(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物、又はその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩、又は式（Ｉ）の化合物若しくはその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩のいずれかの立体異性体若しくは混合物：
【化１】
0006527534.tif 000054
式中、
Ｒ１は、Ｃｙ２’、又は１つ以上の置換基Ｒｂ及び／若しくは１つのＣｙ３’で場合により置換されていてもよいＺ３であり；
ここで、Ｃｙ２’は、
（ａ）１つのＣｙ４；及び／又は
（ｂ）１つ以上の置換基Ｒｂ、及び／又は
（ｃ）１つ以上の置換基Ｒｂ及び／若しくは１つのＣｙ４で場合により置換されていてもよい１つ以上の置換基Ｚ４
で場合により置換されていてもよく；
ここで、Ｃｙ４は、Ｒｂ、及び１つ以上の置換基Ｒｂで場合により置換されていてもよいＺ５から独立して選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよく；
ここで、Ｃｙ３’は、
（ａ）１つのＣｙ５；及び／又は 
（ｂ）１つ以上の置換基Ｒｂ、及び／又は
（ｃ）１つ以上の置換基Ｒｂ及び／若しくは１つのＣｙ５で場合により置換されていてもよい１つ以上の置換基Ｚ６
で場合により置換されていてもよく、
ここで、Ｃｙ５は、Ｒｂ、及び１つ以上の置換基Ｒｂで場合により置換されていてもよいＺ７から独立して選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよく；
Ｒ２は、
（ｉ）フェニル；
（ｉｉ）５員環又は６員環のヘテロ芳香族環；
（ｉｉｉ）３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合したフェニル；
（ｉｖ）３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合した５員環又は６員環のヘテロ芳香族環；
（ｖ）６〜１４員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の二環に縮合し、該二環の環がスピロ縮合している、フェニル；
（ｖｉ）６〜１４員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の二環に縮合し、該二環の環がスピロ縮合している、５員環又は６員環のヘテロ芳香族環
からなる群から選択される既知の環系であり；
ここで、Ｒ２は、
（ａ）１つのＣｙ１若しくは１つのＣｙ２、及び／又は
（ｂ）１つ以上の置換基Ｒｂ、及び／又は
（ｃ）１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ１で場合により置換されていてもよい１つ以上の置換基Ｚ１
で場合により置換されていてもよく、
ここで、Ｃｙ１又はＣｙ２は、Ｒｂ、及び１つ以上の置換基Ｒｂで場合により置換されていてもよいＺ２から独立して選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよく；
Ｒ３は、Ｈ、ハロゲン、−ＣＮ、及び−ＯＲｃ’から選択され；
Ｒ４は、−ＯＲａ及び−ＮＲａＲｃ’から選択され；
各Ｒａは、独立して、Ｃｙ２、又は１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ３で場合により置換されていてもよいＺ３であり、
ここで、Ｃｙ２は、
（ａ）１つのＣｙ４；及び／又は
（ｂ）１つ以上の置換基Ｒｂ、及び／又は
（ｃ）１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ４で場合により置換されていてもよい１つ以上の置換基Ｚ４
で場合により置換されていてもよく；
ここで、Ｃｙ４は、Ｒｂ、及び１つ以上の置換基Ｒｂで場合により置換されていてもよいＺ５から独立して選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよく；
ここで、Ｃｙ３は、
（ａ）１つのＣｙ５；及び／又は 
（ｂ）１つ以上の置換基Ｒｂ、及び／又は
（ｃ）１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ５で場合により置換されていてもよい１つ以上の置換基Ｚ６
で場合により置換されていてもよく、
ここで、Ｃｙ５は、Ｒｂ及び１つ以上の置換基Ｒｂで場合により置換されていてもよいＺ７から独立して選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよく、
各Ｒｂは、独立して、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲｃ’、−ＯＣ（Ｙ）Ｒｃ’、−ＯＣ（Ｙ）ＯＲｃ’、−ＯＣ（Ｙ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｃ（Ｙ）Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｃ（Ｙ）ＯＲｃ’、−ＮＲｃ’Ｃ（Ｙ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｓ（Ｏ）２Ｒｃ’、−ＮＲｃ’ＳＯ２ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＳＲｃ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒｃ’、−Ｓ（Ｏ）ＯＲｃ’、−ＳＯ２Ｒｃ’、−ＳＯ２（ＯＲｃ’）、−ＳＯ２ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＳＣ（Ｙ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−Ｃ（Ｙ）Ｒｃ’、−Ｃ（Ｙ）ＯＲｃ’、−Ｃ（Ｙ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−Ｃ（Ｙ）ＮＲｃ’ＯＲｃ’及び−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ’ＳＯ２Ｒｃ’から選択され；
各Ｒｃ’は、独立して、Ｈ又はＲｃであり；
各Ｒｃは、独立して、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、１つ以上の二重結合及び１つ以上の三重結合を有する（Ｃ２−Ｃ６）炭化水素鎖、及び３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環からなる群から選択され、各Ｒｃは、１つ以上のハロゲン原子で場合により置換されていてもよく、
Ｙは、Ｏ、Ｓ又はＮＲｃ’であり；
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５、Ｚ６及びＺ７は、独立して、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、（Ｃ２−Ｃ１２）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ１２）アルキニル、及び１つ以上の二重結合及び１つ以上の三重結合を有する（Ｃ２−Ｃ６）炭化水素鎖からなる群から選択され；
Ｃｙ１、Ｃｙ４及びＣｙ５は、独立して、フェニル；飽和又は部分的に不飽和の、３〜７員環の炭素環又はヘテロ環の単環；及び５員環又は６員環のヘテロ芳香族環からなる群から選択される既知の環系であり；
Ｃｙ２及びＣｙ３は、独立して、フェニル；５員環又は６員環のヘテロ芳香族環；飽和又は部分的に不飽和の、３〜７員環の炭素環又はヘテロ環の単環；及び３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合しているか、あるいは架橋して縮合しているか、あるいはスピロ縮合している、３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環からなる群から選択される既知の環系であり；
Ｃｙ２’及びＣｙ３’は、独立して、飽和又は部分的に不飽和の、３〜７員環の炭素環又はヘテロ環の単環；及び３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合しているか、あるいは架橋して縮合しているか、あるいはスピロ縮合している、３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の単環からなる群から選択される既知の環系であり；
炭素環において、全ての環原子は、炭素原子であり；ヘテロ環及びヘテロ芳香族環において、１つ以上の環原子は、Ｎ、Ｏ及びＳから選択され；全ての飽和又は部分的に不飽和の環において、環の１個又は２個の原子は、場合により、Ｃ（Ｏ）及び／又はＣ（ＮＨ）及び／又はＣ［Ｎ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル］であり；
但し、式（Ｉ）の化合物は、
２−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］エタノール；
２−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］エタノール塩酸塩；
１−［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］−３−（メチルアミノ）プロパン−２−オール；
１−［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］−３−（メチルアミノ）プロパン−２−オール塩酸塩；
２−［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］エタノール；
２−［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］エタノール塩酸塩；
１−アミノ−３−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］プロパン−２−オール；
１−アミノ−３−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］プロパン−２−オール塩酸塩；
２−［［２−（３，４−ジクロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］エタノール；
２−［［２−（３，４−ジクロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］エタノール塩酸塩；
（２Ｓ）−１−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］プロパン−２−オール；
（２Ｓ）−１−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］プロパン−２−オール塩酸塩；
１−［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］−３−（メチルアミノ）プロパン−２−オール；
１−［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］−３−（メチルアミノ）プロパン−２−オール塩酸塩；
１−アミノ−３−［［２−（３，４−ジクロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール；
１−アミノ−３−［［２−（３，４−ジクロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール塩酸塩；
２−［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］エタノール；
２−［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］エタノール塩酸塩；
３−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］プロパン−１；２−ジオール；
３−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］プロパン−１；２−ジオール塩酸塩；
１−アミノ−３−［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール；
１−アミノ−３−［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール塩酸塩；
１−アミノ−３−［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール；
１−アミノ−３−［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール塩酸塩；
１−アミノ−３−［［７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール；
１−アミノ−３−［［７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール塩酸塩；
２−［［７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−４−キノリル］アミノ］エタノール；
２−［［７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−４−キノリル］アミノ］エタノール塩酸塩；
５−［［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］メチル］オキサゾリジン−２−オン；
５−［［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］メチル］オキサゾリジン−２−オン；
ベンジル−Ｎ−（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）カルバメート；
Ｎ１，Ｎ１−ジエチル−Ｎ４−（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）ペンタン−１，４−ジアミン；及び
Ｎ１，Ｎ１−ジエチル−Ｎ４−（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）ペンタン−１，４−ジアミントリリン酸塩以外である。
【請求項２】
Ｒ２が、無置換フェニル、４−メチルフェニル、４−クロロフェニル、２−クロロフェニル、３，４−ジクロロフェニル、４−フルオロフェニル及び４−メトキシフェニル以外の基である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３】
Ｒ３が−ＯＲｃ’である、請求項１又は２に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項４】
Ｒ４がＯＲａである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項５】
Ｒ４中のＲａが、請求項１に定義されるように場合により置換されていてもよいＺ３である、請求項４に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項６】
Ｒ２は、
（ｉ）フェニル；
（ｉｉ）５員環又は６員環のヘテロ芳香族環；
（ｉｉｉ）３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合したフェニル；
（ｉｖ）３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合した５員環又は６員環のヘテロ芳香族環
からなる群から選択される既知の環系であり、
Ｒ２は、請求項１に定義されるように場合により置換されていてもよい、請求項１〜５のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項７】
Ｒ２は、フェニル又は５員環若しくは６員環のヘテロ芳香族単環であり、両方の基が請求項１に定義されるように場合により置換されていてもよい、請求項６に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項８】
Ｒ２は、請求項１に定義されるように場合により置換されていてもよい５員環又は６員環のヘテロ芳香族単環である、請求項７に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項９】
治療有効量の請求項１〜８のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物又はその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩、又は式（Ｉ）の化合物若しくはその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩のいずれかの立体異性体又は混合物を、１つ以上の医薬的又は獣医学的に許容される賦形剤又は担体と合わせて含む、医薬組成物又は獣医学的組成物。
【請求項１０】
式（Ｉ’）の化合物若しくはその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩、又は式（Ｉ’）の化合物若しくはその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩のいずれかの立体異性体又は混合物を含む、ヒストンメチルトランスフェラーゼＧ９ａの阻害と、ＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ及びＤＮＭＴ３Ｂからなる群から選択される１つ以上のＤＮＭＴの阻害とが介在する癌の治療及び／又は予防において使用するための医薬：
【化２】
0006527534.tif 000055
式中、
Ｒ１は、Ｃｙ２’、又は１つ以上の置換基Ｒｂ及び／若しくは１つのＣｙ３’で場合により置換されていてもよいＺ３であり；
ここで、Ｃｙ２’は、
（ａ）１つのＣｙ４；及び／又は
（ｂ）１つ以上の置換基Ｒｂ、及び／又は
（ｃ）１つ以上の置換基Ｒｂ及び／若しくは１つのＣｙ４で場合により置換されていてもよい１つ以上の置換基Ｚ４
で場合により置換されていてもよく；
ここで、Ｃｙ４は、Ｒｂ、及び１つ以上の置換基Ｒｂで場合により置換されていてもよいＺ５から独立して選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよく；
ここで、Ｃｙ３’は、
（ａ）１つのＣｙ５；及び／又は 
（ｂ）１つ以上の置換基Ｒｂ、及び／又は
（ｃ）１つ以上の置換基Ｒｂ及び／若しくは１つのＣｙ５で場合により置換されていてもよい１つ以上の置換基Ｚ６
で場合により置換されていてもよく、
ここで、Ｃｙ５は、Ｒｂ、及び１つ以上の置換基Ｒｂで場合により置換されていてもよいＺ７から独立して選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよく；
Ｒ２’は、−ＯＺ８、Ｃｙ６及びＺ８からなる群から選択され；各Ｚ８は、１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ７で場合により置換されていてもよく；
Ｃｙ６は、
（ａ）１つのＣｙ１若しくは１つのＣｙ２、及び／又は
（ｂ）１つ以上の置換基Ｒｂ、及び／又は
（ｃ）１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ１で場合により置換されていてもよい１つ以上の置換基Ｚ１
で場合により置換されていてもよく、
ここで、Ｃｙ１又はＣｙ２は、Ｒｂ及び１つ以上の置換基Ｒｂで場合により置換されていてもよいＺ２から独立して選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよく；
Ｃｙ７は、
（ａ）１つのＣｙ８；及び／又は 
（ｂ）１つ以上の置換基Ｒｂ、及び／又は
（ｃ）１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ８で場合により置換されていてもよい１つ以上の置換基Ｚ９
で場合により置換されていてもよく；
Ｃｙ８は、Ｒｂ及び１つ以上の置換基Ｒｂで場合により置換されていてもよいＺ１０から独立して選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよく；
Ｒ３は、Ｈ、ハロゲン、−ＣＮ、及び−ＯＲｃ’から選択され；
Ｒ４は、−ＯＲａ及び−ＮＲａＲｃ’から選択され；
各Ｒａは、独立して、Ｃｙ２又は１つ以上の置換基Ｒｂ及び／若しくは１つのＣｙ３で場合により置換されていてもよいＺ３であり；
Ｃｙ２は、
（ａ）１つのＣｙ４；及び／又は
（ｂ）１つ以上の置換基Ｒｂ、及び／又は
（ｃ）１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ４で場合により置換されていてもよい１つ以上の置換基Ｚ４
で場合により置換されていてもよく、
Ｃｙ４は、Ｒｂ及び１つ以上の置換基Ｒｂで場合により置換されていてもよいＺ５から独立して選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよく；
Ｃｙ３は、
（ａ）１つのＣｙ５；及び／又は 
（ｂ）１つ以上の置換基Ｒｂ、及び／又は
（ｃ）１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ５で場合により置換されていてもよい１つ以上の置換基Ｚ６
で場合により置換されていてもよく、
Ｃｙ５は、Ｒｂ及び１つ以上の置換基Ｒｂで場合により置換されていてもよいＺ７から独立して選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよく；
各Ｒｂは、独立して、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲｃ’、−ＯＣ（Ｙ）Ｒｃ’、−ＯＣ（Ｙ）ＯＲｃ’、−ＯＣ（Ｙ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｃ（Ｙ）Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｃ（Ｙ）ＯＲｃ’、−ＮＲｃ’Ｃ（Ｙ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｓ（Ｏ）２Ｒｃ’、−ＮＲｃ’ＳＯ２ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＳＲｃ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒｃ’、−Ｓ（Ｏ）ＯＲｃ’、−ＳＯ２Ｒｃ’、−ＳＯ２（ＯＲｃ’）、−ＳＯ２ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＳＣ（Ｙ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−Ｃ（Ｙ）Ｒｃ’、−Ｃ（Ｙ）ＯＲｃ’、−Ｃ（Ｙ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−Ｃ（Ｙ）ＮＲｃ’ＯＲｃ’及び−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ’ＳＯ２Ｒｃ’から選択され；
各Ｒｃ’は、独立して、Ｈ又はＲｃであり；
各Ｒｃは、独立して、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、１つ以上の二重結合及び１つ以上の三重結合を有する（Ｃ２−Ｃ６）炭化水素鎖、並びに３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環からなる群から選択され、各Ｒｃは、１つ以上のハロゲン原子で場合により置換されていてもよく、
Ｙは、Ｏ、Ｓ又はＮＲｃ’であり；
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５、Ｚ６、Ｚ７、Ｚ８、Ｚ９及びＺ１０は、独立して、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、（Ｃ２−Ｃ１２）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ１２）アルキニル、並びに１つ以上の二重結合及び１つ以上の三重結合を有する（Ｃ２−Ｃ６）炭化水素鎖からなる群から選択され；
Ｃｙ１、Ｃｙ４、Ｃｙ５及びＣｙ８は、独立して、フェニル；飽和又は部分的に不飽和の、３〜７員環の炭素環又はヘテロ環の単環；及び５員環又は６員環のヘテロ芳香族環からなる群から選択される既知の環系であり；
Ｃｙ２、Ｃｙ３及びＣｙ７は、独立して、フェニル；５員環又は６員環のヘテロ芳香族環；飽和又は部分的に不飽和の３〜７員環の炭素環又はヘテロ環の単環；及び３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合しているか、又は架橋して縮合しているか、又はスピロ縮合している、３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環からなる群から選択される既知の環系であり；
Ｃｙ２’及びＣｙ３’は、独立して、飽和又は部分的に不飽和の、３〜７員環の炭素環又はヘテロ環の単環；及び３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合しているか、あるいは架橋して縮合しているか、あるいはスピロ縮合している、３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の単環からなる群から選択される既知の環系であり；
Ｃｙ６は、
（ｉ）フェニル；
（ｉｉ）５員環又は６員環のヘテロ芳香族環；
（ｉｉｉ）飽和又は部分的に不飽和の、３〜７員環の炭素環又はヘテロ環の単環；
（ｉｖ）３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合しているか、又は架橋して縮合しているか、又はスピロ縮合している、３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環；
（ｖ）６〜１４員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の二環に縮合し、この二環の環がスピロ縮合している、フェニル；
（ｖｉ）６〜１４員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の二環に縮合し、この二環の環がスピロ縮合している、５員環又は６員環のヘテロ芳香族環
からなる群から選択される既知の環系であり；
炭素環において、全ての環原子は、炭素原子であり；ヘテロ環及びヘテロ芳香族環において、１つ以上の環原子は、Ｎ、Ｏ及びＳから選択され；全ての飽和又は部分的に不飽和の環において、環の１個又は２個の原子は、場合により、Ｃ（Ｏ）及び／又はＣ（ＮＨ）及び／又はＣ［Ｎ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル］である。
【請求項１１】
Ｒ２’がＣｙ６であり、Ｃｙ６は、
（ｉ）フェニル；
（ｉｉ）５員環又は６員環のヘテロ芳香族環；
（ｉｉｉ）３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合したフェニル；
（ｉｖ）３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合した５員環又は６員環のヘテロ芳香族環；
（ｖ）６〜１４員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の二環に縮合し、この二環の環がスピロ縮合している、フェニル；
（ｖｉ）６〜１４員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の二環に縮合し、この二環の環がスピロ縮合している、５員環又は６員環のヘテロ芳香族環
からなる群から選択される既知の環系であり；
Ｒ２’は、請求項１０に定義されるように場合により置換されていてもよく；
但し、式（Ｉ’）の化合物は、
２−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］エタノール；
２−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］エタノール塩酸塩；
１−［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］−３−（メチルアミノ）プロパン−２−オール；
１−［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］−３−（メチルアミノ）プロパン−２−オール塩酸塩；
２−［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］エタノール；
２−［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］エタノール塩酸塩；
１−アミノ−３−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］プロパン−２−オール；
１−アミノ−３−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］プロパン−２−オール塩酸塩；
２−［［２−（３，４−ジクロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］エタノール；
２−［［２−（３，４−ジクロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］エタノール塩酸塩；
（２Ｓ）−１−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］プロパン−２−オール；
（２Ｓ）−１−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］プロパン−２−オール塩酸塩；
１−［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］−３−（メチルアミノ）プロパン−２−オール；
１−［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］−３−（メチルアミノ）プロパン−２−オール塩酸塩；
１−アミノ−３−［［２−（３，４−ジクロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール；
１−アミノ−３−［［２−（３，４−ジクロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール塩酸塩；
２−［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］エタノール；
２−［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］エタノール塩酸塩；
３−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］プロパン−１；２−ジオール；
３−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］プロパン−１；２−ジオール塩酸塩；
１−アミノ−３−［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール；
１−アミノ−３−［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール塩酸塩；
１−アミノ−３−［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール；
１−アミノ−３−［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール塩酸塩；
１−アミノ−３−［［７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール；
１−アミノ−３−［［７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール塩酸塩；
２−［［７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−４−キノリル］アミノ］エタノール；
２−［［７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−４−キノリル］アミノ］エタノール塩酸塩；
５−［［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］メチル］オキサゾリジン−２−オン；
５−［［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］メチル］オキサゾリジン−２−オン；
ベンジル−Ｎ−（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）カルバメート；
Ｎ１，Ｎ１−ジエチル−Ｎ４−（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）ペンタン−１，４−ジアミン；及び
Ｎ１，Ｎ１−ジエチル−Ｎ４−（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）ペンタン−１，４−ジアミントリリン酸塩以外である、請求項１０に記載の医薬。
【請求項１２】
Ｒ４がＯＲａであり；及び／又はＲ２’は、フェニル又は５員環若しくは６員環のヘテロ芳香族単環であり、両方の基が請求項１０に定義されるように場合により置換されていてもよい、請求項１０〜１１のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項１３】
癌が、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、大腸癌、膠芽腫、肝細胞癌、メラノーマ、膵癌、前立腺癌、腎臓癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、急性骨髄性白血病、マントル細胞リンパ腫、及び多発性骨髄腫からなる群から選択される、請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項１４】
単離された細胞を、１つ以上の転写因子及び式（Ｉ’）の化合物、又はその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩、又は式（Ｉ’）の化合物若しくはその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩のいずれかの立体異性体若しくは混合物と共に培養する工程を含む、人工多能性幹細胞の生成方法：
【化３】
0006527534.tif 000056
式中、
Ｒ１は、Ｃｙ２’、又は１つ以上の置換基Ｒｂ及び／若しくは１つのＣｙ３’で場合により置換されていてもよいＺ３であり；
ここで、Ｃｙ２’は、
（ａ）１つのＣｙ４；及び／又は
（ｂ）１つ以上の置換基Ｒｂ、及び／又は
（ｃ）１つ以上の置換基Ｒｂ及び／若しくは１つのＣｙ４で場合により置換されていてもよい１つ以上の置換基Ｚ４
で場合により置換されていてもよく；
ここで、Ｃｙ４は、Ｒｂ、及び１つ以上の置換基Ｒｂで場合により置換されていてもよいＺ５から独立して選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよく；
ここで、Ｃｙ３’は、
（ａ）１つのＣｙ５；及び／又は 
（ｂ）１つ以上の置換基Ｒｂ、及び／又は
（ｃ）１つ以上の置換基Ｒｂ及び／若しくは１つのＣｙ５で場合により置換されていてもよい１つ以上の置換基Ｚ６
で場合により置換されていてもよく、
ここで、Ｃｙ５は、Ｒｂ、及び１つ以上の置換基Ｒｂで場合により置換されていてもよいＺ７から独立して選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよく；
Ｒ２’は、−ＯＺ８、Ｃｙ６及びＺ８からなる群から選択され；各Ｚ８は、１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ７で場合により置換されていてもよく；
Ｃｙ６は、
（ａ）１つのＣｙ１若しくは１つのＣｙ２、及び／又は
（ｂ）１つ以上の置換基Ｒｂ、及び／又は
（ｃ）１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ１で場合により置換されていてもよい１つ以上の置換基Ｚ１
で場合により置換されていてもよく、
ここで、Ｃｙ１又はＣｙ２は、Ｒｂ及び１つ以上の置換基Ｒｂで場合により置換されていてもよいＺ２から独立して選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよく；
Ｃｙ７は、
（ａ）１つのＣｙ８；及び／又は 
（ｂ）１つ以上の置換基Ｒｂ、及び／又は
（ｃ）１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ８で場合により置換されていてもよい１つ以上の置換基Ｚ９
で場合により置換されていてもよく；
Ｃｙ８は、Ｒｂ及び１つ以上の置換基Ｒｂで場合により置換されていてもよいＺ１０から独立して選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよく；
Ｒ３は、Ｈ、ハロゲン、−ＣＮ、及び−ＯＲｃ’から選択され；
Ｒ４は、−ＯＲａ及び−ＮＲａＲｃ’から選択され；
各Ｒａは、独立して、Ｃｙ２又は１つ以上の置換基Ｒｂ及び／若しくは１つのＣｙ３で場合により置換されていてもよいＺ３であり；
Ｃｙ２は、
（ａ）１つのＣｙ４；及び／又は
（ｂ）１つ以上の置換基Ｒｂ、及び／又は
（ｃ）１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ４で場合により置換されていてもよい１つ以上の置換基Ｚ４
で場合により置換されていてもよく、
Ｃｙ４は、Ｒｂ及び１つ以上の置換基Ｒｂで場合により置換されていてもよいＺ５から独立して選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよく；
Ｃｙ３は、
（ａ）１つのＣｙ５；及び／又は 
（ｂ）１つ以上の置換基Ｒｂ、及び／又は
（ｃ）１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ５で場合により置換されていてもよい１つ以上の置換基Ｚ６
で場合により置換されていてもよく、
Ｃｙ５は、Ｒｂ及び１つ以上の置換基Ｒｂで場合により置換されていてもよいＺ７から独立して選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよく；
各Ｒｂは、独立して、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲｃ’、−ＯＣ（Ｙ）Ｒｃ’、−ＯＣ（Ｙ）ＯＲｃ’、−ＯＣ（Ｙ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｃ（Ｙ）Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｃ（Ｙ）ＯＲｃ’、−ＮＲｃ’Ｃ（Ｙ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｓ（Ｏ）２Ｒｃ’、−ＮＲｃ’ＳＯ２ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＳＲｃ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒｃ’、−Ｓ（Ｏ）ＯＲｃ’、−ＳＯ２Ｒｃ’、−ＳＯ２（ＯＲｃ’）、−ＳＯ２ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＳＣ（Ｙ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−Ｃ（Ｙ）Ｒｃ’、−Ｃ（Ｙ）ＯＲｃ’、−Ｃ（Ｙ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−Ｃ（Ｙ）ＮＲｃ’ＯＲｃ’及び−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ’ＳＯ２Ｒｃ’から選択され；
各Ｒｃ’は、独立して、Ｈ又はＲｃであり；
各Ｒｃは、独立して、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、１つ以上の二重結合及び１つ以上の三重結合を有する（Ｃ２−Ｃ６）炭化水素鎖、並びに３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環からなる群から選択され、各Ｒｃは、１つ以上のハロゲン原子で場合により置換されていてもよく、
Ｙは、Ｏ、Ｓ又はＮＲｃ’であり；
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５、Ｚ６、Ｚ７、Ｚ８、Ｚ９及びＺ１０は、独立して、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、（Ｃ２−Ｃ１２）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ１２）アルキニル、並びに１つ以上の二重結合及び１つ以上の三重結合を有する（Ｃ２−Ｃ６）炭化水素鎖からなる群から選択され；
Ｃｙ１、Ｃｙ４、Ｃｙ５及びＣｙ８は、独立して、フェニル；飽和又は部分的に不飽和の、３〜７員環の炭素環又はヘテロ環の単環；及び５員環又は６員環のヘテロ芳香族環からなる群から選択される既知の環系であり；
Ｃｙ２、Ｃｙ３及びＣｙ７は、独立して、フェニル；５員環又は６員環のヘテロ芳香族環；飽和又は部分的に不飽和の、３〜７員環の炭素環又はヘテロ環の単環；及び３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合しているか、又は架橋して縮合しているか、又はスピロ縮合している、３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環からなる群から選択される既知の環系であり；
Ｃｙ２’及びＣｙ３’は、独立して、飽和又は部分的に不飽和の、３〜７員環の炭素環又はヘテロ環の単環；及び３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合しているか、あるいは架橋して縮合しているか、あるいはスピロ縮合している、３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の単環からなる群から選択される既知の環系であり；
Ｃｙ６は、
（ｉ）フェニル；
（ｉｉ）５員環又は６員環のヘテロ芳香族環；
（ｉｉｉ）飽和又は部分的に不飽和の、３〜７員環の炭素環又はヘテロ環の単環；
（ｉｖ）３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合しているか、又は架橋して縮合しているか、又はスピロ縮合している、３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環；
（ｖ）６〜１４員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の二環に縮合し、この二環の環がスピロ縮合している、フェニル；
（ｖｉ）６〜１４員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の二環に縮合し、この二環の環がスピロ縮合している、５員環又は６員環のヘテロ芳香族環
からなる群から選択される既知の環系であり；
炭素環において、全ての環原子は、炭素原子であり；ヘテロ環及びヘテロ芳香族環において、１つ以上の環原子は、Ｎ、Ｏ及びＳから選択され；全ての飽和又は部分的に不飽和の環において、環の１個又は２個の原子は、場合により、Ｃ（Ｏ）及び／又はＣ（ＮＨ）及び／又はＣ［Ｎ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル］である。
【請求項１５】
式（Ｉ’）の化合物において、Ｒ２’がＣｙ６であり、Ｃｙ６は、
（ｉ）フェニル；
（ｉｉ）５員環又は６員環のヘテロ芳香族環；
（ｉｉｉ）３〜７員環の飽和若しくは部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合したフェニル；
（ｉｖ）３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合した５員環又は６員環のヘテロ芳香族環；
（ｖ）６〜１４員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の二環に縮合し、該二環の環がスピロ縮合している、フェニル；
（ｖｉ）６〜１４員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の二環に縮合し、該二環の環がスピロ縮合している、５員環又は６員環のヘテロ芳香族環
からなる群から選択される既知の環系であり；
Ｒ２’は、請求項１４に定義されるように場合により置換されていてもよく；
但し、式（Ｉ’）の化合物は、
２−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］エタノール；
２−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］エタノール塩酸塩；
１−［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］−３−（メチルアミノ）プロパン−２−オール；
１−［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］−３−（メチルアミノ）プロパン−２−オール塩酸塩；
２−［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］エタノール；
２−［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］エタノール塩酸塩；
１−アミノ−３−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］プロパン−２−オール；
１−アミノ−３−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］プロパン−２−オール塩酸塩；
２−［［２−（３，４−ジクロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］エタノール；
２−［［２−（３，４−ジクロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］エタノール塩酸塩；
（２Ｓ）−１−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］プロパン−２−オール；
（２Ｓ）−１−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］プロパン−２−オール塩酸塩；
１−［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］−３−（メチルアミノ）プロパン−２−オール；
１−［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］−３−（メチルアミノ）プロパン−２−オール塩酸塩；
１−アミノ−３−［［２−（３，４−ジクロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール；
１−アミノ−３−［［２−（３，４−ジクロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール塩酸塩；
２−［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］エタノール；
２−［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］エタノール塩酸塩；
３−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］プロパン−１；２−ジオール；
３−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］プロパン−１；２−ジオール塩酸塩；
１−アミノ−３−［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール；
１−アミノ−３−［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール塩酸塩；
１−アミノ−３−［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール；
１−アミノ−３−［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール塩酸塩；
１−アミノ−３−［［７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール；
１−アミノ−３−［［７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール塩酸塩；
２−［［７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−４−キノリル］アミノ］エタノール；
２−［［７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−４−キノリル］アミノ］エタノール塩酸塩；
５−［［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］メチル］オキサゾリジン−２−オン；
５−［［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］メチル］オキサゾリジン−２−オン；
ベンジル−Ｎ−（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）カルバメート；
Ｎ１，Ｎ１−ジエチル−Ｎ４−（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）ペンタン−１，４−ジアミン；及び
Ｎ１，Ｎ１−ジエチル−Ｎ４−（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）ペンタン−１，４−ジアミントリリン酸塩以外である、請求項１４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒストンメチルトランスフェラーゼ及びＤＮＡメチルトランスフェラーゼの二重阻害剤である４−アミノキノリン誘導体に関する。本発明は、これらを含有する医薬組成物又は獣医学的組成物、及び医薬としてのこれらの使用、特に、抗癌剤としての使用、また、人工多能性幹細胞を生成するための薬剤としての使用にも関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、癌は、遺伝子の疾患であり、エピジェネティックな疾患であることが示されており、エピジェネティックな改変と遺伝子の改変が相互作用し、癌を進行させる。しかし、遺伝子の変異とは異なり、エピジェネティックな変化は可逆的であり、そのため、エピジェネティックなバランスを元に戻す薬物は、癌のための興味深い潜在的な治療標的を表す。エピジェネティックは、一次ＤＮＡ配列の改変とは独立して起こる遺伝子発現パターンの遺伝性の変化を指す。主なエピジェネティックの機構は、ＤＮＡメチル化及び共有結合性のヒストン修飾であり、転写の制御に重要な役割を果たす。
【０００３】
Ｇ９ａ（ＥＨＭＴ２としても知られる）は、ヒストンＨ３のリジン９をモノメチル化及びジメチル化する（それぞれＨ３Ｋ９ｍｅ１及びＨ３Ｋ９ｍｅ２）ヒストンメチルトランスフェラーゼである。
【０００４】
Ｇ９ａ発現量は、正常組織と比較して、多くの癌で高い。癌トランスクリプトーム分析から、肝細胞、結腸、前立腺、肺及び侵襲性移行上皮癌並びにＢ細胞慢性リンパ球性白血病を含む多くの腫瘍組織において発現量が多いことがわかった。多くの膀胱癌及び肺癌のヒト患者において、Ｇ９ａの発現は上方制御される（Ｓｈａｎｋａｒ  ＳＲ．ｅｔ  ａｌ．、Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ、２０１３．８（１）：ｐ．１６−２２）。膀胱癌細胞株及び肺癌細胞株におけるＧ９ａのノックダウンによって、成長の抑制及びアポトーシスが起こった。更に、前立腺癌に対する研究は、発癌現象におけるＧ９ａの役割を確実なものとし、Ｇ９ａの下方制御によって、癌細胞における中心体の破壊、染色体の不安定化、細胞成長阻害、細胞老化の増加が起こった。侵襲性の高い肺癌において、高レベルのＧ９ａにより、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで細胞の移動及び侵襲が増加し、ｉｎ  ｖｉｖｏでの転移が増加し、予後が悪いことと相関関係にある。Ｇ９ａは、膵臓腺癌でも過剰に発現し、Ｇ９ａの阻害は、この種の癌における細胞の老化を誘発する。急性骨髄性白血病マウスモデルにおいて、Ｇ９ａがないと、疾患の進行が顕著に遅くなり、白血病幹細胞の頻度が減る。
【０００５】
ＤＮＡメチル化は、ＤＮＡ塩基配列を変更することなく遺伝子発現を調整し、腫瘍抑制遺伝子のサイレンシングによって、癌にとって重要な役割を果たすエピジェネティックな改変である。ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ（ＤＮＭＴ）は、ＤＮＡメチル化を触媒する酵素である。ＤＮＭＴ１は、メンテナンスメチルトランスフェラーゼをコードし、ＤＮＭＴ３Ａ及びＤＮＭＴ３Ｂは、デノボメチルトランスフェラーゼをコードする。
【０００６】
ＤＮＭＴ１及びＤＮＭＴ３Ａ／３Ｂは、乳癌、胃癌、膵臓癌、前立腺癌、肝細胞癌、卵巣癌、腎臓癌、網膜芽細胞腫、神経膠腫又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫のようないくつかの種類の癌で過剰に発現する。ゼブラリン、デシタビン、及びアザシチジンは、特に、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、肝癌、肺癌、乳癌、胃癌又は子宮頸癌において、細胞増殖を阻害し、アポトーシスを誘発する（Ｖｉｌａｓ−Ｚｏｒｎｏｚａ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．、ＰＬｏＳ  ＯＮＥ、２０１１．６（２）：ｐ．ｅ１７０１２）。デシタビンは、現在、米国食品医薬品局によって骨髄異形成症候群のために承認されている。
【０００７】
しかし、化学的な不安定性及び活性のためのＤＮＡへの取り込みのような、このようなアザヌクレオシドの限界を克服するために、新しい非ヌクレオシド阻害剤を開発するために多くの努力がなされている。
【０００８】
一連のキナゾリン誘導体は、強力で選択的なＧ９ａ／ＧＬＰ阻害剤、例えば、Ｎ−（１−ベンジル−４−ピペリジル）−６，７−ジメトキシ−２−（４−メチル−１，４−ジアゼパン−１−イル）キナゾリン−４−アミン（ＢＩＸ０１２９４としても知られる）、２−シクロヘキシル−Ｎ−（１−イソプロピル−４−ピペリジル）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キナゾリン−４−アミン（ＵＮＣ０６３８としても知られる）、及び２−（４，４−ジフルオロ−１−ピペリジル）−Ｎ−（１−イソプロピル−４−ピペリジル）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キナゾリン−４−アミン（ＵＮＣ０６４２としても知られる）として記載されている。しかし、これらの分子は、たかだか高いマイクロモル濃度で、ＩＣ５０値でＤＮＭＴに対する活性を示す。従って、化合物ＢＩＸ０１２９４の場合、１００μＭでＤＮＭＴ１に対する３５±８％の阻害、ＤＮＭＴ３Ａに対する１２±３％の阻害が報告されており、この値は、それぞれＤＮＭＴ１及びＤＮＭＴ３Ａに対し、ＩＣ５０値＞１００μＭに対応する（Ｒｏｔｉｌｉ  Ｄ．ｅｔ  ａｌ．、ＰＬｏＳ  ＯＮＥ、２０１４．９（５）：ｐ．Ｅ９６９４１）。化合物ＵＮＣ０６３８の場合、ＤＮＭＴ１に対し、１０７±６μＭのＩＣ５０値が報告されており（Ｖｅｄａｄｉ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２０１１、７、ｐｐ．５６６−５７４）、一方、化合物ＵＮＣ０６４２の場合、ＤＮＭＴ１に対し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＩＣ５０値＞５０μＭが記載されている（Ｌｉｕ  Ｆ．ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１３、５６（２１）、ｐｐ．８９３１−４２）。
【０００９】
細胞リプログラミングは、分化した細胞における多能性の誘導、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）の生成、分化した細胞から無関係の細胞型への直接的な変換、ダイレクトリプログラミングと呼ばれるプロセスを含むプロセスである。ｉＰＳＣの生成によって、天然の多能性幹細胞（すなわち、胚幹細胞（ＥＳＣ））と類似しているが、同じではない細胞を生成する。一般的に、ｉＰＳＣは、形態、増殖、テラトーマ生成及び分化効率がＥＳＣに類似していることが記載されているが、エピジェネティックな発現と、遺伝的な発現で、顕著な差が観察されている。しかし、ｉＰＳＣの生成は、天然の胚発生中に起こる生来の遺伝的な観点に関するある種の知識を使うことができるだろう。
【００１０】
この発見から、細胞リプログラミング、特に、ｉＰＳＣの生成は、医薬分野に大変革をもたらす運命なのは明らかであった。患者に特異的な多能性細胞を作成する力から、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究のためのヒト疾患の非常に有益なモデルを与える見込みがあり、拒絶のない自家細胞移植治療の可能性を与えるが、ウイルスベクターを利用する新しい再生医薬手法によるリプログラミング法は、臨床治療に使用するには危険性が高すぎると判断された。従って、この分野でのほとんどの努力は、良好な品質で、安全であり、導入遺伝子を含まず、又は挿入のないｉＰＳ細胞を作成するための異なる手法の開発に向けられている。これは、高品質のｉＰＳＣを効果的に産生しやすくし、その表現型を決定する生物学的機構を明らかにするために生化学が顕著に貢献する研究分野である。特に、種々の低分子の開発（Ｊｕｎｇ  ＤＷ．，ｅｔ  ａｌ．ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ、２０１４．９（１）：ｐ．８０−９５）は、ｉＰＳＣ産生のためのプロトコルを最適化し、マウスの体細胞から多能性細胞へのリプログラミングを起こさせることができる低分子の組み合わせを特定するのに重要な役割を達成した。
【００１１】
更に、ＤＮＡ及びＨ３Ｋ９メチル化のようなある種のエピジェネティックマークは、細胞リプログラミングに重要な役割を有している可能性があることが記載されている。マウス胚線維芽細胞で過剰に発現するＯｃｔ−４及びＫｌｆ−４によって得られるＢＩＸ０１２９４のリプログラミング効率は、Ｓｈｉ  Ｙ．ｅｔ  ａｌ．、Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  ２００８、３、ｐｐ．５６８−５７４に報告されている。それに加え、この論文は、ＤＮＭＴ阻害剤（２Ｓ）−２−（１，３−ジオキソイソインドリン−２−イル）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン酸（ＲＧ１０８としても知られる）が、ＢＩＸ０１２９４存在下でリプログラミング活性を向上させたことも開示する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ，２０１３．８（１）：ｐ．１６−２２
【非特許文献２】ＰＬｏＳ  ＯＮＥ，２０１１．６（２）：ｐ．ｅ１７０１２
【非特許文献３】Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２０１１，７，ｐｐ．５６６−５７４
【非特許文献４】Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１３，５６（２１），ｐｐ．８９３１−４２
【非特許文献５】ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ，２０１４．９（１）：ｐ．８０−９５
【非特許文献６】Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  ２００８，３、ｐｐ．５６８−５７４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
癌の治療及び／又は予防において、また、人工多能性幹細胞の生成において、改良された活性を示す化合物を開発することが依然として必要である。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本願発明者らは、本発明の実施例によって示されるように、ヒストンメチルトランスフェラーゼＧ９ａ及び１つ以上のＤＮＡメチルトランスフェラーゼ（ＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ及び／又はＤＮＭＴ３Ｂを含むＤＮＭＴ）の両方を阻害することができる４−アミノキノリンコアを有する新規化合物を発見した。従って、これらの化合物は、Ｇ９ａ及びＤＮＭＴの二重阻害剤であり、癌の治療及び／又は予防並びに人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）の生成に有用であろう。
【００１５】
癌における本発明の化合物の使用に関し、本発明の化合物は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験の細胞アッセイ又は動物実験において、癌の治療に有用であることが分かっている２種類の異なる標的に対応するという利点を有する。本発明の化合物が、２種類の病態生理学的事象に影響を有するという事実によって、もっと効果的な治療が導かれるだろう。
【００１６】
それに加えて、本発明の化合物のＧ９ａ／ＤＮＭＴの二重阻害も、実施例によって示されるように、細胞（特に、線維芽細胞）のリプログラミングに影響を与え、文献に記載されるようなリプログラミング活性を向上させるための１種類のＧ９ａ阻害剤と１種類のＤＮＭＴ阻害剤という２種類の異なる化合物の使用を避ける。
【００１７】
本発明の第１の態様は、式（Ｉ）の化合物、又はその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩、若しくは式（Ｉ）の化合物若しくはその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩のいずれかの立体異性体若しくは混合物に関する。
【００１８】
【化１】
0006527534.tif 000002
【００１９】
式中、
Ｒ１は、Ｒａであり；
Ｒ２は、
（ｉ）フェニル；
（ｉｉ）５員環又は６員環のヘテロ芳香族環；
（ｉｉｉ）３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合したフェニル；
（ｉｖ）３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合した５員環又は６員環のヘテロ芳香族環；
（ｖ）６〜１４員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の二環に縮合し、この二環の環がスピロ縮合している、フェニル；
（ｖｉ）６〜１４員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の二環に縮合し、この二環の環がスピロ縮合している、５員環又は６員環のヘテロ芳香族環
からなる群から選択される既知の環系であり；
ここで、Ｒ２は、
（ａ）１つのＣｙ１又は１つのＣｙ２、及び／又は
（ｂ）１つ以上の置換基Ｒｂ、及び／又は
（ｃ）１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ１で場合により置換されていてもよい１つ以上の置換基Ｚ１
で場合により置換されていてもよく、
ここで、Ｃｙ１又はＣｙ２は、Ｒｂ、及び１つ以上の置換基Ｒｂで場合により置換されていてもよいＺ２から独立して選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよく；
Ｒ３は、Ｈ、Ｒｃ、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲｃ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒｃ’、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲｃ’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｃ（Ｏ）Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｃ（Ｏ）ＯＲｃ’、−ＮＲｃ’Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｓ（Ｏ）２Ｒｃ’、−ＮＲｃ’ＳＯ２ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＳＲｃ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒｃ’、−Ｓ（Ｏ）ＯＲｃ’、−ＳＯ２Ｒｃ’、−ＳＯ２（ＯＲｃ’）、−ＳＯ２ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＳＣ（Ｏ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｃ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ’ＯＲｃ’、及び−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ’ＳＯ２Ｒｃ’から選択され；
Ｒ４は、−ＯＲａ及び−ＮＲａＲｃ’から選択され；
各Ｒａは、独立して、Ｃｙ２、又は１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ３で場合により置換されていてもよいＺ３であり、
ここで、Ｃｙ２は、
（ａ）１つのＣｙ４；及び／又は
（ｂ）１つ以上の置換基Ｒｂ、及び／又は
（ｃ）１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ４で場合により置換されていてもよい１つ以上の置換基Ｚ４
で場合により置換されていてもよく；
ここで、Ｃｙ４は、Ｒｂ、及び１つ以上の置換基Ｒｂで場合により置換されていてもよいＺ５から独立して選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよく；
ここで、Ｃｙ３は、
（ａ）１つのＣｙ５；及び／又は
（ｂ）１つ以上の置換基Ｒｂ、及び／又は
（ｃ）１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ５で場合により置換されていてもよい１つ以上の置換基Ｚ６
で場合により置換されていてもよく、
ここで、Ｃｙ５は、Ｒｂ、及び１つ以上の置換基Ｒｂで場合により置換されていてもよいＺ７から独立して選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよく、
各Ｒｂは、独立して、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲｃ’、−ＯＣ（Ｙ）Ｒｃ’、−ＯＣ（Ｙ）ＯＲｃ’、−ＯＣ（Ｙ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｃ（Ｙ）Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｃ（Ｙ）ＯＲｃ’、−ＮＲｃ’Ｃ（Ｙ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｓ（Ｏ）２Ｒｃ’、−ＮＲｃ’ＳＯ２ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＳＲｃ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒｃ’、−Ｓ（Ｏ）ＯＲｃ’、−ＳＯ２Ｒｃ’、−ＳＯ２（ＯＲｃ’）、−ＳＯ２ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＳＣ（Ｙ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−Ｃ（Ｙ）Ｒｃ’、−Ｃ（Ｙ）ＯＲｃ’、−Ｃ（Ｙ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−Ｃ（Ｙ）ＮＲｃ’ＯＲｃ’、及び−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ’ＳＯ２Ｒｃ’から選択され；
各Ｒｃ’は、独立して、Ｈ又はＲｃであり；
各Ｒｃは、独立して、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、１つ以上の二重結合又は１つ以上の三重結合を有する（Ｃ２−Ｃ６）炭化水素鎖、及び３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環からなる群から選択され、各Ｒｃは、１つ以上のハロゲン原子で場合により置換されていてもよく、
Ｙは、Ｏ、Ｓ、又はＮＲｃ’であり；
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５、Ｚ６、及びＺ７は、独立して、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、（Ｃ２−Ｃ１２）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ１２）アルキニル、及び１つ以上の二重結合又は１つ以上の三重結合を有する（Ｃ２−Ｃ６）炭化水素鎖からなる群から選択され；
Ｃｙ１、Ｃｙ４、及びＣｙ５は、独立して、フェニル；３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の単環；及び５員環又は６員環のヘテロ芳香族環からなる群から選択される既知の環系であり；
Ｃｙ２及びＣｙ３は、独立して、フェニル；５員環又は６員環のヘテロ芳香族環；３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の単環；及び３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合しているか、又は架橋して縮合しているか、又はスピロ縮合している、３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環からなる群から選択される既知の環系であり；
炭素環において、全ての環原子は、炭素原子であり；ヘテロ環及びヘテロ芳香族環において、１つ以上の環原子は、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択され；全ての飽和又は部分的に不飽和の環において、環の１個又は２個の原子は、場合により、Ｃ（Ｏ）及び／又はＣ（ＮＨ）及び／又はＣ［Ｎ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル］であり；
但し、式（Ｉ）の化合物は、
２−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］エタノール；
２−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］エタノール塩酸塩；
２−（２−クロロフェニル）−６，７−ジメトキシ−Ｎ−（４−ピリジル）キノリン−４−アミン；
１−［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］−３−（メチルアミノ）プロパン−２−オール；
１−［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］−３−（メチルアミノ）プロパン−２−オール塩酸塩；
２−［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］エタノール；
２−［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］エタノール塩酸塩；
１−アミノ−３−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］プロパン−２−オール；
１−アミノ−３−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］プロパン−２−オール塩酸塩；
２−［［２−（３，４−ジクロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］エタノール；
２−［［２−（３，４−ジクロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］エタノール塩酸塩；
（２Ｓ）−１−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］プロパン−２−オール；
（２Ｓ）−１−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］プロパン−２−オール塩酸塩；
１−［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］−３−（メチルアミノ）プロパン−２−オール；
１−［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］−３−（メチルアミノ）プロパン−２−オール塩酸塩；
１−アミノ−３−［［２−（３，４−ジクロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール；
１−アミノ−３−［［２−（３，４−ジクロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール塩酸塩；
２−［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］エタノール；
２−［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］エタノール塩酸塩；
３−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］プロパン−１；２−ジオール；
３−［（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）アミノ］プロパン−１；２−ジオール塩酸塩；
１−アミノ−３−［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール；
１−アミノ−３−［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール塩酸塩；
１−アミノ−３−［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール；
１−アミノ−３−［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール塩酸塩；
１−アミノ−３−［［７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール；
１−アミノ−３−［［７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−４−キノリル］アミノ］プロパン−２−オール塩酸塩；
２−［［７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−４−キノリル］アミノ］エタノール；
２−［［７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−４−キノリル］アミノ］エタノール塩酸塩；
５−［［［２−（４−クロロフェニル）−７−メトキシ−４−キノリル］アミノ］メチル］オキサゾリジン−２−オン；
５−［［［７−メトキシ−２−（ｐ−トリル）−４−キノリル］アミノ］メチル］オキサゾリジン−２−オン；
ベンジル−Ｎ−（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）カルバメート；
Ｎ−ベンジル−７−メトキシ−２−フェニル−キノリン−４−アミン；
Ｎ１，Ｎ１−ジエチル−Ｎ４−（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）ペンタン−１，４−ジアミン；
Ｎ１，Ｎ１−ジエチル−Ｎ４−（７−メトキシ−２−フェニル−４−キノリル）ペンタン−１，４−ジアミントリリン酸塩；及び
２−（４−フルオロフェニル）−Ｎ７−［（３−メトキシフェニル）メチル］−Ｎ４−（４−ピリジル）キノリン−４，７−ジアミン以外である。
【００２０】
本発明の第２の態様は、有効量の上に定義されるような式（Ｉ）の化合物、又はその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩、又は式（Ｉ）の化合物若しくはその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩のいずれかの立体異性体を、１つ以上の医薬的又は獣医学的に許容される賦形剤又は担体と合わせて含む、医薬組成物又は獣医学的組成物に関する。
【００２１】
本発明の第３の態様は、ヒストンメチルトランスフェラーゼＧ９ａの阻害と、ＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ、及びＤＮＭＴ３Ｂからなる群から選択される１つ以上のＤＮＭＴの阻害が介在する癌の治療及び／又は予防において使用するための式（Ｉ’）の化合物又はその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩、あるいは式（Ｉ’）の化合物又はその医薬的又は獣医学的に許容される塩のいずれかの立体異性体又は混合物に関する。
【００２２】
【化２】
0006527534.tif 000003
【００２３】
式中、
Ｒ１は、Ｒａであり；
Ｒ２’は、−ＯＺ８、Ｃｙ６、及びＺ８からなる群から選択され；各Ｚ８は、１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ７で場合により置換されていてもよく；
Ｃｙ６は、
（ａ）１つのＣｙ１又は１つのＣｙ２、及び／又は
（ｂ）１つ以上の置換基Ｒｂ、及び／又は
（ｃ）１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ１で場合により置換されていてもよい１つ以上の置換基Ｚ１
で場合により置換されていてもよく、
ここで、Ｃｙ１又はＣｙ２は、Ｒｂ、及び１つ以上の置換基Ｒｂで場合により置換されていてもよいＺ２から独立して選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよく；
Ｃｙ７は、
（ａ）１つのＣｙ８；及び／又は
（ｂ）１つ以上の置換基Ｒｂ、及び／又は
（ｃ）１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ８で場合により置換されていてもよい１つ以上の置換基Ｚ９
で場合により置換されていてもよく；
Ｃｙ８は、Ｒｂ、及び１つ以上の置換基Ｒｂで場合により置換されていてもよいＺ１０から独立して選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよく；
Ｒ３は、Ｈ、Ｒｃ、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲｃ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒｃ’、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲｃ’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｃ（Ｏ）Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｃ（Ｏ）ＯＲｃ’、−ＮＲｃ’Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｓ（Ｏ）２Ｒｃ’、−ＮＲｃ’ＳＯ２ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＳＲｃ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒｃ’、−Ｓ（Ｏ）ＯＲｃ’、−ＳＯ２Ｒｃ’、−ＳＯ２（ＯＲｃ’）、−ＳＯ２ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＳＣ（Ｏ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｃ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ’ＯＲｃ’、及び−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ’ＳＯ２Ｒｃ’から選択され；
Ｒ４は、−ＯＲａ及び−ＮＲａＲｃ’から選択され；
各Ｒａは、独立して、Ｃｙ２、又は１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ３で場合により置換されていてもよいＺ３であり；
Ｃｙ２は、
（ａ）１つのＣｙ４；及び／又は
（ｂ）１つ以上の置換基Ｒｂ、及び／又は
（ｃ）１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ４で場合により置換されていてもよい１つ以上の置換基Ｚ４
で場合により置換されていてもよく、
Ｃｙ４は、Ｒｂ、及び１つ以上の置換基Ｒｂで場合により置換されていてもよいＺ５から独立して選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよく；
Ｃｙ３は、
（ａ）１つのＣｙ５；及び／又は
（ｂ）１つ以上の置換基Ｒｂ、及び／又は
（ｃ）１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ５で場合により置換されていてもよい１つ以上の置換基Ｚ６
で場合により置換されていてもよく、
Ｃｙ５は、Ｒｂ、及び１つ以上の置換基Ｒｂで場合により置換されていてもよいＺ７から独立して選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよく；
各Ｒｂは、独立して、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲｃ’、−ＯＣ（Ｙ）Ｒｃ’、−ＯＣ（Ｙ）ＯＲｃ’、−ＯＣ（Ｙ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｃ（Ｙ）Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｃ（Ｙ）ＯＲｃ’、−ＮＲｃ’Ｃ（Ｙ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＮＲｃ’Ｓ（Ｏ）２Ｒｃ’、−ＮＲｃ’ＳＯ２ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＳＲｃ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒｃ’、−Ｓ（Ｏ）ＯＲｃ’、−ＳＯ２Ｒｃ’、−ＳＯ２（ＯＲｃ’）、−ＳＯ２ＮＲｃ’Ｒｃ’、−ＳＣ（Ｙ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−Ｃ（Ｙ）Ｒｃ’、−Ｃ（Ｙ）ＯＲｃ’、−Ｃ（Ｙ）ＮＲｃ’Ｒｃ’、−Ｃ（Ｙ）ＮＲｃ’ＯＲｃ’、及び−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃ’ＳＯ２Ｒｃ’から選択され；
各Ｒｃ’は、独立して、Ｈ又はＲｃであり；
各Ｒｃは、独立して、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、１つ以上の二重結合又は１つ以上の三重結合を有する（Ｃ２−Ｃ６）炭化水素鎖、及び３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環からなる群から選択され、各Ｒｃは、１つ以上のハロゲン原子で場合により置換されていてもよく、
Ｙは、Ｏ、Ｓ、又はＮＲｃ’であり；
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５、Ｚ６、Ｚ７、Ｚ８、Ｚ９、及びＺ１０は、独立して、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、（Ｃ２−Ｃ１２）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ１２）アルキニル、及び１つ以上の二重結合又は１つ以上の三重結合を有する（Ｃ２−Ｃ６）炭化水素鎖からなる群から選択され；
Ｃｙ１、Ｃｙ４、Ｃｙ５、及びＣｙ８は、独立して、フェニル；３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の単環；及び５員環又は６員環のヘテロ芳香族環からなる群から選択される既知の環系であり；
Ｃｙ２、Ｃｙ３、及びＣｙ７は、独立して、フェニル；５員環又は６員環のヘテロ芳香族環；３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の単環；及び３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合しているか、又は架橋して縮合しているか、又はスピロ縮合している、３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環からなる群から選択される既知の環系であり；
Ｃｙ６は、
（ｉ）フェニル；
（ｉｉ）５員環又は６員環のヘテロ芳香族環；
（ｉｉｉ）３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の単環；
（ｉｖ）３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合しているか、又は架橋して縮合しているか、又はスピロ縮合している、３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環；
（ｖ）６〜１４員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の二環に縮合し、この二環の環がスピロ縮合している、フェニル；
（ｖｉ）６〜１４員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の二環に縮合し、この二環の環がスピロ縮合している、５員環又は６員環のヘテロ芳香族環
からなる群から選択される既知の環系であり；
炭素環において、全ての環原子は、炭素原子であり；ヘテロ環及びヘテロ芳香族環において、１つ以上の環原子は、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択され；全ての飽和又は部分的に不飽和の環において、環の１個又は２個の原子は、場合により、Ｃ（Ｏ）及び／又はＣ（ＮＨ）及び／又はＣ［Ｎ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル］である。
【００２４】
従って、本発明の第３の態様は、癌の治療及び／又は予防のための医薬を製造するための上に定義されるような式（Ｉ’）の化合物の使用に関し、癌の治療及び／又は予防のための方法として配合されてもよく、有効量の既に定義された式（Ｉ’）の化合物、又はその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩、あるいは式（Ｉ’）の化合物若しくはその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩のいずれかの立体異性体若しくは混合物と、１つ以上の医薬的又は獣医学的に許容される賦形剤又は担体とを、ヒトを含む投与を必要とする被検体に投与することを含む。
【００２５】
本発明の第４の態様は、人工多能性幹細胞を生成するための方法であって、この方法は、単離された細胞を、１つ以上の転写因子及び式（Ｉ’）の化合物、又はその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩、あるいは式（Ｉ’）の化合物若しくはその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩のいずれかの立体異性体若しくは混合物と共に培養する工程を含み、式（Ｉ’）の化合物が上に定義される通りである、方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】ヒトＢ−ＡＬＬマウスモデルにいて、化合物３−０４で処理されたマウス（点線）と、コントロール群（実線）における生存曲線を表す。Ｙ軸は、生存確率（ＳＰ）％に対応する。Ｘ軸は、腫瘍細胞接種からの経過日数（Ｔ：時間）に対応する。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本明細書で使用される全ての用語は、特に示されていない限り、当該技術分野で知られているような通常の意味を有すると理解すべきである。本明細書で使用される特定の用語に関する他の更に具体的な定義は以下に記載され、他の明確に示される定義が、更に広い定義を与えていない限り、明細書及び特許請求の範囲全体で均一に適用することを意図している。
【００２８】
「炭素環」の環系という用語は、全ての環原子が炭素原子を含む既知の環系を指す。「ヘテロ環」の環系という用語は、１個以上の環原子、好ましくは、１個、２個、３個又は４個の環原子が、化学的に可能な場合にＮＨ、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される既知の環系を指す。ヘテロ環の残りの環原子は、独立して、Ｃ、ＣＨ、ＣＨ２、Ｏ、Ｎ、ＮＨ及びＳから選択される。特に明記されていない限り、「ヘテロ環」の環系は、環原子のＣ原子又はＮ原子を介し、分子の残りに接続していてもよい。炭素環及びヘテロ環はいずれも、飽和又は部分的に不飽和であってもよく、置換されていなくてもよく、あるいは本明細書に記載されるように置換されてもよく、置換基は、任意の利用可能な位置に配置された置換基である。
【００２９】
本発明の目的のために、「縮合した」環において、縮合は、２個の隣接する環に共通する１つの結合によって起こり、「架橋して縮合した」環において、縮合は、２個の環に共通する連続する原子（架橋頭部）によって起こり、「スピロ縮合した」環において、縮合は、２個の隣接する環（架橋した環を含む）に共通する１個の原子のみ（スピロ原子）、好ましくは１個の炭素原子のみによって起こる。
【００３０】
「ヘテロ芳香族」環は、１個以上の環原子、好ましくは、１個、２個、３個又は４個の環原子が、化学的に可能な場合にＮＨ、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される既知の芳香族環を指す。ヘテロ芳香族環の残りの環原子は、独立して、Ｃ、ＣＨ、ＣＨ２、Ｏ、Ｎ、ＮＨ及びＳから選択される。ヘテロ芳香族環は、本明細書に記載されるように置換されてもよく、置換基は、任意の利用可能な位置に配置された置換基である。
【００３１】
本発明は、式（Ｉ）又は（Ｉ’）の化合物の互変異性体形態も含む。「互変異性体」は、その構造が、原子（一般的には水素原子）及び１つ以上の多重結合の位置という点で異なり、ある構造から別の構造へと容易に可逆的に変化することができる異性体を意味する。互変異性体は、本出願で区別せずに用いられる。従って、一例として、ヒドロキシフェニル基は、その互変異性体形態であるシクロヘキサ−２，４−ジエノンと等価であると考えなければならない。
【００３２】
本明細書で使用される「既知の環系」という用語は、化学的に可能であり、当該技術分野で知られている環系を指し、そのため、化学的に不可能な環系を除外することを意図している。
【００３３】
本発明の目的のために、全ての飽和又は部分的に不飽和の環において、環の１個又は２個の環原子は、場合により、Ｃ（Ｏ）及び／又はＣ（ＮＨ）及び／又はＣ［Ｎ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル］であってもよい。
【００３４】
（Ｃ１−Ｃｎ）アルキルという用語は、１〜ｎ個の炭素原子と、単結合のみを含む分枝鎖又は直鎖の飽和炭化水素鎖を指す。（Ｃ２−Ｃｎ）アルケニルは、２〜ｎ個の炭素原子と、少なくとも１つ以上の二重結合を含む分枝鎖又は直鎖の不飽和炭化水素鎖を指す。（Ｃ２−Ｃｎ）アルキニルは、２〜ｎ個の炭素原子と、少なくとも１つ以上の三重結合を含む分枝鎖又は直鎖の不飽和炭化水素鎖を指す。本発明の目的のために、１つ以上の二重結合と１つ以上の三重結合を含む（Ｃ２−Ｃｎ）炭化水素鎖は、２〜ｎ個の炭素原子を含む分枝鎖又は直鎖の炭化水素鎖である。更に、上に定義されるいずれかの炭化水素鎖において、ＣＨ２又はＣＨから選択される１個又は２個の鎖原子は、場合により、Ｎ、ＮＲ、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ、ＮＲＣ（Ｏ）及びＳから独立して選択される鎖原子と置き換わっていてもよく；Ｒは、Ｈ、又は１個以上のハロゲン原子で場合により置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである。
【００３５】
ハロゲン置換基は、フルオロ、クロロ、ブロモ又はヨードを意味する。
【００３６】
式（Ｉ）若しくは式（Ｉ’）の化合物について言及し、特定の基が置換されているか、又は置換されていないかの明記（例えば、その基について特定の置換を示すことによって、又はその基が置換されていないことを示すことによる）がされていない本発明の実施形態において、その基の可能な置換は、式（Ｉ）又は式（Ｉ’）の定義に記載されているものであると理解しなければならない。更に、「本明細書に定義されるように置換された」、「既に定義されたように置換された」という表現又は任意の同義の表現は、その基の可能な置換が、式（Ｉ）又は式（Ｉ’）の定義に記載されているものであると理解しなければならない。
【００３７】
「保護基」（ＰＧ）は、分子中の反応性基に接続したときに、その反応性を覆い隠し、減らし、又は抑える原子群を指す。
【００３８】
「１個以上で置換された」という表現は、ある基が、その基が十分に置換されやすい位置を有する限りにおいて、１個以上、好ましくは、１個、２個、３個又は４個の置換基で置換されていてもよいことを意味する。
【００３９】
本発明の目的のために、「室温」は、２０〜２５℃である。
【００４０】
式（Ｉ）の化合物に関する本発明の第１の態様及び式（Ｉ’）の化合物に関するいくつかの実施形態において、本発明の化合物は、表１に列挙されるもの以外である。
【００４１】
【表１】
0006527534.tif 000004
0006527534.tif 000005
0006527534.tif 000006
0006527534.tif 000007
【００４２】
上の表からわかるように、引用された化合物は、関連する参考文献がない市販製品であるか、又はＥＰ１０８８８１８Ａ１（ＮＭＤＡ（Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸）−受容体サブタイプの選択的な遮断薬）；Ｇｉａｒｄｉｎａ  Ｇ．ｅｔ  ａｌ．、「Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｃｌａｓｓ  ｏｆ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｎｏｎ−Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｎｅｕｒｏｋｉｎｉｎ−３  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １．  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ４−Ｑｕｉｎｏｌｉｎｅｅｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ  Ｆｒａｍｅｗｏｒｋ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９７、４０（１２）、１７９４−１８０７；及びＤｒａｋｅ  Ｎ．ｅｔ  ａｌ．、「Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ａｎｔｉｍａｌａｒｉａｌｓ．Ｔｈｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｒｔａｉｎ  ４−Ａｍｉｎｏｑｕｉｎｏｌｉｎｅｅｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  １９４６、６８、１２０８−１３といった参考文献に開示されている。これらの文書には、これらの化合物が、ヒストンメチルトランスフェラーゼＧ９ａ及びＤＮＡメチルトランスフェラーゼ（ＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ又はＤＮＭＴ３Ｂ）の両方を阻害する能力は記載されておらず、癌の治療及び／若しくは予防への使用、又は人工多能性幹細胞の生成への使用も記載されていない。
【００４３】
治療目的で使用される場合、医薬的又は獣医学的に許容されるものであれば、使用可能な本発明の塩の種類に制限はない。「医薬的又は獣医学的に許容される」という用語は、アルカリ金属塩を生成するため、また、遊離酸又は遊離塩基の付加塩を生成するために一般的に用いられる塩を包含する。
【００４４】
式（Ｉ）又は式（Ｉ’）の化合物の医薬的又は獣医学的に許容される塩は、当該技術分野で知られている方法によって調製することができる。例えば、これらの塩は、従来の化学的な方法によって、塩基性部分又は酸性部分を含む親化合物から調製することができる。一般的に、このような塩は、例えば、水中、有機溶媒中、又は水と有機溶媒の混合物中、これらの化合物の遊離酸形態又は遊離塩基形態と、化学量論量の適切な医薬的又は獣医学的に許容される塩基又は酸と反応させることによって調製される。式（Ｉ）又は式（Ｉ’）の化合物及びこれらの塩は、一部の物理的特性が異なっていてもよいが、本発明の目的のためには等価である。
【００４５】
本発明の化合物は、溶媒和していない化合物又は溶媒和物（例えば、水和物）のいずれかとして、結晶形態であってもよく、両方の形態が本発明の範囲内であることを意図している。溶媒和の方法は、当該技術分野で一般的に知られている。一般的に、医薬的又は獣医学的に許容される溶媒（例えば、水、エタノールなど）で溶媒和された形態は、本発明の目的のために、その溶媒和されていない形態と等価である。
【００４６】
本発明の一部の化合物は、種々の立体異性体を生じ得るキラル中心を有していてもよい。本明細書で使用される場合、「立体異性体」の用語は、空間内での原子の配置のみが異なる個々の化合物の全ての異性体を指す。立体異性体という用語は、鏡像異性体（エナンチオマー）、鏡像異性体の混合物（ラセミ体、ラセミ混合物）、幾何（ｃｉｓ／ｔｒａｎｓ又はｓｙｎ／ａｎｔｉ又はＥ／Ｚ）異性体、及び互いに鏡像体ではない、１個より多いキラル中心を有する化合物の異性体（ジアステレオ異性体）を含む。本発明は、これらそれぞれの立体異性体に関し、更にこれらの混合物にも関する。
【００４７】
ジアステレオ異性体及びエナンチオマーは、クロマトグラフィー又は分別結晶のような従来の技術によって分離することができる。光学異性体は、光学的に純粋な異性体を与える従来の光学分割技術によって分割することができる。この分割は、任意のキラル合成中間体又は本発明の化合物に対して行うことができる。光学的に純粋な異性体は、異性体特異的な合成を用いて個々に得ることもできる。
【００４８】
式（Ｉ）又は式（Ｉ’）の化合物について言及する本発明の全ての実施形態において、式（Ｉ）又はは式（Ｉ’）の化合物のいずれかの医薬的に許容される塩及びその立体異性体、又はこれらの医薬的に許容される塩の立体異性体も、これらが具体的に述べられていない場合であっても、包含される。
【００４９】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、既に記載したような式（Ｉ）の化合物に関し、ここで、Ｒ１において、Ｃｙ２及びＣｙ３は、独立して、飽和又は部分的に不飽和の３〜７員環の炭素環又はヘテロ環の単環；及び３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合しているか、又は架橋して縮合しているか、又はスピロ縮合している、３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環から選択される既知の環系である。
【００５０】
一実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、既に記載した式（Ｉ）の化合物に関し、ここで、Ｒ２は、置換されていないフェニル、４−メチルフェニル、４−クロロフェニル、２−クロロフェニル、３，４−ジクロロフェニル、４−フルオロフェニル、及び４−メトキシフェニル以外である。
【００５１】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、既に記載した式（Ｉ）の化合物に関し、ここで、Ｒ３は、ハロゲン、−ＣＮ、及び−ＯＲｃ’から選択され、更に特定的には、Ｒ３は、ハロゲン及び−ＯＲｃ’から選択される。
【００５２】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、既に記載した式（Ｉ）の化合物に関し、ここで、Ｒ３は−ＯＲｃ’であり、更に特定的には、Ｒｃ’は、Ｈ、又はＲｃであり、Ｒｃは、１個以上のハロゲン原子で場合により置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである。
【００５３】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、既に記載した式（Ｉ）の化合物に関し、ここで、Ｒ４はＯＲａである。更に特定的には、Ｒ４のＲａは、既に定義されるように場合により置換されていてもよいＺ３である。
【００５４】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、既に記載した式（Ｉ）の化合物に関し、ここで、Ｒ４は、Ｒａが少なくとも１個の窒素原子を含むという条件でＯＲａである。
【００５５】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、既に記載した式（Ｉ）の化合物に関し、ここで、Ｒ４は、既に定義されたようなＯＣｙ２又はＯＺ３であり、Ｃｙ２は、既に定義されたように場合により置換されていてもよく、Ｚ３は、既に定義されたように、１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ３で置換されている。更に特定的には、Ｒ４は、既に定義されたようなＯＣｙ２であるか、あるいはＲ４はＯＺ３であり、Ｚ３は、既に定義されたように、１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ３で置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである。更に特定的には、Ｒ４は、既に定義されたようなＯＣｙ２であるか、あるいはＲ４はＯＺ３であり、Ｚ３は、既に定義されたように、Ｚ３が少なくとも１個の窒素原子を含むという条件で、１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ３で置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである。
【００５６】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、既に記載した式（Ｉ）の化合物に関し、ここで、Ｒ２は、
（ｉ）フェニル；
（ｉｉ）３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合したフェニル；
（ｉｉｉ）５員環又は６員環のヘテロ芳香族環；
（ｉｖ）３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合した５員環又は６員環のヘテロ芳香族環
からなる群から選択される既知の環系であり、
Ｒ２は、既に定義されたように、場合により置換されていてもよい。
【００５７】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、既に記載した式（Ｉ）の化合物に関し、ここで、Ｒ２は、炭素原子を介してキノリンに接続している。
【００５８】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、既に記載した式（Ｉ）の化合物に関し、ここで、Ｒ２は、フェニル又は５員環若しくは６員環のヘテロ芳香族単環であり、これらは、両方とも、既に定義されたように、場合により置換されていてもよい基である。更に特定的には、Ｒ２は、既に定義されたように場合により置換されていてもよい５員環又は６員環のヘテロ芳香族単環であり、更に特定的には、Ｒ２は、炭素原子を介してキノリンに接続しており、更に特定的には、Ｒ２は、２−チオフェン、２−ピロール、３−ピロール、２−フラン、及び３−フランからなる群から選択される。
【００５９】
上述のように、本発明は、ヒストンメチルトランスフェラーゼＧ９ａの阻害並びにＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ、及びＤＮＭＴ３Ｂからなる群から選択される１つ以上のＤＮＭＴの阻害が介在する癌の治療及び／又は予防において使用するための式（Ｉ’）の化合物若しくはその塩、又は式（Ｉ’）の化合物若しくはその塩のいずれかの立体異性体若しくは混合物にも関する。
【００６０】
一実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、ヒストンメチルトランスフェラーゼＧ９ａの阻害並びにＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ、及びＤＮＭＴ３Ｂからなる群から選択される１つ以上のＤＮＭＴの阻害が介在する癌の治療及び／又は予防において使用するための式（Ｉ’）の化合物に関し、ここで、Ｒ２’はＣｙ６であり、Ｃｙ６は、
（ｉ）フェニル；
（ｉｉ）５員環又は６員環のヘテロ芳香族環；
（ｉｉｉ）３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合したフェニル；
（ｉｖ）３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合した５員環又は６員環のヘテロ芳香族環；
（ｖ）６〜１４員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の二環に縮合し、この二環の環がスピロ縮合している、フェニル；及び
（ｖｉ）６〜１４員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の二環に縮合し、この二環の環がスピロ縮合している、５員環又は６員環のヘテロ芳香族環
からなる群から選択される既知の環系であり、
Ｒ２’は、既に定義されたように場合により置換されていてもよく；但し、式（Ｉ’）の化合物は、表１に列挙されたもの以外である。
【００６１】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、ヒストンメチルトランスフェラーゼＧ９ａの阻害並びにＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ、及びＤＮＭＴ３Ｂからなる群から選択される１つ以上のＤＮＭＴの阻害が介在する癌の治療及び／又は予防において使用するための式（Ｉ’）の化合物に関し、ここで、Ｒ１において、Ｃｙ２及びＣｙ３は、独立して、３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の単環；及び３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合しているか、又は架橋して縮合しているか、又はスピロ縮合している、３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環からなる群から選択される既知の環系である。
【００６２】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、ヒストンメチルトランスフェラーゼＧ９ａの阻害並びにＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ、及びＤＮＭＴ３Ｂからなる群から選択される１つ以上のＤＮＭＴの阻害が介在する癌の治療及び／又は予防において使用するための式（Ｉ’）の化合物に関し、ここで、Ｒ２’は、置換されていないフェニル、４−メチルフェニル、４−クロロフェニル、２−クロロフェニル、３，４−ジクロロフェニル、４−フルオロフェニル、及び４−メトキシフェニル以外である。
【００６３】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、ヒストンメチルトランスフェラーゼＧ９ａの阻害並びにＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ、及びＤＮＭＴ３Ｂからなる群から選択される１つ以上のＤＮＭＴの阻害が介在する癌の治療及び／又は予防において使用するための式（Ｉ’）の化合物に関し、ここで、Ｒ３は、ハロゲン、−ＣＮ及び−ＯＲｃ’から選択され；更に特定的には、Ｒ３は、ハロゲン、及び−ＯＲｃ’から選択される。
【００６４】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、ヒストンメチルトランスフェラーゼＧ９ａの阻害並びにＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ、及びＤＮＭＴ３Ｂからなる群から選択される１つ以上のＤＮＭＴの阻害が介在する癌の治療及び／又は予防において使用するための式（Ｉ’）の化合物に関し、ここで、Ｒ３は−ＯＲｃ’であり；更に特定的には、Ｒｃ’は、Ｈ又はＲｃであり；Ｒｃは、１個以上のハロゲン原子で場合により置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである。別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、ヒストンメチルトランスフェラーゼＧ９ａの阻害並びにＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ、及びＤＮＭＴ３Ｂからなる群から選択される１つ以上のＤＮＭＴの阻害が介在する癌の治療及び／又は予防において使用するための式（Ｉ’）の化合物に関し、ここで、Ｒ４はＯＲａである。更に特定的には、Ｒ４のＲａは、既に定義されるように場合により置換されていてもよいＺ３である。
【００６５】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、ヒストンメチルトランスフェラーゼＧ９ａの阻害並びにＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ、及びＤＮＭＴ３Ｂからなる群から選択される１つ以上のＤＮＭＴの阻害が介在する癌の治療及び／又は予防において使用するための式（Ｉ’）の化合物に関し、ここで、Ｒ４は、Ｒａが少なくとも１個の窒素原子を含むという条件でＯＲａである。
【００６６】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、ヒストンメチルトランスフェラーゼＧ９ａの阻害並びにＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ、及びＤＮＭＴ３Ｂからなる群から選択される１つ以上のＤＮＭＴの阻害が介在する癌の治療及び／又は予防において使用するための式（Ｉ’）の化合物に関し、ここで、Ｒ４は、既に定義されたようなＯＣｙ２又はＯＺ３であり、Ｃｙ２は、既に定義されたように場合により置換されていてもよく、Ｚ３は、既に定義されたように、１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ３で置換されている。更に特定的には、Ｒ４は、既に定義されたようなＯＣｙ２であるか、あるいはＲ４はＯＺ３であり、Ｚ３は、既に定義されたように、１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ３で置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである。更に特定的には、Ｒ４は、既に定義されたようなＯＣｙ２であるか、あるいはＲ４はＯＺ３であり、Ｚ３は、既に定義されたように、Ｚ３が少なくとも１個の窒素原子を含むという条件で、１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ３で置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである。
【００６７】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、ヒストンメチルトランスフェラーゼＧ９ａの阻害並びにＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ、及びＤＮＭＴ３Ｂからなる群から選択される１つ以上のＤＮＭＴの阻害が介在する癌の治療及び／又は予防において使用するための式（Ｉ’）の化合物に関し、ここで、Ｒ２’はＣｙ６であり、Ｃｙ６は、
（ｉ）フェニル；
（ｉｉ）３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合したフェニル；
（ｉｉｉ）５員環又は６員環のヘテロ芳香族環；
（ｉｖ）３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合した５員環又は６員環のヘテロ芳香族環
からなる群から選択される既知の環系であり、
Ｒ２’は、既に定義されたように場合により置換されていてもよい。
【００６８】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、ヒストンメチルトランスフェラーゼＧ９ａの阻害並びにＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ、及びＤＮＭＴ３Ｂからなる群から選択される１つ以上のＤＮＭＴの阻害が介在する癌の治療及び／又は予防において使用するための式（Ｉ’）の化合物に関し、ここで、Ｒ２’は炭素原子を介してキノリンに接続している。
【００６９】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、ヒストンメチルトランスフェラーゼＧ９ａの阻害並びにＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ、及びＤＮＭＴ３Ｂからなる群から選択される１つ以上のＤＮＭＴの阻害が介在する癌の治療及び／又は予防において使用するための式（Ｉ’）の化合物に関し、ここで、Ｒ２’は、フェニル又は５員環若しくは６員環のヘテロ芳香族単環であり、これらは、両方とも、既に定義されたように、場合により置換されていてもよい基である。更に特定的には、Ｒ２’は、既に定義されたように場合により置換されていてもよい５員環又は６員環のヘテロ芳香族単環であり、更に特定的には、Ｒ２’は、炭素原子を介してキノリンに接続しており、更に特定的には、Ｒ２’は、２−チオフェン、２−ピロール、３−ピロール、２−フラン、及び３−フランからなる群から選択される。
【００７０】
上述のように、本発明は、１つ以上の転写因子及び式（Ｉ’）の化合物若しくはその塩、又は式（Ｉ’）の化合物若しくはその塩のいずれかの立体異性体若しくは混合物と共に、単離された細胞を培養することによって、人工多能性幹細胞を生成するための方法にも関する。
【００７１】
一実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、上に定義されたような人工多能性幹細胞を生成する方法に関し、ここで、式（Ｉ’）の化合物において、Ｒ２’はＣｙ６であり、Ｃｙ６は、
（ｉ）フェニル；
（ｉｉ）５員環又は６員環のヘテロ芳香族環；
（ｉｉｉ）３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合したフェニル；
（ｉｖ）３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合した５員環又は６員環のヘテロ芳香族環；
（ｖ）６〜１４員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の二環に縮合し、この二環の環がスピロ縮合している、フェニル；及び
（ｖｉ）６〜１４員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の二環に縮合し、この二環の環がスピロ縮合している、５員環又は６員環のヘテロ芳香族環
からなる群から選択される既知の環系であり、
Ｒ２’は、既に定義されたように場合により置換されていてもよく；但し、式（Ｉ’）の化合物は、表１に列挙されたもの以外である。
【００７２】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、上に定義されたような人工多能性幹細胞を生成する方法に関し、ここで、式（Ｉ’）の化合物において、Ｒ１において、Ｃｙ２及びＣｙ３は、独立して、３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の単環；及び３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合しているか、又は架橋して縮合しているか、又はスピロ縮合している、３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環からなる群から選択される既知の環系である。
【００７３】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、上に定義されたような人工多能性幹細胞を生成する方法に関し、ここで、式（Ｉ’）の化合物において、Ｒ２’は、置換されていないフェニル、４−メチルフェニル、４−クロロフェニル、２−クロロフェニル、３，４−ジクロロフェニル、４−フルオロフェニル、及び４−メトキシフェニル以外である。
【００７４】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、上に定義されたような人工多能性幹細胞を生成する方法に関し、ここで、式（Ｉ’）の化合物において、Ｒ３は、ハロゲン、−ＣＮ、及びＯＲｃ’から選択され；更に特定的には、Ｒ３はハロゲン及びＯＲｃ’から選択される。
【００７５】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、上に定義されたような人工多能性幹細胞を生成する方法に関し、ここで、式（Ｉ’）の化合物において、Ｒ３は−ＯＲｃ’であり；更に特定的には、Ｒｃ’は、Ｈ又はＲｃであり；Ｒｃは、１個以上のハロゲン原子で場合により置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである。
【００７６】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、上に定義されたような人工多能性幹細胞を生成する方法に関し、ここで、式（Ｉ’）の化合物において、Ｒ４はＯＲａである。更に特定的には、Ｒ４のＲａは、既に定義されるように場合により置換されていてもよいＺ３である。
【００７７】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、上に定義されたような人工多能性幹細胞を生成する方法に関し、ここで、式（Ｉ’）の化合物において、Ｒ４は、Ｒａが少なくとも１個の窒素原子を含むという条件でＯＲａである。
【００７８】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、上に定義されたような人工多能性幹細胞を生成する方法に関し、ここで、式（Ｉ’）の化合物において、Ｒ４は、既に定義されたようなＯＣｙ２又はＯＺ３であり、Ｃｙ２は、既に定義されたように場合により置換されていてもよく、Ｚ３は、既に定義されたように、１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ３で置換されている。更に特定的には、Ｒ４は、既に定義されたようなＯＣｙ２であるか、又はＲ４はＯＺ３であり、Ｚ３は、既に定義されたように、１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ３で置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである。更に特定的には、Ｒ４は、既に定義されたようなＯＣｙ２であるか、又はＲ４はＯＺ３であり、Ｚ３は、既に定義されたように、Ｚ３が少なくとも１個の窒素原子を含むという条件で、１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ３で置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである。
【００７９】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、上に定義されたような人工多能性幹細胞を生成する方法に関し、ここで、式（Ｉ’）の化合物において、Ｒ２’はＣｙ６であり、Ｃｙ６は、
（ｉ）フェニル；
（ｉｉ）３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合したフェニル；
（ｉｉｉ）５員環又は６員環のヘテロ芳香族環；
（ｉｖ）３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合した５員環又は６員環のヘテロ芳香族環
からなる群から選択される既知の環系であり、
Ｒ２’は、既に定義されたように場合により置換されていてもよい。
【００８０】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、上に定義されたような人工多能性幹細胞を生成する方法に関し、ここで、式（Ｉ’）の化合物において、Ｒ２’は、炭素原子を介してキノリンに接続している。
【００８１】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、上に定義されたような人工多能性幹細胞を生成する方法に関し、ここで、式（Ｉ’）の化合物において、Ｒ２’は、フェニル又は５員環又は６員環のヘテロ芳香族単環であり、これらは、両方とも、既に定義されたように、場合により置換されていてもよい基である。更に特定的には、Ｒ２’は、既に定義されたように場合により置換されていてもよい５員環又は６員環のヘテロ芳香族単環であり、更に特定的には、Ｒ２’は、炭素原子を介してキノリンに接続しており、更に特定的には、Ｒ２’は、２−チオフェン、２−ピロール、３−ピロール、２−フラン、及び３−フランからなる群から選択される。別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、既に記載したような式（Ｉ）又は（Ｉ’）の化合物において、
（ａ）Ｒ１のＣｙ２及びＣｙ３は、独立して、３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の単環；及び３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合しているか、又は架橋して縮合しているか、又はスピロ縮合している、３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環からなる群から選択される既知の環系であり；
（ｂ）Ｒ２又はＲ２’は、炭素原子を介してキノリンに接続しており；更に特定的には、Ｒ２又はＲ２’は、フェニル又は５員環又は６員環のヘテロ芳香族単環であり、これらは、炭素原子を介してキノリンに接続したＲ２又はＲ２’であり、これらは、既に定義されたように、場合により置換されていてもよい基であり；更に特定的には、Ｒ２又はＲ２’は、２−チオフェン、２−ピロール、３−ピロール、２−フラン、及び３−フランからなる群から選択される。
【００８２】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、既に記載したような式（Ｉ）又は（Ｉ’）の化合物において、
（ａ）Ｒ１のＣｙ２及びＣｙ３は、独立して、３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和の炭素環又はヘテロ環の単環；及び３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環に縮合しているか、又は架橋して縮合しているか、又はスピロ縮合している、３〜７員環の飽和又は部分的に不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環の単環からなる群から選択される既知の環系であり；
（ｂ）Ｒ４は、Ｒａが少なくとも１個の窒素原子を含むという条件でＯＲａであるか、又はＲ４は、既に定義されたようなＯＣｙ２又はＯＺ３であり、Ｃｙ２は、既に定義されたように場合により置換されていてもよく、Ｚ３は、既に定義されたように、１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ３で置換されている。更に特定的には、Ｒ４は、既に定義されたようなＯＣｙ２であるか、又はＲ４はＯＺ３であり、Ｚ３は、既に定義されたように、１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ３で置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである。更に特定的には、Ｒ４は、既に定義されたようなＯＣｙ２であるか、又はＲ４はＯＺ３であり、Ｚ３は、既に定義されたように、Ｚ３が少なくとも１個の窒素原子を含むという条件で、１つ以上の置換基Ｒｂ及び／又は１つのＣｙ３で置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである。
【００８３】
更に、式（Ｉ）の化合物について言及する本発明の全ての実施形態は、癌の治療及び／若しくは予防に使用されるとき、又は人工多能性幹細胞を生成するための方法において、式（Ｉ’）の化合物にも適用する。
【００８４】
免疫に関連する疾患の治療及び／又は予防に使用するための式（Ｉ’）の化合物若しくはその塩、又は式（Ｉ’）の化合物若しくはその塩のいずれかの立体異性体若しくは混合物を用いて前処理された間葉系幹細胞も本発明の一部を形成する。あるいは、この態様は、免疫に関連する疾患の治療及び／又は予防に使用するための医薬を製造するための式（Ｉ’）の化合物若しくはその塩、又は式（Ｉ’）の化合物若しくはその塩のいずれかの立体異性体若しくは混合物を用いて前処理された間葉系幹細胞の使用として配合することができ、式（Ｉ’）の化合物若しくはその塩、又は式（Ｉ’）の化合物若しくはその塩のいずれかの立体異性体若しくは混合物を用いて前処理された有効な量の間葉系幹細胞を、これを必要とする被検体（ヒトを含む）に投与することを含む、免疫に関連する疾患の治療及び／又は予防のための方法として配合されてもよい。
【００８５】
式（Ｉ’）の化合物若しくはその塩、又は式（Ｉ’）の化合物若しくはその塩のいずれかの立体異性体若しくは混合物と共に、単離された間葉系幹細胞を適切な培地中で培養することによって、前処理された間葉系幹細胞を得るための方法も本発明の一部を形成する。
【００８６】
本発明の別の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、以下からなる群から選択される。
【００８７】
【化３】
0006527534.tif 000008
0006527534.tif 000009
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【００８８】
本発明の別の実施形態において、式（Ｉ’）の化合物は、以下からなる群から選択される。
【００８９】
【化４】
0006527534.tif 000016
0006527534.tif 000017
【００９０】
本発明の別の実施形態において、式（Ｉ’）の化合物は、３−０２、３−０３、３−０４、３−０５、３−０６、３−０７、３−０８、３−０９、３−１０、３−１１、３−１２、３−１３、３−１４、３−１５、３−１６、３−１７、３−１８、３−１９、３−２０、３−２１、３−２５、３−２６、３−２７、３−２８、３−２９、３−３０、３−３１、３−３２、３−３３、３−３４、３−３５、３−３６、３−３７、３−３８、３−３９、３−４０、３−４１、３−４２、３−４３、３−４４、３−４５、３−４６、３−４７、３−４８、３−４９、３−５０、３−５１、３−５２、３−５３、３−５４、３−５５、３−５６、４−０１、４−０２、４−０３、５−０１、５−０２、５−０３、５−０４、５−０５、５−０６、５−０７、８−０１、８−０２、９−０１、１０−０１、１１−０１、１１−０２、１１−０３、１１−０４、１１−０５、１１−０６、１１−０７、１１−０８、１１−０９、１１−１０、１１−１１、１１−１２、１１−１３、１２−０１、１２−０２、１２−０３、１２−０４、１２−０５、１２−０６、１３−０１、１４−０１、１６−０１、１６−０２、１７−０１、１７−０２、１８−０１、１８−０２、１９−０１、１９−０２、１９−０３、１−０１、１−０２、２−０１、３−０１、３−２２、３−２３、３−２４、６−０１、６−０２、７−０１、７−０２、７−０４、７−０５、及び１５−０１からなる群から選択される。
【００９１】
式（Ｉ’）の化合物を調製するための方法も、これらの方法で使用される中間体と共に、本発明の一部である。
【００９２】
従って、式（Ｉ’）の化合物は、式（ＩＩ）の化合物と式（ＩＩＩ）の化合物とをカップリングすることによって得ることができる。
【００９３】
【化５】
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【００９４】
式中、Ｒ１、Ｒ２’、Ｒ３、及びＲ４は、既に定義した通りであり、Ｘはハロゲン原子であり、好ましくはクロロである。この変換は、パラジウム触媒、例えば、トリス（ジベンジリデンアセトン）二パラジウム（０）（Ｐｄ２（ｄｂａ）３）、有機リン化合物、例えば、ビフェニル−２−イル−ジシクロヘキシル−ホスファン、（２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル）（ＢＩＮＡＰ）、又は４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（Ｘａｎｔｐｈｏｓ）及び塩基、例えば、Ｃｓ２ＣＯ３、ナトリウム  ｔｅｒｔ−ブトキシド、又はＫ３ＰＯ４の存在下で行われてもよい。この反応は、例えば、ジメチルエーテル（ＤＭＥ）、トルエン又はジオキサンのような適切な溶媒中で、適切な温度で、好ましくは加熱して行われる。
【００９５】
以下のスキームに示されるように、式（ＩＩ）の化合物は、式（Ｖ）のアニリンと式（ＶＩ）の化合物とを反応させ、その後、得られた式（ＩＶ）の化合物を式（ＩＩ）の化合物に変換することによって得ることができる。
【００９６】
【化６】
0006527534.tif 000019
【００９７】
式中、Ｘ、Ｒ２’、Ｒ３、及びＲ４は、既に定義された通りであり、Ｒ’は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルを表す。１つ目の変換は、ハロゲン化剤（例えば、ＰＯＣｌ３）存在下、適切な温度で、好ましくは加熱して行われてもよく、２つ目の変換は、適切な溶媒（例えば、ポリリン酸（ＰＰＡ））中、適切な温度で、好ましくは加熱して行われてもよい。
【００９８】
Ｒ２’がＯＲａである（即ち、式（Ｉ’ａ）の化合物）、ＮＲａＲｃである（即ち、式（Ｉ’ｂ）の化合物）、Ｃｙ６である（即ち、式（Ｉ’ｃ）の化合物）、又はＺ８である（即ち、式（Ｉ’ｄ）の化合物）である式（Ｉ’）の化合物は、以下のスキームに示されるように、式（ＶＩＩ）の化合物と、式（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）、又は（ＸＩ）の化合物とをそれぞれ反応させ、その後、得られた式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、又は（ＩＩｄ）の化合物を、上述のような式（Ｉ’）のそれぞれの化合物に変換することによって得ることができる。
【００９９】
【化７】
0006527534.tif 000020
【０１００】
式中、Ｒ１、Ｒａ、Ｒｃ、Ｃｙ６、Ｚ８、Ｒ３、及びＲ４は、既に定義された通りであり、Ｘは、ハロゲン原子、好ましくはクロロであり、Ｍは、アルカリ金属、好ましくは、ナトリウムであり、Ｒは、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであるか、又はボロン酸誘導体の場合、２個のＲ基と、これらが接続するＢ原子とで環を形成していてもよい。
【０１０１】
式（Ｉ’ａ）の化合物の場合、１つ目の変換は、溶媒を用いずに、適切な温度で、好ましくは室温で行われてもよい。式（Ｉ’ｂ）の化合物の場合、１つ目の変換は、式（ＩＩ）の化合物を式（Ｉ’）の化合物に変換するために、上に記載したのと同じ条件で行われてもよい。式（Ｉ’ｃ）又は式（Ｉ’ｄ）の化合物の場合、１つ目の変換は、パラジウム触媒、例えば、テトラキス（トリフェニル−ホスフィン）パラジウム（０）（Ｐｄ（ＰＰｈ３）４）及び塩基、例えば、Ｋ２ＣＯ３の存在下、ホウ酸誘導体を用い、適切な溶媒（例えば、場合により水と混合してもよいジオキサン）中、適切な温度で、好ましくは加熱して行われてもよい。あるいは、この変換は、スズ酸塩誘導体を用い、パラジウム触媒、例えば、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（Ｐｄ（ＰＰｈ３）Ｃｌ２）存在下、適切な溶媒（例えば、ジメチルホルムアミド）中、適切な温度で、好ましくは加熱して行われてもよい。
【０１０２】
式（ＶＩＩ）の化合物は、式（ＸＩＩＩ）の化合物から得ることができ、式（ＸＩＩＩ）の化合物を式（Ｖ）の化合物へと還元し、その後、式（ＸＩＶ）の化合物と反応させ、式（ＶＩＩ）の化合物を得る。
【０１０３】
【化８】
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【０１０４】
式（ＸＩＩＩ）の化合物の還元は、水素添加によって行われてもよく、一方、式（Ｖ）の化合物から式（ＶＩＩ）の化合物への変換は、ハロゲン化剤（例えば、ＰＯＣｌ３）存在下、適切な温度で、好ましくは加熱して行われる。あるいは、上述の反応は、異なる順序で行われてもよい。式（Ｉ’）の化合物を式（Ｉ’）の他の化合物に変換してもよい。式（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩＩ）〜（ＸＩＶ）の化合物は、市販されているか、又は従来の合成プロセスによって得ることができる。
【０１０５】
本発明は、有効量の上に定義したような式（Ｉ）の化合物又はその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩、又は式（Ｉ）の化合物若しくはその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩のいずれかの立体異性体を、医薬的又は獣医学的に許容される賦形剤又は担体と合わせて含む、医薬組成物又は獣医学的組成物にも関する。
【０１０６】
「治療に有効な量」の表現は、本明細書で使用される場合、投与されたときに、対処される疾患の１つ以上の症状の発現を防ぐか、あるいはある程度まで軽減するのに十分な化合物の量を指す。治療上の利益を得るための本発明の化合物の具体的な投薬量は、特に、患者の身長、体重、年齢及び性別、疾患の性質及び段階、疾患の侵襲度及び投与経路を含め、個々の患者の特定の状況に応じて変わるだろう。例えば、約０．０１〜約３００ｍｇ／ｋｇの投薬量を使用してもよい。
【０１０７】
「医薬的又は獣医学的に許容される賦形剤又は担体」という表現は、医薬的又は獣医学的に許容される材料、組成物又はビヒクルを指す。それぞれの構成要素は、医薬組成物又は獣医学的組成物の他の成分と適合性であるという観点で、医薬的又は獣医学的に許容されなければならない。更に、それぞれの構成要素は、合理的なベネフィット／リスク比に見合うよりも過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性若しくは他の問題又は合併症が存在せずに、ヒト及び動物の組織又は臓器と接触させて使用するのに適していなければならない。
【０１０８】
医薬製剤又は獣医学的製剤の選択は、活性化合物の性質及びその投与経路に依存して変わるだろう。任意の投与経路、例えば、経口投与、非経口投与、及び局所投与を使用してもよい。
【０１０９】
例えば、医薬組成物又は獣医学的組成物を経口投与のために配合してもよく、１つ以上の生理的に適合する担体又は賦形剤を固体形態又は液体形態で含んでいてもよい。これらの調製物は、結合剤、フィラー、滑沢剤、及び許容される湿潤剤のような従来の成分を含んでいてもよい。
【０１１０】
医薬組成物又は獣医学的組成物は、従来の注射可能な担体（例えば、水又は適切なアルコール）と組み合わせて、非経口投与のために配合されてもよい。注射のための従来の医薬的な賦形剤又は獣医学的な賦形剤、例えば、安定化剤、可溶化剤、及びバッファーが、このような組成物に含まれていてもよい。これらの医薬組成物又は獣医学的組成物を筋肉内、腹腔内、又は静脈内に注射してもよい。
【０１１１】
医薬組成物は、局所投与のために配合されてもよい。製剤としては、クリーム、ローション、ゲル、粉末、溶液、及びパッチ剤が挙げられ、上述の化合物は、適切な賦形剤に分散又は溶解する。
【０１１２】
医薬組成物は、即時放出又は遅延放出のために、特に、錠剤、ペレット、カプセル、水溶液若しくは油性溶液、懸濁物、エマルション、又は使用前に水若しくは他の適切な液体媒体を用いて再構築するのに適した乾燥粉末の形態を含む任意の形態であってもよい。
【０１１３】
適切な賦形剤及び／又は担体、並びにこれらの量は、調製される製剤の種類に従って、当業者が容易に決定することができる。
【０１１４】
上述のように、キノリンコアを含み、既に定義されたように置換された、特に、２位でＲ２’基によって置換された、４位でアミン基によって置換された、７位でＲ４基によって置換された本発明の化合物は、Ｇ９ａ及びＤＮＭＴの二重阻害剤である。本発明の目的のために、このことは、上に定義したような化合物が、Ｇ９ａ及びＤＮＭＴの阻害が、本発明に記載される酵素アッセイで測定される場合、ＩＣ５０値≦１０μＭ、好ましくは≦１μＭ、更に好ましくは≦５００ｎＭでＧ９ａを阻害することができ、更に、ＩＣ５０値≦１０μＭ、好ましくは≦１μＭ、更に好ましくは≦５００ｎＭでＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ、及びＤＮＭＴ３Ｂからなる群から選択される１つ以上のＤＮＭＴを阻害することができることを意味する。
【０１１５】
Ｇ９ａ及びＤＮＭＴの二重阻害剤として、本発明の化合物を癌の治療及び／又は予防に使用してもよい。
【０１１６】
本発明の目的のために、疾患の「治療」の用語は、薬物を、疾患発生の症状を示す被検体に使用するとき、疾患の進行を止めるか、あるいは遅らせることを指す。「予防」という用語は、薬物を、疾患発生の症状を示していないが、疾患発生のリスクが高い被検体に使用するとき、疾患の進行を止めるか、あるいは遅らせることを指す。
【０１１７】
一実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、癌は、血液の癌及び固体腫瘍からなる群から選択される。更に特定的には、血液の癌は、白血病、リンパ腫、及び多発性骨髄腫からなる群から選択され、固体腫瘍は、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、大腸癌、膠芽腫、肝細胞癌、肺癌、メラノーマ、膵癌、前立腺癌、及び腎臓癌からなる群から選択される。
【０１１８】
式（Ｉ’）の化合物は、他の癌を治療する薬剤と合わせて相乗的に効果的であってもよい。従って、一実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、本発明は、ヒストンメチルトランスフェラーゼＧ９ａの阻害並びにＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ、及びＤＮＭＴ３Ｂからなる群から選択される１つ以上のＤＮＭＴの阻害が介在する癌の治療及び／又は予防において使用するための式（Ｉ’）の化合物又はその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩、あるいは式（Ｉ’）の化合物又はその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩の任意の立体異性体又は混合物に関し、ここで、この治療は、式（Ｉ’）の化合物又はその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩、あるいは式（Ｉ’）の化合物又はその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩の任意の立体異性体又は混合物と、１つ以上の他の癌を治療する化合物を同時に、連続して、又は別個に被検体に投与することを含む。
【０１１９】
あるいは、上の実施形態を、癌の治療及び／又は予防のための医薬を製造するための式（Ｉ’）の化合物又はその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩、あるいは式（Ｉ’）の化合物又はその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩の任意の立体異性体又は混合物の使用として配合してもよく、ここで、この治療は、式（Ｉ’）の化合物又はその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩、あるいは式（Ｉ’）の化合物又はその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩の任意の立体異性体又は混合物と、１つ以上の他の癌を治療する化合物を同時に、連続して、又は別個に被検体に投与することを含む。
【０１２０】
あるいは、上の実施形態を、有効な量の既に定義された式（Ｉ’）の化合物又はその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩、あるいは式（Ｉ’）の化合物又はその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩の任意の立体異性体又は混合物と、１つ以上の医薬的又は獣医学的に許容される賦形剤又は担体を、これを必要とする被検体（ヒトを含む）に投与することを含む、癌の治療及び／又は予防のための方法として配合してもよく、ここで、この治療は、式（Ｉ’）の化合物又はその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩、あるいは式（Ｉ’）の化合物又はその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩の任意の立体異性体又は混合物と、１つ以上の他の癌を治療する化合物を同時に、連続して、又は別個に被検体に投与することを含む。
【０１２１】
他の癌を治療する化合物の例としては、限定されないが、以下のものが挙げられる。
−プロテオソーム阻害剤；例えば、ボルテゾミブ、カルジルフォミド（Ｃａｌｚｉｒｆｏｍｉｄ）など、
−免疫調節薬（ＩＭＩＤ）；例えば、レブラミド、サリドマイド、ポマリドミド、レナリドミドなど
−モノクローナル抗体；例えば、リツキシマブ、ＳＡＲ６５０９８４、ダラツムマブ、イプリムマブ、ニボルマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ベバシズマブ、ペルツズマブ、アフリベルセプト、ラムシルマブ、ハーセプチン、ラムブロリツマブなど
−キナーゼ阻害剤；例えば、イマチニブ、イブルチニブ、エルロチニブ、スニチニブ、ソラフェニブ、ラパチニブ、レゴラフェニブ、パゾパニブ、アキシチニブ、カボザンチニブ、アファチニブ、ゲフィチニブ、ダコミチニブ、クリゾチニブ、セリチニブ、ダブラフェニブなど
−ヒストンデアセチラーゼ阻害剤；例えば、ボリノスタット、パノビノスタット、ロシリノスタット（Ｒｏｃｉｌｉｎｏｓｔａｔ）など。
【０１２２】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、癌は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、大腸癌、膠芽腫、肝細胞癌、メラノーマ、膵癌、前立腺癌、腎臓癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、急性骨髄性白血病、マントル細胞リンパ腫、及び多発性骨髄腫からなる群から選択される。
【０１２３】
更に、本発明の化合物は、人工多能性幹細胞の生成にも有用である。従って、この態様は、人工多能性幹細胞を生成するための上に定義したような式（Ｉ’）の化合物又はその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩、あるいは式（Ｉ’）の化合物又はその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩のいずれかの立体異性体又は混合物の使用に関し、人工多能性幹細胞を生成するための方法として配合されてもよく、この方法は、単離された細胞を、１つ以上の転写因子及び式（Ｉ’）の化合物又はその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩、あるいは式（Ｉ’）の化合物又はその医薬的若しくは獣医学的に許容される塩のいずれかの立体異性体又は混合物と共に培養する工程を含む。
【０１２４】
リプログラミングされる細胞の種類を考慮する当業者は、上記の方法を行うための培養条件、転写因子、及び適切なリプログラミング系をどのように調節するかを知っているだろう。一般的に、１つ以上の転写因子、例えば、ＯＣＴ４（Ｏ）、ＳＯＸ２（Ｓ）、ＫＬＦ４（Ｋ）及びｃＭＹＣ（Ｍ）、好ましくは、２種類又は４種類の転写因子を使用してもよい。
【０１２５】
別の実施形態において、場合により、上述の、又は以下に記載される種々の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせて、単離された細胞は、単離された線維芽細胞である。
【０１２６】
この記載及び特許請求の範囲全体で、「〜を含む」という用語及びその変形語は、他の技術的な特徴、添加剤、構成要素、又は工程を除外しないことを意図している。更に、「〜を含む」という用語は、「〜からなる」の場合を包含する。本発明の更なる目的、利点、及び特徴は、この記載を検討すると、当業者に明らかになるだろう。あるいは、本発明の実施によって学ぶだろう。以下の実施例は、実例として与えられ、以下の実施例は、本発明を限定するものであることを意図していない。更に、本発明は、本明細書に記載される具体的な実施形態及び好ましい実施形態の全ての可能な組み合わせを包含する。
【実施例】
【０１２７】
（分取ＨＰＬＣ精製方法のための一般的な手順）
２３３ポンプ（二成分）を備えるＧｉｌｓｏｎ  ２８１、オートサンプラー及びＵＶ検出器を用い、ＨＰＬＣ測定を行った。フラクションをＬＣ−ＭＳによって検出した。ＭＳ検出器は、エレクトロスプレーイオン化源を備えていた。このイオン化源の温度は、３００〜３５０℃に維持されていた。
【０１２８】
ＨＰＬＣ方法（精製方法）：
方法１：Ｌｕｎａ  Ｃ１８（１００×３０ｍｍ；４ｕｍ）で逆相ＨＰＬＣを行った。溶媒Ａ：０．０７５％のトリフルオロ酢酸を含む水、溶媒Ｂ：０．０７５％のトリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル。勾配：室温で、２５ｍＬ／ｍｉｎで６分以内にＢが２０％から４０％、次いで、２５ｍＬ／ｍｉｎで４０％のＢを２分間、ＵＶ検出器。
【０１２９】
方法２：ｌｕｎａ（１００×３０ｍｍ；５ｕｍ）で逆相ＨＰＬＣを行った。溶媒Ａ：０．０７５％のＴＦＡを含む水、溶媒Ｂ：０．０７５％のＴＦＡを含むアセトニトリル。勾配：２５℃で、１０分以内にＢが１３％から３３％、次いで、３３％のＢを４分、流速：２５ｍＬ／ｍｉｎ。ＰＤＡ。
【０１３０】
方法３：Ｌｕｎａ  Ｃ１８（１００×３０ｍｍ；４ｕｍ）で逆相ＨＰＬＣを行った。溶媒Ａ：０．０７５％のトリフルオロ酢酸を含む水、溶媒Ｂ：０．０７５％のトリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル。勾配：室温で、２５ｍＬ／ｍｉｎで６分以内にＢが２０％から４５％、次いで、２５ｍＬ／ｍｉｎで４０％のＢを３分間、ＵＶ検出器。
【０１３１】
方法４：ｌｕｎａ（１００×３０ｍｍ；５ｕｍ）で逆相ＨＰＬＣを行った。溶媒Ａ：０．０７５％のＴＦＡを含む水、溶媒Ｂ：０．０７５％のＴＦＡを含むアセトニトリル。勾配：２５℃で、１０分以内にＢが１０％から３０％、次いで、３０％のＢを５分、流速：２０ｍＬ／ｍｉｎ。ＰＤＡ。
【０１３２】
方法５：Ｌｕｎａ（１００×３０ｍｍ；５ｕｍ）、分取逆相ＨＰＬＣで精製した。溶媒Ａ：０．０７５％のＴＦＡを含む水、溶媒Ｂ：０．０７５％のＴＦＡを含むアセトニトリル。勾配：２５℃で、６分以内にＢが３％から２３％、次いで、２３％のＢを４分、流速：２５ｍＬ／ｍｉｎ。ＰＤＡ。
【０１３３】
方法６：Ｌｕｎａ  Ｃ１８（１００×３０ｍｍ；４ｕｍ）で逆相ＨＰＬＣを行った。溶媒Ａ：０．０７５％のＴＦＡを含む水、溶媒Ｂ：０．０７５％のＴＦＡを含むアセトニトリル。勾配：２５℃で、２０ｍＬ／ｍｉｎで６分以内にＢが２５％から４５％、次いで、２５ｍＬ／ｍｉｎで４０％のＢを３分間、ＵＶ検出器。
【０１３４】
実施例では、以下の省略語を使用した。
【０１３５】
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー、ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー、ＭＷ：マイクロ波、ｃａｌｃ．：計算値、ｃｏｎｃ．：濃縮、ＲＴ：室温、Ｒｔ：保持時間、Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピリジン、ＤＣＭ：ジクロロメタン、ＤＩＡＤ：ジイソプロピルアゾジカルボキシレート、ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド、ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド、ＥＡ：酢酸エチル、ＥＤＣ・ＨＣｌ：１−エチル−３−（３−ジメチルアミノ−プロピル）カルボジイミド塩酸塩、ｅｑ：当量、ＥＳＩ−ＭＳ：エレクトロスプレーイオン化質量分析法、Ｅｔ３Ｎ：トリエチルアミン、ＨＯＢｔ：ヒドロキシベンゾトリアゾール、ＬＤＡ：リチウムジイソプロピルアミド、ＮＭＭ：Ｎ−メチルモルホリン、ＰＥ：石油エーテル、ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸、ＴＨＦ：テトラヒドロフラン、ＴＨＰ：テトラヒドロピラン、ＤＥＡＤ：ジエチルアゾジカルボキシレート、ＢＩＮＡＰ：２，２’ビス（ジフェニルホスフィニオ）−１，１’）−ビナフチル、Ｘ−Ｐｈｏｓ：２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル、ＰＰＡ：ポリリン酸、ＤＭＥ：１，２−ジメトキシエタン。
【０１３６】
（試薬Ｒ−０５ｂの調製：トリブチル−（５−エチル−２−フリル）スタンナンの調製）
市販の２−エチルフラン（１．９２ｇ、２０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（８．８ｍＬ、２２ｍｍｏｌ）を−７８℃で徐々に加え、次いで、−２５℃で２時間攪拌した。次いで、−７８℃でトリブチルクロロスタンナン（６．８９ｇ、２０ｍｏｌ）を加えた。反応混合物をＲＴで攪拌した。この混合物を水でクエンチし、ＡｃＯＥｔで抽出した。有機層を減圧下で濃縮し、所望の試薬Ｒ−０５ｂ（１ｇ、１３％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：３８７．１、Ｃ１８Ｈ３４ＯＳｎとしてのｃａｌｃ．：３８６．１。
【０１３７】
【化９】
0006527534.tif 000022
【０１３８】
上のスキームにおいて、Ｒ３は、Ｈ、Ｃｌ、ＯＣＦ３、又はＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、Ｒａは、窒素原子及び／又は酸素原子を含む炭化水素鎖である。
【０１３９】
（中間体Ｉ−０２ａ：１−［３−（２−メトキシ−５−ニトロ−フェノキシ）プロピル］−ピロリジンの調製）
市販の２−メトキシ−５−ニトロ−フェノール：Ｉ−０１ａ（１９．６ｇ、０．１２ｍｏｌ）のＴＨＦ（２００ｍＬ）溶液に、ＰＰｈ３（６１ｇ、０．２３ｍｏｌ）、市販の３−ピロリジン−１−イル−プロパン−１−オール：Ｒ−０１ａ（１５ｇ、０．１６ｍｏｌ）及びＤＥＡＤ（４０ｇ、０．２３ｍｏｌ）を０℃で加え、この溶液をＲＴで５時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、ＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、未精製生成物を得て、これをカラムクロマトグラフィー（溶出勾配ＰＥ：ＥＡ＝１：０から３：１）によって精製し、中間体Ｉ−０２ａ（１４ｇ、収率４４％）を黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：２８１、Ｃ１４Ｈ２０Ｎ２Ｏ４としてのｃａｌｃ．：２８０．１。
【０１４０】
（中間体Ｉ−０２ｂ：１−［３−（３−ニトロフェノキシ）プロピル］ピロリジンの調製）
市販の３−ニトロフェノール：Ｉ−０１ｂから出発し、Ｉ−０２ａと類似の様式で中間体Ｉ−０２ｂを得た。収率３７％、ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：２５１、Ｃ１３Ｈ１８Ｎ２Ｏ３についてのｃａｌｃ．：２５０．１。
【０１４１】
（中間体Ｉ−０３ａ：４−メトキシ−３−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）アニリンの調製）
中間体Ｉ−０２ａ（１４ｇ、０．０５ｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２００ｍＬ）溶液にＰｄ／Ｃ（３ｇ）を加えた。Ｈ２雰囲気下、この溶液をＲＴで３時間攪拌した。この溶液を濾過し、濃縮して中間体Ｉ−０３ａ（１２ｇ、９６％）を黄色油状物として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：２５１、Ｃ１４Ｈ２２Ｎ２Ｏ２についてのｃａｌｃ．：２５０．１。
【０１４２】
（中間体Ｉ−０３ｂ：３−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）アニリンの調製）
中間体Ｉ−０２ｂから出発し、Ｉ−０３ａと類似の様式で中間体Ｉ−０３ｂを得た。収率９６％、ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：２２１、Ｃ１３Ｈ２０Ｎ２Ｏについてのｃａｌｃ．：２２０．１。
【０１４３】
（中間体Ｉ−０４ａ：２，４−ジクロロ−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノロンの調製）
中間体Ｉ−０３ａ（１２．４ｇ、０．０４９ｍｏｌ）のＰＯＣｌ３（２００ｍＬ）溶液に、ＲＴで市販のマロン酸（５．６７、０．０５５ｍｏｌ）を加えた。ＲＴで４時間攪拌した後、この溶液を９０℃で一晩加熱し、この溶液を濃縮し、氷水に注ぎ、次いで、ＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、中間体Ｉ−０４ａ（１０ｇ、６６％）を淡黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：３５５、Ｃ１７Ｈ２０Ｃｌ２Ｎ２Ｏ２についてのｃａｌｃ．：３５４．１。
【０１４４】
（中間体Ｉ−０４ｂ：２，４−ジクロロ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノロンの調製）
中間体Ｉ−０３ｂから出発し、Ｉ−０４ａと類似の様式で中間体Ｉ−０４ｂを得た。収率３４％、ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：３２５、Ｃ１６Ｈ１８Ｃｌ２Ｎ２Ｏについてのｃａｌｃ．：３２４．１。
【０１４５】
（中間体Ｉ−０４ｃ：２，４−ジクロロ−６，７−ジメトキシ−キノリン  ３，４−ジメトキシアニリンの調製）
市販の３，４−ジメトキシアニリン：Ｉ−０３ｃから出発し、Ｉ−０４ａと類似の様式で中間体Ｉ−０４ｃを得た。淡黄色固体として収率５９％。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：２５８、Ｃ１１Ｈ９Ｃｌ２ＮＯ２についてのｃａｌｃ．：２５７．０。
【０１４６】
以下の表に示される化合物Ｉ−０１から出発する中間体Ｉ−０４ａの合成経路（３工程）と同じ経路に従い、以下の表に示される試薬を用い、以下の中間体を得た。
【０１４７】
【表２】
0006527534.tif 000023
【０１４８】
（中間体Ｉ−０５ａ：６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）−２−（トリフルオロメチル）キノリン−４−オールの調製）
丸底フラスコ中、攪拌しながらＰＰＡ（５０ｍＬ）を８０℃で加熱し、次いで、中間体Ｉ−０３ａ（５ｇ、０．０２ｍｏｌ）を８０〜１００℃で加えた。加えた後、この反応混合物に市販のエチル  ４，４，４−トリフルオロ−３−オキソブタノエート（３．６８ｇ、０．０２ｍｏｌ）を１５〜２０分かけて加えた。この反応混合物を１２０℃で１２時間、激しく攪拌した。次いで、この混合物を氷水に注ぎ、Ｎａ２ＣＯ３を加えることによってｐＨを８に調整し、次いで減圧下で濃縮し、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（３：１）で抽出した。合わせた有機層を減圧下で濃縮し、中間体Ｉ−０５ａ（２．５ｇ、３２％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：３７１、Ｃ１８Ｈ２１Ｆ３Ｎ２Ｏ３についてのｃａｌｃ．：３７０．１。
【０１４９】
（中間体Ｉ−０６ａ：４−クロロ−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）−２−（トリフルオロメチル）キノロンの調製）
中間体Ｉ−０５ａ（３７０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）をＰＯＣｌ３（３０ｍＬ）に溶解し、次いで、１１０℃で２時間攪拌した。この反応混合物を減圧下で濃縮し、次いで、氷水でクエンチし、ＡｃＯＥｔで抽出し、有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、所望の中間体Ｉ−０６ａ（２００ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：３８９、Ｃ１８Ｈ２０ＣｌＦ３Ｎ２Ｏ２についてのｃａｌｃ．：３８８．１。
【０１５０】
【化１０】
0006527534.tif 000024
【０１５１】
上のスキームにおいて、Ｒ１は、環状（Ｃｙ）又は炭化水素鎖であり、場合により、窒素原子、酸素原子及び／又はフッ素原子を含んでいてもよく、Ｃｙは、アリール、ヘテロアリール、炭素環、又はヘテロ環であり；Ｒ３は、Ｏ（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり；Ｒａ及びＲｃは、独立して、炭化水素鎖であり、場合により、窒素原子を含んでいてもよい。
【０１５２】
（中間体Ｉ−０７ａ：４−クロロ−６，７−ジメトキシ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）キノロンの調製）
中間体Ｉ−０４ｃ（３ｇ、０．０１ｍｏｌ）のジオキサン（３０ｍＬ）溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（６．５２ｇ、０．０２ｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（０．６２ｇ、０．００１ｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（０．９２ｇ、０．００１ｍｏｌ）及びＲ−０２ａ：１−メチル−ピペラジン（３．５ｇ、０．０３５ｍｏｌ）を加えた。この混合物を１１０℃で一晩加熱した。この溶液を濃縮し、ＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、未精製生成物を得て、これを分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法１）によって精製し、中間体Ｉ−０７ａ（１ｇ、２７％）を黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：３２２、Ｃ１６Ｈ２０ＣｌＮ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：３２１．１。
【０１５３】
（中間体Ｉ−０７ｂ：４−クロロ−６−メトキシ−２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノリンの調製）
中間体Ｉ−０４ａから出発し、Ｉ−０７ａと類似の様式で中間体Ｉ−０７ｂを得た。収率１８％、ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４１９、Ｃ２２Ｈ３１ＣｌＮ４Ｏ２についてのｃａｌｃ．：４１８．２。
【０１５４】
（中間体Ｉ−０８ａ：４−クロロ−２，６−ジメトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノリンの調製）
中間体Ｉ−０４ａ（１．５ｇ、４．２４ｍｍｏｌ）をＮａＯＭｅ（２５ｍＬ、２５％）に溶解し、次いで、ＲＴで一晩攪拌した。水を加えることによって反応混合物をクエンチした。有機相を分離し、濃縮し、未精製生成物を得て、これを分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法１）によって精製し、所望の中間体Ｉ−０８ａ（０．５ｇ、３４％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：３５１、Ｃ１８Ｈ２３ＣｌＮ２Ｏ３についてのｃａｌｃ．：３５０．１。
【０１５５】
（化合物１−０１：６，７−ジメトキシ−２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−Ｎ−（１−メチル−４−ピペリジル）キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸の調製）
中間体Ｉ−０７ａ（２．５ｇ、７．８ｍｍｏｌ）のジオキサン（５０ｍＬ）溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（５．０８ｇ、５．６ｍｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（０．４８ｇ、０．７８ｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（０．７ｇ、０．７８ｍｏｌ）及びＲ−０３ａ：１−メチル−ピペリジン−４−イルアミン（１．７７ｇ、１５．６ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を１１０℃で一晩化熱した。この溶液を濃縮し、ＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、未精製生成物を得て、これを分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法１）によって精製し、化合物１−０１をＴＦＡ塩として得た（０．０２ｇ、１％）。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４００．３、Ｃ２２Ｈ３３Ｎ５Ｏ２・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：５１３．２；Ｒｔは１．７９である。
【０１５６】
化合物１−０１のための合成経路と同じ合成経路に従い、以下の表に特に示されていない限り、同じ試薬と中間体を用い、以下の化合物を得た。
【０１５７】
【表３】
0006527534.tif 000025
【０１５８】
【化１１】
0006527534.tif 000026
【０１５９】
上のスキームにおいて、Ｒ１は、環状（Ｃｙ）又は炭化水素鎖であり、場合により、窒素原子、酸素原子及び／又はフッ素原子を含んでいてもよく、Ｃｙは、アリール、ヘテロアリール、炭素環、又はヘテロ環であり；Ｒ２は、アリール又はヘテロアリールであり；Ｒ３は、Ｈ、Ｃｌ、ＯＣＦ３、又はＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり；Ｒａは、炭化水素鎖であり、場合により、窒素原子及び／又は酸素原子を含んでいてもよい。
【０１６０】
（中間体Ｉ−０９ａ：４−クロロ−６，７−ジメトキシ−２−メチル−キノリンの調製）
中間体Ｉ−０４ｃ（４ｇ、０．０１６ｍｏｌ）のジオキサン（６０ｍＬ）溶液に、メチルボロン酸（Ｒ−０４ａ）（１．０２ｇ、０．０１７ｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（４．３ｇ、０．０３１２ｍｏｌ）、Ｐｄ（Ｐｈ３）４（１．８ｇ、０．００１６ｍｏｌ）を加え、この溶液を一晩かけて１２０℃まで加熱した。この反応混合物を濃縮し、ＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、未精製生成物を得て、これをカラムクロマトグラフィー（溶出勾配ＰＥ：ＥＡ＝１：０から３：１）によって精製し、中間体Ｉ−０９ａ（０．７ｇ、収率１８％）を黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：２３８、Ｃ１２Ｈ１２ＣｌＮＯ２についてのｃａｌｃ．：２３７．０。
【０１６１】
中間体I−０９ａのための合成経路と同じ合成経路に従い、以下の表に特に示されていない限り、同じ試薬と中間体を用い、以下の中間体を得た。
【０１６２】
【表４】
0006527534.tif 000027
【０１６３】
（中間体Ｉ−０９ｓ：４−クロロ−２−（２−フリル）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノロンの調製）
中間体Ｉ−０４ａ（７０８ｍｇ、２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５ｍＬ）溶液に、市販のトリブチル（２−フリル）スタンナン（Ｒ−０５ａ）（７１６ｍｇ、２ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ＰＰｈ３）Ｃｌ２（８７．７ｍｇ、触媒）を加えた。この溶液を１２時間かけて１１０℃まで加熱した。この混合物を濃縮し、未精製生成物を得て、これを分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法１）によって精製し、中間体Ｉ−０９ｓ（４００ｍｇ、収率５２％）を黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：３８７．２、Ｃ２１Ｈ２３ＣｌＮ２Ｏ３についてのｃａｌｃ．：３８６．１。
【０１６４】
中間体Ｉ−０９のための合成経路と同じ合成経路に従い、以下の表に特に示されていない限り、同じ試薬と中間体を用い、以下の中間体を得た。
【０１６５】
【表５】
0006527534.tif 000028
【０１６６】
（化合物３−０１：６，７−ジメトキシ−２−メチル−Ｎ−（１−メチル−４−ピペリジル）キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸の調製）
中間体Ｉ−０９ａ（１００ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（５ｍＬ）溶液に、Ｋ３ＰＯ４（０．２６ｇ、１．２６ｍｍｏｌ）、ビフェニル−２−イル−ジシクロヘキシル−ホスファン（０．０２２ｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（０．５７、０．０６３ｍｍｏｌ）、１−メチルピペリジン−４−アミン（Ｒ−０３ａ）（０．２４ｇ、２．１ｍｍｏｌ）を加え、マイクロ波を照射しつつ、混合物を３時間かけて１１０℃まで加熱した。この溶液を濃縮し、ＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、未精製生成物を得て、これを分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法１）によって精製し、化合物３−０１をＴＦＡ塩として得た（０．０２ｇ、収率０．１５％）。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：３１６．２、Ｃ１８Ｈ２５Ｎ３Ｏ２・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：４２９．２；Ｒｔは１．５４である。
【０１６７】
（化合物３−０２：６，７−ジメトキシ−２−（５−メチル−２−フリル）−Ｎ−（１−メチル−４−ピペリジル）キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸の調製）
中間体Ｉ−０９ｂから出発し、化合物３−０１と類似の様式で化合物３−０２を得た。分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法１）によって精製した。収率：ＴＦＡ塩として１０％。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：３８２．３、Ｃ２２Ｈ２７Ｎ３Ｏ３・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：４９５．２；Ｒｔは１．８４である。
【０１６８】
化合物３−０２のための合成経路と同じ合成経路に従い、以下の表に特に示されていない限り、同じ試薬と中間体を用い、以下の化合物を得た。
【０１６９】
【表６】
0006527534.tif 000029
【０１７０】
（化合物３−０４：６−メトキシ−２−（５−メチル−２−フリル）−Ｎ−（１−メチル−４−ピペリジル）−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸の調製）
中間体Ｉ−０９ｄから出発し、化合物３−０１と類似の様式で化合物３−０４を得た。分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法１）によって精製した。収率：ＴＦＡ塩として２０％。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４７９、Ｃ２８Ｈ３８Ｎ４Ｏ３・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：５９２．３；Ｒｔは１．４７である。
【０１７１】
化合物３−０４のための合成経路と同じ合成経路に従い、以下の表に特に示されていない限り、同じ試薬と中間体を用い、以下の化合物を得た。
【０１７２】
【表７】
0006527534.tif 000030
0006527534.tif 000031
【０１７３】
（化合物３−４３：２−（５−メチル−２−フリル）−４−［（１−メチル−４−ピペリジル）アミノ］−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノリン−６−オール；２，２，２−トリフルオロ酢酸の調製）
化合物３−０４（５０ｍｇ、０．１０１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液に、ＢＢｒ３（２５４．２６ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）を０℃でゆっくり加え、この溶液をＮ２雰囲気下、０℃で２時間攪拌した。次いで、この溶液を水でクエンチし、濃縮し、未精製生成物を得て、これを分取ＨＰＬＣ（一般的な方法３）によって精製し、化合物３−４３（１１ｍｇ、２３％）を黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４６５．３、Ｃ２７Ｈ３６Ｎ４Ｏ３・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：５７８．２；Ｒｔは１．６である。
【０１７４】
（化合物３−４４：２−（５−メチル−２−フリル）−４−［（１−メチル−４−ピペリジル）メチルアミノ］−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノリン−６−オール；２，２，２−トリフルオロ酢酸の調製）
化合物３−０７から出発し、化合物３−４３と類似の様式で化合物３−４４を得た。分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法３）によって精製した。収率：ＴＦＡ塩として２１％、ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４７９．３、Ｃ２８Ｈ３８Ｎ４Ｏ３・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：５９２．３；Ｒｔは１．７４である。
【０１７５】
【化１２】
0006527534.tif 000032
【０１７６】
上のスキームにおいて、Ｒ２は、アリール又はヘテロアリールであり；Ｒ３は、Ｈ、Ｃｌ、ＯＣＦ３、又はＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり；Ｒ５は、Ｈ又は（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、Ｒａは、窒素原子及び／又は酸素原子を含む炭化水素鎖である。
【０１７７】
（中間体Ｉ−１０ａ：ｔｅｒｔ−ブチル  ３−［［６−メトキシ−２−（５−メチル−２−フリル）−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）−４−キノリル］アミノ］−７−アザスピロ［３．５］ノナン−７−カルボキシレートの調製）
中間体Ｉ−０９ｄ（４００ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（６５０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（７０ｍｇ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（１００ｍｇ）及び市販のＲ−０６ａ：ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アミノ−７−アザスピロ［３．５］ノナン−７−カルボキシレート（２２４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を加えた。マイクロ波を照射しつつ、反応混合物を５時間かけて１３０℃まで加熱した。この溶液を濃縮し、ＡｃＯＥｔで抽出した。有機層を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、未精製生成物を得て、これを分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法３）によって精製し、中間体Ｉ−１０ａ（２００ｍｇ、１７％）を黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：６０５．３、Ｃ３５Ｈ４８Ｎ４Ｏ５についてのｃａｌｃ．：６０４．３。
【０１７８】
（中間体Ｉ−１０ｂ：ｔｅｒｔ−ブチル  ２−［［６−メトキシ−２−（５−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）−４−キノリル］アミノ］−７−アザスピロ［３．５］ノナン−７−カルボキシレートの調製）
中間体Ｉ−０９ｌ（２００ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（３２５ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（３５ｇ、触媒）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（５０ｍｇ）及び市販のＲ−０６ｂ：ｔｅｒｔ−ブチル  ２−アミノ−７−アザスピロ［３．５］ノナン−７−カルボキシレート（１８０ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を１２０℃で１２時間加熱した。この溶液を濃縮し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相を分離し、塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、未精製生成物を得て、これを分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法３）によって精製し、中間体Ｉ−１０ｂ（８０ｍｇ、１７％）を黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：６０４．３、Ｃ３５Ｈ４９Ｎ５Ｏ４についてのｃａｌｃ．：６０３．３。
【０１７９】
（中間体Ｉ−１０ｃ：ｔｅｒｔ−ブチル  ２−［［２−（５−エチル−２−フリル）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）−４−キノリル］アミノ］−７−アザスピロ［３．５］ノナン−７−カルボキシレートの調製）
Ｉ−０９ｔから出発し、中間体Ｉ−１０ｂと類似の様式で中間体Ｉ−１０ｃを得た。収率４４％。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：６１９．３、Ｃ３６Ｈ５０Ｎ４Ｏ５についてのｃａｌｃ．。
【０１８０】
（中間体Ｉ−１０ｄ：ｔｅｒｔ−ブチル  ３−［［２−（５−エチル−２−フリル）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）−４−キノリル］アミノ］−７−アザスピロ［３．５］ノナン−７−カルボキシレートの調製）
Ｉ−０９ｔから出発し、中間体Ｉ−１０ａと類似の様式で中間体Ｉ−１０ｄを得た。収率２４％。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：６１９．４、Ｃ３６Ｈ５０Ｎ４Ｏ５についてのｃａｌｃ．。
【０１８１】
（化合物４−０１：Ｎ−（７−アザスピロ［３．５］ノナン−３−イル）−６−メトキシ−２−（５−メチル−２−フリル）−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸の調製）
中間体Ｉ−１０ａ（６０．４ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）溶液にＨＣｌ／ＭｅＯＨ（５ｍＬ、４Ｍ）を加え、この溶液をＲＴで５時間攪拌した。この溶液を濃縮し、化合物４−０１をＴＦＡ塩として（４９ｍｇ、９７％）、黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：５０５．３、Ｃ３０Ｈ４０Ｎ４Ｏ３・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：６１８．３；Ｒｔは２．２９である。
【０１８２】
（化合物４−０２：Ｎ−（７−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）−６−メトキシ−２−（５−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノリン−４  アミン：塩酸塩の調製）
Ｉ−１０ｂから出発し、化合物４−０１と類似の様式で化合物４−０２をＨＣｌ塩として得た。収率９２％。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：５０４．３、Ｃ３０Ｈ４１Ｎ５Ｏ２・ＣｌＨについてのｃａｌｃ．：５３９．３；Ｒｔは１．８９である。
【０１８３】
（化合物４−０３：Ｎ−（７−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）−２−（５−エチル−２−フリル）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノリン−４−アミン：２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
Ｉ−１０ｃから出発し、化合物４−０１と類似の様式で化合物４−０３をＴＦＡ塩として得た。分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法３）によって精製した。収率３４％。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：５１９．４、Ｃ３１Ｈ４２Ｎ４Ｏ３・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：６３２．３；Ｒｔは１．８５である。
【０１８４】
（化合物４−０４：Ｎ−（７−アザスピロ［３．５］ノナン−３−イル）−２−（５−エチル−２−フリル）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノリン−４−アミン；塩酸塩の調製）
Ｉ−１０ｄから出発し、化合物４−０１と類似の様式で化合物４−０４をＨＣｌ塩として得た。収率８９％。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：５１９．４、Ｃ３１Ｈ４２Ｎ４Ｏ３・ＨＣｌについてのｃａｌｃ．：５５４．３。
【０１８５】
（化合物５−０１：６−メトキシ−Ｎ−（７−メチル−７−アザスピロ［３．５］ノナン−３−イル）−２−（５−メチル−２−フリル）−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
化合物４−０１（５０．５ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）溶液にＲ−０７ａ（ＨＣＨＯ）ｎ（９ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液をｒ．ｔ．で１時間攪拌し、次いで、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（２５ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を加え、この反応混合物をＲＴで一晩攪拌した。有機層を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、未精製生成物を得て、これを分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法３）によって精製し、化合物５−０１をＴＦＡ塩として（２５ｍｇ、４８％）、黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：５１９．３、Ｃ３１Ｈ４２Ｎ４Ｏ３・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：６３２．３；Ｒｔは２．２９である。
【０１８６】
化合物５−０１のための合成経路と同じ合成経路に従い、以下の表に特に示されていない限り、同じ試薬と中間体を用い、以下の化合物を得た。
【０１８７】
【表８】
0006527534.tif 000033
【０１８８】
（化合物５−０５：６−メトキシ−Ｎ−（７−メチル−７−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）−２−（５−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
４−０２から出発し、化合物５−０１と類似の様式で化合物５−０５を得た。分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法３）によって精製した。収率３５％。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：５１８．４、Ｃ３１Ｈ４３Ｎ５Ｏ２・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：６３１．３；Ｒｔは１．８３である。
【０１８９】
（化合物５−０６：２−（５−エチル−２−フリル）−６−メトキシ−Ｎ−（７−メチル−７−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
４−０３から出発し、化合物５−０１と類似の様式で化合物５−０６を得た。分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法６）によって精製した。収率１９％。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：５３３．４、Ｃ３２Ｈ４４Ｎ４Ｏ３・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：６４６．３；Ｒｔは１．８８である。
【０１９０】
（化合物５−０７：２−（５−エチル−２−フリル）−６−メトキシ−Ｎ−（７−メチル−７−アザスピロ［３．５］ノナン−３−イル）−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
４−０４から出発し、化合物５−０１と類似の様式で化合物５−０７を得た。分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法６）によって精製した。収率９６％。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：５３３．５、Ｃ３２Ｈ４４Ｎ４Ｏ３・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：６４６．３；Ｒｔは１．９０である。
【０１９１】
【化１３】
0006527534.tif 000034
【０１９２】
上のスキームにおいて、Ｒ１は、環状（Ｃｙ）又は炭化水素鎖であり、場合により、窒素原子、酸素原子及び／又はフッ素原子を含んでいてもよく、Ｃｙは、アリール、ヘテロアリール、炭素環、又はヘテロ環であり；Ｒ３は、Ｏ（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり；Ｒａは、窒素原子を含む炭化水素鎖であり、Ｘは、炭素原子又は酸素原子である。
【０１９３】
（中間体Ｉ−１１ａ：４−クロロ−２−（シクロヘキセン−１−イル）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノロンの調製）
中間体Ｉ−０４ａ（７０８ｍｇ、２ｍｍｏｌ）のジオキサン／水（５／１ｍＬ）溶液に、Ｋ２ＣＯ３（２７ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２３３ｍｇ、３０％）、２−（シクロヘキサ−１−エン−１−イル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（Ｒ−０４ｉ）（４１６ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を加え、この溶液を、ＭＷを照射しつつ、１２０℃で１時間加熱し、次いで、この混合物を濃縮し、ＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、未精製生成物を得て、これをカラムクロマトグラフィー（溶出勾配ＰＥ：ＥＡ＝１：０から３：１）によって精製し、中間体Ｉ−１１ａ（０．４ｇ、収率５０％）を黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４０１、Ｃ２３Ｈ２９ＣｌＮ２Ｏ２についてのｃａｌｃ．：４００．２。
【０１９４】
（化合物６−０１：２−（シクロヘキセン−１−イル）−６−メトキシ−Ｎ−（１−メチル−４−ピペリジル）−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
中間体Ｉ−１１ａから出発し、化合物１−０１と類似の様式で化合物６−０１を得た。分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法５）によって精製した。収率：ＴＦＡ塩として２０％。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４７９．６、Ｃ２９Ｈ４２Ｎ４Ｏ２・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：５９２．３；Ｒｔは１．４８である。
【０１９５】
化合物６−０１のための合成経路と同じ合成経路に従い、以下の表に示される試薬を用い、以下の化合物を得た。
【０１９６】
【表９】
0006527534.tif 000035
【０１９７】
（化合物６−０３：ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［［２−（シクロヘキセン−１−イル）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）−４−キノリル］アミノ］ピペリジン−１−カルボキシレートの調製）
中間体Ｉ−１１ａ（１５０ｍｇ、３７４．１２ｕｍｏｌ）及びｔｅｒｔ−ブチル  ４−アミノピペリジン−１−カルボキシレート（Ｒ−０３ｘ）（３７４．６ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）のジオキサン（３０ｍＬ）溶液に、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（６８．５ｍｇ、７４．８２ｕｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（９３．２ｍｇ、１４９．６５ｕｍｏｌ）及びＣｓ２ＣＯ３（３０４．８ｍｇ、９３５．３０ｕｍｏｌ）を連続して加えた。得られた混合物をＮ２下、１３０℃で３６時間攪拌した。次いで、この混合物を水（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した（４０ｍＬ×２回）。合わせた有機相を塩水（８０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）によって精製し、化合物６−０３（１５６ｍｇ、収率７３．８３％）を黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：５６５．４、Ｃ３３Ｈ４８Ｎ４Ｏ４についてのｃａｌｃ．。
【０１９８】
（化合物７−０１：２−シクロヘキシル−６−メトキシ−Ｎ−（１−メチル−４−ピペリジル）−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
化合物６−０１（４７．８ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１０ｍＬ）溶液に、Ｈ２下、Ｐｄ／Ｃ（１５ｍｇ）を加えた。この溶液をｒ．ｔ．で一晩攪拌した。この反応混合物を濾過し、濾液を濃縮し、所望の生成物である化合物７−０１をＴＦＡ塩として得た（０．０４８ｇ、収率９５％）。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４８１、Ｃ２９Ｈ４４Ｎ４Ｏ２・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：５９４．３；Ｒｔは１．５４である。
【０１９９】
（化合物７−０２：６−メトキシ−Ｎ−（１−メチル−４−ピペリジル）−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）−２−テトラヒドロピラン−４−イル−キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
６−０２から出発し、化合物７−０１と類似の様式で化合物７−０２を得た。ＴＦＡ塩として収率６３．５％。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４８３．３、Ｃ２８Ｈ４２Ｎ４Ｏ３・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：５９６．３；Ｒｔは２．４４である。
【０２００】
（化合物７−０３：ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［［２−シクロヘキシル−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）−４−キノリル］アミノ］ピペリジン−１−カルボキシレートの調製）
６−０３から出発し、化合物７−０１と類似の様式で化合物７−０３を得た。収率９９％。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：５６７．５、Ｃ３３Ｈ５０Ｎ４Ｏ４についてのｃａｌｃ．。
【０２０１】
（化合物７−０４：２−シクロヘキシル−６−メトキシ−Ｎ−（４−ピペリジル）−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
化合物７−０３（６５．００ｍｇ、１１４．６８ｕｍｏｌ）のＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（１．０Ｍ、２０．００ｍＬ）溶液を１６℃で４時間攪拌した。次いで、この反応混合物を濃縮し、分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法１）によって精製し、所望の生成物である７−０４をＴＦＡ塩として（４０．３ｍｇ、収率６０．５％）、黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４６７．４、Ｃ２８Ｈ４２Ｎ４Ｏ２・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：５８０．３；Ｒｔは１．７３である。
【０２０２】
（化合物７−０５：２−シクロヘキシル−Ｎ−（１−イソプロピル−４−ピペリジル）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
ＴＨＦ（３０ｍＬ）中、化合物７−０４（９０ｍｇ、１７８．８８ｕｍｏｌ）及びアセトン（６２．４ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｎ２下、１６℃でＡｃＯＨ（６４．５ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ）及びＮａＢＨ３ＣＮ（６７．５ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ）を一度に加えた。この混合物を５０℃で１５時間攪拌した。次いで、この混合物を１６℃まで冷却し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法１）によって精製し、所望の生成物である７−０５をＴＦＡ塩として（３８ｍｇ、収率
３３％）、黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：５０９．５、Ｃ３１Ｈ４８Ｎ４Ｏ２・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：６２２．３；Ｒｔは１．８１である。
【０２０３】
【化１４】
0006527534.tif 000036
【０２０４】
上のスキームにおいて、Ｒ３、Ｒａ、及びＲｃは、既に定義された通りであり、Ｒ１は、環状（Ｃｙ）又は炭化水素鎖であり、場合により、窒素原子、酸素原子及び／又はフッ素原子を含んでいてもよく、Ｃｙは、アリール、ヘテロアリール、炭素環又はヘテロ環であり；Ｒ３はＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり；Ｒａは窒素原子を含む炭化水素鎖である。
【０２０５】
（中間体Ｉ−１２ａ：５−［４−クロロ−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）−２−キノリル］フラン−２−カルバルデヒドの調製）
中間体Ｉ−０４ａ（１ｇ、２．８ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン／Ｈ２Ｏ（１５／３ｍＬ）溶液に、Ｎａ２ＣＯ３（８９０ｍｇ、８．４ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（３２３ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）、及び（５−ホルミル−２−フリル）ボロン酸（Ｒ−０４ｋ）（３４７ｍｇ、２．５２ｍｍｏｌ）を加えた。マイクロ波を照射しつつ、この溶液を１１０℃で２時間加熱した。この混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、未精製生成物を得て、これを分取ＴＬＣによって精製し、中間体Ｉ−１２ａ（０．５ｇ、収率４７％）を淡黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４１５、Ｃ２２Ｈ２３ＣｌＮ２Ｏ４についてのｃａｌｃ．：４１４．１。
【０２０６】
（中間体Ｉ−１３ａ：１−［５−［４−クロロ−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）−２−キノリル］−２−フリル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−メタンアミンの調製）
中間体Ｉ−１２ａ（１８０ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）溶液にジメチルアミン（Ｒ−０２ｂ）（１０５ｍｇ、１．３０ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液をｒ．ｔ．で１．５時間攪拌し、次いで、この溶液にＮａＢＨ３ＣＮ（１３５ｍｇ、２．１５ｍｏｌ）を加えた。この溶液をｒ．ｔ．で１２時間撹拌した。この混合物を水でクエンチし、ＡｃＯＥｔで抽出した。有機層を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過・濃縮し、未精製生成物を得て、これを分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法１）によって精製し、純粋な中間体Ｉ−１３ａ（１００ｍｇ、収率５２％）を黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４４４、Ｃ２４Ｈ３０ＣｌＮ３Ｏ３についてのｃａｌｃ．：４４３．２。
【０２０７】
（化合物８−０１：２−［５−［（ジメチルアミノ）メチル］−２−フリル］−６−メトキシ−Ｎ−（１−メチル−４−ピペリジル）−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
中間体Ｉ−１３ａ（８０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）のトルエン（５ｍＬ）溶液に、ｔ−ＢｕＯＫ（０．２７ｍＬ、０．２７ｍｍｏｌ）、ｘ−Ｐｈｏｓ（１７ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（４９ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ）、及びＲ−０３ａ：１−メチルピペリジン−４−アミン（１１９ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）を加えた。マイクロ波を照射しつつ、この溶液を２時間で１３０℃まで加熱した。この混合物を水でクエンチし、ＡｃＯＥｔで抽出した。有機層を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、未精製生成物を得て、これを精製し（一般的な手順の方法１）、純粋な化合物８−０１をＴＦＡ塩として得た（２０．７ｍｇ、収率２２％）。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：５２２．３、Ｃ３０Ｈ４３Ｎ５Ｏ３．Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：６３５．３；Ｒｔは１．９３である。
【０２０８】
化合物８−０１のための合成経路と同じ合成経路に従い、以下の表に示される試薬を用い、以下の化合物を得た。
【０２０９】
【表１０】
0006527534.tif 000037
【０２１０】
（中間体Ｉ−１４ａ：［５−［４−クロロ−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）−２−キノリル］−２−フリル］メタノールの調製）
中間体Ｉ−１２ａ（２００ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）溶液に、ＮａＢＨ４（９１．２ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液をＲＴで２時間攪拌した。この混合物を濃縮し、未精製生成物を得て、これを分取ＴＬＣによって精製し、中間体Ｉ−１４ａ（０．１ｇ、４９％）を淡黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４１７、Ｃ２２Ｈ２５ＣｌＮ２Ｏ４についてのｃａｌｃ．：４１６．１。
【０２１１】
（化合物９−０１：［５−［６−メトキシ−４−［（１−メチル−４−ピペリジル）アミノ］−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）−２−キノリル］−２−フリル］メタノール；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
中間体Ｉ−１４ａ（９０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（４ｍＬ）溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（０．２１ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（０．０２７ｇ、０．０４３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（０．０５９ｇ、０．０６５ｍｍｏｌ）、及び１−メチルピペリジン−４−アミン（０．０８６ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を加えた。マイクロ波を照射しつつ、この溶液を５時間かけて１２０℃まで加熱した。この混合物を水でクエンチし、ＡｃＯＥｔで抽出した。有機層を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、未精製生成物を得て、これを分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法３）によって精製し、化合物９−０１をＴＦＡ塩として得た（１０ｍｇ、８％）。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４９５、Ｃ２８Ｈ３８Ｎ４Ｏ４・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：６０８．２；Ｒｔは２．４３である。
【０２１２】
（中間体Ｉ−１５ａ：５−［４−クロロ−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）−２−キノリル］フラン−２−カルボニトリルの調製）
中間体Ｉ−１２ａ（１００ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１／４ｍＬ）溶液に、フェニルホスホン酸ジクロリド（９４ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）、ピリジン（７６ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）、及びＮＨ２ＯＨ・ＨＣｌ（１６．７ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物をＲＴで１５時間攪拌した。次いで、ＮａＢＨ３ＣＮ（１３５ｍｇ、２．１５ｍｏｌ）を加えた。この反応混合物をＲＴで１２時間攪拌した。この混合物を濃縮し、ＡｃＯＥｔ／水で抽出した。有機層を分離し、ＮａＨＣＯ３塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーによって精製し、中間体Ｉ−１５ａ（５０ｍｇ、５１％）を黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４１２、Ｃ２２Ｈ２２ＣｌＮ３Ｏ３についてのｃａｌｃ．：４１１．１。
【０２１３】
（化合物１０−０１：５−［６−メトキシ−４−［（１−メチル−４−ピペリジル）−アミノ］−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）−２−キノリル］フラン−２−カルボニトリル；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
中間体Ｉ−１５ａから出発し、化合物９−０１と類似の様式で化合物１０−０１を得た。分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法１）によって精製した。ＴＦＡ塩として収率１０％。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４９０、Ｃ２８Ｈ３５Ｎ５Ｏ３・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：６０３．２；Ｒｔは１．９１である。
【０２１４】
【化１５】
0006527534.tif 000038
【０２１５】
上のスキームにおいて、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、既に定義された通りであり；ｎは０〜３であり、Ｒ５は、Ｈ又は（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、Ｑは窒素であり、ＰＧは保護基である。
【０２１６】
（中間体Ｉ−１６ａ：５−アミノ−２−メトキシ−フェノールの調製）
市販の２−メトキシ−５−ニトロ−フェノール：Ｉ−０１ａ（４０ｇ、２３６．５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（３００ｍＬ）溶液に、Ａｒ下、Ｐｄ／Ｃ（３ｇ）を加えた。この懸濁物を減圧下で脱気し、Ｈ２で数回パージした。この反応混合物をＨ２（４０ｐｓｉ）下、ＲＴで２４時間攪拌した。次いで、この混合物を濾過し、濾液を濃縮し、中間体Ｉ−１６ａ（２５ｇ、７６％）を黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：１４０．１、Ｃ７Ｈ９ＮＯ２についてのｃａｌｃ．：１３９．０６。
【０２１７】
（中間体Ｉ−１７ａ：２，４−ジクロロ−６−メトキシ−キノリン−７−オールの調製）
中間体Ｉ−１６ａ（４．９１ｇ、３５．２９ｍｍｏｌ）及びマロン酸（７．３４ｇ、７０．５７ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｎ２雰囲気下、ＰＯＣｌ３（７０ｍＬ）をＲＴで一度に加えた。この混合物をＲＴで１０分間攪拌し、次いで、９５℃で加熱し、１２時間攪拌した。次いで、この混合物をＲＴまで冷却し、減圧下、６０℃で濃縮し、ＰＯＣｌ３を除去した。残渣を水に注ぎ、２０分間攪拌した。水相をＡｃＯＥｔで抽出した。有機相を分離し、塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝２／１）によって精製し、中間体Ｉ−１７ａ（２．１０ｇ、収率２４％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：２４４．０、Ｃ２３Ｈ２７ＣｌＮ２Ｏ３についてのｃａｌｃ．：２４２．９。
【０２１８】
（中間体Ｉ−１８ａ：４−クロロ−６−メトキシ−２−（５−メチル−２−フリル）キノリン−７−オールの調製）
１，６−ジオキサン（９０ｍＬ）中、中間体Ｉ−１７ａ（６ｇ、２４．５８ｍｍｏｌ）、Ｒ−０４ｂ：４，４，５，５−テトラメチル−２−（５−メチル−２−フリル）−１，３，２−ジオキサボロラン（５．６３ｇ、２７．０４ｍｍｏｌ）、及びＰｄ（ＰＰｈ３）４（２．８６ｇ、２．４６ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｎ２雰囲気下、ＲＴでＨ２Ｏ（３０ｍＬ）中のＫ２ＣＯ３（３．４０ｇ、３６．８７ｍｍｏｌ）を一度に加えた。この反応混合物を１２０℃で１２時間攪拌した。この混合物をＲＴまで冷却し、ＡｃＯＥｔで抽出した。有機相を分離し、塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝２／１）によって精製し、中間体Ｉ−１８ａ（２．１ｇ、純度２９％）を黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：２９０．１、Ｃ１５Ｈ１２ＣｌＮＯ３についてのｃａｌｃ．：２８９．０５。
【０２１９】
（中間体Ｉ−１９ａ：ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［［４−クロロ−６−メトキシ−２−（５−メチル−２−フリル）−７−キノリル］オキシメチル］ピペリジン−１−カルボキシレートの調製）
ＴＨＦ（５０ｍＬ）中、中間体Ｉ−１８ａ（６５０ｍｇ、２．２４ｍｍｏｌ）、Ｒ−０８ａ：ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−カルボキシレート（５４０．３ｍｇ、２．６９ｍｍｏｌ）、及びＰＰｈ３（１．１８ｇ、４．４８ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｎ２雰囲気下、ＤＩＡＤ（９０７．３４ｍｇ、４．４８ｍｍｏｌ）を０℃で一度に加えた。この反応混合物を０℃で８時間攪拌した。次いで、この反応混合物をＲＴまで冷却し、濃縮した。水及びＡｃＯＥｔを加えた。有機相を分離し、塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝２／１）によって精製し、中間体Ｉ−１９ａ（７００ｍｇ、収率６４％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４８７．３、Ｃ２６Ｈ３１ＣｌＮ２Ｏ５についてのｃａｌｃ．：４８６．２。
【０２２０】
Ｉ−１７ａから出発する中間体Ｉ−１９ａのための合成経路と同じ合成経路に従い、以下の表に示される試薬を用い、以下の中間体を得た。
【０２２１】
【表１１】
0006527534.tif 000039
【０２２２】
（中間体Ｉ−２０ａ：ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［［６−メトキシ−２−（５−メチル−２−フリル）−４−［（１−メチル−４−ピペリジル）アミノ］−７−キノリル］オキシメチル］ピペリジン−１−カルボキシレートの調製）
１，４−ジオキサン（２０ｍＬ）中、中間体Ｉ−１９ａ（２５０ｍｇ、０．５２８ｍｍｏｌ）及び市販のＲ−０３ａ：１−メチルピペリジン−４−アミン（１２０．７ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｎ２雰囲気下、ＲＴでＣｓ２ＣＯ３（３４４．２８ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）、及びＰｄ（ｄｂａ）２（３０．３８ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を一度に加えた。この反応混合物を１２０℃で１２時間攪拌した。この混合物を２５℃まで冷却し、濃縮した。残渣をシリカゲル（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１０／１）によって精製し、中間体Ｉ−２０ａ（１００ｍｇ、収率３３％）を黄色固体として得た。
【０２２３】
中間体Ｉ−２０ａのための合成経路と同じ合成経路に従い、以下の表に示される試薬を用い、以下の中間体を得た。
【０２２４】
【表１２】
0006527534.tif 000040
【０２２５】
（化合物１１−０１：６−メトキシ−２−（５−メチル−２−フリル）−Ｎ−（１−メチル−４−ピペリジル）−７−（４−ピペリジルメトキシ）キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
中間体Ｉ−２０ａ（１６０ｍｇ、０．２８３ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）溶液に、Ｎ２下、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）を２５℃で一度に加えた。この反応物を２５℃で３時間攪拌した。次いで、この混合物を減圧下、４５℃で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法３）によって精製し、化合物１１−０１をＴＦＡ塩として得た（１００ｍｇ、収率７６％）。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４６５．３、Ｃ２７Ｈ３６Ｎ４Ｏ３・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：５７８．２；Ｒｔは１．６５である。
【０２２６】
化合物１１−０１のための合成経路と同じ合成経路に従い、以下の表に示される中間体から出発し、以下の化合物を得た。
【０２２７】
【表１３】
0006527534.tif 000041
【０２２８】
（化合物１２−０１：６−メトキシ−２−（５−メチル−２−フリル）−Ｎ−（１−メチル−４−ピペリジル）−７−［（１−メチル−４−ピペリジル）メトキシ］キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
化合物１１−０１（８０ｍｇ、０．１７２ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（５ｍＬ）溶液に、Ｒ−０７ａ：（ＨＣＨＯ）ｎ（４６．５３ｍｇ、０．５１６ｍｍｏｌ）、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（１０９．４９ｍｇ、０．５１６ｍｍｏｌ）、及びＨＣＯＯＨ（８．２７ｍｇ、０．１７２ｍｍｏｌ）をＮ２下、ｒ．ｔ．で一度に加えた。この混合物をＲＴで１０分間攪拌した。次いで、１００℃で２時間攪拌した。未精製生成物を分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法３）によって精製し、化合物１２−０１をＴＦＡ塩として（１５ｍｇ、収率１４％）、黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４７９．４、Ｃ２８Ｈ３８Ｎ４Ｏ３・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：５９２．２；Ｒｔは１．６６である。
【０２２９】
化合物１２−０１のための合成経路と同じ合成経路に従い、以下の表に示される化合物から出発し、以下の化合物を得た。
【０２３０】
【表１４】
0006527534.tif 000042
【０２３１】
【化１６】
0006527534.tif 000043
【０２３２】
上のスキームにおいて、Ｒ１は、既に定義された通りであり；Ｒ２は、アリール又はヘテロアリールであり；Ｒ３はＯＣＨ３であり、Ｒａは、窒素原子及び／又は酸素原子を含む炭化水素鎖である。
【０２３３】
（化合物１３−０１：２−（５−メチル−２−フリル）−Ｎ−（１−メチル−４−ピペリジル）−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）−６−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
化合物Ｉ−２１ａ（１００ｍｇ、０．２１５ｍｍｏｌ、３−４３）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液に、ＣＦ３ＣＨ２Ｉ（１１３ｍｇ、０．５４０ｍｍｏｌ）を加え、この溶液を１２時間かけて１１０℃まで加熱した。次いで、この溶液を分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法６）によって精製し、化合物１３−０１をＴＦＡ塩として（４ｍｇ、３．４１％）、黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：５４７．３、Ｃ２９Ｈ３７Ｆ３Ｎ４Ｏ３・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：６６０．２；Ｒｔは１．７８である。
【０２３４】
（中間体Ｉ−２２ａ：ヒドロキシ（２−（５−メチルフラン−２−イル）−４−（（１−メチルピペリジン−４−イル）アミノ）−７−（３−（ピロリジン−１−イル）プロポキシ）キノリン−６−イル）（トリフルオロメチル）−λ７−スルファンジオン；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
化合物Ｉ−２１ａ（２３２ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ、３−４３）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液に、ＤＩＥＡ（２０２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、及びＰｈＮ（ＯＴｆ）２（２７０ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。この溶液を０℃で２時間攪拌し、２５℃で１２時間攪拌した。この混合物を濃縮し、未精製生成物を得て、分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法６）によって精製し、中間体Ｉ−２２ａをＴＦＡ塩として（１８０ｍｇ、６０．４％）、黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：５９７．３、Ｃ２８Ｈ３５Ｆ３Ｎ４Ｏ５Ｓ．Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：６６０．２。
【０２３５】
（化合物１４−０１：２−（５−メチル−２−フリル）−４−［（１−メチル−４−ピペリジル）アミノ］−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノリン−６−カルボニトリル；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
中間体Ｉ−２２ａ（１００ｍｇ、０．１６８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液に、Ｚｎ（ＣＮ）２（３９ｍｇ、０．３３６ｍｍｏｌ）、及びＰｄ（ＰＰｈ３）４（２０ｍｇ、触媒）を加え、この溶液を１２時間かけて１１０℃まで加熱した。次いで、この溶液を濃縮し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、未精製生成物を得て、これを分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法６）によって精製し、１４−０１をＴＦＡ塩として（５８ｍｇ、７２．５％）、黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４７４．２、Ｃ２８Ｈ３５Ｆ３Ｎ５Ｏ２．Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：５８７．２；Ｒｔは１．６８である。
【０２３６】
【化１７】
0006527534.tif 000044
【０２３７】
上のスキームにおいて、Ｒ１は、既に定義された通りであり；Ｒ２は、アリール又はヘテロアリールであり；Ｒ３は、Ｈ、Ｃｌ、ＯＣＦ３、又はＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり；Ｒａは、窒素原子及び／又は酸素原子を含む炭化水素鎖であり、Ｒ５は、Ｈ又は（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである。
【０２３８】
（中間体Ｉ−２４ａ：エチル  ３−（３−ベンジルオキシ−４−メトキシ−アニリノ）−３−オキソ−プロパノエートの調製）
ＤＣＭ（１Ｌ）中、Ｉ−２３ａ：３−ベンジルオキシ−４−メトキシ−アニリン（３５ｇ、０．１５３ｍｏｌ）、及びＴＥＡ（３０．８７ｇ、０．３０６ｍｏｌ）の混合物に、エチル  ３−クロロ−３−オキソ−プロパノエート（２５．２４５ｇ、０．１６８ｍｏｌ）を０℃で滴下した。この混合物を２５℃で１２時間攪拌し、水（２Ｌ）に注ぎ、ＤＣＭで２回抽出した。合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、乾燥するまで濃縮し、Ｉ−２４ａ（４０ｇ、７６．３％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：３４４．２、Ｃ１９Ｈ２１ＮＯ５についてのｃａｌｃ．：３４３．１。
【０２３９】
（中間体Ｉ−２５ａ：３−（３−ベンジルオキシ−４−メトキシ−アニリノ）−３−オキソ−プロパン酸の調製）
ＴＨＦ（１００ｍＬ）、ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）及びＨ２Ｏ（６７ｍＬ）中、中間体Ｉ−２４ａ（２０．４０ｇ、５９．４１ｍｍｏｌ）の混合物に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（３．７４ｇ、８９．１２ｍｍｏｌ）を２５℃で一度に加えた。この混合物を２５℃で１６時間攪拌した。ＬＣＭＳは、反応が終了したことを示した。有機溶媒をロータリーエバポレーションにより減圧下、４５℃で除去した。残渣を氷水（ｗ／ｗ＝１／１）（２００ｍＬ）に注ぎ、１０分間攪拌した。得られたスラリーを濾過し、濾過ケーキを減圧下で乾燥させ、Ｉ−２５ａ（１９．３０ｇ、６１．２１ｍｍｏｌ、未精製）を白色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：３１６．２、Ｃ１７Ｈ１７ＮＯ５についてのｃａｌｃ．：３１５．１。
【０２４０】
（中間体Ｉ−２６ａ：７−ベンジルオキシ−２，４−ジクロロ−６−メトキシ−キノリンの調製）
５００ｍＬの一口丸底フラスコ中、中間体Ｉ−２５ａ（７．００ｇ、２２．２０ｍｍｏｌ）をＰＯＣｌ３（６８．０８ｇ、４４３．９９ｍｍｏｌ）に懸濁させた。この混合物をＮ２下、９０℃で２時間攪拌した。次いで、反応混合物を２５℃まで冷却し、濃縮してＰＯＣｌ３を除去した。残渣を更にシリカゲルクロマトグラフィー（溶出勾配ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝５０：１から１０：１）によって精製し、Ｉ−２６ａ（２．５０ｇ、収率３３．６９％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：３３４．２、Ｃ１７Ｈ１３Ｃｌ２ＮＯ２についてのｃａｌｃ．：３３３．０。
【０２４１】
（中間体Ｉ−２７ａ：７−ベンジルオキシ−４−クロロ−６−メトキシ−２−（５−メチル−２−フリル）キノリンの調製）
中間体Ｉ−２６ａ（９００．００ｍｇ、２．６９ｍｍｏｌ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−（５−メチル−２−フリル）−１，３，２−ジオキサボロラン（Ｒ−０４ｂ）（５８８．３２ｍｇ、２．８３ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（５５８．３０ｍｇ、４．０４ｍｍｏｌ）、及びＰｄ（ＰＰｈ３）４（３１１．１９ｍｇ、２６９．３０ｕｍｏｌ）のジオキサン（１０ｍＬ）溶液を脱気し、次いで、Ｎ２下、１６時間かけて１００℃まで加熱した。次いで、この反応混合物をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）に注いだ。この混合物を酢酸エチルで抽出した（４０ｍＬ×３回）。有機相を飽和塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して残渣を得て、これをカラムクロマトグラフィー（溶出勾配ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝３０：１から５：１）によって精製し、Ｉ−２７ａ（５００．００ｍｇ、収率４８．９３％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：３８０．１、Ｃ２２Ｈ２２ＣｌＮＯ３についてのｃａｌｃ．：３７９．１。
【０２４２】
（中間体Ｉ−２８ａ：７−ベンジルオキシ−６−メトキシ−２−（５−メチル−２−フリル）−Ｎ−（１−メチル−４−ピペリジル）キノリン−４−アミンの調製）
Ｉ−２７ａ（５００．００ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）、１−メチル−ピペリジン−４−イルアミン（Ｒ−０３ａ）（３００．６３ｍｇ、２．６３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（１２０．５４ｍｇ、１３１．６３ｕｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（８１．９６ｍｇ、１３１．６３ｕｍｏｌ）、及びＣｓ２ＣＯ３（８５７．７８ｍｇ、２．６３ｍｍｏｌ）のジオキサン（１０ｍＬ）溶液を脱気し、次いで、Ｎ２下、１６時間かけて１１０℃まで加熱した。次いで、この反応混合物をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）によって精製し、Ｉ−２８ａ（４００．００ｍｇ、収率６６．２３％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４５８．２、Ｃ２８Ｈ３１Ｎ３Ｏ３についてのｃａｌｃ．：４５７．２。
【０２４３】
（中間体Ｉ−２９ａ：６−メトキシ−４−［（１−メチル−４−ピペリジル）アミノ］−２−（５−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）キノリン−７−オールの調製）
ＭｅＯＨ（２０．００ｍＬ）中、Ｉ−２８ａ（４００．００ｍｇ、８７４．２０ｕｍｏｌ）及びＰｄ／Ｃ（１００．００ｍｇ）の混合物をＨ２（５０Ｐｓｉ）下、５０℃で１６時間攪拌した。次いで、触媒を濾過によって除去し、乾燥するまで濾液を濃縮し、中間体Ｉ−２９ａ（３００ｍｇ、収率９２．３８％）を黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：３７２．３、Ｃ２１Ｈ２９Ｎ３Ｏ３についてのｃａｌｃ．：３７１．２。
【０２４４】
（化合物１５−０１：６−メトキシ−Ｎ−（１−メチル−４−ピペリジル）−２−（５−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
ＤＭＦ（５．００ｍＬ）中、Ｉ−２９ａ（２００．００ｍｇ、５３８．４０ｕｍｏｌ）、１−（３−クロロプロピル）ピロリジン（Ｒ−０９ａ）（９５．３９ｍｇ、６４６．０８ｕｍｏｌ）、及びＣｓ２ＣＯ３（３５０．８４ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）の混合物を脱気し、Ｎ２で３回パージし、次いで、この混合物をＮ２雰囲気下、１００℃で１６時間攪拌した。この混合物を濃縮して残渣を得て、これを分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法１）によって精製し、化合物１５−０１をＴＦＡ塩として（５０．００ｍｇ、収率１９．２４％）、黄色油状物として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４８３．４、Ｃ２８Ｈ４２Ｎ４Ｏ３．Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：５９６．３、Ｒｔは１．５７である。
【０２４５】
（中間体Ｉ−３０ａ：６−メトキシ−２−（５−メチル−２−フリル）−４−［（１−メチル−４−ピペリジル）アミノ］キノリン−７−オールの調製）
Ｉ−２８ａ（４５７．００ｍｇ、９９８．７８ｕｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５０ｍＬ）溶液に、Ｎ２下、Ｐｄ／Ｃ（１１９．８５ｍｇ、９９８．７８ｕｍｏｌ）を加えた。この懸濁物を減圧下で脱気し、Ｈ２で数回パージした。この混合物をＨ２（５０ｐｓｉ）下、２５℃で１６時間攪拌した。次いで、この反応混合物を濾過し、フィルターを濃縮した。未精製生成物を石油エーテル／酢酸エチル＝５：１で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、Ｉ−３０ａ（３５０．００ｍｇ、収率９５．３７％）を黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：３６８．２、Ｃ２１Ｈ２５Ｎ３Ｏ３についてのｃａｌｃ．：３６７．２。
【０２４６】
（中間体Ｉ−３１ａ：ｔｅｒｔ−ブチル  ６−［［６−メトキシ−２−（５−メチル−２−フリル）−４−［（１−メチル−４−ピペリジル）アミノ］−７−キノリル］オキシ］−２−アザスピロ［３．３］ヘプタン−２−カルボキシレートの調製）
ＤＭＦ（５．００ｍＬ）中、Ｉ−３０ａ（１００．００ｍｇ、２７２．１５ｕｍｏｌ）及びｔｅｒｔ−ブチル  ６−メチルスルホニルオキシ−２−アザスピロ［３．３］ヘプタン−２−カルボキシレート（Ｒ−１０ａ）（９５．１５ｍｇ、３２６．５８ｕｍｏｌ）の混合物に、Ｎ２下、２５℃でＣｓ２ＣＯ３（１７７．３５ｍｇ、５４４．３１ｕｍｏｌ）を一度に加えた。この混合物を１００℃で１６時間攪拌した。次いで、この混合物を濃縮し、分取ＴＬＣにより精製し、Ｉ−３１ａ（６０．００ｍｇ、収率３９．１８％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：５６３．３、Ｃ３２Ｈ４２Ｎ４Ｏ５についてのｃａｌｃ．：５６２。
【０２４７】
（中間体Ｉ−３１ｂ：ｔｅｒｔ−ブチル  ２−［［６−メトキシ−２−（５−メチル−２−フリル）−４−［（１−メチル−４−ピペリジル）アミノ］−７−キノリル］オキシ］−７−アザスピロ［３．５］ノナン−７−カルボキシレートの調製）
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−メチルスルホニルオキシ−７−アザスピロ［３．５］ノナン−７−カルボキシレート（Ｒ−１０ｂ）を用い、中間体Ｉ−３１ａと類似の様式で中間体Ｉ−３１ｂを得た。収率１９％。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：５９１．３、Ｃ３４Ｈ４６Ｎ４Ｏ５についてのｃａｌｃ．：５９０．３。
【０２４８】
（化合物１６−０１：７−（２−アザスピロ［３．３］ヘプタン−６−イルオキシ）−６−メトキシ−２−（５−メチル−２−フリル）−Ｎ−（１−メチル−４−ピペリジル）キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
５０ｍＬの一口丸底フラスコ中、Ｉ−３１ａ（２０．００ｍｇ、３５．５４ｕｍｏｌ）をＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（５．００ｍＬ）に溶解した。この混合物をＮ２下、２５℃で２時間攪拌した。次いで、この混合物を濃縮し、分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法６）によって精製し、１６−０１をＴＦＡ塩として（１２．００ｍｇ、収率７３％）、黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４６３．３、Ｃ２７Ｈ３４Ｎ４Ｏ３・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：５７６．２、Ｒｔは１．９７である。
【０２４９】
（化合物１６−０２：７−（７−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イルオキシ）−６−メトキシ−２−（５−メチル−２−フリル）−Ｎ−（１−メチル−４−ピペリジル）キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
Ｉ−３１ｂから出発し、化合物１６−０１と類似の様式で化合物１６−０２を得た。分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法６）によって精製した。収率７２％。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４９１．３、Ｃ２９Ｈ３８Ｎ４Ｏ３・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：６０４．３；Ｒｔは２．０３である。
【０２５０】
（化合物１７−０１：６−メトキシ−７−［（２−メチル−２−アザスピロ［３．３］ヘプタン−６−イル）オキシ］−２−（５−メチル−２−フリル）−Ｎ−（１−メチル−４−ピペリジル）キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
ＭｅＯＨ（５．００ｍＬ）中、１６−０１（３７．００ｍｇ、８１．５３ｕｍｏｌ）、（ＨＣＨＯ）ｎ（Ｒ−０７ａ）（２２．０３ｍｇ、２４４．５８ｕｍｏｌ）、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（５１．８４ｍｇ、２４４．５８ｕｍｏｌ）、及びＨＣＯＯＨ（３．９２ｍｇ、８１．５３ｕｍｏｌ）の混合物を脱気し、Ｎ２で３回パージした。この混合物をＮ２雰囲気下、７０℃で１６時間攪拌した。次いで、この混合物を減圧下で濃縮して残渣を得て、これを分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法１）によって精製し、１７−０１をＴＦＡ塩として（９．００ｍｇ、収率２３％）、黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４７７．４、Ｃ２８Ｈ３６Ｎ４Ｏ３・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：５９０．２；Ｒｔは１．６４である。
【０２５１】
（化合物１７−０２：６−メトキシ−７−［（７−メチル−７−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）オキシ］−２−（５−メチル−２−フリル）−Ｎ−（１−メチル−４−ピペリジル）キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
１６−０２から出発し、化合物１７−０１と類似の様式で化合物１７−０２を得た。分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法１）によって精製した。収率１５％。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：５０５．４、Ｃ３０Ｈ４０Ｎ４Ｏ３・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：６１８．３；Ｒｔは１．７２である。
【０２５２】
（中間体Ｉ−３２ａ：２，４−ジクロロ−６−メトキシ−キノリン−７−オールの調製）
５００ｍＬの一口丸底フラスコ中、中間体Ｉ−２５ａ（７．００ｇ、２２．２ｍｍｏｌ）をＰＯＣｌ３（５８．３５ｇ、３８０．５７ｍｍｏｌ）に懸濁させた。この混合物をＮ２下、１０５℃で４時間攪拌した。次いで、この反応混合物を２５℃まで冷却し、濃縮してＰＯＣｌ３を除去した。残渣を更にシリカゲルクロマトグラフィー（溶出勾配ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝５０：１から１０：１）によって精製し、Ｉ−３２ａ（１．４０ｇ、収率２７．４％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：２４４．１、Ｃ１０Ｈ７Ｃｌ２ＮＯ２についてのｃａｌｃ．：２４２．９９。
【０２５３】
（中間体Ｉ−３３ａ：７−（３−ブロモプロポキシ）−２，４−ジクロロ−６−メトキシ−キノリンの調製）
Ｉ−３２ａ（３ｇ、１２．２９ｍｍｏｌ）及び１，３−ジブロモプロパン（２．９８ｇ、１４．７５ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（６０ｍＬ）溶液にＫ２ＣＯ３（４．２５ｇ、３０．７３ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を６０℃で８８時間攪拌した。次いで、この反応混合物を減圧下で濃縮して残渣を得て、これを１００ｍＬの水で希釈し、濾過した。濾過ケーキを減圧下で濃縮し、更にシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝３０：１から純粋なＭｅＯＨによって溶出）によって精製し、中間体Ｉ−３３ａ（１ｇ、収率２２．２９％）を白色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：３６４．１、Ｃ１３Ｈ１２ＢｒＣｌ２ＮＯ２についてのｃａｌｃ．：３６２．９４。
【０２５４】
（中間体Ｉ−３４ａ：２，４−ジクロロ−７−［３−（３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）プロポキシ］−６−メトキシ−キノリンの調製）
Ｉ−３３ａ（５００ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）及び３，３−ジフルオロピロリジン（Ｒ−１１ａ）（２２０ｍｇ、２．０６ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（５０ｍＬ）溶液にＫ２ＣＯ３（３７８ｍｇ、２．７４ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を５０℃で８８時間攪拌した。次いで、この反応混合物を減圧下で濃縮して残渣を得て、これを１００ｍＬのＤＣＭと１００ｍＬの水とに分配した。有機相を分離し、水相をＤＣＭで抽出した（１００ｍＬ×３回）。合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、未精製中間体Ｉ−３４ａ（６００ｍｇ、未精製）を灰色固体として得て、これを更に精製することなく次の工程で使用した。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：３９１．２、Ｃ１７Ｈ１８Ｃｌ２Ｆ２Ｎ２Ｏ２についてのｃａｌｃ．：３９０．１。
【０２５５】
（中間体Ｉ−３４ｂ：２，４−ジクロロ−７−［３−（４，４−ジフルオロ−１−ピペリジル）プロポキシ］−６−メトキシ−キノリンの調製）
４，４−ジフルオロピペリジン（Ｒ−１１ｂ）を用い、中間体Ｉ−３４ａと類似の様式で中間体Ｉ−３４ｂを得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４０５．２、Ｃ１８Ｈ２０Ｃｌ２Ｆ２Ｎ２Ｏ２についてのｃａｌｃ．：４０４．０９。
【０２５６】
（中間体Ｉ−３５ａ：４−クロロ−７−［３−（３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）プロポキシ］−２−（５−エチル−２−フリル）−６−メトキシ−キノリンの調製）
ジオキサン（１０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１０ｍＬ）中、Ｉ−３４ａ（６００ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−（５−エチル−２−フリル）−１，３，２−ジオキサボロラン（Ｒ−０４ｒ）（４０８ｍｇ、１．８４ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（５２９ｍｇ、３．８３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１７７ｍｇ、１５３．００ｕｍｏｌ）の混合物を脱気し、Ｎ２で３回パージし、この混合物をＮ２雰囲気下、１１０℃で１６時間攪拌した。次いで、この反応混合物をＤＣＭで抽出した（５０ｍＬ×３回）。合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して残渣を得て、これをシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１から純粋なＭｅＯＨによって溶出する）によって精製し、中間体Ｉ−３５ａ（４００ｍｇ、収率５７．９８％）を褐色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４５１．３、Ｃ２３Ｈ２５ＣｌＦ２Ｎ２Ｏ３についてのｃａｌｃ．：４５０．１５。
【０２５７】
（中間体Ｉ−３５ｂ：４−クロロ−７−［３−（４，４−ジフルオロ−１−ピペリジル）プロポキシ］−２−（５−エチル−２−フリル）−６−メトキシ−キノリンの調製）
中間体Ｉ−３５ａと類似の様式で中間体Ｉ−３５ｂを得た。収率３５％。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：４６５．３、Ｃ２４Ｈ２７ＣｌＦ２Ｎ２Ｏ３についてのｃａｌｃ．：４６４．１７。
【０２５８】
（化合物１８−０１：７−［３−（３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル）プロポキシ］−２−（５−エチル−２−フリル）−６−メトキシ−Ｎ−（１−メチル−４−ピペリジル）キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
ジオキサン（１０ｍＬ）中、Ｉ−３５ａ（２００ｍｇ、４４３．５５ｕｍｏｌ）、１−メチル−ピペリジン−４−イルアミン（Ｒ−０３ａ）（１０１ｍｇ、８８７．１０ｕｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（４１ｍｇ、４４．３６ｕｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（２８ｍｇ、４４．３６ｕｍｏｌ）、及びＣｓ２ＣＯ３（２８９ｍｇ、８８７．１０ｕｍｏｌ）の混合物を脱気し、Ｎ２で３回パージし、次いで、この混合物をＮ２雰囲気下、１２０℃で１６時間攪拌した。次いで、この反応混合物を減圧下で濃縮して残渣を得て、これを連続して分取ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）及び分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法６）によって精製し、化合物１８−０１をＴＦＡ塩として（１１ｍｇ、３．５６％）、白色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：５２９．４、Ｃ２９Ｈ３８Ｆ２Ｎ４Ｏ３・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：６４２．２；Ｒｔは１．８０である。
【０２５９】
（化合物１８−０２：７−［３−（４，４−ジフルオロ−１−ピペリジル）プロポキシ］−２−（５−エチル−２−フリル）−６−メトキシ−Ｎ−（１−メチル−４−ピペリジル）キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
Ｉ−３５ｂから出発し、化合物１８−０１と類似の様式で化合物１８−０２を得た。分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法６）によって精製した。収率６．６％。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：５４３．４、Ｃ３０Ｈ４０Ｆ２Ｎ４Ｏ３・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：６５６．３；Ｒｔは１．８０である。
【０２６０】
【化１８】
0006527534.tif 000045
【０２６１】
上のスキームにおいて、Ｒ２は、アリール又はヘテロアリールであり；Ｒ３は、Ｈ、Ｃｌ、ＯＣＦ３、又はＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、Ｒａは、窒素原子及び／又は酸素原子を含む炭化水素鎖である。
【０２６２】
（化合物１９−０１：Ｎ−（７−シクロプロピル−７−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）−２−（５−エチル−２−フリル）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
化合物４−０３（２０．００ｍｇ、３８．５６ｕｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０．００ｍＬ）溶液に、（１−エトキシシクロプロポキシ）−トリメチル−シラン（４０．３ｍｇ、２３１．２６ｕｍｏｌ）、ＮａＢＨ３ＣＮ（１４．５４ｍｇ、２３１．３６ｕｍｏｌ）、及びＡｃＯＨ（１３．８９ｍｇ、２３１．３６ｕｍｏｌ）を加えた。この混合物を６０℃で１６時間攪拌した。次いで、この混合物を濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法６）によって精製し、純粋な化合物１９−０１をＴＦＡ塩として（４．００ｍｇ、収率１８．５７％）、黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：５５９．４、Ｃ３４Ｈ４６Ｎ４Ｏ３・Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：６７２．３；Ｒｔは１．９５である。
【０２６３】
（化合物１９−０２：Ｎ−（７−シクロプロピル−７−アザスピロ［３．５］ノナン−３−イル）−２−（５−エチル−２−フリル）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キノリン−４−アミン；２，２，２−トリフルオロ酢酸塩の調製）
４−０４から出発し、化合物１９−０１と類似の様式で化合物１９−０２を得た。分取ＨＰＬＣ（一般的な手順の方法６）によって精製した。収率５４％。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）：５５９．５、Ｃ３４Ｈ４６Ｎ４Ｏ３．Ｃ２ＨＦ３Ｏ２についてのｃａｌｃ．：６７２．３；Ｒｔは１．９１である。
【０２６４】
（生物学的試験）
（Ｇ９ａ酵素活性アッセイ）
Ｇ９ａ酵素活性を測定するための生化学アッセイは、ユーロピウムクリプテート（ドナー）とＸＬ６６５（アクセプター）の間の時間分解蛍光エネルギー転移法（ＴＲ−ＦＲＥＴ）に基づく。Ｇ９ａの酵素反応の後に、ビオチン化ヒストンモノメチル−Ｈ３Ｋ９ペプチドを、クリプテート標識された抗−ジメチル−ヒストンＨ３Ｋ９抗体（ＣｉｓＢｉｏカタログ番号６１ＫＢ２ＫＡＥ）及びストレプトアビジンＸＬ６６５（ＣｉｓＢｉｏカタログ番号６１０ＳＡＸＬＡ）と共にインキュベートしたときに、ＴＲ−ＦＲＥＴが観察される。バキュロウイルスに感染したＳｆ９細胞発現系で発現したヒトＧ９ａ酵素をＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（カタログ番号５１００１）から得た。以下のように、最終的な体積２０μｌで、白色３８４ウェルプレートで酵素活性アッセイを行った。
【０２６５】
・４μｌのビヒクル、又はアッセイバッファー（５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、１０ｍＭのＮａＣｌ、４ｍＭのＤＴＴ、０．０１％のＴｗｅｅｎ−２０、ｐＨ９）中で調製した２．５倍濃縮した試験化合物。ＤＭＳＯの最終濃度は０．５％であった。
・アッセイバッファーで希釈した１ｎＭのＧ９ａ酵素２μｌ。最終的な濃度は０．２ｎＭであった。
・２０μＭのＳ−アデノシルメチオニン及び４０ｎＭのビオチン化ヒストンモノメチル−Ｈ３Ｋ９ペプチドを含む基質混合物４μｌを加えることによって、反応を開始する。
・室温で１時間、反応を行った。
・５μｌのクリプテート標識された抗−ジメチル−ヒストンＨ３Ｋ９抗体を加えることによって酵素活性を止めた。最終的な濃度１５０ｎＭ。
・次いで、５μｌのストレプトアビジンＸＬ６６５ビーズを加える。最終的な濃度１６μＭ。
・室温で１時間インキュベートした後、プレートを読み取る。
【０２６６】
各ウェルについて、６２０ｎｍ及び６６５ｎｍで蛍光を測定した。次いで、培地の干渉を最小限にするため、（６６５ｎｍ／６２０ｎｍ）比を計算した。化合物のビヒクル存在下、ポジティブコントロールを得た。Ｇ９ａ酵素活性が存在しない状態でネガティブコントロールを得た。ＧｒａｐｈＰｒｉｓｍを用い、４パラメーター阻害曲線を用い、計算されたＩＣ５０値を決定した。
【０２６７】
（ＤＮＭＴ１酵素活性アッセイ）
ＤＮＭＴ１酵素活性を測定するための生化学アッセイは、ＥＰＩｇｅｎｅｏｕｓメチルトランスフェラーゼアッセイ（ＣｉｓＢｉｏカタログ番号６２ＳＡＨＰＥＢ）を用い、ｌｕｍｉ４−Ｔｂ（ドナー）及びｄ２（アクセプター）の間の時間分解蛍光エネルギー転移法（ＴＲ−ＦＲＥＴ）に基づく。Ｌｕｍｉ４−Ｔｂで標識されたＳ−アデノシルホモシステインに特異的な抗体を、ｄ２標識されたＳ−アデノシルホモシステインと共にインキュベートしたときにＴＲ−ＦＲＥＴが観察される。ＴＲ−ＦＲＥＴシグナルは、サンプル中のＤＮＭＴ１酵素活性産物であるＳＡＨの濃度に反比例する。ヒトＤＮＭＴ１をＲｅａｃｔｉｏｎ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｃｏｒｐ．（カタログ番号ＤＭＴ−２１−１２４）から得た。
以下のように、最終的な体積２０μｌで、白色３８４ウェルプレートで酵素活性アッセイを行った。
【０２６８】
・４μｌのビヒクル、又はアッセイバッファー（５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＤＴＴ、０．１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、５％のグリセロール、ｐＨ７．５）中で調製した２．５倍濃縮した試験化合物。ＤＭＳＯの最終濃度は０．５％であった。
・アッセイバッファーで希釈した１ｎＭのＤＮＭＴ１酵素２μｌ。最終的な濃度は２０ｎＭであった。
・１μＭのＳ−アデノシルメチオニン及び１μＭのポリ−デオキシイノシンポリ−デオキシシトシン（ｐｄＩ−ｐｄＣ）ＤＮＡを含む基質混合物４μｌを加えることによって、反応を開始する。
・３７℃で１５分間、反応を行った。
・２μｌのＥＰＩｇｅｎｅｏｕｓメチルトランスフェラーゼアッセイのバッファー１を加えることによって酵素活性を止めた。
・室温で１０分後、ＥＰＩｇｅｎｅｏｕｓメチルトランスフェラーゼアッセイのバッファー２で５０倍に希釈したＬｕｍｉ４−Ｔｂで標識されたＳ−アデノシルホモシステインに特異的な抗体４μｌを加えた。
・ＥＰＩｇｅｎｅｏｕｓメチルトランスフェラーゼアッセイのバッファー２で３１倍に希釈したｄ２標識されたＳ−アデノシルホモシステイン４μｌを加える。
・室温で１時間インキュベートした後、プレートを読み取る。
【０２６９】
各ウェルについて、６２０ｎｍ及び６６５ｎｍで蛍光を測定した。次いで、培地の干渉を最小限にするため、（６６５ｎｍ／６２０ｎｍ）比を計算した。化合物のビヒクル存在下、ポジティブコントロールを得た。Ｇ９ａ酵素活性が存在しない状態でネガティブコントロールを得た。ＧｒａｐｈＰｒｉｓｍを用い、４パラメーター阻害曲線を用い、計算されたＩＣ５０値を決定した。
【０２７０】
（ＤＮＭＴ３Ａ及びＤＮＭＴ３Ｂ酵素活性アッセイ）
化学発光ＢＰＳ  ＤＮＭＴ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（ＢＰＳ＃５２０３５）を用い、ＤＮＭＴ基質であらかじめコーティングされたストリップ９６ウェルプレートを用い、ＤＮＭＴ３Ａ及びＤＮＭＴ３Ｂ活性アッセイを行った。
【０２７１】
酵素活性アッセイのプロトコルは、以下の通りである。
−１５０μＬのＴＢＳＴバッファー（１×Ｔｒｉｓ緩衝化食塩水（ＴＢＳ）、ｐＨ８．０、０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０を含有する）を全てのウェルに加えることによって、マイクロウェルを再水和する。室温で１５分間インキュベートする。
−それぞれの精製されたＤＮＭＴ［ＤＮＭＴ３Ａ／３Ｌ（ＢＰＳ＃５１１０６）又はＤＮＭＴ３Ｂ／３Ｌ（ＢＰＳ＃５１１０９）］を１×ＤＮＭＴアッセイバッファー２（ＢＰＳ＃５２２０１）で、５〜１０ｎｇ／μＬになるまで希釈する。使用するまで、希釈した酵素を氷の上で保存する。
−２０μＬのＤＮＭＴ（５〜１０ｎｇ／μＬ）、１２．５μＬの４×ＤＮＭＴアッセイバッファー２（ＢＰＳ＃５２２０１）、２．５μＬのＳ−アデノシルメチオニン４００μＭ、３ｎＭ〜１０μＭの範囲の濃度の試験化合物及び５０μＬまでのＨ２Ｏからなる反応混合物５０μＬを調製する。
−基質でコーティングされたウェルに全反応混合物を加える。３７℃で１２０分間インキュベートする。
−ウェルをＴＢＳＴバッファーで３回洗浄する。
−１００μＬのブロッキングバッファー（ＢＰＳ＃５２１００）を全てのウェルに加える。回転プラットフォームの上で１０分間振とうする。上澄みを除去する。
−５−メチルシトシンに対する第１の抗体（ＢＰＳによる抗−５−メチルシトシン）をブロッキングバッファーで４００倍に希釈し、ウェルあたり１００μＬを加える。ゆっくりと振とうしつつ、室温で１時間インキュベートする。
−プレートをＴＢＳＴバッファーで３回洗浄し、回転プラットフォームの上で、ブロッキングバッファー中で１０分間インキュベートする。上澄みを除去する。
−第２の抗体（第２のＨＲＰ標識された抗体１（ＢＰＳ＃５２１３０Ｈ））をブロッキングバッファーで１０００倍に希釈し、ウェルあたり１００μＬを加える。ゆっくりと振とうしつつ、室温で３０分間インキュベートする。
−プレートをＴＢＳＴバッファーで３回洗浄し、回転プラットフォームの上で、ブロッキングバッファー中で１０分間インキュベートする。上澄みを除去する。
−使用直前に、氷の上で、５０μＬのＨＲＰ化学発光基質Ａ（ＢＰＳ）及び５０μＬのＨＲＰ化学発光基質Ｂ（ＢＰＳ）を混合し、ウェルあたり１００μＬを加える。ＢｉｏＴｅｋ  ＳｙｎｅｒｇｙＴＭ２マイクロプレートリーダーを用い、直ぐに発光を読み取る。
【０２７２】
化学発光強度のデータを分析し、比較した。化合物が存在しない状態で、ポジティブコントロールを得た。ＤＮＭＴ酵素が存在しない状態でネガティブコントロールを得た。計算されたＩＣ５０値を、４パラメーター阻害曲線を用いて作られたＳ字型の用量−応答曲線の非線形回帰分析を用いて決定した。
【０２７３】
表２は、選択した化合物について、Ｇ９ａ及びＤＮＭＴの阻害値（ＩＣ５０）を示す。ここで、１μＭ≦ＩＣ５０≦１０μＭ（＋）、５００ｎＭ≦ＩＣ５０＜１μＭ（＋＋）、１００ｎＭ≦ＩＣ５０＜５００ｎＭ（＋＋＋）及びＩＣ５０＜１００ｎＭ（＋＋＋＋）である。
【０２７４】
【表１５】
0006527534.tif 000046
0006527534.tif 000047
0006527534.tif 000048
【０２７５】
表２の化合物は、Ｇ９ａ及びＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ、及びＤＮＭＴ３Ｂの群から選択させる１つ以上のＤＮＭＴを阻害することができ、ＩＣ５０値≦１０μＭである。
【０２７６】
（細胞増殖アッセイ）
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６  Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ、マディソン、Ｗ）を用い、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで４８時間処理した後、細胞増殖を分析した。これは、増殖中の生存能力のある細胞の数を決定するための比色法である。
【０２７７】
このアッセイのために、９６ウェルプレート中、１×１０６細胞／ｍｌの密度で、３個ずつ懸濁細胞を培養した（１００，０００細胞／ウェル、１００μｌ／ウェル）が、但し、ＯＣＩＬＹ−３及びＯＣＩＬＹ−１０細胞株の場合には、０．５×１０６細胞／ｍｌ（５０，０００細胞／ウェル、１００μｌ／ウェル）の密度で、ＨｅｐＧ２、Ｈｅｐ３Ｂ及びＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞株の場合、３０００細胞／ウェル、１００μｌ／ウェル）の密度で培養した。８０〜９０％コンフルエントのフラスコから接着細胞を得て、９６ウェルプレート中、５０００細胞／ウェルの密度で１００μｌの細胞を３個ずつ接種した。化合物を加える前に、接着細胞をウェル底部に１２時間かけて接着させた。周辺効果を避けるために、全ての場合に、６０個の内側のウェルのみを使用した。
【０２７８】
処理４８時間後、懸濁細胞を含むプレートを８００ｇで１０分間遠心分離し、培地を除去した。接着細胞を含むプレートを軽くたたき、培地を除去した。次いで、細胞を１００ｕｌ／ウェルの培地及び２０ｕｌ／ウェルのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６  Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ試薬と共にインキュベートした。３７℃で１〜３時間インキュベートした後、９６ウェルプレートリーダーで、４９０ｎｍでの吸光度を測定した。細胞株培地と溶液試薬のみを含むウェルで、バックグラウンド吸光度を測定した。データを、処理した細胞の全吸光度／処理していない細胞の吸光度の割合として計算した。
【０２７９】
表３は、樹立された細胞株及び一次培養物に対する、選択した化合物の機能的な応答を示す（ＧＩ５０）。ここで、ＧＩ５０≧１０μＭ（＋）、１μＭ≦ＧＩ５０＜１０μＭ（＋＋）、１００ｎＭ≦ＧＩ５０＜１μＭ（＋＋＋）、及びＧＩ５０＜１００ｎＭ（＋＋＋＋）。これらの癌細胞株及び一次培養物は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、ＣＥＭＯ−１及びＬＡＬ−ＣＵＮ−２に対応し、活性化されたＢ細胞様のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＡＢＣ−ＤＬＢＣＬ）、ＯＣＩ−Ｌｙ３及びＯＣＩ−Ｌｙ１０に対応し、肝細胞癌細胞（ＨＣＣ）、ＨｅｐＧ２、Ｈｅｐ３Ｂ、及びＰＬＣ／ＰＲＦ／５に対応する。
【０２８０】
【表１６】
0006527534.tif 000049
【０２８１】
表３の化合物は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、活性化されたＢ細胞様のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＡＢＣ−ＤＬＢＣＬ）、及び肝細胞癌（ＨＣＣ）の細胞株の増殖を阻害する。
【０２８２】
上述の細胞増殖プロトコルを用い、異なる固体腫瘍及び血液がんの細胞株に対し、化合物３−０４及び３−０７を試験した。
【０２８３】
表４（ＧＣ−ＤＬＢＣＬは、胚中心のＢ細胞様のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫を表し、ＡＭＬは、急性骨髄性白血病を表し、ＭＣＬは、マントル細胞リンパ腫を表し、ＭＭは、多発性骨髄腫を表す。）は、化合物３−０４及び３−０７について、異なる細胞株に対する機能的な応答を示す（ＧＩ５０）。ここで、ＧＩ５０＞１０μＭ（＋）、１μＭ＜ＧＩ５０≦１０μＭ（＋＋）、１００ｎＭ＜ＧＩ５０≦１μＭ（＋＋＋）、及びＧＩ５０≦１００ｎＭ（＋＋＋＋）である。
【０２８４】
【表１７】
0006527534.tif 000050
【０２８５】
表４の化合物は、異なる固体腫瘍及び血液がんの細胞株の増殖を阻害する。
【０２８６】
表５は、樹立された細胞株及び一次培養物に対する、選択した化合物（二重Ｇ９ａ−ＤＮＭＴ）と、選択的なＧ９ａ阻害剤（ＢＩＸ１２０９４及びＵＮＣ０６３８）及びＤＮＭＴ阻害剤（５−アザシチジン及びデシタビン）との比較を示し（ＧＩ５０）、ここで、ＧＩ５０≧１０μＭ（＋）、１μＭ≦ＧＩ５０＜１０μＭ（＋＋）、１００ｎＭ≦ＧＩ５０＜１μＭ（＋＋＋）及びＧＩ５０＜１００ｎＭ（＋＋＋＋）である。これらの癌細胞株及び一次培養物は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、ＣＥＭＯ−１及びＬＡＬ−ＣＵＮ−２に対応し、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）：ＯＣＩ−ＡＭＬ−２及びＭＶ４−１１に対応し、多発性骨髄腫（ＭＭ）：ＪＪＮ３及びＵ２６６に対応する。
【０２８７】
【表１８】
0006527534.tif 000051
【０２８８】
二重化合物３−０４及び３−０７は、選択的なＧ９ａ阻害剤（ＢＩＸ１２０９４及びＵＮＣ０６３８）及びＤＮＭＴ阻害剤（５−アザシチジン及びデシタビン）よりも強力な細胞増殖阻害剤である。
【０２８９】
（ＣＥＭＯ−１細胞株を用いた前臨床ヒトＢ−ＡＬＬマウスモデルにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ治療活性の評価）
ｉｎ  ｖｉｖｏ活性を試験するために、ＲＡＧ２マウスを用いたヒトＢ−ＡＬＬの前臨床モデルを使用した。６〜８週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃＡ−Ｒａｇ２-/-γｃ-/-マウスをＮｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅから購入し、病原体を含まない隔離カゴに維持した。ＲＡＧ２マウスに、尾の静脈から１０×１０６ＣＥＭＯ−１細胞を静脈（ｉ．ｖ．）注射し、ヒトＢ−ＡＬＬマウスモデルを作成した。６群の動物に、細胞接種から３日後に処理を開始した。第１の群は、コントロールとして機能し、ｉ．ｖ．注射によって連続２８日間、１日に１回プラセボ（食塩水）を摂取した。
【０２９０】
（化合物３−０４を用いた結果）
第２の群を３−０４（２．５ｍｇ／ｋｇ）で１日に１回、連続２８日間にわたってｉ．ｖ．から治療した。ヒト細胞のフローサイトメトリーによって、体重減少及び全身腫瘍組織量の徴候について、週に１回監視した。細胞を接種した後のコントロールマウス（Ｎ＝６）について、平均生存日数が５７日（ＳＤ：±１０．５２）であるのに対し、３−０４で治療されたマウス（Ｎ＝６）について、平均生存日数は９１日（ＳＤ：±５．７２）であった。この治療は、統計ソフトウエアＭｅｄＣａｌｃを用いて比較するｌｏｇ−ｒａｎｋ試験を用いたＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ法によって決定される場合、コントロールと比較して、この群の生存日数を有意に延ばした（Ｐ＝０．０００９）（図１）。
【０２９１】
（レンチウイルスベクターを用いたリプログラミング法）
ヒトＯＣＴ４（ａｄｄｇｅｎｅ、参照番号２０７２６）、ＳＯＸ２（ａｄｄｇｅｎｅ、参照番号２０７２４）、ＫＬＦ４（ａｄｄｇｅｎｅ、参照番号２０７２５）及びｃＭＹＣ（ａｄｄｇｅｎｅ、参照番号２０７２３）転写因子（Ｏ：Ｓ：Ｋ：Ｍ）Ｖｅｓｉｃｕｌａｒ  Ｓｔｏｍａｔｉｔｉｓ  Ｖｉｒｕｓ  Ｇ（ＶＳＶＧ）コーティングされたレンチウイルスをコードする４つの独立したドキシサイクリン誘発性レンチウイルスベクター（ＦＵＷ−Ｔｅｔ−Ｏに由来するベクター）からなる、使用するリプログラミング系を、既に記載されたように２９３Ｔ細胞で作成した（Ｔｉｓｃｏｒｎｉａ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔ  Ｐｒｏｔｏｃ．２００６；１（１）：２４１−５．）。簡単に言うと、２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ−３２１６）を、Ｔｉｓｃｏｒｎｉａ  ｅｔ  ａｌ（前出）によって開示されるのと同じ条件で、パッケージングプラスミドｐｓＰＡＸ２（ａｄｄｇｅｎｅ、参照番号１２２６０）及びｐＭＤ２．Ｇ（ａｄｄｇｅｎｅ、参照番号１２２５９）と共に、上に言及したＦＵＷ−ＴｅｔＯレンチウイルスベクターでトランスフェクトした。線維芽細胞培地（ＦＣＭ）（ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｓｉｇｍａ）、１０％の胎児ウシ血清（ＦＢＳ）（Ｇｉｂｃｏ）、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン／ストレプトマイシンＰ／Ｓ（Ｌｏｎｚａ）、２ｍＭのＬ−グルタミン（Ｌｏｎｚａ）、０．１ｍＭの非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）（Ｌｏｎｚａ））を、トランスフェクトから１２時間後に新しい培地と置き換え、トランスフェクトから６０〜７２時間後にウイルスを含有する上澄みを集め、０．４５μＭのフィルターによって濾過し、４因子の感染のためにウイルスを含有する上澄みを保存し、新しいＦＣＭに、ＦＵＷ−Ｍ２ｒｔＴＡウイルス（ａｄｄｇｅｎｅ、参照番号２０３４２）を、２：２：２：２：１（ＯＣＴ４：ＳＯＸ２：ＫＬＦ４：ｃＭＹＣ：ｒｔＴＡウイルス）の比率で追加した。
【０２９２】
レンチウイルスベクターを得たら、ＢＪヒト線維芽細胞について以下のリプログラミングプロトコルを行った。
０日目：ＢＪ細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ−２５２２）をＦＣＭに接種する（７５ｃｍ２の培養フラスコ中、１０６細胞）。
１日目：４μｇ／ｍＬのポリブレン（Ｓｉｇｍａ）存在下、ＢＪ細胞を、ＦＵＷ−Ｔｅｔ−Ｏベクターの組み合わせを用いて１回目の感染（感染多重度、ＭＯＩ＝５）。
２日目：ＢＪ細胞の２回目の感染（１回目の感染と同じ条件）。
３日目：新しいＦＣＭ中、２×１７５ｃｍ２培養フラスコにＢＪ細胞を再び接種する。
４日目：１×１７５ｃｍ２フラスコを、０．２μＭ又は０．１μＭの試験化合物と共にインキュベートし、別のフラスコは、ＦＣＭのみと共にインキュベートした。細胞毒性を避けるために、化合物の濃度は、ＢＪヒト線維芽細胞において決定したＧＩ５０に従って選択した。
６日目：Ｂｊ細胞を、異なる密度で自社内で調製したマウス胚線維芽細胞（ＭＥＦ）フィーダー層（２５０００細胞／ｃｍ２）を既に接種したｐ１００培養皿に再び接種する：ＦＣＭ＋ドキシサイクリン１μｇ／ｍＬ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）中、５×１０４、１０５及び５×１０５細胞／プレート。
【０２９３】
マウス胚線維芽細胞（ＭＥＦ）を、記載されているように製造した（Ｔａｋａｈａｓｈｉ、Ｋ．ｅｔ  ａｌ．、Ｃｅｌｌ  ２００６、１２６、６６３−６７６）。簡単に言うと、１２．５〜１４．５日の妊娠Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈａｒｌａｎ）マウス（６〜８週齢）から単離されたマウス胚をＰＢＳで洗浄し、頭部と内臓の組織を除去した。残った身体を新鮮なＰＢＳで洗浄し、ハサミを用いて細かく切断し、胚あたり、０．１ｍＭのトリプシン／１ｍＭのＥＤＴＡ溶液（Ｌｏｎｚａ）３ｍＬに移し、３７℃で１０分間インキュベートした。インキュベートした後、胚あたり、更に３ｍＬの０．１ｍＭのトリプシン／１ｍＭ  ＥＤＴＡ溶液を加え、混合物を３７℃で１０分間インキュベートした。トリプシン処理した後、等量の培地（胚あたり、１０％のＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）を含有する６ｍＬのＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ））を加え、組織を解離させやすくするために、ピペットで数回吸ったり出したりした。上澄みを新しい管に移し、遠心分離によって細胞を集め、新しい培地に再懸濁させた。細胞を、ＦＣＭ中の約１０個の１００ｍｍ皿に接種した。３継代でのＭＥＦに、ＧａｍｍａＣｅｌｌ照射器（Ｇａｍｍａｃｅｌｌ  ３０００  Ｓｅｒｉａｌ  ３７５型  Ｉｒｒａｄｉａｔｏｒ、ＭＤＳ  Ｎｏｒｄｉｏｎ）で５０Ｇｙを照射した。
【０２９４】
８日目：培地を、ｉＰＳＣ培地（ＤＭＥＭ−ＫＯ（Ｇｉｂｃｏ）、２０％のＫｎｏｃｋｏｕｔ  Ｓｅｒｕｍ  Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＫＳＲ）（Ｇｉｂｃｏ）、１００Ｕ／ｍＬのＰ／Ｓ（Ｌｏｎｚａ）、２ｍＭのＬ−グルタミン（Ｌｏｎｚａ）、０．１ｍＭのＮＥＡＡ（Ｌｏｎｚａ）、０．１ｍＭのβ−メルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）及び５ｎｇ／ｍＬの塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ））＋ドキシサイクリン１μｇ／ｍＬ及びバルプロ酸１ｍＭ（ＶＰＡ）（Ｓｉｇｍａ）に変える。
１０日目から３０日目まで：１日おきに、使用した培地を、新しいｉＰＳＣ培地＋ドキシサイクリン１μｇ／ｍＬ及びＶＰＡ  １ｍＭに変える。
注：ＶＰＡは、リプログラミングの最初の週の間だけ加える。
【０２９５】
（レトロウイルスを用いたリプログラミング法）
レトロウイルスリプログラミング系は、ヒトＯＣＴ４（ａｄｄｇｅｎｅ、参照番号１７２１７）及びＳＯＸ２（ａｄｄｇｅｎｅ、参照番号１７２１８）転写因子（Ｏ：Ｓ）をコードする２種類の独立したレトロウイルスベクター（ｐＭＸに由来するベクター）からなっていた。既に記載されたように、ＶＳＶＧコーティングされたレトロウイルスを２９３Ｔ細胞中で作成した（Ｔａｋａｈａｓｈｉ  Ｋ．ｅｔ  ａｌ．、Ｃｅｌｌ  ２００７、１３１、８６１−８７２）。簡単に言うと、Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ（前出）に開示されたのと同じ条件で、２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ−３２１６）を、パッケージングプラスミドｐＵＭＣＶ（ｇａｇ−ｐｏｌをコードする、ａｄｄｇｅｎｅ、参照番号８４４９）、及びｐＣＭＶ−ＶＳＶ．Ｇ（ａｄｄｇｅｎｅ、参照番号８４５４）と共に、上に言及したｐＭＸｓ−レトロウイルスベクターでトランスフェクトした。トランスフェクトから１２時間後に、ＦＣＭを新しい培地と置き換えた。トランスフェクトから６０〜７２時間後にウイルスを含有する上澄みを集め、０．４５μＭのフィルターによって濾過した。新しいＦＣＭに、２因子の感染のためにウイルスを含有する上澄みを比率２：１（Ｏ：Ｓ）で保存した。
【０２９６】
レンチウイルスベクターを得たら、ＢＪヒト線維芽細胞について以下のリプログラミングプロトコルを行った。
０日目：ＢＪ細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ−２５２２）をＦＣＭに接種する（７５ｃｍ２の培養フラスコ中、１０６細胞）。
１日目：４μｇ／ｍＬのポリブレン存在下、ＢＪ細胞を、ｐＭＸベクターの組み合わせを用いて１回目の感染（感染多重度、ＭＯＩ＝５）。
２日目：ＢＪ細胞の２回目の感染（１回目の感染と同じ条件）。
３日目：ＢＪ細胞の３回目の感染（１回目の感染と同じ条件）。感染から１２日後、ＦＣＭを新しい培地に置き換えた。
４日目：最後の感染から２４時間後に、ＦＣＭを、０．２μＭの試験化合物を含有する新しい培地に置き換える。
６日目：自社内で調製したＭＥＦフィーダー層に、異なる密度でＢＪ細胞を再び接種する：ＦＣＭ中、５×１０４、１０５及び５×１０５細胞／プレート。
８日目：ＦＣＭをｉＰＳＣ培地及びＶＰＡ  １ｍＭと置き換える。
１０日目から３０日目まで：１日おきに、使用した培地を、新しいｉＰＳＣ培地及びＶＰＡ  １ｍＭに変える。
注：ＶＰＡは、リプログラミングの最初の週の間だけ加える。
【０２９７】
（リプログラミング効率の定量）
リプログラミング効率を、感染から４週間後に定量した。製造業者のプロトコルに従ってＬｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ａｌｋａｌｉｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  Ｋｉｔ（Ｓｉｇｍａ）を用い、ＥＳＣ様のコロニーの存在を、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）染色によって検出した。以下の式に従って効率を計算した。
Ｅ（％）＝（ＡＰ＋コロニーの数）＊１００／（ＭＥＦに接種した細胞の数）
【０２９８】
化合物３−０４で処理された異なる転写因子（ＴＦ）にＢＪが感染した後に得られたＡＰ＋コロニーの数と、未処理群のＡＰ＋コロニーの数の比率を用い、リプログラミング効率が何倍に増加したかを計算した。
【０２９９】
（ｉＰＳ生成の結果）
レンチウイルスベクターを用いたリプログラミング法（Ｏ：Ｓ：Ｋ：Ｍ）
【表１９】
0006527534.tif 000052
【０３００】
レトロウイルスベクターを用いたリプログラミング法（Ｏ：Ｓ）：
【表２０】
0006527534.tif 000053
【０３０１】
化合物３−０４の存在下でリプログラミングプロセスを行うと、ＢＪ細胞におけるリプログラミング効率は明らかに増加した。特に、ＢＪ細胞をこの化合物と共にインキュベートすると、多数のＥＳＣ様のコロニーが出現した。このリプログラミング効率の増加は、細胞リプログラミングに２因子のみを使用した場合にも観察され、このことは、化合物３−０４が、高品質のｉＰＳＣ生成に有用であることを示している。
【０３０２】
（本出願に引用される参考文献）
Shankar SR. et al., “G9a, a multipotent regulator of gene expression”. Epigenetics, 2013. 8(1): p. 16-22.
Vilas-Zornoza A. et al., ”Frequent and Simultaneous Epigenetic Inactivation of TP53 Pathway Genes in Acute Lymphoblastic Leukemia” PLoS ONE, 2011. 6(2): p. e17012. 
Rotili D. et al., ”Properly Substituted Analogues of BIX-01294 Lose Inhibition of G9a Histone Methyltransferase and Gain Selective Anti-DNA Methyltransferase 3A Activity”, PLoS ONE, 2014. 9(5): p. E96941. 
Vedadi M. Et al., “A chemical probe selectively inhibits G9a and GLP methyltransferase activity in cells”, Nat. Chem. Biol. 2011, 7, pp. 566-574.
Liu F. et al., “Discovery of an in vivo chemical probe of the lysine methyltransferases G9a and GLP”, J. Med. Chem. 2013, 56(21), pp. 8931-42.
Jung DW. et al., ”Reprogram or Reboot: Small Molecule Approaches for the
Production of Induced Pluripotent Stem Cells and Direct Cell Reprogramming” ACS Chem. Biol, 2014. 9(1): p. 80-95.
Shi Y. et al., “Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic fibroblasts by Oct4 and Klf4 with small-molecule compounds”, Cell Stem Cell 2008, 3, pp. 568-574.
EP1088818 A1
Giardina G. et al., “Discovery of a Novel Class of Selective Non-Peptide Antagonists for the Human Neurokinin-3 Receptor 1. Identification of the 4-Quinolinecarboxamide Framework”, Journal of Medicinal Chemistry 1997, 40(12), pp. 1794-1807.
Drake N. et al., “Synthetic Antimalarials. The Preparation of Certain 4-Aminoquinolines”, Journal of the American Chemical Society 1946, 68, pp. 1208-13.
Tiscornia G. et al., “Production and purification of lentiviral vectors” .Nat Protoc. 2006, 1(1), pp 241-5.
Takahashi K. et al., ”Induction of Pluripotent Stem Cells from Mouse Embryonic and Adult Fibroblast Cultures by Defined Factors” Cell 2006, 126, pp. 663-676.
Takahashi K. et al., ”Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors” Cell 2007, 131, pp. 861-872.
【図１】
0006527534.tif 000057