(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）の化合物
【化１】
0006546272.tif 000048
式中、
Ｋは、ニトロフェニルエステル及びジニトロフェニルエステル、Ｎ−ヒドロキシピペリジニル基、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル基、１−ヒドロキシベンゾトリアゾリル基、並びに７−アザ−１−ヒドロキシベンゾトリアゾリル基からなる群より選ばれるカルボン酸活性エステル基又は−Ｏ−ＲＭを表し、該ＲＭは、Ｈ原子、メチル、エチル、アリル、ベンジル、フェニル、ｔｅｒｔ−ブチル又はトリメチルシリル基を表し、
Ｐｒは、Ｈ原子又はｔ−ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）、カルボベンゾキシ基（Ｃｂｚ）、及びフルオレニルメトキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ）からなる群より選ばれるアミノ保護基を表し、
＃は、不斉Ｃ原子を意味し、
Ｅは、必要に応じ、ベンジルオキシカルボニル基、ベンズヒドリルオキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）、モノメトキシトリチル基（Ｍｍｔ）、ジフェニルカルバモイル基、イソブチリル基、４−ｔｅｒｔ−ブチルベンゾイル基、アニソイル基、ベンジル基、及びアセチル基からなる群より選ばれる核酸塩基保護基で置換されたアデニニル、シトシニル、プソイドイソシトシニル、グアニニル、チミニル、ウラシリル又はフェニル基を表し、
Ｒ1は、下記一般式（ＩＩ）で表される基であり、
【化２】
0006546272.tif 000049
式中、
Ｒ2は、ホスホン酸エステル基又はホスホン酸基であり、
Ｒ3は、Ｈ原子又はｔ−ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）、カルボベンゾキシ基（Ｃｂｚ）、及びベンズヒドロキシカルボニル基（Ｂｈｏｃ）からなる群より選ばれるアミノ保護基であり
ｍは１、２、３又は４であり、ｈは０、１、２又は３であり、但し、一般式（ＩＩ）中のｍ及びｈの合計は、２≦ｘ≦５である。
【請求項２】
Ｅが、チミニル、ウラシリル、フェニル、Ｎ２−アセチル−グアニニル、Ｎ２−イソブチリル−グアニニル、Ｎ２−ベンジルオキシカルボニル−グアニニル、Ｎ２−（４−メトキシフェニル）−ジフェニルメチル−グアニニル、Ｎ２−ベンズヒドリルオキシカルボニル−グアニニル、Ｎ２−ジ−ベンズヒドリルオキシカルボニル−グアニニル、Ｎ２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−グアニニル、Ｎ２−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−グアニニル、Ｎ６−ベンジルオキシカルボニル−アデニニル、Ｎ６−（４−メトキシフェニル）−ジフェニルメチル−アデニニル、Ｎ６−アニソイル−アデニニル、Ｎ６−ベンズヒドリルオキシカルボニル−アデニニル、Ｎ６−ジ−ベンズヒドリルオキシカルボニル−アデニニル、Ｎ６−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−アデニニル、Ｎ６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−アデニニル、Ｏ６−ベンジルグアニニル、Ｎ２−アセチル−Ｏ６−ジフェニルカルバモイル−グアニニル、Ｎ２−イソブチリル−Ｏ６−ジフェニルカルバモイル−グアニニル、Ｎ２−ベンジルオキシカルボニル−Ｏ６−ジフェニルカルバモイル−グアニニル、Ｎ２−（４−メトキシフェニル）−ジフェニルメチル−Ｏ６−ジフェニルカルバモイル−グアニニル、Ｎ２−ベンズヒドリルオキシカルボニル−Ｏ６−ジフェニルカルバモイル−グアニニル、Ｎ４−ベンジルオキシカルボニル−シトシニル、Ｎ４−（４−メトキシフェニル）−ジフェニル−メチル−シトシニル、Ｎ４−４−ｔｅｒｔ−ブチルベンゾイル−シトシニル、Ｎ４−ベンズ−ヒドリルオキシカルボニル−シトシニル、Ｎ４−ジ−ベンズヒドリルオキシカルボニル−シトシニル、Ｎ４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−シトシニル、Ｎ４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−シトシニル、Ｎ２−ベンジルオキシカルボニル−プソイドイソシトニリル、Ｎ２−（４−メトキシフェニル）−ジフェニルメチル−プソイドイソシトシニル、Ｎ２−４−ｔｅｒｔ−ブチルベンゾイル−プソイドイソシトシニル、Ｎ２−ベンズヒドリルオキシカルボニル−プソイドイソシトシニル、Ｎ２−ジ−ベンズヒドリルオキシカルボニルプソイドイソシトシニル、Ｎ２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−プソイドシトシニル又はＮ２−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−プソイドイソシトシニル基である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｅが、チミニル、ウラシリル、フェニル、Ｎ２−ベンジルオキシカルボニル−グアニニル、Ｎ２−ベンズヒドリルオキシカルボニル−グアニニル、Ｎ２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−グアニニル、Ｎ２−ベンジルオキシカルボニル−Ｏ６−ジフェニルカルバモイル−グアニニル、Ｎ２−ベンズヒドリルオキシカルボニル−Ｏ６−ジフェニルカルバモイル−グアニニル、Ｎ６−ベンジルオキシカルボニル−アデニニル、Ｎ６−ベンズヒドリルオキシカルボニル−アデニニル、Ｎ６−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−アデニニル、Ｎ６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−アデニニル、Ｎ４−ベンジルオキシカルボニル−シトシニル、Ｎ４−ベンズヒドリルオキシカルボニル−シトシニル、Ｎ４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−シトシニル、Ｎ２−ベンジルオキシカルボニル−プソイドイソシトシニル、Ｎ２−ベンズヒドリルオキシカルボニル−プソイドシトシニル又はＮ２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−プソイドイソシトシニル基である請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ2が、式−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＶ）2又は式−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＶ）（ＯＨ）のホスホン酸エステル基を表し、各Ｖが独立してメチル、エチル、シクロへキシル又はベンジル基である請求項１〜３の何れか１項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ3が、Ｈ原子である請求項１〜４の何れか１項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ3が、オキソカルバメート、チオカルバメート又はＭｍｔ保護基である請求項１〜４の何れか１項に記載の化合物。
【請求項７】
下記一般式（ＶＩ）で表される化合物。
【化３】
0006546272.tif 000050
式中、
各Ｙは、それぞれ独立して下記一般式（ＩＶ）の基を表し、
【化４】
0006546272.tif 000051
各Ｚは、それぞれ独立して下記一般式（Ｖ）の基を表し、
【化５】
0006546272.tif 000052
式中、
各Ｅは、それぞれ独立してアデニニル、シトシニル、プソイドイソシトシニル、グアニニル、チミニル、ウラシリル又はフェニル基を表し、
♯は、不斉Ｃ原子を意味し、
各Ｒ41は、それぞれＨ原子を表し、
各Ｒ11は、基−（ＣＨ2）m−ＮＨ−（ＣＨ2）h−ＣＨ2−Ｒ12を表し、Ｒ12は、それぞれ独立して式−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＶ）2又は式−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＶ）（ＯＨ）のホスホン酸エステル基を表し、各Ｖは、それぞれ独立してメチル、エチル、シクロへキシル又はベンジル基を表し、
ｍは、それぞれ独立して１、２、３又は４であり、ｈは、それぞれ独立して０、１、２又は３であり、但し、ｍとｈの合計は、２≦ｘ≦５であり、
ｄは、それぞれ独立して０、１、２、３又は４であり、
ｆは、それぞれ独立して０、１、２、３又は４であり、
ｇは、それぞれ独立して０、１、２、３又は４であり、
ｊは、それぞれ独立して０、１、２、３又は４であり、
ｎは、１、２、３、４、５、６、７又は８であり、
但し、一般式（ＶＩ）中のＹd、Ｚf、Ｙg及びＺjの全ての繰り返しユニットの合計は、７≦ｘ≦３０であり、変数ｆ又はｊの少なくとも一つは、１〜５の整数であり、
一般式（ＶＩ）中の比率（（繰り返しユニットＺf及びＺjの合計）：（全ての繰り返しユニットＹd、Ｚf、Ｙg及びＺjの合計））は、０．１≦ｘ≦０．５であり、
Ｒ31は、Ｈ原子；アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、ヒスチジン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン若しくはバリンのアミノ酸側鎖；又は基−（ＣＨ2）m−ＮＨ−（ＣＨ2）h−ＣＨ2−Ｒ12を表し、Ｒ12は、ホスホン酸エステル基又はホスホン酸基であり、ｍは、１〜５の整数を表し、ｈは、０〜４の整数を表し、但し、ｍとｈの合計は、２≦ｘ≦５であり、
Ｒ47は、それぞれ独立してＨ原子、又はリジン、オルニチン若しくはアルギニンのアミノ酸側鎖であり、
ｔは、０、１、２、３、４、５、６、７又は８であり、
Ｌは、ＯＨ、ＯＥｔ、ＮＨ2又は−ＮＨＮＨ2を表し、
Ｕは、下記一般式（ＶＩＩ）の基を表し、
【化６】
0006546272.tif 000053
式中、
Ｂは、Ｈ原子、フェニル基又はＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ及びＮＯ2から選択される１〜３の置換基によって置換されたフェニル基を表し、Ｒ48は、Ｈ原子を表し、
（ｉ）各Ｒ46は、それぞれ独立してＨ原子、又はアラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、ヒスチジン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン若しくはバリンのアミノ酸側鎖を表し、
ｓは、０、１、２、３、４、５、６、７又は８であるか、
（ｉｉ）各Ｒ46は、それぞれ独立してＨ原子、又は下記式（ＩＸｂ）の基、下記式（ＩＸｃ）の基、下記式（ＩＸｄ）の基若しくは下記式（ＩＸｅ）の基を表し、
【化７】
0006546272.tif 000054
【化８】
0006546272.tif 000055
【化９】
0006546272.tif 000056
【化１０】
0006546272.tif 000057
式（ＩＸｂ）、（ＩＸｃ）、（ＩＸｄ）及び（ＩＸｅ）中のｐは、３又は４の数字を表し、ｓは、１、２、３又は４を表す。
【請求項８】
各Ｒ11が、それぞれ式−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｐ＝Ｏ（ＯＥｔ）2の基又は式−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｐ＝Ｏ（ＯＥｔ）2の基である請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
各Ｒ31が、Ｈ原子、リジン、オルニチン、アルギニン、ヒスチジン、トリプトファン、チロシン、トレオニン若しくはセリンのアミノ酸側鎖、式−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｐ＝Ｏ（ＯＥｔ）2の基又は式−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｐ＝Ｏ（ＯＥｔ）2の基である請求項７又は８記載の化合物。
【請求項１０】
医薬品として使用する請求項７〜９の何れか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
請求項７〜９の何れか１項に記載の化合物を少なくとも一つ並びに必要に応じキャリアーを少なくとも一つ及び／又はアジュバントを少なくとも一つ含有する医薬品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ホスホン酸エステル基で置換されたジアルキルアミン側鎖を含む新規ペプチド核酸モノマー及びオリゴマー並びにそれらの製造方法及び用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
ペプチド核酸モノマー（ＰＮＡ）は、Ｎ−（２−アミノエチル）グリシン構造による合成ＤＮＡ／ＲＮＡの類似体である（下記一般式（ＰＮＡ）を参照のこと）。一般式中、ＮＢは核酸塩基を示し、ｎはＰＮＡユニットの数（ｎは０〜５０）を示し、Ｆ及びＧは置換基を表す。
【化１】
0006546272.tif 000002
ペプチド核酸（ＰＮＡ）は、Ｎ−（２−アミノエチル）グリシン  ビルディングブロック（ＰＮＡモノマー）間にペプチド結合が生成することにより調製される。これらの個々のＮ−（２−アミノエチル）グリシン  ビルディングブロックのそれぞれは、ＰＮＡユニットを表す。
【０００３】
ＰＮＡの利点は、生理的条件下で（酵素的）加水分解に耐性があり、相補的な核酸配列（ＤＮＡ又はＲＮＡ）を配列特異的に認識し、これらと高親和性に結合することができることである。したがって、ＰＮＡは、生物学的及び／又は医学的適用（例えば、診断）のための、又はアンチセンス療法における魅力的な化合物であると考えられている。
【０００４】
アンチセンス療法における活性物質としての有効な使用のためには、生体内での十分なバイオアベイラビリティ(bioavailability)が不可欠である。アンチセンス活性物質は、標的部位、標的ＲＮＡ又は標的ＤＮＡにおける治療効果のために十分な量で利用可能でなければならない。これは、投与後のアンチセンス活性物質が、治療上有意な程度までアンチセンス効果を達成するために、（ｉ）組織、（ｉｉ）組織細胞、及び（ｉｉｉ）細胞内で、標的ＲＮＡ又はＤＮＡまでの順に充分な量で浸透しなければならないことを意味する。
【０００５】
しかしながら、ＰＮＡは、ＤＮＡと比較して、水にほとんど溶解せず、細胞膜に浸透しにくいという欠点を有する。したがって、種々の臓器及び組織におけるＰＮＡの吸収又はバイオアベイラビリティーに関する研究に基づいて、非特許文献１（Beth M. et al., Antisense & Nucleic Acid Drug Development (2002) 12:65-70）によって実証されているように、生物におけるアンチセンス療法における活性物質としてのＰＮＡの使用は非常に限られている。Ｂｅｔｈ  Ｍ．らの研究では、ラットの腹腔内投与後のＰＮＡが、９０％変化しないまま２４時間以内に再び排泄されることを見出した。ペプチド核酸の２．５％〜４．５％のみ吸収され、他のすべての臓器では、その数値は、実際には１％未満であった。
【０００６】
水溶性、相補的なＤＮＡ又はＲＮＡへの結合特性、又は細胞における吸収などのＰＮＡの特定の特性を改善するために、とりわけ、次の一般式（ＰＮＡ＊）のＰＮＡユニットのアルファ位に基Ｒを導入することによるＰＮＡの修飾が提案されている。
【化２】
0006546272.tif 000003
【０００７】
一例として、ＰＮＡの修飾のための基Ｒとして、天然アミノ酸の側鎖が提案されている〔非特許文献２（Pueschl A. et al., Tetrahedron Letters 39, (1998) 4707-4710）及び特許文献１(ＵＳ５７１９２６２)〕。修飾によって立体障害が増加するが、ＰＮＡ／ＤＮＡハイブリッドの融点の測定によって確立されているように、このように修飾されたＰＮＡの相補的ＤＮＡ／ＲＮＡへの結合の分解はごくわずかである（Pueschl A. et al., 上掲）。
【０００８】
リジン修飾塩基性構造（Ｒ＝−（ＣＨ2）4−ＮＨ2）を有するＰＮＡは、ＰＮＡ／ＤＮＡハイブリッドの水溶性の向上と融点の上昇を示した（米国特許第５７１９２６２号明細書）。しかしながら、これらのリジン修飾ＰＮＡの欠点は、吸収後、これらは細胞内エンドソーム内の細胞内に閉じ込められたままであることである〔非特許文献３(Nielsen P., Quarterly Reviews of Biophysics 38, 4 (2005), 345-350)及び非特許文献４（Koppelhus U. et al., Antisense & Nucleic Acid Drug Development (2002) 12:51-63)〕。結果として、このように修飾されたＰＮＡは、ＲＮＡへの結合のために細胞内で十分に利用可能ではなく、治療用途には使用できない。〔非特許文献５(R. Corradini et al., Current Topics in Medicinal Chemistry, 11 (12), pp. 1535-1554, (2011)〕に見られるように，例えば、米国特許５７１９２６２号明細書に記載されているように、そのようなリジン修飾ＰＮＡは、細胞には何ら吸収されず、細胞に吸収されてもしばしば小胞に閉じ込められたままである。調査した細胞の選択において、細胞核における吸収は観察されなかった（上掲、ｐ．１５４３）。
【０００９】
グアニジンベースのペプチド核酸（ＧＰＮＡ）
【化３】
0006546272.tif 000004
として知られているアルギニン修飾塩基性構造を有するＰＮＡが、細胞におけるＰＮＡの吸収を改善するために提案されている。
細胞吸収に続いて、ＧＰＮＡは、小胞体（ＥＲ）に細胞内局在化され、細胞自身のｍＲＮＡに結合することができる。しかし、生体内では、全身投与後、ＧＰＮＡは腎臓、肝臓及び腫瘍組織にのみ吸収される〔非特許文献６（Thomas S. M. et al., ACS Chem. Biol.2013 February 15; 8(2):345-352)〕。この限られたバイオアベイラビリティは、治療剤としてのＧＰＮＡのより広い適用を妨げる。
【００１０】
特許文献２（ＥＰ１１５７０３１）、特許文献３（ＥＰ２０４１１６１）及び非特許文献７（Posch W. et al., Mol Med. (2012) 18: 111-22）には、Ｒ＝−（ＣＨ2）n−Ｐ＝Ｏ（ＯＥｔ）2（ｎ＝１，２）のアルキルホスホン酸エステル基修飾ＰＮＡが開示されている。このように修飾されたＰＮＡは、この修飾を含有しないＰＮＡに比して、細胞に入りやすく、水溶性に優れる。さらに、このように修飾されたＰＮＡは、ＨＩＶにおいて、２世代にわたるウイルスの有効性を実証することができる。ＧＰＮＡと比較して、これらのアルキルホスホン酸エステル基修飾ＰＮＡもより良好なバイオアベイラビリティを有する。しかしながら、アルキルホスホン酸エステル基修飾ＰＮＡは、その水溶性が核酸塩基配列に依存するという欠点を有する。したがって、例えば、多数のグアニン塩基及びシトシン塩基を含む配列において、これらのＰＮＡの水溶性は低下する。この配列依存性水溶性は、治療的使用をより困難にする可能性がある。
【００１１】
ＰＮＡを治療剤として広く使用するためには、多くの異なる特性を組み合わせなければならない。つまり、良好な配列非依存的水溶性；良好な細胞吸収、ＤＮＡ及び／又はＲＮＡに対する良好な結合特性；良好なバイオアベイラビリティ（種々の組織におけるバイオアベイラビリティが良好であるほど、治療用途の可能性が増す）、長い半減期（生体内の細胞においてもＤＮＡ及び／又はＲＮＡへのＰＮＡの結合を達成し、遺伝子発現の調節の所望の効果を得るために）；バイオアベイラビリティをサポートし、半減期を延長するための血漿タンパク質への良好な結合（血漿タンパク質に結合したオリゴマーは、腎臓において血流から素早く濾別されることはなく、尿を介して排泄される）、良好な細胞吸収及び細胞内分布並びにＤＮＡ及び／又はＲＮＡに対するＰＮＡの良好な結合特性もまた必要とされる遺伝子発現の調節の強力な効果である。
【００１２】
従来の修飾ＰＮＡの欠点は、（ｉ）良好な配列非依存的水溶性、（ｉｉ）良好な細胞吸収及び細胞内分布、（ｉｉｉ）可能な限り多くの治療関連組織における良好なバイオアベイラビリティ及び長い半減期（ｉｖ）血漿タンパク質への良好な結合及び／又は（ｖ）遺伝子発現の調節の強力な効果のうちのいくつかは有するが、治療薬としての広範な適用に必要なすべての特性を有するわけではないことです。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】ＵＳ５７１９２６２
【特許文献２】ＥＰ１１５７０３１
【特許文献３】ＥＰ２０４１１６１
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Beth M. et al., Antisense & Nucleic Acid Drug Development (2002) 12:65-70
【非特許文献２】Pueschl A. et al., Tetrahedron Letters 39, (1998) 4707-4710
【非特許文献３】Nielsen P., Quarterly Reviews of Biophysics 38, 4 (2005), 345-350
【非特許文献４】Koppelhus U. et al., Antisense & Nucleic Acid Drug Development (2002) 12:51-63
【非特許文献５】R. Corradini et al., Current Topics in Medicinal Chemistry, 11 (12), pp. 1535-1554, (2011)
【非特許文献６】Thomas S. M. et al., ACS Chem. Biol.2013 February 15; 8(2):345-352
【非特許文献７】Posch W. et al., Mol Med. (2012) 18: 111-22
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
従って、本発明の目的は、新規の修飾ＰＮＡモノマーを提供することであり、新たなＰＮＡモノマーをビルディングブロックとして含有する修飾された特性プロファイルを有する新規な修飾ＰＮＡオリゴマーを提供することである。修飾された特性プロファイルは、（ｉ）良好な配列非依存的水溶性、（ｉｉ）良好な細胞吸収及び細胞内分布、（ｉｉｉ）良好なバイオアベイラビリティ及び長い半減期、（ｉｖ）血漿タンパク質への強力な結合、及び（ｖ）遺伝子発現の調節の強力な効果のうちの１つ以上を含む。
本発明のさらなる目的は、上記改変ＰＮＡオリゴマー、及び該改変ＰＮＡオリゴマーを含有する診断及び治療用組成物の新規適用方法を提供することである。
【００１６】
本発明のこの態様及び他の態様は、以下の詳細な説明及び定義の考察から明らかになるであろう。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本願発明は、下記［１］に関する。
［１］下記一般式（Ｉ）の化合物
【化４】
0006546272.tif 000005
式中、
Ｋは、カルボン酸活性エステル基又は−Ｏ−ＲＭを表し、該ＲMは、Ｈ原子、メチル、エチル、アリル、ベンジル、フェニル、ｔｅｒｔ−ブチル又はトリメチルシリル基を表し、
Ｐｒは、Ｈ原子又はアミノ保護基を表し、
＃は、不斉Ｃ原子を意味し、
Ｅは、Ｈ原子、フェニル基、複素環、核酸塩基又は核酸塩基保護基で置換された核酸塩基基を表し、
Ｒ1は、下記一般式（ＩＩ）で表される基であり、
【化５】
0006546272.tif 000006
式中、
Ｒ2は、ホスホン酸エステル基又はホスホン酸基であり、
Ｒ3は、Ｈ原子又はアミノ保護基であり
ｍは、１〜５の整数を表し、ｈは、０〜４の整数を表し、但し、上記一般式（ＩＩ）中のｍ及びｈの合計は、２≦ｘ≦５である。
【００１８】
Ｒ1基を一般式（Ｉ）のモノマー化合物の主鎖に結合させると、Ｒ1と主鎖の結合点に不斉中心（＃）が生じる。主鎖（＃）のそのような不斉中心の各々に、Ｒ−配置又はＳ−配置のいずれかが存在し得る。ここで、この不斉中心（＃）の構成は、カーン・インゴルド・プレローグ順位則（Cahn-Ingold-Prelog sequence rules）に沿って定義され、リガンドの優先順位は常に次のように定義されるという条件が追加される。不斉中心の窒素原子は常に優先順位１を与えられる。不斉中心のカルボキシル基の炭素原子は常に優先順位２を与えられる。不斉中心の基Ｒ1の炭素原子は常に優先順位３を与えられる。不斉中心の水素原子は常に優先順位４を与えられる。
【００１９】
カルボン酸活性エステル基という用語は、カルボン酸官能基のカップリング反応性を高
めるためにペプチド化学(peptide chemistry)において通常使用される当業者に公知のカルボン酸誘導体を示す。そのようなカルボン酸活性エステル基は、例えば、O.Marder, F. Albericio, Chimica Oggi,2002,37及びN.Sewald, H.-D.Jakubke,(eds),Peptide Chemistry, Wiley-VCH Verlag, Weinheim 2002, Chapter 4.3 Peptide Bond Formation, Page 197に記載されている。カルボン酸活性エステル基の例としては、カルボン酸ハロゲン化物、トリス（ピロリジノ）−ホスホニウムカルボキシレートのようなアシルホスホニウム塩（ＰｙＢｒｏＰとの反応による）、無水物、チオフェニルエステル、シアノメチルエステル、ニトロフェニルエステル及びジニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、クロロフェニルエステル、トリクロロフェニルエステル、ペンタクロロフェニルエステル、及び以下の表に挙げる活性エステルが挙げられる。
【００２０】
【表１】
0006546272.tif 000007
【００２１】
アミノ保護基という用語は、アミノ酸又はペプチドの有機合成に使用される、当業者に知られている保護基を示す。例えば、トリフルオロアセチル、オキソカルバメート、チオカルバメート、フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、カルボベンゾキシ（Ｃｂｚ）、モノメトキシトリチル（Ｍｍｔ）、フタロイル、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンズヒドロキシカルボニル（Ｂｈｏｃ）又はアリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）保護基である。
【００２２】
核酸塩基という用語は、ＤＮＡ塩基又はＲＮＡ塩基と塩基対合することができる当業者に公知の塩基を示す。核酸塩基の例としては、プリン塩基性構造を有する塩基、例えばアデニン、グアニン、ヒポキサンチン、キサンチン及び７−メチルグアニン；ピリミジン塩基性構造、例えば、シトシン、ウラシル、チミン、５−ヒドロキシメチルシトシン、５−メチルシトシン及び５，６−ジヒドロウラシル並びにそれらの類似体及び生物学的等価体が挙げられる。
【００２３】
核酸塩基保護基という用語は、核酸塩基を有する化合物の有機合成に使用される当業者に公知の保護基を示し、例えば、アセチル、イソブチリル、ベンジルオキシカルボニル、ジフェニルメチル、ベンズヒドリルオキシカルボニル、アニソイル、４−ｔｅｒｔ−ブチルベンゾイル、ベンジル又はジフェニルカルバモイル基が挙げられる。
【００２４】
アルキルという用語は、１〜４０個の炭素原子、好ましくは１〜２０個の炭素原子、より好ましくは１〜１２個の炭素原子、特に好ましくは１〜６個の炭素原子を有する飽和の直鎖又は分枝の炭化水素基を意味し、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、２，２−ジメチルブチル又はｎ−オクチル基が挙げられる。
【００２５】
アルケニル及びアルキニルという用語は、２〜４０個の炭素原子、好ましくは２〜２０個の炭素原子、より好ましくは２〜１２個の炭素原子、特に好ましくは２〜６個の炭素原子を有する少なくとも部分的に不飽和の、直鎖又は分枝の炭化水素基を意味し、例えば、エテニル、アリル、アセチレニル、プロパルギル、イソプレニル又はヘキサ−２−エニル基が挙げられる。アルケニル基は、好ましくは１又は２個（特に好ましくは１個）の二重結合を有し、アルケニル基は１又は２個（特に好ましくは１個）の三重結合を有する。
【００２６】
アリール又はＡｒという用語は、１個以上の環及び６〜１４個の環炭素原子、好ましくは６〜１０個（特に６個）の環炭素原子を有する芳香族基を指す。具体的な例は、ベンゼン、ナフタレン又はビフェニルである。
【００２７】
アラルキルという用語は、上記の定義によれば、アリール及びアルキル、アルケニル、アルキニル及び／又はシクロアルキル基の両方を含む基を意味し、例えば、アリールアルキル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、アリールシクロアルキル、アリールシクロアルケニル、アルキルアリールシクロアルキル及びアルキルアリールシクロアルケニル基が挙げられる。アラルキルの具体例は、トルエン、キシレン、メシチレン、スチレン、１Ｈ−インデン、テトラリン、ジヒドロナフタレン、インダノン、フェニルシクロペンチル、シクロヘキシルフェニル、フルオレン及びインダンである。アラルキル基は、好ましくは、６〜１０個の炭素原子を有する１又は２個の芳香族環系（１又は２個の環）及び１又は２個〜６個の炭素原子を有する１個又は２個のアルキル、アルケニル及び／又はアルキニル基及び／又は５又は６個の環炭素原子を含む１個のシクロアルキル基を含む。
【００２８】
シクロアルキルという用語は、１個以上の環（好ましくは１又は２個）を有し、３〜１４個の環炭素原子、好ましくは３〜１０個の環炭素原子（特に３、４、５、６又は７）を有する飽和又は部分的に不飽和（例えばシクロアルケニル）の環状基を意味する。シクロアルキル基の具体例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、スピロ［４，５］デカニル、ノルボルニル、シクロヘキシル、シクロペンテニル、シクロヘキサジエニル、デカリニル、ビシクロ［４．３．０］ノニル、テトラリン、シクロペンチルシクロヘキシル又はシクロへキシル−２−エニル基である。
【００２９】
アルキルシクロアルキルという用語は、上記の定義によれば、シクロアルキル及びアルキル、アルケニル又はアルキニル基の両方を含む基を意味する。例えば、アルキルシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルキルシクロアルケニル、アルケニルシクロアルキル及びアルキニルシクロアルキル基である。アルキルシクロアルキル基は、好ましくは、１又は２個の環、及び３〜１４個の環炭素原子、好ましくは３〜１０個、特に３，４，５，６又は７個の環炭素原子を有するシクロアルキル基を含有し、１又は２個〜６個の炭素原子を有する１，２又は３個、好ましくは１又は２個のアルキル、アルケニル又はアルキニル基を含む。Ｃ４〜Ｃ１１アルキルシクロアルキル基が好ましく、Ｃ４〜Ｃ７アルキルシクロアルキル基が特に好ましい。アルキルシクロアルキル基の具体例としては、メチルシクロプロピル（Ｃ４）、メチルシクロブチル（Ｃ５）、エチルシクロプロピル（Ｃ５）、メチルシクロペンチル（Ｃ６）、プロピルシクロプロピル（Ｃ６）、エチルシクロペンチル（Ｃ７）、メチルシクロヘキシル（Ｃ７）、エチルシクロペンテニル（Ｃ７）又はエチルシクロヘキサジエニル（Ｃ８）基が挙げられる。
【００３０】
アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アルキルオキシアリール及びシクロアルキルオキシという用語は、上記のように、１つ以上の−Ｏ基を含むアルキル、アルケニル、アルキニル、アルキルアリール又はシクロアルキル基を意味する。例としては、メトキシ、エトキシ、フラン、テトラヒドロフラン、又は４−メトキシベンジル基が挙げられる。
【００３１】
複素環という用語は、１個以上の、好ましくは１，２又は３個の炭素原子が酸素、窒素又は硫黄原子で置き換えられた、上記のシクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を意味する。例としては、ピペリジル、ピペラジニル、モルホリニル、ウロトロピニル、ピロリジニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフリル又は２−ピラゾリニル基が挙げられる。複素環という用語はまた、例えば、１個以上の環を有し、５〜１４個の環原子、好ましくは５〜１０個、特に５又は６個の環原子を含む芳香族基であって、１個以上、好ましくは１，２，３又は４個の原子が酸素、窒素又は硫黄環原子である基を含む。例えば、４−ピリジル、２−イミダゾリル、３−フェニルピロリル、チアゾリル、オキサゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、イソキサゾリル、インダゾリル、インドリル、ベンゾイミダゾリル、ピリダジニル、キノリニル、プリニル、カルバゾリル、アクリジニル、ピリミジル、２，３’−ビフリル、３−ピラゾリル及びイソキノリニル基が含まれる。
【００３２】
アミノ酸という用語は、炭素原子上の１個以上の水素原子がアミノ基で置き換えられたカルボン酸を意味する。アミノ酸は、例えば、グリシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、システイン、メチオニン、アルギニン、リジン、プロリン、セリン、トレオニン、ヒスチジン、セレノシステイン、ピロリジン、チロキシン、ＤＯＰＡ及びＬ−オルニチン、５−ヒドロキシトリプトファン、ランチオニン、β−クロロアラニン、２−メチルアラニン、シトルリン、カナバニン、テアニン、ククルビチンなどのα−アミノ酸、β−アラニンなどのβ−アミノ酸、又はγ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）などのγ−アミノ酸であってもよい。
【００３３】
本発明は、更に以下のものを含む。
［２］Ｋが、−Ｏ−ＲMであり、ＲMが［１］で定義されたとおりである、［１］に記載の化合物。
【００３４】
［３］ＲＭが、Ｈ原子、メチル、エチル、アリル又はトリメチルシリル基を表す、［１］又は［２］に記載の化合物。
【００３５】
［４］Ｐｒが、アミノ保護基を表す、［１］〜［３］に記載の化合物。
【００３６】
［５］アミノ保護基が、オキソカルバメート、チオカルバメート又はＭｍｔ保護基から選択される、［４］に記載の化合物。
【００３７】
［６］アミノ保護基が、Ｆｍｏｃ、Ｂｏｃ、Ｃｂｚ、Ｂｈｏｃ、Ａｌｌｏｃ又はＭｍｔ保護基である、［４］又は［５］に記載の化合物。
【００３８】
［７］アミノ保護基が、Ｂｏｃ又はＦｍｏｃ保護基である、［４］〜［６］に記載の化合物。
【００３９】
［８］Ｅが、必要に応じて核酸塩基保護基で置換されたアデニニル、シトシニル、シュードイソシトニル、グアニニル、チミニル、ウラシル又はフェニル基を表す、［１］〜［７］に記載の化合物。
【００４０】
［９］Ｅが、以下から選択される基を表す、［８］に記載の化合物。
【化６】
0006546272.tif 000008
【化７】
0006546272.tif 000009
式中、Ｘ1〜Ｘ4は、それぞれ独立して、Ｈ原子又は核酸塩基保護基を表し、Ｘ5は、それぞれ独立して、Ｈ原子、又はＢｏｃ又はＢｈｏｃ保護基を表す。
【００４１】
［１０］Ｘ1、Ｘ2及びＸ4が、それぞれ独立にＨ原子、アセチル（Ａｃ）、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、イソブチリル（ｉＢｕ−ＣＯ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、（４−メトキシフェニル）−ジフェニルメチル（Ｍｍｔ）、ベンズヒドリルオキシカルボニル（Ｂｈｏｃ）、アニソイル（Ａｎ）又は４−ｔｅｒｔ−ブチルベンゾイル（ｔＢｕＢｚ）を表し、Ｘ5が、それぞれ独立して、Ｈ原子、Ｂｏｃ又はＢｈｏｃ保護基を表し、Ｘ3が、それぞれ独立して、Ｈ原子、ベンジル（Ｂｎ）又はジフェニルカルバモイル（Ｄｐｃ）を表す、［９］に記載の化合物。
【００４２】
［１１］Ｅが、チミニル基、ウラシリル基、フェニル基、Ｎ２−アセチル−グアニニル基、Ｎ２−イソブチリル−グアニニル基、Ｎ２−ベンジルオキシカルボニル−グアニニル基、Ｎ２−（４−メトキシフェニル）−ジフェニルメチル−グアニニル基、Ｎ２−ベンズヒドリルオキシカルボニル−グアニニル基、Ｎ２−ジ−ベンズヒドリルオキシカルボニル−グアニニル基、Ｎ２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−グアニニル基、Ｎ２−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−グアニニル基、Ｎ６−ベンジルオキシカルボニル−アデニニル基、Ｎ６−（４−メトキシフェニル）−ジフェニルメチル−アデニニル基、Ｎ６−アニソイル−アデニニル基、Ｎ６−ベンズヒドリルオキシカルボニル−アデニニル基、Ｎ６−ジ−ベンズヒドリルオキシカルボニル−アデニニル基、Ｎ６−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−アデニニル基、Ｎ６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−アデニニル基、Ｏ６−ベンジルグアニニル基、Ｎ２−アセチル−Ｏ６−ジフェニルカルバモイル−グアニニル基、Ｎ２−イソブチリル−Ｏ６−ジフェニルカルバモイル−グアニニル基、Ｎ２−ベンジルオキシカルボニル−Ｏ６−ジフェニルカルバモイル−グアニニル基、Ｎ２−（４−メトキシフェニル）−ジフェニルメチル−Ｏ６−ジフェニルカルバモイル−グアニニル基、Ｎ２−ベンズヒドリルオキシカルボニル−Ｏ６−ジフェニルカルバモイル−グアニニル基、Ｎ４−ベンジルオキシカルボニル−シトシニル基、Ｎ４−（４−メトキシフェニル）−ジフェニル−メチル−シトシニル基、Ｎ４−４−ｔｅｒｔ−ブチルベンゾイル−シトシニル、Ｎ４−ベンズ−ヒドリルオキシカルボニル−シトシニル基、Ｎ４−ジ−ベンズヒドリルオキシカルボニル−シトシニル基、Ｎ４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−シトシニル基、Ｎ４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−シトシニル基、Ｎ２−ベンジルオキシカルボニル−プソイドイソシトニリル基、Ｎ２−（４−メトキシフェニル）−ジフェニルメチル−プソイドイソシトシニル基、Ｎ２−４−ｔｅｒｔ−ブチルベンゾイル−プソイドイソシトシニル基、Ｎ２−ベンズヒドリルオキシカルボニル−プソイドイソシトシニル基、Ｎ２−ジ−ベンズヒドリルオキシカルボニルプソイドイソシトシニル基、Ｎ２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−プソイドシトシニル基又はＮ２−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−プソイドイソシトシニル基である、［１］〜［１０］に記載の化合物。
【００４３】
［１２］Ｅが、チミニル基、ウラシリル基、フェニル基、Ｎ２−ベンジルオキシカルボニル−グアニニル基、Ｎ２−ベンズヒドリルオキシカルボニル−グアニニル基、Ｎ２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−グアニニル基、Ｎ２−ベンジルオキシカルボニル−Ｏ６−ジフェニルカルバモイル−グアニニル基、Ｎ２−ベンズヒドリルオキシカルボニル−Ｏ６−ジフェニルカルバモイル−グアニニル基、Ｎ６−ベンジルオキシカルボニル−アデニニル基、Ｎ６−ベンズヒドリルオキシカルボニル−アデニニル基、Ｎ６−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−アデニニル基、Ｎ６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−アデニニル基、Ｎ４−ベンジルオキシカルボニル−シトシニル基、Ｎ４−ベンズヒドリルオキシカルボニル−シトシニル基、Ｎ４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−シトシニル基、Ｎ２−ベンジルオキシカルボニル−プソイドイソシトシニル基、Ｎ２−ベンズヒドリルオキシカルボニル−プソイドシトシニル基、又はＮ２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−プソイドイソシトシニル基である、［１］〜［１１］に記載の化合物。
【００４４】
［１３］Ｒ2が、式−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＶ）2又はＰ（＝Ｏ）（ＯＶ）（ＯＨ）のホスホン酸エステル基を表し、各Ｖは、独立して、非置換Ｃ1〜Ｃ7アルキル、Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｃ4〜Ｃ7アルキルシクロアルキル、フェニル、又はベンジル基を表す、［１］〜［１２］に記載の化合物。
【００４５】
［１４］各Ｖが、独立して、メチル、エチル、シクロヘキシル又はベンジル基を表す、［１３］に記載の化合物。
【００４６】
［１５］Ｖが、それぞれエチル基である、［１４］に記載の化合物。
【００４７】
［１６］Ｒ3が、Ｈ原子である、［１］〜［１５］に記載の化合物。
【００４８】
［１７］Ｒ3が、オキソカルバメート、チオカルバメート又はＭｍｔ保護基を表す、［１］〜［１５］に記載の化合物。
【００４９】
［１８］Ｒ3が、Ｃｂｚ、Ａｌｌｏｃ、Ｂｈｏｃ又はＢｏｃ保護基を表す、［１７］に記載の化合物。
【００５０】
［１９］ｍが、１、２、３又は４である、［１］〜［１８］に記載の化合物。
【００５１】
［２０］ｈが、０、１、２又は３である［１］〜［１９］に記載の化合物。
【００５２】
［２１］Ｒ1が、式−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｐ＝Ｏ（ＯＥｔ）2の基又は式−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｐ＝Ｏ（ＯＥｔ）2の基を表す、［１］〜［２０］に記載の化合物。
【００５３】
［２２］Ｒ1が、式−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＲ3−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｐ＝Ｏ（ＯＥｔ）2の基又は式−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＲ3−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｐ＝Ｏ（ＯＥｔ）2の基を表し、Ｒ3が、［１７］又は［１８］に定義されたとおりである、［１］〜［１５］、［１９］又は［２０］に記載の化合物。
【００５４】
上記の［１］〜［２２］に記載されているような一般式（Ｉ）の本発明の化合物は、新規なオリゴマー化合物を調製するために使用することができる。したがって、本発明はさらに、以下のものに関する。
【００５５】
［２３］少なくとも一つの下記一般式（ＩＩＩ）の繰り返しユニットを含む化合物。
【化８】
0006546272.tif 000010
式中、
各Ｙはそれぞれ独立に下記一般式（ＩＶ）の基を表し、
【化９】
0006546272.tif 000011
式中、各Ｚは、それぞれ独立に下記一般式（Ｖ）の基を表し、
【化１０】
0006546272.tif 000012
式中、
各Ｅは、それぞれ独立にＨ原子、フェニル基、複素環又は核酸塩基を表し、
＃は、不斉Ｃ原子を意味し、
各Ｒ41は、それぞれＨ原子又はアラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、ヒスチジン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン若しくはバリンのアミノ酸側鎖を表し、
各Ｒ11は、基−（ＣＨ2）m−ＮＨ−（ＣＨ2）h−ＣＨ2−Ｒ12を表し、
Ｒ12は、それぞれ独立して式−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＶ）2又は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＶ）（ＯＨ）のホスホン酸エステル基又はホスホン酸基を表し、
各Ｖは、それぞれ独立してメチル基、エチル基、シクロへキシル基又はベンジル基を表し、
ｍは、１〜５の整数を表し、
ｈは、０〜４の整数を表し、
但し、ｍとｈの合計は、２≦ｘ≦５であり、
ｄは、それぞれ独立して０〜５の整数を表し、
ｆは、それぞれ独立して０〜５の整数を表し、
ｇは、それぞれ独立して０〜５の整数を表し、
ｊは、それぞれ独立して０〜５の整数を表し、
ｎは、それぞれ独立して１〜１０の整数を表し、
但し、一般式（ＩＩＩ）中のＹd、Ｚf、Ｙg、及びＺjの全ての繰り返しユニットの合計は、≦４０であり、
変数ｆ又はｊの少なくとも一つは、１〜５の整数である。
【００５６】
繰り返しユニット、例えば式（ＩＩＩ）の基、例えば、Ｚ又はＹ、又は置換基又は可変基、例えば、Ｅ、Ｒ11又はＲ41は、本明細書に含まれる式中に複数回現れるが、各反復ユニット、反復ユニット中の各基、及び各置換基又は各可変基は、明示的に示されているか否かにかかわらず、互いに独立して選択される。例として、式（ＩＩＩ）において、各基Ｚ及びＹ並びにそれぞれの可変基Ｅ、Ｒ11又はＲ41は、互いに独立して選択される。言い換えれば、一般式（ＩＩＩ）は、上記のように、又は［１］〜［２２］に定義されているように、本発明のモノマーユニットＺを少なくとも一つ、合計で最大４０のＺ又はＺ及びＹのユニットを含む。
【００５７】
例として、一般式（ＩＩＩ）において、各基Ｙ及びＺ、並びに各変数ｄ、ｆ、ｇ及びｊは独立して選択される。したがって、ｄ、ｆ、ｇ、ｊ＝１である組み合わせ［Ｙd−Ｚf−Ｙg−Ｚj］nについて、ｎ＝１０を例にすると、ユニットＹ及びＺは、次の組み合わせを表す：−［Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ］−、全ユニットＹとＺの数の和は４０になる。ｄ＝３、ｆ＝１、ｇ＝１、ｊ＝３である組み合わせ［Ｙd−Ｚf−Ｙg−Ｚj］nについて、ｎ＝３を例にすると、ユニットＹとＺは、次の組み合わせを表す：−［Ｙ−Ｙ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｚ−Ｚ−Ｙ−Ｙ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｚ−Ｚ−Ｙ−Ｙ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｚ−Ｚ］−、全ユニットＹとＺの数の和は２４に等しい。
【００５８】
しかしながら、各繰り返しユニット［Ｙd−Ｚf−Ｙg−Ｚj］における変数ｄ、ｆ、ｇ、及びｊが互いに異なることも可能である。例えば、以下の４つの繰り返しユニット［Ｙd−Ｚf−Ｙg−Ｚj］：（Ｙ1−Ｚ1−Ｙ1−Ｚ1）、（Ｙ1−Ｚ1−Ｙ0−Ｚ0）、（Ｙ5−Ｚ1−Ｙ0−Ｚ0）、（Ｙ1−Ｚ1−Ｙ1−Ｚ1）、即ちｎ＝４は、以下の基Ｙ及びＺの組み合わせで組み合わせることができる：
−［Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｙ−Ｙ−Ｙ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ］−；全基ＹとＺの数の和は１６になる。同様に、例として、以下の３つの（すなわち、ｎ＝３）繰り返しユニット［Ｙd−Ｚf−Ｙg−Ｚj］：（Ｙ5−Ｚ1−Ｙ1−Ｚ1）、（Ｙ1−Ｚ1−Ｙ0−Ｚ0）及び（Ｙ1−Ｚ1−Ｙ5−Ｚ0）は次のように組み合わせることができる。−［Ｙ−Ｙ−Ｙ−Ｙ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｚ−Ｙ−Ｙ−Ｙ−Ｙ−Ｙ］−：全基ＹとＺの数の和は１７になる。ここで、繰り返しユニット又は各置換基に含まれる各基又は一般式（ＩＩＩ）に従う繰り返しユニットに２回以上含まれる各変数は、明示的に示されているか否かにかかわらず、それぞれの場合独立して上記定義から独立して選択される。
本発明はさらに以下のものを含む。
【００５９】
［２４］下記一般式（ＶＩ）で表される化合物。
【化１１】
0006546272.tif 000013
式中、
Ｅ、Ｙ、Ｚ、ｄ、ｆ、ｇ、ｊ及びｎはそれぞれ［２３］で定義されているように独立しており、但し、一般式（ＶＩ）中の全ての繰り返しユニットＹd、Ｚf、Ｙg及びＺｊの合計は≦４０であり、変数ｆ又はｊの少なくとも１つは、１〜５の整数を表し、
Ｒ31はＨ原子；アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、ヒスチジン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン又はバリンのアミノ酸側鎖；又は基−（ＣＨ2）m−ＮＨ−（ＣＨ2）h−ＣＨ2−Ｒ12を表し
Ｒ12は、ホスホン酸エステル基又はホスホン酸基であり、
ｍは１〜５の整数を表し、
ｈは、０〜４の整数を表し、但し、ｍとｈの和は２≦ｘ≦５であり、
Ｒ47は、それぞれ独立してＨ原子；アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、ヒスチジン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン又はバリンのアミノ酸側鎖；
下記式（ＩＸｂ）の基：
【化１２】
0006546272.tif 000014
下記式（ＩＸｃ）の基：
【化１３】
0006546272.tif 000015
下記式（ＩＸｄ）の基：
【化１４】
0006546272.tif 000016
又は下記式（ＩＸｅ）の基：
【化１５】
0006546272.tif 000017
を表し、
式（ＩＸｂ）、（ＩＸｃ）、（ＩＸｄ）及び（ＩＸｅ）中のｐは、３又は４の数字を表し、
ｔは、０〜１０の整数を表し、
Ｌは、−ＮＲDＲE、−ＮＨＮＲDＲE又は−ＯＲFを表し、
ＲD、ＲE及びＲFはそれぞれ互いに独立してＨ原子又はそれぞれ２０個までのＣ原子を有するアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル又はシクロアルケニル基を表し、
Ｕは、−ＮＲAＲB、−Ｎ+ＲAＲBＲC、−ＮＲA（ＣＯ）ＲB、−ＮＨ（ＣＯ）ＮＨＲB、−ＮＨ（ＣＯ）ＯＲB、
下記式（ＶＩＩＩａ）の基：
【化１６】
0006546272.tif 000018
下記式（ＶＩＩＩｂ）の基：
【化１７】
0006546272.tif 000019
下記式（ＶＩＩＩｃ）の基：
【化１８】
0006546272.tif 000020
下記式（ＶＩＩＩｄ）の基:
【化１９】
0006546272.tif 000021
又は下記式（ＶＩＩＩｅ）の基、
【化２０】
0006546272.tif 000022
式（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）及び（ＶＩＩＩｅ）中のｑは、３又は４の数を表し；
又は下記一般式（ＶＩＩ）の基：
【化２１】
0006546272.tif 000023
式中、
Ｂは、Ｈ原子、−ＮＲHＲI、−ＮＲHＲI、−Ｎ+ＲHＲIＲJ、−ＮＲH（ＣＯ）ＲI、−ＮＨ（ＣＯ）ＮＨＲI、−ＮＨ（ＣＯ）ＯＲI、フェニル基、又はＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ及びＮＯ2を含む群から選択される１〜３個の置換基で置換されたフェニル基を表し、
各ＲA、Ｒc、ＲH及びＲJは、それぞれ互いに独立して、Ｈ原子、メチル基又はアミノ保護基を表し、
各ＲB及びＲIは、それぞれ独立してＨ原子；アミノ保護基；それぞれ４０個までのＣ原子を有するアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アルキルオキシアリール、又はシクロアルキルオキシ基を表し、該アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アルキルオキシアリール又はシクロアルキルオキシ基において、それぞれ互いに独立して１つ以上の水素原子がホスホン酸エステル基、ホスホン酸基、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＯＨ、Ｏ−ＣＨ3、Ｓ−ＣＨ3、ＮＯ2、ＮＨ2、−Ｓ（Ｏ2）ＮＨ−、−ＮＨＣＨ3、−Ｎ（ＣＨ3）2、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ2−Ｃ6アルケニル基、Ｃ2−Ｃ6アルキニル、Ｃ3−Ｃ10シクロアルキル、Ｃ6−Ｃ10アリール又はＣ7−Ｃ12アラルキル基によって置換されていてもよく、
Ｒ48及び各Ｒ46は、それぞれ互いに独立して、Ｈ原子；アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、ヒスチジン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン若しくはバリンのアミノ酸側鎖；又は式（ＩＸｂ）、（ＩＸｃ）、（ＩＸｄ）若しくは（ＩＸｅ）の基を表し、
ｓは０〜１０の整数である。
【００６０】
［２５］一般式（ＩＩＩ）又は（ＶＩ）中の全ての繰り返しユニットＹd、Ｚf、Ｙg及びＺjの合計が、３０以下である、［２３］又は［２４］に記載の化合物。
【００６１】
［２６］一般式（ＩＩＩ）又は（ＶＩ）中の全ての繰り返しユニットＹd、Ｚf、Ｙg及びＺjの合計が、７≦ｘ≦３０である、［２３］〜［２５］に記載の化合物。
【００６２】
［２７］一般式（ＩＩＩ）又は（ＶＩ）における比率（（繰り返しユニットＺf及びＺjの合計）：（全ての繰り返しユニットＹd、Ｚf、Ｙg及びＺjの合計））が、０．１≦ｘ≦１．０である、［２３］〜［２６］に記載の化合物。
【００６３】
［２８］一般式（ＩＩＩ）又は（ＶＩ）における比率（（繰り返しユニットＺf及びＺjの合計）：（全ての繰り返しユニットＹd、Ｚf、Ｙg及びＺjの合計））が、０．１≦ｘ≦０．８である、［２３］〜［２６］に記載の化合物。
【００６４】
［２９］一般式（ＩＩＩ）又は（ＶＩ）における比率（（繰り返しユニットＺf及びＺjの合計）：（全ての繰り返しユニットＹd、Ｚf、Ｙg及びＺjの合計））が、０．１≦ｘ≦０．６である、［２３］〜［２６］に記載の化合物。
【００６５】
［３０］一般式（ＩＩＩ）又は（ＶＩ）における比率（（繰り返しユニットＺf及びＺjの合計）：（全ての繰り返しユニットＹd、Ｚf、Ｙg及びＺjの合計））が、０．１≦ｘ≦０．５である、［２３］〜［２６］に記載の化合物。
【００６６】
［３１］一般式（ＩＩＩ）又は（ＶＩ）における比率（（繰り返しユニットＺf及びＺjの合計）：（全ての繰り返しユニットＹd、Ｚf、Ｙg及びＺjの合計））が、０．１≦ｘ≦０．４である、［２３］〜［２６］に記載の化合物。
【００６７】
［３２］各Ｅが、それぞれ独立して、アデニニル、シトシニル、シュードイソシトシニル、グアニニル、チミニル、ウラシリル、又はフェニル基を表す、［２３］〜［３１］に記載の化合物。
【００６８】
［３３］各Ｒ41が、それぞれ独立してＨ原子又はリジン、オルニチン、アルギニン、ヒスチジン、トリプトファン、チロシン、トレオニン若しくはセリンのアミノ酸側鎖を表す、［２３］〜［３２］に記載の化合物。
【００６９】
［３４］各Ｒ41が、それぞれ独立してＨ原子又はリジン、オルニチン若しくはアルギニンのアミノ酸側鎖を表す、［２３］〜［３３］に記載の化合物。
【００７０】
［３５］各Ｒ41が、それぞれＨ原子を表す、［２３］〜［３４］に記載の化合物。
【００７１】
［３６］各Ｒ12が、それぞれ独立して、式−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＶ）2又は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＶ）（ＯＨ）のホスホン酸エステル基を表し、各Ｖはそれぞれ独立して無置換のＣ1−Ｃ7アルキル、Ｃ3−Ｃ7シクロアルキル、Ｃ4−Ｃ7アルキルシクロアルキル、フェニル又はベンジル基を表す、［２３］〜［３４］に記載の化合物。
【００７２】
［３７］各Ｖが、それぞれ独立してメチル、エチル、シクロヘキシル又はベンジル基を表す、［３６］に記載の化合物。
【００７３】
［３８］Ｖが、それぞれエチル基を表す、［３６］又は［３７］に記載の化合物。
【００７４】
［３９］各ｍが、それぞれ独立して、１、２、３又は４を表す、［２３］〜［３８］に記載の化合物。
【００７５】
［４０］各ｈが、それぞれ独立して、０、１、２、又は３を表す、［２３］〜［３９］に記載の化合物。
【００７６】
［４１］各Ｒ11が、それぞれ独立して式−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｐ＝Ｏ（ＯＥｔ）2の基又は式−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｐ＝Ｏ（ＯＥｔ）2の基を表す、［２３］〜［４０］に記載の化合物。
【００７７】
［４２］各ｄが、それぞれ独立して、０、１、２、３又は４を表す、［２３］〜［４１］に記載の化合物。
【００７８】
［４３］各ｆが、それぞれ独立して、０、１、２、３又は４を表す、［２３］〜［４２］に記載の化合物。
【００７９】
［４４］各ｇが、それぞれ独立して、０、１、２、３又は４を表す、［２３］〜［４３］に記載の化合物。
【００８０】
［４５］各ｊが、それぞれ独立して、０、１、２、３又は４を表す、［２３］〜［４４］に記載の化合物。
【００８１】
［４６］ｎが、０、１、２、３、４、５、６、７又は８を表す、［２３］〜［４５］に記載の化合物。
【００８２】
［４７］Ｒ31が、Ｈ原子、リジン、オルニチン、アルギニン、ヒスチジン、トリプトファン、チロシン、トレオニン若しくはセリンのアミノ酸側鎖、式−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｐ＝Ｏ（ＯＥｔ）2の基又は式−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｐ＝Ｏ（ＯＥｔ）2の基を表す、［２４］〜［４６］に記載の化合物。
【００８３】
［４８］Ｒ31が、式−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｐ＝Ｏ（ＯＥｔ）2の基又は式−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｐ＝Ｏ（ＯＥｔ）2の基を表す、［２４］〜［４７］に記載の化合物。
【００８４】
［４９］Ｒ31が、Ｈ原子、リジン、オルニチン、又はアルギニンのアミノ酸側鎖を表す、［２４］〜［４７］に記載の化合物。
【００８５】
［５０］Ｒ31が、Ｈ原子を表す、［２４］〜［４７］又は［４９］に記載の化合物。
【００８６】
［５１］Ｒ47が、それぞれ独立してＨ原子；リジン、オルニチン、アルギニン、ヒスチジン、トリプトファン、チロシン、トレオニン若しくはセリンのアミノ酸側鎖；又は式（ＩＸｂ）、（ＩＸｃ）、（ＩＸｄ）若しくは（ＩＸｅ）の基を表す、［２４］〜［５０］に記載の化合物。
【００８７】
［５２］Ｒ47が、それぞれ独立してＨ原子又はリジン、オルニチンもしくはアルギニンのアミノ酸側鎖を表す、［２４］〜［５１］に記載の化合物。
【００８８】
［５３］Ｒ47が、それぞれＨ原子を表す、［５２］に記載の化合物。
【００８９】
［５４］Ｒ47が、それぞれ独立してリジン、オルニチン又はアルギニンのアミノ酸側鎖を表す、［５２］に記載の化合物。
【００９０】
［５５］ｔが、０、１、２、３、４、５、６、７又は８を表す、［２４］〜［５４］に記載の化合物。
【００９１】
［５６］Ｒ47が、それぞれ独立してＨ原子又は式（ＩＸｂ）、（ＩＸｃ）、（ＩＸｄ）又は（ＩＸｅ）の基を表し、ｔが１、２、３又は４である［２４］〜［５１］に記載の化合物。
【００９２】
［５７］Ｒ47が、それぞれ独立して式（ＩＸｂ）、（ＩＸｃ）、（ＩＸｄ）又は（ＩＸｅ）の基を表す、［５６］に記載の化合物。
【００９３】
［５８］Ｌが、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＮＨＮＨ2、−Ｏ（Ｃ1−Ｃ10）アルキル基、−Ｏ（Ｃ2−Ｃ10）アルケニル基、−Ｏ（Ｃ2−Ｃ10）アルキニル基、−Ｏ（Ｃ3−Ｃ10）シクロアルキル基、−Ｏ（Ｃ4−Ｃ11）アルキルシクロアルキル基、−Ｏ（Ｃ6−Ｃ10）アリール基、−Ｏ（Ｃ7−Ｃ12）アラルキル基、−ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ10）アルキル基、−ＮＨ（Ｃ2−Ｃ10）アルケニル基、ＮＨ（Ｃ2−Ｃ10）シクロアルケニル基、−ＮＨ（Ｃ3−Ｃ10）シクロアルキル基、−ＮＨ（Ｃ6−Ｃ10）アリール基又は−ＮＨ（Ｃ7−Ｃ12）アラルキル基を表す、［２４］〜［５７］に記載の化合物。
【００９４】
［５９］Ｌが、−ＯＨ、−ＯＥｔ、−ＮＨ2又は−ＮＨＮＨ2を表す、［２４］〜［５８］に記載の化合物。
【００９５】
［６０］Ｕが、−ＮＲAＲB、−ＮＲA（ＣＯ）ＲB、−ＮＨ（ＣＯ）ＮＨＲB又は−ＮＨ（ＣＯ）ＯＲBを表し、ＲAが、それぞれ独立してＨ原子又はメチル基を表し、ＲBが［２４］で定義されたとおりである、［２４］〜［５９］に記載の化合物。
【００９６】
［６１］ＲBが、それぞれＨ原子、又はそれぞれ３０個までのＣ原子を有するアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アルキルオキシアリール、若しくはシクロアルキルオキシを表し、該アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アルキルオキシアリール又はシクロアルキルオキシ基において、それぞれ互いに独立して１つ以上の水素原子がホスホン酸エステル基、ホスホン酸基、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＯＨ若しくはＮＯ2によって置換されていてもよい、［６０］に記載の化合物。
【００９７】
［６２］ＲBが、それぞれＨ原子、又はそれぞれ２０個までのＣ原子を有するアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アルキルオキシアリール若しくはシクロアルキルオキシを表し、該アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アルキルオキシアリール又はシクロアルキルオキシ基において、それぞれ互いに独立して１つ以上の水素原子がホスホン酸エステル基、ホスホン酸基、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＯＨ若しくはＮＯ2によって置換されていてもよい、［６０］に記載の化合物。
【００９８】
［６３］ＲBが、それぞれＨ原子、又はそれぞれ１２個までのＣ原子を有するアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アルキルオキシアリール若しくはシクロアルキルオキシを表し、該アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アルキルオキシアリール又はシクロアルキルオキシ基において、それぞれ互いに独立して１つ以上の水素原子がホスホン酸エステル基、ホスホン酸基、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＯＨ若しくはＮＯ2によって置換されていてもよい、［６０］に記載の化合物。
【００９９】
［６４］Ｕが、一般式（ＶＩＩ）の基を表し、Ｂが、−ＮＲHＲI、−ＮＲH（ＣＯ）ＲI、−ＮＨ（ＣＯ）ＮＨＲI又は−ＮＨ（ＣＯ）ＯＲIを表し、Ｒ48が、Ｈ原子を表し、各Ｒ46が、それぞれ互いに独立してＨ原子又はアラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、ヒスチジン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン又はバリンのアミノ酸側鎖を表し、ＲH及びＲIが、［２４］で定義した通りである、［２４］〜［５９］に記載の化合物。
【０１００】
［６５］Ｕが、一般式（ＶＩＩ）の基を表し、Ｂが、−ＮＲHＲI，−ＮＲH（ＣＯ）ＲI，−ＮＨ（ＣＯ）ＮＨＲI又は−ＮＨ（ＣＯ）ＯＲIを表し、Ｒ48が、式（ＩＸｂ）、（ＩＸｃ）、（ＩＸｄ）又は（ＩＸｅ）の基を表し、；各Ｒ46が、それぞれ互いに独立してＨ原子又はアラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、ヒスチジン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン又はバリンのアミノ酸側鎖を表し、ＲH及びＲIが、［２４］で定義した通りである、［２４］〜［５９］に記載の化合物。
【０１０１】
［６６］ＲHが、Ｈ原子又はメチル基を表す、［６４］又は［６５］に記載の化合物。
【０１０２】
［６７］ＲIが、Ｈ原子又はそれぞれ３０個までのＣ原子を有するアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アルキルオキシアリール又はシクロアルキルオキシ基を表し、該アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アルキルオキシアリール又はシクロアルキルオキシ基において、それぞれ互いに独立して１つ以上の水素原子がホスホン酸エステル基、ホスホン酸基、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＯＨ若しくはＮＯ2によって置換されていてもよい、［６４］〜［６６］に記載の化合物。
【０１０３】
［６８］ＲIが、Ｈ原子又はそれぞれ２０個までのＣ原子を有するアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アルキルオキシアリール又はシクロアルキルオキシを表し、該アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アルキルオキシアリール又はシクロアルキルオキシ基において、それぞれ互いに独立して１つ以上の水素原子がホスホン酸エステル基、ホスホン酸基、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＯＨ若しくはＮＯ2によって置換されていてもよい、［６４］〜［６６］に記載の化合物。
【０１０４】
［６９］ＲIが、Ｈ原子又はそれぞれ１２個までのＣ原子を有するアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アルキルオキシアリール又はシクロアルキルオキシ基を表し、該アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アルキルオキシアリール又はシクロアルキルオキシ基において、それぞれ互いに独立して１つ以上の水素原子がホスホン酸エステル基、ホスホン酸基、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＯＨ若しくはＮＯ2によって置換されていてもよい、［６４］〜［６６］に記載の化合物。
【０１０５】
［７０］Ｕが、一般式（ＶＩＩ）の基を表し、Ｂが、Ｈ原子、フェニル基又はＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ及びＮＯ2を含む群から選択される１〜３個の置換基で置換されたフェニル基を表し、Ｒ48が、Ｈ原子であり、各Ｒ46が、それぞれ互いに独立して、Ｈ原子又はアラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、ヒスチジン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン若しくはバリンのアミノ酸側鎖を表す、［２４］〜［５９］に記載の化合物。
【０１０６】
［７１］各Ｒ46が、互いに独立して、Ｈ原子、又はアラニン、アルギニン、アスパラギン、グルタミン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、ヒスチジン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン若しくはバリンのアミノ酸側鎖を表す、［６４］〜［７０］に記載の化合物。
【０１０７】
［７２］各Ｒ46が、互いに独立して、Ｈ原子、又はアルギニン、ヒスチジン、リジン、メチオニン、オルニチン、ヒスチジン、セリン、トレオニン、トリプトファン又はチロシンのアミノ酸側鎖を表す、［６４］〜［７０］に記載の化合物。
【０１０８】
［７３］ｓが、０、１、２、３、４、５、６、７又は８を表す、［６４］〜［７２］に記載の化合物。
【０１０９】
［７４］Ｕが、一般式（ＶＩＩ）の基を表し、Ｂが、Ｈ原子、フェニル基、又はＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ及びＮＯ2を含む群から選択される１〜３個の置換基で置換されたフェニル基を表し、Ｒ48が、Ｈ原子であり、各Ｒ46が、それぞれ互いに独立して、Ｈ原子又は式（ＩＸｂ）、（ＩＸｃ）、（ＩＸｄ）若しくは（ＩＸｅ）の基を表し、ｓが、１、２、３又は４である、［２４］〜［５９］に記載の化合物。
【０１１０】
［７５］Ｒ46が、それぞれ独立して、式（ＩＸｂ）、（ＩＸｃ）、（ＩＸｄ）又は（ＩＸｅ）の基を表す、［７４］に記載の化合物。
【０１１１】
［７６］Ｕが、それぞれ独立して、式（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）又は（ＶＩＩＩｅ）の基を表す、［２４］〜［５９］に記載の化合物。
【０１１２】
［７７］Ｒ31が、Ｈ原子又は基−（ＣＨ2）m−ＮＨ−（ＣＨ2）h−ＣＨ2−Ｒ12を表し、Ｒ12が、式−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＶ）2又はＰ（＝Ｏ）（ＯＶ）（ＯＨ）のホスホン酸エステル基を表し、各Ｖが、独立してメチル、エチル、シクロヘキシル又はベンジル基を表し、ｍが、１、２、３又は４であり、ｈが、０、１、２又は３であり、但し、ｍ及びｈの合計は、２≦ｘ≦５である、［２４］〜［４６］に記載の化合物。
【０１１３】
［７８］Ｒ47が、それぞれ独立して、Ｈ原子又はリジン、オルニチン若しくはアルギニンのアミノ酸側鎖であり、ｔが、０、１、２、３、４、５、６、７又は８であり、Ｌが、ＯＨ、ＯＥｔ、ＮＨ2又は−ＮＨＮＨ2を表し、Ｕが、下記一般式（ＶＩＩ）の基を表し、
【化２２】
0006546272.tif 000024
式中、
Ｂは、Ｈ原子、フェニル基、又はＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ及びＮＯ2を含む群から選択される１〜３個の置換基で置換されたフェニル基を表し、
Ｒ48はＨ原子であり、
（ｉ）各Ｒ46は、それぞれ互いに独立して、Ｈ原子又はアラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、ヒスチジン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン若しくはバリンのアミノ酸側鎖を表し、ｓは０、１、２、３、４、５、６、７又は８であるか、
（ｉｉ）各Ｒ46は、それぞれ互いに独立して、Ｈ原子又は式（ＩＸｂ）、（ＩＸｃ）、（ＩＸｄ）若しくは（ＩＸｅ）の基を表し；ｓは１、２、３又は４である、［７７］に記載の化合物。
【０１１４】
［７９］一般式（ＶＩ）中の全ての繰り返しユニットＹd、Ｚf、Ｙg及びＺjの合計が７≦ｘ≦２５である、［２４］、［２５］及び［２７］〜［７８］に記載の化合物。
【０１１５】
［８０］一般式（ＩＩＩ）又は（ＶＩ）中の全ての繰り返しユニットＹd、Ｚf、Ｙg及びＺjの合計が７≦ｘ≦２２である、［２４］、［２５］及び［２７］〜［７８］に記載の化合物。
【０１１６】
［８１］Ｒ11がそれぞれ独立して式−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｐ＝Ｏ（ＯＥｔ）2の基又は式−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｐ＝Ｏ（ＯＥｔ）2の基を表す、［７７］〜［８０］に記載の化合物。
【０１１７】
［８２］Ｒ31がそれぞれ独立してＨ原子又は式−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｐ＝Ｏ（ＯＥｔ）2，又は式−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｐ＝Ｏ（ＯＥｔ）2を表す、［７７］〜［８１］に記載の化合物。
【０１１８】
［２３］〜［７６］又は［７７］〜［８２］に記載された一般式（ＩＩＩ）及び（ＶＩ）の化合物は、少なくとも１つの基Ｚを含む。したがって、［２３］〜［７６］又は［７７］〜［８２］に記載された本発明の化合物は、一般式（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）のＲ11の結合部位における基本構造は、少なくとも１つの不斉中心（＃）を有する。
【０１１９】
もし、［２３］〜［７６］又は［７７］〜［８２］に記載の一般式（ＩＩＩ）及び（ＶＩ）の化合物において、これらの不斉中心（＃）が２つ以上存在する場合、不斉中心（＃）の少なくとも５０％、好ましくは６６％、７０％、７５％又は８０％、より好ましくは８５％、９０％又は９５％、最も好ましくは１００％がＲ配置を有する。
【０１２０】
あるいは、［２３］〜［７６］又は［７７］〜［８２］に記載されているような、２以上の不斉中心（＃）を有する一般式（ＩＩＩ）及び（ＶＩ）の化合物において、これらの不斉中心（＃）の少なくとも５０、好ましくは６６％、７０％、７５％又は８０％、より好ましくは８５％、９０％又は９５％、最も好ましくは１００％がＳ配置を有する。
【０１２１】
本発明によれば、本発明の少なくとも１種（又はそれ以上）のオリゴマー化合物、場合により、少なくとも１種のキャリアー、必要に応じ、薬理学的に許容される通常の不活性成分及び／又は充填剤及び／又は少なくとも１つのアジュバントとの組み合わせを含む薬品組成物が開示される。
【０１２２】
本発明のオリゴマー化合物を医薬品又は薬物として使用することも、本発明の目的である。一般に、本発明の化合物は、個々に又は任意の他の治療手段と組み合わせて、既知及び許容される方法を用いて投与される。投与は、例えば、以下のいずれかの方法で行うことができる。経口的に、例えば、糖衣錠（ドラジェ：ｄｒａｇｅｅｓ）として、被覆錠剤、丸剤、半固体、軟質又は硬質のカプセル剤、溶液剤、乳剤又は懸濁剤；  非経口的に、例えば、注射液として；直腸に座薬として；吸入、例えば、粉末製剤又は噴霧剤として、経皮的に又は鼻腔内に投与することができる。そのような錠剤、丸剤、半固体、被覆錠剤、糖衣錠及び硬質ゼラチンカプセルの調製のために、治療上使用可能な製品は、薬理学的に不活性な無機又は有機キャリアー、例えば、ラクトース、スクロース、グルコース、ゼラチン、麦芽、シリカゲル、澱粉又はその誘導体、タルク、ステアリン酸又はその塩、乾燥スキムミルクなどを含むが、これらに限定されない。軟質カプセルの製造のために、例えば植物油、流動パラフィン、動物油又は合成油、ワックス、脂肪及び／又はポリオールなどのキャリアーを使用することができる。液体溶液及びシロップの調製のために、例えば水、アルコール、塩水溶液、水性デキストロース、ポリオール、グリセロール、植物油、流動パラフィン、動物及び／又は合成油などのキャリアーを使用することができる。坐剤には、例えば、植物油、流動パラフィン、動物油及び／又は合成油、ワックス、脂肪及び／又はポリオールなどのキャリアーを使用することができる。エアロゾル配合物の場合、例えば酸素、窒素、クロロフルオロカーボン、フッ素化炭化水素、塩素化炭化水素及び二酸化炭素のようなその目的に適した圧縮ガスを使用することができる。薬学的に使用可能な薬剤はまた、保存、安定化、乳化剤、甘味料、香味料、浸透圧を改質するための塩、緩衝剤、カプセル化添加剤及び／又は酸化防止剤のための添加物を含有してもよい。
【０１２３】
本発明のオリゴマー化合物又は医薬組成物は、相補的な核酸配列に結合する能力により、多くの異なる疾患の予防及び／又は治療に使用するのに適している。本発明のオリゴマー化合物で予防することができるか、又はこれらで治療することができるそのような疾患の例は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス及びＣ型肝炎ウイルス又はヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）などのウイルスによって引き起こされる疾患；例えば、皮膚癌、肺癌、肝臓癌、前立腺癌、白血病又は脳腫瘍のような癌；例えば、デュシェンヌ型筋ジストロフィー又は脊髄性筋萎縮症のようなまれな神経筋疾患；例えば、喘息、関節リウマチ又は乾癬のような炎症性疾患；自己免疫疾患、例えばクローン病又は多発性硬化症；例えばパーキンソン病のような神経学的疾患；又は例えば高コレステロール及び肥満などの代謝状態を含む。
【０１２４】
本発明のオリゴマー化合物、すなわち一般式（ＩＩＩ）又は（ＶＩ）のオリゴマー化合物（本明細書ではＮ−ｐｈｏｓオリゴマーとも呼ばれる）は、アルキルホスホン酸エステル基を有するＥＰ２０４１１６１により開示されているオリゴマー化合物（以下、ＥＰ２０４１１６１オリゴマーと称する）と比較して、種々の治療関連器官において、例えば、著しく改善されたバイオアベイラビリティ及びより長い半減期などの驚くべきかつ改善された特性を示す。これは、例えば、マウスにそれぞれのオリゴマー化合物を投与し、１８の治療関連器官において異なる時間にこれらの量を測定した比較組織分布研究において観察された（実施例１４並びに図１及び２参照）。
【０１２５】
ＥＰ２０４１１６１オリゴマーと比較して、Ｎ−ｐｈｏｓオリゴマーは、血漿タンパク質に対する強い結合を有することも観察されている（実施例１５参照）。これはバイオアベイラビリティに有利であり、半減期を延長する。
【０１２６】
本発明のＮ−ｐｈｏｓオリゴマーは、ＥＰ２０４１１６１オリゴマーと比較して、著しく改善された配列非依存的水溶性を有する（実施例１６参照）。
【０１２７】
さらに、本発明のＮ−ｐｈｏｓオリゴマーは、ＤＮＡ（より高い融点）（実施例１７参照）とのより良好な結合特性を有することが観察された。
【０１２８】
本発明のＮ−ＰＨＯＳオリゴマーはまた、ＥＰ２０４１１６１オリゴマーと比較して、遺伝子発現の調節に対して驚くべき有意に大きな効果を示す。遺伝子発現の調節に対するより大きな効果は、例えば、ＨｅＬａ細胞におけるＮＦｋＢのダウンレギュレーション（実施例１８参照）及びＴＨＰ１細胞におけるＴＮＦＲ２遺伝子のスプライス部位調節に反映される（実施例１９参照）。
【０１２９】
ＴＨＰ１細胞における標的ＴＮＦＲ２のスプライス部位調節における本発明のＮ−ｐｈｏｓオリゴマー、ＥＰ２０４１１６１オリゴマー及びＵＳ５７１９２６２オリゴマー間の有効性の比較は、遺伝子発現の調節における本発明のＮ−ｐｈｏｓオリゴマーが、有意な効果を奏することが確認された。ＵＳ５７１９２６２オリゴマーはほとんど効果がなく、これは、ＵＳ５７１９２６２オリゴマーが小胞内の細胞内に蓄積する傾向が強いことを示すR. Corradini(Current Topics in Medicinal Chemistry, 11 (12), pp. 1535-1554, (2011))らの観察と一致する。したがって、ＵＳ５７１９２６２オリゴマーは、細胞質ゾル又は核内のｍＲＮＡの標的部位におけるアンチセンス効果（実施例２１及び図３参照）に利用するには不十分である。
【０１３０】
生物における遺伝子発現の調節に対するＮ−ｐｈｏｓオリゴマーの強力な効果はまた、マウスの脾臓及びリンパ節におけるＴＮＦＲ２遺伝子のスプライス部位調節から明らかである（実施例２０参照）。本発明のＮ−ＰＨＯＳオリゴマーによってさらに強力な効果が、肺（実施例２２及び図４及び実施例２３及び図５参照）、腎臓（実施例２３及び図５及び実施例２４及び図６参照）、肝臓（実施例２３及び図５参照）及び筋肉（実施例２５及び図７参照）で観察された。一例として、マウスの腎臓では、本発明のＮ−ＰＨＯＳオリゴマーは、ＥＰ２０４１１６１オリゴマーと比較して、ＴＮＦＲ２遺伝子のスプライス部位調節において最大１２．６倍強力な効果を示す（実施例２４及び図６）。マウスの筋肉において、ジストロフィン遺伝子の遺伝子発現の調節（エクソン２３スキッピング）に対する本発明のＮ−ｐｈｏｓオリゴマーのより強力な効果が実証された（実施例２５及び図７参照）。
【０１３１】
標的ＮＦ−ｋａｐｐａＢ及びＴＮＦＲ２は、免疫細胞におけるＴＮＦ−αシグナル伝達経路において重要な役割を果たす。脾臓及びリンパ節は、免疫系の重要な器官である。  したがって、本発明のオリゴマー化合物（Ｎ−ＰＨＯＳオリゴマー）は、例えば炎症性疾患、自己免疫疾患又は癌のような免疫系介在疾患における治療的使用に適している。
【０１３２】
一般式（Ｉ）の本発明のモノマーは、当業者に公知の反応によって製造することができる。例として、不斉中心（＃）がＲ配置を有し、Ｒ3がＣｂｚ保護基である一般式（Ｉ）の本発明のモノマーは、以下の合成スキームに従って調製することができる（より詳細な説明は実施例１〜１０参照）。
【０１３３】
【化２３】
0006546272.tif 000025
【０１３４】
【化２４】
0006546272.tif 000026
【０１３５】
不斉中心（＃）にＳ立体配置を有する一般式（Ｉ）の本発明のモノマー（本明細書ではＮ−Ｐｈｏｓモノマーとも呼ばれる）の製造のために、水素化の間に、（Ｒ，Ｒ）−Ｍｅ−ＤｕＰｈｏｓ−Ｒｈ（Ｉ）（ＯＤ）2ＯＴｆ触媒の代わりに、（Ｓ，Ｓ）−Ｍｅ−ＤｕＰｈｏｓ−Ｒｈ（Ｉ）（ＣＯＤ）2ＯＴｆ触媒が使用される。
【０１３６】
一般式（ＩＩＩ）又は（ＶＩ）を有する本発明のオリゴマー化合物は、例えば、文献に記載の方法によって、一般式（Ｉ）の本発明のモノマー、又はＰＮＡモノマー又はアミノ酸を公知の方法（例えば、L. Christensen, R. Fitzpatrick, B. Gildea, K.H. Petersen, H.F. Hansen, T. Koch, M. Egholm, O. Buchardt, P.E. Nielsen, J. Coull, R.H. Berg, J.Pept.Sci. 3, 1995, 175-183、 T. Koch, H.F. Hansen, P. Andersen, T. Larsen, H.G. Batz, K. Otteson, H. Oerum, J. Pept.Res. 49, 1997, 80-88、 F. Bergmann, W. Bannwarth, S. Tam, Tetrahedron Lett. 36, 1995, 6823-6826）で反応させることにより製造することができる。固相合成後、保護基を分割して、本発明のオリゴマー化合物、例えば、一般式（ＩＶ）の化合物が得られる。
【図面の簡単な説明】
【０１３７】
【図１】図１は、本発明の3Ｈ標識Ｎ−Ｐｈｏｓオリゴマー及び3Ｈ標識ＥＰ２０４１１６１オリゴマーの種々の組織における１４日間にわたるバイオアベイラビリティを示す。図からわかるように、１４日間にわたる3Ｈ標識Ｎ−Ｐｈｏｓオリゴマーのバイオアベイラビリティーは、１４日間にわたる3Ｈ標識ＥＰ２０４１１６１オリゴマーのバイオアベイラビリティと比較して、すべての組織において１．７〜４．６倍大きい。
【図２】図２は、本発明の３Ｈ標識Ｎ−Ｐｈｏｓオリゴマー及び3Ｈ標識ＥＰ２０４１１６１オリゴマーの１４日間にわたる半減期を示す。図２は、3Ｈ標識Ｎ−Ｐｈｏｓオリゴマーの半減期が、ほとんどの組織で3Ｈ標識ＥＰ２０４１１６１−オリゴマーと比較して大きく、脾臓では実際に２倍であることを示している。
【図３】図３は、ＴＨＰ１細胞における標的ＴＮＦＲ２のスプライス部位調節（エクソン７スキッピング）における本発明のＮ−Ｐｈｏｓオリゴマー、ＥＰ２０４１１６１オリゴマー及びＵＳ５７１９２６２オリゴマーの有効性を比較したものである。図３は、ＵＳ５７１９２６２オリゴマーによるＴＨＰ１細胞中の標的ＴＮＦＲ２の調節は事実上ゼロであるが、Ｎ−Ｐｈｏｓオリゴマーは、ＴＨＰ１細胞における標的ＴＮＦＲ２のスプライス部位調節においてＥＰ  ２０４１１６１オリゴマーと比較して２．６倍強い効果を有することを示す。
【図４】図４は、マウスの肺中の標的ＴＮＦＲ２のスプライス部位調節（エクソン７スキッピング）における、異なるラジカルＵを有する本発明のＮ−ｐｈｏｓオリゴマーの効果を示したものである。図４は、一般式ＶＩＩであるラジカル基Ｕ及びＲ46としての式ＩＸｃ（コレステロール誘導体）又はＩＸｄ（葉酸誘導体）の基を有する式（ＶＩ）で表される本発明のＮ−ｐｈｏｓオリゴマーは、スプライス部位調節における遺伝子発現に対する効果が、ＰＢＳネガティブコントロールと比較して５６０倍（コレステロール誘導体）又は３７８倍（葉酸誘導体）増加することを示す。
【図５】図５は、マウスの腎臓、肝臓及び肺における本発明のＮ−ｐｈｏｓオリゴマーの、標的ＴＮＦＲ２のスプライス部位調節に対するＮ−Ｐｈｏｓ  ２３−１、Ｎ−Ｐｈｏｓ  ２３−２、Ｎ−Ｐｈｏｓ  ２３−３及びＮ−Ｐｈｏｓ  ２３−４の効果（エクソン７はスキップする）を示す。本発明のＮ−ｐｈｏｓオリゴマーＮ−Ｐｈｏｓ  ２３−１、Ｎ−Ｐｈｏｓ  ２３−２、Ｎ−Ｐｈｏｓ  ２３−３及びＮ−Ｐｈｏｓ  ２３−４は、一般式（ＶＩ）において、酸塩基配列、基Ｕ及び一般式（ＩＶ）及び（Ｖ）の基の数及び位置が異なる。図５は、本発明のＮ−ｐｈｏｓオリゴマー、Ｎ−Ｐｈｏｓ  ２３−１、Ｎ−Ｐｈｏｓ  ２３−２、Ｎ−Ｐｈｏｓ  ２３−３及びＮ−Ｐｈｏｓ  ２３−４が、種々のマウス組織（腎臓、肝臓及び肺）において、エクソン７を含まないｍＲＮＡアイソフォームの遺伝子発現に対して非常に強力な効果を有することを示す。腎臓では、一例として、Ｎ−Ｐｈｏｓ  ２３−１の効果はＰＢＳネガティブコントロールと比較して１，９８３倍増加する。
【図６】図６は、マウスの腎臓における標的ＴＮＦＲ２のスプライス部位調節（エクソン７スキッピング）における、本発明のＮ−ＰＨＯＳオリゴマーとＥＰ２０４１１６１オリゴマーとの間の有効性を比較したものである。試験したオリゴマーは、第１に、すべての繰り返しユニットＹd、Ｚf、Ｙg及びＺj（１５又は１４）の合計と、第２に一般式（ＩＶ）及び（Ｖ）の基の数及び位置が異なる。図６は、ＥＰ２０４１１６１オリゴマーと直接比較して、エクソン７を含まないｍＲＮＡアイソフォームの遺伝子発現に対するＮ−ＰＨＯＳオリゴマーの効果が１２．６倍又は６．７倍強力であることを示す。
【図７】図７は、ｍｄｘマウスの筋肉における標的ジストロフィン（エクソン２３スキッピング）のスプライス部位調節における、２０のビルディングブロック（一般式（ＶＩ）による全ての反復単位Ｙd、Ｚf、Ｙg及びＺjの合計＝１９）を有する本発明のＮ−ＰＨＯＳオリゴマーのインビボ効果を示すものである。図７は、本発明のＮ−Ｐｈｏｓオリゴマーが、筋肉への３回の注射のみの１５日間にわたる短時間の実験において、エクソン２３を含まないｍＲＮＡアイソフォームの遺伝子発現に対して、ＰＢＳコントロール群に比して９倍強力な効果を示す。
【実施例】
【０１３８】
実施例１：化合物１の調製
【化２５】
0006546272.tif 000027
説明：３００ｍｌのメタノール中の６６．５２ｇ（２００ｍｍｏｌ）の２−Ｎ−Ｃｂｚ−アミノ−２−（ジメトキシホスホリル）−酢酸メチルエステルを、２．１３ｇのＰｄ／Ｃ  １０％（１Ｍｏｌ％Ｐｄに相当）と混合し、２バールの水素圧下、室温で２４時間撹拌した。触媒をセライトを通して濾別し、次に溶媒を濾液から蒸発させる。得られた生成物は淡黄色の油状物であり、放置するとワックス様の固体に変化する。
収量：３９ｇ、９９％。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：４．０１（ｄ，１Ｈ）、３．６６−３．７３（ｍ，９Ｈ）、２．４−２．５（ｓ，ｂｒ，２Ｈ）。
31Ｐ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：２３．６ｐｐｍ。
【０１３９】
実施例２：化合物２の調製
【化２６】
0006546272.tif 000028
説明：３９ｇ（１９８ｍｍｏｌ、１当量）の化合物１を１０００ｍｌのジクロロメタンに溶解する。５６．１７８ｇ（２５７ｍｍｏｌ、１．３当量）のＢｏｃ2Ｏ及び１６．１ｍｌ（１９８ｍｍｏｌ、１当量）のピリジンを加える。混合物を室温で４８時間撹拌する。ロータリーエバポレーターで溶媒を除去し、残留物を酢酸に吸収させ、５％クエン酸溶液、飽和炭酸ナトリウム溶液及び飽和食塩水で洗浄した。次いで、硫酸マグネシウムを乾燥及び蒸発に使用する。残りの生成物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エーテル  １：５）を用いて精製する。生成物は、黄色の油状物である。
収量：４３．５ｇ（１４６ｍｍｏｌ、７４％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ１3）：５．３５（ｄ，ｂｒ，１Ｈ）、４．８８（ｄｄ，１Ｈ）、３．８０−３．８６（ｍ，９Ｈ）、１．４６（ｓ，９Ｈ）。
31Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤＣ１3）：２０．１ｐｐｍ
【０１４０】
実施例３：化合物３の調製
【化２７】
0006546272.tif 000029
説明：５０ｇ（３１９ｍｍｏｌ、１当量）の４−アミノブチルアルデヒドジエチルアセタールを室温で２００ｍｌのＴＨＦ及び５１．５ｍｌ（３７２ｍｍｏｌ、１．２当量）のトリエチルアミンに溶解し、７５．９９ｇ（３１０ｍｍｏｌ、１当量）のジエチル−２−ブロモエチルホスホネートを滴下して加える。次に溶液を７０℃に加熱し、この温度で２４時間撹拌する。ロータリーエバポレーターで溶媒を除去する。残渣をエーテルで激しく振とうし、濾過する。残りの固体をエーテルで２回以上抽出する。エーテル濾液を合わせ、蒸発させる。得られた生成物は黄色の油状物であり、これをさらに精製することなく次の反応で使用する。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：４．４５（ｔ，１Ｈ）；３．９８（ｍ，４Ｈ）；３．５４及び３．４２（２ｍ，２ｘ２Ｈ）；２．５−２．８（ｍ，４Ｈ）；１．９０（ｍ，２Ｈ）；１．２５−１．６０（ｍ，４Ｈ）；１．２２（ｔ，６Ｈ）；１．１０（２ｔ，６Ｈ）。
31Ｐ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：３０ｐｐｍ。
【０１４１】
第一段階で得られた中間生成物を４００ｍｌのＴＨＦに溶解し、８５．９４ｍｌ（６２０ｍｍｏｌ、２当量）のトリエチルアミンと混合し、０℃に冷却する。次いで、６６．１１ｍｌ（４６５ｍｍｏｌ、１．５当量）のクロロギ酸ベンジルを滴加し、冷却を取り除き、撹拌を室温で一晩行う。次に、反応混合物を１Ｍ塩酸で中和し、溶媒を蒸発させる。残渣をエーテルと共に振盪し、冷蔵庫に一晩保存する。得られた固体を分離し、エーテルで２回以上十分に洗浄する。エーテル溶液を合わせ、蒸発させる。残留物をシリカゲルカラムによるクロマトグラフィーにより精製する。その際、まずすべての不純物をヘキサン：酢酸エーテル  ２：１で溶出し、次いで生成物を酢酸エーテルで溶離する。
収率：８５．７５２ｇ（６０．２％）無色粘性油。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：７．３４（ｍ，５Ｈ）；５．０７（ｓ，２Ｈ）；４．４４（ｍ，１Ｈ）；３．９４（ｍ，４Ｈ）；３．６−３．２（ｍ，８Ｈ）；２．０２（ｍ，２Ｈ）；１．４６（ｍ，４Ｈ）；１．１９（ｍ，６Ｈ）；１．０９（ｍ，６Ｈ）。
31Ｐ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：２８．９３及び２８．５７ｐｐｍ。
【０１４２】
実施例４：化合物４の調製
【化２８】
0006546272.tif 000030
説明：１０００ｍｌのアセトン中の８０ｇの化合物３を、０．９８ｇ（１．７４ｍｍｏｌ、１Ｍｏｌ％）のインジウム（ＩＩＩ）トリフラートと室温で撹拌する。平衡反応の継続は、ＨＰＬＣ（ＲＰ１８、メタノール／水８０：２０）を用いて監視する。時々、溶媒を蒸発させ、新鮮なアセトンで置換する。これは、反応が９５％以上完了するまで行われる。次いで、溶媒を蒸発させる。黄色の油状物質を高真空下で短時間乾燥し、直ちに使用する。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：９．６２（ｄ，１Ｈ）；７．３６（ｍ，５Ｈ）；５．０７（ｓ，２Ｈ）；３．９４（ｍ，４Ｈ）；３．３７及び３．２４（２ｍ，４Ｈ）；２．４１（ｍ，２Ｈ），２．０４（ｍ，２Ｈ）；１．７３（ｍ，２Ｈ）；１．２２（ｔ，６Ｈ）。
31Ｐ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：２９．５１，２９．１４ｐｐｍ
【０１４３】
実施例５：化合物５の調製
【化２９】
0006546272.tif 000031
説明：アルゴン雰囲気下、２９．４３８ｇの化合物２を３５０ｍｌのＴＨＦ中で−７０℃に冷却し、次に１２．９６ｍｌ（１０３ｍｍｏｌ、１．０４当量）のＮ，Ｎ，Ｎ’Ｎ’−テトラメチルグアニジンを滴下する。−７０℃で１０分間撹拌した後、６０ｍｌのＴＨＦ中の３８．１７０ｇ（９９．０４ｍｍｏｌ、１当量）の化合物４を滴下する。さらに−７０℃で撹拌を続け、その後、調製物をゆっくりと室温に戻し、一晩撹拌する。溶媒を蒸発させる。残留物を約４００ｍｌの酢酸エーテルに溶解し、５％クエン酸溶液で２回、飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、蒸発させる。黄色油状物が得られた。
収率：５３，２２８ｇ、９５．６ｍｍｏｌ、９６．５％。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ１3）：７．３３（ｓ，５Ｈ）；６．４８（ｔ，１Ｈ）；５．１３（ｓ，２Ｈ）；４．０８（ｍ，４Ｈ）；３．８１及び３．７６（２ｓ，合計３Ｈ）；３．４９（ｍ，２Ｈ）；３．３０（ｔ，２Ｈ）；２．２１（ｍ，２Ｈ）；２．０４（ｍ，２Ｈ）；１．７１（ｍ，２Ｈ）；１．４８及び１．４６（２ｓ，合計９Ｈ）；１．２８（ｍ，６Ｈ）。
31Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤＣ１3）：２９．７２及び２９．１５ｐｐｍ。
【０１４４】
実施例６：化合物６の調製
【化３０】
0006546272.tif 000032
説明：Ｐａｒｒ水素化装置の反応瓶中、アルゴン下で、４５０ｍｇ（０．９６ｍｍｏｌ、１Ｍｏｌ％）のビス（１，５−シクロオクタジエニル）ロジウム（Ｉ）−トリフルオロメタンスルホネート及び３０６ｍｇ（０．９６ｍｍｏｌ、１Ｍｏｌ％）の（−）−１，２−ビス−［（２Ｒ、５Ｒ）−２，５−ジメチル−ホスホラノ］−ベンゼンを約５０ｍｌのメタノールに溶解し、次に２５０ｍｌのメタノールに溶解した５３．２２８ｇ（９６ｍｍｏｌ）の化合物５を加える。反応瓶を水素化装置に取り付け、３回排気し、水素を充填する。最後に、４．５〜５バールの水素圧を設定し、反応瓶を２４時間撹拌する。過剰の水素を除去し、反応瓶を除去し、反応溶液をセライトを通して濾過する。濾液を蒸発させ、真空中で乾燥する。明褐色の油状物が得られる。
収率：５３．７１２ｇ、９６ｍｍｏｌ、定量的。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ１3）：７．３５（ｍ，５Ｈ）；６．４８及び６．３５（２ｍ，合計１Ｈ）；５．１３（ｓ，２Ｈ）；４．２７（ｍ，１Ｈ）；４．０７（ｍ，４Ｈ）；３．７３（ｓ，３Ｈ）；３．４８（ｍ，２Ｈ）；３．２７（ｍ，２Ｈ）；２．２５−１．９５（ｍ，４Ｈ）；１．７５−１．５５（ｍ，４Ｈ）；１．４５（ｓ，９Ｈ）；１．２８（ｍ，６Ｈ）。
31Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤＣ１3）：２９．７８及び２９．２３ｐｐｍ。
【０１４５】
実施例７：化合物７の調製
【化３１】
0006546272.tif 000033
説明：ジオキサン中のＨＣｌの４Ｍ溶液２４０ｍｌを、１２０ｍｌのＴＨＦ中の５３．９４ｇ（９６．６ｍｍｏｌ）の化合物６に滴下して加える。次に室温で攪拌を行う。反応プロセスをＨＰＬＣ（メタノール／水  ７０：３０）を用いてモニターする。２〜３時間後、Ｂｏｃ分割が完了する。溶媒を蒸発させ、残渣をジエチルエーテルで洗浄し、乾燥する。焦茶色の油状物が得られる。
収量：４７．８３ｇ、定量的。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：８．６４（ｓ，ｂｒ，２Ｈ）；７．３６（ｍ，５Ｈ）；５．０７（ｓ，２Ｈ）；３．９７（ｍ，５Ｈ）；３．７３（ｓ，３Ｈ）；３．３８（ｍ，２Ｈ）；３．２２（ｍ，２Ｈ）；２．０４（ｍ，２Ｈ）；１．８０（ｍ，２Ｈ）；１．４８−１．３５（ｍ，４Ｈ）；１．２２（ｍ，６Ｈ）。
31Ｐ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：２９．０１２及び２８．６２ｐｐｍ。
【０１４６】
実施例８：化合物８の調製
【化３２】
0006546272.tif 000034
説明：１００ｍｌのメタノール中の１６．６５ｇ（２９．８ｍｍｏｌ、１当量）の化合物７を０℃に冷却し、５．４１４ｇ（６６ｍｍｏｌ、２．２当量）の酢酸ナトリウムと混合する。次いで、１５０ｍｌのメタノール中の５．２１８ｇ（３２．８ｍｍｏｌ、１．１当量）のＮ−Ｂｏｃアミノアセトアルデヒドを滴下する。０℃で１時間撹拌を行い、２．０７４ｇ（３３ｍｍｏｌ、１．１当量）のシアノ水素化ホウ素ナトリウムを少しずつ加える。ガス発生が緩和されたら、冷却浴を除去し、室温で一晩撹拌を行う。溶媒をロータリーエバポレーターで除去し、残留物を酢酸エーテルに吸収させ、炭酸水素ナトリウム溶液（半飽和）及び飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、蒸発させ、真空乾燥させる。粗生成物をシリカゲルカラム（ジクロロメタン／メタノール（５％、ｖ／ｖ））で精製する。粘性のある黄色の油状物が得られる。
収率：１５．３７９ｇ（２５，６ｍｍｏｌ，８６％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：７．３６（ｍ，５Ｈ）；６．６９（ｍ，１Ｈ）；５．０６（ｓ，２Ｈ）；４．０２（ｍ，４Ｈ）；３．４−３．１５（３ｍ，合計７Ｈ）；２．９５（ｍ，１Ｈ）；２．３８（ｍ，１Ｈ）；２．０１（ｍ，２Ｈ）；１．６０−１．３０（ｍ，６Ｈ）；１．３８（ｓ，９Ｈ）；１．２０（ｍ，６Ｈ）。
31Ｐ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：２９．００及び２８．６０ｐｐｍ．
【０１４７】
実施例９：化合物９の調製
【化３３】
0006546272.tif 000035
説明：７０ｍｌのアセトニトリル中の２０．２５ｍｍｏｌ（１．５当量）の酢酸成分（Ｎ６−Ｃｂｚ−アデニン−９−イル−酢酸、Ｎ４−Ｃｂｚ−シトシン−１−イル−酢酸、Ｎ２−Ｃｂｚ−グアニン−９−イル−酢酸、チミジン−１−イル−酢酸）、２０ｍｌのピリジン及び４．５ｍｌ（４０．５ｍｍｏｌ、３当量）のＮ−メチルモルホリンを０℃に冷却し、７．１８６ｇ（１８．９ｍｍｏｌ、１．４当量）のＨＡＴＵと混合する。冷却を除去し、室温で１０分間撹拌する。次いで、この混合物を、５０ｍｌのアセトニトリルに溶解した８．１ｇ（１３．５ｍｍｏｌ、１当量）の化合物８にゆっくり加える。室温で１時間、次いで４０℃で一晩撹拌を行う。
【０１４８】
混合物を再び室温に冷却し、２０ｍｌの水で希釈する。３０分間撹拌した後、溶媒を蒸発させる。できるだけ多くのピリジンを除去するために、残留物をジクロロメタンでさらに２回蒸発させる。次いで、残留物を再びジクロロメタンに吸収させ、一晩冷蔵庫に入れる。得られた固体を濾別し、濾液を蒸発させ、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ジクロロメタン中２〜５％メタノール）により精製すると、生成物は白色黄色の泡として得られる。
【０１４９】
化合物９、Ｅ＝Ｃｂｚ−Ａ：
収率：６２％。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１０．６５（ｓ，１Ｈ）；８．５９（ｓ，１Ｈ）；８．３５及び８．２９（２ｓ，合計  １Ｈ）；１．４７−７．２４（ｍ，１０Ｈ）；６．９０及び６．７２（２ｍ，合計  １Ｈ）；５．４２−５．００（ｍ，６Ｈ）；３．９２（ｍ，５Ｈ）；３．５６及び３．４９（２ｓ，合計  ３Ｈ）；３．５０−２．９５（ｍ，８Ｈ）；２．１２−１．３０（ｍ，８Ｈ）；１．３８及び１．３５（２ｓ，合計  ９Ｈ）；１．１６（ｍ，６Ｈ）。
31Ｐ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：２９．５２及び２９．１６ｐｐｍ．
【０１５０】
化合物９、Ｅ＝Ｃｂｚ−Ｃ：
収率：５９％。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１０．７７（ｓ，ｂｒ，１Ｈ）；７．９４（ｄ，１Ｈ），７．４２−７．３３（ｍ，１０Ｈ）；７．０１（ｄ，１Ｈ）；６．９１及び６．８０（２ｍ，合計  １Ｈ）；５．１９（Ｓ，２Ｈ）；５．０７（ｓ，２Ｈ）；４．８０−４．６（ｍ，２Ｈ）；４．３６（ｍ，１Ｈ）；３．９４（ｍ，４Ｈ）；３．７及び３．５９（２ｓ，合計  ３Ｈ）；３．５−２．８（ｍ，８Ｈ）；２．０５−１．３（ｍ，８Ｈ）；１．３８及び１．３７（２ｓ，合計  ９Ｈ）；１．１９（ｍ，６Ｈ）。
31Ｐ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：２９．０２及び２８．６３ｐｐｍ。
【０１５１】
化合物９、Ｅ＝Ｃｂｚ−Ｇ：
収率：７７．５％。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１１．３３（ｓ，ｂｒ，２Ｈ）；７．８５（ｓ，１Ｈ）；７．４５−７．３０（ｍ，１０Ｈ）；６．９９及び６．８１（２ｍ，合計  １Ｈ）；５．２６（ｓ，２Ｈ）；５．０６（ｍ，４Ｈ）；４．５８及び４．３１（２ｍ，合計  １Ｈ）；３．９３４（ｍ，４Ｈ）；３．５６（ｓ，３Ｈ）；３．３１−３．１９（ｍ，８Ｈ）；２．２１−１．３０（ｍ，８Ｈ）；１．３６及び１．３５（２ｓ，合計  ９Ｈ）；１．１９（ｍ，６Ｈ）。
31Ｐ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：２８．９８及び２８．５９ｐｐｍ。
【０１５２】
化合物９、Ｅ＝Ｔ：
収率：７８％。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１１．２６（ｓ，ｂｒ，１Ｈ）；７．３５（ｍ，  ６Ｈ）；６．９０及び６．７９（２ｍ，合計  １Ｈ）；５．０７（ｓ，２Ｈ）；４．６３−４．４９（ｍ，２Ｈ）；４．３１（ｍ，１Ｈ）；３．９４（ｍ，４Ｈ）；３．７０及び３．５８（２ｓ，合計  ３Ｈ）；３．４６−３．１２（ｍ，８Ｈ）；２．１１−１．３０（ｍ，８Ｈ）；１．７６（ｓ，３Ｈ）；１．３８及び１．３５（２ｓ，合計  ９Ｈ）１．１９（ｍ，６Ｈ）。
31Ｐ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：２９．６１及び２９．２５ｐｐｍ。
【０１５３】
実施例１０：化合物１０の調製
【化３４】
0006546272.tif 000036
説明：２．３１ｍｍｏｌの化合物９（Ｅ＝Ｃｂｚ−Ａ、Ｃｂｚ−Ｃ、Ｃｂｚ−Ｇ又はＴ）を１２ｍｌの水／メタノール  １：１中で０℃に冷却し、次いで１２ｍｌの２Ｎ  ＮａＯＨ溶液を滴下して加えた。０℃で１５分間、次いでＤＣコントロール（シリカゲル、ジクロロメタン中１０％メタノール）により鹸化が完了するまで室温で撹拌を行う（持続時間：約１時間）。次いで、少量の水を希釈に使用し、存在する未溶解の物質を短時間遠心分離して取り除く。透明な溶液を水で約３００ｍｌに希釈し、再び０℃に冷却する。１ＭのＨＣｌ溶液でｐＨを２．５に調整し、白色固体を沈殿させる。さらなる生成物が有機相（ＤＣコントロール）に移らなくなるまで、溶液をジクロロメタン（約５回）で抽出する。合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、蒸発させ、真空乾燥させる。生成物は白色黄色固体として得られる。
【０１５４】
化合物１０、Ｅ＝Ｃｂｚ−Ａ：
収率：７２％。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１０．６８（ｓ，ｂｒ，１Ｈ）；８．５９（ｓ，ｂｒ，１Ｈ）；８．３５及び８．２９（２ｓ，ｂｒ，合計  １Ｈ）；７．４９−７．３３（ｍ，１０Ｈ）；６．９８及び６．８５（２ｍ，合計  １Ｈ）；５．３５−５．０４（ｍ，６Ｈ）；４．６２及び４，２２（２ｍ，合計  １Ｈ）；３．９３（ｍ，４Ｈ，）；３．５０−２．８５（ｍ，８Ｈ）；２．２０−１．３０（ｍ，８Ｈ）；１．３９及び１．３６（２ｓ，合計  ９Ｈ）；１．１７（ｍ，６Ｈ）。
31Ｐ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：２９．５５及び２９．１９ｐｐｍ。
【０１５５】
化合物１０、Ｅ＝Ｃｂｚ−Ｃ：
収率：５９％。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：７．９５（ｄ，１Ｈ）；７．４２−７．２８（ｍ，１０Ｈ）；７．０１（ｄ，１Ｈ）；６．９０及び６．８５（２ｍ，合計  １Ｈ）；５．１９（ｓ，２Ｈ）；５．０７（ｓ，２Ｈ）；４．８１−４．６５（ｍ，２Ｈ）；４．３３（ｍ，１Ｈ）；３．９３３（ｍ，４Ｈ）；３．４５−３．１５（ｍ，８Ｈ）；２．１５−１．３０（ｍ，  ８Ｈ）；１．３８及び１．３５（２ｓ，合計  ９Ｈ）；１．２０（ｍ，６Ｈ）。
31Ｐ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：２９．０３及び２８．６６ｐｐｍ。
【０１５６】
化合物１０、Ｅ＝Ｃｂｚ−Ｇ：
収率：６２％。
lＨ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１１．４３（ｓ，ｂｒ，１Ｈ）；１１．３３（ｓ，ｂｒ，１Ｈ）；７．８５（ｓ，１Ｈ）；７．４４−７．３１（ｍ，１０Ｈ）；６．９７及び６．８１（２ｍ，合計  １Ｈ）；５．２４（ｓ，２Ｈ）；５．１０−５．００（ｍ，  ４Ｈ）；４．５１及び４．２８（２ｍ，合計  １Ｈ）；３．９１（ｍ，４Ｈ）；３．５２−３．０８（ｍ，８Ｈ）；２．１２−１．２８（ｍ，８Ｈ）；１．３６及び１．３４（２ｓ，合計  ９Ｈ）；１．１５（ｍ，６Ｈ）。
31Ｐ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：２９．６１及び２９．２１ｐｐｍ。
【０１５７】
化合物１０、Ｅ＝Ｃｂｚ−Ｔ：
収率：７２％。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：１１．２７（ｓ，ｂｒ，１Ｈ）；７．３５（ｍ，６Ｈ）；６．８８（ｍ，１Ｈ）；５．０７（ｓ，２Ｈ）；４．６５−４．４８（ｍ，２Ｈ）；４．３７及び４．３８（２ｍ，合計  １Ｈ）；３．９４（ｍ，４Ｈ）；３．４５−３．１７  （ｍ，８Ｈ）；２．１１−１．３０（ｍ，８ｈ）；１．７５（ｓ，３Ｈ）；１．３８及び１．３６（２ｓ，合計  ９Ｈ）；１．１９（ｍ，６Ｈ）。
31Ｐ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：２９．６４及び２９．２６ｐｐｍ。
【０１５８】
実施例１１：一般式（ＩＩＩ）又は（ＶＩ）の本発明のオリゴマー化合物の調製
一般式（Ｉ）の適当な化合物と、Ｎ−アセチル−Ｎ−（２−アミノエチル）グリシンビルディングブロック、アミノ酸、アミノ酸誘導体及びＢ−ＣＨ（Ｒ48）ＣＯＯＨから選択されるモノマーユニットとの逐次連結による固相ペプチド合成により、本発明のオリゴマーが調製される。
【０１５９】
一般式（ＩＶ）のオリゴマー化合物において、一般式（Ｖ）であるユニットＺの表示を容易にするために、例としてＴR、ＣR、ＧR、ＡR、ＰR、ＴS、ＣS、ＧS、ＡS及びＰSを略語として使用する。ここで、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ａ及びＰ（フェニル）は、それぞれのモノマーユニットの核酸塩基を表し、上付き文字Ｒ又はＳは、一般式（Ｖ）であるユニットＺの不斉中心（＃）におけるＲ配置又はＳ配置を表す。
【０１６０】
核酸塩基の大文字及び上付き文字構成（例えば、ＡR）の代わりに対応する小文字ａが使用されるという違いはあるが、Ｎ−アセチル−Ｎ−（２−アミノエチル）グリシンビルディングブロックからなるモノマーは、上記一般式（Ｖ）のモノマーと同様に省略される。例として、核酸塩基としてのＣを有するモノマーをｃと略記する。
【０１６１】
実施例１２：基Ｂ−ＣＨ（Ｒ48）ＣＯＯＨとしての４−フルオロフェニル−アセテート置換基を有する一般式（ＩＩＩ）又は（ＶＩ）のオリゴマー化合物の調製
固相ペプチド合成による本発明の化合物の製造のために、以下の合成プロトコールが使用される：
ステップ１：ジクロロメタン中の１０ｍｇの樹脂（ＭＢＨＡ樹脂、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ、約０．５〜０．６ｍｍｏｌ／ｇの低負荷）を３時間、予め浸漬する。
ステップ２：合成サイクルを開始する：ジクロロメタンで４回洗浄する。
ステップ３：樹脂を中和する。ジクロロメタン／ＤＩＰＥＡ（５％）で３回洗浄する。
ステップ４：ジクロロメタンで５回洗浄する。
ステップ５：ＮＭＰで５回洗浄する。
ステップ６：ＮＭＰ／ピリジン（２：１）中の３．８当量のＨＡＴＵ及び９当量のＮＭＭを用いて４当量の対応する保護化合物（一般式（Ｉ）の化合物／ＰＮＡ−モノマー／アミノ酸／アミノ酸誘導体）を、１分間予備活性化する(pre-activation)。
ステップ７：活性化された保護化合物（一般式（Ｉ）の化合物／ＰＮＡ−モノマー／アミノ酸／アミノ酸誘導体）を固相と反応させる（第１カップリング；反応時間：６０分）。
ステップ８：ＮＭＰで４回洗浄する。
ステップ９：ステップ６〜８を繰り返す（第２カップリング）。
ステップ１０：ニンヒドリンとのカップリング効率を調べる（カイザー試験；カイザー試験がポジティブであれば、対応する保護化合物（一般式（Ｉ）の化合物／ＰＮＡ−モノマー／アミノ酸／アミノ酸誘導体）を用いてステップ６〜８を繰り返さなければならない。
ステップ１１：ネガティブを示したカイザー試験後、Ａｃ2Ｏ／ＮＭＰ／ピリジン（１：２５：２５）の溶液で１０分間で１回キャッピングする。
ステップ１２：ＮＭＰで５回洗浄する。
ステップ１３：溶媒をジクロロメタンに切り替え、ＤＣＭで５回洗浄する。
ステップ１４：ＴＦＡ／ｍ−クレゾール（９５：５）との反応によるＢｏｃ分割をする。反応時間：各２×３分
ステップ１５：ＤＣＭで５回洗浄する。
ステップ１６：溶媒をＮＭＰに切り替える。ＮＭＰで５回洗浄する。
ステップ１７：対応する最後の保護化合物（一般式（Ｉ）の化合物／ＰＮＡ−モノマー／アミノ酸／アミノ酸誘導体）とカップリングするための合成サイクル（ステップ６〜１６）を繰り返す。次に、対応する最後の保護化合物（一般式（Ｉ）／ＰＮＡ−モノマー／アミノ酸／アミノ酸誘導体の化合物）とカップリングするために、必要に応じて合成サイクル（ステップ６〜１６）を繰り返す。
ステップ１８：ジクロロメタンで５回洗浄する。
ステップ１９：ＴＦＡ／ｍ−クレゾール（９５：５）との反応によるＢｏｃ分割をする。反応時間：それぞれ２×３分。
ステップ２０：ジクロロメタンで５回洗浄する。
ステップ２１：ＮＭＰで５回洗浄する。
ステップ２２：ＮＭＰ／ピリジン（２：１）中の５．７当量のＨＡＴＵ及び１３当量のＮＭＭを用いて６当量の４−フルオロフェニル−酢酸を１分間予備活性化する。
ステップ２３：活性化された４−フルオロフェニル−酢酸を固相と反応させる（反応時間：６０分）。
ステップ２４：ＮＭＰで４回洗浄する。
ステップ２５：必要に応じて、ステップ２３〜２４（第２のカップリング）を繰り返す。
ステップ２６：ジクロロメタンで５回洗浄する。
ステップ２７：乾燥のために、ジエチルエーテルで５回洗浄する。
一般式（ＩＩＩ）又は（ＶＩ）の化合物が得られ、樹脂のＣ末端に結合される。
【０１６２】
樹脂からの本発明の一般式（ＩＩＩ）又は（ＶＩ）の化合物の分割：
本発明の化合物を含む樹脂を、トリフルオロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸、チオアニソール及びエタンジチオール（８５／１２．５／１．７／０．８、ｖ／ｖ／ｖ／ｖ）の溶液中で２時間振とうする。液相を濾別し、冷たいエーテルを加えて粗生成物を沈殿させる。粗生成物は、サイズ排除クロマトグラフィーによって脱塩される。粗生成物を、メタノール／水を含むＲＰ−Ｃ１８カラムによる分取ＨＰＬＣによって精製する。本発明の化合物は、約５０％の収率で無色の固体として得られる。本発明の化合物の質量は、ＨＰＬＣ−ＥＳＩにより特徴付けられる。
【０１６３】
実施例１３：一般式（ＩＩＩ）又は（ＶＩ）の化合物の調製例
実施例１２の一般的手順に従って、一般式（ＩＩＩ）又は（ＶＩ）のオリゴマー化合物が得られ、これは以下のように略記される：
例えば、Ｒ−配置の不斉中心を有する一般式（Ｉ）のモノマー、他のＰＮＡモノマー及びアミノ酸であるＬ−リジン（略してＬｙｓL）を有する本発明のオリゴマー化合物が調製される。前記の最終ステップでリジンのα−アミノ官能基をアセチルでキャップし、最後に、Ａｃ−ＬｙｓL−ｃＣRｇＧRｇＧRｔｃｇｃａＧRｃＴRｇＧR−ＮＨ2と略記される本発明のオリゴマー化合物が第１級アミドとして樹脂から分離する。
例えば、Ｒ−配置の不斉中心を有する一般式（Ｉ）のモノマー、他のＰＮＡモノマー及びアミノ酸であるグリシン（略してＧｌｙ）を有する本発明のオリゴマー化合物が調製される。前記の最終ステップでリジンのα−アミノ官能基をフェニルアセテート（略してＰａｃ）でキャップし、最後に、Ｐａｃ−Ｇｌｙ−ａｇｃｃｃＴSａａｃＴSｇｃａｃＴSＴSｃｃａＴS−ＮＨ2と略記される本発明のオリゴマー化合物が第１級アミドとして樹脂から分離する。
例えば、Ｒ−配置の不斉中心を有する一般式（Ｉ）のモノマー、他のＰＮＡモノマー及びアミノ酸であるＤ−リジン（略してＬｙｓD）を有する本発明のオリゴマー化合物が調製される。前記の最終ステップでリジンのα−アミノ官能基を４−フルオローフェニルアセテート（略してＦｌｕＰａｃ）でキャップし、最後に、ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓD（ＡＴＴＯ６４７）−ｃＣRｇＧRｇＧRｔｃｇｃａＧRｃＴRｇＧR−ＮＨ2と略記される本発明のオリゴマー化合物が第１級アミドとして樹脂から分離する。該化合物が有するリジンのε−アミノ官能基は、蛍光染料ＡＴＴＯ６４７とカップリングしている。
その他の蛍光染料の例としては、ＡＴＴＯ、ＭｅｇａＲｅｄ、Ａｌｅｘａ、ＢＯＤＩＰＹ及びＴＡＭＲＡが挙げられる。
【０１６４】
以下は、調製された一般式（ＩＶ）の本発明の化合物の例である：
Ｐａｃ−ＬｙｓL−ａｇｃｃｃＴRａａｃＴRｇｃａｃＴRＴRｃｃａＴR−ＮＨ2
Ｐａｃ−ＬｙｓL−ＴRＴRｃｃａＴRｃｃＴRＴRｇｇａｇｃＴRＴRｇｇｃＴR−ＮＨ2
Ｐａｃ−ＬｙｓL−ｃＴRａａｃＴRｇｃａｃＴRＴRｃｃａＴRｃｃＴRＴR−ＮＨ2
Ｐａｃ−ＬｙｓL−ＴRＴRｃｃｃａｇｃｃｃＴRａａｃＴRｇｃａｃＴR−ＮＨ2
Ｐａｃ−ＬｙｓL−ｇａｃｃｃＴRＴRｃｃｃａｇｃｃｃＴRａａｃＴR−ＮＨ2
Ｐａｃ−ＬｙｓL−ｇｇＴRａｇａｃｃｃＴRＴRｃｃｃａｇｃｃｃＴR−ＮＨ2
Ｐａｃ−ＬｙｓL−ＴRＴRｃｇＴRｃｃａＴRｇｇｃｃｇｇｇｇＴRｃｃ−ＮＨ2
Ｐａｃ−ＬｙｓL−ＴRＴRｃｇＴRｃｃａｇＴRｇｃｃｇｇｇｇＴRｃｃ−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｃＣRｇＧRｇＧRｔｃｇｃａＧRｃＴRｇＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｃＣRｇＧRｇＧRｔｃｃｃｇＧRｇＧRｇＣR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＣＣRａＴRｇＧRｃｃｇｇｇＧRｔＣRｃＣR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＧＴRｔＣRｇＴRｃｃａｔｇＧRｃＣRｇＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＧＧRｇＧRｇＡRａｃａｇｔＴRｃＧRｔＣR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＧＡRＧＧRｇＧRｇｇａａｃａＧRｔＴRｃＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＣＧRｇＧRａＡRｇａｔｇａＧRｇＧRｇＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＡＧRａＧRｇＣRｃｔｇｇｇＣRｔＧRｇＣR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｃＣRａＣRａＴRａｇｇｇｇＣRｃＡRｇＡR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｔＴRｇＧRｇＣRｔｇｃｔｃＡRａＴRｇＡR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｃＧRｃＧRｇＡRｇｃｇｃｃＣRｃＴRｃＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｔＧRｇＧRｇＴRｇｇｇｔｃＴRｔＧRｇＴR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｇＴRｃＧRｃＴRｇｔｃｔｃＣRｇＣRｔＴR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ａＧRｃＴRｇＡRｃｃｃｔｇＡRａＧRｔＴR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ａＧRｃＴRｇＡRｃｃｔｇｃＡRａＧRｔＴR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｃＣRｇＧRｇＧRｔｃｇｃａＧRｃＴRＧＡR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｇＣRｃＧRｇＧRｇｔｃｇｃＡRｇＣRｔＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｃＣRａＴRｇＧRｔｃａｇｇＧRｔＣRｃＣR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｇＣRｃＴRｇＧRｇｃｔｇｇＣRｔＣRｔＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｃＣRａＣRａＴRａａｇｇｃＣRｃＡRｇＡR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｔＧRｇＴRｇＧRｔａｔｃｔＧRｔＧRｃＴR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｔＴRｇＡRｔＣRｔｔｇａｔＧRｇＴRｇＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｔＧRｇＧRｇＴRｇｇｇｔｃＴRｔＧRｇＴR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｃＣRｔａｔＣRａＣRｇＡRｔｔａｇｃＡRｔＴRａＡR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｃＣRｃａｔＧRｇＡRａＴRｔｃａｇｔＴRｃＴRｃＡR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｃＣRｔａｔＣRＡＣRｇＡRｔａｔｇｃＴRａＴRａＡR−ＮＨ2
Ａｃ−ＬｙｓL−ｃＣRｇＧRｇＧRｔｃｇｃａＧRｃＴRｇＧR−ＮＨ2
ＴＭＬ−ＬｙｓL−ｃＣRｇＧRｇＧRｔｃｇｃａＧRｃＴRｇＧR−ＮＨ2（ＴＭＬ＝ε−トリメチル−リジン）
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｇＴRｃＧRｃＴRｇｔｃｔｃＣRｇＣRｔＴR−ＮＨ2
Ａｃ−ＬｙｓL−ｇＴRｃＧRｃＴRｇｔｃｔｃＣRｇＣRｔＴR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｃＣRｇＧRｇＧRｔｇｃｃａＧRｃＴRｇＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｃＣRｇｇＧRｇｔｇｃｃＡRｇｃｔＧRｇ−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｃＣRａＣRａＡRｔｃａｇｔＣRｃＴRａＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｃＡRｇＴRｃＣRｔａｇａａＡRｇＡRａＡR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ａＣRｔＴRｔＴRｃａｃｃｔＧRｇＧRｔＣR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｃＡRａＴRａＣRｔａｔｔｇＣRａＣRｔＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｇＣRｔＴRｔＧRａｃａａｔＡRｃＴRａＴR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｔＧRａＣRａＡRｔａｃｔａＴRｔＧRｃＡR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ａＧRｔＡRｔＴRｇｇａｃｃＣRｔＴRａＣR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｇＡRａＣRａＧRｔａｔｔｇＧRａＣRｃＣR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｇＡRａｃａＧRｔＡRｔＴRｇｇａｃｃＣRｔＴRａＣR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｔＣRａＧRｔＣRｔｇａｔａＡRｇＣRｔＡR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｔＣRａＡRｃＡRｔｃａｇｔＣRｔＧRａＴR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ａＣRａＴRｃＡRｇｔｃｔｇＡRｔＡRａＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ｃＣRｇＧRｇＧRｔＣRｇＣRａＧRｃＴRｇＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL（ＡＴＴＯ６４７）−ｃＣRｇＧRｇＧRｔｃｇｃａＧRｃＴRｇＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL（ＭｅｇａＲｅｄ）−ｃＣRｇＧRｇＧRｔｃｇｃａＧRｃＴRｇＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL（ＡＴＴＯ６４７）−ｃＣRｇＧRｇＧRｔＣRｇＣRａＧRｃＴRｇＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL（ＭｅｇａＲｅｄ）−ｃＣRｇＧRｇＧRｔＣRｇＣRａＧRｃＴRｇＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ｇＧRｃｃａＡRａＣRｃＴRｃｇｇｃｔＴRａＣRｃＴR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ｇＧRｃｃａＡRａＣRｃＴRｇｃｇｃｔＴRａＣRｃＴR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL（ＡＴＴＯ）−ｃＣRｇＧRｇＧRｔｃｇｃａＧRｃＴRｇＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL（ＡＴＴＯ）−ｃＣRｇＧRｇＧRｔＣRｇＣRａＧRｃＴRｇＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL（ＡＴＴＯ）−ｃＣRｇＧRｇＧRｔｇｃｃａＧRｃＴRｇＧR−ＮＨ2
Ａｃ−ＬｙｓL（ＡＴＴＯ）−ｃＣRｇＧRｇＧRｔｃｇｃａＧRｃＴRｇＧR−ＮＨ2
Ａｃ−ＬｙｓL（ＡＴＴＯ）−ｃＣRｇＧRｇＧRｔｃｇｃａＧRｃＴRｇ−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL（ＡＴＴＯ）−ｇＴRｃＧRｃＴRｇｔｃｔｃＣRｇＣRｔＴR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL（ＡＴＴＯ）−ｃＣRｇｇＧRｇｔｇｃｃＡRｇｃｔＧRｇ−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL（ＡＴＴＯ）−ＣRｃｇｇｇＧRｔＣRｇＣRａｇｃｔｇＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL（Ａｌｅｘａ）−ｃＣRｇＧRｇＧRｔｃｇｃａＧRｃＴRｇＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL（ＢＯＤＩＰＹ）−ｃＣRｇＧRｇＧRｔｃｇｃａＧRｃＴRｇＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＧRｇＣRｃａａＡRｃｃｔｃｇＧRｃｔｔａｃＣRｔＧRａＡRａＴR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＧRｇＣRｃａａＡRｃｃｔｇｃＧRｃｔｔａｃＣRｔＧRａＡRａＴR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＡRｃＣRａＴRａｇｃｇａＧRｇＴRｇＡR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＧRａＣRｇＡRａｃｃａｔＡRｇＣRｇＡR−ＮＨ2
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ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＡRａＧRｃＡRｇｃｃｃｃＡRｇＡRｇＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＡRｇＣRｇＧRｔｃａｇｅＡRａＧRｃＡR−ＮＨ2
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ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＡRｔＴRｇＧRａｇａａｇＡRａＧRｃＣR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＴRｇＡRｃＡR１１１１１ＣRｇＡRａＡR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＴRｇＴRｃＣRａａｇｇｇＴRｇＡRｃＡR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＣRｔＴRｇＴRｃｃａａｇＧRｇＴRｇＡR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＡRｃＣRｔＴRｇｔｃｃａＡRｇＧRｇＴR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＡRｔＡRｃＣRｔｔｇｔｃＣRａＡRｇＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＣRｔＴRａＴRａｃｃ１１ＧRｔＣRｃＡR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＡRｃＴRｇＣRａａｃｃｔＣRｃＡRｃＣR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＴRｃＡRｃＴRｇｃａａｃＣRｔＣRｃＡR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＣRａＧRｃＴRｃａｃｔｇＣRａＡRｃＣR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＣRｔＣRａＧRｃｔｃａｃＴRｇＣRａＡR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＡRｔＣRｔＣRａｇｃｔｃＡRｃＴRｇＣR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＣRｇＡRｔＣRｔｃａｇｃＴRｃＡRｃＴR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＣRｇＣRｇＡRｔｃｔｃａＧRｃＴRｃＡR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＧRｇＣRｇＣRｇａｔｃｔＣRａＧRｃＴR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＧRｔＧRｇＣRｇｃｇａｔＣRｔＣRａＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＣRｔＣRａＧRｃｔｃａｃＴRｇＣRａＡR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＧRａＴRｇＧRｃａａａｃＡRｇＧRａＴR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＣRａＣRｃＡRａｇａｇｇＡRｔＧRｇＣR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＡRｇＡRｃＣRａｇｃａｃＣRａＡRｇＡR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＡRｃＴRｃＡRｃｔｇａｔＡRａＡRｇＡR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓL−ＣRｃＴRｇＡRｇｇａｃｔＣRａＣRｔＧR−ＮＨ2
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ＭＮ＝４−ヒドロキシ−３−ニトロ−フェニルアセテート−ラジカル
ＭＮ−ＬｙｓL（ＴＡＭＲＡ）−ｔＧRｃＣRｔＡRｇｇａｃｔＣRｃＡRｇＣR−ＮＨ2
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ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓD−ｃＣRａＣRａＡRｔｃａｇｔＣRｃＴRａＧR−ＮＨ2
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ＦｌｕＰａｃ−Ｇｌｙ−ＣRｃａＣRａＡRｔｃａｇｔＣRｃＴRａＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−Ｇｌｙ−ＣRｃａＣRａＡRｔｃａｇｔＣRｃＴRａｇ−ＮＨ2
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ＦｌｕＰａｃ−Ｇｌｙ−ｃｃａＣRａＡRｔｃａｇｔＣRｃＴRａｇ−ＮＨ2
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ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓD（ＡＴＴＯ）−ｃＣRｇＧRｇＧRｔｃｇｃａＧRｃＴRｇＧR−ＮＨ2
Ａｃ−ＬｙｓD（ＡＴＴＯ）−ｃＣRｇＧRｇＧRｔｃｇｃａＧRｃＴRｇＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓD（ＡＴＴＯ）−ｃＣRｇｇｇｇｔｃｇＣRａＧRｃＴRｇＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓD（ＡＴＴＯ）−ａＧRａＧRｃＡRｇａａｃｃＴRｔＡRｃＴR−ＮＨ2
Ａｃ−ＬｙｓD（ＡＴＴＯ）−ａＧRａＧRｃＡRｇａａｃｃＴRｔＡRｃＴR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓD（ＡＴＴＯ）−ａＧRａｇｃａｇａａＣRｃＴRｔＡRｃＴR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓD（ＡＴＴＯ）−ｃＣRａＣRａＡRｔｃａｇｔＣRｃＴRａＧR−ＮＨ2
Ａｃ−ＬｙｓD（ＡＴＴＯ）−ｃＣRａＣRａＡRｔｃａｇｔＣRｃＴRａＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓD（ＡＴＴＯ）−ｃＣRａｃａａｔｃａＧRｔＣRｃＴRａＧR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓD（Ｃｈｏｌ）−ｇＡRｇＡRｇＣRａｇａａｃＣRｔＴRａＣR−ＮＨ2
【化３５】
0006546272.tif 000037
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓD（Ｆｏｌ）−ｇＡRｇＡRｇＣRａｇａａｃＣＣRｔＴRａＣR−ＮＨ2
【化３６】
0006546272.tif 000038
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓD（Ｄａｎｓ）−ｇＡRｇＡRｇＣRａｇａａｃＣRｔＴRａＣR−ＮＨ2
【化３７】
0006546272.tif 000039
ＦｌｕＰａｃ−Ｇｌｙ−ａＧRａＧRｃＡRｇａａｃｃＴRｔＡRｃ−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−Ｇｌｙ−ａＧRａＧRＣａRｇａａｃｃＴRｔＡRｃＴR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓD−ｇＡRｇＣRａＧRａａｃｃｔＴRａＣRｔＴR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−ＬｙｓD−ｇＡRｇａＧRｃａｇａａＣRｃｔｔａRｃ−ＮＨ2
Ａｃ−ＬｙｓD−ｇＡRｇａＧRｃａｇａａＣRｃｔｔａRｃ−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−Ｇｌｙ−ｇＡRｇｃＡRｇａａｃｃＴRｔａｃＴRｔ−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−Ｇｌｙ−ｃａｇｔｃｃＴRａＧRａＡRａｇａａａ−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−Ｇｌｙ−ｇＧRｃｃａＡRａＣRｃＴRｃｇｇｃｔＴRａＣRＴR−ＮＨ2
ＦｌｕＰａｃ−Ｇｌｙ−ｃａｇｔｃｃＴRａＧRａＡRａｇａａａ−ＮＨ2
【０１６５】
実施例１４：様々な臓器／組織における改善されたバイオアベイラビリティ及び延長された半減期
3Ｈ標識Ｎ−Ｐｈｏｓオリゴマー及び3Ｈ標識ＥＰ２０４１１６１オリゴマーはそれぞれＰＢＳ（ｐＨ７．１）に溶解され、静脈内ボーラス注射によって１０ｍｇ／ｋｇの濃度でマウスに投与される。種々の時点（２０分、１．５時間、３時間、６時間、２４時間、２日、４日、８日及び１４日）で、血液及び１８の異なる臓器／組織（腎臓、肝臓、脾臓、骨髄、リンパ節、肺、大腸、小腸、膵臓、膀胱、心臓、胸腺、胃、筋肉、大脳、小脳、前立腺及び皮膚）をマウスから除去し、それぞれの組織中の3Ｈ濃度を測定した。薬物動態解析は、承認されているprofessional WinNonlin software,Version 4.0.1(Pharsight Corporation, Mountain View,USA)を用いて行った。臓器／組織におけるバイオアベイラビリティ（曲線の下の面積として表される）及び半減期を計算するために、各臓器／組織における放射能（サンプリングサイトあたり３匹の平均）を、区画を想定しないで経時的に評価した。すべての組織において3Ｈ標識Ｎ−Ｐｈｏｓオリゴマーのバイオアベイラビリティは3Ｈ標識ＥＰ２０４１１６１オリゴマーのバイオアベイラビリティと比較して１４時間にわたって１．７〜４．６倍増加したことが見出された。そのことは図１から明らかである。ほとんどの組織において、１４時間にわたって3Ｈ標識Ｎ−Ｐｈｏｓオリゴマーの半減期は、3Ｈ標識ＥＰ２０４１１６１オリゴマーの半減期と比較して長く、特に脾臓では２倍以上であることも見出された。そのことは図２から明らかである。
【０１６６】
実施例１５：血漿タンパク質への結合の増加
ヒト血清アルブミンへの結合は、Ｃｈｒｏｍｔｅｃｈ社の５ｃｍＨＰＬＣカラム（４．０×５０ｍｍ、５μｍ）で測定した。ヒト血清アルブミンはこのカラムに固定されているので、保持時間を超えるとヒト血清アルブミンに対する結合親和性を測定することができる。溶離液として３０％イソプロパノール／酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ７）を使用した。親和定数は、次の式を使用して計算される：
ｋ’＝（ｔｒ−ｔｍ）／ｔｍ
ｔｒ＝試料の保持時間
ｔｍ＝アセトアミノフェンの保持時間
この値を用いて、ヒト血清アルブミンに対する結合（％）を以下のように計算することができる：
Ｐ＝１００（ｋ’／（ｋ’＋１））
より高い値はインビボで有利な分布を示す。以下の表は、ＥＰ２０４１１６１オリゴマーと比較して、血清アルブミンに対するＮ−Ｐｈｏｓオリゴマーの有意に強い結合を例示している。
【０１６７】
【表２】
0006546272.tif 000040
【０１６８】
実施例１６：改善された配列非依存的水溶性
様々なＮ−ｐｈｏｓオリゴマー及びＥＰ２０４１１６１オリゴマーを測り、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）を加えて理論上１００μＭの溶液となるようにする。次に、得られた溶液のＯＤ値を測定する。次いで、Ｎ−ｐｈｏｓオリゴマー及びＥＰ２０４１１６１オリゴマーのＯＤ値を互いに比較する。より高いＯＤ値はより高い溶解分子数に対応し、したがってより高い溶解度に対応する。１００μＭ溶液を調製する場合、ＥＰ２０４１１６１オリゴマーは、その配列が多数のグアニン及びシトシン塩基を含んでいるため、オリゴマー化合物がＰＢＳ中に完全に溶解している１００μＭ溶液を調製することができないが、Ｎ−ｐｈｏｓオリゴマーはＰＢＳ中に完全に溶解する。以下の表は、ＥＰ２０４１１６１オリゴマーと比較してＮ−ｐｈｏｓオリゴマーの配列非依存的水溶性が驚くほど有意に増加することを示している。
【０１６９】
【表３】
0006546272.tif 000041
【０１７０】
【表４】
0006546272.tif 000042
【０１７１】
実施例１７：相補的ＤＮＡへの強力な結合
Ｎ−Ｐｈｏｓオリゴマー又はＥＰ２０４１１６１オリゴマー及び配列相補的ＤＮＡオリ
ゴマーは、マグネシウムを含まず及びカルシウムを含まない生理学的ＰＢＳ緩衝液中で等
モル比で溶解する。ＵＶ分光計で０．８のＯＤ値を測定するまで溶液を希釈する。配列相補的ＤＮＡオリゴマーについては、配列表の配列番号１に示すものを用いた。加熱浴を用いて、ＵＶ分光計中のキュベットを室温から９５℃まで１℃ステップで徐々に加熱する。各１℃ステップの後、ＯＤ値が決定される。融点は得られた曲線の変曲点によって与えられる。以下の表は、Ｎ−Ｐｈｏｓオリゴマーが、対応するＥＰ２０４１１６１オリゴマーよりも高い融点を有することを示している。したがって、Ｎ−Ｐｈｏｓオリゴマーは、配列相補的ＤＮＡオリゴマーに対してより安定な結合を形成する。
【０１７２】
【表５】
0006546272.tif 000043
【０１７３】
実施例１８：ＨｅＬａ細胞におけるＮＦｋＢのダウンレギュレーション
８００細胞／ウェルの密度を有するＧｒｅｉｎｅｒμＣｌｅａｒ３８４ｗプレートに播種したＨｅＬａ細胞（供給源ＤＳＭＺ）の培養の２日後に、ＰＢＳに溶解したＮ−ｐｈｏｓオリゴマー又はＥＰ２０４１１６１オリゴマーを添加し、それぞれの場合において、完全培地中において、０．５，２．５及び１０μＭの最終濃度が得られるようにする。細胞播種後５日目に、２０μｌ／ウェルの新鮮な完全培地を添加する。７日目に、０．１％のＦＣＳを含む飢餓培地への変更が行われる。８日目に、細胞の刺激のために、１０ｎｇ  ／ｍｌのＴＮＦα（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ社）を培地（０．１％ＦＣＳ、抗生物質なし）に添加し、細胞は、形態学的分析（４％ＰＦＡ）及び細胞核及び細胞質のような最も重要な細胞下構造の表示のために、適切な色素及び抗体で着色され、３０分後に固定される。画像処理は、ＩｍａｇｅＸＰｒｅｓｓ  Ｍｉｃｒｏ自動顕微鏡（ＭＤＣ）で行われる。画像解析は、ＭｅｔａＭｏｒｐｈ（ＭＤＣ）ソフトウェアで視覚的に、特定のアルゴリズムを使用して自動画像解析ソフトウェアＤｅｆｉｎｉｅｎｓ  ＸＤ（Ｄｅｆｉｎｉｅｎｓ）で定量的に実行される。このようにして、Ｈｏｅｃｈｓｔ色素による発色によって、細胞核の数が決定され、これは、細胞増殖の程度、したがってオリゴマー化合物によるＮＦｋＢのダウンレギュレーションの代用として機能する。以下の表は、細胞核の数のより低い値に基づいて、特に２．５μＭ及び１０μＭの濃度で、ＮＦｋＢの増加したダウンレギュレーションに基づくＮ−ｐｈｏｓオリゴマーの遺伝子発現に対する影響がＥＰ２０４１１６１オリゴマーと比較して良好であることを示している。
【０１７４】
【表６】
0006546272.tif 000044
【０１７５】
実施例１９：ＴＨＰ１細胞における標的ＴＮＦＲ２（エクソン７スキッピング）のより強力なスプライス部位調節
オリゴマー化合物の有効性試験は、ＡＴＣＣ（ＡＴＣＣ  ＴＩＢ−２０２（商標））からのＴＨＰ１細胞培養で実施される。ＴＨＰ１は、急性単球性白血病患者のヒト単球細胞株である。抗生物質を使用せずにＴＨＰ１細胞培養物（１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地中）を実施する。マイコプラズマ試験（Ｍｉｎｅｒｖａ社のＶｅｎｏｒ  ＧｅＭ−Ｋｉｔを使用）は頻繁に実施される。１日目に、マルチドロップディスペンサーを用いて、ＧｒｅｉｎｅｒコラーゲンＩ  ３８４Ｗプレート（＃７８１９５６）に１３，０００細胞／ウェルで、ＰＭＡを添加してＴＨＰ１細胞を配列する。このステップでは、細胞を、１０％血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを含む完全培地中で処理する。播種後、ＰＭＡ（Ｓｉｇｍａ＃Ｐ８１３９）を１００ｎＭで添加する。４日目に、培養培地の交換後、オリゴマーを０．２、２及び２０μＭの濃度で添加する。６日目に１００Ｕ／ｍｌ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）のＴＨＰ１  ＩＮＦｊを添加し、２４時間ＩＦＮ−γで細胞を条件付けをする。７日目に、細胞培養培地の交換後、飢餓培地（０．１％ＦＣＳ）中に５μｇのＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ）を加え、培養物を２４時間刺激する。８日目に、ＴＨＰ１細胞を溶解緩衝液（Ｓｔｒａｔｅｇ  Ｓ）（＃７０６１３１１７００）で溶解し、溶解物を−８０℃で保存する。９日目に、ＲＮＡ  Ｓｔｒａｔｅｃ  ＩｎｖｉＴｒａｐ  ＲＮＡ抽出キットを用いて、細胞（＃７０６１３００４００）を抽出し、さらなる分析のために−８０℃で保存する。
【０１７６】
ＲＴ反応は、ＲＮａｓｅ阻害剤（＃Ｎ８０８０１１９）を含むＬｉｆｅＴｅｃｈ  Ｈｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  ｃＤＮＡキット（＃４３６８８１３）を使用して実施する。ｑＰＣＲは、Ｂｉｏｌｉｎｅ  ＳｅｎｓｉＭｉｘ  Ｓｙｂｒ  ｑＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒｍｉｘ（＃ＱＴ６０５−２０）を使用し、エクソン７の有無にかかわらず、ヒトＴＮＦＲ２アイソフォームのｍＲＮＡのための特異的プライマーを用いて、１１μｌの反応容量で実施する。ｑＰＣＲ反応は、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７９００ＨＴシステムで行う。ＲＴ−ｑＰＣＲデータは、各ウェルの増幅曲線に対して手動でチェックされる。標的遺伝子の相対的ｍＲＮＡは、Ｒｐｌ１３ａ参照遺伝子のｍＲＮＡ量に対して正規化される。
【０１７７】
試験したオリゴマー化合物の各濃度について、エクソン７を伴わないＴＦＮＲ２アイソフォームの発現に対するエクソン７を伴うＴＦＮＲ２アイソフォームの発現の比（パーセントで表した）（いずれの場合も常に参照遺伝子Ｒｐｌ１３ａの発現と比較して）が決定される。等価有効濃度ＥＣ５０は、Ｅｘｃｅｌ  ＸＬｆｉｔ．５アドイン（ＩＤＢＳ）の助けを借りて、個々の濃度データ（二次マッチング）に最も良く適合した曲線関数に基づいて計算される。
【０１７８】
以下の表は、ＴＮＦＲ２のスプライス部位調節において、Ｎ−ｐｈｏｓオリゴマーがＥＰ２０４１１６１オリゴマーよりも有意に低いＥＣ５０値を有することを示している。
【０１７９】
【表７】
0006546272.tif 000045
【０１８０】
実施例２０：マウスにおける標的ＴＮＦＲ２（エクソン７スキッピング）のスプライス部位調節
第１、３及び５日目に、ＢａｌＢ／Ｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ）株の５匹のマウスを含む処置群に、５０ｍｇ／ｋｇのＮ−Ｐｈｏｓオリゴマー又はＰＢＳのいずれかを同じ容量で静脈注射した。８日目に、１５ｍｇ／ｋｇのＬＰＳ〔エンドトキシン値が５００，０００ＥＵ（エンドトキシン単位）／ｍｇ以上の大腸菌血清型φ１２７のフェノール−ＬＰＳ：Ｂ８、Ｓｉｇｍａ  Ｃａｔ＃Ｌ３１２９）〕の炎症反応の刺激が行われる。ＬＰＳ刺激の３時間後、動物を殺し、脾臓及び腸間膜リンパ節のそれぞれ３０ｍｇを調製し、液体窒素中で直ちに凍結する。組織サンプルは、さらなる処理まで冷凍庫中で−８０℃で保存される。ＲＮＡ抽出のために、３０ｍｇ未満の組織断片（メスで余分な組織を除去した後）を直ちに、３００μｌのＱＩＡｚｏｌ試薬及びステンレススチールビーズ（Ｑｉａｇｅｎ  ｃａｔ＃６９９８９）を含むチューブに移して溶解させる。組織サンプルからのＲＮＡの抽出は、Ｑｉａｇｅｎ  ＲＮｅａｓｙ  ９６  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ＃７４８８１）を用いて、製造業者の手順に従って行う。得られたＲＮＡを、その後の使用まで−８０℃で保存する。ｑＰＣＲ分析において、ＲＴ反応のために、ＲＮアーゼ阻害剤、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（カタログ番号４３７４９６６）を有する高容量ｃＤＮＡ逆転写キットを製造業者の手順に従って使用する。ｑＰＣＲ反応混合物は、Ｂｉｏｌｉｎｅ  ＳｅｎｓｉＭｉｘ  ＳＹＢＲ  Ｍａｓｔｅｒｍｉｘ（＃ＱＴ６０５−２０）、１１μｌ反応容積、ＳｙｂｒＧｒｅｅｎに基づく同定及び事前検証された転写産物特異的プライマー対により３回で調製する。リアルタイムＰＣＲ反応は、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７９００ＨＴシステムを用いて行う。ＲＴ−ｑＰＣＲデータを手作業でチェックし、ＲＮＡ参照遺伝子Ｒｐｌ１３ａのｍＲＮＡ量に基づいて標的ｍＲＮＡの量を正規化した。エクソン７を含まないマウスのＴＮＦＲ２遺伝子のｍＲＮＡアイソフォームである標的ｍＲＮＡの発現レベルを、５匹のマウスの試験群からのマウスのそれぞれについて、Ｒｐｌ１３ａに対して正規化した脾臓又は腸間膜リンパ節の３倍の測定の５メジアンの中央値として測定した。
【０１８１】
【表８】
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【０１８２】
実施例２１：ＴＨＰ１細胞における標的ＴＮＦＲ２（エクソン７スキッピング）のスプライス部位調節における本発明のＮ−ｐｈｏｓオリゴマー、ＥＰ２０４１１６１オリゴマー及びＵＳ５７１９２６２オリゴマー間の有効性比較
実験は、実施例１９に記載したようにして行った。結果を以下の表及び図３に示す。ＵＳ５７１９２６２オリゴマーによるＴＨＰ１細胞における標的ＴＮＦＲ２の調節が事実上ゼロであるのに対し、本発明のＮ−Ｐｈｏｓオリゴマーは、ＥＰ  ２０４１１６１オリゴマーと比較して、ＴＨＰ１細胞における標的ＴＮＦＲ２のスプライス部位調節において２．６倍強力な効果を示す。
【０１８３】
【表９】
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【０１８４】
実施例２２：マウスの肺における標的ＴＮＦＲ２（エクソン７スキッピング）のスプライス部位調節に関する異なるラジカルＵを有する本発明のＮ−ｐｈｏｓオリゴマーの効果
実験は実施例２０に記載したように行った。試験に供した、ラジカルＵである一般式（ＶＩＩ）及びＲ46としての式ＩＸｃの基（コレステロール誘導体）又はＩＸｄの基（葉酸誘導体）を有する式（ＶＩ）の本発明のＮ−ホスホオリゴマーは、ＴＮＦＲ２（エクソン７スキッピング）のスプライス部位調節における遺伝子発現に強力な効果を示す。
例として、コレステロール誘導体が使用される場合の肺における効果は、ＰＢＳネガティブコントロールと比較して５６０倍大きく、葉酸誘導体は３７８倍大きい。結果を図４に示す。
【０１８５】
実施例２３：マウスの腎臓、肝臓及び肺における標的ＴＮＦＲ２（エクソン７スキッピング）のスプライス部位調節に関し、本発明のＮ−Ｐｈｏｓオリゴマーにおける核酸塩基配列の相違、ラジカルＵ及び一般式（ＶＩ）の一般式（ＩＶ）及び（Ｖ）の基の数及び位置の相違による効果
この実験は、本発明のＮ−ｐｈｏｓオリゴマーＮ−Ｐｈｏｓ２３−１、Ｎ−Ｐｈｏｓ２３−２、Ｎ−Ｐｈｏｓ−２３−４（図５参照）を用いて行った。実験は実施例２０に記載したように行った。
種々のマウス組織（腎臓、肝臓及び肺）において、試験した本発明の全てのＮ−ＰＨＯＳオリゴマーは、エクソン７なしでｍＲＮＡアイソフォームの遺伝子発現に対して非常に強力な効果を示すことが実証されている。例えば、腎臓では、Ｎ−Ｐｈｏｓ２３−１の効果は、ＰＢＳネガティブコントロールより１，９８３倍大きい。結果を図５に示す。
【０１８６】
実施例２４：マウスの腎臓における標的ＴＮＦＲ２（エクソン７スキッピング）のスプライス部位調節における本発明のＮ−ＰｈｏｓオリゴマーとＥＰ２０４１１６１オリゴマーとの間の有効性の比較
Ｎ−Ｐｈｏｓオリゴマーの２つのバリアント（バリアント１：一般式（ＶＩ）中の繰り返しユニットＹd、Ｚf、Ｙg及びＺjの全ての合計が１５又は１４、バリアント２：一般式（ＶＩ）の一般式（ＩＶ）及び（Ｖ）の基の数及び位置が相違する）及びこれに対応するＥＰ２０４１１６１オリゴマーを試験する。試験されたバリアントを図６に示す。実験は実施例２０に記載したように実施したが、この実験では動物はＬＰＳ刺激の２時間後に既に殺されていたという違いがある。エクソン７を含まないｍＲＮＡアイソフォームの遺伝子発現に対するＮ−ｐｈｏｓオリゴマーの効果は、ＥＰ２０４１１６１オリゴマーと直接比較すると、１２．６倍又は６．７倍強力である。結果を図６に示す。
【０１８７】
実施例２５：ｍｄｘマウスの筋肉における標的ジストロフィン（エクソン２３スキッピング）のスプライス部位調節上の２０ビルディングブロックを有する本発明のＮ−Ｐｈｏｓオリゴマーのインビボ効果
実験は、２０のビルディングブロック（一般式（ＶＩ）の繰り返しユニットＹd、Ｚf、Ｙg及びＺjの全ての合計＝１９）を有する本発明のＮ−ＰＨＯＳオリゴマーを用いて行った。試験した化合物を図７に示す。この実験は、Ｃ５７ＢＬ／１０ＳｃＳｎ−Ｄｍｄｍｄｘ／Ｊ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ）株のマウスを使用し、動物をＬＰＳで刺激せず、それらを１５日目に殺したことを除いて、実施例２０に記載したように行った。エクソン２３を含まないマウスのジストロフィン遺伝子のｍＲＮＡアイソフォームの標的ｍＲＮＡの発現レベルを、Ｒｐｌ１３ａに正規化した筋肉の３倍の測定の５メジアンの中央値として決定した。
【０１８８】
２０のビルディングブロックを有する本発明のＮ−Ｐｈｏｓオリゴマーは、筋肉において、ＰＢＳコントロール群と比較してエクソン２３を含まないｍＲＮＡアイソフォームの遺伝子発現に対してインビボで９倍強力な効果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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