(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
表面に抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）を固定化した粒子（Ｃ）、ラクトース、グリシン及び水を含有する粒子組成物（Ｄ）であって、ラクトース、グリシン及び水の合計重量に基づいて、ラクトースの含有量が１〜２０重量％であり、かつグリシンの含有量が１〜１０重量％であり、さらにゼラチンを含む粒子組成物（Ｄ）。
【請求項２】
粒子（Ｃ）が磁性粒子（Ｃ１）である請求項１に記載の粒子組成物（Ｄ）。
【請求項３】
磁性粒子（Ｃ１）が、磁性シリカ粒子（Ｃ１１）である請求項２に記載の粒子組成物（Ｄ）。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の粒子組成物（Ｄ）を含有する免疫測定用試薬。
【請求項５】
請求項４に記載の免疫測定用試薬を用いて、試料中の測定対象物質を測定することを特徴とする免疫測定方法。
【請求項６】
上記免疫測定用試薬を２〜１０℃で１分間〜１年間保存した後、試料中の測定対象物質を測定する請求項５に記載の免疫測定方法。
【請求項７】
表面に抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）を固定化した粒子（Ｃ）を、ラクトース及びグリシンを含有する水溶液中で保存する、表面に抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）を固定化した粒子（Ｃ）の保存方法。
【請求項８】
上記粒子（Ｃ）を、ラクトース及びグリシンを含有する水溶液中で２〜１０℃で保存する請求項７に記載の粒子（Ｃ）の保存方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、表面に抗原又は抗体を固定化した粒子を有する試薬に関する。更に詳しくは、長期保存した後も活性成分の損失が少ない試薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫測定試薬においては、主要構成要素として固相担体となる磁性粒子やガラスビーズ等の表面に測定対象物質、測定対象物質の類似物質、又は測定対象物質と特異的に結合する物質、例えば、抗原、抗体を固定化したものがある。免疫測定試薬においては、固相上に固定化した物質が一定の活性を維持していることが望まれる。経時的に物質の活性が低下したり、保存状態によって物質の活性が変化したのでは正確な測定結果は期待できず、免疫測定試薬としては、大きな問題である。
【０００３】
固相に固定化される抗原や抗体等の物質自体の形態の違い、例えば、緩衝液等に溶解した液状（液状試薬）であるか、凍結乾燥した状態（凍結乾燥試薬）であるかで、それぞれの形態において様々な安定化方法が提案されている。液状試薬の場合、ＩｇＭ試薬溶液にウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を添加し安定化する方法（特許文献１）、標識抗体をアミノ酸及び、その誘導体を添加した安定化する方法（特許文献２）等が提案されている。また、凍結乾燥試薬の場合、酵素標識抗体溶液にスクロース、トレハロース、又はデキストランを添加して凍結乾燥し安定化する方法（特許文献３）、が提案されている。免疫測定試薬においては、固相担体上に抗原や抗体等の物質を固定化したものを液体中で長期保存する必要がある。しかしながら、固相担体上にこれらの物質を固定化し、液状での長期保存するの場合においては、上記安定化方法はで満足のいくものではない。したがって、免疫測定試薬における抗原や抗体等の安定化方法の改善が望まれている。特に、多数検体同時迅速検査を目的とした自動化免疫測定装置の開発において、さらなる免疫測定試薬における抗原や抗体等の安定性の改善が望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平９−１２７１１４号公報
【特許文献２】特開２０１１−２４１２０６号公報
【特許文献３】特開昭６０−１４９９７２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、固相担体表面に固定化した抗原又は抗体の安定性を高め、継続的に安定した測定が可能な免疫測定用の試薬、免疫測定方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、上記目的を達成するため鋭意検討した結果、本発明に到達した。
即ち本発明は、表面に抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）を固定化した粒子（Ｃ）、ラクトース、グリシン及び水を含有する粒子組成物（Ｄ）であって、ラクトース、グリシン及び水の合計重量に基づいて、ラクトースの含有量が１〜２０重量％であり、かつグリシンの含有量が１〜１０重量％であり、さらにゼラチンを含む粒子組成物（Ｄ）である。
【発明の効果】
【０００７】
表面に抗原又は抗体を固定化した粒子をラクトース、グリシン及び水を含有する粒子組成物中で保存することにより、粒子表面の抗原又は抗体の安定性が高まる。また、本発明の免疫測定試薬は、長期保存においても、安定な免疫反応を可能にすることで、高感度かつ正確性の高い臨床検査を可能とする。
なお、本発明において、「粒子組成物の安定性」及び「抗原又は抗体の安定性」とは、粒子組成物を作製直後と一定期間保存後の抗原又は抗体の活性の変化が少ないことを意味する。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明における粒子組成物（Ｄ）としては、表面に抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）を固定化した粒子（Ｃ）、ラクトース、グリシン及び水を含有することを特徴とする。
【０００９】
粒子（Ｃ）とは一般的にこの分野で測定されるものであれば特に限定はされず、例えばガラスビーズ、ポリスチレンビーズ、磁性粒子（Ｃ１）、マイクロプレート、ラテックス等が代表的なものとして挙げられる。
磁性粒子（Ｃ）としては、具体的には、免疫測定において測定時間の短時間化の観点から、例えば特開２０１４−２１０６８０号公報及び特開２０１３−０１９８８９号公報等に記載の公知の磁性シリカ粒子（Ｃ１１）が好ましい。
粒子（Ｃ）を含む粒子組成物（Ｄ）は、免役測定用試薬、たんぱく質精製等に使用できるが、これらの中で免役測定用試薬の用途が最も好ましい
【００１０】
磁性シリカ粒子（Ｃ１１）は、シリカのマトリックス中に平均粒子径が１〜１５ｎｍで超常磁性を有する金属酸化物が分散されているものである。超常磁性とは、外部磁場の存在下で物質の個々の原子磁気モーメントが整列し誘発された一時的な磁場を示し、外部磁場を取り除くと、部分的な整列が損なわれ磁場を示さなくなることをいう。
【００１１】
平均粒子径が１〜１５ｎｍで超常磁性を示す超常磁性金属酸化物としては、鉄、コバルト、ニッケル及びこれらの合金等の酸化物が挙げられるが、磁界に対する感応性が優れていることから、酸化鉄が特に好ましい。超常磁性金属酸化物は、１種を単独で用いても２種以上を併用してもよい。
【００１２】
磁性シリカ粒子（Ｃ１１）中の超常磁性金属酸化物の含有量の下限は、６０重量％が好ましく、さらに好ましくは６５重量％であり、上限は９５重量％が好ましく、さらに好ましくは８０重量％である。超常磁性金属酸化物の含有量が６０重量％以上であると、得られた磁性シリカ粒子の磁性が十分であるため、実際の用途面における分離操作に時間がかからない。９５重量％以下のものは合成が容易である。
【００１３】
本発明において、抗原（Ａ）としては、一般的この分野で測定されるものであれば特に限定はされず、具体的には下記免疫測定に用いられる抗原が含まれる。
ヌクレオチド鎖（オリゴヌクレオチド鎖、ポリヌクレオチド鎖）；染色体；ペプチド鎖（例えばＣ−ペプチド、アンジオテンシンＩ等）、タンパク質〔例えばプロカルシトニン、免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ），免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ），免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ），免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ），免疫グロブリンＤ（ＩｇＤ），β２−ミクログロブリン、アルブミン、これらの分解産物、フェリチン等の血清タンパク質〕；酵素〔例えばアミラーゼ（例えば膵型，唾液腺型，Ｘ型等）、アルカリホスファターゼ（例えば肝性，骨性，胎盤性，小腸性等）、酸性ホスファターゼ（例えばＰＡＰ等）、γ−グルタミルトランスファラーゼ（例えば腎性，膵性，肝性等）、リパーゼ（例えば膵型，胃型等）、クレアチンキナーゼ（例えばＣＫ−１，ＣＫ−２，ｍＣＫ等）、乳酸脱水素酵素（例えばＬＤＨ１〜ＬＤＨ５等）、グルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナーゼ（例えばＡＳＴｍ，ＡＳＴｓ等）、グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（例えばＡＬＴｍ，ＡＬＴｓ等）、コリンエステラーゼ（例えばＣｈＥ１〜ＣｈＥ５等）、ロイシンアミノペプチダーゼ（例えばＣ−ＬＡＰ，ＡＡ，ＣＡＰ等）、レニン、プロテインキナーゼ、チロシンキナーゼ等〕及びこれら酵素のインヒビター，ホルモン（例えばＰＴＨ，ＴＳＨ，インシュリン，ＬＨ，ＦＳＨ，プロラクチン等）、レセプター（例えばエストロゲン，ＴＳＨ等に対するレセプター）；リガンド（例えばエストロゲン，ＴＳＨ等）；例えば細菌（例えば結核菌，肺炎球菌，ジフテリア菌，髄膜炎菌，淋菌，ブドウ球菌，レンサ球菌，腸内細菌，大腸菌，ヘリコバクター・ピロリ等）、ウイルス（例えばルベラウイルス，ヘルペスウイルス，肝炎ウイルス，ＡＴＬウイルス，ＡＩＤＳウイルス，インフルエンザウイルス，アデノウイルス，エンテロウイルス，ポリオウイルス，ＥＢウイルス，ＨＡＶ，ＨＢＶ，ＨＣＶ，ＨＩＶ，ＨＴＬＶ等）、真菌（例えばカンジダ，クリプトコッカス等）、スピロヘータ（例えばレプトスピラ，梅毒トレポネーマ等）、クラミジア、マイコプラズマ等の微生物；当該微生物に由来するタンパク質又はペプチド或いは糖鎖抗原；気管支喘息，アレルギー性鼻炎，アトピー性皮膚炎等のアレルギーの原因となる各種アレルゲン（例えばハウスダスト、例えばコナヒョウダニ，ヤケヒョウダニ等のダニ類、例えばスギ、ヒノキ、スズメノヒエ，ブタクサ，オオアワガエリ，ハルガヤ，ライムギ等の花粉、例えばネコ，イヌ，カニ等の動物、例えば米，卵白等の食物、真菌、昆虫、木材、薬剤、化学物質等に由来するアレルゲン等）；脂質（例えばリポタンパク質等）；プロテアーゼ（例えばトリプシン，プラスミン，セリンプロテアーゼ等）；腫瘍マーカータンパク抗原（例えばＰＳＡ，ＰＧＩ，ＰＧＩＩ等）；糖鎖抗原〔例えばＡＦＰ（例えばＬ１からＬ３等）、ｈＣＧ（ｈＣＧファミリー）、トランスフェリン、ＩｇＧ、サイログロブリン、Ｄｅｃａｙ−ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｎｇ−ｆａｃｔｏｒ（ＤＡＦ）、癌胎児性抗原（例えばＣＥＡ，ＮＣＡ，ＮＣＡ−２，ＮＦＡ等）、ＣＡ１９−９、ＰＩＶＫＡ−ＩＩ、ＣＡ１２５、前立腺特異抗原、癌細胞が産生する特殊な糖鎖を有する腫瘍マーカー糖鎖抗原、ＡＢＯ糖鎖抗原等〕；糖鎖（��えばヒアルロン酸、β−グルカン、上記糖鎖抗原等が有する糖鎖等）；糖鎖に結合するタンパク質（例えばヒアルロン酸結合タンパク、βグルカン結合タンパク等）；リン脂質（例えばカルジオリピン等）；リポ多糖（例えばエンドトキシン等）；化学物質（例えばＴ３，Ｔ４，例えばトリブチルスズ，ノニルフェノール，４−オクチルフェノール，フタル酸ジ−ｎ−ブチル，フタル酸ジシクロヘキシル，ベンゾフェノン，オクタクロロスチレン，フタル酸ジ−２−エチルヘキシル等の環境ホルモン）；人体に投与・接種される各種薬剤及びこれらの代謝物；アプタマー；核酸結合性物質が挙げられる。
【００１４】
本発明において、抗体（Ｂ）としては、一般的この分野で測定されるものであれば特に限定はされず、具体的には下記免疫測定に用いられる抗体が含まれる。
ヌクレオチド鎖（オリゴヌクレオチド鎖、ポリヌクレオチド鎖）；染色体；ペプチド鎖（例えばＣ−ペプチド、アンジオテンシンＩ等）、タンパク質〔例えばプロカルシトニン、免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ），免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ），免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ），免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ），免疫グロブリンＤ（ＩｇＤ），β２−ミクログロブリン、アルブミン、これらの分解産物、フェリチン等の血清タンパク質〕；酵素〔例えばアミラーゼ（例えば膵型，唾液腺型，Ｘ型等）、アルカリホスファターゼ（例えば肝性，骨性，胎盤性，小腸性等）、酸性ホスファターゼ（例えばＰＡＰ等）、γ−グルタミルトランスファラーゼ（例えば腎性，膵性，肝性等）、リパーゼ（例えば膵型，胃型等）、クレアチンキナーゼ（例えばＣＫ−１，ＣＫ−２，ｍＣＫ等）、乳酸脱水素酵素（例えばＬＤＨ１〜ＬＤＨ５等）、グルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナーゼ（例えばＡＳＴｍ，ＡＳＴｓ等）、グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（例えばＡＬＴｍ，ＡＬＴｓ等）、コリンエステラーゼ（例えばＣｈＥ１〜ＣｈＥ５等）、ロイシンアミノペプチダーゼ（例えばＣ−ＬＡＰ，ＡＡ，ＣＡＰ等）、レニン、プロテインキナーゼ、チロシンキナーゼ等〕及びこれら酵素のインヒビター，ホルモン（例えばＰＴＨ，ＴＳＨ，インスリン，ＬＨ，ＦＳＨ，プロラクチン等）、レセプター（例えばエストロゲン，ＴＳＨ等に対するレセプター）；リガンド（例えばエストロゲン，ＴＳＨ等）；例えば細菌（例えば結核菌，肺炎球菌，ジフテリア菌，髄膜炎菌，淋菌，ブドウ球菌，レンサ球菌，腸内細菌，大腸菌，ヘリコバクター・ピロリ等）、ウイルス（例えばルベラウイルス，ヘルペスウイルス，肝炎ウイルス，ＡＴＬウイルス，ＡＩＤＳウイルス，インフルエンザウイルス，アデノウイルス，エンテロウイルス，ポリオウイルス，ＥＢウイルス，ＨＡＶ，ＨＢＶ，ＨＣＶ，ＨＩＶ，ＨＴＬＶ等）、真菌（例えばカンジダ，クリプトコッカス等）、スピロヘータ（例えばレプトスピラ，梅毒トレポネーマ等）、クラミジア、マイコプラズマ等の微生物；当該微生物に由来するタンパク質又はペプチド或いは糖鎖抗原；気管支喘息，アレルギー性鼻炎，アトピー性皮膚炎等のアレルギーの原因となる各種アレルゲン（例えばハウスダスト、例えばコナヒョウダニ，ヤケヒョウダニ等のダニ類、例えばスギ、ヒノキ、スズメノヒエ，ブタクサ，オオアワガエリ，ハルガヤ，ライムギ等の花粉、例えばネコ，イヌ，カニ等の動物、例えば米，卵白等の食物、真菌、昆虫、木材、薬剤、化学物質等に由来するアレルゲン等）；脂質（例えばリポタンパク質等）；プロテアーゼ（例えばトリプシン，プラスミン，セリンプロテアーゼ等）；腫瘍マーカータンパク抗原（例えばＰＳＡ，ＰＧＩ，ＰＧＩＩ等）；糖鎖抗原〔例えばＡＦＰ（例えばＬ１からＬ３等）、ｈＣＧ（ｈＣＧファミリー）、トランスフェリン、ＩｇＧ、サイログロブリン、Ｄｅｃａｙ−ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｎｇ−ｆａｃｔｏｒ（ＤＡＦ）、癌胎児性抗原（例えばＣＥＡ，ＮＣＡ，ＮＣＡ−２，ＮＦＡ等）、ＣＡ１９−９、ＰＩＶＫＡ−ＩＩ、ＣＡ１２５、前立腺特異抗原、トロポニンＴ（ＴｎＴ）、ヒト脳性ナトリウム利尿ペプチド前駆体Ｎ端フラグメント（ＮＴ−��ｒｏＢＮＰ）等の心疾患抗原、癌細胞が産生する特殊な糖鎖を有する腫瘍マーカー糖鎖抗原、ＡＢＯ糖鎖抗原等〕；糖鎖（例えばヒアルロン酸、β−グルカン、上記糖鎖抗原等が有する糖鎖等）；糖鎖に結合するタンパク質（例えばヒアルロン酸結合タンパク、βグルカン結合タンパク等）；リン脂質（例えばカルジオリピン等）；リポ多糖（例えばエンドトキシン等）；化学物質（例えばＴ３，Ｔ４，例えばトリブチルスズ，ノニルフェノール，４−オクチルフェノール，フタル酸ジ−ｎ−ブチル，フタル酸ジシクロヘキシル，ベンゾフェノン，オクタクロロスチレン，フタル酸ジ−２−エチルヘキシル等の環境ホルモン）；人体に投与・接種される各種薬剤及びこれらの代謝物；アプタマー；核酸結合性物質、これらに対する抗体が挙げられる。尚、本発明において用いられる抗体には、パパインやペプシン等の蛋白質分解酵素、或いは化学的分解により生じるＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント等の分解産物も包含される。
これらのうち、抗体（Ａ）の安定性の観点から、腫瘍マーカータンパク抗原に対する抗体、糖鎖抗原に対する抗体、化学物質に対する抗体、ホルモンに対する抗体、ペプチド鎖に対する抗体及び心疾患抗原に対する抗体からなる群より選ばれる少なくとも１種の抗体が好ましく、さらに好ましくは抗ＰＳＡモノクローナル抗体、抗ＡＦＰモノクローナル抗体、抗ＣＥＡポリクローナル抗体、抗ＣＡ１９−９モノクローナル抗体、抗ＣＡ１９−９モノクローナル抗体、抗Ｔ３モノクローナル抗体、抗Ｔ４モノクローナル抗体、抗Ｃ−ペプチドモノクローナル抗体、抗インスリンポリクローナル抗体、抗ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰポリクローナル抗体及び抗トロポニンＴモノクローナル抗体からなる群より選ばれる少なくとも１種である。
【００１５】
本発明における粒子（Ｃ）に、測定対象物質、測定対象物質の類似物質、又は測定対象物質と特異的に結合する物質、具体的には、抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）を固定化する方法としては、上述の粒子（Ｃ）に測定対象物質等、具体的には、抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）を物理吸着させる方法が挙げられるが、より効率良く測定対象物質等、具体的には、抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）を固定化させる観点から、グルタルアルデヒド、アルブミン、カルボジイミド、ストレプトアビジン、ビオチン及び官能基を有するアルキルアルコキシシランからなる群から選ばれる少なくとも１種の有機化合物を粒子（Ｃ）表面に結合させ、それらを介して測定対象物質等、具体的には、抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）を粒子（Ｃ）に固定化させるのが好ましい。
【００１６】
本発明において、粒子組成物（Ｄ）中の粒子（Ｃ）の重量比率は、ラクトース、グリシン及び水の合計の重量に基づいて、０．０００１〜５０重量％が好ましく、特に好ましくは０．００１〜２０重量％である。（Ｃ）の重量比率が０．０００１重量％以上であることで、粒子の取り扱いが容易であり、作業性が高いので好ましい。その一方で（Ｃ）の重量比率が５０重量％以下であることで十分な安定性の効果があるので好ましい。
【００１７】
粒子組成物（Ｄ）中の粒子（Ｃ）とラクトースとの重量比（粒子（Ｃ）／ラクトース）は、抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）の安定性及び免疫反応性の観点から、０．００１／１〜０．２５／１が好ましく、さらに好ましくは０．０００４／１〜０．２／１である。
粒子組成物（Ｄ）中の粒子（Ｃ）とグリシンとの重量比（粒子（Ｃ）／グリシン）は、抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）の安定性及び免疫反応性の観点から、０．００１／１〜０．３３／１が好ましく、さらに好ましくは０．００２／１〜０．２５／１である。
【００１８】
本発明におけるラクトースの濃度は、ラクトース、グリシン及び水の合計の重量をもとに１〜５０重量％が好ましく、３〜２０重量％がさらに好ましい。その濃度が１重量％以上であると、十分な安定化効果が得られ、その一方で５０重量％以下であると粘度が低く好ましい。
本発明におけるグリシンの濃度は、ラクトース、グリシン及び水の合計の重量をもとに１〜５０重量％が好ましく、３〜１０重量％がさらに好ましい。その濃度が１重量％以上であると、十分な安定化効果が得られ、５０重量％以下であるとｐＨが低くならず十分な安定効果がえられる。
水の重量はラクトース、グリシン及び水の合計の重量をもとに１〜９８重量％が好ましく、７０〜９４重量％がさらに好ましい。
【００１９】
粒子組成物（Ｄ）中のラクトース及びグリシンの重量比（ラクトース／グリシン）は、抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）の安定性の観点から、０．０１／１〜５／１が好ましく、さらに好ましくは０．０５／１〜４／１であり、最も好ましくは０．６／１〜４／１である。
【００２０】
ラクトース、グリシンのいずれか一方だけでも安定化効果はあるが、十分ではない。ラクトースとグリシンの両方を用いることで、抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）の安定性効果が高まる。
【００２１】
本発明の粒子組成物（Ｄ）は、粒子（Ｃ）、ラクトース、グリシン及び水を含有するものであるが、さらにゼラチンを含んでもよい。
本発明において、ゼラチンとしては、公知のゼラチンが含まれ、具体的には、分子量及び性状に限定はなく、いかなる動物（ホ乳類、鳥類、魚類等）から取得したものであってもよい。ゼラチンとしてはコラーゲンを加熱処理、酸又はアルカリによる化学処理して製造した例えば酸処理ゼラチン、アルカリ処理ゼラチン等を挙げるとができる。さらにこのゼラチンをアミノ基、イミノ基、カルボキシル基、メルカプト基、水酸基等の官能基を周知の方法を利用し導入し、化学的に修飾したゼラチン誘導体を用いることもできる。
【００２２】
粒子組成物（Ｄ）中のゼラチンの含有量は、抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）の安定性及び操作性の観点から、ラクトース、グリシン及び水の合計の重量を基準として、０．０１〜３０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．０５〜２０重量％である。
【００２３】
粒子組成物（Ｄ）中のラクトースとゼラチンとの重量比（ラクトース／ゼラチン）は、抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）の安定性の観点から、１／１〜１０／１が好ましい。
また、グリシンとゼラチンとの重量比（グリシン／ゼラチン）は、抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）の安定性の観点から、０．５／１〜５／１が好ましい。
【００２４】
本発明の粒子組成物（Ｄ）中には、さらに牛血清アルブミン、塩化ナトリウム、リン酸等を含有してもよい。
粒子組成物（Ｄ）中の牛血清アルブミン、塩化ナトリウム及びリン酸のそれぞれの含有量は、免疫反応性の観点から、ラクトース、グリシン及び水の合計の重量を基準として、０〜３０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．０１〜１０重量％である。
【００２５】
粒子組成物（Ｄ）のｐＨは、抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）の安定性の観点から、３〜１０が好ましく、さらに好ましくは４〜９である。
【００２６】
本発明において、粒子組成物（Ｄ）は、粒子（Ｃ）、ラクトース、グリシン及び水を含有するものであれば特に制限なく製造できるが、抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）の安定性の観点から、ラクトース、グリシン及び水を含む水溶液中に粒子（Ｃ）を添加して粒子組成物（Ｄ）とすることが好ましい。
【００２７】
本発明の粒子組成物（Ｄ）の保存条件としては、一般的に免疫測定用試薬の保存で用いられる方法であれば、特に限定はない。
保存温度としては、粒子（Ｃ）上に固定化されている測定対象物質、測定対象物質の類似物質、又は測定対象物質と特異的に結合する物質の活性を損なわない一般的保管温度である２℃〜１０℃が好ましい。
容器としては、耐久性のある保管容器であれば、特に限定はないが、例えばクライオチューブ（サーモフィッシャーサイエンティフィック（株）製）、遠沈管（コーニングインターナショナル（株）製）、マイクロチューブ（エッペンドルフ（株）製）、スクリュー管（株）マルエム製）、ＰＣＲチューブ（日本ジェネティクス（株）製）が挙げられる。
凍結期間としては、特に限定はないが、粒子（Ｃ）上に固定化されている測定対象物質、測定対象物質の類似物質、又は測定対象物質と特異的に結合する物質、具体的には、抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）安定性の観点から１年以内が好ましい。
【００２８】
本発明の免疫測定用試薬は、上記粒子組成物（Ｄ）を含有するものであれば特に限定なく、免疫測定用試薬として粒子組成物（Ｄ）をそのまま使用してもよい。
また、免疫測定用試薬は、上記粒子組成物（Ｄ）以外に、牛血清アルブミン、塩化ナトリウム、リン酸等を含有してもよい。
免疫測定用試薬中の牛血清アルブミン、塩化ナトリウム及びリン酸のそれぞれの含有量は、免疫反応性の観点から、ラクトース、グリシン及び水の合計の重量を基準として、０〜３０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．０１〜１０重量％である。
【００２９】
免疫測定用試薬のｐＨは、抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）の安定性の観点から、３〜１０が好ましく、さらに好ましくは４〜９である。
【００３０】
本発明の免疫測定方法は、上記免疫測定試薬を用いて試料中の測定対象物質（Ｅ）を測定するものである。
本発明における免疫測定方法としては、具体的には以下の３種の方法が含まれる。
＜第１の方法＞
前記磁性シリカ粒子（Ｃ１１）が、測定対象物質と特異的に結合する物質（測定対象物質結合物質）、具体的には抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）をその表面に固定化しているものであって、前記測定対象物質（Ｅ）を含む試料と、前記磁性シリカ粒子（Ｃ１１）を含むラクトース、グリシン及び水を含有する粒子組成物（Ｄ）と、標識物質により標識された測定対象物質結合物質（標識測定対象物質結合物質）（Ｆ）とを接触させて、前記磁性シリカ粒子（Ｃ１１）上に前記測定対象物質結合物質、具体的には抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）のと前記測定対象物質（Ｅ）と前記標識測定対象物質結合物質、具体的には抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）との複合体（標識複合体）（Ｇ）を形成させ、前記標識複合体（Ｇ）を担持した磁性シリカ粒子をＢ／Ｆ分離して、前記標識複合体中の標識物質量を測定し、その結果に基づいて前記試料中の測定対象物質（Ｅ）を測定する。
【００３１】
＜第２の方法＞
前記磁性シリカ粒子（Ｃ１１）が、測定対象物質又は測定対象物質の類似物質，具体的には、抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）をその表面に固定化しているものであって、前記測定対象物質（Ｅ）を含む試料と、標識物質により標識された測定対象物質と特異的に結合する物質（標識測定対象物質結合物質）（Ｆ）と、前記磁性シリカ粒子（Ｃ１１）を含むラクトース、グリシン及び水を含有する粒子組成物（Ｄ）とを接触させて、前記磁性シリカ粒子（Ｃ１１）上に前記測定対象物質（Ｅ）又は測定対象物質の類似物質（Ｅ１）と前記標識測定対象物質結合物質（Ｆ）との複合体（標識複合体）（Ｇ）を形成させ、前記標識複合体（Ｇ）を担持した磁性シリカ粒子をＢ／Ｆ分離して、前記標識複合体中の標識物質量を測定し、その結果に基づいて試料中の測定対象物質（Ｅ）を測定する。
【００３２】
＜第３の方法＞
前記磁性シリカ粒子（Ｃ１１）が、測定対象物質と特異的に結合する物質（測定対象物質結合物質）具体的には、抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）をその表面に固定化しているものであって、前記測定対象物質を含む試料と、標識物質により標識された測定対象物質（Ｆ）又は測定対象物質の類似物質（標識測定対象物質又はその類似物質）と前記磁性シリカ粒子（Ｃ１１）を含むラクトース、グリシン及び水を含有する粒子組成物（Ｄ）とを接触させて、前記磁性シリカ粒子上に前記測定対象物質結合物質（Ｆ）と前記標識測定対象物質又はその類似物質との複合体（標識複合体）（Ｇ）を形成させ、前記標識複合体を担持した磁性シリカ粒子をＢ／Ｆ分離して、前記標識複合体中の標識物質量を測定し、その結果に基づいて試料中の測定対象物質を測定する。
【００３３】
測定対象物質としては、一般的にこの分野で測定されるものであれば特に限定はされず、例えば血清，血液，血漿，尿等の生体体液、リンパ液、血球、各種細胞類等の生体由来の試料中に含まれるヌクレオチド鎖、ペプチド鎖、タンパク質、脂質タンパク質、核酸、免疫グロブリン、血液凝固関連因子、抗体、酵素、ホルモン、癌マーカー、心疾患マーカー及び各種薬物等が代表的なものとして挙げられる。更に具体的には、例えばＣ−ペプチド、アンジオテンシンＩ等のペプチド鎖、例えばアルブミン，ヘモグロビン，ミオグロビン，トランスフェリン，プロテインＡ，Ｃ反応性蛋白質（ＣＲＰ）等のタンパク質、例えばＣ−ペプチド、アンジオテンシンＩ等のペプチド鎖、例えば高比重リポ蛋白質（ＨＤＬ），低比重リポ蛋白質（ＬＤＬ），超低比重リポ蛋白質等の脂質蛋白質、例えばデオキシリボ核酸（ＤＮＡ），リボ核酸（ＲＮＡ）等の核酸、例えばアルカリ性ホスファターゼ，アミラーゼ，酸性ホスファターゼ，γ−グルタミルトランスフェラーゼ（γ−ＧＴＰ），リパーゼ，クレアチンキナーゼ（ＣＫ），乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ），グルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナーゼ（ＧＯＴ），グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（ＧＰＴ），レニン，プロテインキナーゼ（ＰＫ），チロシンキナーゼ等の酵素、例えばＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＤ，ＩｇＥ等の免疫グロブリン（或はこれらの、例えばＦｃ部，Ｆａｂ部，Ｆ（ａｂ）２部等の断片）、例えばフィブリノーゲン，フィブリン分解産物（ＦＤＰ），プロトロンビン，トロンビン等の血液凝固関連因子、例えば抗ストレプトリジンＯ抗体，抗ヒトＢ型肝炎ウイルス表面抗原抗体（ＨＢｓ抗原）、抗ヒトＣ型肝炎ウイルス抗体、抗リュウマチ因子等の抗体、例えば甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、甲状腺ホルモン（ＦＴ３，ＦＴ４，Ｔ３，Ｔ４）、インスリン、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）エストラジオール（Ｅ２）等のホルモン、例えばα−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＡ１９−９、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）等の癌マーカー、例えばトロポニンＴ（ＴｎＴ）、ヒト脳性ナトリウム利尿ペプチド前駆体Ｎ端フラグメント（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）等の心疾患マーカー、例えば抗てんかん薬、抗生物質、テオフィリン等の薬物等が挙げられる。
上記したものの中でも、抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）の安定性の観点から、抗体、ペプチド鎖、ホルモン、癌マーカー及び心疾患マーカーからなる群より選ばれる少なくとも１種が好ましく、さらに好ましくはペプチド鎖、ホルモン、癌マーカー及び心疾患マーカーからなる群より選ばれる少なくとも１種である。
【００３４】
本発明の免疫測定方法としては、上記免疫測定用試薬を２〜１０℃で１分間〜１年間保存した後、試料中の測定対象物質を測定するものが含まれる。
保存されていた免疫測定用試薬（粒子組成物（Ｄ）を含む）を用いて、試料中の測定対象物質を測定することを特徴とする免疫測定方法としては、この分野で一般的に行われる方法として、文献［例えば、酵素免疫測定法第２版（石川栄治ら編集、医学書院）１９８２年］記載のサンドイッチ法、競合法及び特開平６−１３００６３号公報記載の測定法に準じて行えばよい。
具体的には、例えば、化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬＩＡ）、蛍光酵素免疫測定法（ＦＥＩＡ）、化学発光免疫測定法（ＣＬＩＡ）、ラッテックス光学免疫測定法（ＬＰＩＡ）及びラッテックス粒子計数免疫凝集測定法（ＣＩＡ）に用いられる検査の測定方法等が挙げられる。
【００３５】
本発明の表面に抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）を固定化した粒子の保存方法は、表面に抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）を固定化した粒子（Ｃ）を、ラクトース及びグリシンを含有する水溶液中で保存するものである。
表面に抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）を固定化した粒子（Ｃ）をラクトース及びグリシンを含有する水溶液中で保存することにより、抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）の活性を維持して保存することができる。
本発明において、水溶液の温度は、抗原（Ａ）又は抗体（Ｂ）の安定性の観点から、２〜１０℃が好ましい。
【実施例】
【００３６】
以下、実施例により、本発明を更に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００３７】
＜製造例１＞
○表面に抗ＰＳＡモノクローナル抗体（Ｂ−１）を固定化した粒子（Ｃ−１）の作製
１重量％γ−アミノプロピルトリエトキシシラン含有水溶液４０ｍＬの入った蓋付きポリスチレン瓶に製造した磁性シリカ粒子（商品名：マグラピッド、三洋化成工業（株）製）４０ｍｇを加え、２５℃で１時間反応させ、ネオジウム磁石で磁性シリカ粒子を集磁後、液をアスピレーターで吸引除去した。次いで脱イオン水４０ｍＬを加えて蓋をし、ポリスチレン瓶をゆっくりと２回倒置攪拌した後、ネオジウム磁石で磁性シリカ粒子を集磁後、液をアスピレーターで吸引除去して磁性シリカ粒子を洗浄した。この洗浄操作を５回行った。次いで、この洗浄後の磁性シリカ粒子を２重量％グルタルアルデヒド含有水溶液４０ｍＬの入った蓋付きポリスチレン瓶に加え、２５℃で１時間反応させた。そして、脱イオン水４０ｍＬを加えて蓋をし、ポリスチレン瓶をゆっくりと２回倒置攪拌したのち、ネオジウム磁石で磁性シリカ粒子を集磁後、液をアスピレーターで吸引除去して磁性シリカ粒子を洗浄した。この洗浄操作を１０回行った。更にこの洗浄後の磁性シリカ粒子を抗ＰＳＡモノクローナル抗体（フナコシ（株）製）１０μｇ／ｍＬの濃度で含む０．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８．７）１２０ｍＬの入った蓋付きポリスチレン瓶に加え、２５℃で１時間反応させた。反応後、ネオジウム磁石で磁性シリカ粒子を集磁後、抗ＰＳＡモノクローナル抗体含有リン酸緩衝液を除去した。次いで、磁性シリカ粒子を１重量％の牛血清アルブミン含有の０．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）４０ｍＬの入った蓋付きポリエチレン瓶に加え、２５℃で１２時間浸漬させた。これにより、抗ＰＳＡモノクローナル抗体固定化粒子（Ｃ−１）を得た。
【００３８】
＜製造例２＞
○表面に抗ＡＦＰモノクローナル抗体（Ｂ−２）を固定化した粒子（Ｃ−２）の作製
製造例１において、「抗ＰＳＡモノクローナル抗体」に代えて「抗ＡＦＰモノクローナル抗体（ダコ・サイトメーション（株）製）」を使用した以外は同様に行い、抗ＡＦＰモノクローナル抗体固定化粒子（Ｃ−２）を得た。
【００３９】
＜製造例３＞
○表面に抗ＣＥＡポリクローナル抗体（Ｂ−３）を固定化した粒子（Ｃ−３）の作製
製造例１において、「抗ＰＳＡモノクローナル抗体」に代えて「抗ＣＥＡモノクローナル抗体（フナコシ（株）製）」を使用した以外は同様に行い、抗ＣＥＡ  ポリクローナル抗体固定化粒子（Ｃ−３）を得た。
【００４０】
＜製造例４＞
○表面に抗ＣＡ１９−９モノクローナル抗体（Ｂ−４）を固定化した粒子（Ｃ−４）の作製
製造例１において、「抗ＰＳＡモノクローナル抗体」に代えて「抗ＣＡ１９−９  モノクローナル抗体（フナコシ（株）製）」を使用した以外は同様に行い、抗ＡＣＡ１９−９モノクローナル抗体固定化粒子（Ｃ−４）を得た。
【００４１】
＜製造例５＞
○表面に抗Ｔ３モノクローナル抗体（Ｂ−５）を固定化した粒子（Ｃ−５）の作製
製造例１において、「抗ＰＳＡモノクローナル抗体」に代えて「抗Ｔ３モノクローナル抗体（フナコシ（株）製）」を使用した以外は同様に行い、抗Ｔ３モノクローナル抗体固定化粒子（Ｃ−５）を得た。
【００４２】
＜製造例６＞
○表面に抗Ｔ４モノクローナル抗体（Ｂ−６）を固定化した粒子（Ｃ−６）の作製
製造例１において、「抗ＰＳＡモノクローナル抗体」に代えて「抗Ｔ４モノクローナル抗体（フナコシ（株）製）」を使用した以外は同様に行い、抗Ｔ４モノクローナル抗体固定化粒子（Ｃ−６）を得た
【００４３】
＜製造例７＞
○表面に抗Ｃ−ペプチドモノクローナル抗体（Ｂ−７）を固定化した粒子（Ｃ−７）の作製
製造例１において、「抗ＰＳＡモノクローナル抗体」に代えて「抗Ｃ−ペプチドモノクローナル抗体（フナコシ（株）製）」を使用した以外は同様に行い、抗Ｃ−ペプチドモノクローナル抗体固定化粒子（Ｃ−７）を得た
【００４４】
＜製造例８＞
○表面に抗インスリンポリクローナル抗体（Ｂ−８）を固定化した粒子（Ｃ−８）の作製
製造例１において、「抗ＰＳＡモノクローナル抗体」に代えて「抗抗インスリンポリクローナル抗体（フナコシ（株）製）」を使用した以外は同様に行い、抗インスリンポリクローナル抗体固定化粒子（Ｃ−８）を得た
【００４５】
＜製造例９＞
○表面に抗ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰポリクローナル抗体（Ｂ−９）を固定化した粒子（Ｃ−９）の作製
製造例１において、「抗ＰＳＡモノクローナル抗体」に代えて「抗抗ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ  ポリクローナル抗体（フナコシ（株）製）」を使用した以外は同様に行い、抗ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ  ポリクローナル抗体固定化粒子（Ｃ−９）を得た
【００４６】
＜製造例１０＞
○表面に抗トロポニンＴモノクローナル抗体（Ｂ−１０）を固定化した粒子（Ｃ−１０）の作製
製造例１において、「抗ＰＳＡモノクローナル抗体」に代えて「抗ＴＮＴモノクローナル抗体（フナコシ（株）製）」を使用した以外は同様に行い、抗ＴＮＴモノクローナル抗体固定化粒子（Ｃ−１０）を得た
【００４７】
＜実施例１＞
○粒子組成物（Ｄ−１）の作製
０．１重量％の牛血清アルブミン、０．８５重量％の塩化ナトリウム（和光純薬工業（株）製）、及び１０重量％のラクトース１水和物（和光純薬工業（株）製）、５重量％グリシン（和光純薬工業（株）製）を含有させた０．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を調製し、その後抗ＰＳＡモノクローナル抗体固定化粒子（Ｃ−１）を１ｍｇ／ｍＬとなるように添加、攪拌して粒子組成物（Ｄ１）を得た。さらに、得られた（Ｄ）を１．５ｍＬクライオチューブ（サーモフィッシャーサイエンティフィック（株）製）に１ｍＬ移し変えて、４℃で１年間保管したものを、粒子組成物（Ｄ−１）とした。
【００４８】
＜実施例２〜１０＞
○粒子組成物（Ｄ−２）〜（Ｄ−１０）の作製
実施例１において、０．０２Ｍリン酸緩衝液中のラクトース１水和物、グリシン及びゼラチンの含有量を表１の含有量（重量％）とし、固定化抗体、粒子濃度、ｐＨを表１に記載のものとする以外は同様にして粒子組成物（Ｄ−２）〜（Ｄ−１０）を得た。
【００４９】
＜実施例１１〜１３＞
○粒子組成物（Ｄ−１１）〜（Ｄ−１３）の作製
実施例１において、「抗ＰＳＡモノクローナル抗体固定化粒子（Ｃ−１）」に代えて「抗ＡＦＰモノクローナル抗体固定化粒子（Ｃ−２）」を用いて、０．０２Ｍリン酸緩衝液中のラクトース１水和物、グリシン及びゼラチンの含有量を表２の含有量（重量％）とし、ｐＨを表２に記載のものとする以外は同様にして粒子組成物（Ｄ−１１）〜（Ｄ−１３）を得た。
【００５０】
＜実施例１４〜２１＞
○粒子組成物（Ｄ−１４）〜（Ｄ−２１）の作製
実施例６において、「抗ＰＳＡモノクローナル抗体固定化粒子（Ｃ−１）」に代えて製造例３〜１０で得た粒子（Ｃ−３）〜（Ｃ−１０）をそれぞれ用いる以外は同様にして粒子組成物（Ｄ−１４）〜（Ｄ−２１）を得た。
【００５１】
＜比較例１〜５＞
○粒子組成物（Ｈ−１）〜（Ｈ−５）の作製
実施例１において、０．０２Ｍリン酸緩衝液中の各成分の組成を表１に記載のものとする以外は同様にして粒子組成物（Ｈ−１）〜（Ｈ−５）を得た。
【００５２】
＜比較例６〜１４＞
○粒子組成物（Ｈ−６）〜（Ｈ−１４）の作製
比較例３において、「抗ＰＳＡモノクローナル抗体固定化粒子（Ｃ−１）」に代えてそれぞれ粒子（Ｃ−２）〜（Ｃ−１０）を用いる以外は同様にして、粒子組成物（Ｈ−６）〜（Ｈ−１４）を得た。
【００５３】
【表１】
0006449221.tif 000002
【００５４】
【表２】
0006449221.tif 000003
【００５５】
【表３】
0006449221.tif 000004
【００５６】
表１〜３において、ラクトースの濃度及びグリシンの濃度は、ラクトース、グリシン及び水の合計の重量をもとにしたものである。また、その他の成分の濃度は、水溶液の重量を基準としたものである。
なお、表１〜３中、ラクトース１水和物、ゼラチン、グルコース及びグルタミン酸は以下のものを用いた。
ラクトース１水和物：和光純薬工業（株）製
ゼラチン：和光純薬工業（株）製
グルコース：和光純薬工業（株）製
グルタミン酸：和光純薬工業（株）製
【００５７】
得られた粒子組成物（Ｄ−１）〜（Ｄ−２１）及び（Ｈ−１）〜（Ｈ−１４）を用いて、以下の方法により免疫測定における粒子組成物の安定性を評価した。安定性の結果を表１〜３に示す。
【００５８】
＜評価＞
○標識試薬の作製：
抗ＰＳＡモノクローナル抗体、西洋ワサビ由来ＰＯＤ（東洋紡製）を用い、文献（エス・ヨシタケ、エム・イマガワ、イー・イシカワ、エトール；ジェイ．バイオケム，Ｖｏｌ．９２，１９８２，１４１３−１４２４）に記載の方法でＰＯＤ標識抗ＰＳＡ抗体を調製した。これを０．５重量％の牛血清アルブミン含有の０．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）で、ＰＯＤ標識抗ＰＳＡ体濃度として２０ｎＭの濃度に希釈し、標識試薬を調製し、冷蔵（２〜１０℃）で保存した。
【００５９】
また、抗ＡＦＰモノクローナル抗体、抗ＣＥＡモノクローナル抗体、Ｔ３、Ｔ４、抗ＣＡ１９−９モノクローナル抗体、抗Ｃ−ペプチドモノクローナル抗体、抗インスリンポリクローナル抗体、抗ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰポリクローナル抗体及び抗トロポニンＴモノクローナル抗体についても、抗ＰＳＡモノクローナル抗体と同様にＰＯＤ標識化し、２０ｎＭの濃度に希釈し、標識試薬を調製し、冷蔵（２〜１０℃）で保存した。
【００６０】
○化学発光試薬第１液の調製：
ルミノールのナトリウム塩［シグマ  アルドリッチ  ジャパン（株）製］０．７ｇ及び４−（シアノメチルチオ）フェノール０．１ｇを１，０００ｍＬメスフラスコに仕込んだ。３−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］プロパンスルホン酸／水酸化ナトリウム緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ８．６）を溶液の容量が１，０００ｍＬになるように仕込み、２５℃で均一混合して化学発光試薬第１液を調製した。測定に用いるまで冷蔵（２〜１０℃）保存した。
【００６１】
○化学発光試薬第２液の調製：
１，０００ｍＬ及び過酸化水素［和光純薬工業（株）製、試薬特級、濃度３０重量％］６．６ｇを１，０００ｍＬメスフラスコに仕込んだ。脱イオン水を溶液の容量が１，０００ｍＬになるように仕込み、２５℃で均一混合して化学発光試薬第２液を調製した。測定に用いるまで冷蔵（２〜１０℃）保存した。
【００６２】
＜粒子組成物（Ｄ−１）〜（Ｄ−１０）及び（Ｈ−１）〜（Ｈ−５）の安定性評価方法＞
粒子組成物０．０２５ｍＬとウマ血清で調製したＰＳＡ濃度が１ｎｇ／ｍＬの標準ＰＳＡ液０．０２５ｍＬを試験管に入れて混合、試験管中で３７℃３分間反応させ、抗ＰＳＡ抗体結合磁性シリカ粒子／ＰＳＡ複合体を形成させた。反応後、試験管の外側からネオジウム磁石で磁性シリカ粒子を１０秒間集め、試験管中の液をアスピレーターで除き、ネオジウム磁石を側面から十分に離し、生理食塩水０．５ｍＬを加えて磁性シリカ粒子を分散させて集磁後、アスピレーターで液を除く洗浄操作を３回行った。
【００６３】
続いて、０．５重量％の牛血清アルブミン含有した標識試薬０．０２５ｍＬを試験管に注入し、試験管中で３７℃３分間反応させ、抗ＰＳＡ抗体結合磁性シリカ粒子／ＰＳＡ／ＰＯＤ標識抗ＰＳＡ抗体複合体を形成させた。反応後、試験管の外側からネオジウム磁石で磁性シリカ粒子を１０秒間集め、試験管中の液をアスピレーターで除き、ネオジウム磁石を側面から十分に離し、生理食塩水０．５ｍＬを加えて磁性シリカ粒子を分散させて集磁後、アスピレーターで液を除く洗浄操作を２回行った。
最後に、化学発光試薬第１液０．０７ｍＬと化学発光試薬第２液０．０７ｍＬとを同時に加え、３７℃で４３秒間発光反応させ、化学発光試薬を添加後４３〜４５秒の平均発光量をルミノメーター［ベルトールドジャパン社製「Ｌｕｍａｔ  ＬＢ９５０７」］で測定した。
【００６４】
粒子組成物を用いて、以下の方法により免疫測定における粒子組成物中の粒子（Ｃ−１）の表面に固定化された抗体（Ｂ）の安定性を評価した。安定性の結果を表１に示す。
【００６５】
安定性については、４℃１年間保管した粒子組成物を用いて免疫反応をして、得られた発光量ｃｐｓを（Ｘ１）とし、粒子組成物を作製して１週間内に免疫測定を行い、得られた発光量ｃｐｓを（Ｘ２）として、以下の計算式で安定率を算出した。
安定率（％）＝（Ｘ１／Ｘ２）×１００
なお、数値が１００％に近いほど、粒子組成物を作製直後（作製後１週間以内）と１年間保存後の抗体の活性の変化が少ないことを意味する。
【００６６】
＜粒子組成物（Ｄ−１１）〜（Ｄ−２１）及び（Ｈ−６）〜（Ｈ−１４）の安定性評価方法＞
粒子組成物（Ｄ−１１）〜（Ｄ−２１）を用いて、それぞれの粒子（Ｃ）の表面に固定化された抗体（Ｂ）に対応する測定対象物質として、それぞれウマ血清で調製したＡＦＰ、ＣＥＡ、ＣＡ１９−９、ＦＴ３、ＦＴ４、Ｃ−ペプチド、インスリン、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ又はトロポニンＴの標準液と反応させて抗体結合磁性シリカ粒子／測定対象物質複合体を形成させ、さらにＰＳＡと同様の条件にてそれぞれの標識抗体と免疫反応させて抗体結合磁性シリカ粒子／測定対象物質／ＰＯＤ標識抗体、又は、ＰＯＤ標識抗原複合体を形成させ、（Ｘ１）及び（Ｘ２）を測定し、安定率を算出した。結果をそれぞれ表２〜３に示す。
【００６７】
表１の実施例１〜１０及び比較例１〜５の安定率の比較から、本発明の粒子組成物（Ｄ−１）〜（Ｄ−１０）中のＰＳＡモノクローナル抗体（Ｂ−１）を固定化した粒子（Ｃ−１）は、比較用の粒子組成物を用いた場合に比べて、安定率が８０％以上と高く、本発明の粒子組成物は冷蔵での抗体（Ｂ）の安定性が向上していることがわかる。また、表２及び３の実施例１１〜２１と比較例６〜１４との安定率の比較から、抗体の種類を変えても、本発明の粒子組成物とすることで、抗体の安定性が向上することがわかる。したがって、本発明の粒子組成物を用いれば、継続的に安定した測定が可能な免疫測定用の試薬が得られることがわかる。
【産業上の利用可能性】
【００６８】
本発明の粒子組成物及び粒子の保存方法は、免疫測定、臨床検査分野、分子生物学又は生化学等の分野に用いられる細胞の分離ならびに蛋白や核酸などの分離・精製に有用である。