(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
骨肉腫、皮膚がん、肺がん、子宮頸がん、胃がん、及び肝臓がんから選ばれる一種以上のがんの、がん治療のための医薬組成物の調製における、有効用量のデュロキセチン又は医薬上許容される塩の使用。
【請求項２】
デュロキセチンまたはその医薬上許容される塩を有効成分とする、がんの治療のための医薬組成物であって、前記がんは骨肉腫、皮膚がん、肺がん、子宮頸がん、胃がん、及び肝臓がんから選ばれる一種以上のがんである、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、デュロキセチン塩酸塩薬物の新しい適応症への応用に関し、特には様々ながんを抑制する薬物としてのデュロキセチン塩酸塩薬物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
がんは長らく世界的に死因のトップであり、がん患者は年々増加している。 したがって、がんの治療は重要な課題となっている。がん治療は、外科的療法、放射線療法、化学療法および標的療法に分けられる。
【０００３】
一般に、がんの薬物治療の目標は、化学療法か標的療法かに関わらず、主に、がん細胞の複製および分裂を阻害することによって腫瘍の転移および拡大を抑制することにある。
【０００４】
がん薬物の設計もまた、高い特異性を有する薬物分子の開発、又は標的型の抗体の設計を目指している。しかし統計によると、１万の新薬につき第I相臨床試験段階まで到達できるのはおよそ５つだけである。
【０００５】
また、薬物そのものが量産可能かどうかという問題に加えて、薬物安全性、患者の選択及び試験用量などの問題も解決しなくてはならない。ＦＤＡによって承認され市販されている薬物でも、患者の反応が好ましくない場合がよくある。さらに、多くのがん細胞は薬物耐性を持ち始めることがあり、薬物効力が大幅に低下して、がん治療において望ましくない結果がもたらされることがある。このように、薬物開発には一定の困難がある。
【０００６】
塩酸デュロキセチン（Duloxetine HCl）は、経口投与できる選択的セロトニンおよびノルエピネフリン再取り込み阻害剤（SSNRI）である。ヒトにおけるデュロキセチンの抗うつ病メカニズムは未知であるが、推測ではデュロキセチンの中枢神経系に作用するセロトニン作動性（serotonergic）およびノルアドレナリン作動性（noradrenergic）と関連しているとされている。前臨床試験では、デュロキセチンがセロトニンとノルエピネフリンの再取り込みを効果的にブロックできることが示されているが、ドーパミンの再取り込みに関してはわずかにブロックできるだけである。インビトロ（in vitro）試験では、デュロキセチンが、ドーパミン作動性（dopaminergic）、アドレナリン作動性（adrenergic）、コリン作動性（cholonergic）又はヒスタミン作動性（histaminergic）受容体に対して有意な親和性を有することは示されていない。また、デュロキセチンはモノアミン酸化酵素を阻害しない。デュロキセチンは広範に代謝されるが、その主要な代謝物質がデュロキセチンの薬理学的活性を明確に有することは見出されていない。デュロキセチン塩酸塩はＦＤＡによって早くから認可された薬物であり、デュロキセチン塩酸塩に関する多くのヒト研究結果データがある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、臨床応用分野の隔たりにより、デュロキセチン塩酸塩によってがん細胞を抑制できる可能性があるとは全く考えられていない。
【０００８】
そこで、本発明は、デュロキセチン塩酸塩薬物における新しい適応症の研究開発を目指し、従来薬物の新しい用途の開発に漕ぎ着けた。
【０００９】
計画的実験の結果により、デュロキセチン塩酸塩薬物が正常細胞に対してほとんどまたは全く毒性を示さないこと、及び、デュロキセチン塩酸塩が正常細胞と腫瘍細胞との間で選択的影響を示すかどうかが示された。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、がん治療のための医薬組成物の調製において使用するというデュロキセチン塩酸塩（Duloxetine HCl）薬物の用途を提供する。ここで、前記医薬組成物は、有効用量のデュロキセチン及び医薬上許容される塩からなる群より選ばれる。
【００１１】
本発明の一実施例において、前記がんは、胸部関連がん、腹腔関連がん、内分泌関連がん又は消化管関連がんの内の１種以上のがんである。
【００１２】
本発明の一実施例において、前記がんは、骨肉腫関連がん、皮膚関連がん、白血病関連がんから選ばれる１種以上のがんである。
【００１３】
本発明の一実施例において、前記胸部関連がんは肺がんである。
【００１４】
本発明の一実施例において、前記腹腔関連がんは、膀胱がん又は／及び子宮頸がんである。
【００１５】
本発明の一実施例において、前記内分泌関連がんは、前立腺がん、乳がん、卵巣がんから選ばれる１種以上のがんである。
【００１６】
本発明の一実施例において、前記消化管関連がんは、胃がん、肝臓がん、大腸がん、すい臓がん、舌がんから選ばれる１種以上のがんである。
【００１７】
本発明の一実施例において、前記有効用量は濃度にして２０〜５００ｍｇ／ｋｇ／日である。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本発明に係るデュロキセチン塩酸塩をがん細胞の抑制に用いた分析結果を示す。
【図２】デュロキセチン塩酸塩の腫瘍の体積に対する影響を示す。
【図３】高用量及び低用量でのデュロキセチン塩酸塩の腫瘍成長に対する抑制効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
具体的な実施方法
各種がん細胞の作製
各種がん細胞株を継代培養した。これらのがん細胞の種類には、肺がん、胃がん、肝臓がん、大腸がん、皮膚がん、子宮頸がん、前立腺がん、膀胱がん、乳がん、白血病、すい臓がん、卵巣がん、舌がん、骨肉腫及び腎臓がんが含まれる。また、試験を行うための対象群としては、腎臓（HEK293（Kidney））及び肺上皮BEAS-2B（Lung Epithelial）の正常細胞を用いた（表１参照）。
【００２０】
まず各細胞を培養液中で培養した後（各細胞の特性が異なるため、各細胞に対応する培養液を用いた（表１参照））、細胞数を計数した。これらの細胞を細胞数２×１０６で播種した後、細胞に培養するための培養液を加えて１０ｍＬとし、２〜３日間培養した。その後細胞数を計数してから、これらの細胞をそれぞれ９６ウェルプレートに播種した。各ウェルの細胞数は３０００株であり、体積は１００μＬである。
【００２１】
【表１】
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【００２２】
細胞生存分析方法 
９６ウェルプレート中の培養液を除去した後、各ウェルに市販の薬物を濃度１０μＭ、体積１００μＬ添加し、７２時間置いた。その後、各ウェルに希釈したＷＳＴ−１溶液（希釈率は培養液とＷＳＴ−１原液との体積比で９：１）１００μＬを加えた。よって各ウェルの最終的な体積は２００μＬとなった。その後、９６ウェルプレートを３７℃で３０〜９０分間置いた。そして、elisa reader（酵素結合免疫吸着検出器）を用いてＯＤ４５０で吸光度を検出し、各がん細胞株の生存率を算出した。
【００２３】
各種がん細胞に対するデュロキセチン塩酸塩薬の分析結果
胸部関連がん細胞に対するデュロキセチン塩酸塩の抑制効果の試験
「胸部関連がん細胞に対するデュロキセチン塩酸塩の抑制効果の試験」と題されたこの分析は、主に２種の肺がん細胞、即ちＡ５４９及びＨ１６５０がん細胞株に対して試験を行った。 各がん細胞の抑制実験を4回行い、平均値を計算した。その結果を以下の表２に示す。
【００２４】
【表２】
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【００２５】
腹腔関連がん細胞に対するデュロキセチン塩酸塩の抑制効果の試験
「腹腔関連がん細胞に対するデュロキセチン塩酸塩の抑制効果の試験」と題されたこの分析は、主に、３種の腹腔関連がんに対して試験を行った。膀胱がん細胞株は、それぞれＴＳＧＨ及びＴ２４細胞株であった（表３）。子宮頸がん細胞株はそれぞれＨｅＬａ細胞株及びＣ‐３３Ａであった（表４）。腎臓がん細胞株は７８６‐Ｏ細胞株であった（表５）。各がん細胞の抑制実験を4回行い、平均値を計算した。結果を以下の表に示す。
【００２６】
【表３】
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【００２７】
【表４】
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【００２８】
【表５】
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【００２９】
内分泌関連がん細胞に対するデュロキセチン塩酸塩の抑制効果の試験
「内分泌関連がん細胞に対するデュロキセチン塩酸塩の抑制効果の試験」と題されたこの分析は、主に３種の内分泌関連がんに対して試験を行った。前立腺がん細胞株は、それぞれＰＣ‐３及びＬＮＣａｐ細胞株であった（表６）。乳がん細胞株は、それぞれＭＣＦ‐７及びＭＤＡ‐ＭＢ‐２３１細胞株であった（表７）。卵巣がん細胞株は、それぞれＮＩＨ‐ＯＶＣＡＲ‐３及びＴＯＶ‐２１Ｇ細胞株であった（表８）。各がん細胞の抑制実験を4回行い、平均値を計算した。結果を以下の表に示す。
【００３０】
【表６】
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【００３１】
【表７】
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【００３２】
【表８】
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【００３３】
消化管関連がん細胞に対するデュロキセチン塩酸塩の抑制効果の試験
「消化管関連がん細胞に対するデュロキセチン塩酸塩の抑制効果の試験」と題されたこの分析は、主に５種の消化管関連がんに対して行った。胃がん細胞株はそれぞれＡＧＳ及びＭＫＮ‐４５細胞株であった（表９）。肝臓がん細胞株はそれぞれＨｅｐＧ２及びＨｅｐ３Ｂ細胞株であった（表１０）。大腸がん細胞株は、それぞれＨＣＴ１１６‐ｗｔ及びＬｏＶｏ細胞株であった（表１１）。すい臓がん細胞株は、それぞれＡｓＰＣ‐１及びＢｘＰＣ‐３細胞株であった（表１２）。舌がん細胞株はＳＡＳ細胞株であった（表１３）。各がん細胞の抑制実験を4回行い、平均値を計算した。結果を以下の表に示す。
【００３４】
【表９】
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【００３５】
【表１０】
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【００３６】
【表１１】
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【００３７】
【表１２】
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【００３８】
【表１３】
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【００３９】
その他のがん細胞に対するデュロキセチン塩酸塩の抑制効果の試験
他の種類のがんに対するデュロキセチン塩酸塩の分析を行った。 骨肉腫細胞株はＵ２ＯＳ細胞株であった（表１４）。皮膚がん細胞株はそれぞれＡ３７５及びＢＣＣ細胞株であった（表１５）。各がん細胞抑制実験を３回又は４回行い、平均値を計算した。結果を以下の表に示す。
【００４０】
【表１４】
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【００４１】
【表１５】
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【００４２】
対称群実験設計 
正常細胞に対するデュロキセチン塩酸塩の抑制効果の試験
多種の正常細胞に対するデュロキセチン塩酸塩の分析を行った。正常腎臓細胞株はＨＥＫ２９３細胞株であった（表１６）。正常肺上皮細胞株はＢＥＡＳ‐２Ｂ細胞株であった（表１７）。各細胞抑制実験を4回行い、平均値を計算した。結果を以下の表に示す。
【００４３】
【表１６】
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【００４４】
【表１７】
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【００４５】
各種がん細胞に対するデュロキセチン塩酸塩の抑制効果を表１８にまとめた。デュロキセチン塩酸塩は様々ながんに対して有意な抑制効果を示すことが明らかとなった。本願発明者らの実験による結果から、デュロキセチン塩酸塩は種々のがん細胞に対して有意な抑制効果を有することが示された（図１参照）。
【００４６】
【表１８】
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【００４７】
動物実験分析 
この実験は、体重約２１±１ｇの雌性BALB / cAnN.Cg-Foxn1nu / CrlNarlマウスをサンプルとして行った。肝臓がん細胞（ＨｅｐＧ２）を皮下注射した後、正常対照群、低用量群（１００ｍｇ／ｋｇ／日）、高用量群（２００ｍｇ／ｋｇ／日）の３群に無作為に分けた。増殖した腫瘍が１００ｍｍ３を超えた後、腹腔内注射によって毎日薬物投与した。そして、腫瘍の大きさを週に２回測定した。腫瘍の大きさを測定する数式は、（Ｌ×Ｗ２）／２であり、Ｌは腫瘍の最長直径を表し、Ｗは腫瘍の最短直径を表す。   
【００４８】
【表１９】
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【００４９】
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【００５０】
図２に示す結果によれば、デュロキセチン塩酸塩は低用量でもまた高用量でも、腫瘍に対して大きな抑制効果を有する。更に、試験中のマウスの各群において明白な体重減少はなかった。従って、デュロキセチン塩酸塩は、高用量または低用量のいずれでも、試験マウスの健康状態を最適な状態に保ち、治療中に死亡させることがないことが示された。
【００５１】
図３に示す結果によれば、デュロキセチン塩酸塩は低用量でもまた高用量でも、腫瘍の体積増加を効果的に抑制し、且つ腫瘍の体積を減少させることができ、特に、高用量の場合により良い効果を発揮することが示された。
【００５２】
上述の詳細な説明は本発明の実施可能な一実施例を具体的に説明するものであり、本発明の権利範囲を制限するものではない。本発明の技術的思想から乖離しない範囲での均等な実施或いは変更は本願の権利範囲に含まれるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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