(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（４）で表されるベンゾチオフェン誘導体又はそれらの薬学的に許容される塩。
【化１】
0006468549.tif 000011
「式中、Ｒ１１は水素，メチル基，イソプロピル基のうち、いずれかである。
Ｒ１２は、水素又はメトキシ基である。
Ｒ１３は水素，メチル基，ベンジル基，イソプロピル基のうち、いずれかである。」
【請求項２】
下記化学式（３）で表されるベンゾチオフェン誘導体又はその薬学的に許容される塩。
【化２】
0006468549.tif 000012
「式中、Ｍｅはメチル基、ｉＰｒはイソプロピル基である。」
【請求項３】
下記化学式（６）で表されるベンゾチオフェン誘導体又はその薬学的に許容される塩。
【化３】
0006468549.tif 000013
「式中、Ｅｔはエチル基である。」
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物を有効成分とする微小管阻害作用又は紡錘体形成阻害作用を有する医薬組成物。
【請求項５】
Ｇ１期の微小管には作用しない請求項４記載の医薬組成物。
【請求項６】
多剤耐性化（ＭＤＲ）がん細胞に対して微小管阻害作用を有する請求項４又は５記載の医薬組成物。
【請求項７】
細胞周期を分裂期で停止させる請求項４記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は抗がん作用をする化合物及び医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
がんは我が国の死因の第一位であり、罹患率も約５０％と非常に高い。
抗がん剤による化学療法はがん治療において重要な役割を担っており、近年では最先端治療法の補助療法としても成果を示している。
一方で、細胞毒性物質の投与による完全脱毛、激しい下痢および嘔吐、血球減少、全身アレルギー等々の過酷な副作用は一刻も早く改善策を見出すべき大きな課題である。
さらにもう一つの克服すべき大きな課題は、持続的化学療法剤投与によるがん細胞の多剤耐性化（Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ：  ＭＤＲ）である。
ＭＤＲが発現したがん細胞は、異物を細胞から排出するトランスポーターを過剰発現させる。
その結果、投与していた抗がん剤のみならずあらゆる種類の薬剤を細胞外へと放出し、薬剤の効果を著しく低下させる。
特許文献１には、ＭＤＲがん細胞に対して微小管形成を阻害する又は有系分裂を阻害する１０’−フルオロービンカアルカロイド化合物を開示するが、本発明とは化合物の構造が相違する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特表２０１３−５２０４９９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、優れた抗がん作用を有する新規化合物の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明に係る化合物は、下記一般式（１）で表されるベンゾチオフェン誘導体又はそれらの薬学的に許容される塩である。
【化１】
0006468549.tif 000002
「式中、Ｒ１はＨ，ＯＨ，ハロゲノ基，１〜１２個の炭素数からなるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、アルキルアミノ基、アルキルチオ基のうちいずれか，置換されていてもよいアリール基，置換されていてもよいベンジル基，５−６位に縮合する置換されていてもよい炭素環又は複素環である。
Ｒ２はＨ，ＯＨ，ハロゲノ基，１〜１２個の炭素数からなるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、アルキルアミノ基、アルキルチオ基のうちいずれか，置換されてもよいアリール基、置換されてもよいベンジル基である。」
【０００６】
本発明に係る化合物の１つの態様としては、下記一般式（２）で表されるベンゾチオフェン誘導体又はそれらの薬学的に許容される塩である。
【化２】
0006468549.tif 000003
「式中、Ｒ１１，Ｒ１３はＨ，１〜１２個の炭素数からなるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基のうちいずれか，置換されてもよいアリール基，置換されていてもよいベンジル基である。
Ｒ１２，Ｒ１４はＨ，ＯＨ，１〜１２個の炭素数からなるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、アルキルアミノ基、アルキルチオ基のうちいずれか，置換されていてもよいアリール基，置換されていてもよいベンジル基である。
Ｒ２はＨ，ＯＨ，ハロゲノ基，１〜１２個の炭素数からなるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、アルキルアミノ基、アルキルチオ基のうちいずれか，置換されてもよいアリール基、置換されてもよいベンジル基である。」
【０００７】
本発明に係る化合物のうち特に好ましい化合物は、下記化学式（３）で表されるベンゾチオフェン誘導体又はその薬学的に許容される塩である。
【化３】
0006468549.tif 000004
「式中、Ｍｅはメチル基、ｉＰｒはイソプロピル基である。」
【０００８】
上記の化合物を有効成分とする医薬組成物は、細胞骨格を構成する微小管に作用し、微小管の重合又は脱重合を阻害、あるいは分裂期紡鐘系形成を阻害する。
また、本発明に係る化合物の中には、例えば下記スキーム（１）に示すベンゾチオフェンの６’位に水酸基を有する化合物は細胞周期のＧ１期には作用せず、Ｇ２／Ｍ期に作用するものもある。
また、本発明に係る医薬組成物は多剤耐性化（ＭＤＲ）がん細胞に対しても高い微小管阻害作用を有する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明に係る化合物は、天然物として多くの植物内で広く生合成されるフラボノイドに類似した骨格を有するものであることから、生物学的安定性の高いことが推定される。
また、これまでに提案されているタキソール、ビンカアルカロイド等は、それぞれチューブリンのタキソール結合サイト、ビンカアルカロイド結合サイトに作用するものであるのに対して、本発明に係る化合物はコルヒチン結合サイトに作用するものと推定される。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】がん細胞の増殖抑制効果の評価結果を示す。
【図２】Ｎｏ．５の化合物に対する細胞周期変化の写真を示す。
【図３】化合物（６）に対する細胞周期写真を示す。
【図４】結合部位の解析結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明に係るベンゾチオフェン誘導体は、アセトフェノンとベンゾチオフェン−３−カルボアルデヒドとから容易に合成できる。
その一般的なスキームを下記スキーム（１）に示す。
＜スキーム（１）＞
0006468549.tif 000005
【００１２】
次に具体的な反応スキーム例を下記スキーム（２）及びスキーム（３）に示す。
＜スキーム（２）＞
0006468549.tif 000006
ここで、ＭＯＭは保護基として機能するメトキシメチル基を示す。
＜スキーム（３）＞
0006468549.tif 000007
【００１３】
＜評価＞
下記化学式（４）の置換基Ｒ１１，Ｒ１２，Ｒ１３を図１の表に示すように選択し、合成した化合物Ｎｏ．１〜Ｎｏ．６のがん細胞増殖抑制評価結果を図１の表に示す。
表中、Ｂｎはベンジル基を示す。
【化４】
0006468549.tif 000008
なお、表中、参考１として比較したＣｈｒｙｓｉｎを下記化学式（５）に示す。
【化５】
0006468549.tif 000009
図１の表の下に示すがん細胞の種類に対して、５０％阻害濃度ＩＣ５０の値を示す。
ここで、ＫＢ−Ｖ細胞は、ＫＢ細胞（ヒト口腔類表皮がん細胞）にＶｉｎｃｒｉｓｔｉｎ（抗がん剤）の持続投与によりＰ糖タンパクが過剰発現した多剤耐性がん細胞を示す。
がん細胞に対する増殖抑制作用試験評価は次のように行った。
ストック細胞株を５％ＣＯ２空気中，３７℃，Ｔ−７５フラスコ中で増殖させた。
トリプシン処理した細胞懸濁液を評価する化合物とともに９６ウェルマイクロプレートに播種した（４，０００〜１２，０００細胞密度）。
７２時間培養後に細胞を５０％トリクロロ酢酸で固定し、次に0.04% sulforhodamine Bで染色した。
１０ｍＭのトリス塩基で蛋白質結合染料を可溶化し、ＤＭＳＯ対象と比較して細胞増殖が５０％減少している化合物の濃度を測定した。
この結果、Ｎｏ．５の化合物である「2-(Benzo[b]thiophen-3-yl)-5-hydroxy-7-isopropoxy-6-methoxy-4H-chromen-4-one」は各種がん細胞に対してＩＣ５０，０．１μＭ以下の強い増殖阻害作用を示した。
この化合物は、ベンゾチオフェニルクロモン誘導体も表現できる。
Ｎｏ．５の化合物の濃度に対するα−チューブリン阻害作用の細胞写真を図２に示す。
図２に示す中で、ＤＭＳＯは対照、ＣＡ−４は、コンブレタスチンＣＡ−４である。
この結果、分裂期紡錘体形成不全と染色体凝集が多く認められ、分裂期で細胞周期が止まっていると推定される。
また、ＫＢがん細胞と多剤耐性のＫＢ−Ｖがん細胞に対する化合物のＩＣ５０の値を比較すると、Ｎｏ．５の化合物はChrysinよりも非常に大きながん細胞の増殖抑制効果が認められる。
特にPaclitaxelと比較して、多剤耐性化がん細胞抑制効果が認められる。
【００１４】
次にベンゾチオフェンの６’位に水酸基を有する化合物の例を説明する。
下記化学式（６）に示す化合物は、6,8,8-triethyl-5-hydroxy-2-(6’-hydroxybenzo[b]thiophen-3-yl)-4H-chromene-4,7(8H)-dioneである。
【化６】
0006468549.tif 000010
フローサイトメトリによるヒトがん細胞（ＰＣ−３）の細胞周期解析により、図３に示すように化合物（６）のヒドロキシ誘導体は顕著にＧ２／Ｍ期細胞の蓄積が認められた。
ヒドロキシ誘導体で処理したがん細胞を抗チューブリン抗体により免疫染色を行った結果、多極化した分裂期紡錘体形成が観察された。
このことから、ヒドロキシ誘導体は双極性紡錘体形成阻害作用による多極化紡錘体形成誘導を引き起こし、細胞分裂前中期から分裂中期への移行を阻害していることが明らかとなった。
一方、細胞における静止期微小管は正常な形態を示した。
高濃度（２０μＭ）の化合物で処理したヒトがん細胞の静止期微小管は、過剰な安定化が観察された。
これらの結果から、化合物（６）は静止期微小管の動態を破壊すること無く選択的に分裂期紡錘体形成のみを阻害していることが明らかとなった。
つまり、化合物（６）は正常双極性紡錘体形成を妨げる濃度では静止期微小管動態は阻害しないという独特な生理活性を有している。
コンピューターモデリングによるチューブリン二量体への結合様式の解析から、図４に示すようにα−チューブリンおよびβ−チューブリンと水素結合を形成していることが推測された。
従って、αおよびβ双方のチューブリンとの水素結合の形成により、静止期微小管への重合阻害作用は極小に抑えられるが、分裂期紡錘体形成は完全に妨げるのではないかと推測される。
【図１】
0006468549.tif 000014
【図２】
0006468549.tif 000015
【図３】
0006468549.tif 000016
【図４】
0006468549.tif 000017