(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
脱毛誘発物質を抗原とするダチョウ抗体であって、前記脱毛誘発物質が５α−リダクターゼまたはジヒドロテストロンの少なくともいずれか一方を含む、ダチョウ抗体。
【請求項２】
前記脱毛誘発物質が５α−リダクターゼを含む、請求項１に記載のダチョウ抗体。
【請求項３】
前記脱毛誘発物質がジヒドロテストロンを含む、請求項１に記載のダチョウ抗体。
【請求項４】
前記脱毛誘発物質が５α−リダクターゼおよびジヒドロテストロンを含む、請求項１に記載のダチョウ抗体。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のダチョウ抗体を含む、発毛および／または育毛用組成物。
【請求項６】
ミニキシジル、アデノシン関連化合物、および／または３’−ホスホアデノシン５’−ホスホ硫酸をさらに含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
請求項５または６に記載の組成物を含む、ヘアケア製品。
【請求項８】
育毛剤、育毛促進剤、洗髪剤、または整髪剤である、請求項７に記載のヘアケア製品。
【請求項９】
脱毛誘発物質をダチョウの雌に接種する工程と、
前記ダチョウの雌が産卵した卵から抗体を精製する工程を含む、抗体の製造方法であって、
前記脱毛誘発物質が５α−リダクターゼまたはジヒドロテストロンの少なくともいずれか一方を含む、製造方法。
【請求項１０】
前記脱毛誘発物質が５α−リダクターゼを含む、請求項９に記載の製造方法。
【請求項１１】
前記脱毛誘発物質がジヒドロテストロンを含む、請求項９に記載の製造方法。
【請求項１２】
前記脱毛誘発物質が５α−リダクターゼおよびジヒドロテストロンを含む、請求項９に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は抜け毛の原因とされる脱毛誘発物質を抗原として得た抗体とその抗体を有する育毛剤やシャンプー等の組成物に係るものである。
【背景技術】
【０００２】
脱毛症の原因メカニズムは不明な点が多く、これまで画期的な治療法は見つかっていない。生活環境の違いや個体差によって原因が複合的になっているのも、原因の明確化を妨げている要因と考えられる。脱毛症の原因の一つとして、５α−リダクターゼという酵素により、男性ホルモンであるテストステロンがジヒドロテストロン（ＤＨＴ）に変換され、このＤＨＴが毛根に作用することで発毛活性が低下すると考えられている。【０００３】
特許文献１には、テストステロン−５α−リダクターゼ活性阻害剤として、アルトカルピン誘導体が効果的であるとして提案されている。【０００４】
また、特許文献２では、ＮＦＡＴ（Ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ  ｏｆ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ）シグナルを阻害することによって育毛が促進されるとし、アメリカンアンジェリカに含まれていた既知化合物および新規化合物を紹介している。【０００５】
また、育毛促進という観点からは特許文献３等いくつかの物質が提案されている。特許文献３では、３’−ホスホアデノシン５’−ホスホ硫酸に効果があるとしている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第２００８／０２０４９０号
【特許文献２】国際公開第２０１０／０４７１０３号
【特許文献３】国際公開第２０１２／０５７３３６号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
脱毛症の原因は、現在では１つに特定できるものではないようである。しかし、脱毛している部分の皮膚には、ＤＨＴが多く見られることから、ＤＨＴの活性を阻害することは、原因の１つを無効にするという観点で非常に有用なことと考えられる。しかし、従来の方法は、効能の１つにこれらのホルモンの産生を抑制したり、活性を抑制するというものであり、直接的にこれらのホルモンや酵素の活性を抑制するものではなかった。つまり副作用があるおそれがあった。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、上記の課題に鑑み、脱毛症の原因と考えられている酵素（５α−リダクターゼ）やホルモン（ＤＨＴ）の活性を、これらに対する抗体を使って阻害しようとするものである。【０００９】
より具体的に本発明に係る組成物は、脱毛誘発物質を抗原として鳥類の雌に接種させ、前記鳥類の雌が産んだ卵から得た抗体を含む。また、その組成物としては、育毛剤やシャンプー等の洗髪剤であってもよい。また、さらにその抗体自体を直接使用することもできる。
本発明はまた、以下の項目を提供する。
(項目1]
脱毛誘発物質をダチョウの雌に接種する工程と、
前記ダチョウの雌が産卵した卵から抗体を精製する工程を含むことを特徴とする脱毛抑制抗体の製造方法。
(項目2)
前記脱毛誘発物質が５α−リダクターゼであることを特徴とする項目１に記載された脱毛抑制抗体の製造方法。
(項目3)
前記脱毛誘発物質が５α−リダクターゼおよびジヒドロテストロンであることを特徴とする項目１に記載された脱毛抑制抗体の製造方法。
(項目4)
項目１乃至３のいずれかの項目に記載された方法で製造された抗体を含む組成物であって、前記抗体が５α−リダクターゼに結合する抗体であることを特徴とする組成物。
(項目5)
項目１乃至３のいずれかの項目に記載された方法で製造された抗体を含む育毛剤であって、前記抗体が５α−リダクターゼに結合する抗体であることを特徴とする育毛剤。
(項目6)
項目１乃至３のいずれかの項目に記載された方法で製造された抗体を含む洗髪剤であって、前記抗体が５α−リダクターゼに結合する抗体であることを特徴とする洗髪剤。
【発明の効果】
【００１０】
抗体を利用すれば、副作用を起こすことなく５α−リダクターゼやＤＨＴ等の脱毛誘発物質をブロッキングすることができる。これらの抗体は、ヘアケア剤（シャンプーやトリートメント、育毛剤などの医薬品）等の組成物として利用すればよく、脱毛予防に効果があると考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】抗５α−リダクターゼ抗体の溶液を眼の周囲に塗布されて発毛が認められたヌードマウスの顔写真である。
【図２】図１で認められた発毛部分に矢印をつけた写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下本発明に係る抗体および組成物およびその製造方法について説明する。なお、以下の説明は本発明の一実施形態を示すものであり、本発明の趣旨を逸脱しない範囲で、以下の実施形態および実施例は改変されてもよい。
【００１３】
本発明は、脱毛症の原因と考えられる酵素（５α−リダクターゼ）やホルモン（ＤＨＴ）（以下「脱毛誘発物質」と呼ぶ。）に対して選択的に吸着する抗体を用いることで、これらの酵素やホルモンの活性を抑制し、毛根における髪の生産を阻害させないことで育毛を図る。
【００１４】
したがって、毛根部での働きを活性化するミニキシジルやアデノシン関連化合物や、上記の３’−ホスホアデノシン５’−ホスホ硫酸等と同時に使用してもよい。これらの組み合わせは、毛根の活動を阻害する脱毛誘発物質の活性を低下させ、さらに毛根の働きを活性化させるので、より高い育毛作用が期待できる。
【００１５】
また、脱毛誘発物質を日常的にブロックすることで、容易に脱毛症の予防や進行抑制などが可能になる。従って、洗髪剤へ含有させることもできる。なお、ここで、洗髪剤とは、石鹸、シャンプー、リンス、トリートメントだけでなく、ポマード等の整髪剤を含む。
【００１６】
以上のように、本発明に係る組成物は、脱毛誘発物質を抗原とし、下記に説明する鳥類から得られた抗体を含めば、特に限定されるものではなく、育毛剤、育毛促進剤、洗髪剤、整髪剤などのヘアケア製品全般にわたる。
【００１７】
本発明に係る抗体は、鳥類の雌に脱毛症の原因と考えられる酵素やホルモンといった脱毛誘発物質を抗原として免疫し、その雌鳥が産卵した卵から得ることができる。鳥類を用いるのは、ヒトとのホモロジーが低いため、異物と認識されやすく、抗体ができやすいからである。
【００１８】
鳥類の雌に対して免疫する工程では、公知の方法を利用することができる。免疫の際は、抗原とともに各種アジュバンドを利用することができる。また、免疫も初回免疫の後、追加免疫してもよい。
【００１９】
利用できる鳥類は特に限定はされない。例えば、ダチョウは１つの卵が大きく、同じロットの抗体を大量に精製することができるので有用である。抗原としては、ここでは、５α−リダクターゼまたはＤＨＴを示す。しかし、脱毛誘発物質を直接抗体で活性低下させるという考え方自体が新規であるので、ここで例示していない脱毛誘発物質が新たに発見された場合は、その物質を抗原として抗体を産生してもよい。
【実施例】
【００２０】
（実施例１）
以下に鳥類を用いた脱毛誘発物質を抗原として免疫し、得られた抗体の脱毛誘発物質に対する反応性を調べた。【００２１】
＜ダチョウ、ニワトリ、ウズラを用いて作製した卵黄抗体の脱毛誘発物質に対する反応性＞  脱毛誘発物質に対する抗体を以下のようにして作製した。成熟したメス鳥（ダチョウ、ニワトリ、ウズラ）を用いた。５α−リダクターゼ５０μｇおよびジヒドロテストロン（ＤＨＴ）５０μｇをそれぞれフロイントの完全アジュバント０．２ｍＬと混和し、ダチョウ、ニワトリ、ウズラに初回免疫した。各抗原を個別に５羽のダチョウ、５羽のニワトリ、５羽のウズラに接種した。ダチョウもニワトリもウズラも同量の抗原を接種したことになる。【００２２】
初回免疫後、２週目と４週目に５０μｇの各抗原とフロイントの不完全アジュバントの混和液を、各鳥に追加免疫した。初回免疫後８週目に得られた各鳥からの卵の卵黄より卵黄抗体（ＩｇＹ）を精製した。得られた卵黄抗体の反応性をＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ−Ｌｉｎｋｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｓｏｒｂｅｎｔ  Ａｓｓａｙ）で検証した。【００２３】
精製は以下の手順で行った。まず、得られた卵の卵黄に５倍量のＴＢＳ（２０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、０．１５ＭのＮａＣｌ、０．５％ＮａＮ３）と同量の１０％デキストラン硫酸／ＴＢＳを加え２０分攪拌した。【００２４】
次に１ＭのＣａＣｌ２／ＴＢＳを卵黄と同量加え攪拌し、１２時間静置した。その後、１５０００ｒｐｍで２０分遠心し上清を回収した。そして、最終濃度が４０％になるように硫酸アンモニウムを加え４℃で１２時間静置した。【００２５】
１２時間の静置後、１５０００ｒｐｍで２０分遠心し、沈殿物を回収した。最後に、卵黄と同量のＴＢＳに再懸濁し、ＴＢＳにて透析した。以上の方法で、各卵から純度９０％の抗体（ＩｇＹ）が回収できた。【００２６】
ＥＬＩＳＡによる抗体の脱毛誘発物質に対する反応性は以下のようにして調べた。９６穴ＥＬＩＳＡプレートの各穴に５α−リダクターゼ１０μｇおよびＤＨＴ１０μｇを別々に固層化した（室温で４時間）。その後、ダチョウ抗体（各５羽のダチョウから得た卵黄からの抗体の混合物）、ニワトリ抗体（各５羽のニワトリから得た卵黄からの抗体の混合物）、ウズラ抗体（各５羽のウズラから得た卵黄からの抗体の混合物）の段階希釈液（原液は２ｍｇ／ｍＬ）を各穴に滴下し、室温で１時間反応させた。【００２７】
洗浄後、各抗体に対するＨＲＰ標識２次抗体を室温で１時間反応させた。十分な洗浄後、ペルオキシダーゼ用発色キット（Ｓ−Ｂｉｏ  ＳＵＭＩＬＯＮ）を用いてプレートリーダーにて吸光度（４５０ｎｍ）を測定した。免疫前の各鳥種の卵黄抗体の２倍以上の吸光度値を示す最大希釈倍率をＥＬＩＳＡ値として示した。結果を表１に示す。【００２８】
【表１】
0006498612.tif 000002
【００２９】
ダチョウ、ニワトリ、ウズラに５α−リダクターゼおよびＤＨＴを免疫することで、各抗原に対する高感度の卵黄抗体が作製されることが判明した。特に、各鳥種類には同量の抗原を免疫したのにもかかわらず、巨大なダチョウが最も反応性が高い抗体が産生された。つまり、ダチョウを使うと少量の抗原でも高感度の抗体が産生できることを示している。【００３０】
（実施例２）
５α−リダクターゼ５０μｇをフロイントの完全アジュバント０．２ｍＬと混和し、ダチョウの雌に初回免疫した。抗原は個別に５羽のダチョウに接種した。初回免疫後は、２週目と４週目に５０μｇの抗原とフロイントの不完全アジュバントの混和液を、各雌ダチョウに追加免疫した。初回免疫後８週目に得られたダチョウの卵の卵黄より卵黄抗体（ＩｇＹ）を精製した。得られた抗体は抗５α−リダクターゼ抗体である。【００３１】
得られた抗５α−リダクターゼ抗体をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）に溶解し、濃度２ｍｇ／ｍＬの抗体液を作製した。この抗体液を９週齢の雄のヌードマウスの眼周辺部に、隔日に計０．５ｍＬを塗布した。また、コントロールとして同じく９週齢の雄のヌードマウスにＰＢＳだけを塗布した場合も行った。なお、ヌードマウスは、遺伝的に全身に被毛が生じないマウスである。【００３２】
ＰＢＳだけを塗布したヌードマウスと、抗５α−リダクターゼ抗体の抗体液を塗布したヌードマウスはそれぞれ１０匹ずつ用意して実験を行った。２週目に明らかな発毛・育毛が認められる個体率を算出した。結果を表２に示す。【００３３】
【表２】
0006498612.tif 000003
【００３４】
ＰＢＳだけを塗布した場合で発毛が認められたのは、１０匹中０匹であった。一方、抗５α−リダクターゼ抗体の抗体液を塗布した場合は、１０匹中７匹で発毛が認められた。抗体液を塗布した場合、早い個体は、塗布開始後、約１週目より抗体液を塗布した部分に、明らかな育毛が認められた。【００３５】
図１には、抗体液を塗布開始後２週目のヌードマウスの顔面写真を示す。眼の周囲にメガネのようなもり上がった領域が確認できる。このもり上がった領域が発毛した部分である。図２は同じ写真で育毛している部分を矢印で示したものである。このように、抗５α−リダクターゼ抗体には塗布するだけで発毛・育毛作用があることがわかった。
【産業上の利用可能性】
【００３６】
本発明に係る抗体は、５α−リダクターゼやＤＨＴといった脱毛誘発物質をブロッキングするので、脱毛症を防ぐことができると考えられる。したがって、脱毛症に係る組成物に広く利用することができる。
【図１】
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【図２】
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