(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）配列番号５の重鎖可変領域、または前記配列の１、２、３、４、５または６アミノ酸が異なるアミノ酸に置換されたそのバリアント、および
（２）配列番号２４の軽鎖可変領域、または前記配列の１、２、３または４アミノ酸が異なるアミノ酸に置換されたそのバリアント
を含んでなる、ＩＬ−１５に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、
前記（１）中、前記配列番号５のバリアントが、
（ｉ）ＶＨ  ＲＨ３のグルタミン（Ｑ）による置換、および／またはＶＨ  ＭＨ５のバリン（Ｖ）による置換、および／またはＶＨ  ＡＨ６のグルタミン酸（Ｅ）による置換、および／またはＶＨ  ＡＨ４９のセリン（Ｓ）による置換、および／または
（ｉｉ）ＶＨ  ＤＨ６１のグルタミン酸（Ｅ）による置換、および／またはＶＨ  ＳＨ６２のスレオニン（Ｔ）による置換、および／または
（ｉｉｉ）ＶＨ  ＭＨ９８のロイシン（Ｌ）、フェニルアラニン（Ｆ）、イソロイシン（Ｉ）、またはアラニン（Ａ）による置換、および／またはＶＨ  ＷＨ１００Ｃのチロシン（Ｙ）、フェニルアラニン（Ｆ）、またはアラニン（Ａ）による置換、および／またはＶＨ  ＭＨ１００Ｅのロイシン（Ｌ）、フェニルアラニン（Ｆ）、またはイソロイシン（Ｉ）による置換がされた以外は配列番号５のアミノ酸配列を有し、および／または
前記（２）中、前記配列番号２４のバリアントが、
（ｉ）ＶＬ  ＹＬ３６のフェニルアラニン（Ｆ）による置換、および／またはＶＬ  ＬＬ４６のアルギニン（Ｒ）による置換、および／または
（ｉｉ）ＶＬ  ＤＬ９１のグルタミン酸（Ｅ）による置換、および／またはＶＬ  ＳＬ９２のスレオニン（Ｔ）による置換がされた以外は配列番号２４のアミノ酸配列を有する、単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２】
（１）（ｉ）ＶＨ  ＲＨ３のグルタミン（Ｑ）による置換、および／またはＶＨ  ＭＨ５のバリン（Ｖ）による置換、および／またはＶＨ  ＡＨ６のグルタミン酸（Ｅ）による置換、および／または
（ｉｉ）ＶＨ  ＳＨ６２のスレオニン（Ｔ）による置換、および／または
（ｉｉｉ）ＶＨ  ＷＨ１００Ｃのチロシン（Ｙ）による置換がされた以外は配列番号５のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および
（２）配列番号２４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域
を含む、請求項１に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３】
（１）配列番号６、配列番号１２、配列番号２１、および配列番号５から選択される重鎖可変領域、および
（２）配列番号２４の軽鎖可変領域
を含む、請求項１または２に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４】
配列番号６の重鎖可変領域および配列番号２４の軽鎖可変領域を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５】
ヒト化抗体である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の単離抗体。
【請求項６】
ＩＬ−１５活性を阻害する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項７】
前記ＩＬ−１５活性が、ＩＬ−１５により誘導されるＫｉｔ２２５細胞株またはＭ−０７ｅ細胞株の増殖および／またはそれらの生存である、請求項６に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項８】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片をコードする、単離核酸分子。
【請求項９】
請求項８に記載の核酸分子を含む組換え発現ベクターを含む、宿主細胞。
【請求項１０】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片を産生するための方法であって、前記抗体またはその断片をコードする核酸配列を含む発現ベクターによって形質転換された宿主細胞を、前記抗体またはその断片の発現を促進するために十分な条件下で培養することを含んでなる、方法。
【請求項１１】
（ｉ）ＩＬ−１５に結合する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片、（ｉｉ）請求項８に記載の核酸、（ｉｉｉ）（ｉｉ）の前記核酸を含む組換え発現ベクター、および／または（ｉｖ）請求項９に記載の宿主細胞、のうち１つ以上、および少なくとも１つの薬剤的に許容される担体を含んでなる、医薬組成物。
【請求項１２】
自己免疫疾患および／または炎症性疾患、悪性腫瘍、移植片拒絶、代謝性の状態および／または寄生虫、ウイルスまたは細菌病原体によって引き起こされる感染症の予防および／または治療に有用な共薬剤、または小腸炎を低減させる、および／または腸粘膜を保護する、および／またはグルテンペプチドに対する免疫反応性を低減させる、および／または腸細菌叢を改善させる化合物をさらに含んでなる、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
薬剤として使用するための、請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片を有効成分として含む、ＩＬ−１５関連疾病または疾患の予防および／または治療のための医薬組成物。
【請求項１５】
ＩＬ−１５関連疾病または疾患が、自己免疫疾患、炎症性疾患、悪性腫瘍、代謝の状態および／または寄生虫、ウイルスまたは細菌病原体によって引き起こされる感染症から選択される、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
ＩＬ−１５関連疾病または疾患が、関節リウマチ、乾癬、難治性セリアック病のようなセリアック病、サルコイドーシス、炎症性腸疾患、Ｃ型肝炎により誘導される肝疾患、多発性硬化症、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、硬化性胆管炎、胆道閉鎖症、円形脱毛症、移植片拒絶、中枢神経系の炎症性疾患および好酸球性食道炎から選択される、請求項１４または１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
ＩＬ−１５関連疾病または疾患が、難治性セリアック病のようなセリアック病、好酸球性食道炎、自己免疫性肝炎、アルツハイマー病、ウイルス感染症およびハンタウイルス感染症から選択される、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記抗体またはその抗原結合断片が、自己免疫疾患および／または炎症性疾患、悪性腫瘍、移植片拒絶、代謝性の状態および／または寄生虫、ウイルスまたは細菌病原体によって引き起こされる感染症の予防および／または治療に有用な共薬剤、または小腸炎を低減させる、および／または腸粘膜を保護する、および／またはグルテンペプチドに対する免疫反応性を低減させる、および／または腸細菌叢を改善させる化合物と併用して投与される、請求項１４〜１７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
生体試料中のＩＬ−１５タンパク質の存在および／またはその濃度を検出するためのｅｘ  ｖｉｖｏ法であって、
（ｉ）被験体由来の生体試料を用意する工程、
（ｉｉ）前記生体試料を、少なくとも１つの、請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片と、前記生体試料中に存在するＩＬ−１５タンパク質の、前記少なくとも１つの抗体またはその断片への、抗原−抗体相互作用を介した結合に十分な条件下で反応させる工程、および
（ｉｉｉ）前記工程（ｉｉ）において形成された抗原−抗体複合体のレベルに比例したシグナルを検出する工程であって、当該シグナル強度が生体試料中のＩＬ−１５タンパク質の濃度と相関する工程
を含んでなる、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インターロイキン−１５に結合する抗体、特に前記タンパク質の活性を中和可能な抗体に関し、また前記抗体の治療用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＭＧＣ９７２１としても知られるインターロイキン１５（ＩＬ−１５）は、１４ないし１５ｋＤａの炎症誘発性サイトカインである。ＩＬ−１５は、様々な刺激条件を介して、複数の組織（胎盤、骨格筋、腎臓、肺、心臓、単球／マクロファージ）、ならびに単球およびマクロファージ、血液由来の樹状細胞、上皮および線維芽細胞を含む多数の細胞型に発現する（Ｆｅｎｈｉｇｅｒ  ａｎｄ  Ｃａｌｉｇｉｕｒｉ，２００１，Ｂｌｏｏｄ，９７（１）：１４−３２）。
【０００３】
インターロイキン−１５は、Ｔ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の活性化、生存および増殖を調節する。このサイトカインとインターロイキン２（ＩＬ−２）とは、これらが受容体シグナル伝達の構成要素（ＩＬ−２／１５ＲβおよびＩＬ−２／１５Ｒγｃ）を共有しているため、多くの生物活性を共有している。しかしながら、ＩＬ−２に対するＩＬ−１５の特異性は、ＩＬ−１５Ｒαβγヘテロ三量体である高親和性の受容体複合体を完成させる独特なα鎖受容体によってもたらされるものであり、これによってリガンドおよび高親和性受容体の発現に応じた差次的な応答性が可能となる（Ｆｅｎｈｉｇｅｒ  ａｎｄ  Ｃａｌｉｇｉｕｒｉ，２００１，上記）。加えて、可溶性ＩＬ−１５は、ＩＬ−１５Ｒαβγ高親和性受容体または低親和性ＩＬ−１５Ｒβγ受容体のいずれかを発現する細胞を直接刺激することができ、この現象はＩＬ−１５シス提示と称される。一方で、例えば１つの細胞型の表面においてＩＬ−１５Ｒαに結合したＩＬ−１５は、別の細胞の表面に発現されたＩＬ−１５Ｒβγと結合して刺激できることが示唆されており、この現象はＩＬ−１５トランス提示と称される（Ｓｔｏｎｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ，２０１０，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．，１２７：８５−９２）。循環中でもまた、ＩＬ−１５は可溶性ＩＬ−１５Ｒαと優先的に結合し得ることから、このようなトランス提示の機構が細胞−細胞相互作用に限られたものであるとは言いがたい（Ｂｅｒｇａｍａｓｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ，２０１２，Ｂｌｏｏｄ  １２０：ｅ１−ｅ８）。
【０００４】
関節リウマチ、乾癬およびセリアック病のような自己免疫疾患ならびにＴ細胞白血病のような悪性腫瘍を含むいくつかの疾患において、ＩＬ−１５発現の調節不全が有害となることが示唆されている。特に、ＩＬ−１５は、セリアック病に付随する炎症とリンパ腫の発生とに対する新しい標的であると考えられているヒト上皮内のリンパ球において、抗アポトーシス経路を誘発する（Ｍａｌａｍｕｔ  ｅｔ．ａｌ．，２０１０，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１２０（６）：２１３１−４３）。さらに、ＩＬ−１５の発現はヒト好酸球性食道炎において増大していること、およびマウスにおいて同様な／関連した病原性を仲介することが見出された（Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１３９（１）：１８２−９３）。加えて、アルツハイマー病および前頭側頭型認知症の患者では炎症誘発活性の増大が見出されており、これらの患者の脳脊髄液中ではＩＬ−１５の濃度が上昇していることから、ＩＬ−１５はマーカーとして使用することができる（Ｒｅｎｔｚｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｊ．Ｇｅｒｉａｔｒ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  Ｎｅｕｒｏｌ．，１９（２）：１１４−７）。
【０００５】
ＩＬ−１５はまた、特に同種移植片移植の場合、自然免疫細胞、特に移植片拒絶応答におけるＮＫおよびＴ細胞の活性化に対して、中心的に重要な役割を果たすことも見出されている（Ｆｅｒｒａｒｉ−Ｌａｃｒａｚ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６７（６）：３４７８−３４８５）。
【０００６】
ＩＬ−１５はまた、筋肉および脂肪代謝において様々な役割を果たすマイオカインであると考えられている（Ｒａｓｃｈｋｅ  ａｎｄ  Ｅｃｋｅｌ，２０１３，Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  Ｉｎｆｌａｍｍ．，３２０７２４）。ＩＬ−１５を含む炎症誘発性サイトカインが過剰である場合、外傷、傷害および癌に付随する悪液質にみられる消耗性の代謝亢進症候群が誘導される（Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｏｎｃｏｌ  Ｒｅｐ．，２８（４）：１４４３−５２）。
【０００７】
一般には免疫系の刺激を通して抗腫瘍活性が得られると考えられているが、ＩＬ−１５は、セリアック病に付随するリンパ腫の発生に加え、急性リンパ性白血病および大顆粒リンパ球性白血病のようなある種の癌においても不利に作用することが示唆されている（Ｃａｒｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２５（３０）：４８１３−２０）。
【０００８】
したがって、ＩＬ−１５に結合してその生物活性を中和することが可能な、特にＩＬ−１５関連疾患、とりわけ自己免疫性疾患および炎症性疾患への治療に応用するための、強力かつ特異的な抗体を提供することは有益であろう。
【０００９】
ＩＬ−１５Ｒα受容体の結合に関してＩＬ−１５と競合しないが、ＩＬ−１５受容体α、β、γ複合体の集合を強く妨害する、完全なヒトモノクローナル抗ＩＬ−１５抗体（１４６Ｂ７）について開示されている（Ｖｉｌｌａｄｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１１２：１５７１−１５８０）。ヒト乾癬の異種移植モデルにおいて、１４６Ｂ７抗体は、乾癬の重症度を低下させた。活動性の関節リウマチ患者に対する１４６Ｂ７抗体（ＡＭＧ７１４としても知られる）を用いたＩ〜ＩＩ相の用量漸増試験において、疾病の活動性の改善が観察された（Ｂａｓｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ，２００５，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，５２（９）：２６８６−２６９２）。しかしながらこのプログラムは、有効性が欠如していたために中止された（Ｆｕｌｍｅｒ  ２００９，Ｔ．ＳｃｉＢＸ  ２（３６））。
【００１０】
モノクローナルマウス抗ＩＬ−１５抗体（Ｂ−Ｅ２９）が、ＩＬ−１５のＩＬ−１５Ｒαへの結合を阻害するとして開示されている（Ｂｅｒｎａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｊ．  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７９（２３）：２４３１３−３４３２２）。完全なヒト抗ＩＬ−１５抗体（ＤＩＳＣ０２８０）が、直接比較した際に、Ｂ−Ｅ２９よりもさらに強力かつ効率的にＩＬ−１５のＩＬ−１５Ｒαへの結合を阻害するとして開示されている（Ｆｉｎｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１６２：４８０−４９０）。ＤＩＳＣ０２８０は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいてＩＬ−１５活性を非常に強力かつ効率的に中和したが、ｉｎ  ｖｉｖｏでは中和しなかった。したがって、ＩＬ−１５のＩＬ−１５Ｒαへの結合の阻害は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＩＬ−１５の中和活性には不利な可能性があると仮定された。
【００１１】
先行技術において抗ＩＬ−１５抗体が報告されているにもかかわらず、先行技術の抗体に比較して有利な特性を示し、および／または、さらに効率的および／またはさらに容易に産生される、別の抗ＩＬ−１５抗体の開発が望まれている。
【００１２】
本発明は、マウスＢ−Ｅ２９抗体に由来する、ＩＬ−１５に特異的な新規ヒト化抗体であって、ＩＬ−１５のＩＬ−１５Ｒαへの結合を阻止せず、ｉｎ  ｖｉｖｏにてＩＬ−１５を中和可能であり、ＩＬ−１５への結合と中和に関して１４６Ｂ７抗体よりもさらに強力かつ効率的な新規ヒト化抗体を提供することによって、この希求を満たすものである。
【発明の概要】
【００１３】
本発明は主に、インターロイキン−１５、特にヒトＩＬ−１５に結合する抗体であって、本明細書に記載される、ヒト化かつ最適化されたマウス抗ＩＬ−１５抗体に由来する可変領域を含む抗体へ向けられる。
【００１４】
本発明の第１の態様は、ＩＬ−１５に結合する単離抗体であって、
（１）配列番号５の重鎖可変領域、または前記配列の１、２、３、４、５、６、７、８、または９アミノ酸が異なるアミノ酸に置換された、そのバリアントのいずれか、および
（２）配列番号２４の軽鎖可変領域、または前記配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸が異なるアミノ酸に置換された、そのバリアントのいずれか
を含んでなる単離抗体、またはその抗原結合断片を提供する。
【００１５】
本発明の第２の態様は、前記抗体またはその断片をコードする、単離核酸分子に関する。
【００１６】
本発明の第３および第４の態様はそれぞれ、前記核酸分子を含む組換え発現ベクターおよび前記組換えベクターを含む宿主細胞に関する。
【００１７】
本発明の第５の態様は、本明細書に記載される、抗体を産生するための方法であって、前記抗体をコードする核酸配列を含む発現ベクターによって形質転換された宿主細胞を、前記抗体またはその断片の発現を促進するために十分な条件下で培養することを含む方法に関する。
【００１８】
本発明の第６の態様は、本明細書に記載される、（ｉ）ＩＬ−１５に結合する単離抗体またはその抗原結合断片、（ｉｉ）核酸、（ｉｉｉ）ベクター、および／または（ｉｖ）宿主細胞のうち１つ以上、および少なくとも１つの薬剤的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
【００１９】
本発明の第７の態様は、本明細書に記載される、１つ以上の抗ＩＬ−１５抗体を含むイメージング組成物または診断用組成物に関する。
【００２０】
本発明の第８の態様は、本明細書に記載される、１つ以上の抗ＩＬ−１５抗体を含むキットに関する。
【００２１】
本発明の第９の態様は、自己免疫疾患および／または炎症性疾患、悪性腫瘍、移植片拒絶、代謝の状態（例えば代謝亢進状態）および／または寄生虫性、ウイルス性または細菌性病原体によって引き起こされる感染症のようなＩＬ−１５関連疾患の予防および／または治療に使用するための、本発明の抗体またはその製剤に関する。
【００２２】
第１０の態様は、自己免疫疾患および／または炎症性疾患、悪性腫瘍、移植片拒絶、遺伝性の、または外傷、傷害または癌に関連した代謝の状態（例えば代謝亢進状態）および／または寄生虫性、ウイルス性または細菌性病原体によって引き起こされる感染症のようなＩＬ−１５関連疾患を予防および／または治療するための方法であって、被験体の必要に応じて治療上有効な量の前記抗体または前記医薬組成物を投与することを含む方法。
【００２３】
本発明のその他の特色および利点は、以下の詳細な説明によって明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】マウスＢ−Ｅ２９のヒト化型およびキメラバリアントの可変領域配列のアラインメントを、比較抗体１、Ｂ−Ｅ２９と比較して示した図である。（Ａ）重鎖可変領域：「ｃＶＨ１」（配列番号３２）はマウスＢ−Ｅ２９抗体の重鎖可変領域を表し、「ｃＶＨ２」（配列番号３３）、「ｃＶＨ３」（配列番号３４）および「ｃＶＨ４」（配列番号３５）はｃＶＨ１のバリアントを表し、「ｈＶＨ１」はｃＶＨ１のヒト化型を表す。（Ｂ）軽鎖可変領域：「ｃＶＫ１」（配列番号３６）はマウスＢ−Ｅ２９抗体の軽鎖可変領域を表し、「ｈＶＫ１」（配列番号２４）、「ｈＶＫ２」（配列番号３７）はｃＶＫ１の２つのヒト化型を表す。Ｋａｂａｔにより定義されたＣＤＲには下線を施し、ＶＨ／ＶＬの接合部分および標準のループ構造に重要な鍵となる残基はアスタリスク（＊）によって示す。
【図２】ＥＬＩＳＡによって決定し、４５０ｎｍにおける吸光度によって表した、抗ＩＬ−１５抗体のヒトＩＬ−１５への結合の用量反応曲線を示した図である。本発明の代表的な抗ＩＬ−１５抗体のうちの１つ（ｈｕＢ−Ｅ２９−１）および１４６Ｂ７抗体のヒトＩＬ−１５への結合（Ａ）、および様々な組換え抗ＩＬ−１５抗体の組換えマウスＩＬ−１５への結合（Ｂ）またはラットＩＬ−１５への結合（Ｃ）を示す。
【図３】ＥＬＩＳＡによって決定した、抗ＩＬ−１５抗体の組換えヒトＩＬ−２への結合を示した図である。棒は、試験する抗ＩＬ−１５抗体または陽性対照としての抗ＩＬ−２抗体の濃度を５μｇ／ｍｌに固定して、４５０ｎｍにおける吸光度を二重に測定した平均値を示す。第２工程のみとは、試験抗体を含まない、ＨＲＰ抗ヒト免疫グロブリンのみの結果を示す。
【図４】ＥＬＩＳＡによって決定し、４５０ｎｍにおける吸光度によって表した、様々な濃度の抗体の存在下での、ビオチン化ヒトＩＬ−１５のＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃへの結合の用量反応曲線を示した図である。本発明の代表的な抗ＩＬ−１５抗体のうちの３つの結合を、ＩＬ−１５のＩＬ−１５Ｒαへの結合を遮断することが知られている対照抗体の結合、および抗体の非存在下またはＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃの非存在下でのビオチン化ＩＬ−１５の結合と比較して示す。
【図５】ビヒクル（未処理）を注射したマウスまたはＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ複合体に続いて代表的な抗ＩＬ−１５抗体または対照ヒトＩｇＧ１アイソタイプを注射したマウスの、脾臓内のＮＫ細胞を示した図である。結果は、１群あたり５匹の動物の平均±標準偏差として示す。
【図６】３つのＩＩ型ＲＣＤ初代細胞株においてＩＬ−１５により誘導されたアポトーシスの防止およびＳＴＡ５のリン酸化に対する、ｈｕＢ−Ｅ２９−２、１４６Ｂ７および対照アイソタイプ抗体の効果を示した図である。アポトーシス細胞のパーセンテージ（Ａ）またはＩＬ−１５により誘導されたリン酸化ＳＴＡＴ５の細胞内発現のＭＦＩ（Ｂ）について、結果は対照条件（培地、１００％に設定）のレベルに対して標準化を行い、３名の異なる患者から採取したＩＩ型ＲＣＤ  ＩＥＬ細胞株から得られた結果の平均プラス標準偏差（ＳＤ）として示す。
【図７】１００μｇのｈｕＢ−Ｅ２９−２（黒丸）または対照アイソタイプ抗体（白丸）を、１週間に２回、２週間腹腔内注射したＴ３ｂ−ｈＩＬ−１５トランスジェニックマウスの、ＣＤ３＋ＣＤ８＋上皮内リンパ球（ＩＥＬ）を示した図である。各記号は個々のマウスを表し、群平均プラス標準偏差（ＳＤ）をプロットした。統計解析：独立スチューデントｔ検定。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
定義
本明細書において、用語「インターロイキン１５」、「インターロイキン−１５」、「ＩＬ−１５」は、ＭＧＣ９７２１としても知られるインターロイキン１５タンパク質を指す。インターロイキン１５は、１４ないし１５ｋＤａの炎症誘発性サイトカインであり、ヒトでは、その配列がＨｕｇｏ  Ｇｅｎｅ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ＩＤ  ５９７７に開示されるＩＬ−１５遺伝子によってコードされる。ＩＬ−１５は１６２アミノ酸を含み、このうち最初の２９アミノ酸はシグナルペプチドを構成し、アミノ酸３０ないし４８はプロペプチドを構成する。ＩＬ−１５の未熟型は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ  受託番号Ｐ４０９３３によって入手できる。ＩＬ−１５タンパク質の成熟型はアミノ酸Ａｓｎ  ４９ないしＳｅｒ  １６２に相当し、ここで示す位置は未熟ＩＬ−１５アミノ酸配列のアミノ酸の位置に相当する。ヒト成熟ＩＬ−１５のアミノ酸配列は配列番号１に相当する。その他の種に由来する未熟ＩＬ−１５のアミノ酸配列が当該技術分野において入手可能であり、例えば、マウスＩＬ−１５（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ  受託番号Ｐ４８３４６、配列番号２の成熟型ＩＬ−１５に相当する）、ラットＩＬ−１５（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ  受託番号Ｐ９７６０４、配列番号３の成熟型ＩＬ−１５に相当する）、アカゲザルＩＬ−１５（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ  受託番号ＮＰ＿００１０３８１９６、ＸＰ＿００１０９１１６６、ＸＰ＿００１０９１２８９、ＸＰ＿００１０９１４１６、配列番号４の成熟型ＩＬ−１５に相当する）およびカニクイザルＩＬ−１５（ＮＣＢＩ  受託番号ＸＰ＿００５５５６０３６．１から予想された配列、配列番号４の成熟型ＩＬ−１５に相当する）が挙げられる。用語「インターロイキン１５」には、細胞によって自然に発現される、インターロイキン１５のいずれかのバリアントまたはアイソフォームもまた含まれる。選択的スプライシングされたＩＬ−１５の転写物であるバリアントが２つ報告されていることに留意されたい。両方のアイソフォーム共に同じ成熟タンパク質を産生するが、これらは細胞内輸送において異なる。
【００２６】
本明細書において、用語「抗体」は、抗原に結合するポリペプチドを指す。この用語には、抗体全体およびいずれかの抗原結合断片が含まれる。用語「抗体」は、本発明の特性、特に標的抗原（例えばＩＬ−１５）への結合能、および任意に、本発明の抗体によって認識されるものとしての、ＩＬ−１５の同じエピトープへの結合能が保持されている限りにおいて、その最も広い意味にて用いられ、この用語には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、およびさらに改変された抗体が含まれる。抗体およびその断片としては、可変ドメイン断片（「Ｆｖ」、抗体の片腕のＶＨおよびＶＬドメインからなる）、Ｆａｂ断片（ＶＨ、ＶＬ、ＣＨ１およびＣＬドメインからなる１価の断片）、Ｆａｂ２断片（２価）、Ｆａｂ３断片（３価）、Ｆａｂ’断片（ヒンジ領域を含むＦａｂ）、Ｆ（ａｂ’）２断片（ヒンジ領域においてジスルフィド橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む、２価の断片）、Ｆｄ断片（ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなる）、ｒＩｇＧ（還元型ＩｇＧまたは半ＩｇＧ）、ダイアボディ、トリボディ、テトラボディ、ミニボディ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、１価の抗体、２以上の抗体の断片を含む２価または多価抗体、単鎖可変断片（ＳｃＦｖ）、ｂｉｓ−ｓｃＦｖ（二重特異性）、およびジスルフィド安定化Ｆｖ断片、ＣＤＲを含んだペプチド、および上記のいずれかのエピトープ結合断片のような、抗体の誘導体が挙げられる（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ，２００５，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２３（９）：１１２６−１１３６）。抗体は、ジスルフィド結合によって相互に連結した少なくとも２本の重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖、またはその抗原結合断片を含む糖タンパク質を指す。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）と重鎖定常領域（ＣＨ）とを含む。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と軽鎖定常領域（ＣＬ）とを含む。哺乳類では、重鎖はアルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）またはミュー（μ）であってよく、これらはそれぞれ抗体のクラスＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭを定義する。哺乳類では、軽鎖はラムダ（λ）またはカッパ（κ）のいずれかであってよい。哺乳類では、抗体のクラスに応じて、重鎖定常領域は、３つの免疫グロブリンドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧの場合）または４つの免疫グロブリンドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４（ＩｇＥおよびＩｇＭの場合）を含む。軽鎖定常領域は、１つの免疫グロブリンドメインであるＣＬを含む。抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤおよびＩｇＭ、およびそれらのいずれかのサブタイプの構造を有してよい。抗体は、特に霊長類（ヒトおよび非ヒト霊長類）を含むいずれかの源、および霊長類化された源に由来してよい。
【００２７】
本明細書で用いられる用語「可変ドメイン」（軽鎖（ＶＬ）の可変ドメイン、重鎖（ＶＨ）の可変ドメイン）は、一対の軽鎖ドメインおよび重鎖ドメインの、抗体の抗原への結合に直接関与するドメインのそれぞれを指す。軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインは同じ一般構造を有し、各ドメインは、その配列が広く保存されており、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」と呼ばれる３つの「超可変領域」によって結合される４つのフレーム構造（「ＦＷ」）領域を含む。フレームワーク領域はβシート構造を取っており、ＣＤＲはこのβシート構造に結合するループを形成し得る。各鎖のＣＤＲは、フレームワーク領域によってその三次元構造を保ち、もう一方の鎖のＣＤＲと共に抗原結合部位を形成する。用語「抗体の抗原結合部位」が本明細書で用いられる場合、この用語は、抗原の結合に関与する抗体のアミノ酸残基を指す。抗体の抗原結合部位は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」由来のアミノ酸残基を含む。「フレーム構造」または「ＦＷ」領域は、本明細書で定義する超可変領域残基以外の可変ドメイン領域である。したがって、抗体の軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインは、Ｎ末端からＣ末端へ向かって、ドメインＦＷ１、ＣＤＲ１、ＦＷ２、ＣＤＲ２、ＦＷ３、ＣＤＲ３およびＦＷ４を含む。ＣＤＲおよびＦＷ領域の残基は、Ｋａｂａｔらによる標準的な定義（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１），Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２）に従って、慣習的に番号付けされる。他に表示の無い限り、本明細書ではこの方式の番号付けを用いる。Ｋａｂａｔ残基による指示は、アミノ酸残基の直鎖の番号付けに、常に直接対応しているわけではない。実際の直鎖アミノ酸配列は、基本的な可変ドメイン構造のフレーム構造または相補性決定領域（ＣＤＲ）に関わらず、構造の構成要素の短縮か、または構成要素内への挿入に対応して、厳密なＫａｂａｔの番号付けよりも少ないアミノ酸か、または追加のアミノ酸を含み得る。Ｋａｂａｔによる残基の正確な番号付けは、「標準」のＫａｂａｔによる番号付けを施された配列をもつ抗体の配列に相同的な残基のアラインメントによって、所定の抗体に対して決定され得る。Ｋａｂａｔ方式の番号付けによれば、重鎖可変ドメインのＣＤＲは、残基３１〜３５（ＣＤＲ−Ｈ１）、残基５０〜６５（ＣＤＲ−Ｈ２）および残基９５〜１０２（ＣＤＲ−Ｈ３）に位置する。Ｋａｂａｔ方式の番号付けによれば、軽鎖可変ドメインのＣＤＲは、残基２４〜３４（ＣＤＲ−Ｌ１）、残基５０〜５６（ＣＤＲ−Ｌ２）および残基８９〜９７（ＣＤＲ−Ｌ３）に位置する。
【００２８】
本願では、他に指定されない限り、すべてのヒト免疫グロブリン重鎖および軽鎖可変ドメインの番号付けは「Ｋａｂａｔ方式の番号付け」（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１），Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２）に従っている。
【００２９】
本願では、他に指定されない限り、すべてのヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインの番号付けは、「ＥＵ方式の番号付け」（Ｅｄｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ，１９６９，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ，６３（１）：７８−８５）に従っている。
【００３０】
本明細書で用いられる用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集団、すなわち、集団を構成する個々の抗体が、わずかに存在する可能性のある天然の変異を除いて同一である集団から得られた抗体を指す。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原部位を標的とする。修飾語句「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体の特性を示すものであって、いずれかの特定の方法による抗体の産生が必要であると解釈されるものではない。
【００３１】
用語「キメラ抗体」は、一般に、１つの源または種に由来する可変領域および異なる源または種に由来する定常領域の少なくとも１部分を含み、通常は組換えＤＮＡ技術によって調製される抗体を指す。キメラ抗体の典型的な例として、マウス可変領域とヒト定常領域とを含む抗体が挙げられる。本明細書に定義されるように、この用語には、第１のヒト抗体のＣＤＲのうちの１つおよび第２のヒト抗体の定常領域の少なくとも１部分を含む抗体も含まれる。この用語にはまた、第１のヒト抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３および第２のヒト抗体の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗体も含まれる。
【００３２】
用語「ヒト化抗体」は、非ヒト種由来の抗体であって、前記非ヒト種に由来する１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）およびヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域を有する抗体を指す。ヒト化抗体は、任意に、そのＣＤＲが由来する非ヒト種由来のフレーム構造残基を１つ以上さらに含んでもよい。
【００３３】
用語「ヒト抗体」または「完全ヒト抗体」は、重鎖および軽鎖両方の可変領域および定常領域がすべてヒト由来であるか、ヒト由来の配列と実質的に同じであるが、必ずしも同じ抗体に由来するものではない抗体を指す。
【００３４】
用語「単離抗体」は、その天然環境の構成要素から分離された抗体を指す。例えば単離抗体は、電気泳動（例えばＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフィー（例えばイオン交換または逆相ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー））法を含む当該技術分野の方法（例えばＦｌａｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ，２００７，Ｊ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ  Ｂ  Ａｎａｌｙｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ，８４８：７９−８７を参照）によって決定された、９５％または９９％を超える純度まで精製されたものである。
【００３５】
用語「ポリヌクレオチド」または「核酸分子」は、ヌクレオチドを含む高分子化合物を指す。核酸分子の例として、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ロックド核酸（ＬＮＡ）、相補性ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）が挙げられる。
【００３６】
「ポリペプチド」は、通常の、または例えば等配電子ペプチド（ｉｓｏｓｔｅｒｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ）のような修飾されたペプチド結合によって互いに結合した少なくとも２つのアミノ酸を含む、ペプチド、オリゴペプチド、オリゴマーまたはタンパク質として理解される。ポリペプチドは、遺伝コードによって定義された２０アミノ酸以外のアミノ酸から構成されてよい。ポリペプチドは、翻訳後成熟過程のような天然の過程によって、または当業者に公知の化学的な過程によって修飾されたアミノ酸から同等に構成されてよい。このような修飾については、文献中に十分に説明されている。これらの修飾は、ポリペプチド内のいずれの箇所でも、すなわちペプチド骨格内、側鎖、またはカルボキシまたはアミノ末端であっても出現し得る。例えばポリペプチド修飾は、アセチル化、アシル化、ＡＤＰリボシル化、アミド化、フラビンの共有結合固定、ヘムの共有結合固定、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合固定、脂質または脂質誘導体の共有結合固定、ホスファチジルイノシトールの共有結合固定、共有結合性または非共有結合性の架橋、環化、ジスルフィド結合の形成、脱メチル化、システイン形成、ピログルタミン酸形成、ホルミル化、ガンマカルボキシル化、ＰＥＧ化を含むグリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨード化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解過程、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セネロイル化（ｓｅｎｅｌｏｙｌａｔｉｏｎ）、硫酸化、アルギニン化またはユビキチン化のようなアミノ酸付加を含むものとして理解される。このような修飾については、文献中に十分に説明されている（Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（１９９３）２ｎｄ  Ｅｄ．，Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｐｏｓｔ−ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｖａｌｅｎｔ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  （１９８３）Ｂ．Ｃ．Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｓｅｉｆｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｆｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｎｏｎｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｆａｃｔｏｒｓ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８２：６２６−６４６  ａｎｄ  Ｒａｔｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ｐｏｓｔ−ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ａｇｉｎｇ，Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ，６６３：  ４８−６２）。
【００３７】
「単離ポリヌクレオチド」または「単離ポリペプチド」は、以前に定義したように、ヒトの身体から単離されたか、そうでなければ技術的な方法によって産生されたポリヌクレオチドまたはポリペプチドとして理解される。
【００３８】
用語「バリアント」は、ポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチドに適用される。例えば、本明細書で参照されるペプチドまたはポリペプチドのバリアントは、参照ペプチド配列と実質的に相同であるが、１つ以上のアミノ酸の欠失、挿入および／または置換のために、参照配列のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を有するペプチドまたはポリペプチドを意味する。実質的に相同であるとは、数個のアミノ酸、例えば１、２、３、４、５または６アミノ酸の欠失、挿入および／または置換を除いて、参照ペプチド配列と同一な変異アミノ酸配列を意味する。実質的に相同であるとは、参照アミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一な変異アミノ酸配列を意味する。変異核酸配列は、参照核酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であってよい。２つのアミノ酸配列または２つの核酸配列の同一性は、目視による点検および／または数学的計算、またはさらに容易には、Ｃｌｕｓｔａｌ  ｐａｃｋａｇｅバージョン１．８３のような、配列比較に用いられる公知のコンピュータプログラムを用いた配列情報の比較によって決定できる。バリアントは、少なくとも１つの保存的に置換されたアミノ酸、すなわち、同様の生理化学的特性をもつ残基によって置換された所定のアミノ酸残基を有する配列を含んでよい。保存された置換としては、１つの脂肪族残基と別の脂肪族残基、例えばＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＡｌａとの互いの置換、または１つの極性残基と別の極性残基との互いの置換、例えばＬｙｓとＡｒｇとの置換、ＧｌｕとＡｓｐとの置換、またはＧｌｎとＡｓｎとの置換が挙げられる。その他のこのような保存された置換としては、例えば、同様な疎水特性を有する全体的な領域の置換が知られている（Ｋｙｔｅ，ｅｔ  ａｌ，１９８２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５７：１０５−１３１）。例えば、「保存されたアミノ酸の置換」には、その位置のアミノ酸残基の極性または電荷への影響が少ないかまたは全く無い、非天然の残基による天然アミノ酸残基の置換も含まれてよい。あるいは、元のポリペプチドに存在する１つ以上のアミノ酸の置換が保存されていない場合、参照抗体に比較して、改変された特性をもつバリアントが産生され得る。所望のアミノ酸置換（保存されているか否かにかかわらず）は、このような置換が必要とされる際に、当業者によって決定できる。用語「バリアント」にはまた、参照ペプチド配列と実質的に相同であるが、１つ以上のアミノ酸が化学的に修飾されているか、またはアミノ酸類似体によって置換されているため、参照配列のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を有するペプチドまたはポリペプチドも含まれる。この用語にはまた、グリコシル化ポリペプチドも含まれる。
【００３９】
用語「エピトープ」には、抗体へ特異的に結合できる、いずれかのポリペプチド決定因子が含まれる。特定の実施形態によれば、エピトープの決定因子としては、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル、またはスルホニルのような、化学的活性のある表面分子群が挙げられ、また、特定の実施形態によれば、エピトープの決定因子は、特定の三次元構造特性およびまたは特定の電荷特性を有してよい。エピトープとは、抗体が結合する抗原の領域である。
【００４０】
本明細書で用いられる用語、抗体が標的抗原に「結合する」または「結合している」とは、前記標的抗原（例えばＩＬ−１５）と共に、または前記標的抗原へ、または前記抗体によって認識されるエピトープを含む前記標的抗原の断片と共に、または前記標的抗原の断片へ、前記抗体が少なくとも一時的に相互作用または会合することを意味する。本明細書で用いられる、ＩＬ−１５に結合する抗体は、抗ＩＬ−１５抗体とも呼ばれる。
【００４１】
用語「選択的に結合する」、「特異的に結合する」、「〜に特異的な」が抗体に関して用いられる場合、これらの用語は、抗体が標的ポリペプチドまたはエピトープを優先的に認識すること、および／または、抗体が標的ポリペプチドまたはエピトープに優先的に結合すること、すなわち、他のいずれの抗原またはエピトープよりも高い親和性によって、すなわち、標的ポリペプチドへの結合が他の抗原への非特異的な結合とは区別できることを示す。抗体の結合親和性は、当該技術分野における通常の技術、例えば、平衡透析、平衡結合、表面プラズモン共鳴または分光法（例えば蛍光アッセイを用いた）のいずれか１つによって、容易に決定できる。特に、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術を用いる場合、生体分子の結合現象が、結合パートナーのうちの１つが固定化されている表層の屈折率を変化させ、これが応答単位（ＲＵ）として表される表面プラズモン共鳴シグナルの変化として検出される。抗体の、その標的抗原への結合動態をリアルタイムで測定することによって、ＳＰＲ技術は、抗体とその標的との間の会合がどれだけ迅速であるか（ｋａまたはｋｏｎ結合定数として測定）、その会合がどれだけ強力であるか（ｋｄまたはｋｏｆｆ解離定数として測定）を決定できる。抗体の、その標的に対する親和性は、その平衡解離定数であるＫＤを決定することによって定量可能である。ＫＤは、ＫＤ＝ｋｄ／ｋａとして定義され、ここでｋａは会合速度（ｋｏｎ）、ｋｄは解離速度（ｋｏｆｆ）である（Ｍｕｒｐｈｙ，ｅｔ  ａｌ，２００６，Ｃｕｒｒ  Ｐｒｏｔｏｃ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ，Ｃｈａｐｔｅｒ  １９：Ｕｎｉｔ  １９．１４）。２つの抗体の間の親和性および／または結合特性の比較は、各抗体のＫＤ値を実際に決定することなく、ＫＤに比例する結合の定量的測定（例えばＥＬＩＳＡまたはＦＡＣＳ解析によって）または親和性の定性的測定または親和性の推定（例えば機能的アッセイまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイにおいて）に基づいて行うことができる。
【００４２】
抗体の活性を「遮断する」または「中和する」との用語は、標的の活性を阻害する抗体の能力を指す。抗体の中和活性は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイまたはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイまたは機能アッセイによって決定されてよい。ＩＬ−１５に結合する抗体に対して用いられる場合、この用語はＩＬ−１５活性を広く中和する抗体の能力を指し、この能力は例えば、活性化Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびＢリンパ球、またはヘテロ三量体のＩＬ−１５Ｒαβγまたはヘテロ二量体ＩＬ−１５Ｒβγ受容体を発現するその他のいずれかの細胞の、ＩＬ−１５により誘導される増殖および／または生存（Ｆｉｎｃｈ，ｅｔ  ａｌ，２０１１，Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１６２：４８０−９０）、抗ＩｇＭまたはＣＤ４０リガンドによって刺激されたＢリンパ球において、ＩＬ−１５により誘導される免疫グロブリン合成（Ｌｉｔｉｎｓｋｉｙ  ｅｔ  ａｌ，２０１２，Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３：８２２−９）、ＩＬ−１５により誘導されるヒト好中球の活性化（Ｒａｔｈｈｅ  ａｎｄ  Ｇｉｒａｒｄ，２００４，Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ．，７６：１６２−８）、およびＩＬ−１５により誘導される、マクロファージ、樹状細胞または上皮細胞からの炎症誘発性サイトカインの産生（Ｎａｎａｙａｋｋａｒａ，ｅｔ  ａｌ，２０１３，Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ．，９８：１１２３−３５）の阻害に相当し得る。特に抗ＩＬ−１５抗体の中和活性は、実施例の項に記載するように、Ｋｉｔ２２５またはＭ−０７ｅ細胞のような細胞株の、ＩＬ−１５により誘導される増殖および／または生存を阻害する抗体の能力を測定することによって評価できる。ＩＬ−１５は、ヘテロ三量体のＩＬ−１５Ｒαβγまたはヘテロ二量体のＩＬ−１５Ｒβγ受容体を発現する細胞において（シスシグナル伝達）、またはＩＬ−１５Ｒα受容体に既に結合している場合に（トランスシグナル伝達）、直接かつ単独で作用することから（Ｓｔｏｎｉｅｒ，ｅｔ  ａｌ，２０１０，上記）、ＩＬ−１５に結合する抗体は、ＩＬ−１５のシスおよびトランス提示（ｃｉｓ  ａｎｄ  ｔｒａｎｓ−ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）のいずれか、または両方を中和可能である。抗体の「効力」は、所定の抗原濃度において最大半量の効果をもたらす抗体／抗原結合断片の濃度として表現され得る。例えば、抗体の「効果」は、その標的の活性の阻害または中和であってよい。この場合、最大半量の阻害をもたらす抗体濃度は、ｍｏｌ／ｌまたはＭによって示されるＩＣ５０と呼ばれ得る。例えばＥＬＩＳＡアッセイによって、結合が抗体の測定された「効果」とされる場合、このような抗体の最大半量の結合能（ＢＣ５０）は、所定の抗原濃度において最大半量のシグナルをもたらす抗体の濃度として表現されてよく、ｍｏｌ／ｌまたはＭによって示される。効力は通常、所定の抗原濃度において、さらに改善しても抗原の結合がそれ以上増強されない親和性に達するまで（いわゆる効力の上限）、親和性に影響される。ＩＬ−１５に対する抗体に関する効力は、例えば、抗体の存在下における、Ｋｉｔ２２５またはＭ−０７ｅ細胞のような細胞株の、ＩＬ−１５により誘導される増殖および／または生存のＩＣ５０値、または異なる源または種に由来するＩＬ−１５への結合のＢＣ５０値を測定することによって決定されてよい。
【００４３】
本明細書で用いられる用語「エフェクター機能」には、抗体のＦｃ領域とＦｃ受容体またはリガンドとの相互作用からもたらされる生化学的現象が含まれる。エフェクター機能には、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞傷害）およびＡＤＣＰ（抗体依存性細胞食作用）のようなＦｃγＲ媒介性エフェクター機能、およびＣＤＣ（補体依存性細胞傷害）のような補体媒介性エフェクター機能が含まれる。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ受容体または補体成分のようなエフェクター分子に対する抗体の親和性を変化させること、すなわち増大または減少させること、好ましくは増大させることによって修飾され得る。抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体またはリガンドとの結合親和性は、エフェクター分子の結合部位を修飾することによって、変化させることができる。また、抗体におけるエフェクター分子の結合部位を変化させることによって、全体的な結合親和性を著しく変化させることなく相互作用の構造を変化させ、結合を非生産的なものとすることでエフェクター機構を無効にすることも可能である。また、エフェクター分子の結合に直接関連はしないが、エフェクター機能のパフォーマンスに関わる部位を修飾することによって、エフェクター機能を変化させることも可能である。抗体のエフェクター機能を変化させることによって、診断および治療法に有益な効果をもたらす可能性のある免疫応答の様々な状況、例えば免疫系の様々な反応の増強または抑制を制御することが可能かもしれない。
【００４４】
用語「薬剤的に許容される」は、生物学的に、またはその他の点でも、望ましくないものではない材料から構成される担体を指す。
【００４５】
用語「担体」は、医薬製剤中に存在する、有効薬剤以外のいずれかの成分を指し、これらには希釈剤、結合剤、潤滑剤、崩壊剤、注入剤、着色料、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、保存料などが含まれる。
【００４６】
本明細書で用いられる「治療」および「治療する」などは、一般に所望の薬理学的および生理的効果を得ることを意味する。該効果は疾病、その症状または状態を阻止するかまたは部分的に阻止する点から予防的であってよく、および／または疾病、疾病に起因する状態、症状、または有害作用の部分的または完全な治癒の点から治療的であってもよい。本明細書で用いられる「治療」との用語は、哺乳類、特にヒトの疾病のいずれの治療も網羅し、かつ（ａ）例えば家族歴に基づいて、疾病にかかりやすい可能性があるが、まだそうであるとは診断されていない被験体の疾病を発生から予防すること；（ｂ）疾病を阻害すること、すなわちその進行を抑止すること；または（ｃ）疾病を軽減すること、すなわち損傷の好転または改善のように、疾病および／またはその症状または状態を退行させることを包含する。例えばセリアック病の治療には、疾病または疾患の症状を阻止、減少または根絶させることまでもが含まれ、例としては、腹痛、下痢、意図されない体重減少、吸収不良症候群、および絨毛萎縮、浸食、潰瘍、および正常または異常な上皮内リンパ球の浸潤のような腸粘膜の異常の、部分的または全体的な緩和が挙げられる。
【００４７】
用語「ＩＬ−１５関連疾病および／または疾患」は、ＩＬ−１５の過剰発現および／または濃度上昇、および／または、細胞または臓器によるＩＬ−１５の異常発現および／または細胞または臓器によるＩＬ−１５バリアントの異常発現によって特徴付けられる、疾病および疾患を包含する。このような疾病および疾患は、例えば、炎症誘発性ＩＬ−１５に関連した構成要素を有する疾患および悪性腫瘍のような、自己免疫疾患および／または炎症性疾患を包含する。
【００４８】
用語「自己免疫疾患および／または炎症性疾患」は、本明細書では通常、体内に正常に存在する物質および組織に対する被験体の異常な免疫応答および免疫系に関連し得るかまたは関連し得ない炎症性の異常からそれぞれ生じる疾病または疾患として定義される。自己免疫疾患および炎症性疾患の限定されない例としては、主に、関節リウマチ、乾癬、セリアック病、特に難治性セリアック病、サルコイドーシス、炎症性腸疾患（例えば潰瘍性大腸炎、クローン病）、Ｃ型肝炎により誘導される肝疾患、多発性硬化症、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、硬化性胆管炎、胆道閉鎖症、円形脱毛症、移植片拒絶応答、中枢神経系の炎症性疾患および好酸球性食道炎が挙げられる。
【００４９】
用語「悪性腫瘍」は、本明細書では通常、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）（例えば菌状息肉腫、セザリー症候群）のようなＴ細胞白血病、顆粒リンパ球のリンパ球増殖性疾患（ＬＤＧＬ）、大顆粒リンパ性白血病および急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を網羅するが、プレＢ細胞白血病、骨肉腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、メラノーマ、小細胞肺癌、腎細胞癌、神経膠芽腫、神経芽細胞腫および中皮腫もまた網羅する。
【００５０】
用語「寄生虫性、ウイルス性または細菌性病原体によって引き起こされる感染症」は、本明細書では通常、肉芽腫性の感染症（例えば結核、リーシュマニア症、住血吸虫症およびサイトメガロウイルス感染症）およびハンタウイルス感染症（例えば腎症候群を伴うハンタウイルス出血熱およびハンタウイルス肺症候群）を網羅する。
【００５１】
用語「中枢神経系（ＣＮＳ）の炎症性疾患」は、ＣＮＳの炎症によって特徴付けられる疾患、特にアミロイド関連疾患に関する。このような疾患の限定されない例として、アルツハイマー病、パーキンソン病およびハンチントン病が挙げられる。
【００５２】
用語「代謝性疾患」は、通常、糖尿病、筋ジストロフィーおよび代謝亢進状態を網羅する。
【００５３】
用語「代謝亢進状態」は、通常、鎌状赤血球症のような遺伝性の状態、または外傷、感染症または癌に付随する悪液質に関連する状態のような後天性の代謝亢進状態を網羅する。
【００５４】
本明細書で用いられる用語「被験体」は、哺乳類を指す。例えば、本発明が意図する哺乳類には、ヒト、霊長類、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマのような家畜、実験用げっ歯類などが含まれる。
【００５５】
本発明の治療または方法の「有効性」との用語は、本発明の使用または方法に応答した、疾病または状態の経過における変化に基づいて測定できる。例えば、本発明の治療または方法の有効性は、病気の徴候または症状におけるその影響によって測定できる。応答は、患者が、病気の望ましくない症状の部分的または全体的な緩和、または減少を経験することによって達成される。
【００５６】
本明細書で用いられる用語「有効量」は、本発明の少なくとも１つの抗体、またはその医薬製剤の量であって、前記抗体を投与された被験体の疾病の症状の、検出可能な減少を誘発する量を指す。
【００５７】
抗ＩＬ−１５抗体
ＩＬ−１５に結合する抗体の全般的な特性
第１の態様によれば、本発明は、ＩＬ−１５、特にヒトＩＬ−１５、またはＩＬ−１５の断片に結合し、本明細書に記載される、抗体の少なくとも１つの重鎖可変領域および／または少なくとも１つの軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００５８】
本発明の一つの実施形態によれば、本明細書に記載される少なくとも１つの重鎖可変領域および少なくとも１つの軽鎖可変領域、および任意に少なくとも１つの定常領域の断片を含む、ＩＬ−１５に結合する単離抗体、さらに詳細にはＩＬ−１５、特にヒトＩＬ−１５に特異的な抗体、またはその抗原結合断片が提供される。
【００５９】
一般に、本発明の抗体の抗原結合断片は、前記抗体の重鎖および／または軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＦＷ２、ＣＤＲ２、ＦＷ３、ＣＤＲ３およびＦＷ４を含む。
【００６０】
一つの実施形態によれば、本発明の抗体の抗原結合断片は、配列番号５のアミノ酸２６乃至１１１、またはそのバリアント、および／または配列番号２４のアミノ酸２４乃至１０２、またはそのバリアントを含む。
【００６１】
本発明の抗体またはその断片が結合するタンパク質は、いずれの種のＩＬ−１５タンパク質であってもよい。
【００６２】
本発明の抗体は、一般にヒトＩＬ−１５に対して高い特異性を示す。しかしながら、異なる種のＩＬ−１５ホモログとの間の配列同一性の程度に応じて、所定の抗体または抗原結合断片は、少なくとも１つの別の種、例えばサル（例えばカニクイザル、アカゲザル）、マウス、ラット、マーモセット、イヌ、および／またはウサギに由来するＩＬ−１５に対して交差反応性を示し得る。ヒトＩＬ−１５に対する抗体については、ある状況において、例えば特定の疾病の動物モデルにおいて抗体を試験する際、または毒性、安全性および投与量の試験を行う際に、ＩＬ−１５のその他の哺乳類型との、ある程度の交差反応性が望ましい場合がある。
【００６３】
特定の実施形態によれば、本発明の抗体またはその断片は、ヒトＩＬ−１５へ優先的に結合する。
【００６４】
別の実施形態によれば、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＩＬ−１５、カニクイザルＩＬ−１５およびアカゲザルＩＬ−１５に対して交差反応性を示す。
【００６５】
さらなる実施形態によれば、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、ラットＩＬ−１５および／またはマウスＩＬ−１５に対して交差反応性を示さない。
【００６６】
幾つかの実施形態によれば、ヒトＩＬ−１５に対する本発明の抗体およびその断片の結合親和性（例えばＫＤ値に対して逆相関する）は、非ヒトＩＬ−１５、例えばマウスまたはラットＩＬ−１５に対するそれらの結合親和性より、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍高い。
【００６７】
一つの実施形態によれば、本発明の抗体またはその断片はＩＬ−１５へ優先的に結合し、ＩＬ−１５に対して相同性を有するその他のタンパク質、例えばＩＬ−２、特にヒトＩＬ−２（配列番号３８）に対して、任意に、補足的に弱い結合を示すか、またはほとんど結合しない（すなわち無視できるかまたは検出できない結合）。
【００６８】
幾つかの実施形態によれば、ＩＬ−１５に対する本発明の抗体またはその断片の量的結合は、ＩＬ−２に対するそれらの量的結合より、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍高い。
【００６９】
結合親和性および／または量的結合は、平衡透析、平衡結合、ゲル濾過、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴または分光法（例えば蛍光アッセイを用いた）（Ｊｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．ＢＭＣ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ２０１０，１０：１０）のような、当該技術分野において公知のいずれかの方法を用いて測定でき、例えば、オンレート、オフレート、平衡解離定数（ＫＤ）、平衡定数（Ｋｅｑ）または当該技術分野で用いられるその他のいずれかの用語によって表すことができる。
【００７０】
幾つかの実施形態によれば、本発明の抗体およびその抗原結合断片は、１００ｎＭ以下、特に１０ｎＭ未満、さらに詳細には１ｎＭ未満、または０．５ｎＭ未満、または０．１ｎＭ未満、または０．０１ｎＭ未満、または０．００５ｎＭ未満の平衡解離定数（ＫＤ）によって、ヒトＩＬ−１５へ特異的に結合する。
【００７１】
特定の実施形態によれば、本発明の抗体またはその抗原結合断片はＩＬ−１５活性を阻害し、ＩＬ−１５に対して相同性を有するその他のタンパク質、例えばＩＬ−２に対して、任意に、補足的に弱い抑制活性を示すか、または抑制活性を示さない（すなわち無視できるかまたは検出できない活性）。
【００７２】
抗体が、その標的タンパク質の活性を遮断または中和する能力は、本明細書に定義するその効力、例えばＩＣ５０値によって反映される効力によって評価できる。典型的には、抗体の中和活性は、実施例の項に記載するように、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ、例えばＫｉｔ２２５またはＭ−０７ｅ細胞のような細胞株においてＩＬ−１５により誘導される増殖および／または生存に対する、前記抗体の存在下での阻害の程度を測定するアッセイによって決定されてよい。
【００７３】
幾つかの実施形態によれば、本発明の抗体およびその抗原結合断片は、実施例の項に記載するように、Ｋｉｔ２２５またはＭ−０７ｅ細胞のような細胞株においてＩＬ−１５により誘導される増殖および／または生存のようなＩＬ−１５活性の阻害に対して、２００ｎＭ以下、特に１００ｎＭ未満、特に５０ｎＭ未満、３０ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、さらに詳細には１０ｎＭ未満、８ｎＭ未満、７ｎＭ未満、５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満、０．３ｎＭ未満、０．２ｎＭ未満、０．１ｎＭ未満、０．０５ｎＭ未満、または０．０３ｎＭ未満のＩＣ５０を有する。
【００７４】
本明細書に記載される、本発明の抗体またはその断片のいずれかのバリアントは、ＩＬ−１５に結合して、任意にＩＬ−１５活性を中和できることを理解されたい。特定の実施形態によれば、このようなバリアントは、前記バリアントが由来する親抗体または断片と比較すると、ＩＬ−１５に対する同じかまたは高い結合親和性、および／または同じかまたは高い効力、および／または同じかまたは高い種選択性、および／またはＩＬ−１５に対する同じかまたは高い選択性、および／または同じかまたは高い中和効率を示し得る。
【００７５】
別の特定の実施形態によれば、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、ＩＬ−１５のＩＬ−１５Ｒαへの結合を実質的に阻止しない、すなわち、本発明の抗体の存在下でのＩＬ−１５のＩＬ−１５Ｒαへの結合阻害は無視できるか、または検出できない。
【００７６】
本発明の抗体は、本発明の抗体の特性、特に標的抗原、さらに詳細には本発明の抗体によって認識されるものと同じＩＬ−１５のエピトープへの結合能、および任意にＩＬ−１５活性の中和能が保持されている限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、およびさらに改変された抗体であってもよい。
【００７７】
本発明の特定の実施形態によれば、本発明のＩＬ−１５に対する抗体、またはＩＬ−１５に結合するその抗原結合断片は、モノクローナル抗体である。
【００７８】
本発明のさらなる特定の実施形態によれば、本発明のＩＬ−１５に対する抗体、またはＩＬ−１５に結合するその抗原結合断片は、ヒト化抗体である。
【００７９】
本発明のさらなる特定の実施形態によれば、本発明のＩＬ−１５に対する抗体、またはＩＬ−１５に結合するその抗原結合断片は、組換え抗体である。
【００８０】
本発明のＩＬ−１５に対する抗体、またはＩＬ−１５に結合するその抗原結合断片は、標的タンパク質と相互作用する部分によって、特に、典型的には重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む可変領域によって特徴付けることができる。
【００８１】
可変領域に関連した、抗ＩＬ−１５抗体の特性
一つの実施形態によれば、本発明は、
（１）配列番号５の重鎖可変領域、または前記配列の１、２、３、４、５、６、７、８、または９アミノ酸が異なるアミノ酸に置換された、そのバリアント、および
（２）配列番号２４の軽鎖可変領域、または前記配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸が異なるアミノ酸に置換された、そのバリアント
を含む、ＩＬ−１５に結合する単離抗体、またはその抗原結合断片に関する。
【００８２】
特定の実施形態によれば、本発明は、
（１）配列番号５の重鎖可変領域、または配列番号５に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有する、そのバリアント、および
（２）配列番号２４の軽鎖可変領域、または配列番号２４に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有する、そのバリアント、
を含む、ＩＬ−１５に結合する単離抗体、またはその抗原結合断片に関する。
【００８３】
さらに特定の実施形態によれば、本発明の抗体は、
（１）配列番号５に対して少なくとも９６％の同一性を有する重鎖可変領域、および
（２）配列番号２４に対して少なくとも９８％の同一性を有する軽鎖可変領域
を含み、またはその抗原結合断片である。
【００８４】
なおさらなる特定の実施形態によれば、本発明の抗体は、
（１）配列番号５に対して少なくとも９７％の同一性を有する重鎖可変領域、および
（２）配列番号２４に対して少なくとも９９％の同一性を有する軽鎖可変領域
を含み、またはその抗原結合断片である。
【００８５】
本発明の一つの実施形態によれば、配列番号５の前記バリアントは、
（ｉ）重鎖可変フレームワーク領域内の位置Ｈ３（ＶＨ  ＲＨ３）のアルギニン（Ｒ）、位置Ｈ５（ＶＨ  ＭＨ５）のメチオニン（Ｍ）、位置Ｈ６（ＶＨ  ＡＨ６）のアラニン（Ａ）、位置Ｈ４９（ＶＨ  ＡＨ４９）のアラニン（Ａ）、および／または
（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ２内の位置Ｈ６１（ＶＨ  ＤＨ６１）のアスパラギン酸（Ｄ）、位置Ｈ６２（ＶＨ  ＳＨ６２）のセリン（Ｓ）、および／または
（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ３内の位置Ｈ９８（ＶＨ  ＭＨ９８）のメチオニン（Ｍ）、位置Ｈ１００Ｃ（ＶＨ  ＷＨ１００Ｃ）のトリプトファン（Ｗ）、位置Ｈ１００Ｅ（ＶＨ  ＭＨ１００Ｅ）のメチオニン（Ｍ）、
のアミノ酸の少なくとも１、特に１、２、３、４、または５が、異なるアミノ酸に置換されていることを除き、配列番号５のアミノ酸配列を有する。
【００８６】
さらなる実施形態によれば、配列番号５の前記バリアントは、
（ｉ）ＶＨ  ＲＨ３のグルタミン（Ｑ）による置換、および／またはＶＨ  ＭＨ５のバリン（Ｖ）による置換、および／またはＶＨ  ＡＨ６のグルタミン酸（Ｅ）による置換、および／またはＶＨ  ＡＨ４９のセリン（Ｓ）による置換、および／または
（ｉｉ）ＶＨ  ＤＨ６１のグルタミン酸（Ｅ）による置換、および／またはＶＨ  ＳＨ６２のスレオニン（Ｔ）による置換、および／または
（ｉｉｉ）ＶＨ  ＭＨ９８のロイシン（Ｌ）、フェニルアラニン（Ｆ）、イソロイシン（Ｉ）、またはアラニン（Ａ）による置換、および／またはＶＨ  ＷＨ１００Ｃのチロシン（Ｙ）、フェニルアラニン（Ｆ）、またはアラニン（Ａ）による置換、および／またはＶＨ  ＭＨ１００Ｅのロイシン（Ｌ）、フェニルアラニン（Ｆ）、またはイソロイシン（Ｉ）による置換
を除き、配列番号５のアミノ酸配列を有する。
【００８７】
本発明の一つの実施形態によれば、配列番号２４の前記バリアントは、
（ｉ）軽鎖可変フレームワーク領域内の位置Ｌ３６（ＶＬ  ＹＬ３６）のチロシン（Ｙ）、位置Ｌ４６（ＶＬ  ＬＬ４６）のロイシン（Ｌ）、および／または
（ｉｉ）軽鎖ＣＤＲ３内の位置Ｌ９１（ＶＬ  ＤＬ９１）のアスパラギン酸（Ｄ）、位置Ｌ９２（ＶＬ  ＳＬ９２）のセリン（Ｓ）、
のアミノ酸の少なくとも１、特に１、２、３、または４が、異なるアミノ酸に置換されていることを除き、配列番号２４のアミノ酸配列を有する。
【００８８】
さらなる実施形態によれば、配列番号２４の前記バリアントは、
（ｉ）ＶＬ  ＹＬ３６のフェニルアラニン（Ｆ）による置換、および／またはＶＬ  ＬＬ４６のアルギニン（Ｒ）による置換、および／または
（ｉｉ）ＶＬ  ＤＬ９１のグルタミン酸（Ｅ）による置換、および／またはＶＬ  ＳＬ９２のスレオニン（Ｔ）による置換
を除き、配列番号２４のアミノ酸配列を有する。
【００８９】
別の実施形態によれば、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、
（ｉ）ＶＨ  ＲＨ３のグルタミン（Ｑ）による置換、および／またはＶＨ  ＭＨ５のバリン（Ｖ）による置換、および／またはＶＨ  ＡＨ６のグルタミン酸（Ｅ）による置換、および／または
（ｉｉ）ＶＨ  ＳＨ６２のスレオニン（Ｔ）による置換、および／または
（ｉｉｉ）ＶＨ  ＷＨ１００Ｃのチロシン（Ｙ）による置換がされた
配列番号５のアミノ酸配列の重鎖可変領域、および
（２）配列番号２４のアミノ酸配列の軽鎖可変領域を含む。
【００９０】
さらに特定の実施形態によれば、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、
（ｉ）配列番号５、配列番号６、配列番号１２、配列番号２１、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２２および配列番号２３から選択される重鎖可変領域、および
（ｉｉ）配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８および配列番号２９から選択される軽鎖可変領域
を含む。
【００９１】
さらに特定の実施形態によれば、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６の重鎖可変領域を含む。
【００９２】
さらに特定の実施形態によれば、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２４の軽鎖可変領域を含む。
【００９３】
本発明の抗体の具体例は、表１に挙げるものを含む。
【００９４】
【表１】
0006563012.tif 000002
【００９５】
さらに特定の実施形態によれば、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、
（１）配列番号５、配列番号６、配列番号１２および配列番号２１から選択される重鎖可変領域、および
（２）配列番号２４の軽鎖可変領域
を含む。
【００９６】
さらになお詳細には、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５の重鎖可変領域および配列番号２４の軽鎖可変領域を含む。
【００９７】
さらになお詳細には、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６の重鎖可変領域および配列番号２４の軽鎖可変領域を含む。
【００９８】
さらになお詳細には、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１２の重鎖可変領域および配列番号２４の軽鎖可変領域を含む。
【００９９】
さらになお詳細には、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２１の重鎖可変領域および配列番号２４の軽鎖可変領域を含む。
【０１００】
定常領域に関連した、抗ＩＬ−１５抗体の特性
抗体の定常領域に相当する部分は、本発明のＩＬ−１５に結合する単離抗体またはその抗原結合断片に任意に含まれる。
【０１０１】
抗体に計画される機能、特に必要とされ得るエフェクター機能に応じて、抗体の定常領域は本発明の抗体内に含まれ得るか、または含まれ得ない。
【０１０２】
典型的には、本発明の抗体またはその抗原結合断片に重鎖定常領域またはその部分が存在する場合、それはいずれの抗体アイソタイプに由来するものであってもよい。例えば、重鎖定常領域またはその部分は、ＩｇＧ（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＡ（例えばＩｇＡ１、ＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ（例えばＩｇＭ１、ＩｇＭ２）から選択される抗体のものであってよい。特にＩｇＧ、さらに詳細にはＩｇＧ１の定常領域またはその部分であってよい。
【０１０３】
特に、抗体分子が治療上の使用に意図されたものであり、かつ抗体エフェクター機能が必要とされる場合には、特にＩｇＧ１およびＩｇＧ３アイソタイプのヒトＩｇＧ定常領域ドメインが用いられてよい。あるいは、抗体分子が治療目的に意図されたものであり、かつ抗体エフェクター機能が必要とされない場合、例えば単にＩＬ−１５活性を遮断する場合には、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４アイソタイプが用いられてよい。
【０１０４】
本発明の抗体またはその抗原結合断片に軽鎖定常領域またはその部分が存在する場合、それはいずれの軽鎖の定常領域に由来するものであってもよい。例えば、軽鎖定常領域またはその部分は、カッパまたはラムダ軽鎖由来であってよい。
【０１０５】
本発明の特定の態様によれば、ＩＬ−１５に対する抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）本明細書に記載される可変領域、およびＩｇＧ抗体（特にＩｇＧ１、さらに詳細にはアロタイプＧ１ｍ３）由来の定常領域またはその部分を含む少なくとも１本の重鎖、および（ｉｉ）本明細書に記載される可変領域、およびカッパ（特にアロタイプＫｍ３）軽鎖由来の定常領域またはその部分を含む少なくとも１本の軽鎖を含む。アロタイプＧ１ｍ３の定常領域のアミノ酸配列は配列番号３０である。アロタイプＫｍ３の定常領域のアミノ酸配列は配列番号３１である。
【０１０６】
本発明の抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも１つの抗原結合部位、例えば１つまたは２つの抗原結合部位を有する。
【０１０７】
幾つかの実施形態によれば、本発明の単離抗体およびその抗原結合断片はグリコシル化されている。典型的には、Ｎ−アセチルグルコサミン、マンノース、グルコース、ガラクトース、フコース、シアル酸などのような単糖が、抗体上の個々のグリコシル化部位に集合してオリゴ糖となる。
【０１０８】
補助分子を含む抱合体
本発明の別の態様によれば、本発明の単離抗体またはその抗原結合断片は、任意にアクセサリー分子を抱合しており、本明細書ではこれを「抱合抗体」または「抱合抗体断片」と称する。
【０１０９】
アクセサリー分子は、抗体または抗体断片に直接抱合させてよいか、または例えばＫｅｌｌｏｇｇら（２０１１，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ，２２：７１７−２７）によって記載されるように、適切な長さのスペーサーを介して抱合させてもよい。
【０１１０】
一つの実施形態によれば、特に治療目的に適用させたアクセサリー分子は、治療用のエフェクターグループ、例えば放射性グループ（すなわち放射性核種または放射性同位元素を含むグループ）または小分子を含む、細胞傷害性（例えば酵素活性のある細菌、真菌、植物または動物由来の毒素、またはその断片）、細胞増殖抑制性、または免疫調節性薬剤であってよい。
【０１１１】
別の実施形態によれば、アクセサリー分子は、本発明の抗体または抗体断片に抱合される際、抗体の抗原結合断片を含み、二重特異性抗体を形成する。特に前記二重特異性抗体は、ＩＬ−１５の２つの異なるエピトープに向けられてよい（したがって、バイパラトピック抗体と定義される）。
【０１１２】
本発明の抱合抗体および抱合抗体断片は、抱合された補助分子が、疾病の場にて治療効果を有し得るように、ｉｎ  ｖｉｖｏにて薬物を疾病の場（例えば炎症または腫瘍の場）へ標的化させることができる。
【０１１３】
別の実施形態によれば、特に診断目的に適用させたアクセサリー分子は、例えば、放射性同位元素（例えば３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、１２５Ｉ）、発色性標識、例えば基質を検出可能な色に変換できる酵素（例えば西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ）または蛍光化合物（例えば緑色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質）、分光学的標識（例えばフルオレセインおよびＦＩＴＣのようなその誘導体、テキサスレッド、シアニン色素、フォトシアン、ローダミンのような蛍光標識、または可視色を呈する標識）、ルシフェリンを含む発光標識、標識に特異的なさらなる化合物によって発色させ、検出および定量化が容易になる親和性標識、または標準的なＥＬＩＳＡで用いられるその他のいずれかの標識を含む、標識グループであってよい。
【０１１４】
本発明のポリペプチドをコードする核酸
別の実施形態によれば、本発明の抗体またはその抗原結合断片をコードする単離核酸分子が提供される。
【０１１５】
本発明の単離核酸は、例えば、天然ＤＮＡまたはＲＮＡ、または組換えまたは合成ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはＬＮＡ、または本発明のいずれかの核酸分子を含む組換え核酸分子を、単独で、または組み合わせたものであってよい。特定の実施形態によれば、本発明の核酸分子はｃＤＮＡである。
【０１１６】
特定の実施形態によれば、
（１）配列番号５の重鎖可変領域、または前記配列の１、２、３、４、５、６、７、８、または９アミノ酸が、異なるアミノ酸によって置換されているそのバリアント、またはその抗原結合断片、をコードする核酸配列、および
（２）配列番号２４の軽鎖可変領域、または前記配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸が、異なるアミノ酸によって置換されているそのバリアント、またはその抗原結合断片、をコードする核酸配列
を１つ以上含む単離核酸が提供される。
【０１１７】
特定の実施形態によれば、
（１）配列番号５の重鎖可変領域、または配列番号５に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するそのいずれかのバリアント、またはその抗原結合断片、をコードする核酸配列、および
（２）配列番号２４の軽鎖可変領域、または配列番号２４に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するそのいずれかのバリアント、またはその抗原結合断片、をコードする核酸配列
を１つ以上含む単離核酸が提供される。
【０１１８】
特定の実施形態によれば、
（１）配列番号５、配列番号６、配列番号１２、配列番号２１、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２２および配列番号２３から選択される重鎖可変領域、またはその抗原結合断片、をコードする核酸配列、および
（２）配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８および配列番号２９から選択される軽鎖可変領域、またはその抗原結合断片、をコードする核酸配列
を１つ以上含む単離核酸が提供される。
【０１１９】
さらに特定の実施形態によれば、本発明は、
（１）配列番号５、配列番号６、配列番号１２および配列番号２１から選択される重鎖可変領域をコードする核酸配列、および
（２）配列番号２４の軽鎖可変領域をコードする核酸配列
を１つ以上含む単離核酸を提供する。
【０１２０】
本発明のポリペプチドを産生および精製するための、ベクターおよび宿主細胞
一つの実施形態によれば、本発明は、本発明の核酸分子を含む組換え発現ベクターを提供し、ここで、該ベクターは任意に、前記核酸分子へ機能的に連結する発現制御配列を含み、この発現制御配列によって、原核生物または真核生物の宿主細胞における、コードされたポリペプチドの発現が可能になる。
【０１２１】
限定はされないが、染色体、エピソーム、およびウイルスに由来する多くの発現系が用いられ得る。さらに詳細には、使用される組換えベクターは、細菌プラスミド、トランスポゾン、酵母エピソーム、挿入エレメント、酵母染色体エレメント、ウイルス、例えばバキュロウイルス、ＳＶ４０のようなパピローマウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、フォックスポックスウイルス、仮性狂犬病ウイルス、レトロウイルス由来であってよい。これらの組換えベクターは、コスミドまたはファージミド誘導体と同等であってよい。
【０１２２】
核酸配列は、例えば、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，４ｔｈ  Ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，２００１に記載されるような、当業者に公知の方法によって、組換えベクター内に挿入できる。
【０１２３】
組換えベクターは、ポリヌクレオチドの発現調節を制御するヌクレオチド配列、および、本発明のポリヌクレオチドの発現および転写および本発明のポリペプチドの翻訳を可能にするヌクレオチド配列を含んでもよい。これらの配列は、使用する宿主細胞に従って選択される。
【０１２４】
したがって、例えば、本発明の核酸分子によってコードされたポリペプチドが、小胞体の内腔へ、細胞膜のペリプラズムへ、または細胞外環境へ方向付けられるように、組換えベクターには適切な分泌シグナルを組み込むことができる。適切な分泌シグナルの選択は、続くタンパク質精製を容易にし得る。
【０１２５】
さらなる実施形態によれば、本発明の組換えベクターを含む宿主細胞が提供される。
【０１２６】
宿主細胞内への組換えベクターの導入は、ＢＡＳＩＣ  ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２ｎｄ  ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，１９９５および上記のＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬに記載されるような、当業者に公知の方法、例えばリン酸カルシウムによるトランスフェクション、ＤＥＡＥデキストランによるトランスフェクション、トランスフェクション、微量注入法、陽イオン脂質によるトランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入または感染に従って行われてよい。
【０１２７】
宿主細胞は、例えば、大腸菌またはストレプトマイセスのような細菌細胞、アスペルギルスのような真菌およびサッカロミセスのような酵母の細胞、昆虫細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、Ｃ１２７マウス細胞株、シリアンハムスター細胞のＢＨＫ細胞株、ヒト胎児腎腎臓２９３（ＨＥＫ２９３）細胞であってよい。特定の実施形態によれば、宿主細胞はＣＨＯ細胞またはＨＥＫ２９３細胞である。
【０１２８】
宿主細胞は、例えば本発明のポリペプチドを発現させるために用いることができる。標準法による精製後、本発明のポリペプチドは、以下に記載する方法に用いることができる。
【０１２９】
例えば、組換えタンパク質を分泌する発現系を用いる場合、培地は最初に、市販のタンパク質濃縮用フィルター、例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを用いて濃縮されてよい。濃縮工程のあと、濃縮物は、ゲル濾過マトリックスのような精製用マトリックスに加えてよい。あるいは、陰イオン交換および／またはアフィニティ樹脂を用いてもよい。マトリックスは、アクリルアミド、アガロース、デキストラン、セルロース、またはタンパク質精製に通常用いられるその他の形であってよい。あるいは、陽イオン交換工程を用いてもよい。最後に、疎水性のＲＰ−ＨＰＬＣ用溶媒を用いた逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）工程を１回以上行って、抗体またはその断片をさらに精製してもよい。様々に組み合わせた、前述の精製工程の幾つかまたは全ては公知であり、実質的に均質な組換えタンパク質を提供するために用いることができる。
【０１３０】
細菌培養によって産生された組換えタンパク質は、最初に宿主細胞の破壊、遠心分離、不溶性ポリペプチドの場合には細胞ペレットからの抽出、または可溶性ポリペプチドの場合には上清液からの抽出を行い、次に１回以上の濃縮、塩析、イオン交換、アフィニティ精製またはサイズ排除クロマトグラフィー工程を行うことによって単離できる。細菌細胞は、凍結融解サイクル、超音波処理、機械的破壊、または細胞溶解剤の使用を含む、いずれかの便利な方法を用いて破壊できる。
【０１３１】
別の実施形態によれば、本発明は、本発明のポリペプチドを発現できる細胞を産生するための方法を提供し、該方法は、細胞を、本発明の組換え発現ベクターまたは核酸によって遺伝的に操作することを含む。
【０１３２】
別の実施形態によれば、本発明は、本発明の抗体またはその断片を産生するための方法を提供し、該方法は、前記抗体またはその断片をコードする核酸配列を含む発現ベクターによって形質転換された宿主細胞を、前記ポリペプチドの発現を十分に促進する条件下で培養することを含む。次に、本発明の抗体またはその断片は、使用する発現系に応じて、培地または細胞抽出物から回収される。当業者に周知であるように、組換えタンパク質の精製手順は、使用する宿主細胞の種類、および上記のように組換えタンパク質培地中に分泌されるか否かといった因子に従って変動し得る。
【０１３３】
組成物
本発明は、組成物としての医薬品または治療薬、および内科的疾患、特にＩＬ−１５関連疾病または疾患、例えば自己免疫疾患および／または炎症性疾患、悪性腫瘍、移植片拒絶、代謝性の状態および／または寄生虫、ウイルスまたは細菌病原体によって引き起こされる感染症を患う患者、好ましくは哺乳類の患者、ヒト患者を治療するための方法を提供する。あるいは、本発明は、内科的疾患、特にＩＬ−１５関連疾病または疾患、例えば自己免疫疾患および／または炎症性疾患、悪性腫瘍、移植片拒絶、代謝性の状態および／または寄生虫、ウイルスまたは細菌病原体によって引き起こされる感染症を予防するための方法を提供する。
【０１３４】
一つの実施形態によれば、（ｉ）ＩＬ−１５に結合する本発明の抗体またはその抗原結合断片、（ｉｉ）本発明の核酸、（ｉｉｉ）本発明のベクター、および／または（ｉｖ）本発明の宿主細胞、のうち１つ以上、および少なくとも１つの薬剤的に許容される担体を含む医薬組成物が提供される。
【０１３５】
本発明の医薬組成物は、ＩＬ−１５に結合する抗体またはその抗原結合断片の１つ以上を、本明細書に記載するいずれかの形態において含んでよい。
【０１３６】
本発明の組成物は、薬剤的に許容される追加成分、例えばミョウバン、安定剤、抗菌剤、緩衝液、着色料、香味料、補助剤などを１つ以上さらに含んでもよい。
【０１３７】
本発明の化合物は、従来から用いられている補助剤、担体、希釈剤または賦形剤と共に、医薬組成物の形態およびその単位剤形へと調製してよく、そのような形態としては、経口用として錠剤または充填したカプセルのような固形剤、凍結乾燥の形態、または溶液、懸濁液、エマルション、エリキシル剤のような液剤、またはそれらを充填したカプセルが用いられてよく、または非経口（皮下を含む）用として注射用無菌溶液の形態が用いられてよい。このような医薬組成物およびその単位剤形は、成分を従来の比率で、追加の有効化合物または成分と共に、またはそれらなしで含んでよく、このような単位剤形は、使用が意図された一日投与量に相応の範囲内にあるいずれかの適切な有効量の有効成分を含有してよい。
【０１３８】
本発明の組成物は、限定はされないが、水性または油性懸濁液、溶液、エマルション、シロップ、およびエリキシル剤のような液体製剤であってよい。経口投与に適した液体剤形には、緩衝液、懸濁剤および調剤、着色剤、香味料などを含む適切な水性または非水性ビヒクルが含まれてよい。組成物はまた、使用前に水またはその他の適切なビヒクルで再構成する乾燥製剤として処方されてもよい。このような液体製剤は、限定はされないが、懸濁剤、乳化剤、非水性ビヒクル、および保存料のような添加物を含有してもよい。懸濁剤としては、ソルビトールシロップ、メチルセルロース、グルコース／糖シロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル、および食用水素化油脂が挙げられるが、これらに限定されない。乳化剤としては、レシチン、ソルビタンモノオレエート、およびアカシアが挙げられるが、これらに限定されない。非水性ビヒクルとしては、食用油、アーモンド油、分留ココナッツ油、油状エステル、プロピレングリコール、およびエチルアルコールが挙げられるが、これらに限定されない。保存料としては、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルまたはプロピル、およびソルビン酸が挙げられるが、これらに限定されない。さらなる材料および加工技術などについては、参照により本明細書に取り込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１２，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙの第５部に記載されている。
【０１３９】
本発明の固形組成物は、従来の方法で処方された錠剤または舐剤の形態であってよい。例えば経口投与のための錠剤およびカプセルは、限定はされないが、結合剤、注入剤、潤滑剤、崩壊剤、および湿潤剤のような従来の賦形剤を含有してよい。結合剤としては、シロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、デンプンの粘液、およびポリビニルピロリドンが挙げられるが、これらに限定されない。注入剤としては、ラクトース、糖、結晶セルロース、トウモロコシでんぷん、リン酸カルシウム、およびソルビトールが挙げられるが、これらに限定されない。潤滑剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ポリエチレングリコール、およびシリカが挙げられるが、これらに限定されない。崩壊剤としては、ジャガイモデンプンおよびデンプングリコール酸ナトリウムが挙げられるが、これらに限定されない。湿潤剤としてはラウリル硫酸ナトリウムが挙げられるが、これに限定されない。錠剤は、当該技術分野において公知の方法によってコートされてよい。
【０１４０】
注射用組成物は、典型的には注射用の無菌生理食塩水またはリン酸緩衝食塩水、または当該技術分野において公知であるその他の注射用担体に基づくものである。
【０１４１】
本発明の組成物はまた、限定はされないがクリーム、軟膏、ローション、ペースト、硬膏、パッチ、または膜のような、水性または非水性のビヒクルを含む経皮製剤として処方されてもよい。
【０１４２】
本発明の組成物は、限定はされないが、注射または持続点滴のような非経口投与用に処方されてもよい。注射用製剤は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、またはエマルションの形態であってよく、限定はされないが、懸濁剤、安定剤、および分散剤のような製剤用の薬剤を含有してよい。組成物は、限定はされないが、発熱物質を含まない無菌水のような適切なビヒクルによって再構成される散剤の形態で提供されてもよい。
【０１４３】
本発明の組成物は、移植または筋肉内注射によって投与され得るデポ製剤としても処方されてよい。組成物は、適切な高分子材料または疎水性材料（例えば許容される油中のエマルションとして）、イオン交換樹脂、または難溶性の誘導体（例えば難溶性の塩として）によって処方されてよい。
【０１４４】
本発明の化合物は、持続放出剤形として、または持続放出薬物送達系から投与されてよい。代表的な持続放出材料についての記載は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓに収載されている材料についても見出すことができる。
【０１４５】
医薬組成物学
本発明の組成物の投与には、注射用製剤が特に適している。
【０１４６】
別の実施形態によれば、本発明は、本明細書に記載される、ＩＬ−１５に結合する抗体またはその抗原結合断片を含むイメージング組成物または診断用組成物を提供する。
【０１４７】
本発明のイメージング組成物または診断用組成物は、自己免疫疾患および／または炎症性疾患、悪性腫瘍、移植片拒絶、代謝性の状態および／または寄生虫、ウイルスまたは細菌病原体によって引き起こされる感染症に付随する、ＩＬ−１５の濃度上昇を検出するために有用である。
【０１４８】
併用
本発明によれば、本発明のＩＬ−１５に結合する抗体またはその抗原結合断片は、単独で投与してよいか、または自己免疫疾患および／または炎症性疾患、悪性腫瘍、移植片拒絶、代謝性の状態および／または寄生虫、ウイルスまたは細菌病原体によって引き起こされる感染症の予防および／または治療に有用な共薬剤、例えば生物製剤、小分子およびワクチンのような免疫調節性薬剤と併用して投与してもよい。
【０１４９】
あるいは、ＩＬ−１５に対する本発明の抗体またはその抗原結合断片は、単独で投与してよいか、またはがんの治療に有用な共薬剤、例えば細胞傷害性薬剤、チロシンキナーゼ阻害剤イマチニブ（グリベック（Ｇｌｅｅｖｅｃ／Ｇｌｉｖｅｃ））またはゲフィチニブ（イレッサ）のような抗がん剤、およびトラスツズマブ（ハーセプチン）または抗ＣＤ２０抗体リツキシマブ（リツキサン）のような治療用抗体と併用して投与してもよい。
【０１５０】
本発明は、ＩＬ−１５に対する抗体またはその抗原結合断片の投与を包含し、ここで治療上有効な量の抗体またはその断片は、その他の治療法またはＩＬ−１５関連疾病または疾患、例えば自己免疫疾患および／または炎症性疾患、悪性腫瘍、移植片拒絶、代謝性の状態および／または寄生虫、ウイルスまたは細菌病原体によって引き起こされる感染症の予防および／または治療に有用な共薬剤に先立ち、それらと同時に、またはそれらと連続的に個体へ投与される。前記共薬剤と同時に投与される、ＩＬ−１５に対する本発明の抗体またはその抗原結合断片は、同一かまたは異なる組成物として、同一かまたは異なる投与経路によって投与できる。
【０１５１】
特定の実施形態によれば、ＩＬ−１５に対する本発明の抗体またはその抗原結合断片は、セリアック病を患う被験体を治療するために小腸炎を低減させる、および／または腸粘膜を保護する、および／またはグルテンペプチドに対する免疫反応性を低減させる、および／または腸細菌叢を改善させる化合物と併用して投与できる。
【０１５２】
特定の実施形態によれば、ＩＬ−１５に対する本発明の抗体またはその抗原結合断片は、難治性セリアック病を患う被験体を治療するために小腸炎を低減させる、および／または腸粘膜を保護する、および／またはグルテンペプチドに対する免疫反応性を低減させる、および／または腸細菌叢を改善させる化合物と併用して投与できる。
【０１５３】
投与方法
本発明の組成物は、限定はされないが、経口、非経口、舌下、経皮、直腸内、経粘膜、局所、吸入、経頬または鼻腔内投与または膀胱内投与、またはそれらの組み合わせのような、いずれかの方法によって投与されてよい。
【０１５４】
非経口投与としては、静脈内、動脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、髄腔内、および関節内投与が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の組成物は、組成物の徐放を可能にする植込錠の形態、および速度を遅く調節した静脈内点滴によって投与されてもよい。
【０１５５】
特定の実施形態によれば、ＩＬ−１５に対する本発明の抗体またはその抗原結合断片は、全身性または局所性に投与される。
【０１５６】
特定の実施形態によれば、ＩＬ−１５に対する本発明の抗体またはその抗原結合断片は、皮下または静脈内経路によって投与される。
【０１５７】
単回または複数回用量として個体に投与される投与量は、薬物動態特性、患者の状態および特性（性、年齢、体重、健康状態、および大きさ）、症状の程度、併用の治療法、治療頻度、および所望の効果のような様々な因子によって異なり得る。
【０１５８】
典型的には、薬剤的に有効な抗体の治療上有効な量は、０．５ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇ体重までの用量の範囲である。投与計画が持続点滴である場合には、０．２５０ｍｇ／ｋｇから１３ｍｇ／ｋｇ体重までの範囲であってよい。
【０１５９】
患者
一つの実施形態によれば、本発明に従った患者は、ＩＬ−１５関連疾病または疾患、例えば関節リウマチ、乾癬、難治性セリアック病のようなセリアック病、サルコイドーシス、炎症性腸疾患（例えば潰瘍性大腸炎、クローン病）、Ｃ型肝炎により誘導される肝疾患、多発性硬化症、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、硬化性胆管炎、胆道閉鎖症、円形脱毛症、移植片拒絶応答、中枢神経系の炎症性疾患および好酸球性食道炎を含む自己免疫疾患および／または炎症性疾患、および代謝亢進状態のような代謝状態を患う患者である。
【０１６０】
特定の実施形態によれば、本発明の患者は、セリアック病を患う患者である。
【０１６１】
特定の実施形態によれば、本発明の患者は、難治性セリアック病を患う患者である。
【０１６２】
特定の実施形態によれば、本発明の患者は、好酸球性食道炎を患う患者である。
【０１６３】
特定の実施形態によれば、本発明の患者は、自己免疫性肝炎を患う患者である。
【０１６４】
別の実施形態によれば、本発明の患者は、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）（例えば菌状息肉腫、セザリー症候群）のようなＴ細胞白血病、顆粒リンパ球のリンパ球増殖性疾患（ＬＤＧＬ）、大顆粒リンパ性白血病および急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、プレＢ細胞白血病、骨肉腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、メラノーマ、小細胞肺癌、腎細胞癌、神経膠芽腫、神経芽細胞腫および中皮腫を患う患者である。
【０１６５】
特定の実施形態によれば、本発明の患者は、大顆粒リンパ性白血病を患う患者である。
【０１６６】
特定の実施形態によれば、本発明の患者は、急性リンパ性白血病を患う患者である。
【０１６７】
別の実施形態によれば、本発明の患者は、移植片拒絶を患う患者である。
【０１６８】
特定の実施形態によれば、本発明の患者は、寄生虫、ウイルスまたは細菌病原体によって引き起こされる感染症を患う患者である。
【０１６９】
特定の実施形態によれば、本発明の患者は、腎症候群を伴うハンタウイルス出血熱および／またはハンタウイルス肺症候群のような、ハンタウイルス（ハンタンウイルス）によって引き起こされる感染症を患う患者である。
【０１７０】
さらに別の実施形態によれば、本発明の患者は、鎌状赤血球症および癌に付随する悪液質を含む、代謝亢進状態を患う患者である。
【０１７１】
さらに別の実施形態によれば、本発明の患者は、中枢神経系の炎症性疾患を患う患者である。
【０１７２】
さらに別の実施形態によれば、本発明の患者は、アルツハイマー病のようなアミロイド関連疾患を患う患者である。
【０１７３】
本発明による使用および方法
ＩＬ−１５に結合する本発明の抗体またはその抗原結合断片、核酸、ベクター、宿主細胞、組成物は、ＩＬ−１５濃度の上昇および／またはＩＬ−１５活性の上昇に付随する、それらによって引き起こされる、またはそれらを伴う疾患の診断、予防または治療のために使用される。
【０１７４】
一つの実施形態によれば、薬剤として使用するための、ＩＬ−１５に対する本発明の抗体またはその抗原結合断片が提供される。
【０１７５】
別の実施形態は、ＩＬ−１５関連疾病または疾患、例えば自己免疫疾患および／または炎症性疾患、特に関節リウマチ、乾癬、難治性セリアック病のようなセリアック病、サルコイドーシス、炎症性腸疾患（例えば潰瘍性大腸炎、クローン病）、Ｃ型肝炎により誘導される肝疾患、多発性硬化症、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、硬化性胆管炎、胆道閉鎖症、円形脱毛症、移植片拒絶応答、中枢神経系の炎症性疾患および好酸球性食道炎の予防および／または治療に使用するための、本発明の抗体またはその断片を提供する。
【０１７６】
別の実施形態は、悪性腫瘍、特に皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）（例えば菌状息肉腫、セザリー症候群）のようなＴ細胞白血病、顆粒リンパ球のリンパ球増殖性疾患（ＬＤＧＬ）、大顆粒リンパ性白血病および急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、プレＢ細胞白血病、骨肉腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、メラノーマ、小細胞肺癌、腎細胞癌、神経膠芽腫、神経芽細胞腫および中皮腫の予防および／または治療に使用するための、本発明の抗体またはその断片を提供する。
【０１７７】
さらに別の実施形態は、移植片拒絶、代謝の状態（例えば代謝亢進状態）および／または寄生虫、ウイルスまたは細菌病原体によって引き起こされる感染症の予防および／または治療に使用するための、本発明の抗体またはその断片を提供する。
【０１７８】
一つの実施形態によれば、ＩＬ−１５関連疾病または疾患、例えば自己免疫疾患および／または炎症性疾患、特に関節リウマチ、乾癬、難治性セリアック病のようなセリアック病、サルコイドーシス、炎症性腸疾患（例えば潰瘍性大腸炎、クローン病）、Ｃ型肝炎により誘導される肝疾患、多発性硬化症、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、硬化性胆管炎、胆道閉鎖症、円形脱毛症、中枢神経系の炎症性疾患および好酸球性食道炎を予防および／または治療する医薬組成物を調製するための、ＩＬ−１５に対する本発明の抗体またはその抗原結合断片の使用が提供される。
【０１７９】
特定の実施形態によれば、セリアック病、特に難治性セリアック病を予防および／または治療する医薬組成物を調製するための、ＩＬ−１５に対する本発明の抗体またはその抗原結合断片の使用が提供される。
【０１８０】
特定の実施形態によれば、好酸球性食道炎を予防および／または治療する医薬組成物を調製するための、ＩＬ−１５に対する本発明の抗体またはその抗原結合断片の使用が提供される。
【０１８１】
特定の実施形態によれば、自己免疫性肝炎を予防および／または治療する医薬組成物を調製するための、ＩＬ−１５に対する本発明の抗体またはその抗原結合断片の使用が提供される。
【０１８２】
一つの実施形態によれば、悪性腫瘍、特にＴ細胞白血病、例えば急性リンパ性白血病、大顆粒リンパ性白血病、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）（例えば菌状息肉腫、セザリー症候群）および顆粒リンパ球のリンパ球増殖性疾患（ＬＤＧＬ）、プレＢ細胞白血病、骨肉腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、メラノーマ、小細胞肺癌、腎細胞癌、神経膠芽腫、神経芽細胞腫および／または中皮腫を、予防および／または治療する医薬組成物を調製するための、ＩＬ−１５に対する本発明の抗体またはその抗原結合断片の使用が提供される。
【０１８３】
別の実施形態によれば、大顆粒リンパ性白血病を予防および／または治療する医薬組成物を調製するための、ＩＬ−１５に対する本発明の抗体またはその抗原結合断片の使用が提供される。
【０１８４】
別の実施形態によれば、急性リンパ性白血病を予防および／または治療する医薬組成物を調製するための、ＩＬ−１５に対する本発明の抗体またはその抗原結合断片の使用が提供される。
【０１８５】
特定の実施形態によれば、移植片拒絶、代謝の状態および／または寄生虫、ウイルスまたは細菌病原体によって引き起こされる感染症を予防および／または治療する医薬組成物を調製するための、ＩＬ−１５に対する本発明の抗体またはその抗原結合断片の使用が提供される。
【０１８６】
特定の実施形態によれば、ハンタウイルス感染症を予防および／または治療する医薬組成物を調製するための、ＩＬ−１５に対する本発明の抗体またはその抗原結合断片の使用が提供される。
【０１８７】
特定の実施形態によれば、中枢神経系の炎症性疾患を予防および／または治療する医薬組成物を調製するための、ＩＬ−１５に対する本発明の抗体またはその抗原結合断片の使用が提供される。
【０１８８】
特定の実施形態によれば、アルツハイマー病を予防および／または治療する医薬組成物を調製するための、ＩＬ−１５に対する本発明の抗体またはその抗原結合断片の使用が提供される。
【０１８９】
別の実施形態によれば、ＩＬ−１５関連疾病または疾患、例えば自己免疫疾患および／または炎症性疾患、特に関節リウマチ、乾癬、セリアック病、特に難治性セリアック病、サルコイドーシス、炎症性腸疾患（例えば潰瘍性大腸炎、クローン病）、Ｃ型肝炎により誘導される肝疾患、多発性硬化症、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、硬化性胆管炎、胆道閉鎖症、円形脱毛症、中枢神経系の炎症性疾患および好酸球性食道炎を予防および／または治療するための方法が提供され、該方法は、ＩＬ−１５に対する本発明の抗体またはその抗原結合断片の治療上有効な量を、必要に応じて被験体に投与することを含む。
【０１９０】
特定の実施形態によれば、セリアック病を予防および／または治療するための方法が提供され、該方法は、ＩＬ−１５に対する本発明の抗体またはその抗原結合断片の治療上有効な量を、必要に応じて被験体に投与することを含む。
【０１９１】
別の実施形態によれば、悪性腫瘍、特にＴ細胞白血病、例えば急性リンパ性白血病、大顆粒リンパ性白血病、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）（例えば菌状息肉腫、セザリー症候群）および顆粒リンパ球のリンパ球増殖性疾患（ＬＤＧＬ）、プレＢ細胞白血病、骨肉腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、メラノーマ、小細胞肺癌、腎細胞癌、神経膠芽腫、神経芽細胞腫および／または中皮腫を、予防および／または治療するための方法が提供され、該方法は、ＩＬ−１５に対する本発明の抗体またはその抗原結合断片の治療上有効な量を、必要に応じて被験体に投与することを含む。
【０１９２】
特定の実施形態によれば、大顆粒リンパ性白血病を予防および／または治療するための方法が提供され、該方法は、ＩＬ−１５に対する本発明の抗体またはその抗原結合断片の治療上有効な量を、必要に応じて被験体に投与することを含む。
【０１９３】
別の実施形態によれば、移植片拒絶、代謝の状態および／または寄生虫、ウイルスまたは細菌病原体によって引き起こされる感染症を予防および／または治療するための方法が提供され、該方法は、ＩＬ−１５に対する本発明の抗体またはその抗原結合断片の治療上有効な量を、必要に応じて被験体に投与することを含む。
【０１９４】
別の実施形態によれば、生体試料中のＩＬ−１５を検出するための方法が提供され、該方法は、被験体由来の生体試料を、ＩＬ−１５に対する本発明の抗体またはその抗原結合断片に接触させることを含む。
【０１９５】
本明細書で用いられる「生体試料」は、被験体、特に自己免疫疾患および／または炎症性疾患、悪性腫瘍、移植片拒絶、代謝性の状態および／または寄生虫、ウイルスまたは細菌病原体によって引き起こされる感染症が疑われるかまたはこれらを患っている被験体、またはこのような疾患にかかるリスクの高い被験体から得た、細胞、組織サンプルまたは細胞成分（例えば細胞膜または細胞成分）を指す。
【０１９６】
生体試料としては、血液、血清、血漿、脳脊髄液、滑液、および前記組織から単離された細胞を含む組織サンプルが挙げられる。組織サンプルには、ホルマリン固定されたかまたは凍結された組織切片が含まれる。
【０１９７】
ＩＬ−１５の検出および分析には、当該技術分野において公知の診断用アッセイ技術、例えば、不均一相または均一相のいずれかによって行われる、競合的結合アッセイ、直接または間接サンドイッチアッセイおよび免疫沈降アッセイのような、いずれかの適切な方法を用いることができる。
【０１９８】
特定の実施形態によれば、本発明は、生体試料中のＩＬ−１５タンパク質の存在および／または濃度を検出するためのｅｘ  ｖｉｖｏ法を提供し、この方法は
（ｉ）被験体由来の生体試料を用意する工程、
（ｉｉ）前記生体試料を、少なくとも１つの本発明の抗体またはその抗原結合断片と、前記生体試料中に存在するＩＬ−１５タンパク質の、前記少なくとも１つの抗体またはその断片への、抗原−抗体相互作用を介した結合に十分な条件下で、反応させる工程、および
（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）において形成された抗原−抗体複合体のレベルに比例したシグナルを検出する工程であって、前記シグナル強度が、生体試料中のＩＬ−１５タンパク質の濃度と相関する工程
を含む。
【０１９９】
さらに詳細には、被験体の生体試料に由来するＩＬ−１５の濃度上昇に付随する、自己免疫疾患および／または炎症性疾患、悪性腫瘍、移植片拒絶、代謝性の状態および／または寄生虫、ウイルスまたは細菌病原体によって引き起こされる感染症を予想または診断するためのｅｘ  ｖｉｖｏ法が提供され、この方法は
（ａ）被験体由来の生体試料を用意する工程、
（ｂ）前記生体試料を、少なくとも１つの本発明の抗体またはその断片が結合した固体基質と接触させる工程であって、接触が、前記生体液体試料中に存在するＩｌ−１５タンパク質の、前記少なくとも１つの抗体またはその断片への、抗原−抗体相互作用を介した結合に十分な条件下で行われる工程、
（ｃ）未結合のＩＬ−１５タンパク質を、前記固体基質の表面から除去する工程、
（ｄ）前記固体基質に結合した抗原−抗体複合体のレベルに比例したシグナルを検出する工程、
（ｅ）工程（ｄ）において検出されたシグナルレベルを、同じ条件下で陰性対照を用いて検出されたシグナルレベルと比較する工程であって、被験体のサンプルにおいて検出されたシグナルレベルが、陰性対照において検出されたシグナルレベルよりも高い場合、自己免疫疾患および／または炎症性疾患、悪性腫瘍、移植片拒絶、代謝の状態および／または寄生虫、ウイルスまたは細菌病原体によって引き起こされる感染症に付随するＩＬ−１５の濃度上昇を示している工程
を含む。
【０２００】
キット
本発明の一態様は、少なくとも１つの本発明の抗体またはその抗原結合断片、および／または少なくとも１つの、前記抗体またはその断片をコードする核酸、および／または少なくとも１つの、前記核酸を含む組換えベクター、および／または少なくとも１つの本発明の宿主細胞、および任意に使用説明書を含むキットに関する。
【０２０１】
特定の実施形態によれば、本発明のキットは、固体基質に結合させるための、または既に結合している、少なくとも１つの本発明の抗体またはその抗原結合断片を含む。
【０２０２】
本発明に適した固体基質としては、免疫アッセイまたは本発明の方法の実行に適したいずれかの固相担体、例えば、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ニトロセルロース、石英、セラミック、デキストランまたはその他の材料から形成されたか、またはそれらによってコートされた、ビーズ、微粒子、ナノ粒子、チューブ、布またはプレート、フィルム、スライド、ウェルが挙げられる。例えば、固体基質は、９６ウェルマイクロタイタープレートのような、マイクロタイターウェルの形態である。
【０２０３】
本発明のキットに含まれる固体基質への、本発明の抗体またはその断片の固定は、固相担体への吸着または化学結合によって行われてよい。タンパク質またはペプチドを固相支持体に固定化するための、当該技術分野において公知のいずれかの手段を用いることができる。本発明の抗体またはその断片は、アミドまたはエステル結合または吸着を通した共有結合のような技術によって、共有結合性または非共有結合性に、固体基質へ結合させることができる。ペプチドは、ビオチンとアビジン、または抗体と抗原のような結合ペアを用いて結合させることができる。ペプチドを固体基質に付着させた後、固体基質は、ブロッキング液（ウシ血清アルブミンのようなブロッキングタンパク質を含んでいる）と共にインキュベートさせて、試験サンプル中の抗体の、担体表面への非特異的吸着を減少させることができる。一態様によれば、本発明の抗体またはその断片は、本発明のキットの固体基質上に直接合成することができる。
【０２０４】
一つの実施形態によれば、該キットが、固相担体としての固体基質へ結合させるための、少なくとも１つの本発明の抗体またはその断片またはそれらの組み合わせを含む場合、該キットはさらに、免疫アッセイを行うためのカップリング試薬および／または固体基質を任意に含んでもよい。
【０２０５】
別のさらなる実施形態によれば、本発明のキットは、検出のバックグラウンドノイズを回避するように、検出前に未結合物質を洗浄するための、少なくとも１つの洗浄試薬をさらに含んでもよい。典型的には、洗浄試薬は、当該技術分野において公知の標準的な緩衝液を含む。
【０２０６】
本明細書に引用される参考文献は、その全体が参照により本明細書に取り込まれる。本明細書に記載した特定の実施形態は本発明の個別の態様に関する単一の例証を意図したものであり、本発明はこれらの実施形態の範囲に限定されるものではなく、機能的に等価な方法および構成要素も本発明の範囲内にある。実際に本明細書の提示および記載に加え、本発明の様々な改変が、前述の記述および添付の図面から当業者には明らかとなるであろう。このような改変は、添付の請求項の範囲内にあることが意図されたものである。
【０２０７】
本発明について記載してきたが、以下の実施例の目的は例示のみであって、本発明を限定するものではない。
【実施例】
【０２０８】
実施例１：本発明による抗ＩＬ−１５抗体の産生および単離
１．マウスＢ−Ｅ２９の産生および配列決定
本発明の抗体は、本明細書で比較抗体１として参照される、Ｂｅｒｎａｒｄ  ｅｔ  ａｌ，２００４，上記、に記載される市販のマウスＢ−Ｅ２９抗体に由来する。簡単に述べると、ヒトＩＬ−１５に特異的なマウスモノクローナル抗体は、本来、Ｅ．ｃｏｌｉによって作られた組換えヒトＩＬ−１５を用いてＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫することによって産生される（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ  ２００−１５）。従来の技術を用い、免疫されたマウスの脾細胞をＸ６．３．ＡＧ．８６５３マウスミエローマ細胞株と融合させてハイブリドーマを産生した。ＥＬＩＳＡ技術を用いて、ハイブリドーマの上清をＩＬ−１５結合抗体の存在についてスクリーニングした後、クローニングのための希釈およびアイソタイプの決定を行った。この手順を用いて、ＩｇＧ１（重鎖）κ（軽鎖）アイソタイプのマウス抗ＩＬ−１５モノクローナル抗体Ｂ−Ｅ２９、およびその他の抗ＩＬ−１５抗体を選択した。しかしながら、組換えＩＬ−１５によって刺激したＫｉｔ２２５Ｔ細胞の増殖の阻害についてアッセイした際、Ｂ−Ｅ２９抗体のみがこの活性を遮断し得たことから、Ｂ−Ｅ２９はＩＬ−１５の生物活性を中和するが、その他の抗ＩＬ−１５抗体は中和しないことが分かった（データ未提示）。
【０２０９】
標準プロトコルを用いて、マウスＢ−Ｅ２９抗体の、重鎖の可変ドメインおよび軽鎖の可変ドメインの配列決定を行った。簡単に述べると、従来のＲＮＡ抽出および精製プロトコルを用いて、Ｂ−Ｅ２９ハイブリドーマ細胞のペレットからメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を抽出した。オリゴ（ｄＴ）プライマーを用いた逆転写によって、ＲＮＡからｃＤＮＡを作製した。モノクローナル抗体ＤＮＡのＶＨおよびＶＬ領域を、ＰＣＲ反応によって増幅した。ＶＨおよびＶＬ産物をＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎの配列決定用ベクターｐＣＲ２．１内にクローン化した後、これによってＴＯＰ１０細胞を形質転換させ、ＰＣＲを用いて陽性の形質転換体をスクリーニングした。選択したコロニーを取り上げ、配列決定によって解析した。マウスＢ−Ｅ２９抗体の重鎖（ＶＨ）の可変ドメインのアミノ酸配列を、配列番号３２として示す。マウスＢ−Ｅ２９抗体のカッパ軽鎖（ＶＬ）の可変ドメインのアミノ酸配列を、配列番号３６として示す。
【０２１０】
２．マウスＢ−Ｅ２９に由来する抗ＩＬ−１５抗体のヒト化
ＩＭＧＴ（免疫グロブリンまたは抗体のための、ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ）およびＫａｂａｔによる抗体の番号付けシステムを用いて、Ｂ−Ｅ２９マウス抗体のフレーム構造およびＣＤＲを同定した。ＢＬＡＳＴサーチアルゴリズムを用いて、ヒトＩｇＧ配列のオンラインデータベースをマウスドメインと比較して検索し、ＢＬＡＳＴの結果の上位１００からヒト可変ドメインフレーム構造を選択した。これらを、フレーム構造の相同性の組み合わせに基づき、重要なフレーム構造残基および標準ループ構造を維持しながら還元した。幾つかのヒト化抗体、キメラ抗体およびコンビナトリアル抗体を構築した。これらのうちのある抗体は、マウスＢ−Ｅ２９抗体（比較抗体１）に比較して、ＩＬ−１５への結合能が保持されているかまたは増大された抗体およびそれらの産生効率が保持されているかまたは増大された抗体を形成するために「最良の」ヒトＶＨおよびＶＬ鎖を選択する目的で、マウスＶＨ領域のＮ末端部位に位置する通常はみられない残基に変異を有した。
【０２１１】
マウスＢ−Ｅ２９の重鎖可変ドメインの、様々なヒト化バリアントおよびキメラバリアントのアミノ酸配列のアラインメントを図１（Ａ）に示す。
【０２１２】
マウスＢ−Ｅ２９の軽鎖可変ドメインの、様々なヒト化バリアントおよびキメラバリアントのアミノ酸配列のアラインメントを図１（Ｂ）に示す。
【０２１３】
上記バリアントそれぞれのＶＨドメインを、配列番号３０のヒトＩｇＧ１アイソタイプの定常ドメイン（アロタイプＧ１ｍ３）配列に対してインフレームとなるように合成した。
【０２１４】
上記バリアントそれぞれのＶＬドメインを、配列番号３１のヒトＩｇＫアイソタイプの定常ドメイン（アロタイプＫｍ３）配列に対してインフレームとなるように合成した。
【０２１５】
抗体を産生するため、重鎖および軽鎖両方のコード配列を、ｐＶＩＴＲＯ−ＤＨＦＲ３ベクター骨格内にクローン化した。プラスミドを、懸濁状態にしたＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣）細胞（ＣＨＯ−Ｓ細胞、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＵＫ）に共トランスフェクションした。７日後に培養上清を回収し、Ａｍｅｒｓｈａｍ  ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓのＡＫＴＡクロマトグラフィーシステムおよびＨｉＴｒａｐプロテインＡカラムを用いて抗体を精製した。
【０２１６】
ｃＶＨ３：ｃＶＫ１およびｃＶＨ４：ｃＶＫ１の組み合わせは、さらに試験するほど十分な抗体産生をもたらさなかった。ＥＬＩＳＡアッセイによれば、ｃＶＨ１：ｃＶＫ１、ｈＶＨ１：ｃＶＫ１、ｃＶＨ１：ｈＶＫ１の組み合わせはヒトＩＬ−１５に対して同様の結合を示し、これらの結合はｈＶＨ１：ｈＶＫ２およびｃＶＨ１：ｈＶＫ２によって観察された結合よりも良好であった（データ未提示）。
【０２１７】
これらの結果により、試験したバリアントのうちのｈＶＨ１およびｈＶＫ１が、効率的に産生できるＩＬ−１５結合抗体を形成するための良い候補であることが実証された。したがって、これらをさらなる最適化のための出発物質として用いた。
【０２１８】
３．ヒト化抗ＩＬ−１５抗体の最適化
最適化は、ｈＶＨ１（本明細書では「ｈｕＶＨ１」とも称される）およびｈＶＫ１（本明細書では「ｈｕＶＬ１」とも称される）のＣＤＲおよび／またはフレーム構造内にある、抗体の化学的不安定性または凝集をもたらす幾つかのアミノ酸またはアミノ酸モチーフを変更すること、およびマウスＢ−Ｅ２９抗体（比較抗体１）に比較して、産生効率を保持させるかまたは増大させることによって為されるものである。この戦略によって、上の表１に示すＶＨ／ＶＬ領域を含むｈｕＶＨ１／ｈｕＶＬ１抗体のバリアントの産生が可能になった。
【０２１９】
表１に示すバリアントそれぞれのＶＨドメインを、配列番号３０のヒトＩｇＧ１アイソタイプの定常ドメイン（アロタイプＧ１ｍ３）配列に対してインフレームとなるように合成した。
【０２２０】
表１に示すバリアントそれぞれのＶＬドメインを、配列番号３１のヒトＩｇＫアイソタイプの定常ドメイン（アロタイプＫｍ３）配列に対してインフレームとなるように合成した。
【０２２１】
一過性のＣＨＯシステムによって組換え抗体を産生させ、培養上清として、またはプロテインＡ  ＦＰＬＣカラムを通して精製した後に、さらなる試験を行った。
【０２２２】
実施例２：本発明の様々な抗ＩＬ−１５抗体の、ＩＬ−１５に対する結合効力
本発明の抗体の幾つかを、プレートに結合させた組換えヒトまたはサルＩＬ−１５への結合能について、ＥＬＩＳＡアッセイにより試験した。先行技術による完全ヒト抗体（ＷＯ０３／０１７９３５に記載される１４６Ｂ７、本明細書では比較抗体２と称する）を同じ発現系によって産生し、精製した後に対照として使用した。
【０２２３】
Ｍａｘｉｓｏｒｐプレートを、カーボネートコーティング緩衝液中の組換えヒトＩＬ−１５（Ｐｒｏｓｐｅｃカタログ番号ＣＹＴ２３０）またはアカゲザルＩＬ−１５（ＭｙＢｉｏｓｏｕｒｃｅカタログ番号ＭＢＳ９４８８９４）１００ｎｇ／ウェルによって、２時間３７℃にてコートした。アカゲザルおよびカニクイザルＩＬ−１５の公表されている配列は同一であるため、これらの組換えＩＬ−１５タンパク質をマカクザルＩＬ−１５と称した。試験したヒトＩＬ−１５組換えタンパク質の配列は配列番号１の配列と同一であるが、Ｅ．Ｃｏｌｉ内での組換えタンパク質発現のために通常為されるように、Ｎ末端の位置に追加のメチオニンを有する。試験した組換えマカクザルＩＬ−１５は酵母によって産生されたものであるため、その配列は配列番号４の配列と同一であるが、Ｎ末端に追加のＨｉｓタグを有する。
【０２２４】
次に、プレートを２％正常ヤギ血清によって３０分間３７℃にてブロッキングした後、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（ＰＢＳ中の０．０５ｖ／ｖ％  Ｔｗｅｅｎ−２０）を用いて６回洗浄した。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎを用いて様々に希釈した試験抗体を、プレートへ三重に加え、このプレートを穏やかに振盪しながら室温にて２時間インキュベートした。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎを用いてプレートを６回洗浄した後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を結合させたヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅカタログ番号ＡＰ３０９Ｐ）を適切に希釈して加え、プレートを室温にて１時間振盪させた。次に、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎを用いてプレートを６回洗浄した後、ＴＭＢ基質と共にインキュベートした。１Ｍ  Ｈ２ＳＯ４を加えて反応を停止させ、４５０ｎｍにて読み取りを行った。吸光度対濃度の用量反応曲線をプロットし、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いた解析によって、最大半量の結合濃度（ＢＣ５０）を決定した。すべての抗体に対して１５０ｋＤａの分子量の値を用い、ｎｇ／ｍｌの濃度から、モル濃度で表したＢＣ５０値を推定した。
【０２２５】
Ｂ−Ｅ２９の幾つかのヒト化バリアントおよび対照として用いた完全ヒト１４６Ｂ７抗体から得た、代表的なＢＣ５０値を表２に示す。
【０２２６】
【表２】
0006563012.tif 000003
【０２２７】
表２に示すように、本発明の抗体バリアントの幾つかの結合活性は同程度であったが、その他はヒトＩＬ−１５に対してより良い結合を示した（例えばｈｕＢ−Ｅ２９−１０およびｈｕＢ−Ｅ２９−２４）。図２Ａによれば、代表的なヒト化Ｂ−Ｅ２９バリアント（ｈｕＢ−Ｅ２９−１）は、ヒトＩＬ−１５に対する１４６Ｂ７抗体よりも強い結合力だけでなく、ＩＬ−１５への結合効率の改善を示唆する、より高い最大シグナルを示している。このヒトＩＬ−１５への改善された結合能は、実施例３と表３にてさらに確認される。
【０２２８】
マカクザルＩＬ−１５への結合試験では、ヒトＩＬ−１５に結合する本発明のすべての抗体バリアントは、わずかに高い結合力で、マカクザルＩＬ−１５にも結合した。
【０２２９】
実施例３：本発明の幾つかの抗ＩＬ−１５抗体の、ヒトＩＬ−１５に対する結合動態および親和性
本発明の３つのヒト化Ｂ−Ｅ２９抗体バリアントの、組換えヒトＩＬ−１５に対する会合速度（ｋａ）、解離速度（ｋｄ）および平衡解離定数（ＫＤ）を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定した。
【０２３０】
標準的なアミン結合を用いて、ＣＭ５チップ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上にヒトＩＬ−１５（Ｐｒｏｓｐｅｃカタログ番号ＣＹＴ２３０）を固定化させた後、１２０μｌのリン酸緩衝生理食塩水中の様々な濃度の抗体を、４０μｌ／ｍｌの流速にて注入した。Ｂｉａｃｏｒｅ  ３０００装置（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用い、３００秒の解離時間によって結合動態を解析した。参照シグナルおよび０ｎＭ抗体濃度シグナルを差し引いた後、１：１（ラングミュア）結合モデルを用いてデータをフィッティングさせた。
【０２３１】
【表３】
0006563012.tif 000004
【０２３２】
比較した全てのヒト化Ｂ−Ｅ２９抗体のオンレート（ｋａ、会合速度）は同様であったが、ｈｕＢ−Ｅ２９−２のオフレート（ｋｄ、解離速度）は比較的遅かったため、平衡解離定数ＫＤは低くなった（表３）。１４６Ｂ７抗体のＫＤも低く、報告と同様であった（Ｖｉｌｌａｄｓｅｎ，ｅｔ  ａｌ，２００３，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１２：１５７１−１５８０）。しかしながら、ヒトＩＬ−１５によってコートされたチップにおける１４６Ｂ７の会合によって得られた最大（Ｒｍａｘ）シグナルは、３つのヒト化Ｂ−Ｅ２９抗体バリアントにみられたものよりも、はるかに低かった。この結果は、実施例２のＥＬＩＳＡによって観察されたものと同様であり、これら３つのヒト化Ｂ−Ｅ２９抗体バリアントのヒトＩＬ−１５に対する結合能は、１４６Ｂ７抗体に比較して改善されていることが示唆される。
【０２３３】
実施例４：本発明の幾つかの抗ＩＬ−１５抗体の種特異性
プレートに結合させた組換えマウスまたはラットＩＬ−１５への本発明の抗体の結合能を、ＥＬＩＳＡアッセイによって試験した。
【０２３４】
Ｍａｘｉｓｏｒｐプレートを、カーボネートコーティング緩衝液中の組換えマウスＩＬ−１５（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号４４７−ＭＬ）またはラットＩＬ−１５（Ｓｉｇｍａカタログ番号ＳＲＰ４１７２）１００ｎｇ／ウェルによって、２時間３７℃にてコートした。試験したＩＬ−１５組換えタンパク質の配列は配列番号２（マウスＩＬ−１５）および配列番号３（ラットＩＬ−１５）の配列と同一であるが、Ｅ．Ｃｏｌｉ内での組換えタンパク質発現のために通常為されるように、Ｎ末端の位置に追加のメチオニンを有する。
【０２３５】
次に、プレートを２％正常ヤギ血清によって３０分間３７℃にてブロッキングした後、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（ＰＢＳ中の０．０５ｖ／ｖ％  Ｔｗｅｅｎ−２０）を用いて６回洗浄した。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎを用いて様々に希釈した試験抗体を、プレートへ三重に加え、このプレートを穏やかに振盪しながら室温にて２時間インキュベートした。陽性対照として、ウサギ抗マウスＩＬ−１５（Ａｃｒｉｓカタログ番号ＡＰ０１１２４ＰＵ−Ｓ）またはウサギ抗ラットＩＬ−１５（Ｂｉｏｖｉｓｉｏｎカタログ番号５１７２）抗体を、同じ濃度にて試験した。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎを用いてプレートを６回洗浄した後、ＨＲＰを結合させたヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅカタログ番号ＡＰ３０９Ｐ）をヒト化抗体に対して、またはヤギ抗ウサギＩｇＧ抗体（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ａ４４１６）を陽性対照に対して適切に希釈して加え、プレートを室温にて１時間振盪させた。次に、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎを用いてプレートを６回洗浄した後、ＴＭＢ基質と共にインキュベートした。１Ｍ  Ｈ２ＳＯ４を加えて反応を停止させ、４５０ｎｍにて読み取りを行った。Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて、吸光度対濃度の用量反応曲線をプロットした。
【０２３６】
図２Ｂおよび図２Ｃに示すように、試験したＢ−Ｅ２９のヒト化バリアントのいずれも、マウスまたはラットＩＬ−１５に対して、試験した濃度では有意な結合を示さなかったが、陽性対照では良好な結合が観察された。
【０２３７】
実施例５：本発明の幾つかの抗ＩＬ−１５抗体の選択性
ＩＬ−２は配列相同性によってＩＬ−１５に近いサイトカインであり、ＩＬ−２とＩＬ−１５とは、２つの共通の受容体鎖（ＩＬ−２／ＩＬ−１５Ｒβ鎖およびコモンγｃ鎖）を共有することから、本発明の抗ＩＬ−１５抗体のＩＬ−２への結合をＥＬＩＳＡによって評価した。
【０２３８】
Ｍａｘｉｓｏｒｐプレートを、カーボネートコーティング緩衝液中の、配列番号３８の組換えヒトＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号２０２−ＩＬ−０１０）１００ｎｇ／ウェルによって、２時間３７℃にてコートした。次に、プレートを２％正常ヤギ血清によって３０分間３７℃にてブロッキングした後、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（ＰＢＳ中の０．０５ｖ／ｖ％  Ｔｗｅｅｎ−２０）を用いて４回洗浄した。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ中の５μｇ／ｍｌの試験抗体または陽性対照ビオチン化抗体（抗ＩＬ−２  Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏカタログ番号ＮＢＰ１−４３４９１）を、プレートへ二重に加え、このプレートを穏やかに振盪しながら室温にて２時間インキュベートした。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎを用いてプレートを４回洗浄した後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を結合させたヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅカタログ番号ＡＰ３０９Ｐ）を試験抗体に対して、またはストレプトアビジン−ＨＲＰを陽性対照抗体に対して適切に希釈して加え、プレートを室温にて１時間振盪させた。次に、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎを用いてプレートを４回洗浄した後、ＴＭＢ（３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン）基質と共にインキュベートした。１Ｍ  Ｈ２ＳＯ４を加えて反応を停止させ、４５０ｎｍにて読み取りを行った。
【０２３９】
図３に示すように、試験した本発明の抗ＩＬ−１５抗体のいずれも、試験した５μｇ／ｍｌの濃度ではヒトＩＬ−２に結合しなかったが、陽性対照抗体は強い結合を示した。
【０２４０】
実施例６：可溶性ＩＬ−１５により誘導される細胞株の増殖／生存に対する、本発明の幾つかの抗ＩＬ−１５抗体による阻害
ＩＬ−１５により誘導されるＫｉｔ２２５またはＭ−０７ｅ細胞の増殖／生存に対する、本発明の抗体の阻害能について試験した（Ｆｉｎｃｈ  ｅｔ  ａｌ，２０１１，上記）。
【０２４１】
Ｋｉｔ２２５細胞株は、Ｔ細胞慢性リンパ性白血病の患者から樹立された（Ｈｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｂｌｏｏｄ，７０：１０６９−１０７２）。Ｋｉｔ２２５細胞は、ＩＬ−１５受容体の３つの鎖（ＩＬ−１５Ｒα、ＩＬ−１５ＲβおよびＩＬ−１５Ｒγ）を発現する（Ｍｏｒｔｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８１：１６１２−１６１９）。Ｍ−０７ｅ細胞株は、急性巨核芽球性白血病の６か月女児の末梢血から樹立された（Ｂｒｉｚｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｂｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ．，７６：２０３−２３９）。Ｍ−０７ｅ細胞は、ＩＬ−１５受容体のＩＬ−１５ＲβおよびＩＬ−１５Ｒγ鎖のみを発現する（Ｍｅａｚｚａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，７８：１８９−９５）。
【０２４２】
Ｋｉｔ２２５細胞（Ｈｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｂｌｏｏｄ，７０（４）：１０６９−１０７２）およびＭ−０７ｅ細胞（Ｌｅｉｂｎｉｚ−Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ＤＳＭＺ）は、１０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ、１００ＩＵ／ｍｌ  ペニシリン、１００μｇ／ｍｌ  ストレプトマイシン、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１ｍＭ  ピルビン酸ナトリウム、１０％熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、ＰＡＡ）および２００Ｕ／ｍｌ  配列番号３８のヒトＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号２０２−ＩＬ）を加えたＲＰＭＩ  １６４０培地中で増殖かつ維持した。実験の１日前に、ＩＬ−２を含まない同じ培地中で、細胞を２４時間スターブさせた。その後、９６ウェルプレートに、様々に希釈した試験抗体および最終濃度１ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＩＬ−１５（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号２４７−ＩＬ）または組換えサルＩＬ−１５（Ｍｙ  Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅカタログ番号ＭＢＳ９４８８９４）の存在下で、１ウェルあたり５×１０４細胞を三重に加え、１ウェルあたりの全量が１００μｌになるように培地を加えた。上に述べたように、アカゲザルおよびカニクイザルＩＬ−１５の公表されている配列は同一であるため、これらの組換えＩＬ−１５タンパク質をマカクザルＩＬ−１５と称した。
【０２４３】
細胞培養は、５％ＣＯ２下で３７℃にて４８時間維持した後、各ウェルに１００μｌのＴｉｔｅｒｇｌｏ溶液（ＡＴＰの消費を測定する。Ｐｒｏｍｅｇａ）を分注して、激しくピペッティングすることにより内容を混合した。プレートを室温にて１５〜２０分インキュベートした後、生細胞の測定として、プレートリーダーを用いて発光シグナルを読み取った。Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて、抗体濃度に対して補正した値をプロットし、対数による阻害物質対応答を用いて半数阻害濃度（ＩＣ５０）を決定した（３パラメータ）。すべての抗体に対して１５０ｋＤａの分子量の値を用い、ｎｇ／ｍｌの濃度から、モル濃度で表したＩＣ５０値を推定した。
【０２４４】
【表４】
0006563012.tif 000005
【０２４５】
表４に示すように、試験した３つのヒト化Ｂ−Ｅ２９抗体バリアントおよび１４６Ｂ７は、ＩＬ−１５により誘導されるＭ−０７ｅおよびＫｉｔ２２５細胞の増殖／生存を阻害可能であった。ヒト化ｈｕＢ−Ｅ２９−２は、Ｍ−０７ｅ細胞およびＫｉｔ２２５細胞において、試験したその他の全ての抗体よりも優れた効力を示した。
【０２４６】
実施例７：トランスＩＬ−１５により誘導される細胞株の増殖／生存に対する、本発明の幾つかの抗ＩＬ−１５抗体による阻害
プラスチックに固定化されたＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃコンストラクトに結合した後に提示されたＩＬ−１５としての、ヒトＩＬ−１５により誘導されるＭ−０７ｅ細胞（ＩＬ−１５Ｒβγのみを発現する）の増殖／生存に対する阻害能について、本発明の抗体の幾つかを試験した。この実験の設定は、文献に記載されており、ＩＬ−１５の生物学に重要であると考えられる（Ｓｔｏｎｉｅｒ，ｅｔ  ａｌ，２０１０，上記）、ＩＬ−１５のトランス提示を模倣している。
【０２４７】
９６ウェルプレートのウェルを、１００μｌ  ＰＢＳ中の１μｇ  組換えヒトＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃキメラ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号７１９４−ＩＲ−０５０）によって、２時間３７℃にてコートした。ウェルの内容を吸引した後、培地と称する、Ｈｅｐｅｓ１０ｍＭ、ペニシリン１００ＩＵ／ｍｌ、ストレプトマイシン１００μｇ／ｍｌ、Ｌ−グルタミン２ｍＭ、ピルビン酸ナトリウム１ｍＭ、１０％熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、ＰＡＡ）を加えたＲＰＭＩ  １６４０培地を、１ウェルあたり１５０μｌ加え、プレートを３０分間３７℃にてインキュベートした。ウェルの内容を吸引した後、３００ｎｇ／ｍｌヒトＩＬ−１５（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）溶液の１００μｌを加え、プレートを１時間３７℃にてインキュベートした。ウェルの内容を吸引した後、２００μｌの培地を用いて未結合のＩＬ−１５を２回洗浄した。様々な濃度の試験抗体を各ウェルに三重に加えた後、５×１０４のＭ−０７ｅ細胞（サイトカインを含まない培地中に一晩置いたもの）を加えた。この系では、ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃの非存在下でＩＬ−１５が増殖／生存を誘導しなかったこと、およびＩＬ−１５の非存在下でＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃが増殖／生存を誘導しなかったことを確認するため、対照ウェルを適切に設定した。
【０２４８】
細胞培養は、５％ＣＯ２下で３７℃にて４８時間維持した後、各ウェルに１００μｌのＴｉｔｅｒｇｌｏ溶液（ＡＴＰの消費を測定する。Ｐｒｏｍｅｇａ）を分注して、激しくピペッティングすることにより内容を混合した。プレートを室温にて１５〜２０分インキュベートした後、生細胞の測定として、プレートリーダーを用いて発光シグナルを読み取った。Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて、抗体濃度に対して補正した値をプロットし、対数による阻害物質対応答を用いて半数阻害濃度（ＩＣ５０）を決定した（３パラメータ）。すべての抗体に対して１５０ｋＤａの分子量の値を用い、ｎｇ／ｍｌの濃度から、モル濃度で表したＩＣ５０値を推定した。
【０２４９】
【表５】
0006563012.tif 000006
【０２５０】
表５に示すように、試験したヒト化Ｂ−Ｅ２９抗体バリアントは全て、Ｍ−０７ｅ細胞へのヒトＩＬ−１５のトランス提示を同様の効力によって阻害した。
【０２５１】
実施例８：本発明の幾つかの抗ＩＬ−１５抗体は、ヒトＩＬ−１５のＩＬ−１５Ｒαへの結合に対して干渉しない
Ｆｉｎｃｈら（Ｆｉｎｃｈ  ｅｔ  ａｌ，２０１１，上記）によって記載された方法に従って、プレート結合ＩＬ−１５−Ｒα−Ｆｃ組換えコンストラクト（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）へのビオチン化ヒトＩＬ−１５の結合に対する、本発明の抗体の阻害能について試験した。
【０２５２】
濃度が６００ｐＭの、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中のインターロイキン−１５Ｒα−Ｆｃを、４℃１６時間のインキュベーションによって、ＭａｘｉＳｏｒｐ  ９６ウェルプレートにコートした。ウェルをＰＢＳによって洗浄した後、３％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むＰＢＳによって２時間ブロッキングを行い、再びＰＢＳによって洗浄した。抗体および対照（ＩＬ−１５のＩＬ−１５Ｒαへの結合を遮断することが知られている抗体、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号ＮＦ１５０、を含む）を０．１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡを含むＰＢＳによって希釈した後、ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃがコートされたアッセイウェルに加えた。最終濃度が１００ｐＭのビオチン化ヒトＩＬ−１５（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号ＮＦ１５０）を加え、アッセイプレートを１時間インキュベートした。０．１％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ  ２０を含むＰＢＳを用いてプレートを３回洗浄した後、適切に希釈したストレプトアビジン−ペルオキシダーゼを加えた。３０分間のインキュベーション後、０．１％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ  ２０を含むＰＢＳを用いてプレートを７回洗浄し、ペルオキシダーゼ基質を加えた。完了した反応を、Ｈ２ＳＯ４を加えて停止させ、４５０ｎｍの発光波長にて吸光度を測定した。
【０２５３】
図４に示すように、陽性対照抗体は、ビオチン化ヒトＩＬ−１５のＩＬ−１５−Ｒα−への結合を用量依存性に阻害できたが、抗ＩＬ−１５抗体ｈｕＢ−Ｅ２９−２、ｈｕＢ−Ｅ２９−１０およびｈｕＢ−Ｅ２９−２４は、１５０μｇ／ｍｌの最高試験用量に至っても阻害できなかった。対照的に、Ｂｅｒｎａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，上記、の観察によれば、モノクローナルマウス抗ＩＬ−１５抗体Ｂ−Ｅ２９（比較抗体１）は、ＩＬ−１５のＩＬ−１５Ｒαへの結合を阻止する。
【０２５４】
実施例９：Ｉｎ  ｖｉｖｏにおける、本発明の幾つかの抗ＩＬ−１５抗体によるヒトＩＬ−１５の中和
実施例４に示すように、本発明の抗ＩＬ−１５抗体はマウスＩＬ−１５を認識しないが、マウス細胞はヒトＩＬ−１５に反応するため、これらの抗体によるｉｎ  ｖｉｖｏでのＩＬ−１５の機能阻害を試験することができる。マウスに注射したインターロイキン−１５は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のような様々なリンパ球サブセットの脾臓における増殖および蓄積を誘導できる。しかしながら、おそらくその半減期が非常に短いため、ＩＬ−１５単独では活性が低く、ｉｎ  ｖｉｖｏではＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒαとの安定な複合体がさらに効率的である。
【０２５５】
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ複合体によって誘導された、Ｃ５７ＢＬ／６雄マウスの脾臓におけるＮＫ細胞の蓄積（Ｆｉｎｃｈ  ｅｔ  ａｌ，２０１１，上記）に対する、本発明の代表的な抗体の阻害能について試験した。５匹のマウスの群に、１μｇ  ヒトＩＬ−１５（Ｐｒｏｓｐｅｃ）および３．６μｇ  ヒトＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）の混合物を３日間連続して注射し、実験の１日目および２日目に、それぞれ１００μｇおよび６２μｇの、試験抗体および対照抗体を注射した。最後の注射の１日後に、脾臓を採取し、脾細胞の計数およびフローサイトメトリーによるＮＫ細胞の解析を行って、ＣＤ４５＋ＮＫ１．１＋ＣＤ３−細胞を決定した。
【０２５６】
図５に示すように、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ複合体の注射によってマウス脾臓には多数のＮＫ細胞の蓄積が誘導され、この蓄積は、本発明の代表的なｈｕＢ−Ｅ２９−２、ｈｕＢ−Ｅ２９−１０およびｈｕＢ−Ｅ２９−２４抗体を用いた処置によって完全に阻害可能であったが、対照のヒトＩｇＧ１アイソタイプ抗体によっては阻害できなかった。
【０２５７】
実施例１０：本発明の抗ＩＬ−１５抗体のエピトープマッピング
本発明の抗ＩＬ−１５抗体のエピトープマッピングを、直鎖を表すように設計された、構築ペプチドのライブラリーへの前記抗体の結合のみではなく、足場上の化学的結合ペプチド（ＣＬＩＰＳ）技術（Ｐｅｐｓｃａｎ  Ｐｒｅｓｔｏ  Ｂｖ，Ｌｅｌｙｓｔａｄ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を用いた、ＩＬ−１５の非連続エピトープのライブラリーへの結合も解析することによって行った。ＣＬＩＰＳ技術（Ｔｉｍｍｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．，２０，２８３−９９）により、ペプチドをシングルループ、ダブルループ、トリプルループ、シート様フォールド、ヘリックス様フォールド、およびそれらの組み合わせに構築することが可能になる。構築されたペプチドは、アレイ上に固定化される。各合成ペプチドへの抗体の結合を、ＰＥＰＳＣＡＮベースのアレイＥＬＩＳＡによって試験した。各ペプチドに対するシグナルを、電荷結合素子カメラを用いて測定し、定量化し、全てのアレイの結果を処理して、どのペプチドが最も良く認識されるかを決定した。ペプチド内のアミノ酸の置換によって、さらに決定的な結合残基の決定が可能になる。
【０２５８】
この技術を用いることで、本発明の抗体ｈｕＢ−Ｅ２９−２、ｈｕＢ−Ｅ２９−１０およびｈｕＢ−Ｅ２９−２４は全て、配列６１ＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮ７２（配列番号４３）のペプチド伸展を含む直鎖および拘束ペプチドへ優先的に結合することが見出された。この観察は、比較抗体１であるＢ−Ｅ２９についての報告（Ｂｅｒｎａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，上記）と同様である。単一のアミノ酸置換を用いることで、本発明の抗体ｈｕＢ−Ｅ２９−２、ｈｕＢ−Ｅ２９−１０およびｈｕＢ−Ｅ２９−２４抗体のＩＬ−１５への結合に最も重要な残基は、Ｄ６１、Ｅ６４、Ｉ６８およびＮ７１であることが見出された。
【０２５９】
比較抗体１は、それぞれ配列番号３９および配列番号４０に示される、ＶＬおよびＶＨによって特徴付けられる。Ｂｅｒｎａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，上記、によれば、Ｂ−Ｅ２９は、本発明の抗体ｈｕＢ−Ｅ２９−２、ｈｕＢ−Ｅ２９−１０およびｈｕＢ−Ｅ２９−２４の結合に重要であることは見出されなかったＬ６６およびＩ６７残基を介した、ＩＬ−１５のＩＬ−１５Ｒαへの結合に影響を与える。一方で、なおＢｅｒｎａｒｄらによれば、残基Ｅ６４、Ｎ６５およびＩ６８は、ＩＬ−１５のＩＬ−１５Ｒβへの結合の、Ｂ−Ｅ２９による阻止に重要であり、これら３つの残基のうちの２つ、Ｅ６４およびＩ６８は、ｈｕＢ−Ｅ２９−２、ｈｕＢ−Ｅ２９−１０およびｈｕＢ−Ｅ２９−２４抗体のＩＬ−１５への結合に決定的であることが見出された。ＩＬ−１５のＩＬ−１５Ｒβ鎖への結合の阻止は、ＩＬ−１５のシグナル伝達を遮断するために重要である。したがって、ｈｕＢ−Ｅ２９−２、ｈｕＢ−Ｅ２９−１０およびｈｕＢ−Ｅ２９−２４抗体は、元のＢ−Ｅ２９抗体と重複したエピトープを共有するが、構造的な違いが、本出願で示すように（実施例８）、ＩＬ−１５を介したシグナル伝達に対する遮断能は保持されているものの、ＩＬ−１５のＩＬ−１５Ｒαへの結合に対する阻止能が失われるという、作用機序の違いを説明し得る。
【０２６０】
また、本発明の抗体ｈｕＢ−Ｅ２９−１０およびｈｕＢ−Ｅ２９−２４は、配列番号４３のペプチド伸展内の置換に対して、ｈｕＢ−Ｅ２９−２抗体よりも寛容性が低いことが示されたが、このことはシグナルが失われる頻度がさらに高いことを意味しており、本出願に示すように（実施例３）、これらの抗体のＩＬ−１５への親和性の低さに関連する可能性がある。
【０２６１】
最後に、比較抗体２である１４６Ｂ７は、試験したペプチドアレイのいずれにもバックグラウンドを超えた結合を示さなかったことから、おそらくＩＬ−１５の複合体／非連続エピトープを認識するものである（Ｖｉｌｌａｄｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１１２：１５７１−１５８０）。アミノ酸の変異原性より、ＩＬ−１５の残基Ｄ８およびＱ１０８は、１４６Ｂ７の結合に重要であることが分かったが、この抗体によって認識されるエピトープについてさらに詳しくは分かっていない。現在の実施例に提示されるデータはこの知見に一致していることから、１４６Ｂ７の非直鎖エピトープは、本発明の抗体ｈｕＢ−Ｅ２９−２、ｈｕＢ−Ｅ２９−１０およびｈｕＢ−Ｅ２９−２４によって認識されるものとは明らかに異なっていることが示唆される。
【０２６２】
ＤＩＳＣ０２８０抗ＩＬ−１５抗体（比較抗体３）によって認識されるエピトープは、結晶学によって決定された（Ｌｏｗｅ  ｅｔ  ａｌ，２０１０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４０６，ｐ．１６０−１７５）。ＤＩＳＣ０２８０抗体は、それぞれが配列番号４１および配列番号４２に示される、ＶＬ  ＣＤＲ３およびＶＨ  ＣＤＲ３によって特徴付けられる。比較抗体Ｂ−Ｅ２９およびＤＩＳＣ０２８０が、ＩＬ−１５への結合に対して競合するという事実から予測されるように（Ｆｉｎｃｈ  ｅｔ  ａｌ，２０１０，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．，４０６（１），ｐ．１６０−１７５）、同様の残基、すなわちＥ６４およびＮ７１が、ＤＩＳＣ０２８０エピトープと本発明のｈｕＢ−Ｅ２９−２、ｈｕＢ−Ｅ２９−１０およびｈｕＢ−Ｅ２９−２４抗体によって認識されるエピトープの間にも見出された。しかしながら、その他の水素結合が、ＤＩＳＣ０２８０とＩＬ−１５残基であるＫ４１、Ｅ４６、Ｑ４８、Ｌ５２、Ｅ５３およびＥ８９について示された。したがって、ＤＩＳＣ０２８０と本発明の抗体ｈｕＢ−Ｅ２９−２、ｈｕＢ−Ｅ２９−１０およびｈｕＢ−Ｅ２９−２４とは、重複しているが異なるエピトープを有する。加えて、ｈｕＢ−Ｅ２９−２、ｈｕＢ−Ｅ２９−１０およびｈｕＢ−Ｅ２９−２４のＩＬ−１５への結合に最も重要であることが見出された２つの残基は、ＤＩＳＣ０２８０エピトープであるＤ６１およびＩ６８の一部ではない。
【０２６３】
実施例１１：難治性セリアック病患者由来の細胞株における、本発明の抗ＩＬ−１５抗体の効果
組換えヒトＩＬ−１５によって誘導される、ＩＩ型難治性セリアック病（ＲＣＤ）患者の初代上皮内リンパ球（ＩＥＬ）細胞株のアポトーシスおよび活性化の防止における、本発明の抗体ｈｕＢ−Ｅ２９−２および比較抗体１４６Ｂ７の効果を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにて評価した。アネキシンＶおよびヨウ化プロピジウム（ＰＩ）によって細胞を染色し、フローサイトメトリーを用いて測定することによって、アポトーシス細胞のパーセンテージを解析した。リン酸化ＳＴＡＴ５タンパク質（ｐＳＴＡＴ５）の発現もまたフローサイトメトリー技術を用いて観察し、ＩＬ−１５による初代ＩＥＬ細胞株の活性化および抗ＩＬ−１５抗体によるその阻害を測定した。
【０２６４】
本発明のヒト化抗ＩＬ−１５抗体ｈｕＢ−Ｅ２９−２は、３名の異なる患者由来のＩＩ型ＲＣＤ初代ＩＥＬ細胞株においてＩＬ−１５により誘導されるアポトーシスの防止を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにて強く阻害し（図６）、試験した３つの細胞株のうちの１つ（ＨＡＭ＿ＲＡＣ）について算出した半数阻害濃度（ＩＣ５０）は２．３６ｎＭであった。この抗体はまた、試験した全てのＩＩ型ＲＣＤ患者初代ＩＥＬ細胞株において、ＨＡＭ＿ＲＡＣ細胞株において８０％のアポトーシス阻害を得るように算出された濃度で用いた際、ＩＬ−１５により誘導されるＳＴＡＴ５のリン酸化も阻害した。最後に、この同じ濃度にて、ｈｕＢ−Ｅ２９−２は、ＩＩ型ＲＣＤ患者初代ＩＥＬ細胞株においてＩＬ−１５により誘導されるアポトーシスの防止およびＳＴＡＴ５のリン酸化の阻害に対して、完全ヒト抗ＩＬ−１５抗体１４６Ｂ７よりもさらに効率的であった（図６）。
【０２６５】
実施例１２：難治性セリアック病のモデルであるヒトＩＬ−１５のトランスジェニックマウスにおける、本発明の抗ＩＬ−１５抗体の効果
腸細胞特異的プロモーターであるＴ３ｂ（ＩＬ−１５ＴｇＥ  ｍｉｃｅ；Ｏｈｔａ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９（１），４６０−４６８）の制御下で、ヒトＩＬ−１５を過剰発現するトランスジェニックマウスは、上皮内リンパ球（ＩＥＬ）を異常かつ大量に蓄積させる。このモデルは、ヒト難治性セリアック病の幾つかの特色を再現するものであると想定されている（Ｍａｌａｍｕｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，上記）。本明細書に記載する１４６Ｂ７抗体と同一の配列を有し、以前にはＨｕＭａｘＩＬ−１５として同定されていた（Ｖｉｌｌａｄｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ，１１２（１０）：１５７１−８０；Ｌｅｂｒｅｃ  ｅｔ  ａｌ，２０１３，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９１（１１）：５５５１−８）、ＩＬ−１５に対する抗体ＡＭＧ７１４をこれらのマウスに投与した際、ＩＥＬのアポトーシスを促進することによって、ＩＥＬの蓄積を逆転させることができる（Ｍａｌａｍｕｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，上記）。
【０２６６】
本発明の抗ＩＬ−１５抗体ｈｕＢ−Ｅ２９−２または対照アイソタイプ抗体ＩｇＧ１を、Ｔ３ｂ−ｈＩＬ−１５トランスジェニックマウスの群に、１００μｇの用量で１週間に２回腹腔内投与した。２週間の処置後、ＣＤ３＋ＣＤ８＋  ＩＥＬを計数し、標準的なフローサイトメトリー技術を用いて解析した（Ｍａｌａｍｕｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，上記）。ｈｕＢ−Ｅ２９−２による処置では、対照抗体に比較して、ＣＤ３＋ＣＤ８＋  ＩＥＬの統計学的に有意な減少が観察された（図７）。
【０２６７】
実施例１３：アレルゲンにより誘導された好酸球性食道炎のモデルにおける、抗ＩＬ−１５抗体の効果
ＩＬ−１５受容体のＩＬ−１５Ｒα鎖を遺伝的に欠損したマウスは、アスペルギルス・フミガーツスの鼻孔滴下に続く好酸球性食道炎に対して抵抗性であった（Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ，２０１０，上記）。クローンＡＩＯ．３（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）のような、マウスＩＬ−１５に結合して中和する抗体を、アスペルギルス・フミガーツスに曝露されたマウスに投与して、好酸球性食道炎の治療に対する抗ＩＬ−１５抗体の活性を試験した。試験日の０、２、４、７、９、１１、１４、１６および１８日目に、マウスの群にアスペルギルス・フミガーツスの調製物を経鼻投与した。様々な時点で、適切な用量の抗マウスＩＬ−１５中和抗体または対照アイソタイプ抗体によって動物を処置した。陽性対照として、マウスをデキサメタゾンによって処置した。試験日の１９日目に、各マウスの食道を処理し、染色した後、顕微鏡を通して好酸球性の浸潤物を測定した。加えて、気管支肺胞洗浄を行い、気道内の炎症性細胞の浸潤を測定した。
【０２６８】
実施例１４：非ヒト霊長類における循環ＮＫ細胞数に対する、本発明の抗ＩＬ−１５抗体の効果
抗ＩＬ−１５抗体をカニクイザルに投与すると、２週間以内に循環ＮＫ細胞数が減少することが示された（Ｌｅｂｒｅｃ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９１（１１），５５５１−５５５８）。異なる抗体は異なる効果を示した。抗ＩＬ−１５  Ｈｕ７１４ＭｕＸＨｕ抗体がｉｎ  ｖｉｖｏでＮＫ細胞を減少させる最少用量は０．１ｍｇ／ｋｇであったが、本明細書に記載する１４６Ｂ７抗体と同一の配列を有する抗ＩＬ−１５  ＡＭＧ７１４抗体（Ｖｉｌｌａｄｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ，１１２（１０）：１５７１−８０；Ｌｅｂｒｅｃ  ｅｔ  ａｌ，２０１３，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９１（１１）：５５５１−８）が、ｉｎ  ｖｉｖｏでＮＫ細胞を減少させる最少用量は１５０ｍｇ／ｋｇであった。
【０２６９】
本発明の抗ＩＬ−１５抗体が循環ＮＫ細胞数を調節する能力を、カニクイザルにおいてｉｎ  ｖｉｖｏで試験した。０．１ｍｇ／ｋｇないし１０ｍｇ／ｋｇの範囲の様々な用量の前記抗体を、カニクイザルに静脈内投与し、用量投与前および試験日の１、３、５、８、１４および２１日目の血液サンプルについてフローサイトメトリー技術を用い、ＮＫ細胞の循環数を評価した。非ヒト霊長類における循環ＮＫ細胞数の調節は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗ＩＬ−１５抗体の薬理学的活性のマーカーとして定義可能であるため、患者への至適な投薬を定義するために有利に用いることができる。
【０２７０】
配列表
ヒト成熟IL-15
配列番号1
nwvnvisdlkkiedliqsmhidatlytesdvhpsckvtamkcfllelqvislesgdasihdtvenliilannslssngnvtesgckeceeleeknikeflqsfvhivqmfints
マウス成熟IL-15
配列番号2 
nwidvrydlekiesliqsihidttlytdsdfhpsckvtamncfllelqvilheysnmtlnetvrnvlylanstlssnknvaesgckeceeleektfteflqsfirivqmfints
ラット成熟IL-15
配列番号3
nwidvrydlekiesliqfihidttlytdsdfhpsckvtamncfllelqvilheysnmtlnetvrnvlylanstlssnknviesgckeceeleernfteflqsfihivqmfints
アカゲザル/カニクイザル成熟IL-15
配列番号4
NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISHESGDTDIHDTVENLIILANNILSSNGNITESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS
huVH1
配列番号5
EVRLMASGGGLVQPGGSLRLSCAASEFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISRGGDYTYYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRVSMITGGWAMDYWGQGTLVTVSS
huVH2
配列番号6
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASEFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISRGGDYTYYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRVSMITGGWAMDYWGQGTLVTVSS
huVH3
配列番号7
EVRLMASGGGLVQPGGSLRLSCAASEFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISRGGDYTYYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRVSMITGGWAMDYWGQGTLVTVSS
huVH4
配列番号8
EVRLMASGGGLVQPGGSLRLSCAASEFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISRGGDYTYYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRVSLITGGWAMDYWGQGTLVTVSS
huVH5
配列番号9
EVRLMASGGGLVQPGGSLRLSCAASEFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISRGGDYTYYPESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRVSFITGGWAMDYWGQGTLVTVSS
huVH6
配列番号10
EVRLMASGGGLVQPGGSLRLSCAASEFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISRGGDYTYYPDTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRVSIITGGWAMDYWGQGTLVTVSS
huVH7
配列番号11
EVRLMASGGGLVQPGGSLRLSCAASEFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISRGGDYTYYPDTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRVSAITGGWAMDYWGQGTLVTVSS
huVH8
配列番号12
EVRLMASGGGLVQPGGSLRLSCAASEFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISRGGDYTYYPDTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRVSMITGGYAMDYWGQGTLVTVSS
huVH9
配列番号13
EVRLMASGGGLVQPGGSLRLSCAASEFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISRGGDYTYYPDTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRVSMITGGFAMDYWGQGTLVTVSS
huVH10
配列番号14
EVRLMASGGGLVQPGGSLRLSCAASEFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISRGGDYTYYPDTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRVSMITGGAAMDYWGQGTLVTVSS
huVH11
配列番号15
EVRLMASGGGLVQPGGSLRLSCAASEFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISRGGDYTYYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRVSMITGGWALDYWGQGTLVTVSS
huVH12
配列番号16
EVRLMASGGGLVQPGGSLRLSCAASEFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISRGGDYTYYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRVSMITGGWAFDYWGQGTLVTVSS
huVH13
配列番号17
EVRLMASGGGLVQPGGSLRLSCAASEFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISRGGDYTYYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRVSMITGGWAIDYWGQGTLVTVSS
huVH14
配列番号18
EVRLMASGGGLVQPGGSLRLSCAASEFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISRGGDYTYYPESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRVSMITGGWAMDYWGQGTLVTVSS
huVH15
配列番号19
EVRLMASGGGLVQPGGSLRLSCAASEFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISRGGDYTYYPDTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRVSMITGGWAMDYWGQGTLVTVSS
huVH16
配列番号20
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASEFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISRGGDYTYYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRVSFITGGYAFDYWGQGTLVTVSS
huVH18
配列番号21
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASEFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISRGGDYTYYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRVSMITGGYAMDYWGQGTLVTVSS
huVH20
配列番号22
EVRLMASGGGLVQPGGSLRLSCAASEFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISRGGDYTYYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRVSFITGGYAMDYWGQGTLVTVSS
huVH21
配列番号23
EVRLMASGGGLVQPGGSLRLSCAASEFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISRGGDYTYYPESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRVSFITGGYAMDYWGQGTLVTVSS
huVL1
配列番号24
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVDITGNTYLEWYQQRPGQSPRLLIYKVFNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQDSFVPYTFGQGTKLEIK
huVL2
配列番号25
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVDITGNTYLEWFQQRPGQSPRLLIYKVFNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQDSFVPYTFGQGTKLEIK 
huVL3
配列番号26
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVDITGNTYLEWYQQRPGQSPRRLIYKVFNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQDSFVPYTFGQGTKLEIK
huVL4
配列番号27
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVDITGNTYLEWYQQRPGQSPRLLIYKVFNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQESFVPYTFGQGTKLEIK
huVL5
配列番号28
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVDITGNTYLEWYQQRPGQSPRLLIYKVFNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQDTFVPYTFGQGTKLEIK
huVL6
配列番号29
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVDITGNTYLEWFQQRPGQSPRRLIYKVFNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQESFVPYTFGQGTKLEIK
IgG1m3 重鎖の定常領域
配列番号30
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
IgKm3 軽鎖の定常領域
配列番号31
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
cVH1 (マウスB-E29由来の重鎖の可変領域)
配列番号32
EVRLMASGGGLVKPGGSLKLSCAASEFTFSNYAMSWVRQTPEKRLEWVATISRGGDYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTALYYCARRVSMITGGWAMDYWGQGTSVTVSS
cVH2
配列番号33
EVRLLASGGGLVKPGGSLKLSCAASEFTFSNYAMSWVRQTPEKRLEWVATISRGGDYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTALYYCARRVSMITGGWAMDYWGQGTSVTVSS
cVH3 
配列番号34
EVQLLASGGGLVKPGGSLKLSCAASEFTFSNYAMSWVRQTPEKRLEWVATISRGGDYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTALYYCARRVSMITGGWAMDYWGQGTSVTVSS
cVH4
配列番号35
EVRLMESGGGLVKPGGSLKLSCAASEFTFSNYAMSWVRQTPEKRLEWVATISRGGDYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTALYYCARRVSMITGGWAMDYWGQGTSVTVSS
cVK1
配列番号36
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVDITGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVFNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGLYYCFQDSFVPYTFGGGTKLEIK
hVK2
配列番号37
EVVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSQSIVDITGNTYLEWYQQKPGQAPRLLIYKVFNRFSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCFQDSFVPYTFGQGTKLEIK
ヒトIL-2
配列番号38
MYRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT
VL-146B7 
配列番号39
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQRYGSSHTFGQGTKLEIS 
VH-146B7
配列番号40
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKVSGYFFTTYWIGWVRQMPGKGLEYMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARGGNWNCFDYWGQGTLVTVSS
VL CDR3 DISC0280 
Kabat位置: 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 95A, 95B, 96, 97
配列番号41
AWYDRELSEWV
VH CDR3 DISC0280 
Kabat位置: 95, 96, 97, 98, 99, 100, 100a, 100b, 100c, 100d, 100e, 100f, 100g, 101, 102 
配列番号42
DPAAWPLQQSLAWFDP
IL-15ペプチド断片の伸展
配列番号43
DTVENLIILANN
【図１（Ａ）】
0006563012.tif 000007
【図１（Ｂ）】
0006563012.tif 000008
【図２】
0006563012.tif 000009
【図３】
0006563012.tif 000010
【図４】
0006563012.tif 000011
【図５】
0006563012.tif 000012
【図６】
0006563012.tif 000013
【図７】
0006563012.tif 000014
【配列表】
0006563012000001.app