(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アブラヤシの果実から得られた水溶性抽出物を含む、被験体におけるミトコンドリアＤＮＡ損傷の治療または予防用医薬組成物であって、
前記ミトコンドリアＤＮＡ損傷は、前記被験体へ投与される医薬品の副作用であり、
前記医薬品が、３’−アジド−３’−デオキシチミジン（ＡＺＴ）を含むヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩ）、又はイソニアジドを含む抗結核薬である、
被験体におけるミトコンドリアＤＮＡ損傷の治療または予防用医薬組成物。
【請求項２】
アブラヤシの果実から得られた水溶性抽出物に存在する１または２以上のフェノール化合物を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
アブラヤシの果実から得られた水溶性抽出物に存在する１または２以上の有機化合物を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記１または２以上の有機化合物が、砂糖、フェノール化合物およびシキム酸からなる群から選択される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記被験体がミトコンドリア疾患または障害を有している、請求項１から４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記ミトコンドリア疾患または障害が、ミトコンドリアＤＮＡの減少である、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記被験体が、加齢性疾患または障害を抱えている、請求項１から４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記加齢性疾患または障害は、アルツハイマー病筋萎縮性側索硬化症、関節炎、アテローム性動脈硬化症、悪液質、癌、心肥大、心不全、心臓肥大、心臓血管疾患、白内障、大腸炎、慢性閉塞性肺疾患、認知症、糖尿病、虚弱、心臓病、肝臓脂肪症、高い血中コレステロール、高血圧、ハンチントン病、高血糖、高血圧症、不妊症、炎症性腸疾患、インスリン抵抗性障害、嗜眠、メタボリックシンドローム、筋ジストロフィー、多発性硬化症、神経障害、腎症、肥満、骨粗しょう症、パーキンソン病、乾癬、網膜変性、サルコペニア、睡眠障害、敗血症および卒中からなる群から選択される、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記被験体が、ミトコンドリアＤＮＡの突然変異体を抱えている、請求項１から８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
請求項１から９のいずれか一項に記載の医薬組成物を含む、被験体におけるミトコンドリアＤＮＡ損傷の治療または予防用キットであって、
前記ミトコンドリアＤＮＡ損傷は、前記被験体へ投与される医薬品の副作用であり、
前記医薬品が、３’−アジド−３’−デオキシチミジン（ＡＺＴ）を含むヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩ）、又はイソニアジドを含む抗結核薬である、被験体におけるミトコンドリアＤＮＡ損傷の治療または予防用キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願との相互参照］
本願は、アメリカ合衆国仮出願番号６１／７６１，４７３、「ヤシ油果汁サプリメントおよびその使用」２０１３年２月６日出願、および同仮出願番号６１／７９１，１６２、名称「ヤシ果汁を用いたＤＮＡ損傷およびミトコンドリア機能障害の治療」、２０１３年３月１５日出願の優先権を主張する出願である。これらの各仮出願は、その全部をここに参照として組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
ミトコンドリアは、細胞機能に求められるＡＴＰの殆どを産生する。ミトコンドリアを含有する幾つかのそれ自身のゲノム（ｍｔＤＮＡ）の複製物を有する、数百のミトコンドリア細胞がある。ヒトのミトコンドリア・ゲノムは、電子輸送鎖の１３の遺伝子、２２のｔＲＮＡ、および２つのｒＲＮＡのためにコードする１６，５６９個のＤＮＡの塩基円形断片である。このゲノムは、また制御領域（Ｄ−ループ）を含み、それは、２個の超可変領域（ＨＶ１、ＨＶ２）を含有する。その他の全ての必要な因子および電子輸送鎖蛋白質は、核にコードされ、そしてミトコンドリア内へ輸送される。
【０００３】
ミトコンドリア機能障害およびミトコンドリアＤＮＡ損傷は時系列で増加し、パーキンソン病、糖尿病および家族性難聴を含む多くの疾患と関連している。ミトコンドリア機能不全の特徴は、活性酸素種（ＲＯＳと略称する）の増加、ＡＴＰ産生の減少、電子輸送鎖タンパク質合成の減少、およびミトコンドリアの大きさ、形状、及び膜電位の変化を含む。ミトコンドリア機能障害は、ミトコンドリア突然変異の段階的な蓄積によって引き起こされることがある。
【０００４】
ミトコンドリア機能障害およびミトコンドリアＤＮＡの損傷は、加齢や病気と関連していることに加えて、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、結核、一般的な感染症および癌を含む種々の疾患を治療するために使用されるある種の薬剤の副作用でもある。例えば、ヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩ）、抗レトロウイルス薬とのＨＩＶ／ＡＩＤＳの処置は、ミトコンドリアの損傷を引き起こし得る。特定のＮＲＴＩは、ウイルス逆転写酵素を阻害するだけでなく、それによってミトコンドリアＤＮＡの複製を阻止する、ミトコンドリアポリメラーゼγ、ミトコンドリアにおける唯一のＤＮＡポリメラーゼを阻害するように設計されている。これは、ミトコンドリア機能障害につながる、ミトコンドリア内のｍｔＤＮＡの減少をもたらす。ミトコンドリアＤＮＡの減少を発生させない、３'-アジド-３'-デオキシチミジン（ＺＤＶとして知られているＡＺＴ）の如きその他のＮＲＴＩは、さらに別の経路を介してミトコンドリアの機能障害を引き起こす可能性がある。具体的には、ＡＺＴは、ＤＮＡ複製の間および／またはＲＯＳの増加を引き起こし、その一方でｍｔＤＮＡ突然変異率を増加させることによって、校正を阻害するＡＺＴの一リン酸化形態の形成を介してミトコンドリアＤＮＡを損傷することがある。
【０００５】
上記に照らして、特に、ＮＲＴＩおよび他の薬剤で治療される、高齢者や個人などの影響を受けやすい集団における、ミトコンドリア機能障害及びＤＮＡ損傷のための新規な組成物、および治療及び予防方法のニーズがある。
【発明の概要】
【０００６】
本願においては、ミトコンドリア機能障害、ミトコンドリアＤＮＡ損傷、および／またはＤＮＡ損傷の予防及び治療のための方法、組成物並びにキットが提供される。
【０００７】
本発明の一態様は、被験体におけるミトコンドリア機能障害および／またはミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）の損傷を治療または防止する方法である。ある種の実施形態において、この方法は、パーム油果実からの抽出物（例えば、水溶性抽出物または乾燥試薬）、またはこのような抽出物中に存在するフェノール類（例えば、１または２以上の天然フェノール、またはそれらフェノール類の合成品）を含有する組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの実施形態において、当該組成物は、ケイ皮酸エステルおよび／または安息香酸エステルの如き天然フェノール類が含まれる。いくつかの実施形態において、当該組成物は、ヤシ油粉砕プロセスから得られる植物液の抽出物を含む。
【０００８】
前記方法のいくつかの実施形態において、被験体は、リスクを増加させ、および／またはミトコンドリア障害および／またはミトコンドリアＤＮＡ損傷を引き起こす薬剤を投与された。特定の実施形態において、被験体は、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩ）、例えば、３'-アジド-３'-デオキシチミジン（ＡＺＴ）を投与された。いくつかの実施形態において、被験体は、ＨＩＶに感染し、および／またはＡＩＤＳを有している。
【０００９】
特定の実施形態において、被験体は、ミトコンドリア疾患または障害を有している。
【００１０】
いくつかの実施形態において、被験体は、加齢性の疾患または障害を有している。
【００１１】
いくつかの実施形態において、被験体は、ミトコンドリアＤＮＡの変異体を有しているか、または有していることを疑われている。いくつかの実施形態では、この方法はまた、被験体が、ミトコンドリアＤＮＡの変異体を有するかどうかを決定するステップを含む。いくつかの実施形態で、その決定のステップは、増幅反応（例えば、ＰＣＲ）、および／または配列決定分析の性能（例えば、連鎖停止シーケンシング、リゲーションによる配列決定、合成、ピロシーケンスによる配列決定、イオン半導体シーケンシング、単一分子リアルタイム配列決定、および／または４５４シーケンシング）を含む。いくつかの実施形態において、決定するステップは、線形後指数関数的−ＰＣＲ／点灯／消灯／ＰＣＲ-パーフェクト技術を用いて行われる。
【００１２】
本発明の別の態様は、被験体におけるゲノムＤＮＡの損傷を治療または防止する方法である。特定の実施形態において、この方法は、パーム油果実からの抽出物（例えば、水溶性抽出物）またはその抽出物中に存在するフェノール類（例えば、天然または合成フェノール）を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの実施形態において、組成物は、ケイ皮酸エステルおよび／または安息香酸エステルなどの天然フェノール類が含まれている。いくつかの実施形態において、組成物は、ヤシ油の粉砕プロセスの植物液からの抽出物を含む。
前記方法のいくつかの実施形態では、対象は癌を持っているか、または癌を発症する素因がある。特定の実施形態において、被験体は、ゲノムＤＮＡの損傷の可能性を増大させる条件にさらされていた。
【００１３】
特定の実施形態において、被験体は、ゲノムＤＮＡの変異を有するか、または有することが疑われている。いくつかの実施形態では、前記方法はまた、被験体は、ゲノムＤＮＡの変異を有するかどうかを決定するステップを含む。いくつかの実施形態では決定ステップは、増幅反応（例えばＰＣＲ）の性能を含む。いくつかの実施形態では前記決定する工程は、配列決定分析の性能（例えば、連鎖停止シーケンシング、リゲーションによる配列決定、合成配列決定、ピロシーケンシング、イオン半導体シーケンシング、単一分子リアルタイムシーケンシング、および／または４５４の配列決定）を含む。いくつかの実施形態において、当該ステップは、線形後指数関数的-ＰＣＲ／点灯／消灯／ＰＣＲ-パーフェクト技術を用いて行われる。
【００１４】
本発明のさらに別の態様は、ＨＩＶおよび／またはＡＩＤＳのために被験体を治療する方法である。特定の実施形態において、当該方法は、ヤシ果実からの抽出物（例えば、水溶性抽出物）、またはその抽出物中に存在するフェノール類（例えば、天然または合成フェノール）を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの実施形態においては、この方法はまた、対象にＡＺＴのようなＮＲＴＩを投与することを含む。いくつかの実施形態において、組成物は、ケイ皮酸エステルおよび／または安息香酸エステルの如き天然フェノール類が含まれる。いくつかの実施形態において、当該組成物は、ヤシ油の粉砕プロセスの植物液からの抽出物を含む。本明細書で提供されるいくつかの実施形態において、パーム油果実から（例えば、水溶性抽出物）の抽出物、またはその抽出物に含まれるフェノール類（例えば合成フェノール類）を含む組成物を含む、被験体においてミトコンドリア機能障害、ミトコンドリアＤＮＡの損傷および／またはゲノムＤＮＡの損傷を治療または予防するためのキットをここに提供する。いくつかの実施形態では抽出物は、例えば、ケイ皮酸エステルおよび／または安息香酸エステルなどのフェノール類が含まれる。いくつかの実施形態では抽出物は、ヤシ油粉砕工程の植物液から得られる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１Ａ】図１Ａ、図１Ｂおよび図１Ｃは、それぞれ、３つのターゲットであるＨＶ２、ＣＯ２、及びＮＤ１のそれぞれについて、ミトコンドリアＤＮＡにおけるＡＺＴ誘発性の変異を示す蛍光サインシフトを示す。黒線は、参照配列を示し、灰色の線がシフトサインを表す。矢印は、相違の領域や変異の証拠を示す。エラーバー（誤差範囲を示す棒線）は、平均の対照からの３つの標準偏差を表す。
【図１Ｂ】図１Ａ、図１Ｂおよび図１Ｃは、それぞれ、３つのターゲットであるＨＶ２、ＣＯ２、及びＮＤ１のそれぞれについて、ミトコンドリアＤＮＡにおけるＡＺＴ誘発性の変異を示す蛍光サインシフトを示す。黒線は、参照配列を示し、灰色の線がシフトサインを表す。矢印は、相違の領域や変異の証拠を示す。エラーバー（誤差範囲を示す棒線）は、平均の対照からの３つの標準偏差を表す。
【図１Ｃ】図１Ａ、図１Ｂおよび図１Ｃは、それぞれ、３つのターゲットであるＨＶ２、ＣＯ２、及びＮＤ１のそれぞれについて、ミトコンドリアＤＮＡにおけるＡＺＴ誘発性の変異を示す蛍光サインシフトを示す。黒線は、参照配列を示し、灰色の線がシフトサインを表す。矢印は、相違の領域や変異の証拠を示す。エラーバー（誤差範囲を示す棒線）は、平均の対照からの３つの標準偏差を表す。
【図２】図２は、ミトコンドリア・ゲノムのターゲット（ＨＶ２、ＣＯ２、およびＮＤ１）のそれぞれに対する治療に基づく変異（無処置、ＡＺＴ処置、ＰＦＪ（パーム油果汁）処置、またはＡＺＴ処置とＰＦＪ処置の両方）を反映するサインシフトの数を示している。白色バーが非処置対照を示し、黒色バーはＡＺＴ処置を示し、灰色のバーは、ＰＦＪ（パーム果汁）処置を示し、斜線のバーは、ＡＺＴとＰＪＦ処置を示している。バーの上の文字は重要な治療間の差（Ｐ＜０．０５）：ａ，コントロール対ＡＺＴ処置を；ｂ，ＡＺＴ処置；ＡＺＴ＋ＰＦＪ治療; ｃ，コントロール対ＡＺＴ＋ＰＦＪ治療を示す。
【図３】図３は、治療（治療なし、イソニアジド（ＩＮＨ）治療、ＩＮＨとＰＦＪ治療の両方）に基づいて、３つのミトコンドリア・ゲノム（ＨＶ２、ＣＯ２、およびＮＤ１）の領域についてのミトコンドリアＤＮＡ変異を示す蛍光サイン変化の数を示す。結果は、ＩＮＨ治療がミトコンドリアＤＮＡ突然変異負荷を増大させること、およびＰＦＪ治療はこれらの突然変異の数を減少させることを示している。
【図４】図４は、ヒト肝腫瘍細胞株におけるドーズ依存ＡＺＴ細胞毒性に対するＰＦＪ処置の保護効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
概要
本願は、ミトコンドリア機能障害、ミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）変異および／またはゲノムＤＮＡ変異を治療および／または予防するための方法及びキットを提供する。幾つかの態様において、提供される方法には、ヤシ果汁（ＰＦＪ）全部および／またはその中に含まれる生理活性物質として投与される（例えば、天然源から得られた、または合成的に製造されたフェノール類）部分の投与および／または消費を含む。
【００１７】
ヤシ果汁（以下、ＰＦＪと略す場合がある）は、抗酸化物質として作用するフェノール類が含まれている。これらの酸化防止剤は、細胞内、および細胞内のミトコンドリアの活性酸素種（ＲＯＳ）の量を減少させるように作用する。細胞内のゲノムＤＮＡとミトコンドリアＤＮＡは、そのような癌、糖尿病やアルツハイマー病などのミトコンドリア機能障害や様々な疾患につながるＲＯＳの過剰蓄積に起因する突然変異が起こり得る。薬物は、ストレプトマイシン、イソニアジド、シクロスポリンＡ、ネオマイシンおよびヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩ）を含むが、これらに限定されない、細菌感染およびウイルス感染を治療するために使用され、ミトコンドリアの損傷を引き起こす可能性を含む。最も一般的に使用されるＮＲＴＩの１つはＡＺＴで、それは、またミトコンドリアゲノムの損傷を引き起こす可能性がある。
【００１８】
さらに、ＰＦＪのコンポーネントは、ＤＮＡ損傷、および／またはミトコンドリア機能障害を軽減／予防するために、細胞状の実在物（ＤＮＡポリメラーゼ、ＲＮＡポリメラーゼ、転写因子、エピジェネティックな機構）と相互作用することができる。
ヤシ果汁とヤシ果汁内に含まれるフェノール類はＡＺＴや他の遺伝毒性薬物によって引き起こされるミトコンドリア損傷を含む、ＤＮＡ損傷を低減する。ＰＦＪとＰＦＪ中のポリフェノールは、例えば、種々の薬剤や加齢、病気などの自然現象によって引き起こされるＲＯＳ媒介ミトコンドリアＤＮＡの損傷を防止することにおいて、有用である。
【００１９】
本明細書で提供されるいくつかの実施形態では、ミトコンドリア機能障害および／または被験体におけるミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）の損傷を治療または予防する方法である。特定の実施形態において、この方法は、被験者にパーム油果実からの抽出物（例えば、水溶性抽出物）、またはそのような抽出物中に存在するフェノール類（例えば、天然または合成フェノール）を含む組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態において、組成物は、ケイ皮酸エステルおよび／または安息香酸エステルなどの天然フェノール類が含まれる。いくつかの実施形態において、組成物は、ヤシ油の粉砕プロセスの植物液から得られる抽出物を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、栄養補助食品または医薬品組成物である。特定の実施形態において、栄養補助食品または医薬品組成物は、さらに、必須脂肪酸、抗酸化物、ビタミン、またはミネラルを含む。いくつかの実施形態において、栄養補助食品または医薬品組成物は、γ−リノレン酸、リノール酸、亜鉛、銅、セレン、ヨウ化物、ピリドキシン、葉酸、コバラミン、コエンザイムＱ１０、ビタミンＣ、ビタミンＢ１、ビタミンＥ、チアミン二リン酸、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＤ、マンガン、ビタミンＡ、リボフラビン、ナイアシン、ナイアシンアミド、パントテン酸、ビオチン、イノシトール、酒石酸水素コリン、ベタイン、ビタミンＫ、モリブデン、クロム、カリウム、シトラスバイオフラボノイド、混合カロチノイド、緑茶抽出物、またはN -アセチルシステインをさらに含む。
【００２０】
いくつかの実施形態において、被験体は、ミトコンドリア障害および／またはミトコンドリアＤＮＡ損傷のリスクを増加させ、および／またはそれらを引き起こす薬剤を投与されていた。特定の実施形態において、被験体はＮＲＴＩなど３'-アジド-３'-デオキシチミジン（ＡＺＴ）を投与されていた。いくつかの実施形態において、被験体は、ＨＩＶに感染し、および／またはＡＩＤＳに罹患している。他の実施形態では、被験体は薬剤の抗結核薬（例えば、ＩＨＮ）、またはこれら薬品の組み合わせを投与された。
【００２１】
特定の実施形態において、被験体は、ミトコンドリア疾患または障害を有している。いくつかの実施形態では、ミトコンドリア疾患または障害は、ミトコンドリアミオパチー、糖尿病と難聴（ＤＡＤ）、レーバー遺伝性視神経症（ＬＨＯＮ）、リー症候群、神経障害、運動失調、網膜色素変性症と下垂（ＮＡＲＰ）、マーフは（ありますMERRF）、筋神経性胃腸脳症（ＭＮＧＩＥ）、ミトコンドリアミオパチー、脳筋症、乳酸アシドーシス、脳卒中様症状（ＭＥＬＡＳ）、カーンズ・セイヤー症候群（ＫＳＳ）、慢性進行性外眼筋麻痺（ＣＰＥＯ）および/またはｍｔＤＮＡの減少である。
【００２２】
いくつかの実施形態において、被験体は、加齢性の疾患または障害を有している。特定の実施形態において、加齢性疾患または障害は、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、関節炎、アテローム性動脈硬化症、悪液質、癌、心肥大、心不全、心臓肥大、心臓血管疾患、白内障、大腸炎、慢性閉塞性肺疾患、認知症、糖尿病であります病、虚弱、心臓病、肝臓脂肪症、高い血中コレステロール、高血圧、ハンチントン病、高血糖、高血圧症、不妊症、炎症性腸疾患、インスリン抵抗性障害、嗜眠、メタボリック症候群、筋ジストロフィー、多発性硬化症、神経障害、腎症、肥満、骨粗しょう症、パーキンソン病、乾癬、網膜変性、サルコペニア、睡眠障害、敗血症および／または脳卒中である。
【００２３】
いくつかの実施形態において、被験体は、ミトコンドリアＤＮＡの変異であるか、またはそれを有することが疑われている。いくつかの実施形態では、当該方法はまた、被験体が、ミトコンドリアＤＮＡの変異体を有するかどうかを決定するステップを含む。いくつかの実施形態では、その決定するステップは、増幅反応（例えば、ＰＣＲまたは線形後指数関数的−ＰＣＲ）、および／または配列決定分析の性能（例えば、連鎖停止シーケンシング、リゲーションによる配列決定、合成によるシーケンシング、ピロシーケンシング、イオン半導体シーケンスによる配列決定、単一分子リアルタイムシーケンシング、および／または４５４の配列決定）を含む。いくつかの実施形態において、決定するステップは、線形後指数関数的ＰＣＲ／点灯／消灯／ ＰＣＲ-パーフェクト技術を用いて行われる。
【００２４】
本明細書に開示されるいくつかの実施形態において、被験体におけるゲノムＤＮＡの損傷を治療または予防する方法が開示される。特定の実施形態において、当該方法は、そのようなパーム油果実から得られる植物の水溶性抽出物を含む組成物、または水溶性抽出物中に存在するフェノール類（例えば、天然または合成フェノール）を含有する組成物として、被験体に投与することを含む。いくつかの実施形態において、当該組成物は、ケイ皮酸エステルおよび／または安息香酸エステルなどの天然フェノール類が含まれている。いくつかの実施形態において、当該組成物は、ヤシ油の粉砕プロセスの植物液からの抽出物を含む。いくつかの実施形態において、当該組成物は、栄養補助食品または医薬品組成物である。特定の実施形態において、栄養補助食品または医薬品組成物は、さらに、必須脂肪酸、抗酸化剤、ビタミン、またはミネラルを含む。いくつかの実施形態において、栄養補助食品または医薬品組成物は、γ−リノレン酸、リノール酸、亜鉛、銅、セレン、ヨウ化物、ピリドキシン、葉酸、コエンザイムＱ１０、コバラミン、ビタミンＣ、ビタミンBＢ１、ビタミンＥ、チアミン二リン酸、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＤ、マンガン、ビタミンＡ、リボフラビン、ナイアシン、ナイアシンアミド、パントテン酸、ビオチン、イノシトール、酒石酸水素コリン、ベタイン、ビタミンＫ、モリブデン、クロム、カリウム、シトラスバイオフラボノイド、混合カロチノイド、緑茶抽出物、またはN -アセチルシステインをさらに含む。
【００２５】
いくつかの実施形態では、被験体は、癌を持っているか、またはその素因を有する。特定の実施形態において、被験体は、ゲノムＤＮＡの損傷の可能性を増大させる条件にさらされた。特定の実施形態において、被験体は、電離放射線レベルの上昇にさらされた。いくつかの実施形態では、被験体は、放射線療法を受けている。いくつかの実施形態において、被験体は、突然変異誘発物質に曝露され、および／またはそれを消費した。いくつかの実施形態で、変異原は、アセトアルデヒド、アフラトキシン、4-アミノビフェニル、ビンロウジュナット、アリストロキン酸、ヒ素、アスベスト、アザチオプリン、ベンゼン、ベンジジン、ベンゾ［α］ピレン、ベリリウム、キンマの一口分、ビス（クロロメチルからなる群から選択されます）エーテル、ブスルファン、1,3-ブタジエン、カドミウム、クロラムブシル、塩化ナファジン、六価クロム（ＶＩ）の化合物、肝吸虫、シクロホスファミド、シクロスポリン、ジエチルスチルベストロール、エリオナイト、エチレンオキシド、エトポシド、ホルムアルデヒド、メトキサレン放射線、メルファランを、イオン化4,4'-メチレンビス（クロロアニリン）、ＭＯＰＰ、２-ナフチルアミン、中性子線、ニッケル化合物、Ｎ’−ニトロソノルニコチン、４-（Ｎ−ニトロソメチルアミノ）-１-（３-ピリジル）-１-ブタノン、３,４-、 ５,３'、４’-ペンタクロロビフェニル、２，３，４，７，８-ペンタクロロジベンゾフラン、フェナセチン、リン３２、プルトニウム、放射性沃素、放射性核種、ラジウム２２４、ラジウム２２６、ラジウム２２８、ラドン２２２、セムスチン、シェールオイル、硫黄マスタード、２，３，７，８-テトラクロロパラ - ジオキシン、チオテパ、トリウム２３２、オルトトルイジン、トレオスルファンおよび塩化ビニルからなる群から選択される。
【００２６】
特定の実施形態において、被験体は、ゲノムＤＮＡの変異を有するか、またはそれを有することが疑われる。いくつかの実施形態において、当該方法は、また、被験体がゲノムＤＮＡの変異を有するかどうかを決定するステップを含む。いくつかの実施形態において、決定するステップは、増幅反応（例えば、ＰＣＲまたはと線形後指数関数的-ＰＣＲ）の性能を含む。いくつかの実施形態において、決定するステップは、配列決定分析の性能（例えば、連鎖停止シーケンシング、リゲーションによる配列決定、合成による配列決定、ピロシーケンシング、イオン半導体シークエンシング、単一分子リアルタイムシーケンシング、および／または４５４配列決定）を含む。いくつかの実施形態において、決定するステップは、線形後指数関数的-ＰＣＲ/点灯／消灯／ＰＣＲ-パーフェクト技術を用いて行われる。
【００２７】
本明細書に開示された、いくつかの実施形態において、ＨＩＶおよび／またはＡＩＤＳのために被験体を治療する方法である。特定の実施形態において、当該方法は、被験体にヤシ油果実由来の水溶性抽出物を含有する組成物、またはヤシ油の果実由来の水溶性抽出物中に存在するフェノール類（例えば、天然または合成フェノール）を含む組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、この方法はまた、被験体にＡＺＴのようなＮＲＴＩを投与することを含む。いくつかの実施形態において、組成物は、ケイ皮酸エステルおよび／または安息香酸エステルなどの天然フェノール類が含まれる。いくつかの実施形態において、前記組成物は、ヤシ油の粉砕プロセスの植物液からの抽出物を含む。いくつかの実施形態において、前記組成物は、栄養補助食品または医薬品組成物である。特定の実施形態において、栄養補助食品または医薬品組成物は、さらに、必須脂肪酸、抗酸化剤、ビタミン、またはミネラルを含む。いくつかの実施形態において、栄養補助食品または医薬品組成物は、γ−リノレン酸、リノール酸、亜鉛、銅、セレン、ヨウ化物、ピリドキシン、葉酸、コバラミン、コエンザイムＱ１０、ビタミンＣ、ビタミンＢ１、ビタミンＥ、チアミン二リン酸、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＤ、マンガン、ビタミンＡ、リボフラビン、ナイアシン、ナイアシンアミド、パントテン酸、ビオチン、イノシトール、酒石酸水素コリン、ベタイン、ビタミンＫ、モリブデン、クロム、カリウム、シトラスバイオフラボノイド、混合カロチノイド、緑茶抽出物、またはＮ -アセチルシステインをさらに含む。本明細書で提供されるいくつかの実施形態において、ヤシ油果実由来の水溶性抽出物または水溶性抽出物中に存在するフェノール類（例えば、合成フェノール）を含む組成物を含む、被験体中のミトコンドリア機能不全、ミトコンドリアＤＮＡの損傷および／またはゲノムＤＮＡ損傷を治療または予防するためのキットである。いくつかの実施形態において、抽出物には、例えば、ケイ皮酸エステルおよび／または安息香酸エステルなどのフェノール類が含まれる。いくつかの実施形態において、抽出物は、ヤシ油粉砕の植物液に由来する。いくつかの実施形態では、キットはまた、例えば、ＡＺＴなどのＮＲＴＩを含む。いくつかの実施形態では、抽出物は、栄養補助食品または医薬品組成物である。特定の実施形態において、栄養補助食品または医薬品組成物は、さらに、必須脂肪酸、抗酸化剤、ビタミン、またはミネラルを含む。いくつかの実施形態において、栄養補助食品または医薬品組成物は、γ−リノレン酸、リノール酸、亜鉛、銅、セレン、ヨウ化物、ピリドキシン、葉酸、コバラミン、コエンザイムＱ１０、ビタミンＣ、ビタミンＢ１、ビタミンＥ、チアミン二リン酸、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＤ、マンガン、ビタミンＡ、リボフラビン、ナイアシン、ナイアシンアミド、パントテン酸、ビオチン、イノシトール、酒石酸水素コリン、ベタイン、ビタミンＫ、モリブデン、クロム、カリウム、シトラスバイオフラボノイド、混合カロチノイド、緑茶抽出物、またはＮ -アセチルシステインをさらに含む。
【００２８】
定  義
本明細書で使用する場合、用語「投与する」は、被験体に、栄養補助食品または医薬品または組成物を提供すること、および、これらに限定されないが、医療専門家および自己投与することによって投与することを含む。
用語「薬剤」は、化学化合物、小分子（例えば、核酸、抗体、抗体フラグメント、タンパク質またはペプチドのような）の化学化合物および／または生物学的高分子の混合物を示すために本明細書中で使用される。薬剤は、本明細書で以下に記載の試験をスクリーニングすることによって特定の活性を有すると同定され得る。このような薬剤の活性は、対象において局所的または全身的に作用する生物学的、生理学的、または薬理的に活性な物質である「治療薬」とされ得る。
本明細書で使用する場合、用語「癌」は、しかし、固形腫瘍および血液由来の腫瘍に限定されるものではない。用語「癌」は、皮膚、組織、臓器、骨、軟骨、血液および血管の疾患を含む。 「癌」という用語はさらに、一次および転移性癌を含む。
【００２９】
本明細書で使用する場合、「栄養補助食品」という用語は、一般に、その栄養の利点以外の付加的な利益を提供する任意の食品を意味する。
【００３０】
本明細書で使用する場合、用語「被験体（者）」は、処置または治療のために選択されたヒトまたは非ヒト的動物を意味する。本発明の組成物の投与‘を必要とする’被験体は、本発明の方法が、予防、治療するため、または疾患、障害、または状態を予防するのを援助するために提供される、本明細書に記載の疾患、障害、または状態のいずれかを有することが疑われる対象である。
【００３１】
語句「治療的に有効な量」及び「有効量」は、本明細書中で使用される任意の医学的治療に適用される、合理的な利益／リスク比で、被験体中の細胞の少なくとも亜集団において所望の治療効果を生じるために有効な薬剤の量を意味する。
【００３２】
被験体における疾患または状態を‘治療する’または、疾患または状態を有する被験体を‘治療する’とは、例えば、栄養補助食品または薬学的処置、医薬品または栄養補助食品組成物の投与を被験体に付すことを意味し、その少なくとも1つの疾患または症状が減少したか、悪化を防ぐが如くである。
【００３３】
被験体における疾患または状態を「予防する」、例えば被験体に関してアクションを実行しない場合と比較して、疾患または状態を発症する確率を低減する、被験体への医薬品または栄養補助食品組成物を投与するが如き、行動を行なうことを示す。
【００３４】
疾患または症状の‘治療を援助する’または‘予防を援助する’とは、追加のアクションと一緒に、疾患または症状の治療または予防をもたらす方法を意味する。
【００３５】
治療組成物およびキット
ヤシ油は２種のヤシ科の種のアブラヤシ（西アフリカ原産）とアブラヤシ属のアブラヤシ（中南米が原産）を含む。最も一般的にはヤシ油の生産の商業的農業で使用され、成熟した木は２０メートル高さに成長する。果実は受粉から成熟するために５〜６ヶ月かかり、単一の種（カーネル）を有する油性、肉質の外層（果皮）を含む。オイルヤシは、複製物を産生せず、種子を播種することによって増殖する。果実のクラスタ（塊）は、４０〜５０キロの重量になり得る。
【００３６】
ヤシ（パーム）果実抽出物は、参照により本明細書に組み込まれた、Ｓａｍｂａｎｔｈａｍｕｒｔｈｉら、米国特許第７３８７８０２号に記載された方法に従って、調製することができる。このような方法の例示的な実施形態では、植物性化学物質は、ヤシ果実由来の植物液から抽出され、水溶性セグメント、または濃縮された水溶性セグメント、または植物性化学物質を含有する残留物は、植物液から分離、回収され、分離は、実質的に一つまたはそれ以上の工程において、実質的にすべての油性部分、実質的にすべての未溶解の固体、実質的に全てのコロイド粒子を除去し、そして上記の実質的に全ての分子は、分子量が例えば、41,000ダルトンである。ヤシの果実の抽出物を調製するには、幾つかのまたは実質的にすべての水溶性画分の含水量は、除去され、濃縮画分または残渣を与える。このプロセスは、油溶性部分を吸着する物質と液体を接触させ、未溶解の固体を濾過によって分離することによって、植物液からコロイド性フラクションと水溶性フラクションを得る工程を含み、本質的にコロイド状の水溶性物質を与え、その物質を１または２以上の膜ろ過によって残渣として得られる実質的に全てのコロイド粒子を含み、その分子量が、例えば、41,000ダルトン以上の実質的に全ての溶質を含む、コロイド状フラクションを与え、浸透（透過）物としてその実質的に全てが分子量41000ダルトン未満の溶質を含む、実質的に透明な水溶性フラクションを与える（すなわち、ヤシ果汁）。遠心分離はまた、植物液からコロイド粒子を除去するために用いられる。
【００３７】
ヤシ果汁の組成物が、Sambanthamurthi R、Tan YA、Sundram Kら（2011）の‘オイルヤシ植物液’：フェノール生理活性物質の新しいソース、BRIT J NUTR 106、1655〜1663頁）;この文献は、本明細書中に参考として援用される。ヤシ果汁の全固形分は炭水化物を主成分とし（65％、主にショ糖および繊維）、タンパク質（12％）、灰（20％）、油ヤシフェノール類（〜3.5％）からなる。任意の選択された抽出液についてフェノール含量は、分光光度分析により没食子酸等価（ＧＡＥ）として測定することができる（Slinkard K、Singleton VL（1977）総フェノール分析：自動と手動の方法との比較、Am J Enol Vitic 28、49-55頁）。
【００３８】
ヤシ油粉砕工程からの植物液の水溶性抽出物（「ヤシ果汁」とも呼ぶ）は、フェノール化合物（「フェノール類」）を含みます。ヤシ果汁に見出されたフェノール類としては、これらに限定されないが、桂皮酸エステル、バニリン酸、クロロゲン酸、カテキン、カフェー酸、プロトカテク酸、ゲンチジン酸、4-ヒドロキシ安息香酸、クマル酸、フェルラ酸、p-ヒドロキシ安息香酸などの安息香酸エステル誘導体、カフェオイルシキミ異性体、およびルチン水和物を含む。オイルヤシフェノール類の詳細組成が記載されている（Sambanthamurthiら（2011）参照）。
【００３９】
特定の実施形態において、組成物は、ヤシ果汁から得られる糖を含んでもよい。特定の実施形態では、糖は、スクロース、フルクトースまたはグルコースを含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、組成物は、スクロース、フルクトースおよび／またはグルコースの組み合わせを含む、糖の組合せを含むことができる。他の実施形態において、組成物は、ヤシ果汁から他の糖類を含む。
【００４０】
ヤシ果汁を含有する組成物は、任意の従来の方法で製剤化することができる。ヤシ果汁を含む処方は原液として投与することが可能であるが、それはまた、栄養果汁として、または医薬製剤として提供することができる。本発明に係る天然飲料または医薬製剤は、ヤシ果汁を含有する複合体を単独で、または1つまたは複数の薬学的に許容される担体または賦形剤、および任意に他の治療薬と一緒にその薬学的に許容される塩を含む。担体は、その受容者に有害ではなく、処方の他の成分と混合可能という意味で許容されなければならない。いくつかの実施形態では、天然のフェノール類の代わりに、組成物は、ヤシ果汁中に存在するフェノール類の合成物が含む。
【００４１】
本明細書に記載の栄養補助食品または医薬製剤は、１または２以上の他の薬剤、医薬品薬剤、担体、アジュバント（補助剤）、および／または希釈剤を含むことができる。例えば、ヤシ果汁源は、本明細書に記載の糖尿病及びその他の疾患および／または障害の治療のための他の活性剤と組み合わせてもよい。適切な経口抗糖尿病薬は、スルホニル尿素、メグリチニド、ビグアナイド、チアゾリジンジオン、及びγ−グルコシダーゼ阻害剤が含まれる。
【００４２】
経口投与のための担体または受益体の例には、コーンスターチ、乳糖、ステアリン酸マグネシウム、微結晶性セルロース、ステアリン酸、ポビドン、二塩基性リン酸カルシウムおよびデンプングリコール酸ナトリウムが含まれる。所望の投与経路に適した任意の担体が、本発明によって検討されている。
【００４３】
本発明の組成物は、固体剤形（例えば、ピル、カプセル剤、または錠剤）、半固体投薬形態または液体投薬形態を含有することができ、それぞれが所定量の活性成分を含有する。特定の実施形態において、固体剤形は、嚥下を容易にするために被覆されている。本発明の組成物は、粉末または顆粒、または溶液または懸濁液の形態であり得る。経口投与のために、微粉末または顆粒は、希釈剤、分散剤、および／または界面活性剤を含有し、および水溶液、水中懸濁液またはシロップ、乾燥状態でカプセルまたは小袋に、非水性の溶液または懸濁液に、ここで懸濁液には懸濁剤が含まれ得、または錠剤中に存在し得る結合剤および潤滑剤が含まれ得る。成分は香料、防腐剤、懸濁剤、増粘剤または乳化剤などの如くに添加し得る。
【００４４】
経口送達方法は、多くの場合、胃腸管のpHの変化、酵素への曝露、胃腸膜の不透過性などの身体によって課せられる化学的および物理的な障壁によって制限される。経口栄養補助食品または医薬製剤を投与するための本発明の方法はまた、本発明の組成物とアジュバント（補助剤）の同時投与を含む。例えば、ポリオキシエチレン・オレイルエーテルおよびn-ヘキサデシル・ポリエチレン・エーテルなどの非イオン性界面活性剤が本発明の製剤と共に人為的に腸壁の浸透性を高めるために投与され得るか、または本発明の製剤に組み込まれる。他の方法は、本発明の製剤と一緒に、酵素阻害剤の同時投与を含む。活性成分はまた、ボーラス（大きい丸薬）またはペーストとして存在するか、リポソームおよびエマルジョン内に含まれてもいてもよい。
【００４５】
直腸投与用の製剤は、坐剤または浣腸として提供することができる。
【００４６】
水溶性液体の溶液の形態で投与する場合、製剤は、ヤシ果汁と水の供給源を含有する。溶液中の任意の成分には、適切な溶媒、緩衝剤、甘味剤、抗菌防腐剤、香味剤、他の果汁、及びこれらの混合物が含まれる。製剤の１成分は、２つ以上の機能を果たすことができる。例えば、適切な緩衝剤はまた、香味剤ならびに甘味料として作用することができる。
【００４７】
本発明において使用される溶液中の適切な溶媒は、例えば、ソルビトール、グリセリン、プロピレングリコール、および水が挙げられる。 ２種以上の溶媒の混合物を、必要に応じて使用することができる。溶媒または溶媒系は、一般的に全液体製剤中の約１％から約９０重量％の量で存在する。
【００４８】
適切な緩衝剤は、例えば、クエン酸、クエン酸ナトリウム、リン酸、リン酸カリウム、および他の種々の酸および塩を含む。二つ以上の緩衝剤の混合物は、必要に応じて使用することができる。緩衝剤またはそれらの混合物は、約０．００１重量％〜約４重量％の量で一般的に存在する。
【００４９】
適切な甘味料としては、例えば、サッカリンナトリウム、スクロース、およびマンニトールが含まれる。二つ以上の甘味料の混合物を、必要に応じて使用することができる。甘味料またはそれらの混合物は、約０．００１重量％〜約７０重量％の量で一般的に存在する。
【００５０】
好適な抗菌防腐剤には、例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸ナトリウム、および塩化ベンザルコニウムが挙げられる。二つ以上の防腐剤の混合物は、必要に応じて使用することができる。防腐剤またはそれらの混合物は、約０．０００１重量％〜約２重量％の量で存在する。
【００５１】
適当な香味剤は、患者が溶液を摂取し易くするため、チェリー香味料、綿菓子味、または他の適切な香味料にして使用されてもよい。香味剤またはそれらの混合物は、約０．０００１重量％〜約５重量％の量で存在する。
【００５２】
いくつかの実施形態において、抽出物は、再構成可能な濃縮物または粉末組成物であること、例えば、水、ミルク、果汁または他の同様な液体で再構成したときに、それを必要とする被験体に抗高血糖活性を提供するために使用され得る飲料を提供する。濃縮または粉末組成物およびそれから調製された飲み物が、振とう、スープ、果物ドリンク、スナックバー、固体、すなわち、錠剤、ゲルキャップなどの形態の如き様々な形で慎重に設計された数々の製品を利用した糖尿病管理プログラムで経腸成分として特に有用であり、それらは混合され、一定期間に渡ってより魅力的に提供され、したがって、より効果的な支援を、患者、特に拡張されたケアの状況の患者に提供するように適合させることができる。
【００５３】
飲料に加えて、本発明の抽出物は、食品に使用することができる。このような抽出物は、例えば、本発明の抽出物を含む水溶性食品を使用することができる、任意の他の食品と組み合わせてもよい。本発明の化合物で強化穀物粉は、焼き菓子、シリアル、パスタやスープのような食品に使用することができる。有利なことには、このような食品は、低脂肪、低コレステロールまたは他の方法で制限された食事プランに含まれていてもよい。
【００５４】
栄養補助食品は、栄養ドリンク、ダイエット・ドリンクだけでなく、スポーツのハーブや他の強化飲料を含むことができる。精製された抽出物に加えて、栄養補助食品または食料品はまた、必須脂肪酸、ビタミンおよびミネラルを含むが、これらに限定されない他の有益な種々の成分を含有してもよい。これらの成分は、当業者に周知であるべきであるが、しかし、特に製剤または内容物に限らず、本項では、本発明の栄養補助食品の一部を形成することができる成分の簡単な説明を提供する。内容や栄養補助食品の製造について記載しているその他の開示は、例えば、米国特許に見出すことができ、例えば、米国特許第５９０２７９７；米国特許米国特許第５８３４０４８；米国特許米国特許第５８１７３５０；米国特許米国特許第５７９２４６１；米国特許第５７０７６５７号および米国特許第５６５６３１２号である。これらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる。γ−リノレン酸（ω−３）およびリノール酸（ω-６）などの必須脂肪酸は、本発明の栄養補助食品に添加し得る。必須脂肪酸は、心血管の健康状態ならびに免疫系の支援に関与している。これらの必須脂肪酸のアンバランスが、悪いコレステロール代謝につながり得る。
【００５５】
ミネラル亜鉛と銅は両方とも心臓血管の健康に関与しており、亜鉛：銅の比率は５：１の比で提供されるべきである。これら二つの鉱物間の不均衡は、銅に亜鉛の拮抗作用を引き起こす可能性がある。この効果は、心臓血管の健康をサポートするための銅を使用する身体能力を妨害し得る。銅に対して余りにも多くの亜鉛の使用は、重要な心臓保護酵素のＳＯＤ（スーパーオキシドジスムターゼ）を製造する身体能力を妨げる可能性がある。また、適切な亜鉛：銅比がＬＤＬに対するＨＤＬの適切なバランスを達成するために必要とされる。典型的なアメリカ人の食事中の亜鉛摂取量は、ＲＤＡの３３〜７５％で、そのように、亜鉛を含む栄養補助食品が期待されている。
【００５６】
セレン及びヨウ化物はまた、最も効果的に機能する割合があり、それはヨウ化物に対するセレンの比率が約２：１である。これらの鉱物は、甲状腺機能に影響を与え、したがって、甲状腺機能の変化に起因する代謝にもたらされる効果を有する。アンバランスの甲状腺機能は、食品からの栄養素の吸収不良をもたらす、体への過度のストレスが掛かり得る。これは、今度は、成長および発達を遅らせ得る。
【００５７】
ピリドキシン、葉酸およびコバラミンはまた、それらが血管障害の予防に最も効果的に機能する割合を持っている。ピリドキシン（ビタミンＢ６）の葉酸およびコバラミン（ビタミンＢ１２）の最適比はそれぞれ、約１００：４：１である。これらのビタミンは、潜在的に毒性のアミノ酸ホモシステインのレベルを低減する能力を介して心血管機能に影響を与える。この比率は、それらの食事からの心臓病の危険性における個体によって消費される、これらのビタミンの不均衡なおよび不十分なレベルを示す。
【００５８】
加えて、ビタミンＣ、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＥを提供することもできる。ビタミンＣの要件は、喫煙者で増加し、喫煙は肺がんの主要な原因である。ビタミンＢ１は、エネルギー変換において重要な役割を果たす。チアミン二リン酸は（ＴＤＰ）は、エネルギーに炭水化物を変換するのに必要な補酵素である。米国の男性は現在、総カロリーの約４５％を炭水化物から消費するので、飲食物中のビタミンＢ１の最適化が望ましい。
【００５９】
ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２とともに、葉酸補給ヘルプはホモシステインの血中濃度を調節し、そのように、本発明の栄養補助食品製剤において有用な成分になる。ビタミンＤ（カルシフェロール）は、骨格の形成のために、ミネラルの恒常性に必須である。ビタミンＤがなければ、小腸は、吸収のためにどのくらいのカルシウムが利用可能であるかに拘わらず、適度なカルシウムを吸収することができない。このように、ビタミンＤは、強い骨の構築を支援するための栄養補助食品の成分として捉えられている。
【００６０】
金属酵素マンガンスーパーオキシドジスムターゼ（Ｍｎ−ＳＯＤ）を駆動中のマンガンの役割が、他の金属酵素系（グルタミン合成酵素、アルギナーゼ、およびピルビン酸カルボキシラーゼ）における類似した役割と共に、明確に同定された。数々の酵素系はまた、それらがマンガン金属酵素ではないにもかかわらず、マンガン活性化を受けることが示された。マンガン−ＳＯＤ接続は、金属酵素のこのフォームが、細胞のミトコンドリア膜内の唯一の動作形態であると思われるので、特別に臨床的に重要であり得、したがって、身体の酸化的エネルギー生産システムの保証、およびミトコンドリアの保護とで独自の役割を果たしている。栄養補助食品中にマンガンを含むことが望ましいであろう。
【００６１】
サプリメントに含まれ得る追加の微量栄養素としては、これらに限定されないが、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、リボフラビン、ナイアシン、ナイアシンアミド、パントテン酸、ピリドキシン、コバラミン、ビオチン、イノシトール、酒石酸水素コリン、ベタイン、ビタミンＫなどのビタミン、モリブデン、クロム、カリウムなどのミネラルを含み得る。
加えて、当業者に知られている他の香料および添加剤は十分にそれらをより口に合うようにも製剤に添加することができる。例えば、製剤は、ショウガ、ボスウェリア、フルーツ香味剤、着色剤、保存剤などを含んでいてもよい。
【００６２】
固体形態で摂取する場合、本明細書に記載の栄養補助組成物はさらに、ゼラチンまたはアジュバントなどの固体担体を含んでいてもよい。液体形態で投与する場合、液体担体は、水、石油、または落花生油、鉱物油、大豆油、またはゴマ油などの動物または植物由来の油、または合成油を添加することができる。本明細書に記載の栄養補助組成物は、当業者に公知の安定化剤、防腐剤、緩衝剤、抗酸化剤、または他の添加剤を含むことができる。
【００６３】
本明細書で提供されるいくつかの実施形態において、本明細書に記載の組成物を含む、被験体においてミトコンドリア機能障害、ミトコンドリアＤＮＡの損傷および／またはゲノムＤＮＡの損傷を治療または予防するためのキットである。例えば、いくつかの実施形態において、キットは、ケイ皮酸エステル、カフェオイルシキミ異性体、および／または安息香酸エステルのようなフェノール類を含む組成物を含有する。このような組成物は、天然源（例えばヤシ果汁からの）から誘導することができ、または合成的に調製することができる。いくつかの実施形態において、組成物は、ヤシ油粉砕プロセスの植物液からの抽出物を含有する。
【００６４】
いくつかの実施形態では、キットはまた、ＮＲＴＩを含む。ＮＲＴＩの例としては、これらに限定されないが、ジドブジン（3'-アジド-3'-デオキシチミジン、またはAZT）、ジダノシン、ザルシタビン、スタブジン、ラミブジン、アバカビル、エムトリシタビン、エンテカビル、アプリシタビン（抗ＡＩＤＳヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤）、テノフォビル、アデフォビル、エファビレンツ、ネビラピン、デラビルジン、エトラビリン、およびリルピビリンを含む。いくつかの実施形態ではＮＲＴＩはＡＺＴである。いくつかの実施形態では、キットはまた、抗結核薬が含まれる。抗結核薬の例としては、これらに限定されないが、イソニアジド（ＩＮＨ）、リファンピシン（米国においてはまたリファンピンとして知られている）、ピラジナミド、エタンブトール。アミノグリコシド：例えば、アミカシン（ＡＭＫ）、カナマイシン（ＫＭ）、ポリペプチド：例えば、カプレオマイシン、バイオマイシン、エンビオマイシン;フルオロキノロン：例えば、シプロフロキサシン（ＣＩＰ）、レボフロキサシン、モキシフロキサシン（ＭＸＦ）、チオアミド：例えばエチオナミド、プロチオンアミド、サイクロセリン：例えば、クロセリンのテリジドンを含む。いくつかの実施形態では抗結核薬がＩＮＨである。
【００６５】
治療方法
本明細書において、治療又はミトコンドリア機能障害および／またはミトコンドリアＤＮＡ損傷を防止することを助けるために治療および／または予防する方法が開示されている。このような方法は、例えば加齢性ミトコンドリア疾患の治療において有用である。特定の実施形態において、この方法は、被験体（例えば、それを必要とする被験体）に、本明細書に記載の組成物（例えば、ヤシ果汁および/またはヤシ果汁中で見出された合成フェノール類を含む組成物）を投与する工程を含む。
【００６６】
いくつかの実施形態において、被験体は、ＨＩＶおよび／またはＡＩＤＳを有している。いくつかの実施形態において、被験体は、ミトコンドリア機能障害および／またはミトコンドリアＤＮＡ損傷の危険性を増加させるか、引き起こす薬剤を投与された。例えば、いくつかの実施形態において、被験体は、ＮＲＴＩを投与された。ＮＲＴＩの例としては、これらに限定されないが、ジドブジン（3'-アジド-3'-デオキシチミジン、またはＡＺＴ）、ジダノシン、ザルシタビン、スタブジン、ラミブジン、アバカビル、エムトリシタビン、エンテカビル、アプリシタビン、テノホビル、アデフォビル、エファビレンツ、ネビラピン、デラビルジン、エトラビリン、およびリルピリビンを含む。いくつかの実施形態において、被験体は、ＡＺＴを投与された。
【００６７】
いくつかの実施形態では、被験体はミトコンドリアＤＮＡの変異体を有するか、または有することが疑われている。特定の実施形態では、この方法は、被験体がミトコンドリアＤＮＡの変異体を有するかどうかを決定するステップを含む。
【００６８】
当技術分野で公知のｍｔＤＮＡ突然変異体を同定する任意の方法は、被験体が本発明の方法におけるミトコンドリアＤＮＡ突然変異体を有するか否かを決定するために使用することができる。したがって、特定の実施形態では、当該決定するステップは、核酸増幅分析を実施するか、および／または核酸配列決定分析を実施することを含む。核酸増幅法の例としては、これに限定されないが、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、線形後指数関数的-ＰＣＲ、非対称増幅ＰＣＲ法、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）、鎖置換増幅（ＳＤＡ）、転写媒介増幅（ＴＭＡ）、自己持続配列複製（３ＳＲ）、Ｑβレプリカーゼに基づく増幅、核酸配列に基づく増幅（ＮＡＳＢＡ）、修復連鎖反応（ＲＣＲ）、ブーメランＤＮＡ増幅（ＢＤＡ）および／またはローリングサークル増幅（ＲＣＡ）を含む 。核酸配列決定法としては、これらに限定されるものではないが、連鎖停止シーケンシング、リゲーションによる配列決定、合成による配列決定、ピロシーケンシング、イオン半導体シーケンシング、単一分子リアルタイムシーケンシングによる配列決定、４５４シークエンシングおよび／または希釈-‘Ｎ’・ゴーシーケンシングを含む。
【００６９】
本明細書に記載のように、本明細書に開示された線形後指数関数的-ＰＣＲ ／点灯／消灯／ＰＣＲ-パーフェクト技術は、検出および多重化、閉鎖チューブ中で分析された、ミトコンドリアゲノムにおける実質的に任意のセットのシーケンシング内のＤＮＡ損傷の量を定量、検出するために使用することができる。本技術の記述のために、この方法の詳細については、ここに参考として援用される、国際公開２０１２／０７５２３０号公報も参照されたい。一般に、この方法は1つが点灯／消灯プローブを用いたｍｔＤＮＡの比較的長いストレッチを走査することにより、変異事象をテストすることを可能にする、単一ストランド・アンプリコンを生成するために、近デジタルレベルでの線形後指数関数的-ＰＣＲを使用することを含む。簡潔に言えば、点灯／消灯プローブは、プローブの２つのタイプの組み合わせである。第一のタイプ、いわゆる点灯プローブは、蛍光体およびプローブの何れかの端部に取り付けられたクエンチャーを有している。その標的に結合すると、プローブは蛍光を発する。プローブの第二のタイプの消灯プローブは、消光剤のみを有する。‘オフプローブ’は、その標的に結合すると、クエンチャーは点灯プローブからの蛍光を消光し、対応する点灯プローブの蛍光団の次に位置する。このように、数百のヌクレオチドの標的配列長までは、長い単一の蛍光色のプローブの組で被覆することができる。各プローブは、特定の温度で結合し、その結果、各プローブがその標的を溶融して切り離しするので、各蛍光のパターンが生成される。配下のシーケンスの変化は、プローブが結合し、したがって蛍光サインを変更する温度のシフトとして表示される。このように点灯／消灯プローブは、急速に突然変異体を検出することができる。
【００７０】
本明細書に記載のいくつかの実施形態では、ミトコンドリア病を治療および／または予防する治療方法である。ミトコンドリア病としては、これらに限定されないが、ミトコンドリアミオパチー、糖尿病と難聴（ＤＡＤ）、レーバー遺伝性視神経症（ＬＨＯＮ）、リー症候群、神経障害、運動失調、網膜色素変性症並びにペトシス（ＮＡＲＰ）、赤色ぼろ線維・ミオクローヌスてんかん症候群（ＭＥＲＲＦ）、筋神経性胃腸脳障害（ＭＮＧＩＥ）、ミトコンドリアミオパチー、脳筋症、乳酸アシドーシス、脳卒中様症状（ＭＥＬＡＳ）、カーンズ・セイヤー症候群（ＫＳＳ）、慢性進行性外眼筋麻痺（ＣＰＥＯ）および／またはｍｔＤＮＡの低減を含む。
【００７１】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供されるものは、加齢関連疾患を治療および/または予防する方法である。年齢に関連する疾患としては、これらに限定されるものではないが、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、関節炎、アテローム性動脈硬化症、悪液質、癌、心肥大、心不全、心臓肥大、心臓血管疾患、白内障、大腸炎、慢性閉塞性肺疾患、認知症糖尿病、虚弱、心臓病、肝臓脂肪症、高い血中コレステロール、高血圧、ハンチントン病、高血糖、高血圧症、不妊症、炎症性腸疾患、インスリン抵抗性障害、嗜眠、メタボリック症候群、筋ジストロフィー、多発性硬化症、神経障害、腎症、肥満、骨粗しょう症、パーキンソン病、乾癬、網膜変性、サルコペニア、睡眠障害、敗血症および/または脳卒中を含む。
【００７２】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供されるものは、ＨＩＶおよび／またはＡＩＤＳの治療方法である。特定の実施形態において、この方法は、被験体（例えば、それを必要とする被験体）に本明細書に記載の組成物（例えば、ヤシ果汁および/またはヤシ果汁で発見された合成フェノール類を含む組成物）を投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、この方法はまた、被験体へのＮＲＴＩを投与することを含む。ＮＲＴＩの例としては、これらに限定されないが、ジドブジン（3'-アジド-3'-デオキシチミジン、またはＡＺＴ）、ジダノシン、ザルシタビン、スタブジン、ラミブジン、アバカビル、エムトリシタビン、エンテカビル、アプリシタビン、テノホビル、アデフォビル、エファビレンツ、ネビラピン、デラビルジン、エトラビリン、およびリルピビリンを含む。いくつかの実施形態ではＮＲＴＩはＡＺＴである。
【００７３】
本明細書中には、被験体中のゲノムＤＮＡの損傷を治療および/または防止する方法が開示されている。特定の実施形態において、この方法は、被験体（例えば、それを必要とする被験体）に、（本明細書に記載の組成物例えば、ヤシ果汁および/またはヤシ果汁で発見された合成フェノール類を含む組成物）を投与する工程を含む。
【００７４】
いくつかの実施形態では、治療される対象は、癌を持っているか、または癌の素因を有する。本明細書に記載される方法は、癌のあらゆる形態を治療するために使用され得る。癌を治療するために使用されるいくつかの実施形態において、本明細書中に提供される方法は、１つまたは複数の化学療法剤と組み合わせて本明細書に記載の組成物を投与することを含む。そのような化学療法剤の例としては、これらに限定されないが、例えば、チオテパ、およびシクロホスホアミドなどのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンなどのアルキルスルホン酸エステル; ベンゾデパ、カルボコン、メツレデパ、およびウレデパなどのアジリジン;アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホアミド、トリエチレンチオホスホアミド、およびトリメチロールメラミンを含む、エチレンイミンおよびメチルメラミン；アセトゲニン（特にブラタシン、ブラタシノン）；カンプトテシン（合成類似体のトポテカンを含む）;ブリオスタチン; カリスタチン;ＣＣ-１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンとビゼルシン合成類似体を含む）; クリプトシン（特にクリプトシン１およびクリプトシン８）；ドラスタチン;デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ-２１８９およびＣＢ１-ＴＭ１を含む）;エレウテロビン; パンクラチスタチン; サルコジクチン;スポンギスタチン;クロラムブシル、クロナファジン、クロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノバムビシン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどの窒素マスタード類;カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムナスチンなどのニトロソ尿素;エネジイン抗生物質の如き抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンγＩＩ、カリケマイシンωＩＩ）;ダイネミシン、ダイネミシンＡ含む;クロドロネートの如きビスホスホネート;エスペラミシン;並びにネオカルジノスタチン発色団および関連色素タンパク質  エネジイン抗生物質の発色団、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン 、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６-ジアゾ-５-オキソ-Ｌ-ノルロイシン、（モルホリノ - ドキソルビシン、シアノモルホリノ-ドキソルビシン、２-ピロリノ - ドキソルビシンの如きドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシン）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸の如きマイトマイシン、ノガルマイシン、オリヴォマイシン、ペプロマイシン、ポットフィロマイシン、ピューロマイシン、クエルマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシン; メトトレキサートおよび5-フルオロウラシル（５-ＦＵ）の如き抗代謝物;デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートの如き葉酸類似体;フルダラビン、６-メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンの如きプリン類似体;アンシタビン、アザシチジン、６-アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンの如きピリミジン類似体;カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンの如きアンドロゲン;アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンの如き抗副腎; フォリン酸の如き葉酸補充液;アセグラトン; アルドホスホアミド  グリコシド;アミノレブリン酸;エニルウラシル;アムサクリン; ベストロブシル;ビサントレン; エダトレキセート; デフォフアミン;デメコルチン; ジアジコン; エルフォミシン; エリプチニューム酢酸塩;エポチロン; エトグルシド;硝酸ガリウム;ヒドロキシウレア;レンチナン; ロニダイニン;メイタンシン及びメイタンシノイドのようなアンサマイトシン;ミトグアゾン;ミトキサントロン; モピダンモール; ニトラクリン;ペントスタチン; フェナメット;ピラルビシン;ロソキサントロン; ポドフィリン酸; ２-エチルヒドラジド；プロカルバジン; ＰＳＫ多糖類複合体；ラゾキサン;リゾキシン;シゾフィラン;スピロゲルマニウム;テヌアゾン酸; トリアジクオン; ２,２'，２'’- トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ-２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ、アンギジン）；ウレタン;ビンデシン;ダカルバジン;マンノムスチン;ミトブロニトール;ミトラクトール;ピポブロマン; サイトシン;アラビノシド（“アラ-Ｃ”）;シクロホスファミド;チオテパ;パクリタキセルおよびドセタキセルの如きタキソイド;クロラムブシル;ゲムシタビン; 6-チオグアニン;メルカプトプリン;メトトレキサート;シスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチンの如き白金配位錯体；ビンブラスチン;プラチナ;エトポシド（ＶＰ-１６）;イホスファミド;ミトキサントロン;ビンクリスチン;ビノレルビン;ノバントロン;テニポシド;エダトレキセート;ダウノマイシン;アミノプテリン;ゼローダ;イバンドロネート;イリノテカン（例えば、ＣＰＴ-１１）；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ ２０００;ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸のようなレチノイド;カペシタビン;および上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体。
【００７５】
本明細書に記載される方法は、任意の癌性または前癌性腫瘍を治療するために使用することができる。本明細書に記載される方法および組成物によって治療、予防、診断することができる癌は、これらに限定されないが、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、乳房、結腸、食道、胃腸管、歯肉、頭部、腎臓、肝臓、肺、鼻咽頭、頸部、卵巣、前立腺、皮膚、胃、精巣、舌、または子宮癌からの癌細胞を含む。加えて、当該癌は、これらに限定されないが、以下の如き組織学的タイプであり得る：悪性腫瘍;癌腫; 未分化癌腫;巨大スピンドル細胞癌;小細胞癌。乳頭癌;扁平上皮癌。リンパ腫;基底細胞癌； 石灰化上皮腫癌種;移行上皮癌。乳頭状移行上皮癌;腺癌; 悪性ガストリノーマ;胆管癌;肝細胞癌；肝細胞癌と胆管癌を合わせたもの；小柱腺癌;腺様嚢胞癌、腺腫性ポリープ内腺癌;腺癌、家族性大腸ポリポーシス、固形癌; 悪性カルチノイド腫瘍; 細気管支肺胞腺癌;乳頭状腺癌;色素嫌癌;癌好酸性;好酸性腺癌;好塩基球腫;明細胞腺癌;顆粒細胞癌;濾胞腺癌;乳頭および濾胞腺癌;非カプセル化硬化性癌;副腎皮質癌、子宮内膜癌;皮膚付属器癌、アポクリン腺癌;皮脂腺癌;耳垢腺癌;粘表皮癌;嚢胞腺癌;乳頭状嚢胞腺癌;乳頭状漿液性嚢胞腺癌;粘液性嚢胞腺癌;粘液腺癌;印環細胞癌;浸潤性導管癌;髄様癌;小葉癌;炎症性癌;パジェット病、乳房。腺房細胞癌;腺扁平上皮癌;扁平上皮化生を伴なう腺癌;胸腺腫、悪性;悪性卵巣間質腫瘍; 悪性卵胞膜細胞腫; 悪性顆粒膜細胞腫瘍; 悪性芽腫;セルトリ細胞癌; 悪性ライディッヒ細胞腫瘍;悪性脂質細胞腫瘍; 悪性傍神経節腫;エクストラ乳腺傍神経節腫、悪性;褐色細胞腫; 血管球血管肉腫;悪性黒色腫;メラニン欠乏性黒色腫;表在拡大型黒色腫；巨大色素性母斑内有害黒色腫;類上皮細胞黒色腫;青色母斑、悪性;肉腫;線維肉腫;線維性組織球腫、悪性;粘液肉腫;脂肪肉腫;平滑筋肉腫;横紋筋肉腫;胎児性横紋筋肉腫;歯槽横紋筋肉腫;間質肉腫;混合腫瘍、悪性;ミュラー管混合腫瘍;腎芽;肝芽腫;癌肉腫;間葉、悪性;ブレンナー腫瘍、悪性;腫瘍が、悪性葉状。滑膜肉腫;中皮腫、悪性;未分化胚細胞腫;胚性癌腫;奇形腫、悪性;卵巣甲状腺腫、悪性;絨毛癌;中腎腫、悪性;血管肉腫;血管内皮腫、悪性;カポジ肉腫;血管周囲細胞腫、悪性;リンパ管肉腫;骨肉腫;傍骨性骨肉腫;軟骨肉腫;軟骨芽細胞腫、悪性;間葉系軟骨肉腫;骨の巨細胞腫;ユーイング肉腫。歯原性腫瘍、悪性;エナメル上皮肉腫;エナメル上皮腫、悪性;エナメル上皮線維肉腫;松果体腫、悪性;脊索腫;神経膠腫、悪性;上衣腫;星細胞腫;原形質星細胞腫;線維性星細胞腫;星状芽;神経膠芽腫;乏突起膠腫; 乏突起神経膠芽細胞腫;原始神経外胚葉;小脳肉腫;神経節;神経芽細胞腫;網膜芽細胞腫;嗅覚神経原性腫瘍;髄膜腫、悪性;神経線維肉腫;神経鞘腫、悪性;顆粒細胞腫瘍、悪性;悪性リンパ腫;ホジキン病;ホジキンリンパ腫; 側肉芽腫;悪性リンパ腫、小リンパ球;悪性リンパ腫、大細胞、びまん；悪性リンパ腫、濾胞。菌状息肉腫;他の指定された非ホジキンリンパ腫;悪性組織球症;多発性骨髄腫;肥満細胞肉腫。小腸疾患の免疫増殖;白血病;リンパ性白血病;形質細胞性白血病;赤白血病;リンパ細胞白血病;骨髄性白血病;好塩基球性白血病;好酸球性白血病;単球性白血病;マスト細胞白血病;巨核芽球性白血病;骨髄性肉腫;および有毛細胞白血病。
【００７６】
いくつかの実施形態において、治療されるべき被験体は、ゲノムＤＮＡの損傷の可能性を増大させる条件にさらされていた。例えば、いくつかの実施形態において、被験体は、電離放射線に曝された（例えば、被験体が受けた放射線療法）か、および／または被験体が変異原レベルの上昇にさらされたか、それを消費したかであった。そのような変異原の例としては、これらに限定されるものではないが、アセトアルデヒド、アフラトキシン、4-アミノビフェニル、ビンロウジュナット、アリストロキン酸、ヒ素、アスベスト、アザチオプリン、ベンゼン、ベンジジン、ベンゾ[α]ピレン、ベリリウム、キンマクウィド、ビス（クロロメチル）エーテル、ブスルファン、1,3-ブタジエン、カドミウム、クロラムブシル、塩化ナファジン、クロム（ＶＩ）化合物、肝吸虫、シクロホスファミド、シクロスポリン、ジエチルスチルベストロール、エリオナイト、エチレンオキシド、エトポシド、ホルムアルデヒド、イオン化放射線、メルファラン、メトキサレン、４，４’-メチレンビス（クロロアニリン）、ＭＯＰＰ、2-ナフチルアミン、中性子線、ニッケル化合物、Ｎ'-ニトロソノルニコチン、4-（Ｎ−ニトロソメチルアミノ）-１-（３-ピリジル）-1-ブタノン、３,４-、 ５,３'、４'-ペンタクロロビフェニル、２，３，４，７，８-ペンタクロロジベンゾフラン、フェナセチン、リン３２、プルトニウム、放射性沃素、放射性核種、ラジウム２２４、ラジウム２２６、ラジウム２２８、ラドン２２２、セムスチン、シェールオイル、硫黄マスタード、２，３，７，８-テトラクロロパラ - ジオキシン、チオテパ、トリウム２３２、オルトトルイジン、トレオスルファンおよび塩化ビニルである。
【００７７】
いくつかの実施形態では、被験体はゲノムＤＮＡの変異を有するか、またはそれを有することが疑われている。特定の実施形態では、この方法は、被験体が、ゲノムＤＮＡの変異体を有するかどうかを決定するステップを含む。
【００７８】
当技術分野で公知のゲノムＤＮＡの変異体を同定する任意の方法は、被験体が、ミトコンドリアＤＮＡの変異体を有するか否かを決定するために使用することができる。したがって、特定の実施形態では、前記決定する工程は、核酸増幅分析を実施する、および/または核酸配列決定分析を実行することを含む。いくつかの実施形態で決定するステップは、線形後指数関数的-ＰＣＲ／点灯／消灯／ＰＣＲ-パーフェクト技術を使用して行われる。核酸増幅法の例としては、これらに限定されないが、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、線形後指数関数的-ＰＣＲ、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）、鎖置換増幅（ＳＤＡ）、転写媒介増幅（ＴＭA）、自己持続配列複製（３ＳＲ）、Ｑβレプリカーゼに基づく増幅、核酸配列に基づく増幅（ＮＡＳＢＡ）、修復連鎖反応（ＲＣＲ）、ブーメランＤＮＡ増幅（ＢＤＡ）および／またはローリングサークル増幅（ＲＣＡ）を含む。核酸配列決定法としては、これらに限定されるものではないが、連鎖停止配列決定（シーケンシング）、連結による配列決定、合成による配列決定、ピロシーケンシング、イオン半導体シークエンシング、単一分子リアルタイムによって配列決定、４５４シーケンシングおよび／または希釈-‘Ｎ’・ゴーシーケンシングを含む。
【００７９】
上述したように、特定の実施形態において、本明細書中に記載する方法は、被験体への第２の治療剤と組み合わせて本明細書に記載の組成物を投与することを含む。接続（または連結）治療は、その後の薬剤が投与される場合、第一の薬剤の投与の治療効果が完全に消えていないような方法での活性化合物の逐次、同時、および分離、または共投与が含まれる。特定の実施形態では、第二の薬剤は、第一の薬剤と共製剤化され得るか、または別個の栄養補助食品または医薬品組成物に処方することができる。
【００８０】
本発明の医薬品および栄養補助食品組成物中の活性成分の実際の用量レベルは、患者に対して毒性がなく、投与の特定の患者、組成物、およびモードに対する所望の治療応答を達成するのに有効な活性成分の量を得るように、変化させることができる。
【００８１】
選択される用量レベルは、治療期間、他に採用されて使用される特定の薬剤の活性、投与経路、投与時間、排泄もしくは特定の化合物の代謝速度、採用される特定の化合物、年齢、性別、体重、状態、一般的な健康および以前の病歴と組み合わせて使用される他の薬剤、化合物および／または材料など、医学分野で周知の同様の因子を含む種々の因子に依存する。
【００８２】
当業者の当該技術分野の通常の技術を有する医師又は獣医師が容易に、必要な栄養補助食品または薬学的組成物の有効量を決定し、処方することができる。例えば、医師または獣医師は、所望の効果を得るために必要とされるよりも低いレベルで所望の効果が得られるまで栄養補助食品または薬学的組成物において用いられる本発明の化合物の投与量を処方および／または投与し、その後投与量を徐々に増加させることができる。
【００８３】
一般的に現在記載される本発明は、以下の実施例を参照すると、より容易に理解されるが、それは単に特定の態様及び本発明の実施形態の説明の目的で含まれるに過ぎず、本発明を限定するものではない。
【実施例】
【００８４】
実施例１：ヤシ果汁は、ＡＺＴによって引き起こされるミトコンドリア変異体数を減少させる。
３０日試験がＨｅｐＧ２肝癌細胞株（ＡＴＣＣ、マナッサス、バージニア州）を用いて行われた。実験は、未処理、ＡＺＴ処理、ＰＦＪ処理、およびＡＺＴおよびＰＦＪ-処理した培養物の分析が含まれている。各条件を三回試験した。
【００８５】
細胞を、イーグル最小必須培地（ＡＴＣＣ、マナッサス、バージニア州）中で増殖させた。培地は、１０％ウシ胎児血清（ＢｉｏＷｅｓｔ）および５０単位／ｍｌのペニシリンＧ、５０単位／ｍｌのストレプトマイシン、および０．２５μｇのアンホテリシンＢ（ＨｙＣｌｏｎｅ社抗生物質／抗真菌ソリューション１００Ｘ）を含む抗生物質で補充された。処理された複製は、７μＭＡＺＴ（Ｓｉｇｍａ、ミズーリ州セントルイス）、２５μｇの／ｍＬのＰＦＪ、または７μＭＡＺＴプラスは２５μｇ／ｍＬのＰＦＪを与えられた。細胞は、７５立方センチメートル３７°Ｃでの組織培養フラスコ（シグマ、セントルイス、ミズーリ州）と５％のＣＯ２で増殖させた。培地は一日おきに変更された。細胞は、ＡＴＣＣの指示に従ってトリプシン処理により継代された。
【００８６】
ＨｅｐＧ２細胞からのＤＮＡを、１００μｇ／ｍｌのプロテイナーゼＫ、１０ｍＭのトリス-Ｃｌ  ｐＨが８．３を含む溶解緩衝液１４μｌの量、および５μＭ  ＳＤＳ（ナトリウムドデシル硫酸）に（平均１０００個の細胞上の）細胞懸濁液の１μｌを注入することによって抽出し、５０℃で２時間、続いて９５℃で１５分間加熱した。次いで、試料を‐２０℃で保存した。
【００８７】
突然変異負荷の分析のために、ミトコンドリア・ゲノムの三つの領域：シトクロム  ｃ  オキシダーゼ  サブユニット２（ＣＯ２）、ＮＡＤＨデヒドロゲナーゼ、サブユニット１（ＮＤ１）、およびＤループの超可変２（ＨＶ２）領域を標的にした、三対の線形後指数関数的−ＰＣＲプライマーからなる多重線形後指数関数的-ＰＣＲ分析を用いて、９６ウェルプレート中にＤＮＡサンプルを近デジタルレベル以下（５−４コピー）に希釈して、繰り返して増幅した。これらの領域の全てがヒトの疾患に関連した配列変化を有することが知られている。
【００８８】
得られた単鎖のアンプリコンは、長さが５８６塩基対（ＣＯ２）、６０４塩基対（ＮＤ１）、５８８塩基対（ＨＶ２）であった。増幅反応の終わりに、これらの単鎖の製品が、増幅反応混合物（ＣＯ２、カルレッド；各アンプリコンに異なる色の６１０；ＨＶ２、クエーサー６７０、ＮＤ１、カルオレンジ５６０；蛍光体、バイオサーチ・テクノロジーズ、Ｎｏｖａｔｏ、カリフォルニア州から入手した）中に含まれた点灯／消灯プローブのセットを使用して、突然変異のために同時にスキャンされた。プローブはプライマーアニール温度以下の温度で交雑し、増幅を妨害しなかった。各点灯プローブは、クエンチャーと蛍光体で標識し、隣接消灯プローブの不在下でその標的配列に交雑したときに蛍光シグナルを生成した。各消灯プローブがクエンチャーのみで標識され、より低い温度で隣接する標的配列に交雑したときに、そのペアの点灯プローブからの信号を消すように設計された。その目標アンプリコンの長さに沿って交雑された点灯／消灯プローブの完全なセットの融解は、各アンプリコンの配列についてユニークだった蛍光サインを生成した。バルクサンプル（１０００目標以上）から生成される基準通常蛍光サインからの如何なる変化も、変異体の存在を示した。変異体は、目標配列中何処かにおける、単一または複数のヌクレオチドの変化、欠失、または挿入であり得る。通常の基準サインに対する変化の蛍光色と温度が、その存在および変異の大よその位置を示した。
反応成分および条件は以下の如くであった：
【００８９】
限定プライマー： ５’−ＡＡＡＧＣＧＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＣＴＧＧＧＴＡＧＧＡＴ    （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）
過剰プライマー: ５‘−ＡＣＴＴＣＡＧＧＧＴＣＡＴＡＡＡＧＣＣＴＡＡＡＴＡＧＣ    （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）
【００９０】
ＣＯ２プライマー
限定プライマー：５‘−ＡＡＴＡＧＡＧＧＧＧＧＴＡＧＡＧＧＧＧＧＴＧＣＴＡＴＡＧＧＧＴ      （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）
過剰プライマー：  ５‘−ＴＣＣＴＴＡＴＣＴＧＣＴＴＣＣＴＡＧＴＣＣＴＧＴＡＴＧＣ    （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）
【００９１】
ＮＤ１プライマー
限定プライマー：５‘−  ＡＡＣＡＴＡＡＧＡＡＣＡＧＧＧＡＧＧＴＴＡＧＡＡＧＴＡＧＧＧＴＣＴＴＧＧＴ    （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５)
過剰プライマー：５‘−  ＣＧＣＣＣＣＧＡＣＣＴＴＡＧＣＴＣＴ    （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）
【００９２】
標的：ＨＶ２
５‘ＧＣＴＣＧＣＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＧＡＣＣＣＡＴＣＣＴＡＣＣＣＧＣＣＣＣＣＡＡＣＡＴＡＡＣＴＡＣＴＣＴＡＡＴＣＡＴＣＡＴＡＣＣＣＴＣＡＣＣＣＴＣＣＣＣＴＴＴＴＡＴＴＡＣＡＣＡＡＴＣＡＡＣＣＣＣＣＣＡＣＴＧＡＣＡＡＴＴＴＴＣＡＣＧＴＡＴＧＧＣＧＧＴＴＴＴＣＴＡＴＴＴＴＡＡＡＣＴＴＴＡＧＡＣＣＡＡＴＣＣＧＡＣＣＡＣＡＡＴＣＣＣＡＡＧＡＡＡＣＡＡＡＡＡＣＣＣＣＡＡＡＣＣＧＴＣＴＣＴＡＣＡＣＡＡＡＴＴＣＡＣＧＡＣＡＣＣＧＧＴＣＴＴＣＧＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＣＣＣＡＡＡＣＣＡＣＣＴＴＴＡＡＡＡＡＡＣＡＡＴＡＣＴＡＣＡＧＡＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＡＣＣＧＡＣＡＣＧＴＣＴＧＴＡＡＧＴＴＡＡＣＡＡＴＡＡＴＡＡＴＡＣＡＧＧＡＴＧＴＴＣＧＴＡＡＴＴＡＡＴＴＡＡＴＴＧＴＧＴＧＡＡＡＴＣＡＴＴＣＡＴＡＣＡＡＧＣＧＧＡＣＡＴＴＡＴＡＡＣＴＴＧＣＡＴＣＣＡＣＧＣＴＡＴＴＴＡＴＴＡＴＣＣＴＡＣＴＣＣＧＴＣＣＴＴＡＧＴＴＴＣＴＧＴＣＴＡＴＧＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＣＣＡＣＧＡＧＧＣＣＧＡＧＧＴＣＧＣＡＧＡＧＣＧＴＴＡＣＧＡＴＡＧＣＧＣＡＣＧＴＡＴＧＧＧＧＧＧＴＣＴＧＣＴＴＴＴＡＴＧＧＴＴＴＡＣＧＴＡＣＣＴＣＴＣＧＡＧＧＧＣＡＣＴＣＡＣＣＡＡＴＴＡＴＣＣＣＡＣＴＡＴＣＴＧＧＡＣＡＣＴＡＧＧＴＡＧＣＡＣＴＡＣＡＧＡＡＴＡＡＡＴＴＣＣＣＣＴＴＧＣＡＣＡＣＣＣＧＡＴＡＡＡＴＣＣＧＡＡＡＴＡＣＴＧＧＧＡＣＴＴＣＡ  （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）
【００９３】
標的：ＣＯ２
５‘ＣＣＣＧＡＧＡＴＣＴＣＣＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＣＡＣＧＡＴＡＴＣＣＣＡＴＴＴＡＴＧＣＣＣＧＧＧＡＴＡＡＡＧＴＴＴＣＴＡＡＡＡＡＴＣＣＣＣＴＴＡＡＴＴＡＡＧＡＴＣＣＴＧＣＴＡＣＣＣＧＴＡＣＴＴＴＧＡＣＡＣＣＡＡＡＣＧＡＧＧＴＧＴＣＴＡＡＡＧＴＣＴＣＧＴＡＡＣＴＧＧＣＡＴＣＡＴＡＴＧＧＧＧＧＣＣＡＧＣＡＣＡＴＣＧＣＣＡＣＴＴＴＣＡＣＣＡＡＡＣＣＡＡＡＴＣＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＴＡＡＣＧＴＡＧＡＣＡＡＡＡＡＴＴＣＧＧＡＴＴＡＣＡＣＣＣＣＴＧＴＣＧＡＧＴＡＣＴＣＡＣＧＴＴＣＴＧＣＡＧＡＡＣＡＣＴＡＣＡＴＴＡＡＴＡＡＴＡＴＧＣＴＴＡＣＣＣＣＣＧＡＡＧＴＴＡＧＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＧＡＧＣＴＡＡＣＡＧＴＴＧＣＡＧＴＴＣＣＴＣＡＧＣＧＴＣＣＡＧＣＧＧＡＣＣＡＡＧＡＴＣＣＴＴＡＴＴＡＣＣＣＣＣＴＴＣＡＴＡＣＡＴＣＣＴＣＡＡＣＴＴＣＴＡＡＴＣＡＧＧＣＧＧＣＡＴＣＡＧＣＣＡＣＡＴＧＡＧＣＡＴＣＣＡＡＧＴＣＡＴＧＧＴＡＡＣＣＡＣＣＧＧＴＴＡＡＣＴＡＡＡＣＴＡＣＣＡＴＴＣＣＣＴＣＣＣＴＡＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＣＡＧＡＣＡＡＴＡＣＡＴＴＴＣＣＴＡＣＧＣＡＴＣＣＣＴＡＣＣＣＴＣＣＣＧＣＴＡＣＴＣＣＴＧＡＴＣＣＴＡＣＴＡＣＣＧＣＣＣＧＴＣＣＴＡＴＣＡＡＧＴＣＴＧＣＣＡＡＡＧＡＴＡＡＡＧＧＡＣＴＣＧＣＡＧＡＣＴＣＴＡＣＡＡＴＣＡＴＡＡＴＣＡＡＴＣＡＡＡＡＣＡＡＣＡＣＴＣＡＣＡＡＴＣＣＴＴＴＴＣＣＣＧＴＡＴＧＴＣＣＴＧＡＴＣＣＴＴＣＧＴＣＴＡＴＴＣＣＴ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）
【００９４】
標的：ＮＤ１
５’ＡＡＧＴＡＴＴＣＴＴＧＴＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＴＴＣＡＴＣＣＣＡＧＡＡＣＣＡＣＴＧＴＴＴＴＡＴＡＣＡＡＣＡＣＡＴＣＴＣＡＡＧＴＣＣＣＣＴＣＴＣＡＣＧＣＡＧＴＡＴＡＣＡＡＣＡＡＧＧＡＴＣＣＴＴＣＴＡＡＣＡＴＣＡＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣＡＡＡＴＡＡＴＡＴＴＡＴＴＡＣＡＡＡＣＡＣＡＴＡＡＧＣＣＧＡＴＡＣＴＴＣＴＴＡＴＣＣＣＧＣＴＴＣＣＣＣＧＧＡＣＧＣＣＧＣＡＴＡＡＧＣＴＡＣＡＡＣＴＴＣＧＧＡＣＴＣＴＧＡＴＣＡＡＧＣＣＴＧＡＧＧＧＧＡＡＧＣＣＧＴＴＣＣＡＧＣＴＴＣＣＣＣＣＡＡＧＣＣＡＡＣＣＡＧＡＧＡＣＧＡＴＣＡＣＡＣＣＴＣＴＡＴＴＴＡＧＴＡＴＡＡＴＡＣＣＧＧＴＴＣＣＣＡＧＴＡＣＴＡＣＣＧＴＣＣＴＣＡＴＴＡＧＴＣＴＣＣＡＣＡＡＧＡＡＣＡＣＡＡＣＡＣＴＡＴＴＣＣＣＡＣＣＴＣＴＣＣＡＡＴＴＴＣＣＴＣＧＧＴＧＡＡＴＡＡＴＣＡＴＴＡＣＡＡＣＴＡＴＣＡＴＣＴＴＡＣＴＡＣＣＧＡＴＣＣＣＡＣＴＧＡＡＧＴＡＴＡＣＴＣＴＡＡＣＡＡＡＣＣＣＧＡＴＧＡＣＧＡＧＣＧＴＣＡＣＧＣＧＧＣＴＡＧＴＣＣＣＧＣＡＴＣＡＡＡＣＴＣＡＡＡＣＴＡＣＧＡＧＴＧＧＧＡＣＴＡＧＴＣＴＣＣＴＡＡＣＴＣＡＴＴＴＧＣＣＧＡＴＣＣＧＡＴＣＴＣＣＡＣＣＧＡＴＣＴＴＡＴＴＴＡＴＣＣＴＣＣＧＧＡＴＣＣＡＡＣＴＣＣＡＡＣＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＡＣＣＣＡＴＡＣＣＣＣＴＣＣＣＣＣＣＡＡＧＴＡＴＣＡＴＣＴＴＣＴＣＧＣＴＡＣＣＡＣＴＣＴＣＧＡＴＴＣＣＡＧＣＣＣＣＧＣ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）
【００９５】
ＨＶ２ プローブ
オン１：
５’-クェーサー６７０-ＴＧＧＴＴＡＧＧＧＴＴＣＴＴＴＡＴＴＴＴＧＧＧＧＴＴＣＡ−ＢＨＱ２ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）
オフ１：
５’−ＡＡＴＧＴＧＡＡＡＴＣＴＧＣＴＴＧＧＧＣＴＧＧＴ−ＢＨＱ２ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）
オン２：
５‘−ＢＨＱ２−ＡＡＴＧＧＣＡＧＡＧＡＴＧＴＣＴＴＴＡＡＧＴＧＣＴＧＴＴＴ−クェーサー  ６７０    （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）
オフ２：
５‘−ＢＨＱ２−ＧＧＣＴＡＧＧＡＧＴＴＧＧＧＧＡＧＧＧＣＧＧＧＴＴ−Ｃ３ （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３）
オン ３：
５‘−ＢＨＱ２−ＡＡＡＴＧＴＡＡＴＣＧＣＧＴＴＣＡＴＡＴＣＡＣＣＣＡＧＴＴ−クェーサー  ６７０    （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）
オフ３：
５‘−ＢＨＱ２−ＡＣＧＡＧＡＧＴＡＣＣＣＡＡＣＧＣＡＴＧＧＡＧＡＧ−Ｃ３   （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５）
オン ４：
５‘−クェーサー  ６７０−ＴＡＡＴＴＧＡＡＣＡＴＡＧＧＴＡＣＧＡＴＡＡＡＴＡＡＴＴＡ−ＢＨＱ２    （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）
オフ４：
５‘−ＴＴＴＡＧＴＡＡＡＴＧＴＧＴＴＣＡＣＣＴＧＴＡＡＴ−ＢＨＱ２   （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７）
オン５：
５‘−クェーサー  ６７０−ＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＡＡＧＴＧＡＣＴＡＴＧＣＧＧＡＣＴＴ−ＢＨＱ２    （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８）
オフ５：
５‘−ＴＧＧＧＧＧＡＡＧＴＴＴＴＴＴＣＴＴＡＴＴＡＴＧＴ−ＢＨＱ２   （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９）
【００９６】
ＣＯ２プローブ
オン１：
５‘−ＢＨＱ２−ＡＡＡＣＴＡＣＴＣＧＡＴＴＡＴＣＡＡＣＧＴＣＡＡＧＧＡＴＴ−Ｃａｌ  Ｒｅｄ  ５９０  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０）
オフ１：
５‘−ＢＨＱ２−ＧＴＣＧＣＡＧＧＡＣＧＣＣＴＡＧＴＴＴＴＡＧＧＡＡ−Ｃ３ （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１）
オン２：
５‘−ＢＨＱ２−ＡＡＡＡＴＧＧＧＧＧＡＡＧＴＴＴＧＴＡＴＧＡＧＴＴＧＡＴＴ−Ｃａｌ  Ｒｅｄ  ５９０    （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２）
オフ２：
５‘−ＢＨＱ２−ＡＧＡＴＡＡＧＴＴＣＧＣＴＧＴＡＴＴＣＧＧＴＧＴ−Ｃ３ （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３）
オン３：
５‘−Ｃａｌ  Ｒｅｄ  ５９０−ＡＡＡＣＧＡＴＴＧＧＧＧＡＣＴＴＴＡＡＴＴＧＧＧＡＧＴＴＴ−ＢＨＱ２ （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４）
オフ３：
５‘−ＡＧＡＣＧＴＣＴＴＡＴＧＴＴＧＴＡＡＴＴＡＴ−ＢＨＱ２ （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５）
オン ４：
５‘−Ｃａｌ  Ｒｅｄ  ５９０−ＴＴＴＧＴＡＡＡＧＡＡＴＧＣＧＴＡＧＡＧＡＴＡＧＧＡＧＡＡ−ＢＨＱ２  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６）
オフ４：
５‘−ＧＡＧＧＣＡＴＴＧＴＴＣＡＣＧＴＣＧＴＴＴＧＴＴＡ−ＢＨＱ２ （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７）
オン５ａ：
５‘−ＢＨＱ２−ＴＴＴＴＴＡＴＡＣＧＴＡＣＧＧＣＡＡＴＴＡＣＡＴＣＴＧＡＡ−Ｃａｌ  Ｒｅｄ  ５９０   （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８）
オフ５ａ：
５‘−ＢＨＱ２−ＴＴＴＴＴＡＡＡＴＴＴＡＡＴＡＴＧＧＧＧＡＴＡＧＣ−Ｃ３ （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９）
オン５ｂ：
５‘−ＢＨＱ２−ＡＧＴＧＡＣＣＡＴＡＡＴＡＴＡＣＣＴＣＣＧＧＣＴ−Ｃａｌ  Ｒｅｄ  ５９０  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０）
オフ５ｂ：
５‘−ＢＨＱ２−ＴＣＧＴＡＴＡＧＴＧＧＴＣＡＡＴＧＴＧＧＴＡＴＧＧ−Ｃ３  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１）
【００９７】
ＮＤ１プローブ
オン１：
５‘−Ｃａｌ  Ｏｒａｎｇｅ  ５６０−ＡＡＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＴＴＴＴＴＧＣＴＧＧＴＧＴＧＧＴＴ−ＢＨＱ１ （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２）
オフ１：
５‘−ＴＴＣＧＧＣＡＡＴＧＴＣＧＡＧＧＧＧＧ−ＢＨＱ１  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３）
オン２：
５‘−ＢＨＱ１−ＡＡＴＡＴＧＡＡＧＡＡＴＡＧＡＧＣＧＡＡＧＡＧＧＣＣＴＴＴ−Ｃａｌ  オレンジ  ５６０ （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４）
オフ２：
５‘−ＢＨＱ１−ＧＣＧＧＣＣＴＡＴＴＣＣＡＴＧＴＴＧＡＣＧＣＣＴＧ−Ｃ３  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５）
オン３：
５‘−ＢＨＱ１−ＴＴＡＡＧＧＴＴＧＴＡＧＴＧＡＴＧＧＧＧＧＴＧＴＴＴＡＡＡ−Ｃａｌ  Ｏｒａｎｇｅ  ５６０  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６）
オフ３：
５‘−ＢＨＱ１−ＴＴＡＴＡＡＴＡＡＴＣＴＴＴＧＴＧＴＴＴＴＣＧＧＣ−Ｃ３  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７）
オン４：
５‘−ＢＨＱ１−ＡＡＴＴＧＡＴＣＡＡＧＧＧＧＴＴＴＧＧＴＡＴＡＧＧＧＡＴＴ−Ｃａｌ  オレンジ  ５６０  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８）
オフ４：
５‘−ＢＨＱ１−ＧＧＧＡＧＧＴＴＴＡＴＡＧＴＡＡＡＡＧＡＧＡＧＡＴ−Ｃ３ （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９）
オン５：
５‘−ＢＨＱ１−ＴＴＡＧＡＴＡＡＡＣＣＡＴＡＧＴＡＴＧＴＣＣＧＡＧＧＧＡＡ−Ｃａｌ  オレンジ  ５６０ （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０）
オフ５：
５‘−ＢＨＱ１−ＴＣＡＴＧＡＴＴＧＣＡＧＴＡＧＴＧＧＴＡＡＧＡＧＧ−Ｃ３ （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１）
【００９８】
ブラックホールクエンチャー１と２がＢＨＱ１及びＢＨＱ２（バイオサーチ・テクノロジーズ、Ｎｏｖａｔ，カリフォルニア州）で示されているのに対して、３つの炭素リンカーはＣ３で示されている。下線を引いた塩基は、改訂されたケンブリッジ参照配列（ｒＣＲＳ）に一致していないものである。
【００９９】
線形後指数関数的−ＰＣＲ増幅は、１×ＰＣＲ緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カールズバッド、カリフォルニア州）、３ｍＭのＭｇＣｌ２、２５０ｎＭのｄＮＴＰ、５０ｎＭの限定プライマー、１０００ｎＭの過剰プライマー（ＨＶ２）、１００ｎＭの制限プライマー、１０００ｎＭの過剰プライマー（ＣＯ２）、５０ｎＭの制限プライマー、１５００ｎＭの過剰プライマー（ＮＤ１）、２．５ユニットのプラチナＴａｑ  ＤＮＡポリメラーゼ（Invitrogen社、カールズバッド、カリフォルニア州）、１００ｎＭの点灯プローブ、および３００ｎＭの消灯プローブからなる２５μｌの容積中で行った。コントロール反応は、１０００ミトコンドリアＤＮＡゲノムを含む１０〜２０複製バルクサンプルから構成された。増幅反応のための熱プロファイルは以下の如くであった：１サイクル９５℃／３分、バルク分析のための９５℃／５秒-６５℃／４５秒-７２℃／９０秒、および低コピー分析のための７５サイクル、続いて７５℃の単一サイクル、１０分間、２５℃の単一サイクル、１０分間。反応生成物は、溶融プロファイル分析を使用して特性化した。プローブ信号の蛍光取得は２５℃で始まる溶融状態で、４５秒間隔で１℃刻みで８０℃まで各温度で行った。蛍光サインは、バックグラウンド信号の減算またはデータ正規化をすることなく、温度の関数としての温度に対する溶融分析からの生の蛍光シグナルの負の一次導関数をプロットすることにより作成された。変異は、参照としてもたらされた複製バルク試料からの平均の蛍光サイン（サイン）の形状に対して、試験サンプルからの蛍光サインの形状を比較することによって同定された。
【０１００】
図１Ａ〜１Ｃは、それぞれ、３つのターゲット、ＨＶ２、ＣＯ２、およびＮＤ１のそれぞれについて、ミトコンドリアＤＮＡの突然変異を示す蛍光サイン変化を示す。黒線は、参照配列を示し、灰色の線（点線）は、シフトサインを表す。矢印は、変異の違いや証拠の領域を示す。エラーバーは、平均の対照からの３つの標準偏差を表す。
【０１０１】
図２は、各ミトコンドリアターゲットの処置（無処置、ＡＺＴ処置、ＰＦＪ処置、またはＡＺＴおよびＰＦＪ処置の両方）に基づいて変異を示す蛍光サイン変化の数を示している。小文字は、処置間で有意差（ｐ＜０．０５）を示す。ブランクのバーは未治療対照を示すのに対して、黒いバー（網掛け）はＡＺＴ処置を、灰色のバー（左上から右下への逆向き斜線）はＰＦＪ治処置療を、斜線（右上から左下向き）のバーは、ＡＺＴおよびＰＦＪ処置を示す。
【０１０２】
実施例２:ＰＦＪはＩＮＨによって引き起こされるミトコンドリア変異体数を減少させる。
肝癌細胞株（ＨｅｐＧ２細胞、ＡＴＣＣ、マナッサス、ヴァージニア州）は、８８μＭのＩＮＨ（Ｓｉｇｍａ、セントルイス、ミズーリ州）または８８μＭのＩＮＨ＋５０μｇ／ｍｌの没食子酸当量（ＧＡＥ）ＰＦＪの存在下で３０日間増殖させた。これらの添加剤を含まない培地は、非処理対照として用いられた。細胞を、イーグル最小必須培地（ＡＴＣＣ、マナッサス、ヴァージニア州）中で増殖させた。培地は、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１０％ウシ胎児血清（ＢｉｏＷｅｓｔ）、５０単位／ｍｌのペニシリンＧ、５０単位／ｍｌのストレプトマイシン、および３７oＣにおける６ウェルプレート中の０．２５μｇのアムホテリシンＢ（ハイクローン抗生物質／抗真菌ソリューション１００Ｘ）および５％ＣＯ２で補充した。培地および添加剤は、一日おきに補充した。細胞を、１×１０５細胞／ｍｌの初期密度で、ＡＴＣＣの指示書に従って継代した。
【０１０３】
培養期間の終わりに、各ＨｅｐＧ２細胞培養物を４℃で１５分間、１００×ｇで遠心分離し、１×１０３細胞／ｍｌの濃度で、ダルベッコのリン酸緩衝溶液（Ｓｉｇｍａ、セントルイス、ミズーリ州）中に再懸濁し、トリプシン処理した。これらの培養物からのＤＮＡを、１００μｇ／ｍｌのプロテイナーゼＫ、１０ｍＭのトリス-Ｃｌ ｐＨが８．３を含む溶解緩衝液３２．５μｌの容積中、および５μＭのＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）へ注入し、その後、加熱中の細胞懸濁液の５μｌを添加し５０℃で２時間、その後９５℃で１５分間加熱することによって抽出した。次いで、試料を‐２０℃で保存した。
【０１０４】
ＤＮＡサンプルは、近デジタル（５-４コピー）レベル以下に希釈して、実施例１に記載されたが如く、多重線形後指数関数的-ＰＣＲ／点灯−消灯分析を用いて、９６ウェルプレート中で反復して突然変異を示す蛍光サインの変更のためにデータベース検索された。
【０１０５】
図３は、ミトコンドリアのターゲットのそれぞれについて（中間灰色バー、無処置；濃い灰色のバー、ＩＮＨ処理；ライトグレーのバー、ＩＮＨとＰＦＪ処理）、治療（中間灰色バー、無処置；濃い灰色バー、ＩＮＨ処置；ライトグレーのバー、ＩＮＨとＰＦＪ処置）に基づいて、ミトコンドリアＤＮＡ変異を示す蛍光サインの変化の割合を示す。結果は、ＩＮＨ処理がミトコンドリアＤＮＡ突然変異負荷を増加させ、ＩＨＮとＰＦＪによる細胞の共処置は、ＩＮＨによって誘発される突然変異の数を減少させることを示している。
【０１０６】
実施例３：ＨｅｐＧ２細胞における用量依存ＡＺＴの細胞毒性へのＰＦＪ処置の保護効果。
７５μｇ／ｍｌのＧＡＥ当量ＰＦＪの存在下または非存在下で、ＨｅｐＧ２細胞の培養物はＡＺＴの濃度を増加させて（０μＭ、１０μＭ、３０μＭ、５０μＭ、７０μＭ、１００μＭ）に設定した。各培養物は、最初に１×１０５の細胞／ｍｌを播種した。培養条件は、実施例２で説明したものであった。図４は、培養の６日後に回収された生存細胞パーセントを示した（塗りつぶされていないバー、ＡＺＴで処置された細胞；黒色のバー、ＡＺＴおよびＰＦＪで処置された細胞）。アスタリスクは、ＡＺＴおよびＡＺＴ／ＰＦＪから回収された生存細胞の割合の差が、統計的に有意であったサンプル示す。結果は、ＡＺＴの濃度増加の細胞毒性効果を示し、ＡＺＴ毒性に対するＰＦＪ処置の緩和効果を示す。
【０１０７】
均  等  物
当業者は、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態の多くの均等物を認識し、または日常的な実験のみを用いて確認することができるであろう。このような均等物は、以下の特許請求の範囲に包含されることが意図されている。
【産業上の利用可能性】
【０１０８】
本願発明のヤシ果実およびヤシ果汁は、ミトコンドリア機能障害、ミトコンドリアＤＮＡ損傷、および／またはＤＮＡ損傷の予防および治療のための方法、組成物並びにキットに利用される。
【図１Ａ】
0006603133.tif 000002
【図１Ｂ】
0006603133.tif 000003
【図１Ｃ】
0006603133.tif 000004
【図２】
0006603133.tif 000005
【図３】
0006603133.tif 000006
【図４】
0006603133.tif 000007
【配列表】
0006603133000001.app