(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
軟包装材からなる培養袋と、前記培養袋を収容する外殻容器とを含み、前記培養袋の内容物を収容する側面及び前記外殻容器の前記培養袋を収容する側壁部は、それぞれ上部の幅が広く、下部の幅が狭くなるように傾斜しており、前記培養袋に内容物が収容されると、前記内容物の重量により前記培養袋が変形して前記外殻容器の内面に密着することにより、前記培養袋が前記外殻容器に支持された状態で、前記培養袋内の前記内容物を撹拌混合する培養装置を用い、前記外殻容器を交換することなく、同一の培養袋に培地を追加して、段階的にスケールアップしながら、多段階の培養を行うことを特徴とする培養方法。
【請求項２】
前記培養袋を収容した前記外殻容器を振とうさせることにより、前記内容物を撹拌混合することを特徴とする請求項１に記載の培養方法。
【請求項３】
前記外殻容器の側壁部が逆円錐形であり、この逆円錐の対向する母線の成す角度θが２５〜９０°であることを特徴とする請求項１又は２に記載の培養方法。
【請求項４】
前記外殻容器の側壁部の下端部に平坦な底壁部を有し、前記側壁部の上端部における直径が、前記側壁部の下端部における直径の１．５〜５倍であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の培養方法。
【請求項５】
前記培養袋がガゼット袋であり、注出口を備えていることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の培養方法。
【請求項６】
前記内容物が細胞及び培地を含み、前記細胞を培養することを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項に記載の培養方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、培養装置を用いた培養方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
微生物、昆虫細胞、植物細胞、動物細胞などの大量培養は、医薬品、食品、化粧品や、これらの原材料などとして有用な各種物質の生産に広く用いられている。
特許文献１には、撹拌翼を有した撹拌装置を気密に収納した培養袋が記載されている。この培養装置は、撹拌時に撹拌翼により、高いシェア（せん断応力）が系内において生じるものであった。また、撹拌翼の軸受け部分の摺動を原因としたパーティクルの発生があった。さらに、価格面の課題、撹拌翼と培養袋の接合方法の課題があった。
特許文献２には、平袋からなる培養袋をトレイ状の支持装置に固定した培養装置が記載されている。この培養装置の場合、平袋が横置きに配置されるため、大スケール化には占有面積の増大の課題があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特許第４９８６６５９号公報
【特許文献２】特許第５２１４７１４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであり、容器を交換することなく、小スケールから大スケールまで、培養が可能な培養装置を用いた培養方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
前記課題を解決するため、軟包装材からなる培養袋と、前記培養袋を収容する外殻容器とを含み、前記培養袋の内容物を収容する側面及び前記外殻容器の前記培養袋を収容する側壁部は、それぞれ上部の幅が広く、下部の幅が狭くなるように傾斜しており、前記培養袋に内容物が収容されると、前記内容物の重量により前記培養袋が変形して前記外殻容器の内面に密着することにより、前記培養袋が前記外殻容器に支持された状態で、前記培養袋内の前記内容物を撹拌混合する培養装置を用い、前記外殻容器を交換することなく、同一の培養袋に培地を追加して、段階的にスケールアップしながら、多段階の培養を行うことを特徴とする培養方法を提供する。
【０００６】
前記培養袋を収容した前記外殻容器を振とうさせることにより、前記内容物を撹拌混合することができることが好ましい。
前記外殻容器の側壁部が逆円錐形であり、この逆円錐の対向する母線の成す角度θが２５〜９０°であることが好ましい。
前記外殻容器の側壁部の下端部に平坦な底壁部を有し、前記側壁部の上端部における直径Ｒ１が、前記側壁部の下端部における直径Ｒ２の１．５〜５倍であることが好ましい。
前記培養袋がガゼット袋であり、注出口を備えていることが好ましい。
【０００７】
前記培養方法において、前記内容物が細胞及び培地を含む場合には、前記細胞を培養することができる。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、容器を交換することなく、少量から大容量までのスケールアップが容易である。また、容器を振とうさせる場合には、低いシェア（せん断応力）で１つの容器内で少量から大容量まで撹拌を行うことができ、効率のよい細胞培養ができる。また撹拌翼を有さないため、撹拌翼の軸受け部によるパーティクルの発生を抑制できる。培養により装置が汚染しても、培養袋を交換すればよく、撹拌翼や撹拌磁石を廃棄する必要がないため、従来よりも安価な培養装置を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】培養袋の一例を示す（ａ）正面図、（ｂ）断面図である。
【図２】外殻容器の一例を示す（ａ）正面図、（ｂ）上面図である。
【図３】培養袋を収容した外殻容器の一例を示す斜視図である。
【図４】培養装置に用いられる振とう装置の一例を示す斜視図である。
【図５】（ａ）は外殻容器の一例を示す平面図であり、（ｂ）は外殻容器の振とう動作の一例を示す平面図である。
【図６】培養袋に収容された内容物の動きの一例を模式的に示す斜視図である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、好適な実施形態に基づき、図面を参照して本発明を説明する。
【００１１】
図１に、培養袋１０の一例を示す。図１（ｂ）は、図１（ａ）のＳ−Ｓ線に沿う断面図である。この培養袋１０は、フィルム１２などの軟包装材から構成されている。図１（ｂ）に示す例は、一対のガゼットなしフィルム１２ａの間に、一対のガゼット付きフィルム１２ｂを配置し、フィルム１２ａ，１２ｂの周縁部にシール部１１を設けることにより、密封されたガゼット袋を示す。培養袋１０の形状は、上部の幅が広く、下部の幅が狭くなるように、側面が傾斜している。培養袋１０の側面とは、内容物を収容した状態で、内容物を囲む面であり、例えばシール部１１の内端やフィルム１２の内面などから構成される。図１の場合、培養袋１０の側縁となるシール部１１が傾斜することにより、内容物が収容された状態で、側面が傾斜可能となる。シール部１１を幅広にしたり、シール部１１の外側にフィルム１２を残したりしてもよい。例えば、培養袋の周縁１４が二点鎖線に示すような矩形状であってもよい。培養袋１０が、二重袋や三重袋など多重の包装袋であると、液体が漏れにくいのでより好ましい。
【００１２】
培養袋１０を構成するフィルム１２の材質は特に限定されないが、ポリスチレン、ポリアミド、ポリエステル、ポリオレフィン等の熱可塑性樹脂や、これらの積層体が挙げられる。培養袋１０に用いるフィルム１２は、精製工程で用いるフィルムと同じ素材であることが好ましい。培養工程と精製工程で同じフィルムを用いることにより、作られる医薬品の製品品質の担保を容易にすることができる。フィルム１２として用いられる各フィルム１２ａ，１２ｂの材質、厚さ等は、互いに同一でもよく、異なってもよい。
培養袋１０の容量（大きさ）は特に限定されないが、例えば０．１Ｌ〜５０００Ｌの大きさとすることができ、好ましくは１〜２０００Ｌ、さらに好ましくは２０〜２０００Ｌである。培養袋１０は、シングルユース（使い捨て）であってもよい。
【００１３】
培養袋１０には、培地や雰囲気ガス等の内容物の追加、取り出し等の目的で、複数のチューブ（図示略）を連結することができる。また、培養袋１０は、注出口１３を備えることができる。注出口１３には、コック、キャップ、先細り状の注ぎ口等を設けることもできる。注出口１３にチューブを連結してもよい。本実施形態の場合、注出口１３の基部がフィルム１２の裏側にシールされることにより、注出口１３が培養袋１０に固定されている。シール方法としては、ヒートシール（熱シール）、超音波シール、高周波シール、冷却シール等が挙げられる。注出口１３の基部が培養袋１０の下部（底部）全体を覆い、注出口１３の基部の側面が培養袋１０の側面にシールされてもよい。
チューブの材質は特に限定されないが、シリコーン、熱可塑性エラストマー等、耐薬品性、耐候性等に優れる材質が好ましい。チューブには、フィルター、フローモニター、流量計、バルブ、ポンプ等を設けてもよい。培養袋１０及びチューブは、培養前に滅菌されていることが好ましい。滅菌手段は培養目的等に応じて適宜選択でき、具体例として、γ線等の放射線、エチレンオキサイド等のガス、水蒸気等による加熱などが挙げられる。
【００１４】
図２に、外殻容器２０の一例を示す。図２において、（ａ）は正面図、（ｂ）は上面図である。また、図３は、図１の培養袋１０を図２の外殻容器２０に収容した状態の斜視図を示す。外殻容器２０は、軟包装材からなる培養袋１０を保護するため、図３に示すように、培養袋１０全体を収容することができる。本実施形態の培養装置に用いられる培養容器４０は、培養袋１０及び外殻容器２０から構成される。
外殻容器の構成は特に限定されないが、図２の外殻容器２０は、側壁部２１及び底壁部２２を備える。底壁部２２は、側壁部２１の下端部に設けられている。外殻容器２０の上部は、開放されていてもよく、蓋を設けて閉鎖可能に構成してもよい。蓋を設けた場合、内部の温度変動を抑制することができる。蓋は、外殻容器２０から分離可能な取り外し式でもよく、ヒンジ等により外殻容器２０に対して開閉可能に連結されてもよい。
【００１５】
外殻容器２０の材質は特に限定されないが、培養袋１０を保護可能な硬さ（剛性）を有することが好ましく、例えば、ステンレス等の金属、樹脂、木材、集成材、繊維強化プラスチック等の複合材料が挙げられる。
外殻容器２０の内部空間は、図２（ａ）に示すように、上部の幅が広く、下部の幅が狭くなるように側壁部２１が傾斜した形状である。幅とは、水平方向の横断面形状の寸法であり、例えば円形の場合は直径に相当する。外殻容器２０の側壁部２１の形状としては、下向きに縮小した錐形（逆錐形）、例えば逆円錐形（底面が上側にある円錐形）が挙げられる。外殻容器２０が逆錐形であることにより、外殻容器２０の底面積が小さくなり、培養袋１０の容量が小さい場合にも、培養袋１０を外殻容器２０に収容して支持することができる。また、外殻容器２０の上部の横断面が広くなるため、培養袋１０の容量が大きい場合にも、培養袋１０を外殻容器２０に収容して支持することができる。したがって、外殻容器２０を交換することなく、少量から大容量までのスケールアップが容易である。培養袋１０の支持を安定にするため、外殻容器２０の底壁部２２は、平坦であることが好ましい。
【００１６】
小容量から大容量の培養袋１０を収容する観点から、外殻容器２０の逆円錐の対向する母線の成す角度θは、２５〜９０°であることが好ましい。角度θの具体例として、２５°、３０°、４５°、６０°、９０°等が挙げられるが、特にこれらに限定されない。図２（ａ）では、θ＝４５°である。なお、円錐の母線とは、円錐の側面と円錐の軸を含む平面との交線であり、軸を中心にして両側に現れる。図２（ａ）では、角度θの両端に位置する直線が、これらの母線に相当する。角度θが小さすぎると、外殻容器２０の上部の幅と下部の幅で差をつけにくく、収容可能な容量の範囲を広くしにくい。角度θが大きすぎると、側壁部２１が水平に近づき、培養袋１０の支持が不安定になるおそれがある。
なお、円錐以外の形状も考慮すると、θは、多角錐において対向する側面の成す角度、あるいは、鉛直軸（上下方向）を含む断面で側面を切断したときに鉛直軸の両側に現れる２辺の成す角度などとして定義することができる。円錐その他の錐形の軸（上下方向）が底面（水平方向）に垂直である場合、外殻容器の側面（側壁部）と底面（底壁部）とが外殻容器の内側に成す角度をφとすると、φ＝９０°＋（θ／２）である。φは、１０２．５〜１３５°の範囲内が好ましい。容器が底面（底壁部）を有しない場合は、水平面を底面とみなすことができる。外殻容器の側面（側壁部）が鉛直軸と成す角度をχとすると、χ＝θ／２である。χは、１２．５〜４５°の範囲内が好ましい。円錐の場合、角度θ、φ、χは一定値であるが、他の形状の場合、所定の角度範囲内で、角度θ、φ、χが側面の位置ごとに異なる値をとることがある。その場合、側面の全周にわたり、側面の各位置のθ、φ又はχが上記範囲内であることが好ましい。
外殻容器２０の上部の幅と下部の幅との比については、例えば上部が下部の１．５〜５倍であることが好ましい。例えば、側壁部２１の上端部における直径Ｒ１が、側壁部２１の下端部における直径Ｒ２の１．５〜５倍であることが好ましい。
【００１７】
外殻容器２０に収容される培養袋１０の内容物は、液体（培地）と気体を含むことが好ましい。外殻容器２０が逆錐形であることにより、図６に示すように、外殻容器２０に密着した培養袋１０も逆錐形となる。内容物を振とうさせると、気体に対する内容物１５の接触面積が大きくなり、気液界面における物質の移動が促進される。気体と液体の容量比（気液容量比）は特に限定されず、液体が気体より多くても、気体が液体より多くてもよく、半々程度でもよい。気液容量比は、例えば１：９〜９：１の範囲が好ましい。培養袋１０が少なくとも液体（培地）を収容する範囲の全体ないし大部分で、培養袋１０が外殻容器２０に密着し、外殻容器２０が培養袋１０の側面を支持することが好ましい。培養袋１０に気体が収容される部分では、培養袋１０の上部（一部）が外殻容器２０の上（外）に露出されてもよい。
【００１８】
培養袋１０に収容される培地は、振とうにより撹拌可能であれば特に限定されず、溶液、乳液、懸濁液、分散液、ゲル等でもよい。培地は均一な単相の組成物でもよく、固形物を含む液体など、二相以上から構成されてもよい。培地は、培養前に滅菌されていることが好ましい。さらに培地は、微生物、昆虫細胞、植物細胞、動物細胞、組織、細胞シート、細胞塊などの生体（培養対象物）を含むことができる。足場を要する培養では、粒状物、塊状物、発泡体、繊維質等の固形物を培養基材として培地に混合してもよい。
【００１９】
培養袋１０に収容される気体は、空気（あるいはＯ２含有ガス）を含む好気的雰囲気でもよく、Ｏ２の濃度が低い嫌気的雰囲気でもよい。気体の組成は特に限定されないが、２種以上の混合ガスが一般的である。気体の成分としては、酸素（Ｏ２）等の酸化性ガス、窒素（Ｎ２）やアルゴン（Ａｒ）等の不活性ガス、二酸化炭素（ＣＯ２）等の酸性ガス、アンモニア（ＮＨ３）等の塩基性ガス、硫化水素（Ｈ２Ｓ）等の還元性ガスなどが挙げられる。培養袋１０に供給される気体は、フィルターを通したものが好ましい。空気、酸素、二酸化炭素などの気体は、下方（液体側）又は上方（気体側）のどちらか一方あるいは両方から導入することが好ましい。
【００２０】
外殻容器２０の側壁部２１には、外殻容器２０に収容された培養袋１０の内容物の量（液面）を目視で確認するための窓２３を有する。窓２３は、側壁部２１の上下方向にスリット状の切れ目として設けられている。窓２３は、開口してもよく、透明な材料で閉鎖されてもよい。また、図２（ｂ）に示すように、底壁部２２には、チューブを通すための穴２４を有する。外殻容器２０を振とう装置３０（図５参照）と連結する構造として、連結部２５が設けられている。
【００２１】
培養袋１０に設けるチューブの配置及び本数は特に限定されず、適宜の位置に所望の本数を設けることができる。チューブの配置は、例えば培養袋の上部、下部、側部のいずれか１又は２以上とすることができる。これらのチューブを介して、内容物のサンプリング、流動物（気体、液体、粉体等）の導入及び排出、栄養分の供給、老廃物の除去等を行うことができる。チューブを介して培養袋と外部装置を含む循環経路を設け、培養液の一部を外部装置で処理してから培養袋に戻す構成も可能である。
【００２２】
図３に示すように、培養袋１０を外殻容器２０に収容すると、培養袋１０が内容物の重量に従って変形し、外殻容器２０の内面に密着する。培養袋１０と外殻容器２０の間が広い面積にわたって接触することにより、機械的な嵌合、係合や、化学的な接着、吸着が無くても密着し、振とうに耐える固着力が生じる。外殻容器２０の内面は、平滑であり、例えばバフ等により研磨されていることが好ましい。内面に緩やかな凹凸があってもよいが、培養袋１０を構成するフィルム１２の厚さに対して、フィルム１２の破損や劣化を招くような微小の凹凸及び形状変化（鋭角部等）を有しないことが好ましい。
【００２３】
外殻容器２０は、培養袋１０及びその内容物の温度調整を行うことができるように、温度調整機構（手段）を有することが好ましい。温度調整機構としては、循環水等の熱媒体を通すことができるジャケット構造、ラバーヒーター等の加熱装置等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２４】
図４に、外殻容器２０を振とうさせる振とう装置３０の一例を示す。振とう装置３０は、外殻容器２０を囲む台部３１及び枠部３２と、外殻容器２０を振とうさせる動力源３３を含む。振とう装置３０は、図３に示すように培養袋１０を収容したまま外殻容器２０を振とうすることができる。本実施形態の培養装置（振とう培養装置）は、培養袋１０を収容した外殻容器２０（上述の培養容器４０）と、振とう装置３０を備え、培養袋１０を収容した外殻容器２０を振とうさせることにより、培養袋１０内の内容物を撹拌混合しながら、培養することができる。
【００２５】
図５（ｂ）に、外殻容器の振とう動作の一例を示す。本実施形態では、外殻容器２０の平面形状は円形、立体形状は中心軸を略上下に向けた逆円錐形である。図５（ａ）は、外殻容器２０の中心２０ｃと半径２０ｒを示す。図５（ｂ）の振とう動作では、外殻容器２０の中心２０ｃが半径Ｒの軌道Ｃ上で回転（公転）する。この場合、振とうの振幅は、半径Ｒの２倍である。さらに外殻容器２０を中心２０ｃ周りに回転（自転）させてもよい。図示例の半径Ｒは半径２０ｒより小さいが、図示の比率は、特に実際の比率を正確に表したものではない。
【００２６】
振とうの際、培養袋１０を収容した外殻容器２０は、水平方向に回転することが好ましい。回転方向が、水平成分と垂直成分の両方を含んでもよい。垂直成分の大きさが、水平成分の大きさより小さい（垂直成分が０である場合を含む）ことが好ましい。一方向への振とうではなく、回転を取り入れることで、効率の良い撹拌ができる。撹拌時のシェア（せん断応力）が培養袋にかかりにくく、効率のよい培養を達成できる。回転速度、回転の方向は、適宜制御することができる。回転速度や回転方向を変化させることで、水平方向の液の撹拌のみではなく、垂直方向の撹拌も実現することができる。
【００２７】
培養の系に応じて回転数、振幅等を設定し、プログラムによって制御することが好ましい。例えば大腸菌の培養であれば、溶液中の溶存酸素濃度（ＤＯ）を高くして培養することが好ましく、ＤＯを高くするためには、激しく振とうさせ、気液の混合を激しくすることが好ましい。一方、動物細胞の培養であれば、培養液の泡立ちを抑え、温和に撹拌することが好ましい。本実施形態の振とう培養装置は、例えば下記の制御因子の１つ又は２以上を制御して培養を行うことができる。
【００２８】
・装置の振とうの回転数及び振とう方向
・培地のｐＨ
・培地の空気通気量
・培地の温度
・液面の高さ（波の高さ）
【００２９】
振とう方向は、右回転と左回転、もしくは正回転と逆回転を任意のパターンで繰り返すことが好ましい。振とう装置の回転速度及び回転数は制御盤等により制御できるようにシステムを組むことが好ましい。振とう装置は、回転方向を任意に切り替え可能であることが好ましい。そのため、動力源や回転装置は、正逆双方向の回転が可能な機構を含むことが好ましい。また、例えばプログラムにより、回転パターンを制御することが好ましい。回転パターンは特に限定されないが、次に数例を挙げる。
【００３０】
（１）正回転→停止→逆回転→停止→正回転→停止→逆回転→（繰り返し）
（２）正回転→停止→正回転→停止→逆回転→停止→逆回転→（繰り返し）
（３）正回転→停止→正回転→停止→正回転→停止→正回転→（繰り返し）
【００３１】
外殻容器の振とうの回転数、振幅は任意に設定することができるが、回転した時に、培養袋内で内容物の波の高さ（例えば液面の平均高さ、最大高さ、高低差など）の上昇幅をある一定の範囲内とするために、波の高さを検出し、波の高さから回転数をフィードバック制御等で調整することが好ましい。回転数は、０．１〜２０００ｒｐｍ（回毎分）が好ましく、０．１〜２００ｒｐｍ、０．１〜１００ｒｐｍがより好ましく、１０〜８０ｒｐｍがさらに好ましい。振幅は０．１〜１００ｍｍが好ましく、２〜１００ｍｍがより好ましく、１０〜３０ｍｍがさらに好ましい。なお、回転方向が変化する場合、回転数は、右回転数と左回転数との和、もしくは正回転数と逆回転数との和のように、回転方向によらず回転数（非負値）の合計とする。
【００３２】
培養袋は、内容物のｐＨ又はＤＯを測定するセンサーと、センサーで得られたデータによるフィードバッグ制御機構を備えることが好ましい。
水素イオン指数（ｐＨ）については、ｐＨ電極を培養袋に挿入する、もしくはｐＨで色の変わるチップを系内に貼ることで系内のｐＨを知ることができる。系内を酸性にしたい場合は、ＣＯ２ガスを導入する、もしくは、酸溶液を滴下することで酸性側にｐＨを変えることができる。ＣＯ２ガスを導入する場合は、ＣＯ２ガスが溶液中に必要以上に溶解することを防ぐため、培養袋の上面からＣＯ２ガスを導入するか、培養袋の底部から間歇で導入することが好ましい。系内を塩基性としたい場合は、アルカリ溶液を添加することにより、ｐＨを塩基性とすることができる。ｐＨを一定にするための酸又はアルカリの投入口は、培養袋１０に接続されたチューブや注出口であってもよく、あるいは他に設けてもよい。
ＤＯ（溶存酸素濃度）については、空気通気量を測定し、フィードバック制御をかけ、酸素を導入することが好ましい。酸素（Ｏ２）の供給方法としては、溶液内に酸素がいきわたるように、溶液内（液面下）に出口を有するチューブから導入することが好ましい。
【００３３】
内容物（培地）の温度については、外殻容器２０の温度調整機能（上述）を用いて温度調整を行うことができる。培養温度は、培養される生物の種類にもよるが、例えば微生物の場合、４〜４０℃が好ましく、２５〜３７℃が特に好ましい。培養しないで培地等の撹拌装置として用いる場合は、冷却してもよい（例えば４〜２０℃）。温度管理は、培養袋１０に温度計を組み込み、その測定値を利用することで、フィードバック制御を行うことができる。温度計は、接触式温度計でもよいが、据え置き型非接触温度計が好ましい。
【００３４】
本実施形態の培養装置は、流加培養（フェドバッチ方式）、灌流培養（パーフュージョン方式）のいずれにも応用することができる。培養する生物体、細胞等は、特に限定されず、大腸菌をはじめとする菌類、酵母、微生物、昆虫細胞、植物細胞、動物細胞、バイオ医薬製造用のＣＨＯ（Chinese Hamster Ovary）細胞、ＨｅＬａ細胞、ＣＯＳ細胞、再生医療用途のｉＰＳ細胞、間葉系幹細胞を始めとした幹細胞、分化させた組織細胞などの動物細胞、などの培養に用いることができる。なかでもＣＨＯ細胞の培養に好適である。
【００３５】
本実施形態の培養装置及びそれを用いた培養方法は、特に大スケールでの培養に適している。振とう装置は、特に大スケールの場合は、カウンターバランスを搭載することが好ましい。カウンターバランスを搭載すると、大容量の培地を含んだ培養袋を用いても、安定して装置を稼働させることができる。１つの振とう装置に２つ以上の培養袋を搭載することにより、相互にカウンターバランスとして機能させてもよい。
【００３６】
例えば細胞を培養する工程の一例を挙げる。まず、細胞及び培地を含む内容物を培養袋１０に収容する。培養袋１０を外殻容器２０に収容して、振とう等により撹拌混合しながら、第１段階の培養を行う。次に、古い培地の一部又は全部を培養袋から取り除くか、あるいは、古い培地を培養袋に残したまま、細胞を培養袋に残して、新しい培地を培養袋に追加する。さらに、細胞及び培地を収容した培養袋１０を振とう等により撹拌混合しながら、第２段階の培養を行う。このように、培養のスケールアップを行う場合に、培養袋１０及び外殻容器２０が逆錐形なので、同一の培養袋１０を用いても外殻容器２０に安定的に支持することができ、培養袋１０に培地を追加して、段階的にスケールアップしながら、多段階の培養を行うことができる。培養袋が逆錐形なので、底部に細胞を沈降させて上澄みを培養袋から排出しやすい。細胞を培養袋から移し替える必要がないので、細胞へのダメージを抑制することができる。ここで、培養対象物は細胞に限らず、個体や組織等の場合も、同様にスケールアップが可能である。
【００３７】
以上、本発明を好適な実施形態に基づいて説明してきたが、本発明は上述の実施形態に限定されるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲で種々の改変が可能である。
培養袋を外殻容器に収容した状態で内容物を撹拌する装置は、振とう装置に限らず、撹拌翼、磁石、撹拌子などを用いてもよい。
上記の振とう装置は、培養のほか、組成物（培地等）の撹拌、調製、化学反応、発酵等にも利用することができる。
【符号の説明】
【００３８】
１０…培養袋、１１…シール部、１２，１２ａ，１２ｂ…フィルム、１３…注出口、１４…培養袋の周縁、１５…内容物、２０…外殻容器、２１…側壁部、２２…底壁部、２３…窓、２４…穴、２５…連結部、３０…振とう装置、３１…台部、３２…枠部、３３…動力源、４０…培養容器。
【図１】
0006566549.tif 000002
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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