(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
１つまたは複数の多糖抗原を含む、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）に対する免疫原性組成物であって、各多糖抗原が、カンピロバクター ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）株に由来する単離されたカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）莢膜多糖を含み、２つ以上の当該莢膜多糖を含む反復多糖ポリマーを形成するように結合しており、
前記カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）株が、ＨＳ５株から選択され、
当該ＨＳ５株が、以下からなる群から選択される莢膜多糖構造から構成されると共に、
前記免疫原性組成物が、ギラン・バレー症候群に関連するカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）リポオリゴ糖構造を含有していない、免疫原性組成物。
【化１】
0006530051.tif 000016
【請求項２】
前記莢膜多糖がタンパク質担体にコンジュゲートされている、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項３】
前記タンパク質担体がＣＲＭ１９７である、請求項２に記載の免疫原性組成物。
【請求項４】
アジュバントも含む、請求項１〜３のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項５】
前記アジュバントが、ＬＴＲ１９２Ｇ、水酸化アルミニウム、ＲＣ５２９、ＱＳ２１、オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチドおよびリン酸アルミニウムからなる群から選択される、請求項４に記載の免疫原性組成物。
【請求項６】
非ヒト動物に対してカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）株に対する免疫応答を誘導する方法であって、
ａ．  １用量当たり０．１μｇ〜１０ｍｇの用量範囲で、請求項１〜５のいずれかに記載の免疫原性組成物を投与するステップ、       
ｂ．  １用量当たり０．１μｇ〜１０ｍｇの用量範囲で、請求項１〜５のいずれかに記載の免疫原性組成物をブースト投与するステップ
を含む、方法。
【請求項７】
前記組成物が、経口、経鼻、皮下、皮内、経真皮、経皮、筋肉内および直腸からなる群から選択される経路で投与される、請求項６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２００５年９月２１日に申請された米国仮特許出願第６０／７２２，０８６号の優先権を主張する、２００６年９月２０日に申請された米国非仮特許出願第１１／５２４，０５７号の一部継続出願であり、これらは本明細書に参照によって組み込まれている。本出願はまた、２０１４年９月２４日に申請された米国仮特許出願第６２／０５４，４５４号；２０１５年３月４日に申請された米国仮特許出願第６２／１２７，９２７号；２０１４年８月７日に申請された米国仮特許出願第６２／０３４，４３６号；および２０１５年５月２２日に申請された米国仮特許出願第６２／１６５，３０１号の利益を主張するものであり、これらは本明細書に参照によって組み込まれている。
【０００２】
本発明の主題は、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）によって引き起こされる下痢からの保護を付与する能力がある免疫原性組成物、および免疫原性組成物を使用してカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）に対する免疫応答を誘導する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）は、米国内で毎年２５０万の症例、世界中では４億超の症例を引き起こしていると見積もられる。開発途上国ではカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）はＥＴＥＣと同様、主に小児疾患である。カンピロバクター腸炎の症状には、下痢、腹痛、発熱および時として嘔吐が含まれる。便は通常、粘液、便中白血球および血液を含むが、水様下痢も観察される。この疾患は動物由来感染症であり、野生のおよび家畜化されたトリが主要な保有宿主となっている。カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）は主要な食物由来の感染であり、大抵の場合は汚染された家禽が関連するが、突発的に大発生する場合は、水または生乳の汚染が関連していた（４４）。カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）はライター症候群および炎症性腸症候群にも関連するが、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）腸炎の主要な合併症は、麻痺を生じ得る感染後性多発ニューロパチーのギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）である（Ａｌｌｏｓ，Ｂ．Ｍ．、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．、１７６（補遺２）：Ｓ１２５〜１２８頁（１９９７））。この関連性は、シアル酸を含有する、リポオリゴ糖（ＬＯＳ）の外側コアと、ヒト・ガングリオシドとの間の分子擬態による（Ｍｏｒａｎら、Ｊ．Ｅｎｄｏｔｏｘ．Ｒｅｓ．３：５２１頁（１９９６））。このため、ＬＯＳコアに対して生じた抗体は、ヒト神経組織に対する自己免疫応答をもたらす。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）莢膜部分は、血清型の決定において重要である。しかし、４７を超える数のカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）のＰｅｎｎｅｒ血清型が同定されているにも関わらず、ほとんどのカンピロバクター下痢疾患は、限られた数の血清型のみを発現するカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）によって引き起こされる。したがって、疫学研究に基いて選定されたカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株のみが、ワクチン組成物開発の適切な候補株となる。しかしこの生物のヒト疾患にとっての重要性にも関わらず、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）に対する認可されたワクチンはない。
【０００５】
カンピロバクターにおけるＬＯＳ合成は、数個の遺伝子によって制御されており、これらには、ＬＯＳに組み込まれるシアル酸の生合成に関与する酵素をコードする遺伝子が含まれる。このようにカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）は、多くの哺乳類細胞に見出される９炭素糖であるシアル酸を内在的に合成することができる数少ない細菌のうちの１つである。これは、ＬＯＳと、ＧＢＳにおいて重要なヒト・ガングリオシドとの間に観察される分子擬態と整合する（Ａｓｐｉｎａｌｌら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２１３：１０２９頁（１９９３）；Ａｓｐｉｎａｌｌら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６２：２１２２〜２１２５頁（１９９４）；Ａｓｐｉｎａｌｌら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、３３：２４１頁（１９９４）；Ｓａｌｌｏｗａｙら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．、６４：２９４５頁（１９９６））。
【０００６】
カンピロバクターゲノム配列に関して最近明らかになった興味深い事実は、ＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉｃｅａｅのタイプＩＩ／ＩＩＩ莢膜遺伝子座に見られるものに類似した莢膜輸送遺伝子の全セットが存在することであった（Ｐａｒｋｈｉｌｌら、Ｎａｔｕｒｅ、４０３：６６５頁（２０００）；Ｋａｒｌｙｓｈｅｖら、Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．、３５：５２９頁（２０００））。その後の、数個の莢膜輸送遺伝子に部位特異的変異を導入した遺伝研究から、莢膜が、Ｐｅｎｎｅｒ血清型別法における血清型決定因子であったことが示された（Ｋａｒｌｙｓｈｅｖら、Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．、３５：５２９頁（２０００））。Ｐｅｎｎｅｒ法（または、熱安定の意味のＨＳ）は、カンピロバクターの主要な２つの血清型別法のうちの１つであり、当初はリポ多糖Ｏ側鎖に基づくものと考えられていた（ＭｏｒａｎおよびＰｅｎｎｅｒ、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．、８６：３６１頁（１９９９））。現在では、以前、Ｏ側鎖として報告されていた構造は、実は莢膜であると考えられている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の組成物は、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）株に由来し、多糖ポリマーを形成するように結合している、単離された莢膜多糖を含む多糖抗原を含む免疫原性組成物に関する。この多糖は、リポオリゴ糖構造およびギラン・バレー症候群または自己免疫異常に関連する他の構造から、単離されている。実施形態の組成物は、ＨＳ１、ＨＳ１／ＨＳ４４、ＨＳ４４、ＨＳ２、ＨＳ３、ＨＳ４、ＨＳ５、ＨＳ１３、ＨＳ４／１３／６４およびＨＳ５０からなる群から選択されるカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株由来の単離された多糖をそれぞれが含む、１つまたは複数の多糖抗原を含む。
【０００８】
別の実施形態は、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株由来の単離された多糖または多糖ポリマーを各抗原が含む、１つまたは複数の多糖抗原を含む免疫原性組成物を投与することによって免疫応答を誘導する方法であって、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株は、ＨＳ１、ＨＳ１／ＨＳ４４、ＨＳ４４、ＨＳ、ＨＳ３、ＨＳ４、ＨＳ５、ＨＳ１３、ＨＳ４／１３／６４およびＨＳ５０からなる群から選択される、方法である。この組成物は、リポオリゴ糖構造およびギラン・バレー症候群または他の自己免疫異常に関連する他の構造を含まない。
【０００９】
別の実施形態は、１つまたは複数の抗原を投与することによって、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株ＨＳ４、ＨＳ１３、ＨＳ４／１３／６４およびＨＳ５０に対して免疫する方法であって、各抗原は、ＨＳ４、ＨＳ１３、ＨＳ４／１３／６４およびＨＳ５０からなる群から選択されるカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株由来の単離された多糖または多糖ポリマーを含む方法である。
【００１０】
別の実施形態は、１つまたは複数の抗原を投与することによって、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株ＨＳ１、ＨＳ１／ＨＳ４４、ＨＳ４４に対して免疫する方法であって、各抗原は、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株ＨＳ４、ＨＳ１３、ＨＳ４／１３／６４からなる群から選択されるカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株由来の単離された多糖または多糖ポリマーを含む方法である。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＨＳ１およびＨＳ４４  Ｐｅｎｎｅｒ型株由来の可変的なＣＰＳ遺伝子座のアライメントを示す図である。遺伝子は図中に示した通りであり、メチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）生合成およびトランスフェラーゼ；ＣＰＳ輸送および構築；推定上のメチルトランスフェラーゼ；ヘプトース／デオキシヘプトース生合成；推定上のグリコシルトランスフェラーゼ；糖生合成；ならびに推測された遺伝子を含む。
【図２】ＨＳ１タイコ酸様の莢膜の構造を示す図である。
【図３】カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＨＳ：１／４４タイコ酸ＣＰＳの２Ｄ  １Ｈ−３１Ｐ  ＨＭＢＣ  ＮＭＲスペクトルを示す図である。このＮＭＲスペクトルから、ＭｅＯＰＮ部分とＦｒｕ単位の３位とが繋がっていること、ならびにリン酸ジエステルとＧａｌの４位およびＧｒｏの１位とが繋がっていることが示される。
【図４】カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＨＳ４４  ＣＰＳ物質のＧＣ−ＭＳおよびＮＭＲを示す図である。（Ａ）（ｉ）タイコ酸ＣＰＳの主鎖単位である、グリセロール（Ｇｒｏ）およびガラクトース（Ｇａｌ）、ならびに（ｉｉ）ヘプトースに富む第２のＣＰＳから生じた主鎖単位である、６−デオキシ−３−Ｏ−メチル−アルトロ−ヘプトース（６ｄ−３−Ｏ−Ｍｅ−ａｌｔｒｏ−Ｈｅｐ）、６−デオキシ−アルトロ−ヘプトース（６ｄ−ａｌｔｒｏ−Ｈｅｐ）および６−デオキシ−ガラクト−ヘプトース（６ｄ−ｇａｌ−Ｈｅｐ）を示す、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＨＳ４４の２つのＣＰＳ由来のアルジトール・アセテート誘導体のＧＣ−ＭＳプロファイル。（Ｂ）ヘプトースに富むＣＰＳの６ｄ−ａｌｔｒｏ−Ｈｅｐｆ、６−デオキシ−ｇａｌａｃｔｏ−Ｈｅｐｆおよび６ｄ−３−Ｏ−Ｍｅ−ａｌｔｒｏ−Ｈｅｐｆ、ならびにタイコ酸ＣＰＳのＧａｌから生じたα−アノマー共鳴を示す、ＨＳ４４  ＣＰＳ物質の１Ｈ  ＮＭＲスペクトル。
【図５】ＨＳ１  ＣＰＳ遺伝子座の変異体の特性決定を示す図である。Ａ．  粗製ＣＰＳ調製物のアルシアン・ブルー染色１２．５％ＳＤＳ  ＰＡＧＥ。レーン１：Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｐｌｕｓタンパク質標準物質、レーン２：ＨＳ１野生型、レーン３：ＨＳ１１．０８突然変異体、レーン４：相補されたＨＳ１１．０８突然変異体、レーン５：ＨＳ１１．０９突然変異体、レーン６：相補されＨＳ１１．０９突然変異体、レーン７：ＨＳ１野生型。Ｂ．  ＨＳ１．０８相補体由来のＣＰＳの３１Ｐ  ＮＭＲ；Ｃ．  ＨＳ１．０９相補体由来のＣＰＳの３１Ｐ  ＮＭＲ；Ｄ．  ＨＳ１野生型由来のＣＰＳの３１Ｐ  ＮＭＲ。
【図６】カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＣＧ２９９５  ＣＰＳのアルジトール・アセテート誘導体のＧＣ−ＭＳプロファイルを示す図である。
【図７】カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＣＧ２９９５  ＣＰＳの１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図８】（Ａ）カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＣＧ２９９５  ＣＰＳの２Ｄ  １Ｈ−１３Ｃ  ＨＳＱＣ  ＮＭＲスペクトル；および（Ｂ）カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＣＧ２９９５  ＣＰＳの１Ｄ選択的１Ｈ  ＮＯＥを示す図である。照射によるピークは「＊」によって示す。０．２５０μｓの混合時間を使用した。
【図９】カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＣＧ２９９５  ＣＰＳの３１Ｐ  ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図１０】カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＣＧ２９９５  ＣＰＳの２Ｄ  １Ｈ−３１Ｐ  ＨＭＢＣ  ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図１１】ｉ）カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＣＧ２９９５の主要なＰＳ構造、ｉｉ）異型体１、ｉｉｉ）異型体２、およびｉｖ）異型体３の４つの異型体を示すＨＳ５  ＣＰＳを示す図である。
【図１２】３，６−ジデオキシ−リボ−ヘプトースの存在量の減少を示すＴＥＭＰＯ酸化後のカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＣＧ２９９５のＣＰＳのアルジトール・アセテート誘導体のＧＣ−ＭＳプロファイル（上）を示す図である。
【図１３】３，６−ジデオキシ−リボ−ヘプトースの存在量の減少を示すＴＥＭＰＯ酸化を示す図である。これから、そのＣ−７の一級ヒドロキシル（ＭｅＯＰＮを欠く）が、このＣＰＳにおいて好まれる酸化部位であり、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＣＧ２９９５  ＣＰＳの担体タンパク質ＣＲＭ１９７へのコンジュゲート化に主に関与することが示される。
【図１４】ＨＳ１コンジュゲート・ワクチン（結合型ワクチン）の特性決定を示す図である。Ａ．  コンジュゲートＣＰＳ中のＭｅＯＰＮの存在を示す、ＨＳ１ＣＰＳ−ＣＲＭ１９７コンジュゲート・ワクチンの３１Ｐ  ＮＭＲ。Ｂ．  ゲルコード・ブルー染色１２％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル。レーン１：ＣＲＭ１９７、レーン２：ＨＳ１−ＣＲＭ１９７コンジュゲート。タンパク質標準物質の質量は左に示す。
【図１５】ＨＳ：１３  ＣＰＳのＮＭＲを示す図である。カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ３０１９  ＣＰＳ（血清型ＨＳ：１３）の（Ａ）１Ｄ  １Ｈ  ＮＭＲ；および（Ｂ）１Ｄ  ３１Ｐ  ＮＭＲスペクトル。
【図１６】ＮＭＲによるＭｅＯＰＮ基の結合の決定を示す図である。カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＢＨ−０１−０１４２  ＣＰＳの２Ｄ  １Ｈ−３１Ｐ  ＨＭＢＣ  ＮＭＲスペクトル（Ａ’：Ｃ残基を有する１，２，３−結合６ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ／ＬＤ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ、Ｃ：ＭｅＯＰＮ）。
【図１７】非糖部分が３−ヒドロキシプロパノイルであったことを示すＮＭＲ分析である。（Ａ）カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＢＨ−０１−０１４２  ＣＰＳの２Ｄ  １Ｈ−１３Ｃ  ＨＭＢＣ  ＮＭＲスペクトル（Ｂ’：残基Ｄを有する１，３，４−結合Ｇａｌ；（Ｂ）Ｄ：３−ヒドロキシプロパノイル基。
【図１８】マウスにおけるＨＳ１−ＣＲＭ１９７コンジュゲートの免疫原性を示す図である。Ａ．  ３回の投与の２週間後のＨＳ１−ＢＳＡに対するＥＬＩＳＡ力価。Ｂ．  １：１０００に最終希釈したマウス血清で免疫検出したカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）細胞のドットブロット。
【図１９】ＨＳ５−ＣＲＭ１９７コンジュゲートに対する免疫応答を示す図である。３用量（コンジュゲートの重量に基づいて、１０μｇおよび５０μｇ）を用いて４週間の間隔でマウスを免疫した。最後の投与の２週間後、マウスから採血した。
【図２０】ＢＨ０１４２（ＨＳ３）コンジュゲート・ワクチンがマウスにおいて免疫原性であることを示す図である。データは、処置群毎における、逆数のＩｇＧ最終力価の平均（±標準誤差）を表す。
【図２１】ＨＳ１−ＣＲＭ１９７ワクチンの免疫原性を実証するドットブロットである。精製莢膜（１ｍｇ／ｍｌ）を３連（各２μｌ）でニトロセルロースにドットブロットし、ＨＳ１−ＣＲＭ１９７ワクチンに対するウサギ・ポリクローナル抗血清で免疫検出した。ＨＳ１：野生型ＨＳ１莢膜、ＨＳ１．０８：フルクトース分枝およびＭｅＯＰＮを欠く、ＨＳ１のフルクトース・トランスフェラーゼ変異体由来の莢膜、ＨＳ２３／３６：異種莢膜（ＨＳ２３／３６）を発現する８１−１７６由来の莢膜。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本明細書で使用される「多糖抗原」という用語は、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉまたはＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）莢膜由来の莢膜多糖を指す。本明細書で使用される場合、各多糖抗原は、１つのカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株由来の多糖または多糖ポリマーを含む。本発明の組成物は、複数の多糖抗原から構成されていてもよい。本明細書で使用される「多糖」は、炭水化物ポリマー分子を構成する２つ以上の単糖単位を指す。「多糖ポリマー」は、繋ぎ合わされた２つ以上の多糖分子を指す。本明細書で使用される、多糖構造中の「ｎ」は、そのポリマー中の多糖反復の数を指し、１以上であり、１００までになり得る。
【００１３】
本発明の実施形態は、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株の莢膜由来の多糖または多糖ポリマーを含む多糖抗原を含む。莢膜多糖が単離される株は、ＨＳ１、ＨＳ１／ＨＳ４４、ＨＳ４４、ＨＳ２、ＨＳ３、ＨＳ４、ＨＳ５、ＨＳ１３、ＨＳ４／１３／６４およびＨＳ５０からなる群から選択される。莢膜多糖ポリマーは、個々のカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株由来の、繋ぎ合わされて多糖ポリマーを形成した１〜１００コピーの多糖構造を含む。本発明の免疫原性組成物は、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株由来の単離されたカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）多糖構造または多糖ポリマーを各多糖抗原が含む、１つまたは複数の多糖抗原を含む。これらの多糖は、リポオリゴ糖またはＧＢＳもしくは他の自己免疫異常に関連する他の構造から分離された形で単離または精製されている。
【００１４】
多数のカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株が同定されている。本発明の一実施形態は、ヒトにおいて疾患をもたらすことが示されたカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株由来の莢膜多糖のみを含む。
【実施例１】
【００１５】
ＨＳ１／ＨＳ４４およびＨＳ４４多糖構造
カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）に対するワクチン戦略は、多くの株のカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）のリポオリゴ糖（ＬＯＳ）コアと、ヒト・ガングリオシドとの間の分子擬態のために大きく制限されてきた（Ｍｏｒａｎら、Ｊ．Ｅｎｄｏｔｏｘ．Ｒｅｓ．、３：５２１頁（１９９６））。この擬態は、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）感染が、感染後性多発ニューロパチーのギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）と強く関連する主要な要因であると考えられる（Ａｌｌｏｓ、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．、１７６（補遺）：Ｓ１２５〜１２８頁（１９９７））。このため、ＬＯＳコアに対して生じた抗体は、ヒト神経組織に対する自己免疫応答をもたらす。カンピロバクター腸炎の症例のうち、３０００分の１もの症例がＧＢＳに至ると見積もられている。したがって、ガングリオシド擬態を含むカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）に対するいずれの全細胞ワクチンも、ＧＢＳを発症する可能性を伴い得る。
【００１６】
分子ＣＰＳ型別システムが最近開発され、ＣＰＳ型とＰｅｎｎｅｒ型との強い相関が再確認された（Ｐｏｌｙら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４９：１７５０頁（２０１１））。Ｐｅｎｎｅｒ血清型別および分子ＣＰＳ型別のいずれからも、ひと握りのＣＰＳ型が世界全体において優勢であることが明らかになっている。ＣＰＳ型の中では、ＨＳ１複合体が最も一般的もののうちの１つであり、世界全体において、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）により誘導される下痢の８．２％の原因となっている（（Ｐｏｌｙら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４９：１７５０頁（２０１１）；Ｐｉｋｅら、ｐｌＯｓ  Ｏｎｅ、８：ｅ６７３７５（２０１３））。この複合体はＨＳ１およびＨＳ４４型から構成され、菌株をＨＳ１、ＨＳ４４またはＨＳ１／４４として血清型別することができる。これまでのところ、ＨＳ１型株のＣＰＳ構造しか記載されておらず、これは、タイコ酸様構造［−４）−α−Ｄ−Ｇａｌｐ−（１−２）−Ｇｒｏ−（１−Ｐ−］ｎ中のリン酸（Ｐ）によって結合した４−置換α−Ｄ−ガラクトース（Ｇａｌ）およびグリセロール（Ｇｒｏ）から構成される反復単位から構成される（Ａｓｐｉｎａｌｌら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２１６：８８０頁（１９９３））。ＨＳ１  ＣＰＳ主鎖は、Ｇａｌ単位のＣ−２およびＣ−３においてβ−Ｄ−フルクトフラノース（Ｆｒｕ）分枝によって修飾されていることがあり、この分枝はさらにＣ−３においてメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）によって修飾されていることがある（図１；（ＭｃＮａｌｌｙら、ＦＥＢＳＪ．２７２：４４０７頁（２００５））。フルクトフラノース分枝およびメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）はいずれも非化学量論的量で見出されるがこれはおそらく、それぞれのトランスフェラーゼをコードする遺伝子内の、塩基のホモポリマー領域における相変異（ｐｈａｓｅ  ｖａｒｉａｔｉｏｎ）による（ＭｃＮａｌｌｙら、ＦＥＢＳＪ．２７２：４４０７頁（２００５））。この多糖（ＢＸ５４５８５９）の合成のための１１個の遺伝子をコードする約１５ｋｂのＨＳ１  ＣＰＳ遺伝子座は、これまでにカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）において同定された最も小さいＣＰＳ遺伝子座である（Ｋａｒｌｙｓｈｅｖら、Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．７１：４００４頁（２００５））（図１）。
【００１７】
使用したＨＳ１型株はＭＳＣ５７３６０およびＨＳ４４株（ＡＴＣＣ４３４６３）であり、米国タイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）（マナッサス、バージニア）から入手した。カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株ＣＧ９８−Ｕ−７７は、タイの下痢症例から単離されたものであり、ｔｈｅ  Ａｒｍｅｄ  Ｆｏｒｃｅｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＡＦＲＩＭＳ）から入手した。カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株は、３７℃で、微好気条件（５％Ｏ２、１０％ＣＯ２および８５％Ｎ２）下、必要なら適切な抗生物質を補充したミュラー・ヒントン（ＭＨ）寒天プレート上で通常手順として培養した。Ｅ．ｃｏｌｉ株は、適切な抗生物質を補充したＬＢ培地で育てた。
【００１８】
カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）ゲノムＤＮＡを１６時間培養物から抽出した。ＣＰＳ遺伝子座の配列決定は、以前に記載されたように（Ｋａｒｌｙｓｈｅｖら、Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５５：９０頁（２００５）；ＰｏｌｙらＪ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４９：１７５０頁（２０１１）；Ｋａｒｌｙｓｈｅｖら、Ｇｅｎｅ、５２２：３７頁（２０１３））行った。
【００１９】
ＣＰＳを、７０℃、２時間の熱水−フェノール抽出によって細胞から抽出した。水層を水で透析（１０００Ｄａ）し、続いて超遠心によりＣＰＳをＬＯＳから分離した。ＣＰＳを含有する上清物をサイズ排除クロマトグラフィー（セファデックスＧ５０）にかけてさらに精製して、無傷のＣＰＳを得た。
【００２０】
単糖組成の決定は、アルジトール・アセテート法が容易に適用可能な手順を用いて行い（Ｃｈｅｎら、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．３４３：１０３４頁（２００８））、アルジトール・アセテートは、ＤＢ−１７キャピラリーカラムを使用してＴｈｅｒｍｏＦｉｎｎｉｇａｎ  ＰＯＬＡＲＩＳ（商標）−Ｑ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ、ウォルサム、マサチューセッツ）ガスクロマトグラフ／質量分析計（ＧＣ／ＭＳ）で分析した。糖の結合の種類は、以前に記載されているように（Ｃｈｅｎら、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．３４３：１０３４頁（２００８））、ＧＣ／ＭＳにより高メチル化アルジトール・アセテートを特性決定することによって、特性決定した。ＮＭＲ実験は、２９５Ｋで、重水素化トリメチルシリル・プロパン酸およびオルトリン酸を外部標準とし、Ｂｒｕｋｅｒクライオ・プラットフォームを備えたＢｒｕｋｅｒ  ４００ＭＨｚ分光計（Ｂｒｕｋｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｂｉｌｌｅｒｉａ、マサチューセッツ）で行った。
【００２１】
多糖の合成のための遺伝子を含む可変的な領域は、莢膜の合成および構築に関与するＡＢＣトランスポーターをコードする保存された遺伝子の間に位置し（図１）、この領域にはＨＳ１  ＣＰＳ遺伝子座の可変的な領域も認められる（ＭｃＮａｌｌｙら、ＦＥＢＳＪ．２７２：４４０７頁（２００５））。ＨＳ４４型株の莢膜遺伝子座のＤＮＡ配列は、ＨＳ１に見出される１１個の遺伝子のうちの１０個のホモログを含み、機能未知の遺伝子であるＨＳ１．０８のみを欠いていた（図１）。ＨＳ４４莢膜生合成遺伝子座の遺伝子の内訳を表１にまとめる。共有されるホモログは、推定上のメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）トランスフェラーゼ（ＨＳ４４．０７）がＨＳ１のそれと４７％の同一性しか示さなかった以外は全て、９６％超の同一性を有していた。
【００２２】
【表１】
0006530051.tif 000002
【００２３】
ＨＳ４４遺伝子座にはさらに１０個の遺伝子の挿入がＨＳ１．０７とＨＳ１．０９との間に含まれ、これは９，２５８塩基対に渡る（表１、図１）。これらの遺伝子には、デオキシヘプトース生合成に関与すると予測される酵素をコードする４個の遺伝子と（ＨＳ４４．０８〜ＨＳ４４．１１）、６−デオキシ−アルトロ−ヘプトース生合成に関与することが最近示されたエピメラーゼ・レダクターゼと相同性があるタンパク質をコードする３個の遺伝子（ＨＳ４４．１２、ＨＳ４４．１３およびＨＳ４４．１５）とが含まれる。ＨＳ４４のＣＰＳ遺伝子座は、ＮＣＴＣ  １１１６８（ＨＳ２）の機能未知のタンパク質をコードするＣＪ１４２９ｃに類似した遺伝子（ＨＳ４４．１４）、ヌクレオチジル−糖ピラノース・ムターゼ（ＨＳ４４．１６）、および推定上のヘプトシルトランスフェラーゼ（ＨＳ４４．１７、表１および図１）も含む。対照的に、ＨＳ１／４４として型別された臨床分離株の可変的なＣＰＳ遺伝子座のＤＮＡ配列は、ＨＳ１の型の株における配列と同一であった。これらの２個の莢膜遺伝子座の１１個の遺伝子から予測された最小のタンパク質相同性は９９％超であった。
【００２４】
精密な構造解析から、ＨＳ１／４４の多糖構造が、以前に記載されたＨＳ１株のタイコ酸莢膜多糖（ＣＰＳ）の多糖構造（Ａｓｐｉｎａｌｌ，ＭｃＤｏｎａｌｄら、１９９３年、ＭｃＮａｌｌｙ，Ｊａｒｒｅｌｌら、２００５年）である、→４）−［ＭｅＯＰＮ→３）−β−Ｄ−Ｆｒｕ−（１→］−α−Ｇａｌ−（１→２）−Ｇｒｏ−（１→Ｐ→（図２）と類似していることが明らかになった。
【００２５】
図３は、ＨＳ１／４４  ＣＰＳにおいてリンとプロトンとが繋がっていることの検出を示しており、これは、タイコ酸のジエステルリン酸（δＰ０．５および１．５）がＧｒｏの１位およびＧａｌの４位に結合し、メチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）（δＰ１４．３）がＦｒｕ残基の３位（δＨ４．８３）に付加されていることによる。Ｆｒｕ分枝を有する４−結合ＧａｌのＨ−４共鳴は、δ４．６８に現れ、一方、脱フルクトース化４−結合Ｇａｌの場合はδ４．４９で共鳴した（図３）。類似したパターンがＧｒｏのＨ−１共鳴についても観察された。ＨＳ１型株およびＨＳ１／４４  ＣＰＳを同時に分析したところ、２，３，４−三置換Ｇａｌ結合（ＧＣ−ＭＳ）およびメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）共鳴（３１Ｐ  ＮＭＲ）の強度が低いことから判断されるように、ＨＳ１／４４  ＣＰＳに含有されるフルクトース化の程度が低かったことが示唆された。
【００２６】
ＨＳ４４  ＣＰＳ物質の分析によって、明確に異なる２つの多糖莢膜構造が同定された。一方のＣＰＳは、上述のＨＳ１およびＨＳ１／４４のタイコ酸ＣＰＳ（図２）に類似していたが、そのメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）含有Ｆｒｕ分枝は観察されなかった。第２のＣＰＳはヘプトースに富み、６−デオキシ−ガラクト−ヘプトース（６ｄ−ｇａｌ−Ｈｅｐ）、６−デオキシ−アルトロ−ヘプトース（６ｄ−ａｌｔｒｏ−Ｈｅｐ）、およびより少量の６−デオキシ−３−Ｏ−メチル−アルトロ−ヘプトース（６ｄ−ａｌｔｒｏ−３−Ｏ−Ｍｅ−Ｈｅｐｆ）の反復ブロックから構成されている。ヘプトース構成を、ＧＣによって、構成がはっきり分かっている合成標準物質と比較することによって特性決定した。結合型分析（ＧＣ−ＭＳ）（図４Ａ）から、デオキシ−ヘプトースは、部分的に末端および２−置換単位としてフラノース形態で存在することが明らかになった。
【００２７】
一緒に行ったＮＭＲ研究（図４Ｂ）から、デオキシ−ヘプトースの存在が確認され（δＨ１．５〜２．０）、これらの単位がαアノマー配置にあることが明らかになった（δＰ５．１５〜５．４２）。ＨＳ４４  ＣＰＳ物質は、ＨＳ１およびＨＳ１／４４が発現するものとは異なる新たなメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）部分（δＰ１４．０）を伴っていた。これは、この株で観察される推定上のメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）トランスフェラーゼが分岐したものであることと整合する。
【００２８】
ＨＳ１．０８遺伝子の産物は８４９アミノ酸の、予測されたタンパク質をコードし、これは推定上の糖トランスフェラーゼとして注釈されている（Ｋａｒｌｙｓｈｅｅｖら、Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．、５５：９０頁（２００５））。ＨＳ４４タイコ酸様ＣＰＳは、非化学量論的なフルクトース分枝を欠き、莢膜遺伝子座においてＨＳ１．０８遺伝子が欠損していることから、本発明者らは、ＨＳ１．０８がフルクトース・トランスフェラーゼをコードすると仮定した。この遺伝子の変異体は、アルシアン・ブルー染色ゲル上で発現したとき、ＭＷがより低い莢膜を発現し、ＭＷは、ゲルによって示されるように、相補体では野生型のＭＷにまで回復した。ＮＭＲ分析からも相補が確認されたが、３１Ｐ  ＮＭＲにおけるメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）共鳴の強度がより低いことから（図５Ｂ）、この場合の相補が部分的であったことが示唆された。したがって、ＨＳ１．０８は、ＦｒｕをＧａｌに転移することができるトランスフェラーゼをコードするようである。
【００２９】
遺伝子ＨＳ１．０９は推定上のＣＤＰグリセロール・トランスフェラーゼと注釈されていた（Ｋａｒｌｙｓｈｅｖら、２００５年）。ＨＳ１においてこの遺伝子が変異すると、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルのアルシアン・ブルー染色によって検出されるようにＣＰＳが失われる（図５Ａ）。この変異体の相補体のゲル解析ではうすいＣＰＳバンドが認められたが（図５Ａ）、ＣＰＳ発現の回復は、メチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）の存在を示した３１Ｐ  ＮＭＲスペクトルから確認された（図５Ｂ）。
【００３０】
一実施形態では、ＨＳ１、ＨＳ１／ＨＳ４４およびＨＳ４４カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株に対するワクチン組成物に含めるのに有用な免疫原性組成物は、構造：
【００３１】
【化１】
0006530051.tif 000003
を含む多糖抗原、またはこの多糖構造の反復を含むポリマーを含み、式中、「ｎ」は１〜１００である。ＨＳ４４の多糖構造は、Ｇａｌの２または３位において繋がれた「［ＭｅＯＰＮ］→３）−Ｆｒｕｆ」単位を含まない上記の構造を含む。したがって、別の実施形態では、免疫原性組成物は、構造：
［→４）−ａ−Ｄ−Ｇａｌｐ−（１→２）−Ｇｒｏ−（１→Ｐ→］ｎ
（式中、「ｎ」は１〜１００である）を含む、ＨＳ４４由来の反復多糖構造を有する多糖抗原を含む。
【００３２】
カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）株ＰＧ３５８８（ＨＳ：１）：
カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）株ＰＧ３５８８（ＨＳ：１）莢膜多糖（ＣＰＳ）を、穏やかな酢酸（５％）で処理すると、フルクトース（Ｆｒｕｆ）側枝、およびそれに付随するメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）単位が除去された。脱フルクトース化ＣＰＳの１Ｈ  ＮＭＲでは、α−Ｄ−Ｇａｌ残基（Ｆｒｕｆ置換のない）に対応するδ５．２１にアノマー共鳴が認められた。Ｈ５  δ４．１８は、Ｈ６  δ３．７５プロトン共鳴から帰属され、Ｇｒｏ共鳴はＨ１／１’  δ４．０５／４．１２、Ｈ２  δ３．９８、およびＨ３／３’  ３．７８／３．８２であることが見出された。
【００３３】
カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）株ＰＧ３５８８（ＨＳ：１）莢膜多糖の全炭素共鳴が、２Ｄ  １Ｈ−１３Ｃ  ＨＳＱＣを用いて帰属された。これらを表２にまとめる。２Ｄ  １Ｈ−３１Ｐ  ＨＭＢＣ（図４）では、（δＨ４．５４／δＰ１．１４）および（δＨ４．０５、４．１１／δＰ１．１４）に強い交差ピークが認められた。このことから、リン酸ジエステルが存在し、これは、ＧｒｏおよびＧａｌのＣ４にリン酸ジエステルによって付加されていることが確認された。この２Ｄ  １Ｈ−３１Ｐ  ＨＭＢＣではもう１つの共鳴がメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）部分についてδ１４．０４に検出され、この共鳴は、δＨ３．７５／δＰ１４．０４に交差ピークを示したことから、メチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）がＧａｌのＣ−６に付加されていることが同定された。
【００３４】
【表２】
0006530051.tif 000004
【００３５】
【化２】
0006530051.tif 000005
【実施例２】
【００３６】
ＨＳ５由来の多糖構造
一実施形態は、ＨＳ５由来の構造の単離された莢膜多糖構造またはポリマーを含有するカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）に対する免疫原性組成物である。この多糖構造は、以下の構造の４つの変異型を含む：
【００３７】
【化３】
0006530051.tif 000006
【００３８】
単糖組成分析の結果から、株ＣＧ２９９５（ＨＳ：５）の莢膜多糖（ＣＰＳ）は、３，６−ジデオキシ−リボ−ヘプトース、グルシトールおよびＤ−グリセロ−Ｄ−マンノ−ヘプトースを含有していたことが明らかになった（図６）。次の各残基の複数の結合が観察された：末端３，６−ジデオキシ−リボ−ヘプトース、２，６−二置換グルシトール、２，３，６−三置換グルシトール、２−一置換Ｄ−グリセロ−Ｄ−マンノ−ヘプトース、２，６−二置換Ｄ−グリセロ−Ｄ−マンノ−ヘプトース、２，７−二置換Ｄ−グリセロ−Ｄ−マンノ−ヘプトース、および２，６，７−三置換Ｄ−グリセロ−Ｄ−マンノ−ヘプトース。
【００３９】
ＣＰＳの１Ｄ  １Ｈ  ＮＭＲから６つのアノマー・ピークが明らかになった。うち３つは５．２０ｐｐｍ、５．１８ｐｐｍおよび５．１６ｐｐｍ（それぞれＡ、Ｂ、Ｃ）において、Ｄ−グリセロ−Ｄ−マンノ−ヘプトース残基に関連付けられ、うち３つは５．２１ｐｐｍ、４．９６ｐｐｍおよび４．８７ｐｐｍ（それぞれＫ、Ｌ、Ｎ）において、３，６−ジデオキシ−リボ−ヘプトース残基に関連付けられる（図７）。結合および環の共鳴は次に２Ｄ  １Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹ、ＴＯＣＳＹおよびＮＯＥＳＹ実験によって確認した。ＮＭＲ実験によって見出された結合は、ＧＣ−ＭＳによって帰属された結合と一致した。
【００４０】
２Ｄ  １Ｈ−１３Ｃ  ＨＳＱＣおよびＨＭＢＣの助けを借りて、グルシトール残基（Ｘ、Ｙ、Ｚ）を、６つのヘプトース残基からの環領域の共鳴と共に帰属することができた。予想通り、グリコシド結合に関わる炭素である、Ｄ−グリセロ−Ｄ−マンノ−ヘプトースＡ、ＢおよびＣのＣ２（δ７８．１）、Ｄ−グリセロ−Ｄ−マンノ−ヘプトースＡのＣ６（δ７６．８）、グルシトールＹおよびＺのＣ２（δ８１．６）、グルシトールＸのＣ２（δ８２．５）、ならびにグルシトールＹおよびＺのＣ３（δ７８．８）は、低磁場の共鳴であることが見出された（図８（Ａ））。３，６−ジデオキシ−リボ−ヘプトースに関連付けられるデオキシ共鳴は、δ３７．１（Ｃ３）およびδ３６．１（Ｃ６）において容易に観察された。選択的１Ｄ  ｎＯｅ実験（図８（Ｂ））も、上記の結合の存在を示した。
【００４１】
１Ｄ  ３１Ｐおよび２Ｄ  １Ｈ−３１Ｐ  ＨＭＢＣ  ＮＭＲから、０．９６および１．３０ｐｐｍの共鳴が明らかになったがこれは、莢膜多糖反復がリン酸架橋によって結合していることを示している（図９）。この架橋によって、グルシトールの６位とＤ−グリセロ−Ｄ−マンノ−ヘプトースの７位とを介した結合が生じる（図９）。１Ｄ  ３１Ｐスペクトルではさらに、メチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）を示すδ１４．５のピークが得られ、２Ｄ  １Ｈ−３１Ｐ  ＨＭＢＣによって、このメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）は、７−置換３，６−ジデオキシ−リボ−ヘプトースを生ずる形で結合していることが分かった（図１０）。
【００４２】
主要な莢膜多糖が１つ観察され、その主鎖は［−７）−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−マンノ−ヘプトース−（１−３）−グルシトール−（６−）−Ｐ−］であり、α−３，６−ジデオキシ−リボ−ヘプトースによって、Ｄ−グリセロ−Ｄ−マンノ−ヘプトースは２，６−二置換され、グルシトールは２−一置換されていた（図１１ｉ）。莢膜多糖反復には他に３つの異型体があることも分かった：２−一置換Ｄ−グリセロ−Ｄ−マンノ−ヘプトースを有し、グルシトールがＤ−グリセロ−Ｄ−マンノ−ヘプトースに３位ではなく２位において結合している異型体１（図１１ｉｉ）、Ｄ−グリセロ−Ｄ−マンノ−ヘプトースが２，６−二置換されており、グルシトールがＤ−グリセロ−Ｄ−マンノ−ヘプトースに３位ではなく２位において結合している異型体２（図１１ｉｉｉ）、ならびに２−一置換Ｄ−グリセロ−Ｄ−マンノ−ヘプトースおよび２−一置換グルシトールを有する異型体３（図１１ｉｖ）。
【実施例３】
【００４３】
ＣＰＳ多糖のタンパク質担体へのコンジュゲート化（複合化）
１つまたは複数の多糖または多糖ポリマーを担体分子にコンジュゲートして、免疫を向上させてもよい。担体は、一実施形態ではタンパク質担体分子である。タンパク質担体の例として、ＣＲＭ１９７を多糖または多糖ポリマーにコンジュゲートしてもよい。ＴＥＭＰＯ酸化後のカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＣＧ２９９５のＣＰＳのアルジトール・アセテート誘導体のＧＣ−ＭＳプロファイルを図１２に示す。コンジュゲート化を図１３に例示する。
【００４４】
ＨＳ５多糖のコンジュゲート化
単離された、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＨＳ５多糖をタンパク質構造にコンジュゲートした。これを、多糖または多糖ポリマーのコンジュゲート化の例示としてここに記述する。コンジュゲート化の全体のスキームを図１３に例示する。任意のタンパク質担体をコンジュゲートすることを想定している。さらに、幾つもの手段によって、タンパク質担体へのコンジュゲート化を行うことができる。
【００４５】
実例として、図１３では、多糖を、ＴＥＭＰＯにより媒介される酸化によってＣＲＭ１９７にコンジュゲートした。図１３に示すこの方法では、第１のステップは、完全な状態のままのＣＰＳの一級ヒドロキシルの約１０％を、ＴＥＭＰＯにより媒介される酸化によってカルボン酸に酸化することである。図１３のスキームは、酸化部位の１つとしてＤＤ−Ｈｅｐの一級ヒドロキシルを用いたコンジュゲート化を例示する。非化学量論的酸化も、ＧｌｃのＣ−６、および側鎖置換基のＣＨ２−ＯＨで起き得る。ＣＰＳの活性化に続いて、担体タンパク質（例えばＣＲＭ１９７）へのコンジュゲート化を、図１３に示すＴＥＭＰＯにより媒介される方法で、カルボジイミド・カップリングによって達成した。コンジュゲート化は、ゲル電気泳動など、任意の方法によって可視化する。
【００４６】
ＨＳ１多糖のコンジュゲート化
ＨＳ１タイコ酸ＣＰＳおよびタンパク質担体ＣＲＭ１９７から構成される糖コンジュゲートを、ＨＳ５に用いたのと類似したコンジュゲート化スキームによって、ＣＰＳ中の反応可能な一級ヒドロキシルの１０％を化学量論的に酸化することに基づいて作製した。一級ヒドロキシルの酸化後、活性化されたＨＳ１  ＣＰＳは次に、ＣＰＳ中に新しく生じたカルボン酸官能基と、露出しているＣＲＭ１９７リシン単位とのカルボジイミド・タイプのカップリングによって、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートした。重要なことに、ＮＭＲによるＨＳ１  ＣＰＳ−ＣＲＭ１９７コンジュゲート・ワクチンの分析から、コンジュゲート化操作の間もメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）およびリン酸部分は無傷のままであったことが確認された。これらの結果を図１４に示す。部分的に酸化されたＨＳ１  ＣＰＳのアノマー共鳴の強度の比較から、主鎖のＧａｌ残基の半数が、Ｆｒｕ含有メチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）単位による分枝を有していたことが示された。
【実施例４】
【００４７】
ＨＳ複合体中の多糖
カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  Ｐｅｎｎｅｒ血清型複合体中に多糖構造が同定された。例えば、抗ＨＳ４血清は、ＨＳ１３、ＨＳ４／１３／６４およびＨＳ５０莢膜を含めたＨＳ４複合体の他の株との交差反応を生ずる。これらの株から多糖を単離し分析したところ、共通のイド−ヘプトース単位を含有する二糖が同定された。これらの株、およびこれらの株由来の単離された多糖を表３に列挙する。
【００４８】
【表３】
0006530051.tif 000007
【００４９】
表３から明らかなように、これらの単離された莢膜多糖に共通の驚くべき特徴はイド−ヘプトース単位である。したがって、一実施形態は、これらの株のカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）由来の多糖構造を各々が含む、１つまたは複数の多糖抗原を含む免疫原性組成物である。
【００５０】
カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株ＣＧ８４８６（ＨＳ：４：１３：６４）の以前に記載されたＣＰＳ構造は、主に二糖反復単位［→３）−６ｄ−β−Ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→４）−β−ＧｌｃＮＡｃ−（１→］からなり、非化学量論的にＯ−メチル・ホスホロアミデート置換基がイド−ヘプトースのＣ−２およびＣ−７位に付加されている。副成分であるＬ−グリセロ−Ｄ−イド−ヘプトース（ＬＤ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ）が、組成分析にアルジトール・アセテート誘導体を使用し、結合分析に高メチル化アルジトール・アセテート誘導体を使用してＧＬＣ−ＭＳにより検出され、これはこの株では新しく見出された。６−デオキシ−ヘプトースおよびＬ−グリセロ−Ｄ−ヘプトースの糖の環構成は、イドースとして帰属された。僅かな量の１，７−アンヒドロ−Ｌ−グリセロ−Ｄ−イド−ヘプトース（１，７−アンヒドロ−ＬＤ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ）および１，６−アンヒドロ−Ｌ−グリセロ−Ｄ−イド−ヘプトース（１，６−アンヒドロ−ＬＤ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ）が、酸加水分解中にＬＤ−ｉｄｏ−Ｈｅｐから生じた。
【００５１】
以前に報告されたカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＣＧ８４８６  ＣＰＳの結合型（３−置換６ｄ−イド−ヘプトース［→３）−６ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→］および２，３−二置換６ｄ−イド−ヘプトース［→２，３）−６ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→］、３，７−二置換６ｄ−イド−ヘプトース［→３，７）−６ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→］、４−置換Ｎ−アセチル−グルコサミン［→４）−ＧｌｃＮＡｃ−（１→］）に加えて、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＨＳ：４：１３：６４  ＣＰＳの高メチル化アルジトール・アセテート誘導体のＧＬＣ−ＭＳのＧＬＣプロファイルは、３−置換Ｌ−グリセロ−Ｄ−イド−ヘプトース［→３）−ＬＤ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→］および２，３−二置換Ｌ−グリセロ−Ｄ−イド−ヘプトース［→２，３）−ＬＤ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→］を含む、以前に報告された構造中には検出されなかったさらに２つのＬＤ−ｉｄｏ−Ｈｅｐの結合型を示した。
【００５２】
カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＣＧ８４８６  ＣＰＳの１Ｄ  １Ｈ  ＮＭＲでは、δ４．９４およびδ４．６６に、２つのβ−グリコシドの２つの共鳴が認められ、これらはそれぞれ６ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ／ＬＤ−ｉｄｏ−ＨｅｐおよびＧｌｃＮＡｃであった。３つの単糖残基（６ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ、ＬＤ−ｉｄｏ−ＨｅｐおよびＧｌｃＮＡｃ）に対して２つのアノマー・プロトン共鳴があることから、６ｄ−ｉｄｏ−ＨｅｐおよびＬＤ−ｉｄｏ−Ｈｅｐのいずれも、Ｈ−６位以外の糖の環系全体に渡って同じ化学シフトを含む可能性があることが示唆された。これは、これらの間の唯一の差異は、Ｃ−６位のヒドロキシル基の有無であったからである。１Ｈ  ＮＭＲスペクトルから、ＧｌｃＮＡｃのＮ−アセチル部分に特徴的であった、δ２．０７における１つのメチル一重線、ならびに６ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐの６−デオキシ部分であった、δ１．７７およびδ２．０３におけるメチレンのシグナルも明らかになった。加えて、１Ｄ  ３１Ｐ  ＮＭＲによって、δｐ１４．７における特徴的なメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）シグナルが検出された。カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）血清型ＨＳ４：１３：６４のＣＰＳ（表３を参照されたい）は、そのＣＰＳ中に６−ｄ−ｉｄｏ−ＨｅｐおよびＬＤ−ｉｄｏ−Ｈｅｐの双方を含有すると判定した。
主な反復である［→３）−６ｄ−β−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→４）−β−ＧｌｃＮＡｃ−（１→］（６ｄ−ｉｄｏ−ＨｅｐのＣ−２および／またはＣ−７において非化学量論的にＭｅＯＰＮを有する）、および
副次的な反復である［→３）−ＬＤ−β−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→４）−β−ＧｌｃＮＡｃ−（１→］（ＬＤ−ｉｄｏ−ＨｅｐのＣ−２において非化学量論的にＭｅＯＰＮを有する）。
【００５３】
カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＨＳ：４型株（株ＭＫ７）のＣＰＳ決定
カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株ＭＫ７（ＨＳ４）から単離されたＣＰＳは、アルジトール・アセテート誘導体のＧＣ−ＭＳプロファイル決定によると、Ｌ−グリセロ−Ｄ−イド−ヘプトース（ＬＤ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ）およびＮ−アセチル−グルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）から構成されていた。カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＨＳ：４型株の上記のＣＰＳ組成は、ＬＤ−ｉｄｏ−Ｈｅｐの代わりに主に６−デオキシ−イド−ヘプトース（６ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ）を含有する、血清型ＨＳ：４複合体（ＨＳ：４，１３，６４；株ＣＧ８４８６）の以前に報告されたＣＰＳに類似していた。高メチル化アルジトール・アセテート誘導体のＧＣ−ＭＳは、各単糖について次の結合型を示した：３−置換Ｌ−グリセロ−Ｄ−イド−ヘプトース［→３）−ＬＤ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→］および４−置換Ｎ−アセチルグルコサミン［→４）−ＧｌｃＮＡｃ−（１→］。
【００５４】
カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株ＭＫ７（ＨＳ：４の型の株）ＣＰＳの１Ｈ  ＮＭＲスペクトルでは、ＧｌｃＮＡｃおよびＬＤ−ｉｄｏ−Ｈｅｐに対しそれぞれδ４．７０およびδ４．９４における２つのβ−アノマー・プロトン共鳴が認められた。１Ｈ  ＮＭＲスペクトルから、ＧｌｃＮＡｃのＮ−アセチル部分に特徴的であった、δ２．０７における１つのメチル一重線、ならびにδ３．５０からδ４．５５の間の広範囲の重なりあった糖の環上プロトン共鳴も明らかになった。加えて、１Ｄ  ３１Ｐ  ＮＭＲによって、δｐ１４．３における微弱なメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）シグナルも検出された。メチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）の置換部位は、このＨＳ：４型株ではメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）置換の量が少ないために検出することができなかった。
【００５５】
カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）血清型ＨＳ：１３（株ＭＫ１６）のＣＰＳ決定
カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＨＳ４型株（ＭＫ７）は、［→３）−Ｌ−β−Ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→４）−β−ＧｌｃＮＡｃ−（１→］の二糖反復から構成されるＣＰＳを含有する。カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株ＭＫ１６（血清型ＨＳ：１３）のアルジトール・アセテート誘導体のＧＣ−ＭＳを用いた単糖組成分析から、グルコース（Ｇｌｃ）、６−デオキシ−イド−ヘプトース（６ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ）およびＬ−グリセロ−Ｄ−イド−ヘプトース（ＬＤ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ）の存在が、アルジトール・アセテート誘導体プロファイルのＧＳ−ＭＳ決定によって明らかになった。高メチル化アルジトール・アセテート誘導体のプロファイルの結合解析から、これらの単位は、４−置換グルコース［→４）−Ｇｌｃ−（１→］、３−置換６−デオキシ−イド−ヘプトース［→３）−６ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→］、２，３−二置換６−デオキシ−イド−ヘプトース［→２，３）−６ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→］、３−置換Ｌ−グリセロ−Ｄ−イド−ヘプトース［→３）−ＬＤ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→］、および３，７−二置換６−デオキシ−イド−ヘプトース［→３，７）−６ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→］として存在していたことが示された。加えて、少量の末端グルコース［Ｇｌｃ−（１→］が、ＣＰＳの非還元末端として検出された。カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）血清型ＨＳ：１３は、４−置換ＧｌｃＮＡｃ（血清型ＨＳ：４：１３：６４およびＨＳ：４に見られる）の代わりに４−置換Ｇｌｃを主鎖として含有する。
【００５６】
カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）血清型ＨＳ：１３  ＣＰＳの１Ｈ  ＮＭＲスペクトルでは、δ４．６３およびδ４．９２における２つのβ−アノマー・プロトン共鳴が認められ、これらはそれぞれＧｌｃおよび６ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ／ＬＤ−ｉｄｏ−Ｈｅｐとして帰属された（図１５Ａ）。１Ｈ  ＮＭＲスペクトルから、６ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐの６−デオキシ部分に特徴的であった、δ１．８６およびδ２．００におけるメチレンのシグナル（多重線）、ならびにδ３．３０からδ４．５５の間の広範囲の重なりあった糖の環上プロトン共鳴も明らかになった。１Ｄ  ３１Ｐ  ＮＭＲによって、メチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）シグナルに典型的であったδｐ１４．１およびδｐ１４．４における２つの共鳴が検出された（図１５Ｂ）。
【００５７】
カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株ＭＫ１６（血清型ＨＳ：１３）ＣＰＳは、ほぼ等濃度の以下の二糖反復（メチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）が非化学量論的に６ｄ−β−ｉｄｏ−ＨｅｐのＣ−２およびＣ−７に付加されている）からなると判定した。
［→３）−６ｄ−β−Ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→４）−β−Ｇｌｃ−（１→］、および
［→３）−Ｌ−β−Ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→４）−β−Ｇｌｃ−（１→］。
【００５８】
カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）血清型ＨＳ３／１３／５０
ＨＳ：３：１３：５０複合体は、量的に低レベルの免疫交差反応性に基いて同定された。カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株ＢＨ−０１−０１４２（血清型ＨＳ：３：１３：５０）は、ＧＳ−ＭＳを用い、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＢＨ−０１−０１４２  ＣＰＳ（血清型ＨＳ：３：１３：５０）の組成分析のためにアルジトール・アセテート誘導体プロファイル決定を用いたところ、ガラクトース（Ｇａｌ）、６−デオキシ−イド−ヘプトース（６ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ）およびＬ−グリセロ−Ｄ−イド−ヘプトース（ＬＤ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ）から構成されていた。
【００５９】
４−置換ガラクトース［→４）−Ｇａｌ−（１→］、３−置換６−デオキシ−ヘプトース［→３）−６ｄ−Ｈｅｐ−（１→］および３−置換Ｌ−グリセロ−Ｄ−イド−ヘプトース［→３）−ＬＤ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→］の糖結合型が血清型ＨＳ：３：１３：５０のＣＰＳを構成していることが、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＢＨ−０１−０１４２  ＣＰＳ（血清型（ＨＳ：３：１３：５０））の高メチル化アルジトール・アセテート誘導体のＧＣ−ＭＳプロファイル分析を用いて見出された。加えて、副成分の３，４−二置換ガラクトース［→３，４）−Ｇａｌ−（１→］、２，３−二置換６−デオキシ−ヘプトース［→２，３）−６ｄ−Ｈｅｐ−（１→］および２，３−二置換Ｌ−グリセロ−Ｄ−イド−ヘプトース［→２，３）−ＬＤ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→］も特性決定された。上記の結果から、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）血清型ＨＳ：３，１３，５０  ＣＰＳの主鎖単位は、［→４）−Ｇａｌ−（１→］、［→３）−６ｄ−Ｈｅｐ−（１→］および［→３）−ＬＤ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→］であり、他の３つの非糖成分が、ＧａｌのＣ−３ならびに６ｄ−ｉｄｏ−ＨｅｐおよびＬＤ−ｉｄｏ−ＨｅｐのＣ−２に非化学量論的に付加されていたことが示唆された。さらに、末端Ｇａｌ［Ｇａｌ−（１→］も決定され、これは非還元末端であることが示唆された。
【００６０】
カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）血清型ＨＳ：３：１３：５０  ＣＰＳの１Ｈ  ＮＭＲスペクトルでは、アノマー・プロトンのシグナルに対応する、δ５．００ｐｐｍからδ５．３０ｐｐｍの間の幅広い重なりピークが認められた。これらの重なりピークは、α−アノマー糖の存在を示唆する。加えて、１Ｈ  ＮＭＲスペクトルから、６ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐの６−デオキシ部分に特徴的な、δ１．８０およびδ２．０２におけるメチレンのシグナルも明らかになった。δ２．７２における別のプロトン共鳴は、１Ｈ  ＮＭＲスペクトルでも明らかになったメチレンのシグナルであることが、後に確認された。
【００６１】
非糖成分について情報を得るために、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＢＨ−０１−０１４２  ＣＰＳの３１Ｐ  ＮＭＲを行って、任意のリン置換基を決定した。δｐ１５．３におけるリン共鳴から、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＣＰＳの血清型ＨＳ：３，１３，５０の構造部分に関与していたＯ−メチル・ホスホロアミデート基（ＭｅＯＰＮ）またはＣＨ３ＯＰ（Ｏ）ＮＨ２（ＯＲ）の存在が明らかになった。メチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）シグナルが１つ現れたことから、この固有の成分は、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株ＢＨ−０１−０１４２のＣＰＳの単糖残基のうちの１つに部分的に付加されていたことが示唆された。これは、糖結合型解分析の結果から、副成分の１，３，４−結合Ｇａｌ、１，２，３−結合６ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐおよび１，２，３−結合ＬＤ−ｉｄｏ−Ｈｅｐの存在が明らかになったからである。
【００６２】
カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）  ＢＨ−０１−０１４２  ＣＰＳの２Ｄ  １Ｈ−３１Ｐ  ＨＭＢＣ  ＮＭＲを行って、メチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）基の結合部位を明らかにした（図１６）。δｐ１５．３／δＨ３．７８における交差ピークは、メチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）のリンとメチル基との相関に対応していた。δｐ１５．３とδＨ４．５６との間の強いプロトン−リン相関はメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）基の結合部位を示唆し、δｐ１５．３とδＨ５．１０におけるアノマー・プロトンとの間の弱いプロトン−リン相関も伴っていた。したがって、単糖結合型分析と２Ｄ  １Ｈ−３１Ｐ  ＨＭＢＣ  ＮＭＲとの結果を組み合わせると、Ｏ−メチル−ホスホロアミデート基（残基Ｃ）は、６ｄ−ｉｄｏ−ＨｅｐおよびＬＤ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ（残基Ａ’）のＣ−２位に付加されていたことが示された。
【００６３】
２Ｄ  １Ｈ−１３Ｃ  ＨＭＢＣ  ＮＭＲ実験（図１７）から、第２の非糖部分は３−ヒドロキシプロパノイルの部分であったことが示された。δＨ３．８９／δＣ１７３．０およびδＨ２．７２／δＣ１７３．０における交差ピークは、カルボニル・エステルＣ−１が、３−ヒドロキシプロパノイル基（残基Ｄ）のＨ−３およびＨ−２とそれぞれ３つの結合および２つの結合を介して繋がっていることを示した。δＨ５．２０／δＣ１７３．０における交差ピークを解釈し、１，３，４−結合Ｇａｌの副ピークを示した結合型分析の結果を考慮に入れることによって、３−ヒドロキシプロパノイル基は、ＧａｌのＣ−３に繋がっていることが観察された。
【００６４】
本発明者らは、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）血清型ＨＳ：３が、二糖反復（６ｄ−α−ｉｄｏ−Ｈｅｐ／Ｌ−α−Ｄ−ｉｄｏ−ＨｅｐのＣ−２においてＯ−メチル−ホスホロアミデートにより、かつα−ＧａｌのＣ−３において３−ヒドロキシプロパノイル・エステルにより非化学量論的に置換されている）を伴うＣＰＳを有すると判定した。
［→３）Ｌ−α−Ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→４）−α−Ｇａｌ−（１→］、および
［→３）−６ｄ−α−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→４）−α−Ｇａｌ−（１→］。
【実施例５】
【００６５】
免疫原性組成物
カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）に対する免疫原性組成物は、１つまたは複数の単離されたＣ．ｊｅｊｕｎｉ多糖または多糖ポリマーを含み得る。この組成物は、ギラン・バレー症候群に関連するＬＯＳを含まない多糖または多糖ポリマーを含有する。一実施形態は、１つまたは複数の単離されたカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）由来の多糖または多糖ポリマーを含む組成物であり、この多糖ポリマーは、１〜１００個の結合し合った多糖を含む（すなわち、「ｎ」は１以上である）。単離されたカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）多糖の構造は、株ＨＳ５、ＨＳ１、ＨＳ２、ＨＳ３、ＨＳ４、ＨＳ４／１３／６４、ＨＳ５０およびＨＳ１３のうちの１つまたは複数に由来する。
【００６６】
一実施形態では、この組成物は、
【００６７】
【化４】
0006530051.tif 000008
カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株ＨＳ４４由来の［→４）−α−Ｄ−Ｇａｌｐ−（１→２）−Ｇｒｏ−（１→Ｐ→］ｎ；および
カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株ＨＳ１および／またはＨＳ１／４４由来の
【００６８】
【化５】
0006530051.tif 000009
Ｌ−Ｄ−イド−ヘプトースの２位において非化学量論的にＯ−メチル−ホスホロアミデートにより置換されている、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株ＨＳ４／ＨＳ１３／ＨＳ６４由来の［→３）−Ｌ−β−Ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１−＞４）−β−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃ−（１→］ｎ；
６ｄ−ｉｄｏ−ＨｅｐのＣ−２および／またはＣ−７において非化学量論的にメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）を有する、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株ＨＳ４／１３／６４由来の［→３）−６ｄ−β−Ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→４）−β−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃ−（１→］ｎ；
ＬＤ−ｉｄｏ−ＨｅｐのＣ−４において非化学量論的にメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）を有する、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株ＨＳ４由来の［→３）−Ｌ−β−Ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→４）−β−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃ−（１→］ｎ；
メチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）を有さないまたは６ｄ−ｉｄｏ−ＨｅｐのＣ−２および／もしくはＣ−７において非化学量論的にメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）を有する、Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ株ＨＳ１３由来の［→３−６ｄ−β−Ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃ−（１→］ｎ；
ＨＳ２由来の
【００６９】
【化６】
0006530051.tif 000010
(式中、ＮＧｒｏ＝アミノグリセロール；Ｅｔｎ＝エタノールアミンである）；
６−デオキシ−アルファ−Ｄ−イド−ヘプトースの２位において非化学量論的にＯ−メチル−ホスホロアミデートにより置換されており、α−ＧａｌのＣ−３において３−ヒドロキシプロパノイル・エステル（ｈｄｒｏｘｙｐｒｏｐａｎｏｙｌ  ｅｓｔｅｒ）を有するまたは有さない、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株ＨＳ３由来の［→３）−Ｌ−アルファ−Ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１−＞４）−アルファ−Ｇａｌ−（１→］ｎ；
ＬＤ−ｉｄｏ−ＨｅｐのＣ−４において非化学量論的にメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）を有する、ＨＳ５０由来の［→３）−Ｌ−β−Ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃ−（１→］ｎ；
ならびに
６ｄ−ｉｄｏ−ＨｅｐのＣ−７において非化学量論的にメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）を有する、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株ＨＳ５０由来の［→３−６ｄ−β−Ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃ−（１→］ｎ
からなる群から選択される１つまたは複数の多糖構造を含み、ここで、同じ多糖が結合して、１〜１００個の結合し合った多糖を含む多糖ポリマーを形成している（すなわち、「ｎ」は１以上である）。
【００７０】
分解（ｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）の多糖または多糖ポリマーを担体に結合させることができ、前記担体はタンパク質であってもよい。一実施形態では、このタンパク質担体はＣＲＭ１９７である。
【実施例６】
【００７１】
ＣＰＳコンジュゲートによる免疫応答の誘導
ＨＳ１、ＨＳ１／ＨＳ４４およびＨＳ４４に対する免疫応答の誘導
一実施形態では、ＨＳ１、ＨＳ１／ＨＳ４４およびＨＳ４４カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株に対するワクチン組成物に含めるのに有用な免疫原性組成物は、構造：
【００７２】
【化７】
0006530051.tif 000011
を含む多糖、またはこの多糖構造の反復を含むポリマーを含み、式中、「ｎ」。代替実施形態では、免疫原性組成物は、実施例１のようにＨＳ４４組成物を含むことがあり、これは「［ＭｅＯＰＮ］→３）−Ｆｒｕｆ」単位を含有しない。
【００７３】
驚くべきことに、ＨＳ１およびＨＳ１／ＨＳ４４株に見出される上記の構造は、
ＨＳ４４株に対する免疫応答を誘導する。この研究では、マウスを、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）（クリフトン、ニュージャージー）と共に投与した漸増量のワクチンによって免疫した。最終免疫の２週間後、免疫した動物は全て、免疫前血清と比べ有意なレベルの（Ｐ＜０．０５）、ＨＳ１  ＣＰＳに対し特異的な血清ＩｇＧ抗体を示した。さらに、この効果は、１用量あたり５０μｇのワクチン（重量に基づいて）で免疫したマウスが、１用量あたり１０μｇを投与したマウスよりも有意に高い（Ｐ＜０．０５）最終力価を有していたことから、用量依存的であった。これらの結果から、ＨＳ１が、マウスにおいて高いレベルの抗ＣＰＳ抗体を生ずることができることが明らかである。これらの研究の結果を図１８に例示する。ＨＳ１−ＣＲＭ１９７ワクチンの免疫原性を実証するドットブロットも図１９に示す。精製莢膜（１ｍｇ／ｍｌ）を３連（各２μｌ）でニトロセルロースにドットブロットし、ＨＳ１−ＣＲＭ１９７ワクチンに対するウサギ・ポリクローナル抗血清で免疫検出した。ＨＳ１：野生型ＨＳ１莢膜、ＨＳ１．０８：フルクトース分枝およびメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）を欠く、ＨＳ１のフルクトース・トランスフェラーゼ変異体由来の莢膜、ＨＳ２３／３６：異種莢膜（ＨＳ２３／３６）を発現する８１−１７６由来の莢膜。
【００７４】
ＨＳ−５多糖組成物を使用した免疫応答の誘導
単離されたＨＳ５多糖が免疫応答を誘導する能力を評価した。単離されたＨＳ５多糖を、数あるタンパク質担体のうちの任意のものとコンジュゲートして使用する可能性が企図されるが、例示として、ＣＲＭ１９７コンジュゲートＨＳ５多糖を評価した。
【００７５】
この研究では、実施例３の方法に基づいてＨＳ５をＣＲＭ１９７にコンジュゲートした。ＢＡＬＢ／ｃマウスに、各１０μｇまたは５０μｇのＨＳ５多糖コンジュゲートを３用量、４週間の間隔で２００μｇのＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ（登録商標）（Ｂｒｅｎｎｔａｇ  ＡＧ、ドイツ）と共に投与した。マウスに合計３回注射した。最後の投与の２週間後、マウスから採血し、血清をＥＬＩＳＡで評価した。この研究の結果を、ＣＰＳ特異的ＩｇＧ応答を示す図１９に示す。
【００７６】
ＣＲＭ１９７にコンジュゲートされたＨＳ３の免疫応答も調べた。メスＢＡＬＢ／ｃマウスを、水酸化アルミニウム中のコンジュゲート・ワクチン（ＣＲＭ１９７にコンジュゲートされた、ＢＨ０１４２由来のＨＳ３）を用いた皮下注射によって、４週間の間隔で３回免疫した。ワクチンは重量に基づいて投与した。５μｇの用量は約０．５μｇのコンジュゲートされた多糖に相当し、２５μｇの用量は約２．５μｇのコンジュゲートされた多糖に相当する。血清を各免疫の２週間後に採取した。莢膜特異的ＩｇＧ応答をＥＬＩＳＡによって決定した。結果を図２０に示す。
【００７７】
加えて、ＨＳ４複合体のメンバー間の免疫交差反応も評価した。これらの研究では、ＨＳ４複合体の様々なメンバーの、細胞全体をプロテイナーゼＫで消化した試料を１２．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルで電気泳動し、ＨＳ４複合体のメンバーの、細胞全体をホルマリンで死滅させたものに対し作製したウサギ・ポリクローナル抗血清でイムノブロットした。ＨＳ４抗血清はＨＳ１３およびＨＳ４と交差反応することが見出された。抗ＨＳ４／１３／６４血清は、ＨＳ６４およびＨＳ４、ならびに多少ＨＳ５０と交差反応することが見出された。
【００７８】
類似した研究では、ウサギ抗ＨＳ１３血清は、ＨＳ４およびＨＳ１３と交差反応することが見出され、抗ＨＳ６４血清は、ＨＳ４、ＨＳ１３、ＨＳ４／１３／６４およびＨＳ５０と交差反応することが見出された。同様にして、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートされた、ＨＳ４／１３／６４株の莢膜から構成されるコンジュゲート・ワクチンに対して作製されたウサギ・ポリクローナル抗血清をイムノブロットに使用して、ＨＳ４複合体の他のメンバーの、プロテイナーゼＫで消化した細胞全体の調製物に対するこのワクチンの交差反応性を決定した。このワクチンに対する抗体は、ＨＳ４およびＨＳ６４とは交差反応したが、ＨＳ１３またはＨＳ５０とは交差反応しなかった。
【実施例７】
【００７９】
哺乳動物において抗カンピロバクター  ジェジュニ(Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ)免疫応答を誘導する方法
本発明の一実施形態は、莢膜多糖に対する免疫応答の誘導である。この実施形態の方法は、１つまたは複数の多糖抗原を含む免疫原性組成物を投与することを含み、各多糖抗原はカンピロバクター  ジェジュニ(Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ)莢膜多糖ポリマーを含む。カンピロバクター  ジェジュニ(Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ)莢膜多糖ポリマーは、実施例１〜４におけるように、カンピロバクター  ジェジュニ(Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ)株を構成する。したがって、莢膜多糖ポリマーは、個々のカンピロバクター  ジェジュニ(Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ)株由来の、繋ぎ合わされて多糖ポリマーを形成した１〜１００コピーの多糖構造を含む。免疫は、１つまたは複数の株のカンピロバクター  ジェジュニ(Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ)に対して誘導され得る。
【００８０】
莢膜多糖は、ＨＳ１およびＨＳ１複合体（ＨＳ１、ＨＳ１／ＨＳ４４またはＨＳ４４）、ＨＳ２、ＨＳ３、ＨＳ４、ＨＳ５、ＨＳ１３、ＨＳ４／１３／６４ならびにＨＳ５０からなる群から選択される１つまたは複数のカンピロバクター  ジェジュニ(Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ)株に由来する。本発明の免疫原性組成物は、リポオリゴ糖またはＧＢＳに関連する他の構造を含まない単離されたカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）多糖構造、またはこの構造の多糖ポリマーを含む。多糖ポリマーは、担体分子にコンジュゲートされていてもコンジュゲートされていなくてもよく、組成物は、アジュバントを伴ってまたは伴わずに、１用量当たり０．１μｇ〜１０ｍｇの用量範囲で投与することができる。
【００８１】
別の実施形態は、ＨＳ１、ＨＳ１／ＨＳ４４またはＨＳ４４由来の単離されたカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）莢膜多糖を投与することによって、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）に対する免疫応答を誘導する方法である。本発明の方法ではこの組成物を使用して、ＨＳ１、ＨＳ１／ＨＳ４４またはＨＳ４４に対する免疫応答を誘導する。例えば、ＬＯＳ成分、およびギラン・バレー症候群などの自己免疫応答を引き起こし得る他の成分から単離または精製された、ＨＳ１由来のものなどの単離されたカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）莢膜多糖を含む組成物を使用して、ＨＳ１、ＨＳ１／ＨＳ４４およびＨＳ４４のカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株に対する免疫応答を誘導する。
【００８２】
別の実施形態では、ＨＳ４、ＨＳ１３、ＨＳ４／ＨＳ１３／ＨＳ６４またはＨＳ５０由来の１つまたは複数の多糖を含む、１つまたは複数の多糖を含む組成物は、ＨＳ４、ＨＳ１３、ＨＳ４／ＨＳ１３／Ｈ６４またはＨＳ５０を含むＨＳ４複合体の任意のカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株に対する免疫を誘導する方法で使用することができる。
【００８３】
上記の組成物において、多糖または多糖ポリマーは担体に結合していてもよく、前記担体はタンパク質であってもよい。一実施形態では、タンパク質担体はＣＲＭ１９７である。
【００８４】
例えば、この実施形態の方法は、
ａ．  ＨＳ１およびＨＳ１複合体（ＨＳ１、ＨＳ１／ＨＳ４４またはＨＳ４４）、ＨＳ２、ＨＳ３、ＨＳ４、ＨＳ５、ＨＳ１３、ＨＳ４／１３／６４ならびにＨＳ５０からなる群から選択されるカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株の莢膜由来の、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）の、１つまたは複数の単離された莢膜多糖ポリマーを含む免疫原性組成物を投与するステップであって、株の莢膜多糖は結合して、個々のカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株由来の、繋ぎ合わされてポリマーを形成した１〜１００コピーの多糖構造を含む多糖ポリマーを形成していてもよく、前記組成物は、リポオリゴ糖またはＧＢＳに関連する他の構造を含まない単離されたカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）多糖構造、またはこの構造のポリマーを含み、多糖または多糖ポリマーは、担体分子にコンジュゲートされていてもコンジュゲートされていなくてもよく、組成物は、アジュバントを伴ってまたは伴わずに、１用量当たり０．１μｇ〜１０ｍｇの用量範囲で投与することができ、多糖構造は、
【００８５】
【化８】
0006530051.tif 000012
カンピロバクター  ジェジュニ(Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ)株ＨＳ４４由来の［→４）−α−Ｄ−Ｇａｌｐ−（１→２）−Ｇｒｏ−（１→Ｐ→］ｎ；
カンピロバクター  ジェジュニ(Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ)株ＨＳ１および／またはＨＳ１／４４由来の
【００８６】
【化９】
0006530051.tif 000013
Ｌ−Ｄ−イド−ヘプトースの２位において非化学量論的にＯ−メチル−ホスホロアミデートにより置換されている、ＨＳ４／ＨＳ１３／ＨＳ６４由来の［→３）−Ｌ−β−Ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１−＞４）−β−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃ−（１→］ｎ；
６ｄ−ｉｄｏ−ＨｅｐのＣ−２および／またはＣ−７において非化学量論的にメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）を有する、ＨＳ４／１３／６４由来の［→３）−６ｄ−β−Ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→４）−β−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃ−（１→］ｎ；
ＬＤ−ｉｄｏ−ＨｅｐのＣ−４において非化学量論的にメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）を有する、ＨＳ４由来の［→３）−Ｌ−β−Ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→４）−β−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃ−（１→］ｎ；
メチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）を有さないまたは６ｄ−ｉｄｏ−ＨｅｐのＣ−２および／もしくはＣ−７において非化学量論的にメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）を有する、ＨＳ１３由来の［→３−６ｄ−β−Ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃ−（１→］ｎ；
ＨＳ２由来の
【００８７】
【化１０】
0006530051.tif 000014
（式中、ＮＧｒｏ＝アミノグリセロール；Ｅｔｎ＝エタノールアミンである）；
６−デオキシ−アルファ−Ｄ−イド−ヘプトースの２位において非化学量論的にＯ−メチル−ホスホロアミデートにより置換されており、α−ＧａｌのＣ−３において３−ヒドロキシプロパノイル・エステルを有するまたは有さない、ＨＳ３由来の［→３）−Ｌ−アルファ−Ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１−＞４）−アルファ−Ｇａｌ−（１→］ｎ；
ＬＤ−ｉｄｏ−ＨｅｐのＣ−４において非化学量論的にメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）を有する、ＨＳ５０由来の［→３）−Ｌ−β−Ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃ−（１→］ｎ；
ならびに
６ｄ−ｉｄｏ−ＨｅｐのＣ−７において非化学量論的にメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）を有する、ＨＳ５０由来の［→３−６ｄ−β−Ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃ−（１→］ｎ
からなる群から選択される構造のうちの１つまたは複数を含み、ここで、同じ多糖が結合して、１〜１００個の結合し合った多糖を含む多糖ポリマーを形成している（すなわち、「ｎ」は１以上である）、ステップ；
ｂ．  １用量当たり０．１μｇ〜１０ｍｇの用量範囲で、アジュバントを伴ってまたは伴わずに、ステップ（ａ）に記載の組成物をブースト投与するステップ
を含む。
【００８８】
別の実施形態は、１つまたは複数の単離されたカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）莢膜多糖を含む組成物を投与することによって、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株ＨＳ１；ＨＳ１／ＨＳ４４および／またはＨＳ４４に対して免疫する方法を含む。本方法は、
ａ．  １つまたは複数のカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）莢膜多糖ポリマーを含む免疫原性組成物を投与するステップであって、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）莢膜多糖ポリマーは、ＨＳ１、ＨＳ１／ＨＳ４４、ＨＳ４４からなる群から選択されるカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株の莢膜由来の多糖構造を含み、莢膜多糖ポリマーは、個々のカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株由来の、繋ぎ合わされてリポオリゴ糖またはＧＢＳに関連する他の構造を含まないポリマーを形成した１〜１００コピーの多糖構造を含み、これは、アジュバントを伴ってまたは伴わずに、１用量当たり０．１μｇ〜１０ｍｇの用量範囲で投与され、多糖構造が、
カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株ＨＳ４４由来の［→４）−α−Ｄ−Ｇａｌｐ−（１→２）−Ｇｒｏ−（１→Ｐ→］ｎ；または
カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株ＨＳ１および／またはＨＳ１／４４由来の
【００８９】
【化１１】
0006530051.tif 000015
の構造から選択される構造のうちの１つまたは複数を含み、ここで、同じ多糖が結合して、１〜１００個の結合し合った多糖を含む多糖ポリマーを形成している（すなわち、「ｎ」は１以上である）、ステップ；
ｂ．  １用量当たり０．１μｇ〜１０ｍｇの用量範囲で、アジュバントを伴ってまたは伴わずに、ステップ（ａ）に記載の組成物をブースト投与するステップ
を含む。
【００９０】
別の実施形態は、ＨＳ４、ＨＳ１３、ＨＳ４／ＨＳ１３／Ｈ６４またはＨＳ５０由来の、１つまたは複数の単離されたカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）莢膜多糖を含む組成物を投与することによって、カンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）株ＨＳ４、ＨＳ１３、ＨＳ４／ＨＳ１３／Ｈ６４またはＨＳ５０に対して免疫する方法を含む。本方法は、
ａ．  ＨＳ４、ＨＳ１３、ＨＳ４／ＨＳ１３／Ｈ６４またはＨＳ５０由来の１つまたは複数のカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）莢膜多糖を含む免疫原性組成物を投与するステップであって、莢膜多糖ポリマーは、繋ぎ合わされてリポオリゴ糖またはＧＢＳに関連する他の構造を含まないポリマーを形成した１〜１００コピーの多糖構造を含み、これは、アジュバントを伴ってまたは伴わずに、１用量当たり０．１μｇ〜１０ｍｇの用量範囲で投与され、多糖構造は、
Ｌ−Ｄ−イド−ヘプトースの２位において非化学量論的にＯ−メチル−ホスホロアミデートにより置換されている、ＨＳ４／ＨＳ１３／ＨＳ６４由来の［→３）−Ｌ−β−Ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１−＞４）−β−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃ−（１→］ｎ；
６ｄ−ｉｄｏ−ＨｅｐのＣ−２および／またはＣ−７において非化学量論的にメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）を有する、ＨＳ４／１３／６４由来の［→３）−６ｄ−β−Ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→４）−β−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃ−（１→］ｎ；
ＬＤ−ｉｄｏ−ＨｅｐのＣ−４において非化学量論的にメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）を有する、ＨＳ４由来の［→３）−Ｌ−β−Ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→４）−β−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃ−（１→］ｎ；
メチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）を有さないまたは６ｄ−ｉｄｏ−ＨｅｐのＣ−２および／もしくはＣ−７において非化学量論的にメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）を有する、ＨＳ１３由来の［→３−６ｄ−β−Ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃ−（１→］ｎ；
ＬＤ−ｉｄｏ−ＨｅｐのＣ−４において非化学量論的にメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）を有する、ＨＳ５０由来の［→３）−Ｌ−β−Ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃ−（１→］ｎ；ならびに
６ｄ−ｉｄｏ−ＨｅｐのＣ−７において非化学量論的にメチル・ホスホロアミデート（ＭｅＯＰＮ）を有する、ＨＳ５０由来の［→３−６ｄ−β−Ｄ−ｉｄｏ−Ｈｅｐ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃ−（１→］ｎ
の構造から選択される構造のうちの１つまたは複数を含み、ここで、同じ多糖が結合して、１〜１００個の結合し合った多糖を含む多糖ポリマーを形成している（すなわち、「ｎ」は１以上である）、ステップ；
ｂ．  ０．１μｇ〜１０ｍｇの用量範囲で、アジュバントを伴ってまたは伴わずに、ステップ（ａ）に記載の組成物をブースト投与するステップ
を含む。
【００９１】
多糖ポリマーは、担体分子および組成物にコンジュゲートされていてもコンジュゲートされていなくてもよい。上記の方法では、免疫原性組成物は、経口、経鼻、皮下、皮内、経真皮、経皮、筋肉内または直腸投与することができる。また担体分子はタンパク質、例えばＣＲＭ１９７であっても、非タンパク質分子であってもよい。アジュバントは任意の数のアジュバントであってよい。アジュバントの例には、ＬＴＲ１９２Ｇ、水酸化アルミニウム、ＲＣ５２９Ｅ、ＱＳ２１、Ｅ２９４、オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチドおよびリン酸アルミニウム（ａｌｕｍｉｎｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｇｅ）が含まれる。
【００９２】
当然、上記の教示を考慮すると、本発明に対し多くの修正および変更が可能である。したがって、添付の特許請求の範囲内において、具体的記載とは異なる形で本発明を実施することもできることを理解されたい。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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