(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
大麦の葉、茎及び／又はそれらの粉砕末を含有する、αディフェンシン分泌促進剤。
【請求項２】
前記αディフェンシン分泌促進剤が、消化管用αディフェンシン分泌促進剤である、請求項１に記載のαディフェンシン分泌促進剤。
【請求項３】
前記αディフェンシン分泌促進剤が、小腸用αディフェンシン分泌促進剤である、請求項１に記載のαディフェンシン分泌促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、αディフェンシン分泌促進剤及び抗菌剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
一般に、抗菌ペプチドは、細胞膜を通過することによって細菌、真菌、ウィルスなどの微生物を殺滅することができる約１０〜５０アミノ酸残基からなる小分子である。抗菌ペプチドの由来生物及び種類は多岐にわたり、植物、昆虫、哺乳類などの生物から数百分子が同定されている。
【０００３】
抗菌ペプチドの一種としてディフェンシンが知られている。ディフェンシンは、３ヵ所の分子内ジスルフィド結合を構成する６個のシステインを有する共通の構造を有する。ディフェンシンには大きく分けて２種類あり、αディフェンシン及びβディフェンシンである。αディフェンシン量は、好中球や小腸陰窩のパネト細胞に存在することが知られており、βディフェンシンはαディフェンシンより長大な構造を有し、粘膜、皮膚、気管などの上皮細胞に存在することが知られている。
【０００４】
αディフェンシンはクリプチンとも呼ばれており、強い殺菌能力を有する抗菌ペプチドである。αディフェンシンは、腸管免疫に重要な役割を果たし、細菌やウィルスなどに対する感染防御機能を発揮する。
【０００５】
ところで、大麦若葉は生体に対する安全性が高い天然由来物である。また、大麦若葉には種々の薬理作用があることが報告されており、例えば、大麦若葉の搾汁成分には抗ウイルス作用及び免疫細胞増強作用があることが知られている（特許文献１及び２を参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開平３−１６９８２３号公報
【特許文献２】特開平４−０７４１２８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかし、特許文献１及び２には、大麦若葉の搾汁成分とαディフェンシンとの関係について記載はない。特に、これらの文献には、大麦若葉の粉末についての抗ウイルス作用や免疫細胞増強作用についてはなんら記載がない。また、大麦若葉のような生体に対する安全性が高い天然由来物でありながら、生体内のαディフェンシン量を高めるような作用を有する物質についてはこれまでに知られていない。
【０００８】
そこで、本発明は、生体に対して高い安全性があり、かつ、生体内の抗菌性αディフェンシン量を高めるような作用を有する天然由来物を有効成分とするαディフェンシン分泌促進剤及び抗菌剤を提供することを、発明が解決しようとする課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決するために、種々の物質について鋭意検討を積み重ねたところ、驚くべきことに、大麦の葉及び／又は茎を摂取すると、腸内のαディフェンシンの分泌が促進され、さらに分泌促進されたαディフェンシンにより腸内に局在し得る病原性のサルモネラ属細菌を殺滅し得ることを見出した。そして、本発明者らは、得られた知見を基に、大麦の葉、茎及び／又はそれらの加工物を有効成分として含有する、αディフェンシン分泌促進剤及び抗菌剤を創作することに成功した。本発明は、このような知見や成功例に基づいて完成された発明である。
【００１０】
したがって、本発明によれば、大麦の葉、茎及び／又はそれらの加工物を含有する、αディフェンシン分泌促進剤が提供される。
【００１１】
好ましくは、本発明において、前記αディフェンシン分泌促進剤が、消化管用αディフェンシン分泌促進剤である。
【００１２】
好ましくは、本発明において、前記αディフェンシン分泌促進剤が、小腸用αディフェンシン分泌促進剤である。
【００１３】
本発明の別の側面によれば、大麦の葉、茎及び／又はそれらの加工物を含有する、抗菌剤が提供される。
【００１４】
好ましくは、本発明において、前記抗菌剤が、消化管に局在する細菌に対する抗菌剤である。
【００１５】
好ましくは、本発明において、前記抗菌剤が、サルモネラ属細菌に対する抗菌剤である。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、大麦の茎葉やその粉末などの加工物を含有することにより、生体内でのαディフェンシンの分泌を促進することや生体内の病原性細菌を殺滅することができる、αディフェンシン分泌促進剤及び抗菌剤が得られる。また、有効成分である大麦の茎葉やその加工物を含有することを特徴とする本発明のαディフェンシン分泌促進剤及び抗菌剤は安全性の高いものである。
【００１７】
本発明のαディフェンシン分泌促進剤及び抗菌剤は、αディフェンシン分泌促進作用及び抗菌作用によって、消化管免疫不全、消化管内の有害微生物代謝産物や有害酵素の発生などの消化管組織の異常に関連する種々の疾病及び異常を改善、緩和、回復、治療及び予防することが期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は、実施例１に記載のコントロール群、セルロース群及び大麦若葉群の糞中αディフェンシン量の測定結果を示した図である。数値は平均値を表わす。
【図２】図２は、実施例２に記載のＰＢＳ、大麦若葉末及びｒＣｒｐ４のチフス菌のディフェンシン高感受性株に対する抗菌活性の測定結果を示した図である。数値は平均値を表わす。
【図３】図３は、実施例３に記載のＰＢＳ及び大麦若葉末のαディフェンシン量の測定結果を示した図である。数値は平均値を表わす。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、本発明の詳細について説明する。
［１．αディフェンシン分泌促進剤］
本発明のαディフェンシン分泌促進剤は、αディフェンシン分泌促進作用を有する有効成分として、大麦の葉、大麦の茎、大麦の葉の粉末などの加工物、大麦の茎の粉末などの加工物のいずれか１種又はいずれか２種以上、すなわち大麦の葉、茎及び／又はそれらの加工物を含有することを特徴とする。本明細書では、大麦の葉及び／又は茎を総称して茎葉とよぶ場合がある。本発明のαディフェンシン分泌促進剤は、上記した有効成分を含有すればよく、これらに加えて、例えば、大麦の根などの大麦の他の部位を含有してもよい。
【００２０】
αディフェンシン分泌促進作用は、生体内での内因性αディフェンシンの存在量が多くなるようにする作用を意味し、その機序は特に限定されない。例えば、小腸陰窩のパネト細胞からのαディフェンシン分泌を促進する作用が挙げられる。そこで、本発明のαディフェンシン分泌促進剤は、好ましくは消化管用αディフェンシン分泌促進剤であり、さらに好ましくは小腸用αディフェンシン分泌促進剤である。さらに、生体内でのαディフェンシン分泌に伴う糞中αディフェンシン量を上昇する作用、上昇した糞中αディフェンシン量を維持する作用、及び上昇した糞中αディフェンシン量の低下を抑制する作用もαディフェンシン分泌促進作用に包含される。
【００２１】
大麦（Ｈｏｒｄｅｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ Ｌ．）は中央アジア原産とされ、イネ科に属する一年生又は越年生草本であり、穂形により、二条大麦や六条大麦などに大別される。本発明に用いられる大麦は特に限定されず、上記した品種、野生種、交雑種などのいずれであってもよい。
【００２２】
大麦の茎葉はいずれの収穫時期に収穫されたものであってもよく、特に限定されないが、例えば、成熟期前、すなわち、分けつ開始期から出穂開始前期に収穫されたものであることが好ましい。
【００２３】
大麦の茎葉は、収穫後、直ちに処理されることが好ましい。処理までに時間を要する場合、大麦の茎葉の変質を防ぐために低温貯蔵などの当業者が通常用いる貯蔵手段により貯蔵することが好ましい。
【００２４】
大麦の茎葉の加工物は、収穫した大麦の茎葉を１種以上の加工処理に供して得られるものであれば特に限定されない。大麦の茎葉の加工物としては、例えば、大麦の茎葉の乾燥粉末、大麦の茎葉の粉砕物及びその乾燥粉末（以下、粉砕物の乾燥粉末のことを「粉砕末」ともいう）、大麦の茎葉の細片化物及びその乾燥粉末（以下、細片化物の乾燥粉末のことを「細片化末」ともいう）、大麦の茎葉の搾汁及びその乾燥粉末（以下、搾汁の乾燥粉末のことを「搾汁末」ともいう）、大麦の茎葉のエキス及びその乾燥粉末（以下、エキスの乾燥粉末のことを「エキス末」ともいう）などが挙げられるが、これらに限定されない。ただし、加工、貯蔵、運搬などの容易性や使用形態の汎用性といった観点から、大麦の茎葉の乾燥粉末であることが好ましい。大麦の茎葉の乾燥粉末としては、大麦の茎葉の乾燥粉末、大麦の茎葉の粉砕末、大麦の茎葉の細片化末、大麦の茎葉の搾汁末、大麦の茎葉のエキス末などが挙げられる。なお、本発明において、粉末とは、必要に応じて賦形剤などを添加し顆粒化又は錠剤化したものを含むものとする。
【００２５】
例えば、乾燥処理及び粉砕処理を組み合わせることにより、大麦の茎葉を乾燥粉末化することができる。この際、乾燥処理及び粉砕処理は同時に行ってもよく、又はいずれを先に行ってもよいが、乾燥処理を先に行った後に粉砕処理を行うことが好ましい。大麦の茎葉を乾燥粉末化するに際して、さらに必要に応じて、ブランチング処理、殺菌処理などの処理から選ばれる１種又は２種以上の処理を組み合わせて行ってもよい。また、粉砕処理を行う回数は特に限定されず、粗粉砕処理を行った後に、より細かく粉砕する微粉砕処理を行うなどのように、１回又は２回以上の処理として実施してもよい。
【００２６】
ブランチング処理は大麦の茎葉の緑色を鮮やかに保つための処理であり、ブランチング処理の方法としては、熱水処理や蒸煮処理などが挙げられる。
【００２７】
熱水処理としては、例えば、７０〜１００℃、好ましくは８０〜１００℃の熱水又は水蒸気中で、大麦の茎葉を６０〜２４０秒間、好ましくは９０〜１８０秒間処理する方法などが挙げられる。また、熱水処理に際して、炭酸マグネシウムなどの炭酸塩や炭酸水素ナトリウムなどの炭酸水素塩を用いることが好ましく、炭酸水素の塩を熱水に溶解することにより、大麦の茎葉の緑色をより鮮やかにすることができる。
【００２８】
蒸煮処理としては、常圧又は加圧下において、大麦の茎葉を水蒸気により蒸煮する処理と冷却する処理とを繰り返す間歇的蒸煮処理が好ましい。間歇的蒸煮処理において、水蒸気により蒸煮する処理は、例えば、２０〜４０秒間、好ましくは３０秒間行われる。蒸煮処理後の冷却処理は、直ちに行われることが好ましく、その方法は特に限定されないが、冷水への浸漬、冷蔵、冷風による冷却、温風による気化冷却、温風と冷風とを組み合わせた気化冷却などが用いられる。このうち温風と冷風とを組み合わせた気化冷却が好ましい。このような冷却処理は、大麦の茎葉の品温が、好ましくは６０℃以下、より好ましくは５０℃以下、さらに好ましくは４０℃以下となるように行われる。また、ビタミン、ミネラル、葉緑素などの栄養成分に富んだ大麦の茎葉の粉末を製造するためには、間歇的蒸煮処理を２〜５回繰り返すことが好ましい。
【００２９】
殺菌処理は当業者に通常知られている殺菌処理であれば特に限定されないが、例えば、温度、圧力、電磁波、薬剤などを用いて物理的又は化学的に微生物を殺滅させる処理であるということができる。
【００３０】
乾燥処理及び粉砕処理に追加してブランチング処理を行う場合、ブランチング処理は乾燥処理の前に行われることが好ましい。また、乾燥処理及び粉砕処理に追加して殺菌処理を行う場合、殺菌処理は、乾燥処理の後か、粉砕処理の前又は後に行われることが好ましい。
【００３１】
乾燥処理は特に限定されないが、例えば、大麦の茎葉の水分含量が１０ｗｔ％以下、好ましくは５ｗｔ％以下となるように乾燥する処理が挙げられる。乾燥処理は、例えば、天日で乾燥する方法、乾燥機を用いて熱風乾燥、高圧蒸気乾燥、噴霧乾燥、減圧乾燥、流動乾燥、電磁波乾燥、凍結乾燥などの当業者に公知の任意の方法により行われ得る。加熱による乾燥は、例えば、４０℃〜１４０℃、好ましくは８０〜１３０℃にて加温により大麦の茎葉が変色しない温度及び時間で行われ得る。
【００３２】
粉砕処理は特に限定されないが、例えば、クラッシャー、ミル、ブレンダー、石臼などの粉砕用の機器や器具などを用いて、当業者が通常使用する任意の方法により植物体を粉砕する処理が挙げられる。粉砕された大麦の茎葉は、必要に応じて篩にかけられ、例えば、３０〜２５０メッシュを通過するものを大麦の茎葉の粉末として用いることが好ましい。粒径が２５０メッシュ通過のもの以下とすることで、さらなる加工時に大麦の茎葉の粉末が取り扱いやすくなり、粒径が３０メッシュ通過以上のものとすることで、大麦の茎葉の粉末と他の素材との均一な混合が容易になる。
【００３３】
粉砕処理において、粗粉砕工程では、大麦の茎葉をカッター、スライサー、ダイサーなどの当業者が通常用いる任意の粗粉砕用の機器又は器具を用いて、例えば、大麦の茎葉の長径が約２０ｍｍ以下、好ましくは約０．１〜１０ｍｍとなるように破砕する。微粉砕工程では、クラッシャー、ミル、ブレンダー、石臼などの当業者が通常用いる任意の微粉採用の機器や器具を用いて、９０ｗｔ％以上が２００メッシュ区分を通過するように大麦の茎葉を微粉砕することが好ましい。
【００３４】
具体的な粉砕末の製造方法としては、例えば、大麦の茎葉を切断した後、ブランチング処理を行い、次いで水分含量が１０質量％以下、好ましくは５質量％以下となるように乾燥し、その後粉砕する方法が挙げられる（特開２００４−０００２１０号公報を参照）。この他にも、例えば、大麦の茎葉を切断した後、ブランチング処理を行い、次いで揉捻し、その後、乾燥し、粉砕する方法（特開２００２−０６５２０４号公報、特許第３４２８９５６号公報を参照）；大麦の茎葉を乾燥し、粗粉砕した後、１１０℃以上で加熱し、さらに微粉砕する方法（特開２００３−０３３１５１号公報、特許第３２７７１８１号公報を参照）などが挙げられる。
【００３５】
大麦の茎葉を細片化する方法は特に限定されないが、例えば、スライス、破砕、細断などの当業者が植物体を細片化する際に通常使用する方法を用いることができる。細片化の一例として、スラリー化してもよい。スラリー化は、大麦の茎葉をミキサー、ジューサー、ブレンダー、マスコロイダーなどにかけ、大麦の茎葉をどろどろした粥状（液体と固体との懸濁液）にすることにより行う。このようにスラリー化することにより、茎葉は、細片の８０質量％以上が、好ましくは平均径１ｍｍ以下、より好ましくは０.５ｍｍ以下、さらに好ましくは０.１ｍｍ以下、なおさらに好ましくは０．０５ｍｍ以下となるように細片化され、流動性を有するようになる。
【００３６】
大麦の茎葉の細片化物を乾燥する方法としては、当業者が通常用いる方法により乾燥すればよく、従来公知の方法を用いてもよい。例えば、上記した大麦の茎葉の乾燥処理を実施することができる。
【００３７】
大麦の茎葉を搾汁する方法は特に限定されないが、例えば、大麦の茎葉又はその細片化物を圧搾する方法、大麦の茎葉の細片化物を遠心やろ過する方法などを挙げることができる。具体的な搾汁方法の例としては、ミキサー、ジューサーなどの機械的破砕手段によって搾汁し、必要に応じて、篩別、濾過などの手段によって粗固形分を除去することにより搾汁液を得る方法が挙げられる。より具体的には、特開平０８−２４５４０８号公報、特開平０９−０４７２５２号公報、特開平５−７４７１号公報、特開平４−３４１１５３号公報などに記載の方法が挙げられ、これらの公知の方法を当業者が適宜選択して実施できる。なお、搾汁物は必要に応じて濃縮してもよい。
【００３８】
大麦の茎葉の搾汁物を乾燥粉末化する方法としては、当業者が通常用いる方法により搾汁物を乾燥粉末化すればよく、従来公知の方法を用いてもよい。例えば、搾汁物をそのまま乾燥して粉末化してもよく、搾汁物に適切な結合剤や賦形剤などを添加してから乾燥して粉末化してもよい。また、搾汁物又は搾汁物の乾燥粉末に必要に応じて賦形剤などを添加して、公知の湿式、乾式などの顆粒造粒法によって顆粒に成形して粉末化してもよい。
【００３９】
大麦の茎葉を抽出する方法としては、当業者が通常用いる方法により抽出すればよく、従来公知の方法を用いてもよい。例えば、大麦の茎葉又はその細片化物に、エタノール、水、含水エタノールなどの当業者が通常用いる抽出溶媒を加え、必要に応じて加温して抽出する方法などが挙げられる。なお、抽出物は必要に応じて濃縮してもよい。また、特定成分の濃度を高めるため、当業者が通常用いる方法により抽出物を分画してもよく、当業者が通常用いる方法により特定成分を精製してもよい。また、大麦の茎葉から抽出処理を行った後に残る抽出残渣を乾燥したものを大麦の茎葉の粉末として用いてもよい。
【００４０】
大麦の茎葉の抽出物を乾燥粉末化する方法としては、当業者が通常用いる方法により抽出物を乾燥粉末化すればよく、従来公知の方法を用いてもよい。例えば、抽出物を乾燥して粉末化してもよく、抽出物に適切な結合剤や賦形剤などを添加してから乾燥して粉末化してもよい。また、抽出物又は抽出物の乾燥粉末に必要に応じて賦形剤などを添加して、公知の湿式、乾式などの顆粒造粒法によって顆粒に成形して粉末化してもよい。
【００４１】
大麦の茎葉の加工物のうち、特に、大麦の茎葉の乾燥粉末を用いることが、本発明のαディフェンシン分泌促進剤及び抗菌剤をより一層外観が優れたものとできる点などから好ましい。大麦の茎葉の乾燥粉末の特性は特に限定されないが、例えば、その安息角について、２０°〜８０°が好ましく、３０°〜７０°がより好ましく、４０°〜６０°がさらに好ましく、４５°〜５５°がなおさらに好ましい。なお、安息角の測定方法は、安息角測定器（アズワン、ＡＳＫ−０１）を用いて、サンプル約５０ｇを高度１２ｃｍから半径４．３ｃｍのシャーレ中央に落下させ、次いで山型に堆積したサンプルの高さを測定し、次いでシャーレの半径及び堆積したサンプルの高さから下記式にて安息角を算出できる。
安息角＝ｔａｎ−１（ｂ／ａ）×１８０÷π（式中、ａ＝シャーレ半径、ｂ＝堆積したサンプルの高さを表わす。）
【００４２】
大麦の茎葉が粉砕末である場合、その特性は特に限定されないが、例えば、メディアン径が１６μｍ以上であり、かつ、アスペクト比が２．０以下であり、前記メディアン径が２０μｍ以上であることが好ましい。特定の粒径とアスペクト比との組み合わせを有する大麦の茎葉の粉砕末を利用することにより、嗜好性に優れたものとできる。
【００４３】
また、大麦の茎葉の粉砕末の別の特性として、例えばメディアン径が２０μｍ未満であり、かつ、ロジン・ラムラー式による分布定数ｎが１．６以上であり、前記メディアン径が１６μｍ未満であることが好ましい。特定の粒径とロジン・ラムラー式による分布定数ｎの組み合わせを有する大麦の茎葉の粉砕末を利用することにより、嗜好性に優れたものとできる。
【００４４】
ここで、ロジン・ラムラー式による分布定数ｎは、粒度分布に関するロジン・ラムラー（Ｒｏｓｉｎ−Ｒａｍｍｌｅｒ）式における定数ｎであり、粒度の均一性を表わす値である。
【００４５】
ロジン・ラムラー式は、下記式（１）で表わされる。
Ｒ＝１００ｅｘｐ（−βＤｎ）  （１）  
式中、Ｄは粒径を表し、ＲはＤ（粒径）より大きな粒子の全粒子に対する百分率（％）を表わし、βは粒度特性係数を表わし、ｎは分布定数を表わす。
【００４６】
ここで、β＝１／Ｄｅｎとおくと、上記式（１）は
Ｒ＝１００ｅｘｐ｛−（Ｄ／Ｄｅ）ｎ  ｝  （２）
のように書き換えられる。Ｄｅは粒度特性係数である。
【００４７】
さらに、上記式（２）を書き換えると下記式（３）が得られる。
ｌｏｇ｛ｌｏｇ（１００／Ｒ）｝＝ｎｌｏｇＤ＋Ｃ  （３）
ただし、Ｃ＝ｌｏｇ（ｌｏｇｅ）−ｎｌｏｇＤｅである。
【００４８】
上記式（３）から、ｘ軸にｌｏｇＤ、ｙ軸にｌｏｇ｛ｌｏｇ（１００／Ｒ）｝の目盛をつけたロジン・ラムラー（ＲＲ）線図にそれらの関係をプロットするとほぼ直線となる。その直線の勾配（分布定数ｎ）は粒度の均一性の度合いを表し、分布定数ｎの数値が大きいほど、粒子径範囲は狭く、粒子の大きさが揃っていることから、粒度の均一性に優れていると評価できる。
【００４９】
本発明に用いられる大麦の茎葉の乾燥粉末は、水不溶性食物繊維を含み得る。乾燥粉末に含まれる水不溶性食物繊維は、乾燥質量換算で２０質量％以上、好ましくは３０質量％以上含有することが好ましく、２０〜８０質量％、好ましくは３０〜７０質量％、より好ましくは３５〜６０質量％含有することがより好ましい。
【００５０】
本発明のαディフェンシン分泌促進剤は、上記した大麦の茎葉やその加工物を含有することにより、αディフェンシン分泌促進作用を示し得る。本発明のαディフェンシン分泌促進剤が示すαディフェンシン分泌促進作用は、例えば、後述する実施例に記載の方法により測定される糞中αディフェンシン量を指標とした場合に、試験開始から１週目及び２週目において糞中αディフェンシン量が維持又は増加する程度の作用であり、好ましくは試験開始から１週目において糞中αディフェンシン量がコントロールに対して１５０％以上、より好ましくは２００％以上、さらに好ましくは３００％以上である程度の作用；又は、好ましくは試験開始から２週目において糞中αディフェンシン量がコントロールに対して２００％以上、より好ましくは３００％以上、さらに好ましくは４００％以上である程度の作用である。
【００５１】
本発明のαディフェンシン分泌促進剤は、αディフェンシン分泌促進作用を得ることを目的とした種々の形態で利用され得る。例えば、特別な処理を加えることなく種々の目的に利用されてもよい。例えば、医薬品、医薬部外品などとして、又はこれらに配合して利用される。
【００５２】
本発明のαディフェンシン分泌促進剤の固形分中、大麦の茎葉の含有量は、乾燥質量で、下限値としては、０．１質量％以上が好ましく、０．５質量％以上がより好ましく、１質量％以上がさらに好ましく、１０質量％以上がなおさらに好ましく、２０質量％以上が特に好ましく、上限値としては、９９．９質量％以下が好ましく、９０質量％以下がより好ましく、８０質量％以下がさらに好ましい。大麦の茎葉の含有量が０．１質量％より少ない場合、αディフェンシン分泌促進作用が十分に発揮されない場合がある。
【００５３】
本発明のαディフェンシン分泌促進剤の１日の使用量は特に限定されず、使用態様や使用者の使用内容や腸内菌叢などに応じて適宜設定され得るが、例えば、大麦の茎葉の質量換算で、使用者の体重を基準として、１〜６０００ｍｇ／ｋｇであり、好ましくは１〜４０００ｍｇ／ｋｇであり、より好ましくは１０〜３０００ｍｇ／ｋｇであり、さらに好ましくは１０〜２０００ｍｇ／ｋｇである。本発明のαディフェンシン分泌促進剤の１回の使用量についても同様に特に限定されず、例えば、大麦の茎葉の質量換算で、使用者の体重を基準として、０．５〜３０００ｍｇ／ｋｇであり、好ましくは１〜２０００ｍｇ／ｋｇであり、より好ましくは５〜１０００ｍｇ／ｋｇである。
【００５４】
また、本発明のαディフェンシン分泌促進剤の１回の使用量は、例えば、大麦の茎葉の質量換算で、０．０１〜３０ｇ、好ましくは０．０５〜２０ｇ、より好ましくは０．１〜１０ｇ、さらに好ましくは０．３〜７ｇとすることができる。同様に、本発明のαディフェンシン分泌促進剤の１日の使用量は、例えば、大麦の茎葉の質量換算で、０．０１〜１００ｇ、好ましくは０．０５〜７０ｇ、より好ましくは０．５〜５０ｇ、さらに好ましくは１〜３０ｇとすることができる。
【００５５】
本発明のαディフェンシン分泌促進剤は、αディフェンシン分泌促進作用を得ることを目的とした種々の形態で利用され得る。本発明のαディフェンシン分泌促進剤は、例えば、経口用又は非経口用のαディフェンシン分泌促進剤とすることができる。本発明のαディフェンシン分泌促進剤を非経口用として用いる場合、剤形は特に限定されないが、例えば、皮膚、頭皮、毛髪などに塗布して用いる外用剤や化粧品が挙げられる。本発明のαディフェンシン分泌促進剤を経口用として用いる場合、剤形は特に限定されないが、例えば、医薬品；医薬部外品；一般食品以外の機能性表示が可能な食品（例えば、機能性表示食品、特定保健用食品といった保険機能食品など）が挙げられる。なお、医薬品や医薬部外品と同様に、食品は、法制上、機能性表示が可能である食品と機能性表示が不可である食品とに大別できる。本発明のαディフェンシン分泌促進剤は、機能性表示が可能である食品として用いること、又は機能性表示が可能である食品に配合されることが好ましい。
【００５６】
本発明のαディフェンシン分泌促進剤の形態は特に限定されず、任意の形態とすることができる。経口用のαディフェンシン分泌促進剤の形態としては、例えば、経口的な使用に適した形態、具体的には、粉末状、粒状、顆粒状、錠状、棒状、板状、ブロック状、固形状、丸状、液状、飴状、ペースト状、クリーム状、ハードカプセルやソフトカプセルのようなカプセル状、カプレット状、ゲル状、チュアブル状、シロップ状などの各形態が挙げられる。
【００５７】
本発明のαディフェンシン分泌促進剤の包装形態は特に限定されず、剤形などに応じて適宜選択できるが、例えば、ＰＴＰなどのブリスターパック；ストリップ包装；ヒートシール；アルミパウチ；プラスチックや合成樹脂などを用いるフィルム包装；バイアルなどのガラス容器；アンプルなどのプラスチック容器などが挙げられる。
【００５８】
本発明のαディフェンシン分泌促進剤は、粉末状（粉末、顆粒などの粉の形態）であって、水と混合した混合物を経口的に使用する形態であると、腐敗を防ぎ長期保存に適することから好ましい。また本発明のαディフェンシン分泌促進剤が粉末状やタブレット状などの固体の形態である場合、上述したように、これを水と混合して液状体となし、経口的に使用することができるが、使用者の好みなどに応じて、固体のまま経口的に使用してもよい。
【００５９】
本発明のαディフェンシン分泌促進剤は、大麦の茎葉の粉末のみを含むものであってもよいし、大麦の茎葉の粉末に加えて、その他の成分を含んでもよい。その他の成分としては、例えば、種々の賦形剤、結合剤、滑沢剤、安定剤、希釈剤、増量剤、増粘剤、乳化剤、着色料、香料、添加剤などを挙げることができる。その他の成分の含有量は、本発明のαディフェンシン分泌促進剤の利用形態などに応じて適宜選択することができる。
【００６０】
本発明のαディフェンシン分泌促進剤に配合されるその他の成分は、大麦の茎葉が有する作用と相加的若しくは相乗的に、又は補助的にαディフェンシン分泌促進作用を示す成分であることが好ましい。
【００６１】
本発明のαディフェンシン分泌促進剤の使用対象は特に限定されず、例えば、乳児、幼児、小児、少年、成人などのヒトが挙げられるが、ネコ、イヌ、ウシ、ウマなどの哺乳動物であってもよい。ただし、本発明のαディフェンシン分泌促進剤は、αディフェンシン分泌促進作用を有することにより、αディフェンシンの生理活性により恩恵を受ける使用対象に使用されることが好ましい。具体的には、本発明のαディフェンシン分泌促進剤は、消化管免疫不全、消化管内の有害微生物代謝産物や有害酵素の発生などの消化管組織の異常等の罹患者及びそのリスクがある者に使用することが好ましい。さらにいえば、本発明のαディフェンシン分泌促進剤は、中高年者や運動不足者に使用されることがより好ましい。
【００６２】
本発明を利用した場合における、改善、緩和、回復、治療及び予防とは、当業者に通常知られているとおりの意味で用いられるものであり、例えば、個体における、異常、疾患及び症状の発症の防止及び遅延；異常、疾患及び症状の発症の危険性を低下させること；異常、疾患、症状及び状態の好転；異常、疾患、症状及び状態の悪化の防止や遅延；異常、疾患及び症状の進行の逆転、防止並びに遅延などを包含する。
【００６３】
本発明のαディフェンシン分泌促進剤は、別の態様として、後述する抗菌剤、消化管免疫不全改善剤、小腸免疫賦活剤などとして使用することができ、さらにこれらの剤を製造するために使用することができる。
【００６４】
本発明のαディフェンシン分泌促進剤の使用態様は特に限定されない。例えば、本発明のαディフェンシン分泌促進剤をヒト又は動物に投与して使用する場合の使用は、治療的使用であっても、非治療的使用であってもよい。なお、非治療的使用は、いわゆる医療行為を含まない使用であり、すなわち、ヒトを手術、治療又は診断する方法を含まない使用である。
【００６５】
［２．抗菌剤］
本発明の抗菌剤は、本発明のαディフェンシン分泌促進剤と同様に、抗菌作用を有する有効成分として、大麦の葉、茎及び／又はそれらの加工物を含有することを特徴とする。
【００６６】
本発明において、抗菌作用は、生体内、特に小腸などの消化管内に生息する特定の微生物を選択的に減弱する作用又は該微生物を選択的に殺菌若しくは滅菌（これらを合わせて殺滅とよぶ。）する作用を意味し、その機序は特に限定されない。例えば、腸内におけるサルモネラ属細菌、カンピロバクター属細菌、大腸菌等の病原性細菌の数を減らす作用が挙げられる。そこで、本発明の抗菌剤は、好ましくは小腸などの消化管に局在する細菌に対する抗菌剤であり、より好ましくはサルモネラ属細菌に対する抗菌剤である。
【００６７】
本発明の抗菌剤が示す抗菌作用は、例えば、後述する実施例に記載の方法により測定されるチフス菌のディフェンシン高感受性株の生菌数を指標とした場合に、ＰＢＳ群に対して１／１０、好ましくは１／１００の生菌数になる程度の作用である。
【００６８】
本発明の抗菌剤は、大麦の茎葉の粉末のみを含むものであってもよいし、大麦の茎葉の粉末に加えて、その他の成分を含んでもよい。その他の成分としては、例えば、種々の賦形剤、結合剤、滑沢剤、安定剤、希釈剤、増量剤、増粘剤、乳化剤、着色料、香料、添加剤などを挙げることができる。その他の成分の含有量は、本発明の抗菌剤の利用形態などに応じて適宜選択することができる。
【００６９】
本発明の抗菌剤に配合されるその他の成分は、大麦の茎葉が有する作用と相加的若しくは相乗的に、又は補助的に抗菌作用を示す成分であることが好ましい。そのようなものとして、例えば、乳酸菌などの有用微生物、乳酸菌などの有用微生物を増加又は活性化する物質、その他の抗菌成分などが挙げられる。
【００７０】
本発明の抗菌剤について、抗菌作用を示す態様である限りにおいて、その他の項目については、適宜、対応する［１．αディフェンシン分泌促進剤］の項目を参照できる。
【００７１】
以下、本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではなく、本発明の課題を解決し得る限り、本発明は種々の態様をとることができる。
【実施例】
【００７２】
大麦茎葉がαディフェンシン分泌促進作用及び抗菌活性を示すことを以下のとおりに評価した。
【００７３】
［実施例１．大麦茎葉の粉砕末によるαディフェンシン分泌促進作用］
１．被験物質
実施例として大麦茎葉の粉砕末である大麦若葉末（株式会社東洋新薬製）を用いた。また、食物繊維の種類による吸収性の相違を検証するために、比較例としてセルロースの白色粉末（オリエンタル酵母工業株式会社製）を用いた。
【００７４】
２．被験飼料の調製
以下の表１に示す組成のとおりに、大麦若葉末及びＡＩＮ−７６標準飼料をベースとした無繊維高脂肪食（ＮＦＨＦ）を構成する各成分を、乳棒及び乳鉢を用いて飼料中の各成分が均一となるように混合して調製して、大麦若葉末含有ＮＦＨＦ粉末飼料を得た。また、セルロースを配合することにより、セルロース含有ＮＦＨＦ粉末飼料を得た。さらに、被験物質を添加しないＮＦＨＦ粉末飼料をコントロールとして用いた。なお、大麦若葉末含有ＮＦＨＦ粉末飼料及びセルロース含有ＮＦＨＦ粉末飼料は、総食物繊維量が５ｗｔ％となるように調製した。表１の数値はｗｔ％を示す。
【００７５】
【表１】
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【００７６】
３．被験動物
４週齢の雄性ＩＣＲ系マウス（日本チャールス・リバー株式会社）を５日間以上馴化させた。飼育環境として、照明時間は１２時間とし、馴化開始から６日間については、ケージは木材チップ（ソフトチップ；日本エスエルシー株式会社）を床じきとしたポリカーボネイト製平底ケージ（Ｗ２２０×Ｄ３２０×Ｈ１３５ｍｍ；東洋理工株式会社）を、その後９日間はステンレス製５連ケージ（Ｗ１５０×Ｄ２１０×Ｈ１５０ｍｍ；トキワ株式会社）を用いた。収容個体数は、平底ケージでは１ケージあたり２〜３匹とし、５連ケージでは１区画に１匹とした。なお、５連ケージは、糞便回収用に用いた。
【００７７】
馴化期間において、給餌方法は原則として自由摂取とした。馴化開始から６日間の飼料はＭＦ固形飼料（オリエンタル酵母工業株式会社）、その後９日間は下記表２の普通飼料を用い、飲水は水道水を用いた。
【００７８】
【表２】
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【００７９】
馴化期間終了後に健常な被験動物を体重がほぼ均一となるように群分けし、６週齢にて試験に供した。ただし、試験開始−４〜−１日目に回収した湿糞便重量に各群で差がみられなかった。
【００８０】
４．試験手順
馴化期間終了後に群分けされた６週齢の被験動物について、試験開始日（０日目）より各試験飼料（大麦若葉末含有ＮＦＨＦ粉末飼料、セルロース含有ＮＦＨＦ粉末飼料及びＮＦＨＦ粉末飼料）を１６日間自由摂取させた。飼育環境として、照明時間は１２時間とし、ステンレス製５連ケージを用いた。収容個体数は１区画に１匹とした。給餌器は摂餌量を測定しやすくするため、ローデンカフェ（オリエンタル酵母工業株式会社）を用いた。群構成をまとめたものを表３とした。
【００８１】
【表３】
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【００８２】
試験期間中は体重及び摂餌量を週１回測定した。試験開始−４日目〜−１日目（０週目）、試験開始６日目〜９日目（１週目）及び１３日目〜１６日目（２週目）の連続した３日間の糞便を回収した。回収した糞便は、プラスチックトレイに置き室温で一晩乾燥させ、試験終了まで−３０℃で冷凍保存した。
【００８３】
５．αディフェンシン分泌量の測定
上記「４．試験手順」において回収した糞便を用いて糞中αディフェンシン（ｃｒｙｐｔｄｉｎ−４）量を測定した。試験方法の詳細は、ナカムラらの文献（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４４３（２０１３）１２４−１３１）の「Ｓａｎｄｗｉｃｈ  ＥＬＩＳＡ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ」の項に記載の方法に準じて実施した。なお、回収した糞便は次のとおりに調製した。すなわち、糞便を粉砕機（Ｂｅａｄｓ  Ｃｒｕｓｈｅｒ  μＴ−１２；タイテック社製）で粉末化し、ＰＢＳ（−）を糞便１０ｍｇに対して１００μｌ加えてボルテックスミキサーで懸濁した。得られた懸濁物を、４℃、２０，４００×ｇ、  １０分間で遠心した。遠心して得られた上清を回収し、これをＥＬＩＳＡの測定試料とした。
【００８４】
６．結果
試験開始０週目、１週目及び２週目の糞便を用いて測定した糞中αディフェンシン量の測定結果を図１に示す。
【００８５】
試験開始１週目の糞中αディフェンシン量は、コントロール群に対して、セルロース群及び大麦若葉群において多かった。驚くべきことに、大麦若葉群は、セルロース群に比べて、糞中αディフェンシン量が顕著に多くなることがわかった。
【００８６】
試験開始２週目の糞中αディフェンシン量も同様の傾向にあった。しかし、驚くべきことに、コントロール群及びセルロース群については試験開始１週目から糞中αディフェンシン量が減少したのに対して、大麦若葉群については試験開始１週目よりさらに糞中αディフェンシン量が増加した。この結果は、大麦若葉群については試験開始１週目から２週目にかけて糞中αディフェンシン量が減少することが抑制され、むしろ糞中αディフェンシン量の増加又は維持が誘起されたことを示す。
【００８７】
これらの結果から、大麦若葉末は、食物繊維量が同一であるセルロース粉末に対して、顕著に良好なαディフェンシン分泌促進作用を示し、さらにセルロース粉末では得られない、試験開始２週目までのαディフェンシン分泌減少抑制作用及びαディフェンシン分泌促進維持作用を示すことが明らかになった。
【００８８】
［実施例２．大麦若葉末を添加したパネト細胞分泌物による抗菌活性の測定］
大麦若葉末を添加したパネト細胞分泌物による抗菌活性の測定を行った。
１．被験物質
実施例として大麦茎葉の粉砕末である大麦若葉末（株式会社東洋新薬製）を用いた。
【００８９】
２．試験方法
試験方法の詳細は、特許第５０８８９１１号公報に記載の方法に準じて行った。雄性ＩＣＲ系マウス（日本チャールス・リバー株式会社）を麻酔下で解剖し、小腸の組織を採取した。続いてクリプトを豊富に含む懸濁液（クリプト懸濁液）を調製した。このクリプト懸濁液から生きたパネト細胞をＰＢＳ（−）中に含むパネト細胞群懸濁液を調製した。クリプト１００個に対して、大麦若葉末（終濃度として１００μｇ／ｍＬ）を添加し、３７℃にて３０分間培養した。なお、大麦若葉末を添加しないものをコントロール（ＰＢＳ）とした。培養後に遠心し、上清を回収後、回収した上清に３０％（ｖ／ｖ）となるように酢酸を添加した後、室温で３０分間撹拌を行うことによって酢酸抽出を行い、それぞれ約１．５ｍＬの酢酸抽出液を得た。次に、外液として０.１％（ｖ／ｖ）酢酸水溶液を用いて、メンブレンフィルターにより透析し、それぞれ約１．５ｍＬの内液を回収した。その後、凍結乾燥機（ＦｒｅｅＺｏｎｅ；Ｌａｂｃｏｎｃｏ社）により凍結乾燥し、各サンプルの凍結乾燥物を得た。凍結乾燥物はそれぞれ滅菌蒸留水１ｍＬで溶解して、パネト細胞分泌物水溶液とした。
【００９０】
３．抗菌活性の測定
得られた２つのパネト細胞分泌物水溶液（大麦若葉末、ＰＢＳ）と還元型クリプチン（ｒＣｒｐ４）（終濃度として５μｇ／ｍＬ）をそれぞれ１０μＬずつ、サルモネラ菌（Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｃａ  ｓｅｒｏｖａｒ  Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ  ｐｈｏＰ−）を１×１０６ＣＦＵ含む４０μＬのＴｒｙｐｔｉｃ Ｓｏｙ Ｂｒｏｔｈ（ＴＳＢ）培地に添加し、３７℃にて６０分間培養した。培養後のサルモネラ菌含有液をＴｒｉｐｔｉｃ ｓｏｙ ａｇａｒ（Ｄｉｆｃｏ社）を用いて作成した栄養アガープレート上にそれぞれ塗布して、３７℃にて一晩培養し、次いで生存菌数を測定した。
【００９１】
４．結果
被験試料である大麦若葉末、ＰＢＳ及び還元型クリプチン（ｒＣｒｐ４）の供試菌に対する抗菌活性を測定した結果を図２に示す。
【００９２】
図２に示すとおり、大麦若葉末を添加したパネト細胞分泌物は、供試菌に対して優れた抗菌活性を示すことが確認できた。また、ｒＣｒｐ４を用いた場合の抗菌活性は検出限界以下であった。この結果から、大麦茎葉末は、パネト細胞から抗菌物質の分泌を促進することが明らかとなった。
【００９３】
［実施例３．大麦茎葉の粉砕末によるαディフェンシン分泌促進作用］
実施例２の「２．試験方法」で得られたパネト細胞分泌物水溶液を回収し、αディフェンシン分泌量を測定した。測定方法は、実施例１の「５．αディフェンシン分泌量の測定」に準じて行った。なお、パネト細胞分泌物水溶液はそのままＥＬＩＳＡの測定試料とした。結果を図３に示す。
【００９４】
図３に示すとおり、大麦若葉末は、優れたαディフェンシン分泌促進作用を示すことが確認できた。また、分泌のメカニズムとして、パネト細胞に直接作用することでαディフェンシンの分泌を促進することが示唆された。
【産業上の利用可能性】
【００９５】
本発明のαディフェンシン分泌促進剤及び抗菌剤は、安全性が高く、かつ、優れた生体内の抗菌性αディフェンシン量を高めるような作用を有する天然由来物を含有するものであることから、消化管免疫不全、消化管内の有害微生物代謝産物や有害酵素の発生などの消化管組織の異常に関連する種々の疾病及び異常の改善、緩和、回復、治療及び予防するために利用することが期待でき、これらの疾病や異常を患う者の健康と福祉に貢献できるものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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