(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩と、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つの有効成分との組み合わせ製剤であって、前記組み合わせ製剤はイミペネムを含まず、前記組み合わせ製剤は、同時に、別々に又は時間間隔をおいて使用されるための前記組み合わせ製剤。
【請求項２】
シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩と、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つの有効成分と、薬学的に許容され得る担体とを含み、イミペネムを含まない、医薬組成物。
【請求項３】
シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩と、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つの有効成分と、薬学的に許容され得る担体とを含み、イミペネムを含まない、抗菌剤。
【請求項４】
コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸又はそれらの薬学的に許容され得る塩の１質量部に対して、０．５質量部以上２００質量部以下のシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩を含む、請求項３に記載の抗菌剤。
【請求項５】
コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸又はそれらの薬学的に許容され得る塩の１質量部に対して、１．５質量部以上３質量部以下のシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩を含む、請求項３に記載の抗菌剤。
【請求項６】
第１の区画にシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩を含み、第２の区画にコリスチン、コリスチンメタンスルホン酸及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つのメガリンリガンドを含み、イミペネムを含まない、医薬キット。
【請求項７】
有効成分としてシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩を含む、メガリン拮抗剤。
【請求項８】
メガリンリガンドが細胞内へ過剰に取り込まれることに起因する細胞障害を抑制するために使用される、請求項７に記載のメガリン拮抗剤。
【請求項９】
腎障害又は内耳障害を抑制するために使用される、請求項７に記載のメガリン拮抗剤。
【請求項１０】
内耳障害を抑制するために使用される、請求項７に記載のメガリン拮抗剤。
【請求項１１】
前記メガリンリガンドが、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つのメガリンリガンドである、請求項８に記載のメガリン拮抗剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、メガリンに結合することによりメガリンリガンドと拮抗するメガリン拮抗剤、及び前記メガリン拮抗剤を含有する医薬組成物に関する。
本願は、２０１４年１月２４日に、日本に出願された特願２０１４−０１１５３０号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。【０００２】
メガリン（Ｍｅｇａｌｉｎ）は、ＬＲＰ−２（Ｌｏｗ  Ｄｅｎｓｉｔｙ  Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  （ＬＤＬ）−ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２）やｇｐ３３０（Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ３３０）とも呼ばれている細胞膜タンパク質であり、分子量が約６００ＫＤａの巨大な膜１回貫通型糖タンパク質である。Ｎ末端側に４つの機能的ドメインを有する細胞外領域があり、Ｃ末端側に短い細胞内領域があり、両者の間に単一の細胞膜貫通領域がある。メガリンはエンドサイトーシスレセプターとして機能しており、その細胞外領域に結合する物質（メガリンリガンド）を細胞内へ取り込む。哺乳動物の体内におけるメガリンの発現は、腎臓近位尿細管上皮細胞（主に、管腔側膜）、内耳の上皮細胞、精巣や神経外胚葉等で確認されている。特に腎臓近位尿細管上皮細胞においては、糸球体ろ過されたタンパク質や投与された薬剤等が、メガリンの細胞外領域と結合し、エンドサイトーシスにより細胞内に取り込まれる（例えば、非特許文献１、２参照。）。例えば、腎臓近位尿細管上皮細胞におけるメガリン介在性エンドサイト−シスは、生体内因子を腎臓近位尿細管に再吸収することにより、生体からの喪失を防ぐ機能がある。【０００３】
多数の生体内因子や薬物等が、メガリンリガンドとして報告されている。具体的には、例えば、アルブミン、アミノグリコシド、アミラーゼ、アンギオテンシンII、アンギオテンシン1-7、アポリポプロテインＢ、アポリポプロテインＥ、アポリポプロテインＨ、アポリポプロテインＪ（Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎ）、アポリポプロテインＭ、アプロチニン、骨形成タンパク質４（Ｂｏｎｅ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ４）、カルシウムイオン、カテプシンＢ、凝固第ＶＩＩＩ因子、ＣＴＧＦ（結合組織成長因子)、チトクロームＣ、シスタチンＣ、ＥＧＦ（上皮成長因子）、葉酸結合タンパク質、ガラクトシダーゼＡ、ゲルゾリン、ヘモグロビン、インシュリン、ＩＧＦ−Ｉ（インスリン様成長因子Ｉ ）、ラクトフェリン、レプチン、リポタンパクリパ−ゼ（Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｐａｓｅ）、肝型脂肪酸結合タンパク質（Ｌｉｖｅｒ ｔｙｐｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）、Ｌｐ（ａ）、リゾチーム、メタロチオネイン、α１ マイクログロブリン、β２ マイクログロブリン、ミオグロビン、ＮＧＡＬ（Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｇｅｌａｔｉｎａｓｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｌｉｐｏｃａｌｉｎ）、臭気物質結合タンパク質、副甲状腺ホルモン、ＰＡＰ−１（Ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ １）、プラスミノーゲン、ＰＡＩ−１（Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｔｙｐｅ １）、ｕＰＡＩ−１（Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｔｙｐｅ １ ｕｒｏｋｉｎａｓｅ）、ｔＰＡＩ−１（Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｔｙｐｅ １ ｔｉｓｓｕｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ）、ポリミキシンＢ、プロラクチン、プロウロキナーゼ、ｒＦＶＩＩａ（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩａ）、ＲＢＰ（Ｒｅｔｉｎｏｌ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）、セレノプロテインＰ、精嚢分泌タンパク質II、性ホルモン結合グロブリン、ソニック・ヘッジホッグタンパク質、チログロブリン、トランスコバラミン−ビタミンＢ１２、トランスサイレチン、トリコサンチン、ビタミンＤ結合タンパク質等が報告されている（例えば、非特許文献３参照。）。【０００４】
薬物やその代謝産物により、重篤な腎障害が生じる場合がある。腎障害の発症機序には様々な経路があるが、メガリンを介した再吸収機構もその一因となることが知られている。例えば、環状ペプチド系抗生物質であるポリミキシン類のうちのポリミキシンＢは、メガリンに結合後にエンドサイトーシスにより細胞内に取込まれることにより、細胞障害を生じさせることが示されている。また、ゲンタマイシン等のアミノグリコシド系抗生物質は、メガリンに結合後にエンドサイトーシスにより細胞内に取込まれるが、メガリンリガンドであるリゾチーム、アプロチニン、及びチトクロームＣを併用投与することによりゲンタマイシンのアミノグリコシド系抗生物質による腎毒性を抑制する効果が得られることが報告されている（例えば、特許文献１参照。）。【０００５】
生体内因子によっても腎障害が生じる場合がある。原尿中に過剰のアルブミンが逸脱してメガリンによる再吸収機能が病的に亢進する状況に陥ると、腎臓近位尿細管細胞が障害され、糖尿病性腎症等の慢性腎障害につながることが知られている。また、例えば、非特許文献４では、イムノトキシンであるＬＭＢ２の投与により腎臓の糸球体上皮細胞（ポドサイト）を破壊して濾過機能障害を引き起こすと、原尿中に多量に逸脱したアルブミンがメガリンを介して過剰に細胞に取込まれる結果、尿細管細胞が細胞ストレスにより障害されるが、メガリンのモザイク型ノックアウトマウス（即ち、腎尿細管細胞のうちの一部のみメガリン発現が欠損しているマウス）では、メガリンを発現していない尿細管細胞の細胞障害が生じないことが報告されている。【０００６】
一方で、シラスタチン（Ｃｉｌａｓｔａｔｉｎ；（Ｚ）−７−［［（Ｒ）−２−Ａｍｉｎｏ−２−ｃａｒｂｏｘｙｅｔｈｙｌ］ｔｈｉｏ］−２−［［［（Ｓ）−２，２−ｄｉｍｅｔｈｙｌｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌ］ｃａｒｂｏｎｙｌ］ａｍｉｎｏ］−２−ｈｅｐｔｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）は、腎臓近位尿細管刷子縁膜に存在する代謝酵素であるＤＨＰ−Ｉ（ｄｅｈｙｄｒｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ−Ｉ）に対して阻害活性をもつ。シラスタチンには抗菌活性は認められないが、カルバペネム系抗生物質イミペネムはＤＨＰ−Ｉによる分解を受け、その代謝産物が腎臓近位尿細管を強く障害することから、前記代謝物による腎障害を防ぐことを目的として、イミペネムとシラスタチンの合剤が注射剤として使用されている。【０００７】
特許文献２には、シラスタチンには、幾つかの腎毒性を有する薬剤に対して、それら薬剤の毒性を減弱させる作用があることが報告されている。この文献においては、実際に、ラットに抗癌剤であるシスプラチンとシラスタチンを併用投与したところ、腎毒性が改善されたことが報告されており、シラスタチンは、コレステロールラフトを介した細胞内への輸送経路を阻害することにより腎毒性を軽減させる可能性が示されている。【０００８】
一方、ある種の抗生物質（ゲンタマイシン等のアミノグリコシド系薬剤、バンコマイシン等のグリコペプチド系抗菌薬剤）、及びシスプラチン等の抗癌剤の使用により、副作用として内耳障害（耳鳴り、めまい、難聴）が生じることが広く知られている（非特許文献６）。
また、内耳障害を引き起こす薬剤はメガリンリガンドとして機能するものが多く、内耳上皮細胞にメガリンが局在することが知られている（非特許文献７）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開２００３−２６１４５９号公報
【特許文献２】米国特許出願公開第２０１１／０１６５２６４号明細書
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｍａｒｚｏｌｏら、Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２０１１年、第４４巻、第８９〜１０５ページ。
【非特許文献２】Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、２００２年、第３巻、第２５８〜２６８ページ。
【非特許文献３】Ｓｃｈｍｉｔｚら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００２年、第２７７巻、第６１８〜６２２ページ。
【非特許文献４】Ｍｏｔｏｙｏｓｈｉら、Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、２００８年、第７４巻、第１０号、第１２６２〜１２６９ページ。
【非特許文献５】Ｏｒｌａｎｄｏら、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ、１９９２年、第８９巻、第１５号、第６６９８〜６７０２ページ。
【非特許文献６】厚生労働省、“医療関係者の皆様へ”、［ｏｎｌｉｎｅ］、２００６年厚生労働省ホームページ、トピックス、［平成２６年１２月２日検索］、インターネット＜ＵＲＬ：  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｈｌｗ．ｇｏ．ｊｐ／ｔｏｐｉｃｓ／２００６／１１／ｄｌ／ｔｐ１１２２−１ｐ０３．ｐｄｆ＞
【非特許文献７】高野  幹久、“レセプター分子を標的としたアミノグリコシドの腎毒性低減製剤の開発”、［ｏｎｌｉｎｅ］、２００５年１月、広島大学大学院医歯薬学総合研究科広報委員会、ＨＩＲＯＳＨＩＭＡ  ＢＩＭＥＳ  ＮＥＷＳ  ５号、第６頁、［平成２６年１２月２日検索］、インターネット＜ＵＲＬ：  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｈｉｒｏｓｈｉｍａ−ｕ．ａｃ．ｊｐ／ｂｉｍｅｓ／ＢｉＭｅＳＮｅｗｓ／Ｒｅｓｅａｒｃｈ／ｐｄｂ６０９６．ｈｔｍｌ＞
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
細胞内への取り込みにより細胞障害を引き起こすおそれのあるメガリンリガンドについて、メガリンへの結合を抑制することにより、細胞内への取り込みを抑制でき、直接的に細胞障害の減弱につながることが期待できる。【００１２】
本発明は、メガリンリガンドのメガリンへの結合を効果的に抑制できる化合物又はその薬学的に許容され得る塩、前記化合物又はその薬学的に許容され得る塩を有効成分として含むメガリン拮抗剤、前記化合物又はその薬学的に許容され得る塩を含む、メガリンリガンドにより生じる腎毒性又は内耳障害の抑制剤、前記化合物又はその薬学的に許容され得る塩を含む医薬組成物、及び前記化合物又はその薬学的に許容され得る塩とメガリンリガンドとの併用療法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、シラスタチンがメガリンと結合し、メガリンリガンド（本明細書において、単に「メガリンリガンド」と称する場合、特に断りのない限り、前記「メガリンリガンド」はシラスタチンを除くメガリンリガンドを意味する）と拮抗し得ること、例えば、コリスチン（ポリミキシンＥともいう）がメガリンリガンドとして機能し、メガリンを介して腎障害（本明細書において、腎毒性ということもある）を生じさせ得ること、及びコリスチンとシラスタチンの併用投与により、コリスチンによる腎障害が改善されることを見出し、本発明を完成させた。
また、シラスタチンがメガリンリガンドと拮抗し得ることから、シラスタチンがメガリンリガンドによる腎障害のみならず、内耳障害の抑制にも有効であることを見出し、本発明を完成させた。【００１４】
すなわち、本発明は、以下の［１］〜［９］のメガリンリガンド拮抗剤及び医薬用組成物を提供する。
［１］  シラスタチン又はその薬理学的に許容される塩を有効成分とすることを特徴とする、メガリンリガンド拮抗剤。
［２］  メガリンリガンドが細胞内へ過剰に取り込まれることに起因する細胞障害を抑制するために使用される、前記［１］のメガリンリガンド拮抗剤。
［３］  腎障害の予防又は治療のために用いられる、前記［２］のメガリンリガンド拮抗剤。
［４］  動物に、メガリンリガンドと併用投与される、前記［１］〜［３］のいずれかのメガリンリガンド拮抗剤。
［５］  前記メガリンリガンドが、ポリミキシン類、アミノグリコシド系抗生物質、グリコペプチド系抗生物質、及びシスプラチンからなる群より選択される１以上である、前記［２］〜［４］のいずれかのメガリンリガンド拮抗剤。
［６］  前記［１］〜［５］のいずれかのメガリンリガンド拮抗剤を含有する医薬用組成物。
［７］  さらに、有効成分としてメガリンリガンドを含有する、前記［６］の医薬用組成物。
［８］  前記メガリンリガンドが、細胞内へ過剰に取り込まれることにより細胞障害を引き起こす物質である、前記［７］の医薬用組成物。
［９］  前記メガリンリガンドが、ポリミキシン類、アミノグリコシド系抗生物質、及びグリコペプチド系抗生物質からなる群より選択される１以上である、前記［７］の医薬用組成物。【００１５】
即ち、本発明は以下の側面を有する。
（１）  有効成分としてシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩を含む、ポリミキシン類、アミノグリコシド系抗生物質、グリコペプチド系抗生物質、シスプラチン、タクロリムス及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つのメガリンリガンドによりメガリンを介して誘発される、腎障害又は内耳障害の抑制剤；
（２）  内耳障害の抑制剤である、（１）に記載の抑制剤；
（３）  前記メガリンリガンドが、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸、ゲンタマイシン、バンコマイシン、シスプラチン、タクロリムス及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つのメガリンリガンドである、（１）又は（２）に記載の抑制剤；
（４）  前記メガリンリガンドが、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つのメガリンリガンドである、（１）又は（２）に記載の抑制剤；
（５）  ポリミキシン類、アミノグリコシド系抗生物質、グリコペプチド系抗生物質、シスプラチン、タクロリムス及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つのメガリンリガンドによりメガリンを介して誘発される、腎障害又は内耳障害の抑制のために使用される、シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩；
（６）  内耳障害の抑制のために使用される、（５）に記載のシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩；
（７）  シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩と、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つの有効成分との組み合わせ製剤であって、前記組み合わせ製剤は、同時に、別々に又は時間間隔をおいて使用されるための前記組み合わせ製剤；
（８）  シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩と、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つの有効成分と、薬学的に許容され得る担体とを含む医薬組成物；
（９）  シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩と、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つの有効成分と、薬学的に許容され得る担体とを含む抗菌剤；
（１０）  コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸又はそれらの薬学的に許容され得る塩の１質量部に対して、０．５質量部以上２００質量部以下のシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩を含む、（９）に記載の抗菌剤；
（１１）  コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸又はそれらの薬学的に許容され得る塩の１質量部に対して、１．５質量部以上３質量部以下のシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩を含む、（９）に記載の抗菌剤；
（１２）  ポリミキシン類、アミノグリコシド系抗生物質、グリコペプチド系抗生物質、シスプラチン、タクロリムス及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つのメガリンリガンドによりメガリンを介して誘発される、腎障害又は内耳障害の抑制剤を製造するための、シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩の使用；
（１３）  内耳障害の抑制剤を製造するための、（１２）に記載の使用；
（１４）  前記メガリンリガンドが、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸、ゲンタマイシン、バンコマイシン、シスプラチン、タクロリムス及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つのメガリンリガンドである、（１２）又は（１３）に記載の使用；
（１５）  前記メガリンリガンドが、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つのメガリンリガンドである、（１２）又は（１３）に記載の使用；
（１６）  第１の区画にシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩を含み、第２の区画にコリスチン、コリスチンメタンスルホン酸及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つのメガリンリガンドを含む医薬キット；
（１７）  有効成分としてシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩を含む、メガリン拮抗剤；
（１８）  メガリンリガンドが細胞内へ過剰に取り込まれることに起因する細胞障害を抑制するために使用される、（１７）に記載のメガリン拮抗剤；
（１９）  腎障害又は内耳障害を抑制するために使用される、（１７）に記載のメガリン拮抗剤；
（２０）  内耳障害を抑制するために使用される、（１７）に記載のメガリン拮抗剤；又は
（２１）  前記メガリンリガンドが、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つのメガリンリガンドである、（１７）に記載のメガリン拮抗剤。
【発明の効果】
【００１６】
本発明に係るシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩、有効成分としてシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩を含むメガリン拮抗剤（以下、「本発明に係る拮抗剤」ということもある）、有効成分としてシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩を含む、メガリンリガンドにより生じる腎障害又は内耳障害の抑制剤（以下、「本発明に係る抑制剤」ということもある）、及び有効成分としてシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩を含む医薬組成物（以下、「本発明に係る医薬組成物」ということもある）は、比較的安全に服用可能であり、かつ重篤な細胞障害の原因となる各種メガリンリガンドのメガリンを介した細胞内取り込みを阻害し得る。このため、シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩、前記メガリン拮抗剤、前記抑制剤、及び前記医薬組成物は、各種メガリンリガンドの主たる薬効を維持しつつ、前記メガリンリガンドによりメガリンを介して誘発される細胞障害やそれに派生する疾患、例えば腎障害又は内耳障害、を抑制するために利用できる（即ち、前記疾患の予防薬や治療薬として利用できる）。また、シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩とメガリンリガンドとの併用療法を提供することができる。
なお、本発明において「各種メガリンリガンドにより誘発される細胞障害やそれに派生する疾患を抑制する」とは、メガリンリガンドが細胞内へ取り込まれることによって生じる細胞障害又はそれに派生する疾患の症状、例えば腎障害又は内耳障害、を全く発現させないこと、前記メガリンリガンドのみを使用したときの症状よりも軽減すること、又は既に発現している前記症状を軽減すること、を意味し、前記「軽減」は、前記症状の程度を低減させること、及び前記症状を完全に消失させることを含む。本明細書では、前記疾患の症状を全く発現させないか、又は前記メガリンリガンドのみを使用したときの症状よりも軽減することを「予防」と称し、既に発現している前記症状を軽減することを「治療」と称し、前記「予防」又は「治療」のために供される医薬を、それぞれ、「予防薬」又は「治療薬」と称する場合がある。また、前記「疾患を抑制する」ための医薬を「抑制剤」と称する場合がある。
また、本明細書では、前記「メガリン拮抗剤」は、「メガリンリガンド拮抗剤」、又は「メガリンリガンド受容体拮抗剤」ともいう。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１Ａ】参考例１において、ＱＣＭ法により、メガリンを固定化したチップに、コリスチンを添加した場合の周波数の経時的変化を示した図である。
【図１Ｂ】参考例１において、ＱＣＭ法により、メガリンを固定化したチップに、ゲンタマイシンを添加した場合の周波数の経時的変化を示した図である。
【図１Ｃ】参考例１において、ＱＣＭ法により、メガリンを固定化したチップに、バンコマイシンを添加した場合の周波数の経時的変化を示した図である。
【図１Ｄ】参考例１において、ＱＣＭ法により、メガリンを固定化したチップに、シスプラチンを添加した場合の周波数の経時的変化を示した図である。
【図１Ｅ】参考例１において、ＱＣＭ法により、メガリンを固定化したチップに、テノホビルを添加した場合の周波数の経時的変化を示した図である。
【図１Ｆ】参考例１において、ＱＣＭ法により、メガリンを固定化したチップに、タクロリムスを添加した場合の周波数の経時的変化を示した図である。
【図２】実施例１において、ＱＣＭ法により、メガリンを固定化したチップにシラスタチンを結合させた後、コリスチンを添加した場合の周波数の経時的変化を示した図である。
【図３】実施例２において、ＱＣＭ法により、メガリンを固定化したチップにシラスタチンを結合させた後、ゲンタマイシンを添加した場合の周波数の経時的変化を示した図である。
【図４】実施例２において、ＱＣＭ法により、メガリンを固定化したチップにシラスタチンを結合させた後、バンコマイシンを添加した場合の周波数の経時的変化を示した図である。
【図５】実施例２において、ＱＣＭ法により、メガリンを固定化したチップにシラスタチンを結合させた後、シスプラチンを添加した場合の周波数の経時的変化を示した図である。
【図６】実施例２において、ＱＣＭ法により、メガリンを固定化したチップにシラスタチンを結合させた後、タクロリムスを添加した場合の周波数の経時的変化を示した図である。
【図７】実施例３において、各試験群における投与５日後の尿中のＮＡＧ／ＣＲＥ値の測定結果を示した図である。
【図８】参考例２において、腎特異的モザイク型メガリンノックアウトマウスにおけるメガリンが発現している近位尿細管細胞の免疫組織化学染色の結果（左）と、メガリンの発現がノックアウトされている近位尿細管細胞の免疫組織化学染色の結果（右）を示した図である。
【図９】参考例３の腎特異的モザイク型メガリンノックアウトマウスにおける近位尿細管細胞において、蛍光２重染色法により、近位尿細管細胞の傷害マーカーであるＫＩＭ−１の発現している近位尿細管細胞（右）と、メガリンの発現している近位尿細管細胞（左）を示した図である。
【図１０】実施例４において、コリスチン投与群の腎組織の免疫組織化学染色（ＰＡＳ染色）（左）と、コリスチン＋シラスタチン併用群の腎組織の免疫組織化学染色（ＰＡＳ染色）（右）の結果を示した図である。
【図１１】実施例４において、コリスチン投与群、コリスチン＋シラスタチン併用群、及びｓａｌｉｎｅ投与群の各腎組織におけるＫＩＭ−１の発現結果をウエスタンブロットにより示した図である。
【図１２】参考例４において、コリスチン及びシラスタチンの抗菌活性、並びにコリスチンの抗菌活性に及ぼすシラスタチン相互作用をディスク法によって評価した結果、コリスチンのみ含有（ａ）の場合は、発育阻止円が形成され（即ち、抗菌力あり）、コリスチン及びシラスタチン含有（ｂ）の場合は、発育阻止円の変化がみられず、シラスタチンのみ含有（ｃ）の場合は、抗菌作用はみられないことを示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明に係るシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩（本明細書において、「薬理学的に許容される塩」ともいう）において、前記薬学的に許容され得る塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩；トリメチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、ジベンジルアミン塩、フェネチルベンジルアミン塩、プロカイン塩、モルホリン塩、ピリジン塩、ピペリジン塩、Ｎ−エチルピペリジン塩等のアミン塩；アンモニウム塩；リジン塩、アルギニン塩等の塩基性アミノ酸塩；等が挙げられる。中でも、シラスタチンナトリウムが特に好ましい。
シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩は、例えば市販品を用いるか、又はそれ自体公知の方法若しくは公知の方法に準じる方法によって製造・入手することができる。
本発明の１つの側面としては、シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩は、イミペネムと組み合わせて使用されない。即ち、本発明の１つの側面としては、本発明に係る抑制剤、本発明に係る医薬組成物、又は本発明に係る拮抗剤は、イミペネムを含まず、本発明に係る治療方法又は予防方法においては、イミペネムが同時又は別々に投与されない。
【００１９】
シラスタチンは、メガリンの細胞外領域に結合する。このため、シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩は、メガリンリガンドと競合する結果、メガリンリガンドのメガリンへの結合を抑制し、前記メガリンリガンドの細胞内への取り込みを抑制できる。このため、本発明に係るシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩は、メガリンリガンドが細胞内へ過剰に取り込まれることに起因する細胞障害を抑制するために使用されることが好ましい。即ち、本発明の１つの側面は、シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩を有効成分とするメガリン拮抗剤である。
【００２０】
メガリンは、腎臓近位尿細管上皮細胞（主に、管腔側膜）、内耳の上皮細胞、精巣や神経外胚葉において発現しているため、本発明に係るシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩、本発明に係る抑制剤、本発明に係る医薬組成物、及び本発明に係る拮抗剤は、各種メガリンリガンドにより、メガリンを介して誘発される、これらの細胞に対する細胞障害やそれに派生する疾患を抑制するために（即ち、予防薬や治療薬として）有用である。
本発明の１つの側面は、各種メガリンリガンドの主たる薬効を維持しつつ、本発明に係るシラスタチン若しくはその薬学的に許容され得る塩、本発明に係る抑制剤、本発明に係る医薬組成物、又は本発明に係る拮抗剤を、腎障害の抑制（即ち、予防又は治療）のために用いることである。
本発明の別の側面は、各種メガリンリガンドの主たる薬効を維持しつつ、本発明に係るシラスタチン若しくはその薬学的に許容され得る塩、本発明に係る抑制剤、本発明に係る医薬組成物、又は本発明に係る拮抗剤を、薬剤性腎障害や糖尿病性腎症の抑制（即ち、予防又は治療）のために用いることである。
本発明のまた別の側面は、各種メガリンリガンドの主たる薬効を維持しつつ、本発明に係るシラスタチン若しくはその薬学的に許容され得る塩、本発明に係る抑制剤、本発明に係る医薬組成物、又は本発明に係る拮抗剤を、薬剤性腎障害を除く疾患又は症状の抑制（即ち、予防又は治療）のために用いることである。
本発明の更に別の側面は、各種メガリンリガンドの主たる薬効を維持しつつ、本発明に係るシラスタチン若しくはその薬学的に許容され得る塩、本発明に係る抑制剤、本発明に係る医薬組成物、又は本発明に係る拮抗剤を、内耳障害、例えば耳鳴り、めまい又は難聴、の抑制（即ち、予防又は治療）のために用いることである。
【００２１】
本発明に係るシラスタチン若しくはその薬学的に許容され得る塩、本発明に係る抑制剤、本発明に係る医薬組成物、又は本発明に係る拮抗剤によりメガリンへの結合が阻害されるメガリンリガンドとしては、メガリン結合能を有している物質であればよく、特に限定されるものではない。例えば、本発明に係るシラスタチン若しくはその薬学的に許容され得る塩、本発明に係る抑制剤、本発明に係る医薬組成物、又は本発明に係る拮抗剤は、非特許文献３に記載されているものとして前記で例示された各物質のメガリン結合能に対して拮抗作用を有する、化合物、抑制剤、医薬組成物、又は拮抗剤として使用することができる。
【００２２】
本発明に係るシラスタチン若しくはその薬学的に許容され得る塩、本発明に係る抑制剤、本発明に係る医薬組成物、又は本発明に係る拮抗剤は、メガリンを介して細胞障害の誘導因子となり得るメガリンリガンドのメガリン結合能に対して拮抗作用を有する、化合物、抑制剤、医薬組成物、又は拮抗剤として使用されることが好ましい。本発明に係る化合物、本発明に係る抑制剤、本発明に係る医薬組成物、又は本発明に係る拮抗剤を用いることにより、メガリンに結合能をもつ細胞障害誘導因子（即ち、メガリンを介して細胞障害の誘導因子となり得るメガリンリガンド）の影響を減弱させることができ、細胞保護効果が得られる。メガリンを介して細胞障害誘導因子となり得るメガリンリガンドとしては、例えば、抗菌剤、抗ウィルス剤、免疫抑制剤、抗癌剤等のうち、メガリン結合能を有する物質や、アルブミン等の生体内因子が挙げられる。本発明に係る化合物、本発明に係る抑制剤、本発明に係る医薬組成物、又は本発明に係る拮抗剤は、コリスチン（ポリミキシンＥともいう）、コリスチンメタンスルホン酸等のポリミキシン類；ゲンタマイシン等のアミノグリコシド系抗生物質；バンコマイシン等のグリコペプチド系抗生物質；シスプラチン；及びタクロリムス；並びにそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つのメガリンリガンドのメガリン結合能に対する拮抗作用を有し、前記メガリンリガンドの主たる薬効を維持しつつ、前記メガリンリガンドによりメガリンを介して誘発される細胞障害やそれに派生する疾患、例えば腎障害又は内耳障害、を抑制するために使用することが好ましく、中でも、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸、ゲンタマイシン、バンコマイシン、シスプラチン、及びタクロリムス、並びにそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つのメガリンリガンド、特に、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸、又はそれらの薬学的に許容され得る塩のメガリン結合能に対する拮抗作用を有し、これらの主たる薬効を維持しつつ、これらによりメガリンを介して誘発される細胞障害やそれに派生する疾患、例えば腎障害又は内耳障害、を抑制するために使用することが好ましい。
【００２３】
本明細書において、コリスチン（Ｃｏｌｉｓｔｉｎ）とは、通常、コリスチンＡ（Ｎ−［３−ａｍｉｎｏ−１［［１−［［３−ａｍｉｎｏ−１−［［６，９，１８−ｔｒｉｓ（２−ａｍｉｎｏｅｔｈｙｌ）−３−（１−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）−１２，１５−ｂｉｓ（２−ｍｅｔｈｙｌｐｒｏｐｙｌ）−２，５，８，１１，１４，１７，２０−ｈｅｐｔａｏｘｏ−１，４，７，１０，１３，１６，１９−ｈｅｐｔａｚａｃｙｃｌｏｔｒｉｃｏｓ−２１−ｙｌ］ｃａｒｂａｍｏｙｌ］ｐｒｏｐｙｌ］ｃａｒｂａｍｏｙｌ］−２−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ］ｃａｒｂａｍｏｙｌ］ｐｒｏｐｙｌ］−６−ｍｅｔｈｙｌ−ｏｃｔａｎａｍｉｄｅ）、及びコリスチンＢ（Ｎ−［３−ａｍｉｎｏ−１［［１−［［３−ａｍｉｎｏ−１−［［６，９，１８−ｔｒｉｓ（２−ａｍｉｎｏｅｔｈｙｌ）−３−（１−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）−１２，１５−ｂｉｓ（２−ｍｅｔｈｙｌｐｒｏｐｙｌ）−２，５，８，１１，１４，１７，２０−ｈｅｐｔａｏｘｏ−１，４，７，１０，１３，１６，１９−ｈｅｐｔａｚａｃｙｃｌｏｔｒｉｃｏｓ−２１−ｙｌ］ｃａｒｂａｍｏｙｌ］ｐｒｏｐｙｌ］ｃａｒｂａｍｏｙｌ］−２−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ］ｃａｒｂａｍｏｙｌ］ｐｒｏｐｙｌ］−５−ｍｅｔｈｙｌ−ｈｅｐｔａｎａｍｉｄｅ）の混合物を意味するが、コリスチンＡ又はコリスチンＢのいずれか一方のみを含んでいてもよい。
また、本明細書において、コリスチンメタンスルホン酸とは、前記コリスチンの１分子内の５つのアミノ基（−ＮＨ２）の一部又は全部、より好ましくは全部がスルホメチル化された化合物を意味する。
前記メガリンリガンドの「薬学的に許容され得る塩」とは、医薬の分野で用いられる慣用的な塩を意味し、例えばカルボキシル基を有する場合の当該カルボキシル基における塩基付加塩又はアミノ基、イミノ基若しくは塩基性の複素環基を有する場合の当該アミノ基、イミノ基若しくは塩基性複素環基における酸付加塩の塩類を挙げることができる。
前記塩基付加塩としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；例えばカルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩；例えばアンモニウム塩；例えばトリメチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、エタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、プロカイン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩等の有機アミン塩等が挙げられる。
前記酸付加塩としては、例えば塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、過塩素酸塩等の無機酸塩；例えばマレイン酸塩、フマール酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、トリフルオロ酢酸塩等の有機酸塩；例えばメタンスルホン酸塩、イセチオン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩等のスルホン酸塩等が挙げられる。
コリスチンの薬学的に許容され得る塩としては、硫酸塩が好ましく、コリスチンメタンスルホン酸の薬学的に許容され得る塩としては、ナトリウム塩が好ましい。
コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸及びそれらの薬学的に許容され得る塩の主たる薬効としては、それ自体公知の抗菌作用が挙げられ、これらは、緑膿菌、アシネトバクター属菌、大腸菌、シトロバクター属菌、エンテロバクター属菌、クレブシエラ属菌等による各種感染症の治療又は予防に用いることができる。特に多剤耐性緑膿菌、多剤耐性アシネトバクター属菌、多剤耐性クレブシエラ属菌などの多剤耐性グラム陰性菌感染症に対しては有効と考えられる。
前記メガリンリガンド又はその薬学的に許容され得る塩は、例えば市販品を用いるか、又はそれ自体公知の方法若しくは公知の方法に準じる方法によって製造・入手することができる。
【００２４】
本発明に係るシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩は、通常の方法によって、散剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤、チュアブル剤等の固形剤、溶液剤、シロップ剤等の液剤、注射剤、又はスプレー剤等に製剤化することができ、本発明に係る拮抗剤、本発明に係る抑制剤、又は本発明に係る医薬組成物とすることができる。本発明に係る拮抗剤、本発明に係る抑制剤、又は本発明に係る医薬組成物としては、注射剤であることが好ましい。
【００２５】
本発明に係る拮抗剤、本発明に係る抑制剤、又は本発明に係る医薬組成物は、有効成分であるシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩（以下、シラスタチン等と称する場合がある）に、製剤上の必要に応じて、適宜の薬学的に許容され得る担体、例えば、賦形剤、結合剤、滑沢剤、溶剤、崩壊剤、溶解補助剤、懸濁化剤、乳化剤、等張化剤、安定化剤、無痛化剤、防腐剤、抗酸化剤、矯味矯臭剤、着色剤等を配合して製剤化される。
賦形剤としては、乳糖、ブドウ糖、Ｄ−マンニトール等の糖類；でんぷん類；結晶セルロース等のセルロース類等の有機系賦形剤；リン酸二カルシウム、炭酸カルシウム、カオリン等の無機系賦形剤等が挙げられる。結合剤としては、α化デンプン、ゼラチン、アラビアゴム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、結晶セルロース、Ｄ−マンニトール、トレハロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール等が挙げられる。滑沢剤としては、ステアリン酸、ステアリン酸塩等の脂肪酸塩、タルク、珪酸塩類等が挙げられる。溶剤としては、精製水、生理的食塩水等が挙げられる。崩壊剤としては、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、化学修飾されたセルロースやデンプン類、アルギン酸等が挙げられる。溶解補助剤としては、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、トレハロース、安息香酸ベンジル、エタノール、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、酢酸ナトリウム等が挙げられる。懸濁化剤あるいは乳化剤としては、ラウリル硫酸ナトリウム、アラビアゴム、ゼラチン、レシチン、モノステアリン酸グリセリン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースナトリウム等のセルロース類；ポリソルベート類；ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等が挙げられる。等張化剤としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、糖類、グリセリン、尿素等が挙げられる。安定化剤としては、ポリエチレングリコール、デキストラン硫酸ナトリウム、その他のアミノ酸類等が挙げられる。無痛化剤としては、ブドウ糖、グルコン酸カルシウム、塩酸プロカイン等が挙げられる。防腐剤としては、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸等が挙げられる。抗酸化剤としては、亜硫酸塩、アスコルビン酸等が挙げられる。矯味矯臭剤としては、医薬及び食品分野において通常に使用される甘味料、香料等が挙げられる。着色剤としては、医薬及び食品分野において通常に使用され得る着色料が挙げられる。
【００２６】
本発明に係る医薬用組成物は、さらにその他の有効成分を含有していてもよい。前記その他の有効成分としては、本発明に係るシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩によりメガリン介在性の細胞内取り込みが阻害されるメガリンリガンドが好ましく；より具体的には、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸等のポリミキシン類；ゲンタマイシン等のアミノグリコシド系抗生物質；バンコマイシン等のグリコペプチド系抗生物質；シスプラチン；及びタクロリムス；並びにそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つのメガリンリガンドが好ましく；中でも、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸、ゲンタマイシン、バンコマイシン、シスプラチン及びタクロリムス、並びにそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つのメガリンリガンドがより好ましく、特に、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸、又はそれらの薬学的に許容され得る塩が好ましい。
【００２７】
本発明の１つの側面は、シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩と、ポリミキシン類、アミノグリコシド系抗生物質、グリコペプチド系抗生物質、シスプラチン、タクロリムス及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つのメガリンリガンドと、薬学的に許容され得る担体とを含む医薬組成物であり、前記医薬組成物はイミペネムを含まないことが好ましい。
【００２８】
本発明の別の側面は、シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩と、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸、ゲンタマイシン、バンコマイシン、シスプラチン、タクロリムス及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つの有効成分と、薬学的に許容され得る担体とを含む医薬組成物であり、前記医薬組成物はイミペネムを含まないことが好ましい。
【００２９】
本発明のまた別の側面は、シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩と、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つの有効成分と、薬学的に許容され得る担体とを含む医薬組成物であり、前記医薬組成物はイミペネムを含まないことが好ましい。
【００３０】
本発明の更に別の側面は、シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩と、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つ有効成分と、薬学的に許容され得る担体とを含む抗菌剤（抗菌性組成物ともいう）であり、前記抗菌剤はイミペネムを含まないことが好ましい。また、前記抗菌剤は、緑膿菌、アシネトバクター属菌、大腸菌、シトロバクター属菌、エンテロバクター属菌、クレブシエラ属菌等に対する抗菌活性を有する抗菌剤であることが好ましく、多剤耐性緑膿菌、多剤耐性アシネトバクター属菌、多剤耐性クレブシエラ属菌など多剤耐性グラム陰性桿菌に対して抗菌活性を有する抗菌剤であることがより好ましい。
【００３１】
本発明に係る医薬用組成物において、前記医薬用組成物が前記メガリンリガンドを含む場合、前記メガリンリガンドの配合量は、前記メガリンリガンドの投与が必要な対象に対し、主たる薬効において治療的に有効な量であればよい。
本発明に係る医薬用組成物において、前記シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩と、前記メガリンリガンドとの配合量は、（前記シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩の質量）：（前記メガリンリガンドの質量）で表される質量比で０．５：１〜２００：１であることが好ましく、０．５：１〜１００：１であることがより好ましく、０．５：１〜４０：１であることが更に好ましい。
シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩は、抗菌活性を有さず、また、シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩と、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸又はそれらの薬学的に許容され得る塩とを併用しても、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸又はそれらの薬学的に許容され得る塩の抗菌活性に影響を与えない。したがって、本発明に係る医薬用組成物において、シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩としては、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸又はそれらの薬学的に許容され得る塩による、例えば腎障害又は内耳障害を抑制するのに有効な量を配合することができる。より具体的には、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸又はそれらの薬学的に許容され得る塩の１質量部に対して、シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩は、０．５質量部以上２００質量部以下が好ましく、０．５質量部以上１００質量部以下がより好ましく、０．５質量部以上４０質量部以下がより好ましく、１．５質量部以上１０質量部以下がより好ましく、１．５質量部以上７質量部以下がより好ましく、１．５質量部以上、４質量部以下が更に好ましく、１．５質量部以上３質量部以下又は３質量部以上、４質量部以下が特に好ましい。
【００３２】
本発明に係る、抑制剤、拮抗剤、医薬組成物が注射剤である場合、前記注射剤の形態は、有効成分であるシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩と、適宜の薬学的に許容される担体と、医薬組成物の場合は所望により前記その他の成分とが予め溶解された形態であってもよく、前記成分が粉末のまま或いは適当な担体（添加物）を加えたもので、用時溶解される形態であってもよい。これらの注射液は、製剤全体の質量を基準として、例えば、 ０．１〜１質量％のシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩を有効成分として含むことが好ましい。注射剤とする場合の適当な溶剤又は希釈剤としては、例えば注射用蒸留水、塩酸リドカイン水溶液（筋肉内注射用）、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、静脈内注射用液体（例えばクエン酸及びクエン酸ナトリウム等の水溶液）若しくは電解質溶液（点滴静注及び静脈内注射用）等、又はこれらの混合溶液が挙げられる。
【００３３】
本発明の１つの側面は、治療的に有効量のシラスタチン若しくはその薬学的に許容され得る塩；又は治療的に有効量のシラスタチン若しくはその薬学的に許容され得る塩を含む、本発明に係る抑制剤、本発明に係る医薬組成物、若しくは本発明に係る拮抗剤を、投与が必要な対象に投与することを含む、各種メガリンリガンドにより、メガリンを介して誘発される、薬剤性腎障害、糖尿病性腎症、又は内耳障害（耳鳴り、めまい又は難聴等）の抑制方法（即ち、治療方法又は予防方法）である。
【００３４】
本発明の別の側面は、治療的に有効量のシラスタチン若しくはその薬学的に許容され得る塩；又は治療的に有効量のシラスタチン若しくはその薬学的に許容され得る塩を含む、本発明に係る抑制剤、本発明に係る医薬組成物、若しくは本発明に係る拮抗剤と、治療的に有効量の、ポリミキシン類、アミノグリコシド系抗生物質、グリコペプチド系抗生物質、シスプラチン、タクロリムス及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つのメガリンリガンドとを、組み合わせて、投与が必要な対象に投与することを含む、前記メガリンリガンドにより、メガリンを介して誘発される、薬剤性腎障害又は内耳障害（耳鳴り、めまい又は難聴等）の抑制方法（即ち、治療方法又は予防方法）である。
【００３５】
本発明のまた別の側面は、治療的に有効量のシラスタチン若しくはその薬学的に許容され得る塩；又は治療的に有効量のシラスタチン若しくはその薬学的に許容され得る塩を含む、本発明に係る抑制剤、本発明に係る医薬組成物、若しくは本発明に係る拮抗剤と、治療的に有効量の、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸、ゲンタマイシン、バンコマイシン、シスプラチン、タクロリムス及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つのメガリンリガンドとを、組み合わせて、投与が必要な対象に投与することを含む、前記メガリンリガンドにより、メガリンを介して誘発される、薬剤性腎障害又は内耳障害（耳鳴り、めまい又は難聴等）の抑制方法（即ち、治療方法又は予防方法）である。
【００３６】
本発明のまた別の側面は、治療的に有効量のシラスタチン若しくはその薬学的に許容され得る塩；又は治療的に有効量のシラスタチン若しくはその薬学的に許容され得る塩を含む、本発明に係る抑制剤、本発明に係る医薬組成物、若しくは本発明に係る拮抗剤と、治療的に有効量の、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸又はそれらの薬学的に許容され得る塩とを、組み合わせて、投与が必要な対象に投与することを含む、前記コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸又はそれらの薬学的に許容され得る塩により、メガリンを介して誘発される、薬剤性腎障害又は内耳障害（耳鳴り、めまい又は難聴等）の抑制方法（即ち、治療方法又は予防方法）である。
【００３７】
本発明の更に別の側面は、治療的に有効量のシラスタチン若しくはその薬学的に許容され得る塩；又は治療的に有効量のシラスタチン若しくはその薬学的に許容され得る塩を含む、本発明に係る抑制剤、本発明に係る医薬組成物、若しくは本発明に係る拮抗剤と、治療的に有効量の、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸又はそれらの薬学的に許容され得る塩とを、組み合わせて、投与が必要な対象に投与することを含む、感染症の治療方法又は予防方法である。
本明細書において、「投与が必要な対象」とは、各種メガリンリガンドにより、メガリンを介して誘発される、薬剤性腎障害、糖尿病性腎症、又は内耳障害の症状を有するか、有するリスクのある対象を意味する。
【００３８】
本発明に係るシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩、本発明に係る抑制剤、本発明に係る医薬組成物、又は本発明に係る拮抗剤としては、投与が必要な動物に投与される、シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩、抑制剤、医薬組成物、又は拮抗剤であることが好ましく；投与が必要な哺乳動物に投与される、シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩、抑制剤、医薬組成物、又は拮抗剤であることがより好ましく；投与が必要なヒト；投与が必要なマウス、ラット、ウサギ、モルモット、ハムスター、サル、ヒツジ、ウマ、ウシ、ブタ、ロバ、イヌ、ネコ等の家畜；又は投与が必要な実験動物に投与される、シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩、抑制剤、医薬組成物、又は拮抗剤であることがさらに好ましく；前記ヒトに投与される、シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩、抑制剤、医薬組成物、又は拮抗剤であることが特に好ましい。
【００３９】
本発明に係るシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩、本発明に係る抑制剤、本発明に係る医薬組成物、又は本発明に係る拮抗剤は、単独で動物へ投与してもよく、メガリンリガンドと組み合わせて投与（本明細書では、「併用投与」ともいう）してもよい。例えば、細胞障害誘導因子となり得るメガリンリガンドと本発明に係るシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩、本発明に係る抑制剤、本発明に係る医薬組成物、又は本発明に係る拮抗剤を動物に併用投与することにより、前記メガリンリガンドによる細胞障害を効果的に抑制し、例えば腎障害又は内耳障害を抑制することができる。
【００４０】
本発明に係るシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩、本発明に係る抑制剤、本発明に係る医薬組成物、又は本発明に係る拮抗剤の投与量は、メガリンリガンドのメガリンへの結合及び続く細胞内への取り込みを阻害するために充分な量であればよく、投与対象の生物種、性別、年齢、体重、食餌、投与の形態、メガリンリガンドの種類及びその投与量又は配合量並びにメガリンリガンドにより引き起こされる細胞障害の症状、細胞障害が誘発されるリスクの程度等によって異なる。例えば、成人（体重６０ｋｇとして）に対する有効成分の１日当たりの投与量は、シラスタチンとして０．５〜２．０ｇが好ましく、０．５〜１．５ｇがより好ましく、０．５〜１．０ｇがさらに好ましく、０．５〜０．８ｇが特に好ましい。このような投与量を１回又は数回、より好ましくは２回ないし４回に分けて投与することができる。また、隔日投与、隔々日投与などの間けつ投与等の投与方法でも用いることができる。
【００４１】
本発明に係るシラスタチン若しくはその薬学的に許容され得る塩、本発明に係る抑制剤、又は本発明に係る拮抗剤は、各種メガリンリガンドと組み合わせて使用することができる。本発明に係るシラスタチン若しくはその薬学的に許容され得る塩、本発明に係る抑制剤、又は本発明に係る拮抗剤と、各種メガリンリガンドとを組み合わせて使用する場合（併用投与する場合）、前記シラスタチン若しくはその薬学的に許容され得る塩、前記抑制剤、前記医薬組成物、又は前記拮抗剤の投与は、メガリンリガンドの投与と同時、メガリンリガンドの投与前、投与後、又はメガリンリガンドの投与前後の両方のいずれであってもよい。
前記併用投与において、個々の成分又は薬剤は、分割された又は単一の製剤で投与することができる。
前記併用投与において、シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩と、メガリンリガンドとの投与量の質量比は、本発明に係る医薬用組成物が前記メガリンリガンドを含む場合の、前記シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩と、前記メガリンリガンドとの配合量の質量比と同じであってもよい。
【００４２】
本発明の１つの側面は、本発明に係るシラスタチン若しくはその薬学的に許容され得る塩、本発明に係る抑制剤、又は本発明に係る拮抗剤と、ポリミキシン類、アミノグリコシド系抗生物質、グリコペプチド系抗生物質、シスプラチン、タクロリムス及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つのメガリンリガンドとの組み合わせ製剤であって、前記組み合わせ製剤は、同時に、別々に又は時間間隔をおいて使用されるための製剤であり、前記メガリンリガンドによりメガリンを介して誘発される細胞障害やそれに派生する疾患、例えば腎障害又は内耳障害、を抑制するために使用される製剤である。
【００４３】
本発明の別の側面は、本発明に係るシラスタチン若しくはその薬学的に許容され得る塩、本発明に係る抑制剤、又は本発明に係る拮抗剤と、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸、ゲンタマイシン、バンコマイシン、シスプラチン、タクロリムス及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つのメガリンリガンドとの組み合わせ製剤であって、前記組み合わせ製剤は、同時に、別々に又は時間間隔をおいて使用されるための製剤であり、前記メガリンリガンドによりメガリンを介して誘発される細胞障害やそれに派生する疾患、例えば腎障害又は内耳障害、を抑制するために使用される製剤である。
【００４４】
本発明のまた別の側面は、本発明に係るシラスタチン若しくはその薬学的に許容され得る塩、本発明に係る抑制剤、又は本発明に係る拮抗剤と、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸又はそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つの有効成分との組み合わせ製剤であって、前記組み合わせ製剤は、同時に、別々に又は時間間隔をおいて使用されるための製剤であり、前記コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸又はそれらの薬学的に許容され得る塩によりメガリンを介して誘発される細胞障害やそれに派生する疾患、例えば腎障害又は内耳障害、を抑制するために使用される製剤である。
【００４５】
本発明の更に別の側面は、本発明に係るシラスタチン若しくはその薬学的に許容され得る塩、本発明に係る抑制剤、又は本発明に係る拮抗剤と、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸又はそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つの有効成分との組み合わせ製剤であって、前記組み合わせ製剤は、同時に、別々に又は時間間隔をおいて使用されるための製剤であり、抗菌剤として、好ましくは、緑膿菌、アシネトバクター属菌、大腸菌、シトロバクター属菌、エンテロバクター属菌、クレブシエラ属菌等に対する抗菌活性を有する抗菌剤として、より好ましくは多剤耐性緑膿菌、多剤耐性アシネトバクター属菌、多剤耐性クレブシエラ属菌など多剤耐性グラム陰性桿菌に対して抗菌活性を有する抗菌剤として、即ち、感染症の治療又は予防ために、使用される製剤である。
【００４６】
シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩と併用されるメガリンリガンドの治療単位は、特に限定されないが、公知文献などにより当業者が必要に応じて決定することができる。例えば、以下に示す通りである。
メガリンリガンドがコリスチン、コリスチンメタンスルホン酸又はそれらの薬学的に許容され得る塩の場合、コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸又はそれらの薬学的に許容され得る塩の治療単位は、成人（体重６０ｋｇとして）に対する有効成分の１日当たりの投与量として、コリスチンとして、０．０５ｇ〜１．５ｇが好ましく、０．１ｇ〜１．０ｇがより好ましく、０．１５ｇ〜０．３ｇがさらに好ましい。このような投与量を１回又は数回、より好ましくは２回ないし４回に分けて投与することができる。また、隔日投与、隔々日投与などの間けつ投与等の投与方法でも用いることができる。
【００４７】
本発明の１つの側面は、第１の区画にシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩を含み、第２の区画にポリミキシン類、アミノグリコシド系抗生物質、グリコペプチド系抗生物質、シスプラチン、タクロリムス及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つのメガリンリガンドを含む医薬キットである。
本発明の別の側面は、第１の区画にシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩を含み、第２の区画にコリスチン、コリスチンメタンスルホン酸、ゲンタマイシン、バンコマイシン、シスプラチン、タクロリムス及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つのメガリンリガンドを含む医薬キットである。
本発明のまた別の側面は、第１の区画にシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩を含み、第２の区画にコリスチン、コリスチンメタンスルホン酸及びそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される少なくとも１つのメガリンリガンドを含む医薬キットである。
前記医薬キットにおいて、第１の区画のシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩と、第２の区画のメガリンリガンドとの含有量の質量比は、本発明に係る医薬用組成物が前記メガリンリガンドを含む場合の、前記シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩と、前記メガリンリガンドとの配合量の質量比と同じであってもよい。
【００４８】
本発明のまた別の側面は、前記メガリンリガンド拮抗剤の製造のための、シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩の使用である。
本発明のまた別の側面は、前記メガリンリガンドにより、メガリンを介して誘発される細胞障害やそれに派生する疾患の抑制剤の製造のための、シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩の使用である。
本発明のまた別の側面は、前記メガリンリガンドにより、メガリンを介して誘発される、薬剤性腎障害や糖尿病性腎症の抑制剤の製造のための、シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩の使用である。
本発明のまた別の側面は、前記メガリンリガンドにより、メガリンを介して誘発される、薬剤性腎障害を除く疾患又は症状の抑制剤の製造のための、シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩の使用である。
本発明の更に別の側面は、前記メガリンリガンドにより、メガリンを介して誘発される、内耳障害（例えば耳鳴り、めまい又は難聴）の抑制剤の製造のための、シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩の使用である。
【実施例】
【００４９】
次に実施例等を示して本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。なお、以下の実施例等においては、メガリンは、非特許文献５に記載の方法に準じてラット腎臓より精製したメガリンを、シラスタチンはシラスタチンナトリウム（シグマアルドリッチ（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ）ジャパン株式会社製）を、コリスチンはコリスチン硫酸塩（シグマアルドリッチ（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ）ジャパン株式会社製）を、ゲンタマイシンはシグマアルドリッチ（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ）ジャパン株式会社製のものを、バンコマイシンはシグマアルドリッチ（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ）ジャパン株式会社製のものを、テノホビルはシグマアルドリッチ（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ）ジャパン株式会社製のものを、シスプラチンは、ブリストル・マイヤーズ株式会社製のものを、それぞれ用いた。【００５０】
［参考例１］
コリスチン、ゲンタマイシン、バンコマイシン、シスプラチン、及びテノホビルのメガリンに対する結合能を、水晶振動マイクロバランス法（ＱＣＭ法）を用いて解析した。
メガリンタンパクの固定化はＩｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  ｆｏｒ  ＡＦＦＩＮＩＸ（登録商標）（株式会社イニシアム製）を用いて、前記キットにおいて推奨されているプロトコールに従い、前記キットの付属のＢｕｆｆｅｒ  Ａにより１２〜１４μｇ/ｍＬになるように調製したメガリンタンパク溶液を、ホルダーに設置した水晶にのせて固定化した。
メガリンタンパクを固定化した水晶を、測定機器ＡＦＦＩＮＩＸ（登録商標）（株式会社イニシアム製）に設置し、周波数が安定したことを確認した後、コリスチン（２４０μｇ）、ゲンタマイシン（４０００μｇ）、バンコマイシン（１６００μｇ）、シスプラチン（４００μｇ）、又はテノホビル（１２００μｇ）を注入（いずれも総注入量）し、周波数を経時的に測定した。より詳細には、８ｍＬのバッファーの入った水面に入れたメガリンタンパク固定化水晶に、各薬剤８μＬを注入し、周波数を測定した。対照として、メガリンタンパクを固定化していない水晶に対しても同様に測定を行った。測定データは、専用解析ソフトウェアＡＱＵＡ（株式会社イニシアム製）を用いて解析した。【００５１】
測定結果を図１Ａ〜図１Ｆに示す。この結果、ゲンタマイシン、コリスチン、バンコマイシン、シスプラチン、及びタクロリムスでは、これらの化合物を注入後に周波数が明らかに低下し、メガリンへの結合が確認されたが、テノホビルではメガリンへの結合は確認できなかった。【００５２】
なお、環状ペプチド系抗生物質であるコリスチンは、現在のところ多剤耐性菌に対する唯一の特効薬であり、近年の多剤耐性菌による感染症の出現により、使用ニーズが高まりつつある。しかし、コリスチンには高い腎毒性があり、かつその発症機序が不明であったことから、限定的な使用しかできず、多剤耐性菌に対する十分な対処が取られていない状況があった。本参考例の結果から、コリスチンがメガリンリガンドであることが明らかとなり、メガリンリガンド拮抗剤によりコリスチンによる腎障害を抑制し得る可能性が示唆された。【００５３】
［実施例１］
シラスタチンによるコリスチンのメガリン結合に対する拮抗作用を、ＱＣＭ法により調べた。
まず、参考例１と同様にして、メガリンタンパクを固定化させた水晶を測定機器に設置し、周波数が安定したことを確認した後、８００μｇ、５０００μｇ、又は１００００μｇのシラスタチンを注入した。続いて、周波数が安定したことを確認した後に、２４０μｇのコリスチンを注入し、周波数を経時的に測定し、測定データを参考例１と同様にして解析した。対照として、シラスタチンを注入しなかった（シラスタチン注入量：０μｇ）以外は同様にして測定及び解析を行った。【００５４】
測定結果を図２に示す。この結果、シラスタチン注入量が多いほど、コリスチン注入による周波数変化が小さく、シラスタチンの濃度依存的にコリスチンのメガリンタンパクへの結合が阻害されていることがわかった。【００５５】
［実施例２］
シラスタチンによるゲンタマイシン、バンコマイシン、シスプラチン、及びタクロリムスのメガリン結合に対する拮抗作用を、ＱＣＭ法により調べた。
具体的には、シラスタチンの注入量を４０００μｇとし、２４０μｇのコリスチンに代えて４０００μｇのゲンタマイシンにした以外は実施例１と同様にして、周波数の測定及び解析を行った。
また、シラスタチンの注入量を５０００μｇとし、２４０μｇのコリスチンに代えて１０００μｇのバンコマイシンにした以外は実施例１と同様にして、周波数の測定及び解析を行った。
また、シラスタチンの注入量を１００００μｇとし、２４０μｇのコリスチンに代えて８００μｇのシスプラチンにした以外は実施例１と同様にして、周波数の測定及び解析を行った。
さらに、シラスタチンの注入量を２０００μｇとし、２４０μｇのコリスチンに代えて１６０μｇのタクロリムスにした以外は実施例１と同様にして、周波数の測定及び解析を行った。【００５６】
ゲンタマイシンを注入した場合の測定結果を図３に、バンコマイシンを注入した場合の測定結果を図４に、シスプラチンを注入した場合の測定結果を図５に、タクロリムスを注入した場合の測定結果を図６にそれぞれ示す。この結果、予めシラスタチンを結合させておいたチップでは、ゲンタマイシン注入後とバンコマイシン注入後とシスプラチン注入後のいずれにおいても、周波数はほとんど低下せず、シラスタチンによりゲンタマイシン、バンコマイシン、シスプラチン及びタクロリムスのメガリンタンパクへの結合が阻害されていることがわかった。【００５７】
［実施例３］
ラットにシラスタチンとコリスチンを併用投与し、シラスタチンのメガリンリガンド拮抗作用によってコリスチンによる腎症が軽減されるかどうかを調べた。【００５８】
シラスタチンによるコリスチン腎症軽減作用を評価するにあたり、コリスチン溶液とシラスタチン溶液を以下のようにして調製した。
コリスチン溶液の調製には、まず、３６０ｍｇのコリスチン硫酸塩を３０ｍＬの生理食塩液に溶解させてコリスチンストック溶液（コリスチン濃度：１０ｍｇ／ｍＬ）を調製した。前記コリスチンストック溶液は、２２ｍｍのＰＶＤＦ膜でろ過滅菌してから、４℃で保管しておき、コリスチン投与前に、前記溶液を生理食塩液で希釈してコリスチン投与液を調製した。
シラスタチン溶液の調製には、まず、５ｇのシラスタチンナトリウムを５０ｍＬの生理食塩液に溶解させてシラスタチンナトリウム溶液（シラスタチンナトリウム濃度：１００ｍｇ／ｍＬ）を調製した。前記シラスタチンナトリウム溶液は、２２ｍｍのＰＶＤＦ膜でろ過滅菌してから、投与時まで４℃で保管しておいた。【００５９】
各薬剤溶液の投与及び採尿は、以下のように実施した。まず、Ｊｃｌ：ＳＤラット（１４週齢、雄、体重：４５０〜５３０ｇ、日本クレア株式会社製）に対して、コリスチンを投与する３日前に、頸静脈内へカテーテルを留置した。次いで、前記で調製したコリスチン投与液を１日２回、約８時間間隔で、５日間にわたり頸静脈内へ単回投与し、腎障害を誘発した。コリスチン投与量は、１日目（１回目：０．５ｍｇ／ｋｇ、２回目：１．０ｍｇ／ｋｇ）、２日目（１回目：１．２５ｍｇ／ｋｇ、２回目：１．２５ｍｇ／ｋｇ）、３日目（１回目：１．７５ｍｇ／ｋｇ、２回目：２．７５ｍｇ／ｋｇ）、４日目（１回目：４ｍｇ／ｋｇ、２回目：４ｍｇ／ｋｇ）、５日目（４ｍｇ／ｋｇ）と随時増加し、５日間で計２０．５ｍｇ／ｋｇ投与した。シラスタチンは、前記で調製したシラスタチンナトリウム溶液を、コリスチン投与前に毎回１００ｍｇ／ｋｇを頸静脈内へ単回投与した。各投与液の投与容量は、１ｍＬ／ｋｇとした。投与５日目は、午前中に最終投与を行った後、スポット尿を回収した。前記のようにシラスタチンナトリウム溶液とコリスチン投与液の両方を投与した試験群（シラスタチン／コリスチン投与群（Ｃｉｌａｓｔａｔｉｎ／Ｃｏｌｓｔｉｎ）、Ｎ＝３）の他に、対照として、シラスタチンナトリウム溶液とコリスチン投与液の両方を生理食塩水に代えた試験群（生理食塩水／生理食塩水投与群（Ｓａｌｉｎｅ／Ｓａｌｉｎｅ）、Ｎ＝４）と、シラスタチンナトリウム溶液のみを生理食塩水に代えた試験群（生理食塩水／コリスチン投与群（Ｓａｌｉｎｅ／Ｃｏｌｓｔｉｎ）、Ｎ＝６）についても同様にして投与及び採尿を行った。【００６０】
回収した尿は、ディスクリート方式臨床化学自動分析装置（製品名：ＣＯＢＡＳ  ＩＮＴＥＧＲＡ  ４００  ｐｌｕｓ、ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社製）を用いて、尿中β−Ｄ−Ｎアセチルグルコサミニダーゼ（ＮＡＧ）及びクレアチニン（ＣＲＥ）濃度をそれぞれ測定キット（製品名：ＣＲＥＰ  ２、及びＢＵＮＫ、いずれもロシュ・ダイアグノスティックス株式会社製）により測定し、各試験群の尿中ＮＡＧ／ＣＲＥ値を算出した。【００６１】
算出結果を図７に示す。コリスチン投与後５日目の尿中ＮＡＧ／ＣＲＥ値は、生理食塩液のみを投与した非腎障害群（生食／生食群）に比べ、生理食塩液とコリスチンを投与した群（生食／コリスチン投与群）では４倍以上増加した。シラスタチンとコリスチンを併用投与した投与群（シラスタチン／コリスチン投与群）は、生食／コリスチン投与群よりも低値を示す傾向を示し、シラスタチン併用投与により、コリスチン誘発性の腎障害が軽減されていた。【００６２】
[参考例２]
メガリンモザイク型ノックアウトマウスにコリスチンを投与した際に生じる尿細管細胞障害を解析した。
まず、１２週齢の腎特異的モザイク型メガリンノックアウトマウス（ａｐｏＥ  ｃｒｅ／ｍｅｇａｌｉｎ  ｌｏｘＰ）を実験に用いた（このマウスは約６０％の近位尿細管細胞においてメガリンを発現する遺伝子がノックアウトされている。）。このマウスに対して、コリスチンの皮下投与を４日間行い(３０ｍｇ／ｋｇ／日）、その後、近位尿細管細胞を取り出して免疫組織化学染色を行った。その結果を図８に示す。
メガリンを発現する近位尿細管細胞（メガリンの免疫組織化学染色陽性）（図８右）においては、メガリンの発現がノックアウトされている近位尿細管細胞（メガリンの免疫組織化学染色陰性）（図８左）に比較し、細胞質内に多数の空胞（矢印）が認められた。【００６３】
[参考例３]
参考例２と同様の方法で、腎特異的モザイク型メガリンノックアウトマウスにコリスチンを投与し、その後、近位尿細管細胞を取出し、近位尿細管細胞の傷害マーカーであるＫＩＭ−１（Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｊｕｒｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  １）の発現とメガリンの発現について、蛍光２重染色法を用いて確認した。その結果を、図９に示す。
図９から分かるように、ノックアウトされずに残存しているメガリンが発現している近位尿細管細胞では一ＫＩＭ−１も発現していることが判明した。
対照として生理食塩水を同様の方法により投与したメガリンノックアウトマウスにおいては、メガリンを発現する近位尿細管細胞においてＫＩＭ−１は発現しないことを確認した。【００６４】
即ち、コリスチンによる近位尿細管細胞障害はメガリンの発現に大きく依存しており、コリスチンがメガリンに結合することを防ぐことが可能なシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩、前記シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩を含む抑制剤、医薬組成物、及び拮抗剤は、コリスチンにより引き起こされる細胞障害性を抑制（予防又は治療）する極めて効果的な手段であることが示された。【００６５】
［実施例４］ 
シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩によるコリスチンにより引き起こされる腎毒性の抑制効果について調べた。
１２週齢のオスＣ５７ＢＬ／６マウスを、３０ｍｇ／ｋｇ／日のコリスチンを４日間皮下投与する群（コリスチン投与群：Ｃｏｌｓｔｉｎ）と、３０ｍｇ／ｋｇ／日のコリスチンを４日間皮下投与と併用して１００ｍｇ／ｋｇ／日のシラスタチンを４日間皮下投与する群（コリスチン＋シラスタチン併用群：Ｃｏｌｓｔｉｎ＋Ｃｉｌａｓｔａｔｉｎ）, 及び、対照としてコリスチンの代わりに生理的食塩水を４日間皮下投与する群（生理食塩水群：Ｓａｌｉｎｅ）に分け、上記参考例２のプロトコールと同様に投与を行い、その後、腎組織を取り出し、免疫組織化学染色（ＰＡＳ染色）を行った。
その結果を図１０に示す。コリスチン投与群においては尿細管の拡張や円柱形成が認められたが（図１０左）、コリスチン＋シラスタチン併用群では、尿細管の拡張や円柱形成は軽減していた（図１０右）。
さらに、前記取り出した腎組織を用いて、尿細管細胞障害マーカーであるＫＩＭ−１の発現をウエスタンブロットにて確認した。その結果を図１１に示す。
コリスチン投与群においてはＫＩＭ−１の発現増加が認められたが、コリスチン＋シラスタチン併用群では、ＫＩＭ−１の発現は軽減していた（図１１）。このことから、シラスタチンはコリスチンにより引き起こされる尿細管細胞障害を組織学的および生化学的にも顕著に改善することが明らかとなった。【００６６】
[参考例４]
MHA(ミューラーヒントンアガー)を用いて、ＡＴＣＣ２５９２２株(大腸菌標準株)を２０時間培養した後、培養されたコロニーを、生理食塩水で懸濁、マックファーランド濁度標準液 ０．５相当に調整した。ＭＨＡに菌液を均一になるように塗布、乾燥後、６ｍｍのＷｈａｔｍａｎ ｆｉｌｔｅｒ ｐａｐｅｒ ｄｉｓｃにそれぞれ、１０μgずつコリスチン、シラスタチン、コリスチン及びシラスタチンを含有させ、上記ＭＨＡに等間隔に配置し、２０時間、３７℃で培養し、阻止円径を比較した。その結果を図１１に示す。シラスタチン含有ディスクでは阻止円は形成されず、抗菌活性は示されなかった。また、コリスチン含有ディスク、コリスチン及びシラスタチン含有ディスクは、それぞれ阻止円径が１３．５ｍｍであった。この結果、シラスタチンは抗菌活性を有さず、コリスチンの抗菌活性に影響を及ぼさないことが判明した。
【産業上の利用可能性】
【００６７】
本発明に係るシラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩、並びに有効成分として前記シラスタチン又はその薬学的に許容され得る塩を含む、抑制剤、医薬組成物、及び拮抗剤は、各種メガリンリガンドにより誘発される細胞障害やそれに派生する疾患を抑制することができるので、産業上極めて有用である。
【図１Ａ】
0006508655.tif 000002
【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
0006508655.tif 000004
【図１Ｄ】
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【図１Ｅ】
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【図１Ｆ】
0006508655.tif 000007
【図２】
0006508655.tif 000008
【図３】
0006508655.tif 000009
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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