(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式１のインダゾール化合物、又はそれらの立体異性体もしくは薬学的に許容される塩：
【化１】
0006474808.tif 000033
式中、Ｒ１は水素またはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルであり、
Ｒ２はＨまたはハロゲンであり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は独立して水素またはアルキルであり；或いは
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６から選択されるいずれか２つの隣接基は、さらに３〜８員環を形成しうる、ただしＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６のすべてがＨであることはない。
【請求項２】
請求項１に記載の式１のインダゾール化合物は、以下の化合物によって表される：
５−クロロ−３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インダゾール；
５−クロロ−３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１−メチル−３ａ，７ａ−ジヒドロ−１Ｈ−インダゾール；
５−クロロ−３−（３ａ，４，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インダゾール；
５−クロロ−３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−インダゾール；
１−ベンジル−５−クロロ−３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インダゾール；
３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−インダゾール；
３−（３ａ，４，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インダゾール。
【請求項３】
請求項１に記載の式１のインダゾール化合物の調製方法であって、前記方法は以下のステップを含む；
ｉ．５−クロロイサチン（１）を５−クロロインダゾール３−カルボン酸（２）に変換するステップ；
ｉｉ．５−クロロイダゾール３−カルボン酸（２）をアルゴン下でクロロギ酸イソブチルおよびＮ−メチルモルホリンで処理し、アンモニア水溶液と反応させ５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド（３）を得るステップ；
ｉｉｉ．５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−カルボキサミド（３）をピリジンおよび無水トリフルオロ酢酸で処理し、シアノ化合物（４）を得るステップ；
ｉｖ．アセトンから選択される溶媒中でシアノ化合物（４）を炭酸カリウムおよびハロゲン化アルキルと反応させ、置換インダゾールカルボニトリルを得るステップ；
ｖ．Ｐ２Ｓ５の存在下、置換インダゾールカルボニトリルをジアミンと反応させ一般式１の化合物を得るステップ。
【請求項４】
請求項３に記載の方法であって、ステップ（ｉｖ）で使用されるハロゲン化アルキルは、臭化エチル、ヨウ化メチル、臭化ベンジルからなる群から選択される、前記方法。
【請求項５】
請求項３に記載の方法であって、ステップ（ｖ）で使用されるジアミンは１，２−シクロヘキサンジアミン、エチレンジアミンからなる群から選択される、前記方法。
【請求項６】
活性成分として請求項１に記載の式１の化合物、又はそれらの立体異性体もしくは薬学的に許容可能な塩、及び１または２以上の薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含む医薬製剤。
【請求項７】
糖尿病、糖尿病合併症、代謝障害、心血管機能障害または損なわれたグルコース処理、変換されたトリグリセリドレベルまたは減少したβ細胞機能が存在する関連疾患の治療のための、請求項１の式１のインダゾール化合物を含む医薬製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般式１の新規インダゾール化合物とその調製方法に関する。本発明は具体的に新規インダゾール化合物、その誘導体およびそれを合成するための方法に関する。さらに本発明は、糖尿病、糖尿病合併症、代謝性疾患、高血圧を含む心臓血管機能障害、損なわれたグルコース処理および脂肪酸とグルコース経路の間のエネルギー消費の不均衡が存在する自己免疫および炎症に関連する障害または疾患の治療のための一般式１の新規インダゾールの使用およびまたそれらを含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）は、最も一般的な、慢性、および生命を脅かす疾患の１つである。毎年、Ｔ２ＤＭの有病率は、世界的に増加しており、世界保健機関（ＷＨＯ）は２０３０年までにＴ２ＤＭと診断される患者の数は、３６６百万人を超えるだろうと予測した。臨床的にＴ２ＤＭＭは、インスリン分泌、インスリン抵抗性またはその両方の欠陥のいずれかによる、増加した血中グルコースレベルによって特徴付けられる。
【０００３】
ＵＳ２００４／０００９９７６Ａ１は式（Ａ１）の化合物：
【化１】
0006474808.tif 000002
および２型糖尿病および哺乳類でインスリン分泌を刺激する治療のためのそれらの使用を開示する。
【０００４】
ＵＳ２００３／０１０９５５０Ａ１は、式Ａ２の化合物を開示し、
【化２】
0006474808.tif 000003
式中、Ｂは５または６の飽和または不飽和ヘテロ環であり、前記へテロ環は任意にＲ１、Ｒ２、およびＲ１２で置換され；ＸはＮおよびＣからなる群から選択され、ＹおよびＺは独立してＮ、ＣＨ、ＣＲ３、Ｓ、およびＯからなる群から選択され、Ｒ３は置換または非置換アミジン、アルキルアミノ、アミノアルキル、ＣＯＮＨＲ７、ＮＨ２、ＮＨＣＯＲ６、およびＣＨ２ＮＨＣＯＲ６からなる群から選択される。
【０００５】
ＥＰ０４１８８４５Ｂ１は、新規ピラゾール誘導体、その調製方法およびそれを含む医薬組成物を開示する。それは式Ａ３の化合物を提供し：
【化３】
0006474808.tif 000004
式中、Ｒ１は４０低級アルキル、ハロゲン、低級アルコキシ、低級アルキルチオ、低級アルキルスルフィニル、低級アルキルスルホニル、ヒドロキシ、低級アルキルスルホニルオキシ、ニトロ、アミノ、低級アルキルアミノ、アクリルアミノおよび低級アルキル−（アシル）アミノからなる群から選択される置換基で置換され得るアリール；またはヘテロ環基であり；Ｒ２は水素、アミノ、低級アルキルアミノ、ハロゲンまたはアシルオキシで置換されたメチル；アシル；４５アシルアミノ；シアノ；ハロゲン；低級アルキルチオ；低級アルキルスルフィニル；またはヘテロ環基であり；およびＲ３は低級アルキル、低級アルキルチオ、低級アルキルスルフィニル、ハロゲン、アミノ、低級アルキルアミノ、アシルアミノ、低級アルキル（アシル）アミノ、低級アルコキシ、シアノ、ヒドロキシまたはアシルで置換されるアリール；または低級アルキルチオ、低級アルキルスルフィニルまたは５０低級アルキルスルホニルで置換されうるヘテロ環基である。
【０００６】
ＵＳ４４３６９１３は１Ｈ−および２Ｈ−インダゾール誘導体および式Ａ４のこれらの血圧低下１Ｈ−および２Ｈ−インダゾール誘導体：
【化４】
0006474808.tif 000005
およびそれらの酸付加塩を開示し、式中Ｒ１は式Ｉにおいて窒素原子上の１位または２位であってもよい。基Ｒ１，Ｒ２およびＲ３は水素または通常の低分子基を表す。Ｒ基は、これらの基はまたそれらの互変異性型で存在しうる２イミダゾリニルアミノ基または３，４，５，６−テトリヒドロピリミジニルアミノ基である。これらの基はまたＲ１基でアリール基であってもよく、その場合、Ｒ基はまたハロゲン原子であってもよい。Ｒ１基が同時にアリールまたはアラルキル基である場合、Ｒは１Ｈインダゾール誘導体の４または７位で複素環式第二級または第三級アミノの１つのみを表しうる。
【０００７】
ＵＳ５８７８７３５Ｂ２は、式Ａ５のイミダゾリンを開示し、
【化５】
0006474808.tif 000006
式中Ｒ１は任意に置換されるアリールであり、Ｒ２はアルキル、アクリル、アリール、アラルキル、５〜１４員環を含むヘテロアリール、および５〜１２員環を含む複素環からなる群から選択され；Ｒ３は任意に選択されるアリールであり、Ｒ４は任意に選択されるアラルキルであり、およびＲ５は水素およびアルキル基を含む群から選択され、それらの全ては任意に置換される。
【０００８】
ＵＳ７５４１３７６Ｂ２は、優れたＪＮＫ阻害作用を有する新規１Ｈ−インダゾール化合物を提供する。さらに具体的には、式Ａ６によって表される化合物を提供し、
【化６】
0006474808.tif 000007
式中Ｒ１はＣ６−Ｃ１４芳香族環状炭化水素基等であり；Ｒ２、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して水素原子、ハロゲン原子、シアノ基等で表され；Ｌは単結合、またはＣ１−Ｃ６アルキレン基等であり；Ｘは単結合、またはCO-NH-または-NH-CO-等によって表される基であり；およびＹはＣ３−Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ６−Ｃ１４芳香族環炭化水素基または５ないし１４員環芳香族複素環基等、それらの塩またはそれらの水和物である。
【０００９】
ＵＳ２０１１／００３４４４１Ａ１は、式Ａ７の化合物を開示し
【化７】
0006474808.tif 000008
式中Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は独立してＨ、Ｃ１−９アルキル、ハロゲン化物、-CF3、-(C1-9 アルキル)nカルボシクリルR12、-(C1-9アルキル)nヘテロシクリルR12、-(C1-9アルキル)nアリールR12、-(C1-9アルキル)nヘテロアリールR12、-(C1-9アルキル)nOR9、-(C1-9 アルキル)nSR9、-(C1-9アルキル)nS(＝O)R10、-(C1-9 アルキル)nSO2R9, -(C1-9アルキル)nN(R9)S(＝O)R10, -(C1-9アルキル)nN(R9)SO2R9, -(C1-9アルキル)nSO2N(R9)2, -(C1-9アルキル)nN(R9)2, -(C1-9アルキル)nN(R9)C(=A)N(R9)2, -(C1-9アルキル)nNR9C(＝O)OR9, -(C1-9アルキル)nC(＝A)N(R9)2, -(C1-9アルキル)nN(R9)C(=A)R9, -(C1-9アルキル)nOC(＝O)N(R9)2, -NO2, -CN, -(C1-9アルキル)nCO2R9および-(C1-9アルキル)nC(=A)R9からなる群から選択される。
【００１０】
ＵＳ２００２／０１６１０２２Ａ１は、式Ａ８の化合物を開示し、
【化８】
0006474808.tif 000009
式中Ｒ１は置換または非置換アルキル、アリール、ヘテロアリール、炭素環、複素環等であり；Ｒ２は置換または非置換アルキル、アリール、ヘテロアリール、炭素環、複素環等である。
【００１１】
ＷＯ２０１１０５７９５９は、式Ａ９の化合物を開示し、
【化９】
0006474808.tif 000010
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は互いに独立して、水素、ハロゲン、低級アルキルまたはアルコキシであり；Ｒ４は水素、非置換低級アルキルまたはメチル、（＝Ｏ）および−ＣＯＯＨからなる群から選択される独立した１〜４個の置換基で置換される低級アルキルであり；Ｘは、ＣＨまたはＮであり；Ｙは水素または−ＮＨ２またはそれらの薬学的に許容可能な塩である。さらに、代謝性疾患および障害の治療または予防のための化合物Ａ９の使用、またはその薬学的に許容可能な塩に関する。
【００１２】
European Journal of Pharmaceutical Sciences 20 (2003) 201-208においてF. Saczewskiらによって記載された記事、「選択性Ｉ２イミダゾリン受容体リガンドとしての２−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）インダゾール（インダジン）誘導体」は、様々に置換された２−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）インダゾールおよび２−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロインダゾールの合成を報告する。さらにそれは、イミダゾリンＩ２受容体で良好な親和性およびα―２−アドレナリン受容体でこの型のイミダゾリンリガンド間で前例のない低親和性を示す４−クロロ−２−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）インダゾール（３ｆ、４−Ｃ１−インダジン）を報告する。
【００１３】
ChemCommun (Camb). 2010 Nov 28;46 (44):8407-9でYuhuiLohによって記載された記事、「オルガネラ特異的送達およびリソソームシステインプロテアーゼの阻害のための小分子ペプチド複合体の合成」は、細胞特異的送達を達成するための小分子阻害剤ペプチド複合体の合成のためのクリック化学アプローチを報告する。それはさらにＣＯＯＨ基がＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、イソブチルクロホルメート（ＩＳＣＦ）およびメチルヒドラジン塩を使用して−ＣＯＮＨ２ＭＥに変換された方法を提供する。
【００１４】
Organic Mechanisms,2010, 321〜338頁における記事、「カルボン酸化合物、ニトリル、およびそれらの相互変換」は、トリフルオロ酢酸Ｆ３Ｃ−ＣＯ２Ｈを形成する試薬でピバリン酸ニトリル（Ｂ）へのピバリン酸アミド（Ａ）のトリフルオロ酢酸無水物媒介脱水を報告する。
【００１５】
Bioorganic & Medicinal Chemistry 15 (2007)、6782〜6795頁においてRajesh H. Bahekar, Mukul R. Jain, Pradip A. Jadav, Vijay M. Prajapati, Dipam N. Patel, Arun A. Gupta, Ajay Sharma, Robby Tom, Debdutta Bandyopadhya, Honey ModiおよびPankaj R. Patelによって記載された記事、「２，５−二置換−３−イミダゾール−２−イル−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンおよびチエノ［２，３−ｂ］ピリジンの合成および抗糖尿病活性」は、エチレンジアミン、Ｐ２Ｓ５を使用して１２０℃および５時間でニトリルのイミダゾへの変換を報告する。
【００１６】
糖尿病の治療において使用される薬は、インスリン抵抗性の病原性役割に基づいて定義され、以下の治療クラスに属する（Pharm. Sci. 21, 259-265 2000における動向）:インスリン、スルホニルウレア、メトオホルミン、α−グルコシダーゼ阻害剤（アカボース）およびチアゾリジンジオン（トログリタゾン）。インスリンは最も知られた薬であり、糖尿病治療において参照薬剤と考えられる。しかし、インスリン治療は以下の欠点がある：薬は非経口経路によってのみ投与可能であり、血糖レベルを常にコントロールする必要があり、局所アレルギー反応が生じる可能性があり、インスリン抵抗性を時間中有意に増加させ、局耐用性が悪い。
【００１７】
また、他の治療的アプローチは、ときに驚くべき欠点がないわけではありません。例えば、スルホニルウレアは、単独またはインスリンと組み合わせてまたは他の経口血降下薬と一緒に投与され、低血糖を引き起こす可能性があります。メトホルミンは、単独またはスルホニルウレアと組み合わせて使用され、腎臓および肝機能疾患のあると禁忌であり、乳酸アシドーシスの状態に誘導することがある。アカルボースは、食後の血糖レベルを低下させるために単独またはスルホニルウレアと組み合わせて使用されるが、胃腸系のレベルで副作用をよく誘発した。トログリタゾンは唯一インスリンと組み合わせて使用され、肝毒性効果を誘導することがある。
【００１８】
したがって、食事摂取に対する正常な生理的反応を保つために試みることができる血糖コントロールのためいくつかの新規の治療アプローチを開発することが差し迫って必要である。そのようなアプローチの１つは、基礎血糖グルコースレベル下でグルコース分泌を起こさず、グルコース依存のインスリン放出のみを示すインスリン分泌促進剤の開発に基づく。
【００１９】
先行技術にけるスタディング問題とグルコース依存性インスリン放出を示す新薬の長年の必要性を考慮すると、糖尿病または糖尿病合併症の治療の副作用を克服し、発明者は本発明に想到した。本発明は、新規インダゾール化合物、それらの誘導体およびそれらの合成方法を開示する。該化合物は、１型および２型の両方の糖尿病および糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症およびグルコース血中レベルの継続的な変動の結果である様々な血管疾患のような関連合併症に対する抗糖尿病活性示す。
【発明の目的】
【００２０】
本発明の主な目的は、一般式１の新規インダゾール化合物を供給することである。
【００２１】
本発明の別の目的は、式１の化合物を合成するための方法を提供することである。
【００２２】
本発明のさらに別の目的は、糖尿病、糖尿病関連の合併症および高血圧を治療する化合物の医薬組成物を提供することである。
【００２３】
本発明のさらに別の目的は、糖尿病、糖尿病合併症、代謝性疾患、高血圧を含む心臓血管機能障害、損なわれたグルコース処理および脂肪酸とグルコース経路の間のエネルギー消費の不均衡および関連するトリグリセリドが存在する自己免疫および炎症に関連する障害または疾患の治療のための一般式１の新規インダゾールの使用を提供することである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２４】
したがって、本発明は、式１のインダゾール化合物を提供し、
【化１０】
0006474808.tif 000011
式中；
Ｒ１は水素またはアルキルまたはアリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ２はＨまたはハロゲンであり；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は、独立して水素またはアルキル、アリール、ヘテロアリールであり；
いずれか２つの隣接基は、さらにヘテロ原子を含んでもよい３〜８員環を形成しうるＲ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６から選択され；
およびそれらの類似体、位置異性体、立体異性体、誘導体、およびそれらの薬学的に許容される塩。
【００２５】
本発明の１つの態様の式１のインダゾール化合物は、以下の化合物によって表される：
a.５−クロロ−３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インダゾール；
b.５−クロロ−３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１−メチル−３ａ，７ａ−ジヒドロ−１Ｈ−インダゾール；
c.５−クロロ−３−（３ａ，４，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インダゾール；
d.５−クロロ−３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−インダゾール；
e.１−ベンジル−５−クロロ−３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インダゾール；
f.３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インダゾール；
g.３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−インダゾール；
h.３−（３ａ，４，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インダゾール。
【００２６】
本発明の１つの態様において、式１のインダゾール化合物の調製方法であって、前記方法は以下のステップを含む；
ｉ．５−クロロイサチン（１）を５−クロロインダゾール３−カルボン酸（２）に変換するステップ；
ｉｉ．５−クロロイダゾール３−カルボン酸（２）をアルゴン下でクロロギ酸イソブチルおよびＮ−メチルモルホリンで処理し、アンモニア水溶液と反応させ５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド（３）を得るステップ；
ｉｉｉ．５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−カルボキサミド（３）をピリジンおよび無水トリフルオロ酢酸で処理し、シアノ化合物（４）を得るステップ；
ｉｖ．アセトンから選択される溶媒中でシアノ化合物（４）を炭酸カリウムおよびハロゲン化アルキルと反応させ、置換インダゾールカルボニトリルを得るステップ；
ｖ．Ｐ２Ｓ５の存在下、置換インダゾールカルボニトリルをジアミンと反応させ一般式１の化合物を得るステップ。
【００２７】
本発明の別の態様において、ステップ（ｉｖ）のハロゲン化アルキルは、臭化エチル、ヨウ化メチル、臭化ベンジルからなる群から選択される。
【００２８】
本発明の別の態様において、ステップ（ｖ）で使用されるジアミンは、１，２−シクロヘキサンジアミン、エチレンジアミンからなる群から選択される。
【００２９】
本発明の別の態様において、１または２以上の薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤と一緒に、活性成分として式１の化合物を含む医薬製剤、またはそれらの類似体、位置異性体、立体異性体、誘導体、およびそれらの薬学的に許容される塩である。
【００３０】
本発明の他の態様において、式１のインダゾール化合物は、糖尿病、糖尿病合併症、代謝障害、心血管機能障害または損なわれたグルコース処理、変換されたトリグリセリドレベルまたは減少したβ細胞機能が存在する関連疾患の治療に有用である。
【００３１】
本は発明の他の態様において、式１のインダゾール化合物であって、式１の化合物、またはそれらの類似体、位置異性体、構造異性体、誘導体、および薬学的に許容可能な塩の治療的有効量を哺乳類へ投与する。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】図１は、３つの異なる日のＮＤＳ１００１７８とＮＤＳ１００１７９のインスリン分泌能力を示す。
【図２】図２は、ＮＤＳ１００１７８とＮＤＳ１００１７９のグルコース依存活性を示す。
【図３】図３は、低濃度でＮＤＳ１００１７８とＮＤＳ１００１７９のインスリン分泌促進活性を示す。
【図４】図４は、ａ）経口ブドウ糖負荷試験：Ｃ５７ＢＬマウスにおけるＮＤＳ１００１７９の存在下での血漿グルコースの減少、ｂ）経口ブドウ糖試験：Ｃ５７ＢＬマウスにおける総ＡＵＣ（グルコース）におけるＮＳＤ１００１７９用量依存％変化を示す。
【図５】図５は、ａ）ヒト膵島におけるＧＳＩＳ強化、ｂ）Ｃ５７ＢＬマウスにおけるＧＳＩＳ強化、ｃ）ＭＩＮ６細胞におけるＧＳＩＳ強化を示す。
【図６】図６は、ａ）ＮＤＳ１００１７９処理されたｄｂ／ｄｂマウスにおけるグリセミックコントロール、ｂ）ＮＤＳ１００１７９処理されたｄｂ／ｄｂマウスにおける耐糖性、ｃ）コントロールまたはＮＤＳ１００１７９処理されたｄｂ／ｄｂマウスの体重測定を示す。
【図７】図７は、コントロールまたはＮＤＳ１００１７９処理されたｄｂ／ｄｂマウスのトリグリセリド測定；ｂ）コントロールまたはＮＤＳ１００１７９処理されたｄｂ／ｄｂマウスのβ細胞機能の測定を示す。
【図８】図８は、ＨｅｐＧ２細胞のグルコース取り込みを示す。
【図９】図９は、Ｃ５７ＢＬ／６ＪＲｃｃＨｓｄマウスにおけるＮＤＳ１００１７９のＰＫを示す。
【図１０】図１０は、Ｃ５７ＢＬ／６ＪＲｃｃＨｓｄマウスにおける経口ブドウ糖負荷試験を示す。
【発明の詳細な説明】
【００３３】
本発明は、一般式１の新規インダゾール化合物およびその調製方法に関する。本発明は、一般式１のインダゾール化合物の新規化合物およびその類似体、位置異性体、立体異性体、誘導体およびそれらの薬学的に許容可能な塩を提供し、
【化１１】
0006474808.tif 000012
式中；
Ｒ１は水素またはアルキルまたはアリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ２はＨまたはハロゲンであり；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は、独立して水素またはアルキル、アリール、ヘテロアリールであり；
いずれか２つの隣接基は、さらにヘテロ原子を含んでもよい３〜８員環を形成しうるＲ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６から選択され；
およびそれらの類似体、位置異性体、立体異性体、誘導体およびそれらの薬学的に許容可能な塩。
【００３４】
好ましい態様において、本発明は以下の群から選択される式１の化合物を提供する：
５−クロロ−３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インダゾール（ＮＤＳ１００１７８）；
５−クロロ−３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１−メチル−３ａ，７ａ−ジヒドロ−１Ｈ−インダゾール（７、ＮＤＳ１００１７９）；
５−クロロ−３−（３ａ，４，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インダゾール（８、ＮＤＳ１００２８１）；
５−クロロ−３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−インダゾール（１０、ＮＤＳ１００２８２）；
１−ベンジル−５−クロロ−３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インダゾール（１２、ＮＤＳ１００２７８）；
３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インダゾール（１６、ＮＤＳ１００２７７）；
３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−インダゾール（１８、ＮＤＳ１００２７８）；
３−（３ａ，４，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インダゾール（１９、ＮＤＳ１００２７９）。
【００３５】
他の態様において、本願発明は、式ＩＩのイサチン化合物から一般式１の新規化合物の調製方法を提供し、
【化１２】
0006474808.tif 000013
式中、Ｒ２はＨまたはハロゲンであり；
以下のステップを含む：
式（ＩＩ）のイサチン化合物をカルボン酸に変換するステップ；
アミドを得るために、クロロギ酸イソブチルおよびＮ−メチルモルホリンでカルボン酸化合物を処理し、アンモニア水溶液と反応させるステップ（ａ）；
シアノ化合物を得るために、アミド化合物をピリジンおよび無水トリフルオロ酢酸で処理するステップ（ｂ）；
式（１）の所望の化合物を得るたに、Ｐ２Ｓ５の存在下で、シアノ化合物をジアミンと反応させるステップ（ｃ）。
【００３６】
好ましい態様において、本発明は、以下のステップを含む式５の新規化合物の調製方法を提供する：
５−クロロイサチン（１）を５−クロロインダゾール３−カルボン酸（２）に変換するステップ；
ステップ（ａ）の化合物（２）をアミド（３）に変換するステップ；
シアノ化合物（４）を得るために、ステップ（ｂ）のアミド３をピリジンおよび無水トリフルオロ酢酸で処理するスッテプ；
Ｐ２Ｓ５の存在下で、ステップ（ｃ）の化合物（４）をエチレンジアミンで反応するステップ。
【００３７】
化合物５の調製をスキーム１に示す。
スキーム１
0006474808.tif 000014
【００３８】
他の好ましい態様において、本発明は、以下の方法を含む式７の新規化合物の調製方法提供する：
５−クロロイサチン（１）を５−クロロインダゾール３−カルボン酸（２）に変換する方法；
ステップ（ａ）の化合物（２）をアミド（３）に変換する方法；
ステップ（ｂ）のアミド３をピリジンおよび無水トリフルオロ酢酸で処理し、シアノ化合物（４）を得る方法；
ステップ（ｃ）の化合物（４）をメチル化し、化合物（６）を得る方法、
ステップ（ｃ）の化合物（６）をＰ２Ｓ５の存在下、エチレンジアミンと反応して化合物（７）を得る方法。
【００３９】
化合物７の調製方法をスキーム２に示す。
【００４０】
スキーム２
0006474808.tif 000015
【００４１】
本発明の開示された方法は、高い収率かつ選択性を有し、商業的に実現可能である。
【００４２】
本発明の一態様において、式１の化合物は、１型および２型の両方の糖尿病および糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症および血中グルコースおよびトリグリセリドレベルの継続的変動である結果である様々な心血管疾患のような関連合併症に対して抗糖尿病活性を有しうる。
【００４３】
本発明の一態様において、式１の化合物は、それらのインスリン分泌促進活性が調査された。式１の化合物は、０．１〜１０μｇ／ｍＬのインスリン分泌促進活性を示した。式１の化合物は、濃度依存性インスリン分泌促進活性を示した。
【００４４】
他の態様において、式１の化合物のインスリン分泌促進活性をＵＳ２００４０００９９７６の従前の化合物の活性と比較し、その結果を表１に列挙する。式１の化合物は、先行技術で開示された化合物と比べて増強されたインスリン分泌促進活性を示す。
【００４５】
また他の態様において、本発明者らは、いくつかのモデルで、グルコース濃度依存性インスリン分泌またはグルコース刺激性インスリン分泌（ＧＳＩＳ）を研究した。研究は、ヒト膵島、Ｃ５７ＢＬマウスおよびＭＩＮ６細胞で実施された。式１の化合物はＧＳＩＳを誘導し、そしてこれは図５を参照することにより明らかである。試験はさらに本発明の化合物のＧＳＩＳ効果が生物系とそれらの構成と無関係であることを確認する。さらに、研究では、式１の化合物は、動物が３０日間、化合物で処置されたとき、糖尿病モデルの動物（ｄｂ／ｄｂマウス）において、ＯＧＴＴ試験で絶食血中グルコースレベルおよび改善された耐糖能を増加させる上で優れたコントロールを提供した。これは式１の化合物の抗糖尿病特性の直接的な指標を提供する（図６ａおよび６ｂ）。またβ細胞機能は、化合物の追加的な利点を確認する化合物処理された動物でよりよい維持／回復がされた（図６ｃ）。
【００４６】
また別の所見において、動物が３０日間化合物で処置された場合、式１の化合物は、糖尿病モデルの動物（ｄｂ／ｄｂマウス）において、トリグリセリドレベルを減少させた（図７）。低トリグリセリドレベルは、改善された心臓の健康とリンクされ、化合物は有意な治療的心血管ベネフィットを提供した。
【００４７】
図８を参照すると、ＨｅｐＧ２細胞によるグルコースの取り込みは、研究された化合物の存在下であった。ＨｅｐＧ２細胞によるグルコースの取り込みは、肝細胞によるグルコースの取り込みを研究するモデルを表す。増加したグルコースの取り込みは、改善したインスリン感受性として特徴付けられ、グルコースの取り込みを刺激しそしてインスリン感受性を改善することができる化合物は、循環系からグルコースを減少させることによりグルコース恒常性の維持を最終的には助ける２型糖尿病の管理に有用である。明らかなように、化合物は、ＨｅｐＧ２細胞でグルコースの取り込みを増加させ、したがってグルコース恒常性の維持と２型糖尿病の管理を助けることができる化合物を表す。
【００４８】
また、別の態様において、式１の化合物の作用のメカニズムは、発明者らによって提案される。イミダゾリン受容体化合物を介する作業は、細胞でジアシルグリセロールと下流のアラキドン酸を増加させる。アラキドン酸代謝産物は、インスリンエキソサイトーシスに関与する。ＬＴＡ４Ｈを阻害する新規知見、細胞におけるアラキドン酸のプールを維持することができる酵素は、発明者らによって確立されたインスリン分泌を促進することができる。ＮＤＳ１００１７８はＬＴＡ４Ｈ（ＩＣ５０＜５００ｎＭ）を阻害する一方、米国特許第ＵＳ２００４０００９９７６号化合物、５−クロロ−２−メチル−３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インドール、からの実施例６のＬＴＡ４Ｈターゲットに対するＩＣ５０は、１０μＭを超える。
【００４９】
また、他の態様において、医薬組成物は、式（Ｉ）の化合物、または立体異性体、またはエステルまたはそれらの薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含んで提供される。
【００５０】
本発明の医薬組成物は、適切な薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤と一緒に本発明の化合物と組み合わせることにより調製することができ、錠剤、カプセル剤、粉末、顆粒、軟膏、液剤、注射剤、ゲルおよび微小球などの固体、半固体、液体または気体の形態の調製で製剤化されうる。
【００５１】
さらに別の形態において、本発明は、前記疾患に罹患している対象に「本発明の組成物」の「有効量」を投与することに関する。したがって、式１の化合物、それらを含む医薬組成物は、任意の量、疾患を治療するために有効な投与経路を介して医薬組成物の任意の形態を用いて投与しうる。そのような医薬組成物を投与する典型的な経路は、限定されないが、経口、局所、経皮、吸入、非経口、舌下、口腔、直腸、膣、および鼻腔内を含む。
【００５２】
本発明の医薬組成物は、本明細書に含まれる活性成分が患者への組成物の投与の際に生物学的に利用可能であることを可能にするように、製剤化される。対象または患者に投与される組成物は、１つ以上の投与単位の形態をとりうる。剤形はまた持続的な、制御された、改変されたおよび即時剤形として調製することができる。
【００５３】
結論として、式１の化合物は糖尿病患者およびＧＳＩＳを誘導することによりそれらの合併症に苦しむ対象へ新規代替物を提供し、対象の体重と投与された濃度に比例する血中グルコース濃度を管理し、トリグリセリドの低下とβ細胞機能を回復／維持する心血管安全性プロファイルを改善する。
【００５４】
以下の実施例は、実際には本発明の働きの説明の方法によって与えられるものであり、決して本発明の範囲を限定するように解釈されるべきではありません。
【実施例】
【００５５】
例１
５−クロロ−３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インダゾール（ＮＤＳ１００１７８）：
５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド（３）
【化１３】
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無水ＴＨＦ（２０ｍＬ）中で５−クロロ−インダゾール３−カルボン酸１２（０．８ｇ、４．０ｍｍｏｌ）の溶液にアルゴン下、０℃でクロロギ酸イソブチル（０．６４ｍＬ、４．９ｍｍｏｌ）とＮ−メチルモルホリン（０．７ｍＬ、６．１ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を２時間、撹拌した。次に１０ｍＬの水性ＮＨ３をこの混合物に加え、２５℃で１時間撹拌した。ＴＨＦを減圧下で除去し、得られた固体をブフナー漏斗を通してろ過し、固体をジエチルエーテルで洗浄し、真空下で乾燥させ、淡黄色固体として表題化合物３（０．５ｇ、６３％）を得た。IR υmax(film): cm-1  2925, 2854, 1463; 1H NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ  8.14 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.80 (bs, 1H), 7.66 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.45-7.39 (m, 2H); MS: 218 (M+Na)+
【００５６】
５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−３−カルボニトリル（４）：
【化１４】
0006474808.tif 000017
５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド３（０．６０ｇ、３．０ｍｍｏｌ）をピリジン（６ｍＬ）および乾燥ジクロロメタン（６ｍＬ）に溶解した。トリフルオロ酢酸無水物（１．０ｍＬ、７．７ｍｍｏｌ）を加え、その反応を２５℃で１０分間撹拌した。その反応混合物を真空下で濃縮し、その残留物を酢酸エチルに取り、その後水、飽和炭酸水素ナトリウムおよび塩水で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過、濃縮して淡黄色固体として標題化合物５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−カルボニトリル４（０．５ｇ、９２％）を得た。IR υmax(film): cm-1  2233; 1H NMR (200 MHz, CDCl3): δ  8.03 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.96 (d, J =1.8 Hz, 1H), 7.75 (dd, J = 9.1, 1.8 Hz, 1H)
【００５７】
５−クロロ−３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インダゾール（５、ＮＤＳ１００１７８）：
【化１５】
0006474808.tif 000018
５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−３−カルボニトリル４（０．２ｇ、１．１ｍｍｏｌ）、エチレンジアミン（ＥＤＡ、４ｍＬ）、およびＰ２Ｓ５（０．１ｇ、０．４ｍｍｏｌ）の混合物を１２０℃で５時間、加熱した。その反応混合物を氷に注ぎ、固体を得、ブフナー漏斗を通してろ過し、ジエチルエーテルで洗浄、真空下で乾燥させ、灰色がかった白色固体として５−クロロ−３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インダゾール化合物５、ＮＤＳ１００１７８（０．１２ｇ、４９％）を得た。Mp = 248 - 249 °C; 1H NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ 8.19 (s, 1H), 7.63 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 3.66 (bs, 4H); MS: 221 (M+H)+
【００５８】
例２
５−クロロ−３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２−メチル−２Ｈ−インダゾール（ＮＤＳ１００１７９）
５−クロロ−１−メチル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボニトリル（６）：
【化１６】
0006474808.tif 000019
炭酸カリウム（０．２３ｇ、１．６ｍｍｏｌ）とヨウ化メチル（０．１ｍＬ、１．６ｍｍｏｌ）をアセトン（１０ｍＬ）中、５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−３−カルボニトリル４（０．１ｇ、０．５ｍｍｏｌ）の懸濁液に加えた。反応混合物を６５℃で４時間加熱し、冷却し、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル１００〜２００メッシュ、３：７酢酸エチル：石油エーテル）により精製し、白色固体として５−クロロ−１−メチル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボニトリル６（０．８ｇ、７５％）を得た。Mp = 154 - 155 °C; 1H NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ 8.03 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.63 (dd, J = 8.9, 1.9 Hz, 1H), 4.20 (s, 3H)
【００５９】
５−クロロ−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−インダゾール−２−イル）−１−メチル−３ａ，７ａ−ジヒドロ−１Ｈ−インダゾール（７、ＮＤＳ１００１７９）：
５−クロロ−１−メチル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボニトリル６（０．１ｇ、１．０ｍｍｏｌ）、ＥＤＡ（４ｍＬ）、およびＰ２Ｓ５（０．０４６ｇ、０．４ｍｍｏｌ）の混合物を１２０℃で５時間加熱した。その反応混合物を氷に注ぎ、固体を得、ブフナー漏斗を通してろ過し、ジエチルエーテルで洗浄し、真空下で乾燥させ、白色固体として化合物７（ＮＤＳ１００１７９）（０．０６０ｇ、５０％）を得た。Mp = 174 - 175 °C; 1H NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ 8.21 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.47 (dd, J = 8.8, 2.0 Hz, 1H), 6.84 (bs, 1H), 4.11 (s, 3H), 3.62 (bs, 4H). 13C NMR (100MHz , DMSO-d6)  δ= 160.1, 139.6, 132.0, 128.2, 127.2, 122.4, 120.1, 111.2, 35.2; MS; 235(M+H)+
【００６０】
例３
５−クロロ−３−（３ａ、４，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンズ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インダゾール８（ＮＤＳ１００２８１）：
【化１７】
0006474808.tif 000020
５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−３−カルボニトリル４（０．１ｇ、０．５ｍｍｏｌ）、１，２−シクロヘキサンジアミン（２ｍＬ）、およびＰ２Ｓ５（０．０５ｇ、０．２ｍｍｏｌ）の混合物を１２０℃で５時間加熱した。その反応混合物を氷に注ぎ、固体を得、ブフナー漏斗を通してろ過し、ジエチルエーテルで洗浄し、真空下で乾燥させ、淡黄色固体として５−クロロ−３−（３ａ，４，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンズ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インダゾールＮＤＳ１００２８１（６０ｍｇ、４０％）を得た。1H NMR (200 MHz, CD3OD) δ = 8.08 (d, J = 1.6 Hz, 1 H), 7.51 (d, J= 8.8 Hz, 1 H), 7.23 (dd, J = 2.0, 8.9 Hz, 1 H), 3.89 (t, J = 3.6 Hz, 2 H), 1.88 - 1.29 (m, 2 H); MS; 275(M+H)+
【００６１】
例４
５−クロロ−１−エチル−３ａ，７ａ−ジヒドロ−１Ｈ−インダゾール−３−カルボニトリル（９）：
【化１８】
0006474808.tif 000021
炭酸カリウム（０．２８ｇ、１．８ｍｍｏｌ）と臭化エチル（０．２ｍＬ、１．８ｍｍｏｌ）をアセトン（１０ｍＬ）中、５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−カルボニトリル４（０．１２ｇ、０．６ｍｍｏｌ）の懸濁液に加えた。その反応混合物を６５℃で４時間加熱し、冷却し、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル１００〜２００メッシュ、２：８酢酸エチル：石油エーテル）により精製して、淡黄色固体として９（０．１３ｇ、９４％）を得た。1H NMR (200 MHz, CDCl3):δ = 7.82 (t, J = 1.1 Hz, 1 H), 7.47 (s, 2 H), 4.49 (d, J = 7.2 Hz, 2 H), 1.57 (t, J = 7.3 Hz, 4 H); MS; 206(M+H)+
【００６２】
５−クロロ−３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−インダゾール（１０）ＮＤＳ１００２８２：
【化１９】
0006474808.tif 000022
９（１５０ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）、ＥＤＡ（４ｍＬ）、およびＰ２Ｓ５（０．０６５ｇ、０．３ｍｍｏｌ）の混合物を１２０℃で５時間加熱した。その反応混合物を氷に注ぎ
固体を得、ブフナー漏斗を通してろ過し、ジエチルエーテルで洗浄し、真空下で乾燥させて、灰色がかった固体として（１０）ＮＤＳ１００２８２（０．１１ｇ、６０％）を得た。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ =8.12 (s, 1H), 7.68 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.44 (dd, J = 2.0, 9.0 Hz, 1H), 4.53 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 3.95 (s, 4H), 1.58 - 1.46 (m, 3H); 13C NMR (100MHz , CD3OD)  δ= 159.9, 138.8, 130.4, 128.7, 127.4, 122.4, 119.7, 111.5, 44.5, 13.6; MS; 249(M+H)+
【００６３】
例５
１−ベンジル−５−クロロ−３ａ，７ａ−ジヒドロ−１Ｈ−インダゾール−３−カルボニトリル（１１）：
【化２０】
0006474808.tif 000023
炭酸カリウム（０．３５ｇ、２．５ｍｍｏｌ）と臭化ベンジル（０．３ｍＬ、２．５ｍｍｏｌ）をアセトン（１０ｍＬ）中、５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−３−カルボニトリル４（０．１５ｇ、０．８ｍｍｏｌ）の懸濁液に加えた。その反応混合物を６５℃で４時間加熱し、冷却し、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル１００〜２００メッシュ、２：８酢酸エチル：石油エーテル）により精製し、淡黄色固体として（１１）（０．１８ｇ、８０％）を得た。1H NMR (200 MHz, CDCl3): δ= 7.83 (t, J = 1.2 Hz, 1 H), 7.41 - 7.29 (m, 5 H), 7.25 - 7.19 (m, 2 H), 5.64 (s, 2 H); MS; 268(M+H)+
【００６４】
１−ベンジル−５−クロロ−３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インダゾール１２（ＮＤＳ１００２８３）：
【化２１】
0006474808.tif 000024
ベンジル−５−クロロ−３ａ，７ａ−ジヒドロ−１Ｈ−インダゾール−３−カルボニトリル１１（１６０ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、ＥＤＡ（４ｍＬ）およびＰ２Ｓ５（０．０５３ｇ、０．２ｍｍｏｌ）を１２０℃で５時間加熱した。その反応混合物を氷に注ぎ、固体を得、ブフナー漏斗を通じてろ過し、ジエチルエーテルで洗浄し、真空下で乾燥させ、灰色がかった白色固体として１２（ＮＤＳ１００２８３）（０．１００ｇ、５４％）を得た。1H NMR (400MHz ,CD3OD) δ = 8.26 - 8.11 (m, 1H), 7.50 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.34 (dd, J = 1.8, 8.9 Hz, 1H), 7.29 - 7.17 (m, 5H), 4.91 (s, 2 H), 3.78 (s, 4H); 13C NMR (100MHz , CD3OD) δ=  160.3, 139.1, 136.3, 134.2, 128.4, 127.9, 127.6, 127.2, 127.0, 122.9, 120.8, 111.2, 52.9, 48.9; MS 311(M+H)+
【００６５】
例６
３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インダゾール（１６）ＮＤＳ１００２７７：
【化２２】
0006474808.tif 000025
５（ＮＤＳ１００１７８）の合成に用いた同一の手順に従う。収率：51%; 1H NMR (200MHz ,DMSO-d6) δ= 8.25 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.67 - 7.55 (m, 1H), 7.48 - 7.35 (m, 1H), 7.23 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 3.66 (s, 4H); 13C NMR (50MHz ,DMSO-d6) δ = 159.8, 141.1, 135.8, 126.2, 122.0, 121.4, 121.1, 110.5, 49.4; MS 187 (M+H)+
【００６６】
１−メチル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボニトリル１７：
【化２３】
0006474808.tif 000026
６の合成の手順に従う。収率：97%;1H NMR (200MHz ,CDCl3) δ = 7.84 (td, J = 0.9, 8.2 Hz, 1 H), 7.57 - 7.47 (m, 2 H), 7.37 (dd, J = 4.0, 8.0 Hz, 1 H), 4.17 (s, 3 H); MS 158 (M+H)+
【００６７】
例７
３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−インダゾール１８（ＮＤＳ１００２７８）：
【化２４】
0006474808.tif 000027
７（ＮＤＳ１００１７９）の合成と同一の手順に従う。収率：42%;1H NMR (200MHz,CD3OD) δ =8.16 (td, J = 1.0, 8.2 Hz, 1H), 7.57 (td, J = 0.9, 8.5 Hz, 1H), 7.44 (ddd, J = 1.0, 6.9, 8.4 Hz, 1H), 7.37 - 7.20 (m, 1H), 4.22 - 4.06 (m, 3H), 3.78 (s, 4H); 13C NMR (100MHz, CD3OD) δ = 161.0, 141.1, 134.1, 126.6, 121.9, 121.8, 121.5, 109.3, 49.0, 34.8; MS 201(M+H)+
【００６８】
例８
３−（３ａ、４，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インダゾール（１９）ＮＤＳ１００２８１：
【化２５】
0006474808.tif 000028
８の合成と同一の手順に従う。収率：30%; 1H NMR (200MHz, CD3OD) δ = 8.09 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 7.56 - 7.43 (m, 1 H), 7.31 (s, 1 H), 7.16 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 3.84 (t, J = 3.6 Hz, 2 H), 1.84 - 1.24 (m, 8 H); 13C NMR (50MHz , CD3OD) δ = 162.1, 143.7, 135.9, 127.7, 123.3, 122.5, 122.2, 112.0, 60.5, 28.9, 21.8; MS 241 (M+H)+
【００６９】
例９：
ＮＤＳ１００１７８とＮＤＳ１００１７９のインスリン分泌促進活性の測定
材料と方法
ＮＤＳ１００１７８とＮＤＳ１００１７９のインスリン分泌促進活性を以下に記載の非常に最適化されたＥＬＩＳＡに基づくアッセイ（Shantani Protocol # 5205）により測定した。
【００７０】
材料
・ＭＩＮ６細胞（ソース：National Center for Cell Sciences, Pune）
・マウスインスリンＥＬＩＳＡキット（メロコディア（Mercodia）、10-1247-01）
・プレートシェーカー（MixMatefromEppendorf）
・ＨＥＰＥＳバラスクレブス−リンガー重炭酸緩衝液（以下のような成分）
【００７１】
【表１】
0006474808.tif 000029
【００７２】
方法
i.実験前２日のほぼ半分の密集度で６ウェルプレートにＭＩＮ−６細胞の増殖培養を播種する。
ii.インスリン誘導実験の１日目、細胞はほぼコンフルエントになり、良好な状態である。
iii.実験の日に、材料で記載されるように、０．１％ＢＳＡとＢＳＡなしの1xKRB-HEPES緩衝液（すすぎ用）を最初に調製する。
iv.平衡緩衝液を準備する：（同じレベルに全ての細胞のグルコースレベルを低下させるために）ＢＳＡなしで３．３Ｍグルコースを含む1xKRB-HEPES緩衝液。例えば、ＢＳＡなしで２０ｍＬのＫＲＢ−ＨＥＰＥＳ緩衝液に６６ulの１Mグルコース原料溶液を加える。
v.刺激緩衝液（インスリン誘導）を調製する：ＢＳＡなしで定義されたグルコースレベル（ほとんどの場合、それは１６．７ｍＭグルコースとなる）および所望の濃度の分子を含む1xKRB-HEPES緩衝液。
vi.水浴中で全ての緩衝液を３７℃に事前に温める（１５分）。
vii.全てのウェルから培地を除去し、０．１％ＢＳＡを含む２ｍＬのKRB-HEPES緩衝液で２回各ウェルをすすぐ。
vii.各ウェル中で２ｍＬの平衡緩衝液を加え、３７℃で３０分間インキュベートする。
ix.インキュベーション後、（適切にラベルされた）各ウェルに２ｍＬの刺激緩衝液を加え、３７℃で１時間インキュベートする。
x.一方、冷却遠心機をオンにし、温度を４℃に設定する。酵素複合体、希釈緩衝液、キャリブレーターおよび必要なストライプ（例えば、重複して実行するため、８個のサンプルのための２つのストライプ）をメコディア（Mercodia）ELISAキットボックス（４℃で保存）から取り出し、それらを室温に温める。
xi.１時間後、インキュベーションはプレートをインキュベーターから取り出され、細胞を乱さず、１ｍLの刺激緩衝液を適切にラベルされた予冷チューブ１に取り出す。
xii.５分間、６００ｇで遠心分離する。
xiii.新たに適切にラベルされた予冷チューブに５００ulを取り出す。
xiv.すぐにキャリブレーター０でサンプル１：３０を希釈する、すなわち、８つの異なる適切にラベルされた０．５ｍLチューブで、８７ulのキャリブレーター０に３ulの各サンプルを加える。それらをよく混ぜる。
xv.１ｘ酵素複合体緩衝液を調製する、すなわち、２つのストライプのELISAのための１８００ulの希釈緩衝液で１８０ulの酵素（11x）を混ぜる。
xvi.２つの隣接するウェルで１０ulの各サンプル（希釈された、二重に）を加える。底が触れないように注意する。
xvii.各ウェルに１００ulの酵素複合体緩衝液（1x）を慎重に加え、８００ｒｐｍで２時間、２５℃でプレートシェーカー（エッペンドルフMixMate）上でインキュベートする。
xviii.インキュベーション前の４５分は、洗浄緩衝液、基質TMBおよび停止溶液を取り出す。それらを室温で保管する。
ix.インキュベーション前の５分は、１ｘ洗浄緩衝液（２１ｘ）、すなわち、リザーバーに４ｍLの希釈水+２ｍLの（２１ｘ）洗浄緩衝液を調製する。
xx.インキュベーションがされた後、３５０ulの洗浄緩衝液で７回、各ウェルを洗浄する。マルチチャンネル（１７５ul）を使用する。
xxi.洗浄後、各ウェルで２００uLの基質TMB溶液を加える。適切なペースを維持する。
xxii.１５分間インキュベートすることができる。４５０nmで読まれる吸光度をとるために、プレートリーダー上でプログラムを設定する。適切な混合をするために、５秒の振動ステップを追加する。
xxiii.インキュベーション後、各ウェルに同じペースで５０ulの停止溶液をすぐに加え、４５０nmで吸光度を読み取る。
【００７３】
アッセイの条件は、全てのアッセイで同じに保たれた。異なる日間の対照実験（分子で治療なし）の吸収値の差は、細胞培養条件に起因する。他の様々な条件は、各グラフで特定される。得られた結果を以下にまとめる。
［注：具体的に述べられていない場合は、HG=高グルコース（１６．７ｍM）、LG=低グルコース（３．３ｍM）］
【００７４】
結果
ＮＤＳ１００７８９とＮＤＳ１００１７９はグルコース刺激性インスリン分泌を増進する。
ＮＤＳ１００１７８とＮＤＳ１００１７９のインスリン分泌能を、図１のように、３つの異なる日に測定した。下記に示されるように、細胞を１時間、ＮＤＳ１００１７８またはＮＤＳ１００１７９のいずれか、３３uＭの濃度の両方で処理した場合、高グルコース条件で、ＭＩＮ６細胞からインスリン分泌の有意な増加が観察された。
【００７５】
ＮＤＳ１００１７８とＮＤＳ１００１７９のインスリン分泌促進活性は、グルコース依存性である。
ＮＤＳ１００１７８とＮＤＳ１００１７９のインスリン分泌促進活性は、グルコース依存性であることがわかった。下記に示されるように、インスリン分泌の有意な増加は、図２のように、低グルコース条件と比べて高グルコース条件で存在する各コントロールにわたって観察された。
【００７６】
ＮＤＳ１００１７８とＮＤＳ１００１７９は、低濃度でインスリン分泌促進活性を示す。
下記に示されるように、１００ｎＭ濃度でインキュベートされた場合、ＮＤＳ１００１７８はインスリン分泌で１００％以上の増加を誘導した。濃度が５０ｎＭまたは１０ｎＭに減少したときに、対照実験を超える有意差は認められなかった。
【００７７】
興味深いことに、ＮＤＳ１００１７９は、１０ｎＭと同じくらい低い濃度でさえ活性であった。１０ｎＭのＮＤＳ１００１７９の存在下での対照実験を超えるインスリン分泌の増加は、統計的に有意であることはわからなかったが、明らかに、５０ｎＭおよび１００ｎＭの濃度の分子とのインキュベーションは、分子が活性インスリン分泌である傾向を示した。
【００７８】
化合物のインスリン分泌促進特性
表１  ＭＩＮ６細胞からのインスリン分泌：
【表２】
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【００７９】
例１０
ＮＤＳ１００１７９による非糖尿病実験用マウスのグルコース減少およびグルコース依存性インスリン分泌
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスのグルコース減少
１２〜１３週の雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを一晩絶食させた。朝、動物にＮＤＳ１００１７９の異なる濃度または３ｇ／ｋｇのグルコースの対照薬を経口投与した。血中グルコースを投与直前、それから化合物投与後３０、６０、９０および１２０分に測定した。分子用量は、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスで血中グルコースを依存的に低下させる（図４）。
【００８０】
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスのインスリン増加
０および１５分時点でのインスリンは、また１２〜１３週の雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを一晩絶食させ、朝、異なる濃度のＮＤＳ１００１７９または３ｇ／ｋｇの対照薬を経口投与して上記の実施された研究で測定された。ＮＤＳ１００１７９からのインスリン分泌は、血漿濃度グルコース依存性であることがわかった（図５）。
【００８１】
例１１：
ＮＤＳ１００１７９によるグルコース刺激性インスリン分泌（ＧＳＩＳ）の増強
ＮＤＳ１００１７９は、高グルコース濃度でのみインスリン分泌を増強するインスリン分泌促進化合物である。低および高グルコース条件でＮＤＳ１００１７９のインスリン誘導の測定は、ヒト膵島、マウスおよびＭＩＮ６細胞で実施された。提示されたデータは、ＮＤＳ１００１７９のＧＳＩＳ増強能力は異なる生物系で類似することを明らかに示す（図５）。
【００８２】
例１２：
ＮＤＳ１００１７９−糖尿病の動物モデル（ｄｂ／ｄｂマウス）における空腹時血漿グルコースと耐糖性
ｄｂ／ｄｂまたはレプチン欠損マウスは、糖尿病のモデルによく対応する。７週齢のｄｂ／ｄｂマウスに３０日間、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇのＮＤＳ１００１７９および賦形剤単独を経口投与した。動物における空腹時血漿グルコースレベルを試験の開始前、１５日目および３０日目に測定した。ＮＤＳ１００１７９で処置された動物は、基礎グルコースレベルの上昇で有意なコントロール、動物に対して与えられた分子の量に依存した効果を示した。ＮＤＳ１００１７９の３０ｇ／ｋｇで処置された動物は、絶食血中グルコースレベルの統計的に有意な上昇を示さなかった。３０日目の終わりに行われた経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）は、ＮＤＳ１００１７９処置マウスで耐糖能に有意な改善を示した（図６ａおよび６ｂ）。
【００８３】
例１３：
ＮＤＳ１００１７９−糖尿病の動物モデル（ｄｂ／ｄｂマウス）におけるβ細胞機能の保存／回復
７週齢のｄｂ／ｄｂマウスに３０日間、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇのＮＤＳ１００７９および賦形剤単独を経口投与した。β細胞機能を３０日目の終わりに、ＨＯＭＡ−β％の計算を用いて評価した。ＮＤＳ１００１７９処置されたマウスは、β細胞機能において有意な改善を示した（図６ｃ）。
【００８４】
例１４：
ＮＤＳ１００１７９−糖尿病の動物モデル（ｄｂ／ｄｂマウス）におけるトリグリセリドの減少
７週齢のｄｂ／ｄｂマウスに１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇのＮＤＳ１００１７９および賦形剤単独を経口投与した。３０日目の終わりに、トリグリセリドレベルを測定した。ＮＤＳ１００１７９処置マウスは、トリグリセリドレベルの有意な減少を示した（図７ａ）。
【００８５】
例１５：
ＮＤＳ１００１７９−糖尿病の動物モデル（ｄｂ／ｄｂマウス）における体重変化
７週齢のｄｂ／ｄｂマウスに１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇのＮＤＳ１００１７９および賦形剤単独を経口投与した。動物モデルの体重変化を３日ごとに測定した。体重の有意な変化は、ＮＤＳ１００１７９処置マウスで観察されなかった（図７ｂ）。
【００８６】
例１６：
ＮＤＳ１００１７９の薬物動態特性
マウスＮＤＳ１００１７９で行われた薬物動態研究に基づいて１００％の生物学的に利用可能な化合物である（図９）。
【００８７】
【表３】
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【００８８】
例１７：
インビトロＡＤＭＥ特性
【００８９】
【表４】
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【００９０】
例１８：
ＮＤＳ１００１７９−ＨｅｐＧ２細胞におけるグルコース取り込みの増加
ＮＤＳ１００１７９は、ＨｅｐＧ２細胞でグルコースの取り込みを増加させる（図８）。アッセイは、２４時間の各薬剤で高グルコース条件でそれらを培養することにより、ＨｅｐＧ２細胞インスリン抵抗性を作った後、実施した。アッセイは、細胞を（それぞれの薬剤含む）無血漿培地で２時間欠乏させ、その後（各薬剤と一緒の）ＫＲＢ緩衝液で３０分のインキュベーションおよび１５分間、２−ＮＢＤＧ（蛍光グルコースアナログ）と一緒に最後にインキュベーションすることによって２４時間後に実施された。細胞を十分に洗浄し、１％のトリトン−Ｘで溶解した。蛍光の読み取りをEx:465とEm:540ですぐに行った。
【００９１】
例１９
作用のメカニズム
化合物のＮＤＳ１００１７８のシリーズは、主にイミダゾリン受容体Ｉ１／Ｉ３（ＩＣ５０〜５０ｎＭ）を活性化する。高いグルコース条件で、この活性は、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）の形成をもたらす。ＤＡＧは、その後、細胞でアラキドン酸（ＡＡ）を生成する。ＡＡ、特にエポキシエイコサトリエン酸（ＥＥＴｓ）およびヒドロキシエイコサテトレン酸（ＨＥＴＥｓ）の代謝物は、細胞からのインスリン分泌につながるエキソサイトーシスを誘導する。ＡＡ誘導されたグルコース／ＤＡＧを変更することができる他の主要なシグナル伝達経路は、ロイコトリエン経路であり、その異なるロイコトリエンにＡＡを代謝させることによって、ＥＥＴｓではなく、ＨＥＴＥｓが、そのインスリン分泌効果を抑制する。ロイコトリエン経路を介してＡＡの代謝を阻害する分子は、ＥＥＴｓおよびＨＥＴＥｓを通じてのみその代謝に導くＡＡプールを維持することができ、そしてその結果インスリン分泌の増加を向上させることができる。ロイコトリエン経路で主要な酵素の１つは、ＬＴＡ４をＬＴＢ４、インスリン分泌を抑制するＡＡ誘導体に変換するＬＴＡ４Ｈヒドラーゼである。ＬＴＡ４Ｈ阻害は、インスリン分泌を増強することができるという新規な発見は、発明者らによって確立された。ＮＤＳ１００１７８はＬＴＡ４Ｈを阻害する（ＩＣ５０＜５００ｎＭ）一方、米国特許第２００４０００９９７６化合物からの化合物６、５−クロロ−２−メチル−３−（４，５−ジヒドロ−１−Ｈ−インダゾール−２−イル）−１Ｈ−インドールのＬＴＡ４Ｈターゲットに対するＩＣ５０は、１０uＭを超える。
発明の効果
【００９２】
・新規抗糖尿病化合物
・周辺環境でグルコースレベルに関してインスリンの制御された分泌
・低血糖のような他の抗糖尿病薬の何らかの副作用を改善する
・トリグリセリドを減少させることにより心血管保護を提供する
・β細胞機能を増強／回復する
・１型および２型の両方の糖尿病及び関連する合併症に対して有効
・経済的および商業的に実現可能な調製方法。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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