(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者が癌に罹患しているかどうかまたは癌のリスクを有するかどうかを検査する方法であって、被験者由来の血漿サンプル中のＨｓｐ９０αの濃度を検出することを含み、その濃度が既定の閾値に達するかまたは超えれば、前記被験者が癌に罹患しているまたは癌のリスクを有することが示され；前記閾値は５０ｎｇ／ｍｌ〜１２０ｎｇ／ｍｌの範囲から選択され、Ｈｓｐ９０α濃度が抗凝固剤としてＥＤＴＡ−Ｋ２を用いて検出され、癌が結腸直腸癌、胃癌、卵巣癌、リンパ腫、食道癌、黒色腫、腎臓癌、子宮癌、鼻咽頭癌腫、骨肉腫、膀胱癌および前立腺癌からなる群から選択される、方法。
【請求項２】
閾値が、５０、５３、５６、６２、６３、６４、６７、７２、８２、８５または１１７ｎｇ／ｍｌである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
閾値が、８２ｎｇ／ｍｌである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
被験者が癌に罹患しているかどうかまたは癌のリスクを有するかどうかを判定するためのキットであって、任意選択のヒト分泌型Ｈｓｐ９０α、ヒト分泌型Ｈｓｐ９０αに対するモノクローナル抗体、検出試薬および説明書を含み、前記説明書が健常者の血漿サンプル中のＨｓｐ９０α濃度の閾値を示し、被験者由来の血漿サンプル中のＨｓｐ９０α濃度が前記閾値に達するかまたは超えれば、前記被験者は癌を有するまたは癌のリスクを有すると判定され；前記閾値は５０ｎｇ／ｍｌ〜１２０ｎｇ／ｍｌの範囲から選択され、Ｈｓｐ９０α濃度が抗凝固剤としてＥＤＴＡ−Ｋ２を用いて検出され、癌が結腸直腸癌、胃癌、卵巣癌、リンパ腫、食道癌、黒色腫、腎臓癌、子宮癌、鼻咽頭癌腫、骨肉腫、膀胱癌および前立腺癌からなる群から選択される、キット。
【請求項５】
閾値が、５０、５３、５６、６２、６３、６４、６７、７２、８２、８５または１１７ｎｇ／ｍｌである、請求項４に記載のキット。
【請求項６】
閾値が、８２ｎｇ／ｍｌである、請求項４または５に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肺癌、肝臓癌、結腸直腸癌、乳癌および１２の他種の悪性腫瘍の診断、疾患監視および治療有効性評価に関する。より詳しくは、本発明は、熱ショックタンパク質９０αの定量的検出により肺癌、肝臓癌、結腸直腸癌、乳癌を含む悪性腫瘍を診断する方法に関する。本発明はまた、これらの疾患の疾患監視および治療有効性評価の方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
熱ショックタンパク質９０α（Ｈｓｐ９０α）は、豊富に存在する細胞内シャペロンタンパク質である。最近の研究では、Ｈｓｐ９０αは細胞外間隙に分泌されることがあり、癌の発生および発達に密接に関係することが報告されている。本発明者らは、末梢血中に分泌されたＨｓｐ９０αが好都合に定量可能であり、その濃度が腫瘍量および悪性度に関連することを実証したが、この指標の臨床使用への応用に導くためのデータが存在しない。従って、腫瘍臨床実践において分泌型Ｈｓｐ９０αの使用をいかに成立させるかが解決すべき差し迫った問題である。
【発明の概要】
【０００３】
一態様において、本発明は、被験者が癌に罹患しているかどうかまたは癌のリスクを有するかどうかを判定する方法であって、被験者由来の血液サンプル中のＨｓｐ９０αの濃度を検出することを含み、その濃度が既定の閾値に達するかまたは超えれば、前記被験者が癌に罹患しているまたは癌のリスクを有すると判定される方法を提供する。前記閾値は５０ｎｇ／ｍｌ〜１２０ｎｇ／ｍｌの範囲から選択され、例えば、閾値は５０、５３、５６、６２、６３、６４、６７、７２、８２、８５または１１７ｎｇ／ｍｌであってよく、閾値前後±１５％内の値は判定に関して等価の有意性を有すると見なされる。
【０００４】
当業者ならば、検出方法の限界により、完全に正確な濃度を得ることがかなり困難であることを理解するであろう。当技術分野の一般的慣行によれば、±１５％内の変動は相応の誤差であると見なされる。例えば、閾値を５０ｎｇ／ｍｌに設定した場合、検出された被験者のＨｓｐ９０α濃度が４３ｎｇ／ｍｌであれば、その被験者は癌患者または癌の高リスクを有すると判定される。
【０００５】
本発明では、血液サンプルは、血漿または血清サンプルであり得る。本発明の好ましい実施形態では、測定精度が高いために血漿サンプルが好ましい。
【０００６】
Ｈｓｐ９０αの閾値は５０、５３、５６、６２、６３、６４、６７、７２、８２、８５または１１７ｎｇ／ｍｌであり得る。例えば、本発明の特定の実施形態では、肺癌の特に好ましい閾値は６７．４７ｎｇ／ｍｌ（６７ｎｇ／ｍｌに丸めてもよい）であり、対応する特異度は８５％であり、対応する感度は６４％である。前述の閾値の前後±１５％内の値は判定に関して等価と見なすことができる。
【０００７】
本発明の特定の実施形態では、肺癌の好ましい閾値は８２ｎｇ／ｍｌであり、すなわち、０〜８２ｎｇ／ｍｌの範囲のＨｓｐ９０α濃度が正常であると見なされる。本発明の好ましい実施形態では、特に好ましい肺癌の閾値は５３ｎｇ／ｍｌであり、すなわち、０〜５３ｎｇ／ｍｌの範囲のＨｓｐ９０α濃度が正常であると見なされる。同様に、閾値前後±１５％内の値は、判定に関して等価の有意性を有すると見なし得る。好ましくは、血液サンプルは血漿サンプルである。
【０００８】
別の態様において、本発明は、処置を受けている癌患者の疾患監視および／もしくは治療有効性評価のため、または候補薬物の有効性評価のための方法であって、処置の前と後で被験者の血液サンプル中のＨｓｐ９０α濃度を検出することを含んでなる方法を提供する。処置前のＨｓｐ９０α濃度に比べての処置後のＨｓｐ９０α濃度の上昇パーセンテージが所定の閾値に達するかまたは超えれば、パーセンテージだけ上昇していれば、前記患者の疾患が進行しているか、および／または処置の有効性が低いか、または候補薬物の有効性が低いと判定される。ここで、前記閾値は１０％〜５０％の範囲から選択される。例えば、閾値は３４％であってよく、閾値前後±１５％内の値は判定に関して等価の有意性を有すると見なし得る。好ましくは、血液サンプルは血漿サンプルである。
【０００９】
本明細書で使用する用語「処置」は、広義で理解すべきである。例えば、肺癌患者の療法は、多回の処置サイクル、例えば合計８回の処置サイクルを含み得る。全処置過程を１つの総体と捉えると、療法全体の有効性を評価するためには、Ｈｓｐ９０α濃度は１サイクル目の開始前と８サイクル目の終了時にそれぞれ検出すればよい。あるいは、各処置サイクルを（より正確な評価を得る目的で）単一の「療法」と考えてもよい。例えば、Ｈｓｐ９０α濃度は各処置サイクルの前と後に検出し、それにより単一の処置サイクルの有効性を評価することもできる。いっそうより正確な評価も行える。例えば、２０日の処置サイクルの場合、各日を単一の「処置」と見なしてよく、その日の治療有効性を評価するために各日の処置の前と後にＨｓｐ９０α濃度を検出すればよい。当業者ならば、種々の評価要件に従って、「処置の」具体的時間間隔を設定することができる。
【００１０】
本発明はまた、被験者が癌に罹患しているかどうかまたは癌のリスクを有するかどうかを判定する方法であって、被験者の血液サンプル中のＨｓｐ９０αおよび少なくとも１つの他の腫瘍バイオマーカーの濃度を検出することを含む方法を提供する。Ｈｓｐ９０αおよび他の腫瘍バイオマーカーの濃度が所定の閾値に達するかまたは超えれば、前記被験者は癌に罹患しているまたは癌のリスクを有すると判定され、Ｈｓｐ９０αの閾値は５０ｎｇ／ｍｌ〜１２０ｎｇ／ｍｌの範囲、例えば、５０、５３、５６、６２、６３、６４、６７、７２、８２、８５または１１７ｎｇ／ｍｌから選択される。閾値の±１５％内の値は、判定に関して等価な有意性を有すると見なされる。好ましくは、血液サンプルは血漿サンプルである。他の腫瘍バイオマーカーは、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、サイトケラチン−１９フラグメント抗原２１−１（ＣＹＦＲＡ２１−１）、ＡＦＰ、ＣＡ１９−９、ＣＡ１２５、ＣＡ１５−３、ＰＳＡおよびＣＡ７２−４からなる群から選択される。
【００１１】
本発明の好ましい実施形態によれば、ＥＤＴＡ−Ｋ２は、Ｈｓｐ９０α濃度の検出において好ましい抗凝固剤である。
【００１２】
本発明の方法は、以下の癌種：肺癌、肝臓癌、結腸直腸癌、乳癌、胃癌、膵臓癌、卵巣癌、リンパ腫、食道癌、黒色腫、腎臓癌、子宮癌、鼻咽頭癌腫、骨肉腫、膀胱癌および前立腺癌に適用可能である。
【００１３】
本発明はまた、被験者が癌に罹患しているかどうかまたは癌のリスクを有するかどうかを判定するためのキットであって、任意選択の分泌型ヒトＨｓｐ９０α、分泌型ヒトＨｓｐ９０αに対するモノクローナル抗体、検出試薬および説明書を含み、前記説明書が健常者の血液サンプル中のＨｓｐ９０α濃度の閾値を明示するキットを提供する。被験者のＨｓｐ９０α濃度が前記閾値に達するかまたは超えれば、前記被験者は癌に罹患しているまたは癌のリスクを有すると判定され、前記閾値は５０ｎｇ／ｍｌ〜１２０ｎｇ／ｍｌの範囲、例えば、５０、５３、５６、６２、６３、６４、６７、７２、８２、８５または１１７ｎｇ／ｍｌから選択される。閾値前後±１５％内の値は判定に関して等価の有意性を有すると見なし得る。好ましくは、血液サンプルは血漿サンプルである。
【００１４】
用語「任意選択の」は、本明細書で使用する場合、「有してもよい」または「有さなくてもよい」を意味する。例えば、「任意選択の分泌型ヒトＨｓｐ９０α」は、本発明のキットが分泌型ヒトＨｓｐ９０αを含んでもよく、または分泌型ヒトＨｓｐ９０αを含まなくてもよいことを意味する。例えば、分泌型ヒトＨｓｐ９０αは別個に包装され、キットの主要部分と組み合わせて使用してよい。好ましくは、本発明のキットは、使用の便宜のための検出標準として分泌型ヒトＨｓｐ９０αを含み得る。組換え分泌型ヒトＨｓｐ９０αが特に好ましい。
【００１５】
本発明の好ましい実施形態によれば、本キットは血液サンプルを受容するための容器を含んでよく、この容器はＥＤＴＡ−Ｋ２を含んでなる。本発明の好ましい実施形態では、血液サンプルを受容するための容器は、ＥＤＴＡ−Ｋ２を含んでなる採血チューブである。
【００１６】
本発明の一実施形態によれば、ＥＤＴＡ−Ｋ２は、Ｈｓｐ９０α濃度の検出において好ましい抗凝固剤である。
【００１７】
本発明のキットは、以下の癌種：肺癌、肝臓癌、結腸直腸癌、乳癌、胃癌、膵臓癌、卵巣癌、リンパ腫、食道癌、黒色腫、腎臓癌、子宮癌、鼻咽頭癌腫、骨肉腫、膀胱癌および前立腺癌に適用可能である。
【００１８】
本発明の例では、癌の補助診断および治療有効性の監視におけるＨｓｐ９０αの定量的検出成績は多種の癌で評価される。癌診断におけるＨｓｐ９０α濃度の閾値は、肺癌、肝臓癌、結腸直腸癌、乳癌および他種の癌に適用可能であることが判明している。肺癌、肝臓癌、結腸直腸癌および乳癌の診断における腫瘍バイオマーカーＨｓｐ９０αの定量的検出の使用に関する詳細な統計パラメーターも提供される。
【００１９】
本発明の例では、異なるヒト群からのデータに基づいて対応するＲＯＣ曲線を描いた。当技術分野の周知の技術によれば、各ＲＯＣ曲線は一連の閾値と、対応する感度および特異度を与える。従って、これらのＲＯＣ曲線から、当業者は対応する癌種における診断の感度、特異度および精度を含む、所与の閾値（カットオフ値としても知られる）に基づく検出の診断成績を容易に確認することができる。
【００２０】
例えば、肝臓癌では、癌患者対、健常者のカットオフ値が５２．７９ｎｇ／ｍｌである場合には、感度、特異度および精度はそれぞれ９３．７％、８５％および９４．５％であり；カットオフ値が６２．２０ｎｇ／ｍｌである場合には、感度、特異度および精度は９１．４％、９０％および９２．２％であり；癌患者対、非癌性肝臓疾患患者のカットオフ値が６３．６６ｎｇ／ｍｌである場合には、感度、特異度および精度はそれぞれ９０．７％、９０％および９０．３％であり；カットオフ値が８５．２４ｎｇ／ｍｌである場合には、感度、特異度および精度はそれぞれ８０．７％、９５％および８８．６％である。
【００２１】
結腸直腸癌では、癌患者対、健常者および非癌性結腸直腸疾患患者のカットオフ値が５２．７９ｎｇ／ｍｌである場合には、感度、特異度および精度はそれぞれ８９．９％、８５％および８７％であり；カットオフ値が６２．２０ｎｇ／ｍｌである場合には、感度、特異度および精度はそれぞれ８３．４％、９０％および８７％である。
【００２２】
乳癌では、癌患者対、健常者のカットオフ値が５２．６６ｎｇ／ｍｌである場合には、感度、特異度および精度はそれぞれ６５．６％、８５％および７３．８５％であり；カットオフ値が６１．９２ｎｇ／ｍｌである場合には、感度、特異度および精度はそれぞれ５４．６％、９０％および６９．６８％であり；癌患者対、非癌性乳房疾患患者のカットオフ値が６３．４１ｎｇ／ｍｌである場合には、感度、特異度および精度はそれぞれ５２．４％、８４．９％および６８．２９％であり；カットオフ値が７２．２１ｎｇ／ｍｌである場合には、感度、特異度および精度はそれぞれ４１．９％、９０．１％および６５．４１％である。
【００２３】
当業者ならば、カットオフ値および対応する感度、特異度および精度は被験者および癌種の違いによって異なり得るが本発明に含まれることを理解できるであろう。特定の腫瘍種、感度および特異度に関する要件に従い、当業者ならば、ＲＯＣ曲線からまたは本発明に開示された閾値範囲から適当な最適閾値を選択することができる。
【００２４】
本発明はまた、手術後の肺癌、肝臓癌、結腸直腸癌および乳癌患者の血漿Ｈｓｐ９０α濃度が手術前に比べて有意に低下したことを実証した。従って、この指標は外科的処置の有効性の評価に使用可能である。加えて、医学的処置から臨床利益（ＣＲ＋ＰＲ＋ＳＤ）を得た患者において、Ｈｓｐ９０α濃度は処置前に比べて処置後に有意に低下したが、このことはＨｓｐ９０αが上記種類の癌において医学的処置の評価のためのマーカーとして使用可能であることを示唆する。
【００２５】
本発明の実施形態では、胃癌、膵臓癌、卵巣癌、リンパ腫、食道癌、黒色腫、腎臓癌、子宮癌、鼻咽頭癌、骨肉腫、膀胱癌および前立腺癌患者の血漿Ｈｓｐ９０α濃度を検出したところ、これらは健常者よりも有意に高かった（統計的有意性を有する）。上記種類の癌における血漿Ｈｓｐ９０α濃度の平均参照値もまた提供された。このことは腫瘍バイオマーカーＨｓｐ９０αが胃癌、膵臓癌、卵巣癌、リンパ腫、食道癌、黒色腫、腎臓癌、子宮癌、鼻咽頭癌、骨肉腫、膀胱癌、前立腺癌および他種の癌の診断に使用可能であることを示唆する。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】Ｈｓｐ９０α検出結果のＲＯＣ曲線を示す（Ｈｓｐ９０α濃度が検出された総ての被験者からのデータに基づく）。
【図２】Ｈｓｐ９０α検出結果のＲＯＣ曲線、ＡＵＣ９５％ＣＩ（０．７８８、０．８２９）を示す。
【図３】Ｈｓｐ９０α検出結果のＲＯＣ曲線、ＡＵＣ９５％ＣＩ（０．８１１、０．８５４）を示す。
【図４】Ｈｓｐ９０α検出結果のＲＯＣ曲線、ＡＵＣ９５％ＣＩ（０．８０４、０．８５０）を示す。
【図５】Ｈｓｐ９０α検出結果のＲＯＣ曲線、ＡＵＣ９５％ＣＩ（０．７３１、０．７７７）を示す。
【図６】傾きによって決定された腫瘍拡大のＲＯＣ曲線を示す。
【図７】パーセンテージ変化に基づくＰＤのＲＯＣ曲線を示す。
【図８】値の変化に基づくＰＤのＲＯＣ曲線を示す。
【図９】ＥＤＴＡ−Ｋ２採血チューブおよびＥＤＴＡ−Ｋ３採血チューブからのサンプルの比較を示す。
【図１０】肝臓癌患者対、健常者のＲＯＣ曲線を示す。
【図１１】肝臓癌患者対、非癌性肝臓疾患患者のＲＯＣ曲線を示す。
【図１２】結腸直腸癌患者対、健常者および非癌性結腸直腸疾患患者のＲＯＣ曲線を示す。
【図１３】乳癌患者対、健常者のＲＯＣ曲線を示す。
【図１４】乳癌患者対、非癌性乳房疾患患者のＲＯＣ曲線を示す。
【図１５】様々な種類の癌に罹患している全患者の検出された血漿Ｈｓｐ９０α濃度の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
発明の詳細な説明
用語「血液サンプル」は、被験者の血液から得られたサンプルを意味する。細胞内Ｈｓｐ９０αの検出結果への干渉を考慮すれば、血液サンプルは好ましくは血漿サンプルもしくは血清サンプルまたは希釈血漿もしくは血清サンプルである。当業者ならば、血漿と血清の成分の違いにより、血漿サンプルから検出されたＨｓｐ９０αの濃度と血清から検出されたＨｓｐ９０αの濃度は若干異なる場合があることを理解するであろう。定量および比較に便利なように、本発明では血漿サンプルが好ましい。
【００２８】
用語「感度」、「特異度」および「精度」は、本明細書で使用する場合、医療統計の分野で一般に認識されているものと同義を有する。
【００２９】
「特異度」は、そのキットにより、病理診断により「非癌性」であると判定されたサンプルに対する、本キットにより「陰性」であると判定されるサンプルの比を意味する。
【００３０】
「感度」は、病理診断により「癌性」であると判定されたサンプルに対する、本キットにより「陽性」であると判定されるサンプルの比を意味する。
【００３１】
「精度」は、全サンプルに対する真の陽性サンプルと真の陰性サンプルの和の比を意味し、これは本キットにより検出された結果が被験者の正確な状態（すなわち、癌を有するまたは有さない）と一致する程度を表す。
【００３２】
用語「カットオフ値」、「分割値」、「基準値」および「閾値」は、本明細書で使用される場合、互換的に使用でき、臨界値としても知られる検出結果を判断するために使用される標準を意味する。カットオフ値よりも高い検出結果を有するサンプルは「陽性」と見なされ、カットオフ値よりも低い検出結果を有するサンプルは「陰性」と見なされる。
【００３３】
用語「臨床利益」は、本明細書で使用する場合、処置の後に疾患が安定を維持するか、または寛解が達成されることを意味する。ＣＲ、ＰＲおよびＳＤは、Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｉｎ  Ｓｏｌｉｄ  Ｔｕｍｏｒｓ（ＲＥＣＩＳＴ）の用語と同義である。すなわち、ＣＲは完全奏功を意味し、ＰＲ部分奏功を意味し、ＳＤは安定を意味する。これら３つの指標ＣＲ、ＰＲおよびＳＤは、臨床利益を得ている対象者を記載するために使用される。これに対し、ＰＤは進行を意味する。
【００３４】
用語「非癌性疾患」は、病理診断によって確認されるような癌ではない良性疾患を意味する。例えば、肺癌の研究では、この用語は、肺炎、肺結核、または肺癌ではない他の良性肺疾患を有すると診断される患者を記載するために使用される。肝臓癌の研究では、この用語は、肝炎、肝硬変、または肝臓癌ではない他の肝臓疾患を有すると診断される患者を記載するために使用される。結腸直腸癌の研究では、この用語は、炎症、結腸直腸ポリープまたは結腸直腸癌ではない他の結腸直腸疾患を有すると診断される患者を記載するために使用される。乳癌の研究では、この用語は、乳腺炎、シクロマストパシー(cyclomastopathy)または乳癌ではない乳房疾患を有すると診断される患者を記載するために使用される。
【００３５】
本明細書で使用するいくつかの略号および統計用語の意味を以下に示す。
【００３６】
【表１】
0006464156.tif 000002
【実施例】
【００３７】
実施例１
研究目的
ヒト血漿熱ショックタンパク質９０α（Ｈｓｐ９０α）の定量的検出キットの臨床成績および臨床有用性範囲を以下の３つの試験により評価した。
【００３８】
１．Ｈｓｐ９０αに対する定量的検出キットの感度、特異度および精度を試験するために、健常者、肺癌患者、非癌性肺疾患患者および他の悪性腫瘍を有する患者における血漿Ｈｓｐ９０αの濃度を検出した。好適なカットオフ値を陽性判定の受診者操作特性(receiver-operating characteristic)（ＲＯＣ）曲線から導いた。
【００３９】
２．肺癌患者の血漿Ｈｓｐ９０α濃度を処置過程で動的に監視し、有効性監視に関するその効率を評価するために血漿Ｈｓｐ９０α濃度と患者の病態の間の関係を調べた。
【００４０】
３．癌胎児性抗原（ＣＥＡ）およびサイトケラチン１９フラグメント抗原２１−１（ＣＹＦＲＡ２１−１）の検出結果を個別にＨｓｐ９０αの検出結果と比較し、これらの腫瘍バイオマーカーの臨床成績を比較した（これは本臨床試験のもう１つの目的であった）。
【００４１】
１．１  サンプル源
選択された被験者は入院患者と外来患者を含んだ。非動的監視群の１１００以上の血漿サンプルと動的監視群の１５０名以上の患者由来の血漿サンプルを試験した。高値サンプルと低値サンプルの比は統計学の要件を満たした。
【００４２】
１．１．１  非動的監視被験者の選択
被験者は、性別の制限無く、症例群と対照群を含んだ。
（１）症例群：種々のタイプおよび種々の病期の肺癌を含む、病理学的方法により担癌と新たに診断された肺癌患者。
（２）対照群：生化学的方法、撮像法または病理学的方法により確認されるような肺癌を有さない対象者。対照群は、明確な疾患症状を有さない健常者、肺癌は有さないが他の肺疾患（例えば、肺結核、肺炎）を有する対象者、良性肺腫瘍を有する対象者および他の悪性癌を有する対象者を含むものとする。
【００４３】
健常者：既知の良性または悪性疾患を有さず、正常な外見を有し、かつ、明らかな疾患症状を有さない対象者。
【００４４】
非癌性肺疾患患者：生化学的方法、撮像法または病理学的方法により肺癌ではない肺疾患に罹患していることが確認された患者。
【００４５】
１．１．２  動的監視被験者の選択
血漿Ｈｓｐ９０α濃度の変化と患者の病態の変化との関係を決定するために、標準的な医学的処置または外科的処置を受けた少なくとも１５０名の肺癌患者を継続的に監視した。以下の時点で血漿サンプルを採取した。
（１）外科的処置を受けた１２名の肺癌患者を、血漿中のＨｓｐ９０αの代謝を監視するために多時点で監視した。血漿サンプルをそれぞれ術前および術後１、３、７、１４、２１日に採取した。
（２）外科的処置を受けた３８名以上の患者の血漿Ｈｓｐ９０α濃度を動的に監視した：血漿サンプルを術前３日以内に採取し；さらなる血漿サンプルを手術３〜７日後に採取し；血漿サンプルを臨床有効性の評価（すなわち、撮像検査日）の前後３日以内に採取した。従って、少なくとも全部で３サンプルを採取した。
（３）医学的処置を受けた１００名以上の肺癌患者の血漿Ｈｓｐ９０α濃度を動的に監視した：まず処置前に血漿サンプルを採取した。処置の開始後、４回の処置サイクルの総てが終了するまで各処置サイクルの終了時にサンプルを採取した。患者がサイクル完了の後に臨床有効性の通常評価（撮像検査）を受けた場合には、血漿サンプルは臨床評価日（撮像検査日）の前後３日以内に採取すべきである。
【００４６】
動的監視プロトコールを満たした過去のサンプルも試験に使用可能である。
【００４７】
１．１．３  サンプル除外基準
（１）肺に腫瘍病巣に進行中の放射線療法を受けている肺癌患者のサンプル；
（２）動的監視過程において、妊娠中もしくは授乳中の患者または妊娠可能であるが試験中に避妊手段をとっていない患者のサンプル；
（３）動的監視過程において、処置前の血漿Ｈｓｐ９０α濃度がカットオフ値よりも低い患者のサンプル；
（４）他の種類の癌に罹患している患者のサンプル。
【００４８】
１．２  定量的検出キット
供試品：
ヒト血漿Ｈｓｐ９０α用定量的検出キット（ＥＬＩＳＡ）
仕様：９６回分／キット  製造者：Yantai Protgen Biotechnology Development Co., Ltd.
ロット番号：２０１１１０１８、２０１２０１０９、２０１２０５０５。保存寿命：６か月。保存条件：２〜８℃。
【００４９】
比較品：
中国国内または国外で類似品は登録および市販されていなかったので、肺癌の病理診断および臨床診断を評価の標準として使用した。
【００５０】
本試験では、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）およびサイトケラチン１９フラグメント抗原２１−１（ＣＹＦＲＡ２１−１）をキットの臨床成績を検討するための基準として使用した。
【００５１】
実施例２
２．結果の要約
２．１  非動的監視群
２０３６例（肺癌群：１，０４６例、他の悪性腫瘍群：３７例、非癌性肺疾患群：３４４例、肺良性腫瘍群：１７例、健常者群：５９２例）を非動的監視群に動員した。２０３６例の総てが動員基準を満たした。除外された被験者はいなかった。詳細については表８．１．１．１および表８．１．１．２を参照。異なる施設からの症例分布を表８．１．１．３にまとめる。
【００５２】
Ｈｓｐ９０αの診断成績の評価
肺癌および非癌性疾患の診断におけるＨｓｐ９０αの成績を評価するために、他種の悪性腫瘍に罹患している患者を除外した。１９９９例を試験に動員し、そのうち１０４６例は肺癌患者であり、９５３例は非癌性疾患患者であった。これら２群の人口統計的情報および肺癌患者の診断結果の概要を表８．１．１．１．１．１および表８．１．１．１．１．２に示した。
【００５３】
表８．１．１．１．２．１に示されるように、２群の血漿Ｈｓｐ９０α検出結果の間の差は統計学的に有意であった（Ｐ＜０．０００１）。
【００５４】
肺癌診断におけるＨｓｐ９０αのＲＯＣ曲線下面積は０．８１４９であった。最大ｙｏｕｄｅｎインデックスにより決定された最適カットオフ値は＞５６．３３ｎｇ／ｍｌであり、感度７２．１８％（９５％信頼区間：６９．４６％〜７４．９０％）および特異度７８．７％（９５％信頼区間：７６．１０％〜８１．３０％）に相当した。相当する感度および特異度８０％、８５％、９０％および９５％に相当する他の診断成績も記載した。図１および表８．１．１．１．２．２および表８．１．１．１．２．３参照。
【００５５】
加えて、肺腺癌、肺扁平上皮癌および小細胞肺癌に対するＨｓｐ９０αの診断成績のＲＯＣ曲線は、他種の肺癌総てのＲＯＣ曲線と類似していた。肺癌群と非癌性肺疾患群を比較すると、これら２群の間の血漿Ｈｓｐ９０α検出結果の差は統計学的に有意であった（Ｐ＜０．０００１）。
【００５６】
Ｈｓｐ９０αおよびＣＥＡの診断成績ならびにＨｓｐ９０αおよびＣＥＡの併用診断の評価
Ｈｓｐ９０αおよびＣＥＡの診断成績を評価するために、Ｈｓｐ９０αとＣＥＡの両検出結果を有した被験者由来のサンプルを評価の対象とした。７１３例の肺癌と３４３例の非癌性肺疾患を含む合計１０５６例を分析した。Ｈｓｐ９０αカットオフ値を＞５６．３３となるように設定し、ＣＥＡカットオフ値を＞５となるように設定した。Ｈｓｐ９０α検出またはＣＥＡ検出のいずれかから陽性結果が得られた場合、その被験者は陽性であると判定された。Ｈｓｐ９０αとＣＥＡの併用により、さらに向上した診断感度が示された。
【００５７】
Ｈｓｐ９０αおよびＣＹＦＲＡ２１−１の診断成績ならびにＨｓｐ９０αおよびＣＹＦＲＡ２１−１の併用診断の評価
Ｈｓｐ９０αおよびＣＹＦＲＡ２１−１の診断成績を評価するために、Ｈｓｐ９０αおよびＣＹＦＲＡ２１−１の両検出結果を有した被験者由来のサンプルを評価の対象とした。６６０例の肺癌と２５０例の非癌性疾患を含む合計９１０例を分析した。Ｈｓｐ９０αカットオフ値を＞５６．３３となるように設定し、ＣＥＡカットオフ値を＞５となるように設定した。Ｈｓｐ９０α検出またはＣＹＦＲＡ２１−１検出のいずれかから陽性結果が得られた場合、その被験者は陽性であると判定された。Ｈｓｐ９０αとＣＹＦＲＡ２１−１の併用により、さらに向上した診断感度が示された。
【００５８】
２．２  外科術群
この評価には１０６例を動員し、そのうち７９例がカットオフ値以上の血漿Ｈｓｐ９０α濃度を有した有効例であった。術前および術後に取得した血漿Ｈｓｐ９０α濃度間の差は統計学的に有意であった（Ｐ＝０．００６２＜０．０１）。詳細については表８．２．２を参照。
【００５９】
２．３  動的監視群（医学的処置を受けている患者）
この評価には２０２名の肺癌患者を動員し、有効例の数は１６９であった。人口統計的情報および他の基本情報を表８．３．１．２に挙げた。
【００６０】
間隔評価
合計２８４の有効統計単位を得、腫瘍退縮群６９例、安定腫瘍サイズ群１６１例および腫瘍進行群５４例を含んだ。これらの３群において２回目の処置サイクルで検出されたベースラインレベルと比べた場合の血漿Ｈｓｐ９０α濃度の差の中央値はそれぞれ−４８．６４ｎｇ／ｍｌ、−８．５１ｎｇ／ｍｌ、７４．６６ｎｇ／ｍｌであった。これらの差は順位和検定によれば統計学的に有意であった（Ｐ＜０．０００１）。加えて、各群内で処置前と処置後に得られた検出値間の差は統計学的に有意であり、差のパーセンテージの中央値はそれぞれ−４１．０９％、−９．４６％および６５．２６％であった。
【００６１】
腫瘍拡大診断に関するＨｓｐ９０αのＲＯＣ曲線下面積は０．７７１９であった。表８．３．２．３．２に示されるように、最良のカットオフ点はｙｏｕｄｅｎインデックスによればベースラインと比べて＞３４．１７％の変化であったと判定され、対応する感度は７０．３７％（９５％信頼区間：５８．１９％、８２．５５％）であり、対応する特異度は８０％（９５％信頼区間：７４．８３％、８５．１７％）であった。
【００６２】
症例による評価
合計２７５の有効例を得、部分奏功（ＰＲ）群９５例、安定（ＳＤ）群１１８例および進行（ＰＤ）群６２例を含んだ。これらの群においてベースラインレベルと比べた場合のＨｓｐ９０α濃度の変換の中央値はそれぞれ−９０．９８ｎｇ／ｍｌ、−３２．９１ｎｇ／ｍｌ、８０．３２ｎｇ／ｍｌであり、順位和により検定したところ統計学的に有意であった（Ｐ＜０．０００１）。各群内処置前と処置後に得られたＨｓｐ９０α検出値間の差は総て統計学的に有意であり、変化のパーセンテージの中央値はそれぞれ−４８．１６％、−２２．２３％、７１．４０％であった。
【００６３】
ＰＤ診断に関するＨｓｐ９０αのＲＯＣ曲線下面積は０．８４０６であった。表８．３．３．２．２に示されるように、最良のカットオフ点はｙｏｕｄｅｎインデックスによればベースラインと比べて＞３４．１７％の変化であったと判定され、対応する感度は７２．５８％（９５％信頼区間：６１．４８％、８３．６８％）であり、対応する特異度は８５．４５％（９５％信頼区間：８０．７１％、９０．１８％）であった。
【００６４】
実施例３
３  統計学的結果
３．１  非動的監視群
【００６５】
【表２】
0006464156.tif 000003
【００６６】
【表３】
0006464156.tif 000004
【００６７】
３．１．１  肺癌群および非癌性群
３．１．１．１  Ｈｓｐ９０αの診断成績の評価
３．１．１．１．１  被験者の特徴
【００６８】
【表４】
0006464156.tif 000005
【００６９】
【表５】
0006464156.tif 000006
【００７０】
３．１．１．１．２  Ｈｓｐ９０αの診断成績の評価（肺癌群と非癌性群）
【００７１】
【表６】
0006464156.tif 000007
【００７２】
図１は、血漿Ｈｓｐ９０α検出結果（全被験者に基づく）のＲＯＣ曲線を示す。
【００７３】
【表７】
0006464156.tif 000008
【００７４】
【表８】
0006464156.tif 000009
【００７５】
【表９】
0006464156.tif 000010
【００７６】
３．１．１．１．３  Ｈｓｐ９０αの診断成績の評価（腺癌群対、非癌性群）
図２は、腺癌群対、非癌性群におけるＨｓｐ９０αのＲＯＣ曲線、曲線下面積（ＡＵＣ）（９５％ＣＩ：０．７８８、０．８２９）を示す。
３．１．１．１．４  Ｈｓｐ９０αの診断成績の評価（扁平上皮癌群対、非癌性群）
図３は、扁平上皮癌群対、非癌性群におけるＨｓｐ９０αのＲＯＣ曲線、ＡＵＣ（９５％ＣＩ：０．８１１、０．８５４）を示す。
３．１．１．１．５  Ｈｓｐ９０αの診断成績の評価（小細胞癌腫対、非癌性群）
図４は、小細胞癌腫群対、非癌性群におけるＨｓｐ９０αのＲＯＣ曲線、ＡＵＣ（９５％ＣＩ：０．８０４、０．８５０）を示す。
３．１．１．１．６  Ｈｓｐ９０αの診断成績の評価（肺癌対、肺非癌性疾患群）
【００７７】
【表１０】
0006464156.tif 000011
【００７８】
図５は、肺癌群対、肺非癌性疾患群におけるＨｓｐ９０αのＲＯＣ曲線、ＡＵＣ（９５％ＣＩ：０．７３１、０．７７７）を示す。
【００７９】
【表１１】
0006464156.tif 000012
【００８０】
３．１．１．２  Ｈｓｐ９０αおよびＣＥＡの診断成績
３．１．１．２．１  被験者の特徴
【００８１】
【表１２】
0006464156.tif 000013
【００８２】
【表１３】
0006464156.tif 000014
【００８３】
３．１．１．２．２  Ｈｓｐ９０αおよびＣＥＡの診断成績の評価（肺癌群および非癌性群）
【００８４】
【表１４】
0006464156.tif 000015
【００８５】
３．１．１．２．２．１  Ｈｓｐ９０αとＣＥＡの併用の診断成績の評価（肺癌群と非癌性群）
【００８６】
【表１５】
0006464156.tif 000016
【００８７】
【表１６】
0006464156.tif 000017
【００８８】
３．１．１．３  Ｈｓｐ９０αおよびＣＹＦＲＡ２１−１の診断成績
３．１．１．３．１  被験者の特徴
【００８９】
【表１７】
0006464156.tif 000018
【００９０】
【表１８】
0006464156.tif 000019
【００９１】
３．１．１．３．２  Ｈｓｐ９０αおよびＣＹＦＲＡ２１−１の診断成績の評価（肺癌群  および非癌性群）
【００９２】
【表１９】
0006464156.tif 000020
【００９３】
３．１．１．３．２．１  Ｈｓｐ９０αおよびＣＹＦＲＡ２１−１の併用の診断成績の評価（肺癌群と非癌性群）
【００９４】
【表２０】
0006464156.tif 000021
【００９５】
【表２１】
0006464156.tif 000022
【００９６】
３．２  外科術群
【００９７】
【表２２】
0006464156.tif 000023
【００９８】
【表２３】
0006464156.tif 000024
【００９９】
３．３  医学的処置群の動的監視
３．３．１  被験者の特徴
【０１００】
【表２４】
0006464156.tif 000025
【０１０１】
３．３．２  間隔評価
【０１０２】
【表２５】
0006464156.tif 000026
【０１０３】
【表２６】
0006464156.tif 000027
【０１０４】
図６は、傾きに基づく腫瘍拡大診断のＲＯＣ曲線を示す。
【０１０５】
【表２７】
0006464156.tif 000028
【０１０６】
【表２８】
0006464156.tif 000029
【０１０７】
３．３．３  被験者の評価
【０１０８】
【表２９】
0006464156.tif 000030
【０１０９】
図７は、変化のパーセンテージに従うＰＤ診断のＲＯＣ曲線を示す。
【０１１０】
【表３０】
0006464156.tif 000031
【０１１１】
【表３１】
0006464156.tif 000032
【０１１２】
図８は、Ｈｓｐ９０α濃度の変化に基づくＰＤ診断のＲＯＣ曲線を示す。
【０１１３】
【表３２】
0006464156.tif 000033
【０１１４】
【表３３】
0006464156.tif 000034
【０１１５】
実施例４
Ｉ：抗凝固剤干渉の評価（ＥＤＴＡ−Ｋ２がＨｓｐ９０α定量に影響を及ぼさないことを証明するため）。
【０１１６】
材料
Ｈｓｐ９０α定量キット、ＥＤＴＡ−Ｋ２、１セットの較正物質
【０１１７】
方法
３００ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ−Κ２溶液を作製した。４μＬのＥＤＴＡ−Ｋ２溶液をＨｓｐ９０α溶液（各１ｍＬ）に加え、Ｈｓｐ９０αの濃度をそれぞれ４００ｎｇ／ｍＬおよび２００ｎｇ／ｍＬとした。抗凝固剤の終濃度は３ｍｇ／ｍＬであった。同時に、同濃度のＨｓｐ９０αで抗凝固剤を含まない溶液を並行して作製し、対照として用いた。抗凝固剤の含むまたは含まない異なるサンプルのＨｓｐ９０α濃度を、各濃度につき６反復として検出した。平均値を下表に示した。
【０１１８】
結果：
【表３４】
0006464156.tif 000035
【０１１９】
結論：抗凝固剤ＥＤＴＡ−Ｋ２は、Ｈｓｐ９０α定量キットの検査結果に影響を及ぼさなかった。
【０１２０】
ＩＩ：  異なる採血チューブからの干渉の評価
材料
Ｈｓｐ９０αキット、ＥＤＴＡ−Ｋ２採血チューブ（血漿チューブ）、ＥＤＴＡ−Ｋ３採血チューブ（血漿チューブ）、血清チューブ。
【０１２１】
方法
異なる採血チューブを用いて各対象者から採血した。各サンプルのＨｓｐ９０α濃度は、当該キットを用い、各サンプルにつき２反復で検出した。異なる採血チューブからの値の差を計算した。
【０１２２】
結果：
１．ＥＤＴＡ−Ｋ２採血チューブとＥＤＴＡ−Ｋ３採血チューブの比較
５名の健常者および４名の癌患者を動員した。
【０１２３】
図９：ＥＤＴＡ−Ｋ２採血チューブとＥＤＴＡ−Ｋ３採血チューブの比較
結論：健常者では、ＥＤＴＡ−Ｋ３採血チューブからのサンプルのＨｓｐ９０α濃度の平均値は、ＥＤＴＡ−Ｋ２チューブからのサンプルより４．３７％低かった。癌患者では、ＥＤＴＡ−Ｋ３チューブからのサンプルのＨｓｐ９０α濃度の平均値は、ＥＤＴＡ−Ｋ２チューブからのサンプルよりも２６．９５％低かった。従って、ＥＤＴＡ−Ｋ３採血チューブを用いてサンプル採取は、陽性サンプルにおいてＨｓｐ９０α検出値に低下をもたらすと思われる。
【０１２４】
２：血漿チューブと血清チューブの比較
１４８名の非癌性疾患患者を動員した。
【０１２５】
【表３５】
0006464156.tif 000036
【０１２６】
結論：１４８名の非癌性疾患患者では、血清Ｈｓｐ９０αの平均濃度は血漿Ｈｓｐ９０α濃度よりも２７．８％低かった。血清サンプルを用いた場合、陽性判定のカットオフ値は低下すると思われる。
【０１２７】
３：  ＥＤＴＡ−Ｋ２採血チューブとヘパリン採血チューブの比較
３０名の非癌性疾患患者を動員した。
【０１２８】
【表３６】
0006464156.tif 000037
【０１２９】
結論：３０名の非癌性疾患患者では、ヘパリンチューブにより採取されたサンプルから平均Ｈｓｐ９０αの濃度は、ＥＤＴＡ−Ｋ２チューブからのサンプルよりも１９．９％高かった。ヘパリンチューブを用いて血液サンプルを採取する場合、陽性判定のカットオフ値は低下すると思われる。
【０１３０】
実施例５
肝臓癌の診断におけるＨｓｐ９０α定量的検出キットの成績を、非動的監視、すなわち、１回の検査からの結果を病理診断結果および臨床診断結果と比較することにより評価した。肝臓癌の治療有効性の評価におけるＨｓｐ９０α定量的検出キットの成績を、動的監視、すなわち、臨床処置の間、肝臓癌患者の血漿Ｈｓｐ９０α濃度の変化を継続的に監視することにより評価した。
【０１３１】
Ｉ．治験計画
１．治験要件
本試験は盲検を採用した。サンプルはＨｓｐ９０α定量的検出キットにより検出し、事前に群などの具体的情報を知ることなくＨｓｐ９０α濃度を測定した。結果を分析し、その検出結果が病理診断結果、臨床診断結果および治療有効性の評価と一致するまたは異なる水準に関して統計指標を計算した。その後、これらの指標により、Ｈｓｐ９０α定量的検出キットの臨床成績を評価した。
【０１３２】
２．サンプル採取、保存および輸送
供試サンプルは、非動的監視サンプルと動的監視サンプルを含んだ。非動的監視サンプルは、日常の臨床検出からの残存血漿サンプルであった。動的監視サンプルは、動員した患者から定期的に採取した血漿サンプルまたは定期的な日常の検出からの残存サンプルであった。
【０１３３】
総ての血漿サンプルの採取および保存は、Ｈｓｐ９０α定量的検出キットの説明書に従わなければならない。静脈血液を採取し、ＥＤＴＡ−Ｋ２抗凝固で保存した。これらのチューブを８〜１０回転倒させ、遠心分離（８００〜１０００ｇ、１０分）により血漿を分離した。１チューブ当たり２５０μｌ以上の血漿アリコートを各ＥＰチューブに加え、保存のために手早く−１８℃に置いた。
【０１３４】
３．  被験者選択の標準
３．１  非動的監視群の選択
動員された患者は、肝臓癌群と非肝臓癌群を含んだ。
【０１３５】
（１）肝臓癌群：病理診断により確認された、異なる種類および異なる病期の肝臓癌を含む肝臓癌患者。
（２）非肝臓癌群：明確な疾患症状を有さない健常者、ならびに肝炎および肝硬変などの非癌性肝臓疾患を有する患者（すなわち、肝臓癌ではない良性肝臓疾患を有する患者）を含む、生化学的方法、撮像法または病理学的方法により肝臓癌を有さないことが確認された対象者。
【０１３６】
健常者：既知の良性または悪性疾患を有さず、正常な外見を有し、明らかな疾患症状を有さず、正常な臨床生化学検査結果を有する対象者。
【０１３７】
非癌性肝臓疾患を有する患者は、撮像法または病理学的方法により肝臓癌を有さないことが確認されなければならない。
【０１３８】
３．２  動的監視群の選択
外科的処置または医学的処置を受けた肝臓癌患者を継続的に監視し、血漿Ｈｓｐ９０α濃度と疾患発症の間の関係を検出した。
【０１３９】
血漿サンプル採取の時点は、次の通りである。
（１）外科的処置を受けた肝臓癌患者の動的監視：  術前３日以内血漿サンプルを１回採取し、術後１４日以内に血漿サンプルをもう1回採取した。
（２）医学的処置を受けた肝臓癌患者の動的監視：  処置前に血漿サンプルを１回採取し、各処置サイクル後に血漿サンプルを１回採取した。サンプル採取は少なくとも最初の有効性評価が完了するまで継続すべきである。
【０１４０】
３．３  サンプル除外基準
（１）動的監視において、治験中に妊娠、授乳している、または妊娠可能であるが避妊手段をとっていない女性からのサンプル；
（２）術後に補助療法を受けている患者からのサンプル；
（３）放射線療法を受けている患者からのサンプル；
（４）他種の癌を有する患者。
【０１４１】
ＩＩ  臨床評価標準
１．非動的監視では、検査の特異度、感度および精度を評価するために病理学的至適基準  を参照する。
２．動的監視では、検出の特異度、感度および精度を評価するために（すなわち、血漿Ｈｓｐ９０α濃度と治療有効性の間の関係を検出するために）ＣＴ結果を参照する。
【０１４２】
ＩＩＩ  統計分析
定量データは平均±Ｓ．Ｄ．として示した。計数データは症例数とパーセンテージで記載した。
【０１４３】
ｔ検定、カイ二乗検定、順位和検定および直接確率などの好適な統計分析法を、データの種類に基づいて選択した。
【０１４４】
感度および特異度を軸として用いてＲＯＣ曲線を描き、ＲＯＣ曲線下面積および９５％ＣＩを算出して診断成績を評価した。
【０１４５】
一貫性を比較し、一貫して陽性および陰性の症例のパーセンテージを計算した。
【０１４６】
臨床サンプルから得られたＨｓｐ９０α濃度の分析にはＳＰＳＳソフトウエアを用い、Ｈｓｐ９０αと疾患の間の関係を得、直線回帰分析（ＲＯＣ曲線）を達成した。
【０１４７】
ＩＶ  臨床研究の結果
１．非動的監視サンプルの統計学的結果
（１）非動的監視サンプルの構成を表９．１に示した。
【０１４８】
【表３７】
0006464156.tif 000038
【０１４９】
（２）ＲＯＣ曲線（健常者に対する肝臓癌患者）、図１０参照
（３）診断指標（健常者に対する肝臓癌患者）、表９．２参照
【０１５０】
【表３８】
0006464156.tif 000039
【０１５１】
（４）ＲＯＣ曲線（非癌性肝臓疾患患者に対する肝臓癌患者）、図１１参照。
（５）診断指標（肝臓癌患者対、非癌性肝臓疾患患者）、表９．３
【０１５２】
【表３９】
0006464156.tif 000040
【０１５３】
（６）手術を受けた患者の動的監視の統計学的結果（６９例）、表９．４。
【０１５４】
【表４０】
0006464156.tif 000041
【０１５５】
結果が示したように、血漿Ｈｓｐ９０α濃度は、術後、有意に低下し、これらの結果は統計学的に有意であった。
【０１５６】
（７）介入療法を受けた肝臓癌患者（９例）の疾患監視および治療有効性評価
９名の患者に介入療法を施し、そのうち４名がその処置から利益を受け（患者番号００１〜００４）、血漿Ｈｓｐ９０α濃度の低下が見られた。５名の患者では疾患が進行し、血漿Ｈｓｐ９０α濃度の低下は見られなかった。これらの結果は、血漿Ｈｓｐ９０α濃度は疾患進行とよく相関することを示した。表９．５参照。
【０１５７】
【表４１】
0006464156.tif 000042
【０１５８】
実施例６
結腸直腸癌の診断におけるＨｓｐ９０α定量的検出キットの成績を、病理学的診断結果および臨床診断結果と比較することにより評価した。結腸直腸癌の治療有効性評価におけるＨｓｐ９０α定量的検出キットの成績を患者の動的監視、すなわち、臨床療法中、結腸直腸癌患者の血漿Ｈｓｐ９０α濃度の変化を継続的に監視することにより評価した。
【０１５９】
Ｉ．治験の全体計画
実施例５の対応する内容を参照。適応症を結腸直腸癌に変更した。非癌性結腸直腸疾患には、結腸直腸ポリープおよび炎症を含んだ。
【０１６０】
ＩＩ  臨床評価の標準
実施例５の対応する内容を参照。
【０１６１】
ＩＩＩ  統計分析の方法
実施例５の対応する内容を参照。
【０１６２】
ＩＶ  臨床試験の結果
１．  非動的監視サンプルの統計学的結果
（１）非動的監視サンプルの構成、表１０．１
【０１６３】
【表４２】
0006464156.tif 000043
【０１６４】
（２）ＲＯＣ曲線（結腸直腸癌患者対、健常者および非癌性結腸直腸疾患患者）、図１２参照。
（３）診断評価指標（結腸直腸癌患者対、健常者および非癌性結腸直腸の疾患患者）、表１０．２
【０１６５】
【表４３】
0006464156.tif 000044
【０１６６】
（４）手術を受けた患者の動的監視の統計学的結果（１０１例）、表１０．３
【０１６７】
【表４４】
0006464156.tif 000045
【０１６８】
結果が示したように、血漿Ｈｓｐ９０α濃度は、術後、有意に低下し、これらの結果は統計学的に有意であった。
【０１６９】
（５）１０名の患者が医学的処置から利益を受け（ＣＲ＋ＰＲ＋ＳＤ）、治療有効性評価結果は、そのうち９名が血漿Ｈｓｐ９０α濃度の低下を示すことうを示した。Ｈｓｐ９０αの検出結果は治療有効性とよく相関した（表１０．４）。
【０１７０】
【表４５】
0006464156.tif 000046
【０１７１】
実施例７
乳癌の診断におけるＨｓｐ９０α定量的検出キットの成績を、病理学的診断結果および臨床診断結果と比較することにより評価した。乳癌の治療有効性評価におけるＨｓｐ９０α定量的検出キットの成績を患者の動的監視、すなわち、臨床療法中、乳癌患者の血漿Ｈｓｐ９０α濃度の変化を継続的に監視することにより評価した。
【０１７２】
Ｉ．治験の全体計画
実施例５の対応する内容を参照。適応症を乳癌に変更した。非癌性乳房疾患には、乳腺炎および乳腺の過形成を含んだ。
【０１７３】
ＩＩ  臨床評価の標準
実施例５の対応する内容を参照。
【０１７４】
ＩＩＩ  統計分析の方法
実施例５の対応する内容を参照。
【０１７５】
ＩＶ  臨床試験の結果
１．  非動的監視サンプルの統計学的結果
（１）非動的監視サンプルの成分、表１１．１
【０１７６】
【表４６】
0006464156.tif 000047
【０１７７】
（２）ＲＯＣ曲線（乳癌患者対、健常者）、図１３。
（３）診断指標（乳癌患者対、健常者）、表１１．２。
【０１７８】
【表４７】
0006464156.tif 000048
【０１７９】
（４）ＲＯＣ曲線（乳癌患者対、非癌性乳房疾患患者）、図１４。
（５）診断指標（乳癌患者対、非癌性乳房疾患患者）、表１１．３。
【０１８０】
【表４８】
0006464156.tif 000049
【０１８１】
（６）手術を受けた患者（２６例）の動的監視の統計学的結果、表１１．４。
【０１８２】
【表４９】
0006464156.tif 000050
【０１８３】
（７）化学療法から利益を受けた乳癌患者（ＣＲ＋ＰＲ＋ＳＤ）（１８例）の動的監視の結果は、血漿Ｈｓｐ９０α濃度はこれらの患者で低下していることを示し、これらの結果は統計学的に有意であった（表１１．５）。
【０１８４】
【表５０】
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【０１８５】
実施例８
多種類の癌の診断におけるＨｓｐ９０α定量的検出キットの成績を、病理学的診断結果および臨床診断結果と比較することにより評価した。結果が示したように、健常者と比較した場合、胃癌、膵臓癌、卵巣癌、リンパ腫、食道癌、黒色腫、腎臓癌、子宮癌、鼻咽頭癌、骨肉腫、膀胱癌、前立腺癌および他種の癌に罹患している患者は有意に高いレベルの血漿Ｈｓｐ９０α濃度（図１５）を示し、これらの結果は統計学的に有意であった。異なる種類の癌に罹患している患者の平均Ｈｓｐ９０α濃度を表１２．１に示した。
【０１８６】
【表５１】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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