(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
足臭の発生を抑制するための足臭抑制剤のスクリーニング方法であって、
（１）イソ吉草酸アルデヒドの産生能を有する微生物を、被験物質およびＬ−ロイシンを含有する培地で培養するステップ、
（２）前記ステップ（１）で得られた培養物におけるイソ吉草酸アルデヒドの量を測定することにより、被験物質がイソ吉草酸アルデヒドの生成を抑制するかどうかを判定するステップ、および
（３）前記ステップ（２）において、イソ吉草酸アルデヒドの生成を抑制する被験物質を、足臭抑制剤として選択するステップ
を含む、足臭抑制剤のスクリーニング方法。
【請求項２】
前記微生物がStaphylococcus.aureus、Staphylococcus.epidermidisおよびCorynebacterium.minutissimumからなる群より選ばれた少なくとも１種である請求項１に記載の足臭抑制剤のスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、足臭判定用指標剤、当該指標剤を用いる足臭判定方法、当該指標剤を用いるデオドラント剤の評価方法、およびスクリーニング方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
足臭（足の不快な臭気）は、皮脂、蛋白質（角質）、汗等の有機物質が、靴の中で繁殖する細菌類によって分解されて発生するものである。足臭は、足が履物の内側に取り囲まれ、汗をかく時に発生する。足は身体の他の部分よりも汗腺が多いため、過剰に汗をかき、産生された汗は履物の中に足が取り囲まれていることに起因して蒸発することができない。従って、足臭は継続的に揮発して臭気を発し、靴下や靴にも付着する。
特許文献１および２には、その足臭の主たる原因物質がイソ吉草酸であると考えられていること、およびイソ吉草酸はＬ−ロイシンの酵素的変換により主に生成されることが記載されている。
【０００３】
イソ吉草酸の類縁物質であるイソ吉草酸アルデヒドについては、足臭に関連する報告は今までなされたことがない。足臭以外の臭いについては、特許文献３および４に以下の通り報告されている。
特許文献３には、メタンチオール、プロパンチオール、ジメチルスルフィド、ジメチルジスルフィド、トリメチルアミン、ジアセチル、アセトインおよび３−メチルブタナール（イソ吉草酸アルデヒド）が、経血臭または生理臭への寄与度の高い成分であると記載されている。
特許文献４には、非水系皮膚外用製品が微生物に汚染して発生する臭いの成分を分析した結果、イソ吉草酸、イソバレルアルデヒド（イソ吉草酸アルデヒド）、アセトイン、酢酸、酪酸等が大幅に増加していたことが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００３−２４４２２
【特許文献２】特表２００９−５０８４７８
【特許文献３】特開２００７−１９８８２９
【特許文献４】特開２０１４−１５０７５８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
足臭の原因物質として知られているイソ吉草酸では、足臭の強度はイソ吉草酸を指標にしても正確に評価できない。そこで、足臭の強度を、より客観的に判定する方法が望まれていた。従って、本発明の課題は、足臭を客観的に判定する方法、およびその方法に用いる足臭判定用指標剤を提供することにある。また、本発明の課題は、その判定方法を用いてデオドラント剤の性能を簡便な操作で客観的かつ的確に評価することができるデオドラント剤の評価方法を提供することにある。さらに、本発明の課題は、その評価方法を用いて足臭抑制剤を簡便な操作で効率よくスクリーニングすることができる足臭抑制剤のスクリーニング方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、足臭の強度を客観的に評価する方法につき鋭意検討したところ、意外にも足臭の強度はイソ吉草酸の量ではなく、イソ吉草酸アルデヒドの量に強く相関することを見出した。特に、弱い足臭では、イソ吉草酸が発生していないにもかかわらず不快な足臭を発する場合がある。そのような弱い足臭の状況においても、イソ吉草酸アルデヒドは発生しており、イソ吉草酸アルデヒドの量によって、弱い足臭まで評価できることを見出した。本発明は、かかる知見に基づくものであり、具体的には、本発明は以下の通りである。
【０００７】
［１］  イソ吉草酸アルデヒドを含有する足臭判定用指標剤。
［２］  ［１］に記載の足臭判定用指標剤を用いる足臭判定方法。
［３］  足の皮膚に存在するサンプルを採取し、得られたサンプル中に含まれるイソ吉草酸アルデヒドの量を測定し、前記イソ吉草酸アルデヒドの量によって足臭の強度を判定する、［２］に記載の足臭判定方法。
［４］  デオドラント剤の適用箇所に存在するサンプルを採取し、前記サンプル中に含まれるイソ吉草酸アルデヒドの量を測定し、前記イソ吉草酸アルデヒドの量によってデオドラント剤の性能を評価する、デオドラント剤の評価方法。
【０００８】
［５］  イソ吉草酸アルデヒドに起因する足臭の発生を抑制するための足臭抑制剤のスクリーニング方法であって、
（１）イソ吉草酸アルデヒドの産生能を有する微生物を、被験物質およびＬ−ロイシンを含有する培地で培養するステップ、
（２）前記ステップ（１）で得られた培養物における前記微生物の生菌数、および／または前記イソ吉草酸アルデヒドの量を測定することにより、被験物質がイソ吉草酸アルデヒドの生成を抑制するかどうかを判定するステップ、および
（３）前記ステップ（２）において、イソ吉草酸アルデヒドの生成を抑制する被験物質を、足臭抑制剤として選択するステップ
を含む、足臭抑制剤のスクリーニング方法。
［６］  前記微生物がStaphylococcus.aureus、Staphylococcus.epidermidisおよびCorynebacterium.minutissimumからなる群より選ばれた少なくとも１種である［５］に記載の足臭抑制剤のスクリーニング方法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の足臭判定用指標剤および足臭判定方法によって、弱い足臭から強い足臭まで広い範囲で、足臭を客観的に評価することができる。弱い足臭の評価が可能になることで、将来の足臭の増幅を予想することも可能になる。また、本発明のデオドラント剤の評価方法によって、デオドラント剤の足臭の消臭効果、デオドラント剤の性能を簡便な操作で客観的かつ的確に評価することが可能になる。また、本発明の足臭抑制剤のスクリーニング方法によって、足臭抑制剤を簡便な操作で効率よくスクリーニングすることが可能になる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】実施例１における、１０名の被験者の足臭の強度とイソ吉草酸アルデヒドの量の関係を示すグラフである。
【図２】実施例１における、１０名の被験者の足臭の強度とイソ吉草酸の量の関係を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
１．足臭判定用指標剤
本発明の足臭判定用指標剤は、イソ吉草酸アルデヒドからなる。本発明の足臭判定用指標剤は、通常イソ吉草酸アルデヒドを有するものからなるが、そのハンドリング性を高めるため、水、メタノール、エタノール、エーテル、イソプロパノール、ジクロロメタン、プロピレングリコール等の溶剤に溶解又は希釈させて用いることもできる。また、必要に応じて、安定剤、殺菌剤、抗菌剤、界面活性剤、酸化防止剤、香料、植物抽出物等の添加剤を添加することができる。足臭の強度を評価する時に用いる溶媒は、特に限定されないが、例えば、無臭で、不揮発性の溶媒である点でプロピレングリコールなどを利用すると足臭の強度をより正確に評価することができる点で優れている。
実施例１に示すように、足臭の強度はイソ吉草酸アルデヒドの量に強く相関する。従って、イソ吉草酸アルデヒドを指標とすることで、弱い足臭から強い足臭まで広い範囲で、足臭を客観的に評価することができる。
そこで、本発明のイソ吉草酸アルデヒドからなる足臭判定用指標剤は、足臭の客観的な判定、足臭の消臭効果または防臭効果の評価、デオドラント剤の評価、足臭抑制剤のスクリーニング等に有用である。
【００１２】
２．足臭判定方法
本発明の足臭判定用指標剤を用いて足臭の強度を判定することができる。
本発明の足臭判定方法は、例えば、足の皮膚に存在するサンプルを採取し、得られたサンプル中に含まれるイソ吉草酸アルデヒドの量を測定し、前記イソ吉草酸アルデヒドの量によって足臭の強度を判定することで実施される。
本発明の足臭判定方法は、足臭判定用指標剤の量を足臭の指標として用いて足臭の判定を行うため、簡便な操作で客観的かつ的確に、被験者の足臭の強度を判定することができる。
【００１３】
前記の足の皮膚に存在するサンプルの採取は、例えば、
（ａ）被験者の足の皮膚のヘッドスペースガスを採取すること、
（ｂ）被験者の足の皮膚に試験片を接触させ、前記試験片に付着したサンプルを抽出すること、
（ｃ）被験者が一定期間着用した靴下に付着したサンプルを抽出すること、および
（ｄ）被験者の足の皮膚に溶媒を接触させ、前記溶媒によって皮膚に存在するサンプルを抽出すること等によって行うことができる。
前記試験片としては、例えば、綿製シート、セルロース製シート、ポリエチレン製シート、ポリエチレンテレフタレート製シートなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。
サンプルの採取としては、（ａ）〜（ｄ）の採取方法が挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されない。また、（ａ）〜（ｄ）の採取方法は、どれか一つの方法を使用してもよいし、幾つかの方法を組合わせてサンプルを採取してもよい。簡便である点で、（ｂ）および（ｃ）の試験片に付着したサンプルを用いる方法が好ましい。
【００１４】
イソ吉草酸アルデヒドの量の測定方法としては、例えば、ガスクロマトグラフ−質量分析法、ガスクロマトグラフ−水素炎イオン検出法、ガスクロマトグラフ−電子捕獲式検出法、高速液体クロマトグラフ−紫外可視分光法、高速液体クロマトグラフ−質量分析法、半導体センサを用いた検出法等が挙げられ、好ましくは、ガスクロマトグラフ−質量分析法が挙げられる。例えば、ガスクロマトグラフ−質量分析法では、クロマトグラムにおけるイソ吉草酸アルデヒドのピーク高さまたはピーク面積の数値を用いてイソ吉草酸アルデヒドの量を算出することができる。
また、足臭の官能評価の場合は、平均評点が０．５未満の場合には「足臭はなし」、平均評点０．５以上〜２未満の場合には「足臭は弱い」、平均評点２以上〜３.５未満の場合には「足臭は中程度」、平均評点３.５以上の場合は「足臭は強い」と判断することができる。
【００１５】
３．デオドラント剤の評価方法
本発明のデオドラント剤の評価方法は、デオドラント剤の適用箇所に存在するサンプルを採取し、前記サンプル中に含まれるイソ吉草酸アルデヒドの量を測定し、前記イソ吉草酸アルデヒドの量によってデオドラント剤の性能を評価することで実施される。
すなわち、本発明のデオドラント剤の評価方法は、本発明の足臭判定用指標剤を用いて、イソ吉草酸アルデヒドの量に基づいてデオドラント剤の性能の評価を行うため、簡便な操作で客観的かつ的確にデオドラント剤を評価することができる。
本明細書において、「デオドラント剤」としては、足の皮膚に直接塗布するデオドラント剤、および靴下、靴等の足臭が付着する物に適用するデオドラント剤のいずれも含まれる。また、デオドラント剤の適用箇所としては、例えば、足の皮膚、靴下、靴等が挙げられる。
【００１６】
デオドラント剤の適用量としては、デオドラント剤としての効果を奏するであろうと思われる量を中心に複数の適応量を試験することが好ましい。
前記適用箇所へのデオドラント剤の接触時間は、適用箇所の種類、デオドラント剤の種類、デオドラント剤の使用量、デオドラント剤に含まれる有効成分の量などによって異なるが、例えば、１〜７２時間、より好ましくは３〜２４時間等が挙げられる。
前記デオドラント剤の適用箇所に存在するサンプルの採取は、例えば、
（ａ）前記デオドラント剤の適用箇所のヘッドスペースガスを採取すること、
（ｂ）前記デオドラント剤の適用箇所に試験片を接触させ、前記試験片に付着した物質を抽出すること、および
（ｃ）前記デオドラント剤の適用箇所に直接溶媒を加え、適用箇所に存在する物質を抽出すること等により、行うことができる。
【００１７】
前記デオドラント剤の適用箇所に存在するサンプル中に含まれるイソ吉草酸アルデヒドの量の測定方法は、前記の足臭判定方法におけるイソ吉草酸アルデヒドの量の測定方法と同様に行うことができる。
本発明のデオドラント剤の評価方法では、デオドラント剤の適用前の皮膚から採取したサンプル中に含まれるイソ吉草酸アルデヒドの量と前記デオドラント剤の適用箇所に存在するサンプル中に含まれるイソ吉草酸アルデヒドの量との差異などにより、デオドラント剤の性能を評価することができる。例えば、デオドラント剤によって前記足臭判定用指標剤の量が低減する場合、デオドラント剤が足臭の消臭効果および／または防臭効果を有すると判定することができる。また、前記のようにデオドランド剤の適用前後での比較ではなく、デオドランド剤の適用部位と非適用部位を比較することで、デオドラント剤の性能を評価することができる。例えば、一方の足にデオドラント剤を適用して、もう一方の足にはデオドランド剤を適用せずに、それぞれの足から採取したサンプル中に含まれるイソ吉草酸アルデヒドの量の差異などにより、デオドラント剤の性能を評価することができる。
【００１８】
４．足臭抑制剤のスクリーニング方法
本発明のイソ吉草酸アルデヒドに起因する足臭の発生を抑制するための足臭抑制剤のスクリーニング方法は、
（１）イソ吉草酸アルデヒドの産生能を有する微生物を、被験物質およびＬ−ロイシンを含有する培地で培養するステップ、
（２）前記ステップ（１）で得られた培養物における前記微生物の生菌数および／または前記イソ吉草酸アルデヒドの量を測定することにより、被験物質がイソ吉草酸アルデヒドの生成を抑制するかどうかを判定するステップ、および
（３）前記ステップ（２）において、イソ吉草酸アルデヒドの生成を抑制する被験物質を、足臭抑制剤として選択するステップ
を含む工程によって実施される。
【００１９】
ステップ（１）では、前記微生物を、被験物質およびＬ−ロイシンを含有する培地で培養して、培養物（培養物Ａ）を得る。
実施例２に記載の通り、足の皮膚に存在しうる皮膚常在微生物を、Ｌ−ロイシンを含有する培地で培養することで、イソ吉草酸アルデヒドが生成することを、本発明者らは見出した。すなわち、イソ吉草酸アルデヒドは、皮膚の角質に存在する蛋白質が微生物によって加水分解されて生成されるＬ−ロイシンから、皮膚常在微生物の作用によって生成されることが明らかとなった。従って、ステップ（１）は、足臭が発生する状況を完全に反映したものであって、ステップ（１）において、被験物質が存在することでイソ吉草酸アルデヒドの量が減少すれば、当該被験物質は足臭抑制剤としての効果を有すると判断することができる。
【００２０】
前記微生物は、イソ吉草酸アルデヒドの産生能を有するものであればよく、例えば、皮膚常在微生物、土壌微生物、腸内常在微生物、発酵食品に用いられる微生物などが挙げられる。前記微生物としては、足臭を抑制するのにより適した足臭抑制剤をスクリーニングする観点から、皮膚常在微生物が好ましい。皮膚常在微生物としては、例えば、Staphylococcus.epidermidis、Staphylococcus.warneri A、Staphylococcus.warneri B、Staphylococcus.caprae B、Staphylococcus.haemolyticus、Staphylococcus.capitis A、Staphylococcus.capitis B、Staphylococcus.lentus、Staphylococcus.gallinarum、Staphylococcus.delphini、Staphylococcus.aureus、Staphylococcus.hominis、Staphylococcus.xylosus、Staphylococcus.hyicus、Staphylococcus.cohnii、Corynebacterium.minutissimum、Corynebacterium.xerosis、Corynebacterium.tenuis、Micrococcus等が挙げられる。
【００２１】
被験物質としては、例えば、Ｌ−ロイシンからイソ吉草酸アルデヒドまでの変換経路のいずれの段階での変換を阻害するもの、イソ吉草酸アルデヒドを分解させるもの、イソ吉草酸アルデヒドの構造を変化させるもの、イソ吉草酸アルデヒドを吸収または吸着するもの等が挙げられる。
被験物質の適用量としては、足臭抑制剤としての効果を奏するであろうと思われる量を中心に複数の適応量を試験することが好ましい。
前記培地におけるＬ−ロイシンの含有率としては、実際の足臭が発生する際の条件を再現する観点から、例えば、０．０１〜５重量％、好ましくは０．１〜２重量％が挙げられる。
【００２２】
用いる培地としては、前記微生物の培養に通常用いられる培地を使用することができる。添加される培地成分としては、例えば、酵母エキス、リン酸、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、塩化アンモニウム、塩化マンガン、塩化鉄、塩化カルシウム等が挙げられる。
前記微生物の培養時間は、微生物の種類、培地の種類などによって異なるが、微生物によるＬ−ロイシンからイソ吉草酸アルデヒドが生成するのに要する時間を十分に確保する観点から、例えば、１〜７２時間、好ましくは３〜２４時間が挙げられる。
前記微生物の培養温度は、微生物の種類などによって異なるが、微生物を良好に生育させる観点から、例えば、２０〜５０℃、好ましくは３０〜４０℃が挙げられる。
【００２３】
ステップ（２）では、前記ステップ（１）で得られた培養物（培養物Ａ）における前記微生物の生菌数および／またはイソ吉草酸アルデヒドの量を測定することにより、被験物質がイソ吉草酸アルデヒドの生成を抑制するかを判定する。
前記培養物における前記微生物の生菌数の測定方法は、特に限定されないが、本発明においては、例えば、前記培養物を寒天培地に塗布し、一定時間培養後に生成したコロニーの数を計測するコロニーカウント法、顕微鏡観察によって培養物Ａにおける前記微生物の数を測定する方法などが挙げられる。
前記培養物におけるイソ吉草酸アルデヒドの量の測定方法としては、前記の足臭判定方法におけるイソ吉草酸アルデヒドの量の測定方法と同様に行うことができる。
【００２４】
ステップ（２）において、被験物質がイソ吉草酸アルデヒドの生成を抑制するかどうかを判定するためには、例えば、被験物質を含めずに、前記ステップ（１）の操作を行って培養物（培養物Ｂ）を調製して、
（ａ）培養物Ｂにおける微生物の生菌数を、前記培養物Ａにおける微生物の生菌数と比較すること、および／または
（ｂ）培養物Ｂに含まれるイソ吉草酸アルデヒドの量と、培養物Ａに含まれるイソ吉草酸アルデヒドの量とを比較すること、
などにより行うことができる。
この場合、
（ａ１）培養物Ａにおける微生物の生菌数が培養物Ｂにおける微生物の生菌数よりも少ないこと、および／または
（ｂ１）培養物Ａに含まれるイソ吉草酸アルデヒドの量が培養物Ｂに含まれるイソ吉草酸アルデヒドの量よりも少ないこと
を満たす場合、被験物質がイソ吉草酸アルデヒドの生成を抑制する物質であると判定することができる。
【００２５】
ステップ（３）では、前記ステップ（２）において、イソ吉草酸アルデヒドの生成を抑制する被験物質を、足臭抑制剤として選択する。
本発明の足臭抑制剤のスクリーニング方法では、前記微生物の生菌数および／または前記微生物により産生されるイソ吉草酸アルデヒドの量によって、イソ吉草酸アルデヒドの生成を抑制する被験物質を足臭抑制剤として選択する。したがって、本発明の足臭抑制剤のスクリーニング方法は、官能評価によって足臭抑制剤を選択する場合と比べ、簡便な操作で客観的かつ的確に、足臭抑制剤を評価することができる。
【実施例】
【００２６】
以下、本発明を実施例、試験例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。
足臭の強度の評価、足からのサンプリング、ならびにイソ吉草酸およびイソ吉草酸アルデヒドの量の分析は以下のようにして行った。
【００２７】
足臭の強度の評価方法
パネラー３人によって、以下の評価基準を用いて足の裏および指（靴下および試験片）における足臭の強度の評価を行った。得られた評価結果の数値から平均値を算出して、足臭の強度とした。
〔評価基準〕
０点：におわない
１点：かすかににおう
２点：弱くにおう
３点：はっきりにおう
４点：やや強くにおう
５点：かなり強くにおう
【００２８】
足からのサンプリング方法
被験者は指定の靴下（洗浄済、綿１００％）および靴を履き、一定時間（６時間）放置する。放置後、足の親指と人差し指の間、人差し指と中指の間、中指と薬指の間に各々２ｃｍ×８ｃｍの試験片（綿１００％）を２つ折りにして挟んだ後、外れないようにテープを巻き、靴下および靴を履く。更に２時間経過後、靴下および試験片を回収し、官能評価（嗅覚）を行う。
【００２９】
イソ吉草酸およびイソ吉草酸アルデヒドの量の分析方法
足から得たサンプル（試験片）を、ヘッドスペースバイアルに挿入し、気化させた成分をヘッドスペース−ガスクロマトグラフ−質量分析法（ＨＳＳ−ＧＣ−ＭＳ）を用いて下記条件で分析して、イソ吉草酸およびイソ吉草酸アルデヒドのピーク高さ（またはピーク面積）を得た。
〔ＧＣ−ＭＳの分析条件〕
機種：アジレント・テクノロジー社製  ヘッドスペース−ガスクロマトグラフ−質量分析装置（ＨＳＳ−ＧＣ−ＭＳ）
ＨＳＳ：７６９７Ａ
ＧＣ  ：７８９０Ｂ
ＭＳ  ：５９７７Ａ
カラム  ：ＧＬサイエンス社製  InertCap Pure Wax ６０ｍ，０．２５ｍｍＩ．Ｄ．，０．２５μｍ
キャリヤーガス：Ｈｅ
［試験条件］
＜ヘッドスペース条件＞
ループサイズ：３ｍＬ
オーブン温度：４５℃
ループ温度  ：７５℃
トランスファーライン温度：１００℃
バイアル平衡化：１０分
注入時間：１分
＜ＧＣ条件＞
温度：４０℃（２分）⇒昇温（３℃／分）⇒１８０℃⇒昇温（１０℃／分)⇒２２０℃
注入口：２００℃
スプリット比  １０：１
平均線速度：２８ｃｍ／秒
＜ＭＳ条件＞
イオン化法：電子イオン化法（EI）
【００３０】
〔イソ吉草酸アルデヒドの定量〕
上記の分析結果で得られたイソ吉草酸アルデヒドのピーク高さ（またはピーク面積）に基づいて、下記のとおり、イソ吉草酸アルデヒドの定量値（ｐｐｍ）を求めた。
既知濃度のイソ吉草酸アルデヒドのプロピレングリコール溶液を調製し、ヘッドスペースバイアルに添加したものを標準試料とした。試料及び標準試料につき、上記条件でＨＳＳ−ＧＣ−ＭＳにより試験を行い、試料および標準試料のピーク高さ（またはピーク面積）を求めた。
イソ吉草酸アルデヒドの量(ｐｐｍ)
＝標準試料の濃度(ｐｐｍ)×試料のピーク高さ（またはピーク面積）÷標準試料のピーク高さ（またはピーク面積）
実施例２では、イソ吉草酸アルデヒドのピーク高さに基づいて定量値を求めており、実施例３では、イソ吉草酸アルデヒドのピーク面積に基づいて定量値を求めた。
【００３１】
実施例１
足臭の強度とイソ吉草酸アルデヒドおよびイソ吉草酸の量の関係
前記の足臭の強度の評価方法、足からのサンプリング、ならびにイソ吉草酸およびイソ吉草酸アルデヒドの量の分析方法に従って、被験者１０名の足臭について評価および分析を行った。その評価および分析の結果を図１および図２にまとめる。図１では、横軸に１０名の被験者を並べて、縦軸に各被験者の「足臭の強度」を●でプロットし、各被験者の「イソ吉草酸アルデヒドのピーク高さ」を■でプロットしている。図２では、横軸に１０名の被験者を並べて、縦軸に各被験者の「足臭の強度」を●でプロットし、各被験者の「イソ吉草酸のピーク高さ」を■でプロットしている。
図２から分かる通り、特に足臭の強度が低いところで、イソ吉草酸は観測されず、足臭の強度を示す指標にはなり得ない。他方、図１から分かる通り、イソ吉草酸アルデヒドの量は、足臭の強度が弱いところから強いところまで広い範囲で、足臭の強度と強い相関を示している。
以上より、イソ吉草酸アルデヒドは、足臭の強度を示す優れた足臭判定用指標として用いることができることが分かる。
【００３２】
実施例２
各種微生物によるイソ吉草酸アルデヒドの生成
足の皮膚に存在しうる皮膚常在微生物を用いて、Ｌ−ロイシンの存在下または非存在下、イソ吉草酸アルデヒドが生成されるかを実験した。用いた微生物は、Staphylococcus.aureus、Staphylococcus.epidermidisおよびCorynebacterium.minutissimumである。
菌濃度が１×１０８（ＣＦＵ／ｍＬ）になるように１重量％ロイシン入り生理食塩水を用いて調製する。被験物質を１重量％になるように添加した。培養液をヘッドスペースバイアルに入れて封入し、よく混和後、３６℃で６時間静置培養した。
【００３３】
得られた培養液より気化したガスを下記の分析方法で分析して、生成したイソ吉草酸アルデヒドの量を測定した。その結果を以下に表１に記す。
【表１】
0006600473.tif 000002
【００３４】
Ｌ−ロイシンを培地に添加しない場合、いずれの微生物の培地にもイソ吉草酸アルデヒドは測定されなかった。それに対して、１重量％のＬ−ロイシンを培地に添加した場合、Staphylococcus.aureus、Staphylococcus.epidermidisおよびCorynebacterium.minutissimumの３つの微生物では、イソ吉草酸アルデヒドが生成された。
この試験結果から、足臭判定用指標剤であるイソ吉草酸アルデヒドは、足の皮膚表面に繁殖する微生物、例えばStaphylococcus.aureus、Staphylococcus.epidermidisおよびCorynebacterium.minutissimumによって、Ｌ−ロイシンから生成されることが分かる。Ｌ−ロイシンは、皮膚の角質に存在する蛋白質が微生物によって加水分解されて生成される。
この試験結果から、足の皮膚表面に繁殖する微生物、例えばStaphylococcus.aureus、Staphylococcus.epidermidisおよびCorynebacterium.minutissimumを用いることで、足臭判定用指標剤であるイソ吉草酸アルデヒドの生成を阻害する足臭抑制剤をスクリーニングすることが可能であることが理解される。
【００３５】
実施例３
デオドラント剤の評価
デオドラント剤（薬用メンソレータム  リフレア足指クリーム：ロート製薬（株））を被験者の足に塗布した。その後、指定の靴下（洗浄済、綿１００％）および靴を履き、一定時間（６時間）放置した。放置後、足の親指と人差し指の間、人差し指と中指の間、中指と薬指の間に各々２ｃｍ×８ｃｍの試験片（綿１００％）を２つ折りにして挟んだ後、外れないようにテープを巻き、靴下および靴を履いた。更に２時間経過後、靴下および試験片を回収し、回収した試験片をヘッドスペース分析用バイアル内に挿入し、試験片に付着したイソ吉草酸アルデヒドの量（Ａ）を分析した。
また、被験者の足にデオドラント剤を塗布せずに、前記と同様に操作を行なって、被験者に着用させた試験片に付着したイソ吉草酸アルデヒドの量（Ｂ）を分析した。
イソ吉草酸アルデヒドの量（Ａ）とイソ吉草酸アルデヒドの量（Ｂ）とを比べ、デオドラント剤によって足臭判定用指標剤が減少しているかどうかを調べた。当デオドラント剤によって足臭判定用指標剤が減少している場合、当デオドラント剤は、消臭効果および／または防臭効果を有すると評価した。
【００３６】
【表２】
0006600473.tif 000003
被験者No.1では、デオドランド剤を塗布した右足は、足臭の強度が１であるが、デオドランド剤を塗布していない左足は、足臭の強度が３と高く、またイソ吉草酸アルデヒドの発生量が、右足に比べて４．０倍高かった。被験者No.2でも、同様の結果であり、イソ吉草酸アルデヒドの発生量が２．８倍異なった。
以上の試験結果から、イソ吉草酸アルデヒドの量を指標にして、デオドランド剤の効果を確かめることができることが分かる。
【００３７】
実施例４
デオドラント剤の評価
デオドラント剤を無臭化した靴下に噴霧する。その後、実施例３と同様に試験を行い、デオドラント剤によってイソ吉草酸アルデヒドの量が減少しているかどうかを調べる。当デオドラント剤によって足臭判定用指標剤が減少している場合、当デオドラント剤は、消臭効果および／または防臭効果を有すると評価する。
【００３８】
実施例５
足臭抑制剤のスクリーニング
実施例２の１重量％のＬ−ロイシンを添加した実験において、微生物としてStaphylococcus.epidermidis ATCC 12228を用いて、被験物質を種々濃度で添加して、実験を行った。実験終了後に、得られた培養液より気化したガスを上記の分析方法で分析して、生成したイソ吉草酸アルデヒドの量（Ｃ）を測定する。
被験物質を添加せずに、前記と同様に操作を行なって、得られた培養液より気化したガスの存在するイソ吉草酸アルデヒドの量（Ｄ）を測定する。
イソ吉草酸アルデヒドの量（Ｃ）とイソ吉草酸アルデヒドの量（Ｄ）とを比べ、被験物質によってイソ吉草酸アルデヒドが減少しているかどうかを調べる。被験物質によってイソ吉草酸アルデヒドが減少している場合、被験物質はイソ吉草酸アルデヒドの生成を阻害し、消臭効果を有すると評価する。
【００３９】
今回開示された実施の形態はすべての点で例示であって、制限的なものではないと考えられるべきである。本発明の範囲は上記した説明ではなく請求の範囲によって示され、請求の範囲と均等の意味、および範囲内でのすべての変更が含まれることが意図される。
【産業上の利用可能性】
【００４０】
本発明の足臭判定用指標剤および足臭判定方法によって、弱い足臭まで広い範囲で、足臭を客観的に評価することができる。また、本発明のデオドラント剤の評価方法によって、デオドラント剤の足臭の消臭効果、デオドラント剤の性能を簡便な操作で客観的かつ的確に評価することが可能になる。また、本発明の足臭抑制剤のスクリーニング方法によって、足臭抑制剤を簡便な操作で効率よくスクリーニングすることが可能になる。
【図１】
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【図２】
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