(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ２２のエピトープに特異的に結合する抗体であって、
ａ）アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３；ＶＨ３）を有するＶＨ領域を含む免疫グロブリン重鎖と、
ｂ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＱＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７；ＶＫ１）、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８；ＶＫ２）及び
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９；ＶＫ４）から選択されるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖と、を含む、抗体、
ａ）アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４；ＶＨ４）を有するＶＨ領域を含む免疫グロブリン重鎖と、
ｂ）アミノ酸配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＱＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７；ＶＫ１） を含む免疫グロブリン軽鎖と、を含む、抗体、
ａ）アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５；ＶＨ５）を有するＶＨ領域を含む免疫グロブリン重鎖と、
ｂ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＱＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７；ＶＫ１）、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ （配列番号８；ＶＫ２）及び
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９；ＶＫ４）から選択されるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖と、を含む、抗体、又は
ａ）アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６；ＶＨ６）を有するＶＨ領域を含む免疫グロブリン重鎖と、
ｂ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＱＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７；ＶＫ１） を有するアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖と、を含む、抗体。
【請求項２】
軽鎖領域および重鎖領域は、別々のポリペプチドに存在する、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記軽鎖領域および前記重鎖領域は、単一ポリペプチドに存在する、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
前記抗体は、１０７Ｍ−１〜１０１２Ｍ−１の親和性でエピトープに結合する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項５】
前記重鎖領域は、アイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の領域である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項６】
前記抗体は、検出可能に標識されている、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項７】
前記抗体は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ´）２、またはＦａｂ´である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項８】
前記抗体は、共有結合された非ペプチド合成ポリマーを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項９】
前記合成ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）ポリマーである、請求項８に記載の抗体。
【請求項１０】
前記抗体は、共有結合された脂質または脂肪酸部分を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１１】
前記抗体は、共有結合された多糖または炭水化物部分を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１２】
前記抗体は、造影剤を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１３】
前記抗体は、親和性ドメインを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１４】
前記抗体は、固体支持体上に固定化される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１５】
前記抗体は、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１６】
前記ｓｃＦｖは、多量体化されている、請求項１５に記載の抗体。
【請求項１７】
前記抗体は、共有結合された細胞毒を含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１８】
前記抗体は、スルファターゼモチーフのアミノ酸配列を含む定常領域のアミノ酸配列を含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１９】
前記抗体は、スルファターゼモチーフのアミノ酸配列を含む定常領域のアミノ酸配列を含み、前記スルファターゼモチーフは、２−ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）部分を含むように修飾されている、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２０】
前記抗体は、前記ＦＧｌｙ部分を介して前記抗体に共有結合される異種部分を含む、請求項１９に記載の抗体。
【請求項２１】
前記異種部分は、薬物、毒素、検出可能な標識、水溶性ポリマー、および合成ペプチドから選択される、請求項２０に記載の抗体。
【請求項２２】
請求項１に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む組換え発現ベクターであって、前記ヌクレオチド配列は、真核細胞中で活性な転写調節エレメントに作動可能に連結されている、前記組換え発現ベクター。
【請求項２３】
ａ）請求項１に記載の抗体と、
ｂ）薬学的に許容される担体と、
を含む、薬学的組成物。
【請求項２４】
前記抗体は、リポソームに封入される、請求項２３に記載の薬学的組成物。
【請求項２５】
ＣＤ２２陽性Ｂ細胞悪性腫瘍の治療のための請求項２３に記載の薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０１２年７月１９日に出願された米国仮特許出願番号第６１／６７３，６３０号の優先利益を主張する。
【０００２】
序論
Ｉｇスーパーファミリーに属する系統限定Ｂ細胞抗原であるＣＤ２２は、多くの種類の悪性Ｂ細胞の表面、および正常な成熟Ｂリンパ細胞上に発現される。
【発明の概要】
【０００３】
本開示は、ＣＤ２２に特異的な抗体を提供する。また、種々の治療、診断、および監視用途に有用な抗体も提供される。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
【図１Ａ】キメラまたはヒト化抗ＣＤ２２抗体の重鎖（図１Ａ）および軽鎖（図１Ｂ）をコードする構築物を示す。
【図１Ｂ】同上。
【図２Ａ】ヒト化抗ＣＤ２２抗体とビオチン化親キメラ抗ＣＤ２２抗体との固定化ＣＤ２２への結合についての競合を示すグラフである。
【図２Ｂ】同上。
【図２Ｃ】同上。
【図２Ｄ】同上。
【図２Ｅ】同上。
【図３Ａ】抗体を試験するための健常ドナーのＴ細胞増殖応答を示す。
【図３Ｂ】同上。
【図３Ｃ】同上。
【図３Ｄ】同上。
【図４】ヒト化抗ＣＤ２２抗体のＲａｊｉ細胞への結合、およびＲａｊｉ細胞による抗体の内在化を示す。
【図５】変異抗体のヒトＣＤ２２に対する結合親和性を示す。
【図６Ａ】ヒト化抗ＣＤ２２変異体の凝集を示す。
【図６Ｂ】同上。
【図６Ｃ】同上。
【図６Ｄ】同上。
【図７Ａ】抗ＣＤ２２の重鎖（図７Ａ）および軽鎖（図７Ｂ）可変領域のアミノ酸配列を提供する。
【図７Ｂ】同上。
【図８Ａ】抗ＣＤ２２抗体の変異抗体９〜２０のアミノ酸配列を提供する。
【図８Ｂ】同上。
【図８Ｃ】同上。
【図８Ｄ】同上。
【図８Ｅ】同上。
【図９Ａ】ＣＤ２２アイソフォームのアミノ酸配列を提供する（上から下へ：配列番号：３５〜３８）。
【図９Ｂ】同上。
【図９Ｃ】同上。
【０００５】
定義
「抗体」および「免疫グロブリン」という用語は、任意のアイソタイプの抗体または免疫グロブリン、抗原との特異的結合を保持する抗体の断片（Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、およびＦｄ断片を含むがこれらに限定されない、）、キメラ抗体、ヒト化抗体、一本鎖抗体、ならびに抗体の抗原結合部分および非抗体タンパク質を含む融合タンパク質を含む。抗体は、例えば、放射性同位体、検出可能な生成物を産生する酵素、蛍光タンパク質等を用いて検出可能に標識されてもよい。抗体はさらに、特異的結合対のメンバー、例えばビオチン（ビオチン−アビジン特異的結合対のメンバー）等の他の部分にコンジュゲートされてもよい。抗体は、ポリスチレンプレートまたはビーズ等を含むがこれらに限定されない固体支持体に結合してもよい。抗原との特異的結合を保持するＦａｂ’、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）２、および／または他の抗体断片、ならびにモノクローナル抗体も、これらの用語に包含される。抗体は、一価または二価であり得る。
【０００６】
「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部、例えば、インタクトな抗体の抗原結合領域または可変領域を含む。抗体断片の例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片；ダイアボディ；線形抗体（Ｚａｐａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２（１９９５））；一本鎖抗体分子；および抗体断片から形成される多特異的抗体が挙げられる。抗体のパパイン消化は、各々が単一の抗原結合部位を有する「Ｆａｂ」断片と称される２つの同一の抗原結合断片と、容易に結晶化する能力を反映する名称である、残りの「Ｆｃ」断片とを産生する。ペプシン処理は、２つの抗原結合部位を有し、なおも抗原と架橋結合することが可能な、Ｆ（ａｂ’）２断片を生じる。
【０００７】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位および抗原結合部位を含む最小の抗体断片である。この領域は、緊密に非共有結合的に会合した１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインとのダイマーからなる。この構成において、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ−ＶＬダイマーの表面上の抗原結合部位を画定する。集合的に、６つのＣＤＲが、抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながら、たとえ単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）であっても、抗原を認識して結合する能力を有するが、その親和性は完全な結合部位よりも低い。
【０００８】
「Ｆａｂ」断片は、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）も含む。Ｆａｂ断片は、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端に、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含む数個の残基が付加していることによってＦａｂ’断片とは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を担持するＦａｂ’の本明細書における名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元々、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として生成された。抗体断片の他の化学的結合は既知である。
【０００９】
任意の脊椎動物種からの抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、κ（カッパ）およびλ（ラムダ）と称される２つの明らかに異なる種類の一方に割り当てることができる。それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンを異なるクラスに割り当てることができる。免疫グロブリンの５つの主要なクラス、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかは、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、およびＩｇＡ２といったサブクラス（アイソタイプ）にさらに分割されてもよい。
【００１０】
「一本鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖内に存在する。いくつかの実施形態において、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、ｓＦｖが抗原結合に所望される構造を形成することを可能にする。ｓＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  ｖｏｌ．１１３，  Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたい。
【００１１】
「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片を指し、該断片は、同じポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）内で軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同じ鎖上の２つのドメイン間で対形成するには短か過ぎるリンカーを用いることにより、ドメインを別の鎖の相補的ドメインと強制的に対形成させ、２つの抗原結合部位を作製する。ダイアボディは、例えば、欧州特許第４０４，０９７号、国際公開第ＷＯ９３／１１１６１号、およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）に、より詳細に記載されている。
【００１２】
本明細書で使用される場合、「親和性」という用語は、２つの物質の可逆的結合の平衡定数を指し、解離定数（Ｋｄ）として表される。親和性は、無関係のアミノ酸配列に対する抗体の親和性よりも、少なくとも１倍大きい、少なくとも２倍大きい、少なくとも３倍大きい、少なくとも４倍大きい、少なくとも５倍大きい、少なくとも６倍大きい、少なくとも７倍大きい、少なくとも８倍大きい、少なくとも９倍大きい、少なくとも１０倍大きい、少なくとも２０倍大きい、少なくとも３０倍大きい、少なくとも４０倍大きい、少なくとも５０倍大きい、少なくとも６０倍大きい、少なくとも７０倍大きい、少なくとも８０倍大きい、少なくとも９０倍大きい、少なくとも１００倍大きいか、もしくは少なくとも１０００倍大きい、またはそれ以上であり得る。標的タンパク質に対する抗体の親和性は、例えば、約１００ナノモル（ｎＭ）〜約０．１ｎＭ、約１００ｎＭ〜約１ピコモル（ｐＭ）、または約１００ｎＭ〜約１フェムトモル（ｆＭ）以上であり得る。本明細書で使用される場合、「結合活性」という用語は、２つ以上の物質の複合体の希釈後の解離に対する抵抗性を指す。「免疫反応性」および「優先的に結合する」という用語は、抗体および／または抗原結合断片に関して、本明細書において同義に使用される。
【００１３】
「結合」という用語は、塩架橋および水架橋等の相互作用を含む、例えば、共有結合的、静電的、疎水性、ならびにイオン性および／または水素結合性の相互作用に起因する２つの分子間の直接的会合を指す。主題の抗ＣＤ２２は、ＣＤ−２２ポリペプチド内のエピトープに特異的に結合する。非特異的結合は、約１０−７Ｍ未満の親和性の結合、例えば、１０−６Ｍ、１０−５Ｍ、１０−４Ｍ等の親和性の結合を指す。
【００１４】
本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」という用語は、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見られる不連続な抗原結合部位を意味することが意図される。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−６６１６（１９７７）；Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ”（１９９１）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）；およびＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（１９９６）に記載されており、その定義は、互いに対して比較した時のアミノ酸残基の重複またはサブセットを含む。それにもかかわらず、抗体または移植抗体またはその変異体のＣＤＲを指すためのいずれかの定義の適用は、本明細書において定義および使用される用語の範囲内であることが意図される。上に列挙した参考文献の各々によって定義されるＣＤＲを包含するアミノ酸残基を、比較として下の表１に記載する。
【表１】
0006578206.tif 000002
【００１５】
本明細書で使用される場合、抗体可変領域に言及して使用される場合の「フレームワーク」という用語は、抗体の可変領域内のＣＤＲ領域以外の全てのアミノ酸残基を意味することが意図される。可変領域のフレームワークは、一般的に約１００〜１２０アミノ酸長の不連続なアミノ酸配列であるが、ＣＤＲ以外のアミノ酸のみを指すことが意図される。本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」という用語は、ＣＤＲによって分離されたフレームワークの各ドメインを意味することが意図される。
【００１６】
「単離された」抗体は、その天然環境の成分から同定および分離され、かつ／または回収された抗体である。その天然環境の混入成分は、抗体の診断または治療上の使用を妨げる物質であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性の溶質を含み得る。いくつかの実施形態において、抗体は、（１）ローリー法によって決定した場合に、抗体の９０重量％を上回るまで、９５重量％を上回るまで、もしくは９８重量％を上回るまで、例えば９９重量％を上回るまで、（２）スピニングカップ配列決定装置の使用によってＮ末端もしくは内部のアミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、または（３）クマシーブルー染色もしくは銀染色を用いた還元条件もしくは非還元条件下でのラウリル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって均質になるまで、精製される。単離された抗体は、抗体の天然環境の少なくとも１つの成分が存在しなくなるため、組換え細胞内にｉｎ  ｓｉｔｕで抗体を含む。場合によっては、単離された抗体は、少なくとも１つの精製ステップによって調製される。
【００１７】
本明細書で使用される場合、「治療」、「治療する」等の用語は、所望の薬理学的および／または生理学的効果を得ることを指す。該効果は、疾患もしくはその症状を完全にもしくは部分的に防止するという点において予防的であり得、かつ／または、疾患および／もしくは疾患に起因する悪影響の部分的もしくは完全な治癒という点において治療的であり得る。本明細書で使用される場合、「治療」は、哺乳動物、特にヒトにおける疾患の任意の治療を包含し、（ａ）疾患にかかりやすい可能性があるが、まだそれを有すると診断されていない対象において疾患の発症を予防すること、（ｂ）疾患を阻害すること、すなわち、その発生を停止すること、および（ｃ）疾患を軽減すること、すなわち、その疾患の退行を引き起こすことを含む。
【００１８】
「個体」、「対象」、「宿主」、および「患者」という用語は、本明細書において同義に使用され、ネズミ（ラット、マウス）、非ヒト霊長類、ヒト、イヌ、ネコ、有蹄動物（例えば、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ）等を含むがこれらに限定されない哺乳動物を指す。
【００１９】
「治療的有効量」または「効果的な量」は、疾患を治療するために哺乳動物または他の対象に投与された場合に、そのような疾患の治療を達成するのに十分な主題の抗ＣＤ２２Ａｂの量を指す。「治療的有効量」は、抗ＣＤ２２Ａｂ、疾患およびその感受性、ならびに治療を受ける対象の年齢、体重等に応じて変化する。
【００２０】
「生物試料」は、個人から得られる様々な試料の種類を包含し、診断アッセイまたはモニタリングアッセイに使用することができる。この定義は、血液および他の生物学的起源の液体試料、固体組織試料、例えば、生検標本もしくは組織培養物またはそれに由来する細胞およびその子孫を包含する。この定義は、例えば、試薬による処理、可溶化、またはポリヌクレオチド等の特定の成分の濃縮等により、それらの調達後にいずれかの方法で操作された試料を包含する。「生物試料」という用語は、臨床試料を包含し、また、培養物中の細胞、細胞上清、細胞溶解物、血清、血漿、生物学的流体、および組織試料も包含する。場合によっては、生物試料はＢ細胞を含む。
【００２１】
本発明をさらに説明する前に、本発明は、記載される特定の実施形態に限定されるものではなく、そのため、当然、変化し得ることを理解されたい。また、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、本明細書で使用される専門用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的としており、限定的であることを意図しないことも理解されたい。
【００２２】
値の範囲が提供される場合、その範囲の上限値と下限値の間の各介在値（別途文脈が明確に指示しない限り、下限値の単位の１０分の１まで）、ならびにその記載される範囲内の任意の他の記載される値または介在値が本発明に包含されることを理解されたい。これらのより小さい範囲の上限値および下限値は、より小さい範囲内に独立して含まれてもよく、記載される範囲内の任意の具体的に除外された限度に従って本発明内にも包含される。記載される範囲がそれらの限度のうちの一方または両方を含む場合、それらの包含される限度のいずれかまたは両方を除外する範囲もまた、本発明に包含される。
【００２３】
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似するかまたは同等の任意の方法および材料が、本発明の実施または試験に用いられ得るが、好ましい方法および材料を次に記載する。本明細書に記載される全ての刊行物は、その刊行物が引用されることに関連して方法および／または材料を開示および記載するために、参照により本明細書に組み込まれる。
【００２４】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎｄ」、および「ｔｈｅ」は、文脈上、別途明確に指示されない限り、複数形の指示対象を含むことに留意されたい。したがって、例えば、「抗体（ａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」への言及は、複数のそのような抗体を含み、「（ｔｈｅ）ＣＤＲ」への言及は、１つ以上のＣＤＲ、および当該者に既知であるその均等物への言及を含む等である。さらに、特許請求の範囲は、あらゆる任意選択的な要素を除外するように起草される場合があることに留意されたい。そのため、この記述は、特許請求の範囲の要素の列挙に関連して、「単独で」、「のみ」等の排他的用語の使用、または「否定的」な限定の使用の先行詞としての役割を果たすことが意図される。
【００２５】
本明細書で論じられる刊行物は、本出願の出願日より前の開示についてのみ提供される。本明細書中のいかなる記載も、本発明が、先行発明のために、そのような刊行物に先行する権利を有しないことの許諾であると解釈されるべきではない。さらに、提供される公開日は、実際の公開日とは異なる可能性があり、それらは個別に確認する必要があり得る。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本開示は、ＣＤ２２に特異的な抗体を提供する。また、種々の治療、診断、および監視用途に有用な抗体も提供される。
【００２７】
抗体
主題の抗体は、ＣＤ２２ポリペプチドに特異的に結合し、エピトープは、ＣＤ２２抗原内のアミノ酸残基（例えば、図９Ａ〜Ｃに示されるＣＤ２２のアミノ酸配列のアミノ酸１〜８４７内、アミノ酸１〜７５９内、アミノ酸１〜７５１、またはアミノ酸１〜６７０内）を含む。
【００２８】
ＣＤ２２エピトープは、図９Ａ〜Ｃに示されるヒトＣＤ２２アイソフォーム４のアミノ酸配列の約５００個のアミノ酸〜約６７０個のアミノ酸の連続的なストレッチに対して、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドによって形成されてもよい。ＣＤ２２エピトープは、図９Ａ〜Ｃに示されるヒトＣＤ２２アイソフォーム３のアミノ酸配列の約５００個のアミノ酸〜約７５１個のアミノ酸の連続的なストレッチに対して、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドによって形成されてもよい。ＣＤ２２エピトープは、図９Ａ〜Ｃに示されるヒトＣＤ２２アイソフォーム２のアミノ酸配列の約５００個のアミノ酸〜約７５９個のアミノ酸の連続的なストレッチに対して、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドによって形成されてもよい。ＣＤ２２エピトープは、図９Ａ〜Ｃに示されるヒトＣＤ２２アイソフォーム１のアミノ酸配列の約５００個のアミノ酸〜約８４７個のアミノ酸の連続的なストレッチに対して、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドによって形成されてもよい。
【００２９】
主題の抗体は、ＣＤ２２への高い親和性結合を示す。例えば、主題の抗体は、少なくとも約１０−７Ｍ、少なくとも約１０−８Ｍ、少なくとも約１０−９Ｍ、少なくとも約１０−１０Ｍ、少なくとも約１０−１１Ｍ、もしくは少なくとも約１０−１２Ｍ、または１０−１２Ｍを上回る親和性でＣＤ２２に結合する。主題の抗体は、ＣＤ２２上に存在するエピトープに、約１０−７Ｍ〜約１０−８Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−１０Ｍ〜約１０−１１Ｍ、もしくは約１０−１１Ｍ〜約１０−１２Ｍ、または１０−１２Ｍを上回る親和性で結合する。
【００３０】
本開示の抗ＣＤ２２抗体は、場合によっては、その細胞表面上にＣＤ２２を発現する細胞においてアポトーシスを誘導することができる。
【００３１】
「ＣＤ２２抗原」または「ＣＤ２２ポリペプチド」は、図９Ａ〜Ｃに示されるＣＤ２２アイソフォーム１、２、３、または４のアミノ酸配列の、約５００個のアミノ酸（ａａ）から、約８４７個のａａ（アイソフォーム１）まで、約７５９個のａａ（アイソフォーム２）まで、約７５１個のａａ（アイソフォーム３）まで、または約６７０個のａａ（アイソフォーム４）までの連続的なストレッチに対して、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。
【００３２】
「抗体」という用語は、エピトープに結合することが可能な１つ以上（例えば、１つもしくは２つ）の重鎖可変領域（ＶＨ）および／または１つ以上（例えば、１つもしくは２つ）の軽鎖可変領域（ＶＬ）、あるいはその細断片を含むタンパク質を指す。ＶＨおよびＶＬ領域は、「フレームワーク領域（ＦＲ）」と称される、より保存された領域が散在する「相補性決定領域（ＣＤＲ）」と称される超可変領域にさらに細分化することができる。ＦＲおよびＣＤＲの範囲は正確に画定されている（Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  ヒトＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７を参照のこと）。ＶＨは、以下の順序でＮ末端からＣ末端に配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲを含むことができる：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。同様に、ＶＬは、以下の順序でＮ末端からＣ末端に配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲを含むことができる：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。
【００３３】
抗体のＶＨ鎖またはＶＬ鎖は、重鎖定常領域または軽鎖定常領域の全部または一部をさらに含むことができ、それによって、それぞれ、重鎖または軽鎖免疫グロブリンを形成する。一実施形態において、抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖の４量体であり、重鎖および軽鎖は、例えば、ジスルフィド結合によって相互接続される。重鎖定常領域は、３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬから構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合領域を含む。抗体の定常領域は、典型的には、免疫系の種々の細胞および補体系の第１の成分を含む宿主の組織および因子への抗体の結合を媒介する。「抗体」という用語は、ＩｇＡ型、ＩｇＧ型、ＩｇＥ型、ＩｇＤ型、ＩｇＭ型、およびそれらの亜型のインタクトな免疫グロブリンを含む。いくつかの実施形態において、主題の抗体は、ＩｇＧアイソタイプである。いくつかの実施形態において、主題の抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプである。
【００３４】
本明細書で使用される場合、「免疫グロブリン」という用語は、免疫グロブリン遺伝子によって実質的にコードされる１つ以上のポリペプチドからなるタンパク質を指す。認識されているヒト免疫グロブリン遺伝子は、κ、λ、α（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、γ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、δ、ε、およびμ定常領域遺伝子、ならびに多数の免疫グロブリン可変領域遺伝子を含む。全長免疫グロブリン軽鎖（約２５ｋＤまたは２１４個のアミノ酸）は、Ｎ末端の可変領域遺伝子（約１１０個のアミノ酸）およびＣ末端のκまたはλ定常領域遺伝子によってコードされる。全長免疫グロブリン重鎖（約５０ｋＤまたは４４６個のアミノ酸）は、Ｎ末端の可変領域遺伝子（約１１６個のアミノ酸）およびＣ末端の他の前述の定常領域遺伝子のうちの１つ、例えば、（約３３０個のアミノ酸をコードする）γによってコードされる。いくつかの実施形態において、主題の抗体は、全長免疫グロブリン重鎖および全長免疫グロブリン軽鎖を含む。
【００３５】
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、全長免疫グロブリン重鎖および全長免疫グロブリン軽鎖を含まず、代わりに、全長免疫グロブリン重鎖および全長免疫グロブリン軽鎖の抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態において、抗原結合断片は、別々のポリペプチド鎖上に含まれており、他の実施形態において、抗原結合断片は、単一のポリペプチド鎖内に含まれる。「抗原結合断片」という用語は、上述のＣＤ２２に特異的に結合することが可能な全長抗体の１つ以上の断片を指す。結合断片の例として、（ｉ）Ｆａｂ断片（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなる一価の断片）；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片（ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって結合される２つのＦａｂ断片を含む二価の断片）；（ｉｉｉ）（ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなる）Ｆｄ断片；（ｉｖ）（抗体の単一アームのＶＨドメインおよびＶＬドメインからなる）Ｆｖ断片；（ｖ）（ＶＨドメインからなる）ｄＡｂ断片；（ｖｉ）単離されたＣＤＲ；（ｖｉｉ）（ＶＨドメインとＶＬドメインが対になって一価の分子を形成するような組換え手段を用いて、合成リンカーによって結合される抗体の単一アームのＶＨドメインおよびＶＬドメインからなる）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）；（ｖｉｉｉ）（ＶＨドメインとＶＬドメインが、対にならないで一価の分子を形成するように結合し、ｓｃＦｖの各１つのＶＨが、他のｓｃＦｖのＶＬドメインと対になって二価の分子を形成する、２つのｓｃＦｖからなる）ダイアボディ；（ｉｘ）（少なくとも２つの抗原結合領域からなり、各領域が異なるエピトープに結合している）二重特異性抗体が挙げられる。いくつかの実施形態において、主題の抗体断片はＦａｂ断片である。いくつかの実施形態において、主題の抗体断片は一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）である。
【００３６】
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、組換えまたは修飾抗体、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、脱免疫化抗体、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ生成抗体である。本明細書で使用される「組換え」または「修飾」抗体という用語は、（ｉ）宿主細胞にトランスフェクトした組換え発現ベクターを用いて発現させる抗体；（ｉｉ）組換えコンビナトリアル抗体ライブラリーから単離された抗体；（ｉｉｉ）ヒト免疫グロブリン遺伝子を遺伝子導入した動物（例えば、マウス）から単離された抗体；または（ｉｖ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列を他のＤＮＡ配列にスプライシングすることを含む任意の他の手段によって調製されたか、発現させたか、作製されたか、または単離された抗体等の、組換え手段によって調製されたか、発現させたか、作製されたか、または単離された全ての抗体を含むことが意図される。そのような組換え抗体は、ヒト化抗体、ＣＤＲ移植抗体、キメラ抗体、脱免疫化抗体、およびｉｎ  ｖｉｔｒｏ生成抗体を含み、任意選択的に、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する定常領域を含むことができる。
【００３７】
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＸ１ＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＸ２ＬＹＬＱＭＸ３ＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１）（Ｘ１は、Ｋ（Ｌｙｓ）またはＲ（Ａｒｇ）であり；Ｘ２は、Ｓ（Ｓｅｒ）またはＴ（Ｔｈｒ）であり；Ｘ３は、Ｎ（Ａｓｎ）またはＳ（Ｓｅｒ）である）を有するＶＨ領域を含む重鎖と、ｂ）免疫グロブリン軽鎖とを含む。
【００３８】
結果として得られる抗体がＣＤ２２に特異的に結合する限り、軽鎖は、任意の好適なＶＬアミノ酸配列を有することができる。
【００３９】
例示的なＶＬアミノ酸配列として、
【００４０】
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＱＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７；ＶＫ１）、
【００４１】
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８；ＶＫ２）、および
【００４２】
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９；ＶＫ４）が挙げられる。
【００４３】
したがって、例えば、主題の抗ＣＤ２２抗体は、ａ）配列番号１）に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ領域を含む重鎖と、ＶＫ１のＶＬ領域を含む軽鎖とを含むことができる。
他の場合において、主題の抗ＣＤ２２抗体は、ａ）配列番号１）に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ領域を含む重鎖と、ＶＫ２のＶＬ領域を含む軽鎖とを含むことができる。さらに他の場合において、主題の抗ＣＤ２２抗体は、ａ）配列番号１）に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ領域を含む重鎖と、ＶＫ４のＶＬ領域を含む軽鎖とを含むことができる。
【００４４】
場合によっては、主題の抗ＣＤ２２抗体は、ａ）アミノ酸配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＸ１ＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＸ２ＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＸ３ＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２）（Ｘ１は、Ｌ（Ｌｅｕ）またはＶ（Ｖａｌ）であり；Ｘ２は、Ｖ（Ｖａｌ）またはＰ（Ｐｒｏ）であり；Ｘ３は、Ｑ（Ｇｌｎ）またはＰ（Ｐｒｏ）である）を含む免疫グロブリン軽鎖と、ｂ）免疫グロブリン重鎖とを含む。重鎖は、
【００４５】
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ  （配列番号３；ＶＨ３）、
【００４６】
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ  （配列番号４；ＶＨ４）、
【００４７】
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ  （配列番号５；ＶＨ５）、および
【００４８】
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６；ＶＨ６）から選択されるアミノ酸配列を含むことができる。
【００４９】
主題の抗体を使用するのに好適なリンカーは、「可動性リンカー」を含む。存在する場合、リンカー分子は、一般的に、結合された領域間のある程度の柔軟な動きを許容するのに十分な長さである。リンカー分子は、一般的に、約６〜５０原子の長さである。またリンカー分子は、例えば、アリールアセチレン、２〜１０単量体単位を含むエチレングリコールオリゴマー、ジアミン、二酸、アミノ酸、またはそれらの組み合わせであってもよい。ポリペプチドに結合することができる他のリンカー分子は、本開示を考慮して使用され得る。
【００５０】
主題の抗体は、「ヒト化」抗体であってもよい。「ヒト化抗体」という用語は、実質的にヒト抗体鎖に由来する可変領域フレームワーク残基（アクセプター免疫グロブリンまたは抗体と称される）と、実質的にマウス抗体に由来する少なくとも１つのＣＤＲ（ドナー免疫グロブリンまたは抗体と称される）とを含む少なくとも１つの鎖を含む抗体を指す。Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：１００２９  １００３３（１９８９）、米国特許第５，５３０，１０１号、米国特許第５，５８５，０８９号、米国特許第５，６９３，７６１号、国際公開第ＷＯ９０／０７８６１号、および米国特許第５，２２５，５３９号を参照のこと。定常領域（複数可）は、存在する場合、実質的にまたは完全に、ヒト免疫グロブリンにも由来し得る。ヒト化抗体の作製方法は、当該技術分野で既知である。例えば、米国特許第７，２５６，２７３号を参照のこと。
【００５１】
例えば、ヒト可変ドメインフレームワークが、ＣＤＲの起源であるマウス可変フレームワークと同じかまたは同様の立体構造をとる場合、マウスＣＤＲをヒト可変ドメインフレームワークに置換することにより、それらの正確な空間的配向を保持することができる。これは、そのフレームワーク配列が、ＣＤＲが由来するマウス可変フレームワークドメインとの高度な配列同一性を示すヒト抗体からヒト可変ドメインを得ることによって達成することができる。重鎖および軽鎖可変フレームワーク領域は、同じかまたは異なるヒト抗体配列に由来し得る。ヒト抗体配列は、天然に存在するヒト抗体の配列であってもよいか、またはいくつかのヒト抗体のコンセンサス配列であってもよい。Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ４：７７３（１９９１）；Ｋｏｌｂｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ６：９７１（１９９３）を参照のこと。
【００５２】
マウスドナー免疫グロブリンおよび適切なヒトアクセプター免疫グロブリンの相補性決定領域を同定したら、次のステップは、結果として得られるヒト化抗体の特性を最適化するために、これらの成分のどの残基（存在する場合）を置換するべきかを決定することである。一般に、マウス残基の導入は、ヒトにおいて抗体によるヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答を誘発するリスクを増大させるため、マウスによるヒトアミノ酸残基の置換は最小限に抑えられるべきである。当該技術分野で認識されている免疫応答を決定する方法は、特定の患者においてまたは臨床試験の間にＨＡＭＡ応答を監視するために行うことができる。ヒト化抗体を投与された患者には、前記治療薬の投与の開始時におよび全体を通して免疫原性の評価が行われてもよい。ＨＡＭＡ応答は、例えば、表面プラズモン共鳴技術（ＢＩＡＣＯＲＥ）および／または固相ＥＬＩＳＡ分析を含む当業者に既知の方法を用いて、患者由来の血清試料中でヒト化治療試薬に対する抗体を検出することによって測定される。多くの実施形態において、主題のヒト化抗体は、ヒト対象において実質的にＨＡＭＡ応答を誘発しない。
【００５３】
ヒト可変領域フレームワーク残基からの特定のアミノ酸は、それらがＣＤＲ立体構造および／または抗原への結合に及ぼすと考えられる影響に基づいて、置換のために選択される。ヒト可変フレームワーク領域を有するマウスＣＤＲ領域の不自然な並置は、不自然な構造的な制約を生じる可能性があり、特定のアミノ酸残基の置換によって修正されない限り、結合親和性の損失を引き起こす。
【００５４】
置換のためのアミノ酸残基の選択は、一部、コンピュータモデリングによって決定されてもよい。免疫グロブリン分子の三次元画像を生成するためのコンピュータハードウェアおよびソフトウェアは、当該技術分野で既知である。一般に、分子モデルは、免疫グロブリン鎖またはそのドメインに関する解明済の構造から出発して生成される。モデル化される鎖は、アミノ酸配列類似性について解明済みの三次元構造の鎖またはドメインと比較され、最も高い配列類似性を示す鎖またはドメイン（単数または複数）が、分子モデルの構築の出発点として選択される。少なくとも５０％の配列同一性を共有する鎖またはドメインが、モデリングのために選択され、好ましくは、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上の配列同一性を共有する鎖またはドメインが、モデリングのために選択される。解明済みの出発構造は、モデル化されている免疫グロブリン鎖またはドメイン内の実際のアミノ酸と、出発構造内のアミノ酸との間の違いを許容するように修飾される。次いで、修飾された構造が、複合免疫グロブリンに組み立てられる。最後に、モデルは、エネルギー最小化によって、また全ての原子が互いから適切な距離内にあること、ならびに結合の長さおよび角度が化学的に許容される限度内にあることを検証することによって、精密化される。
【００５５】
ＣＤＲおよびフレームワーク領域は、Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９８７  ａｎｄ  １９９１）によって定義される通りである。代替の構造の定義は、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７）；Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８（１９８９）；およびＪ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１８６：６５１（１９８９）（集合的に「Ｃｈｏｔｈｉａ」と称される）によって提唱されている。上記Ｋａｂａｔによって定義されるフレームワーク残基が、上記Ｃｈｏｔｈｉａによって定義されるような構造ループ残基を構成する場合、マウス抗体中に存在するアミノ酸が、ヒト化抗体への置換のために選択されてもよい。「ＣＤＲ領域に隣接する」残基は、ヒト化免疫グロブリン鎖の一次配列内のＣＤＲのうちの１つ以上に直接隣接する位置、例えば、Ｋａｂａｔによって定義されるようなＣＤＲまたはＣｈｏｔｈｉａによって定義されるようなＣＤＲに直接隣接する位置にあるアミノ酸残基を含む（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ  ＪＭＢ  １９６：９０１（１９８７）を参照）。これらのアミノ酸は、ＣＤＲ内のアミノ酸と相互作用する可能性が特に高く、アクセプターから選択された場合、ドナーＣＤＲを歪め、親和性を低下させる。さらに、隣接するアミノ酸は、抗原と直接相互作用してもよく（Ａｍｉｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３３：７４７（１９８６））、ドナーからこれらのアミノ酸を選択することは、元の抗体において親和性を提供する全ての抗原接触を維持するために望ましいかもしれない。
【００５６】
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、ｓｃＦｖ多量体を含む。例えば、いくつかの実施形態において、主題の抗体は、ｓｃＦｖ二量体（例えば、２つのタンデムｓｃＦｖを含む（ｓｃＦｖ２））、ｓｃＦｖ三量体（例えば、３つのタンデムｓｃＦｖを含む（ｓｃＦｖ３））、ｓｃＦｖ四両体（例えば、４つのタンデムｓｃＦｖを含む（ｓｃＦｖ４））、または４つより多くのｓｃＦｖの多量体（例えば、タンデム）である。ｓｃＦｖ単量体は、約２アミノ酸〜約１０アミノ酸長、例えば、２ａａ、３ａａ、４ａａ、５ａａ、６ａａ、７ａａ、８ａａ、９ａａ、または１０ａａの長さのリンカーを介して、タンデムに結合することができる。好適なリンカーは、例えば、（Ｇｌｙ）ｘを含み、ｘは、２〜１０の整数である。他の好適なリンカーは、上述したものである。いくつかの実施形態において、上述のように、主題のｓｃＦＶ多量体中のｓｃＦｖ単量体の各々がヒト化される。
【００５７】
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、免疫グロブリンの定常領域（例えば、Ｆｃ領域）を含む。Ｆｃ領域は、存在する場合、ヒトＦｃ領域であってもよい。定常領域が存在する場合、抗体は、軽鎖定常領域および重鎖定常領域の両方を含むことができる。好適な重鎖定常領域は、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４領域を含む。本明細書に記載される抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥを含む全種類の定常領域と、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含むあらゆるアイソタイプを有する抗体を含む。好適な重鎖Ｆｃ領域の例は、ヒトアイソタイプＩｇＧ１  Ｆｃである。軽鎖定常領域は、λまたはκであり得る。主題の抗体（例えば、主題のヒト化抗体）は、１つより多くのクラスまたはアイソタイプからの配列を含むことができる。抗体は、２つの軽鎖および２つの重鎖を含む四量体として、別々の重鎖、軽鎖として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’  Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖとして、または軽鎖および軽鎖可変ドメインがスペーサーによって結合された一本鎖抗体として、発現させることができる。
【００５８】
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、カルボキシル末端に遊離チオール（−ＳＨ）基を含み、遊離チオール基は、抗体を第２のポリペプチド（例えば、主題の抗体を含む別の抗体）、足場、担体等に付着させるために使用することができる。
【００５９】
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、１つ以上の天然には存在しないアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、天然にはコードされないアミノ酸は、カルボニル基、アセチル基、アミノオキシ基、ヒドラジン基、ヒドラジド基、セミカルバジド基、アジド基、またはアルキン基を含む。好適な天然には存在しないアミノ酸については、例えば、米国特許第７，６３２，９２４号を参照のこと。天然には存在しないアミノ酸の包含により、ポリマー、第２のポリペプチド、足場等への結合を提供することができる。例えば、水溶性ポリマーに結合された主題の抗体は、カルボニル基を含む水溶性ポリマー（例えば、ＰＥＧ）を、アミノオキシ、ヒドラジン、ヒドラジド、またはセミカルバジド基を含む天然にはコードされないアミノ酸を含む主題の抗体と反応させることにより作製することができる。別の例として、水溶性ポリマーに結合された主題の抗体は、アルキン含有アミノ酸を含む主題の抗体を、アジド部分を含む水溶性ポリマー（例えば、ＰＥＧ）と反応させることにより作製することができる：いくつかの実施形態において、アジドまたはアルキン基は、アミド結合を介してＰＥＧ分子と結合される。「天然にはコードされないアミノ酸」は、２０の共通アミノ酸のうちの１つまたはピロリジンまたはセレノシステインではないアミノ酸を指す。「天然にはコードされないアミノ酸」と同義に用いられ得る他の用語は、「天然ではないアミノ酸」、「非天然のアミノ酸」、「天然には存在しないアミノ酸」、およびそれらの様々なハイフン付およびハイフンの付かない型である。「天然にはコードされないアミノ酸」という用語は、天然にコードされたアミノ酸（２０の共通アミノ酸またはピロリジンおよびセレノシステインを含むが、これらに限定されない）の修飾（例えば、翻訳後修飾）によって生じるが、それら自体は、成長中のポリペプチド鎖内に翻訳複合体によって天然の状態では組み込まれないアミノ酸も含むが、これらに限定されない。そのような天然には存在しないアミノ酸の例として、限定されないが、Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｌ−セリン、Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｌ−スレオニン、およびＯ−ホスホチロシンが挙げられる。
【００６０】
本開示はまた、対象となる付着部分、例えば、検出可能な標識、薬物、半減期延長部分等を有する抗ＣＤ２２抗体も提供する。抗体の修飾は、様々な合成および／または組換え方法によって達成することができる。抗体に付着する部分（単数または複数）は、多様な機能または特徴おのうちの１つ以上を提供することができる。例示的な部分として、検出可能な標識（例えば、色素標識（例えば、発色団、フルオロフォア）、生物物理学的プローブ（スピン標識、核磁気共鳴（ＮＭＲ）プローブ）、フェルスター共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）型標識（例えば、フルオロフォア／消光剤対の少なくとも１つのメンバーを含むＦＲＥＴ対の少なくとも１つのメンバー）、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）型標識（例えば、ＢＲＥＴ対の少なくとも１つのメンバー）、免疫検出可能なタグ（例えば、ＦＬＡＧ、Ｈｉｓ（６）等）；水溶性ポリマー（例えば、ペグ化）；精製用タグ（例えば、アフィニティークロマトグラフィーによる単離を促進するため（例えば、ＦＬＡＧ  エピトープの付着；膜局在化ドメイン（例えば、脂質またはグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）−型アンカー）；固定用タグ（例えば、選択可能な付着を含む、ポリペプチドの表面への付着を促進するため）；薬物（例えば、例えば、薬物の抗体への付着による、薬物標的化を促進するため）等が挙げられる。
【００６１】
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、ポリマー（例えば、ポリペプチド以外のポリマー）に結合される（例えば、共有結合）。好適なポリマーは、例えば、生体適合性ポリマー、および水溶性生体適合性ポリマーを含む。好適なポリマーは、合成ポリマーおよび天然に存在するポリマーを含む。好適なポリマーは、例えば、置換もしくは非置換の直鎖もしくは分岐鎖のポリアルキレン、ポリアルケニレン、もしくはポリオキシアルキレンポリマー、または分岐もしくは非分岐の多糖類、例えば、ホモもしくはヘテロ多糖を含む。好適なポリマーは、例えば、エチレンビニルアルコールコポリマー（一般には、一般名ＥＶＯＨまたは商品名ＥＶＡＬによって知られる）；ポリブチルメタクリレート；ポリ（ヒドロキシバレレート）；ポリ（Ｌ−乳酸）；ポリカプロラクトン；ポリ（ラクチ°−ｃｏ−グリコリド）；ポリ（ヒドロキシブチレート）；ポリ（ヒドロキシブチレート−ｃｏ−バレレート）；ポリジオキサノン；ポリオルトエステル；ポリ酸無水物；ポリ（グリコール酸）；ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸）；ポリ（グリコール酸−ｃｏ−トリメチレンカーボネート）；ポリホスホエステル；ポリホスホエステルウレタン；ポリ（アミノ酸）；シアノアクリレート；ポリ（トリメチレンカーボネート）；ポリ（イミノカーボネート）；コポリ（エーテル−エステル）（例えば、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（乳酸）（ＰＥＯ／ＰＬＡ）コポリマー）；ポリアルキレンオキサレート；ポリホスファゼン；生体分子、例えば、フィブリン、フィブリノゲン、セルロース、デンプン、コラーゲンおよびヒアルロン酸；ポリウレタン；ケイ素；ポリエステル；ポリオレフィン；ポリイソブチレンおよびエチレン−αオレフィンコポリマー；アクリルポリマーおよびコポリマー；ハロゲン化ビニルポリマーおよびコポリマー、例えば、塩化ポリビニル；ポリビニルエーテル、例えば、ポリビニルメチルエーテル；ハロゲン化ポリビニリデン、例えば、フッ化ポリビニリデンおよび塩化ポリビニリデン；ポリアクリロニトリル；ポリビニルケトン；ポリビニル芳香族、例えばポリスチレン；ポリビニルエステル、例えば、ポリ酢酸ビニル；ビニル単量体同士のコポリマーおよびオレフィンとのコポリマー、例えば、エチレン−メチルメタクリレートコポリマー、アクリロニトリル−スチレンコポリマー、ＡＢＳ樹脂、およびエチレン−酢酸ビニルコポリマー；ポリアミド、例えば、Ｎｙｌｏｎ  ６６およびポリカプロラクタム；アルキド樹脂；ポリカーボネート；ポリオキシメチレン；ポリイミド；ポリエーテル；エポキシ樹脂；ポリウレタン；レーヨン；レーヨン−トリアセテート；セルロース；酢酸セルロース；酪酸セルロース；酢酸酪酸セルロース；セロファン；硝酸セルロース；プロピオン酸セルロース；セルロースエーテル；アモルファスＴｅｆｌｏｎ；ポリ（エチレングリコール）；およびカルボキシメチルセルロースを含む。
【００６２】
好適な合成ポリマーは、非置換および置換の直鎖または分岐鎖ポリ（エチレングリコール）、ポリ（プロピレングリコール）ポリ（ビニルアルコール）、およびそれらの誘導体、例えば、置換ポリ（エチレングリコール）、例えば、メトキシポリ（エチレングリコール）、およびそれらの誘導体を含む。好適な天然に存在するポリマーは、例えば、アルブミン、アミロース、デキストラン、グリコーゲンおよびそれらの誘導体を含む。
【００６３】
好適なポリマーは、５００Ｄａ〜５００００Ｄａ、例えば、５０００Ｄａ〜４００００Ｄａ、または２５０００〜４００００Ｄａの範囲の平均分子量を有することができる。例えば、いくつかの実施形態において、主題の抗体が、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）またはメトキシポリ（エチレングリコール）ポリマーを含む場合、ＰＥＧまたはメトキシポリ（エチレングリコール）ポリマーは、約０．５キロダルトン（ｋＤａ）〜１ｋＤａの範囲、約１ｋＤａ〜５ｋＤａ、５ｋＤａ〜１０ｋＤａ、１０ｋＤａ〜２５ｋＤａ、２５ｋＤａ〜４０ｋＤａ、または４０ｋＤａ〜６０ｋＤａの範囲の分子量を有することができる。
【００６４】
上述のように、いくつかの実施形態において、主題の抗体は、ＰＥＧポリマーに共有結合される。いくつかの実施形態において、主題のｓｃＦｖ多量体は、ＰＥＧポリマーに共有結合される。タンパク質のペグ化に好適な方法および試薬は、当該技術分野で周知であり、例えば、米国特許第５，８４９，８６０号に見出だすことができる。タンパク質とのコンジュゲーションに好適なＰＥＧは、一般的に、室温で水溶性であり、一般式Ｒ（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎＯ−Ｒを有し、式中、Ｒは、水素、または、例えば、アルキルもしくはアルカノール基等の保護基であり、ｎは、１〜１０００の整数である。Ｒは、保護基であり、一般的に１〜８個の炭素を有する。
【００６５】
主題の抗体にコンジュゲートされるＰＥＧは、直鎖である。主題のタンパク質にコンジュゲートされるＰＥＧは、分岐鎖であってもよい。米国特許第５，６４３，５７５号に記載されるような分岐鎖ＰＥＧ誘導体、Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，  Ｉｎｃ．のカタログ「ポリエチレン  Ｇｌｙｃｏｌ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  １９９７−１９９８」に記載されるような「星形ＰＥＧ」および多アームＰＥＧ。星形ＰＥＧは、技術分野に記載されている（例えば、米国特許第６，０４６，３０５号を含む）。
【００６６】
主題の抗体は、グリコシル化することができ、例えば、主題の抗体は、共有結合された炭水化物または多糖部分を含むことができる。抗体のグリコシル化は、典型的にはＮ結合型またはＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合は、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の付着を指す。Ｘがプロリン以外の任意のアミノ酸である、トリペプチド配列アスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−スレオニンは、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素的付着の認識配列である。したがって、ポリペプチドにおけるこれらのトリペプチド配列のうちのいずれかの存在が、潜在的なグリコシル化部位を作成する。Ｏ結合型グリコシル化は、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはスレオニンへの、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースといった糖類のうちの１つの付着を指すが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリジンも用いられ得る。グリコシル化は、例えば、所望のグリコシル化機構を有する宿主細胞における組換え生成によって、達成することができる。
【００６７】
抗体へのグリコシル化部位の付加は、上記トリペプチド配列のうちの１つ以上を含むようにアミノ酸配列を改変することにより、都合よく達成される（Ｎ結合型グリコシル化部位の場合）。改変はまた、元の抗体の配列に対する１つ以上のセリンまたはスレオニン残基の付加または置換によってなされてもよい（Ｏ結合型グリコシル化部位の場合）。同様に、グリコシル化部位の除去は、抗体の天然グリコシル化部位内のアミノ酸改変によって達成されてもよい。
【００６８】
主題の抗体は、例えば、グルタルアルデヒド、ホモ二官能性架橋剤、またはヘテロ二官能性架橋剤を用いて、第２の部分（例えば、脂質、主題の抗体以外のポリペプチド、合成ポリマー、炭水化物等）に共有結合することができる。グルタルアルデヒドは、それらのアミノ部分を介してポリペプチドに架橋する。ホモ二官能性架橋剤（例えば、ホモ二官能性イミドエステル、ホモ二官能性Ｎ−ヒドロキシサクシニミジル（ＮＨＳ）エステル、またはホモ二官能性スルフヒドリル反応性架橋剤）は、２つ以上の反応性部分を含み、結合されるポリペプチドの混合物を含む溶液に架橋剤が添加される一段階反応に用いることができる。ホモ二官能性ＮＨＳエステルおよびイミドエステルは、アミノ含有ポリペプチドを架橋する。穏かなアルカリ性のｐＨでは、イミドエステルが１級アミンのみと反応してイミドアミドを形成し、架橋されたポリペプチドの全体的な電荷は影響を受けない。ホモ二官能性スルフヒドリル反応性架橋剤は、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン（ＤＦＤＮＢ）、および１，４−ジ−（３’，２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミドブタン（ＤＰＤＰＢ）を含む。
【００６９】
ヘテロ二官能性架橋剤は、２つ以上の異なる反応性部分（例えば、アミン反応性部分およびスルフヒドリル反応性部分）を有し、アミンまたはスルフヒドリル反応性部分を介してポリペプチドのうちの一方に架橋され、次いで、未反応部分を介して他のポリペプチドと反応させる。ピリジルジスルフィド架橋剤等の複数のヘテロ二官能性ハロアセチル架橋剤が利用可能である。カルボジイミドは、カルボキシルをアミンとカップリングさせてアミド結合をもたらす、ヘテロ二官能性架橋試薬の古典的な例である。
【００７０】
主題の抗体は、固体支持体に固定化することができる。好適な支持体は、当該技術分野で周知であり、とりわけ、市販のカラム材料、ポリスチレンビーズ、ラテックスビーズ、磁気ビーズ、コロイド金属粒子、ガラスおよび／またはケイ素のチップおよび表面、ニトロセルロースストリップ、ナイロン膜、シート、デュラサイト、反応トレーのウェル（例えば、マルチウェルプレート）、プラスチックチューブ等を含む。固体支持体は、例えば、ガラス、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリカーボネート、デキストラン、ナイロン、アミロース、天然および改質セルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、およびマグネタイトを含む、様々な物質のいずれを含んでもよい。主題の抗体を固体支持体に固定化するための好適な方法は周知であり、イオン性、疎水性、共有結合性の相互作用等を含むが、これらに限定されない。固体支持体は、例えば、水溶液中で可溶性または不溶性であってもよい。いくつかの実施形態において、好適な固体支持体は、一般的に水溶液中で不溶性である。
【００７１】
主題の抗体は、いくつかの実施形態において、検出可能な標識を含むことができる。好適な検出可能な標識は、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、電気的、光学的、または化学的手段によって検出可能なあらゆる組成物を含む。好適な標識は、磁気ビーズ（例えば、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標））、蛍光色素（例えば、フルオレセインイソチオシアナート、テキサスレッド、ローダミン、緑色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質、黄色蛍光タンパク質等）、放射標識（例えば、３Ｈ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、または３２Ｐ）、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ルシフェラーゼ、および酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）で一般的に使用される他の酵素）、コロイド金または色ガラスまたはプラスチック（例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックス等）ビーズ等の比色標識を含むが、これらに限定されない。
【００７２】
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、造影剤または放射性同位体を含み、造影剤または放射性同位体は、例えば、撮像において、例えば、ヒトに対して実行される撮像手順において、検出可能な標識として使用するのに好適なものである。標識の非限定的な例として、１２３１Ｉ（ヨウ素）、１８Ｆ（フッ素）、９９Ｔｃ（テクネチウム）、１１１Ｉｎ（インジウム）、および６７Ｇａ（ガリウム）等の放射性同位体、ならびに、ガドリニウム（Ｇｄ）、ジスプロシウム、および鉄等の造影剤が挙げられる。放射性Ｇｄ同位体（１５３Ｇｄ）も利用可能であり、非ヒト哺乳動物における撮像手順に好適である。
【００７３】
主題の抗体は、標準的な技術を用いて標識することができる。例えば、主題の抗体は、クロラミンＴまたは１，３，４，６−テトラクロロ−３α，６α−ジフェニルグリコルリルを用いてヨウ素化することができる。フッ素付加のために、フッ化物イオン変位反応による合成中にフッ素を主題の抗体に加える。そのような放射性同位体を有するタンパク質の合成の検討については、Ｍｕｌｌｅｒ−Ｇａｒｔｎｅｒ，Ｈ．，ＴＩＢ  Ｔｅｃｈ．，１６：１２２−１３０（１９９８）およびＳａｊｉ，Ｈ．，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ．，１６（２）：２０９−２４４（１９９９）を参照のこと。主題の抗体はまた、標準的な技術によって造影剤で標識することもできる。例えば、主題の抗体は、Ｇｄジエチレントリアミン五酢酸（ＧｄＤＴＰＡ）またはＧｄテトラアザシクロドデカンテトラ酢酸（ＧｄＤＯＴＡ）等の低分子Ｇｄキレートを抗体にコンジュゲートすることによりＧｄで標識することができる。Ｃａｒａｖａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９９：２２９３−２３５２（１９９９）およびＬａｕｆｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．Ｉｍａｇｉｎｇ，３：１１−１６（１９８５）を参照のこと。主題の抗体は、例えば、ポリリジン−Ｇｄキレートを抗体にコンジュゲートすることによりＧｄで標識することができる。例えば、Ｃｕｒｔｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｒａｄｉｏｌ．，３３（１０）：７５２−７６１（１９９８）を参照のこと。代替として、主題の抗体は、Ｇｄキレート剤脂質を含む常磁性の重合リポソームをアビジンおよびビオチン化抗体とともにインキュベートすることによりＧｄで標識することができる。例えば、Ｓｉｐｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．，４：６２３−６２６（１９９８）を参照のこと。
【００７４】
主題の抗体に結合することができる適切な蛍光タンパク質は、限定されないが、例えば、米国特許第６，０６６，４７６号、同第６，０２０，１９２号、同第５，９８５，５７７号、同第５，９７６，７９６号、同第５，９６８，７５０号、同第５，９６８，７３８号、同第５，９５８，７１３号、同第５，９１９，４４５号、同第５，８７４，３０４号に記載されるオワンクラゲ由来の緑色蛍光タンパク質またはその変異体または誘導体；例えば、改良型ＧＦＰ（例えば、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．から市販されている多くのそのようなＧＦＰ）；赤色蛍光タンパク質；黄色蛍光タンパク質；例えば、Ｍａｔｚ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：９６９−９７３に記載される花虫類種に由来する様々な蛍光タンパク質および有色タンパク質のいずれか等を含む。
【００７５】
主題の抗体は、いくつかの実施形態において、「放射線不透過性」標識、例えば、Ｘ線を用いて容易に可視化することができる標識を含む。放射線不透過性物質は、当業者に周知である。最も一般的な放射線不透過性物質は、限定されないが、ヨウ化物、臭化物、またはバリウム塩を含む。他の放射線不透過性物質も既知であり、有機ビスマス誘導体（例えば、米国特許第５，９３９，０４５号を参照）、放射線不透過性マルチウレタン（米国特許第５，３４６，９８１号を参照）、有機ビスマス複合材料（例えば、米国特許第５，２５６，３３４号を参照）、放射線不透過性バリウム多量体複合体（例えば、米国特許第４，８６６，１３２号を参照）等を含む。
【００７６】
主題の抗体を、いくつかの実施形態において、融合パートナー、例えば、リガンド；エピトープタグ；ペプチド；および抗体以外のタンパク質等に結合（例えば、共有結合または非共有結合）させる。好適な融合パートナーは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの安定性の強化（例えば、血清半減期の増加）を付与する；精製の容易さ等を提供する；細胞からの融合タンパク質の分泌を提供する；エピトープタグ、例えば、（Ｈｉｓ）ｎ、例えば、６Ｈｉｓ等を提供する；細胞からの融合タンパク質の分泌を提供する；エピトープタグ、例えば、ＧＳＴ、ヘマグルチニン（ＨＡ；例えば、ＣＹＰＹＤＶＰＤＹＡ；配列番号１０）、ＦＬＡＧ（例えば、ＤＹＫＤＤＤＤＫ；配列番号１１）、ｃ−ｍｙｃ（例えば、ＣＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ；配列番号１２）等を提供する；検出可能なシグナル、例えば、検出可能な生成物を産生する酵素（例えば、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ）、またはそれ自体が検出可能なタンパク質、例えば、緑色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質、黄色蛍光タンパク質等を提供する；多量体化、例えば、免疫グロブリンのＦｃ部等の多量体ドメイン等を提供する、ペプチドおよびポリペプチドを含む。
【００７７】
融合はまた、例えば、同定または精製に有用な、固体支持体に固定化されたもの等の、結合パートナーと相互作用することができるペプチド配列を含む親和性ドメインも含むことができる。ヒスチジン等の連続した単一アミノ酸は、タンパク質と融合させると、ニッケルセファロース等の樹脂カラムへの高い親和性結合によって、融合タンパク質の一段階精製に用いることができる。親和性ドメインの例として、Ｈｉｓ５（ＨＨＨＨＨ）（配列番号１３）、ＨｉｓＸ６（ＨＨＨＨＨＨ）（配列番号１４）、Ｃ−ｍｙｃ（ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ）（配列番号１５）、Ｆｌａｇ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）（配列番号１６）、ＳｔｒｅｐＴａｇ（ＷＳＨＰＱＦＥＫ）（配列番号１７）、赤血球凝集素、例えば、ＨＡタグ（ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ；配列番号１８）、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、チオレドキシン、セルロース結合ドメイン、ＲＹＩＲＳ（配列番号１９）、Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ（配列番号２０）、キチン結合ドメイン、Ｓ−ペプチド、Ｔ７ペプチド、ＳＨ２ドメイン、Ｃ末端ＲＮＡタグ、ＷＥＡＡＡＲＥＡＣＣＲＥＣＣＡＲＡ（配列番号２１）、金属結合ドメイン、例えば、亜鉛結合ドメイン、または、例えば、カルシウム結合タンパク質、例えば、カルモジュリン、トロポニンＣ、カルシニューリンＢ、ミオシン軽鎖、リカバリン、Ｓ−モジュリン、ビジニン、ＶＩＬＩＰ、ニューロカルシン、ヒポカルシン、フリクエニン、カルトラクチン、カルパイン大サブユニット、Ｓ１００タンパク質、パルブアルブミン、カルビンジンＤ９Ｋ、カルビンジンＤ２８Ｋ、およびカルレチニン、インテイン、ビオチン、ストレプトアビジン、ＭｙｏＤ、ロイシンジッパー配列、ならびにマルトース結合タンパク質に由来するドメイン等のカルシウム結合ドメインが挙げられる挙げられる。
【００７８】
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、ポリアミン修飾を含む。主題の抗体は、天然に存在するかまたは合成であるポリアミンで修飾することができる。例えば、米国特許第５，６７０，４７７号を参照のこと。有用な天然に存在するポリアミンは、プトレシン、スペルミジン、スペルミン、１，３−ジアミノプロパン、ノルスペルミジン、合成ホモスペルミジン、テルミン、テルモスペルミン、カルドペンタミン、ホモカルドペンタミン、およびカナバルミンを含む。プトレシン、スペルミジン、およびスペルミンは、特に有用である。合成ポリアミンは、実験式ＣＸＨＹＮＺで構成され、１〜６個のＮＲ部分またはＮ（Ｒ）２部分（式中、Ｒは、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェニル、またはまたはベンジルである）をさらに含む、環式または非環式の、分枝または非分枝の３〜１２炭素原子の炭化水素鎖であり得る。ポリアミンは、任意の標準的な架橋法を用いて抗体に結合させることができる。
【００７９】
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、炭水化物部分を含むように修飾され、炭水化物部分は、抗体に共有結合することができる。いくつかの実施形態において、主題の抗体は、脂質部分を含むように修飾され、脂質部分は、抗体に共有結合することができる。好適な脂質部分は、例えば、Ｎ−ラウロイル、Ｎ−オレオイル等のＮ−脂肪族アシル基；ドデシルアミン、オレオイルアミン等の脂肪族アミン；Ｃ３〜Ｃ１６長鎖の脂肪族脂質等を含む。例えば、米国特許第６，６３８，５１３を参照のこと。いくつかの実施形態において、主題の抗体は、リポソームに組み込まれる。
【００８０】
本開示の抗ＣＤ２２抗体が共有結合された異種部分を含む場合、異種部分を直接的にまたはリンカーを介して抗ＣＤ２２の重鎖および／または軽鎖に結合することができる。好適なリンカーは容易に選択することができ、１アミノ酸長（例えば、Ｇｌｙ）〜２０アミノ酸長、２アミノ酸長〜１５アミノ酸長、３アミノ酸長〜１２アミノ酸長（４アミノ酸長〜１０アミノ酸長、５アミノ酸長〜９アミノ酸長、６アミノ酸長〜８アミノ酸長、または７アミノ酸長〜８アミノ酸長を含む）等の任意の好適な異なる長さであってもよく、１、２、３、４、５、６、または７アミノ酸長であってもよい。
【００８１】
可動性リンカーの例として、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ、グリシン−セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）ｎ、ＧＳＧＧＳｎ（配列番号２２）、およびＧＧＧＳｎ（配列番号２３）を含み、式中、ｎは、少なくとも１の整数である）、グリシン−アラニンポリマー、アラニン−セリンポリマー、および当該分野で既知の他の可動性リンカーが挙げられる。グリシンおよびグリシン−セリンポリマーは、これらのアミノ酸のどちらも比較的構造化されておらず、したがって成分間の中立的なテザーとしての役割を果たし得るため、興味深い。グリシンポリマーは、グリシンが、アラニンよりも有意に大きなΦ‐Ψ空間に到達し、より長い側鎖を有する残基よりもはるかに制限が少ないため、特に興味深い（Ｓｃｈｅｒａｇａ，Ｒｅｖ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｅｍ．１１１７３−１４２（１９９２）を参照のこと）。例示的な可動性リンカーとして、限定されないが、ＧＧＳＧ（配列番号２４）、ＧＧＳＧＧ（配列番号２５）、ＧＳＧＳＧ（配列番号２６）、ＧＳＧＧＧ（配列番号２７）、ＧＧＧＳＧ（配列番号２８）、ＧＳＳＳＧ（配列番号２９）等が挙げられる。当業者は、上述の任意の要素にコンジュゲートしたポリペプチドの設計が、全てまたは部分的に可動性であるリンカーを含むことができ、そのため、リンカーが、可動性リンカーだけでなく、可動性の低い構造を付与する１つ以上の部分も含むことができることを認識するであろう。
【００８２】
抗体の修飾のための方法
抗体は、様々な方法のいずれかの使用により、共有結合的に付着した異種部分（例えば、検出可能な標識、薬物等）を有するように修飾することができる。本開示は、対象となる部分にコンジュゲートされた抗ＣＤ２２抗体を提供し、対象となる部分にコンジュゲートされた抗ＣＤ２２抗体は、「抗ＣＤ２２抗体コンジュゲート」と称される。本開示の抗ＣＤ２２  抗体コンジュゲートは、１）対象となる部分にコンジュゲートされたＩｇ重鎖定常領域、および対象となる部分にコンジュゲートされたＩｇ軽鎖定常領域；２）  対象となる部分にコンジュゲートされたＩｇ重鎖定常領域、および対象となる部分にコンジュゲートされていないＩｇ軽鎖定常領域、または３）対象となる部分にコンジュゲートされていないＩｇ重鎖定常領域、および対象となる部分にコンジュゲートされたＩｇ軽鎖定常領域を含む。主題の抗ＣＤ２２抗体コンジュゲートは、ＶＨおよび／またはＶＬドメインも含むことができる。
【００８３】
一例において、抗体は、異種部分の付着のための化学ハンドルとして機能することができる２−ホルミルグリシン残基を含むように修飾することができる。例えば、本開示の抗ＣＤ２２の重鎖および／または軽鎖定常領域は、２−ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）の作用によって２−ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）を含むように変換されることが可能な、スルファターゼモチーフのアミノ酸配列を含むように修飾することができる。そのようなスルファターゼモチーフはまた、本明細書においてＦＧＥ修飾部位と称されてもよい。ＦＧＥが免疫グロブリンポリペプチド内に位置するスルファターゼモチーフとして作用するという点において、ＦＧＥの作用は、配列特異的な様式で誘導される。対象となる部分は、タグ化Ｉｇポリペプチドの変換されたアルデヒドタグのＦＧｌｙ残基のアルデヒドとの反応のための反応パートナーの構成要素として提供される。対象となる部分の、アルデヒドタグ化ＩｇポリペプチドのＦＧｌｙ残基への付着を達成するために、多様な市販の試薬を使用することができる。例えば、多数の対象となる部分のアミノオキシ、ヒドラジン、またはチオセミカルバジド誘導体が、好適な反応パートナーであり、容易に利用可能であるか、または標準的な化学的方法を用いて作製することができる。
【００８４】
例えば、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）部分をタグ化Ｉｇポリペプチドに付着させるために、標準プロトコルを用いて、モノアミノ−ＰＥＧおよびアミノオキシグリシンからアミノオキシ−ＰＥＧ  を作製することができる。次いで、アミノオキシ−ＰＥＧを変換された（例えば、ＦＧｌｙ修飾）アルデヒドタグ化Ｉｇポリペプチドと反応させて、ＰＥＧ部分の付着を提供することができる。変換されたアルデヒドタグ化ポリペプチドへのビオチン部分の送達は、アミノオキシビオチン、ビオチンヒドラジド、または２，４  ジニトロフェニルヒドラジンを用いて達成することができる。
【００８５】
アルデヒドタグの最小スルファターゼモチーフは、通常、５または６アミノ酸残基長であり、通常、６アミノ酸残基長以下である。Ｉｇポリペプチド中に提供されるスルファターゼモチーフは、１６，１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、または７アミノ酸残基長未満のスルファターゼモチーフを定義するために、少なくとも５または６アミノ酸残基であり、例えば、５〜１６、６〜１６、５〜１５、６〜１５、５〜１４、６〜１４、５〜１３、６〜１３、５〜１２、６〜１２、５〜１１、６〜１１、５〜１０、６〜１０、５〜９、６〜９、５〜８、または６〜８アミノ酸残基長であってもよい。特定の実施形態において、用いられるスルファターゼモチーフは、以下の式によって説明することができる：
【００８６】
Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３            （Ｉ）
【００８７】
式中、
【００８８】
Ｚ１は、システインまたはセリンであり（（Ｃ／Ｓ）によっても表すことができる）；
【００８９】
Ｚ２は、プロリンまたはアラニン残基のいずれかであり（（Ｐ／Ａ）によっても表すことができる）；
【００９０】
Ｚ３は、塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）であり、かつリジン（Ｋ）もしくはヒスチジン（Ｈ）であってもよく、通常はリジンである）、または脂肪族アミノ酸（アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、もしくはプロリン（Ｐ）、通常、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、もしくはＩであり；
【００９１】
Ｘ１は、存在するかまたは存在せず、存在する場合は任意のアミノ酸であってもよいが、通常、脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸、または極性の非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）であり、通常、Ｌ、Ｍ、Ｖ、ＳまたはＴ、より一般的にはＬ、Ｍ、Ｓ、またはＶであるが、但し、スルファターゼモチーフが標的ポリペプチドのＮ末端にある場合はＸ１が存在し、
【００９２】
Ｘ２およびＸ３は、独立して任意のアミノ酸であってもよいが、通常、脂肪族アミノ酸、極性の非荷電アミノ酸、または硫黄含有アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）であり、例えば、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、ＧまたはＣ、例えば、Ｓ、Ｔ、Ａ、ＶまたはＧである。一例において、アルデヒドタグは、式Ｌ（Ｃ／Ｓ）ＴＰＳＲ（配列番号３０）、例えば、ＬＣＴＰＳＲ（配列番号３１）またはＬＳＴＰＳＲ（配列番号３２）のタグである。したがって、本開示は、アルデヒドタグ化Ｉｇ重鎖および／またはアルデヒドタグ化Ｉｇ軽鎖を含む抗体を提供し、アルデヒドタグ化Ｉｇ抗体は、そのようなスルファターゼモチーフを含む重鎖および／または軽鎖のＩｇ定常領域のアミノ酸配列を含む。
【００９３】
一般に、標的ポリペプチドのアルデヒドタグのスルファターゼモチーフ中のシステインまたはセリンのＦＧｌｙへの変換を促進するために用いられるＦＧＥは、アルデヒドタグに存在するスルファターゼモチーフに応じて選択される。ＦＧＥは、アルデヒドタグ化ポリペプチドが発現される宿主細胞に固有であってもよいか、または宿主細胞を遺伝子操作して適切なＦＧＥを発現させてもよい。いくつかの実施形態において、ヒトＦＧＥに適合性のスルファターゼモチーフを使用して、ＦＧＥを発現するヒト細胞または宿主細胞（通常、ヒトＦＧＥを発現するように遺伝子操作された哺乳類細胞）でアルデヒドタグ化タンパク質を発現させることが望ましい場合もある。一般に、ＦＧｌｙ修飾抗体の作製に使用するのに好適なＦＧＥは、天然に存在する源から得られてもよいか、または合成的に生成されてもよい。例えば、適切なＦＧＥは、ＦＧＥを天然に産生するか、またはＦＧＥをコードする組換え遺伝子を発現するように遺伝子操作された生物学的源から得ることができる。多数のＦＧＥをコードする核酸が、当該技術分野で既知であり、手軽である。
【００９４】
ＦＧＥがスルファターゼモチーフに作用すると、Ｚ１が酸化されて２−ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）残基を生成する。さらに、ＦＧＥが媒介する変換、および対象となる部分を含む反応パートナーとの反応の両方に続いて、上述の式のＺ１に位置するＦＧｌｙが対象となる部分（例えば、検出可能な標識、水溶性ポリマー、ポリペプチド、薬物等）に共有結合される。したがって、本開示は、ＦＧｌｙ部分を含むように修飾された抗ＣＤ２２抗体を提供し、抗ＣＤ２２抗体は、以下の式のＦＧｌｙ変換スルファターゼモチーフを含む：
【００９５】
Ｘ１（ＦＧｌｙ）Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３
【００９６】
式中、
【００９７】
Ｘ１は、存在するかまたは存在せず、存在する場合は任意のアミノ酸であるが、但し、スルファターゼモチーフがポリペプチドのＮ末端にある場合はＸ１が存在し、
【００９８】
Ｘ２およびＸ３は、各々、独立して任意のアミノ酸であり、
【００９９】
Ｚ３は、塩基性アミノ酸であり、
【０１００】
ＦＧｌｙ修飾抗ＣＤ２２抗体は、折り畳まれた状態にある場合、溶媒接触可能表面上のＦＧｌｙ基を表す。いくつかの実施形態において、ＦＧｌｙ変換スルファターゼモチーフは、式Ｌ（ＦＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号３３）のモチーフである。
【０１０１】
上述のように、ＦＧｌｙ  部分を含むように修飾された主題の抗ＣＤ２２抗体は、ＦＧｌｙ  部分を介して抗ＣＤ２２抗体に共有結合された対象となる異種部分（例えば、検出可能な標識、水溶性ポリマー、ポリペプチド、薬物等）を含むようにさらに修飾することができる。したがって、本開示は、抗ＣＤ２２抗体コンジュゲート（本明細書において「抗ＣＤ２２コンジュゲート」とも称される）を提供し、抗ＣＤ２２コンジュゲートは、以下の式を含む：
【０１０２】
Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３    （Ｉ’）
【０１０３】
式中、
【０１０４】
ＦＧｌｙ’は、共有結合的に付着した部分を有する２−ホルミルグリシン残基であり、
【０１０５】
Ｚ２は、プロリンまたはアラニン残基のいずれかであり（（Ｐ／Ａ）によっても表すことができる）；Ｚ３は、塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）であり、かつリジン（Ｋ）もしくはヒスチジン（Ｈ）であってもよく、通常はリジンである）、または脂肪族アミノ酸（アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、もしくはプロリン（Ｐ）、通常、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、もしくはＩであり；
【０１０６】
Ｘ１は、存在してもまたは存在しなくてもよく、存在する場合は任意のアミノ酸であってもよいが、通常、脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸、または極性の非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）であり、通常、Ｌ、Ｍ、Ｖ、ＳまたはＴ、より一般的にはＬ、Ｍ、またはＶであるが、但し、スルファターゼモチーフが標的ポリペプチドのＮ末端にある場合はＸ１が存在し、
【０１０７】
Ｘ２およびＸ３は、独立して任意のアミノ酸であってもよいが、通常、脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸、または極性の非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）であり、通常、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、ＧまたはＣであり、より一般的にはＳ、Ｔ、Ａ、ＶまたはＧである。いくつかの実施形態において、モチーフは、式Ｌ（ＦＧｌｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号３４）のモチーフである。
【０１０８】
薬物
場合によっては、本開示の抗ＣＤ２２抗体は、抗体の重鎖および／または軽鎖に共有結合された薬物を含む。「薬物」は、低分子薬、ペプチド薬、毒素（例えば、細胞毒）等を含む。
【０１０９】
本明細書で使用される「低分子薬」は、化合物、例えば、対象となる薬学的活性を示し、一般的に、約８００Ｄａ以下、または２０００Ｄａ以下の分子量であるが、最大５ｋＤａまでの分子を包含してもよく、約１０ｋＤａまでの大きさであってもよい、有機化合物を指す。小さい無機分子は、炭素原子を含まない分子を指し、小さい有機分子は、少なくとも１つの炭素原子を含む化合物を指す。
【０１１０】
本明細書で使用される「ペプチド薬」は、アミノ酸含有ポリマー化合物を指し、天然に存在するおよび天然には存在しないペプチド、オリゴペプチド、環状ペプチド、ポリペプチド、およびタンパク質、ならびにペプチド模倣物を包含することを意味する。ペプチド薬は、化学合成によって得られてもよいか、または遺伝子操作された源（例えば、組換え源）から生成されてもよい。ペプチド薬は、分子量に幅があってもよく、２００Ｄａ〜１０ｋＤａ以上の分子量であってもよい。
【０１１１】
場合によっては、薬物は、毒素、例えば、細胞毒である。高等植物に遍在するタンパク質のクラスであるリボソーム不活性化タンパク質（ＲＩＰ）は、そのような細胞毒の例である。１型および２型に分割されるＲＩＰは、真核生物タンパク質合成の強力な阻害剤としての作用のために毒性である。１型ＲＩＰは、リボソーム不活性化作用を有する単一ペプチド鎖から構成され、２型タンパク質は、細胞結合特性を有するＢ鎖にジスルフィド結合した、本質的に１型タンパク質と同等であるＡ鎖から構成される。特定のアデニン塩基のＮ−グリコシド結合は、真核生物リボソームの２８Ｓ  ｒＲＮＡの高度に保存されたループ領域においてＲＩＰによって加水分解的に切断され、それによって真核細胞における翻訳を不活性化する。例えば、米国特許第５，７４４，５８０号を参照のこと。ゲロニン、ドデカンドリン、トリコサンチン、トリコキリン（ｔｒｉｃｏｋｉｒｉｎ）、ブリオジン、オシロイバナ抗ウイルスタンパク質（ＭＡＰ）、オオムギリボソーム不活性化タンパク質（ＢＲＩＰ）、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質（ＰＡＰS）、サポリン、ルフィン、およびモモルジンは、１型ＲＩＰの例であり、リシンおよびアブリンは、２型ＲＩＰの例である。好適な細胞毒の例として、これらに限定されないが、リシン、アブリン、ジフテリア毒素、シュードモナス外毒素（例えば、ＰＥ３５、ＰＥ３７、ＰＥ３８、ＰＥ４０等）、サポリン、ゲロニン、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質（ＰＡＰ）、ボツリヌス毒素、ブリオジン、モモルジン、およびブーガニンが挙げられる。
【０１１２】
場合によっては、薬物は、癌化学療法剤である。癌化学療法剤は、癌細胞の増殖を低下させる非ペプチド性（すなわち、非タンパク質性）化合物を含み、細胞傷害性薬剤および細胞分裂阻害剤を包含する。化学療法剤の非限定的な例として、アルキル化剤、ニトロソウレア、代謝拮抗剤、抗腫瘍性抗生物質、植物（ビンカ）アルカロイド、およびステロイドホルモンが挙げられる。また、ペプチド化合物も使用することができる。
【０１１３】
好適な癌化学療法剤は、ドラスタチンならびにその活性類似体および誘導体と、アウリスタチンならびにその活性類似体および誘導体を含む。例えば、国際公開第ＷＯ９６／３３２１２号、同第ＷＯ９６／１４８５６号、およびＵＳＰＮ６，３２３，３１５号を参照のこと。例えば、ドラスタチン１０またはアウリスタチンＰＥは、本開示の抗体−薬物コンジュゲートに含めることができる。好適な癌化学療法剤はまた、マイタンシノイドならびにその活性類似体および誘導体（例えば、ＥＰ１３９１２１３；およびＬｉｕ  ｅｔ  ａｌ（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９３：８６１８−８６２３を参照）と、デュオカルマイシンならびにその活性類似体および誘導体（例えば、合成類似体ＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１を含む）を含む。
【０１１４】
細胞増殖を減少させるように作用する薬剤は、当該技術分野で既知であり、広く使用されている。そのような薬剤は、限定されないが、メクロレタミン、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（商標））、メルファラン（Ｌ−サルコリシン）、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、セムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）、ストレプトゾシン、クロロゾトシン、ウラシルマスタード、クロルメチン、イホスファミド、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスホルアミン、ブスルファン、ダカルバジン、およびテモゾロミドを含む、アルキル化剤、例えば、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、エチレンイミン誘導体、スルホン酸アルキル、およびトリアゼンを含む。
【０１１５】
代謝拮抗剤は、限定されないが、シタラビン（ＣＹＴＯＳＡＲ−Ｕ）、シトシンアラビノシド、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フロクスウリジン（ＦｕｄＲ）、６−チオグアニン、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、ペントスタチン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、メトトレキセート、１０−プロパルギル−５，８−ジデアザフォレート（ＰＤＤＦ、ＣＢ３７１７）、５，８−ジデアザテトラヒドロ葉酸（ＤＤＡＴＨＦ）、ロイコボリン、フルダラビンホスフェート、ペントスタチン、およびゲムシタビンを含む、葉酸類似体、ピリミジン類似体、プリン類似体、およびアデノシンデアミナーゼ阻害剤を含む。
【０１１６】
好適な天然の生成物およびそれらの誘導体、（例えば、ビンカアルカロイド、抗腫瘍抗生物質、酵素、リンホカイン、およびエピポドフィロトキシン）は、限定されないが、Ａｒａ−Ｃ、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、デオキシコホルマイシン、マイトマイシン−Ｃ、Ｌ−アスパラギナーゼ、アザチオプリン；ブレキナル；アルカロイド、例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン等；ポドフィロトキシン、例えば、エトポシド、テニポシド等；抗生物質、例えば、アントラサイクリン、塩酸ダウノルビシン（ダウノマイシン、ルビドマイシン、セルビジン）、イダルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、およびモルホリノ誘導体等．；フェノキシゾンビスシクロペプチド（ｐｈｅｎｏｘｉｚｏｎｅｂｉｓｃｙｃｌｏｐｅｐｔｉｄｅｓ）、例えば、ダクチノマイシン；塩基性糖ペプチド、例えば、ブレオマイシン；アントラキノングリコシド、例えば、プリカマイシン（ミトラマイシン）；アントラセンジオン、例えば、ミトキサントロン；アジリノピロロインドールジオン、例えば、マイトマイシン；大環状免疫抑制剤、例えば、サイクロスポリン、ＦＫ−５０６（タクロリムス、Ｐｒｏｇｒａｆ）、ラパマイシン等を含む。
【０１１７】
他の抗増殖性の細胞傷害性薬剤は、Ｎａｖｅｌｂｅｎｅ、ＣＰＴ−１１、アナストラゾール、レトラゾール、カペシタビン、レロキサフィン、シクロホスファミド、イホサミド、およびドロロキサフィンを含む。
【０１１８】
抗増殖性活性を有する微小管作用剤も使用に適しており、限定されないが、アロコルヒチン（ＮＳＣ  ４０６０４２）、ハリコンドリンＢ（ＮＳＣ  ６０９３９５）、コルヒチン（ＮＳＣ  ７５７）、コルヒチン誘導体（例えば、ＮＳＣ  ３３４１０）、ドルスタチン１０（ＮＳＣ  ３７６１２８）、メイタンシン（ＮＳＣ  １５３８５８）、リゾキシン（ＮＳＣ  ３３２５９８）、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、Ｔａｘｏｌ（登録商標）誘導体、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、チオコルヒチン（ＮＳＣ  ３６１７９２）、トリチルシステリン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、天然および合成のエポチロン（限定されないが、エポチロンＡ、エポチロンＢ、ディスコデルモリド；エストラムスチン、ノコダゾール等を含む）を含む。
【０１１９】
使用に適したホルモン調節物質およびステロイド（合成類似体を含む）は、限定されないが、アドレノコルチコステロイド、例えば、プレドニゾン、デキサメタゾン等；エストロゲンおよびプレゲスチン、例えば、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、エストラジオール、クロミフェン、タモキシフェン等；ならびに副腎皮質抑制薬、例えば、アミノグルテチミド；１７α−エチニルエストラジオール；ジエチルスチルベストロール、テストステロン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、メチルプレドニゾロン、メチル−テストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、酢酸メドロキシプロゲステロン、ロイプロリド、フルタミド（Ｄｒｏｇｅｎｉｌ）、トレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）、およびＺｏｌａｄｅｘ（登録商標）を含む。エストロゲンは、増殖および分化を刺激するため、エストロゲン受容体に結合する化合物が、この活性を遮断するために使用される。
【０１２０】
他の好適な化学療法剤は、金属複合体、例えば、シスプラチン（ｃｉｓ−ＤＤＰ）、カルボプラチン等；尿素、例えば、ヒドロキシ尿素；およびヒドラジン、例えば、Ｎ−メチルヒドラジン；エピドフィロトキシン；トポイソメラーゼ阻害剤；プロカルバジン；ミトキサントロン；ロイコボリン；テガフール等を含む。対象となる他の抗増殖剤は、免疫抑制薬、例えば、ミコフェノール酸、サリドマイド、デスオキシスパガリン、アザスポリン，レフルノミド、ミゾリビン、アザスピラン（ＳＫＦ  １０５６８５）；Ｉｒｅｓｓａ（登録商標）（ＺＤ  １８３９、４−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−７−メトキシ−６−（３−（４−モルホリニル）プロポキシ）キナゾリン）等を含む。
【０１２１】
タキサンは、使用に適している。「タキサン」は、パクリタキセル、および任意の活性タキサン誘導体またはプロドラッグを含む。「パクリタキセル」（本明細書において、例えば、ドセタキセル、ＴＡＸＯＬ□、ＴＡＸＯＴＥＲＥ□、（ドセタキセルの製剤）、パクリタキセルの１０−デスアセチル類似体、およびパクリタキセルの３’Ｎ−デスベンゾイル−３’Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル類似体等の類似体、製剤、および、誘導体を含むと理解されたい）は、当業者に公知である技術を用いて容易に調製されてもよいか（国際公開第ＷＯ９４／０７８８２号、同第ＷＯ９４／０７８８１号、同第ＷＯ９４／０７８８０号、同第ＷＯ９４／０７８７６号、同第ＷＯ９３／２３５５５号、同第ＷＯ９３／１００７６号；米国特許第５，２９４，６３７号、同第５，２８３，２５３号、同第５，２７９，９４９号、同第５，２７４，１３７号、同第５，２０２，４４８号、同第５，２００，５３４号、同第５，２２９，５２９号、および欧州特許第５９０，２６７号も参照のこと）、または例えば、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．（セイヨウイチイ由来のＴ７４０２；またはウンナンイチイ由来のＴ−１９１２）を含む様々な商業供給源から得られてもよい。
【０１２２】
パクリタキセルは、パクリタキセルの一般的な化学的に利用可能な形態だけではなく、類似体および誘導体（例えば、上記のようなＴａｘｏｔｅｒｅ□、ドセタキセル）およびパクリタキセルコンジュゲート（例えば、パクリタキセル−ＰＥＧ、パクリタキセル−デキストラン、またはパクリタキセル−キシロース）も指すと理解されたい。
【０１２３】
また、親水性誘導体および疎水性誘導体の両方を含む様々な既知の誘導体も、「タキサン」という用語に含まれる。タキサン誘導体は、限定されないが、国際特許出願第ＷＯ９９／１８１１３号に記載されるガラクトースおよびマンノース誘導体；国際公開第ＷＯ９９／１４２０９号に記載されるピペラジノおよび他の誘導体；国際公開第ＷＯ９９／０９０２１号、国際公開第ＷＯ９８／２２４５１号、および米国特許第５，８６９，６８０号に記載されるタキサン誘導体；国際公開第ＷＯ９８／２８２８８号に記載される６−チオ誘導体；米国特許第５，８２１，２６３号に記載されるスルフェンアミド誘導体；ならびに米国特許第５，４１５，８６９号に記載されるタキソール誘導体を含む。限定されないが、国際公開第ＷＯ９８／５８９２７号、国際公開第ＷＯ９８／１３０５９号、および米国特許第５，８２４，７０１号に記載されるものを含むパクリタキセルのプロドラッグをさらに含む。
【０１２４】
抗体の生成方法
主題の抗体は、任意の既知の方法、例えば、タンパク質合成のための従来の合成法、組換えＤＮＡ法等によって生成することができる。
【０１２５】
主題の抗体が一本鎖ポリペプチドである場合、それは、標準的な化学的ペプチド合成技術を用いて合成することができる。ポリペプチドが化学的に合成される場合、固相または液相を介して合成を進めることができる。配列のＣ末端アミノ酸を不溶性の支持体に付着させた後、配列中の残りのアミノ酸を連続的に付加する固相ポリペプチド合成（ＳＰＰＳ）は、主題の抗体の化学合成のための好適な方法の一例である。ＦｍｏｃおよびＢｏｃ等の種々の形態のＳＰＰＳが、主題の抗体を合成するために利用可能である。固相合成のための技術は、Ｂａｒａｎｙ  ａｎｄ  Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；ｐｐ．３−２８４  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｖｏｌ．２：Ｓｐｅｃｉａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｐａｒｔ  Ａ．，Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８５：２１４９−２１５６（１９６３）；Ｓｔｅｗａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ  ｅｄ．Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，  Ｉｌｌ．（１９８４）；およびＧａｎｅｓａｎ  Ａ．２００６  Ｍｉｎｉ  Ｒｅｖ．Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．６：３−１０、およびＣａｍａｒｅｒｏ  ＪＡ  ｅｔ  ａｌ．２００５  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｅｐｔ  Ｌｅｔｔ．１２：７２３−８に記載されている。端的に述べると、小さな不溶性の多孔質ビーズを、ペプチド鎖が構築された機能単位で処理する。カップリング／脱保護のサイクルを繰り返した後、付着した固相の遊離Ｎ末端アミンを、Ｎ保護アミノ酸単位にカップリングさせる。次いで、この単位を脱保護し、さらなるアミノ酸を付着させ得る新しいＮ末端アミンを露出させる。ペプチドは、固相上に固定化された状態に留まり、切断される前に濾過プロセスを経る。
【０１２６】
主題の抗体の生成には標準的な組換え法を用いることができる。例えば、任意選択的に定常領域に結合された軽鎖および重鎖可変領域をコードする核酸が、発現ベクターに挿入される。軽鎖および重鎖は、同じかまたは異なる発現ベクターにクローニングすることができる。免疫グロブリン鎖をコードするＤＮＡセグメントは、免疫グロブリンポリペプチドの発現を確実にする発現ベクター（複数可）中の制御配列に作動可能に連結される。発現制御配列は、限定されないが、プロモーター（例えば、天然に会合しているかまたは異種のプロモーター）、シグナル配列、エンハンサーエレメント、および転写終止配列を含む。発現制御配列は、真核生物宿主細胞（例えば、ＣＯＳまたはＣＨＯ細胞）を形質転換するかまたはトランスフェクトすることが可能なベクター中の真核生物プロモーター系であってもよい。一旦、ベクターが適切な宿主に組み込まれると、宿主は、高レベルのヌクレオチド配列配列、ならびに抗体の収集および精製に好適な条件下に維持される。
【０１２７】
コードの退縮のために、様々な核酸配列が、各免疫グロブリンアミノ酸配列をコードすることができる。望ましい核酸配列は、新規固相ＤＮＡ合成、または所望のポリヌクレオチドの早期に調製された変異体のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）変異誘発のいずれかによって生成することができる。オリゴヌクレオチド媒介性の変異誘発は、標的ポリペプチドＤＮＡの置換、欠失、および挿入変異体を調製するための好適な方法の一例である。Ａｄｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＤＮＡ２：１８３（１９８３）を参照のこと。端的に述べると、標的ポリペプチドＤＮＡは、一本鎖ＤＮＡ鋳型に対して所望の突然変異をコードするオリゴヌクレオチドをハイブリダイズすることによって改変される。ハイブリダイゼーション後、ＤＮＡポリメラーゼを用いて、オリゴヌクレオチドプライマーを組み込み、標的ポリペプチドＤＮＡ内の選択された改変をコードする鋳型の第２の相補性鎖全体を合成する。
【０１２８】
好適な発現ベクターは、典型的には、エピソームとして、または宿主染色体ＤＮＡの不可欠な部分としてのいずれかで、宿主生物において複製可能である。一般的に、発現ベクターは、所望のＤＮＡ配列で形質転換した細胞の検出を可能にするための選択マーカー（例えば、アンピシリン耐性ハイグロマイシン耐性、テトラサイクリン耐性、カナマイシン耐性、またはネオマイシン耐性）を含む。
【０１２９】
大腸菌は、主題の抗体をコードするポリヌクレオチドをクローニングするために使用できる原核生物宿主細胞の一例である。使用に適した他の微生物宿主は、バチルス・スブチリス等の桿菌、ならびにサルモネラ、セラチア、および種々のシュードモナス種等の他の腸内細菌科を含む。これらの原核生物宿主において、典型的には宿主細胞と適合性の発現制御配列（例えば、複製起点）を含む発現ベクターを作製することができる。さらに、乳糖プロモーター系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、βラクタマーゼプロモーター系、またはファージλからのプロモーター系等の、任意の数の様々な周知のプロモーターが存在する。プロモーターは、典型的には、任意選択的にオペレーター配列を伴って、発現を制御し、また、転写および翻訳を開始および終了させるためのリボソーム結合部位配列等を有する。
【０１３０】
酵母等の他の微生物もまた発現に有用である。サッカロミセス（例えば、サッカロミセス・セレビシア）およびピキアは、好適な酵母宿主細胞の例であり、好適なベクターは、所望に応じて発現制御配列（例えば、プロモーター）、複製起点、終止配列等を有する。典型的なプロモーターは、３−ホスホグリセリン酸キナーゼおよび他の解糖酵素を含む。誘導可能な酵母プロモーターは、中でも、アルコール脱水素酵素、イソチトクロームＣ、ならびにマルトースおよびガラクトース利用を司る酵素からのプロモーターを含む。
【０１３１】
微生物に加えて、哺乳動物組織（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞培養で増殖させた哺乳動物細胞）もまた、本発明のポリペプチド（例えば免疫グロブリンまたはその断片をコードするポリヌクレオチド）を発現させるおよび精製するために使用することができる。Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎ．Ｙ．，Ｎ．Ｙ．（１９８７）を参照のこと。好適な哺乳動物宿主細胞は、ＣＨＯ細胞株、種々のＣｏｓ細胞株、ＨｅＬａ細胞、骨髄腫細胞株、および形質転換Ｂ細胞またはハイブリドーマを含む。これらの細胞のための発現ベクターは、複製起点、プロモーター、およびエンハンサー等の発現制御配列（Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．８９：４９（１９８６））、ならびにリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライシング部位、ポリアデニル化部位、および転写終止配列等の必要なプロセシング情報部位を含むことができる。好適な発現制御配列の例は、免疫グロブリン遺伝子、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシパピローマウイルス、サイトメガロウイルス等に由来するプロモーターである。Ｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９（１９９２）を参照のこと。
【０１３２】
一旦合成されると（化学的にまたは組換え的にのいずれかで）、全抗体、それらの二量体、個々の軽鎖および重鎖、または主題の抗体の他の形態（例えば、ｓｃＦｖ等）を、硫酸アンモニウム沈殿、アフィニティーカラム、カラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）精製、ゲル電気泳動等を含む当該技術分野の標準的手順に従って精製することができる（Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎ．Ｙ．，（１９８２）を全般的に参照のこと）。主題の抗体は、実質的に純粋であってもよく、例えば、少なくとも約８０％〜８５％純粋、少なくとも約８５％〜９０％純粋、少なくとも約９０％〜９５％純粋、または９８％〜９９％純粋、またはそれ以上純粋であってもよく、例えば、細胞片、主題の抗体以外の巨大分子等の混入物を含まない等である。
【０１３３】
組成物
本開示は、主題の抗体を含む組成物を提供する。主題の抗体組成物は、主題の抗体に加えて、塩、例えば、ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ２、ＫＣｌ、ＭｇＳＯ４等；緩衝剤、例えば、Ｔｒｉｓ緩衝液、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピぺラジン−Ｎ’−（２−エタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、２−（Ｎ−Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ）エタンスルホン酸ナトリウム塩（ＭＥＳ）、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ−ｔｒｉｓ［ヒドロキシメチル］メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）等；可溶化剤；洗浄剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ−２０等の非イオン性洗浄剤；プロテアーゼ阻害剤；グリコール等のうちの１つ以上を含むことができる。
【０１３４】
核酸
本開示は、主題の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。主題の抗体をコードするヌクレオチド配列は、意図する標的細胞（例えば、コードされた抗体を合成するように遺伝子操作された細胞）におけるヌクレオチド配列の発現を許容するプロモーターおよびエンハンサー等の１つ以上の調節エレメントに作動可能に連結することができる。
【０１３５】
好適なプロモーターおよびエンハンサーエレメントは、当該技術分野で既知である。細菌細胞における発現の場合、好適なプロモーターは、限定されないが、ｌａｃＩ、ｌａｃＺ、Ｔ３、Ｔ７、ｇｐｔ、λ、Ｐ、およびｔｒｃを含む。真核細胞の発現の場合、好適なプロモーターは、限定されないが、軽鎖および／または重鎖の免疫グロブリン遺伝子プロモーターエレメントおよびエンハンサーエレメント；サイトメガウイルス最初期プロモーター；単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼプロモーター；初期および後期ＳＶ４０プロモーター；レトロウイルスからの長い末端反復に存在するプロモーター；マウスメタロチオネイン−Ｉプロモーター；ならびに種々の当該技術で既知の組織特異的プロモーターを含む。
【０１３６】
いくつかの実施形態において、例えば、酵母細胞における発現の場合、好適なプロモーターは、ＡＤＨ１プロモーター、ＰＧＫ１プロモーター、ＥＮＯプロモーター、ＰＹＫ１プロモーター等の構成的プロモーター；またはＧＡＬ１プロモーター、ＧＡＬ１０プロモーター、ＡＤＨ２プロモーター、ＰＨＯ５プロモーター、ＣＵＰ１プロモーター、ＧＡＬ７プロモーター、ＭＥＴ２５プロモーター、ＭＥＴ３プロモーター、ＣＹＣ１プロモーター、ＨＩＳ３プロモーター、ＡＤＨ１プロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＧＡＰＤＨプロモーター、ＡＤＣ１プロモーター、ＴＲＰ１プロモーター、ＵＲＡ３プロモーター、ＬＥＵ２プロモーター、ＥＮＯプロモーター、ＴＰ１プロモーター、およびＡＯＸ１（例えば、ピキアにおける使用のため）等の調節可能プロモーターである。適切なベクターおよびプロモーターの選択は、当業者の通常の技術の範囲内である。
【０１３７】
原核生物宿主細胞において使用するのに好適なプロモーターは、限定されないが、バクテリオファージＴ７  ＲＮＡポリメラーゼプロモーター；ｔｒｐプロモーター；ｌａｃオペロンプロモーター；ハイブリッドプロモーター、例えば、ｌａｃ／ｔａｃハイブリッドプロモーター、ｔａｃ／ｔｒｃハイブリッドプロモーター、ｔｒｐ／ｌａｃプロモーター、Ｔ７／ｌａｃプロモーター；ｔｒｃプロモーター；ｔａｃプロモーター等；ａｒａＢＡＤプロモーター；ｓｓａＧプロモーターもしくは関連プロモーター等のｉｎ  ｖｉｖｏ調節プロモーター（例えば、米国特許公開第２００４０１３１６３７号を参照）、ｐａｇＣプロモーター（Ｐｕｌｋｋｉｎｅｎ  ａｎｄ  Ｍｉｌｌｅｒ，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１９９１：１７３（１）：８６−９３；Ａｌｐｕｃｈｅ−Ａｒａｎｄａ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ，１９９２；８９（２１）：１００７９−８３）、ｎｉｒＢプロモーター（Ｈａｒｂｏｒｎｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏ．６：２８０５−２８１３）等（例えば、Ｄｕｎｓｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６７：５１３３−５１４１；ＭｃＫｅｌｖｉｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｖａｃｃｉｎｅ  ２２：３２４３−３２５５；およびＣｈａｔｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：８８８−８９２を参照）；σ７０プロモーター、例えば、コンセンサスσ７０プロモーター（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＸ７９８９８０、ＡＸ７９８９６１、およびＡＸ７９８１８３を参照）；定常期プロモーター、例えば、ｄｐｓプロモーター、ｓｐｖプロモーター等；病原性アイランドＳＰＩ−２に由来するプロモーター（例えば、ＷＯ９６／１７９５１を参照）；ａｃｔＡプロモーター（例えば、Ｓｈｅｔｒｏｎ−Ｒａｍａ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７０：１０８７−１０９６を参照）；ｒｐｓＭプロモーター（例えば、Ｖａｌｄｉｖｉａ  ａｎｄ  Ｆａｌｋｏｗ（１９９６）．Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２２：３６７を参照）；ｔｅｔプロモーター（例えば、Ｈｉｌｌｅｎ，Ｗ．ａｎｄ  Ｗｉｓｓｍａｎｎ，Ａ．（１９８９）Ｉｎ  Ｓａｅｎｇｅｒ，Ｗ．ａｎｄ  Ｈｅｉｎｅｍａｎｎ，Ｕ．（ｅｄｓ），Ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ．Ｍａｃｍｉｌｌａｎ，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ，Ｖｏｌ．１０，ｐｐ．１４３−１６２を参照）；ＳＰ６プロモーター（例えば、Ｍｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１２：７０３５を参照）等が挙げられる。大腸菌等の原核生物において使用するのに好適な強力なプロモーターは、限定されないが、Ｔｒｃ、Ｔａｃ、Ｔ５、Ｔ７、およびＰＬａｍｂｄａを含む。細菌宿主細胞において使用するオペレータの非限定的な例として、ラクトースプロモーターオペレーター（ＬａｃＩリプレッサータンパク質は、ラクトースと接触させると立体構造を変化させ、それによってＬａｃＩリプレッサータンパク質がオペレーターに結合するのを防止する）、トリプトファンプロモーターオペレーター（トリプトファンと複合体を形成��た場合、ＴｒｐＲリプレッサータンパク質はオペレーターに結合する立体構造を有する；トリプトファンの非存在下では、ＴｒｐＲリプレッサータンパク質は、オペレーターに結合しない立体構造を有する）、およびｔａｃプロモーターオペレーター（例えば、ｄｅＢｏｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８０：２１−２５を参照）が挙げられる。
【０１３８】
主題の抗体をコードするヌクレオチド配列は、発現ベクターおよび／またはクローニングベクター内に存在し得る。主題の抗体が２つの別々のポリペプチドを含む場合、２つのポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を同じかまたは別々のベクター内でクローニングすることができる。発現ベクターは、選択可能なマーカー、複製起点、ならびにベクターの複製および／または維持を提供する他の特徴を含む。
【０１３９】
多数の好適なベクターおよびプロモーターが当業者に知られており、その多くは、主題の組換え構築物を作製するために市販されている。以下のベクターを例として提供する。細菌：ｐＢｓ、ＰｈａｇｅＳｃｒｉｐｔ、ＰｓｉＸ１７４、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ  ＳＫ、ｐＢｓ  ＫＳ、ｐＮＨ８ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１８ａ、ｐＮＨ４６ａ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡ）；ｐＴｒｃ９９Ａ、ｐＫＫ２２３−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤＲ５４０、およびｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）。真核生物：ｐＷＬｎｅｏ、ｐＳＶ２ｃａｔ、ｐＯＧ４４、ＰＸＲ１、ｐＳＧ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）ｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ、およびｐＳＶＬ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）。
【０１４０】
発現ベクターは、一般的に、異種タンパク質をコードする核酸配列の挿入を提供するために、プロモーター配列の近くに位置する都合のよい制限酵素部位を有する。発現宿主において機能する選択可能なマーカーが存在してもよい。好適な発現ベクターは、限定されないが、ウイルスベクター（例えば、ワクシニアウイルス；ポリオウイルス；アデノウイルス（例えば、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ３５：２５４３  ２５４９，１９９４；Ｂｏｒｒａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ６：５１５  ５２４，１９９９；Ｌｉ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄｓｏｎ，ＰＮＡＳ  ９２：７７００  ７７０４，１９９５；Ｓａｋａｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ５：１０８８  １０９７，１９９９；国際公開第ＷＯ９４／１２６４９号、同第ＷＯ９３／０３７６９号；同第ＷＯ９３／１９１９１号；同第ＷＯ９４／２８９３８号；同第ＷＯ９５／１１９８４号および同第ＷＯ９５／００６５５号を参照）；アデノ随伴ウイルス（例えば、Ａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ９：８１  ８６，１９９８，Ｆｌａｎｎｅｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９４：６９１６  ６９２１，１９９７；Ｂｅｎｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ３８：２８５７  ２８６３，１９９７；Ｊｏｍａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ４：６８３  ６９０，１９９７，Ｒｏｌｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  １０：６４１  ６４８，１９９９；Ａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  ５：５９１  ５９４，１９９６；Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ  ｉｎ  ＷＯ９３／０９２３９、Ｓａｍｕｌｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒ．（１９８９）６３：３８２２−３８２８；Ｍｅｎｄｅｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖｉｒｏｌ．（１９８８）１６６：１５４−１６５；およびＦｌｏｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ（１９９３）９０：１０６１３−１０６１７を参照）；ＳＶ４０；単純ヘルペスウイルス；ヒト免疫不全ウイルス（例えば、Ｍｉｙｏｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９４：１０３１９  ２３，１９９７；Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７３：７８１２  ７８１６，１９９９を参照）；レトロウイルスベクター（例えば、マウス白血病ウイルス、脾臓壊死ウイルス、ならびに、ラウス肉腫ウイルス、ハーベイ肉腫ウイルス、トリ白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、骨髄増殖性肉腫ウイルス、および乳癌ウイルス等のレトロウイルス由来のベクター）等を含む。
【０１４１】
上述のように、主題の核酸は、主題の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む。主題の核酸は、上述のように抗ＣＤ２２重鎖および軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む。
【０１４２】
細胞
本開示は、主題の核酸で遺伝子操作された、単離された遺伝子操作された宿主細胞（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞）を提供する。いくつかの実施形態において、主題の単離された遺伝子操作された宿主細胞は、主題の抗体を生成することができる。
【０１４３】
好適な宿主細胞は、哺乳動物細胞、昆虫細胞、酵母細胞等の真核生物宿主細胞、および細菌細胞等の原核生物細胞を含む。宿主細胞への主題の核酸の導入は、例えば、リン酸カルシウム沈殿法、ＤＥＡＥデキストラン媒介トランスフェクション、リポソーム媒介トランスフェクション、電気穿孔法、または他の既知の方法によって実現することができる。
【０１４４】
好適な哺乳動物細胞は、初代細胞および不死化細胞株を含む。好適な哺乳動物細胞株は、ヒト細胞株、非ヒト霊長類細胞株、げっ歯類（例えば、マウス、ラット）細胞株等を含む。好適な哺乳動物細胞株は、限定されないが、ＨｅＬａ細胞（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）Ｎｏ．ＣＣＬ−２）、ＣＨＯ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ９６１８、ＣＣＬ６１、ＣＲＬ９０９６）、Ｖｅｒｏ細胞、ＮＩＨ  ３Ｔ３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１６５８）、Ｈｕｈ−７細胞、ＢＨＫ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ１０）、ＰＣ１２細胞（ＡＴＣＣ細胞ＣＲＬ１７２１）、ＣＯＳ細胞、ＣＯＳ−７細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１６５１）、ＲＡＴ１細胞、マウスＬ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬＩ．３）、ヒト胎児由来腎臓（ＨＥＫ）２９３細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１５７３）、ＨＬＨｅｐＧ２細胞等を含む。
【０１４５】
好適な酵母細胞は、限定されないが、ピキア・パストリス、ピキア・フィンランディカ、ピキア・トレハロフィラ、ピキア・コクラメ、ピキア・メンブラネファシエンス、ピキア・オプンチエ、ピキア・サーモトレランス、ピキア・サリクタリア、ピキア・グエルクウム、ピキア・ピペリ、ピキア・スチプチス、ピキアメタノリカ、ピキア種、サッカロミセス・セレビシア、サッカロミセス種、ハンセヌラ・ポリモルファ、クルイベロミセス種、クルイベロミセス・ラクチス、カンジダ・アルビカンス、アスペルギルス・ニデュランス、アスペルギルス・ニガー、アスペルギルス・オリゼ、トリコデルマ・リーセイ、クリソスポリウム・ラクノウエンス、フザリウム種、フザリウム・グラミネウム、フザリウム・ベネナツム、ニューロスポラ・クラッサ、クラミドモナスレインハルトチイ等を含む。
【０１４６】
好適な原核生物細胞は、限定されないが、大腸菌、乳酸菌類、サルモネラ菌類、赤痢菌類等の様々な実験株のいずれかを含む。例えば、Ｃａｒｒｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１７６−１１８１；米国特許第６，４４７，７８４号；およびＳｉｚｅｍｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７０：２９９−３０２を参照のこと。本発明に用いることのできるサルモネラ菌株の例は、限定されないが、サルモネラ・チフィおよびサルモネラ・チフィリウムを含む。好適な赤痢菌株は、限定されないが、シゲラ・フレックスネリ、シゲラ・ソネイ、および志賀赤痢菌を含む。典型的には、実験株は非病原性の株である。他の好適な細菌の非限定的な例として、限定されないが、バチルス・スブチリス、シュードモナス・プジタ、シュードモナス・エルジノーサ、シュードモナス・メバロニイ、ロドバクター・スフェロイデス、ロドバクター・カプスラータ、ロドスピリラム・ラブラム、ロドコッカス種等を含む。いくつかの実施形態において、宿主細胞は大腸菌である。
【０１４７】
薬学的組成物
本開示は、主題の抗体を含む薬学的組成物を含む組成物を提供する。一般に、製剤は、有効量の主題の抗体を含む。「有効量」とは、所望の結果、例えば、癌性Ｂ細胞数の減少、自己反応性Ｂ細胞の数および／または活性の減少をもたらすのに十分な投与量を意味する。場合によっては、所望の結果は、少なくとも、Ｂ細胞悪性腫瘍の症状の対象と比較した軽減である。
【０１４８】
製剤
主題の方法において、所望の治療効果または診断効果をもたらすことができる任意の従来の手段を用いて、主題の抗体を宿主に投与することができる。したがって、治療的投与のために様々な製剤に薬剤を組み込むことができる。より具体的には、主題の抗体は、適切な薬学的に許容される担体と組み合わせて薬学的組成物に製剤化することができ、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、軟膏、溶剤、坐剤、注射剤、吸入剤、およびエアロゾル剤等の固体、半固体、液体、または気体形状の調製物に製剤化することができる。
【０１４９】
医薬剤形中で、主題の抗体は、それらの薬学的に許容される塩の形態で投与されてもよいか、またはそれらは単独でもしくは適切な会合において、さらには他の薬学的に活性な化合物と組み合わせて使用されてもよい。以下の方法および賦形剤は、例示であるに過ぎず、決して限定的ではない。
【０１５０】
経口調製物の場合、主題の抗体は、錠剤、散剤、顆粒剤、またはカプセル剤を作製するために、単独で、または適切な添加剤、例えば、ラクトース、マンニトール、トウモロコシデンプン、またはジャガイモデンプン等の従来の添加剤；結晶セルロース、セルロース誘導体、アカシア、トウモロコシデンプン、またはゼラチン等の結合剤；トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、またはカルボキシメチルセルロースナトリウム等の崩壊剤；タルクまたはステアリン酸マグネシウム等の滑剤、また必要に応じて、希釈剤、緩衝剤、湿潤剤、防腐剤、および香味剤と組み合わせて使用することができる。
【０１５１】
主題の抗体は、植物油または他の類似する油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸エステルもしくはプロピレングリコールのエステル等の水性溶媒または非水性溶媒中に、必要に応じて、可溶化剤、等張剤、懸濁剤、乳化剤、安定剤、および防腐剤等の従来の添加剤とともに、調製物を溶解、懸濁、または乳化することによって、注射用調製物に製剤化することができる。
【０１５２】
主題の抗体を含む薬学的組成物は、所望の純度を有する抗体を、任意選択的な生理学的に許容される担体、賦形剤、安定剤、界面活性剤、緩衝剤、および／または等張化剤と混合することによって調製される。許容される担体、賦形剤、および／または安定剤は、用いられる投与量および濃度ではレシピエントに無毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、およびその他の有機酸等の緩衝剤；アスコルビン酸、グルタチオン、システイン、メチオニン、およびクエン酸を含む抗酸化剤；保存剤（エタノール、ベンジルアルコール、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クロル−ｍ−クレゾール、メチルもしくはプロピルパラベン、塩化ベンザルコニウム、またはこれらの組み合わせ）；アミノ酸、例えば、アルギニン、グリシン、オルニチン、リジン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、イソロイシン、ロイシン、アラニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、メチオニン、セリン、プロリン、およびこれらの組み合わせ；単糖類、二糖類、および他の炭水化物；低分子量（１０残基未満）ポリペプチド；ゼラチンまたは血清アルブミン等のタンパク質；ＥＤＴＡ等のキレート化剤；トレハロース、ショ糖、ラクトース、グルコース、マンノース、マルトース、ガラクトース、フルクトース、ソルボース、ラフィノース、グルコサミン、Ｎ−メチルグルコサミン、ガラクトサミン、およびノイラミン酸等の糖類；ならびに／あるいは、Ｔｗｅｅｎ、Ｂｒｉｊ  Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性表面活性剤を含む。
【０１５３】
薬学的組成物は、液体形態、凍結乾燥形態、または凍結乾燥形態から再構成された液体形態であってもよく、凍結乾燥調製物は、投与前に滅菌溶液で再構成される。凍結乾燥組成物を再構成するための標準的な手順は、ある体積の純水（典型的には凍結乾燥中に除去された体積と同等である）を加え戻すことであるが、非経口投与用の薬学的組成物の生成のために抗菌剤を含む溶液が使用されてもよい（Ｃｈｅｎ（１９９２）Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ  Ｉｎｄ  Ｐｈａｒｍ  １８，１３１１−５４も参照のこと）。
【０１５４】
主題の薬学的組成物中の例示的な抗体濃度は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍｌ、または約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、または約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの範囲であり得る。
【０１５５】
抗体の水性製剤は、ｐＨ緩衝溶液中で、例えば、約４．０〜約７．０、または約５．０〜約６．０の範囲、または代替として約５．５のｐＨで調製されてもよい。この範囲内のｐＨに適した緩衝液の例として、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、クエン酸緩衝液、コハク酸緩衝液、酢酸緩衝液、および他の有機酸緩衝液が挙げられる。緩衝液の濃度は、例えば、緩衝液および製剤の所望の浸透圧に応じて、約１ｍＭ〜約１００ｍＭ、または約５ｍＭ〜約５０ｍＭの範囲であり得る。
【０１５６】
等張化剤は、製剤の浸透圧を調節するために抗体製剤に含められてもよい。例示的な等張化剤は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、およびアミノ酸グループのいずれかの成分、糖類、ならびにこれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、水性製剤は等張であるが、高張液または低張液が好適である場合もある。「等張」という用語は、生理食塩水または血清等の比較される特定の他の溶液と同じ浸透圧を有する溶液を意味する。等張化剤は、約５ｍＭ〜約３５０ｍＭ、例えば、１００ｍＭ〜３５０ｎＭの量で使用されてもよい。
【０１５７】
製剤化した抗体の凝集を低減するため、および／または製剤中の微粒子の形成を最小限に抑えるため、および／または吸着を低減するために、界面活性剤が抗体製剤に加えられてもよい。例示的な界面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（Ｔｗｅｅｎ）、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（Ｂｒｉｊ）、アルキルフェニルポリオキシエチレンエーテル（Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマー（Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）、およびラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を含む。好適なポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルの例は、ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ  ２０（商標）の商品名で販売）およびポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ  ８０（商標）の商品名で販売）である。好適なポリエチレン−ポリプロピレンコポリマーの例は、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８またはＰｏｌｏｘａｍｅｒ  １８８（商標）の名称で販売されているものである。好適なポリオキシエチレンアルキルエーテルの例は、Ｂｒｉｊ（商標）の商品名で販売されているものである。界面活性剤の例示的な濃度は、約０．００１％〜約１％ｗ／ｖの範囲であり得る。
【０１５８】
凍結乾燥プロセスの間の不安定化条件から不安定な活性成分（例えば、タンパク質）を保護するために、凍結保護剤が加えられてもよい。例えば、既知の凍結保護剤は、糖類（グルコースおよびショ糖を含む）；ポリオール（マンニトール、ソルビトール、およびグリセロールを含む）；ならびにアミノ酸（アラニン、グリシン、およびグルタミン酸を含む）を含む。凍結保護剤は、約１０ｍＭ〜５００ｎＭの量で含ませることができる。
【０１５９】
いくつかの実施形態において、主題の製剤は、主題の抗体と、上で特定した成分（例えば、界面活性剤、緩衝剤、安定剤、等張化剤）のうちの１つ以上とを含み、エタノール、ベンジルアルコール、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クロール−ｍ−クレゾール、メチルまたはプロピルパラベン、塩化ベンザルコニウム、またはこれらの組み合わせ等の１つ以上の保存剤を本質的に含まない。他の実施形態において、保存剤は、例えば、約０．００１〜約２％（ｗ／ｖ）の範囲の濃度で製剤に含まれる。
【０１６０】
例えば、主題の製剤は、非経口投与に好適な液体または凍結乾燥製剤であり得、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、約０．００１％〜約１％の少なくとも１つの界面活性剤、約１ｍＭ〜約１００ｍＭの緩衝剤、任意選択的に約１０ｍＭ〜約５００ｍＭの安定剤、および約５ｍＭ〜約３０５ｍＭの等張化剤を含んでもよく、約４．０〜約７．０のｐＨを有する。
【０１６１】
別の例として、主題の非経口製剤は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、０．０４％ｗ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ  ２０、２０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、および２５０ｍＭショ糖を含み、５．５のｐＨを有する、液体または凍結乾燥製剤である。
【０１６２】
別の例として、主題の非経口製剤は、１）１５ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、０．０４％ｗ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ  ２０、２０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、および２５０ｍＭショ糖を含み、５．５のｐＨを有するか、または２）７５ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、０．０４％ｗ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ  ２０、２０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、および２５０ｍＭショ糖を含み、５．５のｐＨを有するか、または３）７５ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、０．０２％ｗ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ  ２０、２０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、および２５０ｍＭショ糖を含み、５．５のｐＨを有するか、または４）７５ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、０．０４％ｗ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ  ２０、２０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、および２５０ｍＭトレハロースを含み、５．５のｐＨを有するか、または６）７５ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、０．０２％ｗ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ  ２０、２０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、および２５０ｍＭトレハロースを含み、５．５のｐＨを有する、凍結乾燥製剤を含む。
【０１６３】
別の例として、主題の非経口製剤は、１）７．５ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、０．０２２％ｗ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ  ２０、１２０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、および２５０  １２５ｍＭショ糖を含み、５．５のｐＨを有するか、、または２）３７．５ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、０．０２％ｗ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ  ２０、１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、および１２５ｍＭ  ショ糖を含み、５．５のｐＨを有するか、または３）３７．５ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、０．０１％ｗ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ  ２０、１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、および１２５ｍＭ  ショ糖を含み、５．５のｐＨを有するか、、または４）３７．５ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、０．０２％ｗ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ  ２０、１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、および１２５ｍＭトレハロースを含み、５．５のｐＨを有するか、または５）３７．５ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、０．０１％ｗ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ  ２０、１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、および１２５ｍＭトレハロースを含み、５．５のｐＨを有するか、または６）５ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、０．０２％ｗ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ  ２０、２０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、および２５０ｍＭトレハロースを含み、５．５のｐＨを有するか、または７）７５ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、０．０２％ｗ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ  ２０、２０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、および２５０ｍＭマンニトールを含み、５．５のｐＨを有するか、または８）７５ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、０．０２％ｗ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ  ２０、２０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、および１４０ｍＭ塩化ナトリウムを含み、５．５のｐＨを有するか、または９）１５０ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、０．０２％ｗ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ  ２０、２０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、および２５０ｍＭトレハロースを含み、５．５のｐＨを有するか、または１０）１５０ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、０．０２％ｗ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ  ２０、２０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、および２５０ｍＭマンニトールを含み、５．５のｐＨを有するか、または１１）１５０ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、０．０２％ｗ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ  ２０、２０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、および１４０ｍＭ  塩化ナトリウムを含み、５．５のｐＨを有するか、または１２）１０ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、０．０１％ｗ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ  ２０、２０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、および４０ｍＭ塩化ナトリウムを含み、５．５のｐＨを有する、液体製剤である。
【０１６４】
主題の抗体は、吸入によって投与されるエアロゾル製剤中に用いることができる。主題の抗体は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素等の許容される加圧噴霧剤に製剤化することができる。
【０１６５】
さらに、主題の抗体は、乳化塩基または水溶性塩基等の様々な塩基とともに混合することによって坐剤として作製することができる。主題の抗体は、坐剤によって直腸投与することができる。坐剤は、体温では溶解するが室温では凝固する、ココアバター、カルボワックス、およびポリエチレングリコール等のビヒクルを含むことができる。
【０１６６】
シロップ剤、エリキシル剤、および懸濁剤等の経口または直腸投与のための単位剤形が提供されてもよく、その場合、各投薬単位、例えば、茶さじ１杯、大さじ１杯、錠剤、または坐剤は、１つ以上の阻害剤を含む所定量組成物を含む。同様に、注入または静脈内投与のための単位剤形は、滅菌水、生理食塩水、または別の薬学的に許容される担体中の溶液として組成物中に主題の抗体を含んでもよい。
【０１６７】
「単位剤形」という用語は、本明細書で使用される場合、ヒトおよび動物対象の単位用量として好適な物理的に個別の単位を指し、各単位は、薬学的に許容される希釈剤、担体、またはビヒクルと関連して所望の効果をもたらすのに十分な量で計算された本発明の化合物を所定量含む。主題の抗体の詳細は、用いられる特定の抗体および達成されるべき効果、ならびに宿主における各抗体に関連する薬力学に依存し得る。
【０１６８】
他の投与様式も、主題の発明を用いる用途を見出す。例えば、主題の抗体は、坐剤、また場合によっては、エアロゾル、および鼻腔内組成物に製剤化することができる。坐剤の場合、ビヒクル組成物は、ポリアルキレングリコールまたはトリグリセリド等の従来の結合剤および担体を含む。そのような坐剤は、約０．５％〜約１０％（ｗ／ｗ）、例えば、約１％〜約２％の範囲で活性成分を含む混合物から形成されてもよい。
【０１６９】
鼻腔内製剤は、通常、鼻粘膜に刺激を引き起こさないか、または毛様体の機能を著しく妨害しないビヒクルを含む。水、食塩水、または他の既知の物質等の希釈剤が、主題の発明とともに用いられてもよい。経鼻製剤はまた、限定されないが、クロロブタノールおよび塩化ベンザルコニウム等の保存剤も含み得る。鼻粘膜による主題のタンパク質の吸収を促進するために、界面活性剤が存在してもよい。
【０１７０】
主題の抗体は、注射用製剤として投与することができる。典型的には、注射用組成物は、溶液または懸濁液として、注射が調製され得る前の液体ビヒクル中の溶液または懸濁液に好適な固体形態として、調製される。調製物は、乳化してもよいか、またはリポソームビヒクルに封入された抗体であってもよい。
【０１７１】
好適な賦形剤ビヒクルは、例えば、水、食塩水、ブドウ糖、グリセロール、エタノール等、およびこれらの組み合わせである。さらに、必要に応じて、湿潤剤もしくは乳化剤またはｐＨ緩衝剤等の微量の補助物質を含んでもよい。そのような剤形を調製する実際の方法は、当業者に既知であるかまたは明白となるであろう。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，１７ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８５を参照のこと。投与される組成物または製剤は、いずれの場合も、治療を受ける対象において所望の状態を達成するのに十分な量の主題の抗体を含む。
【０１７２】
ビヒクル、アジュバント、担体、または希釈剤等の薬学的に許容される賦形剤は、公衆が入手しやすい。さらに、ｐＨ調整剤およびｐＨ緩衝剤、浸透圧調整剤、安定剤、湿潤剤等の薬学的に許容される補助物質は、公衆が入手しやすい。
【０１７３】
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、制御放出製剤に製剤化される。徐放調製物は、当該技術分野で周知の技術を用いて調製されてもよい。徐放調製物の好適な例として、抗体を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、該マトリックスは、フィルムまたはマイクロカプセル等の成形品の形態である。徐放マトリックスの例として、ポリエステル、Ｌ−グルタミン酸とエチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、ヒドロゲル、ポリ乳酸、分解性の乳酸−グリコール酸コポリマー、およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。徐放調製物に含まれる抗体の潜在的な生物活性の損失および潜在的な免疫原性の変化は、適切な添加剤を用いることにより、含水量を調節することにより、および特定のポリマーマトリックス組成物を開発することにより、回避することができる。
【０１７４】
本発明の範囲内の制御放出は、多数の拡張放出剤形のうちのいずれか１つを意味すると解釈することができる。以下の用語は、本発明の目的のために、制御放出と実質的に同等であると見なされてもよい：連続放出、制御放出、遅延放出、デポー、漸進的放出、長期間放出、プログラム化放出、長期放出、比例放出、遅延性放出、持続性、遅延、緩徐な放出、間隔を開けた放出、徐放、タイムコート、時限放出、遅延作用、拡張作用、階層的時間作用、長時間作用、長期作用、反復作用、緩徐作用、持続性作用、持続性作用薬物、および拡張放出。これらの用語に関するさらなる考察は、Ｌｅｓｃｚｅｋ  Ｋｒｏｗｃｚｙｎｓｋｉ，Ｅｘｔｅｎｄｅｄ−Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，１９８７（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）に見出すことができる。
【０１７５】
種々の制御放出技術が、非常に広範囲の薬物剤形を網羅する。制御放出技術は、限定されないが、物理的システムおよび化学的システムを含む。
【０１７６】
物理的システムは、限定されないが、マイクロカプセル化、マクロカプセル化、および膜システム等の速度制御膜を用いた貯蔵システム；中空繊維、超微孔質三酢酸セルロース、ならびに多孔質ポリマー基質および発泡体等の速度制御膜を用いない貯蔵システム；非多孔質のポリマー性またはエラストマー性マトリックス（例えば、非侵食性、侵食性、環境因子の侵入、および分解性）に物理的に溶解された系、ならびに非多孔質のポリマー性またはエラストマー性マトリックス（例えば、非侵食性、侵食性、環境因子の侵入、および分解性）に物理的に分散された材料を含むモノリシックシステム；外部制御層と化学的に類似しているかまたは類似していない貯蔵層を含む積層構造；ならびに浸透圧ポンプ、またはイオン交換樹脂への吸着等の他の物理的方法を含む。
【０１７７】
化学的システムは、限定されないが、ポリマーマトリックスの化学的侵食（例えば、不均質もしくは均質な侵食）、またはポリマーマトリックスの生物学的侵食（例えば、不均質もしくは均質）を含む。制御放出システムの種類に関するさらなる考察は、Ａｇｉｓ  Ｆ．Ｋｙｄｏｎｉｅｕｓ，Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｔｈｅｏｒｙ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，１９８０（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）に見出すことができる。
【０１７８】
経口投与のために開発された多数の制御放出製剤が存在する。これらは、限定されないが、浸透圧制御による胃腸管送達システム；動圧制御による胃腸管送達システム；微多孔膜透過制御による胃腸管送達デバイスを含む膜透過制御による胃腸管送達システム；胃液抵抗性の腸管を標的とする制御放出胃腸管送達デバイス；ゲル拡散制御による胃腸管送達システム；ならびに陽イオン性および陰イオン性薬物を含むイオン交換制御による胃腸管送達システムを含む。制御放出薬物送達システムに関するさらなる情報は、Ｙｉｅ  Ｗ．Ｃｈｉｅｎ，Ｎｏｖｅｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，１９９２（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．）に見出すことができる。これらの情報のうちのいくつかを、以下により詳細に記載する。
【０１７９】
投与量
好適な投与量は、種々の臨床的要因に基づいて、担当医師または他の適格な医療従事者によって決定され得る。医学分野において周知であるように、任意の１人の患者のための投与量は、患者の体格、体表面積、年齢、投与される特定の化合物、患者の性別、投与の期間および経路、総体的健康、ならびに同時に投与される他の薬物を含む多くの要因に依存する。主題の抗体は、１用量当たり１ｎｇ／体重１ｋｇ〜２０ｍｇ／体重１ｋｇ、例えば、０．１ｍｇ／体重１ｋｇ〜１０ｍｇ／体重１ｋｇ、例えば、０．５ｍｇ／体重１ｋｇ〜５ｍｇ／体重１ｋｇの量で投与されてもよいが、特に上記要因を考慮すると、この例示的範囲を下回るかまたは上回る用量が想定される。投与計画が持続注入である場合、１μｇ〜１０ｍｇ／体重１ｋｇ／分の範囲内でもあり得る。
【０１８０】
当業者は、用量レベルが、特定の抗体、症状の重症度、および患者の副作用に対する感受性の関数として異なり得ることを容易に認識するであろう。所与の化合物の好ましい投与量は、当業者によって様々な手段により容易に決定される。
【０１８１】
投与経路
主題の抗体は、ｉｎ  ｖｉｖｏおよびｅｘ  ｖｉｖｏ法、ならびに全身および局所投与経路を含む、薬物送達に好適な任意の利用可能な方法および経路を用いて個体に投与される。
【０１８２】
従来の薬学的に許容される投与経路は、鼻腔内、筋肉内、気管内、皮下、皮内、局所適用、静脈内、動脈内、直腸内、経鼻、経口、ならびに他の経腸および非経口投与経路を含む。投与経路は、必要に応じて、組み合わされてもよいか、または抗体および／もしくは所望の効果に応じて調節されてもよい。主題の抗体組成物は、単回または複数回用量で投与され得る。いくつかの実施形態において、主題の抗体組成物は経口投与される。いくつかの実施形態において、主題の抗体組成物は吸入経路を介して投与される。いくつかの実施形態において、主題の抗体組成物は鼻腔内投与される。いくつかの実施形態において、主題の抗体組成物は局所投与される。いくつかの実施形態において、主題の抗体組成物は頭蓋内投与される。いくつかの実施形態において、主題の抗体組成物は静脈内投与される。
【０１８３】
薬剤は、全身および局所経路を含む、従来の薬物の送達に好適な任意の利用可能な従来の方法および経路を用いて宿主に投与することができる。一般に、本発明によって企図される投与経路は、経腸、非経口、または吸入経路を含むが、必ずしもこれらに限定されない。
【０１８４】
吸入投与以外の非経口投与経路は、局所、経皮、皮下、筋肉内、眼窩内、関節内、脊髄内、胸骨内、および静脈内経路、すなわち、消化管を通る以外のあらゆる投与経路を含むが、必ずしもこれらに限定されない。非経口投与は、主題の抗体の全身または局所送達を実現するために行うことができる。全身送達が所望される場合、投与は、典型的には、薬学的調製物の侵襲性または全身性に吸収される局所または粘膜投与を含む。
【０１８５】
主題の抗体はまた、経腸投与によっても送達することができる。経腸投与経路は、経口および直腸（例えば、坐剤を使用）送達を含むが、必ずしもこれらに限定されない。
【０１８６】
治療とは、宿主を苦しめる病理学的状態に関連する症状の少なくとも改善を意味し、改善は、パラメータ、例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍またはＢ細胞媒介性自己免疫疾患等の治療される病理学的状態に関連する症状の規模における少なくとも減少を指すために広義で用いられる。そのため、治療はまた、宿主が、病理学的状態または少なくとも該病理学的状態を特徴付ける症状にそれ以上苦しまないように、病理学的状態または少なくともそれに関連する症状が、完全に阻害される、例えば発症が予防されるか、または停止される、例えば終結される状況も含む。
【０１８７】
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、例えば、全身送達のためにまたは局所部位に、注射によって投与される（例えば、静脈内注入）。
【０１８８】
様々な宿主（この場合、「宿主」という用語は、「対象」、「個体」、および「患者」という用語と同義に用いられる）が、主題の方法に従って治療可能である。一般的に、そのような宿主は、「哺乳動物」または「哺乳類」であり、これらの用語は、食肉目（例えば、イヌおよびネコ）、げっ歯目（例えば、マウス、モルモット、およびラット）、ならびに霊長目（例えば、ヒト、チンパンジー、およびサル）を含む哺乳綱に属する生物を説明するために広義で用いられる。いくつかの実施形態において、宿主はヒトである。
【０１８９】
主題の抗体の単位用量、例えば、経口用量または注射用量を含むキットが提供される。そのようなキットには、単位用量を収容する容器に加えて、対象となる病理学的状態を治療する際の抗体の使用法および付随する利益を記載する情報の添付文書が入っている。好ましい化合物および単位用量は、本明細書に上述したものである。
【０１９０】
治療方法
本開示は、ＣＤ２２陽性Ｂ細胞、例えば、癌性ＣＤ２２陽性Ｂ細胞、自己反応性ＣＤ２２陽性Ｂ細胞と関連するかまたはそれによって引き起こされる疾患または障害を治療する方法を提供する。
【０１９１】
Ｂ細胞悪性腫瘍の治療
本開示は、Ｂ細胞悪性腫瘍を治療する方法を提供し、該方法は、一般的に、有効量の主題の抗体を、それを必要とする個体（例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍を有する個体）に、単独で（例えば、単剤療法において）、または１つ以上のさらなる治療剤と組み合わせて（例えば、併用療法において）投与することを含む。
【０１９２】
Ｂ細胞悪性腫瘍は例えば、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病、ヘアリーセル白血病、および前リンパ球性白血病を含む。
【０１９３】
いくつかの実施形態において、主題の抗体の有効量は、単独で（例えば、単剤療法において）、または１つ以上のさらなる治療剤と組み合わせて（例えば、併用療法において）、１回以上の用量で投与された場合に、抗体を用いた治療が行われていない個体における癌性Ｂ細胞の数と比較して、個体における癌性Ｂ細胞の数を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、またはそれ以上減少させるのに効果的な量である。
【０１９４】
併用療法
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍を治療する主題の方法は、主題の抗体と１つ以上のさらなる治療剤とを投与することを含む。好適なさらなる治療剤は、（上述のような）  癌化学療法剤を含むが、これに限定されない。
【０１９５】
Ｂ細胞媒介性自己免疫疾患の治療
本開示は、Ｂ細胞媒介性自己免疫疾患を治療する方法を提供し、該方法は、一般的に、有効量の主題の抗体を、それを必要とする個体（例えば、Ｂ細胞媒介性自己免疫疾患を有する個体）に、単独で（例えば、単剤療法において）、または１つ以上のさらなる治療剤と組み合わせて（例えば、併用療法において）投与することを含む。Ｂ細胞媒介性自己免疫疾患は、その病理が１つ以上の自己抗原に特異的な抗体の存在に主に起因する自己免疫疾患である。そのため、Ｂ細胞媒介性自己免疫疾患はまた、抗体媒介性自己免疫疾患とも称されてもよい。
【０１９６】
Ｂ細胞媒介性自己免疫疾患は、例えば、全身性エリテマトーデス、重症筋無力症、自己免疫性心筋炎、関節リウマチ等を含む。
【０１９７】
いくつかの実施形態において、主題の抗体の有効量は、単独で（例えば、単剤療法において）、または１つ以上のさらなる治療剤と組み合わせて（例えば、併用療法において）、１回以上の用量で投与された場合に、抗体を用いた治療が行われていない個体における自己反応性Ｂ細胞の数と比較して、個体における自己反応性Ｂ細胞の数を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、またはそれ以上減少させるのに効果的な量である。
併用療法
【０１９８】
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞媒介性自己免疫疾患を治療する主題の方法は、主題の抗体と１つ以上のさらなる治療剤とを投与することを含む。好適なさらなる治療剤は、免疫抑制剤、抗炎症剤等を含むが、これらに限定されない。
【０１９９】
治療に適した対象
様々な対象が主題の方法を用いた治療に好適である。好適な対象は、Ｂ細胞悪性腫瘍を有する；Ｂ細胞悪性腫瘍に罹患すると診断された；Ｂ細胞悪性腫瘍に罹患したことがあり、Ｂ細胞悪性腫瘍の再発のリスクがある；主題の抗ＣＤ２２抗体以外の薬剤を用いてＢ細胞悪性腫瘍の治療を受けた（例えば、癌化学療法剤を用いて治療を受けた）ことがあり、該薬剤に応答を示さなかった；または、主題の抗ＣＤ２２抗体以外の薬剤を用いてＢ細胞悪性腫瘍の治療を受けた（例えば、癌化学療法剤を用いて治療を受けた）ことがあり、最初は該薬剤に応答を示したが、その後応答を示さなくなった（例えば、再発した）、あらゆる個体、例えば、ヒトを含む。
【０２００】
主題の方法を用いたＢ細胞媒介性自己免疫疾患の治療に適した対象は、Ｂ細胞媒介性自己免疫疾患を有する；Ｂ細胞媒介性自己免疫疾患に罹患すると診断された；Ｂ細胞媒介性自己免疫疾患に罹患したことがあり、Ｂ細胞媒介性自己免疫疾患の再発のリスクがある；主題の抗ＣＤ２２抗体以外の薬剤を用いてＢ細胞媒介性自己免疫疾患の治療を受けた（例えば、免疫抑制剤を用いて治療を受けた）ことがあり、該薬剤に応答を示さなかった；または、主題の抗ＣＤ２２抗体以外の薬剤を用いてＢ細胞媒介性自己免疫疾患の治療を受けた（例えば、免疫抑制剤を用いて治療を受けた）ことがあり、最初は該薬剤に応答を示したが、その後応答を示さなくなった（例えば、再発した）、あらゆる個体、例えば、ヒトを含む。
【０２０１】
検出方法
本開示は、主題の抗体の使用を伴う種々の検出方法を提供する。検出方法は、診断方法、予後方法、および監視方法を含む。主題の検出方法は、一般的に、ＣＤ２２陽性細胞、例えば、Ｂ細胞、例えば、癌性Ｂ細胞を検出することを含む。
【０２０２】
いくつかの実施形態において、主題の方法は、例えば、個体がＢ細胞悪性腫瘍を有するかどうかを決定するための、診断方法である。
【０２０３】
いくつかの実施形態において、主題の方法は監視方法であり、例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍を有すると診断された個体が、該疾患の治療を受け、治療および／または疾患の進行／退行に対する応答について監視される。
【０２０４】
場合によっては、主題の検出方法は、検出可能に標識した本開示の抗ＣＤ２２抗体を個体に投与し、個体の組織に対する抗体の結合を検出することを含む。検出は、例えば、磁気共鳴画像または他の好適な撮像技術によって達成することができる。
【０２０５】
他の場合において、主題の検出方法は、検出可能に標識した本開示の抗ＣＤ２２抗体を、個体から採取した生物試料と接触させ、生物試料中の分子に対する抗体の結合を検出することを含む。
【０２０６】
抗ＣＤ２２抗体は、直接的にまたは間接的に標識することができる。間接的標識は、検出可能な標識を含む二次抗体を含み、その場合、二次抗体が主題の抗ＣＤ２２抗体に結合する。他の間接的標識はビオチンを含み、その場合、検出可能な標識を含むアビジンまたはストレプトアビジンを用いてビオチン化抗ＣＤ２２抗体を検出することができる。
【０２０７】
好適な検出可能な標識は、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、電気的、光学的、または化学的手段によって検出可能なあらゆる組成物を含む。好適なものは、磁気ビーズ（例えば、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標））、蛍光色素（例えば、フルオレセインイソチオシアナート、テキサスレッド、ローダミン、緑色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質、黄色蛍光タンパク質等）、放射標識（例えば、３Ｈ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、または３２Ｐ）、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ルシフェラーゼ、および酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）で一般的に使用される他の酵素）、コロイド金または色ガラスまたはプラスチック（例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックス等）ビーズ等の比色標識を含むが、これらに限定されない。．
【０２０８】
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、造影剤または放射性同位体を含み、造影剤または放射性同位体は、撮像において、例えば、ヒトに対して実行される撮像手順における使用に好適なものである。標識の非限定的な例として、１２３１Ｉ（ヨウ素）、１８Ｆ（フッ素）、９９Ｔｃ（テクネチウム）、１１１Ｉｎ（インジウム）、および６７Ｇａ（ガリウム）等の放射性同位体、ならびに、ガドリニウム（Ｇｄ）、ジスプロシウム、および鉄等の造影剤が挙げられる。放射性Ｇｄ同位体（１５３Ｇｄ）も利用可能であり、非ヒト哺乳動物における撮像手順に好適である。主題の抗体は、標準的な技術を用いて標識することができる。例えば、主題の抗体は、クロラミンＴまたは１，３，４，６−テトラクロロ−３α，６α−ジフェニルグリコルリルを用いてヨウ素化することができる。フッ素付加のために、フッ化物イオン変位反応による合成中にフッ素を主題の抗体に加える。そのような放射性同位体を有するタンパク質の合成の検討については、Ｍｕｌｌｅｒ−Ｇａｒｔｎｅｒ，Ｈ．，ＴＩＢ  Ｔｅｃｈ．，１６：１２２−１３０（１９９８）およびＳａｊｉ，Ｈ．，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ．，１６（２）：２０９−２４４（１９９９）を参照のこと。主題の抗体はまた、標準的な技術によって造影剤で標識することもできる。例えば、主題の抗体は、Ｇｄジエチレントリアミン五酢酸（ＧｄＤＴＰＡ）またはＧｄテトラアザシクロドデカンテトラ酢酸（ＧｄＤＯＴＡ）等の低分子Ｇｄキレートを抗体にコンジュゲートすることによりＧｄで標識することができる。Ｃａｒａｖａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９９：２２９３−２３５２（１９９９）およびＬａｕｆｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．Ｉｍａｇｉｎｇ，３：１１−１６（１９８５）を参照のこと。主題の抗体は、例えば、ポリリジン−Ｇｄキレートを抗体にコンジュゲートすることによりＧｄで標識することができる。例えば、Ｃｕｒｔｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｒａｄｉｏｌ．，３３（１０）：７５２−７６１（１９９８）を参照のこと。代替として、主題の抗体は、Ｇｄキレート剤脂質を含む常磁性の重合リポソームをアビジンおよびビオチン化抗体とともにインキュベートすることによりＧｄで標識することができる。例えば、Ｓｉｐｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．，４：６２３−６２６（１９９８）を参照のこと。
【０２０９】
主題の抗体に結合することができる適切な蛍光タンパク質は、限定されないが、例えば、米国特許第６，０６６，４７６号、同第６，０２０，１９２号、同第５，９８５，５７７号、同第５，９７６，７９６号、同第５，９６８，７５０号、同第５，９６８，７３８号、同第５，９５８，７１３号、同第５，９１９，４４５号、同第５，８７４，３０４号に記載されるオワンクラゲ由来の緑色蛍光タンパク質またはその変異体または誘導体；例えば、改良型ＧＦＰ（例えば、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．から市販されている多くのそのようなＧＦＰ）；赤色蛍光タンパク質；黄色蛍光タンパク質；例えば、Ｍａｔｚ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：９６９−９７３に記載される花虫類種に由来する様々な蛍光タンパク質および有色タンパク質のいずれか等を含む。
【０２１０】
キット
本開示は、主題の抗体を含むキット（例えば、試験キット）を提供する。主題のキットは、主題の検出方法を実行する上で有用である。
【０２１１】
主題のキットは、主題の抗体、主題の抗体をコードする核酸、または主題の核酸を含む細胞のうちの１つ以上を含むことができる。主題のキット内の主題の抗体は、ヒト化することができる。主題のキットは、抗体を標識するための試薬を含むことができる。いくつかの実施形態において、主題のキット内の抗体は、検出可能な標識を含む。
【０２１２】
キットの他の任意選択的な構成要素は、緩衝剤、プロテアーゼ阻害剤、検出可能な標識等を含む。主題のキットが主題の核酸を含む場合、該核酸はまた、制限部位、複数のクローニング部位、プライマー部位等も有し得る。キットの種々の構成要素が、別々の容器内に存在してもよいか、または、必要に応じて、特定の適合性を示す構成要素が、単一容器内で予め混合されてもよい。
【０２１３】
上記構成要素に加えて、主題のキットは、主題の方法を実施するためにキットの構成要素を使用するための指示を含むことができる。主題の方法を実施するための指示は、一般的に、好適な記録媒体に記録される。例えば、指示は、紙またはプラスチック等の基板上に印刷されてもよい。そのため、指示は、キットの容器の表示部に、またはその構成要素に（すなわち、パッケージまたはサブパッケージに関連して）、添付文書としてキット内に存在してもよい等である。他の実施形態において、指示は、好適なコンピュータ可読記憶媒体、例えば、コンパクトディスクリードオンリーメモリー（ＣＤ−ＲＯＭ）、デジタル多用途ディスク（ＤＶＤ）、ディスケット等に存在する電子記憶データファイルとして存在する。さらに他の実施形態において、実際の指示はキット内には存在しないが、遠隔源から、例えば、インターネットを介して指示を取得するための手段が提供される。この実施形態の一例は、指示を閲覧することができ、かつ／またはそこから指示をダウンロードすることができるウェブアドレスを含むキットである。指示と同様に、この指示を取得するための手段は、好適な基盤上に記録される。
【実施例】
【０２１４】
以下の実施例は、本発明をどのように作製および使用するかの完全な開示および説明を当業者に提供するために記載されるものであって、本発明者らが彼らの発明と見なすものの範囲を制限することを意図するものではなく、また以下の実験が全てのまたは唯一の行われた実験であることを意味するものでもない。用いた数（例えば、量、温度等）に関して正確性を確保するための努力がなされてきたが、いくらかの実験誤差および偏差を考慮に入れるべきである。別途指示のない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏であり、圧力は大気圧またはその近傍である。標準的な略語、例えば、ｂｐ、塩基対（複数可）；ｋｂ、キロベース（複数可）；ｐｌ、ピコリットル（複数可）；ｓまたはｓｅｃ、秒（複数可）；ｍｉｎ、分（複数可）；ｈまたはｈｒ、時間（複数可）；ａａ、アミノ酸（複数可）；ｋｂ、キロベース（複数可）；ｂｐ、塩基対（複数可）；ｎｔ、ヌクレオチド（ｓ）；ｉ．ｍ．、筋肉内；ｉ．ｐ．、腹腔内；ｓ．ｃ．、皮下等が使用されてもよい。
【０２１５】
実施例において言及される市販の試薬は、別途指示のない限り、製造者の指示に従って使用した。実施例においておよび本明細書を通して、ＥＣＡＣＣ受入れ番号によって特定される細胞の源は、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）、Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ，Ｅｎｇｌａｎｄである。別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。例示的な方法および材料を以下に記載するが、本明細書に記載されるものと類似するかまたは同等の方法および材料もまた、本発明の実施または試験において使用することができる。材料、方法、および実施例は、例示的であるに過ぎず、範囲を限定することを意図するものではない。
【０２１６】
実施例１−キメラ抗体の作製
マウスＲＦＢ４モノクローナル抗体（Ｃａｍｐａｎａ．ｅｔ  ａｌ（１９８５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３４，１５２４−１５３０．Ｍａｎｓｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ（１９９７）Ｂｌｏｏｄ，９０，２０２０−２０２６）の重鎖および軽鎖可変（Ｖ）領域配列を合成し、ｐＡＮＴ抗体発現ベクターにサブクローニングした（図１）：重鎖Ｖ領域および軽鎖Ｖ領域を、それぞれｐＡＮＴ１７およびｐＡＮＴ１３にクローニングした。重鎖Ｖ領域遺伝子は、ヒトγ１重鎖遺伝子（Ｇ１ｍ３（Ｇ１ｍ（ｆ））アロタイプ）とインフレームでＭｌｕＩおよびＨｉｎｄＩＩＩ部位を介してｐＡＮＴ１７にクローニングし、軽鎖Ｖ領域遺伝子は、ヒトκ軽鎖定常領域遺伝子（Ｋｍ３アロタイプ）とインフレームでＢｓｓＨＩＩおよびＢａｍＨＩ部位を介してｐＡＮＴ１３にクローニングした。重鎖遺伝子および軽鎖遺伝子の両方の転写は、ＣＭＶ  Ｉ／Ｅプロモーター（ＵＳ５１６８０６２およびＵＳ５３８５８３９、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｉｏｗａ）の制御下にあり、ｐＡＮＴ１７プラスミドは、ＳＶ４０プロモーターの制御下にある変異ｄｈｆｒミニ遺伝子（Ｓｉｍｏｎｓｅｎ＆Ｌｅｖｉｎｓｏｎ  １９８３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０：２４９５−２４９９）と、真核細胞における選択のためのポリＡ配列とを含んでいた。ｐＡＮＴ１７およびｐＡＮＴ１３の両方が、原核生物選択のためのβ−ラクタマーゼ（ＡｐＲ）遺伝子と、原核細胞における増殖のためのｐＭＢ１複製起点とを含んでいた。全てのプラスミドは、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＤＨ５  ａｌｐｈａ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号１８２６５−０１７）中で増殖させた。
【０２１７】
その後、重鎖および軽鎖発現構築物を、リン酸カルシウムベースのトランスフェクションによりＨＥＫ２９３  ｃ１８に一過性にコトランスフェクトするか、または電気穿孔によりＮＳ０細胞に安定にトランスフェクトした。ＨＥＫ２９３  ｃ１８またはＮＳ０細胞から分泌させて得られたキメラＲＦＢ４抗体を、プロテインＡクロマトグラフィーによって細胞培養上清から精製し、ＰＤ−１０カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅカタログ番号１７−０８５１−０１）を使用してリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中に脱塩した。各個々の抗体のアミノ酸組成物に基づくモル吸光係数を用いて、２８０ｎｍのＵＶ吸光度で濃度を決定した。
【０２１８】
実施例２−ヒト化抗体の作製
ヒト化抗体は、欧州特許第１８４４０７４号（Ａｎｔｉｔｏｐｅ  Ｌｔｄ）に記載される方法を用いて作製した。Ｓｗｉｓｓ  ＰＤＢを用いてマウスＲＦＢ４Ｖ領域の構造モデルを生成し、抗体のＣＤ２２結合特性にとって重要である可能性が高い重要なフレームワークアミノ酸（「制限残基」（ｃｏｎｓｔｒａｉｎｉｎｇ  ｒｅｓｉｄｕｅ））を同定するために分析した。ヒトＶ領域配列のデータベースは、ヒト化抗体の設計において用いられる制限残基の各々を含むヒトＶ領域配列のセグメントを同定するために使用された。ＲＦＢ４  ＣＤＲ配列は、設計されたヒト化抗体配列に保持した。好ましいＶ領域配列のセットを設計し、Ｆｏｔｈｅｒｇｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．（国際公開第ＷＯ９８５９２４４号、譲受人：Ｅｃｌａｇｅｎ  Ｌｔｄ）に記載されるｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ解析により、非生殖系列主要組織適合抗原（ＭＨＣ）クラスＩＩペプチド結合の予測について分析し、また「Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ」（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ（ｄｏｔ）ｉｍｍｕｎエピトープ（ｄｏｔ）ｏｒｇ／）を含むデータベースを使用して、既知のＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープについても分析した。予測された非生殖系列ＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドを有するか、またはＴ細胞エピトープデータベースに著しくヒットしたＶ領域配列は排除した。こうしてＶ領域配列のセットを減少させた。次いで、選択された重鎖および軽鎖Ｖ領域配列を組み合わせて、ヒト化重鎖および軽鎖可変領域アミノ酸配列を生成した。ヒト化ＲＦＢ４抗体の生成に使用するために、６つの重鎖配列および４つの軽鎖配列（それぞれ、ＶＨ１〜ＶＨ６、およびＶκ１〜Ｖκ４と表される）を選択した。ＶＨ配列ＶＨ３（配列番号３）、ＶＨ４（配列番号４）、およびＶＨ５（配列番号５）、ＶＨ６（配列番号６）を含む重鎖を、ＶＬ配列ＶＫ１（配列番号７）、ＶＫ２（配列番号８）、およびＶＫ４（配列番号９）を含む軽鎖と対合した。
【０２１９】
ヒト化ＶＨおよびＶＫ変異体をコードするＤＮＡを合成し、実施例１に記載されるように発現ベクターｐＡＮＴ１７およびｐＡＮＴ１３（図１）にサブクローニングした。ヒト化ＶＨ鎖およびＶκ鎖の全ての組み合わせをＨＥＫ２９３  ｃ１８細胞に一過性にトランスフェクトし、プロテインＡクロマトグラフィーにより培養上清から抗体を精製した後、実施例１に記載されるように脱塩した。
【０２２０】
実施例３−ヒト化抗体の分析
親キメラ抗体に対する競合酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）において、ＣＤ２２抗原に対するＨＥＫ由来ＲＦＢ４ヒト化変異体の結合を評価した。親ＲＦＢ４キメラ抗体は、Ｂｉｏｔｉｎ  Ｔａｇ（商標）Ｍｉｃｒｏ  Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用してビオチン化した。９６ウェルのＭａｘｉＳｏｒｐプレート（Ｎｕｎｃ）を、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  ＰＢＳ（ＰＡＡ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｙｅｏｖｉｌ，ＵＫ）中１．０μｇ／ｍｌのＣＤ２２−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号１９６８ＳＬ）で、４℃で一晩コーティングした（最終体積６０μｌ）。室温で１時間、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  ＰＢＳ−２％  ＢＳＡでプレートをブロックした。洗浄緩衝液（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ−ＰＢＳ中０．０５％  Ｔｗｅｅｎ２０）でプレートを３回洗浄した。種々の濃度の試験ヒト化抗体をビオチン化親キメラ抗体と予め混合しておき（最終体積０．０４μｇ／ｍｌ）、次いで、ＣＤ２２−Ｆｃプレートに加えた（最終体積６０μｌ）。全ての試料を２通り試験した。プレートを室温で１時間インキュベートし、洗浄緩衝液で３回洗浄した。ストレプトアビジン西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）の１／１０００希釈液６０μｌを加え、室温で１時間インキュベートした。プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄し、３，３’，５，５’−テトラメチベンジジン（ＴＭＢ）基質（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）６０μｌを加え、暗所にて室温でインキュベートして発色させた。５０μｌの３Ｍ  ＨＣｌを加えることにより反応を停止させた。Ｄｙｎｅｘプレートリーダを使用して、４５０ｎｍでプレートを読み取った。
【０２２１】
図２に示すように、全てのリードヒト化ＲＦＢ４変異体は、親キメラ抗体と同様の競合的な結合プロファイルを示した。野生型ＲＦＢ４  ＩｇＧ１抗体と比較したキメラＲＦＢ４およびヒト化ＲＦＢ４  抗体のＩＣ５０を、下の表２に示す。
【表２】
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【０２２２】
実施例４−ＣＤ４＋Ｔ細胞応答の分析
ＵＫ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｌｏｏｄ  Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  （Ａｄｄｅｎｂｒｏｏｋｅ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）から、Ａｄｄｅｎｂｒｏｏｋｅ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  Ｌｏｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｅｔｈｉｃｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって与えられた承認に従って得られた健常なコミュニティドナーの軟膜（２４時間以内に採取した血液に由来）から末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を単離した。Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（Ａｘｉｓ−ｓｈｉｅｌｄ、Ｄｕｎｄｅｅ，ＵＫ）密度遠心分離によりＰＢＭＣを軟膜から単離し、ＣＤ８＋  ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（商標）（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ、Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ）を使用してＣＤ８＋Ｔ細胞を枯渇させた。ＨＬＡ単一特異的プライマーポリメラーゼ連鎖反応（ＳＳＰ−ＰＣＲ）ベースの組織適合試験キット（Ｂｉｏｔｅｓｔ、Ｓｏｌｉｈｕｌｌ，ＵＫ）を使用してＨＬＡ−ＤＲハプロタイプを同定することにより、ドナーを特徴付けた。「再現性」対照抗原（キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、Ｐｉｅｒｃｅ  （Ｐｅｒｂｉｏ）、Ｃｒａｍｌｉｎｇｔｏｎ，ＵＫ）だけでなく、インフルエンザＡ型およびエプスタイン・バーウイルスに由来する対照ペプチドに対するＴ細胞応答も決定した。次いで、ＰＢＭＣを凍結し、必要になるまで液体窒素中に保存した。
【０２２３】
プロテインＡクロマトグラフィーの後、１ｘＰＢＳ中で２６／６０  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  Ｓ２００カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用するサイズ排除クロマトグラフィーにより、一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３  ｃ１８細胞株からキメラおよびＶＨ４／ＶＫ１、ＶＨ５／ＶＫ１、ＶＨ６／ＶＫ４ヒト化抗体を精製した。単量体のピーク画分を収集して定量化し、Ｅｎｄｏｓａｆｅ（登録商標）−ＰＴＳ（商標）（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、Ｍａｒｇａｔｅ，ＵＫ）システムを使用して全ての調製物についてエンドトキシンレベルを分析した。
【０２２４】
世界人口において発現されたＨＬＡ−ＤＲアロタイプの数および頻度を最もよく表すために、２０ドナーのコホートを選択した。世界人口において発現されたアロタイプに対する該コホートにおいて発現されたアロタイプの分析により、全ての主要なＨＬＡ−ＤＲ対立遺伝子（世界人口において発現される頻度が＞５％の個々のアロタイプ）が十分に提示されることが明らかとなった。各ドナー由来のＰＢＭＣをＡＩＭ−Ｖ（登録商標）培養培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｐａｉｓｌｅｙ，ＵＫ）中で再生し、洗浄し、ＡＩＭ−Ｖ（登録商標）に再懸濁して４〜６ｘ１０６ＰＢＭＣ／ｍｌとした。各ドナーについて、１ｍｌの増殖細胞ストックを２４ウェルプレートの適切なウェルに加えて、バルク培養物を確立した。０．５ｍｌの培養培地を、０．５ｍｌの各希釈試験試料と一緒にＰＢＭＣに加え、最終濃度を試料当たり５０μｇ／ｍｌとした。各ドナーごとに、再現性対照（１００μｇ／ｍｌのＫＬＨとともにインキュベートした細胞）と、培養培地のみのウェルも含めた。合計８日間、５％ＣＯ２とともに培養物を３７℃でインキュベートした。５、６、７、および８日目に、各ウェル内の細胞を穏やかに再懸濁し、３ｘ１００μｌアリコートを丸底９６ウェルプレートの各ウェルに移した。１００μｌのＡＩＭ−Ｖ（登録商標）培養培地中、０．７５μＣｉ［３Ｈ］−Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ（登録商標）、Ｂｅａｃｏｎｓｆｉｅｌｄ，ＵＫ）で培養物をパルス標識し、さらに１８時間インキュベートしてから、ＴｏｍＴｅｃ  Ｍａｃｈ  ＩＩＩ細胞収集器を使用してフィルターマット（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ（登録商標））上に収集した。Ｐａｒａｌｕｘ低バックグラウンド計測で、１４５０  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ  Ｗａｌｌａｃ  Ｔｒｉｌｕｘ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ  Ｃｏｕｎｔｅｒ  （Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ（登録商標））上でＭｅｌｔｉｌｅｘ（商標）（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ（登録商標））シンチレーションカウントすることにより、各ウェルについて１分当たりのカウント（ｃｐｍ）を決定した。
【０２２５】
増殖アッセイでは、２以上（ＳＩ≧２．０）の刺激指数（ＳＩ）の経験的な閾値が以前に確立されており、この閾値を上回る増殖応答を誘導する試料が陽性であると見なされる（含まれる場合、境界線ＳＩ≧１．９０が協調される）。増殖データセット（ｎ＝３）について、陽性応答は、統計的および経験的な閾値によって定義される：
１）  対合しない２つの試料のスチューデントｔ検定を用いて試験ウェルのｃｐｍを培地対照ウェルに対して比較することによる応答の有意性（ｐ＜０．０５）
２）  ２以上（ＳＩ≧２．０）のＳＩ
３）  基本ｃｐｍ＞１５０ｃｐｍ
【０２２６】
さらに、複製培養物の原データのＣＶおよびＳＤを計算することにより、アッセイ内変動を評価した。
【０２２７】
図３Ａ〜Ｄは、試験抗体に対する健常ドナーのＴ細胞増殖応答を示す。バルク培養物からＰＢＭＣを試料採取し、３つの試験試料とともにインキュベートした後、５、６、７、および８日目に増殖について評価した。対合しない２つの試料のスチューデントｔ検定を用いて有意（ｐ＜０．０５）であった、破線で示したＳＩ≧２．０（ｐ＜０．０５）の増殖応答を陽性と見なした。
【０２２８】
データを図３Ａ〜Ｄに示し、下の表３に要約する。図３Ａ〜Ｄは、試験抗体の各々に対するドナーのＳＩ応答を経時的に示す。完全ヒト化抗ＣＤ２２抗体（ＶＨ４／ＶＫ１、ＶＨ５／ＶＫ１、ＶＨ６／ＶＫ４）は、ＳＩ≧２．０、ｐ＜０．０５閾値を用いた増殖アッセイのドナーのいずれにも陽性応答を誘導しなかったのに対し、キメラ抗ＣＤ２２抗体は、ドナーの２５％に陽性Ｔ細胞増殖応答を誘導した。図３Ａ：キメラ抗体；図３Ｂ：ＶＨ４／ＶＫ１；図３Ｃ：ＶＨ５／ＶＫ１；図３Ｄ：ＶＨ６／ＶＫ４
【表３】
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【０２２９】
実施例５−内在化の分析
【０２３０】
約０．５ｘ１０６細胞／ｍＬに増殖させたＲａｊｉ細胞を試験当たり０．３５〜０．５ｘ１０６細胞で使用した。リン酸緩衝食塩水＋１％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ；緩衝液Ａ）中に１００μＬ／試験管で細胞を再懸濁した。対照は、抗体なしで、または二次抗体のみを用いてインキュベートした、４℃のみ、または４℃および３７℃の両方に曝露した細胞を含んでいた。一次抗体を１μｇ／試験管で加え、細胞を氷上で３０分間インキュベートした。次いで、細胞を洗浄した：１ｍＬの緩衝液Ａを加え、遠心分離により細胞を穏やかにペレット化し、上清を除去した。これを全部で２回洗浄分繰り返した。３７℃に曝露される細胞を、３７℃のＲＭＰＩ＋１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、２ｍＭグルタミン中に再懸濁し、３７℃、５％ＣＯ２で４５分間インキュベートした。次に、１ｍＬの氷冷緩衝液Ａ中で細胞を１回洗浄した。二次抗体（フルオレセインとコンジュゲートしたヤギ抗ヒトＦｃ；Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）を１：１００希釈で緩衝液Ａに加え、細胞を氷上で３０分間インキュベートした。最後に、氷冷緩衝液Ａ中で細胞を２回洗浄し、３００μＬの緩衝液Ａに再懸濁した。細胞を４℃で暗所に維持し、ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェアを使用してＢｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ上でフローサイトメトリーにより１８時間以内に分析した。
【０２３１】
データを次のように分析した：ＦＬ１チャネル（フルオレセインを検出するために使用）上の二次抗体の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を、一次抗体が含まれた時に産生されたシグナルのＭＦＩから差し引いた。結果として得られた値を、次いで、本実験のためのＭＦＩシグナルと名付けた。４℃に維持した細胞のＭＦＩ値は、細胞表面に対する抗体の結合を表していた。３７℃に曝露された細胞のＭＦＩ値は、ＣＤ２２−Ａｂ複合体の内在化後に細胞表面に残った抗体によって産生されたシグナルを表していた。４℃と３７℃のＭＦＩの差は、結合抗体の内在化に対応する（図４）。異なる日に行われた実験間の比較を可能にするために、結合および内在化の値を、時折、野生型抗体ＲＦＢ４に正規化した。
【０２３２】
実施例６−ＣＤ２２の結合親和性の分析
ヒトＣＤ２２をＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（ｈｕＣＤ２２−Ｆｃ形態、カタログ番号１９６８−ＳＬ−０５０）またはＳｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｃ（Ｈｉｓタグを有するｈｕＣＤ２２、カタログ番号１１９５８−Ｈ０８Ｈ）のいずれかから入手し、ＬＣ−ビオチンを用いてＬｙｓにビオチン化した。ＦｏｒｔｅＢｉｏ機器を使用して、ｈｕＣＤ２２に対する変異体１２〜２０の結合を測定した。ストレプトアビジン誘導体化ＦｏｒｔｅＢｉｏバイオセンサにビオチン化ｈｕＣＤ２２分子を充填した。Ａ２８０により対象となる抗体の濃度を確認し、濃度を上昇させた各々の抗体に充填されたバイオセンサを曝露した。４〜５つの濃度（ｐＨ７．２５）でのｈｕＣＤ２２に対する動力学的な会合および解離速度を決定し、ＫＤを決定した（図５）。
【０２３３】
実施例７−凝集の分析
ＲＦＢ４変異体の凝集の程度を判定するために、サイズ排除高性能液体クロマトグラフィーを使用して２０μｇの抗体を分析した（Ｔｏｓｏｈ番号０８５４１  Ｇ３００  ＳＷＸＬ  ７．８ｍｍｘ３０ｃｍ；移動相２５ｍＭリン酸ナトリウム緩衝剤、３００ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ６．８；０．８ｍＬ／分；２２０ｎｍおよび２８０ｎｍで吸光度を監視）。その結果を、図６Ａ〜６Ｄ中に示す。
【０２３４】
本発明を、その特定の実施形態を参照して説明してきたが、当業者は、本発明の主旨および範囲から逸脱することなく、種々の変更が行われ得ること、および均等物が置換され得ることを理解されたい。さらに、特定の状況、材料、組成物、プロセス、プロセスステップ（単数もしくは複数）を本発明の目的、主旨、および範囲に適応させるために、多くの修正が行われてもよい。全てのそのような修正は、本明細書に添付される特許請求の範囲の範囲内であることが意図される。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【配列表】
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