(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体内の腫瘍抗原に対する免疫応答を増強するための医薬であって、前記医薬は、ＯＸ４０アゴニスト、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、および腫瘍抗原を含む免疫原性組成物を含み、前記ＯＸ４０アゴニストは抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合断片であり、前記ＩＤＯ阻害剤は１−メチルトリプトファン（１−ＭＴ）であり、前記腫瘍抗原はＨＰＶ抗原である、医薬。
【請求項２】
インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、および腫瘍抗原を含む免疫原性組成物と組み合わせてＯＸ４０アゴニストを被験体に投与することにより、被験体内の腫瘍抗原に対する免疫応答を増強するための、ＯＸ４０アゴニストを含む医薬であって、前記ＯＸ４０アゴニストは抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合断片であり、前記ＩＤＯ阻害剤は１−メチルトリプトファン（１−ＭＴ）であり、前記腫瘍抗原はＨＰＶ抗原である、医薬。
【請求項３】
ＯＸ４０アゴニスト、および腫瘍抗原を含む免疫原性組成物と組み合わせてインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤を被験体に投与することにより、被験体内の腫瘍抗原に対する免疫応答を増強するための、ＩＤＯ阻害剤を含む医薬であって、前記ＯＸ４０アゴニストは抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合断片であり、前記ＩＤＯ阻害剤は１−メチルトリプトファン（１−ＭＴ）であり、前記腫瘍抗原はＨＰＶ抗原である、医薬。
【請求項４】
被験体における腫瘍成長を遅延または低下させるための医薬であって、前記医薬は、ＯＸ４０アゴニスト、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、および腫瘍抗原を含む免疫原性組成物を含み、前記ＯＸ４０アゴニストは抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合断片であり、前記ＩＤＯ阻害剤は１−メチルトリプトファン（１−ＭＴ）であり、前記腫瘍抗原はＨＰＶ抗原である、医薬。
【請求項５】
インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、および腫瘍抗原を含む免疫原性組成物と組み合わせてＯＸ４０アゴニストを被験体に投与することにより、被験体における腫瘍成長を遅延または低下させるための、ＯＸ４０アゴニストを含む医薬であって、前記ＯＸ４０アゴニストは抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合断片であり、前記ＩＤＯ阻害剤は１−メチルトリプトファン（１−ＭＴ）であり、前記腫瘍抗原はＨＰＶ抗原である、医薬。
【請求項６】
ＯＸ４０アゴニスト、および腫瘍抗原を含む免疫原性組成物と組み合わせてインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤を被験体に投与することにより、被験体における腫瘍成長を遅延または低下させるための、ＩＤＯ阻害剤を含む医薬であって、前記ＯＸ４０アゴニストは抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合断片であり、前記ＩＤＯ阻害剤は１−メチルトリプトファン（１−ＭＴ）であり、前記腫瘍抗原はＨＰＶ抗原である、医薬。
【請求項７】
前記被験体の腫瘍内部のＣＤ８+Ｔ細胞対制御性Ｔ細胞比を増加させる、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項８】
前記ＯＸ４０アゴニストの量が、前記被験体の腫瘍内部のＣＤ８+Ｔ細胞対制御性Ｔ細胞比を増加させるのに十分である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項９】
前記ＯＸ４０アゴニストの量が、前記被験体内の腫瘍浸潤性制御性Ｔ細胞を増加させない程度に十分に低い、請求項１〜７のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項１０】
被験体内の腫瘍内部のＣＤ８+Ｔ細胞対制御性Ｔ細胞比を増加させるための医薬であって、前記医薬は、有効量のＯＸ４０アゴニスト、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、および腫瘍抗原を含む免疫原性組成物を含み、前記ＯＸ４０アゴニストは抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合断片であり、前記ＩＤＯ阻害剤は１−メチルトリプトファン（１−ＭＴ）であり、前記腫瘍抗原はＨＰＶ抗原である、医薬。
【請求項１１】
インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、および腫瘍抗原を含む免疫原性組成物と組み合わせてＯＸ４０アゴニストを被験体に投与することにより、被験体内の腫瘍内部のＣＤ８+Ｔ細胞対制御性Ｔ細胞比を増加させるための、有効量のＯＸ４０アゴニストを含む医薬であって、前記ＯＸ４０アゴニストは抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合断片であり、前記ＩＤＯ阻害剤は１−メチルトリプトファン（１−ＭＴ）であり、前記腫瘍抗原はＨＰＶ抗原である、医薬。
【請求項１２】
有効量のＯＸ４０アゴニスト、および腫瘍抗原を含む免疫原性組成物と組み合わせてインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤を被験体に投与することにより、被験体内の腫瘍内部のＣＤ８+Ｔ細胞対制御性Ｔ細胞比を増加させるための、ＩＤＯ阻害剤を含む医薬であって、前記ＯＸ４０アゴニストは抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合断片であり、前記ＩＤＯ阻害剤は１−メチルトリプトファン（１−ＭＴ）であり、前記腫瘍抗原はＨＰＶ抗原である、医薬。
【請求項１３】
前記ＯＸ４０アゴニストの前記有効量が、前記被験体内の腫瘍浸潤性制御性Ｔ細胞を増加させない程度に十分に低い、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項１４】
前記医薬により、前記被験体の抗腫瘍免疫応答が前記免疫原性組成物を単独で投与される被験体と比べて増強される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項１５】
前記抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合断片がモノクローナル抗体である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項１６】
前記抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合断片がキメラ抗体である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項１７】
前記抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合断片がヒト化抗体である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項１８】
前記抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合断片が抗ＯＸ４０モノクローナル抗体９Ｂ１２と同じＯＸ４０エピトープに結合する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項１９】
腫瘍抗原の量が、前記被験体における抗がん免疫応答を誘導するのに十分である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項２０】
前記被験体におけるＴリンパ球活性を刺激する、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項２１】
前記免疫原性組成物がアジュバントをさらに含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項２２】
前記被験体が、ＨＰＶ関連癌を有する、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項２３】
被験体の生存を、前記免疫原性組成物を単独で投与される被験体と比べて少なくとも１０％、２０％、または３０％増加させる、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項２４】
腫瘍成長を、前記医薬を投与されない被験体における腫瘍成長と比べて少なくとも約２０％低下させるかまたは腫瘍退縮を誘導する、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項２５】
前記被験体がヒト患者である、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項２６】
被験体におけるＨＰＶ腫瘍抗原に対する免疫応答を増強するための医薬であって、抗ＯＸ４０モノクローナル抗体９Ｂ１２と同じＯＸ４０エピトープに結合する抗ＯＸ４０抗体、１−ＭＴ、ならびにＨＰＶ１６抗原およびアジュバントを含む免疫原性組成物を含む、医薬。
【請求項２７】
１−ＭＴ、ならびにＨＰＶ１６抗原およびアジュバントを含む免疫原性組成物と組み合わせて、抗ＯＸ４０抗体を被験体に投与することにより、被験体におけるＨＰＶ腫瘍抗原に対する免疫応答を増強するための、前記抗ＯＸ４０抗体を含む医薬であって、前記抗ＯＸ４０抗体が抗ＯＸ４０モノクローナル抗体９Ｂ１２と同じＯＸ４０エピトープに結合する、医薬。
【請求項２８】
抗ＯＸ４０モノクローナル抗体９Ｂ１２と同じＯＸ４０エピトープに結合する抗ＯＸ４０抗体、ならびにＨＰＶ１６抗原およびアジュバントを含む免疫原性組成物と組み合わせて、１−ＭＴを被験体に投与することにより、被験体におけるＨＰＶ腫瘍抗原に対する免疫応答を増強するための、１−ＭＴを含む医薬。
【請求項２９】
被験体におけるＨＰＶ関連癌を治療するための医薬であって、抗ＯＸ４０モノクローナル抗体９Ｂ１２と同じＯＸ４０エピトープに結合する抗ＯＸ４０抗体、１−ＭＴ、ならびにＨＰＶ１６抗原およびアジュバントを含む免疫原性組成物を含む、医薬。
【請求項３０】
１−ＭＴ、ならびにＨＰＶ１６抗原およびアジュバントを含む免疫原性組成物と組み合わせて、抗ＯＸ４０抗体を被験体に投与することにより、被験体におけるＨＰＶ関連癌を治療するための、前記抗ＯＸ４０抗体を含む医薬であって、前記抗ＯＸ４０抗体が抗ＯＸ４０モノクローナル抗体９Ｂ１２と同じＯＸ４０エピトープに結合する、医薬。
【請求項３１】
抗ＯＸ４０モノクローナル抗体９Ｂ１２と同じＯＸ４０エピトープに結合する抗ＯＸ４０抗体、ならびにＨＰＶ１６抗原およびアジュバントを含む免疫原性組成物と組み合わせて、１−ＭＴを被験体に投与することにより、被験体におけるＨＰＶ関連癌を治療するための、１−ＭＴを含む医薬。
【請求項３２】
前記被験体の腫瘍内部のＣＤ８+Ｔ細胞対制御性Ｔ細胞比の比を増加させる、請求項２６〜３１のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項３３】
前記抗ＯＸ４０抗体の量が、前記被験体の腫瘍内部の前記ＣＤ８+Ｔ細胞対制御性Ｔ細胞比を増加させるのに十分である、請求項２６〜３１のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項３４】
前記抗ＯＸ４０抗体の量が、前記被験体内の腫瘍浸潤性制御性Ｔ細胞を増加させない程度に十分に低い、請求項２６〜３１のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項３５】
前記医薬により、前記被験体の抗腫瘍免疫応答が、前記免疫原性組成物を単独で投与される被験体と比べて増強される、請求項２６〜３１いずれか一項に記載の医薬。
【請求項３６】
前記医薬が静脈内注入により前記被験体に投与される、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腫瘍特異的免疫応答の有効性を増強するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
がんを有する患者は、典型的には、様々な腫瘍抗原に対する適応免疫応答を示す。こうした腫瘍特異的免疫応答が存在するにもかかわらず、多数の症例では、患者の免疫応答は、腫瘍成長を遮断し、生存を延長するには不十分である。がんワクチンは当初、患者自身の免疫応答を増強することを意図して設計された。現在まで、かかるがんワクチンの治療可能性は実現されていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
したがって、腫瘍特異的免疫応答の有効性を増強するための方法が緊急に求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
下記のように、本発明は、ＯＸ４０アゴニストおよびインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤を腫瘍抗原と一緒に投与することによる、腫瘍特異的免疫応答の有効性を増強するための方法を特徴とする。腫瘍抗原は、がんワクチン中に存在してもよく、または被験体内に存在する腫瘍から例えば腫瘍細胞のアポトーシスを誘導することによって放出させてもよい。腫瘍細胞のアポトーシスは、当該技術分野で公知の任意の方法（例えば、放射線、化学療法）によって誘導することができる。
【０００５】
一態様では、本発明は、被験体内の腫瘍抗原に対する免疫応答を増強するための方法であって、ＯＸ４０アゴニスト（例えばＯＸ４０抗体アゴニスト）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤（例えば１ＭＴ）、および腫瘍抗原（例えばがんワクチン）を含有する免疫原性組成物を被験体に投与するステップを含み、それにより腫瘍抗原に対する被験体の免疫応答を免疫原性組成物単独の投与と比べて増強する、方法を特徴とする。
【０００６】
別の態様では、本発明は、被験体における腫瘍成長を（例えば、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、７５％、８０％、９０％または１００％）遅延または低下させるための方法であって、ＯＸ４０アゴニスト、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、および腫瘍抗原を含有する免疫原性組成物を被験体に投与するステップを含み、それにより被験体における腫瘍成長を未治療対照被験体と比べて遅延または低下させる、方法を特徴とする。
【０００７】
別の態様では、本発明は、被験体内の腫瘍抗原に対する免疫応答を増強するための方法であって、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導するのに十分な放射線または化学療法薬（例えば、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、およびバルルビシン）またはオキサリプラチン）、ＯＸ４０アゴニスト、およびインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤を被験体に施すステップを含み、それにより腫瘍抗原に対する被験体の免疫応答を放射線またはアントラサイクリン単独を施す場合と比べて増強する、方法を特徴とする。
【０００８】
別の態様では、本発明は、被験体における腫瘍成長を遅延または低下させるための方法であって、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導するのに十分な放射線または化学療法薬（例えば、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、およびバルルビシン）またはオキサリプラチン）、ＯＸ４０アゴニスト、およびインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤を被験体に施すステップを含み、それにより被験体における腫瘍成長を未治療対照被験体と比べて遅延または低下させる、方法を特徴とする。
【０００９】
別の態様では、本発明は、被験体内の腫瘍内部のＣＤ８＋Ｔ細胞対制御性Ｔ細胞比を増加させるための方法であって、有効量のＯＸ４０アゴニスト、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、および腫瘍抗原を含有する免疫原性組成物を被験体に投与するステップを含み、それにより腫瘍でのＣＤ８／Ｔｒｅｇ比を増加させる、方法を特徴とする。
【００１０】
別の態様では、本発明は、被験体内の腫瘍内部のＣＤ８＋Ｔ細胞対制御性Ｔ細胞比を増加させるための方法であって、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導するのに十分な放射線または化学療法薬（例えば、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、およびバルルビシン）またはオキサリプラチン）、有効量のＯＸ４０アゴニスト、およびインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤を被験体に施すステップを含み、それにより腫瘍でのＣＤ８／Ｔｒｅｇ比を増加させる、方法を特徴とする。
【００１１】
別の態様では、本発明は、被験体内のＨＰＶ腫瘍抗原に対する免疫応答を増強するための方法であって、ｍＡｂ９Ｂ１２と同じＯＸ４０エピトープに結合するアゴニストＯＸ４０抗体、１−ＭＴ、ならびにＨＰＶ１６抗原およびアジュバントを含有する免疫原性組成物を被験体に投与するステップを含み、それにより腫瘍抗原に対する被験体の免疫応答を免疫原性組成物単独の投与と比べて増強する、方法を特徴とする。
【００１２】
別の態様では、本発明は、被験体におけるＨＰＶ関連癌を治療するための方法であって、ｍＡｂ９Ｂ１２と同じＯＸ４０エピトープに結合するアゴニストＯＸ４０抗体、１−ＭＴ、ならびにＨＰＶ１６抗原およびアジュバントを含有する免疫原性組成物を被験体に投与するステップを含み、それにより被験体におけるＨＰＶ関連癌を治療する、方法を特徴とする。
【００１３】
本明細書中で示される本発明の上記態様または任意の他の態様の様々な実施形態では、本方法は、被験体の腫瘍内部のＣＤ８＋Ｔ細胞対制御性Ｔ細胞比を（例えば、少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％以上）増加させる。上記態様の他の実施形態では、投与されるＯＸ４０アゴニストの量は、被験体の腫瘍内部のＣＤ８＋Ｔ細胞対制御性Ｔ細胞比を増加させるのに十分である。上記態様のさらに他の実施形態では、投与されるＯＸ４０アゴニストの量は、被験体における腫瘍浸潤性Ｔｒｅｇ細胞を増加させない程度に十分に低い。上記態様のさらに他の実施形態では、同投与は、被験体の抗腫瘍免疫応答を免疫原性組成物単独の投与と比べて（例えば、少なくとも約１０％、２５％、５０％、７５％、または１００％）増強する。上記態様の他の実施形態では、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤は、１−メチルトリプトファン（１−ＭＴ）、１−メチル−トリプトファンのＤ異性体、またはＮＬＧ９１９である。上記態様の他の実施形態では、ＯＸ４０アゴニストはＯＸ４０に特異的に結合する。上記態様の他の実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、ＯＸ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である。上記態様の他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、またはヒト化抗体である。上記態様の他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ｍＡｂ９Ｂ１２と同じＯＸ４０エピトープに結合する。上記態様の他の実施形態では、腫瘍抗原は、αフェトプロテイン、癌胎児性抗原、ｃｄｋ４、βカテニン、ＣＡ１２５、カスパーゼ−８、上皮腫瘍抗原、ＨＰＶ抗原、ＨＰＶ１６抗原、ＨＰＶ１６  Ｅ７抗原由来のＣＴＬエピトープ、メラノーマ関連抗原（ＭＡＧＥ）−１、ＭＡＧＥ−３、チロシナーゼ、表面Ｉｇイディオタイプ、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ、ＭＵＣ−１、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、シアリルＴｎ（ＳＴｎ）、熱ショックタンパク質、ｇｐ９６、ガングリオシド分子ＧＭ２、ＧＤ２、ＧＤ３、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）およびＭＡＲＴ−１のうちの任意の１つ以上である。上記態様の他の実施形態では、免疫原性組成物中に存在する腫瘍抗原の量は、被験体における抗がん免疫応答を誘導するのに十分である。上記態様の他の実施形態では、免疫原性組成物の投与により、被験体におけるＴリンパ球活性が刺激される。上記態様の他の実施形態では、免疫原性組成物はアジュバントをさらに含有する。上記態様の他の実施形態では、被験体は、ＨＰＶ関連癌、頸部がん、陰茎がん、肛門がん、頭頸部の扁平上皮がんおよび外陰部のがんからなる群から選択されるがんを有する。上記態様の他の実施形態では、本方法は、被験体の生存を、免疫原性組成物単独の投与を受けた被験体と比べて少なくとも１０％、２０％または３０％以上増加させる。上記態様の他の実施形態では、本方法は、腫瘍成長を未治療対照被験体における腫瘍成長と比べて少なくとも約２０％低下させるかまたは腫瘍退縮を誘導する。上記態様の他の実施形態では、被験体はヒト患者である。上記態様の他の実施形態では、免疫原性組成物はがんワクチンである。
【００１４】
本発明の他の特徴および利点は、詳細な説明から、また特許請求の範囲から明らかになるだろう。
【００１５】
定義
別に定義されない限り、本明細書で用いられるすべての科学技術用語使用は、本発明が属する当業者によって一般的に理解されている意味を有する。以下の参考文献は、本発明で用いられる多数の用語の一般的定義を当業者に提供する。Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（２ｎｄ  ｅｄ．１９９４）；Ｔｈｅ  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｗａｌｋｅｒ  ｅｄ．，１９８８）；Ｔｈｅ  Ｇｌｏｓｓａｒｙ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｒ．Ｒｉｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ（１９９１）；およびＨａｌｅ＆  Ｍａｒｈａｍ，Ｔｈｅ  Ｈａｒｐｅｒ  Ｃｏｌｌｉｎｓ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９１）。以下の用語は、本明細書で用いられる場合、別に規定されない限り、下記のそれらに対応する意味を有する。
【００１６】
「ＯＸ４０」は、抗原活性化された哺乳動物のＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔリンパ球ならびに制御性Ｔリンパ球の表面上に発現される受容体のＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバーを意味する。例えば、Ｐａｔｅｒｓｏｎ，Ｄ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２４，１２８１−１２９０（１９８７）；Ｍａｌｌｅｔｔ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．ＥＭＢＯ  Ｊ９，１０６３−１０６８（１９９０）；およびＣａｌｄｅｒｈｅａｄ，Ｄ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５１，５２６１−５２７１（１９９３））を参照のこと。用語「ＯＸ４０」および「ＯＸ４０受容体」は、本明細書で交換可能に用いられる。ＯＸ４０はまた、ＣＤ１３４、ＴＮＦＲＳＦ４、ＡＣＴ−４、およびＡＣＴ３５と称される。ＯＸ４０受容体配列は当該技術分野で公知であり、例えばジェンバンク（ＧｅｎＢａｎｋ）受託番号：ＡＡＢ３３９４４またはＣＡＥ１１７５７で提供される。
【００１７】
代表的なヒトＯＸ４０配列が以下に提供される。
１  ｍｃｖｇａｒｒｌｇｒ  ｇｐｃａａｌｌｌｌｇ  ｌｇｌｓｔｖｔｇｌｈ  ｃｖｇｄｔｙｐｓｎｄ  ｒｃｃｈｅｃｒｐｇｎ  ｇｍｖｓｒｃｓｒｓｑ
６１  ｎｔｖｃｒｐｃｇｐｇ  ｆｙｎｄｖｖｓｓｋｐ  ｃｋｐｃｔｗｃｎｌｒ  ｓｇｓｅｒｋｑｌｃｔ  ａｔｑｄｔｖｃｒｃｒ  ａｇｔｑｐｌｄｓｙｋ
１２１  ｐｇｖｄｃａｐｃｐｐ  ｇｈｆｓｐｇｄｎｑａ  ｃｋｐｗｔｎｃｔｌａ  ｇｋｈｔｌｑｐａｓｎ  ｓｓｄａｉｃｅｄｒｄ  ｐｐａｔｑｐｑｅｔｑ
１８１  ｇｐｐａｒｐｉｔｖｑ  ｐｔｅａｗｐｒｔｓｑ  ｇｐｓｔｒｐｖｅｖｐ  ｇｇｒａｖａａｉｌｇ  ｌｇｌｖｌｇｌｌｇｐ  ｌａｉｌｌａｌｙｌｌ
２４１  ｒｒｄｑｒｌｐｐｄａ  ｈｋｐｐｇｇｇｓｆｒ  ｔｐｉｑｅｅｑａｄａ  ｈｓｔｌａｋｉ
【００１８】
「ＯＸ４０リガンド」は、ＯＸ４０受容体と特異的に相互作用するタンパク質を意味する。例えば、Ｂａｕｍ  Ｐ．Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．ＥＭＢＯ  Ｊ．１３：３９９２−４００１（１９９４））を参照のこと。ＯＸ４０リガンドはまた、ＣＤ２５２、ＣＤ１４３Ｌ、ｇｐ３４およびＴＮＦＳＦ４と称される。用語ＯＸ４０Ｌは、全ＯＸ４０リガンド、可溶性ＯＸ４０リガンド、および第２の部分、例えばタンパク質ドメインに共有結合されたＯＸ４０リガンドの機能活性部分を含む融合タンパク質を含む。また、ＯＸ４０Ｌの定義の中に含まれるものとして、アミノ酸配列が天然ＯＸ４Ｌから変化しても、ＯＸ４０受容体に特異的に結合する能力を保持する変異体がある。さらに、ＯＸ４０Ｌの定義の中に含まれるものとして、ＯＸ４０の生物学的活性を増強する変異体がある。
【００１９】
「ＯＸ４０アゴニスト」は、ＯＸ４０受容体と特異的に相互作用し、かつＯＸ４０受容体の生物学的活性を増強または促進する分子を意味する。望ましくは、生物学的活性は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはさらに１００％増強される。特定の態様では、本明細書に開示されるＯＸ４０アゴニストは、ＯＸ４０結合ポリペプチド、例えば抗ＯＸ４０抗体（例えばＯＸ４０アゴニスト抗体）、ＯＸ４０リガンド、またはこれらの分子の断片もしくは誘導体を含む。
【００２０】
「ＯＸ４０抗体」は、ＯＸ４０に特異的に結合する抗体を意味する。ＯＸ４０抗体は、ＯＸ４０およびその抗原結合断片に特異的なモノクローナルおよびポリクローナル抗体を含む。特定の態様では、本明細書に記載の抗ＯＸ４０抗体は、モノクローナル抗体（またはその抗原結合断片）、例えば、マウス、ヒト化、または完全ヒトモノクローナル抗体である。特定の一実施形態では、ＯＸ４０抗体は、ＯＸ４０受容体アゴニスト、例えばＷｅｉｎｂｅｒｇ，Ａ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ２９，５７５−５８５（２００６）によって記載されるマウス抗ヒトＯＸ４０モノクローナル抗体（９Ｂ１２）である。他の実施形態では、ＯＸ４０またはその抗原結合断片に特異的に結合する抗体は、ｍＡｂ９Ｂ１２と同じＯＸ４０エピトープに結合する。
【００２１】
「抗体」は、標的を認識し、標的に特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。本明細書で使用されるとき、用語「抗体」は、インタクトなポリクローナル抗体、インタクトなモノクローナル抗体、抗体断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片など）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）突然変異体、少なくとも２つのインタクトな抗体から作成される二重特異性抗体などの多特異性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体の抗原決定部分を含む融合タンパク質、および抗原認識部位を含む任意の他の修飾免疫グロブリン分子を包含し、ここで抗体は所望される生物学的活性を示す場合に限られる。抗体は、α、δ、ε、γ、およびμと称される免疫グロブリンの重鎖定常ドメインの同一性に基づき、免疫グロブリンのいずれかの５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭの各々、またはそれらのサブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）であり得る。免疫グロブリンの異なるクラスは、異なる周知のサブユニット構造および三次元配置を有する。
【００２２】
「寛解させる」は、疾患の発生または進行を低下させる、抑制する、弱毒化する、低減する、停止させる、または安定化させることを意味する。
【００２３】
「抗原結合断片」は、抗原に結合するインタクトな抗体の一部分を意味する。特に、抗原結合断片という用語は、インタクトな抗体の抗原決定可変領域を指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって実行され得る。抗体断片の例として、限定はされないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片、線状抗体、一本鎖抗体、および抗体断片から形成される多特異性抗体が挙げられる。
【００２４】
「がん」は、過剰な増殖または低下したアポトーシスによって特徴づけられる疾患または障害を意味する。本発明を用いることができる例示的ながんとして、限定はされないが、白血病（例えば、急性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性単球性白血病、急性赤白血病、慢性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病）、真性多血症、リンパ腫（ホジキン病、非ホジキン病）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、重鎖疾患、ならびに肉腫および癌腫（例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、滑膜腫、中皮腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸がん、膵がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、扁平上皮がん、基底細胞がん、腺がん、汗腺がん、皮脂腺がん、乳頭がん、乳頭腺がん、嚢胞腺がん、髄様がん、気管支原性肺癌、腎細胞がん、肝腫瘍、胆管がん、絨毛がん、セミノーマ、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、頸部がん、子宮がん、睾丸がん、肺がん、小細胞肺がん、膀胱がん、上皮がん、グリオーマ、多形神経膠芽腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫瘍、乏突起神経膠腫、シュワン腫、髄膜腫、メラノーマ、神経芽細胞腫、および網膜芽細胞腫）などの固形腫瘍が挙げられる。
【００２５】
「キメラ抗体」は、免疫グロブリン分子のアミノ酸配列が２つ以上の種に由来する場合の抗体を意味する。典型的には、軽鎖および重鎖双方の可変領域が、所望される特異性、親和性、および機能性を有する哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギなど）の１種に由来する抗体の可変領域に対応する一方、定常領域が別種（通常はヒト）に由来する抗体の配列に対して相同性があることで、その種における免疫応答を誘導することが回避される。
【００２６】
本開示において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」および「有する（ｈａｖｉｎｇ）」などは、米国特許法の場合に対応する意味を有し、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ））」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などを意味することができ、また同様に、「本質的に〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」または「本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ）」は、米国特許法に対応する意味を有し、また同用語は制約がなく、列挙されるその基本的または新規な特性は、列挙されるものを超える存在によって変化を受けない限り、列挙されるものを超える存在を許容するが、先行技術の実施形態を除外する。
【００２７】
「検出する」は、検出されるべき分析物の存在、不在または量を同定することを指す。
【００２８】
「有効量」は、未治療患者に対する、疾患の症状を寛解するのに必要とされる本明細書に記載の作用物質（例えばＯＸ４０アゴニスト）の量を意味する。疾患の治療的処置のため、本発明の実施に用いられるかかる作用物質の有効量は、投与方法、被験体の年齢、体重、および一般健康に応じて変化する。最終的には、主治医または獣医師が適切な量および投与計画を決定することになる。かかる量は「有効」量と称される。
【００２９】
「断片」は、ポリペプチドまたは核酸分子の一部分を意味する。この部分は、好ましくは、参照核酸分子またはポリペプチドの全長の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％を有する。断片は、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、または１０００ヌクレオチドまたはアミノ酸を有してもよい。
【００３０】
「ヒト化抗体」は、ヒト配列を有するように操作されている非ヒト免疫グロブリン由来の抗体を意味する。典型的には、ヒト化抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、所望される特異性、親和性、および能力を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、またはハムスター）のＣＤＲ由来の残基で置換される場合のヒト免疫グロブリンである（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６）。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＷ）残基は、所望される特異性、親和性、および能力を有する非ヒト種由来の抗体中の対応する残基と置換される。
【００３１】
ヒト化抗体は、抗体特異性、親和性、および／または能力を精密化し、最適化するため、Ｆｖフレームワーク領域内および／または置換された非ヒト残基内のいずれかで追加的な残基の置換を行うことにより、さらに修飾することができる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２〜３つの可変ドメインの実質的に全部を含むことになり、同可変ドメインは非ヒト免疫グロブリンに対応するＣＤＲ領域の全部または実質的に全部を有する一方、ＦＷ領域の全部または実質的に全部はヒト免疫グロブリン共通配列のものである。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリンの定常領域またはドメイン（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部を含み得る。ヒト化抗体の作成に用いられる方法の例が、米国特許第５，２２５，５３９号明細書または米国特許第５，６３９，６４１号明細書に記載されている。
【００３２】
本明細書で使用されるとき、「ヒト」または「完全ヒト」抗体は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含み、またヒト免疫グロブリンライブラリまたは１つ以上のヒト免疫グロブリン用の動物トランスジェニックから単離され、かつ内因性免疫グロブリンを発現しない抗体を含み、それは下記のとおりであり、例えばＫｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ  ｅｔ  ａｌ．による米国特許第５，９３９，５９８号明細書に記載されている。「ヒト」または「完全ヒト」抗体はまた、少なくとも重鎖の可変ドメイン、または少なくとも重鎖および軽鎖の可変ドメインを含む抗体を含み、ここでは１つもしくは複数の可変ドメインは、１つもしくは複数のヒト免疫グロブリン可変ドメインのアミノ酸配列を有する。
【００３３】
「ヒト」または「完全ヒト」抗体はまた、変異体（誘導体を含む）を含む、本質的に変異体（誘導体を含む）からなる、または変異体（誘導体を含む）からなる抗体を含む。限定はされないが、アミノ酸置換をもたらす部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介性突然変異誘発を含む当業者に公知の標準的技術は、ヒト抗体をコードするヌクレオチド配列内に突然変異を導入するために用いることができる。好ましくは、変異体（誘導体を含む）は、参照ＶＨ領域、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬ領域、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、またはＶＬＣＤＲ３に対して、５０未満のアミノ酸置換、４０未満のアミノ酸置換、３０未満のアミノ酸置換、２５未満のアミノ酸置換、２０未満のアミノ酸置換、１５未満のアミノ酸置換、１０未満のアミノ酸置換、５未満のアミノ酸置換、４未満のアミノ酸置換、３未満のアミノ酸置換、または２未満のアミノ酸置換をコードする。
【００３４】
「免疫原性組成物」は、被験体に投与される場合、免疫応答を誘導することが可能な抗原を含む組成物を意味する。抗原（腫瘍抗原を含む）は、典型的には薬学的に許容できる賦形剤中で提供される。必要に応じて、免疫原性組成物はアジュバントを含む。特定の実施形態では、腫瘍抗原は、原位置での腫瘍のアポトーシスを誘導し、それにより腫瘍に対する免疫応答を誘導することが可能な腫瘍抗原を放出することによって提供される。
【００３５】
「モノクローナル抗体」は、単一の抗原決定基またはエピトープの高度に特異的な認識および結合に関与する均一抗体を意味する。これは、典型的には異なる抗原決定基に特異的な異なる抗体を含むポリクローナル抗体と対照的である。用語「モノクローナル抗体」は、インタクトおよび完全長モノクローナル抗体、ならびに抗体断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなど）、一本鎖（ｓｃＦｖ）突然変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、および抗原認識部位を含む任意の他の修飾免疫グロブリン分子を包含する。さらに、「モノクローナル抗体」は、限定はされないが、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、およびトランスジェニック動物によるものを含むいくつかの方法で作成されたかかる抗体を指す。
【００３６】
「増強する」は、少なくとも１０％、２５％、５０％、７５％、または１００％の正の変化を意味する。
【００３７】
「参照」は、標準または対照条件を意味する。
【００３８】
「特異的に結合する」は、本発明のポリペプチドに対して認識し、結合するが、本発明のポリペプチドを天然に含む試料、例えば生物学的試料の中の他の分子に対して実質的に認識せず、結合しない化合物または抗体を意味する。
【００３９】
「被験体」は、限定はされないが、ヒトまたは非ヒト哺乳動物、例えばウシ、ウマ、イヌ、ヒツジ、またはネコを含む哺乳動物を意味する。
【００４０】
抗体の「可変領域」は、抗体軽鎖の可変領域または抗体重鎖の可変領域を単独または組み合わせのいずれかとして指す。重鎖および軽鎖の可変領域は各々、超可変領域としても知られる３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって接続された４つのフレームワーク領域（ＦＷ）からなる。各鎖におけるＣＤＲは、ＦＷ領域によって極めて接近して一緒に保持され、他の鎖からのＣＤＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲを決定するには、（１）近縁種の配列可変性に基づく手法（すなわち、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（５ｔｈ  ｅｄ．，１９９１，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  Ｍｄ．））；および（２）抗原抗体複合体の結晶学的試験に基づく手法（Ａｌ−ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−９４８））といった少なくとも２つの技法が存在する。さらに、これら２つの手法の組み合わせは、ＣＤＲを決定するため、時として当該技術分野で用いられる。
【００４１】
本明細書で提供される範囲は、同範囲内のすべての値に対する簡単な表記であると理解される。例えば、１〜５０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０からなる群からの任意の数、数の組み合わせ、または部分的範囲を含むように理解される。
【００４２】
本明細書で使用されるとき、用語「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」などは、障害および／またはそれに伴う症状を低下または寛解させることを指す。排除されないとしても、障害または状態を治療することが、障害、状態またはそれに伴う症状が完全に排除されることを必要としないことは理解されるであろう。
【００４３】
被験体が、がん細胞の数の減少または完全な不在；腫瘍サイズの減少；腫瘍成長の安定化、遅延または逆転のうちの１つ以上を示し、腫瘍成長の阻害が、例えば、転移の抑制、阻止、遅延、縮小、または逆転（例えば、（例えばがんの軟部組織および骨への拡散を含む）がん細胞の末梢器官への浸潤；阻害）；がんに伴う１つ以上の症状の緩和；罹患率および死亡率の低下；生活の質の改善；またはこれらの効果のいくつかの組み合わせを含む場合、被験体は十分に「治療される」。
【００４４】
有益であるかまたは所望される臨床結果は、限定はされないが、症状の軽減、疾患の程度の減少、疾患の安定化された（すなわち増悪していない）状態、疾患進行の遅延または緩徐化、病態の寛解または緩和、および寛解（一部または全体のいずれか）を検出可能または検出不能と無関係に含む。「治療」はまた、治療の不在下で想定される生存と比べての、または標準的治療を受ける被験体と比べての生存の延長を意味し得る。治療を必要とする被験体は、既に状態または障害を有する者、ならびに状態または障害を有する傾向がある者あるいは状態または障害を予防すべきである者を含む。
【００４５】
用語「Ｔ細胞」および「Ｔリンパ球」は、細胞表面上にＴ細胞受容体複合体を有するリンパ球の集団を指すように交換可能に用いてもよい。Ｔリンパ球は、典型的には細胞性免疫として機能する一方、それらの特定の機能だけでなく、特定のＴリンパ球亜集団用の「マーカー」として機能し得る特定の表面および細胞内抗原の発現の差に基づき、多数の亜集団に分割することができる。一般に、ヘルパーＴ細胞は表面抗原ＣＤ４を発現し、細胞傷害性Ｔ細胞はＣＤ８を発現する。これらグループ内の亜集団、およびこれらグループ間の重複は、限定はされないが、ＣＤ９５、ＣＤ２５、ＦｏｘＰ３、ＣＤ２８、ＣＣＲ７、ＣＤ１２７、ＣＤ３８、ＨＬＡ−ＤＲ、およびＫｉ−６７を含む他の細胞表面マーカーにより同定することができる。Ｔリンパ球の亜集団は、標識抗体の使用を介して、例えばフローサイトメトリーまたは蛍光標示式細胞分取器により、血球の混合集団から同定し、および／または単離することができる（下の実施例でさらに詳述される）。例えば、ヘルパーＴ細胞は、ＣＤ３およびＣＤ４を発現するが、ＦｏｘＰ３を発現しないものとして同定することができる。Ｔリンパ球の他の重複および非重複亜集団は、メモリーＴ細胞、未熟Ｔ細胞、成熟Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、活性化Ｔ細胞、およびナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞を含む。
【００４６】
詳述されないかまたは文脈から明らかでない限り、本明細書で使用されるとき、用語「または」は、包括的であると理解される。詳述されないかまたは文脈から明らかでない限り、本明細書で使用されるとき、用語「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、単数または複数であると理解される。
【００４７】
詳述されないかまたは文脈から明らかでない限り、本明細書で使用されるとき、用語「約」は、当該技術分野で正常な許容度の範囲内、例えば平均の２標準偏差内であると理解される。約は、記述される値の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、または０．０１％の範囲内であると理解することができる。特に文脈から明らかでない限り、本明細書に提供されるすべての数値は、約という用語によって修飾される。
【００４８】
本明細書中の変数の任意の定義における化学基のリストの記載は、任意の単一グループまたは列挙されるグループの組み合わせとしての同変数の定義を含む。本明細書中の変数または態様における実施形態の記載は、任意の単一の実施形態としてあるいはその任意の他の実施形態または部分と組み合わせてその実施形態を含む。
【００４９】
本明細書に提供される任意の組成物または方法は、本明細書に提供される他の組成物および方法のいずれかの１つ以上と組み合わせることができる。
【図面の簡単な説明】
【００５０】
【図１Ａ】抗ＯＸ４０アゴニスト抗体と組み合わせたがんワクチンの投与により、腫瘍化マウスモデルにおけるマウスの生存が増加したことを示す。腫瘍発生のマウスモデルにおけるマウスの生存を測定することによる、がんワクチン（ＨＰＶ１６  Ｅ７抗原由来のＣＴＬエピトープ、ＰＡＤＲＥ  ＴヘルパーエピトープおよびＱｕｉｌＡアジュバント）および抗ＯＸ４０の効果に関する試験の設計を示す。
【図１Ｂ】抗ＯＸ４０アゴニスト抗体と組み合わせたがんワクチンの投与により、腫瘍化マウスモデルにおけるマウスの生存が増加したことを示す。がんワクチンおよび１ｍｇ／ｋｇでの抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を投与することにより、がんワクチン単独または抗ＯＸ４０単独を投与するか、あるいはがんワクチンおよび低用量（０．５ｍｇ／ｋｇ、左上パネル）または高用量（２．５ｍｇ／ｋｇ、下パネル）での抗ＯＸ４０を投与する場合と比べて、腫瘍化マウスモデルにおけるマウスの生存が増加したこと（右上パネル）を示すグラフである。がんワクチンおよび１ｍｇ／ｋｇでの抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を受けたマウスの中の約２０％が、ＴＣ−１腫瘍細胞の注射後、約６２日目まで生存していた。
【図２Ａ】抗ＯＸ４０アゴニスト抗体と組み合わせたがんワクチンの投与により、腫瘍化マウスモデルにおけるマウスの腫瘍成長が阻害されたことを示す。腫瘍発生のマウスモデルにおけるマウスの腫瘍成長を測定することによる、がんワクチン（ＨＰＶ１６  Ｅ７抗原由来のＣＴＬエピトープ、ＰＡＤＲＥ  ＴヘルパーエピトープおよびＱｕｉｌＡアジュバント）および抗ＯＸ４０の効果に関する試験の設計を示す。
【図２Ｂ】抗ＯＸ４０アゴニスト抗体と組み合わせたがんワクチンの投与により、腫瘍化マウスモデルにおけるマウスの腫瘍成長が阻害されたことを示す。がんワクチンおよび１ｍｇ／ｋｇでの抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を投与することにより、がんワクチン単独（左下パネル）または抗ＯＸ４０単独（１ｍｇ／ｋｇ、中上パネル；２．５ｍｇ／ｋｇ、右上パネル）を投与するか、あるいはがんワクチンおよび高用量（２．５ｍｇ／ｋｇ；右下パネル）での抗ＯＸ４０を投与する場合と比べて、腫瘍化マウスモデルにおけるマウスの腫瘍成長が阻害されたこと（中下パネル）を示すグラフである。がんワクチンおよび１ｍｇ／ｋｇでの抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を受けたマウスの中で、マウスは、他の試験群と比べて腫瘍体積の低下および／または腫瘍成長の遅延を示した。
【図３Ａ】抗ＯＸ４０アゴニスト抗体と組み合わせたがんワクチンの投与により、腫瘍化マウスモデルにおけるマウスの抗原特異的免疫応答が刺激されたことを示す。腫瘍発生のマウスモデルにおける抗原特異的免疫応答および腫瘍浸潤性Ｔ細胞特性を評価することによる、がんワクチン（ＨＰＶ１６  Ｅ７抗原由来のＣＴＬエピトープ、ＰＡＤＲＥ  ＴヘルパーエピトープおよびＱｕｉｌＡアジュバント）および抗ＯＸ４０の効果に関する試験の設計を示す。
【図３Ｂ】抗ＯＸ４０アゴニスト抗体と組み合わせたがんワクチンの投与により、腫瘍化マウスモデルにおけるマウスの抗原特異的免疫応答が刺激されたことを示す。がんワクチンおよび抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を受けたマウスが、がんワクチン単独または抗ＯＸ４０単独を受けたマウスと比べて、腫瘍化マウスモデルにおける抗原（Ｅ７）特異的ＣＤ８Ｔ細胞の増加を示したことを示すグラフである。がんワクチンおよび１ｍｇ／ｋｇでの抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を受けたマウスは、がんワクチンおよび抗ＯＸ４０を受けた他群と比べて、最高のＥ７特異的ＣＤ８Ｔ細胞：全ＣＤ８Ｔ細胞の比を示した。
【図３Ｃ】抗ＯＸ４０アゴニスト抗体と組み合わせたがんワクチンの投与により、腫瘍化マウスモデルにおけるマウスの抗原特異的免疫応答が刺激されたことを示す。がんワクチンおよび抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を受けたマウスが、がんワクチン単独または抗ＯＸ４０単独を受けたマウスと比べて、腫瘍化マウスモデルにおける抗原（Ｅ７）特異的ＣＤ８Ｔ細胞の増加を示したことを示すグラフである。がんワクチンおよび１ｍｇ／ｋｇでの抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を受けたマウスは、がんワクチンおよび低用量（０．５ｍｇ／ｋｇ）または高用量（２．５ｍｇ／ｋｇ）用量での抗ＯＸ４０を受けた他群と比べて、最高のＥ７特異的ＣＤ８Ｔ細胞：制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の比を示した。
【図４Ａ】抗ＯＸ４０アゴニスト抗体と組み合わせたがんワクチンの投与により、腫瘍化マウスモデルにおける制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）によって腫瘍浸潤が増大したことを示す。腫瘍発生のマウスモデルにおける脾臓および腫瘍浸潤性Ｔ細胞特性を評価することによる、抗ＯＸ４０抗体に基づく治療の効果に関する試験の設計を示す。
【図４Ｂ】抗ＯＸ４０アゴニスト抗体と組み合わせたがんワクチンの投与により、腫瘍化マウスモデルにおける制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）によって腫瘍浸潤が増大したことを示す。抗ＯＸ４０アゴニスト抗体（１ｍｇ／ｋｇ；１．７５ｍｇ／ｋｇ；２．５ｍｇ／ｋｇ）を受けたマウスが、治療を受けていないマウスと比べて、脾臓内の非Ｔｒｅｇ  ＣＤ４Ｔ細胞（ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３−）における有意な増加を示したことを示すグラフである。抗ＯＸ４０アゴニスト抗体（１ｍｇ／ｋｇ；１．７５ｍｇ／ｋｇ；２．５ｍｇ／ｋｇ）を受けたマウスは、治療を受けていないマウスと比べて、脾臓内で類似レベルのＣＤ８＋細胞（左上パネル）およびＴｒｅｇ細胞（ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋；下パネル）を有した。
【図４Ｃ】抗ＯＸ４０アゴニスト抗体と組み合わせたがんワクチンの投与により、腫瘍化マウスモデルにおける制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）によって腫瘍浸潤が増大したことを示す。抗ＯＸ４０を受けたマウスが、抗ＯＸ４０の用量増加に伴い、腫瘍浸潤性Ｔｒｅｇ細胞のレベルの増加を示したことを示すグラフである（下パネル）。
【図５Ａ】抗ＯＸ４０アゴニスト抗体およびインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤と組み合わせたがんワクチンの投与により、腫瘍化マウスモデルにおける腫瘍成長が阻害され、生存が増加したことを示す。腫瘍発生のマウスモデルにおけるマウスの腫瘍成長および生存を測定することによる、がんワクチン（ＨＰＶ１６  Ｅ７抗原由来のＣＴＬエピトープ、ＰＡＤＲＥ  ＴヘルパーエピトープおよびＱｕｉｌＡアジュバント）、抗ＯＸ４０、および１−メチルトリプトファン（１−ＭＴ）の効果に関する試験の設計を示す。
【図５Ｂ−１】抗ＯＸ４０アゴニスト抗体およびインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤と組み合わせたがんワクチンの投与により、腫瘍化マウスモデルにおける腫瘍成長が阻害され、生存が増加したことを示す。がんワクチン、抗ＯＸ４０アゴニスト抗体（１ｍｇ／ｋｇ）、および１−ＭＴを受けたマウスでは、がんワクチンおよび抗ＯＸ４０（パネルｆ）またはがんワクチンおよび１−ＭＴ（パネルｇ）を受けたマウスを含む他のマウス群と比べて、腫瘍化マウスモデルにおける腫瘍成長が有意に阻害され、および／または遅延した（パネルｈ）ことを示すグラフである。がんワクチン、抗ＯＸ４０アゴニスト抗体、および１−ＭＴを受けたマウスの内、マウス２匹が、ＴＣ−１腫瘍細胞の注射後約３５日目、腫瘍体積の完全な低下を示した。
【図５Ｂ−２】図５Ｂ−１の続きである。
【図５Ｃ】抗ＯＸ４０アゴニスト抗体およびインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤と組み合わせたがんワクチンの投与により、腫瘍化マウスモデルにおける腫瘍成長が阻害され、生存が増加したことを示す。がんワクチン、抗ＯＸ４０アゴニスト抗体（１ｍｇ／ｋｇ）、および１−ＭＴを受けたマウスの生存が、がんワクチンおよび抗ＯＸ４０（青）またはがんワクチンおよび１−ＭＴ（緑色）を受けたマウスを含む他のマウス群と比べて増加したことを示すグラフである。がんワクチン、抗ＯＸ４０アゴニスト抗体、および１−ＭＴを受けたマウスが、他の試験群と比べて、腫瘍体積の低下および／または腫瘍成長の遅延を示した。これらのマウスにおいて、最大で約８０％の生存がＴＣ−１腫瘍細胞の注射後約５５日目まで認められた。
【図５Ｄ】抗ＯＸ４０アゴニスト抗体およびインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤と組み合わせたがんワクチンの投与により、腫瘍化マウスモデルにおける腫瘍成長が阻害され、生存が増加したことを示す。マウスの腫瘍成長の阻害と生存が相関したことを示すグラフである。試験における個々のマウスについて、腫瘍体積および生存日数がプロットされた。
【発明を実施するための形態】
【００５１】
本発明は、がんワクチンの有効性を増強するのに有用な方法を特徴とする。
【００５２】
本発明は、少なくとも部分的には、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体での免疫系のエフェクターアームおよびＩＤＯ阻害剤での免疫系のサプレッサーアームを標的化することにより、がんワクチンの有効性が増強されたという発見に基づく。ＯＸ４０分子は、アゴニスト抗体で標的化される場合にＴ細胞エフェクター機能の増殖および増強を誘導し得る、Ｔ細胞で発現される同時刺激性受容体である。しかし、エフェクターＴ細胞は、腫瘍の破壊に対する保護的機構として腫瘍により分泌されるインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤により抑制される。下に詳細に報告されるとおり、がんワクチンと組み合わせた抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を用いた治療により、抗原特異的Ｔ細胞応答の増強がもたらされる。１ｍｇ／ｋｇ用量の抗ＯＸ４０抗体は、Ｔ細胞のエフェクターアームを刺激し、最終的に腫瘍内部でのＣＤ８＋／制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）比の有意な増加をもたらす。さらに、ワクチンおよび抗ＯＸ４０抗体治療のこの組み合わせにより、未治療腫瘍（ＴＣ−１）を有するマウスと比べて、腫瘍成長の有意な阻害およびマウスの生存延長がもたらされる。治療マウスの２０％において、完全な腫瘍退縮が認められた。この効果は、ワクチンおよび抗ＯＸ４０抗体治療が１−ＭＴ、インドールアミン−（２，３）−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）活性阻害剤と組み合わされたとき、有意に増強された。ＩＤＯは、腫瘍環境下で腫瘍細胞、抑制性樹状細胞およびマクロファージにより分泌されることが示されており、またエフェクター細胞の抑制および制御性Ｔ細胞の誘導に関与することが知られている。これらのデータによると、ワクチンおよび抗ＯＸ４０抗体と１−メチルトリプトファン（１−ＭＴ、ＩＤＯ阻害剤）との組み合わせにより、６０％のマウスで、腫瘍成長のより著明な阻害および定着腫瘍の完全な退縮がもたらされる。結論として、これらの知見によると、抗ＯＸ４０抗体での免疫系のエフェクターアームおよび１−ＭＴでの免疫系のサプレッサーアームの同時標的化が、腫瘍根絶をもたらす相乗効果を有し、患者におけるがん治療の全有効性を増強し得る有望な方法であることが示される。
【００５３】
ＯＸ４０
ＯＸ４０は、主に活性化ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞ならびに制御性Ｔ細胞で発現されるＴＮＦ受容体ファミリーメンバである。ＯＸ４０アゴニストは、複数の腫瘍タイプに対してＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞に依存する強力な抗腫瘍活性を有する（Ｋｊａｅｒｇａａｒｄ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６０，５５１４−５５２１（２０００）；Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，Ａ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４，２１６０−２１６９（２０００）；Ｇｏｕｇｈ，Ｍ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６８，５２０６−５２１５（２００８）；Ｐｉｃｏｎｅｓｅ，Ｓ．，Ｖａｌｚａｓｉｎａ，Ｂ．＆  Ｃｏｌｏｍｂｏ，Ｍ．Ｐ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２０５，８２５−８３９（２００８））。ＯＸ４０アゴニストは、Ｔ細胞増殖、エフェクターサイトカイン産生、細胞傷害性、ならびに活性化誘導細胞死の低下および非ヒトモデル系におけるメモリーＴ細胞の産生増加を促進した（Ｇｒａｍａｇｌｉａ，Ｉ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６５，３０４３−３０５０．（２０００）；Ｍａｘｗｅｌｌ，Ｊ．Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４，１０７−１１２（２０００）；Ｌｅｅ，Ｓ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７７，４４６４−４４７２（２００６）；Ｒｕｂｙ，Ｃ．Ｅ．＆  Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，Ａ．Ｄ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ５８，１９４１−１９４７（２００９））。
【００５４】
ＯＸ４０アゴニスト
ＯＸ４０アゴニストは、ＣＤ４＋Ｔ細胞上のＯＸ４０受容体と、抗原によるプライミングの間または直後に相互作用する結果、抗原に対するＣＤ４＋Ｔ細胞の応答が増強される。抗原特異的なＣＤ４＋Ｔ細胞上のＯＸ４０受容体と相互作用するＯＸ４０アゴニストは、抗原単独に対する応答と比べると、Ｔ細胞増殖を増強し得る。抗原に対して増強された応答は、ＯＸ４０アゴニストの不在下で、実質的により長い期間維持され得る。したがって、ＯＸ４０アゴニストを介する刺激は、抗原、例えば腫瘍細胞のＴ細胞認識をブーストすることにより、抗原特異的な免疫応答を増強する。ＯＸ４０アゴニストは、例えば、米国特許第６，３１２，７００号明細書、米国特許第７，５０４，１０１号明細書、米国特許第７，６２２，４４４号明細書、および米国特許第７，９５９，９２５号明細書（それら全体が参照により本明細書中に援用される）に記載されている。がん治療においてかかるアゴニストを用いる方法は、例えば国際公開第２０１３／１１９２０２号パンフレットおよび国際公開第２０１３／１３０１０２号パンフレット（各々はその全体が参照により本明細書中に援用される）に記載されている。
【００５５】
ＯＸ４０アゴニストは、限定はされないが、ＯＸ４０結合分子、例えば結合ポリペプチド、例えばＯＸ４０リガンド（「ＯＸ４０Ｌ」）またはＯＸ４０結合断片、変異体、またはそれらの誘導体、例えば可溶性細胞外リガンドドメインおよびＯＸ４０Ｌ融合タンパク質、ならびに抗ＯＸ４０抗体（例えば、ヒト化モノクローナル抗体などのモノクローナル抗体）、あるいはその抗原結合断片、変異体または誘導体を含む。抗ＯＸ４０モノクローナル抗体の例として、例えば、国際公開第９５／１２６７３号パンフレットおよび国際公開第９５／２１９１５号パンフレット（これらの開示はそれら全体が参照により本明細書中に援用される）に記載されている。特定の実施形態では、抗ＯＸ４０モノクローナル抗体は、Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，Ａ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ２９，５７５−５８５（２００６）（その全体が参照により本明細書中に援用される）に記載のとおり、９Ｂ１２、あるいはその抗原結合断片、変異体、または誘導体である。
【００５６】
９Ｂ１２は、マウスＩｇＧ１、ヒトＯＸ４０（ＣＤ１３４）の細胞外ドメインに特異的な抗ＯＸ４０ｍＡｂである（Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，Ａ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ２９，５７５−５８５（２００６））。９Ｂ１２は、ＯＸ４０シグナル伝達におけるアゴニスト応答を誘発するその能力や安定性が理由で、またハイブリドーマによるその高レベルの産生のため、抗ＯＸ４０モノクローナル抗体のパネルから選択された。臨床応用における用途では、９Ｂ１２ｍＡｂはリン酸塩緩衝生理食塩水、ｐＨ７．０で平衡化され、またその濃度はダイアフィルトレーションによって５．０ｍｇ／ｍｌに調節される。
【００５７】
ＯＸ４０アゴニストは、ＯＸ４０Ｌの１つ以上のドメインが１つ以上の追加的なタンパク質ドメインと共有結合された融合タンパク質を含む。ＯＸ４０アゴニストとして使用可能な例示的なＯＸ４０Ｌ融合タンパク質は、米国特許第６，３１２，７００号明細書（その開示はその全体が参照により本明細書中に援用される）に記載されている。一実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、多量体（例えば三量体または六量体）ＯＸ４０Ｌ融合タンパク質に自己組織化するＯＸ４０Ｌ融合ポリペプチドを含む。かかる融合タンパク質は、例えば米国特許第７，９５９，９２５号明細書（その全体が参照により本明細書中に援用される）に記載されている。多量体ＯＸ４０Ｌ融合タンパク質は、高度に安定な三量体および六量体に自発的に組織化するその能力故に、被験体、特にヒト被験体における抗原特異的免疫応答を増強する場合に増強された有効性を呈する。
【００５８】
別の実施形態では、多量体型に組織化可能なＯＸ４０アゴニストは、Ｎ末端からＣ末端方向に免疫グロブリンドメインを含む融合ポリペプチドを含み、ここで免疫グロブリンドメインは、Ｆｃドメイン、三量体化ドメイン（コイルドコイル三量体化ドメインを含む）、および受容体結合ドメイン（ＯＸ４０受容体結合ドメイン、例えば、ＯＸ４０ＬあるいはそのＯＸ４０結合断片、変異体、または誘導体である）を含み、融合ポリペプチドは、三量体融合タンパク質に自己組織化し得る。一態様では、多量体型に自己組織化可能なＯＸ４０アゴニストは、ＯＸ４０受容体に結合し、少なくとも１つのＯＸ４０媒介性活性を刺激する能力がある。特定の態様では、ＯＸ４０アゴニストは、ＯＸ４０リガンドの細胞外ドメインを含む。
【００５９】
多量体型に自己組織化可能なＯＸ４０アゴニストの三量体化ドメインは、個々のＯＸ４０Ｌ融合ポリペプチド分子の三量体タンパク質への自己組織化を促進するのに役立つ。したがって、三量体化ドメインを有するＯＸ４０Ｌ融合ポリペプチドは、三量体ＯＸ４０Ｌ融合タンパク質に自己組織化する。一態様では、三量体化ドメインは、イソロイシンジッパードメインまたは他のコイルドコイルポリペプチド構造である。例示的なコイルドコイル三量体化ドメインは、ＴＲＡＦ２（ジェンバンク（登録商標）受託番号Ｑ１２９３３、アミノ酸２９９〜３４８；トロンボスポンジン１（受託番号ＰＯ７９９６、アミノ酸２９１〜３１４；マトリリン−４（受託番号Ｏ９５４６０、アミノ酸５９４〜６１８；ＣＭＰ（マトリリン−１）（受託番号ＮＰ-００２３７０、アミノ酸４６３〜４９６；ＨＳＦ１（受託番号ＡＡＸ４２２１１、アミノ酸１６５〜１９１；およびキュビリン（受託番号ＮＰ-００１０７２、アミノ酸１０４〜１３８を含む。特定の具体的な態様では、三量体化ドメインは、ＴＲＡＦ２三量体化ドメイン、マトリリン−４三量体化ドメイン、またはそれらの組み合わせを含む。
【００６０】
特定の実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、その血清半減期を増加させるように修飾される。例えば、ＯＸ４０アゴニストの血清半減期は、血清アルブミン、抗体Ｆｃ領域、またはＰＥＧなどの異種分子への結合により増加し得る。さらに、特定の実施形態では、欠失、付加、または置換突然変異などの突然変異は、抗体または機能的部分に起こすことで、それらの半減期を改善することができる。一実施形態では、Ｆｃ領域は、次の置換、すなわちＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅ（付番はＫａｂａｔでのＥＵインデックスに対応する）の１つ、２つ、または３つ全部を含むように突然変異させてもよい。一実施形態では、Ｆｃ領域は、次の置換、すなわちＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅ（付番はＫａｂａｔでのＥＵインデックスに対応する）の全部を含むように突然変異さてもよい。Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ１ｓ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｆｏｒ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｎｅｏｎａｔａｌ  Ｆｃ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＦｃＲｎ）、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８１（３３）：２３５１４−２３５２４（２００６）。３つ全部の置換を伴う実施形態は、ＹＴＥ変異体として表される。異なる形で表現すると、一実施形態では、抗体または機能的部分は、位置２５２ＹでＹ、位置２５４ＴでＴ、および位置２５６でＥを有するＦｃ領域を有し、ここで付番はＫａｂａｔでのＥＵインデックスに対応する。
【００６１】
特定の実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、免疫複合体および／または融合タンパク質を形成するように、他の治療薬または毒素に結合させることができる。
【００６２】
特定の態様では、ＯＸ４０アゴニストは、投与を促進し、活性剤の安定性を高めるように調合することができる。特定の態様では、本開示に従う医薬組成物は、例えば生理食塩水、非毒性緩衝液、防腐剤などの薬学的に許容できる非毒性の滅菌担体を含む。本明細書に開示される治療方法での使用に適した製剤は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．）１６ｔｈ  ｅｄ．（１９８０）に記載されている。
【００６３】
望ましくは、ＯＸ４０アゴニストの投与の結果、種々のがん細胞上の抗原に対するＴリンパ球応答が増強される。その理由は、ＯＸ４０の活性化はＴリンパ球の抗原刺激と連携して機能しても、それ自体で抗原または細胞特異的でないことである。したがって、ＯＸ４０アゴニストの投与を用いて、仮想的には任意の腫瘍抗原に対する免疫応答を増強することができる。
【００６４】
投与されるべきＯＸ４０アゴニストの有効量は、周知の方法により、当業者によって決定することができる。
【００６５】
ＯＸ４０アゴニストの投与に対する臨床応答は、限定はされないが、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）スキャン、Ｘ線イメージング（ｘ−ｒａｄｉｏｇｒａｐｈｉｃ  ｉｍａｇｉｎｇ）、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、フローサイトメトリーまたは蛍光標示式細胞分取器（ＦＡＣＳ）分析、組織学、肉眼所見、および血液化学を含み、また限定はされないが、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、およびクロマトグラフィーによって検出可能な変化を含む、臨床医に公知の診断技術を用いて評価することができる。さらに、ＯＸ４０アゴニストを用いた治療を受ける被験体は、疾患に関連した症状の改善における有益な効果を経験する場合がある。
【００６６】
ＯＸ４０アゴニストの投与は、製剤の性質および患者のニーズによって決定されるような任意の利用可能な経路を介することができる。特定の実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは静脈内注入により投与される。
【００６７】
ＯＸ４０アゴニストでの免疫刺激が抗原特異的でないことを考慮すると、種々のがんは本明細書に提供される方法によって治療することができ、例えば特定の態様では、がんは固形腫瘍、またはその転移である。がんのタイプは、限定はされないが、メラノーマ、胃腸がん、腎細胞がん、前立腺がん、肺がん、またはそれらの任意の組み合わせを含む。転移の部位は、限定的ではなく、例えばリンパ節、肺、肝臓、骨、またはそれらの任意の組み合わせにおける転移を含み得る。
【００６８】
本明細書に提供されるがん治療方法は、がんワクチン、ＯＸ４０アゴニスト、およびＩＤＯ阻害剤の投与に加えて、従来または非従来のがん治療を含む。非限定例として、がんワクチン、ＯＸ４０アゴニスト、およびＩＤＯ阻害剤の投与は、手術、放射線、化学療法、免疫療法、標的化抗がん治療、ホルモン療法、またはそれらの任意の組み合わせと組み合わせることができる。
【００６９】
ＯＸ４０アゴニストを用いた効果的治療は、原発性腫瘍の部位または１つ以上の転移のいずれかにおける、例えば、がんの進行速度の低減、腫瘍または転移成長の遅延または安定化、腫瘍縮小、および／または腫瘍退縮を含む。
【００７０】
本明細書で下記に報告されるとおり、ＯＸ４０アゴニストおよびＩＤＯ阻害剤の投与により、意外にも腫瘍抗原を含む免疫原性組成物の有効性が増強される。
【００７１】
インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ阻害剤
トリプトファン（Ｔｒｐ）は、タンパク質、ナイアシンおよび神経伝達物質５−ヒドロキシトリプタン（セロトニン）の生合成にとって必要とされる必須アミノ酸である。酵素インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＮＤＯまたはＩＤＯとしても公知）は、Ｌ−トリプトファンのＮ−ホルミル−キヌレニンへの分解における最初の律速段階を触媒する。ヒト細胞においては、ＩＦＮ−ｙ刺激は、ＩＤＯの活性化を誘導し、Ｔｒｐの欠乏をもたらし、それによりＴｒｐ依存性の細胞内病原体、例えばトキソプラズマ原虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）およびクラミジア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）の成長を停止させる。ＩＤＯ活性はまた多数の腫瘍細胞に対する抗増殖性効果を有し、ＩＤＯの誘導が同種腫瘍の拒絶反応中にインビボで認められており、それはこの酵素における腫瘍拒絶過程での想定される役割を示している。
【００７２】
末梢血リンパ球（ＰＢＬ）と共培養されたヒーラ細胞がＩＤＯ活性の上方制御を介して免疫抑制性表現型を獲得することが認められている。インターロイキン−２（ＩＬ−２）を用いた治療時でのＰＢＬ増殖の低下は、ＰＢＬによるＩＦＮ−ｙの分泌に応答して腫瘍細胞によって放出されたＩＤＯに起因すると考えられた。この効果は、特定のＩＤＯ阻害剤の１−メチル−トリプトファン（１−ＭＴ）を用いた治療によって元に戻された。腫瘍細胞内でのＩＤＯ活性が抗腫瘍応答を障害するのに寄与し得ることが提起された（Ｌｏｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１０５：４７８−８７）。
【００７３】
本発明の方法において有用なＩＤＯの小分子阻害剤は、例えば１−メチル−ＤＬ−トリプトファン、ｐ−（３−ベンゾフラニル）−ＤＬ−アラニン、ｐ−［３−ベンゾ（ｂ）チエニル］−ＤＬ−アラニン、および６−ニトロ−Ｌ−トリプトファン）などのＩＤＯの阻害剤を用いてトリプトファンおよびトリプトファン代謝産物の局所細胞外濃度を変更するステップを含む、Ｔ細胞媒介性免疫を改変するための方法を報告するＰＣＴ公開の国際公開第９９／２９３１０号パンフレットに記載されている（Ｍｕｎｎ，１９９９）。インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害活性を有する化合物は、国際公開第２００４／０９４４０９号パンフレットにさらに報告されており、また米国特許出願公開第２００４／０２３４６２３号明細書は、他の治療様式と組み合わせたインドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼの阻害剤の投与により、がんまたは感染を有する被験体を治療する方法を対象としている。インドキシモド（Ｉｎｄｏｘｉｍｏｄ）、１−メチル−トリプトファンのＤ異性体、およびＮＬＧ９１９を含むＩＤＯ阻害剤は、当該技術分野で公知であり、例えばＮｅｗＬｉｎｋ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（Ａｍｅｓ，ＩＡ）から市販されている。他のＩＤＯ阻害剤は、例えば米国特許出願公開第２０１３０２８９０８３号明細書（その全体が参照により本明細書中に援用される）に記載されている。
【００７４】
抗がん免疫応答の生成
がんワクチンは、潜在的には、がんの特定型を治療するための治療薬として有用である。有利なことに、これらのワクチンは、被験体内の腫瘍で発現される特定の腫瘍抗原を標的にする免疫原性組成物を作成することにより、特定の個体のがんの治療に適合させることができる。がんワクチンは、典型的には、患者の免疫系を刺激する不活化腫瘍細胞または腫瘍抗原を含有する。免疫系は、がんを標的にする免疫応答細胞を生成することにより、この刺激に応答する。疾患の発生を予防する他の疾患用のワクチンと異なり、がんワクチンは、典型的には被験体が腫瘍を有するものと同定されてから投与される。
【００７５】
抗原ワクチンでは、免疫系を刺激するように、腫瘍特異抗原、つまり腫瘍細胞上に提示されるタンパク質が用いられる。これらの抗原を患者の癌性領域に注射することにより、免疫系は、腫瘍特異抗原を有するがん細胞を攻撃するように、抗体または細胞傷害性Ｔリンパ球を産生する。免疫系応答を改変するため、複数の抗原をこのタイプのワクチン中で用いることができる。
【００７６】
適切には、腫瘍抗原は、腫瘍特異抗原（ＴＳＡ）または腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である。数種の腫瘍抗原およびそれらの発現パターンは、当該技術分野で公知であり、治療されるべき腫瘍タイプに基づいて選択することができる。腫瘍抗原の非限定例として、αフェトプロテイン（肝細胞がん）、癌胎児性抗原（腸がん）、ｃｄｋ４（メラノーマ）、βカテニン（メラノーマ）、ＢＩＮＧ−４、ＣＡ１２５（卵巣がん）、カルシウム活性化クロライドチャネル２、癌胎児性抗原、カスパーゼ−８（扁平上皮がん）、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、サイクリン−Ｂ１、Ｅｐ−Ｃａｍ、上皮腫瘍抗原（乳がん）、ＥｐｈＡ３、フィブロネクチン、ＨＰＶ抗原、ＨＰＶ１６抗原、ＨＰＶ３６、３７、ＨＰＶ１６  Ｅ７抗原由来のＣＴＬエピトープ、ＡＲＴ−２、メラノーマ関連抗原（ＭＡＧＥ）−１およびＭＡＧＥ−３（メラノーマ、乳がん、グリオーマ）、メソセリン、ＳＡＰ−１、サバイビング（ｓｕｒｖｉｖｉｎｇ）、テロメラーゼ、チロシナーゼ（メラノーマ）、表面Ｉｇイディオタイプ（例えばＢＣＲ）（リンパ腫）、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ（乳がん、卵巣がん）、ＭＵＣ−１（乳がん、膵がん）、ＴＡＧ−７２、チロシナーゼ（メラノーマ）、およびＨＰＶ  Ｅ６およびＥ７（頸部がん）が挙げられる。さらなる好適な腫瘍抗原は、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ＲＡＳ、シアリルＴｎ（ＳＴｎ）、熱ショックタンパク質および関連腫瘍ペプチド（例えばｇｐ９６）、ガングリオシド分子（例えば、ＧＭ２、ＧＤ２、およびＧＤ３）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）およびＭＡＲＴ−１を含む。
【００７７】
典型的には、腫瘍抗原を含む免疫原性組成物は、溶液または懸濁液のいずれかとして注射剤型で調製される。注射に適した固体剤型はまた、乳剤として、またはリポソームに被包されたポリペプチドを用いて調製してもよい。１つもしくは複数の腫瘍抗原は、当該技術分野で公知の任意の好適な担体に封入して注射される。好適な担体は、典型的には、徐々に代謝される大型高分子、例えばタンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマーアミノ酸、アミノ酸共重合体、脂質凝集体、および不活性ウイルス粒子を含む。かかる担体は当業者に周知である。これらの担体はまた、アジュバントとして機能し得る。
【００７８】
アジュバントは、ワクチン有効性を増強する免疫賦活剤である。有効なアジュバントは、限定はされないが、水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムなどのアルミニウム塩、ムラミルペプチド、細菌細胞壁成分、サポニンアジュバント、および組成物の有効性を増強するための免疫賦活剤として作用する他の物質を含む。
【００７９】
免疫原性組成物（例えばがんワクチン）は、投与量処方に適合できる方法で投与される。有効量は、疾患または障害の治療または予防にとって有効である単回用量、または複数回用量スケジュールで投与されるワクチンを意味する。好ましくは、用量は腫瘍の成長を阻害するのに有効である。投与される用量は、治療されるべき被験体、被験体の健康および体調、被験体の免疫系が抗体を産生する能力、所望される防御の程度、および他の関連要素に応じて変化することになる。必要とされる活性成分の正確な量は、施術者の判断に依存することになる。
【００８０】
本明細書で下記に報告されるとおり、ＩＤＯ阻害剤（例えば１−ＭＴ）およびＯＸ４０アゴニスト（例えばＯＸ４０抗体アゴニスト）の投与により、がんワクチンの有効性が相乗的に増強される。好ましくは、腫瘍抗原を含む免疫原性組成物、ＯＸ４０抗体アゴニスト、およびＩＤＯ阻害剤の投与により、かかる作用物質単独の投与と比べて、腫瘍成長が低下または遅延するか、腫瘍退縮が誘発されるか、または患者の生存が増加する。
【００８１】
がんワクチンの使用に加えて、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導する治療法では、腫瘍抗原が抗がん免疫応答を誘導する能力がある身体に放出される。一実施形態では、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導するため、放射線を用いてもよい。したがって、本発明は、放射線療法と組み合わせてＯＸ４０アゴニストおよびインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤を投与することによる、抗がん免疫応答の誘導における腫瘍抗原の有効性を増強するための方法を提供する。別の実施形態では、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導する化学療法剤（例えば、アントラサイクリン、オキサリプラチン）は、ＯＸ４０アゴニストおよびインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤と組み合わせて投与することができる。典型的なアントラサイクリンは、限定はされないが、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、およびバルルビシンを含む。
【００８２】
本発明の実施においては、別段の指示がない限り、分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学における従来の技術が用いられ、それらは当業者が十分に理解できる範囲内にある。かかる技術は、文献、例えば、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」，ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，１９８９）；「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（Ｇａｉｔ，１９８４）；「Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ」（Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，１９８７）；「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（Ｗｅｉｒ，１９９６）；「Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ」（Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｃａｌｏｓ，１９８７）；「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」（Ａｕｓｕｂｅｌ，１９８７）；「ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ」，（Ｍｕｌｌｉｓ，１９９４）；「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（Ｃｏｌｉｇａｎ，１９９１）に十分に説明されている。これらの技術は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの生成に適用可能であり、それ故に本発明を作成し、実施する場合に検討してもよい。特定の実施形態において特に有用な技術は、以下のセクションで考察されることになる。
【００８３】
以下の実施例は、本発明のアッセイ、スクリーニング、および治療方法をいかに作成し、使用するかについての完全な開示および説明を当業者に提供するために示され、発明者が彼らの発明と見なすものの範囲を限定することを意図するものではない。
【実施例】
【００８４】
実施例１．がんワクチンおよび抗ＯＸ４０アゴニスト抗体による治療により腫瘍化マウスモデルにおける生存が増加した
がんワクチン（ＨＰＶ１６  Ｅ７抗原由来のＣＴＬエピトープ、ＰＡＤＲＥ  Ｔ−ヘルパーエピトープおよびＱｕｉｌＡアジュバント）およびＯＸ４０アゴニストを用いた治療の生存に対する効果を判定するため、腫瘍化マウスモデルにおいて試験を実施した（図１Ａ）。マウス（Ｃ５７ＢＬ６；雌、６〜８週齢）にＴＣ−１腫瘍細胞（７×１０４個、皮下）を注射した。抗ＯＸ４０抗体（クローンＯＸ８６）の投与は、ＴＣ−１細胞の注射後４日目または１０日目に開始した。腫瘍出現の初日は約１０日目であった。抗ＯＸ４０抗体は、０．５、１．０、および２．５ｍｇ／ｋｇの用量で週２回、腹腔内投与した。非治療、ワクチン単独、４日目に抗ＯＸ４０単独（０．５、１．０、および２．５ｍｇ／ｋｇ）、１０日目に抗ＯＸ４０単独（０．５、１．０、および２．５ｍｇ／ｋｇ）、４日目に抗ＯＸ４０（０．５、１．０、および２．５ｍｇ／ｋｇ）およびがんワクチン、ならびに１０日目に抗ＯＸ４０（０．５、１．０、および２．５ｍｇ／ｋｇ）およびがんワクチンを受けるマウスを含む、全部で１４のマウス群（ｎ＝５／群）に対して試験した。試験は２回繰り返した。
【００８５】
がんワクチンおよび１ｍｇ／ｋｇでの抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を投与したマウスは、がんワクチン単独または抗ＯＸ４０単独を投与したマウスと比べて生存の増加を示した（図１Ｂ）。特に、がんワクチンおよび低用量（０．５ｍｇ／ｋｇ、左上パネル）または高用量（２．５ｍｇ／ｋｇ、下パネル）での抗ＯＸ４０を投与したマウスは、生存の増加を示さなかった。がんワクチンおよび１ｍｇ／ｋｇでの抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を受けたマウスのうちの約２０％は、ＴＣ−１腫瘍細胞の注射後、約６２日目まで生存していた。抗ＯＸ４０抗体を腫瘍出現前（腫瘍移植後４日目）または腫瘍出現の初日（腫瘍移植後１０日目）に投与したとき、生存における有意差は示されなかった。
【００８６】
実施例２．がんワクチンおよび抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を用いた治療により腫瘍化マウスモデルにおける腫瘍成長が低下した
がんワクチン（ＨＰＶ１６  Ｅ７抗原由来のＣＴＬエピトープ、ＰＡＤＲＥ  ＴヘルパーエピトープおよびＱｕｉｌＡアジュバント）およびＯＸ４０アゴニストを用いた治療の腫瘍成長に対する効果を判定するため、腫瘍化マウスモデルにおいて試験を実施した（図２Ａ）。マウス（Ｃ５７ＢＬ６；雌、６〜８週齢）にＴＣ−１腫瘍細胞（７×１０４個、皮下）を注射した。抗ＯＸ４０抗体（クローンＯＸ８６）の投与は、ＴＣ−１細胞の注射後４日目または１０日目に開始した。抗ＯＸ４０抗体は、１．０および２．５ｍｇ／ｋｇの用量で週２回、腹腔内投与した。非治療、ワクチン単独、抗ＯＸ４０単独（１．０および２．５ｍｇ／ｋｇ）、ならびに抗ＯＸ４０（１．０および２．５ｍｇ／ｋｇ）およびがんワクチンを受けるマウスを含む、全部で６つのマウス群（ｎ＝５／群）に対して試験した。試験は２回繰り返した。
【００８７】
がんワクチンおよび１ｍｇ／ｋｇでの抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を投与したマウスは、がんワクチン単独（図２Ｂ：左下パネル）または抗ＯＸ４０単独（図２Ｂ：中上パネル、右上パネル）を投与したマウスと比べて、腫瘍体積の低下および／または腫瘍成長の遅延を示した（図２Ｂ：中下パネル）。他の結果（例えば図１Ｂを参照）と一致して、がんワクチンおよび高用量（２．５ｍｇ／ｋｇ）での抗ＯＸ４０を投与されたマウスは、腫瘍成長に対して、がんワクチンおよび１ｍｇ／ｋｇでの抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を受けたマウスと同じ効果を示さなかった（図２Ｂ：右下パネル）。したがって、がんワクチンおよび１ｍｇ／ｋｇでの抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を用いた治療により、マウスにおける腫瘍成長が阻害された。
【００８８】
実施例３．がんワクチンおよび抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を用いた治療により腫瘍化マウスモデルにおける腫瘍内部のＣＤ８／Ｔｒｅｇ比が増加した
がんワクチン（ＨＰＶ１６  Ｅ７抗原由来のＣＴＬエピトープ、ＰＡＤＲＥ  ＴヘルパーエピトープおよびＱｕｉｌＡアジュバント）およびＯＸ４０アゴニストを用いた治療の免疫応答に対する効果を判定するため、腫瘍化マウスモデルにおいて試験を実施した（図３Ａ）。マウス（Ｃ５７ＢＬ６；雌、６〜８週齢）にＴＣ−１腫瘍細胞（７×１０４個、皮下）を注射した。抗ＯＸ４０抗体（クローンＯＸ８６）の投与は、ＴＣ−１細胞の注射後１０日目に開始した。抗ＯＸ４０抗体は、０．５、１．０、または２．５ｍｇ／ｋｇの用量で週２回、腹腔内投与した。非治療、ワクチン単独、抗ＯＸ４０単独（０．５および１．０ｍｇ／ｋｇ）、ならびに抗ＯＸ４０（０．５、１．０、および２．５ｍｇ／ｋｇ）およびがんワクチンを受けるマウスを含む、全部で８つのマウス群（ｎ＝５／群）に対して試験した。試験は２回繰り返した。図３Ｂおよび３Ｃは、様々な用量のＯＸ４０の単独またはワクチンと組み合わせたもののＣＤ８Ｔ細胞、Ｅ７特異的ＣＤ８Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ細胞、およびＣＤ８／Ｔｒｅｇ比に対する効果を示す。
【００８９】
実施例４．がんワクチンおよび抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を用いた治療により腫瘍化マウスモデルにおける抗原特異的免疫応答が刺激された
がんワクチン（ＨＰＶ１６  Ｅ７抗原由来のＣＴＬエピトープ、ＰＡＤＲＥ  ＴヘルパーエピトープおよびＱｕｉｌＡアジュバント）およびＯＸ４０アゴニストを用いた治療の免疫応答に対する効果を評価するため、腫瘍化マウスモデルにおいて試験を実施した（図４Ａ）。マウス（Ｃ５７ＢＬ６；雌、６〜８週齢）にＴＣ−１腫瘍細胞（７×１０４個、皮下）を注射した。抗ＯＸ４０抗体（クローンＯＸ８６）の投与は、ＴＣ−１細胞の注射後１０日目に開始した。抗ＯＸ４０抗体は、１．０、１．７５、または２．５ｍｇ／ｋｇの用量で週２回、腹腔内投与した。非治療および抗ＯＸ４０単独（１．０、１．７５、および２．５ｍｇ／ｋｇ）を受けるマウスを含む、全部で４つのマウス群（ｎ＝５／群）に対して試験した。試験は２回繰り返した。
【００９０】
すべての用量での抗ＯＸ４０抗体を用いた治療後、脾臓（図４Ｂ：左上パネル）または腫瘍（図４Ｃ：右上パネル）におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率または数に対する効果は検出されなかった。３つすべての用量で、脾臓内（図４Ｂ、右上パネル）および腫瘍内部（図４Ｃ、右上パネル）の非Ｔｒｅｇ  ＣＤ４Ｔ細胞（ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３−）が有意に増加した。抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を受けたマウスは、治療を受けていないマウスと比べて、類似レベルのＴｒｅｇ細胞を有した（ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋；図４Ｂ：下パネル）。しかし、抗ＯＸ４０を受けたマウスは、抗ＯＸ４０の用量増加に伴い、腫瘍浸潤性Ｔｒｅｇ細胞のレベルの増加を示した（図４Ｃ：下パネル）。特定の理論に拘束されない限り、腫瘍浸潤性Ｔｒｅｇ細胞の増加は、２．５ｍｇ／ｋｇの抗ＯＸ４０抗体ががんワクチンとともに用いられる場合に治療効果が失われることを説明し得る。
【００９１】
実施例５．がんワクチン、抗ＯＸ４０アゴニスト抗体、およびインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤を用いた治療により、腫瘍化マウスモデルにおいて腫瘍成長が低下し、生存が増加した
ＨＰＶ−１６由来のＥ７腫瘍性タンパク質を発現するマウス腫瘍ＴＣ−１を、ＨＰＶ−１６を感染させたヒト腫瘍における代替として用いる。０日目、マウス（Ｃ５７ＢＬ６；雌、６〜８週齢）にＴＣ−１腫瘍細胞（７×１０４個、皮下）を注射した。抗ＯＸ４０抗体（クローンＯＸ８６）の投与は、ＴＣ−１細胞の注射後１０日目に開始した。抗ＯＸ４０抗体は、１．０ｍｇ／ｋｇで週２回、腹腔内投与した。１０日目以降、１−メチル−トリプトファン（１−ＭＴ）をマウスに、１−ＭＴ（２ｍｇ／ｍＬ）をその飲料水に添加することによって投与した。非治療、抗ＯＸ４０単独（１．０ｍｇ／ｋｇ）、１−ＭＴ単独、抗ＯＸ４０および１−ＭＴ、がんワクチン単独、がんワクチンおよび抗ＯＸ４０（１．０ｍｇ／ｋｇ）、がんワクチンおよび１−ＭＴ、ならびにがんワクチン、抗ＯＸ４０、および１−ＭＴを受けるマウスを含む、全部で８つのマウス群（ｎ＝５／群）に対して試験した。
【００９２】
腫瘍化マウスモデルにおいて、がんワクチン、抗ＯＸ４０アゴニスト抗体（１ｍｇ／ｋｇ）、および１−ＭＴを受けたマウスでは、がんワクチンおよび抗ＯＸ４０（図５Ｂ：パネルｆ）またはがんワクチンおよび１−ＭＴ（図５Ｂ：パネルｇ）を受けたマウスを含む他のマウス群と比べて、腫瘍成長が有意に阻害され、および／または遅延した（図５Ｂ：パネルｈ）。がんワクチン、抗ＯＸ４０アゴニスト抗体、および１−ＭＴを受けたマウスの内、マウス２匹が、ＴＣ−１腫瘍細胞の注射後約３５日目で腫瘍体積の完全な低下を示した。がんワクチン、抗ＯＸ４０アゴニスト抗体（１ｍｇ／ｋｇ）（赤）、およびＭＴ−１を受けたマウスは、がんワクチンおよび抗ＯＸ４０（青）またはがんワクチンおよび１−ＭＴ（緑）を受けたマウスを含む他のマウス群と比べて、生存が増加していた（図５Ｃ）。これらのマウスでは、ＴＣ−１腫瘍細胞の注射後約５５日目までで、最大約８０％の生存が認められた。それに対し、先の結果（例えば図１Ｂを参照）と一致して、がんワクチンおよび抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を受けた約２０％のマウスが、ＴＣ−１腫瘍細胞の注射後約５５日目まで生存していた。マウスの腫瘍成長の阻害と生存は相関した（図５Ｄ）。したがって、がんワクチンおよび抗ＯＸ４０を用いた治療への１−ＭＴの添加により、治療の治療効力の有意な増強がもたらされた（例えば、完全な退縮が６０％対２０％）。本明細書で示された結果によると、がんワクチンと組み合わせたＯＸ４０アゴニストおよびＩＤＯ阻害剤の使用が、がんワクチンの有効性を増強する可能性を有することが示される。
【００９３】
本明細書での上記の結果は、以下の材料および方法を用いて実施した。
【００９４】
マウス（Ｃ５７ＢＬ６；雌、６〜８週齢）は、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ）から入手し、病原体を含まない条件下で保存した。
【００９５】
ヒト乳頭腫ウイルス株１６（ＨＰＶ１６）初期タンパク質６および７（Ｅ６およびＥ７）ならびに活性化ｒａｓ癌遺伝子の一次Ｃ５７ＢＬ／６マウス肺上皮細胞への同時トランスフェクションによって誘導されたＴＣ−１細胞は、アメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手した。ＴＣ−１細胞は、５％ＣＯ２下、摂氏３７度で１０％ＦＢＳ、ペニシリンおよびストレプトマイシン（各々１００Ｕ／ｍｌ）ならびにＬ−グルタミン（２ｍＭ）を添加したＲＰＭＩ１６４０中で成長させた。
【００９６】
ワクチンは、Ｅ７抗原由来のＣＴＬエピトープ（Ｅ７４９-５７、９−ｍｅｒペプチド（ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ））をＰＡＤＲＥ１３−ｍｅｒのＴヘルパーエピトープ（ａＫＣｈａＶＡＡＷＴＬＫＡＡａ）（双方はＣｅｌｔｅｋ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｎａｓｈｖｉｌｌｅ，ＴＮ）製）およびＱｕｉｌＡアジュバント（Ｂｒｅｎｎｔａｇ，Ｄｅｎｍａｒｋ）と混合させたものからなる。抗ＯＸ４０抗体（クローンＯＸ８６）はＭｅｄｉｍｍｕｎｅによって提供された。１−メチル−Ｄ−トリプトファン（１−ＭＴ）はＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から入手した。
【００９７】
腫瘍成長および生存の分析がエンドポイントである場合の実験では、０日目、マウス（ｎ＝５／群）に７０，０００個のＴＣ−１細胞を移植した。抗ＯＸ４０抗体（１ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を、腫瘍移植後の４日目または１０日目のいずれかに注射した。全マウスが約３〜４ｍｍの直径の腫瘍を有した１０日目、適切な群からの動物にワクチンを皮下注射した（Ｅ７−１００μｇ／マウス、ＰＡＤＲＥ−２０μｇ／マウス、ＱｕｉｌＡ−１０μｇ／マウス）。適切な群からのマウスに飲料水中の１−ＭＴ（２ｍｇ／ｍｌ）を、やはり実験全体を通して腫瘍移植後１０日目から供給した。マウスは実験全体を通して毎週ワクチンで治療し、抗ＯＸ４０抗体を週２回投与した。腫瘍は３〜４日毎にデジタル式キャリパーを用いて測定し、また腫瘍体積は式Ｖ＝（Ｗ２×Ｌ）／２（式中、Ｖは体積、Ｌは長さ（長い方の直径）、またＷは幅（短い方の直径）である）を用いて算出した。これらの実験では、マウスは、瀕死状態になったか、腫瘍が潰瘍化したか、または腫瘍体積が１．５ｃｍ３に達したとき、屠殺した。
【００９８】
他の実施形態
前述の説明から、変化および修飾は、本明細書に記載の本発明に、それを様々な使用および条件に利用するために加えてもよいことは明らかになるだろう。かかる実施形態はまた、以下の特許請求の範囲の範囲内に含まれる。
【００９９】
本明細書中の変数の任意の定義における要素リストの列挙は、リスト化された要素の任意の単一の要素または組み合わせ（またはサブコンビネーション）としての同変数の定義を含む。本明細書中の実施形態の列挙は、任意の単一の実施形態あるいは任意の他の実施形態またはそれらの部分と組み合わせたものとしての同実施形態を含む。
【０１００】
本明細書中に記載のすべての特許および出版物は、あたかも各々の独立した特許および出版物が詳細かつ個別に参照により援用されるように示されるのと同程度に、参照により本明細書に援用される。
本発明は以下の態様も提供する。
[１]被験体内の腫瘍抗原に対する免疫応答を増強するための方法であって、ＯＸ４０アゴニスト、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、および腫瘍抗原を含む免疫原性組成物を前記被験体に投与するステップを含み、それにより前記腫瘍抗原に対する前記被験体の免疫応答を前記免疫原性組成物単独の投与と比べて増強する、方法。
[２]被験体における腫瘍成長を遅延または低下させるための方法であって、ＯＸ４０アゴニスト、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、および腫瘍抗原を含む免疫原性組成物を前記被験体に投与するステップを含み、それにより前記被験体における腫瘍成長を未治療対照被験体と比べて遅延または低下させる、方法。
[３]被験体内の腫瘍抗原に対する免疫応答を増強するための方法であって、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導するのに十分な放射線または化学療法薬、ＯＸ４０アゴニスト、およびインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤を前記被験体に施すステップを含み、それにより前記腫瘍抗原に対する前記被験体の免疫応答を前記放射線または化学療法薬単独を施す場合と比べて増強する、方法。
[４]被験体における腫瘍成長を遅延または低下させるための方法であって、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導するのに十分な放射線または化学療法薬、ＯＸ４０アゴニスト、およびインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤を前記被験体に施すステップを含み、それにより前記被験体における腫瘍成長を未治療対照被験体と比べて遅延または低下させる、方法。
[５]前記被験体の腫瘍内部のＣＤ８+Ｔ細胞対制御性Ｔ細胞比を増加させる、[１]〜[４]のいずれか一項に記載の方法。
[６]投与されるＯＸ４０アゴニストの量が、前記被験体の腫瘍内部のＣＤ８+Ｔ細胞対制御性Ｔ細胞比を増加させるのに十分である、[１]〜[４]のいずれか一項に記載の方法。
[７]投与されるＯＸ４０アゴニストの量が、前記被験体内の腫瘍浸潤性制御性Ｔ細胞を増加させない程度に十分に低い、[１]〜[４]のいずれか一項に記載の方法。
[８]被験体内の腫瘍内部のＣＤ８+Ｔ細胞対制御性Ｔ細胞比を増加させるための方法であって、有効量のＯＸ４０アゴニスト、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、および腫瘍抗原を含む免疫原性組成物を前記被験体に投与するステップを含み、それにより前記腫瘍での前記ＣＤ８／Ｔｒｅｇ比を増加させる、方法。
[９]被験体内の腫瘍内部のＣＤ８+Ｔ細胞対制御性Ｔ細胞比を増加させるための方法であって、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導するのに十分な放射線または化学療法薬、有効量のＯＸ４０アゴニスト、およびインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤を前記被験体に施すステップを含み、それにより前記腫瘍での前記ＣＤ８／Ｔｒｅｇ比を増加させる、方法。
[１０]投与されるＯＸ４０アゴニストの前記有効量が、前記被験体内の腫瘍浸潤性Ｔｒｅｇ細胞を増加させない程度に十分に低い、[１]〜[９]のいずれか一項に記載の方法。
[１１]前記投与により、前記被験体の抗腫瘍免疫応答が前記免疫原性組成物単独の投与と比べて増強される、[１]〜[９]のいずれか一項に記載の方法。
[１２]前記インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤が、１−メチルトリプトファン（１−ＭＴ）、１−メチル−トリプトファンのＤ異性体、またはＮＬＧ９１９である、[１]〜[１１]のいずれか一項に記載の方法。
[１３]前記ＩＤＯ阻害剤が１−ＭＴである、[１２]に記載の方法。
[１４]前記ＯＸ４０アゴニストがＯＸ４０に特異的に結合する、[１]〜[１３]のいずれか一項に記載の方法。
[１５]前記ＯＸ４０アゴニストが、ＯＸ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である、[１]〜[１４]のいずれか一項に記載の方法。
[１６]前記抗体またはその抗原結合断片がモノクローナル抗体である、[１５]に記載の方法。
[１７]前記抗体またはその抗原結合断片がキメラ抗体である、[１６]に記載の方法。
[１８]前記抗体またはその抗原結合断片がヒト化抗体である、[１６]に記載の方法。
[１９]前記抗体またはその抗原結合断片がｍＡｂ９Ｂ１２と同じＯＸ４０エピトープに結合する、[１６]に記載の方法。
[２０]前記腫瘍抗原が、αフェトプロテイン、癌胎児性抗原、ｃｄｋ４、βカテニン、ＣＡ１２５、カスパーゼ−８、上皮腫瘍抗原、ＨＰＶ抗原、ＨＰＶ１６抗原、ＨＰＶ１６  Ｅ７抗原由来のＣＴＬエピトープ、メラノーマ関連抗原（ＭＡＧＥ）−１、ＭＡＧＥ−３、チロシナーゼ、表面Ｉｇイディオタイプ、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ、ＭＵＣ−１、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、シアリルＴｎ（ＳＴｎ）、熱ショックタンパク質、ｇｐ９６、ガングリオシド分子ＧＭ２、ＧＤ２、ＧＤ３、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）およびＭＡＲＴ−１からなる群から選択される、[１]〜[１６]のいずれか一項に記載の方法。
[２１]腫瘍抗原の量が、前記被験体における抗がん免疫応答を誘導するのに十分である、[２０]に記載の方法。
[２２]前記被験体におけるＴリンパ球活性を刺激する、[２０]に記載の方法。
[２３]前記免疫原性組成物がアジュバントをさらに含む、[１]〜[２２]のいずれか一項に記載の方法。
[２４]前記被験体が、ＨＰＶ関連癌、頸部がん、陰茎がん、肛門がん、頭頸部の扁平上皮がんおよび外陰部のがんからなる群から選択されるがんを有する、[１]〜[２３]のいずれか一項に記載の方法。
[２５]被験体の生存を、前記免疫原性組成物単独の投与を受けた被験体と比べて少なくとも１０％、２０％、または３０％増加させる、[１]〜[２４]のいずれか一項に記載の方法。
[２６]腫瘍成長を未治療対照被験体における腫瘍成長と比べて少なくとも約２０％低下させるかまたは腫瘍退縮を誘導する、[１]〜[２５]のいずれか一項に記載の方法。
[２７]前記被験体がヒト患者である、[１]〜[２５]のいずれか一項に記載の方法。
[２８]前記免疫原性組成物ががんワクチンである、[１]〜[２５]のいずれか一項に記載の方法。
[２９]前記化学療法薬が、アントラサイクリンまたはオキサリプラチンからなる群から選択される、[１]〜[２８]のいずれか一項に記載の方法。
[３０]前記アントラサイクリンが、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、またはバルルビシンである、[１]〜[２９]のいずれか一項に記載の方法。
[３１]被験体におけるＨＰＶ腫瘍抗原に対する免疫応答を増強するための方法であって、ｍＡｂ９Ｂ１２と同じＯＸ４０エピトープに結合するアゴニストＯＸ４０抗体、１−ＭＴ、ならびにＨＰＶ１６抗原およびアジュバントを含む免疫原性組成物を前記被験体に投与するステップを含み、それにより前記腫瘍抗原に対する前記被験体の免疫応答を前記免疫原性組成物単独の投与と比べて増強する、方法。
[３２]被験体におけるＨＰＶ関連癌を治療するための方法であって、ｍＡｂ９Ｂ１２と同じＯＸ４０エピトープに結合するアゴニストＯＸ４０抗体、１−ＭＴ、ならびにＨＰＶ１６抗原およびアジュバントを含む免疫原性組成物を前記被験体に投与するステップを含み、前記被験体におけるＨＰＶ関連癌を治療する、方法。
[３３]前記被験体の腫瘍内部のＣＤ８+Ｔ細胞対制御性Ｔ細胞比の比を増加させる、[３１]または[３２]に記載の方法。
[３４]投与されるＯＸ４０アゴニストの量が、前記被験体の腫瘍内部の前記ＣＤ８+Ｔ細胞対制御性Ｔ細胞比を増加させるのに十分である、[３１]または[３２]に記載の方法。
[３５]投与されるＯＸ４０アゴニストの量が、前記被験体内の腫瘍浸潤性Ｔｒｅｇ細胞を増加させない程度に十分に低い、[３１]または[３２]に記載の方法。
[３６]前記投与により、前記被験体の抗腫瘍免疫応答が前記免疫原性組成物単独の投与と比べて増強される、[３１]または[３２]に記載の方法。
[３７]前記投与が静脈内注入によるものである、[１]〜[３６]のいずれか一項に記載の方法。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ−１】
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【図５Ｂ−２】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【配列表】
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