(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（２）または（３）で表される、異性体マンノシルアルジトールリピッド。
【化１】
0006508667.tif 000014
【化２】
0006508667.tif 000015
（式（２）、（３）において、Ｒ１とＲ２は同一でも異なっていてもよい炭素数６〜２０の脂肪族アシル基であり、Ｒ３とＲ４は水素またはアセチル基を示す。）
【請求項２】
油脂を２〜１０質量％、炭素数５または６のＬ−アルジトール（ただし、リビトール、キシリトール、アリトールおよびガラクチトールを除く）を１〜１０質量％含有する培地でシュードザイマ・ツクバエンシス（Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ  ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ）に属する微生物を培養することを特徴とする、下記式（１）で示される異性体マンノシルアルジトールリピッドの製造方法。
【化３】
0006508667.tif 000016
（式中、Ｒ１とＲ２は同一でも異なっていてもよい炭素数６〜２０の脂肪族アシル基であり、Ｒ３とＲ４は水素またはアセチル基を示し、ｎは３または４を示す。）
【請求項３】
前記微生物が、シュードザイマ・ツクバエンシス（Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ  ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ）ＮＢＲＣ１９４０株、またはシュードザイマ・ツクバエンシス（Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ  ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ）ＪＣＭ１６９８７株である、請求項２記載の異性体マンノシルアルジトールリピッドの製造方法。
【請求項４】
請求項１記載の異性体マンノシルアルジトールリピッドを含む、界面活性剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、炭素数５または６のＬ−アルジトールを含有する培地で所定の微生物を培養して製造される、新規異性体マンノシルアルジトールリピッド、その製造方法、および界面活性剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
バイオサーファクタントは微生物が生産する天然の界面活性剤であり、生分解性が高く、低毒性で環境に優しく、新規な生理機能も有する。食品工業、化粧品工業、医薬品工業、化学工業、環境分野等で使用すれば、環境調和型の社会を実現する上で有意義である。このようなバイオサーファクタントとして、従来から、脂肪酸がエステル結合されたマンノース誘導体に、アルジトールがβグリコシド結合されたマンノシルアルジトールリピッドが存在する。アルジトールがエリスリトールである化合物は、マンノシルエリスリトールリピッド（以下、ＭＥＬとも称す。）と称されている（特許文献１）。特許文献１では、大豆油やグルコースなどを添加した培地でシュードザイマ・ヒュベイエンシスＫＭ−５９株を培養し、ＭＥＬを得ている。
【０００３】
ＭＥＬの生成経路は、以下のように推定される。例えば、特許文献１に記載されるように、培地にトリグリセライド（ＴＧ）などの油脂を添加してシュードザイマ・ヒュベイエンシスＫＭ−５９株を培養して生産すると、培地に添加されたＴＧがグリセリンと脂肪酸とに分解され、グリセリンが糖新生によってグルコースに変換され、さらにマンノースおよびエリスリトールに変換される。マンノースとエリスリトールとはマンノシルトランスフェラーゼによりマンノシルエリスリトールに結合される。脂肪酸は、β酸化によって最終的にはアセチルＣｏＡに分解されるが、その中間体がマンノースの２位および３位に導入される。同時に、アセチルトランスフェラーゼによってアセチル基がマンノースの４位または６位に導入される。こうして合成されたＭＥＬは、菌体外へ放出される。
【０００４】
マンノシルエリスリトールリピッドは、構成する糖アルコールとしてエリスリトールを含むが、培地にエリスリトールを添加することなく合成される。微生物は、ＴＧを資化して栄養源として生育し、その際に副生されたエリスリトールを利用してマンノシルエリスリトールリピッド（ＭＥＬ）を生産するものと理解される。
【０００５】
ここで、アルジトールは、アルドースのアルデヒド基が還元されてヒドロキシメチル基になった糖アルコールであり、炭素鎖の両端にＣＨ２ＯＨ基を有している。図１６（ａ）にエリスリトールを示し、アルドース由来のアルデヒド基に★を付した。図１６（ｂ）に結合手の向きを含めた構造式を示し、アルドース由来のアルデヒド基の配置を反転した構造を図１６（ｃ）に示す。ＤＬ表記法によれば、エリスリトールはＤＬ同一構造である。ただし、マンノース誘導体と結合するエリスリトールのヒドロキシメチル基が１位の炭素に由来するか、４位の炭素に由来するかによって、得られるマンノシルエリスリトールリピッドの構造は、図１６（ｄ）、（ｅ）に示すように相違する。図１６（ｄ）、（ｅ）において、βグリコシド結合に最も近いアルジトール部の不斉炭素に＊を付記した。前記特許公報１に記載されるシュードザイマ・ヒュベイエンシスＫＭ−５９株は、同図（ｄ）に示される、４−Ｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−ｅｒｙｔｈｒｉｔｏｌを糖骨格とする化合物を生成する。以下、この化合物を４−Ｏ−β−ＭＥＬと称する。
【０００６】
上記した４−Ｏ−β−ＭＥＬに対し、図１６（ｅ）に示すように、１−Ｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−ｅｒｙｔｈｒｉｔｏｌを糖骨格とするＭＥＬを製造する微生物もある（特許文献２）。便宜のため、この化合物を１−Ｏ−β−ＭＥＬと称する。シュードザイマ・ツクバエンシスを、オリーブ油を添加した培養培地で培養したところ、１−Ｏ−β−ＭＥＬが生成されたという。この１−Ｏ−β−ＭＥＬは、４−Ｏ−β−ＭＥＬと比べて水和性が向上し、ベシクル形成能も高く、スキンケア剤などとして有望なバイオ素材となるという。
【０００７】
更に、培地にマンニトール、リビトール、アラビトールなどを添加し、マンノシルマンニトールリピッド、マンノシルリビトールリピッド、マンノシルアラビトールリピッド（以下、それぞれＭＭＬ、ＭＲＬ、ＭＡＬとも称する。）などを製造する方法もある（特許文献３）。マンノシルアルジトールリピッドの機能は、アルジトール骨格の構造に依存すると考えられ、アルジトール部の異なるマンノシルアルジトールリピッドやそれらの製造技術の開発は、新機能開拓および応用分野の拡大に貢献しうるという。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特許第４９７８９０８号公報
【特許文献２】特開２０１１−１８２７４０号公報
【特許文献３】特許第５１４５５４０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
１−Ｏ−β−ＭＥＬが４−Ｏ−β−ＭＥＬよりも親和性に優れることは、アルジトールに由来するアルジトールの立体構造によって機能が相違することを意味する。更に、マンノース誘導体にβグリコシド結合するアルジトールの鎖長が伸長すると、水酸基数が増加するため、得られる化合物の更なる水和性の向上も期待することができる。従って、前記した４−Ｏ−β−ＭＥＬと１−Ｏ−β−ＭＥＬとの関係のように、アルジトール部分の立体構造の相違する異性体マンノシルアルジトールリピッドが製造できれば、更なる新機能開拓および応用分野の拡大に貢献することができる。しかしながら、これら化合物の製造方法は存在せず、効率的な異性体マンノシルアルジトールリピッドの製造方法の開発が望まれる。
【００１０】
本発明は上記事情に鑑みなされたもので、新規マンノシルアルジトールリピッド、その製造方法および界面活性剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者等は、マンノシルアルジトールリピッドを生産しうる微生物について詳細に検討したところ、Ｌ−アルジトールのみを、またはＬ−アルジトールをＤ−アルジトールよりも優位に資化しうる微生物が存在すること、この微生物の培養培地にＬ−アルジトールを添加すると、Ｄ−アルジトール由来の立体異性と異なる新規な異性体マンノシルアルジトールリピッドを製造しうることを見出し、本発明を完成させた。
【００１２】
すなわち本発明は、油脂を２〜１０質量％、炭素数５または６のＬ−アルジトールを１〜１０質量％含有する培地で、シュードザイマ（Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ）属に属する微生物を培養して製造される、下記式（１）で示される異性体マンノシルアルジトールリピッドを提供するものである。
【化１】
0006508667.tif 000002
（式中、Ｒ１とＲ２は同一でも異なっていてもよい炭素数６〜２０の脂肪族アシル基であり、Ｒ３とＲ４は水素またはアセチル基を示し、ｎは３または４を示す。）
【００１３】
また、本発明は、下記式（２）または（３）で表される、前記異性体マンノシルアルジトールリピッドを提供するものである。
【００１４】
【化２】
0006508667.tif 000003
【００１５】
【化３】
0006508667.tif 000004
（式（２）、（３）において、Ｒ１とＲ２は同一でも異なっていてもよい炭素数６〜２０の脂肪族アシル基であり、Ｒ３とＲ４は水素またはアセチル基を示す。）
【００１６】
また、本発明は、油脂を２〜１０質量％、炭素数５または６のＬ−アルジトール（ただし、リビトール、キシリトール、アリトールおよびガラクチトールを除く）を１〜１０質量％含有する培地でシュードザイマ・ツクバエンシス（Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ  ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ）に属する微生物を培養することを特徴とする、上記式（１）で示される異性体マンノシルアルジトールリピッドの製造方法を提供するものである。
【００１９】
更に本発明は、前記微生物が、シュードザイマ・ツクバエンシス（Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ  ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ）ＮＢＲＣ１９４０株、またはシュードザイマ・ツクバエンシス（Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ  ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ）ＪＣＭ１６９８７株である、前記異性体マンノシルアルジトールリピッドの製造方法を提供するものである。
【００２０】
更に本発明は、前記異性体マンノシルアルジトールリピッドを含む、界面活性剤を提供するものである。
【発明の効果】
【００２１】
本発明によれば、従来のマンノシルアルジトールリピッドのアルジトール部分の立体構造と立体異性の関係にある、新規異性体マンノシルアルジトールリピッド、その製造方法および界面活性剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】実施例１で得た培養液のＴＬＣの結果を示す図である。ＪＣＭ１１７５２株、ＮＢＲＣ１９４０株、ＪＣＭ１６９８７株を、オリーブ油含有培地、オリーブ油＋Ｄ−アラビトール含有培地、オリーブ油＋Ｌ−アラビトール含有培地で培養すると、微生物によってＤ−アラビトールとＬ−アラビトールとを識別し、生産物が相違する結果が示されている。
【図２】実施例１で得た培養液のＨＰＬＣの結果を示す図である。ＪＣＭ１１７５２株を、オリーブ油含有培地、オリーブ油＋Ｄ−アラビトール含有培地、オリーブ油＋Ｌ−アラビトール含有培地で培養した際の生成物の相違を示す。
【図３】実施例１で得た培養液のＨＰＬＣの結果を示す図である。ＮＢＲＣ１９４０株、ＪＣＭ１６９８７株を、オリーブ油含有培地、オリーブ油＋Ｄ−アラビトール含有培地、オリーブ油＋Ｌ−アラビトール含有培地で培養した際の生成物の相違を示す。
【図４】実施例１で得たＪＣＭ１６９８７株の培養物に含まれるＭＡＬについて、１３Ｃ−ＮＭＲ、１Ｈ−ＮＭＲで解析した結果を示す図である。なお、比較のため、オリーブ油でＪＣＭ１６９８７株を培養して得た１−Ｏ−β−ＭＥＬの解析結果を併記している。
【図５】実施例１のＪＣＭ１６９８７株の培養物に含まれるＭＡＬについて、含まれる糖を分析したＨＰＬＣの結果を示す図である。糖標品およびＭＥＬの結果を併記している。
【図６】比較例１および実施例２で得たＭＡＬおよびＭＡの糖分析の結果を示す図である。
【図７】比較例１および実施例２で得たＭＡの１３Ｃ−ＮＭＲ、１Ｈ−ＮＭＲ解析値を示す図である。
【図８】比較例１および実施例２で得たＭＡの１Ｈ−ＮＭＲ分析のチャートを示す図である。
【図９】比較例１および実施例２で得たＭＡの１３Ｃ−ＮＭＲ分析のチャートを示す図である。
【図１０】実施例３で得た培養液のＴＬＣの結果を示す図である。培地に添加するオリーブ油量、およびＬ−アラビトール量を変化させた場合の生成物をＴＬＣで検出したものである。
【図１１】実施例４の水侵入法による液晶形成能を評価した結果を示す図である。実施例１のＪＣＭ１６９８７株のオリーブ油培養液から単離した１−Ｏ−β−ＭＥＬ−Ｂ、およびオリーブ油＋Ｌ−アラビトール含有培地で培養して得た異性体ＭＡＬの偏光および位相差顕微鏡の観察像を示す。
【図１２】実施例４の水侵入法による液晶形成能を評価した結果を示す図である。実施例１においてＪＣＭ１１７５２株のオリーブ油培養液から得た４−Ｏ−β−ＭＥＬ−Ａ、およびオリーブ油＋Ｄ−アラビトール含有培地で培養して得た基準ＭＡＬの偏光および位相差顕微鏡の観察像を示す。
【図１３】実施例５の結果を示す図である。実施例１のＪＣＭ１６９８７株のオリーブ油培養液から単離した１−Ｏ−β−ＭＥＬ−Ｂ、およびオリーブ油＋Ｌ−アラビトール含有培地で培養して得た異性体ＭＡＬについて水とのなじみやすさを経時的に評価した。
【図１４】Ｌ−アラビトールの構造と、Ｌ−アラビトールのアルドース由来のＣＨ２ＯＨの炭素原子を１位とした場合に、１位のＣＨ２ＯＨ基、または５位のＣＨ２ＯＨ基とマンノース誘導体とがβグリコシド結合した場合に、立体構造が異なることを説明する図である。
【図１５】Ｄ−アラビトールの構造と、Ｄ−アラビトールのアルドース由来のＣＨ２ＯＨの炭素原子を１位とした場合に、１位のＣＨ２ＯＨ基、または５位のＣＨ２ＯＨ基とマンノース誘導体とがβグリコシド結合した場合に、立体構造が異なることを説明する図である。
【図１６】エリスリトールの構造と、エリスリトールのアルドース由来のＣＨ２ＯＨの炭素原子を１位とした場合に、１位のＣＨ２ＯＨ基、または４位のＣＨ２ＯＨ基とマンノースとがβグリコシド結合した場合に、立体構造が異なることを説明する図である。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明の第一は、油脂を２〜１０質量％、炭素数５または６のＬ−アルジトールを１〜１０質量％含有する培地で、シュードザイマ（Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ）属に属する微生物を培養して製造される、下記式（１）で示される異性体マンノシルアルジトールリピッドである。以下、本発明を詳細に説明する。
【００２４】
【化４】
0006508667.tif 000005
（式中、Ｒ１とＲ２は同一でも異なっていてもよい炭素数６〜２０の脂肪族アシル基であり、Ｒ３とＲ４は水素またはアセチル基を示し、ｎは３または４を示す。）
【００２５】
（１）異性体マンノシルアルジトールリピッド
本発明の異性体マンノシルアルジトールリピッドは、マンノースにアルジトールがβグリコシド結合したマンノシルアルジトールに脂肪酸がエステル結合してなる化合物である。上記式（１）において、アルジトール部の炭素数ｎは３または４である。従って式（１）の化合物は、アルジトール部が、アラビトール、グルシトール、マンニトール、イジトール、タリトールに由来するマンノシルアルジトールリピッドとなる。
【００２６】
本発明において、「異性体マンノシルアルジトールリピッド」とは、基準マンノシルアルジトールリピッドとアルジトール部分の立体構造が異なるマンノシルアルジトールリピッドとし、「基準マンノシルアルジトールリピッド」とは、炭素数５または６のＤ−アルジトールを添加した培地に、シュードザイマ・パラアンタクティカ（Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ  ｐａｒａｎｔａｒｃｔｉｃａ）ＪＣＭ１１７５２株（以下、単にＪＣＭ１１７５２株と称する。）を培養して生産される、マンノシルアルジトールリピッドとする。
【００２７】
アルジトールは、炭素鎖の両端に共にＣＨ２ＯＨ基を有するため、何れのＣＨ２ＯＨ基とマンノシル基とがβ結合するかによって生産されるマンノシルアルジトールリピッドの構造が相違する。Ｄ−アラビトールがマンノース誘導体とβグリコシド結合する態様を図１５を用いて説明する。図１５（ａ）にＤ−アラビトールをＤＬ表示法で示し、アルドース由来のアルデヒド基に★を付した。図１５（ｂ）に結合手の向きを含めた構造式を示し、アルドース由来のアルデヒド基の配置を反転させた構造を図１５（ｃ）に示す。アルドース由来のアルデヒド基の炭素原子を１位とした場合に５位のＣＨ２ＯＨ基とマンノース誘導体とがβグリコシド結合した化合物を図１５（ｄ）に、１位のヒドロキシメチル基とマンノース誘導体とがβグリコシド結合した化合物を図１５（ｅ）に示す。図１５（ｄ）および図１５（ｅ）で示す化合物は、それぞれ糖骨格が５−Ｏ−β−Ｄ−マンノピラノシル−Ｄ−アラビトール、および１−Ｏ−β−Ｄ−マンノピラノシル−Ｄ−アラビトールである。本発明では、アルジトールがアラビトールである場合は、これら２化合物がそれぞれ基準マンノシルアラビトールリピッド（以下、単に基準ＭＡＬと称する。）となり、この基準ＭＡＬのアルジトール部分の構造が鏡像の関係にあるマンノシルアラビトールリピッドを、異性体マンノシルアラビトールリピッド（以下、単に異性体ＭＡＬと称する。）となる。
【００２８】
本発明の異性体マンノシルアルジトールリピッドについて、Ｌ−アラビトールがマンノース誘導体とβグリコシド結合する態様を図１４を用いて説明する。図１４（ａ）にＬ−アラビトールをＤＬ表示法で示し、アルドース由来のアルデヒド基に★を付した。図１４（ｂ）に結合手の向きを含めた構造式を示し、アルドース由来のアルデヒド基の配置を反転した構造を図１４（ｃ）に示す。アルドース由来のアルデヒド基の炭素原子を１位とした場合に５位のヒドロキシメチル基とマンノース誘導体とがβグリコシド結合した化合物を図１４（ｄ）に、１位のヒドロキシメチル基とマンノース誘導体とがβグリコシド結合した化合物を図１４（ｅ）に示す。図１４（ｄ）および図１４（ｅ）で示す化合物は、それぞれ糖骨格が５−Ｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−Ｌ−ａｒａｂｉｎｉｔｏｌ、および１−Ｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−Ｌ−ａｒａｂｉｎｉｔｏｌの化合物であり、本発明の異性体マンノシルアルジトールリピッドである。
【００２９】
本発明の異性体マンノシルアルジトールリピッドとして、好ましくは、下記式（２）、（３）で表される異性体マンノシルアルジトールリピッドである。
【００３０】
【化５】
0006508667.tif 000006
【００３１】
【化６】
0006508667.tif 000007
（式（２）、（３）において、Ｒ１とＲ２は同一でも異なっていてもよい炭素数６〜２０の脂肪族アシル基であり、Ｒ３とＲ４は水素またはアセチル基を示す。）
【００３２】
本発明の異性体マンノシルアルジトールリピッドは、後記する実施例に示すように、親水性に優れ、水溶液中で透明分散でき、界面活性作用に優れる。
【００３３】
（２）異性体マンノシルアルジトールリピッドの製造方法
式（１）で示す異性体マンノシルアルジトールリピッドは、Ｌ−アルジトールを含む培地でシュードザイマ属に属する微生物を培養して生産される。
【００３４】
ＭＥＬは、培地にＴＧを添加してシュードザイマ属に属する微生物で培養すれば、エリスリトールを添加することなくＭＥＬを製造することができる。これは、微生物が培地成分を利用してエリスリトールを合成するからである。しかしながら、炭素数５〜６のアルジトールを新生する必要が少なく、微生物中にこれら炭素数５〜６のアルジトールを新生させることは容易でない。しかしながら、少なくともシュードザイマ属に属する微生物は、Ｌ−アルジトールを前駆体物質として生体内に取り込むことができることが判明し、これにより効率的に異性体マンノシルアルジトールリピッドを生産することができる。なお、「Ｌ−アルジトール」とは、ＤＬ表記法で示した場合にＬ体となる化合物を意味する。アルジトールには、リビトール、キシリトール、アリトール、ガラクチトールなどのＤ体とＬ体とが同一構造の化合物も存在する。本発明で使用する「Ｌ−アルジトール」としては、これら、Ｄ体とＬ体とが同一構造のｍｅｓｏ−アルジトールは含まない。
【００３５】
Ｌ−アルジトールの添加量は、１〜１０質量％であることが好ましく、より好ましくは２〜８質量％、特に好ましくは３〜７質量％である。培養の経過に伴い濃度が低下する場合は、培養の途中で添加して上記濃度を維持してもよい。
【００３６】
本発明では、シュードザイマ属（Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ  ｓｐ．）に属する微生物を好適に使用する。より好ましくは、シュードザイマ・ツクバエンシス（Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ  ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ）に属する微生物である。培地にＤ−アルジトールとＬ−アルジトールとを添加した場合に、Ｌ−アルジトールをＤ−アルジトールより優先的に資化して、式（１）で示す異性体マンノシルアルジトールリピッドを生成することができるからである。特に、シュードザイマ・ツクバエンシス（Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ  ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ）ＮＢＲＣ１９４０株や、シュードザイマ・ツクバエンシス（Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ  ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ）ＪＣＭ１６９８７株が好適である。後記する実施例に示すように、培地にＤ−アルジトールを添加した場合には、これを利用してマンノシルアルジトールリピッドを生産できないか、または極めて少量の生産量に限定されるが、培地にＬ−アルジトールを添加すると、これを利用してＬ−アルジトールを含むマンノシルアルジトールリピッドを生産することができる。また、シュードザイマ・パラアンタクティカ（Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ  ｐａｒａｎｔａｒｃｔｉｃａ）ＪＣＭ１１７５２株であってもよい。後記する実施例に示すように、培地にＤ−アラビトールを添加すれば、図１５(ｄ)に示す基準ＭＡＬを生産するが、培地にＬ−アラビトールを添加すれば、図１４（ｄ）に示す異性体ＭＡＬを生産することができるからである。
【００３７】
上記微生物を使用する培地としては、酵母に対して一般に用いられる培地を使用できる。例えば、ＹＰＤ培地、ＹＰＤＡ培地などを挙げることができる。
【００３８】
培地には、油脂を添加してもよい。油脂は、式（１）で示す化合物のＲ１やＲ２で示される脂肪族アシル基となりうるものであれば、植物性油脂および動物性油脂のいずれでもよい。植物性油脂としては、大豆油、菜種油、コーン油、ピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ごま油、オリーブ油、パーム油等があり、オリーブ油が好ましい。動物性油脂としては、牛脂、豚脂、魚脂等がある。なお本発明において「油脂」には、ＴＧ、脂肪族炭化水素、脂肪酸を含むものとする。ＴＧとしては、グリセリンに炭素数６〜２０の直鎖脂肪酸エステルが結合したものが好ましい。また、脂肪族炭化水素としては、炭素数６〜２０の脂肪族炭化水素が好ましく、１〜３の不飽和結合を含むものであってもよい。このような脂肪族炭化水素として、ドデカン、ヘキサデカン、オクタデカン等の飽和炭化水素、１−ぺンタデセン、１−ヘプタデセン等の不飽和炭化水素がある。さらに、脂肪酸としては、炭素数は６〜２０の脂肪酸が好ましく、１〜３の不飽和結合を含むものであってよい。例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸等の飽和脂肪酸、あるいはミリストレイン酸、パルミトレイン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸等の不飽和脂肪酸がある。
【００３９】
上記した油脂は炭素源として使用される。培地への添加量は、培地の２〜１０質量％であり、好ましくは３〜８質量％である。培養の経過に伴い濃度が低下する場合は、培養の途中で添加して上記濃度を維持してもよい。
【００４０】
培地には、酵母エキスを添加してもよい。添加濃度は、０．０１〜０．５質量％であり、好ましくは０．１〜０．３質量％である。
【００４１】
培地には、通常の酵母の培養において栄養源なる炭素源、たとえば、グルコース、マンノース、グリセロール、マンニトール等の単糖、ショ糖、麦芽糖、乳糖等のオリゴ糖、デンプン等の炭水化物、酢酸、プロピオン酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸等の有機酸を添加してもよい。
【００４２】
培地には、当該技術分野で通常用いられる無機塩類、窒素源や必要な栄養源等を添加することができる。無機塩類としては、リン酸第一カリウム、リン酸第二カリワム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸鋼、炭酸カルシウム等がある。窒素源や栄養源としては、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等の無機酸や有機酸のアンモニウム塩、ペプトン、麦芽エキス、肉エキス、コーンスチープリカー等の含窒素化合物がある。
【００４３】
培養温度は、使用する微生物によって適宜選択しうるが、一般には２０〜３６℃、好ましくは２２〜３４℃である。培養日数は、式（１）で示す化合物の生産量に応じて適宜設定すればよいが、一般には３〜２０日間である。なお、培養方法は、振盪培養や、通気撹拌培養等の一般的な微生物の培養方法を適用することができる。本発明においては、好気条件で培養することが好ましい。従って、ジャー・ファーメンターを用いる場合には、空気を通気しながら撹拌するか振盪培養を行えばよい。
【００４４】
収率を高めるには、増殖能の高い微生物を使用する。予め前培養によって菌体を活性化させ、本培養の培地に接種して培養することが好ましい。具体的には、種培養、本培養、化合物（１）の生産用培養の順にスケールアップさせる。
【００４５】
種培養としては、グルコース５〜４０ｇ／Ｌ、好ましくは２０ｇ／Ｌ、酵母エキス０．５〜２ｇ／Ｌ、好ましくは１ｇ／Ｌ、硝酸ナトリウム１〜５ｇ／Ｌ、好ましくは３ｇ／Ｌ、リン酸２水素カリウム０．１〜１ｇ／Ｌ、好ましくは０．３ｇ／Ｌ、及び硫酸マグネシウム０．１〜１ｇ／Ｌ、好ましくは０．３ｇ／Ｌの組成の液体培地２ｍＬが入った試験管に、保存菌株を１白金耳接種し、２０〜３６℃で１〜３日振とう培養を行う方法がある。
【００４６】
本培養としては、２０〜３００ｇ／Ｌ、好ましくは２０〜１００ｇ／Ｌ、より好ましくは４０〜１００ｇ／Ｌの植物油脂等の油脂、４０〜２００ｇ／Ｌ、好ましくは８０〜１６０ｇ／ＬのＬ−アルジトールを加えた以外は種培養と同じ組成の液体培地３０ｍＬの入った坂口フラスコに、上記の種培養を行った培養液を接種して、２０〜３６℃、好ましくは２５℃で１〜７日間振とう培養を行う方法がある。
【００４７】
生産培養としては、上記本培養と同じ組成の液体培地０．５Ｌが入ったジャー・ファーメンターに上記本培養を行った培養液を接種して、２０〜３６℃、好ましくは２２〜３４℃で１〜２Ｌ／分の通気速度と６００〜１０００ｒｐｍの撹拌速度で３〜２０日間培養する方法がある。なお、微生物菌株の培地への使用量は、菌体を接種する場合は、培地１Ｌあたり１０〜２００ｍＬ、好ましくは５０〜１００ｍＬの種培養液あるいは本培養液となる。
【００４８】
なお、微生物は固定化して使用してもよい。固定化法としては、従来公知の担体結合法、架橋化法、包括法などの方法を例示することができる。担体結合法では、担体に微生物を固定化させるが、固定化は物理的吸着、イオン結合、共有結合のいずれであってもよい。担体としては多糖（アセチルセノレロース、アガロース）、無機物質（多孔質ガラス、金属酸化物）、合成高分子（ポリアクリルアミド、ポリスチレン）等を用いることができる。架橋化法では、グルタルアルデヒド等の二官能性試薬を用いて微生物同士を架橋、結合させることによって固定化することができる。また、包括法では、多糖（アルギン酸、カラギーナン）、ポリアクリルアミド、コラーゲン、ポリウレタン等の高分子ゲルの格子や半透膜カプセルに微生物を包み込むことによって固定化することができる。
【００４９】
培養の終了は、目的化合物が所定量生産された時点である。培養液の組成を経時的にガスクロマトグラフィーや高速液体クロマトグラフー、薄層クロマトグラフィーなどで測定し、終了時を決定する。式（１）で示される化合物は培養液中に蓄積されるため、培養終了後に培養液から目的物を抽出すればよい。抽出は、酢酸エチル等の有機溶媒を用いて行うことができる。例えば、培養液１Ｌあたり０．５〜１．５Ｌ程度の酢酸エチルなどの有機溶媒を用いて１〜数回抽出し、有機溶媒層から溶媒を留去する。抽出物を更に、高速液体クロマトグラフーや薄層クロマトグラフィー、その他の方法で精製してもよい。
【００５０】
前記特許文献３の実施例３には、培地にＤ−アラビトールを添加し、ＪＣＭ１１７５２株で培養してマンノシルアラビトールリピッドを製造する方法が記載されている。しかしながら、Ｌ−アルジトールを添加した例は記載されておらず、培地に添加した炭素数５または６のＬ−アルジトールを材料として利用し、異性体マンノシルアルジトールリピッドを生産することは従来全く知られていなかった。しかしながら、本発明によれば、培地に添加したＬ−アルジトールが栄養源として使用されるか否かを問わず、実質的にマンノシルアルジトールリピッドの原料の一部として利用され、対応するマンノシルアルジトールリピッドを生産される。しかも、得られたマンノシルアルジトールリピッドは、親水性および水溶液中での澄明性に優れる。
【００５１】
（３）構造決定
得られた化合物は、例えば薄層クロマトグラフィーを実施し、アンスロン硫酸などの糖検出試薬にて呈色して糖含有化合物であることを確認し、当該化合物について、１３Ｃ−ＮＭＲと１Ｈ−ＮＭＲ解析とを行い、得られたスペクトルと、たとえば下記式（４）で示される構造既知の１−Ｏ−β−ＭＥＬのスペクトルとを比較し、立体構造を決定することができる。
【００５２】
【化７】
0006508667.tif 000008
（式（４）において、Ｒ１とＲ２は同一でも異なっていてもよい炭素数６〜２０の脂肪族アシル基であり、Ｒ３とＲ４は水素またはアセチル基を示す。）
【００５３】
また、得られた化合物の脂質成分を３Ｍ塩酸中、８０℃で分解した後に、水溶性成分を高速液体クロマトグラフィーで分離し、薄層クロマトグラフィーなどで糖含有化合物であることを確認し、当該化合物について１３Ｃ−ＮＭＲと１Ｈ−ＮＭＲ解析とを行い、得られたスペクトルと、下記式（５）で示すマンノシルエリスリトールのスペクトルと比較してもよい。これにより、アルジトール部に由来する立体構造を決定することができる。
【００５４】
【化８】
0006508667.tif 000009
【００５５】
または、予め構造の決定された基準マンノシルアルジトールリピッドや、当該化合物を加水分解して脂肪酸やアセチル基を除去したマンノシルアルジトールを得て、それぞれ１３Ｃ−ＮＭＲと１Ｈ−ＮＭＲ解析とを行い、両者を比較して異性体マンノシルアルジトールリピッドの構造を決定してもよい。
【００５６】
（３）異性体マンノシルアルジトールリピッドの用途
臨界ミセル濃度を超えて界面活性剤を溶解させるとミセルを形成し、更に界面活性剤の濃度を上昇させると棒状ミセルなどのヘキサゴナル液晶、両連続キュービック液晶、ラメラ液晶を形成することが知られている。本発明の異性体マンノシルアルジトールリピッドについて、水侵入法によって位相差像および偏光像を観察して液晶形成を評価したところ、低濃度側から高濃度側に向かってミエリン像とそれに隣接するラメラ相とが観察された。ラメラ相の厚さはミエリン像の２〜５倍であった。なお、ミエリン像は一般に、両親媒性分子の二分子層の間に媒質層が侵入して膨潤し、例えば、前記二分子層の２本鎖が互いに捻れあう形態や、１本鎖がループ状やコイル状等に巻いた形態など様々な形態を呈する。異性体ＭＡＬは、ラメラ相の水相側表面に、無数の両親媒性分子の二分子層からなる１本鎖をループ状に積層するミエリン像であった。厚いラメラ相は、親和性に優れる。よって、界面活性剤として好適に使用することができ、医薬品、化粧品、食品などにおける水系用途に対して適している。
【実施例】
【００５７】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明する。但し、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００５８】
（実施例１）
シュードザイマ・パラアンタクティカ（Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ  ｐａｒａｎｔａｒｃｔｉｃａ）ＪＣＭ１１７５２株、シュードザイマ・ツクバエンシス（Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ  ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ）ＮＢＲＣ１９４０株（以下、単にＮＢＲＣ１９４０株と称する。）、およびシュードザイマ・ツクバエンシス（Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ  ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ）ＪＣＭ１６９８７株（以下、単にＪＣＭ１６９８７株と称する。）を用いて以下の培養を行った。
【００５９】
（１）培養
（ａ）保存培地（麦芽エキス３ｇ／Ｌ、酵母エキス３ｇ／Ｌ、ペプトン５ｇ／Ｌグルコース１０ｇ／Ｌ、寒天３０ｇ／Ｌ）で保存したＪＣＭ１１７５２株、ＮＢＲＣ１９４０株、およびＪＣＭ１６９８７株とを、グルコース２０ｇ／Ｌ、酵母エキス１ｇ／Ｌ、硝酸ナトリウム３ｇ／Ｌ、リン酸２水素カリウム０．３ｇ／Ｌ、及び硫酸マグネシウム０．３ｇ／Ｌの組成の液体培地２ｍＬが入った試験管にそれぞれ１白金耳接種し、２５℃で１日間振とう培養を行った。
【００６０】
（ｂ）得られた菌体培養液を、オリーブ油１．５ｇと、酵母エキス１ｇ／Ｌ、硝酸ナトリウム３ｇ／Ｌ、リン酸２水素カリウム０．３ｇ／Ｌ、及び硫酸マグネシウム０．３ｇ／Ｌの組成の液体培地３０ｍＬ（オリーブ油含有培地）の入った坂口フラスコ、前記オリーブ油含有培地に更に、Ｌ−アラビトール３ｇが添加された液体培地３０ｍＬ（オリーブ油＋Ｌ−アラビトール含有培地）の入った坂口フラスコ、および前記オリーブ油含有培地にＤ−アラビトール３ｇが添加された液体培地３０ｍＬ（オリーブ油＋Ｄ−アラビトール含有培地）の入った坂口フラスコに接種して、２５℃で７日間培養を行った。
【００６１】
（２）薄層クロマトグラフィー分析
上記（１）の培養液を採取し、ＴＬＣにて糖含有化合物の存在を確認した。結果を図１に示す。なお、図中、両端のＭＥＬスタンダードは、下記式（６）に示す４−Ｏ−β−ＭＥＬの標品であり、ＭＥＬ−Ａは、式中、Ｒ１、Ｒ２＝炭素原子数１〜１４の脂肪酸残基、Ｒ３、Ｒ４＝アセチル基であり、ＭＥＬ−Ｂは、式中Ｒ１、Ｒ２＝炭素原子数１〜１４の脂肪酸残基、Ｒ３＝水素原子、Ｒ４＝アセチル基であり、ＭＥＬ−Ｃは、式中、Ｒ１、Ｒ２＝炭素原子数１〜１４の脂肪酸残基、Ｒ３＝アセチル基、Ｒ４＝水素原子で表される化合物を示す。
【００６２】
【化９】
0006508667.tif 000010
【００６３】
図１に示すように、ＪＣＭ１１７５２株、ＮＢＲＣ１９４０株、およびＪＣＭ１６９８７株のいずれもオリーブ油含有培地を使用してＭＥＬを生産した。ＮＢＲＣ１９４０株およびＪＣＭ１６９８７株は、オリーブ油含有培地およびオリーブ油＋Ｌ−アラビトール含有培地の場合は、ＭＥＬ−Ｂを生成したが、オリーブ油＋Ｄ−アラビトール含有培地の場合は、ＭＥＬ−ＡもＭＥＬ−Ｂも生成しなかった。なお、ＪＣＭ１１７５２株はオリーブ油＋Ｌ−アラビトール含有培地の場合はＭＥＬ−Ｂを、オリーブ油＋Ｄ−アラビトール含有培地の場合は、ＭＥＬ−ＡとＭＥＬ−Ｂとを生成した。更に、オリーブ油＋Ｌ−アラビトール含有培地を用いてＮＢＲＣ１９４０株およびＪＣＭ１６９８７株を培養した場合は、ＭＥＬ−Ｂの下方に、マンノシルアラビトールリピッド（ＭＡＬ）と推定される糖含有化合物のスポットが検出された。
【００６４】
（３）高速液体クロマトグラフィー分析
上記（１）で得た培養液を採取し、酢酸エチルで抽出し、酢酸エチル可溶分に含まれる成分を高速液体クロマトグラフィーにて分離した。結果を図２および図３に示す。オリーブ油含有培地を使用した場合に、ＪＣＭ１１７５２株はＭＥＬ−Ａを、ＮＢＲＣ１９４０株およびＪＣＭ１６９８７株はＭＥＬ−Ｂを主生成物とする点、オリーブ油＋Ｌ−アラビトール含有培地の場合、ＮＢＲＣ１９４０株およびＪＣＭ１６９８７株のいずれもＭＥＬ−ＢおよびＭＡＬを生成する点、オリーブ油＋Ｄ−アラビトール含有培地を使用してＮＢＲＣ１９４０株、ＮＢＲＣ１９４０株を培養した場合は、どちらもＭＡＬを産生しない点は、図１の薄層クロマトグラフィーの結果と同じであった。なお、ＨＰＬＣ分析によると、オリーブ油＋Ｌ−アラビトール含有培地を用いてＪＣＭ１１７５２株、ＮＢＲＣ１９４０株、およびＪＣＭ１６９８７株を培養した培養液には、ＭＥＬ−Ｂの後方に、ＭＡＬと推定されるピークが検出された。
【００６５】
液体培地（３０ｍＬ）にはオリーブ油１．５ｇとＬ−アラビトール３ｇとが含まれている。ＮＢＲＣ１９４０株およびＪＣＭ１６９８７株のＨＰＬＣの結果に基づき、ＭＥＬ−Ｂの検量線を用いてＭＥＬ−ＢとＭＡＬの生産量を求めたところ、生産量は、それぞれＭＥＬ−Ｂ０．９ｇ、ＭＡＬ０．３ｇと算出された。
【００６６】
（４）１３Ｃ−ＮＭＲと１Ｈ−ＮＭＲ分析
上記（１）のオリーブ油＋Ｌ−アラビトール含有培地を用いた培養液を採取し、酢酸エチルで抽出し、酢酸エチル可溶分に含まれるＭＡＬについて、１３Ｃ−ＮＭＲと１Ｈ−ＮＭＲとにより構造解析を行った。ＪＣＭ１６９８７株からの抽出物の分析結果を図４（Ａ）に示す。なお、図４（Ｂ）に、実施例１のＪＣＭ１６９８７株のオリーブ油培養液から単離した下記式（４）に示す１−Ｏ−β−ＭＥＬの分析結果を対照として示す。図４（Ａ）の１３Ｃ−ＮＭＲの結果に示すように、ＪＣＭ１６９８７株由来のＭＡＬは、糖骨格の炭素数が５であり、アルジトール部分はアラビトールに由来する化合物であることが確認された。
【００６７】
【化１０】
0006508667.tif 000011
（式（４）において、Ｒ１とＲ２は同一でも異なっていてもよい炭素数６〜２０の脂肪族アシル基であり、Ｒ３とＲ４は水素またはアセチル基を示す。）
【００６８】
（５）アルジトールの解析
上記（１）のオリーブ油＋Ｌ−アラビトール含有培地を用いた培養液を酢酸エチルで抽出し、酢酸エチル可溶分に含まれるＭＡＬをシリカカラムで精製した。精製画分を３Ｍ塩酸中、８０℃で３時間分解処理後、ヘキサンにて脂溶性成分を抽出除去し、水溶性画分をアンバーライトカラムで中和し、ＨＰＬＣでＭＡＬに由来する糖成分の解析を行った。図５（Ａ）に糖標品（マンノシルエリスリトール（ＭＥ）、マンノース（Ｍａｎｎｎｏｓｅ）、リビトール（Ｒｉｂｉｔｏｌ）、エリスリトール（Ｅｒｙｔｈｒｉｔｏｌ）、Ｌ−アラビトール（Ｌ−Ａｒａｂｉｔｏｌ）含有）の分析結果を、図５（Ｂ）にＪＣＭ１６９８７株由来のＭＡＬを分析した結果を、また、図５（Ｃ）に、ＭＥＬとして、式（４）で示す４−Ｏ−β−ＭＥＬの分析結果を示す。図５（Ｂ）に示すように、ＪＣＭ１６９８７株の培養液抽出物には、マンノースとアラビトールとが含まれていた。なお、前記培養液抽出物にはシリカカラム精製の工程でＭＥＬが混入してくるため、図５（Ｃ）のピークと重複する少量のマンノシルエリスリトールが検出された。
【００６９】
（６）立体構造
ＪＣＭ１６９８７株由来のＭＡＬには、図５からＬ−アラビトールが含まれることが確認され、図４（Ａ）と（Ｂ）とに示す１Ｈ−ＮＭＲの結果から、図１４（ｄ）または図１４（ｅ）に示す異性体ＭＡＬと決定された。
【００７０】
ＮＢＲＣ１９４０株由来のＭＡＬについて、ＪＣＭ１６９８７株に由来するＭＡＬと同様に分析したところ、図１４（ｄ）に示す異性体ＭＡＬであることが確認された。
【００７１】
ＪＣＭ１１７５２株をオリーブ油＋Ｌ−アラビトール含有培地で培養して得たＭＡＬも異性体ＭＡＬと推定される。
【００７２】
（比較例１）
実施例１のオリーブ油＋Ｄ−アラビトール培地でＪＣＭ１１７５２株を培養して得たＭＡＬを分取し、その一部を酸加水分解して脂肪酸およびアセチル基を除去してマンノシルアラビトール（ＭＡ）を得た。このＭＡを高速液体クロマトグラフィー（カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＩＦ、溶離液：アセトニトリル：水＝９５：５、検出方法：示差屈折）でカイラルセパレーションを行い、分析した。これらの結果を図６に示す。図６の結果から、ＪＣＭ１１７５２株にオリーブ油＋Ｄ−アラビトール含有培地を培養して生産されたＭＡＬは、アルジトールとしてＤ−アラビトールを含む構造であることが明らかとなった。なお、オリーブ油＋Ｄ−アラビトール培地でＪＣＭ１１７５２株を培養して得たＭＡＬは、特許文献３から、図１５（ｄ）に示す基準ＭＡＬであることが判明しているが、比較例１においてもＤ−アラビトールを含むこと立証された。
【００７３】
（実施例２）
実施例１のオリーブ油＋Ｌ−アラビトール培地でＪＣＭ１６９８７株を用いた培養物を高速液体クロマトグラフィー分析を行い、異性体ＭＡＬを分取した。異性体ＭＡＬの一部を酸加水分解して脂肪酸およびアセチル基を除去してマンノシルアラビトール（ＭＡ）を得た。比較例１と同様にして、このＭＡを高速液体クロマトグラフィー（カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＩＦ、溶離液：アセトニトリル：水＝９５：５、検出方法：示差屈折）でカイラルセパレーションを行い、分析した。結果を併せて図６に記載する。図６の結果から、オリーブ油＋Ｌ−アラビトール培地でＪＣＭ１６９８７株を用いて生産された異性体ＭＡＬは、アルジトールとしてＬ−アラビトールを含む構造であることが確認された。
【００７４】
比較例１で得た基準ＭＡＬおよび実施例２で得た異性体ＭＡＬの約２５０ｍｇをそれぞれ秤取し、２ｍｇ／ｍＬナトリウムメトキシド／メタノール溶液４ｍＬを添加して一晩撹拌した。反応後、メタノールを除去し、水１ｍＬを加え残渣を分散させた後、酢酸エチル３ｍＬで３回抽出操作を行い、脂質部を除去して、マンノシルアラビトール（ＭＡ）を得た。水相を乾燥後、得られたシロップ状の透明固体についてＮＭＲ測定を行った。化学シフトのまとめを図７に、糖骨格部を拡大した１Ｈ−ＮＭＲおよび１３Ｃ−ＮＭＲのチャートを図８、９にそれぞれ示す。基準ＭＡＬ由来のＭＡ（以下、基準ＭＡとも称する。）に対して異性体ＭＡＬ由来のＭＡ（以下、異性体ＭＡとも称する。）は、アラビトール部の立体配置が異なり、これに対応してピークが異なる位置に出ていることが確認された。具体的には、１Ｈ−ＮＭＲチャート（図８）において、マンノースに近い５位炭素に結合する２つの水素のピーク（Ｈ−５ａ、５ｂ）の幅が大きく異なり、基準ＭＡでは２つが離れているのに対して異性体ＭＡでは２つが近づいていた。これは公知の４−Ｏ−β−ＭＥＬ（式（６））と１−Ｏ−β−ＭＥＬ（式（４））の場合と同様の傾向である。さらに、１３Ｃ−ＮＭＲチャート（図９）においても、アラビトールの４位、５位炭素のピーク位置が大きく異なっていた。以上の結果から、オリーブ油＋Ｌ−アラビトール培地でＪＣＭ１６９８７株を用いて培養した異性体ＭＡＬは、少なくとも図１５（ｄ）に示す基準ＭＡＬのアラビトール部の４位、５位炭素の配位が異なることが確認され、Ｌ−アラビトールを含む結果を総合し、実施例１と同様に、図１４（ｄ）または（ｅ）に示す構造であることが確認された。
【００７５】
（実施例３）
培養液に添加するオリーブ油を１質量％、２質量％、４質量％、８質量％に変化させ、かつＬ−アラビトールの添加量を２質量％、４質量％、８質量％、１０質量％に変化させた培地を使用し、ＪＣＭ１６９８７株を２５℃、７日間、振とう培養した。培養後に培養液から酢酸エチルでマンノシルアルジトールリピッドを抽出し、薄層クロマトグラフィーによりＭＥＬおよびＭＡＬを検出した。結果を図１０に示す。
図１０の結果から、オリーブ油およびアルジトールは、それぞれ培地に４質量％以上を添加した場合に、マンノシルアルジトールリピッドを効率的に生成することが判明した。
【００７６】
（実施例４）
実施例１のＪＣＭ１６９８７株のオリーブ油培養液から単離した１−Ｏ−β−ＭＥＬ−Ｂ、およびオリーブ油＋Ｌ−アラビトール含有培地で培養して得た異性体ＭＡＬについて、水侵入法による液晶形成能の比較を行った。その結果を図１１に示す。なお、比較のため、実施例１においてＪＣＭ１１７５２株のオリーブ油培養液から得た４−Ｏ−β−ＭＥＬ−Ａ、およびオリーブ油＋Ｄ−アラビトール含有培地で培養して得た基準ＭＡＬについて、同様に操作した。結果を図１２に示す。図１１に示すように、異性体ＭＡＬは、１−Ｏ−β−ＭＥＬ−Ｂと比較してラメラ相が厚く、かつ二分子膜による一本鎖がループ状に密集するミエリン像を呈するものであった。このことは、アルジトール部の炭素数がミエリン像およびラメラ相の形成に影響を与えることを意味する。本発明の式（１）で示される化合物は、非常に広い濃度領域でラメラ相を形成する能力を有し、液晶形成能に極めて優れたバイオサーファクタントであることが示された。
【００７７】
更に、図１１と図１２とを比較すると、異性体ＭＡＬは、基準ＭＡＬよりもミエリンを形成するループが長い傾向にあった。ミエリンは、両親媒性分子の二分子層の間に媒質層が侵入して膨潤して種々の形状となるが、多くの水が侵入して膨潤したことを意味し、親水性に優れることが示された。
【００７８】
（実施例５）
実施例１のＪＣＭ１６９８７株のオリーブ油培養液から単離した１−Ｏ−β−ＭＥＬ−Ｂ、およびオリーブ油＋Ｌ−アラビトール含有培地で培養して得た異性体ＭＡＬについて、臨界ミセル濃度およびウィルヘルミー法による表面張力を測定した。結果を表１に示す。また、比較のため、実施例１においてＪＣＭ１１７５２株のオリーブ油＋Ｄ−アラビトール含有培地を使用して得た基準ＭＡＬ、従来の界面活性剤であるショ糖脂肪酸エステル（Ｃ１０）およびドデシル硫酸ナトリウム（Ｃ１２）についても同様に操作した。結果を表１に示す。なお、表面張力の測定に際し、溶液として超純水を用い、溶液をシャーレに入れ１日間静置した後、高機能表面張力計（協和科学株式会社製、ＤＹ−５００）を用いて測定した。
【００７９】
【表１】
0006508667.tif 000012
【００８０】
（実施例６）
実施例４で使用した１−Ｏ−β−ＭＥＬ−Ｂ、異性体ＭＡＬ、４−Ｏ−β−ＭＥＬ−Ａ、および基準ＭＡＬについて、下記方法による濁度評価を行った。
【００８１】
上記各試料を１０ｍｇ／ｍｌとなるように１０％エタノールに懸濁し、室温に３日間静置した。１日目および３日目の外観を図１３に示す。また、３日目のサンプルについて、得られた１０％エタノール懸濁液を水で１０倍希釈し、それぞれの濁度（ＯＤ６６０）を測定した。結果を表２に示す。
【００８２】
【表２】
0006508667.tif 000013
【００８３】
図１３に示すように、１日目の基準ＭＡＬおよび異性体ＭＡＬは、４−Ｏ−β−ＭＥＬおよび１−Ｏ−β−ＭＥＬよりも濁度が低く、アルジトール部の炭素数が増加すると、水とのなじみやすさが増強されることが示された。
また、図１３に示すように、４−Ｏ−β−ＭＥＬと１−Ｏ−β−ＭＥＬとの比較、基準ＭＡＬと異性体ＭＡＬとの比較から、βグリコシド結合に隣接するアルジトール部の炭素の立体構造の相違により親水性に差が生じることが観察された。特に、異性体ＭＡＬは、時間の経過に伴い濁度が低下する傾向が観察された。このような濁度の低下は、より小さなベシクルが形成されたためと推定される。異性体ＭＡＬは、基準ＭＡＬと比較して、より親水性に優れると考えられる。
なお、表１に示す臨界ミセル濃度は、異性体ＭＡＬが１．２×１０−５であり、基準ＭＡＬが１．５×１０−６であるから、異性体ＭＡＬの方が高値であり親水性に優れ、これらの結果は図１３の結果とも符合する。更に、図１１と図１２に示すように、異性体ＭＡＬは、二分子膜による一本鎖がループ状に密集するミエリン像を呈するものであり、ミエリン像の相違が親水性と強く関連することが確認された。本発明の式（１）で示される化合物は、非常に広い濃度領域でラメラ相を形成する能力を有し、澄明性に優れ、従来の化合物を超える特性を有している。
【産業上の利用可能性】
【００８４】
本発明のマンノシルアルジトールリピッドは、界面活性効果や親水性に優れ、医薬、環境その他の産業に使用でき有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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