(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）Ｂ７‐Ｈ３に特異的な抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）2若しくはＦｖから選択されたその抗体断片又はダイアボディ；及び
ｂ）ＶＥＧＦ又はＶＥＧＦＲに特異的な抗体又はＦａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）2若しくはＦｖから選択されたその抗体断片
を含む、膠芽腫の治療に使用するための組成物。
【請求項２】
前記ＶＥＧＦ又はＶＥＧＦＲに特異的な抗体又はその抗体断片は：
（Ａ）ＶＥＧＦアンタゴニスト；又は
（Ｂ）ＶＥＧＦＲアンタゴニスト
である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記Ｂ７‐Ｈ３に特異的な抗体、その抗体断片又はダイアボディは、前記Ｂ７‐Ｈ３への結合に関して：
（１）配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える軽鎖可変ドメインと、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える重鎖可変ドメインとを含む抗体；
（２）配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号２７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える軽鎖可変ドメインと、配列番号３１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号３３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号３５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える重鎖可変ドメインとを含む抗体；又は
（３）配列番号３９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号４１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号４３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える軽鎖可変ドメインと、配列番号４７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号４９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号５１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える重鎖可変ドメインとを含む抗体
と競合する、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記Ｂ７‐Ｈ３に特異的な抗体、その抗体断片又はダイアボディは：
（１）配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える軽鎖可変ドメインと、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える重鎖可変ドメインとを含むか；
（２）配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号２７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える軽鎖可変ドメインと、配列番号３１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号３３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号３５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える重鎖可変ドメインとを含むか；又は
（３）配列番号３９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号４１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号４３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える軽鎖可変ドメインと、配列番号４７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号４９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号５１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える重鎖可変ドメインとを含む、
請求項１乃至３の何れか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記ＶＥＧＦ又はＶＥＧＦＲに特異的な抗体又はその抗体断片は：
Ａ．ＶＥＧＦ結合に関してベバシズマブと競合し；又は
Ｂ．ベバシズマブの３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲを含む、
請求項１乃至４の何れか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記Ｂ７‐Ｈ３に特異的な抗体、その抗体断片又はダイアボディは：
（Ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号４１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号４３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える軽鎖可変ドメイン；
（Ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号４９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号５１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える重鎖可変ドメイン；並びに
（Ｃ）置換基：Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ及びＰ３９６Ｌを備えるＦｃ領域
を含む抗Ｂ７‐Ｈ３抗体である、請求項１乃至５の何れか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記Ｂ７‐Ｈ３に特異的な抗体、その抗体断片又はダイアボディは：
（Ａ）配列番号６９のアミノ酸配列を有する可変軽鎖；及び
（Ｂ）配列番号７９のアミノ酸配列を有する可変重鎖
を備えるヒト化抗Ｂ７‐Ｈ３抗体であり、
前記ＶＥＧＦ又はＶＥＧＦＲに特異的な抗体又はその抗体断片は、ベバシズマブである、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
ＶＥＧＦ又はＶＥＧＦＲに特異的な抗体又はＦａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）2若しくはＦｖから選択されたその抗体断片を併用した、Ｂ７‐Ｈ３に特異的な抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）2若しくはＦｖから選択されたその抗体断片又はダイアボディの、膠芽腫を治療するための薬剤の製造における使用。
【請求項９】
前記ＶＥＧＦ又はＶＥＧＦＲに特異的な抗体又はその抗体断片は：
（Ａ）ＶＥＧＦアンタゴニスト；又は
（Ｂ）ＶＥＧＦＲアンタゴニスト
である、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
前記Ｂ７‐Ｈ３に特異的な抗体、その抗体断片又はダイアボディは、前記Ｂ７‐Ｈ３への結合に関して：
（１）配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える軽鎖可変ドメインと、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える重鎖可変ドメインとを含む抗体；
（２）配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号２７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える軽鎖可変ドメインと、配列番号３１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号３３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号３５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える重鎖可変ドメインとを含む抗体；又は
（３）配列番号３９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号４１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号４３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える軽鎖可変ドメインと、配列番号４７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号４９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号５１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える重鎖可変ドメインとを含む抗体
と競合する、請求項８又は９に記載の使用。
【請求項１１】
前記Ｂ７‐Ｈ３に特異的な抗体、その抗体断片又はダイアボディは：
（１）配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える軽鎖可変ドメインと、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える重鎖可変ドメインとを含むか；
（２）配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号２７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える軽鎖可変ドメインと、配列番号３１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号３３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号３５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える重鎖可変ドメインとを含むか；又は
（３）配列番号３９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号４１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号４３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える軽鎖可変ドメインと、配列番号４７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号４９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号５１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える重鎖可変ドメインとを含む、
請求項８乃至１０の何れか１項に記載の使用。
【請求項１２】
前記ＶＥＧＦ又はＶＥＧＦＲに特異的な抗体又はその抗体断片は：
Ａ．ＶＥＧＦ結合に関してベバシズマブと競合し；又は
Ｂ．ベバシズマブの３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲを含む、
請求項８乃至１１の何れか１項に記載の使用。
【請求項１３】
前記Ｂ７‐Ｈ３に特異的な抗体、その抗体断片又はダイアボディは：
（Ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号４１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号４３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える軽鎖可変ドメイン；
（Ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ1、配列番号４９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ2及び配列番号５１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ3を備える重鎖可変ドメイン；並びに
（Ｃ）置換基：Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ及びＰ３９６Ｌを備えるＦｃ領域
を含む抗Ｂ７‐Ｈ３抗体である、請求項８乃至１０又は１２の何れか１項に記載の使用。
【請求項１４】
前記Ｂ７‐Ｈ３に特異的な抗体、その抗体断片又はダイアボディは：
（Ａ）配列番号６９のアミノ酸配列を有する可変軽鎖；及び
（Ｂ）配列番号７９のアミノ酸配列を有する可変重鎖
を備えるヒト化抗Ｂ７‐Ｈ３抗体であり、
前記ＶＥＧＦ又はＶＥＧＦＲに特異的な抗体又はその抗体断片は、ベバシズマブである、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
前記Ｂ７‐Ｈ３に特異的な抗体、その抗体断片又はダイアボディ及び前記ＶＥＧＦ又はＶＥＧＦＲに特異的な抗体又はその抗体断片は同時に投与される、請求項８乃至１４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１６】
前記Ｂ７‐Ｈ３に特異的な抗体、その抗体断片又はダイアボディ、又は前記ＶＥＧＦ又はＶＥＧＦＲに特異的な抗体又はその抗体断片のうちの第２のものは、前記Ｂ７‐Ｈ３に特異的な抗体、その抗体断片又はダイアボディ、又は前記ＶＥＧＦ又はＶＥＧＦＲに特異的な抗体又はその抗体断片のうちの第１のものの投与後５半減期以内に患者に投与される、請求項８乃至１４のいずれか１項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表の参照
本出願は、連邦規則法典第３７巻第１．８２１節以下による１つ又は複数の配列表を含み、これらの配列表は、書類及びコンピュータ可読媒体の両方において開示されており、上記書類及びコンピュータ可読型開示は、参照によりその全体が本出願に援用される。
【０００２】
本発明は、血管新生性癌、特に膠芽腫の治療のための治療用組成物に関する。特に本発明は、Ｂ７‐Ｈ３に特異的な結合能を有する分子及び腫瘍血管新生の促進に関わる細胞表面因子（又はその受容体）（特にＶＥＧＦ又はその受容体、ＶＥＧＦＲ）に特異的な結合能を有する分子を含む組成物を対象とする。本発明は更に、上述のような癌の治療、特に膠芽腫の治療におけるこのような組成物の使用を対象とする。
【背景技術】
【０００３】
Ｉ．Ｂ７スーパーファミリー及びＢ７‐Ｈ３
腫瘍の成長及び転移は、これらが宿主の免疫監視機構を回避して宿主の防御を克服する能力に大きく左右される。ほとんどの腫瘍は、宿主の免疫系によって程度が可変であると認識できる抗原を発現するが、多くの場合、エフェクタＴ細胞の無効な活性化により、不十分な免疫応答が誘発される（非特許文献１）。
【０００４】
ＣＤ４＋Ｔリンパ球は、ほとんどの哺乳類免疫及び自己免疫応答の必須のオーガナイザである（非特許文献２）。ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞の活性化は、抗原提示細胞とナイーブＣＤ４＋Ｔリンパ球との間の共刺激性相互作用によって仲介されることが分かっている。２つの相互作用が必要である（非特許文献３、４）。第１の相互作用では、抗原提示細胞は、これがナイーブＣＤ４＋Ｔリンパ球のＴ細胞受容体（「ＴＣＲ」）に結合できるように、上記細胞の主要な組織適合性複合体に結合した関連する標的抗原を示さなければならない。第２の相互作用では、抗原提示細胞のリガンドは、ＣＤ４＋Ｔリンパ球のＣＤ２８受容体に結合しなければならない（非特許文献２、５）。これら両方の刺激性信号を受けたＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞は次にサイトカイン（インターロイキン‐２、インターロイキン‐１２等）に応答して、Ｔｈ１細胞を発現できる。このような細胞はインターフェロン‐ガンマ（ＩＦＮ‐γ）及び腫瘍壊死因子‐アルファ（ＴＮＦ‐α）を産生し、これらは、上記標的抗原を発現する標的細胞に対する炎症応答を仲介する。Ｂ細胞の活性化及び増殖も発生し、これは上記標的抗原に対して特異的な抗体の産生につながる（非特許文献６）。ＴＣＲの会合中にこれら両方の共刺激性信号が存在しない場合、Ｔ細胞は機能的非応答状態となり、これはクローン麻痺と呼ばれる（非特許文献１）。病理的状態では、Ｔｈ１細胞は、Ｉ型糖尿病、関節リウマチ、多発性硬化症といった様々な器官特異性自己免疫疾患において主要な役割を果たす（非特許文献２）。
【０００５】
ＣＤ２８受容体のリガンドに関する調査は、Ｂ７スーパーファミリーとして知られる関連する分子の組の特性決定につながった（非特許文献７、８、９、１０、１１、４、１２、１３、１４、１５）。現在、上記ファミリーのメンバーは以下の７個が知られている：Ｂ７．１（ＣＤ８０）、Ｂ７．２（ＣＤ８６）、誘導性共刺激リガンド（ＩＣＯＳ‐Ｌ）、プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ‐Ｌ１）、プログラム細胞死２リガンド（ＰＤ‐Ｌ２）、Ｂ７‐Ｈ３、Ｂ７‐Ｈ４（非特許文献１０）。
【０００６】
Ｂ７ファミリーメンバーは、免疫グロブリン‐Ｖ様及び免疫グロブリン‐Ｃ様ドメイン（例えばＩｇＶ‐ＩｇＣ）を有する免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーである（非特許文献８）。Ｂ７‐ファミリーメンバーのＩｇＶ及びＩｇＣドメインはそれぞれ単一のエクソンによってコードされ、追加のエクソンがリーダ配列、膜貫通及び細胞質ドメインをコードする。細胞質ドメインは短く、アミノ酸残基１９〜６２個の長さであり、複数のエクソンによってコードできる（非特許文献１０）。Ｂ７‐Ｈ３は、主要なヒト型が２つの細胞外タンデムＩｇＶ‐ＩｇＣドメイン（即ちＩｇＶ‐ＩｇＣ‐ＩｇＶ‐ＩｇＣ）を含有する点において独特である（非特許文献１０）。Ｂ７ファミリーのメンバーは、細胞表面においてｂａｃｋ−ｔｏ−ｂａｃｋ非共有結合ホモ二量体を形成すると予測され、このような二量体はＢ７‐１（ＣＤ８０）及びＢ７‐２（ＣＤ８６）に関して発見されている。
【０００７】
Ｂ７‐１（ＣＤ８０）及びＢ７‐２（ＣＤ８６）は、刺激性ＣＤ２８受容体及び阻害性ＣＴＬＡ‐４（ＣＤ１５２）受容体に対する二重特異性を呈する（非特許文献８）。
【０００８】
４免疫グロブリン細胞外ドメイン変異体（「４Ｉｇ‐Ｂ７‐Ｈ３」）は、最初はＩｇドメイン（ＩｇＶ‐ＩｇＣ）を２つだけ含むと考えられていた（非特許文献１６、１７）が、上記タンパク質のより一般的なヒト型であることが識別及び発見された（非特許文献８）。これら２つの形態間には機能的な違いは観察されていない。というのは、天然のマウス型（２Ｉｇ）及びヒト４Ｉｇ型は同様の機能を呈するためである（非特許文献１８）。４Ｉｇ‐Ｂ７‐Ｈ３分子は、癌細胞のナチュラルキラー細胞媒介性溶解を阻害する（非特許文献１９）。ヒトＢ７‐Ｈ３（２Ｉｇ型）は、活性化されるＴ細胞上の推定受容体に結合することにより、Ｔ細胞の活性化及びＩＦＮ‐γ産生を促進することが分かっている（非特許文献１６、２０）。Ｂ７‐Ｈ４及びＢ７‐Ｈ１の両方は、腫瘍細胞上に発現した場合、免疫機能の潜在的インヒビタとなる（非特許文献１２）。
【０００９】
Ｂ７‐Ｈ３の作用の態様は複雑である。というのは、このタンパク質はＴ細胞共刺激及び共阻害の両方を仲介するためである（非特許文献１８、２１、２２）。Ｂ７‐Ｈ３は（ＴＲＥＭ）様転写体２（ＴＬＴ‐２）に結合して、Ｔ細胞活性化を共刺激するが、まだ識別されていない１つ又は複数の受容体に結合して、Ｔ細胞の共阻害を媒介する。更にＢ７‐Ｈ３は、１つ又は複数の未知の受容体との相互作用により、ナチュラルキラー細胞及び骨芽細胞のインヒビタとなる（非特許文献１８）。上記阻害は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）が遺伝子転写を制御する主要な信号伝達経路のメンバー（例えばＮＦＴＡ、ＮＦ‐κＢ、又はＡＰ‐１因子）との相互作用によって作用し得る。
【００１０】
Ｂ７‐Ｈ３はＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を共刺激する。Ｂ７‐Ｈ３はまた、ＩＦＮ‐γ産生及びＣＤ８＋溶解活性を刺激する（非特許文献１６、８）。しかしながらこのタンパク質はまた、ＮＦＡＴ（Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｆａｃｔｏｒ  ｆｏｒ  Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｔ  ｃｅｌｌ：活性化されたＴ細胞のための核内因子）、ＮＦ‐κＢ（核内因子カッパＢ）、ＡＰ‐１（アクティベータタンパク質‐１）因子によって、Ｔ細胞活性化を阻害するよう作用する場合がある（非特許文献２３）。Ｂ７‐Ｈ３はまた、Ｔｈ１、Ｔｈ２、又はＴｈ１７をインビボで阻害するとも考えられている（非特許文献２４、２５、２３）。いくつかの独立した研究は、ヒト悪性腫瘍細胞がＢ７‐Ｈ３タンパク質の発現の著しい上昇を呈すること、この著しい発現が、疾患の重篤度の上昇に関連すること（非特許文献２６）を示しており、これはＢ７‐Ｈ３が腫瘍により、免疫回避経路として悪用されていることを示唆している（非特許文献１８）。
【００１１】
Ｂ７分子がＴ細胞受容体（例えばＣＤ２８）に結合する能力をブロックする分子は、免疫系を阻害し、自己免疫疾患の治療法として提案されている（非特許文献２７）。抗４Ｉｇ‐Ｂ７‐Ｈ３抗体で治療される、４Ｉｇ‐Ｂ７‐Ｈ３を発現する神経芽腫細胞は、ＮＫ細胞に対して感受性がより高かった。しかしながら、この活性が、４Ｉｇ‐Ｂ７‐Ｈ３型に対する抗体のみによるものとすることができるかどうかは不明である。というのは、４Ｉｇ‐Ｂ７‐Ｈ３に対して産生された、報告された抗体は全て、Ｂ７Ｈ３の上記２つのＩｇ様形態にも結合したためである（非特許文献２８、非特許文献１９）。
【００１２】
Ｂ７‐Ｈ３は静置されたＢ若しくはＴ細胞、単球又は樹状細胞上では発現しないが、ＩＦＮ‐γによって樹状細胞上に、またＧＭ‐ＣＳＦによって単球上に誘発される（非特許文献８）。Ｂ７‐Ｈ３と結合する１つ又は複数の受容体は、完全には特性決定されていない。以前の研究は、１つのこのような受容体が、活性化後にＴ細胞上で迅速かつ過渡的に上方制御される必要があることを示唆していた（非特許文献１１）。最近、骨髄性細胞上で発現する（ＴＲＥＭ）様転写体２（ＴＬＴ‐２、又はＴＲＥＭＬ２）受容体（非特許文献２９、３０、２３）は、Ｂ７‐Ｈ３と結合でき、またこれによって特にＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を共刺激できることが分かっている（非特許文献３１、３２、１８）。
【００１３】
ヒトＢ７‐Ｈ３は、神経芽腫細胞上での発現に加えて、多様な他の癌細胞（例えば胃、卵巣及び非小細胞肺癌）上で発現することも知られている。Ｂ７‐Ｈ３タンパク質発現は腫瘍細胞株において免疫組織学的に検出されている（非特許文献１６、３３、１９、１７）。ｍＲＮＡ発現は、心臓、腎臓、精巣、肺、肝臓、膵臓、前立腺、大腸、骨芽細胞で発見されている（非特許文献１０）。タンパク質レベルにおいて、Ｂ７‐Ｈ３はヒト肝臓、肺、膀胱、精巣、前立腺、乳房、胎盤、リンパ器官に見られる（非特許文献１８）。
【００１４】
ＩＩ．ＶＥＧＦ及びＶＥＧＦＲ
血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）は、血小板由来成長因子スーパー遺伝子ファミリーに属し、血管新生及びリンパ管新生の制御において中心的な役割を果たす。ＶＥＧＦファミリーは、ホモ二量体構造を有する以下の５つのメンバーに分割される：ＶＥＧＦ‐Ａ、ＶＥＧＦ‐Ｂ、ＶＥＧＦ‐Ｃ、ＶＥＧＦＤ、胎盤成長因子（ＰｌＧＦ）（非特許文献３４、３５）。これらのペプチドは、別個の遺伝子によってコードされる。更に、ＶＥＧＦ‐Ａは４つのアイソフォームで存在する。ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１８９、ＶＥＧＦ２０６は、選択的ｍＲＮＡスプライシングによって生成される（非特許文献３６、３７）。ＶＥＧＦ‐Ａは一般にＶＥＧＦと呼ばれる。というのは、ＶＥＧＦ‐Ａは発生的血管形成、血管新生、及び前駆内皮細胞の分化の主要なレギュレータであるためである。ＶＥＧＦ‐Ａアイソフォームのうち、量及び生物活性の観点から、ＶＥＧＦ１６５が支配的である。ＶＥＧＦ１６５は様々なヒト腫瘍において過剰発現し、この過剰発現は、腫瘍の進行、浸潤、転移に相関する（非特許文献３８、３９、４０）。
【００１５】
ＶＥＧＦ‐Ａは２つのチロシンキナーゼ（ＴＫ）受容体、ＶＥＧＦＲ‐１（Ｆｌｔ‐１）及びＶＥＧＦＲ‐２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ‐１）に結合し、内皮細胞の増殖、遊走、血管透過性分泌及び他の内皮機能を制御する。ＶＥＧＦＲ‐２は血管新生促進信号に対して強いＴＫ活性を呈する一方で、可溶性ＶＥＧＦＲ‐１（ｓＦｌｔ‐１）は、内因性ＶＥＧＦインヒビタとして機能する（非特許文献４１、４２、非特許文献３５、３４）。
【００１６】
ＩＩＩ．免疫療法
抗体は、診断における公知の使用に加えて、治療剤として有用であることが分かっている。例えば免疫療法、即ち治療目的での抗体の使用は、近年癌治療のために使用されている。受動免疫療法は、癌治療におけるモノクローナル抗体の使用を伴う（例えば非特許文献４３参照）。これらの抗体は、腫瘍細胞の成長又は生存の直接的な阻害、及び身体の免疫系の天然の細胞殺傷活性を回復させる能力の両方による、固有の治療的生物活性を有することができる。これらの作用剤は、単独で、又は放射若しくは化学療法剤と併用して投与できる。それぞれ非ホジキンリンパ腫及び乳癌の治療のために承認されているリツキシマブ及びトラスツズマブは、このような療法の例である。あるいは抗体を用いて、抗体が毒性剤に結合した抗体複合体を作製でき、腫瘍への特異的な結合によって腫瘍に上記作用剤を配向する。ゲムツズマブ・オゾガミシンは、白血病の治療のために使用される、承認されている抗体複合体の例である。
【００１７】
癌細胞に結合し、診断及び治療のための潜在的用途を有するモノクローナル抗体が開示されている（例えば、いくつかの標的タンパク質の分子量を特に開示している以下の特許出願を参照：特許文献１（２００ｋＤのｃ‐ｅｒｂＢ‐２（Ｈｅｒ２）及び他の未知の抗原４０‐２００ｋＤ（サイズ））、並びに特許文献２（５０ｋＤ及び５５ｋＤの癌胎児性タンパク質））。充実性腫瘍の治療のために臨床試験中の及び／又は認可された抗体の例としては、以下が挙げられる：トラスツズマブ（抗原：１８０ｋＤ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、エドレコロマブ（抗原：４０‐５０ｋＤ、Ｅｐ‐ＣＡＭ）、抗ヒト乳脂肪球（ＨＭＦＧｌ）（抗原＆ｇｔ；２００ｋＤ、ＨＭＷ  Ｍｕｃｉｎ）、セツキシマブ（抗原：１５０ｋＤ及び１７０ｋＤ、ＥＧＦ受容体）、アレムツズマブ（抗原：２１‐２８ｋＤ、ＣＤ５２）、並びにリツキシマブ（抗原：３５ｋＤ、ＣＤ２０）。
【００１８】
乳癌の治療に使用されるトラスツズマブ（Ｈｅｒ‐２受容体）、及び複数の癌の治療のための臨床試験中であるセツキシマブ（ＥＧＦ受容体）の抗原標的は、皮膚、大腸、肺、卵巣、肝臓、及び膵臓等の多数の正常なヒト成人組織上に、ある程度の検出可能なレベルで存在する。これらの治療剤の使用における安全性の差は、これらの部位における抗原発現のレベル又は抗体のアクセス又は活性の違いによってもたらされ得る。
【００１９】
別のタイプの免疫療法は、１つ若しくは複数の癌に存在する抗原、又は上記抗原の発現を指向させて、個体における免疫応答を喚起する、即ち自身の癌に対する抗体を能動的に生成するように個体を誘導するＤＮＡ構造を用いた能動免疫療法、即ちワクチン接種である。能動免疫作用付与は、受動免疫療法又は免疫毒素ほど頻繁には使用されていない。
【００２０】
（癌を含む）疾患の進行の複数のモデルが提案されている。諸説は、単一の感染／形質転換イベントによる発生から、より一層「疾患様（ｄｉｓｅａｓｅ‐ｌｉｋｅ）」又は「癌様（ｃａｎｃｅｒ‐ｌｉｋｅ）」の組織タイプ（これは最終的には完全に病原性又は悪性の能力を有する組織タイプをもたらす）の展開にまで及ぶ。癌に関して例えば、悪性腫瘍を引き起こすために単一の変異イベントで十分であるとする議論がある一方で、それに続く複数の改変も必要であるとする議論もある。他に、細胞レベルにおける連続する複数の変異‐選択イベントによる新生組織形成の開始及び進行の両方のために、変異荷重及び腫瘍グレードの上昇が必要であることも示唆されている。腫瘍組織内のみに見られる癌標的もあれば、正常の組織内に存在し、腫瘍組織内で上方制御する及び／又は過剰発現する癌標的も存在する。このような状況において、上記過剰発現が悪性腫瘍の獲得に関連していることを示唆する研究者が存在する一方で、上記過剰発現は疾患状態の上昇への道程に沿った傾向の単なるマーカにすぎないことを示唆する研究者も存在する。
【００２１】
場合によっては、腫瘍中で発現又は過剰発現する腫瘍性タンパク質等の癌標的は、胚及び胎児の発達中に存在し、成長及び分化のレギュレータとして機能することが分かっている。数名の研究者は、胚及び胎児の発達中のこれらの腫瘍性タンパク質の発現は、特定の組織に限定されており、また特定の発達段階にも限定されているように思われることを発見している。対照的に、成人におけるこれらの腫瘍性タンパク質の発現は、腫瘍成長における過剰発現及び／又は腫瘍抑制因子タンパク質の機能不全に関連することが分かっている。
【００２２】
理想的な診断用及び／又は治療用抗体は、多数の癌には存在するものの、いずれの正常な組織には存在しないか又はごく低いレベルでしか存在しない抗原に対して特異的である。１つ又は複数の癌に特異的に関連する抗原に結合できる新規の抗体の発見、特性決定及び単離は、多くの方法において有用である。まず上記抗体は、このような癌細胞に対する生物活性を有し、免疫系の応答を回復することによって上記疾患を治療できる。この抗体は、治療剤として単独で、若しくは現行の治療と併用して投与でき、又は毒性剤と結合した免疫複合体を調製するために使用できる。同一の特異性を有するものの、単独で投与した場合に生物活性が低いか又は生物活性を有しない抗体は、放射性同位体、毒素、又は化学療法剤若しくは化学療法剤を含有するリポソームとの免疫複合体を調製するために使用でき、この複合体化された形態は、上記抗体が上記毒素を抗原含有細胞に指向させることにより生物活性を有する、という点で有用となり得る。
【００２３】
上述のように、Ｂ７‐Ｈ３に特異的に結合する抗体及び他の分子が記載されている（特許文献３〜２１；非特許文献４４、４５、４６、２８、２０参照）。
【００２４】
ＩＶ．膠芽腫
膠芽腫は、中枢神経系（ＣＮＳ）の最も一般的な原発性腫瘍であり、ヒトの癌の中でも最も致命的なものである（非特許文献４７、４８）。悪性神経膠腫を有する患者の効果的な治療は未だ不明であり、手術、放射線及びテモゾロミドによる標準治療後の生存期間中央値は１５ヶ月未満である（非特許文献４９）。再発後の効果的な治療は存在しない（非特許文献５０）。
【００２５】
抗ＶＥＧＦ抗体（ベバシズマブ、例えばアバスチン（登録商標））の使用が、膠芽腫の治療法として探求されている（非特許文献５１、５２、５３、４９、５４。ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））は、特許文献２３〜４３；非特許文献５５、５６に記載されており、これらの文献はそれぞれ、その全体が参照により本出願に援用される。）
【００２６】
残念なことに、再発性膠芽腫（ｒＧＢＭ）は、抗ＶＥＧＦＲ治療への初期応答後に必ず再発する（非特許文献５７）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２７】
【特許文献１】米国特許第６，０５４，５６１号
【特許文献２】米国特許第５，６５６，４４４号
【特許文献３】米国特許第７，５２７，９６９号
【特許文献４】米国特許第７，３６８，５５４号
【特許文献５】米国特許第７，３５８，３５４号
【特許文献６】米国特許第７，２７９，５６７号
【特許文献７】米国特許出願公開第２００９００８７４１６号
【特許文献８】米国特許出願公開第２００９００２２７４７号
【特許文献９】米国特許出願公開第２００９００１８３１５号
【特許文献１０】米国特許出願公開第２００８１１６２１９号
【特許文献１１】米国特許出願公開第２００８００８１３４６号
【特許文献１２】米国特許出願公開第２００５０２０２５３６号
【特許文献１３】米国特許出願公開第２００３０１０３９６３号
【特許文献１４】米国特許出願公開第２００２０１６８７６２号
【特許文献１５】国際公開第２００８／１１６２１９号
【特許文献１６】国際公開第２００６／０１６２７６号
【特許文献１７】国際公開第２００４／０９３８９４号
【特許文献１８】国際公開第０４／００１３８１号
【特許文献１９】国際公開第２００２／３２３７５号
【特許文献２０】国際公開第２００２／１０１８７号
【特許文献２１】国際公開第２００１／０９４４１３号
【特許文献２２】欧州特許第１２９２６１９Ｂ号
【特許文献２３】米国特許公開第２００２００３２３１５Ａ１号
【特許文献２４】米国特許公開第２００３０１９０３１７Ａ１号
【特許文献２５】米国特許公開第２００５０１１２１２６Ａ１号
【特許文献２６】米国特許公開第２００７００５９３０２Ａ１号
【特許文献２７】米国特許公開第２００７００５９３１２Ａ１号
【特許文献２８】米国特許公開第２００７０１９６３７４Ａ１号
【特許文献２９】米国特許公開第２００７０２４８６１０Ａ１号
【特許文献３０】米国特許公開第２００８０１８７５３４Ａ１号
【特許文献３１】米国特許公開第２００８０２２６６２９Ａ１号
【特許文献３２】米国特許公開第２０１１００５２５７５Ａ１号
【特許文献３３】米国特許公開第２０１１００８１３４２Ａ１号
【特許文献３４】米国特許公開第２０１３００５８９２７Ａ１号
【特許文献３５】米国特許第６，８８４，８７９号
【特許文献３６】米国特許第７，０６０，２６９号
【特許文献３７】米国特許第７，１６９，９０１号
【特許文献３８】米国特許第７，２９７，３３４号
【特許文献３９】米国特許第７，３６５，１６６号
【特許文献４０】米国特許第７，３７５，１９３号
【特許文献４１】カナダ特許第２，２８６，３３０号
【特許文献４２】カナダ特許第２，１４５，９８５号
【特許文献４３】国際公開第１９９８／０４５３３１号
【非特許文献】
【００２８】
【非特許文献１】Ｋｈａｗｌｉ，  Ｌ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００８）  “Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，  Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ，  ａｎｄ  Ｃｏ‐Ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｓｏｌｉｄ  Ｔｕｍｏｒｓ，”  Ｅｘｐｅｒ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  １８１：２９１‐３２８
【非特許文献２】Ｄｏｎｇ，  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  “Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｎｏｖｅｌ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，”  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ．  Ｒｅｓ．  ２８（１）：３９‐４８
【非特許文献３】Ｖｉｇｌｉｅｔｔａ，  Ｖ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）  “Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ  Ｃｏ‐Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，”  Ｎｅｕｒｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ４：６６６‐６７５
【非特許文献４】Ｋｏｒｍａｎ，  Ａ．Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）  “Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  Ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，”  Ａｄｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ９０：２９７‐３３９
【非特許文献５】Ｌｉｎｄｌｅｙ，  Ｐ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  “Ｔｈｅ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｕｔｉｌｉｔｙ  Ｏｆ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ＣＤ２８‐Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，”  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｒｅｖ．  ２２９：３０７‐３２１
【非特許文献６】Ｂｅｒｎａｒｄ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  “Ｔ  ａｎｄ  Ｂ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｏｎ：  Ａ  Ｄａｎｃｅ  ｏｆ  Ｌｉｆｅ  ａｎｄ  Ｄｅａｔｈ，”  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ７９：Ｓ８‐Ｓ１１
【非特許文献７】Ｃｏｙｌｅ，  Ａ．Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  “Ｔｈｅ  Ｅｘｐａｎｄｉｎｇ  Ｂ７  Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ：  Ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ  Ｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙ  Ｉｎ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  Ｓｉｇｎａｌｓ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，”  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２（３）：２０３‐２０９
【非特許文献８】Ｓｈａｒｐｅ，  Ａ．Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  “Ｔｈｅ  Ｂ７‐ＣＤ２８  Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ，”  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２：１１６‐１２６
【非特許文献９】Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ，  Ｒ．Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  “Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ，”  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２３：５１５‐５４８
【非特許文献１０】Ｃｏｌｌｉｎｓ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  “Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｅ‐Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｌｉｇａｎｄｓ，”  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｉｏｌ．  ６：２２３．１‐２２３．７
【非特許文献１１】Ｌｏｋｅ，  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  “Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｅｘｔｅｎｄｅｄ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ａｎｄ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ．”  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ．  Ｔｈｅｒ．  ６：２０８‐２１４
【非特許文献１２】Ｆｌｉｅｓ，  Ｄ．Ｂ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）  “Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｂ７ｓ：  Ｐｌａｙｉｎｇ  ａ  Ｐｉｖｏｔａｌ  Ｒｏｌｅ  ｉｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，”  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ３０（３）：２５１‐２６０
【非特許文献１３】Ａｇａｒｗａｌ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００８）  “Ｔｈｅ  Ｒｏｌｅ  Ｏｆ  Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  Ｉｎ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ，”  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｏｒｇａｎ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．  １３：３６６‐３７２
【非特許文献１４】Ｌｅｎｓｃｈｏｗ，  Ｄ．Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  “ＣＤ２８／Ｂ７  Ｓｙｓｔｅｍ  ｏｆ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，”  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４：２３３‐２５８
【非特許文献１５】Ｗａｎｇ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  “Ｃｏ‐Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７‐ＣＤ２８  Ｆａｍｉｌｙ  Ｉｎ  Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ａｎｄ  Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，”  Ｍｉｃｒｏｂｅｓ  Ｉｎｆｅｃｔ．  ６：７５９‐７６６
【非特許文献１６】Ｃｈａｐｏｖａｌ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  “Ｂ７‐Ｈ３：  Ａ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｆｏｒ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ＩＦＮ‐γ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２：２６９-２７４
【非特許文献１７】Ｓｕｎ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  “Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｏｕｓｅ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｂ７‐Ｈ３  Ｇｅｎｅｓ，”  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６８：６２９４‐６２９７
【非特許文献１８】Ｈｏｆｍｅｙｅｒ，  Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００８）  “Ｔｈｅ  Ｃｏｎｔｒａｓｔｉｎｇ  Ｒｏｌｅ  Ｏｆ  Ｂ７‐Ｈ３，”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （Ｕ．Ｓ．Ａ．）  １０５（３０）：１０２７７‐１０２７８
【非特許文献１９】Ｃａｓｔｒｉｃｏｎｉ，  Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  “Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｏｆ  ４Ｉｇ‐Ｂ７‐Ｈ３  Ａｓ  Ａ  Ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ‐Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｔｈａｔ  Ｅｘｅｒｔｓ  Ａ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｒｏｌｅ  Ｆｒｏｍ  Ａｎ  ＮＫ  Ｃｅｌｌ‐Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｌｙｓｉｓ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （Ｕ．Ｓ．Ａ．）  １０１（３４）：  １２６４０‐１２６４５
【非特許文献２０】Ｘｕ，  Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  “ＭｉｃｒｏＲＮＡ  ｍｉＲ‐２９  Ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｂ７‐Ｈ３：  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｂａｓｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｏｌｉｄ  Ｔｕｍｏｒｓ，”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６９（１５）：５２７５‐６２８１
【非特許文献２１】Ｍａｒｔｉｎ‐Ｏｒｏｚｃｏ，  Ｎ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）  “Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ａｎｔｉ‐Ｔｕｍｏｒ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，”  Ｓｅｍｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．  １７（４）：２８８‐２９８
【非特許文献２２】Ｓｕｂｕｄｈｉ，  Ｓ．Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  “Ｔｈｅ  Ｂａｌａｎｃｅ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ：  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  Ｖｅｒｓｅ  Ｃｏｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ，”  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｍｅｄ．  ８３：１９３‐２０２
【非特許文献２３】Ｙｉ．  Ｋ．Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  “Ｆｉｎｅ  Ｔｕｎｉｎｇ  Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｂ７‐Ｈ３  Ａｎｄ  Ｂ７‐Ｈ４，”  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｒｅｖ．  ２２９：１４５‐１５１
【非特許文献２４】Ｐｒａｓａｄ，  Ｄ．Ｖ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  “Ｍｕｒｉｎｅ  Ｂ７-Ｈ３  Ｉｓ  Ａ  Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  Ｏｆ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ，”  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １７３：２５００‐２５０６
【非特許文献２５】Ｆｕｋｕｓｈｉｍａ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）  “Ｂ７-Ｈ３  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔｈｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ａｌｌｅｒｇｉｃ  Ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｉｔｉｓ  Ｉｎ  Ｍｉｃｅ，”  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｌｅｔｔ．  １１３：５２‐５７
【非特許文献２６】Ｚａｎｇ，  Ｘ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）  “Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｃｏｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ，”  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １３：５２７１‐５２７９
【非特許文献２７】Ｌｉｎｓｌｅｙ，  Ｐ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  “Ｔｈｅ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｕｔｉｌｉｔｙ  Ｏｆ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ＣＤ２８‐Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｃｏ‐Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，”  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ．  Ｒｅｖ．  ２２９：３０７‐３２１
【非特許文献２８】Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇｅｒ，  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  “Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  ４Ｉｇ‐Ｂ７‐Ｈ３，  ａ  Ｍｅｍｂｅｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  ｗｉｔｈ  Ｆｏｕｒ  Ｉｇ‐Ｌｉｋｅ  ｄｏｍａｉｎｓ，”  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １７２（４）：  ２３５２‐２３５９
【非特許文献２９】Ｋｉｎｇ，  Ｒ．Ｇ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  “Ｔｒｅｍ‐Ｌｉｋｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ  ２  Ｉｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｏｎ  Ｃｅｌｌｓ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｍｙｅｌｏｉｄ／Ｇｒａｎｕｌｏｉｄ  Ａｎｄ  Ｂ  Ｌｙｍｐｈｏｉｄ  Ｌｉｎｅａｇｅ  Ａｎｄ  Ｉｓ  Ｕｐ‐Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  Ｉｎ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｔｏ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，”  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １７６：６０１２‐６０２１
【非特許文献３０】Ｋｌｅｓｎｅｙ‐Ｔａｉｔ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  “Ｔｈｅ  ＴＲＥＭ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｆａｍｉｌｙ  Ａｎｄ  Ｓｉｇｎａｌ  Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ，”  Ｎａｔ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ７：１２６６-１２７３
【非特許文献３１】Ｚａｎｇ，  Ｘ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  “Ｂ７ｘ：  Ａ  Ｗｉｄｅｌｙ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ  Ｔｈａｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （Ｕ．Ｓ．Ａ．）  １００：１０３８８-１０３９２
【非特許文献３２】Ｈａｓｈｉｇｕｃｈｉ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００８）  “Ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｏｎ  Ｍｙｅｌｏｉｄ  Ｃｅｌｌ‐Ｌｉｋｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ  ２  （ＴＬＴ‐２）  Ｉｓ  Ａ  Ｃｏｕｎｔｅｒ‐  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｆｏｒ  Ｂ７-Ｈ３  Ａｎｄ  Ｅｎｈａｎｃｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （Ｕ．Ｓ．Ａ．）  １０５（３０）：１０４９５‐１０５００
【非特許文献３３】Ｓａａｔｉａｎ，  Ｂ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  “Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｏｆ  Ｇｅｎｅｓ  Ｆｏｒ  Ｂ７‐Ｈ３  Ａｎｄ  Ｏｔｈｅｒ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｇａｎｄｓ  Ｂｙ  Ｎａｓａｌ  Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌｓ  Ｄｕｒｉｎｇ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，”  Ａｍｅｒ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌ．  Ｍｏｌ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２８７：Ｌ２１７-Ｌ２２５
【非特許文献３４】Ｔａｋａｈａｓｈｉ，  Ｓ．  （２０１１）  “Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  （ＶＥＧＦ），  ＶＥＧＦ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  Ｆｏｒ  Ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  Ｔｕｍｏｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”  Ｂｉｏｌ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｂｕｌｌ．  ３４（１２）：１７８５‐１７８８
【非特許文献３５】Ｓｕｌｌｉｖａｎ，  Ｌ．Ａ．  （２０１０）  “Ｔｈｅ  ＶＥＧＦ  Ｆａｍｉｌｙ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ａｎｄ  抗体‐Ｂａｓｅｄ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅｉｒ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ，”  ｍＡｂｓ  ２：２：１６５‐１７５
【非特許文献３６】Ｈｏｕｃｋ，  Ｋ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  “Ｔｈｅ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｆａｍｉｌｙ：  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａ  Ｆｏｕｒｔｈ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｐｅｃｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  Ｓｐｌｉｃｉｎｇ  Ｏｆ  ＲＮＡ，”  Ｍｏｌ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．  ５（１２）：１８０６‐１８１４
【非特許文献３７】Ｔｉｓｃｈｅｒ，  Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  “Ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  ｆｏｒ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ，”  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６６：１１９４７‐１１９５４
【非特許文献３８】Ｍａｅｄａ，  Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  “Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  Ｖａｌｕｅ  Ｏｆ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｉｎ  Ｇａｓｔｒｉｃ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ，”  Ｃａｎｃｅｒ  ７７：８５８‐８６３
【非特許文献３９】Ｉｓｈｉｇａｍｉ，  Ｓ．Ｉ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  “Ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ  Ｖａｌｕｅ  Ｏｆ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  （ＶＥＧＦ）  Ｉｎ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  Ａｎｄ  Ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ  Ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  Ｃａｎｃｅｒ，”  Ｂｒ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ７８：１３７９‐１３８４
【非特許文献４０】Ｋａｙａ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  “Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｉｎ  Ｕｎｔｒｅａｔｅｄ  Ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ  Ｉｓ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ  Ｏｆ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  Ａｎｄ  Ｐｏｏｒ  Ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ，”  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６：５７２‐５７７
【非特許文献４１】Ｓｈｉｂｕｙａ，  Ｍ．  （２０１３）  “Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ａｎｄ  Ｉｔｓ  受容体  Ｓｙｓｔｅｍ：  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  Ｉｎ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  Ａｎｄ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｏｌｅｓ  Ｉｎ  Ｖａｒｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，”  Ｊ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  １５３（１）：１３‐１９
【非特許文献４２】Ｋｏｃｈ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  “Ｓｉｇｎａｌ  Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  Ｂｙ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  受容体，”  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｊ．  ４３７：１６９‐１８３
【非特許文献４３】ＤｅＶｉｔａ，  Ｈｅｌｌｍａｎ，  ａｎｄ  Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ'ｓ  Ｃａｎｃｅｒ：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ＆  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，  Ｅｉｇｈｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  （２００８），  ＤｅＶｉｔａ，  Ｖ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｄｓ．，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，  ＰＡ，  ｐｐ．  ５３７‐５４７，  ２９７９‐２９９０
【非特許文献４４】Ｍｏｄａｋ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  （Ｍａｒｃｈ  １９９９）  “Ｄｉｓｉａｌｏｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ  ＧＤ２  Ａｎｄ  Ａｎｔｉｇｅｎ  ８Ｈ９：  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｔａｒｇｅｔｓ  Ｆｏｒ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ‐Ｂａｓｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｄｅｓｍｏｐｌａｓｔｉｃ  Ｓｍａｌｌ  Ｒｏｕｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｔｕｍｏｒ  （ＤＳＲＣＴ）  Ａｎｄ  Ｒｈａｂｄｏｍｙｏｓａｒｃｏｍａ  （ＲＭＳ），”  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  Ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，  Ｖｏｌ．  ４０：４７４  （９０ｔｈ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  Ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ；  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，  ＵＳ；  Ａｐｒｉｌ  １０‐１４，  １９９９
【非特許文献４５】Ｍｏｄａｋ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  （Ｍａｒｃｈ  ２０００）  “Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｔｏ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｈａｂｄｏｍｙｏｓａｒｃｏｍａ  Ｕｓｉｎｇ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ８Ｈ９，”  Ｐｒｏｃ．  Ａｍ．  Ａｓｓｏｃ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４１：７２４
【非特許文献４６】Ｍｏｄａｋ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  “Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ８Ｈ９  Ｔａｒｇｅｔｓ  Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｃｅｌｌ  Ｓｕｒｆａｃｅ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｂｙ  Ａ  Ｗｉｄｅ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｏｌｉｄ  Ｔｕｍｏｒｓ，”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６１（１０）：４０４８‐４０５４
【非特許文献４７】Ｍｒｕｇａｌａ，  Ｍ．Ｍ．  （２０１３）  “Ａｄｖａｎｃｅｓ  Ａｎｄ  Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ  Ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｏｆ  Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ：  Ａ  Ｃｌｉｎｉｃｉａｎ'ｓ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ，”  Ｄｉｓｃｏｖ．  Ｍｅｄ．  １５（８３）：２２１‐２３０
【非特許文献４８】Ｓｔｅｉｎｅｒ，  Ｈ．‐Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  “Ａｕｔｏｃｒｉｎｅ  Ｐａｔｈｗａｙｓ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  （ＶＥＧＦ）  Ｉｎ  Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  Ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｅ：  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｌｅｖａｎｃｅ  Ｏｆ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ‐Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｉｎｃｒｅａｓｅ  Ｏｆ  ＶＥＧＦ  Ｌｅｖｅｌｓ，”  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏ‐Ｏｎｃｏｌ．  ６６：１２９‐１３８
【非特許文献４９】Ｒｅａｒｄｏｎ，  Ｄ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００８）  “Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  Ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｅ：  Ａｎ  Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｐａｒａｄｉｇｍ  Ｏｆ  Ａｎｔｉ‐ＶＥＧＦ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．  Ｂｉｏｌ．  Ｔｈｅｒ．  ８（４）：５４１‐５５３
【非特許文献５０】Ｓｉｍｐｓｏｎ，  Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  “Ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  Ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｅ：  Ａｄｖａｎｃｅｓ  Ｉｎ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ａｎｄ  Ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｎｄｉｄａｔｅｓ，”  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ．  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．  ６（１１）：１５９３‐６０７
【非特許文献５１】Ｇｅｒｓｔｎｅｒ，  Ｅ．Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１２）  “Ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｆｏｒ  Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ，”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．  １８（１）：４５‐５０
【非特許文献５２】Ｐｅｌｌｅｇａｔｔａ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  “Ｂｒａｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｅｄｉｔｉｎｇ：  Ｎｏｖｅｌ  Ｅｘａｍｐｌｅｓ  Ｐｒｏｖｉｄｅｄ  Ｂｙ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｏｆ  Ｍａｌｉｇｎａｎｔ  Ｇｌｉｏｍａｓ，”  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ．  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．  １１（１１）：１７５９‐１７７４
【非特許文献５３】Ｌａｉｇｌｅ‐Ｄｏｎａｄｅｙ，  Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  “Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  Ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ‐Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  Ｉｎ  Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａｓ，”  Ｂｕｌｌ．  Ｃａｎｃｅｒ．  ９６（３）：２９１‐２９７
【非特許文献５４】Ｎａｒｉｔａ，  Ｙ．  （２０１３）  “Ｄｒｕｇ  Ｒｅｖｉｅｗ：  Ｓａｆｅｔｙ  Ａｎｄ  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  Ｏｆ  Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ  Ｆｏｒ  Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  Ａｎｄ  Ｏｔｈｅｒ  Ｂｒａｉｎ  Ｔｕｍｏｒｓ，”  Ｊｐｎ．  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  ４３（６）：５８７‐５９５
【非特許文献５５】Ｂａｃａ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  “Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｕｓｉｎｇ  Ｍｏｎｏｖａｌｅｎｔ  Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ，”  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７２（１６）：１０６７８‐１０６８４
【非特許文献５６】Ｐｒｅｓｔａ，  Ｌ．Ｇ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  “Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａｎ  Ａｎｔｉ‐Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｏｆ  Ｓｏｌｉｄ  Ｔｕｍｏｒｓ  Ａｎｄ  Ｏｔｈｅｒ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ５７（２０）：４５９３‐４５９９
【非特許文献５７】ｄｉ  Ｔｏｍａｓｏ，  Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  “Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  Ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ  ａｆｔｅｒ  Ｃｅｄｉｒａｎｉｂ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ：  Ｌａｃｋ  ｏｆ  "Ｒｅｂｏｕｎｄ"  Ｒｅｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｓ  Ｍｏｄｅ  ｏｆ  Ｅｓｃａｐｅ，”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ７１：１９‐２８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２９】
従って、これまでのあらゆる進歩にもかかわらず、血管新生性癌及び特に膠芽腫を治療するための改良された組成物に対する需要が存在し続けている。本発明は、このような組成物、並びに膠芽腫及び血管新生を伴う他の癌の治療における上記組成物の使用を対象とする。
【課題を解決するための手段】
【００３０】
本発明は血管新生性癌、特に膠芽腫の治療のための治療用組成物に関する。特に本発明は、Ｂ７‐Ｈ３に特異的な結合能を有する分子、及び腫瘍血管新生の促進に関わる細胞表面因子（又はその受容体）（特にＶＥＧＦ又はその受容体、ＶＥＧＦＲ）に特異的な結合能を有する分子を含む組成物を対象とする。本発明は更に、上述のような癌の治療、特に膠芽腫の治療における、上述の組成物の使用を対象とする。
【００３１】
詳細には、本発明は血管新生性癌を治療する方法を提供し、上記方法は、上記方法を必要とするレシピエント患者に、Ｂ７‐Ｈ３に特異的な結合能を有する分子、及び腫瘍血管新生を促進する細胞表面因子又はその受容体に特異的な結合能を有する分子を投与するステップを含む。
【００３２】
本発明は特に、上記方法の実施形態に関し、Ｂ７‐Ｈ３に特異的な結合能を有する分子は：
（Ａ）抗Ｂ７‐Ｈ３抗体；
（Ｂ）（Ａ）のＢ７‐Ｈ３‐結合断片；又は
（Ｃ）Ｂ７‐Ｈ３に結合するダイアボディ
である。
【００３３】
本発明は特に、上記方法の実施形態に関し、腫瘍血管新生を促進する細胞表面因子又はその受容体に特異的な結合能を有する分子は：
（Ａ）抗ＶＥＧＦ抗体若しくはＶＥＧＦアンタゴニスト；又は
（Ｂ）抗ＶＥＧＦＲ抗体若しくはＶＥＧＦＲアンタゴニスト
である。
【００３４】
本発明は特に、上記方法の実施形態に関し、Ｂ７‐Ｈ３に特異的な結合能を有する分子は：
Ａ．Ｂ７‐Ｈ３結合に関して抗体ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ若しくはＰＲＣＡ１５７と競合し；又は
Ｂ．抗体ＢＲＣＡ８４Ｄ、抗体ＢＲＣＡ６９Ｄ若しくは抗体ＰＲＣＡ１５７の３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲを有する。
【００３５】
本発明は更に、上記方法の実施形態に関し、腫瘍血管新生を促進する細胞表面因子又はその受容体に特異的な結合能を有する分子は：
Ａ．ＶＥＧＦ結合に関してベバシズマブと競合し；又は
Ｂ．ベバシズマブの３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲを有する。
【００３６】
本発明は更に、上記方法の実施形態に関し、Ｂ７‐Ｈ３に特異的な結合能を有する分子は：
（Ａ）ＢＲＣＡ８４Ｄの軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を備える軽鎖可変ドメイン；
（Ｂ）ＢＲＣＡ８４Ｄの重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を備える重鎖可変ドメイン；並びに
（Ｃ）置換基：Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ及びＰ３９６Ｌを備えるＦｃ領域
を有する抗Ｂ７‐Ｈ３抗体である。
【００３７】
本発明は更に、上記方法の実施形態に関し、Ｂ７‐Ｈ３に特異的な結合能を有する分子は：
（Ａ）ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐２ＶＬのアミノ酸配列（配列番号６９）を有する可変軽鎖；及び
（Ｂ）ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐２ＶＨのアミノ酸配列（配列番号７９）を有する可変重鎖
を備えるヒト化抗Ｂ７‐Ｈ３抗体であり、また腫瘍血管新生を促進する細胞表面因子又はその受容体に特異的な結合能を有する上記分子は、ベバシズマブである。
【００３８】
本発明は更に、上記方法の実施形態に関し、Ｂ７‐Ｈ３結合能を有する分子及びＶＥＧＦ‐結合能を有する分子は患者に投与され、上記２つの分子は共に投与される。
【００３９】
本発明は更に、上記方法の実施形態に関し、投与される分子のうちの第２のものは、上記分子のうちの第１のものの投与後５半減期以内に患者に投与される。
【００４０】
本発明は更に、上記方法の実施形態に関し、血管新生性癌は膠芽腫である。
【００４１】
本発明は更に、上記方法の実施形態に関し、Ｂ７‐Ｈ３に特異的な結合能を有する分子と、腫瘍血管新生を促進する細胞表面因子又はその受容体に特異的な結合能を有する分子とは同一の分子であり、上記分子は二重特異性抗体又は二重特異性ダイアボディである。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】図１は、膠芽腫患者ＮＦのＭＲＩ走査を示す。第１、第２及び第３の列はそれぞれ、最初、２回目及び３回目に観察された病変のＭＲＩ走査である。行Ａは、ベースラインにおける患者の病変の状態を示す。行Ｂは、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体投与の計画された第２のサイクルの開始前の、患者の病変の状態を示す。行Ｃは、ベバシズマブの３回の投与及びＣＣＮＵの１回の投与後の、患者の病変の状態を示す。
【図２】図２Ａ〜２Ｃは、膠芽腫患者ＭＲのＭＲＩ走査を示す。第１、第２、第３及び第４の列はそれぞれ、最初、２回目、３回目及び４回目に観察された病変のＭＲＩ走査である。行Ａは、ベースラインにおける患者の病変の状態を示す。行Ｂは、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体投与の計画された第２のサイクルの開始前の、患者の病変の状態を示す。行Ｃは、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体治療を停止した時点における、患者の病変１〜５の状態を示す。ベバシズマブの投与後の状態は、図の行Ｄに示されている。
【図３】図３は、膠芽腫患者ＧＣのＭＲＩ走査を示す。行Ａは、ベースラインにおける患者の病変の状態を示す。行Ｂ（サイクル６の開始前に取得された画像）は、５〜６サイクルの抗Ｂ７‐Ｈ３抗体投与を通して、僅かな応答があり得るものの、上記病変が安定していたことを示す。行Ｃ（サイクル６の終了時に取得された画像）は、新規の病変の発生を含む、進行性疾患の兆候を示す。患者は認知機能低下を経験し、患者の脳には浮腫が見られた（行Ｃ、第４列）。行Ｄは、ベバシズマブの２回の投与後のＭＲＩ画像を示す。明らかであるように、病変及び浮腫はそのサイズ及び範囲が減少していることが分かった。認知機能の改善が観察されたが、認知機能はベースラインには至らなかった。
【図４】図４は、膠芽腫患者ＤＫのＭＲＩ走査を示す。行Ａは、ベースラインにおける患者の病変の状態を示す。行Ｂ（サイクル２の途中に取得された画像）は、疾患の進行及び擬進行を示す。行Ｃ（ベバシズマブの２回の投与後に取得された画像）は穏やかな応答を示し、認知機能及び歩行が緩やかに改善されている。
【図５】図５は、膠芽腫患者ＪＫのＭＲＩ走査を示す。行Ａは、ベースラインにおける患者の病変の状態を示す。行Ｂ（サイクル２の前に取得された画像）は、疾患の進行及び擬進行を示す。
【図６】図６は、膠芽腫患者ＤＷのＭＲＩ走査を示す。行Ａは、ベースラインにおける患者の病変の状態を示す。行Ｂ（サイクル２の前に取得された画像）は、疾患の進行を示す。
【図７】図７は、上記６人の治療された患者に関する研究における時間を示す。
【図８】図８は、治療の異なるサイクル（Ｃ）及び日数（Ｄ）において抗Ｂ７‐Ｈ３抗体を受容した全ての患者におけるｓＢ７‐Ｈ３のレベルを示す。
【図９】図９は、治療の異なるサイクル（Ｃ）及び日数（Ｄ）において抗Ｂ７‐Ｈ３抗体を受容した膠芽腫患者におけるｓＢ７‐Ｈ３のレベルを示す。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
本発明は、血管新生性癌、特に膠芽腫の治療のための治療用組成物に関する。特に本発明は、Ｂ７‐Ｈ３に特異的な結合能を有する分子及び腫瘍血管新生の促進に関わる細胞表面因子（又はその受容体）（特にＶＥＧＦ又はその受容体、ＶＥＧＦＲ）に特異的な結合能を有する分子を含む組成物を対象とする。本発明は更に、上述のような癌の治療、特に膠芽腫の治療におけるこのような組成物の使用を対象とする。
【００４４】
本発明によると、Ｂ７‐Ｈ３特異性結合能は癌細胞、特に膠芽腫癌細胞の表面上に存在するＢ７‐Ｈ３分子に結合でき、また上記結合によってこれらの細胞に対する免疫応答を促進又は仲介できる。腫瘍血管新生の促進（即ち「腫瘍血管新生抑制活性」）に関わる細胞表面因子（又はその受容体）に特異的な結合能は、このような因子（又はその受容体）に結合して、このような結合によって、上記因子と上記受容体との間の相互作用によって仲介される血管新生を低減又は抑制できる。第１の実施形態では、Ｂ７‐Ｈ３特異性結合能、及び腫瘍血管新生の促進に関わる細胞表面因子（又はその受容体）に特異的な結合能は、例えば抗Ｂ７‐Ｈ３抗体及び血管新生阻害因子抗体、又はこれらの抗体のＢ７‐Ｈ３結合断片及び血管新生阻害因子結合断片といった、異なる分子上に存在する。本発明の第２の態様では、このような結合親和性は、Ｂ７‐Ｈ３及び血管新生阻害因子又はその受容体の両方に同時に結合できる、二重特異性抗体、ダイアボディ、ＢｉＴＥ（登録商標）、又はこれらの他の単鎖若しくは多重鎖変異体といった単一の分子が有する。本発明は、癌の治療、特に膠芽腫の治療におけるこのような組成物の使用を対象とする。
【００４５】
Ｉ．一般的な技術
本発明の実施は、そうでないことが指示されていない限り、（組み換え技術を含む）分子生物学、微生物学、細胞生物学、生化学及び免疫学の従来の技術を採用することになり、これらは従来技術の範囲内である。このような技術については：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  （Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｄｓ．，  ２００１）  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＮＹ；  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  （Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ），  Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ，  Ｐ．，  Ｅｄ．，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｔｏｔｏｗａ，  ＮＪ；  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  （Ｇａｉｔ，  Ｍ．Ｊ．，  Ｅｄ．，  １９８４）；  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｔｏｔｏｗａ，  ＮＪ；  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｎｏｔｅｂｏｏｋ  （Ｃｅｌｌｉｓ，  Ｊ．Ｅ．，  Ｅｄ．，  １９９８）  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ；  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  （Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，  Ｒ．Ｉ．，  Ｅｄ．，  １９８７）；  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  （Ｍａｔｈｅｒ，  Ｊ．Ｐ．  ａｎｄ  Ｒｏｂｅｒｔｓ，  Ｐ．Ｅ．，  Ｅｄｓ．，  １９９８）  Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ；  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ  （Ｄｏｙｌｅ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｄｓ．，  １９９３‐８）  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｈｏｂｏｋｅｎ，  ＮＪ；  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  （Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．）  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ；  Ｗｅｉｒ’ｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  （Ｈｅｒｚｅｎｂｅｒｇ，  Ｌ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｄｓ．  １９９７）  Ｗｉｌｅｙ‐Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ；  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ  （Ｍｉｌｌｅｒ，  Ｊ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｄｓ．，  １９８７）  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＮＹ；  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  （Ａｕｓｕｂｅｌ，  Ｆ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｄｓ．，  １９８７）  Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂ．  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ；  ＰＣＲ：  Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ，  （Ｍｕｌｌｉｓ，  Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｄｓ．，  １９９４）  Ｂｉｒｋｈaｕｓｅｒ，  Ｂｏｓｔｏｎ  ＭＡ；  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  （Ｃｏｌｉｇａｎ，  Ｊ．Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄｓ．，  １９９１）  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌ���ｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｈｏｂｏｋｅｎ，  ＮＪ；  Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  （Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  １９９９）  Ｈｏｂｏｋｅｎ，  ＮＪ；  Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ  ７  （Ｊａｎｅｗａｙ，  Ｃ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  ２００７）  Ｇａｒｌａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｌｏｎｄｏｎ，  ＵＫ；  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  （Ｐ．  Ｆｉｎｃｈ，  １９９７）  Ｓｔｒｉｄｅ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ｄｅｖｏｒａｎ，  ＵＫ；  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  （Ｄ．  Ｃａｔｔｙ．，  ｅｄ．，  １９８９）  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ＵＳＡ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  ＮＹ）；  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  （Ｓｈｅｐｈｅｒｄ，  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｄｓ．，  ２０００）  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ＵＳＡ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  ＮＹ；  Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  （Ｈａｒｌｏｗ，  Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｄｓ．，  １９９８）  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＮＹ；  Ｔｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  （Ｚａｎｅｔｔｉ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｄｓ．  １９９５）  Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  Ｌｏｎｄｏｎ，  ＵＫ）；  ａｎｄ  ＤｅＶｉｔａ，  Ｈｅｌｌｍａｎ，  ａｎｄ  Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ'ｓ  Ｃａｎｃｅｒ：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ＆  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，  Ｅｉｇｈｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  ＤｅＶｉｔａ，  Ｖ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｄｓ．  ２００８，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，  ＰＡ．等の文献に十分に説明されている。
【００４６】
ＩＩ．定義
本明細書において使用される場合、「抗体」は、免疫グロブリン分子であって、当該免疫グロブリン分子の可変領域に位置する少なくとも１つの抗原認識部位によって、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチド等の標的に特異的に結合できる、免疫グロブリン分子である。本明細書において使用される場合、この用語は、完全なポリクローナル又はモノクローナル抗体だけでなく、これらの断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２Ｆｖ等）、単鎖（ＳｃＦｖ）、その変異体、自然に発生する変異体、必要な特異性の抗原認識部位を有する抗体部分を備える融合タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、「ＢｉＴＥ」、「ＤＡＲＴ（商標）」分子、及び必要な特異性の抗原認識部位を備える免疫グロブリン分子の他のいずれの修飾構成を包含する。
【００４７】
用語「ＢｉＴＥ」（ｂｉ‐ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ‐ｃｅｌｌ  ｅｎｇａｇｅｒ：二重特異性Ｔ細胞会合抗体）は、２つの抗原結合ドメインを有し、そのうちの一方がＴ細胞抗原に結合し、第２のものが標的の表面に存在する抗原に結合する、単ポリペプチド鎖分子を表す（国際公開第０５／０６１５４７号；  Ｂａｅｕｅｒｌｅ，  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．  （２００８）  “ＢｉＴＥ（登録商標）：  Ａ  Ｎｅｗ  Ｃｌａｓｓ  Ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｔｈａｔ  Ｒｅｃｒｕｉｔ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ，”  Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ  ３３：  １３７‐１４７；  Ｂａｒｇｏｕ，  ｅｔ  ａｌ．  ２００８）  “Ｔｕｍｏｒ  Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｂｙ  Ｖｅｒｙ  Ｌｏｗ  Ｄｏｓｅｓ  ｏｆ  ａ  Ｔ  Ｃｅｌｌ‐Ｅｎｇａｇｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ，”  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２１：  ９７４‐９７７）。
【００４８】
用語「ＤＡＲＴ（商標）」（ｄｕａｌ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｒｅａｇｅｎｔ：二重親和性最標的化試薬）は、（特に共有結合相互作用によって）連結して、同一の又は異なるエピトープ認識してよい少なくとも２つのエピトープ結合部位を形成する、少なくとも２つのポリペプチド鎖を備える免疫グロブリン分子を指す。ＤＡＲＴ（商標）の各ポリペプチド鎖は、免疫グロブリン軽鎖可変領域及び免疫グロブリン重鎖可変領域を備えるが、これらの領域は相互作用してエピトープ結合部位を形成しない。そうではなく、ＤＡＲＴ（商標）ポリペプチド鎖のうちの一方（例えば第１のもの）の免疫グロブリン重鎖可変領域は、ＤＡＲＴ（商標）ポリペプチド鎖のうちの異なる一方（例えば第２のもの）の免疫グロブリン軽鎖可変領域と相互作用して、エピトープ結合部位を形成する。同様に、ＤＡＲＴ（商標）ポリペプチド鎖のうちの一方（例えば第１のもの）の免疫グロブリン軽鎖可変領域は、ＤＡＲＴ（商標）ポリペプチド鎖のうちの異なる一方（例えば第２のもの）の免疫グロブリン重鎖可変領域と相互作用して、エピトープ結合部位を形成する。ＤＡＲＴ（商標）は単一特異性、二重特異性、三重特異性等であってよく従って１つ、２つ、３つ又はそれより多くの異なるエピトープ（これらは同一の又は異なる抗原のものであってよい）。ＤＡＲＴ（商標）は更に、１価、２価、３価、４価、５価、６価等であってよく、従って１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ又はそれより多くの分子に同時に結合できる。ＤＡＲＴ（商標）の上記２つの属性（即ち特異性及び価の度合い）を組み合わせることによって、例えば４価（即ち４組のエピトープと結合できる）の二重特異性（即ち２つのエピトープと結合できる）抗体等を生成してよい。ＤＡＲＴ（商標）分子は、国際公開第２００６／１１３６６５号、第２００８／１５７３７９号及び第２０１０／０８０５３８号に開示されている。
【００４９】
用語「モノクローナル抗体」は均質な抗体の集団を指し、上記モノクローナル抗体は、抗原の選択的結合に関わる（自然に発生する又は自然に発生しない）アミノ酸から構成される。モノクローナル抗体は特異性が高く、単一の抗原部位に対して指向性を有する。用語「モノクローナル抗体」は、完全なモノクローナル抗体及び完全長モノクローナル抗体だけでなく、これらの断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆｖ等）、単鎖（ＳｃＦｖ）、その変異体、抗体部分を備える融合タンパク質、ヒト化モノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、及び必要な特異性及び抗原への結合能力を有する抗原認識部位を備える免疫グロブリン分子の他のいずれの修飾構成を包含する。抗原の源又は抗原を作製する方法（例えば、ハイブリドーマ、ファージ選択、組み換え発現、遺伝子導入動物等による）に関して、限定は意図されていない。この用語は、免疫グロブリン全体、及び「抗体」の定義において上述した断片等を含む。
【００５０】
用語“ヒト化抗体”は、キメラ分子であって、一般に組み換え技術を用いて調製され、非ヒト種からの免疫グロブリンに由来する抗原結合部位と、残りのヒト免疫グロブリンの構造及び／又は配列に基づく分子の免疫グロブリン構造とを有するキメラ分子を指す。抗原結合部位は、定常ドメインに融合した完全な可変ドメイン、又は可変ドメイン内の適切なフレームワーク領域上に移植された相補性決定領域（ＣＤＲ）のみを備えてよい。抗原結合部位は野生型であってよく、又は１つ若しくは複数のアミノ酸置換によって修飾されてよい。これにより、ヒト個体の免疫原としての不変領域が削減されるが、外来の可変領域に対する免疫応答の可能性は残る（ＬｏＢｕｇｌｉｏ，  Ａ．Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  “Ｍｏｕｓｅ／Ｈｕｍａｎ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｉｎ  Ｍａｎ：  Ｋｉｎｅｔｉｃｓ  Ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （Ｕ．Ｓ．Ａ．）  ８６：４２２０‐４２２４）。別のアプローチは、ヒト由来不変領域を提供することだけでなく、可変領域を修飾して、ヒト型に可能な限り近くなるように再成形することに焦点を当てている。重鎖及び軽鎖両方の可変領域は、４つのフレームワーク領域（ＦＲ）が隣接し、問題となる抗原に応答して変化して結合能力を決定する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を内包することが知られており、上記フレームワーク領域は、ある所与の種において相対的に保存され、またＣＤＲのための足場を提供するものと推定される。ある特定の抗原に対して非ヒト抗体を調製する際、非ヒト抗体由来のＣＤＲを、修飾されるヒト抗体内に存在するＦＲに移植することによって、可変領域を「再成形」又は「ヒト化」できる。様々な抗体に対するこのアプローチの適用は：Ｓａｔｏ，  Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  “Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ  Ａ  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｏ  Ｉｎｈｉｂｉｔ  Ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６‐Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ，”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５３：８５１‐８５６．  Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，  Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  “Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”  Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３‐３２７；  Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  “Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ｇｒａｆｔｉｎｇ  Ａｎ  Ａｎｔｉｌｙｓｏｚｙｍｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ，”  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４‐１５３６；  Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ，  Ｃ．  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  “Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａ  Ｍｏｕｓｅ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｂｙ  ＣＤＲ‐Ｇｒａｆｔｉｎｇ：  Ｔｈｅ  Ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ  Ｏｆ  Ｆｒａｍｅｗｏｒｋ  Ｒｅｓｉｄｕｅｓ  Ｏｎ  Ｌｏｏｐ  Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，”  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ４：７７３‐３７８３；  Ｍａｅｄａ，  Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  “Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｒｅｓｈａｐｅｄ  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｗｉｔｈ  ＨＩＶ‐Ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ  Ａｃ���ｉｖｉｔｙ，”  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ２：１２４‐１３４；  Ｇｏｒｍａｎ，  Ｓ．  Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  “Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ  Ａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ＣＤ４  Ａｎｔｉｂｏｄｙ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （Ｕ．Ｓ．Ａ．）  ８８：４１８１‐４１８５；  Ｔｅｍｐｅｓｔ，  Ｐ．Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  “Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ  Ａ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｏ  Ｉｎｈｉｂｉｔ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｓｙｎｃｙｔｉａｌ  Ｖｉｒｕｓ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ，”  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：２６６‐２７１；  Ｃｏ，  Ｍ．  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  “Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （Ｕ．Ｓ．Ａ．）  ８８：２８６９‐２８７３；  Ｃａｒｔｅｒ，  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  “Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａｎ  Ａｎｔｉ‐ｐ１８５ｈｅｒ２  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｏｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （Ｕ．Ｓ．Ａ．）  ８９：４２８５‐４２８９；  ａｎｄ  Ｃｏ，  Ｍ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  “Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ａｎｄ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｗｉｔｈ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅ  ＣＤ３３  Ａｎｔｉｇｅｎ，”  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４８：１１４９‐１１５４．によって報告されている。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は全てのＣＤＲ配列を保存する（例えば、マウス抗体からの６つのＣＤＲ全てを含有するヒト化マウス抗体）。他の実施形態では、ヒト化抗体は、オリジナルの抗体に対して改変された１つ又は複数のＣＤＲ（１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つ）を有し、これらは、オリジナルの抗体からの１つ又は複数のＣＤＲ「に由来する」１つ又は複数のＣＤＲとも呼ばれる。
【００５１】
本明細書において使用される場合、抗体又はポリペプチドが、別の分子のある領域（即ちエピトープ）に対して「特異的に」結合する、と言われるのは、別のエピトープに比べて当該エピトープとより頻繁に、より迅速に、より長い持続時間、及び／又はより高い親和性で反応又は連結する場合である。例えば、あるＢ７‐Ｈ３エピトープに特異的に結合する抗体は、当該Ｂ７‐Ｈ３エピトープに、他のＢ７‐Ｈ３エピトープ若しくは非Ｂ７‐Ｈ３エピトープに結合するよりも高い親和性、結合活性で、及び／又はより長い持続時間でより容易に、結合する抗体である。同様に、ＶＥＧＦ又はＶＥＧＦＲのあるエピトープに特異的に結合する抗体は、当該エピトープに、他のＶＥＧＦ若しくはＶＥＧＦＲエピトープ又は非ＶＥＧＦ若しくはＶＥＧＦＲエピトープに結合するよりも高い親和性、結合活性で、より容易に、及び／又はより長い持続時間、結合する。また、この定義を読むことにより、例えば、第１の標的に特異的に結合する抗体（又は部分若しくはエピトープ）は、第２の標的に特異的に又は優先的に結合してもしなくてもよいことが理解される。従って「特異的結合」は、排他的結合を（含むことはできるものの）必ずしも必要としない。一般に、結合に対する言及は「特異的」結合を意味するが、必ずしもそうではない。
【００５２】
本明細書において使用される場合、エピトープが「免疫学的に活性である」又は「免疫学的に活性のままである」という言及における用語「免疫学的に活性の（ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｌｙａｃｔｉｖｅ）」は、抗体（例えば抗Ｂ７‐Ｈ３抗体又は抗ＶＥＧＦ若しくは抗ＶＥＧＦＲ抗体）の、異なる条件下で、例えばエピトープを還元及び変性条件に曝露した後に、上記エピトープに結合する能力を指す。
【００５３】
Ｂ７‐Ｈ３（及び特に腎臓、前立腺、若しくは肺癌細胞を含むがこれらに限定されない癌細胞の表面に発現するＢ７‐Ｈ３分子）に特異的に結合する能力；公知の抗Ｂ７‐Ｈ３抗体のＢ７‐Ｈ３への優先的結合を競合的に阻害する能力（オリジナルの抗体が優先的に結合するものと同一のＢ７‐Ｈ３エピトープに対して優先的に結合する能力を含む）；インビトロ若しくはインビボで、生きた細胞の表面に露出したＢ７‐Ｈ３の一部分に結合する能力；限定するものではないが前立腺、肺若しくは腎癌細胞といった、生きた癌細胞の表面に露出したＢ７‐Ｈ３の一部分に結合する能力；表面にＢ７‐Ｈ３を発現する癌細胞（腎臓、前立腺若しくは肺癌細胞等）に化学療法剤を送達する能力；及び／又は表面にＢ７‐Ｈ３を発現する癌細胞に治療剤若しくは検出可能なマーカを送達する能力のうちの１つ又は複数を含むがこれらに限定されない、異なる生物的機能が、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体に関連し得る。同様に：ＶＥＧＦのＶＥＧＦＲ（及び特に細胞の表面に発現するＶＥＧＦＲ分子）への結合を阻害する能力；公知の抗ＶＥＧＦ若しくは抗ＶＥＧＦＲ抗体の、ＶＥＧＦ若しくはＶＥＧＦＲへの優先的結合を競合的に阻害する能力（オリジナルの抗体が優先的に結合するものと同一のエピトープに対して優先的に結合する能力を含む）；インビトロ若しくはインビボで、生きた細胞の表面に露出したＶＥＧＦＲの一部分に結合する能力；及び／又はＶＥＧＦＲ発現細胞に化学療法剤を送達する能力のうちの１つ又は複数を含むがこれらに限定されない、異なる生物的機能が、抗ＶＥＧＦＲ又は抗ＶＥＧＦＲ抗体に関連し得る。本発明のポリペプチド（抗体を含む）は、これらの特徴のうちのいずれの１つ又は複数を有してよい。
【００５４】
「抗Ｂ７‐Ｈ３同等抗体」又は「抗Ｂ７‐Ｈ３同等ポリペプチド」は、例えば結合特異性等の、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体に関連する１つ又は複数の生物的機能を有する抗体又はポリペプチドを指す。「抗ＶＥＧＦ同等抗体」又は「抗ＶＥＧＦ同等ポリペプチド」は、例えばＶＥＧＦのＶＥＧＦＲに対する結合を阻害する能力等の、抗ＶＥＧＦ抗体に関連する１つ又は複数の生物的機能を有する抗体又はポリペプチドを指す。
【００５５】
本明細書において使用される場合、用語「作用剤」は、生物的医薬又は化学化合物を指す。非限定的な例としては、単純若しくは複合の有機若しくは無機分子、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、抗体、抗体誘導体、抗体断片、ビタミン誘導体、炭水化物、毒素、又は化学療法剤化合物が挙げられる。例えば小分子及びオリゴマー（例えばオリゴペプチド及びオリゴヌクレオチド）、並びに様々なコア構造をベースとする合成有機化合物といった、様々な化合物を合成できる。更に、植物又は動物抽出物等、様々な天然源が、スクリーニングのための化合物を提供できる。
【００５６】
本発明の方法において採用される作用剤は、ランダムに選択でき、又は合理的に選択若しくは設計できる。本明細書において使用される場合、作用剤は、当該作用剤が、分子と、その１つ若しくは複数の天然の結合パートナー又は公知の抗体との連結に関わる、特定のアミノ酸又は他の化学的部分に関する事前の考慮又は知識なしに選択される場合に、「ランダムに選択される」と言われる。ランダムに選択される作用剤の例は、化学ライブラリ又はペプチドコンビナトリアルライブラリの使用及びスクリーニングによって識別される作用剤である。
【００５７】
本明細書において使用される場合、作用剤は、当該作用剤が、標的部位の配列及び／又は当該作用剤の作用に関連する標的部位の構造を考慮したランダムでない基準で選択される場合に、「合理的に選択される」と言われる。抗Ｂ７‐Ｈ３作用剤に関して、現在、それに対して抗体を産生できるＢ７‐Ｈ３上の少なくとも３つのエピトープ、従ってＢ７‐Ｈ３／抗Ｂ７‐Ｈ３相互作用をブロックする作用剤に関して少なくとも３つの作用部位が存在すると考えられている。本発明はまた、Ｂ７‐Ｈ３とその天然の結合パートナーとの間の相互作用の部位において作用する作用剤も包含するが、他のリガンド及びその活性Ｂ７‐Ｈ３相互作用部位も、現在公知であるか又は後に識別されるかにかかわらず、本発明の範囲に包含される。作用剤は、受容体／リガンド及び／又はＢ７‐Ｈ３／抗Ｂ７‐Ｈ３抗体複合体の接触部位を構成するペプチド配列を利用することによって、合理的に選択又は合理的に設計できる。例えば、合理的に選択されたペプチド作用剤は、天然の環境において生きた細胞の表面に露出するＢ７‐Ｈ３上に現れるエピトープと、そのアミノ配列が同一であるペプチドとすることができる。このような作用剤は、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体又はＢ７‐Ｈ３の天然のリガンドと結合することによって、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体とＢ７‐Ｈ３との連結又はＢ７‐Ｈ３とその天然のリガンドとの連結を必要に応じて低減又はブロックすることになる。
【００５８】
本明細書において使用される場合、抗体に関する用語「標識される（ｌａｂｅｌｅｄ）」は、放射性作用剤又はフルオロフォア（例えばフィコエリトリン（ＰＥ）若しくは（フルオロイソチオシアネート又はＦＩＴＣとしても知られる）フルオレセインイソチオシアネート）といった検出可能な物質を抗体に連結させる（即ち物理的にリンクさせる）ことによる、抗体の直接的な標識、及び検出可能な物質との反応性による、プローブ又は抗体の間接的な標識を包含することを意図している。
【００５９】
本明細書において使用される場合、抗体に関する用語「連結（ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）」は、抗体への作用剤（例えば化学療法剤）の共有及び非共有吸着又は共有及び非共有結合を含む。抗体は、直接的な結合、又は共通のプラットフォームへの付着を介した間接的な結合により、作用剤（例えば化学療法剤）に連結でき、これにより抗体は、この抗体が結合する癌細胞に対する作用剤の局在化を指示し、またここで、作用剤が、抗体が結合するものと同一の癌細胞を標的としないように、又は作用剤の効力が低下しないように、抗体及び作用剤は生理学的条件下で実質的に解離しない。
【００６０】
用語「生物的試料」は、個体から得られる様々な試料タイプを包含し、診断又は監視アッセイで使用できる。この定義は、唾液、血液及び生物由来の他の液体試料、生体標本又は上記生体標本由来の組織培養物若しくは細胞、及びその子孫、例えば癌を有することが疑われる個体から、好ましい実施形態では卵巣、肺、前立腺、膵臓、大腸、及び乳房組織から採取された組織試料から得られた細胞を包含する。この定義はまた、試薬による処理、可溶化、又はタンパク質若しくはポリヌクレオチド等の特定の成分の富化、又は区分化（ｓｅｃｔｉｏｎｉｎｇ）を目的とした半固体若しくは固体マトリクスへの埋入等によって、獲得後にいずれの方法で走査された試料も含む。用語「生物的試料」は、臨床試料を包含し、また培地中の細胞、細胞上清、細胞溶解物、血清、血漿、生体液及び組織試料も含む。
【００６１】
用語「宿主細胞」は、ポリヌクレオチドインサートの取り込みのための１つ又は複数のベクターに対するレシピエントとすることができる、又は上記レシピエントであった、個々の細胞又は細胞培養物を含む。宿主細胞は単一の宿主細胞の子孫を含み、上記子孫は、自然の、偶発的な、又は意図的な変異により、オリジナルの親細胞と（形態又はゲノムＤＮＡ相補において）必ずしも完全に同一でなくてよい。宿主細胞は、本発明の１つ又は複数のポリヌクレオチドによってインビボでトランスフェクトされた細胞を含む。
【００６２】
本明細書において使用される場合、用語「転移の遅延発現（ｄｅｌａｙｉｎｇ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ）」は、転移の発現を、延ばす、妨害する、遅くする、遅らせる、安定させる、及び／又は延期することを意味する。この遅延は、癌及び／又は治療されている個体の履歴に応じて様々な時間的長さのものとすることができる。当業者には明らかであるように、十分な又は有意な遅延は実際には、個体が転移を発現させないという点で、予防を内包できる。
【００６３】
本明細書において使用される場合、一実施形態では、医薬組成物の「治療有効量」は、（例えば乳癌若しくは前立腺癌といった癌の文脈における）腫瘍のサイズの縮小、癌細胞の成長の遅滞、転移の発現の遅延、疾患によって発生する症状の低減、疾患に罹患した人々のＱＯＬの向上、疾患を治療するために必要な他の薬物の用量の低減、標的化及び／若しくは細胞内在化等による別の薬物の効果の増強、疾患の進行の遅延、並びに／又は個体の生存期間の延長といった臨床的結果を含むがこれらに限定されない、有益な又は望ましい結果を得るために十分な量である。治療有効量は、１回又は複数回の投与で投与できる。本発明の目的に関して、薬剤、化合物又は医薬組成物の治療有効量は、直接的又は間接的に、癌細胞の増殖を低減する（若しくは癌細胞を破壊する）ため、並びに癌細胞の腫瘍の発現若しくは成長を低減する及び／又は遅延させるために十分な量である。いくつかの実施形態では、薬剤、化合物又は医薬組成物の治療有効量は、別の薬剤、化合物又は医薬組成物と併用して達成してもしなくてもよい。従って「治療有効量」は、１つ又は複数の化学療法剤の投与の文脈で考えることができ、また１つ又は複数の他の作用剤との併用によって望ましい結果が達成され得る又は達成される場合、ある単一の作用剤は治療有効量で提供されていると考えてよい。個々の必要量は異なるが、各成分の治療有効量の最適な範囲の決定は当該技術分野の範囲内である。典型的な投薬量に関しては以下で議論する。
【００６４】
本明細書において使用される場合、核酸分子又は作用剤、抗体、組成物若しくは細胞等は、当該核酸分子又は作用剤、抗体、組成物若しくは細胞等が、そのオリジナルの源に自然に存在する汚染された核酸分子、抗体、作用剤、組成物若しくは細胞等から実質的に分離されている場合に、「単離されている」と言われる。
【００６５】
用語「個体」は、１体の脊椎動物、好ましくは哺乳類である。哺乳類としては、ヒト、家畜、競技用の動物、ペット、霊長類、マウス及びラットが挙げられるが、これらに限定されない。最も好ましい実施形態では、用語「個体」はヒトを指す。
【００６６】
用語「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」は本明細書において相互交換可能に使用され、いずれの長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは直鎖又は分岐であってよく、修飾アミノ酸を含んでよく、非アミノ酸によって中断されていてよい。これらの用語はまた、自然に、又は例えばジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、若しくは標識化成分との複合体形成といった他のいずれの操作若しくは修飾の介入によって修飾された、アミノ酸ポリマーも包含する。またこの定義には、例えばアミノ酸の１つ又は複数の類似体（例えば非天然アミノ酸等を含む）及び当該技術分野で公知の他の修飾を含むポリペプチドも含まれる。本発明のポリペプチドは抗体をベースとするため、このポリペプチドは単鎖として、又は連結した複数の鎖として発生し得ることが理解される。
【００６７】
本発明の範囲には本明細書に記載のＢ７‐Ｈ３ペプチドアゴニスト、アンタゴニスト及びモジュレータ（抗Ｂ７‐Ｈ３抗体を含む）のペプチド模倣薬も内包される。このようなペプチド模倣薬はペプチドを含み、ここで少なくとも１つのアミノ酸残基が、アミノ酸のＤ異性体又はアミノ酸のＮ‐アルキル化種といった、自然には一般に見られないアミノ酸残基で置換されている。他の実施形態では、ペプチド模倣薬は、Ｂ７‐Ｈ３ペプチドアゴニスト、アンタゴニスト又はモジュレータの少なくとも１つのアミド結合（−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−）をアミド同配体で置換することによって構成される。好適なアミド同配体としては：−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２−Ｓ（Ｏ）−、−ＣＨ２−Ｓ（Ｏ）２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（Ｅ又はＺ形態）、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＮ）−ＮＨ−、−Ｃ（ＯＨ）−ＣＨ２−、及び−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−が挙げられる。アミド同配体による置換の好適な候補であるＢ７‐Ｈ３ペプチドアゴニスト、アンタゴニスト又はモジュレータのアミド結合は、Ｂ７‐Ｈ３ペプチドアゴニスト、アンタゴニスト又はモジュレータ処置の意図された対象の内因性エステラーゼ又はプロテアーゼによって加水分解可能な結合を含む。
【００６８】
本明細書において使用される場合、用語「実質的に純粋である」は、少なくとも５０％純粋な（即ち汚染物質を有しない）、より好ましくは少なくとも９０％純粋な、より好ましくは少なくとも９５％純粋な、より好ましくは少なくとも９８％純粋な、より好ましくは少なくとも９９％純粋な、最も好ましくは９９％超が純粋な、材料を指す。
【００６９】
本明細書において使用される場合、用語「毒素」は、細胞内の有害反応を発生させるいずれの物質を指す。例えば、癌細胞を指向する毒素は、癌細胞に対して有害な、場合によっては破壊的な影響を有する。毒素の例としては、タキサン、メイタンシノイド、アウリスタチン（例えばモノメチルアウリスタチン（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、アウリスタチンＥ（ＡＥ）等）（米国特許第５，２０８，０２０号；第５，４１６，０６４号；第６，３３３，４１０号；第６，３４０，７０１号；第６，３７２，７３８号；第６，４３６，９３１号；第６，４４１，１６３号；第６，５９６，７５７号；第７，２７６，４９７号；第７，５８５，８５７号；又は第７，８５１，４３２号において開示されているもの等）、カリケアマイシン、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン）、ＣＣ‐１０６５類似体、ドセタキセル；カテプシンＢ又はＥ；リシン、ゲロニン、シュードモナス外毒素、ジフテリア毒素及びＲＮａｓｅ；放射性標識化された（例えばチウキセタンと複合体化された、又は毒性放射性同位体（例えば９０Ｙ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、２１１Ａｔ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃ等で標識された）抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７０】
本明細書において使用される場合、用語「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」又は「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、有益な又は望ましい結果を得るためのアプローチであって、上記有益な又は望ましい結果は、有益な又は望ましい臨床的結果を含み、かつ好ましくは有益な又は望ましい臨床的結果である、アプローチを指す。このような有益な又は望ましい臨床的結果は、限定するものではないが、以下のうちの１つ又は複数を含む：癌細胞若しくは他の患部の増殖の低減（又は癌細胞若しくは他の患部の破壊）；癌において発見される癌細胞の転移の低減；腫瘍のサイズの縮小；疾患によって発生する症状の低減；疾患に罹患した人々のＱＯＬの向上；疾患を治療するために必要な他の薬物の用量の低減；疾患の進行の遅延、並びに／又は個体の生存期間の延長。
【００７１】
本明細書において使用される場合、用語「癌」は、以下から構成される群から選択された癌細胞の存在を特徴とする癌を包含することを意図している：副腎腫瘍の細胞；ＡＩＤＳ関連癌；胞巣状軟部肉腫；星状細胞腫瘍；膀胱癌（扁平上皮癌及び移行上皮癌）；骨癌（アダマンチノーマ、動脈瘤の骨嚢腫、骨軟骨腫、骨肉腫）；脳及び脊髄の癌；転移性脳腫瘍；乳癌；頸動脈球腫瘍；子宮頸癌；軟骨肉腫；脊索腫；嫌色素性腎細胞癌；明細胞癌；大腸癌；結腸直腸癌；皮膚の良性線維性組織球腫；線維形成性小円形細胞腫瘍；上衣腫；ユーイング腫瘍；骨外性粘液型軟骨肉腫；骨性線維形成不全症；線維性骨異形成；胆嚢又は胆管癌；胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）；妊娠性絨毛性疾患；胚細胞腫瘍；神経膠芽腫；頭頸部癌；肝細胞癌；膵島細胞腫瘍；カポジ肉腫；腎癌（腎芽細胞腫、乳頭状腎細胞癌）；白血病；脂肪腫／良性脂肪腫；脂肪肉腫／悪性脂肪腫；肝癌（肝芽腫、肝細胞癌）；リンパ腫；肺癌；髄芽腫；黒色腫；髄膜腫；多発性内分泌腫瘍；多発性骨髄腫；骨髄異形成症候群；神経芽細胞腫；神経内分泌腫瘍；卵巣癌；膵臓癌；甲状腺乳頭癌；副甲状腺腫瘍；小児癌；末梢神経鞘腫瘍；褐色細胞腫；下垂体腫瘍；前立腺癌；後部ブドウ膜黒色腫；希少な血液学的障害；腎転移性癌；ラブドイド腫瘍；横紋筋肉腫；肉腫；皮膚癌；軟組織肉腫；扁平上皮癌；胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｅｒ）；滑膜肉腫；精巣癌；胸腺癌；胸腺腫；甲状腺転移癌；並びに子宮癌（子宮頸部の癌、子宮内膜癌及び平滑筋腫）。
【００７２】
ＩＩＩ．Ｂ７‐Ｈ３及び抗Ｂ７‐Ｈ３抗体
本発明は、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体由来のポリペプチド、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体をコードする配列を含むポリヌクレオチド、及び本明細書に記載の他の作用剤からなる、医薬組成物を含む組成物を包含する。本明細書において使用される場合、組成物は更に、Ｂ７‐Ｈ３、Ｂ７‐Ｈ３アゴニスト、アンタゴニスト、モジュレータに結合する１つ若しくは複数の抗体、ポリペプチド及び／若しくはタンパク質、並びに／又はＢ７‐Ｈ３に結合する１つ若しくは複数の抗体、ポリペプチド及びタンパク質をコードする配列を含む１つ若しくは複数のポリヌクレオチドを含む。
【００７３】
本発明は更に、いずれのＢ７‐Ｈ３ペプチドアゴニスト、アンタゴニスト又はモジュレータと、上記特定のＢ７‐Ｈ３ペプチドアゴニスト、アンタゴニスト又はモジュレータの意図した１つ又は複数の機能を支援する追加の化学構造との複合体を提供する。
【００７４】
これらの複合体は、本明細書において議論される診断、スクリーニング又は精製手順で使用されるいずれの非可溶性剛性支持体マトリクス等の巨大分子と共有結合する、Ｂ７‐Ｈ３ペプチドアゴニスト、アンタゴニスト又はモジュレータを含む。好適なマトリクス材料は、化学的に不活性で、高い多孔性を有し、またペプチドリガンドと共有結合を形成できる多数の官能基を有する、いずれの物質を含む。マトリクス材料、及びマトリクス‐リガンド複合体を調製するための手順の例は、Ｄｅａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （Ｅｄｓ）  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，  ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ  （１９８５）；  Ｌｏｗｅ，  “Ａｎ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ”，  ｉｎ  Ｗｏｒｋ  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ）  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．  ７，  Ｐａｒｔ  ＩＩ，  Ｎｏｒｔｈ-Ｈｏｌｌａｎｄ  （１９７９）；  Ｐｏｒａｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｂｉｏｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ”，  ｉｎ  Ｎｅｕｒａｔｈ，  Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ），  Ｔｈｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，  ３ｒｄ  ｅｄ．，  Ｖｏｌ．  １，  ｐｐ．  ９５-１７８  （１９７５）；  ａｎｄ  Ｓｃｈｏｔｔ，  Ｈ．  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，  Ｍａｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．  ＮＹ  （１９８４）に記載されている。
【００７５】
本明細書ではまた、Ｂ７‐Ｈ３ペプチドアゴニスト、アンタゴニスト又はモジュレータと、本明細書において議論される診断手順において使用されるいずれかのリポーター部分との複合体も提供される。抗Ｂ７‐Ｈ３抗体を含む本発明のＢ７‐Ｈ３ペプチドアゴニスト、アンタゴニスト又はモジュレータ作用剤、ポリペプチド及びタンパク質は更に、以下の基準のうちのいずれか（１つ又は複数）によって識別及び特性決定される：
（ａ）Ｂ７‐Ｈ３（及び特に腎臓、前立腺、若しくは肺癌細胞を含むがこれらに限定されない癌細胞の表面に発現するＢ７‐Ｈ３分子）に特異的に結合する能力；
（ｂ）公知の抗Ｂ７‐Ｈ３抗体のＢ７‐Ｈ３への優先的結合を競合的に阻害する能力（オリジナルの抗体が優先的に結合するものと同一のＢ７‐Ｈ３エピトープに対して優先的に結合する能力を含む）；
（ｃ）インビトロ若しくはインビボで、生きた細胞の表面に露出したＢ７‐Ｈ３の一部分に結合する能力；
（ｄ）Ｂ７‐Ｈ３を発現する生きた癌細胞の表面に露出したＢ７‐Ｈ３の一部分に結合する能力；
（ｅ）表面にＢ７‐Ｈ３を発現する癌細胞（腎臓、前立腺若しくは肺癌細胞等）に化学療法剤を送達する能力；及び
（ｆ）表面にＢ７‐Ｈ３を発現する癌細胞（限定するものではないが前立腺癌細胞等）に治療剤若しくは検出可能なマーカを送達する能力。
【００７６】
本発明の好ましい抗体は、正常な非癌性組織に対する腫瘍組織の差異的ＩＨＣ染色を呈し、更に抗体の効率の霊長類（特にカニクイザル）モデルにおいて試験できる。本発明の好ましい抗体は更に、望ましいレベルの親和性及び抗原特異性を呈する。本発明の好ましい抗体は更に、望ましいレベルの免疫調節活性及び細胞内在化を呈する。
【００７７】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ハイブリドーマＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ若しくはＰＲＣＡ１５７又はこれらの子孫によって産生される抗体である。本発明はまた、これらの寄託されたハイブリドーマによって産生された抗体及びその同等抗体又はポリペプチド断片（例えばＦａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２Ｆｖ、Ｆｃ等）、キメラ抗体、単鎖（ｓｃＦｖ）、その変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、及び必要な特異性の抗原（Ｂ７‐Ｈ３）認識部位を含むこれらの又は同等抗体のうちのいずれの他のいずれの修飾構成の、様々な処方を包含する。本発明はまた、抗Ｂ７‐Ｈ３ファミリーメンバーの生物的特性のうちの１つ又は複数を示すヒト抗体も提供する。抗Ｂ７‐Ｈ３ファミリーの同等抗体（ヒト化抗体及びヒト抗体を含む）、ポリペプチド断片、並びにこれらの断片のうちのいずれを含むポリペプチドは、上述の５つの基準のうちのいずれ（１つ又は複数）によって識別及び特性決定される。抗Ｂ７‐Ｈ３抗体のマウス及び例示的なヒト化可変ドメイン配列は、国際公開第２００８／０６６６９１号において提供されている。このような配列は限定ではなく例として提供されており、異なる配列、並びに上記提供された配列の断片及び変異体は、本発明の範囲に包含される。
【００７８】
Ａ．Ｂ７‐Ｈ３
本明細書において使用される場合、用語「Ｂ７‐Ｈ３」は、ＣＤ２７６としても知られるＩｇ様ドメインを有するタイプＩ膜タンパク質であるタンパク質のヒトＢ７ファミリーのメンバーを指す。用語「２Ｉｇ‐Ｂ７‐Ｈ３」は、Ｉｇ様ドメインを２つのみ含むＢ７‐Ｈ３の形態を指し、用語「４Ｉｇ‐Ｂ７‐Ｈ３」は、Ｉｇ様ドメインを４つ含むＢ７‐Ｈ３の形態を指す（Ｓｕｎ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  “Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｏｕｓｅ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｂ７-Ｈ３  Ｇｅｎｅｓ，”  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６８：６２９４-６２９７；  Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２００４），  “Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  ４Ｉｇ-Ｂ７-Ｈ３，  Ａ  Ｍｅｍｂｅｒ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｗｉｔｈ  Ｆｏｕｒ  Ｉｇ-Ｌｉｋｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ，”  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２００４，  １７２（４）：２３５２-２３５９  ａｎｄ  Ｃａｓｔｒｉｃｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  “Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｏｆ  ４Ｉｇ-Ｂ７-Ｈ３  Ａｓ  Ａ  Ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ-Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｔｈａｔ  Ｅｘｅｒｔｓ  Ａ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｒｏｌｅ  Ｆｒｏｍ  Ａｎ  ＮＫ  Ｃｅｌｌ-Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｌｙｓｉｓ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （Ｕ．Ｓ．Ａ．）  １０１（３４）：１２６４０-１２６４５参照）。抗原「ＴＥＳ７」（国際公開第２００８／０６６６９１号）は、４Ｉｇ‐Ｂ７‐Ｈ３の特性を共有する抗原である。従って、ＴＥＳ７に特異的に結合する抗体は４Ｉｇ‐Ｂ７‐Ｈ３に結合する。ＴＥＳ７抗原は、２つ以上の異なるエピトープを有してよく、エピトープは非直鎖であってよい。いくつかの抗Ｂ７‐Ｈ３抗体は、４Ｉｇ‐Ｂ７‐Ｈ３アイソフォーム上にのみ存在するものを含む非直鎖エピトープに結合することが知られている。現在、ＴＥＳ７は特定の癌細胞において、その正常な組織相対物に比べて過剰発現し得ると考えられている。
【００７９】
ヒトＢ７‐Ｈ３の「２Ｉｇ」形態のアミノ酸配列は、以下の（配列番号１）である：
MLRRRGSPGM GVHVGAALGA LWFCLTGALE VQVPEDPVVA LVGTDATLCC
SFSPEPGFSL AQLNLIWQLT DTKQLVHSFA EGQDQGSAYA NRTALFPDLL
AQGNASLRLQ RVRVADEGSF TCFVSIRDFG SAAVSLQVAA PYSKPSMTLE
PNKDLRPGDT VTITCSSYRG YPEAEVFWQD GQGVPLTGNV TTSQMANEQG
LFDVHSVLRV VLGANGTYSC LVRNPVLQQD AHGSVTITGQ PMTFPPEALW
VTVGLSVCLI ALLVALAFVC WRKIKQSCEE ENAGAEDQDG EGEGSKTALQ
PLKHSDSKED DGQEIA
【００８０】
ヒトＢ７‐Ｈ３の「２Ｉｇ」形態をコードするｃＤＮＡ配列は、以下の（配列番号２）である：
atgctgcgtc ggcggggcag ccctggcatg ggtgtgcatg tgggtgcagc
cctgggagca ctgtggttct gcctcacagg agccctggag gtccaggtcc
ctgaagaccc agtggtggca ctggtgggca ccgatgccac cctgtgctgc
tccttctccc ctgagcctgg cttcagcctg gcacagctca acctcatctg
gcagctgaca gataccaaac agctggtgca cagctttgct gagggccagg
accagggcag cgcctatgcc aaccgcacgg ccctcttccc ggacctgctg
gcacagggca acgcatccct gaggctgcag cgcgtgcgtg tggcggacga
gggcagcttc acctgcttcg tgagcatccg ggatttcggc agcgctgccg
tcagcctgca ggtggccgct ccctactcga agcccagcat gaccctggag
cccaacaagg acctgcggcc aggggacacg gtgaccatca cgtgctccag
ctaccggggc taccctgagg ctgaggtgtt ctggcaggat gggcagggtg
tgcccctgac tggcaacgtg accacgtcgc agatggccaa cgagcagggc
ttgtttgatg tgcacagcgt cctgcgggtg gtgctgggtg cgaatggcac
ctacagctgc ctggtgcgca accccgtgct gcagcaggat gcgcacggct
ctgtcaccat cacagggcag cctatgacat tccccccaga ggccctgtgg
gtgaccgtgg ggctgtctgt ctgtctcatt gcactgctgg tggccctggc
tttcgtgtgc tggagaaaga tcaaacagag ctgtgaggag gagaatgcag
gagctgagga ccaggatggg gagggagaag gctccaagac agccctgcag
cctctgaaac actctgacag caaagaagat gatggacaag aaatagcc
【００８１】
ヒトＢ７‐Ｈ３の「２Ｉｇ」形態のアミノ酸配列（配列番号１）（以下では太字及び下線で示されている）は、ヒトＢ７‐Ｈ３の「４Ｉｇ」形態（配列番号３）内に完全に包含される：
MLRRRGSPGM GVHVGAALGA LWFCLTGALE VQVPEDPVVA LVGTDATLCC
SFSPEPGFSL AQLNLIWQLT DTKQLVHSFA EGQDQGSAYA NRTALFPDLL
AQGNASLRLQ RVRVADEGSF TCFVSIRDFG SAAVSLQVAA PYSKPSMTLE
PNKDLRPGDT VTITCSSYQG YPEAEVFWQD GQGVPLTGNV TTSQMANEQG
LFDVHSILRV VLGANGTYSC LVRNPVLQQD AHSSVTITPQ RSPTGAVEVQ
VPEDPVVALV GTDATLRCSF SPEPGFSLAQ LNLIWQLTDT KQLVHSFTEG
RDQGSAYANR TALFPDLLAQ GNASLRLQRV RVADEGSFTC FVSIRDFGSA
AVSLQVAAPY SKPSMTLEPN KDLRPGDTVT ITCSSYRGYP EAEVFWQDGQ
GVPLTGNVTT SQMANEQGLF DVHSVLRVVL GANGTYSCLV RNPVLQQDAH
GSVTITGQPM TFPPEALWVT VGLSVCLIAL LVALAFVCWR KIKQSCEEEN
AGAEDQDGEG EGSKTALQPL KHSDSKEDDG QEIA
【００８２】
ヒトＢ７‐Ｈ３の「４Ｉｇ」形態をコードするｃＤＮＡ配列は、以下の（配列番号４）であり；ヒトＢ７‐Ｈ３の「２Ｉｇ」形態をコードする残基は、太字及び下線で示されている：
atgctgcgtc ggcggggcag ccctggcatg ggtgtgcatg tgggtgcagc
cctgggagca ctgtggttct gcctcacagg agccctggag gtccaggtcc
ctgaagaccc agtggtggca ctggtgggca ccgatgccac cctgtgctgc
tccttctccc ctgagcctgg cttcagcctg gcacagctca acctcatctg
gcagctgaca gataccaaac agctggtgca cagctttgct gagggccagg
accagggcag cgcctatgcc aaccgcacgg ccctcttccc ggacctgctg
gcacagggca acgcatccct gaggctgcag cgcgtgcgtg tggcggacga
gggcagcttc acctgcttcg tgagcatccg ggatttcggc agcgctgccg
tcagcctgca ggtggccgct ccctactcga agcccagcat gaccctggag
cccaacaagg acctgcggcc aggggacacg gtgaccatca cgtgctccag
ctaccagggc taccctgagg ctgaggtgtt ctggcaggat gggcagggtg
tgcccctgac tggcaacgtg accacgtcgc agatggccaa cgagcagggc
ttgtttgatg tgcacagcat cctgcgggtg gtgctgggtg caaatggcac
ctacagctgc ctggtgcgca accccgtgct gcagcaggat gcgcacagct
ctgtcaccat cacaccccag agaagcccca caggagccgt ggaggtccag
gtccctgagg acccggtggt ggccctagtg ggcaccgatg ccaccctgcg
ctgctccttc tcccccgagc ctggcttcag cctggcacag ctcaacctca
tctggcagct gacagacacc aaacagctgg tgcacagttt caccgaaggc
cgggaccagg gcagcgccta tgccaaccgc acggccctct tcccggacct
gctggcacaa ggcaatgcat ccctgaggct gcagcgcgtg cgtgtggcgg
acgagggcag cttcacctgc ttcgtgagca tccgggattt cggcagcgct
gccgtcagcc tgcaggtggc cgctccctac tcgaagccca gcatgaccct
ggagcccaac aaggacctgc ggccagggga cacggtgacc atcacgtgct
ccagctaccg gggctaccct gaggctgagg tgttctggca ggatgggcag
ggtgtgcccc tgactggcaa cgtgaccacg tcgcagatgg ccaacgagca
gggcttgttt gatgtgcaca gcgtcctgcg ggtggtgctg ggtgcgaatg
gcacctacag ctgcctggtg cgcaaccccg tgctgcagca ggatgcgcac
ggctctgtca ccatcacagg gcagcctatg acattccccc cagaggccct
gtgggtgacc gtggggctgt ctgtctgtct cattgcactg ctggtggccc
tggctttcgt gtgctggaga aagatcaaac agagctgtga ggaggagaat
gcaggagctg aggaccagga tggggaggga gaaggctcca agacagccct
gcagcctctg aaacactctg acagcaaaga agatgatgga caagaaatag
cc
【００８３】
「パンニング」手順は、Ｂ７‐Ｈ３を発現する組織又は細胞からｃＤＮＡライブラリを得るステップ、第２の細胞タイプで上記ｃＤＮＡを過剰発現させるステップ、及び上記第２の細胞タイプのトランスフェクトされた細胞を、Ｂ７‐Ｈ３への特異的結合に関してスクリーニングするステップによって実行できる。「パンニング」による、細胞表面タンパク質をコードする哺乳類遺伝子のクローニングにおいて使用される方法の詳細な説明は、従来技術に見ることができる（例えばＡｒｕｆｆｏ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９８７）  “Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｏｆ  Ａ  ＣＤ２８  ｃＤＮＡ  Ｂｙ  Ａ  Ｈｉｇｈ-Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ  ＣＯＳ  Ｃｅｌｌ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （Ｕ．Ｓ．Ａ．）  ８４：８５７３-８５７７  ａｎｄ  Ｓｔｅｐｈａｎ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  “Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｓｕｒｆａｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  Ｉｎｖｏｌｖｅｄ  Ｉｎ  Ｏｒｇａｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：  Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｓ  Ｉｎｖｏｌｖｅｄ  Ｉｎ  Ｎｏｒｍａｌ  Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，”  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．  １４０：５８４１-５８５４参照）。
【００８４】
抗Ｂ７‐Ｈ３抗体、並びに他のＢ７‐Ｈ３ペプチドアゴニスト、アンタゴニスト及びモジュレータをコードするｃＤＮＡは、当該技術分野において標準的な方法に従った特定の細胞タイプからのｍＲＮＡの逆転写によって得ることができる。具体的には、ｍＲＮＡは、既出のＳａｍｂｒｏｏｋｅｔ  ａｌ．に記載の手順に従って、様々な溶解酵素若しくは化学溶液を用いて単離でき、又は市販の核酸結合樹脂により、製造者（例えばＱｉａｇｅｎ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｐｒｏｍｅｇａ）が提供する添付の説明書に従って抽出できる。次に合成ｃＤＮＡを発現ベクターに導入して、第２のタイプの細胞において関心対象の抗体又はタンパク質を産生する。発現ベクターは宿主細胞内で、エピソームとして又は染色体ＤＮＡの不可欠な部分として複製可能でなければならないことがうかがえる。好適な発現ベクターとしては、プラスミド；アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス及びコスミドを含むウイルスベクターが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８５】
関心対象のポリヌクレオチドを含有するベクターは：電気穿孔；塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ‐デキストラン又は他の物質を使用したトランスフェクション；微粒子銃；リポフェクション；及び感染（例えばベクターがワクシニアウイルス等の感染性因子である場合）を含む多数の適切な手段のうちのいずれによって、宿主細胞に導入できる。ベクター又はポリヌクレオチドの導入の選択は、宿主細胞の特徴に左右される場合が多い。
【００８６】
異種ＤＮＡを過剰発現できるいずれの宿主細胞を、関心対象の抗体、ポリペプチド又はタンパク質をコードする遺伝子を単離するために使用できる。好適な哺乳類宿主細胞の非限定的な例としては、ＣＯＳ、ＨｅＬａ及びＣＨＯ細胞が挙げられるがこれらに限定されない。好ましくは、宿主細胞は、（存在する場合は）宿主細胞内の対応する関心対象の内因性抗体又はタンパク質の約５倍、より好ましくは１０倍、更に好ましくは２０倍高いレベルでｃＤＮＡを発現する。Ｂ７‐Ｈ３に対する特異的結合に関して宿主細胞をスクリーニングするステップは、免疫アッセイ又はＦＡＣＳによって実施される。関心対象の抗体又はタンパク質を過剰発現する細胞を識別できる。
【００８７】
Ｂ７‐Ｈ３官能基のアゴニスト、アンタゴニスト及び他のモジュレータは、明示的に本発明の範囲内に含まれる。これらのアゴニスト、アンタゴニスト及びモジュレータは、Ｂ７‐Ｈ３の抗原決定部位のうちの１つ若しくは複数を含む、又は上記部位の１つ若しくは複数の断片、上記部位の変異体、若しくは上記部位のペプチド模倣薬を含む、ポリペプチドである。これらのアゴニスト化合物、アンタゴニスト化合物及びＢ７‐Ｈ３モジュレータ化合物は、直鎖又は環化形態で提供され、また任意に、自然には一般的に見られない少なくとも１つのアミノ酸残基、又は少なくとも１つのアミド同配体を含む。これらの化合物はグリコシル化してよい。
【００８８】
より具体的には、本明細書において使用される場合、用語「Ｂ７‐Ｈ３モジュレータ」は、（１）ヒトＢ７‐Ｈ３とその天然のリガンド若しくは抗Ｂ７‐Ｈ３抗体との間の相互作用を妨害若しくはブロックでき；又は（２）ヒトＢ７‐Ｈ３及びその天然のリガンド若しくは抗Ｂ７‐Ｈ３抗体に結合でき；（３）ヒトＢ７‐Ｈ３及びその天然のリガンド若しくは抗Ｂ７‐Ｈ３抗体に結合できる抗体の産生において使用できる抗原部位を含有し；（４）ヒトＢ７‐Ｈ３及びその天然のリガンド若しくは抗Ｂ７‐Ｈ３抗体に結合できる抗体のスクリーニングにおいて使用できる抗原部位を含有し；（５）ヒトＢ７‐Ｈ３とその天然のリガンド若しくは抗Ｂ７‐Ｈ３抗体との間の相互作用を妨害若しくはブロックできる抗体の産生において使用できる抗原部位を含有し；（６）ヒトＢ７‐Ｈ３とその天然のリガンド若しくは抗Ｂ７‐Ｈ３抗体との間の相互作用を妨害若しくはブロックできる抗体のスクリーニングにおいて使用できる抗原部位を含有する、いずれの化合物として定義される。Ｂ７‐Ｈ３モジュレータは、その活性がＴ細胞活性化を増強するか又はＴ細胞活性化を阻害するかに応じて、それぞれ「Ｂ７‐Ｈ３アゴニスト」又は「Ｂ７‐Ｈ３アンタゴニスト」であってよい。
【００８９】
Ｂ７‐Ｈ３アゴニスト、アンタゴニスト及びモジュレータは、Ｂ７‐Ｈ３変異体、Ｂ７‐Ｈ３ペプチドアンタゴニスト、ペプチド模倣薬及び小分子；抗Ｂ７‐Ｈ３抗体及び免疫グロブリン変異体；アミノ酸置換、欠失、及び付加変異体又はこれらのいずれの組み合わせを含むヒトＢ７‐Ｈ３のアミノ酸変異体；並びにキメラ免疫グロブリンを含む。本発明のＢ７‐Ｈ３アゴニスト、アンタゴニスト及びモジュレータは、ヒトＢ７‐Ｈ３の、その天然のリガンド又は抗Ｂ７‐Ｈ３抗体への結合に関わるＢ７‐Ｈ３ドメインの識別に基づく。従って本発明は、Ｂ７‐Ｈ３アゴニスト、アンタゴニスト及びモジュレータに、ヒトＢ７‐Ｈ３の抗Ｂ７‐Ｈ３結合ドメインのうちの１つ又は複数を複製又は模倣する分子構造をもたらす。
【００９０】
本明細書において使用される場合、用語「Ｂ７‐Ｈ３変異体」は、アミノ酸置換、欠失、及び付加変異体又はこれらのいずれの組み合わせを含むヒトＢ７‐Ｈ３のいずれのアミノ酸変異体を指す。この定義は、ヒトＢ７‐Ｈ３／非ヒトキメラといったキメラ分子、及び他のハイブリッド分子を包含する。またこの定義には、当該分子の変異体又は１つ若しくは複数のハイブリッド領域を含む、Ｂ７‐Ｈ３変異体分子のいずれの断片も含まれる。
【００９１】
Ｂ．抗Ｂ７‐Ｈ３抗体
複数の方法を用いて、Ｂ７‐Ｈ３に結合するポリペプチド及びモノクローナル抗体をスクリーニングしてよい。「結合」は、生物的又は免疫学的に妥当な特異的結合を指し、例えば免疫グロブリンが非特異的標的に対して極めて高い濃度で使用される場合に発生し得る非特異的結合を指すものではないことが理解される。一実施形態では、モノクローナル抗体は、標準的なスクリーニング技術を用いて、Ｂ７‐Ｈ３への結合に関してスクリーニングされる。このようにして、抗Ｂ７‐Ｈ３モノクローナル抗体が得られた。このような抗体を得るための方法は、米国特許公開第２０１３／０１４９２３６号及び国際公開第２０１１／１０９４００号に記載されている。
【００９２】
本発明はまた、本発明の抗体のアミノ酸配列を含むポリペプチドも提供する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、軽鎖及び／又は重鎖可変領域のうちの１つ又は複数を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、抗体の軽鎖及び／又は重鎖ＣＤＲのうちの１つ又は複数を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、抗体の軽鎖及び／又は重鎖の３つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは：オリジナルの抗体の配列の、少なくとも５個の連続するアミノ酸、少なくとも８個の連続するアミノ酸、少なくとも約１０個の連続するアミノ酸、少なくとも約１５個の連続するアミノ酸、少なくとも約２０個の連続するアミノ酸、少なくとも約２５個の連続するアミノ酸、少なくとも約３０個の連続するアミノ酸のうちのいずれを有する抗体のアミノ酸配列を含み、ここで上記アミノ酸のうちの少なくとも３つは、抗体の可変領域からのものである。一実施形態では、可変領域は、オリジナルの抗体の軽鎖からのものである。別の実施形態では、可変領域は、抗体の重鎖からのものである。別の実施形態では、５つの（又はそれを超える）連続するアミノ酸は、抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）からのものである。
【００９３】
本発明の好ましい抗Ｂ７‐Ｈ３抗体は、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７であり、これらの抗体は全て、ヒトＢ７‐Ｈ３分子に対して反応性を有するマウス抗体である。ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７の可変軽鎖及び可変重鎖のアミノ酸及びコード化ポリヌクレオチド配列を、これらの鎖それぞれのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３ドメインそれぞれと共に以下に示す。従って当業者は、このようなＣＤＲ及びその誘導体を有する抗体を構成でき、またＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ及びＰＲＣＡ１５７によって認識されるエピトープに結合できる。
【００９４】
１．ＢＲＣＡ６９Ｄの配列
（ａ）ＢＲＣＡ６９Ｄ軽鎖配列
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変軽鎖のアミノ酸配列（配列番号５）：
DIQMTQTTSS LSASLGDRVT ISCRASQDIS NYLNWYQQKP DGTVKLLIYY
TSRLHSGVPS RFSGSGSGTD YSLTIDNLEQ EDIATYFCQQ GNTLPPTFGG
GTKLEIK
【００９５】
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号６）：
gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga
cagagtcacc atcagttgca gggcaagtca ggacattagt aattatttaa
actggtatca gcagaaacca gatggaactg ttaaactcct gatctactac
acatcacgat tacactcagg agtcccatca aggttcagtg gcagtgggtc
tggaacagat tattctctca ccattgacaa cctggagcaa gaagatattg
ccacttactt ttgccaacag ggtaatacgc ttcctccgac gttcggtgga
ggcaccaaac tggaaatcaa a
【００９６】
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ１（配列番号７）：RASQDISNYLN
【００９７】
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ１をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号８）：
agggcaagtc aggacattag taattattta aac
【００９８】
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ２（配列番号９）：YTSRLHS
【００９９】
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ２をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号１０）：tacacatcac gattacactc a
【０１００】
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ３（配列番号１１）：QQGNTLPPT
【０１０１】
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ３をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号１２）：caacagggta atacgcttcc tccgacg
【０１０２】
（ｂ）ＢＲＣＡ６９Ｄ重鎖配列
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変重鎖のアミノ酸配列（配列番号１３）：
QVQLQQSGAE LARPGASVKL SCKASGYTFT SYWMQWVKQR PGQGLEWIGT
IYPGDGDTRY TQKFKGKATL TADKSSSTAY MQLSSLASED SAVYYCARRG
IPRLWYFDVW GAGTTVTVSS
【０１０３】
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変重鎖をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号１４）：
caggttcagc tccagcagtc tggggctgag ctggcaagac ctggggcttc
agtgaagttg tcctgcaagg cttctggcta cacctttact agctactgga
tgcagtgggt aaaacagagg cctggacagg gtctggaatg gattgggact
atttatcctg gagatggtga tactaggtac actcagaagt tcaagggcaa
ggccacattg actgcagata aatcctccag cacagcctac atgcaactca
gcagcttggc atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagaagaggg
attccacggc tttggtactt cgatgtctgg ggcgcaggga ccacggtcac
cgtctcctca
【０１０４】
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変重鎖ＣＤＲ１（配列番号１５）：SYWMQ
【０１０５】
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変重鎖ＣＤＲ１をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号１６）：agctactgga tgcag
【０１０６】
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変重鎖ＣＤＲ２（配列番号１７）：TIYPGDGDTR YTQKFKG
【０１０７】
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変重鎖ＣＤＲ２をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号１８）：actatttatc ctggagatgg tgatactagg tacactcag aagttcaagg gc
【０１０８】
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変重鎖ＣＤＲ３（配列番号１９）：RGIPRLWYFD V
【０１０９】
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変重鎖ＣＤＲ３をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号２０）：agagggattc cacggctttg gtacttcgat gtc
【０１１０】
２．ＰＲＣＡ１５７の配列
（ａ）ＰＲＣＡ１５７軽鎖配列
ＰＲＣＡ１５７可変軽鎖のアミノ酸配列（配列番号２１）：
DIQMTQSPAS LSVSVGETVT ITCRASESIY SYLAWYQQKQ GKSPQLLVYN
TKTLPEGVPS RFSGSGSGTQ FSLKINSLQP EDFGRYYCQH HYGTPPWTFG
GGTNLEIK
【０１１１】
ＰＲＣＡ１５７可変軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号２２）：
gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgtat ctgtgggaga
aactgtcacc attacatgtc gagcaagtga gagtatttac agttatttag
catggtatca gcagaaacag ggaaaatctc ctcagctcct ggtctataat
acaaaaacct taccagaggg tgtgccatca aggttcagtg gcagtggatc
aggcacacag ttttctctga agatcaacag cctgcagcct gaagattttg
ggagatatta ctgtcaacat cattatggta ctcctccgtg gacgttcggt
ggaggcacca acctggaaat caaa
【０１１２】
ＰＲＣＡ１５７可変軽鎖ＣＤＲ１（配列番号２３）：RASESIYSYLA
【０１１３】
ＰＲＣＡ１５７可変軽鎖ＣＤＲ１をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号２４）：cgagcaagtg agagtattta cagttattta gca
【０１１４】
ＰＲＣＡ１５７可変軽鎖ＣＤＲ２（配列番号２５）：NTKTLPE
【０１１５】
ＰＲＣＡ１５７可変軽鎖ＣＤＲ２をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号２６）：aatacaaaaa ccttaccaga g
【０１１６】
ＰＲＣＡ１５７可変軽鎖ＣＤＲ３（配列番号２７）：QHHYGTPPW
【０１１７】
ＰＲＣＡ１５７可変軽鎖ＣＤＲ３をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号２８）：caacatcatt atggtactcc tccgtgg
【０１１８】
（ｂ）ＰＲＣＡ１５７重鎖配列
ＰＲＣＡ１５７可変重鎖のアミノ酸配列（配列番号２９）：
EVQQVESGGD LVKPGGSLKL SCAASGFTFS SYGMSWVRQT PDKRLEWVAT
INSGGSNTYY PDSLKGRFTI SRDNAKNTLY LQMRSLKSED TAMYYCARHD
GGAMDYWGQG TSVTVSS
【０１１９】
ＰＲＣＡ１５７可変重鎖をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号３０）：
gaggtgcagc aggtggagtc ggggggagac ttagtgaagc ctggagggtc
cctgaaactc tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt tcctatggca
tgtcttgggt tcgccagact ccagacaaga ggctggagtg ggtcgcaacc
attaatagtg gtggaagtaa cacctactat ccagacagtt tgaaggggcg
attcaccatc tccagagaca atgccaagaa caccctttac ctgcaaatgc
gcagtctgaa gtctgaggac acagccatgt attactgtgc aagacatgac
gggggagcta tggactactg gggtcaagga acctcagtca ccgtctcctc
a
【０１２０】
ＰＲＣＡ１５７可変重鎖ＣＤＲ１（配列番号３１）：SYGMS
【０１２１】
ＰＲＣＡ１５７可変重鎖ＣＤＲ１をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号３２）：tcctatggca tgtct
【０１２２】
ＰＲＣＡ１５７可変重鎖ＣＤＲ２（配列番号３３）：VATINSGGSN TYYPDSLKG
【０１２３】
ＰＲＣＡ１５７可変重鎖ＣＤＲ２をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号３４）：gtcgcaacca ttaatagtgg tggaagtaac acctactatc cagacagttt gaagggg
【０１２４】
ＰＲＣＡ１５７可変重鎖ＣＤＲ３（配列番号３５）：HDGGAMDY
【０１２５】
ＰＲＣＡ１５７可変重鎖ＣＤＲ３をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号３６）：catgacgggg gagctatgga ctac
【０１２６】
２．ＢＲＣＡ８４Ｄの配列
（ａ）ＢＲＣＡ８４Ｄ軽鎖配列
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖のアミノ酸配列（配列番号３７）：
DIAMTQSQKF MSTSVGDRVS VTCKASQNVD TNVAWYQQKP GQSPKALIYS
ASYRYSGVPD RFTGSGSGTD FTLTINNVQS EDLAEYFCQQ YNNYPFTFGS
GTKLEIK
【０１２７】
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号３８）：
gacattgcga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga
cagggtcagc gtcacctgca aggccagtca gaatgtggat actaatgtag
cctggtatca acagaaacca gggcaatctc ctaaagcact gatttactcg
gcatcctacc ggtacagtgg agtccctgat cgcttcacag gcagtggatc
tgggacagat ttcactctca ccatcaacaa tgtgcagtct gaagacttgg
cagagtattt ctgtcagcaa tataacaact atccattcac gttcggctcg
gggacaaagt tggaaataaa a
【０１２８】
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ１（配列番号３９）：KASQNVDTNVA
【０１２９】
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ１をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号４０）：aaggccagtc agaatgtgga tactaatgta gcc
【０１３０】
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ２（配列番号４１）：SASYRYS
【０１３１】
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ２をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号４２）：tcggcatcct accggtacag t
【０１３２】
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ３（配列番号４３）：QQYNNYPFT
【０１３３】
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ３をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号４４）：cagcaatata acaactatcc attcacg
【０１３４】
（ｂ）ＢＲＣＡ８４Ｄ重鎖配列
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖のアミノ酸配列（配列番号４５）：
DVQLVESGGG LVQPGGSRKL SCAASGFTFS SFGMHWVRQA PEKGLEWVAY
ISSDSSAIYY ADTVKGRFTI SRDNPKNTLF LQMTSLRSED TAMYYCGRGR
ENIYYGSRLD YWGQGTTLTV SS
【０１３５】
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号４６）：
gatgtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgcagc ctggagggtc
ccggaaactc tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt agctttggaa
tgcactgggt tcgtcaggct ccagagaagg ggctggagtg ggtcgcatac
attagtagtg acagtagtgc catctactat gcagacacag tgaagggccg
attcaccatc tccagagaca atcccaagaa caccctgttc ctgcaaatga
ccagtctaag gtctgaggac acggccatgt attactgtgg aagagggagg
gaaaacattt actacggtag taggcttgac tactggggcc aaggcaccac
tctcacagtc tcctca
【０１３６】
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖ＣＤＲ１（配列番号４７）：FGMH
【０１３７】
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖ＣＤＲ１をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号４８）：tttggaatgcac
【０１３８】
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖ＣＤＲ２（配列番号４９）：YISSDSSAIYYADTVK
【０１３９】
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖ＣＤＲ２をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号５０）：tacattagta gtgacagtag tgccatctac tatgcagaca cagtgaag
【０１４０】
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖ＣＤＲ３（配列番号５１）：GRENIYYGSRLDY
【０１４１】
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖ＣＤＲ３をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号５２）：gggagggaaa acatttacta cggtagtagg cttgactac
【０１４２】
モノクローナル抗体ＢＲＣＡ８４Ｄをヒト化することにより、改善されたヒト治療潜在能力を提供する抗体（本明細書では一般的に「ｈＢＲＣＡ８４Ｄ」と呼ぶ）を産生した。得られたヒト化抗体（本明細書では「ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐１」と呼ぶ）の可変軽鎖及び可変重鎖の配列並びにこれらそれぞれのアミノ酸ポリヌクレオチド配列を、以下に挙げる：
【０１４３】
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変軽鎖（配列番号５３）：
DIQLTQSPSF LSASVGDRVT ITCKASQNVD TNVAWYQQKP GKAPKLLIYS
ASYRYSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YNNYPFTFGQ
GTKLEIK
【０１４４】
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号５４）：
gacatccagc tgacccagtc cccctccttc ctgtctgcct ccgtgggcga
cagagtgacc atcacatgca aggcctccca gaacgtggac accaacgtgg
cctggtatca gcagaagcct ggcaaggccc ctaagctgct gatctactcc
gcctcctacc ggtactccgg cgtgccttcc aggttctccg gctccggctc
tggcaccgac ttcaccctga ccatctccag cctgcagcct gaggacttcg
ccacctacta ctgccagcag tacaacaact accctttcac cttcggccag
ggcaccaagc tggaaatcaa g
【０１４５】
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変軽鎖ＣＤＲ１（配列番号５５）：KASQNVDTNVA
【０１４６】
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変軽鎖ＣＤＲ１をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号５６）：aaggccagtc agaatgtgga tactaatgta gcc
【０１４７】
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変軽鎖ＣＤＲ２（配列番号５７）：SASYRYS
【０１４８】
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変軽鎖ＣＤＲ２をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号５８）：tcggcatcct accggtacag t
【０１４９】
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変軽鎖ＣＤＲ３（配列番号５９）：QQYNNYPFT
【０１５０】
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変軽鎖ＣＤＲ３をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号６０）：cagcaatata acaactatcc attcacg
【０１５１】
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変重鎖のアミノ酸配列（配列番号６１）：
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SFGMHWVRQA PGKGLEWVAY
ISSDSSAIYY ADTVKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRDED TAVYYCARGR
ENIYYGSRLD YWGQGTTVTV SS
【０１５２】
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変重鎖をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号６２）：
gaggtgcagc tggtcgagtc tggcggagga ctggtgcagc ctggcggctc
cctgagactg tcttgcgccg cctccggctt caccttctcc agcttcggca
tgcactgggt ccgccaggct ccaggcaagg gactggaatg ggtggcctac
atctcctccg actcctccgc catctactac gccgacaccg tgaagggcag
gttcaccatc tcccgggaca acgccaagaa ctccctgtac ctgcagatga
actccctgcg ggacgaggac accgccgtgt actactgcgc cagaggccgg
gagaatatct actacggctc ccggctggat tattggggcc agggcaccac
cgtgaccgtg tcctct
【０１５３】
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変重鎖ＣＤＲ１（配列番号６３）：FGMH
【０１５４】
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変重鎖ＣＤＲ１をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号６４）：tttggaatgcac
【０１５５】
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖ＣＤＲ２（配列番号６５）：YISSDSSAIYYADTVK
【０１５６】
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変重鎖ＣＤＲ２をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号６６）：tacattagta gtgacagtag tgccatctac tatgcagaca cagtgaag
【０１５７】
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変重鎖ＣＤＲ３（配列番号６７）：GRENIYYGSRLDY
【０１５８】
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変重鎖ＣＤＲ３をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号６８）：gggagggaaa acatttacta cggtagtagg cttgactac
【０１５９】
ヒトＢ７‐Ｈ３に対する改善された親和性を示すｈＢＲＣＡ８４Ｄ種を得るために、ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐１の軽鎖又は重鎖（即ちそれぞれｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐１ＶＬ又はｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐１ＶＨ）をコードするポリヌクレオチドを、変異誘発に供し、変異したｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐１軽鎖誘導体ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐２ＶＬ、ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐３ＶＬ、ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐４ＶＬ、ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐５ＶＬ及びｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐６ＶＬ、並びに変異したｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐１重鎖誘導体ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐２ＶＨ、ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐３ＶＨ及びｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐４ＶＨを単離して特性決定した。これらの抗体の可変軽鎖及び重鎖のアミノ酸及びポリヌクレオチド配列を以下に示す：
【０１６０】
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐２ＶＬのアミノ酸配列（配列番号６９）：
DIQLTQSPSF LSASVGDRVT ITCKASQNVD TNVAWYQQKP GKAPKALIYS
ASYRYSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YNNYPFTFGQ
GTKLEIK
【０１６１】
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐２ＶＬをコードするポリヌクレオチド（配列番号７０）：
gacatccagc tgacccagtc cccctccttc ctgtctgcct ccgtgggcga
cagagtgacc atcacatgca aggcctccca gaacgtggac accaacgtgg
cctggtatca gcagaagcct ggcaaggccc ctaaggcgct gatctactcc
gcctcctacc ggtactccgg cgtgccttcc aggttctccg gctccggctc
tggcaccgac ttcaccctga ccatctccag cctgcagcct gaggacttcg
ccacctacta ctgccagcag tacaacaact accctttcac cttcggccag
ggcaccaagc tggaaatcaa g
【０１６２】
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐３ＶＬのアミノ酸配列（配列番号７１）：
DIQLTQSPSF LSASVGDRVS VTCKASQNVD TNVAWYQQKP GKAPKLLIYS
ASYRYSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YNNYPFTFGQ
GTKLEIK
【０１６３】
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐３ＶＬをコードするポリヌクレオチド（配列番号７２）：
gacatccagc tgacccagtc cccctccttc ctgtctgcct ccgtgggcga
cagagtgtcc gtcacatgca aggcctccca gaacgtggac accaacgtgg
cctggtatca gcagaagcct ggcaaggccc ctaagctgct gatctactcc
gcctcctacc ggtactccgg cgtgccttcc aggttctccg gctccggctc
tggcaccgac ttcaccctga ccatctccag cctgcagcct gaggacttcg
ccacctacta ctgccagcag tacaacaact accctttcac cttcggccag
ggcaccaagc tggaaatcaa g
【０１６４】
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐４ＶＬのアミノ酸配列（配列番号７３）：
DIQLTQSPSF LSASVGDRVT ITCKASQNVD TNVAWYQQKP GQAPKLLIYS
ASYRYSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YNNYPFTFGQ
GTKLEIK
【０１６５】
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐４ＶＬをコードするポリヌクレオチド（配列番号７４）：
gacatccagc tgacccagtc cccctccttc ctgtctgcct ccgtgggcga
cagagtgacc atcacatgca aggcctccca gaacgtggac accaacgtgg
cctggtatca gcagaagcct ggccaggccc ctaagctgct gatctactcc
gcctcctacc ggtactccgg cgtgccttcc aggttctccg gctccggctc
tggcaccgac ttcaccctga ccatctccag cctgcagcct gaggacttcg
ccacctacta ctgccagcag tacaacaact accctttcac cttcggccag
ggcaccaagc tggaaatcaa g
【０１６６】
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐５ＶＬのアミノ酸配列（配列番号７５）：
DIQLTQSPSF LSASVGDRVT ITCKASQNVD TNVAWYQQKP GQAPKALIYS
ASYRYSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YNNYPFTFGQ
GTKLEIK
【０１６７】
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐５ＶＬをコードするポリヌクレオチド（配列番号７６）：
gacatccagc tgacccagtc cccctccttc ctgtctgcct ccgtgggcga
cagagtgacc atcacatgca aggcctccca gaacgtggac accaacgtgg
cctggtatca gcagaagcct ggccaggccc ctaaggcgct gatctactcc
gcctcctacc ggtactccgg cgtgccttcc aggttctccg gctccggctc
tggcaccgac ttcaccctga ccatctccag cctgcagcct gaggacttcg
ccacctacta ctgccagcag tacaacaact accctttcac cttcggccag
ggcaccaagc tggaaatcaa g
【０１６８】
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐６ＶＬのアミノ酸配列（配列番号７７）：
DIQLTQSPSF LSASVGDRVT ITCKASQNVD TNVAWYQQKP GKAPKLLIYS
ASYRYSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFAEYYCQQ YNNYPFTFGQ
GTKLEIK
【０１６９】
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐６ＶＬをコードするポリヌクレオチド（配列番号７８）：
gacatccagc tgacccagtc cccctccttc ctgtctgcct ccgtgggcga
cagagtgacc atcacatgca aggcctccca gaacgtggac accaacgtgg
cctggtatca gcagaagcct ggcaaggccc ctaagctgct gatctactcc
gcctcctacc ggtactccgg cgtgccttcc aggttctccg gctccggctc
tggcaccgac ttcaccctga ccatctccag cctgcagcct gaggacttcg
ccgagtacta ctgccagcag tacaacaact accctttcac cttcggccag
ggcaccaagc tggaaatcaa g
【０１７０】
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐２ＶＨのアミノ酸配列（配列番号７９）：
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SFGMHWVRQA PGKGLEWVAY
ISSDSSAIYY ADTVKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRDED TAVYYCGRGR
ENIYYGSRLD YWGQGTTVTV SS
【０１７１】
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐２ＶＨをコードするポリヌクレオチド（配列番号８０）：
gaggtgcagc tggtcgagtc tggcggagga ctggtgcagc ctggcggctc
cctgagactg tcttgcgccg cctccggctt caccttctcc agcttcggca
tgcactgggt ccgccaggct ccaggcaagg gactggaatg ggtggcctac
atctcctccg actcctccgc catctactac gccgacaccg tgaagggcag
gttcaccatc tcccgggaca acgccaagaa ctccctgtac ctgcagatga
actccctgcg ggacgaggac accgccgtgt actactgcgg cagaggccgg
gagaatatct actacggctc ccggctggat tattggggcc agggcaccac
cgtgaccgtg tcctct
【０１７２】
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐３ＶＨのアミノ酸配列（配列番号８１）：
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SFGMHWVRQA PGKGLEWVAY
ISSDSSAIYY ADTVKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRDED TAMYYCGRGR
ENIYYGSRLD YWGQGTTVTV SS
【０１７３】
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐３ＶＨをコードするポリヌクレオチド（配列番号８２）：
gaggtgcagc tggtcgagtc tggcggagga ctggtgcagc ctggcggctc
cctgagactg tcttgcgccg cctccggctt caccttctcc agcttcggca
tgcactgggt ccgccaggct ccaggcaagg gactggaatg ggtggcctac
atctcctccg actcctccgc catctactac gccgacaccg tgaagggcag
gttcaccatc tcccgggaca acgccaagaa ctccctgtac ctgcagatga
actccctgcg ggacgaggac accgccatgt actactgcgg cagaggccgg
gagaatatct actacggctc ccggctggat tattggggcc agggcaccac
cgtgaccgtg tcctct
【０１７４】
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐４ＶＨのアミノ酸配列（配列番号８３）：
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SFGMHWVRQA PGKGLEWVAY
ISSDSSAIYY ADTVKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRSED TAVYYCARGR
ENIYYGSRLD YWGQGTTVTV SS
【０１７５】
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐４ＶＨをコードするポリヌクレオチド（配列番号８４）：
gaggtgcagc tggtcgagtc tggcggagga ctggtgcagc ctggcggctc
cctgagactg tcttgcgccg cctccggctt caccttctcc agcttcggca
tgcactgggt ccgccaggct ccaggcaagg gactggaatg ggtggcctac
atctcctccg actcctccgc catctactac gccgacaccg tgaagggcag
gttcaccatc tcccgggaca acgccaagaa ctccctgtac ctgcagatga
actccctgcg gagcgaggac accgccgtgt actactgcgc cagaggccgg
gagaatatct actacggctc ccggctggat tattggggcc agggcaccac
cgtgaccgtg tcctct
【０１７６】
表１には、研究対象のｈＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖及び可変重鎖変異体が列挙されており、番号はＫａｂａｔ番号付与システムを表している。
【０１７７】
【表１】
0006533534.tif 000002
【０１７８】
ヒトＢ７‐Ｈ３に関するｈＢＲＣＡ８４Ｄ軽鎖誘導体ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐３ＶＬ、ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐４ＶＬ及びｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐５ＶＬの相対結合親和性を、これらの軽鎖可変領域及びキメラＢＲＣＡ８４Ｄ‐１ＶＨ重鎖を含有する抗体を形成することによって決定した。ＢＲＣＡ８４Ｄ‐５ＶＬ（Ｋ４２Ｑ、Ｌ４６Ａ）は、試験したｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐ＶＬの最も高い結合親和性を有することが分かった。従ってＢＲＣＡ８４Ｄ‐５ＶＬを軽鎖として使用して、ヒトＢ７‐Ｈ３に関するｈＢＲＣＡ８４Ｄ重鎖：ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐１ＶＨ、ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐２ＶＨ、ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐３ＶＨ及びｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐４ＶＨの相対結合親和性を調査した。ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐２ＶＨ（Ａ９３Ｇ）は、試験したｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐ＶＨの最も高い結合親和性を有することが分かった。
【０１７９】
ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１のキメラのアミノ酸配列及びコード化ポリヌクレオチド配列は、以下のとおりである：
【０１８０】
ｃｈＢＲＣＡ８４Ｄ軽鎖のアミノ酸配列（配列番号８５）：
DIAMTQSQKF MSTSVGDRVS VTCKASQNVD TNVAWYQQKP GQSPKALIYS
ASYRYSGVPD RFTGSGSGTD FTLTINNVQS EDLAEYFCQQ YNNYPFTFGS
GTKLEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV
DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG
LSSPVTKSFN RGEC
【０１８１】
ｃｈＢＲＣＡ８４Ｄ軽鎖をコードするポリヌクレオチド（配列番号８６）：
gacattgcga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga
cagggtcagc gtcacctgca aggccagtca gaatgtggat actaatgtag
cctggtatca acagaaacca gggcaatctc ctaaagcact gatttactcg
gcatcctacc ggtacagtgg agtccctgat cgcttcacag gcagtggatc
tgggacagat ttcactctca ccatcaacaa tgtgcagtct gaagacttgg
cagagtattt ctgtcagcaa tataacaact atccattcac gttcggctcg
gggacaaagt tggaaataaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat
cttcccgcca tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt
gcctgctgaa taacttctat cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg
gataacgccc tccaatcggg taactcccag gagagtgtca cagagcagga
cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg ctgagcaaag
cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag
【０１８２】
ｃｈＢＲＣＡ８４Ｄ重鎖のアミノ酸配列（配列番号８７）：
DVQLVESGGG LVQPGGSRKL SCAASGFTFS SFGMHWVRQA PEKGLEWVAY
ISSDSSAIYY ADTVKGRFTI SRDNPKNTLF LQMTSLRSED TAMYYCGRGR
ENIYYGSRLD YWGQGTTLTV SSASTKGPSV FPLAPSSKST SGGTAALGCL
VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT
QTYICNVNHK PSNTKVDKRV EPKSCDKTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP
KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ
YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE
PQVYTLPPSR DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP
PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP
GK
【０１８３】
ｃｈＢＲＣＡ８４Ｄ重鎖をコードするポリヌクレオチド（配列番号８８）：
gatgtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgcagc ctggagggtc
ccggaaactc tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt agctttggaa
tgcactgggt tcgtcaggct ccagagaagg ggctggagtg ggtcgcatac
attagtagtg acagtagtgc catctactat gcagacacag tgaagggccg
attcaccatc tccagagaca atcccaagaa caccctgttc ctgcaaatga
ccagtctaag gtctgaggac acggccatgt attactgtgg aagagggagg
gaaaacattt actacggtag taggcttgac tactggggcc aaggcaccac
tctcacagtc tcctcagcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg
caccctcctc caagagcacc tctgggggca cagcggccct gggctgcctg
gtcaaggact acttccccga accggtgacg gtgtcgtgga actcaggcgc
cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag tcctcaggac
tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc
cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga
caagagagtt gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt
gcccagcacc tgaactcctg gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca
aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg acccctgagg tcacatgcgt
ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc aactggtacg
tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga
ctggctgaat ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc
cagcccccat cgagaaaacc atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa
ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg gatgagctga ccaagaacca
ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc gacatcgccg
tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt
ggacaagagc aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc
atgaggctct gcacaaccac tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg
ggtaaatga
【０１８４】
ＩＶ．ＶＥＧＦ及びＶＥＧＦＲ、並びに抗ＶＥＧＦ及び抗ＶＥＧＦＲ抗体
Ａ．ＶＥＧＦ及びＶＥＧＦＲ
本明細書において使用される場合、用語「ＶＥＧＦ」は、血管内皮増殖因子Ａを指す（Ｌｅｕｎｇ，  Ｄ．Ｗ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  “Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｉｓ  Ａ  Ｓｅｃｒｅｔｅｄ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  Ｍｉｔｏｇｅｎ，”  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６（４９３５）：１３０６-１３０９）。ＶＥＧＦは、代替的プロモータの使用、代替的スプライシング及び代替的開始を反映して、複数のアイソフォームで存在する。最初に発見された形態は、ここではアイソフォーム１６２（配列番号８９）：
MNFLLSWVHW SLALLLYLHH AKWSQAAPMA EGGGQNHHEV VKFMDVYQRS
YCHPIETLVD IFQEYPDEIE YIFKPSCVPL MRCGGCCNDE GLECVPTEES
NITMQIMRIK PHQGQHIGEM SFLQHNKCEC RPKKDRARQE NPCGPCSERR
KHLFVQDPQT CKCSCKNTDS RCKARQLELN ERTCRCDKPR R
と呼ばれ、ｃＤＮＡ配列（配列番号９０）：
cagtgtgctg gcggcccggc gcgagccggc ccggccccgg tcgggcctcc
gaaaccatga actttctgct gtcttgggtg cattggagcc tcgccttgct
gctctacctc caccatgcca agtggtccca ggctgcaccc atggcagaag
gaggagggca gaatcatcac gaagtggtga agttcatgga tgtctatcag
cgcagctact gccatccaat cgagaccctg gtggacatct tccaggagta
ccctgatgag atcgagtaca tcttcaagcc atcctgtgtg cccctgatgc
gatgcggggg ctgctgcaat gacgagggcc tggagtgtgt gcccactgag
gagtccaaca tcaccatgca gattatgcgg atcaaacctc accaaggcca
gcacatagga gagatgagct tcctacagca caacaaatgt gaatgcagac
caaagaaaga tagagcaaga caagaaaatc cctgtgggcc ttgctcagag
cggagaaagc atttgtttgt acaagatccg cagacgtgta aatgttcctg
caaaaacaca gactcgcgtt gcaaggcgag gcagcttgag ttaaacgaac
gtacttgcag atgtgacaag ccgaggcggt gagccgggca ggaggaagga
gcctccctca gggtttcggg aaccagatct ctcaccagga aagactgata
cagaacgatc gatacagaaa ccacgctgcc gccaccacac catcaccatc
gacagaacag tccttaatcc agaaacctga aatgaaggaa gaggagactc
tgcgcagagc actttgggtc cggagggcga gactccggcg gaagcattcc
cgggcgggtg acccagcacg gtccctcttg gaattggatt cgccatttta
tttttcttgc tgctaaatca ccgagcccgg aagattagag agttttattt
ctgggattcc tgtagacaca ccgcggccgc cagcacactg
によってコードされる
【０１８５】
ＶＥＧＦ２０６アイソフォーム（Ｈｏｕｃｋ，  Ｋ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  “Ｔｈｅ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｆａｍｉｌｙ：  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａ  Ｆｏｕｒｔｈ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｐｅｃｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  Ｓｐｌｉｃｉｎｇ  Ｏｆ  ＲＮＡ，”  Ｍｏｌ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．  ５（１２）：１８０６-１８１４）を、正準配列として選択した（配列番号９１）：
MNFLLSWVHW SLALLLYLHH AKWSQAAPMA EGGGQNHHEV VKFMDVYQRS
YCHPIETLVD IFQEYPDEIE YIFKPSCVPL MRCGGCCNDE GLECVPTEES
NITMQIMRIK PHQGQHIGEM SFLQHNKCEC RPKKDRARQE KKSVRGKGKG
QKRKRKKSRY KSWSVYVGAR CCLMPWSLPG PHPCGPCSER RKHLFVQDPQ
TCKCSCKNTD SRCKARQLEL NERTCRCDKP RR
【０１８６】
既に示したように、３つのＶＥＧＦ受容体：ＶＥＧＦＲ‐１（Ｆｌｔ‐１）、ＶＥＧＦＲ‐２（Ｆｌｋ‐１／ＫＤＲ）及びＶＥＧＦＲ‐３（Ｆｌｔ‐４）が記載されている。ＶＥＧＦＲ‐１及びＶＥＧＦＲ‐２だけが、ＶＥＧＦ‐Ａに結合できる（Ｓｈｉｂｕｙａ，  Ｍ．  （２０１３）  “Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ａｎｄ  Ｉｔｓ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｓｙｓｔｅｍ：  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  Ｉｎ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  Ａｎｄ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｏｌｅｓ  Ｉｎ  Ｖａｒｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，”  Ｊ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  １５３（１）：１３-１９；  Ｋｏｃｈ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  “Ｓｉｇｎａｌ  Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  Ｂｙ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，”  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｊ．  ４３７：１６９-１８３）。
【０１８７】
ＶＥＧＦＲ‐１のアミノ酸配列は以下のとおりである（配列番号９２）：
MVSYWDTGVL LCALLSCLLL TGSSSGSKLK DPELSLKGTQ HIMQAGQTLH
LQCRGEAAHK WSLPEMVSKE SERLSITKSA CGRNGKQFCS TLTLNTAQAN
HTGFYSCKYL AVPTSKKKET ESAIYIFISD TGRPFVEMYS EIPEIIHMTE
GRELVIPCRV TSPNITVTLK KFPLDTLIPD GKRIIWDSRK GFIISNATYK
EIGLLTCEAT VNGHLYKTNY LTHRQTNTII DVQISTPRPV KLLRGHTLVL
NCTATTPLNT RVQMTWSYPD EKNKRASVRR RIDQSNSHAN IFYSVLTIDK
MQNKDKGLYT CRVRSGPSFK SVNTSVHIYD KAFITVKHRK QQVLETVAGK
RSYRLSMKVK AFPSPEVVWL KDGLPATEKS ARYLTRGYSL IIKDVTEEDA
GNYTILLSIK QSNVFKNLTA TLIVNVKPQI YEKAVSSFPD PALYPLGSRQ
ILTCTAYGIP QPTIKWFWHP CNHNHSEARC DFCSNNEESF ILDADSNMGN
RIESITQRMA IIEGKNKMAS TLVVADSRIS GIYICIASNK VGTVGRNISF
YITDVPNGFH VNLEKMPTEG EDLKLSCTVN KFLYRDVTWI LLRTVNNRTM
HYSISKQKMA ITKEHSITLN LTIMNVSLQD SGTYACRARN VYTGEEILQK
KEITIRDQEA PYLLRNLSDH TVAISSSTTL DCHANGVPEP QITWFKNNHK
IQQEPGIILG PGSSTLFIER VTEEDEGVYH CKATNQKGSV ESSAYLTVQG
TSDKSNLELI TLTCTCVAAT LFWLLLTLFI RKMKRSSSEI KTDYLSIIMD
PDEVPLDEQC ERLPYDASKW EFARERLKLG KSLGRGAFGK VVQASAFGIK
KSPTCRTVAV KMLKEGATAS EYKALMTELK ILTHIGHHLN VVNLLGACTK
QGGPLMVIVE YCKYGNLSNY LKSKRDLFFL NKDAALHMEP KKEKMEPGLE
QGKKPRLDSV TSSESFASSG FQEDKSLSDV EEEEDSDGFY KEPITMEDLI
SYSFQVARGM EFLSSRKCIH RDLAARNILL SENNVVKICD FGLARDIYKN
PDYVRKGDTR LPLKWMAPES IFDKIYSTKS DVWSYGVLLW EIFSLGGSPY
PGVQMDEDFC SRLREGMRMR APEYSTPEIY QIMLDCWHRD PKERPRFAEL
VEKLGDLLQA NVQQDGKDYI PINAILTGNS GFTYSTPAFS EDFFKESISA
PKFNSGSSDD VRYVNAFKFM SLERIKTFEE LLPNATSMFD DYQGDSSTLL
ASPMLKRFTW TDSKPKASLK IDLRVTSKSK ESGLSDVSRP SFCHSSCGHV
SEGKRRFTYD HAELERKIAC CSPPPDYNSV VLYSTPPI
【０１８８】
ＶＥＧＦＲ‐２のアミノ酸配列は以下のとおりである（配列番号９３）：
MQSKVLLAVA LWLCVETRAA SVGLPSVSLD LPRLSIQKDI LTIKANTTLQ
ITCRGQRDLD WLWPNNQSGS EQRVEVTECS DGLFCKTLTI PKVIGNDTGA
YKCFYRETDL ASVIYVYVQD YRSPFIASVS DQHGVVYITE NKNKTVVIPC
LGSISNLNVS LCARYPEKRF VPDGNRISWD SKKGFTIPSY MISYAGMVFC
EAKINDESYQ SIMYIVVVVG YRIYDVVLSP SHGIELSVGE KLVLNCTART
ELNVGIDFNW EYPSSKHQHK KLVNRDLKTQ SGSEMKKFLS TLTIDGVTRS
DQGLYTCAAS SGLMTKKNST FVRVHEKPFV AFGSGMESLV EATVGERVRI
PAKYLGYPPP EIKWYKNGIP LESNHTIKAG HVLTIMEVSE RDTGNYTVIL
TNPISKEKQS HVVSLVVYVP PQIGEKSLIS PVDSYQYGTT QTLTCTVYAI
PPPHHIHWYW QLEEECANEP SQAVSVTNPY PCEEWRSVED FQGGNKIEVN
KNQFALIEGK NKTVSTLVIQ AANVSALYKC EAVNKVGRGE RVISFHVTRG
PEITLQPDMQ PTEQESVSLW CTADRSTFEN LTWYKLGPQP LPIHVGELPT
PVCKNLDTLW KLNATMFSNS TNDILIMELK NASLQDQGDY VCLAQDRKTK
KRHCVVRQLT VLERVAPTIT GNLENQTTSI GESIEVSCTA SGNPPPQIMW
FKDNETLVED SGIVLKDGNR NLTIRRVRKE DEGLYTCQAC SVLGCAKVEA
FFIIEGAQEK TNLEIIILVG TAVIAMFFWL LLVIILRTVK RANGGELKTG
YLSIVMDPDE LPLDEHCERL PYDASKWEFP RDRLKLGKPL GRGAFGQVIE
ADAFGIDKTA TCRTVAVKML KEGATHSEHR ALMSELKILI HIGHHLNVVN
LLGACTKPGG PLMVIVEFCK FGNLSTYLRS KRNEFVPYKT KGARFRQGKD
YVGAIPVDLK RRLDSITSSQ SSASSGFVEE KSLSDVEEEE APEDLYKDFL
TLEHLICYSF QVAKGMEFLA SRKCIHRDLA ARNILLSEKN VVKICDFGLA
RDIYKDPDYV RKGDARLPLK WMAPETIFDR VYTIQSDVWS FGVLLWEIFS
LGASPYPGVK IDEEFCRRLK EGTRMRAPDY TTPEMYQTML DCWHGEPSQR
PTFSELVEHL GNLLQANAQQ DGKDYIVLPI SETLSMEEDS GLSLPTSPVS
CMEEEEVCDP KFHYDNTAGI SQYLQNSKRK SRPVSVKTFE DIPLEEPEVK
VIPDDNQTDS GMVLASEELK TLEDRTKLSP SFGGMVPSKS RESVASEGSN
QTSGYQSGYH SDDTDTTVYS SEEAELLKLI EIGVQTGSTA QILQPDSGTT
LSSPPV
【０１８９】
Ｂ．抗ＶＥＧＦＲ及び抗ＶＥＧＦＲ抗体
既に示したように、膠芽腫の治療において、抗ＶＥＧＦ抗体が考察されている。更に、乳癌、膠芽腫、子宮頸癌、転移性結腸直腸癌、胃癌、肝細胞癌、白血病、肺癌、転移性黒色腫、血管新生性膵臓癌及び転移前立腺癌等の、多数の他のタイプの血管新生性癌に関して、ＶＥＧＲ及びその受容体が考察されている（Ｒｏｂｅｒｔｓ，  Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  “Ｔｈｅ  Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  Ｃａｎｃｅｒ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｓｋｅｌｅｔｏｎ，”  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０１３：４１８３４０；  Ｖｉｃｉ，  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１４）  “Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｕｔｅｒｉｎｅ  Ｃｅｒｖｉｃａｌ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ，”  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ５（２）：８６-９７；  Ｄｉｅｔｖｏｒｓｔ，  Ｍ．Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  “Ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｎｄ  Ｎｏｖｅｌ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｏｐｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  Ｃａｎｃｅｒ：  Ｅｍｐｈａｓｉｓ  ｏｎ  Ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ，”  Ｂｉｏｌ．  Ｔｈｅｒ．  ３：２５-３３；  Ｍｏｅｉｎｉ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１２）  “Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｐａｔｈｗａｙｓ  ｉｎ  Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ，”  Ｌｉｖｅｒ  Ｃａｎｃｅｒ  １（２）：８３-９３；  Ｃｅｓｃａ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  “Ｔｕｍｏｒ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ａｇｅｎｔｓ，”  Ｆｒｏｎｔ  Ｏｎｃｏｌ．  ３：２５９：１-７；  Ｐａｖｌｉｄｉｓ，  Ｅ．Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  “Ｒｏｌｅ  Ｏｆ  Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ  Ｉｎ  Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ａｎｄ  Ｉｔｓ  Ａｄｖｅｒｓｅ  Ｅｆｆｅｃｔｓ：  Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ，”  Ｗｏｒｌｄ  Ｊ．  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．  １９（３１）：５０５１-５０６０；  Ｗｅｌｔｉ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  “Ｒｅｃｅｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｉｅｓ  Ｉｎ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  Ａｎｄ  Ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ，”  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  １２３（８）：３１９０-３２００；  Ｅｖｅｎｏ，  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１２）  “ＶＥＧＦ  Ｌｅｖｅｌｓ  Ａｎｄ  Ｔｈｅ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ  Ｃａｎ  Ａｆｆｅｃｔ  Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｓｔｒａｔｅｇｙ  Ｆｏｒ  Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  Ｌｉｖｅｒ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ，”  Ｃｅｌｌ．  Ａｄｈ．  Ｍｉｇｒ．  ６（６）：５６９-５７３；  Ｍｉｙａｋｅ，  Ｔ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  “Ｃｏｎｔｅｍｐｏｒａｒｙ  Ｕｓｅ  Ｏｆ  Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ  Ｉｎ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｃａｎｃｅｒ，”  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．  Ｂｉｏｌ．  Ｔｈｅｒ．  １３（２）：２８３-２９４；  Ｐｌａｔｅ，  Ｋ．Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１２）  “Ｔｕｍｏｒ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  Ａｎｄ  Ａｎｔｉ-Ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｉｎ  Ｍａｌｉｇｎａｎｔ  Ｇｌｉｏｍａｓ  Ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ，”  Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．  １２４（６）：７６３-７７５；  Ｌｉｕ，  Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１２）  “Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  Ｖａｌｕｅ  Ｏｆ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｉｎ  Ｒｅｓｅｃｔｅｄ  Ｇａｓｔｒｉｃ  Ｃａｎｃｅｒ，”  Ａｓｉａｎ  Ｐａｃ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｐｒｅｖ．  １３（７）：３０８９-３０９７；  Ｋｉｍ，  Ｋ．Ｂ．  （２０１３）  “Ｉｓ  Ｔｈｅｒｅ  Ａ  Ｒｏｌｅ  Ｆｏｒ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ／Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｘｉｓ  Ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｏｆ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  Ｗｉｔｈ  Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  Ｍｅｌａｎｏｍａ？，”  Ｃａｎｃｅｒ  １１９（３）：４７７-４８０；  Ｋｕｂｏｔａ，  Ｙ．  （２０１２）  “Ｔｕｍｏｒ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  Ａｎｄ  Ａｎｔｉ-Ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”  Ｋｅｉｏ  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ６１（２）：４７-５６；  Ｗｉｃｋｉ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１２）  “Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  Ｉｎ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ，”  Ｓｗｉｓｓ  Ｍｅｄ．  Ｗｋｌｙ．  １４２：ｗ１３５５０：１-７；  Ｐａｒｅｎｔｅ  Ｌａｍｅｌａｓ，  Ｉ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１２）  “Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  Ｉｎ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ：  Ｎｅｗ  Ｈｏｐｅ？，”  Ａｒｃｈ．  Ｂｒｏｎｃｏｎｅｕｍｏｌ．  ４８（１０）：３６７-３７１；  Ｓａｉｎｔｉｇｎｙ，  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１２）  “Ｒｅｃｅｎｔ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  Ｉｎ  Ｎｏｎ-Ｓｍａｌｌ  Ｃｅｌｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，”  Ｄｉｓｃｏｖ．  Ｍｅｄ．  １３（７１）：２８７-２９７；  Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ，  Ｃ．Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１２）  “Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ  Ａｎｄ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ：  Ｗｈａｔ  Ｄｏｅｓ  Ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｈｏｌｄ？，”  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｏｎｃｏｌ．  ８（４）：４０３-４１４；  Ａｇｇａｒｗａｌ，  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１２）  “Ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  Ｏｆ  Ｎｏｎ-Ｓｍａｌｌ  Ｃｅｌｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ：  Ｗｈｅｒｅ  Ｄｏ  Ｗｅ  Ｓｔａｎｄ  Ｎｏｗ  Ａｎｄ  Ｗｈｅｒｅ  Ａｒｅ  Ｗｅ  Ｈｅａｄｅｄ？，”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．  Ｔｈｅｒ．  １３（５）：２４７-２６３）。
【０１９０】
特に好ましいのは、アバスチン（登録商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ  ＵＳ，  Ｉｎｃ．）として販売されているヒト化抗ＶＥＧＦ抗体（ベバシズマブ）である。ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））は：米国特許公開第２００２／００３２３１５号，２００３／０１９０３１７号，２００５／０１１２１２６号，２００７／００５９３０２号，２００７／００５９３１２号，２００７／０１９６３７４号，２００７／０２４８６１０号，２００８／０１８７５３１号，２００８／０２２６６２９号，２０１１／００５２５７５号，２０１１／００８１３４２号，２０１３／００５８９２７号；米国特許第６，８８４，８７９号；７，０６０，２６９号；７，１６９，９０１号；７，２９７，３３４号；７，３６５，１６６号；７，３７５，１９３号；カナダ特許第２，２８６，３３０号及び２，１４５，９８５号；並びに国際公開第１９９８／０４５３３１号；  Ｂａｃａ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  “Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｕｓｉｎｇ  Ｍｏｎｏｖａｌｅｎｔ  Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ，”  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７２（１６）：１０６７８-１０６８４；  Ｐｒｅｓｔａ，  Ｌ．Ｇ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  “Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａｎ  Ａｎｔｉ-Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｏｆ  Ｓｏｌｉｄ  Ｔｕｍｏｒｓ  Ａｎｄ  Ｏｔｈｅｒ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ５７（２０）：４５９３-４５９９に記載されており、これらの文献はそれぞれ、参照によりその全体が本出願に援用される。
【０１９１】
ベバシズマブの軽鎖のアミノ酸配列は以下のとおりである（配列番号９４）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCSASQDIS NYLNWYQQKP GKAPKVLIYF
TSSLHSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YSTVPWTFGQ
GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV
DNALQSGNSQ ESVTEEDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG
LSSPVTKSFN RGEC
【０１９２】
ベバシズマブの重鎖のアミノ酸配列は以下のとおりである（配列番号９５）：
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGYTFT NYGMNWVRQA PGKGLEWVGW
INTYTGEPTY AADFKRRFTF SLDTSKSTAY LQMNSLRAED TAVYYCAKYP
HYYGSSHWYF DVWGQGTLVT VSSASTKGPS VFPLAPSSKS TSGGTAALGC
LVKDYFPEPV TVSWNSGALT SGVHTFPAVL QSSGLYSLSS VVTVPSSSLG
TQTYICNVNH KPSNTKVDKK VEPKSCDKTH TCPPCPAPEL LGGPSVFLFP
PKPKDTLMIS RTPEVTCVVV DVSHEDPEVK FNWYVDGVEV HNAKTKPREE
QYNSTYRVVS VLTVLHQDWL NGKEYKCKVS NKALPAPIEK TISKAKGQPR
EPQVYTLPPS REEMTKNQVS LTCLVKGFYP SDIAVEWESN GQPENNYKTT
PPVLDSDGSF FLYSKLTVDK SRWQQGNVFS CSVMHEALHN HYTQKSLSLS
PGK
【０１９３】
特に好ましい抗ＶＥＧＦＲ抗体は、ラムシルマブ（ヒト化抗ヒトＶＥＧＦＲ‐２中和モノクローナル抗体）である（Ｙａｎｇ，  Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  “Ａｎｔｉ-ＶＥＧＦ-  Ａｎｄ  Ａｎｔｉ-ＶＥＧＦ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ-Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ  Ｉｎ  Ｍｏｕｓｅ  Ｈｅａｌｔｈｙ  Ｔｉｓｓｕｅｓ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （Ｕ．Ｓ．Ａ．）  １１０（２９）：１２０１８-１２０２３；  Ａｎｏｎｙｍｏｕｓ  （２０１３）  “Ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ  Ｔａｋｅｓ  Ｓｔｅｐｓ  Ｆｏｒｗａｒｄ  Ｉｎ  Ｇａｓｔｒｉｃ  Ｃａｎｃｅｒ，”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．  ３（１２）：ＯＦ４；  Ａｐｒｉｌｅ，  Ｇ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  “Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒａｉｓａｌ  Ｏｆ  Ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ  （ＩＭＣ-１１２１Ｂ）  Ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ：  Ｆｒｏｍ  Ｂｅｎｃｈｓｉｄｅ  Ｔｏ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｕｓｅ，”  Ｄｒｕｇｓ  ７３（１８）：２００３-２０１５；  Ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ  Ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｆｏｒ  Ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ  Ｔｒｅａｔｅｄ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｇａｓｔｒｉｃ  Ｏｒ  Ｇａｓｔｒｏ-Ｏｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  Ｊｕｎｃｔｉｏｎ  Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ  （ＲＥＧＡＲＤ）：  Ａｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，  Ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ，  Ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｒｅ，  Ｐｌａｃｅｂｏ-Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ，  Ｐｈａｓｅ  ３  Ｔｒｉａｌ；  Ｆｕｃｈｓ，  Ｃ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１４）  “Ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ  Ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｆｏｒ  Ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ  Ｔｒｅａｔｅｄ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｇａｓｔｒｉｃ  Ｏｒ  Ｇａｓｔｒｏ-Ｏｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  Ｊｕｎｃｔｉｏｎ  Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ  （ＲＥＧＡＲＤ）：  Ａｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，  Ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ，  Ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｒｅ，  Ｐｌａｃｅｂｏ-Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ，  Ｐｈａｓｅ  ３  Ｔｒｉａｌ，”  Ｌａｎｃｅｔ  ３８３（９９１１）：３１-３９；  Ｃｌａｒｋｅ，  Ｊ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  “Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  Ｏｆ  ＶＥＧＦ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ２：  Ａｎ  Ｕｐｄａｔｅ  Ｏｎ  Ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ，”  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．  Ｂｉｏｌ．  Ｔｈｅｒ．  １３（８）：１１８７-１１９６；  Ｗａｄｈｗａ，  Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  “Ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ：  ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  ａｇｅｎｔ，”  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｏｎｃｏｌ．  ９（６）：７８９-７９５）。
【０１９４】
他の抗ＶＥＧＦＲ抗体としては、ラット抗マウスＶＥＧＦＲ‐１中和モノクローナル抗体（ＭＦ‐１）及びラット抗マウスＶＥＧＦＲ‐２中和モノクローナル抗体（ＤＣ１０１）が挙げられる（Ｘｕｅ，  Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００８）  “Ａｎｔｉ-ＶＥＧＦ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｏｎｆｅｒ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ  Ａｄｖａｎｔａｇｅｓ  Ｔｏ  Ｔｕｍｏｒ-Ｂｅａｒｉｎｇ  Ｍｉｃｅ  Ｂｙ  Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ-Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （Ｕ．Ｓ．Ａ．）  １０５（４７）：１８５１３-１８５１８；  Ｚｈａｎｇ，  Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  “Ａｎｔｉ-Ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ  Ｉｍｐｒｏｖｅ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ  Ｉｎ  Ｔｕｍｏｒ-Ｂｅａｒｉｎｇ  Ｍｉｃｅ  Ｂｙ  Ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ  Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  Ｔｏ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ-Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （Ｕ．Ｓ．Ａ．）  １０８（１０）：４１１７-４１２２；  Ｃａｏ，  Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  “ＶＥＧＦＲ１-Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｐｅｒｉｃｙｔｅ  Ａｂｌａｔｉｏｎ  Ｌｉｎｋｓ  ＶＥＧＦ  Ａｎｄ  Ｐｌｇｆ  Ｔｏ  Ｃａｎｃｅｒ-Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （Ｕ．Ｓ．Ａ．）  １０７（２）：８５６-８６１）。
【０１９５】
あるいは本発明は、ＶＥＧＦＲアンタゴニスト（例えばアフリバーセプト（ＶＥＧＦトラップ）、ＶＥＧＦＲ‐１及びＶＥＧＦＲ‐２の細胞外ドメインの可溶性融合タンパク質（Ｄｉｅｔｖｏｒｓｔ，  Ｍ．Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  “Ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｎｄ  Ｎｏｖｅｌ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｏｐｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  Ｃａｎｃｅｒ：  Ｅｍｐｈａｓｉｓ  ｏｎ  Ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ，”  Ｂｉｏｌ．  Ｔｈｅｒ．  ３：２５-３３；  Ｍｏｒａｄｉ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  “Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｔｒａｐ-Ｅｙｅ  （Ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ）  Ｆｏｒ  Ｔｈｅ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  Ｏｆ  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｍａｃｕｌａｒ  Ｅｄｅｍａ，”  Ｗｏｒｌｄ  Ｊ．  Ｄｉａｂｅｔｅｓ．  ４（６）：３０３-３０９；  Ｖｅｎｔｒｉｃｅ，  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  “Ａｎｔｉ-ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｄｒｕｇｓ  ｓａｆｅｔｙ  ａｎｄ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｉｎ  ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅｓ，”  Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．  ４（Ｓｕｐｐｌ１）：Ｓ３８-Ｓ４２；  Ｓｏｐｈｉｅ，  Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１２）  “Ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ：  ａ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｆｏｒ  Ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ａｇｅ-Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍａｃｕｌａｒ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｏｔｈｅｒ  Ｒｅｔｉｎａｌ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，”  Ｂｉｏｌ．  Ｔｈｅｒ．  ２：３：１-２２）、又はパンＶＥＧＦＲチロシンキナーゼインヒビタ、セジラニブ（アストラゼネカ）（Ｄｉｅｔｒｉｃｈ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  “Ｃｅｄｉｒａｎｉｂ：  Ｐｒｏｆｉｌｅ  Ｏｆ  Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ａｎｔｉ-Ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  Ａｇｅｎｔ  Ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  Ｗｉｔｈ  Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ，”  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．  Ｄｒｕｇｓ．  １８（１０）：１５４９-１５５７）の使用を考えている。
【０１９６】
Ｖ．Ｆｃ‐操作抗体
従来の免疫機能では、抗体‐抗原複合体と免疫系の細胞との相互作用は、抗体依存性細胞毒性、肥満細胞脱顆粒及び食作用等のエフェクタ機能から、リンパ球増殖及び抗体分泌を制御するもの等の免疫調節性信号にまで及ぶ、広範な応答をもたらす。これらの相互作用は全て、抗体又は免疫複合体のＦｃドメインの、造血細胞上の特殊化された細胞表面受容体への結合によって開始される。抗体及び免疫複合体によってトリガされる細胞応答の多様性は、３つのＦｃ受容体：ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）の構造不均質性によって得られる。ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）は活性化（即ち免疫系増強）受容体であり；ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）は阻害性（即ち免疫系減衰）受容体。ＩｇＧ１Ｆｃ領域のアミノ酸配列を以下に示す。（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  ５ｔｈ  Ｅｄ．  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，  ＮＩＨ，  ＭＤ  （１９９１）に従って、配列番号９６として番号を付与した；上記文献は参照により本出願に明示的に援用され、これ以降「Ｋａｂａｔ  ＥＵ」と呼ぶ）（配列番号９６）：
PAPELLGGPS  VFLFPPKPKD  TLMISRTPEV  TCVVVDVSHE  DPEVKFNWYV
230         240         250         260         270
DGVEVHNAKT  KPREEQYNST  YRVVSVLTVL  HQDWLNGKEY  KCKVSNKALP
280         290         300         310         320
APIEKTISKA  KGQPREPQVY  TLPPSREEMT  KNQVSLTCLV  KGFYPSDIAV
330         340         350         360         370
EWESNGQPEN  NYKTTPPVLD  SDGSFFLYSK  LTVDKSRWQQ  GNVFSCSVMH
380         390         400         410         420
EALHNHYTQK  SLSLSPGK
430         440
残基２３０‐３４１はＦｃＣＨ２領域である。残基３４２‐４４７はＦｃＣＨ３領域である。
【０１９７】
本発明は、１つ又は複数の部分に１つ又は複数のアミノ酸修飾（例えば置換、欠失、挿入）を有する変異型Ｆｃ領域を含む抗Ｂ７‐Ｈ３抗体及び／又は腫瘍血管新生抑制抗体（抗ＶＥＧＦ若しくは抗ＶＥＧＦＲ抗体等）を含み、上記修飾は、（活性化及び阻害性ＦｃγＲｓを含む）ＦｃγＲに関する変異型Ｆｃ領域の親和性及び結合活性を上昇させる。いくつかの実施形態では、上記１つ又は複数のアミノ酸修飾は、ＦｃγＲＩＩＩＡ及び／又はＦｃγＲＩＩＡに関する変異型Ｆｃ領域の親和性を上昇させる。別の実施形態では、変異型Ｆｃ領域は更に、同等の親抗体（即ち、Ｆｃ領域の１つ又は複数のアミノ酸修飾を除いて、本発明の抗体と同一のアミノ酸配列を有する抗体）のＦｃ領域に比べて低い親和性で、ＦｃγＲＩＩＢと特異的に結合する。いくつかの実施形態では、このような修飾は、ＦｃγＲＩＩＩＡ及び／又はＦｃγＲＩＩＡに関する変異型Ｆｃ領域の親和性を上昇させ、またＦｃγＲＩＩＢに関する変異型Ｆｃ領域の親和性を、上記親抗体に比べて増進させる。他の実施形態では、上記１つ又は複数のアミノ酸修飾は、ＦｃγＲＩＩＩＡ及び／又はＦｃγＲＩＩＡに関する変異型Ｆｃ領域の親和性を上昇させるが、ＦｃγＲＩＩＢに関する変異型Ｆｃ領域の親和性を、親抗体のＦｃ領域に比べて変化させない。別の実施形態では、上記１つ又は複数のアミノ酸修飾は、ＦｃγＲＩＩＩＡ及びＦｃγＲＩＩＡに関する変異型Ｆｃ領域の親和性を上昇させるが、ＦｃγＲＩＩＢに関する親和性を、親抗体に比べて低下させる。親和性及び／又は結合活性の上昇は、当該細胞内において（修飾されたＦｃ領域を有しない）親分子の結合活性が検出できない場合に低いレベルのＦｃγＲを発現する細胞における、検出可能なＦｃγＲへの結合又はＦｃγＲ関連活性につながる。他の実施形態では、修飾された分子は、３００００〜２００００分子／細胞の密度、２００００〜１００００分子／細胞の密度、１００００〜５０００分子／細胞の密度、５０００〜１０００分子／細胞の密度、１０００〜２００分子／細胞の密度、又は２００分子／細胞以下（ただし少なくとも１０、５０、１００若しくは１５０分子／細胞）の密度で非ＦｃγＲ受容体標的抗原を発現する細胞において検出可能な結合を呈する。
【０１９８】
別の実施形態では、Ｆｃ領域のアミノ酸に対する上記１つ又は複数の修飾は、１つ又は複数のＦｃγＲ受容体に関する抗体の親和性及び結合活性を低下させる。ある特定の実施形態では、本発明は変異型Ｆｃ領域を含む抗体を包含し、ここで上記変異型Ｆｃ領域は、野生型Ｆｃ領域に対する少なくとも１つのアミノ酸修飾を含み、上記変異型Ｆｃ領域は１つのＦｃγＲのみに結合し、上記ＦｃγＲはＦｃγＲＩＩＩＡである。別の特定の実施形態では、本発明は変異型Ｆｃ領域を含む抗体を包含し、上記変異型Ｆｃ領域は、野生型Ｆｃ領域に対する少なくとも１つのアミノ酸修飾を含み、上記変異型Ｆｃ領域は１つのＦｃγＲのみに結合し、上記ＦｃγＲはＦｃγＲＩＩＡである。
【０１９９】
好ましくは、本発明の上述の抗Ｂ７‐Ｈ３抗体及び／又は腫瘍血管新生抑制抗体の結合特性は、１つ又は複数のＦｃγＲメディエータエフェクタ細胞機能を決定するためのインビボ機能アッセイによって特性決定される。本発明の分子、例えば抗体の、ＦｃγＲに関する親和性及び結合特性は、抗体‐抗原又はＦｃ‐ＦｃγＲ相互作用、即ち抗体に対する抗原の特異的結合又はＦｃγＲに対するＦｃ領域の特異的結合それぞれを決定するための、ＥＬＩＳＡアッセイ、表面プラズモン共鳴アッセイ、免疫沈降アッセイを含むがこれらに限定されない当該技術分野で公知のインビトロアッセイ（生化学又は免疫学系アッセイ）を用いて決定できる。最も好ましい実施形態では、本発明の分子は、（本明細書で記載及び開示されているもの等の）インビボモデルにおいて、インビトロ系アッセイにおいてと同様の結合特性を有する。しかしながら本発明は、インビトロ系アッセイにおいて所望の表現型を呈するもののインビボにおいて所望の表現型を呈し内本発明の分子を排除しない。
【０２００】
いくつかの実施形態では、変異型Ｆｃ領域を含む本発明の上述の抗Ｂ７‐Ｈ３抗体及び／又は腫瘍血管新生抑制抗体は、Ｆｃ領域のＣＨ３ドメインに少なくとも１つのアミノ酸修飾を含み（例えば１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又はそれより多くのアミノ酸修飾を有し）、これはアミノ酸３４２‐４４７からの延長として定義される。他の実施形態では、変異型Ｆｃ領域を含む本発明の分子は、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインに少なくとも１つのアミノ酸修飾を含み（例えば１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又はそれより多くのアミノ酸修飾を有し）、これはアミノ酸２３１‐３４１からの延長として定義される。いくつかの実施形態では、本発明の分子は少なくとも２つのアミノ酸修飾を含み（例えば１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又はそれより多くのアミノ酸修飾を有し）、少なくとも１つこのような修飾はＣＨ３領域におけるものであり、かつ少なくとも１つのこのような修飾はＣＨ２領域におけるものである。本発明は更に、ヒンジ領域にアミノ酸修飾を包含する。ある特定の実施形態では、本発明はＦｃ領域のＣＨ１ドメインにアミノ酸修飾を包含し、これはアミノ酸２１６‐２３０からの延長として定義される。
【０２０１】
特に好ましい実施形態では、本発明は、変異型Ｆｃ領域を含む抗Ｂ７‐Ｈ３抗体及び／又は腫瘍血管新生抑制抗体を包含し、上記変異型は、当業者に公知でありかつ本明細書で例示されている方法を用いて測定される、増大したＡＤＣＣ活性及び／又は増大したＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）への結合をもたらす、又は有する。本発明の方法に従って使用されるＡＤＣＣアッセイは、ＮＫ依存性又はマクロファージ依存性であってよい。
【０２０２】
特に好ましい実施形態では、本発明は、変異型Ｆｃ領域を含む抗Ｂ７‐Ｈ３抗体及び／又は腫瘍血管新生抑制抗体を包含し、上記変異型は、当業者に公知でありかつ本明細書で例示されている方法を用いて測定される、増大したＡＤＣＣ活性及び／又は増大したＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ）への結合をもたらす、又は有する。本発明の方法に従って使用されるＡＤＣＣアッセイは、ＮＫ依存性又はマクロファージ依存性であってよい。
【０２０３】
本発明のＦｃ変異体は、米国特許第７，６３２，４９７号；７，５２１，５４２号；７，４２５，６１９号；７，４１６，７２７号；７，３７１，８２６号；７，３５５，００８号；７，３３５，７４２号；７，３３２，５８１号；７，１８３，３８７号；７，１２２，６３７号；６，７３７，０５６号；国際公開第２００８／１０５８８６号；２００８／００２９３３号；２００７／０２１８４１号；２００７／１０６７０７号；０６／０８８４９４号；０５／１１５４５２号；０５／１１０４７４号；０４／１０３２２６９号；０４／０６３３５１号；並びにＰｒｅｓｔａ，  Ｌ．Ｇ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  “Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ，”  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  Ｔｒａｎｓ．  ３０（４）：４８７-４９０；  Ｓｈｉｅｌｄｓ，  Ｒ．Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．    （２００２）  “Ｌａｃｋ  ｏｆ  ｆｕｃｏｓｅ  ｏｎ  ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ１  Ｎ-ｌｉｎｋｅｄ  ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ｈｕｍａｎ  Ｆｃｇａｍｍａ  ＲＩＩＩ  ａｎｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ-ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ，”  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６；２７７（３０）：２６７３３-２６７４０  ａｎｄ  Ｓｈｉｅｌｄｓ，  Ｒ．Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．    （２００１）  “Ｈｉｇｈ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅ  Ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ１  Ｆｏｒ  Ｆｃ  ｇａｍｍａ  ＲＩ，  Ｆｃ  ｇａｍｍａ  ＲＩＩ，  Ｆｃ  ｇａｍｍａ  ＲＩＩＩ，  Ａｎｄ  ＦｃＲｎ  Ａｎｄ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｏｆ  ＩｇＧ１  Ｖａｒｉａｎｔｓ  Ｗｉｔｈ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｔｏ  Ｔｈｅ  Ｆｃ  ｇａｍｍａ  Ｒ，”  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７６（９）：６５９１-６６０４）に開示されているもの等の、他のＦｃ修飾と組み合わせてよい。本発明は、本発明のＦｃ変異体を他のＦｃ修飾と組み合わせて、修飾された抗体に追加的、相乗的又は新規の特性を与えることを包含する。好ましくは、本発明のＦｃ変異体は、これが組み合わされる修飾の表現型を増強する。例えば、本発明のＦｃ変異体を、同等の野生型Ｆｃ領域よりも高い親和性でＦｃγＲＩＩＩＡと結合することが知られている変異体と組み合わせる場合、本発明の変異体との組み合わせは、ＦｃγＲＩＩＩＡ親和性に更に何倍もの増強をもたらす。
【０２０４】
本発明は、変異型Ｆｃ領域を含む抗Ｂ７‐Ｈ３抗体及び／又は腫瘍血管新生抑制抗体を包含し、上記変異型Ｆｃ領域は、野生型Ｆｃ領域に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含み（例えば１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又はそれより多くのアミノ酸修飾を有し）、これにより、上記変異型Ｆｃ領域が２４３、２５５、２５６、２５８、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３００、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３２０、３２２、３２６、３２９、３３０、３３２、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３３９、３４０、３５９、３６０、３７３、３７６、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８、４３９位のうちのいずれの１つ若しくは複数における置換を有しない、又は上記置換のみではない場合、上記分子は、野生型Ｆｃ領域を含む分子に比べて増強されたエフェクタ機能を有する。ある特定の実施形態では、本発明は、変異型Ｆｃ領域を含む上述のような抗体を包含し、上記変異型Ｆｃ領域は、野生型Ｆｃ領域に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含み（例えば１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又はそれより多くのアミノ酸修飾を有し）、これにより、上記変異型Ｆｃ領域が２４３、２５５、２５８、２６７、２６９、２７０、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８９、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、３００、３０３、３０５、３０７、３０９、３２０、３２２、３２９、３３２、３３１、３３７、３３８、３４０、３７３、３７６、４１６、４１９、４３４、４３５、４３７、４３８、４３９位のうちのいずれの１つ若しくは複数における置換を有さず、又は上記置換のみではなく、また：アラニンを２５６、２９０、２９８、３１２、３２６、３３３、３３４、３５９、３６０、若しくは４３０位のうちのいずれに；アスパラギンを２６８位に；グルタミンを２７２位に；グルタミン、セリン若しくはアスパラギン酸を２８６位に；セリンを２９０位に；メチオニンを３０１位に；メチオニン、グルタミン、グルタミン酸若しくはアルギニンを３２０位に；グルタミン酸を３２２位に；アスパラギン、セリン、グルタミン酸若しくはアスパラギン酸を３２６位に；リジンを３３０位に；グルタミンを３３４位に；グルタミン酸を３３４位に；メチオニンを３３４位に；ヒスチジンを３３４位に；バリンを３３４位に；ロイシンを３３４位に；グルタミンを３３５位に；リジンを３３５位に；又はスレオニンを３３９位に有しない場合、上記分子は、野生型Ｆｃ領域を含む分子に対して変化した親和性でＦｃγＲに結合する。
【０２０５】
本発明はまた、変異型Ｆｃ領域を含む抗Ｂ７‐Ｈ３抗体及び／又は腫瘍血管新生抑制抗体を包含し、上記変異型Ｆｃ領域は、変異型Ｆｃ領域を含むこのような抗体を構成し、上記変異型Ｆｃ領域は、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８３、２８５、２８６、２８９、２９２、２９３、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３２０、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８若しくは４３９位のうちのいずれの１つ若しくは複数における置換を有さず、又は上記置換のみではなく、また：ヒスチジン、グルタミン、若しくはチロシンを２８０位に；セリン、グリシン、スレオニン若しくはチロシンを２９０位に；アスパラギンを２９４位に；リジンを２９５位に；プロリンを２９６位に；プロリン、アスパラギン、アスパラギン酸、若しくはバリンを２９８位に；又はロイシン若しくはイソロイシンを３００位に有しない。別の実施形態では、本発明は、変異型Ｆｃ領域を含む上述のような抗体を包含し、上記変異型Ｆｃ領域は、野生型Ｆｃ領域に対する少なくとも１つのアミノ酸修飾を含み、これにより、変異型Ｆｃ領域が、２４３、２５２、２５４、２６５、２６８、２６９、２７０、２７８、２８９、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３００、３０１、３０３、３２２、３２４、３２７、３２９、３３３、３３５、３３８、３４０、３７３、３７６、３８２、３８８、３８９、４１４、４１６、４１９、４３４、４３５、４３７、４３８、又は４３９位のうちのいずれの１つ若しくは複数における置換を有しない、又は上記置換のみではない場合、上記分子は、野生型Ｆｃ領域を含む分子に比べて低下した親和性でＦｃγＲに結合する。更に別の実施形態では、本発明は、変異型Ｆｃ領域を含む上述のような抗体を包含し、上記変異型Ｆｃ領域は、野生型Ｆｃ領域に対する少なくとも１つのアミノ酸修飾を含み、これにより、上記変異型Ｆｃ領域が、２８０、２８３、２８５、２８６、２９０、２９４、２９５、２９８、３００、３０１、３０５、３０７、３０９、３１２、３１５、３３１、３３３、３３４、３３７、３４０、３６０、３７８、３９８、ｏｒ４３０位のうちのいずれの１つ若しくは複数における置換を有しない、又は上記置換のみではない場合、上記分子は、野生型Ｆｃ領域を含む分子に比べて増強された親和性でＦｃγＲに結合する。
【０２０６】
本発明はまた、変異型Ｆｃ領域を含む抗Ｂ７‐Ｈ３抗体及び／又は腫瘍血管新生抑制抗体を包含し、上記変異型Ｆｃ領域は、３３０、２４３、２４７、２９８、２４１、２４０、２４４、２６３、２６２、２３５、２６９、又は３２８位のうちのいずれの１つ若しくは複数における置換を含まず、又は上記置換のみではなく、また：ロイシンを２４３位に；アスパラギンを２９８位に；ロイシンを２４１位に；イソロイシン若しくはアラニンを２４０位に；ヒスチジンを２４４位に；バリンを３３０位に；又はイソロイシンを３２８位に有しない。
【０２０７】
本発明は特に、活性化及び／又は阻害性受容体に関する増強されたエフェクタ機能及び／又は変化した親和性を有する変異型Ｆｃ領域を含む、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体及び／又は腫瘍血管新生抑制抗体を包含し、上記変異型Ｆｃ領域は：（ａ）以下の置換：Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２９８Ａ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ、Ｅ３３３Ａ、若しくはＫ３３４Ａのうちのいずれの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ若しくは６つ；又は（ｂ）置換の組み合わせ：（１）Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａ及びＫ３３４Ａ；（２）Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅ；若しくは（３）Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ及びＩ３３２Ｅのうちのいずれを含む。
【０２０８】
本発明は特に、活性化及び／又は阻害性受容体に関する増強されたエフェクタ機能及び／又は変化した親和性を有する変異型Ｆｃ領域を含む、上述のような抗体を包含し、上記変異型Ｆｃ領域は、以下の置換を含む：
（１）２８８位をアスパラギンで、３３０位をセリンで、及び３９６位をロイシンで；
（２）３３４位をグルタミン酸で、３５９位をアスパラギンで、及び３６６位をセリンで；
（３）３１６位をアスパラギン酸で、３７８位をバリンで、３９９位をグルタミン酸で；
（４）２４７位をロイシンで、及び４２１位をリジンで置換；
（５）３９２位をスレオニンで、及び３９６位をロイシンで；
（６）２２１位をグルタミン酸で、２７０位をグルタミン酸で、３０８位をアラニンで、３１１位をヒスチジンで、３９６位をロイシンで、及び４０２位をアスパラギン酸で；
（７）４１９位をヒスチジンで、及び３９６位をロイシンで置換；
（８）２４０位をアラニンで、及び３９６位をロイシンで；
（９）４１０位をヒスチジンで、及び３９６位をロイシンで；
（１０）２４３位をロイシンで、３０５位をイソロイシンで、３７８位をアスパラギン酸で、４０４位をセリンで、及び３９６位をロイシンで；
（１１）２５５位をイソロイシンで、及び３９６位をロイシンで；
（１２）３７０位をグルタミン酸で、及び３９６位をロイシンで；
（１３）２７０位をグルタミン酸で；又は
（１４）上記（１）〜（１２）の置換のいずれの組み合わせ。
【０２０９】
ある特定の実施形態では、本発明は、置換：Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、及びＹ３００Ｌを含む変異型Ｆｃ領域を含む、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体及び／又は腫瘍血管新生抑制抗体を包含する。更なる具体的実施形態では、本発明は、置換Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、及びＰ３９６Ｌを含む変異型Ｆｃ領域を含む、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体及び／又は腫瘍血管新生抑制抗体を包含する。また更なる具体的実施形態では、本発明は、置換：Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、及びＰ３９６Ｌを含む変異型Ｆｃ領域を含む、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体及び／又は腫瘍血管新生抑制抗体を包含する。
【０２１０】
更なる具体的実施形態では、本発明は、ロイシンによる３９６位の置換、グルタミン酸による２７０位の置換及びロイシンによる２４３位の置換を含む変異型Ｆｃ領域を含む、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体及び／又は腫瘍血管新生抑制抗体を包含する。別の特定の実施形態では、上記分子は更に、本明細書で開示されているような１つ又は複数のアミノ酸修飾を含む。
【０２１１】
本発明は特に、活性化及び／又は阻害性受容体に関する増強されたエフェクタ機能及び／又は変化した親和性を有する変異型Ｆｃ領域を含む、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体及び／又は腫瘍血管新生抑制抗体を包含し、これらは、以下の位置のうちの１つ又は複数におけるアミノ酸修飾を有する：１１９、１２５、１３２、１３３、１４１、１４２、１４７、１４９、１６２、１６６、１８５、１９２、２０２、２０５、２１０、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２７、２２９、２３１、２３２、２３３、２３５、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４６、２４７、２４８、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５８、２６１、２６２、２６３、２６８、２６９、２７０、２７２、２７４、２７５、２７６、２７９、２８０、２８１、２８２、２８４、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９５、２９８、３０１、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２３、３２６、３２７、３２８、３３０、３３３、３３４、３３５、３３７、３３９、３４０、３４３、３４４、３４５、３４７、３４８、３５２、３５３、３５４、３５５、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６５、３６６、３６７、３６９、３７０、３７１、３７２、３７５、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、３８２、３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６、３９７、３９８、３９９、４００、４０１、４０２、４０４、４０６、４０７、４０８、４０９、４１０、４１１、４１２、４１４、４１５、４１６、４１７、４１９、４２０、４２１、４２２、４２３、４２４、４２７、４２８、４３１、４３３、４３５、４３６、４３８、４４０、４４１、４４２、４４３、４４６、又は４４７位。好ましくは、このような変異により、エフェクタ細胞媒介性機能が与えられ、また任意に、本明細書に開示及び例示された、当業者に公知の方法を用いて決定されるような、ＦｃγＲに関する変化した親和性を有する、分子が得られる。
【０２１２】
本発明は特に、活性化及び／又は阻害性受容体に関する増強されたエフェクタ機能及び／又は変化した親和性を有する変異型Ｆｃ領域を含む、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体及び／又は腫瘍血管新生抑制抗体を包含し、これらは以下を有する：
（Ｉ）以下の位置のうちの１つ若しくは複数におけるアミノ酸修飾：２３５、２４０、２４１、２４３、２４４、２４７、２６２、２６３、２６９、２９８、３２８、若しくは３３０位、及びより好ましくは以下の修飾のうちの１つ若しくは複数：Ｖ２４０Ａ、Ｖ２４０Ｉ、Ｆ２４１Ｌ、Ｆ２４３Ｌ、Ｐ２４４Ｈ、Ｓ２９８Ｎ、Ｌ３２８Ｉ、Ａ３３０Ｖ；ここで上記抗体は、このような修飾を有しない野生型Ｆｃ領域を有する抗体に対して変化したエフェクタ機能を呈する；
（ＩＩ）以下の位置のうちの１つ若しくは複数におけるアミノ酸修飾：２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８３、２８５、２８６、２８９、２９２、２９３、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８若しくは４３９位、及びより好ましくは以下の修飾のうちの１つ若しくは複数：Ｄ２８０Ｈ、Ｄ２８０Ｑ、Ｄ２８０Ｙ、Ｋ２９０Ｇ、Ｋ２９０Ｓ、Ｋ２９０Ｔ、Ｋ２９０Ｙ、Ｅ２９４Ｎ、Ｑ２９５Ｋ、Ｙ２９６Ｐ、Ｓ２９８Ｄ、Ｓ２９８Ｎ、Ｓ２９８Ｐ、Ｓ２９８Ｖ、Ｙ３００Ｉ、Ｙ３００Ｌ；ここで上記抗体は、このような修飾を有しない野生型Ｆｃ領域を有する抗体に対して変化したエフェクタ機能を呈する；
（ＩＩＩ）以下の位置のうちの１つ若しくは複数におけるアミノ酸修飾：２５５、２５６、２５８、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３００、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３２０、３２２、３２６、３２９、３３０、３３２、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３３９、３４０、３５９、３６０、３７３、３７６、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８、４３９位、及びより好ましくは以下の修飾のうちの１つ若しくは複数：Ｔ２５６Ａ、Ｈ２６８Ｎ、Ｅ２７２Ｑ、Ｎ２８６Ｄ、Ｎ２８６Ｑ、Ｎ２８６Ｓ、Ｋ２９０Ａ、Ｋ２９０Ｓ、Ｓ２９８Ａ、Ｒ３０１Ｍ、Ｄ３１２Ａ、Ｋ３２０Ｅ、Ｋ３２０Ｍ、Ｋ３２０Ｑ、Ｋ３２０Ｒ、Ｋ３２２Ｅ、Ｋ３２６Ａ、Ｋ３２６Ｄ、Ｋ３２６Ｅ、Ｋ３２６Ｎ、Ｋ３２６Ｓ、Ａ３３０Ｋ、Ａ３３９Ｔ、Ｅ３３３Ａ、Ｋ３３４Ａ、Ｋ３３４Ｅ、Ｋ３３４Ｈ、Ｋ３３４Ｌ、Ｋ３３４Ｍ、Ｋ３３４Ｑ、Ｋ３３４Ｖ、Ｔ３３５Ｋ、Ｔ３３５Ｑ、Ｔ３５９Ａ、Ｋ３６０Ａ、Ｅ４３０Ａ；ここで上記抗体は、このような修飾を有しない野生型Ｆｃ領域を有する抗体に対して変化したエフェクタ機能を呈する；
（ＩＶ）以下の位置のうちの１つ若しくは複数におけるアミノ酸修飾：２５２、２５４、２６５、２６８、２６９、２７０、２７８、２８９、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３００、３０１、３０３、３２２、３２４、３２７、３２９、３３３、３３５、３３８、３４０、３７３、３７６、３８２、３８８、３８９、４１４、４１６、４１９、４３４、４３５、４３７、４３８、若しくは４３９位；ここで上記抗体は、このような修飾を有しない野生型Ｆｃ領域を有する抗体に比べて低下したエフェクタ機能を呈する；
（Ｖ）以下の位置のうちの１つ若しくは複数におけるアミノ酸修飾：２８０、２８３、２８５、２８６、２９０、２９４、２９５、２９８、３００、３０１、３０５、３０７、３０９、３１２、３１５、３３１、３３３、３３４、３３７、３４０、３６０、３７８、３９８、若しくは４３０位；ここで上記抗体は、このような修飾を有しない野生型Ｆｃ領域を有する抗体に比べて増強されたエフェクタ機能を呈する；又は
（ＶＩ）以下の位置のうちの１つ若しくは複数におけるアミノ酸修飾：Ｒ２５５Ａ、Ｔ２５６Ａ、Ｅ２５８Ａ、Ｓ２６７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｎ、Ｅ２７２Ａ、Ｅ２７２Ｑ、Ｎ２７６Ａ、Ｄ２８０Ａ、Ｅ２８３Ａ、Ｈ２８５Ａ、Ｎ２８６Ａ、Ｎ２８６Ｄ、Ｎ２８６Ｑ、Ｎ２８６Ｓ、Ｋ２９０Ａ、Ｋ２９０Ｓ、Ｒ３０１Ｍ、Ｋ３２０Ｅ、Ｋ３２０Ｍ、Ｋ３２０Ｑ、Ｋ３２０Ｒ、Ｋ３２２Ｅ、Ｋ３２６Ａ、Ｋ３２６Ｄ、Ｋ３２６Ｅ、Ｋ３２６Ｓ、Ａ３３０Ｋ、Ｐ３３１Ａ、Ｔ３３５Ｑ、Ｓ３３７Ａ、Ｅ４３０Ａ；ここで上記抗体は、このような修飾を有しない野生型Ｆｃ領域を有する抗体に比べて増強されたエフェクタ機能を呈する。
【０２１３】
他の実施形態では、本発明は：Ｊｅｆｆｅｒｉｓ，  Ｂ．Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  “Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  Ｓｉｔｅｓ  Ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ-Ｆｃ  Ｆｏｒ  ＦｃｇａｍｍａＲ：  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｏｄｅｌｓ，”  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｌｅｔｔ．  ８２：５７-６５；  Ｐｒｅｓｔａ，  Ｌ．Ｇ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  “Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，”  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  Ｔｒａｎｓ．  ３０：４８７-９０；  Ｉｄｕｓｏｇｉｅ，  Ｅ．Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  “Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｗｉｔｈ  Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｔｏ  Ｒｅｃｒｕｉｔ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ，”  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６６：２５７１-７５；  Ｓｈｉｅｌｄｓ，  Ｒ．Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  “Ｈｉｇｈ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅ  Ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ１  Ｆｏｒ  Ｆｃ  Ｇａｍｍａ  ＲＩ，  Ｆｃ  Ｇａｍｍａ  ＲＩＩ，  Ｆｃ  Ｇａｍｍａ  ＲＩＩＩ，  Ａｎｄ  ＦｃＲｎ  Ａｎｄ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｏｆ  ＩｇＧ１  Ｖａｒｉａｎｔｓ  Ｗｉｔｈ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｔｏ  Ｔｈｅ  Ｆｃ  ｇａｍｍａ  Ｒ，”  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７６：６５９１-６６０４；  Ｉｄｕｓｏｇｉｅ，  Ｅ．Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  “Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｃ１ｑ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅ  Ｏｎ  Ｒｉｔｕｘａｎ，  Ａ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｗｉｔｈ  Ａ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  Ｆｃ，”  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６４：４１７８-８４；  Ｒｅｄｄｙ，  Ｍ．Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  “Ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｆｃ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ-Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｅｆｆｅｃｔｏｒ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  Ｏｆ  Ａ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ＩｇＧ４  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｏ  Ｈｕｍａｎ  ＣＤ４，”  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６４：１９２５-１９３３；  Ｘｕ，  Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  “Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｆｉｖｅ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ＯＫＴ３  Ｅｆｆｅｃｔｏｒ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ｖａｒｉａｎｔ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，”  Ｃｅｌｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２００：１６-２６；  Ａｒｍｏｕｒ，  Ｋ．Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  “Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  Ｌａｃｋｉｎｇ  Ｆｃｇａｍｍａ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｉ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ａｎｄ  Ｍｏｎｏｃｙｔｅ  Ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ  Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ，”  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２９：２６１３-２４；  Ｊｅｆｆｅｒｉｓ，  Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  “Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｆｃ（Ｇａｍｍａ）Ｒ  Ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｂｙ  ＩｇＧ３-Ｃｏｒｅ  Ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，”  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｌｅｔｔ．  ５４：１０１-０４；  Ｌｕｎｄ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  “Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  Ｏｆ  ＩｇＧ  Ｗｉｔｈ  Ｉｔｓ  Ｃｏｒｅ  Ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  Ｃａｎ  Ｍｏｄｕｌａｔｅ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  Ｂｙ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｆｃ  Ｇａｍｍａ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｉ  Ａｎｄ  Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  Ｔｈｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｏｆ  Ｉｔｓ  Ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  Ｃｈａｉｎｓ，”  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５７：４９６３-４９６９；  Ｈｕｔｃｈｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  “Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｂｉｏｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ，  Ｔｕｍｏｒ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ，  Ａｎｄ  Ｒｅｄｕｃｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  Ｉｎ  Ｍｉｃｅ  Ｗｉｔｈ  Ａ  Ｇａｍｍａ  ４  Ｖａｒｉａｎｔ  Ｏｆ  Ｃａｍｐａｔｈ-１Ｈ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （Ｕ．Ｓ．Ａ．）  ９２：１１９８０-８４；  Ｊｅｆｆｅｒｉｓ，  Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  “Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  Ｓｉｔｅｓ  Ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  Ｆｏｒ  Ｆｃ  Ｇａｍｍａ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：  Ｔｈｅ  Ｒｏｌｅ  Ｏｆ  Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ，”  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｌｅｔｔ．  ４４：１１１-１７；  Ｌｕｎｄ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  “Ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ-Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  Ｉｎ  ＩｇＧ  Ｃａｎ  Ｍｏｄｕｌａｔｅ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  Ｂｙ  Ｆｃ  Ｇａｍｍａ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，”  ＦＡＳＥＢ  Ｊ．  ９：１１５-１９；  Ａｌｅｇｒｅ，  Ｍ．Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  “Ａ  Ｎｏｎ-Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  "Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ"  Ａｎｔｉ-ＣＤ３  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｒｅｔａｉｎｓ  Ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ，”  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５７：１５３７-１５４３；  Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  “Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅｓ  Ｏｎ  Ｔｈｅ  ＣＨ２  Ｄｏｍａｉｎ  Ｏｆ  ＩｇＧ  Ｆｏｒ  Ｍｏｕｓｅ  Ｆｃ  Ｇａｍｍａ  Ｒ１１，”  Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２９：５３-５９；  Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  “Ｈｕｍａｎ  Ｆｃ  Ｇａｍｍａ  ＲＩ  Ａｎｄ  Ｆｃ  Ｇａｍｍａ  ＲＩＩ  Ｉｎｔｅｒａｃｔ  Ｗｉｔｈ  Ｄｉｓｔｉｎｃｔ  Ｂｕｔ  Ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ  Ｓｉｔｅｓ  Ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ，”  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４７：２６５７-２６６２；  Ｄｕｎｃａｎ，  Ａ．Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  “Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｈｉｇｈ-Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｆｃ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｏｎ  ＩｇＧ，”  Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：５６３-５６４；  米国特許第５，６２４，８２１号；５，８８５，５７３号；６，１９４，５５１号；７，２７６，５８６号；７，３１７，０９１号；国際公開第００／４２０７２号及び国際公開９９／５８５７２号に開示されているもの等の、当該技術分野において公知のいずれのＦｃ変異体の使用を包含する。
【０２１４】
本発明は、以下の表２に列挙された変異のうちのいずれからなる又はいずれを含む変異型Ｆｃ領域を含む分子を包含する。
【０２１５】
【表２】
0006533534.tif 000003
0006533534.tif 000004
0006533534.tif 000005
0006533534.tif 000006
0006533534.tif 000007
【０２１６】
特定の実施形態では、このような抗Ｂ７‐Ｈ３抗体及び／又は腫瘍血管新生抑制抗体の変異型Ｆｃ領域は、以下を有する：
（１）ロイシンを２４７位に、リジンを４２１位に、及びグルタミン酸を２７０位に；
（２）スレオニンを３９２位に、ロイシンを３９６位に、グルタミン酸を２７０位に、及びロイシンを２４３位に；
（３）ヒスチジンを４１９位に、ロイシンを３９６位に、に、及びグルタミン酸を２７０位に；
（４）ヒスチジンを４１９位に、ロイシンを３９６位に、グルタミン酸を２７０位に、及びロイシンを２４３位に；
（５）アラニンを２４０位に、ロイシンを３９６位に、及びグルタミン酸を２７０位に；
（６）リジンを２５５位に、及びロイシンを３９６位に；
（７）リジンを２５５位に、ロイシンを３９６位に、及びグルタミン酸を２７０位に；
（８）リジンを２５５位に、ロイシンを３９６位に、グルタミン酸を２７０位に、及びリジンを３００位に；
（９）リジンを２５５位に、ロイシンを３９６位に、グルタミン酸を２７０位に、及びグリシンを２９２位に；
（１０）リジンを２５５位に、ロイシンを３９６位に、グルタミン酸を２７０位に、及びロイシンを２４３位に；
（１１）グルタミン酸を３７０位に、ロイシンを３９６位に、及びグルタミン酸を２７０位に；
（１２）グルタミン酸を２７０位に、アスパラギン酸を３１６位に、及びグリシンを４１６位に；
（１３）ロイシンを２４３位に、プロリンを２９２位に、イソロイシンを３０５位に、及びロイシンを３９６位に；
（１４）ロイシンを２４３位に、グルタミン酸を２７０位に、アスパラギンを３９２位に、及びロイシンを３９６位に；
（１５）ロイシンを２４３位に、ロイシンを２５５位に、グルタミン酸を２７０位に、及びロイシンを３９６位に；
（１６）グルタミンを２９７位に；又は
（１７）上記（１）〜（１６）の置換のいずれの組み合わせ
を有する。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、本発明の分子は更に、１つ又は複数のグリコシル化部位を含み、これにより、１つ又は複数の炭水化物部分が上記分子に共有結合する。好ましくは、１つ若しくは複数のグリコシル化部位及び／又はＦｃ領域の１つ若しくは複数の修飾を有する本発明の分子は、親抗体に比べて増強された抗体媒介性エフェクタ機能、例えば増強されたＡＤＣＣ活性を与える、又は有する。いくつかの実施形態では、本発明は更に、２４１、２４３、２４４、２４５、２４５、２４９、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６５、２９６、２９９、及び３０１位のアミノ酸を含むがこれらに限定されない、抗体の炭水化物部分と直接的又は間接的に相互作用することが知られているアミノ酸の１つ又は複数の修飾を含む分子を含む。抗体の炭水化物部分と直接的又は間接的に相互作用するアミノ酸は、当該技術分野において公知であり、例えばＪｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，  ４４：  １１１‐７を参照されたい（この文献は参照によりその全体が本出願に援用される）。
【０２１８】
別の実施形態では、本発明は、好ましくは分子の機能性、例えば標的抗原又はＦｃγＲへの結合活性を変化させることなく、分子の１つ又は複数の部位に１つ又は複数のグリコシル化部位を導入することによって修飾された分子を包含する。グリコシル化部位は、本発明の分子の可変及び／又は不変領域に導入してよい。本明細書において使用される場合、「グリコシル化部位」は、オリゴ糖（即ち連結した２つ以上の単糖を含有する炭水化物）が特異的に共有結合することになる、抗体内のいずれの特定のアミノ酸配列を含む。オリゴ糖側鎖は典型的にはＮ−又はＯ−結合鎖を介して抗体の骨格に連結される。Ｎ−結合型グリコシル化は、アスパラギン残基の側鎖へのオリゴ糖部分の付着を意味する。Ｏ−結合型グリコシル化は、ヒドロキシアミノ酸、例えばセリン、スレオニンへのオリゴ糖部分の付着を意味する。本発明の分子はＮ−結合型及びＯ−結合型グリコシル化部位を含む１つ又は複数のグリコシル化部位を含んでよい。当該技術分野で公知のＮ−結合型又はＯ−結合型グリコシル化のためのいずれのグリコシル化部位を、本発明に従って使用してよい。本発明の方法に従って有用な例示的Ｎ−結合型グリコシル化部位は、アミノ酸配列：Ａｓｎ‐Ｘ‐Ｔｈｒ／Ｓｅｒであり、ここでＸはいずれのアミノ酸であってよく、Ｔｈｒ／Ｓｅｒはスレオニン又はセリンを表す。本発明が属する技術分野において公知の方法を用いて、このような１つ又は複数の部位を本発明の分子に導入してよい（例えばＩｎ  ｖｉｔｒｏ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ，  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ：  Ａ  Ｓｈｏｒｔ  Ｃｏｕｒｓｅ，  Ｊ．  Ｄ．  Ｗａｔｓｏｎ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｗ．Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９８３，  ｃｈａｐｔｅｒ  ８，  ｐｐ．  １０６‐１１６を参照（この文献は参照によりその全体が本出願に援用される）。本発明の分子にグリコシル化部位を導入する例示的な方法は、所望のＡｓｎ‐Ｘ‐Ｔｈｒ／Ｓｅｒ配列が得られるように分子のアミノ酸配列を修飾する、又は変異させることを含んでよい。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、本発明は、グリコシル化部位を付加する又は欠失させることによって、本発明の分子の炭水化物含有量を修正する方法を包含する。抗体の炭水化物含有量を修正する方法は、当該技術分野において公知であり、本発明に包含される（例えば米国特許第６，２１８，１４９号；欧州特許第０３５９０９６Ｂ１号；米国公開特許第２００２／００２８４８６号；国際公開第０３／０３５８３５号；米国公開特許第２００３／０１１５６１４号；米国特許第６，２１８，１４９号；米国特許第６，４７２，５１１号を参照のこと；これらの文献は参照によりその全体が本出願に援用される））。他の実施形態では、本発明は、分子の１つ又は複数の内因性炭水化物部分を欠失させることによって、本発明の分子の炭水化物含有量を修正する方法を包含する。ある特定の実施形態では、本発明は、２９７位に隣接する位置を修飾することによって、抗体のＦｃ領域のグリコシル化部位をシフトさせることを包含する。ある特定の実施形態では、本発明は、２９６位がグリコシル化され、２９７位がグリコシル化されないように、２９６位を修飾することを包含する。
【０２２０】
１つ又は複数のシステイン残基をＦｃ領域に導入することによって、この領域において鎖間ジスルフィド結合の形成を発生させ、改善された内在化能力並びに／又は向上した相補的な媒介性細胞殺傷及びＡＤＣＣを得る等の技術によって、エフェクタ機能を修正することもできる（Ｃａｒｏｎ，  Ｐ．Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  “Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｄｉｍｅｒｉｃ  Ｆｏｒｍｓ  Ｏｆ  ＩｇＧ  Ａｒｅ  Ｍｏｒｅ  Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，”  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １７６：１１９１-１１９５；  Ｓｈｏｐｅｓ，  Ｂ．  （１９９２）  “Ａ  Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  Ｍｕｔａｎｔ  Ｗｉｔｈ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｃｙｔｏｌｙｔｉｃ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ，”  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４８（９）：２９１８-２９２２）。Ｗｏｌｆｆ，  Ｅ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  “Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｈｏｍｏｄｉｍｅｒｓ：  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｉｎ  Ｎｕｄｅ  Ｍｉｃｅ，”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：２５６０-２５６５に記載されているようなヘテロ二機能性架橋剤を用いて、増強された腫瘍抑制活性を有するホモ二量体抗体も調製してよい。あるいは、二重Ｆｃ領域を有する抗体を操作でき、これによって上記抗体は、増強された相補的な溶解及びＡＤＣＣ能力を有することができる（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ，  Ｇ．Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  “Ａ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｗｉｔｈ  Ｄｕａｌ  Ｆｃ  Ｒｅｇｉｏｎｓ  （ｂｉｓＦａｂＦｃ）  Ｐｒｅｐａｒｅｄ  Ｂｙ  Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎｓ  Ａｔ  Ｔｈｅ  ＩｇＧ  Ｈｉｎｇｅ，”    Ａｎｔｉ-Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ３：２１９-２３０）。
【０２２１】
ＶＩ．Ｂ７‐Ｈ３／腫瘍血管新生抑制ダイアボディ
上述のように、本発明は更に、少なくとも２つのエピトープ結合部位を形成する少なくとも２つの共有結合したポリペプチド鎖を含む、ダイアボディ（特に「ＤＡＲＴ（商標）」（二重親和性再標的化試薬））分子を包含し、上記エピトープ結合部位のうちの１つは、Ｂ７‐Ｈ３に特異的に結合し、上記エピトープ結合部位のうちの第２のものは、腫瘍血管新生の促進に関わる細胞表面因子（又はその受容体）に結合する。最も好ましくは、このようなダイアボディは、Ｂ７‐Ｈ３及びＶＥＧＦに、又はＢ７‐Ｈ３及びＶＥＧＦＲに結合することになる。
【０２２２】
好ましい実施形態では、ダイアボディの第１のポリペプチド鎖は：
（ｉ）Ｂ７‐Ｈ３のエピトープに対して特異的な、第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ１）の結合領域を含むドメイン（Ａ）；
（ｉｉ）ＶＥＧＦ又はＶＥＧＦＲのエピトープに対して特異的な、第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ２）の結合領域を含むドメイン（Ｂ）；及び
（ｉｉｉ）任意に、ドメイン（Ｃ）
を含む。このようなダイアボディの第２のポリペプチド鎖は：
（ｉ）上述のようなＶＥＧＦ又はＶＥＧＦＲのエピトープに対して特異的な、第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ２）の結合領域を含むドメイン（Ｄ）；
（ｉｉ）上述のようなＢ７‐Ｈ３のエピトープに対して特異的な、第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ１）の結合領域を含むドメイン（Ｅ）；及び
（ｉｉｉ）任意に、ドメイン（Ｆ）
を含む。
【０２２３】
第１及び第２のポリペプチド鎖の可変ドメインは互いに反転してよく、これにより、ダイアボディの第１のポリペプチド鎖は：
（ｉ）上述のようなＶＥＧＦ又はＶＥＧＦＲのエピトープに対して特異的な、第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ２）の結合領域を含むドメイン（Ａ）；
（ｉｉ）上述のようなＢ７‐Ｈ３のエピトープに対して特異的な、第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ１）の結合領域を含むドメイン（Ｂ）；及び
（ｉｉｉ）任意に、ドメイン（Ｃ）；
を含み、またこのようなダイアボディの第２のポリペプチド鎖は：
（ｉ）Ｂ７‐Ｈ３のエピトープに対して特異的な、第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ１）の結合領域を含むドメイン（Ｄ）；
（ｉｉ）ＶＥＧＦ又はＶＥＧＦＲのエピトープに対して特異的な、第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ２）の結合領域を含むドメイン（Ｅ）；及び
（ｉｉｉ）任意に、ドメイン（Ｆ）。
を含む。
【０２２４】
ダイアボディドメイン（Ａ）及び（Ｂ）は、互いに連結してエピトープ結合部位を形成しない。同様に、ダイアボディドメイン（Ｄ）及び（Ｅ）は、互いに連結してエピトープ結合部位を形成しない。その代わりに、ダイアボディドメイン（Ａ）及び（Ｅ）が連結して、Ｂ７‐Ｈ３エピトープに結合する結合部位を形成し、ダイアボディドメイン（Ｂ）及び（Ｄ）が連結して、ＶＥＧＦ又はＶＥＧＦＲエピトープに結合する結合部位を形成する。
【０２２５】
いずれのポリペプチド鎖のＶＨ又はＶＬドメインも、ポリペプチド鎖内のいずれの位置に拘束されず、即ちアミノ（Ｎ）又はカルボキシ（Ｃ）末端に拘束されずまた互いに対する相対位置に関して制限されたドメインではない、即ちＶＬドメインがＶＨドメインに対するＮ末端であってよく、又はその逆であってよい。唯一の制限は、機能性ダイアボディを形成するために、相補的なポリペプチド鎖を利用できることである。
【０２２６】
ドメイン（Ｃ）及び（Ｆ）が存在する場合、これらは互いに共有結合している。ドメイン（Ｃ）及び（Ｆ）は、Ｆｃドメイン又はその一部分（例えばＣＨ２ドメイン若しくはＣＨ３ドメイン）であってよい。Ｆｃドメイン又はその一部分は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＥ及びＩｇＭを含むがこれらに限定されない、いずれの免疫グロブリンアイソタイプ又はアロタイプに由来するものであってよい。好ましい実施形態では、Ｆｃドメイン（又はその一部分）は、ＩｇＧに由来する。特定の実施形態では、ＩｇＧアイソタイプはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３若しくはＩｇＧ４又はそのアロタイプである。一実施形態では、ダイアボディ分子はＦｃドメインを含み、このＦｃドメインは、いずれの免疫グロブリンアイソタイプから独立して選択されたＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む（即ち、ＩｇＧに由来するＣＨ２ドメイン及びＩｇＥに由来するＣＨ３ドメイン、又はＩｇＧ１に由来するＣＨ２ドメイン及びＩｇＧ２に由来するＣＨ３ドメイン等を含むＦｃドメイン）。上記Ｆｃドメインは、本発明のダイアボディ分子を含むポリペプチド鎖に、上記ポリペプチド鎖の他のドメイン又は部分に対していずれの位置において組み込むことができる（例えば上記Ｆｃドメイン又はその一部分は、鎖のポリペプチドのＶＬ及びＶＨドメインに対するＣ末端であってよく、又は一方のドメインに対するＮ末端及び他方のドメインに対するＣ‐末端（即ちポリペプチド鎖の２つのドメインの間）であってよい）。
【０２２７】
ダイアボディ分子のポリペプチド鎖のＦｃドメインは、優先的に二量体化し、これは免疫グロブリン様特性、例えばＦｃ‐ＦｃγＲ相互作用を呈するダイアボディ分子の形成につながる。ダイアボディを構成するＦｃドメインは、例えばそれぞれがＶＨドメイン、ＶＬドメイン及びＦｃドメインを含む２つのポリペプチド鎖からなる、二量体であってよい。上記ポリペプチド鎖の二量体化により、非修飾２価抗体の構造とは異なっているにも関わらず、Ｆｃドメインを含む２価ダイアボディが得られる。このようなダイアボディ分子は、野生型免疫グロブリンに対して変化した表現型、例えば変化した血清半減期、結合特性等を呈することになる。他の実施形態では、Ｆｃドメインを構成するダイアボディ分子は四量体であってよい。このような四量体は、２つの「比較的重い」ポリペプチド鎖、即ちＶＬ、ＶＨ及びＦｃドメインを含むポリペプチド鎖と、２つの「比較的軽い」ポリペプチド鎖、即ちＶＬ及びＶＨを含むポリペプチド鎖とを含む。上記比較的軽い鎖及び比較的重い鎖は、相互作用して単量体を形成し、上記単量体は、それ自体の、ペアになっていないドメインを介して相互作用して、Ｉｇ様分子を形成する。このようなＩｇ様ダイアボディは４価である。
【０２２８】
上述のような四重特異性ダイアボディ分子の形成は、４つの異なるポリペプチド鎖の相互作用を必要とする。このような相互作用は潜在的に発生し得る鎖の誤ったペアリングの様々な変形例により、単一細胞組み換え産生系内で効率的に達成するのが困難である。誤ったペアリングの蓋然性を低減する１つの解決策は、「ノブ・イントゥ・ホール」タイプの変異を所望のポリペプチド鎖ペアに組み込むことである。このような変異は、ホモ二量体化を抑えてヘテロ二量体化を促進する。例えばＦｃ‐Ｆｃ間相互作用に関して、ＣＨ２又はＣＨ３ドメインにアミノ酸置換（好ましくは「ノブ（ｋｎｏｂ）」を形成する嵩高な側鎖基、例えばトリプトファンを含むアミノ酸による置換）を導入して、立体障害により、同様に変異させたドメインとの相互作用を防止し、上記変化させたドメインを、相補的な又は適応した変異（例えばグリシンによる置換）を施されたドメイン、即ち「ホール（ｈｏｌｅ）」とペアにすることができる。このような一連の変化は、上記ダイアボディ分子を構成するポリペプチドのいずれのペアに施すことができ、また更に、上記ペアのポリペプチド鎖のいずれの部分に施すことができる。ホモ二量体化を抑えてヘテロ二量体化を促進するためのタンパク質加工の方法は、特に免疫グロブリン様分子の加工に関して当該技術分野で公知であり、本明細書に包含される（例えばＲｉｄｇｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  “‘Ｋｎｏｂｓ‐Ｉｎｔｏ‐Ｈｏｌｅｓ’  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＣＨ３  Ｄｏｍａｉｎｓ  Ｆｏｒ  Ｈｅａｖｙ  Ｃｈａｉｎ  Ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ，”  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｒ．  ９：６１７‐６２１；  Ａｔｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  “Ｓｔａｂｌｅ  Ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｓ  Ｆｒｏｍ  Ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ  Ｔｈｅ  Ｄｏｍａｉｎ  Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  Ｏｆ  Ａ  Ｈｏｍｏｄｉｍｅｒ  Ｕｓｉｎｇ  Ａ  Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ  Ｌｉｂｒａｒｙ，”  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２７０：  ２６‐３５；及びＸｉｅ  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  “Ａ  Ｎｅｗ  Ｆｏｒｍａｔ  Ｏｆ  Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ：  Ｈｉｇｈｌｙ  Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  Ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ，  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌ  Ｌｙｓｉｓ，”  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２９６：９５‐１０１を参照（これらはそれぞれ参照によりその全体が本明細書に援用される））。
【０２２９】
本発明はまた、変異型Ｆｃドメイン又は変異型ヒンジＦｃドメイン（又はその一部分）を含むダイアボディ分子も包含し、上記変異型Ｆｃドメインは、同等の野生型Ｆｃドメイン又はヒンジＦｃドメイン（又はその一部分）に対する少なくとも１つのアミノ酸修飾（例えば置換、挿入、欠失）を含む。変異型Ｆｃ又は変異型ヒンジＦｃドメイン（又はその一部分）を含む分子（例えば抗体）は通常、野生型Ｆｃドメイン又はヒンジＦｃドメイン又はその一部分を含む分子に対して変化した表現型を有する。この変異型表現型は、変化した血清半減期、変化した安定性、細胞酵素に対する変化した感受性、又はＮＫ依存性若しくはマクロファージ依存性アッセイで測定されるような変化したエフェクタ機能として表現され得る。変化したエフェクタ機能として表されるＦｃドメイン修飾については、既に開示している。
【０２３０】
本発明はまた、ヒンジドメインを含む分子も包含する。このヒンジドメインは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＥ及びＩｇＭを含むいずれの免疫グロブリンアイソタイプ又はアロタイプに由来するものであってよい。好ましい実施形態では、ヒンジドメインはＩｇＧに由来し、上記ＩｇＧアイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３若しくはＩｇＧ４又はこれらのアロタイプである。Ｆｃドメインと共にダイアボディ分子を構成するポリペプチド鎖に上記ヒンジドメインを組み込むことによって、上記ダイアボディ分子がヒンジＦｃドメインを含むようにしてよい。特定の実施形態では、上記ヒンジドメイン及びＦｃドメインは、当該技術分野において公知の、本明細書において例示されているいずれの免疫グロブリンアイソタイプから独立して選択される。他の実施形態では、上記ヒンジドメイン及びＦｃドメインは、ポリペプチド鎖の少なくとも１つの他のドメイン、例えばＶＬドメインによって分離される。ヒンジドメイン、又は任意にヒンジＦｃドメインを、本発明のポリペプチド鎖に、上記ポリペプチド鎖の他のドメイン又は部分に対していずれの位置において組み込んでよい。特定の実施形態では、本発明のポリペプチド鎖はヒンジドメインを含み、上記ヒンジドメインはポリペプチド鎖のＣ末端にあり、上記ポリペプチド鎖はＦｃドメインを含まない。更に他の実施形態では、本発明のポリペプチド鎖はヒンジＦｃドメインを含み、上記ヒンジＦｃドメインはポリペプチド鎖のＣ末端にある。更なる実施形態では、本発明のポリペプチド鎖はヒンジＦｃドメインを含み、上記ヒンジＦｃドメインはポリペプチド鎖のＮ末端にある。
【０２３１】
ダイアボディのポリペプチド鎖の各ドメイン、即ちＶＬ、ＶＨ及びＦｃドメインは、ペプチドリンカーによって隔てられていてよい。ペプチドリンカーは、０、１、２、３、４、５、６、７、８又は９個のアミノ酸の長さであってよい。特定の実施形態では、上記アミノ酸リンカーの配列は、核酸配列ggaggcggat ccggaggcgg aggc（配列番号９８）によってコードされるGGGSGGGG（配列番号９７）である。ダイアボディ分子の第２のポリペプチド鎖上の対応するシステイン残基と相互作用して鎖間ジスルフィド結合を形成することになる少なくとも１つのシステイン残基を含むように、ダイアボディ分子のポリペプチド鎖を操作してよい。このような鎖間ジスルフィド結合は、ダイアボディ分子を安定化させることによって、組み換え系における発現及び回復を改善する役割を果たし、これは、安定した一定の処方をもたらし、またインビボでの単離された及び／又は精製された産物の安定性を改善する。システイン残基は、ポリペプチド鎖のいずれの部分において、単一のアミノ酸として、又はより大きなアミノ酸配列の一部、例えばヒンジドメインとして、導入してよい。ある特定の実施形態では、システイン残基を、ポリペプチド鎖のＣ末端に発生するように操作してよい。いくつかの実施形態では、システイン残基を、アミノ酸配列：LGGC（配列番号９９）内のポリペプチド鎖に導入する。ある特定の実施形態では、本発明のダイアボディ分子を構成するポリペプチド鎖のＣ末端は、アミノ酸配列LGGC（配列番号９９）を含む。別の実施形態では、システイン残基を、ヒンジドメインを含むアミノ酸配列、例えばEPKSCDKTHTCPP（配列番号１００）又はESKYGPPCPS（配列番号１０１）内のポリペプチドに導入する。ある特定の実施形態では、本発明のダイアボディ分子のポリペプチド鎖のＣ末端は、ＩｇＧヒンジドメインのアミノ酸配列、例えば配列番号１００又は配列番号１０１を含む。別の実施形態では、本発明のダイアボディ分子のポリペプチド鎖のＣ末端は、アミノ酸配列VEPKSC（配列番号１０２）を含み、上記アミノ酸配列はヌクレオチド配列gttgagccca aatcttgt（配列番号１０３）によってコードできる。他の実施形態では、システイン残基を、アミノ酸配列LGGCFNRGEC（配列番号１０４）内のポリペプチド鎖に導入し、上記アミノ酸配列はヌクレオチド配列ctgggaggct gcttcaacag gggagagtgt（配列番号１０５）によってコードできる。ある特定の実施形態では、本発明のダイアボディ分子を構成するポリペプチド鎖のＣ末端は、アミノ酸配列LGGCFNRGEC（配列番号１０４）を含む。更に他の実施形態では、システイン残基をFNRGEC（配列番号１０６）内のポリペプチド鎖に導入し、上記アミノ酸配列はヌクレオチド配列ttcaacaggg gagagtgt（配列番号１０７）によってコードできる。ある特定の実施形態では、本発明のダイアボディ分子を構成するポリペプチド鎖のＣ末端は、アミノ酸配列FNRGEC（配列番号１０６）を含む。
【０２３２】
特定の実施形態では、ダイアボディ分子は少なくとも２つのポリペプチド鎖を含み、これらはそれぞれアミノ酸配列LGGC（配列番号９９）を含み、LGGC（配列番号９９）配列内のシステイン残基間のジスルフィド結合によって共有結合される。別の特定の実施形態では、ダイアボディ分子は少なくとも２つのポリペプチド鎖を含み、これらのうちの一方はアミノ酸配列FNRGEC（配列番号１０６）を含み、他方は（少なくとも１つのシステイン残基を含有する）ヒンジドメインを含み、上記少なくとも２つのポリペプチド鎖は、FNRGEC（配列番号１０６）内のシステイン残基と、ヒンジドメイン内のシステイン残基との間のジスルフィド結合によって共有結合される。特定の態様では、ヒンジドメインに位置するジスルフィド結合に寄与するシステイン残基はＣｙｓ‐１２８（Ｋａｂａｔ  ＥＵに従って番号付与；非修飾の完全なＩｇＧ重鎖のヒンジドメインに位置する）であり、また対応するシステイン残基はＣｙｓ‐２１４（Ｋａｂａｔ  ＥＵに従って番号付与；非修飾の完全なＩｇＧ軽鎖のＣ末端に位置する）である（Ｅｌｋａｂｅｔｚ  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  “Ｃｙｓｔｅｉｎｅｓ  Ｉｎ  ＣＨ１  Ｕｎｄｅｒｌｉｅ  Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｕｎａｓｓｅｍｂｌｅｄ  Ｉｇ  Ｈｅａｖｙ  Ｃｈａｉｎｓ，”  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２８０：１４４０２-１４４１２）。更なる他の実施形態では、少なくとも１つのシステイン残基を、アミノ酸鎖のＮ末端に発生するように操作する。更に他の実施形態では、少なくとも１つのシステイン残基を、ダイアボディ分子のポリペプチド鎖のリンカー部分に発生するように操作する。更なる実施形態では、ＶＨ又はＶＬドメインを、親ＶＨ又はＶＬドメインに対する少なくとも１つのアミノ酸修飾を含むように操作し、これにより上記アミノ酸修飾は、システインによる親アミノ酸の置換を含む。
【０２３３】
本実施形態の更に別の態様では、第１のポリペプチド鎖のドメイン（Ｃ）は、アミノ酸配列VEPKSC（配列番号１０２）を含み、このアミノ酸配列は、ヒトＩｇＧのヒンジドメインに由来し、またヌクレオチド配列gttgagccca aatcttgt（配列番号１０３）によってコードできる。本実施形態の別の態様では、第２のポリペプチド鎖のドメイン（Ｆ）はアミノ酸配列VEPKSC（配列番号１０２）を含む。この実施形態の特定の態様では、第１のポリペプチド鎖のドメイン（Ｃ）は、ヒトカッパ軽鎖のＣ末端の６個のアミノ酸、FNRGEC（配列番号１０６）を含み；第２のポリペプチド鎖のドメイン（Ｆ）は、アミノ酸配列VEPKSC（配列番号１０２）又はヒンジドメインを含む。本実施形態の他の実施形態では、第２のポリペプチド鎖のドメイン（Ｆ）は、ヒトカッパ軽鎖のＣ末端の６個のアミノ酸、FNRGEC（配列番号１０６）を含み；第１のポリペプチド鎖のドメイン（Ｃ）は、アミノ酸配列VEPKSC（配列番号１０２）又はヒンジドメインを含む。
【０２３４】
以上を踏まえて理解されるように、二重特異性ダイアボディの個々のポリペプチドは、２種のホモ二量体及び１種のヘテロ二量体を形成できる。本発明の一実施形態では、帯電させたポリペプチドを、一方の又は好ましくは両方のダイアボディポリペプチドのＣ末端に付加できる。二重特異性ダイアボディの個々のポリペプチドに関して、対向する電荷の帯電させたポリペプチドを選択すると、このような帯電させたポリペプチドを含むことにより、ヘテロ二量体の形成が促進され、ホモ二量体の形成を低減する。好ましくは、正電荷のポリペプチドは有意量のアルギニン、グルタミン、ヒスチジン及び／又はリジン（又はこれらのアミノ酸の混合物）を含有し、負電荷のポリペプチドは、有意量のアスパラギン酸又はグルタミン酸（又はこれらのアミノ酸の混合物）を含有する。有意量のリジンを含有する正電荷のポリペプチド、及び有意量のグルタミン酸を含有する負電荷のポリペプチドが特に好ましい。これらの対向する電荷のポリペプチド間の静電引力を最大化するために、自発的に螺旋型構造を取ることができるポリペプチドを採用するのが好ましい。
【０２３５】
従って好ましい実施形態では、正電荷の「Ｅコイル」が、二重特異性ダイアボディを形成するために使用されているポリペプチドのうちの１つに付加され、負電荷の「Ｋコイル」が、上記ダイアボディのポリペプチドのうちの第２のものに付加される。特に好ましいＥコイルは、配列：（EVAALEK）４［即ち（配列番号１０８）EVAALEKEVAALEKEVAALEKEVAALEK］を有する。特に好ましいＫコイルは、配列：（KVAALKE）４［即ち（配列番号１０９）KVAALKEKVAALKEKVAALKEKVAALKE］を有する。
【０２３６】
このようなＥコイルを有する好ましいダイアボディのポリペプチドは、一般配列：［ＶＬドメイン］‐［GGGSGGGG］‐［ＶＨドメイン］‐［（EVAALEK）４］‐GGGNSを有し、ここでＶＬはダイアボディの可変軽鎖Ｉｇドメイン、GGGSGGGGは配列番号９７、ＶＨはダイアボディの可変重鎖Ｉｇドメイン、（EVAALEK）４は配列番号１０８、GGGNSは配列番号１１０である。上述のようなＫコイルを有する好ましいダイアボディのポリペプチドは、一般配列：［ＶＬドメイン］‐［GGGSGGGG］‐［ＶＨドメイン］‐［（KVAALKE）４］‐GGGNSを有し、ここでＶＬはダイアボディの可変軽鎖Ｉｇドメイン、GGGSGGGGは配列番号９７、ＶＨはダイアボディの可変重鎖Ｉｇドメイン、（KVAALKE）４は配列番号１０９、GGGNSは配列番号１１０である。
【０２３７】
更なる実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｅコイル又はＫコイルダイアボディのＥ及び／又はＫコイルに連結できる。Ｆｃ含有ダイアボディのＦｃ領域とダイアボディＶＨドメインとの間の間隔を広げることは、これらのドメインの離間が小さい構成によって、これらのドメインとその結合リガンドとの間の相互作用が低下する、又は他の様式でダイアボディアセンブリが妨害される場合において望ましい。いずれのアミノ酸配列のセパレータを採用してよいが、Ｆｃドメインを可変ドメインから最大限伸長及び突出させるために、α螺旋型コイルを形成するセパレータを採用することが好ましい。上述の対向する電荷のコイル化されたポリペプチドは更に、ヘテロ二量体形成を促進する機能を有するため、このような分子は特に好ましいセパレータである。このようなコイル含有Ｆｃダイアボディ分子は、改善された血清半減期及びエフェクタ機能の回復を含む、Ｆｃダイアボディと同様の便益を提供する。上述のＥコイル及びＫコイルポリペプチドは、この目的に関して特に好ましい。従って好ましい実施形態では、ＥコイルＦｃ含有ダイアボディは、Ｄ２３４（Ｋａｂａｔ番号付与）で始まる一般配列：［ＶＬドメイン］‐［GGGSGGGG］‐［ＶＨドメイン］‐［（EVAALEK）４］‐GGG‐Ｆｃドメインを有し、ここでＶＬはダイアボディの可変軽鎖Ｉｇドメイン、GGGSGGGGは配列番号９７、ＶＨはダイアボディの可変重鎖Ｉｇドメイン、（EVAALEK）４は配列番号１０８である。同様に、好ましい実施形態では、ＫコイルＦｃ含有ダイアボディは、Ｄ２３４（Ｋａｂａｔ番号付与）で始まる一般配列：［ＶＬドメイン］‐［GGGSGGGG］‐［ＶＨドメイン］‐［（KVAALKE）４］‐GGG‐Ｆｃドメインを有し、ここでＶＬはダイアボディの可変軽鎖Ｉｇドメイン、GGGSGGGGは配列番号９７、ＶＨはダイアボディの可変重鎖Ｉｇドメイン、（KVAALKE）４は配列番号１０９である。
【０２３８】
既に示したように、コイル含有ダイアボディ分子又はコイル含有Ｆｃ含有ダイアボディ分子は、上述のようなコイルセパレータを１つだけ含有してよく、又は２つ以上の上述のようなセパレータ（例えば、好ましくは対向する電荷を有し、かつ一方がダイアボディのポリペプチドの各ＶＨドメインに連結される、２つのセパレータ）を含有してよい。Ｆｃ領域をこのような１つ又は複数のセパレータ分子に連結することによって、鎖の交換によってＦｃダイアボディの２価、４価等のバージョンを作製する能力が増進される。従って、ＦｃドメインがダイアボディＶＨドメインのうちの一方に連結されるか両方に連結されるかに応じて単量体又は二量体を形成する、Ｆｃダイアボディ分子を産生できる。
【０２３９】
ＶＩＩ．治療方法
Ｂ７‐Ｈ３又は腫瘍血管新生の促進に関わる細胞表面因子（若しくはその受容体）（特にＶＥＧＦ若しくはその受容体、ＶＥＧＦＲ）に特異的に結合する抗体（又はダイアボディ）を、癌又は他の疾患を有する個体の治療目的で使用してよい。一実施形態では、このような結合活性を提供する１つ又は複数の分子は、共に投与される。本明細書において使用される場合、このような「共に（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ）」投与は、以下を意味することが意図されている：
Ａ．Ｂ７‐Ｈ３に特異的な結合能を有する分子と、腫瘍血管新生の促進に関わる細胞表面因子（又はその受容体）（特にＶＥＧＦ又はその受容体、ＶＥＧＦＲ）に特異的な結合能を有する分子との両方を含有する、単一の医薬組成物の投与。これらの分子は同一の分子であってよく（例えばダイアボディ）、又は別個であってよい（例えば抗Ｂ７‐Ｈ３抗体、若しくはその抗原結合性断片、及び抗ＶＥＧＦ抗体若しくはその抗原結合性断片）；あるいは
Ｂ．２つ以上の医薬組成物の個別投与、そのうちの１つの組成物は、Ｂ７‐Ｈ３に特異的な結合能を有する分子を含有し、別の組成物は、腫瘍血管新生の促進に関わる細胞表面因子（又はその受容体）（特にＶＥＧＦ又はその受容体、ＶＥＧＦＲ）に特異的な結合能を有する分子を含有し、ここで２番目に投与される組成物は、１番目に投与される分子の投与後、１生物的半減期以内、又は１番目に投与される分子の投与後、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０半減期以内に投与される。ベバシズマブは、推定半減期が約２０日である。ヒト化抗Ｂ７‐Ｈ３の推定半減期は２〜３週である。
【０２４０】
第２の実施形態では、２つの別個の分子が採用され、これらの分子は「順次」投与される（例えば抗ＶＥＧＦ抗体を投与した後で抗Ｂ７‐Ｈ３抗体が提供されるか、又はその逆）。このような順次投与では、２番目に投与される組成物は、１番目に投与される組成物の投与後、１０半減期以内に投与される。
【０２４１】
上述のような分子を用いた治療は、インビトロ及びインビボ両方での複合体の形成を伴う場合がある。一実施形態では、様々な組織の血管新生性癌細胞、並びに特に乳癌、膠芽腫、子宮頸癌、転移性結腸直腸癌、胃癌、肝細胞癌、白血病、肺癌、転移性黒色腫、血管新生性膵臓癌及び転移性前立腺癌といった癌細胞を対象とする免疫療法のために、モノクローナル抗Ｂ７‐Ｈ３抗体及びモノクローナル抗ＶＥＧＦ抗体（特にそのキメラ又はヒト化変異体）を使用できる。このような免疫療法は例えば、癌細胞における細胞分裂の低減、転移の発現（例えば発生及び拡散）の遅延、又は癌に対する緩和治療の提供には十分であり得る。癌個体の緩和治療は、癌の進行に直接影響を及ぼさない、疾患の有害症状又は当該疾患のために行われた他の治療によって発生する医原性症状の低減又は軽減を伴う。これは、疼痛、栄養供給、性的問題、心理的苦痛、抑鬱状態、疲労、精神障害、吐き気、嘔吐等の緩和のための治療、処置を含む。
【０２４２】
抗体は、生理学的（例えばインビボ）条件において結合を促進する濃度で投与されることが理解される。抗体（又はダイアボディ）は、個体自身の免疫応答を増強する又は指向する追加の作用剤、例えばＡＤＣＣを強化する作用剤等と共に投与してよい。
【０２４３】
更に別の実施形態では、このような抗体又はダイアボディのうちの１つ又は複数は：放射性分子；毒素（例えばカリケアマイシン）；化学療法剤分子；化学療法剤化合物を含み、これらの化合物を、上記抗体が認識する抗原を含有する癌細胞に対して標的化することによって、癌細胞又は罹患細胞を除去するために、このような治療を必要とする個体に投与されるリポソーム又は他の小胞と、複合化又は連結させてよい。いずれの特定の理論に限定されるものではないが、上記抗体（例えば抗Ｂ７‐Ｈ３抗体）は、Ｂ７‐Ｈ３を表面に担持する細胞によって内在化され、これにより上記細胞に複合化された部分を送達して治療的効果を誘起し、また、腫瘍血管新生の促進に関わる細胞表面因子（又はその受容体）（特にＶＥＧＦ又はその受容体、ＶＥＧＦＲ）に特異的に結合する抗体（又はダイアボディ）が、腫瘍血管新生を阻害する。
【０２４４】
更に別の実施形態では、このような抗体又はダイアボディは、転移の発現の遅延、抑制又は防止のための、腫瘍の外科的除去時の補助療法として使用できる。抗体は、腫瘍のサイズを低減することによって手術を可能とする若しくは簡略化するため、手術中に組織をなるべく保護するため、及び／又は結果として発生するいずれの外面的破壊を低減するために、手術前に投与することもできる。
【０２４５】
本発明の実践にあたって、細胞サイクル投薬が考えられる。このような実施形態では、化学療法剤を用いて、腫瘍又はその他の標的の罹患細胞の細胞サイクルを、事前に決定したステージにおいて同期させる。続いて、本発明の抗体を（単独で又は追加の治療的部分と共に）投与する。代替実施形態では、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体を用いて細胞サイクルを同期させ、２周目の治療の投与の前の細胞分裂を低減し；この２周目は、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体と、腫瘍血管新生の促進に関わる細胞表面因子（又はその受容体）（特にＶＥＧＦ又はその受容体、ＶＥＧＦＲ）に特異的に結合する抗体（又はダイアボディ）とを、単独で又は追加の治療的部分と共に投与することであってよい。
【０２４６】
化学療法剤は：放射性分子；癌細胞の生存能力に対して有害ないずれの作用剤を含む、細胞毒素又は細胞毒性剤とも呼ばれる毒素；作用剤；及び化学療法剤化合物を含有するリポソーム又は他の小胞を含む。好適な化学療法剤の例は：１‐デヒドロテストステロン、５‐フルオロウラシルデカルバジン、６‐メルカプトプリン、６‐チオグアニン、アクチノマイシンＤ、アドリアマイシン、アルデスロイキン、アルキル化剤、アロプリノールナトリウム、アルトレタミン、アミフォスチン、アナストロゾール、アントラマイシン（ＡＭＣ））、抗有糸分裂剤、シス‐ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、ジアミノジクロロ白金、アントラサイクリン、抗生物質、代謝拮抗剤、アスパラギナーゼ、ＢＣＧ生菌（膀胱内）、リン酸ベタメタゾンナトリウム及びベタメタゾン酢酸、ビカルタミド、ブレオマイシン硫酸塩、ブスルファン、ロイコヴォリン‐カルシウム、カリケアマイシン、カペシタビン、カルボプラチン、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、コルヒチン、結合型エストロゲン、シクロホスファミド、Ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ、シタラビン、サイトカラシンＢ、サイトキサン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ダウノルビシンＨＣＬ、クエン酸ダウノルビシン、デニロイキンジフチトクス、デクスラゾキサン、ジブロモマンニトール、ジヒドロキシアントラリンジオン、ドセタキセル、ドラセトロンメシル酸、ドキソルビシンＨＣＬ、ドロナビノール、大腸菌Ｌ‐アスパラギナーゼ、エメチン、エポエチンアルファ、エルウィニアＬ‐アスパラギナーゼ、エステル化エストロゲン、エストラジオール、エストラムスチンリン酸ナトリウム、臭化エチジウム、エチニルエストラジオール、エチドロン酸、エトポシドシトロボラム因子、リン酸エトポシド、フィルグラスチム、フロクスウリジン、フルコナゾール、リン酸フルダラビン、フルオロピリミジンイリノテカン、フルオロピリミジンオキサリプラチン、フルオロウラシル、フルタミド、葉酸、ゲムシタビンＨＣＬ、グルココルチコイド、酢酸ゴセレリン、グラミシジンＤ、グラニセトロンＨＣＬ、ヒドロキシ尿素、イダルビシンＨＣＬ、イホスファミド、インターフェロンアルファ‐２ｂ、イリノテカンＨＣＬ、レトロゾール、ロイコボリンカルシウム、酢酸ロイプロリド、レバミゾールＨＣＬ、リドカイン、ロムスチン、メイタンシノイド、メクロレタミンＨＣＬ、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、メルファランＨＣＬ、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、メチルテストステロン、ミトラマイシン、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、ニルタミド、酢酸オクトレオチド、オンダンセトロンＨＣＬ、パクリタキセル、パミドロネート二ナトリウム、ペントスタチン、ピロカルピンＨＣＬ、プリマイシン、ポリフェプロザン２０（カルムスチンインプラントと共に）、ポルフィマーナトリウム、プロカイン、プロカルバジンＨＣＬ、プロプラノロール、リツキシマブ、サルグラモスチム、ストレプトゾトシン、タモキシフェン、タキソール、テニポシド、テノポシド、テストラクトン、テトラカイン、チオエパクロラムブシル、チオグアニン、チオテパ、トポテカンＨＣＬ、クエン酸トレミフェン、トラスツズマブ、トレチノイン、バルルビシン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、及び酒石酸ビノレルビンを含むがこれらに限定されない。フルオロピリミジンイリノテカン又はフルオロピリミジンオキサリプラチン、テモゾロミド、プロカルバジン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、ビンクリスチン、ＰＶＣ（プロカルバジン、ロムスチン及びビンクリスチン）、イリノテカン、シスプラチン、カルボプラチン、メトトレキサート、エトポシド、ブレオマイシン、ビンブラスチン、アクチノマイシン（ダクチノマイシン）、シクロホスファミド及びイホスファミドのうちの１つ又は複数の使用が特に好ましい。
【０２４７】
好ましい実施形態では、細胞毒素は、非分裂細胞が毒性効果を比較的受けないように細胞を分裂させる又は迅速に分裂させるにあたって特に効果的である。
【０２４８】
本発明の抗体は、これらの抗体が結合する罹患又は癌細胞内に内在化させることができ、従って例えば、その有害な活性のために内在化させる必要がある毒素を細胞内に送達する治療的応用のために有用である。このような毒素の例としては、サポリン、カリケアマイシン、アウリスタチン及びメイタンシノイドが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４９】
本発明の抗体又はポリペプチドは、放射性分子、毒素、又は他の治療剤、又は治療剤を直接的若しくは間接的に共有的若しくは非共有的に含有するリポソーム若しくは他の小胞に関連させること（複合化又は連結を含む）ができる。抗体は、この抗体がその標的に結合できる限りにおいて、この抗体のいずれの位置において放射性分子、毒素又は化学療法剤に連結させてよい。
【０２５０】
毒素又は化学療法剤は、好適なモノクローナル抗体と共に（投与前、後若しくは投与中に）投与してよく、又は（例えばリンカー基を介して、あるいは米国特許第５，５５２，３９１号に記載されているようなプラットフォーム分子等の、適切な付着部位を有する連結分子を介して）好適なモノクローナル抗体に直接的若しくは間接的に連結（例えば共有結合）してよい。本発明の毒素及び化学療法剤は、当該技術分野において公知の方法を用いて、特定の標的化されたタンパク質に連結できる。例えば、作用剤及び抗体がそれぞれ相手と反応できる置換基を有する場合、作用剤と抗体との間の直接的な反応が可能である。例えば、作用剤及び抗体のうちの一方の、アミノ又はスルフヒドリル基といった求核性基は、作用剤及び抗体のうちの他方の、無水物若しくは酸ハロゲン化物といったカルボニル含有基、又は良好な離脱基（例えばハロゲン化物）を含有するアルキル基と反応できる。
【０２５１】
抗体又はポリペプチドはまた、マイクロキャリアを介して化学療法剤に連結することもできる。用語「マイクロキャリア」は、非水溶性であり、かつサイズが約１５０μｍ未満、１２０μｍ未満又は１００μｍ未満、より一般には約５０〜６０μｍ未満、好ましくは約１０、５、２．５、２又は１．５μｍ未満の、生分解性又は非生分解性粒子を指す。マイクロキャリアは「ナノキャリア」を含み、これはサイズが約１μｍ未満、好ましくは約５００ｎｍ未満のマイクロキャリアである。このような粒子は当該技術分野において公知である。固相マイクロキャリアは、生体適合性の、天然に発生するポリマー、合成ポリマー又は合成コポリマーから形成される粒子であってよく、これらは、アガロース又は架橋アガロース及び当該技術分野において公知の他の生分解性材料から形成されたマイクロキャリアを含んでも含まなくてもよい。生分解性固相マイクロキャリアは、哺乳類の生理学的条件下において、分解性ポリマー（例えばポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）及びこれらのコポリマー）又は侵食性ポリマー（例えば３，９‐ジエチリデン‐２，４，８，１０‐テトラオキサスピロ［５．５］ウンデカン（ＤＥＴＯＳＵ）等のポリ（オルトエステル）、若しくはセバシン酸のポリ（無水物）等のポリ（無水物））から形成してよい。マイクロキャリアは、抗原を有しないリポソーム、イスコム（免疫刺激複合体：これはコレステロール、及びリン脂質、アジュバント活性サポニンの安定な複合体である）又は液滴若しくは上記液相が生分解性である場合に水中油若しくは油中水エマルジョン中に見られるミセル等の、（例えば油又は脂質系の）液相であってもよい。生分解性液相マイクロキャリアは典型的には、スクアレン及び植物油等の生分解性油を組み込む（多数の生分解性油が当該技術分野において公知である）。マイクロキャリアは典型的には球形であるが、球形から逸脱したマイクロキャリアも許容可能である（例えば楕円体、棒状等）。マイクロキャリアは、その（水に対する）不溶性により、水溶液及び水系（水性）溶液から濾過できる。
【０２５２】
本発明の抗体又はポリペプチド複合体は、毒性剤又は化学療法剤に連結できる基と、抗体に連結できる基との両方を含有する、二官能性リンカーを含んでよい。リンカーは、抗体を作用剤から離間させることによって結合能力を妨害するためのスペーサとして機能できる。リンカーは開裂性又は非開裂性とすることができる。リンカーはまた、作用剤又は抗体上の置換基の化学反応性を上昇させ、これによって連結効率を上昇させる役割を果たすこともできる。化学反応性の上昇により、作用剤、又は作用剤上の官能基の使用を容易にすることもでき、これは化学反応性の上昇がなければ不可能である。二官能性リンカーは、当該技術分野において公知の手段で抗体に連結できる。例えば、Ｎ‐ヒドロスクシンイミドエステル等の活性エステル部分を含有するリンカーを、アミド結合を介した抗体中のリジン残基への連結のために使用できる。別の例では、求核性アミン又はヒドラジン残基を含有するリンカーは、抗体の炭水化物残基の解糖酸化によって産生されたアルデヒド基に連結できる。これらの直接連結方法に加えて、リンカーは、アミノデキストラン等の中間キャリアを用いて、抗体に間接的に連結できる。これらの実施形態では、修飾された連結は、リジン、炭水化物又は中間キャリアを介したものである。一実施形態では、リンカーは、タンパク質中の遊離チオール残基に、部位選択的に連結する。タンパク質上のチオール基への選択的連結に好適な部分は、当該技術分野において公知である。例としては、ジスルフィド化合物、α‐ハロカルボニル及びα‐ハロカルボキシル化合物、並びにマレイミドが挙げられる。求核性アミン官能基が、α‐ハロカルボニル又はカルボキシル基と同一の分子内に存在する場合、アミンの分子間アルキル化によって環化を発生させるための電位が存在する。この問題を防止するための方法は当業者には公知であり、例えば、アミン及びα‐ハロ官能基が、望ましくない環化を立体化学的に抑制する、アリル基又はトランスアルカン類等の柔軟性のない基によって分離されている分子を調製することによる。ジスルフィド部分を介したメイタンシノイド及び抗体の複合体の調製に関しては、例えば米国特許第６，４４１，１６３号を参照のこと。
【０２５３】
抗体‐薬剤複合体の調製に使用できる開裂性リンカーのうちの１つは、受容体媒介性エンドサイトーシス中に出現するエンドソーム、及びリソソーム等の、様々な細胞内室の酸性環境を利用した、シス‐アコニット酸をベースとした酸不安定性リンカーである。例えば、ダウノルビシンと巨大分子キャリアとの複合体の調製に関してはＳｈｅｎ，  Ｗ．Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９８１）  （“ｃｉｓ‐Ａｃｏｎｉｔｙｌ  Ｓｐａｃｅｒ  Ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｄａｕｎｏｍｙｃｉｎ  Ａｎｄ  Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ：  Ａ  Ｍｏｄｅｌ  Ｏｆ  ｐＨ‐Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｌｉｎｋａｇｅ  Ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  Ｄｒｕｇ  Ｆｒｏｍ  Ａ  Ｌｙｓｏｓｏｍｏｔｒｏｐｉｃ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，”  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｔｎｕｎ．  １０２：１０４８‐１０５４  （１９８１）；ダウノルビシンと抗黒色腫抗体との複合体の調製に関してはＹａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  （“Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  Ａｎｄ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  Ｏｆ  Ａｃｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａ  Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ-Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ９．２．２７  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｔｏ  Ａ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｌａｎｏｍａ  Ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ，”  Ｊ．  Ｎａｔｌ．  Ｃａｎｃ．  Ｉｎｓｔ．  ８０：１１５４-１１５９）；ダウノルビシンと抗Ｔ細胞抗体との複合体を調製するための、同様の様式での酸不安定性リンカーの使用に関してはＤｉｌｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  （“Ｓｕｐｅｒｉｏｒｉｔｙ  Ｏｆ  Ａｎ  Ａｃｉｄ-Ｌａｂｉｌｅ  Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ-Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｏｍｐａｒｅｄ  Ｔｏ  Ｆｒｅｅ  Ｄｒｕｇ，”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ４８：６０９７-６１０２；ペプチドスペーサアームを介したダウノルビシンの抗体への連結に関してはＴｒｏｕｅｔ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８２）  “Ａ  Ｃｏｖａｌｅｎｔ  Ｌｉｎｋａｇｅ  Ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ  Ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  Ｔｈａｔ  Ｉｓ  Ｓｔａｂｌｅ  Ｉｎ  Ｓｅｒｕｍ  Ａｎｄ  Ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｂｙ  Ｌｙｓｏｓｏｍａｌ  Ｈｙｄｒｏｌａｓｅｓ，  Ａｓ  Ｒｅｑｕｉｒｅｄ  Ｆｏｒ  Ａ  Ｌｙｓｏｓｏｍｏｔｒｏｐｉｃ  Ｄｒｕｇ-Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ：  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ａｎｄ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ｓｔｕｄｉｅｓ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （Ｕ．Ｓ．Ａ．）  ７９：６２６-６２９を参照のこと。
【０２５４】
本発明の抗体（又はポリペプチド）は、当該技術分野において公知のいずれの方法によって、放射性分子又は毒素と複合化（連結）してよい。抗体を放射性標識化するための方法の議論に関しては、Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｗｉｔｈ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ｄ．Ｍ．  Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ  （Ｅｄ．）  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，  １９９５を参照のこと。好適な毒素としては、タキサン、メイタンシノイド、アウリスタチン（例えばモノメチルアウリスタチン（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、アウリスタチンＥ（ＡＥ）等）（米国特許第５，２０８，０２０号；５，４１６，０６４号；６，３３３，４１０号；６，３４０，７０１号；６，３７２，７３８号；６，４３６，９３１号；６，４４１，１６３号；６，５９６，７５７号；７，２７６，４９７号；７，５８５，８５７号；又は７，８５１，４３２号に開示されているもの等）、カリケアマイシン、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン）、ＣＣ-１０６５アナログ、ドセタキセル；カテプシンＢ又はＥ；リシン、ゲロニン、シュードモナス外毒素、ジフテリア毒素及びＲＮａｓｅ；チウキセタン又は毒性放射性同位元素（９０Ｙ；１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、２１１Ａｔ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃ等）が挙げられる。
【０２５５】
あるいは、抗体を第２の抗体と複合化させて、米国特許第４，６７６，９８０号に記載されているように、抗体ヘテロ複合体を形成できる。架橋抗体の形成により、免疫系を特定のタイプの細胞、例えばＢ７‐Ｈ３を発現する癌又は罹患細胞に対して標的化できる。
【０２５６】
更に別の実施形態では、本明細書に記載のＢ７‐Ｈ３結合組成物のいずれは、Ｂ７‐Ｈ３発現性癌細胞に結合でき、またＢ７‐Ｈ３を発現する癌細胞に対して能動免疫応答を誘起できる。場合によっては、上記能動免疫応答は、癌細胞の死滅を引き起こす（例えば癌細胞に結合した抗体がアポトーシス細胞死を誘起する）か、又は癌細胞の成長を阻害する（例えば細胞サイクルの進行をブロックする）ことができる。他の場合には、本明細書に記載の新規の抗体のいずれは、癌細胞に結合でき、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）によって、抗Ｂ７‐Ｈ３が結合した癌細胞を排除できる。従って本発明は、本明細書に記載の組成物のいずれを投与するステップを含む、免疫応答を刺激する方法を提供する。
【０２５７】
場合によっては、抗体結合は、細胞性及び体液性免疫応答の両方を活性化することもでき、またより多くのナチュラルキラー細胞を回復でき、又は癌細胞を破壊できるように個体の免疫系を更に活性化する、サイトカイン（例えばＩＬ‐２、ＩＦＮ‐ガンマ、ＩＬ‐１２、ＴＮＦ‐アルファ、ＴＮＦ‐ベータ等）の産生を増大させることができる。更に別の実施形態では、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体は癌細胞に結合でき、マクロファージ又は他の食細胞は癌細胞をオプソニン化できる。
【０２５８】
投与のために、抗体若しくはその断片又はダイアボディの様々な処方を用いてよい。いくつかの実施形態では、このような分子はそのまま投与してよい。本発明の組成物は、薬理学的活性作用剤に加えて、薬理学的に効果的な物質の投与を促進する、又は作用部位への送達のために薬学的に使用できる調剤への活性化合物の加工を促進する、当該技術分野において公知の、比較的不活性の物質である賦形剤及び助剤を含む、薬学的に許容可能な好適なキャリアを含有してよい。例えば賦形剤は、形状若しくは濃度を与えることができ、又は希釈剤として作用できる。好適な賦形剤としては、安定化剤、湿潤及び乳化剤、モル浸透圧濃度を変化させるための塩、カプセル化剤、緩衝液及び皮膚浸透エンハンサが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２５９】
非経口投与のための好適な処方は、水溶性形態、例えば水溶性塩である活性化合物の水溶液を含む。更に、油性注射懸濁液のために適切な、活性化合物の懸濁液も投与してよい。好適な親油性溶媒又は担体は、脂肪油、例えばゴマ油、又は合成脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチル若しくはトリグリセリドを含む。水性注射懸濁液は、懸濁液の粘度を上昇させる物質を含有してよく、また例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム及び／又はデキストランを含んでよい。任意に、上記懸濁液は安定化剤も含有してよい。細胞内への送達のために作用剤をカプセル化するために、リポソームも使用できる。
【０２６０】
本発明による全身投与のための薬学的処方は、経腸、非経口又は局所投与のために処方してよい。実際には、これら３つのタイプの処方全てを同時に使用して、活性成分の全身投与を達成してよい。非経口及び経口薬剤送達のための賦形剤及び処方は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  ２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  （２００５）に記載されている。経口投与のための好適な処方は、硬質若しくは軟質ゼラチンカプセル、丸薬、コーティング錠剤を含む錠剤、エリキシル、懸濁液、シロップ又は吸入剤及びこれらの徐放形態を含む。一般にこれらの作用剤は、（例えば腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内等の）注射による投与のために処方されるが、他の投与形態（例えば経口、粘膜等）も使用できる。従って抗Ｂ７‐Ｈ３抗体は好ましくは、生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液等の、薬学的に許容可能な担体と組み合わされる。
【０２６１】
本発明の処方に採用される正確な用量は、投与経路及び状態の重篤度に左右され、専門家の判断及び各患者の状況に従って決定しなければならず、標準的な臨床技術によって決定できる。効果的な用量（即ち、障害に関連する１つ又は複数の症状の治療、予防又は寛解に効果的となるために十分な用量）は、インビトロ又は動物モデル試験系から得られる用量‐応答曲線から外挿法によって推定できる。従って、特定の投薬レジメン、即ち用量、タイミング及び繰り返し数は、特定の個体及びその個体の治療歴、並びに投与経路に左右される。本発明の分子の投与の投薬量及び頻度は、例えば脂質付加等によって上記分子の摂取及び／又は組織浸透を増強することにより、低減又は変化させてよい。
【０２６２】
患者に投与されるこのような分子の投薬量は典型的には、少なくとも約０．０１μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約０．０５μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約０．１μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約０．２μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約０．５μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１０μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２０μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３０μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５０μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１００μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２５０μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７５０μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１．５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ体重、又は少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ体重である。ベースラインにある患者の体重に基づいて、計算した用量を投与する。ベースライン又は確立された平坦域体重からの体重の有意な（≧１０％）変化がある場合、用量の再計算を促す必要がある。
【０２６３】
半減期等の経験的考慮事項は一般に、投薬量の決定に寄与する。ヒト化抗体又は完全ヒト抗体等のヒト免疫系に適合する抗体を用いて、抗体の半減期を延長し、抗体が宿主の免疫系に攻撃されるのを防止できる。投与の頻度は、治療過程全体に亘って決定及び調整してよく、癌細胞の数の減少、癌細胞の減少の維持、癌細胞の増殖の低下、又は転移の発現の遅延に基づく。あるいは、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体の持続連続放出処方も適切であり得る。持続放出を達成するための様々な処方及びデバイスは、当該技術分野において公知である。
【０２６４】
抗Ｂ７‐Ｈ３抗体治療をレシピエント患者に提供するために、上述のように様々な投薬量及び投与経路を採用してよいが、以下の投薬量及び投与経路が好ましい。抗Ｂ７‐Ｈ３抗体（ヒト被験体に投与する場合は好ましくはヒト化されている）は好ましくは、静脈内（ＩＶ）注入により、（５０日）サイクル１の１日目、８日目、１５日目、２２日目に投与される。更なる抗Ｂ７‐Ｈ３抗体は、適格な患者に対する後続のサイクルにおいて、各後続の２８日サイクルの１日目、８日目、１５日目に投与される。ＩＶ注入は好ましくは、患者が注入反応の兆候又は症状を呈しなければ、１２０分の期間に亘って送達される。注入反応が発生すると、速度の低下、中断又は中止が必要となる。抗Ｂ７‐Ｈ３抗体をＩＶプッシュ又はボーラスとして投与しないこと、及びインラインフィルタ又は非ポリオレフィンＩＶプッシュ注入バッグを使用しないことが好ましい。抗体は、他の薬剤と混合してはならず、又は他の薬剤で希釈してはならない。注入反応又はアレルギ反応が発生し得る。注入反応の予防のための麻酔前投与が推奨され、また抗体投与中には、アナフィラキシーに対する警戒を行う必要がある。補助的手段としては：エピネフリン、抗ヒスタミン薬、コルチコステロイド、静脈内輸液、昇圧剤、酸素、気管支拡張薬、ジフェンヒドラミン及びアセトアミノフェンが挙げられるが、これらに限定されない。過敏症反応を治療するために、ＩＶ生理食塩水、アセトアミノフェン、並びに皮下用エピネフリン（０．３〜０．５ｍｇ（０．３〜０．５ｍＬの１：１０００溶液））、ジフェンヒドラミン（２５〜５０ｍｇＩＶ）及びデカドロン（１０ｍｇＩＶプッシュ又は当量）を含む救急用薬剤を利用しなければならない。発熱又は悪寒の症状が発現した場合、薬剤注入を停止して、アセトアミノフェン及び塩酸ジフェンヒドラミンを与える必要がある。
【０２６５】
抗ＶＥＧＦ抗体治療をレシピエント患者に提供するために、上述のように様々な投薬及び投与経路を採用してよいが、以下の投薬及び投与経路が好ましい。抗ＶＥＧＦ抗体（ベバシズマブ）は好ましくは、静脈内（ＩＶ）注入によって投与される。ベバシズマブは好ましくは、静脈内プッシュ又はボーラスとして投与されない。ベバシズマブ治療は、主要な手術の少なくとも２８日後まで、かつ外科切開が完全に治癒した後でしか、開始してはならない。最初のＩＶ注入は好ましくは、患者が注入反応の兆候又は症状を呈しなければ、９０分の期間に亘って送達される。注入反応が発生すると、速度の低下、中断又は中止が必要となる。初期注入に耐えられた場合、第２のＩＶ注入を、好ましくは６０分の期間に亘って送達する。６０分に亘る注入に耐えられた場合、後続の注入は３０分の期間に亘って送達してよい。疾患が進行するか、許容できない毒性となるまで、患者は治療を継続すべきである。推奨される投薬量は：静脈内５‐ＦＵ系化学療法と併用する場合は２週間毎に５ｍｇ／ｋｇ体重又は１０ｍｇ／ｋｇ体重；ボーラス‐ＩＦＬ（イリノテカン、ロイコヴォリン（葉酸）及びフルオロウラシル）と併用する場合は５ｍｇ／ｋｇ体重；ＦＯＬＦＯＸ４（ロイコヴォリン（葉酸）、５-フルオロウラシル（５‐ＦＵ）、オキサリプラチン（エロキサチン（登録商標））と併用する場合は１０ｍｇ／ｋｇ体重；カルボプラチン及びパクリタキセルと併用する場合は３週間毎に１５ｍｇ／ｋｇ体重である。第一選択のベバシズマブ含有レジメンにおいて進行した患者において、フルオロピリミジン‐イリノテカン又はフルオロピリミジン‐オキサリプラチン系化学療法レジメンと併用する場合、組成物は好ましくは、２週間毎に５ｍｇ／ｋｇ体重又は３週間毎に７．５ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与される。膠芽腫の治療に関しては、推奨される投薬量は２週間毎に１０ｍｇ／ｋｇである。
【０２６６】
一実施形態では、抗体に関する投薬量は、１つ又は複数の投与を受けている個体において経験的に決定してよい。個体は抗体を、増分する投薬量で与えられる。抗Ｂ７‐Ｈ３抗体の効力を評価するために、特定の癌疾患状態のマーカを追跡できる。これらは：触診若しくは目視観察による腫瘍サイズの直接的な測定、Ｘ線若しくは他の撮像技術による腫瘍サイズの間接的な測定；直接的な腫瘍生検及び腫瘍試料の顕微鏡検査によって評価される改善；間接的腫瘍マーカ（例えば前立腺癌に対するＰＳＡ）の測定、疼痛若しくは麻痺の減少；発話、視認、呼吸若しくは他の腫瘍に関連する身体障害の改善；食欲の向上；又は承認された試験によって測定されるＱＯＬの向上若しくは生存期間の延長を含む。投薬量は、個体、癌のタイプ、癌のステージ、癌が当該個体内の他の位置に転移し始めているかどうか、並びに使用されている過去及び現在の治療に応じて変化することになることは、当業者には明らかであろう。
【０２６７】
他の処方は、リポソーム等のキャリアを含むがこれに限定されない、当該技術分野において公知の好適な送達形態を含む。例えばＭａｈａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  “Ｃａｔｉｏｎｉｃ  Ｌｉｐｉｄ‐Ｂａｓｅｄ  Ｇｅｎｅ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ：  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ，”  Ｐｈａｒｍ．  Ｒｅｓ．  １４：８５３‐８５９を参照のこと。リポソーム製剤は、サイトフェクチン、多層小胞及び単層小胞を含むがこれらに限定されない。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、２つ以上の抗体が存在してよい。抗体はモノクローナル又はポリクローナルとすることができる。このような組成物は、癌腫、腺癌、肉腫又はアデノ肉腫に対して反応性の、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つの異なる抗体を含有してよい。抗Ｂ７‐Ｈ３抗体は、卵巣、乳房、肺、前立腺、大腸、腎臓、皮膚、甲状腺、骨、上部消化管及び膵臓を含むがこれらに限定されない器官内の癌腫、腺癌、肉腫又はアデノ肉腫に対して反応性の、１つ又は複数の抗体と混合できる。一実施形態では、異なる複数の抗Ｂ７‐Ｈ３抗体の混合物を使用する。抗体の混合物は、当該技術分野においてしばしば示されるように、幅広い個体の治療において特に有用であり得る。
【０２６９】
ＶＩＩＩ．投与方法
本発明の組成物は、有効量の本発明の医薬組成物を被験体に投与することによる、疾患、障害又は感染症に関連する１つ又は複数の症状の治療、予防及び改善のために提供できる。好ましい態様では、上記組成物は実質的に精製される（即ち上記組成物の効果を制限する、又は望ましくない副作用を生成する物質を実質的に含まない）。ある具体的実施形態では、被験体は動物、好ましくは非霊長類（例えばウシ属、ウマ科、ネコ科、イヌ科、齧歯類等）又は霊長類（例えばカニクイザル等のサル、ヒト等）といった哺乳類である。ある好ましい実施形態では、被験体はヒトである。
【０２７０】
例えば抗体又は融合タンパク質を発現できるリポソーム、微粒子マイクロカプセル、組み換え細胞内へのカプセル化；受容体媒介性エンドサイトーシス（例えばＷｕ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８７）  “Ｒｅｃｅｐｔｏｒ‐Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｂｙ  Ａ  Ｓｏｌｕｂｌｅ  ＤＮＡ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍ，”  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６２：４４２９‐４４３２を参照）；レトロウイルス又は他のベクターの一部としての核酸の構築等、様々な送達系が公知であり、本発明の組成物の投与に使用できる。
【０２７１】
本発明の分子を投与する方法としては：非経口投与（例えば皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内及び皮下）；硬膜外；並びに粘膜（例えば鼻腔内及び経口経路）が挙げられるがこれらに限定されない。ある具体的実施形態では、本発明の分子は、筋肉内、静脈内又は皮下投与される。組成物は、いずれの便利な経路によって、例えば点滴又はボーラス注射によって、上皮又は粘膜皮膚層（例えば口腔粘膜、直腸及び腸粘膜等）を通した吸収によって投与してよく、他の生物学的活性作用剤と共に投与してよい。投与は全身性又は局所性とすることができる。更に、例えば吸入器又は噴霧器の使用及びエアロゾル化剤を用いた処方により、肺投与を採用することもできる。例えば米国特許第６，０１９，９６８号；５，９８５，３２０号；５，９８５，３０９号；５，９３４，２７２号；５，８７４，０６４号；５，８５５，９１３号；５，２９０，５４０号；４，８８０，０７８号；国際公開第９２／１９２４４号；９７／３２５７２号；９７／４４０１３号；９８／３１３４６号；９９／６６９０３を参照（これらはそれぞれ、参照により本明細書に援用される）。
【０２７２】
本発明はまた、本発明医薬組成物を、このような分子の量を示すアンプル又はサシェ等の気密性コンテナ内に包装することも提供する。一実施形態では、このような医薬組成物の抗体、抗体断片又はダイアボディは、気密性コンテナ内の乾燥滅菌凍結乾燥粉末又は無水濃縮物として供給され、例えば水又は食塩水を用いて、被験体への投与に適切な濃度へと再構成できる。好ましくは、本発明の分子は、少なくとも５μｇ、より好ましくは少なくとも１０μｇ、少なくとも１５μｇ、少なくとも２５μｇ、少なくとも５０μｇ、少なくとも１００μｇ又は少なくとも２００μｇの単位剤形で、気密性コンテナ内の乾燥滅菌凍結乾燥粉末として供給される。
【０２７３】
本発明の凍結乾燥分子は、その元の容器内で２〜８℃で保存しなければならず、上記分子は再構成後、１２時間以内、好ましくは６時間以内、５時間以内、３時間以内又は１時間以内に投与しなければならない。代替実施形態では、本発明のこのような分子は、分子、融合タンパク質又は複合化された分子の量及び濃度が記された密閉容器内に、液体形態で供給される。好ましくは、このような二重特異性１価ダイアボディ又は二重特異性１価Ｆｃダイアボディの液体形態は、密閉容器内に供給され、上記密閉容器内において、上記分子は少なくとも１μｇ／ｍｌ、より好ましくは少なくとも２．５μｇ／ｍｌ、少なくとも５μｇ／ｍｌ、少なくとも１０μｇ／ｍｌ、少なくとも５０μｇ／ｍｌ又は少なくとも１００μｇ／ｍｌの濃度で存在する。
【０２７４】
ある特定の実施形態では、本発明の医薬組成物を、治療が必要な領域に局所的に投与することが望ましい場合があり、これは例えば、限定するものではないが、局所的注入によって、注射によって又はインプラントを用いて達成してよく、上記インプラントは、シラスティック膜等の膜又は繊維を含む、多孔性、非多孔性又はゼラチン質材料である。好ましくは、本発明の分子を投与する際、上記分子を吸収しない材料を使用するよう注意する必要がある。
【０２７５】
別の実施形態では、組成物は小胞、特にリポソーム内で送達できる（Ｌａｎｇｅｒ  （１９９０）  “Ｎｅｗ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，”  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７-１５３３）；  Ｔｒｅａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ｉｎ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ，  Ｌｏｐｅｚ-Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｆｉｄｌｅｒ  （ｅｄｓ．），  Ｌｉｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ｐｐ．  ３５３-３６５  （１９８９）；  Ｌｏｐｅｚ-Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ，  ｐｐ．  ３  １７-３２７；  ｓｅｅ  ｇｅｎｅｒａｌｌｙ  ｉｂｉｄ．参照）。
【０２７６】
更に別の実施形態では、上記組成物は、徐放系又は徐放系中で送達できる。１つ又は複数の本発明の分子を含む徐放性処方を製造するために、当業者に公知のいずれの技術を使用できる。例えば：米国特許第４，５２６，９３８号；国際公開第９１／０５５４８号；  国際公開第９６／２０６９８号；Ｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）  “Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ  Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｈｙ  Ｏｆ  Ａ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｌｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  Ｕｓｉｎｇ  Ａ  Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ-Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｇｅｌ，”  Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ＆  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ３９：１７９‐１８９；Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）  “Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｌｕｎｇ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｏｆ  Ｌｏｎｇ-Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ，”  ＰＤＡ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ５０：３７２-３９７；Ｃｌｅｅｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）  “Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｆｏｒ  Ａ  ｂＦＧＦ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｏｒ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，”  Ｐｒｏ．  Ｉｎｔ’ｌ．  Ｓｙｍｐ．  Ｃｏｎｔｒｏｌ．  Ｒｅｌ．  Ｂｉｏａｃｔ．  Ｍａｔｅｒ．  ２４：８５３‐８５４；及びＬａｍ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  “Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｏｒ  Ｌｏｃａｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｉｎｔ’ｌ．  Ｓｙｍｐ．  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌ．  Ｂｉｏａｃｔ．  Ｍａｔｅｒ．  ２４：７５９‐７６０を参照（これらはそれぞれ参照によりその全体が本明細書に援用される）。一実施形態では、徐放系においてポンプを使用してよい（Ｌａｎｇｅｒ，  ｓｕｐｒａ；  Ｓｅｆｔｏｎ，（１９８７）“Ｉｍｐｌａｎｔａｂｌｅ  Ｐｕｍｐｓ，”  ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｍｅｄ．  Ｅｎｇ．  １４：２０１‐２４０；Ｂｕｃｈｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８０）“Ｌｏｎｇ‐Ｔｅｒｍ，  Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  Ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  Ｈｅｐａｒｉｎ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  Ｂｙ  Ａｎ  Ｉｍｐｌａｎｔａｂｌｅ  Ｉｎｆｕｓｉｏｎ  Ｐｕｍｐ  Ｉｎ  Ａｍｂｕｌａｔｏｒｙ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  Ｗｉｔｈ  Ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  Ｖｅｎｏｕｓ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ，”  Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７‐５１６；及びＳａｕｄｅｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）“Ａ  Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  Ｔｒｉａｌ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｐｒｏｇｒａｍｍａｂｌｅ  Ｉｍｐｌａｎｔａｂｌｅ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｆｏｒ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，”  Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３２１：５７４‐５７９参照）。別の実施形態では、抗体の徐放を達成するためにポリマー材料を使用できる（例えばＭｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，  Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ  （ｅｄｓ．），  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．，  Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，  Ｆｌｏｒｉｄａ  （１９７４）；  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌ��ｂｉｌｉｔｙ，  Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，  Ｓｍｏｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｌ  （ｅｄｓ．），  Ｗｉｌｅｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９８４）；Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）“Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｂｉｏｐｒｏｓｔｈｅｔｉｃ  Ｈｅａｒｔ  Ｖａｌｖｅｓ  Ｂｙ  Ｌｏｃａｌ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ‐Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｉｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ，”  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０‐１９２；Ｄｕｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）“Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｏｆ  Ｄｏｐａｍｉｎｅ  Ｆｒｏｍ  Ａ  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  Ｂｒａｉｎ  Ｉｍｐｌａｎｔ：  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，”  Ａｎｎ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  ２５：３５１-３５６；Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）“Ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｉｎ  Ｒａｔｓ  Ｗｉｔｈ  Ｌｅｓｉｏｎ‐Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｍｅｍｏｒｙ  Ｄｅｆｉｃｉｔｓ，”  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．  ７（１）：１０５‐１１２）；米国特許第５，６７９，３７７号；米国特許第５，９１６，５９７号；米国特許第５，９１２，０１５号；米国特許第５，９８９，４６３号；米国特許第５，１２８，３２６号；国際公開第９９／１５１５４号；及び国際公開第９９／２０２５３号参照）。徐放性処方において使用されるポリマーの例としては、ポリ（2‐ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン‐コ‐酢酸ビニル）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ無水物類、ポリ（Ｎ‐ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド類（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド‐コ‐グリコリド）類（ＰＬＧＡ）及びポリオルトエステル類が挙げられるが、これらに限定されない。更に別の実施形態では、徐放系は、治療標的（例えば肺）の近傍に配置でき、従って全身用量の一部しか必要としない（例えばＧｏｏｄｓｏｎ，  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，  ｓｕｐｒａ，  ｖｏｌ．２，  ｐｐ．１１５‐１３８（１９８４）参照）。別の実施形態では、徐放インプラントとして有用なポリマー組成物は、Ｄｕｎｎ  ｅｔ  ａｌ．に従って使用される（米国特許第５，９４５，１５５号参照）。この特定の方法は、ポリマー系からの生物活性材料のインサイチュ徐放の治療効果に基づく。埋入は一般に、治療的処置を必要とする患者の身体内のいずれの部位において実施できる。別の実施形態では、非ポリマー徐放系が使用され、この場合、被験体の身体内の非ポリマーインプラントを、薬剤送達系として使用する。身体内への埋入後、インプラントの有機溶媒が組成物から周辺の組織液中へと放散、分散又は浸出し、非ポリマー材料は徐々に凝集又は沈殿して、固体の微小細孔性マトリクスを形成する（米国特許第５，８８８，５３３号参照）。
【０２７７】
徐放系については、Ｌａｎｇｅｒ  （１９９０，“Ｎｅｗ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，”  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７‐１５３３）による報告中で議論されている。１つ又は複数の本発明の治療剤を含む徐放性処方を製造するために、当業者に公知のいずれの技術を使用できる。例えば：米国特許第４，５２６，９３８号；国際公開第９１／０５５４８号及び第９６／２０６９８号；Ｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）“Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ  Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｈｙ  Ｏｆ  Ａ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｌｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  Ｕｓｉｎｇ  Ａ  Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ‐Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｇｅｌ，”  Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ＆  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ３９：１７９‐１８９；Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）“Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｌｕｎｇ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｏｆ  Ｌｏｎｇ‐Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ，”  ＰＤＡ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ５０：３７２‐３９７；Ｃｌｅｅｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）“Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｆｏｒ  Ａ  ｂＦＧＦ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｏｒ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，”  Ｐｒｏ．  Ｉｎｔ’ｌ．  Ｓｙｍｐ．  Ｃｏｎｔｒｏｌ．  Ｒｅｌ．  Ｂｉｏａｃｔ．  Ｍａｔｅｒ．  ２４：８５３‐８５４；並びにＬａｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）“Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｏｒ  Ｌｏｃａｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｉｎｔ’ｌ．  Ｓｙｍｐ．  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌ．  Ｂｉｏａｃｔ．  Ｍａｔｅｒ．  ２４：７５９‐７６０参照（これらはそれぞれ、参照によりその全体が本明細書に援用される）。
【０２７８】
被験体の治療は、単回治療を含むことができ、又は好ましくは一連の複数回の治療を含むことができる。ある好ましい例では、被験体は、本発明の分子を用いて、約１〜１０週間、好ましくは２〜８週間、より好ましくは約３〜７週間、更に好ましくは約４、５又は６週間に亘って週１回処置される。他の実施形態では、本発明の医薬組成物は、１日１回、１日２回又は１日３回投与される。他の実施形態では、この医薬組成物は、１週間に１回、１週間に２回、２週間に１回、１ヶ月に１回、６週間に１回、２ヶ月に１回、１年に２回又は１年に１回投与される。治療に使用される上記分子の有効な用量設定は、特定の治療の期間に亘って増減させてよいことも理解されるだろう。
【０２７９】
ここまで本発明を概説してきたが、以下の実施例を参照することにより、本発明は更に容易に理解されるだろう。これらの実施例は例示として提供されており、そうでないことが明記されていない限り本発明を制限することを意図したものではない。
【０２８０】
実施例１
抗Ｂ７‐Ｈ３抗体及び抗ＶＥＧＦ抗体を用いた再発性多形性膠芽腫（ＧＢＭ）の治療
Ｂ７‐Ｈ３に対して特異的な結合能及び腫瘍血管新生の促進に関わる細胞表面因子（又はその受容体）に対して特異的な第２の結合能をもたらす作用剤を使用併用療法の能力を実証するために、再発性多形性膠芽腫（ＧＢＭ）に罹患した患者を、ヒト化抗Ｂ７‐Ｈ３抗体及びベバシズマブ（アバスチン（登録商標））を用いて治療した。
【０２８１】
概説：２６〜６８歳の６人の患者（男性４人、女性２人）を治療した。患者のうち４人は、癌の３回目の再発中であり、１人の患者は癌の２回目の再発中であり、また１人の患者は癌の１回目の再発中であった。患者のうち４人はベバシズマブを受容した。１人の患者は代替として抗ＶＥＧＦ治療を受けており、１人の患者は抗ＶＥＧＦ治療を経験していなかった。１人の患者は、ベースラインにおいて高投薬量のデキサメタゾン（８ｍｇ／日）を受容しており、１人の患者は、二次性副腎機能低下症のために、補充量のプレドニゾン（５ｍｇ／日）を受容しており、残りの４人の患者はステロイドを受容していなかった。抗体治療は、１日目、８日目、１５日目、２２日目に抗体を投与する１つ又は複数の５０日サイクルを含むように設計した。患者のプロフィールを表３において報告する。
【０２８２】
【表３】
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【０２８３】
患者ＮＦ
図１は、患者ＮＦの臨床的進行を示す。この患者の脳のＭＲＩ走査により、３つの病変が明らかになった。ヒト化抗Ｂ７‐Ｈ３抗体の最初のサイクルを、ベースラインにおいて投与した。行Ａは、ベースラインにおける患者の病変の状態を示す（病変３に関して、行Ａ内の矢印は、病変が図の行Ｂにおいて確認される部位を指し、図の行Ａにおいて病変３のエビデンスは見られないことに留意されたい。）。行Ｂは、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体投与の計画された第２のサイクルの開始前の、患者の病変の状態を示す。行Ｂは、３つの病変のサイズが増大しているように見えることを明らかにしている（「擬進行」として知られる現象）。このような擬進行と共に、患者は脳内の浮腫の増大（第４列）、頭痛及び発作の増加を経験した。抗Ｂ７‐Ｈ３抗体治療を停止し、患者にベバシズマブの３回の投与及びＣＣＮＵの１回の投与を提供した（行Ｃ）。
【０２８４】
重要なことには、投与された抗Ｂ７‐Ｈ３抗体は、２〜３週間の生物的半減期を有していた。従って行ＣのＭＲＩ分析の時点では、患者のベバシズマブのレベルは、最大値のおよそ２５％にまで減少していた。図１の行Ｃに見られるように、患者の頭痛及び発作の解決と共に、病変のサイズ及び浮腫の劇的な減少が観察された。
【０２８５】
このデータは、ベバシズマブと抗Ｂ７‐Ｈ３抗体との併用治療が相乗的に作用して、患者の状態を改善させたことを示すものとして解釈される。１サイクルの抗Ｂ７‐Ｈ３抗体治療後、頭痛及び発作の増加を伴う病変の増進の大幅な増大が観察された。しかしながら、３用量のベバシズマブ＋ＣＣＮＵを受容した後、ＭＲＩによる全ての発見の著しい低減が観察された。患者は、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体の最後の投与後１０ヶ月超に亘って臨床的に安定している。患者の全生存期間は、診断日から２年７ヶ月超である。
【０２８６】
患者ＭＲ
図２Ａ〜２Ｃは、患者ＭＲの臨床的進行を示す。患者ＭＲは、二次膠芽腫を呈しており、またＩＤＨ１変異体を特徴とする膠芽腫を有していた（Ｉｃｈｉｍｕｒａ，  Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  “ＩＤＨ１  Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  Ａｒｅ  Ｐｒｅｓｅｎｔ  Ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｍａｊｏｒｉｔｙ  Ｏｆ  Ｃｏｍｍｏｎ  Ａｄｕｌｔ  Ｇｌｉｏｍａｓ  Ｂｕｔ  Ｒａｒｅ  Ｉｎ  Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａｓ，”  Ｎｅｕｒｏ．  Ｏｎｃｏｌ．  １１（４）：３４１-３４７）。ＩＤＨ１変異に関連する膠芽腫の特徴は、このような腫瘍がコントラスト非強調性であることである（Ｃａｒｉｌｌｏ，  Ｊ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１２）  “Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ，  Ｅｄｅｍａ，  ＩＤＨ１  Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｔｕｓ，  ＭＧＭＴ  Ｐｒｏｍｏｔｅｒ  Ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ，  ａｎｄ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ，”  Ａｍｅｒ．  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｒａｄｉｏｌ．  １０．３１７４／ａｊｎｒ．Ａ２９５０，  ｐａｇｅｓ  １-７）。
【０２８７】
この患者の脳のＭＲＩ走査により、５つの病変が明らかになった。病変１〜４のＭＲＩ走査を図２Ａ〜２Ｂに示し、；病変５のＭＲＩ走査を図２Ｃに示す。患者ＭＲの病変を評価するために、造影剤ガドリニウム（図２Ａ〜２Ｃ、「ＧＡＤＯ」）の存在下で、Ｔ２重み付けを用いて及び用いずに（図２Ａ〜２Ｃ、Ｔ２）ＭＲＩ撮像を実施した。理解できるように、ＭＲＩ画像内の信号は、使用したパルスシーケンス及び関心対象の画像領域内の組織のタイプに応じて高い（明るい）か又は低い（暗い）。Ｔ２重み付け画像上で明るく見える特徴部分は、浮腫又は炎症内のように、増加した水を含んでいる。Ｔ２重み付け画像上で暗く見える特徴部分は、石灰化、線維組織、タンパク質に富む流体及びフローボイドを含む。患者ＭＲの腫瘍は、コントラスト強調構成要素及びコントラスト非強調構成要素（Ｔ２において明るい）の両方を有していた。
【０２８８】
ヒト化抗Ｂ７‐Ｈ３抗体の最初のサイクルをベースラインにおいて投与した。第２のサイクルの開始後、デキサメタゾンを患者に投与した（２ｍｇ  ｂｉｄ）。サイクル３の途中で抗Ｂ７‐Ｈ３抗体治療を停止し、患者に１用量のベバシズマブと脳室腹腔シャント術（ＶＰＳ）とを提供した。患者は、ベバシズマブ投与時に相当な量の抗Ｂ７‐Ｈ３抗体を有していた。
【０２８９】
図２Ａ〜２Ｃでは、行Ａはベースラインにおける患者の病変を示す。行Ｂは、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体投与の計画された第２のサイクルの開始前の、患者の病変の状態を示す。図２Ａ〜２Ｂの行Ｂは、病変１〜４のサイズが増大していること、及び脳内の浮腫の増大（第４列）が明らかであることを明らかにしている。このデータは、擬進行を示す物として解釈される。図２Ａ〜２Ｂの行Ｃは、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体治療を停止した時点における病変１〜４の状態を明らかにしている。その後患者に、１用量のベバシズマブと脳室腹腔シャント術とを提供した。ベバシズマブの投与後の状態を図の行Ｄに示す。図２Ａ〜２Ｂの行Ｄに見られるように、病変１〜４に関して、病変サイズ及び浮腫の劇的な減少が観察された。
【０２９０】
図２Ｃに示すように、患者の病変５はこの治療に応答できなかった。行Ａは、ベースラインにおける病変５の状態を示す。行Ｂは、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体投与の計画された第２のサイクルの開始前の、病変５の状態を示す。行Ｃは、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体治療を停止した時点における病変５の状態を明らかにしている。ベバシズマブの投与後の状態を図の行Ｄに示す。ＩＤＨ１‐変異型神経膠腫（右下の矢印参照）に典型的であるように、腫瘍の大半は事前に強化されていなかった。発現した腫瘍の大半は、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体による強化を示した（サイクル２）。腫瘍サイズは、ベバシズマブの１回の投与後に安定して減少し続けた。病変５（右下の矢印）は、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体治療によってはあまり強化されず、治療過程全体を通して着実に成長した。病変５の成長は左心室を捉え（右上の矢印参照）、患者はＶＰシャント術を必要とした。患者の認知機能及び歩行は改善された。
【０２９１】
図２Ａ〜２Ｃのデータは、病変１〜４に関しては、ベバシズマブと抗Ｂ７‐Ｈ３抗体との併用治療が相乗的に作用して、患者の状態を改善させたこと、ただし病変５は、いずれの治療効果もなく、全体を通して着実に成長したことを示すものとして解釈される。病変１〜４は、１回のサイクル後に著しい強化を発現した（ＩＤＨ１‐変異型神経膠腫において典型的であるように、以前にはそれほどの強化を有しなかった）。治療効果は症候的であり、患者は研究から離れると神経的な低下（運動失調及び短期記憶喪失）を経験した。ベバシズマブの１回の投与後、腫瘍の殆どは、ベースラインに比べて安定して徐々に減少した（例えば病変２参照）。従って治療効果は最終的には腫瘍の退縮を引き起こし、腫瘍の不均質性は様々な応答につながった。
【０２９２】
現在、患者は、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体の最後の投与から５ヶ月後に、臨床的最低点から改善している。患者は、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体の最後の投与後１０ヶ月超に亘って臨床的に安定している。患者の全生存期間は、診断日から３年５ヶ月超である。
【０２９３】
患者ＧＣ
図３は、患者ＧＣの臨床的進行を示す。この患者の脳のＭＲＩ走査により、３つの病変が明らかになった。ヒト化抗Ｂ７‐Ｈ３抗体の最初のサイクルを、ベースラインにおいて投与した。サイクル１の後、認知及び歩行の低下に対する著しく増大した強化が観察された。
【０２９４】
行Ａは、ベースラインにおける患者の病変の状態を示す。行Ｂ（サイクル６の開始前に取得された画像）は、５〜６サイクルの抗Ｂ７‐Ｈ３抗体投与を通して、僅かな応答があり得るものの、上記病変が安定していたことを示す。行Ｃ（サイクル６の終了時に取得された画像）は、新規の病変の発生を含む、進行性疾患の兆候を示す。患者は認知機能低下を経験し、患者の脳には浮腫が見られた（行Ｃ、第４列）。行Ｄは、ベバシズマブの２回の投与後のＭＲＩ画像を示す。明らかであるように、病変及び浮腫はそのサイズ及び範囲が減少していることが分かった。認知機能の改善が観察されたが、認知機能はベースラインには至らなかった。
【０２９５】
図３のデータは、ベバシズマブと抗Ｂ７‐Ｈ３抗体との併用治療が相乗的に作用して、観察された病変に関する患者の状態を改善させたことを示すものとして解釈される。抗Ｂ７‐Ｈ３抗体治療の前に比べてベバシズマブ治療後に、以前の標的であった病変が小さくなっているという事実によって示されるように、患者は、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体治療後にベバシズマブに応答した。患者の全生存期間は、診断日から３年超である。
【０２９６】
患者ＤＫ
図４は、患者ＤＫの臨床的進行を示す。この患者の脳のＭＲＩ走査により、３つの病変が明らかになった。ヒト化抗Ｂ７‐Ｈ３抗体の最初のサイクルを、ベースラインにおいて投与した。サイクル２の１日目（Ｃ２Ｄ１）に、デキサメタゾンの投与（２ｍｇ  ｂｉｄ）を含むように治療を修正した。行Ａは、ベースラインにおける患者の病変の状態を示す。行Ｂ（サイクル２の途中に取得された画像）は、疾患の進行及び擬進行を示す。行Ｃ（ベバシズマブの２回の投与後に取得された画像）は穏やかな応答を示し、認知機能及び歩行が緩やかに改善されている。
【０２９７】
図４のデータは、擬進行及び進行の両方、並びにベバシズマブと抗Ｂ７‐Ｈ３抗体との併用治療が穏やかな応答を提供し、相乗的に作用して、観察された病変に関する患者の状態を改善させたことを示すものとして解釈される。抗Ｂ７‐Ｈ３抗体治療の前に比べてベバシズマブ治療後に、以前の標的であった病変が小さくなっているという事実によって示されるように、患者は、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体治療後にベバシズマブに応答した。
【０２９８】
患者は、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体の最後の投与から１０日後、ホスピスにおいて健康状態が低下していた。患者の全生存期間は、診断日から１年１０ヶ月超である。
【０２９９】
患者ＪＫ
図５は、患者ＪＫの臨床的進行を示す。この患者の脳のＭＲＩ走査により、３つの病変が明らかになった。ヒト化抗Ｂ７‐Ｈ３抗体の最初のサイクルを、ベースラインにおいて投与した。サイクル１の後、デキサメタゾンの投与（２ｍｇ  ｂｉｄ）を含むように治療を修正した。言語能力及び右腕の器用さの穏やかな低下が観察された。行Ａは、ベースラインにおける患者の病変の状態を示す。行Ｂ（サイクル２の前に取得された画像）は、疾患の進行及び擬進行を示す。ベバシズマブ及びＣＣＮＵ×１ヶ月の投与後、患者は安定した言語能力及び右腕の器用さを示す。更なるＭＲＩ走査は留保されている。
【０３００】
患者ＤＷ
図６は、患者ＤＷの臨床的進行を示す。この患者の脳のＭＲＩ走査により、３つの病変が明らかになった。ヒト化抗Ｂ７‐Ｈ３抗体の最初のサイクルを、ベースラインにおいて投与した。行Ａは、ベースラインにおける患者の病変の状態を示す。サイクル１の後、重篤な言語機能並びに右腕及び右脚機能の低下により、疾患の進行が示された。患者はベバシズマブの１回の投与を受けたが、重篤な言語機能並びに右腕及び右脚機能の低下を経験し続けた。行Ｂ（サイクル２の前に取得された画像）は、疾患の進行を示す。患者は、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体の最後の投与の５週間後に、病によって死亡した（全生存期間は診断から１４ヶ月であった）。患者は、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体治療後、ベバシズマブに対する臨床的応答を全く示さなかった。応答の欠如はおそらく、ベースラインにおける高いステロイド、又は特に難治性の疾患によるものである。
【０３０１】
結論として、データは、治療効果（増大した強化）が発生する（擬進行）ことを示す。この治療効果は、腫瘍の応答、及び観察可能な神経学的症状に関連するものと思われ、完全に可逆性でない。ベバシズマブは、治療効果に相乗するか、又は治療効果を低減する場合もある。デキサメタゾンの用量がベースラインにおいて高いと、耐性が生じるものと思われる。抗Ｂ７‐Ｈ３抗体治療は、良好に耐えられるものであった。図７は、治療された６人の患者に関する研究における時間を示す。
【０３０２】
実施例２
抗Ｂ７‐Ｈ３抗体を受容した患者の評価
癌の治療における抗Ｂ７‐Ｈ３抗体治療の効力を評価するための進行中の臨床試験の過程において、レシピエント患者における可溶性Ｂ７‐Ｈ３（「ｓＢ７‐Ｈ３」）のレベルを測定した。治療前のレシピエント患者におけるｓＢ７‐Ｈ３のレベルはゼロであった。
【０３０３】
図８（全患者）及び図９（膠芽腫患者）に示すように、レシピエント患者におけるｓＢ７‐Ｈ３のレベルは、治療の第１のサイクルを通して上昇し、治療を継続するに従って最終的に低下した。この上昇は、治療の結果としての、腫瘍細胞の死滅（及び破壊）、又は膜結合Ｂ７‐Ｈ３の開裂及び放出を反映したものであり得る。レシピエント患者におけるｓＢ７‐Ｈ３の放出は、進行性疾患のマーカである。
【０３０４】
本明細書において言及されている全ての公刊物及び特許は、個々の公刊物又は特許出願それぞれの全体が参照により本明細書に援用されていることが具体的かつ独立に指示されている場合と同程度に、参照により本明細書に援用されている。本発明をその具体的実施形態に関して説明したが、更なる修正形態が可能であり、本出願は、本発明が属する分野の公知の方法又は慣例の範囲内であるような、及びこれまでに挙げた必須の特徴に適用できるような、本開示からの逸脱を含む、本発明の原理に概ね従う本発明のいずれの変形、使用又は改変を包含することを意図していることを理解されたい。
【配列表フリーテキスト】
【０３０５】
配列表の数字見出し＜２２３＞の記載は以下のとおりである。
配列番号１：ヒトＢ７‐Ｈ３の「２Ｉｇ」形態
配列番号２：ヒトＢ７‐Ｈ３の「２Ｉｇ」形態をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号３：ヒトＢ７‐Ｈ３の「４Ｉｇ」形態
配列番号４：ヒトＢ７‐Ｈ３の「４Ｉｇ」形態をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号５：ＢＲＣＡ６９Ｄ可変軽鎖のアミノ酸配列
配列番号６：ＢＲＣＡ６９Ｄ可変軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号７：ＢＲＣＡ６９Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ１
配列番号８：ＢＲＣＡ６９Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ１をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号９：ＢＲＣＡ６９Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ２
配列番号１０：ＢＲＣＡ６９Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ２をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号１１：ＢＲＣＡ６９Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ３
配列番号１２：ＢＲＣＡ６９Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ３をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号１３：ＢＲＣＡ６９Ｄ可変重鎖のアミノ酸配列
配列番号１４：ＢＲＣＡ６９Ｄ可変重鎖をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号１５：ＢＲＣＡ６９Ｄ可変重鎖ＣＤＲ１
配列番号１６：ＢＲＣＡ６９Ｄ可変重鎖ＣＤＲ１をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号１７：ＢＲＣＡ６９Ｄ可変重鎖ＣＤＲ２
配列番号１８：ＢＲＣＡ６９Ｄ可変重鎖ＣＤＲ２をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号１９：ＢＲＣＡ６９Ｄ可変重鎖ＣＤＲ３
配列番号２０：ＢＲＣＡ６９Ｄ可変重鎖ＣＤＲ３をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号２１：ＰＲＣＡ１５７可変軽鎖のアミノ酸配列
配列番号２２：ＰＲＣＡ１５７可変軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号２３：ＰＲＣＡ１５７可変軽鎖ＣＤＲ１
配列番号２４：ＰＲＣＡ１５７可変軽鎖ＣＤＲ１をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号２５：ＰＲＣＡ１５７可変軽鎖ＣＤＲ２
配列番号２６：ＰＲＣＡ１５７可変軽鎖ＣＤＲ２をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号２７：ＰＲＣＡ１５７可変軽鎖ＣＤＲ３
配列番号２８：ＰＲＣＡ１５７可変軽鎖ＣＤＲ３をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号２９：ＰＲＣＡ１５７可変重鎖のアミノ酸配列
配列番号３０：ＰＲＣＡ１５７可変重鎖をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号３１：ＰＲＣＡ１５７可変重鎖ＣＤＲ１
配列番号３２：ＰＲＣＡ１５７可変重鎖ＣＤＲ１をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号３３：ＰＲＣＡ１５７可変重鎖ＣＤＲ２
配列番号３４：ＰＲＣＡ１５７可変重鎖ＣＤＲ２をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号３５：ＰＲＣＡ１５７可変重鎖ＣＤＲ３
配列番号３６：ＰＲＣＡ１５７可変重鎖ＣＤＲ３をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号３７：ＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖のアミノ酸配列
配列番号３８：ＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号３９：ＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ１
配列番号４０：ＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ１をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号４１：ＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ２
配列番号４２：ＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ２をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号４３：ＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ３
配列番号４４：ＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ３をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号４５：ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖のアミノ酸配列
配列番号４６：ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号４７：ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖ＣＤＲ１
配列番号４８：ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖ＣＤＲ１をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号４９：ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖ＣＤＲ２
配列番号５０：ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖ＣＤＲ２をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号５１：ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖ＣＤＲ３
配列番号５２：ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖ＣＤＲ３をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号５３：ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変軽鎖
配列番号５４：ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号５５：ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変軽鎖ＣＤＲ１
配列番号５６：ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変軽鎖ＣＤＲ１をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号５７：ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変軽鎖ＣＤＲ２
配列番号５８：ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変軽鎖ＣＤＲ２をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号５９：ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変軽鎖ＣＤＲ３
配列番号６０：ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変軽鎖ＣＤＲ３をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号６１：ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変重鎖のアミノ酸配列
配列番号６２：ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変重鎖をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号６３：ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変重鎖ＣＤＲ１
配列番号６４：ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変重鎖ＣＤＲ１をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号６５：ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変重鎖ＣＤＲ２
配列番号６６：ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変重鎖ＣＤＲ２をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号６７：ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変重鎖ＣＤＲ３
配列番号６８：ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ‐１可変重鎖ＣＤＲ３をコードするポリヌクレオチド配列
配列番号６９：ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐２ＶＬのアミノ酸配列
配列番号７０：ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐２ＶＬをコードするポリヌクレオチド
配列番号７１：ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐３ＶＬのアミノ酸配列
配列番号７２：ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐３ＶＬをコードするポリヌクレオチド
配列番号７３：ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐４ＶＬのアミノ酸配列
配列番号７４：ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐４ＶＬをコードするポリヌクレオチド
配列番号７５：ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐５ＶＬのアミノ酸配列
配列番号７６：ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐５ＶＬをコードするポリヌクレオチド
配列番号７７：ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐６ＶＬのアミノ酸配列
配列番号７８：ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐６ＶＬをコードするポリヌクレオチド
配列番号７９：ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐２ＶＨのアミノ酸配列
配列番号８０：ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐２ＶＨをコードするポリヌクレオチド
配列番号８１：ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐３ＶＨのアミノ酸配列
配列番号８２：ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐３ＶＨをコードするポリヌクレオチド
配列番号８３：ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐４ＶＨのアミノ酸配列
配列番号８４：ｈＢＲＣＡ８４Ｄ‐４ＶＨをコードするポリヌクレオチド
配列番号８５：ｃｈＢＲＣＡ８４Ｄ軽鎖のアミノ酸配列
配列番号８６：ｃｈＢＲＣＡ８４Ｄ軽鎖をコードするポリヌクレオチド
配列番号８７：ｃｈＢＲＣＡ８４Ｄ重鎖のアミノ酸配列
配列番号８８：ｃｈＢＲＣＡ８４Ｄ重鎖をコードするポリヌクレオチド
配列番号８９：ＶＥＧＦアイソフォーム１６２のアミノ酸配列
配列番号９０：ＶＥＧＦアイソフォーム１６２のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド
配列番号９１：ＶＥＧＦアイソフォーム２０６のアミノ酸配列
配列番号９２：ＶＥＧＦ受容体ＶＥＧＦＲ‐１のアミノ酸配列
配列番号９３：ＶＥＧＦ受容体ＶＥＧＦＲ‐２のアミノ酸配列
配列番号９４：ベバシズマブの軽鎖のアミノ酸配列
配列番号９５：ベバシズマブの重鎖のアミノ酸配列
配列番号９６：ＩｇＧ１Ｆｃ領域のアミノ酸配列
配列番号９７：ＶＬ及びＶＨダイアボディドメインの好ましいリンカー
配列番号９８：ＶＬ及びＶＨダイアボディドメインの好ましいリンカーをコードするポリヌクレオチド
配列番号９９：システイン含有リンカー
配列番号１００：ヒンジドメインリンカーのアミノ酸配列
配列番号１０１：ヒンジドメインリンカーのアミノ酸配列
配列番号１０２：ＩｇＧヒンジドメインに由来するシステイン含有、ヘテロ二量体促進リンカー
配列番号１０３：ＩｇＧヒンジドメインに由来するシステイン含有、ヘテロ二量体促進リンカーをコードするポリヌクレオチド
配列番号１０４：ヒトカッパ軽鎖ドメインに由来するシステイン含有、ヘテロ二量体促進リンカー
配列番号１０５：ヒトカッパ軽鎖ドメインに由来するシステイン含有、ヘテロ二量体促進リンカーをコードするポリヌクレオチド
配列番号１０６：ヒトカッパ軽鎖ドメインに由来するシステイン含有、ヘテロ二量体促進リンカー
配列番号１０７：ヒトカッパ軽鎖ドメインに由来するシステイン含有、ヘテロ二量体促進リンカーをコードするポリヌクレオチド
配列番号１０８：Ｅコイルヘテロ二量体促進ドメインのアミノ酸配列
配列番号１０９：Ｋコイルヘテロ二量体促進ドメインのアミノ酸配列
配列番号１１０：リンカーのアミノ酸配列
【図１】
0006533534.tif 000009
【図２Ａ】
0006533534.tif 000010
【図２Ｂ】
0006533534.tif 000011
【図２Ｃ】
0006533534.tif 000012
【図３】
0006533534.tif 000013
【図４】
0006533534.tif 000014
【図５】
0006533534.tif 000015
【図６】
0006533534.tif 000016
【図７】
0006533534.tif 000017
【図８】
0006533534.tif 000018
【図９】
0006533534.tif 000019
【配列表】
0006533534000001.app