(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ｆｅ０．９７Ｃｒ０．０３）７６（Ｓｉ０．５Ｂ０．５）２２Ｃ２からなるアモルファス金属の磁性粒子と、
前記磁性粒子の表面に設けられた酸化シリコン膜と、
を含む、核酸結合性固相担体。
【請求項２】
請求項１において、
飽和磁化が５０ｅｍｕ／ｇ以上である、核酸結合性固相担体。
【請求項３】
請求項１または２において、
飽和磁化が１００ｅｍｕ／ｇ以上１５０ｅｍｕ／ｇ以下である、核酸結合性固相担体。
【請求項４】
請求項１ないし３のいずれか１項において、
前記磁性粒子の平均粒径は、０．５μｍ以上１０μｍ以下である、核酸結合性固相担体。
【請求項５】
請求項１ないし４のいずれか１項において、
前記酸化シリコン膜の平均厚さは、１ｎｍ以上５００ｎｍ以下である、核酸結合性固相担体。
【請求項６】
請求項１ないし５のいずれか１項において、
前記磁性粒子は、軟磁性体である、核酸結合性固相担体。
【請求項７】
カオトロピック物質を含む吸着液中にて、請求項１ないし６のいずれか１項に記載の核酸結合性固相担体に核酸を吸着させる工程と、
前記核酸が吸着した前記核酸結合性固相担体を洗浄液中に配置し、前記核酸が吸着した前記核酸結合性固相担体を洗浄する工程と、
前記核酸が吸着した前記核酸結合性固相担体を溶出液中に配置し、前記溶出液中に前記核酸を溶出させる工程と、
を含み、
前記核酸結合性固相担体を洗浄する工程は、前記核酸が吸着した前記核酸結合性固相担体を、磁力によって前記洗浄液中を振動させて行われる、核酸の抽出方法。
【請求項８】
請求項７において、
前記核酸を溶出させる工程は、前記核酸が吸着した前記核酸結合性固相担体を、磁力によって前記溶出液中を振動させて行われる、核酸の抽出方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、核酸結合性固相担体および核酸の抽出方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、遺伝子の利用技術の発展により、遺伝子診断や遺伝子治療など遺伝子を利用した医療が注目されている他、農畜産分野においても品種判別や品種改良に遺伝子を用いた手法が多く開発されている。遺伝子を利用するための技術として、ＰＣＲ（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ）法などの技術が広く普及している。今日では、ＰＣＲ法は生体物質の情報解明において必要不可欠な技術となっている。
【０００３】
ＰＣＲ法は、増幅の対象とする核酸（標的核酸）および試薬を含む溶液（反応液）に熱サイクルを施すことで、標的核酸を増幅させる手法である。熱サイクルは、２段階以上の温度を周期的に反応液に施す処理である。ＰＣＲ法においては、２段階または３段階の熱サイクルを施す手法が一般的である。
【０００４】
近年、ＰＣＲ法に用いるための前処理デバイスとして、カートリッジ中に液体層を形成し、核酸が結合した磁性粒子を通過させることにより、核酸の精製および抽出を行うデバイスが提案されている。
【０００５】
例えば特許文献１には、超常磁性金属酸化物を含む磁性シリカ粒子である核酸結合用磁性担体が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開平９−１９２９２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、特許文献１に記載の核酸結合用磁性担体では、超常磁性金属酸化物として酸化鉄を用いている。そのため、特許文献１に記載の核酸結合用磁性担体では、外部磁場に対する応答性が不足し、例えば、外部磁場の印加方向を数Ｈｚ以上の周波数で変化させる場合に、核酸結合用磁性担体が外部磁場の変化に追従できない場合がある。したがって、このような担体では、例えば、核酸が吸着した担体を洗浄する工程において、該担体が外部磁場の変化に追従せず、効率よく核酸を抽出することができない場合があった。
【０００８】
本発明のいくつかの態様に係る目的の１つは、効率よく核酸を抽出することができる核酸結合性固相担体を提供することにある。また、本発明のいくつかの態様に係る目的の１つは、効率よく核酸を抽出することができる核酸の抽出方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明に係る核酸結合性固相担体は、
Ｆｅ、Ｃｒ、Ｓｉ、およびＢを含むアモルファス金属の磁性粒子と、
前記磁性粒子の表面に設けられた酸化シリコン膜と、
を含む。
【００１０】
このような核酸結合性固相担体では、外部磁場印加方向を変化させて、核酸が吸着した核酸結合性固相担体を移動させ、洗浄する場合に、外部磁場の変化に対する追従性を向上
することができる。したがって、核酸が吸着した核酸結合性固相担体を、外部磁場の変化によって十分に洗浄することができ、効率よく核酸を抽出することができる。
【００１１】
本発明に係る核酸結合性固相担体において、
飽和磁化が５０ｅｍｕ／ｇ以上であってもよい。
【００１２】
このような核酸結合性固相担体では、外部磁場の変化に追従することができる。
【００１３】
本発明に係る核酸結合性固相担体において、
飽和磁化が１００ｅｍｕ／ｇ以上１５０ｅｍｕ／ｇ以下であってもよい。
【００１４】
このような核酸結合性固相担体では、より確実に外部磁場の変化に追従することができ、かつ核酸結合性固相担体の製造ばらつきを小さくすることができる。
【００１５】
本発明に係る核酸結合性固相担体において、
前記磁性粒子の平均粒径は、０．５μｍ以上１０μｍ以下であってもよい。
【００１６】
このような核酸結合性固相担体では、かかる核酸結合性固相担体を使用して抽出、精製を行った核酸をＰＣＲ法により遺伝子分析を行った場合に、Ｃｔ値を小さくすることができ、かつ外部磁場の印加方向を変化させて核酸結合性固相担体に吸着させた核酸の洗浄等を行う場合に、ブラウン運動を抑制することができる。
【００１７】
本発明に係る核酸結合性固相担体において、
前記酸化シリコン膜の平均厚さは、１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であってもよい。
【００１８】
このような核酸結合性固相担体では、単位質量当たりの飽和磁化を大きくすることができ、かつ酸化シリコン膜の製造ばらつきを小さくすることができる。
【００１９】
本発明に係る核酸結合性固相担体において、
前記磁性粒子は、軟磁性体であってもよい。
【００２０】
このような核酸結合性固相担体では、小さな保磁力を有することができる。
【００２１】
本発明に係る核酸の抽出方法は、
カオトロピック物質を含む吸着液中にて、本発明に係る核酸結合性固相担体に核酸を吸着させる工程と、
前記核酸が吸着した前記核酸結合性固相担体を洗浄液中に配置し、前記核酸が吸着した前記核酸結合性固相担体を洗浄する工程と、
前記核酸が吸着した前記核酸結合性固相担体を溶出液中に配置し、前記溶出液中に前記核酸を溶出させる工程と、
を含み、
前記核酸結合性固相担体を洗浄する工程は、前記核酸が吸着した前記核酸結合性固相担体を、磁力によって前記洗浄液中を振動させて行われる。
【００２２】
このような核酸の抽出方法では、核酸結合性固相担体は、外部磁場の変化に追従することができるので、核酸が吸着した核酸結合性固相担体を、外部磁場の変化によって十分に洗浄することができる。したがって、このような核酸の抽出方法では、効率よく核酸を抽出することができる。
【００２３】
本発明に係る核酸の抽出方法において、
前記核酸を溶出させる工程は、前記核酸が吸着した前記核酸結合性固相担体を、磁力によって前記溶出液中を振動させて行われてもよい。
【００２４】
このような核酸の抽出方法では、核酸結合性固相担体は、外部磁場の変化に追従することができるので、磁力によって直接核酸結合性固相担体を振動させることができる。そのため、このような核酸の抽出方法は、溶出効率（核酸の振り落とし効果）を向上させることができ、効率よく核酸を抽出することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】本実施形態に係る核酸結合性固相担体を模式的に示す断面図。
【図２】本実施形態に係る核酸結合性固相担体の製造方法を説明するためのフローチャート。
【図３】本実施形態に係るカートリッジを模式的に示す断面図。
【図４】本実施形態に係るカートリッジを模式的に示す断面図。
【図５】本実施形態に係る核酸の抽出方法を説明するためのフローチャート。
【図６】本実施形態に係る核酸の抽出方法を説明するための模式図。
【図７】実施例１の核酸結合性固相担体の磁化特性を示すグラフ。
【図８】比較例１の核酸結合性固相担体の磁化特性を示すグラフ。
【図９】実施例１の核酸結合性固相担体の粒径分布を示すグラフ。
【図１０】比較例１の核酸結合性固相担体の粒径分布を示すグラフ。
【図１１】核酸結合性固相担体が外部磁場に対して追従することができる例を説明するための模式図。
【図１２】核酸結合性固相担体が外部磁場に対して追従することができない例を説明するための模式図。
【図１３】核酸結合性固相担体の平均粒径とＣｔ値との関係を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
以下、本発明の好適な実施形態について、図面を用いて詳細に説明する。なお、以下に説明する実施形態は、特許請求の範囲に記載された本発明の内容を不当に限定するものではない。また、以下で説明される構成の全てが本発明の必須構成要件であるとは限らない。
【００２７】
１．  核酸結合性固相担体
まず、本実施形態に係る核酸結合性固相担体について説明する。図１は、本実施形態に係る核酸結合性固相担体１０を模式的に示す断面図である。
【００２８】
核酸結合性固相担体１０は、ＤＮＡ（Ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）やＲＮＡ（Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）などの核酸を、吸着、すなわち、可逆的な物理的結合により保持することが可能な物質である。核酸を抽出する場合は、粉末状の核酸結合性固相担体１０を用いる。核酸結合性固相担体１０は、図１に示すように、磁性粒子１２と、酸化シリコン膜１４と、を含む。
【００２９】
１．１．  磁性粒子
磁性粒子１２は、磁性を有する粒子である。磁性粒子１２は、アモルファス（非晶質）金属である。そのため、磁性粒子１２は、原子配列が不規則であり、内部に結晶構造や結晶粒界をほどんど含まない。これにより、磁性粒子１２は、結晶金属のように転位による変形や結晶粒界を起点する破壊等が生じ難く、高い硬度を有する。さらに、磁性粒子１２は、原子配列が不規則であることから、比較的電気抵抗値が高く、保磁力が小さい。したがって、磁性粒子１２は、磁場（磁界）が印加されていない状態で、磁性粒子１２同士が凝集しにくく、液体中において均一性よく分散することができる。磁性粒子１２は、軟磁
性体である。「軟磁性体」とは、磁性体の中でも比較的簡単に磁極が消えたり反転したりするものを指し、保磁力が小さく透磁率が大きい。
【００３０】
核酸結合性固相担体１０の飽和磁化は、例えば、５０ｅｍｕ／ｇ以上であり、好ましくは、１００ｅｍｕ／ｇ以上１５０ｅｍｕ／ｇ以下である。「飽和磁化」とは、印加する磁場を強くしていたときに飽和する磁化の値であり、上記では、単位質量当たりの値を示している。磁性粒子１２の飽和磁化は、例えば、核酸結合性固相担体１０の飽和磁化として示した上記範囲に含まれる値である。
【００３１】
核酸結合性固相担体１０の飽和磁化を５０ｅｍｕ／ｇ以上とすることにより、例えば外部磁場の印加方向を数Ｈｚ以上の周波数で変化させても、核酸結合性固相担体１０は、外部磁場の変化に追従することができる。さらに、核酸結合性固相担体１０の飽和磁化を１５０ｅｍｕ／ｇ以下とすることにより、核酸結合性固相担体１０の製造ばらつきを小さくすることができる。核酸結合性固相担体１０の飽和磁化が１５０ｅｍｕ／ｇより大きくなると、核酸結合性固相担体１０を製造することが困難となり、核酸結合性固相担体１０の製造ばらつき（例えば組成のばらつき）が大きくなる場合がある。
【００３２】
なお、核酸結合性固相担体１０や磁性粒子１２の飽和磁化は、振動試料型磁力計（ＶＳＭ：Ｖｉｂｒａｔｉｎｇ  Ｓａｍｐｌｅ  Ｍａｇｎｅｔｏｍｅｔｅｒ）により測定することができる。具体的には、株式会社玉川作製所製の「ＴＭ−ＶＳＭ１２３０−ＭＨＨＬ」等によって測定することができる。
【００３３】
磁性粒子１２の平均粒径は、例えば、０．５μｍ以上１０μｍ以下であり、好ましくは、０．５μｍ以上５μｍ以下である。磁性粒子１２の平均粒径を０．５μｍ以上とすることにより、液体中（吸着液中）において核酸結合性固相担体１０がブラウン運動することを抑制することができる。核酸結合性固相担体１０がブラウン運動すると、核酸結合性固相担体１０は、核酸を吸着し難くなる。さらに、磁性粒子１２の平均粒径を１０μｍ以下とすることにより、リアルタイムＰＣＲ検出時のＣｔ（Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ  Ｃｙｃｌｅ）値を小さくすることができる。「Ｃｔ値」とは、ＰＣＲによる増幅産物がある一定量に達し蛍光輝度が一定値以上に達したときのサイクル数（熱サイクルのサイクル数）である。核酸結合性固相担体１０の平均粒径は、例えば、磁性粒子１２の平均粒径として示した上記範囲に含まれる値である。
【００３４】
なお、核酸結合性固相担体１０や磁性粒子１２の平均粒径は、例えば、レーザー回折法により取得された体積基準の粒度分布において、小径側から累積５０％となるときの粒径（粒径Ｄ５０）として求められる。
【００３５】
図１に示す例では、磁性粒子１２の形状は、球である。なお、磁性粒子１２の形状は、特に限定されず、磁性粒子１２は、楕円形や多角形の断面形状を有していてもよい。
【００３６】
磁性粒子１２は、Ｆｅ（鉄）、Ｃｒ（クロム）、Ｓｉ（珪素）、およびＢ（ホウ素）を含むアモルファス金属（アモルファス合金）である。磁性粒子１２は、Ｆｅ、Ｃｒ、Ｓｉ、Ｂのアモルファス金属から構成されていてもよい。この場合、Ｆｅ、Ｃｒ、Ｓｉ、およびＢは、例えば、下記式（１）で示される割合で含まれている。
【００３７】
（Ｆｅ１−ｘＣｒｘ）ａ（Ｓｉ１−ｙＢｙ）１００−ａ  ・・・（１）
【００３８】
ただし、式（１）において、ｘおよびｙは原子比、ａは原子％を示し、それぞれ、０＜ｘ≦０．０６、０．３≦ｙ≦０．７、７０≦ａ≦８１である。
【００３９】
磁性粒子１２は、さらに、Ｃ（炭素）を含んでいてもよい。磁性粒子１２は、Ｆｅ、Ｃｒ、Ｓｉ、Ｂ、Ｃのアモルファス金属から構成されていてもよい。この場合、Ｆｅ、Ｃｒ、Ｓｉ、Ｂ、およびＣは、例えば、下記式（２）で示される割合で含まれている。
【００４０】
（Ｆｅ１−ｘＣｒｘ）ａ（Ｓｉ１−ｙＢｙ）１００−ａ−ｂＣｂ  ・・・（２）
【００４１】
ただし、式（２）において、ｘおよびｙは原子比、ａおよびｂは原子％を示し、それぞれ、０＜ｘ≦０．０６、０．３≦ｙ≦０．７、７０≦ａ≦８１、０＜ｂ≦２である。
【００４２】
Ｆｅは、磁性粒子１２において、最も含有率が大きい主成分である。そのため、Ｆｅは、磁性粒子１２の基本的な磁気特性や機械特性に大きな影響を与える。Ｆｅは、例えば、磁性粒子１２の磁気モーメントを高めることができる。
【００４３】
Ｃｒは、磁性粒子１２の耐食性を向上させる。具体的には、Ｃｒの酸化物（Ｃｒ２Ｏ３等）を主とする不働態被膜が磁性粒子１２の表面に形成されることにより、磁性粒子１２の耐食性が向上する。これにより、Ｆｅの経時的な酸化を抑制することができるので、磁性粒子１２の磁気特性の低下を抑制することができる。上記のように０＜ｘ≦０．０６とすることにより、Ｆｅの含有率を確保しつつ、Ｆｅの酸化を抑制することができる。
【００４４】
Ｓｉは、磁性粒子１２の保磁力を低下させ、透磁率を高める。上記のように、０．３≦ｙ≦０．７、７０≦ａ≦８１とすることにより、Ｆｅ、Ｃｒ、およびＢの含有率を確保しつつ、磁性粒子１２の保磁力の低下、および透磁率の増加を図ることができる。
【００４５】
Ｂは、アモルファス金属の融点を低下させる。そのため、磁性粒子１２を構成するアモルファス金属を容易に製造することができる。さらに、Ｂは、アモルファス金属の溶融時の粘度を低下させる。そのため、磁性粒子１２の微細化や球形化を図ることができる。さらに、Ｂは、磁性粒子１２の保磁力を低下させる。上記のように０．３≦ｙ≦０．７、７０≦ａ≦８１とすることにより、Ｆｅ、Ｃｒ、およびＳｉの含有率を確保しつつ、アモルファス金属の融点の低下、磁性粒子１２の微細化や球形化、および保磁力の低下を図ることができる。
【００４６】
Ｃは、アモルファス金属の溶融時の粘度を低下させる。そのため、磁性粒子１２の微細化や球形化を図ることができる。さらに、Ｃは、の保磁力を低下させる。上記のように０＜ｂ≦２とすることにより、ＳｉおよびＢの含有率を確保しつつ、磁性粒子１２の微細化や球形化、および保磁力の低下を図ることができる。
【００４７】
なお、磁性粒子１２の組成比は、例えば、ＪＩＳ  Ｇ  １２５８に規定されたＩＣＰ発光分析法、ＪＩＳ  Ｇ  １２５３に規定されたスパーク発光分析法により特定することができる。具体的には、例えばＳＰＥＣＴＲＯ社製固体発光分光分析装置（スパーク発光分析装置、モデル：ＳＰＥＣＴＲＯＬＡＢ、タイプ：ＬＡＶＭＢ０８Ａ）や、（株）リガク製ＩＣＰ装置（ＣＩＲＯＳ１２０型）が挙げられる。Ｃの特定に際しては、特に、ＪＩＳ
Ｇ  １２１１に規定された酸素気流燃焼（高周波誘導加熱炉燃焼）−赤外線吸収法も用いられる。具体的には、ＬＥＣＯ社製炭素・硫黄分析装置、ＣＳ−２００が挙げられる。
【００４８】
また、Ｘ線回折法を用いることにより、磁性粒子の構成材料がアモルファスであるか否かを特定することができる。一般的には明瞭な回折ピークが認められない場合、アモルファスであると特定することができる。
【００４９】
磁性粒子１２は、不可避元素を含んでいてもよい。不可避元素とは、磁性粒子１２の原料や核酸結合性固相担体１０の製造時に意図せずに混入する元素（不純物）である。不可
避元素は、特に限定されないが、例えば、Ｎ（窒素）、Ｐ（リン）、Ｓ（硫黄）、Ｎａ（ナトリウム）、Ｍｇ（マグネシウム）、Ａｌ（アルミニウム）、Ｋ（カリウム）、Ｃａ（カルシウム）、Ｔｉ（チタン）、Ｖ（バナジウム）、Ｃｏ（コバルト）、Ｎｉ（ニッケル）、Ｃｕ（銅）、Ｚｎ（亜鉛）、Ｇａ（ガリウム）、Ｇｅ（ゲルマニウム）、Ａｓ（ヒ素）、Ｓｅ（セレン）、Ｙ（イットリウム）、Ｚｒ（ジルコニウム）、Ｎｂ（ニオブ）、Ｍｏ（モリブデン）、Ａｇ（銀）、Ｃｄ（カドミウム）、Ｉｎ（インジウム）、Ｓｎ（錫）、Ｓｂ（アンチモン）、Ｔｅ（テルル）等が挙げられる。なお、不可避元素が磁性粒子１２に混入する場合、その混入量は、磁性粒子１２を構成するアモルファス金属の０．２質量％未満であることが好ましく、０．１質量％以下であることがより好ましい。
【００５０】
１．２．  酸化シリコン膜
酸化シリコン膜１４は、カオトロピック物質を含む水溶液中において、核酸を特異的に吸着する。酸化シリコン膜１４は、図１に示すように、磁性粒子１２の表面に設けられている。酸化シリコン膜１４は、磁性粒子１２の表面をコーティングしている。酸化シリコン膜１４の材質は、例えば、ＳｉＯｘ（０＜ｘ≦２）であり、具体的には、ＳｉＯ２である。図示の例では、酸化シリコン膜１４は、磁性粒子１２の表面全面を覆って設けられているが、酸化シリコン膜１４は、磁性粒子１２の表面の少なくとも一部に設けられていればよい。
【００５１】
酸化シリコン膜１４の平均厚さは、例えば、１ｎｍ以上５００ｎｍ以下であり、好ましくは、１０ｎｍ以上３００ｎｍ以下である。「平均厚さ」とは、粉末状の核酸結合性固相担体１０を用いて核酸を抽出する場合に、複数の核酸結合性固相担体１０の酸化シリコン膜１４の厚さの平均である。図示の例では、酸化シリコン膜１４は、磁性粒子１２の表面を均一な厚さで覆っているが、酸化シリコン膜１４は、磁性粒子１２の表面に対して、異なる厚さを有していてもよい。この場合、「平均厚さ」とは、各核酸結合性固相担体１０において酸化シリコン膜１４の厚さの最大値の平均である。
【００５２】
酸化シリコン膜１４の平均厚さを１ｎｍ以上とすることにより、酸化シリコン膜１４の製造ばらつきを小さくすることができる。酸化シリコン膜１４の平均厚さが１ｎｍより小さいと、酸化シリコン膜１４を製造することが困難となり、酸化シリコン膜１４の製造ばらつき（例えば厚さのばらつき）が大きくなる場合がある。さらに、酸化シリコン膜１４の平均厚さを５００ｎｍ以下とすることにより、核酸結合性固相担体１０の単位質量当たりの飽和磁化を大きくすることができる。
【００５３】
なお、酸化シリコン膜１４の厚さは、例えば、赤外光などの光を利用した非接触による厚さ測定によって求めたり、核酸結合性固相担体１０の断面ＳＥＭ（Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）像から酸化シリコン膜１４の厚さを測って求めたりすることができる。
【００５４】
酸化シリコン膜１４は、不可避元素を含んでいてもよい。酸化シリコン膜１４が含む不可避元素としては、磁性粒子１２が含む不可避元素として上記に列挙したものと同じものが挙げられる。
【００５５】
２．  核酸結合性固相担体の製造方法
次に、本実施形態に係る核酸結合性固相担体１０の製造方法について、図面を参照しながら説明する。図２は、本実施形態に係る核酸結合性固相担体１０の製造方法を説明するためのフローチャートである。
【００５６】
まず、磁性粒子１２を形成する（ステップＳ１）。磁性粒子１２は、例えば、アトマイズ法（例えば、水アトマイズ法、ガスアトマイズ法、高速回転水流アトマイズ法など）、
粉砕法などの各種粉末化法等により形成される。
【００５７】
アトマイズ法には、冷却媒の種類や装置構成の違いによって、水アトマイズ法、ガスアトマイズ法、高速回転水流アトマイズ法に区分けされる。アトマイズ法は、溶融金属（溶湯）を、高速で噴射された流体（液体または気体）に衝突させることにより、微粉化するとともに冷却して、金属粉末（アモルファス合金粉末）を製造する方法である。アモルファス合金粉末をこのようなアトマイズ法によって製造することにより、極めて微小な粉末を効率よく製造することができる。さらに、アモルファス合金粉末の粒子形状が表面張力の作用により球形状に近くなる。
【００５８】
さらに、高速回転水流アトマイズ法は、溶湯を極めて高速で冷却することができるので、溶融金属における無秩序な原子配置が高度に維持された状態で固化に至らせることがでる。そのため、高速回転水流アトマイズ法では、非晶質化度の特に高いアモルファス合金粉末を（より確実にアモルファスとなる合金粉末を）効率よく製造することができる。したがって、磁性粒子１２を形成する方法としては、高速回転水流アトマイズ法が好ましい。
【００５９】
具体的には、高速回転水流アトマイズ法では、冷却用筒体の内周面に沿って冷却液を噴出供給し、冷却用筒体の内周面に沿って旋回させることにより、内周面に冷却液層を形成する。一方、アモルファス合金の原材料を溶融し、得られた溶融金属を自然落下させつつ、これに液体または気体のジェットを吹き付ける。これにより、溶融金属が飛散し、飛散した溶融金属は、冷却液層に取り込まれる。その結果、飛散して微粉化した溶融金属が急速冷却されて固化し、アモルファス合金粉末が得られる。
【００６０】
次に、磁性粒子１２の表面に酸化シリコン膜１４を形成する（ステップＳ２）。酸化シリコン膜１４は、例えば、ゾルゲル法、ＣＶＤ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｖａｐｏｒ  Ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ）法、スパッタ法、レーザーアブレーション法等により形成される。
【００６１】
以上の工程により、核酸結合性固相担体１０を製造することができる。
【００６２】
２．  カートリッジ
次に、本実施形態に係るカートリッジについて説明する。図３は、本実施形態に係るカートリッジ１００を模式的に示す断面図である。
【００６３】
カートリッジ１００は、核酸を本発明に係る核酸結合性固相担体（例えば核酸結合性固相担体１０）に吸着させ、核酸が吸着した核酸結合性固相担体を洗浄して精製し、核酸が吸着した核酸結合性固相担体から核酸を分離させて溶出するための容器である。
【００６４】
カートリッジ１００は、図３に示すように、例えば、第１チューブ２０と、第２チューブ２２と、栓２４と、を含む。
【００６５】
第１チューブ２０の形状は、例えば、円筒状である。第１チューブ２０の内径は、例えば、１ｍｍ以上５ｍｍ以下である。第１チューブ２０の一方の端部には、第２チューブ２２が設けられている。第２チューブ２２の形状は、例えば、容器状である。第１チューブ２０の他方の端部には、栓２４が設けられている。第２チューブ２２および栓２４は、第１チューブ２０内の空間および第２チューブ２２内の空間を密閉するように、第１チューブ２０に接続されている。チューブ２０，２２の材質は、例えば、ポリプロピレン等の樹脂である。栓２４の材質は、例えば、ゴムである。
【００６６】
カートリッジ１００は、図３に示すように、吸着液３０、洗浄液３２、溶出液３４、第
１オイル４０、第２オイル４２、および第３オイル４４を収容している。図示の例では、第２チューブ２２側から栓２４側に向けて、吸着液３０、第１オイル４０、洗浄液３２、第２オイル４２、溶出液３４、第３オイル４４の順でカートリッジ１００内に配置されている。具体的には、吸着液３０は、第２チューブ２２内に配置され、洗浄液３２、溶出液３４、およびオイル４０，４２，４４は、第１チューブ２０内に配置されている。
【００６７】
吸着液３０は、核酸結合性固相担体１０に核酸を吸着させる場となる液体である。吸着液３０は、カオトロピック物質を含む水溶液である。吸着液３０としては、例えば、５Ｍグアニジンチオシアン酸塩、２％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．２）を用いる。
【００６８】
カオトロピック物質とは、水溶液中でカオトロピックイオン（イオン半径の大きな１価の陰イオン）を生じ、疎水性分子の水溶性を増加させる作用を有しており、核酸の核酸結合性固相担体１０への吸着に寄与する物質である。具体的には、カオトロピック物質としては、グアニジン塩酸塩、ヨウ化ナトリウム、過塩素酸ナトリウム等を用いる。
【００６９】
吸着液３０中にカオトロピック物質が存在することによって、吸着液３０中の核酸は、水溶液に囲まれて存在するよりも、固体に吸着して存在するほうが熱力学的に有利となる。そのため、核酸は、核酸結合性固相担体１０の表面に吸着する。
【００７０】
洗浄液３２は、核酸が吸着した核酸結合性固相担体１０を洗浄する液体である。洗浄液３２は、例えば、緩衝液等の低塩濃度水溶液である。低塩濃度水溶液の塩濃度は、例えば、１００ｍＭ以下である。洗浄液３２を緩衝液とするための塩は、例えば、トリス、ヘペス、ピペス、リン酸等である。さらに、洗浄液３２は、アルコールを含んでいてもよい。
【００７１】
なお、図示はしないが、洗浄液は、複数の部分に分離されていてもよい。具体的には、洗浄液は、オイルによって、第１部分、第２部分、第３部分に分離されていてもよい。この場合、第１部分、第２部分、第３部分の組成や濃度は、異なってもよい。これにより、より確実に、核酸が吸着した核酸結合性固相担体１０を洗浄することができる。
【００７２】
溶出液３４は、核酸が吸着した核酸結合性固相担体１０から核酸を分離させ、溶出液３４に核酸を溶出させる液体である。溶出液３４としては、例えば、純水を用いる。溶出液３４は、液滴であってもよい。
【００７３】
第１オイル４０は、吸着液３０と洗浄液３２との間に配置されている。第１オイル４０は、吸着液３０および洗浄液３２を互いに相分離させ、吸着液３０および洗浄液３２と混和しない液体である。第２オイル４２は、洗浄液３２と溶出液３４との間に配置されている。第２オイル４２は、洗浄液３２および溶出液３４を互いに相分離させ、洗浄液３２および溶出液３４と混和しない液体である。第３オイル４４は、溶出液３４と栓２４との間に配置されている。第３オイル４４は、溶出液３４と混和しない液体である。
【００７４】
第１オイル４０、第２オイル４２、および第３オイルとしては、例えば、ジメチルシリコーンオイル等のシリコーン系オイル、パラフィン系オイル、ミネラルオイル、およびそれらの混合物を用いる。
【００７５】
カートリッジ１００は、図４に示すように、第１チューブ２０と第２チューブ２２とが分離可能である。第１チューブ２０の一方の端部には、栓２６が着脱可能である。第２チューブ２２は、開口２２ａを有している。開口２２ａには、栓２８が着脱可能である。
【００７６】
カートリッジ１００を組立てる場合は、第２チューブ２２から栓２８を外して、核酸結
合性固相担体１０が配置された吸着液３０中に核酸を導入する。そして、第１チューブ２０から栓２６を外して、第２チューブ２２の開口２２ａに、第１チューブ２０の一方の端部を挿入する。このようにして、図３に示すカートリッジ１００を組立てることができる。
【００７７】
３．  核酸の抽出方法
次に、本実施形態に係る核酸の抽出方法について説明する。図５は、本実施形態に係る核酸の抽出方法を説明するためのフローチャートである。図６は、本実施形態に係る核酸の抽出方法を説明するための模式図である。以下では、一例として、カートリッジ１００を用いた核酸の抽出方法について説明する。
【００７８】
（１）まず、図４に示すように、第２チューブ２２から栓２８を外し、第２チューブ２２に収容された吸着液３０中に核酸を導入する（ステップＳ１０１）。吸着液３０中には、核酸結合性固相担体１０が配置されている。核酸は、綿棒などの採取具によって、ヒトや細菌などの生物由来の細胞、あるいはウイルス等から採取される。吸着液３０に核酸を導入した後、第２チューブ２２の開口２２ａを栓２８で塞ぐ。
【００７９】
（２）次に、核酸結合性固相担体１０に核酸を吸着液３０中に配置し、吸着液３０中にて、核酸結合性固相担体１０に核酸を吸着させる（ステップＳ１０２）。核酸は、吸着液３０に含まれるカオトロピック物質によって、核酸結合性固相担体１０の表面に吸着する。例えば、核酸結合性固相担体１０を攪拌して、核酸結合性固相担体１０に核酸を吸着させる。
【００８０】
（３）次に、核酸が吸着した核酸結合性固相担体１０を洗浄液３２中に配置し、核酸が吸着した核酸結合性固相担体１０を洗浄する（ステップＳ１０３）。具体的には、図６に示すように、一対の磁石５０，５２を用いて磁石５０，５２の磁力により、核酸が吸着した核酸結合性固相担体１０を吸着液３０中から洗浄液３２中へ移動させる。磁石５０，５２は、例えば、永久磁石である。一対の磁石５０，５２は、磁石５０，５２間にカートリッジ１００が位置するように設けられている。図６に示すように、磁石５０をカートリッジ１００に近づけることにより、核酸結合性固相担体１０は、カートリッジ１００の磁石５０側の内壁に引き寄せられる（図６におけるＡの状態）。その状態で、一対の磁石５０，５２を、栓２４側に移動させることにより、核酸結合性固相担体１０を吸着液３０中から洗浄液３２中へ移動させることができる。
【００８１】
核酸結合性固相担体１０を洗浄する工程（ステップＳ１０３）は、核酸が吸着した核酸結合性固相担体１０を、磁力によって洗浄液３２中を振動させて行われる。具体的には、磁石５０，５２間の距離を一定に保ちながら、磁石５０，５２を、カートリッジ１００の長手方向（第１チューブ２０の一方の端部から他方の端部に向かう方向）と直交する短手方向（以下、単に「短手方向」ともいう）に、所定の周波数で振動させる。この状態で、磁石５０，５２を、カートリッジ１００の長手方向（以下、単に「長手方向」ともいう）に移動させる。すなわち、磁石５０，５２は、磁石５０が磁石５２よりもカートリッジ１００に近づく工程と、磁石５２が磁石５０よりもカートリッジ１００に近づく工程と、を繰り返しながら（核酸結合性固相担体１０に対する外部磁場の印加方向を所定の周波数で変化させながら）、長手方向に移動する。
【００８２】
核酸結合性固相担体１０の磁性粒子１２は、上記のように磁性を有する。そのため、磁石５０がカートリッジ１００に近づくと、核酸結合性固相担体１０は、カートリッジ１００の（第１チューブ２０の）磁石５０側の内壁に引き寄せられる（図６におけるＢおよびＤの状態）。一方、磁石５２がカートリッジ１００に近づくと、核酸結合性固相担体１０は、カートリッジ１００の磁石５２側の内壁に引き寄せられる（図６におけるＣおよびＥ
の状態）。図示の例では、核酸結合性固相担体１０は、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅの順に、洗浄液３２中を移動する。このように、核酸結合性固相担体１０は、磁石５０，５２の短手方向の振動および長手方向への移動に伴って、短手方向に振動しながら長手方向に移動する。
【００８３】
磁石５０，５２の短手方向の振動の周波数は、例えば、３Ｈｚ以上３０Ｈｚ以下であり、好ましくは５Ｈｚ以上１５Ｈｚ以下である。磁石５０，５２の振動の周波数を３Ｈｚ以上とすることにより、洗浄液３２による洗浄の効果を高めることができる。磁石５０，５２の振動の周波数を３０Ｈｚ以下とすることにより、核酸結合性固相担体１０を、磁石５０，５２の振動に追従させることができる。磁石５０，５２の長手方向の移動速度は、核酸結合性固相担体１０を洗浄することができれば、特に限定されない。磁石５０，５２の短手方向の振動および長手方向の移動は、例えば、図示せぬ移動機構によって自動的に行われる。
【００８４】
（４）次に、核酸が吸着した核酸結合性固相担体１０を溶出液３４中に配置し、溶出液３４中に核酸を溶出させる（ステップＳ１０４）。具体的には、磁石５０，５２を長手方向に移動させることにより、核酸が吸着した核酸結合性固相担体１０を、洗浄液３２中から溶出液３４中に移動させる。核酸が吸着した核酸結合性固相担体１０が溶出液３４と接触すると、核酸は、核酸結合性固相担体１０から分離して、溶出液３４中に溶出する。
【００８５】
核酸を溶出する工程（ステップＳ１０４）は、例えば、核酸結合性固相担体１０を洗浄する工程（ステップＳ１０３）と同様に、核酸が吸着した核酸結合性固相担体１０を、磁力によって溶出液３４中を振動させて行われる。本工程では、磁石５０，５２の長手方向の移動を停止させた状態で、磁石５０，５２を短手方向に振動させてもよい。
【００８６】
なお、核酸を吸着させる工程（ステップＳ１０２）において、核酸結合性固相担体１０を攪拌して、核酸結合性固相担体１０に核酸を吸着させる際に、核酸結合性固相担体１０を洗浄する工程（ステップＳ１０３）と同様に、核酸結合性固相担体１０を、磁力によって吸着液３０中を振動させてもよい。これにより、例えば、核酸結合性固相担体１０に対する核酸の吸着効率を向上させることができる。
【００８７】
（５）次に、第１チューブ２０から栓２４を外して、例えば公知の方法により、核酸が溶出された溶出液３４を採取する（ステップＳ１０５）。
【００８８】
以上により、精製された核酸を抽出することができる。
【００８９】
抽出された核酸は、図示せぬ容器に導入され、ＰＣＲが行われる。これにより、核酸を増幅させることができる。
【００９０】
４．  特徴
核酸結合性固相担体１０は、例えば、以下の特徴を有する。
【００９１】
核酸結合性固相担体１０では、Ｆｅ、Ｃｒ、Ｓｉ、およびＢを含むアモルファス金属の磁性粒子１２と、磁性粒子１２の表面に設けられた酸化シリコン膜１４と、を含む。そのため、磁性粒子１２は、飽和磁化が大きく、保磁力が小さい。これにより、外部磁場印加方向を変化させて、核酸が吸着した核酸結合性固相担体１０を移動させ、洗浄する場合に、核酸結合性固相担体１０は、外部磁場の変化に対する追従性を向上することができる。したがって、核酸が吸着した核酸結合性固相担体１０を、外部磁場の変化によって十分に洗浄することができ、効率よく核酸を抽出することができる。その結果、核酸の抽出量を多くすることができるので、ＰＣＲの高速化や高感度化を図ることができる。また、短時間で、核酸を抽出することができる。
【００９２】
例えば核酸結合性固相担体が外部磁場の変化に追従しないと、核酸結合性固相担体が集まって塊状となり、核酸結合性固相担体の表面において洗浄液と接触しない部分の割合が大きくなる。そのため、十分に核酸結合性固相担体を洗浄できない場合がある。
【００９３】
核酸結合性固相担体１０では、飽和磁化が５０ｅｍｕ／ｇ以上である。そのため、核酸結合性固相担体１０は、外部磁場の変化に追従することができる。
【００９４】
核酸結合性固相担体１０では、飽和磁化が１００ｅｍｕ／ｇ以上１５０ｅｍｕ／ｇ以下である。そのため、核酸結合性固相担体１０は、より確実に外部磁場の変化に追従することができ、かつ核酸結合性固相担体１０の製造ばらつきを小さくすることができる。
【００９５】
核酸結合性固相担体１０では、磁性粒子１２の平均粒径は、０．５μｍ以上１０μｍ以下である。そのため、核酸結合性固相担体１０は、核酸結合性固相担体１０を使用して抽出、精製を行った核酸をＰＣＲ法により遺伝子分析を行った場合に、Ｃｔ値を小さくすることができ、かつ外部磁場の印加方向を変化させて核酸結合性固相担体１０に吸着させた核酸の洗浄等を行う場合に、ブラウン運動を抑制することができる。
【００９６】
核酸結合性固相担体１０では、酸化シリコン膜１４の平均厚さは、１ｎｍ以上５００ｎｍ以下である。そのため、核酸結合性固相担体１０は、核酸結合性固相担体１０の単位質量当たりの飽和磁化を大きくすることができ、かつ酸化シリコン膜１４の製造ばらつきを小さくすることができる。
【００９７】
核酸結合性固相担体１０では、磁性粒子１２は、軟磁性体である。そのため、磁性粒子１２は、小さな保磁力を有することができる。
【００９８】
本実施形態に係る核酸の抽出方法は、例えば、以下の特徴を有する。
【００９９】
本実施形態に係る核酸の抽出方法では、核酸結合性固相担体１０を洗浄する工程（ステップＳ１０３）は、核酸が吸着した核酸結合性固相担体１０を、磁力によって洗浄液３２中を振動させて行われる。核酸結合性固相担体１０は、外部磁場の変化（外部磁場の印加方向の変化）に追従することができるので、本実施形態に係る核酸の抽出方法では、核酸が吸着した核酸結合性固相担体１０を、外部磁場の変化によって十分に洗浄することができる。したがって、本実施形態に係る核酸の抽出方法では、効率よく核酸を抽出することができる。
【０１００】
本実施形態に係る核酸の抽出方法では、核酸を溶出させる工程（ステップＳ１０４）は、核酸が吸着した前記核酸結合性固相担体１０を、磁力によって溶出液３４中を振動させて行われる。核酸結合性固相担体１０は、外部磁場の変化に追従することができるので、本実施形態に係る核酸の抽出方法は、磁力によって直接核酸結合性固相担体１０を振動させることができる。そのため、本実施形態に係る核酸の抽出方法は、例えばボルテックスミキサーを用いてカートリッジ全体を振動させて核酸を溶出させる場合に比べて、核酸結合性固相担体１０の溶出液に対するせん断力を大きくすることができ、溶出効率（核酸の振り落とし効果）を向上させることができる。したがって、本実施形態に係る核酸の抽出方法では、効率よく核酸を抽出することができる。
【０１０１】
５．  実験例
以下に実験例を示し、本発明をより具体的に説明する。なお、本発明は、以下の実験例によって何ら限定されるものではない。
【０１０２】
５．１．  試料の調製
実施例１では、磁性粒子として（Ｆｅ０．９７Ｃｒ０．０３）７６（Ｓｉ０．５Ｂ０．５）２２Ｃ２からなるアモルファス合金粉末を高速回転水流アトマイズ法により製造した。このような磁性粒子の表面に、ゾルゲル法により酸化シリコン（ＳｉＯ２）膜（平均厚さ１００ｎｍ程度）を形成して、実施例１の核酸結合性固相担体（ビーズ）を得た。
【０１０３】
比較例１では、磁性粒子として酸化鉄からなる金属粉末（東洋紡株式会社製）を用いたこと以外は、実施例１と同様に、核酸結合性固相担体を得た。
【０１０４】
比較例２では、磁性粒子として酸化鉄からなる金属粉末（ｃｈｅｍｉｃｅｌｌ  ＧｍｂＨ社製）を用いたこと以外は、実施例１と同様に、核酸結合性固相担体を得た。
【０１０５】
５．２．  磁化特性評価
実施例１および比較例１の核酸結合性固相担体の磁化特性を、ＶＳＭにより評価した。図７は、実施例１の核酸結合性固相担体の磁化特性を示すグラフである。図８は、比較例１の核酸結合性固相担体の磁化特性を示すグラフである。
【０１０６】
図７および図８に示すように、実施例１の飽和磁化は、１４０ｅｍｕ／ｇ程度であったのに対し、比較例１の飽和磁化は、２２ｅｍｕ／ｇ程度であった。したがって、Ｆｅ，Ｃｒ、Ｓｉ、およびＢを含むアモルファス合金粉末は、酸化鉄からなる金属粉末に比べて、飽和磁化が大きいことがわかった。
【０１０７】
図９は、図７で評価した実施例１の粒径分布を示すグラフである。図１０は、図８で評価した比較例１の粒径分布を示すグラフである。図９に示す実施例１の平均粒径は、３．４μｍであった。図１０に示す比較例１の平均粒径は、３．８μｍであった。平均粒径は、レーザー回折法により取得された体積基準の粒度分布において、小径側から累積５０％となるときの粒径である。
【０１０８】
５．３．  外部磁場に対する追従性評価
実施例１および比較例１，２の核酸結合性固相担体の外部磁場に対する（外部磁場の印加方向に対する）追従性を評価した。具体的には、図１１に示すように、水Ｗを収容するチューブＴを準備し、核酸結合性固相担体Ｎを水Ｗ中に導入した。次に、磁石Ｍ１と磁石Ｍ２との間にチューブＴを配置し、磁石Ｍ１，Ｍ２を振動させた。そして、磁石Ｍ１，Ｍ２の振動の周波数を１Ｈｚ〜７Ｈｚの範囲で変化させて、核酸結合性固相担体Ｎの磁力に対する追従性を目視により評価した。チューブＴとしては、内径（内径の最大値）が８ｍｍ、材質がポリプロピレンである容器を用いた。磁石Ｍ１，Ｍ２としては、永久磁石を用いた。なお、本実験で用いた実施例１、比較例１、および比較例２の平均粒径は、それぞれ、１．８μｍ、３．８μｍ、１．０μｍであった。
【０１０９】
図１１は、核酸結合性固相担体Ｎが外部磁場に対して追従することができる例を説明するための模式図である。本例では、図１１に示すように、磁石Ｍ１がチューブＴに近づいている状態（（Ａ）参照）から、磁石Ｍ２がチューブＴに近づく状態に移行すると、全ての核酸結合性固相担体Ｎが、磁石Ｍ１側のチューブＴの内壁から離間し（（Ｂ）参照）、磁石Ｍ２側のチューブＴの内壁に移る（（Ｃ）参照）。そして、再び、磁石Ｍ１がチューブＴに近づくと、全ての核酸結合性固相担体Ｎが、磁石Ｍ２側のチューブＴの内壁から離間する（（Ｄ）参照）。このように、全ての核酸結合性固相担体Ｎは、外部磁場に対して追従する。
【０１１０】
図１２は、核酸結合性固相担体Ｎが外部磁場に対して追従することができない例を説明するための模式図である。本例では、磁石Ｍ１がチューブＴに近づいている状態（（Ａ）
参照）から、磁石Ｍ２がチューブＴに近づく状態に移行しても、核酸結合性固相担体Ｎの一部は、磁石Ｍ１側のチューブＴの内壁に残ったままである（（Ｂ）および（Ｃ）参照）。そして、全ての核酸結合性固相担体Ｎが磁石Ｍ２側のチューブＴの内壁に移動する前に、再び、磁石Ｍ１がチューブＴに近づく（（Ｄ）参照）。したがって、核酸結合性固相担体Ｎの一部は、磁石Ｍ２側のチューブＴの内壁に移動することができない。このように、核酸結合性固相担体Ｎの一部または全ては、外部磁場に対して追従することができない。
【０１１１】
表１は、核酸結合性固相担体の外部磁場に対する追従性を示す表である。表１では、図１１に示すように、全ての核酸結合性固相担体Ｎが磁力に対して追従した場合を「○」と示し、図１２に示すように、核酸結合性固相担体Ｎの一部または全てが磁力に対して追従することができなかった場合を「×」と示している。
【０１１２】
【表１】
0006597451.tif 000002
【０１１３】
表１に示すように、実施例１では、磁石Ｍ１，Ｍ２の振動の周波数１Ｈｚ〜７Ｈｚにおいて追従した。一方、比較例１では、磁石Ｍ１，Ｍ２の振動の周波数が高くなると追従せず、比較例２では、全ての周波数において追従しなかった。したがって、Ｆｅ，Ｃｒ、Ｓｉ、およびＢを含むアモルファス合金粉末は、酸化鉄からなる金属粉末に比べて、外部磁場に対する追従性がよいことがわかった。なお、本実験では、磁石Ｍ１，Ｍ２の振動の周波数を７Ｈｚまでしか上げていないが、実施例１は、周波数が７Ｈｚより高くても、追従することができると考えられる。
【０１１４】
実施例１では、磁性粒子として、Ｆｅ，Ｃｒ、Ｓｉ、およびＢを含むアモルファス合金粉末を用いているため、保磁力が小さい。そのため、図１１に示すように、核酸結合性固相担体は、磁石Ｍ１側から磁石Ｍ２側に移動する際に、塊状になり難く、分散性がよいと考えられる。一方、比較例１，２では、磁性粒子として、酸化鉄からなる金属粉末を用いているため、保磁力が大きい。そのため、図１２に示すように、核酸結合性固相担体は、磁石Ｍ１側から磁石Ｍ２側に移動する際に、塊状になり易いと考えられる。
【０１１５】
５．４．  平均粒径に対するＣｔ値の依存性評価
平均粒径が１．８μｍ、３．２μｍ、および１１μｍの実施例１の核酸結合性固相担体を用いて核酸抽出反応（前処理）を実施し、その抽出液をＰＣＲ反応液へ添加してリアルタイムＰＣＲ反応を行い、Ｃｔ値を求めた。ＰＣＲは、標的核酸として大腸菌のＤＮＡを用い、各平均粒径の核酸結合性固相担体に対して、同じ条件で行った。
【０１１６】
図１３は、核酸結合性固相担体の平均粒径とＣｔ値との関係を示すグラフである。図１３に示すように、核酸結合性固相担体の平均粒径が小さいほど、Ｃｔ値が低く、ＰＣＲの高感度化を図れることがわかった。なお、図１３では、核酸結合性固相担体の粒径のばらつきについても示している。
【０１１７】
ここで、体積Ｖに含まれる核酸結合性固相担体の表面の総面積Ａは、核酸結合性固相担体１個の直径をＲとすると、下記式（３）で表される。
【０１１８】
【数１】
0006597451.tif 000003
【０１１９】
（３）式より、粒径をＲ１からＲ２（Ｒ２＜Ｒ１）へ変更させると、総面積Ａは、（Ｒ１／Ｒ２）倍となる。したがって、核酸結合性固相担体の平均粒径が小さいほど、核酸結合性固相担体の表面の総面積が大きなくり、核酸の吸着量が増えるために、図１３に示すようにＣｔ値が低くなると考えられる。
【０１２０】
本発明は、実施の形態で説明した構成と実質的に同一の構成（例えば、機能、方法及び結果が同一の構成、あるいは目的及び効果が同一の構成）を含む。また、本発明は、実施の形態で説明した構成の本質的でない部分を置き換えた構成を含む。また、本発明は、実施の形態で説明した構成と同一の作用効果を奏する構成又は同一の目的を達成することができる構成を含む。また、本発明は、実施の形態で説明した構成に公知技術を付加した構成を含む。
【符号の説明】
【０１２１】
１０…核酸結合性固相担体、１２…磁性粒子、１４…酸化シリコン膜、２０…第１チューブ、２２…第２チューブ、２２ａ…開口、２４，２６，２８…栓、３０…吸着液、３２…洗浄液、３４…溶出液、４０…第１オイル、４２…第２オイル、４４…第３オイル、５０，５２…磁石、１００…カートリッジ
【図１】
0006597451.tif 000004
【図２】
0006597451.tif 000005
【図３】
0006597451.tif 000006
【図４】
0006597451.tif 000007
【図５】
0006597451.tif 000008
【図６】
0006597451.tif 000009
【図７】
0006597451.tif 000010
【図８】
0006597451.tif 000011
【図９】
0006597451.tif 000012
【図１０】
0006597451.tif 000013
【図１１】
0006597451.tif 000014
【図１２】
0006597451.tif 000015
【図１３】
0006597451.tif 000016