(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の経口制御剤の候補物質の存在下で、ＴＲＰＶ４活性制御能を測定し、ＴＲＰＶ４活性の制御可能な候補物質を皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の経口制御剤として選択する、皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の経口制御剤のスクリーニング方法。
【請求項２】
前記ＴＲＰＶ４活性が消化管ＴＲＰＶ４活性である、請求項１に記載のスクリーニング方法。
【請求項３】
前記消化管ＴＲＰＶ４活性の制御が求心性迷走神経活動を介して皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環を制御する、請求項２に記載のスクリーニング方法。
【請求項４】
経口投与又は摂取により、ＴＲＰＶ４活性を制御することによる、非治療的な、皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の制御方法。
【請求項５】
前記ＴＲＰＶ４活性が消化管ＴＲＰＶ４活性である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記消化管ＴＲＰＶ４活性の制御が求心性迷走神経活動を介して皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環を制御する、請求項５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の経口制御剤のスクリーニング方法に関する。
また本発明は、非治療的な、皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の制御方法に関する。
さらに本発明は、経口交感神経活動制御剤又は経口皮膚微小循環制御剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚には、皮膚表面に平行な３層の血管床からなる血管網が形成されている。皮膚微小循環の最も重要な機能は体温調節であり、寒冷刺激や温熱刺激が与えられると皮膚血管は収縮又は拡張して皮膚微小循環の血流を変化させ、体熱放散を抑制又は促進することで体温を維持する。さらに皮膚微小循環は、全身の血流配分の調節という面においても重要な役割を持っており、中枢や末梢の温熱受容器からの情報以外に圧または化学受容器からの情報や運動によって引き起こされた血管運動反射によっても影響を受ける。
【０００３】
皮膚微小循環は自律神経系の１つである交感神経系を介したメカニズムと、局所的調節因子による局所性メカニズムとの二元的調節を受けている。局所メカニズムの１つは軸索反射である。これは刺激により皮膚の感覚神経内で発生したインパルスが中枢に向けて伝導される途中で他の分岐に逆行性に伝わり、その神経終末からsubstance P（ＳＰ）やcalcitonin gene-related peptide（ＣＧＲＰ）などの神経ペプチドを放出させる。その結果として、皮膚血管が拡張する。一方、交感神経系は皮膚の血管では細動脈平滑筋を支配しており、暑熱時における手指の血流増加は皮膚交感神経活動の低下によって起こる。一方、寒冷時の血流低下は皮膚交感神経活動の亢進によって起こっている。
したがって、皮膚交感神経活動は皮膚微小循環制御において重要な役割を果たしている。
【０００４】
皮膚微小循環は、加齢、ストレス、生活習慣など様々な影響を受けることが知られている。皮膚微小循環が正常に制御されることは健康を維持する上において重要であり、皮膚血管が拡張しすぎて皮膚血流量が多すぎる状態では、赤ら顔（毛細血管拡張症）などの症状を引き起こす。逆に皮膚血管が収縮しすぎて皮膚血流量が少ない状態では、血行不良、冷え症などの症状を引き起こす。
したがって、皮膚微小循環を制御する皮膚交感神経活動を制御できれば、上記のような症状も効果的に改善できると考えられる。
【０００５】
従来の皮膚微小循環を制御する成分として、コラーゲンペプチド（特許文献１）、センダングサ属植物（特許文献２）、γ‐リノレン酸単独若しくはγ‐リノレン酸と脂溶性抗酸化剤（特許文献３）、ジラセブ若しくはその他付加塩（特許文献４）、ヒドロキシメチルフルフラール誘導体（特許文献５）、イチョウ葉の一成分であるビロバリド（特許文献６）などが血行促進剤として知られている。しかしこれらは、効果や特異性の面で必ずしも満足できる技術ではない。
【０００６】
したがって、より効果的な皮膚微小循環や皮膚交感神経の制御剤が望まれている。しかし、それらのスクリーニング方法も満足できるものはなく、皮膚微小循環や皮膚交感神経の制御剤の効率的なスクリーニング方法の確立が望まれている。
【０００７】
一方、ＴＲＰＶ４（Transient receptor potential cation channel subfamily V member 4）は、カチオンチャネルの一過性受容器電位（ＴＲＰ）スーパーファミリーのメンバーであり、低浸透圧、温熱（２７℃＜）、アラキドン酸代謝物などにより活性化されることが知られている（非特許文献１、２）。
また、ＴＲＰＶ４は、腎、肺、膀胱、心臓、皮膚、脳、消化管など幅広い組織で発現しており、異なった幅広い生理的役割を果たしていると考えられている。腎の遠位尿細管上皮細胞には特に強く発現しており、尿の浸透圧や流量を感知していると示唆されている（非特許文献３）。また、ＴＲＰＶ４活性化剤を静脈投与すると動脈の血管が拡張し、血圧が低下することが報告されている（非特許文献４）。
しかしながら、ＴＲＰＶ４活性制御剤を経口投与した際に皮膚交感神経活動及び皮膚微小循環に及ぼす影響については知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００２−１２１１４８号公報
【特許文献２】特開２００２−２０５９５４号公報
【特許文献３】特開２０００−３０２６７７号公報
【特許文献４】特開平１１−９２３８２号公報
【特許文献５】特開平１１−２２８５６１号公報
【特許文献６】特開平７−５３３７１号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Guler AD.，et al.，J．Neurosci.，2002，vol．22，p．6408-6414
【非特許文献２】Vriens J.，et al.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA，2004，vol．101, p.396-401
【非特許文献３】Tian W.，et al.，Am．J．Physiol．Renal．Physiol.，2004，vol．287，p．F17-F24
【非特許文献４】Gao F.，et al.，Hypertension，2010，vol．55，p．1018-1025
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
皮膚交感神経活動を制御し皮膚微小循環を制御することは、健康を維持する上において重要である。しかし、これまで満足のいく皮膚微小循環制御剤や皮膚交感神経制御剤を用いた皮膚微小循環制御技術はなく、またこのような皮膚微小循環制御剤や皮膚交感神経制御剤を見出すための効率的なスクリーニング方法も存在しない。
【００１１】
本発明は、ＴＲＰＶ４活性制御を指標とした皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の経口制御剤のスクリーニング方法の提供を課題とする。
また本発明は、経口投与又は摂取によるＴＲＰＶ４活性制御による非治療的皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の制御方法の提供を課題とする。
また本発明は、皮膚交感神経活動を制御して皮膚微小循環を制御する、ＴＲＰＶ４活性亢進剤を有効成分とする経口皮膚微小循環抑制剤又は経口皮膚交感神経活動亢進剤の提供を課題とする。
さらに本発明は、ＴＲＰＶ４活性抑制剤を有効成分とする経口皮膚微小循環亢進剤又は経口皮膚交感神経活動抑制剤の提供を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは上記課題に鑑み、ＴＲＰＶ４活性制御剤の皮膚交感神経活動及び皮膚微小循環機能に対する作用について検討した。その結果、ＴＲＰＶ４活性制御剤の経口摂取が皮膚交感神経活動を亢進させ皮膚微小循環機能を抑制する作用があることを見出した。
本発明はこの知見に基づいて完成するに至った。
【００１３】
本発明は、皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の経口制御剤の候補物質の存在下で、ＴＲＰＶ４活性制御能を測定し、ＴＲＰＶ４活性の制御可能な候補物質を皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の経口制御剤として選択する、皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の経口制御剤のスクリーニング方法に関する。
また本発明は、経口投与又は摂取により、消化管ＴＲＰＶ４活性を制御することによる、非治療的な、皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の制御方法に関する。
さらに本発明は、ＴＲＰＶ４活性制御剤を有効成分とする、経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤に関する。
【発明の効果】
【００１４】
ＴＲＰＶ４活性制御を指標とする本発明の皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の経口制御剤のスクリーニング方法によれば、効率的に皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の経口制御剤をスクリーニングすることができる。
また、経口投与又は摂取にてＴＲＰＶ４活性を制御することによる本発明の皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の制御方法によれば、効果的に皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環を制御することができる。
また、本発明の経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤は、効果的に皮膚交感神経活動を制御し皮膚微小循環を制御できる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】ラットにＴＲＰＶ４活性阻害剤、ＴＲＰＶ４活性亢進剤を経口投与した場合の求心性迷走神経活動の経時変化を示すグラフである。
【図２】図２（Ａ）はラットにＴＲＰＶ４活性亢進剤を経口投与した場合の皮膚交感神経活動の経時変化を示すグラフであり、図２（Ｂ）は求心性迷走神経を切除したラットにＴＲＰＶ４活性亢進剤を経口投与した場合の皮膚交感神経活動の経時変化を示すグラフである。
【図３】図３（Ａ）はラットにＴＲＰＶ４活性亢進剤を経口投与した場合の皮膚血流量の経時変化を示すグラフであり、図３（Ｂ）は求心性迷走神経を切除したラットにＴＲＰＶ４活性亢進剤を経口投与した場合の皮膚血流量の経時変化を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本明細書において「予防」とは、個体における疾患若しくは症状の発症の防止若しくは遅延、又は個体の疾患若しくは症状の発症の危険性を低下させることをいう。また、本明細書において「改善」とは、疾患、症状若しくは状態の好転、疾患、症状若しくは状態の悪化の防止若しくは遅延、又は疾患、症状若しくは状態の進行の逆転、防止若しくは遅延をいう。
また、本明細書において「非治療的」とは、医療行為、すなわち医師又は医師の指示による治療を目的とした人体への処理行為を含まない概念である。
また、本明細書において「皮膚交感神経活動」とは、皮膚の細動脈を支配する交感神経の活動をいう。
また、本明細書において「皮膚微小循環」とは、皮膚における細動脈、毛細血管、細静脈の総合的な血流をいう。
また、本明細書において「ＴＲＰＶ４活性制御」又は「消化管ＴＲＰＶ４活性制御」とは、ＴＲＰＶ４チャネル又は消化管ＴＲＰＶ４チャネル自体の機能、即ち、ＴＲＰＶ４チャネルを介した細胞内へのカルシウムイオン流入能の制御をいう。
【００１７】
後述の実施例で示すように、消化管ＴＲＰＶ４活性と、皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環との間で相関性を有し、消化管ＴＲＰＶ４活性亢進剤を経口投与又は摂取させた場合、皮膚交感神経活動は亢進し、皮膚血流量は低下する。また、消化管ＴＲＰＶ４活性抑制剤を経口投与又は摂取させた場合、皮膚交感神経活動は抑制され、皮膚血流量は増加する。
本発明の皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の経口制御剤のスクリーニング方法は、ＴＲＰＶ４活性と、皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環との間の相関性に基づくものである。具体的には、本発明のスクリーニング方法では、皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の制御剤の候補物質の存在下でＴＲＰＶ４活性、好ましくは消化管ＴＲＰＶ４活性、の制御能を測定し、ＴＲＰＶ４活性の制御可能な候補物質を皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の経口制御剤として選択する。
【００１８】
本発明のスクリーニング方法において指標とするＴＲＰＶ４活性制御能又は消化管ＴＲＰＶ４活性制御能は、以下の方法により確認することが可能である。しかし、本発明はこれに制限するものではない。
ＴＲＰＶ４活性は、ＴＲＰＶ４を発現するベクターを用いて、Ｈｅｌａ細胞、や２９３細胞等にＴＲＰＶ４を強制的に発現させる。そして、ＴＲＰＶ４発現培養細胞を用いて、皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の経口制御剤の候補物質（以下、「スクリーニング検体」ともいう）の存在下で、ＴＲＰＶ４を介した細胞内Ｃａ２＋流入活性を測定することで確認できる。この場合、細胞内へＣａ２＋流入が認められたスクリーニング検体は、ＴＲＰＶ４活性亢進作用を有する。これに対して、細胞内へＣａ２＋流入を抑制するスクリーニング検体は、ＴＲＰＶ４活性抑制作用を有する。
なお、ヒトの消化管ＴＲＰＶ４の塩基配列情報及びアミノ酸配列情報は、それぞれNCBI  Reference Sequence：NM_021625.4、NP_067638.3として登録されている。またラットのＴＲＰＶ４の塩基配列情報及びアミノ酸配列情報は、それぞれNCBI  Reference Sequence：NM_023970.1、NP_076460.1として登録されている。さらにマウスのＴＲＰＶ４の塩基配列情報及びアミノ酸配列情報は、それぞれNCBI  Reference Sequence：NM_022017.3、NP_071300.2として登録されている。これらの情報は、ＮＣＢＩより入手可能である。また、これらのバリアント又はホモログは本発明の対象となり得る。
【００１９】
後述の実施例において、消化管ＴＲＰＶ４活性制御は求心性迷走神経活動を介して皮膚交感神経活動及び皮膚微小循環活動の制御に関与することが認められた。したがって、消化管ＴＲＰＶ４活性制御能を確認する為には、さらに、スクリーニング検体をマウス、ラット等の消化管に作用させ、消化管からの求心性迷走神経活動の調節能を確認する必要がある。すなわち、消化管上での粘膜透過性、検体の吸収性等を含めて消化管ＴＲＰＶ４活性制御能を確認する必要がある。
消化管ＴＲＰＶ４活性亢進作用を有するスクリーニング検体は、求心性迷走神経活動を増加させる。これに対して、消化管ＴＲＰＶ４活性抑制作用を有するスクリーニング検体は、求心性迷走神経活動を低下させる。そして、前述した、消化管ＴＲＰＶ４活性と、皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環との間の相関性に基づき、消化管ＴＲＰＶ４活性亢進作用を有するスクリーニング検体を、求心性迷走神経活動を介した皮膚交感神経活動亢進剤又は皮膚微小循環抑制剤として選択する。これに対して、消化管ＴＲＰＶ４活性抑制作用を有するスクリーニング検体は、求心性迷走神経活動を介した皮膚交感神経活動抑制剤又は皮膚微小循環亢進剤として選択する。
【００２０】
本発明の経口投与又は摂取による皮膚交感神経活動若しくは皮膚微小循環の制御方法、並びに経口皮膚微小循環制御剤若しくは経口皮膚交感神経活動制御剤も、ＴＲＰＶ４活性、好ましくは消化管ＴＲＰＶ４活性と、求心性迷走神経活動を介した皮膚交感神経活動若しくは皮膚微小循環との間の相関性に基づくものである。
具体的には、本発明の経口投与又は摂取による皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の制御方法は、ＴＲＰＶ４活性、好ましくは消化管ＴＲＰＶ４活性、を制御する工程を含む。ＴＲＰＶ４活性又は消化管ＴＲＰＶ４活性を制御するには、本発明の経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤を経口投与又は摂取させることが好ましい。なお本発明の経口投与又は摂取による皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の制御方法は、治療的方法（即ち医療行為）であってもよいし、非治療的方法（非医療的な行為）であってもよい。
また、本発明の経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤は、ＴＲＰＶ４活性制御剤、好ましくは消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤、を有効成分とする。本発明で用いるＴＲＰＶ４活性制御剤又は消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤には、ＴＲＰＶ４活性又は消化管ＴＲＰＶ４活性を亢進するＴＲＰＶ４活性亢進剤又は消化管ＴＲＰＶ４活性亢進剤（以下、「本発明の第１の実施態様の制御剤」、又は単に「本発明の消化管ＴＲＰＶ４活性亢進剤」ともいう）と、消化管ＴＲＰＶ４活性を抑制するＴＲＰＶ４活性抑制剤又は消化管ＴＲＰＶ４活性抑制剤（以下、「本発明の第２の実施態様の制御剤」、又は単に「本発明の消化管ＴＲＰＶ４抑制亢進剤」ともいう）が含まれる。これらの制御剤は求心性迷走神経活動を介した皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環活動制御に用いられる。
【００２１】
ＴＲＰＶ４活性制御剤又は消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤としてＴＲＰＶ４活性亢進剤又は消化管ＴＲＰＶ４活性亢進剤を有効成分とする、経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤（以下、「皮膚微小循環抑制剤又は皮膚交感神経活動亢進剤」ともいう）について説明する。
本発明の皮膚微小循環抑制剤又は皮膚交感神経活動亢進剤としては、有効成分として、任意のＴＲＰＶ４活性亢進剤又は消化管ＴＲＰＶ４活性亢進剤を１種又は２種以上用いることができる。
ＴＲＰＶ４活性亢進剤又は消化管ＴＲＰＶ４活性亢進剤としては、12,13-ジデカン酸4α-ホルボール（4α-Phorbol-12,13-Didecanoate、以下「４α-ＰＤＤ」とも略記する）、5,6-エポキシエイコサトリエン酸（5,6-epoxyeicosatrienoic acid、別名：５，６−ＥＥＴ）、1-ベンジル-4-(4-クロロ-2-ニトロフィル)スルホニルベンジルピペラジン（1-benzyl-4-(4-chloro-2-nitrophenyl)sulfonylpiperazine、別名：ＲＮ−１７４７）、及びN-[(2S)-1-[4-[(2S)2-[(2,4-ジクロロフェニル)スルフォニルアミノ]-3-ハイドロキシプロパノイル]ピペラジン-1-イル]-4-メチル-1-オキソペンタン-2-イル]-1-ベンゾチオフェン-2-カルボキサミド（N-[(2S)-1-[4-[(2S)2-[(2,4-dichlorophenyl)sulfonylamino]-3-hydroxypropanoyl]piperazin-1-yl]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]-1-benzothiophene-2-carboxamide、別名：ＧＳＫ１０１６７９０Ａ）が挙げられる。４α-ＰＤＤ、５，６−ＥＥＴ、ＲＮ−１７４７及びＧＳＫ１０１６７９０Ａはそれぞれ、ＴＲＰＶ４自体の機能を亢進することにより、消化管ＴＲＰＶ４活性を亢進する。
本発明で用いることができるＴＲＰＶ４活性亢進剤又は消化管ＴＲＰＶ４活性亢進剤は、試薬として市販されているものを用いることができる。
【００２２】
ＴＲＰＶ４活性制御剤又は消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤としてＴＲＰＶ４活性抑制剤又は消化管ＴＲＰＶ４活性抑制剤を有効成分とする、経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤（以下、「皮膚微小循環亢進剤又は皮膚交感神経活動抑制剤」ともいう）について説明する。
本発明の皮膚微小循環亢進剤又は皮膚交感神経活動抑制剤としては、有効成分として、任意のＴＲＰＶ４活性抑制剤又は消化管ＴＲＰＶ４活性抑制剤を１種又は２種以上用いることができる。
ＴＲＰＶ４活性抑制剤又は消化管ＴＲＰＶ４活性抑制剤としては、2,4-ジクロロ-N-プロパン-2-イル-N-[2-(プロパン-2-イルアミノ)エチル]ベンゼンスルホンアミド（2,4-dichloro-N-propan-2-yl-N-[2-(propan-2-ylamino)ethyl]benzenesulfonamide、別名：ＲＮ１７３４）、N-[4-[2-[ベンジル(メチル)アミノ]エチル]フェニル]-5-ピリジン-3-イル-1,3-チアゾール-2-アミン;ハイドロブロミド（N-[4-[2-[benzyl(methyl)amino]ethyl]phenyl]-5-pyridin-3-yl-1,3-thiazol-2-amine;hydrobromide、別名：ＧＳＫ２０５）及び2-メチル-1-(3-モルホリン-4-イルプロピル)-5-フェニル-N-[3-(トリフルオロメチル)フェニル]ピロール-3-カルボキサミド（2-methyl-1-(3-morpholin-4-ylpropyl)-5-phenyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]pyrrole-3-carboxamide、別名：ＨＣ０６７０４７）が挙げられる。ＲＮ１７３４、ＧＳＫ２０５及びＨＣ０６７０４７はそれぞれ、ＴＲＰＶ４自体の機能を抑制することにより、消化管ＴＲＰＶ４活性を抑制する。
本発明で用いることができるＴＲＰＶ４活性抑制剤又は消化管ＴＲＰＶ４活性抑制剤は、試薬として市販されているものを用いることができる。
【００２３】
後記実施例でも示すように、ＴＲＰＶ４活性亢進剤は、消化管のＴＲＰＶ４活性亢進により、消化管からの求心性迷走神経活動を亢進させ、皮膚交感神経活動を亢進し皮膚微小循環を抑制する。またＴＲＰＶ４活性抑制により、消化管からの求心性迷走神経活動を抑制し、皮膚交感神経活動を抑制し皮膚微小循環を亢進することができる。
また、上記に示す関係性に基づく、ＴＲＰＶ４活性制御又は消化管ＴＲＰＶ４活性制御を指標とする本発明のスクリーニング方法によれば、効率的に皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の経口制御剤をスクリーニングすることができる。
【００２４】
前記皮膚交感神経活動亢進剤、皮膚微小循環抑制剤、皮膚交感神経活動抑制剤及び皮膚微小循環亢進剤は、上記経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤の具体的態様の１つであり、治療的用途（医療用途）、非治療用途（非医療用途）のいずれにも適用することができる。具体的には、前記有効成分単体を本発明の皮膚交感神経活動亢進剤、皮膚微小循環抑制剤、皮膚交感神経活動抑制剤又は皮膚微小循環亢進剤として用いてもよい。あるいは、前記有効成分と、薬学的に許容される担体とを含む本発明の皮膚交感神経活動亢進剤、皮膚微小循環抑制剤、皮膚交感神経活動抑制剤又は皮膚微小循環亢進剤を医薬組成物、医薬品、医薬部外品等としての使用することができる。あるいは、本発明の皮膚交感神経活動亢進剤、皮膚微小循環抑制剤、皮膚交感神経活動抑制剤又は皮膚微小循環亢進剤を各種の飲食品、飼料、ペットフード等に含有させることもできる。
ここで、本発明の皮膚交感神経活動亢進剤、皮膚微小循環抑制剤、皮膚交感神経活動抑制剤又は皮膚微小循環亢進剤は、前記物質単体を有効成分とする態様と、前記物質を有効成分として含有し、薬学的に許容される担体や各種添加剤を含有する組成物の態様の、いずれをも包含する。
以下、前記物質を有効成分として含有し、薬学的に許容される担体や各種添加剤を含有する組成物の態様について説明する。
【００２５】
本発明の皮膚交感神経活動亢進剤、皮膚微小循環抑制剤、皮膚交感神経活動抑制剤又は皮膚微小循環亢進剤として医薬組成物を調製する場合は、通常、前記有効成分と好ましくは薬学的に許容される担体を含む製剤として調製する。薬学的に許容される担体とは、一般的に、前記有効成分とは反応しない、不活性の、無毒の、固体若しくは液体の、増量剤、希釈剤又はカプセル化材料等をいい、例えば、水、エタノール、ポリオール類、適切なそれらの混合物、植物性油などの溶媒又は分散媒体などが挙げられる。
【００２６】
医薬組成物は、経口により投与又は摂取される。経口投与製剤としては、錠剤、被覆錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、腸溶剤、トローチ剤、ドリンク剤などが挙げられる。
【００２７】
本発明の皮膚交感神経活動亢進剤、皮膚微小循環抑制剤、皮膚交感神経活動抑制剤及び皮膚微小循環亢進剤は、効果に影響を与えない範囲で他の添加剤を含有するものであってもよい。他の添加剤としては、例えば、賦形剤、液体担体、油性担体、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤、崩壊剤、滑沢剤、増量剤、界面活性剤、分散剤、懸濁剤、希釈剤、浸透圧調整剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、紫外線吸収剤、保湿剤、増粘剤、光沢剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、矯臭剤、細菌抑制剤など、薬学的に許容される、通常用いられている添加剤を使用することができる。
【００２８】
本発明の皮膚交感神経活動亢進剤、皮膚微小循環抑制剤、皮膚交感神経活動抑制剤及び皮膚微小循環亢進剤を医薬品、医薬部外品に適用する場合、前記有効成分を有効量含有させ、必要により添加剤を配合して各種剤形に調製することができる。種々の剤型に調製するには、添加剤を用いて常法に従って製造すればよい。
【００２９】
本発明の皮膚交感神経活動亢進剤、皮膚微小循環抑制剤、皮膚交感神経活動抑制剤及び皮膚微小循環亢進剤は、食料、飲料、飼料、ペットフード等に添加又はこれらと混合して使用することができる。あるいは、そのままで飲料又は食品として使用することができる。あるいは、皮膚交感神経活動の亢進、皮膚微小循環の抑制、皮膚交感神経活動の抑制、又は皮膚微小循環の亢進をコンセプトとしてその旨を表示した飲食品、すなわち、健康食品、機能性表示食品、病者用食品、保健食品及び特定保健用食品などに添加又は配合して使用することができる。また、前記有効成分を含有し、皮膚交感神経活動の亢進、皮膚微小循環の抑制、皮膚交感神経活動の抑制、又は皮膚微小循環の亢進により治療、予防又は改善しうる疾患又は状態の治療、予防又は改善等をコンセプトとしてその旨を表示した飲食品、すなわち、健康食品、機能性表示食品、病者用食品、保健食品及び特定保健用食品などに添加又は配合して使用することができる。前記の、健康食品、機能性表示食品、病者用食品、保健食品及び特定保健用食品は、食用又は飲料用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル、ペースト等の各種製剤形態に成形して提供することができる。製剤形態の食品は、医薬製剤と同様に製造することができ、前記有効成分と、食品として許容できる担体、例えば適当な賦形剤等とを混合した後、慣用の手段を用いて製造することができる。さらに、スープ類、ジュース類、果汁飲料、牛乳、乳飲料、乳清飲料、乳酸菌飲料、茶飲料、アルコール飲料、コーヒー飲料、炭酸飲料、清涼飲料水、水飲料、ココア飲料、ゼリー状飲料、スポーツ飲料、ダイエット飲料などの液状食品組成物、プリン、ヨーグルトなどの半固形食品組成物、麺類、菓子類、スプレッド類等に、本発明の皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の制御剤を添加又はこれらと混合して、食品組成物を製造することができる。飼料としては、ウサギ、ラット、マウス等に用いる小動物用飼料、犬、猫、小鳥、リス等に用いるペットフード等が挙げられる。
【００３０】
食品組成物には、種々の食品添加物、例えば、酸化防止剤、色素、香料、調味料、甘味料、酸味料、pH調整剤、品質安定剤、保存剤等、通常の食品又は飲料の原料として使用されている添加剤を単独あるいは併用して配合してもよい。
【００３１】
食品組成物は、ポリエチレンテレフタレートを主成分とする成形容器（ＰＥＴボトル）、金属缶、金属箔やプラスチックフィルムと複合された紙容器、瓶等の通常の包装容器に充填して提供することができる。
また、食品組成物は、例えば、金属缶のような容器に充填後、加熱殺菌できる場合にあっては適用されるべき法規（日本にあっては食品衛生法）に定められた殺菌条件で製造することができる。ＰＥＴボトルや紙容器のようにレトルト殺菌できないものについては、あらかじめ上記同等の殺菌条件、例えばプレート式熱交換器等で高温短時間殺菌後、一定の温度まで冷却して容器に充填する等の方法が採用できる。
【００３２】
前記有効成分を含有する本発明の皮膚交感神経活動亢進剤、皮膚微小循環抑制剤、皮膚交感神経活動抑制剤及び皮膚微小循環亢進剤における前記有効成分の含有量は、その使用形態により適宜決定することができる。
例えば、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等の経口用固形製剤、内服液剤、シロップ剤等の経口用液体製剤の場合は、本発明の経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤の総量中、前記有効成分の含有量は固形分濃度（固形分換算）として０．００１質量％以上が好ましく、０．０１質量％以上がより好ましく、０．１質量％以上がさらに好ましく、また、その上限値は１０質量％以下が好ましく、１質量％以下がより好ましく、０．５質量％以下がさらに好ましい。さらに、前記有効成分の含有量の数値範囲は、０．００１〜１０質量％が好ましく、０．０１〜１質量％がより好ましく、０．１〜０．５質量％がさらに好ましい。
本発明の経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤を飲食品やペットフード等に配合する場合は、本発明の経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤の総量中、前記有効成分の含有量は固形分濃度として０．０００１質量％以上が好ましく、０．００１質量％以上がより好ましく、０．０１質量％以上がさらに好ましく、また、その上限値は１質量％以下が好ましく、０．１質量％以下がより好ましく、０．０５質量％以下がさらに好ましい。さらに、前記有効成分の含有量の数値範囲は、０.０００１〜１質量％が好ましく、０．００１〜０．１質量％がより好ましく、０．０１〜０．０５質量％がさらに好ましい。
【００３３】
本発明の経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤の投与又は摂取対象は、好ましくは温血脊椎動物であり、より好ましくは哺乳動物である。本明細書において哺乳動物は、例えば、ヒト、並びにサル、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタなどの非ヒト哺乳動物が挙げられる。本発明の経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤は、ヒトへの投与に好適である。
【００３４】
本発明の経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤は、皮膚微小循環の制御又は皮膚交感神経活動の制御を所望する対象者、皮膚微小循環の制御又は皮膚交感神経活動の制御を必要とする対象者又は所望する対象者に好ましく適用することができる。あるいは、毛細血管拡張症予防若しくは改善効果、血行不良予防若しくは改善効果、又は冷え症予防若しくは改善効果を所望する者、並びに前記症状の予備群に好ましく適用することができる。
また、本発明の経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤は、正常な皮膚交感神経活動や皮膚微小循環が妨げられている条件下で好ましく適用することができる。
【００３５】
本発明の経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤を用いた、皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の制御方法において、該制御剤を投与又は摂取することで適用する前記有効成分の投与又は摂取量は、個体の状態、体重、性別、年齢、素材の活性、投与又は摂取経路、投与又は摂取スケジュール、製剤形態又はその他の要因により適宜決定することができる。例えば、前記有効成分の投与又は摂取量は、０．００１mg/kg体重/日以上が好ましく、０．０１mg/kg体重/日以上がより好ましく、０．１mg/kg体重/日以上がさらに好ましく、その上限値は、１００mg/kg体重/日以下が好ましく、１０mg/kg体重/日以下がより好ましく、１mg/kg体重/日以下がさらに好ましい。さらに、前記有効成分の投与又は摂取量の数値範囲は、０．００１〜１００mg/kg体重/日が好ましく、０．０１〜１０mg/kg体重/日がより好ましく、０．１〜１mg/kg体重/日がさらに好ましい。なお前記有効成分は、１日１回〜数回に分け、又は任意の期間及び間隔で投与若しくは摂取され得る。
【００３６】
上述の実施形態に関し、本発明はさらに以下のスクリーニング方法、皮膚交感神経活動若しくは皮膚微小循環の制御方法、経口皮膚微小循環制御剤若しくは皮膚交感神経活動制御剤、並びに製造方法についてさらに詳細に説明する。
【００３７】
＜１＞皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の経口制御剤の候補物質の存在下で、ＴＲＰＶ４活性制御能を測定し、ＴＲＰＶ４活性の制御可能な候補物質を皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の経口制御剤として選択する、皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の経口制御剤のスクリーニング方法。
＜２＞前記ＴＲＰＶ４活性が消化管ＴＲＰＶ４活性である、前記＜１＞項に記載のスクリーニング方法。
＜３＞前記ＴＲＰＶ４又は消化管ＴＲＰＶ４が、ヒト、ラット又はマウス由来のＴＲＶ４又は消化管ＴＲＰＶ４である、前記＜１＞又は＜２＞項に記載のスクリーニング方法。
＜４＞ＴＲＰＶ４又は消化管ＴＲＰＶ４発現培養細胞を用いてＴＲＰＶ４又は消化管ＴＲＰＶ４活性能を測定する、前記＜１＞〜＜３＞のいずれか１項に記載のスクリーニング方法。
＜５＞前記消化管ＴＲＰＶ４活性の制御が求心性迷走神経活動を介して皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環を制御する、前記＜２＞〜＜４＞のいずれか１項に記載のスクリーニング方法。
【００３８】
＜６＞経口投与又は摂取により、ＴＲＰＶ４活性を制御することによる、皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環の制御方法。
＜７＞前記ＴＲＰＶ４活性が消化管ＴＲＰＶ４活性である、前記＜６＞項に記載の方法。
＜８＞前記消化管ＴＲＰＶ４活性の制御が求心性迷走神経活動を介して皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環を制御する、前記＜７＞項に記載の方法。
＜９＞ＴＲＰＶ４活性亢進剤又は消化管ＴＲＰＶ４活性亢進剤を経口投与又は摂取する、前記＜６＞〜＜８＞のいずれか１項に記載の方法。
＜１０＞前記ＴＲＰＶ４活性亢進剤又は消化管ＴＲＰＶ４活性亢進剤が、４α-ＰＤＤ、５，６−ＥＥＴ、ＲＮ-１７４７、及びＧＳＫ１０１６７９０Ａからなる群より選ばれる１種又は２種以上である、前記＜９＞項に記載の方法。
＜１１＞ＴＲＰＶ４活性抑制剤又は消化管ＴＲＰＶ４活性抑制剤を経口投与又は摂取する、前記＜６＞〜＜８＞のいずれか１項に記載の方法。
＜１２＞前記ＴＲＰＶ４活性抑制剤又は消化管ＴＲＰＶ４活性抑制剤が、ＲＮ１７３４、ＧＳＫ２０５、及びＨＣ０６７０４７からなる群より選ばれる１種又は２種以上である、前記＜１１＞項に記載の方法。
＜１３＞ＴＲＰＶ４活性制御剤又は消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤を、皮膚交感神経活動若しくは皮膚微小循環の亢進若しくは抑制を望むヒト若しくは動物、皮膚交感神経活動若しくは皮膚微小循環の亢進若しくは抑制を必要とするヒト若しくは動物、又は毛細血管拡張症予防若しくは改善効果、血行不良予防若しくは改善効果、若しくは冷え症予防若しくは改善効果を所望するヒト、又は前記症状の予備群に適用する、前記＜６＞〜＜１２＞のいずれか１項に記載の方法。
＜１４＞前記ＴＲＰＶ４活性制御剤又は消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤の有効成分の投与又は摂取量が、０．００１mg/kg体重/日以上、好ましくは０．０１mg/kg体重/日以上、より好ましくは０．１mg/kg体重/日以上、であり、１００mg/kg体重/日以下、好ましくは１０mg/kg体重/日以下、より好ましくは１mg/kg体重/日以下、である、前記＜６＞〜＜１３＞のいずれか１項に記載の方法。
＜１５＞非治療的である、前記＜６＞〜＜１４＞のいずれか１項に記載の方法。
【００３９】
＜１６＞ＴＲＰＶ４活性制御剤を有効成分とする、経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤。
＜１７＞前記ＴＲＰＶ４活性制御剤が消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤である、前記＜１６＞項に記載の経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤。
＜１８＞前記消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤が求心性迷走神経活動を介して皮膚交感神経活動又は皮膚微小循環を制御する、前記＜１７＞項に記載の経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤。
＜１９＞前記ＴＲＰＶ４活性制御剤又は消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤が、ＴＲＰＶ４活性亢進剤若しくは消化管ＴＲＰＶ４活性亢進剤、又はＴＲＰＶ４活性抑制剤若しくは消化管ＴＲＰＶ４活性抑制剤である、前記＜１６＞〜＜１８＞のいずれか１項に記載の経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤。
＜２０＞前記ＴＲＰＶ４活性亢進剤又は消化管ＴＲＰＶ４活性亢進剤が、４α-ＰＤＤ、５，６−ＥＥＴ、ＲＮ-１７４７、及びＧＳＫ１０１６７９０Ａからなる群より選ばれる１種又は２種以上である、前記＜１９＞項に記載の経口皮膚微小循環制御剤又は皮膚交感神経活動制御剤。
＜２１＞前記ＴＲＰＶ４活性抑制剤又は消化管ＴＲＰＶ４活性抑制剤が、ＲＮ１７３４、ＧＳＫ２０５、及びＨＣ０６７０４７から選ばれる１種又は２種以上である、前記＜１９＞項に記載の経口皮膚微小循環制御剤又は皮膚交感神経活動制御剤。
＜２２＞前記経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤の総量中、前記有効成分の含有量が固形分濃度（固形分換算）として、０．００１質量％以上、好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは０．１質量％以上、であり、１０質量％以下、好ましくは１質量％以下、より好ましくは０．５質量％以下、である、前記＜１６＞〜＜２１＞のいずれか１項に記載の経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤。
＜２３＞前記経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤の総量中、前記有効成分の含有量が固形分濃度（固形分換算）として、０．０００１質量％以上、好ましくは０．００１質量％以上、より好ましくは０．０１質量％以上、であり、１質量％以下、好ましくは０．１質量％以下、より好ましくは０．０５質量％以下、である、前記＜１６＞〜＜２２＞のいずれか１項に記載の経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤。
【００４０】
＜２４＞求心性迷走神経活動を介して作用を有する経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤としての、消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤の使用。
＜２５＞求心性迷走神経活動を介して作用を有する経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤の製造のための、消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤の使用。
＜２６＞求心性迷走神経活動を介して作用を有する消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤を、経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤として使用する方法。
＜２７＞求心性迷走神経活動を介して作用を有する消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤を適用する、皮膚微小循環又は皮膚交感神経活動の制御方法。
【００４１】
＜２８＞前記消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤が消化管ＴＲＰＶ４活性亢進剤である、前記＜２４＞〜＜２７＞のいずれか１項に記載の使用又は方法。
＜２９＞前記消化管ＴＲＰＶ４活性亢進剤が、４α-ＰＤＤ、５，６−ＥＥＴ、ＲＮ-１７４７、及びＧＳＫ１０１６７９０Ａからなる群より選ばれる１種又は２種以上である、前記＜２８＞項に記載の使用又は方法。
＜３０＞前記消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤が消化管ＴＲＰＶ４活性抑制剤である、前記＜２４＞〜＜２７＞のいずれか１項に記載の使用又は方法。
＜３１＞前記消化管ＴＲＰＶ４活性抑制剤が、ＲＮ１７３４、ＧＳＫ２０５、及びＨＣ０６７０４７から選ばれる１種又は２種以上である、前記＜３０＞項に記載の使用又は方法。
＜３２＞前記消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤を、皮膚交感神経活動若しくは皮膚微小循環の亢進若しくは抑制を望むヒト若しくは動物、皮膚交感神経活動若しくは皮膚微小循環の亢進若しくは抑制を必要とするヒト若しくは動物、又は毛細血管拡張症予防若しくは改善効果、血行不良予防若しくは改善効果、若しくは冷え症予防若しくは改善効果を所望するヒト、又は前記症状の予備群に適用する、前記＜２４＞〜＜３１＞のいずれか１項に記載の使用又は方法。
＜３３＞前記経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤の総量中、前記有効成分の含有量が固形分濃度（固形分換算）として、０．００１質量％以上、好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは０．１質量％以上、であり、１０質量％以下、好ましくは１質量％以下、より好ましくは０．５質量％以下、である、前記＜２４＞〜＜３２＞のいずれか１項に記載の使用又は方法。
＜３４＞前記経口皮膚微小循環制御剤又は経口皮膚交感神経活動制御剤の総量中、前記有効成分の含有量が固形分濃度（固形分換算）として、０．０００１質量％以上、好ましくは０．００１質量％以上、より好ましくは０．０１質量％以上、であり、１質量％以下、好ましくは０．１質量％以下、より好ましくは０．０５質量％以下、である、前記＜２４＞〜＜３２＞のいずれか１項に記載の使用又は方法。
【００４２】
＜３５＞皮膚微小循環又は皮膚交感神経活動の制御方法のために用いる、求心性迷走神経活動を介して作用を有する、消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤。
＜３６＞皮膚微小循環又は皮膚交感神経活動の制御薬の製造のための、求心性迷走神経活動を介して作用を有する、消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤の使用。
＜３７＞皮膚微小循環又は皮膚交感神経活動の制御の非治療的な処置方法のために用いる、求心性迷走神経活動を介して作用を有する、消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤の使用。
【００４３】
＜３８＞前記消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤が消化管ＴＲＰＶ４活性亢進剤である、前記＜３５＞〜＜３７＞のいずれか１項に記載の消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤又は使用。
＜３９＞前記消化管ＴＲＰＶ４活性亢進剤が、４α-ＰＤＤ、５，６−ＥＥＴ、ＲＮ-１７４７、及びＧＳＫ１０１６７９０Ａからなる群より選ばれる１種又は２種以上である、前記＜３８＞項に記載の消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤又は使用。
＜４０＞前記消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤が消化管ＴＲＰＶ４活性抑制剤である、前記＜３５＞〜＜３７＞のいずれか１項に記載の消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤又は使用。
＜４１＞前記消化管ＴＲＰＶ４活性抑制剤が、ＲＮ１７３４、ＧＳＫ２０５、及びＨＣ０６７０４７から選ばれる１種又は２種以上である、前記＜４０＞項に記載の消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤又は使用。
＜４２＞前記消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤を、皮膚交感神経活動若しくは皮膚微小循環の亢進若しくは抑制を望むヒト若しくは動物、皮膚交感神経活動若しくは皮膚微小循環の亢進若しくは抑制を必要とするヒト若しくは動物、又は毛細血管拡張症予防若しくは改善効果、血行不良予防若しくは改善効果、若しくは冷え症予防若しくは改善効果を所望するヒト、又は前記症状の予備群に適用する、前記＜３５＞〜＜４１＞のいずれか１項に記載の消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤又は使用。
＜４３＞前記消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤を医薬組成物の形態で適用する、前記＜３５＞〜＜４２＞のいずれか１項に記載の消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤又は使用。
＜４４＞前記消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤の含有量が、剤の総量中、固形分濃度（固形分換算）として、０．００１質量％以上、好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは０．１質量％以上、であり、１０質量％以下、好ましくは１質量％以下、より好ましくは０．５質量％以下、である、前記＜４３＞項に記載の消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤又は使用。
＜４５＞前記消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤を食品、飲料、又は飼料の形態で適用する、前記＜３５＞〜＜４２＞のいずれか１項に記載の消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤又は使用。
＜４６＞前記消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤の含有量が、剤の総量中、固形分濃度（固形分換算）として、０．０００１質量％以上、好ましくは０．００１質量％以上、より好ましくは０．０１質量％以上、であり、１質量％以下、好ましくは０．１質量％以下、より好ましくは０．０５質量％以下、である、前記＜４５＞項に記載の消化管ＴＲＰＶ４活性制御剤又は使用。
【実施例】
【００４４】
以下、本発明を実施例に基づき詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００４５】
［試験例１］ＴＲＰＶ４活性亢進剤の経口投与による、ラット求心性迷走神経への影響
ラット（ＳＨＲ、雄、１１週齢）に１８時間の絶食をさせた後、ウレタン（和光純薬工業社製、1g/kg体重、i．p．）の麻酔下で正中切開手術を行い、右横隔膜下迷走神経を露出させ、新島らの方法（Niijima A.，et al.，Physiol．Behav.，1991，vol．49(5)，p．1025-1028）を参考にし、求心性神経活動を記録した。なお、手術開始から求心性神経活動の測定終了まで、保温装置にて体温の低下を防いだ。
【００４６】
詳しくは、ヘパリン（ニプロ社製、１００ｕｎｉｔ／ｍＬ）で満したポリエチレンカテーテル（ベクトン・ディッキンソン社製）を右大腿静脈へ挿入した後、仰向けで気道を確保しながら正中切開し、左右横隔膜下迷走神経の連絡枝を切断し、右横隔膜下迷走神経を食道から剥離した。迷走神経を剥離した後、右横隔膜下迷走神経を横隔膜直下（中枢側）で切断し、中枢側切断端末をテフロン（登録商標）コートした２極性のステンレスワイヤー電極（As634、Cooner Wire社製）に繋ぎ、シリコン（Sil-Gel 604、Wacker社製）を用いて絶縁固定し、求心性迷走神経活動を取得した。
次に、素材投与の為に、ニプロ栄養カテーテル（ニプロ社製）を経口で胃内に挿入した。そして、投与素材による必要以上の胃内圧の上昇を防ぐ為に、胃幽門部より内径３mm外形５mmのシリコンチューブを挿入し胃内容物の排泄を促した。術後１時間以上の馴化を経て、素材投与前に１０ｍＬの生理食塩水を用いて胃内を洗浄した。そして、１５分以上の安静を経て、１％ＤＭＳＯ含有０．０５Ｍ ＮａＣｌ水溶液に溶解した、公知のＴＲＰＶ４活性阻害剤（ＨＣ０６７０７４、Ｓｉｇｍａ−ａｌｄｒｉｃｈ社製、４ｍｍｏｌ／ｋｇ体重）、及び公知のＴＲＰＶ４活性亢進剤（ＧＳＫ１０１６７９０Ａ、Ｓｉｇｍａ−ａｌｄｒｉｃｈ社製、０．４μｍｏｌ／ｋｇ体重）を１ｍＬ／分で経口投与（４ｍＬ／ｋｇ体重）した。対照には、１％ＤＭＳＯ含有０．０５Ｍ ＮａＣｌ水溶液を用いた。試験終了後、飽和塩化カリウム水溶液を大腿静脈カテーテルより静脈投与し、安楽死させた。
【００４７】
求心性迷走神経活動は、プレアンプ（JC-101B、日本光電社製）及びバンドパスフィルタ（ｌｏｗ ｃｕｔ：１５０Ｈｚ、ｈｉｇｈ ｃｕｔ：１ｋＨｚ）内蔵の高感度増幅器（MEG-5100、日本光電社製）を用いて増幅させ、ポリグラフシステム（LEG-1000、日本光電社製）及びサーマルアレイレコーダ（RTA-1100、日本光電社製）に接続し、4ｋ／ｓのサンプリング速度にてデータ収録した。
求心性迷走神経活動は、飽和塩化カリウム水溶液の静脈投与による安楽死の際に、神経活動の興奮が認められた場合にのみ、取得できたものとした。飽和塩化カリウム水溶液の大腿静脈投与による安楽死２０分後以降の神経活動値はノイズとした。また、求心性迷走神経活動の解析には、ノイズを差し引いた神経活動値を用いた。また、求心性迷走神経活動の解析には、各時間点の１４．４秒間における神経活動の積算値の平均値を用い、安静時（１分毎の投与前５分間の平均値）に対する変化率（％）を算出した。
得られた結果を図１に示す。図１において、求心性迷走神経活動は（平均値±標準誤差）で表した。群間における平均値の差の検定はＡＮＯＶＡを施行した後、Ｓｔｕｄｅｎｔ−Ｎｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓ検定を施行した。
【００４８】
図１に示すように、ＴＲＰＶ４活性亢進剤の経口投与により、対照投与群と比較して、ＴＲＰＶ４活性亢進剤の投与後３〜５分後及び１５分後において、求心性迷走神経活動は有意に亢進していた。
また、ＴＲＰＶ４活性亢進剤の作用による求心性迷走神経活動の亢進は、ＴＲＰＶ４活性阻害剤を併用投与することで、有意に抑制された。
【００４９】
［試験例２］ＴＲＰＶ４活性亢進剤の経口投与による、求心性迷走神経を介した皮膚交感神経活動への影響
ラット（ＳＨＲ、雄、１０週齢）をペントバルビタール（共立製薬社製、５０mg／ｋｇ体重、i．p．）の麻酔下で正中切開手術を行い、食道に並走する横隔膜下迷走神経の連絡枝を切除すると共に、肝臓枝より中枢側の横隔膜下迷走神経を食道から剥離し、両側性に約５mm程度切除した。切除後は、切開部を縫合糸で縫合した。対照ラットには、迷走神経の切除以外は同様の手術を施した偽手術を行った。
術後１週間以上の回復期間を経て、下記に示す皮膚交感神経活動の測定を行った。なお、手術開始から皮膚交感神経活動の測定終了まで、保温装置にて体温の低下を防いだ。
【００５０】
手術を行ったラットに１８時間の絶食をさせた後、ウレタン（和光純薬工業社製、1g/kg体重、i．p．）の麻酔下で、ヘパリン（ニプロ社製、１００ｕｎｉｔ／ｍＬ）で満したポリエチレンカテーテル（ベクトン・ディッキンソン社製）を右大腿静脈へ挿入した。その後、外側大腿部位を切開し、踵裏の皮膚血流、汗腺を支配する皮膚交感神経を含有する脛骨神経を露出させ、末梢側（足先側）で切断した。次に、切断された脛骨神経の末梢側の切断端末をテフロン（登録商標）コートした２極性のステンレスワイヤー電極（As634、Cooner Wire社製）に繋ぎ、シリコン（Sil-Gel 604、Wacker社製）を用いて絶縁固定し、脛骨神経活動を取得した。
次に、素材投与の為に、ニプロ栄養カテーテル（ニプロ社製）を経口で胃内に挿入した。そして、１時間以上の馴化を経て、１％ＤＭＳＯ含有０．０５Ｍ ＮａＣｌ水溶液に溶解した、公知のＴＲＰＶ４亢進剤（ＧＳＫ１０１６７９０Ａ、Ｓｉｇｍａ−ａｌｄｒｉｃｈ社製、０．４μｍｏｌ／ｋｇ体重）を０．５ｍＬ／分で経口投与（４ｍＬ／ｋｇ体重）した。対照には、１％ＤＭＳＯ含有０．０５Ｍ ＮａＣｌ水溶液を投与した。
【００５１】
脛骨神経活動は、プレアンプ（JC-101B、日本光電社製）及びバンドパスフィルタ（ｌｏｗ ｃｕｔ：５０Ｈｚ、ｈｉｇｈ ｃｕｔ:１ｋＨｚ）内蔵の高感度増幅器（MEG-5100、日本光電社製）を用いて増幅させ、多目的データ取得システム（PowerLab 4/30、AD Instruments社製）に出力させ、１０ｋ／ｓのサンプリング速度にてデータ収録した。取得した脛骨神経活動を、さらに、ＬａｂＣｈａｒｔ解析ソフト（ver 7.0、ADInstruments）のバンドパスフィルタ（ｌｏｗ ｃｕｔ:２５０Ｈｚ、ｈｉｇｈ ｃｕｔ:４００Ｈｚ）を用いてノイズを除去し、得られた脛骨神経活動を皮膚交感神経活動とした。
皮膚交感神経活動は、安楽死前に、自律神経節阻害剤である臭化ヘキサメトニウム（和光純薬工業社製、１３．５mg／ｋｇ体重）を静脈投与することで神経活動の低下が認められ、且つ、飽和塩化カリウム水溶液の静脈投与による安楽死の際に、神経活動の興奮が認められた場合にのみ、取得できたものとした。飽和塩化カリウム水溶液の静脈投与による安楽死２０分後以降の神経活動値はノイズとした。また、皮膚交感神経活動の解析には、ノイズを差し引いた神経活動値を用いた。また、皮膚交感神経活動の解析には、各時間点の１分間における神経活動の積算値の平均値を用い、安静時（１分毎の投与前１０分間の平均値）に対する変化率（％）を算出した。
得られた結果を図２に示す。図２において、皮膚交感神経活動は（平均値±標準誤差）で表した。群間における平均値の差の検定は、Ｆ検定を施行した後、等分散の場合はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定、不等分散の場合はＷｅｌｃｈのｔ検定を行った。
【００５２】
図２（Ａ）に示すように、偽手術群のラットにおいて、ＴＲＰＶ４活性亢進剤を投与した場合、対照投与に比較し、皮膚交感神経活動は亢進していた。特に、ＴＲＰＶ４活性亢進剤の投与から１分、５分、２０分、３０分の時点で、皮膚交感神経活動は有意に亢進していた。
また、ＴＲＰＶ４活性亢進剤の作用による皮膚交感神経活動の亢進は、図２（Ｂ）に示すように、迷走神経切除術を行ったラットにおいては認められなかった。したがって、ＴＲＰＶ４活性亢進剤投与による皮膚交感神経活動亢進は、迷走神経を介することが明らかとなった。
【００５３】
［試験例３］ＴＲＰＶ４活性亢進剤の経口投与による、求心性迷走神経を介した皮膚微小循環への影響
ラット（ＳＨＲ、雄、１０週齢）をペントバルビタール（共立製薬社製、５０mg／ｋｇ体重、i．p．）の麻酔下で正中切開手術を行い、食道に並走する横隔膜下迷走神経の連絡枝を切除すると共に、肝臓枝より中枢側の横隔膜下迷走神経を食道から剥離し、両側性に約5mm程度切除した。切除後は、切開部を縫合糸で縫合した。対照ラットには、迷走神経の切除以外は同様の手術を施した偽手術を行った。
皮膚微小循環は、皮膚における細動脈、毛細血管、細静脈の総合的な血流量から評価できる。その為、皮膚微小循環を評価するために、術後１週間以上の回復期間を経て、下記に示す皮膚血流量の測定を行った。
【００５４】
手術を行ったラットに１８時間の絶食をさせた後、ウレタン（和光純薬工業社製、1g/kg体重、i．p．）の麻酔下で、接触型レーザードップラー血流計（ALF21、アドバンス社製）を用いて右踵裏の表皮の細動脈、毛細血管、細静脈の総合的な皮膚血流量を計測した。
次に、素材投与の為に、ニプロ栄養カテーテル（ニプロ社製）を経口で胃内に挿入した。そして、１時間以上の馴化を経て、１％ＤＭＳＯ含有０．０５Ｍ ＮａＣｌ水溶液に溶解した、公知のＴＲＰＶ４亢進剤（ＧＳＫ１０１６７９０Ａ、Ｓｉｇｍａ−ａｌｄｒｉｃｈ社製、０．４μｍｏｌ／ｋｇ体重）を０．５ｍＬ／分で経口投与（４ｍＬ／ｋｇ体重）した。対照には、１％ＤＭＳＯ含有０．０５Ｍ ＮａＣｌ水溶液を投与した。
【００５５】
皮膚血流量は、多目的データ取得システム（PowerLab 4/30、AD Instruments社製）を用いて１ｋ/ｓのサンプリング速度にてデータ収録した。解析には、各時間点の１分間における皮膚血流量の平均値を用い、安静時（１分毎の投与前１０分間の平均値）に対する変化率（％）を算出した。
得られた結果を図３に示す。図３において、皮膚血流量は（平均値±標準誤差）で表した。群間における平均値の差の検定は、Ｆ検定を施行した後、等分散の場合はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定、不等分散の場合はＷｅｌｃｈのｔ検定を行った。
【００５６】
図３（Ａ）に示すように、偽手術したラットにおいて、ＴＲＰＶ４活性亢進剤を投与した場合、対照投与に比較し、皮膚血流量は低下していた。特に、ＴＲＰＶ４活性亢進剤の投与から３分、５分、１０分の時点で、皮膚血流量は有意に低下した。
また、ＴＲＰＶ４活性亢進剤の作用による血流量の低下は、図３（Ｂ）に示すように、迷走神経切除術を行ったラットにおいては認められなかった。したがって経口投与により、消化管ＴＲＰＶ４が亢進され、迷走神経を介し、皮膚血流量が低下することが明らかとなった。
【００５７】
上記試験例１〜３の結果によれば、消化管ＴＲＰＶ４活性制御により、求心性迷走神経を介して、皮膚交感神経活動及び皮膚微小循環を制御できることが明らかとなった。
横隔膜下の迷走神経は、中枢から内臓に情報を伝える遠心性神経の役割を果たす他に、消化管を主体とする内臓の情報を中枢に伝える求心性神経の役割も果たす。上記試験例でも示すように、ＴＲＰＶ４活性亢進剤の経口投与が求心性の迷走神経活動の亢進を示す。さらに、ＴＲＰＶ４活性亢進剤の経口投与による皮膚交感神経活動亢進作用、皮膚微小循環抑制作用は、迷走神経を切除すると消失する。したがって、ＴＲＰＶ４活性亢進剤が消化管ＴＲＰＶ４に作用した際にのみ、皮膚交感神経、皮膚微小循環に影響を与えると考えられる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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