(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＮａv１．７のドメイン１の細胞外（ＥＣ３）ループ（ＥＣ３−１）と特異的に結合し、配列番号７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３）および配列番号７２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の相補性決定領域（ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３）を含む、単離ヒト抗体又はヒト抗体の抗原結合断片。
【請求項２】
配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲおよび配列番号７２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む、請求項１記載のヒト抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３】
ＩｇＧ４抗体である、請求項２記載のヒト抗体。
【請求項４】
ＩｇＧ１抗体である、請求項２記載のヒト抗体。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項記載の抗体又はその抗原結合断片をコードする、単離核酸分子。
【請求項６】
請求項５記載の核酸分子を含む発現ベクター。
【請求項７】
疼痛の治療法において使用するための、請求項１〜４のいずれか１項記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項８】
前記疼痛が、急性疼痛、慢性疼痛、神経因性疼痛、炎症性疼痛、関節炎、骨関節炎、偏頭痛、群発頭痛症候群、三叉神経痛、疱疹性神経痛、全身性神経痛、神経変性疾患、運動障害、神経内分泌障害、失調症、内臓痛、急性痛風、ヘルペス後神経痛、糖尿病性神経障害、座骨神経痛、背痛、頭部若しくは頸部の疼痛、激痛若しくは難治性疼痛、突発痛、手術後の痛み、遺伝性紅痛症、歯痛、鼻炎、がん疼痛、又は膀胱障害からなる群から選択される病状又は疾患に関連するものである、請求項７記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項９】
前記がん疼痛が、前立腺がん、乳がん、及び子宮頸がんからなる群から選択されるがんと関連する、請求項８記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１０】
前記抗体若しくはその抗原結合断片が、第２の治療薬と組み合わせて患者に投与され、任意で、該第２の治療薬が、オピオイド、ＣＯＸ−２阻害剤、局所麻酔剤、ＮＭＤＡモジュレータ、カンナビノイド受容体アゴニスト、Ｐ２Ｘファミリーモジュレータ、ＶＲ１アンタゴニスト、サブスタンスＰアンタゴニスト、第２のＮａv１．７アンタゴニスト、サイトカイン若しくはサイトカイン受容体アンタゴニスト、抗てんかん薬、神経成長因子（ＮＧＦ）阻害剤、低用量コルヒチン、アスピリン、ＮＳＡＩＤ、ステロイド、低用量サイクロスポリンＡ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）若しくはＴＮＦ受容体阻害剤、尿酸合成阻害剤、尿酸排泄促進剤、キャスパーゼ−１、ｐ３８、ＩＫＫ１／２、ＣＴＬＡ−４Ｉｇ及び副腎皮質ステロイドの阻害剤等の他の炎症阻害剤からなる群から選択され、任意で、該第２のＮａv１．７アンタゴニストが、低分子量有機分子、Ｎａv１．７に特異的な第２抗体、ポリペプチドアンタゴニスト、ｓｉＲＮＡ、又はＮａv１．７に特異的なアンチセンス分子であり、又は該サイトカイン若しくはサイトカイン受容体アンタゴニストが、インターロイキン−１（ＩＬ−１）アンタゴニスト、ＩＬ−６アンタゴニスト若しくはＩＬ−１８アンタゴニストである、請求項７〜９のいずれか１項記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１１】
請求項１〜４のいずれか１項記載の単離抗体又はその抗原結合断片と、薬学的に許容し得る担体とを含む医薬組成物。
【請求項１２】
Ｎａv１．７−関連病状若しくは疾患、又はＮａv１．７−関連病状若しくは疾患と関連する疼痛を治療するための第２の薬剤を更に含み、任意で、該第２の薬剤が、オピオイド、ＣＯＸ−２阻害剤、局所麻酔剤、ＮＭＤＡモジュレータ、カンナビノイド受容体アゴニスト、Ｐ２Ｘファミリーモジュレータ、ＶＲ１アンタゴニスト、サブスタンスＰアンタゴニスト、第２のＮａv１．７アンタゴニスト、サイトカイン若しくはサイトカイン受容体アンタゴニスト、抗てんかん薬、神経成長因子（ＮＧＦ）阻害剤、低用量コルヒチン、アスピリン、ＮＳＡＩＤ、ステロイド、低用量サイクロスポリンＡ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）若しくはＴＮＦ受容体阻害剤、尿酸合成阻害剤、尿酸排泄促進剤、キャスパーゼ−１、ｐ３８、ＩＫＫ１／２、ＣＴＬＡ−４Ｉｇ及び副腎皮質ステロイドの阻害剤等の他の炎症阻害剤からなる群から選択され、任意で、該第２のＮａv１．７アンタゴニストが、低分子量有機分子、Ｎａv１．７に特異的な第２抗体、ポリペプチドアンタゴニスト、ｓｉＲＮＡ、又はＮａv１．７に特異的なアンチセンス分子である、請求項１１記載の医薬組成物。
【請求項１３】
疼痛の治療法において使用するための、請求項１１又は１２記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトナトリウムチャネルＮａv１．７と特異的に結合するヒト抗体及びヒト抗体の抗原結合断片、並びに上記抗体を使用する治療方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｎａv１．７は、種々の興奮細胞における電気発生及び神経インパルス誘導にとって重要な電位開口型ナトリウムチャネル（ＶＧＳＣｓ又はＮａｖ）のファミリーのメンバーである。ＶＧＳＣは、大きい中心孔形成α−サブユニットと２個の小さい補助β−サブユニットからなるヘテロ二量体複合体である。孔形成α−サブユニットは機能発現には十分であるが、チャネル開閉の動態及び電圧依存性はβ−サブユニットにより修飾されている。α−サブユニットは、Ｉ〜ＩＶ（Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤ、又は１、２、３及び４とも呼ばれる）の４個の繰り返しドメインを有しており、それぞれは、Ｓ１〜Ｓ２と標識される６個の膜貫通領域を含んでいる。１０種のクローニングされたα−サブユニットと４種のβ−サブユニットがある。これらの異なるナトリウムチャネルは、類似の構造的及び機能的特性を有しているが、それらは異なる細胞型において活動電位を惹起し、異なる制御特性及び薬理学的特性を有している。１０種の異なる遺伝子は、ナトリウムチャネルタンパク質の１０種のイソ型をコードし、それは全て共通の構造を有するが、異なるアミノ酸配列を有している。
【０００３】
ＳＣＮ９ＡによりコードされるＮａv１．７は、主に痛覚器官脊髄後根神経節ニューロン及び交感神経節ニューロンにおける電気信号に重要である。Ｎａv１．７は、インパルスが惹起される部位の近くの痛覚器官の末端で発現する（非特許文献１）。
【０００４】
疼痛におけるＮａv１．７の役割は、Ｎａv１．７を欠失するように遺伝子操作がなされたマウスにおいて決定された。より具体的には、痛覚器官のＮａv１．７を欠失するノックアウトマウスが、炎症性疼痛を小さくすることが示された（非特許文献２）。更に、患者が軽度の温かさに対して激しい灼熱痛を感じる遺伝性ニューロパシーである肢端紅痛症は、過度のチャネル活性を起こすＮａv１．７の変異の結果であると思われる（非特許文献３；非特許文献４）。Ｎａv１．７の機能の欠失をもたらし、痛みの喪失をももたらすＳＣＮ９Ａ変異は、パキスタンの３つの家系で同定された。観察された全ての変異は、ＳＣＮ９Ａ遺伝子におけるホモ接合変異を有する影響を受けたほとんどの患者でナンセンス変異であった。この観察は、痛みを経験できないことで、Ｎａv１．７機能の欠失と関連している（非特許文献５）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｔｏｌｅｄｏ−Ａｒａｌら（１９９７），ＰＮＡＳ  ９４：１５２７−１５３２
【非特許文献２】Ｎａｓｓａｒら（２００４），ＰＮＡＳ  １０１：１２７０６−１２７１１
【非特許文献３】Ｄｒｅｎｔｈら（２００１），Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．６８：１２７７−１２８２
【非特許文献４】Ｃｕｍｍｉｎｓら，（２００４），Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２４：８２３２−８２３６
【非特許文献５】Ｃｏｘら、（２００６），Ｎａｔｕｒｅ  ４４４：８９４−８９８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ナトリウムイオンの細胞外孔形成領域と結合し、または機能性カリウム、ナトリウムまたはカルシウムチャネルのイオン輸送を阻害する抗体は、米国特許出願公開第２００５／０２７１６５６号、米国特許出願公開第２０１１／０１３５６６２号、米国特許出願公開第２０１２／０２５９０９６、欧州特許出願公開第２４９３９２６Ａ１号、ＷＯ２００７／０２３２９８及びＷＯ２０１１／０５１３５０に開示されている。ナトリウムチャネル遮断薬を投与することにより局所麻酔を行う方法は、例えば、米国特許第６４０７０８８号、米国特許第６５９９９０６及び米国特許第６５４８５０７号に開示されている。Ｎａv１．７イオンチャネルの活性を修飾する薬剤の同定法はＷＯ２００７／１０９３２４に開示されている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
第１の態様においては、本発明は、ヒトＮａv１．７と特異的に結合し、その活性を阻害又は遮断する、完全なヒトモノクローナル抗体（ｍＡｂｓ）及びその抗原結合断片を提供する。抗体又はその抗原結合断片は、細胞内でのＮａv１．７の存在と関連する疼痛を改善するのに有用である。
【０００８】
本発明の抗体は完全長であってもよく（例えば、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４）であってもよく、又は抗原結合部位（Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）2又はｓｃＦｖ断片）のみを含んでいてもよく、機能性に影響を及ぼすように、例えば残りのエフェクター機能を除去するように（Ｒｅｄｄｙら，２０００，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：１９２５−１９３３）修飾されていてもよい。
【０００９】
一実施態様においては、ヒトＮａv１．７と特異的に結合する、単離ヒト抗体又はヒト抗体の抗原結合断片は、ヒトＮａv１．７の少なくとも１つの細胞外（ＥＣ）ループ若しくはその断片、又はパドル領域若しくはその断片と結合する。
【００１０】
一実施態様においては、抗体が結合するＥＣループは、ドメイン１、２、３又は４のいずれかにおけるＥＣ１、ＥＣ２及びＥＣ３から選択することができる。
【００１１】
他の実施態様においては、抗体が結合するＥＣループは、そのドメインが配列番号：６７０のおおよそ２６９番目の残基から３３８番目のアミノ酸残基を含むドメイン１の細胞外ループ３（ＥＣ３）であってもよい。
【００１２】
他の実施態様においては、抗体が結合するＥＣループは、そのドメインが配列番号：６７０のおよそ１３３３番目の残基からおよそ１３８２番目の残基のアミノ酸残基を含むドメイン３内の細胞外ループ３（ＥＣ３）であってもよい。
【００１３】
他の実施態様においては、抗体は、そのパドル領域が、配列番号：６７０のおよそ２０２番目の残基からおよそ２３２番目の残基のアミノ酸残基を含む、Ｎａv１．７のパドル領域と結合する場合がある。
【００１４】
特定の実施態様においては、抗体は、配列番号８３８〜８５２の１以上と結合しない。
【００１５】
一実施態様においては、本発明は、表１に示す重鎖可変（ＶH）アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に同様の配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む、抗体又はその抗原結合断片を含む。一実施態様においては、本発明は、配列番号：２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、９８、１０２、１０６、１１０、６８１、６８５、６８９、６９３、６９７、７０１、７０５、７０９、７２２、７２７、７４３、７５９、７９１、８０７、８２３、８６０、８６４、８６８及び８７２からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に同様の配列を有するＨＣＶＲを含む、抗体若しくは抗体の抗原結合断片を含む。一実施態様においては、抗体又は抗体の抗原結合断片は、１８、２２、４６、５０、６６、７０、８２、８６、９０、９４、１０２、６８９、６９３、７０５及び７０９からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に同様の配列を有するＨＣＶＲを含む。一実施態様においては、抗体又は抗体の抗原結合断片は、配列番号：１４、２２、３０、９８、７０１、７２２、７２７、７５９、８６０、８６４、８６８及び８７２からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に同様の配列を有するＨＣＶＲを含む。一実施態様においては、Ｈ４Ｈ４３９Ｐとして設計された抗体のＶＨ鎖のアミノ酸配列（配列番号：７０）の位置番号７は、セリン（Ｓ）、又はトリプトファン（Ｗ）である。一実施態様においては、ヒトＮａv１．７と結合するヒト抗体の抗体又は抗原結合断片は、配列番号：４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４０、４４、４８、５２、５６、６０、６４、６８、７２、７６、８０、８４、８８、９２、９６、１００、１０４、１０８、１１２、６８３、６８７、６９１、６９５、６９９、７０３、７０７、７１１、７２４、７３５、７５１、７６７、７９９、８１５、８３１、８６２、８６６、８７０及び８７４からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に同様の配列を有する軽鎖可変領域（ＬＤＶＲ）を含む。一実施態様においては、抗体又は抗原結合断片は、配列番号：１６、２４、３２、１００、７０３、７２４、７３５、７６７、８６２、８６６、８７０及び８７４からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に同様の配列を有するＬＤＶＲを含む。一実施態様においては、���発明は、表１に示す軽鎖可変領域（ＶＬ）のいずれかから選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に同様の配列を有するＬＣＶＲを含む抗体又は抗体の抗原結合断片を含む。
【００１６】
一実施態様においては、本発明は、配列番号：４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４０、４４、４８、５２、５６、６０、６４、６８、７２、７６、８０、８４、８８、９２、９６、１００、１０４、１０８、１１２、６８３、６８７、６９１、６９５、６９９、７０３、７０７、７１１、７２４、７３５、７５１、７６７、７９９、８１５、８３１、８６２、８６６、８７０及び８７４からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に同様の配列を有するＬＣＶＲを含む抗体又は抗体の抗原結合断片を含む。
【００１７】
一実施態様においては、抗体又は抗体の抗原結合断片は、２０、２４、４８、５２、６８、７２、８４、８８、９２、９６、１０４、６９１、６９５及び７０７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む。一実施態様においては、抗体又は抗体の抗原結合断片は、配列番号：１６、２４、３２、１００、７０３、７２４、７３５、７６７、８６２、８６６、８７０及び８７４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む。
【００１８】
特定の実施態様においては、抗体又は抗体の抗原結合断片は、配列番号：２／４、６／８、１０／１２、１４／１６、１８／２０、２２／２４、２６／２８、３０／３２、３４／３６、３８／４０、４２／４４、４６／４８、５０／５２、５４／５６、５８／６０、６２／６４、６６／６８、７０／７２、７４／７６、７８／８０、８２／８４、８６／８８、９０／９２、９４／９６、９８／１００、１０２／１０４、１０６／１０８、１１０／１１２、６８１／６８３、６８５／６８７、６８９／６９１、６９３／６９５、６９７／６９９、７０１／７０３、７０５／７０７、７０９／７１１、７２２／７２４、７２７／７３５、７４３／７５１、７５９／７６７、７９１／７９９、８０７／８１５、８２３／８３１、８６０／８６２、８６４／８６６、８６８／８７０及び８７２／８７４からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。
【００１９】
一実施態様においては、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対は、配列番号：１８／２０、２２／２４、４６／４８、５０／５２、６６／６８、７０／７２、８２／８４、８６／８８、９０／９２、９４／９６、１０２／１０４、６８９／６９１、６９３／６９５及び７０５／７０７からなる群から選択される。
【００２０】
一実施態様においては、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対は、配列番号：１４／１６、２２／２４、３０／３２、９８／１００、７０１／７０３、７２２／７２４、７２７／７３５、７５９／７６７、８６０／８６２、８６４／８６６、８６８／８７０及び８７２／８７４からなる群から選択される。
【００２１】
第２の態様においては、本発明は、配列番号：２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、９４、９８、１０２、１０６、１１０、６８１、６８５、６８９、６９３、６９７、７０１、７０５、７０９、７２２、７２７、７４３、７５９、７９１、８０７、８２３、８６０、８６４、８６８及び８７２からなる群から選択されるＨＣＶＲ内に含まれる３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）を含むＨＣＶＲと、配列番号：４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４０、４４、４８、５２、５６、６０、６４、６８、７２、７６、８０、８４、８８、９２、９６、１００、１０４、１０８、１１２、６８３、６８７、６９１、６９５、６９９、７０３、７０７、７１１、７２４、７３５、７５１、７６７、７９９、８１５、８３１、８６２、８６６、８７０及び８７４からなる群から選択されるＬＣＶＲ配列内に含まれる３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）を含むＬＣＶＲとを含む、ヒトＮａv１．７と特異的に結合する単離ヒト抗体又はその抗原結合断片を提供する。
【００２２】
第３の態様においては、本発明は、表２に示すもののいずれかから選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に同様の配列を有するＨＣＤＲ３ドメインと；表２に示すもののいずれかから選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に同様の配列を有するＬＣＤＲ３ドメインとを含む、抗体又は抗体の抗原結合断片をも提供する。
【００２３】
本発明の第４の態様は、表２に示すもののいずれかのアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に同様の配列を有するＨＣＤＲ１ドメインと、表２に示すもののいずれかのアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に同様の配列を有するＨＣＤＲ２ドメインと、表２に示すもののいずれかのアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に同様の配列を有するＬＣＤＲ１ドメインと、表２に示すもののいずれかのアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に同様の配列を有するＬＣＤＲ２ドメインとを更に含む、抗体又はその断片を提供する。
【００２４】
一実施態様においては、抗体又は抗体の抗原結合部分は、（ａ）配列番号：１８の残基９７〜１１２；配列番号：１４、２２、７２７、又は７５９の残基９７〜１０７；配列番号：４６又は５０の残基９７〜１０８；配列番号：６６、７０、７０１又は８６４の残基９６〜１１０；配列番号８２又は８６の残基９７〜１１７；配列番号９０又は９４の残基９７〜１１６；配列番号１０２又は７０５の残基９８〜１１０；配列番号：６８９又は６９３の残基９７〜１１１；配列番号：３０、７２２、８６８又は８７２の残基９７〜１０６；配列番号：９８又は８６０の残基９６〜１０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメインと、
（ｂ）配列番号：２０、６８、７２、８４、８８、９２、９６、１０４、７０３、７０７、７２４、８６６又は８７４の残基８９〜９７；配列番号：３２、４８、５２、６９１、６９５又は８７０の残基９５〜１０３；及び配列番号：１６、２４、７３５又は７６７の残基９４〜１０２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメインとを含む。
【００２５】
一実施態様においては、抗体又は抗体の抗原結合部分は、（ｃ）配列番号：１４、１８、２２、３０、４６、５０、６６、７０、８２、８６、９０、９４、９８、６８９、６９３、７０１、７２２、７２７、７５９、８６０、８６４、８６８又は８７２の残基２６〜３３；及び配列番号：１０２又は７０５の残基２６〜３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメインと；
（ｄ）配列番号：１４、１８、２２、３０、４６、５０、８２、８６、９０、９４、６８９、６９３、７２２、７２７、７５９、８６８又は８７２の残基５１〜５８配列番号：６６、７０、９８、７０１、８６０又は８６４の残基５１〜５７；及び配列番号：１０２又は７０５の残基５３〜５９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメインと；
（ｅ）配列番号：２０、６８、７２、８４、８８、９２、９６、１０４、７０３、７０７、７２４、８６６又は８７４の残基２７〜３２；配列番号：１６、２４、７３５、又は７６７の残基２７〜３７；及び配列番号：３２、４８、５２、１００、６９１、６９５、８６２又は８７０の残基２７〜３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；と
（ｆ）配列番号：２０、６８、７２、８４、８８、９２、９６、１０４、７０３、７０７、７２４、８６６又は８７４の残基５０〜５２；配列番号：１６、２４、７３５又は７６７の残基５５〜５７；及び配列番号：３２、４８、５２、１００、６９１、６９５、８６２又は８７０の残基５６〜５８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２とを更に含む。
【００２６】
特定の実施態様においては、ヒトＮａv１．７と特異的に結合する抗体又は抗体の抗原結合部分は、表２に示すＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列から選択されるＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対を含む。特定の実施態様によれば、抗体又は抗体の抗原結合部分は、配列番号：１８の残基９７〜１１２／配列番号：２０の残基８９〜９７；配列番号：２２の残基９７〜１０７／配列番号：２４の残基９４〜１０２；配列番号：４６又は５０の残基９７〜１０８／４８又は５２の残基９５〜１０３；配列番号：６６又は７０の残基９６〜１１０／配列番号：６８又は７２の残基８９〜９７；配列番号：８２又は８６の残基９７〜１１７／配列番号：８４又は８８の残基８９〜９７；配列番号：９０又は９４の残基９７〜１１６／配列番号：９２又は９６の残基８９〜９７；配列番号：１０２又は７０５の残基９８〜１１０／配列番号：１０４又は７０７の残基８９〜９７；配列番号：６８９又は６９３の残基９７〜１１１／配列番号：６９１又は６９５の残基９５〜１０３，配列番号：１４の残基９７〜１０７／配列番号：１６の残基９４〜１０２；配列番号：２２の残基９７〜１０７／配列番号：２４の残基９４〜１０２；配列番号：７２７の残基９７〜１０７／配列番号：７３５の残基９４〜１０２；配列番号：７５９の残基９７〜１０７／配列番号：７６７の残基９４〜１０２；配列番号：３０の残基９７〜１０６／配列番号：３２の残基９５〜１０３；配列番号：８６８の残基９７〜１０６／配列番号：８７０の残基９５〜１０３；配列番号：７０１の残基９６〜１１０／配列番号：７０３の残基８９〜９７；配列番号：８６４の残基９６〜１１０／配列番号：８６６の残基８９〜９７；配列番号：９８の残基９６〜１０８／配列番号：１００の残基９５〜９９；配列番号：８６０の残基９６〜１０８／配列番号：８６２の残基９５〜９９；配列番号：７２２の残基９７〜１０６／配列番号：７２４の残基８９〜９７；配列番号：８７２の残基９７−１０６／配列番号：８７４の残基８９〜９７からなる群から選択されるＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対を含む。
【００２７】
一実施態様においては、抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号：１８の残基２６〜３３、５１〜５８及び９７〜１１２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列と、それぞれ、配列番号：２０の残基２７〜３２、５０〜５２及び８９〜９７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列とを含む。
【００２８】
一実施態様においては、抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号：２２の残基２６〜３３、５１〜５８及び９７〜１０７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列と、それぞれ、配列番号：２４の残基２７〜３７、５５〜５７及び９４〜１０２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列とを含む。  
【００２９】
一実施態様においては、抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号：４６の残基２６〜３３、５１〜５８及び９７〜１０８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列と、それぞれ、配列番号：４８の残基２７〜３８、５６〜５８及び９５〜１０３のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列とを含む。  
【００３０】
一実施態様においては、抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号：６６の残基２６〜３３、５１〜５７及び９６〜１１０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列と、それぞれ、配列番号：６８の残基２７〜３２、５０〜５２及び８９〜９７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列とを含む。
【００３１】
一実施態様においては、抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号：８２の残基２６〜３３、５１〜５８及び９７〜１１７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列と、それぞれ、配列番号：８４の残基２７〜３２、５０〜５２及び８９〜９７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列とを含む。
【００３２】
一実施態様においては、抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号：９０の残基２６〜３３、５１〜５８及び９７〜１１６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列と、それぞれ、配列番号：９２の残基２７〜３２、５０〜５２及び８９〜９７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列とを含む。
【００３３】
一実施態様においては、抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号：１０２の残基２６〜３５、５３〜５９及び９８〜１１０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列と、それぞれ、配列番号：１０４の残基２７〜３２、５０〜５２及び８９〜９７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列とを含む。
【００３４】
一実施態様においては、抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号：６８９の残基２６〜３３、５１〜５８及び９７〜１１１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列と、それぞれ、配列番号：６９１の残基２７〜３８、５６〜５８及び９５〜１０３のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列とを含む。
【００３５】
一実施態様においては、抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号：１４の残基２６〜３３、５１〜５８及び９７〜１０７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列と、それぞれ、配列番号：１６の残基２７〜３７、５５〜５７及び９４〜１０２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列とを含む。  
【００３６】
一実施態様においては、抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号：２２の残基２６〜３３、５１〜５８及び９７〜１０７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列と、それぞれ、配列番号：２４の残基２７〜３７、５５〜５７及び９４〜１０２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列とを含む。  
【００３７】
一実施態様においては、抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号：７２７の残基２６〜３３、５１〜５８及び９７〜１０７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列と、それぞれ、配列番号：７３５の残基２７〜３７、５５〜５７及び９４〜１０２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列とを含む。
【００３８】
一実施態様においては、抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号：７５９の残基２６〜３３、５１〜５８及び９７〜１０７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列と、それぞれ、配列番号：７６７の残基２７〜３７、５５〜５７及び９４〜１０２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列とを含む。
【００３９】
一実施態様においては、抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号：３０又は８６８の残基２６〜３３、５１〜５８及び９７〜１０６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列と、それぞれ、配列番号：３２又は８７０の残基２７〜３８、５６〜５８及び９５〜１０３のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
【００４０】
一実施態様においては、抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号：７０１又は８６４の残基２６〜３３、５１〜５７及び９６〜１１０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列と、それぞれ、配列番号：７０３又は８６６の残基２７〜３２、５０〜５２及び８９〜９７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
【００４１】
一実施態様においては、抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号：９８又は８６０の残基２６〜３３、５１〜５７及び９６〜１０８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列と、それぞれ、配列番号：１００又は８６２の残基２７〜３８、５６〜５８及び９５〜９９のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
【００４２】
一実施態様においては、抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号：７２２又は８７２の残基２６〜３３、５１〜５８及び９７〜１０６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列と、それぞれ、配列番号：７２４又は８７４の残基２７〜３２、５０〜５２及び８９〜９７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
【００４３】
本発明の特定の非限定的な典型的な抗体及び抗原結合断片は、それぞれ表１又は２に示すアミノ酸配列のいずれかから選択される、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３ドメインを含む。
【００４４】
一実施態様においては、抗体又は抗原結合断片は、ヒト、サル、マウス及びラットのＮａv１．７と結合する。
【００４５】
一実施態様においては、抗体又は抗原結合断片は、ヒト、サル及びマウスのＮａv１．７と結合するが、ラットのＮａv１．７とは結合しない。
【００４６】
一実施態様においては、抗体又は抗原結合断片は、ヒト、サル及びラットのＮａv１．７と結合するが、マウスのＮａv１．７とは結合しない。
【００４７】
一実施態様においては、抗体又は抗原結合断片は、ヒト及びサルのＮａv１．７と結合するが、ラット又はマウスのＮａv１．７とは結合しない。
【００４８】
一実施態様においては、抗体又は抗原結合断片はヒトのＮａv１．７と結合するが、サル、マウス又はラットのＮａv１．７とは結合しない。
【００４９】
一実施態様においては、本発明は、ヒトＮａv１．７（ｈＮａv１．７）と特異的に結合し、ｈＮａv１．７活性を中和する完全なモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を提供する。抗体又はその断片が、以下の特徴の１以上を示す。（ｉ）配列番号：１４、１８、２２、３０、４６、５０、６６、７０、８２、８６、９０、９４、９８、１０２、６８９、６９３、７０１、７０５、７２２、７２７、７５９、８６０、８６４、８６８及び８７２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含み；（ｉｉ）配列番号：１６、２０、２４、３２、４８、５２、６８、７２、８４、８８、９２、９６、１００、１０４、６９１、６９５、７０３、７０７、７２４、７３５、７６７、８６２、８６６、８７０及び８７４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含み；（ｉｉｉ）表２に示す、重鎖又は軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列及びそれらの組み合わせのいずれか１以上を含み；（ｉｖ）他のナトリウムチャネル活性、例えばＮａv１．５に影響を及ぼさずにＮａv１．７活性の阻害に特異的であり；（ｖ）ｈＮａv１．７の以下の領域、すなわち配列番号：６７０のおよそ２６９〜３３８番目の残基のアミノ酸残基を含む、ドメイン１の細胞外ループ３（ＥＣ３−１と命名）若しくはその断片；配列番号：６７０のおよそ１３３３〜１３８２番目の残基のアミノ酸残基を含む、ドメイン３の細胞外ループ３（ＥＣ３−３と命名）若しくはその断片；又は配列番号；６７０のおよそ２０２〜２３２番目の残基のアミノ酸残基を含む、Ｎａv１．７のパドル領域若しくはその断片のいずれかの１以上に対し特異的結合を示し；（ｉｖ）ヒト、サル、マウス又はラットのＮａv１．７のいずれか１種以上と結合し、又は（ｖｉｉ）当業者に公知の任意の標準法、例えば、パッチクランプ法により示されるように、Ｎａv１．７含有細胞においてイオン束を阻害し、それにより膜貫通型脱分極を阻害する。
【００５０】
一実施態様においては、本発明は、以下の特徴の１以上を示す、ヒトＮａv１．７（ｈＮａv１．７）と特異的に結合し、ｈＮａv１．７活性を中和する完全なモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を提供する：（ｉ）抗体又はその断片が、以下の特徴の１以上を示す。（ｉ）配列番号：１４、１８、２２、３０、４６，５０、６６、７０、８２、８６、９０、９４、９８、１０２、６８９、６９３、７０１、７０５、７２２、７２７、７５９、８６０、８６４、８６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含み；（ｉｉ）配列番号：１６、２０、２４、３２、４８、５２、６８、７２、８４、８８、９２、９６、  １００、１０４、６９１、６９５、７０３、７０７、７２４、７３５、７６７、８６２、８６６、８７０及び８７４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含み；（ｉｉｉ）表２に示す、重鎖又は軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列及びそれらの組み合わせのいずれか１以上を含み；（ｉｖ）他の特定のナトリウムチャネル活性、例えば１．８及び／又はＮａv１．９に加え、Ｎａv１．７活性を阻害し得；（ｖ）ｈＮａv１．７の以下の領域、すなわち配列番号：６７０のおよそ２６９〜３３８番目の残基のアミノ酸残基を含む、ドメイン１の細胞外ループ３（ＥＣ３−１と命名）若しくはその断片；配列番号：６７０のおよそ１３３３〜１３８２番目の残基のアミノ酸残基を含む、ドメイン３の細胞外ループ３（ＥＣ３−３と命名）若しくはその断片；又は配列番号；６７０のおよそ２０２〜２３２番目の残基のアミノ酸残基を含む、Ｎａv１．７のパドル領域若しくはその断片のいずれかの１以上に対し特異的結合を示し；（ｉｖ）ヒト、サル、マウス又はラットのＮａv１．７のいずれか１種以上と結合し、又は（ｖｉｉ）当業者に公知の任意の標準法、例えば、パッチクランプ法により示されるように、Ｎａv１．７含有細胞においてイオン束を阻害し、それにより膜貫通型脱分極を阻害する。
【００５１】
一実施態様においては、本発明は、配列番号：２／４、６／８、１０／１２、１４／１６、１８／２０、２２／２４、２６／２８、３０／３２、３４／３６、３８／４０、４２／４４、４６／４８、５０／５２、５４／５６、５８／６０、６２／６４、６６／６８、７０／７２、７４／７６、７８／８０、８２／８４、８６／８８、９０／９２、９４／９６、９８／１００、１０２／１０４、１０６／１０８、１１０／１１２、６８１／６８３、６８５／６８７、６８９／６９１、６９３／６９５、６９７／６９９、７０１／７０３、７０５／７０７、７０９／７１１、７２２／７２４、７２７／７３５、７４３／７５１、７５９／７６７、７９１／７９９、８０７／８１５、８２３／８３１、８６０／８６２、８６４／８６６、８６８／８７０及び８７２／８７４からなる群から選択される重鎖及び軽鎖配列対内に含まれる重鎖及び軽鎖ＣＤＲドメインを含む、抗体又は抗原結合断片とのｈＮａv１．７の特異的結合と競合する単離抗体又はその抗原結合断片を提供する。
【００５２】
一実施態様においては、本発明は、配列番号：２／４、６／８、１０／１２、１４／１６、１８／２０、２２／２４、２６／２８、３０／３２、３４／３６、３８／４０、４２／４４、４６／４８、５０／５２、５４／５６、５８／６０、６２／６４、６６／６８、７０／７２、７４／７６、７８／８０、８２／８４、８６／８８、９０／９２、９４／９６、９８／１００、１０２／１０４、１０６／１０８、１１０／１１２、６８１／６８３、６８５／６８７、６８９／６９１、６９３／６９５、６９７／６９９、７０１／７０３、７０５／７０７、７０９／７１１、７２２／７２４、７２７／７３５、７４３／７５１、７５９／７６７、７９１／７９９、８０７／８１５、８２３／８３１、８６０／８６２、８６４／８６６、８６８／８７０及び８７２／８７４からなる群から選択される重鎖及び軽鎖配列対を含む抗体により認識されるｈＮａv１．７上の同一エピトープと結合する、単離抗体又はその抗原結合断片を提供する。
【００５３】
第５の態様においては、本発明は、抗−Ｎａv１．７抗体又はその断片をコードする核酸を提供する。本発明の核酸を保有する組換え発現ベクター、及びそのようなベクターを導入した宿主細胞、また、抗体の産生及び産生された抗体を回収することを可能にする条件下に宿主細胞を培養することにより、抗体を産生する方法も本発明に包含される。
【００５４】
一実施態様においては、本発明は、配列番号：１、５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７７、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、６８０、６８４、６８８、６９２、６９６、７００、７０４、７０８、７２１、７２６、７４２、７５８、７９０、８０６、８２２、８５９、８６３、８６７及び８７１からなる群から選択される核酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の相同性を有するそれらと実質的に同様の配列によりコードされるＨＣＶＲを含む、抗体又はその断片を提供する。一実施態様においては、ＨＣＶＲは、配列番号：１３，１７、２１、２９、４５、４９、６５、６９、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、６８８、６９２、７００、７０４、７２１、７２６、７５８、８５９、８６３、８６７及び８７１からなる群から選択される核酸配列によってコードされる。
【００５５】
一実施態様においては、抗体又はその断片は、配列番号：３、７、１１、１５、１９、２３、２７、３１、３５、３９、４３、４７、５１、５５、５９、６３、６７、７１、７５、７９、８３、８７、９１、９５、９９、１０３、１０７、１１１、６８２、６８６、６９０、６９４、６９８、７０２、７０６、７１０、７２３、７３４、７５０、７６６、７８２、７９８、８１４、８３０、８６１、８６５、８６９及び８７３からなる群から選択される核酸配列、又はこれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の相同性を有する実質的に同一の配列によりコードされるＬＣＶＲを更に含む。一実施態様においては、ＬＣＶＲは、配列番号：１５、１９、２３、３１、４７、５１、６７、７１、８３、８７、９１、９５、９９、１０３、６９０、６９４、７０２、７０６、７２３、７３４、７６６、８６１、８６５、８６９及び８７３からなる群から選択される核酸によってコードされる。
【００５６】
一実施態様においては、本発明は、表１に示すいずれかの抗体由来の可変領域内に位置する核酸配列、又はそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同一の配列によりコードされるＨＣＤＲ３ドメインと；表１に示すいずれかの配列、又はそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同一の配列によりコードされるＬＣＤＲ３ドメインとを含む抗体又は抗体の抗原結合断片をも提供する。
【００５７】
一実施態様においては、本発明は、表１に示すものの核酸配列、又はそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同一の配列によりコードされるＨＣＤＲ１ドメイン；表１に示すものの核酸配列、又はそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同一の配列によりコードされるＨＣＤＲ２ドメイン；表１に示すものの核酸配列、又はそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同一の配列によりコードされるＬＣＤＲ１ドメイン；並びに表１に示すものの核酸配列、又はそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同一の配列によりコードされるＬＣＤＲ２ドメイン；を更に含む抗体又はその断片を提供する。
【００５８】
第６の態様においては、本発明は、ＶH、ＤH及びＪH生殖系配列に由来する核酸配列断片によりコードされるＨＣＶＲと、ＶK及びＪK生殖系配列に由来する核酸配列断片によりコードされるＬＣＶＲとを、表３に示すように組み合わせて含む、ヒト抗−ｈＮａv１．７抗体又は抗体の抗原結合断片を特徴とする。
【００５９】
本発明は、修飾されたグリコシル化パターンを有する抗−Ｎａv１．７抗体を包含する。ある応用においては、所望でないグリコシル化部位を除去するための修飾、例えば、抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）機能を増強するためのフコース部分の除去が有用である場合がある（Ｓｈｉｅｌｄら（２００２）  ＪＢＣ  ２７７：２６７３３を参照のこと）。他の応用においては、補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）を修飾するために、ガラクトシル化の修飾を実施することができる。
【００６０】
第７の態様においては、本発明は、ｈＮａv１．７と特異的に結合する組換え型ヒト抗体又はその断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を特徴とする。一実施態様においては、本発明は、本発明の抗体又は抗体の抗原結合断片と、第２の治療薬との組み合わせである組成物を特徴とする。第２の治療薬は、本発明の抗体又はその断片と遊離に併用される任意の薬剤、例えば、疼痛を減少し得る薬剤、例えば、限定されないが、オピオイド、ＣＯＸ−２阻害剤、局所麻酔剤、ＮＭＤＡモジュレータ、カンナビノイド受容体アゴニスト、Ｐ２Ｘファミリーモジュレータ、ＶＲ１アンタゴニスト、及びサブスタンスＰアンタゴニストであってもよい。第２の治療薬は、インターロイキン（ＩＬ−１）阻害剤、例えば、融合タンパク質（米国特許第６，９２７，０４４号）；ガバペンチン、プレガバリン、トピラマート等の抗てんかん薬；アミトリプチリン等の三環系抗うつ薬；セレコキシブ；ＩＬ−６、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１８又はＩＬ−１８Ｒに対するアンタゴニスト等のサイトカイン阻害剤又はアンタゴニスト、Ｎａv１．８阻害剤、Ｎａv１．９阻害剤、又はＮＧＦ阻害剤、又はＮａv１．７に対する第２の阻害剤若しくはアンタゴニストであってもよい。第２の治療薬は、Ｎａv１．７に特異的な第２の抗体、Ｎａv１．７に対するポリペプチド性アンタゴニスト、ｓｉＲＮＡ、若しくはアンチセンス分子であってもよい。第２の治療薬は、低分子量薬剤、又はタンパク質／ポリペプチド性阻害剤であってもよい。第２の治療薬は、合成又は天然由来であってもよい。本発明の抗体及び薬学的に許容される組成物は、併用療法において使用することができ、すなわち、抗体及び薬学的に許容される組成物は、１種以上の他の所望の治療薬若しくは内科的治療と同時に、前に、若しくは後に投与することができる。併用療法において使用される治療法（治療又は手術）の特定の組み合わせは、所望の治療及び／又は手術の適合性、達成すべき所望の治療効果を考慮する。また、用いる治療は、同じ障害（例えば、抗体を、同じ障害を治療するために使用される他の薬剤と同時に投与することができる）に対して所望の効果を達成することができ、またはそれらが異なる効果（例えば、任意の副作用の制御）を達成し得ることが理解されるであろう。本明細書で用いられる場合、特定の疾患又は病状を治療又は予防するために通常に投与される追加の治療薬は、治療される疾患又は病状に適したものである。
【００６１】
第８の態様においては、本発明は、本発明の抗−ｈＮａv１．７抗体又は抗体の抗原結合部分を使用する、ｈＮａv１．７活性の阻害法を特徴とし、この治療法は、治療的有効量の抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む。
【００６２】
一実施態様においては、本発明は、Ｎａv１．７関連病状若しくは疾患、又はＮａv１．７関連病状若しくは疾患と関連する疼痛を治療するための治療法を提供する。該方法は、Ｎａv１．７関連病状又は疾患が解消し、前記病状又は疾患に関連する疼痛が軽減又は減少するように、本明細書に記載されたＮａv１．７抗体又は抗原結合断片を、治療を必要とする患者に投与することを含む。
【００６３】
関連実施態様においては、本発明は、治療を必要とする患者において、Ｎａv１．７関連病状若しくは疾患、又はＮａv１．７関連病状若しくは疾患に関連する疼痛、又はＮａv１．７関連病状若しくは疾患と関連する少なくとも１種の症状若しくは合併症が、重傷度及び／又は期間において予防、改善又は抑制される、Ｎａv１．７関連病状若しくは疾患、又はＮａv１．７関連病状若しくは疾患に関連する疼痛、又はＮａv１．７関連病状若しくは疾患と関連する少なくとも１種の症状若しくは合併症の治療に使用するための、本発明の１種以上の任意の抗−Ｎａv１．７抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物を提供する。
【００６４】
一実施多様においては、本発明は、治療を必要とする患者における、Ｎａv１．７関連病状若しくは疾患、又はＮａv１．７関連病状若しくは疾患に関連する疼痛、又はＮａv１．７関連病状若しくは疾患と関連する少なくとも１種の症状若しくは合併症の治療用医薬の製造における、本発明の１種以上の任意の抗−Ｎａv１．７抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物の使用であって、Ｎａv１．７−関連病状若しくは疾患、又はＮａv１．７−関連病状若しくは疾患と関連する疼痛、又はＮａv１．７−関連病状若しくは疾患と関連する少なくとも１種の症状又は合併症が、重症度及び／又は期間において予防、改善又は抑制される、医薬組成物の使用を提供する。
【００６５】
治療される障害は、ｈＮａv１．７活性を、排除、阻害又は減少することによって、改善、軽減、阻害又は予防されるあらゆる障害又は病状である。本発明の治療法によって治療可能な具体的な集団としては、急性、慢性、神経障害性、若しくは炎症性疼痛、関節炎、偏頭痛、群発性頭痛、三叉神経痛、疱疹性神経痛、全身性神経痛、てんかん若しくはてんかん様症状、筋緊張症、不整脈、運動障害、神経内分泌障害、失調症、過敏性大腸症候群、炎症性腸疾患、糞便切迫感、失禁、直腸過敏症、内臓痛、骨関節痛、ヘルペス後神経痛、糖尿病性神経障害、神経根痛、座骨痛、背痛、頭部又は頸部の疼痛、激痛、手術後疼痛、又はがん疼痛が挙げられる。本発明の治療法により治療可能な他の病状としては、遺伝性紅痛症、鼻炎、前立腺がん、乳がん、子宮頸がん又は膀胱障害が挙げられる。本発明の抗体又はその抗原結合断片は、以下の病状：非悪性の急性、慢性、若しくは骨折による骨痛；リウマチ性関節炎、脊椎管狭窄症、神経障害性腰痛；筋膜性疼痛症候群；繊維筋痛症；側頭骨顎関節痛；膵臓；慢性頭痛；群発性頭痛等の緊張型頭痛；糖尿病性神経障害；ＨＩＶ−関連ニューロパシー；シャルコー・マリー・トゥースニューパシー；遺伝性感覚性ニューロパシー；末梢神経損傷；有痛性神経腫；異所性近位及び遠位排泄；神経根症；化学療法誘発性神経因性痛；放射線療法誘発性神経因性痛；乳房切除後の痛み；中枢性疼痛；脊髄損傷疼痛；脳卒中後疼痛；視床痛；複合性局所疼痛症候群；幻肢痛；難治性疼痛；急性筋骨格痛；関節痛；急性痛風による痛み；機械的な腰痛；頸部痛；腱炎；負傷／運動痛；腹痛；腎盂腎炎；盲腸炎；胆嚢炎；腸閉塞；ヘルニア等；心臓痛を含む胸部痛；骨盤痛、腎臓疝痛、陣痛を含む出産時の痛み；帝王切開の痛み；火傷及び外傷痛；子宮内膜症；帯状疱疹痛；鎌状赤血球貧血；急性膵炎；激痛；副鼻腔炎痛、歯痛を含む口腔顔面痛；多発性硬化症痛；ハンセン病痛；ベーチェット病痛；有痛脂肪症；静脈炎痛；ギランバレー症候群痛；痛む脚と動く足趾症候群；Ｈａｇｌｕｎｄ症候群；ファブリー病痛；膀胱及び泌尿生殖器疾患；活発性膀胱；有痛性膀胱症候群；間質性膀胱炎；又は前立腺炎を治療するために使用することもできる。本発明の抗体又はその抗原結合断片は、前立腺癌、乳癌及び頸部癌等の腫瘍細胞の腫瘍細胞増殖又は転移を阻害するためにも使用することができる。
【００６６】
他の実施態様は、以下の詳細な説明の検討から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００６７】
【図１】図１は、Ｎａｖチャネルの図を示す。
【図２】図２は、対照の抗体ＲＥＧＮ６４６、ＲＥＧＮ１０６３（Ｈ４Ｈ４３９Ｐ）、又はＲＥＧＮ１０６４（Ｈ４Ｈ４６８Ｐ）で処理した前後の機械的刺激に対する足圧しきい値（プールされた左及び右の後ろ足の値）を示す。
【図３】図３は、ＲＥＧＮ６４６（対照）、ＲＥＧＮ１０６３（Ｈ４Ｈ４３９Ｐ）、又はＲＥＧＮ１０６４（Ｈ４Ｈ４６８Ｐ）で処理下前後の有害な熱刺激に対する足撤退の潜伏時間（プールされた左及び右の後ろ足の値）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００６８】
本発明の方法記載に入る前に、本発明は、記載される特定の方法及び実験条件に限定されるものではなく、かかる方法及び条件も異なる場合があることは理解されるべきである。また、本明細書で使用する用語は、あくまでも個々の実施形態を説明するためのであり、限定を意図したものではなく、その理由は、本発明の範囲は添付のクレームによってのみ限定されるからである。
【００６９】
特に定義しない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、一般的に、本発明が属する技術分野の当業者によって理解されるのと同じ意味を有する。任意の方法および本明細書に記載のものと類似または同等の材料が本発明の実施または試験において使用され得るが、好ましい方法および材料は以下に記載されている。本明細書で言及される全ての刊行物は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００７０】
定義
本明細書で用いられる場合、「Ｎａv１．７」又は「Ｎａｖ１．７］は、ＥＴＨＡ、ＦＥＢ３Ｂ、ＮＥ−ＮＡ、ｈＮＥ−Ｎａ、Ｎａｖ１．７、ＰＮ１、ＮａＳ、ナトリウムチャンネルタンパク質９型サブユニットアルファ、ナトリウムチャンネルＩＸ型サブユニットアルファ、及び電位開口型ナトリウムチャネルサブユニットアルファＮａｖ１．７等の名称により当該技術分野で公知の電位開口型ナトリウムチャネル（ＶＧＳＣ）のイソ型を意味する。Ｎａv１．７ナトリウムチャネルをコードする遺伝子は、ＳＣＮ９Ａと命名されている。本明細書で用いられる場合、「Ｎａv１．７」、「Ｎａｖ１．７」、「ｈＮａｖ１．７」、又は「ｈＮａｖ１．７」又はその断片という表現は、例えば、ヒト以外の種由来のもの、例えば、「マウスＮａｖ１．７」、「ラットＮａｖ１．７」、又は「サルＮａｖ１．７」であると特に指定しない限り、ヒトＮａｖ１．７タンパク質又はその断片を意味する。更に、本明細書で用いられる場合、「Ｎａv１．７」又は「Ｎａｖ１．７」は、配列番号：６６９（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＤＱ８５７２９２；ＮＭ＿００２９７７．３；Ｘ８２８３５）で示される核酸配列、及び配列番号：６７０（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＢＩ５１９８１；ＮＰ＿００２９６８；ＣＡＡ５８０４２）のアミノ酸配列、又はそれらの生物学的活性断片を有するヒトＮａv１．７を意味する。Ｎａｖv1．７のα−サブユニットは、Ｉ〜ＩＶ（Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤ、又は１、２、３及び４とも呼ばれる）の４個の繰り返しドメインを有しており、それぞれは、Ｓ１〜Ｓ２と標識される６個の膜貫通領域を含んでいる。ドメインＩは配列番号：６７０の残基１〜７２８にわたり、ドメインＩＩは配列番号；６７０の残基７２９〜１１７６にわたり、ドメインＩＩＩは配列番号；６７０の残基１１７７〜１４９４にわたり、ドメインＩＶは配列番号；６７０の残基１４９５〜１９７７にわたる。本明細書で用いられる場合、Ｎａv１．７と結合し、その機能を阻害するＮａv１．７特異的抗体を調製するのに有用であるＮａv１．７の細胞外領域は、「細胞外（ＥＣ）ループ３−１」（ループ３、ドメイン１、「ＥＣ３−１」と命名された。配列番号：６７０の残基番号２６９〜３３８）；「ＥＣループ番号３−２」（ループ３、ドメイン２、「ＥＣ３−２」と命名された。配列番号：６７０の残基番号８７４〜９３２）；「ＥＣループ３−３」（ループ３、ドメイン３、「ＥＣ３−３」と命名された、配列番号：６７０の残基番号１３３３〜１３８２）；又は「ＥＣループ番号３−４」（ループ３、ドメイン４、「ＥＣ３−４」と命名された。配列番号：６７０の残基番号１６５９〜１７２３）を意味する。本明細書で用いられる場合、「パドル領域２−１」は、配列番号：６７０の残基番号２０２〜２３２に延び、本発明において、Ｎａv１．７の機能を阻害するのに有用な抗体の調製にも使用することができる。以下のＧｅｎｂａｎｋ受託番号：ＮＭ  ００２９７７（ヒト）、Ｕ３５２３８（ウサギ）、Ｘ８２８３５（ヒト）、Ｕ７９５６８（ラット）及びＡＦ０００３６８（ラット）を有するＮａv１．７遺伝子に関連する他の種々の配列がある。更に、各細胞外領域及び／又はドメインについての正確なアミノ酸配列は、使用されるデ��タベースエントリーによって変化する場合があり、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔは、本明細書に開示される配列と非常にわずかに異なるＮａv１．７の情報を提供する。これらの核酸配列、それによってコードされるポリペプチド、並びに他の核酸及びポリペプチド配列は、本明細書に含まれる個々の配列と同様、全体として参照により本明細書に組み入れられる。
【００７１】
本明細書で用いられる場合「抗体」という用語は、２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖がジスルフィド結合により相互接続した４つのポリペプチド鎖、並びにそれらの多量体（例えば、ＩｇＭ）又はその抗原結合断片を意味することが意図される。各重鎖は、重鎖可変領域（「ＨＣＶＲ」又は「ＶH」）と重鎖定常領域（ドメインＣH１、ＣH２及びＣH３からなる）とから構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（「ＬＣＶＲ」又は「ＶL」）と軽鎖定量領域（ＣL）とから構成される。ＶH及びＶL領域は、  フレームワーク（ＦＲ）領域と命名された、更に保存された領域が分散している相補性決定領域（ＣＤＲ）と命名された超可変領域に更に分けることができる。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順番：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４に配列した、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成される。本発明の特定の実施態様においては、抗−Ｎａv１．７抗体（又はその抗原結合断片）のＦＲは、ヒトの生殖系列配列と同一であってもよく、又は天然のものであり、又は人工的に修飾されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、２種以上のＣＤＲの比較分析に基づいて定義することができる。
【００７２】
１以上のＣＤＲ残基の置換、又は１以上のＣＤＲの脱落の可能である。結合するために１以上のＣＤＲを省略することができる抗体は科学文献に開示されている。Ｐａｄｌａｎら（１９９５  ＦＡＳＥＢ  Ｊ．９：１３３−１３９）は、公開された結晶構造に基づき、抗体とその抗原との接触領域を分析し、ＣＤＲ残基の約１／５〜１／３のみが実際に抗原と接触していると結論づけた。また、Ｐａｄｌａｎは、１つ又は２つのＣＤＲが抗原と接触するアミノ酸を有していない多くの抗体を発見した（Ｖａｊｄｏｓら、２００２  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３２０：４１５−４２８も参照のこと）。
【００７３】
分子モデリング及び／又は経験により、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲの外側にあるＫａｂａｔ  ＣＤＲの領域から、抗原と接触していないＣＤＲ残基は、以前の研究に基づいて同定することはできない（例えば、残基ＣＤＲＨ２のＨ６０〜Ｈ６５が必要でない場合がある）。ＣＤＲ又は残基が省略されている場合は、通常、他のヒト抗体配列の対応する位置又はそのような配列のコンセンサスを占めるアミノ酸配列のコンセンサスを占めるアミン残で置換されている。置換するＣＤＲ及びアミノ酸も経験的に選択することができる。経験的置換は、保存的又は非保存的置換であってもよい。
【００７４】
本明細書に開示された完全なヒト抗−ｈＮａv１．７抗体は、対応する生殖系列配列と比較し、フレームワーク及び／又は重鎖及び軽鎖可変ドメインのＣＤＲ領域内に、１以上のアミノ酸置換、挿入及び／又は欠失を含んでいてもよい。このような変異は、例えば、本明細書に開示されたアミノ酸配列を公共の抗体配列データベースからの生殖系列配列と比較することにより確認することができる。本発明は、１以上のフレームワーク及び／又はＣＤＲ領域内の１以上のアミノ酸が対応する生殖系列残基又は生殖系列残基の保存アミノ酸置換（天然又は非天然）に復帰突然変異した（このような配列の変化を、本明細書において「生殖細胞系復帰突然変異」と呼ぶ）、本明細書に開示されたアミノ酸配列のいずれかに由来する抗体及びその抗原結合断片を包含する。当業者は、  本明細書に開示された重鎖及び軽鎖可変領域から開始し、１以上の個々の生殖細胞系復帰突然変異又はそれらの組み合わせを含む、多数の抗体及び抗原結合断片を容易に製造することができる。特定の実施態様においては、ＶＨ及び／又はＶＬドメイン内のフレームワーク及び／又はＣＤＲ残基の全ては、生殖細胞系列配列に復帰突然変異される。他の実施態様においては、ある種の残基のみ、例えば、ＦＲ１の最初の８つのアミノ酸内若しくはＦＲ４の最後の８つのアミノ酸内に見出される突然変異残基のみが、生殖細胞系列配列に復帰突然変異され、又は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２若しくはＣＤＲ３内に見出される突然変異残基のみがＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４の全てのフレームワーク内の生殖系復帰突然片に突然変異される。更に、本発明の抗体は、フレームワーク及び／又はＣＤＲ領域内に２つ以上の生殖細胞系列復帰突然変異の任意の組み合わせを含んでもよく、すなわち、その際、ある種の個々の残基は、生殖細胞系列配列に復帰突然変異されるが、生殖細胞系列配列と異なるある種の他の残基は維持される。いったん入手したら、１以上の生殖細胞系列復帰突然変異を含む抗体及び抗原結合性断片は、１以上の所望の性質、例えば改善された結合特異性、増強された結合親和性、改善された又は強化されたアンタゴニスト又はアゴニストの生物学的性質（場合による）、低下された免疫原性等について容易に試験することができる。この一般的な方法で入手した抗体及び抗原結合性断片は、本発明内に包含される。
【００７５】
本明細書で用いられる場合、「ヒト抗体」という用語は、ヒト生殖細胞系列に由来する可変領域及び定常領域を有する抗体を含むことを意図する。本発明のヒトｍＡｂは、例えばＣＤＲ中、特にＣＤＲ３中にヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでランダムな若しくは部位特異的な突然変異誘発によって又は生体内で体細胞突然変異によって導入された突然変異）を含んでいてもよい。しかし、本明細書に用いられる「ヒト抗体」という用語は、別の哺乳動物種（例えば、マウス）の生殖細胞系列から誘導されたＣＤＲ配列がヒトＦＲ配列に融合されたｍＡｂを含まないものとする。本発明の抗−Ｎａv１．７抗体は、「抗−ｈＮａv１．７」又は「抗−ｈＮａv１．７」と命名される。
【００７６】
「特異的に結合する」又は同様の用語は、抗体又はその抗原結合性断片が生理学的状条件下で比較的安定である、抗原との複合体を形成することを意味する。特異的結合は、少なくとも約１×１０-6Ｍ又はそれ未満の平衡解離定数（例えば、ＫDが小さいほど、より緊密な結合を表す）を特徴とすることができる。２つの分子が特異的に結合するかどうかを測定する方法は、当該技術分野で周知であり、例えば、平衡透折、表面プラズモン共鳴及び同様のものが挙げられる。しかし、Ｎａv１．７を特異的に結合する単離抗体は、他の種由来のＮａv１．７分子のような他の抗原に対する交差反応性を示すことがある。それにもかかわらず、更に、ｈＮａv１．７及び１以上の更なる抗原と結合する多重特異的抗体、又はｈＮａv１．７の２種の異なる領域（例えば、ＥＣループ３−１及びＥＣループ３−３）と結合する二重特異的抗体は、ｈＮａv１．７と「特異的に結合する」抗体とみなされる。
【００７７】
本明細書で用いられる場合、特定の標的分子（例えば、特定のＮａv１．７ペプチド）に「結合しない」という用語は、プラズモン共鳴アッセイにおいて２５℃で標的分子に対する結合について試験をした場合に、抗体が５００ｎＭを超えるＫDを示し、又は酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）において２５℃で標的分子に対する結合について試験をした場合に５０ｎＭを超えるＥＣ50を示し、又はいずれかのタイプのアッセイ又はその同等のアッセイにおいて結合を示さないことを意味する。
【００７８】
「高親和性」抗体という用語は、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥＴＭ又は溶液親和性ＥＬＩＳＡで測定してｈＮａv１．７に対し、少なくとも１０-9Ｍ、好ましくは１０-10Ｍ、更に好ましくは１０-11Ｍ、より好ましくは１０-12Ｍの結合親和性を有するｍＡｂｓを意味する。
【００７９】
「スローオフレート（ｓｌｏｗ  ｏｆｆ  ｒａｔｅ）」、「Ｋｏｆｆ」又は「ｋｄ」という用語は、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥで測定して、１×１０-3ｓ-1以下、好ましくは１×１０-4ｓ-1以下の速度定数でｈＮａｖ１．７から解離する抗体を意味する。
【００８０】
本明細書で用いられる場合、抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合断片」のような用語は、抗原と特異的に結合して複合体を形成する、天然の、酵素的に得られた、合成、若しくは遺伝子操作されたポリペプチド糖タンパク質を含む。本明細書で用いられる場合、抗体の「抗原結合部分」又は「抗体断片」という用語は、ｈＮａv１．７と特異的に結合する能力を保持する１以上の抗体の断片を意味する。
【００８１】
本発明の特定の実施態様の抗体又は抗体断片は、オピオイド、ＣＯＸ−２阻害剤、局所麻酔剤、ＩＬ−１又はＩＬ−６阻害剤等のサイトカインアンタゴニスト、第２のＮａv１．７阻害剤、ＮＭＤＡモジュレータ、カンナビノイド受容体アゴニスト、Ｐ２Ｘファミリーモジュレータ、ＶＲ１アンタゴニスト、サブスタンスＰアンタゴニスト、化学療法剤、又は放射性同位体のような治療部分と結合させてもよい（免疫複合体）。
【００８２】
本明細書で用いられる場合、「単離抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体（Ａｂｓ）を実質的に含んでいない（例えば、ｈＮａv１．７と特異的に結合する単離抗体は、ｈＮａv１．７以外の抗原と特異的に結合するＡｂｓを実質的に含んでいない）ことを意味することを意図する。
【００８３】
本明細書で用いられる場合、「中和抗体」（又は「Ｎａv１．７活性を中和する抗体）は、ｈＮａv１．７に対するその結合がＮａv１．７の少なくとも１つの生物活性の阻害をもたらす抗体を意味することを意図する。Ｎａv１．７の生物活性のこの阻害は、当該技術分野で公知の幾つかの１以上の標準的インビトロ又はインビボ分析で、Ｎａv１．７生物活性の１以上の指標を測定するにより評価することができる（下記実施例を参照）。
【００８４】
本明細書で用いられる場合、「表面プラズモン共鳴」という用語は、例えばＢＩＡＣＯＲＥシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ  ａｎｄ  Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を用いて、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度変化の検出により、リアルタイム生体特異的相互作用の解析を可能にする光学現象を意味する。
【００８５】
本明細書で用いられる場合、「ＫD」という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の平衡解離定数を意味することを意図する。
【００８６】
「エピトープ」という用語は、パラトープとして知られる抗体分子の可変領域内の抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を意味する。単一の抗原は１以上のエピトープを有している。したがって、異なる抗体は、抗原の異なる領域と結合し、異なる生物学的効果を有している可能性がある。また、「エピトープ」という用語は、Ｂ及び／又はＴ細胞が応答する抗原上の部位を意味する。また、抗体によって結合する抗原の領域を意味する。エピトープは構造又は機能として定義される。機能エピトープは、一般的に構造エピトープのサブセットであり、相互作用の親和性に直接寄与するそれらの残基を有する。エピトープは、立体配座性でもあり、すなわち非線形アミノ酸から構成されてもよい。特定の実施態様においては、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、又はスルホニル基などの分子の化学的活性表面グルーピングである決定因子を含んでもよく、そして特定の実施態様では、特異的３次元構造特性、及び／又は特異的電荷特性を有してもよい。
【００８７】
核酸又はその断片に言及する場合の、「実質的同一性」又は「実質的に同一の」という用語は、他の核酸（又はその相補鎖）と適切なヌクレオチド挿入又は欠失を有して最適に整列した場合に、下記で検討するＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ又はＧＡＰなど配列同一性のいずれか周知のアルゴリズムによって測定して、少なくとも約９０％、より好ましくは少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のヌクレオチド塩基においてヌクレオチド配列同一性があることを意味する。特定の例においては、基準核酸分子と実質的に同一性を有する核酸分子は、基準核酸分子によりコードされるのと同一又は実質的に類似のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする。
【００８８】
ポリペプチドに適用した場合に、「実質的類似性」又は「実質的に類似の」という用語は、デフォルトギャップ重量を用いてＧＡＰ又はＢＥＳＴＦＩＴプログラム等により最適整列した場合に、２つのペプチド配列が、少なくとも９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％、９８％又は９９％の配列同一性を共有することを意味する。好ましくは、同一ではない残基位置は保存アミノ酸置換によって異なる。「保存アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が類似の化学特性（例えば、電荷又は疎水性）を有する側鎖（Ｒ基）を有する他のアミノ酸残基によって置換されたものである。一般に、保存アミノ酸置換は、タンパク質の機能特性を実質的に変えない。２つ以上のアミノ酸配列が保存的置換により互いに異なるという場合に、類似性の割合及び程度は、置換の保存的性質を修正するために上方へ調整してもよい。この調整を行なう手段は当業者に周知である。例えば、本明細書に参照として組み入れられるＰｅａｒｓｏｎ（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７−３３１を参照のこと。類似の化学特性を有する側鎖を有するアミノ酸群の例としては、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシン；２）脂肪族ヒドロキシル側鎖：セリン及びスレオニン；３）アミド含有側鎖：アスパラギン及びグルタミン；４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファン；５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、及びヒスチジン；６）酸性側鎖；アスパラギン酸及びグルタミン酸、並びに７）含硫黄側鎖：システイン及びメチオニンが挙げられる。好ましい保存アミノ酸置換群は：バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸、及びアスパラギン−グルタミンである。また、保存的置換は、Ｇｏｎｎｅｔら（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１４４３  ４５に開示されているＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて、正の値を有するあらゆる変化である。「緩やかな保存」置換は、ＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて負ではない値を有するあらゆる変化である。
【００８９】
ポリペプチドの配列類似性は、一般に配列解析ソフトウェアを使用して測定する。タンパク質分析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含め、種々の置換、欠失及び他の改変に割り当てられている類似性測定値を使用して類似配列を照合する。例えば、ＧＣＧソフトウェアには、ＧＡＰ及びＢＥＳＴＦＩＴなどのプログラムが含有されており、これらをデフォルトのパラメータで使用して、異なる生物種からの相同ポリペプチドなど密接に関連するポリペプチド間で、又は野生型タンパク質とその変異タンパク質との間で、配列相同性又は配列同一性を決定することができる。例えば、ＧＣＧバージョン６．１を参照のこと。ポリペプチド配列は、ＧＣＧバージョン６．１付属プログラムであるＦＡＳＴＡを使用してデフォルト又は推奨パラメータを用いて比較することもできる。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２及びＦＡＳＴＡ３）により、クエリー及び検索配列間で最良重複領域のアラインメント及び配列同一性のパーセントが得られる（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００）、前出）。本発明の配列を異なる生物の多数の配列を含むデータベースと比較する場合に好ましい別のアルゴリズムは、デフォルトのパラメータを用いる、コンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特にＢＬＡＳＴＰ又はＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、それぞれ、参照として本明細書に組み入れられるＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３４１０及び（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９  ４０２を参照のこと。
【００９０】
特定の実施態様においては、本発明の方法に使用するための抗体又は抗体断片は、単一特異性、二重特異性、又は多重特異性であってもよい。多重特異性抗体は１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに対して特異的であってもよく、又は１つの標的ポリペプチドより大きいエピトープに特異的な抗原結合ドメインを含んでいてもよい。本発明との関連で使用することができる典型的な二重特異体型は、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）ＣＨ３ドメイン及び第２のＩｇＣH３ドメインの使用であって、第１及び第２のＩｇＣH３ドメインが少なくとも１つのアミノ酸で互いに異なり、少なくとも１つのアミノ酸の差異が、アミノ酸の差異を欠いている二重特異体と比べて、プロテインＡに対する二重特性抗体の結合を減少させる、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）ＣH３ドメイン及び第２のＩｇＣH３ドメインの使用を包含する。一実施態様においては、第１のＩｇＣH３ドメインはプロテインＡを結合し、第２のＩｇＣH３ドメインはＨ９５Ｒ修飾（ＩＭＧＴエキソンナンバリングによる；ＥＵナンバリングによるＨ４３５Ｒ）糖のプロテインＡ結合を減少又は停止させる突然変異を含む。第２のＣH３はＹ９６Ｆ修飾（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＹ４３６Ｆ）を更に含む。第２のＣH３内に認められる可能性のある更なる修飾としては：ＩｇＧ１ｍＡｂｓの場合におけるＤ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、及びＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、及びＶ４２２Ｉ）；ＩｇＧ２ｍＡｂｓの場合におけるＮ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、及びＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴ；ＥＵによるＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、及びＶ４２２Ｉ）；及びＩｇＧ４ｍＡｂｓの場合におけるＱ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、及びＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＱ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、及びＶ４２２Ｉ）が挙げられる。上記の二重特異体型の変異は、本発明の範囲内であると考えられる。
【００９１】
「治療的有効量」という語句は、それが投与されて所望の効果をもたらす量を意味する。正確な量は治療の目的に依存し、公知技術（例えば、Ｌｌｏｙｄ（１９９９）Ｔｈｅ  Ａｒｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇを参照）を用いて当業者により確認することが可能である。
【００９２】
一般的記載
電位開口型ナトリウムチャネル（ＶＧＳＣ）は、典型的には、種々のサブユニットの複合体であり、原則として１つは孔形成サブユニットであるアルファ−サブユニットである。アルファ−サブユニットのみで全ての既知のナトリウムチャネル機能に十分である。しかし、特定のナトリウムチャネルにおいては、大きいアルファ−サブユニットと結合していることが知られており、アルファサブユニットの機能のいくつかを修飾すると考えられているベータ−サブユニットと呼ばれる小さい、補助的なサブユニットがある（Ｋｒａｎｅｒら（１９８５）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２６０：６３４１−６３４７；Ｔａｎａｋａら（１９８３）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２５８：７５１９−７５２６；Ｈａｒｔｓｈｏｒｎｅら（１９８４）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２５９：１６６７−１６７５；Ｃａｔｔｅｒａｌｌ（１９９２）Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｖ  ７２：Ｓ１４−Ｓ４８；Ａｎｄｅｒｓｏｎら（１９９２）Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｖ  ７２：Ｓ８９−Ｓ１５８を参照のこと）。ナトリウムチャネルの総説は、Ｃａｔｔｅｒａｌｌ，（１９９５）Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ６４：４９３−５３１）に示されている。
【００９３】
ナトリウムチャネルのアルファ−サブユニットは、細胞内ループによって連結した４個の相同的繰り返しドメイン（Ｉ〜ＩＶと命名）を含む、大きな糖タンパク質であり（Ａｌｂｅｒｔｓら編、”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ”５３４−５３５，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９４））、各ドメインは６個の膜貫通領域を含んでいる（Ｓ１〜Ｓ６と命名）。セグメント５（Ｓ５）及びセグメント６（Ｓ６）の間に細孔ループがある。セグメント４（Ｓ４）は、電圧「センサー」／リガンド結合ドメインである。「パドル領域」は、セグメントＳ３ｂとＳ４との間にある。細胞外ループは、セグメント１（Ｓ１）をセグメント２（Ｓ２）に、セグメント３（Ｓ３）をセグメント４（Ｓ４）に、Ｓ５をＳ６に連結している。細胞内ループは、Ｓ２をＳ３に、Ｓ４をＳ５（Ｓ５）に連結している（Ａｇｎｅｗら（１９７８）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７５：２６０６−２６１０；Ａｇｎｅｗら（１９８０）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍ  ９２：８６０−８６６；Ｃａｔｔｅｒａｌｌ，（１９８６）Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ５５：９５３−９８５；Ｃａｔｔｅｒａｌｌ，（１９９２）Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｖ  ７２：Ｓ１４−Ｓ４８を参照のこと）。
【００９４】
Ｎａv１．７  ＶＧＳＣは、テトロドトキシン（ＴＴＸ）による遮断に感受性があり、好ましくは末梢交感神経及び感覚ニューロンに発現している。Ｎａv１．７をコードするＳＣＮ９Ａ遺伝子は、ヒト、ラット及びウサギを含む多くの種からクローニングされ、ヒト及びラットの遺伝子間で９０％アミノ酸同一性を示す（Ｔｏｌｅｄｏ−Ａｒａｌら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９４（４）：１５２７−１５３２（１９９７））。ｈＮａv１．７の構造及び機能発現は、Ｋｌｕｇｂａｕｅｒら（Ｋｌｕｇｂａｕｅｒ，Ｎ．ら（１９９５）Ｔｈｅ  ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ  １４  （６）：１０８４−１０９０）に開示されている。
【００９５】
本発明の特定の実施態様においては、Ｎａv１．７の１以上の任意のドメイン（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ又はＩＶ、ドメイン１、２、３及び４とも呼ばれる）、又はＮａv１．７のドメインのいずれかの１以上の任意の細胞外ループ（又はその断片）は、Ｎａv１．７と結合し、その機能を阻害する抗体を調製するために使用することができる。ヒトＮａv１．７の完全長アミノ酸配列を配列番号：６７０に示す。ドメインＩは配列番号：６７０の残基１〜７２８にわたり、ドメインＩＩは配列番号：６７０の残基７２９〜１１７６にわたり、ドメインＩＩＩは配列番号：６７０の残基１１７７〜１４９４にわたり、ドメインＩＶは配列番号：６７０の残基１４９５〜１９７７にわたる。一実施態様においては、Ｎａv１．７と結合し、その機能を阻害するＮａv１．７特異的抗体を調製するのに有用であるＮａv１．７の細胞外領域は、「細胞外（ＥＣ）ループ３−１」（ループ３、ドメイン１、「ＥＣ３−１」と命名された。配列番号：６７０の残基番号２６９〜３３８）；又は「ＥＣループ３−３」（ループ３、ドメイン３、「ＥＣ３−３」と命名された、配列番号：６７０の残基番号１３３３〜１３８２）；又は「パドル領域２−１」（配列番号：６７０の残基番号２０２〜２３２）に言及される領域が含まれる。特定の実施態様においては、Ｎａv１．７に対する阻害抗体を調製するのに使用される興味のある領域は、「ＥＣループ番号３−２」（ループ３、ドメイン２、「ＥＣ３−２」と命名された。配列番号：６７０の残基番号８７４〜９３２）及び「ＥＣループ番号３−４」（ループ３、ドメイン４、「ＥＣ３−４」と命名された。配列番号：６７０の残基番号１６５９〜１７２３）から選択することができる。特定の実施態様においては、Ｎａv１．７と特異的に結合する抗体は、上記ループ又はパドル領域の断片、又は本明細書に開示された領域のＮ若しくはＣ末端のいずれか若しくは両方から約１０〜約５０個のアミノ酸残基により指定された領域を超えて延びるペプチド、例えば、配列番号：６７０内に含まれるパドル領域の約２０２〜２１５の残基番号；配列番号：６７０内に含まれるパドル領域のおよそ２０６〜２１１の残基番号；配列番号：６７０内に含まれるＥＣループ３−１のおよそ２６９〜３１０の残基番号；配列番号：６７０内に含まれるＥＣループ３−１のおよそ２６９〜３２６の残基番号；配列番号：６７０内に含まれるＥＣループ３−１のおよそ２７２〜３１０の残基番号；配列番号：６７０内に含まれるＥＣループ３−１のおよそ２７２〜３７８の残基番号；配列番号：６７０内に含まれるＥＣループ３−３のおよそ１３３３〜１３７５の残基番号；配列番号：６７０内に含まれるＥＣループ３−３のおよそ１３４１〜１４１９の残基番号を使用して製造することができる。特定の実施態様においては、上記領域又はその断片が、Ｎａv１．７特異的抗体を調製するために使用される。上述したように、Ｎａv１．７のＥＣループ又はパドル領域を含むアミノ酸残基の長さ又は数は、抗−ｈＮａv１．７特異的抗体を調製するための完全長ＥＣループ若しくはパドル領域、又はその断片のＮ末端若しくはＣ末端のいずれか若しくは両方から延びる約１０〜５０個のアミノ酸残基で変化し得る。例えば、パドル領域２−１を含むアミノ酸残基の数は、配列番号：６７０等で本明細書に開示された領域のＮ若しくはＣ末端のいずれか若しくは両方から約２０アミノ酸残基に及び得る。更に、ＥＣループ３−１を含むアミノ酸残基の数は、配列番号：６７９等で本明細書に開示された領域のＮ若しくはＣ末端のいずれか若しくは両方から約４０アミノ酸残基の範囲となり得る。更に、ＥＣループ３−３を含むアミノ酸残基の数は、配列番号：７２５等で本明細書に開示された領域のＮ若しくはＣ末端のいずれか若しくは両方から約５０アミノ酸残基の範囲となり得る。特定の実施態様においては、Ｎａv１．７のいずれか１以上の上記領域又はその断片は、単一特異的、二重特異的、又は多重特異的抗体を調製するのに使用することができる。
【００９６】
抗体の抗原結合断片
本明細書で用いられる場合特に指摘しない限り、「抗体」という用語は、２本の免疫グロブリン重鎖及び２本の免疫グロブリン軽鎖（すなわち、完全な抗体分子）、及びその抗原結合断片を包含すると理解される。本明細書で用いられる場合、抗体の「抗原結合部分」、抗体の抗原結合断片」という用語には、天然の、抗原と特異的に結合して複合体を形成する、酵素的に得られた、合成、又は遺伝子操作されたポリペプチド又は糖タンパク質が含まれる。本明細書で用いられる場合、抗体の「抗原結合部分」又は「抗体断片」という用語は、ｈＮａv１．７と特異的に結合する能力を維持する抗体の１以上の断片を意味する。抗体断片としては、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）2断片、Ｆｖ断片、ｄＡｂ断片、ＣＤＲを含む断片、又は単離ＣＤＲが挙げられる。抗体の抗原結合断片は、例えば、適切な標準的技術、例えば、タンパク質分解、又は抗体の可変及び（任意に）定常ドメインをコードするＤＮＡの操作及び発現を含む組換え遺伝子操作技術を使用し、完全抗体分子から得ることができる。このようなＤＮＡは公知であり、例えば、商業的供給源、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ−抗体ライブラリー）から容易に得ることができ、又は合成することができる。ＤＮＡは、１以上の可変及び／又は定常ドメインを適切な立体配置に配置するために、又はコドンを導入し、システイン残基を作成し、アミノ酸などを修飾し、加え又は削除するために、配列決定されそして化学的に又は分子生物学技術を用いることによって操作され得る。
【００９７】
抗原結合断片の非限定的例としては：（ｉ）Ｆａｂ断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）2断片；（ｉｉｉ）Ｆｄ断片；（ｉｖ）Ｆｖ断片；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂ断片；及び（ｖｉｉ）抗体の超可変領域（例えば、単離相補性決定領域（ＣＤＲ））が挙げられる。本明細書で用いられる場合、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体及びミニボディ等の他の遺伝子操作された分子も、「抗原結合断片」という表現に包含される。
【００９８】
抗体の抗原結合断片は、通常、少なくとも１つの可変ドメインを含む。可変ドメインはいずれのサイズ及びアミノ酸組成物であってもよく、一般的に、１以上のフレームワーク配列を備えたフレームに隣接して又はその中にある少なくとも１つのＣＤＲを含む。ＶLドメインと関連するＶHドメインを有する抗原結合断片において、ＶH及びＶLドメインは、互いに対していずれの適切な配列にも位置し得る。例えば、可変領域は二量体であり、ＶH−ＶH、ＶH−ＶL又はＶL−ＶL二量体を含有し得る。または、抗体の抗原結合断片は、単量体のＶH及びＶLドメインを含有し得る。
【００９９】
ある実施態様においては、抗体の抗原結合断片は、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合した少なくとも１つの可変ドメインを含有し得る。本発明の抗体の抗原結合断片内に見出され得る、可変及び定常ドメインの限定されない、例示的立体配置としては：（ｉ）ＶH−ＣH１；（ｉｉ）ＶH−ＣH２；（ｉｉｉ）ＶH−ＣH３；（ｉｖ）ＶH−ＣH１−ＣH２；（ｖ）ＶH−ＣH１−ＣH２−ＣH３；（ｖｉ）ＶH−ＣH２−ＣH３；（ｖｉｉ）ＶH−ＣL；（ｖｉｉｉ）ＶL−ＣH１；（ｉｘ）ＶL−ＣH２；（ｘ）ＶL−ＣH３；（ｘｉ）ＶL−ＣH１−ＣH２；（ｘｉｉ）ＶL−ＣH１−ＣH２−ＣH３；（ｘｉｉｉ）ＶL−ＣH２−ＣH３；及び（ｘｉｖ）ＶL−ＣL：が挙げられる。上記に記載した例示的立体配置のいずれをも含む、可変及び定常ドメインのいずれの立体配置においても、可変及び定常ドメインは、互いに直接連結され得るか又は完全若しくは部分ヒンジ若しくはリンカー領域によって連結され得る。ヒンジ領域は、単一ポリペプチド分子中の隣接可変及び／又は定常ドメイン間の可撓性又は半可撓性連結をもたらす、少なくとも２つの（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０又はそれ以上）アミノ酸から成り得る。更に、本発明の抗体の抗原結合断片は、お互いと及び／又は１以上の単量体ＶＨ又はＶＬドメインと非共有結合に関係して（例えば、１つ又は複数のジスルフィド結合）、上記に掲載された可変及び定常ドメイン立体配置のいずれかのホモ二量体又はヘテロ二量体（又は他の多量体）を含んでいてもよい。
【０１００】
完全抗体分子と同様に、抗原結合断片は、単一特異性又は多重特異性（例えば、二重特異性）であってもよい。抗体の多重特異性抗原結合断片は通常、少なくとも２つの異なる可変ドメインを含んでいてもよく、メインは別々の抗原に又は同じ抗原上の異なるエピトープに特異的に結合することができる。本明細書に開示の例示的な二重特異性抗体フォーマットを含む、いずれの多重特異性抗体フォーマットも、当技術分野で利用できるルーチン技術を用いて本発明の抗体の抗原結合断片との関連で用いるのに適合し得る。
【０１０１】
ヒト抗体の調製
形質転換マウス中でヒト抗体を生成する方法は当該技術分野において公知である。本発明の文脈では、任意のこのような知られている方法を用いて、ヒトＮａv１．７に特異的に結合するヒト抗体を作製することができる。
【０１０２】
ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（商標）技術又はモノクローナル抗体を生成するための他のなんらかの知られている方法を用いて、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有する、Ｎａv１．７に対する高親和性キメラ抗体を最初に単離する。以下の実験の項におけるように、親和性、選択性、エピトープ等を含む望ましい特徴について抗体を特徴づけし、選択する。マウス定常領域を所望のヒト定常領域と置換して本発明の完全ヒト抗体、例えば、野生型又は修飾されたＩｇＧ１又はＩｇＧ４を生成する。選択する定常領域は特定の使用に応じて変化してもよいが、高親和性の抗原結合性及びターゲット特異性の特徴は可変領域に存在する。
【０１０３】
一般に、本発明の抗体は、極めて高い親和性を保有し、典型的に、固相上に固定化されているかまたは溶液相中にある抗原に対する結合によって測定した場合に約１０-12〜約１０-9ＭのＫDを有する。マウス定常領域を、所望のヒト定常領域で置換して、本発明の完全ヒト抗体を作製する。選択した定常領域は特定の使用に応じて変化し得るが、高親和性抗原結合特性および標的特異性は可変領域内に残る。
【０１０４】
生物学的同等性
本発明の抗−Ｎａv１．７抗体及び抗体断片は、記載される抗体のアミノ酸配列とは異なるが、Ｎａv１．７に結合する能力を保持するアミノ酸配列を有するタンパク質を包含する。このような変異体の抗体および抗体断片は、親配列と比較して１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換を含むが、記載される抗体と本質的に同等な生物学的活性を示す。同様に、本発明の抗体をコードするＤＮＡ配列も、開示された配列と比較した場合、１つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、または置換を含むが、本発明の抗−Ｎａv１．７抗体又は抗体断片と生物学的に本質的に同等な抗−Ｎａv１．７抗体又は抗体断片をコードする配列を包含する。
【０１０５】
２つの抗原結合タンパク質又は抗体は、例えば、単回投与であれ、複数回投与であれ、類似の実験条件下において同じモル用量で投与した場合、それらの吸収速度及び吸収度が有意差を示さない薬学的同等物または薬学的代替物であれば、生物学的に同等であると考えられる。一部の抗体は、それらの吸収度は同等であるが、それらの吸収速度が同等でなくとも、このような吸収速度の差異が意図的なものであり、表示において反映され、例えば、長期使用における有効な体内薬物濃度の達成には本質的でなく、特定の被験薬生成物にとって医学的に重要ではないと考えられるために生物学的に同等であると考えられれば、同等物又は薬学的代替物と考えられる。
【０１０６】
一実施態様においては、２つの抗原結合タンパク質は、それらの安全性、純度、及び効力において臨床的に有意味な差異が認められなければ生物学的に同等である。
【０１０７】
一実施態様においては、２つの抗原結合タンパク質は、患者を、基準生成物と生物学的生成物との間で１回以上にわたり切り換え、このような切換えを伴わない連続療法と比較して臨床的に重要な免疫原性の変化又は有効性の減殺を含む、有害作用の危険性の予測される増大を伴わずにおくことが可能であれば、生物学的に同等である。
【０１０８】
一実施形態では、２つの抗原結合タンパク質は、それらの両方が、１以上の使用条件に対して、１以上の共通の作用機構を介して作用するなら、このような機構が知られている限りにおいて、生物学的に同等である。
【０１０９】
生物学的同等性は、インビボ及び／又はインビトロの方法によって実証することができる。生物学的同等性の測定には、例えば、（ａ）抗体又はその代謝物の濃度を、血液、血漿、血清、又は他の体液において時間の関数として測定する、ヒト又は他の哺乳動物におけるインビボ試験；（ｂ）インビボにおけるヒトのバイオアベイラビリティーデータと相関し、これを妥当な程度で予測するインビトロ試験；（ｃ）抗体の適切な急性の薬理学的効果（又はその標的）を時間の関数として測定する、ヒト又は他の哺乳動物におけるインビボ試験；及び（ｄ）抗体の安全性、有効性、又はバイオアベイラビリティー若しくは生物学的同等性を確立する、十分に制御された臨床試験が含まれる。
【０１１０】
本発明の抗−Ｎａv１．７抗体の生物学的に同等な変異体は、例えば、残基又は配列の様々な置換を施すことによって構築することもでき、生物学的活性に必要でない末端又は内部の残基又は配列を欠失させることによって構築することもできる。例えば、生物学的活性に本質的でないシステイン残基を欠失させるか、又は他のアミノ酸で置換して、復元した際の、不必要であるか又はは不適正な分子内ジスルフィド架橋の形成を防止することができる。他の文脈では、生物学的に同等な抗体は、この抗体のグリコシル化特性を修飾するアミノ酸変化、例えば、グリコシル化を消失させるかまたは除去する突然変異を含む抗−Ｎａv１．７抗体の変異体を包含し得る。
【０１１１】
抗体の生物学的特徴
一般に、本発明の抗体は、Ｎａv１．７のドメイン（Ｉ、ＩＩ、ＩＩ、ＩＶ）の任意の１以上に結合することによって機能し得る。特定の実施態様においては、本発明の抗体は、ｈＮａv１．７のいずれかのドメイン内に見いだされる細胞外（ＥＣ）ループの少なくとも１つに位置するエピトープに結合し得る。特定の実施態様においては、本発明の抗体は、ドメインＩ、及び／又はドメインＩＩＩのいずれか若しくは両方のＥＣループ３に結合することにより、Ｎａv１．７の活性を遮断若しくは阻害することによって機能し得る。また、あるいは更に、本発明の抗体は、配列番号６７０のおよそ２０２〜２３２の残基間に位置するＮａv１．７のパドル領域に結合し得る。特定の実施態様においては、本発明の抗体は二重特異性抗体であってもよい。本発明の二重特異性抗体は、ＥＣループ３−１内の１つのエピトープと結合することができ、またＥＣループ３−１以外のｈＮａv１．７の領域内の１つのエピトープとも結合することができる。特定の実施態様においては、本発明の二重特異性抗体は、ＥＣループ３−１の内の１つのエピトープと結合することができ、ＥＣループ３−３内の１つのエピトープ、又はｈＮａv１．７のドメインＩ、ＩＩ、ＩＩＩ又はＩＶ内のパドル領域若しくは他の任意のドメインと結合することができる。特定の実施態様においては、本発明の二重特異性抗体は、同じＥＣループ内の２種の領域と結合し得る。
【０１１２】
具体的には、本発明の抗−Ｎａv１．７抗体は、以下の特徴の１以上を示す：（１）ヒトＮａv１．７又はその断片と、非ヒト（例えば、マウス、サル、ラット、ウサギ、イヌ、ブタ等）のＮａv１．７又はその断片との結合能力；（２）ヒトＮａv１．７又はその断片と結合するが、非ヒト（例えば、マウス、サル、ラット、ウサギ、イヌ、ブタ等）のＮａv１．７又はその断片とは結合しない能力；（３）ヒトＮａv１．７又はその断片と、非ヒト霊長類（例えば、サル）のＮａv１．７又はＮａv１．７断片と結合するが、マウス、ラット、ウサギ、イヌ又はブタのＮａv１．７又はＮａv１．７断片とは結合しない能力；（４）ヒトＮａv１．７又はその断片、非ヒト霊長類（例えば、サル）のＮａv１．７又はその断片、及びマウスのＮａv１．７又はその断片と結合するが、ラットのＮａv１．７とは結合しない能力；（５）ヒトＮａv１．７又はその断片、非ヒト霊長類（例えば、サル）のＮａv１．７又はその断片、及びラットのＮａv１．７又はその断片と結合するが、マウスのＮａv１．７とは結合しない能力；（６）他の電位開口型ナトリウムチャネル、又はナトリウムチャネルの他の任意のイソ型（例えば、Ｎａv１．１、Ｎａv１．２、Ｎａv１．３、Ｎａv１．４、Ｎａv１．５、Ｎａv１．６、Ｎａv１．８又はＮａv１．９）と結合するか若しくはしないか、又は、交差反応性を有するか若しくは有しない；又は（７）例えば、パッチクランプ法を使用する、当業者に公知の任意の標準的技術により示されるような、Ｎａv１．７を含む細胞内のイオン束を阻害し、それによって膜貫通形脱分極を阻害する能力。
【０１１３】
本発明の特定の抗−Ｎａv１．７抗体は、インビトロアッセイにおいて、Ｎａv１．７の活性を阻害又は減弱さることができる。ナトリウムチャネル活性と結合し、阻害するという本発明の抗体の能力は、電気生理的方法（例えば、パッチクランプアッセイ）、結合アッセイ、放射性フラックスアッセイ、膜電位感受性蛍光色素、及び蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）に基づく電圧検出端子を含む、当業者に公知の任意の標準的方法を用いて測定することができる。Ｎａv１．７活性を測定するための非限定的な励磁機インビトロアッセイを、本明細書の実施例６及び７に示す。この実施例においては、ｈＮａv１．７を発現する細胞を、Ｉｏｎ  Ｗｏｒｋ  Ｑｕａｔｔｒｏアッセイのようなアッセイを使用するイオンフラックスを阻害するＮａv１．７抗体の能力を評価するために使用し、又はｈＮａv１．７が安定に形質転換された細胞内のＮａv１．７チャネルからのイオンフラックスを阻害する抗−Ｎａv１．７抗体の能力を検出するためのポート−パッチシステムを使用し、イオンフラックスを阻害するＮａv１．７抗体の能力を評価する。
【０１１４】
本発明は、以下のペプチド又はその断片の１以上と結合する、抗−Ｎａv１．７抗体及びその抗原結合断片を含む：配列番号：６７０の残基番号１〜７２８（Ｎａv１．７アルファサブユニットのドメインＩ）；配列番号：６７０の残基７２９〜１１７６（Ｎａv１．７アルファサブユニットのドメインＩＩ）；配列番号：６７０の残基１１７７〜１４９４（Ｎａv１．７アルファサブユニットのドメイン３）；配列番号：６７０の残基１４９５〜１９７７（Ｎａv１．７アルファサブユニットのドメインＩＶ）；配列番号：６７７又は７２５（ｈＮａv１．７，ＥＣ３−３）；配列番号：６７６又は６７８（ｈＮａv１．７，ＥＣ３−１）；配列番号：６７５又は６７９（ｈＮａｖ１．７パドル領域２−１）。本明細書に開示されるあらゆるＮａv１．７ペプチド又はその断片は、抗−Ｎａv１．７抗体を生成するために使用することができる。更に、抗体の調製を考慮するための多のアミノ酸配列としては、抗体を生成するためにヒトＦｃと結合した、全てが、ｈＮａv１．７のＥＣループ又はパドル領域と結合したＲｏｒ１シグナル配列（配列番号：６７１、６７２、６７３及び６７４の最初の２９個のアミノ酸）を含む、配列番号：６７１、６７２、６７３及び／又は６７４が挙げられる。ペプチドは、タグ付けのための特定の残基、又はＫＬＨ等の担体分子へのコンジュゲーションを目的とする特定の残基の付加又は置換を包含するように修飾することができる。例えば、ペプチドのＮ末端又はＣ末端にシステインを付加することもでき、リンカー配列を付加して、例えば、免疫感作のためにＫＬＨへとコンジュゲートされるペプチドを調製することもできる。
【０１１５】
Ｎａv１．７に対して特異的な抗体は、さらなる標識又は部分を含有しない場合もあり、Ｎ末端又はＣ末端の標識または部分を含有する場合もある。一実施態様においては、標識又は部分はビオチンである。結合アッセイでは、標識（存在する場合）の配置によって、ペプチドが結合する表面に対するペプチドの方向が決定され得る。例えば、表面をアビジンでコーティングする場合は、Ｎ末端にビオチンを含有するペプチドを、ペプチドのＣ末端部分が表面に対して遠位となるように方向付ける。
【０１１６】
一実施態様においては、本発明は、ｈＮａv１．７と特異的に結合し、ｈＮａv１．７を中和する完全ヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって、以下の特徴の１以上を示す完全ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を提供する：（ｉ）配列番号：１８、２２、４６、５０、６６、７０、８２、８６、９０、９４、１０２、６８９、６９３及び７０５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含み；（ｉｉ）配列番号：２０、２４、４８、５２、６８、７２、８４、８８、９２、９６、１０４、６９１、６９５及び７０７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含み；（ｉｉｉ）表２に示す、任意の１以上の重鎖又は軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、及びそれらの組み合わせを含み；（ｉｖ）他のナトリウムチャネルに影響を及ぼさずに、Ｎａv１．７の活性を特異的に遮断し；（ｖ）例えば、配列番号：６７０のおよそ２６９〜３３８の残基、又は、配列番号：６７０の残基１３３３〜１３８２のアミノ酸残基を含む、ＥＣ３−１又はＥＣ３−３を含む、Ｎａv１．７の１以上の任意の細胞外ループに特異的な結合を示し；（ｖｉ）配列番号：６７０のおよそ２０２〜２３２の残基のアミノ酸残基を含む、Ｎａv１．７のパドル領域に対して特異的な結合を示し；（ｖｉｉ）ヒト、サル、マウス又はラットのＮａv１．７の任意の１以上と結合し、当業者に公知の任意の標準法、例えば、パッチクランプ法により示されるように、Ｎａv１．７含有細胞においてイオン束を阻害し、それにより膜貫通型脱分極を阻害する。
【０１１７】
Ｆｃ改変体を含む抗−Ｎａｖ１．７抗体
本発明のある実施形態によれば、ＦｃＲｎ受容体への抗体の結合性を、例えば、中性ｐＨに比して酸性ｐＨで高める又は減退させる、１つ以上の変異を含むＦｃドメインを含む、抗Ｎａv１．７抗体を提供する。例えば、本発明は、ＦｃドメインのＣH２又はＣH３領域における変異を含む抗Ｎａv１．７抗体を含み、これにおいて、変異（複数可）により酸性環境（例えば、ｐＨ範囲約５．５〜約６．０のエンドソームで）におけるＦｃドメインのＦｃＲｎに対する親和性が高まる。こうした変異により、動物に投与した場合、抗体の血清中半減期が長くなり得る。このようなＦｃ改変の非限定的な実施例には、例えば、２５０位（例えば、Ｅ又はＱ）；２５０及び４２８位（例えば、Ｌ又はＦ）；２５２位（例えば、Ｌ／Ｙ／Ｆ／Ｗ又はＴ）、２５４位（例えば、Ｓ又はＴ）、並びに２５６位（例えば、Ｓ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／Ｄ又はＴ）での改変；又は４２８位及び／又は４３３位（例えば、Ｈ／Ｌ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／Ｑ又はＫ）及び／又は４３４位（例えば、Ａ、Ｗ、Ｈ、Ｆ又はＹ［Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｗ、Ｎ４３４Ｈ、Ｎ４３４Ｆ又はＮ４３４Ｙ］）での改変；又は２５０及び／又は４２８位での改変；又は３０７もしくは３０８位（例えば、３０８Ｆ、Ｖ３０８Ｆ）、及び４３４位での改変が含まれる。ある実施形態では、改変には、４２８Ｌ（例えば、Ｍ４２８Ｌ）及び４３４Ｓ（例えば、Ｎ４３４Ｓ）の改変；４２８Ｌ、２５９Ｉ（例えば、Ｖ２５９Ｉ）、及び３０８Ｆ（例えば、Ｖ３０８Ｆ）の改変；４３３Ｋ（例えば、Ｈ４３３Ｋ）及び４３４（例えば、４３４Ｙ）の改変；２５２、２５４、及び２５６（例えば、２５２Ｙ、２５４Ｔ、及び２５６Ｅ）の改変；２５０Ｑ及び４２８Ｌの改変（例えば、Ｔ２５０Ｑ及びＭ４２８Ｌ）；並びに３０７及び／又は３０８の改変（例えば、３０８Ｆ又は３０８Ｐ）が含まれる。さらに別の実施形態では、改変には、２６５Ａ（例えば、Ｄ２６５Ａ）及び／又は２９７Ａ（例えば、Ｎ２９７Ａ）の改変が含まれる。
【０１１８】
例えば、本発明は、２５０Ｑ及び２４８Ｌ（例えば、Ｔ２５０Ｑ及びＭ２４８Ｌ）；２５２Ｙ、２５４Ｔ及び２５６Ｅ（例えば、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅ）；４２８Ｌ及び４３４Ｓ（例えば、Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓ）；２５７Ｉ及び３１１Ｉ（例えば、Ｐ２５７Ｉ及びＱ３１１Ｉ）；２５７Ｉ及び４３４Ｈ（例えば、Ｐ２５７Ｉ及びＮ４３４Ｈ）；３７６Ｖ及び４３４Ｈ（例えば、Ｄ３７６Ｖ及びＮ４３４Ｈ）；３０７Ａ、３８０Ａ及び４３４Ａ（例えば、Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０Ａ及びＮ４３４Ａ）；並びに４３３Ｋ及び４３４Ｆ（例えば、Ｈ４３３Ｋ及びＮ４３４Ｆ）からなる群から選択される１つ以上の変異対又は変異群を含む抗Ｎａv１．７抗体Ｆｃドメインを含む。上述のＦｃドメイン変異、及び本明細書に開示する抗体の可変ドメイン内の他の変異について可能な全組み合わせは、本発明の範囲内であることが意図される。
【０１１９】
本発明はまた、キメラ重鎖定常（ＣH）領域を含む抗Ｎａv１．７抗体を含み、これにおいて、かかるキメラＣH領域は１つ以上のイムノグロブリン・アイソタイプのＣH領域に由来するセグメントを含む。例えば、本発明の抗体は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２又はヒトＩｇＧ４分子に由来するＣH２ドメインの一部又はすべてを含むキメラＣH領域を、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２又はヒトＩｇＧ４分子に由来するＣH３ドメインの一部又はすべてと組み合わせて含んでよい。ある実施形態によれば、本発明の抗体は、キメラのヒンジ領域を有するキメラＣH領域を含む。例えば、キメラのヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２又はヒトＩｇＧ４のヒンジ領域領域に由来する「アッパーヒンジ（ｕｐｐｅｒ  ｈｉｎｇｅ）」のアミノ酸配列（ＥＵナンバリングの２１６〜２２７位のアミノ酸残基）を、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２又はヒトＩｇＧ４のヒンジ領域領域に由来する「ロワーヒンジ（ｌｏｗｅｒ  ｈｉｎｇｅ）」配列（ＥＵナンバリングの２２８〜２３６位のアミノ酸残基）と組み合わせて含んでよい。ある実施形態によれば、キメラのヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１又はヒトＩｇＧ４のアッパーヒンジ（ｕｐｐｅｒ  ｈｉｎｇｅ）に由来するアミノ酸残基、及びヒトＩｇＧ２ロワーヒンジ（ｌｏｗｅｒ  ｈｉｎｇｅ）に由来するアミノ酸残基を含む。ある実施形態では、本明細書に記載するキメラＣH領域を含む抗体は、抗体の治療的又は薬物動態的性質に悪影響を与えることなく改変されたＦｃエフェクター機能を示す。（例えば、その全体が本明細書に参照として組み入れられる、２０１３年２月１日提出の米国仮出願第６１／７５９，５７８号を参照のこと）。
【０１２０】
エピトープマッピング及び関連技術
特定のエピトープに結合する抗体をスクリーニングするために、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂ．，ＮＹ）に記載されているようなルーチンの交叉ブロッキングアッセイを使用することができる。他の方法としては、アラニンスキャン変異解析、ペプチドブロット解析（Ｒｅｉｎｅｋｅ（２００４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２４８：４４３−６３）（その全体が参照として本明細書に組み入れられる）又はペプチド開裂解析が挙げられる。更に、抗原のエピトープ切り出し（ｅｐｉｔｏｐｅ  ｅｘｃｉｓｉｏｎ）、エピトープ抽出及び化学的な修飾等の方法を使用することができる（Ｔｏｍｅｒ、２０００、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ９：４８７−４９６）（その全体が参照として本明細書に組み入れられる）。
【０１２１】
「エピトープ」という用語は、Ｂ細胞及び／又はＴ細胞がそれに対して応答する、抗原における部位を意味する。Ｂ細胞エピトープは、隣接アミノ酸から形成される場合もあり、タンパク質の三次フォールディングによって並置される非隣接アミノ酸から形成される場合もある。隣接アミノ酸から形成されるエピトープは、典型的に、変性溶媒へと曝露しても保持されるが、三次フォールディングによって形成されるエピトープは、典型的に、変性溶媒で処理すると失われる。エピトープは、典型的に、固有の空間配座にある少なくとも３つのアミノ酸、より通常には少なくとも５または８〜１０アミノ酸を包含する。
【０１２２】
特定の実施態様においては、抗−Ｎａv１．７抗体又は抗体の抗原結合断片は、Ｎａv１．７ドメインＩ、ＩＩ、ＩＩＩ若しくはＩＶ、又はその断片の少なくとも１つの中のエピトープと結合し、ここで、ドメインＩは、配列番号：６７０のおよそ１〜およそ７２８番の残基であり；ドメインＩＩは、配列番号：６７０のおよそ７２９〜およそ１１７６番の残基であり；ドメインＩＩＩは、配列番号：６７０のおよそ１１７７〜およそ１４９４番の残基であり；ドメインＩＶは、配列番号：６７０のおよそ１４９５〜およそ１９７７番の残基である。
【０１２３】
特定の実施態様においては、抗−Ｎａv１．７抗体又は抗体の抗原結合断片は、Ｎａv１．７のドメインＩ、ＩＩ、ＩＩＩ若しくはＩＶのいずれかの細胞外ループ若しくはその断片、又はＮａv１．７のパドル領域又はその断片のいずれか１の中のエピトープと結合する。
【０１２４】
一実施態様においては、抗体は、Ｎａv１．７のドメインＩのＥＣループ３又はその断片内のエピトープと結合する。一実施態様においては、抗体は、配列番号：６７０のおよそ２６９〜およそ３３８の残基番号のＮａv１．７のドメインＩのＥＣループ３内のエピトープと結合する。一実施態様においては、抗体は、配列番号：６７０のおよそ２７２〜およそ３２６の残基番号のＮａv１．７のドメインＩのＥＣループ３内のエピトープと結合する。一実施態様においては、抗体は、配列番号：６７０のおよそ２７２〜およそ３１０の残基番号のＮａv１．７のドメインＩのＥＣループ３内のエピトープと結合する。
【０１２５】
特定の実施態様においては、抗−Ｎａv１．７抗体又は抗体の抗原結合断片は、Ｎａv１．７のドメインＩＩＩの細胞外（ＥＣ）ループ３又はその断片内のエピトープと結合する。一実施態様においては、抗体は、配列番号：６７０のおよそ１３３３〜およそ１３８２番の残基のＮａv１．７のドメインＩＩＩのＥＣループ３内のエピトープと結合する。一実施態様においては、抗体は、配列番号：６７０のおよそ１３３３〜およそ１３７５番の残基のＮａv１．７のドメインＩＩＩのＥＣループ３内のエピトープと結合する。
【０１２６】
特定の実施態様においては、抗−Ｎａv１．７抗体又は抗体の抗原結合断片は、Ｎａv１．７のパドル領域（配列番号：６７０の残基番号２０２〜２３２）内のエピトープと結合する。
【０１２７】
特定の実施態様においては、抗−Ｎａv１．７抗体又は抗体の抗原結合断片は、ＥＣループ３−２（配列番号：６７０のおよそ８７４〜およそ９３２の残基番号）内のエピトープと結合する。
【０１２８】
特定の実施態様においては、抗−Ｎａv１．７抗体又は抗体の抗原結合断片は、ＥＣループ番号３−４（配列番号：６７０のおよそ１６５９〜およそ１７２３の残基番号）内のエピトープと結合する。
【０１２９】
特定の実施態様においては、本発明の抗−Ｎａv１．７抗体は、上記ループ又はパドル領域の断片内のエピトープ、例えば、配列番号：６７０のパドル領域の残基番号２０２〜２１５；配列番号：６７０のループ３−１の残基２６９〜３１０：配列番号：６７０のループ３−１の残基番号２６９〜３２６；配列番号：６７０のループ３−１の残基２７２〜３１０；配列番号：６７０のループ３−３の残基１３３３〜１３７５と結合し得る。
【０１３０】
特定の実施態様においては、  抗体又は抗体断片は、ドメインＩ、ＩＩ、ＩＩＩ又はＩＶ内、及び／又は２若しくは３種のドメイン内（例えば、ドメインＩ、ＩＩ及びＩＩＩ内、ドメインＩＩ、ＩＩＩ及びＩＶ内、ドメインＩ、ＩＩＩ及びＩＶ内、又はドメインＩ、ＩＩ及びＩＶ内）の  Ｎａv１．７の列挙される１以上のエピトープを含むエピトープと結合する。
【０１３１】
特定の実施態様においては、抗体は、Ｎａv１．７の１つのドメイン内のエピトープと、Ｎａv１．７の異なるドメイン内の他のエピトープと結合する二重特異性抗体である。一実施態様においては、抗体は、Ｎａv１．７の１つのドメインのＥＣループ３内の１つのエピトープと、Ｎａv１．７の異なるドメインのＥＣループ３内の他のエピトープと結合する二重特異性抗体である。一実施態様においては、抗体は、Ｎａv１．７のドメインＩのＥＣループ内の１つのエピトープと、Ｎａv１．７のドメインＩＩＩのＥＣループ３内の他のエピトープと結合する二重特異性抗体である。一実施態様においては、抗体は、Ｎａv１．７のドメインＩのＥＣループ３内の１つのエピトープ（１つのエピトープは配列番号：６７０のおよそ２６９〜およそ３３８番目の残基の範囲である）と、Ｎａv１．７のドメインＩＩＩのＥＣループ３内の第２のエピトープ（第２のエピトープは配列番号：６７０のおよそ１３３３〜およそ１３８２番目の残基の範囲である）と結合する二重抗体である。一実施態様においては、抗体は、ドメインＩ（配列番号：６７０のおよそ２６９〜およそ３３８番目の残基）及びドメインＩＩＩ（配列番号：６７０のおよそ１３３３〜およそ１３８２番目の残基）のいずれかのＥＣループ３内の１つのエピトープと、Ｎａv１．７のパドル領域（配列番号：６７０のおよそ２０２〜およそ２３２番目の残基）内の第２のエピトープと結合する二重特異性抗体である。
【０１３２】
本発明は、本明細書に記載する具体的に例示される抗体（例えば、ＨＩＭ８５２Ｎ、Ｈ１Ｍ８７５Ｎ、Ｈ４Ｈ３９１Ｂ、Ｈ４Ｈ３９１Ｐ、Ｈ４Ｈ４３４Ｂ、Ｈ４Ｈ４３４Ｐ、Ｈ４Ｈ４３９Ｂ、Ｈ４Ｈ４３９Ｐ、Ｈ４Ｈ４６８Ｂ、Ｈ４Ｈ４６８Ｐ、Ｈ４Ｈ４７１Ｂ、Ｈ４Ｈ４７１Ｐ、Ｈ１Ｈ１００６Ｂ、Ｈ１Ｈ１００６Ｐ）のいずれかと同一のエピトープに結合する抗Ｎａv１．７抗体を含む。同様に、本発明はまた、Ｎａv１．７又はＮａv１．７断片への結合について、本明細書に記載する具体的に例示される抗体のいずれかと競合する抗Ｎａv１．７抗体を含む。
【０１３３】
ある抗体が、基準となる抗Ｎａv１．７抗体について、それと同一のエピトープに結合、又はそれとの結合について競合するするか否かは、当該技術分野で既知であるルーチンの方法により容易に測定できる。例えば、被験抗体が、基準となる本発明の抗Ｎａv１．７抗体と同一のエピトープに結合するかどうかを測定する場合は、飽和状態で基準抗体をＮａv１．７タンパク質又はペプチドと結合させる。次いで、Ｍａv１／７分子への被験抗体の結合能力を評価する。被験抗体が、基準抗Ｎａv１．７抗体との飽和結合に続いてＮａv１．７に結合することができれば、被験抗体は基準抗Ｎａv１．７抗体とは異なるエピトープに結合するという結論を出すことができる。一方、被験抗体が、基準抗Ｎａv１．７抗体との飽和結合に続いてＮａv１．７に結合することができなければ、被験抗体は、基準となる本発明の抗Ｎａv１．７抗体が結合したエピトープと同一のエピトープに結合し得るということである。
【０１３４】
抗体が基準抗Ｎａv１．７抗体と結合について競合することを検討するため、上記の結合方法を２つの方向から実施する。第１の方向は、基準抗体を飽和条件下でＮａv１．７分子に結合させた後、被験抗体のＮａv１．７分子への結合を評価する。第２の方向では、被験抗体を飽和条件下でＮａv１．７分子に結合させた後、基準抗体のＮａv１．７分子への結合を評価する。この２つの方向において、第１の（飽和）抗体のみがＮａv１．７分子に結合することができれば、被験抗体と基準抗体はＮａv１．７への結合について競合するという結論が導き出される。当該技術分野の当業者には認識されるように、結合について基準抗体と競合する抗体は、必ずしも基準抗体と同一のエピトープに結合するわけではないが、重複する又は隣接するエピトープに結合することにより基準抗体の結合を立体的に遮断し得る。
【０１３５】
それぞれが、抗原に対する他のものの結合を阻害（遮断）するなら、２つの抗体は、同じかまたは重複するエピトープに結合している。すなわち、１倍、５倍、１０倍、２０倍または１００倍過剰の１つの抗体は競合的結合アッセイで測定すると、他の結合を少なくとも５０％、しかし、好ましくは７５％、９０％又は更に９９％阻害する（例えば、Junghansら,Cancer Res.1990:50:1495-1502を参照のこと）。また、あるいは、１つの抗体の結合を低減または排除する抗原中の本質的にすべてのアミノ酸変異が他の結合を低減または排除する場合、２つの抗体は同じエピトープに結合すると考えられる。１つの抗体の結合を低減または排除する一部のアミノ酸変異が他の結合を低減または排除する場合、２つの抗体は重複している。
【０１３６】
さらなる常用実験（例えば、ペプチド変異及び結合分析）を実施して、試験抗体の結合が観察されなかったのが実際に参照抗体と同じエピトープに結合したことによるものかどうか、または立体障害（または、別の現象）が、結合が観察されなかった原因であるかどうかを確認することができる。この種の実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリー、又は当分野で利用可能な他のなんらかの定量的若しくは定性的抗体結合アッセイを用いて実施することができる。
【０１３７】
種選択性および種交差反応性
本発明の特定の実施態様によれば、抗−Ｎａv１．７抗体はヒトＮａv１．７に結合するが、他の種からのＮａv１．７には結合しない。また、特定の実施態様においては、本発明の抗−Ｎａv１．７抗体はヒトＮａv１．７に結合し、かつ１以上の非ヒト種からのＮａv１．７に結合する。例えば、本発明の抗−Ｎａv１．７抗体は、ヒトＮａv１．７に結合してもよく、かつ、場合によっては、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、スナネズミ、ブタ、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ウマ、ラクダ、カニクイザル、マーモセット、アカゲザル又はチンパンジーのＮａv１．７の１種以上に結合してもよく、結合しなくてもよい。
【０１３８】
免疫複合体
本発明は、痛み及び／又は炎症、化学療法剤又は放射性同位体を軽減し得る薬剤のような、治療部分と結合した、ヒト抗−Ｎａv１.7モノクローナル抗体を包含する。抗−Ｎａv１.7抗体と結合し得る治療部分の種類は、治療すべき状態及び達成すべき所望の治療効果を考慮する。例えば、急性又は慢性疼痛の治療のために、NSAID等の薬剤、オピオイド、又はCox-2阻害剤、局所麻酔剤、又は第２のＮａv１.7阻害剤を、Ｎａv１．７抗体と結合することができる。また、所望の治療効果が、痛みを伴う病状に関連する炎症を治療することである場合には、これらに限定されないが、セレコキシブ、IL-1又はIL-6阻害剤のようなサイトカインアンタゴニスト等の抗−炎症剤を抗−Ｎａv１.7抗体に結合させることが有利である。治療すべき病状が癌性状態である場合には、化学療法剤、又は放射性同位体をＮａv１.7抗体に結合することが有益である。免疫複合体を精製するのに適切な薬剤の例は当該技術分野において公知であり、例えば、WO 05/103081を参照のこと。
【０１３９】
多重特異性抗体
本発明の抗体は、単一特異性、二重特異的、又は多重特異性であってよい。多重特異性抗体は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的であってよく、又は、１つ以上の標的ポリペプチドに特異的な抗原結合ドメインを含有してよい。例えば、Tutt et al.、1991、J.Immunol.147:60-69; Kufer et al.、2004、Trends Biotechnol.22:238-244を参照のこと。本発明の抗Ｎａｖ１.7抗体を、別の機能性分子、例えば、別のペプチド又はタンパク質と結合又は共発現させてよい。例えば、抗体又はその断片を、別の抗体又は抗体断片など１つ以上の他の分子種（molecular entities）に機能的に結合させ（例えば、化学的共役、遺伝子融合、非共有性会合又はその他により）、第２の結合特異性を有する二重特異性又は多重特異性抗体を作製することができる。例えば、本発明は、免疫グロブリンの１本の腕はヒトＮａv１.7又はその断片に対して特異的であり、免疫グロブリンのもう一方の腕は第２の治療標的に対して特異的である又は治療的部分に抱合される、二重特異性抗体を含む。。本発明の特定の実施態様においては、免疫グロブリンの一方の腕が、ｈＮａv１.7の一方のECループ又はその断片に対して得意手できであり、免疫グロブリンの他方の腕が、ｈＮａv１.7の第２のECループ又はｈＮａv１.7のパドル領域に対して特異的である。特定の実施態様においては、免疫グロブリンの一方の腕がｈＮａv１.7の一方のECループの１つのエピトープに対して特異的であり、他の腕がｈＮａv１.7の同じECループの第２のエピトープに対して特異的である。
【０１４０】
本発明の文脈において使用可能な例示的な二重特異性抗体フォーマットでは、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）のＣH３ドメイン及び第２のＩｇのＣH３ドメインを使用し、これにおいて、第１及び第２のＩｇのＣH３ドメインは少なくとも１個のアミノ酸が互いに異なり、かつ、少なくとも１個のアミノ酸の違いにより、アミノ酸の違いがない二重特異性抗体に比してタンパク質への二重特異性抗体の結合を減少させる。ある実施形態では、第１のＩｇのＣH３ドメインはタンパク質Ａに結合し、第２のＩｇのＣH３ドメインには、Ｈ９５Ｒ改変（ＩＭＧＴエキソンナンバリングによる；ＥＵナンバリングによるＨ４３５Ｒ）などのタンパク質Ａ結合を減少又は消失させる変異が含まれている。第２のＣH３は、Ｙ９６Ｆ改変（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＹ４３６Ｆ）をさらに含んでよい。第２のＣH３内に見ることができるさらなる改変には、ＩｇＧ１抗体の場合はＤ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、及びＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、及びＶ４２２Ｉ）；ＩｇＧ２抗体の場合はＮ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、及びＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、及びＶ４２２Ｉ）；並びにＩｇＧ４抗体の場合はＱ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、及びＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＱ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、及びＶ４２２Ｉ）が含まれる。上記の二重特異性抗体フォーマットに対する変形は本発明の範囲内であることを意図するものである。
【０１４１】
治療的投与及び製剤
本発明は、本発明の抗−Ｎａv１．７抗体又はそれらの抗原結合断片を含む治療用組成物を提供する。本発明に従う治療用組成物の投与は、導入、送達、忍容性などの改善をもたらすために製剤に組み込まれる、適切な担体、賦形剤、および他の薬剤と共に施される。適切な製剤の大半は、全ての製薬化学者に公知の処方集である、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡにおいて見出すことができる。これらの製剤としては、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、蝋、油、脂質、脂質（カチオン性脂質またはアニオン性脂質）を含有する小胞（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）など）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油エマルジョン及び油中水エマルジョン、カーボワックスエマルジョン（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、及びカーボワックスを含有する半固体混合物が含まれる。Ｐｏｗｅｌｌら、”Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ”ＰＤＡ（１９９８）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ  ５２：２３８−３１１も参照のこと。
【０１４２】
本発明の抗体の用量は、投与される対象の年齢及び大きさ、標的疾患、病状、投与経路等に応じて変化させることができる。成人患者において、病状又は疾患が、急性又は慢性疼痛、炎症性疼痛、神経因性疼痛等をもたらす種々の病状及び疾患において、Ｎａv１.7と関連する痛みを治療するために本発明の抗体を使用する場合、本発明の抗体を、通常は約０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重、更に好ましくは約０．０２〜約７、約０．０３〜約５、又は約０．０５〜約３ｍｇ／ｋｇ体重の単回投与で静脈内投与することが有利である。病状の重症度に依存し、治療の頻度及び期間を調整することができる。
【０１４３】
種々の送達システムが公知であり、本発明の医薬組成物の投与に使用できる。例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセル、変異ウイルスを発現することができる組換え細胞、受容体介在性エンドサイトーシスへの封入がある（例えば、Wu et al.、1987、J.Biol.Chem.262:4429-4432を参照のこと）。導入方法には、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、経鼻、硬膜外、及び経口経路が含まれるが、これらに限定されない。組成物を、任意の好都合な経路、例えば注入又はボーラス注射で、上皮又は粘膜皮膚内膜（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜及び腸管粘膜など）を介した吸収により投与してよく、また、他の生物学的に活性な薬剤とともに投与してよい。投与は、全身又は局所で行うことができる。
【０１４４】
医薬組成物はまた、小胞、特に、リポソームによって送達することもできる（例えば、Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３を参照のこと）。
【０１４５】
特定の状況下では、医薬組成物を、制御放出系によって送達することができる。一実施態様においては、ポンプを使用することができる。他の実施態様においては、ポリマー材料を使用することができる。さらに別の実施形態では、制御放出系を組成物の標的に近接して設置するため、全身投与用量の一部しか必要としない。
【０１４６】
注射用調製物は、静脈内注射用、皮下注射用、皮内注射用、及び筋肉内注射用、滴下注入用などの剤形を包含し得る。これらの注射用調製物は、公知の方法を介して調製することができる。例えば、注射用調製物は、例えば、上記で記載した抗体又はその塩を、注射に通常使用される滅菌の水性媒体若しくは油性媒体中に溶解、懸濁、又は乳化させることによって調製することができる。注射用の水性媒体としては、例えば、アルコール（例えば、エタノール）、多価アルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（水素化したヒマシ油のポリオキシエチレン（５０モル）付加物）］のような適切な可溶化剤と組み合わせて使用し得る、生理食塩液、グルコース及び他の補助剤などを含有する等張性溶液が存在する。油性媒体としては、例えば、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール等の可溶化剤と組み合わせて使用し得るゴマ油、ダイズ油などが用いられる。こうして調製された注射液は、好ましくは適切なアンプル内に充填する。
【０１４７】
本発明の医薬組成物は、標準的な針及び注射器を用いて皮下又は静脈内に送達可能である。さらに、皮下送達に関しては、ペン送達デバイスには、本発明の医薬組成物の送達適用が用意されている。かかるペン送達デバイスは、再使用可能又は使い捨てであってよい。再使用可能ペン送達デバイスは、一般に、医薬組成物を含有する交換式カートリッジを使用する。一旦カートリッジ内の医薬組成物をすべて投与し、カートリッジが空になると、その空のカートリッジを廃棄し医薬組成物が含有されている新しいカートリッジと交換することができる。その後、そのペン送達デバイスは再度使用することができる。使い捨てペン送達デバイスでは交換式カートリッジはない。むしろ、使い捨てペン送達デバイスはデバイス内のレザバーに医薬組成物が予め充填されて提供される。一旦レザバーの医薬組成物がなくなると、デバイスは丸ごと廃棄される。
【０１４８】
多数の再使用可能ペン及び自動注入送達デバイスが、本発明の医薬組成物の皮下送達で適用される。ほんの数例として、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ  Ｍｕｍｆｏｒｄ,Ｉｎｃ、イギリス、ウッドストック）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、スイス、ブルグドルフ）、ＨＵＭＡＬＯＧ  ＭＩＸ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏ.、インディアナ州インディアナポリス）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ、デンマーク、コペンハーゲン）、ＮＯＶＯＰＥＮ  ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ、デンマーク、コペンハーゲン）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ニュージャージー州フランクリン・レイクス）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、及びＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ、ドイツ、フランクフルト）が含まれるが、これらに限定されない。本発明の医薬組成物の皮下送達に適用される使い捨てペン送達デバイスには、ほんの数例として、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）、及びＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）自動注入器（Ａｍｇｅｎ、カリフォルニア州サウザンズオークス）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、ドイツ、シュツットガルト）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ、Ｌ.Ｐ.）、及びＨＵＭＩＲＡ（商標）ペン（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｓ、イリノイ州アボットパーク）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１４９】
有利には、上記の経口又は非経口用の医薬組成物を、活性成分の用量にふさわしい適切な単位用量の剤形に調製する。単位用量のかかる剤形には、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤（アンプル）、坐剤などが含まれる。前述の抗体含有量は、一般に、単位用量の剤形あたり約５〜約５００ｍｇであり、特に注射形態では、前述の抗体を約５〜約１００ｍｇで含有し、また他の剤形では約１０〜約２５０ｍｇで含有することが好ましい。
【０１５０】
投与レジメン
本発明のある実施形態によれば、ｈＮａv１.7に対する抗体の複数用量をある一定期間被験者に投与してよい。本発明のこの態様による方法は、複数用量のＮａv１.7に対する抗体を被験者に順次投与することを含む。本明細書中で使用する場合、「順次投与する」とは、Ｎａv１.7に対する抗体の各用量を被検者に異なる時間ポイントで、例えば、予め設定された間隔（例えば、時間、日、週又は月）で区切った異なる日に投与することを意味する。本発明は、患者に単一の初回用量でＮａv１.7に対する抗体投与後、１つ以上の第２用量でＮａv１.7に対する抗体を投与し、必要に応じ、さらに１つ以上の第３用量でＮａv１.7に対する抗体を順次投与することを含む方法を含む。
【０１５１】
「初回用量」、「第２用量」、及び「第３用量」という用語は、本発明のhＮａv１.7に対する抗体を時間的順序で投与することをいう。したがって、「初回用量」とは、治療レジメン開始時に投与する用量であり（「ベースライン用量」とも言う）、「第２用量」は、初回用量後に投与する用量、並びに「第３用量」は、第２用量後に投与する用量である。初回、第２、及び第３用量はすべて同量のhＮａv１.7に対する抗体を含有してよいが、一般に投与頻度の点で互いに異なる場合がある。しかしながら、ある実施形態では、初回、第２及び／又は第３用量におけるhＮａv１.7に対する抗体含有量は、治療期間中、互いに異なる（例えば、適宜、増減を調整）。ある実施形態では、２以上の（例えば、２、３、４、又は５）用量を治療レジメン開始時に「負荷投与」として投与した後、以降の用量を低頻度で（例えば、「維持量」）投与する。
【０１５２】
本発明のある例示的な実施形態では、各第２及び／又は第３用量を直近の先行投与から１〜２６（例えば、１、１1/2、２、２1/2、３、３1/2、４、４1/2、５、５1/2、６、６1/2、７、７1/2、８、８1/2、９、９1/2、１０、１０1/2、１１、１１1/2、１２、１２1/2、１３、１３1/2、１４、１４1/2、１５、１５1/2、１６、１６1/2、１７、１７1/2、１８、１８1/2、１９、１９1/2、２０、２０1/2、２１、２１1/2、２２、２２1/2、２３、２３1/2、２４、２４1/2、２５、２５1/2、２６、２６1/2、又はそれ以上）週間後に投与する。「直近の先行投与」という語句は、本明細書中で使用する場合、一連の複数投与において、他の用量が介在しない順序で、直後の用量に先立ち患者に投与するｈＮａv１．７に対する抗体の用量を意味する。
【０１５３】
本発明のこの態様による方法は、任意の数の第２及び／又は第３用量のｈＮａv１．７に対する抗体を患者に投与することを含んでよい。例えば、ある実施形態では、第２用量を１回のみ患者に投与する。他の実施形態では、２以上の（例えば、２、３、４、５、６、７、８、又はそれ以上）の第２用量を患者に投与する。同様に、ある実施形態では、第３用量を１回のみ患者に投与する。他の実施形態では、２以上の（例えば、２、３、４、５、６、７、８、又はそれ以上）の第３用量を患者に投与する。
【０１５４】
複数の第２用量を使用する実施形態では、各第２用量を、他の第２用量と同一頻度で投与してよい。例えば、各第２用量を、直近の先行投与から１〜２週間後に患者に投与してよい。同様に、複数の第３用量を使用する実施形態では、各第３用量を、他の第３用量と同一頻度で投与してよい。例えば、各第３用量を直近の先行投与から２〜４週間後に患者に投与してよい。また、第２及び／又は第３用量を患者に投与する頻度は治療レジメン期間中を通して異なり得る。投与頻度は、臨床検査後の個々の患者の必要性に応じ、治療期間中に医師が調整してもよい。
【０１５５】
抗体の治療的使用
本発明の抗体は、Ｎａv１．７と関連する疾患、障害又は病状の治療、予防及び／又は改善、該疾患、障害又は病状と関連する少なくとも１種の症状の改善、このような疾患、障害又は病状と関連する疼痛の改善に有用である。本発明の抗−Ｎａv１．７抗体により治療することのできる、このような病状、疾患又は障害の例としては、急性、慢性、神経障害性、若しくは炎症性疼痛、関節炎、偏頭痛、群発性頭痛、三叉神経痛、疱疹性神経痛、全身性神経痛、てんかん若しくはてんかん様症状、筋緊張症、不整脈、運動障害、神経内分泌障害、失調症、過敏性大腸症候群、炎症性腸疾患、糞便切迫感、失禁、直腸過敏症、内臓痛、骨関節痛、痛風、ヘルペス後神経痛、糖尿病性神経障害、神経根痛、座骨痛、背痛、頭部又は頸部の疼痛、激痛、手術後疼痛、又はがん疼痛が挙げられる。本発明の治療法により治療可能な他の病状としては、遺伝性紅痛症、鼻炎、前立腺がん、乳がん、子宮頸がん又は膀胱障害が挙げられる。本発明の抗体又はその抗原結合断片は、以下の病状：非悪性の急性、慢性、若しくは骨折による骨痛；リウマチ性関節炎、脊椎管狭窄症、神経障害性腰痛；筋膜性疼痛症候群；繊維筋痛症；側頭骨顎関節痛；腹腔、膵臓を含む内臓痛；慢性頭痛；群発性頭痛等の緊張型頭痛；糖尿病性神経障害；ＨＩＶ−関連ニューロパシー；シャルコー・マリー・トゥースニューパシー；遺伝性感覚性ニューロパシー；末梢神経損傷；有痛性神経腫；異所性近位及び遠位排泄；神経根症；化学療法誘発性神経因性痛；放射線療法誘発性神経因性痛；乳房切除後の痛み；中枢性疼痛；脊髄損傷疼痛；脳卒中後疼痛；視床痛；複合性局所疼痛症候群；幻肢痛；難治性疼痛；急性筋骨格痛；関節痛；急性痛風による痛み；機械的な腰痛；頸部痛；腱炎；負傷／運動痛；腹痛；腎盂腎炎；盲腸炎；胆嚢炎；腸閉塞；ヘルニア等；心臓痛を含む胸部痛；骨盤痛、腎臓疝痛、陣痛を含む出産時の痛み；帝王切開の痛み；火傷及び外傷痛；子宮内膜症；帯状疱疹痛；鎌状赤血球貧血；急性膵炎；激痛；副鼻腔炎痛、歯痛を含む口腔顔面痛；多発性硬化症痛；ハンセン病痛；ベーチェット病痛；有痛脂肪症；静脈炎痛；ギランバレー症候群痛；痛む脚と動く足趾症候群；Ｈａｇｌｕｎｄ症候群；ファブリー病痛；膀胱及び泌尿生殖器疾患；活発性膀胱；有痛性膀胱症候群；間質性膀胱炎；又は前立腺炎を治療するために使用することもできる。本発明の抗体又はその抗原断片は、前立腺癌、乳癌及び頸部癌等の腫瘍細胞の腫瘍細胞増殖又は転移を阻害するためにも使用することができる。
【０１５６】
併用療法
併用療法としては、他のＮａv１．７アンタゴニスト（例えば、抗−Ｎａv１．７抗体、又はＮａv１．７の抗体若しくは低分子量阻害剤）、Ｎａv１．８アンタゴニスト（例えば、抗−Ｎａv１．８抗体、又はＮａv１．８の抗体若しくは低分子量阻害剤）、Ｎａv１．９アンタゴニスト（例えば、抗−Ｎａv１．９抗体、又はＮａv１．９の抗体若しくは低分子量阻害剤）、サイトカイン阻害剤（例えば、インターロイキン−１（ＩＬ−１）阻害剤（例えば、リロナセプト（「ＩＬ−１トラップ」、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）又はアナキンラ（ＫＩＮＥＲＥＴ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ）、低分子量ＩＬ−１アンタゴニスト、又は抗−ＩＬ−１抗体）；ＩＬ−１８阻害剤（例えば、低分子量ＩＬ−１８アンタゴニスト、又は抗−ＩＬ−１８抗体）；ＩＬ−６又はＩＬ−６Ｒ阻害剤（例えば、低分子量ＩＬ−６アンタゴニスト、抗−ＩＬ−６抗体、又は抗−ＩＬ−６受容体抗体）；抗てんかん薬（例えば、ガバペンチン、プレガバリン）；神経成長因子（ＮＧＦ）阻害剤（例えば、低分子量ＮＧＦアンタゴニスト、又は抗−ＮＧＦ抗体）；低用量コルヒチン；アスピリン；ＮＳＡＩＤ；ステロイド（例えば、プレドニゾン、メトトレキサート等）；低用量シクロスポリンＡ；腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）又はＴＮＦ受容体阻害剤（例えば、低分子量ＴＮＦ若しくはＴＮＦＲアンタゴニスト、  又は抗−ＴＮＦ若しくはＴＮＦＲ抗体）；尿酸合成阻害剤（例えば、アロプリノール）；尿酸排泄促進剤（例えば、プロベネシド、スルフィンピラゾン、ベンズブロマロン等）；他の炎症阻害剤（例えば、キャスパーゼ−１の阻害剤、ｐ３８、ＩＫＫ１／２、ＣＴＬＡ−４Ｉｇ等；及び／又は副腎皮質ステロイドと本発明の抗−ｈＮａv１．７抗体とが挙げられる。
【０１５７】
抗体の診断用使用
本発明の抗Ｎａv１．７抗体を、Ｎａv１．７、又は試料中のＮａv１．７を検出及び／又は測定するため、例えば、診断するために使用することもできる。例えば、抗Ｎａv１．７抗体、又はその断片を、Ｎａv１．７の異常発現を特徴とする病態又は疾患を診断するため（例えば、過剰発現、低発現、発現の欠如など）に使用してよい。Ｎａv１．７の例示的な診断アッセイは、例えば、患者から得た試料を本発明の抗Ｎａv１．７抗体と接触させることを含んでよく、ここでは、抗Ｎａv１．７抗体を検出可能標識又はレポーター分子で標識する。別の方法では、未標識抗Ｎａv１．７抗体を、それ自体が検出可能に標識された第２抗体と組み合わせて診断用途に使用できる。検出可能標識又はレポーター分子は、3Ｈ、14Ｃ、32Ｐ、35Ｓ、又は125Ｉなどの放射性同位元素；フルオレセインイソチオシアネート、又はローダミンなどの蛍光又は化学発光部分；又はアルカリホスファターゼ、アルカリフォスファターゼ、βガラクトシダーゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、又はルシフェラーゼなどの酵素であり得る。試料中のＮａv１．７を検出又は測定するために使用可能な具体的試験法の例には、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、及び蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）を含む。
【０１５８】
本発明のＮａv１．７診断アッセイに使用可能な試料には、検出可能量のＮａv１．７タンパク質、又はその断片を正常又は病理学的状態で含有する、患者から得ることが可能な任意の組織又は流体の試料が含まれる。一般に、健常な患者（例えば、Ｎａv１．７の異常なレベル又は活性に関連する疾患又は病態に罹患していない患者）から得た特定試料中におけるＮａv１．７レベルを測定し、最初にＮａv１．７のベースライン、すなわち標準のレベルを設定する。次いで、このＮａv１．７のベースライン値を、Ｎａv１．７関連の疾患若しくは病態、又はこのような疾患若しくは病態と関連する疼痛を有することが疑われる各患者から得た試料で測定されたＮａv１．７レベルと比較する。
【実施例】
【０１５９】
以下の実施例は、本発明の方法及び組成物をいかに使用し作製するかについての開示及び説明を完全に当業者に提供するために提案するものであり、本発明者らが該発明者らの発明であるとみなす範囲を限定することは意図していない。使用する数字に関し、正確さを保証するべく試みがなされた（例えば、量、温度など）が、一部の実験上の誤差及び偏差は考慮されるべきである。特に指定しない限り、部は重量部、分子量は平均分子量、温度はセ氏、及び圧力は大気圧又はその近傍圧である。
【実施例１】
【０１６０】
ヒトＮａv１．７に対するヒト抗体の作製
ヒトＮａv１．７のパドル領域（ループ２−１）由来の細胞外ループ３−１又は３−３からのアミノ酸配列を有するＮａv１．７ペプチドのいずれか１つを含む免疫源を、ヒトＮａv１．７に対する抗体を生成するために使用した。これらのペプチドを、キャリアー、例えばＫＬＨとコンジュゲートした後、免疫応答を刺激するためにアジュバントとともに、ヒト免疫グロブリンの重鎖及びκ軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを含む、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスに直接投与した。抗体免疫応答をＮａv１．７特異的イムノアッセイにより監視した。所望の免疫応答が達成されたら、脾細胞を回収してマウス骨髄腫細胞と融合させ、細胞の活動性を保存するとともにハイブリドーマ細胞株を形成した。Ｎａv１．７特異性抗体を産生する細胞株を同定するために、ハイブリドーマ細胞株をスクリーニングし選択した。この手法を使用し、抗Ｎａv１．７ラ抗体（すなわち、ヒト可変ドメイン及びマウスの定常ドメインを有する抗体）を幾つか得た。この方法で作製した２つの例示的抗体を、Ｈ１Ｍ８５２Ｎ及びＨ１Ｍ８７５Ｎと命名した。この方法を使用して生成した、他の抗−Ｎａv１．７抗体を表１に示し、Ｈ１Ｍ６８３Ｎ、Ｈ１Ｍ７９７Ｎ、Ｈ１Ｍ８３４Ｎ、Ｈ１Ｍ８３９Ｎ、Ｈ１Ｍ７９９Ｎ、Ｈ１Ｍ８３９Ｎ、Ｈ１Ｍ８７５Ｎ、Ｈ１Ｍ８０１Ｎ及びＨ１Ｍ８３６Ｎと命名した。
【０１６１】
また、抗Ｎａv１．７抗体を、その全体が参照として本明細書に組み入れられる、米国特許第２００７／０２８０９４５Ａ号に記載のように、骨髄腫細胞とは融合させずに、抗原陽性Ｂ細胞から直接単離した。この方法を使用して、完全ヒト抗-Ｎａv１．７抗体（すなわち、ヒト可変ドメイン及びヒト定常ドメイン）を幾つか得た；この方法で作製した例示的抗体を、Ｈ４Ｈ３９１Ｂ、Ｈ４Ｈ３９１Ｐ、Ｈ４Ｈ４３９Ｂ、Ｈ４Ｈ４３９Ｐ、Ｈ４Ｈ４６８Ｂ、Ｈ４Ｈ４６８Ｐ、Ｈ４Ｈ４７１Ｂ、Ｈ４Ｈ４７１Ｐ、Ｈ１Ｈ１００６Ｂ、Ｈ１Ｈ１００６Ｐ、Ｈ４Ｈ４３４Ｂ、Ｈ４Ｈ４３４Ｐ、Ｈ４Ｈ３６２Ｂ、Ｈ４Ｈ３６２Ｐ、Ｈ４Ｈ４４１Ｂ、Ｈ４Ｈ４４１Ｐ、Ｈ１Ｈ１００３Ｂ、Ｈ４Ｈ１００３Ｐ、Ｈ１Ｈ１０２５Ｂ及びＨ１Ｈ１０２５Ｐと命名した。この方法を使用して生成した、他の抗−Ｎａv１．７抗体を表１に示す。表２は、例示的な抗Ｎａv１．７抗体についての重鎖及び軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸残基の位置を要約する。
【０１６２】
本実施例の方法に従って作製した例示的抗Ｎａv１．７抗体の生物学的性質を、下記実施例に詳述する。
【０１６３】
【表１】
0006533512.tif 000002
【０１６４】
【表２】
0006533512.tif 000003
【０１６５】
【表３】
0006533512.tif 000004
【０１６６】
【表４】
0006533512.tif 000005
【０１６７】
【表５】
0006533512.tif 000006
【０１６８】
【表６】
0006533512.tif 000007
【０１６９】
【表７】
0006533512.tif 000008
【０１７０】
【表８】
0006533512.tif 000009
【実施例２】
【０１７１】
可変遺伝子の利用分析
生産した抗体の構造を分析するために、抗体の可変領域をコードする核酸をクローニングし、配列決定した。抗体の核酸配列および抗体の予測アミノ酸配列から、各重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）について、遺伝子使用を同定した。表３は、本発明による選択抗体の遺伝子使用を示す。ＮＡ：利用不可能
【０１７２】
【表９】
0006533512.tif 000010
【実施例３】
【０１７３】
Ｎａv１．７抗体の結合アフィニティー
Ｎａv１．７ループペプチドに対する抗−Ｎａv１．７抗体の結合アフィニティーをＢｉａｃｏｒｅにより測定した。一価の動力学的試験のために、抗体を、ヤギ抗−Ｆｃ−結合バイオセンサー表面を介してＦｃ領域を介して捕捉し、ペプチド（分析物としての）を、捕捉した抗体表面上に注入した。二価（結合力駆動型）の動力学的試験のために、Ｎａv１．７  ３−１、３−３又はパドルループ配列に対応するビオチニル化ペプチドをＮｅｕｔｒＡｖｉｄｉｎセンサー面に捕捉し、抗−Ｎａv１．７抗体（分析物としての）をこの表面に捕捉した。捕捉工程の後、各分析物を、それぞれの撮像面上に、いくつかの濃度で個々に注入し、結合表面単位（ＲＵ）をモニターした。解離速度は、実験に使用する分析物の濃度とは無関係であり、解離速度定数（Ｋd）は、経時的な抗体に結合した分析物ＲＵの変化から求めた。二重参照手順（ｒｅｆｅｒｅｎｃｉｎｇ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）を用いて、Ｂｉａｃｏｒｅ動態データを得た。二重参照は、参照表面上の分析物のあらゆる相互作用を減算することにより実施し（すなわち、抗−Ｆｃ結合表面単独又はＮｅｕｔｒＡｖｉｄｉｎ表面単独）、それによって、捕捉表面に対する非特異的結合及び屈折率を補正した。抗体−又はペプチド−捕捉表面上の対照の緩衝液の注入（分析物なし）も実施し、センサー表面からの捕捉パートナーの自然の解離から得られる結果として得られるＲＵシグナル変化の減算を可能にした。動的パラメータは、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ１００評価ソフトウェアバージョン２．０．２を使用し、全ての試験を行った所定のペプチド又は抗体を１：１結合モデルにデータを包括的に適合させることにより得た。ＫＤは、会合速度常数で割った解離速度常数として算出した（ＫD＝ｋｄ／ｋａ）。解離半減期（ｔ1/2）は、解離速度常数から計算した（ｔ1/2＝ｌｎ２／ｋd）。
【０１７４】
ヒト、サル、ラット及びマウスの３−１、３−３ループ及び２−１（パドル領域）配列を含む、種々の種由来のＮａv１．７の細胞外ループを表わす合成ペプチド（Ｃｅｌｔｅｋ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，ＬＬＣ，１５１５  Ｅｌｍ  Ｈｉｌｌ  Ｐｉｋｅ，Ｓｕｉｔｅ  １０４，Ｎａｓｈｖｉｌｌｅ，ＴＮ  ３７２１０，ＵＳＡ）を生成し、ペプチドに対するＮａv１．７の結合プロフィールを特徴づけた。種々のペプチドのビオチニル化形状及び非ビオチニル化形状の両者を、以下に示すＢｉａｃｏｒｅ結合実験のために作製した。ビオチニル化形状については、Ｇ４Ｓリンカーを開始、Ｃー末端又はＮ−末端のいずれかで、ペプチドにビオチン部分を共有的に結合させた。表４は、Ｂｉａｃｏｒｅ結合実験に使用する、これらのペプチド−配列及び起源を示す。
【０１７５】
【表１０】
0006533512.tif 000011
【０１７６】
一価の結合形式（捕捉した抗体センサー表面上に注入された一価のペプチド）を使用することにより、表５に示すように、試験を行った３０種の抗−Ｎａv１．７抗体のうち２７種が、ヒトＮａv１．７の３−１ループペプチドと、０．４６ｎＭ〜３３２ｎＭの範囲のＫＤで結合した。２種の抗体、Ｈ４Ｈ４０８Ｂ及びＨ１Ｈ１０２５Ｂは、この形式を用いて、測定可能な結合を示さなかった（表中、「ＮＢ」）。１種の抗体、Ｈ１Ｈ１００３Ｂは、標準適合モデルに適合し得る結合データを生成しなかった（表中、「ＩＣ」）。Ｈ４Ｈ４２６Ｂ、Ｈ４Ｈ４４３Ｂ及びＨ４Ｈ４４８Ｂが、この形式で測定した時にヒトのペプチドに結合したにもかかわらず、サルのペプチドとは結合しなかったことを除き、試験を行った抗体は、サル（アカゲザル）のＮａv１．７の３−１ペプチドに対し、ヒトのペプチドに対するのと類似の結合挙動を示した（表５）。抗体、Ｈ１Ｍ７９７Ｎ、Ｈ１Ｍ８３４Ｎ、Ｈ１Ｍ８３９Ｎ、Ｈ１Ｍ８７５Ｎ、Ｈ１Ｈ１００３Ｂ、Ｈ１Ｈ１００６Ｂ、Ｈ４Ｈ１００８Ｂ、Ｈ１Ｈ１０１９Ｂ、Ｈ４Ｈ３６７Ｂ、Ｈ４Ｈ３６８Ｂ、Ｈ４Ｈ３９７Ｂ、Ｈ４Ｈ４３４Ｂ、Ｈ４Ｈ４４３Ｂ、及びＨ１Ｍ８０１Ｎは、この結合形式で、３．５ｎＭ〜２，０００ｎＭの範囲のＫDでマウスのＮａv１．７の３−１ペプチドと結合する（表５）。抗体、Ｈ４Ｈ４３９Ｐ、Ｈ１Ｍ７９７Ｎ、Ｈ１Ｍ８３４Ｎ、Ｈ１Ｍ８３９Ｎ、Ｈ１Ｍ８７５Ｎ、Ｈ１Ｈ１００６Ｂ、Ｈ４Ｈ１００８Ｂ、Ｈ１Ｈ１０１９Ｂ、Ｈ４Ｈ３６７Ｂ、Ｈ４Ｈ３６８Ｂ、Ｈ４Ｈ３９７Ｂ、Ｈ４Ｈ４３４Ｂ、Ｈ４Ｈ４３８Ｂ、Ｈ４Ｈ４４１Ｂ、Ｈ４Ｈ４４３Ｂ、Ｈ１Ｍ８０１Ｎ、及びＨ１Ｍ８３６Ｎは、この結合形式で、２．６ｎＭ〜７５０ｎＭの範囲のＫDで、ラットのＮａv１．７の３−１ペプチドと結合する（表５）。表６に示すように、捕捉抗体としてのＨ４Ｈ４６８Ｐ及びＨ４Ｈ４７１Ｐは、一価のヒトのＮａv１．３の３−３ループペプチドと結合するが、この条件下で、マウス又はラットのペプチドとは結合しない（Ｈ４Ｈ４７１Ｐは、１：１モデルに適合することのできない、マウスペプチドに対する結合反応を示した。表中、「ＩＣ」）。表７に示すように、捕捉抗体Ｈ１Ｍ６８３Ｎは、９．４ｎＭのＫDで、ヒトのＮａv１．７のパドルペプチドと結合する。
【０１７７】
二価（結合力駆動型）形式を使用することにより、表８に示すように、試験を行った３２種の抗体のうち２８種が、Ｃ−末端ビオチンを介してＮｅｕｔｒＡｖｉｄｉｎセンサー表面で捕捉された。ヒトＮａv１．７の３−１ループペプチド上に注入した時に、２５ｐＭ〜１３４０ｎＭの範囲のＫDで測定可能な結合を示した。表９に示すように、抗体Ｈ４Ｈ４６８Ｐ、Ｈ４Ｈ４７１Ｐ及びＨ１Ｍ８５２Ｎは、ＮｅｕｔｒＡｖｉｄｉｎセンサー表面に固定したビオチニル化ヒトＮａv１．７の３−３ループペプチドと、１３８ｐＭ〜１１７ｎＭの範囲のＫDで結合した。
【０１７８】
表形式データの要約：
【表１１】
0006533512.tif 000012
【０１７９】
【表１２】
0006533512.tif 000013
【０１８０】
【表１３】
0006533512.tif 000014
【０１８１】
【表１４】
0006533512.tif 000015
【０１８２】
【表１５】
0006533512.tif 000016
【実施例４】
【０１８３】
Ｎａv１．７ペプチドに対する抗体結合／種特異性
ヒト、サル、ラット及びマウスの３−１、３−３ループ及び２−１（パドル領域）配列を含む、様々な種由来の細胞外ループを表わす合成ペプチド（Ｃｅｌｔｅｋ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，ＬＬＣ，１５１５  Ｅｌｍ  Ｈｉｌｌ  Ｐｉｋｅ，Ｓｕｉｔｅ  １０４，Ｎａｓｈｖｉｌｌｅ，ＴＮ  ３７２１０，ＵＳＡ）を生成し、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）により抗−Ｎａv１．７抗体の結合プロファイルを特徴づけた。種々のペプチドのビオチン化形状及び非ビオチン化形状の両者を、以下に示す実験のために作製した。ビオチン化形状については、Ｇ４Ｓリンカーを介しー末端又はＮ−末端のいずれかで、ペプチドにビオチン部分を共有的に結合させた。表１０は、これらのペプチド−配列及び起源を示す。
【０１８４】
【表１６】
0006533512.tif 000017
【０１８５】
抗−Ｎａv１．７抗体を、Ｎａv１．７ペプチドに対する結合能力について試験した。種々のペプチドをＰＢＳ中、４μｇ％ｍＬ濃度で９６ウェルのＮｕｎｃ  Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｐプレートに一晩コーティングした後、適切なブロッキング剤中で１時間ブロッキングした。ビオチン化ペプチドについて、最初に、アビジンを、ＰＢＳ中、２μｇ／ｍＬでＮｕｎｃ  Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｐに一晩コーティングした後、上述のようにブロッキングし、次いで、ビオチン化ペプチドを、０．４μｇ／ｍＬでコーティングし、室温で１時間インキュベートした。精製した抗−Ｎａv１．７抗体を最終濃度０．１μｇ／ｍＬ及び１．０μｇ／ｍＬに希釈し、コーティングしたマイクロタイタープレートのウェルに加え、室温で１時間インキュベートした。抗体種に依存し、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合抗−マウス又は抗−ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂ，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）を用いて結合抗体を検出し、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用い、比色反応により発色させた。吸光度は、プレートリーダーにより、ＯＤ450で０．１秒間読み取った。
【０１８６】
表１１中の値は、以下のように、１μｇ／ｍＬで加えた抗体についてのペプチドをコーティングしたプレートに対する絶対結合範囲（ＯＤ４５０における）を示す：ＯＤ４５０＜０．２：−；０．２＜ＯＤ４５０＜１：＋；１＜ＯＤ４５０＜２：＋＋；２＜ＯＤ４５０＜４：＋＋＋；ＮＴ：試験を行っていない。
【０１８７】
表１１に示すように、抗−Ｎａv１．７抗体は、ＥＬＩＳＡ）により測定すると、異なる異種間特異性を示した。
【０１８８】
【表１７】
0006533512.tif 000018
【実施例５】
【０１８９】
Ｎａv１．７を発現するように遺伝子操作された細胞に対する抗体結合
抗−Ｎａv１．７を更に特徴づけるため、ヒト胎児腎臓２９３株化細胞（ＨＥＫ２９３）の細胞を遺伝子操作し、全長ヒト（配列番号：６７０）Ｎａv１．７を過剰発現させた。
【０１９０】
ＨＥＤ２９３細胞中で発現した全長Ｎａv１．７に対する抗−Ｎａv１．７ヒト抗体の結合は、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）で測定した。ＨＥＫ２９３細胞を、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）にそのＮ末端で融合した全長ヒトＮａｖ１．７を安定的にトランスフェクトし、株化細胞ｈＮａv１．７−ＧＦＰ−ＨＥＫ２９３を作製した。Ｎａv１．７を過剰発現するトランスフェクトした細胞に対する抗体の結合を、親のＨＥＫ２９３細胞に対する結合と比較した。結合実験を実施するため、１ｍＭ  ＥＤＴＡのＰＢＳ溶液を使用して付着細胞を集め、５％  ＰＢＳを含む冷ＰＢＳに再懸濁した。各懸濁実験について、抗−Ｎａv１．７抗体（１ｎＭ〜１３ｎＭの範囲の濃度）を、５％  ＦＢＳを含む５００μＬのＰＢＳ中の２５０，０００個の細胞に加えた。氷上で２０分間インキュベートした後、ヒト−Ｆｃ及びシアニン５（Ｃｙ５）に結合したもの、又はマウス−Ｆｃ及びアロフィコシアニン（ＡＰＣ）に結合したもののいずれかを認識する二次抗体を、二次抗体の濃度が１．７ｎＭとなるように細胞混合物に加えた。氷上で２０分間インキュベートした後、ＰＢＳ＋５％  ＦＢＳに細胞を再懸濁し、その後、貯蔵し、フローサイトメトリーで分析し、候補抗体による相対的結合を測定した。ＦＡＣＳ分析のため、抗体結合実験において、健康な生細胞のみを調べるため、ゲート開閉（ｇａｔｉｎｇ）を適用し、染色した割合を記録した。Ｎａv１．７−ＧＦＰ−ＨＥＫ２９３に対する二次抗体のみの染色により、低いバックグラウンドシグナルが得られた（１〜２％）。Ｎａv１．７−ＧＦＰ−ＨＥＫ２９３に対する結合割合から親のＨＥＫ２９３細胞に対する結合の割合を引くことにより、特異的結合を測定した。
【０１９１】
表１２に示すように、抗−Ｎａv１．７抗体は、親細胞と比較し、Ｎａv１．７を過剰発現するＨＥＫ２９３細胞に対し特異的な結合を示した。
【０１９２】
【表１８】
0006533512.tif 000019
【０１９３】
同様の実験において、遺伝子操作を行った全長ヒト（配列番号：６７０）Ｎａv１．７を過剰発現させたヒト胎児腎臓２９３株化細胞（ＨＥＫ２９３）に対する結合について抗−Ｎａv１．８の試験を、免疫染色法を用いて行った。上述したように、ＨＥＫ２９３細胞を、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）にそのＮ末端で融合した全長ヒトＮａv１．７を安定的にトランスフェクトし、株化細胞ｈＮａv１．７−ＧＦＰ−ＨＥＫ２９３を作製した。Ｎａv１．７を過剰発現するトランスフェクトした細胞に対する抗体の結合を、親のＨＥＫ２９３細胞に対する結合と比較した。１μｇ／ｍＬのドキシサイクリンで一晩誘導した後、全長ヒトＮａv１．５を発現するＨＥＫ２９３細胞を用いて、抗−Ｎａv１．７抗体の交差反応性を試験した。Ｎａv１．５を過剰発現するトランスフェクトした細胞に対する抗体の結合を、誘導を行っていない同じＨＥＫ２９３細胞の結合と比較した。手短に言えば、細胞を、ＰＤＬをコーティングした８チャンバーの培養スライドグラスに、１５０，０００細胞／ウェルの密度で、３７℃で一晩置いた。次の日、培地を取り除き、細胞をＰＢＳで３回洗浄した。細胞を４％  ＰＦＡを用い、室温で２０分間固定した後、０．０５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を用い、室温で５分間透過処理した。スーパーブロックを用いて、細胞を室温で１時間ブロックした後、１μｇの抗Ｎａv１．７抗体を用いて４℃で一晩インキュベートした。次いで、抗−ヒトＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５９４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を結合した二次抗体の１：１４００倍希釈液中で、室温で１時間、細胞をインキュベートした後、グリーンフィルターを使用し、蛍光顕微鏡下、撮像した。
【０１９４】
以下の表１３に示すように、ほとんどの抗−Ｎａv１．７抗体が、全長ヒトＮａv１．７を発現するＨＥＫ２９３細胞に対する結合陽性を示したが、ドキシサイクリンで誘導した後は、全長ヒトＮａv１．７を発現するＨＥＫ２９３細胞に対する結合を示さなかった。上記のＦＡＣＳ結合試験により観察された結果と比較し、免疫染色法により観察された結果の間の相違は、使用した試薬、例えば、界面活性剤、緩衝液等の違いによって説明することが可能である。
【０１９５】
【表１９】
0006533512.tif 000020
【０１９６】
他の実験においては、遺伝子操作を行った全長ヒト（配列番号：６７０）Ｎａv１．７を過剰発現させたヒト胎児腎臓２９３株化細胞（ＨＥＫ２９３）（上述した通り）内で発現する全長ｈＮａv１．７に対する結合について、ウェスタンブロット法を用いて、抗−Ｎａv１．７抗体の試験を行った。
【０１９７】
プロテアーゼ阻害剤を補充したＲＩＰＡ緩衝液を用いて細胞を収集した。１５μＬの細胞溶解物を、マイクロチューブ中、１５μＬのＳＤＳ試料緩衝液と混合し、１００℃で５分間加熱した。試料をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより単離し、ＰＶＤＦ膜に移動させた。膜を、５％（ｗ／ｖ）脱脂粉乳を用い、室温で１時間ブロッキングした後、抗−Ｎａv１．７抗体と、４℃で一晩インキュベートした。膜を、ＴＢＳ−Ｔを用いて５分間、３回洗浄した
後、二次抗体（１：１０，０００希釈）と室温で１時間インキュベートした。二次抗体は、試験を行った抗−Ｎａv１．７抗体のＦｃ断片に応じて、ＨＲＰ−結合抗−ヒトＩｇＧ又は抗−マウスＩｇＧであった。膜を１５分間、３回洗浄した後、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＥＣＬ溶液を用いて発色させ、感光性フィルムにさらした。
【０１９８】
以下の表１４に示すように、以下の抗−Ｎａv１．７抗体は、Ｈ１Ｍ７９７Ｎ、Ｈ２Ｍ７９９Ｎ、Ｈ１Ｍ８３４Ｎ及びＨ１Ｍ８３９Ｎ細胞由来のＰＶＤＦブロットした全長Ｎａv１．７との結合を示した。
【０１９９】
【表２０】
0006533512.tif 000021
【実施例６】
【０２００】
ペプチド結合競合によって評価した、細胞表面ｈＮａv１．７に対する抗−Ｎａv１．７抗体結合の特異性
ＨＥＫ２９３細胞内で発現する全長Ｎａv１．７に対する抗−Ｎａv１．７ヒト抗体の結合特異性を、フローサイトメトリーを用いたペプチド競合実験により測定した。
【０２０１】
ＧＦＰにそのＮ末端で融合した全長Ｎａv１．７を安定的にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞（Ｎａv１．７−ＧＦＰ−ＨＥＫ２９３）を、本試験に使用した。Ｎａv１．７を過剰発現する、トランスフェクトされた細胞に対する抗体の結合を、過剰のペプチド−存在下における結合、及び親ＨＥＫ２９３株化細胞に対する結合と比較した。結合実験を実施するため、１ｍＭ  ＥＤＴＡのＰＢＳ溶液を用いて付着細胞を収集し、洗浄し、５％  ＦＢＳを含む冷ＰＢＳに再懸濁した。各結合実験について、最終濃度が３．３ｎＭ（ＰＢＳ／５％  ＦＢＳ中）で抗−Ｎａv１．７抗体を、直接、又は抗体のループ特異性に対応する配列を有する、１０００倍モル過剰（ＰＢＳ／５％  ＦＢＳ中、最終濃度３．３μＭ）の合成ペプチドとともに氷上で１０分間インキュベートした後のいずれかに細胞に加えた。ＰＢＳ溶液を用いて付着細胞を収集し、洗浄し、５％  ＦＢＳを含む冷ＰＢＳに再懸濁した。各結合実験について、最終濃度が３．３ｎＭ（ＰＢＳ／５％  ＦＢＳ中）で抗−Ｎａv１．７抗体を直接、又は抗体のループ特異性に対応する配列を有する、１００倍モル過剰（ＰＢＳ／５％  ＦＢＳ中、最終濃度３．３μＭ）の合成ペプチドとともに氷上で１０分間インキュベートした後のいずれかに細胞に加えた。Ｈ４Ｈ３９１Ｐ、Ｈ４Ｈ４４３Ｂ、Ｈ４Ｈ４４８Ｂ、及びＨ１Ｍ７９７Ｎと命名した抗体を、上述したように、ＥＣループ３−１に対応する合成ペプチド（配列番号：６７０のアミノ酸残基２６９〜３３８）とプレインキュベートしたが、Ｈ４Ｈ４６８Ｐ及びＨ１Ｍ８５２Ｎと命名した抗体は、ＥＣループ３−３（配列番号：６７０のアミノ酸残基１３３３〜１３８２）に対応する合成ペプチドとプレインキュベートした。次いで、抗体又は抗体−ペプチド混合物を、氷上で細胞とともに２０分間インキュベートし、その後、５００μＬの冷ＰＢＳ／５％  ＦＢＳを加えた。遠心単離により細胞を集め、５００μＬの冷ＰＢＳ／５％  ＦＢＳに再懸濁した後、抗体イソ型に適合する二次抗体（シアニンと結合した抗−ヒト−Ｆｃ、又はアロフィコシアニンと結合した抗−マウス−Ｆｃ）を加えた。結合はフローサイトメトリー装置で検出し、装置のソフトウェアを用い、結合の割合として分析した。ＦＡＣＳ分析については、健康な生細胞のみを数えるため、適切なゲーティングを適用した。Ｎａv１．７−ＧＦＰ−ＨＥＫ２９３細胞に対する二次抗体単独でのバックグラウンド染色について試験を行い、全ての試料について記録し、結果は１〜２％結合の範囲であった。
【０２０２】
ペプチド競合について試験を行った６種の抗−Ｎａv１．７は、各抗体−特異的ペプチドとプレインキュベートした時に結合の減少を示した（表１５）が、無関係なペプチドとインキュベートした時には同様の減少を示さなかった。
【０２０３】
【表２１】
0006533512.tif 000022
【実施例７】
【０２０４】
ＩｏｎＷｏｒｋｓ（Ｑｕａｔｔｒｏ（ＩＷＱ）Ｐａｔｃｈ  Ｃｌａｍｐ  Ｄｅｖｉｃｅにより測定した膜貫通脱分極における抗−Ｎａv１．７抗体の影響
１８１０と命名されたＮａv１．７安定株化細胞（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、又は全長Ｎａv１．７受容体及びＮ−末端にＧＦＰタグを発現する、安定にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞を、ＩｏｎＷｏｒｋｓ（Ｑｕａｔｔｒｏ（ＩＷＱ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｄｅｖｉｃｅｓ）パッチクランプアッセイ装置を用いた、膜貫通電流フラックスにおけるＮａv１．７抗体の影響について試験を行うために使用した。貯蔵溶液からの、Ｎａv１．７に対するヒト抗体を、１００（ｇ／ｍＬシステム緩衝液（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ，４ｍＭ  ＫＣｌ，１．８ｍＭ  ＣａＣｌ2，１０ｍＭグルコース，１ｍＭ  ＭｇＣｌ2  ｐＨ＝７．３）中）の濃度で使用した。マウスの定常領域を有するコントロール抗体は、陰性コントロールとして含まれていた。コントロール抗体及び１ｎｍが、ＴＴＸを要するコントロールとして含まれていた。対照抗体及び１００ｎＭのＴＴＸは、陽性コントロールとして含まれていた。
【０２０５】
抗−Ｎａv１．７抗体を、最終濃度２２３ｎＭに３倍希釈し（一部が細胞懸濁液、一部がシステム緩衝液、一部が抗体溶液）、反復脈動により、細胞を最大３０分仇インキュベートした。全ての抗体は、別々の３日間に三重に試験を行った。アッセイは、８０ｍＶの保持電位で実施し、同様に、不活性化状態と閉鎖状態とで分割されたチャネルを有する抗体を提供するように設計された。膜貫通電流の阻害は、最初のパルスの後、又は-８０ｍＶでの保持電位から１０番目のパルスの後に算出した。
【０２０６】
表１６に示すように、複数の試験抗体は、複数の実験において、膜貫通脱分極を阻害することを示した。
【０２０７】
【表２２】
0006533512.tif 000023
【実施例８】
【０２０８】
Ｐｏｒｔ−ａ−Ｐａｔｃｈ（登録商標）パッチクランプ装置により測定した抗−Ｎａv１．７抗体によるｈＮａv１．７チャネル脱分極の機能的阻害
マイクロチップをベースとするパッチクランプシステム（Ｐｏｒｔ−ａ−Ｐａｔｃｈ（登録商標）、Ｎａｎｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｍｕｎｉｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、抗−Ｎａv１．７ヒト抗体のＮａv１．７イオンチャネルを介した電位開口型イオン束を阻害する能力を測定した。これらの実験のために、ＧＦＰにその末端で融合したヒトＨＥＫ２９３株化細胞を安定的にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３株化細胞を使用した。記録の日に、トリプシン（０．０２５％）で処理することにより細胞を収集し、遠心単離し、５００μＬの細胞外緩衝液溶液（１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、４ｍＭ  ＫＣｌ、１  ｍＭ  ＭｇＣｌ2、２ｍＭ  ＣａＣｌ2、５ｍＭグルコース、及びグルコース及び１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ＮａＯＨによりｐＨ７．３に調整）に再懸濁した。その後、５μＬの細胞懸濁液を記録チップ上に載せた。まず、パッチを安定化するため、０．１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミンを含む細胞外緩衝液で約５分間細胞を灌流した。Ｎａv１．７電流は、１０秒毎に、−１００ｍＶの保持電位から０ｍＶへの２０ｍｓの反復脱分極工程を誘発した。１ｎＡよりも大きいナトリウム内向き電流を示す細胞を、３００、５０又は３０ｎＭの最終濃度で試験又は対照抗体溶液を加えることにより、イオンチャネル阻害について試験した。細胞内記録溶液の組成は、ＣｓＯＨでｐＨ７．３に調整した、１４０ｍＭ  ＣｓＦ、１０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＧＴＡ及び１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳであった。十分に確認された電位開口型ナトリウムチャネル遮断薬を、陽性コントロールとして実験の最後に適用した。
【０２０９】
チャネルブロッキングは、複数の遮断実験にわたり平均され、抗体の非存在下、電流束に対する抗体の存在において観察された電流の阻害の割合として測定した。
【０２１０】
表１７に示すように、抗−Ｎａv１．７抗体は、非阻害電流レベルと比較し、最大で７０％の電圧依存脱分極を阻害することが示された。
【０２１１】
【表２３】
0006533512.tif 000024
【実施例９】
【０２１２】
Ｑ−パッチクランプ装置により測定した、抗−Ｎａv１．７抗体によるｈＮａv１．７チャネルの機能的阻害
１８１０と命名されたＮａv１．７安定株化細胞（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、又は全長Ｎａv１．７受容体及びＮ−末端にＧＦＰタグを発現する、安定にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞を、Ｑ−パッチ（Ｓｏｐｈｉｏｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）自動化パッチクランププラットフォームを使用し、ヒトＮａv１．７電流におけるＮａv１．７抗体の効果の試験を行うために使用した。記録の日に、アクターゼ細胞単離溶液（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，カタログ番号ＳＲＣ００５）により細胞を収集し、１ｍＬの血清を含まない溶液［ＣＨＯ−ＳＦＭ−ＩＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カタログ番号３１０３３），ＨＥＰＥＳ  ２５ｍＭ及びペニシリン／ストレプトマイシン  １００単位／ｍＬ］に再懸濁した。細胞懸濁液を振盪機上に室温で３０分間置いた後、細胞をＱ−パッチに載せた。Ｎａv１．７電流は、３０秒毎に、−１００ｍＶの保持電流から−３０ｍＶへの２０ｍｓの１回の脱分極パルス、その後の０ｍＶへの２０ｍｓ（５秒離して）への脱分極パルスを誘発した。ヒト抗−Ｎａv１．７抗体を、０．２％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む細胞外緩衝液（１３７ｍＭ  ＮａＣｌ，４ｍＭ  ＫＣｌ，１．８ｍＭ  ＣａＣｌ2，１ｍＭ  ＭｇＣｌ2，１０ｍＭグルコース、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ，ｐＨ＝７．３）で最終濃度１００ｎＭに希釈した。ＴＴＸ（１００ｎＭ）を、陽性コントロールとして実験の最後に含有させた。
【０２１３】
まず、電流を安定化させるために繰り返しパルス処理をしながら、細胞を０．２％  ＢＳＡで１６分間インキュベートし、０．２％  ＢＳＡの存在下、繰り返しパルス処理をしながら抗−Ｎａv１．７抗体と更に１６分間インキュベートした。。電流の電圧依存を、０．２％  ＢＳＡによるインキュベーションの最後と抗体とのインキュベーションの最後に記録し、電流は、−１００ｍＶの保持電流から、５ｍＭの増加で−８５ｍＶ〜＋３０ｍＶの工程の脱分極で誘発された。全ての抗体は、３日以上離れた日に、二重に試験を行った。チャネルブロッキングは、複数の遮断実験にわたり平均され、抗体の非存在下、電流束に対する抗体及び０．２％  ＢＳＡの存在下に観察された電流束の阻害割合として測定した。
【０２１４】
表１８に示すように、複数の実験において、ほとんどの抗体はヒトＮａv１．７の機能的阻害を示した。
【０２１５】
【表２４】
0006533512.tif 000025
【０２１６】
ほとんどの抗体はある程度の阻害を示しているので、どの抗体を更に試験するかについて決定するための一定の基準を設定した。試験を行った４０％の１５％以上のヒトＮａv１．７電流を阻害するＮａv１．７抗体を、４点用量応答アッセイにおいて更に試験を行うために選択した。まず、電流を安定化させるために繰り返しパルス処理しながら、細胞を、０．２％  ＢＳＡで１６分間インキュベートし、０．２％  ＢＳＡの存在下、各濃度で抗−Ｎａv１．７抗体とインキュベートした。４種の濃度を、同じウェルで連続的に（
パルス処理をしながら）試験を行った。Ｎａv１．７抗体の単一用量試験と同様、ヒトＮａv１．７電流の電圧依存性を、ＢＳＡとのインキュベーションの最後、抗体の各濃度でのインキュベーションの最後に記録した。ＴＴＸ（１００ｎＭ）を、陽性コントロールとして記録の最後に含有させた。全ての抗体は、３日以上離して二重で試験を行った。チャネルブロッキングは、複数の遮断実験にわたり平均され、抗体の非存在下、電流束に対する抗体及び０．２％  ＢＳＡの存在において観察された電流の阻害の割合として測定した。
【０２１７】
１２種の抗体の試験を行い、そのうちの８種が、用量依存的な、ヒトＮａv１．７電流の阻害を示した。陰性コントロールの抗体（ＲＥＧＮ１００２）も含まれていた。結果を表１９に要約する。
【０２１８】
【表２５】
0006533512.tif 000026
【０２１９】
８種の抗体について、１μｇ／ｍＬのドキシサイクリンを用いて一晩誘導した後、全長ヒトＮａv１．５を発現するＨＥＫ２９３細胞を用い、交差反応性について、更に試験を行った。Ｎａv１．５電流は、５秒毎に、−１００ｍＶの保持電流から０ｍＶへの２０ｍｓの１回の脱分極パルスに誘発された。まず、電流を安定化させるために繰り返しパルス処理しながら、細胞を、０．２％  ＢＳＡで１６分間インキュベートし、０．２％  ＢＳＡの存在下、繰り返しパルス処理をしながら抗−Ｎａv１．７抗体と更に１６分間インキュベートした。ＴＴＸ（２μｍＭ）を、陽性コントロールとして記録の最後に含有させた。ヒトＮａv１．７抗体を、０．２％ＢＳＡを含む細胞外記録溶液（１３７ｍＭ  ＮａＣｌ，４ｍＭ  ＫＣｌ，１．８ｍＭ  ＣａＣｌ2，１ｍＭ  ＭｇＣｌ2，１０ｍＭグルコース、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ，ｐＨ＝７．３）で最終濃度１００ｎＭ又は３００ｎＭに希釈した。全ての抗体は、３日以上離れた日に、二重に試験を行った。チャネルブロッキングは、複数の遮断実験にわたり平均され、抗体の非存在下、電流束に対する抗体及び０．２％
ＢＳＡの存在下に観察された電流束の阻害割合として測定した。表２０に示すように、抗体は、ヒトＮａv１．５電流の顕著な阻害を示さなかった。
【０２２０】
【表２６】
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【実施例１０】
【０２２１】
後根神経節（ＤＲＧ）侵害受容ニューロンにと結合する抗体
Ｎａv１．７は、後根神経節（ＤＲＧ）侵害受容ニューロンで優先的に発現する。選択したヒト抗−Ｎａv１．７抗体を、ヒトＮａv１．７を発現するように遺伝子操作されたマウス（Ｓｃｎ９ａhu/+）、ヒト細胞外孔ループを含むキメラＮａv１．７を発現するように遺伝子操作されたマウス（Ｓｃｎ９ａhu3-1/hu3-1）及び野生型マウス（Ｓｃｎ９ａ+/+）から収集したＤＲＧニューロンに対する結合について評価した。
【０２２２】
手短に言うと、腰部ＤＲＧを、Ｓｃｎ９ａhu/+、Ｓｃｎ９ａhu3-1/hu3-1、及びＳｃｎ９ａ+/+マウスから収集した。単離後、細胞を、ポリ−ＤＬ−オルニチン（０．１ｍｇ／ｍＬ）及びラミニン（５μｇ／ｍＬ）で処理した９６ウェルプレートに、５．５×１０4細胞／ウェルの密度で入れ、９６．５％空気及び３．５％  ＣＯ2で３７℃でインキュベートした。５０ｎｇ／ｍＬの神経成長因子、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン／ストレプトマイシン、ＭＥＭビタミン類、及び１０％の加熱不活性ウシ胎児血清を補充したＤＭＥＭの培地中に維持した。
【０２２３】
培地中で３〜８日後、ニューロンを、ＰＢＳ中、４％  ＰＦＡ及び４％ショ糖内に３０分間固定し、１０％  ＮＧＳ及び０．１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００内で透過処理した。次いで、ニューロンを、６６ｎＭ（１μｇ）の抗−Ｎａv１．７抗体と４℃で一晩インキュベートした。次の日、ニューロンを、１：４００に希釈した、抗−ヒトＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５９４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）結合二次抗体中、室温で１時間インキュベートした。蛍光顕微鏡を用いて撮像した。
【０２２４】
ＤＲＧに対する抗−Ｎａv１．７ヒト抗体の結合特異性を、免疫細胞化学を用いたペプチド競合実験により測定した。ヒトの配列由来のＮａv１．７又はＮａv１．５のドメイン１の細胞外ループ３（ＥＣ３−１）及びドメイン３の細胞外ループ３（ＥＣ３−３）を表わす合成ペプチド（Ｃｅｌｔｅｋ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，ＬＬＣ，１５１５  Ｅｌｍ  Ｈｉｌｌ  Ｐｉｋｅ，Ｓｕｉｔｅ  １０４，Ｎａｓｈｖｉｌｌｅ，ＴＮ  ３７２１０，ＵＳＡ）を合成し、抗−Ｎａv１．７抗体の結合プロファイルの特徴付けを行った。ＤＲＧに対する抗体結合を、過剰のペプチドの存在下における結合と比較した。ＤＲＧニューロンに対するＮａv１．７抗体の結合は、Ｅｌｉｓａ及びＢｉａｃｏｒｅにより測定したペプチドに対する異種間結合と一致していた（表２１Ａ及び２１Ｂ）。
【０２２５】
【表２７】
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【実施例１１】
【０２２６】
カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）放出アッセイ
神経ペプチド、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）は、刺激に反応して、ペプチド性Ａ（及びＣ線維侵害受容ニューロンの末梢及び脊髄の末端から放出される。神経ペプチドの放出は、痛覚をもたらす神経性炎症、肥満細胞の脱顆粒、及び他の炎症性反応を開始する。プロスタグランジンＥ２、ブラジキニン、セロトニン、ヒスタミン及びカプサイシン等の炎症性メディエータは、インビトロ及びインビボで侵害受容ＤＲＧを直接感作及び刺激する。ＤＲＧの感作及び活動電位の発火は、ＣＧＲＰを放出し、それによってＤＲＧ侵害受容機能を測定するための手段として機能する、異なる炎症メディエータによりインビトロで達成され得る。
【０２２７】
インビトロにおけるＤＲＧのＣＧＲＰの炎症性上清誘発性放出においてＮａv１．７がどのように役割を果たしているかを決定するためにコントロールとして、２種の公知のナトリウム電位開口型チャネル阻害剤（テトロドトキシン（ＴＴＸ）及びリドカインを試験した。
【０２２８】
手短に言うと、培養４〜８日のＤＲＧをアッセイ緩衝液で１度洗浄し、３７℃に維持した。炎上性上清をアッセイ緩衝液（例えば、１０μＭプロスタグランジン、１０μＭブラジキニン、及び１μＭカプサイシン）中に調製した。ニューロンを、１０ｎＭ  ＴＴＸ又は５ｍＭリドカインのいずれかと２０分間インキュベートし、次いで、炎症性上清又は１０ｎＭ  ＴＴＸ及び炎症性上清、又は５ｍＭリドカイン及び炎症性上清を用いて２０分間刺激した。炎症性上清で刺激する前に、ニューロンを阻害剤と２０分間プレインキュベートすると、ＣＧＲＰの炎症性上清誘導性放出が顕著に増大することが示された。しかし、ニューロンを阻害剤及び炎症性上清と２０分間同時インキュベートすると、阻害剤は、ＣＧＲＰの炎症性上清誘導性放出に影響しない。
【０２２９】
他の毒素、ＰｒｏＴｘ−ＩＩを用いて同様の実験を実施した。２０ｎＭで、ＰｒｏＴｘ−ＩＩはＮａv１．７をほとんど阻害する。この結果は、ＰｒｏＴｘ−ＩＩとの２０分間のプレインキュベーションがＣＧＲＰの放出を顕著に増大するが、ＰｒｏＴｘ−ＩＩを炎症性上清に添加しても、炎症性上清が誘導するＣＧＲＰ放出に影響しないことを示している。
【０２３０】
炎症性上清誘導性のＣＧＲＰ放出におけるＮａv１．７阻害剤の影響は、以下に示すように、Ｓｃｎ９ａ+/+、Ｓｃｎ９ａhu3-1/hu3-1、及びＳｃｎ９ａhu/+マウスから単離したＤＲＧにおいても示された。
【０２３１】
他の実験においては、Ｓｃｎ９ａ+/+から単離したＤＲＧにおけるインビトロでのＣＧＲＰ放出についてのそれらの影響について、３００ｎＭ濃度で、選択された抗−Ｎａv１．７ヒト抗体の試験を行った。結果は、炎症性上清による刺激前に、抗−Ｎａv１．７で２０分間プレインキュベートすると、ＣＧＲＰの放出が顕著に増大することを示した。
【０２３２】
同様の実験において、Ｓｃｎ９ａ+/+、Ｓｃｎ９ａhu3-1/hu3-1、及びＳｃｎ９ａhu/+マウスから単離したＤＲＧにおけるインビトロでのＣＧＲＰ放出についてのそれらの影響について、選択された抗−Ｎａv１．７ヒト抗体−試験を行った。Ｈ４Ｈ８５２Ｎ及びＨ４Ｈ４３９Ｂのようなマウスと交差しないヒトＮａv１．７抗体、  Ｈ４Ｈ４３９Ｂ及びＨ１Ｈ１００６Ｂのようなドメイン１の細胞外ループ３（ＥＣ３−１）と結合する抗体、ドメイン３の細胞外ループ３（ＥＣ３−３）と結合する抗体の試験により、ＤＲＧニューロンにおけるＮａv１．７チャネルとの特異的結合が示された。表２２に示すように、インビトロでのＣＧＲＰ放出アッセイにおけるＮａv１．７抗体の影響は、ＥＬＩＳＡ及びＢｉａｃｏｒｅにより測定されたペプチドに対する異種間結合と相関している。これらのデータは、生成されたＮａv１．７抗体が、ＤＲＧニューロン中でヒトＮａv１．７チャネルと特異的に結合し機能的であることを示唆している。
【０２３３】
【表２８】
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【実施例１２】
【０２３４】
急性侵害受容のラットモデルにおける、インビボでの抗−Ｎａv１．７抗体の効果
ラットにおける、侵害受容性疼痛の効果を判定するため、特定の抗−Ｎａv１．７抗体の効果を評価するために試験を実施した。ＲＥＧＮ１０６３（Ｈ４Ｈ４３９Ｐ）及びＲＥＧＮ１０６４（Ｈ４Ｈ４６８Ｐ）と命名された抗−Ｎａv１．７抗体、並びに対照のイソ型適合抗体ＲＥＧＮ６４６を、５０ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内注射を介して投与した。機械的及び熱的侵害受容しきい値（それぞれ足の圧力、及びハーグリーブス試験）試験を、抗体投与前に実施し、抗体の投与約２４及び４８時間後に再度実施した。
【０２３５】
動物
オスのスプラーグドーリーラット（Ｈｓｄ：Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（登録商標）ＳＤ（登録商標）ＴＭ，Ｈａｒｌａｎ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、Ｉｎｄｉａｎａ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）を、ケージあたり３匹収容し、試験開始前に施設の環境に順応させ、摂食状態で投与した。全ての試験は、盲検法で行った。
【０２３６】
治療前のベースライン評価後、動物を、処置群の平均値がほぼ等しくなるように、足の圧力の終点のベースライン応答しきい値に基づいて処置群に割り当てた。手短に言うと、上記基準を満たした全ての動物は、最低から最高まで応答しきい値によってランク付けされ、以下のように治療が割り当てられた（例えば、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｂ、Ｃ等）。その後、一連の所定の動物全体の治療の分布が予測可能ではなかったように、動物は、その後、治療時間に基づいて順々に投与された。
【０２３７】
抗−Ｎａv１．７候補抗体
本試験において、抗体はリン酸緩衝食塩水（Ｓｉｇｍａ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒｅｄ  Ｓａｌｉｎｅ  １０ｘ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ）を食塩水０．９％（Ｐｈｏｅｎｉｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）で１：９ｖｏｌ：ｖｏｌで希釈することにより個々に調製した。手短に言うと、凍結保存した抗体を室温に戻した後、あらかじめ標識してある濃度から５０ｍｇ／ｄｍＬの濃度に調整した。全ての抗体は、個々の動物の体重を基準に、１ｍＬ／ｋｇの用量容積で腹腔注入により投与した。
【０２３８】
機械的しきい値試験
機械的刺激に対するベースライン及び治療後足逃避（ｐａｗ  ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ）しきい値を、Ｒａｎｄａｌｌ−Ｓｅｌｉｔｔｏ足圧力装置（Ｕｇｏ  Ｂａｓｉｌｅ  Ａｎａｌｇｅｓｙｍｅｔｅｒ，ｍｏｄｅｌ  ＃７２００）を用いて測定した。この装置は、直線的に増加する機械的な力を発生する。３番目及び４番目の中足間に配置されたドーム状のプラスチックチップにより後ろ足の足底表面に刺激が適用される。組織の損傷を避けるため、カットオフ圧を２５０ｇで設定した。機械的しきい値は、足逃避、奮闘、及び／又は発生を含む、第１の疼痛行動のグラムで表す力として定義された。平均値及び平均値の標準誤差（ＳＥＭ）は、各処置群について負傷した足について決定した。
【０２３９】
熱しきい値テスト
有害な刺激に対するベースライン及び治療後の足逃避潜伏時間は、足底試験装置（ＩＩＴＣ，Ｗｏｏｄｌａｎｄ  Ｈｉｌｌｓ，ＣＡ，モデル番号３９０）を使用した、放射熱試験（Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓ，Ｋ．ら，１９８８，Ｐａｉｎ，Ｖｏｌ．３２（１）：７７−８８）を用いて測定した。刺激強度は、最大出力を３０％に設定し、カットオフ時間は４５秒に設定した。ラットを２８±２℃に加温したガラス台に置き、各試験セッションの前に、最低１５分間、試験室に馴化させた。熱刺激は、足の足底表面に適用し、足あたり、ラット毎に３つの読み取り値を、各試験セッションにおいて取得した。熱しきい値は、刺激された足の侵害防御足逃避、足を引っ込めること、足を咬むこと、及び／又は足をなめることを含む、最初の疼痛行動を秒で表した潜伏時間と定義されている。動物あたりの各足の読み取りを、それぞれ個々の時点で平均し、平均及び平均の標準誤差（ＳＥＭ）は、各処置群について、左右の足（プールされた値）について決定した。
【０２４０】
データ分析
試験品が足逃避しきい値又は熱侵害受容応答を大幅に変化させるかどうかを判断するために、対照の抗体（ＲＥＧＮ６４６）を、所定の候補抗体、ＲＥＧＮ１０６３（Ｈ４Ｈ４３９Ｐ）及びＲＥＧＮ１０６４（Ｈ４Ｈ４６８Ｐ）と比較し、各時点（治療後１、２、及び４時間）での対応のないｔ−検定を実施した。統計分析は、ＰｒｉｓｍTM  ５．０１（ＧｒａｐｈＰａｄ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して実施した。
【０２４１】
結果
図２に示すように、候補抗体ＲＥＧＮ１０６３（Ｈ４Ｈ４３９Ｐ）及びＲＥＧＮ１０６４（Ｈ４Ｈ４６８Ｐ）の５０ｍｇ／ｋｇでの腹腔内注射によって、対照抗体（ＲＥＧＮ６４６）で処置した動物と比較し、注射後２４又は４８時間の機械的刺激に対する足逃避しきい値の大幅な変化はなかった（有意性をｐ≦０．０５に設定、対応のないｔ−検定）。示したものは、特定時点における、ＲＥＧＮ６４６、ＲＥＧＮ１０６３及びＲＥＧＮ１０６４で処置した動物についての足逃避しきい値の平均±ＳＥＭ（ｎ＝８）である。
【０２４２】
図３及び下記表２３に示すように、候補抗体ＲＥＧＮ１０６３（Ｈ４Ｈ４３９Ｐ）の５０ｍｇ／ｋｇの腹腔内注射によって、ＲＥＧＮ６４６と比較し、注射後４８時間での熱侵害受容しきい値の大幅な上昇が示された（＋：ｐ≦０．０５、対応のないｔ−検定）。ＲＥＧＮ１０６４（Ｈ４Ｈ４６８Ｐ）は５０ｍｇ／ｋｇにおいて、投与後いかなる時点でも熱侵害受容しきい値を大幅に変化させなかった。示したものは、特定時点における、ＲＥＧＮ６４６、ＲＥＧＮ１０６３及びＲＥＧＮ１０６４−で処置した動物についての逃避しきい値に対する潜伏時間の平均±ＳＥＭ（ｎ＝８）である。
【０２４３】
結論
候補の抗−Ｎａv１．７抗体、ＲＥＧＮ１０６３及びＲＥＧＮ１０６４の投与により（５０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）、対照抗体、ＲＥＧＮ６４６と比較し、試験を行った以下の用量でいかなる時点においても、機械的刺激しきい値に影響を及ぼさないことが示された。しかし、ＲＥＧＮ１０６３の投与（５０  ｍｇ／ｋｇ，腹腔内投与）は、投与４８時間後の時点で、対照のＲＥＧＮ６４６と比較し、熱侵害受容しきい値が顕著に上昇していた。対照抗体と比較した、熱侵害受容しきい値におけるＲＥＧＮ１０６３及びＲＥＧＮ  １０６４の効果を示すデータを下記表２３（＊ｐ≦０．０５）及び図３に示す。
【０２４４】
【表２９】
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【実施例１３】
【０２４５】
カラギーナン疼痛モデルにおけるインビボでの疼痛の減少に対する抗−Ｎａv１．７抗体の効果
海藻抽出物から得られた多糖類、λのカラギーナンは、注射３〜５時間に、ピーク効果を伴う強固な炎症及び侵害受容過敏症をもたらす。選択した抗−ｈＮａv１．７抗体を、λカラギーナン誘発性熱侵害受容過敏症を減少させる能力について試験を行う。
【０２４６】
Ｃ５７ＢＬ／６を、試験を行う抗体毎、８匹のマウスの群に分ける。全てのマウスに、約５０ｍｇ／ｋｇの抗体を皮下注射により投与する。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの対照群には、試験抗体として、同じイソ型の無関係の抗体を投与する。１％〜２％のλ−カラギーナン溶液（生理食塩水に溶解）２５μＬを、左の後ろ足の足底側に皮下（ｓ．ｃ．）注射により、マウスに、末梢性炎症を起こす。λカラギーナン注射の前、１及び３時間後のマウスの後ろ足熱感受性は、有害な熱刺激から後ろ足を逃避する動物の潜伏時間を測定する、ハーグリーブス装置（ＩＩＴＣ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．）を使用して測定する。各マウスについて、３回の測定を別々に行い、各群の平均の熱侵害受容を計算する（平均±ＳＥＭ）。一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を使用し、各群の平均値を、対照群と比較して統計的に比較する。浮腫の存在量も、λ−カラギーナン注射の前及び３時間後に、ノギスにより後ろ足の厚さを測定することによって測定する。実験の最後に血液を集め、循環する抗−ｈＮａｖ１．７抗体の濃度（血清Ａｂ）を、標準的なＥＬＩＳＡアッセイを使用して測定する。手短に言えば、プレートを、ヤギ抗−ヒトＦｃ抗体（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）でコーティングし、血清Ａｂを捕獲する。次いで、プレートに血清を加え、捕獲した抗−ｈＮａv１．７抗体を、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）が結合したヤギ抗−ヒトＩｇＧ抗体（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用し、比色基質により測定する。
【０２４７】
Ｎａv１．７活性を遮断又は中和するのに十分に効果的な量の抗−Ｎａｖ１．７抗体を受け入れた動物は、同じイソ型の無関係の抗体を受け入れた動物と比較して、熱感受性が大幅に減少することを示すであろう。
【実施例１４】
【０２４８】
二重特異性抗−Ｎａv１．７抗体の生成
Ｎａv１．７特異的チャネル遮断薬は、ループ特異的可溶性領域が、単一の結合分子内で二重ループの特異性を付与するために一緒に連結された、二重特異性の形式（二重特異性）で生成される。適切に設計された二重特異性は、Ｎａv１．７のチャネル特異性及び結合親和性の両方を向上させることにより、全体的なチャネル遮断効果を増強するはずである。個々のループ（例えば、ＥＣ３−１、ＥＣ−３−３、又はパドル領域２−１Ｎａv１．７ループ特異的バインダー）についての特異性を有する可変領域又は１つのループ内で異なる領域と結合し得る可変領域は、各可変領域が個々のループ又は１つのループ内の異なる領域に同時に結合できる、構造的な骨格で対になっている。二重特異性についての一例においては、１つのループ特異性を有するバインダー由来の重鎖可変領域（ＶH）は、ＶHの元の特異性を破壊することなく、元のＶHと対を形成することのできる、非類似のＶLパートナーを同定するための第２のループ特異性を有する一連のバインダー由来の軽鎖可変領域（ＶL）と再結合している。このように、単一のＶL断片（例えば、ＶL１）は、２つの異なるＶHドメイン（ＶH１及びＶH２）と結合し、２つの結合「アーム」（ＶH１−ＶL１及びＶH２−ＶL１）からなる二重特異性を生成することができる。単一のＶL断片を使用すると、システムの複雑さが低減し、それによって、簡略化され、クローニング、発現及び二重特異性を生成するために使用される使用プロセスの効率が増大する。
【０２４９】
二重特異性バインダーは、上記抗体のアッセイのいずれかにおける、Ｎａv１．７の結合及び機能的遮断について試験を行う。例えば、Ｎａv１．７発現細胞に対する二重特異性抗体の結合は、細胞に結合した抗−Ｎａv１．７二重特異性抗体を認識する、蛍光標識した二次抗体を使用してフローサイトメトリーにより測定する。異なる種変異体内、又は異なる種変異体間の種々のＮａv１．７ループの交差反応性を、異なるループを表わす合成ペプチドがマイクロタイタープレートのウェルにコーティングされているＥＬＩＳＡ結合アッセイを用いて評価し、二重特異性の結合は、二次検出抗体を使用することにより測定する。また、二重特異性抗体またはペプチドのそれぞれが捕捉されるセンサー表面にわたりペプチドまたは二重特異性抗体を流すことにより、リアルタイムのペプチドの抗体に対する結合相互作用を測定する表面プラズモン共鳴実験を用いてループペプチドによる結合実験も実施することができる。二重特異性によるＮａv１．７チャネルの機能的遮断は、二重特異性が、Ｎａv１．７発現細胞の電圧刺激脱分極を阻害するパッチクランプアッセイを用いて測定される。上述の急性侵害受容及びカラギーナンモデルを含むインビボモデルは、インビボでの効果を評価するために使用されるであろう。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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