(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
カルノシン酸またはピシフェリン酸を含む、
ＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害試薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害試薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＦｏｘＯは、ＤＮＡ結合ドメインを有する転写因子である。ＦｏｘＯの１つであるＦｏｘＯ３ａは約６５０個のアミノ酸からなるタンパク質で、遺伝子のプロモーター領域の特定の配列に結合し、遺伝子の発現を誘導する。
【０００３】
ＦｏｘＯ３ａは、ストレス応答、代謝制御、細胞周期、アポトーシスおよびＤＮＡの修復などに関連する多くの遺伝子の発現を促進する。また、ＦｏｘＯ３ａは、様々なストレスに対する抵抗力を高める作用に寄与しており、寿命延長および老化性疾患の抑制に重要である。
【０００４】
ＦｏｘＯ３ａは、リン酸化を受けると、転写活性が低下する。詳細には、ＦｏｘＯ３ａは、ＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ経路によって負に制御されている。ＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ経路が活性化されるとＡｋｔによってＦｏｘＯ３ａがリン酸化され、ＦｏｘＯ３ａの核外移行が促進される。核外に移行したＦｏｘＯ３ａは、転写因子としての機能を失う。
【０００５】
したがって、ＦｏｘＯ３ａのリン酸化を阻害することで、結果的にＦｏｘＯ３ａが活性化され、様々なストレスに対する抵抗力を高める作用を得ることができる。ストレスに対する抵抗力を高めることで、寿命延長および老化性疾患などの抑制が期待できる。
【０００６】
ＦｏｘＯ３ａは、ＴＧＦβにより活性化されることが知られている。例えば、特許文献１によれば、白血病幹細胞にＴＧＦβを作用させると、細胞核内にＦｏｘＯ３ａが局在する細胞の割合が増加する。一方、当該白血病幹細胞にＴＧＦβ阻害剤を作用させると、細胞核内にＦｏｘＯ３ａが局在する細胞の割合が減少する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２０１０−２８１６５６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
ＴＧＦβは、細胞増殖および分化を制御し、細胞死を促すサイトカインである。ＴＧＦβはタンパク質であるため、低分子化合物と比較して、ＦｏｘＯ３ａの活性化に使用するには製剤化の煩雑さ、および安定性において改善の余地がある。また、ＴＧＦβは、その様々な作用が知られており、線維症疾患などの種々の疾患に関与している。このため、ＴＧＦβの使用は、ＦｏｘＯ３ａの活性化以外の作用をもたらす、すなわち選択性に懸念がある。これらのことから、ＴＧＦβは、ＦｏｘＯ３ａを活性化するために使用しやすいとは言い難い。
【０００９】
本発明は、上記実情に鑑みてなされたものであり、より使用しやすい新規なＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害試薬を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の観点に係るＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害試薬は、
カルノシン酸またはピシフェリン酸を含む。
【発明の効果】
【００１７】
本発明によれば、より使用しやすい新規なＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害試薬が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】カルノシン酸の存在下で培養した細胞におけるＦｏｘＯ３ａとリン酸化ＦｏｘＯ３ａの量を示す図である。（ａ）は、ウエスタンブロッティング法の結果を示す図である。（ｂ）は、ＦｏｘＯ３ａに対するリン酸化ＦｏｘＯ３ａの比の相対値を示す図である。
【図２】ピシフェリン酸の存在下で培養した細胞におけるＦｏｘＯ３ａとリン酸化ＦｏｘＯ３ａの量を示す図である。（ａ）は、ウエスタンブロッティング法の結果を示す図である。（ｂ）は、ＦｏｘＯ３ａに対するリン酸化ＦｏｘＯ３ａの比の相対値を示す図である。
【図３】カルノシン酸を投与したマウスの肝臓におけるリン酸化ＦｏｘＯ３ａの量を示す図である。（ａ）は、ウエスタンブロッティング法の結果を示す図である。（ｂ）は、リン酸化ＦｏｘＯ３ａの量の相対値を示す図である。
【図４】カルノシン酸を投与したマウスの体重当たりの血清中のクレアチニン量を示す図である。
【図５】染色した腎臓組織切片の画像を示す図である。（ａ）は、カルノシン酸を投与したマウスの腎臓組織切片の画像を示す図である。（ｂ）は、対照のマウスの腎臓組織切片の画像を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明に係る実施の形態について説明する。
（実施の形態１）
まず、実施の形態１について詳細に説明する。本実施の形態に係るＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害剤は、ＦｏｘＯ３ａのリン酸化を阻害する。当該ＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害剤は、フェノール性ジテルペンを含む。フェノール性ジテルペンは、次の構造を有する化合物である。
【００２０】
【化１】
0006533412.tif 000002
【００２１】
フェノール性ジテルペンとしては、Ｒ３がＣＯ２Ｈであるフェノール性ジテルペンカルボン酸が好ましい。フェノール性ジテルペンカルボン酸は、Ｒ１およびＲ２がそれぞれＣＨ３、Ｒ３がＣＯ２Ｈ、かつＲ４がＨであるピシフェリン酸（以下、「ＰＡ」とする）であることが好ましく、特に好適には、Ｒ１およびＲ２がそれぞれＣＨ３、Ｒ３がＣＯ２Ｈ、かつＲ４がＯＨであるカルノシン酸（以下、「ＣＡ」とする）である。
【００２２】
上記ＣＡおよびＰＡの他、フェノール性ジテルペンとしては、例えば、Ｒ１およびＲ２がそれぞれＣＨ３、Ｒ３がＣＨ２ＯＨ、かつＲ４がＨである化合物（ピシフェロール）、Ｒ１およびＲ２がそれぞれＣＨ３、Ｒ３がＣＨＯ、かつＲ４がＨである化合物（ピシフェラール）、Ｒ１およびＲ２がそれぞれＣＨ３、Ｒ３がＣＯ２ＣＨ３、かつＲ４がＨである化合物、Ｒ１がＣＨ３、Ｒ２がＣＨ２ＯＨ、Ｒ３がＣＨ３、かつＲ４がＨである化合物、Ｒ１がＣＨ３、Ｒ２がＣＯ２Ｈ、Ｒ３がＣＨ３、かつＲ４がＨである化合物、ならびにＲ１がＣＯ２Ｈ、Ｒ２がＣＨ３、Ｒ３がＣＨ３、かつＲ４がＨである化合物が挙げられる。
【００２３】
フェノール性ジテルペンは、市販のものを用いてもよいし、天然物から抽出してもよい。例えば、フェノール性ジテルペンは、サワラ（Ｃｈａｍａｅｃｙｐａｒｉｓ  ｐｉｓｉｆｅｒａ）の葉、ローズマリー（Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）およびセージ（Ｓａｌｖｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）からメタノール抽出によって抽出することができる。特にＰＡは、サワラの葉に含有されている。一方、ＣＡは、ローズマリーおよびセージなどに含有されている。
【００２４】
各種フェノール性ジテルペンは、サワラの葉、ローズマリーまたはセージからメタノールで得た抽出物からシリカゲル担体を用いたクロマトグラフィーによって単離できる。具体的には、例えば、ＰＡの単離では、サワラの葉を２４時間メタノール抽出し、抽出物を濃縮する。次に、濃縮物に対して、ヘキサン−酢酸エチルを溶媒にしたシリカゲル担体のカラムクロマトグラフィーを行うことで、ＰＡが得られる。フェノール性ジテルペンは抽出に限らず、構造式に従って合成してもよい。例えば、ＣＡは、オルト位酸化などで水酸基をＰＡに導入することで合成できる。
【００２５】
本実施の形態に係るＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害剤は、下記実施例１に示すように、培養細胞におけるＦｏｘＯ３ａのリン酸化を抑制する。このため、細胞におけるＦｏｘＯ３ａの転写活性が低下する条件下であっても、ＦｏｘＯ３ａに制御される遺伝子の発現を維持または増強させることができる。このため、ストレス応答、代謝制御、細胞周期、アポトーシスおよびＤＮＡの修復などに関連する多くのＦｏｘＯ３ａに制御される遺伝子の機能解析に使用することができる。
【００２６】
以上詳細に説明したように、本実施の形態に係るＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害剤は、ＦｏｘＯ３ａのリン酸化を阻害するため、ＦｏｘＯ３ａを活性化することができる。また、本実施の形態に係るＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害剤に含まれるフェノール性ジテルペンは、化合物であるため、タンパク質と比較して製剤化が容易であり、安定性に優れるため、使用しやすい。
【００２７】
また、上記ＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害剤は、様々なストレスに対する抵抗力を高めて、種々の病気に対するリスクを減少させるとともに、寿命を延長させ、老化性疾患などを抑制し、その改善予防に有効である。
【００２８】
さらに、本実施の形態では、フェノール性ジテルペンが、フェノール性ジテルペンカルボン酸、特にＣＡまたはＰＡであってもよいこととした。ＣＡおよびＰＡは、上述のように自然界に存在する植物から得られるため、ヒトに安心して用いることができる。
【００２９】
また、別の実施の形態では、ＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害剤として使用するためのフェノール性ジテルペンが提供される。また、他の実施の形態は、ＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害剤の製造のためのフェノール性ジテルペンの使用である。
【００３０】
（実施の形態２）
次に、実施の形態２について説明する。本実施の形態に係る医薬は、上記実施の形態１に係るＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害剤を含む。当該医薬は、有効成分として上記ＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害剤を含む。当該医薬は、公知の方法で製造される。
【００３１】
上記医薬の剤形は、限定されないが、液剤、錠剤、カプセル剤、注射剤、直腸坐剤、膣坐剤、経鼻吸収剤、経皮吸収剤、経肺吸収剤および口腔内吸収剤などである。当該医薬は、例えば、薬理的に許容される担体と配合された合剤であってもよい。薬理的に許容される担体は、製剤素材として用いられる各種の有機担体物質または無機担体物質である。また、当該医薬には、白糖、緩衝剤などの薬理的に許容される添加剤が含まれてもよい。必要に応じて、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤などの添加物を用いることもできる。
【００３２】
上記医薬の投与方法は任意であるが、好ましくは経口投与、皮下注射または静脈内注射である。当該医薬の投与量は、患者の体重、病態など患者の状態に応じて適宜調整されるが、１日の投与量として１人あたり１ｍｇ〜１ｇ、好ましくは５０〜５００ｍｇである。当該医薬は、１〜３６ヶ月、好ましくは１２〜２４ヶ月などの長期間にわたって投与してもよい。もちろん、投与回数、投与間隔などの投与方法は、患者の状態を見ながら、適宜調整することができる。
【００３３】
上記医薬は、ＦｏｘＯ３ａのリン酸化を阻害することで、ＦｏｘＯ３ａを活性化する。ＦｏｘＯ３ａは、酸化ストレス耐性に関連する遺伝子の発現を促進するため、当該医薬は、酸化ストレスに起因する疾患、特には、脂肪肝、肝硬変肝および肝炎などの肝臓疾患、アテローム動脈硬化症、パーキンソン病、狭心症、心筋梗塞、アルツハイマー病、統合失調症、双極性障害ならびに慢性疲労症候群などに薬効を有する。また、下記実施例２に示すように、上記医薬は、老化促進マウスの生存率を高めるため、寿命を延長し、老化性疾患などを抑制する。
【００３４】
また、上記医薬は、下記実施例３に示すように、腎臓でのＦｏｘＯ３のリン酸化を抑制する。このため、上記医薬は、好適には、腎臓疾患の治療または予防に使用される。例えば、糖尿病モデル動物では、腎臓でのＦｏｘＯ３のリン酸化が亢進することが知られており、その結果、ＦｏｘＯ３の制御を受けている抗酸化ストレス酵素の発現量が低下し、酸化ストレスの増加による腎機能低下をもたらすと考えられている。このため、上記医薬は、糖尿病性腎症に有効である。腎臓疾患としては、糖尿病性腎症に加え、例えば、急性腎炎、慢性腎炎、ネフローゼ症候群、急性腎不全および慢性腎不全などが挙げられる。
【００３５】
以上詳細に説明したように、上記医薬は、ＦｏｘＯ３ａを活性化することができるので、種々の疾患、特に酸化ストレス関連の疾患および老化性疾患などを治療および予防できる。また、当該医薬は、腎保護作用を有するため、腎臓疾患を治療または予防できる。
【００３６】
また、別の実施の形態は、上記医薬を患者に投与することによりＦｏｘＯ３ａのリン酸化を阻害する方法、ＦｏｘＯ３ａを活性化する方法または酸化ストレス関連の疾患もしくは腎臓疾患を治療する方法である。さらに別の実施の形態は、ＦｏｘＯ３ａのリン酸化を阻害するための医薬またはＦｏｘＯ３ａを活性化するための医薬の製造のための上記ＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害剤の使用である。他の実施の形態は、酸化ストレス関連の疾患または腎臓疾患を治療するための医薬の製造のための上記ＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害剤の使用である。さらに他の実施の形態では、上記医薬は、腎臓疾患治療剤または腎臓疾患予防剤であってもよい。
【００３７】
（実施の形態３）
さらに、実施の形態３について説明する。本実施の形態に係るＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害用添加剤は、フェノール性ジテルペンを含む。下記実施例２に示すように上記フェノール性ジテルペンは、経口投与で用いてもＦｏｘＯ３ａのリン酸化を阻害するため、添加剤として使用してもその作用が得られる。
【００３８】
ＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害用添加剤は、例えば、食品に添加される。該食品としては、栄養ドリンクおよび機能性食品などが挙げられる。具体的には、上記ＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害用添加剤は、清涼飲料水、紅茶および緑茶などの飲料、キャンデー、クッキー、錠菓、チューインガムおよびゼリーなどの菓子、麺、パン、米飯およびビスケットなどの穀類加工品、ソーセージ、ハムおよびかまぼこなどの練り製品、バターおよびヨーグルトなどの乳製品、ならびにふりかけなどの調味料などに含有されてもよい。なお、上記ＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害用添加剤が食品に添加される場合、該食品には、甘味料、香料、着色料などの他の添加物が含まれてもよい。
【００３９】
食品中の有効成分としての上記ＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害用添加剤の含有量は通常０．０００１〜９９重量％、好ましくは１〜９０重量％である。有効成分としての上記ＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害用添加剤の摂取量が、成人１日当たり１ｍｇ〜１００ｇ、１０ｍｇ〜１００ｇ、または１００ｍｇ〜５０ｇの範囲であればよい。
【００４０】
本実施の形態に係るＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害用添加剤は、ＦｏｘＯ３ａのリン酸化を阻害する上記フェノール性ジテルペンを含むため、食品などに抗酸化ストレス作用、抗老化作用および腎保護作用を付与することができる。
【００４１】
以上詳細に説明したように、本実施の形態に係るＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害用添加剤は、ＦｏｘＯ３ａのリン酸化を阻害するフェノール性ジテルペンを含む。このため、当該ＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害用添加剤を食品などとともに摂取することで、ＦｏｘＯ３ａを活性化させることによる抗酸化ストレス作用、抗老化作用および腎保護作用を得ることができる。
【００４２】
別の実施の形態では、上記ＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害用添加剤を含む機能性食品が提供される。当該機能性食品は、酸化ストレス関連の疾患、老化性疾患および腎臓疾患の予防および改善のために食されるのが好適である。こうすることで、ＦｏｘＯ３ａのリン酸化を阻害するフェノール性ジテルペンを、食事を介して手軽に摂取することができる。なお、当該ＦｏｘＯ３ａリン酸化阻害用添加剤は、酸化ストレス関連の疾患、老化性疾患または腎臓疾患の予防、抑制および改善などの効能が表示された包装で提供される食品に、有効成分として含まれてもよい。
【実施例】
【００４３】
以下の実施例により、本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。
【００４４】
（実施例１：ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞を用いたＦｏｘＯ３ａのリン酸化阻害実験）
ヒト神経繊維芽腫細胞であるＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ；ＤＡファーマバイオメディカル社より入手）を、６ｃｍのディッシュでほぼコンフルエントになるまで培養した。培養の培地には、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）と抗生物質（５０  ｕｎｉｔ／ｍｌ  ペニシリンおよび５０μｇ／ｍｌ  ストレプトマイシン（ＧＩＢＣＯ社製））とを含むＤＭＥＭ培地（ＧＩＢＣＯ社製）を用いた。
【００４５】
１％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）と抗生物質（５０  ｕｎｉｔ／ｍｌ  ペニシリンおよび５０μｇ／ｍｌ  ストレプトマイシン（ＧＩＢＣＯ社製））とを含むＤＭＥＭ培地（ＧＩＢＣＯ社製）に培地交換し、ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ（ＤＭＳＯ）に溶解したＣＡまたはＰＡを培地に添加した。なお、対照には、同量のＤＭＳＯを添加した。２４時間後、Ｍ−Ｐｅｒ試薬（ＰＩＥＲＣＥ、サーモサイエンティフィック社製）を用いてタンパク質を抽出し、１０分間の遠心分離（１４，０００ｒｐｍ）で上清のタンパク質を回収した。
【００４６】
得られたタンパク質に含まれる全ＦｏｘＯ３ａとリン酸化ＦｏｘＯ３ａとを、ＦｏｘＯ３ａ抗体（＃１２８２９、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）およびリン酸化ＦｏｘＯ３ａ抗体（ａｂ１５４７８６、ａｂｃａｍ社製）を用いたウエスタンブロッティング法で定量した。ウエスタンブロッティング法には、ＷｅｓｔｅｒｎＢｒｅｅｚｅ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｋｉｔ，ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）を用いた。
【００４７】
（結果）
図１は、５μＭのＣＡを添加したときのＦｏｘＯ３ａとリン酸化ＦｏｘＯ３ａの量を示す。ＣＡによってＦｏｘＯ３ａのリン酸化が抑制された（図１（ａ）参照）。バンドの濃度に基づいて全ＦｏｘＯ３ａに対するリン酸化ＦｏｘＯ３ａの比を算出したところ、ＣＡは、対照群と比較してＦｏｘＯ３ａのリン酸化を約４０％まで有意に抑制することが示された（ｎ＝３）（図１（ｂ）参照）。
【００４８】
図２は、５μＭまたは１０μＭのＰＡを添加したときのＦｏｘＯ３ａとリン酸化ＦｏｘＯ３ａの量を示す。１０μＭのＰＡによってＦｏｘＯ３ａのリン酸化が抑制された（図２（ａ）参照）。ＦｏｘＯ３ａに対するリン酸化ＦｏｘＯ３ａの比では、１０μＭのＰＡによってＦｏｘＯ３ａのリン酸化が約６０％まで抑制される傾向が示された（ｎ＝３）（図２（ｂ）参照）。
【００４９】
（実施例２：老化促進マウスへの経口投与実験）
３週齢の老化促進マウス（ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ  ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ  ｍｏｕｓｅ：ＳＡＭＰ８）を１週間予備飼育後、ＣＡの投与を開始した。ＣＡは６、５０または６０μＭになるように蒸留水に溶解し、飲水として自由摂取させた。対照群には蒸留水を同様に与えた。以下、老化促進マウスを単に「マウス」という。なお、ＣＡ投与群と対照群との間に、飼育期間における体重、摂餌量および飲水量に明らかな差は認められなかった。なお、４０週齢時における飲水量は、対照群で３．７７ｇ／匹／日、６μＭのＣＡ投与群で３．６８ｇ／匹／日および６０μＭのＣＡ投与群で４．２０ｇ／匹／日であった。
【００５０】
ＣＡの投与を続け、１０ヶ月齢時に生存しているマウスを計数し、生存率を算出した。５０μＭのＣＡを１１ヶ月間投与したマウスについて、肝臓を回収し、上記と同様にウエスタンブロッティング法を用いて肝臓におけるリン酸化ＦｏｘＯ３ａを定量した。
【００５１】
（結果）
表１は、１０ヶ月齢時のマウスの生存率を示す。ＣＡを投与しなかった対照群の生存率は５０〜８０％であった。一方、ＣＡを投与されたマウスは、対照群よりも生存率が高く、６０μＭの場合、ＣＡを投与されたマウスの生存率は１００％であった。このことは、ＣＡの摂取がＦｏｘＯ３ａのリン酸化を抑制することで疾病のリスクを下げることを示唆している。
【００５２】
【表１】
0006533412.tif 000003
【００５３】
図３は、５０μＭのＣＡを１１ヶ月間投与した１２ヶ月齢のマウスおよび対照群由来の肝臓におけるリン酸化ＦｏｘＯ３ａの量を示す。ＣＡ投与群は、対照群と比較して、リン酸化ＦｏｘＯ３ａの量が低下していた（図３（ａ）参照）。バンドの濃度に基づいてリン酸化ＦｏｘＯ３ａの量を比較すると、対照群の平均値を１００％とすると、ＣＡ投与群では、リン酸化ＦｏｘＯ３ａの量が約６０％まで有意に低下していた（対照群はｎ＝７、ＣＡ投与群はｎ＝９）（図３（ｂ）参照）。
【００５４】
以上の結果より、ＣＡおよびＰＡは、ＦｏｘＯ３ａのリン酸化を抑制することが示された。老化促進のモデルマウスに１１ヶ月間という長期にわたってＣＡを投与しても、有害事象は観察されなかった。さらに、ＣＡはＦｏｘＯ３ａのリン酸化を抑制することで、マウスの寿命を延長することが明らかになった。
【００５５】
（実施例３：ＣＡの腎保護作用の検討）
上記実施例２において、５０μＭのＣＡを１１ヶ月間投与したマウスから血液を回収し、血清を得た。血清中のクレアチニン量をランピア  リキッド  ＣＲＥＡ（極東製薬社製）を用いて測定した。一方、５０μＭのＣＡを１１ヶ月間投与したマウスについて、腎臓を回収し、腎臓を１０％中性ホルマリンで固定した後、パラフィン包埋した。腎臓組織切片を作成し、リン酸化ＦｏｘＯ３ａ抗体（ａｂ１５４７８６、ａｂｃａｍ社製）を用いた免疫組織化学染色を行った。
【００５６】
（結果）
血清クレアチニンの濃度を算出し、各マウスの体重で除した値を図４に示す。ＣＡ投与群の値は、対照群に比べ有意に低かった。クレアチニンは、筋肉に多く存在するクレアチンの代謝物で、腎臓の糸球体で血液から取り除かれ尿中に排泄されるため、通常血液中の濃度は低い。しかし、腎機能が低下すると、血中のクレアチニンの濃度が高くなる。したがって、ＣＡ投与によって、腎機能が保護されていることが明らかとなった。
【００５７】
図５は、染色した腎臓組織切片の顕微鏡画像を示す。対照群ではリン酸化されたＦｏｘＯ３が腎臓の組織に多く存在しているが（図５（ａ）参照）、ＣＡ投与群ではリン酸化されたＦｏｘＯ３が少ないことが明らかとなった（図５（ｂ）参照）。この結果は、ＣＡ投与群ではＦｏｘＯ３のリン酸化が抑制されており、ＣＡが腎臓の細胞に対して保護的に作用していることを示している。図４および図５の結果より、ＣＡの投与によって、腎機能が保護されることが示された。
【００５８】
リン酸化していないＦｏｘＯ３が転写因子として働くことが腎臓保護に重要なことが知られているため、腎臓の細胞におけるＦｏｘＯ３のリン酸化を抑制するＣＡは、腎保護剤として有用である。
【００５９】
上述した実施の形態は、本発明を説明するためのものであり、本発明の範囲を限定するものではない。すなわち、本発明の範囲は、実施の形態ではなく、特許請求の範囲によって示される。そして、特許請求の範囲内およびそれと同等の発明の意義の範囲内で施される様々な変形が、本発明の範囲内とみなされる。
【産業上の利用可能性】
【００６０】
本発明は、ＦｏｘＯ３ａのリン酸化を阻害するのに好適である。
【図１】
0006533412.tif 000004
【図２】
0006533412.tif 000005
【図３】
0006533412.tif 000006
【図４】
0006533412.tif 000007
【図５】
0006533412.tif 000008