(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式Iを有する化合物又はその医薬的に許容される塩若しくは溶媒和物であって、
0006607962.tif 000013
式I
ｎが０〜４の整数を表し、
各Ｒ１は独立して、ハロゲン、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、又はハロアルキルであり、
Ｒ２が、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、ＯＲ４、ＳＲ４、ＣＯＲ５、ＣＯＯＲ６、アルケニル、アルキニル、又はハロアルキルであり、
Ｒ３が、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、ＮＯ２、ＮＲａＲｂ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、又はハロアルキルであり、
Ｒ４が、ハロゲン、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、又はハロアルキルであり、
Ｒ５とＲ６がそれぞれ独立し、Ｈ、ハロゲン、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、又はハロアルキルであり、
ＲａとＲｂがそれぞれ独立し、Ｃ（Ｏ）ＮＲｃＲｄ、Ｈ、ハロゲン、ＯＨ、ＣＮ、ＮＨ２、ＮＯ２、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、又はハロアルキルであり、
ＲｃとＲｄがそれぞれ独立し、Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、ハロアルキル、又は非置換若しくは置換アリールであり、（Ｒ１）ｎにおけるｎが０、Ｒ２が３’−Ｆ、４’−ＣＨ３、又は４’−ＯＣＨ３、及びＲ３がＮＨ２である化合物、並びに（Ｒ１）ｎにおけるｎが０、（Ｒ２）ｎにおけるｎが０、Ｒ３がＮＨ２である化合物を除くことを特徴とする、前記化合物又はその医薬的に許容される塩若しくは溶媒和物。
【請求項２】
Ｒ１が、ハロゲン、又はＣ−５、Ｃ−６、Ｃ−７若しくはＣ−８位で置換されたＣ１−１０アルキルであることを特徴とする、請求項１に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩若しくは溶媒和物。
【請求項３】
Ｒ１が、ハロゲン又はＣ１−４アルキルであることを特徴とする、請求項１に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩若しくは溶媒和物。
【請求項４】
Ｒ１が、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、メチルであることを特徴とする、請求項１に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩若しくは溶媒和物。
【請求項５】
（Ｒ１）ｎにおけるｎが０であることを特徴とする請求項１に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩若しくは溶媒和物。
【請求項６】
Ｒ２が、ハロゲン、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０アルコキシ、Ｃ１−１０アルキルチオ、ＮＨ２、ＮＯ２、ハロアルキル、ＣＯＲ５又はＣ−２’、Ｃ−３’若しくはＣ−４’位で置換されたＣＯＯＲ５であることを特徴とする、請求項１に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩若しくは溶媒和物。
【請求項７】
Ｒ２が、ハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、ＮＨ２、ＮＯ２、ハロＣ１−４アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１−４アルキル又はＣＯＯＨであることを特徴とする、請求項１に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩若しくは溶媒和物。
【請求項８】
Ｒ２が、メチル、ＯＨ、ＮＨ２、メトキシ、メチルチオ、ＣＦ３、Ｃｌ、Ｆ、ＮＯ２、ＣＯＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ３であることを特徴とする、請求項１に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩若しくは溶媒和物。
【請求項９】
Ｒ３がＮＲａＲｂ、ＯＨ又はＮＯ２であり、
ＲａとＲｂが、それぞれ独立し、Ｈ又はＣ（Ｏ）ＮＲｃＲｄであり、
ＲｃとＲｄが、それぞれ独立し、Ｈ又は非置換若しくは置換アリールであることを特徴とする、請求項１に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩若しくは溶媒和物。
【請求項１０】
前記化合物が、３−アミノ−４−（４−クロロフェニルアミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン、Ｎ４−（４−クロロフェニル）−６−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン−３，４−ジアミン、６−メチル−Ｎ４−（ｐ−トリル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン−３，４−ジアミン、Ｎ４−（４−クロロフェニル）−７−フルオロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン−３，４−ジアミン、７−フルオロ−Ｎ４−（ｐ−トリル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン−３，４−ジアミン、８−クロロ−Ｎ４−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン−３，４−ジアミン、８−クロロ−Ｎ４−（ｐ−トリル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン−３，４−ジアミン、８−ブロモ−Ｎ４−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン−３，４−ジアミン、８−ブロモ−Ｎ４−（ｐ−トリル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン−３，４−ジアミン、３−アミノ−４−（４−ヒドロキシフェニルアミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン、３−アミノ−４−（４−アミノフェニルアミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン、３−アミノ−４−（４−フルオロフェニルアミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン、３−アミノ−４−（４−トリフルオロメチルフェニルアミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン、３−アミノ−４−（４−メチルチオフェニルアミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン、３−アミノ−４−（４−ニトロフェニルアミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン、４−（３−アミノ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン−４−イルアミノ）安息香酸、３−アミノ−４−（４−アセチルフェニルアミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン、３−アミノ−４−（３−ヒドロキシフェニルアミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン、Ｎ４−（ｍ−トリル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン−３，４−ジアミン、Ｎ４−（３−クロロフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン−３，４−ジアミン、３−アミノ−４−（３−メトキシフェニルアミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン、３−アミノ−４−（３−アセチルフェニルアミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン、３−アミノ−４−（２−ヒドロキシフェニルアミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン、Ｎ４−（ｏ−トリル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン−３，４−ジアミン、Ｎ４−（２−クロロフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン−３，４−ジアミン、３−アミノ−４−（２−メトキシフェニルアミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン、１−｛４−［（４−クロロフェニル）アミノ］−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン−３−イル｝−３−フェニル尿素、１−フェニル−３−［４−（４−トリルアミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン−３−イル］尿素、１−｛４−［（４−クロロフェニル）アミノ］−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン−３−イル｝−３−（４−メトキシフェニル）尿素及び１−（４−メトキシフェニル）−３−［４−（４−トリルアミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］−キノリン−３−イル］尿素からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩若しくは溶媒和物。
【請求項１１】
以下からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
0006607962.tif 000014
TCH-3510           TCH-3511 
0006607962.tif 000015
TCH-3561          TCH-3508
【請求項１２】
以下の式Iを有する化合物の調製方法であって、
0006607962.tif 000016
式I
ｎは、０又は１を表し、
各Ｒ１は、ハロゲン、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、又はハロアルキルであり、
Ｒ２が、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、ＯＲ４、ＳＲ４、ＣＯＲ５、ＣＯＯＲ６、アルケニル、アルキニル、又はハロアルキルであり、
Ｒ４が、ハロゲン、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、又はハロアルキルであり、
Ｒ５とＲ６がそれぞれ独立し、Ｈ、ハロゲン、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、又はハロアルキルであり、
（Ｒ１）ｎにおけるｎが０、Ｒ２が３’−Ｆ、４’−ＣＨ３、又は４’−ＯＣＨ３、及びＲ３がＮＨ２である化合物、並びに（Ｒ１）ｎにおけるｎが０、（Ｒ２）ｎにおけるｎが０、及びＲ３がＮＨ２である化合物を除き、
４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボニトリルをＰＯＣｌ３と反応させて、２，４−ジクロロキノリン−３−カルボニトリルを生成する工程と、
２，４−ジクロロキノリン−３−カルボニトリルをヒドラジンと反応させて、４−クロロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン−３−アミンを得る工程と、
４−クロロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリン−３−アミンを置換アニリンと反応させて、３−アミノ−４−置換アニリノ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］キノリンを生成する工程と、を含むことを特徴とする、前記調製方法。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれかに記載の化合物及び薬学的に許容される担体を含む組成物。
【請求項１４】
薬品又は栄養補助食品であることを特徴とする、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
追加の治療剤を更に含み、
前記追加の治療剤が、グルクロン酸化によって代謝される薬剤であり、前記追加の治療剤が、抗癌剤、免疫賦活剤又は免疫調節剤であることを特徴とする、請求項１３又は１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記抗癌剤が、タモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、ヨードキシフェン、酢酸メゲストロール、アナストロゾール、レトラゾール、ボラゾール、エキセメスタン、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、酢酸シプロテロン、ゴセレリンアセテート、ロイプロリド、フィナステリド、ハーセプチン、メトトレキセート、5-フルオロウラシル、シトシンアラビノシド、ドキソルビシン、ダウノマイシン、エピルビシン、イダルビシン、マイトマイシン-C、ダクチノマイシン、ミトラマイシン、シスプラチン、カルボプラチン、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、シクロホスファミド、イホスファミド、ニトロソ尿素、チオテファン、ビンクリスチン、タキソール、タキソテール、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、イリノテカン、トポテカン、又はエポチロンであることを特徴とする、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
対象において、ヒトβ-グルクロニダーゼではなく、微生物β-グルクロニダーゼを選択的に阻害することを特徴とする請求項１３〜１６のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
前記対象が、癌に罹患していることを特徴とする、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
対象におけるグルクロン酸化により代謝された治療剤の再活性化を低減/阻害すること
を特徴とする請求項１３〜１６のいずれかに記載の組成物。
【請求項２０】
対象における化学療法によって誘発された下痢又は発癌物質によって誘発された大腸癌を治療及び/又は予防することを特徴とする請求項１３〜１６のいずれかに記載の組成物。
【請求項２１】
対象における癌の化学療法の効率を高めることを特徴とする請求項１３〜１６のいずれかに記載の組成物。
【請求項２２】
前記対象が、血管新生阻害剤、化学療法、放射線及び/又は外科手術による治療を含む１つ以上の治療法を受けていることを特徴とする請求項１７〜２１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２３】
グルクロン酸化によって代謝される抗癌剤、免疫賦活剤又は免疫調節剤を含む追加の治療剤と組み合わせて投与することを特徴とする、請求項１７〜２２のいずれかに記載の組成物。
【請求項２４】
前記追加の治療剤が、同時に又は別々に投与されることを特徴とする、請求項２３に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、β-グルクロニダーゼの阻害のための新規な化合物に関する。特に、本発明は、微生物（microbiota）β-グルクロニダーゼを特異的に阻害するピラゾロ[4,3-c]キノリン誘導体を提供する。
【背景技術】
【０００２】
喜樹（Camptotheca acuminata）から単離されたアルカロイドであるカンプトテシン（Camptothecin）[Wall,M.E.；Wani,M.C.；Cook,C.E.；Palmer,K.H.；McPhail,A.T.；Sim,G.A.J.Am.Chem.Soc.1966,88,3888-3890；Werbovetz,K.A.；Bhattacharjee,A.K.；Brendle,J.J.；Scovill,J.P.Bioorg.Med.Chem.2000,8,1741-1747]は、有意な抗癌活性を有することが見出されている[Wall,M.E.Camptothecin and taxol：discovery to clinic.Med.Res.Rev.18,299-314(1998)]。しかしながら、カンプトテシンは、顕著な毒性及び低いバイオアベイラビリティを示し（J. F. Pizzolato、L.B. Saltz、Lancet 361、2235（2003）]、その臨床的使用を制限している。トポテカン及びイリノテカン（CPT-11）は、カンプトテシンに由来する半合成産物であり、卵巣癌及び非小細胞肺癌（トポテカン）および結腸癌（CPT-11）の治療に現在臨床的に使用されている[Mathijssen, R.H., Loos, W.J., Verweij, J. & Sparreboom, A. Pharmacology of topoisomerase I inhibitors irinotecan (CPT-11) and topotecan. Curr. Cancer Drug Targets 2, 103-123 (2002)]。 CPT-11は、生体内においてインビボで除去されて活性代謝物SN-38を生成するカルバメート結合ジピペリジノ基を有するプロドラッグである。次に、ウリジン二リン酸（UDP）-グルクロン酸転移酵素によって肝臓でグルクロン酸化され、不活性SN38-グルクロニド（SN-38G）が形成され、胆管を介して消化管（GI）に排出される。ひとたび腸内に入ると、SN-38Gは微生物β-グルクロニダーゼ（eβG）の基質として働き、下痢において本質的な役割を果たす生物活性SN-38に加水分解される[Takasuna, K. et al. Optimal antidiarrhea treatment for antitumor agent irinotecan (CPT-1 l)-induced delayed diarrhea. Cancer Chemother. Pharmacol. 58,~i~ 494-503 (2006); Yong, W.P., et al. Effects of ketoconazole on glucuronidation by UDP- glucuronosyltransferase enzymes. Clin. Cancer Res. 11, 6699-6704 (2005)]。
【０００３】
SN-38Gの生物活性を低下させ、CPT-11誘発下痢を緩和するために、特定のeβG阻害剤が発見されている [Benson, A.B., 3rd et al. Recommended guidelines for the treatment of cancer treatment-induced diarrhea. J. Clin. Oncol. 22, 2918-2926 (2004)]。Takasuna, K.らの研究（Optimal antidiarrhea treatment for antitumor agent irinotecan hydrochloride (CPT-11)-induced delayed diarrhea. Cancer Chemother. Pharmacol. 58, 494- 503 (2006)）には、CPT-11は、肝臓でSN-38Gに代謝され、次に消化管（GI）に排出され、eβGによって生理活性SN-38に加水分解され、腸の損傷及び下痢を引き起こし、CPT-11、SN-38及びSN-38Gの構造が開示されている。
0006607962.tif 000002
【０００４】
グルクロニド化は、ヒトの薬物解毒の主要な経路である。しかし、腸内細菌叢におけるβ-グルクロニダーゼ（βG）によるグルクロニドの脱共役は、癌化学療法中に重度の毒性を誘発し、結腸直腸癌の発症のために発癌を促進する可能性がある。現在使用されているイリノテカン（CPT-11）[Kobayashi, K. Chemotherapy-induced diarrhea. Cancer & chemotherapy 30, 765-771 (2003)]、5-FU[Cascinu, S. et al. High-dose loperamide in the treatment of 5- fluorouracil-induced diarrhea in colorectal cancer patients. Supportive care in cancer, 8, 65- 67 (2000)]、オキサリプラチン[Dranitsaris, G., et al. Severe chemotherapy-induced diarrhea in patients with colorectal cancer: a cost of illness analysis. Supportive care in cancer, 13, 318- 324 (2005)]などの抗癌剤は、化学療法誘発下痢（CID）の重篤な副作用を誘発し、投与量の減少や中断の原因となることが判明している[Viele, C.S. Overview of chemotherapy-induced diarrhea. Semin. Oncol. Nurs. 19, 2-5 (2003)]。CIDは、特に進行癌の患者に共通の問題である。したがって、腸内の特異的βG阻害剤の発見、すなわち細菌βG（E.coli βG；eβG）のみを阻害するが、ヒトβG(hβG)を阻害しない化合物の発見は急務である。
【０００５】
多くのβG阻害剤が、SN-38Gの生物活性を低下させ、CPT-11誘発下痢を緩和することが発見されている[Benson, A.B., 3rd et al. Recommended guidelines for the treatment of cancer treatment-induced diarrhea. J. Clin. Oncol. 22, 2918-2926 (2004)]。例えば、グルカロ-1,4-ラクトンは、CPT-11の投与によって引き起こされるCID症状を改善することが見出された[Takasuna, K. et al. Optimal antidiarrhea treatment for antitumor agent irinotecan hydrochloride (CPT-11)-induced delayed diarrhea. Cancer Chemother. Pharmacol. 58, 494-503 (2006]。しかしながら、非選択的βG阻害剤であるグルカロ-1,4-ラクトンの投与は、その強い阻害作用のためにムコ多糖症症状の副作用を引き起こす可能性がある[Fittkau, M., et al. Saccharic acid 1,4-lactone protects against CPT-11-induced mucosa damage in rats. J. Cancer Res. Clin. 130, 388-394 (2004); Constantopoulos, G., et al. Experimental animal model for mucopolysaccharidosis: suramin-induced glycosaminoglycan and sphingolipid accumulation in the rat. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 77, 3700-3704 (1980)]。加えて、文献によると、腸溶性eβGがグルクロン酸コンジュゲート発癌剤の代謝活性化において重要な役割を果たし、大腸癌の形成をもたらすことも明らかにしている[Kaderlik, K.R. et al. Metabolic activation pathway for the formation of DNA adducts of the carcinogen 2-amino-1-methyl-6-phenylimidazo[4,5-b]pyridine (PhIP) in rat extrahepatic tissues. Carcinogenesis 15, 1703-1709 (1994); Nalini, N., et al. Effect of coconut cake on the bacterial enzyme activity in 1,2-dimethyl hydrazine induced colon cancer. Clin. Chim. Acta. 342, 203-210 (2004); Nalini, N., et al. Influence of spices on the bacterial (enzyme) activity in experimental colon cancer. J. Ethnopharmacol. 62, 15-24 (1998)]。Kimらは、腸内のeβG活性の阻害が結腸癌の事象を減少させ、結腸癌患者におけるeβGの活性が正常対照の12.1倍であることを発見した[Kim, D.H. & Jin, Y.H. Intestinal bacterial beta-glucuronidase activity of patients with colon cancer. Arch. Pharm. Res. 24, 564-567 (2001)]。Humblot, C.らは、腸内のeβG活性と結腸遺伝毒性との間に正の相関があることを証明した[Humblot, C. et al. Beta-glucuronidase in human intestinal microbiota is necessary for the colonic genotoxicity of the food-borne carcinogen 2-amino-3-methylimidazo[4,5-f]quinoline in rats. Carcinogenesis 28, 2419-2425 (2007)]。最近、1-（（6,8-ジメチル-2-オキソ-1,2-ジヒドロキノリン-3-イル）メチル）-3-（4-エトキシフェニル）-1-（2-ヒドロキシエチル）チオ尿素（βG-Inh 、唯一の公開されたeβGの特異的阻害剤）が最も強力で特異的なeβG阻害剤として発見された[Wallace, B.D. et al. Alleviating cancer drug toxicity by inhibiting a bacterial enzyme. Science 330, 831-835 (2010)]。以下の式は、グルカロ-1,4-ラクトン及びβG-Inhの構造を示す。
0006607962.tif 000003
【０００６】
さらに、米国特許US5447719は、β-グルクロニダーゼ阻害剤を提供し、β-グルクロニダーゼ阻害剤は、バイカリン、オロキシリンA-7-O-グルクロニド及びルテオリン-3'-グルクロニドからなる群から選択される少なくとも1つの化合物、黄岑及び/又は荊芥穂の抽出物、又は原薬として黄岑及び/又は荊芥穂からなる中国又は日本の伝統的処方である。米国公開公報US20130345235は、細菌性グルクロニダーゼを阻害するフェノキシチオフェンスルホンアミド、そのような化合物の1つ以上を含む組成物、及びそのような化合物の1つ以上を、カンプトテシン由来抗癌剤と組み合わせて共薬剤として使用する方法に関する。
【発明の開示】
【０００７】
しかしながら、βG-Inhの有効性及び特異性は、理想とはかけ離れており、より強力で選択的なeβG阻害剤の鑑定が我々の注目を集めた。
【０００８】
本発明は、以下の式Iを有する化合物を提供する。
0006607962.tif 000004
【０００９】
本発明の化合物は、（1）化学療法誘発下痢（CID）を予防し、癌の化学療法の効率を高めるための化学療法アジュバント、及び（2）発癌物質が結腸癌を引き起こすことを防ぐための健康食品補給剤としている。従って、本発明の化合物及び組成物は、対象において化学療法誘発下痢及び発癌物質が誘導する結腸癌を治療及び/又は予防するための治療剤としての用途が見出される。さらなる実施形態において、本発明は、対象におけるグルクロン化によって代謝された治療剤の再活性化の低減/阻害方法を提供し、有効量の本明細書に記載の化合物または組成物を対象に投与することを含む。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ピラゾロ[4,3-c]キノリン誘導体の選択的阻害を示す。（Ａ）eβGに対する阻害、（Ｂ）hβGに対する阻害。
【図２】低濃度（10μM）又は高濃度（50μM）の両方でのピラゾロ[4,3-c]キノリン誘導体による内因性eβG活性の阻害効力を示す。
【図３】HEK293（図３（Ａ））とCNL（図３（Ｂ））に対するピラゾロ[4,3-c]キノリン誘導体の細胞生存率アッセイを示す。
【図４】大腸菌の増殖に対するピラゾロ[4,3-c]キノリン誘導体の効果を示す。
【図５】生体内において、光学イメージングシステムにより化合物17（TCH-3511）と化合物32（THC-3510）が腸のβG活性（図５（Ａ））を有意に阻害し得ることを明らかにすることを示す。化合物17（TCH-3511）の阻害は、化合物32（THC-3510）より良好である（図４（Ｂ））。
【図６】CPT-11の下痢及び抗腫瘍活性に対する化合物17（TCH-3511）の効果を示す。マウスには、7日目にCT26細胞を接種する。実験期間中（0日目以降）、水または化合物17（TCH-3511）を3mg/kg/日で1日1回経口投与する。マウスには、2日目にCPT-11処置（50mg/kg/日）又は生理食塩水を毎日腹腔内投与する。下痢レベルと腫瘍サイズを1日おきに記録する。（Ａ）化合物17（TCH-3511）は、CPT-11誘発下痢を軽減することができる。（Ｂ）化合物17（TCH-3511）は、CPT-11処置の抗腫瘍効果に影響を及ぼさない。
【図７】腸内のDMH誘導腫瘍形成に対する化合物17（TCH-3511）の効果を示す。実験期間中（約8週間）、週に三回、水又は化合物17（TCH-3511）を3mg/kg/日で経口投与する。マウスには、腹腔内DMH（30mg/kg/週）を与える。化合物17（TCH-3511）の経口投与は、DMH誘発腫瘍形成を減少させることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明は、微生物のβ-グルクロニダーゼに対して特異的な阻害活性を示す新規なピラゾロ[4,3-c]キノリン誘導体を提供し、癌の化学療法誘発下痢（CID）を予防する強力な活性を提供する。従って、本発明の化合物は、（1）化学療法誘発下痢（CID）を予防し、癌の化学療法の効率を高めるための化学療法アジュバント、及び（2）発癌物質が結腸癌を引き起こすことを防ぐための健康食品補給剤としている。
【００１２】
定義
冠詞「一つ」は、本明細書では、1つ又は複数の（すなわち、少なくとも1つの）物品の文法的なオブジェクトを指すために使用されてもよい。 一例として、「アナログ」は、1つのアナログ又は複数のアナログを意味する。
【００１３】
本明細書中で使用される「含む」という用語は、本発明の医薬組成物において一緒に使用され得る様々な成分を意味する。従って、「〜から本質的になる」及び「からなる」という用語は、〜を含むという用語において具体化される。
【００１４】
本明細書で使用される「置換」という用語は、1つ以上の水素原子がそれぞれ独立して同一又は異なる置換基で置換されている基を意味する。
【００１５】
本明細書で使用される「アルキル」という用語は、1〜20個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖の脂肪族炭化水素を意味する。特定のアルキルは、1〜8個の炭素原子を有する。より特定的には、1〜6個の炭素原子を有する低級アルキルである。さらなる特定の基は、1〜4個の炭素原子を有する。例示的な直鎖状の基としては、メチル、エチル、n-プロピル、及びn-ブチルが挙げられる。分枝鎖は、メチル、エチル、プロピル又はブチルのような1つ又は複数の低級アルキル基が直鎖アルキル鎖に結合していることを意味し、例示的な分枝鎖基には、イソプロピル、イソブチル、t-ブチル及びイソアミルが含まれる。
【００１６】
本明細書で使用される「アルケニルラジカル」という用語は、2〜10個の炭素原子を含み、1つ以上の二重結合を含む直鎖又は分枝鎖の不飽和炭化水素ベースの鎖を意味する。
【００１７】
本明細書で使用される「アルキニル基」という用語は、2〜10個の炭素原子を含み、1つ以上の三重結合を含む直鎖又は分枝鎖の不飽和炭化水素系鎖を意味する。
【００１８】
本明細書で使用される「シクロアルキル」という用語は、3〜約10個の炭素原子を有し、単一の環式環又は融合と架橋環系を含む複数の縮合環を有する環式ヒドロカルビル基を意味し、1〜3個のアルキル基で任意に置換されていてもよい。そのようなシクロアルキル基には、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチル、1-メチルシクロプロピル、2-メチルシクロペンチル、2-メチルシクロオクチルなどの単環構造、及びアダマンタニルなどの複数の環構造などが含まれる 。  
【００１９】
本明細書で使用される「アリール」という用語は、芳香族炭化水素ベースの環又は2つの縮合芳香族炭化水素ベースの環を意味する。好ましくは、アリールは、ナフチルのフェニルである。
【００２０】
本明細書で使用される「アルコキシ」という用語は、指定された炭素原子数（例えば、C1-10アルコキシ）の直鎖又は分枝鎖のアルコキシド、又はこの範囲内の任意の数（すなわち、メトキシ（MeO-）、エトキシ、イソプロポキシなど）を意味する。
【００２１】
本明細書で使用される「アルキルチオ」という用語は、指定された炭素原子数の直鎖又は分枝鎖のアルキルスルフィド（例えば、C1-10アルキルチオ）、又はこの範囲内の任意の数（すなわち、メチルチオ（MeS-）、エチルチオ、イソプロピルチオなど）を意味する。
【００２２】
本明細書で使用される「アルキルアミノ」という用語は、指定された炭素原子数の直鎖又は分岐アルキルアミン（例えば、C1-10アルキルアミノ）、またはこの範囲内の任意の数（すなわち、メチルアミノ、エチルアミノ、イソプロピルアミノ、t-ブチルアミノなど）を意味する。
【００２３】
本明細書で使用される「ヘテロアリール」という用語は、5〜14個の環原子を有する基を指し、環状配列中で共有される6個、10個または14個のπ電子を指し、炭素原子及び1、2又は3個の酸素、窒素及び/又は硫黄ヘテロ原子を含有することを意味する。ヘテロアリール基の例としては、インダゾリル、フリル、チエニル、ピロリル、イミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、テトラゾリル、トリアジニル、アゼピニル、オキサゼピニル、モルホリニル、チアゼピニル、ジアゼピニル、チアゾリニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、イミダゾピリジニル、ベンゾオキサジニル、ベンゾチアジニル、ベンゾチオフェニルオキサゾロピリジニル、ベンゾフラニル、キノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、ベンゾチアゾリル、フタルイミド、ベンゾフラニル、インドリル、インダニル、アザインダゾリル、デアザプリニル及びイソインドリルが挙げられる。
【００２４】
本明細書で使用される「薬学的に許容される塩」という用語は、その生物学的特性を保持し、無毒又は薬学的使用のために望ましくない本発明の化合物の塩を意味する。そのような塩は、当該技術分野において周知の様々な有機と無機対イオンから誘導され得り、そして含まれ得る。
【００２５】
本明細書で使用される「溶媒和物」という用語は、非共有結合分子間力によって結合された化学量論的又は非化学量論的量の溶媒をさらに含む、本発明の化合物またはその塩を意味する。溶媒が水である場合、溶媒和物は水和物である。
【００２６】
本明細書で使用される「プロドラッグ」という用語は、本発明の化合物の誘導体を含む化合物を意味し、この化合物は、開裂可能な基を有し、加溶媒分解又は生理学的条件下で生体内の薬学的に活性な本発明の化合物になる。そのような例としては、コリンエステル誘導体など、N-アルキルモルホリンエステルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２７】
本明細書中で使用される「障害」、「状態」及び「疾患」という用語は、対象における状態を指すために交換可能に使用される。特定の状態は、複数の障害として特徴付けることができる。
【００２８】
本明細書中で使用される「有効量」という用語は、疾患又は状態を緩和するための化合物の量を意味する。「治療上有効な量」という用語は、疾患を治療するために対象に投与するときに、その疾患についてそのような治療を行うのに十分な化合物の量を意味する。「治療有効量」は、化合物、疾患及びその重症度、並びに治療される対象の年齢、体重などに応じて変化し得る。
【００２９】
本明細書で使用される「予防」という用語は、1つの療法又は複数の療法の組み合わせの投与に起因する対象の障害の1つ又は複数の症状の再発、発症又は発展の予防を意味する。
【００３０】
本明細書で使用される「治療」、「処置」及び「処理」という用語は、1つ以上の療法で、障害の進行、重症度及び/又は持続時間、或いは障害の1以上の症状を軽減又は改善することを意味する。
【００３１】
本明細書中で使用される「対象」及び「患者」という用語は、本明細書において互換的に使用される。特定の実施形態では、非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット及びマウス）並びに霊長類（例えば、カニクイザル、チンパンジー及びヒトなどの霊長類）を含む哺乳動物を意味し、より具体的にはヒトを含む。特定の実施形態では、対象はヒトである。
【００３２】
本発明の化合物
一つの態様において、本発明は、以下の式Iを有する化合物を提供することを目的とする。
0006607962.tif 000005
nが0〜4個の置換基を表し、
R1が1〜4個の置換基を表し、各R1は独立して、H、ハロゲン、OH、NH2、NO2、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、ハロアルキル、非置換若しくは置換シクロアルキル、非置換若しくは置換アリール、又は非置換若しくは置換ヘテロアリールであり、
R2が、H、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、OH、NH2、NO2、OR4、SR4、COR5、COOR6、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、非置換若しくは置換シクロアルキル、非置換若しくは置換アリール、又は非置換若しくは置換ヘテロアリールであり、
R3が、ハロゲン、CN、OH、NO2、NRaRb、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、ハロアルキル、シクロアルキル、非置換若しくは置換アリール、又は非置換若しくは置換ヘテロアリールであり、
R4が、ハロゲン、OH、NH2、NO2、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、ハロアルキル、非置換若しくは置換シクロアルキル、非置換若しくは置換アリール、又は非置換若しくは置換ヘテロアリールであり、
R5とR6がそれぞれ独立し、H、ハロゲン、OH、NH2、NO2、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、ハロアルキル、非置換若しくは置換シクロアルキル、非置換若しくは置換アリール、又は非置換若しくは置換ヘテロアリールであり、
RaとRbがそれぞれ独立し、C（O）NRcRd、H、ハロゲン、OH、CN、NH2、NO2、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、ハロアルキル、非置換若しくは置換シクロアルキル、非置換若しくは置換アリール、又は非置換若しくは置換ヘテロアリールであり、
RcとRdがそれぞれ独立し、H、ハロゲン、CN、OH、NH2、NO2、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、ハロアルキル、非置換若しくは置換シクロアルキル、非置換若しくは置換アリール、又は非置換若しくは置換ヘテロアリールである。
【００３３】
いくつかの実施形態において、シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールのそれぞれは、非置換であるか、又はハロゲン、CN、OH、NH2、NO2、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、ハロアルキル、非置換または置換シクロアルキル、非置換または置換アリールまたは非置換または置換ヘテロアリールである。
【００３４】
いくつかの実施形態において、ヘテロアリールは、C6-10員環であり、N、O及びSから選択される1〜3個のヘテロ原子を有する。
【００３５】
いくつかの実施形態において、R1は、H、ハロゲン又はC-5、C-6、C-7若しくはC-8位で置換されたC1-10アルキルである。さらなる実施形態において、R1は、H、ハロゲン又はC1-4アルキルである。さらなる実施形態において、R1は、H、Cl、F、Br又はメチルである。さらなる実施形態において、R1はHである。
【００３６】
いくつかの実施形態において、R2は、H、ハロゲン、C1-10アルキル、C1-10アルコキシ、C1-10アルキルチオ、NH2、NO2、C-2'、C-3'若しくはC-4'位で置換されたハロアルキル、COR5又はCOOR5である。さらなる実施形態において、R2は、H、ハロゲン、C1-4アルキル、C1-4アルコキシ、C1-4アルキルチオ、NH2、NO2、ハロC1-4アルキル、C（O）C1-4アルキル又はCOOHである。さらなる実施形態において、R2は、H、メチル、OH、NH2、メトキシ、メチルチオ、CF3、Cl、F、NO2、COOH、C（O）CH3である。
【００３７】
いくつかの実施形態において、R3は、NRaRb、OH又はNO2であり、RaとRbはそれぞれ独立して、H又はC（O）NRcRdであり、RcとRdは、それぞれ独立して、H又は非置換若しくは置換アリールである。いくつかの実施形態において、アリールは、非置換であるか、又はC1-6アルコキシで置換されている。 好ましくは、-OCH3である。好ましくは、R3は、NH2、OH、NO2、フェニル、-OCH3で置換されたフェニルである。
【００３８】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、以下の式の1つを有する。
0006607962.tif 000006
R1とR2は、上記定義のとおりであり、Rは、H又は1〜4個のハロゲン、CN、OH、NH2、NO2、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、ハロアルキル、非置換若しくは置換シクロアルキル、非置換若しくは置換アリール、又は非置換若しくは置換ヘテロアリールである。
【００３９】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、4-ヒドロキシ-8-メチル-2-オキソ-1,2-ジヒドロキノリン-3-カルボニトリル、2,6-ブロモ-4-ヒドロキシ-2-オキソ-1,2-ジヒドロキノリン-3-カルボニトリル、2,4-ジクロロ-8-メチルキノリン-3-カルボニトリル、4,6-ブロモ-2,4-ジクロロキノリン-3-カルボニトリル、4-クロロ-6-メチル-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-アミン、4-クロロ-7-フルオロ-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-アミン、4,8-ジクロロ-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-アミン、8-ブロモ-4-クロロ-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-アミン、3-アミノ-4-（4-クロロフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン、3-アミノ-4-（4-メチルフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン、N4-（4-クロロフェニル）-6-メチル-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3,4-ジアミン、6-メチル-N4-（p-トリル）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3,4-ジアミン、N4-（4-クロロフェニル）-7-フルオロ-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3,4-ジアミン、7-フルオロ-N4 -（p-トリル）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3,4-ジアミン、8-クロロ-N4-（4-クロロフェニル）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3,4-ジアミン、8-クロロ-N4-（p-トリル）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3,4-ジアミン、8-ブロモ-N4-（4-クロロフェニル）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3,4-ジアミン、8-ブロモ-N4-（p-トリル）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3,4-ジアミン、3-アミノ-4-アニリノ-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン、3-アミノ-4-（4-ヒドロキシフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン、3-アミノ-4-（4-アミノフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン、3-アミノ-4-（4-フルオロフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン、3-アミノ-4-（4-トリフルオロメチルフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン、3-アミノ-4-（4-メトキシフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン、3-アミノ-4-（4-メチルチオフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン、3-アミノ-4-（4-ニトロフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン、4-（3-アミノ-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-4-イルアミノ）安息香酸、3-アミノ-4-（4-アセチルフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン、3-アミノ-4-（3-ヒドロキシフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン、N4-（m-トリル）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3,4-ジアミン、N4-（3-クロロフェニル）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3,4-ジアミン、3-アミノ-4-（3-メトキシフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン、3-アミノ-4-（3-アセチルフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン、3-アミノ-4-（2-ヒドロキシフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン、N4-（o-トリル）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3,4-ジアミン、N4-（2-クロロフェニル）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3,4-ジアミン、3-アミノ-4-（2-メトキシフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン、3-アミノ-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-4（5H）-オン、1-（4-オキソ-4,5-ジヒドロ-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-イル）-3-フェニル尿素、1-（4-メトキシフェニル）-3-（4-オキソ-4,5-ジヒドロ-1H-ピラゾロ[4,3-c] - キノリン-3-イル）尿素、1- {4 - [（4-クロロフェニル）アミノ] -1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-イル} -3-フェニル尿素、1-フェニル-3- [4-（4-トリルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-イル]尿素、1- {4 - [（4-クロロフェニル）アミノ] -1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-イル} -3-（4-メトキシフェニル）尿素及び1-（4-メトキシフェニル）-3- [4-（4-トリルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c] - キノリン-3-イル]尿素からなる群から選択されるもの、又はその異性体、医薬的に許容される塩、プロドラッグ若しくは溶媒和物。
【００４０】
他の実施形態において、本発明の化合物は、以下からなる群から選択される。
0006607962.tif 000007
【００４１】
同じ分子式を有するが、それらの原子の結合の性質若しくは順序、又は空間における原子の配置が異なる化合物を「異性体」と称することは理解されるべきである。空間におけるそれらの原子の配置が異なる異性体は、「立体異性体」と呼ばれる。互いに鏡像ではない立体異性体は「ジアステレオマー」と呼ばれ、互いに重ね合わせることができない鏡像である立体異性体は「鏡像異性体」と呼ばれる。化合物が不斉中心を有する場合、例えば４つの異なる基に結合される場合、一対のエナンチオマーを有してもよい。エナンチオマーは、その不斉中心の絶対配置によって特徴付けることができ、Cahn and Prelog(Mata and Lobo, 1993, Tetrahedron: Asymmetry 4:657-668)の規則に従って（R）又は（S）と命名されるか、または分子が偏光された光の面を回転させ、右旋性または左旋性（すなわち、それぞれ（+）-又は（-）-異性体）と指定される。キラル化合物は、個々のエナンチオマーとして、又はその混合物として存在することができる。等量のエナンチオマーを含む混合物は、「ラセミ混合物」と呼ばれる。
【００４２】
一つの実施形態において、本明細書に記載の化合物の薬学的塩は、以下に含んでいるが、限定されるものではない。（1）有機酸または無機酸と形成される酸付加塩であり、有機酸または無機酸が、塩酸、臭化水素酸、硝酸、リン酸、スルファミン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンチルプロピオン酸、グリコール酸、グルタル酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、ソルビン酸、アスコルビン酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、3-（4-ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、ピクリン酸、桂皮酸、マンデル酸、フタル酸、ラウリン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、1,2-エタン-ジスルホン酸、2-ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、4-クロロベンゼンスルホン酸、2-ナフタレンスルホン酸、4-トルエンスルホン酸、樟脳、樟脳スルホン酸、4-メチルビシクロ[2.2.2]オクト-2-エン-1-カルボン酸、グルコヘプトン酸、3-フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、tert-ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、安息香酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、シクロヘキシルスルファミン酸、キナ酸、ムコン酸などの酸、又は（2）酸性プロトンが親化合物中に存在する時に形成された塩が、以下の（a）または（b）であり、（a）が、金属イオンによって置換され、金属イオンが例えばアルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、アルミニウムイオン、アルカリ金属又はアルカリ土類金属の水酸化物であり、例えばナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム、リチウム、亜鉛、水酸化バリウム、アンモニアなどが挙げられ、（b）が、有機塩基と配位し、有機塩基が脂肪族、脂環式、又は芳香族有機アミンであり、例えばアンモニア、メチルアミン、ジエチルアミン、ピコリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、エチレンジアミン、リジン、アルギニン、オルニチン、コリン、N、N'-ジベンジルエチレン - ジアミン、クロロプロカイン、ジエタノールアミン、プロカイン、N-ベンジルフェネチルアミン、N-メチルグルカミンピペラジン、トリス（ヒドロキシメチル）-アミノメタン、水酸化テトラメチルアンモニウム等が挙げられる。前記塩は、単なる一例として、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、テトラアルキルアンモニウム等を含み、化合物が塩基性官能基を含む場合、塩酸塩、臭化水素酸塩、酒石酸塩、メシル酸塩、ベシル酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩などの非毒性の有機酸又は無機酸の塩が挙げられる。「生理学的に許容されるカチオン」という用語は、酸性官能基の非毒性の生理学的に許容されるカチオン性対イオンを意味する。そのようなカチオンは、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム及びテトラアルキルアンモニウムカチオンなどによって例示される。
【００４３】
本発明の化合物の調製
これらのピラゾロ[4,3-c]キノリン誘導体は、以下の反応スキーム（スキーム1）の手順に従って調製することができる。4-ヒドロキシ-2-オキソ-1,2-ジヒドロキノリン-3-カルボニトリル（1）をPOC13と反応させると、2,4-ジクロロキノリン-3-カルボニトリル（2）が得られ、これをヒドラジンと反応させて、4-クロロ-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-アミン（3）。化合物３と置換アニリンとの反応は、3-アミノ-4-置換アニリノ-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン（4-32）を生成する。
0006607962.tif 000008
0006607962.tif 000009
【００４４】
本発明の化合物を含む組成物
医薬品または栄養補助食品（food supplement）として使用する場合、本発明の化合物は、一般的に、医薬組成物又は食品組成物の形態で投与される。このような組成物は、医薬品又は食品分野において周知の方法で調製することができ、少なくとも1つの活性化合物を含む。通常、本発明の化合物は、薬学的有効量の有効量で投与される。実際に投与される化合物の量は、一般的に、処置すべき状態、選択される投与経路、投与される実際の化合物、年齢、体重及び個々の患者の応答、患者の症状の重篤度等を含む関連する状況に照らして医師によって決定される。
【００４５】
本発明の医薬組成物又は食品組成物は、経口、直腸、皮下、関節内、静脈内及び筋肉内を含む様々な経路によって投与することができる。本発明の化合物は、好ましくは、意図される送達経路に応じて、経皮投与のための注射用若しくは経口用の組成物、膏薬、ローション、又はパッチとして製剤化される。
【００４６】
経口投与のために、本教示の化合物は、賦形剤と混合し、摂取可能な錠剤、バッカル錠剤、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウエハーなどの形態で使用することができる。経口投与のための組成物は、バルク液体溶液若しくは懸濁液、又はバルク粉末の形態を取ることができる。しかしながら、より一般的には、組成物は、正確な投与を容易にするための単位剤形で提供される。「単位剤形」という用語は、適切な賦形剤、ビヒクル又は担体と共に、所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性物質を含有し、ヒト対象及び他の哺乳動物のための単位用量として適切な物理的に別個の単位を指す。典型的な単位投薬形態は、予め充填され、測定された液体組成物のアンプル若しくはシリンジ、又は固体組成物の丸剤、錠剤、カプセル剤などを含む。そのような組成物において、本発明の化合物は、通常、少量成分（例えば1〜6mg/kg/日）であり、残りは種々のビヒクル又は担体及び所望の投与形態を形成することに役立つ加工助剤である。
【００４７】
経口投与に適した液体形態は、緩衝剤、懸濁剤と分配剤、着色剤及び香味剤などを有する適切な水性又は非水性ビヒクルを含み得る。固体形態は、例えば、以下の成分のいずれか、又は類似の性質の化合物を含み得い、結合剤（例えば、微結晶性セルロース、トラガカントガム若しくはゼラチン）、賦形剤（例えば、デンプン若しくは乳糖）、崩壊剤（例えばアルギン酸、プリモゲル若しくはコーンスターチ）、潤滑剤（例えばステアリン酸マグネシウム）、流動促進剤（例えばコロイド状二酸化ケイ素）、甘味剤（例えばスクロース若しくはサッカリン）、香味剤（例えばペパーミント、メチルサリチレート、若しくはオレンジフレーバー）を含む。
【００４８】
注射用組成物は、通常、注射可能な滅菌生理食塩水、リン酸緩衝化生理食塩水又は当該分野で公知の他の注射用担体に基づく。
【００４９】
直腸投与のために、本明細書に記載の化合物は、ココアバターのような従来の坐剤基剤を含有する坐剤の形態で製剤化することができる。
【００５０】
本発明の組成物は、追加の治療薬を含むことができる。一つの実施形態において、治療剤は、グルクロニド化によって代謝される任意の薬剤であり得る。いくつかの実施形態において、治療剤は、抗癌剤、免疫不全治療剤又は免疫調節剤である。例えば、抗癌剤は、タモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、ヨードキシフェン、酢酸メゲストロール、アナストロゾール、レトラゾール、ボラゾール、エキセメスタン、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、酢酸シプロテロン、酢酸ゴセレリン、 ウルソマイシン、ミトマイシン、ミトラマイシン、シスプラチン、カルボプラチン、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、シクロホスファミド、イフォスファミド、ニトロソウレア、チオテファン、ビンクリスチン、タキソール、 タキソテール、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、イリノテカン、トポテカン、エポチロンなどが挙げられる。
【００５１】
本発明の化合物/組成物の投与
本発明の化合物は、（1）化学療法誘発下痢（CID）を予防し、癌の化学療法の効率を高めるための化学療法アジュバント、及び（2）発癌物質が結腸癌を引き起こすことを防ぐための健康食品補給剤としている。
【００５２】
従って、本発明の化合物と組成物は、化学療法誘発下痢及び発癌物質が対象において誘発する大腸癌を治療又は予防するための治療剤として使用することができる。
【００５３】
一つの態様において、本発明の化合物又はその化合物を含む組成物を提供し、医薬として使用する。
【００５４】
一つの実施形態において、本発明は、微生物βGを阻害するが、ヒトβG(hβG)を阻害しない方法を提供し、有効量の本発明の化合物を対象に投与することを含む。
【００５５】
一つの実施形態において、本発明は、対象におけるグルクロン酸化によって代謝された治療剤の再活性化を低減/阻害する方法を提供し、有効量の本発明の化合物又は本発明の組成物を対象に投与することを含む。
【００５６】
別の実施形態において、本発明は、化学療法誘発下痢又は発癌物質が対象において誘発する大腸癌の治療又は予防方法を提供し、有効量の本発明の化合物を対象に投与することを含む。
【００５７】
さらなる実施形態において、本発明は、癌の化学療法の効率を高める方法を提供し、有効量の本発明の化合物を対象に投与することを含む。
【００５８】
本発明のさらなる態様として、上記の状態及び疾患の治療又は予防における医薬又は食品としての使用のための本発明の化合物が提供される。上記の状態及び疾患の1つの治療又は予防のための医薬又は食品調製物の製造における本化合物の使用も本明細書で提供される。
【００５９】
本方法の特定のレジメンは、化学療法誘発下痢（CID）若しくは発癌物質誘発大腸癌を伴う疾患に罹患している対象への投与、又は癌の化学療法効率を高めるための対象への投与を含む。
【００６０】
本発明の方法のさらなる特定のレジメンは、血管新生阻害剤、化学療法、放射線、外科手術、又は癌を予防及び/又は治療するために当業者に知られている他の治療などの1つ以上の治療を受ける対象への投与を含む。この方法の特定の実施形態において、有効量の本発明の化合物を対象の化学療法誘発下痢（CID）又は発癌物質誘発大腸癌に投与することを含む。この方法の別の特定の実施形態において、有効量の本発明の化合物を対象に投与して、癌の化学療法効率を高めることを含む。特定の実施形態において、用量レベルは、約1〜約6mg/kg/日の範囲である。
【００６１】
状態の発症を予防するために使用される場合、本発明の化合物は、状態を発症する危険のある患者に投与され、通常、医師の助言と監督下で、上記の投与量レベルで投与される。
【００６２】
本発明の化合物は、唯一の活性剤として投与することができるか、または他の治療剤と組み合わせて投与することができ、好ましくは、グルクロニド化によって代謝される任意の薬剤、抗がん剤、免疫賦活剤又は免疫調節剤を含む。特定の実施形態において、２つ（又はそれ以上）の薬剤の共投与を使用することができる。
【００６３】
1つの実施形態において、本発明の化合物は、癌の治療及び/又は予防のための抗癌剤と同時投与され、特定の薬剤には、グルクロニド化によって代謝される抗癌剤が含まれるが、これに限定されない。更に、本発明の化合物は、放射線療法、化学療法又は外科手術を含むが、これらに限定されなく、他の療法と組み合わせて投与することができる。
【００６４】
同時投与は、当業者には明らかであるように、同じ治療計画の一部として患者に２種以上の治療薬を送達する任意の手段を含む。２つ以上の薬剤は、単一の製剤、すなわち単一の医薬組成物として同時に投与することができるが、これは必須ではない。薬剤は、異なる製剤で、異なる時間に別々に投与することができる。
【実施例】
【００６５】
実施例１  一般的な製造方法
一般的なTLC：EM Laboratories, Inc.からのプレコート（0.2mm）シリカゲル  60 F254 プレートをUV光（254nm）により検出する。融点測定(M.P.)：電熱デジタル融点測定装置IA9100により測定され、補正されていない。1Hと13C  NMRスペクトル：400と100MHzでのVarian-Unity-400分光計による測定、又は200と50MHzでのVarian-Gemini-200分光計による測定、内部標準（= 0ppm）としてのSiMe4を用いた化学シフトδ（ppm）、カップリング定数 J (Hz)。元素分析は、Heraeus CHN-O-Rapid元素分析装置で行い、その結果は計算値の±0.4％以内である。
【００６６】
実施例２ 4-ヒドロキシ-8-メチル-2-オキソ-1,2-ジヒドロキノリン-3-カルボニトリル  1b（R1= 8-Me）
ジメチルホルムアミド（DMF、15mL）に溶解した8-メチルイサト酸無水物（3.46g、19.5mmol）、シアノ酢酸エチル（2.21g、19.5mmol）及びトリエチルアミン（Et3N、3mL、20mmol）の混合物を160℃で18時間加熱する（薄層クロマトグラフィー（TLC） モニタリング）。反応混合物を減圧下で濃縮し、続いて1N HClを添加する。沈殿物を濾過により集め、水で洗浄し、乾燥して茶色の固体を得る。粗生成物をメタノール（MeOH）で再結晶化して、1b（2.00g、収率51％）を得る。融点:276-277℃，1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 2.40 (s, 3H, 8-Me)、7.15  (dd, 1H, J = 7.2, 7.6 Hz, 6-H)、7.49(d, 1H, J = 7.2 Hz, 7-H)、7.88 (d, 1H, J = 7.6 Hz, 5-H)、10.88 (br s, 1H, NH)。
【００６７】
実施例３ 6-ブロモ-4-ヒドロキシ-2-オキソ-1,2-ジヒドロキノリン-3-カルボニトリル  le（R1 = 6-Br）
収率95％。融点：280-282℃。1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): 7.23 (d, 1H, J =8.8 Hz, 8-H)、7.63 (dd, 1H, J = 8.8, 2.2 Hz, 7-H)、8.13 (d, 1H, J = 2.2 Hz, 5-H)、11.73 (br s, 1H, NH)。
【００６８】
実施例４ 2,4-ジクロロ-8-メチルキノリン-3-カルボニトリル  2b（R1 = 8-Me）
塩化ホスホリル（POCl3、30mL）に溶解したlb（1.99g、10mmol）の混合物を140℃で3時間加熱する（TLCモニタリング）。冷却後、混合物を氷水（50mL）に注ぎ、pH7になるまで飽和Na2CO3で中和する。この水性混合物をジクロロメタン（CH2Cl2、50mL×3）で三回抽出し、硫酸マグネシウム（MgSO4）で乾燥し、濃縮して褐色固体を得る。粗生成物をFC（n-ヘキサン：CH2Cl2 = 1：2を溶出液としての使用）で精製して白色固体を得い、これをメタノールで再結晶して2b（1.50g、収率64％）を得る。融点:156-158℃。1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6) : 2.67 (s, 3H, 8-Me)、7.80 (dd, 1H, J = 6.4, 8.4 Hz, 6-H)、7.97 (d, 1H, J = 6.4 Hz, 7-H)、8.07 (d, 1H, J = 8.4 Hz, 5-H)。
【００６９】
実施例５ 6-ブロモ-2,4-ジクロロキノリン-3-カルボニトリル  2e（R1 = 6-Br）
収率65％。融点：191-193℃。1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): 8.05 (d, 1H, J = 9.0 Hz, 8-H)、8.23 (dd, 1H, J = 9.0, 2.2 Hz, 7-H)、8.44 (d, 1H, J = 2.2 Hz, 5-H)。
【００７０】
実施例６ 4-クロロ-6-メチル-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-アミン  3b（R1= 8-Me）
ヒドラジン水和物（20mL）とエタノール（30mL）に溶解した2b（1.17g、5mmol）の混合物を60℃で10分間加熱する（TLCモニタリング）。反応混合物を減圧下で濃縮し、続いて水（100mL）を加える。沈殿物を濾過によって集め、水で洗浄し、乾燥して白色固体を得る。粗生成物をメタノールで再結晶して、3b（0.98g、収率84％）を得る。融点：216-217℃。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 2.66 (s, 3H, 8-Me)、5.63 (br s, 2H, NH2)、7.53-7.60 (m, 2H, Ar-H)、8.10 (d, 1H, J = 7.6 Hz, Ar-H)、13.24 (br s, 1H, NH)。
【００７１】
実施例７ 4-クロロ-7-フルオロ-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-アミン  3d（R1= 7-F）
収率72％。融点：224℃（dec）。1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): 5.84 (br s, 2H, NH2)、7.57 (m, 1H, Ar-H)、7.69 (dd, 1H, J = 10.4, 2.4 Hz, Ar-H)、8.30 (dd, 1H, J = 8.8, 6.0 Hz, Ar-H)、13.20 (br s, 1H, NH)。
【００７２】
実施例８ 4,8-ジクロロ-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-アミン  3d（R1 = 6-Cl）
収率90％。融点：282℃（dec）。1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): 5.70 (br s, 2H, NH2)、7.73 (d, 1H, J = 7.2 Hz, Ar-H)、7.93 (d, 1H, J = 9.0 Hz, Ar-H)、8.34 (s, 1H, Ar-H)、13.28 (br s, 1H, NH)。
【００７３】
実施例９ 8-ブロモ-4-クロロ-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-アミン  3e（R1= 6-Br）
収率90％。融点：325℃（dec）。1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): 5.70 (br s, 2H, NH2)、7.84 (s, 2H, Ar-H)、8.50 (s, 1H, Ar-H)、13.27 (br s, 1H, NH)。
【００７４】
実施例１０ 3-アミノ-4-置換アニリノ-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン4-32の合成のための一般手順
DMF（20mL）に溶解した4-クロロ-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-アミン（3a、0.44g、2mmol）と適切な芳香族アミン（4mmol）の混合物を（TLCモニタリングにより）3時間撹拌しながら還流する。次いで、混合物を冷却し、減圧下で蒸発させて残渣を得り、これを水（50mL）で処理する。このようにして集めた沈殿物を水で洗浄し、次いで乾燥して粗固体を得り、これをエタノールで再結晶する。
【００７５】
実施例１１ 3-アミノ-4-（4-クロロフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン  4（R1= H、R2 = 4'-Cl）（3561）
収率75％。融点：246-248℃。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5.62 (br s, 2H, NH2)、7.26-7.30 (m, 1H, Ar-H)、7.35 (d, 2H, J = 8.8 Hz, Ar-H)、7.46-7.50 (m, 1H, Ar-H)、7.61 (d, 1H, J = 8.0 Hz, Ar-H)、7.99-8.05 (m, 3H, Ar-H)、8.31 (br s, 1H, NH)、12.92 (br s, 1H, NH)。C16H12ClN5・0.2H2Oの元素分析計算値(anal. calcd.)：C 61.33, H 3.99, N 22.35；実測値(found)：C 61.45、H 3.86、N 22.67。
【００７６】
実施例１２ 3-アミノ-4-（4-メチルフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン  5(R1 = Η, R2= 4'-Me) (3562)
収率81％。融点：292-294℃(lit. 296-298℃)。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 2.30 (s, 3H, Me), 5.62 (br s, 2H, NH2)、7.16 (d, 2H, J = 8.4 Hz, Ar-H)、7.26-7.29 (m, 1H, Ar-H)、7.47-7.51 (m, 1H, Ar-H)、7.60 (d, 1H, J = 8.4 Hz, Ar-H)、7.84 (d, 2H, J = 8.4 Hz, Ar-H)、8.05 (d, 1H, J = 8.0 Hz)、8.15 (s, 1H, NH)、12.89 (br s, 1H, NH)。
【００７７】
実施例１３ N4-（6-クロロフェニル）-1H-ピラゾール-4-イル]-キノリン-6-ジアミン  6（R1 = 8-Me、R2 = 4'-Cl）
収率：83％。融点：249-250℃。1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): 2.61 (s, 3H, Me)、5.67 (br s, 2H, NH2)、7.20-7.24 (m, 1H, Ar-H)、7.39-7.43 (m, 3H, Ar-H)、7.94 (d, 1H, J = 7.6 Hz, Ar-H)、8.11 (d, 2H, J = 8.8 Hz, Ar-H)、8.37 (br s, 1H, NH)、12.90 (br s, 1H, NH)。
【００７８】
実施例１４ 6-メチル-N4-（p-トリル）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3,4-ジアミン  7（R1 = 8-Me、R2 = 4'-Me）
収率：81％。融点：270-271℃。1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): 2.29 (s, 3H, Me)、2.60 (s, 3H, Me)、5.65 (br s, 2H, NH2)、7.15-7.19 (m, 3H, Ar-H)、7.39 (d, 1H, J = 6.8 Hz, Ar-H)、7.90-7.97 (m, 3H, Ar-H)、8.18 (s, 1H, NH)、12.85 (br s, 1H, NH)。C18H17N5の元素分析計算値(anal. calcd.)：C, 71.67; H, 5.65; N, 23.09。実測値(found)：C, 71.21; H, 5.69; N, 23.00。
【００７９】
実施例１５ N4-（4-クロロフェニル）-7-フルオロ-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3,4-ジアミン  8（R1 = 7-F、R2 = 4'-Cl）
収率：52％。融点：254℃ (dec)。1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): 5.70 (br s, 2H, NH2)、7.21 (br m, 1H, Ar-H)、7.35-7.42 (m, 3H, Ar-H)、8.00 (d, 2H, J = 8.4 Hz, Ar-H)、8.09-8.14 (m, 1H, Ar-H)、8.42 (br s, 1H, NH)、12.97 (br s, 1H, NH)。C16H11ClFN5の元素分析計算値(anal. calcd.)：C, 58.63; H, 3.38; N, 21.37。実測値(found)：C, 58.72; H, 3.45; N, 21.45。
【００８０】
実施例１６ 7-フルオロ-N4-（p-トリル）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3,4-ジアミン  9（R1 = 7-F、R2 = 4'-Me）
収率：81％。融点：246-247℃。1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): 2.30 (s, 3H, Me)、5.68 (br s, 2H, NH2)、7.14-7.17 (m, 3H, Ar-H)、7.29 (dd, 1H, J = 11.2, 2.4 Hz, Ar-H)、7.80 (d, 2H, J = 8.0 Hz, Ar-H)、8.08 (dd, 1H, J = 8.4, 6.8 Hz, Ar-H)、8.22 (br s, 1H, NH)、12.85 (br s, 1H, NH)。C17H14FN5．1HClの元素分析計算値(anal. calcd.)：C, 59.37; H, 4.40; N, 20.37。実測値(found)：C, 59.31; H, 4.27; N, 20.36。
【００８１】
実施例１７ 8-クロロ-N4-（4-クロロフェニル）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3,4-ジアミン  10（R1 = 6-Cl、R2 = 4'-Cl）
収率：33％。融点：270-272℃。1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): 5.72 (br s, 2H, NH2)、7.40 (d, 2H, J = 8.8 Hz, Ar-H)、7.51 (d, 1H, J = 8.4 Hz, Ar-H)、7.64 (d, 1H, J = 8.4 Hz, Ar-H)、8.00 (d, 2H, J = 8.0 Hz, Ar-H)、8.15 (s, 1H, Ar-H)、8.41 (s, 1H, NH)、12.98 (br s, 1H, NH)。C16H11Cl2N5．1.3HClの元素分析計算値(anal. calcd.)：C, 49.04; H, 3.17; N, 17.88。実測値(found)：C, 48.90; H, 3.47; N, 17.77。
【００８２】
実施例１８ 8-クロロ-N4-（p-トリル）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3,4-ジアミン  11（R1 = 6-Cl、R2 = 4'-Me）
収率：46％。融点：261℃。1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): 2.30 (s, 3H, Me)、5.67 (br s, 2H, NH2)、7.16 (d, 2H, J = 8.0 Hz, Ar-H)、7.49 (d, 1H, J = 7.6 Hz, Ar-H)、7.60 (d, 1H, J = 8.8 Hz, Ar-H)、7.80 (d, 2H, J = 8.0 Hz, Ar-H)、8.13 (s, 1H, Ar-H)、8.23(s, 1H, NH)、12.95 (br s, 1H, NH)。C17H14ClN5．1.3HClの元素分析計算値(anal. calcd.)：C, 54.45; H, 4.14; N, 18.68。実測値(found)：C, 54.24; H, 4.36; N, 18.38。
【００８３】
実施例１９ 8-ブロモ-N4-（4-クロロフェニル）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3,4-ジアミン  12（R1 = 6-Br、R2 = 4'-Cl）
収率：50％。融点：264℃(dec)。1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): 5.71 (br s, 2H, NH2)、7.39 (d, 2H, J = 8.8 Hz, Ar-H)、7.56-7.63 (m, 2H, Ar-H)、8.00 (d, 2H, J = 8.8 Hz, Ar-H)、8.30 (s, 1H, Ar-H)、8.40 (s, 1H, NH)、12.95 (br s, 1H, NH)。
【００８４】
実施例２０ 8-ブロモ-N4-（P-トリル）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3,4-ジアミン  13（R1 = 6-Br、R2 = 4'-Me）
収率：73％。融点：276℃。1H-NMR (400MHz, DMSO): 2.30 (s, 3H, Me)、5.68 (br s, 2H, NH2)、7.17 (d, 2H, J = 8.4 Hz, Ar-H)、7.52-7.61 (m, 2H, Ar-H)、7.79 (d, 2H, J = 6.8 Hz, Ar-H)、8.26 (br s, 2H, Ar-H and NH)、12.96 (br s, 1H, NH)。
【００８５】
実施例２１ 3-アミノ-4-アニリノ-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン  14（R1 = R2 = H）（3509）
収率86％。融点：256-258℃（lit. 258-259℃）。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5.62 (br s, 2H, NH2)、6.99-7.03 (m, 1H, Ar-H)、7.27-7.37 (m, 3H, Ar-H)、7.48-7.52 (m, 1H, Ar-H)、7.63 (d, 1H, J = 8.0 Hz, Ar-H)、7.97 (d, 2H, J = 8.0 Hz, Ar-H)、8.06 (d, 1H, J = 8.0 Hz, Ar-H)、8.24 (s, 1H, NH)、12.92 (s, 1H, NH)。C16H13N5の元素分析計算値(anal. calcd.)：C 69.80, H 4.76, N 25.44；実測値(found)：C 70.11, H 5.01, N 25.32。
【００８６】
実施例２２ 3-アミノ-4-（4-ヒドロキシフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン  15（R1 = H、R2 = 4'-OH）（3565）
収率82％。融点：347-349℃（dec）。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 6.96 (d, 2H, J = 8.8 Hz, Ar-H)、7.36 (d, 2H, J = 8.4 Hz, Ar-H)、7.39-7.43 (m, 1H, Ar-H)、7.51-7.56 (m, 1H, Ar-H)、7.79-7.81 (m, 1H, Ar-H)、8.14 (m, 1H, Ar-H)、9.96 (br s, 1H, NH)、10.59 (br s, 1H, OH)、12.21 (br s, 1H, NH)。C16H13N5O・2.0H2Oの元素分析計算値(anal. calcd.)：C 58.70, H 5.24, N 21.40；実測値(found)：C 58.47, H 5.24, N 21.70。
【００８７】
実施例２３ 3-アミノ-4-（4-アミノフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン  16（R1= H、R2 = 4'-NH2）（4522）
収率61％。融点：355-356℃。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5.57 (br s, 2H, NH2)、6.35 (br s, 2H, NH)、6.71 (d, 2H, J = 8.8 Hz, Ar-H)、7.17 (d, 2H, J = 8.0 Hz, Ar-H)、7.39-7.51 (m, 3H, Ar-H)、7.77-7.81 (m, 1H, Ar-H)、8.08 (br s, 1H, NH)、10.41 (br s, 1H, NH)、10.98 (br s, 1H, NH)、12.96 (br s, 1H, NH)。
【００８８】
実施例２４ 3-アミノ-4-（4-フルオロフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン  17（R1 = H、R2 = 4'-F）（3511）
収率79％。融点：266-268℃。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5.64 (br s, 2H, NH2)、7.16-7.21 (m, 2H, Ar-H)、7.27-7.30 (m, 1H, Ar-H)、7.47-7.51 (m, 1H, Ar-H)、7.60 (d, 1H, J = 8.0 Hz, Ar-H)、7.96-7.99 (m, 2H, Ar-H)、7.61 (d, 1H, J = 7.6 Hz, Ar- H)、8.25 (br s, 1H, NH)、12.91 (br s, 1H, NH)。C16H12FN5の元素分析計算値(anal. calcd.)：C 65.52, H 4.12, N 23.88；実測値(found)：C 65.52, H 4.39, N 23.63。
【００８９】
実施例２５ 3-アミノ-4-（4-トリフルオロメチルフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン  18（R1 = H、R2 = 4'-CF3）（3508）
収率75％。融点：251-252℃。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5.68 (br s, 2H, NH2)、7.34-7.38 (m, 1H, Ar-H)、7.53-7.57 (m, 1H, Ar-H)、7.68-7.72 (m, 3H, Ar-H)、8.40 (d, 1H, J = 7.6 Hz, Ar-H)、8.20 (d, 2H, J = 8.8 Hz, Ar-H)、8.61 (br s, 1H, NH)、13.00 (br s, 1H, NH)。C17H12F3N5の元素分析計算値(anal. calcd.)：C 59.48, H 3.52, N 20.40；実測値(found)：C 59.55, H 3.57, N 20.26。
【００９０】
実施例２６ 3-アミノ-4-（4-メトキシフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン  19（R1 = H、R2 = 4'-OMe）（3506）
収率81％。融点：228-230℃（lit. 235~237℃）。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 3.67 (s, 3H, OMe)、5.62 (br s, 2H, NH2)、6.94 (d, 2H, J = 9.2 Hz, Ar-H)、7.23-7.26 (m, 1H, Ar-H)、7.44-7.48 (m, 1H, Ar-H)、7.56 (d, 1H, J = 8.0 Hz, Ar-H)、7.83 (d, 2H, J = 7.6 Hz, Ar-H)、8. 03 (d, 1H, J = 8.4 Hz, Ar-H)、8.10 (br s, 1H, NH)、12.86 (br s, 1H, NH)。C17H15N5O・0.1H2Oの元素分析計算値(anal. calcd.)：C 66.47, H 5.00, N 22.80；実測値(found)：C 66.39, H 4.98, N 22.94。
【００９１】
実施例２７ 3-アミノ-4-（4-メチルチオフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン  20（R1 = 1H、R2 = 4'-SMe）（3512）
収率80％。融点：269-271℃。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 2.48 (s, 3H, SMe)、5.63 (br s, 2H, NH2)、7.29 (d, 1H, J = 8.8 Hz, Ar-H)、7.48-7.51 (m, 1H, Ar-H)、7.61 (d, 1H, J = 8.0 Hz, Ar-H)、7.95 (d, 1H, J = 8.4 Hz, Ar-H)、8.05 (d, 1H, J = 7.6 Hz, Ar-H)、8.24 (br s, 1H, NH)、12.91 (br s, 1H, NH)。C17H15N5S・0.1HClの元素分析計算値(anal. calcd.)：C 62.82, H 4.68, N 21.54；実測値(found)：C 62.66, H 4.72, N 21.14。
【００９２】
実施例２８ 3-アミノ-4-（4-ニトロフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン  21（R1= H、R2 = 4'-NO2）（3515）
収率36％。融点：303-305℃（dec）。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5.73 (br s, 2H, NH2)、7.40-7.43 (m, 1H, Ar-H)、7.58-7.61 (m, 1H, Ar-H)、7.78 (d, 1H, J = 7.6 Hz, Ar-H)、8.14 (d, 1H, J = 8.0 Hz, Ar-H)、8.25 (s, 4H, Ar-H)、9.10 (br s, 1H, NH)、13.08 (br s, 1H, NH)。C16H12N6O2・0.3HClの元素分析計算値(anal. calcd.)：C 58.01, H 3.73, N 25.37；実測値(found)：C 57.72, H 4.03, N 24.98。
【００９３】
実施例２９ 4-（3-アミノ-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-4-イルアミノ）安息香酸  22（R1 = H、R2 = 4'-COOH）（3564）
収率76％。融点：362-364℃。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5.65 (br s, 2H, NH2)、7.47-7.51 (m, 1H, Ar-H)、7.59-7.63 (m, 1H, Ar-H)、7.74-7.78 (m, 3H, Ar-H)、8.07 (d, 2H, J = 8.4 Hz, Ar-H)、8.19 (d, 1H, J = 8.0 Hz, Ar-H)、11.21 (br s, 1H, NH)、12.17 (br s, 1H, NH)、12.95 (br s, 1H, COOH)。C17H13N5O2・HClの元素分析計算値(anal. calcd.)：C 57.39, H 3.97, N 19.68；実測値(found)：C 57.45, H 3.84, N 19.76。
【００９４】
実施例３０ 3-アミノ-4-（4-アセチルフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン  23（R1= 1H、R2 = 4'-COMe）（3505）
収率83％。融点：249-251℃。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 2.55 (s, 3H, Me)、5.67 (br s, 2H, NH2)、7.35-7.38 (m, 1H, Ar-H)、7.54-7.58 (m, 1H, Ar-H)、7.72 (d, 1H, J = 8.0 Hz, Ar-H)、7.97 (d, 2H, J = 8.8 Hz, Ar-H)、8.10-8.15 (m, 3H, Ar-H)、8.65 (br s, 1H, NH)、13.01 (br s, 1H, NH)。C18H15N5O・0.1HClの元素分析計算値(anal. calcd.)：C 67.35, H 4.74, N 21.82；実測値(found)：C 67.22, H 4.82, N 21.57。
【００９５】
実施例３１ 3-アミノ-4-（3-ヒドロキシフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン  24（R1= H、R2 = 3'-OH）（4518）
収率84％。融点：319-321℃。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 6.82 (d, 1H, J = 7.6 Hz, Ar-H)、6.98 (d, 2H, J = 6.8 Hz, Ar-H)、7.30-7.34 (m, 1H, Ar-H)、7.42-7.46 (m, 1H, Ar-H)、7.54-7.58 (m, 1H, Ar-H)、7.78 (d, 1H, J = 7.6 Hz, Ar-H)、8.15 (s, 1H, Ar-H)、9.95 (s, 1H, NH)、10.81 (br s, 1H, OH)、11.78 (br s, 1H, NH)。C16H13N5O・1.25HClの元素分析計算値(anal. calcd.)：C 57.03, H 4.27, N 20.79；実測値(found)：C 56.95, H 4.62, N 21.02。
【００９６】
実施例３２  N4-（m-トリル）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3,4-ジアミン  25(R1 = H、R2 = 3’-Me) 
収率50％。融点：281-282℃。1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): 2.39 (s, 3H, Me)、7.23 (d, 1H, J = 7.6 Hz, Ar-H)、7.38-7.47 (m, 4H, Ar-H)、7.57 (dd, 1H, J = 8.0 Hz, Ar-H)、7.78 (d, 1H, J = 8.0 Hz, Ar-H)、8.16 (d, 1H, J = 6.4 Hz, Ar-H)、10.88 (br s, 1H, NH), 11.70 (br s, 1H, NH)。C17H15N5．1.1HClの元素分析計算値(anal. calcd.)：C, 61.95; H, 4.93; N, 21.25。実測値(found)：C, 61.95; H, 4.67; N, 21.18。
【００９７】
実施例３３  N4-（3-クロロフェニル）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3,4-ジアミン  26（R1= H、R2 = 3'-Cl）
収率57％。融点：227-229℃。1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): 5.66 (br s, 2H, NH2)、7.05 (dd, 1H, J = 8.0, 1.6 Hz, Ar-H)、7.34-7.39 (m, 2H, Ar-H)、7.54 (m, 1H, Ar-H)、7.67(d, 1H, J = 7.6 Hz, Ar-H)、7.89 (d, 1H, J = 7.2 Hz, Ar-H)、8.09 (d, 1H, J = 7.6 Hz, Ar-H)、8.27 (s, 1H, Ar-H)、8.39 (br s, 1H, NH)、12.97 (br s, 1H, NH)。C16H12ClN5の元素分析計算値(anal. calcd.)：C, 62.04; H, 3.90; N, 22.61。実測値(found)：C, 61.91; H, 3.88; N, 22.40。
【００９８】
実施例３４  3-アミノ-4-（3-メトキシフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン  27（R1= H、R2 = 3'-OMe）（3514）
収率76％。融点：184-186℃。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 3.81 (s, 3H, OMe)、3.81 (s, 3H, OMe)、5.63 (br s, 2H, NH2)、6.58-6.61 (m, 1H, Ar-H)、7.22-7.26 (m, 1H, Ar-H)、7.29-7.33 (m, 1H, Ar-H)、7.44 (d, 1H, J = 8.0 Hz, Ar-H)、7.50-7.54 (m, 1H, Ar-H)、7.65(d, 1H, J = 8.0 Hz, Ar-H)、7.90 (s, 1H, Ar-H)、8.07(d, 1H, J = 7.6 Hz, Ar-H)、8.24 (s, 1H, NH)、12.95 (br s, 1H, NH)。C17H15N5Oの元素分析計算値(anal. calcd.)：C 66.87, H 4.95, N 22.94；実測値(found)：C 66.64, H 4.98, N 22.68。
【００９９】
実施例３５ 3-アミノ-4-（3-アセチルフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン  28（R1= 1H、R2 = 3'-COMe）（3117）
収率84％。融点：＞380℃。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 2.63 (s, 3H, Me)、7.45-7.49 (m, 1H, Ar-H)、7.57-7.60 (m, 1H, Ar-H)、7.68-7.72 (m, 1H, Ar-H)、7.76 (d, 1H, J = 8.4 Hz, Ar-H)、7.89 (d, 1H, J = 8.8 Hz, Ar-H)、7.97 (d, 1H, J = 7.6 Hz, Ar-H)、8.17-8.20 (m, 2H, Ar-H)、11.05 (br s, 1H, NH)、11.85 (br s, 1H, NH). C18H15N5O・0.5H2Oの元素分析計算値(anal. calcd.)：C 66.23, H 4.95, N 21.46；実測値(found)：C 66.31, H 4.66, N 21.26。
【０１００】
実施例３６ 3-アミノ-4-（2-ヒドロキシフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン  29（R1= H、R2 = 2'-OH）（3507）
収率64％。融点：156-157℃。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5.51 (br s, 2H, NH2)、6.84-6.99 (m, 3H, Ar-H)、7.29-7.32 (m, 1H, Ar-H)、7.50-7.53 (m, 1H, Ar-H)、7.60 (d, 1H, J = 7.2 Hz, Ar-H)、8.06 (d, 2H, J = 7.6 Hz, Ar-H)、8.43 (s, 1H, NH)、11.22 (br s, 1H, OH)、13.06 (s, 1H, NH)。C16H13N5O・0.5H2Oの元素分析計算値(anal. calcd.)：C 63.98, H 4.71, N 23.32；実測値(found)：C 63.66, H 4.65, N 23.33。
【０１０１】
実施例３７  N4-（o-トリル）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3,4-ジアミン  30（R1= H、R2 = 2'-Me）
収率31％。融点：228-230℃。1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): 2.31 (s, 3H, Me)、5.48 (br s, 2H, NH2)、7.02-7.05 (m, 1H, Ar-H)、7.23-7.27 (m, 3H, Ar-H)、7.45 (br s, 1H, Ar-H)、7.55 (d, 1H, J = 7.6 Hz, Ar-H)、8.05 (br s, 2H, Ar-H)、8.31 (br s, 1H, NH)、12.96 (br s, 1H, NH)。C17H15N5．0.2 H2Oの元素分析計算値(anal. calcd.)：C, 69.68; H, 5.30; N, 23.90。実測値(found)：C, 69.95; H, 5.17; N, 23.70。
【０１０２】
実施例３８  N4-（2-クロロフェニル）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3,4-ジアミン  31（R1= 1H、R2 = 2'-Cl）
収率：52％。融点：243-244℃。1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): 5.46 (br s, 2H, NH2)、7.43-7.47 (m, 1H, Ar-H)、7.52-7.59 (m, 3H, Ar-H)、7.71-7.75 (m, 2H, Ar-H)、7.79 (d, 1H, J = 8.0 Hz, Ar-H)、8.17 (d, 1H, J = 7.6 Hz, Ar-H)、8.30 (br s, 1H, NH)、11.45 (br s, 1H, NH)。
【０１０３】
実施例３９ 3-アミノ-4-（2-メトキシフェニルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン  32（R1= H、R2 = 2'-OMe）（3510）
収率69％。融点：210-211℃。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5.22 (s, 2H, NH2)、6.96-7.08 (m, 3H, Ar-H)、7.29-7.32 (m, 1H, Ar-H)、7.50-7.54 (m, 1H, Ar-H)、7.69 (d, 1H, J = 8.0 Hz, Ar-H)、8.06 (d, 1H, J = 8.0 Hz, Ar-H)、8.57 (s, 1H, NH)、8.99 (d, 1H, J = 7.2 Hz, Ar-H)、13.03 (s, 1H, NH)。C17H15N5O・0.45H2Oの元素分析計算値(anal. calcd.)：C 65.13, H 5.12, N 22.35；実測値(found)：C 65.31, H 5.03, N 21.99。
【０１０４】
実施例４０ 3-アミノ-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-4（5H）-オン  33
DMF（30mL）に溶解した4-クロロ-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-アミン（3a、0.22g、1.0mmol）及び36％の塩酸（1mL）の混合物を2時間還流する（TLCモニタリング）。混合物を減圧下で蒸発させ、水（20mL）で処理し、濾過し、粗固体をエタノールで再結晶化させて3-アミノ-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-4（5H）-オン（33、0.15g、収率75％）を黄色固体として得る。融点：316-318℃。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5.73 (br s, 2H, NH2)、7.60-7.72 (m, 2H, Ar-H)、7.89 (d, 1H, J = 8.0 Hz, Ar-H)、8.24 (dd, 1H, J = 8.0, 1.6 Hz, Ar-H)、13.23 (br s, 1H, NH)。
【０１０５】
実施例４１ 1-（4-オキソ-4,5-ジヒドロ-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-イル）-3-フェニル尿素  34
アセトニトリル（8mL）に溶解した4-クロロ-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-アミン（3a、0.20g、1.0mmol）及びフェニルイソシアネート（0.36g、3.0mmol）の混合物を室温で2時間撹拌する（TLCモニタリング）。沈殿物を濾過により回収し、アセトニトリルで洗浄し、乾燥して白色固体を得る。粗生成物をエタノールで再結晶して1-（4-オキソ-4,5-ジヒドロ-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-イル）-3-フェニル尿素（34、0.23g、収率72％）を得る。融点：240-242℃。1H-NMR (400 MHz, TFA-d): 7.39-7.44 (m, 1H, Ar-H)、7.49-7.52 (m, 4H, Ar-H)、7.56-7.63 (m, 2H, Ar-H)、7.84-7.88 (m, 1H, Ar-H)、8.20 (d, 1H, J = 8.0 Hz, Ar-H)。
【０１０６】
実施例４２ 1-（4-メトキシフェニル）-3-（4-オキソ-4,5-ジヒドロ-1H-ピラゾロ[4,3-c] - キノリン-3-イル）尿素  35
化合物35は、化合物34に記載の通り、3-アミノ-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-4（5H）-オン（33）及び4-メトキシフェニルイソシアネートから収率47％で得る。融点：224-225℃。1H-NMR (400 MHz, TFA-d): 3.90 (s, 3H, OCH3)、7.02 (d, 2H, J = 8.8 Hz, Ar-H)、7.37 (d, 2H, J = 8.8 Hz, Ar-H)、7.43-7.46 (m, 2H, Ar-H)、7.68-7.72 (m, 1H, Ar-H)、8.02 (d, 1H, J = 8.0 Hz, Ar-H)。
【０１０７】
実施例４３ 1-{4-[（4-クロロフェニル）アミノ]-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-イル}-3-フェニル尿素  36
化合物36は、化合物34に記載の通り、化合物4とイソシアン酸フェニルから収率70％で得られる。融点：282-283℃。1H-NMR (400 MHz, TFA-d): 3.90 (s, 3H, OCH3)、7.02 (d, 2H, J = 8.8 Hz, Ar-H)、7.37 (d, 2H, J = 8.8 Hz, Ar-H)、7.43-7.46 (m, 2H, Ar-H)、7.68-7.72 (m, 1H, Ar-H)、8.02 (d, 1H, J = 8.0 Hz, Ar-H)。
【０１０８】
実施例４４ 1-フェニル-3- [4-（p-トリルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-イル]尿素  37
化合物37は、化合物34に記載の通り、化合物5とイソシアン酸フェニルから収率73％で得られる。融点：212-213℃。1H-NMR (400 MHz, TFA-d): 2.51 (s, 3H, CH3)、7.38-7.58 (m, 11H, Ar-H)、7.66-7.70 (m, 1H, Ar-H)、8.33 (d, 1H, J = 7.6 Hz, Ar-H)。
【０１０９】
実施例４５ 1-{4-[（4-クロロフェニル）アミノ]-1H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-イル}-3-（4-メトキシフェニル）尿素  38
化合物38は、化合物34に記載の通り、化合物4と4-メトキシフェニルイソシアネートから収率78％で得られる。融点：211-112℃。1H-NMR (400 MHz, TFA-d): 4.13 (s, 3H, OCH3)、7.26 (d, 2H, J = 8.4 Hz, Ar-H)、7.45 (d, 1H, J = 8.4 Hz, Ar-H)、7.54-7.77 (m, 8H, Ar-H)、8.39 (d, 1H, J = 8.0 Hz, Ar-H)。
【０１１０】
実施例４６ 1-（4-メトキシフェニル）-3- [4-（p-トリルアミノ）-1H-ピラゾロ[4,3-c] - キノリン-3-イル]尿素39
化合物39は、化合物34に記載の通り、化合物5及び4-メトキシフェニルイソシアネートから収率85％で得られる。融点：163-164℃。1H-NMR (400 MHz, TFA-d): TFA-d): 2.89 (s, 3H, CH3)、4.43 (s, 3H, OCH3)、7.56 (d, 2H, J = 9.2 Hz, Ar-H)、7.73-7.78 (m, 3H, Ar-H)、7.86-7.95 (m, 5H, Ar-H)、8.03-8.06 (m, 1H, Ar-H)、8.68 (d, 1H, J = 8.0 Hz, Ar-H)。
【０１１１】
実施例４７  ピラゾロ[4,3-c]キノリン誘導体による特異的な大腸菌β-グルクロニダーゼ活性の阻害
より強力で特異的なeβG阻害剤を同定するために、ハイスループットスクリーニング（HTS）により多数の化合物をスクリーニングし、そして特定のピラゾロ[4,3-c]キノリン誘導体（TCH-シリーズ、式I）を発見する。特異的にeβGの活性を阻害することができるが、hβGには影響しない（表1参照）。
【０１１２】
ピラゾロ[4,3-c]キノリン誘導体は、eβG又はhβG活性に対する阻害について試験する。精製された組換えeβG又はhβGタンパク質は、それぞれ阻害剤の段階的希釈と共にインキュベートする。βG活性は、βG基質、pNPG（p-ニトロフェニル-β-D-グルコピラノシド）の発色によって決定する。pNPGの加水分解産物であるPNPは、OD420で測定する。結果は、阻害剤を含まなくて処置する対照と比較して、βG活性の阻害をパーセントとして表示される（下記表1参照）。データは、化合物4（TCH-3561）、化合物5（TCH-3562）、化合物17（TCH-3511）及び化合物32（TCH-3510）などの阻害剤がeβG活性を選択的に阻害するが、hβGを阻害しないことを示す。これらの化合物は、βG-Inhよりも優れたβG活性の阻害効果を示す（図１）。
表1、eβGとhβGに対するピラゾロ[4,3-c]キノリンの阻害活性
0006607962.tif 000010
【０１１３】
【表１】
0006607962.tif 000011
0006607962.tif 000012
【０１１４】
実施例４８  生体内の内在性β-グルクロニダーゼ活性アッセイ
ピラゾロ[4,3-c]キノリン誘導体の内在性eβG活性に対する阻害を試験する。このアッセイは、生体外のアッセイと同様である。大腸菌BL21細胞は、LB培地において0.35のOD600まで増殖させる。大腸菌を4倍希釈し、各阻害剤とともにインキュベートする。記載のようなPNPを検出することによって、内在性eβG活性を測定する。結果は、化合物4（TCH-3561）、化合物5（TCH-3562）、化合物17（TCH-3511）及び化合物32（TCH-3510）を含む阻害剤が、低濃度（10μM）又は高濃度（50μM）の両方で、βG-Inhよりも優れた内因性eβG活性の阻害効力を有する（図２）。
【０１１５】
実施例４９  生体内の内在性β-グルクロニダーゼ活性アッセイ
ピラゾロ[4,3-c]キノリン誘導体をヒト細胞に対する細胞毒性について測定する。HEK293ヒト胎児腎臓細胞及びCNL正常肝細胞は、阻害剤で処理する。ATPlite（商標）を使用して、培養細胞のアデノシン三リン酸を検出することによって阻害剤の増殖効果を定量的に評価する。結果、低濃度の抑制剤での化合物17（TCH-3511）又は化合物32（TCH-3510）によって処理した細胞がβG-Inh処置群（図３）と同様の生存可能性を示す。
【０１１６】
実施例５０  大腸菌増殖アッセイ
ピラゾロ[4,3-c]キノリン誘導体を大腸菌の増殖に対する効果について試験する。TOP10大腸菌細胞をLB培地において0.35のOD600まで増殖させ、各阻害剤で処理する。処理後6時間にOD600を読み取ることにより、大腸菌細胞培養物をモニターする。細胞生存率を非阻害剤対照群と比較し、パーセント対照で示す。化合物5（TCH-3562）、化合物17（TCH-3511）及び化合物32（TCH-3510）は、高濃度（100μM）での大腸菌の増殖に影響を与えなかった（図４）。
【０１１７】
実施例５１  腸内β-グルクロニダーゼ活性の生体内画像
化合物17（TCH-3511）又は化合物32（TCH-3510）の生体内での画像によるマウスの腸内βG活性に対する阻害について試験する。化合物5（TCH-3562）、化合物17（TCH-3511）又は化合物32（TCH-3510）をddH20に溶解する。健康な6〜10週齢の女性Balb/cJマウスに化合物5（TCH-3562）、化合物17（TCH-3511）、化合物32（TCH-3510）又はddH20（60μg/200μl）を5日間連続経口投与する。フルオレセインジ-β-D-グルクロニド（FDG1cU）であるβG蛍光プロプローブは、6日目に経口投与する。βG活性は、生体内光学イメージングシステムによって検出される。結果は、化合物17（TCH-3511）の経口投与が腸における蛍光信号を有意に減少させたことを示し、化合物17（TCH-3511）が腸のβG活性を効果的に阻害し得ることを指摘した（図５）。
【０１１８】
実施例５２ CPT-11誘発下痢及び抗腫瘍効果に対する化合物17（TCH-3511）の効果
化合物17（TCH-3511）をマウスに投与して、細菌抑制剤17（TCH-3511）による腸内βGの阻害が、CPT-11誘発下痢を除去し、腫瘍を有するマウスにおけるCPT-11と組み合わせて治療効力を維持するかどうかを試験する。CT26ネズミ結腸腺癌細胞は、Balb/cJマウスに移植する。固形腫瘍形成後、17（TCH-3511）（3mg/kg/日）をCPT-11（50mg/kg/日）の腹腔内注射と共に経口投与する。下痢の徴候は、糞便形態及び肛門周囲染色に基づく。図６（Ａ）に示すように、17（TCH-3511）は、CPT-11誘発下痢を減少させることができ、CPT-11処置の抗腫瘍効果に影響を及ぼさない（図６（Ｂ））。
【０１１９】
実施例５３  化合物17（TCH-3511）の腸内でのDMH誘導腫瘍形成への影響
化合物17（TCH-3511）をC57BL/6J-APCMIN/Jマウスに投与して、DMH誘発の腸の損傷と腫瘍形成を防止するかどうかを試験する。化合物17（3mg/kg、3回/週）を、DMH（30mg / kg、1回/週）の腹腔内注射と共に経口投与する。処置の8週間後、マウスを犠牲し、腸内の腫瘍を検査する。図７に示すように、DMH処置のみの群では、26個以上の腫瘍が検出されたが、17個の群（TCH-3511）では6個の腫瘍しか検出されなかった。従って、化合物17（TCH-3511）は、DMH誘発の腸の損傷を低減し、腫瘍形成を防止することができる。
【符号の説明】
【０１２０】
ない
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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