(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物：
【化１】
0006507157.tif 000109
またはその薬学的に許容される塩であって、ここで、
Ｒ２はインダゾ−５−イル、４−（ピリジン−４−イル）シクロヘキシル、４−（ピリジン−４−イル）フェニル、４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）フェニル、１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル、１Ｈ−ピラゾール−４−イル、ピリジン−４−イル、及び４−（ピリジン−４−イル）−１，３−チアゾール−２−イルから成る群から選択され、
Ｒ4及びＲ5は、Ｈ、ハロ、Ｃ1−Ｃ8アルキル、Ｃ2−Ｃ8アルケニル、Ｃ2−Ｃ8アルキニル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）、−ＮＲ41Ｒ42、−（ＣＨ2）xＮＲ41Ｒ42及び−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキルから成る群から独立して選択され、
Ｒ41及びＲ42は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ8アルキル、Ｃ2−Ｃ8アルケニル、Ｃ2−Ｃ8アルキニル及び−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）から成る群から独立して選択され、
またはＲ41及びＲ42は、一緒になって、ハロ、Ｃ1−Ｃ6アルキル及びＣ1−Ｃ6アルコキシから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されてもよい、最大３個のヘテロ原子を有する、３〜１２員のシクロアルキルまたは複素環を形成してもよく、
ｘは０〜６から選択され、
またはＲ4及びＲ5は、一緒になって、ハロ、Ｃ1−Ｃ6アルキル及びＣ1−Ｃ6アルコキシから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されてもよい、最大３個のヘテロ原子を有する３〜１２員の複素環または芳香族環を形成してもよく、
Ｒ6はそれぞれハロ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ2−Ｃ6アルケニル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）、Ｃ3−Ｃ7シクロアルキル、オキソ、アシル、−Ｓ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）、ＯＨ、ＮＨ2、ＣＮ及びＣ1−Ｃ3ペルフルオロアルキルから成る群から独立して選択され、
ｄは０〜３から選択される、前記化合物。
【請求項２】
式ＩＩＩを有する請求項１に記載の化合物であって、
【化２】
0006507157.tif 000110
Ｒ4及びＲ5は、Ｈ、ハロ、Ｃ1−Ｃ8アルキル、Ｃ2−Ｃ8アルケニル、Ｃ2−Ｃ8アルキニル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）、−ＮＲ41Ｒ42、−（ＣＨ2）xＮＲ41Ｒ42及び−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキルから成る群から独立して選択され、
Ｒ41及びＲ42は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ8アルキル、Ｃ2−Ｃ8アルケニル、Ｃ2−Ｃ8アルキニル、及び−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）から成る群から独立して選択され、
またはＲ41及びＲ42は、一緒になって、ハロ、Ｃ1−Ｃ6アルキル及びＣ1−Ｃ6アルコキシから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されてもよい、最大３個のヘテロ原子を有する３〜１２員のシクロアルキルまたは複素環を形成してもよく、
ｘは０〜６から選択され、
またはＲ4及びＲ5は、一緒になって、ハロ、Ｃ1−Ｃ6アルキル及びＣ1−Ｃ6アルコキシから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されてもよい、最大３個のヘテロ原子を有する３〜１２員の複素環または芳香族環を形成してもよく、
Ｒ6はそれぞれ、ハロ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ2−Ｃ6アルケニル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）、Ｃ3−Ｃ7シクロアルキル、オキソ、アシル、−Ｓ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）、ＯＨ、ＮＨ2、ＣＮ及びＣ1−Ｃ3ペルフルオロアルキルから成る群から独立して選択され、
ｄは０〜３から選択される、前記化合物。
【請求項３】
Ｒ2が以下：
【化３】
0006507157.tif 000111
から選択される、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ4及びＲ5が、一緒になって５員の環を形成する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
薬学的に許容される担体と一緒になった請求項１に記載の化合物を含む、医薬組成物。
【請求項６】
対象における自己免疫障害の治療における使用のための、治療有効量の請求項１に記載の化合物を含む、医薬組成物。
【請求項７】
前記自己免疫障害が、関節リウマチ、（多発性硬化症）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ；ループス）、乾癬、クローン病、アトピー性皮膚炎、湿疹、または移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）である、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記化合物が選択的ＲＯＣＫ２阻害剤である、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項９】
対象における心血管障害の治療における使用のための、治療有効量の請求項１に記載の化合物を含む、医薬組成物。
【請求項１０】
前記心血管障害が、高血圧症、アテローム性動脈硬化、再狭窄、心肥大、高眼圧症、脳虚血、脳血管攣縮、または勃起不全である、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
対象における炎症の治療における使用のための、治療有効量の請求項１に記載の化合物を含む、医薬組成物。
【請求項１２】
前記炎症が、喘息、心血管性炎症、腎性炎症または動脈硬化症である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
対象における中枢神経系障害の治療における使用のための、治療有効量の請求項１に記載の化合物を含む、医薬組成物。
【請求項１４】
前記中枢神経系障害が、神経退化または脊髄損傷である、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記中枢神経系障害が、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、または多発性硬化症である、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
対象における動脈血栓性障害の治療における使用のための、治療有効量の請求項１に記載の化合物を含む、医薬組成物。
【請求項１７】
前記動脈血栓性障害が、血小板凝集、または白血球凝集である、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
対象における線維性障害の治療における使用のための、治療有効量の請求項１に記載の化合物を含む、医薬組成物。
【請求項１９】
前記線維性障害が、肝線維症、肺線維症、または腎線維症である、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
対象における緑内障の治療または眼内圧の制御における使用のための、治療有効量の請求項１に記載の化合物を含む、医薬組成物。
【請求項２１】
前記緑内障が、原発開放隅角緑内障、急性閉塞隅角緑内障、色素性緑内障、先天性緑内障、正常眼圧緑内障、または続発緑内障である、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
対象における腫瘍疾患の治療における使用のための、治療有効量の請求項１に記載の化合物を含む、医薬組成物。
【請求項２３】
前記腫瘍障害が、リンパ腫、癌腫、白血病、肉腫、または芽細胞腫である、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記腫瘍障害が、扁平上皮癌、小細胞肺癌、下垂体癌、食道癌、星状細胞腫、軟部肉腫、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌、膵臓癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、大腸癌、子宮内膜または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、肝癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、脳癌、子宮内膜癌、精巣癌、胆管癌、胆嚢癌、胃癌、メラノーマ、または頭頸部癌である、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
対象におけるメタボリックシンドローム、インスリン抵抗性、高インスリン血症、２型糖尿病、または耐糖能障害の治療における使用のための、治療有効量の請求項１に記載の化合物を含む、医薬組成物。
【請求項２６】
対象における骨粗鬆症の治療または骨形成の促進における使用のための、治療有効量の請求項１に記載の化合物を含む、医薬組成物。
【請求項２７】
対象における血管新生成分を有する眼障害における使用のための、治療有効量の請求項１に記載の化合物及び血管新生阻害薬を含む、医薬組成物。
【請求項２８】
前記眼障害が、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、虹彩血管新生、ブドウ膜炎、血管新生緑内障、または未熟児網膜症（ＲＯＰ）である、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
前記血管新生阻害薬が、ＶＥＧＲアンタゴニストである、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
前記ＶＥＧＲアンタゴニストが、ＶＥＧＦＲ２に結合する抗体である、請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
前記ＶＥＧＦＲ２抗体が、リガンド結合をブロックする、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
対象におけるアテローム性動脈硬化症、リューマチ性関節炎（ＲＡ）、血管腫、血管線維腫、乾癬、角膜移植後拒絶反応、インスリン依存性糖尿病、多発性硬化症、重症筋無力症、クローン病、自己免疫性腎炎、原発性胆汁性肝硬変、急性膵炎、同種移植片拒絶、アレルギー性炎症、接触性皮膚炎、遅延型過敏症、炎症性腸疾患、敗血症性ショック、骨粗鬆症、骨関節炎、神経性炎症、オスラー・ウェバー症候群、再狭窄、真菌症、寄生虫感染症、及びウイルス感染症から選択される血管新生成分を有する障害の治療における使用のための、治療有効量の請求項１に記載の化合物及び血管新生阻害剤を含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＲＯＣＫ１及び／またはＲＯＣＫ２の阻害剤に関する。また、疾患の治療に有用であるＲＯＣＫ１及び／またはＲＯＣＫ２を阻害する方法も提供している。
【０００２】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１３年１０月７日に提出されたＵ．Ｓ．６１／８８７，９３５号の優先権を主張し、参照によりその全体は本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００３】
Ｒｈｏ結合タンパク質キナーゼ（ＲＯＣＫ）は、細胞骨格動態と細胞運動の重要な細胞内制御因子である。Ｒｈｏキナーゼは、リン酸化によって、例えば、ミオシン軽鎖、ミオシン軽鎖ホスファターゼ結合サブユニット及びＬＩＭキナーゼ２を含むいくつかのＲｈｏＡの下流標的を制御する。これらの基質は、アクチンフィラメントの組織化と収縮性を調節する。平滑筋細胞では、Ｒｈｏキナーゼは、カルシウム感作及び平滑筋収縮を媒介している。Ｒｈｏキナーゼの阻害は、筋収縮を誘導する５−ＨＴ及びフェニレフリンをブロックする。Ｒｈｏキナーゼは、非平滑筋細胞に導入されると、ストレスファイバーの形成を誘導し、ＲｈｏＡによって媒介される細胞形質転換に必要とされる。Ｒｈｏキナーゼは、これに限定されないが、細胞接着、細胞運動及び遊走、増殖調節、細胞収縮、及び細胞質分裂といった様々な細胞プロセスに関与している。Ｒｈｏキナーゼはまた、Ｎａ／Ｈ交換輸送系の活性化、ストレスファイバー形成、アデュシン活性化、ならびに血管収縮、気管支平滑筋の収縮、血管平滑筋及び内皮細胞の増殖、血小板凝集等の生理学的プロセスにも関与している。
【０００４】
動物モデルにおけるＲｈｏキナーゼ活性の阻害は、ヒト疾患の治療についてＲｈｏキナーゼ阻害のいくつかの利点を実証している。これらには、高血圧、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、心肥大、高眼圧症、脳虚血、脳血管攣縮、陰茎勃起障害、神経変性及び脊髄損傷等の中枢神経系障害といった心血管疾患のモデル、ならびに細胞の異常増殖等が含まれている。Ｒｈｏキナーゼ活性の阻害によって、腫瘍細胞の増殖及び転移、血管新生、血小板凝集及び白血球凝集等の動脈血栓障害、喘息、眼内圧の調節、ならびに骨吸収が阻害されることが示されている。患者に対するＲｈｏキナーゼ活性の阻害は、脳血管攣縮及びくも膜下出血発生後の虚血、眼内圧の低下、線維柱帯網組織の弛緩による眼房水の流出の増加を制御し、視神経への血流の改善、ならびに健康な神経節細胞の保護といった利点を有する。
【０００５】
哺乳動物では、Ｒｈｏキナーゼは２つのアイソフォーム、ＲＯＣＫ１（ＲＯＣＫβ；ｐ１６０−ＲＯＣＫ）及びＲＯＣＫ２（ＲＯＣＫα）から構成される。ＲＯＣＫ１及びＲＯＣＫ２は、特定の組織で差次的に発現され、制御されている。例えば、ＲＯＣＫ１は比較的高いレベルで偏在性に発現し、ＲＯＣＫ２は心臓、脳及び骨格筋で優先的に発現する。そのアイソフォームはまた、いくつかの組織で、発育段階の特定の様式で発現する。ＲＯＣＫ１は、アポトーシスの最中のカスパーゼ−３による切断のための基質であるが、ＲＯＣＫ２はそうではない。平滑筋特異的塩基性カルポニンは、ＲＯＣＫ２によってのみリン酸化される。
【０００６】
関係する細胞プロセスと疾患の範囲を考慮すると、１つのＲｈｏキナーゼを選択的に阻害する、またはＲＯＣＫ１及びＲＯＣＫ２を阻害する化合物が望まれる。
【発明の概要】
【０００７】
本発明は、式Ｉを有する化合物
【０００８】
【化１】
0006507157.tif 000002
【０００９】
またはその薬学的に許容可能な塩に関するものであり、
Ｒ1は、ＨまたはＣ1−Ｃ6アルキルから成る群から選択され、
Ｒ2は、アリール、ヘテロアリール、Ｃ3−Ｃ7シクロアルキル、最大３個のヘテロ原子を含む３〜１２員の複素環から成る群から選択され、それぞれハロ及びＣ1−Ｃ6アルキルから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されてもよく、
Ｘは、ＮまたはＣＲ3から選択され、
Ｙは、ＮまたはＣＲ3から選択され、
Ｚは、ＮまたはＣＲ4から選択され、
Ｗは、ＣＲ5から選択され、
ここで、Ｘ、Ｙ及びＺは、独立して選択され、その少なくとも１つがＮであり、
ここでＲ3はそれぞれ、Ｈ、Ｃ1−Ｃ8アルキル、Ｃ2−Ｃ8アルケニル、Ｃ2−Ｃ8アルキニル、−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）、−ＮＲ31Ｒ32、及び−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）から成る群から独立して選択され、
Ｒ31及びＲ32は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ8アルキル、Ｃ2−Ｃ8アルケニル、Ｃ2−Ｃ8アルキニル、及び−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）から成る群から独立して選択され、
Ｒ4及びＲ5は、Ｈ、ハロ、Ｃ1−Ｃ8アルキル、Ｃ2−Ｃ8アルケニル、Ｃ2−Ｃ8アルキニル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）、−ＮＲ41Ｒ42、−（ＣＨ2）xＮＲ41Ｒ42、及び―Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）から成る群から独立して選択され、
Ｒ41及びＲ42は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ8アルキル、Ｃ2−Ｃ8アルケニル、Ｃ2−Ｃ8アルキニル、及び−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）から成る群から独立して選択され、
またはＲ41及びＲ42は一緒になって、３〜１２員のシクロアルキルまたはハロ、Ｃ1−Ｃ6アルキル及びＣ1−Ｃ6アルコキシから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されてもよい最大３個のヘテロ原子を有する複素環を形成してもよく、
ｘは０〜６から選択され、
またはＲ4及びＲ5は一緒になって、３〜１２員の複素環またはハロ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、及びＣ1−Ｃ6アルコキシから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されてもよい最大３個のヘテロ原子を有する芳香族環を形成してもよく、
ａは０〜２から選択され、
ｂは０〜２から選択され、
ここで、ａまたはｂは独立して選択され、その１つは少なくとも１である。
Ａは、３〜１２員の複素環またはハロ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ2−Ｃ6アルケニル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）、Ｃ3−Ｃ7シクロアルキル、オキソ、アシル、−Ｓ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）、ＯＨ、ＮＨ2、ＣＮ、及びＣ1−Ｃ3ペルフルオロアルキルから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されてもよい最大３個のヘテロ原子を有する芳香族環である。
【００１０】
本発明は、本発明の化合物及び薬学的に許容される担体及び／または希釈剤を含む医薬組成物を含む。
【００１１】
本発明は、本発明の実質的に純粋な化合物及び薬学的に許容される塩、立体異性体、またはその水和物、ならびに薬学的に許容される賦形剤及び／または希釈剤を含む組成物を含む。
【００１２】
本発明は、哺乳動物におけるＲｈｏキナーゼを阻害する方法を提供している。本発明は、治療有効量の式Ｉの化合物を治療が必要な患者に投与することを含む、疾患を患っている患者を治療する方法を提供している。このような実施形態では、式Ｉの化合物はＲＯＣＫ２を阻害する。このような実施形態では、式Ｉの化合物は、ＲＯＣＫ２を選択的に阻害する。本発明に従って治療される疾患及び病態として、これに限定されないが、高血圧、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、心臓肥大、高眼圧症、脳虚血、脳血管攣縮、陰茎勃起障害等の心血管疾患、神経変性及び脊髄損傷等の中枢神経系障害、血小板凝集及び白血球凝集等の動脈血栓障害、喘息、眼内圧の調節、ならびに骨吸収が挙げられる。細胞の異常増殖では、Ｒｈｏキナーゼの阻害によって、腫瘍細胞の増殖及び転移、及び血管形成が阻害される。
【００１３】
本発明は、対象の自己免疫障害を治療する方法を提供し、治療有効量の式Ｉの化合物を当該対象に投与することを含む。自己免疫障害として、これに限定されないが、関節リウマチ、（多発性硬化症）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ、ループス）、乾癬、クローン病、アトピー性皮膚炎、湿疹、または移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）が挙げられる。
【００１４】
本発明は、対象の心血管障害を治療する方法を提供し、治療有効量の式Ｉの化合物を当該対象に投与することを含む。心血管障害として、これに限定されないが、高血圧、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、心臓肥大、高眼圧症、脳虚血、脳血管攣縮、または勃起不全が挙げられる。
【００１５】
本発明は、対象の炎症を治療する方法を提供し、治療有効量の式Ｉの化合物を当該対象に投与することを含む。炎症として、これに限定されないが、喘息、心臓血管の炎症、腎臓の炎症または動脈硬化が挙げられる。
【００１６】
本発明は、対象の中枢神経系障害を治療する方法を提供し、治療有効量の式Ｉの化合物を当該対象に投与することを含む。中枢神経系障害として、これに限定されないが、神経変性または脊髄損傷ならびにハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、または多発性硬化症が挙げられる。
【００１７】
本発明は、対象の動脈血栓性障害を治療する方法を提供し、治療有効量の式Ｉの化合物を当該対象に投与することを含む。動脈血栓性障害の例として、これに限定されないが、血小板凝集、または白血球凝集が挙げられる。
【００１８】
本発明は、対象の線維性障害を治療する方法を提供し、治療有効量の式Ｉの化合物を当該対象に投与することを含む。線維性障害の例として、これに限定されないが、肝線維症、肺線維症、または腎線維症が挙げられる。
【００１９】
本発明は、上皮の安定性を維持する方法を提供し、治療有効量の式Ｉの化合物を当該対象に投与することを含む。
【００２０】
本発明は、対象の緑内障を治療するまたは眼内圧を調節する方法を提供し、治療有効量の式Ｉの化合物を当該対象に投与することを含む。緑内障の例として、これに限定されないが、原発性開放隅角緑内障、急性閉塞隅角緑内障、色素性緑内障、血管新生緑内障、先天性緑内障、正常眼圧緑内障、または続発性緑内障が挙げられる。
【００２１】
本発明は、対象の腫瘍性疾患を治療する方法を提供し、治療有効量の式Ｉの化合物を当該対象に投与することを含む。腫瘍性疾患として、これに限定されないが、リンパ腫、癌、白血病、肉腫、または芽腫が挙げられ、例えば、扁平上皮癌、小細胞肺癌、下垂体癌、食道癌、星状細胞腫、軟部肉腫、肺非小細胞癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、消化器癌、膵臓癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、結腸癌、大腸癌、子宮内膜または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌、脳腫瘍、子宮体癌、精巣癌、胆管癌、胆嚢癌、胃癌、悪性黒色腫、または頭頸部癌が挙げられる。
【００２２】
本発明は、対象のメタボリックシンドローム、インスリン抵抗性、高インスリン血症、２型糖尿病または耐糖能障害を治療する方法を提供し、治療有効量の式Ｉの化合物を当該対象に投与することを含む。
【００２３】
さらに、本発明は、対象の骨粗鬆症の治療または骨形成を促進する方法を提供し、治療有効量の式Ｉの化合物を当該対象に投与することを含む。
【００２４】
本発明は、対象のメタボリックシンドローム、インスリン抵抗性、高インスリン血症、２型糖尿病または耐糖能障害を治療する方法を提供し、治療有効量の式Ｉの化合物を当該対象に投与することを含む。
【００２５】
本発明はまた、ＴＨ17及びＴｒｅｇ機能、ならびに免疫系細胞内のＩＬ−１７及びＩＬ−２１の産生を制御する方法を提供している。したがって、本発明は、式ＩのＲｈｏキナーゼ阻害剤を用いた免疫学的応答を調節する方法を提供している。
【００２６】
本発明は、血管新生成分を有する眼障害を治療する方法を提供し、治療有効量の式Ｉの化合物及び血管新生阻害剤を当該対象に投与することを含む。このような眼障害の非限定的な例として、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、虹彩血管新生、ブドウ膜炎、血管新生緑内障、または未熟児網膜炎（ＲＯＰ）が挙げられる。
【００２７】
とりわけ、当該血管新生阻害剤は、抗ＶＥＧＦＲ２抗体を含むＶＥＧＲアンタゴニストである。一実施形態では、本発明は、ＣＤＲ−１Ｈ、ＣＤＲ−２Ｈ、及びＣＤＲ−３Ｈ配列を含む単離された重鎖可変ドメインを提供し、
（ｉ）ＣＤＲ−１Ｈ配列はＧＦＴＦＳＷＹＸ1ＭＸ2（配列番号：１８５）であり、ここで、Ｘ1はＶまたはＩであり、Ｘ2はＧまたはＬであり、
（ｉｉ）ＣＤＲ−２Ｈ配列はＳＩＸ1Ｘ2ＳＧＧＸ3ＴＸ4ＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：１８６）であり、ここで、Ｘ1はＹまたはＧであり、Ｘ2はＰまたはＳであり、Ｘ3はＡまたはＦであり、Ｘ4はＮまたはＤであり、
（ｉｉｉ）ＣＤＲ−３Ｈ配列はＧＮＹＦＤＹ（配列番号：３）またはＧＬＡＡＰＲＳ（配列番号：１１）である。
【００２８】
一実施形態では、本発明は、ＣＤＲ−１Ｌ、ＣＤＲ−２Ｌ、及びＣＤＲ−３Ｌを含む単離された軽鎖可変ドメインを提供し、
（ｉ）ＣＤＲ−１Ｌ配列は、Ｘ1ＧＸ2Ｘ3ＬＸ4Ｘ5Ｘ6Ｘ7Ｘ8Ｓ（配列番号：１８７）であり、ここでＸ1はＳ、ＱまたはＴであり、Ｘ2はＤ、ＥまたはＱであり、Ｘ3はＫ、Ｓ、Ｎ、ＩまたはＡであり、Ｘ4はＧまたはＲであり、Ｘ5はＤ、Ｓ、Ｈ、ＥまたはＮであり、Ｘ6はＥ、Ｙ、Ｑ、ＲまたはＮであり、Ｘ7はＹ、ＦまたはＳであり、Ｘ8はＡもしくはＳまたはＳＧＳＸ1ＳＮＸ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6Ｘ7Ｘ8（配列番号：１８８）であり、ここでＸ1はＳまたはＴであり、Ｘ2はＩまたはＬであり、Ｘ3はＥまたはＧであり、Ｘ4はＴ、ＳまたはＮであり、Ｘ5はＮまたはＹであり、Ｘ6はＴ、Ｐ、ＡまたはＹであり、Ｘ7はＶまたはＬであり、Ｘ8はＮ、ＩもしくはＹまたはＸ1ＧＸ2ＳＸ3ＤＸ4ＧＸ5ＹＤＹＶＳ（配列番号：１８９）であり、ここでＸ1はＡまたはＴであり、Ｘ2はＳまたはＴであり、Ｘ3はＨ、ＳまたはＮであり、Ｘ4はＩまたはＶであり、Ｘ5はＳまたはＡであり、
（ｉｉ）ＣＤＲ−２Ｌ配列は、Ｘ1Ｘ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5ＰＳ（配列番号：１９０）であり、ここで、Ｘ1はＱ、Ｄ、Ｔ、Ｙ、ＳまたはＡであり、Ｘ2はＤ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、またはＶであり、Ｘ3はＤ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、またはＹであり、Ｘ4はＱ、Ｋ、Ｎ、またはＬであり、Ｘ5はＲまたはＬであり、
（ｉｉｉ）ＣＤＲ−３Ｌ配列は、ＱＸ1ＷＸ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6Ｘ7Ｘ8（配列番号：１９１）であり、ここで、Ｘ1はＡまたはＴであり、Ｘ2はＤまたはＧであり、Ｘ3はＲまたはアミノ酸なしであり、Ｘ4はＳ、ＦまたはＮであり、Ｘ5はＳ、ＴまたはＮであり、Ｘ6はＳ、ＴまたはＰであり、Ｘ7は、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩまたはＹであり、Ｘ8はＶまたはＬまたはＡＸ1ＷＤＤＸ2ＬＸ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6（配列番号：１９２）であり、ここでＸ1はＡ、ＳまたはＴであり、Ｘ2はＮまたはＳであり、Ｘ3はＮ、ＩまたはＧであり、Ｘ4はＧまたはＳであり、Ｘ5はＰ、ＷまたはＶであり、Ｘ6はＶまたはＬ、またはＭＹＳＴＩＴＸ1ＬＬ（配列番号：１９３）でありここでＸ1はＡまたはＴである。
【００２９】
一実施形態では、本発明は、ＣＤＲ−１Ｌ、ＣＤＲ−２Ｌ、及びＣＤＲ−３Ｌを含む単離された軽鎖可変ドメインを提供し、
（ｉ）ＣＤＲ−１Ｌ配列は、ＲＡＳＸ1Ｘ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6Ｘ7ＹＸ8Ｘ9（配列番号：１９４）であり、ここで、Ｘ1はＱ、ＥまたはＨであり、Ｘ2はＳ、Ｒ、またはＮであり、Ｘ3はＶ、Ｉ、またはＬであり、Ｘ4はＳ、Ｒ、ＧまたはＮであり、Ｘ5はＳまたはＮであり、Ｘ6はＳ、Ｎ、Ｗ、またはＤであり、Ｘ7はＧまたはアミノ酸なしであり、Ｘ8はＬまたはＦであり、Ｘ9はＡ、Ｇ、ＭまたはＳであり、
（ｉｉ）ＣＤＲ−２Ｌ配列は、ＧＡＳＸ1ＲＡＴ（配列番号：１９５）であり、ここで、Ｘ1はＳ、Ｔ、Ｉ、またはＮであり、
（ｉｉｉ）ＣＤＲ−３Ｌ配列は、ＱＱＸ1Ｘ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6Ｘ7Ｘ8（配列番号：１９６）であり、ここで、Ｘ1はＦまたはＹであり、Ｘ2はＤ、ＧまたはＹであり、Ｘ3はＳ、ＴまたはＮであり、Ｘ4はＳ、ＬまたはＷであり、Ｘ5はＰまたはアミノ酸なしであり、Ｘ6はＰまたはＴであり、Ｘ7はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｐ、ＷまたはＹであり、Ｘ8はＴまたはＳである。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】図１は本発明の化合物を示す。
【図２Ａ】図２Ａは、ＲＯＣＫ２  ｓｉＲＮＡを示すが、ＲＯＣＫ１  ｓｉＲＮＡではなく、ＩＬ−１７及びＩＬ−２１の分泌を阻害する。パネルＡ、左：抗ＲＯＣＫ１  ｓｉＲＮＡは、ＲＯＣＫ１の発現を約７５％減少させた。抗ＲＯＣＫ２  ｓｉＲＮＡは、ＲＯＣＫ２の発現を約８５％減少させた。パネルＡ、右：ＲＯＣＫ２  ｓｉＲＮＡであり、ＲＯＣＫ１  ｓｉＲＮＡではなく、ＩＬ−１７及びＩＬ−２１の発現を阻害した。ＩＦＮ−γの阻害は観察されなかった。パネルＢ：ＲＯＣＫ２  ｓｉＲＮＡであり、ＲＯＣＫ１  ｓｉＲＮＡではなく、Ｓｔａｔ３、ＩＲＦ４及びＲＯＲγｔのリン酸化を阻害した。パネルＣ：ＲＯＣＫ２  ｓｉＲＮＡであり、ＲＯＣＫ１  ｓｉＲＮＡではなく、ＭＬＣのリン酸化を阻害した。
【図２Ｂ】図２Ｂは、ＲＯＣＫ２  ｓｉＲＮＡを示すが、ＲＯＣＫ１  ｓｉＲＮＡではなく、ＩＬ−１７及びＩＬ−２１の分泌を阻害する。パネルＡ、左：抗ＲＯＣＫ１  ｓｉＲＮＡは、ＲＯＣＫ１の発現を約７５％減少させた。抗ＲＯＣＫ２  ｓｉＲＮＡは、ＲＯＣＫ２の発現を約８５％減少させた。パネルＡ、右：ＲＯＣＫ２  ｓｉＲＮＡであり、ＲＯＣＫ１  ｓｉＲＮＡではなく、ＩＬ−１７及びＩＬ−２１の発現を阻害した。ＩＦＮ−γの阻害は観察されなかった。パネルＢ：ＲＯＣＫ２  ｓｉＲＮＡであり、ＲＯＣＫ１  ｓｉＲＮＡではなく、Ｓｔａｔ３、ＩＲＦ４及びＲＯＲγｔのリン酸化を阻害した。パネルＣ：ＲＯＣＫ２  ｓｉＲＮＡであり、ＲＯＣＫ１  ｓｉＲＮＡではなく、ＭＬＣのリン酸化を阻害した。
【図２Ｃ】図２Ｃは、ＲＯＣＫ２  ｓｉＲＮＡを示すが、ＲＯＣＫ１  ｓｉＲＮＡではなく、ＩＬ−１７及びＩＬ−２１の分泌を阻害する。パネルＡ、左：抗ＲＯＣＫ１  ｓｉＲＮＡは、ＲＯＣＫ１の発現を約７５％減少させた。抗ＲＯＣＫ２  ｓｉＲＮＡは、ＲＯＣＫ２の発現を約８５％減少させた。パネルＡ、右：ＲＯＣＫ２  ｓｉＲＮＡであり、ＲＯＣＫ１  ｓｉＲＮＡではなく、ＩＬ−１７及びＩＬ−２１の発現を阻害した。ＩＦＮ−γの阻害は観察されなかった。パネルＢ：ＲＯＣＫ２  ｓｉＲＮＡであり、ＲＯＣＫ１  ｓｉＲＮＡではなく、Ｓｔａｔ３、ＩＲＦ４及びＲＯＲγｔのリン酸化を阻害した。パネルＣ：ＲＯＣＫ２  ｓｉＲＮＡであり、ＲＯＣＫ１  ｓｉＲＮＡではなく、ＭＬＣのリン酸化を阻害した。
【図３】図３は、本発明の化合物がサイトカインの分泌を制御していることを示す。パネルＡは、実施例１の化合物が、ＩＮＦ−γまたはＩＬ−２ではなく、ＩＬ−２１の分泌を阻害することを示す。パネルＢは、ＩＬ−１７分泌の阻害は用量依存的であることを示している。レジェンド（ＡとＢ）：左のバー１：ＫＤ０２５（ＲＯＣＫ２選択的阻害剤）；中央のバー：ＨＣＬに溶解した実施例１の化合物；右のバー；ＤＭＳＯに溶解した実施例１の化合物。
【図４Ａ】図４Ａは、本発明に有用な抗ＶＥＧＦＲ２抗体のヒト重鎖、λ軽鎖、及びκ軽鎖可変ドメイン配列をそれぞれ示す。箱型の領域は、Ｋａｂａｔ及び／またはＣｈｏｔｈｉａによって定められた相補性決定領域中のアミノ酸残基を示している。
【図４Ｂ１】図４Ｂ１は、本発明に有用な抗ＶＥＧＦＲ２抗体のヒト重鎖、λ軽鎖、及びκ軽鎖可変ドメイン配列をそれぞれ示す。箱型の領域は、Ｋａｂａｔ及び／またはＣｈｏｔｈｉａによって定められた相補性決定領域中のアミノ酸残基を示している。
【図４Ｂ２】図４Ｂ２は、本発明に有用な抗ＶＥＧＦＲ２抗体のヒト重鎖、λ軽鎖、及びκ軽鎖可変ドメイン配列をそれぞれ示す。箱型の領域は、Ｋａｂａｔ及び／またはＣｈｏｔｈｉａによって定められた相補性決定領域中のアミノ酸残基を示している。
【図４Ｂ３】図４Ｂ３は、本発明に有用な抗ＶＥＧＦＲ２抗体のヒト重鎖、λ軽鎖、及びκ軽鎖可変ドメイン配列をそれぞれ示す。箱型の領域は、Ｋａｂａｔ及び／またはＣｈｏｔｈｉａによって定められた相補性決定領域中のアミノ酸残基を示している。
【図４Ｃ１】図４Ｃ１は、本発明に有用な抗ＶＥＧＦＲ２抗体のヒト重鎖、λ軽鎖、及びκ軽鎖可変ドメイン配列をそれぞれ示す。箱型の領域は、Ｋａｂａｔ及び／またはＣｈｏｔｈｉａによって定められた相補性決定領域中のアミノ酸残基を示している。
【図４Ｃ２】図４Ｃ２は、本発明に有用な抗ＶＥＧＦＲ２抗体のヒト重鎖、λ軽鎖、及びκ軽鎖可変ドメイン配列をそれぞれ示す。箱型の領域は、Ｋａｂａｔ及び／またはＣｈｏｔｈｉａによって定められた相補性決定領域中のアミノ酸残基を示している。
【図４Ｃ３】図４Ｃ３は、本発明に有用な抗ＶＥＧＦＲ２抗体のヒト重鎖、λ軽鎖、及びκ軽鎖可変ドメイン配列をそれぞれ示す。箱型の領域は、Ｋａｂａｔ及び／またはＣｈｏｔｈｉａによって定められた相補性決定領域中のアミノ酸残基を示している。
【図５】図５は、ＲＯＣＫ阻害剤（実施例１の化合物）が、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）に関連する麻痺を減少させることを示している。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中のＭＯＧ35-55ペプチドで免疫した。マウスに３日間麻痺の兆候が個別にあった場合、指示された化合物（１０ｍｇ／ｋｇでＦＴＹ７２０、１５０ｍｇ／ｋｇで化合物１を１日１回［ＱＤ］または１日２回［ＢＩＤ］）で治療を行った。１５０ＢＩＤ群について、治療の途中で化合物１の投与量に変化が示された。ＦＴＹ７２０は、スフィンゴシン１−リン酸受容体モジュレーターである。
【図６Ａ】図６Ａは、配列番号：４を有するＶHドメインを含むＭａｂ１３８に由来する４つの親和性成熟抗体の重鎖アミノ酸配列を示す。
【図６Ｂ】図６Ｂは、配列番号：１６０に由来する４つの同親和性成熟抗体の軽鎖アミノ酸配列を示す。
【図７Ａ】図７Ａは、ＤＣ１０１（マウスＶＥＧＦＲ２に結合するマウスモノクロナールＡｂ）及びヒトＶＥＧＦＲ２にのみ結合する対照抗体と比較した場合の、本発明の抗体のヒト及びマウスＶＥＧＦＲ２への結合を示す。Ｍａｂ１４７は、ヒトとマウスＶＥＧＦＲ２の両方に結合する。Ｍａｂ１０６は、ヒトＶＥＧＦＲ２に結合するが、マウスＶＥＧＦＲ２には結合しない。
【図７Ｂ】図７Ｂは、リガンドのブロッキングを示す。Ｍａｂ１４７は、ヒトＶＥＧＦＲ２を有するヒトＶＥＧＦの結合とマウスＶＥＧＦＲ２を有するマウスＶＥＧＦの結合をブロックする。Ｍａｂ１０６は、ヒトＶＥＧＦＲ２を有するヒトＶＥＧＦの結合をブロックするが、マウスＶＥＧＦＲ２を有するマウスＶＥＧＦの結合はブロックしない。
【図８】図８Ａは、ＨＵＶＥＣ（ヒト臍帯静脈内皮細胞）及びブタ大動脈内皮（ＰＡＥ）細胞を過剰発現するＫＤＲ（ＫＤＲ−ＰＡＥ）での、Ｍａｂ１０６及びＭａｂ１４７のヒトＶＥＧＦＲ２への結合を示す。図８Ｂは、Ｍａｂ１４７を示すが、Ｍａｂ１０６は示しておらず、ＭＳ１マウス内皮細胞でのＶＥＧＦＲ２への結合を示す。図８Ａと図８Ｂでは、対照はｈＶＥＧＦＲ２に結合するが、ｍＶＥＧＦＲ２には結合しない抗体である。
【図９】図９は、Ｍａｂ１０６及びＭａｂ１４７によるＶＥＧＦＲ２媒介性シグナル伝達の阻害を示す。Ｍａｂ１０６及びＭａｂ１４７は、用量依存的に、ＫＤＲ−ＰＡＥ（図９Ａ）細胞とＨＵＶＥＣ（図９Ｂ）中のＫＤＲ及びｐ４４／４２のリン酸化を阻害する。
【図１０】図１０Ａは、Ｍａｂ１０６、Ｍａｂ１４７及びｈＶＥＧＦＲ２に結合する対照抗体によってＫＤＲ−ＰＡＥ細胞の増殖が阻害されることを示す。図１０Ｂは、誘導された細胞遊走の阻害を示す。ＫＤＲ−ＰＡＥ細胞の移動は、ＶＥＧＦ勾配（５０ｎｇ／ｍｌのＶＥＧＦ（高）、１００ｎｇ／ｍｌのＶＥＧＦ（低））で誘導された。プロットは、０．６μｇ／ｍｌ、３μｇ／ｍｌ、または１５μｇ／ｍｌのＭａｂ１０６またはＭａｂ１４７抗体の存在下での細胞数を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
本発明は、式Ｉを有する化合物
【００３２】
【化２】
0006507157.tif 000003
【００３３】
またはその薬学的に許容可能な塩に関するものであり、
Ｒ1は、ＨまたはＣ1−Ｃ6アルキルから成る群から選択され、
Ｒ2はアリール、ヘテロアリール、Ｃ3−Ｃ7シクロアルキル、最大３個のヘテロ原子を含有する３〜１２員の複素環から成る群から選択され、それぞれハロ及びＣ1−Ｃ6アルキルから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されてもよく、
Ｘは、ＮまたはＣＲ3から選択され、
Ｙは、ＮまたはＣＲ3から選択され、
Ｚは、ＮまたはＣＲ4から選択され、
Ｗは、ＣＲ5から選択され、
ここで、Ｘ、Ｙ及びＺは、独立して選択され、その少なくとも１つがＮであり、
ここでＲ3はそれぞれ、Ｈ、Ｃ1−Ｃ8アルキル、Ｃ2−Ｃ8アルケニル、Ｃ2−Ｃ8アルキニル、−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）、−ＮＲ31Ｒ32、及び−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）から成る群から独立して選択され、
Ｒ31及びＲ32は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ8アルキル、Ｃ2−Ｃ8アルケニル、Ｃ2−Ｃ8アルキニル、及び−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）から成る群から独立して選択され、
Ｒ4及びＲ5は、Ｈ、ハロ、Ｃ1−Ｃ8アルキル、Ｃ2−Ｃ8アルケニル、Ｃ2−Ｃ8アルキニル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）、−ＮＲ41Ｒ42、−（ＣＨ2）xＮＲ41Ｒ42、及びＯ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）から成る群から独立して選択され、
Ｒ41及びＲ42は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ8アルキル、Ｃ2−Ｃ8アルケニル、Ｃ2−Ｃ8アルキニル、及び−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）から成る群から独立して選択され、
またはＲ41及びＲ42は一緒になって、３〜１２員のシクロアルキルまたはハロ、Ｃ1−Ｃ6アルキル及びＣ1−Ｃ6アルコキシから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されてもよい最大３個のヘテロ原子を有する複素環を形成してもよく、
ｘは０〜６から選択され、
またはＲ4及びＲ5は一緒になって、３〜１２員の複素環またはハロ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、及びＣ1−Ｃ6アルコキシから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されてもよい最大３個のヘテロ原子を有する芳香族環を形成してもよく、
ａは０〜２から選択され、
ｂは０〜２から選択され、
ここで、ａまたはｂは独立して選択され、その１つは少なくとも１である。
Ａは、３〜１２員の複素環またはハロ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ2−Ｃ6アルケニル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）、Ｃ3−Ｃ7シクロアルキル、オキソ、アシル、−Ｓ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）、ＯＨ、ＮＨ2、ＣＮ、及びＣ1−Ｃ3ペルフルオロアルキルから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されてもよい最大３個のヘテロ原子を有する芳香族環である。
【００３４】
本発明の一実施形態では、Ｒ1はＨである。
【００３５】
本発明の一実施形態では、Ｒ2は、インダゾール、シクロヘキシルピリジン、フェニルピリジン、フェニル−１Ｈ−ピラゾール、１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン、１Ｈ−ピラゾール、ピリジン、イソキノリン、キノリン及び１，３−チアゾリルピリジンから選択される。
【００３６】
本発明の一実施形態では、Ｒ2は以下から選択される。
【００３７】
【化３】
0006507157.tif 000004
【００３８】
本発明の一実施形態では、
Ｘ、Ｚ＝Ｎ；Ｗ＝ＣＲ3、または
Ｘ、Ｙ＝Ｎ；Ｚ＝ＣＲ4である。
【００３９】
本発明の一実施形態では、Ｒ4及びＲ5はそれぞれＨであり、
【００４０】
別の実施形態では、Ｒ4及びＲ5はそれぞれ−ＣＨ3であり、
【００４１】
さらに別の実施形態では、Ｒ4及びＲ5は、一緒になってこれらに限定されないが、ジヒドロフランを含む５員環を形成する。
【００４２】
特定の実施形態では、本発明は、式ＩＩの化合物を提供し、
【００４３】
【化４】
0006507157.tif 000005
【００４４】
ここで、Ｒ2、Ｒ4及びＲ5は上記で定義した通りであり、
Ｒ6はそれぞれ、ハロ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ2−Ｃ6アルケニル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）、Ｃ3−Ｃ7シクロアルキル、オキソ、アシル、−Ｓ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）、ＯＨ、ＮＨ2、ＣＮ及びＣ1−Ｃ3ペルフルオロアルキルから成る群から独立して選択され、
ｄは０〜３から選択される。
【００４５】
特定の実施形態では、本発明は、式ＩＩＩの化合物を提供し、
【００４６】
【化５】
0006507157.tif 000006
【００４７】
ここで、Ｒ4及びＲ5は上記で定義した通りであり、
Ｒ6はそれぞれ、ハロ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ2−Ｃ6アルケニル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）、Ｃ3−Ｃ7シクロアルキル、オキソ、アシル、−Ｓ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）、ＯＨ、ＮＨ2、ＣＮ及びＣ1−Ｃ3ペルフルオロアルキルから成る群から独立して選択され、
ｄは０〜３から選択される。
【００４８】
本明細書で使用する「ヘテロ原子」という用語は、炭素または水素以外の任意の元素の原子を意味する。好ましいヘテロ原子は窒素、酸素、及び硫黄である。
【００４９】
用語「アルキル」は、直鎖アルキル基及び分岐鎖アルキル基を含む飽和脂肪族基のラジカルを指す。好ましい実施形態では、直鎖または分枝鎖アルキルは、その骨格に１０個以下の炭素原子を有する（例えば、直鎖についてはＣ1−Ｃ10、分岐鎖についてはＣ3−Ｃ10）。同様に、好ましいシクロアルキルは、その環構造中に３〜１０個の炭素原子を有し、より好ましくは環構造中に３〜６個の炭素を有する。
【００５０】
炭素の数が特に指定されない限り、本明細書で使用する「低級アルキル」は、上記で定義した通りのアルキル基を意味するが、１〜６個の炭素原子、より好ましくは１〜４個の炭素原子を有する。同様に、「低級アルケニル」及び「低級アルキニル」は同様の鎖長を有する（Ｃ2−Ｃ6）。好ましいアルキル基は低級アルキルである。好ましい実施形態では、アルキルとして本明細書に示される置換基は低級アルキルである。
【００５１】
「シクロアルキル」という用語は、環中に３〜７個の炭素を有する飽和炭素環式基を指す。好ましいシクロアルキル基として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルが挙げられる。
【００５２】
本明細書で使用する「アラルキル」という用語は、アリール基で置換されたアルキル基（例えば、芳香族またはヘテロ芳香族基）を指す。
【００５３】
「アルケニル」及び「アルキニル」という用語は、上記のアルキルと、長さ及び可能な置換が類似する不飽和脂肪族基を指すが、それぞれ少なくとも１つの二重または三重結合を含む。
【００５４】
本明細書で使用される「アリール」という用語は、０〜４個のヘテロ原子を含んでいてもよい５及び６員単環芳香族基を含み、例えば、ベンゼン、ピレン、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、トリアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン及びピリミジン等が挙げられる。環構造中にヘテロ原子を有するこれらのアリール基は、「アリール複素環」、「ヘテロ芳香族」または「ヘテロアリール」と呼ぶことができる。芳香環は、前述の置換基、例えば、ハロゲン、アジド、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アルコキシル、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、ホスホネート、ホスフィネート、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、スルホニル、スルホンアミド、ケトン、アルデヒド、エステル、ヘテロシクリル、芳香族またはヘテロ芳香族部分、−ＣＦ3、−ＣＮ等で、１つ以上の環の位置で置換することができる。「アリール」という用語はまた、２つ以上の環状環を有する多環式環系を含み、２つ以上の炭素が２つの隣接する環に共通であり（その環は「縮合環」である）、その環の少なくとも１つは芳香族であり、例えば、他の環状環はシクロアルキル、シクロアルケニル、アリール及び／または複素環基であることができる。
【００５５】
「ヘテロシクリル」または「複素環基」という用語は、３〜１０員の環構造、より好ましくは、５または６員の環であり、その環構造は１〜４個のヘテロ原子を含む。複素環は多環であってもよい。複素環基として、例えば、チオフェン、チアントレン、フラン、ピラン、イソベンゾフラン、クロメン、キサンテン、フェノキサチイン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、イソチアゾール、イソオキサゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、インドール、インダゾール、プリン、キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、ピリミジン、フェナントロリン、フェナジン、フェナルザジン、フェノキサジン、フラザン、フェノチアジン、フラザン、フェノキサジン、ピロリジン、オキソラン、チオラン、オキサゾール、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、ラクトン、アゼチジノン及びピロリジノン等のラクタム、スルタム、スルトン等が挙げられる。芳香環は、１つ以上の位置で、前述の置換基、例えば、ハロゲン、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、ホスホネート、ホスフィネート、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、スルホニル、ケトン、アルデヒド、エステル、ヘテロシクリル、芳香族またはヘテロ芳香族部分、−ＣＦ3、−ＣＮ等で置換することができる。
【００５６】
「多環」または「多環基」という用語は、２つ以上の炭素が、２つの隣接する環と共有されている２つ以上の環（例えば、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール及び／またはヘテロシクリル）を指し、例えば、この環は「縮合環」である。非隣接原子を介して結合している環は、「架橋」環と呼ばれる。多環基の環のそれぞれは、前述の置換基、例えば、ハロゲン、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、ホスホネート、ホスフィネート、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、スルホニル、ケトン、アルデヒド、エステル、ヘテロシクリル、芳香族またはヘテロ芳香族部分、−ＣＦ3、−ＣＮ等で置換することができる。
【００５７】
本明細書で使用される「ニトロ」という用語は、−ＮＯ2を意味する。「ハロゲン」または「ハロ」という用語は、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒまたは−Ｉを示す。「ヒドロキシル」という用語は、−ＯＨを意味する。
【００５８】
用語「アミン」及び「アミノ」は、非置換と置換アミンの両方、例えば、以下の一般式によって表すことができる部分を指し、
【００５９】
【化６】
0006507157.tif 000007
【００６０】
ここで、Ｒ、Ｒ’及びＲ”はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アラルキル、アリール、及びヘテロ環式基であり、最も好ましくはＨまたは低級アルキルを表す。
【００６１】
本明細書で使用される「アルコキシル」または「アルコキシ」という用語は、前述したように、それに結合した酸素ラジカルを有するアルキル基を指している。代表的なアルコキシル基として、メトキシ、エトキシ、プロピルオキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ等が挙げられる。低級アルコキシという用語は、１〜６個の炭素原子を有するアルコキシ基を指す。
【００６２】
本明細書で使用される「オキソ」という用語は、別の原子、特に炭素または硫黄に二重結合を有する酸素原子を指す。
【００６３】
本明細書で使用されるとき、それぞれの表現、例えば、アルキル、ｍ、ｎ、Ｒ等は、任意の構造に２回以上出現するとき、同一の構造内のどこかでその定義から独立していることを意図している。
【００６４】
「置換された」、「置換」または「〜で置換された」は、このような置換が置換された原子の許容される原子価に従っていること、及び当該置換が結果的に安定した化合物になること、例えば、転位、環化、脱離等によって自発的に変質しないことを暗黙の条件として含んでいることが理解される。
【００６５】
「置換された」という用語は、本明細書で使用するとき、有機化合物のすべての許容される置換基を含むことが熟慮される。広い態様では、許容される置換基として、非環式及び環式、分岐及び非分岐、炭素環及び複素環式、有機化合物の芳香族及び非芳香族置換基が挙げられる。例示的な置換基として、例えば、前述したものが挙げられる。
【００６６】
本発明の特定の化合物は、特定の幾何または立体異性体形態で存在し得る。本発明はすべてのそのような化合物を意図しており、例えば、シス−及びトランス異性体、Ｒ及びＳエナンチオマー、そのラセミ混合物、ならびにその他の混合物が挙げられ、本発明の範囲にある。追加の不斉炭素原子がアルキル基等の置換基に存在してもよい。すべてのこのような異性体、ならびにその混合物は、本発明に含まれる。
【００６７】
本発明の化合物の特定の実施形態は、アミノまたはアルキルアミノ等の塩基性官能基を含み、このように、薬学的に許容される酸で薬学的に許容される塩を形成することができる。この文脈における「薬学的に許容される塩」という用語は、本発明の化合物の比較的非毒性の、無機及び有機酸付加塩を指す。代表的な塩として、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル酸塩（ｎａｐｔｈｙｌａｔｅ）、及びメシル酸塩等が挙げられる。（例えばＢｅｒｇｅら“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ”、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．（１９７７）６６：１−１９）を参照のこと。）
【００６８】
他の場合では、本発明の化合物は、１つ以上の酸性官能基を含んでいてもよく、それによって薬学的に許容される塩基で薬学的に許容される塩を形成することができる。代表的な塩として、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム塩等のアルカリまたはアルカリ土類塩が挙げられる。塩基付加塩の形成に有用な代表的な有機アミンとして、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン等が挙げられる。（例えば、Ｂｅｒｇｅら、前掲を参照のこと）。
【００６９】
一態様では、本発明は、Ｒｈｏキナーゼの阻害剤である式Ｉの化合物を提供している。Ｒｈｏキナーゼ（ＲＯＣＫ）、セリン／スレオニンキナーゼは、小さいＧＴＰ結合タンパク質Ｒｈｏのための標的タンパク質として機能し、接着点、運動性、平滑筋収縮、及び細胞質分裂を含む多くの細胞機能の重要なメディエーターである。平滑筋では、ＲＯＣＫは、Ｃａ2+感作及び血管緊張の制御に重要な役割を果たしている。ＲＯＣＫは、主にミオシンホスファターゼの阻害によって、ミオシンＩＩのミオシンＩＩ軽鎖のリン酸化のレベルを調節し、平滑筋収縮でのアゴニスト誘導Ｃａ2+感作に寄与している。
【００７０】
Ｒｈｏキナーゼは、２つの形態、ＲＯＣＫ１（ＲＯＣＫβ；ｐ１６０−ＲＯＣＫ）とＲＯＣＫ２（ＲＯＣＫα）に認められる。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、選択的にＲＯＣＫ１を阻害する。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、ＲＯＣＫ２を選択的に阻害する。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、ＲＯＣＫ１及びＲＯＣＫ２の阻害に対して非選択的である。
【００７１】
キナーゼ阻害を決定する方法は、当該技術分野で周知である。例えば、酵素のキナーゼ活性及び試験化合物の阻害能力は、基質の酵素特異的リン酸化を測定することによって決定することができる。市販のアッセイ及びキットを使用することができる。例えば、キナーゼ阻害は、ＩＭＡＰ（登録商標）アッセイ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社）を使用して決定することができる。このアッセイ法は、蛍光タグ付きペプチド基質の使用を伴う。目的のキナーゼによるタグ付きペプチドのリン酸化は、ホスホ基と三価金属との特異的で高親和性の相互作用を介して、三価金属をベースとするナノ粒子にペプチドを結合させることを促す。ナノ粒子に近接することによって、蛍光偏光が増加する。キナーゼ阻害剤によるキナーゼの阻害は、基質のリン酸化を防止し、それによって蛍光タグ付き基質のナノ粒子への結合を制限する。このようなアッセイは、複数の化合物のＩＣ50の同時決定を可能にする、マイクロウェルアッセイフォーマットと互換性を持つことができる。
【００７２】
本発明の別の態様では、治療有効量の本発明の化合物を、治療を必要とする患者に投与することを含む、疾患を患っている患者を治療する方法を提供している。本明細書で使用される「治療有効量」という語句は、化合物、物質、または本発明の化合物を含む組成物の量を意味し、任意の治療に適用できるベネフィット／リスク比、例えば、任意の治療に適用できるある程度の副作用で、動物の細胞の少なくとも１つのサブ集団に、いくらか所望の治療効果をもたらすのに効果的な量である。
【００７３】
Ｒｈｏキナーゼ及び／またはＲｈｏキナーゼ媒介性リン酸化を阻害する本発明の化合物は、Ｒｈｏキナーゼの機能が関係する心血管及び非心血管疾患を患っている患者を治療するのに有効であり、当該疾患の例として、高血圧、肺高血圧症、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、冠状動脈性心臓病、心臓肥大、高眼圧症、網膜症、虚血性疾患、脳虚血、脳血管攣縮、陰茎勃起障害、末梢循環障害、末梢動脈閉塞性疾患、緑内障、（例えば、眼内圧力を調整する）、肺線維症、肝線維症、腎線維症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、成人呼吸窮迫症候群、神経変性及び脊髄損傷等の中枢神経系障害が挙げられる。さらに、本発明のＲｈｏキナーゼ阻害剤は、血小板凝集及び白血球凝集、及び骨吸収等の動脈血栓性疾患を治療するために使用することができる。
【００７４】
本発明の一実施形態では、脳海綿状奇形（ＣＣＭ）を治療するために化合物が使用される。ＣＣＭは、漏出し、拡張した毛細血管のクラスターから成る血管病変であり、発作及び脳卒中を含む中枢神経系（ＣＮＳ）障害に関連している。血管の完全性の喪失は、ＲｈｏＡの活性化とＲＯＣＫの活性化に関与していると考えられ、細胞骨格の安定性の変化と血管透過性の増加につながる。本発明の化合物は、ＲＯＣＫの活性化を阻害し、血管内皮機能を回復する。
【００７５】
これまで示してきたように、特定の実施形態では、式Ｉの化合物は、緑内障の治療に使用される。治療することのできる緑内障のいくつかの種類として、これに限定されないが、以下に挙げる。２つの最も一般的な、原発開放隅角緑内障及び急性閉塞隅角緑内障は、高眼圧を特徴としている。色素性緑内障及び先天性緑内障もまた、流体流出の減少と高眼内圧（ＩＯＰ）を特徴としている。正常眼圧緑内障は、別の機序に起因し、特に視神経への血流の悪さに起因すると考えられている。続発性緑内障は、損傷、感染、炎症、腫瘍または白内障から生じる可能性があり、また、ステロイドの長期使用、全身性高血圧、糖尿病性網膜症、及び網膜中心静脈閉塞にも関連している。
【００７６】
特定の実施形態では、本発明のＲｈｏキナーゼ阻害剤は、以下に限定されないが、喘息、心血管性炎症、腎炎症、アテローム性動脈硬化症及び動脈硬化症を含む炎症を治療するために使用される。
【００７７】
本発明は、治療を必要とする患者に有効量のＲｈｏキナーゼ阻害剤を投与することを含む緑内障の治療方法を提供している。特定の実施形態では、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤は、式Ｉ−ＸＸＶのいずれか１つの化合物である。Ｒｈｏキナーゼ阻害剤は、ＲＯＣＫ１及びＲＯＣＫ２に対して非選択的であることができ、または選択的ＲＯＣＫ１阻害剤、または選択的ＲＯＣＫ２阻害剤であることができる。一般に、前記阻害剤は、ＲＯＣＫ１を阻害し、すなわちＲＯＣＫ１とＲＯＣＫ２の両方を阻害し、またはＲＯＣＫ１に対して選択的であることが好ましい。本発明の文脈では、選択的とは、前記阻害剤が、あるＲｈｏキナーゼについてのＩＣ50が、他のＲｈｏキナーゼについてのＩＣ50と比較して、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、または少なくとも２５倍低いことを示すことを意味する。上述したように、いくつかの種類の緑内障があり、ＲＯＣＫ１またはＲＯＣＫ２に選択的な化合物は、特定の種類の緑内障の治療のために有益であり得る。また、血管新生成分を有する特定の緑内障は、ＲＯＣＫ阻害剤の他に、血管新生阻害剤を投与することから利益を得ることができる。
【００７８】
本発明のＲｈｏキナーゼ阻害剤は、腫瘍細胞の増殖及び転移、及び血管新生を阻害し、腫瘍性疾患の治療に有用である。腫瘍性疾患は、異常なまたは制御されない細胞分裂によって引き起こされる任意の悪性増殖または腫瘍を含み、リンパ系または血流を介して身体の他の部分に拡散する可能性がある。腫瘍性疾患として、これらに限定されないが、リンパ腫（通常は悪性であるリンパ組織の新生物）、癌腫（上皮組織由来の悪性腫瘍）、白血病（血管形成組織の悪性腫瘍、白血球の異常な増殖を特徴とする）、肉腫（骨または筋肉等の結合組織から生じる通常悪性の腫瘍）、及び芽細胞腫（前駆体細胞内の悪性）が挙げられる。腫瘍性疾患の非限定的な例として、扁平上皮癌、小細胞肺癌、下垂体癌、食道癌、星状細胞腫、軟部組織肉腫、非小細胞肺癌、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌、膵臓癌、神経膠芽細胞腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌、脳癌、子宮内膜癌、精巣癌、胆管癌、胆嚢癌、胃癌、メラノーマ、及び様々な種類の頭頸部癌が挙げられる。
【００７９】
本発明に従って、ＲＯＣＫ阻害剤は、体重減少をもたらす、及び／または体重増加を制限するために使用される。好ましい実施形態では、ＲＯＣＫ阻害剤は、ＲＯＣＫ２選択的である。ＲＯＣＫ−２阻害剤は、正常な対象の体重減少を促進し、肥満になりやすい対象の体重増加を制限する。
【００８０】
本発明の実施形態では、ＲＯＣＫ阻害剤は、インスリン抵抗性を減少または防ぐ、またはインスリン感受性を復元するために使用される。したがって、一実施形態では、本発明の化合物は、インスリン依存性グルコース取り込みを促進または回復するために使用される。本発明の別の実施形態では、本発明のＲＯＣＫ阻害剤は、耐糖能を促進または回復するために使用される。本発明の別の実施形態では、本発明のＲＯＣＫ阻害剤は、メタボリックシンドロームを治療するために使用される。別の実施形態では、本発明のＲＯＣＫ阻害剤は、高インスリン血症を低減または予防するために使用される。本発明の一実施形態では、ＲＯＣＫ阻害剤は、とりわけ２型糖尿病の糖尿病を治療するために使用される。本発明のＲＯＣＫ阻害剤は、血管平滑筋細胞（ＶＳＭＣ）のインスリン媒介性弛緩を促進または回復するために使用されてもよい。好ましい実施形態では、ＲＯＣＫ阻害剤は、ＲＯＣＫ２選択的である。
【００８１】
式Ｉの化合物は、効果的な血液脳関門（ＢＢＢ）の浸透と中枢神経系の組織への組織分布を示している。したがって、本発明の化合物は、中枢神経系障害の治療に有用であるだけでなく、特定の眼障害等の障害にも有用であり、これはＢＢＢを通過する能力から得られる利益である。このような障害は、神経変性または神経組織に対する物理的損傷を伴い、以下に限定されないが、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、または多発性硬化症が挙げられる。
【００８２】
Ｔｈ１７細胞は、ＩＬ−１７、ＩＬ−２１及びＩＬ−２２を分泌する新規のヘルパーＣＤ４+Ｔ細胞のサブセットである。Ｔｈ１７細胞の炎症促進性活性は、感染中の宿主に利益をもたらすことができるが、制御されていないＴｈ１７がつなげられ、いくつかの自己免疫病態及び慢性移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、幹細胞または骨髄接種中に存在する成熟したＴ細胞によって媒介される、標的臓器に対するいくつかの上皮損傷を特徴とする疾患に積極的に関与している。実際、高レベルのＩＬ−１７が、骨膜組織の破壊や疾患活動性と相関する間接リウマチ（ＲＡ）と全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の患者の血清及び生検に検出された。関節炎の関節におけるＩＬ−１７の病理学的役割は、炎症促進性サイトカインの産生の刺激と、Ｔ細胞及び自然免疫細胞の動員の増加に関連している。さらに、Ｔｈ１７細胞の数はＲＡ患者の末梢血で顕著に増加し、ならびにＩＬ−１７の濃度の増加が、ｅｘ  ｖｉｖｏでの抗ＣＤ３／ＣＤ２８抗体で刺激した後に、それらのＰＢＭＣの上清中に見られた。さらに、多発性硬化症（ＭＳ）患者では、ミエリン反応性Ｔｈ１７細胞がまた濃縮され、高容量のＩＬ−２２とＩＦＮ−γを産生する。さらに、クローン病（ＣＤ）の同対象の健康な領域と比較して、顕著に多数のＩＬ−１７+細胞が、疾患の影響を受けた腸領域で検出されている。
【００８３】
Ｔｈ１７細胞の発達及び機能は、特定の細胞内シグナル伝達経路の活性化に依存する。ステロイド受容体型核内受容体のＲＯＲγｔは、Ｔｈ１７細胞で選択的に発現し、ＩＬ−１７産生のために必要とされているように見える。ＲＯＲγｔの誘導は、ＳＴＡＴ３依存性機序を介してＩＬ−６、ＩＬ−２１及びＩＬ−２３によって媒介されることが観察されている。ＳＴＡＴ３はまた、ＩＬ−１７及びＩＬ−２１プロモーターに直接結合する。ＲＯＲγｔ及びＳＴＡＴ３の他に、インターフェロン調節因子４（ＩＲＦ４）は、ＩＲＦ４  ＫＯマウスがＴｈ１７応答を開始することができず、自己免疫応答の発生に対して耐性であったため、Ｔｈ１７細胞の分化に必要とされている。最近の研究では、Ｒｈｏキナーゼ２（ＲＯＣＫ２）によるＩＲＦ４のリン酸化は、ＩＬ−１７及びＩＬ−２１産生及びマウスにおける自己免疫の発生を調節することが実証されている。
【００８４】
本発明に従って、Ｒｈｏキナーゼ阻害によるＴｈ１７（ＩＬ−１７分泌）細胞を標的とすることによって、以下に限定されないが、ＲＡ、ＭＳ、ＳＬＥ、乾癬及びクローン病、ならびにヒトのＧＶＨＤ等の自己免疫障害を含むＴｈ１７細胞媒介性疾患を治療する方法を提供している。本発明の一実施形態では、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤は、式Ｉの化合物である。いくつかの実施形態では、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤は、ＲＯＣＫ１及びＲＯＣＫ２を阻害する。いくつかの実施形態では、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤は、選択的にＲＯＣＫ２を阻害する。ＲＯＣＫ２の選択的阻害によって、Ｔｈ１７細胞媒介性疾患を治療することができ、ＲＯＣＫ活性の完全な阻害に関連する毒性を低減しまたは防いでいる。
【００８５】
調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は、自己抗原に対する自己免疫耐性の維持と自己免疫応答の阻害に重要な役割を果たしているが、それと同時に、腫瘍細胞に対する効果的な免疫応答を妨げてしまう。実際に、関節リウマチ（ＲＡ）及び多発性硬化症（ＭＳ）等の自己免疫疾患の患者の末梢血から単離されたＴｒｅｇは、エフェクターＴ細胞の機能を抑制する能力が欠損し、一方で、Ｔｒｅｇの蓄積の増加は多くの癌の良好ではない予後と相関している。したがって、Ｔｒｅｇ機能のレベルは、効果的な免疫性と病理学的な自己反応性の回避との間のバランスに影響を与える。
【００８６】
Ｔｒｅｇの発現と機能は、特異的なシグナル伝達経路に依存する。転写因子のＴＧＦ−β及びＩＬ−２は、Ｆｏｘｐ３とＳＴＡＴ５転写因子―両方ともＴｒｅｇ抑制機能の制御に重要な役割を果たしている―の発現を活性化する。一方、炎症促進性サイトカインは、ＳＴＡＴ３リン酸化のアップレギュレーションを介してＦｏｘｐ３発現を阻害する。本発明に従って、ＲＯＣＫ１ではなく、ＲＯＣＫ２（例えば、ＫＤ０２５、ＲＯＣＫ２のＲＯＣＫ２特異的ｓｉＲＮＡ媒介性阻害等の選択的ＲＯＣＫ２阻害剤で）は、ＳＴＡＴ３リン酸化、インターフェロン調節因子４（ＩＲＦ４）及びヒトＴ細胞中のステロイド受容体型核内受容体ＲＯＲγｔタンパク質レベルのダウンレギュレーションを導く。したがって、ＲＯＣＫ２阻害剤は、Ｔｒｅｇ機能を調節する。
【００８７】
本発明は、血管新生成分を有する疾患及び障害を治療するための方法及び化合物を提供している。本発明に従って、特定の実施形態では、当該疾患及び障害は、対象に有効量のＲｈｏキナーゼ阻害剤を投与することによって治療する。このような実施形態では、ＲＯＣＫ２阻害剤が好ましい。特定の実施形態では、当該阻害剤は、ＲＯＣＫ２選択的阻害剤である。本発明に従って、当該疾患及び障害はまた、ＲＯＣＫ２を阻害する、またはＲＯＣＫ２選択的であってもよい有効量のＲｈｏキナーゼ阻害剤、及び有効量の血管新生阻害剤を投与することによって治療することもできる。本発明に従って、血管新生成分を有する眼疾患及び障害はこの方法で治療する。一実施形態では、本発明は、「乾燥」及び「湿潤型」の形態で発症する加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）を治療する方法を提供している。ＡＭＤの「湿潤」形態は、異常な血管増殖（血管新生）による失明を引き起こす。これらの網膜血管からの出血、漏出、瘢痕は、結果的に、光受容体に対して不可逆的な損傷を引き起こす。ＡＭＤの乾燥形態は、網膜色素上皮層の萎縮から生じ、目の中央部の光受容体（桿体及び錐体）の喪失によって、失明を引き起こす。別の実施形態では、本発明は、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）を治療する方法を提供している。脈絡膜血管新生は、新しい血管がブルッフ膜を介して脈絡膜中で増殖し、網膜下空間に侵入するプロセスであり、他の原因の中でもとりわけ加齢性黄斑変性症、近視及び眼外傷の症状である。別の実施形態では、本発明は、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）を治療する方法を提供している。別の実施形態では、本発明は、網膜分枝静脈閉塞症（ＢＲＶＯ）または網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）に対して二次的な黄斑浮腫を治療する方法を提供している。他の実施形態では、治療される疾患として、以下に限定されないが、網膜血管新生、感染性及び非感染性、角膜血管新生感染性及び非感染性、虹彩血管新生、ブドウ膜炎、血管新生緑内障、及び未熟児の網膜症（ＲＯＰ）が挙げられる。治療方法は、角膜移植後の角膜血管新生を食い止める、または線維柱帯切除手術における創傷の治癒を調節するなど、予後的であることができる。これらの疾患及び障害は、血管新生成分を有するものとして特徴付けることができる。本発明に従って、当該障害は、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤、好ましくはＲＯＣＫ２選択的Ｒｈｏキナーゼ阻害剤、及び血管新生阻害剤を投与することによって治療する。
【００８８】
したがって、このような一実施形態では、疾患または障害はＡＭＤであり、ＡＭＤの治療を必要とする対象は、ＡＭＤを治療するのに有効な量のＲＯＣＫ２阻害剤を投与される。別の実施形態では、対象はＡＭＤを治療するためにＲＯＣＫ２阻害剤及び有効量の血管新生阻害剤を投与される。このような実施形態では、ＲＯＣＫ２選択的阻害剤が好ましい場合もある。いくつかの実施形態では、血管新生阻害剤はＶＥＧＦＲ２アンタゴニストである。このような特定の実施形態では、ＶＥＧＦＲ２アンタゴニストは、ＶＥＧＦに結合する。他のこのような実施形態では、ＶＥＧＦＲ２アンタゴニストは、ＶＥＧＦＲ２に結合する。当該ＶＥＧＦＲ２結合阻害剤として、ＶＥＧＦＲ２の細胞外ドメインと結合する薬剤が挙げられ、例えば、以下に限定されないが、その抗体及びＶＥＧＦＲ２結合フラグメント、ＶＥＧＦＲ２の細胞内ドメインと相互作用し、ＶＥＧＦＲ２依存性シグナル伝達をブロックする薬剤が挙げられる。ＶＥＧＦＲ２アンタゴニストはさらにＶＥＧＦＲ２依存性シグナル伝達をブロックする他の細胞成分と相互作用する薬剤を含む。本発明の他の実施形態では、血管新生成分を有する他の眼疾患及び障害は、前述のように、同様に治療する。
【００８９】
本発明に従って、ＲＯＣＫ阻害剤及び血管新生阻害剤は、過剰な血管新生を特徴とする病的状態を治療または予防するのに有効な量で、対象に投与される。例えば、血管新生及び／または炎症を伴うこのような病態として、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ（ＲＡ）、血管腫、血管線維腫、乾癬が挙げられる。血管新生疾患の他の非限定的な例として、未熟児網膜症（水晶体後線維形成）、角膜移植片拒絶、屈折矯正手術の合併症に関連した角膜血管新生、コンタクトレンズ合併症に関連した角膜血管新生、翼状片及び再発翼状片に関連した角膜血管新生、角膜潰瘍性疾患、非特異的眼表面疾患、インスリン依存性糖尿病、多発性硬化症、重症筋無力症、クローン病、自己免疫腎炎、原発性胆汁性肝硬変、急性膵炎、異書体拒絶反応、アレルギー性炎症、接触皮膚炎及び遅延型過敏反応、炎症性腸疾患、敗血症性ショック、骨粗鬆症、神経炎症によって誘発される認知障害、オスラー−ウェーバー症候群、再狭窄、及びサイトメガロウイルス感染症を含む真菌、寄生虫及びウイルス感染症が挙げられる。
【００９０】
本発明は、汎ＲＯＣＫ阻害剤（すなわちＲＯＣＫ１とＲＯＣＫ１を阻害する化合物）ならびにアイソフォーム選択的であるＲＯＣＫ阻害剤を提供している。上述したように、本発明の特定の実施形態では、ＲＯＣＫ２選択的阻害剤が好ましい場合がある。例えば、ある研究では、ＲＯＣＫ２が非腫瘍性の肝臓に比べて肝細胞癌で頻繁に過剰発現するが、ＲＯＣＫ１の発現は変化しないことを観察した。ＲＯＣＫ２選択的阻害剤による治療から利益を得ることができるその他の癌として、これに限定されないが、結腸癌及び膀胱癌が挙げられる。対照的に、ＲＯＣＫ１発現レベルが乳房腫瘍でより高いことが観察された。ＲＯＣＫ１及び／またはＲＯＣＫ２の過剰発現があるかどうかを決定するために任意の癌を試験し、それに従って治療を行うことができる。特定の状況では、ＲＯＣＫ１及びＲＯＣＫ２アイソフォームは、特定の下流標的を調節する点で類似性を示し、どちらのアイソフォームも優勢には見えない。このような場合、汎ＲＯＣＫ阻害剤が好ましい場合がある。
【００９１】
別の態様では、本発明は、１つ以上の薬学的に許容される担体（添加剤）及び／または希釈剤と一緒に配合された、治療有効量の１つ以上の式Ｉの化合物を含む薬学的に許容される組成物を提供している。以下に詳細に説明するように、本発明の医薬組成物は、固体または液体形態で投与するために特別に処方されてもよく、例えば、（１）経口、例えば水薬（水性または非水性溶液または懸濁液）、錠剤、例えば口腔、舌下、及び体内吸収、ボーラス、粉末、顆粒剤、舌に適用するためのペースト、（２）非経口投与、例えば、無菌溶液または懸濁液、または徐放性製剤として、例えば、皮下、筋肉内、静脈内または硬膜外注射、（３）例えばクリーム、軟膏、または皮膚に適用するための徐放性パッチまたはスプレーとしての局所適用、（４）例えば、ペッサリー、クリームまたはフォームとして膣内または直腸内、（５）舌下、（６）眼、（７）経皮、または（８）経鼻のために適用される。
【００９２】
「薬学的に許容される」という語句は、安全な医学的判断の範囲内で、ヒトや動物の組織に接触させて使用するのに適しており、毒性、刺激、アレルギー反応、またはその他の問題もしくは合併症を有して、妥当なベネフィット／リスク比に見合っている化合物、材料、組成物及び／または剤形を指す。
【００９３】
本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」という語句は、液体または固体充填剤、希釈剤、賦形剤、製造補助剤（例えば、潤滑剤、タルクマグネシウム、カルシウム、もしくはステアリン酸亜鉛、またはステアリン酸）、または化合物を対象の臓器もしくは身体の一部分から別の臓器もしくは身体の一部分へ運ぶまたは輸送することに関与する、物質を内包している溶媒等の薬学的に許容される物質、組成物またはビヒクルを意味する。各担体は、製剤のその他の成分と適合性があり、患者に有害でないという意味で、「許容可能」でなければならない。薬学的に許容される担体として使用することができる物質のいくつかの例として、（１）ラクトース、ブドウ糖及びショ糖等の糖類、（２）コーンスターチ、片栗粉等のデンプン、（３）カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース及びアセチルセルロース等のセルロース及びその誘導体、（４）粉末トラガカント、（５）モルト、（６）ゼラチン、（７）タルク、（８）ココアバター及び坐剤ワックス等の賦形剤、（９）ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、ダイズ油等の油類、（１０）プロピレングリコール等のグリコール、（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール等のポリオール、（１２）オレイン酸エチル、ラウリン酸エチル等のエステル、（１３）寒天、（１４）水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム等の緩衝剤、（１５）アルギン酸、（１６）パイロジェンを含まない水、（１７）等張生理食塩水、（１８）リンガー液、（１９）エチルアルコール、（２０）ｐＨ緩衝液、（２１）ポリエステル、ポリカーボネート及び／またはポリ無水物、ならびに（２２）医薬製剤に適用されるその他の非毒性親和性物質が挙げられる。
【００９４】
前述のように、本発明の化合物の特定の実施形態は、アミノまたはアルキルアミノ等の塩基性官能基を含有していてもよく、このように、薬学的に許容される酸で薬学的に許容される塩を形成することができる。この態様の中の「薬学的に許容される塩」という用語は、本発明の化合物の比較的、非毒性、無機及び有機酸付加塩を指す。これらの塩は、投与ビヒクルまたは剤形製造プロセスにおいて、その遊離塩基形態の本発明の精製化合物を、適切な有機酸または無機酸と個別に反応させ、次の精製の間に形成された塩を単離させることによって、ｉｎ  ｓｉｔｕで調製することができる。代表的な塩として、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル酸塩、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩、及びラウリルスルホン酸塩等が挙げられる。（例えば、Ｂｅｒｇｅら、（１９７７）“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ”、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９を参照のこと）。
【００９５】
対象の化合物の薬学的に許容される塩として、例えば非毒性有機酸または無機酸からの従来の非毒性塩または化合物の第四級アンモニウム塩が挙げられる。例えば、このような従来の非毒性塩として、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸等の無機酸から誘導されるもの、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パルミチン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イソチオン酸等の有機酸から調製される塩が挙げられる。
【００９６】
他の場合では、本発明の化合物は、１つ以上の酸性官能基を含んでいてもよく、それによって薬学的に許容される塩基で薬学的に許容される塩を形成することができる。これらの例の中の「薬学的に許容される塩」という用語は、本発明の化合物の比較的、非毒性の無機及び有機酸付加塩を指す。これらの塩は、投与ビヒクルまたは剤形製造プロセスにおいて、その遊離塩基形態の精製化合物を、薬学的に許容される金属カチオンの水酸化物、炭酸塩または重炭酸塩と、アンモニアと、または薬学的に許容される有機第一級、第二級もしくは第三級アミンと個別に反応させることによって、同様にｉｎ  ｓｉｔｕで調製することができる。代表的なアルカリまたはアルカリ土類塩として、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、及びアルミニウム塩等が挙げられる。塩基付加塩の形成に有用な代表的な有機アミンとして、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン等が挙げられる。（例えば、Ｂｅｒｇｅら、前掲を参照のこと）。
【００９７】
ラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウム等の湿潤剤、乳化剤、潤滑剤、ならびに着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味料、着香剤及び香料、保存剤及び抗酸化剤は、または組成物中に存在することができる。
【００９８】
薬学的に許容される抗酸化剤として、（１）アスコルビン酸、塩酸システイン、硫酸水素ナトリウム、二亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等の水溶性抗酸化剤、（２）パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α−トコフェロール等の油溶性抗酸化剤、及び（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸等の金属キレート剤が挙げられる。
【００９９】
本発明の製剤は、経口、鼻腔、口腔及び舌下を含む局所、直腸、膣及び／または非経口投与に適したものが含まれる。当該製剤は、優位なこととして単位剤形で提供することができ、薬学分野に周知の任意の方法によって調製することができる。単一剤形を製造するために担体材料と組み合わせることができる有効成分の量は、治療を受ける宿主、特定の投与様式によって変化する。単一剤形を製造するために担体材料と組み合わせることができる有効成分の量は、一般に、治療効果が生じる化合物の量である。一般に、１００％のうち、この量は、有効成分の約０．１％〜約９９％、好ましくは約５％〜約７０％、最も好ましくは約１０％〜約３０％である。
【０１００】
特定の実施形態では、本発明の製剤は、シクロデキストリン、セルロース、リポソーム、ミセル形成剤、例えば胆汁酸、及び高分子担体、例えば、ポリエステル及びポリ無水物から成る群から選択される賦形剤、ならびに本発明の化合物を含む。特定の実施形態では、前述の製剤は、本発明の化合物を、経口的に生物学的に利用可能にする。
【０１０１】
これらの製剤または組成物を調製する方法は、本発明の化合物を、担体、任意に１つ以上の補助成分と会合させるステップを含む。一般に、当該製剤は、本発明の化合物を、液体担体、または微細に分けられた固体担体、またはその両方と均一かつ密接に会合し、必要に応じて製品を形成することによって、調製する。
【０１０２】
経口投与に適した製剤は、カプセル、カシェ剤、丸剤、錠剤、トローチ剤（通常、スクロース、及びアカシアまたはトラガカントといった風味づけを使用する）、粉末、顆粒の形態で、または水中油型もしくは油中水型乳剤として、またはエリキシルもしくはシロップとして、またはトローチ（ゼラチン及びグリセリンまたはスクロース及びアカシアを使用する）として、及び／またはマウスウォッシュとしてでもよく、それぞれ有効成分として事前に定められた量の本発明の化合物を含有する。本発明の化合物はまた、ボーラス、舐剤またはペーストとして投与してもよい。
【０１０３】
経口投与（カプセル、錠剤、丸剤、糖衣丸、粉末、トローチ等）のための本発明の固体剤形では、有効成分は、クエン酸ナトリウムやリン酸二カルシウム等の１つ以上の薬学的に許容される担体と混合され、その他にも（１）デンプン、ラクトース、ショ糖、ブドウ糖、マンニトール及び／またはケイ酸等の充填剤または増量剤、（２）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ショ糖及び／またはアカシア等の結合剤、（３）グリセロール等の湿潤剤、（４）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカでんぷん、アルギン酸、特定のケイ酸塩と炭酸ナトリウム等の崩壊剤、（５）パラフィン等の溶液遅延剤、（６）第四級アンモニウム化合物等の吸収促進剤及びポロクサマー及びラウリル硫酸ナトリウム等の界面活性剤、（７）例えば、セチルアルコール、モノステアリン酸グリセリン、及び非イオン性界面活性剤等の湿潤剤、（８）カオリン及びベントナイト粘土等の吸収剤、（９）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸及びその混合物、（１０）着色剤、ならびに（１１）クロスポビドンまたはエチルセルロース等の徐放剤と混合される。カプセル、錠剤及び丸薬の場合、医薬組成物はまた、緩衝剤を含んでもよい。同様の種類の固体組成物は、ラクトースまたは乳糖、ならびに高分子ポリエチレングリコール等の賦形剤を使用して、軟質及び硬質の殻のゼラチンカプセル中の充填剤として使用することもできる。
【０１０４】
錠剤は、任意に１つ以上の補助成分と共に圧縮または成形することによって製造されてもよい。圧縮錠剤は、結合剤（例えば、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑剤、不活性希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウムまたは架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、表面活性剤もしくは分散剤を用いて調製してもよい。成形錠剤は、適切な機械で、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末の化合物を混合したものを成形することによって製造してもよい。
【０１０５】
糖衣錠、カプセル剤、丸剤、及び顆粒剤等の本発明の医薬組成物の錠剤、及びその他の固体剤形は、医薬製剤分野で周知の腸溶コーティング剤及びその他のコーティング剤等のコーティング剤及びシェルで、スコアまたは調製されてもよい。当該錠剤及びその他の固体剤形はまた、例えば、様々な割合でヒドロキシプロピルメチルセルロースを使用して、剤形中の有効成分を徐放または制御して放出させるために製剤化し、所望の放出特性、その他のポリマーマトリックス、リポソーム及び／またはミクロスフィアを提供してもよい。それらは、速放性放出、例えば凍結乾燥するために処方されてもよい。それらは、例えば、細菌保持フィルターによって濾過する、または滅菌水、もしくは使用直前にいくつか他の滅菌注射用媒体に溶解することのできる、滅菌固体組成物の形態で、滅菌剤を組み込むことによって滅菌することができる。これらの組成物は、不透明化剤を含んでいてもよく、消化管の特定の部位に、任意に遅延様式で有効成分のみをまたは優先的に放出する組成物であってもよい。使用することができる埋封組成物の例として、ポリマー物質及びワックスが挙げられる。有効成分は、適宜、１つ以上の前述の賦形剤と共に、マイクロカプセル化形態であってもよい。
【０１０６】
本発明の化合物を経口投与するための液体剤形として、薬学的に許容される乳剤、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ及びエリキシル剤が挙げられる。有効成分の他に、液体剤形は、当該技術分野で多く使用される不活性希釈剤を含んでいてもよく、例えば、水または他の溶媒、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール及び脂肪酸エステルソルビタン等の可溶化剤及び乳化剤、ならびにその混合物が挙げられる。
【０１０７】
不活性希釈剤以外に、経口組成物はまた、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、甘味料、香味料、及び香料等のアジュバントも含むことができる。
【０１０８】
活性化合物の他に、懸濁剤は、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天及びトラガカント、及びこれらの混合物等の懸濁剤を含んでもよい。
【０１０９】
直腸または膣投与のための本発明の医薬組成物の製剤は、坐剤として提供されてもよく、本発明の１つ以上の化合物を、例えば、ココアバター、ポリエチレングリコール、坐剤ワックスまたはサリチル酸塩と混合させることによって調製してもよく、室温では固体であるが、体温では液体となり、そうすることで直腸または膣腔で溶解し、活性化合物を放出する。
【０１１０】
膣内投与に適した本発明の製剤としてまた、当該技術分野で周知である担体を含む、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム、またはスプレー製剤が挙げられる。
【０１１１】
本発明の化合物の局所または経皮投与用の剤形として、粉末、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パッチ及び吸入剤が挙げられる。活性化合物は、無菌条件下で、薬学的に許容される担体、及び必要とされ得る任意の保存剤、緩衝剤、または噴射剤と混合することができる。
【０１１２】
軟膏、ペースト、クリーム及びゲルは、本発明の活性化合物の他に、動物性及び植物性脂肪、油、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルク、及び酸化亜鉛、またはそれらの混合物等の賦形剤を含んでいてもよい。
【０１１３】
粉末及びスプレーは、本発明の化合物の他に、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム及びポリアミド粉末、またはこれらの物質の混合物等の賦形剤を含有することができる。スプレーは、さらにクロロフルオロ炭素水素等の通常の噴射剤ならびにブタン及びプロパン等の揮発性非置換炭化水素を含むことができる。
【０１１４】
経皮パッチは、本発明の化合物を身体に制御して送達させるというさらなる利点を有する。当該剤形は、適切な媒体に化合物を溶解または分散することによって作製することができる。吸収促進剤はまた、皮膚を横切る化合物の流動を増加させるために使用することもできる。その流動の速度は、律速している膜を提供する、もしくはポリマーマトリックスまたはゲル中に化合物を分散させることによって、制御することができる。
【０１１５】
眼科用製剤、眼軟膏、粉末、溶液等もまた、本発明の範囲内であると考えられる。
【０１１６】
非経口投与に適した本発明の医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される滅菌の等張水性または非水性溶液、分散剤、懸濁液、エマルジョン、または、使用直前に滅菌注射用溶液または分散液に再構成することができる滅菌粉末を組み合わせて、１つ以上の本発明の化合物を含み、糖類、アルコール、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、目的のレシピエントの血液に等張な製剤になる溶質または懸濁剤または増粘剤を含んでいてもよい。
【０１１７】
本発明の医薬組成物に使用できる適切な水性及び非水性担体の例として、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等）、及びそれらの適切な混合物、オリーブオイル等の植物油、ならびにオレイン酸エチル等の注射用有機エステルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチン等のコーティング材料を使用することよって、分散液の場合には必要な粒子サイズを維持することによって、界面活性剤を使用することによって維持することができる。
【０１１８】
これらの組成物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤等のアジュバントを含んでいてもよい。対象化合物での微生物の活動の防止は、種々の抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸等を含めることによって確実にすることができる。また、糖、塩化ナトリウム等の等張剤を組成物に含むことが望ましい。さらに、注射可能な剤形の持続的吸収は、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチン等の吸収を遅らせる薬剤を含むことによって行うことができる。
【０１１９】
いくつかの場合では、薬物の効果を延長するために、皮下または筋肉内注射からの薬物の吸収を遅くすることが望ましい。これは、水溶性の低い結晶状または非晶質材料の液体懸濁液を使用することによって達成することができる。薬物の吸収速度は、その溶解速度に依存し、順に結晶のサイズ及び結晶質形態に依存し得る。あるいは、非経口的に投与された薬物形態の遅延吸収は、薬物を油状ビヒクルに溶解または懸濁することによって達成される。
【０１２０】
注射用デポー形態は、ポリラクチド−ポリグリコリド等の生分解性ポリマーに対象化合物のマイクロカプセルマトリックスを形成することによって作製される。ポリマーに対する薬物の比と使用される特定のポリマーの性質に応じて、薬物の放出速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例として、ポリ（オルトエステル）及びポリ（無水物）が挙げられる。デポー注射製剤はまた、身体組織に適合するリポソームまたはマイクロエマルジョン中に薬物を閉じ込めることによっても調製される。
【０１２１】
本発明の化合物は、ヒト及び動物に、医薬品として投与され、それ自体または薬学的に許容される担体と組み合わせて、例えば、有効成分の０．１〜９９％（好ましくは１０〜３０％）を含む医薬組成物として投与することができる。
【０１２２】
本発明の製剤は、経口、非経口、局所、または直腸に投与することができる。それらはもちろん、各投与経路に適した形態で投与される。例えば、それらは、錠剤またはカプセルの形態で、注射、吸入、目薬、軟膏、座薬等による投与、注射、注入または吸入による投与、ローションまたは軟膏による局所投与、及び座薬による直腸投与によって投与される。経口投与が好ましい。
【０１２３】
本明細書で使用される「非経口投与」及び「非経口で投与された」という語句は、経腸及び局所投与以外の投与様式を意味し、通常、注射によるものであり、以下に限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、髄腔内及び胸骨内の注射及び注入が挙げられる。
【０１２４】
本明細書で使用される「全身投与」、「全身的に投与された」、「末梢投与」、「末梢に投与された」は、中枢神経系への直接的な投与をしないで、化合物、医薬品、またはその他の物質を投与することを意味し、このようにして、患者の器官に進入し、代謝や例えば皮下投与といったプロセスと同様の対象となる。
【０１２５】
これらの化合物は、適切な投与経路、例えば、経口、例えばスプレーによる鼻腔内、直腸、膣内、非経口、大槽内、粉末または液滴によって局所に、あるいは口腔、舌下に、治療のためにヒト及びその他の動物に投与することができる。
【０１２６】
選択した投与経路にかかわらず、本発明の化合物は、適切な水和形態で使用してもよく、及び／または本発明の医薬組成物を当業者に周知の従来の方法で、薬学的に許容される剤形に製剤化する。
【０１２７】
本発明の医薬組成物中の活性成分の実際の投与レベルは、患者に毒性を示すことなく、特定の患者によって望ましい治療応答を達成するのに効果的な量の有効成分、組成物、及び投与様式を得るために、変化する場合がある。
【０１２８】
選択される投与レベルは、使用される本発明の化合物の活性、またはそのエステル、塩もしくはアミド、投与経路、投与時間、使用される特定の化合物の排泄または代謝速度、吸収速度と程度、治療期間、他の医薬品、使用される特定の化合物と組み合わせて使用される化合物及び／または物質、年齢、性別、体重、健康状態、治療を受ける患者の病歴を含む様々な要因、当該技術分野で周知の同様の要因に依存する。
【０１２９】
当該技術分野で通常の技術を有する医師または獣医師は、容易に、必要とされる医薬組成物の有効量を決定し処方することができる。例えば、医師または獣医師は、医薬組成物中に使用される本発明の化合物の用量を、所望の治療効果を達成するために、必要とされるレベルより低いレベルから始めて、所望の効果が達成されるまで用量を徐々に増加させるものと思われる。
【０１３０】
一般に、本発明の化合物の適当な１日用量は、治療効果が生じるのに有効な最低用量の化合物の量になる。このような有効用量は、一般に、上述の要因に依存する。一般的に、経口、静脈内、脳室内及び静脈内の化合物の用量は、示された鎮痛効果のために使用される場合、１日あたり体重１ｋｇあたり約０．０００１〜約１００ｍｇの範囲である。
【０１３１】
特定の実施形態では、化合物または組成物の用量は、毎日、１日おき、２日おき、３日おき、週に１回、週に２回、週に３回、２週間に１回、対象に投与される。所望であれば、活性化合物の効果的な１日用量は、単位剤形で、一日を通して適切な間隔で、個別に２、３、４、５、６、またはそれ以上のサブ用量で投与してもよい。いくつかの実施形態では、化合物または組成物の用量は、２日、３日、５日、７日、１４日、または２１日間投与される。特定の実施形態では、化合物または組成物の用量は、１カ月、１．５カ月、２カ月、２．５カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月以上投与される。
【０１３２】
上述の投与スケジュールは、例示する目的のためだけに提供され、限定するものではない。当業者は容易にすべての用量が本発明の範囲内であることを理解する。
【０１３３】
本発明の化合物は単独で投与することが可能であるが、医薬製剤（組成物）として化合物を投与することが好ましい。
【０１３４】
この治療を受ける患者は、治療を必要とする任意の動物、例えば、霊長類、特にヒトであり、ウマ、ウシ、ブタやヒツジ、及び一般的な家禽とペットである。
【０１３５】
本発明の化合物は、薬学的に許容される担体との混合物として投与することができ、ペニシリン、セファロスポリン、アミノグリコシド及びグリコペプチド等の抗菌剤と組み合わせて投与することもできる。連結的な療法は、最初に投与された当該化合物の治療効果が、次に投与されるときに完全に消えていないような方法で、活性化合物を連続的、同時及び別々に投与することを含む。
【０１３６】
動物飼料への本発明の活性化合物の添加は、有効量の活性化合物を含む適切な飼料プレミックスを調製し、そのプレミックスを完全な給餌量に組み込むことによって達成されることが好ましい。
【０１３７】
あるいは、有効成分を含む中間濃縮物または飼料サプリメントを飼料に配合することができる。このような飼料プレミックスと完全な給餌量を調製し、投与することができる方法は、参考図書に記述されている（例えば、“Ａｐｐｌｉｅｄ  Ａｎｉｍａｌ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ”、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｄｍａｎ  ａｎｄ  ＣＯ．、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、Ｕ．Ｓ．Ａ．、１９６９または“Ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ  Ｆｅｅｄｓ  ａｎｄ  Ｆｅｅｄｉｎｇ”  Ｏ  ａｎｄ  Ｂ  ｂｏｏｋｓ、Ｃｏｒｖａｌｌｉｓ、Ｏｒｅ．、Ｕ．Ｓ．Ａ．、１９７７）。
【０１３８】
マイクロ乳化技術は、親油性（水不溶性）薬剤の生物学的利用能を改善するために用いることができる。例としてＴｒｉｍｅｔｒｉｎｅ（Ｄｏｒｄｕｎｏｏ、Ｓ．Ｋ．，ら、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、１７（１２）、１６８５−１７１３、１９９１）及びＲＥＶ  ５９０１（Ｓｈｅｅｎ、Ｐ．Ｃ．、ら、Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８０（７）、７１２−７１４、１９９１）が挙げられる。とりわけ、マイクロ乳化は、優先的に、循環器系の代わりにリンパ系に直接的に吸収させることによって生物学的利用能を高め、それによって、肝臓を迂回し、肝胆循環で前記化合物が破壊されるのを防いでいる。
【０１３９】
本発明の一態様では、前記製剤は、本発明の化合物と少なくとも１つの両親媒性担体から形成されるミセルを含有し、そのミセルは約１００ｎｍ未満の平均直径を有する。より好ましい実施形態は、約５０ｎｍ未満の平均直径を有するミセルを提供し、より好ましい実施形態は、約３０ｎｍ未満の平均直径を有するミセルを提供し、または約２０ｎｍ未満の平均直径を有するミセルを提供する。
【０１４０】
すべての適切な両親媒性担体が企図されているが、現在好ましい担体は食品医薬品局合格証（ＧＲＡＳ）の状態を一般的に有している担体であり、本発明の化合物を可溶化することも、溶液が錯体水相（ヒトの消化器官に認められるような）と接触する後半のステージでそれをマイクロ乳化することもできる。通常、これらの要求を満たす両親媒性成分は、２〜２０のＨＬＢ値（親水親油バランス）を有しており、それらの構造は、Ｃ−６〜Ｃ−２０の範囲の直鎖脂肪族を含んでいる。例として、ポリエチレングリコール化脂肪酸グリセリド及びポリエチレングリコールがある。
【０１４１】
特に好ましい両親媒性担体は、完全または部分的に水素化された様々な植物油から得られるような飽和及び一不飽和ポリエチレングリコール化脂肪酸グリセリドである。このような油は、有利な点として、カプリン酸４〜１０％、カプリン酸３〜９％、ラウリン酸４０〜５０％、ミリスチン酸１４〜２４％、パルミチン酸４〜１４％及びステアリン酸５〜１５％を含む特に好ましい脂肪酸組成物を伴って、トリ−、ジ−、モノ−脂肪酸グリセリド及び対応する脂肪酸のジ−、モノ−ポリエチレングリコールエステルから構成することができる。両親媒性担体の別の有用なクラスは、一不飽和脂肪酸（ＳＰＡＮ系）または対応するエトキシル化類似体（ＴＷＥＥＮ系）部分的にエステル型ソルビタン及び／またはソルビトールを含む。
【０１４２】
市販の両親媒性担体は特に考慮に入れており、例えば、Ｇｅｌｕｃｉｒｅ系、Ｌａｂｒａｆｉｌ、Ｌａｂｒａｓｏｌ、またはＬａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ（すべてＧａｔｔｅｆｏｓｓｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓａｉｎｔ  Ｐｒｉｅｓｔ、Ｆｒａｎｃｅで製造、販売）、ＰＥＧモノオレート、ＰＥＧジオレート、ＰＥＧモノラウレート及びジラウレート、レシチン、ポリソルベート８０等（米国と世界中のいくつかの企業で製造、販売）が挙げられる。
【０１４３】
本発明における使用に適した親水性ポリマーは、容易に水溶性であり、小胞形質脂質に共有結合的に結合することができ、毒性がない状態でｉｎ  ｖｉｖｏで耐性がある（すなわち生物学的利用能がある）。適切なポリマーとして、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ乳酸（ポリラクチドとも称される）、ポリグリコール酸（ポリグリコリドとも称される）、ポリ乳酸−ポリグリコール酸共重合体、及びポリビニルアルコールが挙げられる。好ましいポリマーは、約１００または１２０ダルトン、最大で約５，０００または１０，０００ダルトンであり、より好ましくは、約３００ダルトン〜約５，０００ダルトンである。特に好ましい実施形態では、ポリマーは、約１００〜約５，０００ダルトンの分子量を有し、より好ましくは、約３００〜約５，０００ダルトンの分子量を有するポリエチレングリコールである。特に好ましい実施形態では、ポリマーは、７５０ダルトンのポリエチレングリコールである（ＰＥＧ（７５０））。本発明で使用されるポリマーは、標準的なペグ化技術で使用される５０００ダルトン以上の大きい分子量と比較して、非常に小さい分子量を有し、約１００ダルトンである。ポリマーはその中のモノマーの数によっても定義され、本発明の好ましい実施形態は、３つのモノマーから構成されるＰＥＧポリマー（約１５０ダルトン）といった少なくとも約３つのモノマーから成るポリマーを使用している。
【０１４４】
本発明で使用するのに適切であり得る他の親水性ポリマーとして、ポリビニルピロリドン、ポリメトキサゾリン、ポリエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、及びヒドロキシメチルセルロースまたはヒドロキシエチルセルロース等の誘導体化セルロースが挙げられる。
【０１４５】
特定の実施形態では、本発明の製剤は、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレン、アクリル及びメタクリル酸エステルのポリマー、ポリビニルポリマー、ポリグリコリド、ポリシロキサン、ポリウレタン及びそのコポリマー、セルロース、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、乳酸及びグリコール酸のポリマー、ポリ無水物、ポリ（オルト）エステル、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド−コ−カプロラクトン）、多糖類、タンパク質、ポリヒアルロン酸、ポリシアノアクリレート、それらのブレンド、混合物、またはコポリマーから成る群から選択される生体適合性ポリマーを含む。
【０１４６】
本発明の製剤の放出特性は、封入材料、封入された医薬品の濃度、及び放出調節剤の存在に依存する。例えば、放出は、腸のように低いｐＨでのみ放出する、または胃のように高いｐＨで放出するｐＨ感受性コーティング剤を使用して、ｐＨ依存的に操作することができる。腸溶コーティングは、発生から胃の通過後までに放出するのを防ぐために使用することができる。複数のコーティング剤または異なる材料にカプセル化されたシアナミドの混合物は、胃で最初に放出され、後に腸で放出されるように使用することができる。放出は、塩または孔形成剤を含ませることによって操作することもでき、カプセルからの拡散による医薬品の水の取り込みまたは放出を増加させることができる。当該医薬品の溶解度を調製する賦形剤もまた、放出速度を制御するために使用することができる。マトリックスの分解またはマトリックスからの放出を高める薬剤も考慮に入れてもよい。それらの薬剤を医薬品に添加することができ、分離相として（すなわち微粒子として）添加することができ、または化合物によってはポリマー相に共溶解させることもできる。すべての場合において、その量は０．１〜３０％（ｗ／ｗポリマー）の間にあるべきである。分解促進剤の種類として、硫酸アンモニウム及び塩化アンモニウム等の無機塩、クエン酸、安息香酸、及びアスコルビン酸等の有機酸、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸亜鉛、及び水酸化亜鉛等の無機塩基、ならびに硫酸プロタミン、スペルミン、コリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン等の有機塩基ならびにＴｗｅｅｎ（登録商標）やＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）等の界面活性剤が挙げられる。マトリックス（すなわち無機塩または糖等の水溶性化合物）に微細構造を加える孔形成剤を、微粒子として追加する。その範囲は１〜３０％（ｗ／ｗポリマー）にあるべきである。
【０１４７】
取り込みはまた、腸内での粒子の滞留時間を変化させることによって操作することができる。これは、例えば、粘膜粘着性ポリマーと共に粒子をコーティングする、またはカプセル化材料として粘膜粘着性ポリマーを選択することによって達成することができる。例としては、キトサン、セルロース、及び特にポリアクリレート等の遊離カルボキシル基を有する大部分のポリマーが挙げられる（本明細書で使用されるとき、ポリアクリレートは、アクリレート基及びシアノアクリレートやメタクリレート等の修飾アクリレート基を含むポリマーを意味する）。
【０１４８】
上述の投与スケジュールは、例示する目的のためだけに提供され、限定するものではない。当業者は容易にすべての用量が本発明の範囲内であることを理解する。
【０１４９】
本発明の化合物は、有利な点として、それを必要とする患者に第２の薬剤と共に投与することができる。Ｒｈｏキナーゼ阻害剤が第２の薬剤と共に投与されるとき、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤及び第２の薬剤は、逐次的または同時に投与することができる。逐次的とはある時間にある薬剤を投与し、次に第２の薬剤を投与し、次に第１の薬剤を投与してもよいことを意味する。薬剤が逐次的に投与される場合、ある薬剤のレベルは、第２の薬剤が投与されるときに、治療上有効なレベルで維持されていない場合があり、その逆も当てはまる。同時にとは、第１と第２の薬剤が、両方の薬剤が同時に投与されていなくとも、実質的に治療上有効なレベルで維持されるスケジュールに従って、投与されることを意味する。それぞれの薬剤は単回または複数回投与で投与することができ、その用量は、これに限定されないが、１日２回、毎日、毎週、２週に１回、及び毎月といった任意のスケジュールで、投与することができる。
【０１５０】
また、本発明は、補助的投与が含まれる。補助的投与は、疾患または疾患症状を治療するために、患者にすでに投与されている第１の薬剤に追加して、第２の薬剤を投与することを意味する。いくつかの実施形態では、補助的投与は第１の薬剤では疾患または疾患症状に満足のいく治療がなされなかった患者に対して、第２の薬剤を投与することを含む。他の実施形態では、補助的投与は、第１の薬剤の投与によって効果的な治療を受けた患者に対して、補助的治療によって治療の転帰を改善することを期待して、第２の薬剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２の薬剤の投与の効果は相乗的である。いくつかの実施形態では、第１及び第２の薬剤の投与は、どちらかの薬剤を単独で投与した場合と比較して、予防または再発までの時間を延長する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の薬剤の投与は、投与量及び／または第１及び第２の薬剤の投与頻度を減少させることができる。
【０１５１】
本発明の実施形態では、本発明のＲｈｏキナーゼ阻害剤及び抗新生物剤が、それを必要とする対象に投与される。別の実施形態では、本発明のＲｈｏキナーゼ阻害剤と血管新生阻害剤が、それを必要とする対象に投与される。別の実施形態では、本発明のＲｈｏキナーゼ阻害剤と抗炎症剤が、それを必要とする対象に投与される。さらに別の実施形態では、本発明のＲｈｏキナーゼ阻害剤と免疫抑制剤が投与される。第２の薬剤は、これに限定されないが、小分子、抗体またはその抗原結合断片、または放射線であってもよい。
【０１５２】
抗腫瘍剤として、これに限定されないが、細胞傷害性化学療法剤、標的小分子及び生体分子、及び放射線であってもよい。癌治療に投与される化合物及び薬剤は、本発明のＲｈｏキナーゼ阻害剤の他に、イリノテカン、エトポシド、カンプトテシン、５−フルオロウラシル、ヒドロキシ尿素、タモキシフェン、パクリタキセル、カペシタビン、カルボプラチン、シスプラチン、ブレオマイシン、ダクトマイシン、ゲムシタビン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シクロホスファミド、及び体外となり得る放射線治療（例えば、体外照射療法（ＥＢＲＴ））または体内となり得る（例えば、近接照射療法（ＢＴ））が挙げられる。
【０１５３】
標的化小分子及び生物学的分子として、これらに限定されないが、チロシンキナーゼのモジュレーター、受容体チロシンキナーゼの阻害剤、及び腫瘍特異的抗原と結合する薬剤等の、シグナル伝達経路の成分の阻害剤が挙げられる。例として、ゲフィチニブ、エルロチニブ、及びセツキシマブ、ＨＥＲ２の阻害剤（例えば、トラスツズマブ、トラスツズマブエムタンシン（トラスツズマブ−ＤＭ１、Ｔ−ＤＭ１）及びペルツズマブ）、抗ＶＥＧＦ抗体及びそのフラグメント（例えば、ベバシズマブ）、ＣＤ２０を阻害する抗体（例えば、リツキシマブ、イブリツモマブ）、抗ＶＥＧＦＲ抗体（例えば、ラムシルマブ（ＩＭＣ−１１２１Ｂ）、ＩＭＣ−１Ｃ１１、及びＣＤＰ７９１）、抗ＰＤＧＦＲ抗体、及びイマチニブを含む上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）の阻害剤を含む。小分子キナーゼ阻害剤は、特定のチロシンキナーゼに特異的であるか、または２つ以上のキナーゼの阻害剤であることができる。例えば、化合物Ｎ−（３，４−ジクロロ−２−フルオロフェニル）−７−（｛［（３ａＲ、６ａＳ）−２−メチルオクタヒドロシクロペンタ［ｃ］ピロール−５−イル］メチル｝オキシ）−６−（メチルオキシ）キナゾリン−４−アミン（ＸＬ６４７、ＥＸＥＬ−７６４７とＫＤ−０１９としても知られている）は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏのいくつかの受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）の阻害剤であり、例えば、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＫＤＲ（ＶＥＧＦＲ）、Ｆｌｔ４（ＶＥＧＦＲ３）及びＥｒｂＢ２であり、特定のＴＫＩに対する腫瘍の非応答を生じる伝達経路に関与しているＳＲＣキナーゼの阻害剤もある。本発明の実施形態では、治療を必要とする対象の治療は、式ＩのＲｈｏキナーゼ阻害剤とＫＤ−０１９の投与を含む。
【０１５４】
ダサチニブ（ＢＭＳ−３５４８２５、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）は、他の経口的に生物学的に利用可能な、ＡＴＰ部位競合性Ｓｒｃ阻害剤である。ダサチニブはまた、Ｂｃｒ−Ａｂｌ（慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）やフィラデルフィア染色体陽性（Ｐｈ＋）急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の患者に使用することがＦＤＡによって承認された）、ならびにｃ−Ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲ、ｃ−ＦＭＳ、ＥｐｈＡ２及びＳｒｃファミリーキナーゼを標的にする。Ｓｒｃ及びＢｃｒ−Ａｂｌの２つの他の経口チロシンキナーゼ阻害剤は、ボスチニブ（ＳＫＩ−６０６）とｓａｒａｃａｔｉｎｉｂ（ＡＺＤ０５３０）である。
【０１５５】
本発明に従って、血管新生阻害剤は、本発明の化合物と組み合わせて対象に投与することができる。血管新生阻害剤は、新しい血管の成長を阻害する任意の物質が含まれている。例えば、血管新生阻害剤は、本明細書に開示された抗体を含むＶＥＧＦ、ＰｌＧＦ及びＶＥＧＦ受容体のアンタゴニストを含む。阻害剤とは、生物学的プロセスの阻害剤または標的の阻害剤を意味する。この点において、血管新生阻害剤は、血管新生を減少させる薬剤である。Ｒｈｏキナーゼ阻害剤は、ＡＴＰ結合の競合性阻害剤等の薬剤であり、内部活性を阻害し、またはＲｈｏキナーゼの相互作用をブロックする。アンタゴニストとは、標的に関連する細胞内の活性または機能を阻害する物質を意味する。例えば、ＶＥＧＦアンタゴニストは、ＶＥＧＦに関連している細胞内の機能を低下させまたはブロックする。ＶＥＧＦアンタゴニストは、ＶＥＧＦに結合し、その受容体への結合をブロックすることによってＶＥＧＦに作用し、及び／またはＶＥＧＦ媒介性シグナル伝達に関与する別の細胞成分に作用することができる。同様に、ＶＥＧＦＲ２アンタゴニストは、ＶＥＧＦＲ２に結合し、リガンド結合またはＶＥＧＦＲ２基質との相互作用をブロックすることによってＶＥＧＦＲ２媒介性シグナル伝達を低減またはブロックし、またはＶＥＧＦＲ２媒介性シグナル伝達を低減しまたはブロックする別の細胞成分に作用する薬剤である。したがって、血管新生阻害剤は、本明細書に記載の（表１、表２、図１０）抗ＶＥＧＦＲ２抗体を含み、及び、これらに限定されないが、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦ、ＰＤＧＦＲ−β、ニューロピリン−１（ＮＲＰ１）、及び補体のアンタゴニストを含む。
【０１５６】
本発明は、このような抗体を含む組成物及びこのような抗体をコードする核酸を含む抗ＶＥＧＦＲ２抗体を提供する。一実施形態では、本発明は前記ＣＤＲ−１Ｈ、ＣＤＲ−２Ｈ、及びＣＤＲ−３Ｈ配列を含む単離された抗体の重鎖可変ドメインを提供している。
（ｉ）ＣＤＲ−１Ｈ配列は、ＧＦＴＦＳＷＹＸ 1ＭＸ2(配列番号：１８５）であり、ここで、Ｘ1はＶまたはＩであり、Ｘ2はＧまたはＬであり、
（ii）ＣＤＲ−２Ｈ配列は、ＳＩＸ1Ｘ2ＳＧＧＸ3ＴＸ4ＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：１８６）であり、ここで、Ｘ1はＹまたはＧであり、Ｘ2はＰまたはＳであり、Ｘ3はＡまたはＦであり、Ｘ4はＮまたはＤであり、及び
（ｉｉｉ）ＣＤＲ−３Ｈ配列はＧＮＹＦＤＹ（配列番号：３）またはＧＬＡＡＰＲＳ（配列番号：１１）である。
【０１５７】
一実施形態では本発明は、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３を含む単離された軽鎖可変ドメインを提供し、
（ｉ）ＣＤＲ−Ｌ１配列はＸ1ＧＸ2Ｘ3ＬＸ4Ｘ5Ｘ6Ｘ7Ｘ8Ｓ（配列番号：１８７）であり、ここでＸ1は、Ｓ、Ｑ、またはＴであり、Ｘ2はＤ、Ｅ、またはＱであり、Ｘ3はＫ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、またはＡであり、Ｘ4はＧまたはＲであり、Ｘ5はＤ、Ｓ、Ｈ、Ｅ、またはＮであり、Ｘ6はＥ、Ｙ、Ｑ、Ｒ、Ｎであり、Ｘ7はＹ、Ｆ、またはＳであり、Ｘ8はＡまたはＳ、またはＳＧＳＸ1ＳＮＸ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6Ｘ7Ｘ8（配列番号：１８８）であり、ここでＸ1はＳまたはＴであり、Ｘ2はＩまたはＬであり、Ｘ3はＥまたはＧであり、Ｘ4はＴ、ＳまたはＮであり、Ｘ5はＮまたはＹであり、Ｘ6はＴ、Ｐ、ＡまたはＹであり、Ｘ7はＶまたはＬであり、Ｘ8はＮ、Ｉ、Ｙ、またはＸ1ＧＸ2ＳＸ3ＤＸ4ＧＸ5ＹＤＹＶＳ（配列番号：１８９）であり、ここでＸ1はＡまたはＴであり、Ｘ2はＳまたはＴであり、Ｘ3はＨ、ＳまたはＮであり、Ｘ4はＩまたはＶであり、Ｘ5はＳまたはＡであり、
（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ２配列は、Ｘ1Ｘ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5ＰＳ（配列番号：１９０）であり、ここで、前記Ｘ1はＱ、Ｄ、Ｔ、Ｙ、Ｓ、またはＡであり、Ｘ2はＤ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、またはＶであり、Ｘ3はＤ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、またはＹであり、Ｘ4はＱ、Ｋ、Ｎ、またはＬであり、Ｘ5はＲまたはＬであり、及び
（ｉｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ３配列はＱＸ1ＷＸ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6Ｘ7Ｘ8（配列番号：１９１）であり、ここで、Ｘ1はＡまたはＴであり、Ｘ2はＤまたはＧであり、Ｘ3はＲまたはアミノ酸なしであり、Ｘ4はＳ、Ｆ、またはＮであり、Ｘ5はＳ、ＴまたはＮであり、Ｘ6はＳ、ＴまたはＰであり、Ｘ7はＡ、Ｖ、Ｌ、ＩまたはＹであり、Ｘ8はＶまたはＬ、またはＡＸ1ＷＤＤＸ2ＬＸ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6（配列番号：１９２、ここで、Ｘ1はＡ、Ｓ、またはＴであり、Ｘ2はＮまたはＳであり、Ｘ3はＮ、Ｉ、またはＧであり、Ｘ4はＧまたはＳであり、Ｘ5はＰ、Ｗ、またはＶであり、Ｘ6はＶまたはＬであり、またはＭＹＳＴＩＴＸ1ＬＬ（配列番号：１９３）であり、ここで、Ｘ1はＡまたはＴである。
【０１５８】
一実施形態では、本発明は、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３を含む単離された軽鎖可変ドメインを提供し、
（ｉ）ＣＤＲ−Ｌ１配列は、ＲＡＳＸ1Ｘ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6Ｘ7ＹＸ8Ｘ9（配列番号：１９４）であり、ここで、Ｘ1はＱ、Ｅ、またはＨであり、Ｘ2はＳ、Ｒ、またはＮであり、Ｘ3はＶ、Ｉ、またはＬであり、Ｘ4はＳ、Ｒ、ＧまたはＮであり、Ｘ5はＳまたはＮであり、Ｘ6はＳ、Ｎ、Ｗ、またはＤであり、Ｘ7はＧまたはアミノ酸なしであり、Ｘ8はＬまたはＦであり、Ｘ9はＡ、Ｇ、Ｍ、またはＳであり、
（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ２配列はＧＡＳＸ1ＲＡＴ（配列番号：１９５）であり、ここで、Ｘ1はＳ、Ｔ、Ｉ、またはＮであり、
（ｉｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ３配列はＱＱＸ1Ｘ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6Ｘ7Ｘ8（配列番号：１９６）、ここで、Ｘ1はＦまたはＹであり、Ｘ2はＤ、Ｇ、またはＹであり、Ｘ3はＳ、Ｔ、またはＮであり、Ｘ4はＳ、Ｌ、またはＷであり、Ｘ5はＰまたはアミノ酸なしであり、Ｘ6はＰまたはＴであり、Ｘ7はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｐ、Ｗ、またはＹであり、Ｘ8はＴまたはＳである。
【０１５９】
本発明の実施形態では、１、２、３、４、５、または６個の軽鎖可変ドメイン及び前述の重鎖可変ドメインのＣＤＲ配列を含む重鎖可変ドメインを含む抗体を提供している。
【０１６０】
ＶＥＧＦＲ２結合抗体配列の非限定的な例を提供している。本明細書に記載されているように、ヒトＦａｂファージディスプレイライブラリから、ヒトＶＥＧＦＲ２に結合し、リガンドＶＥＧＦＡのｈＶＥＧＦＲ２への結合をブロックし、ＶＥＧＦＲ２リン酸化及び  ＶＥＧＦＡによって刺激される下流シグナル伝達を阻害する２つの中和抗体が同定された。表１は、ＣＤＲのアミノ酸配列及び抗体の可変ドメインを示す。Ｍａｂ１０１とＭａｂ１０２のＫdはそれぞれ、約６．６ｍＭと約１．７ｎＭである。
【０１６１】
【表１】
0006507157.tif 000008
【０１６２】
Ｍａｂ１０１の重鎖は、κ軽鎖遺伝子（κ−ライブラリ）とλ軽鎖遺伝子（λ−ライブラリ）で再編成された。２０個のユニークなλ軽鎖変異体は、ヒトＶＥＧＦＲ２とマウスＶＥＧＦＲ２の両方に対してλ−ライブラリをパニングすることによって認められた。２２個のユニークなκ軽鎖変異体は、ヒトＶＥＧＦＲ２とマウスＶＥＧＦＲ２の両方に対してκ−ライブラリをパニングすることによって認められた。表２は、ＣＤＲ及び軽鎖の可変ドメインのアミノ酸配列を示す。Ｍａｂ１０５、１０６、及び１０７のＫＤは、約１０倍増加した（それぞれ０．２４ｎＭ、０．２２ｎＭ、０．１２ｎＭ）。
【０１６３】
【表２】
0006507157.tif 000009
【０１６４】
本発明は、単離されたＶＥＧＦＲ２抗体及びそのＶＥＧＦＲ２結合フラグメントを提供し、１、２または３個の重鎖ＣＤＲ及び１、２または３個の軽鎖ＣＤＲを含み、表１及び表２に記載の配列から選択される。本発明の抗体では、２つ以上のＣＤＲが表１及び表２に表された配列から選択されるとき、異なるＣＤＲはこれらの表に表された同モノクロナール抗体から選択される必要はないが、この表に表された２つ以上の抗体可変ドメインから選択することができる。具体的な実施形態として、限定されないが、以下に挙げられる。本発明の実施形態では、単離されたＶＥＧＦＲ２抗体は、配列番号：１、配列番号：２及び配列番号：３を有する１、２、３個の重鎖ＣＤＲを含む。本発明の一実施形態では、抗体は配列番号：５、配列番号：６及び配列番号：７を有する１、２、３個の軽鎖ＣＤＲを含む。別の実施形態では、抗体は、表１または表２に記載の配列を有する１、２または３個の軽鎖ＣＤＲを含む。非限定的な例として、配列番号：２５、配列番号：２６、配列番号：２７の１つ以上、配列番号：２９、配列番号：３０、配列番号：３１の１つ以上、配列番号：３３、配列番号：３４、配列番号：３５の１つ以上を含む軽鎖可変ドメインが挙げられる。特定の実施形態では、ＶＥＧＦＲ２抗体は、配列番号：４または配列番号：１２を含む重鎖可変ドメインを含む。特定の実施形態では、ＶＥＧＦＲ２抗体は、配列番号：８、配列番号：１６、配列番号：２７、配列番号：３１、または配列番号：３５を含む軽鎖可変ドメインを含む。特定の実施形態では、抗体は、前述の重鎖可変ドメインの１つ及び前述の軽鎖可変ドメインの１つを含む。特定の実施形態では、ＶＥＧＦＲ２抗体またはその結合フラグメントは、表１、２、または３に記載のＣＤＲ及び可変ドメイン配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲまたは１つ以上の可変ドメインを含む。特定の実施形態では、本発明の抗体は、本明細書に開示されるものと同一のＣＤＲアミノ酸及び少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％同一のフレームワークを有する。
【０１６５】
「同一性」とは、ギャップの数、各ギャップの長さを考慮に入れて、２つのアミノ酸または核酸配列によって共有される同一の位置の数または割合を指し、２つの配列の最適なアライメントのために導入される必要がある。「実質的に同一の」は、保存的アミノ酸置換、例えば、１つのアミノ酸の同じクラスの別のアミノ酸への置換（例えば、バリンのグリシンへの置換、アルギニンのリシンへの置換等）によってのみ置換され、または１つ以上の非保存的アミノ酸置換、欠失、もしくはタンパク質の機能を破壊しないアミノ酸配列の位置に配置される挿入によって、異なるアミノ酸配列を意味する。好ましくは、アミノ酸配列は、別のアミノ酸配列と少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、最も好ましくは少なくとも９０％類似している。配列類似性を決定するための方法及びコンピュータプログラムは一般に入手可能であり、これらに限定されないが、ＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １２：３８７、１９８４）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３（１９９０）、及びＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）が挙げられる。周知のＳｍｉｔｈ  Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムも類似性を決定するために使用することができる。ＢＬＡＳＴプログラムは、ＮＣＢＩ及び他のソース（ＢＬＡＳＴ  Ｍａｎｕａｌ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ら、ＮＣＢＩ  ＮＬＭ  ＮＩＨ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．２０８９４；ＢＬＡＳＴ  ２．０、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｌａｓｔ／）から一般に入手可能である。配列を比較すると、これらの方法は、種々の置換、欠失、及びその他の変更を考慮している。保存的置換は、典型的には、以下の群、グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン；セリン、トレオニン、リジン、アルギニン；及びフェニルアラニン、チロシン内の置換を含む。
【０１６６】
本発明の特定の実施形態は、ＶＥＧＦＲ２結合抗体フラグメントの使用を含む。Ｆｖは、完全な重鎖及び軽鎖可変ドメインを含む最小のフラグメントであり、６つの超可変ループ（ＣＤＲ）すべてを含む。定常ドメインを欠いて、可変ドメインが非共有結合的に結合している。重鎖及び軽鎖は、ＶH及びＶLドメインに結合し、抗原結合部位を形成することのできるリンカーを使用して、単一ポリペプチド鎖（「単一鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」）に結合されてもよい。本発明の実施形態では、リンカーは（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）3である。ｓｃＦｖフラグメントは、全抗体の定常領域を欠いているため、抗体全体よりも非常に小さい。ｓｃＦｖフラグメントはまた、特定の実施形態では望まれない場合もあるその他の生体分子との正常な重鎖定常領域の相互作用を含んでいない。
【０１６７】
ＶH、ＶL、任意にＣL、ＣH１を含む抗体のフラグメント、または他の定常ドメインを使用することもできる。パパイン消化により生成される抗体の一価フラグメントは、Ｆａｂと呼ばれ、重鎖ヒンジ領域を欠いている。ペプシン消化によって生成されるフラグメントは、Ｆ（ａｂ’）2と呼ばれ、重鎖ヒンジを保持し、二価である。このようなフラグメントはまた、組換えにより産生され得る。多くの他の有用な抗原結合抗体フラグメントは、当技術分野で周知であり、以下に限定されないが、ダイアボディ、トリアボディ、単一ドメイン抗体、及び他の一価及び多価形態が挙げられる。
【０１６８】
本発明は、多価抗原タンパク質をさらに提供し、これらに限定されないが、抗体、その抗原結合フラグメント、及び抗体の抗原結合部位のすべてまたは一部分を含むタンパク質の形態で存在することができる。多価の抗原結合タンパク質は単一特異性、二重特異性、または多重特異性であってもよい。特異性という用語は、特定の分子が結合し得る異なる種類の抗原決定基の数を指す。免疫グロブリン分子が抗原決定基の一種類のみに結合する場合、その免疫グロブリン分子は単一特異性である。異なる種類の抗原決定基に結合する場合、その免疫グロブリン分子は多重特異性である。
【０１６９】
例えば、二重特異性の多価単鎖抗体は、２つの異なる種類のエピトープの認識が可能になる。両方のエピトープは、同じ抗原上（例えば、ＶＥＧＦＲ２）にあってもよい。あるいは、１つのエピトープは１つの抗原上にあってもよく（例えば、ＶＥＧＦＲ２）、第２のエピトープは異なる抗原上あってもよい。
【０１７０】
一実施形態では、多価の単鎖抗体は、様々な重鎖−フラグメントと結合され（ｓｃＦｖに類似している）と結合される様々な軽鎖−フラグメントを含み、少なくとも１つの他の抗原結合ドメインと、別のペプチドリンカーによってさらに結合されている。一般的に、ペプチドリンカーは、約１５個のアミノ酸残基から構成されている。好ましい実施形態では、ＶLとＶHドメインの数は同等である。例えば、二価の単鎖抗体は、ＶL−Ｌ1−ＶH−Ｌ2−ＶL−Ｌ3−ＶHまたはＶL−Ｌ1−ＶH−Ｌ2−ＶH−Ｌ3−ＶLまたはＶH−Ｌ1−ＶL−Ｌ2−ＶH−Ｌ3−ＶLまたはＶH−Ｌl−ＶL−Ｌ2−ＶＬ−Ｌ3−ＶHとして表すことができる。三価以上である多価の単鎖抗体は、追加のペプチドリンカーによって、二価の単鎖抗体と結合される１つ以上の抗体フラグメントを有する。三価単鎖抗体の一例としてＶL−Ｌ1−ＶH−Ｌ2−ＶL−Ｌl−ＶH−Ｌ2−ＶL−Ｌl−ＶHがある。
【０１７１】
２つの単鎖抗体はまた、二価二量体としても知られているダイアボディを形成するために組み合わせることができる。ダイアボディは２つ鎖を有する。ダイアボディの各鎖は、約５〜１０個のアミノ酸残基の短いリンカーによってＶLドメインと接続されるＶHドメインを含み、例えば（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）、（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）2である。このようなリンカーは、同じ鎖上のドメイン間の鎖内対形成を防ぐのに十分に短く、そのため、異なる鎖上の相補的ドメイン間の鎖内対形成を駆動し、２つの抗原−結合部位を再構築する。ダイアボディ構造は剛性があり、コンパクトであり、抗原結合部位が分子の反対側にある。ダイアボディは単一特異性または二重特異性であってもよい。
【０１７２】
３つの単一鎖抗体は、三価三量体としても知られるトリアボディを形成するために結合することができる。いくつかの実施形態では、トリアボディは、すなわち、リンカー配列がない状態で、ＶHまたはＶLドメインのアミノ末端で直接的に融合される、ＶLまたはＶHドメインのカルボキシ末端で構築される。トリアボディは環状、ヘッドトゥーテールの様式で配置されるポリペプチドを有する３つのＦｖヘッドを有する。トリアボディ分子の可能な構造は、互いに１２０度の角度で平面に位置される３つの結合部位で平面状である。トリアボディは単一特異性、二重特異性、または三重特異性であってもよい。
【０１７３】
本発明の抗ＶＥＧＦＲ２抗体は、予防または治療の目的で哺乳動物に使用される場合、薬学的に許容される担体を追加で含む組成物の形態で投与されることを理解されたい。適切な薬学的に許容される担体として、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝塩類溶液、ブドウ糖、グリセロール、エタノール等の１つ以上ならびにその組み合わせが挙げられる。薬学的に許容される担体はさらに湿潤剤または乳剤、保存剤または緩衝液等の少量の補助物質を含んでいてもよく、それによって抗体の貯蔵寿命と有効性が向上する。
【０１７４】
本明細書に記載されるように、本発明は血管新生阻害剤と共にＲｈｏキナーゼ阻害剤の投与を提供している。したがって、本発明のＶＥＧＦＲ抗体は、本明細書に開示される化合物に限定されないが、ＷＯ２０１４／０５５９９６、ＷＯ２０１４／０５５９９９及びＷＯ２００６／１０５０５１に開示される化合物（これらは参照により本明細書に組み込まれる）を含む任意のＲｈｏキナーゼ阻害剤と共に投与することができる。
【０１７５】
本発明の抗ＶＥＧＦＲ−２抗体はＶＥＧＦを標的とする薬剤と共に投与されてもよい。ＶＥＧＦ結合剤の非限定的な例として、ＶＥＧＦ抗体及びＶＥＧＦトラップ、すなわち、ＶＥＧＦ受容体のリガンド結合ドメインが挙げられる。一般的に、ＶＥＧＦトラップは１つ以上のＶＥＧＦ受容体のＶＥＧＦ結合ドメインを含むタンパク質である。ＶＥＧＦトラップとして、これに限定されないが、可溶性ＶＥＧＦＲ−１、可溶性ニューロピリン１（ＮＲＰ１）、可溶性ＶＥＧＦＲ−３（ＶＥＧＦ−ＣとＶＥＧＦ−Ｄを結合する）、及びアフリバーセプト（Ｚａｌｔｒａｐ；Ｅｙｅｌｅａ；ＶＥＧＦ  Ｔｒａｐ  Ｒ１Ｒ２）が挙げられ、ヒトＩｇＧ１の定常領域（Ｆｃ）に融合されるヒト血管内皮増殖因子受容体の細胞外ドメインであるＶＥＧＦＲ１とＶＥＧＦＲ２のセグメントから構成される。コンバセプト（Ｃｏｎｂｅｒｃｅｐｔ）（ＫＨ９０２）は、ＶＥＧＦＲ−１（Ｆｌｔ−１）の細胞外ドメイン２とヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に融合されるＶＥＧＦＲ−２（ＫＤＲ）の細胞外ドメイン３、４を含む融合タンパク質である。様々な組み合わせでＫＤＲとＦＬＴ−１   Ｉｇ様ドメインを含むいくつかのＶＥＧＦトラップは米国特許第８，２１６，５７５号に開示されている。ＤＡＲＰｉｎ（設計されたアンキリン反復タンパク質の頭字語）は、通常、非常に特異的で高親和性の標的タンパク質結合を典型的に示す設計された抗体疑似タンパク質である。ＤＡＲＰｉｎ（登録商標）ＭＰ０１１２は、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）阻害剤であり、滲出型黄斑変性及び糖尿病黄斑浮腫の治療のために臨床試験に進んでいる。
【０１７６】
本発明に従って、ＶＥＧＦ発現を標的化することができる。例えば、ＶＥＧＦ阻害剤ＰＴＣ２９９は、ＶＥＧＦメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の５’と３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を選択的に結合させることによって、転写後にＶＥＧＦを標的にし、それによってＶＥＧＦの翻訳を防ぐ。ペガプタニブ（Ｐｅｇａｐｔａｎｉｂ）（Ｍａｃｕｇｅｎ）は、ＶＥＧＦ−１６５に対して向けられたＲＮＡアプタマーである。
【０１７７】
胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）は病的血管新生に関係している。ＰｌＧＦは構造的にＶＥＧＦに関係しており、ＶＥＧＦＲ−１についてのリガンドでもある。結果的にＶＥＧＦＲ１（上記参照のこと）の細胞外ドメインを含むＶＥＧＦトラップはＰｌＧＦを標的にするのに有効である。
【０１７８】
ＰＤＧＦはホモ二量体ＰＤＧＦ−ＡＡ、ＢＢ、ＣＣ及びＤＤならびにヘテロ二量体ＰＤＧＦ−ＡＢを形成する４つのポリペプチド鎖から構成される。ＰＤＧＦ受容体（ＰＤＧＦＲ）αとβはＰＤＧＦ機能を媒介する。特に、ＰＤＧＦＲαはＰＤＧＦ−ＡＡ、−ＢＢ、−ＡＢ及び−ＣＣに結合し、一方、ＰＤＧＦＲβは−ＢＢと−ＤＤに相互作用する。ＰＤＧＦ結合剤の非限定的な例として、抗ＰＤＧＦ抗体及びＰＤＧＦトラップが挙げられる。ＰＤＧＦを標的にする薬剤として、Ｆｏｖｉｓｔａ（商標）（Ｅ１００３０、Ｏｐｈｔｈｏｔｅｃｈ）、ＰＤＧＦ−Ｂを標的にするペジ化アプタマー、及びＡＸ１０２（Ｓｅｎｎｉｎｏら、２００７、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７５（１５）：７３５９−６７）、ＰＤＧＦ−Ｂに結合するＤＮＡオリゴヌクレオチドアプタマーが挙げられる。
【０１７９】
ＰＤＧＦ受容体を標的にする薬剤として、ラムシルマブ（ＩＭＣ−３Ｇ３、ヒトＩｇＧ1）抗−ＰＤＧＦＲα抗体、ｃｒｅｎｏｌａｎｉｂ（ＣＰ−８６８５９６）、ＰＤＧＦＲα（ＩＣ50＝０．９ｎＭ）とＰＤＧＦＲβ（ＩＣ50＝１．８ｎＭ）の選択的阻害剤、及びニロチニブ（Ｔａｓｉｇｎａ（登録商標））、ＰＤＧＦＲα及びＰＤＧＦＲβならびにその他のチロシンキナーゼの阻害剤が挙げられる。
【０１８０】
血管新生阻害剤として、例えば、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＶＥＧＦまたはＰＤＧＦ受容体のリガンドまたは補体によって媒介されるシグナル伝達をブロックする細胞内薬剤が挙げられる。血管新生阻害剤を阻害する細胞内薬剤として、限定されないが以下のものがある。スニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ；ＳＵ１１２４８）は、ＶＥＧＦＲ１−ＶＥＧＦＲ３、ＰＤＧＦＲα及びＰＤＧＦＲβ、幹細胞因子受容体（ｃＫＩＴ）、Ｆｌｔ−３、及びコロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ−１Ｒ）の汎特異的小分子阻害剤である。アキシチニブ（ＡＧ０１３７３６；Ｉｎｌｙｔａ）は、ＶＥＧＦＲ−１−ＶＥＧＦＲ−３、ＰＤＧＦＲ、及びｃＫＩＴを阻害する別の小分子チロシンキナーゼ阻害剤である。セディラニブ（ＡＺＤ２１７１）はＶＥＧＦＲ−１−ＶＥＧＦＲ−３、ＰＤＧＦＲβ、及びｃＫＩＴの阻害剤である。ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ）は、ＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、及びＲａｆキナーゼを含むいくつかのチロシンタンパク質キナーゼの別の小分子阻害剤である。パゾパニブ（Ｖｏｔｒｉｅｎｔ；（ＧＷ７８６０３４）はＶＥＧＦＲ−１、−２と−３、ｃＫＩＴ及びＰＤＧＦＲを阻害する。Ｆｏｒｅｔｉｎｉｂ（ＧＳＫ１３６３０８９；ＸＬ８８０）はＶＥＧＦＲ２及びＭＥＴを阻害する。ＣＰ−５４７６３２は、ＶＥＧＦＲ−２と塩基性線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）キナーゼの強力な阻害剤である。Ｅ−３８１０（（６−（７−（（１−アミノシクロプロピル）メトキシ）−６−メトキシキノリン−４−イルオキシ）−Ｎ−メチル−１−ナフトアミド）は、ＶＥＧＦＲ−１、−２と−３及びＦＧＦＲ−１と−２キナーゼを、ナノモル濃度の範囲で阻害する。ブリバニブ（ＢＭＳ−５８２６６４）は、ＦＧＦ受容体シグナル伝達も阻害するＶＥＧＦＲ−２阻害剤である。ＣＴ−３２２（Ａｄｎｅｃｔｉｎ）は、ヒトフィブロネクチンドメインに基づく小さなタンパク質であり、ＶＥＧＦＲ２に結合し、ＶＥＧＦＲ２の活性を阻害する。バンデタニブ（Ｃａｐｒｅｌａｓ；Ｚａｃｔｉｍａ；ＺＤ６４７４）は、ＶＥＧＦＲ２、ＥＧＦＲ、及びＲＥＴチロシンキナーゼの阻害剤である。Ｘ−８２（Ｘｃｏｖｅｒｙ）は、成長因子受容体のＶＥＧＦＲ及びＰＤＧＦＲによるシグナル伝達の小分子インドリノン阻害剤である。
【０１８１】
抗炎症剤及び免疫抑制剤として、グルココルチコイド（例えば、デキサメタゾン）、ＦＫ５０６（タクロリムス）、シクロスポリン、フィンゴリモド、ＩＦＮβまたはＩＦＮγ等のインターフェロン、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ）、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ）、またはアダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ）等の腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）結合タンパク質、及びミコフェノール酸が挙げられる。
【０１８２】
本明細書に開示される発明の原理の変化形が当業者によって実施されることが理解され、期待され、このような変化例は本発明の範囲内にあることが意図される。
【０１８３】
本出願全体を通して、様々な刊行物が参照されている。これらの刊行物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれ、本明細書が属する技術分野の状況をより完全に記述している。以下の実施例は、本発明をさらに説明し、いかなる場合であっても、本発明の範囲を制限すると解釈されるべきではない。
【実施例】
【０１８４】
以下の実施例及び調製に使用される略語は以下である。
Ａｃ2Ｏ                 無水酢酸
ＡｃＯＨ                酢酸
Ｂｎ                    ベンジル
セライト（登録商標）    珪藻土
ＤＣＭ                  ジクロロメタン
ＤＩＥＡ                ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ                ４−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＥ                  １，２−ジメトキシルエタン
ＤＭＦ                  ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ                ジメチルスルホキシド
ＥＤＣ                  １−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジ
イミド塩酸塩
ＥｔＯＡｃ              酢酸エチル
ＥｔＯＨ                エチルアルコールまたはエタノール
Ｅｔ2Ｏ                 エチルエーテル
Ｅｔ3Ｎ                 トリエチルアミン
ｇ                      グラム
ＨＯＢｔ                １−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＰＬＣ                高速液体クロマトグラフィー
ｈ                      時間
ＭｅＣＮ                アセトニトリル
ｍｉｎ                  分
ＭｅＯＨ                メチルアルコールまたはメタノール
ｍＬ                    ミリリットル
ｍｍｏｌ                ミリモル
ＭＳ                    質量分析
ＮＭＲ                  核磁気共鳴
ｉＰｒＯＨ              イソ−プロパノール
ＰｙＢＯＰ（登録商標）  ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホス
ホニウム
ｒｔ                    室温
ｓ                      シングレット
ｔ                      トリプレット
ＴＨＦ                  テトラヒドロフラン
【０１８５】
質量分析はＳｙｎＰｅｐ  Ｃｏ．、６９０５  Ｃｔ．Ｄｕｂｌｉｎ、ＣＡ  ９４５６８によって実施され、ＬＣ−ＭＳ：Ｗａｔｅｒｓ  ２６９５  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ  Ｍｏｄｕｌｅ  ｗｉｔｈ  ａ  Ｗａｔｅｒｓ  ＺＱ２０００  ｓｉｎｇｌｅ  ｑｕａｄｒａｐｏｌｅ  ＭＳ  ｄｅｔｅｃｔｏｒで記録した。明記していない限り、すべての質量分析は、ＥＳＩモードで実行した。1Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、Ｍｅｒｃｕｒｙソフトウェアを用いてＶａｒｉａｎ  ４００ＭＨｚの機械で記録した。これまで本発明の化合物の以下の実施例の合成は、当該実施例に明示的に記載されていなく、合成は一般用語で本明細書に記載されている通りであり、適切な実施例の化合物を合成するための出発材料は容易に選択することができる。
【０１８６】
実施例１
Ｎ−（２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０１８７】
【化７】
0006507157.tif 000010
【０１８８】
Ｎ−（２−クロロピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０１８９】
【化８】
0006507157.tif 000011
【０１９０】
エタノール（６７ｍＬ）中の２，４−ジクロロピリミジン（２．０ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）の溶液に、５−アミノ−インダゾール（１．７９ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２．８１ｍＬ、２０．１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を一晩加熱還流した。反応混合物を濃縮し、残渣をメタノールで再結晶化し、ピンク色の固体として表題化合物（３．１ｇ、９７％）を得た。
【０１９１】
Ｎ−（２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０１９２】
【化９】
0006507157.tif 000012
【０１９３】
ＤＭＦ（４．０７ｍＬ）中のＮ−（２−クロロピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン（０．５００ｇ、２．０４ｍｍｏｌ）、５−メトキシイソインドリン塩酸塩（０．４０４ｇ、２．１８ｍｍｏｌ）、及びＫ2ＣＯ3（０．８４４ｇ、６．１１ｍｍｏｌ）の混合物を１１５℃で一晩撹拌した。混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。１つに合わせた有機層を水及びブラインで洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、濃縮し、ＤＣＭ中のＭｅＯＨを用いてクロマトグラフィーにより精製した。生成物をＥｔＯＡｃ中で再結晶によりさらに精製し、淡橙色固体として表題化合物（２１５ｍｇ、３０％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １３．１５（ｓ、１Ｈ）、９．４５（ｓ、１Ｈ）、８．５２（ｓ、１Ｈ）、８．２９（ｓ、１Ｈ）、８．１６（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．８１-７．６６（ｍ、２Ｈ）、７．５９（ｓ、１Ｈ）、７．２５（ｄ、Ｊ＝１９．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１０（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．２９（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、１Ｈ）、５．０１（ｄ、Ｊ＝１６．０Ｈｚ、４Ｈ）、３．９９（ｓ、３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ３５９（Ｍ＋Ｈ）+。
【０１９４】
実施例２
Ｎ−（２−（イソインドリン−２−イル）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０１９５】
【化１０】
0006507157.tif 000013
【０１９６】
ＤＭＦ（６．８９ｍＬ）中のＮ−（２−クロロピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン（０．２００ｇ、１．０３ｍｍｏｌ）、イソインドリン（０．１４０ｇ、１．０３ｍｍｏｌ）、及びＫ2ＣＯ3（０．１７１ｇ、１．２４ｍｍｏｌ）の混合物を８０℃で４時間撹拌し、次に室温で一晩撹拌した。混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させ、５％のＭｅＯＨ／ＤＣＭから再結晶化された粗褐色油状物を得て、次にＥｔＯＨでさらに結晶化し、灰色の固体として表題化合物（３６．１ｍｇ、１１％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １２．９５（ｓ、１Ｈ）、９．２５（ｓ、１Ｈ）、８．２５（ｓ、１Ｈ）、８．０７（ｓ、１Ｈ）、７．９５（ｄ、Ｊ＝４．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．３１−７．５１（ｍ、６Ｈ）、６．０８（ｄ、Ｊ＝４．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．８２（ｄ、Ｊ＝２４．７Ｈｚ、４Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ３２９（Ｍ＋Ｈ）+。
【０１９７】
実施例３
Ｎ−（５−フルオロ−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０１９８】
【化１１】
0006507157.tif 000014
【０１９９】
Ｎ−（２−クロロ−５−フルオロピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０２００】
【化１２】
0006507157.tif 000015
【０２０１】
ＥｔＯＨ（４０ｍＬ）中の２，４−ジクロロ−５−フルオロピリミジンの溶液（０．８００ｇ、４．５５ｍｍｏｌ）に、Ｎａ2ＣＯ3（６．２７ｇ、４５．５ｍｍｏｌ）及び化合物１Ｈ−インダゾール−５−アミン（０．６０５ｇ、４．５５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を１００℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳによって反応が完了したことを示した後、溶媒を減圧下で除去し、残渣を水（５０ｍＬ）に投入し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬを３回）で抽出した。有機相をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、残渣を得て、シリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１：１で溶出）により精製し、固体として表題化合物（１２０ｍｇ、９．７％）を得た。
【０２０２】
Ｎ−（５−フルオロ−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０２０３】
【化１３】
0006507157.tif 000016
【０２０４】
アセトニトリル（４ｍＬ）中のＮ−（２−クロロ−５−フルオロピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン（３００ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）の溶液に、５−メトキシイソインドリン（１７０ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（４４１ｍｇ、３．４２ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を、９０℃で１２時間加熱した。ＬＣＭＳによって反応が完了したことを示した後、混合物を濃縮し、メタノールに溶解し、分取ＨＰＬＣにより精製し、凍結乾燥し、白色固体として表題化合物を得た（５２ｍｇ、１２．１％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １３．０（ｓ、１Ｈ）、９．２６（ｓ、１Ｈ）、８．３２（ｓ、１Ｈ）、８．０９（ｓ、１Ｈ）、８．０３（ｄ、Ｊ＝４．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．７４（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．５０（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．３０（ｂ、１Ｈ）、７．００（ｂ、１Ｈ）、６．８６（ｄｄ、Ｊ＝８．４及び２．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．７２（ｓ、２Ｈ）、４．６９（ｓ、２Ｈ）、３．７６（ｓ、３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ３７７（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２０５】
実施例４
Ｎ−（５−クロロ−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０２０６】
【化１４】
0006507157.tif 000017
【０２０７】
Ｎ−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０２０８】
【化１５】
0006507157.tif 000018
【０２０９】
ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）中の２，４，５−トリクロロピリミジン（１．００ｇ、５．４９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎａ2ＣＯ3（３．０３ｇ、２８．６ｍｍｏｌ）及び化合物、１Ｈ−インダゾール−５−アミン（０．６５７ｇ、４．９４ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を１５℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳによって反応が完了したことを示した後、溶媒を減圧下で除去し、残渣を水（５０ｍＬ）に投入し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬを３回）で抽出した。有機相をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、固体として表題化合物（８００ｍｇ、５２．３％）を得た。
【０２１０】
Ｎ−（５−クロロ−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０２１１】
【化１６】
0006507157.tif 000019
【０２１２】
アセトニトリル（５ｍＬ）中の化合物Ｎ−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン（２８１ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）を、化合物５−メトキシルイソインドリン（１５０ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（３９１ｍｇ、３．０３ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を、９０℃で１２時間加熱した。ＬＣＭＳによって反応が完了したことを示した後、混合物を濃縮し、メタノールに溶解し、分取ＨＰＬＣにより精製し、凍結乾燥し、白色固体として表題化合物を得た（１１５ｍｇ、２９．１％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １３．００（ｓ、１Ｈ）、８．７３（ｓ、１Ｈ）、８．１４（ｓ、１Ｈ）、８．０８（ｓ、２Ｈ）、７．６９（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．５０（ｓ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．２７（ｂ、１Ｈ）、６．９７（ｂ、１Ｈ）、６．８４（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．６７（ｔ、Ｊ＝１６．４Ｈｚ、４Ｈ）、３．７４（ｓ、３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ３９３（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２１３】
実施例５
Ｎ−（２−（５−メトキシルイソインドリン−２−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０２１４】
【化１７】
0006507157.tif 000020
【０２１５】
Ｎ−（２−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０２１６】
ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）中の化合物２，４−ジクロロ−５−メチルピリミジン（１．００ｇ、６．１７ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎａ2ＣＯ3（３．２７ｇ、３０．９ｍｍｏｌ）及び化合物１Ｈ−インダゾール−５−アミン（０．８２１ｇ、６．１７ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を９０℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳによって反応が完了したことを示した後、溶媒を減圧下で除去し、残渣を水（５０ｍＬ）に投入し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬを３回）で抽出した。有機相をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製された残渣を得て、固体として表題化合物（４００ｍｇ、収率２５％）を得た。
【０２１７】
Ｎ−（２−（５−メトキシルイソインドリン−２−イル）−５−メチルピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０２１８】
【化１８】
0006507157.tif 000021
【０２１９】
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の化合物Ｎ−（２−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン（２６１ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物５−メトキシイソインドリン（１５０ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）とＤＩＥＡ（３９１ｍｇ、３．０３ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を、１１０℃で１２時間加熱した。ＬＣＭＳによって反応が完了したことを示した後、混合物を濃縮し、メタノールに溶解し、分取ＨＰＬＣにより精製し、凍結乾燥し、白色固体として表題化合物を得た（１０５ｍｇ、２７．０％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １２．９２（ｓ、１Ｈ）、８．２５（ｓ、１Ｈ）、８．１８（ｓ、１Ｈ）、８．０６（ｓ、１Ｈ）、７．８１（ｓ、１Ｈ）、７．７２（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．４８（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．２５（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．９８（ｓ、１Ｈ）、６．８３（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．７０（ｓ、２Ｈ）、４．６５（ｓ、２Ｈ）、３．７５（ｓ、３Ｈ）、２．０９（ｓ、３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ３７３（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２２０】
実施例６
Ｎ−（２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−６−メチルピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０２２１】
【化１９】
0006507157.tif 000022
【０２２２】
Ｎ−（２−クロロ−６−メチルピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０２２３】
【化２０】
0006507157.tif 000023
【０２２４】
ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）中の化合物２，４−ジクロロ−６−メチルピリミジン（１．００ｇ、６．１７ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎａ2ＣＯ3（３．２７ｇ、３０．９ｍｍｏｌ）及び化合物１Ｈ−インダゾール−５−アミン（０．８２１ｇ、６．１７ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を９０℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳによって反応が完了したことを示した後、溶媒を減圧下で除去し、残渣を水（５０ｍＬ）に投入し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬを３回）で抽出した。有機相をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製された残渣を得て、固体として表題化合物（４００ｍｇ、収率２５％）を得た。
【０２２５】
Ｎ−（２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−６−メチルピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０２２６】
【化２１】
0006507157.tif 000024
【０２２７】
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の化合物Ｎ−（２−クロロ−６−メチルピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン（２６１ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物５−メトキシイソインドリン（１５０ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）とＤＩＥＡ（３９１ｍｇ、３．０３ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を、１１０℃で１２時間加熱した。ＬＣＭＳによって反応が完了したことを示した後、混合物を濃縮し、メタノールに溶解し、分取ＨＰＬＣにより精製し、凍結乾燥し、白色固体として表題化合物（８０ｍｇ、２１．４％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １２．９１（ｓ、１Ｈ）、９．０８（ｓ、１Ｈ）、８．２５（ｓ、１Ｈ）、８．０６（ｓ、１Ｈ）、７．４７−７．５３（ｍ、２Ｈ）、７．２９（ｂ、１Ｈ）、７．００−７．０５（ｍ、１Ｈ）、６．８７（ｄ、Ｊ＝１０．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．９３（ｓ、１Ｈ）、５．７６（ｂ、４Ｈ）、３．７７（ｓ、３Ｈ）、２．１７（ｓ、３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ３７３（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２２８】
実施例７
Ｎ−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−５，７−ジヒドロフロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【０２２９】
【化２２】
0006507157.tif 000025
【０２３０】
２−クロロ−Ｎ−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−５，７−ジヒドロフロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【０２３１】
【化２３】
0006507157.tif 000026
【０２３２】
ＥｔＯＨ（３０ｍＬ）中の化合物２，４−ジクロロ−５，７−ジヒドロフロ［３，４−ｄ］ピリミジン（１．００ｇ、５．３０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎａ2ＣＯ3（１．７０ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）及び化合物１Ｈ−インダゾール−５−アミン（７１１ｍｇ、５．３ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を１５℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した後、溶媒を減圧下で除去し、残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に溶解し、水（５０ｍＬを２回）で洗浄した。有機相をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、固体として表題化合物（８００ｍｇ、収率３８．３％）を得た。
【０２３３】
Ｎ−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−５，７−ジヒドロフロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【０２３４】
【化２４】
0006507157.tif 000027
【０２３５】
アセトニトリル（３０ｍＬ）中の化合物２−クロロ−Ｎ−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−５，７−ジヒドロフロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン（３４６ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物５−メトキシイソインドリン（１５０ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（２７３ｍｇ、２．１１ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を、９０℃で２０時間加熱した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した後、混合物を濃縮し、メタノールに溶解し、分取ＨＰＬＣにより精製し、凍結乾燥し、表題化合物を得た（６９．０ｍｇ、１７．２％）。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １２．９０（ｓ、１Ｈ）、８．８３（ｓ、１Ｈ）、８．２７（ｓ、１Ｈ）、８．０９（ｓ、１Ｈ）、７．６４（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．５０（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．００−７．４０（ｍ、２Ｈ）、６．８６（ｄｄ、Ｊ＝８．４及び２．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．７３−４．８９（ｍ、８Ｈ）、３．７７（ｓ、３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ４０１（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２３６】
実施例８
Ｎ−（４−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）ピリミジン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０２３７】
【化２５】
0006507157.tif 000028
【０２３８】
２−（２−クロロピリミジン−４−イル）−５−メトキシイソインドリン
【０２３９】
【化２６】
0006507157.tif 000029
【０２４０】
ＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中の化合物２，４−ジクロロピリミジン（２９８ｍｇ、２．０１ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎａ2ＣＯ3（１．１１ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）及び化合物５−メトキシイソインドリン（３００ｍｇ、２．０１ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を９０℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳによって反応が完了したことを示した後、溶媒を減圧下で除去し、残渣を水（５０ｍＬ）に投入し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬを３回）で抽出した。有機相をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、分取ＴＬＣによって精製された残渣を得て、固体として表題化合物（２５０ｍｇ、収率４７．８％）を得た。
【０２４１】
Ｎ−（４−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）ピリミジン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０２４２】
【化２７】
0006507157.tif 000030
【０２４３】
ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の化合物２−（２−クロロピリミジン−４−イル）−５−メトキシイソインドリン（２５０ｍｇ、０．９５８ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物５−アミノインダゾール（１２７ｍｇ、０．９５８ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（３７０ｍｇ、２．８７ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を、１１０℃で２０時間加熱した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した後、混合物を濃縮し、分取−ＨＰＬＣによって精製し、凍結乾燥し、表題化合物（５１．７ｍｇ、１７％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １２．８３（ｓ、１Ｈ）、９．０３（ｓ、１Ｈ）、８．３３（ｓ、１Ｈ）、８．００（ｓ、１Ｈ）、７．９９（ｓ、１Ｈ）、７．６２（ｄｄ、Ｊ＝９．２及び２．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．４２（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．３０（ｂ、１Ｈ）、７．０７（ｂ、１Ｈ）、６．９０（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．０２（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．８３（ｄ、Ｊ＝１４．４Ｈｚ、２Ｈ）、４．６５（ｄ、Ｊ＝１７．６Ｈｚ、２Ｈ）。３．７７（ｓ、３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ３５９（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２４４】
実施例９
Ｎ−（２−（５−フルオロイソインドリン−２−イル）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０２４５】
【化２８】
0006507157.tif 000031
【０２４６】
ＤＭＦ（５ｍＬ）中のＮ−（２−クロロピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン（４５７ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物５−フルオロイソインドール（２５０ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（７２４ｍｇ、５．６１ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を、１１０℃で２０時間加熱した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した後、混合物を濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製し、凍結乾燥し、表題化合物（２００ｍｇ、３１．０％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １２．９２（ｓ、１Ｈ）、９．２４（ｓ、１Ｈ）、８．２８（ｓ、１Ｈ）、８．０６（ｓ、１Ｈ）、７．９４（ｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．１１−７．５３（ｍ、５Ｈ）、６．０８（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．８０（ｂ、４Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ３４７（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２４７】
実施例１０
Ｎ−（２−（５−クロロイソインドリン−２−イル）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０２４８】
【化２９】
0006507157.tif 000032
【０２４９】
アセトニトリル（５ｍＬ）中のＮ−（２−クロロピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン（３８４ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物５−クロロイソインドリン（２４０ｍｇ、１５７ｍｍｏｌ）とＤＩＥＡ（６０８ｍｇ、４．７１ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を９０℃で１７時間加熱した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した後、混合物を濃縮し、粗生成物をＭｅＯＨで洗浄し、褐色の固体として表題化合物を得た（２３０ｍｇ、収率：４０．５％）。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １３．００（ｓ、１Ｈ）、９．６５（ｓ、１Ｈ）、８．３１（ｓ、１Ｈ）、８．１０（ｓ、１Ｈ）、７．９３（ｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．３５−７．５７（ｍ、５Ｈ）、６．１８（ｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．８２（ｂ、４Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ３６３（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２５０】
実施例１１
Ｎ−（２−（６−メトキシ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０２５１】
【化３０】
0006507157.tif 000033
【０２５２】
ＤＭＦ（１．２ｍＬ）中のＮ−（２−クロロピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン（１００ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）、６−メトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（８１．３ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）、及びＫ2ＣＯ3（１６８ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）の混合物を、１２０℃で一晩撹拌し、室温に冷却し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を濃縮し、残渣を１〜２０％のＭｅＯＨ／ＤＣＭでクロマトグラフィーにより精製し、白色固体（４２ｍｇ、２８％）として表題化合物を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １２．９６（ｓ、１Ｈ）、９．２１（ｓ、１Ｈ）、８．１３（ｄ、Ｊ＝１．６Ｈｚ、１Ｈ）、８．０４（ｔ、Ｊ＝１．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．９３（ｄ、Ｊ＝５．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．５６-７．４１（ｍ、２Ｈ）、７．１５（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．８４-６．７２（ｍ、２Ｈ）、６．０３（ｄ、Ｊ＝５．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．７９（ｓ、２Ｈ）、３．９５（ｔ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．７３（ｓ、３Ｈ）、２．８５（ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ３７３（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２５３】
実施例１２
Ｎ−（２−（６，７−ジヒドロチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−５（４Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０２５４】
【化３１】
0006507157.tif 000034
【０２５５】
ＤＭＦ（１．２ｍＬ）中のＮ−（２−クロロピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン（１００ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）、４−Ｈチエノ［３，２］ピリジン（７１．５ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）、及びＫ2ＣＯ3（１６８ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）の混合物を、１２０℃で一晩撹拌し、室温に冷却し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を濃縮し、残渣を１〜２０％のＭｅＯＨ／ＤＣＭでクロマトグラフィーにより精製し、白色固体として表題化合物（３３ｍｇ、２３％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １２．９７（ｓ、１Ｈ）、９．２３（ｓ、１Ｈ）、８．１２-８．０１（ｍ、２Ｈ）、７．９３（ｄ、Ｊ＝５．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．５６-７．４０（ｍ、２Ｈ）、７．３４（ｄ、Ｊ＝５．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．９７（ｄ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．０４（ｄ、Ｊ＝５．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．８０（ｓ、２Ｈ）、４．０７（ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、２Ｈ）、２．９３-２．８２（ｍ、２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ３４９（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２５６】
実施例１３
Ｎ−（６−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０２５７】
【化３２】
0006507157.tif 000035
【０２５８】
Ｎ−（６−クロロピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０２５９】
【化３３】
0006507157.tif 000036
【０２６０】
４，６−ジクロロピリミジン（３００ｍｇ、２．０１ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル５−アミノ−１Ｈ−インダゾール−１−カルボキシレート（４７０ｍｇ、２．０１ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（０．７４ｍＬ、３．０３ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（２．０１ｍＬ）の混合物を８０℃で一晩撹拌し、次に、１２０℃で４時間撹拌した。混合物を室温に冷却し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を真空中で濃縮し、表題化合物を得て、さらに精製することなく次のステップの反応のために直接実行した。
【０２６１】
Ｎ−（６−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０２６２】
【化３４】
0006507157.tif 000037
【０２６３】
ＤＭＦ（１．２２ｍＬ）中のＮ−（６−クロロピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン（１５０ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）、５−メトキシイソインドリン塩化水素（１２１ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）、Ｋ2ＣＯ3（２５３ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）の混合物を、１００℃で２時間撹拌し、次に１２０℃で１２時間撹拌した。混合物を室温に冷却し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を濃縮し、ＤＣＭ中の０〜２０％のＭｅＯＨでクロマトグラフィーによって精製し、ＤＣＭ／Ｈｅｘで研和することによってさらに精製し、表題化合物（３０ｍｇ、１４％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １２．９５（ｓ、１Ｈ）、９．０２（ｓ、１Ｈ）、８．２２（ｄ、Ｊ＝０．９Ｈｚ、１Ｈ）、８．０１（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、２Ｈ）、７．５５-７．３６（ｍ、２Ｈ）、７．３１（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．００（ｄ、Ｊ＝２．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．８９（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．７４（ｄ、Ｊ＝１．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．６５（ｓ、４Ｈ）、３．７７（ｓ、３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ３５９（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２６４】
実施例１４
Ｎ−（６−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−２−メチルピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０２６５】
【化３５】
0006507157.tif 000038
【０２６６】
ＤＭＦ（１．２２ｍＬ）中のＮ−（６−クロロピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン（１５９ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）、５−メトキシイソインドリン塩化水素（１２１ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）、Ｋ2ＣＯ3（２５３ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）の混合物を、１００℃で２時間撹拌し、次に１２０℃で１２時間撹拌した。混合物を室温に冷却し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を濃縮し、ＤＣＭ中の０〜２０％のＭｅＯＨでクロマトグラフィーによって精製し、ＤＣＭ／Ｈｅｘで研和することによってさらに精製し、表題化合物（２５ｍｇ、１１％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １２．９５（ｓ、１Ｈ）、８．９０（ｓ、１Ｈ）、７．９８（ｄ、Ｊ＝１５．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．５４-７．３６（ｍ、２Ｈ）、７．２９（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．９９（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．８８（ｄｄ、Ｊ＝８．３、２．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．６０（ｓ、１Ｈ）、４．６３（ｓ、４Ｈ）、３．７６（ｓ、３Ｈ）、２．３４（ｓ、３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ３７３（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２６７】
実施例１５
Ｎ−（２−（１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−２（３Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０２６８】
【化３６】
0006507157.tif 000039
【０２６９】
ＤＭＦ（０．８１ｍＬ）中のＮ−（２−クロロピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン（１００ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン二水素塩化物（１０２ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（０．７４ｍＬ、１．２２ｍｍｏｌ）の混合物を１１０℃で一晩撹拌した。混合物を室温に冷却し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を濃縮し、ＤＣＭ中の０〜２０％のＭｅＯＨでクロマトグラフィーによって精製し、わずかに黄色の固体として表題化合物を得た（１３ｍｇ、１０％）。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １２．９５（ｓ、１Ｈ）、９．２９（ｓ、１Ｈ）、８．６９（ｓ、１Ｈ）、８．５２（ｄ、Ｊ＝５．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．２９（ｓ、１Ｈ）、８．０８（ｓ、１Ｈ）、７．９７（ｄ、Ｊ＝５．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．６１−７．４６（ｍ、３Ｈ）、６．１１（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．８８（ｓ、４Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ３３０（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２７０】
実施例１６
Ｎ−（２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−５，６−ジメチルピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０２７１】
【化３７】
0006507157.tif 000040
【０２７２】
Ｎ−（２−クロロ−５，６−ジメチルピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０２７３】
【化３８】
0006507157.tif 000041
【０２７４】
ＥｔＯＨ（４０ｍＬ）中の２，４−ジクロロ−５，６−ジメチルピリミジン（０．８００ｇ、４．５５ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎａ2ＣＯ3（２．４２ｇ、２２．８ｍｍｏｌ）及び１Ｈ−インダゾール−５−アミン（０．６０５ｇ、４．５５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を１００℃で１２時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣を水（５０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬを３回）で抽出した。有機相をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、シリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１：１で溶出）により精製された残渣を得て、白色固体として表題化合物（１２０ｍｇ、収率９．７％）を得た。
【０２７５】
Ｎ−（２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−５，６−ジメチルピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０２７６】
【化３９】
0006507157.tif 000042
【０２７７】
ＣＨ3ＣＮ（６０ｍＬ）中のＮ−（２−クロロ−５，６−ジメチルピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン（１．０ｇ、３．６６ｍｍｏｌ）の溶液に、５−メトキシイソインドリン（５４５ｍｇ、３．６６ｍｍｏｌ）及びＫ2ＣＯ3（１．０１ｇ、７．３３ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を、９０℃で７２時間加熱した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した後、混合物を濃縮し、粗生成物をＭｅＯＨで洗浄し、褐色固体として表題化合物を得た（４２３ｍｇ、収率：３０．０％）。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １２．９５（ｓ、１Ｈ）、８．０８（ｓ、１Ｈ）、８．０１（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．３０（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．００（ｓ、１Ｈ）、６．９０−６．８３（ｍ、４Ｈ）、４．８１（ｓ、２Ｈ）、４．７７（ｓ、２Ｈ）、３．７５（ｓ、３Ｈ）、２．４４（ｓ、３Ｈ）、２．７７（ｓ、３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ３８７（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２７８】
実施例１７
Ｎ−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−（イソインドリン−２−イル）−５，７−ジヒドロフロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【０２７９】
【化４０】
0006507157.tif 000043
【０２８０】
表題化合物を、実施例７の合成（ＫＬ−００２３０）について記載したものと同じ手順を用いて合成した。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １２．９４（ｓ、１Ｈ）、８．８２（ｓ、１Ｈ）、８．２５（ｓ、１Ｈ）、８．０６（ｓ、１Ｈ）、７．６４−７．２８（ｍ、６Ｈ）、４．８７−４．７２（ｍ、８Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ３７１（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２８１】
実施例１８
Ｎ−（４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）フェニル）−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）ピリミジン−４−アミン
【０２８２】
【化４１】
0006507157.tif 000044
【０２８３】
Ｎ−（４−ブロモフェニル）−２−クロロピリミジン−４−アミン
【０２８４】
【化４２】
0006507157.tif 000045
【０２８５】
ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）中の化合物Ｎ−（４−ブロモフェニル）−２−クロロピリミジン−４−アミン（２．００ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎａ2ＣＯ3（４．２６ｇ、４０．２ｍｍｏｌ）及び化合物４−ブロモアニリン（２．３ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を１５℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳによって反応が完了したことを示した後、溶媒を減圧下で除去し、残渣を水（５０ｍＬ）に投入し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬを３回）で抽出した。有機相をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、ＥＡによって洗浄することによって精製された残渣を得て、固体として表題化合物（１．２０ｇ、収率：３１．６％）を得た。
【０２８６】
Ｎ−（４−ブロモフェニル）−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）ピリミジン−４−アミン
【０２８７】
【化４３】
0006507157.tif 000046
【０２８８】
アセトニトリル（５ｍＬ）中の化合物Ｎ−（４−ブロモフェニル）−２−クロロピリミジン−４−アミン（１．００ｇ、３．５３ｍｍｏｌ）の溶液（５ｍＬ）に、化合物５−メトキシイソインドリン（５２６ｍｇ、３．５３ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（１．３６ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を９０℃で１７時間加熱した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した後、混合物を濃縮し、粗生成物をＭｅＯＨで洗浄し、褐色の固体として表題化合物を得た（６００ｍｇ、収率：４２．９％）。
【０２８９】
２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−Ｎ−（４−（１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）フェニル）ピリミジン−４−アミン
【０２９０】
【化４４】
0006507157.tif 000047
【０２９１】
化合物Ｎ−（４−ブロモフェニル）−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）ピリミジン−４−アミン（３００ｍｇ、０．７５８ｍｏｌ）、化合物４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２ジオキサボロラン−２−イル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール（４９２ｍｇ、１．５２ｍｏｌ）とＫ2ＣＯ3（２０９ｍｇ、１．５２ｍｏｌ）の溶液を、ジオキサン／Ｈ2Ｏ（２ｍＬ／２ｍＬ）に溶解し、１０分間窒素で脱気した。Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２７．７ｍｇ、０．０３７９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を８５℃で１７時間窒素下で撹拌した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した後、混合物を次のステップに使用するために濃縮した。
【０２９２】
Ｎ−（４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）フェニル）−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）ピリミジン−４−アミン
【０２９３】
【化４５】
0006507157.tif 000048
【０２９４】
化合物２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−Ｎ−（４−（１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）フェニル）ピリミジン−４−アミン（３５０ｍｇ、０．０１９５ｍｏｌ）の溶液をＴＦＡ（２ｍＬ）に溶解し、８５℃で１時間撹拌した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した後に、ＴＦＡを除去し、残渣を分取−ＨＰＬＣによって精製し、褐色の固体として表題化合物（５３．１ｍｇ、収率：２０．３％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  ９．５５（ｓ、１Ｈ）、７．９９（ｓ、１Ｈ）、７．９４（ｄ、Ｊ＝６．０、１Ｈ）、７．７６（ｄ、Ｊ＝８．４、１Ｈ）、７．５７（ｄ、Ｊ＝８．４、１Ｈ）、７．３１（ｓ、１Ｈ）、７．００（ｓ、１Ｈ）、６．８９（ｄ、Ｊ＝８．４、１Ｈ）、６．１３（ｄ、Ｊ＝５．６、１Ｈ）、４．７７（ｍ、４Ｈ）、３．７６（ｓ、３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ３８５（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２９５】
実施例１９
２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イル）ピリミジン−４−アミン
【０２９６】
【化４６】
0006507157.tif 000049
【０２９７】
２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）ピリミジン−４−アミン
【０２９８】
【化４７】
0006507157.tif 000050
【０２９９】
ＣＨ3ＣＮ（２０ｍＬ）中の化合物２−クロロピリミジン−４−アミン（３８１ｍｇ、２．９５ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（６９２ｍｇ、５．３７ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物５−メトキシイソインドリン（４００ｍｇ、２．６８ｍｍｏｌ）を加えた。次に、反応物を９０℃で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した後に、粗生成物を分取ＴＬＣによって精製し、表題化合物（２３０ｍｇ、収率：３５．４％）を得た。
【０３００】
２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イル）ピリミジン−４−アミン
【０３０１】
【化４８】
0006507157.tif 000051
【０３０２】
ジオキサン（２０ｍＬ）中の２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）ピリミジン−４−アミン（２７０ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）及び４−ブロモピリジン（１９３ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｃｓ2ＣＯ3（１．０９ｇ、３．３５ｍｍｏｌ）を加え、Ｎ2下で撹拌した。その後、ｘｐｈｏｓ（３２．２ｍｇ、０．０５５８ｍｍｏｌ）及びＰｄ2（ｄｂａ）3（５１．１ｍｇ、０．０５５８ｍｍｏｌ）を添加し、反応物をＮ2下で８５℃で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した後に、粗生成物を分取ＨＰＬＣで精製し、表題化合物を得た（９６．０ｍｇ、収率：２６．９％）。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  ９．６９（ｓ、１Ｈ）、８．３８（ｄｄ、Ｊ＝４．８及び１．６、２Ｈ）、８．０７（ｄ、Ｊ＝５．２、１Ｈ）、７．８０（ｄｄ、Ｊ＝４．８及び１．２、２Ｈ）、７．３３−７．８９（ｍ、１Ｈ）、７．０４−６．９８（ｍ、１Ｈ）、６．８６（ｄ、Ｊ＝８．４、１Ｈ）、６．１６（ｄ、Ｊ＝５．２、１Ｈ）、４．８７−４．７１（ｍ、４Ｈ）、３．７６（ｓ、３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ３２０（Ｍ＋Ｈ）+。
【０３０３】
実施例２０
２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−Ｎ−（４−（ピリジン−４−イル）フェニル）ピリミジン−４−アミン
【０３０４】
【化４９】
0006507157.tif 000052
【０３０５】
化合物Ｎ−（４−ブロモフェニル）−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）ピリミジン−４−アミン（２９７ｍｇ、０．７４８ｍｍｏｌ）、ピリジン−４−イルボロン酸（３０７ｍｇ、１．４９６ｍｍｏｌ）、Ｋ2ＣＯ3（２０６ｍｇ、１．４９６ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ2（ｄｐｐｆ）（３０．５ｍｇ、０．０３７４ｍｍｏｌ）及びジオキサン（２０ｍＬ）及びＨ2Ｏ（２０ｍＬ）の混合物を、Ｎ2下で１１０℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した後、混合物を２８℃に冷却し、濾過し、フィルターケーキをＭｅＯＨ（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、褐色の固体として表題化合物を得た（２００ｍｇ、収率：６７．６％）。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  ９．５４（ｓ、１Ｈ）、８．５６（ｓ、２Ｈ）、８．００−７．６９（ｍ、７Ｈ）、７．２９−６．８７（ｍ、３Ｈ）、６．１４（ｓ、１Ｈ）、４．７８−４．７５（ｍ、４Ｈ）、３．７５（ｓ、３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ３９６（Ｍ＋Ｈ）+。
【０３０６】
実施例２１
Ｎ−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピラノ［４，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【０３０７】
【化５０】
0006507157.tif 000053
【０３０８】
エチル４−オキソテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−カルボキシレート
【０３０９】
【化５１】
0006507157.tif 000054
【０３１０】
トルエン（３００ｍＬ）中のジヒドロ−２Ｈ−ピラン−４（３Ｈ）−オン（５．００ｇ、５０ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃ですばやくヘキサン中のＬＤＡ（２７．５ｍＬ、５５ｍｍｏｌ）を加えた。１０分間撹拌した後、カルボノシアニド酸エチル（４．４５ｇ、４５ｍｍｏｌ）を一部ずつ溶液に加え、混合物をさらに１０分間撹拌した。混合物をＡｃＯＨ（３０ｍＬ）及び水（１００ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬを３回）で抽出した。１つに合わせた有機層をＮａＨＣＯ3及びブラインで洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、濃縮し、表題化合物（１．５０ｇ、収率：１９．４％）を得て、次のステップに直接使用した。
【０３１１】
２−（メチルチオ）−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−ピラノ［４，３−ｄ］ピリミジン−４（５Ｈ）−オン
【０３１２】
【化５２】
0006507157.tif 000055
【０３１３】
ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中のナトリウムメトキシド（６２．８ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）の溶液に、エチル４−オキソテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−カルボキシレート（１００ｍｇ、０．５８１ｍｍｏｌ）及びカルバムイミドチオ酸メチル（７８．５ｍｇ、０．８７２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１２時間還流した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した。溶液を濃縮し、粗生成物を得て、分取ＴＬＣによって精製し、表題化合物（５２ｍｇ、収率：４５．２％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ）δ４．４４（２Ｈ、ｓ）、３．９２（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ）、２．６４（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ）、２．５４（３Ｈ、ｓ）。
【０３１４】
４−クロロ−２−（メチルチオ）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピラノ［４，３−ｄ］ピリミジン
【０３１５】
【化５３】
0006507157.tif 000056
【０３１６】
ＭｅＣＮ（９．６ｍＬ）／ＤＭＦ（０．３ｍＬ）中の２−（メチルチオ）−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−ピラノ［４，３−ｄ］ピリミジン−４（５Ｈ）−オン（１．００ｇ、５．０５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰＯＣｌ3（６．４ｍＬ、５０．５ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。混合物を８０℃に加熱し、Ｎ2下で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した後、大部分のＰＯＣｌ3を真空中で除去し、残渣を氷水に注いだ。得られた混合物を水性Ｎａ2ＣＯ3で、ｐＨ＝７〜８に中和し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬを３回）で抽出した。１つに合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、濃縮し、表題化合物（９００ｍｇ、収率：８２．６％）を得て、直接次のステップに使用した。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、４００ＭＨｚ）δ  ４．６９（２Ｈ、ｓ）、４．０３（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ）、２．９２（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ）、２．５８（３Ｈ、ｓ）。
【０３１７】
Ｎ−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−（メチルチオ）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピラノ［４，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【０３１８】
【化５４】
0006507157.tif 000057
【０３１９】
ジオキサン（５ｍＬ）中の４−クロロ−２−（メチルチオ）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピラノ［４，３−ｄ］ピリミジン（１００ｍｇ、０．４６３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＫＩ（７６．４ｍｇ、０．４６３ｍｍｏｌ）、水性ＨＣｌ（０．２ｍＬ）及び１Ｈ−インダゾール−５−アミン（７３．９ｍｇ、０．５５６ｍｍｏｌ）を１つずつ加えた。得られた混合物を１００℃で１２時間加熱した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した。混合物を濃縮し、粗生成物を得て、分取ＨＰＬＣによって精製し、表題化合物（４５ｍｇ、収率：３１．１％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  ９．２３（１Ｈ、ｓ）、８．０６（１Ｈ、ｓ）、７．８８（１Ｈ、ｓ）、７．４５−７．５３（２Ｈ、ｍ）４．６０（２Ｈ、ｓ）、３．９１（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝５．２Ｈｚ）、２．７０（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝５．２Ｈｚ）、２．３５（３Ｈ、ｓ）。
【０３２０】
Ｎ−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−（メチルスルホニル）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピラノ［４，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【０３２１】
【化５５】
0006507157.tif 000058
【０３２２】
ＣＨ2Ｃｌ2（１０ｍＬ）／ジオキサン（６ｍＬ）中のＮ−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−（メチルチオ）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピラノ［４，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン（１．４ｇ、４．４７ｍｍｏｌ）の溶液に、ｍ−ＣＰＢＡ（１．５４ｇ、８．９４ｍｍｏｌ）を１５℃で分けて加えた。混合物を１５℃で２〜３時間撹拌した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した。反応混合物をＮ2下で濃縮し、１．５ｇの表題化合物を得て、次のステップに直接使用した。
【０３２３】
Ｎ−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピラノ［４，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【０３２４】
【化５６】
0006507157.tif 000059
【０３２５】
ジオキサン（２０ｍＬ）中のＮ−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−（メチルスルホニル）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピラノ［４，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン（１．５ｇ、４．３４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＥＡ（２．１９ｇ、２１．７ｍｍｏｌ）及び５−メトキシイソインドリン（１．３０ｇ、８．６９ｍｍｏｌ）を加えた。電子レンジで封管を１５０℃で２時間加熱した。ＬＣ−ＭＳにより出発材料が消費されたことを示した。混合物を真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー、分取ＨＰＬＣによって精製し、表題化合物（１３０ｍｇ、収率：７．２３％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ  ８．１０（１Ｈ、ｓ）、８．０２（１Ｈ、ｓ）、７．６８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ）、７．４９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、７．１９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、６．８８（１Ｈ、ｓ）、６．８２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、４．７４（２Ｈ、ｓ）、４．７０（２Ｈ、ｓ）、４．６３（２Ｈ、ｓ）、３．９９（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝５．２Ｈｚ）、３．７８（３Ｈ、ｓ）、２．７２（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝５．２Ｈｚ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ４１５．２（Ｍ＋Ｈ）+。
【０３２６】
実施例２２（ＫＬ−００２５４）
Ｎ−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−６−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【０３２７】
【化５７】
0006507157.tif 000060
【０３２８】
ｔｅｒｔ−ブチル４−（（１Ｈ−インダゾール−５−イル）アミノ）−２−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６（７Ｈ）−カルボキシレート
【０３２９】
【化５８】
0006507157.tif 000061
【０３３０】
ＤＭＦ（２０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル２，４−ジクロロ−５Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６（７Ｈ）−カルボキシレート（１．０ｇ、３．１４６ｍｍｏｌ）、１Ｈ−インダゾール−５−アミン（０．５５ｇ、４．１５ｍｍｏｌ）、及びＮａ2ＣＯ3（１．１ｇ、１０．３８ｍｍｏｌ）の混合物を１００℃で２．５時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬを３回）で抽出した。１つに合わせた有機層を真空中で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、表題化合物を得た（０．９ｇ、収率６７．７％）。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨＺ、ＭｅＯＤ）δ  １３．０５（１Ｈ、Ｓ）、９．５７（１Ｈ、Ｓ）、８．０６（１Ｈ、Ｓ）、７．９５（１Ｈ、Ｍ）、７．５３−７．４７（２Ｈ、Ｍ）、４．４１−４．３９（４Ｈ、Ｓ）、１．４３（９Ｈ、Ｓ）。
【０３３１】
ｔｅｒｔ−ブチル４−（（１Ｈ−インダゾール−５−イル）アミノ）−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−５Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６（７Ｈ）−カルボキシレート
【０３３２】
【化５９】
0006507157.tif 000062
【０３３３】
ＮＭＰ（３０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（（１Ｈ−インダゾール−５−イル）アミノ）−２−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６（７Ｈ）−カルボキシレート（１．５０ｇ、３．８９ｍｍｏｌ）、５−メトキシイソインドリン（０．８７ｇ、５．３８ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（１．１８ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）の混合物を１５０℃で１時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、濾過し、分取ＨＰＬＣにより精製し、表題化合物（０．９５ｇ、４８．９％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ  ８．２０−８．１０（２Ｈ、Ｍ）、７．７５−７．５７（２Ｈ、Ｍ）、７．２５−７．２３（１Ｈ、Ｄ）、６．９１−６．８８（２Ｈ、Ｍ）、４．８９（４Ｈ、Ｍ）、４．５９−４．４８（３Ｈ、Ｍ）、３．７９（３Ｈ、Ｓ）、１．４９（９Ｈ、Ｓ）。
【０３３４】
Ｎ−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【０３３５】
【化６０】
0006507157.tif 000063
【０３３６】
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（（１Ｈ−インダゾール−５−イル）アミノ）−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−５Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６（７Ｈ）−カルボキシレート（０．９５ｇ、１．９ｍｍｏｌ）及びＴＦＡ（２０ｍＬ）を２５℃で１時間撹拌した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した。混合物を真空中で濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製し、表題化合物（３８０ｍｇ）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨＺ、ＭｅＯＤ）δ  ８．１３−８．１１（２Ｈ、Ｍ）、７．６６−７．６０（２Ｈ、Ｍ）、７．２７−７．２５（１Ｈ、Ｄ）、６．９１−６．８８（２Ｈ、Ｍ）、４．９１−４．８６（４Ｈ、Ｍ）、４．５７−４．５１（４Ｈ、Ｍ）、３．７９（３Ｈ、Ｓ）。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｍ／Ｅ  ４００．２（Ｍ＋Ｈ）+。
【０３３７】
実施例２３
Ｎ−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−６−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【０３３８】
【化６１】
0006507157.tif 000064
【０３３９】
（（１Ｈ−インダゾール−５−イル）（２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−６−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）メタノール
【０３４０】
【化６２】
0006507157.tif 000065
【０３４１】
ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中のＮ−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン（１．０ｇ、２．５ｍｍｏｌ）及びＨＣＨＯ（４ｍＬ）の混合物を２５℃で１時間撹拌した。ＮａＢＨ3ＣＮ（１００ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２５℃で１０時間撹拌した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した。混合物を真空中で濃縮し、粗生成物を得て、次のステップで直接使用した。
【０３４２】
Ｎ−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−６−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【０３４３】
【化６３】
0006507157.tif 000066
【０３４４】
ＭｅＯＨ（２０ｍｌ）中の（（１Ｈ−インダゾール−５−イル）（２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−６−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）メタノール（１．２ｇ、２．７ｍｍｏｌ）及びＨＣｌ（５ｍＬ）の混合物を２５℃で１．５時間撹拌した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した。混合物を濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製し、表題化合物（１００ｍｇ、９．０％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨＺ、ＭｅＯＤ）δ  ８．１３−８．１０（２Ｈ、Ｍ）、７．６６−７．５８（２Ｈ、Ｍ）、７．２７−７．２５（１Ｈ、Ｄ）、６．９４−６．８７（２Ｈ、Ｍ）、４．８５（４Ｈ、Ｍ）、４．６１−４．５６（４Ｈ、Ｍ）、３．８０（３Ｈ、Ｓ）。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｍ／Ｅ  ４１４．１（Ｍ＋Ｈ）+。
【０３４５】
実施例２４
Ｎ−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【０３４６】
【化６４】
0006507157.tif 000067
【０３４７】
ｔｅｒｔ−ブチル４−（（１Ｈ−インダゾール−５−イル）アミノ）−２−クロロ−５，６−ジヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−カルボキシレート
【０３４８】
【化６５】
0006507157.tif 000068
【０３４９】
ＤＭＦ（３０．０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル２，４−ジクロロ−５，６−ジヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−カルボキシレート（１．５０ｇ、４．９５ｍｍｏｌ）、１Ｈ−インダゾール−５−アミン（０．６６ｇ、４．９５ｍｍｏｌ）及びＮａ2ＣＯ3（１．０５ｇ、９．９ｍｍｏｌを１００℃で３時間加熱した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した。不溶性固体を濾過により除去し、濾液をＨＰＬＣによって精製し、表題化合物を得た（４００ｍｇ、２０．２％）。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）δ  ８．０２（１Ｈ、Ｓ）、７．９６（１Ｈ、Ｓ）、７．５２（２Ｈ、Ｓ）、４．４１（２Ｈ、Ｍ）、３．７４（２Ｈ、Ｍ）、２．６５−２．６２（２Ｈ、Ｍ）、１．４９（９Ｈ、Ｓ）。
【０３５０】
ｔｅｒｔ−ブチル４−（（１ｈ−インダゾール−５−イル）アミノ）−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−５，６−ジヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７（８ｈ）−カルボキシレート
【０３５１】
【化６６】
0006507157.tif 000069
【０３５２】
ＮＭＰ（２０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（（１Ｈ−インダゾール−５−イル）アミノ）−２−クロロ−５，６−ジヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−カルボキシレート（３６０ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）、５−メトキシイソインドリン（２０１ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（２７２ｍｇ、２．７ｍｍｏｌ）を１５０℃で１時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、濾過し、分取ＨＰＬＣにより精製し、表題化合物（１１０ｍｇ、２９．６％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）δ  ８．０８−８．０２（２Ｈ、Ｍ）、７．６４−７．５６（２Ｈ、Ｍ）、７．１７（２Ｈ、Ｂ）、６．８４−６．８３（２Ｈ、Ｍ）、４．７０−４．５３（６Ｈ、Ｍ）、３．８４−３．８２（５Ｈ、Ｍ）、２．６８−２．５７（２Ｈ、Ｍ）、１．５３（９Ｈ、Ｓ）。
【０３５３】
ｎ−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【０３５４】
【化６７】
0006507157.tif 000070
【０３５５】
ＤＣＭ（３ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（（１Ｈ−インダゾール−５−イル）アミノ）−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−５，６−ジヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−カルボキシレート（１１０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）及びＴＦＡ（３ｍＬ）を２５℃で１時間撹拌した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した後、混合物を濃縮し、表題化合物（７５ｍｇ、８８％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）δ  ８．１２（１Ｈ、ｓ）、８．００（１Ｈ、ｓ）、７．６３（２Ｈ、ｍ）、７．２２（２Ｈ、ｂｒｓ）、６．９０−６．８７（２Ｈ、ｍ）、４．８０−４．７９（４Ｈ、ｍ）、４．４０（２Ｈ、ｓ）、３．７６（２Ｈ、ｓ）、３．６６−３．６３（２Ｈ、ｍ）、２．９５−２．９２（２Ｈ、ｍ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ４１４．１（Ｍ＋Ｈ）+。
【０３５６】
実施例２５
Ｎ−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−７−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【０３５７】
【化６８】
0006507157.tif 000071
【０３５８】
（（１Ｈ−インダゾール−５−イル）（２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−７−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）メタノール
【０３５９】
【化６９】
0006507157.tif 000072
【０３６０】
ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中のＮ−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン（３００ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）及びＨＣＨＯ（１ｍＬ）の混合物を２５℃で１時間撹拌した。次に、ＮａＢＨ3ＣＮ（３０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を２５℃１０時間で撹拌した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した。混合物を濃縮し、次のステップで使用した。
【０３６１】
ｎ−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−７−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【０３６２】
【化７０】
0006507157.tif 000073
【０３６３】
ＭｅＯＨ（１０ｍｌ）中の（（１Ｈ−インダゾール−５−イル）（２−（５−メトキシイソインドリン−２−イル）−７−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）メタノール（４００ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）及びＨＣｌ（２ｍＬ）の混合物を２５℃で１．５時間撹拌した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した後、混合物を濃縮し、ＨＰＬＣによって精製し表題化合物（８６ｍｇ、２３．２％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨＺ、ＭｅＯＤ）δ  ８．１２（１Ｈ、Ｓ）、８．０１（１Ｈ、Ｓ）、７．６３（２Ｈ、Ｍ）、７．２３（２Ｈ、Ｂ）、６．９０−６．８８（２Ｈ、Ｍ）、４．８０（４Ｈ、Ｍ）、４．４６（２Ｈ、Ｓ）、３．７７−３．７０（５Ｈ、Ｍ）、３．１５（３Ｈ、Ｓ）、３．０３−３．００（２Ｈ、Ｍ）。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｍ／Ｅ  ４２８．２（Ｍ＋Ｈ）+。
【０３６４】
実施例２６
２−（４−（（１Ｈ−インダゾール−５−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）イソインドリン−５−カルボニトリル
【０３６５】
【化７１】
0006507157.tif 000074
【０３６６】
５−ブロモイソインドリン
【０３６７】
【化７２】
0006507157.tif 000075
【０３６８】
ＴＨＦ（１０００ｍＬ）中の５−ブロモイソインドリン−１，３−ジオン（２５．０ｇ、０．１１ｍｍｏｌ）の溶液にＢＨ3Ｍｅ2Ｓ（１００ｍＬ）を加えた。得られた混合物を８０℃で１７時間加熱した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した後、反応混合物をＭｅＯＨでクエンチし、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１で溶出）、表題化合物（３．９８ｇ、１８．２％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）δ  ７．６２（１Ｈ、ｓ）７．５５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）７．３５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）４．６２（２Ｈ、ｓ）４．５８（２Ｈ、ｓ）。
【０３６９】
ｔｅｒｔ−ブチル５−ブロモイソインドリン−２−カルボキシレート
【０３７０】
【化７３】
0006507157.tif 000076
【０３７１】
ＤＭＦ（２０ｍl）中の５−ブロモイソインドリン（３．９８ｇ、２０．２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＡＰ（４０．０ｍｇ）及びＢＯＣ2Ｏ（８．８１ｇ、４０．４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２５℃で１０時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳにより反応が完了したことが示した。反応混合物を濃縮し、粗生成物を得て、ｐｅで洗浄し、表題化合物（５．００ｇ、８３．４％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ  ７．３９−７．４３（２Ｈ、ｍ）７．０９−７．１８（１Ｈ、ｍ）４．６１−４．６８（４Ｈ、ｍ）１．５３（９Ｈ、ｓ）。
【０３７２】
ｔｅｒｔ−ブチル５−シアノイソインドリン−２−カルボキシレート
【０３７３】
【化７４】
0006507157.tif 000077
【０３７４】
ＤＭＦ（１５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル５−ブロモイソインドリン−２−カルボキシレート（５．００ｇ、１６．８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＺＮ（ＣＮ）2（３．９４ｇ、３３．５ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ＰＰｈ3）4（３．６２ｇ）を得た。混合物を８０℃で３時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳにより反応が完了したことが示された後、混合物を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝３０：１で溶出）によって精製し、表題化合物（４．００ｇ、９７．６％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ  ７．５３−７．６０（２Ｈ、ｍ）７．３３−７．４２（１Ｈ、ｍ）４．７１−４．７６（４Ｈ、ｍ）１．５３（９Ｈ、ｓ）。
【０３７５】
イソインドリン−５−カルボニトリル
【０３７６】
【化７５】
0006507157.tif 000078
【０３７７】
ＴＦＡ／ＤＣＭ（２Ｍ、１００ｍｌ）中のｔｅｒｔ−ブチル５−シアノイソインドリン−２−カルボキシレート（４．００ｇ、１６．４ｍｍｏｌ）の溶液を１５℃で１２０分間撹拌した。ＬＣ−ＭＳにより反応が完了したことを示した後、反応液を濃縮し、表題化合物（２．３６ｇ、９９．９％）を得て、次のステップに直接使用した。
【０３７８】
２−（４−（（１Ｈ−インダゾール−５−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）イソインドリン−５−カルボニトリル
【０３７９】
【化７６】
0006507157.tif 000079
【０３８０】
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の化合物イソインドリン−５−カルボニトリル（２００ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＥＡ（２００ｍｇ）及び４−メチル−Ｎ，Ｎ−ジ（プロパ−２−イン−１−イル）ベンゼンスルホンアミド（１７０ｍｇ、０．６９４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を８０℃で５時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳにより反応が完了したことを示した後、溶液を濃縮し、粗生成物を得て、分取ＨＰＬＣによって精製し、表題化合物を得た（１３０ｍｇ、５３．０％）。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ  １０．８１（１Ｈ、ｂ）、８．２９（１Ｈ、ｂ）８．１７（１Ｈ、ｓ）、８．０１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．９４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ）７．８５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ）７．６５−７．６７（１Ｈ、ｍ）、７．６０（３Ｈ、Ｂｒ．ｓ．）、６．４２（１Ｈ、Ｂｒ．ｓ．）、４．９２−５．０３（４Ｈ、ｍ）。ＭＳ（ＥＳ＋）Ｍ／Ｅ  ３５４．１（Ｍ＋Ｈ）+。
【０３８１】
実施例２７
Ｎ−（２−（５−（メトキシメチル）イソインドリン−２−イル）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０３８２】
【化７７】
0006507157.tif 000080
【０３８３】
４−メチル−ｎ，ｎ−ジ（プロパ−２−イン−１−イル）ベンゼンスルホンアミド
【０３８４】
【化７８】
0006507157.tif 000081
【０３８５】
ＣＨ3ＣＮ（２００ｍＬ）中の４−メチルベンゼンスルホンアミド（１０ｇ、４８．１ｍｍｏｌ）、Ｋ2ＣＯ3（１２．７ｇ、１２０ｍｍｏｌ）の溶液に臭化プロパルギル（１０．４ｇ、１４４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を６０℃に加熱し、５時間撹拌した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した後、混合物をＥｔＯＡｃ及び水で希釈した。水相をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、残渣を得て、ＥｔＯＨから再結晶化させ、黄色固体として表題化合物（１２ｇ、８３．１％）を得た。
【０３８６】
５−（メトキシメチル）−２−トシルイソインドリン
【０３８７】
【化７９】
0006507157.tif 000082
【０３８８】
ＥｔＯＨ（１００ｍＬ）中の４−メチル−Ｎ，Ｎ−ジ（プロパ−２−イン−１−イル）ベンゼンスルホンアミド（５ｇ、０．０２ｍｏｌ）、３−メトキシプロパ−１−イン（３．５ｇ、０．０５ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃でＲｈ（ＰＰｈ3）4Ｃｌ（２．３７ｇ、２ｍｍｏｌ）を加えた。その後、混合物を２０℃で１８時間撹拌した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことが示された後、反応物を減圧下で濃縮し、残渣を得て、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、表題化合物を得た（２ｇ、３１．２％）。1Ｈ  ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ、ＣＤ3ＯＤ）δ  ２．３４−２．４４（３Ｈ、ｍ）、３．３１（３Ｈ、ｓ）、４．３９（２Ｈ、ｓ）、４．５６（４Ｈ、ｓ）、７．１０−７．２４（３Ｈ、ｍ）、７．３８（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．９４Ｈｚ）、７．７６（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．９４Ｈｚ）。
【０３８９】
５−（メトキシメチル）イソインドリン
【０３９０】
【化８０】
0006507157.tif 000083
【０３９１】
ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中の５−（メトキシメチル）−２−トシルイソインドリン（２．５ｇ、７．８９ｍｍｏｌ）、Ｍｇ（４８０ｍｇ、２０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（２．０ｇ、２０ｍｍｏｌ）を加え、７５℃で２４時間撹拌した。転換率は約５０％であり、その後、反応物を減圧下で濃縮し、残渣を得て、さらに精製することなく直接使用した。
【０３９２】
Ｎ−（２−（５−（メトキシメチル）イソインドリン−２−イル）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０３９３】
【化８１】
0006507157.tif 000084
【０３９４】
ＭｅＣＮ（５０ｍＬ）中の５−（メトキシメチル）イソインドリン（１．５ｇ、粗）、Ｎ−（２−クロロピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン（２．５ｇ、０．０１ｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（５．２ｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を加え、マイクロ波の下で１２０℃で６時間撹拌した。次に、反応物を減圧下で濃縮し、残渣を得て、分取ＨＰＬＣによって精製し、白色固体として最終化合物（９４ｍｇ）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  ４．４３（２Ｈ、ｓ）、４．８０（４Ｈ、ｄ、Ｊ＝１８．５２Ｈｚ）、６．０７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．７３Ｈｚ）、７．２５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．５０Ｈｚ）、７．４２（２Ｈ、Ｂｒ．ｓ．）、７．４５−７．５９（２Ｈ、ｍ）、７．９４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．７３Ｈｚ）、８．０６（１Ｈ、Ｂｒ．ｓ．）、８．２９（１Ｈ、Ｂｒ．ｓ．）、９．２２（１Ｈ、Ｂｒ．ｓ．）、１２．９１（１Ｈ、Ｂｒ．ｓ．）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ３７３（Ｍ＋Ｈ）+。
【０３９５】
実施例２８
Ｎ−（２−（４−メトキシイソインドリン−２−イル）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０３９６】
【化８２】
0006507157.tif 000085
【０３９７】
ｔｅｒｔ−ブチル４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）イソインドリン−２−カルボキシレート
【０３９８】
【化８３】
0006507157.tif 000086
【０３９９】
ジオキサン（２０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−ブロモイソインドリン−２−カルボキシレート（１．００ｇ、３．３７ｍｍｏｌ）、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ（１，３，２−ジオキサボロラン）（１．０３ｇ、４．０４ｍｍｏｌ）、ＡｃＯＫ（６６１ｍｇ、６．７４ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ2(５０．０ｍｇ）を窒素雰囲気下で９０℃で１６時間撹拌した。２０℃に冷却した後、ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した後、混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮し、褐色の固体として表題化合物（１．２ｇ、収率：１０３％）を得て、さらに精製することなく次のステップに直接使用した。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、４００ＭＨｚ）δ  ７．６９（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）７．３６−７．２７（ｍ、２Ｈ）４．８７−４．６３（ｍ、４Ｈ）１．５２（ｓ、９Ｈ）１．３１（ｓ、１２Ｈ）。
【０４００】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−ヒドロキシイソインドリン−２−カルボキシレート
【０４０１】
【化８４】
0006507157.tif 000087
【０４０２】
ＴＨＦ（２０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）イソインドリン−２−カルボキシレート（１．２ｇ、３．４８ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｈ2Ｏ（１０ｍＬ）及びＨ2Ｏ2（２０ｍＬ）中のＮＨ4Ｃｌ（１８８ｍｇ、３．４８ｍｍｏｌ）を滴下し、１９℃で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した後、反応物を水性Ｎａ2Ｓｏ3溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬを３回）で抽出した。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、表題化合物（８００ｍｇ、９７．９％）を得て、さらに精製することなく次のステップに直接使用した。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、４００ＭＨｚ）δ  ７．１９−７．１１（ｍ、１Ｈ）６．８３−６．６８（ｍ、２Ｈ）４．７８−４．６３（ｍ、４Ｈ）１．２４（ｓ、９Ｈ）。
【０４０３】
ｔｅｒｔ−ブチル４−メトキシイソインドリン−２−カルボキシレート
【０４０４】
【化８５】
0006507157.tif 000088
【０４０５】
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシイソインドリン−２−カルボキシレート（７５０ｍｇ、３．１９ｍｍｏｌ）とＫ2ＣＯ3（８８０ｍｇ、６．３８ｍｍｏｌ）の混合物に、ＭｅＩ（６８０ｍｇ、４．７９ｍｍｏｌ）を滴下し、１００℃で６時間撹拌した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した後、混合物を濃縮し、次いでそれをＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）に溶解し、濾過し、濾液を濃縮し、褐色の固体として粗表題化合物（７００ｍｇ、８８．０％）を得て、さらに精製することなく次のステップに直接使用した。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、４００ＭＨｚ）δ  ７．１８−７．１４（ｍ、１Ｈ）６．８１−６．６４（ｍ、２Ｈ）４．６２−４．５２（ｍ、４Ｈ）３．７８（ｓ、３Ｈ）１．４４（ｓ、９Ｈ）。
【０４０６】
４−メトキシイソインドリン
【０４０７】
【化８６】
0006507157.tif 000089
【０４０８】
ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ、４Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−メトキシイソインドリン−２−カルボキシレート（７００ｍｇ、２．８１ｍｍｏｌ）の混合物を１８℃で１６時間撹拌した。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）により反応が完了した後、混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）に溶解し、濾過し、フィルターケーキをＥｔＯＡｃ（１０ｍＬを３回）で洗浄し、濃縮して、褐色の固体として、表題化合物を得た（５００ｍｇ、９６．１％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6、４００ＭＨｚ）δ  ９．９５（ｂｒ．ｓ、２Ｈ）７．３５−７．３１（ｍ、１Ｈ）６．９５（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）４．４６−４．４５（ｍ、２Ｈ）４．３７（ｔ、Ｊ＝４．８Ｈｚ、２Ｈ）３．８１（ｓ、３Ｈ）。
【０４０９】
Ｎ−（２−（４−メトキシイソインドリン−２−イル）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０４１０】
【化８７】
0006507157.tif 000090
【０４１１】
ｎ−ＢｕＯＨ（１０ｍＬ）中の４−メトキシイソインドリン（２００ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）、Ｎ−（２−クロロピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン（２９１ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（５５９ｍｇ、４．３２ｍｍｏｌ）の混合物を、マイクロ波の下で１５０℃で２時間で撹拌した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した後、混合物を濃縮し、シリカゲル上で精製し（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１〜５：１〜１：１〜０：１）、粗生成物を得て、基本的な分取ＨＰＬＣによって精製し、黄色固体として表題化合物を得た（４０ｍｇ、１０．３％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6、４００ＭＨｚ）δ  １２．９３（Ｂｒ．ｓ、１Ｈ）９．２１（ｓ、１Ｈ）８．２５（Ｂｒ．ｓ、１Ｈ）７．９３（ｄ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、２Ｈ）７．４９−７．４７（ｍ、２Ｈ）７．３１−７．２７（ｍ、１Ｈ）７．０３−６．９７（ｍ、１Ｈ）６．９０（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）６．０６（ｄ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、１Ｈ）４．８４−４．６８（ｍ、４Ｈ）３．８４（Ｂｒ．ｓ、３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ３５９．２（Ｍ＋Ｈ）+。
【０４１２】
実施例２９
Ｎ−（２−（４−フルオロイソインドリン−２−イル）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０４１３】
【化８８】
0006507157.tif 000091
【０４１４】
１，２−ビス（ブロモメチル）−３−フルオロベンゼン
【０４１５】
【化８９】
0006507157.tif 000092
【０４１６】
ＣＣｌ4（５０ｍＬ）中の１−フルオロ−２，３−ジメチルベンゼン（１．００ｇ、３．３７ｍｍｏｌ）、ＮＢＳ（２．８７ｇ、１６．１ｍｍｏｌ）及びＢＰＯ（１９．５ｍｇ）の混合物を８０℃で１時間撹拌した。室温に冷却した後、ＴＬＣ（ＰＥ）により反応が完了したことを示した後、混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮し、粗生成物を得て、シリカゲル（ＰＥ）カラムクロマトグラフィーにより精製し、無色油として表題化合物（１．７ｇ、７４．９％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、４００ＭＨｚ）δ  ７．３２−７．２６（ｍ、１Ｈ）７．１７（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）７．０８−７．０１（ｍ、１Ｈ）４．７０（ｓ、２Ｈ）４．６３（ｓ、２Ｈ）。
【０４１７】
２−ベンジル−４−フルオロイソインドリン
【０４１８】
【化９０】
0006507157.tif 000093
【０４１９】
トルエン（３０ｍＬ）中の１，２−ビス（ブロモメチル）−３−フルオロベンゼン（１．９ｇ、６．７４ｍｍｏｌ）、ＢｎＮＨ2（１．０８ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）及びＫ2ＣＯ3（１．８６ｇ、１３．９ｍｍｏｌ）の混合物を１００℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）により反応が完了したことが示した後、混合物を濾過し、濾液を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１：０〜１００：１〜５０：１〜３０：１〜２０：１）及び分取−ＴＬＣ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１、Ｒf＝０．６）によって精製し、褐色の油状物として表題化合物（５８０ｍｇ、３７．９％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、４００ＭＨｚ）δ  ７．４２−７．３３（ｍ、４Ｈ）７．３０−７．２７（ｍ、１Ｈ）７．２０−７．１１（ｍ、１Ｈ）６．９５（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）６．８６（ｔ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）３．９９（ｓ、２Ｈ）３．９５（ｓ、２Ｈ）３．９１（ｓ、２Ｈ）。
【０４２０】
４−フルオロイソインドリン
【０４２１】
【化９１】
0006507157.tif 000094
【０４２２】
ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の２−ベンジル−４−フルオロイソインドリン（５８０ｍｇ、２．５６ｍｍｏｌ）及びＰｄ−Ｃ（２００ｍｇ）の混合物に、ＨＣｌ（１ｍＬ）を添加し、反応混合物を５０ｐｓｉのＨ2の下、５０℃で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した後、混合物を濾過し、濾液を濃縮して、明褐色の固体として表題化合物を得て（３５０ｍｇ、７９．７％）、さらに精製することなく次のステップに直接使用した。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、４００ＭＨｚ）δ  ７．４３−７．３７（ｍ、１Ｈ）７．２２（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）７．０９（ｔ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）４．５７（ｂｒ．ｓ、４Ｈ）。
【０４２３】
Ｎ−（２−（４−フルオロイソインドリン−２−イル）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０４２４】
【化９２】
0006507157.tif 000095
【０４２５】
ｎ−ＢｕＯＨ（５ｍＬ）中の４−フルオロイソインドリン（３５０ｍｇ、２．０２ｍｍｏｌ）、Ｎ−（２−クロロピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン（４９５ｍｇ、２．０２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（５２１ｍｇ、４．０４ｍｍｏｌ）の混合物を、マイクロ波の下で１５０℃で２時間撹拌した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを示した後、混合物を濃縮し、それにＭｅＯＨ（２０ｍＬ）を添加し、沈殿物を、濾過により回収し、ＭｅＯＨ（１０ｍＬを３回）で洗浄し、真空下で乾燥させ、淡褐色の固体として表題化合物を得た（４５０ｍｇ、６４．３％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6、４００ＭＨｚ）δ  １２．９３（ｓ、１Ｈ）９．２５（ｓ、１Ｈ）８．２２（ｂｒ．ｓ、１Ｈ）７．９６−７．９４（ｍ、２Ｈ）７．５４−７．４７（ｍ、２Ｈ）７．３８−７．２９（ｍ、２Ｈ）７．１５−７．１０（ｍ、１Ｈ）６．０９（ｄ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、１Ｈ）４．８５（ｂｒ．ｓ、４Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ３４７．２（Ｍ＋Ｈ）+。
【０４２６】
実施例３０
２−（５−フルオロイソインドリン−２−イル）−Ｎ−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−５，７−ジヒドロフロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【０４２７】
【化９３】
0006507157.tif 000096
【０４２８】
ＮＭＰ（１０ｍＬ）中の２−クロロ−Ｎ−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−５，７−ジヒドロフロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン（０．５ｇ，１．３ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．４ｇ、３．９ｍｍｏｌ）及び５−フルオロイソインドリン塩酸塩（０．２９ｇ、１．３ｍｍｏｌ）を１５０℃で１時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、濾過し、ＨＰＬＣによって精製し、表題化合物（５４ｍｇ、８．０５％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭＥＴＨＡＮＯＬ−ｄ4）δ  ８．１８（１Ｈ、ｓ）８．０４（１Ｈ、ｓ），７．６５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．１０Ｈｚ）、７．５２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４０Ｈｚ）、７．３４（１Ｈ、ｍ）、７．１０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．６０Ｈｚ）、７．０２（１Ｈ、ｍ）、４．７９−４．９１（８Ｈ、ｍ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ３８９（Ｍ＋Ｈ）+。
【０４２９】
実施例３１
２−（５−クロロイソインドリン−２−イル）−Ｎ−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−５，７−ジヒドロフロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【０４３０】
【化９４】
0006507157.tif 000097
【０４３１】
ＮＭＰ（２０ｍＬ）中の２−クロロ−Ｎ−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−５，７−ジヒドロフロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン（１．０ｇ、２．６ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．８ｇ、７．８ｍｍｏｌ）及び５−クロロイソインドリン塩酸塩（０．５８ｇ、２．６ｍｍｏｌ）を１５０℃で１時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、濾過し、ＨＰＬＣによって精製し、表題化合物（１１０ｍｇ、９．１２％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １２．９５（１Ｈ、ｓ），８．８３（１Ｈ、ｓ），８．２６（１Ｈ、ｓ），８．０８（１Ｈ、ｓ），７．６２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８０Ｈｚ）、７．４９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８０Ｈｚ）、７．３４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．６０Ｈｚ）、４．８６−４．７１（８Ｈ、ｍ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ４０５（Ｍ＋Ｈ）+。
【０４３２】
実施例３２
Ｎ−（２−（イソインドリン−２−イル）−５，６−ジメトキシピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０４３３】
【化９５】
0006507157.tif 000098
【０４３４】
５−メトキシ−２−チオキソジヒドロピリミジン−４，６（１Ｈ，５Ｈ）−ジオン
【０４３５】
【化９６】
0006507157.tif 000099
【０４３６】
ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）にＮａ（２．４ｇ、１０４．３ｍｍｏｌ）を室温で添加した。Ｎａが消失後、ジメチル２−メトキシマロン酸（６．８ｇ、４１．９ｍｍｏｌ）及びチオ尿素（４．８ｇ、６１．３ｍｍｏｌ）の混合物を添加した。得られた混合物を８０℃で１０時間撹拌した。ＴＬＣにより反応が完了したことを示した後、溶媒を蒸発させた。水を添加し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬを３回）で洗浄した。水層をＨＣｌでｐＨ＝１に酸性化し、沈殿物を濾過により回収し、真空下で乾燥させ、表題化合物（５ｇ、６４．１％）を得た。1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ  １０．４１（ｓ、２Ｈ）３．７５（ｓ、３Ｈ）。
【０４３７】
５−メトキシ−２−（メチルチオ）ピリミジン−４，６（１Ｈ，５Ｈ）−ジオン
【０４３８】
【化９７】
0006507157.tif 000100
【０４３９】
ＭｅＩ（４．４５ｇ、３１．３ｍｍｏｌ）を、水（４０ｍＬ）中の５−メトキシ−２−（メチルチオ）ピリミジン−４，６（１Ｈ，５Ｈ）−ジオン（５ｇ、２８．６ｍｍｏｌ）及びＮａＯＨ（１．３６ｇ、３４ｍｍｏｌ）の混合物に滴下した。添加後、得られた混合物を１６時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液をｐＨ＝１に酸性化し、沈殿物を濾過により回収し、水で洗浄し、真空下で乾燥させ、表題化合物（２ｇ、３７％）を得た。1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）δ  ３．７１（ｓ、３Ｈ）２．５２（ｓ、３Ｈ）。
【０４４０】
４，６−ジクロロ−５−メトキシ−２−（メチルチオ）ピリミジン
【０４４１】
【化９８】
0006507157.tif 000101
【０４４２】
オキシ塩化リン（１５ｍＬ）中の５−メトキシ−２−（メチルチオ）ピリミジン−４，６（１Ｈ，５Ｈ）−ジオン（２ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）とＮ，Ｎ−ジエチルアニリン（１ｍＬ）を１００℃で３時間加熱した。ＬＣＭＳによって反応が完了したことが検出された。過剰な試薬を真空除去し、残渣を氷上に注ぎ、ＭＴＢＥで抽出した。有機相を水（１０ｍＬを２回）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、真空濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）によって精製し、白色固体として表題化合物（２．３ｇ、９６％）を得た。1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）δ  ３．９０（ｓ、３Ｈ）２．５３（ｓ、３Ｈ）。
【０４４３】
Ｎ−（６−クロロ−５−メトキシ−２−（メチルチオ）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０４４４】
【化９９】
0006507157.tif 000102
【０４４５】
エタノール（１５ｍＬ）中の４，６−ジクロロ−５−メトキシ−２−（メチルチオ）ピリミジン（２．０ｇ、８９ｍｍｏｌ）及び１Ｈ−インダゾール−５−アミン（１．５４ｇ、１１．６ｍｍｏｌ）の混合物を１６時間加熱還流し、溶媒を減圧下で除去した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１：１）によって精製し、白色固体として表題化合物（２．３ｇ、８２％）を得た。1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ  ９．４４（ｓ、１Ｈ）８．０２（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）７．５８（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）７．５０（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）３．８０（ｓ、１Ｈ）２．３８（ｓ、１Ｈ）。
【０４４６】
Ｎ−（５，６−ジメトキシ−２−（メチルチオ）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０４４７】
【化１００】
0006507157.tif 000103
【０４４８】
ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）に、Ｎａ（０．３６ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）を室温で添加した。Ｎａが消失した後、Ｎ−（６−クロロ−５−メトキシ−２−（メチルチオ）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン（１．０ｇ、３．１ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を８０℃で１０時間撹拌した。ＴＬＣにより反応が完了したことを示した後、溶媒を減圧下で濃縮し、残渣をＣＨ2Ｃｌ2に溶解し、水（１０ｍＬを２回）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、真空によって蒸発させ、表題化合物を得た（０．９ｇ、９２％）。
【０４４９】
Ｎ−（５，６−ジメトキシ−２−（メチルスルホニル）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０４５０】
【化１０１】
0006507157.tif 000104
【０４５１】
ジクロロメタン（３０ｍＬ）中のＮ−（５，６−ジメトキシ−２−（メチルチオ）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン（０．９ｇ、３．１ｍｍｏｌ）及び３−クロロペルオキシ安息香酸（２．０３ｇ、９．３ｍｍｏｌ）の混合物を２５℃で３時間撹拌した。ＴＬＣにより反応が完了したことを示した後、混合物を水性Ｎａ2ＳＯ3（２０ｍＬを２回）、水性ＮａＨＣＯ3（２０ｍＬを２回）、Ｈ2Ｏ（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、真空によって蒸発させ、白色固体として表題化合物を得た（０．９ｇ、９０％）。
【０４５２】
Ｎ−（２−（イソインドリン−２−イル）−５，６−ジメトキシピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン
【０４５３】
【化１０２】
0006507157.tif 000105
【０４５４】
１，４−ジオキサン３０ｍＬ）中のＮ−（５，６−ジメトキシ−２−（メチルスルホニル）ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン（０．９ｇ、２．５ｍｍｏｌ）及びイソインドリン（０．５８ｇ、３．７５ｍｍｏｌ）の混合物を、マイクロ波の下１４０℃で５時間反応させた。ＬＣＭＳにより出発物質の大部分が消費されたことを示した後、溶媒を減圧下で除去した。粗生成物を中性分取ＨＰＬＣによって精製し、褐色固体として表題化合物を得た（１７５ｍｇ、１８％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ、４００ＭＨｚ）δ  １２．８８（ｓ、１Ｈ）８．５０（ｓ、１Ｈ）８．２８（ｓ、１Ｈ）８．０２（ｓ、１Ｈ）７．７４（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）７．４６−７．４１（ｍ、３Ｈ）７．２９−７．２７（ｍ、２Ｈ）、４．７７（ｓ、４Ｈ）３．９１（ｓ、３Ｈ）３．６４（ｓ、３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ  ３８９（Ｍ＋Ｈ）+。
【０４５５】
実施例３３
ＲＯＣＫ１  ｓｉＲＮＡではなくＲＯＣＫ２  ｓｉＲＮＡがＩＬ−１７及びＩＬ−２１の分泌を阻害する。
【０４５６】
ヒトＴ細胞のＩＬ−１７及びＩＬ−２１の分泌を制御するＲＯＣＫ２の役割を確認するために、我々はＲＮＡ干渉により特定のＲＯＣＫ１とＲＯＣＫ２の発現を停止させた。特定のＲＯＣＫ１及びＲＯＣＫ２低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）によって、それぞれタンパク質発現レベルが７２％と８４％低下した。ＲＯＣＫ１のサイレンシングではなく、ＲＯＣＫ２のサイレンシングは、ヒトＴ細胞中のＩＦＮ−γ分泌に対する最小の効果で、ＩＬ−１７とＩＬ−２１を減少させた（図２）。
【０４５７】
実施例３４
ＲＯＣＫ１及びＲＯＣＫ２化合物の選択性
【０４５８】
Ｒｈｏキナーゼ阻害に関する用量反応曲線は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｚ’−ＬＹＴＥ（商標）キナーゼアッセイキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号ＰＶ３７９３）から生じた。精製された活性のＲＯＣＫ１及びＲＯＣＫ２は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（カタログ番号ＲＯＣＫ１、ＰＶ３６９１及びＲＯＣＫ２、ＰＶ３７５９）から入手した。キットの要素は、ミオシン軽鎖２（ＫＫＲＰＱＲＲＹＳＮＶＦ）に基づいたクマリン及びフルオレセイン標識ペプチド、開発用試薬を含む専売のプロテアーゼ、ならびに発生反応を停止するために使用される専売のストップ緩衝液を含んでいる。化合物の阻害活性は、製造元のプロトコルに従って測定される。簡潔には、減少した濃度の試験化合物または周知のＲＯＣＫ阻害剤Ｙ−２７９６３を、１０ｕＭ〜２．５６×１０-5ｕＭの範囲で反応緩衝液に加え、当該反応緩衝液はアッセイ希釈緩衝液中に、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．５、１０ｍＭのＭｇＣｌ2、５ｍＭのＥＧＴＡ、０．０５％のＢｒｉｊ−３５、０．１８ｕｇ／ｍＬのＲＯＣＫ１または０．１８ｕｇ／ｍＬのＲＯＣＫ２を含んでいる。この混合物を、白色９６ウェルハーフエリアプレートに重層し、ＲＯＣＫ１については５ｕＭのＡＴＰ、ＲＯＣＫ２については１２ｕＭのＡＴＰを添加して、反応を開始する。アッセイは室温で１時間進み、次に、開発用試薬を添加し、さらに室温で１時間インキュベーションを行った。ＳＴＯＰ試薬をその後添加し、その反応物とクマリン及びフルオレセイン発光シグナルをすぐにＴｅｃａｎ  Ｉｎｆｉｎｉｔｅ  Ｍ１０００蛍光プレートリーダー（励起：４００ｎｍ；発光：それぞれ４４５ｎｍと５２０ｎｍ）で読み取る。対照サンプルに対する試験サンプルの発光比を比較することによって、リン酸化値の割合を計算し、キナーゼ活性の１／２阻害をもたらす阻害剤の濃度（ＩＣ50）をＰｒｉｓｍを使用して決定する。表１は、前述の実施例の化合物についてのＩＣ50濃度を提供している。いくつかの化合物はまた、ミオシン軽鎖のリン酸化（ｐＭＬＣ）の阻害を測定した予備的アッセイにおいて活性を示した。ＮＤのマークを付せられた化合物については、使用した試験条件下では決定することができないことを示している。ＲＯＣＫ１及びＲＯＣＫ２の阻害、及びＲＯＣＫ２の阻害についての特定の化合物の選択性を示すデータは、表１に示している。
【０４５９】
【表３】
0006507157.tif 000106
【０４６０】
実施例３５
実施例１のＲＯＣＫ２選択的阻害剤は、ヒトＣＤ４+Ｔ細胞において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、ＩＬ−１７とＩＬ−２１の分泌を阻害するが、ＩＮＦ−γまたはＩＬ−２の分泌は阻害しない。
【０４６１】
サイトカイン分泌及び増殖をもたらす、休止Ｔ細胞の活性化は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）／ＣＤ３複合体及びＣＤ２８受容体の共刺激により模倣された、抗原提示細胞（ＡＰＣ）からの２つの別個のシグナルを含んでいる。新たに精製したＣＤ４ +ヒトＴ細胞ならびにＣＤ３及びＣＤ２８に対する刺激性抗体を使用することによって、ＴＣＲの活性化に応答したＩＬ−１７及びＩＬ−２１の分泌を刺激し、実施例１のＲＯＣＫ２選択的阻害剤による治療は、有意に、用量依存的に、ＩＬ−１７とＩＬ−２１の分泌を阻害した。同じ条件下で、ＩＦＮ−γ及びＩＬ−２の阻害は観察されなかった（図２）。
【０４６２】
実施例３６
実施例１のＲＯＣＫ２阻害剤は、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）に関連する麻痺を低減する。
【０４６３】
ＥＡＥの誘導のために、マウスに、第０日目に、ＣＦＡ（４００ｍｇ／ｍｌの結核菌で補充されたＣＦＡ）に乳状にされた、１５０ｍｇ／マウスのＭＯＧ  ３５−５５ペプチド（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｃｏｒｅ  Ｆａｃｉｌｉｔｉｅｓ、Ｄａｎａ−Ｆａｒｂｅｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｈａｒｖａｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）を皮下に免疫した。
【０４６４】
マウスに麻痺の兆候が３日間個別にあった場合、指示された化合物（１０ｍｇ／ｋｇの割合でＦＴＹ７２０、１５０ｍｇ／ｋｇの割合で化合物１を１日４回［ＱＤ］または１日２回［ＢＩＤ］）で処置を行った。化合物１の治療の投与量の変化は、１５０ＢＩＤ群にのみ指示される。ＦＴＹ７２０は、スフィンゴシン１−リン酸受容体モジュレーターである。ＦＴＹ７２０は、末梢血リンパ球数の減少を誘発し、様々な実験同種移植及び自己免疫疾患モデルにおいて免疫調節活性を発揮する。ＥＡＥスコアは、Ｉｖａｎｏｖ，ら、２００６に基づいた。端的には、０−疾患なし、１−尾の引きずり、２−弱い／部分的な後ろ足の麻痺、３−後ろ足が完全に麻痺、４−後肢すべてと部分的な前脚の麻痺、５−完全麻痺／死。処置を受けたマウスの平均臨床スコアは、図５に示されている。化合物１で処置を受けた対象は、臨床スコアの大幅な改善を示した。
【０４６５】
実施例３６
ＶＥＧＦＲ２抗体
【０４６６】
ＶＥＧＦＲ２結合抗体配列の非限定的な例が提供されている。本明細書に記載されているように、ヒトＦａｂファージディスプレイライブラリから、ヒトＶＥＧＦＲ２に結合し、リガンドＶＥＧＦＡのｈＶＥＧＦＲ２への結合をブロックし、ＶＥＧＦＲ２リン酸化及びＶＥＧＦＡによって刺激される下流シグナル伝達を阻害する２つの中和抗体が同定された。表１は、ＣＤＲのアミノ酸配列及び抗体の可変ドメインを示す。Ｍａｂ１０１とＭａｂ１０２のＫdはそれぞれ、約６．６ｍＭと約１．７ｎＭである。
【０４６７】
Ｍａｂ１０１の重鎖はκ軽鎖遺伝子（κ−ライブラリ）とλ軽鎖遺伝子（λ−ライブラリ）で再編成された。２０個のユニークなλ軽鎖変異体は、ヒトＶＥＧＦＲ２とマウスＶＥＧＦＲ２の両方に対してλ−ライブラリをパニングすることによって認められた。２２個のユニークなκ軽鎖変異体は、ヒトＶＥＧＦＲ２とマウスＶＥＧＦＲ２の両方に対してκ−ライブラリをパニングすることによって認められた。表２は、ＣＤＲ及び軽鎖の可変ドメインのアミノ酸配列を示す。Ｍａｂ１０５、１０６、及び１０７のＫＤは、約１０倍増加した（それぞれ０．２４ｎＭ、０．２２ｎＭ、０．１２ｎＭ）。
【０４６８】
Ｍａｂ抗体１３８（表２）は、Ｍａｂの４重鎖を含み、親和性成熟のために選択された。突然変異は、軽鎖のＣＤＲ３及び重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３に導入された。得られたライブラリは、ヒト及びマウスＶＥＧＦＲ２にパニングされた。表３は、重鎖及び軽鎖のＣＤＲ及び４つの得られた抗体可変ドメインのアミノ酸配列を示している。図６は、Ｍａｂ４重鎖及びＭａｂ１３８カッパ鎖（すなわち配列番号１６０）への配列の比較を示している。
【０４６９】
【表４】
0006507157.tif 000107
【０４７０】
ヒト、マウス、及びラットのＶＥＧＦＲ２のためのＭａｂ１４７、Ｍａｂ１４９ならびに親Ｍａｂ１６０の結合定数は、Ｂｉａｃｏｒｅ分析（表４）により決定した。
【０４７１】
【表５】
0006507157.tif 000108
【０４７２】
Ｍａｂ抗体１４７は、その受容体結合及びリガンド遮断特性についてＥＬＩＳＡによって調べられた。Ｍａｂ１４７ブロックは、同様の親和性でｈＶＥＧＦＲ２とｍＶＥＧＦＲ２の両方に結合する（図７Ａ）。Ｍａｂ１４７は、ｈＶＥＧＦＲ特異的対照抗体と同様にｈＶＥＧＦＲ２に結合するリガンドをブロックし、また、ｍＶＥＧＦＲ２特異的対照抗体と同様にｍＶＥＧＦＲ２への結合もブロックする（図７Ｂ）。
【０４７３】
細胞膜上に発現されたｈＶＥＧＦＲ２とｍＶＥＧＦＲ２へのＭａｂ１４７の結合も確認された。図８Ａは、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）ならびにＫＤＲを過剰発現するブタ大動脈内皮（ＰＡＥ）細胞によって発現されるｈＶＥＧＲ２（すなわちヒトＶＥＧＦＲ２）への結合を示している。Ｍａｂ１４７はまた、ＭＳ１マウス内皮細胞によって発現されるｍＶＥＧＦＲにも結合した（図８Ｂ）。
【０４７４】
Ｍａｂ−１４７は、ＫＤＲ−ＰＡＥ細胞（図９Ａ）及びＨＵＶＥＣ（図９Ｂ）内のＫＤＲ及びｐ４２／４４のリン酸化の減少によって示されるように、ＫＤＲ−ＰＡＥ細胞内のＶＥＧＦＲ−２媒介性シグナル伝達を阻害する。Ｍａｂ−１０６とＭａｂ−１４７は、ＫＤＲ−ＰＡＥ細胞の増殖を阻害し（図１０Ａ）、ならびにＫＤＲ−ＰＡＥ細胞のＶＥＧＦ誘導性移動を阻害する（図１０Ｂ）。
0006507157.tif 000112
【図１−１】
0006507157.tif 000113
【図１−２】
0006507157.tif 000114
【図１−３】
0006507157.tif 000115
【図１−４】
0006507157.tif 000116
【図１−５】
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【図２Ａ】
0006507157.tif 000118
【図２Ｂ】
0006507157.tif 000119
【図２Ｃ】
0006507157.tif 000120
【図３】
0006507157.tif 000121
【図４Ａ】
0006507157.tif 000122
【図４Ｂ１】
0006507157.tif 000123
【図４Ｂ２】
0006507157.tif 000124
【図４Ｂ３】
0006507157.tif 000125
【図４Ｃ１】
0006507157.tif 000126
【図４Ｃ２】
0006507157.tif 000127
【図４Ｃ３】
0006507157.tif 000128
【図５】
0006507157.tif 000129
【図６Ａ】
0006507157.tif 000130
【図６Ｂ】
0006507157.tif 000131
【図７Ａ】
0006507157.tif 000132
【図７Ｂ】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０】
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【配列表】
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