(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Iで表される化合物、またはその薬学的に許容し得る塩：
【化１】
0006508796.tif 000058
（式中において、
R1およびR2は、隣接のN原子と連結して環状構造を構成し、前記の環状構造は置換または無置換の3〜12員の飽和または不飽和の複素環または橋架け環またはスピロ環を含み；ここで、前記複素環とは環構造に、母核に連結する窒素原子以外、さらにN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子が0〜3個含まれ；
R3は、置換または無置換のC1〜C8アルキル基、CN、C(O)OR12、CONR13R14、C(O)R15、置換または無置換の5〜8員のアリール基、置換または無置換の5〜8員のヘテロアリール基、置換または無置換の3〜12員の飽和または不飽和の複素環または炭素環から選ばれ；ここで、前記のヘテロアリール基はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を1〜3個含み；前記の複素環はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を1〜3個含み；
R4は、H、置換または無置換のC1〜C4アルキル基、置換または無置換のC1〜C8アルコキシ基、ハロゲン、OH、CN、C(O)OR12、CONR13R14、C(O)R15、置換または無置換の5〜8員のアリール基、置換または無置換の5〜8員のヘテロアリール基、置換または無置換の3〜12員の飽和または不飽和の複素環または炭素環から選ばれ；ここで、前記のヘテロアリール基はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を1〜3個含み；前記の複素環はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を1〜3個含み；
R5はHまたはC1〜C4アルキル基から選ばれ；
XはCR16であり；
A、BおよびZはそれぞれ独立にNまたはCR16から選ばれ；
R16はH、C1〜C4アルキル基またはC1〜C4ハロアルキル基であり、
Lは無し、C1〜C6アルキレン基、C(O)、CONR17またはS(O)2からなる群から選ばれ；
YはH、R18、NR19R20、OH、または以下の基から選ばれ；
【化２】
0006508796.tif 000059
ここで、
R6は無し、H、置換または無置換のC1〜C8アルキル基、置換または無置換のC1〜C8アルコキシ基、置換または無置換のC2〜C6アシル基、置換または無置換のC2〜C6スルホニル基、置換または無置換のC1〜C6アルキレンヒドロキシ基、CONR22R23またはC(O)R24であり；
R7は0〜3個の置換基で、かつR7は置換または無置換のC1〜C8アルキル基、酸素またはハロゲンであるか、あるいは2個またはそれ以上のR7は橋架けアルキル基を形成し；
WはCR21、NまたはOで、WがOである場合、R6は存在せず；
YaはCR21またはNであり；
R21はHまたはハロゲンであり；
R12、R13、R14、R15、R17、R18、R19、R20、R22、R23およびR24は、それぞれ独立に、H、置換または無置換のC1〜C8アルキル基、置換または無置換のC1〜C8アルコキシ基、置換または無置換のC1〜C6アルキレン-アミン基、置換または無置換のC1〜C6アルキレン-ヒドロキシ基、置換または無置換の5〜8員のアリール基、あるいは置換または無置換の5〜8員のヘテロアリール基、置換または無置換の3〜12員の飽和または不飽和の複素環または炭素環から選ばれ；ここで、前記のヘテロアリール基はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を少なくとも1個含み；前記の複素環はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を少なくとも1個含み；
nおよびtはそれぞれ0、1または2であり；
上記の「置換」はいずれも基における一つまたは複数の水素原子がハロゲン、OH、NH2、CN、無置換またはハロゲン置換のC1〜C8アルキル基、C1〜C8アルコキシ基、無置換またはハロゲン置換のC2〜C6アルケニル基、無置換またはハロゲン置換のC2〜C6アルキニル基、無置換またはハロゲン置換のC2〜C6アシル基、無置換またはハロゲン置換の5〜8員のアリール基、無置換またはハロゲン置換の5〜8員のヘテロアリール基、無置換またはハロゲン置換の3〜12員の飽和の複素環または炭素環からなる群から選ばれる置換基で置換されることをいい；ここで、前記のヘテロアリール基はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を1〜3個含み；前記の複素環はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を1〜3個含む。）
【請求項２】
前記式Iで表される化合物は以下に示されたものである請求項1に記載の式Iで表される化合物。
【化３】
0006508796.tif 000060
【化４】
0006508796.tif 000061
【請求項３】
請求項1に記載の式Iで表される化合物の調製方法であって、以下の工程を含む方法：
【化５】
0006508796.tif 000062
a）不活性溶媒において、式I-6化合物と式I-7化合物を反応させ、式Iで表される化合物を形成し、ここで、各基の定義は請求項1の通りである。
【請求項４】
前記不活性溶媒は、トルエン、キシレン、エチレングリコールジメチルエーテル、ジオキサン、THF、DMF、DMSO、NMP、またはこれらの組み合わせからなる群から選ばれる請求項3に記載の調製方法。
【請求項５】
請求項3に記載の調製方法であって、以下の特徴の一つまたは複数を有する方法：
前記反応はパラジウム触媒の存在下で行われ、かつ前記のパラジウム触媒は、Pd(PPh3)4、Pd2(dba)3、Pd(dba)2、Pd(OAc)2、Pd(PPh3)2Cl2、Pd(dppe)Cl2、Pd(dppf)Cl2、Pd(dppf)Cl2・CH2Cl2、またはこれらの組み合わせからなる群から選ばれ；
前記反応は配位子の存在下で行われ、前記の配位子は単座ホスフィン配位子または二座ホスフィン配位子で、かつ前記の配位子は、トリフェニルホスフィン、トリトリルホスフィン、トリシクロヘキシルホスフィン、トリ-t-ブチルホスフィン、X-Phos、S-Phos、ビス(ジフェニルホスフィノ)ビナフチル、1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン、1,2-ビス(ジフェニルホスフィノ)エタン、Xant-Phos、またはこれらの組み合わせからなる群から選ばれ、ここで、X-Phosは
【化６】
0006508796.tif 000063
であり、
S-Phosは、
【化７】
0006508796.tif 000064
であり、
Xant-Phosは、
【化８】
0006508796.tif 000065
であり；
前記反応は塩基の存在下で行われ、かつ前記の塩基は、Na2CO3、K2CO3、Cs2CO3、LiHMDS、NaHMDS、KHMDS、ナトリウムｔ-ブトキシド、カリウムｔ-ブトキシド、トリエチルアミン、ジイソプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、またはこれらの組み合せからなる群から選ばれる。
【請求項６】
（i）治療有効量の請求項1に記載の式Iで表される化合物、またはその薬学的に許容し得る塩と、（ii）薬学的に許容し得る担体とを含む医薬組成物。
【請求項７】
CDKキナーゼの活性を抑制するまたは腫瘍細胞を抑制するための医薬組成物であって、抑制有効量の請求項1に記載の式Iで表される化合物またはその薬学的に許容し得る塩を含む、前記医薬組成物。
【請求項８】
CDKキナーゼの活性または発現量に関連する疾患の処置のための、請求項6に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記CDKキナーゼは、CDK4、CDK6、またはこれらの組み合わせからなる群から選ばれ、かつ/あるいは、
前記の腫瘍細胞は白血病細胞株である、
請求項7または8に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記腫瘍細胞は骨髄性白血病細胞株である、請求項7に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記腫瘍細胞は急性骨髄性白血病細胞株KG1細胞である、請求項7に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記CDKキナーゼの活性または発現量に関連する疾患は、乳癌、子宮内膜癌、胃癌、膀胱癌、リンパ癌、頭頚部癌、黒色腫、非小細胞肺癌、肝臓癌、神経膠細胞腫、結腸癌からなる群から選ばれる癌である、請求項8に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬物化学の分野に属し、具体的に、新規なキナーゼ阻害剤の調製と使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
細胞周期の異常は癌の代表的な特徴の一つで、サイクリン依存性キナーゼ（cyclin-dependent  kinase、CDK）はセリン/スレオニンキナーゼで、細胞周期において中心的な作用を果たし、細胞周期の開始、進行および終了を主導する。CDKファミリーはCDK1〜13を含む。
【０００３】
中では、CDK4/6は多くの癌においていずれも過剰に活性化することで、細胞の増殖が制御されなくなる。研究によって、サイクリンD1およびCDK4の過剰発現は食道癌の発症に関与し、両者の発現の増加は食道癌の分化度に関連すること、良性の膵臓内分泌腫瘍においても悪性のものにおいても、CDK4は発現されることが見出された。肺癌組織においても、CDK4の発現は正常の肺組織よりも遥かに高く、高い陽性発現の程度は肺癌の組織病理学的分類、リンパ節転移および臨床分期の悪性度に正相関し、潜在の予後不良の要素である。CDK6も多くの腫瘍細胞において過剰に発現され、たとえばアンドロゲン感受性の高い前立腺癌細胞系CDK6が安定して発現されるのが検出された。しかも外来性のCDK6の過剰発現は腫瘍細胞の生長を加速させ、CDK6が干渉された腫瘍細胞の生長速度が顕著に遅くなる。
【０００４】
CDK4とCDK6はアミノ酸の構成で71％の相同性があり、この結果はその機能上の類似性を示唆する。最近の研究で、CDK4/6-サイクリンDは転写因子FOXM1をリン酸化させ、黒色腫におけるその安定性と活性を向上させることが開示された。そのため、CDK4/6に対する抑制はシグナル経路の下流から細胞の増殖を抑制することを実現させることができる。CDK4/6阻害剤と内分泌治療の併用は二重の抑制効果を果たし、臨床前の研究でもCDK4/6阻害剤と内分泌治療の併用は顕著な協同作用を有することが実証された。
【０００５】
過去の20年で、潜在の腫瘍治療の標的として、CDKファミリーの阻害剤はすでに幅広く注目されている。しかし、第一世代のCDK阻害剤は選択性が欠けており、広域阻害剤で、たとえばフラボピリドールはCDK1、CDK2、CDK4、CDK6、CDK7およびCDK9を抑制することができる。フラボピリドールは細胞周期の遮断を誘導することができるが、同時に細胞毒作用を示し、臨床治療効果は満足できるものではない。第二世代のCDK阻害剤は選択性の向上に着目し、特にCDK4/6だけを標的とする選択的阻害剤は良い臨床治療効果と少ない毒性・副作用を示し、注目されている。現在、ファイザー社のCDK4/6二重阻害剤であるパルボシクリブ（商品名：イブランス）は最初に市販された二重阻害剤で、米国FDAによって第一線の薬物としてER陽性、HER2陰性の乳癌を処置することが許可されている。
【０００６】
ノバルティス社のLEE011はCDK4/CDK6の二重阻害剤で、悪性横紋筋様腫瘍と神経芽細胞腫に最も敏感である。臨床実験において、LEE011は主にアロマターゼ系阻害剤およびPI3K阻害剤との併用に使用され、良い抗腫瘍活性を果たす。LEE011とレトロゾールの併用による転移性のHR陽性/HER2陰性の乳癌に対する処置は臨床III期に、LEE011とBYL719およびレトロゾールの併用による転移性のHR陽性の乳癌に対する処置は臨床Ib/II期にある。
【０００７】
また、イーライリリー社のLY-2835219も現在臨床III期の研究段階にあり、これらの臨床試験でいずれも予期された効果が得られると、CDK4/CDK6の二重阻害剤は必ず多くの末期乳癌患者により多い生存利益をもたらす。
上記のように、CDK4/CDK6の選択的二重阻害剤の研究・開発は既に抗腫瘍薬研究の最先端の焦点と重要な分野になっているため、新しいCDKキナーゼ阻害剤の研究・開発が必要である。
【発明の概要】
【０００８】
本発明の目的は、新規なCDKキナーゼ阻害剤およびその調製方法と使用を提供することである。
本発明の第一の側面では、式Iで表される化合物、またはその薬学的に許容し得る塩を提供する。
【化１】
0006508796.tif 000002
（式中において、
R1およびR2は、それぞれ独立に、H、置換または無置換のC1〜C8アルキル基、C(O)OR8、CONR9R10、C(O)R11、置換または無置換の5〜8員のアリール基、置換または無置換の5〜8員のヘテロアリール基、置換または無置換の3〜12員の飽和または不飽和の複素環または炭素環から選ばれる。ここで、前記のヘテロアリール基はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を1〜3個含む。前記の複素環はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を1〜3個含む。
【０００９】
また、R1およびR2は、隣接のN原子と連結して環状構造を構成してもよく、前記の環状構造は置換または無置換の3〜12員の飽和または不飽和の複素環または橋架け環またはスピロ環を含む。ここで、前記複素環とは環構造に、母核に連結する窒素原子以外、さらにN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子が0〜3個含まれる。
【００１０】
R3は、置換または無置換のC1〜C8アルキル基、CN、C(O)OR12、CONR13R14、C(O)R15、置換または無置換の5〜8員のアリール基、置換または無置換の5〜8員のヘテロアリール基、置換または無置換の3〜12員の飽和または不飽和の複素環または炭素環から選ばれる。ここで、前記のヘテロアリール基はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を1〜3個含む。前記の複素環はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を1〜3個含む。
【００１１】
R4は、H、置換または無置換のC1〜C4アルキル基、置換または無置換のC1〜C8アルコキシ基、ハロゲン、OH、CN、C(O)OR12、CONR13R14、C(O)R15、置換または無置換の5〜8員のアリール基、置換または無置換の5〜8員のヘテロアリール基、置換または無置換の3〜12員の飽和または不飽和の複素環または炭素環から選ばれる。ここで、前記のヘテロアリール基はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を1〜3個含む。前記の複素環はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を1〜3個含む。
R5はHまたはC1〜C4アルキル基から選ばれる。
XはCR16またはNである。
A、BおよびZはそれぞれ独立にNまたはCR16から選ばれる。
R16はH、C1〜C4アルキル基またはC1〜C4ハロアルキル基である。
Lは無し、C1〜C6アルキレン基、C(O)、CONR17またはS(O)2からなる群から選ばれる。
YはH、R18、NR19R20、OH、または以下の基の一部から選ばれる。
【化２】
0006508796.tif 000003
ここで、
R6は無し、H、置換または無置換のC1〜C8アルキル基、置換または無置換のC1〜C8アルコキシ基、置換または無置換のC2〜C6アシル基、置換または無置換のC2〜C6スルホニル基、置換または無置換のC1〜C6アルキレンヒドロキシ基、CONR22R23またはC(O)R24である。
R7は0〜3個の置換基で、かつR7は置換または無置換のC1〜C8アルキル基、酸素またはハロゲンで、あるいは2個またはそれ以上のR7は橋架けアルキル基を形成する。WはCR21、NまたはOで、WがOである場合、R6は存在しない。
YaはCR21またはNで、R21はHまたはハロゲンである。
【００１２】
R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R17、R18、R19、R20、R22、R23およびR24は、それぞれ独立に、H、置換または無置換のC1〜C8アルキル基、置換または無置換のC1〜C8アルコキシ基、置換または無置換のC1〜C6アルキレン-アミン基、置換または無置換のC1〜C6アルキレン-ヒドロキシ基、置換または無置換の5〜8員のアリール基、あるいは置換または無置換の5〜8員のヘテロアリール基、置換または無置換の3〜12員の飽和または不飽和の複素環または炭素環から選ばれる。ここで、前記のヘテロアリール基はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を少なくとも1個含む。前記の複素環はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を少なくとも1個含む。
nおよびtはそれぞれ0、1または2である。
【００１３】
上記の「置換」はいずれも基における一つまたは複数の水素原子がハロゲン、OH、NH2、CN、無置換またはハロゲン置換のC1〜C8アルキル基、C1〜C8アルコキシ基、無置換またはハロゲン置換のC2〜C6アルケニル基、無置換またはハロゲン置換のC2〜C6アルキニル基、無置換またはハロゲン置換のC2〜C6アシル基、無置換またはハロゲン置換の5〜8員のアリール基、無置換またはハロゲン置換の5〜8員のヘテロアリール基、無置換またはハロゲン置換の3〜12員の飽和の複素環または炭素環からなる群から選ばれる置換基で置換されることをいう。ここで、前記のヘテロアリール基はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を1〜3個含む。前記の複素環はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を1〜3個含む。）
【００１４】
もう一つの好適な例において、
【化３】
0006508796.tif 000004
は置換または無置換の以下の群から選ばれる基である。
【化４】
0006508796.tif 000005
（ただし、mは0、1、2、3、4、5、6、7、8または9で、前記「置換」は前記の通りである。）
もう一つの好適な例において、R1およびR2は隣接の窒素原子と4〜12員の環状構造を形成している。
もう一つの好適な例において、R1およびR2は隣接の窒素原子と5〜7員の環状構造を形成している。
もう一つの好適な例において、R1およびR2は隣接の窒素原子と6員の環状構造を形成している。
もう一つの好適な例において、R13およびR14は隣接の窒素原子と4〜6員の環状構造を形成している。
もう一つの好適な例において、Lが無しの場合、Yは窒素原子を含有する6員の複素環である。
もう一つの好適な例において、A、B、L、X、Y、Z、R1、R2、R3、R4またはR5は実施例に記載される具体的な化合物における相応する基である。
【００１５】
もう一つの好適な例において、前記式Iで表される化合物は以下に示す化合物である。
【化５】
0006508796.tif 000006
【化６】
0006508796.tif 000007
【００１６】
本発明の第二の側面では、本発明の第一の側面に記載の式Iで表される化合物を調製する方法であって、以下の工程を含む方法を提供する。
【化７】
0006508796.tif 000008
a) 不活性溶媒において、式I-6化合物と式I-7化合物を反応させ、式Iで表される化合物を形成し、ここで、各基の定義は上記の通りである。
もう一つの好適な例において、前記の不活性溶媒は、トルエン、キシレン、エチレングリコールジメチルエーテル、ジオキサン、THF、DMF、DMSO、NMP、またはこれらの組み合わせからなる群から選ばれる。
もう一つの好適な例において、前記反応は、パラジウム触媒の存在下で行われる。
もう一つの好適な例において、前記のパラジウム触媒は、Pd(PPh3)4、Pd2(dba)3、Pd(dba)2、Pd(OAc)2、Pd(PPh3)2Cl2、Pd(dppe)Cl2、Pd(dppf)Cl2、Pd(dppf)Cl2・CH2Cl2、またはこれらの組み合わせからなる群から選ばれる。
もう一つの好適な例において、前記反応は、配位子の存在下で行われる。
【００１７】
もう一つの好適な例において、前記の配位子は単座ホスフィン配位子または二座ホスフィン配位子で、より好ましくは、前記の配位子は、トリフェニルホスフィン、トリトリルホスフィン、トリシクロヘキシルホスフィン、トリ-t-ブチルホスフィン、X-Phos、S-Phos、ビス(ジフェニルホスフィノ)ビナフチル、1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン、1,2-ビス(ジフェニルホスフィノ)エタン、Xant-Phos、またはこれらの組み合わせからなる群から選ばれる。
もう一つの好適な例において、前記反応は、塩基の存在下で行われる。
もう一つの好適な例において、前記の塩基は、Na2CO3、K2CO3、Cs2CO3、LiHMDS、NaHMDS、KHMDS、ナトリウム t-ブトキシド、カリウム t-ブトキシド、トリエチルアミン、ジイソプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、またはこれらの組み合せからなる群から選ばれる。
【００１８】
一つの好適な調製方法は、以下の工程を含む。
【化８】
0006508796.tif 000009
(1) 化合物A3は、化合物A1と相応するヒドラジンA2から塩基(ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミンを含むが、これらに限定されない)の触媒下で不活性溶媒(エタノール、THFなど)において反応して得られる。
【００１９】
（2）化合物A5は、化合物A3と相応する末端アルキンA4から薗頭カップリング（Sonogashira coupling）を行って得られ、不活性溶媒（たとえばTHF、DMF、DMSO、ジオキサンなど）において、触媒a（たとえばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム（Pd2(dba)3）、ビス(ジベンジリデンアセトン)パラジウム、ビス(トリフェニルホスフィン)パラジウムジクロリド、ビス(トリ-o-トリルホスフィン)パラジウムジクロリド、1,2-ビス(ジフェニルホスフィノ)エタンパラジウムジクロリド、[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]パラジウムジクロリド、[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]パラジウムジクロリドジクロロメタン錯体など）、触媒b（たとえばヨウ化第一銅、塩化亜鉛、酸化銀、炭酸銀など）および塩基（たとえば炭酸カリウム、フッ化カリウム、炭酸セシウム、フッ化セシウム、フッ化ナトリウム、リン酸カリウム、水和リン酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデセン-7、トリエチルアミン、ジイソプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジンまたはこれらの組み合わせなど）の存在下で、薗頭カップリング反応を行い（反応時間：2〜8時間）、化合物A5を得る。
(3) 化合物A6は、化合物A5から不活性溶媒(ジクロロメタン、THF、アセトニトリルなど)において、フッ化テトラブチルアンモニウム（TBAF）を入れ、加熱しながら反応させて得られる。
【００２０】
（4）化合物A8は、化合物A6と相応する芳香族アミンA7からバックワルド・ハートウィグカップリング（Buchwald-Hartwig coupling）を行って得られ、不活性溶媒（たとえばトルエン、THF、DMF、DMSO、ジオキサンなど）において、触媒a（たとえばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム（Pd2(dba)3）、ビス(ジベンジリデンアセトン)パラジウム、ビス(トリフェニルホスフィン)パラジウムジクロリド、ビス(トリ-o-トリルホスフィン)パラジウムジクロリド、1,2-ビス(ジフェニルホスフィノ)エタンパラジウムジクロリド、[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]パラジウムジクロリド、[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]パラジウムジクロリドジクロロメタン錯体など）、配位子（たとえばトリトリルホスフィン、トリシクロヘキシルホスフィン、トリ-t-ブチルホスフィン、ビス(ジフェニルホスフィノ)ビナフチルなど）および塩基（たとえば炭酸カリウム、フッ化カリウム、炭酸セシウム、フッ化セシウム、フッ化ナトリウム、リン酸カリウム、水和リン酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、ナトリウム t-ブトキシド、カリウム t-ブトキシド、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデセン-7、トリエチルアミン、ジイソプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジンまたはこれらの組み合わせなど）の存在下で、バックワルド・ハートウィグカップリング反応を行い（反応時間：2〜8時間）、化合物A8を得る。
【００２１】
本発明の第三の側面では、本発明の第一の側面に記載の式Iで表される化合物の使用であって、
（a）CDKキナーゼの活性または発現量に関連する疾患を処置する薬物の調製、
（b）CDKキナーゼ選択的阻害剤の調製、
（c）体外におけるCDKキナーゼの活性に対する非治療的な抑制、
（d）体外における腫瘍細胞の増殖に対する非治療的な抑制、および/あるいは
（e）CDKキナーゼの活性または発現量に関連する疾患の処置、
における使用を提供する。
【００２２】
もう一つの好適な例において、前記CDKキナーゼは、CDK4、CDK6、またはこれらの組み合わせからなる群から選ばれ、かつ/あるいは
前記の腫瘍細胞は白血病細胞株で、好ましくは骨髄性白血病細胞株で、より好ましくは急性骨髄性白血病細胞株KG1細胞である。
本発明の第四の側面では、（i）治療有効量の式Iで表される化合物、またはその薬学的に許容し得る塩と、（ii）薬学的に許容し得る担体とを含む医薬組成物を提供する。
本発明の第五の側面では、CDKキナーゼの活性を抑制する方法であって、対象に、抑制有効量の本発明の第一に係る式Iで表される化合物またはその薬学的に許容し得る塩を投与する工程、あるいは対象に、抑制有効量の本発明の第四に係る医薬組成物を投与する工程を含む方法を提供する。
【００２３】
本発明の第六の側面では、体外で腫瘍細胞を抑制する方法であって、対象に、抑制有効量の本発明の第一に係る式Iで表される化合物またはその薬学的に許容し得る塩を投与する工程、あるいは対象に、抑制有効量の本発明の第四に係る医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。
【００２４】
各技術特徴は互いに組合せ、新しい、または好適な技術方案を構成できることが理解される。紙数に限りがあるため、ここで逐一説明しない。
【００２５】
具体的な実施形態
本発明者は長期間にわたって深く研究したところ、式Iで表される構造を有する化合物を調製し、かつCDKキナーゼ抑制活性を有することを見出した。そして、前記の化合物は非常に低い濃度（≦100nMまで）でも、一連のCDKキナーゼに抑制作用を果たし、抑制活性が非常に優れているため、CDKキナーゼの活性または発現量に関連する疾患、たとえば腫瘍の処置に使用することができる。上記の知見に基づき、発明者らは本発明を完成させた。
【００２６】
用語
本明細書で用いられるように、用語「C1〜C6アルキル基」とは、炭素原子を1〜6個有する直鎖または分岐鎖のアルキル基で、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、t-ブチル基や類似の基が挙げられる。
本明細書で用いられるように、用語「C2〜C6アシル基」とは、「炭素原子を1〜6個有する直鎖または分岐鎖のアルキル-カルボニル基」のような構造の置換基で、例えばアセチル基、プロピオニル基、ブチリル基や類似の基が挙げられる。
用語「C1〜C6アルキレン基」とは、上記のようなC1〜C6アルキル基から一つの水素原子が失われた基で、たとえば-CH2-、-CH2-CH2-や類似の基が挙げられる。
用語「C6〜C10アリーレン基」とは、炭素原子を6〜10個有するアリール基から一つの水素原子が失われた基で、単環または二環のアリーレン基を含み、たとえばフェニレン基、ナフチレン基や類似の基が挙げられる。
【００２７】
用語「6員のアリール基」とはフェニル基である。
用語「5〜8員のアリール基」とは、5〜8員環の炭素非飽和系の置換基で、たとえばフェニル基や類似の基が挙げられる。
用語「5員〜8員のヘテロアリール基」とは、5〜8員の環系にO、S、NまたはPから選ばれる一つまたは複数のヘテロ原子を有する非飽和環系置換基で、たとえばピリジル基、チエニル基や類似の基が挙げられる
用語「飽和3〜12員の炭素環」とは、炭素原子を3〜12個有する飽和炭素環で、たとえばシクロヘキシル基や類似の基が挙げられる
用語「3員〜12員のヘテロアリール基」とは、3〜12員の環系にO、S、NまたはPから選ばれる一つまたは複数のヘテロ原子を有する非飽和環系置換基で、たとえばピペリジニル基、ピロリル基や類似の基が挙げられる
【００２８】
用語「ハロゲン」とは、F、Cl、BrおよびIである。
本発明において、用語の「含有」、「包含」または「含む」は、各種の成分が一緒に本発明の混合物或いは組成物に用いられることを指す。そのため、用語「主に〜からなる」および「〜からなる」は、用語の「含有」に含まれる。
本発明において、用語「薬学的に許容し得る」成分とは、ヒト及び/又は動物に適用する場合、過度の不良な副反応（例えば毒性、刺激とアレルギー反応）がない、すなわち、合理的なベネフィット/リスク比を持つ物質である。
【００２９】
本発明において、用語の「有効量」とは、治療剤として目的の疾患や病状を治療、緩和または予防できる量、あるいは検出できる治療または予防の効果を示す量を指す。ある対象に対する正確な有効量は、その対象の体型や健康状況、病症の性質や程度、及び選ばれる治療剤および/または治療剤の組み合わせにもよる。そのため、予め指定される精確な有効量は意味がない。しかしながら、ある指定された状況に対して、臨床の医師は、通常の実験で有効量を確定し、判断することができる。
【００３０】
本明細書において、特別に説明しない限り、用語「置換」とは、基における一つまたは複数の水素原子がハロゲン、無置換またはハロゲン置換のC1〜C4アルキル基、無置換またはハロゲン置換のC2〜C6アシル基、無置換またはハロゲン置換のC1〜C6アルキル基-ヒドロキシ基からなる群から選ばれる置換基で置換されることである。
特別に説明しない限り、本発明において、記載されたすべての化合物はいずれもすべての可能な光学異性体、たとえば単一のキラル化合物、または様々な異なるキラル化合物の混合物（すなわちラセミ体）を含む。本発明のすべての化合物において、各キラル炭素原子は任意にR配置またはS配置でもよく、あるいはR配置とS配置の混合物でもよい。
ここで用いられるように、用語「本発明化合物」とは式Iで表される化合物である。この用語は、さらに、式Iで表される化合物の各種の結晶型、薬学的に許容し得る塩、水和物または溶媒和物を含む。
【００３１】
ここで用いられるように、用語「薬学的に許容し得る塩」とは本発明化合物と酸または塩基とで形成される、薬物として適切な塩である。薬学的に許容し得る塩は無機塩と有機塩を含む。一種類の好適な塩は、本発明化合物と酸とで形成される塩である。塩の形成に適切な酸は、塩酸、臭化水素酸、フッ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸、ギ酸、酢酸、プロパン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、ピクリン酸、メタンスルホン酸、フェニルメタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸などの有機酸、およびアスパラギン酸、グルタミン酸などの酸性アミノ酸を含むが、これらに限定されない。
【００３２】
医薬組成物およびそれらの投与
本発明化合物は、優れたCDKキナーゼ、たとえばCDK4、CDK6に対する抑制活性を有するため、本発明化合物およびその各種の結晶型、薬学的に許容し得る無機・有機塩、水和物もしくは溶媒和物、並びに本発明化合物を主要活性成分として含有する医薬組成物はCDKの活性または発現量に関連する疾患の処置、予防および緩和に有用である。既存技術に基づき、本発明の化合物は、乳癌、子宮内膜癌、胃癌、膀胱癌、リンパ癌、頭頚部癌などの疾患の処置に有用で、特にPI3K、B-RAF、FGFRなどのキナーゼ阻害剤と併用し、キナーゼ阻害剤の薬剤耐性を克服し、薬剤耐性を有する黒色腫、乳癌、非小細胞肺癌、肝臓癌、神経膠細胞腫、結腸癌などの腫瘍を標的とする処置に使用することができる。
【００３３】
本発明の医薬組成物は、安全な有効量の範囲にある本発明化合物または薬学的に許容し得る塩と、薬学的に許容し得る賦形剤または担体と含む。ここで、「安全有効量」とは、化合物の量が病状の顕著な改善に充分で、重度な副作用が生じないことを指す。通常、医薬組成物は、本発明化合物を1〜2000mg/製剤で、好ましくは5〜200mg/製剤で含有する。好ましくは、前記の「製剤」は、カプセルまたは錠である。
【００３４】
「薬学的に許容し得る担体」とは、ヒトに適用でき、且つ十分な純度および充分に低い毒性を持たなければならない、一種または複数種の相溶性固体または液体フィラーまたはゲル物質を指す。「相溶性」とは、組成物における各成分が本発明の化合物と、またその同士の間で配合することができ、化合物の効果を顕著に低下させないことを指す。薬学的に許容し得る担体の例の一部として、セルロースおよびその誘導体(たとえばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースナトリウム、セルロースアセテートなど)、ゼラチン、タルク、固体潤滑剤(たとえばステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム)、硫酸カルシウム、植物油(たとえば大豆油、ゴマ油、落花生油、オリーブオイルなど)、多価アルコール(たとえばプロピレングリコール、グリセリン、マンニトール、ソルビトールなど)、乳化剤(たとえばツインR)、湿潤剤(たとえばドデシル硫酸ナトリウム)、着色剤、調味剤、安定剤、酸化防止剤、防腐剤、発熱性物質除去蒸留水などがある。
本発明の医薬組成物の投与方法は、特に限定されないが、代表的な投与方法は、経口投与、腫瘍内、直腸、胃腸外(静脈内、筋肉内、または皮下)投与、および局部投与を含むが、これらに限定されない。
【００３５】
経口投与に用いられる固体剤形は、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤および顆粒剤を含む。これらの固体剤型において、活性化合物は通常、少なくとも一種の不活性賦形剤(又は担体)、たとえばクエン酸ナトリウム又はリン酸二カルシウムと混合されるが、或いは、(a)フィラー又は相溶剤、例えば、でん粉、乳糖、ショ糖、グルコース、マンニトールやケイ酸、(b)バインダー、例えば、ヒドロメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ショ糖やアラビアゴム、(c)保湿剤、例えば、グリセリン、(d)崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシウム、馬鈴薯澱粉やタピオカ澱粉、アルギン酸、ある複合ケイ酸塩や炭酸ナトリウム、(e)溶液遅延剤、例えばパラフィン、(f)吸収促進剤、例えば、アンモニウム化合物、(g)湿潤剤、例えばセタノール、グリセリンモノステアレート、(h)吸着剤、例えば、カオリン、また(i)潤滑剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ドデシル硫酸ナトリウム、又はこれらの混合物、のような成分と混合される。カプセル剤、錠剤および丸剤において、剤形に緩衝剤を含んでもよい。
【００３６】
固体剤形、たとえば錠剤、ピル、カプセル剤、丸剤や顆粒剤は、コーディングやシェル剤、たとえば、腸衣および他の本分野で公知の材料で調製することができる。不透明剤を含んでもよく、且つこのような組成物において、活性物または化合物の放出は遅延の様態で消化管のある部分で放出してもよい。使用できる包埋成分の実例として、重合物質やワックス系物質が挙げられる。必要な場合、活性化合部も上記賦形剤のうちの一種または複数種とマイクロカプセルの様態に形成してもよい。
【００３７】
経口投与に用いられる液体剤形は、薬学的に許容し得る乳液、溶液、懸濁液、シロップまたはチンキ剤を含む。活性化合物の他、液体剤形は、本分野で通常使用される不活性希釈剤、たとえば、水または他の溶媒、相溶剤および乳化剤、たとえば、エタノール、イソプロパノール、炭酸エチル、酢酸エチル、プロピレングリコール、1,3-ブタンジオール、ジメチルホルムアミドおよび油、特に、綿実油、落花生油、コーン油、オリーブ油、ヒマシ油やゴマ油またはこれらの物質の混合物などを含んでもよい。
これらの不活性希釈剤の他、組成物は助剤、たとえば、湿潤剤、乳化剤、懸濁剤、甘味料、矯味剤や香料を含んでもよい。
【００３８】
活性化合物の他、懸濁液は、懸濁剤、たとえば、エトキシ化イソオクタデカノール、ポリオキシエチレンソルビトールやソルビタンエステル、微晶質セルロース、メトキシアルミニウムや寒天またはこれらの物質の混合物などを含んでもよい。
胃腸外注射用組成物は、生理的に許容し得る無菌の水含有または無水溶液、分散液、懸濁液や乳液、および再溶解して無菌の注射可能な溶液または分散液にするための無菌粉末を含む。適切な水含有または非水性担体、希釈剤、溶媒または賦形剤は、水、エタノール、多価アルコールおよびその適切な混合物を含む。
局部投与のための本発明化合物の剤形は、軟膏剤、散剤、湿布剤、噴霧剤や吸入剤を含む。活性成分は、無菌条件で生理学的に許容し得る担体および任意の防腐剤、緩衝剤、または必要よって駆出剤と一緒に混合される。
本発明化合物は、単独で投与してもよいし、あるいは他の薬学的に許容し得る化合物と併用して投与してもよい。
【００３９】
医薬組成物を使用する場合、安全な有効量の本発明化合物を処置の必要のある哺乳動物(たとえばヒト)に使用し、使用の際の用量は薬学上で効果があるとされる投与量で、体重60kgのヒトの場合、毎日の投与量は、通常1〜2000mg、好ましくは5〜500mgである。勿論、具体的な投与量は、さらに投与の様態、患者の健康状況などの要素を考えるべきで、すべて熟練の医者の技能範囲以内である。
【００４０】
式Iで表される化合物
本発明は、式Iで表される化合物、またはその薬学的に許容し得る塩を提供する。
【化９】
0006508796.tif 000010
（式中において、
R1およびR2は、それぞれ独立に、H、置換または無置換のC1〜C8アルキル基、C(O)OR8、CONR9R10、C(O)R11、置換または無置換の5〜8員のアリール基、置換または無置換の5〜8員のヘテロアリール基、置換または無置換の3〜12員の飽和または不飽和の複素環または炭素環から選ばれる。ここで、前記のヘテロアリール基はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を1〜3個含む。前記の複素環はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を1〜3個含む。
【００４１】
また、R1およびR2は、隣接のN原子と連結して環状構造を構成してもよく、前記の環状構造は置換または無置換の3〜12員の飽和または不飽和の複素環または橋架け環またはスピロ環を含む。ここで、前記複素環とは環構造に、母核に連結する窒素原子以外、さらにN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子が0〜3個含まれる。
【００４２】
R3は、置換または無置換のC1〜C8アルキル基、CN、C(O)OR12、CONR13R14、C(O)R15、置換または無置換の5〜8員のアリール基、置換または無置換の5〜8員のヘテロアリール基、置換または無置換の3〜12員の飽和または不飽和の複素環または炭素環から選ばれる。ここで、前記のヘテロアリール基はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を1〜3個含む。前記の複素環はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を1〜3個含む。
【００４３】
R4は、H、置換または無置換のC1〜C4アルキル基、置換または無置換のC1〜C8アルコキシ基、ハロゲン、OH、CN、C(O)OR12、CONR13R14、C(O)R15、置換または無置換の5〜8員のアリール基、置換または無置換の5〜8員のヘテロアリール基、置換または無置換の3〜12員の飽和または不飽和の複素環または炭素環から選ばれる。ここで、前記のヘテロアリール基はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を1〜3個含む。前記の複素環はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を1〜3個含む。
R5はHまたはC1〜C4アルキル基から選ばれる。
XはCR16またはNである。
A、BおよびZはそれぞれ独立にNまたはCR16から選ばれる。
R16はH、C1〜C4アルキル基またはC1〜C4ハロアルキル基である。
Lは無し、C1〜C6アルキレン基、C(O)、CONR17またはS(O)2からなる群から選ばれる。
YはH、R18、NR19R20、OH、または以下の基の一部から選ばれる。
【化１０】
0006508796.tif 000011
（ただし、
R6は無し、H、置換または無置換のC1〜C8アルキル基、置換または無置換のC1〜C8アルコキシ基、置換または無置換のC2〜C6アシル基、置換または無置換のC2〜C6スルホニル基、置換または無置換のC1〜C6アルキレンヒドロキシ基、CONR22R23またはC(O)R24である。
R7は0〜3個の置換基で、かつR7は置換または無置換のC1〜C8アルキル基、酸素またはハロゲンで、あるいは2個またはそれ以上のR7は橋架けアルキル基を形成する。WはCR21、NまたはOで、WがOである場合、R6は存在しない。
YaはCR21またはNで、R21はHまたはハロゲンである。
【００４４】
R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R17、R18、R19、R20、R22、R23およびR24は、それぞれ独立に、H、置換または無置換のC1〜C8アルキル基、置換または無置換のC1〜C8アルコキシ基、置換または無置換のC1〜C6アルキレン-アミン基、置換または無置換のC1〜C6アルキレン-ヒドロキシ基、置換または無置換の5〜8員のアリール基、あるいは置換または無置換の5〜8員のヘテロアリール基、置換または無置換の3〜12員の飽和または不飽和の複素環または炭素環から選ばれる。ここで、前記のヘテロアリール基はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を少なくとも1個含む。前記の複素環はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を少なくとも1個含む。
nおよびtはそれぞれ0、1または2である。
【００４５】
上記の「置換」はいずれも基における一つまたは複数の水素原子がハロゲン、OH、NH2、CN、無置換またはハロゲン置換のC1〜C8アルキル基、C1〜C8アルコキシ基、無置換またはハロゲン置換のC2〜C6アルケニル基、無置換またはハロゲン置換のC2〜C6アルキニル基、無置換またはハロゲン置換のC2〜C6アシル基、無置換またはハロゲン置換の5〜8員のアリール基、無置換またはハロゲン置換の5〜8員のヘテロアリール基、無置換またはハロゲン置換の3〜12員の飽和の複素環または炭素環からなる群から選ばれる置換基で置換されることをいう。ここで、前記のヘテロアリール基はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を1〜3個含む。前記の複素環はN、OまたはSからなる群から選ばれるヘテロ原子を1〜3個含む。）
【００４６】
もう一つの好適な例において、
【化１１】
0006508796.tif 000012
は置換または無置換の以下の群から選ばれる基である。
【化１２】
0006508796.tif 000013
（ただし、mは0、1、2、3、4、5、6、7、8または9で、前記「置換」は前記の通りである。）
もう一つの好適な例において、R1およびR2は隣接の窒素原子と4〜12員の環状構造を形成している。
もう一つの好適な例において、R1およびR2は隣接の窒素原子と5〜7員の環状構造を形成している。
もう一つの好適な例において、R1およびR2は隣接の窒素原子と6員の環状構造を形成している。
もう一つの好適な例において、R13およびR14は隣接の窒素原子と4〜6員の環状構造を形成している。
もう一つの好適な例において、Lが無しの場合、Yは窒素原子を含有する6員の複素環である。
もう一つの好適な例において、A、B、L、X、Y、Z、R1、R2、R3、R4またはR5は実施例に記載される具体的な化合物における相応する基である。
【００４７】
もう一つの好適な例において、前記式Iで表される化合物は以下に示す化合物である。
【化１３】
0006508796.tif 000014
【化１４】
0006508796.tif 000015
【００４８】
式Iで表される化合物の調製方法
本発明は、式Iで表される化合物を調製する方法であって、以下の工程を含む方法を提供する。
【化１５】
0006508796.tif 000016
a) 不活性溶媒において、式I-6化合物と式I-7化合物を反応させ、式Iで表される化合物を形成し、ここで、各基の定義は上記の通りである。
もう一つの好適な例において、前記の不活性溶媒は、トルエン、キシレン、エチレングリコールジメチルエーテル、ジオキサン、THF、DMF、DMSO、NMP、またはこれらの組み合わせからなる群から選ばれる。
もう一つの好適な例において、前記反応は、パラジウム触媒の存在下で行われる。
もう一つの好適な例において、前記のパラジウム触媒は、Pd(PPh3)4、Pd2(dba)3、Pd(dba)2、Pd(OAc)2、Pd(PPh3)2Cl2、Pd(dppe)Cl2、Pd(dppf)Cl2、Pd(dppf)Cl2・CH2Cl2、またはこれらの組み合わせからなる群から選ばれる。
もう一つの好適な例において、前記反応は、配位子の存在下で行われる。
【００４９】
もう一つの好適な例において、前記の配位子は単座ホスフィン配位子または二座ホスフィン配位子で、より好ましくは、前記の配位子は、トリフェニルホスフィン、トリトリルホスフィン、トリシクロヘキシルホスフィン、トリ-t-ブチルホスフィン、X-Phos、S-Phos、ビス(ジフェニルホスフィノ)ビナフチル、1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン、1,2-ビス(ジフェニルホスフィノ)エタン、Xant-Phos、またはこれらの組み合わせからなる群から選ばれる。
もう一つの好適な例において、前記反応は、塩基の存在下で行われる。
【００５０】
もう一つの好適な例において、前記の塩基は、Na2CO3、K2CO3、Cs2CO3、LiHMDS、NaHMDS、KHMDS、ナトリウム t-ブトキシド、カリウム t-ブトキシド、トリエチルアミン、ジイソプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、またはこれらの組み合せからなる群から選ばれる。
一つの好適な調製方法は、以下の工程を含む。
【化１６】
0006508796.tif 000017
(1) 化合物A3は、化合物A1と相応するヒドラジンA2から塩基(たとえばジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミンが挙げられるが、これらに限定されない)の触媒下で不活性溶媒(エタノール、THFなど)において反応して得られる。
【００５１】
（2）化合物A5は、化合物A3と相応する末端アルキンA4から薗頭カップリング（Sonogashira coupling）を行って得られ、不活性溶媒（たとえばTHF、DMF、DMSO、ジオキサンなど）において、触媒a（たとえばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム（Pd2(dba)3）、ビス(ジベンジリデンアセトン)パラジウム、ビス(トリフェニルホスフィン)パラジウムジクロリド、ビス(トリ-o-トリルホスフィン)パラジウムジクロリド、1,2-ビス(ジフェニルホスフィノ)エタンパラジウムジクロリド、[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]パラジウムジクロリド、[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]パラジウムジクロリドジクロロメタン錯体など）、触媒b（たとえばヨウ化第一銅、塩化亜鉛、酸化銀、炭酸銀など）および塩基（たとえば炭酸カリウム、フッ化カリウム、炭酸セシウム、フッ化セシウム、フッ化ナトリウム、リン酸カリウム、水和リン酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデセン-7、トリエチルアミン、ジイソプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジンまたはこれらの組み合わせなど）の存在下で、薗頭カップリング反応を行い（反応時間：2〜8時間）、化合物A5を得る。
(3) 化合物A6は、化合物A5から不活性溶媒(ジクロロメタン、THF、アセトニトリルなど)において、フッ化テトラブチルアンモニウム（TBAF）を入れ、加熱しながら反応させて得られる。
【００５２】
（4）化合物A8は、化合物A6と相応する芳香族アミンA7からバックワルド・ハートウィグカップリング（Buchwald-Hartwig coupling）を行って得られ、不活性溶媒（たとえばトルエン、THF、DMF、DMSO、ジオキサンなど）において、触媒a（たとえばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム（Pd2(dba)3）、ビス(ジベンジリデンアセトン)パラジウム、ビス(トリフェニルホスフィン)パラジウムジクロリド、ビス(トリ-o-トリルホスフィン)パラジウムジクロリド、1,2-ビス(ジフェニルホスフィノ)エタンパラジウムジクロリド、[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]パラジウムジクロリド、[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]パラジウムジクロリドジクロロメタン錯体など）、配位子（たとえばトリトリルホスフィン、トリシクロヘキシルホスフィン、トリ-t-ブチルホスフィン、ビス(ジフェニルホスフィノ)ビナフチルなど）および塩基（たとえば炭酸カリウム、フッ化カリウム、炭酸セシウム、フッ化セシウム、フッ化ナトリウム、リン酸カリウム、水和リン酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、ナトリウム t-ブトキシド、カリウム t-ブトキシド、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデセン-7、トリエチルアミン、ジイソプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジンまたはこれらの組み合わせなど）の存在下で、バックワルド・ハートウィグカップリング反応を行い（反応時間：2〜8時間）、化合物A8を得る。
【００５３】
式Iで表される化合物の使用
本発明は、
（a）CDKキナーゼの活性または発現量に関連する疾患を処置する薬物の調製、
（b）CDKキナーゼ選択的阻害剤の調製、
（c）体外におけるCDKキナーゼの活性に対する非治療的な抑制、
（d）体外における腫瘍細胞の増殖に対する非治療的な抑制、および/あるいは
（e）CDKキナーゼの活性または発現量に関連する疾患の処置、
における式Iで表される化合物の使用を提供する。
もう一つの好適な例において、前記CDKキナーゼは、CDK4、CDK6、またはこれらの組み合わせからなる群から選ばれ、かつ/あるいは
前記の腫瘍細胞は白血病細胞株で、好ましくは骨髄性白血病細胞株で、より好ましくは急性骨髄性白血病細胞株KG1細胞である。
【００５４】
本発明の主な利点は以下の通りである。
1．式Iで表される化合物を提供する。
2．新規な構造のCDKキナーゼ阻害剤およびその調製と使用を提供し、前記の阻害剤は非常に低い濃度でも各CDKキナーゼの活性を抑制することができる。
3．CDKキナーゼの活性に関連する疾患を処置する医薬組成物を提供する。
【００５５】
以下、具体的な実施例によって、さらに本発明を説明する。これらの実施例は本発明を説明するために用いられるものだけで、本発明の範囲の制限にはならないと理解されるものである。以下の実施例において、具体的な条件が記載されていない実験方法は、通常、通常の条件、あるいはメーカーの薦めの条件で行われた。特に説明しない限り、百分率および部は重量百分率および重量部である。
各実施例において：
LCMS装置：PumpAgilent1100UV、検出器：Agilent1100DAD、
質量分析装置：API3000、
クロマトグラフィーカラム：WaterssunfireC18,4.6×50mm,5um、
移動相：A-アセトニトリル、B-H2O(0.1％FA)。
【００５６】
実施例1
【化１７】
0006508796.tif 000018
乾燥した250mL三口フラスコに化合物1(5.00g，21.94mmol)およびエタノール(100.0mL)を入れ、-20℃でゆっくり1-アミノピペリジン2(3.30g，32.91mmol)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(4.25g，32.91mmol)を滴下した。-20℃で3時間撹拌し、反応液から溶媒を回転乾燥させてシリカゲルカラムにかけて精製し、白色固体の化合物3を得た(2.9g，45.24％)。LCMS:293(M+H)+,RT=0.50mim.
【化１８】
0006508796.tif 000019
【００５７】
化合物3（2.5g，8.56mmol）および[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]パラジウムジクロリドジクロロメタン錯体（0.35g，0.4281mmol）をテトラヒドロフラン（12mL）に溶解させ、室温でトリエチルアミン（1.3g，12.84mmol）および3,3-ジエトキシ-1-プロピン4（1.64g,12.84mmol）を入れた。窒素ガスで1分間置換し、室温で10分間撹拌した。その後、ヨウ化第一銅（65.1mg，0.3425mmol）を入れ、窒素ガスで3回置換した。100℃で6時間マイクロ波処理し、混合物をシリカゲルと混ぜてカラムにかけて精製し、黄色の油状の化合物5を得た（1.512g，52.25％）。LCMS:339(M+H)+,RT=1.72mim.
【化１９】
0006508796.tif 000020
【００５８】
化合物5（1.512g，4.47mmol）をテトラヒドロフラン（80ml）に溶解させ、室温でフッ化テトラブチルアンモニウム（7.13g,27.29mmol）を入れた。65℃で2時間撹拌し、反応液から溶媒を回転乾燥させてシリカゲルカラムにかけて精製し、黄色の油状の化合物6を得た(1.208g，79.89％)。LCMS:339(M+H)+,RT=1.72mim。
1HNMR(CD3Cl3,400MHz)δ(ppm)8.723(s，1H)，6.512(s，1H),5.728(s，1H)，3.967(t，2H，J=11Hz)，3.646-3.729(m，4H)，3.104(d，2H,J=10Hz)，1.689-1.838(m，6H)，1.261(t,6H，J=7Hz)。
【化２０】
0006508796.tif 000021
【００５９】
化合物6（0.98g，2.899mmol）を1,4-ジオキサン（15ml）に溶解させ、室温で濃塩酸（8ml）を入れ、10分間撹拌した。反応液を60 mLの水で希釈し、80mLの酢酸エチルで2回抽出し、有機相を合併し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を回転乾燥して褐色固体の化合物7(0.765 g，100％)を得、精製せずにそのまま次の工程に使用した。LCMS:265(M+H)+,RT=1.34mim。
【化２１】
0006508796.tif 000022
【００６０】
化合物7（0.765g，2.899mmol）をN,N-ジメチルホルムアミド（5ml）に溶解させ、室温でペルオキソ一硫酸カリウム（1.96g，3.1875mmol）を入れ、室温で一晩撹拌した。反応液に水を入れたら、固体が析出し、ろ過して黄色固体の化合物8を得た（0.812g，100％）。LCMS:281(M+H)+,RT=0.92mim。
【化２２】
0006508796.tif 000023
【００６１】
化合物8（0.54g，1.929mmol）および自メチルアミン塩酸塩9（0.189g，2.3143mmol）をN,N-ジメチルホルムアミド（6ml）に溶解させ、室温で2-(7-アザベンゾトリアゾリル)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（0.733g，1.929mmol）およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン（0.784g，5.786mmol）を入れ、1時間撹拌した。反応液をオイルポンプで回転乾燥してシリカゲルカラムにかけて精製し、黄色固体の化合物10を得た（0.118g、19.93％）。LCMS:308(M+H)+，RT=1.42mim.
【化２３】
0006508796.tif 000024
【００６２】
化合物11a（13.7g，73.9mmol）、化合物11b（10g，49.3mmol）、ヨウ化カリウム（81.8mg，0.493mmol）および炭酸カリウム（13.6g，98.6mmol）をDMSO（100mL）に入れ、反応液を120℃で一晩撹拌した。反応液の温度を室温に下げ、1mol塩酸でpHを約7とし、DCMで抽出し、水相をさらに飽和炭酸ナトリウムで塩基化し、そして水相をさらにDCMで抽出した。有機相を合併し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、さらに水でスラリーにし、化合物11cを得た（9.2g，60％）。LCMS:309(M+H)+,RT=1.710min。
【化２４】
0006508796.tif 000025
【００６３】
化合物11c（9.2g，29.9mmol）および湿潤パラジウム炭素（2g）をメタノール（100mL）も入れ、反応液における空気を水素ガスで4〜5回置換した後、水素ガス雰囲気において室温で一晩撹拌した。反応液をろ過し、少量のメタノールで洗浄し、濃縮して化合物11を得た（7.1g，85％）。LCMS:279(M+H)+,RT=1.120min。
【化２５】
0006508796.tif 000026
【００６４】
化合物10(90mg,0.2932mmol)、4-(6-アミノピリジン-3-イル)ピペラジン-1-カルボン-t-ブチル11(122.2mg,0.4397mmol)およびトリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(26.8mg,0.02932mmol)を1,4-ジオキサン（1ml）に溶解させ、そしてナトリウム t-ブトキシド(50.7mg,0.5277mmol)およびビス(ジフェニルホスフィノ)ビナフチル(36.5mg,0.05863mmol)を入れ、窒素ガスで3回置換した。110℃で1.5時間マイクロ波処理した。混合物を回転乾燥させて精製し、褐色固体の化合物12を得た（68mg，42.3％）。LCMS:550(M+H)+，RT=1.41mim。
1HNMR(CDCl3,400MHz)δ(ppm)8.931(s,1H),8.280(s，1H)，8.118(s，1H)，7.916(s,1H)，6.455(s，1H),3.719(s,4H),3.647(s，2H)，3.300(s,5H), 3.147(s，3H),3.006(s，3H),3.243(t,1H,J=7.6Hz),1.990-2.018(m，4H), 1.481(s.9H),1.427(s,2H)。
【化２６】
0006508796.tif 000027
【００６５】
化合物12(68mg,0.1239mmol)をジクロロメタン(10mL)に溶解させ、そしてトリフルオロ酢酸(2ml)を入れ、室温で一晩撹拌した。回転乾燥させて粗製品を得、pre-TLCで精製した後、33 mgの黄色固体の産物13を得、収率は59.34％であった。LCMS:450(M+H)+，RT=1.12mim。
1HNMR(MeOD,400MHz)δ(ppm)8.680(s，1H)，8.308(d，1H，J=9.2Hz), 7.972(d，1H，J=2.8Hz)，7.498-7.528(m，1H)，6.413(s，1H)，3.990(s，2H)，3.344(s，1H)，3.138(t，6H,J=4.8Hz)，3.056(s,3H),2.987-3.011(m，4H),2.121-2.205(m,1H),1.986-2.088(m,1H)1.581-1.737(m,6H)。
【００６６】
類似の方法によって以下の化合物を得ることができる。
N,N-ジメチル-2-((5-(4-メチルピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル）アミノ)-7-(ピペリジン-1-イル）-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-ホルムアミド
【化２７】
0006508796.tif 000028
LCMS:464(M+H)+，RT=1.13mim
1HNMR(DMSO,400MHz)δ(ppm)9.361(s,1H),8.732(s，1H)，8.240(d，1H，J=9.2Hz)，8.006(d,1H,J=2.4Hz)，7.465-7.493(m，1H),6.379(s,1H),3.857(s，2H)，3.132(s,5H),3.020(s，3H),2.952(m，3H),2.479-2.490(m,4H),2.234(s，3H),1.196(s,1H),1.547-1.703(m,6H)。
【００６７】
7-(アゼパン-1-イル)-N,N-ジメチル-2-((5-(ピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル）アミノ)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-ホルムアミド
【化２８】
0006508796.tif 000029
LCMS:464(M+H)+，RT=1.18mim
1HNMR(MeOD,400MHz)δ(ppm)8.686(s,1H),8.373(d，1H,J=8.8Hz)，8.006 (d，1H，J=2.8Hz)，7.565-7.595(m，1H)，6.397(s，1H), 5.338(t,1H,J=4.8Hz), 3.958(s，2H)，3.221-3.245(m,4H),3.158(s，3H), 3.065(s，3H),2.156- 2.209(m,1H),2.002-2.048(m，2H),1.781(s,6H),1.581-1.674(m,4H)。
【００６８】
アゼチジン-1-イル(2-((5-(4-メチルピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル）アミノ)-7-(ピペリジン-1-イル）-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-イル)ケトン
【化２９】
0006508796.tif 000030
LCMS:476(M+H)+，RT=1.16mim
1HNMR(MeOD,400MHz)δ(ppm)8.696(s,1H),8.316(d，1H,J=8.8Hz)，7.985 (d，1H，J=2.8Hz)，7.514-7.544(m，1H)，6.593(s，1H), 4.288(t, 2H,J=7.6Hz), 4.208(t,2H,J=7.6Hz),3.953(s，2H)，3.232(t,4H,J=4.8Hz), 2.710(s，4H),2.367-2.424(m，4H),2.152-2.187(m,1H),2.019-2.033(m，1H), 1.787(s, 5H),1.598(m,1H)。
【００６９】
アゼチジン-1-イル(2-((5-(ピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル）アミノ)-7-(ピペリジン-1-イル）-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-イル)ケトン
【化３０】
0006508796.tif 000031
LCMS:462(M+H)+，RT=1.19mim
1HNMR(MeOD,400MHz)δ(ppm)8.706(s,1H),8.351(d，1H,J=8.4Hz)，8.008 (d，1H，J=2.8Hz)，7.543-7.573(m，1H)，6.602(s，1H), 4.290(t,2H,J=7.6Hz), 4.210(t,2H,J=8Hz),3.952(s，2H)，3.215-3.229(m,6H),2.349-2.427(m，2H),2.152-2.205(m，2H),2.008-2.033(m,1H),1.788(m，1H),1.787(s,5H), 1.598(t,1H,J=6.4Hz)。
【００７０】
N-メチル-2-((5-(ピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル）アミノ)-7-(ピペリジン-1-イル）-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-ホルムアミド
【化３１】
0006508796.tif 000032
LCMS:436(M+H)+，RT=1.15mim
1HNMR(MeOD,400MHz)δ(ppm)8.777(s,1H),8.7251(d，1H,J=9.2Hz)，7.994 (d，1H，J=2.8Hz)，7.511-7.542(m,1H)，7.130(s，1H), 4.201(t,2H,J=10.8Hz), 3.132-3.166(m，5H)，3.004(s,5H),2.187(t，2H,J=7.6Hz),2.019-2.003(m，1H),1.944(s,2H),1.790(d，2H,J=13.6Hz), 1.580-1.616(m,2H)。
【００７１】
4-(6-((6-(ジメチルアミノホルミル）-7-(ピロリジン-1-イル）-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イル)アミノ)ピリジン-3-イル)ピペラジン-1-カルボン酸 t-ブチル
【化３２】
0006508796.tif 000033
LCMS:536(M+H)+，RT=1.36mim
1HNMR(CDCl3,400MHz)δ(ppm)8.723(s,1H),8.395(d，1H,J=9.2Hz)，7.713 (d，1H，J=9.2Hz)，7.593(s,1H)，6.374(s，1H),3.604(d,7H,J=13.6Hz), 3.494 (s，1H)，3.163(s,3H),3.121(s，4H),3.031(s，3H),2.075(s,4H), 1.497(s，9H)。
【００７２】
2-((5-(3,3-ジメチルピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル）アミノ)-N,N-ジメチル-7-(ピペリジン-1-イル）-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-ホルムアミド
【化３３】
0006508796.tif 000034
LCMS:478(M+H)+，RT=1.20mim
1HNMR(MeOD,400MHz)δ(ppm)8.720(s,1H),8.277(s，1H)，8.018(s，1H)，7.624(s，1H)，6.434(s，1H),4.003(m,2H),3.477(m，1H)，3.141(m,4H), 3.049(s，3H),2.177(d，2H,J=8Hz),2.026(d,4H,J=5.6Hz),1.735-1.757(m，3H),1.580-1.616(m,3H),1.471(s,4H),1.401(s,2H)。
【００７３】
(2-((5-(4-メチルピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル）アミノ)-7-(ピペリジン-1-イル）-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-イル)-ピロリジン-1-イルケトン
【化３４】
0006508796.tif 000035
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.37(d,1H,J=3.2Hz),8.72(s,1H),8.24(d,1H,J=5.6Hz),8.00(d,1H,J=0.8Hz),7.48(m,1H),6.45(s,1H),3.45(m,4H),3.15(m,6H),2.28(m,4H),1.96(s,3H),1.84(m,6H),1.64(m,8H).
【００７４】
N,N-ジメチル-2-((5-(4-メチルピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル）アミノ)-7-モルホリル-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-ホルムアミド
【化３５】
0006508796.tif 000036
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.36(s,1H),8.74(s,1H),8.16(d,1H,J=9.2Hz),8.00(d,1H,J=2.4Hz),7.39(dd,1H,J=2.8Hz),6.42(s,1H),3.71(m,4H),3.12(t,4H,J=4.6Hz),3.03(s,3H),2.97(s,3H),2.47(m,8H),2.23(s,3H).
【００７５】
(2-((5-(ピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル）アミノ)-7-(ピペリジン-1-イル）-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-イル)-ピロリジン-1-イルケトン
【化３６】
0006508796.tif 000037
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.38(s,1H),8.73(s,1H),8.23(d,1H,J=8.4Hz),8.00(d,1H,J=1.2Hz),7.46(dd,1H,J=6Hz),6.45(s,1H),3.48(m,4H),3.10(m,8H),2.93(m,6H),1.65(m,8H).
【００７６】
N,N-ジメチル-2-((5-(ピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル）アミノ)-7-(ピロリジン-1-イル）-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-ホルムアミド
【化３７】
0006508796.tif 000038
1HNMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.69(s,1H),8.20(d,1H,J=9.2Hz),7.97(d,1H,J=2.4Hz),7.52(dd,1H,J=2.8Hz),6.43(s,1H),3.63(m,4H),3.14(m,4H),3.13(s,3H),3.08(s,3H),3.00(m,4H),2.06(m,4H).
【００７７】
N,N-ジメチル-2-((5-モルホリルピリジン-2-イル）アミノ)-7-(ピペリジン-1-イル）-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-ホルムアミド
【化３８】
0006508796.tif 000039
LCMS:450(M+H)+，RT=6.41mim。
1HNMR(CDCl3,400MHz)δ(ppm)8.661(s,1H),8.414(d，1H，J=8.8Hz)，8.014 (d，1H，J=2.4Hz)，7.895(s，1H)，7.349-7.320(m，1H)，6.288 (s,1H), 3.967- 3.882(m，6H),3.240-3.133(m，9H),3.016(s,3H),1.776-1.630(m，6H，)。
【００７８】
N,N-ジメチル-2-((5-(4-エチルピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル）アミノ)-7-(ピペリジン-1-イル）-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-ホルムアミド
【化３９】
0006508796.tif 000040
LCMS:477(M+H)+，RT=5.56mim
1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ(ppm)9.385（s，1H），8.730（s，1H），8.248（d，1H，J=8.8Hz），8.009（S，1H），7.493（d，1H，J=8.4Hz）, 6.377（S，1H），3.146（S，6H），3.014-2.949（m，7H），2.567(m，5H)，1.706-1.552（m，4H），1.235（s，4H），1.054（s，3H）。
【００７９】
2-((5-((3S,5R)-3,5-ジメチルピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル）アミノ)-N,N-ジメチル-7-(ピペリジン-1-イル）-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-ホルムアミド
【化４０】
0006508796.tif 000041
LCMS:478(M+H)+,RT=1.20min.
1HNMR(d6-DMSO,400MHz)δ(ppm)9.30(s,1H),8.72(s,1H),8.22(d,1H,J=8.0Hz),7.97(s,1H),7.46(d,1H,J=8.0Hz),6.37(s,1H),3.83(s,1H),3.49(d,2H,J=8.0Hz),3.01(s,3H),2.94(s,3H),2.89(m,2H),2.33(s,1H),2.14(m,2H),2.01(m,2H),1.23(s,6H),1.04(d,6H,J=8.0Hz),0.85(m,1H).
【００８０】
N,N-ジメチル-2-((5-(ピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル）アミノ)-7-モルホリル-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-ホルムアミド
【化４１】
0006508796.tif 000042
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.47（s,1H）,8.77(s,1H),8.17(d,1H,J=4Hz),8.01(s,1H),7.40(m,1H),6.43(s,1H),3.71(m,8H),3.03(s,6H),3.00(m,4H),2.87(m,4H),
【００８１】
N,N-ジエチル-2-((5-(ピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル）アミノ)-7-(ピペリジン-1-イル）-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-ホルムアミド
【化４２】
0006508796.tif 000043
1HNMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.72（s,1H）,8.35(d,1H,J=4Hz),8.02(d,1H,J=4Hz),7.55(t,1H,J=3Hz),6.42(s,1H),4.01(m,2H),3.61(q,2H,J=8Hz),3.39(m,4H),3.17(m,4H),3.03(m,4H),1.83(m,4H),1.64(m,4H),1.34(m,8H),
【００８２】
N,N-ジメチル-2-((5-(4-トリデューテロメチルピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル）アミノ)-7-(ピペリジン-1-イル）-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-ホルムアミド
【化４３】
0006508796.tif 000044
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ (ppm) 9.34 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.23 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.47 (dd, J = 9.2 Hz, 1H), 6.37 (s, 1H), 3.51 (m, 2H), 3.21 (s, 6H), 3.01 (s, 3H), 2.95 (s, 3H), 1.68 (m, 10H).
【００８３】
N,N-ジメチル-2-((5-(4-メチルピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル）アミノ)-7-(アゼパン-1-イル）-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-ホルムアミド
【化４４】
0006508796.tif 000045
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ (ppm) 9.34 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.29 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.50 (m, 1H), 6.34 (s, 1H), 3.83 (m, 2H), 3.20 (m, 8H), 3.03 (s, 3H), 2.95 (s, 3H), 1.67 (m, 10H).
【００８４】
N,N-ジメチル-2-((5-(4-メチル-1,4-ジアザシクロヘプタン-1-イル）ピリジン-2-イル）アミノ)-7-(ピペリジン-1-イル）-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-ホルムアミド
【化４５】
0006508796.tif 000046
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ (ppm) 9.16 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.27 (m, 1H), 6.36 (s, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.48 (m, 3H), 3.01 (m, 10H), 2.60 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.64 (m, 6H). 
【００８５】
N,N-ジメチル-2-((5-((4-メチルピペラジン-1-イル）メチル)ピリジン-2-イル）アミノ)-7-(ピペリジン-1-イル）-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-ホルムアミド
【化４６】
0006508796.tif 000047
1H NMR (メタノール-d4, 400 MHz) δ (ppm) 8.98 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.20 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.64 (s, 1H), 3.98 (s, 2H), 3.71 (s, 2H), 3.57-3.43 (m, 2H), 3.34 (m, 2H), 3.16 (s, 6H), 3.06 (s, 4H), 2.91 (s, 3H), 2.52 (s, 2H), 1.76-1.60 (s, 6H).
【００８６】
-  N,N-ジメチル-2-((4-(4-メチルピペラジン-1-イル）フェニル）アミノ)-7-(ピペリジン-1-イル）-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-ホルムアミド
【化４７】
0006508796.tif 000048
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ (ppm) 9.37 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 7.75 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.95 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.33 (s, 1H), 3.86 (m, 2H), 3.26-3.13 (m, 6H), 3.01 (s, 4H), 2.95 (s, 6H), 2.57 (s, 3H), 1.73-1.55 (m, 6H).
【００８７】
N,N-ジメチル-2-((5-(4-シクロプロピルピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル）アミノ)-7-(ピペリジン-1-イル）-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-ホルムアミド
【化４８】
0006508796.tif 000049
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ (ppm) 9.31 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.23 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.99(d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.48 (m, 1H), 6.37 (s, 1H) 3.18 (d, J = 5.6 Hz, 4H), 3.01(s, 3H), 2.95 (s, 3H), 2.70 (t, J = 8.8 Hz, 4H), 1.67 (m, 8H), 0.45 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 0.35 (d, J = 2.8 Hz, 2H).
【００８８】
N,N-ジメチル-2-((6-(4-メチルピペラジン-1-イル）ピリダジン-3-イル）アミノ)-7-(ピペリジン-1-イル）-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-ホルムアミド
【化４９】
0006508796.tif 000050
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ (ppm) 9.85 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.29 (d, 1H, J = 10 Hz), 7.45 (d, 1H, J = 9.6 Hz), 6.39 (s, 1H), 3.80-3.71 (m, 2H), 4.45 (s, 4H), 3.02 (s, 3H), 2.95 (s, 3H), 2.45 (s, 4H), 2.24 (s, 3H), 1.66-1.58 (m, 6H), 1.24 (s, 2H),
【００８９】
2-((5-(4-メチルピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル）アミノ)-7-(ピペリジン-1-イル）-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-イル)メタノール
【化５０】
0006508796.tif 000051
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ (ppm) 11.02 (s,1H), 10.23 (s，1H)， 8.83 (s，1H)， 8.01 (s，1H), 7.89 (d, 1H, J = 8.4Hz)，7.71 (d, 1H, J = 8.8Hz), 6.44 (s，1H), 4.61 (s,2H), 4.06-3.79 (m，6H)，3.27-2.89 (m , 6H), 2.89 (s，3H), 1.77-1.65 (m, 6H).
【００９０】
N,N-ジメチル-2-((5-(4-メチルピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル）アミノ)-5-メチル-7-(ピペリジン-1-イル）-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-ホルムアミド
【化５１】
0006508796.tif 000052
1HNMR (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) 8.58 (s, 1H), 7.93 (s, 2H), 7.37 (s, 1H), 3.98-3.93 (t, 3H, J = 8.8 Hz, 10.8 Hz), 3.49 (s, 9H), 3.18-2.71 (m, 12H), 2.44 (s, 3H), 2.04-1.62 (m, 6H).
【００９１】
以下の化合物も類似の方法で調製することができる。
【化５２】
0006508796.tif 000053
【００９２】
実施例2  本発明化合物のCDKキナーゼ活性に対する測定
1．試験材料
本実験で使用されたCDKキナーゼ：CDK4/CyclinD1（invitrogen，商品番号PV4400）；CDK6/CyclinD1(invitrogen,商品番号PV4401)；CDK1/CyclinB(invitrogen,商品番号：PV3292)。
使用された試薬：基質はULight-4E-BP1（PerkinElmer，商品番号TRF0128）で、抗体はEu標識抗リン酸化eIF4E結合タンパク質1（Eu-labeledanti-phospho-eIF4E-bindingprotein1）(Thr37/46)（Perkin -Elmer，商品番号TRF0216）である。
【００９３】
2．試験方法
被験化合物をジメチルスルホキシドに溶解させ、そして試験の要求に応じて緩衝液(50mMHEPES、10mMMgCl2、1mMEGTA、2mMDTTおよび0.01％Tween20)で各濃度勾配に希釈し、ジメチルスルホキシドの濃度は4％であった。さらに緩衝液でATPおよび基質であるULight-4E-BP1を希釈し、濃度が800μMATPおよび200nM基質の溶液の混合物とし、使用に備えた。反応ウェルに2.5μLの基質とATPの混合液または2.5μLの基質を入れ、さらに2.5μLの化合物または4％ジメチルスルホキシドの緩衝液を入れ、最後に5μLの酵素（最終濃度0.66μg/mL）を入れ、室温で光を避けて60分間インキュベートした。各ウェルに5μLの1x検出緩衝液（LANCEDetectionBuffer，10x，PerkinElmer，商品番号CR97-100）で希釈されたEDTA停止液（最終濃度6mM）を入れ、さらに5μLの1x検出緩衝液で希釈された抗体（最終濃度2nM）を入れ、室温で光を避けて60分間インキュベートした。Perkin Elmer EnVisionR TRFRETmode（励起波長:320nm，発光波長:615nmと665nm）によってプレートを測定した。
サンプルの抑制率は、以下の公式で求めた。
【数１】
0006508796.tif 000054
IC50値はGraphPadPrismソフトで算出した。
【００９４】
3． 結果
得られた結果を表1に示す。符号+はIC50が100 nM未満を、符号++はIC50が100 nM〜500 nMを、符号+++はIC50が500 nM超を、符号N/Aはデータ無しを表す。
【表１】
0006508796.tif 000055
結果から、本発明の化合物は非常に低い濃度（≦100 nM）でも、有効にCDK4キナーゼの活性を抑制しながら、CDK1キナーゼに弱い抑制活性を有することが示された。
【００９５】
実施例3  本発明化合物のヒト結腸癌細胞株Colo205に対する増殖抑制活性の測定
1．試験方法
以下に記載の体外細胞試験は、被験化合物のヒト結腸癌細胞株に対する増殖抑制活性を測定することができ、その活性はIC50値で表す。
Colo205細胞(中国科学院典型培養物寄託委員会細胞ライブラリー)を適切な細胞濃度2000個/ウェルで96ウェルプレートに接種し、各ウェルに培地を40μLずつ入れ、二酸化炭素恒温槽で37℃で一晩培養した後、10μLの異なる濃度の被験化合物を入れて96時間作用させ、そして溶媒コントロール群（陰性コントロール）を設けた。96時間後、CCK8(Cell  Counting  Kit-8，商品番号:CK04，同仁化学から購入)方法によって化合物の腫瘍細胞の増殖に対する抑制活性を検出した。全波長式マイクロプレートリーダーSPECTRA MAX 190によって波長450 nmで数値を読み取った。
サンプルの抑制率は、以下の公式で求めた。
【数２】
0006508796.tif 000056
IC50値はマイクロプレートリーダー付属ソフトによって4パラメータ法でフィッティングして求めた。
【００９６】
2． 結果
得られた結果を表2に示す。符号+はIC50が0.5 nM未満を、符号++はIC50が0.5 nM〜2 nMを、符号+++はIC50が2 nM超を、符号N/Aはデータ無しを表す。
【表２】
0006508796.tif 000057
結果から、本発明の化合物は非常に低い濃度（≦2uM）でも、有効に腫瘍細胞の増殖を抑制することができることが示された。
【００９７】
各文献がそれぞれ単独に引用されるように、本発明に係るすべての文献は本出願で参考として引用する。また、本発明の上記の内容を読み終わった後、この分野の技術者が本発明を各種の変動や修正をすることができるが、それらの等価の様態のものは本発明の請求の範囲に含まれることが理解されるはずである。