(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
日本人女性被験者由来のミトコンドリアＤＮＡ含有サンプル中のミトコンドリアＤＮＡのＡ、Ｂ、Ｄ４、Ｄ５、Ｆ、Ｇ、Ｍ７ａ、Ｍ７ｂ、Ｎ９ａ及びＮ９ｂから選ばれるハプログループを検出することを特徴とする該被験者の皮膚性状に関する遺伝子検出方法であって、次の（１）〜（１０）のうち、少なくとも１つに分類する遺伝子検出方法。
（１）ハプログループＡは上腕のハリが弱く、頬のたるみが多く、上腕及び頬の皮膚色が明るく、紫外線感受性が高く、シワが少なく、角層水分量が少ない、
（２）ハプログループＢは皮脂分泌量が少なく、頬の皮膚色の赤味が強く、頬のハリが弱く、シワが多い、
（３）ハプログループＤ４は上腕及び頬の皮膚色が暗く、赤味が少なく、紫外線感受性が低く、バリア機能が高い、
（４）ハプログループＤ５は上腕のハリが強く、上腕の皮膚色が暗い、
（５）ハプログループＦは上腕の皮膚のヘモグロビン量が少ない、
（６）ハプログループＧは上腕のたるみが多く、頬のたるみが少なく、ハリが強く、上腕の皮膚色が黄味が強い、
（７）ハプログループＭ７ａは頬の皮膚色の赤味が強く、メラニン量が多く、上腕のヘモグロビン量が多く、頬の皮膚色が暗く、頬のたるみが多い、
（８）ハプログループＭ７ｂは上腕の皮膚色の黄味が強く、皮脂分泌量が多く、バリア機能が低い、
（９）ハプログループＮ９ａは上腕の皮膚色が暗い、
（10）ハプログループＮ９ｂは上腕及び頬のヘモグロビン量が少なく、上腕の皮膚色が明るく、頬の皮膚色が明るく、赤味が弱く、上腕のたるみが多く、紫外線感受性が低い。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚性状判定のための遺伝子検出方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
個々のヒトにおける、皮膚の粘弾性が強い、皮膚色が明るい、紫外線に対する感受性が高い、シワが少ない、角層水分量が多い、皮脂分泌量が多い、バリア機能が高い等の皮膚性状を知ることは、健康状態の把握だけでなく、化粧料の選択、化粧方法の選択にとっても重要である。従来、これらの皮膚性状は、年齢、環境、食事等により変化するものと考えられており、個々の皮膚性状を実際に測定し、それに対応する処置や化粧が行なわれてきた。例えば、角層水分量や皮脂分泌量を測定し、その量によって化粧方法を決定することなどが行なわれてきた。
【０００３】
一方、ミトコンドリアＤＮＡの遺伝子多型のバリエーションを指標として、民族の分類、各種疾患との関連性が指摘されている。例えば、脳梗塞、心筋梗塞、２型糖尿病、メタボリック症候群等の危険性がミトコンドリアハプログループの検出により判定する方法が報告されている（特許文献１〜４等）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特許第５３９６５８６号公報
【特許文献２】特許第５３６０８５５号公報
【特許文献３】特許第５３６０８５４号公報
【特許文献４】特許第５３６０８５３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
皮膚性状に関する多くの項目をそれぞれ測定するのは煩雑であり、測定技術によって判定が困難であることから、個々の肌質（皮膚性状の一定の傾向）が一つの測定手段により判定できることが望ましい。
従って、本発明の課題は、皮膚性状の傾向を一つの手段により判定する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
そこで本発明者は、皮膚性状の傾向の判定手段につき種々検討し、９６２名の日本人女性のミトコンドリアＤＮＡのハプログループと皮膚性状との相関性を検討したところ、当該ハプログループを検出することにより、皮膚性状を判定できることを見出し、本発明を完成した。
【０００７】
すなわち、本発明は、被験者の皮膚性状を判定する目的で、当該被験者のミトコンドリアＤＮＡのハプログループを検出することを特徴とする遺伝子検出方法を提供するものである。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、ミトコンドリアＤＮＡのハプログループの検出により、個々のヒトの各種皮膚性状の傾向が予想できるため、皮膚の管理方法、例えば化粧料の選択等が容易になる。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明は、被験者の皮膚性状を判定する目的で、当該被験者のミトコンドリアＤＮＡのハプログループを検出することを特徴とする。
【００１０】
被験者としては、女性が好ましく、特に日本人女性が好ましい。
【００１１】
ミトコンドリアＤＮＡのハプログループの検出方法としては、従来公知の方法、例えばＤＮＡシークエンス、ＤＮＡチップ、ＤＮＡマイクロアレイ、ＲＦＬＰ、ＰＣＲ−ＳＳＯＰ−Ｌｕｍｉｎｅｘ法を用いることができるが、ＰＣＲ−ＳＳＯＰ−Ｌｕｍｉｎｅｘ法を用いるのが好ましい。ＰＣＲ−ＳＳＯＰ−Ｌｕｍｉｎｅｘ法は、前記の特許文献１〜４及びＩｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ（２００５）５７：７１７−７２９に記載されている。ハプログループ検出のためのミトコンドリアＤＮＡサンプルは、例えば血餅ＤＮＡを用いることができる。
【００１２】
ミトコンドリアＤＮＡのハプログループは、日本人の場合、Ａ、Ｂ、Ｄ４、Ｄ５、Ｆ、Ｇ１、Ｇ２、Ｍ７ａ、Ｍ７ｂ、Ｍ７ｃ、Ｎ９ａ、及びＮ９ｂの１２グループに分類されている（特許文献１〜４等）。当該各ハプログループ特有の遺伝子多型も既に知られている（特許文献１〜４等）。
【００１３】
本発明においては、日本人女性９６２名のミトコンドリアＤＮＡのハプログループと、皮膚性状との相関性を検討した。ミトコンドリアＤＮＡのハプログループＡ、Ｂ、Ｄ４、Ｄ５、Ｆ、Ｇ、Ｍ７ａ、Ｍ７ｂ、Ｎ９ａ及びＮ９ｂから選ばれる１０のグループと皮膚性状との間に相関性があることが認められた。
【００１４】
皮膚性状としては、皮膚粘弾性、皮膚色、紫外線感受性、シワ、角層水分量、皮脂分泌量及びバリア機能から選ばれる１種又は２種以上が挙げられる。皮膚粘弾性については、キュートメーター（Ｃｏｕｒａｇｅ ＋ Ｋｈａｚａｋａ社製）を用いて皮膚の粘弾性を測定し、Ｒ５（ハリ）、Ｒ６（たるみ）、Ｒ７（ハリ）を求めた。皮膚色については、分光測色計（ＣＭ−２６００ｄ、コニカミノルタセンシング(株)製）を用いて皮膚色（明るさ、赤味、黄味、）を測定した。また、皮膚色については、メラニン量指数、ヘモグロビン量指数も測定した。紫外線感受性については、皮膚に紫外線を照射し、翌日ＭＥＤ（肉眼的にもっとも軽い紅斑が出現するのに必要な紫外線エネルギー量：１ＭＥＤ＝６０〜８０ｍＪ／ｃｍ2）を判定した。シワについては、白色シルフロレプリカ剤（(株)アミックグループ製）を用いて目尻部のレプリカを採取し、非接触３Ｄ測定装置  ＰＲＩＭＯＳ  ＰＩＣＯ（ＧＦＭｅｓｓｔｅｃｈｎｉｋ社）を用いてシワパラメータ（最大シワ深さ(Ｒｚ)、最大シワ最大深さ（Ｒｍａｘ）、総シワ平均深さ（Ｒａ））を測定した。角層水分量については、コルネオメーター（Ｃｏｕｒａｇｅ ＋ Ｋｈａｚａｋａ社製）を用いて角層水分量を測定した。皮脂分泌量については、セブメーター（Ｃｏｕｒａｇｅ ＋ Ｋｈａｚａｋａ社製）を用いて測定した。バリア機能については、ＴＥＷＡメーター（Ｃｏｕｒａｇｅ ＋ Ｋｈａｚａｋａ社製）を用いて経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）を測定した。
【００１５】
その結果、ミトコンドリアＤＮＡのハプログループと皮膚性状との間には、相関性が認められ、具体的には、ハプログループの検出により以下の皮膚性状が判定できる。
（１）ハプログループＡのヒトは上腕のハリが弱く、頬のたるみが多く、上腕及び頬の皮膚色が明るく、紫外線感受性が高く、シワが少なく、角層水分量が少ないと判定する。
（２）ハプログループＢのヒトは皮脂分泌量が少なく、頬の皮膚色の赤味が強く、頬のハリが弱く、シワが多いと判定する。
（３）ハプログループＤ４のヒトは上腕及び頬の皮膚色が暗く、赤味が少なく、紫外線感受性が低く、バリア機能が高いと判定する。
（４）ハプログループＤ５のヒトは上腕のハリが強く、上腕の皮膚色が暗いと判定する。
（５）ハプログループＦのヒトは上腕の皮膚のヘモグロビン量が少ないと判定する。
（６）ハプログループＧのヒトは上腕のたるみが多く、頬のたるみが少なく、ハリが強く、上腕の皮膚色が黄味が強いと判定する。
（７）ハプログループＭ７ａのヒトは頬の皮膚色の赤味が強く、メラニン量が多く、上腕のヘモグロビン量が多く、頬の皮膚色が暗く、頬のたるみが多いと判定する。
（８）ハプログループＭ７ｂのヒトは上腕の皮膚色の黄味が強く、皮脂分泌量が多く、バリア機能が低いと判定する。
（９）ハプログループＮ９ａのヒトは上腕の皮膚色が暗いと判定する。
（10）ハプログループＮ９ｂのヒトは上腕及び頬のヘモグロビン量が少なく、上腕の皮膚色が明るく、頬の皮膚色が明るく、赤味が弱く、上腕のたるみが多く、紫外線感受性が低いと判定する。
【００１６】
本発明方法によれば、ミトコンドリアＤＮＡのハプログループ検出を行えば、そのヒトの皮膚性状の傾向が予想できるため、皮膚性状の管理、化粧方法等が決定できる。
【００１７】
上述した実施形態に関し、本発明はさらに以下の方法を開示する。
【００１８】
＜１＞被験者の皮膚性状を判定する目的で、当該被験者のミトコンドリアＤＮＡのハプログループを検出することを特徴とする遺伝子検出方法。
【００１９】
＜２＞皮膚性状が、皮膚粘弾性、皮膚色、紫外線感受性、シワ、角層水分量、皮脂分泌量及びバリア機能から選ばれる１種又は２種以上である＜１＞記載の遺伝子検出方法。
＜３＞ミトコンドリアＤＮＡのハプログループが、Ａ、Ｂ、Ｄ４、Ｄ５、Ｆ、Ｇ、Ｍ７ａ、Ｍ７ｂ、Ｎ９ａ及びＮ９ｂから選ばれるグループである＜１＞又は＜２＞記載の遺伝子検出方法。
＜４＞ハプログループＡのヒトは上腕のハリが弱く、頬のたるみが多く、上腕及び頬の皮膚色が明るく、紫外線感受性が高く、シワが少なく、角層水分量が少ないと判定する＜１＞〜＜３＞のいずれかに記載の遺伝子検出方法。
＜５＞ハプログループＢのヒトは皮脂分泌量が少なく、頬の皮膚色の赤味が強く、頬のハリが弱く、シワが多いと判定する＜１＞〜＜３＞のいずれかに記載の遺伝子検出方法。
＜６＞ハプログループＤ４のヒトは上腕及び頬の皮膚色が暗く、赤味が少なく、紫外線感受性が低く、バリア機能が高いと判定する＜１＞〜＜３＞のいずれかに記載の遺伝子検出方法。
＜７＞ハプログループＤ５のヒトは上腕のハリが強く、上腕の皮膚色が暗いと判定する＜１＞〜＜３＞のいずれかに記載の遺伝子検出方法。
＜８＞ハプログループＦのヒトは上腕の皮膚のヘモグロビン量が少ないと判定する＜１＞〜＜３＞のいずれかに記載の遺伝子検出方法。
＜９＞ハプログループＧのヒトは上腕のたるみが多く、頬のたるみが少なく、ハリが強く、上腕の皮膚色が黄味が強いと判定する＜１＞〜＜３＞のいずれかに記載の遺伝子検出方法。
＜10＞ハプログループＭ７ａのヒトは頬の皮膚色の赤味が強く、メラニン量が多く、上腕のヘモグロビン量が多く、頬の皮膚色が暗く、頬のたるみが多いと判定する＜１＞〜＜３＞のいずれかに記載の遺伝子検出方法。
＜11＞ハプログループＭ７ｂのヒトは上腕の皮膚色の黄味が強く、皮脂分泌量が多く、バリア機能が低いと判定する＜１＞〜＜３＞のいずれかに記載の遺伝子検出方法。
＜12＞ハプログループＮ９ａのヒトは上腕の皮膚色が暗いと判定する＜１＞〜＜３＞のいずれかに記載の遺伝子検出方法。
＜13＞ハプログループＮ９ｂのヒトは上腕及び頬のヘモグロビン量が少なく、上腕の皮膚色が明るく、頬の皮膚色が明るく、赤味が弱く、上腕のたるみが多く、紫外線感受性が低いと判定する＜１＞〜＜３＞のいずれかに記載の遺伝子検出方法。
＜14＞被験者が、日本人女性である＜１＞〜＜１３＞のいずれかに記載の遺伝子検出方法。
【実施例】
【００２０】
次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明する。
【００２１】
実施例１（ミトコンドリアＤＮＡのハプログループの検出）
日本人女性９６２名から得られた血液から分離した血餅からＤＮＡを常法に従って抽出した。ＤＮＡ（１μｇ）を鋳型として使用し、遺伝子増幅する。ミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）のコード領域をｍｕｌｔｉｐｌｅｘ  ＰＣＲ法により増幅し、Ｌｕｍｉｎｅｘ１００システムを用いてミトコンドリアゲノム多型を分析する。これまでに、日本人６７２人のｍｔＤＮＡ全塩基配列の分析に基づいてミトコンドリアゲノムの分子系統樹を得ている（Ｔａｎａｋａ  ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ  １４：１８３２−１８５０，２００４）。この系統樹に基づいて多型部位を選定、一斉分析によりミトコンドリアゲノムの型をＡ、Ｂ、Ｄ４、Ｄ５、Ｆ、Ｇ、Ｍ７ａ、Ｍ７ｂ、Ｎ９ａ、Ｎ９ｂのハプログループに分類する。
このミトコンドリアＤＮＡの遺伝子多型の分析及びハプログループの分類は、詳細には、特許文献１〜４の記載に従って行った。
【００２２】
実施例２（皮膚性状の計測）
実施例１でハプログループの分類を行った被験者に対し、（表１）の皮膚性状計測を行った。
【００２３】
【表１】
0006598450.tif 000002
【００２４】
表１中の皮膚計測の詳細は以下の如く行った。
【００２５】
（１）紫外線感受性（上腕）
被験者の片側上腕内側に、１ｍＷ／ｃｍ2の照射率で紫外線（ＵＶ）を照射する。この際に照射時間を７点振って異なるエネルギー量（７段階）の紫外線（ＵＶ）に暴露させる（０．５ｃｍ2×７ヶ所）。紫外線（ＵＶ）照射の翌日、研究者の目視により研究者のＭＥＤを判定した。
ここで、ＭＥＤには個人差があり、１ＭＥＤ＝６０〜８０ｍＪ／ｃｍ2であるとされている。
１ｍＷ・ｓｅｃ＝１ｍＪ。したがって、１ｍＷ／ｃｍ2の照射率で６０秒間照射した場合は、６０ｍＪ／ｃｍ2となる。
紫外線を皮膚に照射すると照射後２４時間をピークにして紅斑が出現するが、肉眼的にもっとも軽い紅斑が出現するのに必要なエネルギー量をＭＥＤという。
日本においては真夏の関東周辺の海岸で１ＭＥＤに要する暴露時間は２０分程度であり、１時間あたり３ＭＥＤを受光することになる。
個人差はあるが一般に、かゆみや軽い痛みを伴う日焼けでは４ＭＥＤ、水疱が出来るようなケースでは８ＭＥＤ以上を連続して受光したものと考えられている。
【００２６】
（２）皮膚粘弾性（頬、上腕）
キュートメーター（Ｃｏｕｒａｇｅ ＋ Ｋｈａｚａｋａ社製）を用いて片側頬部、片側上腕内側部の弾力性を計測した。計測値（Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７）を取得した。
【００２７】
（３）皮膚色（頬、上腕）
分光測色計（ＣＭ−２６００ｄ、コニカミノルタセンシング株式会社製）を用いて頬部、上腕内側部の肌色を計測した。
明るさ（Ｌ＊値）、赤味（ａ＊値）、黄味（ｂ＊値）、メラニン量指数、ヘモグロビン量指数を取得した。
【００２８】
（４）シワ（目尻）
白色シルフロレプリカ剤（株式会社アミックグループ製）を用いて片側目尻部のレプリカを採取した。非接触３Ｄ測定装置ＰＲＩＭＯＳ  ＰＩＣＯ（ＧＦＭｅｓｓｔｅｃｈｎｉｋ社）を用いてシワに関するパラメーター（＊）を測定した。
シワパラメーターは、最大シワ平均深さ（Ｒｚ）、最大シワ最大深さ（Ｒｍａｘ）、総シワ平均深さ（Ｒａ）である。
【００２９】
（５）角層水分量（上腕）
コルネオメーター（Ｃｏｕｒａｇｅ ＋ Ｋｈａｚａｋａ社製）を用いて片側上腕内側部の水分量を計測した。コルネオメーターは、皮膚表面から約１５μｍ（主に角層）に含まれる水分量を測定するとされている。
【００３０】
（６）バリア機能（頬、上腕）
ＴＥＷＡメーター（Ｃｏｕｒａｇｅ ＋ Ｋｈａｚａｋａ社製）を用いて片側頬部、片側上腕内側部の経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）を計測した。
（７）皮脂分泌量（額）
セブメーター（Ｃｏｕｒａｇｅ ＋ Ｋｈａｚａｋａ社製）を用いて額部の皮脂量（回復値）を計測した。
【００３１】
実施例３（統計処理）
皮膚計測データとハプログループ間の相関性を解析した。解析にあたり、各計測項目について、計測値と人数構成をもとに中央値を算出後、低値群（Ｌｏｗｅｒ）と高値群（Ｈｉｇｈｅｒ）とに分類した。
各計測値の高低におけるｍｔハプログループの特徴について、Ｆｉｓｈｅｒの相関性係数、オッズ比と９５％信頼性区間を算出した。
解析には、ＪＭＰ（ｖｅｒ．９，ＳＡＳ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）を使用した。
Ｆｉｓｈｅｒの相関性係数の算出値（Ｐ値）が０．１よりも小さかった場合に、その皮膚計測データとミトコンドリアハプログループとに関連性があると判断した。
【００３２】
結果を表２〜表３に示す。
【００３３】
【表２】
0006598450.tif 000003
【００３４】
【表３】
0006598450.tif 000004
【００３５】
表２〜表３より、ミトコンドリアハプログループの検出により、以下の皮膚性状が判定できることがわかった。
【００３６】
（１）ハプログループＡのヒトは上腕のハリが弱く、頬のたるみが多く、上腕及び頬の皮膚色が明るく、紫外線感受性が高く、シワが少なく、角層水分量が少ないと判定できる。
（２）ハプログループＢのヒトは皮脂分泌量が少なく、頬の皮膚色の赤味が強く、頬のハリが弱く、シワが多いと判定できる。
（３）ハプログループＤ４のヒトは上腕及び頬の皮膚色が暗く、赤味が少なく、紫外線感受性が低く、バリア機能が高いと判定できる。
（４）ハプログループＤ５のヒトは上腕のハリが強く、上腕の皮膚色が暗いと判定できる。
（５）ハプログループＦのヒトは上腕の皮膚のヘモグロビン量が少ないと判定できる。
（６）ハプログループＧのヒトは上腕のたるみが多く、頬のたるみが少なく、ハリが強く、上腕の皮膚色が黄味が強いと判定できる。
（７）ハプログループＭ７ａのヒトは頬の皮膚色の赤味が強く、メラニン量が多く、上腕のヘモグロビン量が多く、頬の皮膚色が暗く、頬のたるみが多いと判定できる。
（８）ハプログループＭ７ｂのヒトは上腕の皮膚色の黄味が強く、皮脂分泌量が多く、バリア機能が低いと判定できる。
（９）ハプログループＮ９ａのヒトは上腕の皮膚色が暗いと判定できる。
（10）ハプログループＮ９ｂのヒトは上腕及び頬のヘモグロビン量が少なく、上腕の皮膚色が明るく、頬の皮膚色が明るく、赤味が弱く、上腕のたるみが多く、紫外線感受性が低いと判定できる。