(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＩＬ−６の部位ＩＩへ特異的に結合することのできる単離された抗体またはその抗原結合断片であって、
ａ）配列番号２３のアミノ酸１〜１２１に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶＨドメイン配列であって、配列番号４に示すＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号５に示すＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号６に示すＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨドメイン配列、ならびに
ｂ）配列番号２２のアミノ酸１〜１１１に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶＬドメイン配列であって、配列番号７に示すＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号８に示すＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号９に示すＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬドメイン配列
を含む単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項２】
前記抗体がＩｇＧ２抗体である、請求項１に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項３】
前記抗体が、配列番号２２および配列番号２３のうちの少なくとも１つを含む、請求項２に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項４】
前記抗体または抗原結合断片が、ＩＬ−６へ２４０ｐＭ以下のＫＤで結合することができ、かつ７０℃以上のＴｍを有する、請求項１に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項５】
前記抗体または抗原結合断片が、ＩＬ−６へ２４０ｐＭ以下のＫＤで結合することができ、かつ８０℃以上のＴｍを有する、請求項１に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項６】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＩＬ−６のＲ２４、Ｋ２７、Ｙ３１、Ｄ３４、Ｓ１１８、またはＶ１２１のうちの少なくとも１つへ結合する、請求項１に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項７】
（ａ）表面プラズモン共鳴によって測定されるように２４０ｐＭ以下のＫＤでヒトＩＬ−６から解離することができ、かつ
（ｂ）２５５ｐＭ以下のＩＣ５０でインビトロＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ−６アッセイにおけるＩＬ−６活性を中和することができる、
請求項１に記載の単離された抗体、またはその抗原結合断片。
【請求項８】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ｐＨ５．５において２ｎＭ以上の一価のＫｄを有する、請求項１に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９】
配列番号２３が、Ｈ３１１Ａ、Ｈ３１１Ｅ、Ｈ３１１Ｎ、Ｄ３１３Ｔ、Ｉ２５４Ａ、Ｉ２５４Ｒ、およびＨ４３６Ａからなる群から選択される１つ以上の突然変異を有する、請求項３に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１０】
野生型Ｆｃドメインを有する対応する抗体と比較して減少したＦｃＲｎ結合を呈する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片を含む組成物。
【請求項１２】
ＩＬ−６関連疾患の治療における使用のための、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
硝子体における高水準のＩＬ−６を特徴とする眼疾患の治療における使用のための、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１４】
糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病網膜症、ぶどう膜炎、ドライアイ症候群、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、増殖糖尿病網膜症（ＰＤＲ）、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、角膜移植、角膜剥離、または眼に対する物理的損傷の治療における使用のための、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記治療がヒトのためのものである、請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
ａ）配列番号２２のアミノ酸１〜１１１に示されるアミノ酸配列、および
ｂ）配列番号２３のアミノ酸１〜１２１に示されるアミノ酸配列
をコードする核酸配列を含むベクター。
【請求項１７】
ａ）配列番号２３のアミノ酸１〜１２１に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶＨドメイン配列であって、配列番号４に示すＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号５に示すＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号６に示すＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨドメイン配列、ならびに
ｂ）配列番号２２のアミノ酸１〜１１１に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶＬドメイン配列であって、配列番号７に示すＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号８に示すＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号９に示すＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬドメイン配列
を含む抗体または抗原結合断片をコードする核酸配列を含む、ベクター。
【請求項１８】
請求項１６または請求項１７のいずれか一項に記載のベクターを発現することのできる、インビトロ宿主細胞。
【請求項１９】
ＩＬ−６関連疾患の治療のための医薬の製造における、治療有効量の請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片の使用。
【請求項２０】
前記ＩＬ−６関連疾患が、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病網膜症、ぶどう膜炎、ドライアイ症候群、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、増殖糖尿病網膜症（ＰＤＲ）、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、角膜移植、角膜剥離、または眼に対する物理的損傷から選択される、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
ＩＬ−６関連疾患の治療のための医薬の製造における、治療有効量の請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項２２】
前記ＩＬ−６関連疾患が、硝子体における高水準のＩＬ−６を特徴とする、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
前記ＩＬ−６関連疾患が、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病網膜症、ぶどう膜炎、ドライアイ症候群、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、増殖糖尿病網膜症（ＰＤＲ）、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、角膜移植、角膜剥離、または眼に対する物理的損傷から選択される、請求項２２に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１２年１１月８日出願の米国特許出願第６１／７２３，９７２号および２０１３年６月６日出願の米国特許出願第６１／８３１，６９９号に対する優先権を請求する。先の出願の各々の全内容はこれにより、参照により本明細書中に組み込まれる。
本発明の分野は、ＩＬ−６に関する。より詳細には、分野は、ＩＬ−６の修飾物質および眼に関するこのような疾患の疾患を治療する上での修飾物質の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＩＬ−６とは、炎症、造血、血管新生、細胞分化、およびニューロン生存における役割が報告されている多面的サイトカインである。
【発明の概要】
【０００３】
本発明は、ＩＬ−６の部位ＩＩに対する結合特異性を含む或る特徴を有する、ＩＬ−６抗体および断片ならびにこの抗体および断片の誘導体、ならびにこの抗体、断片、および誘導体の使用方法に関する。したがって、本発明は、ＩＬ−６の部位ＩＩへ特異的に結合できる抗体、その断片または誘導体に関する。いくつかの実施形態において、この抗体、断片、または誘導体は、２４０ｐＭ以下のＫＤでＩＬ−６へ結合できる。いくつかの実施形態において、この抗体、断片、または誘導体は、Ｔｍが７０℃以上である。いくつかの実施形態において、この抗体、断片、または誘導体は、２４０ｐＭ以下のＫＤでＩＬ−６へ結合できかつＴｍが７０℃以上である。この抗体もしくは断片またはこれらの誘導体は、いくつかの場合、ヒトＩＬ−６のＲ２４、Ｋ２７、Ｙ３１、Ｄ３４、Ｓ１１８、またはＶ１２１のうちの少なくとも１つへ結合できる。いくつかの場合、この抗体もしくは断片またはこれらの誘導体は、ヒトＩＬ−６のＲ２４、Ｋ２７、Ｙ３１、Ｄ３４、Ｓ１１８、およびＶ１２１へ結合できる。複数の実施形態において、この抗体もしくは断片またはこれらの誘導体は、ヒトＩＬ−６のＲ２４、Ｋ２７、Ｙ３１、Ｄ３４、Ｓ１１８、およびＶ１２１のうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つへ結合できる。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
ヒトＩＬ−６の部位ＩＩへ特異的に結合することのできる単離された抗体またはその抗原結合断片。
（項目２）
（ａ）配列番号４に示すＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号５に示すＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号６に示すＶＨ  ＣＤ３、ならびに
（ｂ）配列番号７に示すＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号８に示すＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号９に示すＶＬ  ＣＤＲ３を含むこと
を含み、抗体またはその抗原結合部位は、ヒトＩＬ−６へ特異的に結合することができる（例えば、ヒトＩＬ−６の部位ＩＩへ特異的に結合することができる）、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
（項目３）
前記抗体または抗原結合断片が、ＩＬ−６へ２４０ｐＭ以下のＫＤで結合することができ、かつ７０℃以上のＴｍを有する、項目１または項目２に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
（項目４）
前記抗体または抗原結合断片が、ＩＬ−６へ２４０ｐＭ以下のＫＤで結合することができ、かつ８０℃以上のＴｍを有する、項目１または項目２に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目５）
前記抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＩＬ−６のＲ２４、Ｋ２７、Ｙ３１、Ｄ３４、Ｓ１１８、またはＶ１２１のうちの少なくとも１つへ結合する、項目１、項目２、項目３、または項目４に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目６）
前記抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＩＬ−６のＲ２４、ｋ２７、Ｙ３１、Ｄ３４、Ｓ１１８、およびＶ１２１へ結合する、項目１、項目２、項目３、または項目４に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目７）
（ａ）表面プラズモン共鳴によって測定されるように２４０ｐＭ以下のＫＤでヒトＩＬ−６から解離することができ、かつ
（ｂ）２５５ｐＭ以下のＩＣ５０でインビトロＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ−６アッセイにおけるＩＬ−６活性を中和することができる、単離されたＩＬ−６抗体、またはその抗原結合断片。
（項目８）
配列番号１および配列番号２を含む抗体もしくはその抗原結合断片または配列番号３および配列番号２を含む抗体もしくは抗原結合断片によってヒトＩＬ−６への結合を競合的に阻害することのできる、単離されたＩＬ−６抗体またはその抗原結合断片。
（項目９）
（ａ）配列番号１２の前記アミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、および配列番号１１の前記アミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む、ヒトＩＬ−６の部位ＩＩへ特異的に結合することのできる単離された抗体またはその断片。
（項目１０）
前記抗体またはその抗原結合断片が、ｐＨ５．５において２ｎＭ以上の一価のＫｄを有する、項目１〜９のいずれか一項に記載の単離されたＩＬ−６抗体またはその抗原結合断片。
（項目１１）
前記抗体がＩｇＧ２抗体である、項目１〜１０のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目１２）
前記抗体または抗原結合断片が、基準抗体またはその断片と比較して変化したＦｃＲｎ結合を有する、項目１〜１１のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目１３）
前記ＦｃＲｎ結合が基準抗体と比較して減少している、項目１２に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目１４）
前記抗体または抗原結合断片のＦｃドメインが基準抗体と比較して変化した、項目１２または１３に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目１５）
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号２３のＨ３１１、Ｄ３１３、Ｉ２５４、またはＨ４３６のうちの１つ以上において突然変異を含む、項目１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目１６）
前記抗体が、Ｈ３１１Ａ、Ｈ３１１Ｅ、Ｈ３１１ＮおよびＤ３１３Ｔ、Ｉ２５４Ａ、Ｉ２５４Ｒ、ならびにＨ４３６Ａからなる群から選択される１つ以上の突然変異を含む、項目１５に記載の抗体またはその抗原結合断片。
（項目１７）
配列番号２５を含む、単離されたモノクローナル抗体。
（項目１８）
ヒトＩＬ−６の部位ＩＩへ特異的に結合しかつ野生型Ｆｃドメインを有する対応する抗体と比較して減少したＦｃＲｎ結合を呈する、単離されたＩＬ−６抗体またはその抗原結合断片。
（項目１９）
ＩＬ−６関連疾患を有する対象（例えば、ヒト）の治療における使用のための、項目１〜１８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目２０）
前記疾患が、前記硝子体における高水準のＩＬ−６を特徴とする眼疾患である、項目１９に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目２１）
糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病網膜症、ぶどう膜炎、ドライアイ症候群、ぶどう膜炎、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、増殖糖尿病網膜症（ＰＤＲ）、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、角膜移植、角膜剥離、または眼に対する物理的損傷を有する対象（例えば、ヒト）の治療における使用のための、項目１９または２０に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目２２）
ＤＭＥを有する対象（例えば、ヒト）の治療における使用のための、項目２１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目２３）
項目１〜１８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片を含む組成物。
（項目２４）
前記抗体がヒトモノクローナル抗体である、項目１または項目２に記載の抗体を含む組成物。
（項目２５）
ＩＬ−６関連疾患の治療における使用のための、項目２３または２４に記載の組成物。
（項目２６）
硝子体における高水準のＩＬ−６を特徴とする眼疾患の治療における使用のための、項目２５に記載の組成物。
（項目２７）
糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病網膜症、ぶどう膜炎、ドライアイ症候群、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、増殖糖尿病網膜症（ＰＤＲ）、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、角膜移植、角膜剥離、または眼に対する物理的損傷の治療における使用のための、項目２３または２４に記載の組成物。
（項目２８）
対象へ、治療有効量の項目１〜１８のいずれか一項に記載のＩＬ−６抗体またはその断片を投与することを含む、ＩＬ−６関連疾患の治療方法。
（項目２９）
前記ＩＬ−６関連疾患が、前記硝子体における高水準のＩＬ−６を特徴とする眼疾患である、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
前記ＩＬ−６関連疾患が、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病網膜症、ドライアイ症候群、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、増殖糖尿病網膜症（ＰＤＲ）、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、角膜移植、角膜剥離、または眼に対する物理的損傷である、項目２８または２９に記載の方法。
（項目３１）
前記抗体または抗原結合断片が、前記対象の眼の前記硝子体へ送達される、項目２９に記載の方法。
（項目３２）
前記ＩＬ−６関連疾患が糖尿病黄斑浮腫であり、かつ前記抗体またはその断片が前記対象の眼の前記硝子体へ送達される、項目２９に記載の方法。
（項目３３）
配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、または配列番号９をコードする配列を含む、ベクター。
（項目３４）
配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、または配列番号９のうちの１つ以上を発現することのできる、細胞。
（項目３５）
対象におけるＩＬ−６を阻害する全身作用の低減方法であって、対象へ、ＩＬ−６の活性を阻害することができかつ野生型Ｆｃドメインを有する対応する抗体またはその断片と比較して低下したＦｃＲｎ結合活性を有する抗体またはその断片を投与することを含む、方法。
（項目３６）
前記ＫＤが、５〜６のｐＨにおいて１μＭ超である、項目３５に記載の方法。
【０００４】
一態様において本明細書で提供されるのは、ヒトＩＬ−６の部位ＩＩへ特異的に結合できる抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）である。
【０００５】
複数の実施形態において、この抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）は、２００ｐＭ以下のＫＤでＩＬ−６へ結合できる。
【０００６】
複数の実施形態において、この抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）は、２００ｐＭ以下のＫＤでＩＬ−６へ結合でき、および／またはＴｍが７０℃以上である。
【０００７】
複数の実施形態において、この抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）は、２００ｐＭ以下のＫＤでＩＬ−６へ結合でき、および／またはＴｍが８０℃以上である。
【０００８】
複数の実施形態において、この抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）は、ヒトＩＬ−６のＲ２４、Ｋ２７、Ｙ３１、Ｄ３４、Ｓ１１８、およびＶ１２１のうちの少なくとも１つへ結合する。複数の実施形態において、この抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）は、ヒトＩＬ−６のＲ２４、Ｋ２７、Ｙ３１、Ｄ３４、Ｓ１１８、およびＶ１２１のうちの少なくとも２つへ結合する。複数の実施形態において、この抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）は、ヒトＩＬ−６のＲ２４、Ｋ２７、Ｙ３１、Ｄ３４、Ｓ１１８、およびＶ１２１のうちの少なくとも３つへ結合する。複数の実施形態において、この抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）は、ヒトＩＬ−６のＲ２４、Ｋ２７、Ｙ３１、Ｄ３４、Ｓ１１８、およびＶ１２１のうちの少なくとも４つへ結合する。複数の実施形態において、この抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）は、ヒトＩＬ−６のＲ２４、Ｋ２７、Ｙ３１、Ｄ３４、Ｓ１１８、およびＶ１２１のうちの少なくとも５つへ結合する。複数の実施形態において、この抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）は、ヒトＩＬ−６のＲ２４、Ｋ２７、Ｙ３１、Ｄ３４、Ｓ１１８、およびＶ１２１へ結合する。
【０００９】
一態様において本明細書で提供されるのは、（ａ）配列番号４に示すＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号５に示すＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号６に示すＶＨ  ＣＤＲ３、ならびに場合により（ｂ）配列番号７に示すＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号８に示すＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号９に示すＶＬ  ＣＤＲ３を含む、抗体（例えば、単離された抗体、例えば、単離されたモノクローナル抗体）またはその断片（例えば、その抗原結合断片）であり、この中で、この抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）は、ヒトＩＬ−６へ特異的に結合できる。複数の実施形態において、この抗体またはその断片は、配列番号４、配列番号５および配列番号６にそれぞれ示すＣＤＲ配列と同一であるあるいは１、２、３、４、もしくは５以下のアミノ酸だけこのＣＤＲ配列とは集約的に異なる、重鎖ＣＤＲであるＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含む。複数の実施形態において、この抗体またはその断片は、配列番号７、配列番号８、および配列番号９にそれぞれ示す、ＣＤＲ配列と同一であるあるいは１、２、３、４、もしくは５以下のアミノ酸だけこのＣＤＲ配列とは集約的に異なる、軽鎖ＣＤＲであるＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【００１０】
一態様において本明細書で提供されるのは、２４０ｐＭ以下のＫＤでヒトＩＬ−６から解離できる（例えば、表面プラズモン共鳴によって測定されるとおり）ＩＬ−６抗体（例えば、単離されたＩＬ−６抗体）またはその断片（例えば、その抗原結合断片）である。複数の実施形態において、この抗体は、例えば、インビトロでのＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ−６アッセイにおいて測定されるとおり、２５５ｐＭ以下のＩＣ５０でＩＬ−６活性を中和できる。
【００１１】
一態様において本明細書で提供されるのは、配列番号１および配列番号２を含む抗体またはその断片（例えば、抗原結合断片）あるいは配列番号３および配列番号２を含む抗体またはその断片（例えば、抗原結合断片）によってヒトＩＬ−６への結合を競合的に阻害できるＩＬ−６抗体（例えば、単離されたＩＬ−６抗体）またはその断片（例えば、抗原結合断片）である。
【００１２】
複数の実施形態において、この抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）は、一価のＫｄがｐＨ５．５で２ｎＭ以上である。
【００１３】
複数の実施形態において、この抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）は、ＩｇＧ２抗体である。
【００１４】
複数の実施形態において、この抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）は、基準抗体と比較してＦｃＲｎ結合が変化している。複数の実施形態において、このＦｃＲｎ結合は基準抗体と比較して減少している。複数の実施形態において、この抗体または断片のＦｃドメインは、基準抗体と比較して変化している。
【００１５】
一態様において本明細書で提供されるのは、Ｆｃドメインが修飾されかつ、野生型Ｆｃドメインを有する対応する抗体と比較してＦｃＲｎ結合が減少した、ＩＬ−６抗体（ＩＬ−６へ、例えば、ヒトＩＬ−６の部位ＩＩへ結合できる抗体）またはその断片である。
【００１６】
複数の実施形態において、この抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）は、配列番号２３のＨ３１１、Ｉ２５４、およびＨ４３６のうちの１つ以上における突然変異を含む。
【００１７】
複数の実施形態において、この抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）は、配列番号２３のＨ３１１、Ｄ３１３、Ｉ２５４、およびＨ４３６のうちの２つ以上における突然変異を含む。
【００１８】
複数の実施形態において、この抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）は、配列番号２３のＨ３１１、Ｄ３１３、Ｉ２５４、およびＨ４３６のうちの３つ以上における突然変異を含む。
【００１９】
複数の実施形態において、この抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）は、配列番号２３のＨ３１１、Ｄ３１３、Ｉ２５４、およびＨ４３６の各々における突然変異を含む。
【００２０】
複数の実施形態において、この抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）は、Ｈ３１１Ａ、Ｈ３１１Ｅ、Ｈ３１１Ｎ、Ｄ３１３Ｔ、Ｉ２５４Ａ、Ｉ２５４Ｒ、およびＨ４３５Ａからなる群から選択される１つ以上の突然変異（例えば、１、２、３、または４つの突然変異）を含む。
【００２１】
複数の実施形態において、この抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）は単離されている。
【００２２】
複数の実施形態において、この抗体は、モノクローナル抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）である。複数の実施形態において、この抗体は、ヒトモノクローナル抗体である。
【００２３】
複数の実施形態において、この抗体は、単離されたモノクローナル抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）である。
【００２４】
複数の実施形態において、この抗体（例えば、この単離されたモノクローナル抗体）は、配列番号２３を含む。
【００２５】
また本明細書で提供されるのは、抗体またはその断片（例えば、抗原結合断片）（例えば、本明細書で説明されるようなＩＬ−６抗体またはその断片）、あるいはこのような抗体またはその断片を含み、ＩＬ−６関連疾患の治療における使用のための（例えば、ＩＬ−６関連疾患を有する対象、例えばヒト対象の治療における使用のための）組成物である。複数の実施形態において、この疾患は、硝子体における高水準のＩＬ−６を特徴とする眼疾患である。複数の実施形態において、この疾患は、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病網膜症、ぶどう膜炎、ドライアイ症、ぶどう膜炎、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、増殖糖尿病網膜症（ＰＤＲ）、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、角膜移植、角膜剥離、または眼に対する物理的損傷である。複数の実施形態において、この疾患はＤＭＥである。複数の実施形態において、この疾患はドライアイ症である。複数の実施形態において、この疾患はドライアイ症候群である。複数の実施形態において、この疾患はぶどう膜炎である。複数の実施形態において、この疾患はＡＭＤである。複数の実施形態において、この疾患はＰＤＲである。複数の実施形態において、この疾患はＰＤＲである。複数の実施形態において、この疾患は、角膜移植、角膜剥離、または眼に対する物理的損傷である。複数の実施形態において、この抗体またはその断片（例えば、抗原結合断片）は、眼の硝子体への送達に適している。複数の実施形態において、この抗体またはその断片（例えば、抗原結合断片）は、眼の硝子体へ送達される。
【００２６】
また本明細書で提供されるのは、ＩＬ−６関連疾患の治療方法であり、この方法は、対象へ、ＩＬ−６抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）、例えば、本明細書に説明されるＩＬ−６抗体またはその断片を投与することを含む。複数の実施形態において、このＩＬ−６抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）は、治療的有効量で投与される。複数の実施形態において、このＩＬ−６関連疾患は、硝子体における高水準のＩＬ−６を特徴とする眼疾患である。複数の実施形態において、このＩＬ−６関連疾患は、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病網膜症、ぶどう膜炎、ドライアイ症候群、ドライアイ症、ぶどう膜炎、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、増殖糖尿病網膜症（ＰＤＲ）、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、角膜移植、角膜剥離、または眼に対する物理的損傷である。複数の実施形態において、この抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）は、眼の硝子体への送達に適している。複数の実施形態において、この抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）は、対象の眼の硝子体へ送達される。複数の実施形態において、このＩＬ−６関連疾患は糖尿病黄斑浮腫であり、この抗体またはその断片が対象の眼の硝子体へ送達される。
【００２７】
別の態様において本明細書で提供されるのは、本明細書に説明されるＩＬ−６抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）をコードする配列を含むベクターである。複数の実施形態において、このベクターは、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、または配列番号９をコードする配列を含む。
【００２８】
別の態様において本明細書で提供されるのは、本明細書に説明されるＩＬ−６抗体またはその断片（例えば、その抗原結合断片）の配列を発現できる細胞である。複数の実施形態において、この細胞は、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、または配列番号９のうちの１つ以上を発現できる。
【００２９】
さらに別の態様において、本発明は、対象におけるＩＬ−６を阻害する全身作用の低下方法に関するものであり、この方法は、この対象へ、ＩＬ−６の活性を阻害できかつ野生型Ｆｃドメインを有する対応する抗体またはその断片と比較して、Ｆｃ活性の低下した抗体またはその断片を投与することを含む。いくつかの場合、対象におけるＩＬ−６を阻害する全身作用の低下方法には、この対象へ、例えばｐＨ５．５のような低いｐＨで、ＦｃＲｎ結合が１μＭを超えるＩＬ−６アンタゴニストを投与することを含む。
【００３０】
本明細書で使用する場合、用語「抗体」は免疫グロブリンと同義であり、当該技術分野で一般に公知であるものとして理解されるべきである。この抗体という用語は、この抗体の何らかの特定の製造方法によって限定されることはない。例えば、この抗体という用語にはとりわけ、組換え抗体、モノクローナル抗体、およびポリクローナル抗体を含む。本明細書で使用する場合、抗体とは四量体であり、別段の開示がない限り、各々は、２つの同一対のポリペプチド鎖から構成され、各対は１つの軽鎖および１つの重鎖を有する。各鎖のアミノ末端は、抗原認識において主要な役割を担う約１００〜１２０またはそれより多数のアミノ酸からなる可変部を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、抗体エフェクター機能における主要な役割を有する定常部を含む。ヒト軽鎖のクラスはκ軽鎖およびλ軽鎖と呼ばれる。重鎖クラスは、μ、δ、γ、α、またはεであり、抗体のアイソタイプを規定する。抗体のアイソタイプはそれぞれ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥである。軽鎖および重鎖内で、可変部および定常部は約１２個以上のアミノ酸からなる「Ｊ」部によって連結し、この重鎖はまた、約３個以上のアミノ酸からなる「Ｄ」部を含む。
【００３１】
各重鎖／軽鎖対の可変部（ＶＨおよびＶＬ）はそれぞれ、抗原結合部位を形成する。したがって、無処置のＩｇＧ抗体は例えば、２個の結合部位を有する。二機能性抗体または二重特異性抗体においてを除き、これら２個の結合部位は同じである。
【００３２】
抗体の重鎖および軽鎖の可変部は、相補性決定領域またはＣＤＲとも呼ばれる３個の超可変部によって連結される比較的保存された枠組み構造領域（ＦＲ）からなる同じ一般構造を呈する。用語「可変」とは、可変ドメインの或る部分の配列が抗体間で広範に異なりかつ、この抗体の特定の抗原に対する各特定の抗体の結合および特異性に関与するという事実を指す。可変性は主としてＣＤＲに存在し、このＣＤＲは、より高度に保存された枠組み構造領域（ＦＲ）によって分離される。各ドメインに対するアミノ酸の割当ては、当該技術分野で公知の方法を説明している免疫学的関心対象のタンパク質に関するカバット配列（Ｋａｂａｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ）（米国国立衛生研究所、米国メリーランド州ベセスダ非法人地域（１９８７年および１９９１年））の定義、またはＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １９６：９０１〜９１７（１９８７年）、Ｃｈｏｔｈｉａら，Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８〜８８３（１９８９年）の定義に従って行われる。
【００３３】
「野生型」は、抗原結合分子のアミノ酸を変更するために突然変異誘発のような或る種の操作、組換え方法の使用などによって得られる対立遺伝子もしくは多型、またはバリアントもしくは誘導体と比較して、集団において見られる最も優勢な対立遺伝子もしくは種を、または操作していない動物から得られる抗体を指すことができる。
【００３４】
用語「抗体断片」とは、無処置のもしくは完全長の鎖もしくは抗体の一部分を、一般的には、標的結合部または可変部を指す。抗体断片の例には、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントおよびＦｖフラグメントを含むが、これらに限定されない。「機能的断片」または「抗ＩＬ−６部位ＩＩ抗体の類似体」とは、受容体へ結合するＩＬ−６の能力を防止もしくは実質的に低減でき、ｇｐ１３０へ結合するＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ複合体の能力を低減でき、またはｇｐ１３０へ結合するもしくはシグナル伝達を開始するリガンドの能力を低減できる断片である。本明細書で使用する場合、機能的断片とは一般的に、「抗体断片」と同義でありかつ抗体に関して、受容体へ結合するＩＬ−６の能力を防止もしくは実質的に低減でき、ｇｐ１３０へ結合しもしくはシグナル伝達を開始するＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ複合体の能力を低減できる、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２などのようなフラグメントを指すことができる。
【００３５】
抗体の「誘導体」とは、ＩＬ−６の部位ＩＩへ特異的に結合できかつＩＬ−６部位ＩＩ抗体と配列を共有する、例えば、ヒトＩＬ−６の部位ＩＩを特異的に結合できる抗体の少なくとも１個のＣＤＲを共有する、ポリペプチドである。
【００３６】
「競合する」とは、第一の抗体またはその断片が結合について第二の抗体またはその断片と競合でき、それにより、第二の抗体の非存在下での第一の抗体の結合と比較して、第一の抗体とそのエピトープとの結合が第二の抗体の存在下で検出可能に減少していることを意味する。いくつかの場合、この用語は、第一の抗体の存在下で検出可能に減少した、第二の抗体のそのエピトープへの結合も指すことができる。このような競合の機序は、非限定例において、立体障害、コンホメーションの変化、共通エピトープへの結合を介することができる。
【００３７】
用語「％配列同一性」は核酸配列の文脈において、最大対応について配列した場合に同じである２つの配列における残基を意味する。配列同一性の比較の長さは、少なくとも約９個のヌクレオチド、例えば、少なくとも約１８個のヌクレオチド、少なくとも約２４個のヌクレオチド、少なくとも約２８個のヌクレオチド、少なくとも約３２個のヌクレオチド、少なくとも約３６個のヌクレオチド、または少なくとも約４８個以上のヌクレオチドにわたることがある。当該技術分野で公知のアルゴリズムを使用して、ヌクレオチド配列同一性を測定することができる。例えば、ＦＡＳＴＡ、ＧａｐまたはＢｅｓｔｆｉｔ（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅバージョン１０．０，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ）社，米国ウィスコンシン州マディソン市）を用いてポリヌクレオチド配列を比較することができる。ＦＡＳＴＡは例えばＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３のプログラムを含み、問い合わせ配列と検索配列の間の最良重複部の整列および％配列同一性を提供する（参照により本明細書に組み込まれるＰｅａｒｓｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  １８３：６３〜９８（１９９０）、Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １３２：１８５〜２１９（２０００）、Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ２６６：２２７〜２５８（１９９６）、Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２７６：７１〜８４（１９９８））。特定のプログラムまたはアルゴリズムについての省略時パラメータが典型的には使用される。例えば、核酸配列間の％配列同一性は、ＦＡＳＴＡをその省略時パラメータ（ワードサイズ６、および点数化マトリックスのためのＮＯＰＡＭ因子）とともに用いて、またはＧＣＧバージョン６．１において提供されるようなＧａｐをその省略時パラメータとともに用いて決定することができ、これらは参照により本明細書に組み込まれる。
【００３８】
用語「％配列同一性」はアミノ酸配列の文脈において、最大対応について整列した場合に同じである２つの配列における残基を意味する。配列同一性比較の長さは、少なくとも約５個のアミノ酸残基、例えば少なくとも約２０個のアミノ酸残基、少なくとも約３０個のアミノ酸残基、少なくとも約５０個のアミノ酸残基、少なくとも約１００個のアミノ酸残基、少なくとも約１５０個のアミノ酸残基、または少なくとも約２００個以上のアミノ酸残基にわたることがある。ポリペプチドについての配列同一性は典型的には、配列分析ソフトウェアを用いて測定される。％配列同一性の決定についてのアルゴリズムは当該技術分野で公知である。例えば、アミノ酸配列は、ＦＡＳＴＡ、ＧａｐまたはＢｅｓｔｆｉｔ（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅバージョン１０．０，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ）社，米国ウィスコンシン州マディソン市）を用いて比較することができる。タンパク質分析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む種々の置換、欠失および他の修飾へ割り当てられた類似性の基準を用いて配列を符合させる。例えば、ＧＣＧは、「Ｇａｐ」および「Ｂｅｓｔｆｉｔ」のようなプログラムを含有し、このプログラム指定の省略時パラメータとともにこのプログラムを使用して、異なる種の生物由来の相同的ポリペプチドのような密接に関連するポリペプチド間の、または野生型タンパク質とその類似体の間の配列相同性または配列同一性を決定することができる。例えば、ＧＣＧバージョン６．１（ウィスコンシン大学，米国ウィスコンシン州マディソン市）を参照されたい。ポリペプチド配列は、省略時パラメータまたは推奨パラメータを用いるＦＡＳＴＡを用いて比較することもでき、ＧＣＧバージョン６．１を参照されたい。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）は、問い合わせ配列と検索配列の間の最良重複部の整列および％配列同一性を提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  １８３：６３〜９８（１９９０）、Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １３２：１８５〜２１９（２０００））。１つの配列を、異なる生物由来の多数の配列を含有するデータベースと比較する場合に使用できる別のアルゴリズムは、コンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、例えばｂｌａｓｔｐまたはｔｂｌａｓｔｎであり、このプログラムとともに供給されるような省略時パラメータを用いる。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２１５：４０３〜４１０（１９９０）、Ａｌｔｓｃｈｕｌら，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２５：３３８９〜３４０２（１９９７）を参照されたい。
【００３９】
タンパク質またはポリペプチドは、試料の少なくとも約６０〜７５％が単一の種のポリペプチドを呈する場合、「実質的に純粋」、「実質的に均質」であり、または「実質的に精製され」ている。このポリペプチドまたはタンパク質は、単量体または多量体であることがある。実質的に純粋なポリペプチドまたはタンパク質は、約５０％、６０％、７０％。８０％、９０％、９５％、９８％、または９９％純粋を含むことができ、例えば、実質的に純粋なポリペプチドまたはタンパク質は、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または９９％純粋である。タンパク質の純度または均質性は、タンパク質試料のポリアクリルアミドゲル電気泳動に続くこのタンパク質またはポリペプチドと関連する１つ以上のバンドを可視化すること（例えば、ゲルを染色する際）、サイズ排除ＨＰＬＣ、陽イオン交換ＨＰＬＣ、ＳＤＳ中での還元型キャピラリー電気泳動、ペプチドマッピング、またはグリカンマッピングのような何らかの適切な手段によって評価することができる。より高い分解能には、例えば、当該技術分野で公知の方法、または他の精製手段を用いて到達することができる。
【００４０】
用語「実質的な類似性」は核酸またはその断片を指す場合、別の核酸（またはその相補鎖）を用いた適切なヌクレオチドの挿入物または欠失物と最適に整列した場合、ヌクレオチド塩基の少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、および少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％または９９％におけるヌクレオチド配列同一性、例えば、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴまたはＧａｐのような配列同一性に関する何らかの公知のアルゴリズムによって測定される場合の８５％、９０％、９５％、９６％、９８％、または９９％の配列同一性があることを意味する。
【００４１】
ポリペプチドへ適用される場合、用語「実質的な同一性」または「実質的な類似性」は、ＧＡＰプログラムまたはＢＥＳＴＦＩＴプログラムとともに供給される省略時ギャップ重みを用いてこれらのプログラムによってのように最適に整列した場合に、２つのアミノ酸配列が少なくとも約７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性、例えば７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を共有することを意味する。或る実施形態において、同一ではない残基位置は、保存的アミノ酸置換が異なる。
【００４２】
「治療的有効量」とは、治療中の疾患の少なくとも１つの徴候もしくは症状を寛解させまたはＩＬ−６関連疾患を治療するのに有用な別の治療法（例えば、別の治療薬）の予防的効果およびまたは治療的効果を高めもしくは改善する、投与中の治療薬の量を指す。この治療的有効量が、限定された量の時間にわたる複数回用量でまたは長期間の治療として投与されることがあることは理解される。
【００４３】
「治療する」、「治療すること」および「治療」は、徴候または症状または疾患を寛解させる方法を指す。
【００４４】
本明細書で使用する場合、用語「疾患」には疾患および障害を含む。
【００４５】
本明細書で参照される各特許文書および科学文献の全開示、ならびにこれらにより引用される特許文書および科学文献は、すべての目的のために参照により本明細書に明白に組み込まれる。
【００４６】
本発明の追加的な特徴および利点は、以下により詳しく説明される。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】図１は、抗ＩＬ−６抗体がラットＣＮＶモデルにおいて投与されたＩＶＴであった実験の結果を示すグラフである。抗ＶＥＧＦ抗体を陽性対照として投与し、陰性対照はビヒクル単独とした。ビヒクル対照に対する抗ＩＬ−６について１５日後でｐ＝０．００５４、および２２日後でｐ＝０．０００５であった。
【図２】図２は、ｇｐ１３０へのＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒの結合を阻害するマウス６４抗体の能力を検査する結合実験の結果を示すグラフである。
【図３Ａ】図３Ａは、過剰量の可溶性ＩＬ−６Ｒαの非存在下におけるＩＬ−６シグナル伝達を遮断する能力について０２０を検査した実験を示すグラフである。実験は、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ−ＩＬ−６細胞において、０．２ｎｇ／ｍＬのＩＬ−６および２μｇ／ｍＬのＩＬ６Ｒαを用いて実施した。
【図３Ｂ】図３Ｂは、過剰量の可溶性ＩＬ−６Ｒαの非存在下存在下におけるＩＬ−６シグナル伝達を遮断する能力について０２０を検査した実験を示すグラフである。実験は、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ−ＩＬ−６細胞において、０．２ｎｇ／ｍＬのＩＬ−６および２μｇ／ｍＬのＩＬ６Ｒαを用いて実施した。
【発明を実施するための形態】
【００４８】
ＩＬ−６は、関節リウマチのような数多くの疾患における役割を担うものとして関与が明らかとなっており、眼疾患を含む数多くの疾患において有意に上方制御されることが報告されている。ＩＬ−６は、シスおよびトランスの両機序を介して作用することができる。シス機序においては、遊離ＩＬ−６は、膜結合型ＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒは、ＩＬ−６ＲαおよびＣＤ１２６とも呼ばれる。）へ結合し、次いでＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ複合体がｇｐ１３０（ＣＤ１３０、オンコスタチンＭ受容体、ＩＬ−６Ｒβ、およびＩＬ−６シグナル伝達物質とも呼ばれる。）と相互作用して、この複合体を含有する細胞におけるシグナル伝達を活性化させると考えられている。トランス機序においては、遊離ＩＬ−６は可溶性ＩＬ−６受容体（ｓＩＬ−６Ｒ）へ結合する。次いで、ＩＬ−６／ｓＩＬ−６Ｒ複合体は、細胞膜に存在するｇｐ１３０へ結合できる。これらの機序間の基本的な差は、ＩＬ−６Ｒを発現するよりも多くの細胞型がｇｐ１３０を発現し、この発現がより限定されている点である。それゆえ、ＩＬ−６シグナル伝達を阻害することが望ましい疾患において、例えば、ＩＬ−６シグナル伝達を広範に阻害することが望ましい疾患において、シスおよびトランスの両ＩＬ−６シグナル伝達を阻害することは有用である。出願人は、ＩＬ−６アンタゴニスト、例えばＩＬ−６によるシスおよびトランスの両シグナル伝達を阻害できる抗ＩＬ−６抗体、断片、および誘導体を操作した。加えて、出願人は、このようなＩＬ−６アンタゴニストを操作して、高い硝子体保持およびより迅速な全身性クリアランスを達成した。
【００４９】
（ＩＬ−６アンタゴニスト（ＩＬ−６ａ）の特徴）
一般に、本明細書で説明されるＩＬ−６アンタゴニスト（ＩＬ−６ａ）は、ＩＬ−６の部位ＩＩ（部位２）へ特異的に結合し、ＩＬ−６関連眼疾患および或る他の疾患の治療に有用である。ＩＬ−６関連眼疾患とは、疾患の望ましくない症状または生物活性がＩＬ−６の発現または存在と関連している眼疾患である。いくつかの実施形態において、このＩＬ−６ａは、遊離型および結合型の両ＩＬ−６に対する高い親和性を有し、生物において比較的安定であり、ＩＬ−６Ｒへ結合したＩＬ−６（本明細書では、ＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ複合体またはＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒという。）のｇｐ１３０への結合を阻害でき、かつ治療効果を有することができる。一般に、このＩＬ−６ａは、抗体でありまたは抗体に由来している。例えば、ＩＬ−６ａは、ＩＬ−６の部位ＩＩへ特異的に結合できかつ、シスおよびトランスの両ＩＬ−６シグナル伝達を強力に遮断する高親和性のヒト化Ｆａｂである。別の実施例において、このＩＬ−６ａは、完全長の抗体、例えば、ＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ２抗体である。
【００５０】
いくつかの実施形態において、このＦａｂはまた、Ｆｃが操作された配列として構成され、もしくは完全長の抗体中にある。いくつかの実施形態において、このＦｃが操作されたＩＬ−６ａ（例えば、Ｆｃが操作されたＦａｂ）は、適切な対照と比較して、例えば、操作されたＦｃを有さない対応する抗体、断片、またはその誘導体と比較して、長い硝子体滞留時間および／またはより迅速な全身性クリアランスを有する。ＩＬ−６ａのこれらおよび他の特徴はさらに本明細書で説明する。
【００５１】
出願人は、ＩＬ−６の部位ＩＩへ選択的に結合してＩＬ−６シグナル伝達の広範な阻害を提供するＩＬ−６アンタゴニストを設計した。なぜならこのような分子は、ＩＬ−６が膜ＩＬ−６ＲまたはｓＩＬ−６Ｒへ結合したかどうかにかかわらず、ＩＬ−６へのｇｐ１３０の結合を阻害できるからである。なお、ＩＬ−６受容体とは反対にリガンド（ＩＬ−６）を標的にすることは、受容体仲介性クリアランスおよびＡＤＣＣ（抗体依存性細胞傷害）による毒性を回避できる。ＩＬ−６は疾患における病理学的役割および保護的役割の両方を担うので、増加したＩＬ−６と関連した疾患を治療するためのＩＬ−６アンタゴニスト（ＩＬ−６ａ）の使用は、１つの容態の或る態様を改善することはできるが、有意な副作用、例えば全身作用も引き起こすことがある。ＩＬ−６経路に関するこの二重性（すなわち、望ましいおよび／または望ましくない効果を有する能力）は、全身性阻害薬を用いてＩＬ−６関連障害を治療することが望ましくないものになる可能性がある。したがって、本明細書で提供される組成物および方法は、少なくとも１つのＩＬ−６活性を阻害するがＩＬ−６の正の活性に望ましくない効果を及ぼさない治療に有用である可能性があり、一部ではその理由は、この組成物を、局所送達のために、例えば眼への局所送達のために製剤化することができるからである。例えば、或る態様において、このＩＬ−６ａは、特定の部位への送達に適した大きさであるよう設計される。いくつかの実施形態において、このＩＬ−６ａは完全長の抗体である。いくつかの実施形態において、このＩＬ−６ａは１つの抗体に由来しかつ、眼の硝子体における滞留性がより長くあることがありかつ全身性漏逸が制限されることがある形態にある。いくつかの実施形態において、このＩＬ−６ａは、対応する修飾されていない抗体と比較して、眼の硝子体における滞留性が長くおよび／または全身性漏逸が制限された修飾された抗体（例えば、Ｆｃドメインの修飾された抗体）である。いくつかの実施形態において、このＩＬ−６ａはＩｇＧ２抗体である。
【００５２】
いくつかの態様において、このＩＬ−６ａは、完全長の抗体よりも小さな抗体の断片または抗体の他の誘導体のような比較的小さなＩＬ−６ａ、例えば、ＩＬ−６抗体由来のＦａｂである。いくつかの場合、ＩＬ−６ａは、組織の一部分から別の部分へと、対応する完全長のＩＬ−６抗体と比較して高い動態で通過できる形態にある。いくつかの実施形態において、このＩＬ−６ａは、より大きな分子であるよう操作されたＦａｂであり、これは、Ｆａｂ単独と比較して送達される位置における滞留性がおそらく長く、例えば、このＩＬ−６ａはＦｃドメインを通じて二量体化する。或る実施形態において、このＦｃドメインは、野生型Ｆｃを含むのと同じＩＬ−６結合実体と比較して、Ｆｃ部分が、結果的に長い局所滞留性、例えば長い硝子体滞留を生じることができかつ全身性蓄積を減少できる、切断または縮小したＦｃＲｎ結合を有するよう操作されている。
【００５３】
本明細書で説明されるＩＬ−６アンタゴニストは、ＩＬ−６の少なくとも１つの望ましくない作用を改善する上で有効であるよう、ＩＬ−６アンタゴニストの標的であるＩＬ−６に対する十分に高い親和性も有する。この阻害薬はまた、治療薬としても有用であるよう十分に安定である。
【００５４】
一般に、ＩＬ−６ａ、例えば眼における使用に適したＩＬ−６ａのＰＫは、治療効果を提供するのに十分なＰＫを送達部位、例えば硝子体において有する。非限定的な実施例において、このＰＫは、少なくとも１２時間、２４時間、２日間、３日間、４日間、５日間、８日間、１０日間、１４日間、２１日間、２８日間、または３０日間の半減期である可能性がある。
【００５５】
（部位ＩＩへのＩＬ−６アンタゴニスト結合に関する識別）
一般に、当該技術分野で公知のいかなる方法も、ＩＬ−６へ結合できる分子を生じるために使用することができ、例えば、ポリペプチドライブラリまたは分子ライブラリは、ＩＬ−６へ結合するポリペプチドまたは化合物の能力についてのアッセイにおいて候補化合物をスクリーニングすることができる。一度このような候補化合物を識別すると、その化合物の結合部位は、当該技術分野で公知の方法を用いて決定することができる。例えば、分子は、野生型ＩＬ−６へ結合する能力およびその結合について、部位Ｉ、部位ＩＩ、または部位ＩＩＩにおいて突然変異したＩＬ−６へ結合するこの化合物の能力と比較して検査することができる。複数の実施形態において、本明細書で説明されるＩＬ−６ａは、ＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒα複合体へおよびＩＬ−６へ結合する能力を保有し、ｇｐ１３０へのＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒαの結合を防止する。複数の実施形態において、本明細書で説明されるＩＬ−６ａは、ＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒα複合体への結合について、例えばＩＬ−６の部位ＩＩへの結合によってｇｐ１３０と競合できる。このような結合活性は、当該技術分野で公知の方法を用いてアッセイすることができる。
【００５６】
ＩＬ−６ａ候補物は、例えば、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ−６アッセイシステム（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ社，米国サンディエゴ市）を用いて検査することができる。ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ−６細胞とは、ヒトＩＬ−６ＲおよびＳＴＡＴ３誘導性ＳＥＡＰリポーター遺伝子を安定してトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞である。ＩＬ−６の存在下で、ＳＴＡＴ３は活性化してＳＥＡＰが分泌される。ＳＥＡＰは、例えばＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅ（商標）（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ社、米国サンディエゴ市）を用いて評価される。この細胞へのＩＬ−６アンタゴニストの添加は、分泌を防止し、または遊離型ＩＬ−６および可溶性受容体結合型ＩＬ−６の両方を阻害する結果としてＳＥＡＰの水準を低下させる。
【００５７】
ＫＤとは、特定の抗体抗原間相互作用または抗体断片抗原間相互作用に関する結合親和性平衡定数を指す。抗体またはその断片は、ＫＤが２５０ｐＭ以下、例えば、２２５ｐＭ、２２０ｐＭ、２１０ｐＭ、２０５ｐＭ、１５０ｐＭ、１００ｐＭ、５０ｐＭ、２０ｐＭ、１０ｐＭ、または１ｐＭ以下の場合、抗原を特異的に結合するといわれる。ＫＤは、当該技術分野で公知の方法を用いて、例えば、表面プラズモン共鳴を用いて、例えばビアコア（商標）システムを用いて測定することができる。
【００５８】
Ｋｏｆｆとは、特定の抗体抗原間相互作用または抗体断片抗原複合体の解離速度定数を指す。この解離速度定数は、表面プラズモン共鳴を用いて、例えば、ビアコア（商標）システムを用いて測定することができる。比較的緩徐なＫｏｆｆは、治療薬の望ましい特徴に貢献することができ、例えば、このような治療を必要とする対象へのこの阻害薬の投与の頻度を下げることができる。
【００５９】
（特異性）
本明細書に開示されるＩＬ−６アンタゴニストの特徴は、その結合特異性に関する。先に論議したように、ＩＬ−６は、遊離型ＩＬ−６としておよび可溶性ＩＬ−６Ｒα結合型ＩＬ−６として存在することができる。出願人は、ＩＬ−６の部位ＩＩを、ＩＬ−６の部位Ｉへ結合する阻害薬と比較してＩＬ−６アンタゴニストについての最適な標的として識別した。部位Ｉ阻害薬は、ＩＬ−６Ｒαへの遊離型ＩＬ−６の結合を阻害することがある。しかしながら、このような阻害薬は、事前に存在するＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ複合体のＫｏｆｆによって制限される置換を除き、この複合体によって開始される活性を防止できない。別の代替例であるＩＬ−６Ｒαへ結合する阻害薬は、飽和濃度でない限り、ＩＬ−６活性を防止する能力を制限されたことがあるので、あまり適切ではない。ＩＬ−６受容体の量がＩＬ−６の量と比較して一般的に極めて多いので、このアプローチは、この受容体への結合によってＩＬ−６活性を阻害する望ましくない多量の組成物の投与を必要とすることがある。複数の実施形態において、本明細書で説明されるＩＬ−６アンタゴニスト（例えば、本明細書で説明される抗体ならびにこれらの断片および誘導体）は、ＩＬ−６がＩＬ−６Ｒへ結合した場合でさえ、ＩＬ−６の活性を遮断できる。したがって、本明細書で説明されるＩＬ−６ａの利点は、ＩＬ−６受容体を標的とする阻害薬と比較して、治療効果を達成するためにこの組成物が比較的少量しか投与される必要がないかもしれないという点である。抗受容体抗体は、この抗体のＰＫを有意に制限する受容体仲介性除去によって迅速に除去され、それゆえ、より多量の用量、より頻繁な投薬、またはこの両方を必要とすると報告されている。追加的に、抗受容体および抗部位Ｉの両ＩＬ−６抗体は、リガンドの正常受容体仲介性除去経路を妨害することによってＩＬ−６の組織内濃度を有意に増大させ、それにより組織中の潜在的に望ましくない水準のＩＬ−６へ対象を曝露するという問題を有する。なお、ＩＬ−６Ｒαを標的とする阻害薬の使用は、阻害が要求される部位および阻害が望ましくない部位の両部位の近くで阻害薬の存在を余儀なくさせることがあり、例としては全身治療である。ｇｐ１３０が結合する部位ＩＩを結合するＩＬ−６ａの使用は、遊離型ＩＬ−６を介するおよび、ＩＬ−６Ｒへ結合したＩＬ−６を介する阻害を可能にするが、ｇｐ１３０を介するＩＬ−６経路を依然として活性化しない。したがって、本明細書で説明されるＩＬ−６アンタゴニストは、ＩＬ−６の両方の形態（可溶性型および受容体結合型）へ結合するよう設計され、具体的には、ＩＬ−６アンタゴニストは、両形態で到達可能なＩＬ−６の部位ＩＩへ結合する。本明細書で説明されるＩＬ−６ａを含有する組成物は、シスおよびトランスの両シグナル伝達をＩＬ−６によって阻害できる。
【００６０】
いくつかの場合、本明細書に提供される化合物および方法は、ＩＬ−６関連障害の少なくとも１つの徴候または症状を治療するのに、例えば、血管新生および／または炎症を阻害するのに十分な有効量のＩＬ−６遮断を提供するよう設計される。
【００６１】
本明細書に説明される化合物は、例えば硝子体における望ましくない高水準のＩＬ−６を特徴とする眼疾患を治療するのに有用である（Ｙｕｕｋｉら，Ｊ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃｏｍｐｌ  １５：２５７（２００１）、Ｆｕｎａｔｓｕら，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  １１０：１６９０（２００３）、Ｏｈら，Ｃｕｒｒ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  ３５：１１１６（２０１０）、Ｎｏｍａら，Ｅｙｅ  ２２：４２（２００８）、Ｋａｗａｓｈｉｍａら，Ｊｐｎ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ５１：１００（２００７）、Ｋａｕｆｆｍａｎら，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ３５：９００（１９９４）、Ｍｉａｏら，Ｍｏｌｅｃ  Ｖｉｓ  １８：５７４（２０１２）を参照されたい。）。
【００６２】
一般に、本明細書に説明されるＩＬ−６ａは、ＩＬ−６シグナル伝達の強力なアンタゴニストである。これは、ＩＬ−６に対する高い親和性、例えば、１０ｐＭのＩＬ−６を用いたＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ＩＬ−６アッセイにおいて１００ｐＭ以下のＩＣ５０を有する分子を設計することによって一部達成される。ＩＬ−６ａの高い親和性は、ＩＬ−６ａのＫＤ、例えば、１ｎＭ以下、５００ｐＭ以下、４００ｐＭ以下、３００ｐＭ以下、２４０ｐＭ以下、または２００ｐＭ以下のＫＤを基に決定できる。
【００６３】
ＩＬ−６の高い発現または活性と関連した障害を治療するのに有用な生物製剤ＩＬ−６ａ（例えば、抗体、その断片または誘導体のようなタンパク質またはポリペプチド）を製造するために、典型的には、この生物製剤ＩＬ−６ａは高い生産性を有することが望ましい。例えば、適切な生産性は、１ｇ／Ｌ以上（例えば、２ｇ／Ｌ以上、５ｇ／Ｌ以上、または１０ｇ／Ｌ以上）である。
【００６４】
ＩＬ−６アンタゴニストを有効に投与するために、投与される予定の濃度と適合性のある溶解度をこの阻害薬が有することが必要である。例えば、完全長抗体ＩＬ−６ａの場合、溶解度は、２０ｍｇ／ｍＬ以上、１０ｍｇ／ｍＬ以上、５ｍｇ／ｍＬ以上、または１ｍｇ／ｍＬ以上である。
【００６５】
なお、生存可能な治療となるよう、この阻害薬は、送達部位および活性部位の体温における高い安定性、ならびに保管安定性を有さなければならない。例えば、６０℃以上（例えば、６０℃以上、６２．５℃以上、６５℃以上、７０℃以上、７３℃以上、７５℃以上）のＴｍおよび、４５℃以上、例えば５０℃以上、５１℃以上、５５℃以上、または６０℃以上のＴｏｎｓｅｔである。ＴｍおよびＴｏｎｓｅｔの決定方法は、当該技術分野で公知の方法を用いて決定することができる。
【００６６】
所望の特徴を有するアンタゴニストは、当該技術分野で公知の適切な種類の分子、例えば、親ＩＬ−６抗体に関する十分な特徴（例えば、望ましい結合特性）を一般的に保有または維持するＩＬ−６部位ＩＩ標的化抗体の断片および誘導体を含む抗体から選択できる。このようなアンタゴニストには、Ｆａｂフラグメント、ｓｃＦｖ、Ｆｃ部分を含むよう操作されたＦａｂフラグメント、親ＩＬ−６部位ＩＩ標的化抗体とは異なる枠組み構造を有するよう操作された完全長抗体を含む。
【００６７】
いくつかの態様において、本明細書に開示されるＩＬ−６ａは、ＩＬ−６の部位ＩＩへ結合できる抗体またはその断片と競合または交差競合できるヒト抗体抗原結合部位を含む。例えば、この抗体またはその断片は、本明細書に開示されるＶＨドメインおよびＶＬドメインから構成でき、かつこのＶＨドメインおよびＶＬドメインは、本明細書に開示されるＩＬ−６／部位ＩＩ結合抗体の１セットのＣＤＲを含む。
【００６８】
何らかの適切な方法を用いて、例えば、ＩＬ−６上の種々の部位を突然変異させることによって、ＩＬ−６ａの結合したドメインおよび／またはエピトープを決定することがある。突然変異がこのＩＬ−６ａおよびこのＩＬ−６リガンドの結合を防止または低下させる部位は、ＩＬ−６ａへの結合に直接的に関与し、または、例えば、ＩＬ−６のコンホメーションに影響することによって、結合部位に間接的に影響するかのいずれかである。他の方法を用いて、ＩＬ−６ａの結合したアミノ酸を決定できる。例えば、ＰＥＰＳＣＡＮ系の酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）のようなペプチド結合走査を使用できる。この種類のペプチド結合走査において、この抗原由来の短い重複ペプチドを、結合メンバーへの結合について系統的にスクリーニングする。このペプチドは、支持表面へ共有結合してペプチドのアレイを形成することができる。ペプチドは、直鎖状のまたは制限されたコンホメーションにあることができる。制約されたコンホメーションは、ペプチド配列の各末端に末端システイン（ｃｙｓ）残基を有するペプチドを用いて製造することができる。ｃｙｓ残基は、このペプチドがループ状コンホメーションで保持されるよう、支持表面へ直接的にまたは間接的に共有結合できる。したがって、この方法で使用されるペプチドは、抗原の断片に対応するペプチド配列の各末端へ付加したｃｙｓ残基を有することがある。二重ループ状ペプチドも使用でき、このペプチドにおいて、ｃｙｓ残基はこのペプチド配列の中間部にまたは中間部近くに追加的に配置される。このｃｙｓ残基は、このペプチドが、中央のｃｙｓ残基の各側に１つのループを有する二重ループ状コンホメーションを形成するよう支持表面へ直接的にまたは間接的に共有結合できる。ペプチドは合成で作製することができ、ｃｙｓ残基はそれゆえ、ＩＬ−６部位ＩＩ配列において天然ではないにもかかわらず、所望の位置で操作することができる。場合により、直鎖状ペプチドおよび制限されたペプチドは両方とも、ペプチド結合アッセイにおいてスクリーニングできる。ペプチド結合走査は、結合メンバーの結合する１セットのペプチドを識別すること（例えば、ＥＬＩＳＡを使用する。）を包含することがあり、この中で、このペプチドは、ＩＬ−６ａの断片（例えば、ＩＬ−６ａの約５個、１０個、または１５個の連続した残基を含むペプチド）に対応しかつ、結合メンバーの結合した残基のフットプリントを決定するためにこのペプチドを整列させるアミノ酸配列を有しており、ここで、このフットプリントは、重複するペプチドと共通の残基を含む。それに替わるものとしてまたは追加的に、このペプチド結合走査法を使用して、ＩＬ−６ａが少なくとも１つ選択されたシグナル：ノイズ比で結合するペプチドを識別することができる。
【００６９】
当該技術分野で公知の他の方法を使用して、抗体の結合した残基を決定することができ、および／または、例えば、部位特異的突然変異誘発（例えば、本明細書に説明されるようなもの）、水素重水素交換、質量分析、ＮＭＲ、およびＸ線結晶解析を含むペプチド結合走査結果を確認することができる。
【００７０】
典型的には、本明細書に説明されるように有用なＩＬ−６ａは、ヒト抗体分子、ヒト化抗体分子、またはその結合断片である。一般に、この抗体はモノクローナル抗体である。このような抗体の起源はヒト、マウス、ラット、ラクダ科動物、ウサギ、ヒツジ、ブタ、またはウシであることができ、当業者に公知の方法に従って作製することができる。
【００７１】
一般に、ＩＬ−６ａは、ＩＬ−６（例えば、ヒトＩＬ−６）の部位ＩＩへ特異的に結合することのできる１つの抗体の少なくとも複数のこのＣＤＲを含む。本発明の１つのＣＤＲまたは１セットのＣＤＲを保有するための構造は、再編成した免疫グロブリン遺伝子によってコードされる天然のＶＨ抗体可変ドメインおよびＶＬ抗体可変ドメインのこのＣＤＲまたはこのセットのＣＤＲに対応する位置でこのＣＤＲまたはこのセットのＣＤＲが配置された抗体重鎖配列もしくは抗体軽鎖配列またはその実質的な部分であることができる。免疫グロブリン可変ドメインの構造および位置は、何らかのインターネット検索エンジンを用いて、「Ｋａｂａｔ」の下で見つけることのできるＫａｂａｔら，１９８３（米国国立衛生研究所）に対する参照およびその更新物により決定することができる。
【００７２】
１つの抗体であるＩＬ−６ａは一般的に、抗体のＶＨドメイン（例えば、配列番号１または配列番号３）および／またはＶＬドメイン（例えば、配列番号２）を含む。ＶＨドメインは、１セットの重鎖ＣＤＲ（ＶＨＣＤＲ）を含み、ＶＬドメインは１セットの軽鎖ＣＤＲ（ＶＬＣＤＲ）を含む。このようなＣＤＲの例は、実施例３に提供され、この実施例３に関する例を配列番号４〜９に示す。抗体分子は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む抗体ＶＨドメインならびに枠組み構造を含むことができる。この抗体分子は、それに替わるものとしてまたはその上、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含む抗体ＶＬドメインならびに枠組み構造を含むことができる。
【００７３】
本明細書に開示されるのは、本明細書に開示されるようなＶＨＣＤＲ１および／もしくはＶＨＣＤＲ２および／もしくはＶＨＣＤＲ３ならびに／または本明細書に開示されるようなＶＬＣＤＲ１および／もしくはＶＬＣＤＲ２および／もしくはＶＬＣＤＲ３を含むＩＬ−６アンタゴニストである。このＩＬ−６ａは、本明細書に説明される抗体、断片または誘導体のうちのいずれかの１つ以上のＣＤＲを含むことができる。このＩＬ−６ａは、１セットのＶＨＣＤＲ（例えば、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３）を含むことができ、場合により、１セットのＶＬＣＤＲ（例えば、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３）も含むことができる。このＣＤＲは、本明細書に説明される１つ以上の抗体、断片、または誘導体に由来することができる。例えば、このＶＬＣＤＲは、このＶＨＣＤＲと同じまたは異なる抗体に由来することができる。
【００７４】
一般に、ＶＨドメインは、抗体抗原結合部位を提供するためにＶＬドメインと対形成する。例えば、配列番号１または配列番号３のＨＣドメインは、配列番号２のＬＣドメインと対形成する。いくつかの場合、ＶＨドメイン単独またはＶＬドメイン単独をＩＬ−６ａとして使用することができる。
【００７５】
いくつかの態様において、このＩＬ−６ａは、（ｉ）本明細書に説明されるＶＨドメイン、例えば、配列番号１もしくは配列番号３のＶＨドメインと少なくとも６０、７０、８０、８５、９０、９５、９８もしくは９９％のアミノ酸配列同一性を有するＶＨドメイン配列を、または（ｉｉ）これらの配列（（ｉ）において定義される配列）のうちの１セットのＶＨＣＤＲ（例えば、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、および／またはＶＨＣＤＲ３）を含む抗体分子、断片、またはその誘導体である。複数の実施形態において、この抗体分子、その断片または誘導体は、配列番号１のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３、または配列番号３のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３を含む。複数の実施形態において、この抗体分子、その断片または誘導体は、配列番号１のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３とは、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下、または５個以下のアミノ酸だけ集約的に異なるＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３を含む。複数の実施形態において、この抗体分子、その断片または誘導体は、配列番号３のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３とは、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下、または５個以下のアミノ酸だけ集約的に異なるＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３を含む。
【００７６】
この抗体分子、その断片または誘導体は場合により、（ｉ）本明細書に説明されるＶＬドメイン、例えば配列番号２のＶＬドメインと少なくとも６０、７０、８０、８５、９０、９５、９８もしくは９９％のアミノ酸配列同一性を有するＶＬドメイン配列、または（ｉｉ）これらの配列（（ｉ）において定義される配列）の１セットのＶＬＣＤＲ（例えば、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、および／またはＶＬＣＤＲ３）も含むことができる。複数の実施形態において、この抗体分子、その断片または誘導体は、配列番号２のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３を含む。複数の実施形態において、この抗体分子、断片、または誘導体は、配列番号３のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３とは１個以下、２個以下、３個以下、４個以下、または５個以下のアミノ酸だけ集約的に異なるＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３を含む。２つのアミノ酸配列の％同一性を算出するのに使用できるアルゴリズムには例えば、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ、または、例えば省略時パラメータを採用するスミス−ウォーターマンアルゴリズムを含む。
【００７７】
本明細書に説明されるＩＬ−６ａは、抗体定常部またはその複数の部分、例えばヒト抗体定常部またはその複数の部分を含むことができる。例えば、ＶＬドメインは、そのＣ末端で、ヒトＣＫ鎖またはＣＬ鎖を含む抗体軽鎖定常ドメインへ結合することがある。同様に、ＶＨドメインを基にしたＩＬ−６ａは、そのＣ末端で何らかの抗体アイソタイプ、例えばＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥおよびＩｇＭ、ならびに何らかのアイソタイプサブクラスのうちのいずれか、特にＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４に由来する免疫グロブリン重鎖の全体または部分（例えば、ＣＨ１ドメイン）へ結合することができる。
【００７８】
いくつかの場合、本発明の抗体はさらに、当該技術分野で公知の方法を用いて修飾して、特異的なアロタイプ、例えば、特定の地理的起源を有する集団において優勢なアロタイプを有する配列を作製する。いくつかの場合、ヒト重鎖定常部は、この目的のために修飾される。
【００７９】
ＩＬ−６ａは、１つ以上のＣＤＲ、例えば、１セットのＣＤＲを抗体枠組み構造内に有する抗体分子、その結合断片、またはバリアントであることができる。例えば、抗体（例えば、本明細書に説明される抗体またはその断片もしくは誘導体）の１つ以上のＣＤＲまたは１セットのＣＤＲを、枠組み構造（例えば、ヒト枠組み構造）へと移植して、抗体分子を提供することがある。この枠組み構造領域は、ヒト生殖系列遺伝子配列に由来することができ、または起源において非生殖系列であることができる。
【００８０】
ＶＨ枠組み構造残基および／またはＶＬ枠組み構造残基は、本明細書で論議および例示されるように、例えば、部位特異的突然変異誘発を使用して、修飾することができる。
【００８１】
アミノ酸の変化は、当該技術分野で公知の方法およびパラメータを用いてＩＬ−６の部位ＩＩを標的とする抗体ＩＬ−６ａ（本明細書では「基準ＩＬ−６抗体」と命名される。）に由来する１つ以上の枠組み構造領域および／または１つ以上のＣＤＲにおいてなされることができる。また本明細書に含まれているのは、ＩＬ−６の部位ＩＩ（例えば、ヒトＩＬ−６の部位ＩＩ）への結合を保有しかつ基準ＩＬ−６抗体と比較して少なくとも同じ結合または高い親和性を典型的に有する、結果として生じるＩＬ−６アンタゴニストである。いくつかの場合、安定性のようなパラメータを改善するために、基準ＩＬ−６ａ（例えば、基準抗体）と比較して誘導されたＩＬ−６ａの結合親和性の低下を結果的に生じる変化を導入して、有用なＩＬ−６ａを作製することができる。いくつかの実施形態において、例えば、この基準が硝子体における半減期または全身の半減期（例えば、血液、血漿、血清、リンパ液、肝臓、腎臓、他の組織、または体液における）のようなＦｃＲｎ結合パラメータまたは薬物動態（ＰＫ）パラメータに関するいくつかの場合、基準抗体はＩＬ−６を特異的に結合しない抗体であることがある。
【００８２】
ＩＬ−６ａポリペプチドのアミノ酸配列における変化には、１つ以上のアミノ酸残基を非天然のもしくは非標準的なアミノ酸と置換すること、１つ以上のアミノ酸残基を非天然のもしくは非標準的な形態へと修飾すること、または１つ以上の非天然のもしくは非標準的なアミノ酸をこの配列へと挿入することを含むことができる。本発明の配列における変更の数および位置に関する実施例は、本明細書の別の箇所で説明する。天然アミノ酸には、標準的な一文字表記によってＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｐ、Ｆ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｙ、Ｃ、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｄ、Ｅとして識別される２０個の「標準的な」Ｌ型アミノ酸を含む。非標準的なアミノ酸には、ポリペプチド主鎖へと組み込まれることがありまたは既存のアミノ酸残基の修飾から結果として生じることがある何らかの他の残基を含む。非標準的なアミノ酸は、天然または非天然であることがある。４−ヒドロキシプロリン、５−ヒドロキシリジン、３−メチルヒスチジン、およびＮ−アセチルセリンのようないくつかの天然の非標準的なアミノ酸は、当該技術分野で公知である。Ｎ−α位で誘導体化されるこれらのアミノ酸残基は、アミノ酸配列のＮ末端に配置されるに過ぎない。このアミノ酸は典型的には、Ｌ型アミノ酸である。いくつかの場合、このアミノ酸はＤ型アミノ酸である。それゆえ、変更は、Ｌ型アミノ酸をＤ型アミノ酸へと修飾すること、またはＬ型アミノ酸をＤ型アミノ酸と置換することを含むことがある。アミノ酸のメチル化、アセチル化および／またはリン酸化された形態も公知であり、本発明におけるアミノ酸はこのような修飾を受けやすいことがある。
【００８３】
本発明の抗体ドメインおよび結合メンバーにおけるアミノ酸配列は、本明細書で論議される非天然のまたは非標準的なアミノ酸を含むことができる。非標準的なアミノ酸（例えば、Ｄ型アミノ酸）は、当該技術分野で公知の方法を用いて、例えば、この分子の合成においてまたはアミノ酸の合成後の修飾もしくは置換によって、アミノ酸配列へと組み込むことができる。いくつかの場合、Ｄ型アミノ酸を用いて、ＩＬ−６ａのＰＫを増大させる。
【００８４】
本発明のＣＤＲ由来配列を保有する新規のＶＨ部またはＶＬ部は、１つ以上の選択されたＶＨ核酸配列および／またはＶＬ核酸配列の無作為突然変異誘発を用いて作製して、全可変ドメイン内で突然変異を生じることがある。例えば、エラープローンＰＣＲを使用することができる（Ｃｈａｏら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，１：７５５〜７６８（２００６））。いくつかの実施形態において、１つまたは２つのアミノ酸置換は、全可変ドメインまたは全セットのＣＤＲ内でなされる。当該技術分野で公知の他の方法を使用して、典型的には１つ以上のＣＤＲにおいて、突然変異、例えば部位特異的突然変異誘発を生じることができる。
【００８５】
抗体ＩＬ−６ａを産生するための１つの方法は、１個以上のアミノ酸を付加、欠失、置換または挿入することによって、配列番号１および配列番号３に示されるようなＶＨドメインを変化させることである。変化したＶＨドメインは、配列番号２に示すようなＶＬドメインと組み合わせることができ、これはまた、本明細書に説明されるようにおよび当該技術分野で公知の方法を用いて変化させることができる。このような変化した分子を、ＩＬ−６の部位ＩＩへ結合する能力について、場合により、基準分子と比較して高い親和性のような他の所望の特性について検査する。いくつかの場合、バリアントのＶＨドメインまたはＶＬドメインは、１、２、３、４、または５個のこのような変化（例えば、１、２、３、４、または５個のアミノ酸置換）を有することができる。
【００８６】
本発明のＩＬ−６ａは、ＩＬ−６の部位ＩＩへ結合する抗体の断片であることができ、ただし、この断片が、抗原結合部位を含み、例えば、ＩＬ−６の部位ＩＩへ結合することができることを条件とする。本発明の抗体断片は一般的には、配列番号１および配列番号２を、または配列番号３および配列番号２を含む抗体分子のような基準（親）抗体分子を用いて出発して得る。抗体断片は、組換えＤＮＡ、抗体の酵素的切断（例えば、ペプシンまたはパパインを用いる。）、化学的切断（例えば、ジスルフィド架橋の化学的還元）のような当該技術分野で公知の方法を用いて作製することができる。抗体抗原結合部位を含む抗体断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ｄＡｂ、Ｆｄ、およびジスルフィド安定化可変部（ｄｓＦｖ）のような分子を含むがこれらに限定されない。１つ以上の抗体抗原結合部位を含む種々の他の抗体分子を操作することができ、これには、例えばＦ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）３、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、およびミニボディを含む。抗体分子ならびにこの抗体分子の構築および使用のための方法に関する実施例は、ＨｏｌｌｉｇｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ，２００５，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２３：１１２６〜１１３６に説明されている。結合断片の非限定的な実施例は、ＶＬ、ＶＨ、軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）および重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）のドメインから構成されるＦａｂ断片、ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインから構成されるＦｄフラグメント、単一の抗体のＶＬドメインおよびＶＨドメインから構成されるＦｖフラグメント、ＶＨドメインまたはＶＬドメインから構成されるｄＡｂフラグメント、単離されたＣＤＲ部、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、２つの連結されたＦａｂフラグメントを含む二価断片、一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）（この中で、ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、２つのドメインを結合させて抗原結合部位を形成するペプチドリンカーによって連結される。）、二重特異性一本鎖Ｆｖ二量体（例えば、ＷＯ１９９３／０１１１６１において開示されたもの）、ならびに遺伝子融合を用いて構築される多価断片または多重特異性断片であるダイアボディ（例えば、ＷＯ９４／１３８０４において開示されたもの）である。Ｆｖ分子、ｓｃＦｖ分子、またはダイアボディ分子は、ＶＨドメインおよびＶＬドメインを連結するジスルフィド架橋の組み込みによって安定化させることができる。ＣＨ３ドメインへ結合するｓｃＦｖを含むミニボディをＩＬ−６ａとして使用することもできる。ＩＬ−６ａとして使用することのできる抗体の他の断片および誘導体には、抗体ヒンジ部由来の１個以上のシステインを含む、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端における数個のアミノ酸残基の付加だけＦａｂ断片とは異なるＦａｂ’、および定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を保有するＦａｂ’フラグメントであるＦａｂ’−ＳＨを含む。
【００８７】
いくつかの場合、抗体断片であるＩＬ−６ａは、所望の特性を改善または導入するよう化学的に修飾された抗体であり、例えば、ペグ化により半減期または組み込みを増大させる。
【００８８】
ｄＡｂ（ドメイン抗体）とは、抗体の低分子単量体抗原結合断片（抗体の重鎖または軽鎖の可変部）である。ＶＨ  ｄＡｂは、ラクダ科動物（例えば、ラクダおよびラマ）において天然であり、標的抗原を用いてラクダ科動物を免疫化すること、抗原特異的Ｂ細胞を単離すること、および個々のＢ細胞からｄＡｂ遺伝子を直接クローニングすることによって製造することができる。本発明のＩＬ−６ａは、本明細書に実質的に述べるようなＶＨドメインもしくはＶＬドメインを含むｄＡｂ、または本明細書に実質的に述べるように１セットのＣＤＲを含むＶＨドメインもしくはＶＬドメインを含むｄＡｂであることができる。
【００８９】
本発明の抗体には、２つの異なる可変部が同じ分子において組み合わされる二重特異性抗体を含む。ＩＬ−６ａは、当該技術分野で公知の方法を用いて調製された、例えば、化学的にもしくは複合型ハイブリドーマから調製された二重特異性抗体の一部として組み込むことができる。このような分子は、先に論議された種類の二重特異性抗体断片であることができる。二重特異性抗体を作製するための方法に関する１つの非限定的な実施例は、異なる特異性を有する２つの抗体の結合ドメインを使用して短い可撓性ペプチドを介して直接連結することのできるＢｉＴＥ（商標）技術である。これは、２つの抗体を短い一本鎖のポリペプチド鎖上で組み合わせる。ダイアボディおよびｓｃＦｖは、Ｆｃ部なしで、可変ドメインのみを使用して構築することができ、抗イディオタイプ反応の効果を潜在的に低下させることができる。二重特異性抗体は、完全なＩｇＧとして、二重特異性Ｆａｂ’２として、Ｆａｂ’ＰＥＧとして、ダイアボディ、または二重特異性ｓｃＦｖのようなその他のものとして構築することができる。さらに、２つの二重特異性抗体は、当該技術分野で公知の慣例的な方法を用いて連結して、四価の抗体を形成することができる。
【００９０】
二重特異性ダイアボディは、二重特異性完全抗体とは対照的に有用であり、その理由は、二重特異性ダイアボディは、イー・コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）において構築および発現させることができることが一部ある。適切な結合特異性のダイアボディ（および抗体断片のような多くの他のポリペプチド）は、ライブラリからファージディスプレイ（ＷＯ１９９４／１３８０４）を用いて容易に選択することができる。このダイアボディの１つのアームが例えばＩＬ−６の部位ＩＩに対して特異性を方向づけられて定常を維持することになっている場合、その他のアームが変化して適切な特異性の抗体が選択されたライブラリを作製することができる。
【００９１】
二重特異性完全抗体は、ＷＯ１９９６／２７０１１、ＷＯ１９９８／５０４３１およびＷＯ２００６／０２８９３６において説明されるような説明されるような代替的な操作方法によって作製されることがある。
【００９２】
いくつかの場合、本発明のＩＬ−６ａは、例えば、さらに以下で論議するように、１個以上のＣＤＲ、例えば１セットのＣＤＲを非抗体タンパク質足場に組み込むことによって非抗体分子内に抗原結合部位を含む。いくつかの場合、このＣＤＲは非抗体足場へと組み込まれる。ＩＬ−６部位ＩＩ結合部位は、フィブロネクチンもしくはチトクロムＢのような、非抗体タンパク質足場におけるＣＤＲの配置によって、またはタンパク質足場内のループの複数のアミノ酸残基を無作為化もしくは突然変異させてＩＬ−６部位ＩＩに対する結合特異性を与えることによって提供することができる。タンパク質における新規の結合部位を操作するための足場は、当該技術分野で公知である。例えば、抗体模倣物質のためのタンパク質足場は、少なくとも１つの無作為化したループを有するフィブロネクチンＩＩＩ型ドメインを含むタンパク質（抗体模倣物質）を説明するＷＯ２０００３４７８４において開示されている。１個以上のＣＤＲ、例えば１セットのＨＣＤＲが移植される適切な足場は、免疫グロブリン遺伝子スーパーファミリーの何らかのドメインメンバーによって提供することができる。この足場は、ヒトタンパク質または非ヒトタンパク質であることができる。非抗体タンパク質足場の利点は、この足場が、少なくともいくつかの抗体分子よりも小さなおよび／または製造するのに容易な足場分子において抗原結合部位を提供することができる点である。大きさの小さな結合メンバーは、細胞に進入する能力、組織へ深く浸透する能力もしくは他の構造内の標的に到達する能力、または標的抗原のタンパク質空洞内に結合する能力のような有用な生理学的特性を与えることがある。典型的なのは、安定した主鎖および１個以上の可変ループを有するタンパク質であり、この中で、このループまたは複数のループのアミノ酸配列は、特異的または無作為に突然変異して、標的抗原を結合する抗原結合部位を作製する。このようなタンパク質には、黄色ブドウ球菌由来のプロテインＡのＩｇＧ結合ドメイン、トランスフェリン、テトラネクチン、フィブロネクチン（例えば、１０番目のフィブロネクチンＩＩＩ型ドメインを使用する。）、リポカリンならびにγ型クリスタリン足場および他のアフィリン（商標）足場（Ｓｃｉｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ社，ドイツ国ハレ市）を含む。他のアプローチの実施例には、分子内ジスルフィド結合を有する低分子タンパク質であるシクロチドを基にした合成ミクロボディ、ミクロタンパク質（例えば、Ｖｅｒｓａｂｏｄｉｅｓ（商標），Ａｍｕｎｉｘ社，米国カリフォルニア州マウンテンビュー市）およびアンキリン反復タンパク質（ＤＡＲＰｉｎｓ、例えばＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ  ＡＧ社（スイス国チューリッヒ市シュリーレン町）製）を含む。またこのようなタンパク質には、例えば免疫ドメインのような操作された低分子タンパク質ドメインも含む（例えば、米国特許公報第２００３／０８２６３０号および第２００３／１５７５６１号を参照されたい。）。免疫ドメインは、抗体の少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含有する。
【００９３】
ＩＬ−６ａは、追加的な複数のアミノ酸を含んで、例えばこの分子に、抗原を結合する能力に加えて別の機能的特徴を与えることができる。
【００９４】
いくつかの場合、ＩＬ−６ａは、検出可能な標識を保有し、あるいは毒素または標的指向化する部分もしくは酵素へ結合する（例えば、ペプチジル結合またはペプチジルリンカーを介する。）。例えば、ＩＬ−６ａは、触媒部位（例えば、酵素ドメインにある。）および抗原結合部位（例えば、ＩＬ−６の部位ＩＩに対する結合部位）を含むことができ、それにより抗原結合部位は抗原へ結合し、したがって触媒部位をＩＬ−６またはＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ複合体へ標的指向化させる。触媒部位は、いくつかの場合、ＩＬ−６の生物学的機能を、例えばＩＬ−６の切断、ＩＬ−６Ｒの切断、またはＩＬ−６ａ／ＩＬ−６Ｒ複合体と結合した他の分子の切断によってさらに阻害することができる。
【００９５】
いくつかの態様において、本発明には、基準抗体と比較して修飾して、例えば、ＩＬ−６ａの生物学的作用機能を変化、例えば増大、低下、または除去した抗体ＩＬ−６ａを含む。一実施例において、このＦｃ部を修飾し、または親Ｆｃドメインを修飾されたＦｃドメインと置換して、修飾されていない親と比較して修飾されたＩＬ−６ａの薬物動態を変化させる。いくつかの実施形態において、このＩＬ−６ａは、ＩｇＧ２枠組み構造を有するよう操作される。他の実施形態において、ＩｇＧ１枠組み構造もしくはＩｇＧ２枠組み構造におけるＩＬ−６ａは、親もしくは他の基準ＩＬ−６ａと比較してｐＨ６．０でＩＬ−６ａの結合親和性を高めかつｐＨ７．０で結合親和性を実質的に変化させない修飾されたＦｃを有し、またはこのＦｃドメインは修飾されかつこのＩＬ−６ａは親もしくは他の基準ＩＬ−６ａと比較して長い半減期を有する。
【００９６】
いくつかの実施形態において、抗体ＩＬ−６ａは、補体固定および補体依存性細胞毒性を高めるよう修飾される。他の態様において、基準抗体と比較して抗体の能力を高めてエフェクター細胞を活性化させかつ抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に関与するよう抗体ＩＬ−６ａを修飾する。いくつかの場合、本明細書に開示される抗体を修飾して、エフェクター細胞を活性化しかつ抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に関与するこの抗体の能力を高め、および補体を固定しかつ補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）に関与するこの抗体の能力も高めることができる。
【００９７】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される抗体を修飾して、補体を固定しかつ補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）に関与するこの抗体の能力を低下させる。他の実施形態において、この抗体を修飾して、エフェクター細胞を活性化させかつ抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に関与するこの抗体の能力を低下させる。さらに他の実施形態において、本明細書に開示される抗体を修飾して、エフェクター細胞を活性化させかつ抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に関与するこの抗体の能力を低下させ、および補体を固定しかつ補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）に関与するこの抗体の能力も低下させることができる。
【００９８】
例えば、眼への注入によって送達する場合、単回用量のＩＬ−６ａの頻繁な送達を回避することは一般的に有利である。この特徴を容易にするために、或る実施形態において、送達部位、例えば硝子体における本発明に開示されたＩＬ−６ａの半減期は、少なくとも４日間、例えば少なくとも７日間、少なくとも９日間、少なくとも１１日間、または少なくとも１４日間である。或る実施形態において、ＩＬ−６ａの平均半減期は、少なくとも２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、２５日間、３０日間、４０日間、５０日間、または６０日間である。抗体の半減期の長期化方法は当該技術分野で公知であり、例えば、米国特許第６，２７７，３７５号ならびに国際公報第ＷＯ１９９８／２３２８９号および第ＷＯ１９９７／３４６１号において説明されるとおりである。いくつかの実施形態において、ＩＬ−６ａの半減期は、標的送達部位、例えば硝子体においては、全身性の半減期、例えば、血液、血清、血漿、リンパ液、肝臓、腎臓、または他の組織もしくは体液）における半減期よりも長い。
【００９９】
別の実施形態において、本発明は、容器を含む製造品を提供する。この容器には、本明細書に開示されるＩＬ−６ａを含有する組成物、および組成物を使用してＩＬ−６関連障害を治療することができることを示す包装挿入物またはラベルを含む。典型的には、この組成物は、医薬として許容し得る賦形剤を含む組成物中のＩＬ−６ａである。
【０１００】
いくつかの場合、本発明は、本明細書に開示されるＩＬ−６ａを含有する組成物および治療を必要とする対象へこの組成物を投与するための説明書を含むキットである。
【０１０１】
例えば、ＩＬ−６ａの送達部位またはその近くでのＩＬ−６ａの保有を高めるために高分子ＩＬ−６ａが所望である実施形態において、大きさを増すがＩＬ−６ａの機能（例えば、ＩＬ−６もしくはＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ複合体に対するＩＬ−６の結合親和性）に有意に有害に影響しない部分は、Ｉｌ−６ａと結合することができる。例えば、Ｆａｂは、ＦａｂおよびＦｃ部分を含有する一本鎖ポリペプチドとして発現するよう遺伝子操作することができる。
【０１０２】
ＩＬ−６ａに対して比較的小さな大きさが所望である実施形態において、ＩＬ−６抗体の断片、例えばｓｃＦｖフラグメントまたはＦａｂフラグメントを使用することができる。ＩｇＧ抗体は大きさが約１５０ｋＤであり、Ｆａｂは約５０ｋＤでありおよびｓｃＦｖは約２５ｋＤである。いくつかの実施形態において、本明細書に説明されるＩＬ−６ａは大きさが約５０ｋＤ未満である。このようなアンタゴニストは例えば、５０ｋＤ以下かつ１０ｋＤ超、５０ｋＤ以下かつ２０ｋＤ超、または５０ｋＤ以下かつ２５ｋＤ以上であることができる。
【０１０３】
いくつかの場合、ＩＬ−６アンタゴニスト、例えば複数のジスルフィドを有する抗体または他の阻害薬の安定性は、複数のジスルフィド架橋のうちの１個以上が親分子におけるよりも安定であるバリアントを作製することによって改善される。
【０１０４】
本明細書に説明される或るＩＬ−６ａ分子の別の利点は、送達様式、送達部位、または活性様式に適切な大きさを有する有効分子の利用能である可能性がある。例えば、Ｆａｂ形態にあるＩＬ−６ａを局所適用に使用することがある。このような分子の操作方法は、本明細書に説明されておりかつ当該技術分野で公知である。
【０１０５】
（効能／ＩＬ−６関連疾患）
本発明のＩＬ−６ａを用いて治療することのできる疾患には、高いＩＬ−６が疾病状態とまたは疾病状態に対する必要条件として関連している疾患を含む。このような疾患には、ＩＬ−６によって駆動される血管新生および炎症が疾患の病理状態に寄与する疾患を含む。これには、ＩＬ−６が正常水準と比較して高い疾患、例えば、ＩＬ−６が硝子体または眼の組織において高い疾患（例えば、糖尿病黄斑浮腫、糖尿病網膜症、およびぶどう膜炎）を含む。例には、ドライアイ症候群、ぶどう膜炎、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、増殖糖尿病網膜症（ＰＤＲ）、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を含む或る眼疾患を含むが、これらに限定されない。治療することのできる他の眼障害には、角膜移植、角膜剥離、または眼に対する他のこのような物理的損傷のような外傷によって生じる障害を含む。したがって、本発明には、本発明に説明されるＩＬ−６ａを用いて、ＩＬ−６関連疾患を有する対象を治療することを含む。いくつかの実施形態において、対象の治療には、この対象がＩＬ−６関連疾患を有するかどうか、および場合により、この対象がステロイドまたは抗ＶＥＧＦ治療薬のような他の非ＩＬ−６阻害性治療に耐性があるかどうかを判定することも含む。
【０１０６】
眼のような特異的な部位で、例えば硝子体において有効な或る抗体系治療薬に伴う１つの問題は、全身的適用から結果として生じる有害作用である。１つの解決策は、本明細書に説明される分子によって例示されるような全身的なものとは対照的に局所的に送達することのできる治療薬を提供することである。局所的に、例えば硝子体へ送達されるいくつかの治療薬はある程度全身的であるようなので、比較的迅速な全身性代謝回転を有する分子を設計することは有利である。出願人は、このような分子の１つの実施例、すなわち例えば親分子または基準抗体と比較して迅速な全身性代謝回転のために設計されたＩＬ−６ａ抗体を操作した。このことは、この分子のＦｃＲｎ結合を修飾して、ＩＬ−６ａのＦｃＲｎ仲介性再利用を低下させることによって達成された。このような操作、すなわちＦｃＲｎ再利用を低下させることに関するさらなる利点は、ＩＶＴ投与後の硝子体からの抗体の流出を低下させることによって高まった硝子体の保有であることができる。したがって、いくつかの実施形態において、ＦｃＲｎ結合の低いＩＬ−６ａは、投薬頻度を低下させることができる。
【０１０７】
（糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ））
糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）は、網膜の血管の閉塞および漏れを包含し、視力を低下させ、潜在的に失明を引き起こす。ＤＭＥに対する標準的な治療には、ステロイドまたは抗ＶＥＧＦ抗体の局所投与を含む。しかしながら、多くの患者は、これらの治療法に対して不応性である。糖尿病黄斑浮腫の病理発生は、血管新生、炎症、および酸化的ストレスに関する構成要素を包含する。ＩＬ−６は、低酸素症および高血糖によって誘導され、血管炎症、血管透過性、および病理学的血管新生を高めることができる。ＩＬ−６は、ＶＥＧＦ発現を直接的に誘導することができ、動物モデルにおける脈絡膜血管新生を促進することができる。ＤＭＥ患者においては、眼のＩＬ−６水準は黄斑の厚さおよび疾患の重症度と正に相関する。ＩＬ−６水準は、抗ＶＥＧＦ応答性患者においては低いながらも、抗ＶＥＧＦ療法に失敗する患者においては高いと伝えられている。したがって、本明細書に説明されるＩＬ−６ａの投与は、抗ＶＥＧＦ治療薬と組み合わせた糖尿病の治療に、または抗ＶＥＧＦ療法に応答しない患者用を含む抗ＶＥＧＦ治療に対する代替療法として有用である。ＩＬ−６ａを用いた黄斑浮腫の治療はまた、いずれかの機序を完全に阻害して病理状態を阻害する必要性を除去し、したがって、各サイトカインの所望の生理学的役割のうちのいくつかを保存することによって安全性を改善することもある。したがって、ＶＥＧＦ阻害と組み合わせた局所的なＩＬ−６ａ治療は、投薬頻度を低下させることができ、かつ治療の有害作用を低減させることができる。
【０１０８】
ＤＭＥにおいて、硝子体ＩＬ−６水準と疾患重症度およびＶＥＧＦ不応性対象の両方の間には正の相関がある。したがって、本明細書に説明されるＩＬ−６ａを使用して、ステロイド療法、抗ＶＥＧＦ療法、またはその両方に対して不応性のＤＭＥ対象を治療することができる。いくつかの場合、ＩＬ−６ａを抗ＶＥＧＦ療法またはステロイド療法と組み合わせて使用して、例えばＤＭＥを治療する。
【０１０９】
本明細書に説明されるＩＬ−６ａを使用して、癌、例えば前立腺癌、白血病、多発性骨髄腫、炎症性疾患（慢性炎症性増殖性疾患など）および自己免疫疾患、例えば関節リウマチ、キャッスルマン病（巨大リンパ節増殖症または血管小胞リンパ節増殖症、リンパ性過誤腫、血管小胞リンパ節増殖症）、若年性特発性関節炎（多関節性若年性特発性関節炎および全身性若年性特発性関節炎を含む。）、スチル病（若年性特発性関節炎および成人発症スチル病を包含する。）、成人発症スチル病、アミロイドＡアミロイドーシス、リウマチ性多発筋痛、圧痕浮腫随伴性弛緩性血清学的陰性対称性滑膜炎（ｒｅｍｉｔｔｉｎｇ  ｓｅｒｏｎｅｇａｔｉｖｅ  ｓｙｍｍｅｔｒｉｃａｌ  ｓｙｎｏｖｉｔｉｓ  ｗｉｔｈ  ｐｉｔｔｉｎｇ  ｅｄｅｍａ）、脊椎関節炎（ｓｐｏｎｄｙｌｏａｒｔｈｒｉｔｉｄｅｓ）、ベーチェット病（眼の症状の治療を含む。）、粥状硬化症、乾癬、全身性エリテマトーデス、多発性筋炎（炎症性ミオパチーの１種）、再発性多発軟骨炎、後天性血友病Ａ、多発性硬化症、炎症に関する貧血、ならびにクローン病のような障害を治療することもできる。
【０１１０】
ＩＬ−６アンタゴニストは、或る神経学的疾患、例えばうつ病およびアルツハイマー病の治療にも有用である。
【０１１１】
本明細書に説明されるＩＬ−６ａを用いて治療することのできる他の疾患には、全身性強皮症、高安動脈炎、巨細胞動脈炎、移植片対宿主病、およびＴＮＦ受容体関連周期熱症候群（ＴＲＡＰＳ）を含むが、これらに限定されない。
【０１１２】
（投与）
ＩＬ−６抗体またはその断片は、例えば異常に高水準のＩＬ−６を発現する対象（例えば、患者）へ投与することができる。抗体またはその断片は、単回投与することができ、または複数回投与することができる。この抗体は例えば、１日３回から６か月以上に１回まで投与することがある。この投与は、１日３回、１日２回、１日１回、２日に１回、３日に１回、週に１回、２週に１回、毎月１回、２か月に１回、３か月に１回および６か月に１回のような予定にあることができる。この抗体またはその断片は、ミニポンプもしくは植え込み可能な徐放性カプセルのような他の経路を介して、またはこの抗体もしくはその断片を産生する封入された細胞によって連続的に投与することができる。この抗体またはその断片は、粘膜、頬側、鼻内、吸入性、静脈内、皮下、筋肉内、非経口、眼内、または腫瘍内の経路を介して投与することができる。この抗体またはその断片は、１回、少なくとも２回または少なくとも容態を治療、緩和もしくは治癒させるまでの期間投与することができる。この抗体またはその断片は一般的に、この容態が存在する限り投与される。この抗体またはその断片は一般的に、本明細書に説明される医薬組成物の一部として投与される。抗体の薬用量は一般的に、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ、１〜２０ｍｇ／ｋｇ、および１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲にある。この抗体またはその断片の血清濃度は、何らかの適切な方法によって測定することができる。本明細書に説明される或る化合物の１つの特徴は、この化合物が比較的頻繁でない投与、例えば、週１回、週２回、週３回、４週ごとに１回、２週ごとに１回、８週ごとに１回、１２週ごとに１回、１６週ごとに１回、３２週ごとに１回、１か月ごとに１回、２か月ごとに１回、３か月ごとに１回、または６か月ごとに１回を必要とする点である。いくつかの場合、この化合物は、例えば対象の容態によって決定される必要に応じたベースで投与される。ＩＬ−６へ一度結合すると緩徐な解離速度に少なくとも一部よることによって達成される高い効力と、比較的高濃度の化合物を送達する能力との組合せは、比較的あまり頻繁ではない投薬を可能にする本明細書に説明されるＩＬ−６アンタゴニストの特徴である。
【０１１３】
いくつかの場合、このＩＬ−６ａは単一療法として投与される。他の実施形態において、このＩＬ−６ａはメトトレキサートまたは他の疾患緩和性抗関節炎薬と同時に投与される。
【０１１４】
（抗体の作製）
抗体ＩＬ−６ａまたはその誘導体もしくは断片は、モノクローナル抗体法のような当該技術分野で公知の方法を用いて製造することができる（例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５を参照されたい。）。Ｂリンパ球のウイルス形質転換または癌遺伝子形質転換のようなモノクローナル抗体を製造するための他の技術も採用することができる。
【０１１５】
キメラ抗体またはヒト化抗体は、当該技術で公知の方法を用いて調製されたマウスモノクローナル抗体の配列を基に調製することができる。重鎖免疫グロブリンおよび軽鎖免疫グロブリンをコードするＤＮＡは、関心対象のマウスハイブリドーマから得ることができ、標準的な分子生物学技術を用いて非マウス（例えば、ヒト）免疫グロブリン配列を含有するよう操作することができる。例えば、キメラ抗体を作製するために、マウス可変部をヒト定常部へ、当該技術で公知の方法を用いて連結することができる（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい。）。ヒト化抗体を作製するために、マウスＣＤＲ部をヒト枠組み構造へと、当該技術分野で公知の方法を用いて挿入することができる（例えば、米国特許第５，２２５，５３９号、ならびに米国特許第５，５３０，１０１号、第５，５８５，０８９号、第５，６９３，７６２号、および第６，１８０，３７０号を参照されたい。）。
【０１１６】
複数の実施形態において、本明細書に説明されるＩＬ−６ａ（例えば、抗ＩＬ−６抗体またはその誘導体もしくは断片）は、ヒトＩＬ−６を特異的に結合することができる。複数の実施形態において、このＩＬ−６ａは、ＩＬ−６の部位ＩＩ（例えば、ヒトＩＬ−６の部位ＩＩ）へ特異的に結合することができる。
【０１１７】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−６ａ抗体は、ヒトモノクローナル抗体である。このような抗体は、マウスの系よりもむしろヒトの免疫系の複数の部分を含むトランスジェニックマウスまたはトランスクロモソーミックマウスを用いて作製することができる。これらのトランスジェニックマウスおよびトランスクロモソーミックマウスにはそれぞれ、ＨｕＭＡｂマウス（登録商標）およびＫＭマウス（登録商標）として本明細書に参照されるマウスを含み、「ヒトＩｇマウス」として本明細書に集約的に参照される（例えば、米国特許第５，５４５，８０６号、第５，５６９，８２５号、第５，６２５，１２６号、第５，６３３，４２５号、第５，７８９，６５０号、第５，８７７，３９７号、第５，６６１，０１６号、第５，８１４，３１８号、第５，８７４，２９９号、および第５，７７０，４２９号、米国特許第５，５４５，８０７号、ＰＣＴ公報第ＷＯ９２／０３９１８号、第ＷＯ９３／１２２２７号、第ＷＯ９４／２５５８５号、第ＷＯ９７／１３８５２号、第ＷＯ９８／２４８８４号および第ＷＯ９９／４５９６２号、ならびにＰＣＴ公報第ＷＯ０１／１４４２４号を参照されたい。）。
【０１１８】
別の態様において、ヒト抗ＩＬ−６抗体は、ヒト重鎖導入遺伝子およびヒト軽鎖導入染色体を保有するマウスのような、導入遺伝子および導入染色体の上にヒト免疫グロブリン配列を保有するマウスを用いて産生させることができる。このようなマウスは、ＰＣＴ公報第ＷＯ０２／４３４７８号において詳細に説明されている。
【０１１９】
ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する他のトランスジェニック動物系は、当該技術分野で入手可能であり、抗体ＩＬ−６ａを産生させるために使用することができる。例えば、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（商標）（Ａｂｇｅｎｉｘ社）として参照される代替的な導入遺伝子の系を使用することができ、このようなマウスは、例えば、米国特許第５，９３９，５９８号、第６，０７５，１８１号、第６，１１４，５９８号、第６，１５０，５８４号、および第６，１６２，９６３号に説明される。その上、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現するトランスクロモソーミック動物の系は、当該技術分野で入手可能であり、抗体ＩＬ−６ａを産生させるために使用することができる。例えば、ヒト重鎖導入染色体およびヒト軽鎖導入染色体の両方を保有するマウスは、富塚ら（２０００，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９７：７２２〜７２７）に説明される。ヒトモノクローナル抗体は、ヒト抗体の応答が免疫化の際に生じることができるようヒト免疫細胞が再構築されたＳＣＩＤマウスを用いても調製することができる。このようなマウスは例えば、米国特許第５，４７６，９９６号および第５，６９８，７６７号に説明されている。
【０１２０】
（ファージディスプレイライブラリ）
いくつかの場合、抗体ＩＬ−６ａ抗体またはその誘導体もしくは断片は、ファージを用いてヒト抗体のライブラリを合成すること、このライブラリをＩＬ−６、例えばヒトＩＬ−６またはその断片でスクリーニングすること、ＩＬ−６を結合するファージを単離すること、およびこのファージからこの抗体を得ることを包含する方法で製造する。
【０１２１】
組換えヒト抗体ＩＬ−６ａは、組換え組合せ抗体ライブラリをスクリーニングすることによっても単離することができる。一般に、このライブラリは、Ｂ細胞から単離したｍＲＮＡから調製したヒトＶＬｃＤＮＡおよびＶＨｃＤＮＡを用いて作製したｓｃＦｖファージディスプレイライブラリである。このようなライブラリの調製方法およびスクリーニング方法は当該技術分野で公知である。ファージディスプレイライブラリを作製するためのキットは市販されている（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ組換えファージ抗体システム，カタログ番号２７−９４００−０１、およびＳｔｒａｔａｇｅｎｅ  ＳｕｒｆＺＡＰ（商標）ファージディスプレイキット，カタログ番号２４０６１２）。抗体ディスプレイライブラリを作製およびスクリーニングする上で使用することのできる他の方法および試薬は、当該技術分野で公知である（例えば、参照により本明細書にすべて組み込まれる米国特許第５，２２３，４０９号、ＰＣＴ公報第ＷＯ９２／１８６１９号、第ＷＯ９１／１７２７１号、第ＷＯ９２／２０７９１号、第ＷＯ９２／１５６７９号、第ＷＯ９３／０１２８８号、第ＷＯ９２／０１０４７号、第ＷＯ９２／０９６９０号、Ｆｕｃｈｓら，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７０〜１３７２（１９９１）、Ｈａｙら，Ｈｕｍ  Ａｎｔｉｂｏｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ３：８１〜８５（１９９２）、Ｈｕｓｅら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５〜１２８１（１９８９）、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２〜５５４（１９９０）、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら，ＥＭＢＯ  Ｊ  １２：７２５〜７３４（１９９３）、Ｈａｗｋｉｎｓら，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２６：８８９〜８９６（１９９２）、Ｃｌａｃｋｓｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４〜６２８（１９９１）、Ｇｒａｍら，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８９：３５７６〜３５８０（１９９２）、Ｇａｒｒａｄら，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７３〜１３７７（１９９１）、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら，Ｎｕｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ  １９：４１３３〜４１３７（１９９１）、およびＢａｒｂａｓら，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８８：７９７８〜７９８２（１９９１）を参照されたい。）。
【０１２２】
所望の特徴を有するヒトＩＬ−６抗体を単離および製造するための実施例において、まずヒトＩＬ−６抗体を使用して、参照によりすべて本明細書に組み込まれるＰＣＴ公報第ＷＯ９３／０６２１３号に説明されるエピトープ刷り込み方法を用いて、ＩＬ−６と類似の結合活性を有するヒト重鎖配列および軽鎖配列を選択する。本方法において使用される抗体ライブラリは一般的に、参照によりすべて本明細書に組み込まれるＰＣＴ公報第ＷＯ９２／０１０４７号、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２〜５５４（１９９０）、およびＧｒｉｆｆｉｔｈｓら，ＥＭＢＯ  Ｊ  １２：７２５〜７３４（１９９３）において説明されるように調製およびスクリーニングされたｓｃＦｖライブラリである。
【０１２３】
初期のヒトＶＬドメインおよびＶＨドメインを一度選択すると、「混合および符合」実験が行われ、この中で、初期的に選択されたＶＬ区域およびＶＨ区域の異なる対をＩＬ−６結合についてスクリーニングして、好ましいＶＬ／ＶＨ対の組合せを選択する。ＩＬ−６ａの所望の特徴について選択するために、選択された対のＶＬ区域および／またはＶＨ区域を無作為に突然変異させることができる。このインビトロでの親和性熟成は、例えば、選択されたＶＨドメインおよびＶＬドメインのうちの１つまたは両方のＣＤＲに対して招待されるＰＣＲプライマーを用いてＶＨドメインおよびＶＬドメインを増幅することによって達成することができ、このプライマーは、結果として生じるＰＣＲ産物が、無作為突然変異をＶＨおよび／またはＶＬへと導入したこのＶＨ区域およびＶＬ区域をコードするよう、或る位置にある４つのヌクレオチド塩基の無作為混合物を含有する。このような無作為に突然変異したＶＨ区域およびＶＬ区域は、ＩＬ−６への、例えばＩＬ−６の部位ＩＩへの結合について再スクリーニングすることができる。
【０１２４】
組換え免疫グロブリンディスプレイライブラリからの抗体ＩＬ−６ａのスクリーニングおよび単離の後、当該技術分野で公知の組換えＤＮＡ技術を用いて、この選択された抗体をコードする核酸をディスプレイパッケージから（例えば、ファージゲノムから）回収して、他の発現ベクターへとサブクローニングすることができる。このような抗体をさらに操作して、本明細書に説明されるような抗体断片を製造することができる。
【０１２５】
（薬物動態（ＰＫ））
ＰＫについての検査は、当該技術分野で公知の方法を用いて実施することができる。動物の使用を必要とする測定、例えばＰＫの測定に対する１つの関門は、ヒトＩＬ−６がこのような検査に通常使用されるいくつかの動物のＩＬ−６と５０％未満の相同性を有することである。ＰＫを検査する１つの方法はそれゆえ、ヒトＩＬ−６を発現するトランスジェニックマウスを使用することである。いくつかの実施形態において、非ヒト霊長類を使用して、ＰＫを測定する。
【０１２６】
いくつかの実施形態において、抗ＩＬ−６抗体を突然変異させて、この抗体のＰＫを例えば、ＦｃＲｎ結合のｐＨ感度を変化させることによって変化させる。このような突然変異の入手方法は、実施例において説明する。したがって、いくつかの実施形態において、このＩＬ−６ａは、親ＩＬ−６ａまたは基準分子と比較して全身性のＰＫが変化している。いくつかの場合、このＰＫは、硝子体において変化も改善もされない。いくつかの実施形態において、このＩＬ−６ａは、親ＩＬ−６ａまたは基準分子と比較して硝子体における同じまたは高いＰＫ（例えば、長い半減期）および低い全身性ＰＫ（例えば、血液、血漿、リンパ液、血清、肝臓、腎臓、他の組織、もしくは他の体液のような循環流体中でアッセイされるようなもの）を有する。
【０１２７】
（ＩＬ−６アンタゴニストを検査するためのモデル）
ＩＬ−６アンタゴニストは、ＩＬ−６関連送達のための、特に治療効能および、有利なＩＬ−６特性に及ぼす限定された有害作用についての疾患モデルにおいて検査することができる。例えば、ぶどう膜炎は、ラットまたはマウスにおける実験的自己免疫ぶどう膜炎モデル（Ｃａｓｐｉ，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ５２：１８７３、Ａｇａｒｗａｌら，９００：４４３〜４６９，２０１２）において、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）免疫化における視細胞間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）を用いて検査することができる。他のモデルには、樹状細胞起因性ぶどう膜炎、培養エフェクターＴ細胞の養子免疫細胞移入、ＩＲＢＰ  ＴＣＲ  Ｔｇマウスにおける自発性ＥＡＵ、内毒素誘発性ぶどう膜炎、自己免疫性ぶどう膜網膜炎について当該技術分野で公知のものを含む（Ｈａｒｕｔａら，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ５３：３２６４（２０１１）、吉村ら，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  ４８：３４７〜３５４（２００９））。ＩＬ−６ａ疾患に関する効果を検討するために使用することのできる他のモデル系は、例えば、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）モデル（泉−永井ら，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １７０：６（２００７）、Ｋｒｚｙｓｔｏｌｉｋら，Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  １２０：３３８（２００２））およびＫｅｒｎら（糖尿病合併症集合体に関する動物モデル（Ａｎｉｍａｌ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ）（Ｐ０１  ＤＫ５７７３３），改訂報告書（Ｕｐｄａｔｅ  Ｒｅｐｏｒｔ（２００１年９月〜２００４年１月））に説明されるモデルのような糖尿病モデルである。関節リウマチにおけるＩＬ−６ａを検査するのに有用な動物モデルは当該技術分野で公知であり、例えば、Ａｓｑｕｉｔｈら（Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３９：２０４０〜２０４４（２００９））およびＫｏｌｌｉａｓら（Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ  ７０：１３５７〜１３６２（２０１１）を参照されたい。
【０１２８】
（併用療法）
いくつかの実施形態において、ＩＬ−６ａは、第二の治療実体と組み合わせて投与される。例えば、ＩＬ−６ａは、ラニジズマブ（ｒａｎｉｄｉｚｕｍａｂ）のようなＶＥＧＦ阻害薬を含む治療処方において投与される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−６ａは、抗ＰＤＧＦ抗体または抗ＰＤＧＦ受容体抗体（例えば、イマチニブのようなＰＤＧＦ阻害薬を含む治療処方において投与される。
【０１２９】
（ＩＬ−６アンタゴニストの送達）
ＩＬ−６アンタゴニストは、ＩＬ−６阻害を標的としている細胞もしくは組織と直接接触してまたはこの細胞もしくは組織の近くでのいずれかで、局所的に送達することができる。このような送達方法に関する非限定的な実施例には、ＩＬ−６アンタゴニストを含有する物質の注射、注入、または植え込みを含む。
【０１３０】
いくつかの実施形態において、このＩＬ−６ａ組成物は、眼科用製剤として投与される。この方法は、このＩＬ−６ａ組成物および眼科的に許容し得る担体の投与を含むことができる。いくつかの実施形態において、この眼科用製剤は、液体、半固体、挿入物、膜、ミクロ粒子、またはナノ粒子である。
【０１３１】
いくつかの実施形態において、このＩＬ−６ａ組成物は、例えば眼への局所的投与のために製剤化される。この局所製剤は液体製剤または半固体であることができ、例えば、局所製剤は、水溶液、水性懸濁液、軟膏剤またはゲルを含むことができる。眼科用ＩＬ−６ａ製剤は、眼の前面に、上瞼の下に、下瞼の上におよび結膜嚢の中に局所的に適用することができる。典型的には、眼科用製剤は無菌である。ＩＬ−６ａ眼科用製剤は、眼科用製剤の調製に適した１つ以上の医薬賦形剤を含有することができる。このような賦形剤の例は、保存剤、緩衝剤、キレート剤、抗酸化剤および浸透圧調節用塩類である。軟膏剤および懸濁液の両方を含む眼科用製剤の粘度は典型的には、選択された投与経路に適している。いくつかの実施形態において、この眼科用製剤の粘度は、約１，０００センチポアズから約３０，０００センチポアズまでである。
【０１３２】
いくつかの実施形態において、この製剤は、ポリマーを含む液体製剤である。このようなポリマーを使用して、生物学的利用能を改善し、粘度を高め、または眼からの液体製剤の排水を低下させることができる。適切なポリマーには、Ｗａｇｈら（Ａｓｉａｎ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ，２：１２〜１７，２００８）において説明されるものを含むがこれには限定されない。非限定的な実施例において、このポリマーは、ヒアルロナーゼナトリウム、キトサン、シクロデキストリン（例えば、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン）、ポリガラクトロン酸、キシログルカン、キサンタンガム、ゲランガム、チオマー（ｔｈｉｏｍｅｒ）、ポリ（オルトエステル）（例えば、Ｅｉｎｍａｈｌ，Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ  ５３：４５〜７３，２００１）、またはタマリンド種子多糖（例えば、Ｇｈｅｌａｒｄｉら，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  ４８：３３９６〜３４０１，２００４）である。
【０１３３】
いくつかの実施形態において、眼科用送達のためのＩＬ−６ａ組成物を含む製剤は、界面活性剤、アジュバント、緩衝剤、抗酸化剤、浸透圧調整剤、保存剤（例えば、ＥＤＴＡ、ＢＡＫ（塩化ベンザルコニウム）、亜塩素酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウム、ポリクオテリウム（ｐｏｌｙｑｕａｔｅｒｉｕｍ）−１）、増粘剤または粘度調節剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、グリコール４００、プロピレングリコールヒドロキシメチルセルロース（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ  ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、ヒドロクスプロピル（ｈｙｄｒｏｘｐｒｏｐｙｌ）−グアー、ヒアルロン酸、およびヒドロキシプロピルセルロース）およびこれらに類するもののうちの１つ以上を含むことができる。製剤中の添加物には、塩化ナトリウム、重炭酸ナトリウム、ソルビン酸、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ひまし油、および過ホウ酸ナトリウムを含むことがあるが、これらに限定されない。
【０１３４】
いくつかの実施形態において、精製水または脱イオン水をこの組成物に使用する。このｐＨは、何らかの生理学的かつ眼科的に許容し得るｐＨ調整性の酸、塩基または緩衝剤を約５．０〜８．５の範囲内で、例えば、ｐＨ７．０、ｐＨ７．３、ｐＨ７．４、またはｐＨ７．５で添加することによって調整することができる。酸に関する眼科的に許容し得る実施例には、酢酸、ホウ酸、クエン酸、乳酸、リン酸、塩酸、またはこれらに類するものを含み、塩基に関する実施例には、水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、トロメタミン、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、およびこれらに類するものを含む。製剤に使用することのできる塩類および緩衝剤の実施例には、クエン酸塩／デキストロース、重炭酸ナトリウム、塩化アンモニウムならびに前記の酸および塩基の混合物を含む。
【０１３５】
いくつかの実施形態において、眼科用組成物の浸透圧は、約１０ミリオスモル（ｍＯｓＭ）から約４００ｍＯｓＭ、例えば２００〜４００ｍＯｓＭ、または２２０〜３７０ｍＯｓＭであることがある。一般的に、この浸透圧は、生理学的かつ眼科的に許容し得る塩類または賦形剤を用いて調整することができる。いくつかの実施形態において、塩化ナトリウムは製剤中に含まれ、例えば、塩化ナトリウムは製剤中に、組成物の総重量を基にした０．０１重量％から１重量％まで、または０．０５重量％から０．４５重量％まで及ぶ濃度で存在する。カリウム、アンモニウムおよびこれらに類するもののような陽イオン、ならびに塩化物塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、ホウ酸塩、リン酸塩、重炭酸塩、硫酸塩、チオ硫酸塩、重硫酸塩、重硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、およびこれらに類するもののような陰イオンから構成される等価の量の１つ以上の塩類は、塩化ナトリウムに加えてまたは塩化ナトリウムの代わりに使用して、所望の範囲内のモル浸透圧濃度を達成することもできる。いくつかの実施形態において、マンニトール、デキストロース、ソルビトール、グルコースおよびこれらに類するもののような糖も使用して、モル浸透圧濃度を調整する。
【０１３６】
いくつかの実施形態において、この方法は、眼の外側表面と接触して薬剤のデポーを形成または供給することを包含する。デポーとは、涙または他の眼クリアランス機序によって迅速に除去されることのない薬剤源を指す。このことは、単回適用によって眼の外側表面上における流体中に薬剤が高濃度で持続され、維持されて存在することを可能にする。いくつかの実施形態において、このデポーは、最長８時間以上存続することができる。いくつかの実施形態において、この眼科用デポー製剤には、水性ポリマー懸濁液、軟膏剤、および固体挿入物を含むが、これらに限定されない。
【０１３７】
いくつかの実施形態において、半固体組成物は、典型的には増大が、温度、ｐＨ、または電解質濃度の変化とともに粘度が生じることである液体製剤中のポリマーの存在により、眼への適用の際に粘度が増大する液体製剤である。このポリマーは例えば、セルロースアセトフタラート、ポリアクリル酸、ゲランガム、ヒアルロナーゼ、キトサン、アルギン酸の塩（例えば、アルギン酸ナトリウム）、または酸化エチレンおよび酸化プロピレンからなるブロック共重合体（例えば、ＢＡＳＦ製のポロキサマーであるプルロニック（登録商標））であることができる。いくつかの実施形態において、このポリアクリル酸は、橋かけアクリル酸（例えば、カルボポール（登録商標））である。いくつかの実施形態において、この半固体組成物は、カルボポールと酸化エチレンおよび酸化プロピレンからなるブロック共重合体との混合物、メチルセルロースとヒドロキシエチルセルロースとの混合物、またはポリエチレングリコールと酸化エチレンおよび酸化プロピレンからなるブロック共重合体との混合物を含む。
【０１３８】
いくつかの実施形態において、このＩＬ−６ａを含有する眼科用製剤は軟膏剤またはゲルである。いくつかの実施形態において、この眼科用製剤は油系送達ビヒクルである。例えば、この製剤は、このＩＬ−６ａ組成物が添加される（例えば、０．１〜２％）石油基剤またはラノリン基剤、および賦形剤を含むことができる。共通の基剤には、鉱油、石油およびこれらの組合せを含むことができるが、それらに限定されない。いくつかの実施形態において、この軟膏は下瞼上へリボンとして適用される。
【０１３９】
いくつかの場合、この眼科用組成物は眼科用挿入物である。例えば、この眼科用挿入物は生物学的に不活性であり、軟らかく、生分解性であり、粘弾性があり、治療薬への曝露後の滅菌に対して安定であり、風媒性細菌からの感染に対して耐性があり、生分解性であり、生体適合性であり、および／または粘弾性である。いくつかの実施形態において、この挿入物は、眼科的に許容し得るマトリックス、例えばポリマーマトリックスを含む。このマトリックスは典型的にはポリマーであり、このＩＬ−６ａ組成物はこのマトリックス内に分散し、またはこのポリマーマトリックスへ結合している。いくつかの実施形態において、この薬剤は、共有結合の溶解または加水分解を通じてこのマトリックスから緩徐に放出される。いくつかの実施形態において、このポリマーは生分解性（可溶性）であり、その溶解速度は、その中で分散する薬剤の放出速度を制御することができる。別の形態において、このポリマーマトリックスは、加水分解などによって分解しそれによりポリマーへ結合したまたはポリマーの中に分散している薬剤を放出する生分解性ポリマーである。さらなる実施形態において、このマトリックスおよび薬剤は、放出をさらに制御するために、追加的なポリマー被膜で取り囲むことができる。いくつかの実施形態において、この挿入物は、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）のような生分解性ポリマー、エチレン／ビニル酢酸共重合体（ＥＶＡ）、ポリアルキルシアノアクリラート、ポリウレタン、ナイロン、もしくはポリ（ｄｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）、またはこれらのうちのいずれかからなる共重合体を含む。いくつかの場合、この薬剤は、このマトリックス材料へと分散しており、または重合に先立ってこのマトリックス材料を製造するのに使用される単量体組成物の中で分散している。いくつかの実施形態において、薬剤の量は、約０．１〜約５０％、または約２〜約２０％である。この生分解性（ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ）または生分解性（ｂｉｏｅｒｏｄｉｂｌｅ）ポリマーマトリックスは、使用済みの挿入物を眼から取り出す必要がないよう使用することができる。この生分解性（ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ）または生分解性（ｂｉｏｅｒｏｄｉｂｌｅ）ポリマーマトリックスが分解または溶解すると、薬剤が放出される。
【０１４０】
さらなる実施形態において、眼科用挿入物は、その全体において参照により本明細書に組み込まれるＷａｇｈら，「眼科用剤形および薬剤送達システムにおいて使用されるポリマー（Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ｕｓｅｄ  ｉｎ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｏｓａｇｅ  ｆｏｒｍ  ａｎｄ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ）」，Ａｓｉａｎ  Ｊ．Ｐｈａｒｍ．１２〜１７頁（２００８年１月）において説明されるものを含むがこれに限定されないポリマーを含む。いくつかの実施形態において、この挿入物は、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、アクリラートもしくはメタクリラートのポリマーもしくは共重合体（例えば、Ｒｏｈｍ社もしくはＤｅｇｕｓｓａ社製のポリマーからなるオイドラギット（登録商標）ファミリー）、ヒドロキシメチルセルロース、ポリアクリル酸、ポリ（アミドアミン）デンドリマー、ポリ（ジメチルシロキサン）、酸化ポリエチレン、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリラート）、ポリビニルアルコール）、またはポリ（プロピレンフマラート）から選択されるポリマーを含む。いくつかの実施形態において、この挿入物はゲルフォーム（登録商標）を含む。いくつかの実施形態において、この挿入物は、４５０ｋＤａのシステイン抱合体のポリアクリル酸である。
【０１４１】
この挿入物は、ＩＬ−６ａ組成物を含有する中心および外側チューブ（例えば、米国特許公報第２００４０００９２２２号に説明されるもの）を含むことができる、いくつかの場合、この外側チューブは薬剤に対して透過性、半透性、または不透過性であることができる。いくつかの実施形態において、この中心には、ＩＬ−６ａ組成物放出速度に有意な作用を及ぼさないポリマーマトリックスを含む。いくつかの場合、この外側チューブ、中心のポリマーマトリックス、またはこれらの両方は生分解性である。この同時押出成形された製品は、薬剤送達装置中へといくつかに分けることができる。いくつかの実施形態において、この装置は個々の末端が開いているよう未被覆であり、またはこの装置は例えば、このＩＬ−６ａ組成物に対して浸透性の、このＩＬ−６ａ組成物に対して半透性の、もしくは生分解性の層で被覆されている。或る実施形態において、このＩＬ−６ａ組成物および少なくとも１つのポリマーは粉末状で混ざっている。
【０１４２】
いくつかの実施形態において、この眼科用組成物は、眼科用膜である。このような膜に適したポリマーには、Ｗａｇｈら（上述）に説明される膜を含むが、これに限定されない。いくつかの実施形態において、この膜は、軟収縮性（ｓｏｆｔ−ｃｏｎｔｒａｃｔ）レンズ、例えば、ジメタクリル酸エチレングリコールを用いて架橋したＮ，Ｎ−ジエチルアクリルアミドおよびメタクリル酸からなる共重合体から構成されたレンズである。
【０１４３】
或る実施形態において、このＩＬ−６ａは、管状である挿入物中にあり、かついくつかに分けることがある。
【０１４４】
いくつかの実施形態において、このＩＬ−６ａ組成物は、治療有効量で製剤化され、ポリマーマトリックスによって被覆され、またはポリマーマトリックス中に分散しており、それによりＩＬ−６ａ組成物は顆粒状または粒子状にある。いくつかの実施形態において、このＩＬ−６ａ組成物は、この顆粒由来の薬剤がマトリックス中へとまたはマトリックス内で溶解すると製剤から放出され、マトリックスを通って拡散し、周囲の生理学的流体へと放出される。いくつかの実施形態において、放出速度は、主として顆粒／粒子からマトリックスへのＩＬ−６ａ組成物の溶解速度によって律速され、このマトリックスを通る拡散工程および周囲の流体への分散工程は、主として放出速度を律速されていない。或る実施形態において、このポリマーマトリックスは、非生分解性であるのに対し、他の実施形態において、このポリマーマトリックスは生分解性である。例示的な非生分解性ポリマーマトリックスは、ポリウレタン、ポリシリコーン、ポリ（エチレン−コ−酢酸ビニル）（ＥＶＡ）、ポリビニルアルコール、ならびにこれらの誘導体および共重合体から形成することができる。例示的な生分解性ポリマーマトリックスは、ポリ酸無水物（ｐｏｌｙａｎｈｙｄｒｉｄｅ）、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリオルトエステル、ポリアルキルシアノアクリラート、ならびにこれらの誘導体および共重合体から形成することができる。
【０１４５】
いくつかの場合、このＩＬ−６ａ組成物は、コラーゲン材料中に製剤化される。例えば、この挿入物は、可溶性眼科用薬剤挿入物（例えば、薬剤送達のために上部結膜嚢に導入することのできるポリマー楕円状膜、エチレンビニル酢酸でできたオキュサート（ＯＣＵＳＥＲＴ）（登録商標）（ピロカルピン眼用治療システム、Ａｌｚａ社により開発）、セルロースでできた桿状挿入物であるラクリサート（Ｌａｃｒｉｓｅｒｔ）（登録商標）、ポリ（ビニルアルコール）でできた新眼科用薬剤送達システム（Ｎｅｗ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＮＯＤＳ））のような楕円状挿入物、またはＦａｂｒｉｚｉｏ（Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ  １６：９５〜１０６，１９９８）に説明されるような挿入物であることができる。いくつかの場合、この挿入物は、コラーゲン、ゼラチン、またはポリマーを含み、この中でポリマーは、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）、エチレン／酢酸ビニル共重合体（ＥＶＡ）、ポリアルキルシアノアクリラート、ポリウレタン、ナイロン、ポリ（ｄｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）、またはこれらのうちのいずれかからなる共重合体から選択される。いくつかの場合、この挿入物は、上部瞼の下に植え込まれる。いくつかの場合、この挿入物は、眼の後部区域に、脈絡膜腔に、または強膜に植え込まれる。いくつかの実施形態において、この挿入物は、硝子体内にまたは網膜下に植え込まれる。いくつかの実施形態において、この挿入物は網膜下に注射される。これらの調製物のための投与方法および技術は、その内容が参照により本明細書に組み込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎの医薬の科学の実施（Ｔｈｅ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）第２０版（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００６）に示されている。
【０１４６】
他の実施形態において、ＩＬ−６ａ組成物を含有する挿入物は、この薬剤の眼の硝子体への徐放性を提供する。本明細書で使用する場合、「徐放性」とは、制御された様式で長い時間にわたってこの組成物が薬剤を放出することを意味する。いくつかの実施形態において、この挿入物は、水性薬剤濃度が放出中に硝子体薬剤濃度を下回ったままであるような速度でこの薬剤を放出する。いくつかの実施形態において、水性薬剤濃度は、約０．００２μｇ／ｍＬ〜約０．０１μｇ／ｍＬまたは約０．０１μｇ／ｍＬ〜約０．０５μｇ／ｍＬ、または約０．０５μｇ／ｍＬ未満である。いくつかの実施形態において、この薬剤は、約１μｇ／日〜約５０μｇ／日、または約１μｇ／日〜約１０μｇ／日の速度で放出される。いくつかの実施形態において、この挿入物はさらに、先に詳述したように、追加的な治療薬、例えば、フルオシノロンアセトニド（眼科用挿入物であるレチサート（登録商標）において認められるようなもの）を含む。
【０１４７】
いくつかの実施形態において、この眼科用組成物は、ミクロスフェアまたはナノ粒子を含む。いくつかの実施形態において、このミクロスフェアはゼラチンを含む。いくつかの実施形態において、このミクロスフェアは、眼の後部区域に、脈絡膜腔に、強膜に、硝子体内にまたは網膜下に注射される。いくつかの実施形態において、このミクロスフェアまたはナノ粒子は、Ｗａｇｈら（Ａｓｉａｎ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  ２：１２〜１７，２００８）に説明されるものを含むがこれに限定されないポリマーを含む。いくつかの実施形態において、このポリマーは、キトサン、ポリアクリル酸のようなポリカルボン酸、アルブミン粒子、ヒアルロン酸エステル、ポリイタコン酸、ポリ（ブチル）シアノアクリラート、ポリカプロラクトン、ポリ（イソブチル）カプロラクトン、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）、またはポリ（乳酸）である。いくつかの実施形態において、このミクロスフェアまたはナノ粒子は、固体の脂質粒子を含む。
【０１４８】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−６ａ組成物は、イオン交換樹脂を含む。いくつかの実施形態において、このイオン交換樹脂は、無機ゼオライトまたは合成有機樹脂である。いくつかの実施形態において、このイオン交換樹脂には、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＷａｇｈら（上述）に説明されるものを含むがこれには限定されない。いくつかの実施形態において、このイオン交換樹脂は、部分的に中和されたポリアクリル酸である。
【０１４９】
ＩＬ−６ａ組成物は、水性ポリマー懸濁液中に提供することができる。いくつかの実施形態において、このＩＬ−６ａ組成物またはポリマー系懸濁剤は、水性媒体（例えば、先に説明したような特性を有する）中に懸濁される。ポリマー系懸濁剤の例には、デキストラン、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、多糖ゲル、ゲルライト（Ｇｅｌｒｉｔｅ）（登録商標）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースのようなセルロース系ポリマー、およびアクリル酸のポリマーまたは共重合体のようなカルボキシ含有ポリマー、ならびに他のポリマー系粘滑剤を含むがこれらに限定されない。いくつかの実施形態において、このポリマー系懸濁剤は、水膨潤性、水不溶性のポリマー、特に架橋したカルボキシ含有ポリマーである。いくつかの実施形態において、このポリマー系懸濁剤は、１つ以上のカルボキシを含有するモノエチレン系不飽和単量体の、存在する単量体の総重量を基にした少なくとも約９０重量％〜約９９．９重量％、または約９５重量％〜約９９．９重量％を含む。いくつかの実施形態において、このカルボキシ含有モノエチレン系不飽和単量体には、アクリル酸、メタクリル酸、エタクリル酸、メチルアクリル酸（クロトン酸）、シス−．アルファ．−メチルクロトン酸（アンゲリカ酸）、トランス−α−メチルクロトン酸（チグリン酸）、α−ブチルクロトン酸、アルファ．−フェニルアクリル酸、α−ベンジルアクリル酸、α−シクロヘキシルアクリル酸、フェニルアクリル酸（ケイ皮酸）、クマリン酸（ｏ−ヒドロキシケイ皮酸）、およびウンベル酸（ｐ−ヒドロキシクマリン酸）を含む。いくつかの実施形態において、このポリマーは、多官能性架橋剤（例えば、二官能性架橋剤）によって架橋される。いくつかの実施形態において、この架橋剤は、存在する単量体の総重量を基にした約０．０１％〜約５％、または約０．１％〜約５．０％、または約０．２％〜約１％の量で含有される。いくつかの実施形態において、この架橋剤は、ジビニルグリコール、２，３−ジヒドロキシヘキサ−１，５−ジエン、２，５−ジメチル−１，５−ヘキサジエン、ジビニルベンゼン、Ｎ，Ｎ−ジアリルアクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジアリルメタクリルアミドのような非ポリアルケニルポリエーテル二官能性架橋単量体；少なくとも４個の炭素原子を含有する多価アルコールをエーテル化することによって調製される１分子当たり２個以上のアルケニルエーテル基、例えば、末端Ｈ２Ｃ＝Ｃ基を含有するアルケニルエーテル基と、臭化アリルまたはこれに類するもののようなハロゲン化アルケニルを有する少なくとも３個の水酸基とを含有するポリアルケニルポリエーテル架橋剤、例えば、ポリアリルスクロース、ポリアリルペンタエリトリトール、またはこれらに類するもの；不溶性のジアクリラートならびにポリアクリラートならびにジオールおよびポリオールのメタクリラート、ポリエステルジオール、ポリエーテルジオールもしくはポリシロキサンジオール由来のイソシアナート末端プレポリマーのヒドロキシアルキルメタクリラートとのジイソシアナートヒドロキシアルキルアクリラート反応産物もしくはメタクリラート反応産物のような、約４００〜約８，０００の分子量を有するジオレフィン系非親水���マクロマ架橋剤、ならびにこれらに類するものである。
【０１５０】
いくつかの実施形態において、この架橋ポリマーは、１つのまたは複数の架橋剤とともに存在する唯一のモノエチレン系不飽和単量体としての１つまたは複数のカルボキシ含有モノエチレン系不飽和単量体から製造される。いくつかの実施形態において、このポリマーは、最高約４０重量％、好ましくは約０重量％〜約２０重量％の１つのまたは複数のカルボキシ含有モノエチレン系不飽和単量体が、生理学的かつ眼科的に無害な置換基しか含有しない、１つ以上の非カルボキシルを含有する１つのまたは複数のモノエチレン系不飽和単量体によって置き換えられたものであり、メタクリル酸メチル、アクリル酸エチル、アクリル酸ブチル、２−エチルヘキシルアクリラート、メタクリル酸オクチル、２−ヒドロキシエチルメタクリラート、３−ヒドロキシプロピルアクリラート、およびこれらに類するもののようなアクリル酸エステルおよびメタクリル酸エステル、酢酸ビニル、Ｎ−ビニルピロリドン、ならびにそれらに類するものを含む（例えば、Ｍｕｅｌｌｅｒらの米国特許第４，５４８，９９０号）。いくつかの実施形態において、このポリマーには、ポリカルボフィル（Ｎｏｖｅｏｎ  ＡＡ−１）、カルボポール（登録商標）、およびＤｕｒａＳｉｔｅ（登録商標）を含む。いくつかの実施形態において、この架橋ポリマーは、従来のフリーラジカル重合触媒を用いて、等価の球径において約５０μｍ以下の乾燥粒度へと単量体を重合する懸濁液またはエマルションによって調製される。いくつかの実施形態において、平均乾燥粒度は、等価の球径において約１〜約３０μｍ、または約３〜約２０μｍである。いくつかの実施形態において、このポリマー粒子は、より大きなポリマー粒子を機械的に摩砕することによって得る。さらなる実施形態において、このようなポリマーの分子量は、約２５０，０００〜約４，０００，０００、および３，０００，０００，０００〜４，０００，０００，０００の分子量である。他の実施形態において、架橋ポリマーの粒子は単分散であり、この粒子の少なくとも約８０％、約９０％または約９５％が主要粒度分布のμｍ帯域内に収まるような粒度分布を有することを意味する。さらなる実施形態において、この単分散粒度は、１μｍ未満の大きさの粒子が約２０％以下、約１０％、または約５％存在することを意味する。いくつかの実施形態において、この水性ポリマー懸濁液は、約０．０５〜約１％、約０．１〜約０．５％、または約０．１〜約０．５％の薬剤、および約０．１〜約１０％、約０．５〜約６．５％、約０．５〜約２．０％、約０．５％〜約１．２％、約０．６〜約０．９％、または約０．６〜約０．８％のポリマー系懸濁剤を含む。単数形であるよう参照しているが、ポリマー系懸濁剤のうちの１つ以上の種が、示された範囲内に収まる総量で使用できることは理解されるべきである。一実施形態において、不溶性の軽く架橋したポリマー粒子の量、ｐＨ、および浸透圧は互いにならびに架橋度と相関して、２５番スピンドルおよび１３Ｒ小型試料アダプタを装備したＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ  Ｄｉｇｉｔａｌ  ＬＶＴ粘度計を１２ｒｐｍで使用して室温（約２５℃）で測定される場合に、約５００〜約１００，０００センチポアズ、好ましくは約１，０００〜約３０��０００または約１，０００〜約１０，０００センチポアズの範囲の粘度を有する組成物を与えることができる。いくつかの実施形態において、この粘度は、約１０〜約４００センチポアズ、約１０〜約２００センチポアズまたは約１０〜約２５センチポアズである。
【０１５１】
いくつかの実施形態において、この水性ポリマー懸濁液は、眼への投与前と同じまたは実質的に同じ粘度を眼の中で保有するよう製剤されることがある。いくつかの実施形態において、涙液との接触の際にゲル化が増すよう製剤化されることがある。例えば、ＤｕｒａＳｉｔｅ（登録商標）または他の類似のポリアクリル酸型ポリマーを含有する製剤を眼に約６．７未満のｐＨで投与する場合、このポリマーは、より高いｐＨ（約７）を有するので、涙液との接触の際に膨潤することがある。このゲル化またはゲル化の亢進は、懸濁した粒子の捕捉をもたらすことがあり、これにより、眼の中での組成物の残留時間を長くする。いくつかの実施形態において、この薬剤は、懸濁された粒子が経時的に溶解するにつれて緩徐に放出される。いくつかの実施形態において、この送達経路は、患者の快適性および眼の組織との長い薬剤接触時間を高め。これにより薬剤吸収度および眼の中での製剤の作用持続時間を増大させる。これらの薬剤送達システムに含有される薬剤は、薬剤自体およびその物理的形態、薬剤搭載度およびシステムのｐＨのような因子に、ならびに眼の表面と適合性のある存在することもあるイオン交換樹脂のような何らかの薬剤送達アジュバントに左右される速度でゲルから放出される。
【０１５２】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−６アンタゴニストは、遺伝子送達、例えば、局所遺伝子送達を用いて対象へ提供される。このような送達は、一過性発現システム、Ｂｌｕｅｂｉｒｄ  Ｂｉｏ（米国マサチューセッツ州ケンブリッジ市）によって製造されるレンチウイルス送達システムのような安定（例えば統合）発現システム、またはＮｅｕｒｏｔｅｃｈ（米国ロード島カンバーランド町）によって製造されるような細胞工場における送達を介することができる。
【０１５３】
すべての技術的特徴は、このような特徴のすべての起こり得る組合せにおいて個々に組み合わせることができる。
【０１５４】
（等価物）
本発明は、その精神または本質的な特徴から逸脱することなく、他の具体的な形態で具現化することがある。先の実施形態はそれゆえ、本明細書に説明される本発明に関して制限するよりもむしろすべての点において実例となるとみなされるべきである。
【実施例】
【０１５５】
以下の非限定的な実施例は、本明細書に説明される本発明の実施形態をさらに説明する。
【実施例１】
【０１５６】
（脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）モデルにおける局所的ＩＬ−６遮断の確認）
局所的ＩＬ−６遮断が眼疾患、例えば糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）または滲出型ＡＭＤを治療するのに有効であり得るかどうかを判断するために、脈絡膜血管新生のためのモデルシステムを用いて、抗ＩＬ−６抗体を局所的に投与した。レーザ誘起ＣＮＶモデル（ｅｙｅｃｒｏ．ｃｏｍ／ｉｎ−ｖｉｖｏ／ｌａｓｅｒ−ｉｎｄｕｃｅｄ−ｃｈｏｒｏｉｄａｌ−ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ−ｃｎｖ／）は、炎症および血管新生を含むＤＭＥの基礎となる病理学的過程のうちの多くを再現する。試験は、ＥｙｅＣＲＯ（米国オクラホマ州オクラホマシティ）においてラットで実施した。各群６個体の動物は０日後に両側性レーザ治療を受け、片眼当たり３個の病変を生じた。３日後および１０日後に、３μｇのポリクローナル抗ラットＩＬ−６抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＡＦ５０６、米国ミネソタ州ミネアポリス市）を検査群へ硝子体内（ＩＶＴ）注射によって投与する一方、ＰＢＳまたは抗ＶＥＧＦポリクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＡＦ５６４）をビヒクル群および陽性対照群へそれぞれ投与した。病変領域を測定するために、１５日後および２２日後にインビボでの血管造影法を実施した。１５日後および２２日後の両日において、抗ＩＬ−６治療群は、ビヒクル対照と比較して血管新生を有意に低下させた。抗ＩＬ−６治療群と抗ＶＥＧＦ陽性対照の間に応答における有意差はなかった。図１は、このような実験の結果を示す。これらのデータは、ＩＶＴ投与されたＩＬ−６ａ、例えば抗ＩＬ−６抗体がラットＣＮＶモデルにおける血管新生を抗ＶＥＧＦ陽性対照と類似の水準まで低下させることができることを示す（抗ＩＬ−６対ビヒクル対照について、１５日後にｐ＝０．００５４および２２日後にｐ＝０．０００５）。
【０１５７】
これらのデータは、血管漏出を包含する疾患、例えば黄斑浮腫のような眼疾患を治療するのにＩＬ−６の局所遮断が有用であり得ることを示す。
【実施例２】
【０１５８】
（候補抗体ＩＬ−６アンタゴニスト）
候補抗体ＩＬ−６アンタゴニストは、免疫化をまず包含する過程を用いて開発された。免疫化は開発業務受託機関（ＣＲＯ）によって本出願人の監督で実施した。５個体のＢＡＬＢ／Ｃマウスに、フロイントアジュバントとともに１Ｍ  ＮａＣｌを含有するＰＢＳ中のヒトＩＬ−６（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社，カタログ番号２０６−ＩＬ／ＣＦ，米国ミネソタ州ミネアポリス市）８０μｇを皮下注射した。２回の追加免疫を８０μｇおよび５０μｇのＩＬ−６を用いて実施した。最高力価のマウスから脾細胞を収集し、Ｐ３ｘ７６３Ａｇ８．６５３骨髄腫細胞と融合させ、ハイブリドーマを形成した。
【０１５９】
ハイブリドーマ上清をＩＬ−６結合および拮抗作用についてスクリーニングした。結合ＥＬＩＳＡについて、Ｃｏｓｔａｒ  ９０１８プレートをＰＢＳ中の１μｇ／ｍＬヒトＩＬ−６で４℃で一晩被覆した。ウェルを２％ＢＳＡ含有ＰＢＳでブロッキングし、洗浄し、次いで２％ＢＳＡ含有ＰＢＳで１：２に希釈した各ハイブリドーマ上清５０μＬとともにインキュベートした。６０分後、ウェルを０．１％トゥイーン２０含有ＰＢＳ３００μｌで３回洗浄した。ＰＢＳ−ＢＳＡ中に１：３０００希釈した抗マウスＨＲＰを次に各ウェルへ添加し、３０分間インキュベートした。ウェルを先のとおり洗浄した後、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質を添加し、シグナルを４５０ｎｍおよび５５０ｎｍで測定した。拮抗作用試験については、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）−ＩＬ６受容体細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ社，米国カリフォルニア州サンディエゴ市）を、１：１０に希釈したハイブリドーマ上清の存在下でヒトＩＬ−６の濃度を高めながらインキュベートした。２０〜２４時間後、上清２０μｌを１８０μｌのＱｕａｎｔｉＢｌｕｅ（商標）（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ社）と混合し、その吸光度を６５５ｎｍで測定した。
【０１６０】
結合試験および拮抗作用試験を基に、ハイブリドーマ６４を発明者らはリードとして選択し、ＣＲＯでサブクローニングした。ＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒα複合体のｇｐ１３０への結合を阻害する能力について、酵素結合イムノソルバント（ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂａｎｔ）測定法（ＥＬＩＳＡ）を用いてハイブリドーマ６４（マウスモノクローナル）をさらに検査した。１．５μｇ／ｍｌの濃度のハイブリドーマ６４は、ＥＬＩＳＡによって固定したｇｐ１３０に対するＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒα複合体の結合を有意に低下させた（図２）。
【０１６１】
このサブクローンを再スクリーニングし、サブクローン６４．５８の可変ドメインを５’ＲＡＣＥ  ＰＣＲによって増幅して配列決定した。マウス可変ドメイン配列（ｍ６４と呼ぶ。）は次のとおりである。
【０１６２】
ｍ６４ＶＨ（可変重鎖）
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＴＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＳＮＹＬＩＥＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＶＩＴＰＧＳＧＴＩＮＹＮＥＫＦＫＧＫＡＶＬＴＡＤＫＳＳＳＴＶＹＭＱＬＳＳＬＴＳＤＤＳＡＶＹＦＣＡＫＳＲＷＤＰＬＹＹＹＡＬＥＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号１３）
ｍ６４ＶＬ（可変軽鎖）
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＭＮＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＱＧＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＮＩＨＰＭＥＥＤＤＴＡＭＹＦＣＱＱＳＫＥＶＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号１４）
ヒト化配列を作製するために、ｍ６４相補性決定領域（ＣＤＲ）を、計算機アルゴリズムによってマウス配列との類似性について選択されたヒト生殖系列枠組み構造へと移植した。このヒト化配列（ｈ６４と呼ぶ。）は以下のとおりであった（ｍ６４配列と比較して変化した残基に下線を付している。）ので、このマウス配列と約７９．５％の同一性（ＶＨ）および８４．４％の同一性（ＶＬ）を有する。
【０１６３】
【化１】
0006480338.tif 000002
このヒト化配列をＤＮＡ２．０（米国カリフォルニア州メンローパーク市）によって合成した後、ヒトＩｇＧ１定常ドメインとのインライン融合物としてｐｃＤＮＡ３．１由来の発現ベクターをクローニングした。ＩｇＧを一過性トランスフェクションによってＦｒｅｅｓｔｙｌｅ（商標）−２９３細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社，米国ニューヨーク州グランド島）において発現させ、プロテインＡクロマトグラフィーによって精製した。結合および拮抗作用の両試験において、このｈ６４ＩｇＧは、そのｍ６４先祖と比較して相当低い効力を示した。それゆえ、酵母ディスプレイを利用して、この失われた親和性を回復させた。
【０１６４】
ヒト化ｈ６４ＩｇＧの親和性を回復または改善するよう設計された親和性成熟を実施するために、ｈ６４抗体配列を再クローニングして、ｐＹＣ２／ＣＴ由来の酵母ベクターにおいてＦａｂ分子を作製し、このベクター中でＦａｂＨ鎖を抗ＦＩＴＣ  ｓｃＦｖ  ４ｍ５．３へ（Ｇ４Ｓ）３リンカーを通じて融合させた。次に、ｈ６４バリアントのライブラリをＣｈａｏら（２００６，Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，１：７５５〜７６８）のプロトコルに従ってエラープローンＰＣＲによって作製した。Ｈ６４変異体を発現させ、ＦＩＴＣ−ＰＥＧ−ＮＨＳで標識した酵母によって表面捕捉した後、ビオチン化ヒトＩＬ−６とともにインキュベートした。結合型ＩＬ−６をストレプトアビジン−ＡＰＣで検出し、表示されたＦａｂの量に対して最多量の結合型ＩＬ−６を有する細胞をＢＤ  ＦＡＣＳＡｒｉａ（商標）細胞選別機で選択した。４回の選択の後、より高い親和性のバリアントの集団を選択および配列決定した。親和性成熟によって選択したクローン（ｈ６４−１．４と呼ぶ。）の配列は以下のとおりであり、選択された突然変異（すなわち、ｈ６４のＶＨおよびＶＬの配列と比較して突然変異している。）は太字であり、ＣＤＲには下線を付している。これらは、０１８（ならびに以下に説明する０２０および０２９のＩＬ−６ａ分子）の可変ドメインである。完全なＦａｂがＣＫドメインおよびＩｇＧ１  ＣＨ１ドメインを含むことに留意されたい。本出願の文脈において、「Ｆａｂ」重鎖および軽鎖のアミノ酸配列に対する参照は、配列が軽鎖由来配列および重鎖由来配列からなる機能しているＦａｂの一部であることができることを意味する。
【０１６５】
ｈ６４−１．４ＶＨ（０１８ＶＨ）（可変ドメイン）
【化２】
0006480338.tif 000003
ｈ６４−１．４ＶＬ（０１８ＶＬ）（可変ドメイン）
【化３】
0006480338.tif 000004
ｈ６４−１．４可変ドメインをｐｃＤＮＡ３．１ヒトＩｇＧ１ベクターへと再クローニングし、Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ（商標）−ＨＥＫ２９３細胞（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）において完全長のＩｇＧ１として発現させた。結果として生じる精製されたＩｇＧは、結合試験および細胞内拮抗作用試験の両方において元のｈ６４抗体よりも有意に効力があった。酵母系を用いて親和性を検査すると、親和性は、元のヒト化分子に対して３４３ｐＭから４３ｐＭまで高まった。このアンタゴニストの効力は、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ細胞系を用いてアッセイすると約１０倍の増加であった。
【０１６６】
ｈ６４−１．４ＩｇＧを眼適応症および他の適応症における使用のためにＦａｂとして再フォーマットした。追加的に、別の回のライブラリ作製および酵母ベースの選択を実施して、親和性をさらに改良した。４回の選択の後、Ａ７９Ｖ突然変異を有するＶＨバリアントについて有意な濃縮があった。このＡ７９Ｖバリアントを含む抗体、そのバリアントおよび断片は、０１９ＩＬ−６ａ抗体、そのバリアントおよび断片と呼ぶ。
【実施例３】
【０１６７】
（フォーマット選択）
抗体ベースのＩＬ−６アンタゴニストに適したフォーマットを研究するために、上記に説明したように選択されたＩＬ−６抗体を一過性発現、安定性、凝集特性、結合親和性、およびＩＣ５０について０１８配列のＦａｂ、ｓｃＦｖ（ＶＨ−ＶＬ）およびｓｃＦｖ（ＶＬ−ＶＨ）形態を用いて検査した。
【０１６８】
候補ＩＬ−６ａ分子（０１８可変部を含有する配列）のうちの１つについてのこれらの試験結果を表１に示す。
【表１】
0006480338.tif 000005
【０１６９】
これらのデータは、抗体ベースのＩＬ−６アンタゴニストの種々のフォーマットの基本的な特徴の識別方法を明らかにしており、０１８可変部を含有するＩＬ−６アンタゴニストについて０１８Ｆａｂフォーマットが、ほとんどの基本的なカテゴリー、すなわち発現、安定性、凝集、および結合親和性において、ｓｃＦｖ配置と比較して最も好ましい特徴を有することを説明している。０１８ＦａｂのＩＣ５０は、治療上の使用のための妥当な範囲内に収まる。
【実施例４】
【０１７０】
（ＩＬ−６ａ抗体、断片、および誘導体に関する実施例）
出願人は、本明細書に説明される方法を用いて、以下の配列を識別した。下線を付した配列は、重鎖および軽鎖のＣＤＲを表す。他の配列は、本明細書のいたるところで見つけることができる。
【０１７１】
ＩｇＧ１枠組み構造における０１８重鎖（完全長；ｆｌ０１８ＨＣ）ポリペプチド配列
【化４】
0006480338.tif 000006
ＩｇＧ１枠組み構造における０１８重鎖（完全長：ｆｌ０１８ＨＣ）核酸配列
ＣＡＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＡＧＧＧＧＣＣＧＡＧＧＴＴＡＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＧＡＧＣＡＧＣＧＴＣＡＡＧＧＴＡＴＣＴＴＧＴＡＡＡＧＣＧＴＣＴＧＧＴＴＡＣＧＣＣＣＴＴＴＣＡＡＡＣＴＡＣＣＴＧＡＴＣＧＡＡＴＧＧＧＴＧＡＧＧＣＡＧＧＣＴＣＣＣＧＧＣＣＡＡＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＡＧＴＴＡＴＣＡＣＣＣＣＴＧＧＧＡＧＣＧＧＣＡＣＣＡＴＴＡＡＴＴＡＣＧＣＣＣＡＧＡＡＡＴＴＴＣＡＧＧＧＡＣＧＡＧＴＧＡＣＧＡＴＴＡＣＣＧＣＣＧＡＣＧＡＧＴＣＣＡＣＣＡＧＴＡＣＴＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＴＣＣＴＣＡＣＴＣＣＧＣＡＧＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＡＧＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＣＧＧＡＧＴＣＧＡＴＧＧＧＡＣＣＣＴＣＴＴＴＡＣＴＡＴＴＡＴＧＣＴＣＴＧＧＡＡＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＧＡＣＣＧＴＴＡＣＡＧＴＧＴＣＡＴＣＴＧＣＴＡＧＣＡＣＡＡＡＡＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＣＡＣＴＴＧＣＴＣＣＴＴＣＡＴＣＴＡＡＧＡＧＣＡＣＡＡＧＴＧＧＴＧＧＣＡＣＴＧＣＡＧＣＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＡＧＡＴＴＡＴＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＴＧＴＴＡＣＡＧＴＴＴＣＴＴＧＧＡＡＣＴＣＣＧＧＴＧＣＡＣＴＧＡＣＡＴＣＣＧＧＡＧＴＡＣＡＣＡＣＴＴＴＣＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＣＡＧＧＡＣＴＧＴＡＴＡＧＣＣＴＧＴＣＴＴＣＧＧＴＧＧＴＣＡＣＴＧＴＴＣＣＡＴＣＧＴＣＧＡＧＴＣＴＴＧＧＣＡＣＡＣＡＧＡＣＡＴＡＴＡＴＴＴＧＣＡＡＣＧＴＣＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＴＣＣＡＡＣＡＣＡＡＡＡＧＴＧＧＡＴＡＡＧＡＡＧＧＴＣＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＴＡＣＧＴＧＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＧＣＣＣＣＴＧＡＡＣＴＧＣＴＧＧＧＡＧＧＣＣＣＴＴＣＴＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＡＣＣＴＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＧＡＴＧＡＴＣＡＧＣＣＧＧＡＣＴＣＣＣＧＡＧＧＴＴＡＣＣＴＧＴＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＧＴＣＴＣＡＴＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＴＡＡＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＣＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＣＧＣＡＡＡＡＡＣＣＡＡＧＣＣＧＡＧＡＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣａａｔＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＡＧＴＡＧＴＧＡＧＣＧＴＣＣＴＧＡＣＴＧＴＣＴＴＡＣＡＴＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＣＡＡＴＧＧＴＡＡＡＧＡＡＴＡＴＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＡＡＧＣＡＡＣＡＡＧＧＣＣＣＴＡＣＣＣＧＣＡＣＣＡＡＴＡＧＡＧＡＡＧＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧＣＧＡＡＡＧＧＴＣＡＧＣＣＣＡＧＧＧＡＧＣＣＣＣＡＧＧＴＴＴＡＴＡＣＡＣＴＧＣＣＴＣＣＣＴＣＡＣＧＣＧＡＣＧＡＡＴＴＡＡＣＡＡＡＧＡＡＴＣＡＧＧＴＧＴＣＴＣＴＣＡＣＣＴＧＴＣＴＣＧＴＣＡＡＧＧＧＣＴＴＴＴＡＣＣＣＴＴＣＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＡＴＣＣＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＡＣＡＡＴＴＡＴＡＡＧＡＣＡＡＣＴＣＣＣＣＣＡＧＴＣＣＴＧＧＡＴＴＣＡＧＡＴＧＧＧＴＣＧＴＴＣＴＴＴＣＴＡＴＡＴＡＧＴＡＡＧＴＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＴＡＡＧＴＣＴＣＧＣＴＧＧＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＧＴＴＣＴＣＴＴＧＣＴＣＴＧＴＴＡＴＧＣＡＴＧＡＡＧＣＧＣＴＧＣＡＣＡＡＴＣＡＴＴＡＴＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＣＣＧＧＧＡＡＧ（配列番号２０）
ＩｇＧ１枠組み構造における０１８Ｆａｂ重鎖（０１８ＦａｂＨＣ）ポリペプチド配列。ＣＤＲには下線を付している。
【０１７２】
【化５】
0006480338.tif 000007
０１８完全長軽鎖（ｆｌ０１８ＬＣ）ポリペプチド配列。ＣＤＲには下線を付している。
【０１７３】
【化６】
0006480338.tif 000008
これは、０２０および０２９のＩＬ−６アンタゴニストについての軽鎖配列でもある。
【０１７４】
ＩｇＧ１枠組み構造における０１８完全長軽鎖（０１８ＬＣ）核酸配列
ＧＡＣＡＴＡＧＴＧＡ  ＴＧＡＣＴＣＡＡＡＧ  ＴＣＣＧＧＡＣＡＧＣ  ＣＴＧＧＣＧＧＴＧＴ  ＣＡＣＴＣＧＧＣＧＡ  ＡＣＧＧＧＣＡＡＣＴ  ＡＴＣＡＡＣＴＧＣＣ  ＧＡＧＣＣＡＧＣＧＡ  ＧＡＧＣＧＴＣＧＡＴ  ＡＡＴＴＡＣＧＧＣＡ  ＴＣＣＣＣＴＴＣＡＴ  ＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴ  ＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣ  ＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣ  ＧＣＣＣＡＡＧＣＴＧ  ＣＴＴＡＴＣＴＡＣＧ  ＣＣＧＣＴＴＣＣＡＡ  ＣＣＧＧＧＧＡＴＣＡ  ＧＧＧＧＴＧＣＣＣＧ  ＡＴＣＧＡＴＴＴＡＧ  ＴＧＧＡＡＧＣＧＧＴ  ＡＧＴＧＧＧＡＣＣＧ  ＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴ  ＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣ  ＴＣＣＣＴＴＣＡＧＧ  ＣＣＧＡＧＧＡＴＧＴ  ＧＧＣＴＧＴＣＴＡＴ  ＴＡＴＴＧＴＣＡＧＣ  ＡＡＴＣＣＧＡＧＧＡ  ＡＧＴＧＣＣＧＣＴＣ  ＡＣＧＴＴＴＧＧＴＣ  ＡＧＧＧＡＡＣＣＡＡ  ＡＣＴＧＧＡＧＡＴＣ  ＡＡＧＣＧＧＡＣＣＧ  ＴＡＧＣＧＧＣＧＣＣ  ＴＡＧＴＧＴＣＴＴＣ  ＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣ  ＣＣＴＣＣＧＡＣＧＡ  ＡＣＡＧＣＴＧＡＡＧ  ＴＣＴＧＧＣＡＣＴＧ  ＣＴＴＣＣＧＴＣＧＴ  ＧＴＧＣＣＴＧＣＴＣ  ＡＡＣＡＡＣＴＴＴＴ  ＡＣＣＣＴＡＧＡＧＡ  ＧＧＣＡＡＡＡＧＴＴ  ＣＡＡＴＧＧＡＡＡＧ  ＴＡＧＡＣＡＡＴＧＣ  ＣＴＴＧＣＡＧＴＣＣ  ＧＧＧＡＡＣＴＣＣＣ  ＡＧＧＡＧＴＣＴＧＴ  ＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧ  ＧＡＴＡＧＴＡＡＧＧ  ＡＣＴＣＡＡＣＣＴＡ  ＣＡＧＣＣＴＧＴＣＣ  ＡＧＣＡＣＡＣＴＧＡ  ＣＣＣＴＣＴＣＣＡＡ  ＡＧＣＣＧＡＣＴＡＣ  ＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡ  ＡＡＧＴＧＴＡＣＧＣ  ＴＴＧＣＧＡＡＧＴＴ  ＡＣＧＣＡＴＣＡＧＧ  ＧＧＣＴＧＴＣＣＴＣ  ＡＣＣＣＧＴＴＡＣＡ  ＡＡＡＡＧＴＴＴＴＡ  ＡＣＡＧＡＧＧＧＧＡ  ＧＴＧＣ（配列番号２６）
０１９Ｆａｂ重鎖（０１９ＦａｂＨＣ、Ａ７９Ｖ（太字／斜字）以外は０１８ＦａｂＨＣと同じ配列）
【化７】
0006480338.tif 000009
０１９ＶＨ（可変部／０１９ＨＣ、Ａ７９Ｖ（太字／斜字）以外は０１８ＨＣ可変部と同じ配列）
【化８】
0006480338.tif 000010
０１９抗体軽鎖（０１９ＬＣ）配列（ポリペプチドおよび核酸）は、０１８ＬＣと同じである。
【０１７５】
０１８ＨＣのＣＤＲ１（ＶＨ  ＣＤＲ１  ０１８）：ＧＹＡＬＳＮＹＬＩＥ（配列番号４）
０１８ＨＣのＣＤＲ２（ＶＨ  ＣＤＲ２  ０１８）：ＶＩＴＰＧＳＧＴＩＮ（配列番号５）
０１８ＨＣのＣＤＲ３（ＶＨ  ＣＤＲ３  ０１８）：ＳＲＷＤＰＬＹＹＹＡＬＥＹ（配列番号６）
０１８ＬＣのＣＤＲ１（ＶＬ  ＣＤＲ１）：ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＰＦＭＮ（配列番号７）
０１８ＬＣのＣＤＲ２（ＶＬ  ＣＤＲ２）：ＡＡＳＮＲＧＳ（配列番号８）
０１８ＬＣのＣＤＲ３（ＶＬ  ＣＤＲ３：ＱＱＳＥＥＶＰＬＴ（配列番号９）
０１９ＨＣのＣＤＲ１（ＶＨ  ＣＤＲ１  ０１９）：ＧＹＡＬＳＮＹＬＩＥ（配列番号４）
０１９ＨＣのＣＤＲ２（ＶＨ  ＣＤＲ２  ０１９）：ＶＩＴＰＧＳＧＴＩＮ（配列番号５）
０１９ＨＣのＣＤＲ３（ＶＨ  ＣＤＲ３  ０１９）：ＳＲＷＤＰＬＹＹＹＡＬＥＹ（配列番号６）
【実施例５】
【０１７６】
（エピトープマッピングおよび構造マッピング）
（エピトープマッピング）
機能的エピトープマッピングを、選択された候補ＩＬ−６アンタゴニストに関して実施した。候補抗体（マウス６４抗体）は、この候補抗体が部位Ｉへ結合中ではないことを示すＥＬＩＳＡにおいてＩＬ−６に対するＩＬ−６Ｒαの結合を低下させないことを発見した。追加的な実験を実施して、キメラマウス６４抗体は、ＩＬ−６の部位ＩＩまたは部位ＩＩＩのいずれかがこの抗体に対する結合部位を有することを示すＥＬＩＳＡにおいて、ｇｐ１３０に対するＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒα複合体の結合を減少させることを示した。また、マウス６４抗体がＩＬ−６に対する公知の部位ＩＩＩ結合抗体ＡＨ−６５（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ社，フランス国マルセイユ市）の結合を有意に遮断せず、この候補抗体がＩＬ−６の部位ＩＩを結合することを示すことも発見した。これらのデータは、部位ＩＩに対する抗体が作製できることを示しており、かつこのような抗体の識別方法を示している。
【０１７７】
このエピトープをさらに規定するために、ＩＬ−６における突然変異を酵母において、４ｍ５．３への融合として発生させた（Ｂｏｄｅｒら，２０００，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９７，１０７０１〜１０７０５、Ｃｈａｏら，２００６，Ｎａｔ  Ｐｒｏｔｏｃ  １，７５５〜７６８）。発現した突然変異は、ヒトＩＬ−６において、以下の単一のまたは二重の突然変異、すなわち、Ｒ２４Ｅ／Ｄ２７Ｅ、Ｒ３０Ｅ、Ｙ３１Ｅ，Ｄ３４Ｒ、Ｓ１１８Ｒ／Ｖ１２１Ｅ、Ｗ１５７Ｅ、Ｑ１５９Ｅ／Ｔ１６２Ｐ、Ｋ１７１Ｅ、およびＲ１７９Ｅを伴った。この発現した突然変異したＩＬ−６分子を０１８（Ｆａｂ）との結合試験に使用した。０１８（Ｆａｂ）に対する低い親和性は、すべてがＩＬ−６の部位ＩＩに位置するＲ２４Ｅ／Ｋ２７Ｅ、Ｙ３１Ｅ、Ｄ３４Ｒ、およびＳ１１８Ｒ／Ｖ１２１Ｒについて観察された。したがって、本明細書で説明される本発明には、ヒトＩＬ−６の位置２４、２７、３１、３４、１１８、および１２１またはＩＬ−６における等価の部位にあるアミノ酸のうちの少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、または６個へ結合する抗体を含む。
【０１７８】
（部位ＩＩエピトープの構造的規定）
部位ＩＩを構造的に規定するために、以下の距離を算出した。この算出は、ＩＬ−６／ＩＬ−６α／ｇｐ１３０六量体結晶構造、ＰＤＢ  １Ｐ９Ｍに基づいている（Ｂｏｕｒａｎｇｅｒら，２００３，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３００：２１０１〜２１０４）。ＩＬ−６のヘリックス１は、部位Ｉと部位ＩＩの間に走っており、部位ＩＩ近くに収まるが部位Ｉ、例えばＲ３０に対して向いている側鎖を有する或る残基を結果として生じる。Ｄ２およびＤ３とは、ＩＬ−６Ｒαの細胞外ドメインを指す。
【０１７９】
ＩＬ−６の以下のアミノ酸、すなわち、Ｌ１９、Ｒ２４、Ｋ２７、Ｑ２８、Ｒ３０、Ｙ３１、Ｄ３４、Ｅ１１０、Ｑ１１１、Ｒ１１３、Ａ１１４、Ｍ１１７、Ｓ１１８、Ｖ１２１、Ｑ１２４、Ｆ１２５、およびＫ１２８をｇｐ１３０−Ｄ２−Ｄ３の５Å内に収まるよう決定した。
【０１８０】
以下のアミノ酸、すなわち、Ｌ１９、Ｅ２３、Ｒ２４、Ｉ２５、Ｋ２７、Ｑ２８、Ｉ２９、Ｒ３０、Ｙ３１、Ｄ３４、Ｋ４１、Ｑ１０２、Ｅ１０９、Ｅ１１０、Ｑ１１１、Ａ１１２、Ｒ１１３、Ａ１１４、Ｖ１１５、Ｑ１１６、Ｍ１１７、Ｓ１１８、Ｋ１２０、Ｖ１２１、Ｌ１２２、Ｑ１２４、Ｆ１２５、およびＫ１２８をｇｐ１３０−Ｄ２−Ｄ３の７Å内に収まるよう決定した。
【０１８１】
したがって、分子、例えば、部位ＩＩの５Åまたは７Å内に収まるＩＬ−６アミノ酸のうちの１個以上を結合することのできる抗体またはその断片はＩＬ−６ａである可能性がある。
【０１８２】
ヒトＩＬ−６の配列は、参照のために以下に提供される（下線を付した配列はリーダー配列である。）。ｇｐ１３０−Ｄ２−Ｄ３の７Å内にあるアミノ酸は斜字である。アミノ酸の番号付け、例えばエピトープを規定するのに使用される突然変異は、リーダー配列を有さない。
【０１８３】
ヒトＩＬ−６
【化９】
0006480338.tif 000011
ｈ６４−１．４ヒト化抗体のＦａｂフラグメントを検査する実験を実施し、部位ＩＩ標的化により、シスおよびトランスの両ＩＬ−６シグナル伝達を遮断することができることを示した。Ｆａｂフラグメントの効力は、可溶性ＩＬ−６受容体（ｓＩＬ−６Ｒ）の存在下で不変であった。このことは、ｓＩＬ６Ｒの存在下で効力の低下した、かつシスシグナル伝達のみを遮断する、抗ＩＬ−６ＲＩｇＧとは対照的である。
【０１８４】
これらの実験は、部位ＩＩを標的とする抗体またはＦａｂフラグメントのような抗体断片が、ＩＬ−６のシスおよびトランスの両シグナル伝達を阻害するのに使用することができることを示す。
【実施例６】
【０１８５】
（霊長類試験）
非霊長類の活性が霊長類の活性とは大きく異なり得るので、候補ＩＬ−６アンタゴニストをＰＫおよび他のパラメータについて、非ヒト霊長類を用いて典型的にさらに評価する。ヒトＩＬ−６は、７部位でカニクイザルおよびアカゲザルのＩＬ−６とは異なり、この部位のうちの１つは部位ＩＩ（アミノ酸２８）にあり、アフリカミドリザルＩＬ−６における部位ＩＩと同じである。このことは、０１８配列を含む抗体の結合を約３〜４倍しか低下させないように見える。非ヒト霊長類ＩＬ−６へ結合する能力はＩＬ−６アンタゴニストの有用な特徴であり、例えば、非ヒト霊長類における中毒検査のような検査を可能にすることによって、薬剤としてのこの候補の開発を容易にする。
【０１８６】
ほとんどのＩＬ−６抗体と同様に、本明細書に説明される抗ＩＬ−６抗体は、低い配列相同性により、げっ歯類、ウサギ、またはイヌのＩＬ−６と交差反応しなかった。しかしながら、親和性試験においては、０１８ＦａｂがカニクイザルおよびアフリカミドリザルのＩＬ−６をほぼヒトの親和性で結合することを発見した（表２）。
【表２】
0006480338.tif 000012
【０１８７】
これらのデータはさらに、本明細書に説明されるようなＩＬ−６ａの、適切な動物における例えば中毒試験および生殖試験についての検査を可能にする特徴を有する分子を特異的に結合する能力、ならびにこの分子を発生させる能力を示す。
【実施例７】
【０１８８】
（ＩＬ−６ａの発現増加）
０１８Ｆａｂポリペプチドおよび０１９Ｆａｂポリペプチドの発現を増加させるために、当該技術分野で公知の方法を用いて、ＣＨ１／ヒンジ部における重鎖へ５つの追加的なアミノ酸（ＤＫＴＨＴ）を導入してコンストラクトを作製した。この変化した０１８Ｆａｂ重鎖の配列を配列番号２４として以下に示す。変化した０１８配列は本明細書で０２０と呼び、変化した０１９配列は本明細書で０２１と呼ぶ。０２０分子（０２０Ｆａｂ重鎖および０１８Ｆａｂ軽鎖）は、０１８Ｆａｂ重鎖および０１８Ｆａｂ軽鎖を有する親Ｆａｂと比較して発現が改良されていた。０１９分子は、０２０分子と比較して有意な親和性の差を呈さなかった。０２０および０１９の両方の発現は、それぞれ約２倍ほど増加し、この親和性はこの変化によって影響されなかった。
【０１８９】
０２０重鎖（カルボキシ末端にＤＫＴＨＴを有するＦａｂ）
【化１０】
0006480338.tif 000013
０２０Ｆａｂを用いたＩＬ−６拮抗作用をＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ−６リポーター細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ社，米国カリフォルニア州サンディエゴ市）において測定した。細胞を１０ｐＭのＩＬ−６と、変動する濃度の０２０またはＩＬ−６Ｒα（Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社，米国マサチューセッツ州カントン市）のいずれかの抗体の混合物中で、５０ｎＭのＩＬ−６Ｒαとともにまたはなしでインキュベートした。２０〜２４時間のインキュベーション後、細胞培養上清２０μＬをＱｕａｎｔｉＢｌｕｅ（商標）（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ社）１８０μＬと混合し、１時間インキュベートした後、吸光度を６５５ｎｍで測定した。図３Ａおよび図３Ｂは、これらの実験からのデータを示し、ＩＬ−６Ｒの存在下または非存在下でのＩＬ−６活性を阻害する０２０の能力を示す。
【実施例８】
【０１９０】
（ＩｇＧ２  ＩＬ−６抗体）
当該技術分野で公知の方法を用いて、０１８をヒトＩｇＧ２アイソタイプ枠組み構造へと再フォーマットし、ＩｇＧ１フォーマットした抗体と比較してＦｃγＲ結合を低下させかつＡＤＣＣを低下させた。加えて、完全長フォーマット、例えばＩｇＧ２への０１８の再フォーマットは、この分子の大きさがより大きいため、硝子体からのクリアランス速度を低下させると期待される。
【０１９１】
（抗ＩＬ６  ＩｇＧ２抗体の構築／精製）
上記に説明した抗ＩＬ−６配列を用いてヒトＩｇＧ２抗体を構築するために、ヒトＩｇＧ２定常ドメインをＮ末端およびＣ末端でそれぞれＮｈｅＩ制限部位およびＭｌｕＩ制限部位を用いてｃＤＮＡからＰＣＲ増幅した。このＰＣＲ産物を精製し、ＮｈｅＩ制限酵素およびＭｌｕＩ制限酵素で切断した後、抗ＩＬ６可変ドメインを含有するｐＴＴ５ベクター、すなわち配列番号１（上記参照）へと連結した。このことは、完全長のＩｇＧ２重鎖配列を生じた。０１８配列を含有する完全長軽鎖を含有するプラスミドを使用して、軽鎖を提供した。
【０１９２】
ＦｃＲｎ結合をさらに低下させ、それによりＩＬ−６ａの再利用を低下させるため、点突然変異を重鎖において行った。この突然変異は、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ（登録商標）突然変異誘発によって実施した（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社，米国カリフォルニア州サンタクララ市）。重鎖プラスミドおよび軽鎖プラスミドを、ポリ（エチレンイミン）（ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ））（ＰＥＩ）を用いて、ＨＥＫ２９３−６Ｅ細胞の１００ｍＬ一過性培養物中へと同時トランスフェクトし、約５日間培養して発現を可能にした。このことは、抗ＩＬ−６部位ＩＩ結合部分およびＩｇＧ２構造を含有する抗体を作製した。０１８ＣＤＲを含有するこのような構造は、本明細書で０１８ＩｇＧ２または０２９と命名する。この点突然変異は、残基Ｉ２５３で行った。
【０１９３】
ＩｇＧ２分子は十分に発現したので、細胞内アッセイにおいて、０２０Ｆａｂと比較してわずかに改良された効力でＩＬ−６を遮断する。
【０１９４】
０２９成熟配列（ＣＤＲに下線を付す。）
０２９重鎖
【化１１】
0006480338.tif 000014
０２９軽鎖
【化１２】
0006480338.tif 000015
（変化したＦｃＲｎ結合）
ＩＬ−６は、或る陽性の全身作用を有することができる。それゆえ、硝子体内で良好な保持を有するが、制限された全身半減期を有するＩＬ−６ａを操作することは有利である。ＦｃＲｎ結合の低下または除去は、循環中へと逃れるいかなる薬剤の全身性蓄積も低下させ、それによりＩＬ−６ａの安全性を改善すべきである。
【０１９５】
したがって、ＦｃＲｎ仲介性輸送が眼からの抗体の流出を増加させることがあるので、Ｍａｒｔｉｎら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ，７：４，８６７〜８７７（２００１））に従って番号付けする残基Ｉ２５４、Ｈ３１１、またはＨ４３６（配列番号２３参照）におけるＦｃ突然変異を導入することによって、０２０  ＩｇＧ２をさらに修飾してＦｃＲｎ結合を切除した。この突然変異した部位を配列番号２３に太字で示し、Ｉ２５４をＡまたはＲへと突然変異させ、Ｈ３１１をＡまたはＥへと突然変異させ、Ｈ３１１をＮへと突然変異させるとともにＤ３１３をＴへと突然変異させ、およびＨ４３６をＡへと突然変異させた（番号付けは、配列番号２３において下線を付してあるリーダー配列の後から始める。このような配列を含有するＩＬ−６アンタゴニストを０１８ＩｇＧ２ｍと命名する。）。
【０１９６】
突然変異部位（太字）を示す抗ＩＬ−６重鎖（ＩｇＧ２）（標準フォント；ＶＨ、斜字
フォント：ＣＨ）（リーダー配列なし）
【化１３】
0006480338.tif 000016
突然変異部位（太字）を示すリーダー配列（下線付き）を有する抗ＩＬ−６重鎖（ＩｇＧ２）（標準フォント：ＶＨ、斜字フォント：ＣＨ）
【化１４】
0006480338.tif 000017
したがって、いくつかの実施形態には、Ｉ２５４（例えば、ＡまたはＲ）、Ｈ３１１（ＡまたはＥへ突然変異）、Ｈ４３６（Ａへ突然変異）、またはＮへ突然変異したＨ３１１を伴うＤ３１３（Ｔへ突然変異）における突然変異を伴う配列番号２３に示す重鎖配列を有する抗体を含む。
【０１９７】
配列番号２５はそれゆえ、Ｉ１３３（例えば、Ｉ１３３ＡまたはＩ１３３Ｒ）、Ｈ１９０（例えば、Ｈ１９０ＡまたはＨ１９０Ｅ）、Ｈ３１５（例えば、Ｈ３１５Ａ）、またはＨ１９０を伴うＤ１９２（例えば、Ｈ１９０Ｎを伴うＤ１９２Ｔ）において突然変異した場合、抗体、その断片または誘導体において使用することができる配列を提供して、この配列を含まない親分子または他の基準分子と比較して低ｐＨ、例えばｐＨ５．５もしくはリソソームｐＨでのＦｃ結合の減少したポリペプチドおよび／または全身半減期の減少したポリペプチドを製造することができる。
【０１９８】
【化１５】
0006480338.tif 000018
抗ＩＬ−６軽鎖（ＩｇＧ２）（標準フォント：ＶＫ、斜字フォント：ＣＫ）
【化１６】
0006480338.tif 000019
【実施例９】
【０１９９】
製剤安定性
抗ＩＬ−６／ＩｇＧ１  Ｆａｂフラグメント（ＩｇＧ１  ＣＨ１ドメイン含有）の安定性を、示差走査蛍光定量法を用いて、まずＰＢＳにおいて、次に或る範囲の緩衝液および賦形剤においてＴｍを測定することによって検査した。クエン酸緩衝液ｐＨ５．５はＴｍを８０℃超まで増大させることを発見した。したがって、いくつかの実施形態において、ＩＬ−６ａはクエン酸緩衝液中で提供され、いくつかの場合、少なくとも８０℃のＴｍを有する。
【０２００】
凝集をＳＥＣ−ＭＡＬＳを用いて検査し、リン酸緩衝塩類溶液（ＰＢＳ）中では２０ｍｇ／ｍｌにおいて凝集を観察しなかった。
【実施例１０】
【０２０１】
（高まったＰＫに対するｐＨ感受性抗体）
ＩＬ−６は、或る正の全身作用を有することができる。それゆえ、硝子体において良好な保持を有するが制限された全身半減期を有するＩＬ−６ａを操作することは１つの利点である。ＦｃＲｎ結合の減少または除去は、循環中へ逃れるいかなる薬剤の全身性蓄積も低下させるべきであり、それによりＩＬ−６ａの安全性を改善する。したがって、ＦｃＲｎ仲介性輸送が眼からの抗体の流出を高めることがあるので、残基Ｉ２５３、Ｈ３１０、またはＨ４３５（Ｍａｒｔｉｎら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ，７：４，８６７−８７７（２００１））に従った番号付け）におけるＦｃ突然変異を導入することによって、０２０  ＩｇＧ２をさらに修飾して、ＦｃＲｎ結合を切断した。このような抗体は本明細書でＩＬ−６ｐＨ抗体または抗ＩＬ−６ｐＨと呼び、以下にさらに説明する。
【０２０２】
（ＩＬ−６ｉｐＨ抗体の生成）
ヒスチジンのｐＫａは約６．０であり、結合界面に挿入されるヒスチジンは、低ｐＨで側鎖プロトン付加の際に結合を破壊することができる。本明細書に説明される抗ＩＬ−６部位ＩＩ標的化抗体を用いて、０１８由来のＣＤＲの多ヒスチジンバリアントを含有するライブラリを作製し、酵母ディスプレイを用いてこのライブラリをｐＨ感受性結合についてスクリーニングした。生じたライブラリは、各残基が野生型残基（すなわち、親抗体にあるのと同じ）またはヒスチジン残基のいずれかであるようコドンを変性させることによってＣＤＲをコードしたコンビナトリアルライブラリであった。スクリーニングは、生理学的ｐＨ（７．４）での高い結合およびエンドソームｐＨ（５．５）での低い結合についての選別を交互にすることによって実施した。
【０２０３】
ｐＨ７．４における比較的高い結合（親分子に対する１９２ｐＭと比較して突然変異体に対する４０７ｐＭの一価のＫｄ）およびｐＨ５．５における比較的低い結合（親に対する１９５ｐＭと比較して突然変異体に対する２．３６２ｎＭの一価のＫｄ）を有する酵母選択性突然変異体を識別した。このことは、ｐＨ５．５での親和性においておよそ５．８倍の変化を構成する。この突然変異体は、軽鎖ＣＤＲ１における複数のヒスチジン突然変異を含有した。したがって、この突然変異体は、ｐＨ７．４での親分子と類似の結合およびｐＨ５．５での親和性の有意な喪失を示した。この観察は、当該技術分野で公知の方法によって、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ、およびＳＰＲ分析を用いて検証した。
【０２０４】
これらのデータは、抗体を基にしたＩＬ−６ａがＩＬ−６のシスおよびトランスの両活性を阻害するのに使用することのできるＩＬ−６の部位ＩＩを標的とする抗ＩＬ−６の特徴を有しかつ、親抗体またはｐＨ５．５での変化した結合によって少なくとも一部もたらされた野生型Ｆｃドメインを有する他の抗体と比較して高いＰＫを有するＩＬ−６ａを作製できることを示す。
【０２０５】
他の実施形態は、以下の特許請求の範囲の範囲内である。
【図１】
0006480338.tif 000020
【図２】
0006480338.tif 000021
【図３Ａ】
0006480338.tif 000022
【図３Ｂ】
0006480338.tif 000023
【配列表】
0006480338000001.app