(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者におけるＣ．ディフィシル感染の治療のための剤であって、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む繊維ブレンドを有効成分として含有し、治療的に有効な量の前記繊維ブレンドが前記抗生物質治療後に前記患者に投与されるように用いられる、剤。
【請求項２】
前記繊維ブレンドは少なくとも１種の不溶性繊維をさらに含み、前記少なくとも１種の不溶性繊維は大豆繊維、エンドウ豆外皮繊維又はそれらの組み合わせである、請求項１に記載の剤。
【請求項３】
前記繊維ブレンドは、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム、イヌリン及びエンドウ豆外皮繊維を含む、請求項１に記載の剤。
【請求項４】
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者におけるＣ．ディフィシル感染の治療のための栄養組成物であって、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有し、前記抗生物質治療後に前記栄養組成物が前記患者に投与されるように用いられる、栄養組成物。
【請求項５】
前記ＦＯＳ、前記アカシアガム及び前記イヌリンは前記栄養組成物におけるすべての繊維である、請求項４に記載の栄養組成物。
【請求項６】
前記繊維ブレンドは少なくとも１種の不溶性繊維をさらに含み、前記少なくとも１種の不溶性繊維は大豆繊維、エンドウ豆外皮繊維又はそれらの組み合わせである、請求項４に記載の栄養組成物。
【請求項７】
前記繊維ブレンドは、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム、イヌリン及びエンドウ豆外皮繊維を含む、請求項４に記載の栄養組成物。
【請求項８】
前記ＦＯＳ、前記アカシアガム、前記イヌリン及び前記エンドウ豆外皮繊維は前記栄養組成物におけるすべての繊維である、請求項７に記載の栄養組成物。
【請求項９】
前記栄養組成物は経腸投与される、請求項４〜８のいずれか一項に記載の栄養組成物。
【請求項１０】
前記栄養組成物は経口投与される、請求項４〜８のいずれか一項に記載の栄養組成物。
【請求項１１】
前記栄養組成物は、前記抗生物質治療後に少なくとも１週間、少なくとも１日１回、前記患者に投与される、請求項４〜１０のいずれか一項に記載の栄養組成物。
【請求項１２】
前記少なくとも１週間の間、プロバイオティクスが前記患者に投与されない、請求項１１に記載の栄養組成物。
【請求項１３】
前記少なくとも１週間の間、前記患者が他の抗生物質治療を受けない、請求項１１又は１２に記載の栄養組成物。
【請求項１４】
Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染の治療若しくは予防又はＣ．ディフィシル感染の症状の軽減のための剤であって、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む繊維ブレンドを有効成分として含有し、治療的に有効な量の前記繊維ブレンドが患者に投与されるように用いられ、前記患者は、前記繊維ブレンドの投与前に抗生物質治療を受けた患者であるか、前記繊維ブレンドの投与と同時に抗生物質治療を受ける患者であるか、又は前記繊維ブレンドの投与後に抗生物質治療を受ける予定の患者である、剤。
【請求項１５】
前記繊維ブレンドは、約３５〜約４４重量％の量のＦＯＳ、約３８〜約５０重量％の量のアカシアガム、及び１２〜２４重量％の量のイヌリンを含む、請求項１４に記載の剤。
【請求項１６】
前記繊維ブレンドは少なくとも１種の不溶性繊維をさらに含み、前記少なくとも１種の不溶性繊維は大豆繊維、エンドウ豆外皮繊維又はそれらの組み合わせである、請求項１４又は１５に記載の剤。
【請求項１７】
前記繊維ブレンドは部分加水分解グアーガム（ＰＨＧＧ）をさらに含む、請求項１４又は１５に記載の剤。
【請求項１８】
前記患者は抗生物質治療を受けた患者であり、前記繊維ブレンドは前記抗生物質治療後に前記患者に投与される、請求項１４〜１７のいずれか一項に記載の剤。
【請求項１９】
抗生物質治療が前記繊維ブレンドの投与後に又は前記繊維ブレンドの投与と同時に前記患者に実施される、請求項１４〜１７のいずれか一項に記載の剤。
【請求項２０】
Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染の治療若しくは予防又はＣ．ディフィシル感染の症状の軽減のための栄養組成物であって、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有し、前記栄養組成物が患者に投与されるように用いられ、前記患者は、前記栄養組成物の投与前に抗生物質治療を受けた患者であるか、前記栄養組成物の投与と同時に抗生物質治療を受ける患者であるか、又は前記栄養組成物の投与後に抗生物質治療を受ける予定の患者である、栄養組成物。
【請求項２１】
前記繊維ブレンドは、約３５〜約４４重量％の量のＦＯＳ、約３８〜約５０重量％の量のアカシアガム、及び１２〜２４重量％の量のイヌリンを含む、請求項２０に記載の栄養組成物。
【請求項２２】
前記繊維ブレンドは少なくとも１種の不溶性繊維をさらに含み、前記少なくとも１種の不溶性繊維は大豆繊維、エンドウ豆外皮繊維又はそれらの組み合わせである、請求項２０又は２１に記載の栄養組成物。
【請求項２３】
前記繊維ブレンドは部分加水分解グアーガム（ＰＨＧＧ）をさらに含む、請求項２０又は２１に記載の栄養組成物。
【請求項２４】
前記患者は抗生物質治療を受けた患者であり、前記栄養組成物は、前記抗生物質治療後に少なくとも１週間、少なくとも１日１回投与される、請求項２０〜２３のいずれか一項に記載の栄養組成物。
【請求項２５】
前記患者は抗生物質治療を受ける予定の患者であり、前記栄養組成物は、前記抗生物質治療前に少なくとも１週間、少なくとも１日１回投与される、請求項２０〜２３のいずれか一項に記載の栄養組成物。
【請求項２６】
Ｃ．ディフィシル感染を有する患者におけるＣ．ディフィシル感染の治療のための、請求項２０〜２５のいずれか一項に記載の栄養組成物。
【請求項２７】
抗生物質治療を受けた患者におけるＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染の予防のための栄養組成物であって、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有し、前記抗生物質治療後に前記栄養組成物が前記患者に投与されるように用いられる、栄養組成物。
【請求項２８】
抗生物質治療を受ける予定の患者におけるＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染の予防のための栄養組成物であって、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有し、前記抗生物質治療の実施前に前記栄養組成物が前記患者に投与されるように用いられる、栄養組成物。
【請求項２９】
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者におけるラクトバチルス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ）濃度の回復を改善するための栄養組成物であって、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有し、前記抗生物質治療後に前記栄養組成物が前記患者に投与されるように用いられる、栄養組成物。
【請求項３０】
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者における短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）産生の回復を改善するための栄養組成物であって、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有し、前記抗生物質治療後に前記栄養組成物が前記患者に投与されるように用いられる、栄養組成物。
【請求項３１】
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者における乳酸（ｌａｃｔａｔｅ）産生の回復を改善するための栄養組成物であって、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有し、前記抗生物質治療後に前記栄養組成物が前記患者に投与されるように用いられる、栄養組成物。
【請求項３２】
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者におけるビフィドバクテリウム菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）濃度の回復を改善するための栄養組成物であって、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有し、前記抗生物質治療後に前記栄養組成物が前記患者に投与されるように用いられる、栄養組成物。
【請求項３３】
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者におけるバクテロイデス菌（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）濃度の回復を改善するための栄養組成物であって、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有し、前記抗生物質治療後に前記栄養組成物が前記患者に投与されるように用いられる、栄養組成物。
【請求項３４】
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者におけるファーミキューテス菌（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）濃度の回復を改善するための栄養組成物であって、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有し、前記抗生物質治療後に前記栄養組成物が前記患者に投与されるように用いられる、栄養組成物。
【請求項３５】
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者における全細菌濃度の回復を改善するための栄養組成物であって、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有し、前記抗生物質治療後に前記栄養組成物が前記患者に投与されるように用いられる、栄養組成物。
【請求項３６】
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者における結腸酸性化を改善するための栄養組成物であって、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有し、前記抗生物質治療後に前記栄養組成物が前記患者に投与されるように用いられる、栄養組成物。
【請求項３７】
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者における結腸からのＣ．ディフィシルの排除を改善するための栄養組成物であって、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有し、前記抗生物質治療後に前記栄養組成物が前記患者に投与されるように用いられる、栄養組成物。
【請求項３８】
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者の結腸における毒素レベルを低下させるための栄養組成物であって、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有し、前記抗生物質治療後に前記栄養組成物が前記患者に投与されるように用いられる、栄養組成物。
【請求項３９】
Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染の治療又は予防における使用のための栄養組成物であって、
可溶性繊維及び不溶性繊維を含む繊維ブレンドを含み、
前記可溶性繊維及び前記不溶性繊維は約６０：４０〜約４０：６０の比で存在し、
前記可溶性繊維は、該可溶性繊維の約３５〜約４４重量％の量のフラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、約３８〜約５０重量％の量のアカシアガム、及び１２〜２４重量％の量のイヌリンであり、
前記不溶性繊維はエンドウ豆外皮繊維であり、
該組成物は、経口投与又は経腸投与の少なくとも１つによって個体に投与されるように用いられ、
前記個体は、前記栄養組成物の投与前に抗生物質治療を受けた個体であるか、前記栄養組成物の投与と同時に抗生物質治療を受ける個体であるか、又は前記栄養組成物の投与後に抗生物質治療を受ける予定の個体である、
栄養組成物。
【請求項４０】
前記繊維ブレンドは該組成物における唯一の繊維である、請求項３９に記載の栄養組成物。
【発明の詳細な説明】
【背景】
【０００１】
[0001]本開示は、腸内病原菌を低減するための食物繊維を含む栄養組成物に関し、腸内病原菌を低減する方法にも関する。
【０００２】
[0002]標準的組成物を用いた経腸栄養は、腸微生物叢及び短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）産生において改悪を引き起こすことが明らかにされており、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）集落化のリスク増大とも関係する。上記の結果は、抗生物質の過用でも観察される。例えば、抗生物質は、クーロン病、潰瘍性大腸炎及び回腸嚢炎を治療するためにしばしば投与されるが、意図しない結果として、腸微生物叢に悪影響を及ぼす可能性もある。
【０００３】
[0003]Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）は、院内下痢症の主原因であり、抗菌剤に対する耐性及び抵抗性を高めつつある。抗生物質は、Ｃ．ディフィシルに対する治療の基本形態であり、いくつかの抗生物質はＣ．ディフィシルに対して有効である。しかし、Ｃ．ディフィシル感染の死亡率は増加している。さらに、抗生物質治療は、腸微生物叢におけるさらなる改変及びＳＣＦＡ産生の中断を引き起こす。例えば、抗生物質は、細菌成長を阻害したり、有害細菌だけではなく、有害ではない、食品の消化を助けてその他の健康利益をもたらす腸内細菌の個体群も殺したりする。
【０００４】
[0004]プロバイオティクス菌は、Ｃ．ディフィシル感染の防止に使用されているが、ほとんどの研究は、有効性を判定するには力不足である。Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ（ＳＨＥＡ）及びＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ（ＩＤＳＡ）が発行した２０１０  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  によると、プロバイオティクス菌の投与は、データが限られていること、及び、血液感染する危険性があることから、Ｃ．ディフィシル感染の予防又は治療に推奨されない。
【０００５】
[0005]本開示は、微生物叢をさらに破壊する抗生物質治療とは異なり、微生物叢のバランスを有利に回復する。さらに、本明細書に開示される繊維ブレンドは、プロバイオティクスで懸念される血液感染のリスクを増大しない。
【概要】
【０００６】
[0006]本開示は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム（「ＡＧ」）及びイヌリンを含む、Ｃ．ディフィシル感染の治療又は予防に使用するための繊維ブレンドを提供する。繊維ブレンドは、経管栄養を必要とする患者に経腸投与されてもよい。経口投与も可能である。
【０００７】
[0007]ブレンド中の可溶性繊維は、結腸細菌が、日和見病原体の成長を防止する通常の微生物群及びＳＣＦＡ産生を維持するための発酵性食料源を提供する。このようなブレンドがクロストリジウム・ディフィシル又は任意のその他の病原体に対して抗病原体活性を有するという証拠は過去に存在しない。
【０００８】
[0008]本明細書に開示する繊維ブレンドは、インビトロで抗生物質治療及び病原体Ｃ．ディフィシル感染の後のラクトバチルス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ）濃度回復、ＳＣＦＡ及び乳酸（ｌａｃｔａｔｅ）産生を改善する。繊維ブレンドは、インビトロでビフィドバクテリウム菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）、バクテロイデス菌（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）、ファーミキューテス菌（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）、及び全細菌濃度の回復、並びに抗生物質治療及びＣ．ディフィシル感染の後の結腸酸性化も改善する。さらに、繊維ブレンドにより、抗生物質治療及びインビトロでのＣ．ディフィシル感染後の対照と比較して、Ｃ．ディフィシルの洗い出しがより短時間となる。具体的には、繊維ブレンドにより、模擬結腸からＣ．ディフィシルがより短時間で排除される。
【０００９】
[0009]一実施形態において、Ｃ．ディフィシル感染の治療又は予防のための方法が提供される。方法は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを患者に投与するステップを含む。実施形態において、繊維ブレンドは、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者及び抗生物質治療を受けた患者に、抗生物質治療の実施後に投与される。他の実施形態において、繊維ブレンドは、抗生物質治療を受けている患者に投与される。他の実施形態において、繊維ブレンドは、患者に抗生物質治療を実施した後に、患者に投与される。
【００１０】
[0010]好ましい実施形態において、繊維ブレンドは、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者及び抗生物質治療を受けた患者に、抗生物質治療の実施後に投与される。
【００１１】
[0011]一実施形態において、Ｃ．ディフィシル感染の予防又は治療のための方法が提供される。方法は、栄養組成物を患者に投与するステップを含み、この組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム、イヌリン及びエンドウ豆外皮繊維を含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する。実施形態において、栄養組成物は、抗生物質治療を受けた患者に、抗生物質治療後に、投与される。他の実施形態において、栄養組成物は、抗生物質治療を受けている患者に投与される。他の実施形態において、栄養組成物は、患者に抗生物質治療を実施した後に、患者に投与される。
【００１２】
[0012]一実施形態では、方法が提供される。方法は、抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者に、抗生物質治療後に栄養組成物を投与するステップを含み、上記組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する。
【００１３】
[0013]一実施形態において、ＦＯＳ、アカシアガム及びイヌリンは、栄養組成物における唯一の可溶性繊維である。
【００１４】
[0014]一実施形態において、ＦＯＳ、アカシアガム及びイヌリンは、栄養組成物におけるすべての繊維である。
【００１５】
[0015]一実施形態において、繊維ブレンドは、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム、イヌリン及びエンドウ豆外皮繊維を含む。
【００１６】
[0016]一実施形態において、ＦＯＳ、アカシアガム、イヌリン及びエンドウ豆外皮繊維は、栄養組成物におけるすべての繊維である。
【００１７】
[0017]一実施形態において、栄養組成物は経腸投与される。
【００１８】
[0018]一実施形態においては、組成物は経口投与される。
【００１９】
[0019]一実施形態において、栄養組成物は、抗生物質治療後少なくとも１週間、少なくとも１日１回、患者に投与される。
【００２０】
[0020]一実施形態において、上記少なくとも１週間の間、プロバイオティクスは患者に投与されない。
【００２１】
[0021]一実施形態において、上記少なくとも１週間の間、患者は他の抗生物質治療を受けない。
【００２２】
[0022]別の実施形態において、方法が提供され、この方法は、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者に栄養組成物を投与するステップであって、この組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、ステップを含み、上記栄養組成物は、抗生物質治療と同時に投与される。
【００２３】
[0023]別の実施形態において、方法が提供され、この方法は、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者にステップ栄養組成物を投与するステップであって、この組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、と、患者が栄養組成物を受容した後、患者に抗生物質治療を実施するステップと、を含む。
【００２４】
[0024]一実施形態において、繊維ブレンドは、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム、イヌリン及びエンドウ豆外皮繊維を含む。
【００２５】
[0025]一実施形態において、栄養組成物は、抗生物質治療の前の少なくとも１週間、少なくとも１日１回、患者に投与される。
【００２６】
[0026]一実施形態において、上記少なくとも１週間の間、プロバイオティクスは患者に投与されない。
【００２７】
[0027]一実施形態において、上記少なくとも１週間の間、患者は他の抗生物質治療を受けない。
【００２８】
[0028]別の実施形態において、方法が提供され、この方法は、抗生物質治療を受けた患者に、抗生物質治療後に少なくとも１週間、少なくとも１日１回、栄養組成物を投与するステップであって、この組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む繊維ブレンドを治療的に有効な量含有する、ステップを含む。
【００２９】
[0029]別の実施形態において、方法が提供され、この方法は、抗生物質治療を受けた患者に、栄養組成物を抗生物質治療後に投与して、Ｃ．ディフィシル感染を予防するステップであって、この組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、ステップを含む。
【００３０】
[0030]別の実施形態において、方法が提供され、この方法は、抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者に、栄養組成物を抗生物質治療後に投与して、Ｃ．ディフィシル感染を治療するステップであって、この組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、ステップを含む。
【００３１】
[0031]別の実施形態において、方法が提供され、この方法は、抗生物質治療を受ける予定の患者に、栄養組成物を抗生物質治療前に投与して、Ｃ．ディフィシル感染を予防するステップであって、この組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、ステップを含む。
【００３２】
[0032]別の実施形態において、方法が提供され、この方法は、抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者に、栄養組成物を抗生物質治療後に投与して、ラクトバチルス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ）濃度の回復を改善するステップであって、この組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、ステップを含む。
【００３３】
[0033]別の実施形態において、方法が提供され、この方法は、抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者に、栄養組成物を抗生物質治療後に投与して、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）産生の回復を改善するステップであって、この組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、ステップを含む。
【００３４】
[0034]別の実施形態において、方法が提供され、この方法は、抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者に、栄養組成物を抗生物質治療後に投与して、乳酸（ｌａｃｔａｔｅ）産生の回復を改善するステップであって、この組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、ステップを含む。
【００３５】
[0035]別の実施形態において、方法が提供され、この方法は、抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者に、栄養組成物を抗生物質治療後に投与してビフィドバクテリウム菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）濃度の回復を改善するステップであって、この組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、ステップを含む。
【００３６】
[0036]別の実施形態において、方法が提供され、この方法は、抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者に、栄養組成物を抗生物質治療後に投与して、バクテロイデス菌（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）濃度の回復を改善するステップであって、この組成物はフラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、ステップを含む。
【００３７】
[0037]別の実施形態において、方法が提供され、この方法は、抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者に、栄養組成物を抗生物質治療後に投与して、ファーミキューテス菌（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）濃度の回復を改善するステップであって、この組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、ステップを含む。
【００３８】
[0038]別の実施形態において、方法が提供され、この方法は、抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者に、栄養組成物を抗生物質治療後に投与して、全細菌濃度の回復を改善するステップであって、この組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、ステップを含む。
【００３９】
[0039]別の実施形態において、方法が提供され、この方法は、抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者に、栄養組成物を、抗生物質治療後に投与して、結腸酸性化を改善するステップであって、この組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、ステップを含む。
【００４０】
[0040]別の実施形態において、方法が提供され、この方法は、抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者に、栄養組成物を抗生物質治療後に投与して、結腸からのＣ．ディフィシルの排除を改善するステップであって、この組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、ステップを含む。
【００４１】
[0041]別の実施形態において、方法が提供され、この方法は、抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者に、栄養組成物を、抗生物質治療後に投与して、結腸中のＣ．ディフィシル濃度を低下させるステップであって、この組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、ステップを含む。
【００４２】
[0042]別の実施形態において、繊維ブレンドは、患者が抗生物質治療を受ける前に患者に投与される。
【００４３】
[0043]さらなる別の実施形態において、繊維ブレンドは、患者に抗生物質治療を実施するのと同時に、患者に投与される。
【００４４】
[0044]一実施形態において、繊維ブレンドは、さらに不溶性繊維を含み、不溶性繊維は、大豆繊維、エンドウ豆外皮繊維、又はそれらの組み合わせから選択される。好ましい実施形態において、繊維ブレンドは、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム、イヌリン及びエンドウ豆外皮繊維を含む。
【００４５】
[0045]一実施形態において、繊維ブレンドは、さらに可溶性繊維、例えば、部分加水分解グアーガム（「ＰＨＧＧ」）を含む。例えば、ＰＨＧＧは、１０ｇ／Ｌまでの量、例えば、約２ｇ／Ｌ〜約９ｇ／Ｌの量で提供されてもよい。一実施形態において、繊維ブレンドは、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム、イヌリン及びＰＨＧＧを含む。
【００４６】
[0046]本開示は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム（「ＡＧ」）及びイヌリンを含む、Ｃ．ディフィシル感染の治療又は予防に使用するための繊維ブレンドを提供する。
【００４７】
[0047]好ましい実施形態において、本開示は、繊維ブレンド投与前に抗生物質治療を受けた患者に、Ｃ．ディフィシル感染の治療又は予防で使用するための、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム（「ＡＧ」）及びイヌリンを含む繊維ブレンドを提供する。
【００４８】
[0048]別の実施形態において、本開示は、繊維ブレンドと同時に抗生物質治療を受けた患者、又は繊維ブレンドの投与後に抗生物質治療を受ける予定の患者に、Ｃ．ディフィシル感染の治療又は予防で使用するための、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム（「ＡＧ」）及びイヌリンを含む繊維ブレンドを提供する。
【００４９】
[0049]本開示は、ブレンドの約３８〜４４重量％の量のフラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、ブレンドの約３８〜約４４重量％の量及びのアカシアガム（「ＡＧ」）を含み、イヌリンがブレンドの約１２〜約２４重量％の量で存在する、Ｃ．ディフィシル感染の治療又は予防に使用するための繊維ブレンドを提供する。繊維ブレンドは、経管栄養を必要とする患者に経腸投与されてもよい。経口投与も可能である。
【００５０】
[0050]一実施形態において、繊維ブレンドは、さらに可溶性繊維、例えば、部分加水分解グアーガム（「ＰＨＧＧ」）を含む。例えば、ＰＨＧＧは、１０ｇ／Ｌまでの量、例えば、約２ｇ／Ｌ〜約９ｇ／Ｌの量で提供されてもよい。一実施形態において、繊維ブレンドは、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム、イヌリン及びＰＨＧＧを含む。
【００５１】
[0051]一実施形態において、繊維ブレンドは、さらに不溶性繊維を含み、不溶性繊維は、大豆繊維、エンドウ豆外皮繊維、又はそれらの組み合わせから選択される。好ましい実施形態において、繊維ブレンドは、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム、イヌリン及びエンドウ豆外皮繊維を含む。
【００５２】
[0052]本開示は、ブレンドの約５０重量％の可溶性繊維と約５０重量％の不溶性繊維とを有する繊維ブレンドを提供する。可溶性繊維は、ディフィシル感染の治療又は予防で使用するための、ブレンドの約４１重量％のフラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、約４１重量％のアカシアガム、及び約１８重量％のイヌリンを含む。不溶性繊維は、エンドウ豆外皮繊維である。繊維ブレンドは、経管栄養を必要とする患者に経腸投与されてもよい。経口投与も可能である。
【００５３】
[0053]一実施形態において、抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者に、ラクトバチルス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ）濃度の回復の改善、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）産生の回復の改善、及び／又は乳酸（ｌａｃｔａｔｅ）産生の回復の改善のために使用するための、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム（「ＡＧ」）及びイヌリンを含む繊維ブレンドが提供される。
【００５４】
[0054]一実施形態において、抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者に、ビフィドバクテリウム菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）濃度の回復の改善、バクテロイデス菌（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）濃度の回復の改善、ファーミキューテス菌（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）濃度の回復の改善、全細菌濃度の回復の改善、結腸酸性化の改善、及び／又は結腸からのＣ．ディフィシル排除の改善、及び／又は結腸中のＣ．ディフィシル濃度の低減のために使用するための、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム（「ＡＧ」）及びイヌリンを含む繊維ブレンドが提供される。
【００５５】
[0055]別の実施形態において、繊維ブレンドは、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者に、患者が抗生物質治療を受ける前に使用するために処方される。
【００５６】
[0056]さらなる別の実施形態において、繊維ブレンドは、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者に、抗生物質治療と同時に投与するために処方される。
【００５７】
[0057]別の実施形態において、Ｃ．ディフィシル感染の予防又は治療に使用するための栄養組成物が提供される。栄養組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム（「ＡＧ」）及びイヌリンを含む。特定の実施形態において、栄養組成物は、約５０％の可溶性繊維及び約５０％の不溶性繊維である繊維ブレンドを含み、可溶性繊維は、可溶性繊維の約４１重量％の量のフラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、可溶性繊維の約４１重量％の量のアカシアガム、及び可溶性繊維の約１８重量％の量のイヌリンであり、不溶性繊維はエンドウ豆外皮繊維であり、上記組成物は、経口投与又は経腸投与の少なくとも１つによって個体に投与されるよう設計されている。
【００５８】
[0058]一実施形態において、繊維ブレンドは、組成物中で唯一の繊維である。
【００５９】
本発明の実施形態は例えば下記実施形態１〜４６を含む。
実施形態１：
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者に、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを前記抗生物質治療後に投与するステップを含む、方法。
実施形態２：
前記繊維ブレンドは少なくとも１種の不溶性繊維をさらに含み、前記少なくとも１種の不溶性繊維は大豆繊維、エンドウ豆外皮繊維又はそれらの組み合わせである、実施形態１に記載の方法。
実施形態３：
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者に、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム、イヌリン及びエンドウ豆外皮繊維を含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを前記抗生物質治療後に投与するステップを含む、実施形態１に記載の方法。
実施形態４：
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者に、前記抗生物質治療後に栄養組成物を投与するステップを含み、前記組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、方法。
実施形態５：
前記ＦＯＳ、前記アカシアガム、前記イヌリン及び前記エンドウ豆外皮繊維は前記栄養組成物におけるすべての繊維である、実施形態４に記載の方法。
実施形態６：
前記繊維ブレンドは少なくとも１種の不溶性繊維をさらに含み、前記少なくとも１種の不溶性繊維は大豆繊維、エンドウ豆外皮繊維又はそれらの組み合わせである、実施形態４に記載の方法。
実施形態７：
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者に、前記抗生物質治療後に栄養組成物を投与するステップを含み、前記組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム、イヌリン及びエンドウ豆繊維を含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、実施形態４に記載の方法。
実施形態８：
前記ＦＯＳ、前記アカシアガム、前記イヌリン及び前記エンドウ豆外皮繊維は前記栄養組成物におけるすべての繊維である、実施形態７に記載の方法。
実施形態９：
前記栄養組成物は経腸投与される、実施形態４に記載の方法。
実施形態１０：
前記栄養組成物は経口投与される、実施形態４に記載の方法。
実施形態１１：
前記栄養組成物は、前記抗生物質治療後に少なくとも１週間、少なくとも１日１回、前記患者に投与される、実施形態４に記載の方法。
実施形態１２：
前記少なくとも１週間の間、プロバイオティクスが前記患者に投与されない、実施形態４に記載の方法。
実施形態１３：
前記少なくとも１週間の間、前記患者が他の抗生物質治療を受けない、実施形態４に記載の方法。
実施形態１４：
Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染の治療又は予防のための方法であって、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを患者に投与するステップを含む方法。
実施形態１５：
前記繊維ブレンドは少なくとも１種の不溶性繊維をさらに含み、前記少なくとも１種の不溶性繊維は大豆繊維、エンドウ豆外皮繊維又はそれらの組み合わせである、実施形態１４に記載の方法。
実施形態１６：
前記患者は抗生物質治療を受けた患者であり、前記繊維ブレンドは前記抗生物質治療後に前記患者に投与される、実施形態１４に記載の方法。
実施形態１７：
抗生物質治療が前記繊維ブレンドの投与後に又は前記繊維ブレンドの投与と同時に前記患者に実施される、実施形態１４に記載の方法。
実施形態１８：
前記繊維ブレンドは少なくとも１種の不溶性繊維をさらに含み、前記少なくとも１種の不溶性繊維は大豆繊維、エンドウ豆外皮繊維又はそれらの組み合わせである、実施形態１４に記載の方法。
実施形態１９：
Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染の治療又は予防のための方法であって、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含む栄養組成物を患者に投与するステップを含む方法。
実施形態２０：
前記繊維ブレンドは少なくとも１種の不溶性繊維をさらに含み、前記少なくとも１種の不溶性繊維は大豆繊維、エンドウ豆外皮繊維又はそれらの組み合わせである、実施形態１９に記載の方法。
実施形態２１：
抗生物質治療を受けた患者に、前記抗生物質治療後に少なくとも１週間、少なくとも１日１回、栄養組成物を投与するステップを含み、前記組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、方法。
実施形態２２：
抗生物質治療を受けた患者に栄養組成物を前記抗生物質治療後に投与して、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を予防するステップを含み、前記組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、方法。
実施形態２３：
抗生物質治療を受ける予定の患者に栄養組成物を前記抗生物質治療の実施前に投与して、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を予防するステップを含み、前記組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）及びアカシアガムを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、方法。
実施形態２４：
抗生物質治療を受ける予定の患者に、前記抗生物質治療前に少なくとも１週間、少なくとも１日１回、栄養組成物を投与するステップを含み、前記組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、方法。
実施形態２５：
Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者に栄養組成物を投与してＣ．ディフィシル感染を治療するステップを含み、前記組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、方法。
実施形態２６：
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者に、栄養組成物を前記抗生物質治療後に投与して、Ｃ．ディフィシル感染を治療するステップを含み、前記組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム、イヌリン及びエンドウ豆外皮繊維を含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、方法。
実施形態２７：
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者に、栄養組成物を前記抗生物質治療後に投与して、ラクトバチルス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ）濃度の回復を改善するステップを含み、前記組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、方法。
実施形態２８：
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者に、栄養組成物を前記抗生物質治療後に投与して、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）産生の回復を改善するステップを含み、前記組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、方法。
実施形態２９：
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者に、栄養組成物を前記抗生物質治療後に投与して、乳酸（ｌａｃｔａｔｅ）産生の回復を改善するステップを含み、前記組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、方法。
実施形態３０：
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者に、栄養組成物を前記抗生物質治療後に投与して、ビフィドバクテリウム菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）濃度の回復を改善するステップを含み、前記組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、方法。
実施形態３１：
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者に、栄養組成物を前記抗生物質治療後に投与して、バクテロイデス菌（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）濃度の回復を改善するステップを含み、前記組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、方法。
実施形態３２：
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者に、栄養組成物を前記抗生物質治療後に投与して、ファーミキューテス菌（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）濃度の回復を改善するステップを含み、前記組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、方法。
実施形態３３：
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者に、栄養組成物を前記抗生物質治療後に投与して、全細菌濃度の回復を改善するステップを含み、前記組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、方法。
実施形態３４：
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者に、栄養組成物を前記抗生物質治療後に投与して、結腸酸性化を改善するステップを含み、前記組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、方法。
実施形態３５：
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者に、栄養組成物を前記抗生物質治療後に投与して、結腸からのＣ．ディフィシルの排除を改善するステップを含み、前記組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、方法。
実施形態３６：
抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者に、栄養組成物を前記抗生物質治療後に投与して、結腸における毒素レベルを低下させるステップを含み、前記組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む治療的に有効な量の繊維ブレンドを含有する、方法。
実施形態３７：
Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染の治療若しくは予防又はＣ．ディフィシル感染の症状の軽減における使用のための繊維ブレンドであって、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む繊維ブレンド。
実施形態３８：
約３５〜約４４重量％の量のＦＯＳ、約３８〜約５０重量％の量のアカシアガム、及び１２〜２４重量％の量のイヌリンを含む、実施形態３６に記載の繊維ブレンド。
実施形態３９：
不溶性繊維をさらに含み、少なくとも１種の不溶性繊維は大豆繊維、エンドウ豆外皮繊維又はそれらの組み合わせである、実施形態３７又は３８に記載の繊維ブレンド。
実施形態４０：
部分加水分解グアーガム（ＰＨＧＧ）をさらに含む、実施形態３７又は３８に記載の繊維ブレンド。
実施形態４１：
Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染の治療若しくは予防又はＣ．ディフィシル感染の症状の軽減における使用のための栄養組成物であって、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む栄養組成物。
実施形態４２：
約３５〜約４４重量％の量のＦＯＳ、約３８〜約５０重量％の量のアカシアガム、及び１２〜２４重量％の量のイヌリンを含む、実施形態４１に記載の栄養組成物。
実施形態４３：
不溶性繊維をさらに含み、少なくとも１種の不溶性繊維は大豆繊維、エンドウ豆外皮繊維又はそれらの組み合わせである、実施形態４１又は４２に記載の栄養組成物。
実施形態４４：
部分加水分解グアーガム（ＰＨＧＧ）をさらに含む、実施形態４１又は４２に記載の栄養組成物。
実施形態４５：
Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染の治療又は予防における使用のための栄養組成物であって、
可溶性繊維及び不溶性繊維を含む繊維ブレンドを含み、
前記可溶性繊維及び前記不溶性繊維は約６０：４０〜約４０：６０の比で存在し、
前記可溶性繊維は、該可溶性繊維の約３５〜約４４重量％の量のフラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、約３８〜約５０重量％の量のアカシアガム、及び１２〜２４重量％の量のイヌリンであり、
前記不溶性繊維はエンドウ豆外皮繊維であり、及び
該組成物は、経口投与又は経腸投与の少なくとも１つによって個体に投与されるように設計されている、
栄養組成物。
実施形態４６：
前記繊維ブレンドは該組成物における唯一の繊維である、実施形態４５に記載の栄養組成物。
[0059]追加の特徴及び利点を本明細書に記載する。これらは、以降の発明の詳細な説明及び図面から明らかとなろう。
【図面の簡単な説明】
【００６０】
【図１】図１。胃、十二指腸、及び上行結腸をシミュレートする連続的な反応器を含む、改造したヒト腸内微生物生態系のシミュレータ（「ＳＨＩＭＥ」）のシステムを示し、２つのＳＨＩＭＥシステムは、両システムで同じ環境条件を実現するために並行に配置される（「ＴＷＩＮＳＨＩＭＥ」）。
【図２】図２。Ｃ．ディフィシル（Ｖ２）の試料採取のスキームを示す。
【図３】図３。対照ＳＨＩＭＥ並びに繊維ブレンドをＶ１及びＶ２のそれぞれに使用したＳＨＩＭＥについて、各日間試料Ｓ１〜Ｓ７の全ＳＣＦＡ、アセタート、プロピオナート及びブチラート濃度のグラフを示す。
【図４】図４。対照ＳＨＩＭＥ並びに繊維ブレンドをＶ１及びＶ２のそれぞれに使用したＳＨＩＭＥについて、各日間試料Ｓ１〜Ｓ７のブチラート濃度のグラフを示す。
【図５】図５。対照ＳＨＩＭＥ並びに繊維ブレンドをＶ１及びＶ２のそれぞれに使用したＳＨＩＭＥについて、試料Ｓ１の値を基準として使用して、Ｓ３とＳ４との間で繊維ブレンドを添加した、各日間試料Ｓ２〜Ｓ７のＳＣＦＡ産生の変化の棒グラフを示す。
【図６】図６。対照ＳＨＩＭＥ並びに繊維ブレンドをＶ１及びＶ２のそれぞれに使用したＳＨＩＭＥについて、各日間試料Ｓ１〜Ｓ７の乳酸（ｌａｃｔａｔｅ）濃度の棒グラフを示す。
【図７】図７。対照ＳＨＩＭＥ並びに繊維ブレンドをＶ１及びＶ２のそれぞれに使用したＳＨＩＭＥについて、各日間試料Ｓ３〜Ｓ７の酸−塩基消費量を示す。
【図８Ａ】図８Ａ。対照ＳＨＩＭＥ並びに繊維ブレンドをＶ１及びＶ２のそれぞれに使用したＳＨＩＭＥについて、各日間試料Ｓ１〜Ｓ７の全細菌のｑＰＣＲデータを示す。
【図８Ｂ】図８Ｂ。対照ＳＨＩＭＥ並びに繊維ブレンドをＶ１及びＶ２のそれぞれに使用したＳＨＩＭＥについて、各日間試料Ｓ１〜Ｓ７の全バクテロイデス菌（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）のｑＰＣＲデータを示す。
【図８Ｃ】図８Ｃ。対照ＳＨＩＭＥ並びに繊維ブレンドをＶ１及びＶ２のそれぞれに使用したＳＨＩＭＥについて、各日間試料Ｓ１〜Ｓ７の全ファーミキューテス菌（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）のｑＰＣＲデータを示す。
【図８Ｄ】図８Ｄ。対照ＳＨＩＭＥ並びに繊維ブレンドをＶ１及びＶ２のそれぞれに使用したＳＨＩＭＥについて、各日間試料Ｓ１〜Ｓ７の全ビフィドバクテリウム菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）のｑＰＣＲデータを示す。
【図８Ｅ】図８Ｅ。対照ＳＨＩＭＥ並びに繊維ブレンドをＶ１及びＶ２のそれぞれに使用したＳＨＩＭＥについて、各日間試料Ｓ１〜Ｓ７の全ラクトバチルス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ）のｑＰＣＲデータを示す。
【図９Ａ】図９Ａ。対照ＳＨＩＭＥ並びに繊維ブレンドをＶ１及びＶ２のそれぞれに使用したＳＨＩＭＥについて、試料Ｓ１の値を基準として使用して、各日間試料Ｓ２〜Ｓ７のビフィドバクテリウム菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）濃度の変化を示す。
【図９Ｂ】図９Ｂ。対照ＳＨＩＭＥ並びに繊維ブレンドをＶ２に使用したＳＨＩＭＥについて、試料Ｓ１の値を基準として使用して、図９Ａとは異なる目盛を使用して、各日間試料Ｓ２〜Ｓ７のビフィドバクテリウム菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）濃度の変化を示す。
【図９Ｃ】図９Ｃ。対照ＳＨＩＭＥ並びに繊維ブレンドをＶ１及びＶ２のそれぞれに使用したＳＨＩＭＥについて、試料Ｓ１の値を基準として使用して、各日間試料Ｓ２〜Ｓ７のラクトバチルス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ）濃度の変化を示す。
【図１０】図１０。対照ＳＨＩＭＥ並びに繊維ブレンドをＶ１及びＶ２のそれぞれに使用したＳＨＩＭＥについて、各日間試料Ｓ２〜Ｓ７のウェルシュ菌（Ｃ．ｐｅｆｒｉｎｇｅｎｓ）、Ｃ．ディフィシル、及び肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）のｑＰＣＲデータを示す。
【図１１】図１１。対照ＳＨＩＭＥ並びに繊維ブレンドをＶ１に使用したＳＨＩＭＥについて、各日間試料Ｓ０〜Ｓ６のウェルシュ菌群のｑＰＣＲデータを示す。
【図１２】図１２。管腔及び粘液関連の両方の微生物群の培養を可能にする、改造したヒト腸内微生物生態系のシミュレータ（「Ｍ−ＳＨＩＭＥ」）の装置の一例を示す。すべてのシステムで同一の環境条件を達成するため、３種類のＳＨＩＭＥシステムを並行に構成した（「トリプルＳＨＩＭＥ」）。
【図１３】図１３。近位及び遠位結腸に関して、３つの胃腸管をシミュレートしたＭ−ＳＨＩＭＥ（トリプルＳＨＩＭＥ）の模式図を示す。３つのＳＨＩＭＥシステムは、並行して操作した（ＳＨＩＭＥ１＝可溶性繊維ブレンド；ＳＨＩＭＥ２＝ＦＯＳ；ＳＨＩＭＥ３＝対照［デンプン］）。
【図１４】図１４。実施例２で使用したような、実施例の試験プロトコルの模式図を示す。
【図１５−１】図１５。ＳＨＩＭＥ実験の実験週当たりの全ＳＣＦＡ、アセタート、プロピオナート及びブチラートの濃度のグラフを示す。
【図１５−２】図１５（続き）。ＳＨＩＭＥ実験の実験週当たりの全ＳＣＦＡ、アセタート、プロピオナート及びブチラートの濃度のグラフを示す。
【図１５−３】図１５（続き）。ＳＨＩＭＥ実験の実験週当たりの全ＳＣＦＡ、アセタート、プロピオナート及びブチラートの濃度のグラフを示す。
【図１６】図１６。遠位結腸におけるアセタート、プロピオナート、ブチラート及び全ＳＣＦＡの正味の産生の棒グラフを示す。
【図１７−１】図１７。近位及び遠位結腸ＳＨＩＭＥ反応器における実験期間毎の酸−塩基消費量の棒グラフを示す。
【図１７−２】図１７（続き）。近位及び遠位結腸ＳＨＩＭＥ反応器における実験期間毎の酸−塩基消費量の棒グラフを示す。
【図１７−３】図１７（続き）。近位及び遠位結腸ＳＨＩＭＥ反応器における実験期間毎の酸−塩基消費量の棒グラフを示す。
【図１８−１】図１８。対照ＳＨＩＭＥ（デンプン）、繊維としてＦＯＳ（ブレンドＡ）を有するＳＨＩＭＥ及び繊維ブレンド（ブレンドＢ）を使用したＳＨＩＭＥについて、実験期間にわたる全細菌データのｑＰＣＲデータを示す。
【図１８−２】図１８（続き）。対照ＳＨＩＭＥ（デンプン）、繊維としてＦＯＳ（ブレンドＡ）を有するＳＨＩＭＥ及び繊維ブレンド（ブレンドＢ）を使用したＳＨＩＭＥについて、実験期間にわたる全細菌データのｑＰＣＲデータを示す。
【図１９−１】図１９。対照ＳＨＩＭＥ（デンプン）、繊維としてＦＯＳ（ブレンドＡ）を有するＳＨＩＭＥ及び繊維ブレンド（ブレンドＢ）を使用したＳＨＩＭＥについて、実験期間にわたる全ビフィドバクテリウム菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）のｑＰＣＲデータを示す。
【図１９−２】図１９（続き）。対照ＳＨＩＭＥ（デンプン）、繊維としてＦＯＳ（ブレンドＡ）を有するＳＨＩＭＥ及び繊維ブレンド（ブレンドＢ）を使用したＳＨＩＭＥについて、実験期間にわたる全ビフィドバクテリウム菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）のｑＰＣＲデータを示す。
【図２０−１】図２０。対照ＳＨＩＭＥ（デンプン）、繊維としてＦＯＳ（ブレンドＡ）を有するＳＨＩＭＥ及び繊維ブレンド（ブレンドＢ）を使用したＳＨＩＭＥについて、各日間試料Ｓ１〜Ｓ７の全ラクトバチルス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ）のｑＰＣＲデータを示す。
【図２０−２】図２０（続き）。対照ＳＨＩＭＥ（デンプン）、繊維としてＦＯＳ（ブレンドＡ）を有するＳＨＩＭＥ及び繊維ブレンド（ブレンドＢ）を使用したＳＨＩＭＥについて、各日間試料Ｓ１〜Ｓ７の全ラクトバチルス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ）のｑＰＣＲデータを示す。
【図２１−１】図２１。対照ＳＨＩＭＥ（デンプン）、繊維としてＦＯＳ（ブレンドＡ）を有するＳＨＩＭＥ及び繊維ブレンド（ブレンドＢ）を使用したＳＨＩＭＥについて、０日目、１日目、２日目、４日目、６日目、８日目、１１日目及び１３日目における日間試料中のＣ．ディフィシルのプレートカウントデータを示す。
【図２１−２】図２１（続き）。対照ＳＨＩＭＥ（デンプン）、繊維としてＦＯＳ（ブレンドＡ）を有するＳＨＩＭＥ及び繊維ブレンド（ブレンドＢ）を使用したＳＨＩＭＥについて、０日目、１日目、２日目、４日目、６日目、８日目、１１日目及び１３日目における日間試料中のＣ．ディフィシルのプレートカウントデータを示す。
【図２１−３】図２１（続き）。対照ＳＨＩＭＥ（デンプン）、繊維としてＦＯＳ（ブレンドＡ）を有するＳＨＩＭＥ及び繊維ブレンド（ブレンドＢ）を使用したＳＨＩＭＥについて、０日目、１日目、２日目、４日目、６日目、８日目、１１日目及び１３日目における日間試料中のＣ．ディフィシルのプレートカウントデータを示す。
【図２２−１】図２２。対照ＳＨＩＭＥ（デンプン）、繊維としてＦＯＳ（ブレンドＡ）を有するＳＨＩＭＥ及び繊維ブレンド（ブレンドＢ）を使用したＳＨＩＭＥの実験期間にわたるＣ．ディフィシルのｑＰＣＲデータを示す。
【図２２−２】図２２（続き）。対照ＳＨＩＭＥ（デンプン）、繊維としてＦＯＳ（ブレンドＡ）を有するＳＨＩＭＥ及び繊維ブレンド（ブレンドＢ）を使用したＳＨＩＭＥの実験期間にわたるＣ．ディフィシルのｑＰＣＲデータを示す。
【詳細な説明】
【００６１】
定義：
[0088]本出願において含まれるすべての用量域は、この範囲内に含まれるすべての数値、整数、又は分数を包含することを意図する。本明細書に記載のすべての百分率は、別途記載のない限り繊維配合物の合計重量によるものである。本明細書において使用する場合、「約」は、数値範囲内の数を指すと理解される。さらに、本明細書におけるすべての数値範囲は、その範囲内のすべての整数又は分数を含むと理解されるべきである。
【００６２】
[0089]本開示及び添付の特許請求の範囲において使用されるとき、単数形（「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」）には、別段の指示がない限り、複数の参照物も含まれる。よって、例えば、「アミノ酸（ａｎ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ）」という言及は、２種以上のアミノ酸の混合物を含む等である。
【００６３】
[0090]本明細書で使用するとき、「動物」としては、齧歯類、水生哺乳類、イヌ及びネコ等の飼育動物、ヒツジ、ブタ、ウシ及びウマ等の家畜、並びにヒトを含むがこれらに限定されない哺乳類が挙げられるが、これらに限定されない。「動物」、「哺乳類」、又はそれらの複数形が用いられる場合、これらの用語は、本節の文脈により効果が示されるか、又は示されるように意図されることができる動物にも当てはまる。本明細書で使用する場合、用語「患者」は、本明細書において定義されるような治療を受けるか、又は受けることを意図している、動物、とりわけ哺乳類、かつ一層とりわけ、ヒトを含むと理解される。用語「個体」及び「患者」は本明細書において多くの場合、ヒトを指して用いられるが、本開示はそのように限定されない。したがって、用語「個体」及び「患者」は、治療から利益を享受できる医学的状態を有するか又はその危険性のある、任意の動物、哺乳類又はヒトを指す。
【００６４】
[0091]本明細書で使用するとき、「栄養組成物」は、例えば１種以上の酸味料、追加の増粘剤、ｐＨ調節用緩衝液若しくはｐＨ調節剤、キレート剤、着色剤、乳化剤、添加物、香料、ミネラル、浸透剤、医薬的に許容されるキャリア、防腐剤、安定剤、糖、甘味料、調質剤及び／又はビタミン類等の従来の食品添加物を含む、任意の数の任意の添加成分を含むと理解される。任意の成分は、任意の好適な量で添加することができる。
【００６５】
[0092]本明細書で使用する場合、「治療的に有効な量」とは、個体における、欠乏を防ぐ、疾患若しくは医学的状態を治療する、又は、さらに一般的には、個体に対して、症状を軽減する、疾患の進行を管理する、若しくは栄養学的、生理学的若しくは医学的利益を提供する量である。治療は患者に関連するか、又は医者に関連するものとすることができる。
【００６６】
[0093]用語「治療」「治療する」及び「緩和する」には、抑止的又は予防的治療（標的とする病的状態又は障害を予防する及び／又は発症を遅らせる治療）と、治癒的、治療的、又は疾患改質的治療との両方が含まれ、例えば、診断された病的状態又は障害の治癒、遅延、症状の軽減、及び／又は進行の停止のための治療的手段、並びに疾患に冒されるリスクがある、又は疾患に冒されたことが疑われる患者、加えて病気であるか、又は疾患若しくは医学的状態に罹患していると診断されている患者の治療を含む。この用語は、対象者が完全に回復するまで治療を受けることを、必ずしも意味するものではない。「治療」及び「治療する」という用語は、疾患に罹患していないが、不健康な状態、例えば、窒素の不均衡又は筋肉の減少等を発生しやすい可能性がある個体の健康の維持及び／又は促進も指す。用語「治療」「治療する」及び「緩和する」はまた、１つ又はそれより多くの主たる予防又は治療手段の相乗作用、又はそうでない場合強化を含むことも目的としている。用語「治療」「治療する」及び「緩和すること」はさらに、疾患若しくは状態における食事療法、又は疾患若しくは状態の予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ又はｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）のための食事療法を含むことも目的としている。
【００６７】
[0094]本明細書で使用するとき、「経管栄養」は、動物の胃腸系へ経口投与以外によって投与される完全又は不完全な栄養製品又栄養組成物であり、限定はされないが、経鼻胃管、経口胃管、胃管、腸瘻チューブ（「Ｊチューブ」）、経皮内視鏡的胃瘻造設術（「ＰＥＧ」）、並びにポート、例えば胃、空腸へのアクセスを可能にする胸壁のポート、及び他の好適なアクセスポートによる投与が挙げられる。
【００６８】
[0095]「微生物」という用語は、細菌、酵母及び／若しくは真菌、微生物を含む細胞増殖培地、又は微生物が培養された細胞増殖培地を含むことを意味する。
【００６９】
例示的な実施形態：
[0100]経腸栄養法は、栄養必要量を経口によって満たすことができない個体に栄養分を送達するための好ましい方法である。標準処方物は、特定の医学的懸念がない個体に最も一般的に使用される。これらの処方物は、健康な個体群に対する推奨に適合し、一般に十分に耐容される、多量及び微量栄養素含量を有する。以前には、チューブ閉塞の問題、並びに腸管安静が有益であるという考えにより、繊維を含まない経腸処方物が好まれた。繊維による閉塞の問題はほぼ排除されたことから、現在では、この個体群に望ましい多くの有益な生理的効果を与えるために、繊維をそのような処方物に含めることができることが認識されている。
【００７０】
[0101]したがって、栄養組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリン等の可溶性繊維を含む繊維ブレンドを含有し、好ましい実施形態において、栄養組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む可溶性繊維を、栄養組成物１リットル当たり約０．５ｇ〜約２５ｇ、好ましくは栄養組成物１リットル当たり約１．０ｇ〜約２０ｇ、より好ましくは栄養組成物１リットル当たり約１．５ｇ〜約１５ｇの量で含有する。特定の実施形態において、栄養組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む可溶性繊維を、栄養組成物１リットル当たり約６ｇ〜約１５ｇ、好ましくは栄養組成物１リットル当たり約６ｇ〜約１３ｇの量で含有する。特定の実施形態において、栄養組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含む可溶性繊維を、栄養組成物１リットル当たり約６．５ｇの量で含有する。
【００７１】
[0102]一実施形態において、繊維ブレンドは、エンドウ豆外皮繊維を包含する不溶性繊維を含む。好ましい実施形態において、繊維ブレンドは、可溶性繊維及び不溶性繊維を、可溶性繊維：不溶性繊維の比が約４０：６０〜約６０：４０で含む。特定の実施形態において、繊維ブレンドは、約５０％の可溶性繊維と約５０％の不溶性繊維とである。好ましい実施形態において、栄養組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム、イヌリン、及びエンドウ豆外皮繊維を含む繊維ブレンドを、栄養組成物１リットル当たり約３ｇ〜約３０ｇ、好ましくは栄養組成物１リットル当たり約５ｇ〜約２５ｇ、より好ましくは栄養組成物１リットル当たり約５ｇ〜約２０ｇの量で含有する。特定の実施形態において、栄養組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含むブレンド可溶性繊維を、栄養組成物１リットル当たり約１０ｇ〜約２０ｇの量で含有する。別の実施形態において、栄養組成物は、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム及びイヌリンを含むブレンド可溶性繊維を、栄養組成物１リットル当たり約５ｇ〜約９ｇの量で含有する。
【００７２】
[0103]可溶性繊維は、結腸細菌のための発酵性食料源を提供し、これは通常の微生物群及びＳＣＦＡ産生を維持して日和見病原体の成長を防止する効果がある。不溶性繊維は、規則性及び糞便膨化性の利益を提供する。
【００７３】
[0104]好ましくは、繊維ブレンドは、栄養組成物中で唯一の繊維である。例えば、ＦＯＳ、アカシアガム及びイヌリンは、組成物中ですべての繊維であることができる。別の実施形態において、ＦＯＳ、アカシアガム及びイヌリンは、組成物中で唯一の可溶性繊維であることができ、エンドウ豆外皮繊維は、組成物中で唯一の不溶性繊維であることができる。
【００７４】
[0105]別の実施形態において、繊維ブレンドは、さらなる可溶性繊維、例えば、部分加水分解グアーガム（「ＰＨＧＧ」）を含んでもよい。例えば、ＰＨＧＧは、１０ｇ／Ｌまでの量、例えば、約２ｇ／Ｌ〜約９ｇ／Ｌの量で提供されてもよい。一実施形態において、繊維ブレンドは、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム、イヌリン及びＰＨＧＧを含む。一実施形態において、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、アカシアガム、イヌリン及びＰＨＧＧは、組成物中ですべての繊維であってもよい。
【００７５】
[0106]ＦＯＳは短鎖繊維を提供し、イヌリンは中鎖繊維を提供し、アカシアガムは長鎖繊維を提供する。したがって、繊維ブレンドは、異なる速度で発酵する繊維を提供し、それによって、結腸の全長にわたって効果を与える。
【００７６】
[0107]好ましい実施形態において、栄養組成物は、約３５〜約４４重量％の量のＦＯＳ、約３８〜約５０重量％の量のアカシアガム、及び１２〜２４重量％の量のイヌリンを含む。
【００７７】
[0108]より好ましい実施形態において、本開示の栄養組成物は、それぞれ約４０〜約４２重量％の量で存在するＦＯＳ及びアカシアガム、並びに約１６〜約２０重量％の量で存在するイヌリンを含む。
【００７８】
[0109]ＦＯＳ及びアカシアガムは、約４４：３８〜約３５：５０、又は約４２：４０〜約４０：４２、又は約１：１の重量比で存在することが有利である。さらに、ＦＯＳ及びイヌリンは、約３８：２４〜約４４：１２、又は約４０：２０〜約４２：１６、又は約７：３の重量比で存在することが有利である。
【００７９】
[0110]好ましい実施形態において、可溶性繊維は、可溶性繊維の約４１重量％の量のＦＯＳ、可溶性繊維の約４１重量％の量のアカシアガム、及び可溶性繊維の約１８重量％の量のイヌリンである。
【００８０】
[0111]ＦＯＳ及びイヌリンは、β（２−１）フルクトシル−フルクトースのグリコシド結合を含有する直鎖フルクタンである、低粘度可溶性繊維である。ＦＯＳは単純な炭水化物の短鎖ポリマーであり、このポリマーは体内で単純な糖のようなふるまいをしない。ＦＯＳはチコリ、バナナ、ニンニク、及び特定の他の食品中に天然に存在し、技術的には可溶性繊維である。イヌリンは、平均重合度が１０以上の分子を指し、ＦＯＳは重合度が１０未満であり、イヌリンの加水分解生成物として、又はフルクトース若しくはフルクトースとグルコースから合成によって、得ることができる。
【００８１】
[0112]アカシアガムは、複雑なアラビノガラクタンの族に属する、天然の低粘度可溶性繊維である。アカシアガムは、ガラクトース、アラビノース、ラムノース、及びグルクロン酸単位を含む、高度に分岐した高分子量の分子である。この天然物質の平均分子量は３００〜８００ｋＤａである。アカシアガムは、３つの異なる画分、すなわち１％の糖タンパク質、１〜１０％のアラビノガラクタン−タンパク質、及び９０〜９９％のアラビノガラクタンで構成される。アカシアガムは、他の可溶性繊維と比較してゆっくりと発酵し、ＳＣＦＡの産生を増加させ、したがって遠位結腸に有益となり得る。
【００８２】
[0113]不溶性繊維はエンドウ豆外皮繊維を含み、好ましくはエンドウ豆外皮繊維からなる。エンドウ豆外皮繊維はエンドウマメのサヤから得られ、主に、アラビノースに富んだヘミセルロース、セルロース、及びウロン酸等のペクチン質で構成される。アカシアガムは、エンドウ豆外皮繊維が存在するときに、処方物の粘度維持に役立つ。
【００８３】
[0114]栄養組成物は液体形態で調製することもできる。水は組成物成分に対し最も一般的なキャリアであるものの、このような組成物が経口投与される場合、組成物は、例えば、乳、果汁、コーヒー、茶、又はその他の飲料等の、他の液体に提供することができる。経腸製剤には典型的には水が使用される。
【００８４】
[0115]栄養組成物は乾燥粉末製剤とすることができる。粉末製剤は、乾燥粉末原料を組み合わせることにより製造することができ、あるいは当業界で知られる噴霧乾燥、凍結乾燥、又はその他の乾燥法等のプロセスのうちの１つを用い、液体組成物を乾燥させて、乾燥粉末組成物を製造することにより、液体栄養組成物から製造することができる。必要とされる場合、その他の栄養成分又は組成物を液体に加えた後、乾燥させて、粉末製剤の栄養効果を増強することもできる。このような粉末製剤は、はるかに長い貯蔵寿命を有し、将来的な使用に備えた保管及び輸送のためパッケージングすることができる。このとき、粉末製剤を水又はその他の液体に再溶解させた後、各個体に経口又は経腸投与することができる。粉末製剤は、グラス、瓶、又はその他の液体を含有している容器に加える粉末製剤を大量に供給するもの等といった各種容器にパッケージングすることができ、あるいは粉末を容器中に存在させて、添加により経口又は経腸投与用の液体を形成可能な水又は他の液体を１回供給することができる。
【００８５】
[0096]一実施形態では、栄養組成物は、十分な種類及び量の主要栄養素（タンパク質、脂質及び糖質）を含有する完全栄養製品であり、主要栄養素は、組成物を投与される動物の唯一の栄養源として十分なものである。別の実施形態では、栄養組成物は、十分な量の主要栄養素（タンパク質、脂質、及び糖質）を含有していない不完全栄養製品であり、又は主要栄養素は組成物を投与される動物の唯一の栄養源として十分なものである。
【００８６】
[0116]好ましい実施形態において、栄養組成物は微生物を含まない。このような実施形態において、栄養組成物はプロバイオティクスを含まない。プロバイオティクスは、適切な量で投与された場合に宿主に対して健康上の利益を与えることができる、より詳細には、その腸内微生物バランスを改善し、宿主の健康又は幸福に対する効果をもたらすことによって宿主に有益な影響を及ぼす、食品グレードの微生物、代謝産物、微生物細胞調製物又は微生物細胞成分である。Ｓａｌｍｉｎｅｎ  Ｓ．、Ｏｕｗｅｈａｎｄ  Ａ．、Ｂｅｎｎｏ  Ｙ．らの「Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ：ｈｏｗ  ｓｈｏｕｌｄ  ｔｈｅｙ  ｂｅ  ｄｅｆｉｎｅｄ？」Ｔｒｅｎｄｓ  Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９９：１０：１０７〜１０を参照されたい。一般に、これらの微生物は、腸管内の病原性細菌の増殖及び／又は代謝を阻害する、又はそれに影響を与えると考えられており、宿主の免疫機能を活性化する場合もある。プロバイオティクスの非限定的な例として、アエロコッカス（Ａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）、クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、デバロマイセス（Ｄｅｂａｒｏｍｙｃｅｓ）、エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、フソバクテリウム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、リューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）、メリッソコッカス（Ｍｅｌｉｓｓｏｃｏｃｃｕｓ）、ミクロコッカス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ムコール（Ｍｕｃｏｒ）、オエノコッカス（Ｏｅｎｏｃｏｃｃｕｓ）、ペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、ペプトストレプトコッカス（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｏｃｏｃｃｕｓ）、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、シュードカテヌラータム（Ｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ）、クモノスカビ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）、サッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、トルロプシス（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ）、ワイセラ（Ｗｅｉｓｓｅｌｌａ）、及びそれらの組み合わせが挙げられる。
【００８７】
[0117]一実施形態では、栄養組成物は、繊維ブレンドに加えて、タンパク質を含む。好適なタンパク質の非限定例として、乳製品ベースのタンパク質、植物ベースのタンパク質、動物ベースのタンパク質及び人工タンパク質が挙げられる。乳製品ベースのタンパク質として、例えば、カゼイン、カゼイン塩（例えば、カゼインナトリウム、カゼインカルシウム、カゼインカリウムを含むすべての形態）、カゼイン加水分解物、乳清（例えば、濃縮物、単離物、脱塩物を含むすべての形態）、乳清加水分解物、乳タンパク質濃縮物、及び乳タンパク質単離物が挙げられる。植物ベースのタンパク質として、例えば、大豆タンパク質（例えば、濃縮物及び単離物を含むすべての形態）、エンドウ豆タンパク質（例えば、濃縮物及び単離物を含むすべての形態）、キャノーラタンパク質（例えば、濃縮物及び単離物を含むすべての形態）、市販品としては小麦及び分画小麦タンパク質、トウモロコシ及びゼインを含むトウモロコシ画分、米、オート麦、ジャガイモ、落花生、グリーンピース粉末、サヤエンドウ粉末である他の植物タンパク質、並びに腎臓形の豆（ｂｅａｎｓ）、ヒラマメ（ｌｅｎｔｉｌｓ）及び豆類（ｐｕｌｓｅｓ）由来の任意のタンパク質が挙げられる。
【００８８】
[0118]一実施形態では、栄養組成物は、例えば、魚油又は非海洋性（ｎｏｎｍａｒｉｎｅ）油又は中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）等の脂質をさらに含む。魚油の非限定例としては、ドコサヘキサエン酸（「ＤＨＡ」）及びエイコサペンタエン酸（「ＥＰＡ」）が挙げられる。あるいは、又は加えて、ＤＨＡ及びＥＰＡは、魚油資源以外のもの、例えば、藻類、及び組換植物等に由来するものであってよい。一実施形態において、栄養組成物は、繊維ブレンドに加えて、さらにＤＨＡ、ＥＰＡ又はそれらの組み合わせを含む。
【００８９】
[0119]いくつかの実施形態において、栄養組成物は、繊維ブレンドに加えて、さらに抗酸化剤を含む。好適な抗酸化剤の非限定例としては、活性酸素種（「ＲＯＳ」）により促進される酸化又は反応を阻害する物質が挙げられ、並びにその他のラジカル種及び非ラジカル種も、その他の分子の酸化を遅延又は予防し得る分子として挙げられる。例えば、繊維配合物に加えて、栄養組成物には、さらにカロテノイド、補酵素Ｑ１０（「ＣｏＱ１０」）、フラボノイド、グルタチオンゴジ（ウォルフベリー）、ヘスペリジン、ラクトウォルフベリー、リグナン、ルテイン、リコピン、ポリフェノール、セレニウム、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ゼアキサンチン、又はそれらの組み合わせを含ませることができる。
【００９０】
[0120]いくつかの実施形態では、栄養組成物は、繊維ブレンドに加えて、ビタミン、ミネラル又はそれらの組み合わせをさらに含む。ビタミン類としては、身体の通常の成長及び活動に微量が必須とされる脂溶性又は水溶性有機分子が挙げられる。組成物に使用するビタミン類は、植物性及び動物性食品から天然に得られ又は合成され、かつプロビタミン、誘導体及び類似体が包含され得る。好適なビタミン類の非限定例としては、ビタミンＡ、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ３（ナイアシン又はナイアシンアミド）、ビタミンＢ５（パントテン酸）、ビタミンＢ６（ピリドキシン、ピリドキサール、又はピリドキサミン、又は塩酸ピリドキシン）、ビタミンＢ７（ビオチン）、ビタミンＢ９（葉酸）、及びビタミンＢ１２（各種コバラミン；ビタミンサプリメントでは、通常、シアノコバラミン）、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、葉酸、ビオチン、及びそれらの組み合わせが挙げられる。好適なミネラルの非限定例としては、ホウ素、カルシウム、クロム、銅、ヨウ素、鉄、マグネシウム、マンガン、モリブデン、ニッケル、リン、カリウム、セレン、ケイ素、スズ、バナジウム、亜鉛、又はそれらの組み合わせが挙げられる。
【００９１】
[0121]一実施形態では、栄養組成物は、植物資源に由来する健康増進化合物である植物栄養素をさらに含む。植物により生成され、使用者に１種以上の健康効果をもたらす任意の化合物を、植物栄養素として栄養組成物に使用できる。好適な植物栄養素の非限定例としては、フェノール化合物、テルペン、ベタレイン（ｂｅｔａｌａｉｎｓ）、オルガノスルフィド、タンパク質阻害剤、その他の有機酸及びそれらの組み合わせが挙げられる。
【００９２】
[0122]栄養組成物は、抗生物質治療を受けた患者に、治療的に有効な量の繊維ブレンドを、抗生物質治療後に投与するステップを含む方法に使用できる。別の態様において、栄養組成物は、抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者に、治療的に有効な量の繊維ブレンドを、抗生物質治療後に投与するステップを含む方法に使用できる。
【００９３】
[0123]さらなる態様において、栄養組成物は、抗生物質治療を受けた患者に、治療的に有効な量の繊維ブレンドを、抗生物質治療後に投与して、Ｃ．ディフィシル感染を予防するステップを含む方法に使用できる。栄養組成物は、抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者に、治療的に有効な量の繊維ブレンドを、抗生物質治療後に投与して、Ｃ．ディフィシル感染を治療するステップを含む方法にも用できる。
【００９４】
[0124]加えて、栄養組成物は、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者に、治療的に有効な量の繊維ブレンドを投与し、続いて患者に抗生物質治療を実施するステップを含む、Ｃ．ディフィシル感染を治療又は予防する方法に使用できる。
【００９５】
[0125]さらに、栄養組成物は、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者に、治療的に有効な量の繊維ブレンドを投与するステップ、又は同時に患者に抗生物質治療を実施するステップを含む、Ｃ．ディフィシル感染を治療又は予防する方法に使用できる。
【００９６】
[0126]さらなる態様において、栄養組成物は、抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者に、治療的に有効な量の繊維ブレンドを、抗生物質治療後に投与して、ラクトバチルス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ）濃度の回復の改善、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）産生の回復の改善、及び／又は乳酸（ｌａｃｔａｔｅ）産生の回復の改善を行うステップを含む方法に使用できる。改善は、繊維ブレンドを含まない組成物から得られる効果を基準にしている。
【００９７】
[0127]さらに、栄養組成物は、抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者に、治療的に有効な量の繊維ブレンドを、抗生物質治療後に投与して、ビフィドバクテリウム菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）濃度の回復の改善、バクテロイデス菌（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）濃度の回復の改善、ファーミキューテス菌（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）濃度の回復の改善、全細菌濃度の回復の改善、結腸酸性化の改善、及び／又は結腸からのＣ．ディフィシルの排除／結腸内のＣ．ディフィシルの濃度低下の改善を行うステップを含む方法に使用できる。改善は、繊維ブレンドを含まない組成物から得られる効果を基準にしている。
【００９８】
[0128]さらなる態様において、栄養組成物は、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者に、治療的に有効な量の繊維ブレンドを、抗生物質治療の後又は抗生物質治療と同時に投与して、ラクトバチルス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ）濃度の回復の改善、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）産生の回復の改善、及び／又は乳酸（ｌａｃｔａｔｅ）産生の回復の改善を行うステップを含む方法に使用できる。改善は、繊維ブレンドを含まない組成物から得られる効果を基準にしている。
【００９９】
[0129]さらに、栄養組成物は、抗生物質治療を受けた、Ｃ．ディフィシル感染を有する患者に、治療的に有効な量の繊維ブレンドを、抗生物質治療の後又は抗生物質治療と同時に投与して、ビフィドバクテリウム菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）濃度の回復の改善、バクテロイデス菌（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）濃度の回復の改善、ファーミキューテス菌（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）濃度の回復の改善、全細菌濃度の回復の改善、結腸酸性化の改善、及び／又は結腸からのＣ．ディフィシルの排除の改善を行うステップを含む方法に使用できる。改善は、繊維ブレンドを含まない組成物から得られる効果を基準にしている。
【０１００】
[0130]例えば、一実施形態において、治療的に有効な量の繊維ブレンドを含む栄養組成物は、抗生物質治療から少なくとも１週間後、好ましくは少なくとも２週間後、より好ましくは少なくとも３週間後まで、少なくとも１日１回投与されてもよい。一実施形態において、患者は、さらなる抗生物質なしで、及びプロバイオティクスなしで、繊維ブレンドを用いて治療される。
【０１０１】
[0131]栄養組成物は、長期投与、具体的には、６週間を超える継続的投与、又は短期投与、具体的には６週間未満の継続的投与に使用できる。栄養組成物は、経管栄養投与に使用できる。経腸投与に加えて、経口投与も可能である。
【非限定的実施例】
【０１０２】
実施例１：
ヒト腸内微生物生態系のシミュレータ（「ＳＨＩＭＥ」）を用いた繊維ブレンドのインビトロ評価
実験計画：
[0132]胃腸管及び腸の微生物プロセスを研究するためのインビトロによる方法は、選択した食品成分が有し得るプレバイオティクス特性を研究するための優れた実験装置を提供する。適切に計画された連続モデルの適用により、代表的環境条件下の腸内における選択した分子の生物活性を詳細に研究できる。
【０１０３】
[0133]研究は、５０％の可溶性繊維と５０％の不溶性繊維との繊維ブレンドを調査し、可溶性繊維は、可溶性繊維の約４１重量％のＦＯＳ、可溶性繊維の約４１重量％のアカシアガム、及び可溶性繊維の約１８重量％のイヌリンであり、不溶性繊維は、エンドウ豆外皮繊維であった（以下「繊維ブレンド」と呼ぶ）。インビトロの装置を使用して、繊維ブレンドの潜在的特性を詳細に研究するため、複雑な腸内微生物生態系を代表的条件下で培養する連続モデルを使用した。さらに、過去のインビトロ及びインビボ研究は、プレバイオティクス特性の評価は、化合物を２〜３週間連続投与した後でしか実施できないということを示していることから、このモデルはプレバイオティクスの反復摂取をシミュレートするべきである。したがって、ヒト胃腸管の動的ＳＨＩＭＥシミュレータを使用して、繊維ブレンドによる治療の有効性を評価した。
【０１０４】
[0134]Ｍｏｌｌｙらによって「Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａ  ５−ｓｔｅｐ  ｍｕｌｔｉｃｈａｍｂｅｒ  ｒｅａｃｔｏｒ  ａｓ  ａ  ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｅｃｏｓｙｓｔｅｍ，」Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３９：２５４〜２５８（１９９３）に記載されるように、反応器の構成はＳＨＩＭＥから改造したもので、成人のヒトの胃腸管（「ＧＩＴ」）を表す。ＳＨＩＭＥは、ヒトの胃腸管の異なる部分をシミュレートする反応器を使用する。例えば、図１を参照されたい。
【０１０５】
[0135]最初の２個の反応器は、充填及び吸引（ｆｉｌｌ−ａｎｄ−ｄｒａｗ）原理を使用して食品の摂取及び消化における異なるステップをシミュレートし、蠕動ポンプが規定量のＳＨＩＭＥ栄養物（１４０ｍＬ  ３回／日）並びに膵液及び胆汁（６０ｍＬ  ３回／日）をそれぞれ胃（「Ｓｔ．」）及び十二指腸（「ＳＩ」）に添加し、指定の期間後にそれぞれの反応器を空にする。他の区画（Ｖ１、Ｖ２）は、一定の体積及びｐＨに制御された連続撹拌された反応器であった。容器Ｖ１、Ｖ２の保持時間及びｐＨは、上行結腸のインビボ条件に似たものになるように選択した。接種材料の調製、保持時間、ｐＨ、温度設定、及び反応器の栄養物組成は、過去に、Ｐｏｓｓｅｍｉｅｒｓ著「ＰＣＲ−ＤＧＧＥ−ｂａｓｅｄ  ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  微生物群ｉｎ  ａ  ｓｉｍｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｅｃｏｓｙｓｔｅｍ，」ＦＡＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｅｃｏｌｏｇｙ，４９：４９５〜５０７（２００４）に記載されていた。ＳＨＩＭＥは、約２０年間、科学プロジェクトと及び工業プロジェクトの両方において広く用いられており、インビボのパラメーターで検証されている。
【０１０６】
[0136]図１に示すように、繊維ブレンドの抗病原体効果を評価するため、腸を代表する微生物群におけるＴＷＩＮＳＨＩＭＥシステムの上行結腸をシミュレートした容器に、抗生物質のパルス後に病原体Ｃ．ディフィシルを添加して、通常病院内での感染の前に起こることをシミュレートした。容器Ｖ１にはウェルシュ菌が入っており、容器Ｖ２にはＣ．ディフィシルが入っていた。容器Ｖ２は、アモキシシリン、シプロフロキサシン及びテトラサイクリンの混合物を用いた予備的抗生物質注射を容器に受け、その後Ｃ．ディフィシルが接種された。ウェルシュ菌については、抗生物質を添加せず、この日和見病原体はＳＨＩＭＥに通常存在することから、容器１には病原体添加を実施しなかった。抗生物質治療は、４０ｐｐｍのアモキシリン、４０ｐｐｍのシプロフロキサシン、及び１０ｐｐｍのテトラサイクリンの混合物からなった。
【０１０７】
[0137]研究の第１の目的は、繊維ブレンドが、抗生物質治療あり又はなしで抗病原体活性を有するか否かを評価することであった。第２の目的は、抗生物質パルス後及び繊維ブレンドの添加後の組成物中の微生物群及び機能性の回復を追跡することであった。
【０１０８】
[0138]これらの実験では、２つのシステムを同時に並行して操作することによって、ＴＷＩＮＳＨＩＭＥ装置を用いた（ＳＨＩＭＥ１＝対照；ＳＨＩＭＥ２＝繊維ブレンド治療）。同一のｐＨ及び温度制御によって、及び反応器間の液体輸送に２口ポンプを用いることによって、両方のシステムで同一の環境条件を得た。繊維ブレンドはＳＨＩＭＥ２にのみ与え、ＳＨＩＭＥ２の上行結腸内の病原体の濃度をＳＨＩＭＥ１との比較として測定した。この方法は、抗菌効果は必ずしも繊維ブレンドの直接的効果と関係するのではなく、繊維ブレンドを使用して他の細菌によって産生される代謝物によるものである可能性があるという事実に対処した。
【０１０９】
[0139]図２に示すように、研究の第１段階は開始段階であった。上行結腸反応器に適切な糞便試料（ビフィドバクテリウム菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）の濃度が低い高齢の提供者）を接種した後、２週間の開始期間で、異なる反応器中で局所的環境条件に応じて微生物群を分化させた。図２に示すように、上行結腸容器のそれぞれから試料を１日１回採取し、１）短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）、乳酸（ｌａｃｔａｔｅ）、及びアンモニウム産生；２）日間ΔｐＨ；３）ラクトバチルス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ）、ビフィドバクテリウム菌、全細菌、バクテロイデス菌（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）、及びファーミキューテス菌（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）のｑＰＣＲ；及び４）病原体に特異なｑＰＣＲを分析した。
【０１１０】
結果−ＳＣＦＡ：
[0140]ＳＣＦＡは、主に腸内細菌による糖分解発酵の典型的な最終生成物である。ＳＣＦＡのプロファイルは主にアセタート、プロピオナート、及びブチラートと、少量の他の酸、例えば、イソ酪酸、吉草酸、イソ吉草酸、及びカプロン酸等からなる。アセタートは腸から吸収されて宿主によってエネルギー基質として利用され得るのに対し、ブチラートは腸上皮の主なエネルギー基質として働き、炎症及び結腸癌に対する保護効果が立証されている。プロピオナートは、ブチラートと比較して、腸内で同様の局所的活性を有するが、肝臓にも運ばれ、そこで良好なコレステロール低下効果及び血糖管理に対する効果を有することが明らかにされた。このため、ブチラート及びプロピオナートはアセタートと比較して宿主の健康により有益であると考えられ、腸内の微生物発酵のプロファイルをブチラート及び／又はプロピオナート産生の増加へ向けて調節することが有益であると考えられる。
【０１１１】
[0141]ＳＣＦＡに関しては、試料を１日１回採取して、酢酸、プロピオン酸、及び酪酸の濃度を分析した。図３において、データは、ＴＷＩＮＳＨＩＭＥ実験の１日当たりの全ＳＣＦＡ、アセタート、プロピオナート及びブチラートの産生量を示す。図４は、ブチラート産生のみに焦点を合わせた。上記のように、プレバイオティクス特性は、全ＳＣＦＡ産生におけるプロピオナート及び／又はブチラートの相対的な増加によって評価される。
【０１１２】
[0142]通常条件（ウェルシュ菌を有するＳＨＩＭＥ容器Ｖ１で抗生物質治療なし、図３の左のグラフ）下で、繊維ブレンドの添加は、より大量のＳＣＦＡ産生を招いた。このＳＣＦＡ産生は、Ｃ．ディフィシルを有するＳＨＩＭＥ容器Ｖ２に示されるように、抗生物質治療によって妨害される（図３の右のグラフ）。繊維ブレンド治療と対照とを試料Ｓ５から出発して比較すると、繊維ブレンドからのＳＣＦＡ産生の回復の改善は明白である。
【０１１３】
[0143]繊維ブレンドの同じプラス効果は、ＳＣＦＡ産生のデータを試料Ｓ１の値を基準として用いたデルタとして示した図５に示されている。日間試料Ｓ１〜Ｓ７のそれぞれについて、データは、左から右へ、アセタート、プロピオナート、ブチラート及び全ＳＣＦＡ濃度である。
【０１１４】
[0144]ＳＣＦＡ産生に関するデータに基づき、以下の結論に到達できる：繊維ブレンド治療は胃腸管の生理学的条件下でＳＣＦＡ産生を改善し、抗生物質が投与されたとき、正常機能の数日での素早い回復及び改善を助ける。
【０１１５】
結果−乳酸：
[0145]ヒトの腸管は、乳酸を産生する細菌と乳酸を利用する細菌の両方を保有する。乳酸はラクトバチルス菌によって産生され、環境のｐＨを低下させて抗菌剤としても作用する。乳酸はまた、他の微生物によってアセタート、ブチラート、及びプロピオナートへと短時間で転化され得る。実験における乳酸濃度の分析を図６に示す。各日間試料Ｓ１〜Ｓ７について、左の棒は対照試料であり、右の棒は繊維ブレンド治療試料である。
【０１１６】
[0146]抗生物質治療がない場合（ウェルシュ菌ＳＨＩＭＥ  Ｖ１、図６の左のグラフ）、繊維ブレンドは乳酸産生をわずかに低下した（最後の３つの試料採取点を考慮した場合、ｐ＜０．０５）。Ｃ．ディフィシルを有するＳＨＩＭＥ容器Ｖ２（図６の右のグラフ）において、抗生物質の添加は、Ｓ１とＳ２との比較によって明らかなように、乳酸の増加を招いた。この効果は、細菌間にもともと存在したネットワークの破壊と関係する可能性がある。これらの条件下で、繊維ブレンドの添加は、対照の場合と比較して、乳酸産生の増大を招いた（最後の３つの試料採取点を考慮した場合、ｐ＞０．０５）。この効果は、Ｃ．ディフィシルＳＨＩＭＥ  Ｖ２において非常に強力であった。
【０１１７】
結果−ｐＨ変動：
[0147]最適な環境条件が維持されることを確実とするため、ＳＨＩＭＥシステムにおけるｐＨを、ｐＨコントローラによって、上行結腸については５．６〜５．８の範囲に制御する。ただし、接種の２週間後に異なる反応器中で微生物群が安定化すると、微生物群はそれ自身が自動調節することができ、酸−塩基消費量は通常は低い。それにもかかわらず、治療の間に細菌が順応し、例えば、ＳＣＦＡの産生量が増えた場合、反応器内の環境が酸性化することがあり、これは塩基をそれぞれの反応器にさらに投与することによるさらなるｐＨ制御をもたらす。これに関連して、実験中の酸性化の度合いを、繊維ブレンドの細菌代謝の強さの指標として使用できる。したがって、ｐＨを正しい範囲に維持するための酸及び塩基の消費量を、日間試料Ｓ３〜Ｓ７について測定し、データを図７に報告する。
【０１１８】
[0148]図７に示すように、ウェルシュ菌ＳＨＩＭＥ容器Ｖ１（図７の左のグラフ）において、繊維ブレンド治療は、対照と比較して、抗生物質治療がない場合に酸性化改善を招く（ｐ＜０．０５）。Ｃ．ディフィシルＳＨＩＭＥ容器Ｖ２（図７の右のグラフ）において、抗生物質治療の後の繊維ブレンドの添加は、対照と比較して、酸性化のより素早い回復を招く（ｐ＜０．０５）。このデータは、上記のＳＣＦＡ及び乳酸産生の改善と一致する。
【０１１９】
結果−微生物群組成：
[0149]試料をＴＷＩＮＳＨＩＭＥから１日１回採取して、繊維ブレンド治療が管腔微生物群組成に与える影響を、定量ポリメラーゼ連鎖反応（「ｑＰＣＲ」）によって評価した。具体的には、ｑＰＣＲを用いて、全細菌、ビフィドバクテリウム菌、ラクトバチルス菌、ファーミキューテス菌、及びバクテロイデス菌をモニタリングした。ｑＰＣＲは、特定の細菌の配列（１６５ｒＲＮＡ遺伝子）の増幅をベースとし、様々な時点における微生物生態系でのこれらの特定の配列の数の定量化と組み合わせた分子技術である。この方法は細菌の培養能（の欠如）に依存しないので、この方法で得られるデータは、繊維ブレンド治療による微生物群への定量的効果について、より信頼できる概観を提供する。
【０１２０】
[0150]ファーミキューテス菌及びバクテロイデス菌は、腸内で最も優勢な２つの細菌門である。バクテロイデス菌によってコード化されるタンパク質の大部分は、多糖の分解及びそれらの糖の代謝へと進むことから、バクテロイデス菌は非常に重要な糖分解発酵性の細菌と考えられる。このグループに属するいくつかの種はプロピオナートの産生とも関係している。
【０１２１】
[0151]ファーミキューテス菌は、バクテロイデス菌の代謝によって生成する代謝中間体を使用する。これにはラクトバチルス菌及びクロストリジウム菌が含まれる。特定のクロストリジウム菌は周知の病原体であることから、後者は多くの場合健康に好ましくないと考えられている。しかし、クロストリジウム菌の中には最も重要なブチラート（重要な健康有益化合物と考えられる細菌代謝産物）の産生者も数種類ある。
【０１２２】
[0152]抗生物質治療の効果及び繊維ブレンド治療後の微生物群の回復を、特異的ｑＰＣＲプロトコルを使用して、全細菌、バクテロイデス菌、ファーミキューテス菌、ビフィドバクテリウム菌、及びラクトバチルス菌について追跡した。図８Ａ〜８Ｅは、各日間試料Ｓ１〜Ｓ７（一番左のＳ１から一番右のＳ７まで）のこれらの微生物群の濃度を報告し、図９Ａ〜９Ｃは、Ｓ１を各反応器の基準として使用したビフィドバクテリウム菌及びラクトバチルス菌のデータを示す。さらに、繊維ブレンドが２種の病原体に及ぼす効果も、対照と比較して、特異的ｑＰＣＲプロトコルで調査し、結果を図１０に示す。
【０１２３】
[0153]微生物群組成に関するデータに基づき、繊維ブレンドの使用に関して、以下の結論に到達できる。繊維ブレンドを添加したＣ．ディフィシルＳＨＩＭＥ容器Ｖ２において、対照ＳＨＩＭＥと比較して、抗生物質治療後の全細菌数の回復が改善された。
【０１２４】
[0154]バクテロイデス菌濃度に関しては、抗生物質治療なしの場合、影響は限られていた。繊維ブレンドを添加したＣ．ディフィシルＳＨＩＭＥ容器Ｖ２において、対照ＳＨＩＭＥと比較して、抗生物質治療後のバクテロイデス菌（炭水化物分解菌）数の回復が改善された。
【０１２５】
[0155]ファーミキューテス菌濃度に関しては、抗生物質治療なしの場合、影響は認められなかった。繊維ブレンドを添加したＣ．ディフィシルＳＨＩＭＥ容器Ｖ２において、対照ＳＨＩＭＥと比較して、抗生物質治療後のファーミキューテス菌数の回復が改善された。
【０１２６】
[0156]ビフィドバクテリウム菌濃度に関しては、抗生物質治療なしのウェルシュ菌ＳＨＩＭＥ容器Ｖ１では、起こり得る定性的変化、及びその後繊維ブレンドからの遅発性のビフィドバクテリウム菌増殖促進（ｂｉｆｉｄｏｇｅｎｉｃ）効果が認められた。繊維ブレンドの結果として、ビフィドバクテリウム菌は、抗生物質混合物に対して耐性であった。Ｃ．ディフィシルＳＨＩＭＥ容器Ｖ２において、繊維ブレンドからのビフィドバクテリウム菌増殖促進効果は、その週の終わりに観察された。ラクトバチルス菌濃度に関しては、抗生物質治療なしのウェルシュ菌ＳＨＩＭＥ  Ｖ１では、繊維ブレンドからの明白なラクトバチルス菌増殖促進（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｏｇｅｎｉｃ）効果は認められなかった。試料Ｓ５及びＳ６において、ラクトバチルス菌の濃度は、繊維ブレンド治療の方が対照と比較してわずかに高いが、その後の試料採取点Ｓ７では値は同じである。抗生物質治療ありの場合、ラクトバチルス菌の急速な回復が、対照及び繊維ブレンド治療の両方で観察された。
【０１２７】
[0157]システムからのＣ．ディフィシルの洗い出しは、繊維ブレンドを用いた治療の方が速かった。この結果は、繊維ブレンド治療を実施したＳＨＩＭＥにおけるウェルシュ菌の濃度は、Ｓ３において、対照よりも１Ｌｏｇ高いという事実によって、より強力となる。
【０１２８】
[0158]最後に、クロストリジウム属をクラスターに分ける。ウェルシュ菌は、プロバイオティクスで一般的に使用されるブチラート産生種である酪酸菌（Ｃ．ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ）及びプロピオナート産生細菌であるＣ．ホモプロピオニカム（Ｃ．ｈｏｍｏｐｒｏｐｉｏｎｉｃｕｍ）等の興味深い特性を有するいくつかの細菌を含む属の菌株である。したがって、ウェルシュ菌属について、プライマを用いて追加のｑＰＣＲを実施した。結果を図１１に示す。繊維ブレンドを用いた治療により、ウェルシュ菌クラスターに属する細菌の濃度が、対照と比較して、より高くなった（最後の２つの試料採取点を考慮した場合、ｐ＝０．０１５）。
【０１２９】
実施例２：
Ｍ−ＳＨＩＭＥを使用した可溶性繊維のインビトロ評価
実験計画：
[0159]適切に計画された胃腸管の連続インビトロモデルの適用により、代表的環境条件下の腸内における選択した分子の生物活性を詳細に研究できる。この研究は、Ｃ．ディフィシル濃度、毒素レベル、並びに抗生物質治療後の微生物叢組成及び機能性の回復に対する可溶性繊維の影響を調査した。
【０１３０】
[0160]研究は、個別の可溶性繊維並びに可溶性繊維のブレンドを試験した。個別繊維はＦＯＳであり、可溶性繊維は、約４１重量％のＦＯＳ、約４１重量％のアカシアガム、及び約１８重量％のイヌリンである（以下「可溶性繊維ブレンド」）。
【０１３１】
[0161]インビトロ装置を使用して繊維の潜在的特性を詳細に研究するため、連続モデルを使用した。大部分のインビトロ法は、管腔微生物群のモデリングに限られ、腸粘膜に付着した微生物の画分の培養は不可能である。これは、腸生態系の重要部分が考慮されないことを意味する。したがって、この研究は、管腔と粘液関連の両方の微生物群の培養を可能にするＳＨＩＭＥの改造（Ｍ−ＳＨＩＭＥ）を採用した。
【０１３２】
[0162]Ｍ−ＳＨＩＭＥは、標準ＳＨＩＭＥの改造として開発され、追加で腸表面（すなわち、ムチン寒天で覆われたプラスチックビーズ；その５０％を４８時間毎に交換することで、常に細菌付着のための表面を提供する）をシミュレーションする（図１２）。これは、より生態学的に適切な腸微生物群を提供し、他の方法ではすぐに洗い出されると考えられるそれらの種（例えばラクトバチルス菌）のシステム内での生存率が上昇する。粘膜区画を含めることで、ＳＨＩＭＥ（登録商標）の値及びモデリング能力が増大し、研究中のプロバイオティクス／病原体の集落化が腸管内腔に限られるか否か、又は菌株が粘液層に効率的に付着し、膜関連微生物群内で自らを維持するか否かを評価することができる。さらに、細菌が付着できることは、一方では、腸内での保持に優れることから腸管内腔を集落化する能力を増大し、もう一方では、通常はインビボで起こるプロセスの、より信頼できるシミュレーションを提供する。
【０１３３】
[0163]実験は、近位及び遠位結腸に関して３つの胃腸管をシミュレートするＭーＳＨＩＭＥ（トリプルＳＨＩＭＥ）を使用した（従来の上行、横行、及び下行結腸の代わり）；図１３．３つのシステムを、並行して操作した（ＳＨＩＭＥ１＝可溶性繊維ブレンド；ＳＨＩＭＥ２＝ＦＯＳ；ＳＨＩＭＥ３＝対照［デンプン］）。同一のｐＨ及び温度制御によって、及び反応器間の液体輸送にポンプを用いることによって、同一の環境条件を得た。
【０１３４】
[0164]研究の第１段階は開始段階であった。近位結腸反応器に適切な糞便試料（ビフィドバクテリウム菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）の濃度が低い高齢の提供者）を接種した後、２週間の開始期間で、異なる反応器中で局所的環境条件に応じて微生物群を分化させた。近位及び遠位結腸容器から試料を採取して、以下の分析を実施した：１）短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）；２）ｐＨ変動；３）毒素測定（Ｃ．ディフィシル毒素Ａ及びＢ）；４）管腔細菌（ラクトバチルス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ）、ビフィドバクテリウム菌、全細菌）のｑＰＣＲ；５）Ｃ．ディフィシル（管腔及び粘膜）に特異的なｑＰＣＲ；及び６）選択的プレーティングによる生存可能なＣ．ディフィシルＣＦＵの数。
【０１３５】
[0165]繊維の抗病原体効果を評価するため、病原体Ｃ．ディフィシルを、抗生物質治療後の近位及び遠位結腸をシミュレートする容器に添加した。抗生物質治療は、４０ｐｐｍのアモキシリン、４０ｐｐｍのシプロフロキサシン、及び１０ｐｐｍのテトラサイクリンの混合物からなり、３個の近位結腸容器及び３個の遠位結腸容器に１日２回投与した。続いて、容器に５種類の用量のＣ．ディフィシルを３日間にわたって接種し、その後繊維治療又は対照を２週間添加した（図１４）。
【０１３６】
[0166]研究の第１の目的は、繊維が、抗生物質及びＣ．ディフィシル感染後に抗病原体活性を有するか否かを評価することであった。第２の目的は、抗生物質治療後及び繊維ブレンドの添加後の微生物叢組成（管腔及び粘膜）及び機能性の回復を評価することであった。
【０１３７】
結果−ＳＣＦＡ：
[0167]試料は、すべての結腸区画から１週間に３回採取し、酢酸、プロピオン酸、及び酪酸の濃度を分析した。図１５において、データは、ＳＨＩＭＥ実験の実験週毎の全ＳＣＦＡ、アセタート、プロピオナート及びブチラートの産生量として示される。
【０１３８】
[0168]いずれの繊維治療も、全ＳＣＦＡ濃度の増大を誘発し、これは、いずれの産生物も胃腸管内で十分に発酵されることを示唆する。ＳＣＦＡ産生は抗生物質治療によって妨害され、繊維治療により、全ＳＣＦＡ産生がより素早く回復され（図１５）。ＳＣＦＡの最終濃度は、繊維治療がＳＨＩＭＥに投与された場合に、近位結腸及び遠位結腸のいずれの容器においても、対照と比べて高かった。遠位結腸において、可溶性繊維ブレンドではプロピオナートが、対照よりも高くなった。
【０１３９】
[0169]図１６は、繊維治療の主要発酵領域において起こり得る差を評価するため、遠位結腸におけるアセタート、プロピオナート、ブチラート及び全ＳＣＦＡの正味の産生量を示す。可溶性繊維ブレンドでは、ＦＯＳと比較して、全ＳＣＦＡの正味産生量が高くなった。これは、ＦＯＳは主に近位結腸で発酵されるのに対し、可溶性繊維ブレンドは遠位結腸での継続的発酵を呈することを示唆する。
【０１４０】
結果−ｐＨ変動：
[0170]最適な環境条件が維持されることを確実とするため、ＳＨＩＭＥシステムにおけるｐＨをｐＨコントローラによって、以下の範囲に制御する：５．６〜５．８（近位結腸）；６．６〜６．８（遠位結腸）。２週間の開始期間の後で微生物群が安定化すると、酸−塩基消費量は通常は低い。しかし、繊維治療の間に、ＳＣＦＡの産生等によって反応器内の環境が酸性化することがある。この結果、塩基をそれぞれの反応器にさらに投与することによって追加のｐＨ制御が行われる。これに関連して、実験中の酸性化の度合いを、繊維ブレンドの細菌代謝の強さの指標として使用できる。
【０１４１】
[0171]図１７は、実験期間毎の酸−塩基消費量を示す。両ブレンドの投与は、模擬結腸反応器の酸性化を誘発し、ＳＣＦＡ産生の増加及びより健康な腸の環境を示唆した。可溶性繊維ブレンドでは発酵がより緩やかであり、主要酸性化が遠位結腸で起こり；ＦＯＳの酸性化の主要部位は近位結腸であり；コントロール食（ｃｏｎｔｒｏｌ  ｄｉｅｔ）では酸性化が極小となり、微生物叢の良好な安定性を示唆した。
【０１４２】
結果−微生物群組成：
[0172]試料をＳＨＩＭＥから採取して、繊維治療が管腔微生物群組成に与える影響を、ｑＰＣＲによって評価した。具体的には、ｑＰＣＲを使用して、全細菌、ビフィドバクテリウム菌、及びラクトバチルス菌をモニタリングした。
【０１４３】
[0173]抗生物質治療は、全細菌の濃度低下を招いた（図１８）。実験期間の終了時点で、いずれの繊維治療でも、いずれの結腸区画においても、対照ＳＨＩＭＥと比較して全細菌濃度がわずかに高くなった。
【０１４４】
[0174]ビフィドバクテリウム菌は抗生物質治療の影響を受け、いずれの繊維治療も、２週間の治療期間にわたってビフィドバクテリウム菌増殖促進（ｂｉｆｉｄｏｇｅｎｉｃ）効果を生じた（図１９）。ビフィドバクテリウム菌の最終濃度は、治療の終了時点で、いずれの繊維治療でも、いずれの結腸区画においても対照ＳＨＩＭＥと比べて高かった（０．５ｌｏｇ超）。
【０１４５】
[0175]ラクトバチルス菌は、抗生物質治療に対する耐性があると考えられた。対照期間と比較して、可溶性繊維ブレンドは、いずれの結腸区画でもラクトバチルス菌増殖促進（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｏｇｅｎｉｃ）効果を生じた；ＦＯＳは、遠位結腸でのみプラスの効果を生じた（図２０）。
【０１４６】
結果−抗病原体活性：
プレートカウントから、対照ＳＨＩＭＥと比較して、いずれの繊維治療も、近位結腸におけるＣ．ディフィシル濃度の低下を招き、それは治療の第２週目から始まることがわかる（ｐ＜０．０５）。（図２１）。遠位結腸において、可溶性繊維ブレンドによる生存可能なＣ．ディフィシルの濃度低下は、その効果がそれほど明白でないＦＯＳ（約−０．５ｌｏｇ）と比較して、より大幅であった（−２．５ｌｏｇ）。
【０１４７】
[0176]プレートカウントは、Ｃ．ディフィシル株の生菌細胞の濃度に関する情報を提供する。逆に、ｑＰＣＲにより、細胞の総量（すなわち、生存及び死亡の両方）の定量化が可能である。ｑＰＣＲの結果（図２２）を見ると、いずれの繊維治療も、いずれの結腸区画でも、病原体濃度の低下を生じている。対照ＳＨＩＭＥと比較した場合、いずれの繊維治療も近位結腸におけるＣ．ディフィシルの濃度低下を生じた（可溶性繊維ブレンドは−１ｌｏｇ、ＦＯＳは−２ｌｏｇ）。遠位結腸において、可溶性繊維ブレンドを用いた場合、最終濃度は対照ＳＨＩＭＥよりも低かった（−１ｌｏｇ）。
【０１４８】
[0177]粘膜に付着したＣ．ディフィシル細胞を検出することは不可能であった。おそらくは、抗生物質治療は、粘液層で、病原体が自己付着微生物叢と競争できるための十分な機能的ニッシェを開かなかった。
【０１４９】
[0178]繊維治療が毒素産生に与える潜在的効果を評価するため、追加実験を実施した。この短期実験では、Ｃ．ディフィシルを異なるペニシリンフラスコ内でＲＣＭ培地で培養した。２４時間後、毒素の濃度を測定し、次いで繊維治療を添加した。５時間後、毒素の濃度を再度測定し、繊維治療の潜在的効果を評価した。結果を下の表１に示す。ＦＯＳの添加により、毒素はより高レベルとなった。可溶性繊維ブレンドと対照とは類似の毒素産生を示すことから、可溶性繊維ブレンドは特に毒素に付着しない／毒素を分解しないと思われる。
【０１５０】
表１：
【表１】
0006527522.tif 000002
【０１５１】
[0179]並行実験では、病原体と繊維治療の共成長の間に毒素の濃度を測定した新たな一連の実験で、接種材料として主培養の１０％を使用した。可溶性繊維ブレンド存在下の毒素レベルは、対照及びＦＯＳの場合よりも低かった。これは、他の２種類の条件と比較した場合の、可溶性繊維ブレンドの成長阻害効果を示唆した。あるいは、この株は毒素を産生せずに成長した可能性もある。
【０１５２】
表２：
【表２】
0006527522.tif 000003
【０１５３】
[0180]様々な変更及び修正が当業者には明白のものであることを認識されたい。このような変更及び修正は、本発明の主題の主旨及び範囲から逸脱させずに、及び意図される利点を損なわずになすことができる。このような変更及び修正は添付の請求項によって網羅される。
【図１】
0006527522.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５−１】
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【図１５−２】
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【図１５−３】
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【図１６】
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【図１７−１】
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【図１７−２】
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【図１７−３】
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【図１８−１】
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【図１８−２】
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【図１９−１】
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【図１９−２】
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【図２０−１】
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【図２０−２】
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【図２１−１】
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【図２１−２】
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【図２１−３】
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【図２２−１】
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【図２２−２】
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