(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
パパベル  ロエアス抽出物から得られ、以下の構造を有する、核を染色するための分子。
【化１】
0006564030.tif 000002
【請求項２】
５−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−（４−メトキシ−３−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−（（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）フェニル）−４Ｈ−クロメン−４−オンである、請求項１に記載の分子。
【請求項３】
自動又は手動の診断染色方法による組織病理学、微生物学、又は細胞学上の顕微鏡評価のための核の染色における、請求項１に記載の分子の使用。
【請求項４】
免疫組織化学診断技術における、請求項１に記載の分子の使用。
【請求項５】
請求項１に記載の分子を含有する、染色組成物。
【請求項６】
前記分子が糖基、アルキル基、飽和脂肪基、アルコール、酸、アルカロイド、蛍光物質、放射性対照剤、ナノマテリアル、分散剤、及び媒染剤組成物として伴う金属複合体と結合する、請求項５に記載の染色組成物。
【請求項７】
パパベル  ロエアスから抽出する工程を含む、請求項１に記載の分子を含む染色組成物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
パパベル  ロエアス（Ｐａｐａｖｅｒ  ｒｈｏｅａｓ）染料処方は、誘導体及び相乗的分子を伴う新規バイオフラボノイドを含む。診断目的のために、「細胞及び組織」の核の特異的染色を与える新規核染料がパパベル  ロエアス抽出物から処方される。本発明は、「ヘマトキシリン」の日常的な染料の代替処方であり、保健部門における診断の利点があり、また経済に貢献する染料に関する。
【０００２】
概説
パパベル  ロエアス（Ｐａｐａｖｅｒ  ｒｈｏｅａｓ）処方は、主に核染料として使用され、新規分子を含み、毎年経済に１００〜１５０億ドル貢献する可能性があり、ヘマトキシリンの代替物である。供給源は、世界の絶滅の危機に瀕している熱帯雨林を保存し、地域の生態系のバランスをとる取り組みに貢献し、工業製品として有用である。（Ａｎａｔｅｃｈ  ＬＴＤ．“ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ  ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，’ｂｏｉｌｉｎｇ  ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ  ｍａｒｋｅｔ”“Ｓｕｍｍｅｒ  ２００８  ＩＮＮＯＶＡＴＯＲ）。
【０００３】
パパベル  ロエアス処方は、日常的な診断法で用いられるヘマトキシリンの従来型染料の合理的代替物である。ヘマトキシリンに対して高まる必要性は、ヒト集団の数及び診断的治療的医療処置の増加に起因する。１グラム当たりのヘマトキシリンの販売価格は非常に高く、生産は世界の熱帯雨林を危険にさらし、また生態系にリスクを負わせる。
【０００４】
本明細書におけるパパベル  ロエアスは、発見され処方された新規細胞−組織染色源である。パパベル  ロエアス分子は非常に活性で機能的であり、これはバイオフラボノイド分子であり、エオシンと組み合わせられる。分子自体は誘導体及び相乗的分子とあわせて、組織及び微生物学的サンプル由来の真菌等の他の供給源中の核において明確な染色を提供して細部の微細な染色を可能にし、診断目的のために組織病理学、細胞学に応用することができる。診断における広範囲の色のスペクトル及び特徴を解明及び詳述することで、新規診断パラメータ及び知見を提供する。
【０００５】
病院、研究所及び製造業における染色法、ハードウェア装置及び材料は、伝統的技術と類似し、追加の投資を必要としない。分子は、免疫系調節剤、Ｔ−細胞活性化剤、抗ウイルス剤、組織保護剤、及び再生剤、並びにインジケータとして、また新規ビタミン複合体の合成のために使用できる。それは更に、ワイン業界において色素として、食品、軍服を着色するため、特にベビー服及び玩具用の更に不活性な色素として、また環境に配慮した織物において着色剤として、肌の若返り及びスムージングとしても使用することができ、吹き出物治療薬及び抗しわ剤として使用することができる。化粧品は、外科的プロテーゼ及び外科縫合糸の染色で用いられる。生化学的診断検査に応用される。特に、工業用プラズマテレビでは、モニタースクリーン並びに製造のためのナノテクノロジー及びナノ粒子合成のためのセンサーテクノロジーも使用してプリンターカートリッジを製造することができ、ペイントが可能になる。ここでも、免疫組織化学は他のデジタル画像テクノロジーと組み合わせて診断目的のために使用される。
【背景技術】
【０００６】
パパベル  ロエアスは、自然界で自然に生育する。種名はパパベル  ロエアス  エル（Ｐａｐａｖｅｒ  ｒｈｏｅａｓ  Ｌ）であり、科学的系統名前はケシ科（Ｐａｐａｖｅｒａｃｅａｅ）である。他の名称は、ｒｅｄ  Ｐｏｐｐｙ、Ｃｏｒｎ  Ｐｏｐｐｙ、Ｆｌａｎｄｅｒｓ  Ｐｏｐｐｙ、Ｓｈｉｒｌｅｙ  Ｐｏｐｐｙ  Ｐａｐａｖｅｒ  Ｐａｐａｖｅｒ  Ｐａｐａｖｅｒ  Ｒｏｕｂｉｎｉ  Ｐａｐａｖｅｒ  ｔｅｎｕｉｓｓｉｍａ  Ｐａｐａｖｅｒ  ｔｕｍｉｇｉｌ  Ｐａｐａｖｅｒ  ｔｒｉｌｏｂｕｍ  Ｐａｐａｖｅｒ  ｓｔｒｉｇｏｓｕｍであり、同じ種がある（１〜６）。通常、様々なサイズの２枚及び４枚の大きな有毛萼片の花弁上に黒色の斑点があり、赤色の葉を有する。子房は中心に位置し、黒地で取り囲まれている。花粉の量は果実のサイズに応じて変わり、果実１個あたり２００個を超える種子が含まれている。
【０００７】
パパベル  ロエアスは陽気な気候で生育し、砂地で最もよく生育する。パパベル  ロエアスの花弁は、化学的に発色し、パパベリン酸（Ｐａｐａｖｅｒｉｃ  ａｃｉｄ）が関与する反応を呈する。鎮静作用軟化剤、及び初経調整性、去痰性、催眠性を有し、麻酔及び鎮静作用を若干機能させ（７〜９）、熱、気管支炎症状及び咳、不眠症、消化系障害の治療及び疼痛に有用である。（１０〜１２）。更に、多動及び不眠症などの神経系症状に使用することもできる。子供にとって安全であることも証明されている（１３〜１５）。
【０００８】
フラボノイドはフェノール構造を有し、果物、野菜、穀物、樹皮、根中に自然に存在し、花、茶、及びワインでも見いだされる（１６）。５０００種を超えるフラボノイドが検出されているが、特異的効果は非常に稀にしか示されない。バイオフラボノイド花（Ｂｉｏｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ  ｆｌｏｗｅｒｓ）は、果実の色に関与する（１７〜２０）。食物と共に摂取すると、心臓血管疾患が減弱し、死亡率が減少した。（２１，２２）。誘導体は野菜でも見られ、一例としてビタミンＰ（ルチン）等のビタミンとしての特徴も示す（２３）。毛細血管壁の血管透過性（２４）はフラボノイドによって増加し、このことは１９５０年代に発見された。フラボノイドは４つの主な群に分けられ（２５，２６）（２７）、サブグループに分けることができる。フラボノイドは分子構造において特徴的な各基について示されている。
【０００９】
フラボンは中心の芳香環上に二重結合を有し、平面構造を有する。フラボノイドは２−フェニルベンゾピレン（ｂｅｎｚｏｐｉｒｅｎ）芳香族複素環を含む。バイオフラボノイドは植物に色を与え、フラボノイド植物の成長及び発育においても重要な役割を果たす。キノコバイオフラボノイドでＵＶ−Ｂ線に対する自然のバリアを作製することは、日和見真菌の成長の防止に役立つ。抗菌効果及び抗寄生虫効果が示されている。微生物で微生物フラボノイド分子に対して遺伝的変化を生じさせることができる。しかしながら、技術的にはこれらは費用がかかる方法である（２８）。
【００１０】
ＩＵＰＡＣ４．５によると、フラボノイドはイソフラボノイド及びネオフラボノイドの２つの群に分けられる。これらは、構造イソフラボンから誘導される３−フェニルクロメン−４−オン（３−フェニル−１，４−ベンゾピラン）及びバイオフラボノイドの構造から誘導されるフェニルクマラン（４−フェニル−１，２−ベンゾピラン）である。
【００１１】
バイオフラボノイドは、ケトン並びにそれらのフラボン及びフラボノールを含んでいるかどうかによって化合物の名称が与えられる。フラボノイドという語は、非ポリヒドロキシケトンにおいてよりも大まかに、ポリフェノールの化合物を記載するために用いられる。フラボノイドは３つの環又は複素環構造を有し、全体で３環の構造のフロログルシノールモデルを示す構造を有する。イソフラボノイド分子は遺伝子工学によって産生することができる（２８）。
【００１２】
パパベル  ロエアスの花弁及びさく果は、いくつかのアルカロイドを産生する。これらのアルカロイドは、酸と共に加熱した場合、ポルフィリンと呼ばれる活性な複合体に変わる。未知の反応複合体アルカロイドの結果は赤色になる。クレイマン（Ｋｌａｙｍａｎ）は「赤色原理」と呼び（２９−３３）、反応のｐＨに関連して発色する（３３〜３５）。
【００１３】
バイオフラボノイドは、反応性の酸素ラジカルに対する抗酸化剤として反応を加速させ（３９，４０）、内部酸化反応性酸素種を還元する還元剤のようなスーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、およびグルタチオンペルオキシダーゼ、アスコルビン酸、及びα−トコフェロールを通じて（４１）脂質過酸化を防止することによって（３６〜３８）、酸素損傷を制御する。
【００１４】
いくつかのフラボノイドは、反応性の酸素−誘導体を不活化ラジカルペルオキシ亜硝酸に変換する（４２）。多くのフラボノイドは内皮細胞及びマクロファージと相互作用することができ、一酸化窒素、一酸化窒素シンターゼ活性を減少させ（４３）、従って、非常に有害なペルオキシ亜硝酸と反応し、酸素フリーラジカルの産生を誘導する。
【００１５】
フラボノイドは抗酸化剤として作用し、残存するフリーラジカルを除去するため、よって、損傷をあまり起こさず、一酸化窒素（４４）及び一酸化窒素分子と反応することもでき（４５）、フラボノイドによって阻害される。
【００１６】
フラボノイド酸化的損傷（４６，４７）は、キサンチンのオキシダーゼ活性の阻害をもたらし（４８）、白血球炎症の減少を可能にする（４９）。いくつかのフラボノイド超過酸化物の産生（５０）は、如何なる影響なく好中球の脱顆粒を阻害する。肥満細胞脱顆粒は膜内で起こる。Ｃａ２＋受容体はチャンネルの制御に影響を及ぼす（５１，５２）。
【００１７】
フラボノイドは鉄結合特性及び鉄安定化特性を有し、更に脂質過酸化も阻害する（５３〜５６）。いくつかのフラボノイドは、好中球接着が最適の炎症反応を起こす際に、炎症細胞を減少させる（５７〜５９）。しかしながら、概して、補体活性化を減少させることができる。フラボノイドはペルオキシダーゼ放出を減少する。この反応によるＡ１−抗トリプシン活性化は、反応性酸素ラジカルの産生を阻害する。タンパク質分解酵素は、酵素系に対するアラキドン酸の前進的不活性化を示し（６０〜６２）、同時に抗炎症及び抗血栓特性が与えられる（６３）。
【００１８】
フラボノイドの平均的一日摂取量の研究は少ない。例えば、ビタミンＣの消費はフラボノイドの摂取より３倍多い（６４）。フラボノイド消費は国によって大きく異なる（６５，６６）。集団研究でのフラボノイドの食物摂取の判定は困難である。ヒトにおけるフラボノイドの代謝吸収及び排出に関する研究も少ない（６７〜７２）。グリコシル化形態は、アグリコン形態よりも吸収される。接合は腸及び肝臓で起こる（７３）。
【００１９】
フラボノイドの代謝は腸細胞で始まり、肝臓へ運ばれた後にアルブミンと結合することによりグルクロニド抱合体が形成され、硫酸基、メチル基の添加、又はフラボノイドの抱合の両方が完了する。バイオフラボノイド抱合体の活性が高いほど、地中海における死亡率及び心臓血管疾患が低くなる。
【００２０】
バイオフラボノイドのいわゆる毒性効果は十分研究されていない（７４〜７９）。均等変異原性（ｅｖｅｎ  ｍｕｔａｇｅｎｉｃ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ）について多くの議論がなされている（８０〜８２）。しかしながら、ヒトに関する長期間の他の研究は、明確な発がん性副作用の可能性が低いことを示す。フラボノイドは癌細胞又は不死化細胞に対して有害であるが、これらは正常な細胞に対する毒性は低い（８３〜８５）。フラボノイドの生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）研究から、抗アレルギー剤、抗酸化剤、抗菌剤、抗細菌剤（ａｎｔｉ−ｂａｃｔｅｒｉａｌ）、抗真菌剤、同様のいくつかの他の生物学的及び薬理学的活性は抗ウイルス効果を有することが示されている。
【００２１】
ワンらは、呼吸器合胞体ウイルス、パラインフルエンザウイルス、及びアデノウイルスと同様に、単純ヘルペスウイルス及びＨＩＶによって実施した研究で、フラボノイドの抗ウイルス活性を示した（８７）。フラボノイドの効果は、ウイルスの複製周期の異なる段階によって異なり得る（８８）。フラボノイドのアグリコン形態（８９）は、ロタウイルス阻害に対して影響を及ぼす。逆転写酵素又はＤＮＡ指向性ＲＮＡポリメラーゼとして、抗ＨＩＶ剤の阻害活性に関する研究がされている（９０）。ＨＩＶに感染した患者を治療するために、以前に定義されたフラボノイドの治療に対する多大な貢献が利益をもたらすかは明らかではない（９１）。フラボノイド白血病（ＭＬＬ）遺伝子における生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）の研究は、トポイソメラーゼ酵素を阻害することによるＤＮＡ複製変異効果の進展において重要であると考えられる。シクロオキシゲナーゼ及びリポキシゲナーゼは、抗炎症効果を通じて見られている。膜チロシンキナーゼは、様々な免疫応答フラボノイドを阻害する性質である（９２、９３）。
【００２２】
血管内皮新生は多くの発生反応（ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）によって調節される。フラボノイドの摂取は、肺癌及び黒色腫増殖率の間に逆相関関係がある。しかしながら、フラボノイドの抗血管新生効果の背景メカニズムは明らかではない。タンパク質キナーゼの可能なメカニズムは阻害であり得る（９４〜１０４）。
【００２３】
男性で臨床研究を行ったところ、通常消費する食品でフラボノイドを摂取することにより、冠動脈性心疾患による死亡のリスクが低減されるようである。加えて、フラボノイドの摂取が、認知症の発生を防止するために提示されている（１０５，１０６）。酸化的ストレスの存在と血管損傷との間の総血漿コレステロール濃度逆相関関係が報告されている。フラボノイドの摂取は認知症のリスクを低減する。血管炎症メカニズムを変えることで、動脈圧及び高血圧が高度に調節される。毛細管内皮機能を増加させ、アテローム性動脈硬化症のリスクを減少させることにより、血管は細胞における酸化的ストレスに関連するシグナル経路を阻害する。塞栓形成は、血小板凝集を阻害することによって血栓形成を阻害する。フラボノイドは、（ａ）直接的抗菌活性を有し、（ｂ）活性を有する抗生物質と相乗的に、そして（ｃ）細菌毒性因子を抑制する同じ効果を有する。
【００２４】
更に、極端な量の力の効果を生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）で測定することを目的とした酸化的細胞損傷について、手順は十分でなく、研究は限られている。吸収及び排出に関するより多くのデータ収集を確実にする分析技術の開発が必要とされる。今日の情報に照らすと、果物、野菜および飲料（例えば、茶及び赤ワイン）によるフラボノイド摂取が推奨される（１０７〜１１２）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００２５】
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【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２６】
診断、教育及び研究目的のための組織病理学及び細胞学において、固定され及び生存する組織及び細胞サンプルを染色して顕微鏡検査及び評価を行い、特異的な病理学的特徴を特定して、組織及び細胞における診断特徴を決定する。まず、顕微鏡的評価のために組織又は細胞サンプルのスライドガラスを置く。パパベル  ロエアス（Ｐａｐａｖｅｒ  ｒｈｏｅａｓ）処方で染色する前のこれらのサンプルは、無色、半透明又は透明である。新しい処方は組織層に積極的に浸透し、細胞膜に達し、その後、核に達する。内容物の処方によって提供される染料は着色方法であり、適切な顕微鏡評価が提供され、構造について必要な情報間の関係を示す特徴を理解するために、再度、組織及び細胞における構造を区別するために適切で必要な着色を確実にしなければならない。
【課題を解決するための手段】
【００２７】
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】組織及び細胞染色分析法のためのパパベル  ロエアス処方である。
【図２】パパベル  ロエアス処方の調製フェーズである。
【図３】パパベル  ロエアスの前駆体の調製技術である。
【図４】パパベル  ロエアスのバイオフラボノイドのシス−トランス化学構造である。
【図５】分子の名称及び生化学的構造である。
【図６】パパベル  ロエアス処方染色パターンである。
【図７】パパベル  ロエアス処方染色法の段階である。
【図８】染色の種類及び相違である。
【図９】染色パターンに基づくパパベル  ロエアス細胞及び組織染料の種類である。
【図１０】パパベル  ロエアス処方調製物の例である。
【図１１】パパベル  ロエアス処方が肺組織における細胞核を特異的に強調することを示す図である。
【図１２】パパベル  ロエアス処方が肺組織における細胞核を特異的に強調することを示す図である。
【図１３】エオシンを伴うパパベル  ロエアス処方が肺組織における核及び組織の詳細を明らかにすることを示す図である。
【図１４】エオシンを伴うパパベル  ロアエス処方が肺組織における核及び組織の詳細を明らかにすることを示す図である。
【図１５】パパベル  ロアエス処方が真菌の構造的詳細を染色することを示す図である。
【図１６】パパベル  ロアエス花弁内の比例らせん管状構造を示す図である。
【図１７】原子間力顕微鏡法によるパパベル  ロアエス花弁内の槽内構造である図である。
【図１８】パパベル  ロアエス分子のＮＭＲ分析である図である。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
用語及び定義
Ｉ．本発明は、生物学的サンプル中の細胞の核の染料に関し、新規細胞組織色素を記載する（パパベル  ロエアス細胞組織染色（Ｐａｐａｖｅｒ  ｒｈｏｅａｓ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｘｔｕｒｅ  Ｐａｉｎｔ））。この染色は、新規反応性バイオフラボノイドを含むことが見出された。
【００３０】
ＩＩ．実施のために本発明をよりよく記載し、都合よく説明するために、用語を使用する。
【００３１】
ＩＩＩ．新しい特定の専門用語がある場合、その新しい用語の特性を説明し、詳細を説明することで記載する。
【００３２】
ＩＶ．定義は単数形又は複数形で表す。値は例示した値に限定されない。
【００３３】
Ｖ．「誘導体」は、１、２、３を有する分子の数の点で対応し、この数は４以下まで減少させ得るか、又は特定の実施形態まで増加させ得る。
【００３４】
ＶＩ．「相乗的分子」は１、２、３を有する分子の数を意味し、この数は４以上まで、又は本発明の目的に特異的なものについて増加させることができる。
【００３５】
ＶＩＩ．典型的には、染色プロトコルにおいてリンス溶媒として水道水が非常に経済的に使用される。実際、本明細書中で使用する場合、「水」という語には、例えば、蒸留水又は脱イオン水等の適用が含まれ、特定された水道水と同様に使用される。
【００３６】
ＶＩＩＩ．「生物学的サンプル」は原核生物起源、古細菌又は真核性起源（例えば、昆虫、原生動物、鳥類、魚類、爬虫類）である。あるいは哺乳類（例えば、ラット、マウス、ウシ、イヌ、ロバ、モルモットもしくはウサギ）又は霊長類（例えば、チンパンジーもしくはヒト）があり得る。生体内又は生体外生物学的組織又は液体から得ることができる。そのようなサンプル、体液（例えば、血液、血漿、血清もしくは尿）、例えば、細胞、細胞オルガネラ、単離された器官、生物学的標本。組織及び断片はその全部又は一部を含み得るが。生物学的サンプルはまた、生物学的サンプルの一部から抽出される。生物学的サンプルタンパク質は炭水化物及び核酸を含み得る。
【００３７】
ＩＸ．本発明で細胞学的に評価される生物サンプル、組織及び体液はサンプリングに限定されない。体腔洗浄液、眼洗浄液、皮膚バリヤ、頬の唾液腺、血液および膣腺、骨髄、尿、ｐｒｅｅｊａｋｕｌａｔ乳頭吸引、精液、乳、痰、粘液、胸水、骨盤液（ｐｅｌｖｉｃ  ｆｌｕｉｄ）、滑液、腹水、パップスメア、直腸綿棒、吸引、針生検、手術または剖検液、組織標本、血漿、血清、髄液、リンパ液、汗、涙、痰、唾液、腫瘍、液体、器官および生体外細胞系および組織培養物。生物学的細胞および組織サンプルをパラフィン中に包埋する等により固定した後、染色過程で使用することができる。この調製物を調査するためにドキュメントガラス（ｄｏｃｕｍｅｎｔ  ｇｌａｓｓ）上に置く。サンプルは、真菌、寄生虫及び微生物を着色するために使用することができる。生物学的サンプルの着色段階の調製の技術的相違は本発明を何ら限定するものではない。
【００３８】
Ｘ．色素溶液は、水又は化学的溶媒等の液体を用いて、溶媒中、室温にて保管する。水（およそ５０体積％以上）は液体又は１つ以上の低級アルカノール及び水を含むポリオールを含む。修飾に応じて異なる。使用する溶媒としては、エタノール、蒸留水、メタノール、流水、エチレングリコール、プロピレングリコール、メタノール及びホルムアルデヒドを挙げることができる。
【００３９】
ＸＩ．高い酸化物を有する分子の抗酸化能力の用語を記載し、その分子は、他の分子の酸化を防止する同じ環境中にある。
【００４０】
ＸＩＩ．低級アルカノール分子；ＯＨ基、アルキル基（メチル基、エチル基、ｎ−含有は１〜５個の炭素原子を有するアルキル基である）−プロピル基、（イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−基、イソペンチル基、ネオペンチル基、またはペンチル）、及び低級（アルカノールはメタノール、エタノール及びイソプロパノールである）を加えてもよい。
【００４１】
ＸＩＩＩ．第２酸化剤（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ｏｘｉｄａｎｔ）分子の用語は、他の分子よりも強力な還元電位を有するものを指す。異なる化学酸化剤を異なる処方に使用することができる。ヨウ素塩及びヨウ素酸カリウム、ヨウ素酸ナトリウム、酸化亜鉛、過マンガン酸塩又は過マンガン酸カリウム、過ヨウ素酸ナトリウム、過ヨウ素酸カリウム塩及び過酸化物、過酸化水素、過ヨウ素酸塩、次亜塩素酸カルシウム、クロラミット（ｋｌｏｒａｍｉｔ）、さらし粉（ｌｉｍｅ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ヨウ素酸ナトリウム、酸化亜鉛、ヨウ素、次亜塩素酸ナトリウム、酸化例塩酸塩（ｏｘｉｄｅ  ｅｘａｍｐｌｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、及び水酸化バリウム。
【００４２】
ＸＩＶ．媒染剤は、金属である色素分子のカチオン性錯体と結合することができる。新規分子は細胞内のＤＮＡ、ミエリン、エラスチン及び筋肉縞のコラーゲン繊維を検出することができ、ミトコンドリアは分子の相乗効果にも関連している。媒染剤の例としては、以下のものを挙げることができる：硫酸アルミニウム、硫酸アルミニウムカリウム、硫酸アルミニウムアンモニウム、塩化アルミニウム、鉄、タングステン、ジルコニウム、ビスマス、モリブデンホスホモリビン酸（ｆｏｓｆｏｍｏｌｉｂｉｃ  ａｃｉｄ）又はモリブデン酸、バナジウム（バナデート）アルミニウム又はアンモニウムミョウバン、硫酸アルミニウム、カリウムミョウバン、酢酸アルミニウム、塩化カルシウム、硝酸アルミニウム、鉄、硫酸アンモニウム、硫酸第一鉄、フェロシアン化カリウム、フェリシアン化カリウム、塩化第二鉄、酢酸銅、鉄ミョウバン、アルミニウム、硝酸ビスマス、モリブデン酸及びホスホモリブデン酸。媒染剤の異なる金属は、異なる色のフラクションを生成する。例えば；アルミニウム；紫−青、鉄；青−黒、クロム；青−黒、銅；青−緑、ニッケル；紫、スズ；赤、鉛；暗褐色；オスミウム；緑褐色。
【００４３】
ＸＶ．染料処方混合物は、生物学的サンプルの細胞に酸を添加することによって調製され、核染色特異性を増加させる。この目的のために、酢酸、サリチル酸、クエン酸、塩酸、硫酸、飽和エタノール性ギ酸、及びアスコルビン酸を使用することができる。
【００４４】
ＸＶＩ．抗酸化剤という語は、安定化の意味で使用され、色素酸化の最適期間を保つのに役立ち、貯蔵寿命を延長する。安定剤としてグリセロール、抱水クローラル、ジエチレングリコール、ヨウ化カリウム、エチルグリコールが求められる。
【００４５】
ＸＶＩＩ．「分子」は有機分子であり、様々な結合点により他の分子と連結することができ、複雑な構造を形成することができる。新規組成物及び分子構造は、特に、色素複合組成物の分子を用いて多様に作製することができる。これらの分子に結合した異なる分子構造及び合成された構造並びに異なる特性は、示している誘導体を形成することができる。これらの多糖類数例は意味する。アミロース及びシクロデキストリン及び多くのアルドース環、単糖類、グルコース、フルクトース、及びガラクトース、二糖類（スクロース）、他の結合分子は更にクリプツエーテル（ｃｒｙｐｔｓ  ｅｔｈｅｒ）、例えばマルトース及びラクトース、デンドリマー、ナノチューブ、カリサネレ（ｋａｌｉｓａｎｅｒｅ）、バリノミク（ｖａｌｉｎｏｍｙｃ）及びニゲリシンが考えられる。
【００４６】
ＸＶＩＩＩ．発明を開示する明細書全体及びクレーム全体にわたって、用語は特定の言語表現で使用される。「約」という語は、特定された値が、この語によって修飾される正確な値に限定されないことを意味する。特に記載しない限り、そのような本明細書中で用いられる分子量、反応条件及び成分等、例えばクレーム中の特徴の量を表す全ての数等、各々の場合でこの語によって修飾されると理解されるべきである。従って、特に別段の記載がない限り、少なくとも所望の特性によって特定される数値パラメータの有効桁数及びその数値パラメータが記載される以下の説明で詳述する。
【００４７】
ＸＩＸ．「アルキル」という語は、分枝、直鎖アルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル等）を意味し、飽和脂肪族基を指す。鎖状アルキル基（イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチル等）。直鎖又は６以下の炭素原子のアーム（例えば、Ｃ３〜Ｃ６分枝鎖についてはＣ１〜Ｃ６、直鎖）に対する分枝鎖アルキル骨格中、脊髄（例えば、Ｃ３〜Ｃ４分枝鎖については、Ｃ１〜Ｃ４直鎖または４個以下の炭素原子）。「Ｃ１〜Ｃ６」アルキルとは、１〜６個の炭素原子を含むアルキル基を指す。本明細書中で使用する場合、「Ｃ１〜Ｃ４」アルキルという語は、１〜４個の炭素原子を含むアルキル基を意味する。更に、アルキルという語は、「非置換アルキル」及び置換された炭化水素骨格の後半の「置換アルキル」のどちらも意味し、１又は複数の炭素上の水素を置換する置換基を有するアルキルを意味する。そのような置換基としては、例えば、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミノ、（Ｃ１〜Ｃ４）ジアルキルアミノ）、シクロアルキル、アリール（例えば、フェニル、ナフチル）、ヒドロキシル、シアノ、ハロゲン、又はニトロが挙げられる。上述したように、アリールアルキル及びシクロアルキル置換基も示される。
【００４８】
ＸＸ．「アルコキシ」という語は、置換及び非置換アルキル、アルケニル及びアルキニル基に共有結合した酸素原子を指す。アルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシが挙げられるが、これらに限定されるものではない。いくつかの実施形態では、４以下の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖アルコキシ、分岐骨格（例えば、Ｃ１〜Ｃ４直鎖、Ｃ３〜Ｃ４分枝鎖）を有する。本明細書中で使用する場合、「Ｃ１〜Ｃ４」アルキルは、１〜４個の炭素原子を含むアルキル基を指す。
【００４９】
ＸＸＩ．本明細書中で使用する場合、「アミン」または「アミノ」は、少なくとも１個の炭素又は窒素原子がヘテロ原子と共有結合している構造を意味する。アルキル基は４又はそれ以下の炭素原子の骨格（例えば、Ｃ１〜Ｃ４直鎖、Ｃ３〜Ｃ４分枝鎖）中にあり得、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミノ窒素は、アルキル基に結合した少なくとも１個の更なるＣ１〜Ｃ４であり、その基及び化合物を意味する。「（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミノ」において、窒素が少なくとも２つの更なるＣ１〜Ｃ４アルキル基に結合し、基及び化合物を指す。
【００５０】
ＸＸＩＩ．「アリール」という語には、例えば、ベンゼン、フェニル、ピロール、フラン、チオフェン、チアゾール、０〜４個のヘテロ原子を含む基が含まれ、例えば、５及び６員単環芳香族基、イソチアゾール、イミダゾール、トリアゾール、テトラゾール、ピラゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン及びピリミジン等を指す。加えて、「アリール」は、三環式、二環式等の多環式アリール基、例えば、ナフタレン、ベンズオキサゾール、ベンゾビスオキサゾール、ベンゾチアゾール、ベンズイミダゾール、ベンゾチオフェン、メチレンジオキシフェニル、キノリン、イソキノリンを指し、そのような基には更に、インドール、ベンゾフラン、プリン、ベンゾフランも含まれ、デアザプリン構造またはインドリジン中のヘテロ原子も含まれる。これらのアリール基、「アリール複素環式」、「ヘテロアリール」または「ヘテロ芳香族」は以下のように表すこともできる。「上述の芳香環、例えば１マタハ複数の環の位置で見られるもの、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミノおよびジアルキルアミノを含む（Ｃ１〜Ｃ４））アミノ、ヒドロキシ、シアノ、ハロゲン、またはニトロなどの置換基。アリール基は、多環（例えば、テトラリン）と縮合させることもでき、充分な非芳香族脂環式を創出する。ヘテロアリール（ｈｅｔｅｒｏａｒｉｌ）には、例えばラザルス（Ｌａｚａｒｕｓ）複素環が含まれ、オキシラン、ジチエト（ｄｉｔｈｉｅｔ  ｔｏ）、ピロリン、ピロール、フラン、ジヒドロフラン、ジヒドロチオフェン、チオフェン、ピラゾール、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、１２，２，３−トリアゾールが含まれ、１，２，４には、不飽和環状化合物、トリアゾール、ジチアゾール、テトラゾール、ピリジン、ピラン、ピリミジン、ピラン、チアピルバルブ（ｔｈｉａｐｙｒ  ｖａｌｖｅ）、ジアジン、チアジン、ジオキシン、トリアジン及びテトラセンが含まれる。
【００５１】
ＸＸＩＩＩ．「抗体」という語は、特定の空間及び極性に特異的に結合し、従って更に、有機体に対して相補的と定義される免疫グロブリン分子を指す。抗体はモノクローナル又はポリクローナルであり得、分泌されたタンパク質の集団の連続したハイブリッド細胞（モノクローナル）又は宿主血清の集団によって形成される（ポリクローナル）のいずれかが得られる。抗体は完全免疫グロブリンであるか、またはその断片、例えばＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３、ＩｇＭ、クラス及びアイソタイプ、機能的抗体断片を含んでもよく、類似した親和性で全長に対する結合を保持できる部分（例えば、Ｆａｂ、Ｆｖ及びＦ（ａｂ’）２、又はＦａｂ’）を含んでもよい。
【００５２】
ＸＸＩＶ．バインダーという語は、生物学的サンプル中の１又は複数の標的を結合することができる分子を指す。バインダーは、目的に対して独自の方法で連結させることができる。好適なバインダーとしては、天然又は修飾ペプチド、タンパク質（例えば、抗体であり、それらはアフィボ（ａｆｉｂｏ）又はアプタマー）、核酸（例えば、ポリヌクレオチド、ＤＮＡ、ＲＮＡ、又はアプタマー）が挙げられる。多糖類（例えば、レクチン、糖）、脂質、酵素、酵素基質若しくは阻害剤、リガンド、受容体、抗原、又はハプテン。分析されるサンプルの好適なバインダーは、本発明の標的に応じて選択し決定することができる。
【００５３】
ＸＸＶ．分析されるサンプルの好適なバインダーは、本発明の標的に応じて選択し決定することができる。例えば、標的はサンプル中のリガンドを含んでもよく、バインダーは受容体を含んでもよい、あるいは標的は受容体を含んでもよく、バインダーはリガンドを含んでもよい。同様に、標的は、抗原及び抗体若しくはその結合フラグメントを含んでもよく、又はその逆であってもよく、あるいは抗体を含んでもよい。いくつかの実施形態では、標的は核酸を含んでもよく、バインダーは相補性核酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、標的及びバインダーはどちらも互いに結合することができるタンパク質を含んでもよい。
【００５４】
ＸＸＶＩ．新しい官能基及び分子オーブン生成物に関するいかなる変化も本発明を限定するものではなく、本発明の可能性と考えられる。
【００５５】
発明の詳細
パパベル  ロエアス抽出物から得られる新規細胞核染料を本発明で記載する。この新規組織学塗料は非常に活性且つ機能的なバイオフラボノイドを含む。パパベル  ロエアス処方は、組織病理学、細胞学及び微生物学において適用される特有のパターンの生物学的特性を示す新規核染料として、細胞及び組織サンプルの特性を示す（図１１，１２）。
【００５６】
細胞核の特徴は、病理学者によって診断、特に悪性又は転移性細胞の検出のために評価されるが、通常の知見、特に術後外科手術標本及び生検、細針生検、塗抹標本、洗浄液中、又は侵襲的若しくは非侵襲的方法のサンプルでの病理学的知見を助けるための診断からの分離を用いて、剖検調製物を検査する。
【００５７】
パパベル  ロエアスは自然界で自発的に生育し、組織細胞核処方を産生するために染料を維持するために容易に生産可能である。染料処方は、細胞核の核を目立たせるための分子から構成される。該分子は分析され、提示し、説明する他の基礎研究に進められた。
【００５８】
媒染剤（金属）を組み入れて充分且つ安定な染色を提供し、酸を添加する。パパベル  ロアエス（Ｐａｐａｖｅｒ  ｒｈｏｅａｓ）処方は、明確な細胞形態及び簡単な方法で恒久的な染色特性を示した。特に、エオシン染料と組み合わせた場合、Ｐａｐａｖｅｒ  ｒｈｏｅａｓ処方は、組織及び細胞、組織層、膜、筋肉組織、核内又は細胞質内構造を染色し、細部まで着色する（図１３．１４）。
【００５９】
色素溶液に関する保存期間が長いと自然に又は化学的に酸化される（１１３．１１４）。最適な効率及び量の酸化剤の使用によって、過酸化からの生成物の形成が防止される（１１５，１１６）。
【００６０】
色素濃度の変動は染色の安定性を損なう（１１７）。この時間は染料の適用によって置換しなければならず、修正しなければならない。染料の強度は視覚的に評価する。訓練された専門家が染色を評価し、望ましい染色品質に達するまで染色強度を調節する。
【００６１】
フラボノイドは一般に２つの芳香環を含む。これらの環の各々は少なくとも１つのヒドロキシル基及び３個の炭素橋を有する６−複素環のデザインを形成する。フラボノイドサブグループは、特性又は官能基及びヘテロ環の構造及び結合フラクションの酸化状態に応じて、結合した芳香環に対するヘテロ環により形成される。
【００６２】
天然または修飾ペプチド、タンパク質（例えば、抗体、又はアプタマー）、核酸（例えば、ポリヌクレオチド、ＤＮＡ、ＲＮＡ、又はアプタマー）、多糖類（例えば、レクチン、糖）、脂質、酵素、酵素基質マタハ阻害剤、リガンド、受容体、抗原又はハプテンである異なる基および原子に結合するためにバインダーを使用するこの分子。同様に、結合した標的基は、抗原及び抗体又は抗体フラグメントであり得る。この処方中のパパベル  ロアエスは核酸を標的とする。
【００６３】
パパベル  ロアエスは、顕微鏡による、分子及び原子間力顕微鏡検査法に関連し、調節された（図１）。ろ過した抽出物の分子分析のために、溶液を熱エタノール中、半量でインキュベートすることによって乾燥する。乾燥サンプルを３回摩砕し、次いでメタノール浴中に１時間曝した。再度、液体フラクションを一晩３０〜６０℃のインキュベータ中で蒸発させ、乾燥させる。１ｇの結果として得られる粉末を１００ｃｃのエタノール中に溶解させ、ファイバープレート上に吸着させる。ピンク色プレートと１％アンモニウム溶液は青味がかっていることが、特異的に観察される。この青色の色素を酢酸中に溶解させる。液体フラクションを除去した。そして残存する乾燥粉末を分析のために処理する（図２．３）。
【００６４】
分子解析はバイオフラボノイドの特徴を示し（図１８）、構造的生化学的名称は；５−ヒドロキシ−２−（３−（テトラヒドロ−６−（（テトラヒドロ−３，４，５−トリヒドロキシ−６−メチル−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）メチル）−２Ｈ−ピラン−２，３，４，５−テトラオール）−４−メトキシフェニル）−７−メトキシ−４Ｈ−クロメン−４−オンである。
【００６５】
それは、バイオフラボノイドの特徴的な生化学的構造を有する（図４，５）。
【００６６】
パパベル  ロアエス処方及びエオシン（１１８）を組み合わせとして使用してもよい。分子及びその誘導体相乗的バイオフラボノイド及び新しい分子は、組織層、膜、筋肉細胞を染色し、細胞質内及び核内構造物並びにムチン及び神経膠繊維を詳細に示す。
【００６７】
染料処方は、媒染剤、溶媒、酸、酸化剤又は酸化剤及び防腐剤を組み入れた処方を利用するように修飾することができる（１１９）。
【００６８】
酸は、概して、溶液のｐＨを調節するために用いられ、より耐久性のある染料処方を維持することができ、細胞をより選択的に着色し、過剰な酸化物を防止する。従って、酸は沈殿の形成を防止する。自動又は手動染色法を選択することができる。
【００６９】
安定化添加剤は超高速酸化を防止し、基本的には最適化によってより長い貯蔵寿命を提供する。この目的のために、アミロース、シクロデキストリン、クリプタンド、クリプトフィシン、カビタンド、クラウンエーテル、カリックスアレーン、バリノマイシン、シクロデキストリン、又はナイジェリアが用いられる。
【００７０】
液体溶媒は水中に可溶性であり、抗酸化剤と結合する。例えば、ｎ−プロピル、ｎ−オクチル及びｎ−ドデシル、ｎ−アルキルガレートガレートを還元することができ、例えばソルビトール及びマンニトールは糖である；ベンゾエート及びヒドロキシベンゾエート；亜硫酸塩及びメタ重亜硫酸塩；クエン酸、酒石酸、乳酸、エリソルビン酸、アスコルビン酸、尿酸、タンニン酸、及び塩基性塩（Ｍｇ２＋、ＮＨ４＋、Ｎａ＋、Ｋ＋及びＣａ２＋塩）；ＥＤＴＡ及び抱水クローラルが添加される。
【００７１】
１又は複数の溶媒をパパベル  ロアエス処方のために使用することができる。水、エタノール等の低級アルカノール、ポリオールが含まれていてもよい。ポリオールの例としては、グリセロール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール及びポリプロピレングリコールが挙げられ、これらを適用することができる。
【００７２】
ホルマリンは組織及び細胞サンプルの適切な定着剤である。パラフィン組織カセットを調製のために使用し、サンプルを充填し埋め込み、次いで凍らせる。固定された組織をパラフィンと共にミクロトームカッタで薄い切片に切断し、顕微鏡スライドガラス上に置く。次いで、調製物をオーブン中に入れて、過剰のパラフィンを溶融させ、残存するワックス上に溶かす。キシレン及びトルエンで脱ろうして、スライドを完全に定着させなければならない。
【００７３】
凍結組織サンプルを染色過程の切片とすることができる。短期間凍結組織切片を１０％ホルマリン中で保持する。染色法、タイミング及びシーケンシングは処方法及び他の条件に応じて変わり得る。エオシンＹ、オレンジＩＧ、ライトグリーンＳＦイエローイッシュビスマルクブラウン、ファストグリーンＦＣＦ、Ｏ−６、ＥＡ２５、ＥＡ３６、ＥＡ５０、及びＥＡ６５に対する対抗細胞質染色も用いることができる（１２２）。
【００７４】
染料処方は以下の色素処方で修飾することができる：Ａｎｄｅｒｓｏｎ、Ｂａｋｅｒ、Ｂｅｎｎｅｔｔ、Ｂoｈｍｅｒ、Ｂｏｓｍａ、Ｂｕｌｌａｒｄ、Ｃａｒａｚｚ、Ｃｏｃａ  Ｃｏｌａ、ｄｅ  Ｇｒｏｏｔ、Ｄｅｂｉ、Ｄｅｌａｆｉｅｌｄ、Ｄｕｖａｌ、Ｅｈｒｌｉｃｈ、Ｆｒｉｅｄｌａｎｄｅｒ、Ｇａｄｓｄｏ、Ｇａｇｅ、Ｇａｌｉｇｈ、Ｇａｒｖｅｙ、Ｇｉｌｌｓ、Ｇｒａｈａｍ、Ｍｉｔｃｈｅｌｌ、Ｍａｙｅｒ、Ｍａｓｓｏｎ、Ｍａｒｔｉｎｏｔｔｉ、Ｍａｎｎ、Ｍａｌｌｏｒｙ、ＭｃＬａｃｈｌａｎ、Ｌｉｌｌｉｅ、Ｌｅｅ、Ｌａｕｎｏｙ、Ｌａｎｇｅｒｏｎ、Ｋｒｕｔｓａｙ、Ｋｌｅｉｎｅｎｂｅｒｇ、Ｈｏｒｎｅｙｏｌｄ、Ｈａｕｇ、Ｈａｍｉｌｔｏｎ、Ｈａｒｒｉｓ、Ｈａｒｒｉｓ＆Ｐｏｗｅｒ、Ｈａｕｇｅｎ、Ｍｏｌｎａｒ、Ｐａｐａｍｉｌｔｉａｄｅｓ、Ｐｕｓｅｙ、Ｒａｗｉｔｚ、Ｒｅｄｄｙ，、Ｓａｓｓ、Ｓｃｈｍｏｒｌ、Ｓｌｉｄｅｒｓ、Ｕｎｎａ、Ｗａｔｓｏｎ、Ｗｅｉｇｅｒｔ、Ｗｒｉｇｈｔ；鉄媒染ヘマトキシリン、Ａｎｄｅｒｓｏｎ、Ｃｒｅｔｉｎ、Ｆａｕｒｅ、Ｇｏｌｄｍａｎ、Ｈａｎｓｅｎ、Ｈｅｉｄｅｎｈａｉｎ、Ｊａｎｓｓｅｎ、Ｋｅｆａｌａｓ、Ｋｒａｊｉｎａ、Ｍａｎｎａ、Ｌｉｌｌｉｅ、Ｌｉｌｌｉｅ、Ｅａｒｌｅ、Ｍａｓｓｏｎ、Ｍｏｒｅ＆Ｂａｓｓａｌ、Ｍｕｒｒａｙ、Ｐａｑｕｉｎ  ａｎｄ  Ｇｏｄｄａｒｄ、Ｒｏｚａｓ、Ｓｅｉｄｅｌ、Ｔｈｏｍａｓ、ＷｅｉｇｅｒｔおよびＹａｓｖｏｙｎ；ビスマス媒染ヘマトキシリン、Ｒｏａｃｈ＆Ｓｍｉｔｈ；銅媒染ヘマトキシリン、Ｂｅｎｓｌｅｙ、Ｃｏｏｋ及びＦａｕｒｅ；モリブデン媒染ヘマトキシリン、Ｈｅｌｄ；バナジウム媒染ヘマトキシリン、Ｈｅｄｅｎｈａｍ、Ｓｍｉｔｈ；ジルコニウム媒染ヘマトキシリン、ＭｃＮｕｌｔｙ＆Ｓｍｉｔｈ（１２３）を考慮することができる。
【００７５】
他の染料、例えば、アクリジン色素、アントラキノン色素、アリールメタン色素、アゾ色素、ジアゾニウム色素を組み合わせることができ、ニトロ色素等の色素（特に、芳香族の使用法）は、フタロシアニン色素、キニンイミン色素、テトラゾリウム色素、色素およびチアゾール色素、キサンテンを組み合わせることができる。組織学的染色のためのトランスレーションペイントサンプル、酢酸、イエローアシッド、１ブラックアシッド、２２ブルー９３、アシッドフクシン、アシッドグリーン、アシッド、アシッド、１グリーン５、アシッドレッド、オレンジアシッド１０、アシッドレッド４、アシッドレッド２６、アシッド、アシッド、アシッドレッド２９、アシッドレッド４４、アシッドレッド５１、アシッドレッド６６、アシッドレッド７３、アシッドレッド８７、アシッドレッド９１、アシッドレッド９２、アシッドレッド９４、１０１レッド１０３、アシッドロセアジアシッドルビン、アシッドバイオレット１９、アシッド、アシッド、１イエローアシッド、９イエローアシッド、２３イエローアシッド、２４イエローアシッド、３６イエローイエロー７３、アシッドイエローＳ、アシッドイエローＴ、アクリジン、アクリフラビン、アルシアンブルー、アルシアンイエロー、アルコール−・ソリュブル・エオシン、アリザリン、アリザリンブルー、アリザリンブルー２ＲＣ、アリザリンカーマイン、アリザリンシアニンＢＢＳアリザロールシアニンＲ、アリザリンレッドＳ、アリザリンプルプリン、アルミナ、アミドブラック１０Ｂ、レッドアミドナフトール、アミドシュワルツ、アニリンブルーＷＳ、モーブ、アントラセンＧアゾエオールブルーＳＷＲ、アントラセンブルーＳＷＸ、オーラミン０、アゾ−エオシン、アゾカルムＢ、アゾカルムＧ、アゾイックジアゾ５、アゾイックジアゾ４８、アゾフロックス（ａｚｏｐｈｌｏｘ  ｔｏ）、アゾブブルー（ａｚｏｖ  ｂｌｕｅ）、ディープブルー、アズールＢ、アズールＣ、ベーシックブルー８、ベーシックファンデーション、９ブルーファンデーション、１２ブルーファンデーション、１５ブルーファンデーション、１７ブルーファンデーション、２０ブルーファンデーション、２６ブルーブラウンワン、ベーシカリー・ユー・フッシュ、ベーシック、４ベーシック５レッド・ベーシック・レッド２ベーシックグリーン、オレンジ１４、ベーシック、５グリーン、ベーシックエッセンシャルズ、９レッド・バイオレット２、ベーシック・バイオレット４、ベーシック・バイオレット１０、ベーシック・バイオレット１４、ベーシックエッセンシャルズ、１イエローイエロー２、ビーブリックＲ、ビスマルクブラウンＹ、ブラジル、ブラジル、シャイニー・クロック、ブリリアント・クリスタル・スカーレット６Ｒスカーレット・ビーブリック・スカーレット、カルシウム、レッド、カーマイン、カルミン酸カルモイシン６、セレスチンブルーＢ、チャイナブルー、クロラント・ファスト・レッド５Ｂ、レッド、ブルー・コエレスト・ザ・シカゴブルー４Ｂ、クロムバイオレットＣＧ、２クロモトロプからクロモクスからシアニンＲまで、コンゴ・コリント、コンゴ・レッド、コットン・ブルー・コットン、レッド、クロッカー・オン・レッド・レッド３Ｄ、クロッ��ーのレッド・ムーン、スケッチ、クリスタル・ポンソー６Ｒ、クリスタル・レッド、クリスタル・バイオレット、ダヒラ、ダイアモンド・グリーンＢ、ダイレクト・ブルー１４、ダイレクト・ブルー５８、クロッカー・ダイレクト・ダイレクト・レッド２８レッドディレクトリ、１０レッド、ダイレクト、７イエローディレクトリ、８１レッドディレクトリ、８０レッド、ブルー４デュラゾール（ｄｕｒａｚｏｌ）、ブルー８Ｇ、イエローイッシュ、エオシノール、エオシンＹエオシンエオシンＢ、ブルーイッシュエオシン、エオシン、デュラゾール、エリーガーネットＢ、エリオクロからシアニンＲ、エリスロシンＢエチルエオシン、エチルグリーン、エチルバイオレット、エバンスブルー、ファストブルーＢ、ファストグリーンＦＣＦ、ファストレッドＢ、ファストイエロー、ファスト・イエロー・エクストラ・ファスト・イエローＧ、オイリーブラックＨＢ、フルオレセイン、フードグリーン３、ガレオン、ガラミン・ブルー・ガロシー、ゲンチャン・バイオレット、イエロー、リサミン・ファスト・イエロー１、ＩＮＴ、ケルメス、ケルメス酸、ケメクトロット、ラック、ラッカイン酸、ＬＡＵＴＨザ・バイオレット、ライトグリーン、トゥ・ルート、１ブルー・トゥ・ルート、クイックリ・ラブ・ザＢＢＬ、ヘルベシア・ブルー、ホフマン・バイオレット、ヒドラジンイエロー、インペリアル・レッド・ヘリオ・リサミン・グリーンＳＦ、ルクソール・ファスト・ブルー、マゼンタ、０、マゼンタＩＩ、マゼンタＩＩ、マゼンタＩＩＩ、マラカイトグリーン、マンチェスタ・ブラウン、マルチウス・イエロー、ライラック、モーブ・トゥ、マーブロ・マイ、マーキュロクロム、メタニルイエロー、メチレンブルーメチレンアズールＢ、メチレンブルーＣ、メチレンブルー、メチレングリーン、ブルー、メチル、メチルグリーン、メチルバイオレット、メチルバイオレット２Ｂ、メチルバイオレット１０Ｂ、イエロー３Ｇミリング、媒染剤ブルー３、媒染剤ブルー１０、ブルー１４媒染剤、媒染剤ブルー２３、ブルー３２媒染剤、媒染剤４レッド・ナチュラル媒染剤、４５ブルー−パープル、レッド−パープル・トゥ１１、３２５レッド・バイオレット、パープル・トゥ・バイオレット３９、ナフタレン・ブルー、ブラック、ナフトールブルー、ブラック、ナフトールグリーンＢ、ナフトール・イエローＳ、１ナチュラル・ブラック、ナチュラル・レッド、ナチュラル・レッド３、ナチュラル・セニック、２８レッド・ナチュラル、２５レッド・ナチュラル、２４レッド・ナチュラル、１６レッド・ナチュラル、８レッド、イエロー６、ＮＢＴ、ナチュラルレッド、ゲット・ニュー・フクシン、ナイアガラ・ブルー３Ｂ、ブルー・ナイト、ナイル・ブルー、ナイル・ブルーａ、ナイル・ブルー・スルフェート、ナイル・レッド、ニトロＢＴ、ニトロブルーテトラゾリウム、ニュークレア・ファスト・レッド、オイル・レッドＯ、オレンジＧ、オルセイン、パラロスアニリン・パーキン・バイオレット、フロキシンＢ、ピクリン酸、ポンソー２Ｒ、ポンソー６Ｒ、ポンソーＢ、ポンソー・デ・キシリジン、ポンソーＳ、ポンタ・ザ・スカイブルー５Ｂ、プリムローズ、プリムラ・トゥ、プルプリン、ピロＢ、ＧピロニンＹ、ロ��ダミンＢ、ロサニル・ザ・ピロ、ＯＲ、レッドＲイン・レッド、スカーラック（Ｓｃｈａｒｌａｃｈ）Ｒ、シェラック、シリウスレッドＦ３Ｂ、シリウスレッド４Ｂ  サフラニン、ベンガル、サフロン・ローズ・シリウス・ブルー・アバブＦ３、ソロクロ・トゥ・シアニンＲ−・ソリュブル・ブルー、ソルベント；３ブラック・ソルベント・ブルー３８ソルベント、２３レッドソルベント、２４レッドソルベント、２７レッドソルベント、４５レッド、イエロー９４、スピリット・ソリュブル・エオシン、スーダンＩＩＩ、スーダンＩＶスーダンブラックＢ、スーダンレッドＢＫ、サルファーイエローＳ、スイスブルー、タートラジン、ＳチオフラビンＴ、チオン（ｔｉｏｎ）、ブルー、トルイジン・レッド・トルエン、トロパエオール（ｔｒｏｐａｅｏｌ）Ｇ、トリパフラブ・ザ・チオフラビン（ｔｒｙｐａｆｌａｖ  ｔｈｅ  ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎｅ）、ブルー、ウラニントリパン、ビクトリアブルー４Ｒ、ビクトリアブルーＢ、ビクトリアブルーＲ、ビクトリアグリーンＢ、水溶性エオシン、ウッドスタレッド（ｗｏｏｄｓｔａ  ｒｅｄ）、キシリジンポンソーおよびエオシン・イエローイッシュ、およびそれらの組み合わせ（１２３〜１２８）。
【００７６】
組織学において、相乗的分子としての媒染剤として最も一般的な２つの金属はアルミニウムおよび第二鉄である。媒染剤色素は共有結合または配位錯体とキレートを形成する。媒染剤および色素分子の多価金属イオンは配位錯体を形成する。キレート形成は、色素−媒染剤多価錯体と定義される「レーキ」を構成する。この分子は、１より多い結合点を有し、結果として多様性および官能性が異なる錯体を形成する。
【００７７】
処方のｐＨレベルの変更は、非常に急速かつ大規模な色の変化を示す。突然の色の変化は、非局在化電子との置換及び金属電子での低いエネルギーレベルによって説明される。金属は、錯体分子構造と比較して比較的低いエネルギーレベルを有し、即ち、金属添加によって、溶液中でのエネルギーレベルが急速に降下する。
【００７８】
ＤＮＡの塩基構造において、増加したデオキシリボースリン酸の後ろに位置する、チミンシトシン、グアニン及びアデニンがマッピングと相補的にらせん構造を形成する。リン酸基は組織学的染料の基本である。媒染剤を色素と混合し、ＤＮＡ中のリン酸はキレートを形成する。
【００７９】
配位結合アセンブリを形成するために必要な電子は、媒染剤色素をリン酸酸素と結合させる。ＤＮＡ及びタンパク質は、ヒドロキシル及びカルボキシル基を含み、核クロマチン同様に、タンパク質成分及びＤＮＡ複合体を含む。従って、ＤＮＡ核成分から染料を除去した後でも見ることができる。
【００８０】
不適切に固定された組織は最適に染色することができない。急速処理技術は染色の質に影響を及ぼす。１０％中性緩衝ホルマリンを数時間適用する場合、タンパク質の固定化は不適切である。エタノールは安定化剤及び脱水剤である。ホルマリン溶液での固定化はこの目的にとって十分である。エタノールを単独で使用する場合、もろくゆがんだ切片は組織のアーチファクトを残す。
【００８１】
前進的染色法は、後退的方法とは逆にディファレンシエートする必要がない。細胞核の染色以外に、バックグラウンド染色も様々な程度で望ましい可能性がある。前進的溶液はムチンなしでバックグラウンド染色をほとんどまたは全く示さない。
【００８２】
しかしながら、酸添加で更に高い色素濃度（１．５〜２．０ｇ／ｌ）は、透明なバックグラウンド染色も同様に提供する。後退的塗料（特に上記処方中５ｇ／ｌ色素濃度）はより色が強いように見える。後退的染色後、ディファレンシエーションによって明確できれいな核の形態外観が得られる。後退的処方は大型の研究所及び病院に好まれる可能性がある。
【００８３】
アンモニウム及びカリウムのアルミニウム（Ａｌｕｍｉｎｙｕｍ）は、単独又はアルミニウムと溶媒で、低いｐＨレベルを示す。しかしながら、緩衝能力が非常に限定される場合、ｐＨは最終的に増加する。しかしながら、処方の酸色素のｐＨに調節し、短時間液体と接触したアルカリ溶液は液体のｐＨに影響を及ぼさない。色素溶液の寿命は、アルカリ液体の保持量に跳ね返る媒染剤又は色素に関連する。このように、塗料は活性を減少させ始める。分解の最初の徴候は、不透明な赤桜色の赤−明紫色からの染料溶液の変化である。酸色素の色素溶液への活性化によって関与する量が少なくなる。この目的のために、２５％酢酸、０．１％クエン酸（ｃｉｔｒｉｃ）又は０．５％塩酸（ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃ）、更に酒石酸、乳酸、エリソルビン酸、アスコルビン酸、尿酸、タンニン酸を、ｐＨ制御に必要な量に基づいて１リットルの溶液で決定しなければならない。他の酸もｐＨを制御するために選択することができる。溶液のｐＨは２．５付近でなければならない。しかしながら、修飾は、処方によってｐＨ１〜４に調節することができる（図６）。
【００８４】
強酸の添加は、組織中のカルシウム貯蔵を溶解させ、染色されたカルシウムの組織沈着は、診断（例えば、乳がん）を誤らせる可能性がある場合に、診断にとって重要である。従って、強酸の非常に低いｐＨ値は避けなければならない。例えば、酢酸及びクエン酸は、酸クリーナーを含む処方及び顕著なコア染色を提供することが期待される。言い換えると、弱酸を含む前進的理想的処方での核の染色を達成することができる。対照的に、処方を含まない酸は、より良好なバックグラウンドを示し、核がはっきりしない。処方中の酸の後退的添加は、染色に貢献するが、色素溶液の酸性ｐＨを再度増加したレベルにし、染料の寿命を延ばすことを明確にする。
【００８５】
染色プロトコルのステップは、１．脱パラフィン化、２．再水和（アルコールを使用）、３．水でリンス、４．Ｐａｐａｖｅｒ  ｒｈｏｅａｓ処方実施、５．水でリンス、６．ディファレンシエーション、７．水でリンスする、８．青色化、９．水でリンス、１０．アルコールでリンス、１１．エオシン、１２．脱水（アルコールを使用）、１３．水（又はキシレン）で洗浄を含む（図７）。
【００８６】
染色時間は他の色素と同様に適用され、処方率に応じて調節することができ、３０分から１または２分に及ぶ（１３１〜１３３）。非常に短いインキュベーション期間では、不完全且つ一貫性のない染色となる。適切な調製物を作製できない場合は撹拌によって修正することができる。酸はスライド上のアーチファクトを除去することができる。しかしながら、これは媒染剤色素複合体の有効性を減少させる可能性がある。染料とともに１５秒間撹拌（振とう）することで、総染色時間が減少した。撹拌しない場合、期間は長くなるはずである。
【００８７】
染色には５分間の適用で十分である。時間の調節による染色時間の長さが、前進的染料の質を調節する。理想的には、染色時間は５〜１０分である。前進的ペインティングはまず迅速に開始し、タイミングについてはより独立的であり、後で平衡点に関して自身を制限する。後退的技術については、５〜１０分が十分な時間であり、過剰の色素は酸アルコールによって除去する。
【００８８】
エタノールでの弁色（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）の目的のために、酸エタノールの濃度を変えて適用する。サンプル；７０％エタノール（標準的酸アルコール）０．５％塩酸混合物を３０〜４５秒間使用する。クリップボードを完全に除去するためには強酸色素の希釈が必要である。ここでは、エタノールの代わりに、７０％蒸留水を使用してもよい。水は酸を希釈することができ、ディファレンシエーションは最適染色をもたらし得る。しかしながら、アルコールの代わりに水を使用することで染色のばらつきが起こる。ｎ−イソ−プロパノールを選択することができる。
【００８９】
組織スライド上の酸媒体の最初の色は明赤紫色である。これは恒久的な色ではなく、永続的な青色に変わる。赤色相は下にある搭載ガラスににじみ出る。青色層は溶媒に対して抵抗性、不溶性であり、水及び穏やかな溶媒を含み、ｐＨを調節することにより恒久的に変換される。水道水又は他のアルカリ性溶液は青色化をもたらす。水は、０．１〜１％炭酸リチウム溶液、０．５％酢酸ナトリウム、２％重炭酸ナトリウム、及びスコットの水道水代替物等の他のアルカリ溶液と同様に、核を青色にするのに充分であり得る（図８）。
【００９０】
水中の塩素はスライド上の塗料の退色の原因となる可能性があり、染色及び漂白を完全に除去する可能性がある。塩素処理水を使用する場合、水道水による洗浄を排除するか、あるいは非塩素処理水を使用しなければならない。青色化のために強アルカリを使用する場合、高ｐＨはその後のエオシン染色を阻害する可能性がある。弁色は、ｐＨ制御、定着剤、酸化剤、及び他の色素によって提供される溶媒で維持することができる。
【００９１】
過剰の染料は媒染剤の使用により減少させることができる。組織に対する結合の競合によって、溶液中に含まれる媒染剤色素がより多く入り、色素を組織からゆっくりと分離する。染料調製物に対してこの方法で競合除去が可能である。熟成により染料溶液の効率が増加する。熟成は、自然の酸化過程によって達成することができ、より信頼性があり耐久性がある。上部から空気が入るように綿でゆるく閉じた大き目のフラスコが適している。ゆっくりとした酸化を可能にするために、フラスコを温かくて暗く風通しの良いところに置かなければならない。
【００９２】
化学酸化剤を化学熟成で使用すると、より早く効率的な成熟をもたらす。沸騰は操作を加速し、沸騰後、ヨウ素酸ナトリウム、次亜塩素酸カルシウム、過酸化水素、ＵＳＰ、過マンガン酸カリウム、フェリシアン化カリウム、ヨウ化ナトリウム、酸化亜鉛を、過ヨウ素酸カリウム及び次亜塩素酸ナトリウムに加えて化学的酸化剤として使用できる。
【００９３】
硫酸アルミニウムカリウム等のアルミニウム塩と結合させた場合、溶液は淡色（未熟）不透明のクリアな青紫色であり、酸化されると明るい濃紫色（熟成）に変わる。それらは鉄塩と結合させることもできる。これらは非常に濃い紫色であり、通常、濃密な色彩である。用いられる化合物に応じて、シュウ酸、フェリシアン化ボラックス、過マンガン酸カリウムを酸化剤（ｏｘｉｄａｎｔ）として使用できる。
【００９４】
硫酸アルミニウム又は硫酸アルミニウムカリウム、硫酸アンモニウムアルミニウム、硫酸ナトリウムアルミニウム、酢酸アルミニウム及び硝酸アルミニウムの溶液を、染色するための主な媒染剤とすることができる。１リットルあたり５グラムの塗料粉末を使用し、水性溶媒として、蒸留水を使用すべきである。媒染剤色素比はおよそ１０倍又は若干低いレベルで有り得る。過剰且つ連続した酸化によって沈殿が生じる。この沈殿は、通常、酸化により結果として得られる不活性な誘導体である媒染剤も含む。染料処方を定期的にろ過する。
【００９５】
抽出物から得られるパパベル  ロアエス（Ｐａｐａｖｅｒ  ｒｈｏｅａｓ）液体処方は暗赤色であり、異なる方法で取り扱われる。生成物自体の粉末は市販するのに好適であり（特に輸送の容易さの点で）、病院や研究所の技術者によって調製される。試験した溶液は、直ちに使用できるパッケージで輸送が容易であり、暗色容器中で適切な病院に送達することができる。
【００９６】
酢酸と反応させることによって、核クロマチンコアはより一貫性があり明確な核画像を提供する。媒染剤アルミニウム塗料処方は酸性ｐＨ（ｐＨ−３．３〜−２．５）を有する。長さでペイントした構造の有効性は、染色で複数回洗浄する間に色素容器が移動する場合は減少する可能性がある。新しい溶液の添加はコーティングを強化する。酸化後に溶液内で有効性の低い誘導体が形成され、その結果、若干の沈殿が生じる。液体処方は、空気酸化を防止するために薄い油層で覆われたバレル又は容器内で保管できる。
【００９７】
エオシンＹ又は他の色素は、細胞質の対比染料として使用することができる。一般的な原則をここで適用することができるが、結果は主観評価である。造影剤は、核の外側の青色のコア成分でよく見えるだけでなく、組織が互いに明確に区別できるようになるので理想的であり（図１４）、コラーゲンサンプルから新しい筋肉組織を区別できなければならない。エオシンＹは通常、９５％エタノール中に可溶性であり、ラメラ調製物ＣＡがいったん閉じられアルコールが非常に長時間残った場合、染料は無色になる。従って、９５％エタノールが非常に長時間残った場合、染色されたＥＯが無色組織にされる可能性があり、Ｅｏｎの溶液における１００％エタノールよりは可能性は低いものの、それでも染料は組織から取り除かれる。この問題を回避するために、好エオシン（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ）調製物を７〜１０回急速に浸漬した後、９５％エタノールサブトラクション又はフォーム（ｓｕｂｔｒａｃｔｉｏｎ  ｏｒ  ｆｏｒｍ）で洗浄しなければならない。ｓｕｂｔｒａｃｔｉｏｎ  ｏｒ  ｆｏｒｍ．エオシンレッドは青色のコアに対して好適な対比を提供する。エオシンＹは、通常、若干黄色−オレンジ色を有するが、酢酸で赤くなる。
【００９８】
赤色の強さは、核の外側の構造を区別することにおいて重要である。不適切な染料は薄い染色の原因となり、一方、染料が核に多すぎると組織構造間の区別が困難になる。エオシン色素対比の組み合わせにより、コラーゲン；淡ピンク色、筋肉；暗ピンク色、好酸性細胞質；赤、好塩基性細胞質；紫、コア；暗紫色がかった青、赤血球；赤色に染色される。エオシンはパパベル  ロアエス処方の染色後約１分でスライドに適用しなければならない。
【００９９】
エオシン色素のより多くをその後洗い流さなければならない（１２９．１３０）。好ましくは、一連のエチルアルコール溶液中５０％、７５％及び９５％濃度がこの目的のために選択される。
【０１００】
染色過程の終了は重要な基準であるが、色強度及びコントラストの視覚的評価のための最良のアプローチである。標準の調製及び染色の品質管理の経験が染色の効率の改善をもたらす（１３４〜１３８）。
【０１０１】
パパベル  ロアエス処方を非ヒト組織生物学的サンプルの染色のために使用する。例えば酵母ボールからのサンプル中の酵母菌を細部まで染色する（図１５）。
【０１０２】
ここでも、顕微鏡法で調べることによる花弁の光及び原子間力花弁は、優れた比例らせん管によって生じた、液体で満たされた完璧な配列で配列された槽内構造を示すことが観察された（図１６．１７）。
【実施例】
【０１０３】
実施例１
前駆体の調製：抽出された色素の調製で使用したパパベル  ロエアスの凍結、生、又は乾燥花弁（花弁）の調製（図９）。葉を断弁化する。蒸留水、次いで一晩放置し、この手順を加え、次いで圧縮して、液体色素前駆体を得る。最初の色素は紫色、赤色、紫がかった赤色、赤味がかった紫色及び赤みがかった青色である。ろ過後、溶液は、例えば１／１０の割合のホルマリン、エタノール、メタノールを提供するようなものであり、溶媒を他のエーテルとして組み入れ、インキュベータ中、３０〜６０℃で加熱しながら乾燥する。乾燥した粗物質を再度メタノールで処理し、そして沈殿を分離する。この沈殿を使用して、粗粉末を調製する。この沈殿を冷又は沸騰エチルアルコール（１ｇ塗料／１００エチルアルコール）中に添加し、溶解させる。この液体混合物（冷または沸点）を１０００ｍｌの脱イオン水に添加する。
【０１０４】
実施例２
分子解析のために、抽出溶液を濾過し、エタノールで処理し、インキュベータ中で乾燥させる。乾燥サンプルを粉砕し、次いでメタノール浴に３回通し、３０〜６０℃のインキュベータ中に一晩入れ、液体フラクションを蒸発させる。１ｇの結果として得られる粉末を１００ｃｃのエタノール中に溶解させ、プレート上の繊維上に吸収させる。１％アンモニア溶液でピンク色のプレートが青色になるのが観察される。この青色素を酢酸中に溶解させる。液体フラクションを除去した。そして残りの乾燥粉末分析に。
【０１０５】
実施例３
部分的又は完全にこの新規分子の組成物中で使用される化学酸化剤。酸化の結果として分子の誘導体が生じる。しかしながら、活性の低い複合体も形成される可能性がある。酸化剤と分子とのモルバランスは４：１〜１：１である。溶媒内の色素は複数の媒染剤を有する（アルミニウム、鉄ビスマス媒染剤、銅、モリブデン、クロムおよびバナジウム、ならびにジルコニウム）（１２０、１２１）。分子及び媒染剤のモル比は２：１及び１：１００であり、この比は処方に応じて異なり、例えば１：２０〜１：５の間で変わる。処方は更に、酢酸等の酸も含み得る。最終媒染剤色素および溶媒溶液（例えばＡｌＣｌ３  ８０％、１０〜５０ｇ／リットル）は酸性ｐＨを有する。酸を処方に添加することで、核染色の特異性を調節し、貯蔵寿命を増加させた。青み付けによって細胞核の形状を目立たせる。酢酸を色素処方に添加すると、色が明るい褐色がかった紫色になる（図１０）。
【０１０６】
実施例４
処方の理想的ｐＨは２．５であるが、ｐＨは１から４まで変化する。いくつかの特定の実施形態では、酸化剤は組成物中のヨウ素酸ナトリウム、媒染剤としての硫酸アルミニウム、β−シクロデキストリンとしての塩化アルミニウム抗酸化剤、溶媒として６０〜９０％の水であり、１０〜４０％エチレングリコール混合物の割合で使用することができる。例えば、ｎ−プロピルガレート、ヒドロキノン、及び１又は複数の水溶性抗酸化剤を使用することができる。
【０１０７】
実施例５
着色は、前進的又は後退的方法で確立される。生物学的サンプルを顕微鏡スライドに担持させる。当該方法はさらに、顕微鏡スライド上に載せた細胞学サンプルについても使用することができる。対比染色、エオシンを選択する。
【０１０８】
実施例６
安定剤は、過酸化、蒸発及び最終的には沈殿を防止する。溶媒および色素／溶媒の量の比を１リットルに対して１〜２０グラムに設定して、染料処方を調製する。前進的溶液については１リットル当たり最低１グラムの色素、そして後退的塗料は１リットルあたり少なくとも５グラムの溶媒を含む。媒染剤の量が一定のままである場合、溶液中であまり濃縮されていない色素は、細胞核のより選択的な染色を明らかにする。例えば５ｍＬの色素の１０％溶液及び１０％を超えるまで量を増加させたアルコール性色素溶液を添加して最適選択性に達する。
【０１０９】
実施例７
濃度が低く、溶液中の色素の媒染剤色素／色素比が高い場合、溶液中に残存し、少量の色素が組織に付着する。０．１％又は２％酢酸、クエン酸等の酸を添加すると、貯蔵寿命が延びる。
【０１１０】
実施例８
非常に低いｐＨレベルの溶液は、組織石灰化も溶解し得るので、診断にとって重要である。従って、診断はエラーを引き起こす可能性があり、強酸を含む溶液を省略する。０．２ｍｌの氷酢酸の濃度を増加させて、又は０．１ｍｌのＨＣｌ酸、５ｇの色素及び５０ｇの媒染剤（硫酸アルミニウム）を添加することによって試験することができる。後退的染色処方の使用により酸性にし（１／１０の割合）、染色処方を使用して１ｇの色素および５０ｇの媒染剤（硫酸アルミニウム）前進的酸を得る（比１／５０）（図９）。
【０１１１】
実施例９
１０００ｍｌの脱イオン水沸点を大きなフラスコに入れる。これは、５０ｇの硫酸アンモニウムを含むのを添加し、混合物を冷却させる。４ｇの乾燥粉末を撹拌したフラスコ内に入れ、０．４ｇのヨウ化ナトリウムを５０ｍｌの冷水中に溶解させる。１００ｃｃのエチレングリコールを添加し、それと混合し、１０ｃｃの酢酸を添加する（ｐＨ単位は２．７〜３．１である）。ストック溶液を互いに混合する。塗料は使える状態である。塗料の塗布時間を試験によって最適化しなければならない。
【０１１２】
実施例１０
修正も可能である。染料と共に５ｇの媒染剤を含む酸フリーの後退的染料１００ｇに酸を添加する。ここで、割合は１／２０（５ｇ色素＋１００ｇの硫酸アルミニウム）である。１リットルあたり１〜２グラムの前進的及び５〜６ｇの後退的。中間体処方は３〜４グラムの染料を含む。色素の調製及び適用は技術者には十分に理解されるはずである。色素の含有量の変更によって、結果として得られる色素の質を調節できる。
【０１１３】
実施例１１
生じた粉末は赤れんが色がかった紫褐色であり、エタノールで溶解し、水ではあまり溶解しない（１００ｃｃの水、しかし、１ｇの色素は１００ｇのエチルアルコールに溶解し、３５〜５０ｇは除去塗料を溶解する）。グリセリンを抗酸化剤として組み入れることができ、過度の酸化処方を防止し、更に真菌の発生も防止する。任意の抗菌剤、例えばＰｒｏｃｌｉｎ  ３００（登録商標）アジ化ナトリウム、Ｐｒｏｃｌｉｎ  １５０（登録商標）、抗菌剤、例えばＰｒｏｃｌｉｎ  Ｐｒｏｃｌｉｎ  ２００（登録商標）及び９５０（登録商標）を添加して、２．０〜５のｐＨユニット内の微生物増殖を阻害する。（例えば）溶液に約０．０４％Ｐｒｏｃｌｉｎ  ３００（登録商標）（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ，  Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）の量で（図１０）。
【０１１４】
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【図１】
0006564030.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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