(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の工程（１）、（２）及び（３）：
（１）カツオ及び／又はマグロから採取した魚油を有機溶剤に溶解し、次いで冷却する工程、
（２）工程（１）において析出した固体部を液体部から分離し、液体部を得る工程、
（３）工程（２）で得た液体部を再び有機溶剤に溶解し、次いで工程（１）における冷却温度よりも低い温度に冷却した後、析出した固体部を得る工程、
を含む、分別魚油の製造方法であって、分別魚油が、トリアシルグリセロールの２位に結合した脂肪酸の総質量中にパルミチン酸を３０質量％以上含み、且つトリアシルグリセロールに結合したω３系高度不飽和脂肪酸の総質量に対する、１，３位に結合したω３系高度不飽和脂肪酸の割合が６０質量％以上のものであり、融点が２５〜４１℃である製造方法。
【請求項２】
前記魚油が、魚油を構成する脂肪酸中にドコサヘキサエン酸を１９質量％以上含むものである、請求項１記載の分別魚油の製造方法。
【請求項３】
工程（３）における冷却温度が、工程（１）における冷却温度よりも３℃以上低い温度である請求項１又は２記載の分別魚油の製造方法。
【請求項４】
有機溶剤がアセトン、ヘキサン又はこれらの組み合わせである請求項１〜３のいずれか１項記載の分別魚油の製造方法。
【請求項５】
前記魚油がトリアシルグリセロールを７８質量％以上含有するものである請求項１〜４のいずれか１項記載の分別魚油の製造方法。
【請求項６】
次の工程（１）、（２）及び（３）：
（１）カツオ及び／又はマグロから採取した魚油を有機溶剤に溶解し、次いで冷却する工程、
（２）工程（１）において析出した固体部を液体部から分離し、液体部を得る工程、
（３）工程（２）で得た液体部を再び有機溶剤に溶解し、次いで工程（１）における冷却温度よりも低い温度に冷却した後、析出した固体部と液体部とを分離する工程、
を含む、魚油の分別方法であって、前記析出した固体部が、トリアシルグリセロールの２位に結合した脂肪酸の総質量中にパルミチン酸を３０質量％以上含み、且つトリアシルグリセロールに結合したω３系高度不飽和脂肪酸の総質量に対する、１，３位に結合したω３系高度不飽和脂肪酸の割合が６０質量％以上のもので、融点が２５〜４１℃のものである分別方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、分別魚油の製造方法、並びに魚油の分別方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
天然に産出する油脂は固有の脂肪酸組成をもち、且つトリアシルグリセロールにおける脂肪酸のグリセリンとの結合位置は特有の規則性でその配置が決まっている。例えば、魚油に多く含まれるω３系高度不飽和脂肪酸は、グリセロールの２位に多く分布することが知られている。また、ヒト母乳では、パルミチン酸がグリセロールの２位に多く分布し、不飽和脂肪酸や中鎖脂肪酸が主として１，３位に分布している。
【０００３】
これに対して、栄養学的改善や物性改良、或いは代替を目的としてグリセリンの特定の位置に特定の脂肪酸を組み込んだ所謂構造脂質が種々提案されている。例えば、グリセリド構造の１位および／または３位にｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸を多くもつ油脂であって、ｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸の総量の４０モル％未満がグリセリドの２位に結合したトリグリセリドからなる血中脂質濃度を低減する作用のある油脂（特許文献１）、ｓｎ−２位にパルミチン酸、ｓｎ−１，３位にオレイン酸やドコサヘキサエン酸（Ｃ２２：６、ＤＨＡ）を有する母乳代替脂（非特許文献１）等が報告されている。
前記特許文献等によれば、ω３系高度不飽和脂肪酸はトリアシルグリセロールの２位よりも１位，３位への結合率が高い方がヒト体内での生理機能発現に有利であり、また、パルミチン酸を２位に有するトリアシルグリセロールはヒト母乳代替脂としても有用である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平９−１３０７５号公報
【特許文献２】特開２００２−１８００８３号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｊ  Ａｍ  Ｏｉｌ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ、２０１３年、第９０巻、ｐ．１３１１−１３１８
【非特許文献２】ＪＡＯＣＳ、１９９８年、第７５巻第６号、ｐ．７３３−７３６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、前記特許文献１及び非特許文献１では、１，３位置特異性のリパーゼを利用したエステル交換又はアシドリシスによりｓｎ-１，３位の脂肪酸を目的の脂肪酸に変換して油脂が製造されるため、コストが高くなる原因となる。
一方、特許文献２や非特許文献２のように、魚油を分別して、魚油に含まれるω３系高度不飽和脂肪酸を濃縮する方法が知られているが、ｓｎ-１，３位のω３系高度不飽和脂肪酸の濃縮を図るものではない。
本発明は、斯かる実情に鑑み、グリセロールの２位にパルミチン酸が多く結合し、且つ１，３位に結合したω３系高度不飽和脂肪酸の割合が高いトリアシルグリセロールを製造する新たな方法を提供しようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題に鑑み鋭意検討したところ、所定の条件下、魚油を二段階に分けて溶剤分別を行うことで高融点グリセリドを分別可能であり、ヒト体温近傍で溶融する油脂であって、グリセロールの２位にパルミチン酸が多く結合し、且つω３系高度不飽和脂肪酸の多くが１，３位に結合したトリアシルグリセロールに富む油脂を高い収率で回収できることを見出した。
【０００８】
すなわち、本発明は、次の工程（１）、（２）及び（３）：
（１）魚油を有機溶剤に溶解し、次いで冷却する工程、
（２）工程（１）において析出した固体部を液体部から分離し、液体部を得る工程、
（３）工程（２）で得た液体部を再び有機溶剤に溶解し、次いで工程（１）における冷却温度よりも低い温度に冷却した後、析出した固体部を得る工程、
を含む、分別魚油の製造方法を提供するものである。
また、本発明は、次の工程（１）、（２）及び（３）：
（１）魚油を有機溶剤に溶解し、次いで冷却する工程、
（２）工程（１）において析出した固体部を液体部から分離し、液体部を得る工程、
（３）工程（２）で得た液体部を再び有機溶剤に溶解し、次いで工程（１）における冷却温度よりも低い温度に冷却した後、析出した固体部と液体部とを分離する工程、
を含む、魚油の分別方法を提供するものである。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、グリセロールの２位にパルミチン酸が多く結合し、且つ１，３位に結合したω３系高度不飽和脂肪酸の割合が高いトリアシルグリセロールに富む分別魚油が簡便に得られる。この分別魚油は、ヒト母乳中のトリアシルグリセロール構造に類似し、且つヒト体温近傍で溶融するため、ヒト母乳代替脂としても有用である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明の分別魚油の製造方法では、（１）魚油を有機溶剤に溶解し、次いで冷却する工程と、（２）工程（１）において析出した固体部を液体部から分離し、液体部を得る工程と、（３）工程（２）で得た液体部を再び有機溶剤に溶解し、次いで工程（１）における冷却温度よりも低い温度に冷却した後、析出した固体部を得る工程、とを有する。
また、本発明の魚油の分別方法では、（１）魚油を有機溶剤に溶解し、次いで冷却する工程と、（２）工程（１）において析出した固体部を液体部から分離し、液体部を得る工程と、（３）工程（２）で得た液体部を再び有機溶剤に溶解し、次いで工程（１）における冷却温度よりも低い温度に冷却した後、析出した固体部と液体部とを分離する工程、とを有する。
なお、本明細書において「油」と「油脂」は同義であり、油（油脂）を構成する物質にはトリアシルグリセロールのみならずモノアシルグリセロールやジアシルグリセロールも含まれる。すなわち、本発明において油（油脂）は、モノアシルグリセロール、ジアシルグリセロール及びトリアシルグリセロールのいずれか１種以上を含むものである。  
【００１１】
本発明の方法に供する魚油とは、水産動物油脂であり、例えば、ニシン、サンマ、サバ、カツオ、マグロ、イワシ、イカ、たら肝臓等の原料から採取することができる。
本発明の方法に供する魚油は、原料となる魚体等から搾油して得られる所謂粗魚油（原油）であってもよく、また、当該粗魚油に、油脂に対して行われる精製処理のうち１又は２以上の処理を施した油脂であってもよい。
油脂に対して行われる精製処理としては、油脂に水、場合によっては更に酸を添加混合して、リン脂質やたんぱく質等のガム質を除去する脱ガム処理；油脂にアルカリを添加混合して、遊離脂肪酸を除去するアルカリ脱酸処理；油脂に水を接触させ、油水分離を行う操作を行う水洗処理；油脂に活性白土や活性炭等の吸着剤を接触させ、有色成分を除去する脱色処理がある。また、アルカリを使用せずに、油脂を蒸留して、脂肪酸や環境汚染物質等の軽質の副生物を除去する蒸留処理や、この他に、低温で、油脂から固形分を分離する脱ロウ処理等がある。
【００１２】
本発明の方法に供する魚油は、トリアシルグリセロールを含む。
魚油中、トリアシルグリセロールの含有量は、７８質量％以上であることが好ましく、魚油の劣化抑制の点から、更に７８〜１００質量％、更に８８〜１００質量％、更に９０〜９９．５質量％、更に９２〜９９質量％であることが好ましい。
また、魚油はジアシルグリセロールを含んでもよく、魚油中、ジアシルグリセロールの含有量は、０〜１９質量％であることが好ましく、更に０〜９質量％、更に０．１〜７質量％、更に０．２〜５質量％であることが好ましい。
また、魚油中のモノアシルグリセロールの含有量は、０〜１０質量％、更に０〜５質量％、更に０〜３質量％であることが好ましい。
【００１３】
本発明の方法に供する魚油を構成する脂肪酸中、ω３系高度不飽和脂肪酸の含有量は、本発明の効果が有効に発揮される点から、２０質量％以上、更に２５質量％以上であることが好ましい。尚、ω３系高度不飽和脂肪酸としては、エイコサペンタエン酸（Ｃ２０：５、ＥＰＡ）、ドコサヘキサエン酸（Ｃ２２：６、ＤＨＡ）が好ましい。
また、魚油を構成する脂肪酸中のドコサヘキサエン酸の含有量は、本発明の効果が有効に発揮される点から、１９質量％以上、更に２２質量％以上、更に２５質量％以上であることが好ましい。
また、魚油を構成する脂肪酸中のパルミチン酸の含有量は、同様の点から、１０質量％以上、更に１３質量％以上、更に１６質量％以上であることが好ましい。
なお、本明細書における脂肪酸量は遊離脂肪酸換算量である。
【００１４】
魚油を構成する残余の脂肪酸は、特に限定されず、飽和脂肪酸又は不飽和脂肪酸のいずれであってもよい。飽和脂肪酸又は不飽和脂肪酸の炭素数は、１２〜２４、更に１４〜２４のものが好ましい。
【００１５】
〔工程（１）〕
本工程は、魚油を有機溶剤に溶解し、次いで冷却する工程である。
本発明で用いられる有機溶剤は、魚油が溶解する溶剤であれば良く、例えばメタノール、ヘキサン、アセトン、メチルエチルケトン等が挙げられる。これらは組み合わせて用いても良い。なかでも、析出させた高融点成分を分離しやすくする点から、ヘキサン、アセトンが好ましく、アセトンがより好ましい。
有機溶剤の使用量は、工業的生産性の点から、魚油１００質量部に対して１０質量部以上が好ましく、更に３０〜１０００質量部、更に５０〜５００質量部が好ましい。
【００１６】
魚油を有機溶剤に溶解する温度は、後に析出させる高融点成分を一旦十分に溶解しておく観点より、２０℃以上が好ましく、３０℃〜７０℃がより好ましい。
【００１７】
工程（１）における冷却温度は、透明な油相が濁り始める温度、すなわち魚油の中の高融点成分が結晶化して析出する温度であり、有機溶剤の種類等によって好適な範囲を設定できる。なかでも、結晶として析出した高融点成分を容易に分離できる点、２段目分別固体部の融点を２５〜４２℃にする点から、アセトンを溶剤として用いた場合は１５℃〜０℃が好ましく、ヘキサンを溶剤として用いた場合は５℃〜−５℃が好ましい。
【００１８】
冷却時間は、冷却温度にて析出するべき結晶を十分に析出させる点から、０．１時間以上、更に０．２〜２００時間、更に０．５〜１００時間が好ましい。なお、ここでの時間は、魚油が冷却温度範囲内にある時間の合計を意味する。
【００１９】
魚油の冷却温度範囲に至るまでの冷却速度は、析出させた高融点成分を分離しやすくする点、生産性向上の点から１０℃／ｈ以下が好ましく、工業生産性の点から、０．１℃／ｈ以上が好ましい。
【００２０】
冷却操作は、ジャケット冷却、熱交換器等により行うことができる。
冷却操作は、静置下で行なっても、撹拌下で行ってもよい。析出した結晶の分散を良好に保つ点から、撹拌下で行うことが好ましい。撹拌の程度は、装置によって異なるが、析出した結晶の破砕を抑制できる条件を選択することが好ましい。
【００２１】
〔工程（２）〕
本工程は、工程（１）において析出した固体部を液体部から分離し、液体部を得る工程である。
固体部の液体部からの分離は、例えば、静置分離、濾過、遠心分離等の方法により行うことができる。なかでも、操作性の点から濾過が好ましい。
液体部から分離した固体部は、前記有機溶剤で洗浄することが好ましい。洗浄に用いる有機溶剤は、析出させた高融点成分に対して１０質量％以上、更に２０〜２００質量％、更に３０〜１００質量％が好ましい。
固液分離時の温度、洗浄に用いる有機溶剤の温度は、魚油の冷却時と同じ温度であることが好ましい。
【００２２】
工程（２）において、固体部として分別により除去される高融点成分としては、パルミチン酸が４０質量％以上、更に４４質量％以上結合したトリアシルグリセロールが挙げられる。高融点成分の融点は４０℃以上、更に４５℃以上であることが好ましい。
高融点成分は、魚油中に含まれる高融点成分の濃度により異なるが、魚油に対して０．２〜６質量％、更に０．４〜４質量％、更に０．６〜３質量％除去されることが製造効率の点から好ましい。
【００２３】
〔工程（３）〕
本工程は、工程（２）で得た液体部を再び有機溶剤に溶解し、次いで工程（１）における冷却温度よりも低い温度に冷却した後、分別魚油の製造方法では、析出した固体部を得る工程であり、魚油の分別方法では、析出した固体部と液体部とを分離する工程である。
有機溶剤は、前記と同様に、ヘキサン、アセトンが好ましく、アセトンがより好ましい。
工程（３）における有機溶剤の使用量は、工業的生産性の点から、工程（２）で得た液体部１００質量部に対して１０質量部以上が好ましく、更に３０〜１０００質量部、更に５０〜５００質量部が好ましい。
【００２４】
液体部を有機溶剤に溶解する温度は、前記と同様に１０℃以上、更に２０〜７０℃が好ましい。
【００２５】
工程（３）における冷却温度は、工程（１）における冷却温度よりも低い温度である。一段目の分別よりも低い温度で二段目の分別を行なうことで、２段目分別固体部として所望量のパルミチン酸、エイコサペンタエン酸及びドコサヘキサエン酸が結合した分別魚油が得られるという利点がある。冷却温度は、析出した高融点成分を容易に分離できる点、２段目分別固体部の融点を２５〜４２℃にする点から、工程（１）における冷却温度よりも３℃以上低い温度であることが好ましく、更に５℃〜３０℃低い温度であることが好ましく、更に７℃〜２５℃低い温度であることが好ましい。
また、工程（３）における冷却温度は、同様の点から、アセトンを溶剤として用いた場合は０℃〜−１５℃、ヘキサンを溶剤として用いた場合は−５℃〜−２０℃の温度範囲内が好ましい。
【００２６】
冷却時間は、冷却温度にて析出するべき結晶を十分に析出させる点から、０．１時間以上、更に０．２〜２００時間、更に０．５〜１００時間が好ましい。なお、ここでの時間は、工程（２）で得た液体部が冷却温度範囲内にある時間の合計を意味する。
【００２７】
液体部の冷却温度範囲に至るまでの冷却速度は、析出させた高融点成分を分離しやすくする点、生産性向上の点から１０℃／ｈ以下が好ましく、工業生産性の点から、０．１℃／ｈ以上が好ましい。
【００２８】
冷却操作は、前記と同様に、ジャケット冷却、熱交換器等により行うことができる。
また、冷却操作は、静置下で行なっても、撹拌下で行ってもよいが、析出した結晶の分散を良好に保つ点から、撹拌下で行うことが好ましい。撹拌の程度は、装置によって異なるが、析出した結晶の破砕を抑制できる条件を選択することが好ましい。
【００２９】
固液分離は、例えば、静置分離、濾過、遠心分離等の方法により行うことができる。なかでも、操作性の点、結晶部の洗浄が容易である点から濾過が好ましい。
また、析出した固体部は、前記と同様に、有機溶剤で洗浄することが好ましい。
固液分離時の温度、洗浄に用いる有機溶剤の温度は、工程（２）で得た液体部の冷却温度と同じ温度であることが好ましい。
【００３０】
かくして、固体部として分別魚油が得られる。工程（２）で得た液体部の魚油に対する回収率（歩留まり）は、０．２〜６質量％、更には０．４〜５質量％、更には０．６〜４質量％が好ましい。
一方、工程（３）で固液分離を行って析出した固体部と分離した液体部は、ω３系高度不飽和脂肪酸を含む魚油として使用できる。そのため、本発明の方法によれば、魚油に含まれるω３系高度不飽和脂肪酸をロスすることなく、有効に利用することができる。
【００３１】
また、分別魚油の、本発明の方法に供する魚油に対する回収率（歩留まり）は、魚油のパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸濃度に依存するが、１〜１２質量％、更には２〜９質量％、更には３〜７質量％が好ましい。
【００３２】
本発明の製造方法により得られる分別魚油は、グリセロールの２位にパルミチン酸が多く結合し、且つ１，３位に結合したω３系高度不飽和脂肪酸の割合が高いトリアシルグリセロールに富む。
トリアシルグリセロールの２位に結合した脂肪酸の総質量中、パルミチン酸の含有量は、３０質量％以上であることが好ましく、更に４０質量％以上、更に４５質量％以上であることが好ましい。
また、トリアシルグリセロールに結合したω３系高度不飽和脂肪酸（エイコサペンタエン酸＋ドコサヘキサエン酸）の総質量に対する、１，３位に結合したω３系高度不飽和脂肪酸の割合（１，３位ＥＰＡ＋ＤＨＡ含有率）は、６０質量％以上、更に６５〜９５質量％であることが好ましい。
【００３３】
また、トリアシルグリセロールに結合したドコサヘキサエン酸の総質量に対する、１，３位に結合したドコサヘキサエン酸の割合（１，３位ＤＨＡ含有率）は、５５質量％以上、更に６０〜９５質量％であることが好ましい。
また、トリアシルグリセロールに結合したエイコサペンタエン酸の総質量に対する、１，３位に結合したエイコサペンタエン酸の割合（１，３位ＥＰＡ含有率）は、６５質量％以上、更に７０〜９５質量％であることが好ましい。
なお、トリアシルグリセロールの１，３位の脂肪酸組成は、トリアシルグリセロールを構成する全ての脂肪酸組成と、トリアシルグリセロールの２位に結合している脂肪酸の組成を分析することで求めることができる。詳細は後記実施例に記載した。
【００３４】
分別魚油を構成する脂肪酸中のドコサヘキサエン酸の含有量は、分別魚油の融点からの点から、５質量％以上、更に７〜１７質量％、更に９〜１４質量％であることが好ましい。また、分別魚油を構成する脂肪酸中、エイコサペンタエン酸の含有量は、同様の点から、１質量％以上、更に１．５〜５質量％、更に２〜４質量％であることが好ましい。
【００３５】
分別魚油中のトリアシルグリセロールの含有量は、油脂の工業的生産性の点、油脂の劣化抑制の点から、９０質量％以上、更に９４質量％以上であることが好ましい。
【００３６】
分別魚油の酸価（ＡＶ）は、油脂の劣化抑制の点から、１０ｍｇＫＯＨ／ｇ以下、更に５ｍｇＫＯＨ／ｇ以下であることが好ましい。
【００３７】
本発明の製造方法により得られる分別魚油はヒト体温近傍で溶融する。すなわち、分別魚油の融点は、４２℃未満であり、好ましくは２５〜４１℃、より好ましくは２７〜４０℃である。
【００３８】
本発明の製造方法、並びに分別法により得られる分別魚油は、一般の食用油脂と同様に使用でき、油脂を用いた各種飲食物に広範に適用することができる。なかでも、ヒト母乳代替脂として有用である。
【００３９】
本発明の実施の形態及び好ましい実施の形態を以下に例示する。
【００４０】
＜１＞次の工程（１）、（２）及び（３）：
（１）魚油を有機溶剤に溶解し、次いで冷却する工程、
（２）工程（１）において析出した固体部を液体部から分離し、液体部を得る工程、
（３）工程（２）で得た液体部を再び有機溶剤に溶解し、次いで工程（１）における冷却温度よりも低い温度に冷却した後、析出した固体部を得る工程、
を含む、分別魚油の製造方法。  
【００４１】
＜２＞次の工程（１）、（２）及び（３）：
（１）魚油を有機溶剤に溶解し、次いで冷却する工程、
（２）工程（１）において析出した固体部を液体部から分離し、液体部を得る工程、
（３）工程（２）で得た液体部を再び有機溶剤に溶解し、次いで工程（１）における冷却温度よりも低い温度に冷却した後、析出した固体部と液体部とを分離する工程、
を含む、魚油の分別方法。
＜３＞魚油が、トリアシルグリセロールを好ましくは７８質量％以上、より好ましくは８８質量％以上、更に好ましくは９０質量％以上、更に好ましくは９２質量％以上含有し、また、好ましくは１００質量％以下、より好ましくは９９．５質量％以下、更に好ましくは９９質量％以下含有し、また、好ましくは７８〜１００質量％、より好ましくは８８〜１００質量％、更に好ましくは９０〜９９．５質量％、更に好ましくは９２〜９９質量％含有する＜１＞又は＜２＞に記載の方法。
＜４＞魚油が、ジアシルグリセロールを好ましくは０〜１９質量％、より好ましくは０〜９質量％、更に好ましくは０．１〜７質量％、更に好ましくは０．２〜５質量％含有する＜１＞〜＜３＞のいずれか１に記載の方法。
＜５＞魚油が、モノアシルグリセロールを好ましくは０〜１０質量％、より好ましくは０〜５質量％、更に好ましくは０〜３質量％含有する＜１＞〜＜４＞のいずれか１に記載の方法。
＜６＞魚油が、魚油を構成する脂肪酸中にω３系高度不飽和脂肪酸を好ましくは２０質量％以上、より好ましくは２５質量％以上含有する＜１＞〜＜５＞のいずれか１に記載の方法。
＜７＞魚油が、魚油を構成する脂肪酸中にドコサヘキサエン酸を好ましくは１９質量％以上、より好ましくは２２質量％以上、更に好ましくは２５質量％以上含有する＜１＞〜＜６＞のいずれか１に記載の方法。
＜８＞魚油が、魚油を構成する脂肪酸中にパルミチン酸を好ましくは１０質量％以上、より好ましくは１３質量％以上、更に好ましくは１６質量％以上含有する＜１＞〜＜７＞のいずれか１に記載の方法。
＜９＞有機溶剤が、好ましくは魚油が溶解する溶剤であり、より好ましくはメタノール、ヘキサン、アセトン及びメチルエチルケトンから選ばれる１種又は２種以上であり、更に好ましくはヘキサン、アセトン又はこれらの組み合わせであり、更に好ましくはアセトンである＜１＞〜＜８＞のいずれか１に記載の方法。
＜１０＞工程（１）における有機溶剤の使用量が、魚油１００質量部に対して、好ましくは１０質量部以上、より好ましくは３０〜１０００質量部、更に好ましくは５０〜５００質量部である＜１＞〜＜９＞のいずれか１に記載の方法。
＜１１＞工程（１）において、魚油を有機溶剤に溶解する温度が、好ましくは２０℃以上、より好ましくは３０℃〜７０℃である＜１＞〜＜１０＞のいずれか１に記載の方法。
＜１２＞工程（１）における冷却温度が、アセトンを溶剤として用いた場合は好ましくは１５℃〜０℃であり、ヘキサンを溶剤として用いた場合は好ましくは５℃〜−５℃である＜１＞〜＜１１＞のいずれか１に記載の方法。
＜１３＞工程（１）における冷却時間が、好ましくは０．１時間以上、より好ましくは０．２〜２００時間、更に好ましくは０．５〜１００時間である＜１＞〜＜１２＞のいずれか１に記載の方法。
＜１４＞魚油の冷却温度範囲に至るまでの冷却速度が、好ましくは１０℃／ｈ以下であり、また、好ましくは０．１℃／ｈ以上である＜１＞〜＜１３＞のいずれか１に記載の方法。
＜１５＞工程（２）において、固体部として分別により除去される高融点成分が、好ましくはパルミチン酸が４０質量％以上、より好ましくは４４質量％以上結合したトリアシルグリセロールである＜１＞〜＜１４＞のいずれか１に記載の方法。
＜１６＞高融点成分の融点が、好ましくは４０℃以上、より好ましくは４５℃以上である＜１５＞に記載の方法。
＜１７＞工程（２）において、固体部として分別により除去される高融点成分は、魚油に対して、好ましくは０．２〜６質量％、より好ましくは０．４〜４質量％、更に好ましくは０．６〜３質量％除去される＜１＞〜＜１６＞のいずれか１に記載の方法。
＜１８＞工程（３）における冷却温度が、工程（１）における冷却温度よりも好ましくは３℃以上低い温度であり、より好ましくは５℃〜３０℃低い温度であり、更に好ましくは７℃〜２５℃低い温度である＜１＞〜＜１７＞のいずれか１に記載の方法。
＜１９＞工程（３）における冷却温度が、アセトンを溶剤として用いた場合は好ましくは０℃〜−１５℃であり、ヘキサンを溶剤として用いた場合は好ましくは−５℃〜−２０℃である＜１＞〜＜１８＞のいずれか１に記載の方法。
＜２０＞工程（３）における有機溶剤の使用量が、工程（２）で得た液体部１００質量部に対して好ましくは１０質量部以上、より好ましくは３０〜１０００質量部、更に好ましくは５０〜５００質量部である＜１＞〜＜１９＞のいずれか１に記載の方法。
＜２１＞工程（３）において、液体部を有機溶剤に溶解する温度が、好ましくは１０℃以上、より好ましくは２０〜７０℃である＜１＞〜＜２０＞のいずれか１に記載の方法。＜２２＞工程（３）における冷却時間が、好ましくは０．１時間以上、より好ましくは０．２〜２００時間、更に好ましくは０．５〜１００時間である＜１＞〜＜２１＞のいずれか１に記載の方法。
＜２３＞液体部の冷却温度範囲に至るまでの冷却速度が、好ましくは１０℃／ｈ以下であり、また、好ましくは０．１℃／ｈ以上である＜１＞〜＜２２＞のいずれか１に記載の方法。
＜２４＞工程（２）で得た液体部の魚油に対する回収率（歩留まり）が、好ましくは０．２〜６質量％、より好ましくは０．４〜５質量％、更に好ましくは０．６〜４質量％である＜１＞〜＜２３＞のいずれか１に記載の方法。
＜２５＞分別魚油の、工程（１）に供する魚油に対する回収率（歩留まり）が、好ましくは１〜１２質量％、より好ましくは２〜９質量％、更に好ましくは３〜７質量％である＜１＞〜＜２４＞のいずれか１に記載の方法。
＜２６＞分別魚油が、トリアシルグリセロールの２位に結合した脂肪酸の総質量中にパルミチン酸を好ましくは３０質量％以上、より好ましくは４０質量％以上、更に好ましくは４５質量％以上含み、且つトリアシルグリセロールに結合したω３系高度不飽和脂肪酸の総質量に対する、１，３位に結合したω３系高度不飽和脂肪酸の割合が好ましくは６０質量％以上、より好ましくは６５〜９５質量％のものである＜１＞〜＜２５＞のいずれか１に記載の方法。
＜２７＞分別魚油が、トリアシルグリセロールに結合したドコサヘキサエン酸の総質量に対する、１，３位に結合したドコサヘキサエン酸の割合（１，３位ＤＨＡ含有率）が好ましくは５５質量％以上、より好ましくは６０〜９５質量％のものである＜１＞〜＜２６＞のいずれか１に記載の方法。
＜２８＞分別魚油が、トリアシルグリセロールに結合したエイコサペンタエン酸の総質量に対する、１，３位に結合したエイコサペンタエン酸の割合（１，３位ＥＰＡ含有率）が好ましくは６５質量％以上、より好ましくは７０〜９５質量％のものである＜１＞〜＜２７＞のいずれか１に記載の方法。＜２９＞分別魚油が、分別魚油を構成する脂肪酸中にドコサヘキサエン酸を好ましくは５質量％以上、より好ましくは７〜１７質量％、更に好ましくは９〜１４質量％含有する＜１＞〜＜２８＞のいずれか１に記載の方法。
＜３０＞分別魚油が、分別魚油を構成する脂肪酸中にエイコサペンタエン酸を好ましくは１質量％以上、より好ましくは１．５〜５質量％、更に好ましくは２〜４質量％含有する＜１＞〜＜２９＞のいずれか１に記載の方法。
＜３１＞分別魚油が、トリアシルグリセロールを好ましくは９０質量％以上、より好ましくは９４質量％以上含有する＜１＞〜＜３０＞のいずれか１に記載の方法。
＜３２＞分別魚油の酸価（ＡＶ）が、好ましくは１０ｍｇＫＯＨ／ｇ以下、より好ましくは５ｍｇＫＯＨ／ｇ以下である＜１＞〜＜３１＞のいずれか１に記載の方法。
＜３３＞分別魚油の融点が、好ましくは４２℃未満であり、より好ましくは２５〜４１℃、更に好ましくは２７〜４０℃である＜１＞〜＜３２＞のいずれか１に記載の方法。
＜３４＞工程（３）で析出した固体部と分離した液体部を、ω３系高度不飽和脂肪酸を含む魚油として使用する＜１＞〜＜３３＞のいずれか１に記載の方法。
【実施例】
【００４２】
以下の実施例において「％」は「質量％」を意味する。
〔分析方法〕
（ｉ）構成脂肪酸組成の測定
日本油化学会編「基準油脂分析試験法２００３年版」中の「メチルエステル化法（三フッ化ホウ素メタノール法）（２．４．１．２−１９９６）」に従って脂肪酸メチルエステルを調製し、得られたサンプルを、ガスクロマトグラフィー（ＧＬＣ）に供して、構成脂肪酸の分析を行った。
【００４３】
（ii）グリセリド組成の測定
「グリセリド組成」は、ガラス製サンプル瓶に、サンプル１０ｍｇとトリメチルシリル化剤（「シリル化剤ＴＨ」、関東化学製）０．５ｍＬを加え、密栓した後、７０℃で１５分間加熱した。これに蒸留水１．０ｍＬ、ヘキサン２．０ｍＬを加えて、混合後、ヘキサン層をガスクロマトグラフィー（ＧＬＣ）に供して、グリセリド組成の分析を行った。
【００４４】
(iii)酸価（ＡＶ）の測定
日本油化学会編「基準油脂分析試験法２００３年版」中の「酸価（２．３．１−１９９６）」に従って測定した。
【００４５】
（iv）融点の測定
高感度型示差走査熱量計（ＤＳＣ７０２０、ＳＩＩ製）を用いて、融点を測定した。分析条件は、試料５ｍｇを７０℃で５分保持し溶解後、２０℃／分の速度で−４０℃まで冷却し５分保持し固化させた。その後、２０℃／分の速度で融点予想より３０℃低い温度まで昇温した。次いで、０．５℃／分の速度で昇温し、溶解終了温度を融点とした。
【００４６】
（ｖ）２位の脂肪酸組成及び１，３位の脂肪酸組成の測定
高濃度のエタノール存在下で高い１，（３）位選択性を示し、既存リパーゼ剤で脂肪酸選択性が低いノボザイム４３５（ノボザイムズジャパン製）を用いた。グリセリドの１，３位結合脂肪酸を分解することで２−モノグリセリドの脂肪酸組成を求め、１，３位の脂肪酸組成を算出した。
試料１５０ｍｇとエタノール１．５ｇを混合し、ノボザイム４３５を６６ｍｇ加えて３０℃で３時間反応させた。その後、リパーゼを濾別して、エタノールを減圧留去することで反応液を得た。
続いて、固相カラム（Ｓｅｐ−Ｐａｋ  Ｓｉｌｉｃａ  ＷＡＴ０５１９００、日本ウォーターズ製）を使って、２−モノグリセリドを分画した。固相カラムをヘキサン８０％、ジエチルエーテル２０％の混合溶剤１０ｍＬでコンデショニングした。ヘキサン８０％、ジエチルエーテル２０％の混合溶剤１ｍＬに反応液１００ｍｇ溶解し、固相カラムに通液した。次いで、ヘキサン８０％、ジエチルエーテル２０％の混合溶剤３０ｍＬ通液し遊離脂肪酸及びジグリセリドを分離した。その後、メタノールを１０ｍＬ通液した。メタノールを減圧留去して２−モノグリセリド画分を回収した。その後、トリヘンイコサノイン（和光純薬工業製）を内部標準として、構成脂肪酸組成の測定と同じ操作を行い２−モノグリセリド画分の構成脂肪酸の分析を行った。
この結果を用いて、１，３位の構成脂肪酸組成（％）及び１，３位含有率（％）を次式（１）、（２）より算出した。
１，３位の構成脂肪酸組成（％）＝｛グリセリドの構成脂肪酸組成（％）×３−２位モノグリセリドの構成脂肪酸組成（％）｝／２・・・・（１）
【００４７】
１，３位含有率（％）＝｛１，３位の構成脂肪酸組成（％）×２｝／｛グリセリドの構成脂肪酸組成（％）×３｝×１００・・・・（２）
【００４８】
〔原料油脂〕
原料油脂として、表１に示す蒸留カツオマグロ油及びマグロ原油を用いた。
原料油脂の脂肪酸組成、２位に結合する脂肪酸の総質量中のパルミチン酸の含有量（２位パルミチン酸）、ＥＰＡ、ＤＨＡの１，３位含有率、酸価（ＡＶ）、グリセリド組成、及び融点を表１に示す。なお、蒸留カツオマグロ油の融点は、不明瞭であった。
【００４９】
【表１】
0006600227.tif 000002
【００５０】
〔実施例１〕
表１に示す蒸留カツオマグロ油を原料油脂とし、１段目アセトン分別を５℃で行った。得られた液体画分を用いて、２段目アセトン分別を−５℃で行った。
１段目アセトン分別は、２Ｌビーカーに蒸留カツオマグロ油２００ｇとアセトン（特級、和光純薬工業製）４００ｍＬを加えて、混合しながら４０℃で溶解した。次いで、５℃恒温室内に静置した。７０時間後、ブフナー漏斗を用いて、定性濾紙ＮＯ．２（ＡＤＶＡＮＴＥＣ製）で減圧濾過を行った。固体部は５℃に冷却した２００ｍＬのアセトンで洗浄しながら、再度減圧濾過した。洗浄濾液は先に分離した液体部に加えた。固体部及び液体部を含むアセトン溶液をそれぞれ減圧留去して、固体画分及び液体画分の歩留まりを求め分析を行った。
【００５１】
続いて、２段目アセトン分別は、上記で得られた液体部９９．５ｇとアセトン（特級、和光純薬工業製）２００ｍＬを加えて、混合しながら４０℃で溶解した。次いで、ジャケット温度を−５℃にしたセパラブルフラスコに入れた。４時間静置後、ブフナー漏斗を用いて、定性濾紙ＮＯ．２（ＡＤＶＡＮＴＥＣ製）で減圧濾過を行った。固体部は−５℃に冷却した２００ｍＬのアセトンで洗浄しながら、再度減圧濾過した。洗浄濾液は先に分離した液体部に加えた。固体部及び液体部アセトン溶液をそれぞれ減圧留去して、固体画分及び液体画分の歩留まりを求め分析を行った。
【００５２】
〔実施例２〕
表１に示すマグロ原油を原料油脂とし、１段目アセトン分別を５℃で行った。得られた液体画分を用いて、２段目アセトン分別を−５℃で行った。
１段目アセトン分別は、撹拌翼１００×１００ｍｍを取り付けた２Ｌジャケット冷却式セパラブルフラスコ（内径１３０ｍｍ）に、表１に示すマグロ原油３００ｇとアセトン（特級、和光純薬工業製）９００ｍＬを加えた。５０ｒ／分で撹拌しながら４０℃で溶解後、３０℃まで冷却した。次いで、０．５℃／分の速度で冷却し、５℃まで冷却した。２時間後、ブフナー漏斗を用いて、定性濾紙ＮＯ．２（ＡＤＶＡＮＴＥＣ製）で減圧濾過を行った。固体部は５℃に冷却した３００ｍＬのアセトンで洗浄しながら、再度減圧濾過した。洗浄濾液は先に分離した液体部に加えた。固体部及び液体部を含むアセトン溶液をそれぞれ減圧留去して、固体画分及び液体画分の歩留まりを求め分析を行った。
【００５３】
続いて、２段目アセトン分別は、撹拌翼１００×１００ｍｍを取り付けた２Ｌジャケット冷却式セパラブルフラスコ（内径１３０ｍｍ）に、上記で得られた液体部２８０ｇとアセトン（特級、和光純薬工業製）８４０ｍＬを加えた。５０ｒ／分で撹拌しながら３０℃で溶解後、２０℃まで冷却した。次いで、０．５℃／分の速度で冷却し、−５℃まで冷却した。２時間後、ブフナー漏斗を用いて、定性濾紙ＮＯ．２（ＡＤＶＡＮＴＥＣ製）で減圧濾過を行った。固体部は−５℃に冷却した２８０ｍＬのアセトンで洗浄しながら、再度減圧濾過した。洗浄濾液は先に分離した液体部に加えた。固体部及び液体部を含むアセトン溶液をそれぞれ減圧留去して、固体画分及び液体画分の歩留まりを求め分析を行った。
【００５４】
〔実施例３〕
１段目アセトン分別を１０℃で行い、得られた液体画分を用いて、２段目アセトン分別を−１０℃で行った。他の条件は実施例２と同じ操作を行い、固体画分及び液体画分の歩留まりを求め分析を行った。
【００５５】
〔実施例４〕
分別に用いる溶剤をヘキサンとし、１段目ヘキサン分別を０℃で行い、得られた液体画分を用いて、２段目ヘキサン分別は−１５℃で行った。他の条件は、実施例２と同じ操作を行い、固体画分及び液体画分の歩留まりを求め分析を行った。１段目ヘキサン分別の固体画分は、融点が５１．５℃と高く、エタノール中においても３０℃では固化してしまうため、１，３位の脂肪酸組成及び２位脂肪酸組成の測定は困難であった。
【００５６】
〔比較例１〕
表１に示す蒸留カツオマグロ油を原料油脂として、無溶剤分別を５℃で行った。
無溶剤分別は、遠心分離用９１０ｍＬ広口ボトル（日立工機製）に蒸留カツオマグロ油を５００ｇ加えて、４０℃で溶解した。次いで、２０℃に冷却した遠心分離機（ＣＲ２２ＧIII；日立工機製）で回転数５０００ｒ／分、３０分の条件で遠心分離したが、結晶析出は観察されなかった。１０℃に冷却した遠心分離機で回転数５０００ｒ／分、６０分間遠心分離した。続いて、５℃に冷却した遠心分離機で回転数５０００ｒ／分、６０分間遠心分離し、得られた固体画分及び液体画分の歩留まりを求め分析を行った。
【００５７】
〔比較例２〕
１０℃に冷却した遠心分離機で回転数５０００ｒ／分、６０分の条件で遠心分離して固液分離した他は、比較例１と同じ操作を行い、固体画分及び液体画分の歩留まりを求め分析を行った。
【００５８】
〔比較例３〕
表１に示すマグロ原油を原料油脂として、１段目無溶剤分別は５℃で行い、得られた液体画分を用いて、２段目無溶剤分別は−５℃で行った。
１段目無溶剤分別は、撹拌翼１００×１００ｍｍを取り付けた２Ｌジャケット冷却式セパラブルフラスコ（内径１３０ｍｍ）に表１に示すマグロ原油１５００ｇを入れた。５０ｒ／分で撹拌しながら４０℃で溶解後、３０℃まで冷却した。次いで、０．５℃／分の速度で冷却し、５℃まで冷却した。２時間後、ブフナー漏斗を用いて、定性濾紙ＮＯ．２（ＡＤＶＡＮＴＥＣ製）で減圧濾過を行った。分離した固体画分及び液体画分の歩留まりを求め分析を行った。
【００５９】
続いて、２段目無溶剤分別は、撹拌翼１００×１００ｍｍを取り付けた２Ｌジャケット冷却式セパラブルフラスコ（内径１３０ｍｍ）に、上記で得られた液体画分８５０ｇを入れた。５０ｒ／分で撹拌しながら３０℃で溶解後、２０℃まで冷却した。次いで、０．５℃／分の速度で冷却し、−５℃まで冷却した。２時間後、ブフナー漏斗を用いて、定性濾紙ＮＯ．２（ＡＤＶＡＮＴＥＣ製）で減圧濾過を行った。分離した固体画分及び液体画分の歩留まりを求め分析を行った。
【００６０】
〔比較例４〕
表１に示すマグロ原油を原料油脂として、アセトン分別を−５℃で行った。
アセトン分別は、撹拌翼１００×１００ｍｍを取り付けた２Ｌジャケット冷却式セパラブルフラスコ（内径１３０ｍｍ）に表１に示すマグロ原油３００ｇとアセトン（特級、和光純薬工業製）９００ｍＬを加えた。５０ｒ／分で撹拌しながら４０℃で溶解後、３０℃まで冷却した。次いで、０．５℃／分の速度で冷却し、−５℃まで冷却した。２時間後、ブフナー漏斗を用いて、定性濾紙ＮＯ．２（ＡＤＶＡＮＴＥＣ製）で減圧濾過を行った。固体部は−５℃に冷却した３００ｍＬのアセトンで洗浄しながら、再度減圧濾過した。洗浄濾液は先に分離した液体部に加えた。固体部及び液体部を含むアセトン溶液をそれぞれ減圧留去して、固体画分及び液体画分の歩留まりを求め分析を行った。
【００６１】
実施例及び比較例の分析値と歩留まりを表２に示す。
【００６２】
【表２】
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【００６３】
表２より明らかなように、原料油脂を二段階の溶剤分別を行うと、グリセリドの２位にパルミチン酸が４０％以上と高く結合し、且つ１，３位ＤＨＡ含有率が６０％以上と高い、ヒト母乳中のトリアシルグリセロール構造と考えられている油脂が得られた。また、斯かる油脂の融点は２５〜４１℃であり、体温近傍で溶融することが確認された。
これに対して、無溶剤分別と一段階の溶剤分別では高融点グリセリドを分別できず、所望の油脂は得られなかった。