(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）リン脂質及び（ｉｉ）少なくとも１つのリン脂質とコレステロールの混合物からなる群から選択される粒子形成成分、
多価対イオン供与体又は薬学的に許容されるその塩を０．１〜１０ｍＭ、
一価対イオン供与体又は薬学的に許容されるその塩を１００〜５００ｍＭ、及び
ビンカアルカロイド又は薬学的に許容されるその塩
を有する少なくとも１つのリポソームを含み、副作用が低減された医薬組成物であって、
前記多価対イオン供与体がデキストラン硫酸であり、
前記一価対イオン供与体が硫酸である、医薬組成物。
【請求項２】
前記一価対イオン供与体の前記薬学的に許容される塩が、（ｉ）硫酸イオン、及び（ｉｉ）カチオン性イオンからなり、前記硫酸イオンが前記カチオン性イオンとイオン対を形成している、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記多価対イオン供与体の前記薬学的に許容される塩が、（ｉ）デキストラン硫酸、及び（ｉｉ）カチオン性イオンからなり、前記デキストラン硫酸が前記カチオン性イオンとイオン対を形成している、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記カチオン性イオンが、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、ナトリウムイオン、カリウムイオン、マンガンイオン及びＮＲ４＋（式中、ＲはＨ又は有機残基である）、並びにそれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つのカチオン性イオンを含む、請求項２又は３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記カチオン性イオンがアンモニウムである、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記デキストラン硫酸又は前記薬学的に許容される塩が、約１ミリ当量（ｍＥｑ）／Ｌから約３２０ｍＥｑ／Ｌの量で硫酸基を含む、請求項１又は３に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記デキストラン硫酸又は前記薬学的に許容される塩が約１ｍＥｑ／Ｌから約２５０ｍＥｑ／Ｌの量で硫酸基を含む、請求項１又は３に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記多価対イオン供与体の前記薬学的に許容される塩がデキストラン硫酸ナトリウム又はデキストラン硫酸アンモニウムである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
デキストラン硫酸の分子量が約１，６００ダルトンから約８，０００ダルトンである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
リン脂質又は少なくとも１つのリン脂質とコレステロールの混合物から選択される粒子形成成分、
０．１ｍＭから１０ｍＭのデキストラン硫酸又は薬学的に許容されるその塩、
１５０ｍＭから４５０ｍＭの硫酸又は薬学的に許容されるその塩、及び
ビンカアルカロイド
を有する少なくとも１つのリポソームを含み、副作用が低減された医薬組成物。
【請求項１１】
前記硫酸又は薬学的に許容されるその塩が硫酸アンモニウムである、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記リポソームが更に親水性ポリマーを含む、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
有効量の請求項１〜１２のいずれか１項に記載の医薬組成物を含む、癌細胞増殖を阻害するために用いられる組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、その開示全体を参照により本明細書に援用する２０１３年３月１５日に出願された米国特許出願第６１／７９２，８５０号の利益を主張するものである。
【０００２】
本発明は、少なくとも１つのリポソーム、少なくとも１つの多価対イオン供与体又は薬学的に許容されるその塩、少なくとも１つの一価対イオン供与体又は薬学的に許容されるその塩、及び治療薬を含む、医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
リポソームは、種々の治療薬の生体内担体として広く用いられている。理想的には、かかるリポソームは、高い封入効率、及び長期保持プロファイル（すなわち、標的部位に到達する前の薬物の最小放出）を有するべきである。
【０００４】
ＮａｎｏＶＮＢ（登録商標）製品は、標的部位に到達する前のビノレルビンの保持を高めるのにリポソームを利用したリポソームビノレルビンである。ＮａｎｏＶＮＢ（登録商標）製品の第Ｉ相臨床試験は、確かに高い抗癌効力を示したが、ビノレルビンの長期生体内保持は、毒性の増加ももたらす。
【０００５】
したがって、最適な抗癌効力と最小の副作用のバランスを得るために、治療薬の送達に有用であり、調節可能な保持プロファイルを有するリポソーム組成物を提供する必要がある。本発明は、この要求及び他の重要な要求に応えるものである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
一実施形態においては、本発明は、少なくとも１つのリポソーム、少なくとも１つの多価対イオン供与体又は薬学的に許容されるその塩、少なくとも１つの一価対イオン供与体又は薬学的に許容されるその塩、及び治療薬、その誘導体、又は薬学的に許容されるその塩を含む、医薬組成物を対象とする。有利には、この医薬組成物は、治療薬の調節可能な保持プロファイル及び調節可能な封入率を提供する。
【０００７】
別の一実施形態においては、本発明は、リン脂質又は少なくとも１つのリン脂質とコレステロールの混合物から選択される粒子形成成分を有する少なくとも１つのリポソーム、０．１ｍＭから１０ｍＭ多価対イオン供与体又は薬学的に許容されるその塩、１５０ｍＭから４５０ｍＭ一価対イオン供与体又は薬学的に許容されるその塩、及びビンカアルカロイドを含む、医薬組成物を提供する。
【０００８】
第３の実施形態においては、本発明は、リン脂質又は少なくとも１つのリン脂質とコレステロールの混合物から選択される粒子形成成分を有する少なくとも１つのリポソーム、１ミリ当量（ｍＥｑ：ｍｉｌｌｉｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ）から３２０ｍＥｑ多価対イオン供与体又は薬学的に許容されるその塩、１５０ｍＭから４５０ｍＭ一価対イオン供与体又は薬学的に許容されるその塩、及び両親媒性治療薬を含む、医薬組成物を提供する。
【０００９】
本発明は、それを必要とする対象における癌細胞増殖を阻害する方法も対象とする。この方法は、本明細書に記載の医薬組成物を投与するステップを含み、対象における癌の症候及び徴候が軽減される。有利には、この方法は、癌細胞阻害を増強し、毒性を弱める。
【００１０】
これらの用語を含む記載は、本明細書に記載の主題を限定するものではなく、下記特許請求の範囲の意味又は範囲を限定するものでもないことを理解すべきである。この特許によって包含される本発明の実施形態は、この要旨ではなく、下記特許請求の範囲によって定義される。この要旨は、本発明の種々の態様の高水準の概要であり、下記詳細な説明の項で更に記述される概念の一部を紹介するものである。この要旨は、請求項に係る主題の重要な特徴又は本質的特徴を明らかにすることを意図したものではなく、請求項に係る主題の範囲を決定するために別途使用されることを意図したものでもない。主題は、明細書全体の適切な部分、任意又はすべての図面、及び各特許請求の範囲を参照して理解すべきである。
【００１１】
本発明は、添付図及び下記詳細な説明を読むとより明瞭になるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】リポソーム中のデキストラン硫酸ナトリウム及びビノレルビンの沈殿を示す。
【図２】ＮａｎｏＶＮＢ群、ＬＶ３０４群及び食塩水（対照）群における平均腫瘍体積を示す。
【図３】ＮａｎｏＶＮＢ群、ＬＶ３０４群及び食塩水（対照）群における平均生存時間を示す。
【図４】ＮａｎｏＶＮＢ群及びＬＶ３０４群における皮膚毒性スコアを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
定義
上記で使用したように、本開示を通して、以下の用語は、別段の記載がない限り、以下の意味を有すると理解すべきである。
【００１４】
本明細書では、単数形「１つの（ａ、ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈が別のことを明示しない限り、複数形を含む。
【００１５】
本明細書では「有効量」は、体重減少、疼痛、及び触知腫瘤として臨床的に又は種々の画像化手段によって放射線学的に検出可能である腫瘤を含めて、ただしそれだけに限定されない癌の症候及び徴候を軽減するのに十分な医薬組成物の用量を含む。
【００１６】
本明細書では「治療する」、「治療された」又は「治療」という用語は、防止（例えば、予防）、緩和及び治癒的使用又は結果を含む。
【００１７】
「阻害する」及び「抑制する」という用語は、増殖の遅延又は停止を含む。
【００１８】
「対象」という用語は、癌を有する脊椎動物、又は癌治療が必要であると考えられる脊椎動物を指し得る。対象としては、霊長類などの哺乳動物などの温血動物、より好ましくはヒトが挙げられる。非ヒト霊長類も対象である。対象という用語は、ネコ、イヌなどの飼い慣らされた動物、家畜（例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギなど）及び実験動物（例えば、マウス、ウサギ、ラット、スナネズミ、モルモットなど）を含む。したがって、獣医学的な使用及び医学的製剤が本明細書で企図される。
【００１９】
「対イオン供与体」という用語は、治療薬と一緒に塩を形成可能な対イオン供与体を含み、治療薬の活性を低下させない。一実施形態においては、治療薬は、正味の負電荷を有する両親媒性酸であり、対イオン供与体は、カチオン性イオン、又は１つ以上のカチオン性官能基と共有結合した実体である。別の一実施形態においては、治療薬は、正味の正電荷を有する両親媒性塩基であり、対イオン供与体は、アニオン性イオン、又は１つ以上のアニオン性官能基と共有結合した実体である。対イオン供与体は、リポソームの薬剤輸送成分への溶解性は高いが、リポソーム膜（二重層）透過性は低い。したがって、対イオン供与体は、治療薬の充填中、及び貯蔵中に、薬剤輸送成分中に保持される。
【００２０】
本明細書のすべての数は、「約」で修飾されていると理解してもよい。
【００２１】
本明細書では「アルキル」という用語は、１から約１０個の炭素原子を有する直鎖又は分枝、飽和、脂肪族基を指す。アルキルは、Ｃ１−２、Ｃ１−３、Ｃ１−４、Ｃ１−５、Ｃ１−６、Ｃ１−７、Ｃ１−８、Ｃ１−９、Ｃ１−１０、Ｃ２−３、Ｃ２−４、Ｃ２−５、Ｃ２−６、Ｃ３−４、Ｃ３−５、Ｃ３−６、Ｃ４−５、Ｃ４−６及びＣ５−６などの任意の数の炭素を含むことができる。例えば、Ｃ１−６アルキルとしては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシルなどが挙げられるが、それだけに限定されない。アルキルは、ヘプチル、オクチル、ノニル、及びデシルなど、ただしそれだけに限定されない最高２０個の炭素原子を有するアルキル基を指すこともできる。
【００２２】
本明細書では「アリール」という用語は、任意の適切な数の環原子及び任意の適切な数の環を有する芳香環系を指す。アリール基は、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６個の環原子などの任意の適切な数の環原子、並びに６から１０、６から１２、又は６から１４個の環員を含むことができる。アリール基は、縮合して二環式若しくは三環式基を形成した、又は結合によって連結されてビアリール基を形成した、１５単環式とすることができる。代表的アリール基としてはフェニル、ナフチル及びビフェニルが挙げられる。別のアリール基としては、メチレン連結基を有するベンジルが挙げられる。一部のアリール基は、フェニル、ナフチル又はビフェニルなどの６から１２個の環員を有する。別のアリール基は、フェニル又はナフチルなどの６から１０個の環員を有する。一部の別のアリール基は、フェニルなどの６から２０個の環員を有する。「置換アリール」基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ及びアルコキシから選択される１つ以上の基で置換することができる。
【００２３】
本発明の両親媒性酸の「薬学的に許容される塩」は、塩基と一緒に形成される塩、すなわちナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどのアルカリ及びアルカリ土類金属塩、並びにアンモニウム、トリメチル−アンモニウム、ジエチルアンモニウム、及びトリス−（ヒドロキシメチル）−メチル−アンモニウム塩などの４アンモニウム塩などのカチオン性塩である。
【００２４】
鉱酸、有機カルボン酸及び有機スルホン酸、例えば、塩酸、メタンスルホン酸、マレイン酸などの類似の酸付加塩も、構造の一部として、ピリジルなどの構成と塩基性治療薬を提供することができる。
【００２５】
リポソーム
本明細書では「リポソーム」という用語は、多胞体リポソーム（ＭＶＬ）、多層小胞（ＭＬＶ）又は小さい若しくは大きい単層小胞（ＵＬＶ）を意味する。リポソームは、ナノサイズであり、粒子形成成分及び薬剤輸送成分を含む。粒子形成成分は、封入された脂質関門を形成し、薬剤輸送成分は、粒子形成成分によって封入された媒体を含む。
【００２６】
粒子形成成分は、リン脂質又は少なくとも１つのリン脂質とコレステロールの混合物から調製することができる。本発明に使用されるリン脂質の例としては、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、卵黄ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、卵黄ホスファチジルグリセロール（ＥＰＧ）、卵黄ホスファチジルエタノールアミン（ＥＰＥ）、卵黄ホスファチジルセリン（ＥＰＳ）、卵黄ホスファチジン酸（ＥＰＡ）、卵黄ホスファチジルイノシトール（ＥＰＩ）、大豆ホスファチジルコリン（ＳＰＣ）、大豆ホスファチジルグリセロール（ＳＰＧ）、大豆ホスファチジルエタノールアミン（ＳＰＥ）、大豆ホスファチジルセリン（ＳＰＳ）、大豆ホスファチジン酸（ＳＰＡ）、大豆ホスファチジルイノシトール（ＳＰＩ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ヘキサデシルホスホコリン（ＨＥＰＣ）、水素化大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルステアロイルホスファチジルコリン（ＰＳＰＣ）、パルミトイルステアロイルホスファチジルグリセロール（ＰＳＰＧ）、モノオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＭＯＰＥ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジルセリン（ＤＯＰＳ）、ジミリストイルホスファチジルセリン（ＤＭＰＳ）、ジステアロイルホスファチジルセリン（ＤＳＰＳ）、ジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸（ＤＯＰＡ）、ジミリストイルホスファチジン酸（ＤＭＰＡ）、ジステアロイルホスファチジン酸（ＤＳＰＡ）、ジパルミトイルホスファチジルイノシトール（ＤＰＰＩ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジルイノシトール（ＤＯＰＩ）、ジミリストイルホスファチジルイノシトール（ＤＭＰＩ）、ジステアロイルホスファチジルイノシトール（ＤＳＰＩ）、及びそれらの混合物が挙げられるが、それだけに限定されない。
【００２７】
一実施形態においては、粒子形成成分は、脂肪酸又はカチオン性脂質（すなわち、生理学的ｐＨにおいて正味正電荷を有する脂質）を含まない。
【００２８】
別の一実施形態においては、粒子形成成分は、リン脂質分子に結合した高度に水和された柔軟中性ポリマーの長鎖を有する親水性ポリマーを含む。いかなる理論にも拘泥するものではないが、親水性ポリマーは、リポソームを安定化し、生体内でより長い循環時間をもたらすと考えられる。親水性ポリマーの例としては、分子量約２，０００から約５，０００ダルトンのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、メトキシＰＥＧ（ｍＰＥＧ）、ガングリオシドＧＭ１、ポリシアル酸、ポリ乳酸（ポリラクチドとも称される）、ポリグリコール酸（ポリグリコリドとも称される）、ポリ乳酸ポリグリコール酸、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリメトキサゾリン、ポリエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルオキサゾリン、ポリアスパルトアミド、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、ポリビニルメチルエーテル、ポリアクリル酸ヒドロキシエチル、ヒドロキシメチルセルロース又はヒドロキシエチルセルロースなどの誘導体化セルロース、及び合成ポリマーが挙げられるが、それだけに限定されない。
【００２９】
実施形態の一群においては、リン脂質は、ＤＳＰＣ及びＤＳＰＥ−ＰＥＧから選択され、ＰＥＧの分子量は約２，０００ダルトンである（以下、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００）。
【００３０】
実施形態の別の一群においては、ＤＳＰＣ、コレステロール及びＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００のモル比は約３：２：０．４５である。
【００３１】
粒子形成成分は、さらに、標的分子を有する標的細胞にリポソームが特異的に結合できるようにターゲティング部分として作用する抗体又はペプチドの脂質複合物を含むことができる。標的分子の例としては、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、及びｅｒｂＢ−２／ｎｅｕ（ＨＥＲ２）が挙げられるが、それだけに限定されない。
【００３２】
リポソームの平均粒径は、約３０ｎｍから約２００ｎｍ、より好ましくは約５０ｎｍから約１５０ｎｍである。
【００３３】
本発明において調製されるリポソームは、小胞の調製に使用される従来の技術によって生成することができる。これらの技術としては、エーテル注入法（Ｄｅａｍｅｒら，Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９７８）３０８：２５０）、界面活性剤法（Ｂｒｕｎｎｅｒら，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ（１９７６）４５５：３２２）、凍結融解法（Ｐｉｃｋら，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．（１９８１）２１２：１８６）、逆相蒸発法（Ｓｚｏｋａら，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．（１９８０）６０１：５５９  ７１）、超音波処理法（Ｈｕａｎｇら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９６９）８：３４４）、エタノール注入法（Ｋｒｅｍｅｒら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９７７）１６：３９３２）、押し出し法（Ｈｏｐｅら，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ（１９８５）８１２：５５  ６５）、フレンチプレス法（Ｂａｒｅｎｈｏｌｚら，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．（１９７９）９９：２１０）、及びＳｚｏｋａ，Ｆ．，Ｊｒ．ら，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．９：４６７（１９８０）に詳述された方法が挙げられる。上記プロセスはすべてリポソーム小胞の形成の基本技術であり、これらのプロセスを参照により本明細書に援用する。
【００３４】
治療薬
治療薬は、任意の適切な治療薬とすることができる。一実施形態においては、治療薬は抗癌剤である。抗癌剤の非限定的例としては、ビンカアルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、タキサン化合物、それらの誘導体、又は薬学的に許容されるそれらの塩が挙げられる。
【００３５】
ビンカアルカロイドの例としては、ビノレルビン、ビンクリスチン、ビンブラスチン及びビンデシン（ｖｉｎｄｅｓｔｉｎｅ）が挙げられるが、それだけに限定されない。
【００３６】
トポイソメラーゼ阻害剤の例としては、トポテカン、カンプトセシン、イリノテカン、エトポシド及びドキソルビシンが挙げられるが、それだけに限定されない。
【００３７】
タキサン化合物の例としては、パクリタキセルが挙げられるが、それだけに限定されない。
【００３８】
一価対イオン供与体
一実施形態においては、治療薬は、正味正電荷を有する両親媒性塩基であり、リポソーム内の一価対イオン供与体は、アニオン性イオン、又はアニオン性官能基と共有結合した実体から選択することができる。アニオン性イオン又はアニオン性官能基の原子価は、−１、−２又は−３である。
【００３９】
一価対イオン供与体の非限定的例としては、図示したように、ベンゼンスルホン酸及び４−ヒドロキシベンゼンスルホン酸が挙げられる。
【００４０】
【化１】
0006449848.tif 000002
ベンゼンスルホン酸、及び
【化２】
0006449848.tif 000003
４−ヒドロキシベンゼンスルホン酸。
【００４１】
別の一実施形態においては、一価対イオン供与体の薬学的に許容される塩は、ａ）アニオン性イオン、又はアニオン性官能基と共有結合した実体、及びｂ）１つ以上のカチオン性イオンを含み、アニオン性イオン又はアニオン性官能基はカチオン性イオンとイオン対を形成している。
【００４２】
アニオン性イオン又はアニオン性官能基は、以下の１つ以上から選択することができる：クエン酸塩、硫酸塩、スルホン酸塩、リン酸塩、ピロリン酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ホウ酸塩、カルボン酸塩、グルクロン酸塩（ｇｌｕｃｏｒｏｎａｔｅ）、塩化物、水酸化物、硝酸塩、シアン酸塩又は臭化物。一実施形態においては、アニオン性イオン及びアニオン性官能基は、以下の１つ以上から選択される：クエン酸塩、硫酸塩、スルホン酸塩、リン酸塩、ピロリン酸塩又はカルボン酸塩。
【００４３】
更に別の一実施形態においては、アニオン性官能基と結合した実体は、天然又は合成、有機又は無機化合物とすることができる。実体の例としては、ベンゼン、オリゴヌクレオチド及び単糖などの非ポリマー、又はポリビニルなどのポリマー、グリセロール、ソルビトール及びマンニトールなどのポリオール、多糖、ポリペプチド、糖タンパク質並びにポリヌクレオチドが挙げられるが、それだけに限定されない。
【００４４】
薬学的に許容される塩のカチオン性イオンは、以下の１つ以上から選択することができる：カルシウムイオン、マグネシウムイオン、ナトリウムイオン、カリウムイオン、マンガンイオン若しくはＮＲ４＋（式中、ＲはＨ又はアルキル若しくはアリールなどの有機残基である）又はそれらの混合物。一実施形態においては、カチオン性イオンはアンモニウムである。
【００４５】
本発明の第２の実施形態は、両親媒性酸性治療薬を提供し、リポソーム内の一価対イオン供与体は、カチオン性イオン、又はカチオン性官能基と共有結合した実体から選択することができる又は含むことができる。カチオン性イオン又はカチオン性官能基の原子価は、＋１、＋２又は＋３である。
【００４６】
一価対イオン供与体の薬学的に許容される塩は、ａ）カチオン性イオン、又はカチオン性官能基と共有結合した実体、及びｂ）１つ以上のアニオン性イオンを含み、カチオン性イオン又はカチオン性官能基は１つ以上のアニオン性イオンとイオン対を形成している。
【００４７】
一実施形態においては、一価対イオン供与体は硫酸アンモニウムである。別の一実施形態においては、一価対イオン供与体の濃度は約１００から約５００ｍＭ、又は増分１０ｍＭのその間の任意の値若しくは範囲（例えば、８０ｍＭ、３２０ｍＭ）である。更に別の一実施形態においては、一価対イオン供与体の濃度は約１５０から約４５０ｍＭである。更に別の一実施形態においては、一価対イオン供与体の濃度は約２００ｍＭから約４００ｍＭである。更に別の一実施形態においては、一価対イオン供与体の濃度は約３００ｍＭである。
【００４８】
多価対イオン
一実施形態においては、治療薬は、両親媒性塩基であり、少なくとも１つの多価対イオン供与体又は薬学的に許容されるその塩は、リポソーム内で不溶性塩を形成する。
【００４９】
別の一実施形態においては、多価対イオン供与体は、１つより多いアニオン性官能基と共有結合した実体を含み、アニオン性官能基の原子価は−１、−２又は−３である。多価対イオン供与体の薬学的に許容される塩は、ａ）１つより多いアニオン性官能基と共有結合した実体、及びｂ）１つ以上のカチオン性イオンを含み、アニオン性官能基はカチオン性イオンとイオン対を形成している。
【００５０】
多価対イオンのアニオン性官能基は、以下の１つ以上から選択される：クエン酸塩、硫酸塩、スルホン酸塩、リン酸塩、ピロリン酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ホウ酸塩、カルボン酸塩、グルクロン酸塩、塩化物、水酸化物、硝酸塩、シアン酸塩又は臭化物。一実施形態においては、アニオン性官能基は、以下の１つ以上から選択される：クエン酸塩、硫酸塩、スルホン酸塩、リン酸塩、ピロリン酸塩又はカルボン酸塩。多価対イオン供与体のアニオン性官能基の各々は、互いに異なり得る。例えば、コンドロイチン硫酸は、図示したように、同じ実体上の異なるアニオン性官能基を有する多価対イオン供与体である。
【００５１】
【化３】
0006449848.tif 000004
【００５２】
カチオン性イオンは、以下の１つ以上から選択することができる：カルシウムイオン、マグネシウムイオン、ナトリウムイオン、カリウムイオン、マンガンイオン、ＮＲ４＋（式中、ＲはＨ又はアルキル若しくはアリールなどの有機残基である）、及びそれらの混合物。一実施形態においては、カチオン性イオンはアンモニウムである。
【００５３】
本発明の別の一実施形態は、両親媒性酸性治療薬を提供し、リポソーム内の多価対イオン供与体は、１つより多いカチオン性官能基と共有結合した実体を含み、前記カチオン性基の原子価は＋１、＋２又は＋３である。両親媒性酸は、多価対イオン供与体と不溶性塩を形成し、リポソーム内に捕捉される。
【００５４】
多価対イオン供与体の薬学的に許容される塩は、ａ）１つ以上のカチオン性官能基と共有結合した実体、及びｂ）１つ以上のアニオン性イオンを含み、カチオン性官能基はアニオン性イオンとイオン対を形成している。
【００５５】
多価対イオン供与体の実体は、天然又は合成、有機又は無機化合物とすることができる。実体の非限定的例としては、オリゴヌクレオチド及び単糖などの非ポリマー、又はポリビニルなどのポリマー、グリセロール、ソルビトール及びマンニトールなどのポリオール、デキストラン及びキトサンなどの多糖、ポリペプチド、糖タンパク質及びポリヌクレオチドが挙げられる。
【００５６】
一実施形態においては、多価対イオン供与体は、以下の１つ以上から選択される：硫酸化ヘパリン、カラゲナン、ムチン、硫酸化ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、ケラチン硫酸又はデルマタン硫酸。硫酸化多糖の非限定的例としては、分子量約１，６００ダルトンから約８，０００ダルトンのデキストラン硫酸が挙げられる。
【００５７】
一実施形態においては、デキストラン硫酸の薬学的に許容される塩は、デキストラン硫酸アンモニウム又はデキストラン硫酸ナトリウムから選択される。
【００５８】
医薬組成物
一実施形態においては、本発明の医薬組成物は、ａ）リン脂質又は少なくとも１つのリン脂質とコレステロールの混合物から選択される粒子形成成分を有する少なくとも１つのリポソーム、ｂ）少なくとも１つの多価対イオン供与体又は薬学的に許容されるその塩、（ｃ）少なくとも１つの一価対イオン供与体又は薬学的に許容されるその塩、及び（ｄ）両親媒性治療薬、その誘導体、又は薬学的に許容されるその塩の組合せを含む。
【００５９】
別の一実施形態においては、本発明の医薬組成物は、ａ）１つ以上のリン脂質とコレステロールの混合物から選択される粒子形成成分を有する少なくとも１つのリポソーム、ｂ）濃度約０．１ｍＭから約１０ｍＭ未満の少なくとも１つの多価対イオン供与体又は薬学的に許容されるその塩、（ｃ）濃度約１５０ｍＭから約４５０ｍＭの少なくとも１つの一価対イオン供与体又は薬学的に許容されるその塩、及び（ｄ）ビンカアルカロイドの組合せを含む。更に別の一実施形態においては、粒子形成成分は、更に親水性ポリマーを含む。
【００６０】
有利には、多価対イオン供与体又は薬学的に許容されるその塩と一価対イオン供与体又は薬学的に許容されるその塩を組み合わせることによって、治療薬の封入効率及び／又は保持プロファイルを調節して、治療効率を維持し、それにもかかわらず毒性を最小化することができる。
【００６１】
実施形態の一群においては、多価対イオン供与体又はその薬学的に許容される塩のアニオン性官能基の原子価の全当量は、約１から約１６０ミリ当量（ｍＥｑ）、約３から１６０ｍＥｑ、約１から約３２０ｍＥｑ、約１から約２５０ｍＥｑ、約３から約２５０ｍＥｑ、約１６０から約２５０ｍＥｑ、約１６０から約３２０又は増分１ｍＥｑの１から３２０ｍＥｑの間の任意の値若しくは範囲（例えば、２３ｍＥｑ、２３３ｍＥｑ）である。別の一実施形態においては、多価対イオン供与体又はその薬学的に許容される塩のアニオン性官能基は、硫酸塩である。
【００６２】
実施形態の別の一群においては、多価対イオン供与体又はその薬学的に許容される塩の濃度は、約２ｍＭから８ｍＭ未満、約０．１ｍＭから８ｍＭ未満、約０．１ｍＭから約１０ｍＭ未満、約２ｍＭから１０ｍＭ未満、又は増分０．１ｍＭの０．１ｍＭから１０ｍＭの間の任意の値若しくは範囲（例えば、１．５ｍＭ、８．３ｍＭ）である。
【００６３】
医薬組成物は、頭蓋内、脳内、脳室内、髄腔内、脊髄内、経口、局所、直腸、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、鼻腔内、腹膜内、腫瘍内などを含めて、任意の適切な投与経路用に処方される。
【００６４】
本発明の医薬組成物の投与量は、実施形態に従って当業者が決定することができる。単位投与又は複数回投与形態が企図され、各々が特定の臨床現場において利点を有する。本発明によれば、投与する医薬組成物の実際の量は、治療対象の年齢、体重、全身状態、癌のタイプ、毒性に応じて変わる可能性があり、医療従事者の裁量に依存する。
【００６５】
一部の実施形態においては、（ビノレルビンなどの）治療薬の少なくとも一部は、多価対イオン供与体の薬学的に許容される塩と塩を形成し、図１において明らかなように、リポソーム内水溶液コア中で沈殿する。
【００６６】
癌細胞増殖を阻害する方法
本発明は、有効量の本明細書に記載の医薬組成物をそれを必要とする対象に投与し、それによって癌の症候及び徴候及び／又は対象における毒性が軽減されるステップを含む、対象における癌細胞増殖を阻害する方法を対象とする。
【００６７】
医薬組成物は、例えば、循環腫瘍細胞が血流によって増殖及び移動するのを阻害することによって、例えば、手術前に腫瘍サイズを減少させるために、及び／又は手術後に転移の可能性を低下させるために、単独で投与することができ、又は手術にアジュバントとして投与することができる。
【００６８】
医薬組成物は、１つ以上の抗癌剤の前、後又は同時に投与することができる。抗癌剤は、従来の化学療法剤、標的癌治療又は放射線療法を含む。
【００６９】
従来の化学療法剤は、ＤＮＡ合成阻害剤、アルキル化剤、葉酸代謝拮抗薬、代謝阻害剤又はそれらの組合せを含む。
【００７０】
標的癌治療は、（例えば、従来の化学療法剤を用いて）急速に分裂する細胞を単に妨げるのではなく、発癌及び癌増殖に必要な特異的標的分子を妨げることによって癌細胞の増殖を阻害する薬物療法である。標的癌治療は、キナーゼ阻害剤、血管新生阻害剤、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体又はそれらの組合せを含む。
【００７１】
放射線療法は、高エネルギー照射を使用して、腫瘍を収縮させ、癌細胞を殺す。放射線療法の例としては、Ｘ線、ガンマ線及び荷電粒子が挙げられる。
【００７２】
以下の実施例によって本発明を更に説明する。これらの実施例は、単に本発明の説明のためのものであって、限定するものと解釈すべきではない。
【実施例】
【００７３】
実施例１：リポソームの調製
リポソームを溶媒注入法によって調製した。ＤＳＰＣ、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００及びコレステロールを含む脂質をモル比３：０．０４５：２で化合させ、フラスコ中で９９．９％エタノールに約６０℃で溶解させた。卓上超音波浴を脂質溶解に使用した。
【００７４】
溶解した脂質溶液を１．０ｍＭリン酸ナトリウム溶液にぜん動ポンプによって１００ｍＬ／ｍｉｎで添加し、２つの溶液を混合した。次いで、脂質混合物をそれぞれ孔径０．２μｍ及び０．１μｍのポリカーボネート膜に６〜１０回通過させた。リポソーム（又は大きい多層小胞）が形成され、平均小胞直径は約１００〜１２０ｎｍであった（Ｍａｌｖｅｒｎ  ＺｅｔａＳｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳ−９０によって測定）。
【００７５】
Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎ  ２  Ｍｉｎｉ  Ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ  Ｍｏｄｕｌｅ  Ｂｉｏｍａｘ−１００Ｃ（０．１ｍ２）を使用して、リポソーム混合物をタンジェンシャルフローろ過システムによって０．９％（ｗ／ｗ）塩化ナトリウム及び９％（ｗ／ｗ）スクロース溶液に対して透析及び濃縮し、次いで０．２μｍ無菌フィルタによって滅菌した。
【００７６】
実施例２：封入効率及び保持プロファイルに対する一価対イオン供与体の効果
実施例１のリポソームを硫酸アンモニウム一価対イオン供与体と混合して医薬組成物を調製した。ビノレルビンの遠隔充填（ｒｅｍｏｔｅ  ｌｏａｄｉｎｇ）のために、３００ｍＭ及び６００ｍＭ硫酸アンモニウムを使用してリポソームの脂質二分子膜を横切る勾配を設定した。リポソームビノレルビンの封入（充填）効率及び保持プロファイルをインビトロ血漿遊離法によって評価し、結果を表１にまとめた。
【００７７】
結果：データによれば、硫酸アンモニウムはビノレルビンをリポソームに充填又は封入するのに有効であった。しかし、硫酸アンモニウムは、ビノレルビンをリポソーム中に保持するのにさほど有効ではなく、２４時間の血漿インキュベーション後にリポソーム中に封入されたままのビノレルビンは３０％未満であった。
【００７８】
表１  一価対イオン供与体を含む医薬組成物の特性
【表１】
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【００７９】
実施例３：封入効率及び保持プロファイルに対する多価対イオン供与体の効果
分子量８，０００（８Ｋ）ダルトンのデキストラン硫酸ナトリウムをＤＯＷＥＸイオン交換カラムによってデキストラン硫酸アンモニウム（デキストラン硫酸の薬学的に許容される塩）に転化した。実施例１のリポソームをそれぞれ４ｍＭ及び８ｍＭデキストラン硫酸アンモニウムと混合し、続いてビノレルビン約２ｍｇを遠隔充填し、約６０℃でインキュベートすることによって、２種類の医薬組成物を調製した。
【００８０】
これら２種類の医薬組成物におけるリポソームビノレルビンの封入効率及び保持プロファイルをインビトロ血漿遊離法によって評価し、結果を表２にまとめた。
【００８１】
結果：８ｍＭデキストラン硫酸アンモニウムは封入効率が９３％であったのに対して、４ｍＭデキストラン硫酸アンモニウムの封入効率は９０％未満であった。同様に、表４のＬＶ００９製剤は多価対イオン供与体のみを含み、封入効率が９０％未満、血漿インキュベーションから２４時間後の保持率が９８．７４％であった。
【００８２】
表２  多価対イオン供与体を含む医薬組成物の特性
【表２】
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【００８３】
実施例４：一価と多価対イオン供与体の組合せの効果
インビトロ試験を実施して、リポソームビノレルビンの保持プロファイルに対する一価と多価対イオン供与体の組合せを評価した。
【００８４】
実施例１によって調製されたリポソームを３００ｍＭ硫酸アンモニウム（一価対イオン供与体）及び種々の濃度のデキストラン硫酸ナトリウム（多価対イオン供与体塩）と混合した。
【００８５】
種々のリポソームビノレルビンの封入効率及び保持プロファイルを２４時間インビトロ血漿遊離法によって評価し、結果を表３にまとめた。
【００８６】
結果：データによれば、一価と多価対イオン供与体の種々の組合せは、ビノレルビンの封入効率を維持し、リポソームサイズは約１００ｎｍであった。さらに、リポソームビノレルビンの保持プロファイルは、多価対イオン供与体の濃度に依存する。８ｍＭデキストラン硫酸ナトリウムは、２ｍＭデキストラン硫酸ナトリウム（５１．８％）よりも２４時間のビノレルビン保持率が高い（７８．９％）。
【００８７】
表３  一価と多価対イオン供与体の組合せによるリポソームビノレルビンの特性
【表３】
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【００８８】
実施例５：種々の多価対イオン供与体塩の効果
インビトロ試験を実施して、リポソームビノレルビンの保持プロファイルに対する種々の多価対イオン供与体塩の効果を評価した。
【００８９】
実施例１によって調製されたリポソームを３００ｍＭ硫酸アンモニウム（ＡＳ）及び２種類の多価対イオン供与体塩：デキストラン硫酸（ＤＳ）ナトリウム塩及びＤＳアンモニウム塩と混合した。
【００９０】
リポソームビノレルビンの封入効率及び保持プロファイルを２４時間インビトロ血漿遊離法によって評価し、結果を表４にまとめた。
【００９１】
結果：データによれば、デキストラン硫酸のナトリウム塩とアンモニウム塩は、２４時間の血漿インキュベーション後のリポソーム中のビノレルビンの保持に同等に有効であった。さらに、多価対イオン供与体又はその塩の濃度が１０ｍＭであるとき、一価と多価対イオン供与体の組合せの保持プロファイル（ビノレルビンの１００％及び９４．２％が２４時間においてリポソーム中に残った）は、多価対イオン供与体組成物（ビノレルビンの９８．７％が２４時間後にリポソーム中に残った）と同様であった。これは、表３のデータと対照的である。表３のデータでは、多価対イオン供与体の濃度が１０ｍＭ未満であるときに、リポソームビノレルビンの保持プロファイルは多価対イオン供与体の濃度に依存する。
【００９２】
表４  一価と多価対イオン供与体の組合せによるリポソームビノレルビンの特性
【表４】
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【００９３】
実施例６：多価対イオン供与体の種々の分子量の効果
リポソームビノレルビン保持プロファイルに対する多価対イオン供与体の分子量の効果を評価した。実施例１によって調製されたリポソームをそれぞれ硫酸アンモニウム並びに５Ｋ及び８Ｋデキストラン硫酸と混合した。
【００９４】
リポソームビノレルビンの封入効率及び保持プロファイルを２４時間インビトロ血漿遊離法によって評価し、結果を表５にまとめた。
【００９５】
結果：多価対イオン供与体の全原子価は、リポソームビノレルビンの保持プロファイルに影響を及ぼす。データによれば、多価対イオン供与体の原子価が高いほど、２４時間における封入ビノレルビンが多くなる。
【００９６】
表５  種々の分子量の多価対イオン供与体を用いたリポソームビノレルビンの特性
【表５】
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【００９７】
実施例７：一価と多価対イオン供与体の組合せを用いた調節可能な保持プロファイル
実施例１のリポソームを種々の濃度の硫酸アンモニウム及び種々の濃度のデキストラン硫酸と混合し、続いてビノレルビンを遠隔充填することによって種々の医薬組成物を調製した。リポソームビノレルビンの封入効率及び保持プロファイルを２４時間インビトロ血漿遊離法によって評価し、表６〜８にまとめた。
【００９８】
表６の結果：７２時間において、封入ビノレルビンの７２．２％がＮａｎｏＶＮＢ組成物（医薬組成物は、多価対イオン供与体オクタスルファートトリエチルアミンのみを含む）中にまだ残っており、７２時間におけるこの高い保持率は、毒性、最も顕著には皮膚毒性をもたらし得る。一方、ＬＶ００５組成物（医薬組成物は、一価対イオン供与体のみを含む）では７２時間で封入ビノレルビンのすべてが遊離し、これは低い治療効果と関連する。一価と多価対イオン供与体を組み合わせることによって、ある範囲のリポソームビノレルビン保持プロファイルが得られた。多価対イオン供与体又はその薬学的に許容される塩の原子価の全当量は約１から約２４０ｍＥｑであることが注目される。
【００９９】
表６  １００ｍＭ及び３００ｍＭ一価対イオン供与体及び種々の濃度の多価対イオン供与体を含む医薬組成物の特性
【表６】
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【０１００】
表７  種々の濃度の一価対イオン供与体及び固定濃度（０．３ｍＭ）の多価対イオン供与体を含む医薬組成物の特性
【表７】
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【０１０１】
表７の結果：ビノレルビンの封入効率は、１００ｍＭから５００ｍＭ硫酸アンモニウムを用いて７０％を超えた。
【０１０２】
表８  種々の濃度の一価対イオン供与体及び固定濃度（０．３ｍＭ）の多価対イオン供与体を含む医薬組成物の特性
【表８】
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【０１０３】
表８の結果：３０％を超えるリポソームビノレルビンが、２００〜４００ｍＭ硫酸アンモニウム（一価対イオン供与体）を用いて２４時間インキュベーション後に保持される。
【０１０４】
実施例８：ＨＴ−２９ヒト結腸癌細胞を使用した生体内抗癌評価
ＬＶ３０４医薬組成物の生体内抗癌評価をマウスにおいて正所性ＨＴ−２９ヒト結腸腫瘍モデルを用いて実施した。
【０１０５】
マウスは、この試験中すべての時間で飲料水及び食物を自由に摂取した。
【０１０６】
試験設計は、以下の３試験群を含んだ。
【０１０７】
ＮａｎｏＮＶＢ群：６匹のマウスにビノレルビン２５ｍｇ／ｋｇをＮａｎｏＶＮＢとして０、３、６及び９日目に１日１回静脈内注射によって投与した。
【０１０８】
ＬＶ３０４群：６匹のマウスにビノレルビン２５ｍｇ／ｋｇをＬＶ３０４医薬組成物として０、３、６及び９日目に１日１回静脈内注射によって投与した。
【０１０９】
対照群：６匹のマウスに０、３、６及び９日目に１日１回静脈内食塩水注射をした。
【０１１０】
試験期間中、以下の結果を測定した。
・  腫瘍増殖変化率（％Ｔ／Ｃ）。これは、以下の式によって計算した。
（腫瘍重量ｘ日目−腫瘍重量０日目）治療／（腫瘍重量ｘ日目−腫瘍重量０日目）対照×１００％
・  ０日目の体重と比較した最大体重変化。
・  平均腫瘍倍加時間（ＴＤＴ）。これは、腫瘍増殖速度の定量化に広く用いられ、以下の式によって計算される。
（ｘ日目−０日目）
・  ｘ日目は、腫瘍体積が、ステージ分類サイズの２倍になるのに要した時間である。
・  評価し、表９のパラメータに基づいて段階づけした皮膚毒性スコア。
【０１１１】
表９  皮膚毒性スコア
【表９】
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【０１１２】
結果：
表１０によれば、８日目の腫瘍増殖変化率（％Ｔ／Ｃ）は、ＮａｎｏＶＮＢ群とＬＶ３０４群で類似していた（ＮａｎｏＶＮＢは−４１．０％、ＬＶ３０４は−４２．４％）。平均腫瘍倍加時間（平均ＴＤＴ）は、ＮａｎｏＶＮＢ群で＞７８日、ＬＶ３０４群で６７．１日、対照群で７．６日であった。さらに、ＬＶ３０４を投与したマウスは、ＮａｎｏＶＮＢを投与したマウスよりも副作用が少なかった（体重減少が少なく、皮膚毒性スコアが低い）。
【０１１３】
図２に、ＮａｎｏＶＮＢ群、ＬＶ３０４群及び食塩水（対照）群における平均腫瘍体積を示す。結果の示すところによれば、ＮａｎｏＶＮＢ及びＬＶ３０４群の平均腫瘍体積は、試験期間を通して２００ｍｍ３未満であったのに対して、対照群の平均腫瘍体積は、４０日目で３０００ｍｍ３を超えた。
【０１１４】
これらの結果は、ＬＶ３０４がＮａｎｏＶＮＢに比べて有効な抗癌治療薬であるが、副作用が少ないことを示している。
【０１１５】
表１０  ＨＴ−２９ヒト結腸癌モデルにおけるＮａｎｏＶＮＢ、ＬＶ３０４及び食塩水の抗癌評価
【表１０】
0006449848.tif 000014
【０１１６】
実施例９：ＰＣ１４ＰＥ６／ＡＳ２ヒト肺腺癌正所性モデルを用いた生体内抗癌評価
ＬＶ３０４医薬組成物の生体内抗癌評価をマウスにおいて正所性ＰＣ１４ＰＥ６／ＡＳ２肺腫瘍モデルを用いて実施した。
【０１１７】
試験設計は、以下の３試験群を含んだ。
ＮａｎｏＶＮＢ群：６匹のマウスに、０日目に単一の静脈内注射としてＮａｎｏＶＮＢの最大耐量（ＭＴＤ）の５０％を投与した（１／２ＭＴＤ＝ビノレルビン７．５ｍｇ／ｋｇ）。
【０１１８】
ＬＶ３０４群：６匹のマウスに、０日目に単一の静脈内注射としてＬＶ３０４医薬組成物のＭＴＤの５０％を投与した（１／２ＭＴＤ＝ビノレルビン１０ｍｇ／ｋｇ）。
【０１１９】
対照群：６匹のマウスに０日目に単一の食塩水静脈内注射をした。
【０１２０】
試験期間中、以下の結果を測定した。
・  ０日目の体重と比較した最大体重変化。
・  平均生存時間。
【０１２１】
結果：表１１を参照して、マウスの平均生存時間は、単一のＮａｎｏＶＮＢ注射後３３．８日間、単一のＬＶ３０４注射後３４．２日間、及び単一の食塩水注射後２１．４日間であった。図３は、ＮａｎｏＶＮＢ群及びＬＶ３０４群の生存時間が食塩水（対照）群よりも有意に長いことを示している（ｐ＜０．０１）。
【０１２２】
表１１  ＰＣ１４ＰＥ６／ＡＳ２ヒト肺腺癌正所性モデルにおけるＮａｎｏＶＮＢ、ＬＶ３０４及び食塩水群の抗癌評価
【表１１】
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【０１２３】
実施例１０：ＳＣＩＤマウスモデルを用いた生体内皮膚毒性評価
ＬＶ３０４医薬組成物の生体内皮膚毒性評価をＢＡＬＢ／ｃマウスを使用して実施した。マウスは、この試験中すべての時間で飲料水及び食物を自由に摂取した。マウスを以下のように３試験群に無作為化した。
ＮａｎｏＶＮＢ群：６匹のマウスにＮａｎｏＶＮＢとして１日ビノレルビン７．５ｍｇ／ｋｇを０及び９日目にＩＶ注射し、３及び６日目に５ｍｇ／ｋｇ注射した。
【０１２４】
ＬＶ３０４群：６匹のマウスにＬＶ３０４として１日ビノレルビン７．５ｍｇ／ｋｇを０及び９日目にＩＶ注射し、３及び６日目に５ｍｇ／ｋｇ注射した。
【０１２５】
対照群：６匹のマウスに０、３、６及び９日目に１日１回ＩＶ食塩水注射をした。
【０１２６】
試験期間中、皮膚毒性を評価し、表９の段階づけ方式に基づいて採点した。
【０１２７】
結果：図４に、ＮａｎｏＶＮＢ群及びＬＶ３０４群における皮膚毒性スコアを示す。ＬＶ３０４群の皮膚毒性は、６０日の試験期間中、ＮａｎｏＶＮＢ群よりもかなり少なかった。
【０１２８】
本明細書で分子量などの物性又は化学式などの化学的性質に範囲を使用する場合、その中の範囲特定の実施形態のすべての組合せ及びサブ組合せが含まれるものとする。
【０１２９】
本明細書に引用又は記載された各特許、特許出願及び刊行物の開示を参照によりその全体を本明細書に援用する。
【０１３０】
当業者は、本発明の好ましい実施形態に多数の変更及び改変を加えることができ、本発明の精神から逸脱することなくかかる変更及び改変を加えることができることを理解されたい。したがって、添付の特許請求の範囲は、本発明の真の精神及び範囲内のすべてのかかる等価な変形を包含することが意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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