(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１のアミノ酸配列を含むＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合し、配列番号１６９のアミノ酸配列を含むＫＩＲ３ＤＬ１ポリペプチドに結合せず、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞中に内在化されないモノクローナル抗体であって、前記抗体は、前記抗体と配列番号１の野生型ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドとの間の結合と比較して、アミノ酸突然変異Ｉ６０ＮおよびＧ６２Ｓを有する突然変異体ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有する、および／またはアミノ酸突然変異Ｐ１４Ｓ、Ｓ１５ＡおよびＨ２３Ｓを有する突然変異体ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有する、モノクローナル抗体。
【請求項２】
請求項１に記載の抗体であって、前記抗体は、ＦｃγＩＩＩＡ受容体と結合するヒト重鎖定常領域を有する、抗体。
【請求項３】
請求項１または２に記載の抗体であって、前記抗体は、前記抗体と配列番号１の野生型ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドとの間の結合と比較して、アミノ酸突然変異Ｒ１３Ｗ、Ａ２５ＴおよびＱ２７Ｒを有する突然変異体ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有する、抗体。
【請求項４】
前記ＫＩＲ３ＤＬ２と、ＫＩＲ３ＤＬ２のＨＬＡクラスＩ−リガンドとの間の結合を少なくとも５０％低減させる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項５】
前記ＫＩＲ３ＤＬ２とＨＬＡ−Ｂ２７との間の結合を少なくとも５０％低減させる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項６】
前記ＫＩＲ３ＤＬ２とＨＬＡ−Ｂ２７との間の結合を少なくとも５０％低減させるが、ＫＩＲ３ＤＬ２とＨＬＡ−Ａ３との間の結合を低減させない、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項７】
前記ＫＩＲ３ＤＬ２とＨＬＡ−Ａ３との間の結合を少なくとも５０％低減させるが、ＫＩＲ３ＤＬ２とＨＬＡ−Ｂ２７との間の結合を低減させない、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項８】
ＡＤＣＣを介してＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の溶解を誘導し得る、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項９】
ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの結合について、
（ａ）配列番号１３および１４のＶＨおよびＶＬ領域をそれぞれ有する抗体（２Ｂ１２）、
（ｂ）配列番号２３および２４のＶＨおよびＶＬ領域をそれぞれ有する抗体（１０Ｇ５）、
（ｃ）配列番号２および３のＶＨおよびＶＬ領域をそれぞれ有する抗体（１０Ｆ６）、および
（ｄ）配列番号４５および４６のＶＨおよびＶＬ領域をそれぞれ有する抗体（１Ｅ２）、
からなる群から選択される抗体と競合する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１０】
配列番号１のアミノ酸配列を含むＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合し、配列番号１６９のアミノ酸配列を含むＫＩＲ３ＤＬ１ポリペプチドに結合せず、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞中に内在化されないモノクローナル抗体であって：
（ａ）（ｉ）配列番号１５（ＨＣＤＲ１）、配列番号１８（ＨＣＤＲ２）および配列番号２０（ＨＣＤＲ３）の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに（ｉｉ）配列番号１０、２１または２２の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む軽鎖を有する抗体；
（ｂ）（ｉ）配列番号２５（ＨＣＤＲ１）、配列番号２８（ＨＣＤＲ２）および配列番号３０（ＨＣＤＲ３）の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに（ｉｉ）配列番号３１、３２または３３の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む軽鎖を有する抗体；
（ｃ）（ｉ）配列番号４（ＨＣＤＲ１）、配列番号７（ＨＣＤＲ２）および配列番号９（ＨＣＤＲ３）の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに（ｉｉ）配列番号１０、１１または１２の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む軽鎖を有する抗体；
（ｄ）（ｉ）配列番号４７（ＨＣＤＲ１）、配列番号５０（ＨＣＤＲ２）および配列番号５２（ＨＣＤＲ３）の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに（ｉｉ）配列番号５３、５４または５５の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む軽鎖を有する抗体；ならびに
（ｅ）（ｉ）配列番号５８（ＨＣＤＲ１）、配列番号６１（ＨＣＤＲ２）および配列番号６３（ＨＣＤＲ３）の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに（ｉｉ）配列番号６４、６５または６６の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む軽鎖を有する抗体；
（ｆ）（ｉ）配列番号１７２、１７３または１７４（ＨＣＤＲ１）、配列番号１７５または１７６（ＨＣＤＲ２）および配列番号１７７（ＨＣＤＲ３）の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに（ｉｉ）配列番号１７８、１７９または１８０の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む軽鎖を有する抗体；ならびに
（ｇ）（ｉ）配列番号１８３、１８４または１８５（ＨＣＤＲ１）、配列番号１８６または１８７（ＨＣＤＲ２）および配列番号１８８（ＨＣＤＲ３）の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに（ｉｉ）配列番号１８９、１９０または１９１の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む軽鎖を有する抗体、
からなる群から選択されるモノクローナル抗体。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗体であって、前記抗体は、
少なくとも１つのアミノ酸置換を有する改変ヒト重鎖定常領域を含み、ＦｃγＩＩＩＡ受容体に対する前記改変定常領域の結合親和性が、前記アミノ酸置換を有さない定常領域と比較して増加されるものであるか、または
低フコシル化Ｎ結合グリカンを有するヒト重鎖定常領域を含み、ＦｃγＩＩＩＡ受容体に対する前記改変定常領域の結合親和性が、前記低フコシル化Ｎ結合グリカンを有さない定常領域と比較して増加されるものである、
抗体。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の抗体を含む、ＣＤ４＋Ｔ細胞リンパ腫の治療または予防のための、医薬組成物。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の抗体を含む、脊椎関節炎の治療または予防のための、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合し得る抗原結合タンパク質を提供する。抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞、特にＣＤ４＋Ｔ細胞により特徴づけられる障害、例として、悪性腫瘍、例えば、菌状息肉症およびセザリー症候群、ならびにＫＩＲ３ＤＬ２発現自己免疫障害の治療における増加した活性を有する。
【０００２】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１２年９月１９日に出願された米国仮特許出願第６１／７０２，８３４号明細書の利益を主張し；その開示は任意の図面を含め参照により全体として本明細書に組み込まれる。
【０００３】
配列表の参照
本出願は、電子フォーマットの配列表とともに出願されている。配列表は、２０１３年９月１３日に作出され、９１ＫＢサイズの標題「ＫＩＲ−３  ＰＣＴ＿ＳＴ２５」のファイルとして提供される。配列表の電子フォーマット中の情報は、参照により全体として本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００４】
キラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）は、Ｃ型レクチン受容体（ＣＤ９４−ＮＫＧ２）とともに、ＭＨＣクラスＩ分子を特異的に認識するためにヒトＮＫ細胞およびＴリンパ球サブセットにより使用される受容体のファミリーである。ある阻害および活性化ＫＩＲは、高度に類似する細胞外ドメインを有し、同一のモノクローナル抗体により認識され、例えばＫＩＲ２ＤＬ１およびＫＩＲ２ＤＳ１は両方ともＥＢ６により認識され、２ＤＬ２および２ＤＳ２はＧＬ１８３により認識される。３つの基準（細胞外Ｉｇ様ドメイン（ドメインＤ０、Ｄ１、Ｄ２）の数、細胞質テール長、および配列相似性）が、ＫＩＲタンパク質を１３のグループ、すなわち、ＫＩＲ３ＤＬ１〜２、ＫＩＲ３ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＬ１〜５、およびＫＩＲ２ＤＳ１〜５にカテゴライズするために使用されている。２つのドメインについての名称２Ｄまたは３つのドメインについての３Ｄは、Ｉｇ様ドメインの数を与え；長鎖または短鎖細胞質ドメインのいずれかを有する受容体は、さらにＬまたはＳとして分類される（非特許文献１）。阻害受容体は、そのＨＬＡクラスＩリガンドのＫＩＲエンゲージメントによりチロシンリン酸化されるカノニカルなＩＴＩＭを含有する長鎖（Ｌ）細胞質テール（すなわち、ＫＩＲ２ＤＬまたはＫＩＲ３ＤＬ）を有する。リン酸化されたＩＴＩＭは、Ｓｒｃホモロジー２ドメインを含有するタンパク質チロシンホスファターゼの、Ｓｒｃホモロジー２ドメイン含有ホスファターゼ１および／またはＳｒｃホモロジー２ドメイン含有ホスファターゼ２を動員し、それらが細胞基質を脱リン酸化し、したがってＮＫ活性化シグナルを停止させ、すなわち、適切な自己ＭＨＣクラスＩ発現を有する標的細胞を回避する。短鎖（Ｓ）細胞質テールを有する受容体は、ＩＴＩＭを欠く（すなわち、ＫＩＲ２ＤＳまたはＫＩＲ３ＤＳ）。これらの活性化ＫＩＲは、それらの膜貫通ドメイン内に荷電残基を含有し、それによりシグナリング鎖ＫＡＲＡＰ／ＤＡＰ１２との相互作用が容易となる。ＫＩＲ２ＤＳ受容体ファミリーのエンゲージメントは、ＫＡＲＡＰ／ＤＡＰ１２媒介シグナリングイベントのカスケードをもたらし、ＮＫ細胞の細胞溶解活性の増加および炎症促進性サイトカイン、例えばＩＦＮ−γの産生に至ることが示されている（非特許文献１）。成熟ＮＫ細胞は、一般に潜在的に自己反応性の活性化分子より機能的に優先する自己ＭＨＣクラスＩ分子に特異的な少なくとも１つの阻害受容体を獲得することが予測されている。ＮＫ細胞の応答は、ＫＩＲおよび他の受容体による活性化および阻害シグナリングの両方の統合された成果を表すことが提案されている。
【０００５】
ＫＩＲ３ＤＬ２は、ＫＩＲ３ＤＬ２受容体を発現するＣＤ４＋Ｔ細胞、特にＣＤ４＋Ｔ細胞が関与する悪性腫瘍、例として、菌状息肉症およびセザリー症候群のような悪性腫瘍の治療のための標的として研究されてきた（例えば、特許文献１および特許文献２参照）。
【０００６】
ＫＩＲ３ＤＬ２のリガンドＨＬＡ−Ｂ２７は、強直性脊椎炎（ＡＳ）に代表される消耗性炎症性関節炎障害のグループの脊椎関節炎（ＳｐＡ）と強く関連する。ゲノムワイド関連試験は、ＳｐＡにおいてＴｈ１７細胞により産生されるＩＬ−１７の調節に関与する遺伝子を強く示した（非特許文献２）。ＩＬ１７は、多様な自己免疫障害、例としてＳｐＡに関与している（非特許文献３；非特許文献４）。ＨＬＡ−Ｂ２７（Ｂ２７）は、古典的なβ２ｍ会合ヘテロトリマーおよび非カノニカルなβ２ｍフリージスルフィド結合重鎖ダイマー（Ｂ２７２と称される）の両方として、疾患において抗原発現細胞（ＡＰＣ）の表面において発現される（非特許文献５；非特許文献６）。キラー細胞免疫グロブリン様受容体ＫＩＲ３ＤＬ２についてのリガンドは、Ｂ２７ヘテロトリマーでなく、Ｂ２７ダイマーである（非特許文献６）。ＫＩＲ３ＤＬ２の３つの免疫グロブリン様ドメインＤ０  Ｄ１およびＤ２は、リガンドの結合に関与する。Ｂ２７ダイマーによるＫＩＲ３ＤＬ２ライゲーションは、Ｔｈ１７およびＮＫ細胞サブセットの生存を促進する（非特許文献７；非特許文献８）。ＳｐＡを有する患者において、ＫＩＲ３ＤＬ２を発現する病原性Ｔｈ１７およびＮＫ細胞サブセットの比率の増加が存在することが示されている（非特許文献７および非特許文献８）。研究は、ＫＩＲ３ＤＬ２−Ｂ２７相互作用がＳｐＡにおいて中心的な役割を担うことおよびＫＩＲ３ＤＬ２が有望な治療標的であることを強く示唆している。
【０００７】
種々のＫＩＲ３Ｄポリペプチドに対して反応性の抗体の存在が、報告されている。２つの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の存在：Ｑ２４１およびＱ６６が報告されている（非特許文献９）。しかしながら、これら２つの抗体はＩｇＭアイソタイプ（ペンタマー）のものであり、医薬使用に容易に適合されず；さらにそれらの可変領域が二価ＩｇＧ型抗体に関して配置された場合、それらの親和性は低いと予測される。さらなる抗体を産生する「ＡＺ１５８」と称される細胞が報告された（非特許文献１０；特許文献１）。抗体５．１３３は、Ｍｉｌｔｅｎｔｙ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ａｕｂｕｒｎ  ＣＡ）から入手可能である。抗体ＡＺ１５８および５．１３３は両方とも、ＫＩＲ３ＤＬ２およびＫＩＲ３ＤＬ１に結合する（さらに高度に相同性のＫＩＲ３ＤＳ１に結合する）。ＫＩＲ３ＤＬ２およびＫＩＲ３ＤＬ１は、比較的高いアミノ酸同一性を共有し、ＫＩＲ３ＤＬ２に結合する種々のＨＬＡリガンドはＫＩＲ３ＤＬ１によっても認識される。ＡＺ１５８、Ｑ２４１およびＱ６６を生じさせた免疫化にかかわらず、治療および他の用途において改善された抗体が必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開第２０１０／０８１８９０号パンフレット
【特許文献２】国際公開第０２／５０１２２号パンフレット
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｐａｓｃａｌ  Ｖ．ｅｔ  ａｌ．，２００７  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７９：１６２５−１６３３
【非特許文献２】Ｒｅｖｅｉｌｌｅ，ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ  ４３：７６１−７６７
【非特許文献３】Ｓｈｅｎ，ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ６０：１６４７−１６５６
【非特許文献４】Ｗｅｎｄｌｉｎｇ，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｊｏｉｎｔ  Ｂｏｎｅ  Ｓｐｉｎｅ  ７４：３０４−３０５
【非特許文献５】Ｂｉｒｄ，ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３３：７４８−７５９
【非特許文献６】Ｋｏｌｌｎｂｅｒｇｅｒ，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ４６：２９７２−２９８２
【非特許文献７】Ｂｏｗｎｅｓｓ，ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １８６：２６７２−２６８０
【非特許文献８】Ｃｈａｎ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ５２：３５８６−３５９５
【非特許文献９】Ｐｅｎｄｅ，ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８４：５０５−５１８
【非特許文献１０】Ｐａｒｏｌｉｎｉ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｉｎ  Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ  ｔｙｐｉｎｇ  ＶＩＩ．Ｄ．Ｍａｓｏｎ，ｅｄｉｔｏｒ．Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ．４１５−４１７
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
一態様において、本発明は、とりわけ、ＫＩＲ３ＤＬ２が抗体に結合する場合に内在化し得るという発見から得られる。本発明者らは、次いで、内在化しない一連の抗ＫＩＲ３ＤＬ２ｍＡｂを同定する。ＫＩＲ３ＤＬ２内在化は、ＡＤＣＣベースアプローチを強く妨げることが実証される。ここで、本発明者らはまた、ＫＩＲ３ＤＬ２とのＢ２７ダイマー相互作用を阻害する抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を提供する。特に、リガンド遮断は、受容体内在化を引き起こさずに達成することができる。本発明者らはまた、ＫＩＲ３ＤＬ２−ＨＬＡ−Ａ３相互作用を遮断せずにＫＩＲ３ＤＬ２−ＨＬＡ  Ｂ２７相互作用を選択的に遮断する抗体を提供する。
【００１１】
メジャー（ヒト集団の頻度に関して）ＫＩＲ３ＤＬ２アレルに結合するが、密接に関連するＫＩＲ３ＤＬ１ポリペプチド（例えば、配列番号１６９に示されるアミノ酸配列を含むアレル＊００１０１）に結合しない抗体が提供される。一実施形態において、抗体は、配列番号１および１５９〜１６８のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（例えば、アレル＊００２、＊００３、＊００５、＊００７、および／または＊００８）の１、２、３、４または５つ以上に結合する。結果的に、本明細書に記載の有利な機能特性を有し、例えば、個体中で発現されるＫＩＲ３ＤＬ２アレルを評価する診断試験の実施を必要とせずに実質的にヒト集団にわたる疾患の治療のために投与することができる抗体が提供される。
【００１２】
抗体のエピトープの試験を通して、有利な特性を生じさせるために抗体により標的化することができるＫＩＲ３ＤＬ２上（Ｄ０ドメインおよびＤ２ドメイン中）の領域も提供される。
【００１３】
一態様において、抗体は、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２の複数のアレルに結合する一方、ＫＩＲ３ＤＬ１を超えるＫＩＲ３ＤＬ２特異性を維持する追加の利点をさらに有する。
【００１４】
ＫＩＲ３ＤＬ２の天然リガンドを遮断する利点を有し、したがって枯渇または非枯渇ｍＡｂフォーマットのいずれかとして炎症障害の治療または予防に十分に適合する抗体が提供される。さらに、異なるエピトープは、異なるリガンド遮断特異性を提供する。
【００１５】
ＫＩＲ３ＤＬ２リガンド（ＨＬＡ−Ａ３およびＨＬＡ−Ｂ２７）を遮断しない抗体、例として非内在化抗体も提供され；これらの抗体は、リガンドとの競合を回避するために有用であり得るＡＤＣＣベースアプローチにおいて有利であり得る。
【００１６】
一態様において、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する抗体であって、ＫＩＲ３ＤＬ１ポリペプチドに実質的に結合せず（例えば、ＫＩＲ３ＤＬ１ポリペプチドは、配列番号１６９のアミノ酸配列を含む）、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞中に内在化されない抗体が提供される。
【００１７】
一態様において、少なくとも２つのＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（アレル）に結合する抗体であって、ＫＩＲ３ＤＬ１ポリペプチド（例えば、配列番号１６９に示されるアミノ酸配列を含むＫＩＲ３ＤＬ１アレル＊００１０１）に実質的に結合しない抗体が提供される。
【００１８】
一実施形態において、抗体は、配列番号１、１６１、１６３、１６５および／または１６６のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（アレル＊００２、＊００３、＊００５、＊００７、および／または＊００８）の１、２、３、４または５つに結合する。
【００１９】
一実施形態において、抗体は、配列番号１、１７１および１７６に示されるアミノ酸配列を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（それぞれアレル＿＊００２、＊００１および＊００７）のそれぞれに結合する。一実施形態において、抗体は、配列番号１７１および１７８に示されるアミノ酸配列を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（それぞれアレル＿＊００１および＊００９）のそれぞれに結合する。一実施形態において、抗体は、配列番号１７１、１、１７６および１７８に示されるアミノ酸配列を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（それぞれアレル＿＊００１、＊００２、＊００７および＊００９）のそれぞれに結合する。一実施形態において、抗体は、配列番号１７１、１、１７２、１７４および１７６に示されるアミノ酸配列を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（それぞれアレル＿＊００１、＊００２、＊００３、＊００５および＊００７）のそれぞれに結合する。一実施形態において、抗体は、配列番号１７１、１、１７６および１７７に示されるアミノ酸配列を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（それぞれアレル＿＊００１、＊００２、＊００７および＊００８）のそれぞれに結合する。一実施形態において、抗体は、配列番号１７１、１、１７２、１７４、１７６および１７７に示されるアミノ酸配列を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（それぞれアレル＿＊００１、＊００２、＊００３、＊００５、＊００７および＊００８）のそれぞれに結合する。上記のいずれかの一実施形態において、抗体は、配列番号１７８に示されるアミノ酸配列を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（アレル＊０９）にさらに結合する。上記のいずれかの一実施形態において、抗体は、配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（アレル＊００４）にさらに結合する。上記のいずれかの一実施形態において、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドアレル＊０１０（＊００１と同一の配列番号１７１の細胞外ドメインを有する）にさらに結合する。上記のいずれかの一実施形態において、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドアレル＊０１１（＊００３と同一の（配列番号１７９の）細胞外ドメインを有する）にさらに結合する。上記のいずれかの一実施形態において、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドアレル＊００６にさらに結合する。場合により、それぞれの場合、抗体は、細胞（例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２が天然立体構造であるレポーター細胞系）の表面上で発現される前記ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する。場合により、抗体は立体構造的エピトープに結合する。
【００２０】
任意に、それぞれの場合、抗体は、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して、任意に二価である１０−８Ｍ未満の結合親和性（ＫＤ）で、細胞の表面上で発現される前記ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する。好ましくは、抗体はＫＩＲ３ＤＬ２上の立体構造的エピトープに結合する。
【００２１】
一実施形態において、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドのＤ０またはＤ２ドメイン中のアミノ酸残基に結合する抗体であって、ＫＩＲ３ＤＬ１ポリペプチドに実質的に結合しない抗体が提供される。
【００２２】
任意に、抗体は、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して、任意に二価である１０−８Ｍ未満、好ましくは、１０−９Ｍ未満、または好ましくは、１０−１０Ｍ未満の結合親和性（ＫＤ）（すなわち、それらよりも良好な親和性）を有する。
【００２３】
場合により、抗体は、特定のＫＩＲ３ＤＬ２アレル（例えば、アレル＿＊００１、＊００２、＊００３、＊００５、＊００７および／または＊００８）を表面において発現させるようにした細胞への結合についての、５μｇ／ｍｌ以下、場合により３μｇ／ｍｌ以下、２μｇ／ｍｌ以下、１μｇ／ｍｌ以下または０．５μｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０を有する。
【００２４】
一態様において、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドにそのリガンド（ＨＬＡ）結合領域（例えば、ＨＬＡ結合ポケット）中で、または少なくとも部分的にＫＩＲ３ＤＬ２タンパク質のＨＬＡ結合面上で結合する抗体が提供される。
【００２５】
好ましくは、本明細書の実施形態のいずれかにおいて、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドのＤ０ドメイン（配列番号１の残基１〜９８）および／またはＤ２ドメイン（配列番号１の残基１９３〜２９２）内のアミノ酸残基に結合する抗体が提供される。場合により、Ｄ０および／またはＤ２ドメイン内の残基における突然変異を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの抗体の結合は、配列番号１の野生型ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの結合と比較して実質的に低減される。
【００２６】
一態様において、抗体は、Ｒ１３、Ｐ１４、Ｓ１５、Ｈ２３、Ａ２５、Ｑ２７、Ｉ６０およびＧ６２（配列番号１に関する）からなる群から選択される残基の１、２、３、４、５つ以上を含むエピトープに結合し、ならびに／または抗体は、Ｒ１３、Ｐ１４、Ｓ１５、Ｈ２３、Ａ２５、Ｑ２７、Ｉ６０およびＧ６２（配列番号１に関する）からなる群から選択される残基における突然変異を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有する。
【００２７】
本明細書の突然変異について使用される略語表記は、野生型残基：ポリペプチド中の位置（配列番号１に示される残基の番号付与）：突然変異残基である。
【００２８】
一態様において、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基Ｒ１３、Ａ２５および／もしくはＱ２７を含むエピトープに結合し、ならびに／または残基Ｒ１３、Ａ２５および／もしくはＱ２７（配列番号１に関する）における突然変異を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有する抗体が提供される。例えば、抗体は、突然変異Ｒ１３Ｗ、Ａ２５Ｔおよび／またはＱ２７Ｒを有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有し得る。場合により、エピトープは、残基Ｉ６０および／もしくはＧ６２（配列番号１に関する）の１つ以上をさらに含み、ならびに／または抗体は、残基Ｉ６０および／もしくはＧ６２における突然変異（配列番号１に関する、例えば、Ｉ６０Ｎ、Ｇ６２Ｓ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有する。場合により、エピトープは、残基Ｐ１４、Ｓ１５および／もしくはＨ２３（配列番号１に関する）の１つ以上をさらにもしくは代替的に含み、ならびに／または抗体は、残基Ｐ１４、Ｓ１５および／もしくはＨ２３における突然変異（配列番号１に関する、例えば、Ｐ１４Ｓ、Ｓ１５Ａ、Ｈ２３Ｓ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有する。場合により、エピトープは、残基Ｒ３２および／もしくはＧ３３（配列番号１に関する）を含まず、ならびに／または抗体は、残基Ｒ３２および／もしくはＧ３３における突然変異（配列番号１に関して、例えば、Ｒ３２Ｈおよび／またはＧ３３Ｒ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有さない。場合により、エピトープは、残基Ｆ５０および／もしくはＲ５３（配列番号１に関する）を含まず、ならびに／または抗体は、残基Ｆ５０および／もしくはＲ５３における突然変異（配列番号１に関する、例えば、Ｆ５０Ａ、Ｒ５３Ｓ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有さない。抗体は、残基Ｑ５６および／もしくはＥ５７、ならびに／または残基Ｆ９および／もしくはＳ１１に結合してもよく（例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２−ＨＬＡ  Ｂ２７および−ＨＬＡ  Ａ３相互作用を遮断する抗体）、結合しなくてもよく（例えば、非内在化抗体）；したがって、一実施形態において、場合により、エピトープは、残基Ｆ９、Ｓ１１、Ｑ５６および／もしくはＥ５７（配列番号１に関する）を含まず、ならびに／または抗体は、残基Ｆ９、Ｓ１１、Ｑ５６および／もしくはＥ５７における突然変異（配列番号１に関する、例えば、Ｆ９ＳおよびＳ１１Ａ、Ｑ５６ＳおよびＥ５７Ａ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有さず；別の実施形態において、場合により、エピトープは、残基Ｆ９、Ｓ１１、Ｑ５６および／もしくはＥ５７（配列番号１に関する）を含み、ならびに／または抗体は、残基Ｆ９、Ｓ１１、Ｑ５６および／もしくはＥ５７（配列番号１に関する、例えば、Ｆ９ＳおよびＳ１１Ａ、Ｑ５６ＳおよびＥ５７Ａ）における突然変異を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有する。場合により、エピトープは、残基Ｈ２９および／もしくはＦ３４（配列番号１に関する）を含まず、ならびに／または抗体は、残基Ｈ２９および／もしくはＦ３４における突然変異（配列番号１に関する、例えば、Ｈ２９Ｓ、Ｆ３４Ａ）��有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有さない。場合により、エピトープは、残基Ｆ９および／もしくはＳ１１（配列番号１に関する）の１つ以上を含まず、ならびに／または抗体は、残基残基Ｆ９および／もしくはＳ１１における突然変異（配列番号１に関する、例えば、Ｆ９Ｓ、Ｓ１１Ａ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有さない。
【００２９】
一態様において、配列番号１のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基Ｉ６０および／もしくはＧ６２を含むエピトープに結合し、ならびに／または残基Ｉ６０および／もしくはＧ６２（配列番号１に関する）における突然変異を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有する抗体が提供される。例えば、抗体は、突然変異Ｉ６０Ｎおよび／またはＧ６２Ｓを有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有し得る。場合により、エピトープは、残基Ｐ１４、Ｓ１５および／もしくはＨ２３（配列番号１に関する）の１つ以上をさらにもしくは代替的に含み、ならびに／または抗体は、残基Ｐ１４、Ｓ１５および／もしくはＨ２３における突然変異（配列番号１に関する、例えば、Ｐ１４Ｓ、Ｓ１５Ａ、Ｈ２３Ｓ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有する。場合により、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基Ｒ１３、Ａ２５および／もしくはＱ２７に結合せず、ならびに／または残基Ｒ１３、Ａ２５および／もしくはＱ２７における突然変異を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（例えば、突然変異Ｒ１３Ｗ、Ａ２５Ｔおよび／またはＱ２７Ｒを有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド）への低減した結合を有さない。
【００３０】
一態様において、配列番号１のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基Ｐ１４、Ｓ１５および／もしくはＨ２３を含むエピトープに結合し、ならびに／または残基Ｐ１４、Ｓ１５および／もしくはＨ２３における突然変異（配列番号１に関する、例えば、Ｐ１４Ｓ、Ｓ１５Ａ、Ｈ２３Ｓ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有する抗体が提供される。
【００３１】
一態様において、（１）残基Ｉ６０および／もしくはＧ６２における突然変異（配列番号１に関する、例えば、Ｉ６０Ｎ、Ｇ６２Ｓ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド、ならびに（２）残基Ｐ１４、Ｓ１５および／もしくはＨ２３における突然変異（配列番号１に関する、例えば、Ｐ１４Ｓ、Ｓ１５Ａ、Ｈ２３Ｓ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有する抗体が提供される。
【００３２】
一態様において、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの（ａ）残基Ｒ１３、Ａ２５および／またはＱ２７の１、２または３つ、ならびに（ｂ）残基Ｉ６０および／またはＧ６２の１つまたは両方を含むエピトープに結合する抗体が提供される。一態様において、抗体は、（ａ）残基Ｒ１３、Ａ２５および／またはＱ２７の１、２または３つにおける突然変異、ならびに（ｂ）残基Ｉ６０および／またはＧ６２の１つまたは両方における突然変異を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有する。
【００３３】
一態様において、配列番号１のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基Ｒ７８および／もしくはＬ８２を含むエピトープに結合し、ならびに／または残基Ｒ７８および／もしくはＬ８２（配列番号１に関する）における突然変異を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有する抗体が提供される。例えば、抗体は、突然変異Ｒ７８ＨおよびＬ８２Ｐを有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有し得る。場合により、エピトープは、残基Ｋ７、Ｙ３０、Ｒ３１、Ｐ７９、Ｈ８０、Ｓ８１、Ｔ８３、Ｇ８４、Ｗ８５、Ｓ８６および／もしくはＡ８７（配列番号１に関する）の１つ以上をさらに含み、もしくは除外し、ならびに／または抗体は、残基Ｋ７、Ｙ３０、Ｒ３１、Ｐ７９、Ｈ８０、Ｓ８１、Ｔ８３、Ｇ８４、Ｗ８５、Ｓ８６および／もしくはＡ８７（配列番号１に関する）における突然変異を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有し、もしくは低減した結合を有さない。一実施形態において、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基１〜９８（配列番号１に関する）に対応するセグメント中の１、２、３、４、５、６、７つ以上の残基を含むエピトープに結合し、場合により、さらにエピトープは、残基Ｋ７、Ｙ３０、Ｒ３１、Ｒ７８、Ｐ７９、Ｈ８０、Ｓ８１、Ｌ８２、Ｔ８３、Ｇ８４、Ｗ８５、Ｓ８６および／またはＡ８７の１つ以上（例えば、１、２、３、４、５つ）を含む。
【００３４】
一態様において、配列番号１のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基Ｗ２２６を含むエピトープに結合し、および／または残基Ｗ２２６（配列番号１に関する）における突然変異を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有する抗体が提供される。場合により、エピトープは、残基Ｉ２３１および／もしくはＲ２４６（配列番号１に関する）の１つ以上をさらに含み、ならびに／または抗体は、残基Ｉ２３１および／もしくはＲ２４６における突然変異（配列番号１に関する、例えば、Ｉ２３１Ｍ、Ｒ２４６Ｐ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有する。場合により、エピトープは、残基Ｅ２３９（配列番号１に関する）をさらに含み、および／または抗体は、残基Ｅ２３９における突然変異（配列番号１に関する、例えば、Ｅ２３９Ｇ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有する。
【００３５】
一態様において、配列番号１のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基Ｉ２３１および／もしくはＲ２４６を含むエピトープに結合し、ならびに／または残基Ｉ２３１および／もしくはＲ２４６（配列番号１に関する）における突然変異を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有する抗体が提供される。
【００３６】
一態様において、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基Ｗ２２６、ならびに残基Ｉ２３１および／またはＲ２４６の１つまたは両方を含むエピトープに結合する抗体が提供される。
【００３７】
一態様において、抗体は、残基Ｗ２２６における突然変異、ならびに残基Ｉ２３１および／またはＲ２４６の１つまたは両方における突然変異を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有する。
【００３８】
本明細書の任意の実施形態において、抗体は、場合により、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞中でのＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの内在化を引き起こさず、および／またはＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞中に内在化されない。
【００３９】
一実施形態において、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する抗体であって、ＫＩＲ３ＤＬ２と、ＫＩＲ３ＤＬ２の第１のＨＬＡ天然リガンドとの間の結合を検出可能に低減させる（または排除する）が、ＫＩＲ３ＤＬ２と、ＫＩＲ３ＤＬ２の第２のＨＬＡ天然リガンドとの間の結合を検出可能に低減させない（または排除しない）抗体が提供される。
【００４０】
一実施形態において、抗体は、場合により、ＫＩＲ３ＤＬ２と、ＫＩＲ３ＤＬ２のＨＬＡクラスＩリガンド（例えば、ＨＬＡ−Ｂ２７、ＨＬＡ−Ａ３、ＨＬＡ−Ｂ７、ＨＬＡ−Ｂ３５および／またはＨＬＡ−Ａ２）との間の結合を検出可能に低減させる。
【００４１】
一実施形態において、抗体は、場合により、ＫＩＲ３ＤＬ２とＨＬＡ−Ｂ２７との間の結合を検出可能に低減させるが、ＫＩＲ３ＤＬ２とＨＬＡ−Ａ３との間の結合を検出可能に低減させない。
【００４２】
一実施形態において、抗体は、場合により、ＫＩＲ３ＤＬ２とＨＬＡ−Ａ３との間の結合を検出可能に低減させるが、ＫＩＲ３ＤＬ２とＨＬＡ−Ｂ２７との間の結合を検出可能に低減させない。
【００４３】
一実施形態において、抗体は、場合により、ＫＩＲ３ＤＬ２とＨＬＡ−Ｂ２７との間の結合も、ＫＩＲ３ＤＬ２とＨＬＡ−Ａ３との間の結合も検出可能に低減させない。
【００４４】
一実施形態において、抗体は、場合により、抗体は、異なるアミノ酸配列を有する少なくとも２つのＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（アレル）に結合する。
【００４５】
一実施形態において、抗体は、場合により、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ１ポリペプチドに実質的に結合しない。
【００４６】
リガンド遮断抗体ならびに／またはＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドのＨ３２および／もしくはＧ３３の残基を含むエピトープに結合する抗体についての本明細書の実施形態において、抗体は、場合により、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞中でのＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの内在化を引き起こし得、および／またはＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞中に内在化される。
【００４７】
抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、例えば、ヒト対象における癌、炎症障害および自己免疫障害の治療に有用であり得る。この抗体は、所望の効果または抗体の使用に応じて毒性剤または他の薬剤にカップリングさせてまたはさせないで使用することができる。一実施形態において、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、「ネイキッド抗体（ｎａｋｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」であり、毒性剤にカップリングされていない。一実施形態において、ネイキッドまたはカップリング抗体は、Ｆｃγ受容体（例えば、ＣＤ１６）に結合するＦｃ領域（例えば、ＩｇＧ１）を含む重鎖を含む。場合により、そのような抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２を発現する細胞に対する補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）および／または抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を誘導する。
【００４８】
場合により、任意の実施形態において、抗体（例えば、ＩｇＧ４、ＩｇＧ１、抗体断片など）は、抗体−毒素コンジュゲートの内在化時に細胞に対して毒性である毒性剤（例えば、化学療法剤）をさらに含む。一実施形態において、抗体は、放射能薬剤にコンジュゲートしている。
【００４９】
本開示は、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２に特異的に結合する抗体、抗体断片、および誘導体をさらに提供する。本開示は、そのような抗体組成物、ならびに癌、炎症障害または自己免疫障害を治療、予防および診断する本明細書に開示される方法のいずれかにおけるそれらの使用を提供する。
【００５０】
一実施形態において、抗体は、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して１０−８Ｍ未満、好ましくは、１０−９Ｍ未満、または好ましくは、１０−１０Ｍ未満の結合親和性（ＫＤ）を有する。任意に、親和性は二価結合を指す。
【００５１】
本発明の実施形態のいずれかの一態様において、抗体は、抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３および／または２０Ｅ９からなる群から選択される抗体のそれぞれの重鎖および／または軽鎖の１、２または３つのＣＤＲを有する重鎖および／または軽鎖を有し得る。
【００５２】
本発明の実施形態のいずれかの一態様において、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの結合について、モノクローナル抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３および／または２０Ｅ９のいずれか１つまたは任意の組合せと競合する。一実施形態において、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの結合について、以下からなる群から選択される抗体と競合する。
【００５３】
一態様において、本開示は、
（ａ）（ｉ）配列番号４、５または６（ＨＣＤＲ１）、配列番号７または８（ＨＣＤＲ２）および配列番号９（ＨＣＤＲ３）の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに（ｉｉ）配列番号１０、１１または１２の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む軽鎖を有し、それぞれのＣＤＲは、任意に１、２、３または４つのアミノ酸置換、欠失または挿入を含み得る抗体；
（ｂ）（ｉ）配列番号１５、１６または１７（ＨＣＤＲ１）、配列番号１８または１９（ＨＣＤＲ２）および配列番号２０（ＨＣＤＲ３）の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに（ｉｉ）配列番号１０、２１または２２の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む軽鎖を有し、それぞれのＣＤＲは、任意に１、２、３または４つのアミノ酸置換、欠失または挿入を含み得る抗体；
（ｃ）（ｉ）配列番号２５、２６または２７（ＨＣＤＲ１）、配列番号２８または２９（ＨＣＤＲ２）および配列番号３０（ＨＣＤＲ３）の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに（ｉｉ）配列番号３１、３２または３３の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む軽鎖を有し、それぞれのＣＤＲは、任意に１、２、３または４つのアミノ酸置換、欠失または挿入を含み得る抗体；
（ｄ）（ｉ）配列番号３６、３７または３８（ＨＣＤＲ１）、配列番号３９または４０（ＨＣＤＲ２）および配列番号４１（ＨＣＤＲ３）の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに（ｉｉ）配列番号４２、４３または４４の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む軽鎖を有し、それぞれのＣＤＲは、任意に１、２、３または４つのアミノ酸置換、欠失または挿入を含み得る抗体；
（ｅ）（ｉ）配列番号４７、４８または４９（ＨＣＤＲ１）、配列番号５０または５１（ＨＣＤＲ２）および配列番号５２（ＨＣＤＲ３）の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに（ｉｉ）配列番号５３、５４または５５の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む軽鎖を有し、それぞれのＣＤＲは、任意に１、２、３または４つのアミノ酸置換、欠失または挿入を含み得る抗体；
（ｆ）（ｉ）配列番号５８、５９または６０（ＨＣＤＲ１）、配列番号６１または６２（ＨＣＤＲ２）および配列番号６３（ＨＣＤＲ３）の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに（ｉｉ）配列番号６４、６５または６６の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む軽鎖を有し、それぞれのＣＤＲは、任意に１、２、３または４つのアミノ酸置換、欠失または挿入を含み得る抗体；
（ｇ）（ｉ）配列番号１７２、１７３または１７４（ＨＣＤＲ１）、配列番号１７５または１７６（ＨＣＤＲ２）および配列番号１７７（ＨＣＤＲ３）の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに（ｉｉ）配列番号１７８、１７９または１８０の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む軽鎖を有し、それぞれのＣＤＲは、任意に１、２、３または４つのアミノ酸置換、欠失または挿入を含み得る抗体；ならびに
（ｈ）（ｉ）配列番号１８３、１８４または１８５（ＨＣＤＲ１）、配列番号１８６または１８７（ＨＣＤＲ２）および配列番号１８８（ＨＣＤＲ３）の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに（ｉｉ）配列番号１８９、１９０または１９１の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む軽鎖を有し、それぞれのＣＤＲは、任意に１、２、３または４つのアミノ酸置換、欠失または挿入を含み得る抗体
からなる群から選択されるＫＩＲ３ＤＬ２に特異的に結合するモノクローナル抗体を提供する。
【００５４】
一態様において、ＫＩＲ３ＤＬ２に特異的に結合する抗体であって、以下の特性：
（ａ）ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの結合についての１０−８Ｍ未満、好ましくは、１０−９Ｍ未満、または好ましくは、１０−１０Ｍ未満のＫｄを有する；
（ｂ）ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基１〜９８または残基１９３〜２９２に対応するセグメント中の少なくとも１つの残基に結合する；
（ｃ）ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの結合について抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３および／または２０Ｅ９と競合する；
（ｄ）ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの結合についてＫＩＲ３ＤＬ２の天然リガンド（例えば、ＨＬＡポリペプチドＨＬＡ−Ａ３、ＨＬＡ−１１および／またはＨＬＡ−Ｂ２７）と競合し、または競合しない（例えば、ポリペプチド相互作用アッセイにおいて）；
（ｅ）ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞中でのＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの内在化を引き起こさず、および／またはＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞中に内在化されない；
（ｆ）ＫＩＲ３ＤＬ２の天然リガンド（例えば、ＨＬＡポリペプチドＨＬＡ−Ａ３、ＨＬＡ−１１および／またはＨＬＡ−Ｂ２７）により誘導されるＫＩＲ３ＤＬ２シグナリングを阻害し、または阻害しない；
（ｇ）ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＳ１、ＫＩＲ３ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＬ１および／またはＫＩＲ２ＤＳ４ポリペプチドに実質的に結合しない；
（ｈ）ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（例えば、配列番号１６０、１、１６１、１６３、１６５および／または１６６のアレル＊００１、＊００２、＊００３、＊００５、＊００７および／または＊００８）の１、２、３、４、５または６つに結合する；
（ｉ）ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドのアミノ酸残基Ｒ１３、Ｐ１４、Ｓ１５、Ｈ２３、Ａ２５、Ｑ２７、Ｈ３２、Ｇ３３、Ｉ６０、Ｇ６２、Ｒ７８、Ｌ８２、Ｗ２２６、Ｉ２３１および／またはＲ２４６の任意の１つ以上を含むエピトープに結合する；ならびに
（ｊ）ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基Ｒ１３、Ｐ１４、Ｓ１５、Ｈ２３、Ａ２５、Ｑ２７、Ｈ３２、Ｇ３３、Ｉ６０、Ｇ６２、Ｒ７８、Ｌ８２、Ｗ２２６、Ｉ２３１および／またはＲ２４６の１つ以上における突然変異を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有する、
の１つ以上（組合せが矛盾しない程度で、それらの任意の組合せを含む）を有する抗体が提供される。
【００５５】
本明細書の実施形態のいずれかにおいて、抗体は、上記（ａ）〜（ｊ）のいずれか１つ以上により特徴づけることができる。
【００５６】
一実施形態において、抗体は、ヒトに好適である。一実施形態において、抗体は、キメラであり、例えば、非ネズミ、場合により、ヒト定常領域を含有する。一実施形態において、抗体は、ヒトまたはヒト化である。別の実施形態において、抗体は、マウス抗体である。
【００５７】
本発明の実施形態のいずれかの一態様において、抗体のアイソタイプは、ＩｇＧ、場合により、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４である。一実施形態において、抗体は、Ｆｃドメインを含み、またはＦｃγＲ（例えば、ＦｃγＲＩＩＩＡ）により結合されるアイソタイプのもの、例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプの抗体である。
【００５８】
本発明の実施形態のいずれかの一態様において、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ダイアボディ、単鎖抗体断片、または複数の異なる抗体断片を含む多重特異的抗体から選択される抗体断片である。本発明の実施形態のいずれかの一態様において、抗体は、Ｆｃドメインを含まず、またはＦｃγＲにより実質的に結合されないアイソタイプのものである。一実施形態において、抗体は、ＩｇＧ４またはＩｇＧ２アイソタイプのものである。
【００５９】
場合により、そのような抗体は、さらにテトラマー（２つの重鎖および２つの軽鎖）であり、したがって、二価である（例えば、ＩｇＧ抗体）。
【００６０】
ある実施形態において、抗体は、毒性剤をさらに含む。一実施形態において、毒性剤を含む抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２を発現する細胞の死滅を直接引き起こし得る。一実施形態において、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の少なくとも２０％、３０％、４０％または５０％の細胞死を、例えばインビトロアッセイにおいて（例えば、免疫エフェクター細胞の不存在下で）直接誘導し得る。
【００６１】
一実施形態において、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２を発現する細胞のＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣを誘導し得る。一実施形態において、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞（例えば、Ｔ細胞リンパ腫細胞、ＳＳ患者からの細胞またはＳＳ細胞系）の少なくとも２０％、３０、４０または５０％の細胞溶解を、細胞毒性アッセイにおいて誘導し得る。
【００６２】
一実施形態において、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を試験する方法であって、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する抗体を、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを発現する細胞と接触させること、ならびに抗体がＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞中に内在化されるか否かおよび／または抗体がＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの細胞内内在化を誘導し、および／または増加させるか否かを評価すること、ならびに抗体がＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの細胞内内在化を誘導せず、および／または増加させない場合にその抗体を選択することを含む方法が提供される。
【００６３】
別の実施形態において、場合により、癌、炎症障害または自己免疫障害の治療のための、哺乳動物対象においてＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する抗体を産生する方法であって、ａ）複数の抗体を提供し、場合により、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを含む免疫原により非ヒト哺乳動物を免疫化するステップ；ｂ）複数の抗体のそれぞれが、１、２、３、４、５つ以上の異なるＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドアレル（例えば、アレル＊００１、＊００２、＊００３、＊００５、＊００７、＊００８、＊００９および／または＊０１１）に結合し得るか否かを決定するステップ（場合により、それぞれの場合、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドは細胞の表面上で発現される）、ならびにｃ）１、２、３、４、５つ以上の異なるＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドアレル（例えば、アレル＊００１、＊００２、＊００３、＊００５、＊００７、＊００８、＊００９および／または＊０１１）に結合し得る抗体を前記複数の抗体から（例えば、産生、開発、治療における使用などのために）選択するステップ（場合により、それぞれの場合、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドは細胞の表面上で発現される）を含む方法が提供される。場合により、本方法は、複数の抗体のそれぞれがＫＩＲ３ＤＬ１ポリペプチドに結合し得るか否かを決定すること、ならびに前記ＫＩＲ３ＤＬ１ポリペプチドに結合し得る抗体を前記複数の抗体から選択することをさらに含む。
【００６４】
別の実施形態において、場合により、癌、炎症障害または自己免疫障害の治療のための、哺乳動物対象においてＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する抗体を産生する方法であって、ａ）複数の抗体を提供し、場合により、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを含む免疫原により非ヒト哺乳動物を免疫化するステップ；ならびにｂ）
（ｉ）ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合するが、ＫＩＲ３ＤＬ１ポリペプチドに結合せず、ならびに／または
（ｉｉ）（ａ）配列番号１の成熟ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基９９〜１９２に対応するセグメント中の少なくとも１つの残基に、および／もしくは残基Ｒ１３、Ｐ１４、Ｓ１５、Ｈ２３、Ａ２５、Ｑ２７、Ｈ３２、Ｇ３３、Ｉ６０、Ｇ６２、Ｒ７８、Ｌ８２、Ｗ２２６、Ｉ２３１および／もしくはＲ２４６のいずれか１つ以上（例えば、２、３、４、５つ以上）に結合し、および／もしくは前記残基におけるアミノ酸置換を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有し、
または
（ｂ）配列番号１の成熟ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基１〜９８に対応するセグメント中の少なくとも１つの残基に、および／もしくは残基Ｒ１３、Ｐ１４、Ｓ１５、Ｈ２３、Ａ２５、Ｑ２７、Ｈ３２、Ｇ３３、Ｉ６０、Ｇ６２、Ｒ７８、Ｌ８２、Ｗ２２６、Ｉ２３１および／もしくはＲ２４６のいずれか１つ以上（例えば、２、３、４、５つ以上）に結合し、および／もしくは前記残基におけるアミノ酸置換を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有し、ならびに／または
（ｉｉｉ）ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞中に内在化されず、および／もしくはＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの細胞内内在化を誘導および／もしくは増加させない
抗体を前記複数の抗体から（例えば、産生、開発、治療における使用などのために）選択するステップを含む方法が提供される。
【００６５】
一態様において、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の生物学的活性を阻害する方法であって、細胞を抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体とインビトロ、エクスビボまたはインビボで接触させることを含む方法が提供される。場合により、前記接触は、ＫＩＲ３ＤＬ２のリガンド（例えば、ＨＬＡ）、場合により、ＫＩＲ３ＤＬ２のリガンド（例えば、ＨＬＡ）を発現する細胞の存在下で行う。好ましくは、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞もしくはＮＫ細胞、悪性腫瘍Ｔ細胞もしくはＮＫ細胞、ＣＤ４Ｔｈ１７細胞（例えば、ＩＬ−２３Ｒを発現し、ＩＬ−１７Ａを産生する炎症促進性ＣＤ４Ｔ細胞）またはＩＬ−１７Ａ発現し、産生する炎症促進性ＮＫ細胞である。一実施形態において、ＩＬ−１７Ａを産生するＫＩＲ３ＤＬ２発現ＴまたはＮＫ細胞の生物学的活性を阻害する方法であって、細胞を抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体とインビトロ、エクスビボまたはインビボで接触させることを含む方法が提供される。好ましくは、生物学的活性は、活性化、溶解活性、サイトカイン（例えば、ＩＬ−１７Ａ）産生および／または細胞増殖である。好ましくは、生物学的活性は、リガンド誘導（例えば、ＨＬＡ誘導）シグナリングである。一態様において、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の生物学的活性を阻害する方法であって、細胞を抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体とインビトロ、エクスビボまたはインビボで接触させることを含む方法が提供される。
【００６６】
一態様において、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞を排除し、または枯渇させる方法であって、細胞を抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体とインビトロ、エクスビボまたはインビボで接触させることを含む方法が提供される。細胞は、例えば、悪性腫瘍Ｔ細胞もしくはＮＫ細胞、Ｔ細胞もしくはＮＫ細胞、ＣＤ４Ｔｈ１７細胞（例えば、ＩＬ−２３Ｒを発現し、ＩＬ−１７Ａを産生する炎症促進性ＣＤ４Ｔ細胞）またはＩＬ−１７Ａを発現し、産生する炎症促進性ＮＫ細胞であり得る。
【００６７】
一態様において、本明細書の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を使用する治療方法が提供される。抗体は、予防または治療的治療として使用することができ；本明細書の実施形態のいずれかにおいて、治療有効量の抗体を予防有効量の抗体と交換することができる。一態様において、癌、例えば、Ｔ細胞リンパ腫、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋ＣＴＣＬ、セザリー症候群（ＳＳ）、菌状息肉症（ＭＦ）、ＣＤ３０＋Ｔ細胞リンパ腫を有する患者を治療する方法であって、患者に医薬有効量の、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに特異的に結合する本明細書に記載の抗原結合化合物を投与することを含む方法が提供される。別の実施形態において、少なくとも部分的にＫＩＲ３ＤＬ２発現Ｔ細胞により媒介される自己免疫または炎症障害を有する患者を治療する方法であって、患者に医薬有効量の、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに特異的に結合する本明細書に記載の抗原結合化合物を投与することを含む方法が提供される。
【００６８】
治療方法および抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を、第２の治療剤、例として、免疫調節剤（例えば、化学療法薬、抗炎症薬、腫瘍ワクチン、腫瘍細胞上の腫瘍特異的抗原に結合する抗体、腫瘍細胞に対してＡＤＣＣを誘導する抗体、免疫応答を増強する抗体、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）など）との組合せで使用して個体を治療することができる。一実施形態において、第２の治療剤は、抗ＣＤ４抗体または抗ＣＤ３０抗体である。
【００６９】
本開示はさらに、ＫＩＲ３ＤＬ２アンタゴニスト（例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する抗体）を使用する治療に応答する疾患を有する対象を選択する方法であって、前記対象中の疾患関連細胞がＫＩＲ３ＤＬ２受容体を発現するか否かを決定することを含み、ＫＩＲ３ＤＬ２受容体の発現は、レスポンダー対象を示す方法に関する。場合により、本方法は、レスポンダー対象に、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する抗体（例えば、本発明の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体）を投与することをさらに含む。一実施形態において、本方法は、癌を有する対象を選択するために使用し、疾患関連細胞は癌細胞である。一実施形態において、本方法は、炎症または自己免疫障害を有する対象を選択するために使用し、疾患関連細胞はＴ細胞である。
【００７０】
前記疾患関連細胞中でのＫＩＲ３ＤＬ２受容体の発現は、ＫＩＲ３ＤＬ２特異的リガンドを使用して決定することができる。好ましくは、リガンドは、抗体、またはその断片もしくは誘導体である。一態様において、本発明は、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２に特異的に結合するモノクローナル抗体、例として、限定されるものではないが、抗体断片、および誘導体を含む組成物、ならびにそれを使用する方法を提供する。
【００７１】
別の態様において、患者が、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド、例えば、本明細書に記載の抗体により結合されるＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（１つ以上のＫＩＲ３ＤＬ２アレル）を発現する疾患関連細胞を有するか否かを評価することを含む方法（例えば、診断アッセイ、レスポンダーアッセイなどを実施する方法）が提供される。前記方法は、例えば、疾患関連細胞を含む患者からの生物学的試料を得ること、前記疾患関連細胞をそのような抗体と接触させることおよび抗体が疾患関連細胞に結合するか否かを評価することを含み得る。ＫＩＲ３ＤＬ２が疾患関連細胞により発現される知見は、患者がＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞により特徴づけられる病態を有し、および／または本明細書に記載の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体による治療に好適であることを示す。患者は、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞により特徴づけられる特定の疾患に好適な治療によりさらに治療することができる。場合により、患者は、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体により治療する。一実施形態において、本方法は、癌を有する対象を選択するために使用し、疾患関連細胞は癌細胞である。一実施形態において、本方法は、炎症または自己免疫障害を有する対象を選択するために使用し、疾患関連細胞はＴ細胞である。一実施形態において、抗体が疾患関連細胞に結合するか否かを評価するために疾患関連細胞と接触させる抗体は、本明細書に記載の抗体である。
【００７２】
患者を治療する方法であって、
ａ）患者が病原性ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞を有するか否かを決定すること、および
ｂ）患者が病原性ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞を有すると決定された場合、本開示の抗原結合化合物（例えば、抗体）を投与すること
を含む方法も提供される。
【００７３】
患者のある身体区画内に存在する悪性腫瘍ＣＤ４＋ＣＴＣＬ細胞の比率（例えば、割合）の評価を可能とするＣＴＣＬの発達レベルを評価する（疾患の病期を分類する）方法も提供される。この方法によれば、前記身体区画から回収された生物学的試料からの細胞を、本開示の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体と接触させ、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを表面において発現するＣＤ４＋細胞の比率を計測する。前記身体区画中に実際に存在するＣＤ４＋ＣＴＣＬ細胞の比率は、前記計測される比率と、例えばこの計測される比率から±１０％の範囲内で実質的に等しいとみなすことができる。
【００７４】
ＣＴＣＬ診断方法であって、個体からの生物学的試料からの細胞を、本開示の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体と接触させ、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを表面において発現するＴ細胞の比率（例えば、割合）を計測すること、およびそのような比率を、非ＣＴＣＬヒト（好ましくは、健常ヒトにおけるもの）において観察されるＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを表面において発現するＴ細胞の平均比率（例えば、割合）と比較することを含み、前記計測される比率が前記平均比率よりも有意に高い場合、ＣＴＣＬ陽性診断を行う方法も提供される。
【００７５】
本発明のこれらおよび追加の有利な態様および特徴を本明細書の他箇所でさらに記載することができる。
【図面の簡単な説明】
【００７６】
【図１】Ｄ０ドメイン内の部分を含むＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの画像を示し、抗体による結合の損失を（様々な組合せで）もたらした「突然変異体１」、「突然変異体２」、「突然変異体３」および「突然変異体６」として示される突然変異したアミノ酸残基を示す。
【図２】Ｄ０ドメイン内の部分を含むＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの画像を示し、「突然変異体１」、「突然変異体２」および「突然変異体３」として示される突然変異したアミノ酸残基を示し、突然変異体１、２および６は、抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５および１３Ｈ１による結合の損失を（様々な組合せで）もたらし、残基に隣接する残基（突然変異体２に隣接するＦ９、Ｓ１１、Ｐ１４、Ｆ３４および／またはＳ１４０、ならびに突然変異体１に隣接するＧ２１、Ｇ２２、Ｈ２３、Ｅ５７、Ｓ５８、Ｆ５９、Ｐ６３および／またはＨ６８）に陰影を付す。
【図３】Ｄ０ドメイン内の部分を含むＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドのそれぞれの面の画像を示し、抗体５Ｈ１による結合の損失をもたらした「突然変異体６」として示される突然変異したアミノ酸残基を示し、結合の損失をもたらさなかった「突然変異体３」も示す。陰影において、この抗体によっても結合され得る突然変異体６に隣接する残基に隣接する残基（Ｋ７、Ｙ３０、Ｒ３１、Ｐ７９、Ｈ８０、Ｓ８１、Ｔ８３、Ｇ８４、Ｗ８５、Ｓ８６および／またはＡ８７）も示す。
【図４】Ｄ２ドメイン内の部分（Ｄ１／Ｄ２接合部）を含むＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの画像を示し、抗体１Ｃ３および２０Ｅ９が結合を損失した「突然変異体１４」、ならびに抗体による結合の損失を引き起こさなかった「突然変異体１２」および「突然変異体１７」として示される突然変異したアミノ酸残基を示し；陰影において、残基に隣接する残基（突然変異体１４に隣接するＱ２０１、Ｋ２０２、Ｐ２０３、Ｓ２０４、Ｓ２２４、Ｓ２２５、Ｓ２２７、Ｓ２２８、Ｎ２５２、Ｒ２５３および／またはＴ２５４）も示す。
【図５】Ｄ２ドメイン内の部分（Ｄ１／Ｄ２接合部）を含むＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの画像を示し、抗体２０Ｅ９が結合を損失した「突然変異体１５」として示される突然変異したアミノ酸残基を示し；陰影において、残基に隣接する残基（突然変異体１４に隣接するＤ２３０、Ｉ２３１、Ｒ２４４、Ｌ２４５、Ｒ２４６、Ａ２４７、Ｖ２４８、Ｓ２７５、Ｒ２７７および／またはＰ２８０））も示す。
【図６】ＣＤＣを媒介する抗体の能力を示し；Ｄ０ドメインに結合する抗ＫＩＲ３ＤＬ２ｍＡｂは灰色であり、Ｄ１ドメインに結合するものは黒色であり、親ネズミｍＡｂについて、ｍＡｂのアイソタイプがＣＤＣに対して最も顕著な影響を有することを示す。
【図７】結合時のＫＩＲ３ＤＬ２の内在化が、補体動員によりＢ２２１−ＫＩＲ３ＤＬ２を殺滅するｍｏ１９Ｈ１２の能力を完全に停止させる一方、内在化を制限する温度条件において、ｍｏ１９Ｈ１２のＣＤＣ活性が明確に観察されることを示す。
【図８】インビトロでＢ２２１−ＫＩＲ３ＤＬ２に対してＣＤＣを媒介するキメラ抗ＫＩＲ３ＤＬ２ｍＡｂの能力を示す。
【図９】同一の最終濃度（１０μｇ／ｍｌ）において試験された、ＡＤＣＣ媒介機序を通してプロトタイプセザリー細胞系ＨＵＴ７８を殺滅する一連の抗ＫＩＲ３ＤＬ２ｍＡｂの能力を示す。
【図１０】ＫＩＲ３ＤＬ２形質移入Ｂ２２１細胞をＡＤＣＣ媒介殺滅する抗ＫＩＲ３ＤＬ２ｍＡｂの能力を示す。灰色で示されるｍＡｂは、受容体の内在化を誘導し、ＫＩＲ３ＤＬ２内在化を誘導しない４つの他のｍＡｂよりも有効でないと考えられる。
【図１１】用量範囲探索実験における抗体の比較、ＫＩＲ３ＤＬ２発現Ｂ２２１標的に対するＡＤＣＣを媒介するキメラ化ｈｕＩｇＧ１抗ＫＩＲ３ＤＬ２ｍＡｂの能力を示す。
【図１２】３ＩｇＧ２ｂアイソタイプネズミ抗ＫＩＲ３ＤＬ２  ９Ｅ１０および１９Ｈ１２の効力を、ＳＣ  Ｂ２２１−ＫＩＲ３ＤＬ２ゼノグラフトに対して試験した実験の結果を示す（１群当たりｎ＝６匹のＮＯＤ−ＳＣＩＤマウス）。非内在化抗Ｄ０抗体９Ｅ１０は、ＰＢＳおよび内在化抗Ｄ１抗体１９Ｈ１２の両方と比較して増加した生存率を示した。
【図１３】ネズミ抗ＫＩＲ３ＤＬ２  １９Ｈ１２の効力を、ＳＣ  ＲＡＪＩ−ＫＩＲ３ＤＬ２ゼノグラフトに対して試験した別の実験を結果を示す（１群当たりｎ＝６匹のＮＯＤ−ＳＣＩＤマウス）。インビトロで、ＫＩＲ３ＤＬ２形質移入ＲＡＪＩ細胞は、ｍＡｂ結合時にＢ２２１−ＫＩＲ３ＤＬ２またはセザリー細胞系よりも少ない内在化を示した。ＲＡＪＩ−ＫＩＲ３ＤＬ２ゼノグラフトモデルにおいて、ｍｏ１９Ｈ１２ｍＡｂは、Ｂ２２１−ＫＩＲ３ＤＬ２モデルよりも有効であった。このことは、インビボでのそれほど強力でない標的の内在化に起因する。
【図１４】ＫＩＲ３ＤＬ２  Ｄ０ドメイン抗体は、ＨＬＡ−Ａ３およびＢ２７重鎖ダイマー（Ｂ２７２）結合を阻害することを示す。ＫＩＲ３ＤＬ２形質導入Ｂａｆ３細胞へのＨＬＡ−Ａ３およびＢ２７２テトラマー結合に対する抗ＫＩＲ３ＤＬ２  Ｄ０抗体の効果を示す代表的なＦＡＣＳ染色（３つの独立実験の代表的な１つ）。
【図１５】ＫＩＲ３ＤＬ２抗Ｄ１および抗Ｄ２（１Ｃ３抗体）ドメイン抗体は、ＨＬＡ−Ａ３結合を阻害するが、Ｂ２７重鎖ダイマー（Ｂ２７２）結合を阻害しないことを示す。ＫＩＲ３ＤＬ２形質導入Ｂａｆ３細胞へのＨＬＡ−Ａ３およびＢ２７２テトラマー結合に対する抗ＫＩＲ３ＤＬ２  Ｄ１／Ｄ２抗体の効果を示す代表的なＦＡＣＳ染色（３つの独立実験の代表的な１つ）。
【図１６Ａ】ＫＩＲ３ＤＬ２  Ｄ０ドメイン抗体は、ＨＬＡ−Ａ３およびＢ２７重鎖ダイマーテトラマー結合を阻害することを示す。
【図１６Ｂ】抗Ｄ２（１Ｃ３）ドメインｍＡｂはＨＬＡ−Ａ３テトラマー結合を阻害するが、Ｂ２７重鎖ダイマー（Ｂ２７２）結合を阻害しない。結果をアイソタイプ対照ＭＡｂの存在下でのテトラマー染色の％として表現する。
【図１７】ＫＩＲ３ＤＬ２  Ｄ０ドメイン抗体は、ＨＬＡ−Ｂ２７発現Ｂ細胞系（２２１Ｂ２７）により刺激されたＫＩＲ３ＤＬ２  ＣＤ３ｅレポーター細胞によるＩＬ−２分泌を阻害することを示すが、Ｄ１／Ｄ２ドメイン抗体は示さない。Ｄ０抗体は、対照ＨＬＡクラス１を発現するＢ細胞系により刺激されたレポーター細胞によるＩＬ−２産生を、ＨＬＡ−Ｂ２７により刺激された細胞と比較して小さい程度で阻害する。３つの独立実験の１つからのＩＬ−２産生についての代表的なＥＬＩＳＡ。
【図１８】Ｄ０ドメイン内の置換Ｉ６０ＮおよびＧ６２Ｓを有する突然変異体２に対応する抗体結合部位（例えば、抗体２Ｂ１２、１０Ｆ６、１８Ｃ１０、１０Ｇ５および１３Ｈ１についての結合部位）を含むＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドアレル＊００１の画像を示す。図中、ＫＩＲ３ＤＬ２アレル＊００１と、アレル＊００２、＊００４、＊００６／＊００７、＊００８および＊００９との間のアミノ酸差異も示す。
【図１９】Ｄ０ドメイン内の置換Ｉ６０ＮおよびＧ６２Ｓを有する突然変異体２に対応する抗体結合部位を含むＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドアレル＊００１の代替画像を示す。図中、ＫＩＲ３ＤＬ２アレル＊００１と、アレル＊００５および＊００３／＊０１１との間のアミノ酸差異も示す。
【図２０】Ｄ０ドメイン内の置換Ｉ６０ＮおよびＧ６２Ｓを有する突然変異体２に対応する抗体結合部位を含むＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドアレル＊００１の２つの代替（前方および後方）画像を示す。図中、ＫＩＲ３ＤＬ２アレル＊００１と、アレル＊００４との間のアミノ酸差異も示す。
【発明を実施するための形態】
【００７７】
導入
本開示の抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞、特にＣＤ４＋、ＫＩＲ３ＤＬ２＋Ｔ細胞を、他の細胞、例えばＫＩＲ３ＤＬ１＋細胞（またはＫＩＲ３ＤＬ２＋ＫＩＲ３ＤＬ１＋細胞、ＫＩＲ３ＤＳ１＋細胞；またはＫＩＲ３ＤＳ１  ＫＩＲ３ＤＬ２＋細胞）を標的化せずに直接および特異的に標的化し得、ＫＩＲ３ＤＬ２＋細胞中に内在化しない。ＫＩＲ３ＤＬ２の天然リガンドの結合（またはリガンド誘導ＫＩＲ３ＤＬ２シグナリング）を阻害し、または阻害しない抗体も提供される。本開示は、そのような特性を有し、配列番号１の成熟ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドのアミノ酸残基１〜９８および残基１９３〜２９２によりそれぞれ定義されるドメイン０および２を含むＫＩＲ３ＤＬ２＋の領域への結合について互いに競合する多数の抗体を提供する。
【００７８】
ＫＩＲ３ＤＬ２（ＣＤ１５８ｋ）は、開示が参照により本明細書に組み込まれるＰｅｎｄｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４：５０５−５１８に記載される、約１４０ｋＤの３Ｉｇドメイン分子のジスルフィド結合ホモダイマーである。ＫＩＲ３ＤＬ１（ＣＤ１５８ｅ１）は、Ｃｏｌｏｎｎａ  ａｎｄ  Ｓａｍａｒｉｄｉｓ（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６８（５２０９），４０５−４０８に記載される、約７０ｋＤのモノマー分子であり；ＨＬＡ結合ポケットは、Ｖｉｖｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ  ４７９：４０１−４０５に記載されている。ＫＩＲ３ＤＬ２の天然リガンドとしては、とりわけ、ＨＬＡ−ＡおよびＨＬＡ−Ｂポリペプチド、特にＨＬＡ−Ａ３およびＨＬＡ−Ａ１１（Ｈａｎｓａｓｕｔａ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３４：１６７３−１６７９参照ならびにＨＬＡ−Ｂ２７が挙げられる。ＨＬＡ−Ｂ２７（例えば、ＨＬＡ−Ｂ２７遺伝子の組織化、配列および発現については、Ｗｅｉｓｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ  １７０（５）：３６７−３８０参照、ならびにＨＬＡ−Ｂ２７マルチマーおよびＨＬＡ−Ｂ２７２ホモダイマーについては、Ａｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：５０４５−５０４８およびＫｏｌｌｎｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ（２００７）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３７：１３１３−１３２２参照。上記参照文献の全ての開示は、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書において使用される「ＫＩＲ３Ｄ」は、個々にまたは集合的に任意のＫＩＲ３Ｄ受容体（例えば、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ３ＤＳ１）を指し、用語「ＫＩＲ３Ｄ」は、用語「ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２および／またはＫＩＲ３ＤＳ１」により代用することができる。同様に、「ＫＩＲ３ＤＬ」は、個々にまたは集合的に任意のＫＩＲ３ＤＬ受容体（例えば、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２）を指し、用語「ＫＩＲ３ＤＬ」は、用語「ＫＩＲ３ＤＬ１および／またはＫＩＲ３ＤＬ２」により代用することができる。用語「ＫＩＲ３Ｄ」、「ＫＩＲ３ＤＬ」、「ＫＩＲ３ＤＬ１」、「ＫＩＲ３ＤＬ２」、「ＫＩＲ３ＤＳ１」は、それぞれ、それらが指すＫＩＲ３Ｄ遺伝子またはコードされるタンパク質の任意のバリアント、誘導体、またはアイソフォームをさらに含む。いくつかのアレルバリアントが、ＫＩＲ３Ｄポリペプチド（例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２）について報告されており、それらのそれぞれはそれぞれの用語により包含される。成熟ヒトＫＩＲ３ＤＬ２（アレル＊００２）のアミノ酸配列は、配列番号１に示され、２１アミノ酸残基リーダー配列が省略されたＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＡＢ５２５２０に対応し、ＩＰＤ  ＫＩＲデータベース（ＥＭＢＬ−ＥＢＩ，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍにより公開）アクセッション番号ＫＩＲ０００６６に対応する。ＫＩＲ３ＤＬ２（アレル＊００２）のｃＤＮＡは、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｕ３０２７２に示される。ヒトＫＩＲ３ＤＬ２アレル＊００２の前駆体アミノ酸配列（リーダー配列を含む）は、配列番号１５９に示され、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＡＢ５２５２０に対応する。ヒトＫＩＲ３ＤＬ２アレル＊００１のアミノ酸配列は、配列番号１６０に示され、ＩＰＤ  ＫＩＲデータベースアクセッション番号ＫＩＲ０００６５に対応する。ヒトＫＩＲ３ＤＬ２アレル＊００３のアミノ酸配列は、配列番号１６１に示され、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＡＢ３６５９３およびＩＰＤ  ＫＩＲデータベースアクセッション番号ＫＩＲ０００６７に対応する。ヒトＫＩＲ３ＤＬ２アレル＊００４のアミノ酸配列は、配列番号１６２に示され、ＩＰＤ  ＫＩＲデータベースアクセッション番号ＫＩＲ０００６８に対応する。ヒトＫＩＲ３ＤＬ２アレル＊００５のアミノ酸配列は、配列番号１６３に示され、ＩＰＤ  ＫＩＲデータベースアクセッション番号ＫＩＲ０００６９に対応する。ヒトＫＩＲ３ＤＬ２アレル＊００６（成熟）のアミノ酸配列は、配列番号１６４に示され、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＡＫ３００５３およびＩＰＤ  ＫＩＲデータベースアクセッション番号ＫＩＲ０００７０に対応する。ヒトＫＩＲ３ＤＬ２アレル＊００７（成熟）のアミノ酸配列は、配列番号１６５に示され、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＡＫ３００５２およびＩＰＤ  ＫＩＲデータベースアクセッション番号ＫＩＲ０００７１に対応する。ヒトＫＩＲ３ＤＬ２アレル＊００８のアミノ酸配列は、配列番号１６６に示され、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＡＫ３００５４およびＩＰＤ  ＫＩＲデータベースアクセッション番号ＫＩＲ０００７２に対応する。ヒトＫＩＲ３ＤＬ２アレル＊００９のアミノ酸配列は、配列番号１６７に示され、ＩＰＤ  ＫＩＲデータベースアクセッション番号ＫＩＲ００４５７に対応する。ヒトＫＩＲ３ＤＬ２アレル＊０１１のアミノ酸配列は、配列番号１６８に示され、ＩＰＤ  ＫＩＲデータベースアクセッション番号ＫＩＲ００５４４に対応する。ＫＩＲ３ＤＬ１（ＣＤ１５８ｅ２）ポリペプチド（アレル＊００１０１）をコードするｃＤＮＡは、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｌ４１２６９に示され；コードされるアミノ酸配列は、配列番号１６９に示され、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＡＡ６９８７０に対応する。リーダー配列が、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド配列を記載する特定の配列番号（例えば、配列番号１および１５９〜１６８）中に存在する場合、本明細書のアミノ酸残基位置への任意の参照は、成熟ＫＩＲ３ＤＬポリペプチドに対するものである。
【００７９】
抗原結合化合物を使用する方法；例えば、細胞増殖または活性を阻害する方法、分子を細胞中に（例えば、毒性分子、検出可能マーカーなど）送達する方法、細胞を標的化、同定または精製する方法、細胞を枯渇させ、殺滅し、または排除する方法、細胞増殖を低減させる方法であって、細胞、例えば、ＫＩＲ３ＤＬポリペプチドを発現するＴ細胞を、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する本開示の抗原結合化合物に曝露することを含む方法が提供される。本開示の目的のため、「細胞増殖」は、細胞の成長または増殖の任意の態様、例えば、細胞成長、細胞分裂、または細胞周期の任意の局面を指し得ることが認識される。細胞は、細胞培養物（インビトロ）または哺乳動物（インビボ）、例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２発現病変を罹患する哺乳動物中に存在し得る。ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを発現する細胞の死滅を誘導し、またはその細胞の増殖もしくは活性を阻害する方法であって、細胞を、細胞の死滅を誘導し、および／または細胞の増殖を阻害するために有効な量の毒性剤に結合しているＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する抗原結合化合物に曝露させることを含む方法も提供される。したがって、増殖疾患、およびＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを発現する細胞の病原性増殖または活性化により特徴づけられる任意の病態を罹患する哺乳動物を治療する方法であって、医薬有効量の本明細書に開示の抗原結合化合物を哺乳動物に投与することを含む方法が提供される。そのような病態の例としては、セザリー症候群、菌状息肉症、ＣＴＣＬ、および自己免疫または炎症病態、例えば関節炎、心血管疾患が挙げられる。好ましくは、そのような病原増殖細胞は、ＫＩＲ３ＤＬ２を発現するが、ＫＩＲ３ＤＬ１を顕著に発現せず（例えば、病原性細胞の２０％、４０％、５０％または６０％以下がＫＩＲ３ＤＬ１を発現する、それらの病態は特に選択的抗体から利益を受ける。
【００８０】
いくつかのＫＩＲ３ＤＬ２発現障害、特にＴおよびＮＫ細胞媒介障害を、本開示の方法および組成物を使用して治療または診断することができる。障害は、例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞悪性腫瘍、例えば、ＣＴＣＬ、ＭＦもしくはＳＳ、またはＴ細胞および／もしくはＮＫ細胞の活性および／もしくは増殖の排除もしくは阻害が有用である自己免疫もしくは炎症障害であり得る。ＣＤ４＋Ｔ細胞としては、例えば、活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞、Ｔｈ１７Ｔ細胞、１つ以上の他のマーカーを発現し、または発現しないＣＤ４＋Ｔ細胞（例えば、ＣＤ２＋、ＣＤ３＋、ＣＤ５＋、ＣＤ８−、ＣＤ２８＋、ＣＤ２８−、ＣＤ４５ＲＯ＋およびＴＣＲαβ＋）が挙げられる。ＣＤ４＋ＣＤ２８−Ｔ細胞は、例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２を発現し得、一部の自己免疫および炎症障害において高頻度のクローナル増殖細胞中に存在するが、健常個体においては希少であることが公知である。これらのＴ細胞は、細胞毒性であり、大量のＩＦＮ−ガンマを分泌し、自己接着単核細胞による刺激時に増殖し得る。
【００８１】
本開示の抗体は、異なるＫＩＲ３ＤＬ２アレルにわたり結合する利点を有し、疾患を治療、特徴決定および診断するための広範な使用を可能とする。皮膚および循環ＭＦ／ＳＳ細胞は、試験された９つのＫＩＲ３ＤＬ２アレルの中の優位のアレルを発現しないことが報告されている。１３のアレルも今日まで記載されている。ｐ１４０−ＫＩＲ３ＤＬ２受容体が健常者においてはＮＫ細胞のマイナーサブセット上で、および希にＣＤ８＋Ｔ細胞上で発現される一方、ＭＦ／ＳＳ患者においてはＣＴＣＬ腫瘍ＣＤ４＋Ｔ細胞に限定されると考えられる。通常、ＮＫ細胞の表面において観察される他の受容体（例えば、ｐ５８．１、ｐ５８．２、ｐ７０ＫＩＲ、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ）は、悪性腫瘍ＣＤ４＋Ｔ細胞の表面において見出されない（Ｂａｈｌｅｒ  Ｄ．Ｗ．ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｂ  Ｃｌｉｎ  Ｃｙｔｏｍ．７４（３）：１５６−６２）。ＳＳ細胞は、典型的には、ＣＤ４＋に加え、成熟Ｔリンパ球表現型ＣＤ２＋、ＣＤ３＋、ＣＤ５＋、ＣＤ８−、ＣＤ２８＋、ＣＤ４５ＲＯ＋およびＴＣＲαβ＋を有することによっても特徴づけられる。
【００８２】
本開示の方法および組成物は、ＫＩＲ３ＤＬ２発現により特徴づけられる自己免疫および炎症病態の治療において、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞を排除することにより、および／または生物学的活性ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞を阻害することにより（すなわち、天然リガンドにより誘導されるＫＩＲ３ＤＬ２シグナリングを遮断することにより）使用することができる。生物学的活性ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の阻害は、例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の増殖を減少させること、標的細胞に対するＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の反応性もしくは細胞毒性を減少させること、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞による活性化、活性化マーカー（例えば、ＣＤ１０７発現）および／もしくはサイトカイン産生（例えば、ＩＦＮγ産生）を減少させること、ならびに／またはそのような活性化、反応性、細胞毒性および／もしくは活性化ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞のインビボ頻度を減少させることを含み得る。
【００８３】
例えば、いくつかのそのような障害は、少なくとも部分的にＣＤ４＋Ｔ細胞、例として、特定のＣＤ４＋ＣＤ２８ｎｕｌｌＴ細胞により媒介されることが示されている。ＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化は、一般に、刺激シグナルの優占性が自己免疫反応を助長する刺激受容体と阻害受容体との間の相互作用により影響を受けると考えられる。Ｃｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．（（２００５）Ａｒｔｈｒｉｔ．Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  ５２（１１）：３５８６−３５９５は、脊椎関節炎において増加数の末梢血および滑液ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞がＫＩＲ３ＤＬ２を発現することを報告している。関節リウマチを有する患者において、重要な共刺激分子ＣＤ２８の発現は高頻度で損失される。代わりに、ＣＤ２８を欠くＣＤ４＋Ｔ細胞集団（ＣＤ４＋ＣＤ２８−Ｔ細胞）は、キラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）を発現する。ＣＤ４＋ＣＤ２８ｎｕｌｌＴ細胞は特に、ＫＩＲ３Ｄポリペプチドを発現することが報告されている。ＣＤ４＋ＣＤ２８−細胞は、それらのＣＤ２８＋相当物と比較すると、それらに炎症促進細胞として機能する能力に与える有意に高いレベルのＩＦＮ−γを産生する。ＣＤ４＋ＣＤ２８ｎｕｌｌＴ細胞クローンは、循環中で数年間存続する。これらのＴ細胞は、ＣＤ３の架橋時のＦａｓ媒介アポトーシスに耐性である点でＣＤ２８＋Ｔ細胞と異なることが公知である。ＣＤ２８ｎｕｌｌＴ細胞は、細胞周期を通して進行し、細胞周期の全ての段階における細胞は、それらのＣＤ２８＋相当物と異なりアポトーシスに耐性である。ＣＤ４＋ＣＤ２８ｎｕｌｌＴ細胞におけるアポトーシス経路の調節不全は、インビボでそれらのクローン生成および維持を助長することが示されている。Ｎａｍｅｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．（（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：１１３８−１１４５は、ＫＩＲ、例としてＫＩＲ３ＤＬ２が、関節リウマチにおいて増殖したＣＤ４＋ＣＤ２８ｎｕｌｌＴ細胞上で存在したことを報告している。関節リウマチは、線維芽細胞様滑膜細胞およびマクロファージの侵襲性増殖から生じるリンパ球浸潤物、炎症メディエーター、および滑膜過形成を伴う。骨びらんの予後および疾患重症度は、高頻度のクローナル増殖ＣＤ４＋ＣＤ２８−Ｔ細胞と相関する。Ｌａｍｐｒｅｃｈｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｔｈｏｒａｘ  ５６：７５１−７５７は、ウェグナー肉芽腫症におけるＣＤ４＋ＣＤ２８−Ｔ細胞の動員を報告している。Ｍａｒｋｏｖｉｃ−Ｐｌｅｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．１０８：１１８５−１１９４は、ＣＮＳ中のＣＤ４＋ＣＤ２８−共刺激非依存性Ｔ細胞の存在、およびそれらの多発性硬化症との関連を報告している。したがって、本方法および組成物は、ウェグナー肉芽腫症、多発性硬化症または他の中枢神経系炎症もしくは自己免疫障害、関節炎、または炎症により特徴づけられる他のリウマチ障害の治療または予防において使用することができる。
【００８４】
ＣＤ４＋ＣＤ２８−Ｔ細胞は、心血管障害とも関連している。Ｂｅｔｊｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ７４，７６０−７６７は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）血清陽性の患者におけるアテローム性動脈硬化疾患についての増加リスクが、個体における循環ＣＤ４Ｔ細胞の過半数を占め得るＣＤ４＋ＣＤ２８−Ｔ細胞の年齢依存性増加と関連することを報告している。５０歳を超える患者は、ＣＭＶ血清陰性患者と比較して５０倍高い割合および血清陽性健常対照と比較して５倍高い割合のＣＤ４＋ＣＤ２８−Ｔ細胞を有することが報告された。Ｎａｋａｊｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．（（２００３）Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．９３：１０６−１１３）は、急性冠症候群におけるＫＩＲのデノボ発現を報告しており、急性冠症候群（ＡＣＳ）を有する患者からのＣＤ４＋Ｔ細胞は、複数のＫＩＲを発現する一方、健常ドナーからの正常ＣＤ４＋ＣＤ２８ｎｕｌｌＴ細胞は、ＫＩＲを発現しない。Ｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖｏｌｕｍｅ  １９３，Ｎｕｍｂｅｒ  １０，Ｍａｙ  ２１，２００１  １１５９−１１６８は、リウマチ性血管炎を有する患者から樹立されたＣＤ４＋ＣＤ２８ｎｕｌｌＴ細胞クローンを、阻害および刺激ＫＩＲの発現についてＲＴ−ＰＣＲにより研究した。関節リウマチを有する患者およびＡＣＳを有する患者において、発現パターンは阻害ＫＩＲ、例としてＫＩＲ３ＤＬ２を助長した一方、刺激受容体の発現はＫＩＲ２ＤＳ２に高度に制限された。したがって、本方法および組成物は、炎症により特徴づけられる心血管障害、例えば、ＡＣＳ、アテローム性動脈硬化疾患、リウマチ性血管炎の治療または予防において使用することができる。
【００８５】
Ｂｏｗｎｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ（２０１１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８６：２６７２−２６８０は、ＫＩＲ３ＤＬ２＋ＣＤ４Ｔ細胞が、末梢血ＣＤ４Ｔ細胞によるＩＬ−２３Ｒ発現の大多数を占めること、およびＴｈ１７型のそのようなＫＩＲ３ＤＬ２＋細胞は、ＩＬ−２３の存在下でより多くのＩＬ−１７を産生することを報告している。ＳｐＡ患者の末梢血中に平均１５％にすぎないＣＤ４Ｔを含むＫＩＲ３ＤＬ２＋細胞にかかわらず、このサブセットは、対照対象と比較してＳｐＡ患者において観察されたＴｈ１７数の増加の７０％を占めた。ＳｐＡ患者からのＴＣＲ刺激末梢血ＫＩＲ３ＤＬ２＋ＣＤ４Ｔ細胞系は、対照からのＫＩＲ３ＤＬ２＋系またはＫＩＲ３ＤＬ２−ＣＤ４Ｔ細胞よりも４倍多いＩＬ−１７を分泌した。
【００８６】
ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の排除が有用である障害（例えば、癌、炎症および自己免疫障害）の治療に好適な抗体および他の化合物を産生および使用する方法が提供される。抗体、抗体誘導体、抗体断片、およびそれらを産生する細胞は、それを産生する方法ならびに抗体および化合物を使用して患者を治療する方法と同様に包含される。
【００８７】
本抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２に特異的であるため、それらは、一連の目的、例として、ＫＩＲ３ＤＬ２またはＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の精製、ＫＩＲ３ＤＬ２受容体のインビトロ、エクスビボもしくはインビボでのモジュレーション（例えば、活性化または阻害）、インビボでの破壊のためのＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の標的化、またはＫＩＲ３ＤＬ２のインビボ、エクスビボもしくはインビトロでの特異的標識／結合に、例として、イムノブロッティング、ＩＨＣ分析、すなわち、凍結生検物に対する分析、ＦＡＣＳ分析および免疫沈降のような方法に使用することができる。
【００８８】
定義
本明細書において使用される「ａ」または「ａｎ」は、１つ以上を意味し得る。特許請求の範囲において使用され、語「含む」とともに使用される場合、語「ａ」または「ａｎ」は、１つまたは２つ以上を意味し得る。本明細書において使用される「別の」は、少なくとも第２以上を意味し得る。
【００８９】
「含む」が使用される場合、これは、好ましくは、「〜から本質的になる」、より好ましくは、「〜からなる」により置き換えることができる。
【００９０】
「増殖疾患の治療」または「腫瘍の治療」、または「癌の治療」などは、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤（例えば、抗体）に関して挙げられる場合、それらは、（ａ）増殖疾患を治療する方法であって、（例えば、薬学的に許容可能な担体材料中の）抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を、そのような治療が必要とされる温血動物、特にヒトに、前記疾患の治療を可能とする用量（治療有効量）で、例えば、上記および下記で規定される用量（量）で（少なくとも１つの治療のために）投与するステップを含む方法；（ｂ）増殖疾患の治療のための、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤の使用、または前記治療（特にヒト）において使用される抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤；（ｃ）増殖疾患の治療のための医薬調製物の製造のための、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤の使用、増殖疾患の治療のための医薬調製物の製造のために抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を使用する方法であって、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を薬学的に許容可能な担体と混合することを含む方法、もしくは増殖疾患の治療に適切な有効用量の抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を含む医薬調製物；または（ｄ）ａ）、ｂ）、およびｃ）の任意の組合せを含むが、これらに限定されず、本出願が出願される国において特許化の許容可能な主題に従う。特定の疾患（例えば、炎症または自己免疫疾患）または規定の腫瘍（例えば、ＣＴＣＬ）が「増殖疾患」に代えて挙げられる場合にもカテゴリーａ）〜ｅ）が包含され、それぞれの疾患を特許主題に従って「増殖疾患」に代えて上記ａ）〜ｅ）に埋めることができることを意味する。
【００９１】
本明細書において使用される用語「癌」および「腫瘍」は、制御不能および進行性の増殖を含む細胞または組織の新たな成長と定義される。具体的な実施形態において、自然経過時に癌は致命的である。具体的な実施形態において、癌は侵襲性、転移性、および／または未分化（分化ならびに互いおよびそれらの軸のフレームワークへの配向の損失）である。
【００９２】
「自己免疫」障害としては、自己を非自己またはその他から区別する能力の破壊に起因して免疫系が自己細胞または組織に対する反応を開始する任意の障害、病態、または疾患が挙げられる。自己免疫障害の例としては、関節リウマチ、リウマチ性血管炎、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、ウェゲナー肉芽腫症、脊椎関節炎などが挙げられる。「炎症障害」としては、不所望な免疫応答により特徴づけられる任意の障害が挙げられる。自己免疫および炎症障害は、免疫系の任意の構成要素が関与し得、体内の任意の細胞または組織型を標的化し得る。
【００９３】
本明細書において使用される用語「生検」は、試験の目的のため、例えば、診断を確定するための臓器（例えば、関節）からの組織の取出と定義される。生検のタイプの例としては、吸引の適用によるもの、例えば、シリンジに取り付けられた針を介するもの；組織の断片の装置による取出によるもの；内視鏡を介する適切な装置による取出によるもの；例えば、病巣全体の外科的切除によるもの；などが挙げられる。
【００９４】
本明細書において使用される用語「抗体」は、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体を指す。重鎖中の定常ドメインのタイプに応じて、抗体は、５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭの１つに割り当てられる。これらのいくつかは、サブクラスまたはアイソタイプ、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４などにさらに分類される。例示的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、テトラマーを含む。それぞれのテトラマーは、２つの同一のポリペプチド鎖ペアから構成され、それぞれのペアは、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。それぞれの鎖のＮ末端は、主として抗原認識を担う約１００〜１１０以上のアミノ酸からなる可変領域を定義する。可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）という用語はそれぞれ、これらの軽鎖および重鎖を指す。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインはそれぞれ、「アルファ」、「デルタ」、「イプシロン」、「ガンマ」および「ミュー」と称される。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元立体配置は周知である。ＩｇＧおよび／またはＩｇＭは、それらが生理学的状況における最も一般的な抗体であるため、およびそれらが研究室の環境において最も容易に作製されるため、本明細書において用いられる好ましいクラスの抗体であり、ＩｇＧが特に好ましい。好ましくは、抗体は、モノクローナル抗体である。ヒト化、キメラ、ヒト、またはそれ以外ではヒトに好適な抗体が特に好ましい。「抗体」として、本明細書に記載の抗体のいずれかの任意の断片または誘導体も挙げられる。
【００９５】
用語「に特異的に結合する」は、抗体が、好ましくは、競合結合アッセイにおいて、タンパク質の組換え形態、その中のエピトープ、または単離標的細胞の表面上に存在する天然タンパク質のいずれかを使用して評価される場合、結合パートナー、例えばＫＩＲ３ＤＬ２に結合し得ることを意味する。競合結合アッセイおよび特異的結合を決定する他の方法は、下記にさらに記載され、当技術分野において周知である。
【００９６】
抗体が特定のモノクローナル抗体（例えば、１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９）「と競合する」と言われる場合、それは、抗体が、組換えＫＩＲ３ＤＬ２分子または表面発現ＫＩＲ３ＤＬ２分子のいずれかを使用する結合アッセイにおいてモノクローナル抗体と競合することを意味する。例えば、試験抗体が結合アッセイにおいてＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドまたはＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞への１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９の結合を低減させる場合、抗体は、１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９とそれぞれ「競合する」と言われる。
【００９７】
本明細書において使用される用語「親和性」は、抗体のエピトープへの結合強度を意味する。抗体の親和性は、［Ａｂ］×［Ａｇ］／［Ａｂ−Ａｇ］（式中、［Ａｂ−Ａｇ］は抗体−抗原複合体のモル濃度であり、［Ａｂ］は未結合抗体のモル濃度であり、［Ａｇ］は未結合抗原のモル濃度である）として定義される解離定数Ｋｄにより与えられる。親和性定数Ｋａは、１／Ｋｄにより定義される。ｍＡｂの親和性を測定する方法の例は、Ｈａｒｌｏｗ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８８）、Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，（１９９２、１９９３）、およびＭｕｌｌｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．９２：５８９−６０１（１９８３）に見出すことができ、その参照文献は参照により全体として本明細書に組み込まれる。ｍＡｂの親和性を測定する当技術分野において周知の１つの好ましい標準的方法は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）スクリーニング（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）ＳＰＲ分析装置による分析によるもの）の使用である。
【００９８】
本明細書で使用されるように、「決定基」は、ポリペプチド上での相互作用または結合の部位を指定する。
【００９９】
用語「エピトープ」は、抗原決定基を指し、抗体が結合する抗原上の区域または領域である。タンパク質エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基、および特異的抗原結合抗体またはペプチドにより有効に遮断されるアミノ酸残基、すなわち抗体の「フットプリント」内のアミノ酸残基を含み得る。それは、例えば、抗体または受容体と結合し得る複合抗原分子上の最も単純な形態または最小の構造領域である。エピトープは、直鎖または立体構造的／構造的であり得る。用語「直鎖エピトープ」は、アミノ酸の直鎖配列（一次構造）上で連続するアミノ酸残基から構成されるエピトープとして定義される。用語「立体構造的または構造的エピトープ」は、全てが連続しておらず、したがって、分子のフォールディング（二次、三次および／または四次構造）により互いに近接されるアミノ酸の直鎖配列の分離部分を表すアミノ酸残基から構成されるエピトープとして定義される。立体構造的エピトープは、三次元構造に依存する。したがって、用語「立体構造的」は、「構造的」と交換可能に使用されることが多い。
【０１００】
用語「細胞内内在化」、または「内在化」は、そのように結合するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドおよび／または抗体を指す場合、細胞の細胞外表面から細胞の細胞内表面に分子をトランスロケートするプロセスと関連する分子、生化学物質および細胞イベントを指す。分子の細胞内内在化を担うプロセスは周知であり、とりわけ、細胞外分子（例えば、ホルモン、抗体、および有機小分子）；膜会合分子（例えば、細胞表面受容体）；および細胞外分子に結合している膜会合分子の複合体（例えば、膜貫通受容体に結合しているリガンドまたは膜会合分子に結合している抗体）の内在化を含み得る。したがって、「細胞内内在化を誘導し、および／または増加させる」は、細胞内内在化を開始させ、ならびに／または細胞内内在化の速度および／もしくは程度を増加させるイベントを含む。
【０１０１】
ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞に関する用語「枯渇」は、殺滅し、排除し、溶解させ、またはそのような殺滅、排除もしくは溶解を誘導して試料中または対象中に存在するＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の数を減らすように影響し得るプロセス、方法、または化合物を意味する。
【０１０２】
用語「薬剤」は、本明細書において、化合物、化合物の混合物、生物学的巨大分子、または生物学的材料から作製された抽出物を示すために使用される。用語「治療剤」は、生物学的活性を有する薬剤を指す。
【０１０３】
用語「毒性剤」および「細胞毒性剤」は、細胞の増殖を遅延、停止、もしくは反転させ、細胞の活性を任意の検出可能な手法で減少させ、または細胞を直接もしくは間接的に殺滅し得る任意の化合物を包含する。好ましくは、細胞毒性剤は、主として細胞の機能を直接干渉することにより細胞死を引き起こし、それとしては、限定されるものではないが、アルキル化剤、腫瘍壊死因子阻害剤、インターカレーター、微小管阻害剤、キナーゼ阻害剤、プロテアソーム阻害剤およびトポイソメラーゼ阻害剤が挙げられる。本明細書において使用される「毒性ペイロード」は、細胞に送達された場合に細胞死をもたらす十分量の毒性剤を指す。毒性ペイロードの送達は、抗体または抗原結合断片および毒性剤を含む十分量のイムノコンジュゲートの投与により達成することができる。毒性ペイロードの送達は、抗体または抗原結合断片を認識し、それに結合する二次抗体またはその抗原結合断片を含む細胞毒性剤を含む十分量のイムノコンジュゲートの投与により達成することもできる。
【０１０４】
本明細書の目的のため、「ヒト化」または「ヒト」抗体は、１つ以上のヒト免疫グロブリンの定常および可変フレームワーク領域が、動物免疫グロブリンの結合領域、例えばＣＤＲと融合している抗体を指す。そのような抗体は、結合領域が由来する非ヒト抗体の結合特異性を維持するが、非ヒト抗体に対する免疫反応を回避するように設計される。そのような抗体は、結合領域が由来する非ヒト抗体の結合特異性を維持するが、非ヒト抗体に対する免疫反応を回避するように設計される。そのような抗体は、抗原チャレンジに応答して特異的ヒト抗体を産生するように「遺伝子操作」されたトランスジェニックマウスまたは他の動物から得ることができる（例えば、Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ  ７：１３；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６；Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎ  ６：５７９参照、それらの全教示は、参照により本明細書に組み込まれる）。完全ヒト抗体は、遺伝子または染色体形質移入（ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ  ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）法、およびファージディスプレイ技術により構築することもでき、それらは全て当技術分野において公知である（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３参照）。ヒト抗体は、インビトロで活性化されたＢ細胞により生成することもできる（例えば、米国特許第５，５６７，６１０号明細書および米国特許第５，２２９，２７５号明細書参照、それらは全て、参照により全体として組み込まれる）。
【０１０５】
「キメラ抗体」は、（ａ）抗原結合部位（可変領域）が異なるもしくは変化されたクラス、エフェクター機能および／もしくは種の定常領域、もしくはキメラ抗体に新しい特性を付与する完全に異なる分子、例えば、酵素、毒素、ホルモン、成長因子、薬剤などに結合するように定常領域もしくはその一部が変化、置換、もしくは交換されている抗体分子；または（ｂ）可変領域、もしくはその一部が可変領域が異なるもしくは変化された抗原特異性を有する可変領域により変化、置換、もしくは交換されている抗体分子である。
【０１０６】
用語「Ｆｃドメイン」、「Ｆｃ部分」および「Ｆｃ領域」は、抗体重鎖、例えば、約アミノ酸（ａａ）２３０〜約ａａ４５０のヒトγ（ガンマ）重鎖、または他のタイプの抗体重鎖（例えば、ヒト抗体についてのα、δ、εおよびμ）におけるその相当配列、またはその天然アロタイプのＣ末端断片を指す。特に記載のない限り、免疫グロブリンについての一般に認められたＫａｂａｔアミノ酸番号付与が、本開示全体に使用される（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  ｅｄ．，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ参照）。
【０１０７】
用語「抗体依存性細胞媒介細胞毒性」または「ＡＤＣＣ」は、当技術分野において十分理解されている用語であり、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞毒性細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介反応を指す。ＡＤＣＣを媒介する非特異的細胞毒性細胞としては、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、単球、好中球、および好酸球が挙げられる。
【０１０８】
用語「単離された」、「精製された」または「生物学的に純粋な」は、通常、天然状態で見出される場合に材料に付随する成分を実質的または本質的に有さない材料を指す。純度および等質性は、典型的には、分析化学技術、例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィーを使用して決定される。調製物中に存在する優勢種であるタンパク質は、実質的に精製される。
【０１０９】
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを指すために本明細書において交換可能に使用される。この用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然アミノ酸の人工的な化学的模倣体である場合のアミノ酸ポリマー、ならびに天然アミノ酸ポリマーおよび非天然アミノ酸ポリマーに適用される。
【０１１０】
用語「組換え体」は、例えば、細胞、または核酸、タンパク質、またはベクターに関して使用される場合、細胞、核酸、タンパク質またはベクターが、異種核酸もしくはタンパク質の導入もしくは天然核酸もしくはタンパク質の変化により改変されていること、または細胞がそのように改変された細胞に由来することを示す。したがって、例えば、組換え細胞は、天然（非組換え）形態の細胞内で見出されない遺伝子を発現し、または発現され、もしくは全く発現されない下で他で異常発現される天然遺伝子を発現する。
【０１１１】
用語「改変」は、アミノ酸の配列を指す場合（例えば、「アミノ酸改変」）、ポリペプチド配列中のアミノ酸置換、挿入、および／または欠失を意味する。「改変」または「アミノ酸改変」は、ポリペプチド配列中のアミノ酸置換、挿入、および／または欠失を意味する。本明細書の「アミノ酸置換」または「置換」は、タンパク質配列中の所与の位置におけるアミノ酸の、別のアミノ酸による置き換えを意味する。例えば、置換Ｐ１４Ｓは、１４位におけるプロリンがセリンにより置き換えられている親ポリペプチドのバリアントを指す。ポリペプチドの「バリアント」は、参照ポリペプチド、典型的には、天然または「親」ポリペプチドと実質的に同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを指す。ポリペプチドバリアントは、天然アミノ酸配列内のある位置における１つ以上のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し得る。
【０１１２】
本明細書において使用される「Ｔ細胞」は、胸腺中で成熟し、数ある分子のうち、Ｔ細胞受容体を表面上でディスプレイするリンパ球の下位集団を指す。Ｔ細胞は、ある特徴および生物学的特性、例えば、特異的表面抗原、例として、ＴＣＲ、ＣＤ４またはＣＤ８、任意にＣＤ４およびＩＬ−２３Ｒの発現、腫瘍または感染細胞の殺傷するあるＴ細胞の能力、免疫系の他の細胞を活性化させるあるＴ細胞の能力、および免疫応答を刺激または阻害するサイトカインと呼ばれるタンパク質分子を放出する能力により同定することができる。これらの特徴および活性のいずれかを使用し、当技術分野において周知の方法を使用してＴ細胞を同定することができる。本明細書で使用されるように、「活性」または「活性化」Ｔ細胞は、生物学的に活性なＴ細胞、より特定すると、細胞溶解または例えば、サイトカインの分泌による免疫応答を刺激する能力を有するＴ細胞を指定する。活性細胞は、多数の周知の方法のいずれか、例として、機能アッセイおよび発現ベースアッセイ、例えば、ＴＮＦ−アルファまたはＩＬ−１７Ａサイトカインの発現において検出することができる。
【０１１３】
本明細書において使用される、ポリペプチドまたはエピトープに「結合する」抗体という用語は、特異性および／または親和性を示して前記決定基に結合する抗体を示す。
【０１１４】
抗体およびエピトープ
開示される抗体は、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２に結合する抗体である。一実施形態において、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２（例えば、１、２、３、４つ以上の最優占ＫＩＲ３ＤＬ２アレル）に選択的に結合するが、ＫＩＲ３ＤＬ１（例えば、１、２、３、４つ以上の最優占ＫＩＲ３ＤＬ１アレル）に結合しない。一実施形態において、抗体は、配列番号１のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドのアミノ酸残基１〜９８に対応するＫＩＲ３ＤＬ２のＤ０ドメインに結合する。一実施形態において、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２のＤ２ドメインに、または配列番号１のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドのＤ１およびＤ２ドメインの両方に跨る（Ｄ１およびＤ２ドメインの境界における）領域に結合する。一実施形態において、抗体は、１０−９Ｍ未満、好ましくは、１０−１０Ｍ未満のＫＤにより特徴づけられるヒトＫＩＲ３ＤＬ２に対する親和性を有する。
【０１１５】
別の実施形態において、抗体は、抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９と実質的に同一のエピトープに結合する。別の実施形態において、抗体は、少なくとも部分的に重複し、または配列番号１のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（またはその部分配列の残基１〜９８もしくは残基１９３〜２９２に対応するセグメント中の少なくとも１つの残基を含む。一実施形態において、エピトープの全てのキー残基は、残基１〜９８に対応するセグメント中に存在する。一実施形態において、抗体は、Ｄ１ドメイン中に存在する残基およびＤ２ドメイン中に存在する残基に結合し；場合により、１つ以上のキー残基は、Ｄ１（残基９９〜１９２）およびＤ２ドメイン（残基１９３〜２９２）の境界に存在する。一実施形態において、抗体は、配列番号１のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基１〜９８、９９〜２９２、９９〜１９２、または１９３〜２９２に対応するセグメント中の１、２、３、４、５、６、７つ以上の残基を含むエピトープに結合する。好ましくは、抗体により結合される残基は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの表面上に存在する。
【０１１６】
一実施形態において、抗体は、残基Ｒ１３、Ａ２５、および／またはＱ２７を含むエピトープに結合する。場合により、抗体は、残基Ｒ１３、Ａ２５、および／またはＱ２７、ならびに残基Ｉ６０および／またはＧ６２を含むエピトープに結合する。場合により、抗体は、残基Ｈ３２および／またはＨ３３に結合しない。場合により、抗体は、残基Ｑ５６および／またはＥ５７にさらに結合する。
【０１１７】
一実施形態において、抗体は、残基Ｉ６０および／またはＧ６２を含むエピトープに結合する。場合により、抗体は、残基Ｉ６０および／またはＧ６２の１つ以上を含むが、残基Ｒ１３、Ａ２５、および／またはＱ２７を含まないエピトープに結合する。
【０１１８】
一実施形態において、抗体は、残基Ｉ６０および／またはＧ６２の１つ以上ならびに残基Ｐ１４、Ｓ１５および／またはＨ２３の１つ以上を含むエピトープに結合する。場合により、抗体は、残基Ｇ２１、Ｇ２２、Ｈ２３、Ｅ５７、Ｓ５８、Ｆ５９、Ｐ６３および／またはＨ６８の１、２、３、４、５、６または７つを含むエピトープに結合する。
【０１１９】
場合により、抗体は、残基Ｒ７８および／またはＬ８２の１つ以上を含むエピトープに結合する。場合により、抗体は、残基Ｋ７、Ｙ３０、Ｒ３１、Ｐ７９、Ｈ８０、Ｓ８１、Ｔ８３、Ｇ８４、Ｗ８５、Ｓ８６および／またはＡ８７の１、２、３、４、５、６または７つを含むエピトープに結合する。
【０１２０】
場合により、抗体は、残基Ｗ２２６を含むエピトープに結合する。場合により、抗体は、残基Ｑ２０１、Ｋ２０２、Ｐ２０３、Ｓ２０４、Ｓ２２４、Ｓ２２５、Ｓ２２７、Ｓ２２８、Ｎ２５２、Ｒ２５３および／またはＴ２５４の１、２、３、４、５、６または７つを含むエピトープに結合する。
【０１２１】
場合により、抗体は、残基Ｉ２３１および／またはＲ２４６の１つ以上を含むエピトープに結合する。場合により、抗体は、残基Ｉ２３１および／またはＲ２４６を含むエピトープならびに残基Ｗ２２６を含むエピトープに結合する。場合により、抗体は、残基Ｄ２３０、Ｉ２３１、Ｒ２４４、Ｌ２４５、Ｒ２４６、Ａ２４７、Ｖ２４８、Ｓ２７５、Ｒ２７７および／またはＰ２８０の１、２、３、４、５、６または７つを含むエピトープに結合する。
【０１２２】
場合により、抗体は、残基Ｅ２３９を含むエピトープに結合する。場合により、抗体は、残基Ｉ２３１および／またはＲ２４６の１つ以上にさらに結合する。場合により、抗体は、残基Ｗ２２６にさらに結合する。
【０１２３】
本明細書の実施例セクションは、一連の突然変異体ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの構築を記載する。ＫＩＲ３ＤＬ２突然変異体により形質移入された細胞への抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の結合を計測し、野生型ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（配列番号１）に結合する抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の能力と比較した。本明細書において使用される抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体と突然変異体ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドとの間の結合の低減は、結合親和性の低減（例えば、公知の方法、例えば、特定の突然変異体を発現する細胞のＦＡＣＳ試験により、または突然変異体ポリペプチドへの結合のＢｉａｃｏｒｅ試験により計測される場合）および／または抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の全結合能の低減（例えば、ポリペプチド濃度に対する抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体濃度のプロットにおけるＢｍａｘの減少により証明される場合）が存在することを意味する。結合の有意な低減は、突然変異残基が抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体への結合に直接関与し、または抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体がＫＩＲ３ＤＬ２に結合する場合に結合タンパク質に近接することを示す。したがって、抗体エピトープは、好ましくは、そのような残基を含み、そのような残基に隣接する追加の残基を含み得る。
【０１２４】
一部の実施形態において、結合の有意な低減は、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体と突然変異体ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドとの間の結合親和性および／または能力が、その抗体と野生型ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（例えば、配列番号１に示されるポリペプチド）との間の結合に対して４０％超、５０％超、５５％超、６０％超、６５％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超または９５％超だけ低減されることを意味する。ある実施形態において、結合は、検出可能な限界未満に低減される。一部の実施形態において、結合の有意な低減は、突然変異体ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の結合が、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体と野生型ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（例えば、配列番号１に示される細胞外ドメイン）との間で観察される結合の５０％未満（例えば、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％または１０％未満）である場合に証明される。そのような結合計測は、当技術分野において公知の種々の結合アッセイを使用して行うことができる。１つのそのようなアッセイの具体例を実施例セクションに記載する。
【０１２５】
一部の実施形態において、野生型ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（配列番号１）中の残基が置換されている突然変異体ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドについて有意に低い結合を示す抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体が提供される。本明細書において使用される略語表記において、フォーマットは、野生型残基：ポリペプチド中の位置：突然変異残基であり、残基の番号付与は配列番号１に示されるとおりである。
【０１２６】
一部の実施形態において、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、野生型ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合するが、以下の突然変異（配列番号１に関する）：
Ｒ１３Ｗ、Ａ２５Ｔおよび／もしくはＧ２５Ｒ；
Ｉ６０Ｎおよび／もしくはＧ６２Ｓ；
Ｐ１４Ｓ、Ｓ１５Ａおよび／もしくはＨ２３Ｓ；
Ｒ１３Ｗ、Ａ２５Ｔおよび／もしくはＧ２５Ｒの１つ以上、ならびにＩ６０Ｎおよび／もしくはＧ６２Ｓの１つ以上；
Ｐ１４Ｓ、Ｓ１５Ａおよび／もしくはＨ２３Ｓの１つ以上、ならびにＩ６０Ｎおよび／もしくはＧ６２Ｓの１つ以上；
Ｒ１３Ｗ、Ａ２５Ｔおよび／もしくはＧ２５Ｒの１つ以上、Ｉ６０Ｎおよび／もしくはＧ６２Ｓの１つ以上；ならびにＰ１４Ｓ、Ｓ１５Ａおよび／もしくはＨ２３Ｓの１つ以上；
Ｐ１４Ｓ、Ｓ１５Ａおよび／もしくはＨ２３Ｓの１つ以上、ならびにＩ６０Ｎおよび／もしくはＧ６２Ｓの１つ以上；
Ｒ７８Ｈおよび／もしくはＬ８２Ｐ；
Ｗ２２６Ａ；
Ｉ２３１Ｍおよび／もしくはＲ２４６Ｐ；
Ｉ２３１Ｍおよび／もしくはＲ２４６Ｐの１つ以上、ならびにさらにＷ２２６Ａ
のいずれか１つ以上を有する突然変異体ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの減少した結合を有し；または
Ｉ２３１Ｍおよび／もしくはＲ２４６Ｐの１つ以上を有する突然変異体ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの減少した結合を有するが、抗体は、Ｗ２２６Ａの突然変異を有する突然変異体への減少した結合を有さない。
【０１２７】
好ましくは、ＫＩＲ３ＤＬ２の特定の突然変異体への結合は、野生型ＫＩＲ３ＤＬ２への結合と比較して有意に低減される。
【０１２８】
抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の産生
抗体は、当技術分野において公知の種々の技術により産生することができる。典型的には、これらは、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド、好ましくは、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを含む免疫原による非ヒト動物、好ましくは、マウスの免疫化により産生される。ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドは、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの全長配列、またはその断片もしくは誘導体、典型的には、免疫原性断片、すなわち、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを発現する細胞の表面上で露出されるエピトープ、好ましくは、１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９抗体により認識されるエピトープを含むポリペプチドの一部を含み得る。そのような断片は、典型的には、成熟ポリペプチド配列の少なくとも約７つの連続アミノ酸、いっそうより好ましくは、その少なくとも約１０の連続アミノ酸を含有する。断片は、典型的には、本質的に、受容体の細胞外ドメインに由来する。一実施形態において、免疫原は、典型的には細胞の表面における脂質膜中の野生型ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを含む。具体的な実施形態において、免疫原は、場合により、治療または溶解されるインタクトな細胞、特にインタクトなヒト細胞を含む。別の実施形態において、ポリペプチドは、組換えＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドである。具体的な実施形態において、免疫原は、インタクトなＳＳまたはＭＦ細胞、特に場合により治療または溶解されるインタクトなヒト悪性腫瘍ＣＤ４＋Ｔ細胞、またはＣＤ４＋ＣＤ２８−Ｔ細胞を含む。別の実施形態において、ポリペプチドは、組換えダイマーＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドである。
【０１２９】
非ヒト哺乳動物を抗原により免疫化するステップは、マウス中での抗体の産生を刺激する当技術分野において周知の任意の様式で実施することができる（例えば、Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄ．Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８８）参照、その全開示は、参照により本明細書に組み込まれる）。免疫原は、任意選択で、アジュバント、例えば完全または不完全フロイントアジュバントを有する緩衝液中で懸濁または溶解される。免疫原の量、緩衝液のタイプおよびアジュバントの量を測定する方法は、当業者に周知である。これらのパラメーターは、異なる免疫原について異なり得るが、容易に解明される。
【０１３０】
同様に、抗体の産生を刺激するために十分な免疫化の局在および頻度も、当技術分野において周知である。典型的な免疫プロトコルにおいて、非ヒト動物に１日目および約１週間後に再度、抗原を腹腔内注射する。この後、約２０日目、任意選択で、アジュバント、例えば、不完全フロイントアジュバントによる抗原のリコール注射を行う。リコール注射は静脈内で実施し、数日間連続して繰り返すことができる。この後、４０日目、典型的にはアジュバントを用いずに静脈内または腹腔内のいずれかでブースター注射を行う。このプロトコルは、約４０日後、抗原特異的抗体を産生するＢ細胞の産生をもたらす。免疫化において使用される抗原に指向される抗体を発現するＢ細胞の産生をもたらす限り、他のプロトコルを使用することもできる。
【０１３１】
ポリクローナル抗体調製のため、血清を免疫化非ヒト動物から得、その中に存在する抗体を周知技術により単離する。血清を、固体支持体に結合している上記免疫原のいずれかを使用して親和性精製してＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドと反応する抗体を得ることができる。
【０１３２】
代替的実施形態において、非免疫化非ヒト哺乳動物からのリンパ球を単離し、インビトロで成長させ、次いで細胞培養物中で免疫原に曝露させる。次いで、リンパ球を回収し、下記の融合ステップを実施する。
【０１３３】
モノクローナル抗体について、次のステップは、免疫化非ヒト哺乳動物からの脾細胞を単離し、続いてそれらの脾細胞を不死化細胞と融合させて抗体産生ハイブリドーマを形成することである。非ヒト哺乳動物からの脾細胞の単離は、当技術分野において周知であり、典型的には、麻酔された非ヒト哺乳動物から脾臓を摘出し、それを小片に切断し、脾細胞を脾膜から細胞濾過器のナイロンメッシュを介して適切な緩衝液中に搾出して単一の細胞懸濁液を産生することを含む。細胞を洗浄し、遠心分離し、いかなる赤血球も溶解する緩衝液中で再懸濁させる。溶液を再び遠心分離し、最終的にペレット中の残留リンパ球を新たな緩衝液中で再懸濁させる。
【０１３４】
リンパ球は、単離され、単一の細胞懸濁液中で存在する場合、不死細胞系と融合させることができる。これは、典型的には、マウス骨髄腫細胞系であるが、ハイブリドーマの作出に有用な多数の他の不死細胞系は当技術分野において公知である。ネズミ骨髄腫系としては、限定されるものではないが、Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｕ．Ｓ．Ａ．から入手可能なＭＯＰＣ−２１およびＭＰＣ−１１マウス腫瘍、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，Ｕ．Ｓ．Ａ．から入手可能なＸ６３  Ａｇ８６５３およびＳＰ−２細胞に由来するものが挙げられる。融合は、ポリエチレングリコールなどを使用して行う。次いで、得られたハイブリドーマを、未融合の親骨髄腫細胞の成長または生存を阻害する１つ以上の物質を含有する選択培地中で成長させる。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマ用の培養培地は、典型的にはヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジンを含み（ＨＡＴ培地）、それらの物質はＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を妨害する。
【０１３５】
ハイブリドーマは、典型的には、マクロファージのフィーダー層上で成長させる。マクロファージは、好ましくは、脾細胞を単離するために使用される非ヒト哺乳動物のリッターメイトからのものであり、典型的には、ハイブリドーマをプレーティングする数日前に不完全フロイントアジュバントなどによりプライミングする。融合方法は、Ｇｏｄｉｎｇ，“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，”ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６）に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。
【０１３６】
細胞は、コロニー形成および抗体産生に十分な時間、選択培地中で成長させておく。これは通常、約７〜約１４日間である。
【０１３７】
次いで、ハイブリドーマコロニーを、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド遺伝子産物、任意選択で、抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９により特異的に認識されるエピトープに特異的に結合する抗体の産生についてアッセイする。アッセイは、典型的には、比色ＥＬＩＳＡタイプアッセイであるが、ハイブリドーマを成長させるウェルに適合させることができる任意のアッセイを用いることができる。他のアッセイとしては、ラジオイムノアッセイまたは蛍光活性化細胞選別が挙げられる。所望の抗体産生について陽性のウェルを試験して１つ以上の区別されるコロニーが存在するか否かを決定する。２つ以上のコロニーが存在する場合、細胞を再クローニングおよび成長させ、単一細胞のみが所望の抗体を産生するコロニーを生じさせていることを確保することができる。
【０１３８】
好ましいモノクローナル抗体を産生することが確認されているハイブリドーマは、適切な培地、例えばＤＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０中でより大量に成長させることができる。あるいは、ハイブリドーマ細胞は、動物中で腹水腫瘍としてインビボで成長させることができる。
【０１３９】
モノクローナル抗体（または腹水）を含有する成長培地は、所望のモノクローナル抗体を産生するために十分に成長させた後、細胞から分離し、その中に存在するモノクローナル抗体を精製する。精製は、典型的には、ゲル電気泳動、透析、プロテインＡもしくはプロテインＧ−セファロース、または固体支持体、例えば、アガロースもしくはセファロースビーズに結合している抗マウスＩｇを使用するクロマトグラフィーにより達成する（全ては、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．１８−１０３７−４６，Ｅｄｉｔｉｏｎ  ＡＣに記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる）。結合抗体は、典型的には、抗体含有画分の即時中和を伴う低ｐＨ緩衝液（ｐＨ３．０以下のグリシンまたは酢酸緩衝液）の使用により、プロテインＡ／プロテインＧカラムから溶出させる。これらの画分は、必要に応じてプール、透析、および濃縮する。
【０１４０】
外見上単一のコロニーを有する陽性のウェルを、典型的には、再クローニングおよび再アッセイして１つのモノクローナル抗体のみが検出および産生されていることを確保する。
【０１４１】
抗体は、例えば、（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，３４１（１９８９）ｐ．５４４、その全開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されるとおり、免疫グロブリンのコンビナトリアルライブラリーの選択により産生することもできる。
【０１４２】
ＫＩＲ３ＤＬ２、特に、モノクローナル抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９と実質的または本質的に同一のエピトープに結合する１つ以上の抗体の同定は、抗体競合をアッセイすることができる種々の免疫学的スクリーニングアッセイのいずれか１つを使用して容易に決定することができる。多くのそのようなアッセイは、定型的に実施され、当技術分野において周知である（例えば、米国特許第５，６６０，８２７号明細書参照、具体的には参照により本明細書に組み込まれる）。本明細書に記載の抗体が結合するエピトープの実際的な決定は、本明細書に記載のモノクローナル抗体と同一または実質的に同一のエピトープに結合する抗体を同定するために決して要求されないことが理解される。
【０１４３】
例えば、試験すべき試験抗体が異なる動物源から得られ、またはさらに異なるＩｇアイソタイプのものである場合、対照（１０Ｆ６、例えば、例示目的のため、または２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９などのいずれかの他の抗体）および試験抗体を混合（または予備吸着）し、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを含有する試料にアプライする単純な競合アッセイを用いることができる。ウエスタンブロッティングに基づくプロトコルおよびＢＩＡＣＯＲＥ分析の使用は、そのような競合試験における使用に好適である。
【０１４４】
ある実施形態において、対照抗体（１０Ｆ６、例えば、いずれかの他の抗体）を、変動量の試験抗体と、ＫＩＲ３ＤＬ２抗原試料にアプライする前のある期間、予備混合する（例えば、約１：１０または約１：１００）。他の実施形態において、対照および変動量の試験抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２抗原試料に曝露させる間、単純に混合することができる。（例えば、未結合抗体を除去するための分離または洗浄技術を使用することにより）結合抗体を遊離抗体から、（例えば、種特異的もしくはアイソタイプ特異的二次抗体を使用し、または６Ｅ４、２０Ｃ６もしくは１６Ａ８を検出可能な標識により特異的に標識することにより）１０Ｆ６を試験抗体から区別することができる限り、試験抗体が１０Ｆ６の抗原への結合を低減させるか否かを決定することができ、それは試験抗体が１０Ｆと実質的に同一のエピトープを認識することが示す。完全に無関連な抗体の不存在下での（標識）対照抗体の結合は、高値の対照として機能し得る。低値の対照は、標識（１０Ｆ６）抗体を全く同一のタイプ（１０Ｆ６）の未標識抗体とインキュベートすることにより得ることができ、この場合、競合が生じ、標識抗体の結合を低減させる。試験アッセイにおいて、試験抗体の存在下での標識抗体の反応性における有意な低減は、実質的に同一のエピトープを認識する試験抗体、すなわち、標識（１０Ｆ６）抗体と「交差反応する」または競合する抗体を示す。１０Ｆ６のＫＩＲ３ＤＬ２抗原への結合を、少なくとも約５０％、例えば少なくとも約６０％、またはより好ましくは少なくとも約８０％もしくは９０％（例えば、約６５〜１００％）だけ低減させる任意の試験抗体を、約１：１０〜約１：１００の１０Ｆ６：試験抗体の任意の比において、１０Ｆ６と実質的に同一のエピトープまたは決定基に結合する抗体であるとみなす。好ましくは、そのような試験抗体は、１０Ｆ６のＫＩＲ３ＤＬ２抗原への結合を、少なくとも約９０％（例えば約９５％）だけ低減させる。
【０１４５】
競合は、例えばフローサイトメトリー試験により評価することもできる。そのような試験において、所与のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを担持する細胞は、最初に例えば、１０Ｆ６と、次いで蛍光色素またはビオチンにより標識された試験抗体とインキュベートすることができる。飽和量の１０Ｆ６とのプレインキュベーション時に得られる結合が、１０Ｆ６とのプレインキュベーションなしの抗体により得られる（蛍光を介して計測される）結合の、約８０％、好ましくは約５０％、約４０％以下（例えば、約３０％、２０％または１０％）である場合、抗体は、１０Ｆ６と競合すると言われる。あるいは、飽和量の試験抗体とプレインキュベートされた細胞上の（蛍光色素またはビオチンによる）標識１０Ｆ６抗体について得られる結合が、試験抗体とのプレインキュベーションなしの場合に得られる結合の、約８０％、好ましくは約５０％、約４０％以下（例えば、約３０％、２０％または１０％）である場合、抗体は、１０Ｆ６と競合すると言われる。
【０１４６】
試験抗体を、ＫＩＲ３ＤＬ２抗原が固定化された表面に飽和濃度において予備吸着およびアプライする単純な競合アッセイを用いることもできる。単純な競合アッセイにおける表面は、好ましくはＢＩＡＣＯＲＥチップ（または表面プラズモン共鳴分析に好適な他の媒体）である。次いで、対照抗体（例えば、１０Ｆ６）を、ＫＩＲ３ＤＬ２飽和濃度において表面と接触させ、対照抗体のＫＩＲ３ＤＬ２および表面結合を計測する。対照抗体のこの結合を、試験抗体の不存在下での対照抗体のＫＩＲ３ＤＬ２含有表面への結合と比較する。試験アッセイにおいて、試験抗体の存在下での対照抗体によるＫＩＲ３ＤＬ２含有表面の結合の有意な低減は、試験抗体が対照抗体と実質的に同一のエピトープを認識し、その結果、試験抗体が対照抗体と「交差反応する」ことを示す。対照（例えば、１０Ｆ６）抗体のＫＩＲ３ＤＬ２抗原への結合を少なくとも約３０％以上、好ましくは約４０％だけ低減させる任意の試験抗体を、対照（例えば、１０Ｆ６）と実質的に同一のエピトープまたは決定基に結合する抗体であるとみなすことができる。好ましくは、そのような試験抗体は、対照抗体（例えば、１０Ｆ６）のＫＩＲ３ＤＬ２抗原への結合を少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％以上）だけ低減させる。対照および試験抗体の順序は入れ替えることができ、すなわち、競合アッセイにおいて、最初に対照抗体を表面に結合させることができ、その後に試験抗体を表面と接触させることが認識される。好ましくは、ＫＩＲ３ＤＬ２抗原に対してより高い親和性を有する抗体を最初に表面に結合させる。それというのも、二次抗体について見られる結合の減少（抗体が交差反応していると想定）がより顕著な大きさであると予期されるためである。そのようなアッセイのさらなる例が、例えば、Ｓａｕｎａｌ（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８３：３３−４１に提供され、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。
【０１４７】
好ましくは、ＫＩＲ３ＤＬ２エピトープを認識するモノクローナル抗体は、かなりの割合またはさらには全ての関連細胞、例えば、悪性腫瘍ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＳＳまたはＭＦ患者からの細胞上に存在するエピトープと反応するが、他の細胞、すなわち、ＫＩＲ３ＤＬ２を発現しない細胞と有意に反応しない。一態様において、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２に結合するが、ＫＩＲ３ＤＬ１および／またはＫＩＲ３ＤＳ１に結合しない。
【０１４８】
一部の実施形態において、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２陽性細胞の発現により特徴づけられる疾患を有する１つまたは複数の個体、すなわち、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を使用する本明細書に記載の方法の１つによる治療についての候補である個体からのＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞に結合する。したがって、細胞上のＫＩＲ３ＤＬ２を特異的に認識する抗体を得たら、それを、ＳＳまたはＭＦのような障害を有する患者から採取されたＫＩＲ３ＤＬ２陽性細胞（例えば、悪性腫瘍ＣＤ４＋Ｔ細胞）に結合するその能力について試験することができる。特に、患者を本抗体の１つにより治療する前に、その患者から採取された例えば血液試料中の悪性腫瘍細胞に結合する抗体の能力を試験して治療が患者において有益になる確率を最大化することが有益である。
【０１４９】
一実施形態において、抗体は、イムノアッセイにおいてバリデートしてＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞、例えば、悪性腫瘍ＣＤ４＋Ｔ細胞、炎症促進性ＣＤ４＋細胞に結合するそれらの能力を試験する。例えば、末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を複数の患者から採取し、ＣＤ４＋Ｔ細胞をＰＢＬから、例えば、関連抗体を使用するフローサイトメトリーにより濃縮し（悪性腫瘍ＣＤ４＋細胞について、例えば、開示が参照により本明細書に組み込まれるＢａｇｏｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｂｌｏｏｄ  ９７：１３８８−１３９１参照）、またはＣＤ４＋ＣＤ２８−細胞分画をＭＡＣＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）上で磁気分離により単離する。次いで、細胞に結合する所与の抗体の能力を、当技術分野において周知の標準的な方法を使用して評価する。個体または患者のかなりの割合（例えば、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％以上）からのＫＩＲ３ＤＬ２を発現することが公知の細胞、例えば、Ｔ細胞のかなりの割合（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％以上）に結合することが見出される抗体は、患者中の悪性腫瘍Ｔ細胞の存在またはレベルを決定するための診断目的のための本明細書の使用に、または本明細書に記載の治療方法における使用に、例えば、悪性腫瘍Ｔ細胞の数もしくは活性を増加もしくは減少させるための使用の両方に好適である。細胞への抗体の結合を評価するため、抗体は、直接または間接的に標識することができる。間接的に標識する場合、典型的には、二次標識抗体を添加する。次いで、細胞への抗体の結合を、例えば、フローサイトメトリー分析（例えば、ＦＡＣＳｃａｎ）を使用して検出することができる。そのような方法は、当業者に周知である。
【０１５０】
抗体がエピトープ領域内で結合するか否かの決定は、当業者に公知の手法において実施することができる。そのようなマッピング／特徴決定方法の一例として、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体についてのエピトープ領域を、ＫＩＲ３ＤＬ２タンパク質中の露出アミン／カルボキシルの化学修飾を使用するエピトープ「フットプリンティング」により決定することができる。そのようなフットプリンティング技術の１つの具体例は、ＨＸＭＳ（質量分析により検出される水素−重水素交換）の使用であり、この場合、受容体およびリガンドタンパク質のアミドプロトンの水素／重水素交換、結合、および逆交換が生じ、タンパク質結合に関与する骨格アミド基は逆交換から保護され、したがって重水素化されたままになる。関連領域は、この箇所において、ペプシンタンパク質加水分解、高速マイクロボア高速液体クロマトグラフィー分離、および／またはエレクトロスプレーイオン化質量分析により同定することができる。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ  Ｈ，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．２６７（２）ｐｐ．２５２−２５９（１９９９）Ｅｎｇｅｎ，Ｊ．Ｒ．ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｌ．（２００１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３，２５６Ａ−２６５Ａ参照。好適なエピトープ同定技術の別の例は核磁気共鳴エピトープマッピング（ＮＭＲ）であり、この場合、典型的には、遊離抗原および抗原結合ペプチド、例えば抗体と複合体化された抗原の二次元ＮＭＲスペクトルにおけるシグナルの位置を比較する。抗原は、典型的には、ＮＭＲスペクトルにおいて、抗原に対応するシグナルのみが見られ、抗原結合ペプチドからのシグナルが全く見られないように、１５Ｎにより選択的に同位体標識する。抗原結合ペプチドとの相互作用に関与するアミノ酸から生じる抗原シグナルは、典型的には、複合体のスペクトルにおける位置を、遊離抗原のスペクトルと比較してシフトさせ、結合に関与するアミノ酸をそのように同定することができる。例えば、Ｅｒｎｓｔ  Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｒｅｓ  Ｆｏｕｎｄ  Ｗｏｒｋｓｈｏｐ．２００４；（４４）：１４９−６７；Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２８１（１）ｐｐ．６１−６７（１９９８）；およびＳａｉｔｏ  ａｎｄ  Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９９６  Ｊｕｎ；９（３）：５１６−２４参照。
【０１５１】
エピトープマッピング／特徴決定は、質量分析法を使用して実施することもできる。例えば、Ｄｏｗｎｗａｒｄ，Ｊ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．２０００  Ａｐｒ；３５（４）：４９３−５０３およびＫｉｓｅｌａｒ  ａｎｄ  Ｄｏｗｎａｒｄ，Ａｎａｌ  Ｃｈｅｍ．１９９９  Ｍａｙ  １；７１（９）：１７９２−８０１参照。プロテアーゼ消化技術も、エピトープマッピングおよび同定に関して有用であり得る。抗原決定基関連領域／配列は、プロテアーゼ消化により、例えばトリプシンをＫＩＲ３ＤＬ２に対して約１：５０の比またはｐＨ７〜８における一晩消化において使用し、次いでペプチド同定のための質量分析（ＭＳ）分析を行うことにより決定することができる。続いて、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤によりトリプシン開裂から保護されるペプチドを、トリプシン消化を受けた試料と、抗体とインキュベートされ、次いで、例えば、トリプシンによる消化を受けた試料との比較により同定することができる（それにより、結合剤についてのフットプリントが明らかになる）。他の酵素、例えば、キモトリプシン、ペプシンなどをさらに、または代替的に類似のエピトープ特徴決定方法において使用することができる。さらに、酵素消化は、潜在的な抗原決定基配列が、表面露出されておらず、したがって、免疫原性／抗原性に関して最も関連性が少ないＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの領域内に存在するか否かを分析する迅速な方法を提供し得る。例えば、同様の技術の議論のため、Ｍａｎｃａ，Ａｎｎ  Ｉｓｔ  Ｓｕｐｅｒ  Ｓａｎｉｔａ．１９９１；  ２７：  １５−９参照。
【０１５２】
部位特異的突然変異誘発は、結合エピトープの解明に有用な別の技術である。例えば、「アラニンスキャニング」において、タンパク質セグメント内のそれぞれの残基をアラニン残基により置き換え、結合親和性についての結果を計測する。突然変異が結合親和性の有意な低減をもたらす場合、それは結合に関与する可能性が最も高い。構造エピトープに特異的なモノクローナル抗体（すなわち、フォールディングされていないタンパク質に結合しない抗体）を使用し、アラニン置換がタンパク質のフォールディング全体に影響を与えないことを確認することができる。例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９５；２６７：３８３−３８６；およびＷｅｌｌｓ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １９９６；９３：１−６参照。
【０１５３】
エピトープ「フットプリンティング」に電子顕微鏡を使用することもできる。例えば、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  １９９２；３５５：２７５−２７８は、天然ササゲモザイクウイルスのカプシド表面上のＦａｂ断片の物理的フットプリントを測定するため、低温電子顕微鏡観察、三次元画像再構成、およびＸ線結晶分析の協調的適用を使用した。
【０１５４】
エピトープ評価のための「ラベルフリー」アッセイの他の形態としては、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ、ＢＩＡＣＯＲＥ）および反射干渉分光法（ＲｉｆＳ）が挙げられる。例えば、Ｆａｅｇｅｒｓｔａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  １９９０；３：２０８−１４；Ｎｉｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．１９９３；６４６：１５９−１６８；Ｌｅｉｐｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．１９９８；３７：３３０８−３３１１；Ｋｒｏｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ  ２００２；１７：９３７−９４４参照。
【０１５５】
本明細書に記載の抗体と同一のまたは実質的に同一のエピトープに結合する抗体は、本明細書に記載の例示的な競合アッセイの１つ以上において同定することができることも留意すべきである。
【０１５６】
場合により、細胞取り込みまたは局在化を評価してそれＫＩＲ３ＤＬ２が存在する細胞中におよび／または細胞区画中に容易に吸収される抗体を選択する。細胞取り込みまたは局在化は、一般に、抗体がその活性を与えることが求められ、または考えられる細胞中で計測する。細胞取り込みまたは局在化は、標準的方法により、例えば、検出可能部分（例えば、蛍光部分）によりマーキングされている抗体を使用する共焦点染色により評価することができる。
【０１５７】
脊椎動物または細胞中での抗体の免疫化および産生時、特定の選択ステップを実施して特許請求される抗体を単離することができる。これに関し、具体的な実施形態において、本発明はまた、そのような抗体を産生する方法であって、（ａ）ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを含む免疫原により非ヒト哺乳動物を免疫化するステップ；および（ｂ）前記免疫化動物から抗体を調製するステップ；および（ｃ）ＫＩＲ３ＤＬ２に結合し得る、ステップ（ｂ）からの抗体を選択するステップを含む方法が提供される。
【０１５８】
典型的には、本明細書の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して約１０４〜約１０１１Ｍ−１（例えば、約１０８〜約１０１０Ｍ−１）の範囲の親和性を有する。例えば、抗体は、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）スクリーニング（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）ＳＰＲ分析装置による分析による）により測定される場合、ＫＩＲ３ＤＬ２に関して１×１０−９Ｍ未満の平均解離定数（Ｋｄ）を有し得る。より特定の例示的態様において、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２に対して約１×１０−８Ｍ〜約１×１０−１０Ｍ、または約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−１１ＭのＫｄを有し得る。
【０１５９】
抗体は、例えば、約１００、６０、１０、５、または１ナノモル濃度以下、好ましくは、ナノモル濃度以下、または場合により約５００、２００、１００または１０ピコモル濃度以下の平均Ｋｄ（すなわち、それらよりも良好な親和性）により特徴づけることができる。Ｋｄは、例えば、例えば、組換え産生ヒトＫＩＲ３ＤＬ２タンパク質をチップ表面上に固定化し、次いで溶液中の試験すべき抗体をアプライすることにより測定することができる。一実施形態において、本方法は、ＫＩＲ３ＤＬ２への結合について抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９と競合し得る（ｂ）からの抗体を選択するステップ（ｄ）をさらに含む。
【０１６０】
実施形態のいずれかの一態様において、本方法により調製される抗体は、モノクローナル抗体である。別の態様において、本発明の方法により抗体を産生するために使用される非ヒト動物は、哺乳動物、例えば、齧歯類、ウシ、ブタ、ニワトリ、ウマ、ウサギ、ヤギ、またはヒツジである。抗体は、１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９を包含する。さらに、抗体は、場合により、抗体Ｑ２４１およびＱ６６（Ｐｅｎｄｅ，ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８４：５０５−５１８）、クローン５．１３３（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）、「ＡＺ１５８」（Ｐａｒｏｌｉｎｉ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｉｎ  Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ  ｔｙｐｉｎｇ  ＶＩＩ．Ｄ．Ｍａｓｏｎ，ｅｄｉｔｏｒ．Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ．４１５−４１７および国際公開第２０１０／０８１８９０号パンフレット（例えば、国際公開第２０１０／０８１８９０号パンフレットの配列番号８および１０の重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体）のいずれか、または例えばその抗原結合領域の全部もしくは一部を含む上記の誘導体以外の抗体と規定することができる。
【０１６１】
代替的実施形態によれば、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド上に存在するエピトープに結合する抗体をコードするＤＮＡは、ハイブリドーマから単離し、適切な宿主中への形質移入に適切な発現ベクター中に配置する。次いで、宿主を抗体、またはそのバリアント、例えば、そのモノクローナル抗体のヒト化バージョン、抗体の活性断片、抗体の抗原認識部分を含むキメラ抗体、または検出可能部分を含むバージョンの組換え産生に使用する。
【０１６２】
モノクローナル抗体、例えば、抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９をコードするＤＮＡは、慣用の手順を使用して（例えば、ネズミ抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合し得るオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）容易に単離および配列決定することができる。ＤＮＡは、単離したら、発現ベクター中に配置することができ、次いでそれを他で免疫グロブリンタンパク質を産生しない宿主細胞、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞中に形質移入して組換え宿主細胞中でのモノクローナル抗体の合成を得る。本明細書の他箇所において記載されるとおり、そのようなＤＮＡ配列は、多数の目的のいずれかのため、例えば、抗体をヒト化するため、断片もしくは誘導体を産生するため、または例えば抗原結合部位中の抗体の配列を改変するために改変して抗体の結合特異性を最適化することができる。
【０１６３】
抗体をコードするＤＮＡの細菌中での組換え発現は、当技術分野において周知である（例えば、Ｓｋｅｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５，ｐｐ．２５６（１９９３）；およびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３０，ｐ．１５１（１９９２）参照）。
【０１６４】
活性の評価
抗原結合化合物を得たら、それを一般に、ＫＩＲ３ＤＬ２発現標的細胞中に内在化し、またはＫＩＲ３ＤＬ２発現標的細胞中へのＫＩＲ３ＤＬ２内在化を引き起こしてＫＩＲ３ＤＬ２発現標的細胞に対するＡＤＣＣもしくはＣＤＣを誘導し、ＫＩＲ３ＤＬ２発現標的細胞の炎症促進活性および／もしくは増殖を阻害し、ならびに／またはその排除を引き起こすその能力について評価する。内在化し、またはＡＤＣＣ、ＣＤＣを誘導し、または一般にＫＩＲ３ＤＬ２発現標的細胞の活性の排除もしくは阻害をもたらす抗原結合化合物の能力の評価は、例えば、本明細書に提供される実施例におけるように本方法の任意の好適な段階において実施することができる。この評価は、治療的使用予定の抗体（または他の化合物）の同定、産生および／または開発に関与する種々のステップの１つ以上において有用であり得る。例えば、活性は、候補抗原結合化合物を同定するスクリーニング法に関して、または抗原結合化合物を選択し、ヒトに好適とする（例えば、抗体の場合においてキメラまたはヒト化とする）方法、抗原結合化合物を発現する細胞（例えば、組換え抗原結合化合物を発現する宿主細胞）を得、機能抗体（または他の化合物）を産生するその能力を評価する方法、および／もしくは多数の抗原結合化合物を産生し、（例えば、産物のバッチまたはロットを試験するために）活性について評価することができる方法において評価することができる。一般に、抗原結合化合物は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに特異的に結合することが公知である。ステップは、複数（例えば、高スループットスクリーニング法を使用して極めて多数またはより少数）の抗原結合化合物を試験することを含み得る。
【０１６５】
本明細書において使用される、「内在化」されない、または「内在化」しない抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、哺乳動物細胞上のＫＩＲ３ＤＬ２（すなわち、細胞表面ＫＩＲ３ＤＬ２）への結合時に細胞により実質的に吸収されない（細胞に流入しない）抗体である。非内在化抗体としては、無論、抗体断片、ヒトまたはヒト化抗体および抗体コンジュゲートが挙げられる。
【０１６６】
抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体が、哺乳動物細胞上のＫＩＲ３ＤＬ２への結合時に内在化するか否か、またはＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドが細胞内内在化を受けるか否か（例えば、抗体により結合されている時）は、種々のアッセイ、例として本明細書の実験実施例に記載されるものにより決定することができる。例えば、インビボでの内在化を試験するため、試験抗体を標識し、ある細胞の表面上で発現されたＫＩＲ３ＤＬ２を有することが公知の動物中に導入する。抗体は、例えば、放射性標識または蛍光もしくは金粒子により標識することができる。このアッセイに好適な動物としては、哺乳動物、例えば、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２発現腫瘍移植物もしくはゼノグラフトを含有するヌードマウス、またはヒトＫＩＲ３ＤＬ２により形質移入された細胞が導入されたマウス、またはヒトＫＩＲ３ＤＬ２トランス遺伝子を発現するトランスジェニックマウスが挙げられる。適切な対照としては、試験抗体を受容しなかった、または未関連抗体を受容した動物、および関心対象の細胞上の別の抗原に対する抗体を受容し、抗体が抗原への結合時に内在化されることが公知である動物が挙げられる。抗体は、動物に例えば、静脈内注射により投与することができる。好適な時間間隔において、動物の組織切片を公知のまたは以下の実験実施例に記載の方法を使用して調製し、光学顕微鏡観察または電子顕微鏡観察により内在化および細胞中の内在化抗体の局在について分析することができる。インビトロでの内在化については、細胞を組織培養ディッシュ中で、培養培地に添加された関連抗体の存在または不存在下でインキュベートし、所望の時点において顕微鏡分析のために処理することができる。細胞中の内在化標識抗体の存在は、顕微鏡観察により、または放射性標識抗体を使用する場合にはオートラジオグラフィーにより直接可視化することができる。場合により、顕微鏡観察において、既知ポリペプチドまたは他の細胞構成要素との共局在化を評価することができ；例えば、エンドソーム／リソソームマーカーＬＡＭＰ−１（ＣＤ１０７ａ）との共局在化は、内在化抗体の細胞内局在についての情報を提供し得る。あるいは、定量的生化学アッセイにおいて、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞を含む細胞の集団をインビトロまたはインビボで放射性標識試験抗体と接触させ、細胞（インビボで接触させる場合、細胞を好適な時間後に単離する）をプロテアーゼにより処理し、または酸洗浄に供して細胞表面上の非内在化抗体を除去する。細胞を粉砕し、耐性プロテアーゼの量、細胞のそれぞれのバッチと関連する毎分放射能カウント数（ｃｐｍ）を、シンチレーションカウンターにホモジネートを通すことにより計測する。放射性標識抗体の既知の特異的活性に基づき、細胞当たりの内在化抗体分子の数を、粉砕細胞のシンチレーションカウントから推定することができる。細胞をインビトロで、好ましくは、溶液形態の抗体と、例えば、細胞を、培養ディッシュまたはフラスコ中の細胞培養培地に添加し、抗体を培地と十分混合して抗体への細胞の均等な曝露を確保することにより「接触」させる。
【０１６７】
ＣＤＣおよびＡＤＣＣの試験を実施することができ、種々のアッセイ、例として、本明細書の実験実施例に記載のもの（実施例４および５参照）により測定することができる。ＡＤＣＣの試験は、典型的には、結合した抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を有するＫＩＲ３ＤＬ２発現標的細胞（例えば、Ｃｏｕ−Ｌ細胞、セザリー症候群細胞または他のＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞）が補体の関与なしでＦｃ受容体を担持するエフェクター細胞により認識される細胞媒介細胞毒性を評価することを含む。ＫＩＲ３ＤＬ２抗原を発現しない細胞を場合により対照として使用することができる。ＮＫ細胞の細胞毒性の活性化は、サイトカイン産生（例えば、ＩＦＮ−γ産生）または細胞毒性マーカー（例えば、ＣＤ１０７動員）の増加を計測することにより評価する。好ましくは、抗体は、標的細胞の存在下で対照抗体（例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２に結合しない抗体、ネズミ定常領域を有するＫＩＲ３ＤＬ２抗体）と比較して少なくとも２０％、５０％、８０％、１００％、２００％または５００％のサイトカイン産生、細胞毒性マーカーの発現、または標的細胞溶解の増加を誘導する。別の例において、標的細胞の溶解は、例えば、クロム放出アッセイにおいて検出し、好ましくは、抗体は、標的細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％または５０％の溶解を誘導する。抗原結合化合物を、（ａ）ＡＤＣＣを誘導するその能力ならびに（ｂ）ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞中に内在化し、および／またはＫＩＲ３ＤＬ２内在化を誘導するその能力の両方について試験する場合、（ａ）および（ｂ）のアッセイは、任意の順序で実施することができる。しかしながら、内在化の程度および速度が大きければ、一般に、ＣＤＣおよびＡＤＣＣ活性の程度の減少と関連することが予測される。
【０１６８】
抗体１０Ｆ６
抗体１０Ｆ６の重鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号２として列記し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号３として列記する。具体的な実施形態において、本発明は、モノクローナル抗体１０Ｆ６と本質的に同一のエピトープまたは決定基に結合する抗体が提供され；場合により、抗体は、抗体１０Ｆ６の抗原結合領域を含む。本明細書の実施形態のいずれかにおいて、抗体１０Ｆ６は、そのアミノ酸配列および／またはそれをコードする核酸配列により特徴づけることができる。一実施形態において、モノクローナル抗体は、１０Ｆ６のＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２部分を含む。１０Ｆ６の重鎖可変領域を含むモノクローナル抗体も提供される。一実施形態によれば、モノクローナル抗体は、１０Ｆ６の重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含む。１０Ｆ６の可変軽鎖可変領域または１０Ｆ６の軽鎖可変領域のＣＤＲの１、２もしくは３つをさらに含むモノクローナル抗体も提供される。場合により、前記軽鎖または重鎖ＣＤＲのいずれか１つ以上は、１、２、３、４または５つ以上のアミノ酸改変（例えば、置換、挿入または欠失）を含有し得る。場合により、抗体１０Ｆ６の抗原結合領域の一部または全部を含む軽鎖および／または重鎖可変領域のいずれかがヒトＩｇＧタイプの免疫グロブリン定常領域、場合により、ヒト定常領域、場合により、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプに融合している抗体が提供される。
【０１６９】
別の態様において、抗体をコードする精製ポリペプチドであって、抗体は、配列番号６に記載のアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＩＡＧＭＱ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（例えば、ＩＡＧＭＱ（配列番号４）、ＧＹＴＦＴＩ（配列番号５））（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＨＣＤＲ１領域；配列番号７に記載のアミノ酸配列ＷＩＮＴＨＳＧＶＰＫＹＡＥＤＦＫＧ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（例えば、ＷＩＮＴＨＳＧＶＰＫ（配列番号８））（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＨＣＤＲ２領域；配列番号９に記載のアミノ酸配列ＧＧＤＥＧＶＭＤＹ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＨＣＤＲ３領域；配列番号１０に記載のアミノ酸配列ＫＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＬＣＤＲ１領域；配列番号１１に記載のアミノ酸配列ＷＡＳＴＲＨＴ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＬＣＤＲ２領域；配列番号１２に記載のアミノ酸配列ＱＱＨＹＮＴＰＷＴ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、欠失され、または異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＬＣＤＲ３領域を含むポリペプチドが提供される。
【０１７０】
別の態様において、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２に結合する抗体であって、
（ａ）配列番号２の重鎖可変領域（場合により、１、２、３つ以上の残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｂ）配列番号３の軽鎖可変領域（場合により、１、２、３つ以上の残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｃ）配列番号２の重鎖可変領域（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；および配列番号３の軽鎖可変領域（場合により、１、２、３つ以上の残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｄ）配列番号４〜６、７〜８および９にそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列（場合により、任意のＣＤＲの１、２、３つ以上の残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）、ならびに／または
（ｅ）配列番号１０、１１および１２に示される軽鎖ＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列（場合により、任意のＣＤＲの１、２、３つ以上の残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｆ）配列番号４、７および９にそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列（場合により、任意のＣＤＲの１、２、３つ以上の残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；および配列番号１０、１１および１２に示される軽鎖ＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列（場合により、任意のＣＤＲの１、２、３つ以上の残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）
を含む抗体が提供される。
【０１７１】
本明細書の実施形態のいずれかの別の態様において、重鎖および軽鎖のＣＤＲ１、２および３のいずれかは、その少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列により、および／または対応する配列番号に列記される特定のＣＤＲもしくはＣＤＲの組と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の配列同一性を共有するアミノ酸配列を有すると特徴づけることができる。
【０１７２】
別の態様において、ＫＩＲ３ＤＬ２結合について上記（ａ）〜（ｆ）のモノクローナル抗体と競合する抗体を提供する。
【０１７３】
抗体２Ｂ１２
抗体２Ｂ１２の重鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号１３として列記し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号１４として列記する。一実施形態において、モノクローナル抗体２Ｂ１２と本質的に同一のエピトープまたは決定基に結合する抗体を提供し；任意に、抗体は、抗体２Ｂ１２の抗原結合領域を含む。本明細書の実施形態のいずれかにおいて、抗体２Ｂ１２は、そのアミノ酸配列および／またはそれをコードする核酸配列により特徴づけることができる。一実施形態において、モノクローナル抗体は、２Ｂ１２のＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２部分を含む。２Ｂ１２の重鎖可変領域を含むモノクローナル抗体も提供される。一実施形態によれば、モノクローナル抗体は、２Ｂ１２の重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含む。２Ｂ１２の可変軽鎖可変領域または２Ｂ１２の軽鎖可変領域のＣＤＲの１、２もしくは３つをさらに含むモノクローナル抗体も提供される。任意に、前記軽鎖または重鎖ＣＤＲのいずれか１つ以上は、１、２、３、４または５つのアミノ酸改変（例えば、置換、挿入または欠失）を含有し得る。任意に、抗体２Ｂ１２の抗原結合領域の一部または全部を含む軽鎖および／または重鎖可変領域のいずれかがＩｇＧタイプの免疫グロブリン定常領域、任意に、ヒト定常領域、任意選択で、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプに融合している抗体が提供される。
【０１７４】
別の態様において、抗体をコードする精製ポリペプチドであって、抗体は、配列番号１７に記載のアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＡＧＭＱ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）（例えば、ＴＡＧＭＱ（配列番号１５）、ＧＹＴＦＴＴ（配列番号１６））を含むＨＣＤＲ１領域；配列番号１８に記載のアミノ酸配列ＷＩＮＳＨＳＧＶＰＫＹＡＥＤＦＫまたはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）（例えば、ＷＩＮＳＨＳＧＶＰ（配列番号１９））を含むＨＣＤＲ２領域；配列番号２０に記載のアミノ酸配列ＧＧＤＥＧＶＭＤＹＷ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＨＣＤＲ３領域；配列番号１０に記載のアミノ酸配列ＫＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＬＣＤＲ１領域；配列番号２１に記載のアミノ酸配列ＷＴＳＴＲＨＴ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＬＣＤＲ２領域；および／または配列番号２２に記載のアミノ酸配列ＱＱＨＹＳＴＰＷＴ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、欠失され、または異なるアミノ酸により置換されていてよい、または配列は、１つ以上のアミノ酸の挿入を含んでもよい）を含むＬＣＤＲ３領域を含むポリペプチドを提供する。
【０１７５】
別の態様において、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２に結合する抗体であって、
（ａ）配列番号１３の重鎖可変領域（場合により、アミノ酸残基の１、２、３つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｂ）配列番号１４の軽鎖可変領域（場合により、アミノ酸残基の１、２、３つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｃ）配列番号１３の重鎖可変領域（場合により、アミノ酸残基の１、２、３つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；および配列番号１４の軽鎖可変領域（場合により、アミノ酸残基の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｄ）配列番号１５〜１７、１８〜１９および２０にそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列（場合により、任意のＣＤＲの１、２、３つ以上の残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｅ）配列番号１０、２１および２２にそれぞれ示される軽鎖ＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列（場合により、任意のＣＤＲの１、２、３つ以上の残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｆ）配列番号１５、１８および２０にそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列（場合により、任意のＣＤＲの１、２、３つ以上の残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；および配列番号１０、２１および２２に示される軽鎖ＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列（場合により、任意のＣＤＲの１、２、３つ以上の残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）
を含む抗体が提供される。
【０１７６】
本明細書の実施形態のいずれかの別の態様において、重鎖および軽鎖のＣＤＲ１、２および３のいずれかは、その少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列により、および／または対応する配列番号に列記される特定のＣＤＲもしくはＣＤＲの組と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の配列同一性を共有するアミノ酸配列を有すると特徴づけることができる。
【０１７７】
別の態様において、ＫＩＲ３ＤＬ２結合について上記（ａ）〜（ｆ）のモノクローナル抗体と競合する抗体が提供される。
【０１７８】
抗体１０Ｇ５
抗体１０Ｇ５の重鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号２３として列記し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号２４として列記する。具体的な実施形態において、モノクローナル抗体１０Ｇ５と本質的に同一のエピトープまたは決定基に結合する抗体が提供され；場合により、抗体は、抗体１０Ｇ５の抗原結合領域を含む。本明細書の実施形態のいずれかにおいて、抗体１０Ｇ５は、そのアミノ酸配列および／またはそれをコードする核酸配列により特徴づけることができる。一実施形態において、モノクローナル抗体は、１０Ｇ５のＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２部分を含む。１０Ｇ５の重鎖可変領域を含むモノクローナル抗体も提供される。一実施形態によれば、モノクローナル抗体は、１０Ｇ５の重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含む。１０Ｇ５の可変軽鎖可変領域または１０Ｇ５の軽鎖可変領域のＣＤＲの１、２もしくは３つをさらに含むモノクローナル抗体も提供される。場合により、前記軽鎖または重鎖ＣＤＲのいずれか１つ以上は、１、２、３、４または５つ以上のアミノ酸改変（例えば、置換、挿入または欠失）を含有し得る。場合により、抗体１０Ｇ５の抗原結合領域の一部または全部を含む軽鎖および／または重鎖可変領域のいずれかがヒトＩｇＧタイプの免疫グロブリン定常領域、場合により、ヒト定常領域、場合により、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプに融合している抗体が提供される。
【０１７９】
別の態様において、抗体をコードする精製ポリペプチドであって、抗体は、配列番号２７に記載のアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（例えば、ＳＹＴＭＨ（配列番号２５）、ＧＹＴＦＴＳ（配列番号２６））（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＨＣＤＲ１領域；配列番号２８に記載のアミノ酸配列ＹＩＮＰＳＳＧＹＴＥＮＮＲＫＦ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（例えば、ＹＩＮＰＳＳＧＹ（配列番号２９））（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＨＣＤＲ２領域；配列番号３０に記載のアミノ酸配列ＲＬＧＫＧＬＬＰＰＦＤＹ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＨＣＤＲ３領域；配列番号３１に記載のアミノ酸配列ＲＡＳＥＮＩＹＳＮＬＡ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＬＣＤＲ１領域；配列番号３２に記載のアミノ酸配列ＡＡＴＮＬＡＤ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＬＣＤＲ２領域；配列番号３３に記載のアミノ酸配列ＱＨＦＷＧＴＰＹＴ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、欠失され、または異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＬＣＤＲ３領域を含むポリペプチドが提供される。
【０１８０】
別の態様において、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２に結合する抗体であって、
（ａ）配列番号２３の重鎖可変領域（場合により、１、２、３つ以上の残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｂ）配列番号２４の軽鎖可変領域（場合により、１、２、３つ以上の残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｃ）配列番号２３の重鎖可変領域（場合により、１つ以上の残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；および配列番号２４の軽鎖可変領域（１、２、３つ以上の残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｄ）配列番号２５〜２７、２８〜２９および３０にそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列（場合により、任意のＣＤＲの１、２、３つ以上の残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｅ）配列番号３１、３２および３３に示される軽鎖ＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列（場合により、任意のＣＤＲの１、２、３つ以上の残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｆ）配列番号２５、２８および３０にそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列（場合により、任意のＣＤＲの１つ以上の残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；および配列番号３１、３２および３３に示される軽鎖ＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列（場合により、任意のＣＤＲの１、２、３つ以上の残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）
を含む抗体が提供される。
【０１８１】
本明細書の実施形態のいずれかの別の態様において、重鎖および軽鎖のＣＤＲ１、２および３のいずれかは、その少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列により、および／または対応する配列番号に列記される特定のＣＤＲもしくはＣＤＲの組と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の配列同一性を共有するアミノ酸配列を有すると特徴づけることができる。
【０１８２】
別の態様において、ＫＩＲ３ＤＬ２結合について上記（ａ）〜（ｆ）のモノクローナル抗体と競合する抗体が提供される。
【０１８３】
抗体１３Ｈ１
抗体１３Ｈ１の重鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号３４として列記し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号３５として列記する。具体的な実施形態において、モノクローナル抗体１３Ｈ１と本質的に同一のエピトープまたは決定基に結合する抗体が提供され；場合により、抗体は、抗体１３Ｈ１の抗原結合領域を含む。本明細書の実施形態のいずれかにおいて、抗体１３Ｈ１は、そのアミノ酸配列および／またはそれをコードする核酸配列により特徴づけることができる。一実施形態において、モノクローナル抗体は、１３Ｈ１のＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２部分を含む。１３Ｈ１の重鎖可変領域を含むモノクローナル抗体も提供される。一実施形態によれば、モノクローナル抗体は、１３Ｈ１の重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含む。１３Ｈ１の可変軽鎖可変領域または１３Ｈ１の軽鎖可変領域のＣＤＲの１、２もしくは３つをさらに含むモノクローナル抗体も提供される。場合により、前記軽鎖または重鎖ＣＤＲのいずれか１つ以上は、１、２、３、４または５つ以上のアミノ酸改変（例えば、置換、挿入または欠失）を含有し得る。場合により、抗体１３Ｈ１の抗原結合領域の一部または全部を含む軽鎖および／または重鎖可変領域のいずれかがヒトＩｇＧタイプの免疫グロブリン定常領域、場合により、ヒト定常領域、場合により、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプに融合している抗体が提供される。
【０１８４】
別の態様において、抗体をコードする精製ポリペプチドであって、抗体は、配列番号３８に記載のアミノ酸配列ＨＹＳＦＩＧＹＴＭ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（例えば、ＧＹＴＭＮ（配列番号３６）、ＨＹＳＦＩＧ（配列番号３７））（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＨＣＤＲ１領域；配列番号３９に記載のアミノ酸配列ＬＩＮＰＹＮＧＤＴＴＹＮＱＫＦＫＧ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（例えば、ＬＩＮＰＹＮＧＤＴＴ（配列番号４０））（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＨＣＤＲ２領域；配列番号４１に記載のアミノ酸配列ＥＮＷＧＹＰＹＡＭＤＹ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＨＣＤＲ３領域；配列番号４２に記載のアミノ酸配列ＲＡＳＥＳＶＤＮＦＧＩＳＦＭＮ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＬＣＤＲ１領域；配列番号４３に記載のアミノ酸配列ＡＡＳＮＱＧＳ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＬＣＤＲ２領域；配列番号４４に記載のアミノ酸配列ＱＱＳＫＥＶＰＹＴ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、欠失され、または異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＬＣＤＲ３領域を含むポリペプチドが提供される。
【０１８５】
別の態様において、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２に結合する抗体であって、
（ａ）配列番号３４の重鎖可変領域（場合により、１、２、３つ以上のアミノ酸残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｂ）配列番号３５の軽鎖可変領域（場合により、１、２、３つ以上のアミノ酸残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｃ）配列番号３４の重鎖可変領域（場合により、１つ以上のアミノ酸残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；および配列番号３５の軽鎖可変領域（これらのアミノ酸の１、２、３つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｄ）配列番号３６〜３８、３９〜４０および４１にそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列（場合により、任意のＣＤＲの１、２、３つ以上のアミノ酸残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｅ）配列番号４２、４３および４４に示される軽鎖ＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列（場合により、任意のＣＤＲの１、２、３つ以上のアミノ酸残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｆ）配列番号３６、３９および４１にそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列（場合により、任意のＣＤＲの１つ以上のアミノ酸残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；および配列番号４２、４３および４４に示される軽鎖ＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列（場合により、任意のＣＤＲの１、２、３つ以上のアミノ酸残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）
を含む抗体が提供される。
【０１８６】
本明細書の実施形態のいずれかの別の態様において、重鎖および軽鎖のＣＤＲ１、２および３のいずれかは、その少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列により、および／または対応する配列番号に列記される特定のＣＤＲもしくはＣＤＲの組と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の配列同一性を共有するアミノ酸配列を有すると特徴づけることができる。
【０１８７】
別の態様において、ＫＩＲ３ＤＬ２結合について上記（ａ）〜（ｆ）のモノクローナル抗体と競合する抗体が提供される。
【０１８８】
抗体１Ｅ２
抗体１Ｅ２の重鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号４５として列記し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号４６として列記する。具体的な実施形態において、モノクローナル抗体１Ｅ２と本質的に同一のエピトープまたは決定基に結合する抗体が提供され；場合により、抗体は、抗体１Ｅ２の抗原結合領域を含む。本明細書の実施形態のいずれかにおいて、抗体１Ｅ２は、そのアミノ酸配列および／またはそれをコードする核酸配列により特徴づけることができる。一実施形態において、モノクローナル抗体は、１Ｅ２のＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２部分を含む。１Ｅ２の重鎖可変領域を含むモノクローナル抗体も提供される。一実施形態によれば、モノクローナル抗体は、１Ｅ２の重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含む。１Ｅ２の可変軽鎖可変領域または１Ｅ２の軽鎖可変領域のＣＤＲの１、２もしくは３つをさらに含むモノクローナル抗体も提供される。場合により、前記軽鎖または重鎖ＣＤＲのいずれか１つ以上は、１、２、３、４または５つ以上のアミノ酸改変（例えば、置換、挿入または欠失）を含有し得る。場合により、抗体１Ｅ２の抗原結合領域の一部または全部を含む軽鎖および／または重鎖可変領域のいずれかがヒトＩｇＧタイプの免疫グロブリン定常領域、場合により、ヒト定常領域、場合により、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプに融合している抗体が提供される。
【０１８９】
別の態様において、抗体をコードする精製ポリペプチドであって、抗体は、配列番号４９に記載のアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＡＭＮ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（例えば、ＤＹＡＭＮ（配列番号４７）、ＧＹＴＦＴＤ（配列番号４８））（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＨＣＤＲ１領域；配列番号５０に記載のアミノ酸配列ＶＩＳＴＹＹＧＤＡＮＹＮＱＫＦＫＧ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（例えば、ＶＩＳＴＹＹＧＤＡＮ（配列番号５１））（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＨＣＤＲ２領域；配列番号５２に記載のアミノ酸配列ＩＹＹＤＹＤＧＳＹ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＨＣＤＲ３領域；配列番号５３に記載のアミノ酸配列ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＬＣＤＲ１領域；配列番号５４に記載のアミノ酸配列ＫＶＳＮＲＦＳ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＬＣＤＲ２領域；配列番号５５に記載のアミノ酸配列ＳＱＳＴＨＶＰＰＹＴ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、欠失され、または異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＬＣＤＲ３領域を含むポリペプチドが提供される。
【０１９０】
別の態様において、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２に結合する抗体であって、
（ａ）配列番号４２の重鎖可変領域（場合により、１、２、３つ以上のアミノ酸残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｂ）配列番号４３の軽鎖可変領域（場合により、１、２、３つ以上のアミノ酸残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｃ）配列番号４２の重鎖可変領域（場合により、１つ以上のアミノ酸残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；および配列番号４３の軽鎖可変領域（場合により、これらのアミノ酸の１、２、３つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｄ）配列番号４７〜４９、５０〜５１および５２にそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列（場合により、任意のＣＤＲの１、２、３つ以上のアミノ酸残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｅ）配列番号５３、５４および５５に示される軽鎖ＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列（場合により、任意のＣＤＲの１、２、３つのアミノ酸残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｆ）配列番号４７、５０および５２に示される重鎖ＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列（場合により、任意のＣＤＲの１つ以上のアミノ酸残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；および配列番号５３、５４および５５に示される軽鎖ＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列（場合により、任意のＣＤＲの１、２、３つ以上のアミノ酸残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）
を含む抗体が提供される。
【０１９１】
本明細書の実施形態のいずれかの別の態様において、重鎖および軽鎖のＣＤＲ１、２および３のいずれかは、その少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列により、および／または対応する配列番号に列記される特定のＣＤＲもしくはＣＤＲの組と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の配列同一性を共有するアミノ酸配列を有すると特徴づけることができる。
【０１９２】
別の態様において、ＫＩＲ３ＤＬ２結合について上記（ａ）〜（ｆ）のモノクローナル抗体と競合する抗体が提供される。
【０１９３】
抗体９Ｅ１０
抗体９Ｅ１０の重鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号５６として列記し、９Ｅ１０の軽鎖可変領域（利用可能な２つの交互の軽鎖）のアミノ酸配列を配列番号５７および６７として列記する。具体的な実施形態において、モノクローナル抗体９Ｅ１０と本質的に同一のエピトープまたは決定基に結合する抗体が提供され；場合により、抗体は、抗体９Ｅ１０の抗原結合領域を含む。本明細書の実施形態のいずれかにおいて、抗体９Ｅ１０は、そのアミノ酸配列および／またはそれをコードする核酸配列により特徴づけることができる。一実施形態において、モノクローナル抗体は、９Ｅ１０のＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２部分を含む。９Ｅ１０の重鎖可変領域を含むモノクローナル抗体も提供される。一実施形態によれば、モノクローナル抗体は、９Ｅ１０の重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含む。９Ｅ１０の可変軽鎖可変領域または９Ｅ１０の軽鎖可変領域のＣＤＲの１、２もしくは３つをさらに含むモノクローナル抗体も提供される。場合により、前記軽鎖または重鎖ＣＤＲのいずれか１つ以上は、１、２、３、４または５つのアミノ酸改変（例えば、置換、挿入または欠失）を含有し得る。場合により、抗体９Ｅ１０の抗原結合領域の一部または全部を含む軽鎖および／または重鎖可変領域のいずれかがヒトＩｇＧタイプの免疫グロブリン定常領域、場合により、ヒト定常領域、場合により、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプに融合している抗体が提供される。
【０１９４】
別の態様において、抗体をコードする精製ポリペプチドであって、抗体は、配列番号６０に記載のアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＴＭＨ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（例えば、ＳＹＴＭＨ（配列番号５８）、ＧＹＴＦＴＳ（配列番号５９））（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＨＣＤＲ１領域；配列番号６１に記載のアミノ酸配列ＹＩＮＰＳＳＧＹＴＤＹＮＱＫＦＫＤ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（例えば、ＹＩＮＰＳＳＧＹＴＤ（配列番号６２））（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＨＣＤＲ２領域；配列番号６３に記載のアミノ酸配列ＬＧＫＧＬＬＰＰＦＤＹ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＨＣＤＲ３領域；配列番号６４に記載のアミノ酸配列ＫＳＮＱＮＬＬＷＳＧＮＱＲＹＣＬＶ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＬＣＤＲ１領域；配列番号６５に記載のアミノ酸配列ＷＴＳＤＲＹＳ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）を含むＬＣＤＲ２領域；配列番号６６に記載のアミノ酸配列ＱＱＨＬＨＩＰＹＴ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列（これらのアミノ酸の１つ以上は、欠失され、もしくは異なるアミノ酸により置換されていてよく、または配列は、１つ以上のアミノ酸の挿入を含み得る）を含むＬＣＤＲ３領域を含むポリペプチドが提供される。
【０１９５】
別の態様において、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２に結合する抗体であって、
（ａ）配列番号５６の重鎖可変領域（場合により、１、２、３つまたはアミノ酸残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｂ）配列番号５７もしくは６７の軽鎖可変領域（場合により、１、２、３つ以上のアミノ酸残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｃ）配列番号５６の重鎖可変領域（場合により、１、２、３つ以上のアミノ酸残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；および配列番号５７もしくは６７の軽鎖可変領域（場合により、１、２、３つ以上のアミノ酸残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｄ）配列番号５８、５９および６０、６１〜６２および６３に示される重鎖ＣＤＲ１および２（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２）アミノ酸配列（場合により、任意のＣＤＲの１、２、３つ以上の残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｅ）配列番号６４、６５および６６に示される軽鎖ＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列（場合により、任意のＣＤＲの１、２、３つ以上の残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；ならびに／または
（ｆ）配列番号５８、６１および６３に示される重鎖ＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列（場合により、任意のＣＤＲの１、２、３つ以上の残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）；および配列番号６４、６５および６６に示される軽鎖ＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列（場合により、任意のＣＤＲの１、２、３つ以上の残基は、異なるアミノ酸により置換されていてよい）
を含む抗体が提供される。
【０１９６】
別の実施形態において、抗体１Ｃ３（抗Ｄ２ドメイン）、その可変領域およびＣＤＲが提供される。一実施形態において、配列番号１７０および１７１のＶＨおよびＶＬ領域をそれぞれ有する抗体（１Ｃ３）が提供される。一実施形態において、配列番号１７２、１７３または１７４（ＨＣＤＲ１）、配列番号１７５または１７６（ＨＣＤＲ２）および配列番号１７７（ＨＣＤＲ３）の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）を含む重鎖を有し、それぞれのＣＤＲは、任意に、１、２、３または４つのアミノ酸置換、欠失または挿入を含み得る抗体が提供される。一実施形態において、（ｉ）配列番号１７２、１７３または１７４（ＨＣＤＲ１）、配列番号１７５または１７６（ＨＣＤＲ２）および配列番号１７７（ＨＣＤＲ３）の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに（ｉｉ）配列番号１７８、１７９または１８０の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む軽鎖を有し、それぞれのＣＤＲは、任意に、１、２、３または４つのアミノ酸置換、欠失または挿入を含み得る抗体が提供される。
【０１９７】
別の実施形態において、抗体２０Ｅ９（抗Ｄ２ドメイン）、その可変領域およびＣＤＲが提供される。一実施形態において、配列番号１８１および１８２のＶＨおよびＶＬ領域をそれぞれ有する抗体（２０Ｅ９）が提供される。一実施形態において、配列番号１８３、１８４または１８５（ＨＣＤＲ１）、配列番号１８６または１８７（ＨＣＤＲ２）および配列番号１８８（ＨＣＤＲ３）の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）を含む重鎖を有し、それぞれのＣＤＲは、任意に、１、２、３または４つのアミノ酸置換、欠失または挿入を含み得る抗体が提供される。一実施形態において、（ｉ）配列番号１８３、１８４または１８５（ＨＣＤＲ１）、配列番号１８６または１８７（ＨＣＤＲ２）および配列番号１８８（ＨＣＤＲ３）の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに（ｉｉ）配列番号１８９、１９０または１９１の配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、２および３を含む軽鎖（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を有し、それぞれのＣＤＲは、任意に、１、２、３または４つのアミノ酸置換、欠失または挿入を含み得る抗体が提供される。
【０１９８】
本明細書の実施形態のいずれかの別の態様において、重鎖および軽鎖のＣＤＲ１、２および３のいずれかは、その少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０連続アミノ酸の配列により、および／または対応する配列番号に列記される特定のＣＤＲもしくはＣＤＲの組と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の配列同一性を共有するアミノ酸配列を有すると特徴づけることができる。
【０１９９】
別の態様において、ＫＩＲ３ＤＬ２結合について上記モノクローナル抗体と競合する抗体が提供される。
【０２００】
抗体のいずれかにおいて、規定の可変領域およびＣＤＲ配列は、１、２、３、４、５つ以上の保存的配列改変を含み得る。保存的配列改変は、アミノ酸配列を含有する抗体の結合特徴に有意に影響せず、変化もさせないアミノ酸改変を指す。そのような保存的改変としては、アミノ酸置換、付加および欠失が挙げられる。改変は、当技術分野において公知の標準的技術、例えば、部位特異的突然変異導入およびＰＣＲ媒介突然変異導入により本発明の抗体中に導入することができる。保存的アミノ酸置換は、典型的には、アミノ酸残基を、類似の物理化学的特性を有する側鎖を有するアミノ酸残基により置き換えるものである。規定の可変領域およびＣＤＲ配列は、１、２、３、４つ以上のアミノ酸挿入、欠失または置換を含み得る。置換を行う場合、置換は、任意選択的に保存的改変であってもよい。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野において定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えばグリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分枝側鎖（例えばトレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が挙げられる。したがって、抗体のＣＤＲ領域内の１つ以上のアミノ酸残基は、同一側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基により置き換えることができ、または変化された抗体は、保持された機能（すなわち、本明細書に記載の特性）について本明細書に記載のアッセイを使用して試験することができる。
【０２０１】
用語「同一性」または「同一である」は、２つ以上のポリペプチドの配列間の関係において使用される場合、２つ以上のアミノ酸残基の文字列間でのマッチの数によって決定された、ポリペプチド間の配列の関連性の程度を示す。「同一性」は、特定の数学モデルまたはコンピュータプログラム（すなわち、「アルゴリズム」）により対処されるギャップアラインメント（存在する場合）を有する２つ以上の配列の小さい方の間での同一のマッチのパーセントの尺度である。関連するポリペプチドの同一性は、公知の方法により容易に計算することができる。そのような方法としては、限定されるものではないが、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  １，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１；およびＣａｒｉｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，ＳＩＡＭ  Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．４８，１０７３（１９８８）に記載のものが挙げられる。
【０２０２】
同一性を決定するための好ましい方法は、試験される配列間で最大マッチを与えるように設計される。同一性を決定するための方法は、公的に利用可能なコンピュータプログラムにおいて記述されている。２つの配列間の同一性を判定するための好ましいコンピュータプログラムの方法としては、ＧＣＧプログラムパッケージ、例としてＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１２，３８７（１９８４）；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、およびＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５，４０３−４１０（１９９０））が挙げられる。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）および他のソース（ＢＬＡＳＴ  Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．、前掲）から公的に利用可能である。周知のＳｍｉｔｈ  Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムを使用して同一性を決定することもできる。
【０２０３】
ＡｂＭ（Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアの定義）、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの定義系による、本発明による抗体のＣＤＲの配列を、重鎖ＣＤＲについては表１に、軽鎖ＣＤＲについては表２に以下にまとめた（軽鎖ＣＤＲは、ＡｂＭ、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの定義のそれぞれについて同一である）。本明細書に記載のアミノ酸配列は、Ａｂｍ、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａ番号付与系により番号付与する。任意の好適な番号付与系を任意の他の表示の不存在下で、指定されたＣＤＲ領域に対して使用することができる一方、Ａｂｍ番号付与が使用される。そのような番号付与は、以下の表示を使用して確立されている：ＣＤＲ−Ｌ１：開始：約残基２４、前の残基：常にＣｙｓ、後の残基：常にＴｒｐ（典型的には、Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎだけでなく、Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ、Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ、Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ）、長さ：１０〜１７残基；ＣＤＲ−Ｌ２：開始：Ｌ１の末端の後に常に１６残基、前の残基：一般にＩｌｅ−Ｔｙｒ（それだけでなく、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ、Ｉｌｅ−Ｐｈｅ）、長さ：常に７残基；ＣＤＲ−Ｌ３、開始：Ｌ２の末端の後に常に３３残基、前の残基：常にＣｙｓ、後の残基：常にＰｈｅ−Ｇｌｙ−Ｘａａ−Ｇｌｙ、長さ：７〜１１残基；ＣＤＲ−Ｈ１、開始：約残基２６（Ｃｙｓの後に常に４残基）（Ｃｈｏｔｈｉａ／ＡｂＭ定義、Ｋａｂａｔ定義は５残基後から開始する）、前の残基：常にＣｙｓ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ、後の残基：常にＴｒｐ（典型的には、Ｔｒｐ−Ｖａｌだけでなく、Ｔｒｐ−Ｉｌｅ、Ｔｒｐ−Ａｌａ）、長さ：１０〜１２残基（ＡｂＭ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は最後の４残基を除外する）；ＣＤＲ−Ｈ２、開始：ＣＤＲ−Ｈ１のＫａｂａｔ／ＡｂＭ定義の末端の後に常に１５残基、前の残基：典型的にはＬｅｕ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ（しかし、多数の変動、Ｌｙｓ／Ａｒｇ−Ｌｅｕ／Ｉｌｅ／Ｖａｌ／Ｐｈｅ／Ｔｈｒ／Ａｌａ−Ｔｈｒ／Ｓｅｒ／Ｉｌｅ／Ａｌａ後の残基）、長さ：Ｋａｂａｔ定義では１６〜１９残基；ＡｂＭ（およびＣｈｏｔｈｉａ）定義では、７残基前で終了する；ＣＤＲ−Ｈ３、開始：ＣＤＲ−Ｈ２の末端の後に常に３３残基（Ｃｙｓの後に常に２残基）、前の残基：常にＣｙｓ−Ｘａａ−Ｘａａ（典型的にはＣｙｓ−Ａｌａ−Ａｒｇ）、後の残基：常にＴｒｐ−Ｇｌｙ−Ｘａａ−Ｇｌｙ、長さ：３〜２５残基。
【０２０４】
一実施形態において、抗体は、ヒトまたはマウスＩｇＧ１アイソタイプのものである。別の実施形態において、抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプのものである。一実施形態において、抗体は、その結合および／または機能特性を保持する抗体断片である。
【０２０５】
【表１】
0006507097.tif 000002
【０２０６】
【表２】
0006507097.tif 000003
【０２０７】
抗体の可変鎖の配列を、以下の表３に列記し、ＣＤＲに下線を付す。本明細書の任意の実施形態において、ＶＬまたはＶＨ配列は、シグナルペプチドまたはそれらの任意の部分を含有し、または欠くように規定または番号付与することができる。
【０２０８】
【表３】
0006507097.tif 000004
【０２０９】
【表４】
0006507097.tif 000005
【０２１０】
【表５】
0006507097.tif 000006
【０２１１】
断片および誘導体
抗体の断片および誘導体（特に記載がなくまたは文脈と明らかに矛盾しない限り、本出願において使用される用語「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」または「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」により包含される）、好ましくは、１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９様抗体は、当技術分野において公知の技術により産生することができる。「断片」は、インタクト抗体の一部、一般に抗原結合部位または可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片；ダイアボディ；連続アミノ酸残基の１つの不断配列からなる一次構造を有するポリペプチドである任意の抗体断片（本明細書において「単鎖抗体断片」または「単鎖ポリペプチド」と称される）、例として、限定されるものではないが、（１）単鎖Ｆｖ分子、（２）会合重鎖部分を有さない、１つの軽鎖可変ドメインのみを含有する単鎖ポリペプチド、または軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含有するその断片、および（３）会合軽鎖部分を有さない、１つの重鎖可変領域のみを含有する単鎖ポリペプチド、または重鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを有するその断片；ならびに抗体断片から形成される多重特異的抗体が挙げられる。とりわけ、ナノボディ、ドメイン抗体、単一ドメイン抗体または「ｄＡｂ」が含まれる。
【０２１２】
本抗体の断片は、標準的方法を使用して得ることができる。例えば、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２断片は、慣用技術に従って単離抗体のプロテアーゼ消化により産生することができる。免疫反応性断片は、公知の方法を使用し、例えば、インビボでクリアランスを遅延させ、より望ましい薬物動態学的特性を得るように改変することができ、断片をポリエチレングリコール（ＰＥＧ）により修飾することができることが理解される。ＰＥＧをＦａｂ’断片にカップリングおよび部位特異的にコンジュゲートする方法は、例えば、開示が参照により本明細書に組み込まれるＬｅｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ，１６（３）：１０６−１１９（２００１）およびＤｅｌｇａｄｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ７３（２）：１７５−１８２（１９９６）に記載されている。
【０２１３】
あるいは、抗体、好ましくは、１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９様抗体を産生するハイブリドーマのＤＮＡを、断片をコードするように改変することができる。次いで、改変ＤＮＡを発現ベクター中に挿入し、それを使用して適切な細胞を形質転換または形質移入し、次いでそれが所望の断片を発現する。
【０２１４】
ある実施形態において、抗体、好ましくは、１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９様抗体を産生するハイブリドーマのＤＮＡは、発現ベクター中への挿入前、例えばヒト重鎖および軽鎖定常ドメインについてのコード配列を相同非ヒト配列の代わりに置換し（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ｐｐ６８５１（１９８４））、または免疫グロブリンコード配列に、非免疫グロブリンポリペプチドについてのコード配列の全部もしくは一部を共有結合させることにより改変することができる。そのようにして、元の抗体の結合特異性を有する「キメラ」または「ハイブリッド」抗体を調製する。典型的には、そのような非免疫グロブリンポリペプチドは、本発明の抗体の定常ドメインと置換する。
【０２１５】
したがって、別の実施形態によれば、抗体、好ましくは、１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９様抗体は、ヒト化されている。本発明による抗体の「ヒト化」形態は、特異的なキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはその断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または抗体の他の抗原結合部分配列など）であり、それらはネズミ免疫グロブリンに由来する最小配列を含有する。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）らの残基が元の抗体（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基により置き換えられている一方、元の抗体の所望の特異性、親和性、および能力を維持するヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。
【０２１６】
一部の例において、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基により置き換えられていてよい。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはインポートされたＣＤＲもしくはフレームワーク配列のいずれにおいても見出されない残基を含み得る。これらの改変は、抗体性能をさらに改良し、最適化するためになされる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全部を含み、ＣＤＲ領域の全部または実質的に全部は、元の抗体のそれらに対応し、ＦＲ領域の全部または実質的に全部は、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のそれらである。ヒト化抗体は、最適には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのそれも含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１，ｐｐ．５２２（１９８６）；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，３３２，ｐｐ．３２３（１９８８）；Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２，ｐｐ．５９３（１９９２）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９，ｐｐ．１５３４；および米国特許第４，８１６，５６７号明細書参照、それらの全開示は、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０２１７】
ヒト化抗体の作製に使用すべき軽鎖および重鎖の両方のヒト可変ドメインの選択は、抗原性を低減させるために極めて重要である。いわゆる「ベストフィット（ｂｅｓｔ−ｆｉｔ）」法によれば、抗体の可変ドメインの配列を、既知のヒト可変ドメイン配列の全ライブラリーに対してスクリーニングする。次いで、マウスの配列に最も近いヒト配列をヒト化抗体のヒトフレームワーク（ＦＲ）として認める（Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１，ｐｐ．２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．１９６，１９８７，ｐｐ．９０１）。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定の下位群の全てのヒト抗体のコンセンサス配列からの特定のフレームワークを使用する。同一フレームワークは、いくつかの異なるヒト化抗体について使用することができる（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ８９，ｐｐ．４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１，ｐ．２６２３（１９９３））。
【０２１８】
抗体がＫＩＲ３ＤＬ２受容体に対する高親和性および他の好ましい生物学的特性を保持してヒト化されていることはさらに重要である。この目的を達成するため、例示的な方法によれば、親およびヒト化配列の三次元モデルを使用する親配列および種々の概念的ヒト化産物の分析プロセスによりヒト化抗体を調製する。三次元免疫グロブリンモデルは、一般に利用可能であり、当業者には周知である。選択される候補免疫グロブリン配列の考えられる三次元構造を図示し、表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらの表示の精査により、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の推定される役割の分析、すなわち候補免疫グロブリンのその抗原への結合能に影響を与える残基の分析が可能になる。このようにして、所望の抗体特性、例えば標的抗原に対する親和性の増加が達成されるように、ＦＲ残基をコンセンサスおよびインポート配列から選択し、組み合わせることができる。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合への影響に直接的に、最も実質的に関与する。
【０２１９】
「ヒト化」モノクローナル抗体を作製する別の方法は、免疫グロブリン遺伝子が機能ヒト免疫グロブリン遺伝子により置き換えられたことによるネズミ宿主を使用することである（例えば、参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許第６，１６２，９６３号明細書参照）。
【０２２０】
ヒト抗体は、種々の他の技術に従って、例えば免疫化のため、ヒト抗体レパートリーを発現するように遺伝子操作された他のトランスジェニック動物を使用することにより（Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６２（１９９３）２５５）、またはファージディスプレイ法を使用する抗体レパートリーの選択により産生することもできる。そのような技術は、当業者に公知であり、本明細書に開示されるモノクローナル抗体から出発して実施することができる。
【０２２１】
抗体、場合により、１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９様抗体は、重鎖／軽鎖の一部が元の抗体中の対応配列と同一または相同である一方、鎖の残部が、別種に由来し、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応配列と同一または相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）、ならびにそのような抗体の断片に、それらが所望の生物学的活性および結合特異性を示す限り、誘導体化することもできる（Ｃａｂｉｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．、前掲；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，ｐｐ．６８５１（１９８４））。
【０２２２】
ヒト化抗体または親和性成熟抗体の種々の形態が企図される。例えば、ヒト化抗体または親和性成熟抗体は、抗体断片、例えば、Ｆａｂであり得る。あるいは、ヒト化抗体または親和性成熟抗体は、全長またはインタクト抗体、例えば、全長またはインタクトＩｇＧ１またはＩｇＧ４抗体であり得る。一実施形態において、ヒト化抗体は、全長ＩｇＧ４抗体またはその断片である。そのような抗体を産生するため、ヒト化ＶＨおよびＶＬ領域、またはそれらのバリアントバージョンを、標準的な組換え法に従ってヒト抗体からの全長またはトランケート定常領域をコードする発現ベクター中にクローニングすることができる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄＥｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９参照）。結果は、選択されたＶＨおよびＶＬ領域ならびに定常領域を含む関心対象のヒト化抗体分子を発現および分泌する形質移入細胞系である。ヒト抗体の定常領域をコードするｃＤＮＡ配列は、既知である。
【０２２３】
定常領域は、公知の方法に従ってさらに改変することができる。例えば、ＩｇＧ４定常領域において、残基Ｓ２４１は、プロリン（Ｐ）残基に突然変異させてヒンジにおける完全なジスルフィド架橋形成を可能とすることができる（例えば、Ａｎｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９３；３０：１０５−８参照）。
【０２２４】
改変定常領域
ＡＤＣＣおよびＣＤＣを誘導する本発明の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体（特に、非内在化抗体）の能力の観点から、エフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞毒性、マスト細胞脱顆粒、および食作用、ならびに免疫調節シグナル、例えば、リンパ球増殖および抗体分泌の調節に影響し得るＦｃ受容体に結合するそれらの能力を増加させる改変を有する抗体を作製することもできる。典型的な改変としては、少なくとも１つのアミノ酸改変（例えば、置換、欠失、挿入）、および／または変化されたタイプのグリコシル化、例えば、低フコシル化を含む改変ヒトＩｇＧ１定常領域が挙げられる。そのような改変は、Ｆｃ受容体：ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）との相互作用に影響し得る。ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）は、活性化（すなわち、免疫系向上）受容体である一方、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）は、阻害（すなわち、免疫系減衰）受容体である。改変は、例えば、エフェクター（例えば、ＮＫ）細胞上のＦｃγＲＩＩＩａへのＦｃドメインの結合を増加させ得る。
【０２２５】
抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、好ましくは、任意に改変されているヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプのＦｃドメイン（またはその一部）を含む。残基２３０〜３４１（Ｋａｂａｔ  ＥＵ）は、ＦｃＣＨ２領域である。残基２３０〜３４１（Ｋａｂａｔ  ＥＵ）は、ＦｃＣＨ２領域である。残基３４２〜４４７（Ｋａｂａｔ  ＥＵ）は、ＦｃＣＨ３領域である。抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、１つ以上の位置中の１つ以上のアミノ酸改変（例えば、置換、欠失、挿入）を有するバリアントＦｃ領域を含み得、その改変は、ＦｃγＲ（例として、活性化および阻害ＦｃγＲ）に対するバリアントＦｃ領域の親和性およびアビディティーを増加させる。一部の実施形態において、前記１つ以上のアミノ酸改変は、ＦｃγＲＩＩＩＡおよび／またはＦｃγＲＩＩＡに対するバリアントＦｃ領域の親和性を増加させる。別の実施形態において、バリアントＦｃ領域は、同等の親抗体（例えば、Ｆｃ領域中の１つ以上のアミノ酸改変を除き抗体と同一のアミノ酸配列を有する抗体）のＦｃ領域よりも低い親和性でＦｃγＲＩＩＢにさらに特異的に結合する。例えば、アミノ酸３１０および４３５位におけるヒスチジン残基の一方または両方は、例えば、リジン、アラニン、グリシン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、メチオニン、トリプトファン、フェニルアラニン、セリンまたはトレオニンにより置換されていてよく（例えば、ＰＣＴ公開の国際公開第２００７／０８０２７７号パンフレット参照）；そのような置換定常領域は、活性ＦｃγＲＩＩＩＡへの結合を減少させずに阻害ＦｃγＲＩＩＢへの結合の減少を提供する。一部の実施形態において、そのような改変は、親抗体に比べてＦｃγＲＩＩＩＡおよび／またはＦｃγＲＩＩＡに対するバリアントＦｃ領域の親和性を増加させ、ＦｃγｙＲＩＩＢに対するバリアントＦｃ領域の親和性も向上させる。他の実施形態において、前記１つ以上のアミノ酸改変は、親抗体のＦｃ領域に比べてＦｃγＲＩＩＩＡおよび／またはＦｃγＲＩＩＡに対するバリアントＦｃ領域の親和性を増加させるが、ＦｃγＲＩＩＢに対するバリアントＦｃ領域の親和性を変化させない。別の実施形態において、前記１つ以上のアミノ酸改変は、親抗体に比べてＦｃγＲＩＩＩＡおよびＦｃγＲＩＩＡに対するバリアントＦｃ領域の親和性を向上させるが、ＦｃγＲＩＩＢに対する親和性を低減させる。親和性および／またはアビディティーの増加は、（改変Ｆｃ領域を有さない）親分子の結合活性を細胞中で検出することができない低レベルのＦｃγＲを発現する細胞中での検出可能なＦｃγＲへの結合またはＦｃγＲ関連活性をもたらす。
【０２２６】
ＦｃγＲに対する抗体の親和性および結合特性は、抗体−抗原またはＦｃ−ＦｃγＲ相互作用、すなわち、それぞれ抗体への抗原の特異的結合またはＦｃγＲへのＦｃ領域の特異的結合を測定する当技術分野において公知のインビトロアッセイ（生化学または免疫ベースアッセイ）、例として、限定されるものではないが、ＥＬＩＳＡアッセイ、表面プラズモン共鳴アッセイ、免疫沈降アッセイを使用して測定することができる。
【０２２７】
一部の実施形態において、バリアントＦｃ領域を含む抗体は、Ｆｃ領域のＣＨ３ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９つ以上のアミノ酸改変を有する）を含む。他の実施形態において、バリアントＦｃ領域を含む抗体は、アミノ酸２３１〜３４１から伸長すると定義されるＦｃ領域のＣＨ２ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９つ以上のアミノ酸改変を有する）を含む。一部の実施形態において、抗体は、少なくとも２つのアミノ酸改変（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９つ以上のアミノ酸改変を有する）を含み、少なくとも１つのそのような改変はＣＨ３領域中に存在し、少なくとも１つのそのような改変はＣＨ２領域中に存在する。ヒンジ領域中のアミノ酸改変も包含する。一実施形態において、アミノ酸２１６〜２３０から伸長すると定義されるＦｃ領域のＣＨ１ドメイン中のアミノ酸改変を包含する。
【０２２８】
Ｆｃ改変の任意の組合せ、例えば、米国特許第７，６３２，４９７号明細書；米国特許第７，５２１，５４２号明細書；米国特許第７，４２５，６１９号明細書；米国特許第７，４１６，７２７号明細書；米国特許第７，３７１，８２６号明細書；米国特許第７，３５５，００８号明細書；米国特許第７，３３５，７４２号明細書；米国特許第７，３３２，５８１号明細書；米国特許第７，１８３，３８７号明細書；米国特許第７，１２２，６３７号明細書；米国特許第６，８２１，５０５号明細書および米国特許第６，７３７，０５６号明細書；ＰＣＴ公開の国際公開第２０１１／１０９４００号パンフレット；国際公開第２００８／１０５８８６号パンフレット；国際公開第２００８／００２９３３号パンフレット；国際公開第２００７／０２１８４１号パンフレット；国際公開第２００７／１０６７０７号パンフレット；国際公開第０６／０８８４９４号パンフレット；国際公開第０５／１１５４５２号パンフレット；国際公開第０５／１１０４７４号パンフレット；国際公開第０４／１０３２２６９号パンフレット；国際公開第００／４２０７２号パンフレット；国際公開第０６／０８８４９４号パンフレット；国際公開第０７／０２４２４９号パンフレット；国際公開第０５／０４７３２７号パンフレット；国際公開第０４／０９９２４９号パンフレットおよび国際公開第０４／０６３３５１号パンフレット；ならびにＰｒｅｓｔａ，Ｌ．Ｇ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３０（４）：４８７−４９０；Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６；２７７（３０）：２６７３３−２６７４０およびＳｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１−６６０４）に開示される異なる改変の任意の組合せを作製することができる。
【０２２９】
抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体はバリアントＦｃ領域を含んでもよく、バリアントＦｃ領域は、分子が野生型Ｆｃ領域を含む分子に比べて向上されたエフェクター機能を有するように、野生型Ｆｃ領域に比べて少なくとも１つのアミノ酸改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９つ以上のアミノ酸改変を有する）を含み、任意に、バリアントＦｃ領域は、２２１、２４３、２４７、２５５、２５６、２５８、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３００、３０１、３０３、３０５、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１６、３２０、３２２、３２６、３２９、３３０、３３２、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３３９、３４０、３５９、３６０、３７０、３７３、３７６、３７８、３９２、３９６、３９９、４０２、４０４、４１６、４１９、４２１、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８および／または４３９位のいずれか１つ以上における置換を含む抗体を包含する。一実施形態において、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体はバリアントＦｃ領域を含んでもよく、バリアントＦｃ領域は、分子が野生型Ｆｃ領域を含む分子に比べて向上されたエフェクター機能を有するように、野生型Ｆｃ領域に対する少なくとも１つのアミノ酸改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９つ以上のアミノ酸改変を有する）を含み、任意に、バリアントＦｃ領域は、３２９、２９８、３３０、３３２、３３３および／または３３４位のいずれか１つ以上における置換（例えば、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２９８Ａ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ、Ｅ３３３Ａおよび／またはＫ３３４Ａ置換）を含む抗体を包含する。
【０２３０】
一実施形態において、バリアントまたは野生型Ｆｃ領域を有する抗体は、抗体のＦｃ受容体結合能を増加させる変化されたグリコシル化パターンを有し得る。そのような炭水化物改変は、例えば、変化されたグリコシル化機序を有する宿主細胞中で抗体を発現させることにより達成することができる。変化したグリコシル化機序を有する細胞は、当技術分野において記載されており、本発明の組換え抗体を発現し、それにより変化したグリコシル化を有する抗体を産生する宿主細胞として使用することができる。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０；Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１、ならびに欧州特許第１，１７６，１９５号明細書；ＰＣＴ公開の国際公開第０６／１３３１４８号パンフレット；国際公開第０３／０３５８３５号パンフレット；国際公開第９９／５４３４２号パンフレット参照、そのそれぞれは参照により全体として本明細書に組み込まれる。
【０２３１】
一般に、変化されたグリコシル化を有するそのような抗体は、抗体が、ある所望の特性、例として、限定されるものではないが、非改変抗体または天然定常領域を有し、ネズミ骨髄腫ＮＳＯおよびチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｃｈｕ  ａｎｄ  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００１，１２：１８０−７）により生産される抗体、本明細書の実施例セクション、または組換え治療抗体を産生するために一般に使用される他の哺乳動物宿主細胞系において産生されるＨＥＫ２９３Ｔ発現抗体と比較して向上されたＡＤＣＣおよびエフェクター細胞受容体結合活性を産生する特定のＮ−グリカン構造を有するように、「糖最適化（ｇｌｙｃｏ−ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ）」されている。
【０２３２】
哺乳動物細胞系中で産生されるモノクローナル抗体は、それぞれの重鎖のＡｓｎ２９７におけるＮ−結合グリコシル化部位を含有する。抗体上のグリカンは、典型的には、極めて低い分岐Ｎ−アセチルグルコサミン（分岐ＧｌｃＮＡｃ）を有しまたは有さず、高レベルのコアフコシル化を有する複雑な二分岐（ｂｉａｔｅｎｎａｒｙ）構造である。グリカン末端は、極めて低い末端シアル酸を含有しまたは含有せず、変動量のガラクトースを含有する。抗体機能に対するグリコシル化の効果の観点については、例えば、Ｗｒｉｇｈｔ  ＆  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｔｒｅｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５：２６−３１（１９９７）参照。多数の研究が、抗体グリカン構造の糖組成の変化がＦｃエフェクター機能を変化させ得ることを示す。抗体活性に寄与する重要な炭水化物構造は、Ｆｃ領域Ｎ−結合オリゴ糖の最内部のＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌａｃＮＡｃ）残基へのアルファ−１，６結合を介して結合しているフコース残基であると考えられる（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。したがって、Ｎ−結合グリカン（ハイポフコシル化Ｎ−結合グリカン）上に低フコース含有物を有する抗体を生成することができる。
【０２３３】
ＦｃγＲ結合は、ヒトＩｇＧｌ、ＩｇＧ２またはＩｇＧ３タイプのＦｃ領域中の保存Ａｓｎ２９７において共有結合しているオリゴ糖の存在を要求する。近年、非フコシル化オリゴ糖構造は、インビトロＡＤＣＣ活性の大幅な増加に関連している。「Ａｓｎ２９７」は、Ｆｃ領域中の約２９７位において局在しているアミノ酸アスパラギンを指し；抗体のマイナー配列変異に基づき、Ａｓｎ２９７は、上流または下流（通常、＋３以下のアミノ酸）に局在している一部のアミノ酸でもあり得る。
【０２３４】
歴史的に、ＣＨＯ細胞中で産生される抗体は、非フコシル化集団の約２〜６％を含有する。ＹＢ２／０（ラット骨髄腫）およびＬｅｃｌ３細胞系（アルファ６−フコシルトランスフェラーゼの基質であるＧＤＰ−フコースまたはＧＤＰ糖中間体の欠損をもたらす欠損ＧＤＰマンノース４，６−デヒドラターゼを有するＣＨＯ系のレクチン突然変異体は、７８〜９８％の非フコシル化種を有する抗体を産生することが報告されている。他の例において、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）またはノックアウト技術を用いて細胞を遺伝子操作してＦＵＴ８ｍＲＮＡ転写産物レベルを減少させ、または遺伝子発現を完全にノックアウトすることができ、そのような抗体は、最大７０％の非フコシル化グリカンを含有することが報告されている。
【０２３５】
ＫＩＲ３ＤＬ２に結合する抗体は、Ａｓｎ２９７における糖鎖によりグリコシル化されていてもよく、ＦｃγＲＩＩＩへのＦｃ部分を介する増加された結合親和性を示す抗体を含む。本発明の一実施形態において、抗体は、ＦｃｙＲＩＩＩａへの抗体結合および／またはＡＤＣＣを改善するＦｃ領域中の少なくとも１つのアミノ酸変化を含む定常領域を含む。
【０２３６】
一態様において、抗体は、それらの定常領域中で低フコシル化されている。そのような抗体は、アミノ酸変化を含み得、またはアミノ酸変化を含み得ないが、そのような低フコシル化を生じさせるための条件下で産生または処理することができる。一態様において、抗体組成物は、本明細書に記載のキメラ、ヒトまたはヒト化抗体を含み、組成物中の抗体種の少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７５、８５、９０、９５％または実質的に全ては、フコースを欠くコア炭水化物構造（例えば、複合体、ハイブリッドおよび高マンノース構造）を含む定常領域を有する。一実施形態において、フコースを有するコア炭水化物構造を含む抗体を有さない抗体組成物が提供される。コア炭水化物は、好ましくは、Ａｓｎ２９７における糖鎖である。
【０２３７】
一実施形態において、抗体組成物、例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２に結合し、Ａｓｎ２９７における糖鎖によりグリコシル化されている組成物であって、抗体は、部分的にフコシル化されている組成物を含む。部分的にフコシル化されている抗体は、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースを欠く組成物中の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の比率が２０％〜９０％、好ましくは、２０％〜８０％、好ましくは、２０％〜５０％、５５％、６０％、７０％もしくは７５％、３５％〜５０％、５５％、６０％、７０％もしくは７５％、または４５％〜５０％、５５％、６０％、７０％もしくは７５％であることを特徴とする。好ましくは、抗体は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３タイプのものである。
【０２３８】
糖鎖は、任意の特徴（例えば、複合体、ハイブリッドおよび高マンノース構造の存在および比率）、例として、ヒト細胞からの抗体の、または齧歯類細胞、ネズミ細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）もしくは鳥類細胞中で組換え発現される抗体のＡｓｎ２９７に結合しているＮ−結合グリカンの特徴をさらに示し得る。
【０２３９】
一実施形態において、抗体は、細胞系がコア炭水化物中のフコースを欠くタンパク質を産生するように、フコシルトランスフェラーゼ酵素を欠いている細胞中で発現させる。例えば、細胞系Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、およびＭｓ７０９は、フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８（アルファ（１，６）フコシルトランスフェラーゼ）を欠き、その結果、Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、およびＭｓ７０９細胞系中で発現される抗体はそれらのコア炭水化物上のフコースを欠く。これらの細胞系は、２つの置換ベクターを使用するＣＨＯ／ＤＧ４４細胞中でのＦＵＴ８遺伝子の標的化破壊により作出された（Ｙａｍａｎｅ  ｅｔ  ａｌ．による米国特許出願公開第２００４０１１０７０４号明細書；およびＹａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  ８７：６１４−２２参照、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる）。他の例としては、ＦＵＴ８遺伝子を機能的に破壊するためのアンチセンス抑制、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）干渉、ヘアピンＲＮＡ（ｈｐＲＮＡ）干渉またはイントロン含有ヘアピンＲＮＡ（ｉｈｐＲＮＡ）干渉の使用が挙げられる。一実施形態において、抗体は、細胞系中で発現される抗体がアルファ１，６結合関連酵素の低減または排除による低フコシル化を示すように、機能的に破壊された、フコシルトランスフェラーゼをコードするＦＵＴ８遺伝子を有する細胞系中で発現させる。
【０２４０】
一実施形態において、抗体は、遺伝子操作細胞系中で発現される抗体が抗体のＡＤＣＣ活性の増加をもたらす分岐ＧｌｃＮａｃ構造の増加を示すように、糖タンパク質（ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｍ）改変グリコシルトランスフェラーゼ（例えば、ベータ（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニル−トランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＨＩ））を発現するように遺伝子操作された細胞系中で発現させる（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．によるＰＣＴ公開の国際公開第９９／５４３４２号パンフレット；およびＵｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１８０、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０２４１】
別の実施形態において、抗体を発現させ、フコシダーゼ酵素を使用してフコシル残基を開裂させる。例えば、フコシダーゼアルファ−Ｌ−フコシダーゼは、抗体からフコシル残基を除去する（Ｔａｒｅｎｔｉｎｏ，ｅｔ  ａｌ．（１９７５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４：５５１６−５５２３）。他の例において、抗体を産生する細胞系をグリコシル化阻害剤により処理することができ；Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．ａｎｄ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎ．９９：６５２−６６５（２００８）は、非フコシル化オリゴマンノースタイプＮグリカンを有する抗体の産生をもたらすアルファ−マンノシダーゼＩ阻害剤、キフネンシンによるＣＨＯ細胞の処理を記載した。
【０２４２】
一実施形態において、抗体は、フコシルを抗体のＦｃ領域に結合するＮ−アセチルグルコサミンに付加するための低い酵素活性を天然で有し、またはその酵素活性を有さない細胞系、例えば、ラット骨髄腫細胞系ＹＢ２／０（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１６６２）中で発現させる。細胞系の他の例としては、フコシルをＡｓｎ（２９７）結合炭水化物に結合させる能力の低減を有し、宿主細胞中で発現される抗体の低フコシル化ももたらすバリアントＣＨＯ細胞系、Ｌｅｄ３細胞が挙げられる（国際公開第０３／０３５８３５号パンフレット（Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ）；およびＳｈｉｅｌｄｓ，ＲＸ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる）。別の実施形態において、抗体は、鳥類細胞、好ましくは、低フコース含有量を有する抗体を天然に生じさせるＥＢｘ（登録商標）細胞（Ｖｉｖａｌｉｓ，Ｆｒａｎｃｅ）中で発現させる、例えば、国際公開第２００８／１４２１２４号パンフレット。低フコシル化グリカンは、植物起源の細胞系中で産生することもでき、例えば、国際公開第０７／０８４９２６Ａ２号パンフレット（Ｂｉｏｌｅｘ  Ｉｎｃ．）、国際公開第０８／００６５５４号パンフレット（Ｇｒｅｅｎｏｖａｔｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＧＭＢＨ）、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。
【０２４３】
診断および治療における使用
ある実施形態において、本抗体は、生物学的試料からＫＩＲ３ＤＬ２陽性細胞を精製または同定するために使用する。生物学的試料は、患者から、例えば、診断もしくはエクスビボ治療目的のため、または研究目的のためにそのような細胞源を得るために個体もしくは非ヒト霊長類から得ることができる。
【０２４４】
ＫＩＲ３ＤＬ２陽性細胞は、多数の標準的方法のいずれかを用いて本抗体を使用して精製または同定することができる。例えば、末梢血細胞を、ＫＩＲ３ＤＬ２に特異的な、および任意選択で典型的に細胞上に存在する他の細胞表面分子、例えば、Ｔ細胞のＣＤ４、ＣＤ８またはＣＤ３０；セザリー症候群における悪性細胞のＣＤ４  ＣＤ２＋、ＣＤ３＋、ＣＤ５＋、ＣＤ８−、ＣＤ２８＋、ＣＤ４５ＲＯ＋および／またはＴＣＲαβ＋；炎症性、自己免疫性、または心血管疾患におけるＣＤ４＋（任意選択的に、ＣＤ４＋およびＣＤ２８−）に対する標識抗体を使用するＦＡＣＳスキャナーを使用して選別することができる。
【０２４５】
さらに、本発明の抗体は、固体支持体にコンジュゲートまたは共有結合していてよく、患者または他の個体からの生物学的試料、例えば、血液試料または粘膜組織生検物からＫＩＲ３ＤＬ２陽性細胞またはＫＩＲ３ＤＬ２を発現する任意の細胞を精製または同定するために使用することができる。具体的には、生物学的試料を、試料内の細胞が抗体に結合することを可能とする条件下で抗体と接触させ、次いで細胞を固体支持体結合抗体から溶出させる。
【０２４６】
ＫＩＲ３ＤＬ２陽性細胞を単離、精製または同定するために使用される方法にかかわらず、そのように実施する能力は、多数の目的のため、例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の病原性拡張により特徴づけられる障害を、患者から得られるＫＩＲ３ＤＬ２陽性細胞の数もしくは活性もしくは他の特徴を評価することにより診断するため、または例えば、抗体を使用する本明細書に記載の治療の１つの前に患者の細胞の活性もしくは挙動をモジュレートする抗体、もしくはその断片もしくは誘導体の能力を評価するために有用である。さらに、精製ＫＩＲ３ＤＬ２陽性細胞は、例えば、細胞ならびにそれらの種々の特性および挙動をより良好に特徴づけ、ならびにそれらの挙動、活性、または増殖をモジュレートするために使用することができる化合物または方法を同定するため、研究関連で有用である。抗体は、診断方法において、例えば、患者からの細胞、例えば、疾患細胞上のＫＩＲポリペプチドを検出する方法においても有用であり得る。
【０２４７】
本開示は、細胞の表面上のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体を含む医薬組成物も提供する。抗体は、好ましくは、細胞の成長もしくは活性（例えば、サイトカイン生成）を阻害し、および／またはＫＩＲ３ＤＬ２陽性細胞の排除を、好ましくは、ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣの誘導を介してもたらす。組成物は、薬学的に許容可能な担体をさらに含む。
【０２４８】
本開示はさらに、ＫＩＲ３ＤＬ２陽性細胞の成長もしくは活性の阻害、および／またはその細胞の枯渇が必要とされる患者におけるＫＩＲ３ＤＬ２陽性細胞の成長もしくは活性を阻害し、および／またはその細胞を枯渇させる方法であって、前記患者に本明細書に記載の組成物を投与するステップを含む方法を提供する。そのような治療方法は、多数の障害、例として、限定されるものではないが、ＣＴＣＬ、ＳＳおよびＭＦ、炎症、自己免疫および心血管障害に使用することができる。
【０２４９】
ＣＤ４＋ＣＴＣＬの形態にかかわらず、ＫＩＲ３ＤＬ２を表面において発現する悪性腫瘍ＣＤ４＋Ｔ細胞が存在する。したがって、ＫＩＲ３ＤＬ２は、ＣＤ４＋ＣＴＣＬの範囲、特にセザリー症候群（「ＳＳ」）、トランスフォーム型菌状息肉症（「トランスフォーム型ＭＦ」）、リンパ腫様丘疹症（「ＬＰ」）、およびＣＤ３０＋リンパ腫をカバーする。
【０２５０】
診断（例えば、ＣＴＣＬ診断）は、疑いのある身体区域（例えば、トランスフォーム型ＭＦが疑われる場合、皮膚紅皮症の試料、またはより侵襲性のＣＴＣＬ形態、例えば、ＳＳが疑われる場合、末梢血の試料）から回収されたＣＤ４＋細胞の表面におけるＫＩＲ３ＤＬ２の存在の分析に基づき得る。典型的には、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、これらのＣＤ４＋Ｔ細胞の表面において検出されるＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドが存在する場合は速やかに腫瘍性であることを結論づけることができる。ＣＤ４＋ＫＩＲ３ＤＬ２＋Ｔ細胞の割合は、ＳＳが疑われる患者から回収された末梢血の試料中で計測することができ、そのような割合は、この患者の末梢血中に実際に存在する悪性腫瘍ＳＳ細胞の割合に実質的に対応する（一般に、ＫＩＲ３ＤＬ２＋、ＣＤ４＋細胞について±１０％範囲またはさらには±５％範囲内。したがって、ＫＩＲ３ＤＬ２および本明細書に記載の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、疾患、特に、ＳＳの病期分類において使用することができる。
【０２５１】
ＫＩＲ３ＤＬ２がＣＴＣＬについてのユニバーサルマーカーである限り、抗体は、他のＣＴＣＬについての治療または診断マーカーとの組合せで使用することができる。例えば、悪性腫瘍ＣＤ４＋Ｔ細胞の表面におけるＣＤ３０の存在は、患者が当技術分野においてＣＤ３０＋リンパ腫と称されるＣＤ４＋ＣＴＣＬの特定の形態を有することを示す。したがって、ＣＤ３０は、ＣＴＣＬの特定の形態（ＣＤ３０＋リンパ腫）についてのＣＴＣＬマーカーであるが、ＣＤ３０は、ＣＤ４＋ＣＴＣＬの全ての形態をカバーするわけではない。それというのも、ＣＤ４＋ＣＴＣＬ、例えば、ＳＳ、トランスフォーム型ＭＦ、またはＬＰについては、ＣＤ３０を表面において発現する悪性腫瘍ＣＤ４＋Ｔ細胞が必ずしも存在しないためである。したがって、ＣＤ３０は、ＫＩＲ３ＤＬ２に加え、ＣＴＣＬ診断および治療におけるマーカーとして使用することができる。さらに、患者がＣＤ３０を発現するＣＤ４＋ＣＴＣＬを有する知見は、患者が抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体および抗ＣＤ３０抗体による治療に好適であることを示し得；場合により、次いで患者を抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体および抗ＣＤ３０抗体により治療することができる。
【０２５２】
一部の実施形態において、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体または組成物の投与前、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４５ＲＯおよび／またはＴＣＲαβの存在を、患者からの細胞（例えば、病原性細胞）に対して評価する。次いで、細胞がマーカーを発現する（または特定の障害および標的化が求められる細胞に従って発現しない）患者を、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体または組成物により治療することができる。一部の実施形態において、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体または組成物の投与前、例えば、患者におけるＫＩＲ３ＤＬ２陽性細胞の相対レベルおよび活性を決定するため、ならびに患者の細胞への抗体の結合効力を確認するために患者の細胞上のＫＩＲ３ＤＬ２の存在を評価する。次いで、細胞がＫＩＲ３ＤＬ２を発現する患者を、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体または組成物により治療することができる。このことは、障害の部位からのＰＢＬまたは細胞の試料を得、例えば、イムノアッセイを使用して試験して細胞上のマーカー、例えば、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ３０またはＫＩＲ３ＤＬ２の相対的顕著性を決定することにより達成することができる。
【０２５３】
一実施形態において、患者のＫＩＲ３ＤＬ２陽性細胞の活性または成長を阻害し、またはその細胞を枯渇させることが求められる場合、患者のＫＩＲ３ＤＬ２陽性細胞を増殖を阻害し、またはその細胞を枯渇させる抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の能力を評価する。ＫＩＲ３ＤＬ２陽性細胞が抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体または組成物により枯渇される場合、患者を抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体または組成物による治療に応答性であると決定し、場合により、患者を抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体または組成物により治療する。
【０２５４】
一部の実施形態において、本方法は、前記患者に、免疫調節剤、免疫抑制剤、ホルモン剤、化学療法剤、またはＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞上に存在するポリペプチドに結合する二次抗体（例えば、枯渇抗体）から選択される適切な追加（第２）の治療剤を投与する追加のステップを含み得る。そのような追加の薬剤は、前記患者に、前記抗体と一緒に単一剤形として、または別個の剤形として投与することができる。抗体の投与量（または集合的に抗体および追加の治療剤の投与量）は、患者における治療応答を検出可能に誘導し、促進し、および／または向上させるために十分な量である。別個に投与する場合、抗体、断片、または誘導体および追加の治療剤は、望ましくは、患者に検出可能な併用治療利益をもたらす（例えば、タイミング、用量数などに関する）条件下で投与する。
【０２５５】
菌状息肉症およびより侵襲性のセザリー症候群は、ＣＴＣＬの最も一般的な形態を表す。ＭＦ／ＳＳの臨床過程は、通常、遅発性であり、掻痒紅斑部がゆっくりと長期間にわたり広がる。しかしながら、最終的には、紅斑は、徐々に浸潤し、局面に発達し、最後には潰瘍性腫瘍になる。ＭＦ／ＳＳの予後は、診察時の疾患の程度に基づく。病期Ｉ疾患を有する患者は、病期ＩＩＩ／ＩＶ疾患を有する患者についての約３〜４年の生存期間の中央値と比較して２０年以上の生存期間の中央値を有する。
【０２５６】
本明細書に記載の組成物は、特定のＴ細胞悪性腫瘍の治療において有用であることが公知の任意の薬剤との組合せでの治療に使用することができる。ＣＴＣＬについての種々の治療、例として、コルチコステロイド、ナイトロジェンマスタード、カルムスチン、局所タクロリムス（Ｐｒｏｔｏｐｉｃ（登録商標））、イミキモド（Ａｌｄａｒａ（登録商標）；３Ｍ  Ｉｎｃ．）、局所レチノイド、およびレキシノイド（ベキサロテン；Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標）；Ｌｉｇａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ））、ならびに紫外線光療法（プソラレン＋ＵＶＡ（ＰＵＶＡ）、狭帯域ＵＶＢ、およびＵＶＢ）、光線力学的療法（ＰＤＴ）ならびに身体照射が使用される。治療としては、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、例えば、ボリノスタット（ヒドロキサミン酸サブエロイルアニリド、Ｚｏｌｉｎｚａ（登録商標））およびロミデプシン（デプシペプチド、ＦＫ−２２８、Ｉｓｔｏｄａｘ（登録商標））、ヒストンデアセチラーゼアイソタイプ１、２、４および６を選択的に阻害する環状ペプチドも挙げられる。化学療法または併用化学療法も使用される。例としては、ゲムシタビン、抗葉酸アナログ、例えば、プララトレキサート（Ｆｏｌｏｔｙｎ（登録商標））が挙げられる。さらなる治療としては、広範な効果、例として、免疫および非免疫関連効果の両方を有するサリドマイドに由来するアナログＩＭｉＤ（免疫調節薬）が挙げられる。ＩＭｉＤクラスの代表例としては、ＣＣ−５０１３（レナリドミド；Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標））、ＣＣ−４０４７（Ａｃｔｉｍｉｄ）、およびＥＮＭＤ−０９９５が挙げられる。さらなる治療としては、プロテオソーム阻害剤、例えば、可逆的２６Ｓプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））が挙げられる。幹細胞移植も使用される。
【０２５７】
ＭＦ／ＳＳのためのケアの現行基準は存在しないが、広範な症状の発症まで早期疾患遅延全身療法およびより毒性の療法のための局所介入に依存する一般的な傾向が存在する。プソラレンおよび紫外線Ａ照射（ＰＵＶＡ）は、低用量のインターフェロン−αとの組合せまたは非組合せで、早期ＭＦ／ＳＳにおいて有効であり、ほとんどの患者において完全寛解（ＣＲ）を誘導する。局所放射線療法または全身電子線照射（ＴＳＥＢ）が使用されており、進行した皮膚疾患の管理に成功している。体外循環光療法を良好に使用することもできるが、一般に利用可能でない。疾患につき局所療法が無効になると、インターフェロン−α、レキシノイドのベキサロテン（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標）、Ｌｉｇａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、レチノイドＸ受容体を標的化する合成レチノイドアナログ、単剤化学療法または併用化学療法を与えることができる。治療、特に皮膚指向性療法としては、例えば、コルチコステロイド、ナイトロジェンマスタード、カルムスチン、局所タクロリムス（Ｐｒｏｔｏｐｉｃ（登録商標））およびイミキモド（Ａｌｄａｒａ（登録商標）；３Ｍ  Ｉｎｃ．）が挙げられる。しかしながら、奏功期間は１年未満であることが多く、最終的には全ての患者が再発し、疾患は難治性になる。組換えＩＬ−２ジフテリア毒素デニロイキン・ディフティトックス（ＤＡＢ３８９ＩＬ−２、ＯＮＴＡＫ（登録商標）、Ｌｉｇａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）は、上記治療が無効である病期Ｉｂから病期ＩＶのＣＴＣＬを有する患者において活性であり（７ヵ月の奏功期間の中央値を有する７１人の患者の３０％における全客観的奏功）、症状緩和および生活の質における利益効果を有すると考えられる。近年になって、デニロイキン・ディフティトックスは、第１相試験においてベキサロテンとの組合せで試験されている。それというのも、それはＣＤ２５の上方調節をインビトロで誘導するためである。この組合せは、十分容認され、１４人の患者の６７％において客観的奏功を誘導した。最も有意な有害事象は、ベキサロテン単独について既に報告されているもの（高トリグリセリド血症およびＴＳＨ産生の減少に起因する甲状腺機能の抑制）およびグレード３または４のリンパ球減少症であったが、治療停止１ヵ月以内に消散した。治療成功期間は、この試験において報告されなかった。他の試験において、ＣＤ４発現細胞を枯渇させる抗ＣＤ４抗体が開発されている。例としては、完全ヒトＩｇＧ１抗ＣＤ４抗体ザノリムマブ（ＨｕＭａｘ−ＣＤ４；Ｇｅｎｍａｂ  Ａ／ＳおよびＴｅｎＸ  ＢｉｏＰｈａｒｍａ  Ｉｎｃ．）が挙げられ、キメラモノクローナル抗ＣＤ４（ｃＭ−Ｔ４１２、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ，Ｍａｌｖｅｒｎ，ＰＡ）がＭＦを有する８人の患者に投与され、それらの７人において客観的奏功を誘導したが、奏功期間の中央値は５ヵ月にすぎなかった。体外循環光療法におけるＵｖａｄｅｘ（登録商標）（メトキサレン、Ｔｈｅｒａｋｏｓ  Ｉｎｃ．Ｅｘｔｏｎ，ＰＡ）も、効力の徴候を示している。ヒト化モノクローナル抗体アレムツズマブ（ｈｕ−ＩｇＧ１抗ＣＤ５２ｍＡｂ、Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）、Ｍｉ��ｌｅｎｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．およびＩＬＥＸ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｂｅｒｌｅｘ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｍｏｎｔｖｉｌｌｅ，ＮＪにより米国において販売および流通）は、アルキル化剤により治療されており、フルダラビン療法が不成功の患者におけるＢ細胞慢性リンパ球性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）の治療に適応される。これは、進行したＭＦ／ＳＳ（病期ＩＩＩまたはＩＶ疾患）を有する患者において試験され、症例の少なくとも半数（２２人の患者の５５％）において客観的奏功をもたらした。この副作用プロファイルは、主として免疫抑制および注入反応からなる。独立したレトロスペクティブ試験は、８人の患者のうち４人において有意な心毒性も説明した。長期継続する寛解が観察され（治療成功期間の中央値１２ヵ月、５〜３２＋ヵ月の範囲）、アレムツズマブ療法は、今日までに報告された全ての治療と比較して好ましい奏功期間の中央値を有する治療であると考えられる。有用であり得る他の薬剤としては、抗ＣＣＲ４（Ｃ−Ｃケモカイン受容体４；ＣＤ１９４）抗体が挙げられる。一例は、モガムリズマブ（ＫＷ−０７６１；ＡＭＧ−７６１；商標名Ｐｏｔｅｌｉｇｅｏ、Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｉｒｉｎ  Ｌｔｄ．，ＪａｐａｎおよびＡｍｇｅｎ，ＵＳＡ）、およびヒト化抗ＣＣＲ４抗体である。有用であり得る他の薬剤としては、抗ＣＤ３０抗体が挙げられる。一例は、ＳＧＮ−３５であり、それは、抗ＣＤ３０モノクローナル抗体ｃＡＣ１０に結合している強力な抗有糸分裂薬モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）を含有する抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である（Ｏｋｅｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１６（３）：８８８−８９７）であり；別の例は、ヒト抗ＣＤ３０免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｇ１κモノクローナル抗体ＭＤＸ−０６０（Ｍｅｄａｒｅｘ  Ｉｎｃ．およびＢｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ；Ａｎｓｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２５：２７６７−２７６９）である。これらの治療のそれぞれを本開示の抗体との組合せで使用することができる。
【０２５８】
本方法を使用して産生される抗体は、自己免疫および炎症障害、ならびに心血管障害、最も特定すると急性冠症候群、関節炎、関節リウマチ、リウマチ性血管炎、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症およびウェゲナー肉芽腫症、脊椎関節炎の治療において特に有効である。一般に、本方法は、少なくとも部分的にＫＩＲ３ＤＬ発現細胞、例えば、ＮＫ細胞またはＴ細胞、ＩＬ−１７Ａを産生する炎症促進性ＴもしくはＮＫ細胞、Ｔｈ１７細胞のようなＴ細胞またはＫＩＲ３ＤＬ２を発現するＣＤ４＋ＣＤ２８−細胞の存在または活性により引き起こされ、したがって、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の増殖または活性を選択的に殺滅または阻害することにより有効に治療することができる任意の障害を治療するために使用することができる。
【０２５９】
一部の実施形態において、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の投与前、特定の疾患の基礎をなす細胞上のＫＩＲ３ＤＬ２の発現を評価する。このことは、障害の部位から（例えば、ＲＡ患者における滑膜から）のＰＢＬまたは細胞の試料を得、例えば、イムノアッセイを使用して試験して細胞上のマーカー、例えば、ＣＤ４、ＣＤ２８など、およびＫＩＲ３ＤＬ２の相対的顕著性を決定することにより達成することができる。他の方法、例えば、ＲＮＡベースの方法、例えば、ＲＴ−ＰＣＲまたはノザンブロッティングを使用してＫＩＲ３ＤＬ２および他の遺伝子の発現を検出することもできる。
【０２６０】
治療は、抗体または化合物投与の複数のラウンドを含み得る。例えば、投与の初回ラウンド後、患者におけるＫＩＲ３ＤＬ発現ＴまたはＮＫ細胞（例えば、ＣＤ４＋ＣＤ２８−Ｔ細胞、悪性腫瘍ＣＤ４＋Ｔ細胞）のレベルおよび／または活性を一般に再計測し、依然として上昇している場合、投与の追加ラウンドを実施することができる。このようにして、受容体検出および抗体または化合物投与の複数のラウンドを、例えば、障害が管理下になるまで実施することができる。
【０２６１】
自己免疫または炎症障害の治療に使用される場合、本開示の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、特定の炎症障害、自己免疫障害、または心血管障害の治療において有用であることが公知の任意の薬剤との組合せの治療に使用することができる。抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、例えば、ステロイド抗炎症剤、非ステロイド抗炎症剤、代謝拮抗剤および心血管、炎症または自己免疫障害の治療において使用される他の薬剤と組み合わせることができる。一部の実施形態において、抗炎症剤はステロイド抗炎症剤を含み、それとしては糖質コルチコステロイドおよび鉱質コルチコステロイドが挙げられる。これらは、炎症障害の治療に好適な任意の方法、例として、とりわけ、経口、静脈内、筋肉内、経皮、または経鼻経路により投与することができる。一部の実施形態において、抗炎症剤は、非ステロイド抗炎症剤を含む。これらの薬剤は、一般に、シクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼ酵素、またはそれらの酵素により生成されるメディエーターについての受容体の作用を阻害することにより作用する。非ステロイド抗炎症化合物としては、非選択的ＣＯＸ阻害剤、選択的ＣＯＸ阻害剤、ならびにＦＬＡＰアンタゴニストおよび５−リポキシゲナーゼアンタゴニストが挙げられる。一部の実施形態において、抗炎症剤は、免疫応答に関与する細胞の増殖に影響する代謝拮抗剤を含み得る。好適な代謝拮抗剤としては、葉酸アナログ、例えば、メトトレキサート；イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＭＰＤＨ）阻害剤、例えば、ミコフェノール酸モフェチル；およびアザチオプリンが挙げられる。このグループの化合物は、一般に、ＤＮＡ複製に必要な基質の産生に影響し、それにより炎症反応に関与し、またはそれに応答して活性化される細胞の増殖を阻害する。一部の実施形態において、抗炎症剤は、炎症障害に関与する主要なサイトカインＴＮＦ−アルファの作用を遮断する薬剤である。一部の実施形態において、抗ＴＮＦは、ＴＮＦアルファの作用を遮断する抗体である。例示的な抗ＴＮＦ抗体は、インフリキシマブ（ＲｅＫＩＲ３ＤＬ２ｄｅ（登録商標））である。他の実施形態において、抗ＴＮＦアルファ剤は、ＴＮＦアルファに結合し、それと、細胞上に存在するＴＮＦ受容体との相互作用を妨害する受容体構築物、例えば、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））である。他の実施形態において、抗炎症剤は、免疫抑制特性を有し、本明細書に記載のＫＩＲ３ＤＬ２抗体により治療されている障害の治療において有用な任意の他の薬剤である（例えば、抗体薬剤）。
【０２６２】
医薬配合物
これらの組成物中で使用することができる薬学的に許容可能な担体としては、限定されるものではないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、緩衝液物質、例えば、リン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸塩、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂が挙げられる。本明細書に記載される抗体は、患者におけるＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の活性をモジュレートする、例えば、阻害する方法において用いることができる。この方法は、前記組成物を前記患者と接触させるステップを含む。そのような方法は、予防および治療目的の両方において有用である。
【０２６３】
患者への投与における使用のため、組成物は、患者への投与のために配合する。本明細書に記載される組成物は、経口投与、非経口投与、吸入スプレー投与、局所投与、直腸投与、経鼻投与、バッカル投与、経膣投与または移植されたリザーバーを介して投与することができる。本明細書において使用されるものとしては、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑膜内、胸骨内、髄腔内、肝内、病巣内および頭蓋内注射または注入技術が挙げられる。抗体は、例えば、約２５ｍｇ〜５００ｍｇの量の単一用量で存在し得る。
【０２６４】
本明細書に記載される組成物の無菌の注射可能な形態は、水性または油性懸濁液であり得る。これらの懸濁液は、好適な分散剤または浸潤剤および懸濁化剤を使用する当技術分野において公知の技術に従って配合することができる。無菌の注射可能な調製物は、例えば、１，３−ブタンジオール中溶液としての、非経口的に許容可能な非毒性の希釈剤または溶媒中の、無菌の注射可能な溶液または懸濁液でもあり得る。用いることができる許容可能なビヒクルおよび溶媒のうち、水、リンガー液および等張性塩化ナトリウム溶液が挙げられる。さらに、無菌固定油は、慣用的に溶媒または懸濁培地として用いられる。この目的のため、任意の無刺激性固定油、例として、合成モノもしくはジグリセリドを用いることもできる。脂肪酸、例えばオレイン酸およびそのグリセリド誘導体は、薬学的に許容可能な天然油、例えば、特にポリオキシエチル化型のオリーブ油またはヒマシ油の場合と同様、注射剤の調製において有用である。これらの油性溶液または懸濁液は、薬学的に許容可能な剤形、例として、エマルジョンおよび懸濁液の配合において一般に使用される長鎖アルコール希釈剤または分散剤、例えばカルボキシメチルセルロースまたは類似の分散剤も含有し得る。他の一般に使用される界面活性剤、例えばＴｗｅｅｎ、Ｓｐａｎおよび薬学的に許容可能な固体、液体、または他の剤形の製造において一般に使用される他の乳化剤またはバイオアベイラビリティー向上剤を配合の目的に使用することもできる。
【０２６５】
本明細書に記載される組成物は、任意の経口的に許容可能な剤形、例として、限定されるものではないが、カプセル剤、錠剤、水性懸濁液または液剤で経口投与することができる。経口使用のための錠剤の場合、一般に使用される担体としては、ラクトースおよびトウモロコシデンプンが挙げられる。典型的には、潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウムも添加される。カプセル剤形態での経口投与のため、有用な希釈剤としては、例えばラクトースが挙げられる。経口使用に水性懸濁液が要求される場合、活性成分は、乳化剤および懸濁化剤と合わせる。所望により、ある甘味剤、香味剤または着色剤を添加することもできる。
【０２６６】
あるいは、本明細書に記載される組成物は、直腸投与のために坐剤の形態で投与することができる。これらは、薬剤を、室温において固体であるが直腸温度において液体であり、したがって直腸中で融解し、薬剤を放出する好適な非刺激性賦形剤と混合することにより調製することができる。そのような材料としては、ココアバター、蜜ろうおよびポリエチレングリコールが挙げられる。
【０２６７】
本明細書に記載される組成物は、治療の標的が、特に、局所適用により容易に接近可能である領域または器官、例として、眼、皮膚、または下部腸管の疾患を含む場合、局所投与することもできる。好適な局所配合物は、これらの領域または器官のそれぞれについて容易に調製される。局所適用のため、組成物は、１つ以上の担体中で懸濁または溶解された活性成分を含有する好適な軟膏剤に配合することができる。本明細書に記載される化合物の局所投与のための担体としては、限定されるものではないが、鉱油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ろうおよび水が挙げられる。あるいは、組成物は、１つ以上の薬学的に許容可能な担体中で懸濁または溶解された活性成分を含有する好適なローション剤またはクリーム剤に配合することができる。好適な担体としては、限定されるものではないが、鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水が挙げられる。
【０２６８】
本抗体は、キットに含めることができる。キットは、場合により、任意数の抗体および／または他の化合物、例えば、１、２、３、４つ、または他の任意数の治療抗体および／または化合物をさらに含有し得る。キットの内容物についての本説明が決して限定されるものではないことが理解される。例えば、キットは、他のタイプの治療化合物を含有し得る。好ましくは、キットは、例えば本明細書に記載の方法を詳述する、抗体を使用するための説明書も含む。
【０２６９】
剤形
抗体の治療配合物は、所望の純度を有する抗体を、任意選択の薬学的に許容可能な担体、賦形剤または安定剤と混合することにより、凍結乾燥配合物または水溶液の形態で貯蔵のために調製する。配合に関する一般的な情報については、例えば、Ｇｉｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｅｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，８ｔｈ  Ｅｄ．（Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９９０）；Ｇｅｎｎａｒｏ（ｅｄ．），Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９９０）；Ａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９３）；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ（Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９０）；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９０）；およびＷａｌｔｅｒｓ（ｅｄ．），Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ（Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ），Ｖｏｌ  １１９（Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００２）参照。
【０２７０】
許容可能な担体、賦形剤または安定剤は、用いられる投与量および濃度においてレシピエントに非毒性であり、それらとしては、緩衝液、例えば、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸；酸化防止剤、例として、アスコルビン酸およびメチオニン；保存剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；ベンザルコニウムクロリド、ベンゼトニウムクロリド；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルもしくはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンもしくはリジン；単糖、二糖、および他の炭水化物、例として、グルコース、マンノース、もしくはデキストリン；キレート化剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／または非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられる。
【０２７１】
例示的抗体配合物は、例えば、国際公開第１９９８／５６４１８号パンフレットに記載されており、それは、４０ｍｇ／ｍＬのリツキシマブ、２５ｍＭの酢酸塩、１５０ｍＭのトレハロース、０．９％のベンジルアルコール、および０．０２％のｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ２０（商標）をｐＨ５．０において含み、２〜８℃における２年間の貯蔵の最小の保存可能期間を有する抗ＣＤ２０抗体のための液体複数回用量配合物を記載する。別の関心対象の抗ＣＤ２０配合物は、１０ｍｇ／ｍＬのリツキシマブを９．０ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、７．３５ｍｇ／ｍＬのクエン酸ナトリウム二水和物、０．７ｍｇ／ｍＬのｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ８０（商標）、および注射滅菌水、ｐＨ６．５中で含む。
【０２７２】
皮下投与に適合された凍結乾燥配合物は、例えば、米国特許第６，２６７，９５８号明細書（Ａｎｄｙａ  ｅｔ  ａｌ．）に記載されている。そのような凍結乾燥配合物は、好適な希釈液により高タンパク質濃度に再構成することができ、再構成された配合物は本明細書において治療することができる哺乳動物に皮下投与することができる。
【０２７３】
本明細書の配合物は、２つ以上の活性化合物（上記の第２の医薬）、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものも含有し得る。そのような医薬のタイプおよび有効量は、例えば、配合物中に存在するＢ細胞アンタゴニストの量およびタイプ、ならびに対象の臨床パラメーターに依存する。例示的な第２の医薬は、上記のとおりである。
【０２７４】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技術または界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えば、コロイド薬剤送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマクロエマルジョン中で、それぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタアシレート）マイクロカプセル中で封入することもできる。そのような技術は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、前掲に開示されている。
【０２７５】
徐放性配合物を調製することができる。好適な徐放性調製物の例としては、アンタゴニストを含有する固体疎水性ポリマーの半透明マトリックスが挙げられ、そのマトリックスは、形成品、例えばフィルムまたはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール）、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号明細書）、Ｌ−グルタミン酸およびγエチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン−ビニルアセテート、分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、例えばＬｕｐｒｏｎ  Ｄｅｐｏｔ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドからなる注射可能なマイクロスフィア）、およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシブチル酸が挙げられる。
【０２７６】
インビボ投与に使用することができる配合物は、無菌でなくてはならない。これは、滅菌濾過膜を通す濾過により容易に達成される。これらの組成物中で使用することができる薬学的に許容可能な担体としては、限定されるものではないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン、緩衝液物質、例えば、リン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えば、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂が挙げられる。
【０２７７】
さらなる態様および利点を以下の実験セクションに開示し、それは、説明としてみなすべきであり、本出願の範囲を限定するものとみなすべきではない。
【実施例】
【０２７８】
実施例１
抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の生成
材料および方法
一次および二次フローサイトメトリースクリーニング
抗ＫＩＲ３ＤＬ２ｍＡｂを、最初にフローサイトメトリーにおいてＫＩＲ３ＤＬ２発現セザリー細胞系（ＨＵＴ７８およびＣＯＵ−Ｌ）およびＫＩＲ３ＤＬ２形質移入腫瘍細胞系（ＨＥＫ−２９３Ｔ）細胞系への結合についてスクリーニングした。フローサイトメトリー装置は、ＦＡＣＳａｒｒａｙ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、一次スクリーン）、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩ  ｎ°１  ｅｔ  ｎ°２（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）（二次スクリーン）およびＦＣ５００（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）（二次スクリーン）を含む。使用されるＫＩＲ３ＤＬ２＋および他の腫瘍細胞系は、以下を含んだ：
−  完全ＩＭＤＭ中で成長させたＨＵＴ−７８（ＫＩＲ３ＤＬ２陽性セザリー細胞系）；
−  ＨＥＫ−２９３Ｔ（ヒト腎癌）／ＫＩＲ３ＤＬ２およびＨＥＫ−２９３Ｔ／ＫＩＲ３ＤＬ２ドメイン０−ｅＧＦＰ細胞系（完全ＤＭＥＭ中で成長させた）；
−  ＣＯＵ−Ｌ（ＫＩＲ３ＤＬ２陽性セザリー細胞系）（１０％のヒト血清ＡＢが補給された完全ＲＰＭＩ中で成長させた）；
−  ＨＥＫ−２９３Ｔ／ＫＩＲ３ＤＬ１およびＨＥＫ−２９３Ｔ／ＫＩＲ３ＤＬ１−ｅＧＦＰ細胞系（完全ＤＭＥＭ中で成長させた）；
−  Ｂ２２１（Ｂリンパ芽球様ＣＤ２０陽性ヒト細胞系）／ＫＩＲ３ＤＬ２細胞系（ＦＣＳ血清を含有する完全ＲＰＭＩ中で成長させた）；および
−  ＲＡＪＩ（バーキットリンパ腫ＣＤ２０陽性ヒト細胞系）／ＫＩＲ３ＤＬ２細胞系（ＦＣＳ血清を含有する完全ＲＰＭＩ中で成長させた）。
【０２７９】
使用されたセザリー細胞系はいずれも、免疫低下マウスへのＩＶ移植後にもＳＣ移植後にも成長しなかった一方、ＫＩＲ３ＤＬ２形質移入Ｂ２２１またはＲＡＪＩ細胞は、マウスへの注射後に播種性（ＩＶ）または固形（ＳＣ）腫瘍として成長した。
【０２８０】
Ｇａｒｄｉｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２００１（ｖｏｌ  １６６，ｐ２９９２−３００１）において利用可能な情報に基づき、使用された腫瘍細胞系中に存在するＫＩＲ３ＤＬ２遺伝子アレルを決定した。本発明者らは、セザリー細胞系ＣＯＵ−Ｌがアレル３ＤＬ２＊００３および３ＤＬ２＊００８についてヘテロ接合であり、ＨＵＴ−７８がアレル３ＤＬ２＊００２および３ＤＬ２＊００７についてヘテロ接合であることを確立した。４つ全てのアレル３ＤＬ２＊００３、３ＤＬ２＊００８、３ＤＬ２＊００２および３ＤＬ２＊００７は、細胞外ドメインが異なるＫＩＲ３ＤＬ２タンパク質バリアントをコードする。注目すべきは、マウスを免疫化するために使用された組換えＫＩＲ３ＤＬ２−Ｆｃ融合タンパク質は、異なるＫＩＲ３ＤＬ２遺伝子アレル３ＤＬ２＊００６および３ＤＬ２＊００７（クローン１．１、両方のアレルは、同一の細胞外ドメインタンパク質配列をコードする）によりコードされる。
【０２８１】
ＫＩＲ３ＤＬ２ドメイン０、１および２細胞系
ＨＥＫ２９３Ｔ／１７細胞を、ピルビン酸ナトリウム（１ｍＭ）、ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）および１０％の熱不活化ＦＣＳ（ＰＡＮ  ｂｉｏｔｅｃｈ）が補給されたＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）中で培養した。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００試薬、Ｔｒｉｚｏｌ、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＩＩ逆転写酵素、ｐｃＤＮＡ３．１ベクターおよび抗Ｖ５−ＦＩＴＣ抗体をＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入した。ヤギ抗マウス（Ｈ＋Ｌ）−ＰＥをＢｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒから購入した。ヒト（Ｈｏｍｏ  Ｓａｐｉｅｎｓ）からのＰＢＭＣ（５×１０６個の細胞）を、１ｍｌのＴｒｉｚｏｌ試薬中に再懸濁させた。ＲＮＡ抽出を、２００μｌのクロロホルムの添加により実施した。遠心分離（１５分間、１３，０００ｒｐｍ）後、ＲＮＡを水相から５００μｌのイソプロパノールにより沈殿させた。インキュベーション（１０分間、室温）および遠心分離（１０分間、１３，０００）後、ＲＮＡを７０％のエタノールにより洗浄し、再度遠心分離（５分間、１３，０００ｒｐｍ）した。ＲＮＡをＨ２ＯのＲｎアーゼフリー水中で再懸濁させた。ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＩＩ逆転写酵素を使用し、２μｇの規定のＲＮＡを使用して製造業者の説明書に従ってｃＤＮＡを得た。ヒトＫＩＲ３ＤＬ２（アクセッション番号Ｕ３０２７２、ＫＩＲ３ＤＬ２アレル＊００２）ドメイン０、ドメイン１およびドメイン２配列を表４に示す。
【０２８２】
【表６】
0006507097.tif 000007
【０２８３】
ヒト（Ｈｏｍｏ  Ｓａｐｉｅｎｓ）ＫＩＲ３ＤＬ２（アクセッション番号Ｕ３０２７２）ドメイン０、ドメイン１およびドメイン２配列を、ｃＤＮＡからＰＣＲ反応により、５’ＡＡ  ＧＣＴ  ＡＧＣ  ＧＧＴ  ＡＡＧ  ＣＣＴ  ＡＴＣ  ＣＣＴ  ＡＡＣ  ＣＣＴ  ＣＴＣ  ＣＴＣ  ＧＧＴ  ＣＴＣ  ＧＡＴ  ＴＣＴ  ＡＣＧ  ＣＴＣ  ＡＴＧ  ＧＧＴ  ＧＧＴ  ＣＡＧ  ＧＡＣ  ＡＡＡ  Ｃ（配列番号７１）（フォワード）および３’ＡＡ  ＧＧＡ  ＴＣＣ  ＣＴＣ  ＴＣＣ  ＴＧＡ  ＴＴＴ  ＣＡＧ  ＣＡＧ  ＧＧＴ（配列番号７２）（リバース）；５’ＡＡ  ＧＣＴ  ＡＧＣ  ＧＧＴ  ＡＡＧ  ＣＣＴ  ＡＴＣ  ＣＣＴ  ＡＡＣ  ＣＣＴ  ＣＴＣ  ＣＴＣ  ＧＧＴ  ＣＴＣ  ＧＡＴ  ＴＣＴ  ＡＣＧ  ＡＣＡ  ＧＴＣ  ＡＴＣ  ＣＴＧ  ＣＡＡ  ＴＧＴ  ＴＧＧ（配列番号７３）（フォワード）および３’ＡＡ  ＧＧＡ  ＴＣＣ  ＣＴＣ  ＴＣＣ  ＴＧＣ  ＣＴＧ  ＡＡＣ  ＣＧＴ  ＧＧＧ（配列番号７４）（リバース）；５’ＡＡ  ＧＣＴ  ＡＧＣ  ＧＧＴ  ＡＡＧ  ＣＣＴ  ＡＴＣ  ＣＣＴ  ＡＡＣ  ＣＣＴ  ＣＴＣ  ＣＴＣ  ＧＧＴ  ＣＴＣ  ＧＡＴ  ＴＣＴ  ＡＣＧ  ＡＡＣ  ＧＴＧ  ＡＣＣ  ＴＴＧ  ＴＣＣ  ＴＧＴ  ＡＧＣ（配列番号７５）（フォワード）および３’ＡＡ  ＧＧＡ  ＴＣＣ  ＡＴＧ  ＣＡＧ  ＧＴＧ  ＴＣＴ  ＧＣＡ  ＧＡＴ  ＡＣＣ（配列番号７６）（リバース）オリゴヌクレオチドをそれぞれ使用して増幅した。ＴＡクローニングおよび配列決定後、配列をｐｃＤＮＡ３．１ベクター中に、ＮｈｅＩおよびＢａｍＨＩ制限部位間にクローニングした。これらの構築物を、ＭＷＧ  Ｂｉｏｔｅｃｈにより合成されたＣＤ３３ペプチドリーダーと、ＣＤ２４  ＧＰＩアンカー（ＣＤ２４  ＧＰＩアンカーＤＮＡおよびアミノ酸配列を配列番号７７および７８にそれぞれ示す）との間に挿入（ＢａｍＨＩおよびＨｉｎｄＩＩＩ制限部位間に挿入）した。
【０２８４】
ＨＥＫ−２９３Ｔ／１７細胞を、形質移入の２４時間前に６ウェルプレート（５．１０５個の細胞／ウェル）中に抗生物質を有さないＤＭＥＭ中で播種した。形質移入は、５μｇの異なるｐｃＤＮＡ３．１／ＫＩＲ３ＤＬ２ドメイン０、ｐｃＤＮＡ３．１／ＫＩＲ３ＤＬ２ドメイン１またはｐｃＤＮＡ３．１／ＫＩＲ３ＤＬ２ドメイン２構築物を使用し、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００を使用して製造業者の説明書に従って実施した。形質移入のためのＤＮＡ純度を確保するため、Ｑｉａｇｅｎ製のＭａｘｉ−ｐｒｅｐエンドトキシンフリーキットを使用した。使用されるＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ／ＤＮＡ比を２／１に固定した。細胞をフローサイトメトリー実験のために形質移入の４８時間後に収集した。
【０２８５】
免疫化
マウスを組換えＫＩＲ３ＤＬ２−Ｆｃ融合タンパク質（アレル＊００６）により免疫化した。成長ハイブリドーマの上清（ＳＮ）を、ＨＵＴ７８、ＣＯＵ−ＬおよびＨＥＫ−２９３Ｔ／ＫＩＲ３ＤＬ２ドメイン０−ｅＧＦＰに対してフローサイトメトリーにより試験した。初回スクリーニングから選択された潜在的に関心対象のハイブリドーマを、９６ウェルプレート中で限定希釈技術によりクローニングした。二次スクリーンは、ＨＵＴ７８、ＣＯＵ−Ｌ、ＨＥＫ−２９３Ｔ／ＫＩＲ３ＤＬ１ドメイン０−ｅＧＦＰおよびＨＥＫ−２９３Ｔ／ＫＩＲ３ＤＬ２ドメイン０−ｅＧＦＰに対してフローサイトメトリーによりサブクローンの上清を試験することによる関心対象のハイブリドーマの選択を含んだ。陽性サブクローンを、マウス中に注射して腹水症を生じさせ、関心対象の抗体を精製してから組換えＫＩＲ３ＤＬ２チップを使用するＢｉａｃｏｒｅアッセイにおいて試験し、次いでヒトＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞への結合に基づき種々のアッセイフォーマットにおいて試験した。クローンの中で、抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、４Ｂ５、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３および２０Ｅ９の上清が選択された。Ｄ０またはＤ１／２ドメイン結合の中の選択を可能としたスクリーンに基づくと、抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、４Ｂ５、５Ｈ１および１Ｅ２は、細胞外ドメイン０（Ｄ０）上に存在するＫＩＲ３ＤＬ２に結合する一方、１Ｃ３および２０Ｅ９は、ドメイン１／２（Ｄ２）上に存在するエピトープに結合する。
【０２８６】
選択された抗体の重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）の可変ドメインの配列を、それぞれの抗体のｃＤＮＡからＰＣＲにより増幅した。増幅された配列を、アガロースゲル上で流し、次いでＱｉａｇｅｎ  Ｇｅｌ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎキットを使用して抽出した。次いで、ＶＨおよびＶＬ配列をＬｏｎｚａ発現ベクター（二重遺伝子ベクター（Ｄｏｕｂｌｅ−Ｇｅｎｅ  Ｖｅｃｔｏｒ））中に、ＩｎＦｕｓｉｏｎシステム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を使用して製造業者の説明書に従ってサブクローニングした。配列決定後、ＶＨおよびＶＬ配列を含有するベクターを、Ｐｒｏｍｅｇａ  ＰｕｒｅＹｉｅｌｄ（商標）Ｐｌａｓｍｉｄ  Ｍａｘｉｐｒｅｐ  Ｓｙｓｔｅｍを使用してマキシプレップとして調製した。次いで、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ製Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００を使用して製造業者の説明書に従ってベクターをＨＥＫ−２９３Ｔ細胞形質移入に使用した。
【０２８７】
実施例２
ＫＩＲ３ＤＬ２内在化を誘導しない抗体
手短に述べると、抗体なし、または２０μｇ／ｍＬの抗ＫＩＲ３ＤＬ２ドメイン０抗体、または抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、４Ｂ５、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９を、５人の異なるヒトドナーからの新たなセザリー症候群細胞とともに３７℃において２４時間インキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、固定し、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ製のＩｎｔｒａＰｒｅｐ透過処理試薬を使用して透過処理した。ＫＩＲ３ＤＬ２結合１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、４Ｂ５、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９のＡｂの存在が、ＧＡＭ−ＰＥにより標識されているヤギ抗マウスＡｂにより明らかにされる。表６は、２４時間のインキュベーション後の抗ＫＩＲ３ＤＬ２ドメイン０抗体１３Ｈ１の一例をそれぞれ示す。表５は、異なるドナーのそれぞれにおいて１３Ｈ１について蛍光の強い減少を示し、この抗体の結合がＳＳ細胞上のＫＩＲ３ＤＬ２の発現を下方モジュレートすることが確認される。類似の結果が、抗Ｄ０抗体４Ｂ５および一連の抗Ｄ１抗体について得られた。これとは逆に、抗ＫＩＲ３ＤＬ２ドメイン０またはドメイン２抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３および２０Ｅ９は、蛍光の減少をもたらさず、この抗体がＳＳ細胞上のＫＩＲ３ＤＬ２の発現を下方モジュレートしなかったことを示した。表６は、抗体１０Ｇ５についての代表例を示す。
【０２８８】
【表７】
0006507097.tif 000008
【０２８９】
【表８】
0006507097.tif 000009
【０２９０】
実施例３
セザリー症候群細胞系中に内在化しない抗体
抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、４Ｂ５、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３および２０Ｅ９、ならびに抗体ＡＺ１５８（抗ドメイン０ｍＡｂ）および他の抗Ｄ１抗体の内在化を、ＨＵＴ７８ＳＳ細胞系を使用する蛍光顕微鏡観察により評価した。
【０２９１】
材料および方法：
Ｈｕｔ−７８細胞を、１０μｇ／ｍｌの様々な抗体とともに４℃において１時間インキュベートした。このインキュベーション後、細胞を固定し（ｔ＝０時間）、または３７℃において２時間インキュベートした。次いで、２時間インキュベートされた細胞を固定および染色した。Ａｌｅｘａ５９４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ａ１１０３２）にカップリングしているヤギ抗マウス抗体を使用して抗体を染色した。ウサギ抗ＬＡＭＰ−１抗体（Ａｂｃａｍ、ａｂ２４１７０）を使用してＬＡＭＰ−１区画を染色し、ＦＩＴＣ（Ａｂｃａｍ  ａｂ６７１７）にカップリングしているヤギ抗ウサギポリクローナル抗体により明らかにした。写真は、Ａｐｏｔｏｍｅ装置（Ｚｅｉｓｓ）を使用して取得し、Ａｘｉｏｖｉｓｉｏｎソフトウェアを使用して分析した。
【０２９２】
結果：
抗ＫＩＲ３ＤＬ２ｍＡｂは赤色で可視性であった一方、ＬＡＭＰ−１区画は緑色で可視性であった。抗体の添加時、赤色でのＫＩＲ３ＤＬ２染色は細胞表面において可視性であった一方、緑色ＬＡＭＰ−１は細胞内で緑色で可視性であった。しかしながら、抗体の添加の２時間後において、抗体ＡＺ１５８、１３Ｈ１および４Ｂ５のそれぞれ、ならびに抗Ｄ１抗体は、赤色染色を引き起こして緑色染色と共局在化し、細胞表面における赤色染色の減少を伴い、ＡＺ１５８、１３Ｈ１および４Ｂ５、ならびに抗Ｄ１抗体が急速に内在化されたことを示した。しかしながら、抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３および２０Ｅ９は、内在化されず、抗体の添加の２時間後において、赤色染色は細胞表面上に完全に残留した。
【０２９３】
実施例４
抗体は、補体依存性機序（ＣＤＣ）を介してＫＩＲ３ＤＬ２発現標的を殺滅し得る
手短に述べると、希釈された５０μｌの２０μｇ／ｍｌ抗体（２×濃縮）を標準培地、白色透明底Ｐ９６ウェル（商品番号６５５０９８−Ｇｒｅｉｎｅｒ）中で提供し、それに５０μｌの細胞懸濁液を１ｍｌ当たり２００万個（１ウェル当たり１００，０００個の細胞）において標準培地中で添加し、４℃において３０分間インキュベートした。１ウェル当たり５μｌの新たに再構成された補体（商品番号ＣＬ３４４１−Ｃｅｄａｒｌａｎ）を添加し、次いで３７℃において１時間インキュベートした。１ウェル当たり１００μｌのＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（商品番号Ｇ７５７２−Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加し、次いで光保護下で室温において１０分間インキュベートした。結果はルミノメーター（ＶＩＣＴＯＲ）を使用して読み取った。
【０２９４】
ウサギ血液から精製された補体を使用して、補体を動員し、ＫＩＲ３ＤＬ２形質移入Ｂ２２１細胞を溶解させる本発明者らの抗ＫＩＲ３ＤＬ２ｍＡｂの能力をインビトロで扱った。
【０２９５】
図６は、ＣＤＣを媒介する抗体の能力を示し；Ｄ０ドメインに結合する抗ＫＩＲ３ＤＬ２ｍＡｂは灰色であり、Ｄ１ドメインに結合するものは黒色である。親ネズミｍＡｂについて、ｍＡｂのアイソタイプは、このアッセイの結果に対して最も顕著な影響を有する。それというのも、ＩｇＧ２ｂネズミｍＡｂが、いかなる他のアイソタイプよりも有効に補体に結合するためである（マウスＩｇＧ１は、補体に全く結合しない）。
【０２９６】
抗ＫＩＲ３ＤＬ２ｍＡｂとの結合時にＫＩＲ３ＤＬ２内在化の補体媒介標的細胞死に対する影響を扱うため、本発明者らは、ｍｏ１９Ｈ１２、ＨＵＴ７８セザリー細胞系中へのＫＩＲ３ＤＬ２の急速な内在化を誘導する抗体ＫＩＲ３ＤＬ２抗体およびＢ２２１−ＫＩＲ３ＤＬ２を使用した。補体とのインキュベーション前、本発明者らは、標的Ｂ２２１−ＫＩＲ３ＤＬ２標的を、ｍｏ１９Ｈ１２とともに４℃（内在化を遮断する）または３７℃（最適な内在化を可能とする）のいずれかにおいてプレインキュベートした。次いで、補体を添加し、インキュベートし、ＣＤＣを上記のとおり計測した。
【０２９７】
この実験において、結合時のＫＩＲ３ＤＬ２の内在化は、補体動員によりＢ２２１−ＫＩＲ３ＤＬ２を殺滅するｍｏ１９Ｈ１２の能力を完全に停止させる一方、内在化を制限する温度条件においては、ｍｏ１９Ｈ１２のＣＤＣ活性が明確に観察される（図７）。抗ＣＤ２０リツキシマブを、ＣＤ２０＋標的に対するＣＤＣを媒介するが、ＣＤ２０内在化を誘導しない対照として使用する。
【０２９８】
選択されたｍＡｂをヒトＩｇＧ１にキメラ化してそれらをエフェクター機能（ＡＤＣＣおよびＣＤＣ）媒介可能とした。図８は、インビトロでＢ２２１−ＫＩＲ３ＤＬ２に対するＣＤＣを媒介するキメラ抗ＫＩＲ３ＤＬ２ｍＡｂの能力を示す。
【０２９９】
あるｍＡｂクローン、例えば、１Ｅ２および１０Ｇ５は、キメラ化後、ＣＤＣ機序を通してＫＩＲ３ＤＬ２陽性標的を殺滅する能力を獲得した。この実験において、抗Ｄ０ｍＡｂについて、強力な内在化（例えば、１３Ｈ１により誘導されるもの、黒色）が、特に１Ｅ２および１０Ｇ５について観察されたとおり最適な効力を妨害し得た。
【０３００】
実施例５
抗体は、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を介してＫＩＲ３ＤＬ２発現標的を殺滅し得る
ＡＤＣＣ機序を通しての細胞溶解を、放射能ベース５１Ｃｒ放出実験においてモニタリングした（事前に負荷された標的細胞から放出される放射能のレベルは、それらの細胞死に比例する）。１００万個の標的細胞に５１Ｃｒを３７℃において１時間負荷し、３回洗浄した。１ウェル（Ｕ字底９６ウェルプレート）当たり３，０００個の細胞を播種し、試験ｍＡｂを１０または２０μｇ／ｍｌの最終濃度（または用量応答関係を試験する場合、増加濃度）において添加する。エフェクター細胞を規定のエフェクター：標的比（一般に１０：１）において添加し、混合物を３７℃において４時間インキュベートした。上清をＬｕｍａｐｌａｔｅ機器上で分析する。キメラｈｕＩｇＧ１ｍＡｂを使用する場合、エフェクター細胞は、健常被験ドナーから採取されたＰＢＭＣから精製された同種異系ヒトＮＫ細胞であった。
【０３０１】
最適な評価のため、一般に、種々の親ネズミ抗ＫＩＲ３ＤＬ２ｍＡｂから生成されたキメラ化ｈｕＩｇＧ１ｍＡｂを使用してＡＤＣＣ実験を実施した。図９は、同一の最終濃度（１０μｇ／ｍｌ）において試験された、ＡＤＣＣ媒介機序を通してプロトタイプセザリー細胞系ＨＵＴ７８を殺滅する一連の抗ＫＩＲ３ＤＬ２ｍＡｂの能力を示す。
【０３０２】
図１０は、使用される標的細胞が、抗ＫＩＲ３ＤＬ２ｍＡｂによるＡＤＣＣ媒介殺滅に全体的により感受性であるＫＩＲ３ＤＬ２形質移入Ｂ２２１である類似の実験を示す。灰色で示されるｍＡｂは、受容体の内在化を誘導し、ＫＩＲ３ＤＬ２内在化を誘導しない４つの他のｍＡｂよりも有効でないと考えられる。
【０３０３】
図１１は、用量範囲探索実験における抗体の比較、ＫＩＲ３ＤＬ２発現Ｂ２２１標的に対するＡＤＣＣを媒介するキメラ化ｈｕＩｇＧ１抗ＫＩＲ３ＤＬ２ｍＡｂの能力を示し、標的の内在化を誘導しないｍＡｂ（１０Ｆ６、２Ｂ１２および１０Ｇ５）の効力プロファイルは、ＫＩＲ３ＤＬ２内在化を誘導するｍＡｂ（１３Ｈ１および抗Ｄ０ｍＡｂ１５Ｃ１１および１８Ｂ１０）よりも良好である。
【０３０４】
実施例６
ＫＩＲ３ＤＬ２発現ヒト腫瘍のマウスゼノグラフトモデルにおける活性
材料および方法
Ｂ２２１−ＫＩＲ３ＤＬ２およびＲＡＪＩ−ＫＩＲ３ＤＬ２モデルに使用された免疫低下マウスは、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入したＮＯＤ−ＳＣＩＤであった。以下のモデルにおいて、５００万個のヒト腫瘍細胞（ビヒクルとしての１００μｌのＰＢＳ中）を０日目（Ｄ０）、すなわち、処理開始（Ｄ１）１日前にＩＶ移植した。Ｄ１から、マウスをＰＢＳ中で希釈された様々な用量のｍＡｂ（用量は、マウス体重に適合させた）により、実験全体の期間にわたり１週間当たり２回の注射でＩＶ処理した。
【０３０５】
対照群を実験に応じて含めた：
−  正常／非罹患腫瘍成長の対照としてのＰＢＳ／プラセボ処理マウス；
−  無関連抗原に対して指向される同一用量のアイソタイプ対照マッチｍＡｂを注射されたマウス。
【０３０６】
マウスを秤量し、臨床徴候についてモデルに応じて２〜５日間ごとに観察した。体重変化のパーセントを、腫瘍移植前のＤ０における体重と、または実験の間に達した最大体重と比較して計算した。マウス死亡または重要な体重損失を記録し、それを使用して生存カプラン・マイヤー曲線を作成し、対照群のマウスと比較して生存率の改善を計算した。
【０３０７】
結果
図１２は、３ＩｇＧ２ｂアイソタイプネズミ抗ＫＩＲ３ＤＬ２  ９Ｅ１０および１９Ｈ１２（両方とも、３００μｇ／マウスにおいて与える、週２回）の効力を、ＳＣ  Ｂ２２１−ＫＩＲ３ＤＬ２ゼノグラフトに対して試験した実験の結果を示す（１群当たりｎ＝６匹のＮＯＤ−ＳＣＩＤマウス）。非内在化抗Ｄ０抗体９Ｅ１０は、ＰＢＳおよび内在化抗Ｄ１／Ｄ２抗体１９Ｈ１２の両方と比較して増加した生存率を示した。
【０３０８】
図１３は、ネズミ抗ＫＩＲ３ＤＬ２  １９Ｈ１２（３００μｇ／マウスにおいて与える、週２回）の効力を、ＳＣ  ＲＡＪＩ−ＫＩＲ３ＤＬ２ゼノグラフトに対して試験した別の実験を結果を示す（１群当たりｎ＝６匹のＮＯＤ−ＳＣＩＤマウス）。インビトロで、ＫＩＲ３ＤＬ２形質移入ＲＡＪＩ細胞は、Ｂ２２１−ＫＩＲ３ＤＬ２またはセザリー細胞系よりも少ないｍＡｂ結合時の内在化を示した。ＲＡＪＩ−ＫＩＲ３ＤＬ２ゼノグラフトモデルにおいて、ｍｏ１９Ｈ１２ｍＡｂは、Ｂ２２１−ＫＩＲ３ＤＬ２モデルよりも有効であった。このことは、インビボでのそれほど強力でない標的の内在化に起因する。
【０３０９】
実施例７
リガンド遮断
材料および方法
テトラマー染色の抗体阻害
Ｂ２７ダイマーおよびＨＬＡ−Ａ３テトラマー調製ならびにＦＡＣＳ染色は、既に記載されている（Ｋｏｌｌｎｂｅｒｇｅｒ，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３７：１３１３−１３２２）。ＨＬＡ−Ａ３テトラマーを、を用いて調製した。抗体阻害実験のため、ＫＩＲ３ＤＬ２により形質導入されたＢａｆ３細胞を、５μｇの抗体またはＩｇＧ１／ＩｇＧ２ａアイソタイプ対照（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ  ＵＫ  Ｌｔｄ）により４℃において２０分間染色してから、テトラマーにより室温において２０分間染色した。次いで、染色された細胞を上記のとおり洗浄および固定してから、ＦＡＣＳ分析をＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ  ＦＡＣＳ装置上で行った。ＦＡＣＳ分析は、Ｆｌｏｗｊｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ  ｓｔａｒ  Ｉｎｃ  ＵＳ）を使用して実施した。
【０３１０】
Ｊｕｒｋａｔ  ＫＩＲ３ＤＬ２  ＣＤ３εレポーター細胞の抗体阻害
ＫＩＲ３ＤＬ２ＣＤ３ε融合タンパク質を発現するように形質導入されたＪｕｒｋａｔレポーター細胞は、既に記載されている（Ｐａｙｅｌｉ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．）。抗体阻害実験のため、ＲＰＭ１６４０（Ｓｉｇｍａ、１０％のＦＣＳならびにペニシリンおよびストレプトマイシンを補給）中の１００，０００個／ウェルのレポーター細胞を、最初に１０μｇの抗体またはアイソタイプ対照抗体により４℃において２０分間染色した。続いて、レポーター細胞を２００，０００個の親ＬＣＬ．ＬＢＬ．７２１．２２１細胞（以下、２２１細胞と称する）またはＨＬＡ−Ｂ２７もしくは対照ＨＬＡ−クラス１により形質移入された２２１細胞により２００μｌの最終容量で刺激した。製造業者の説明書に従って実施されるＥＬＩＳＡ（Ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＵＫ  Ｌｔｄ）によるＩＬ−２アッセイのために一晩刺激後に上清を収集した。
【０３１１】
結果
Ｄ０ドメイン特異的抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２形質導入細胞のＨＬＡ−Ａ３およびＢ２７ダイマー（Ｂ２７２）テトラマー染色を阻害する
最初に、本発明者らは、ＫＩＲ３ＤＬ２のＨＬＡ−Ａ３およびＢ２７ダイマーテトラマー染色を阻害するＤ０およびＤ１／Ｄ２ドメイン特異的抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の能力を試験した。Ｄ０ドメイン特異的抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体１Ｅ２および１３Ｈ１は、ＫＩＲ３ＤＬ２形質導入Ｂａｆ３細胞のＨＬＡ−Ａ３およびＢ２７重鎖（Ｂ２７２）染色を常に阻害した（図１４および１６Ａ）。２Ｂ１２はＢ２７２を阻害した一方、ＫＩＲ３ＤＬ２のＨＬＡ−Ａ３テトラマー染色に対するごくわずかな効果を実証した。対照的に、１０Ｇ５は、ＨＬＡ−Ａ３またはＢ２７２テトラマーのいずれによるＫＩＲ３ＤＬ２の染色も阻害しなかった。
【０３１２】
Ｄ２ドメイン特異的抗体１Ｃ３は、ＫＩＲ３ＤＬ２のＨＬＡ−Ａ３テトラマー染色を阻害するが、Ｂ２７ダイマー（Ｂ２７２）テトラマー染色を阻害しない
Ｄ２特異的抗体１Ｃ３は、ＫＩＲ３ＤＬ２形質導入細胞のＨＬＡ−Ａ３テトラマー染色を常に阻害した（図１５および１６Ｂ）。対照的に、１Ｃ３ＭＡｂは、ＫＩＲ３ＤＬ２Ｂａｆ３細胞のＢ２７２染色に影響せず、Ｄ１特異的抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２のＨＬＡ−Ａ３テトラマー染色にもＢ２７２テトラマー染色にも有意に影響しなかった（図１５および１６Ｂ）。
【０３１３】
Ｄ１／Ｄ２ではなくＤ０ドメイン特異的抗ＫＩＲ３ＤＬ２ＭＡｂが、ＨＬＡ−クラス１とのＫＩＲ３ＤＬ２レポーター細胞の相互作用を阻害する。
次に、本発明者らは、２２１形質移入体により刺激されたＫＩＲ３ＤＬ２ＣＤ３ε形質導入Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞のＩＬ−２産生に対する抗体の効果を試験することにより、ＨＬＡ−Ｂ２７および他のＨＬＡ−クラス１のＫＩＲ３ＤＬ２認識に対するＫＩＲ３ＤＬ２特異的抗体の効果を決定した。本発明者らの上記知見と一致して、ＨＬＡ−Ｂ２７を発現する２２１細胞は、対照ＨＬＡクラス１を発現する細胞による刺激と比較して６倍大きい、ＫＩＲ３ＤＬ２レポーター細胞によるＩＬ−２産生を常に刺激した（図１７）。
【０３１４】
Ｄ０ドメイン特異的抗体２Ｂ１２、１Ｅ２、１０Ｇ５および１３Ｈ１は全て、ＨＬＡ−Ｂ２７形質移入細胞により刺激されたＫＩＲ３ＤＬ２レポーター細胞によるＩＬ−２産生をある程度阻害し（図４）、２Ｂ１２および１Ｅ２が最大阻害効果を実証した。対照的に、Ｄ２特異的抗体１Ｃ３は、ＨＬＡ−Ｂ２７のレポーター細胞認識に対する有意な効果を有さなかった。
【０３１５】
Ｄ０ドメイン特異的抗体は、ＨＬＡ−Ｂ７、ＨＬＡ−Ｂ３５ならびにＨＬＡ−Ａ２およびＨＬＡ−Ａ３により形質移入された２２１細胞により刺激されたＫＩＲ３ＤＬ２レポーター細胞によるＩＬ−２産生も阻害したが、効果は、細胞をＨＬＡ−Ｂ２７により刺激した場合に観察されたものよりも顕著ではなかった。対照的に、Ｄ２特異的抗体１Ｃ３は、ＨＬＡ−Ｂ７、ＨＬＡ−Ｂ３５ならびにＨＬＡ−Ａ２およびＨＬＡ−Ａ３により形質移入された２２１細胞により刺激されたＫＩＲ３ＤＬ２レポーター細胞によるＩＬ−２産生に対する有意な効果を有さなかった。
【０３１６】
まとめ
ここで、本発明者らは、ＫＩＲ３ＤＬ２のＤ０ドメインに対するモノクローナル抗体（２Ｂ１２、１Ｅ２、１３Ｈ１）が、β２ｍフリーＢ２７重鎖ダイマー（Ｂ２７２）およびβ２ｍ会合リガンド、例えば、ＨＬＡ−Ａ３への結合を阻害することを示す。対照的に、ＫＩＲ３ＤＬ２のＤ２ドメインに対する抗体（１Ｃ３）は、ＨＬＡ−Ａ３との相互作用を阻害するにすぎず、Ｂ２７２テトラマー結合に対する効果をほとんど有さない。
【０３１７】
ＫＩＲ３ＤＬ２レポーターＴ細胞は、ＨＬＡ−Ｂ２７、ＨＬＡ−Ｂ７、ＨＬＡ−Ｂ３５、ＨＬＡ−Ａ２およびＨＬＡ−Ａ３形質移入ＬＢＬ．７２１．２２１Ｂ細胞により刺激された場合にＩＬ−２を産生するが、レポーター細胞は、ＨＬＡ−Ｂ２７に応答して６倍多いＩＬ−２を常に産生する。ＨＬＡ−Ｂ２７および他のＨＬＡ−クラス１を発現するＢ細胞とのＫＩＲ３ＤＬ２相互作用は、Ｄ０ドメイン特異的抗体２Ｂ１２および１Ｅ２ならびにより少ない程度で１３Ｈ１により常に阻害される。このことは、ＫＩＲ３ＤＬ２のＤ０ドメインが異なるＨＬＡ−クラス１の共通の共有される特性についてのいくらかの親和性を有し得ることを示唆する。ＫＩＲ３ＤＬ２Ｄ０ドメインは、異なるＨＬＡクラス１間で共有されるＨＬＡ−Ｂ２７中の領域に少なくとも部分的に結合し得る。ＨＬＡ−Ｂ２７についてのＫＩＲ３ＤＬ２のアビディティーの増加は、Ｂ２７重鎖のダイマー化から生じ得る。
【０３１８】
ＫＩＲ３ＤＬ２の３つの免疫グロブリン様ドメインＤ０、Ｄ１およびＤ２が、リガンドの結合に関与することが報告された。抗体阻害試験からの結果は、ＫＩＲ３ＤＬ２とＨＬＡ−クラス１との優勢な接触がＤ０ドメインを介することを示唆する。特に、Ｄ２抗体１Ｃ３は、ＫＩＲ３ＤＬ２へのＨＬＡ−Ａ３結合を阻害したにすぎず、Ｂ２７ダイマー結合を阻害しなかった。したがって、本発明者らは、Ｄ０ドメインは残基に接触し、それは異なるＨＬＡ−クラス１間で保存され、Ｄ１およびＤ２ドメインはペプチドＭＨＣ複合体中の多型領域およびペプチドに接触することを提案する。同定された抗体は、異なるリガンドを選択的に遮断し、または複数のリガンドを遮断し、またはＫＩＲ３ＤＬ２への結合についてリガンドと競合しないようにするために特定の用途に応じた治療、診断および他の研究用途に使用することができる。
【０３１９】
実施例８
エピトープマッピング
ＫＩＲ３ＤＬ２突然変異体を発生させて所望の結合特性を有するＫＩＲ３ＤＬ２特異的抗体を同定した。抗体は、有利には、集団におけるメジャーＫＩＲ３ＤＬ２アレル（アレル頻度に関して）のほとんどまたは全てへの結合を有するが、メジャーＫＩＲ３ＤＬ１アレル（例えば、アレル＊００１０１）への結合を有さない。
【０３２０】
ＫＩＲ３ＤＬ１とＫＩＲ３ＤＬ２との間で異なる残基に対応する突然変異を生成した。ＫＩＲ３ＤＬ１中のアミノ酸をＫＩＲ３ＤＬ２中に置換した第１の突然変異の組を生成した。しかしながら、これらの突然変異タンパク質の多くは、細胞表面において発現し得ず、ＫＩＲ３ＤＬ１の取り込みがＫＩＲ３ＤＬ２分子全体のフォールディングに深く影響を与えたことを示唆した。特に、以下の表７Ａに示されるクラスターＤ２１、Ｄ２２、Ｄ２３、Ｄ２６およびＤ２７における突然変異体は、細胞表面において発現しなかった。
【０３２１】
【表９】
0006507097.tif 000010
【０３２２】
さらなる突然変異体を再設計および試験し、最後の突然変異の組を以下の表７Ｂに示す。抗体を、ＫＩＲ３ＤＬ２から種々のＫＩＲ３ＤＬ２突然変異体への結合について試験した。ＫＩＲ３ＤＬ２突然変異体を、ＰＣＲにより生成した（以下の表７Ｂ参照）。全てのＭｘ−Ｒプライマーを、以下の５’プライマーＡＣＣＣＡＡＧＣＴＧＧＣＴＡＧＣＡＴＧＴＣＧＣＴＣＡＣＧＧＴＣＧＴＣＡＧＣＡＴＧ（配列番号７９）とともに使用した。全てのＭｘ−Ｆプライマーを、以下の３’プライマーＡＧＣＡＣＡＧＴＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＴＡＧＡＡＡＡ  ＣＣＣＣＣＴＣＡＡＧＡＣＣ（配列番号８０）とともに使用した。増幅された配列をアガロースゲル上で流し、次いでＱｉａｇｅｎ  Ｇｅｌ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎキットを使用して精製した。
【０３２３】
突然変異体１２および２１を作出するため、第３のＰＣＲを行うことが必要であった。これらのＰＣＲに使用されるプライマーは、Ｍ１２ａ−Ｆプライマー（５’−ＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＣＡＴＡＴＧＡＧＡＡＡＣＣＴＴＣＴＣＴＣＴＣＡＧＣＣ−３’）（配列番号８１）とＭ１２ｂ−Ｒプライマー（５’−ＴＧＧＧＴＣＡＣＴＴＧＣＧＧＣＴＧＡＣＣＡＣＡＣＧＣＡＧＧＧＣＡＧＧＧ−３’）（配列番号８２）およびＭ２１ａ−Ｆプライマー（５’−ＣＧＴＧＣＣＣＴＧＣＣＣＴＡＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＴＣＡＡＧＴＧＡＣ−３’）（配列番号８３）とＭ２１ｂ−Ｒプライマー（５’−ＡＴＧ  ＣＡＧＧＴＧＴＣＴＧＧＧＧＡＴＡＣＣＡＧＡＴＴＴＧＧＡＧＣＴＴＧＧＴＴＣ−３’）（配列番号８４）であった。
【０３２４】
次いで、それぞれの突然変異体について生成された２または３つのＰＣＲ産物を、ＩｎＦｕｓｉｏｎシステム（ＣｌｏｎＴｅｃｈ）を用いて製造業者の説明書に従って制限酵素ＮｈｅＩおよびＮｏｔＩにより消化されたｐｃＤＮＡ３．１ベクター中にライゲートした。
【０３２５】
配列決定後、突然変異配列を含有するベクターを、Ｐｒｏｍｅｇａ  ＰｕｒｅＹｉｅｌｄ（商標）Ｐｌａｓｍｉｄ  Ｍａｘｉｐｒｅｐ  Ｓｙｓｔｅｍを使用してマキシプレップとして調製した。次いで、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ製Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００を使用して製造業者の説明書に従ってベクターをＨＥＫ−２９３Ｔ細胞形質移入に使用した。
【０３２６】
【表１０】
0006507097.tif 000011
【０３２７】
【表１１】
0006507097.tif 000012
【０３２８】
【表１２】
0006507097.tif 000013
【０３２９】
【表１３】
0006507097.tif 000014
【０３３０】
【表１４】
0006507097.tif 000015
【０３３１】
それぞれの抗体を、野生型ＫＩＲ３ＤＬ２への、ならびにＤ０、Ｄ１およびＤ２ドメイン突然変異体のそれぞれへの結合について試験した。抗体は、非突然変異野生型ＫＩＲ３ＤＬ２（ＷＴａＫＩＲ３ＤＬ２）への結合のいかなる損失も示さなかったが、１つ以上の突然変異体への結合を損失し、それによりいくつかのエピトープを同定した。
【０３３２】
まとめを表７Ｃおよび７Ｄに示す（「＋」は、有意な結合の損失がないことを示し、「＋／−」は、結合の減少（または部分的な結合の損失）を示し、「−」は、実質的に完全な結合の損失を示す）。ほとんどの非内在化Ｄ０抗体は、突然変異体２への実質的に全ての結合を損失した（４つの抗体：１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、１０Ｇ５）。これらの抗体の全ては、突然変異体２Ａ３への少なくとも部分的な結合の損失も有した。１つの非内在化Ｄ０抗体は、突然変異体１のみへの結合の損失を示した（９Ｅ１０）。１つの非内在化Ｄ０抗体（１Ｅ２）は、突然変異体２Ａ３のみへの結合を損失した。１つの抗体（５Ｈ１）は、突然変異体６への結合を損失した。
【０３３３】
天然リガンド遮断および内在化抗体１３Ｈ１は、突然変異体１および２に加え、突然変異体２Ａ２およびＭＤ０／ＨＬＡ１への減少した結合をさらに示した。
【０３３４】
ＫＩＲ３ＤＬ２のドメインＤ２に結合した抗体に関して、抗体１Ｃ３および２０Ｅ９（両方とも非内在化）は、突然変異体１４への結合を損失し、突然変異体１５および突然変異体１６への結合を部分的に損失した。
【０３３５】
抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６および１０Ｇ５は、Ｉ６０ＮおよびＧ６２Ｓ置換を有する突然変異体２への結合を損失し、Ｐ１４Ｓ、Ｓ１５ＡおよびＨ２３Ｓ置換を有する突然変異体２Ａ３への減少した結合を有したが、他のいかなる突然変異体への結合も損失しなかった。したがって、これらの抗体の主要エピトープは、残基Ｉ６０および／またはＧ６２を含む（エピトープは、場合により、Ｐ１４、Ｓ１５、およびＨ２３の１つ以上をさらに含む）。残基６０および６２は、ＫＩＲ３ＤＬ２のＤ０ドメイン内に存在する。
【０３３６】
抗体１３Ｈ１は、Ｒ１３Ｗ、Ａ２５ＴおよびＱ２７Ｒを有する突然変異体１ならびにＩ６０ＮおよびＧ６２Ｓ置換を有する突然変異体２の両方への結合を損失した。１３Ｈ１は、突然変異体２Ａ２（Ｑ５６Ｓ、Ｅ５７Ａ）および突然変異体ＭＤ０／ＨＬＡ１（Ｆ９Ｓ、Ｓ１１Ａ）への減少した結合も有した。したがって、１３Ｈ１のエピトープは、残基Ｆ９、Ｓ１１、Ｑ５６および／またはＥ５７を含む。これらの残基はＤ０ドメイン内に存在する。
【０３３７】
抗体９Ｅ１０は、Ｒ１３Ｗ、Ａ２５ＴおよびＱ２７Ｒ置換を有する突然変異体１への減少した結合を有したが、他のいかなる突然変異体への減少した結合も有さなかった。したがって、９Ｅ１０および１０Ｇ５のエピトープは、残基Ｒ１３、Ａ２５および／またはＱ２７を含む。
【０３３８】
図１は、Ｄ０ドメイン内の部分を含むＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの画像を示し、抗体による結合の損失を（様々な組合せで）もたらした「突然変異体１」、「突然変異体２」、「突然変異体３」および「突然変異体６」として示される突然変異したアミノ酸残基を示す。図２は、Ｄ０ドメイン内の部分を含むＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの画像を示し、抗体による結合の損失を（様々な組合せで）もたらした「突然変異体１」、「突然変異体２」および「突然変異体３」として示される突然変異したアミノ酸残基を示し、残基に隣接する残基（突然変異体２に隣接するＦ９、Ｓ１１、Ｐ１４、Ｆ３４および／またはＳ１４０、ならびに突然変異体１に隣接するＧ２１、Ｇ２２、Ｈ２３、Ｅ５７、Ｓ５８、Ｆ５９、Ｐ６３および／またはＨ６８）に陰影を付す。
【０３３９】
抗体５Ｈ１は、Ｒ７８ＨおよびＬ８２Ｐ置換を有する突然変異体６への結合を損失したが、他のいかなる突然変異体への結合も損失しなかった。したがって、５Ｈ１の主要エピトープは、残基Ｒ７８および／またはＬ８２を含む。残基Ｒ７８およびＬ８２は、ＫＩＲ３ＤＬ２のＤ０ドメイン内に存在する。これらの突然変異残基に隣接する表面露出残基も、抗体のエピトープに寄与し得る。図３は、Ｄ０ドメイン内の部分を含むＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドのそれぞれの面の画像を示し、抗体による結合の損失を（様々な組合せで）もたらした「突然変異体６」として示される突然変異したアミノ酸残基を示し、結合の損失をもたらさなかった「突然変異体３」も示す。陰影において、この抗体によっても結合され得る突然変異体６に隣接する残基に隣接する残基（Ｋ７、Ｙ３０、Ｒ３１、Ｐ７９、Ｈ８０、Ｓ８１、Ｔ８３、Ｇ８４、Ｗ８５、Ｓ８６および／またはＡ８７）も示す。
【０３４０】
抗体１Ｃ３および２０Ｅ９は、Ｗ２２６Ａ置換を有する突然変異体１４への結合を損失した。抗体は、Ｉ２３１ＭおよびＲ２４６Ｐ置換を有する突然変異体１５ならびにＥ２３９Ｇ置換を有する突然変異体１６への減少した結合をさらに有した。したがって、１Ｃ３の主要エピトープは、残基Ｗ２２６を含む。２０Ｅ９の主要エピトープは、残基Ｉ２３１Ｍおよび／もしくはＲ２４６Ｐを含み得、ならびに／またはＥ２３９をさらに含み得る。残基Ｗ２２６、Ｉ２３１およびＲ２４６は、ＫＩＲ３ＤＬ２のＤ１およびＤ２ドメインの接合部の領域中に存在する。突然変異残基に隣接する表面露出残基、例として、例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２の表面においてＷ２２６エピトープの領域中であるが、抗体の結合の損失をもたらさなかったＫＩＲ３ＤＬ２突然変異（例えば、突然変異体１２および１７）の領域の外側に局在する残基Ｑ２０１、Ｋ２０２、Ｐ２０３、Ｓ２０４、Ｓ２２４、Ｓ２２５、Ｓ２２７、Ｓ２２８、Ｎ２５２、Ｒ２５３および／またはＴ２５４（配列番号１に関する）も、抗体のエピトープに寄与し得る。突然変異残基Ｉ２３１およびＲ２４６に隣接する表面露出残基、例として、例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２の表面においてＩ２３１／Ｒ２４６エピトープの領域中であるが、抗体の結合の損失をもたらさなかったＫＩＲ３ＤＬ２突然変異（例えば、突然変異体１２および１７）の領域の外側に局在する残基Ｄ２３０、Ｉ２３１、Ｒ２４４、Ｌ２４５、Ｒ２４６、Ａ２４７、Ｖ２４８、Ｓ２７５、Ｒ２７７および／またはＰ２８０（配列番号１に関する）も、抗体のエピトープに寄与し得る。
【０３４１】
図４は、Ｄ２ドメイン内の部分（Ｄ１／Ｄ２接合部）を含むＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの画像を示し、抗体が結合を損失した「突然変異体１４」、ならびに抗体による結合の損失を引き起こさなかった「突然変異体１２」および「突然変異体１７」として示される突然変異したアミノ酸残基を示し；陰影において、さらに結合され得る残基に隣接する残基（突然変異体１４に隣接するＱ２０１、Ｋ２０２、Ｐ２０３、Ｓ２０４、Ｓ２２４、Ｓ２２５、Ｓ２２７、Ｓ２２８、Ｎ２５２、Ｒ２５３および／またはＴ２５４）も示す。
【０３４２】
図５は、Ｄ２ドメイン内の部分（Ｄ１／Ｄ２接合部）を含むＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの画像を示し、抗体が結合を損失した「突然変異体１５」として示される突然変異したアミノ酸残基を示し；陰影において、さらに結合され得る残基に隣接する残基（突然変異体１４に隣接するＤ２３０、Ｉ２３１、Ｒ２４４、Ｌ２４５、Ｒ２４６、Ａ２４７、Ｖ２４８、Ｓ２７５、Ｒ２７７および／またはＰ２８０））も示す。
【０３４３】
図１８、１９および２０は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドアレル＊００１の画像を示し、突然変異体２の結合部位を示し、最大頻度（米国における集団の研究）を有する異なるＫＩＲ３ＤＬ２アレルにおいて見られるアミノ酸差異を示す。抗体結合部位は、ＫＩＲ３ＤＬ２アレルにわたり保存される部位に存在することを把握することができ、このことは、試験された全ての個体からの細胞に結合する抗体の能力と一致する。
【０３４４】
【表１５】
0006507097.tif 000016
【０３４５】
【表１６】
0006507097.tif 000017
【０３４６】
全ての見出しおよび小見出しは、本明細書において便宜的に使用されるにすぎず、決して本発明を限定するものとして解釈すべきではない。上記要素のその全ての考えられる変形形態における任意の組合せは、本明細書に特に記載されず、または特に文脈と明らかに矛盾しない限り、本発明により包含される。本明細書の値の範囲の記述は、本明細書に特に記載のない限り、その範囲内に含まれるそれぞれの別個の値を個別に参照する略記方法として機能するものにすぎず、それぞれの別個の値は、あたかもそれが本明細書において個々に記述されるように、本明細書に組み込まれる。特に記載のない限り、本明細書に提供される全ての正確な値は、対応する近似値を代表する（例えば、特定の因子または計測値に関連して提供される全ての正確な例示値は、適宜「約」により修飾される、対応する近似測定値も提供するものとみなすことができる）。
【０３４７】
本明細書に記載の全ての方法は、本明細書に特に記載されず、または特に文脈と明らかに矛盾しない限り、任意の好適な順序で実施することができる。
【０３４８】
本明細書に提供される任意および全ての例、または例示的な文言（例えば、「例えば」）の使用は、本発明をより良好に説明するものにすぎず、特に記載のない限り、本発明の範囲を限定するものではない。本明細書中の文言は、任意の要素が本発明の実施に不可欠であることを示すものとして、そのように明示されない限り、解釈すべきでない。
【０３４９】
本明細書の特許文書の引用および組込みは、便宜的に行われるにすぎず、そのような特許文書の有効性、特許性および／または権利行使可能性に関するいかなる見解も反映するものではない。１つまたは複数の要素に対する参照などの用語を使用する本発明の任意の態様または実施形態の本明細書の記載は、特に記載されず、または文脈と明らかに矛盾しない限り、その特定の１つまたは複数の要素「からなる」、「本質的にその要素からなる」またはその要素を「実質的に含む」本発明の類似の態様または実施形態へのサポートを提供するものとする（例えば、特定の要素を含む本明細書に記載の組成物は、特に記載されず、または文脈と明らかに矛盾しない限り、その要素からなる組成物も記載するものとして理解すべきである）。
【０３５０】
本発明は、適用可能な法律により許容される最大の程度までの、本明細書に提示される態様または特許請求の範囲に記載される、主題の全ての改変形態および均等物を含む。
【０３５１】
本明細書に引用される全ての刊行物および特許出願は、それぞれの個々の刊行物または特許出願が、あたかも参照により組み込まれることが個別具体的に示されるように、参照により全体として本明細書に組み込まれる。
【０３５２】
上記発明を、理解を明確にすることを目的として、説明および例として、いくらか詳細に記載したが、本発明の教示に照らして添付の特許請求の範囲の趣旨からも範囲からも逸脱することなくある変更および改変をそれに対して行うことができることは当業者に容易に明らかである。
【図１】
0006507097.tif 000018
【図２】
0006507097.tif 000019
【図３】
0006507097.tif 000020
【図４】
0006507097.tif 000021
【図５】
0006507097.tif 000022
【図６】
0006507097.tif 000023
【図７】
0006507097.tif 000024
【図８】
0006507097.tif 000025
【図９】
0006507097.tif 000026
【図１０】
0006507097.tif 000027
【図１１】
0006507097.tif 000028
【図１２】
0006507097.tif 000029
【図１３】
0006507097.tif 000030
【図１４】
0006507097.tif 000031
【図１５】
0006507097.tif 000032
【図１６】
0006507097.tif 000033
【図１７】
0006507097.tif 000034
【図１８】
0006507097.tif 000035
【図１９】
0006507097.tif 000036
【図２０】
0006507097.tif 000037
【配列表】
0006507097000001.app