(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
乳酸脱水素酵素基質、乳酸脱水素酵素補酵素、ジアホラーゼ、テトラゾリウム塩、酵素安定化剤およびｐＨ緩衝剤を含むｐＨ７〜１１の水溶液が吸水性基材に浸透され乾燥されてなる試験紙、又は乳酸脱水素酵素基質、乳酸脱水素酵素補酵素、Ｐｈｅｎａｚｉｎｉｕｍｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆａｔｅ誘導体、テトラゾリウム塩、酵素安定化剤およびｐＨ緩衝剤を含むｐＨ７〜１１の水溶液が吸水性基材に浸透され乾燥されてなる試験紙を用い、
正常者、歯肉炎患者及び歯周炎患者の唾液を試験紙に浸して一定時間の経過したときの試験紙呈色の色調に対する正常者数の分布、歯肉炎患者及び歯周炎患者の各患者数の分布を求め、
正常者の最大数の色調と歯肉炎患者の最大数の色調との間の中間の色調を第１境界値とし、歯肉炎患者の最大数の色調と歯周炎患者の最大数の色調との間の中間の色調を第２境界値とし、
患者の唾液を試験紙に浸して一定時間経過後の呈色が第１境界値を超える色調の患者を歯肉炎と、第２境界値を超える色調の患者を歯周炎と簡易判定するようにしたことを特徴とする歯肉炎・歯周炎の簡易判定補助方法。
【請求項２】
乳酸脱水素酵素基質、乳酸脱水素酵素補酵素、ジアホラーゼ、テトラゾリウム塩、酵素安定化剤およびｐＨ緩衝剤を含むｐＨ７〜１１の水溶液が吸水性基材に浸透され乾燥されてなる試験紙、又は乳酸脱水素酵素基質、乳酸脱水素酵素補酵素、Ｐｈｅｎａｚｉｎｉｕｍｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆａｔｅ誘導体、テトラゾリウム塩、酵素安定化剤およびｐＨ緩衝剤を含むｐＨ７〜１１の水溶液が吸水性基材に浸透され乾燥されてなる試験紙を用い、
正常者、歯肉炎患者及び歯周炎患者の唾液を試験紙に浸して一定時間の経過したときの試験紙呈色の色調に対する正常者数の分布、歯肉炎患者及び歯周炎患者の各患者数の分布における、正常者の最大数の色調と歯肉炎患者の最大数の色調との間の中間の色調を第１境界値とし、歯肉炎患者の最大数の色調と歯周炎患者の最大数の色調との間の中間の色調を第２境界値としたとき、患者の唾液を試験紙に浸して一定時間経過後の呈色が第１境界値を超える色調の患者を歯肉炎と、第２境界値を超える色調の患者を歯周炎と簡易判定するようにしたことを特徴とする歯肉炎・歯周炎の簡易判定補助方法。
【請求項３】
上記簡易判定を行った患者の唾液を試験紙に浸して一定時間経過後の呈色が第１境界値又は第２境界値を超える色調から正常者又は第１境界値の色調に変化したときに歯肉炎又は歯周炎が改善され、第１境界値を超える色調から第２境界値を超える色調に変化したときには歯肉炎が悪化したと簡易判定するようにした請求項１又は２記載の歯肉炎・歯周炎の簡易判定補助方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は歯肉炎・歯周炎の簡易判定方法及びその簡易判定キットに関し、特に歯肉炎や歯周炎を呈色の色調によって非侵襲（生体を傷つけない）で迅速に簡易判定できるようにした方法及びキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、我が国において歯周病は生活習慣病として位置づけられ、その罹患率は生活習慣の欧米化や精神的ストレスの増加等により高まっている。歯周病は痛み等の自覚症状が現れないうちに進行し、放置すると歯牙喪失に至る。さらには歯周病と肺炎、骨粗鬆症、糖尿病、心筋梗塞、早産、メタボリックシンドローム等との関連性も近年報告されており、歯周病の予防や治療への関心が急速に高まっている。
【０００３】
従来、歯周病罹患状態は歯周ポケットの深さを測定する、ＣＰＩ（ＣｏｍｍｕｎｉｔｙＰｅｒｉｏｄｏｎｔａｌＩｎｄｅｘ）により診断されている。しかしながら、その診断には熟練した専門技術が求められること、診断に時間がかかること、歯周ポケットへのプローブ挿入時の不快感などの問題が指摘されている。
【０００４】
唾液中には歯周病の有用なマーカーとなりうる物質が多く含まれており、近年、歯周病の早期発見や診断に唾液検査を用いることが提唱されている。これまでに、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、アラニンアミノトランスフェラーゼ、ジペプチジルペプチダーゼ、乳酸脱水素酵素（以下、ＬＤＨという）、アルカリフォスファターゼ、酸性フォスファターゼ、γグルタミルトランスフェラーゼ、マトリックスメタロプロテアーゼ、クレアチニン、尿素、遊離ヘモグロビン等と歯周病との関連性が指摘されている。
【０００５】
特に、ＬＤＨは歯周病疾患のマーカーとして有用であることが古くから報告されている。ＬＤＨはヒトのほぼ全ての細胞の細胞質中に存在する酵素であるが、細胞の損傷や壊死により細胞外に漏出する。歯周病患者においても唾液のＬＤＨ活性が有意に高いことが知られており、唾液ＬＤＨ活性を歯周病の罹患状態の指標とすることができる（特許文献１〜特許文献４、非特許文献１〜非特許文献９）。
【０００６】
しかしながら、従来のＬＤＨ活性の測定法は分注器等の実験器具や分光光度計等の測定機器を必要とし、特に技術及び設備の面で、歯周病患者自身が測定することは実際には困難である。
【０００７】
これに対し、ＬＤＨ基質、ＬＤＨ補酵素、ジアホラーゼ、テトラゾリウム塩、酵素安定化剤およびｐＨ緩衝剤を含むｐＨ７〜１１の水溶液が吸水性基材に浸透され乾燥してなる歯周病診断試験紙、又はＬＤＨ基質、ＬＤＨ補酵素、Ｐｈｅｎａｚｉｎｉｕｍｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆａｔｅ誘導体、テトラゾリウム塩、酵素安定化剤およびｐＨ緩衝剤を含むｐＨ７〜１１の水溶液が吸水性基材に浸透され乾燥してなる歯周病診断試験紙を用い、呈色の色調を１〜１０までに区分して色見本を作成し、色調の７と８の間を境界値とし、境界値を越えたときに歯周病と判定するようにした方法が提案されている（特許文献５）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００４−２２９５３７号公報
【特許文献２】特開２００４−３２９１４１号公報
【特許文献３】特開２００２−１８１８１５号公報
【特許文献４】特開２００５−２０１７６８号公報
【特許文献５】特開２０１０−１３０９２４号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ２９８，１８７−１９１，２０００
【非特許文献２】Ｍｅｄ．ＯｒａｌＰａｔｒｏｌ．ＯｒａｌＣｉｒ．Ｂｕｃａｌ１１，１１５−１１９，２００６
【非特許文献３】Ｊ．ＯｒａｌＳｃｉ．４８，１１７−１８３，２００６
【非特許文献４】Ｊ．ＯｒａｌＳｃｉ．５０，５３−５６，２００８
【非特許文献５】Ｃｈｉｒ．Ｄｅｎｔ．Ｆｒ．５６，６３−６９，１９８６
【非特許文献６】Ｊ．Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ．５８，６１４−６２１，１９８７
【非特許文献７】Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ．１６，１６４−１６９，１９８９
【非特許文献８】Ａｒｃｈ．ＯｒａｌＢｉｏｌ．５２，９１１−９１５，２００７
【非特許文献９】Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ１０１，３２１−３２６，１９８０
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
しかし、特許文献５記載の歯周病診断試験紙では歯周病を非侵襲で迅速に簡易判定できるという点で優れているものの、口腔の状態の精度よい判定には使用できなかった。
【００１１】
本発明はかかる問題点に鑑み、口腔内の状態を精度よく簡易判定できるようにした歯肉炎・歯周炎の簡易判定方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
そこで、本発明に係る歯肉炎・歯周炎の簡易判定方法は、乳酸脱水素酵素基質、乳酸脱水素酵素補酵素、ジアホラーゼ、テトラゾリウム塩、酵素安定化剤およびｐＨ緩衝剤を含むｐＨ７〜１１の水溶液が吸水性基材に浸透され乾燥されてなる試験紙、又は乳酸脱水素酵素基質、乳酸脱水素酵素補酵素、Ｐｈｅｎａｚｉｎｉｕｍｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆａｔｅ誘導体、テトラゾリウム塩、酵素安定化剤およびｐＨ緩衝剤を含むｐＨ７〜１１の水溶液が吸水性基材に浸透され乾燥されてなる試験紙を用い、正常者、歯肉炎患者及び歯周炎患者の唾液を試験紙に浸して一定時間の経過したときの試験紙呈色の色調に対する正常者数の分布、歯肉炎患者及び歯周炎患者の各患者数の分布を求め、正常者の最大数の色調と歯肉炎患者の最大数の色調との間の中間の色調を第１境界値とし、歯肉炎患者の最大数の色調と歯周炎患者の最大数の色調との間の中間の色調を第２境界値とし、患者の唾液を試験紙に浸して一定時間経過後の呈色が第１境界値を超える色調の患者を歯肉炎と、第２境界値を超える色調の患者を歯周炎と簡易判定するようにしたことを特徴とする。
【００１３】
また、本発明に係る歯肉炎・歯周炎の簡易判定方法は、乳酸脱水素酵素基質、乳酸脱水素酵素補酵素、ジアホラーゼ、テトラゾリウム塩、酵素安定化剤およびｐＨ緩衝剤を含むｐＨ７〜１１の水溶液が吸水性基材に浸透され乾燥されてなる試験紙、又は乳酸脱水素酵素基質、乳酸脱水素酵素補酵素、Ｐｈｅｎａｚｉｎｉｕｍｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆａｔｅ誘導体、テトラゾリウム塩、酵素安定化剤およびｐＨ緩衝剤を含むｐＨ７〜１１の水溶液が吸水性基材に浸透され乾燥されてなる試験紙を用い、正常者、歯肉炎患者及び歯周炎患者の唾液を試験紙に浸して一定時間の経過したときの試験紙呈色の色調に対する正常者数の分布、歯肉炎患者及び歯周炎患者の患者数の分布における、正常者の最大数の色調と歯肉炎患者の最大数の色調との間の中間の色調を第１境界値とし、歯肉炎患者の最大数の色調と歯周炎患者の最大数の色調との間の中間の色調を第２境界値としたとき、患者の唾液を試験紙に浸して一定時間経過後の呈色が第１境界値を超える色調の患者を歯肉炎と、第２境界値を超える色調の患者を歯周炎と簡易判定するようにしたことを特徴とする。
【００１４】
ここで、歯周炎の前段階として歯肉炎があり、歯肉炎は歯と歯の間や歯と歯肉の間（歯周ポケット）に歯垢（プラーク）や歯石がたまり、歯肉が炎症をおこして赤く腫れた状態である。この歯肉炎を放置すると、歯周ポケットに歯垢や歯石が大量に沈着して軽度の歯周炎となり、さらに病状が進行すると、歯周ポケットが次第に深くなって歯垢や歯石が増加し、膿がでるとともに、歯槽骨が吸収される中度や重度の歯周炎に至る。
【００１５】
軽度の歯周炎は歯石や歯垢の沈着が比較的少なく、うまくブラッシングを行ってプラークコントロールをすれば、軽度の歯周炎から歯肉炎に、歯肉炎から正常な状態にまで回復させることができる一方、重度の歯周炎になると手術によって原因を除去することが必要となる。
【００１６】
ところで、口腔内の個々の歯については歯周炎が軽度、中度、重度か否かを歯肉の炎症や歯周ポケットの深さから正確に判断することができる。しかし、唾液は口腔内の歯肉の状態に総括的に関連しており、唾液から個々の歯の状況を判断することができず、口腔内が軽度歯周炎、中度歯周炎、重度歯周炎かどうかを判断することは実質的に困難である。
【００１７】
他方、正常者、歯肉炎患者及び歯周炎患者の唾液中のＬＤＨ活性を調べたところ、正常、歯肉炎、歯周炎といっても唾液中のＬＤＨ活性にばらつきが存在してＬＤＨ活性に重畳が見られることが判明した。
【００１８】
本発明の特徴は、正常者、歯肉炎患者及び歯周炎患者の試験紙呈色の色調に対する正常者数の分布、歯肉炎患者及び歯周炎患者の各患者数の分布を求め、正常者の最大数の色調と歯肉炎患者の最大数の色調との間の中間の色調を第１境界値とし、歯肉炎患者の最大数の色調と歯周炎患者の最大数の色調との間の中間の色調を第２境界値とし、患者の唾液を試験紙に浸して一定時間経過後の呈色が第１境界値を超える色調の患者を歯肉炎と、第２境界値を超える色調の患者を歯周炎と簡易判定するようにした点にある。
【００１９】
これにより、試験紙の呈色によって口腔内が正常な者、口腔内に歯肉炎や歯周炎が起こっている者を高い精度で簡易判別できる。
【００２０】
また、簡易判定を行った患者に対し、プラークコントロールをし、又歯石のクリーニングを行った後、一定期間の経過後に再度簡易判定を行うと、病状の改善又は悪化を簡易判定することができる。
【００２１】
すなわち、本発明によれば、簡易判定を行った患者の唾液を試験紙に浸して一定時間経過後の呈色が第１境界値又は第２境界値を超える色調から、正常者又は第１境界値の色調に変化したときに歯肉炎又は歯周炎が改善され、第１境界値を超える色調から第２境界値を超える色調に変化したときには歯肉炎が悪化したと簡易判定することができる。
【００２２】
また、上記簡易判定に使用するキットも斬新である。即ち、本発明に係る歯肉炎・歯周炎の簡易判定キットは、乳酸脱水素酵素基質、乳酸脱水素酵素補酵素、ジアホラーゼ、テトラゾリウム塩、酵素安定化剤およびｐＨ緩衝剤を含むｐＨ７〜１１の水溶液が吸水性基材に浸透され乾燥されてなる試験紙、又は乳酸脱水素酵素基質、乳酸脱水素酵素補酵素、Ｐｈｅｎａｚｉｎｉｕｍｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆａｔｅ誘導体、テトラゾリウム塩、酵素安定化剤およびｐＨ緩衝剤を含むｐＨ７〜１１の水溶液が吸水性基材に浸透され乾燥されてなる試験紙と、正常者、歯肉炎患者及び歯周炎患者の唾液を、乳酸脱水素酵素基質、乳酸脱水素酵素補酵素、ジアホラーゼ、テトラゾリウム塩、酵素安定化剤およびｐＨ緩衝剤を含むｐＨ７〜１１の水溶液が吸水性基材に浸透され乾燥されてなる試験紙、又は乳酸脱水素酵素基質、乳酸脱水素酵素補酵素、Ｐｈｅｎａｚｉｎｉｕｍｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆａｔｅ誘導体、テトラゾリウム塩、酵素安定化剤およびｐＨ緩衝剤を含むｐＨ７〜１１の水溶液が吸水性基材に浸透され乾燥されてなる試験紙に浸して一定時間の経過したときの試験紙呈色の色調に対する正常者数の分布、歯肉炎患者及び歯周炎患者の各患者数の分布における、正常者の最大数の色調と歯肉炎患者の最大数の色調との間の中間の色調を第１境界値とし、歯肉炎患者の最大数の色調と歯周炎患者の最大数の色調との間の中間の色調を第２境界値としたとき、患者の唾液を試験紙に浸して一定時間経過後の呈色が第１境界値を超える色調の患者を歯肉炎と、第２境界値を超える色調の患者を歯周炎と簡易判定する第１境界値の色調及び第２境界値の色調を示す色見本と、を備えたことを特徴とする。
【００２３】
試験紙はＬＤＨの基質である乳酸または乳酸塩、ＬＤＨの補酵素である酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（以下、ＮＡＤという）またはその塩、発色酵素であるジアホラーゼ、ジアホラーゼ基質であるテトラゾリウム塩、酵素安定化剤およびｐＨ緩衝剤を溶解したｐＨ７〜１１の水溶液、またはジアホラーゼの代わりに電子キャリアであるＰｈｅｎａｚｉｎｉｕｍｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆａｔｅ（以下、ＰＭＳという）誘導体を用いた上記水溶液を吸水性基材に浸透した後、乾燥することにより製造できる。
【００２４】
ＬＤＨの基質としては、乳酸、乳酸リチウム、乳酸ナトリウム、乳酸アンモニウム、乳酸マグネシウム、乳酸カリウム等が好適に用いられる。ＬＤＨ基質はＬＤＨ活性試験紙用発色液中の最終濃度が１．０〜５０ｍｇ／ｍＬとなるように添加することが望ましい。
【００２５】
ＬＤＨの補酵素はＮＡＤまたはそのナトリウム塩またはリチウム塩が好適に用いられる。ＬＤＨ補酵素はＬＤＨ活性試験紙用発色液中の最終濃度が０．０５〜５．０ｍｇ／ｍＬとなるように添加することが望ましい。
【００２６】
酵素安定化剤としては、ウシ血清アルブミン等が好適に用いられる。酵素安定化剤はＬＤＨ活性試験紙用発色液中の最終濃度が０．０５〜２０ｍｇ／ｍＬとなるように添加することが望ましい。
【００２７】
ｐＨ緩衝剤としてはｐＨ７〜１１において緩衝作用を示す、トリス塩酸、リン酸、ホウ酸、グリシン、ジエタノールアミン、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、またはＨＥＰＥＳ、ＨＥＰＰＳ、Ｔｒｉｃｉｎｅ、Ｂｉｃｉｎｅ、Ｇｌｙｃｙｌｇｌｙｃｉｎｅ、ＴＡＰＳ、ＣＡＰＳ等のＧｏｏｄの緩衝液が好適に用いられる。ｐＨ緩衝剤はＬＤＨ活性試験紙用発色液中の最終濃度が０．０５〜５０ｍｇ／ｍＬとなるように添加することが望ましい。
【００２８】
テトラゾリウム塩としては、３，３’−［３，３’−Ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ−（１，１’−ｂｉｐｈｅｎｙｌ）−４，４’−ｄｉｙｌ］−ｂｉｓ（２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｕｉｍｃｈｌｏｒｉｄｅ）、３，３’−［３，３’−Ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ−（１，１’−ｂｉｐｈｅｎｙｌ）−４，４’−ｄｉｙｌ］−ｂｉｓ［２−（４−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ）−５−ｐｈｅｎｙｌ−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｕｉｍｃｈｌｏｒｉｄｅ］（以下、ＮＢＴという）、２−（４−Ｉｏｄｏｐｈｅｎｙｌ）−３−（４
−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ）−５−ｐｈｅｎｙｌ−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｃｈｌｏｒｉｄｅ（以下、ＩＮＴという）、３−（４，５−Ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｔｈｉａｚｏｌｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ、２−（４−Ｉｏｄｏｐｈｅｎｙｌ）−３−（４−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ）−５−（２，４−ｄｉｓｕｌｆｏｐｈｅｎｙｌ）−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ，ｍｏｎｏｓｏｄｉｕｍｓａｌｔ（以下、ＷＳＴ−１という）、２−（４−Ｉｏｄｏｐｈｅｎｙｌ）−３−（２，４−ｄｉｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ）−５−（２，４−ｄｉｓｕｌｆｏｐｈｅｎｙｌ）−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ，ｍｏｎｏｓｏｄｉｕｍｓａｌｔ等が好適に用いられる。テトラゾリウム塩はＬＤＨ活性試験紙用発色液中の最終濃度が０．０５〜２０ｍｇ／ｍＬとなるように添加することが望ましい。
【００２９】
ＰＭＳ誘導体は１−Ｍｅｔｈｏｘｙ−５−ｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎａｚｉｎｉｕｍｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆａｔｅ（以下、１−ＭｅｔｈｏｘｙＰＭＳという）が特に好適に用いられる。ＰＭＳ誘導体はＬＤＨ活性試験紙用発色液中の最終濃度が１．０〜１００ｍｇ／ｍＬとなるように添加することが望ましい。
また、吸水性基材には通常の濾紙、書道用吸い取り紙、高分子吸収体、不織布などが用いられる。
【００３０】
試験紙は、唾液を浸した後、通常室温で１０秒から１０分間、好ましくは１分から５分間放置後の呈色を色調見本の色と比較して正常、歯肉炎、歯周炎を簡易判定する。
【００３１】
試験紙の呈色は製造に用いるテトラゾリウム塩により異なる。例えば、ＮＢＴを用いる場合は紫色に、ＩＮＴを用いる場合は赤色に、ＷＳＴ−１を用いる場合は黄色に呈色する。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】正常、歯肉炎、歯周炎の数と試験紙呈色の色調との関係を示す図である。
【図２】色見本の例を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明する。
【実施例１】
【００３４】
４０ｍｇ／ｍＬ乳酸リチウムおよび１０ｍｇ／ｍＬウシ血清アルブミンを含む１２ｍｇ／ｍＬトリス塩酸緩衝液（ｐＨ９．０、２５℃）を調製した（以下、緩衝液という）。ＮＢＴを５．０ｍｇ／ｍＬとなるように蒸留水に添加して熱水中で加温した後、超音波処理により完全に溶解した（以下、ＮＢＴ溶液という）。ＮＡＤ（リチウム塩）（Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅａｄｅｎｉｎｅｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ，Ｌｉｔｈｉｕｍｓａｌｔ；Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）を３．３４７ｍｇ／ｍＬとなるように緩衝液に溶解した（以下、ＮＡＤ溶液という）。ジアホラーゼ（Ｄｉａｐｈｏｒａｓｅ；オリエンタル酵母社製）を５００Ｕ／ｍＬとなるように蒸留水に懸濁したのち、１２，０００ｒｐｍ×５分間の遠心分離により得られた上清をジアホラーゼ溶液とした。緩衝液、ＮＢＴ溶液、ＮＡＤ溶液およびジアホラーゼ溶液をそれぞれ４：４：１：１（ｍｌ）の割合で混合し、再度１２，０００ｒｐｍ×５分間の遠心分離を行い、得られた上清をＬＤＨ活性試験紙用発色液とした。以上の溶液はすべて褐色瓶中で調製した。得られた発色液を吸い取り紙（墨運堂社製、４０ｍｍ×５ｍｍ）に浸透したのち、遮光下で凍結乾燥して紫発色ＬＤＨ試験紙を得た。
【実施例２】
【００３５】
ＮＢＴの代わりにＩＮＴ（同仁化学研究所製）を使用する以外は実施例１と同様にして赤発色ＬＤＨ試験紙を得た。
【実施例３】
【００３６】
ＮＢＴの代わりにＷＳＴ−１（同仁化学研究所製）を使用する以外は実施例１と同様にして黄発色ＬＤＨ試験紙を得た。
【実施例４】
【００３７】
ジアホラーゼ溶液の代わりに６７ｍｇ／Ｌ１−ＭｅｔｈｏｘｙＰＭＳ（同仁化学研究所製）水溶液を使用する以外は実施例１と同様にして紫発色ＬＤＨ試験紙を得た。
【実施例５】
【００３８】
ジアホラーゼ溶液の代わりに６７ｍｇ／Ｌ１−ＭｅｔｈｏｘｙＰＭＳ水溶液を使用する以外は実施例２と同様にして赤発色ＬＤＨ試験紙を得た。
【実施例６】
【００３９】
ジアホラーゼ溶液の代わりに６７ｍｇ／Ｌ１−ＭｅｔｈｏｘｙＰＭＳ水溶液を使用する以外は実施例３と同様にして黄発色ＬＤＨ試験紙を得た。
【００４０】
実施例１により得られた試験紙によって簡易判定を行った。
〔唾液検査の方法〕
４６人の成人被験者に水でうがいをさせた後、１分間後に安静時唾液を約１００μＬ、アルミホイル上に吐出させた。試験紙を唾液に浸した後に遮光し、１分間後の色の濃さを１０種類の濃度の色見本の中で最も近いものから選んだ。なお、色の濃さは１０が最も濃く、１が最も薄いものとした。
【００４１】
〔歯周組織の評価〕
各被験者の全ての歯を対象に、歯周ポケットプローブを用いて、１歯に対して６ヶ所を検査し、プロービング後の出血の有無及び歯周ポケットの深さから、正常、歯肉炎、軽度歯周炎、中度歯周炎及び重度歯周炎を評価し、試験紙呈色の色調と正常、歯肉炎、軽度歯周炎、中度歯周炎及び重度歯周炎の関係を求め、図１に示される関係図を得た。
【００４２】
図１において、正常者の最大数の色調と歯肉炎患者の最大数の色調との間の中間の色調を第１境界値Ａとし、歯肉炎患者の最大数の色調と軽度歯周炎患者の最大数の色調との間の中間の色調を第２境界値Ｂとし、図２に示される色見本を作成し、試験紙と色見本の組合せを簡易判定キットとした。
【００４３】
〔簡易判定〕
本例の簡易判定キットを用いると、正常、歯肉炎、歯周炎の簡易判定が可能であった。また、簡易判定を行った患者、あるいは歯石の除去を行った患者に、ブラッシングを指導してプラークコントロールを行い、２週間の経過後、再度試験紙を用いて簡易判定を行ったところ、病状の改善が見られること、あるいは病状が進行していることを簡易判定することができた。
【図１】
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【図２】
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