(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療用ナノ粒子の製造方法であって、
第１の有機相と第１の水性溶液とを組み合わせて第２の相を形成する工程と；
前記第２の相を乳化してエマルジョン相を形成する工程であって、前記エマルジョン相が、第１のポリマーと、プロトン化可能な窒素を有する塩基性治療剤と、パモ酸とを含む、工程と；そして、
前記エマルジョン相をクエンチすることによりクエンチ相を形成する工程と；
を含み、
ここにおいて、前記エマルジョン相をクエンチする工程が、前記エマルジョン相を、４〜７のｐＨを有する第２の水性溶液、と混合することを含み、そして、前記第２の水性溶液は、クエンチ相が第２の水性溶液のｐＨとの差が１ｐＨ単位未満のｐＨを有するのに十分な濃度の緩衝剤を含む、
前記治療用ナノ粒子の製造方法。
【請求項２】
前記第２の水性溶液のｐＨが４〜５である、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
前記第２の水性溶液のｐＨが６〜７である、請求項１に記載の製造方法。
【請求項４】
前記第２の水性溶液がリン酸を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項５】
前記第２の水性溶液がクエン酸を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項６】
前記第２の水性溶液がリン酸とクエン酸との混合物を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項７】
前記第２の水性溶液がホウ酸とリン酸と酢酸との混合物を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項８】
前記クエンチ相が前記第２の水性溶液と同一のｐＨを有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項９】
前記クエンチ相が４〜７のｐＨを有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項１０】
前記クエンチ相が４〜５のｐＨを有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項１１】
前記クエンチ相が６〜７のｐＨを有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１４年２月１３日出願の米国仮特許出願第６１／９３９，３６３号明細書（本出願をもって参照によりその全体が組み込まれる）に基づく利益および優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
ある特定の薬剤（たとえば、特定の組織もしくは細胞型を標的とするかまたは正常組織を標的とせずに特異的罹患組織を標的とする薬剤）を患者に送達するシステムまたは薬剤の放出を制御するシステムは、有益なものとして長い間認識されてきた。
【０００３】
たとえば、活性薬剤を含み、かつたとえば特定の組織もしくは細胞型を標的とするかまたは正常組織を標的とせずに特異的罹患組織を標的とする治療剤は、標的とならない生体組織内の薬剤量を低減することができる。このことは、周囲の非癌組織を死滅させることなく細胞傷害用量の薬剤を癌細胞に送達することが望ましい癌などの病態を治療する場合にとくに重要である。有効な薬剤標的化は、抗癌治療によく見られる望ましくない命にかかわることもある副作用を低減することができる。そのほかに、かかる治療剤は、他の方法では到達不能と思われるある特定の組織への薬剤の到達を可能にする。
【０００４】
制御放出および／または標的治療を提供する治療剤はまた、他のナノ粒子送達システムで限界があることが知られている有効量の薬剤を送達可能でなければならない。たとえば、有利な送達性をもたせるのに十分な程度にナノ粒子のサイズを小さく維持しつつ、各ナノ粒子に会合させた適切量の薬剤を有するナノ粒子システムを作製することは、難題であるかもしれない。
【０００５】
少なくとも１個の塩基性窒素原子を含有する治療剤（すなわち、プロトン化可能な窒素含有治療剤）は、一群の重要な治療剤を提供する。しかし、この一群の薬剤のナノ粒子製剤は、バースト放出プロファイルや不十分な薬剤負荷などの望ましくない性質により妨害されることが多い。
【発明の概要】
【０００６】
したがって、癌などの疾患を治療するために治療レベルのプロトン化可能な窒素含有治療剤を送達可能であるとともに患者の副作用を低減可能なナノ粒子治療剤およびかかるナノ粒子の製造方法の必要性が存在する。
【０００７】
本明細書には、プロトン化可能な窒素含有治療剤を含むポリマーナノ粒子ならびにかかる治療用ナノ粒子の製造方法および使用方法が記載されている。
【０００８】
一態様では、治療用ナノ粒子の調製プロセスが提供される。プロセスは、第１の有機相と第１の水性溶液とを組み合わせて第２の相を形成する工程と、第２の相を乳化してエマルジョン相を形成する工程であって、エマルジョン相が、第１のポリマーと、プロトン化可能な窒素を有する塩基性治療剤と、パモ酸とを含む、工程と、エマルジョン相をクエンチすることによりクエンチ相を形成する工程とを含む。
【０００９】
いくつかの実施形態では、エマルジョン相のクエンチングは、エマルジョン相と、約２〜約８のｐＨを有する第２の水性溶液と、の混合を含む。
【００１０】
他の態様では、治療用ナノ粒子の調製プロセスが提供される。プロセスは、第１の有機相と第１の水性溶液とを組み合わせて第２の相を形成する工程と、第２の相を乳化してエマルジョン相を形成する工程であって、エマルジョン相が、第１のポリマーと、プロトン化可能な窒素を有する塩基性治療剤と、実質的に疎水性の酸とを含む、工程と、エマルジョン相をクエンチすることによりクエンチ相を形成する工程であって、エマルジョン相のクエンチングが、エマルジョン相と、約４〜約７のｐＨを有する第２の水性溶液との混合を含む、工程とを含む。
【００１１】
いくつかの実施形態では、プロセスは、クエンチ相を濾過して治療用ナノ粒子を回収する工程をさらに含む。
【００１２】
いくつかの実施形態では、プロセスは、第２の相の乳化前に第２の相で塩基性治療剤と酸とを組み合わせる工程をさらに含む。たとえば、いくつかの実施形態では、塩基性治療剤および酸は、第２の相の乳化前に疎水性イオン対を形成する。他の実施形態では、塩基性治療剤および酸は、第２の相の乳化前、乳化時に疎水性イオン対を形成する。
【００１３】
いくつかの実施形態では、プロセスは、第２の相の乳化と実質的に同時に第２の相で塩基性治療剤と酸とを組み合わせる工程をさらに含む。たとえば、いくつかの実施形態では、第１の有機相は塩基性治療剤を含み、かつ第１の水性溶液は酸を含む。
【００１４】
いくつかの実施形態では、塩基性治療剤は、プロトン化時に第１のｐＫaを有し、酸は、第２のｐＫaを有し、かつエマルジョン相は、第１のｐＫaと第２のｐＫaとの間のｐＫa単位に等しいｐＨを有する水性溶液でクエンチされる。たとえば、いくつかの場合には、クエンチ相は、第１のｐＫaと第２のｐＫaとの間のｐＫa単位に等しいｐＨを有する。いくつかの実施形態では、塩基性治療剤は、プロトン化時に第１のｐＫaを有し、酸は、第２のｐＫaを有し、かつ第１の水性溶液は、第１のｐＫaと第２のｐＫaとの間のｐＫa単位に等しいｐＨを有する。いくつかの実施形態では、ｐＨ（たとえば、クエンチ相または第１の水性溶液のｐＨ）は、第１のｐＫaおよび第２のｐＫaからほぼ等距離にあるｐＫa単位に等しい。
【００１５】
さらに他の態様では、治療用ナノ粒子が提供される。治療用ナノ粒子は、第１のポリマーと、プロトン化可能な窒素を有する塩基性治療剤と、パモ酸とを含む第１の有機相を乳化することによりエマルジョン相を形成する工程と、エマルジョン相をクエンチすることによりクエンチ相を形成する工程と、により調製される。
【００１６】
いくつかの実施形態では、エマルジョン相のクエンチングは、エマルジョン相と、約２〜約８のｐＨを有する水性溶液と、の混合を含む。
【００１７】
さらに他の態様では、治療用ナノ粒子が提供される。治療用ナノ粒子は、第１のポリマーと、プロトン化可能な窒素を有する塩基性治療剤と、実質的に疎水性の酸とを含む第１の有機相を乳化することによりエマルジョン相を形成する工程と、エマルジョン相をクエンチすることによりクエンチ相を形成する工程であって、エマルジョン相のクエンチングが、エマルジョン相と、約４〜約７のｐＨを有する水性溶液と、の混合を含む、工程と、により調製される。
【００１８】
いくつかの実施形態では、意図される水性溶液（たとえば、第１または第２の水性溶液）のｐＨは、約４〜約７、たとえば、約４〜約５または約６〜約７である。
【００１９】
いくつかの実施形態では、意図される水性溶液は、リン酸、クエン酸、またはリン酸とクエン酸との混合物を含む。いくつかの実施形態では、第２の水性溶液は、ホウ酸とリン酸と酢酸との混合物を含む。
【００２０】
いくつかの実施形態では、治療用ナノ粒子の意図される調製プロセスは、クエンチ相を濾過して治療用ナノ粒子を回収する工程をさらに含む。
【００２１】
いくつかの実施形態では、クエンチ相は、エマルジョン相と実質的に同一のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、クエンチ相は、約４〜約７、たとえば、約４〜約５または約６〜約７のｐＨを有する。
【００２２】
さらに他の態様では、治療用ナノ粒子が提供される。治療用ナノ粒子は、約０．０５〜約３０重量パーセントのパモ酸と、約０．２〜約２０重量パーセントの、プロトン化可能な窒素を有する塩基性治療剤と、約５０〜約９９．７５重量パーセントの、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーとを含み、治療用ナノ粒子は、約１０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む。
【００２３】
さらに他の態様では、治療用ナノ粒子が提供される。治療用ナノ粒子は、約０．２〜約２０重量パーセントの、プロトン化可能な窒素を有する塩基性治療剤と、パモ酸と塩基性治療剤とのモル比が約０．２５：１〜約２：１である、パモ酸と、約５０〜約９９．７５重量パーセントの、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーとを含み、治療用ナノ粒子は、約１０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む。
【００２４】
いくつかの実施形態では、パモ酸と塩基性治療剤とのモル比は、約０．５：１〜約１．５：１、たとえば、約０．７５：１〜約１．２５：１である。
【００２５】
いくつかの実施形態では、塩基性治療剤のｐＫaは、パモ酸のｐＫaよりも少なくとも約１．０ｐＫa単位大きいか、パモ酸のｐＫaよりも少なくとも約２．０ｐＫa単位大きいか、またはパモ酸のｐＫaよりも少なくとも約４．０ｐＫa単位大きい。
【００２６】
さらに他の態様では、治療用ナノ粒子が提供される。治療用ナノ粒子は、パモ酸と少なくとも１つのイオン化可能なアミン部分を有する治療剤とを含む疎水性イオン対と、約５０〜約９９．７５重量パーセントのジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーとを含み、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約１５ｋＤａ〜約２０ｋＤａの数平均分子量のポリ（乳酸）と、約４ｋＤａ〜約６ｋＤａの数平均分子量のポリ（エチレン）グリコールとを有する。
【００２７】
いくつかの実施形態では、塩基性治療剤のｐＫaとパモ酸のｐＫaとの差は、少なくとも約１．０ｐＫa単位、少なくとも約２．０ｐＫa単位、または少なくとも約４．０ｐＫa単位である。
【００２８】
いくつかの実施形態では、意図される治療用ナノ粒子は、約０．０５〜約３０重量パーセントのパモ酸を含む。
【００２９】
いくつかの実施形態では、パモ酸および塩基性治療剤は、意図される治療用ナノ粒子中で疎水性イオン対を形成する。
【００３０】
いくつかの実施形態では、意図される治療用ナノ粒子は、約２〜約２０重量パーセントまたは約４〜約２０重量パーセントまたは約１０〜約２０重量パーセントまたは約４〜約１０重量パーセントのプロトン化可能な窒素含有治療剤を含む。
【００３１】
いくつかの実施形態では、治療剤はキナーゼ阻害剤である。たとえば、いくつかの実施形態では、キナーゼ阻害剤は、スニチニブ、イマチニブ、ニロチニブ、ダサチニブ、ボスチニブ、ポナチニブ、バフェチニブ、およびそれらの薬学的に許容可能な塩からなる群から選択されるチロシンキナーゼ阻害剤である。
【００３２】
いくつかの実施形態では、意図される治療用ナノ粒子の流体力学的直径は、約６０〜約１５０ｎｍまたは約９０〜約１４０ｎｍまたは約９０〜約１２０ｎｍである。
【００３３】
いくつかの実施形態では、意図される治療用ナノ粒子は、３７℃のリン酸緩衝溶液中に配置されたときに少なくとも１分間にわたり治療剤を実質的に保持する。
【００３４】
いくつかの実施形態では、意図される治療用ナノ粒子は、３７℃のリン酸緩衝溶液中に配置されたときに治療剤の約３０％未満を実質的に即時放出する。
【００３５】
いくつかの実施形態では、意図される治療用ナノ粒子は、３７℃のリン酸緩衝溶液中に配置されたときに約１時間にわたり治療剤の約１０〜約４５％を放出する。
【００３６】
いくつかの実施形態では、意図される治療用ナノ粒子は、脂肪酸も胆汁酸も含有していないこと以外は治療用ナノ粒子と実質的に同一の対照ナノ粒子の放出プロファイルと実質的に同一の放出プロファイルを有する。
【００３７】
いくつかの実施形態では、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約０．６〜約０．９５または約０．６〜約０．８または約０．７５〜約０．８５または約０．７〜約０．９のポリ（乳）酸数平均分子量分率を有する。
【００３８】
いくつかの実施形態では、意図される治療用ナノ粒子は、約１０〜約２５重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールまたは約１０〜約２０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールまたは約１５〜約２５重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールまたは約２０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む。
【００３９】
いくつかの実施形態では、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約１５ｋＤａ〜約２０ｋＤａの数平均分子量のポリ（乳酸）と、約４ｋＤａ〜約６ｋＤａの数平均分子量のポリ（エチレン）グリコールとを有する。
【００４０】
いくつかの実施形態では、意図される治療用ナノ粒子は、約０．２〜約３０重量パーセントの、標的化リガンドで機能化されたポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーをさらに含む。いくつかの実施形態では、意図される治療用ナノ粒子は、約０．２〜約３０重量パーセントの、標的化リガンドで機能化されたポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーをさらに含む。たとえば、いくつかの実施形態では、標的化リガンドはポリ（エチレン）グリコールに共有結合される。
【００４１】
いくつかの実施形態では、意図される治療用ナノ粒子は、パモ酸と実質的に疎水性の酸との混合物を含む。
【００４２】
さらに他の態様では、薬学的に許容可能な組成物が提供される。組成物は、複数の意図される治療用ナノ粒子と薬学的に許容可能な賦形剤とを含む。
【００４３】
いくつかの実施形態では、意図される薬学的に許容可能な組成物は、スクロース、トレハロース、それらの混合物などの糖をさらに含む。
【００４４】
いくつかの実施形態では、意図される薬学的に許容可能な組成物は、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、ヘプタキス−（２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル）−β−シクロデキストリン、それらの混合物などのシクロデキストリンをさらに含む。
【００４５】
さらに他の態様では、必要とされる患者において癌を治療する方法が提供される。方法は、意図される治療用ナノ粒子を含む治療上有効量の組成物を患者に投与する工程を含む。
【００４６】
いくつかの実施形態では、癌は慢性骨髄性白血病である。いくつかの実施形態では、癌は、慢性骨髄単球性白血病、好酸球増加症候群、腎細胞癌、肝細胞癌、フィラデルフィア染色体陽性急性リンパ芽球性白血病、非小細胞肺癌、膵臓癌、乳癌、固形腫瘍、およびマントル細胞性リンパ腫からなる群から選択される。
【００４７】
さらに他の態様では、必要とされる患者において胃腸間質腫瘍を治療する方法が提供される。方法は、意図される治療用ナノ粒子を含む治療上有効量の組成物を患者に投与する工程を含む。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】図１は、開示されたナノ粒子を形成するための乳化プロセスのフロー図である。
【図２Ａ−２Ｂ】図２Ａおよび２Ｂは、開示された乳化プロセスのフロー図を示している。
【図３】図３は、スニチニブ含有ナノ粒子製剤のインビトロ放出プロファイルを示している。
【図４】図４は、イマチニブ含有ナノ粒子製剤のインビトロ放出プロファイルを示している。
【図５】図５は、イマチニブ含有ナノ粒子製剤のインビトロ放出プロファイルを示している。
【図６】図６は、イマチニブ含有ナノ粒子製剤のインビトロ放出プロファイルを示している。
【図７】図７は、ダサチニブ含有ナノ粒子製剤のインビトロ放出プロファイルを示している。
【図８】図８は、ダサチニブ含有ナノ粒子製剤のインビトロ放出プロファイルを示している。
【図９】図９は、ダサチニブ含有ナノ粒子製剤のインビトロ放出プロファイルを示している。
【発明の詳細な説明】
【００４９】
本明細書には、プロトン化可能な窒素を有する塩基性治療剤（たとえば、プロトン化可能な窒素含有治療剤）を含むポリマーナノ粒子ならびにかかる治療用ナノ粒子の製造方法および使用方法が記載されている。いくつかの実施形態では、開示されたナノ粒子への実質的に疎水性の酸（たとえばパモ酸）の組込み（すなわちドーピング）および／またはナノ粒子調製プロセスへの組込みは、改善された薬剤負荷を含むナノ粒子をもたらすことができる。さらに、ある特定の実施形態では、疎水性の酸を含むおよび／またはその存在下で調製されたナノ粒子は、改善された制御放出性を呈すことができる。たとえば、開示されたナノ粒子は、疎水性の酸の不在下で調製されたナノ粒子と比較してプロトン化可能な窒素含有治療剤をより遅く放出することができる。
【００５０】
いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、疎水性の酸（たとえば、脂肪酸および／または胆汁酸）を含む開示されたナノ粒子製剤は、アミンなどを有する治療剤と酸との疎水性イオン対（ＨＩＰ）の形成を介して、有意に改善された製剤の性質（たとえば、薬剤負荷および／または放出プロファイル）を有すると考えられる。本明細書で用いられる場合、ＨＩＰとは、クーロン引力により一体的に保持された一対の反対荷電のイオンのことである。同様にいかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、いくつかの実施形態では、ＨＩＰは、イオン化可能な基（たとえばアミン）を含有する治療剤の疎水性を増加するために使用可能である。いくつかの実施形態では、疎水性が増加した治療剤は、ナノ粒子製剤に有益であるとともに、有機溶媒への治療剤のより高い溶解度を提供することができるＨＩＰ形成をもたらす。本明細書で意図されるＨＩＰ形成は、たとえば増加した薬剤負荷を有するナノ粒子をもたらすことができる。また、ナノ粒子からの治療剤のより遅い放出は、たとえばいくつかの実施形態では、水性溶液への治療剤の溶解度の減少に起因して起こるかもしれない。さらに、治療剤と大きな疎水性対イオンとの複合体化は、ポリマーマトリックス内の治療剤の拡散を遅くすることができる。有利には、ＨＩＰ形成は、疎水性基と治療剤との共有結合を必要とすることなく起こる。
【００５１】
いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、ＨＩＰの濃度は、意図されるナノ粒子の薬剤負荷および放出速度に影響を及ぼすと考えられる。たとえば、ＨＩＰの濃度は、以下でより詳細に考察されるように、プロトン化可能な窒素含有治療剤のｐＫaと疎水性の酸のｐＫaとの差を増加させることにより増加させることができる。同様にいかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、イオン対形成の条件は、意図されるナノ粒子の薬剤負荷および放出速度に影響を及ぼすと考えられる。
【００５２】
本明細書に開示されたナノ粒子は、１、２、３種以上の生体適合性および／または生分解性ポリマーを含む。たとえば、意図されるナノ粒子は、約３５〜約９９．７５重量パーセント、いくつかの実施形態では約５０〜約９９．７５重量パーセント、いくつかの実施形態では約５０〜約９９．５重量パーセント、いくつかの実施形態では約５０〜約９９重量パーセント、いくつかの実施形態では約５０〜約９８重量パーセント、いくつかの実施形態では約５０〜約９７重量パーセント、いくつかの実施形態では約５０〜約９６重量パーセント、いくつかの実施形態では約５０〜約９５重量パーセント、いくつかの実施形態では約５０〜約９４重量パーセント、いくつかの実施形態では約５０〜約９３重量パーセント、いくつかの実施形態では約５０〜約９２重量パーセント、いくつかの実施形態では約５０〜約９１重量パーセント、いくつかの実施形態では約５０〜約９０重量パーセント、いくつかの実施形態では約５０〜約８５重量パーセント、いくつかの実施形態では約６０〜約８５重量パーセント、いくつかの実施形態では約６５〜約８５重量パーセントおよびいくつかの実施形態では約５０〜約８０重量パーセントの、生分解性ポリマーとポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）とを含む１種以上のブロックコポリマーと、約０〜約５０重量パーセントの生分解性ホモポリマーとを含むことができる。
【００５３】
開示されたナノ粒子は、プロトン化可能な窒素含有治療剤を含むことができる。本明細書で用いられる場合、「プロトン化可能な窒素含有治療剤」は、少なくとも１個のプロトン化可能な窒素含有官能基を含有する任意の医薬活性剤を含む。プロトン化可能な窒素含有治療剤は、１、２、３個以上プロトン化可能な窒素含有官能基を含有むことができる。プロトン化可能な窒素含有官能基の例としては、限定されるものではないが、脂肪族アミノ基（たとえば、第１級アミン、第２級アミン、および第３級アミン）、窒素含有ヘテロアリール基（たとえば、ピリジン、イミダゾール、トリアゾール、およびテトラゾール）、およびグアニジノ基が挙げられる。
【００５４】
いくつかの実施形態では、開示されたナノ粒子は、約０．２〜約３５重量パーセント、約０．２〜約２０重量パーセント、約０．２〜約１０重量パーセント、約０．２〜約５重量パーセント、約０．５〜約５重量パーセント、約０．７５〜約５重量パーセント、約１〜約５重量パーセント、約２〜約５重量パーセント、約３〜約５重量パーセント、約１〜約２０重量パーセント、約２〜約２０重量パーセント、約４〜約２０重量パーセント、約５〜約２０重量パーセント、約１０〜約２０重量パーセント、約１〜約１５重量パーセント、約２〜約１５重量パーセント、約３〜約１５重量パーセント、約４〜約１５重量パーセント、約５〜約１５重量パーセント、約１〜約１０重量パーセント、約２〜約１０重量パーセント、約３〜約１０重量パーセント、約４〜約１０重量パーセント、約５〜約１０重量パーセント、約１０〜約３０重量パーセント、または約１５〜約２５重量パーセントのプロトン化可能な窒素含有治療剤を含むことができる。
【００５５】
ある特定の実施形態では、開示されたナノ粒子は、疎水性の酸（たとえば、脂肪酸および／または胆汁酸）を含み、かつ／または疎水性の酸を含むプロセスにより調製される。かかるナノ粒子は、疎水性の酸を含まないプロセスにより調製されたナノ粒子よりも高い薬剤負荷を有することができる。たとえば、疎水性の酸を含むプロセスにより調製された開示されたナノ粒子の薬剤負荷（たとえば重量基準）は、疎水性の酸を含まないプロセスにより調製された開示されたナノ粒子の約２倍〜約１０倍とすることができる。いくつかの実施形態では、疎水性の酸を含む第１のプロセスにより調製された開示されたナノ粒子の薬剤負荷（重量基準）は、第２のプロセスが疎水性の酸を含まないこと以外は第２のプロセスが第１のプロセスと同じである第２のプロセスにより調製された開示されたナノ粒子の少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、またはより少なくとも約１０倍とすることができる。
【００５６】
任意の好適な疎水性の酸が意図される。いくつかの実施形態では、疎水性の酸は、カルボン酸（たとえば、モノカルボン酸、ジカルボン酸、トリカルボン酸など）、スルフィン酸、スルフェン酸、またはスルホン酸とすることができる。いくつかの場合には、意図される疎水性の酸は２種以上の酸の混合物を含むことができる。たとえば、ある特定の実施形態では、疎水性の酸は、２種の実質的に疎水性の酸の混合物、いくつかの実施形態では３種の実質的に疎水性の酸の混合物、いくつかの実施形態では４種の実質的に疎水性の酸の混合物、またはいくつかの実施形態では５種の実質的に疎水性の酸の混合物を含むことができる。
【００５７】
いくつかの場合には、疎水性の酸の塩が製剤で使用することができる。
【００５８】
たとえば、開示されたカルボン酸は、脂肪族カルボン酸（たとえば、環式または非環式の分岐状または非分岐状の炭化水素鎖を有するカルボン酸）とすることができる。開示されたカルボン酸は、いくつかの実施形態では、限定されるものではないがハロゲン（すなわち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩ）、スルホニル、ニトロ、およびオキソをはじめとする１個以上の官能基で置換することができる。ある特定の実施形態では、開示されたカルボン酸は非置換としてもよい。
【００５９】
例示的なカルボン酸は、置換または非置換の脂肪酸（たとえば、Ｃ6〜Ｃ50脂肪酸）を含むことができる。いくつかの場合には、脂肪酸はＣ10〜Ｃ20脂肪酸とすることができる。他の場合には、脂肪酸はＣ15〜Ｃ20脂肪酸とすることができる。いくつかの場合には、脂肪酸は飽和とすることができる。他の実施形態では、脂肪酸は不飽和とすることができる。たとえば、脂肪酸はモノ不飽和脂肪酸またはポリ不飽和脂肪酸とすることができる。いくつかの実施形態では、不飽和脂肪酸基の二重結合はｃｉｓ配座とすることができる。いくつかの実施形態では、不飽和脂肪酸の二重結合はｔｒａｎｓ配座とすることができる。不飽和脂肪酸としては、限定されるものではないが、ω−３、ω−６、およびω−９脂肪酸が挙げられる。
【００６０】
飽和脂肪酸の例としては、限定されるものではないが、カプロン酸、エナント酸、カプリル酸、ペラルゴン酸、カプリン酸、ウンデカン酸、ラウリン酸、トリデカン酸、ミリスチン酸、ペンタデカン酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、ノナデカン酸、アラキジン酸、ヘンエイコサン酸、ベヘン酸、トリコサン酸、リグノセリン酸、ペンタコサン酸、セロチン酸、ヘプタコサン酸、モンタン酸、ノナコサン酸、メリシン酸、ヘナトリアコンタン酸、ラクセロン酸、フィリン酸、ゲダ酸、セロプラスチン酸、ヘキサトリアコンタン酸、およびそれらの組合せが挙げられる。
【００６１】
不飽和脂肪酸の例としては、限定されるものではないが、ヘキサデカトリエン酸、α−リノレン酸、ステアリドン酸、エイコサトリエン酸、エイコサテトラエン酸、エイコサペンタエン酸、ヘンエイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、テトラコサペンタエン酸、テトラコサヘキサエン酸、リノール酸、γ−リノレン酸、エイコサジエン酸、ジホモ−γ−リノレン酸、アラキドン酸、ドコサジエン酸、アドレン酸、ドコサペンタエン酸、テトラコサテトラエン酸、テトラコサペンタエン酸、オレイン酸（ｐＫa＝約４〜５、ｌｏｇＰ＝６．７８）、エイコセン酸、ミード酸、エルカ酸、ネルボン酸、ルメン酸、α−カレンド酸、β−カレンド酸、ジャカル酸、α−エレオステアリン酸、β−エレオステアリン酸、カタルプ酸、プニカ酸、ルメレン酸、α−パリナリン酸、β−パリナリン酸、ボセオペンタエン酸、ピノレン酸、ポドカルピン酸、パルミトレイン酸、バクセン酸、ガドレイン酸、エルカ酸、およびそれらの組合せが挙げられる。
【００６２】
他の疎水性の酸の例としては、限定されるものではないが、芳香族酸、たとえば、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸（すなわちキシナホ酸）（ｐＫa＝約２〜３、ｌｏｇＰ＝２．９７）、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸（ｐＫa＝−２、ｌｏｇＰ＝１．３）、ナフタレン−２−スルホン酸（ｐＫa＝−１．８、ｌｏｇＰ＝２．１）、パモ酸（ｐＫa＝２．４）、ケイ皮酸、フェニル酢酸、（±）−カンファー−１０−スルホン酸、ドデシルベンゼンスルホン酸（ｐＫa＝−１．８、ｌｏｇＰ＝６．６）、およびそれらの組合せが挙げられる。他の疎水性の酸の例としては、限定されるものではないが、ドデシル硫酸（ｐＫa＝−０．０９、ｌｏｇＰ＝４．５）、ジオクチルスルホコハク酸（すなわちドキュセート酸）（ｐＫa＝−０．８、ｌｏｇＰ＝５．２）、ジオレオイルホスファチジン酸（ｐＫa＝約２）、およびビタミンＤ3硫酸（ｐＫa＝−１．５）が挙げられる。
【００６３】
いくつかの実施形態では、疎水性の酸は胆汁酸とすることができる。胆汁酸の例としては、限定されるものではないが、ケノデオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸、デオキシコール酸（ｐＫa＝４．６５、ｌｏｇＰ＝３．７９）、ヒコール酸、β−ムリコール酸、コール酸（ｐＫa＝約４．５、ｌｏｇＰ＝２．４８）、タウロコール酸、コレステリル硫酸（ｐＫa＝−１．４）、リトコール酸、アミノ酸抱合胆汁酸、およびそれらの組合せが挙げられる。アミノ酸抱合胆汁酸は任意の好適なアミノ酸に抱合されてもよい。いくつかの実施形態では、アミノ酸抱合胆汁酸はグリシン抱合胆汁酸またはタウリン抱合胆汁酸である。
【００６４】
ある特定の場合には、疎水性の酸は高分子電解質とすることができる。たとえば、高分子電解質は、ポリスルホン酸（たとえば、ポリ（スチレンスルホン酸）もしくはデキストラン硫酸）またはポリカルボン酸（たとえば、ポリアクリル酸もしくはポリメタクリル酸）とすることができる。
【００６５】
いくつかの場合には、意図される酸は、約１０００Ｄａ未満、いくつかの実施形態では約５００Ｄａ未満、いくつかの実施形態では約４００Ｄａ未満、いくつかの実施形態では約３００Ｄａ未満、いくつかの実施形態では約２５０Ｄａ未満、いくつかの実施形態では約２００Ｄａ未満、およびいくつかの実施形態では約１５０Ｄａ未満の分子量を有することができる。いくつかの場合には、酸は、約１００Ｄａ〜約１０００Ｄａ、いくつかの実施形態では約２００Ｄａ〜約８００Ｄａ、いくつかの実施形態では約２００Ｄａ〜約６００Ｄａ、いくつかの実施形態では約１００Ｄａ〜約３００Ｄａ、いくつかの実施形態では約２００Ｄａ〜約４００Ｄａ、いくつかの実施形態では約３００Ｄａ〜約５００Ｄａ、およびいくつかの実施形態では約３００Ｄａ〜約１０００Ｄａの分子量を有することができる。ある特定の実施形態では、意図される酸は、約３００Ｄａ超、いくつかの実施形態では４００Ｄａ超、およびいくつかの実施形態では５００Ｄａ超の分子量を有することができる。ある特定の実施形態では、ナノ粒子からの治療剤の放出速度は、ナノ粒子製剤で使用される疎水性の酸の分子量を増加させることにより遅くすることが可能である。
【００６６】
いくつかの実施形態では、疎水性の酸は、少なくとも部分的には酸の強度に基づいて選択することができる。たとえば、疎水性の酸は、２５℃で決定したときに約−５〜約７、いくつかの実施形態では約−３〜約５、いくつかの実施形態では約−３〜約４、いくつかの実施形態では約−３〜約３．５、いくつかの実施形態では約−３〜約３、いくつかの実施形態では約−３〜約２、いくつかの実施形態では約−３〜約１、いくつかの実施形態では約−３〜約０．５、いくつかの実施形態では約−０．５〜約０．５、いくつかの実施形態では約１〜約７、いくつかの実施形態では、約２〜約７、いくつかの実施形態では約３〜約７、いくつかの実施形態では約４〜約６、いくつかの実施形態では約４〜約５．５、いくつかの実施形態では約４〜約５、およびいくつかの実施形態では約４．５〜約５の水中での酸解離定数（ｐＫa）を有することができる。いくつかの実施形態では、酸は、２５℃で決定したときに約７未満、約５未満、約３．５未満、約３未満、約２未満、約１未満、または約０未満のｐＫaを有することができる。
【００６７】
ある特定の実施形態では、疎水性の酸は、少なくとも部分的には疎水性の酸のｐＫaとプロトン化窒素含有治療剤のｐＫaとの差に基づいて選択することができる。たとえば、いくつかの場合には、疎水性の酸のｐＫaとプロトン化窒素含有治療剤のｐＫaとの差は、２５℃で決定したときに約１ｐＫa単位〜約１５ｐＫa単位、いくつかの実施形態では約１ｐＫa単位〜約１０ｐＫa単位、いくつかの実施形態では約１ｐＫa単位〜約５ｐＫa単位、いくつかの実施形態では約１ｐＫa単位〜約３ｐＫa単位、いくつかの実施形態では約１ｐＫa単位〜約２ｐＫa単位、いくつかの実施形態では約２ｐＫa単位〜約１５ｐＫa単位、いくつかの実施形態では約２ｐＫa単位〜約１０ｐＫa単位、いくつかの実施形態では約２ｐＫa単位〜約５ｐＫa単位、いくつかの実施形態では約２ｐＫa単位〜約３ｐＫa単位、いくつかの実施形態では約３ｐＫa単位〜約１５ｐＫa単位、いくつかの実施形態では約３ｐＫa単位〜約１０ｐＫa単位、いくつかの実施形態では約３ｐＫa単位〜約５ｐＫa単位、いくつかの実施形態では約４ｐＫa単位〜約１５ｐＫa単位、いくつかの実施形態では約４ｐＫa単位〜約１０ｐＫa単位、いくつかの実施形態では約４ｐＫa単位〜約６ｐＫa単位、いくつかの実施形態では約５ｐＫa単位〜約１５ｐＫa単位、いくつかの実施形態では約５ｐＫa単位〜約１０ｐＫa単位、いくつかの実施形態では約５ｐＫa単位〜約７ｐＫa単位、いくつかの実施形態では約７ｐＫa単位〜約１５ｐＫa単位、いくつかの実施形態では約７ｐＫa単位〜約９ｐＫa単位、いくつかの実施形態では約９ｐＫa単位〜約１５ｐＫa単位、いくつかの実施形態では約９ｐＫa単位〜約１１ｐＫa単位、いくつかの実施形態では約１１ｐＫa単位〜約１３ｐＫa単位、およびいくつかの実施形態では約１３ｐＫa単位〜約１５ｐＫa単位とすることができる。
【００６８】
いくつかの場合には、疎水性の酸のｐＫaとプロトン化窒素含有治療剤のｐＫaとの差は、２５℃で決定したときに少なくとも約１ｐＫa単位、いくつかの実施形態では少なくとも約２ｐＫa単位、いくつかの実施形態では少なくとも約３ｐＫa単位、いくつかの実施形態では少なくとも約４ｐＫa単位、いくつかの実施形態では少なくとも約５ｐＫa単位、いくつかの実施形態では少なくとも約６ｐＫa単位、いくつかの実施形態では少なくとも約７ｐＫa単位、いくつかの実施形態では少なくとも約８ｐＫa単位、いくつかの実施形態では少なくとも約９ｐＫa単位、いくつかの実施形態では少なくとも約１０ｐＫa単位、およびいくつかの実施形態では少なくとも約１５ｐＫa単位とすることができる。
【００６９】
いくつかの実施形態では、疎水性の酸は、約２〜約１５、いくつかの実施形態では約５〜約１５、いくつかの実施形態では約５〜約１０、いくつかの実施形態では約２〜約８、いくつかの実施形態では約４〜約８、いくつかの実施形態では約２〜約７、またはいくつかの実施形態では約４〜約７のｌｏｇＰを有することができる。いくつかの場合には、疎水性の酸には、約２超、約４超、約５超、または６超のｌｏｇＰを有することができる。
【００７０】
いくつかの実施形態では、意図される疎水性の酸は、たとえば治療用ナノ粒子の性質を改良するのに有利な相転移温度を有することができる。たとえば、酸は、約３００℃未満、いくつかの場合には約１００℃未満、およびいくつかの場合には約５０℃未満の融点を有することができる。ある特定の実施形態では、酸は、約５℃〜約２５℃、いくつかの場合には約１５℃〜約５０℃、いくつかの場合には約３０℃〜約１００℃、いくつかの場合には約７５℃〜約１５０℃、いくつかの場合には約１２５℃〜約２００℃、いくつかの場合には約１５０℃〜約２５０℃、およびいくつかの場合には約２００℃〜約３００℃の融点を有することができる。いくつかの場合には、酸は、約１５℃未満、いくつかの場合には約１０℃未満、またはいくつかの場合には約０℃未満の融点を有することができる。ある特定の実施形態では、酸は、約−３０℃〜約０℃またはいくつかの場合には約−２０℃〜約−１０℃の融点を有することができる。
【００７１】
たとえば、本明細書に開示された方法およびナノ粒子で使用される酸は、少なくとも部分的には酸を含む溶媒へのプロトン化可能な窒素含有治療剤の溶解度に基づいて選択することができる。たとえば、いくつかの実施形態では、酸を含む溶媒に溶解されたプロトン化可能な窒素含有治療剤は、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約１２５ｍｇ／ｍＬ〜約１７５ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬの溶解度を有することができる。いくつかの実施形態では、酸を含む溶媒に溶解されたプロトン化可能な窒素含有治療剤は、約１０ｍｇ／ｍＬ超、約５０ｍｇ／ｍＬ超、または約１００ｍｇ／ｍＬ超の溶解度を有することができる。いくつかの実施形態では、疎水性の酸を含む溶媒に溶解されたプロトン化可能な窒素含有治療剤（たとえば、治療剤と溶媒と疎水性の酸とからなる第１の溶液）は、プロトン化可能な窒素含有治療剤が疎水性の酸を含有しない溶媒に溶解された場合（たとえば、治療剤と溶媒とからなる第２の溶液の場合）の少なくとも約２倍、いくつかの実施形態では少なくとも約５倍、いくつかの実施形態では少なくとも約１０倍、いくつかの実施形態では少なくとも約２０倍、いくつかの実施形態では約２倍〜約２０倍、またはいくつかの実施形態では約１０倍〜約２０倍の溶解度を有することができる。
【００７２】
いくつかの場合には、薬剤溶液（すなわち、プロトン化可能な窒素含有治療剤の溶液）中の酸の濃度は、約１重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約２重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約３重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約４重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約５重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約６重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約８重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約１０重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約１２重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約１４重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約１６重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約１重量パーセント〜約５重量パーセント、いくつかの実施形態では約３重量パーセント〜約９重量パーセント、いくつかの実施形態では約６重量パーセント〜約１２重量パーセント、いくつかの実施形態では約９重量パーセント〜約１５重量パーセント、いくつかの実施形態約１２重量パーセント〜約１８重量パーセントおよびいくつかの実施形態では約１５重量パーセント〜約２１重量パーセントとすることができる。ある特定の実施形態では、薬剤溶液中の疎水性の酸の濃度は、少なくとも約１重量パーセント、いくつかの実施形態では少なくとも約２重量パーセント、いくつかの実施形態では少なくとも約３重量パーセント、いくつかの実施形態では少なくとも約５重量パーセント、いくつかの実施形態では少なくとも約１０重量パーセント、いくつかの実施形態では少なくとも約１５重量パーセントおよびいくつかの実施形態では少なくとも約２０重量パーセントとすることができる。
【００７３】
ある特定の実施形態では、疎水性の酸とプロトン化可能な窒素含有治療剤とのモル比（たとえば、ナノ粒子の初期製剤時および／またはナノ粒子中）は、約０．２５：１〜約６：１、いくつかの実施形態では約０．２５：１〜約５：１、いくつかの実施形態では約０．２５：１〜約４：１、いくつかの実施形態では約０．２５：１〜約３：１、いくつかの実施形態では約０．２５：１〜約２：１、いくつかの実施形態では約０．２５：１〜約１．５：１、いくつかの実施形態では約０．２５：１〜約１：１、いくつかの実施形態では約０．２５：１〜約０．５：１、いくつかの実施形態では約０．５：１〜約６：１、いくつかの実施形態では約０．５：１〜約５：１、いくつかの実施形態では約０．５：１〜約４：１、いくつかの実施形態では約０．５：１〜約３：１、いくつかの実施形態では約０．５：１〜約２：１、いくつかの実施形態では約０．５：１〜約１．５：１、いくつかの実施形態では約０．５：１〜約１：１、いくつかの実施形態では約０．５：１〜約０．７５：１、いくつかの実施形態では約０．７５：１〜約２：１、いくつかの実施形態では約０．７５：１〜約１．５：１、いくつかの実施形態では約０．７５：１〜約１．２５：１、いくつかの実施形態では約０．９：１〜約１．１：１、いくつかの実施形態では約０．９５：１〜約１．０５：１、いくつかの実施形態では約１：１、いくつかの実施形態では約０．７５：１〜約１：１、いくつかの実施形態では約１：１〜約６：１、いくつかの実施形態では約１：１〜約５：１、いくつかの実施形態では約１：１〜約４：１、いくつかの実施形態では約１：１〜約３：１、いくつかの実施形態では約１：１〜約２：１、いくつかの実施形態では約１：１〜約１．５：１、いくつかの実施形態では約１．５：１〜約６：１、いくつかの実施形態では約１．５：１〜約５：１、いくつかの実施形態では約１．５：１〜約４：１、いくつかの実施形態では約１．５：１〜約３：１、いくつかの実施形態では約２：１〜約６：１、いくつかの実施形態では約２：１〜約４：１、いくつかの実施形態では約３：１〜約６：１、いくつかの実施形態では約３：１〜約５：１、およびいくつかの実施形態では約４：１〜約６：１とすることができる。
【００７４】
いくつかの場合には、疎水性の酸とプロトン化可能な窒素含有治療剤との初期モル比（すなわち、ナノ粒子の製剤時）は、ナノ粒子中の疎水性の酸とプロトン化可能な窒素含有治療剤とのモル比（すなわち、カプセル化されていない疎水性の酸およびプロトン化可能な窒素含有治療剤の除去後）とは異なるかもしれない。他の場合には、疎水性の酸とプロトン化可能な窒素含有治療剤との初期モル比（すなわち、ナノ粒子の製剤時）は、ナノ粒子中の疎水性の酸とプロトン化可能な窒素含有治療剤とのモル比（すなわち、カプセル化されていない疎水性の酸およびプロトン化可能な窒素含有治療剤の除去後）と本質的に同一とすることができる。
【００７５】
いくつかの場合には、プロトン化可能な窒素含有治療剤を含有する溶液は、ポリマーを含有する溶液とは独立して調製することができるとともに、次いで２つの溶液は、ナノ粒子の製剤前に組み合わせることができる。たとえば、一実施形態では、第１の溶液は、プロトン化可能な窒素含有治療剤と疎水性の酸とを含有し、かつ第２の溶液は、ポリマーと任意選択で疎水性の酸とを含有する。第２の溶液が疎水性の酸を含有しない製剤は、プロセスで使用される疎水性の酸の量を最小限に抑えたり、またはいくつかの場合には疎水性の酸とたとえば疎水性の酸の存在下で分解可能なポリマーとの接触時間を最小限に抑えたりするうえで、有利とすることができる。他の場合には、プロトン化可能な窒素含有治療剤とポリマーと疎水性の酸とを含有する単一の溶液を調製することができる。
【００７６】
いくつかの実施形態では、疎水性イオン対は、ナノ粒子の製剤前に形成することができる。たとえば、疎水性イオン対を含有する溶液は、意図されるナノ粒子の製剤前に調製することができる（たとえば、好適量のプロトン化可能な窒素含有治療剤と疎水性の酸とを含有する溶液を調製することにより）。他の実施形態では、疎水性イオン対は、ナノ粒子の製剤時に形成することができる。プロトン化可能な窒素含有治療剤を含有する第１の溶液および疎水性の酸を含有する第２の溶液は、ナノ粒子を調製するプロセス工程時（たとえば、エマルジョン形成前および／またはエマルジョン形成時）に組み合わせることができる。ある特定の実施形態では、疎水性イオン対は、意図されるナノ粒子中にプロトン化可能な窒素含有治療剤と疎水性の酸とをカプセル化する前に形成することができる。他の実施形態では、疎水性イオン対は、たとえば、プロトン化可能な窒素含有治療剤と疎水性の酸とをカプセル化した後にナノ粒子中で形成することができる。
【００７７】
ある特定の実施形態では、疎水性の酸は、２５℃で決定したときに約２ｇ／水１００ｍＬ未満、いくつかの実施形態では約１ｇ／水１００ｍＬ未満、いくつかの実施形態では約１００ｍｇ／水１００ｍＬ未満、いくつかの実施形態では約１０ｍｇ／水１００ｍＬ未満、およびいくつかの実施形態では約１ｍｇ／水１００ｍＬ未満の溶解度を有することができる。他の実施形態では、酸は、２５℃で決定したときに約１ｍｇ／水１００ｍＬ〜約２ｇ／水１００ｍＬ、いくつかの実施形態では約１ｍｇ／水１００ｍＬ〜約１ｇ／水１００ｍＬ、いくつかの実施形態では約１ｍｇ／水１００ｍＬ〜約５００ｍｇ／水１００ｍＬ、およびいくつかの実施形態では約１ｍｇ／水１００ｍＬ〜約１００ｍｇ／水１００ｍＬの溶解度を有することができる。いくつかの実施形態では、疎水性の酸は、２５℃の水に本質的に不溶とすることができる。
【００７８】
いくつかの実施形態では、開示されたナノ粒子は、ナノ粒子の調製時に使用される疎水性の酸を本質的に含まないものとすることができる。他の実施形態では、開示されたナノ粒子は疎水性の酸を含むことができる。たとえば、いくつかの実施形態では、開示されたナノ粒子中の酸含有率は、約０．０５重量パーセント〜約３５重量パーセント、いくつかの実施形態では約０．０５重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約０．５重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約１重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約２重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約３重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約５重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約７重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約１０重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約１５重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約２０重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約０．０５重量パーセント〜約０．５重量パーセント、いくつかの実施形態では約０．０５重量パーセント〜約５重量パーセント、いくつかの実施形態では約１重量パーセント〜約５重量パーセント、いくつかの実施形態では約３重量パーセント〜約１０重量パーセント、いくつかの実施形態では約５重量パーセント〜約１５重量パーセントおよびいくつかの実施形態では約１０重量パーセント〜約２０重量パーセントとすることができる。
【００７９】
いくつかの実施形態では、開示されたナノ粒子は、たとえば、室温（たとえば２５℃）および／または３７℃のリン酸緩衝溶液中に配置された場合、プロトン化可能な窒素含有治療剤の約２％未満、約５％未満、約１０％未満、約１５％未満、約２０％未満、約２５％未満、約３０％未満、または４０％未満を実質的に即時放出する（たとえば、約１分間〜約３０分間、約１分間〜約２５分間、約５分間〜約３０分間、約５分間〜約１時間、約１時間、または約２４時間にわたり）。ある特定の実施形態では、プロトン化可能な窒素含有治療剤を含むナノ粒子は、たとえば２５℃および／または３７℃の水性溶液（たとえばリン酸緩衝溶液）中に配置された場合、約１時間にわたりプロトン化可能な窒素含有治療剤の約０．０１〜約５０％、いくつかの実施形態では約０．０１〜約２５％、いくつかの実施形態では約０．０１〜約１５％、いくつかの実施形態では約０．０１〜約１０％、いくつかの実施形態では約１〜約４０％、いくつかの実施形態では約５〜約４０％、およびいくつかの実施形態では約１０〜約４０％の放出に実質的に対応する速度で、プロトン化可能な窒素含有治療剤を放出することができる。いくつかの実施形態では、プロトン化可能な窒素含有治療剤を含むナノ粒子は、たとえば２５℃および／または３７℃の水性溶液（たとえばリン酸緩衝溶液）中に配置された場合、約４時間にわたりプロトン化可能な窒素含有治療剤の約１０〜約７０％、いくつかの実施形態では約１０〜約４５％、いくつかの実施形態では約１０〜約３５％、またはいくつかの実施形態では、約１０〜約２５％の放出に実質的に対応する速度で、プロトン化可能な窒素含有治療剤を放出することができる。
【００８０】
いくつかの実施形態では、開示されたナノ粒子は、３７℃のリン酸緩衝溶液中に配置された場合、たとえば、少なくとも約１分間、少なくとも約１時間、またはそれ以上にわたり、プロトン化可能な窒素含有治療剤を実質的に保持することができる。
【００８１】
一実施形態では、開示された治療用ナノ粒子は、標的化リガンド、たとえば、低分子量リガンドを含むことができる。ある特定の実施形態では、低分子量リガンドは、ポリマーにコンジュゲートされ、かつナノ粒子は、リガンドコンジュゲートポリマー（たとえば、ＰＬＡ−ＰＥＧ−リガンド）と非機能化ポリマー（たとえば、ＰＬＡ−ＰＥＧまたはＰＬＧＡ−ＰＥＧ）とのある特定の比を含む。ナノ粒子は、有効量のリガンドが癌などの疾患または障害の治療のためのナノ粒子に会合されるように、これらの２種のポリマーの最適比を有することができる。たとえば、リガンド密度を増加させると標的結合（細胞結合／標的取込み）が増加することができるため、ナノ粒子は「標的特異的」となり得る。他の選択肢として、ある特定の濃度のナノ粒子中の非機能化ポリマー（たとえば、非機能化ＰＬＧＡ−ＰＥＧコポリマー）は、炎症および／または免疫原性（すなわち、免疫反応の誘発能）を制御可能であり、かつ疾患または障害の治療に適した循環半減期をナノ粒子にもたせることが可能である。さらに、非機能化ポリマーは、いくつかの実施形態では、細網内皮系（ＲＥＳ）を介して循環系からのクリアランス速度を低下させることができる。したがって、非機能化ポリマーは、投与時に粒子が生体内を移動しうる特徴をナノ粒子に提供することができる。いくつかの実施形態では、非機能化ポリマーは、それ以外に高濃度のリガンドをバランス調整することができる。そうでなければ、被験者によるクリアランスが加速されて標的細胞への送達の低下をもたらすことができる。
【００８２】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されたナノ粒子は、ナノ粒子の全ポリマー組成物（すなわち、機能化ポリマー＋非機能化ポリマー）の約０．１〜５０、たとえば０．１〜３０、たとえば０．１〜２０、たとえば０．１〜１０モルパーセントを占めるリガンドにコンジュゲートされた機能化ポリマーを含むことができる。そのほかに、他の実施形態では、１種以上の低分子量リガンドがコンジュゲートされた（たとえば、共有結合された（すなわち、リンカー（たとえばアルキレンリンカー）または結合を介して））ポリマーを含むナノ粒子が本明細書に開示されている。全ポリマーを基準にした低分子量リガンドの重量パーセントは、約０．００１〜５、たとえば約０．００１〜２、たとえば約０．００１〜１である。
【００８３】
いくつかの実施形態では、開示されたナノ粒子は、生物学的存在物、たとえば、特定の膜成分または細胞表面レセプターに効率的に結合または他の形で会合させることができる。治療剤の標的化（たとえば、正常組織に対してではなく、特定の組織または細胞型、特異的罹患組織に対して）は、固形腫瘍癌（たとえば前立腺癌）などの組織特異的疾患の治療に望ましい。たとえば、細胞傷害性抗癌剤の全身送達とは対照的に、本明細書に開示されたナノ粒子は、作用剤による健常細胞の死滅を実質的に阻止することができる。そのほかに、開示されたナノ粒子は、（開示されたナノ粒子や製剤を用いることなく投与された有効量の作用剤と比較して）より低用量の作用剤の投与を可能にするため、伝統的な化学療法によく見られる望ましくない副作用を低減することができる。
【００８４】
一般に、「ナノ粒子」とは、１０００ｎｍ未満、たとえば、約１０ｎｍ〜約２００ｎｍの直径を有する任意の粒子を意味する。開示された治療用ナノ粒子は、約６０〜約１２０ｎｍ、または約７０〜約１２０ｎｍ、または約８０〜約１２０ｎｍ、または約９０〜約１２０ｎｍ、または約１００〜約１２０ｎｍ、または約６０〜約１３０ｎｍ、または約７０〜約１３０ｎｍ、または約８０〜約１３０ｎｍ、または約９０〜約１３０ｎｍ、または約１００〜約１３０ｎｍ、または約１１０〜約１３０ｎｍ、または約６０〜約１４０ｎｍ、または約７０〜約１４０ｎｍ、または約８０〜約１４０ｎｍ、または約９０〜約１４０ｎｍ、または約１００〜約１４０ｎｍ、または約１１０〜約１４０ｎｍ、または約６０〜約１５０ｎｍ、または約７０〜約１５０ｎｍ、または約８０〜約１５０ｎｍ、または約９０〜約１５０ｎｍ、または約１００〜約１５０ｎｍ、または約１１０〜約１５０ｎｍ、または約１２０〜約１５０ｎｍの直径を有するナノ粒子を含むことができる。
【００８５】
ポリマー
いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、ポリマーのマトリックスと治療剤とを含むことができる。いくつかの実施形態では、治療剤および／または標的化部分（すなわち低分子量リガンド）は、ポリマーマトリックスの少なくとも一部分に会合可能である。たとえば、いくつかの実施形態では、標的化部分（たとえばリガンド）は、ポリマーマトリックスの表面と共有結合可能である。いくつかの実施形態では、共有結合はリンカーにより媒介される。治療剤は、ポリマーマトリックスの表面との会合、その内部へのカプセル化、それによる包囲、および／またはその全体にわたる分散が可能である。
【００８６】
多種多様なポリマーおよびそれからの粒子の形成方法は、薬剤送達の技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも２種の高分子を含むナノ粒子に関する。第１の高分子は、低分子量リガンド（たとえば標的化部分）に結合された第１のポリマーを含み、かつ第２の高分子は、標的化部分に結合されない第２のポリマーを含む。ナノ粒子は、任意選択で、１種以上の追加の非機能化ポリマーを含むことができる。
【００８７】
任意の好適なポリマーを開示されたナノ粒子で使用することが可能である。ポリマーは、天然ポリマーまたは非天然（合成）ポリマーとすることができる。ポリマーは、ホモポリマーとすることができるかまたは２種以上のモノマーを含むコポリマーとすることができる。配列に関して、コポリマーは、ランダム配列、ブロック配列とすることができるか、またはランダム配列とブロック配列との組合せを含むことができる。典型的には、ポリマーは有機ポリマーである。
【００８８】
本明細書で用いられる「ポリマー」という用語は、当技術分野で用いられるその通常の意味が与えられる。すなわち、分子構造は、共有結合により接続された１つ以上の繰返し単位（モノマー）を含む。繰返し単位はすべて同一とすることができるか、またはいくつかの場合には、２種以上の繰返し単位がポリマー内に存在するかもしれない。いくつかの場合には、ポリマーは、生物学的に誘導可能なもの、すなわち、バイオポリマーである。限定されるものではないが、例としては、ペプチドまたはタンパク質が挙げられる。いくつかの場合には、追加の部分は、ポリマー、たとえば、以下に記載されるような生物学的部分に存在していてもよい。２種以上の繰返し単位がポリマー内に存在する場合、ポリマーは「コポリマー」であると言われる。ポリマーを利用する実施形態のいずれでも、利用されているポリマーはいくつかの場合にはコポリマーとすることができることを理解すべきである。コポリマーを形成する繰返し単位は、任意の方式で配置されていてもよい。たとえば、繰返し単位は、ランダムな順序で、交互の順序で、またはブロックコポリマーとして、すなわち、それぞれ第１の繰返し単位（たとえば第１のブロック）を含む１つ以上の領域、それぞれ第２の繰返し単位（たとえば第２のブロック）を含む１つ以上の領域などを含んで、配置されていてもよい。ブロックコポリマーは、２個（ジブロックコポリマー）、３個（トリブロックコポリマー）、またはそれ以上の数の個別ブロックを有することができる。
【００８９】
開示された粒子はコポリマーを含むことができる。コポリマーは、いくつかの実施形態では、２種以上のポリマーが通常は共有結合で一体化されることにより互いに会合された２種以上のポリマー（たとえば、本明細書に記載のもの）を表す。したがって、コポリマーは、一体的にコンジュゲートされてブロックコポリマーを形成した第１のポリマーと第２のポリマーとを含むことができる。第１のポリマーは、ブロックコポリマーの第１のブロックとすることができるとともに、第２のポリマーは、ブロックコポリマーの第２のブロックとすることができる。ブロックコポリマーは、いくつかの場合には、複数のブロックのポリマーを含有することができる及び本明細書で用いられる「ブロックコポリマー」は、単一の第１のブロックと単一の第２のブロックとのみを有するブロックコポリマーのみに限定されるものではないことが当業者であれば理解されよう。たとえば、ブロックコポリマーは、第１のポリマーを含む第１のブロック、第２のポリマーを含む第２のブロック、第３のポリマーまたは第１のポリマーを含む第３のブロックなどを含むことができる。いくつかの場合には、ブロックコポリマーは、第１のポリマーの任意の数の第１のブロック、第２のポリマーの任意の数の第２のブロック（ある特定の場合には、第３のブロック、第４のブロックなど）を含有することができる。そのほかに、ブロックコポリマーは、いくつかの場合には、他のブロックコポリマーからも形成可能であることに留意すべきである。たとえば、第１のブロックコポリマーを他のポリマー（ホモポリマー、バイオポリマー、他のブロックコポリマーなどとすることができる）にコンジュゲートして複数種のブロックを含有する新しいブロックコポリマーを形成したり、かつ／または他の部分（たとえば非ポリマー部分）にコンジュゲートすることができる。
【００９０】
いくつかの実施形態では、ポリマー（たとえばコポリマー、たとえばブロックコポリマー）は両親媒性とすることができる。すなわち、親水性部分と疎水性部分とを有していてもよいし、または比較的親水性部分と比較的疎水性部分とを有していてもよい。親水性ポリマーは、一般に水を求引するものであり、かつ疎水性ポリマーは、一般に水を反撥するものである。親水性ポリマーまたは疎水性ポリマーは、たとえば、ポリマーのサンプルを調製してその水との接触角を測定することにより同定可能である（典型的には、ポリマーは６０°未満の接触角を有し、一方、疎水性ポリマーは約６０°超の接触角を有するであろう）。いくつかの場合には、２種以上のポリマーの親水性は互いを基準にして測定してもよい。すなわち、第１のポリマーは第２のポリマーよりも親水性とすることができる。たとえば、第１のポリマーは第２のポリマーよりも小さい接触角を有していてもよい。
【００９１】
一群の実施形態では、本明細書で意図されるポリマー（たとえばコポリマー、たとえばブロックコポリマー）は、生体適合性ポリマー、すなわち、典型的には生存被験者に挿入または注入した場合に有害反応を誘発しないポリマー、たとえば、有意な炎症および／またはたとえばＴ細胞反応を介する免疫系によるポリマーの急性拒絶を伴わないポリマーを含む。したがって、本明細書で意図される治療用粒子は非免疫原性とすることができる。本明細書で用いられる非免疫原性という用語は、通常は循環抗体、Ｔ細胞、または反応性免疫細胞を誘導しないかまたはごくわずかなレベルで誘導しかつ通常は個体において自己免疫反応を誘発しない天然の状態の内因性成長因子について言及する。
【００９２】
生体適合性とは、典型的には、免疫系の少なくとも一部による材料の急性拒絶について言及するものである。すなわち、被験者内に留置された非生体適合性材料は、免疫系による材料の拒絶が適正に制御できないほど重篤でありかつしばしば材料を被験者から除去しなければならないほどである免疫反応を被験者において誘発する。生体適合性を決定する簡易検査の１つは、インビトロでポリマーを細胞に暴露してもよい。すなわち、生体適合性ポリマーとは、典型的には、中程度の濃度で、たとえば、５０マイクログラム／１０6細胞の濃度で有意な細胞死をもたらさないポリマーのことである。たとえば、生体適合性ポリマーは、線維芽細胞や上皮細胞などの細胞に暴露された場合、たとえ貪食されたりさもなければかかる細胞により取り込まれたりしても約２０％未満の細胞死を引き起こすかもしれない。種々の実施形態に役立つ生体適合性ポリマーの例としては、限定されるものではないが、ポリジオキサノン（ＰＤＯ）、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリヒドロキシブチレート、ポリ（グリセロールセバケート）、ポリグリコリド（すなわちポリ（グリコール）酸）（ＰＧＡ）、ポリラクチド（すなわちポリ（乳）酸）（ＰＬＡ）、ポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸（ＰＬＧＡ）、ポリカプロラクトン、またはこれらのおよび／もしくは他のポリマーを含むコポリマーもしくは誘導体が挙げられる。
【００９３】
ある特定の実施形態では、意図される生体適合性ポリマーは生分解性とすることができる。すなわち、ポリマーは、生体内などの生理学的環境内で化学的および／または生物学的に分解されうる。本明細書で用いられる場合、「生分解性」ポリマーとは、細胞に導入されたときに細胞機構（生物学的に分解可能）によりおよび／または加水分解などの化学プロセス（化学的に分解可能）により細胞に有意な傷害作用を及ぼすことなく細胞による再使用または処分が可能な成分に分解されるポリマーのことである。一実施形態では、生分解性ポリマーおよびその分解副産物は生体適合性とすることができる。
【００９４】
本明細書に開示された粒子は、ＰＥＧを含有するものまたは含有しないものとすることができる。そのほかに、ある特定の実施形態は、ポリ（エステル−エーテル）を含有するコポリマー、たとえば、エステル結合（たとえば、Ｒ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ’結合）およびエーテル結合（たとえば、Ｒ−Ｏ−Ｒ’結合）により連結された繰返し単位を有するポリマーに関するものとすることができる。いくつかの実施形態では、カルボン酸基を含有する加水分解性ポリマーなどの生分解性ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）繰返し単位にコンジュゲートさせてポリ（エステル−エーテル）を形成することができる。ポリ（エチレングリコール）繰返し単位を含有するポリマー（たとえばコポリマー、たとえばブロックコポリマー）は、「ＰＥＧ化」ポリマーとしても参照することができる。
【００９５】
たとえば、意図されるポリマーは、水への暴露時に（たとえば被験者内で）自然に加水分解するものであってもよいし、またはポリマーは、熱（たとえば約３７℃の温度）への暴露時に分解するものであってもよい。ポリマーの分解は、使用されるポリマーまたはコポリマーに依存してさまざまである速度で起こるかもしれない。たとえば、ポリマーの半減期（ポリマーの５０％がモノマーおよび／または他の非ポリマー部分に分解される時間）は、ポリマーに依存して、何日間、何週間、何ヵ月間、または何年間かとすることができる。ポリマーは、たとえば、酵素活性または細胞機構により、いくつかの場合には、たとえば、リゾチーム（たとえば、比較的低いｐＨを有するもの）への暴露により、生物学的に分解することができる。いくつかの場合には、ポリマーは、モノマーおよび／または細胞に有意な傷害作用を及ぼすことなく細胞による再使用もしくは処分が可能な他の非ポリマー部分に分解されうる（たとえば、ポリラクチドは加水分解されて乳酸を形成することができ、ポリグリコリドは加水分解されてグリコール酸を形成することができるなど）。
【００９６】
いくつかの実施形態では、ポリマーは、乳酸単位とグリコール酸単位とを含むコポリマー、たとえば、本明細書ではまとめて「ＰＬＧＡ」として参照されるポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）およびポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）を含めて、ポリエステル、ならびに本明細書では「ＰＧＡ」として参照されるグリコール酸単位を含むホモポリマー、および本明細書ではまとめて「ＰＬＡ」として参照されるポリＬ−乳酸、ポリＤ−乳酸、ポリＤ，Ｌ−乳酸、ポリＬ−ラクチド、ポリＤ−ラクチド、ポリＤ，Ｌ−ラクチドなどの乳酸単位を含むホモポリマーとすることができる。いくつかの実施形態では、例示的なポリエステルとしては、たとえば、ポリヒドロキシ酸、ラクチドおよびグリコリドのＰＥＧ化ポリマーおよびＰＥＧ化コポリマー（たとえば、ＰＥＧ化ＰＬＡ、ＰＥＧ化ＰＧＡ、ＰＥＧ化ＰＬＧＡ、およびそれらの誘導体）が挙げられる。いくつかの実施形態では、ポリエステルとしては、たとえば、ポリアンヒドリド、ポリ（オルトエステル）ＰＥＧ化ポリ（オルトエステル）、ポリ（カプロラクトン）、ＰＥＧ化ポリ（カプロラクトン）、ポリリシン、ＰＥＧ化ポリリシン、ポリ（エチレンイミン）、ＰＥＧ化ポリ（エチレンイミン）、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リシン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）、ポリ［α−（４−アミノブチル）−Ｌ−グリコール酸］、およびそれらの誘導体が挙げられる。
【００９７】
いくつかの実施形態では、ポリマーはＰＬＧＡとすることができる。ＰＬＧＡは、乳酸とグリコール酸との生体適合性かつ生分解性のコポリマーであり、ＰＬＧＡの種々の形態は、乳酸：グリコール酸の比により特徴付け可能である。乳酸は、Ｌ−乳酸、Ｄ−乳酸、またはＤ，Ｌ−乳酸とすることができる。ＰＬＧＡの分解速度は、乳酸−グリコール酸の比を変化させることにより調整可能である。いくつかの実施形態では、ＰＬＧＡは、約８５：１５、約７５：２５、約６０：４０、約５０：５０、約４０：６０、約２５：７５、または約１５：８５の乳酸：グリコール酸の比により特徴付け可能である。いくつかの実施形態では、粒子中のポリマー（たとえば、ＰＬＧＡブロックコポリマーまたはＰＬＧＡ−ＰＥＧブロックコポリマー）の乳酸モノマー対グリコール酸モノマーの比は、種々のパラメーターを最適化するように選択することができる。たとえば、水の取込み、治療剤の放出、および／またはポリマーの分解速度を最適化することが可能である。
【００９８】
いくつかの実施形態では、ポリマーは１種以上のアクリルポリマーとすることができる。ある特定の実施形態では、アクリルポリマーとしては、たとえば、アクリル酸およびメタクリル酸のコポリマー、メチルメタクリレートコポリマー、エトキシエチルメタクリレート、シアノエチルメタクリレート、アミノアルキルメタクリレートコポリマー、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、メタクリル酸アルキルアミドコポリマー、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（メタクリル酸）、ポリアクリルアミド、アミノアルキルメタクリレートコポリマー、グリシジルメタクリレートコポリマー、ポリシアノアクリレートおよび以上のポリマーの１種以上を含む組合せが挙げられる。アクリルポリマーは、低含有率の第四級アンモニウム基を有するアクリル酸エステルとメタクリル酸エステルとの完全重合コポリマーを含むことができる。
【００９９】
いくつかの実施形態では、ポリマーはカチオン性ポリマーとすることができる。一般に、カチオン性ポリマーは、核酸（たとえば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはそれらの誘導体）の負荷電鎖を濃縮および／または保護することが可能である。アミン含有ポリマー、たとえば、ポリ（リシン）、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、およびポリ（アミドアミン）のデンドリマーは、いくつかの実施形態では、開示された粒子での使用が意図される。
【０１００】
いくつかの実施形態では、ポリマーは、カチオン性側鎖を有する分解性ポリエステルとすることができる。これらのポリエステルの例としては、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リシン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）が挙げられる。
【０１０１】
ＰＥＧは、末端に存在することができるとともに、たとえば、ＰＥＧがリガンドにコンジュゲートされない場合、末端基を含んでいてもよい。たとえば、ＰＥＧは、ヒドロキシル基、メトキシ基もしくは他のアルコキシル基、メチル基もしくは他のアルキル基、アリール基、カルボン酸、アミン基、アミド基、アセチル基、グアニジノ基、またはイミダゾール基が末端に存在することができる。他の意図される末端基としては、アジド部分、アルキン部分、マレイミド部分、アルデヒド部分、ヒドラジド部分、ヒドロキシルアミン部分、アルコキシアミン部分、またはチオール部分が挙げられる。
【０１０２】
たとえば、ＥＤＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩）とＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）とを用いてアミンが末端に存在するＰＥＧ基にポリマーを反応させることにより、開環重合技術（ＲＯＭＰ）などにより、ポリマーをＰＥＧ化する方法および技術については、当業者の知るところであろう。
【０１０３】
一実施形態では、本明細書に開示さるように、有効な治療を行うために、ポリマーの分子量（またはたとえばコポリマーの異なるブロックのたとえば分子量比）を最適化することが可能である。たとえば、ポリマーの分子量は、粒子の分解速度（たとえば、生分解性ポリマーの分子量を調整可能である場合）、溶解度、水の取込み、および薬剤の放出速度に影響を及ぼすかもしれない。たとえば、ポリマーの分子量（またはたとえばコポリマーの異なるブロックのたとえば分子量比）は、治療される被験者において粒子が合理的な時間内（数時間から１〜２週間、３〜４週間、５〜６週間、７〜８週間などまでに及ぶ）で生分解するように調整可能である。
【０１０４】
開示された粒子は、たとえば、ＰＥＧとＰＬ（Ｇ）Ａとのジブロックコポリマーを含むことができる。たとえば、ＰＥＧ部分は、約１，０００〜２０，０００、たとえば約２，０００〜２０，０００、たとえば約２〜約１０，０００の数平均分子量を有することができるとともに、ＰＬ（Ｇ）Ａ部分は、約５，０００〜約２０，０００または約５，０００〜１００，０００、たとえば約２０，０００〜７０，０００、たとえば約１５，０００〜５０，０００の数平均分子量を有することができる。
【０１０５】
たとえば、本明細書には、約１０〜約９９重量パーセントのポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーもしくはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、または約２０〜約８０重量パーセント、約４０〜約８０重量パーセント、約３０〜約５０重量パーセント、もしくは約７０〜約９０重量パーセントのポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーもしくはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーを含む例示的な治療用ナノ粒子が開示されている。例示的なポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約１５〜約２０Ｄａまたは約１０〜約２５ｋＤａの数平均分子量のポリ（乳）酸と約４〜約６または約２ｋＤａ〜約１０ｋＤａの数平均分子量のポリ（エチレン）グリコールとを含むことができる。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約０．６〜約０．９５、いくつかの実施形態では約０．７〜約０．９、いくつかの実施形態では約０．６〜約０．８、いくつかの実施形態では約０．７〜約０．８、いくつかの実施形態では約０．７５〜約０．８５、いくつかの実施形態では約０．８〜約０．９、およびいくつかの実施形態では約０．８５〜約０．９５のポリ（乳）酸数平均分子量分率を有することができる。ポリ（乳）酸数平均分子量分率は、コポリマーのポリ（乳）酸成分の数平均分子量をポリ（乳）酸成分の数平均分子量とポリ（エチレン）グリコール成分の数平均分子量との和で除算することにより計算され得ることを理解すべきである。
【０１０７】
開示されたナノ粒子は、任意選択で、約１〜約５０重量パーセントのポリ（乳）酸もしくはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸（ＰＥＧを含まない）を含むことができるか、または任意選択で、約１〜約５０重量パーセントもしくは約１０〜約５０重量パーセントもしくは約３０〜約５０重量パーセントのポリ（乳）酸もしくはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸を含むことができる。たとえば、ポリ（乳）酸またはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸は、約５〜約１５ｋＤａまたは約５〜約１２ｋＤａの数平均分子重量を有することができる。例示的なＰＬＡは、約５〜約１０Ｄａの数平均分子量を有することができる。例示的なＰＬＧＡは、約８〜約１２Ｄａの数平均分子量を有することができる。
【０１０８】
治療用ナノ粒子は、いくつかの実施形態では、約１０〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約１０〜約２５重量パーセント、いくつかの実施形態では約１０〜約２０重量パーセント、いくつかの実施形態では約１０〜約１５重量パーセント、いくつかの実施形態では約１５〜約２０重量パーセント、いくつかの実施形態では約１５〜約２５重量パーセント、いくつかの実施形態では約２０〜約２５重量パーセント、いくつかの実施形態では約２０〜約３０重量パーセント、もしくはいくつかの実施形態では約２５〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含有することができる。ポリ（エチレン）グリコールは、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、ポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、またはポリ（エチレン）グリコールホモポリマーとして存在することができる。ある特定の実施形態では、ナノ粒子のポリマーは脂質にコンジュゲート可能である。ポリマーは、たとえば脂質末端ＰＥＧとすることができる。
【０１０９】
標的化部分
本明細書には、いくつかの実施形態では、任意選択の標的化部分、すなわち、膜成分、細胞表面レセプター、抗原などの生物学的存在物に結合または他の形で会合させることができる部分を含むことができるナノ粒子が提供される。粒子の表面上に存在する標的化部分は、特定の標的部位、たとえば、腫瘍、疾患部位、組織、器官、ある種の細胞などに粒子を局在化させることができる。このため、ナノ粒子は、その場合、「標的特異的」とすることができる。いくつかの場合には、薬剤または他のペイロードは、次いで粒子から放出されて特定の標的部位と局所的に相互作用させることができる。
【０１１０】
一実施形態では、開示されたナノ粒子は標的化部分（すなわち低分子量リガンド）を含む。本明細書で用いられる「結合（ｂｉｎｄまたはｂｉｎｄｉｎｇ）」という用語は、典型的には、限定されるものではないが生化学的、生理学的、および／または化学的な相互作用をはじめとする特異的または非特異的な結合または相互作用に起因して、相互の親和性または結合能を呈する対応する分子対間またはその一部間の相互作用を意味する。「生物学的結合」とは、タンパク質、核酸、糖タンパク質、炭水化物、ホルモンなどを含む分子対間で起こる相互作用のタイプを規定するものである。「結合パートナー」という用語は、特定の分子との結合を起こすことができる分子を意味する。「特異的結合」とは、他の類似の生物学的存在物よりも実質的に高度に結合パートナー（または限られた数の結合パートナー）に結合可能なまたはそれを認識可能なポリヌクレオチドなどの分子を意味する。一群の実施形態では、標的化部分は、約１マイクロモル未満、少なくとも約１０マイクロモル、または少なくとも約１００マイクロモルの親和性（解離定数により測定される）を有する。
【０１１１】
たとえば、標的化部分は、使用する標的化部分に依存して、被験者の生体内の腫瘍（たとえば固形腫瘍）、疾患部位、組織、器官、ある種の細胞などに粒子を局在化させることができる。たとえば、低分子量リガンドは、固形腫瘍、たとえば、乳房腫瘍または前立腺腫瘍または癌細胞に局在化させることができる。被験者は、ヒトまたは非ヒト動物とすることができる。被験者の例としては、限定されるものではないが、イヌ、ネコ、ウマ、ロバ、ウサギ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラット、マウス、モルモット、ハムスター、霊長動物、ヒトなどの哺乳動物が挙げられる。
【０１１２】
意図される標的化部分は低分子を含むことができる。ある特定の実施形態では、「低分子」という用語は、天然に存在するかまたは人工的に（たとえば化学合成により）形成されるかにかかわらず、比較的低分子量を有しかつタンパク質でもポリペプチドでも核酸でもでない有機化合物を意味する。低分子は、典型的には複数の炭素−炭素結合を有する。ある特定の実施形態では、低分子は、約２０００ｇ／ｍｏｌ未満のサイズである。いくつかの実施形態では、低分子は、約１５００ｇ／ｍｏｌ未満または約１０００ｇ／ｍｏｌ未満である。いくつかの実施形態では、低分子は、約８００ｇ／ｍｏｌ未満または約５００ｇ／ｍｏｌ未満、たとえば約１００ｇ／ｍｏｌ〜約６００ｇ／ｍｏｌまたは約２００ｇ／ｍｏｌ〜約５００ｇ／ｍｏｌである。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、低分子量リガンドは、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶ：
【化１】
0006573895.tif 000002
で示されるもの、およびそれらの鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体、ジアステレオマー、またはラセミ体であり、
式中、ｍおよびｎは、それぞれ独立して、０、１、２、または３であり、ｐは、０または１であり、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4、およびＲ5は、それぞれ独立して、置換または非置換のアルキル（たとえば、Ｃ1〜10−アルキル、Ｃ1〜6−アルキル、またはＣ1〜4−アルキル）、置換または非置換のアリール（たとえば、フェニルまたはピリジニル）、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択され、かつＲ3は、ＨまたはＣ1〜6−アルキル（たとえばＣＨ3）である。
【０１１４】
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、およびＩＶで示される化合物では、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4、またはＲ5は、ナノ粒子への結合点、たとえば、開示されたナノ粒子の一部を形成するポリマーたとえばＰＥＧへの結合点を含む。結合点は、共有結合、イオン結合、水素結合、化学吸着および物理吸着を含む吸着により形成される結合、ファンデルワールス結合または分散力により形成される結合により形成することができる。たとえば、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4、またはＲ5がアニリン基またはＣ1〜6−アルキル−ＮＨ2基として定義される場合、これらの官能基の任意の水素（たとえばアミノ水素）は、低分子量リガンドがナノ粒子のポリマーマトリックス（たとえば、ポリマーマトリックスのＰＥＧブロック）に共有結合されるように除去可能である。本明細書で用いられる場合、「共有結合」という用語は、少なくとも１つの電子対を共有することにより形成される２個の原子間の結合を意味する。
【０１１５】
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの特定の実施形態では、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4、およびＲ5は、それぞれ独立して、Ｃ1〜6−アルキルもしくはフェニルまたはＣ1〜6−アルキルもしくはフェニルの任意の組合せであり、これらは、独立して、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ2、またはＣＯ2Ｈで１回以上置換され、かつアルキル基は、Ｎ（Ｈ）、Ｓ、またはＯが介在していてもよい。他の実施形態では、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4、およびＲ5は、それぞれ独立して、ＣＨ2−Ｐｈ、（ＣＨ2）2−ＳＨ、ＣＨ2−ＳＨ、（ＣＨ2）2Ｃ（Ｈ）（Ｈ2）ＣＯ2Ｈ、ＣＨ2Ｃ（Ｈ）（ＮＨ2）ＣＯ2Ｈ、ＣＨ（ＮＨ2）ＣＨ2ＣＯ2Ｈ、（ＣＨ2）2Ｃ（Ｈ）（ＳＨ）ＣＯ2Ｈ、ＣＨ2−Ｎ（Ｈ）−Ｐｈ、Ｏ−ＣＨ2−Ｐｈ、またはＯ−（ＣＨ2）2−Ｐｈであり、各Ｐｈは、独立して、ＯＨ、ＮＨ2、ＣＯ2Ｈ、またはＳＨで１回以上置換されていてもよい。これらの式では、ＮＨ2基、ＯＨ基、またはＳＨ基は、ナノ粒子への共有結合点（たとえば、−Ｎ（Ｈ）−ＰＥＧ、−Ｏ−ＰＥＧ、または−Ｓ−ＰＥＧ）として機能する。
【０１１６】
例示的なリガンドは、
【化２】
0006573895.tif 000003
およびそれらの鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体、ジアステレオマー、またはラセミ体を含む。式中、ＮＨ2基、ＯＨ基、またはＳＨ基は、ナノ粒子への共有結合点（たとえば、−Ｎ（Ｈ）−ＰＥＧ、−Ｏ−ＰＥＧ、もしくは−Ｓ−ＰＥＧ）として機能するか、または
【化３】
0006573895.tif 000004
は、ナノ粒子への結合点を表し、ｎは、１、２、３、４、５、または６であり、Ｒは、独立して、ＮＨ2、ＳＨ、ＯＨ、ＣＯ2Ｈ、Ｃ1〜6−アルキル（ＮＨ2、ＳＨ、ＯＨ、またはＣＯ2Ｈで置換されたもの）、およびフェニル（ＮＨ2、ＳＨ、ＯＨ、またはＣＯ2Ｈで置換されたもの）からなる群から選択され、かつＲは、ナノ粒子への共有結合点（たとえば、−Ｎ（Ｈ）−ＰＥＧ、−Ｓ−ＰＥＧ、−Ｏ−ＰＥＧ、またはＣＯ2−ＰＥＧ）として機能する。これらの化合物は、ＮＨ2、ＳＨ、ＯＨ、ＣＯ2Ｈ、Ｃ1〜6−アルキル（ＮＨ2、ＳＨ、ＯＨ、またはＣＯ2Ｈで置換されたもの）、またはフェニル（ＮＨ2、ＳＨ、ＯＨ、またはＣＯ2Ｈで置換されたもの）でさらに置換していてもよく、これらの官能基は、ナノ粒子への共有結合点としても機能することができる。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、前立腺癌腫瘍や乳癌腫瘍などの固形腫瘍に関連する細胞を標的とするのに使用することができる低分子標的化部分は、ＰＳＭＡペプチダーゼ阻害剤、たとえば、２−ＰＭＰＡ、ＧＰＩ５２３２、ＶＡ−０３３、フェニルアルキルホスホンアミデート、ならびに／またはそれらのアナログおよび誘導体を含む。いくつかの実施形態では、前立腺癌腫瘍に関連する細胞を標的とするのに使用することができる低分子標的化部分は、チオール誘導体およびインドールチオール誘導体、たとえば、２−ＭＰＰＡおよび３−（２−メルカプトエチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸誘導体を含む。いくつかの実施形態では、前立腺癌腫瘍に関連する細胞を標的とするのに使用することができる低分子標的化部分は、ヒドロキサメート誘導体を含む。いくつかの実施形態では、前立腺癌腫瘍に関連する細胞を標的とするのに使用することができる低分子標的化部分は、ＺＪ４３、ＺＪ１１、ＺＪ１７、ＺＪ３８、ならびに／またはそれらのアナログおよび誘導体、ＰＢＤＡ−およびウレア系阻害剤、アンドロゲンレセプター標的化剤（ＡＲＴＡ）、ポリアミン、たとえば、プトレシン、スペルミン、およびスペルミジン、ＮＡＡＧペプチダーゼまたはＮＡＡＬＡＤアーゼとしても知られる酵素グルタメートカルボキシラーゼＩＩ（ＧＣＰＩＩ）の阻害剤を含む。
【０１１８】
他の実施形態では、標的化部分は、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、葉酸レセプター、またはｔｏｌｌレセプターを標的とするリガンドとすることができる。他の実施形態では、標的化部分は、ホレート、葉酸、またはＥＧＦＲ結合分子である。
【０１１９】
たとえば、意図される標的化部分は、核酸、ポリペプチド、糖タンパク質、炭水化物、または脂質を含むことができる。たとえば、標的化部分は、細胞型特異的マーカーに結合する核酸標的化部分（たとえばアプタマー、たとえばＡ１０アプタマー）とすることができる。一般に、アプタマーは、ポリペプチドなどの特定の標的に結合するオリゴヌクレオチド（たとえば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはそれらのアナログまたは誘導体）である。いくつかの実施形態では、標的化部分は、細胞表面レセプターに対する天然に存在するまたは合成のリガンド、たとえば、成長因子、ホルモン、ＬＤＬ、トランスフェリンなどとすることができる。標的化部分は抗体とすることができるとともに、この用語は抗体フラグメンとを含むことが意図される。抗体の特徴的部分、一本鎖標的化部分は、たとえばファージディスプレイなどの手順を用いて同定可能である。
【０１２０】
標的化部分は、約５０残基までの長さを有する標的化ペプチドまたは標的化ペプチドミメティックとすることができる。たとえば、標的化部分は、アミノ酸配列ＡＫＥＲＣ、ＣＲＥＫＡ、ＡＲＹＬＱＫＬＮ、またはＡＸＹＬＺＺＬＮを含むことができる。式中、ＸおよびＺは、可変アミノ酸もしくは保存変異体またはそれらのペプチドミメティックである。特定の実施形態では、標的化部分、アミノ酸配列ＡＫＥＲＣ、ＣＲＥＫＡ、ＡＲＹＬＱＫＬＮ、またはＡＸＹＬＺＺＬＮを含むペプチドである。式中、ＸおよびＺは、可変アミノ酸であり、かつ２０、５０、または１００残基未満の長さを有する。ＣＲＥＫＡ（ＣｙｓＡｒｇＧｌｕＬｙｓＡｌａ）ペプチドもしくはそのペプチドミメティックまたはオクタペプチドＡＸＹＬＺＺＬＮもまた、標的化部分として意図され、コラーゲンＩＶとの結合もしくはそれとの複合体の形成を行うかまたは組織基底膜（たとえば、血管の基底膜）を標的とするペプチドもしくは保存変異体またはそれらのペプチドミメティックも同様である。例示的な標的化部分は、ＩＣＡＭ（細胞間接着分子、たとえばＩＣＡＭ−１）を標的とするペプチドを含む。
【０１２１】
本明細書に開示された標的化部分は、いくつかの実施形態では、開示されたポリマーまたはコポリマー（たとえば、ＰＬＡ−ＰＥＧ）にコンジュゲート可能であり、かかるポリマーコンジュゲートは、開示されたナノ粒子の一部を形成することができる。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、治療用ナノ粒子は、ポリマー−薬剤コンジュゲートを含むことができる。たとえば、薬剤は、開示されたポリマーまたはコポリマー（たとえば、ＰＬＡ−ＰＥＧ）にコンジュゲート可能であり、かかるポリマー−薬剤コンジュゲートは、開示されたナノ粒子の一部を形成することができる。たとえば、開示された治療用ナノ粒子は、任意選択で、約０．２〜約３０重量パーセントのＰＬＡ−ＰＥＧまたはＰＬＧＡ−ＰＥＧを含むことができる。ＰＥＧは薬剤で機能化される（たとえば、ＰＬＡ−ＰＥＧ−薬剤）。
【０１２３】
開示されたポリマーコンジュゲート（たとえば、ポリマー−リガンドコンジュゲート）は、任意の好適なコンジュゲーション技術を用いて形成することができる。例として、２種の化合物、たとえば、標的化部分または薬剤と生体適合性ポリマー（たとえば、生体適合性ポリマーとポリ（エチレングリコール））は、ＥＤＣ−ＮＨＳ化学（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド）、チオール官能基化、アミン官能基化、または同様に官能基化されたポリエーテルの一方の末端にコンジュゲート可能なマレイミドまたはカルボン酸が関与する反応などの技術を用いて一体的にコンジュゲートさせることができる。標的化部分または薬剤をポリマーにコンジュゲートすることによるポリマー−標的化部分コンジュゲートまたはポリマー−薬剤コンジュゲートの形成は、有機溶媒、たとえば、限定されるものではないが、ジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、アセトンなどの中で行うことが可能である。特異的反応条件は、当業者であればルーチンの実験の域を出ることなく決定可能である。
【０１２４】
他の一連の実施形態では、コンジュゲーション反応は、カルボン酸官能基を含むポリマー（たとえば、ポリ（エステル−エーテル）化合物）と、アミンを含むポリマーまたは他の部分（たとえば、標的化部分または薬剤）とを反応させることにより行うことができる。例として、低分子量リガンドなどの標的化部分またはダサチニブなどの薬剤をアミンと反応させてアミン含有部分を形成し、次いで、それをポリマーのカルボン酸にコンジュゲートすることが可能である。かかる反応は単一工程反応として行うことができる。すなわち、コンジュゲーションは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドやマレイミドなどの中間体を用いることなく行われる。いくつかの実施形態では、薬剤をアミン含有リンカーと反応させてアミン含有薬剤を形成し、次いで、それを以上に記載のようにポリマーのカルボン酸にコンジュゲートすることが可能である。アミン含有部分とカルボン酸末端ポリマー（たとえば、ポリ（エステル−エーテル）化合物）との間のコンジュゲーション反応は、一群の実施形態では、有機溶媒、たとえば（限定されるものではないが）、ジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、テトラヒドロフラン、アセトン、ホルムアミド、ジメチルホルムアミド、ピリジン、ジオキサン、またはジメチルスルホキシドの中に可溶化されたアミン含有部分を、カルボン酸末端ポリマーを含有する溶液に添加することにより達成することができる。カルボン酸末端ポリマーは、有機溶媒、たとえば、限定されるものではないが、ジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、またはアセトンの中に含ませることができる。アミン含有部分とカルボン酸末端ポリマーとの反応は、いくつかの場合には自然に起こるかもしれない。未コンジュゲート反応剤は、かかる反応後に洗浄除去することができる。また、ポリマーは、溶媒、たとえば、エチルエーテル、ヘキサン、メタノール、エタノールなどの中で沈殿させることができる。ある特定の実施形態では、アルコール含有部分とポリマーのカルボン酸官能基との間でコンジュゲーとを形成することができる。これは、アミンとカルボン酸とのコンジュゲートについて以上に説明したのと同様に達成可能である。
【０１２５】
ナノ粒子の調製
本開示の他の態様は、開示されたナノ粒子の作製システムおよび作製方法に関する。いくつかの実施形態では、２つ以上の異なるポリマー（たとえばコポリマー、たとえばブロックコポリマー）をさまざまな比で用いてポリマー（たとえばコポリマー、たとえばブロックコポリマー）から粒子を作製することにより、粒子の性質が制御される。たとえば、１種のポリマー（たとえばコポリマー、たとえばブロックコポリマー）は、低分子量リガンドを含むことができるが、他のポリマー（たとえばコポリマー、たとえばブロックコポリマー）は、その生体適合性および／または得られる粒子の免疫原性をする制御するその能力に関して選択することができる。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、ナノ粒子の調製プロセス（たとえば、以下で考察されるナノ沈殿プロセスまたはナノエマルジョンプロセス）で使用される溶媒は、疎水性の酸を含むことができる。これにより、プロセスを用いて調製されるナノ粒子に有利な性質を付与することができる。以上で考察したように、いくつかの場合には、疎水性の酸は、開示されたナノ粒子の薬剤負荷を改善することができる。さらに、いくつかの場合には、疎水性の酸を用いることにより開示されたナノ粒子の制御放出性を改善することができる。いくつかの場合には、疎水性の酸は、たとえば、プロセスで使用される有機溶液または水性溶液に組み込むことができる。一実施形態では、薬剤は、有機溶液および疎水性の酸および任意選択で１種以上のポリマーと組み合わされる。薬剤を溶解するために使用される溶液中の疎水性の酸の濃度は以上で考察されており、たとえば、約１重量パーセント〜約３０重量パーセントなどとすることができる。
【０１２７】
一群の実施形態では、粒子は、１種以上のポリマーを含む溶液を提供する工程と、溶液をポリマー非溶媒に接触させて粒子を生成する工程と、により形成される。溶液は、ポリマー非溶媒に対して混和性または非混和性とすることができる。たとえば、アセトニトリルなどの水混和性液体は、ポリマーを含有することができるとともに、たとえば、アセトニトリルを制御速度で水中に注加することによりアセトニトリルをポリマー非溶媒である水に接触させると、粒子が形成される。その際、溶液中に含有されるポリマーは、ポリマー非溶媒に接触させると沈殿してナノ粒子などの粒子を形成することができる。２種の液体は、周囲温度および周囲圧力で一方が他方に少なくとも１０重量％のレベルまで可溶でない場合、互いに「非混和性」または「混和性でない」と言われる。典型的には、有機溶液（たとえば、ジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、テトラヒドロフラン、アセトン、ホルムアミド、ジメチルホルムアミド、ピリジン、ジオキサン、ジメチルスルホキシドなど）および水性液体（たとえば、水、または溶解された塩もしくは他の種、細胞もしくは生体媒質、エタノールなどを含有する水）は、互いに非混和性である。たとえば、第１の溶液を第２の溶液中に（好適な割合または速度で）注加することができる。いくつかの場合には、第１の溶液を非混和性の第２の液体に接触させるとナノ粒子などの粒子が形成することができる。たとえば、第１の溶液を第２の液体中に注加しながら接触によりポリマーを沈殿させるとナノ粒子が形成され、いくつかの場合には、たとえば、導入速度を注意深く制御して比較的低速に維持した場合、ナノ粒子が形成することができる。かかる粒子形成の制御は、当業者であればルーチンの実験のみを用いて容易に最適化可能である。
【０１２８】
表面機能性、表面電荷、サイズ、ゼータ（ζ）電位、疎水性、免疫原性制御能などの性質は、開示されたプロセスを用いて高度に制御することができる。たとえば、粒子のライブラリーを合成してスクリーニングし、粒子の表面上に存在する特異的密度の部分（たとえば、低分子量リガンド）を粒子にもたせる特定比のポリマーを有する粒子を同定することができる。これにより、過度の労力をかけることなく、１つ以上の特異的性質を有する粒子、たとえば、特異的サイズおよび特異的表面密度の部分を有する粒子を調製されることが可能になる。したがって、ある特定の実施形態は、かかるライブラリーを用いたスクリーニング技術、さらにはかかるライブラリーを用いて同定された任意の粒子に関する。そのほかに、同定は、任意の好適な方法により行うことができる。たとえば、同定は、直接的もしくは間接的とすることができるか、または定量的もしくは定性的に行うことができる。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、すでに形成されたナノ粒子は、リガンド機能化ポリマーコンジュゲートの作製について記載したのと類似した手順を用いて標的化部分で機能化される。たとえば、第１のコポリマー（ＰＬＧＡ−ＰＥＧ、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）およびポリ（エチレングリコール））をプロトン化可能な窒素含有治療剤と混合して粒子を形成する。次いで、粒子を低分子量リガンドに会合させて癌の治療に使用可能なナノ粒子を形成する。ナノ粒子のリガンド表面密度を制御することによりナノ粒子の治療特性を変化させるために、粒子をさまざまな量の低分子量リガンドに会合させることが可能である。さらに、たとえば、分子量、ＰＥＧの分子量、ナノ粒子の表面電荷などのパラメーターを制御することにより、非常に精密に制御された粒子が得られる。
【０１３０】
他の実施形態では、ナノエマルジョンプロセス、たとえば、図１、２Ａ、および２Ｂに示されるプロセスが提供される。たとえば、プロトン化可能な窒素含有治療剤（たとえばダサチニブ）、疎水性の酸、第１のポリマー（たとえば、いずれも任意選択でリガンドに結合することができるＰＬＡ−ＰＥＧやＰＬＧＡ−ＰＥＧなどのジブロックコポリマー）、および任意選択の第２のポリマー（たとえば、（ＰＬ（Ｇ）Ａ−ＰＥＧまたはＰＬＡ）を有機溶液と組み合わせて、第１の有機相を形成することができる。かかる第１の相は、約１〜約５０重量％の固体、約５〜約５０重量％の固体、約５〜約４０重量％の固体、約１〜約１５重量％の固体、または約１０〜約３０重量％の固体を含むことができる。第１の有機相を第１の水性溶液と組み合わせて第２の相を形成することができる。有機溶液は、たとえば、トルエン、メチルエチルケトン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、エチルアセテート、イソプロピルアルコール、イソプロピルアセテート、ジメチルホルムアミド、メチレンクロリド、ジクロロメタン、クロロホルム、アセトン、ベンジルアルコール、Ｔｗｅｅｎ８０、Ｓｐａｎ８０など、およびそれらの組合せを含むことができる。実施形態では、有機相は、ベンジルアルコール、エチルアセテートおよびそれらの組合せを含むことができる。第２の相は、固体が約０．１〜５０重量％、約１〜５０重量％、約５〜４０重量％、または約１〜１５重量％とすることができる。水性溶液は、任意選択でナトリウムコレート、エチルアセテート、ポリビニルアセテートをよびベンジルアルコールの１つ以上と組み合わされた水とすることができる。いくつかの実施形態では、水性相のｐＨは、プロトン化塩基性治療剤のｐＫaおよび／または疎水性の酸のｐＫaを基づいて選択することができる。たとえば、ある特定の実施形態では、塩基性治療剤は、プロトン化された場合、第１のｐＫaを有し、疎水性の酸は、第２のｐＫaを有し、かつ水性相は、第１のｐＫaと第２のｐＫaとの間のｐＫa単位に等しいｐＨを有することができる。特定の実施形態では、水性相のｐＨは、第１のｐＫaおよび第２のｐＫaからほぼ等距離にあるｐＫa単位と等しいものとすることができる。
【０１３１】
たとえば、油または有機相では、非溶媒（水）に対して部分的に混和性であるにすぎない溶媒を使用することができる。したがって、十分に低い比で混合した場合および／または有機溶媒であらかじめ飽和させた水を使用した場合、油相は液体状態を維持する。油相は、水性溶液中に乳化することができるとともに、たとえば、ホモジナイザーやソニケーターなどの高エネルギー分散システムを用いて、液体ドロップレットとしてナノ粒子に剪断することができる。「水相」としても知られるエマルジョンの水性部分は、エチルアセテートおよびベンジルアルコールであらかじめ飽和されたナトリウムコレートからなる界面活性剤溶液とすることができる。いくつかの場合には、有機相（たとえば、第１の有機相）は塩基性治療剤を含むことができる。そのほかに、ある特定の実施形態では、水性溶液（たとえば、第１の水性溶液）は実質的に疎水性の酸を含むことができる。他の実施形態では、塩基性治療剤および実質的に疎水性の酸の両方を有機相に溶解させることができる。
【０１３２】
第２の相を乳化してエマルジョン相を形成する工程は、たとえば、１工程または２工程の乳化工程で行うことができる。たとえば、一次エマルジョンを調製し、次いで、乳化して微細エマルジョンを形成することができる。一次エマルジョンは、たとえば、単純混合、高圧ホモジナイザー、プローブソニケーター、撹拌子、またはローターステーターホモジナイザーを用いて形成可能である。一次エマルジョンは、たとえば、プローブソニケーターまたは高圧ホモジナイザーを用いて、たとえば、ホモジナイザーに１、２、３回以上通して、微細エマルジョンとして形成することができる。たとえば、高圧ホモジナイザーを使用する場合、使用される圧力は、約３０〜約６０ｐｓｉ、約４０〜約５０ｐｓｉ、約１０００〜約８０００ｐｓｉ、約２０００〜約４０００ｐｓｉ、約４０００〜約８０００ｐｓｉ、または約４０００〜約５０００ｐｓｉ、たとえば、約２０００、２５００、４０００、または５０００ｐｓｉとすることができる。
【０１３３】
いくつかの場合には、エマルジョン中のドロップレットの非常に高い表面積対体積比により特徴付け可能な微細エマルジョン条件は、プロトン化可能な窒素含有治療剤および疎水性の酸の溶解度を最大化しかつ所望のＨＩＰを形成するように選択可能である。ある特定の実施形態では、微細エマルジョン条件下で溶存成分の平衡化を非常に迅速に、すなわち、ナノ粒子の凝固よりも速く行うことが可能である。したがって、たとえば、プロトン化可能な窒素含有治療剤と疎水性の酸とのｐＫa差に基づいてＨＩＰを選択する工程、または微細エマルジョンのｐＨおよび／またはクエンチ溶液のｐＨなどの他のパラメーターを調整する工程は、たとえば、ナノ粒子中のプロトン化可能な窒素含有治療剤および／または疎水性の酸の拡散とは対照的なナノ粒子中のＨＩＰの形成を決定付けることにより、ナノ粒子の薬剤負荷および放出性に有意な影響を及ぼすことができる。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、塩基性治療剤（たとえば、プロトン化可能な窒素含有治療剤）および実質的に疎水性の酸は、第２の相の乳化前に第２の相で組み合わすことができる。いくつかの場合には、塩基性治療剤および実質的に疎水性の酸は、第２の相の乳化前に疎水性イオン対を形成することができる。他の実施形態では、塩基性治療剤および実質的に疎水性の酸は、第２の相の乳化時に疎水性イオン対を形成するかもしれない。たとえば、塩基性治療剤および実質的に疎水性の酸は、第２の相の乳化と実質的に同時に第２の相で組み合わすことができる。たとえば、塩基性治療剤および実質的に疎水性の酸は、個別の溶液（たとえば、２種の実質的に不混和性の溶液）に溶解させることができるとともに、次いで、これは乳化時に組み合わされる。他の例では、塩基性治療剤および実質的に疎水性の酸は、個別の混和性溶液に溶解させることができるとともに、次いで、乳化時に第２の相に供給される。
【０１３５】
溶媒の抽出を終了しかつ粒子を凝固させるために、溶媒蒸発または希釈のいずれかを用いてもよい。抽出速度のより良い制御のためにおよびより拡張性のあるプロセスのために、水性クエンチによる溶媒希釈を使用することができる。たとえば、有機溶媒のすべてを溶解させるのに十分な濃度にエマルジョンを冷水中に希釈して、クエンチ相を形成することが可能である。いくつかの実施形態では、クエンチングは、少なくとも部分的には約５℃以下の温度で行うことができる。たとえば、クエンチングで使用される水は、室温（たとえば、約０〜約１０℃または約０〜約５℃）未満の温度とすることができる。
【０１３６】
ある特定の実施形態では、クエンチは、たとえば、放出プロファイルなどのナノ粒子の性質を改善することにより、または薬剤負荷などのナノ粒子パラメーターを改善することにより、エマルジョン相をクエンチするのに有利なｐＨを有するように選択することができる。クエンチのｐＨは、酸もしくは塩基の滴定によりまたはたとえば緩衝剤の適切な選択により、調整することができる。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、クエンチのｐＨは、プロトン化塩基性治療剤のｐＫaおよび／または疎水性の酸のｐＫaを基づいて選択することができる。たとえば、ある特定の実施形態では、塩基性治療剤は、プロトン化された場合、第１のｐＫaを有し、疎水性の酸は、第２のｐＫaを有し、かつエマルジョン相は、第１のｐＫaと第２のｐＫaとの間のｐＫa単位に等しいｐＨを有する水性溶液でクエンチすることができる。いくつかの実施形態では、得られるクエンチ相もまた、第１のｐＫaと第２のｐＫaとの間のｐＫa単位に等しいｐＨを有することができる。特定の実施形態では、ｐＨは、第１のｐＫaおよび第２のｐＫaからほぼ等距離にあるｐＫa単位と等しいものとすることができる。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、クエンチは、約２〜約１２、いくつかの実施形態では約３〜約１０、いくつかの実施形態では約３〜約９、いくつかの実施形態では約３〜約８、いくつかの実施形態では約３〜約７、いくつかの実施形態では約４〜約８、いくつかの実施形態では約４〜約７、いくつかの実施形態では約４〜約６、いくつかの実施形態では約４〜約５、いくつかの実施形態では約４．２〜約４．８、いくつかの実施形態では約６〜約１０、いくつかの実施形態では約６〜約９、いくつかの実施形態では約６〜約８、いくつかの実施形態では約６〜約７のｐＨを有することができる。ある特定の実施形態では、クエンチは約４．５のｐＨを有することができる。緩衝溶液のｐＨは、温度の関数として変化しうることを理解すべきである。とくに明記されていない限り、本明細書で参照される緩衝溶液のｐＨは２３℃のｐＨである。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、クエンチは、緩衝剤を含む水性溶液（すなわち緩衝溶液）とすることができる。任意の好適な緩衝剤を使用することができる。緩衝剤の例としては、限定されるものではないが、リン酸、クエン酸、酢酸、ホウ酸、イミダゾール、ＭＥＳ（４−モルホリンエタンスルホン酸）、ビス−トリス（ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン）、ＡＤＡ（Ｎ−（２−アセトアミド）イミノ二酢酸）、ＡＣＥＳ（Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸）、ＰＩＰＥＳ（１，４−ピペラジンジエタンスルホン酸）、ＭＯＰＳＯ（３−モルホリノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ビス−トリスプロパン（１，３−ビス［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］プロパン）、ＢＥＳ（Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸）、ＭＯＰＳ（３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸）、ＴＥＳ（２−［（２−ヒドロキシｌおよびｌビス（ヒドロキシメチル）エチル）アミノ］エタンスルホン酸）、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸）、ＤＩＰＳＯ（３−（Ｎ，Ｎ−ビス［２−ヒドロキシエチル］アミノ）−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ＭＯＢＳ（４−（Ｎ−モルホリノ）ブタンスルホン酸）、ＴＡＰＳＯ（２−ヒドロキシ−３−［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−１−プロパンスルホン酸）、トリズマ（２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール）、ＨＥＰＰＳＯ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸））、ＰＯＰＳＯ（ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸））、ＴＥＡ（トリエチルアミン）、ＥＰＰＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンプロパンスルホン酸）、トリシン（Ｎ−［Ｔｒｉｓ（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン）、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（ジグリシン）、ビシン（Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン）、ＨＥＰＢＳ（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（４−ブタンスルホン酸））、ＴＡＰＳ（Ｎ−［Ｔｒｉｓ（ヒドロキシメチル）メチル］−３−アミノプロパンスルホン酸）、ＡＭＰＤ（２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール）、ＴＡＢＳ（Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−４−アミノブタンスルホン酸）、ＡＭＰＳＯ（Ｎ−（１，１−ジメチル−２−ヒドロキシエチル）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ＣＨＥＳ（２−（シクロヘキシルアミノ）エタンスルホン酸）、ＣＡＰＳＯ（３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸）、ＡＭＰ（β−アミノイソブチルアルコール）、ＣＡＰＳ（３−（シクロヘキシルアミノ）−１−プロパンスルホン酸）、ＣＡＢＳ（４−（シクロヘキシルアミノ）−１−ブタンスルホン酸）、ならびにそれらの組合せが挙げられる。緩衝剤は酸と塩基とを平衡状態で含むことを理解すべきである（たとえば、酸と共役塩基および／または塩基と共役酸）。したがって、簡潔さを期して、本明細書では、緩衝溶液または緩衝剤は、遊離酸（たとえばリン酸）もしくはその共役塩基���たとえばリン酸イオン）の名称または遊離塩基（たとえばイミダゾール）もしくはその共役酸（たとえばイミダゾリウム）の名称により参照されることをさらに理解すべきであるが、当業者であれば緩衝剤の２種以上の異なるプロトン化種間（たとえば、Ｈ3ＰＯ4、Ｈ2ＰＯ4-、ＨＰＯ42-、およびＰＯ43-）に平衡が存在することが理解されよう。いくつかの実施形態では、クエンチは、２種以上の緩衝剤を含むことができる。たとえば、クエンチは、２、３、４、または５種の緩衝剤を含むことができる。いくつかの実施形態では、クエンチは、リン酸およびクエン酸の混合物を含むことができる。他の実施形態では、クエンチは、ホウ酸、リン酸、および酢酸の混合物（たとえば、所望のｐＨに調整された０．０４Ｍ  Ｈ3ＢＯ3、０．０４Ｍ  Ｈ3ＰＯ4、および０．０４Ｍ  ＣＨ3ＣＯＯＨを含むブリトン・ロビンソン緩衝液）を含むことができる。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、緩衝溶液（すなわち、クエンチ）は、特定のｐＨ範囲内の好適な緩衝能を有することができる。例示的な緩衝溶液のｐＨ範囲は、限定されるものではないが、以下の表Ａに提供される。ある特定の実施形態では、緩衝溶液は、約０．００１Ｍ〜約１Ｍ、いくつかの実施形態では約０．００１Ｍ〜約０．５Ｍ、いくつかの実施形態では約０．０１Ｍ〜約０．５Ｍ、いくつかの実施形態では約０．０５Ｍ〜約０．５Ｍ、いくつかの実施形態では約０．１Ｍ〜約０．５Ｍ、いくつかの実施形態では約０．０１Ｍ〜約０．２Ｍ、いくつかの実施形態では約０．０５Ｍ〜約０．１５Ｍ、およびいくつかの実施形態では約０．０７５Ｍ〜約０．１２５Ｍの緩衝剤濃度を有することができる。
【０１４１】
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【０１４２】
いくつかの実施形態では、クエンチは、実質的なｐＨ変化に耐えるのに十分な緩衝剤濃度を有することができる。たとえば、クエンチ相は、いくつかの実施形態では、エマルジョン相のｐＨとの差が１ｐＨ単位未満、いくつかの実施形態では０．５ｐＨ単位未満、０．２ｐＨ単位未満、いくつかの実施形態では、０．１ｐＨ単位未満、およびいくつかの実施形態では、０．０５ｐＨ単位未満であるｐＨを有することができる。いくつかの実施形態では、クエンチ相のｐＨは、エマルジョン相（すなわち、クエンチング前）のｐＨと実質的に同一とすることができる。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、クエンチ相は、約２〜約１２、いくつかの実施形態では約３〜約１０、いくつかの実施形態では約３〜約９、いくつかの実施形態では約３〜約８、いくつかの実施形態では約３〜約７、いくつかの実施形態では約４〜約８、いくつかの実施形態では約４〜約７、いくつかの実施形態では約４〜約６、いくつかの実施形態では約４〜約５、いくつかの実施形態では約４〜約６、いくつかの実施形態では約４．２〜約４．８、いくつかの実施形態では約６〜約１０、いくつかの実施形態では約６〜約９、いくつかの実施形態では約６〜約８、いくつかの実施形態では約６〜約７のｐＨを有することができる。ある特定の実施形態では、クエンチ相は約４．６のｐＨを有することができる。
【０１４４】
所望のｐＨの緩衝溶液（たとえばクエンチ）は、当業者であれば容易に調製可能である。たとえば、緩衝剤を含有する溶液を強酸（たとえばＨＣｌ）または強塩基（たとえばＮａＯＨ）で調整することにより、所望のｐＨの緩衝溶液を調製することが可能である。他の選択肢として、弱酸（たとえばクエン酸）とその共役塩基（たとえばクエン酸ナトリウム）とを組み合わせることによりまたは弱塩基（たとえばイミダゾール）とその共役酸（たとえばイミダゾリウムクロリド）とを組み合わせることにより、所望のｐＨの緩衝溶液を調製することが可能である。当業者であれば、ヘンダーソン・ハッセルバルヒの式を用いることにより、緩衝溶液の調製で使用する弱酸または弱塩基および対応する共役体の量を決定することが可能である。
【０１４５】
ある特定の実施形態では、ＨＩＰ形成は、たとえば、微細エマルジョンの平衡状態の結果として、乳化時または乳化後に行うことができる。いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、有機溶性対イオン（すなわち、疎水性の酸）は、ＨＩＰ形成の結果としてエマルジョンのナノ粒子中への親水性治療剤の拡散を促進可能であると考えられる。いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、ナノ粒子へのＨＩＰの溶解度がエマルジョンの水性相および／またはクエンチへのＨＩＰの溶解度よりも高いので、ＨＩＰはナノ粒子の凝固前にナノ粒子中に残留させることができる。たとえば、塩基性治療剤のｐＫaと疎水性の酸のｐＫaとの間のクエンチのｐＨを選択することにより、イオン化塩基性治療剤と疎水性の酸との形成を最適化することができる。しかし、あまりにも高いｐＨを選択するとナノ粒子からの疎水性の酸の拡散を引き起こしやすくなりうるのに対して、あまりにも低いｐＨを選択するとナノ粒子からの塩基性治療剤の拡散を引き起こしやすくすることができる。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、ナノ粒子製剤プロセスで使用される水性溶液（たとえば、限定されるものではないが、水性相、エマルジョン相、クエンチ、およびクエンチ相を含む）のｐＨは、独立して、選択することができるとともに、約１〜約３、いくつかの実施形態では約２〜約４、いくつかの実施形態では約３〜約５、いくつかの実施形態では約４〜約６、いくつかの実施形態では約５〜約７、いくつかの実施形態では約６〜約８、いくつかの実施形態では約７〜約９、およびいくつかの実施形態では約８〜約１０とすることができる。ある特定の実施形態では、ナノ粒子製剤プロセスで使用される水性溶液のｐＨは、約３〜約４、いくつかの実施形態では約４〜約５、いくつかの実施形態では約５〜約６、いくつかの実施形態では約６〜約７、いくつかの実施形態では約７〜約８、およびいくつかの実施形態では約８〜約９とすることができる。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、プロトン化可能な窒素含有治療剤は、この段階で粒子中にすべてカプセル化されるとは限らず、可溶化相を形成するためにクエンチ相に薬剤可溶化剤が添加される。薬剤可溶化剤は、たとえば、Ｔｗｅｅｎ８０、Ｔｗｅｅｎ２０、ポリビニルピロリドン、シクロデキストラン、ナトリウムドデシルスルフェート、ナトリウムコレート、ジエチルニトロソアミン、酢酸ナトリウム、尿素、グリセリン、プロピレングリコール、グリコフロール、ポリ（エチレン）グリコール、ｂｒｉｓ（ポリオキシエチレングリコールドデシルエーテル、安息香酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、またはそれらの組合せとすることができる。たとえば、Ｔｗｅｅｎ−８０をクエンチされたナノ粒子サスペンジョンに添加することにより、遊離薬剤を可溶化して薬剤結晶の形成を防止することができる。いくつかの実施形態では、薬剤可溶化剤とプロトン化可能な窒素含有治療剤との比は、約２００：１〜約１０：１、またはいくつかの実施形態では約１００：１〜約１０：１である。
【０１４８】
可溶化相を濾過してナノ粒子を回収することができる。たとえば、限外濾過膜を用いてナノ粒子サスペンジョンを濃縮し、かつ有機溶媒、遊離薬剤（すなわち、カプセル化されていない治療剤）、薬剤可溶化剤、および他の処理助剤（界面活性剤）を実質的に排除することができる。例示的な濾過は、タンジェンシャルフロー濾過システムを用いて行うことができる。たとえば、溶質、ミセル、および有機溶媒を通過させつつナノ粒子を保持するのに好適な細孔サイズを有する膜を用いることにより、ナノ粒子を選択的に分離することが可能である。約３００〜５００ｋＤａ（約５〜２５ｎｍ）の分画分子量を有する例示的な膜を用いることが可能である。
【０１４９】
透析濾過（ダイア  フィルトレーション）は、定体積法を用いて行うことができる。このことは、濾液をサスペンジョンから除去するのと同じ速度で透析濾過（ダイア  フィルトレーション）液（冷脱イオン水、たとえば、約０〜約５℃または０〜約１０℃）を供給サスペンジョンに添加することができることを意味する。いくつかの実施形態では、濾過は、約０〜約５℃または０〜約１０℃の第１の温度および約２０〜約３０℃または１５〜約３５℃の第２の温度を用いる第１の濾過を含むことができる。いくつかの実施形態では、濾過は、いくつかの場合には、約１〜約３０、約１〜約１５、またはいくつかの場合には１〜約６透析体積の処理を含むことができる。たとえば、濾過は、約０〜約５℃で約１〜約３０またはいくつかの場合には約１〜約６透析体積を処理する工程と、約２０〜約３０℃で少なくとも１透析体積（たとえば、約１〜約１５、約１〜約３、または約１〜約２透析体積）を処理する工程とを含むことができる。いくつかの実施形態では、濾過は、異なる個別の温度で異なる透析体積を処理する工程を含む。
【０１５０】
ナノ粒子サスペンジョンの精製および濃縮を行った後、粒子は、１、２以上の滅菌フィルターおよび／またはデプスフィルターに通して、たとえば、約０．２μｍデプスプレフィルターを用いて、処理することができる。たとえば、滅菌濾過工程は、制御速度で濾過トレインを用いた治療用ナノ粒子の濾過を含むことができる。いくつかの実施形態では、濾過トレインは、デプスフィルターおよび滅菌フィルターを含むことができる。
【０１５１】
ナノ粒子の調製の他の実施形態では、プロトン化可能な窒素含有治療剤とポリマー（ホモポリマー、コポリマー、およびリガンドを有するコポリマー）との混合物で構成された有機相を形成する。有機相を約１：５の比（油相：水性相）で水性相と混合する。水性相は、界面活性剤およびなんらかの溶解溶媒で構成される。単純混合下でまたはローターステーターホモジナイザーを用いて２つの相を組み合わせることにより一次エマルジョンを形成する。次いで、高圧ホモジナイザーを用いて一次エマルジョンを微細エマルジョンの形態にする。次いで、混合下で脱イオン水に添加することにより微細エマルジョンをクエンチする。いくつかの実施形態では、クエンチ：エマルジョン比は、約２：１〜約４０：１、いくつかの実施形態では約５：１〜約１５：１である。いくつかの実施形態では、クエンチ：エマルジョン比は約８．５：１である。次いで、全体で約２％のＴｗｅｅｎとなるようにＴｗｅｅｎ（たとえばＴｗｅｅｎ８０）の溶液をクエンチに添加する。これは、遊離のカプセル化されていないプロトン化可能な窒素含有治療剤を溶解させる働きをする。次いで、遠心分離または限外濾過／透析濾過（ダイア  フィルトレーション）のいずれかによりナノ粒子を単離する。
【０１５２】
製剤の調製で使用されるポリマー、プロトン化可能な窒素含有治療剤、および疎水性の酸の量は、最終製剤とは異なっていてもよいことが分かるであろう。たとえば、プロトン化可能な窒素含有治療剤のいくつかは、ナノ粒子に完全に組み込まれるとは限らず、かかる遊離のプロトン化可能な窒素含有治療剤は、たとえば、濾過により除去することができる。たとえば、実施形態では、約９％の第１の疎水性の酸（たとえば脂肪酸）を含有する第１の有機溶液中に約１１重量パーセントの理論負荷のプロトン化可能な窒素含有治療剤を含有する第１の有機溶液、約８９重量パーセントのポリマー（たとえば、ポリマーは、約２．５ｍｏｌパーセントの、ポリマーにコンジュゲートされた標的化部分と、約９７．５ｍｏｌパーセントのＰＬＡ−ＰＥＧとを含むことができる）を含有する第２の有機溶液、および約０．１２％の第２の疎水性の酸（たとえば胆汁酸）を含有する水性溶液を製剤の調製に使用することができる。この結果、たとえば、２重量パーセントのプロトン化可能な窒素含有治療剤と、約９７．５重量パーセントのポリマー（ポリマーは、約１．２５ｍｏｌパーセントの、ポリマーにコンジュゲートされた標的化部分と、約９８．７５ｍｏｌパーセントのＰＬＡ−ＰＥＧとを含むことができる）と、合計約０．５％の疎水性の酸とを含む最終ナノ粒子が得られる。かかるプロセスは、患者への投与に好適な最終ナノ粒子を提供することができる。最終ナノ粒子は、約１〜約２０重量パーセントの治療剤、たとえば、約１、約２、約３、約４、約５、約８、約１０、または約１５重量パーセントのプロトン化可能な窒素含有治療剤を含む。
【０１５３】
治療剤
プロトン化可能な窒素含有治療剤は、その製薬上許容される塩形、遊離塩基形、水和物、異性体、およびプロドラッグなどの代替形を含むことができる。いくつかの実施形態では、プロトン化可能な窒素含有治療剤は、公知の作用剤のリスト、たとえば、すでに合成された作用剤のリスト、被験者、たとえば、ヒト被験者もしくは哺乳動物被験者にすでに投与された作用剤のリストＦＤＡにより承認された作用剤のリスト、または作用剤の過去のリスト、たとえば、製薬会社の過去のリストなどから選択することができる。公知の作用剤の好適なリストは当業者に周知であり、限定されるものではないが、Ｍｅｒｃｋ  ＩｎｄｅｘおよびＦＤＡ  Ｏｒａｎｇｅ  Ｂｏｏｋ（それぞれ参照により本明細書に組み込まれる）を含む。いくつかの場合には、２種以上のプロトン化可能な窒素含有治療剤（たとえば、２、３種以上のプロトン化可能な窒素含有治療剤）の組合せを開示されたナノ粒子製剤で使用することができる。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、プロトン化可能な窒素含有治療剤はチロシンキナーゼ阻害剤とすることができる。たとえば、チロシンキナーゼは、多標的レセプターチロシンキナーゼ阻害剤（たとえばスニチニブ（ｐＫa＝７．０７））とすることができる。他の例では、プロトン化可能な窒素含有治療剤は、Ｂｃｒ−Ａｂｌチロシンキナーゼ阻害剤（たとえば、イマチニブ（ｐＫa＝８．３８）、ニロチニブ、ダサチニブ（ｐＫa＝７．０７）、ボスチニブ、ポナチニブ、およびバフェチニブ）とすることができる。いくつかの実施形態では、Ｂｃｒ−Ａｂｌチロシンキナーゼ阻害剤は、Ｓｒｃチロシンキナーゼをも阻害することができる。したがって、いくつかの実施形態では、プロトン化可能な窒素含有治療剤は、Ｂｃｒ−ＡｂｌおよびＳｒｃチロシンキナーゼ阻害剤とすることができる。Ｂｃｒ−ＡｂｌおよびＳｒｃチロシンキナーゼ阻害剤の例は、限定されるものではないがダサチニブである。
【０１５５】
プロトン化可能な窒素含有治療剤の他の例としては、限定されるものではないが、化学治療剤、たとえば、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、ゲムシタビン（ゲムザール）、ダウノルビシン、プロカルバジン、マイトマイシン、シタラビン、ビノレルビン、ビンカアルカロイド、たとえば、ビンブラスチンまたはビンクリスチン（ｐＫa＝７．０８）、ブレオマイシン、クラドリビン、カンプトテシン、ＣＰＴ−１１、１０−ヒドロキシ−７−エチルカンプトテシン（ＳＮ３８）、ダカルバジン、Ｓ−Ｉカペシタビン、ＵＦＴ、デオキシシチジン、５−アザシトシン、５−アザデオキシシトシン、アロプリノール、２−クロロアデノシン、トリメトレキセート、アミノプテリン、メチレン−１０−デアザアミノプテリン（ＭＤＡＭ）、エピルビシン、９−アミノカンプトテシン、１０，１１−メチレンジオキシカンプトテシン、カレニテシン、９−ニトロカンプトテシン、ＴＡＳ１０３、ビンデシン、Ｌ−フェニルアラニンカラシナ、エポチロンＡ〜Ｅ、トムデックス、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、アムサクリン、カレニテシン、アシクロビル、バラシクロビル、ガンシクロビル、アマンタジン、リマンタジン、ラミブジン、およびそれらの組合せが挙げられる。
【０１５６】
一群の実施形態では、ペイロードは、薬剤または２種以上の薬剤の組合せである。かかる粒子は、薬剤を含有する粒子を被験者内の特定の局所位置に方向付けるために、たとえば、薬剤の局所送達を可能にするために標的化部分を使用することができる実施形態に有用とすることができる。
【０１５７】
医薬製剤
本明細書に開示されたナノ粒子は、他の態様によれば、医薬組成物を形成するために薬学的に許容可能な担体と組み合わせることができる。当業者であれば分かるであろうが、担体は、以下に記載の投与経路、標的組織の位置、送達される薬剤、薬剤送達の時間経過などに基づいて選択することができる。
【０１５８】
医薬組成物は、経口経路および非経口経路を含む当技術分野で公知の任意の手段により患者に投与可能である。本明細書で用いられる「患者」という用語は、ヒト、さらにはたとえば哺乳動物、トリ、爬虫動物、両生動物、およびサカナをはじめとするヒトを意味する。たとえば、非ヒトは、哺乳動物（たとえば、齧歯動物、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、霊長動物、またはブタ）とすることができる。ある特定の実施形態では、消化管に見いだされる消化酵素との接触が回避されることから、非経口経路が望ましい。かかる実施形態によれば、本発明の組成物は、注射（たとえば、静脈内注射、皮下注射、筋肉内注射、腹腔内注射）により、経直腸的に、経腟的に、局所的に（たとえば、粉末剤、クリーム剤、軟膏剤、もしくは滴剤により）、または吸入により（たとえば、スプレーにより）投与することができる。
【０１５９】
特定の実施形態では、ナノ粒子は、全身的に、たとえば、ＩＶ注入または注射により必要とされる被験者に投与される。
【０１６０】
注射用製剤、たとえば、無菌注射用の水性または油性のサスペンジョン剤は、好適な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて公知の技術に従って製剤化することができる。無菌注射用製剤はまた、非毒性の非経口的に許容可能な希釈剤中または溶媒中の無菌注射用の溶液剤、サスペンジョン剤、またはエマルジョン剤、たとえば、１，３−ブタンジオール中の溶液剤とすることができる。利用することができる媒体および溶媒としては、水、リンゲル液（米国薬局方）、および生理食塩液がある。そのほかに、無菌固定油が溶媒または懸濁媒体として従来から利用されている。この目的のために、合成モノまたはジグリセリドを含む任意の無刺激性固定油を利用することが可能である。それに加えて、オレイン酸などの脂肪酸が注射剤の調製に使用される。一実施形態では、本発明のコンジュゲートは、１％（ｗ／ｖ）のナトリウムカルボキシメチルセルロースと０．１％（ｖ／ｖ）のＴＷＥＥＮ（商標）８０とを含む担体流体中に懸濁される。注射用製剤は、たとえば、細菌保持フィルターに通して濾過することにより、または使用前に無菌水または他の無菌注射用媒体に溶解可能または分散可能な無菌固体組成物の形態で滅菌剤を組み込むことにより、滅菌可能である。
【０１６１】
経口投与に供される固形製剤としては、カプセル剤、錠剤、丸剤、粉末剤、および顆粒剤が挙げられる。かかる固形製剤では、カプセル化コンジュゲートまたは非カプセル化コンジュゲートは、少なくとも１種の不活性な薬学的に許容可能な賦形剤または担体、たとえば、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウム、および／または（ａ）充填剤または増量剤、たとえば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、およびケイ酸、（ｂ）結合剤、たとえば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロース、およびアカシアなど、（ｃ）湿潤剤、たとえば、グリセロール、（ｄ）崩壊剤、たとえば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプンまたはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、および炭酸ナトリウム、（ｅ）溶解遅延剤、たとえば、パラフィン、（ｆ）吸収促進剤、たとえば、第４級アンモニウム化合物、（ｇ）湿潤剤、たとえば、セチルアルコールおよびグリセロールモノステアレートなど、（ｈ）吸収剤、たとえば、カオリンおよびベントナイトクレー、および（ｉ）滑沢剤、たとえば、タルク、カルシウムステアレート、マグネシウムステアレート、固体ポリエチレングリコール、ナトリウムラウリルスルフェートおよびそれらの混合物と混合される。カプセル剤、錠剤、および丸剤の場合、製剤は緩衝剤も含むことができる。
【０１６２】
プロトン化可能な窒素含有治療剤を含有するナノ粒子の厳密な投与量は、治療される患者を考慮して個々の医師により選択され、一般に、投与量および投与は、治療された患者に有効量のプロトン化可能な窒素含有治療剤ナノ粒子を提供するように調整されることが分かるであろう。本明細書で用いられる場合、プロトン化可能な窒素含有治療剤を含有するナノ粒子の「有効量」とは、所望の生物学的反応を引き出すのに必要な量を意味する。当業者であれば分かるであろうが、プロトン化可能な窒素含有治療剤を含有するナノ粒子の有効量は、所望の生物学的エンドポイント、送達される薬剤、標的組織、投与経路などの因子に依存してさまざまとすることができる。たとえば、プロトン化可能な窒素含有治療剤を含有するナノ粒子の有効量は、所望の期間にわたり所望の量の腫瘍サイズ減少をもたらす量とすることができる。考慮されうる追加の因子としては、疾患の重症度状態、治療される患者の年齢、体重、および性別、食事、投与時間、および投与頻度、薬剤の組合せ、反応感受性、ならびに治療に対する耐性／反応が挙げられる。
【０１６３】
ナノ粒子は、投与が容易になるようにかつ投与量が均一になるように投与ユニット製剤として製剤化することができる。本明細書で用いられる「投与ユニット製剤」という表現は、治療される患者に適したナノ粒子の物理的に個別のユニッとを意味する。しかし、組成物の１日合計使用量は、健全な医学的判断の範囲内で担当医により決定されることが理解されよう。任意のナノ粒子に対して、治療上有効用量は、細胞培養アッセイで、または動物モデルで、通常は、マウス、ウサギ、イヌ、もしくはブタで、初期に推定可能である。動物モデルはまた、望ましい濃度範囲および投与経路を達成するためにも使用される。次いで、かかる情報は、ヒトにおいて有用な投与用量および投与経路を決定するために使用可能である。ナノ粒子の治療有効性および毒性は、標準的な薬学的手順により、たとえば、ＥＤ50（集団の５０％で治療上有効な用量）およびＬＤ50（集団の５０％で致死的な用量）により、細胞培養物または実験動物で決定可能である。毒性作用と治療効果との用量比は治療指数であり、ＬＤ50／ＥＤ50の比として表現可能である。大きな治療指数を呈する医薬組成物は、いくつかの実施形態に有用とすることができる。細胞培養アッセイおよび動物試験から得られるデータは、ヒトで使用するための投与量範囲の策定に使用可能である。
【０１６４】
実施形態では、本明細書に開示された組成物は、約１０ｐｐｍ未満のパラジウムまたは約８ｐｐｍ未満もしくは約６ｐｐｍ未満のパラジウムを含むことができる。たとえば、本明細書には、ポリマーコンジュゲートを有するナノ粒子を含む組成物が提供され、組成物は約１０ｐｐｍ未満のパラジウムを有する。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されたナノ粒子と凍結に好適な溶液とを含む凍結に好適な組成物が意図される。たとえば、単糖、二糖、多糖などの糖、たとえば、スクロースおよび／もしくはトレハロース、ならびに／または塩、ならびに／またはシクロデキストリン溶液がナノ粒子サスペンジョンに添加される。糖（たとえば、スクロースまたはトレハロース）は、たとえば、凍結時の粒子の凝集を防止するための凍結保護剤として作用させることができる。本明細書には、たとえば、複数の開示されたナノ粒子と、スクロースと、イオン性ハロゲン化物と、水とを含むナノ粒子製剤が提供され、ナノ粒子／スクロース／水／イオン性ハロゲン化物は、約３〜４０％／１０〜４０％／２０〜９５％／０．１〜１０％（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）、または約５〜１０％／１０〜１５％／８０〜９０％／１〜１０％（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）である。たとえば、かかる溶液は、本明細書に開示されたナノ粒子と、約５重量％〜約２０重量％のスクロースと、約１０〜１００ｍＭ濃度の塩化ナトリウムなどのイオン性ハロゲン化物とを含むことができる。他の例では、本明細書には、複数の開示されたナノ粒子と、トレハロースと、シクロデキストリンと、水とを含むナノ粒子製剤が提供され、ナノ粒子／トレハロース／水／シクロデキストリンは、約３〜４０％／１〜２５％／２０〜９５％／１〜２５％（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）、または約５〜１０％／１〜２５％／８０〜９０％／１０〜１５％（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）である。
【０１６６】
たとえば、意図される溶液は、本明細書に開示されたナノ粒子と、約１重量％〜約２５重量％の二糖、たとえば、トレハロースまたはスクロース（たとえば、約５重量％〜約２５重量％のトレハロースもしくはスクロース、たとえば、約１０重量％のトレハロースもしくはスクロース、または約１５重量％のトレハロースもしくはスクロース、たとえば、約５重量％のスクロース）と、約１重量％〜約２５重量％の濃度のシクロデキストリン、たとえば、β−シクロデキストリン（たとえば、約５重量％〜約２０重量％、たとえば、１０重量％、または約２０重量％、または約１５重量％〜約２０重量％のシクロデキストリン）とを含むことができる。意図される製剤は、複数の開示されたナノ粒子（たとえば、ＰＬＡ−ＰＥＧと活性剤とを有するナノ粒子）と、約２重量％〜約１５重量％（または約４重量％〜約６重量％、たとえば、約５重量％）のスクロースと、約５重量％〜約２０重量％（たとえば、約７％重量パーセント〜約１２重量％、たとえば、約１０重量％）のシクロデキストリン、たとえば、ＨＰｂＣＤとを含むことができる。
【０１６７】
本開示は、部分的には、再構成時の大きな凝集体の量を最小限に抑えた凍結乾燥医薬組成物に関する。かかる大きな凝集体は、約０．５μｍ超、約１μｍ超、または約１０μｍ超のサイズを有することができるものであり、再構成溶液では望ましくないものとすることができる。凝集体サイズは、米国薬局方３２＜７８８＞（本出願をもって参照により組み込まれる）に示されるものを含めてさまざまな技術を用いて測定可能である。ＵＳＰ３２＜７８８＞に概説される試験は、光遮蔽粒子カウント試験、微視的粒子カウント試験、レーザー回折、および単一粒子光学センシングを含む。一実施形態では、所与のサンプルの粒子サイズは、レーザー回折および／または単一粒子光学センシングを用いて測定される。
【０１６８】
光遮蔽粒子カウント試験によるＵＳＰ３２＜７８８＞には、サスペンジョンの粒子サイズをサンプリングするためのガイドラインが示されている。１００ｍＬ以下の溶液では、≧１０μｍの存在する粒子の平均数が１容器当たり６０００個を超えない場合かつ≧２５μｍのものが１容器当たり６００個を超えない場合、調製物は試験に適合する。
【０１６９】
ＵＳＰ３２＜７８８＞に概説されるように、微視的粒子カウント試験には、接眼マイクロメーターを有する１００±１０×の倍率に調整された双眼顕微鏡を用いて粒子量を決定するためのガイドラインが示されている。接眼マイクロメーターは、１００×の倍率で見たときに１０μｍおよび２５μｍを表す黒色参照円を有する四分区画に分割された円からなる円径グラティキュールである。線形スケールはグラティキュールの下に提供される。１０μｍおよび２５μｍを基準にした粒子数は、視覚的に計算される。１００ｍＬ以下の溶液では、≧１０μｍの存在する粒子の平均数が１容器当たり３０００個を超えない場合かつ≧２５μｍのものが１容器当たり３００個を超えない場合、調製物は試験に適合する。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、開示された組成物の再構成時の１０ｍＬの水性サンプルは、１０ミクロン以上のサイズを有する粒子が１ｍｌ当たり６００個未満であり、かつ／または２５ミクロン以上のサイズを有する粒子が１ｍｌ当たり６０個未満である。
【０１７１】
動的光散乱（ＤＬＳ）を用いて粒子サイズを測定することができるが、この技術はブラウン運動に基づくものなので、いくつかのより大きな粒子を検出できないおそれがある。レーザー回折は、粒子と懸濁媒体との屈折率差に基づくものである。この技術は、サブミクロン〜ミリメートルの範囲で粒子を検出が可能である。比較的少量（たとえば約１〜５重量％）のより大きな粒子をナノ粒子サスペンジョンで決定可能である。単一粒子光学センシング（ＳＰＯＳ）では、希釈サスペンジョンの光遮蔽を用いて約０．５μｍの個別粒子をカウントする。測定サンプルの粒子濃度が分かれば、凝集体の重量パーセントまたは凝集体の濃度（粒子／ｍＬ）の計算が可能である。
【０１７２】
凝集体の形成は、粒子の表面の脱水に起因して凍結乾燥時に起こりうる。この脱水は、凍結乾燥前のサスペンジョンで二糖などの凍結乾燥保護剤により回避可能である。好適な二糖としては、スクロース、ラクツロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、またはセロビオース、および／またはそれらの混合物が挙げられる。他の意図される二糖としては、コージビオース、ニゲロース、イソマルトース、β，β−トレハロース、α，β−トレハロース、ソホロース、ラミナリビオース、ゲンチオビオース、ツラノース、マルツロース、パラチノース、ゲンチオビウロース、マンノビオース、メリビオース、メリビウロース、ルチノース、ルチヌロース、およびキシロビオースが挙げられる。再構成は、出発サスペンジョンと比較したときに等価なＤＬＳサイズ分布を示す。しかし、レーザー回折によりいくつかの再構成溶液で＞１０μｍのサイズの粒子を検出可能である。さらにまた、ＳＰＯＳによりＦＤＡのガイドライン（＞１０μｍの粒子について１０4〜１０5粒子／ｍＬ）の濃度を超える濃度で＞１０μｍのサイズの粒子を検出することができる。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、スクロース、トレハロース、それらの混合物などの糖への追加の凍結乾燥保護剤として、１種以上のイオン性ハロゲン化物塩を使用することができる。糖は、二糖、単糖、三糖、および／または多糖を含むことができるとともに、他の賦形剤、たとえば、グリセロールおよび／または界面活性剤を含むことができる。任意選択で、追加の凍結乾燥保護剤としてシクロデキストリンを含むことができる。シクロデキストリンは、イオン性ハロゲン化物塩の代わりに添加することができる。他の選択肢として、シクロデキストリンは、イオン性ハロゲン化物塩に加えて添加することができる。
【０１７４】
好適なイオン性ハロゲン化物塩としては、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、塩化亜鉛、またはそれらの混合物が挙げることができる。追加の好適なイオン性ハロゲン化物塩としては、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化アンモニウム、臭化ナトリウム、臭化カルシウム、臭化亜鉛、臭化カリウム、臭化マグネシウム、臭化アンモニウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カルシウム、ヨウ化亜鉛、ヨウ化カリウム、ヨウ化マグネシウム、またはヨウ化アンモニウム、および／またはそれらの混合物が挙げられる。一実施形態では、約１〜約１５重量パーセントのスクロースをイオン性ハロゲン化物塩と共に使用することができる。一実施形態では、凍結乾燥医薬組成物は、約１０〜約１００ｍＭの塩化ナトリウムを含むことができる。他の実施形態では、凍結乾燥医薬組成物は、約１００〜約５００ｍＭの塩化カルシウムや塩化亜鉛などの２価イオン性塩化物を含むことができる。さらに他の実施形態では、凍結乾燥されるサスペンジョンは、シクロデキストリンをさらに含むことができる。たとえば、約１〜約２５重量パーセントのシクロデキストリンを使用することができる。
【０１７５】
好適なシクロデキストリンとしては、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、またはそれらの混合物が挙げることができる。本明細書に開示された組成物での使用が意図される例示的なシクロデキストリンとしては、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰｂＣＤ）、ヒドロキシエチル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、メチル−β−シクロデキストリン、ジメチル−β−シクロデキストリン、カルボキシメチル−β−シクロデキストリン、カルボキシメチルエチル−β−シクロデキストリン、ジエチル−β−シクロデキストリン、トリ−Ｏ−アルキル−β−シクロデキストリン、グルコシル−β−シクロデキストリン、およびマルトシル−β−シクロデキストリンが挙げられる。一実施形態では、約１〜約２５重量パーセントのトレハロース（たとえば、約１０重量％〜約１５重量％、たとえば、５〜約２０重量％）をシクロデキストリンと共に使用することができる。一実施形態では、凍結乾燥医薬組成物は、約１〜約２５重量パーセントのβ−シクロデキストリンを含むことができる。例示的な組成物は、ＰＬＡ−ＰＥＧを含むナノ粒子と、活性剤／治療剤と、約４％〜約６％（たとえば、約５重量％）のスクロースと、約８〜約１２重量パーセント（たとえば、約１０重量％）のＨＰｂＣＤとを含むことができる。
【０１７６】
一態様では、開示されたナノ粒子を含む凍結乾燥医薬組成物が提供される。約１００ｍＬ以下の水性媒体中に約５０ｍｇ／ｍＬのナノ粒子濃度で凍結乾燥医薬組成物を再構成すると、非経口投与に好適な再構成された組成物は、６０００個未満、たとえば３０００個未満の１０ミクロン以上のマイクロ粒子を含み、かつ／または６００個未満、たとえば３００個未満の２５ミクロン以上のマイクロ粒子を含む。
【０１７７】
マイクロ粒子の数は、光遮蔽粒子カウント試験によるＵＳＰ３２＜７８８＞、微視的粒子カウント試験によるＵＳＰ３２＜７８８＞、レーザー回折、単一粒子光学センシングなどの手段により決定可能である。
【０１７８】
態様では、疎水性ポリマーセグメントと親水性ポリマーセグメントとを有するコポリマーをそれぞれ含む複数の治療用粒子と、活性剤と、糖と、シクロデキストリンとを含む、再構成時に非経口使用に好適な医薬組成物が提供される。
【０１７９】
たとえば、コポリマーは、ポリ（乳）酸−ブロック−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーとすることができる。再構成時、１００ｍＬの水性サンプルは、６０００個未満の１０ミクロン以上のサイズを有する粒子を含み、かつ６００個未満の２５ミクロン以上のサイズを有する粒子を含む。
【０１８０】
二糖とイオン性ハロゲン化物塩とを添加する工程は、約５〜約１５重量パーセントのスクロースまたは約５〜約２０重量パーセントのトレハロース（たとえば、約１０〜約２０重量パーセントのトレハロース）と、約１０〜約５００ｍＭのイオン性ハロゲン化物塩とを添加する工程を含むことができる。イオン性ハロゲン化物塩は、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、および塩化亜鉛から選択することができるか、またはそれらの混合物とすることができる。実施形態では、約１〜約２５重量パーセントのシクロデキストリンも添加される。
【０１８１】
他の実施形態では、二糖とシクロデキストリンとを添加する工程は、約５〜約１５重量パーセントのスクロースまたは約５〜約２０重量パーセントのトレハロース（たとえば、約１０〜約２０重量パーセントのトレハロース）と、約１〜約２５重量パーセントのシクロデキストリンとを添加する工程を含むことができる。実施形態では、約１０〜約１５重量パーセントのシクロデキストリンが添加される。シクロデキストリンは、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリンン、またはそれらの混合物から選択することができる。
【０１８２】
他の態様では、再構成時のナノ粒子の凝集を防止するために凍結乾燥製剤に糖および塩を添加する工程を含む、医薬ナノ粒子組成物中の粒子の実質的な凝集を防止する方法が提供される。実施形態では、シクロデキストリンもまた凍結乾燥製剤に添加される。さらに他の態様では、再構成時のナノ粒子の凝集を防止するために凍結乾燥製剤に糖およびシクロデキストリンを添加する工程を含む、医薬ナノ粒子組成物中の粒子の実質的な凝集を防止する方法が提供される。意図される凍結乾燥組成物は、約４０ｍｇ／ｍＬ超の治療用粒子濃度を有することができる。非経口投与に好適な製剤は、１０ｍＬの用量で約６００個未満の１０ミクロン超のサイズを有する粒子を有することができる。凍結乾燥は、約−４０℃超またはたとえば約−３０℃未満の温度で組成物を凍結させて凍結組成物を形成する工程と、凍結乾燥組成物を乾燥させて凍結組成物を形成する工程とを含むことができる。乾燥工程は、約−２５〜約−３４℃または約−３０〜約〜−３４℃の温度で約５０ｍＴｏｒｒで行うことができる。
【０１８３】
治療方法
いくつかの実施形態では、標的化ナノ粒子は、疾患、障害、および／または病態を治療、軽減、改善、緩和したり、その発症を遅延したり、その進行を阻害したり、その重症度を低減したり、かつ／またはその１つ以上の症状もしくは特徴の出現を低減したりするために使用することができる。いくつかの実施形態では、標的化ナノ粒子は、固形腫瘍、たとえば、癌および／または癌細胞を治療するために使用することができる。ある特定の実施形態では、標的化ナノ粒子は、必要とされる被験者において、癌細胞の表面上で、または前立腺固形腫瘍もしくは非前立腺固形腫瘍の血管新生を含めて腫瘍血管新生で、ＰＳＭＡが発現される任意の癌を治療するために使用することができる。ＰＳＭＡ関連適応症の例としては、限定されるものではないが、前立腺癌、乳癌、非小細胞肺癌、結腸直腸癌、および膠芽細胞腫が挙げられる。
【０１８４】
「癌」という用語は、前悪性癌さらには悪性癌を含む。癌としては、限定されるものではないが、血液癌（たとえば、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、フィラデルフィア染色体陽性急性リンパ芽球性白血病、マントル細胞性リンパ腫）、前立腺癌、胃癌、結腸直腸癌、皮膚癌、たとえば、黒色腫または基底細胞癌、肺癌（たとえば、非小細胞肺癌）、乳癌、頭頸部癌、気管支癌、膵臓癌、膀胱癌、脳癌または中枢神経系癌、末梢神経系癌、食道癌、口腔癌または咽頭癌、肝臓癌（たとえば、肝細胞癌）、腎臓癌（たとえば、腎細胞癌）、精巣癌、胆道癌、小腸癌または虫垂癌、胃腸間質腫瘍、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫、血液学的組織癌などが挙げられる。「癌細胞」は、腫瘍の形態とすることができるか（すなわち、固形腫瘍）、被験者内に単独で存在しうるか（たとえば、白血病細胞）、または癌に由来する細胞系とすることができる。
【０１８５】
癌はさまざまな身体症状に関連しうる。癌の症状は、一般に腫瘍のタイプおよび位置に依存する。たとえば、肺癌は、咳、息切れ、および胸痛を引き起こすことができるが、結腸癌は、多くの場合、下痢、便秘、および糞便中の血液を引き起こす。しかし、わずかではあるが例を挙げると、次の症状、すなわち、発熱、悪寒、寝汗、咳、呼吸困難、体重減少、食欲減退、拒食症、悪心、嘔吐、下痢、貧血、黄疸、肝腫大、喀血、疲労、倦怠感、認知機能不全、鬱病、ホルモン障害、好中球減少症、疼痛、非治癒性潰瘍、リンパ節腫大、末梢神経症、および性機能不全は、多くの場合、一般に多くの癌に関連する。
【０１８６】
一態様では、癌（たとえば白血病）の治療方法が提供される。いくつかの実施形態では、癌の治療は、所望の結果を達成するのに必要な量および時間で、必要とされる被験者に治療上有効量の本発明の標的化粒子を投与することを含む。ある特定の実施形態では、本発明の標的化粒子の「治療上有効量」は、癌を治療、軽減、改善、緩和したり、その発症を遅延したり、その進行を阻害したり、その重症度を低減したり、その１つ以上の症状および／または特徴の出現を低減したりするのに有効な量である。
【０１８７】
一態様では、癌（たとえば白血病）に罹患している被験者に本発明の組成物を投与する方法が提供される。いくつかの実施形態では、粒子は、所望の結果（すなわち、癌の治療）を達成するのに必要な量および時間で被験者に投与することができる。ある特定の実施形態では、本発明の標的化粒子の「治療上有効量」は、癌を治療、軽減、改善、緩和したり、その発症を遅延したり、その進行を阻害したり、その重症度を低減したり、その１つ以上の症状および／または特徴の出現を低減したりするのに有効な量である。
【０１８８】
本発明の治療プロトコルは、健常者（すなわち、癌の症状をなんら示さない被験者および／または癌と診断されていない被験者）に治療上有効量の本発明の標的化粒子を投与することを含む。たとえば、健常者は、癌の発生前および／または癌の症状の出現前に本発明の標的化粒子で「免疫」されうる。リスク個体（たとえば、癌の家族歴を有する患者、癌の発生に関連する１つ以上の遺伝子突然変異を有する患者、癌の発生に関連する遺伝子多型を有する患者、癌の発生に関連するウイルスが感染した患者、癌の発生に関連する嗜癖および／または生活習慣を有する患者など）は、癌の症状の出現と実質的に同時に（たとえば、その４８時間以内、２４時間以内、または１２時間以内）治療可能である。当然ながら、癌を有することが知られている個体は、本発明の治療をいつでも受けることができる。
【０１８９】
他の実施形態では、開示されたナノ粒子は、癌細胞、たとえば、骨髄性白血病癌細胞の成長を阻害するために使用可能である。本明細書で用いられる場合、「癌細胞の成長を阻害する」という用語は、癌細胞の成長の速度が未治療の対照癌細胞の成長の観測速度または予測速度と比較して低減されるように、癌細胞の増殖および／または遊走の速度をいくらかでも減速したり、癌細胞の増殖および／または遊走を停止させたり、または癌細胞を死滅させたりすることを意味する。「成長を阻害する」という用語はまた、癌細胞または腫瘍のサイズの減少または消失、さらにはその転移能の低減も意味する。好ましくは、細胞レベルでのかかる阻害は、患者において癌のサイズの低減、成長の抑止、侵攻性の低減、または転移の防止もしくは阻害をもたすかもしれない。当業者であれば、癌細胞の成長が阻害されるかをさまざまな好適な指標のいずれかにより容易に決定可能である。
【０１９０】
癌細胞の成長の阻害は、たとえば、細胞周期の特定期での癌細胞の停止により、たとえば、細胞周期のＧ２／Ｍ期での停止により、実証することができる。癌細胞の成長の阻害はまた、癌細胞または腫瘍のサイズの直接的または間接的な測定により実証可能である。ヒト癌患者では、かかる測定は、一般に、磁気共鳴イメージング、コンピューター横断断層撮影、Ｘ線などの周知のイメージング法を用いて行われる。癌細胞の成長はまた、癌細胞の成長に関連する循環癌胎児性抗原、前立腺特異的抗原、または他の癌特異的抗原のレベルを決定することなどにより、間接的に決定可能である。癌の成長の阻害はまた、一般に、被験者の長期間生存および／または健康増進および幸福に関連する。
【０１９１】
また、本明細書には、活性剤を含む本明細書に開示されたナノ粒子を患者に投与する方法も提供される。患者に投与すると、かかるナノ粒子は、作用剤単独（すなわち、開示されたナノ粒子としてでない）の投与と比較して、実質的に分布容積を低減し、かつ／または遊離Ｃmaxを実質的に低減する。
【０１９２】
「薬剤担持ポリマーナノ粒子ならびにその製造方法および使用方法」という名称で２０１２年６月２６日に発行された米国特許第８，２０６，７４７号明細書は、本出願をもって参照によりその全体が組み込まれる。
【実施例】
【０１９３】
本発明について現時点では一般的に説明されているが、以下の実施例を参照すれば、より容易に理解されよう。これらの実施例は、ある特定の態様および実施形態を単に例示するために含まれているにすぎず、本発明をなんら限定することを意図したものではない。
【０１９４】
実施例１：スニチニブ含有ナノ粒子の調製
有機相の調製。（工程１、ポリマー溶液の調製）第１の７ｍＬガラスバイアルにポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）ジブロックコポリマー（ＰＬＡ−ＰＥＧ）とエチルアセテートとを添加する。ポリマーが溶解するまで混合物をボルテックスする。（工程２、薬剤溶液の調製）スニチニブの入った第２の７ｍＬガラスバイアルに適切量のベンジルアルコールを添加し、スニチニブが溶解するまで混合物をボルテックスする。他の選択肢として、適切量のオレイン酸をベンジルアルコールに添加して３〜１５％（ｗ／ｗ）の溶液を作製し、次いで、これをスニチニブの入った第２の７ｍＬガラスバイアルに添加し、スニチニブが溶解するまで混合物をボルテックスする。（工程３）ポリマー溶液と薬剤溶液とを組み合わせ、ナノ粒子の製剤前に数分間ボルテックスする。
【０１９５】
水性相の調製。（０．０７％のナトリウムコレート溶液の場合）１Ｌボトルにナトリウムコレート（ＳＣ）（０．７）とＤＩ水（９５９．３ｇ）とを添加する。溶解するまで混合物を撹拌プレート上で撹拌する。ナトリウムコレート／水にベンジルアルコール（４０ｇ）を添加し、溶解するまで混合物を撹拌プレート上で撹拌する。（０．２５％のナトリウムコレート溶液の場合）１Ｌボトルにナトリウムコレート（ＳＣ）（２．５ｇ）とＤＩ水（９５７．５ｇ）とを添加する。溶解するまで混合物を撹拌プレート上で撹拌する。ナトリウムコレート／水にベンジルアルコール（４０ｇ）を添加し、溶解するまで混合物を撹拌プレート上で撹拌する。
【０１９６】
エマルジョンの形成。水性相対有機相の比は５：１である。有機相を水性相に注加し、ハンドホモジナイザーを用いて混合物を室温で１０秒間ホモジナイズすることにより粗エマルジョンを形成する。粗エマルジョンをゲージで４０〜４５ｐｓｉの圧力に設定された高圧ホモジナイザー（１１０Ｓ）に供給して慎重に１回通過させることによりナノエマルジョン（微細エマルジョン）を形成する。
【０１９７】
ナノ粒子の形成。撹拌プレート上で撹拌しながらナノエマルジョンを５℃未満のクエンチ（Ｄ．Ｉ．水）に注加することによりクエンチ相を形成する。クエンチ対エマルジョンの比は８：１である。１５０：１のＴｗｅｅｎ８０対薬剤の比でクエンチ相に水中Ｔｗｅｅｎ８０（３５％（ｗ／ｗ））を添加する。
【０１９８】
タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）によるナノ粒子の濃縮。３００ｋＤａ  Ｐａｌｌカセット（２メンブレン）を用いてＴＦＦによりクエンチ相を濃縮して約１００ｍＬのナノ粒子濃縮物を形成する。約２０透析体積（２Ｌ）の冷ＤＩ水を用いてナノ粒子濃縮物を透析濾過（ダイア  フィルトレーション）する。透析濾過（ダイア  フィルトレーション）されたナノ粒子濃縮物の体積は最小体積に低減される。冷水（１００ｍＬ）を容器に添加し、ポンプ操作でメンブレンに通して濯ぎ、スラリーを形成する。スラリー（１００〜１８０ｍＬ）をガラスバイアルに捕集する。より小さいＴＦＦ装置を用いてスラリーをさらに濃縮し、最終体積１０〜２０ｍＬの最終スラリーにする。
【０１９９】
未濾過最終スラリーの固形分濃度の決定。風袋測定済み２０ｍＬシンチレーションバイアルに一定量の最終スラリーを添加し、凍結乾燥機／オーブン上で真空乾燥させる。乾燥スラリーの体積中のナノ粒子の重量を決定する。最終スラリーに濃縮スクロース（０．６６６ｇ／ｇ）を添加して１０％のスクロースを達する。
【０２００】
０．４５μｍの濾過最終スラリーの固形分濃度の決定。スクロースの添加前に最終スラリーサンプルの一部を０．４５μｍシリンジフィルターに通して濾過する。風袋測定済み２０ｍＬシンチレーションバイアルに一定量の濾過サンプルを添加し、凍結乾燥機／オーブンを用いて真空乾燥させる。スクロースを含む未濾過最終スラリーの残りのサンプルを凍結させる。
【０２０１】
オレイン酸ドーピングを用いてまたは用いずに１１種のスニチニブ製剤を作製した。オレイン酸ドーピングを用いずに作製した製剤の理論負荷、固形分濃度、観測負荷、および粒子サイズを表１に列挙する。
【０２０２】
0006573895.tif 000006
【０２０３】
表１から分かるように、水を含むまたは含まない（プレーン１６／５ＰＬＡ／ＰＥＧ）１６／５ＰＬＡ／ＰＥＧ製剤の場合、ナノ粒子内の薬剤負荷は３％未満であった。オレイン酸ドーピングを用いて作製された製剤のスニチニブ溶解に使用したオレイン酸濃度、理論負荷、固形分濃度、観測負荷、および粒子サイズを表２に列挙する。
【０２０４】
0006573895.tif 000007
【０２０５】
表２から分かるように、オレイン酸を有機溶媒中のスニチニブに添加した場合、ナノ粒子中のスニチニブ負荷は、製剤で使用したオレイン酸の濃度に依存して１０％超まで有意に増加した。オレイン酸を用いることなく作製された製剤が３％未満の薬剤負荷を有していたことと比較して（表１参照）、オレイン酸を含有する製剤で観測される薬剤負荷の増加は有意であった。
【０２０６】
図３は、オレイン酸ドーピングを用いたまたは用いないスニチニブ含有ナノ粒子のインビトロ放出プロファイルを示している。オレイン酸ドーピングを用いたナノ粒子は、オレイン酸を用いずに作製されスニチニブナノ粒子に類似した放出プロファイルを示した。したがって、特定の固形分濃度では、オレイン酸は、オレイン酸を用いずに作製された製剤と対比してスニチニブナノ粒子の放出プロファイルに有意に影響を及ぼさない。
【０２０７】
実施例２：イマチニブ含有ナノ粒子の調製
有機相の調製。（工程１、ポリマー溶液の調製）第１の７ｍＬガラスバイアルにポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）ジブロックコポリマー（ＰＬＡ−ＰＥＧ）とエチルアセテートとを添加する。ポリマーが溶解するまで混合物をボルテックスする。（工程２、薬剤溶液の調製）適切量のベンジルアルコールをイマチニブの入った第２の７ｍＬガラスバイアルに添加し、イマチニブが溶解するまで混合物をボルテックスする。他の選択肢として、適切量のオレイン酸をベンジルアルコールに添加して９％（ｗ／ｗ）の溶液を作製し、次いで、これをイマチニブの入った第２の７ｍＬガラスバイアルに添加し、イマチニブが溶解するまで混合物をボルテックスする。（工程３）ポリマー溶液と薬剤溶液とを組み合わせ、ナノ粒子の製剤前に約１０〜３０秒間ボルテックスする。
【０２０８】
水性相の調製。ＤＩ水中にナトリウムコレートを溶解させることにより、水中の０．０５〜０．５％のナトリウムコレート／４％のベンジルアルコール溶液（ｗ／ｗ）を調整し、次いで、水性ナトリウムコレート溶液にベンジルアルコールを溶解させる。
【０２０９】
エマルジョンの形成。水性相対有機相の比は５：１である。有機相を水性相に注加し、ハンドホモジナイザーを用いて混合物を室温で５〜１０秒間ホモジナイズすることにより粗エマルジョンを形成する。粗エマルジョンをゲージで４４〜５０ｐｓｉの圧力に設定された高圧ホモジナイザー（Ｍ１１０Ｓ）に供給して慎重に１回通過させることによりナノエマルジョン（微細エマルジョン）を形成する。
【０２１０】
ナノ粒子の形成。撹拌プレート上で撹拌しながらナノエマルジョンを５℃未満のクエンチ（Ｄ．Ｉ．水）に注加することによりクエンチ相を形成する。クエンチ対エマルジョンの比は１０：１である。オレイン酸含有製剤では１５０：１のＴｗｅｅｎ８０対薬剤の比でおよびオレイン酸を含まない製剤では５０：１のＴｗｅｅｎ８０対薬剤の比で、水中のＴｗｅｅｎ８０（３５％（ｗ／ｗ））をクエンチ相に添加する。
【０２１１】
タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）によるナノ粒子の濃縮。３００ｋＤａ  Ｐａｌｌカセット（２メンブレン）を用いてＴＦＦによりクエンチ相を濃縮することにより約２００ｍＬのナノ粒子濃縮物を形成する。ナノ粒子濃縮物は、冷ＤＩ水（５℃未満）の約２０透析体積（４Ｌ）を有して透析濾過（ダイア  フィルトレーション）される。透析濾過（ダイア  フィルトレーション）されたナノ粒子濃縮物の体積は最小体積に低減される。冷水（３０〜７５ｍＬ）を容器に添加し、ポンプ操作でメンブレンに通して濯ぎ、最終スラリーを形成する。最終スラリー（５０〜１００ｍＬ）をガラスバイアルに捕集する。
【０２１２】
最終スラリーに濃縮スクロース（０．６６６ｇ／ｇ）を添加して１０％のスクロースを達成し、次いで、これを凍結して−２０℃で貯蔵する。
【０２１３】
オレイン酸ドーピングを用いてまたは用いずに１１種のイマチニブ製剤を作製した。オレイン酸ドーピングを用いずに作製された製剤の理論負荷、固形分濃度、観測負荷、粒子サイズ、ナトリウムコレート（ＳＣ）の濃度、ホモジナイザー通過回数、および対応する圧力を表３に列挙する。
【０２１４】
0006573895.tif 000008
【０２１５】
表３から分かるように、４．７％および１５％の固形分でオレイン酸を用いずに調製された製剤は、それぞれ約０．４〜１％および約７〜８％の薬剤負荷をもたらした。固形分濃度の増加は薬剤負荷の増加をもたらした。
【０２１６】
オレイン酸ドーピングを用いて作製された製剤の理論負荷、固形分濃度、観測負荷、粒子サイズ、ナトリウムコレート（ＳＣ）の濃度、ホモジナイザー通過回数、および対応する圧力を表４に列挙する。
【０２１７】
0006573895.tif 000009
【０２１８】
表４から分かるように、オレイン酸を用いて調製された製剤は、試験したすべての固形分濃度およびオレイン酸対薬剤のモル比で約６〜９％の薬剤負荷をもたらした。
【０２１９】
図４は、さまざまな固形分濃度を有しかつオレイン酸ドーピングを用いないイマチニブ含有ナノ粒子のインビトロ放出プロファイルを示している。インビトロ放出は、より高い固形分濃度で遅くなるが（グラフ上の実線）、より低い固形分でのより大きな粒子サイズもまた、放出を遅くする（グラフ上の点線）。
【０２２０】
図５は、オレイン酸を用いて調製されたイマチニブ製剤のインビトロ放出プロファイルを示している。インビトロ放出プロファイルは類似しており、４時間で約６８〜７５％の範囲内の薬剤が放出される。
【０２２１】
図６に示されるように、酸を含まない製剤の放出プロファイルとオレイン酸を含む製剤の放出プロファイルと比較した場合、より高い固形分濃度（たとえば、固形分１５％）を含みかつ酸を用いない製剤の放出プロファイルは類似していることが観測される。しかし、より低い固形分濃度（たとえば、４．７％）では、オレイン酸を含む製剤は、オレイン酸を含まない製剤と比較してより遅い放出プロファイルを示す。したがって、製剤へのオレイン酸の組込みは、所与の固形分濃度でオレイン酸を含まない製剤と比較して、製剤の放出プロファイルに影響を及ぼすことができる。
【０２２２】
実施例３：ダサチニブ含有ナノ粒子の調製−乳化プロセス１
有機相の調製。２０ｍＬガラスバイアルにポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）ジブロックコポリマー（ＰＬＡ−ＰＥＧ）（９５０ｍｇ）とベンジルアルコール（９ｇ）とを添加する。混合物を一晩ボルテックスしてポリマー−ＢＡ溶液を与える。ナノ粒子の製剤前に５０ｍｇのダサチニブをポリマー−ＢＡ溶液に添加し、ダサチニブが溶解するまで混合物をボルテックスする。
【０２２３】
水性相の調製。１Ｌボトルにナトリウムコレート（ＳＣ）（４．７５ｇ）とＤＩ水（９５５．２５ｇ）とを添加する。溶解するまで混合物を撹拌プレート上で撹拌する。ナトリウムコレート／水にベンジルアルコール（４０ｇ）を添加し、溶解するまで混合物を撹拌プレート上で撹拌する。
【０２２４】
エマルジョンの形成。水性相対有機相の比は５：１である。有機相を水性相に注加し、ハンドホモジナイザーを用いて混合物を室温で１０秒間ホモジナイズすることにより粗エマルジョンを形成する。粗エマルジョンをゲージで４６ｐｓｉの圧力に設定された高圧ホモジナイザー（１１０Ｓ）に供給して個別に２回通過させることによりナノエマルジョン（微細エマルジョン）を形成する。（注：１回目の通過後、５％のＳＣを微細エマルジョンにドープして０．５％の最終ＳＣ濃度を達成する。）
【０２２５】
ナノ粒子の形成。撹拌プレート上で撹拌しながらナノエマルジョンを５℃未満のクエンチ（Ｄ．Ｉ．水）に注加することによりクエンチ相を形成する。クエンチ対エマルジョンの比は１０：１である。１００：１のＴｗｅｅｎ８０対薬剤の比でクエンチ相に水中Ｔｗｅｅｎ８０（３５％（ｗ／ｗ））を添加する。
【０２２６】
タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）によるナノ粒子の濃縮。３００ｋＤａ  Ｐａｌｌカセット（２メンブレン）を用いてＴＦＦによりクエンチ相を濃縮することにより約２００ｍＬのナノ粒子濃縮物を形成する。約２０透析体積（４Ｌ）の冷ＤＩ水を用いてナノ粒子濃縮物を透析濾過（ダイア  フィルトレーション）する。透析濾過（ダイア  フィルトレーション）されたナノ粒子濃縮物の体積は最小体積に低減される。冷水（１００ｍＬ）を容器に添加し、ポンプ操作でメンブレンに通して濯ぎ、スラリーを形成する。最終スラリー（約１００ｍＬ）をガラスバイアルに捕集する。
【０２２７】
未濾過最終スラリーの固形分濃度の決定。風袋測定済み２０ｍＬシンチレーションバイアルに一定量の最終スラリーを添加し、凍結乾燥機／オーブン上で真空乾燥させる。乾燥スラリーの体積中のナノ粒子の重量を決定する。最終スラリーに濃縮スクロース（０．６６６ｇ／ｇ）を添加して１０％のスクロースを達する。
【０２２８】
０．４５μｍの濾過最終スラリーの固形分濃度の決定。スクロースの添加前に最終スラリーサンプルの一部を０．４５μｍシリンジフィルターに通して濾過する。風袋測定済み２０ｍＬシンチレーションバイアルに一定量の濾過サンプルを添加し、凍結乾燥機／オーブンを用いて真空乾燥させる。スクロースを含む未濾過最終スラリーの残りのサンプルを凍結させる。
【０２２９】
実施例４：ダサチニブ含有ナノ粒子の調製−乳化プロセス２
有機相の調製。第１の２０ｍＬガラスバイアルにポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）ジブロックコポリマー（ＰＬＡ−ＰＥＧ）（８９０ｍｇ）とエチルアセテート（１６．２２ｇ）とを添加する。混合物を一晩ボルテックスしてポリマー−ＥＡ溶液を与える。第２の２０ｍＬガラスバイアルに１１０ｍｇのダサチニブと４．０６ｇの新たに調製されたベンジルアルコール（ＢＡ）中９％のオレイン酸を添加し、混合物を一晩ボルテックスして薬剤−酸−ＢＡ溶液を与える。ナノ粒子の製剤前にポリマー−ＥＡ溶液を薬剤−酸−ＢＡ溶液に添加し、混合物をボルテックスして有機相を形成する。
【０２３０】
水性相の調製。１Ｌボトルにナトリウムコレート（ＳＣ）（１．２ｇ）とＤＩ水（９５５ｇ）とを添加する。溶解するまで混合物を撹拌プレート上で撹拌する。ナトリウムコレート／水にベンジルアルコール（４０ｇ）を添加し、溶解するまで混合物を撹拌プレート上で撹拌する。
【０２３１】
エマルジョンの形成。水性相対有機相の比は５：１である。有機相を水性相に注加し、ハンドホモジナイザーを用いて混合物を室温で１０秒間ホモジナイズすることにより粗エマルジョンを形成する。粗エマルジョンをゲージで４６ｐｓｉの圧力に設定された高圧ホモジナイザー（１１０Ｓ）に供給して１回通過させることによりナノエマルジョン（微細エマルジョン）を形成する。
【０２３２】
ナノ粒子の形成。撹拌プレート上で撹拌しながらナノエマルジョンを５℃未満のクエンチ（Ｄ．Ｉ．水）に注加することによりクエンチ相を形成する。クエンチ対エマルジョンの比は１０：１である。１００：１のＴｗｅｅｎ８０対薬剤の比でクエンチ相に水中Ｔｗｅｅｎ８０（３５％（ｗ／ｗ））を添加する。
【０２３３】
タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）によるナノ粒子の濃縮。３００ｋＤａ  Ｐａｌｌカセット（２メンブレン）を用いてＴＦＦによりクエンチ相を濃縮することにより約２００ｍＬのナノ粒子濃縮物を形成する。約２０透析体積（４Ｌ）の冷ＤＩ水を用いてナノ粒子濃縮物を透析濾過する。透析濾過（ダイア  フィルトレーション）されたナノ粒子濃縮物の体積は最小体積に低減される。冷水（１００ｍＬ）を容器に添加し、ポンプ操作でメンブレンに通して濯ぎ、スラリーを形成する。最終スラリー（約１００ｍＬ）をガラスバイアルに捕集する。
【０２３４】
未濾過最終スラリーの固形分濃度の決定。風袋測定済み２０ｍＬシンチレーションバイアルに一定量の最終スラリーを添加し、凍結乾燥機／オーブン上で真空乾燥させる。乾燥スラリーの体積中のナノ粒子の重量を決定する。最終スラリーに濃縮スクロース（０．６６６ｇ／ｇ）を添加して１０％のスクロースを達する。
【０２３５】
０．４５μｍの濾過最終スラリーの固形分濃度の決定。スクロースの添加前に最終スラリーサンプルの一部を０．４５μｍシリンジフィルターに通して濾過する。風袋測定済み２０ｍＬシンチレーションバイアルに一定量の濾過サンプルを添加し、凍結乾燥機／オーブンを用いて真空乾燥させる。スクロースを含む未濾過最終スラリーの残りのサンプルを凍結させる。
【０２３６】
実施例５：オレイン酸／ベンジルアルコール溶液へのダサチニブの溶解度
表５に示されるように、ベンジルアルコールにオレイン酸をドープするとダサチニブの溶解度は約２〜３倍改善することができる。ベンジルアルコール、エチルアセテートおよびオレイン酸とベンジルアルコールとの混合物へのダサチニブの溶解度は、ＨＰＬＣを用いて定量した。
【０２３７】
0006573895.tif 000010
【０２３８】
実施例６：オレイン酸がドープされたダサチニブ含有ナノ粒子製剤
オレイン酸ドーピングを用いてまたは用いずに１１種のダサチニブ製剤を作製した。製剤条件および特徴付けを表６に提供する。ダサチニブ製剤は、オレイン酸ドーピングを用いないプレーンナノ粒子またはオレイン酸がドープされたナノ粒子として作製した。４．７％および１０％の２つの固形分濃度を使用した。プレーン製剤（ロット１７０−５１−１）では有機溶媒としてＢＡのみを使用したが、オレイン酸製剤ではすべて、有機溶媒として２０／８０ＢＡ／ＥＡ（ｗ／ｗ）混合物を使用した。乳化直前にＥＡをオレイン酸−ＢＡ混合物中にあらかじめ溶解された薬剤溶液に添加した。
【０２３９】
0006573895.tif 000011
【０２４０】
表６に示されるように、すべての製剤の粒子サイズが１００〜１３０ｎｍの範囲内に良好に制御された。類似の粒子サイズの達成を目標とする類似の条件下で、有機溶媒としてオレイン酸−ＢＡを含むロットは、オレイン酸を含まないロットよりもかなり少ないナトリウムコレーとを使用する傾向があった。いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、この結果は、エマルジョンの安定化を支援しうる脂肪酸（たとえば、オレイン酸）の部分的な界面活性剤作用によるものとすることができる。３％のオレイン酸は０．２０％の薬剤負荷を与えた。これは、対照ロット（オレイン酸を含まない製剤）の０．８７％と比較して改善されなかった。しかし、６％のオレイン酸を使用すると、４．７％の固形分および９％の理論薬剤負荷で＞１％の薬剤負荷が達成された。オレイン酸濃度をＢＡ中９％に増加させると、薬剤負荷は対照ロットの負荷の約２倍の約２％に増加された。
【０２４１】
インビトロ放出プロファイルを以下の図７および８に示した。（ダサチニブは３７℃の放出緩衝液中で２４時間後に分解したので、６時間までの放出データを報告した。）図７に示されるように、３％のオレイン酸のロットは、オレイン酸を用いずに製剤された対照ナノ粒子および６％のオレイン酸を用いて製剤されたナノ粒子と比較して、最も大きいバーストおよび最も速い放出を与えた。６％のオレイン酸のロットは、対照ナノ粒子のバーストに類似した約１０％のバーストを与えた。最も大きい薬剤負荷の２つのロット（ロット１７０−１００−３および１７０−１３９−８）は、対照ロットよりも比較的遅い放出を与え、それらの４時間累積放出は、対照ロットの６０．９９％に対してそれぞれ３４．２％および４３．５％であった。
【０２４２】
図８に示されるように、９％のオレイン酸を用いると、バーストは、＜５％まで大幅に抑制され、放出速度も遅くなった。４時間での薬剤放出は、約２９％〜約３８％の範囲内であり、６％のオレイン酸の２つの遅放ロット１７０−１００−３および１７０−１３９−８よりもわずかに遅い。
【０２４３】
以上の製剤は、薬剤負荷の改善および薬剤放出速度の低減の両方を行うＢＡ中９％のオレイン酸の能力を実証する。
【０２４４】
実施例７：コール酸がドープされたダサチニブ含有ナノ粒子製剤
コール酸がドープされた９種のダサチニブ製剤を作製した。製剤条件および特徴付けを表７に提供する。２．０および３．０％の２つの固形分濃度を使用した。製剤中の酸／薬剤モル比を変化させた。
【０２４５】
0006573895.tif 000012
【０２４６】
表７に示されるように、製剤の粒子サイズは、一般に１２０〜１５０ｎｍの範囲内に良好に制御された。３種のコール酸のそれぞれを用いて、ナノ粒子の類似の性質を得た。しかし、コール酸の代わりにリトコール酸誘導体を用いると、ナノ粒子の類似の性質を得るのに使用される酸を１／４に減らすことが可能であった。６％のデオキシコール酸を使用すると、さまざまな条件下で良好に制御された粒子サイズおよび薬剤負荷が得られた。
【０２４７】
インビトロ放出プロファイルを表８および図９に示す。（ダサチニブは３７℃の放出緩衝液中で２４時間後に分解したので、６時間までの放出データを報告した。）表８および図９に示されるように、３％のリトコール酸を用いると、バーストは＜７％であり、放出速度は良好に制御された。４時間薬剤放出は約２２％〜約３４％の範囲内であった。水性相で最大量のナトリウムコレートを用いた１４５−５４−３製剤は、最小量のバースト放出（＜５％）を生じた。１４５−５４−３Ｒおよび１４５−１０７−３製剤は、より高いバースト放出を有し、かつ全体的にわずかに速いダサチニブの長期放出を有していた。
【０２４８】
0006573895.tif 000013
【０２４９】
以上の製剤は、酸を用いずに調製したナノ粒子と比較して、薬剤負荷の改善および薬剤放出速度の低減の両方を行うＢＡ中３％のオレイン酸の能力を実証する。
【０２５０】
実施例８：ダサチニブ含有ナノ粒子の調製−乳化プロセス３
緩衝液の調製。１０００ｍＬの０．５Ｍリン酸（ｐＫa2＝７．２）緩衝液：ｐＨ＝６．５を作製するために、約９００ｍＬの純水中に６８．９９５ｇのＮａＨ2ＰＯ4Ｈ2Ｏ（Ｍr＝１３７．９９）を溶解する。必要に応じてＮａＯＨ強塩基を用いて２５℃の実験室温度でｐＨ６．４９に調整する。純水を用いて体積を１０００ｍＬにする。１０００ｍＬの０．３７Ｍリン酸（ｐＫa2＝７．２）緩衝液：ｐＨ＝６．５を作製するために、約９００ｍＬの純水中に４６．９２ｇのＮａＨ2ＰＯ4Ｈ2Ｏ（Ｍr＝１３７．９９）を溶解する。必要に応じてＮａＯＨ強塩基を用いて２５℃の実験室温度でｐＨ６．４９に調整する。純水を用いて体積を１０００ｍＬにする。１０００ｍＬの０．１７Ｍリン酸（ｐＫa2＝７．２）緩衝液：ｐＨ＝６．５を作製するために、約９００ｍＬの純水中に２３．４６ｇのＮａＨ2ＰＯ4Ｈ2Ｏ（Ｍr＝１３７．９９）を溶解する。必要に応じてＮａＯＨ強塩基を用いて２５℃の実験室温度でｐＨ６．４９に調整する。純水を用いて体積を１０００ｍＬにする。
【０２５１】
パモ酸溶液の調製。容器内で２．９ｇのパモ酸と７．１ｇのＤＭＳＯとを混合することにより、ＤＭＳＯ中２９％（ｗ／ｗ）のパモ酸溶液を調製した。パモ酸がすべて溶解するまで、７０〜８０℃の加熱オーブン内で容器を加熱した。
【０２５２】
８％ＴＦＡ／７．５％水／８４．５％ベンジルアルコール（重量％）溶液の調製。トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（３．２ｇ）、脱イオン（ＤＩ）水（３．０ｇ）、およびベンジルアルコール（ＢＡ）（３３．８ｇ）を組み合わせて、８％ＴＦＡ／７．５％水／８４．５％ベンジルアルコール（重量％）溶液を調製した。
【０２５３】
有機相の調製。第１の２０ｍＬガラスバイアルにポリ（乳酸）−ポリ（エチレングリコール）ジブロックコポリマー（ＰＬＡ−ＰＥＧ）（７００ｍｇ）とエチルアセテートアルコール（７．５８３ｇ）とを添加する。混合物を一晩ボルテックスしてポリマー−ＥＡ溶液を与える。第２の２０ｍＬガラスバイアルに、３００ｍｇの薬剤（ダサチニブ）と、１．７３６ｇの上記の８％ＴＦＡ／７．５％水／ＢＡ溶液と、７９２ｍｇの上記の２９％パモ酸／ＤＭＳＯ溶液とを添加し、透明薬剤溶液が得られるまで混合物をボルテックスして薬剤−酸−ＢＡ溶液を与える。ナノ粒子の製剤前にポリマー−ＥＡ溶液を薬剤−酸−ＢＡ溶液に添加し、混合物をボルテックスして有機相を形成する。
【０２５４】
水性相（０．０９％のＢｒｉｊ１００、水中４％のベンジルアルコール）の調製。１ＬボトルにＢｒｉｊ１００（０．９ｇ）とＤＩ水（９５９．１ｇ）とを添加する。溶解するまで混合物を撹拌プレート上で撹拌する。Ｂｒｉｊ／水にベンジルアルコール（４０ｇ）を添加し、溶解するまで混合物を撹拌プレート上で撹拌する。
【０２５５】
エマルジョンの形成。水性相対油相の比は５：１である。有機相を水性相に注加し、ハンドホモジナイザーを用いて混合物を室温で１０秒間ホモジナイズすることにより粗エマルジョンを形成する。粗エマルジョンをゲージで約１１，０００ｐｓｉの圧力に設定された高圧ホモジナイザー（１１０Ｓ）に供給して慎重に１回通過させることによりナノエマルジョン（微細エマルジョン）を形成する。
【０２５６】
ナノ粒子の形成。撹拌プレート上で撹拌しながらナノエマルジョンを５℃未満のクエンチ（適切モルのｐＨ６．５リン酸緩衝液）に注加することによりクエンチ相を形成する。クエンチ対エマルジョンの比は１０：１である。１００：１のＴｗｅｅｎ８０対薬剤の比でクエンチ相に水中Ｔｗｅｅｎ８０（３５％（ｗ／ｗ））を添加する。
【０２５７】
タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）によるナノ粒子の濃縮。３００ｋＤａ  Ｐａｌｌカセット（２×０．１ｍ2）を用いてＴＦＦによりクエンチ相を濃縮することにより約２００ｍＬのナノ粒子濃縮物を形成する。約２０透析体積（４Ｌ）の冷ＤＩ水を用いてナノ粒子濃縮物を透析濾過（ダイア  フィルトレーション）する。透析濾過（ダイア  フィルトレーション）されたナノ粒子濃縮物の体積は最小体積に低減される。冷水（１００ｍＬ）を容器に添加し、ポンプ操作でメンブレンに通して濯ぎ、スラリーを形成する。最終スラリー（約１００ｍＬ）をガラスバイアルに捕集する。
【０２５８】
未濾過最終スラリーの固形分濃度の決定。風袋測定済み２０ｍＬシンチレーションバイアルに一定量の最終スラリーを添加し、凍結乾燥機／オーブン上で真空乾燥させる。乾燥スラリーの体積中のナノ粒子の重量を決定する。最終スラリーに濃縮スクロース（０．６６６ｇ／ｇ）を添加して１０％のスクロースを達成する。
【０２５９】
０．４５μｍの濾過最終スラリーの固形分濃度の決定。スクロースの添加前に最終スラリーサンプルの一部を０．４５μｍシリンジフィルターに通して濾過する。風袋測定済み２０ｍＬシンチレーションバイアルに一定量の濾過サンプルを添加し、凍結乾燥機／オーブンを用いて真空乾燥させる。スクロースを含む未濾過最終スラリーの残りのサンプルを凍結させる。
【０２６０】
実施例９：薬剤負荷に及ぼすクエンチｐＨの影響
実施例８のプロトコルを用いてパモ酸がドープされた８種のダサチニブ製剤を作製した。製剤条件および特徴付けを表９および１０に提供する。製剤条件は、クエンチとしてクエン酸／リン酸緩衝液（ｐＨ４．５）またはクエンチとしてＤＩ水のいずれかを含む。溶液は、製剤時間中、透明かつ安定であり、エマルジョンは製剤時、十分に安定であった。
【０２６１】
表９および１０に示されるように、クエン酸／リン酸緩衝液クエンチを含む製剤は、ＤＩ水クエンチを含む製剤と比較して、２倍超の薬剤負荷であった。さらに、ＳＱ保持の結果、２〜３％の薬剤負荷損失（たとえば、１４％超から約１１％への低減）を生じた。
【０２６２】
ＤＩ水クエンチを含むパモ酸製剤もまた、パモ酸の代わりにオレイン酸またはコール酸がドープされた類似の製剤と比較して、より高い薬剤負荷を有していた（上記の表６および７を参照されたい）。
【０２６３】
0006573895.tif 000014
【０２６４】
0006573895.tif 000015
【０２６５】
均等物
当業者であれば、本明細書に記載の具体的な実施形態の多くの均等物を認識し確認することができるであろう。このような均等物は、以下の特許請求の範囲に包含されることが意図される。
【０２６６】
参照による組込み
本明細書で引用されたすべての特許、公開特許出願、ウェブサイトおよび他の参照文献
の全内容は、本出願をもって参照によりその全体が明示的に本明細書に組み込まれる。
非限定的に、本発明は以下の態様を含む。
［態様１］
第１の有機相と第１の水性溶液とを組み合わせて第２の相を形成する工程と、
前記第２の相を乳化してエマルジョン相を形成する工程であって、前記エマルジョン相が、第１のポリマーと、プロトン化可能な窒素を有する塩基性治療剤と、パモ酸とを含む、工程と、
前記エマルジョン相をクエンチすることによりクエンチ相を形成する工程と、
を含む、治療用ナノ粒子の製造方法。
［態様２］
前記エマルジョン相をクエンチする工程が、前記エマルジョン相と、約２〜約８のｐＨを有する第２の水性溶液と、の混合を含む、態様１に記載の製造方法。
［態様３］
第１の有機相と第１の水性溶液とを組み合わせて第２の相を形成する工程と、
前記第２の相を乳化してエマルジョン相を形成する工程であって、前記エマルジョン相が、第１のポリマーと、プロトン化可能な窒素を有する塩基性治療剤と、実質的に疎水性の酸とを含む、工程と、
前記エマルジョン相をクエンチすることによりクエンチ相を形成する工程であって、前記エマルジョン相のクエンチングが、前記エマルジョン相と、約４〜約７のｐＨを有する第２の水性溶液と、の混合を含む、工程と、
を含む、治療用ナノ粒子の製造方法。
［態様４］
前記クエンチ相を濾過して前記治療用ナノ粒子を回収する工程をさらに含む、態様１〜３のいずれか一項に記載の製造方法。
［態様５］
前記第２の相の乳化前に前記第２の相で前記塩基性治療剤と前記酸とを組み合わせる工程をさらに含む、態様１〜４のいずれか一項に記載の製造方法。
［態様６］
前記塩基性治療剤および前記酸が、前記第２の相の乳化前に疎水性イオン対を形成する、態様５に記載の製造方法。
［態様７］
前記塩基性治療剤および前記酸が、前記第２の相の乳化前、乳化時に疎水性イオン対を形成する、態様６に記載の製造方法。
［態様８］
前記第２の相の乳化と実質的に同時に前記第２の相で前記塩基性治療剤と前記酸とを組み合わせる工程をさらに含む、態様１〜４のいずれか一項に記載の製造方法。
［態様９］
前記第１の有機相が前記塩基性治療剤を含み、かつ前記第１の水性溶液が前記酸を含む、態様８に記載の製造方法。
［態様１０］
前記塩基性治療剤がプロトン化時に第１のｐＫaを有し、前記酸が第２のｐＫaを有し、
かつ前記エマルジョン相が、前記第１のｐＫaと前記第２のｐＫaとの間のｐＫa単位に等しいｐＨを有する水性溶液を用いてクエンチされる、態様１に記載の製造方法。
［態様１１］
前記クエンチ相が、前記第１のｐＫaと前記第２のｐＫaとの間のｐＫa単位に等しいｐＨを有する、態様１０に記載の製造方法。
［態様１２］
前記塩基性治療剤がプロトン化時に第１のｐＫaを有し、前記酸が第２のｐＫaを有し、
かつ前記第１の水性溶液が、前記第１のｐＫaと前記第２のｐＫaとの間のｐＫa単位に等しいｐＨを有する、態様１〜１１のいずれか一項に記載の製造方法。
［態様１３］
前記ｐＨが、前記第１のｐＫaおよび前記第２のｐＫaからほぼ等距離にあるｐＫa単位と等しい、態様１０〜１２のいずれか一項に記載の製造方法。
［態様１４］
前記第２の水性溶液のｐＨが約４〜約７である、態様２または４〜１３のいずれか一項に記載の製造方法。
［態様１５］
前記第２の水性溶液のｐＨが約４〜約５である、態様２〜１３のいずれか一項に記載の製造方法。
［態様１６］
前記第２の水性溶液のｐＨが約６〜約７である、態様２〜１３のいずれか一項に記載の製造方法。
［態様１７］
前記第２の水性溶液がリン酸を含む、態様２〜１６のいずれか一項に記載の製造方法。
［態様１８］
前記第２の水性溶液がクエン酸を含む、態様２〜１６のいずれか一項に記載の製造方
法。
［態様１９］
前記第２の水性溶液がリン酸とクエン酸との混合物を含む、態様２〜１６のいずれか一項に記載の製造方法。
［態様２０］
前記第２の水性溶液がホウ酸とリン酸と酢酸との混合物を含む、態様２〜１６のいずれか一項に記載の製造方法。
［態様２１］
前記クエンチ相が前記エマルジョン相と実質的に同一のｐＨを有する、態様１〜２０のいずれか一項に記載の製造方法。
［態様２２］
前記クエンチ相が約４〜約７のｐＨを有する、態様１〜２０のいずれか一項に記載の製造方法。
［態様２３］
前記クエンチ相が約４〜約５のｐＨを有する、態様１〜２０のいずれか一項に記載の製造方法。
［態様２４］
前記クエンチ相が約６〜約７のｐＨを有する、態様１〜２０のいずれか一項に記載の製造方法。
［態様２５］
第１のポリマーと、プロトン化可能な窒素を有する塩基性治療剤と、パモ酸とを含む第１の有機相を乳化することによりエマルジョン相を形成する工程と、
前記エマルジョン相をクエンチすることによりクエンチ相を形成する工程と、
により調製される治療用ナノ粒子。
［態様２６］
前記エマルジョン相をクエンチする工程が、前記エマルジョン相と、約２〜約８のｐＨを有する水性溶液と、の混合を含む、態様２５に記載の治療用ナノ粒子。
［態様２７］
第１のポリマーと、プロトン化可能な窒素を有する塩基性治療剤と、実質的に疎水性の酸とを含む第１の有機相を乳化することによりエマルジョン相を形成する工程と、
前記エマルジョン相をクエンチすることによりクエンチ相を形成する工程であって、前記エマルジョン相のクエンチングが、前記エマルジョン相と、約４〜約７のｐＨを有する水性溶液と、の混合を含む、工程と、
により調製される治療用ナノ粒子。
［態様２８］
前記水性溶液のｐＨが約４〜約７である、態様２６に記載の治療用ナノ粒子。
［態様２９］
前記水性溶液のｐＨが約４〜約５である、態様２６または２７に記載の治療用ナノ粒
子。
［態様３０］
前記水性溶液のｐＨが約６〜約７である、態様２６または２７に記載の治療用ナノ粒子。
［態様３１］
前記水性溶液がリン酸を含む、態様２６〜３０のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様３２］
前記水性溶液がクエン酸を含む、態様２６〜３０のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様３３］
前記水性溶液がリン酸とクエン酸との混合物を含む、態様２６〜３０のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様３４］
前記水性溶液がホウ酸とリン酸と酢酸との混合物を含む、態様２６〜３０のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様３５］
前記クエンチ相を濾過して前記治療用ナノ粒子を回収する工程をさらに含む、態様２５〜３４のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様３６］
前記クエンチ相が前記エマルジョン相と実質的に同一のｐＨを有する、態様２５〜３５のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様３７］
前記クエンチ相が約４〜約７のｐＨを有する、態様２５〜３５のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様３８］
前記クエンチ相が約４〜約５のｐＨを有する、態様２５〜３５のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様３９］
前記クエンチ相が約６〜約７のｐＨを有する、態様２５〜３５のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様４０］
約０．０５〜約３０重量パーセントのパモ酸と、
約０．２〜約２０重量パーセントの、プロトン化可能な窒素を有する塩基性治療剤と、
約５０〜約９９．７５重量パーセントの、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーと、
を含む治療用ナノ粒子であって、前記治療用ナノ粒子が約１０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む、治療用ナノ粒子。
［態様４１］
約０．２〜約２０重量パーセントの、プロトン化可能な窒素を有する塩基性治療剤と、
パモ酸であって、前記パモ酸と前記塩基性治療剤とのモル比が約０．２５：１〜約２：１である、パモ酸と、
約５０〜約９９．７５重量パーセントの、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーと、
を含む治療用ナノ粒子であって、前記治療用ナノ粒子が約１０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む、治療用ナノ粒子。
［態様４２］
前記パモ酸と前記塩基性治療剤とのモル比が約０．５：１〜約１．５：１である、態様４１に記載の治療用ナノ粒子。
［態様４３］
前記パモ酸と前記塩基性治療剤とのモル比が約０．７５：１〜約１．２５：１である、態様４１に記載の治療用ナノ粒子。
［態様４４］
前記塩基性治療剤のｐＫaが前記パモ酸のｐＫaよりも少なくとも約１．０ｐＫa単位大きい、態様４０〜４３のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様４５］
前記塩基性治療剤のｐＫaが前記パモ酸のｐＫaよりも少なくとも約２．０ｐＫa単位大きい、態様４０〜４３のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様４６］
前記塩基性治療剤のｐＫaが前記パモ酸のｐＫaよりも少なくとも約４．０ｐＫa単位大きい、態様４０〜４３のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様４７］
パモ酸と少なくとも１つのイオン化可能なアミン部分を有する治療剤とを含む疎水性イオン対と、
約５０〜約９９．７５重量パーセントのジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーであって、前記ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーが、約１５ｋＤａ〜約２０ｋＤａの数平均分子量のポリ（乳酸）と、約４ｋＤａ〜約６ｋＤａの数平均分子量のポリ（エチレン）グリコールとを有する、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーと、
を含む治療用ナノ粒子。
［態様４８］
前記塩基性治療剤のｐＫaと前記パモ酸のｐＫaとの差が少なくとも約１．０ｐＫa単位である、態様４７に記載の治療用ナノ粒子。
［態様４９］
前記塩基性治療剤のｐＫaと前記パモ酸のｐＫaとの差が少なくとも約２．０ｐＫa単位である、態様４７に記載の治療用ナノ粒子。
［態様５０］
前記塩基性治療剤のｐＫaと前記パモ酸のｐＫaとの差が少なくとも約４．０ｐＫa単位である、態様４７に記載の治療用ナノ粒子。
［態様５１］
約０．０５〜約３０重量パーセントのパモ酸を含む、態様４７〜５０のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様５２］
前記パモ酸と前記塩基性治療剤とが前記治療用ナノ粒子中で前記疎水性イオン対を形成する、態様４０〜５１のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様５３］
約２〜約２０重量パーセントの前記プロトン化可能な窒素含有治療剤を含む、態様４０〜５２のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様５４］
約４〜約２０重量パーセントの前記プロトン化可能な窒素含有治療剤を含む、態様４０〜５２のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様５５］
約１０〜約２０重量パーセントの前記プロトン化可能な窒素含有治療剤を含む、態様４０〜５２のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様５６］
約４〜約１０重量パーセントの前記プロトン化可能な窒素含有治療剤を含む、態様４０〜５２のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様５７］
前記治療剤がキナーゼ阻害剤である、態様４０〜５６のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様５８］
前記キナーゼ阻害剤が、スニチニブ、イマチニブ、ニロチニブ、ダサチニブ、ボスチニブ、ポナチニブ、バフェチニブ、およびそれらの薬学的に許容可能な塩からなる群から選択されるチロシンキナーゼ阻害剤である、態様５７に記載の治療用ナノ粒子。
［態様５９］
前記治療用ナノ粒子の流体力学的直径が約６０〜約１５０ｎｍである、態様４０〜５８のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様６０］
前記流体力学的直径が約９０〜約１４０ｎｍである、態様４０〜５８のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様６１］
前記流体力学的直径が約９０〜約１２０ｎｍである、態様４０〜５８のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様６２］
前記治療用ナノ粒子が、３７℃のリン酸緩衝溶液中に配置されたときに少なくとも１分間にわたり前記治療剤を実質的に保持する、態様４０〜６１のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様６３］
前記治療用ナノ粒子が、３７℃のリン酸緩衝溶液中に配置されたときに前記治療剤の約３０％未満を実質的に即時放出する、態様４０〜６２のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様６４］
前記治療用ナノ粒子が、３７℃のリン酸緩衝溶液中に配置されたときに約１時間にわたり前記治療剤の約１０〜約４５％を放出する、態様４０〜６２のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様６５］
前記治療用ナノ粒子が、脂肪酸も胆汁酸もを含有していないこと以外は前記治療用ナノ粒子と実質的に同一の対照ナノ粒子の放出プロファイルと実質的に同一の放出プロファイルを有する、態様４０〜６４のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様６６］
前記ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーが約０．６〜約０．９５のポリ（乳）酸数平均分子量分率を有する、態様４０〜６５のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様６７］
前記ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーが約０．６〜約０．８のポリ（乳）酸数平均分子量分率を有する、態様４０〜６５のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様６８］
前記ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーが約０．７５〜約０．８５のポリ（乳）酸数平均分子量分率を有する、態様４０〜６５のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様６９］
前記ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーが約０．７〜約０．９のポリ（乳）酸数平均分子量分率を有する、態様４０〜６５のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様７０］
前記治療用ナノ粒子が約１０〜約２５重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを
含む、態様４０〜６９のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様７１］
前記治療用ナノ粒子が約１０〜約２０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む、態様４０〜６９のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様７２］
前記治療用ナノ粒子が約１５〜約２５重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを
含む、態様４０〜６９のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様７３］
前記治療用ナノ粒子が約２０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む、態様４０〜６９のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様７４］
前記ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーが、約１５ｋＤａ〜約２０ｋＤａの数平均分子量のポリ（乳酸）と、約４ｋＤａ〜約６ｋＤａの数平均分子量のポリ（エチレン）グリコールとを有する、態様４０〜７３のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様７５］
標的化リガンドで機能化された約０．２〜約３０重量パーセントのポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーをさらに含む、態様４０〜７４のいずれか１項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様７６］
標的化リガンドで機能化された約０．２〜約３０重量パーセントのポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーをさらに含む、態様４０〜７５のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様７７］
前記標的化リガンドがポリ（エチレン）グリコールに共有結合される、態様７５または７６に記載の治療用ナノ粒子。
［態様７８］
パモ酸と実質的に疎水性の酸との混合物を含む、態様４０〜７７のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
［態様７９］
態様２５〜７８のいずれか一項に記載の複数の治療用ナノ粒子と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む薬学的に許容可能な組成物。
［態様８０］
糖をさらに含む、態様７９に記載の薬学的に許容可能な組成物。
［態様８１］
シクロデキストリンをさらに含む、態様７９または８０に記載の薬学的に許容可能な組成物。
［態様８２］
前記糖が、スクロースまたはトレハロースまたはそれらの混合物からなる群から選択される二糖である、態様８０に記載の薬学的に許容可能な組成物。
［態様８３］
前記シクロデキストリンが、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、ヘプタキス−（２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル）−β−シクロデキストリン、およびそれらの混合物からなる群から選択される、態様８１に記載の薬学的に許容可能な組成物。
［態様８４］
癌の治療のための、態様２５〜７８のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子を含む組成物。
［態様８５］
前記癌が慢性骨髄性白血病である、態様８４に記載の組成物。
［態様８６］
前記癌が、慢性骨髄単球性白血病、好酸球増加症候群、腎細胞癌、肝細胞癌、フィラデルフィア染色体陽性急性リンパ芽球性白血病、非小細胞肺癌、膵臓癌、乳癌、固形腫瘍、およびマントル細胞性リンパ腫からなる群から選択される、態様８４に記載の組成物。
［態様８７］
胃腸間質腫瘍の治療のための、態様２５〜７８のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子を含む組成物。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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