨウ抽出物を配合する医薬品、化粧料及び食品組成物はアルツハイマー認知症のみならず、学習機能の低下、うつ病、精神不安の治療及び/又は予防に寄与し得ると考えられる。また、アセチルコリンエステラーゼに起因する皮膚トラブルに対しても予防効果が期待できる。