(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルテアンヌイン化合物が、そのカルボキシル基と、アミン基により修飾されたシクロデキストリンのアミン基との間で形成されたアミド結合を介して結合される、アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体であって、
アミン基により修飾されたシクロデキストリンが、式Ｉ：
【化７】
0006453761.tif 000009
（式中、ｍが１〜７であり；ｎが１〜７であり、ｍ＋ｎが、６、７、及び８のいずれか１つであり；
Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３が、−ＯＨ、又は−ＲＮＨ２を表し、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３の少なくとも１つが、−ＲＮＨ２を表し；
Ｒが、−（ＣＨ２）Ｘ−、−ＮＨ（ＣＨ２）Ｘ−、−ＮＨ（ＣＨ２）ＸＮＨ（ＣＨ２）Ｘ−、−ＣＯ（ＣＨ２）Ｘ−、又は−Ｏ（ＣＨ２）Ｘ−を表し、
Ｘが、１〜１０の整数である）
に示される構造を有し、
アルテアンヌイン化合物が、式ＩＩ：
【化８】
0006453761.tif 000010
（式中、Ｒ４が、−（ＣＨ２）ｙ−、−ＣＯ（ＣＨ２）ｙ−、−Ｃ６Ｈ４（ＣＨ２）ｙ−（ここで、−Ｃ６Ｈ４（ＣＨ２）ｙ−の左側が１２位の酸素原子に結合する）、又は−ＣＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｙ−であり；ｙが０、１又は２の整数であり；ＣＯがカルボニルであり；Ｃ６Ｈ４がフェニレン環である）
に示される構造を有する、アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体。
【請求項２】
アミン基により修飾されたシクロデキストリンが、式Ｉ：
【化９】
0006453761.tif 000011
（式中、ｎが１であり、ｍ＋ｎが、６、７、及び８のいずれか１つであり；
Ｒ１、Ｒ２、又はＲ３が、−ＲＮＨ２を表し；
Ｒが、−（ＣＨ２）Ｘ−、−ＮＨ（ＣＨ２）Ｘ−、−ＮＨ（ＣＨ２）ＸＮＨ（ＣＨ２）Ｘ−、−ＣＯ（ＣＨ２）Ｘ−又は−Ｏ（ＣＨ２）Ｘ−を表し、
ｘが、１、２、３、又は４である）
に示される構造を有する、請求項１記載のアルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体。
【請求項３】
アミン基により修飾されたシクロデキストリンが、モノ−［６−（アミノエチルアミノ）−６−デオキシ］−β−シクロデキストリン、及びモノ−［２−（アミノエチルアミノ）−２−デオキシ］−β−シクロデキストリンからなる群より選択される、請求項１記載のアルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体。
【請求項４】
アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体であって、
アミン基により修飾されたシクロデキストリンが、式Ｉ：
【化１０】
0006453761.tif 000012
（式中、ｍが１〜７であり；ｎが１〜７であり、ｍ＋ｎが、６、７、及び８のいずれか１つであり；
Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３が、−ＯＨ、又は−ＲＮＨ２を表し、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３の少なくとも１つが、−ＲＮＨ２を表し；
Ｒが、−（ＣＨ２）Ｘ−、−ＮＨ（ＣＨ２）Ｘ−、−ＮＨ（ＣＨ２）ＸＮＨ（ＣＨ２）Ｘ−、−ＣＯ（ＣＨ２）Ｘ−、又は−Ｏ（ＣＨ２）Ｘ−を表し、
Ｘが、１〜１０の整数である）
に示される構造を有し、
アルテアンヌイン化合物が、式ＩＩ：
【化１１】
0006453761.tif 000013
（式中、Ｒ４が、−（ＣＨ２）ｙ−、−ＣＯ（ＣＨ２）２−、又は−Ｃ６Ｈ４−であり；ｙが１又は２の整数であり；ＣＯがカルボニルであり；Ｃ６Ｈ４がフェニレン基である）
に示される構造を有し、
アルテアンヌイン化合物が、アルテスナート、式ＩＩのＲ４が−Ｃ６Ｈ４−である化合物、及び式ＩＩのＲ４が−（ＣＨ２）ｙ−であり；ｙが１又は２である化合物からなる群より選択される、
アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項記載のアルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体の製造方法であって、縮合剤の存在下、アルテスナートのカルボキシル基とアミン基により修飾されたシクロデキストリンのアミン基の間でのアミド化反応が、高極性を有する有機溶媒中で行われ、これにより、アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体を得る、製造方法。
【請求項６】
縮合剤が、カルボジイミドの縮合剤である、請求項５記載の製造方法。
【請求項７】
カルボジイミドの縮合剤が、ジシクロヘキシルカルボジイミドと１−ヒドロキシベンゾトリアゾールの複合縮合剤である、請求項５記載の製造方法。
【請求項８】
アミド化反応が、アミン基により修飾されたシクロデキストリンを過剰のアルテスナートと、−１０℃〜１０℃の条件下、６〜２４時間反応させ、次に、１５℃〜４０℃の条件下、６〜２４時間反応させることを含む、請求項５記載の製造方法。
【請求項９】
アミド化反応の前に、アミン基により修飾されたシクロデキストリンの表面のヒドロキシル基を活性化する工程を更に含み、当該工程が、アミン基により修飾されたシクロデキストリンを縮合剤と、−１０℃〜１０℃の条件下、０．５〜５時間反応させることを含む、請求項５記載の製造方法。
【請求項１０】
アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体を精製する工程を更に含む、請求項５記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬合成の分野、特に、アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体、及びその製造方法に関する。
【０００２】
発明の背景
１９７０年代に漢方薬アルテミシア・アヌア（Artemisia annua）Ｌ．から単離された、過酸化基を含有するセスキテルペンラクトン化合物としての新世代の抗マラリア薬アルテミシニン（セスキテルペン１，２，４−トリオキサン（セスキテルペンラクトンエンドペルオキシド）、アルテミシニン、ＡＭＳ）は、クロロキンへの薬物抵抗性を有するプラスモジウム・ファルシパルム（Plasmodium falciparum）に対する有効な抗マラリア薬である。アルテアンヌイン化合物、例えば、アーテメータ、ジヒドロアルテミシニン、アルテテル、及びアルテスナートは、クロロキン耐性又は感受性プラスモジウム・ファルシパルム、及び脳性マラリアに対して有効である。マラリアに感染した人にとって迅速かつ信頼できる、世界保健機関（ＷＨＯ）により推奨されるアルテアンヌイン併用療法（ＡＣＴ）はまた、マラリアが流行している国の大部分で、広く受け入れられている。
【０００３】
近年、研究により、アルテアンヌイン化合物が、癌細胞の殺傷に良好な効果を表すことが示されている。アルテアンヌインは、正常細胞に対して最小限の影響で癌細胞を選択的に殺傷する能力を有する。従来の化学療法薬の腫瘍に対する作用機序と異なり、アルテアンヌインは、腫瘍細胞の多剤耐性を元に戻すことができる。ドキソルビシン、ビンクリスチン、メトトレキサート、又はヒドロキシウレアに耐性である白血病細胞株は、アルテスナートに交差抵抗性現象を有しない。アルテアンヌイン薬は、既に、長年、抗マラリア薬として臨床上用いられており、それ故に、その安全性は、何千もの臨床ケースで確かめられている。しかしながら、その抗腫瘍機序は、依然研究下にあり、アルテアンヌインとＦｅ２＋の間の反応、及びアルキル化に起因した大量のフリーラジカルの生成と関連し得、また腫瘍細胞アポトーシスの誘導と密接に関連する。癌細胞におけるイオン濃度は、正常細胞におけるものよりずっと高い。アルテアンヌインの構造中の過酸化物架橋を鉄により触媒して分け、フリーラジカルを生成し、これにより、フリーラジカル経路を介して細胞を殺傷する。加えて、研究により、アルテアンヌインは、マウスにおいて白血病の癌細胞のアポトーシス、及びヒトにおいて肝細胞腫細胞のアポトーシスを誘導し得ることが示されている。しかしながら、刺激（薬物が標的部位で作用する）、及び効果（細胞アポトーシス）の特定の機序は、依然不明である。更に、研究により、アルテアンヌインが、ある程度まで腫瘍血管新生因子に影響し、アルテスナートが、広範な抗腫瘍活性を有することが暗示されている。
【０００４】
インビトロの研究により、アルテアンヌイン薬が、インビトロで培養されたＰ３８８白血病細胞に作用し、白血病細胞の増殖を有意に阻害する能力があることが示されている。いくつかのアルテアンヌイン酸、及びアルテアンヌイン酸化合物は、種々の癌細胞をインビトロで選択的に阻害する。加えて、ナトリウムアルテスナートは、ヒト子宮頸部のがん細胞ＨｅＬａへの殺傷効果を示し、全てのヒトのあまり分化していない、鼻咽頭の扁平上皮癌（ＨｅＬａ、ＳＵＮＥ−１、及びＣＮＥ２）への殺傷効果を示し、肝細胞腫細胞ＢＥＬ−７４０２の細胞成長を有意に阻害し、ヌードマウスにおいて、異種移植されたヒト肝細胞腫細胞の細胞成長を有意に阻害する。アルテスナートは、Ｕ９３７細胞のアポトーシスを誘導し、ヒト大腸癌細胞ＨＣＴ−８、ヒト赤白血病細胞Ｋ５６２、及びヒト乳癌細胞株ＭＣＦ−７に対する殺傷効果を有する。
【０００５】
インビボ実験の態様に関して、マウスにおけるＨｅｐ２肝細胞腫に対する異なる用量のアルテスナートの効果についての実験は、６０mg/kgでのアルテスナートの腹腔内注射は、抗腫瘍率 ８０．４％でマウスＨｅｐ２肝細胞腫を有意に阻害することを示す。アルテスナートの影響が、筋内注射により研究されるとき、アルテスナートは、マウスにおける肝細胞腫、及び固形腫瘍Ｓ１８０の両方を有意に阻害することが見出された。陽性対照薬５−Ｆｕと同様に、マウスにおける肝細胞癌Ｈ２２に対するアルテスナートの阻害につていの研究から見られるように、アルテスナートが、経管栄養により３００mg/kgで投与されるとき、抗腫瘍率は４０％以上である。硫酸鉄の経口投与の６時間後、試験マウスにジヒドロアルテミシニンを更に投与される場合、マウスにおける移植された線維肉腫の成長は、有意に阻害され得、その効果は、ジヒドロアルテミシニンが単独で用いられる場合と比較して、大いに増強される。加えて、アルテアンヌイン薬はまた、ヌードマウスにおける腫瘍、例えば、ヒト卵巣癌ＨＯ−８９１０の移植された腫瘍の成長、及びトランスジェニックマウスにおける前立腺癌を阻害し得る。
【０００６】
しかしながら、アルテアンヌイン化合物は、水への低い溶解度、低いバイオアベイラビリティを有し、癌細胞に都合良く輸送されることができない。加えて、これらは、ヒト及び動物モデルにおいて迅速に排泄され、それ故に、癌細胞の表面で治療用量に達することができない。
【０００７】
シクロデキストリン（ＣＤ）は、シクロデキストリンのグルコシルトランスフェラーゼの触媒分解により、デンプンから生成された半天然に存在する高分子化合物である。ＣＤは、ほとんど加水分解されることができず、ヒトの身体の胃及び小腸を通過したとき、わずかに少量が吸収される。しかしながら、ＣＤは、大腸中の微生物により発酵され、単糖又は二糖に分解され、それ故に、大腸によって吸収され得る。本発明者らは、驚くべきことに、アルテアンヌイン化合物がシクロデキストリン化合物と結合して、結合体を生成し得ることを見出した。アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体は、アルテアンヌイン化合物の固有の欠点を克服し、治療効果を改善し、毒性又は副作用を低減することができる。
【０００８】
発明の概要
上記を考慮して、本発明は、標的化アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体、すなわち、アルテアンヌイン化合物−アミン基で修飾されたシクロデキストリン結合体を提供することを目的とする。
【０００９】
本発明の目的のため、本発明は、次の技術的解決法：
アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体（ここで、アルテアンヌイン化合物は、アミン基により修飾されたシクロデキストリンと、アルテアンヌイン化合物のカルボキシル基と、アミン基により修飾されたシクロデキストリンのアミン基の間で形成されたアミド結合を通じて結合される）
を選択する。
【００１０】
当業者は、「結合体」は、２つ以上の分子を共有結合を介して結合させることにより形成される、新規分子実体に言及することを理解するだろう。本明細書で用いられる通り、用語「アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体」は、アルテアンヌイン化合物を、シクロデキストリン化合物（アミン基により修飾されたシクロデキストリン）とアミド結合を介して結合させることにより形成される化合物、特に、アルテアンヌイン化合物により形成される化合物（ここで、アルテアンヌイン化合物のカルボキシル基は、アミン基により修飾されたシクロデキストリンのアミン基とアミド結合を形成する）に言及する。
【００１１】
本発明によるアルテアンヌイン化合物は、アルテアンヌイン分子のＣ１２の、カルボキシル基を含む化合物での置換から生成されたものである。アルテアンヌイン化合物の合成は、先行技術文献に記載される通り、行われ得る。
【００１２】
シクロデキストリン（ＣＤ）は、バチルス・セレウス（Bacillus cereus）により生成されるシクロデキストリングルコシルトランスフェラーゼの作用でアミロースにより生成される、一連の環状オリゴ糖についての一般的用語である。このうち、６、７、又は８つのグルコース単位を含有する分子（それぞれ、α−、β−、及びγ−シクロデキストリンとして公知である）は、なおさら興味を引き、非常に実用的価値がある。Ｘ線結晶回折、赤外線スペクトル、及び核磁気共鳴分光法の結果に基づき、シクロデキストリン分子を構成するそれぞれのＤ（＋）−グルコピラノースは、椅子型配座を有し、それぞれのグルコース単位は、１，４−グリコシド結合で結合して、環を形成することが、確定される。グルコース単位を構成するグリコシド結合は、自由に回転することができないので、シクロデキストリンは、２つの開放端（ここで、一方の端は大きく、他方の端は小さい）を有する中空の円柱状立体ループ構造を有する。この中空構造において、疎水性領域が、Ｃ−Ｈ結合により引き起こされる遮蔽効果に起因して形成される一方、全てのヒドロキシル基は、分子の外側に位置する。巨大な開放を有する端は、Ｃ２及びＣ３２級ヒドロキシル基を含み、小さい開放を有する端は、Ｃ６１級ヒドロキシル基を含み、高度に親水性であり、シクロデキストリンは、構造：
【化１】
0006453761.tif 000002
（ここで、化合物は、ｑ＝６のとき、α−シクロデキストリンであり、ｑ＝７のとき、β−シクロデキストリンであり、ｑ＝８のとき、γ−シクロデキストリンである）を有する。
【００１３】
アミン基により修飾されたシクロデキストリンは、シクロデキストリン分子を構成するＤ（＋）−グルコピラノースのＣ２、Ｃ３、及び／又はＣ６のヒドロキシル基のアミン基での置換により生成された化合物である。アミン基により修飾されたシクロデキストリンの合成は、先行技術書類に記載される通り、行われ得る。シクロデキストリンは、スルホニル化試薬とまず反応して、スルホニル化シクロデキストリンを生じ得［R.C. Petter, J.S. Salek, C.T. Sikorski, G. Kumaravel, and F.-T. Lin: J. Am. Chem. Soc. 112, 3860-3868(1990)を参照］、シクロデキストリンは、Ｄ（＋）−グルコピラノースの２−、３−、及び／又は６−位でスルホニル化され得る。一般に用いられるスルホニル化試薬は、ベンゼンスルホニルクロリド、及びｐ−メチルベンゼンスルホニルクロリドである。次に、アミノ化剤の求核攻撃下で、スルホニル化シクロデキストリンのスルホニル基は離脱し、アミン基で置換され、これにより、アミン基により修飾されたシクロデキストリンを生じる［B.L. May, S.D. Kean, C.J. Easton, and S.F. Lincoln: J. Chem. Soc., Perkin Trans. 13157-3160 (1997)を参照］。アミノ化剤は、アンモニア、メチルアミン、エチルアミン、プロピル、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、アセトアミド、及びジエチレントリアミンを含む、アミン基を含有する種々の有機試薬であり得る。例えば、ｐ−トルエンスルホニルクロリドは、β−シクロデキストリンと反応して、６−ｐ−トルエンスルホニル−β−シクロデキストリン（６−ＯＴｓ−β−ＣＤ）を生成する。次に、６−ＯＴｓ−β−ＣＤは、エチレンジアミン溶液に加えられ、これにより、エチレンジアミンで修飾されたβ−シクロデキストリンを得る。反応式は、以下の通りである。
【化２】
0006453761.tif 000003
【００１４】
好ましくは、アミン基により修飾されたシクロデキストリンは、式Ｉ：
【化３】
0006453761.tif 000004
（式中、ｍは０〜７であり；ｎは１〜８であり、ｍ＋ｎは、６、７、及び８のいずれか１つであり；
Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、−ＯＨ、又は−ＲＮＨ２を表し、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３の少なくとも１つは、−ＲＮＨ２を表し；
Ｒは、（ＣＨ２）Ｘ、ＮＨ（ＣＨ２）Ｘ、ＮＨ（ＣＨ２）ＸＮＨ（ＣＨ２）Ｘ、ＣＯ（ＣＨ２）Ｘ、又はＯ（ＣＨ２）Ｘであり、ｘは、０以上の整数である）
に示される構造を有する。
【００１５】
式Ｉについて、用語「ｍ＋ｎは、６、７、又は８のいずれか１つである」は、本発明によるアミン基により修飾されたシクロデキストリンは、α−、β−、又はγ−シクロデキストリンであり得；用語「ｎは、少なくとも１である」は、アミン基により修飾されたシクロデキストリン分子のうち少なくとも１つのＤ（＋）−グルコピラノースは、アミン基により修飾され、これにより、ｍは、５、６、又は７であることを意味し；用語「ｍは０である」は、アミン基により修飾されたシクロデキストリン（ここで、シクロデキストリン分子を構成するそれぞれのＤ（＋）−グルコピラノースは、アミン基により修飾されている）を意味する。
【００１６】
用語「式Ｉ中のＲ１、Ｒ２、及びＲ３の少なくとも１つは、−ＲＮＨ２を表す」は、アミン基により修飾されたシクロデキストリン（ここで、Ｄ（＋）−グルコピラノース分子のアミン基修飾は、２−、３−、又は６−位で生じ得る、少なくともモノアミン修飾であるか、又はジアミン修飾であり得る）を意味するか；あるいは、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、全て修飾されている。
【００１７】
シクロデキストリンを修飾するための、アミン基−ＲＮＨ２中のＲはまた、式Ｉで定義される。用語「Ｒは、（ＣＨ２）Ｘ、ＮＨ（ＣＨ２）Ｘ、ＮＨ（ＣＨ２）ＸＮＨ（ＣＨ２）Ｘ、ＣＯ（ＣＨ２）Ｘ、又はＯ（ＣＨ２）Ｘを表す」は、シクロデキストリンを修飾するためのアミン基は、有機アミン基、例えば、アンモニア、メチルアミン、エチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、アセトアミド、及びジエチレントリアミンであり得ることを意味する（式中、ｘは、０以上の整数であり、好ましくは、０〜１０であり、より好ましくは、０、１、２、３、又は４である）。
【００１８】
好ましくは、アミン基により修飾されたシクロデキストリンは、式Ｉ：
【化４】
0006453761.tif 000005
（式中、ｎは１であり、ｍ＋ｎは、６、７、及び８のいずれか１つであり；
Ｒ１、Ｒ２、又はＲ３は、−ＲＮＨ２であり；
Ｒは、（ＣＨ２）Ｘ、ＮＨ（ＣＨ２）Ｘ、ＮＨ（ＣＨ２）ＸＮＨ（ＣＨ２）Ｘ、ＣＯ（ＣＨ２）Ｘ、又はＯ（ＣＨ２）Ｘであり、ｘは、０、１、２、３、又は４である）
に示される構造を有する。
【００１９】
より好ましくは、アミン基により修飾されたシクロデキストリンは、モノ−［６−（エタンジアミン）−６−デオキシ］−β−シクロデキストリン、モノ−［２−（エタンジアミン）−６−デオキシ］−β−シクロデキストリン、モノ−［３−（メチルアミノ）−６−デオキシ］−α−シクロデキストリン、及びモノ−［６−（エタノールアミン）−６−デオキシ］−γ−シクロデキストリンからなる群より選択される。
【００２０】
本発明によるアルテアンヌイン化合物は、アルテアンヌイン分子を構成するＣ１２のカルボキシル基を含有する化合物での置換により生成されるものである。アルテアンヌイン化合物の合成は、先行技術文献に記載される通り、行われ得る。
【００２１】
ジヒドロアルテアンヌインは、カルボキシル基を含有する化合物と反応して、アルテアンヌイン化合物を生成し得る［P. M. O' Neill, et al.: J. Med. Chem. 44, 58-68(2001)を参照］。ジヒドラルテアンヌインは、Ｃ１２のヒドロキシル基でエーテル化されるか、又はエステル化され得、ここで、エーテル化試薬、又はエステル化試薬は、カルボキシル基及びヒドロキシル基の有機基を含有する様々な化合物であってもよく、反応式は、以下の通りである。
【化５】
0006453761.tif 000006
【００２２】
好ましくは、アミン基により修飾されたシクロデキストリンは、式ＩＩ：
【化６】
0006453761.tif 000007
（式中、Ｒ４は、（ＣＨ２）ｙ、ＣＯ（ＣＨ２）ｙ、Ｃ６Ｈ６（ＣＨ２）ｙ、又はＣＯＣ６Ｈ６（ＣＨ２）ｙであり；ｙは、０以上の整数であり；ＣＯはカルボニルであり；Ｃ６Ｈ６はベンゼン環である）
に示される構造を有する。
【００２３】
より好ましくは、エーテル化試薬、又はエステル化試薬は、コハク酸、無水コハク酸、テレフタル酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸塩、ｐ−ハロ安息香酸、及びｐ−ハロ安息香酸である。
【００２４】
より好ましくは、アルテアンヌイン化合物は、アルテスナート、アルテアンヌインのＣ−１２がフェノキシ基と結合された化合物、及びアルテアンヌインのＣ−１２がアルコキシ基と結合された化合物である。
【００２５】
本発明の別の目的は、本発明によるアルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体の製造方法を提供することである。
【００２６】
本発明によるアルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体の製造方法は、縮合剤の存在下、アルテアンヌイン化合物のカルボキシル基とアミン基により修飾されたシクロデキストリンのアミン基の間のアミド化反応を、高極性を有する有機溶媒中で行い、これにより、アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体を得ることを含む。
【００２７】
本発明の製造方法に有用な縮合剤は、カルボジイミド縮合剤、及びオニウム塩縮合試薬を含む、医薬合成におけるアミド化反応で用いられる種々の縮合剤を含む（ここで、カルボジイミド縮合剤は、医薬合成のアミド製造で広く用いられる）。本発明による製造方法で用いられる縮合剤は、好ましくは、カルボジイミド縮合剤である。
【００２８】
本発明による製造方法において、主に３つのカルボジイミド縮合剤：ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、及び１−（３−ジメチルアミノ−プロピル）−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣＩ）がある。本発明において好ましい縮合剤は、ジシクロヘキシルカルボジイミドと１−ヒドロキシベンゾトリアゾールの複合縮合剤（ＤＣＣ−ＨＯＢｔ）である。
【００２９】
好ましくは、アミン基により修飾されたシクロデキストリンのジシクロヘキシルカルボジイミドに対する重量比は、１：０．０４〜１０であり、より好ましくは、１：０．４〜５である。
【００３０】
好ましくは、アミン基により修飾されたシクロデキストリンの１−ヒドロキシルベンゾトリアゾールに対する重量比は、１：０．０３〜７．５であり、より好ましくは、１：０．３〜３である。
【００３１】
より好ましくは、脱水試薬をまた、本発明によるアミド化反応において用いて、縮合反応により生成される水分子が吸収され、これにより、加水分解由来の縮合生成物を防ぎ、縮合反応の効率を改善し得る。脱水試薬は、酸化カルシウム、５酸化リン、分子篩などを含む。
【００３２】
アミン基により修飾されたシクロデキストリンは、水溶性であり、高極性を有する有機溶媒である一方、アルテアンヌイン化合物、ジシクロヘキシルカルボジイミド、及び１−ヒドロキシルベンゾトリアゾールは、全く、水に不溶性である。更に、カルボキシル基とアミン基の間のアミド化は、脱水縮合反応である。水が溶媒として用いられるとき、アミド化は不都合である。それ故、本発明による製造方法は、高極性を有する有機溶媒を溶媒として用いる。
【００３３】
好ましくは、高極性を有する有機溶媒は、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミド、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミド、又はジメチルスルホキシドである。
【００３４】
好ましくは、本発明による製造方法におけるアミド化反応は、アミン基により修飾されたシクロデキストリンを過剰のアルテアンヌイン化合物と、−１０℃〜１０℃の条件下、６〜２４時間反応させて、カルボキシル基で活性化された中間体を生成すること、次に、アルテスナートのカルボキシル基とシクロデキストリンのアミン基の間でのアミド化反応を、１５℃〜４０℃の条件下、６〜２４時間行い、これにより、アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体を生成することを含む。
【００３５】
本発明による製造方法は、アミド化反応前に、アミン基により修飾されたシクロデキストリンの表面のヒドロキシル基を活性化する工程を更に含み、これは、アミン基により修飾されたシクロデキストリンを縮合剤と、−１０℃〜１０℃の条件下、０．５〜５時間反応させることを含む。
【００３６】
本発明による製造方法は、アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体を精製する工程を更に含む。
【００３７】
ジシクロヘキシルカルボジイミド、及び１−ヒドロキシルベンゾトリアゾールは、水に不溶性であるので、アルテアンヌイン化合物は、乏しい水への溶解度を有し、水に溶解し難い。しかしながら、本発明によるアルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体について、アルテアンヌイン化合物は、アミン基により修飾されたシクロデキストリンとアミド結合を介して結合される。これにより、本発明によるアルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体は、多数の親水性活性基を有し、それ故に、より良好な水への溶解度を有し、水に容易に溶解する。本発明による精製工程は、アミド化反応から得られた溶液を乾燥させ、固形残渣を集め、水に溶解し、次に、これを濾過して、夾雑物を取り除き、有機溶媒沈殿法により単離し、これにより、アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体を純品形態で得ることを含み得る。夾雑物を取り除くための濾過は、未反応のアルテスナート、ジシクロヘキシルカルボジイミド、及び１−ヒドロキシルベンゾトリアゾールを取り除くことを目的とする。
【００３８】
いずれの理論によって制限されることを望むことなく、有機溶媒沈殿による分離によってアルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体を製造する原理は、有機溶媒が、溶液の比誘電率を低減し、溶媒の極性を低減し、これにより、溶媒分子とアルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体分子の間の相互作用を減少させ、それ故に、溶解度の減少に起因して、アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体が沈殿されることを含む。
【００３９】
好ましくは、有機溶媒は、アセトン、メタノール、エタノール、イソプロパノール、クロロホルム、又はテトラヒドロフランである。
【００４０】
本発明による有機溶媒沈殿法は、溶液の濃度によって影響される。低濃度の溶液の場合、アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体が十分に沈殿しないので、回収率は低い。または、より高い割合の有機溶媒が、沈殿を行うために必要とされる。高濃度の溶液が用いられるとき、有機溶媒は節約され得る。本発明による製造方法は、溶液中の水を低減するために濃縮する工程、溶液の濃度を改善し、これにより、アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体を有機溶媒から完全に沈殿させる工程を更に含み得る。
【００４１】
本発明による製造方法は、アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体を精製する工程を更に含む。
【００４２】
好ましくは、精製は、有機溶媒抽出、又はクロマトグラフィーである。
【００４３】
有機溶媒は、アセトン、ジエチルエーテル、クロロホルム、及びテトラヒドロフランからなる群より選択される。
【００４４】
特定の実施態様において、アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体の構造は、本発明において、ＮＭＲ、及び高分解能質量分析により決定される。アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体の１ＨＮＭＲグラフは、Ｄ２Ｏ、Ｈ５、Ｈ１２、Ｈ１３、Ｈ１４、及びＨ１５の条件下、アルテアンヌイン化合物の特徴的ピークが、０．３〜３．０ppm、及び５．０〜７．１ppmで生じ、ここで、シクロデキストリンは特徴的吸収を有しないことを示している。加えて、アルテスナートは、ほぼ水に不溶性であり、初めに、アルテスナートがシクロデキストリンと既に反応していることを示し得る。アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体の１３ＣＮＭＲグラフは、アルテアンヌインのＣ骨格の特徴的ピークが、１０〜５０ppmで生じ、アルテアンヌイン化合物中のカルボニルのＣ骨格の特徴的ピークが、１７０〜１９０ppmで生じることを示し、そしてこれは、アミド化反応が、アルテスナートのカルボキシル基で生じることを示す。これは、アルテスナートが、シクロデキストリンにＯ＝Ｃ−ＯＨと−ＮＨ２の間の縮合を介して結合することを示す。高分解能質量分析は、ｍ／ｚ：１５４３．５７１５（Ｍ＋）を示している。
【００４５】
本発明によるアルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体は、シクロデキストリンを担体として用い、アルテアンヌイン化合物の分子は、そのカルボキシル基とアミン基により修飾されたシクロデキストリンの任意のアミン基の間で形成されたアミド結合を介して、シクロデキストリンに結合される。アルテアンヌイン及びジヒドロアルテミシニンと比較して、本発明によるアルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体は、より多くの親水性の活性基を有する。アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体は、良好な生体適合性、及びアルテアンヌイン、及びジヒドロアルテミシニンより良好な水への溶解度を有する。本発明によるアルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体は、２５℃下で、水への溶解度 ４５〜９８mg/mLを有する一方、アルテアンヌイン、及びジヒドロアルテアンヌインは、ほぼ水に不溶性である。
【００４６】
別の態様において、本発明によるアルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体は、特に、結腸直腸癌細胞の標的部位に対する、抗癌標的化特性を有する。ヒトの身体の胃及び小腸を通過するとき、少量のアルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体のみが吸収され、結腸で単に分解され、放出され、次に、大腸により吸収され、それ故に、結腸での放出特性を有する。本発明によるアルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体は、特に、結腸直腸癌細胞に対する、抗癌標的化特性を有し、患者の身体に有効に入り、標的化癌細胞の周りに優先的に集まり、ヒトの身体において直腸癌細胞を死へ選択的に誘導し、これにより、薬力学的効果を改善し、毒性作用、又は副作用を低減することができる。
【００４７】
例えば、濃度４×１０４/mL ヒト直腸癌細胞ＨＣＴ１１６、Ｌｏｖｏ、ＳＷ４８０、及びＨＴ２９懸濁液 １８０μlが、９６ウェル培養プレートに加えられ、５％ ＣＯ２、３７℃、及び飽和湿度の条件下、２４時間前培養される。培地 １５０μlが置き換えられた後、異なる濃度の分子集合を含有する培地 ２０μlが加えられ、更に４８時間培養される（試料を含まない培地が陰性対照として、異なる濃度のカンプトテシン、オキサリプラチン、及びフルオロウラシルを含有する培地が陽性対照として用いられる）。ＭＴＴアッセイを用いて、ＯＤ値が決定され、成長阻害率が計算される。高濃度、中程度の濃度、及び低濃度の化合物の腫瘍細胞増殖に対する阻害が、観察される。上記の実験全ては、トリプレットで行われる。ヒト直腸、及び盲腸癌細胞に関するアルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体のインビトロ実験の結果が、表１に示される。
【００４８】
【表１】
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【００４９】
表１から見られる通り、適当な結合の長さを有するアルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体（例えば、モノ−［６−（エタンジアミン）−６−デオキシ］−β−シクロデキストリン−アルテスナート結合体）が設計され、合成され、そしてこれらは、大部分の反応原料（ジヒドロアルテアンヌイン、及びアルテスナート）、及び臨床的に用いられる医薬（オキサリプラチン、及びフルオロウラシル）より良好な抗癌活性を有する。理由は、シクロデキストリンとアルテスナートを結合するための適当な長さでの結合が、標的化直腸及び盲腸癌細胞の周りに優先的に集まり、ヒトの身体において直腸癌細胞を死へ選択的に誘導することができることに、恐らくある。シクロデキストリンは、結腸管中の微生物群により鎖式マルトデキストリン、マルトース、及びグルコースに分解され、次に、大腸により吸収されることができるという事実から見て、直腸へ薬物を輸送するための結腸直腸標的部位での薬物の担体として用いられることができ、これにより、結腸での薬物のバイオアベイラビリティを改善し、薬物の機能を発揮する。それ故に、本発明によるアルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体は、特に、結腸直腸癌細胞に対する、抗癌標的化特性を有し、患者の身体に有効に進入し、標的化癌細胞の周りに優先的に集まり、ヒトの身体において直腸癌細胞を死へ選択的に誘導し、これにより、薬力学的効果を改善し、毒性作用、又は副作用を低減することができる。
【００５０】
本発明におけるアルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体の製造方法は、簡単な操作、原料の容易な入手可能性、及び穏やかな反応条件により特徴付けられ、アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体のラージスケールでの製造のために用いられ得る。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】図１は、β−シクロデキストリンの１ＨＮＭＲの図表を示す。
【図２】図２は、実施例１で調製されたモノ−［２−（エタンジアミン）−６−デオキシ］−β−シクロデキストリン−アルテスナート結合体の１ＨＮＭＲの図表を示し、７〜８ppmでのＨ５、Ｈ１２、Ｈ１３、Ｈ１４、及びＨ１５特徴的ピークを有するが、シクロデキストリンは、ここで特徴的ピークを有しない。
【図３】図３は、実施例１で調製されたモノ−［２−（エタンジアミン）−６−デオキシ］−β−シクロデキストリン−アルテスナート結合体の１３ＣＮＭＲの図表を示し、１０〜５０ppmでのアルテスナートの不飽和Ｃ骨格吸収特徴的ピーク、及び１７９〜１９０ppmでのアミド結合の不飽和カルボニル吸収ピークを有する。
【図４】図４は、実施例１で調製されたモノ−［２−（エタンジアミン）−６−デオキシ］−β−シクロデキストリン−アルテスナート結合体の高分解能質量スペクトル図表［ＨＳＭＳ（ＴＯＦ−ＥＳＩ）］を示す。
【００５２】
実施態様の詳細な説明
本発明の実施例は、アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体、及びその製造方法を開示する。当業者は、本発明の開示によるプロセスにおけるパラメーターを改変し得る。全ての同様の置換、及び改変が、当業者に明らかであり、したがって、本発明において考慮されることは注意されるべきである。本発明の生成物及び方法は、好ましい実施態様により記載される。当業者が、本発明の内容、精神、及び範囲から逸脱することなく、本発明の生成物及び方法への種々の改変、又は適当な変更、及びその組合せをなして、本発明の技術を達成し、適用することができることは明らかである。
【００５３】
本発明は、本発明を更に理解するために、以下の実施例と組み合わせて、詳細に説明されるだろう。
【００５４】
実施例１：
１．  スルホニル化シクロデキストリンの調製
文献［R.C. Petter, J.S. Salek, C.T. Sikorski, G. Kumaravel, and F. -T. Lin: J. Am. Chem. Soc. 112, 3860-3868(1990)］を参照して、再結晶化したβ−シクロデキストリン（２１０ｇ）を蒸留水（１３００mL）に溶解し、溶液を完全に撹拌した後、白色のエマルションを得た。水酸化ナトリウム溶液（１７．２ｇ、５０mL）を加え、１．５時間撹拌した。次に、ｐ−トルエンスルホニルクロリド（２６．０ｇ）を計量し、アセトニトリル溶液（８０ml）に溶解した。得られた溶液を、β−シクロデキストリン塩基性溶液に滴下し、室温で２時間撹拌した。少量の不溶物を吸引により濾過し、濾液のｐＨを、２M ＨＣｌで７．５に調節した。同時に、大量の沈殿物を生じ、濾液を吸引により濾過した。次に、沈殿物を、加熱しながら水（４５０mL）に溶解し、不溶物が高温であったので、濾去した。濾液を、０℃下で１２時間再結晶化させた。次に、濾過後に得た沈殿物を、温水で複数回再結晶化した。結果物を、真空下、６０℃で１２時間乾燥させ、これにより、モノ−６−ｐ−トルベンスルホニル−β−シクロデキストリンを純品形態で得た（約１８ｇ、収率８％）。
【００５５】
２．  モノ−［６−（エタンジアミン）−６−デオキシ］−β−シクロデキストリンの調製
文献［B.L. May, S.D. Kean, C.J. Easton, and S.F. Lincoln: J. Chem. Soc., Perkin Trans. 13157-3160(1997)］を参照して、モノ−６−ｐ−トルベンスルホニル−β−シクロデキストリン（３ｇ）をエチレンジアミン溶液（２０mL）に加え、８０℃下で８時間反応させた。冷却後、得られた溶液をアセトンに滴下した。次に、沈殿物を集め、これにより、モノ−［６−（エタンジアミン）−６−デオキシ］−β−シクロデキストリン（２．３ｇ、収率８４％）を得た。
【００５６】
３．  モノ−［６−（エタンジアミン）−６−デオキシ］−β−シクロデキストリン−アルテスナート結合体の調製
モノ−［２−（エタンジアミン）−６−デオキシ］−β−シクロデキストリン（２．６１ｇ、２mmol）を無水Ｎ，Ｎ−ジメチルアミド（５０mL）に溶解し、約０℃まで冷却した。この溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、１．２ｇ）、及び１−ヒドロキシルベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ、０．９ｇ）を加え、氷浴にて５時間撹拌した。次に、アルテスナート（２．７７ｇ、６mmol）を加えた。反応溶液を、０℃下で２０時間撹拌し、次に、２５℃下で１０時間撹拌した（ＴＣＬトラッキング検出、及びディベロッパーは、メタノール：酢酸エチル：水＝７：７：１であった）。次に、反応溶液を６０℃で蒸発させて、減圧乾固した。残渣を水に完全に溶解し、濾過し、濾液に濃縮し、抽出のため、クロロホルム（１００mL）に滴下し、濾過した。沈殿物を集め、真空下、５０℃で１２時間乾燥させ、これにより、モノ−［６−（エタンジアミン）−６−デオキシ］−β−シクロデキストリン−アルテスナート結合体（収率：６５％；溶解度：６８mg/mL）を得た。
【００５７】
ＮＭＲ及び高分解能質量スペクトルの結果を、図２、３、及び４に示す。アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体の１ＨＮＭＲグラフは、Ｄ２Ｏの条件下、アルテアンヌイン化合物のＨ５、Ｈ１２、Ｈ１３、Ｈ１４、及びＨ１５特徴的ピークが０．３〜３．０ppm、及び５．０〜７．１ppmで生じる一方、シクロデキストリンはここで特徴的吸収を有しないことを示す。加えて、アルテスナートは、水にほぼ不溶性であり、アルテスナートがシクロデキストリンと既に反応していることを予め示している。アルテアンヌイン−シクロデキストリン結合体の１３ＣＮＭＲグラフは、アルテアンヌインのＣ骨格特徴的ピークが、１０〜５０ppmで生じ、アルテアンヌイン化合物中のカルボニルのＣ骨格特徴的ピークが、１７０〜１９０ppmで生じることを示し、アミド化反応は、アルテスナートのカルボキシル基で生じることを示す。これは、アルテスナートが、シクロデキストリンに、Ｏ＝Ｃ−ＯＨと−ＮＨ２の間の縮合を通じて結合することを示す。高分解能質量スペクトルは、ｍ／ｚ：１５４３．５７１５（Ｍ＋）を示す。
【００５８】
実施例２
モノ−［６−（モノアミン）−６−デオキシ］−β−シクロデキストリン（２．６１ｇ、２mmol）を無水Ｎ，Ｎ−ジエチルアミド（５０mL）に溶解し、約−１０℃まで冷却した。この溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、１．２ｇ）を加え、氷浴にて０．５時間撹拌した。次に、アルテスナート（２．７７ｇ、６mmol）を加えた。反応溶液を、１０℃下で６時間撹拌し、次に、４５℃下で４時間撹拌した。次に、反応溶液を６０℃で蒸発させて、減圧乾固した。残渣を水に完全に溶解し、濾過し、濾液に濃縮し、抽出のため、テトラヒドロフラン（１００mL）に滴下し、濾過した。沈殿物を集め、真空下、５０℃で１２時間乾燥させ、これにより、モノ−［６−（モノアミン）−６−デオキシ］−β−シクロデキストリン−アルテスナート結合体（収率：５８％；溶解度：４５mg/mL）を得た。
【００５９】
実施例３
モノ−［３−（ジエチレントリアミン）−６−デオキシ］−α−シクロデキストリン（２mmol）を無水ジメチルスルホキシド（５０mL）に溶解し、約−５℃まで冷却した。この溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、１．２ｇ）、及び１−ヒドロキシルベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ、０．９ｇ）を加え、氷浴にて２．５時間撹拌した。次に、アルテスナート（２．７７ｇ、６mmol）を加えた。反応溶液を、０℃下で１２時間撹拌し、次に、２５℃下で２４時間撹拌した。次に、反応溶液を６０℃で蒸発させて、減圧乾固した。残渣を水に完全に溶解し、濾過し、濾液に濃縮し、イソプロパノール（１００mL）に滴下し、濾過した。沈殿物を集め、真空下、５０℃で２４時間乾燥させ、これにより、モノ−［３−（ジエチレントリアミン）−６−デオキシ］−α−シクロデキストリン−アルテスナート結合体（収率：５６％；溶解度：７８mg/mL）を得た。
【００６０】
実施例４
モノ−［６−（エタノールアミン）−６−デオキシ］−γ−シクロデキストリン（１mmol）を無水Ｎ，Ｎ−ジメチルアミド（５０mL）に溶解し、約０℃まで冷却した。この溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、１．２ｇ）を加え、氷浴にて２４時間撹拌した。次に、アルテスナート（２．７７ｇ、６mmol）を加えた。反応溶液を、１０℃下で２４時間撹拌し、次に、４５℃下で１２時間撹拌した。次に、反応溶液を６０℃で蒸発させて、減圧乾固した。残渣を水に完全に溶解し、濾過した。濾液を濃縮し、水を溶出液として用いたカラムクロマトグラフィーを行った。クロマトグラフィーから得た溶液を集め、濃縮し、次に、真空下、５０℃で２４時間乾燥させ、これにより、モノ−［６−（エタノールアミン）−６−デオキシ］−γ−シクロデキストリン−アルテスナート結合体（収率：５７％；溶解度：７５mg/mL）を得た。
【００６１】
実施例５
モノ−［２−（エタンジアミン）−６−デオキシ］−β−シクロデキストリン（２．６１ｇ、２mmol）を無水Ｎ，Ｎ−ジメチルアミド（５０mL）に溶解し、約０℃まで冷却した。この溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、１．２ｇ）、及び１−ヒドロキシルベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ、０．９ｇ）を加え、氷浴にて５時間撹拌した。次に、アルテアンヌインのＣ−１２がフェノキシ基と結合した化合物（３．７７ｇ、６mmol）を加えた。反応溶液を、０℃下で２０時間撹拌し、次に、２５℃下で１０時間撹拌した（ＴＣＬトラッキング検出を採用し、ディベロッパーはメタノール：酢酸エチル：水＝７：７：１であった）。次に、反応溶液を６０℃で蒸発させて、減圧乾固した。残渣を水に完全に溶解し、濾過し、濾液に濃縮し、抽出のため、クロロホルム（１００mL）に滴下し、濾過した。沈殿物を集め、真空下、５０℃で１２時間乾燥させ、これにより、モノ−［６−（エタンジアミン）−６−デオキシ］−β−シクロデキストリンと、アルテアンヌインのＣ−１２がフェノキシ基と結合した化合物の結合体（収率：６５％；溶解度：６８mg/mL）を得た。
【００６２】
実施例６
モノ−［６−（モノアミン）−６−デオキシ］−β−シクロデキストリン（２．６１ｇ、２mmol）を無水Ｎ，Ｎ−ジエチルアミド（５０mL）に溶解し、約−１０℃まで冷却した。この溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、１．２ｇ）を加え、氷浴にて０．５時間撹拌した。次に、アルテアンヌインのＣ−１２がフェノキシ基と結合した化合物（３．７７ｇ、６mmol）を加えた。反応溶液を、１０℃下で６時間撹拌し、次に、４５℃下で４時間撹拌した。次に、反応溶液を６０℃で蒸発させて、減圧乾固した。残渣を水に完全に溶解し、濾過し、濾液に濃縮し、抽出のため、テトラヒドロフラン（１００mL）に滴下し、濾過した。沈殿物を集め、真空下、５０℃で２４時間乾燥させ、これにより、モノ−［６−（モノアミン）−６−デオキシ］−β−シクロデキストリンと、アルテアンヌインのＣ−１２がフェノキシ基と結合した化合物の結合体（収率：５８％；溶解度：５４mg/mL）を得た。
【００６３】
実施例７
モノ−［３−（ジエチレントリアミン）−６−デオキシ］−α−シクロデキストリン（２mmol）を無水ジメチルスルホキシド（５０mL）に溶解し、約−５℃まで冷却した。この溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、１．２ｇ）、及び１−ヒドロキシルベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ、０．９ｇ）を加え、氷浴にて２．５時間撹拌した。次に、アルテアンヌインのＣ−１２がフェノキシ基と結合した化合物（３．７７ｇ、６mmol）を加えた。反応溶液を、０℃下で１２時間撹拌し、次に、２５℃下で２４時間撹拌した。次に、反応溶液を６０℃で蒸発させて、減圧乾固した。残渣を水に完全に溶解し、濾過し、濾液に濃縮し、イソプロパノール（１００mL）に滴下し、濾過した。沈殿物を集め、真空下、５０℃で２４時間乾燥させ、これにより、モノ−［３−（ジエチレントリアミン）−６−デオキシ］−α−シクロデキストリンと、アルテアンヌインのＣ−１２がフェノキシ基と結合した化合物の結合体（収率：５６％；溶解度：８８mg/mL）を得た。
【００６４】
実施例８
モノ−［６−（トリエチレンテトラアミン）−６−デオキシ］−γ−シクロデキストリン（１mmol）を無水ジメチルアミド（５０mL）に溶解し、約０℃まで冷却した。この溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、１．２ｇ）を加え、氷浴にて２４時間撹拌した。次に、アルテアンヌインのＣ−１２がフェノキシ基と結合した化合物（３．７７ｇ、６mmol）を加えた。反応溶液を、１０℃下で２４時間撹拌し、次に、４５℃下で１２時間撹拌した。次に、反応溶液を６０℃で蒸発させて、減圧乾固した。残渣を水に完全に溶解し、濾過した。濾液を濃縮し、水を溶出液として用いたカラムクロマトグラフィーを行った。クロマトグラフィーから得た溶液を集め、濃縮し、次に、真空下、５０℃で２４時間乾燥させ、これにより、モノ−［６−（トリエチレンテトラアミン）−６−デオキシ］−γ−シクロデキストリンと、アルテアンヌインのＣ−１２がフェノキシ基と結合した化合物の結合体（収率：５７％；溶解度：９５mg/mL）を得た。
【００６５】
実施例９
モノ−［２−（エタンジアミン）−６−デオキシ］−β−シクロデキストリン（２．６１ｇ、２mmol）を無水Ｎ，Ｎ−ジメチルアミド（５０mL）に溶解し、約０℃まで冷却した。この溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、１．２ｇ）、及び１−ヒドロキシルベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ、０．９ｇ）を加え、氷浴にて５時間撹拌した。次に、アルテアンヌインのＣ−１２がアルコキシ基と結合した化合物（３．４７ｇ、６mmol）を加えた。反応溶液を、０℃下で２０時間撹拌し、次に、２５℃下で１０時間撹拌した（ＴＣＬトラッキング検出を採用し、ディベロッパーはメタノール：酢酸エチル：水＝７：７：１であった）。次に、反応溶液を６０℃で蒸発させて、減圧乾固した。残渣を水に完全に溶解し、濾過し、濾液に濃縮し、抽出のため、クロロホルム（１００mL）に滴下し、濾過した。沈殿物を集め、真空下、５０℃で２４時間乾燥させ、これにより、モノ−［６−（エタンジアミン）−６−デオキシ］−β−シクロデキストリンと、アルテアンヌインのＣ−１２がアルコキシ基と結合した化合物の結合体（収率：６５％；溶解度：７１mg/mL）を得た。
【００６６】
実施例１０
モノ−［６−（モノアミン）−６−デオキシ］−β−シクロデキストリン（２．６１ｇ、２mmol）を無水Ｎ，Ｎ−ジエチルアミド（５０mL）に溶解し、約−１０℃まで冷却した。この溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、１．２ｇ）を加え、氷浴にて０．５時間撹拌した。次に、アルテアンヌインのＣ−１２がアルコキシ基と結合した化合物（３．４７ｇ、６mmol）を加えた。反応溶液を、１０℃下で６時間撹拌し、次に、４５℃下で４時間撹拌した。次に、反応溶液を６０℃で蒸発させて、減圧乾固した。残渣を水に完全に溶解し、濾過し、濾液に濃縮し、抽出のため、テトラヒドロフラン（１００mL）に滴下し、濾過した。沈殿物を集め、真空下、５０℃で２４時間乾燥させ、これにより、モノ−［６−（モノアミン）−６−デオキシ］−β−シクロデキストリンと、アルテアンヌインのＣ−１２がアルコキシ基と結合した化合物の結合体（収率：５８％；溶解度：５２mg/mL）を得る。
【００６７】
実施例１１
モノ−［３−（ジエチレントリアミン）−６−デオキシ］−α−シクロデキストリン（２mmol）を無水ジメチルスルホキシド（５０mL）に溶解し、約−５℃まで冷却した。この溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、１．２ｇ）、及び１−ヒドロキシルベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ、０．９ｇ）を加え、氷浴にて２．５時間撹拌した。次に、アルテアンヌインのＣ−１２がアルコキシ基と結合した化合物（３．４７ｇ、６mmol）を加えた。反応溶液を、０℃下で１２時間撹拌し、次に、２５℃下で２４時間撹拌した。次に、反応溶液を６０℃で蒸発させて、減圧乾固した。残渣を水に完全に溶解し、濾過し、濾液に濃縮し、イソプロパノール（１００mL）に滴下し、濾過した。沈殿物を集め、真空下、５０℃で２４時間乾燥させ、これにより、モノ−［３−（ジエチレントリアミド）−６−デオキシ］−α−シクロデキストリンと、アルテアンヌインのＣ−１２がアルコキシ基と結合した化合物の結合体（収率：５６％；溶解度：８０mg/mL）を得る。
【００６８】
実施例１２
モノ−［６−（トリエチレンテトラアミン）−６−デオキシ］−γ−シクロデキストリン（１mmol）を無水ジメチルアミド（５０mL）に溶解し、約０℃まで冷却した。この溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、１．２ｇ）を加え、氷浴にて２４時間撹拌した。次に、アルテアンヌインのＣ−１２がアルコキシ基と結合した化合物（３．４７ｇ、６mmol）を加えた。反応溶液を、１０℃下で２４時間撹拌し、次に、４５℃下で１２時間撹拌した。次に、反応溶液を６０℃で蒸発させて、減圧乾固した。残渣を水に完全に溶解し、濾過した。濾液を濃縮し、水を溶出液として用いたカラムクロマトグラフィーを行った。クロマトグラフィーから得た溶液を集め、濃縮し、次に、真空下、５０℃で２４時間乾燥させ、これにより、モノ−［６−（トリエチレンテトラアミン）−６−デオキシ］−γ−シクロデキストリンと、アルテアンヌインのＣ−１２がアルコキシ基と結合した化合物の結合体（収率：５７％；溶解度：９８mg/mL）を得た。
【００６９】
上記実施例の記載は、本発明の方法、及びその中核概念の理解を助けるために単に用いられる。その種々の改変及び改良は、当業者にとって、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、明白であることは、注意されるべきことである。全てのかかる改良及び改変は、以下の請求項の範囲内に含まれることが意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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