(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚角層のＨＳＰ−２７の発現量を測定し、その多寡を指標とする、頭皮をつまんだときの圧縮応力の評価方法。
【請求項２】
被験者の頭皮の角層を採取する採取工程と、前記採取工程で採取された角層におけるＨＳＰ−２７の発現量を測定する測定工程と、前記測定工程で測定されたＨＳＰ−２７の発現量をあらかじめ測定した無作為に選択された標本集団の頭皮の角層のＨＳＰ−２７の発現量分布と比較する比較工程と、を備えた請求項１に記載の評価方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、頭皮の圧縮応力の評価方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
女性の毛髪は４０代を過ぎると、頭頂部の薄毛化が進行することが確認されている（非特許文献１）。また、頭皮に弾力性があるほど、発毛状態が良くなると言われており、頭皮をつまんだときの圧縮応力が大きいほど、発毛状態が良いと考えられる。
ところで、頭皮の圧縮応力を評価するためには、専用機器を用いた手間のかかる測定が必要であるが、店舗や通信販売において、多数の被験者に対して頭皮ケアのアドバイスを行うために、前記の測定を行うことは困難である。そこで、被験者を拘束せず、簡便に頭皮の圧縮応力を評価できる方法が求められている。
【０００３】
本出願人は、ＨＳＰ−２７タンパク質がアトピー性皮膚炎マーカーとして有用であること（特許文献１）、皮膚の紫外線ストレス蓄積の指標となること（特許文献２）を見出した。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１２−１７７６０１号公報
【特許文献２】特開２０１２−１８９５８１号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】皮膚  第３７巻  第６号  平成７年１２月  ７２２−７３２ページ
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、被験者に負担を与えることなく、頭皮をつまんだときの圧縮応力を評価できる生化学的指標を用いた新規な評価方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は以下の構成である。
（１）皮膚角層のＨＳＰ−２７の発現量を測定し、その多寡を指標とする、頭皮をつまんだときの圧縮応力の評価方法。
（２）被験者の評価対象部位の角層を採取する採取工程と、前記採取工程で採取された角層におけるＨＳＰ−２７の発現量を測定する測定工程と、前記測定工程で測定されたＨＳＰ−２７の発現量をあらかじめ測定した無作為に選択された標本集団の前記評価対象部位の角層のＨＳＰ−２７の発現量分布と比較する比較工程と、を備えた（１）に記載の評価方法。
（３）被験者の評価対象部位が頭皮または顔面である（２）に記載の評価方法。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の評価方法によれば、頭皮の圧縮応力を、角層におけるＨＳＰ−２７の発現量を測定することで評価できる。さらに、本発明の評価方法は、テープストリッピング法など簡便な操作方法で評価試料を採取するため、被験者が自宅で行うことが可能であるため、通信販売の手法によって頭皮の圧縮応力の評価結果を提供することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】角層中のＨＳＰ−２７の発現量と頭皮をつまんだときの圧縮応力の関係を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明の評価方法は、皮膚角層におけるＨＳＰ−２７の存在量を指標とすることを特徴としている。
【００１１】
ＨＳＰは細胞の加熱に反応して発現することが知られており、この発現は細菌感染や炎症、エタノール、活性酸素、重金属、紫外線、飢餓、低酸素状態などの細胞に対する様々なストレスにより誘導されることが知られている。核内タンパク質である熱ショック転写因子（ＨＳＦ）はＤＮＡ上の熱ショックエレメント（ＨＳＥ）に結合することによりＨＳＰの発現を制御する転写因子として働くが、熱ストレスによりＨＳＦが誘導される詳細な機構については十分に明らかにされてはいない。
【００１２】
本発明では、角層という用語を使用する。角層は、皮膚の一番上にある組織をいう。角層は、体の外からの異物や刺激から皮膚を守る働きを有している。
【００１３】
本発明における評価対象部位は、角層が入手できる部分であれば、いかなる部位をも包含しうるが、主な部位としては頭皮、顔面が挙げられ、従来の方法に従い、これらの部位から皮膚由来の角層を得ることができる。しかし、外科的に皮膚を摘出する等の方法は、被験者に負担を与えるため、テープストリッピング、擦過等の非侵襲的に角層を得る方法を用いる。
【００１４】
こうして用意した各試料におけるＨＳＰ−２７の発現量は、従来から知られている方法で測定することができる。例えば、ＨＳＰ−２７に対する抗体との反応に基づくエンザイムイムノアッセイ、ラジオイムノアッセイ、ウエスタンブロッティング等の方法を用いることができる。
【００１５】
各試料からＨＳＰ−２７をそれ自体既知の生化学的方法、たとえば凍結融解法、超音波破砕法、ホモジュネート法等を介して可溶性画分を調製し、抽出後、速やかに測定する。
【００１６】
頭皮をつまんだときの圧縮応力が大きい被験者の角層中のＨＳＰ−２７の発現量は高い傾向にあるため、角層におけるＨＳＰ−２７の発現量の多寡を指標として、簡便に頭皮をつまんだときの圧縮応力を評価できる。
本発明に用いる角層は、テープストリッピング等により角層の表層部分のみを角質テープで採取する簡単な方法で採取することができる。このため、被験者に負担を与えることなく、粘弾性計等の特別な機器を使用することなく、被験者の頭皮の圧縮応力を評価することができる。特に、被験者の頭皮に、より適した化粧品や洗浄剤を簡単に選択することができ、それによって、脱毛の改善が期待できる。
【００１７】
本発明の評価方法は、角層を採取する採取工程と、前記採取工程で採取された角層におけるＨＳＰ−２７の発現量を測定する測定工程と、前記測定工程で測定されたＨＳＰ−２７の発現量を標本集団の角層におけるＨＳＰ−２７の発現量の分布と比較する比較工程から構成される。
以下にこの評価方法について説明する。
【００１８】
まず、被験者のある評価対象部位の角層におけるＨＳＰ−２７の発現量を測定し、測定されたＨＳＰ−２７の発現量を、標本集団の同一評価対象部位の角層におけるＨＳＰ−２７の発現量の分布と比較し、ＨＳＰ−２７の発現量の多寡を判定する。標本集団のＨＳＰ−２７の発現量の分布を使用することによって、客観的にＨＳＰ−２７の発現量の多寡を評価できる。
【００１９】
このように比較した結果、測定されたＨＳＰ−２７の発現量が、標本集団のＨＳＰ−２７の発現量分布と比較して、ＨＳＰ−２７の発現量が大きいと評価される場合には、発毛状態が良く、頭皮の圧縮応力が大きいと評価できる。標本集団は、統計的に有効な規模で、無作為に抽出することが好ましいが、目的に応じて、例えば、性別、年齢別に標本集団を抽出することも好ましい。
【００２０】
角層の採取部位は身体のどこの部位でも構わないが、顔面又は頭皮が好ましく、頭皮が特に好ましい。
【００２１】
本発明を試験例、実施例によって説明する。なお本発明は下記の実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００２２】
試験例１
角層中のＨＳＰ−２７の発現量と頭皮をつまんだときの圧縮応力との関係を調べた。
（１）試験方法
＜角層採取＞
被験者：髪の悩み（薄毛、軟毛化）が顕在化するとされる40歳以上の女性 74名（40代（56名）、50代（15名）、60代（3名））
角層採取部位：頭皮
角層採取方法：頭皮を70%アルコールで拭いた。毛を分けて地肌を露出させ、角層採取用テープ（アサヒバイオメッド社製  角層チェッカー  ２．２ｃｍ×２．２ｃｍ）を縦に３分割し、３分割した部分それぞれに、３カ所の地肌の角層を付着させた。さらに、その角層採取用テープを横に３分割し、３分割した部分それぞれに、新たな３カ所の地肌の角層を付着させた。すなわち、被験部位は０．７ｃｍ×２．２ｃｍの範囲を６カ所であり、３カ所は角層採取用テープに直接付着させ、残りの３カ所は先の３カ所の角層が付着したテープに方向を変えて重ねて付着させた。
【００２３】
＜角層中ＨＳＰ−２７測定＞
ガラスビーズとT-PERバッファー（Thermo scientific社）500μlの入ったチューブに角層を採取した角層採取用テープを入れ、25分ボルテックスミキサーにて振とうし、角層タンパクを抽出した。各サンプルのタンパク濃度はBCA protein Assay Kit (Thermo Scientific社)で測定した。測定には角層サンプルを10μlに reagentA: reagentB=50:1で混和した液200μlを加え、60℃30分でインキュベーションしたのち、562nmの吸光度で測定した。同時にウシ血清アルブミン（BSA）で検量線を作成した。この検量線と吸光度の値からタンパク濃度を算出した。
角層抽出液中に含まれるHSP27濃度はHuman HSP27 DuoSet  (R&D systems社)を用いて定量した。
角層抽出液中に含まれるHSP27濃度を角層抽出液に含まれるタンパク濃度で割って、角層中のHSP27発現量とした。
【００２４】
＜頭皮をつまんだときの圧縮応力の測定＞
頭皮粘弾性計（スキングリップメータ   アサヒバイオメッド社製  AS-GP1）を用いて、頭皮をつまんで幅７ｍｍから６ｍｍに圧縮し、その際の圧縮応力を測定した。
【００２５】
（２）結果
角層中のＨＳＰ−２７の発現量と頭皮をつまんだときの圧縮応力の関係を図１に示す。角層中のＨＳＰ−２７の発現量と頭皮をつまんだときの圧縮応力は正の相関関係を示した（Ｒ２＝０．０５２８）。今回の被験者を標本集団とすれば、頭皮をつまんだときの圧縮応力は、[頭皮をつまんだときの圧縮応力]＝０．５７９１×[角層中のＨＳＰ−２７の発現量]+ １２５．３の計算式で評価できる。
【図１】
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