(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
クリオプレシピテートを除去した血漿由来画分から、血液凝固第ＶＩＩ因子及び／又は活性型血液凝固第ＶＩＩ因子を精製する方法であって、以下の工程を含む精製方法；
（ａ）血液凝固第ＶＩＩ因子及び／又は活性型血液凝固第ＶＩＩ因子を第１の強アニオン交換樹脂にバッチ法にて吸着させる工程、
（ｂ）（ａ）の非吸着画分に残存する血液凝固第ＶＩＩ因子及び／又は活性型血液凝固第ＶＩＩ因子を第２の強アニオン交換樹脂にカラム法にて吸着させる工程、
（ｃ）（ａ）と（ｂ）の吸着画分から血液凝固第ＶＩＩ因子及び／又は活性型血液凝固第ＶＩＩ因子を回収する工程。
【請求項２】
前記（ａ）〜（ｃ）の工程が、クリオプレシピテートを除去した血漿由来画分から、血液凝固第ＶＩＩ因子及び／または活性型血液凝固第ＶＩＩ因子を、７５％以上の収率で回収する工程である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記（ａ）〜（ｃ）の工程が、クリオプレシピテートを除去した血漿由来画分から、血液凝固第ＶＩＩ因子及び／または活性型血液凝固第ＶＩＩ因子を、９０％以上の収率で回収する工程である、請求項２に記載の方法。
【請求項９】
前記工程（ａ）及び（ｂ）の強アニオン交換樹脂が、トリメチルアミノエチル（ＴＭＡＥ）、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、第４級アミノアルキル、第４級アミノエチル（ＱＡＥ）、及び第４級アンモニウム（Ｑ）よりなる群から選択される正電荷基を有する樹脂である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記工程（ａ）及び（ｂ）の強アニオン交換樹脂がともに第４級アンモニウム（Ｑ）を有する樹脂である、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
クリオプレシピテートを除去した血漿由来画分から、血液凝固第ＶＩＩ因子及び／又は活性型血液凝固第ＶＩＩ因子を精製する方法であって、以下の工程を含む精製方法；
（ｄ）血液凝固第ＶＩＩ因子及び／又は活性型血液凝固第ＶＩＩ因子を弱アニオン交換樹脂にカラム法にて吸着させる工程、
（ｅ）（ｄ）の非吸着画分に残存する血液凝固第ＶＩＩ因子及び／又は活性型血液凝固第ＶＩＩ因子を強アニオン交換樹脂にカラム法にて吸着させる工程、
（ｆ）（ｄ）と（ｅ）の吸着画分から血液凝固第ＶＩＩ因子及び／又は活性型血液凝固第ＶＩＩ因子を回収する工程。
【請求項１３】
前記（ｄ）〜（ｆ）の工程が、クリオプレシピテートを除去した血漿由来画分から、血液凝固第ＶＩＩ因子及び／または活性型血液凝固第ＶＩＩ因子を、７５％以上の収率で回収する工程である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記（ｄ）〜（ｆ）の工程が、クリオプレシピテートを除去した血漿由来画分から、血液凝固第ＶＩＩ因子及び／または活性型血液凝固第ＶＩＩ因子を、９０％以上の収率で回収する工程である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記工程（ｄ）の弱アニオン交換樹脂が、ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）又はジメチルアミノエチル（ＤＭＡＥ）の正電荷基を有する樹脂であり、前記工程（ｅ）の強アニオン交換樹脂が、トリメチルアミノエチル（ＴＭＡＥ）、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、第４級アミノアルキル、第４級アミノエチル（ＱＡＥ）、及び第４級アンモニウム（Ｑ）よりなる群から選択される正電荷基を有する樹脂である、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記工程（ｄ）の弱アニオン交換樹脂が、ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）であり、前記工程（ｅ）のアニオン交換樹脂が第４級アンモニウム（Ｑ）を有する樹脂である、請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血漿由来画分から、血液凝固第VII因子及び／又は活性型血液凝固第VII因子を高収率に回収する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
血液凝固は、最終的にフィブリンクロットを生じさせる種々の血液成分または因子の複雑な相互作用の過程からなる。一般に、血液凝固カスケードとして知られる反応に関与する血液成分は、それによって正常な止血に関与する２つの独立した系が存在し、これらの系は各々「内因性経路」及び「外因性経路」と称されている。【０００３】
内因性経路は、血漿中のみに存在する因子を介してトロンビンの形成を導く反応経路である。当該経路における中間的現象として活性型血液凝固第XI因子（以下、FXIaと称することがある）及びカルシウムイオンにより触媒される反応である血液凝固第IX因子（以下、FIXと称することがある）の活性化がある。次に、活性型血液凝固第IX因子（以下、FIXaと称することがある）は、活性型血液凝固第VIII因子（以下、FVIIIaと称することがある）、リン脂質及びカルシウムイオンの存在下で、血液凝固第Ｘ因子（以下、FXと称することがある）の活性化に関与する。【０００４】
外因性経路は血漿因子、及び組織抽出物中に存在する成分が関与する反応経路である。血液凝固因子の１つである血液凝固第VII因子（以下、FVIIと称することがある）は、活性型血液凝固第VII因子（以下、FVIIaと称することがある）への変換の後に、組織因子及びカルシウムイオンの存在下でFXをFXaに活性化することにより、血液凝固の外因性経路に関与する。FXaは次に活性型血液凝固第Ｖ因子（以下、FVaと称することがある）、カルシウムイオン及びリン脂質の存在下でプロトロンビンをトロンビンに転換する。このトロンビンにより、フィブリノーゲンがフィブリンに転換されて血管損傷部位を塞ぎ止血が行われる。【０００５】
この血液凝固カスケード中の因子が欠損または正常に機能しないと、血液凝固が妨げられ、出血症状を呈することがある。その多くは遺伝的素因に基づく場合が多く、先天性凝固因子障害によって引き起こされる代表的な疾患として、FVIIIが欠損した血友病A、FIXが欠損した血友病Bがよく知られている。これら血友病患者の治療には、欠損因子の補充を目的としてFVIIIあるいはFIXを含む製剤が開発され、止血管理に使用されており、これを補充療法という。しかし、その結果、FVIIIあるいはFIXに対する抗体（インヒビター)が発生することが知られている。インヒビターが発生すると、従来の補充療法は効果がなくなり、患者の止血管理は困難を極める。【０００６】
インヒビターを有する血友病患者の治療には、FVIIaを含有する活性凝固酵素及び不活性凝固酵素の混合物からなることが知られている活性化されたプロトロンビン複合体により治療がされてきた。さらに近年、FVIIaの単剤がその血漿中に高レベルの抗FVIII抗体を有する血友病患者の重度の進行性出血を抑制するために有効であることが明らかとなり、FVIIa製剤が治療に用いられている（非特許文献１）。【０００７】
FVIIは、１本鎖糖蛋白でビタミンK依存性凝固因子（FVIIのほか、プロトロンビン、FIX、FX、プロテインC、プロテインS、プロテインZからなり、これらは構造上の相同性が高くプロトロンビンファミリーとも呼ばれる）の１つである。FVIIは、主に肝臓で生合成され、ヒト血漿中では前駆体のFVIIとして存在するが、そのうち約1%がFVIIaとして存在していることが知られている（非特許文献２）。FVIIは、生理的には、組織因子（Tissue Factor）と複合体を形成し、血液凝固の開始反応を担う重要な蛋白質である。また、FVIIaは、FVIIのArg152−Ile153結合が限定分解を受け２本鎖になった糖蛋白で、その凝固活性はFVIIと比べ25倍程高いことが知られており、前述のように従来その止血管理が困難とされているFVIII及びFIXに対する抗体を有する血友病患者の治療に有用である。【０００８】
上記の通り、FVIIa製剤はインヒビターを有する血友病患者の治療に有効であるため、血漿由来のFVIIを調製すべく種々の方法が試みられてきた。しかしながら、これらの調製法においてはFVIIの部分精製にとどまり、FVIIそのものを純粋に物質として単離するまでには至っていない（非特許文献３〜５）。【０００９】
このような中、塩化バリウムによる吸着処理及び硫酸アンモニウムによる塩析沈澱法、ならびにイオン交換クロマト法及びゲルろ過法よりなる精製方法によりFVIIが良好に調製されることが報告された（非特許文献６）。【００１０】
ヒト血漿由来のFVII濃縮物の大規模生産としては、クリオプレシピテートを除去したヒト血漿（Cryoprecipitate-poor plasma）からの精製方法として、まず陰イオン交換処理によりビタミンK依存性凝固因子rich画分を取得し、そこから金属イオン存在下でFVIIを吸着しうる、FVIIコンフォメーション特異性モノクローナル抗体を免疫吸着体として用いる方法が開示されている（非特許文献７）。【００１１】
同様に、ヒトFVIIコンフォメーション特異性モノクローナル抗体を固定化した吸着体を用いたFVII及び／又はFVIIaの調製方法が開示されている（特許文献１）。この方法は、金属陽イオンの結合の有無に起因するコンフォメーションの差異を識別するFVII及び／又はFVIIaに対するモノクローナル抗体を免疫吸着クロマトグラフィーに応用することにより、強力な変性剤を用いることなく、目的とするFVII及び／又はFVIIaを溶出し精製することを可能とするものである。【００１２】
さらに、Al(OH)3吸着処理ならびにTMAE-EMDによるイオン交換クロマト法及び凍結乾燥加熱後、Phenyl-Sepharose-HPによる疎水クロマト法及びXK26/100 Superose 12によるゲルろ過クロマト法よりなる精製方法によりFVIIが良好に調製されることが報告された（特許文献２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】特開平03-155797号（特許第2824430）公報
【特許文献２】特許公開2002-518411号公報
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Hedner, et al., J.Clin.Invest. 71, p.1836 (1983)
【非特許文献２】Peter,W., et al., Blood, 80, p.25-28, (1992)
【非特許文献３】Prydz, J.Scand.J.Clin.Lab.Invest. 1, p.101 （1964）;Gladhaug,A. et al., Biochim.Biophys.Acta 215, p.105, (1970)
【非特許文献４】Laake,K., et al., Thromb.Res. 5, p.539, (1974); Schiffman,S., et al., Thromb Res. 6, p.273 (1975)
【非特許文献５】Osterud,B., et al., Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. 74, p.5260 (1977)
【非特許文献６】Broze,Jr.G.J. et al., J.Biol.Chem. 255, p,1242 (1980)
【非特許文献７】Tomokiyo et al., Vox Sanguinis, 2003, 84, p.54-64
【非特許文献８】PRODUCTION OF PLASMA PROTEINS FOR THERAPEUTIC USE p.68 (2013) by John Wiley & Sons,Inc., Hoboken, New Jersey
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
上記従来の方法では、純度の高いFVII濃縮物が得られるものの、クリオプレシピテートを除去したヒト血漿からのFVII濃縮物の回収率が低い点が大きな問題となっていた。これは、FVIIが他の類似するビタミンK依存性凝固因子と比較してアニオン交換体に対する親和性が低い上に（非特許文献６）、ヒト血漿中の濃度が著しく低いこと（表１：非特許文献８）が理由である。また、クリオプレシピテートを除去したヒト血漿を強アニオン交換樹脂に供すると凝固傾向を示すことが一般的に知られており、このことも回収率が低くなる理由として挙げられる。
【表１】
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【００１６】
回収率が低くなるのは、ヒト血漿からFVIIをアニオン交換樹脂吸着により回収する際に、FVIIよりもアニオン交換体に対する親和性が高い他のビタミンK依存性凝固因子と競合する結果、FVIIの一部が非吸着画分に分配されるためと考えられる。非特許文献７の大規模生産方法では、クリオプレシピテートを除去したヒト血漿をアニオン交換樹脂（Q-FF）に展開し、FVIIを含むビタミンK依存性凝固因子群を吸着回収しているが、その回収率は70%に留まっていることから、FVIIの一部が非吸着画分に残存していることが推測された。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
上記の問題点を解決するべく、本願発明者等は鋭意研究を重ねた結果、第１のアニオン交換樹脂に吸着されなかった非吸着画分に残存するFVII及び／又はFVIIaを第２のアニオン交換樹脂に吸着させることで、目的とするFVII及び／又はFVIIaを90%以上の高回収率で回収することができることを見出し、本発明を完成するに至った。【００１８】
したがって、本発明は、血漿からFVII及び／又はFVIIaを高収率に回収するためクロマトグラフィー法を提供するものであり、具体的には以下の発明が含まれる。
[１]血漿由来画分から、血液凝固第VII因子及び／又は活性型血液凝固第VII因子を精製する方法であって、以下の工程を含む精製方法；
（ａ）血液凝固第VII因子及び／又は活性型血液凝固第VII因子を第１のアニオン交換樹脂に吸着させる工程、
（ｂ）（ａ）の非吸着画分に残存する血液凝固第VII因子及び／又は活性型血液凝固第VII因子を第２のアニオン交換樹脂に吸着させる工程、
（ｃ）（ａ）と（ｂ）の吸着画分から血液凝固第VII因子及び／又は活性型血液凝固第VII因子を回収する工程；
[２]前記（ａ）〜（ｃ）の工程が、血漿由来画分から、血液凝固第VII因子及び／又は活性型血液凝固第VII因子を、75%以上の収率で回収する工程である、前記[１]に記載の方法；
[３]前記（ａ）〜（ｃ）の工程が、血漿由来画分から、血液凝固第VII因子及び／又は活性型血液凝固第VII因子を、90%以上の収率で回収する工程である、前記[２]に記載の方法；
[４]前記血漿由来画分が、クリオプレシピテートを除去した画分である、前記[１]〜[３]のいずれかに記載の方法；
[５]前記工程（ａ）及び（ｂ）のアニオン交換樹脂がともに強アニオン交換樹脂である、前記[１]〜[４]のいずれかに記載の方法；
[６]前記工程（ａ）のアニオン交換樹脂が強アニオン交換樹脂であり、前記工程（ｂ）のアニオン交換樹脂が弱アニオン交換樹脂である、前記[１]〜[４]のいずれかに記載の方法；
[７]前記工程（ａ）のアニオン交換樹脂が弱アニオン交換樹脂であり、前記工程（ｂ）のアニオン交換樹脂が強アニオン交換樹脂である、前記[１]〜[４]のいずれかに記載の方法；
[８]前記工程（ａ）及び（ｂ）のアニオン交換樹脂がともに弱アニオン交換樹脂である、前記[１]〜[４]のいずれかに記載の方法；
[９]前記工程（ａ）及び（ｂ）のアニオン交換樹脂が、ジエチルアミノエチル（DEAE）、ジメチルアミノエチル（DMAE）、トリメチルアミノエチル（TMAE）、ポリエチレンイミン（PEI）、第4級アミノアルキル、第4級アミノエチル（QAE）、及び第4級アンモニウム（Q）よりなる群から選択される正電荷基を有する樹脂である、前記[１]〜[４]のいずれかに記載の方法；
[１０]前記工程（ａ）のアニオン交換樹脂がジエチルアミノエチル（DEAE）であり、前記工程（ｂ）のアニオン交換樹脂が第4級アンモニウム（Q）を有する樹脂である、前記[９]に記載の方法；
[１１]前記工程（ａ）及び（ｂ）のアニオン交換樹脂がともに第4級アンモニウム（Q）を有する樹脂である、前記[９]に記載の方法。
【発明の効果】
【００１９】
本発明は、血漿由来画分をアニオン交換樹脂で処理する際に、非吸着画分に残存したFVII及び／又はFVIIaを、第２のアニオン交換樹脂処理により回収する方法である。1回目のアニオン交換樹脂処理により、FVII以外のビタミンK依存性凝固因子が除去されるため、その非吸着画分中の蛋白に占めるFVII及び／又はFVIIaの濃度が相対的に上昇し、2回目のアニオン交換樹脂処理による効率的なFVII及び／又はFVIIaの回収が可能となる。【００２０】
また本発明によれば、血漿由来画分をアニオン交換樹脂で処理する際の凝固傾向を抑制し、クリオプレシピテートを除去したヒト血漿からFVII及び／又はFVIIaを90%以上の高収率で回収することが可能となる。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明で用いられるアニオン交換樹脂は、強アニオン交換樹脂であっても弱アニオン交換樹脂であってもよく、当該分野で一般的に用いられているあらゆる物質、例えば、天然ポリマー（セルロース、デキストラン、アガロース）や合成ポリマー（スチレン/ジビニルベンゼン共重合体、ポリアクリル、ポリビニルアルコールなど）、無機材料（シリカゲル、アルミナ、ジルコニア）などの担体マトリックスの表面にアニオン交換基が導入されているものであってよい。
【００２２】
アニオン交換基は、限定されるものではないが、ジエチルアミノエタン（DEAE）、ジメチルアミノエタン（DMAE）、ジエチルアミノプロピル（DEAP）、ポリエチレンイミン（PEI）、第4級アミノアルキル、トリメチルアミノエチル（TMAE）、第4級アミノエタン（QAE）、及び第4級アンモニウム（Q）からなる群から選択される正電荷基を有する物質などが含まれる。
【００２３】
アニオン交換基にはそれぞれ強弱があり、これはタンパク質との結合の強弱ではなく、pHの変動によってイオンとの結合状態が変化しにくいか(強い)、影響をうけやすいか（弱い）の違いで表される。
【００２４】
強アニオン交換体とは、pHが変化してもイオン交換容量の変動がないイオン交換体である。強アニオン交換体はpHの変化によってプロトンを受け取ったり失ったりしないため、広いpH域で同じ荷電状態を保つ。強アニオン交換体として、TMAE、QAE、Q、PEIなどが知られている。
【００２５】
一方、弱アニオン交換体はイオン交換基の解離度すなわち交換容量がpHによって著しく変化するものである。pHの変化によってプロトンを受け取ったり失ったりするため、イオン交換容量がpHによって変動する。弱アニオン交換体としてDEAE、DMAE、DEAPなどが知られている。
【００２６】
これら市販されているアニオン交換樹脂として、例えば以下のものが挙げられる。
DEAE-Sephacel（登録商標）、DEAE-Sephadex（登録商標）、DEAE-Sepharose CL6B（登録商標）、DEAE-Sepharose Fast Flow（登録商標）、ANX-Sepharose Fast Flow (登録商標)、QAE-Sephadex（登録商標）、Q-Sepharose Fast Flow（登録商標）、Q-Sepharose High Performance（登録商標）、Q-Sepharose Bid Beads（登録商標）（すべてGE Healthcare社）；
DEAE-Tris-Acryl（登録商標）、DEAE-Spherodex（登録商標）、Q-Hyper-D（登録商標）（すべてSepracor社）；
Macroprep DEAE（登録商標）、Macroprep Ｑ（登録商標）（すべてBio-Rad社）；
DEAE-Toyopearl（登録商標）、QAE-Toyopearl（登録商標）、Toyopearl  Super-Ｑ（登録商標）（すべてTosoh社）；
Protein PAK DEAE（Waters社）；
Fractogel EMD-TMAE（登録商標）、Fractogel END-DEAE（登録商標）、Fractogel  EMD-DMAE（登録商標）、Liocrospher 1000 TMAE（登録商標）、Licrospher 1000 DEAE（登録商標）及びLicrospher 4000 DMAE（登録商標）（すべてMERCK-MILLIPORE社）。
【００２７】
本発明の方法では、第１及び第２アニオン交換樹脂は、同じものであっても異なるものであってもよい。さらに、数種のアニオン交換樹脂の組み合わせ物が、樹脂の選択性に依存して利用されてもよい。さらに、本発明で用いられる第１及び第２アニオン交換樹脂に吸着させる工程は、カラム法、バッチ法のいずれであっても、両方が組み合わさった方法でもよい。
【００２８】
ここで、カラム法とは、アニオン交換樹脂を細長い管（多くの場合ガラス、ポリプロピレンなどのプラスチック、ステンレスなど）に充填したカラムにサンプルを管の一方向から流し込む方法である。一方、バッチ法とは、アニオン交換樹脂とサンプルを同じ容器に入れて一定時間攪拌する方法である。吸着が終わった後に、カラムに充填して組み合わせることもできる。
【００２９】
以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に何ら限定されるものではない。
【実施例１】
【００３０】
Q-Sepharose Fast Flow（Q-FF；バッチ法）→Q-Sepharose Fast Flow（Q-FF；カラム法）の2回クロマト
クリオプレシピテートを除去したヒト血漿24L（FVII抗原量：約25000U）を第１のアニオン交換樹脂（Q-FFゲル：0.6L）に展開し（バッチ法）、得られた非吸着画分をさらに第２のアニオン交換樹脂（Q-FFゲル：1L）に展開した（カラム法）。第１と第２のアニオン交換樹脂を連結し、0.2Mの塩化ナトリウムを含む10mMクエン酸緩衝液（pH7）3Lにて洗浄を行い、さらに第2のアニオン交換樹脂のみを同じ緩衝液2Lにて洗浄を行った。洗浄後、再度、第１と第２のアニオン交換樹脂を連結し、0.7Mの塩化ナトリウムを含む20mMクエン酸緩衝液（pH7）にて溶出した。【００３１】
その結果、クリオプレシピテートを除去したヒト血漿からのFVIIの回収率（FVII抗原回収率）は、2つのアニオン交換樹脂処理後で94%となり（表３）、従来技術（表２：非特許文献７）よりも高回収率を達成した。また、アニオン交換樹脂処理後のFVII抗原量／総蛋白量比（精製度）は、ヒト血漿から十分に上昇していた（表３）。
【表２】
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【表３】
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【実施例２】
【００３２】
FVIIモノクローナル抗体による免疫吸着
実施例１で得られた2段階のアニオン交換樹脂（Q-FF→Q-FF）溶出画分を非特許文献７に従った方法、すなわちカルシウムイオン存在下でFVIIを吸着しうるFVIIコンフォメーション特異性モノクローナル抗体に展開し、FVIIを精製した。その結果、クリオプレシピテートを除去したヒト血漿からのFVIIの回収率は、モノクローナル抗体処理後92%となり（表４）、非特許文献７の方法（表５）よりも高回収率を達成した。
【表４】
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【表５】
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【実施例３】
【００３３】
DEAE-Sepharose Fast Flow（DEAE-FF）→Q-Sepharose Fast Flow（Q-FF）の2回クロマト
クリオプレシピテートを除去したヒト血漿3L（FVII抗原量：約3000U）を第１のアニオン交換樹脂（DEAE-FFゲル：84mL）に展開し、得られた非吸着画分をさらに第２のアニオン交換樹脂（Q-FFゲル：135mL）に展開した。第１と第２のアニオン交換樹脂を連結し、0.2Mの塩化ナトリウムを含む10mMクエン酸緩衝液（pH7）420mLにて洗浄を行い、さらに第2のアニオン交換樹脂のみを同じ緩衝液270mLにて洗浄を行った。洗浄後、再度、第１と第２のアニオン交換樹脂を連結し、0.7Mの塩化ナトリウムを含む20mMクエン酸緩衝液（pH7）にて溶出した。【００３４】
その結果、クリオプレシピテートを除去したヒト血漿からのFVIIの回収率（FVII抗原回収率）は、2つのアニオン交換樹脂処理後で95%となり、従来技術（表２：非特許文献７）よりも高回収率を達成した。また、アニオン交換樹脂処理後のFVII抗原量／総蛋白量比（精製度）は、ヒト血漿から十分に上昇していた（表６）。
【表６】
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【００３５】
2つのアニオン交換樹脂について個別に洗浄と溶出を行う方法で、各吸着画分のFVII抗原量／総蛋白量比（ビタミンK依存性凝固因子量に対するFVII量）を比較すると、著しく第２のアニオン交換樹脂処理（Q-FF）の比率が高かった（表７）。このことから、第１のアニオン交換樹脂処理（DEAE-FF）でFVII以外のビタミンK依存性凝固因子が除去されることにより、その非吸着画分中のビタミンK依存性凝固因子群に占めるFVII濃度が相対的に上昇し、第２のアニオン交換樹脂処理による効率的なFVII回収が実現されていることが示唆された。
【表７】
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【産業上の利用可能性】
【００３６】
本発明は、血漿由来画分から血液凝固第VII因子及び／又は活性型血液凝固第VII因子を回収する方法として利用可能である。