(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）コンドロイチン硫酸；
ｂ）１個から８０個までのコラーゲン結合性ペプチド；および
ｃ）１個から８０個までのヒアルロン酸結合性ペプチド
を含む細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンであって、ｂ）およびｃ）の該ペプチドが該コンドロイチン硫酸に共有結合しており、かつさらに、該コラーゲン結合性ペプチドがアミノ酸配列ＷＹＲＧＲＬを含み、該ヒアルロン酸結合性ペプチドがアミノ酸配列ＧＡＨＷＱＦＮＡＬＴＶＲを含む、細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカン。
【請求項２】
前記コラーゲン結合性ペプチドがＷＹＲＧＲＬＧＣである、請求項１に記載の合成ペプチドグリカン。
【請求項３】
前記ヒアルロン酸結合性ペプチドがＧＡＨＷＱＦＮＡＬＴＶＲＧＧＧＣである、請求項１に記載の合成ペプチドグリカン。
【請求項４】
前記ペプチドが前記コンドロイチン硫酸にリンカーを介して共有結合している、請求項１に記載の合成ペプチドグリカン。
【請求項５】
前記リンカーがＮ−［β−マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド（ＢＭＰＨ）である、請求項４に記載の合成ペプチドグリカン。
【請求項６】
ａ）コンドロイチン硫酸；
ｂ）５個から２０個までのコラーゲン結合性ペプチド；および
ｃ）５個から２０個までのヒアルロン酸結合性ペプチド
を含む細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンであって、ｂ）およびｃ）の該ペプチドが該コンドロイチン硫酸にＮ−［β−マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド（ＢＭＰＨ）を介して共有結合しており、かつさらに、該コラーゲン結合性ペプチドがＷＹＲＧＲＬＧＣであり、該ヒアルロン酸結合性ペプチドがＧＡＨＷＱＦＮＡＬＴＶＲＧＧＧＣである、細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカン。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンを含む医薬組成物。
【請求項８】
患者においてヒアルロン酸リッチな組織の分解を処置および／または予防するための、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記ヒアルロン酸リッチな組織が皮膚である、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
患者において軟骨変性を処置および／または予防するための、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
患者において軟骨変性を処置および／または予防するための、請求項７に記載の医薬組成物であって、それを必要としている該患者の滑液腔へ注射されることを特徴とする、医薬組成物。
【請求項１２】
患者において硝子体液変性を処置および／または予防するための、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
患者において髄核変性を処置および／または予防するための、請求項７に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この開示は、グリカンにコンジュゲートした１つまたは複数の合成ペプチドで構成された細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカン、およびそれらの使用の方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
ほとんどの組織において、細胞は、コラーゲン、ラミニン、およびフィブロネクチンなどのタンパク質を含有する細胞外マトリックス（ＥＣＭ）によって囲まれている。哺乳動物が加齢するにつれて、およびいくつかの疾患状態において、身体のある特定の領域（例えば、滑膜関節、硝子体液、脊椎円板、皮膚など）における細胞外マトリックスは、分解し得、様々な型の関節炎、視力喪失などの望ましくない症状を引き起こす。
【０００３】
表面ゾーンタンパク質（ｓｕｐｅｒｆｉｃｉａｌ  ｚｏｎｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ）（ＳＺＰ）またはＰＲＧ４としても知られたラブリシンは、動物関節の内部表面を裏打ちする組織によって分泌される粘液性糖タンパク質である（Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ，Ｂ．Ｌ．ら、Ａｒｃｈ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ、１９９４、３１１（１）：１４４−５２参照）。関節組織表面トポグラフィーと共形の吸着分子層の形成によって特徴づけられる境界潤滑領域（ｒｅｇｉｍｅ）における運動力学状態によって、表面滑りがもたらされる場合、ラブリシンは、関節において直接的な固体間接触に対して軟骨保護バリアとして働く（Ｎｅｕ，Ｃ．Ｐ．、Ｋ．Ｋｏｍｖｏｐｏｕｌｏｓ、およびＡ．Ｈ．Ｒｅｄｄｉ、Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｐａｒｔ  Ｂ：Ｒｅｖｉｅｗｓ、２００８参照）。強吸着性の連続性自己補充境界潤滑層が存在しない場合、断続的な粗面間の相互作用は、癒着、摩耗、表面疲労、および剥離などの様々な機械的摩耗過程によって関節表面の急速な悪化をもたらす。ラブリシン摩擦補強は、軟骨変性を低下させることが示されている（Ｊａｙ，Ｇ．Ｄ．ら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ、２０１２、６４（４）：１１６２−７１、およびＴｅｅｐｌｅ，Ｅ．ら、Ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｐｏｒｔｓ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２０１１、３９（１）：１６４−７２参照）。関節軟骨接触面において摩擦を低下させることは、軟骨摩耗および表面損傷を抑制する。
【０００４】
別の細胞外マトリックスは、眼の後部腔を満たし、およそ９９重量％の水、０．９重量％の塩、０．１重量％未満のヘテロタイプコラーゲン原線維（ＩＩ、Ｖ／ＸＩ、およびＩＸ型）、およびヒアルロナンネットワークで構成される複雑なゲル状ネットワークである、硝子体液である。硝子体液は、いくつかの目的（発生的、光学的、保護的を含む）を果たし、その分解は、網膜裂孔、網膜剥離、網膜浮腫、脈絡膜剥離、硝子体出血、および緑内障などのいくつかの眼病態に結びつけられている。
【０００５】
加えて、脊椎円板の内核におけるゲル状物質である、髄核の変性は、結果として、負荷を椎体間に均等かつ効率的に伝達する脊椎円板の能力の低下を生じ、線維（ｆｉｂｒｏｓｉｓ）輪として知られた円板の輪状領域に損傷をもたらす。髄核は、圧縮負荷下で各円板内の全方向に水圧を分配するように機能し、軟骨細胞様細胞、コラーゲン原線維、およびヒアルロン酸鎖を通して凝集するプロテオグリカンのアグリカンで構成される。輪における亀裂または断裂は、ヘルニアまたは円板の破裂になり得、円板の領域における神経のインピンジメント、最後には、腰痛または下腿痛を生じる。
【０００６】
この開示は、身体において細胞外マトリックス液を補給および／または交換し、それにしたがって、その分解に起因する疾患または障害を処置および／または予防するのに用いる細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンを提供する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ，Ｂ．Ｌ．ら、Ａｒｃｈ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ、１９９４、３１１（１）：１４４−５２
【非特許文献２】Ｎｅｕ，Ｃ．Ｐ．、Ｋ．Ｋｏｍｖｏｐｏｕｌｏｓ、およびＡ．Ｈ．Ｒｅｄｄｉ、Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｐａｒｔ  Ｂ：Ｒｅｖｉｅｗｓ、２００８
【非特許文献３】Ｊａｙ，Ｇ．Ｄ．ら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ、２０１２、６４（４）：１１６２−７１
【非特許文献４】Ｔｅｅｐｌｅ，Ｅ．ら、Ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｐｏｒｔｓ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２０１１、３９（１）：１６４−７２
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
グリカン；約１個から６０個までのコラーゲン結合性ペプチド；および約１個から６０個までのヒアルロン酸結合性ペプチドを含む、細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンが本明細書に提供される。細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンにおいて、コラーゲン結合性ペプチドおよびヒアルロン酸結合性ペプチドは、グリカンに共有結合している。合成ペプチドグリカンは、任意のグリカンを含むことができ、そのグリカンには、デキストラン、コンドロイチン、コンドロイチン硫酸、デルマタン、デルマタン硫酸、ヘパラン、ヘパリン、ケラチン、ケラタン硫酸、またはヒアルロン酸が挙げられるが、それらに限定されない。
【０００９】
グリカン；約１個から８０個までのコラーゲン結合性ペプチド；および約１個から８０個までのヒアルロン酸結合性ペプチドを含む細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンを含む医薬組成物であって、前記コラーゲン結合性ペプチドおよび前記ヒアルロン酸結合性ペプチドが前記グリカンに共有結合している、医薬組成物もまた提供される。
【００１０】
本明細書に記載されているような合成ペプチドグリカンは、軟骨、髄核、および眼の硝子体液などの、コラーゲンとヒアルロン酸の両方を有する組織を補給し、および／または保護するのに有用である可能性がある。したがって、患者において軟骨変性を処置および／または予防する方法であって、本明細書に記載された細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンを含む医薬組成物を、それを必要としている患者に投与することを含む方法が提供される。加えて、患者において硝子体液変性を処置および／または予防する方法であって、本明細書に記載された細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンを含む医薬組成物を、それを必要としている患者に投与することを含む方法が提供される。患者において髄核変性を処置および／または予防する方法であって、本明細書に記載された細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンを含む医薬組成物を、それを必要としている患者に投与することを含む方法が提供される。
【００１１】
細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンおよびその医薬組成物は、例えば、剥皮した内皮の露出したコラーゲンへの血小板結合、血小板活性化、血栓症、内皮を剥皮することに起因する炎症、内膜過形成、および血管攣縮のいずれか１つまたは組み合わせを予防することを含む血管インターベンション術に用い得ることがさらに企図される。本明細書に記載された細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンはまた、内皮細胞増殖を刺激するために用いることができ、剥皮した血管においてコラーゲンに結合することができる。
【００１２】
例えば、本発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
ａ）グリカン；
ｂ）約１個から約８０個までのコラーゲン結合性ペプチド；および
ｃ）約１個から約８０個までのヒアルロン酸結合性ペプチド
を含む細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンであって、ｂ）およびｃ）の該ペプチドが該グリカンに共有結合している、細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカン。
（項目２）
前記グリカンが、デキストラン、コンドロイチン、コンドロイチン硫酸、デルマタン、デルマタン硫酸、ヘパラン、ヘパリン、ケラチン、ケラタン硫酸、またはヒアルロン酸である、項目１に記載の合成ペプチドグリカン。
（項目３）
前記グリカンがデルマタン硫酸である、項目１に記載の合成ペプチドグリカン。
（項目４）
前記グリカンがコンドロイチン硫酸である、項目１に記載の合成ペプチドグリカン。
（項目５）
前記グリカンがヒアルロン酸である、項目１に記載の合成ペプチドグリカン。
（項目６）
前記ペプチドが前記グリカンにリンカーを介して共有結合している、項目１に記載の合成ペプチドグリカン。
（項目７）
前記リンカーがＮ−［β−マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド（ＢＭＰＨ）である、項目６に記載の合成ペプチドグリカン。
（項目８）
合計約５０個未満のペプチドを含む、項目１に記載の合成ペプチドグリカン。
（項目９）
合計約１０個から約４０個までのペプチドを含む、項目１に記載の合成ペプチドグリカン。
（項目１０）
合計約２２個のペプチドを含む、項目１に記載の合成ペプチドグリカン。
（項目１１）
前記コラーゲン結合性ペプチドが、コラーゲンＩ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型、またはＩＶ型の１つまたは複数に対して結合親和性を有する、項目１に記載の合成ペプチドグリカン。
（項目１２）
前記コラーゲン結合性ペプチドが、Ｉ型コラーゲンに結合する少なくとも１個のコラーゲン結合性ペプチド、およびＩＩ型コラーゲンに結合する少なくとも１個のコラーゲン結合性ペプチドを含む、項目１に記載の合成ペプチドグリカン。
（項目１３）
前記コラーゲン結合性ペプチドが、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、項目１に記載の合成ペプチドグリカン：
ｉ）ＷＹＲＧＲＬＧＣ、ＲＲＡＮＡＡＬＫＡＧＥＬＹＫＳＩＬＹＧＣ、ＲＬＤＧＮＥＩＫＲＧＣ、ＡＨＥＥＩＳＴＴＮＥＧＶＭＧＣ、ＧＣＧＧＥＬＹＫＳＩＬＹ、ＮＧＶＦＫＹＲＰＲＹＦＬＹＫＨＡＹＦＹＰＰＬＫＲＦＰＶＱＧＣ、ＣＱＤＳＥＴＲＴＦＹ、ＴＫＫＴＬＲＴＧＣ、ＧＬＲＳＫＳＫＫＦＲＲＰＤＩＱＹＰＤＡＴＤＥＤＩＴＳＨＭＧＣ、ＳＱＮＰＶＱＰＧＣ、ＳＹＩＲＩＡＤＴＮＩＴＧＣ、ＳＹＩＲＩＡＤＴＮＩＴ、ＫＥＬＮＬＶＹＴ、ＫＥＬＮＬＶＹＴＧＣ、ＧＳＩＴＴＩＤＶＰＷＮＶ、ＧＥＬＹＫＳＩＬＹＧＣ、およびＧＳＩＴＴＩＤＶＰＷＮＶＧＣ、または
ｉｉ）ｉ）のアミノ酸配列と少なくとも約８０％配列同一性を有する配列を含む任意のペプチド配列。
（項目１４）
前記コラーゲン結合性ペプチドが、ＷＹＲＧＲＬＧＣ、ＲＲＡＮＡＡＬＫＡＧＥＬＹＫＳＩＬＹＧＣ、ＲＬＤＧＮＥＩＫＲＧＣ、ＡＨＥＥＩＳＴＴＮＥＧＶＭＧＣ、ＧＣＧＧＥＬＹＫＳＩＬＹ、ＮＧＶＦＫＹＲＰＲＹＦＬＹＫＨＡＹＦＹＰＰＬＫＲＦＰＶＱＧＣ、ＣＱＤＳＥＴＲＴＦＹ、ＴＫＫＴＬＲＴＧＣ、ＧＬＲＳＫＳＫＫＦＲＲＰＤＩＱＹＰＤＡＴＤＥＤＩＴＳＨＭＧＣ、ＳＱＮＰＶＱＰＧＣ、ＳＹＩＲＩＡＤＴＮＩＴＧＣ、ＳＹＩＲＩＡＤＴＮＩＴ、ＫＥＬＮＬＶＹＴ、ＫＥＬＮＬＶＹＴＧＣ、ＧＳＩＴＴＩＤＶＰＷＮＶ、ＧＥＬＹＫＳＩＬＹＧＣ、またはＧＳＩＴＴＩＤＶＰＷＮＶＧＣである、項目１に記載の合成ペプチドグリカン。
（項目１５）
前記コラーゲン結合性ペプチドがＷＹＲＧＲＬＧＣである、項目１に記載の合成ペプチドグリカン。
（項目１６）
前記ヒアルロン酸結合性ペプチドが、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、項目１に記載の合成ペプチドグリカン：
ｉ）ＧＡＨＷＱＦＮＡＬＴＶＲＧＧ、ＧＤＲＲＲＲＲＭＷＨＲＱ、ＧＫＨＬＧＧＫＨＲＲＳＲ、ＲＧＴＨＨＡＱＫＲＲＳ、ＲＲＨＫＳＧＨＩＱＧＳＫ、ＳＲＭＨＧＲＶＲＧＲＨＥ、ＲＲＲＡＧＬＴＡＧＲＰＲ、ＲＹＧＧＨＲＴＳＲＫＷＶ、ＲＳＡＲＹＧＨＲＲＧＶＧ、ＧＬＲＧＮＲＲＶＦＡＲＰ、ＳＲＧＱＲＧＲＬＧＫＴＲ、ＤＲＲＧＲＳＳＬＰＫＬＡＧＰＶＥＦＰＤＲＫＩＫＧＲＲ、ＲＭＲＲＫＧＲＶＫＨＷＧ、ＲＧＧＡＲＧＲＨＫＴＧＲ、ＴＧＡＲＱＲＧＬＱＧＧＷＧＰＲＨＬＲＧＫＤＱＰＰＧＲ、ＲＱＲＲＲＤＬＴＲＶＥＧ、ＳＴＫＤＨＮＲＧＲＲＮＶＧＰＶＳＲＳＴＬＲＤＰＩＲＲ、ＲＲＩＧＨＱＶＧＧＲＲＮ、ＲＬＥＳＲＡＡＧＱＲＲＡ、ＧＧＰＲＲＨＬＧＲＲＧＨ、ＶＳＫＲＧＨＲＲＴＡＨＥ、ＲＧＴＲＳＧＳＴＲ、ＲＲＲＫＫＩＱＧＲＳＫＲ、ＲＫＳＹＧＫＹＱＧＲ、ＫＧＲＹＳＩＳＲ、ＲＲＲＣＧＱＫＫ、ＫＱＫＩＫＨＶＶＫＬＫ、ＫＬＫＳＱＬＶＫＲＫ、ＲＹＰＩＳＲＰＲＫＲ、ＫＶＧＫＳＰＰＶＲ、ＫＴＦＧＫＭＫＰＲ、ＲＩＫＷＳＲＶＳＫ、およびＫＲＴＭＲＰＴＲＲ、または
ｉｉ）ｉ）のアミノ酸配列と少なくとも約８０％配列同一性を有する配列を含む任意のペプチド配列。
（項目１７）
前記ヒアルロン酸結合性ペプチドが、ＧＡＨＷＱＦＮＡＬＴＶＲＧＧ、ＧＤＲＲＲＲＲＭＷＨＲＱ、ＧＫＨＬＧＧＫＨＲＲＳＲ、ＲＧＴＨＨＡＱＫＲＲＳ、ＲＲＨＫＳＧＨＩＱＧＳＫ、ＳＲＭＨＧＲＶＲＧＲＨＥ、ＲＲＲＡＧＬＴＡＧＲＰＲ、ＲＹＧＧＨＲＴＳＲＫＷＶ、ＲＳＡＲＹＧＨＲＲＧＶＧ、ＧＬＲＧＮＲＲＶＦＡＲＰ、ＳＲＧＱＲＧＲＬＧＫＴＲ、ＤＲＲＧＲＳＳＬＰＫＬＡＧＰＶＥＦＰＤＲＫＩＫＧＲＲ、ＲＭＲＲＫＧＲＶＫＨＷＧ、ＲＧＧＡＲＧＲＨＫＴＧＲ、ＴＧＡＲＱＲＧＬＱＧＧＷＧＰＲＨＬＲＧＫＤＱＰＰＧＲ、ＲＱＲＲＲＤＬＴＲＶＥＧ、ＳＴＫＤＨＮＲＧＲＲＮＶＧＰＶＳＲＳＴＬＲＤＰＩＲＲ、ＲＲＩＧＨＱＶＧＧＲＲＮ、ＲＬＥＳＲＡＡＧＱＲＲＡ、ＧＧＰＲＲＨＬＧＲＲＧＨ、ＶＳＫＲＧＨＲＲＴＡＨＥ、ＲＧＴＲＳＧＳＴＲ、ＲＲＲＫＫＩＱＧＲＳＫＲ、ＲＫＳＹＧＫＹＱＧＲ、ＫＧＲＹＳＩＳＲ、ＲＲＲＣＧＱＫＫ、ＫＱＫＩＫＨＶＶＫＬＫ、ＫＬＫＳＱＬＶＫＲＫ、ＲＹＰＩＳＲＰＲＫＲ、ＫＶＧＫＳＰＰＶＲ、ＫＴＦＧＫＭＫＰＲ、ＲＩＫＷＳＲＶＳＫ、またはＫＲＴＭＲＰＴＲＲである、項目１に記載の合成ペプチドグリカン。
（項目１８）
前記ヒアルロン酸結合性ペプチドがＧＡＨＷＱＦＮＡＬＴＶＲＧＧＧＣである、項目１に記載の合成ペプチドグリカン。
（項目１９）
ａ）コンドロイチン硫酸；
ｂ）約１個から約８０個までのコラーゲン結合性ペプチド；および
ｃ）約１個から約８０個までのヒアルロン酸結合性ペプチド
を含む細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンであって、ｂ）およびｃ）の該ペプチドが該グリカンに共有結合しており、かつさらに、該コラーゲン結合性ペプチドがＷＹＲＧＲＬＧＣであり、該ヒアルロン酸結合性ペプチドがＧＡＨＷＱＦＮＡＬＴＶＲＧＧＧＣである、細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカン。
（項目２０）
前記ペプチドが前記グリカンにリンカーを介して共有結合している、項目１９に記載の合成ペプチドグリカン。
（項目２１）
前記リンカーがＮ−［β−マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド（ＢＭＰＨ）である、項目２０に記載の合成ペプチドグリカン。
（項目２２）
ａ）コンドロイチン硫酸；
ｂ）約５個から約２０個までのコラーゲン結合性ペプチド；および
ｃ）約５個から約２０個までのヒアルロン酸結合性ペプチド
を含む細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンであって、ｂ）およびｃ）の該ペプチドが該グリカンにＮ−［β−マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド（ＢＭＰＨ）を介して共有結合しており、かつさらに、該コラーゲン結合性ペプチドがＷＹＲＧＲＬＧＣであり、該ヒアルロン酸結合性ペプチドがＧＡＨＷＱＦＮＡＬＴＶＲＧＧＧＣである、細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカン。
（項目２３）
項目１〜２２のいずれか一項に記載の細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンを含む医薬組成物。
（項目２４）
患者においてヒアルロン酸リッチな組織の分解を処置および／または予防する方法であって、項目２３に記載の医薬組成物を、それを必要としている患者に投与することを含む方法。
（項目２５）
ヒアルロン酸リッチな組織が皮膚である、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
患者において軟骨変性を処置および／または予防する方法であって、項目２３に記載の医薬組成物を、それを必要としている患者に投与することを含む方法。
（項目２７）
患者において軟骨変性を処置および／または予防する方法であって、項目２３に記載の医薬組成物を、それを必要としている患者の滑液腔へ注射することを含む方法。
（項目２８）
患者において硝子体液変性を処置および／または予防する方法であって、項目２３に記載の医薬組成物を、それを必要としている患者に投与することを含む方法。
（項目２９）
患者において髄核変性を処置および／または予防する方法であって、項目２３に記載の医薬組成物を、それを必要としている患者に投与することを含む方法。
添付の図面と併せて読む場合、以下の詳細な説明から、ある特定の態様が最もよく理解される。慣行により、図面の様々な外観は一定の縮尺ではないことを強調しておく。反対に、様々な外観の寸法は、明確にするために、任意に拡大され、または縮小される。以下の図が図面に含まれる：
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、非損傷軟骨（アグリカン欠乏がない）の場合における摩擦力を示し、本開示による合成ペプチドグリカンで、軟骨表面間の摩擦が増加することを示している。
【００１４】
【図２】図２は、損傷軟骨（変形性関節症をシミュレートするアグリカン欠乏がある）の場合における摩擦力を示し、実施例１による合成ペプチドグリカンが軟骨に加えられた場合、軟骨表面間の摩擦が減少することを示している。
【００１５】
【図３】図３は、未処理の（対照）、ＰＢＳ緩衝液処理された、およびトリプシン処理されたウシ硝子体におけるレオロジー的測定（図３Ａ）、トリプシン、および３つの異なるペプチドグリカンと組み合わせたトリプシンで処理されたウシ硝子体におけるレオロジー的測定（図３Ｂ）、ならびに未処理の（対照）、ＰＢＳ緩衝液処理された、およびトリプシンなしで３つの異なるペプチドグリカンで処理されたウシ硝子体におけるレオロジー的測定（図３Ｃ）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
この開示は、記載された特定の実施形態に限定されず、かかる実施形態は当然に変化し得ることは、理解されるべきである。本明細書で用いられる専門用語は、特定の実施形態を説明することを目的とするのみであって、限定することを意図するものではなく、本開示の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることも理解されるべきである。
【００１７】
本明細書および添付の特許請求の範囲で用いられる場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈上明らかに他に指図がない限り、複数の指示対象を含むことは留意されなければならない。したがって、例えば、「１つのペプチド（ａ  ｐｅｐｔｉｄｅ）」への言及は、複数のペプチドを含む。
【００１８】
定義
他に規定がない限り、本明細書に用いられる全ての技術的および科学的用語は、当業者によって一般的に理解されているのと同じ意味をもつ。本明細書で用いられる場合、以下の用語は以下の意味をもつ。
【００１９】
本明細書で用いられる場合、用語「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」は、組成物および方法が、列挙された要素を含むが、他のものを排除しないことを意味することが意図される。組成物および方法を定義するために用いられる場合の「から本質的になること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」は、述べられた目的のために、その組み合わせにとって任意の本質的な意義をもつ他の要素を排除することを意味するものとする。したがって、本明細書で定義されているような要素から本質的になる組成物は、主張された基本的かつ新規な特徴に具体的には影響しない他の材料またはステップを排除しない。「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」は、他の成分および実質的な方法ステップの微量より多い要素も排除することを意味するものとする。これらの移行句のそれぞれにより定義される実施形態は、この開示の範囲内である。
【００２０】
範囲を含む、数字表示、例えば、温度、時間、量、および濃度の前に用いられる場合の用語「約」は、（＋）または（−）１０％、５％、または１％、変化し得る近似値を示す。
【００２１】
本明細書で用いられる場合、用語「滑液腔」は、滑液で満たされている滑膜関節の骨間の空間を指す。
【００２２】
本明細書で用いられる場合、用語「処置および／または予防する」は、疾患状態、疾患進行、または他の異常な状態の有害な効果を予防し、治癒させ、逆転させ、減弱し、軽減し、最小化し、抑制し、または停止させることを指す。
【００２３】
本明細書で用いられる場合、用語「患者」は、疾患状態、疾患進行、または他の異常な、もしくは有害な状態のリスクがあるか、またはそれらを患っている対象（すなわち、ヒト）を指す。
【００２４】
本明細書で用いられる場合、用語「合成ペプチドグリカン」は、グリカン、およびそれに共有結合した１個または複数の合成ペプチドを含む合成コンジュゲートを指す。グリカン部分は、合成的に作製することができ、または動物供給源に由来し得る。合成ペプチドは、グリカンに直接的に、またはリンカーを介して、共有結合することができる。ヒアルロン酸結合性ペプチドをグリカンにコンジュゲートする方法について、例えば、ＷＯ２０１２／１６２５３４を参照されたい。コラーゲン結合性ペプチドをグリカンにコンジュゲートする方法について、例えば、ＵＳ２０１３／０１９０２４６、ＵＳ２０１２／０１００１０６、およびＵＳ２０１１／００２０２９８（それらの開示は全体として参照により本明細書に組み入れられている）を参照されたい。
【００２５】
本明細書で用いられる場合、用語「共有結合した」は、１個または複数の電子対が２個の原子によって共有されている結合を指す。
【００２６】
本明細書で用いられる場合、用語「グリカン」は、グリコシド結合した多数の単糖からなる化合物を指す。ある特定の実施形態において、グリカンは、グリコサミノグリカンであり、グルコサミノグリカンは、ウロン酸と交互様式で連結した２−アミノ糖を含み、ヘパリン、ヘパラン硫酸、コンドロイチン、ケラチン、およびデルマタンなどのポリマーが挙げられる。したがって、本明細書に記載された実施形態において用いることができるグリカンの非限定的例には、アルギナート、アガロース、デキストラン、コンドロイチン、コンドロイチン硫酸、デルマタン、デルマタン硫酸、ヘパラン、ヘパリン、ケラチン、ケラタン硫酸、およびヒアルロン酸が挙げられる。
【００２７】
本明細書で用いられる場合、「ヒアルロン酸結合性ペプチド」は、ヒアルロン酸結合性配列を含む合成ペプチドを指す。本明細書に記載された様々な実施形態において、合成ペプチドグリカンのペプチド構成要素は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むことができる：ＧＡＨＷＱＦＮＡＬＴＶＲ、ＧＡＨＷＱＦＮＡＬＴＶＲＧＧ、ＧＤＲＲＲＲＲＭＷＨＲＱ、ＧＫＨＬＧＧＫＨＲＲＳＲ、ＲＧＴＨＨＡＱＫＲＲＳ、ＲＲＨＫＳＧＨＩＱＧＳＫ、ＳＲＭＨＧＲＶＲＧＲＨＥ、ＲＲＲＡＧＬＴＡＧＲＰＲ、ＲＹＧＧＨＲＴＳＲＫＷＶ、ＲＳＡＲＹＧＨＲＲＧＶＧ、ＧＬＲＧＮＲＲＶＦＡＲＰ、ＳＲＧＱＲＧＲＬＧＫＴＲ、ＤＲＲＧＲＳＳＬＰＫＬＡＧＰＶＥＦＰＤＲＫＩＫＧＲＲ、ＲＭＲＲＫＧＲＶＫＨＷＧ、ＲＧＧＡＲＧＲＨＫＴＧＲ、ＴＧＡＲＱＲＧＬＱＧＧＷＧＰＲＨＬＲＧＫＤＱＰＰＧＲ、ＲＱＲＲＲＤＬＴＲＶＥＧ、ＳＴＫＤＨＮＲＧＲＲＮＶＧＰＶＳＲＳＴＬＲＤＰＩＲＲ、ＲＲＩＧＨＱＶＧＧＲＲＮ、ＲＬＥＳＲＡＡＧＱＲＲＡ、ＧＧＰＲＲＨＬＧＲＲＧＨ、ＶＳＫＲＧＨＲＲＴＡＨＥ、ＲＧＴＲＳＧＳＴＲ、ＲＲＲＫＫＩＱＧＲＳＫＲ、ＲＫＳＹＧＫＹＱＧＲ、ＫＧＲＹＳＩＳＲ、ＲＲＲＣＧＱＫＫ、ＫＱＫＩＫＨＶＶＫＬＫ、ＫＬＫＳＱＬＶＫＲＫ、ＲＹＰＩＳＲＰＲＫＲ、ＫＶＧＫＳＰＰＶＲ、ＫＴＦＧＫＭＫＰＲ、ＲＩＫＷＳＲＶＳＫ、もしくはＫＲＴＭＲＰＴＲＲ、またはそのアミノ酸配列と少なくとも約８０％配列同一性を有する配列を含む任意のペプチド配列。ヒアルロン酸結合性合成ペプチドグリカンのペプチド構成要素として含まれ得る追加のペプチドには、ＲＲＡＳＲＳＲＧＱＶＧＬ、ＧＲＧＴＨＨＡＱＫＲＲＳ、ＱＰＶＲＲＬＧＴＰＶＶＧ、ＡＲＲＡＥＧＫＴＲＭＬＱ、ＰＫＶＲＧＲＲＨＱＡＳＧ、ＳＤＲＨＲＲＲＲＥＡＤＧ、ＮＱＲＶＲＲＶＫＨＰＰＧ、ＲＥＲＲＥＲＨＡＶＡＲＨＧＰＧＬＥＲＤＡＲＮＬＡＲＲ、ＴＲＰＧＧＫＲＧＧＱＶＧＰＰＡＧＶＬＨＧＲＲＡＲＳ、ＮＶＲＳＲＲＧＨＲＭＮＳ、ＤＲＲＲＧＲＴＲＮＩＧＮ、ＫＴＡＧＨＧＲＲＷＳＲＮ、ＡＫＲＧＥＧＲＲＥＷＰＲ、ＧＧＤＲＲＫＡＨＫＬＱＡ、ＲＲＧＧＲＫＷＧＳＦＥＧ、およびＲＱＲＲＲＤＬＴＲＶＥＧからなる群から選択される１個または複数のペプチドなどのＡｒｇ−Ａｒｇ（Ｒ−Ｒ）モチーフを有するペプチドが挙げられる（例えば、参照により本明細書に組み入れられた、Ａｍｅｍｉｙａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、２００５、１７２４、９４−９９参照）。別の実施形態において、ペプチドは、ＲＤＧＴＲＹＶＱＫＧＥＹＲ、ＨＲＥＡＲＳＧＫＹＫ、ＰＤＫＫＨＫＬＹＧＶ、およびＷＤＫＥＲＳＲＹＤＶからなる群から選択される（例えば、Ｙａｎｇら、ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ、１９９４、１３、２８６−２９６、およびＧｏｅｔｉｎｃｋら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ、１９８７、１０５、２４０３−２４０８参照（どちらも参照により本明細書に組み入れられている））。
【００２８】
本明細書で用いられる場合、用語「コラーゲン結合性ペプチド」は、コラーゲン結合性配列を含む合成ペプチドを指す。「コラーゲン結合性ペプチド」は、コラーゲン原線維形成に通常関与し、または通常には関与しないタンパク質の部分とアミノ酸相同性を有し得る。一実施形態において、コラーゲン結合性ペプチドは、約５個から約４０個までのアミノ酸、または約５個から約２０個までのアミノ酸、または約５個から約１０個までのアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、これらのペプチドは、低分子量ロイシンリッチプロテオグリカン、血小板受容体配列、またはコラーゲン原線維形成を制御するタンパク質のアミノ酸配列と相同性または配列同一性を有する。様々な実施形態において、コラーゲン結合性ペプチドは、ＲＲＡＮＡＡＬＫＡＧＥＬＹＫＳＩＬＹ、ＲＬＤＧＮＥＩＫＲ、ＡＨＥＥＩＳＴＴＮＥＧＶＭ、ＧＥＬＹＫＳＩＬＹ、ＮＧＶＦＫＹＲＰＲＹＦＬＹＫＨＡＹＦＹＰＰＬＫＲＦＰＶＱ、ＣＱＤＳＥＴＲＴＦＹ、ＴＫＫＴＬＲＴ、ＧＬＲＳＫＳＫＫＦＲＲＰＤＩＱＹＰＤＡＴＤＥＤＩＴＳＨＭ、ＳＱＮＰＶＱＰ、ＳＹＩＲＩＡＤＴＮＩＴ、ＫＥＬＮＬＶＹＴ、ＧＳＩＴＴＩＤＶＰＷＮＶＧＣ、およびＧＳＩＴＴＩＤＶＰＷＮＶ、ならびにそのアミノ酸配列と少なくとも約８０％配列同一性を有する配列を含む任意のペプチド配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、コラーゲン結合性ペプチドは、Ｃｈｉａｎｇら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：３４８９６−３４９０１（２００２）、Ｈｕｉｚｉｎｇ  ａら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ５：１１４７−１１５６（１９９７）、Ｒｏｍｉｊｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：１５０３５−１５０３９（２００３）、およびＣｈｉａｎｇら、Ｃａｒｄｉｏ．＆  Ｈａｅｍａｔｏ．Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ−Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ７：７１−７５（２００７）（それぞれは参照により本明細書に組み入れられている）に記載されているようなヴォン・ヴィレブランド因子または血小板コラーゲン受容体のコラーゲン結合性ドメインと約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９８％、または約１００％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００２９】
本明細書に記載された実施形態のいずれかにおいて、合成ペプチドのいずれか１個または複数（例えば、ヒアルロン酸結合性ペプチドおよび／またはコラーゲン結合性ペプチド）は、そのペプチドのＣ末端に付着したグリシン−システイン（ＧＣ）、および／またはそのペプチドのＮ末端に付着したグリシン−システイン−グリシン（ＧＣＧ）を有し得る。例えば、コラーゲン結合性ペプチドは、ＲＲＡＮＡＡＬＫＡＧＥＬＹＫＳＩＬＹＧＣ、ＲＬＤＧＮＥＩＫＲＧＣ、ＡＨＥＥＩＳＴＴＮＥＧＶＭＧＣ、ＧＣＧＧＥＬＹＫＳＩＬＹ、ＮＧＶＦＫＹＲＰＲＹＦＬＹＫＨＡＹＦＹＰＰＬＫＲＦＰＶＱＧＣ、ＣＱＤＳＥＴＲＴＦＹＧＣ、ＴＫＫＴＬＲＴＧＣ、ＧＬＲＳＫＳＫＫＦＲＲＰＤＩＱＹＰＤＡＴＤＥＤＩＴＳＨＭＧＣ、ＳＱＮＰＶＱＰＧＣ、ＳＹＩＲＩＡＤＴＮＩＴＧＣ、ＫＥＬＮＬＶＹＴＧＣ、ＧＳＩＴＴＩＤＶＰＷＮＶＧＣ、ＧＣＧＧＥＬＹＫＳＩＬＹＧＣ、およびＧＥＬＹＫＳＩＬＹＧＣからなる群から選択されるアミノ酸配列を含み得る。
【００３０】
本明細書で用いられる場合、用語「アミノ酸」は、グリシン、およびＤとＬの両方の光学異性体、アミノ酸類似体、およびペプチド模倣体を含む、天然および／または非天然もしくは合成のアミノ酸のいずれかを指す。天然に存在するアミノ酸の１文字および３文字の略語は、下記の表１に挙げられている。３個またはそれを超えるアミノ酸のペプチドは、ペプチド鎖が短い場合には、オリゴペプチドと一般的に呼ばれる。ペプチド鎖が長い場合には、ペプチドはポリペプチドまたはタンパク質と一般的に呼ばれる。
【表１−１】
0006603650.tif 000002
【表１−２】
0006603650.tif 000003
【００３１】
本明細書に記載された実施形態のいずれかにおいて、合成ペプチド（例えば、ヒアルロン酸結合性ペプチドおよび／またはコラーゲン結合性ペプチド）は、前記の段落に記載された任意のアミノ酸配列、またはこれらのアミノ酸配列のいずれかと８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、もしくは１００％相同性を有するアミノ酸配列を含む。様々な実施形態において、本明細書に記載された合成ペプチドグリカンのペプチド構成要素は、１つまたは複数の保存的アミノ酸置換を含めることにより改変することができる。当業者によく知られているように、ペプチドの任意の重要ではないアミノ酸を保存的置換によって変化させることは、交換アミノ酸の側鎖が、交換されているアミノ酸の側鎖と類似した結合および接触を形成することができるため、そのペプチドの活性を有意には変化させない。非保存的置換は、これらが、ペプチドのヒアルロン酸結合活性に過度には影響しないとの条件で、可能である。
【００３２】
本明細書で用いられる場合、用語「相同性」は、２個のペプチドの間または２個の核酸分子の間の配列類似性を指す。相同性は、比較のために整列され得る各配列における位置を比較することにより決定することができる。比較される配列におけるある位置が同じ塩基またはアミノ酸によって占有されている場合、その分子はその位置において相同である。配列間の相同性の程度は、配列によって共有される一致した、または相同の位置の数の関数である。ペプチド（またはポリペプチドまたはペプチド領域）が、別の配列とある特定のパーセンテージ（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）の「相同性」または「配列同一性」を有するとは、整列された場合、そのパーセンテージの塩基（またはアミノ酸）が、２つの配列の比較において同じであることを意味する。このアラインメントおよびパーセント相同性または配列同一性は、当技術分野において知られたソフトウェアプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ）、および例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら編（２００７）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙに記載されたプログラムを用いて決定することができる。
【００３３】
当技術分野においてよく知られているように、アミノ酸の「保存的置換」またはペプチドの「保存的置換変異体」は、以下を維持するアミノ酸置換を指す：１）ペプチドの二次構造；２）アミノ酸の電荷または疎水性；および３）側鎖のかさ高さ、またはこれらの特徴の任意の１つもしくは複数。実例としては、よく知られた専門用語「親水性残基」は、セリンまたはスレオニンに関する。「疎水性残基」は、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、バリン、またはアラニンなどを指す。「正荷電残基」は、リジン、アルギニン、オルニチン、またはヒスチジンに関する。「負荷電残基」は、アスパラギン酸またはグルタミン酸を指す。「かさ高い側鎖」を有する残基は、フェニルアラニン、トリプトファン、またはチロシンなどを指す。実例的な保存的アミノ酸置換のリストは表２に示されている。
【表２−１】
0006603650.tif 000004
【表２−２】
0006603650.tif 000005
【００３４】
一実施形態において、本開示の合成ペプチドグリカンは、コラーゲンおよび／またはヒアルロン酸に直接的にか、または間接的にかのいずれかで結合する。本明細書で用いられる場合、用語「結合すること（ｂｉｎｄｉｎｇ）」または「結合する（ｂｉｎｄ）」は、例えば、ハイブリダイゼーションアッセイ、表面プラズモン共鳴、ＥＬＩＳＡ、競合的結合アッセイ、等温滴定熱量測定、ファージディスプレイ、アフィニティークロマトグラフィー、レオロジー、または免疫組織化学を用いて検出され得る、分子間の相互作用を含むものとする。その用語はまた、分子間の「結合性（ｂｉｎｄｉｎｇ）」相互作用を含むものとする。結合（ｂｉｎｄｉｎｇ）は、「直接的」でも「間接的」でもよい。「直接的」結合（ｂｉｎｄｉｎｇ）は、分子間の直接的な物理的接触を含む。分子間の「間接的」結合は、１つまたは複数の分子との直接的な物理的接触を同時に有する分子を含む。例えば、本開示の合成ペプチドグリカンは、ヒアルロン酸とＩＩ型コラーゲンの両方と直接的に結合して、相互作用し、関節軟骨の低摩擦性を回復させ、それにしたがって、表面を機械的摩耗から保護するために用い得ることが企図される。この結合（ｂｉｎｄｉｎｇ）は、相互作用分子を含む「複合体」の形成を生じ得る。「複合体」は、共有結合性または非共有結合性の結合、相互作用、または力によって一緒に保持された２つまたはそれを超える分子の結合を指す。
【００３５】
合成ペプチドグリカン
本開示は、ａ）グリカン；ｂ）約１個から約８０個までのコラーゲン結合性ペプチド；およびｃ）約１個から約８０個までのヒアルロン酸結合性ペプチドを含む細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンであって、ｂ）およびｃ）のペプチドが前記グリカンに共有結合している、細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンを提供する。
【００３６】
本明細書に開示された合成ペプチドグリカンにおいて、グリカンは、任意のグリカンまたは多糖であり得、それには、デキストラン、コンドロイチン、コンドロイチン硫酸、デルマタン、デルマタン硫酸、ヘパラン、ヘパリン、ケラチン、ケラタン硫酸、およびヒアルロン酸が挙げられるが、それらに限定されない。いくつかの実施形態において、グリカンはコンドロイチン硫酸である。いくつかの実施形態において、グリカンはデルマタン硫酸である。いくつかの実施形態において、グリカンはヒアルロン酸である。
【００３７】
ペプチドは、グリカンへ直接的に、またはリンカーを介して、結合することができる。ある特定の実施形態において、ペプチドは、グリカンにリンカーを介して共有結合している。リンカーは、任意の適切な二官能性リンカー、例えば、３−（２−ピリジルジチオ）プロピオニルヒドラジド（ＰＤＰＨ）、Ｎ−［β−マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド（ＢＭＰＨ）などであり得る。本明細書に記載された様々な実施形態のいずれかにおいて、ペプチドの配列は、グリカンに付着点を供給するためにグリシン−システインセグメントを含むように改変されてもよい。ある特定の実施形態において、リンカーは、Ｎ−［β−マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド（ＢＭＰＨ）である。
【００３８】
合成ペプチドグリカンの望まれる性質に依存して、グリカンに結合したペプチドの総数は変わり得る。ある特定の実施形態において、合成ペプチドグリカンに存在するペプチドの総数は、約２個から約１６０個まで、約１０個から約１６０個まで、約２０個から約１６０個まで、約３０個から約１６０個まで、約４０個から約１６０個まで、約４０個から約１５０個まで、約４０個から約１４０個まで、約１０個から約１２０個まで、または約２０個から約１１０個まで、または約２０個から約１００個まで、または約２０個から約９０個まで、または約３０個から約９０個まで、または約４０個から約９０個まで、または約５０個から約９０個まで、または約５０個から約８０個まで、または約６０個から約８０個まで、または約１０個、または約２０個、または約３０個、または約４０個、または約５０個、または約６０個、または約７０個、または約８０個、または約９０個、または約１００個、または約１１０個、または約１２０個である。ある特定の実施形態において、合成ペプチドグリカンに存在するペプチドの総数は、約５０個未満である。ある特定の実施形態において、合成ペプチドグリカンに存在するペプチドの総数は、約１０個から約４０個までである。ある特定の実施形態において、合成ペプチドグリカンに存在するペプチドの総数は、約２２個である。ある特定の実施形態において、コラーゲン結合性ペプチドの総数は、約５個から約２０個まで、または約１０個、または約１１個である。ある特定の実施形態において、ヒアルロン酸結合性ペプチドの総数は、約５個から約２０個まで、または約１０個、または約１１個である。
【００３９】
一態様において、本明細書に記載された細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンに存在するコラーゲン結合性ペプチドは、コラーゲンＩ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型、またはＩＶ型の１つまたは複数に対して結合親和性を有する。特定された結合親和性を有する１個または複数のコラーゲン結合性ペプチドを、本明細書に記載された細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンに用いることができる。例えば、細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンは、Ｉ型コラーゲンに対して結合親和性を有する少なくとも１個のコラーゲン結合性ペプチド、およびＩＩ型コラーゲンに対して結合親和性を有する少なくとも１個のコラーゲン結合性ペプチドを含み得る。別の態様において、コラーゲン結合性ペプチドは、Ｉ型コラーゲンに対して結合親和性を有する。ある特定の態様において、コラーゲン結合性ペプチドは、ＩＩ型コラーゲンに対して結合親和性を有する。
【００４０】
適切なコラーゲン結合性ペプチドは当技術分野において知られている（例えば、ＵＳ２０１３／０１９０２４６、ＵＳ２０１２／０１００１０６、およびＵＳ２０１１／００２０２９８参照（それらの開示は全体として参照により本明細書に組み入れられている））。一実施形態において、コラーゲン結合性ペプチドは約５個から約４０個までのアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、これらのペプチドは、低分子量ロイシンリッチプロテオグリカン、血小板受容体配列、またはコラーゲン原線維形成を制御するタンパク質のアミノ酸配列と相同性を有する。
【００４１】
様々な実施形態において、コラーゲン結合性ペプチドは、ＷＹＲＧＲＬＧＣ、ＲＲＡＮＡＡＬＫＡＧＥＬＹＫＳＩＬＹＧＣ、ＲＬＤＧＮＥＩＫＲＧＣ、ＡＨＥＥＩＳＴＴＮＥＧＶＭＧＣ、ＧＣＧＧＥＬＹＫＳＩＬＹ、ＮＧＶＦＫＹＲＰＲＹＦＬＹＫＨＡＹＦＹＰＰＬＫＲＦＰＶＱＧＣ、ＣＱＤＳＥＴＲＴＦＹ、ＴＫＫＴＬＲＴＧＣ、ＧＬＲＳＫＳＫＫＦＲＲＰＤＩＱＹＰＤＡＴＤＥＤＩＴＳＨＭＧＣ、ＳＱＮＰＶＱＰＧＣ、ＳＹＩＲＩＡＤＴＮＩＴＧＣ、ＳＹＩＲＩＡＤＴＮＩＴ、ＫＥＬＮＬＶＹＴ、ＫＥＬＮＬＶＹＴＧＣ、ＧＳＩＴＴＩＤＶＰＷＮＶ、ＧＥＬＹＫＳＩＬＹＧＣ、およびＧＳＩＴＴＩＤＶＰＷＮＶＧＣからなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも約８０％配列同一性、もしくは少なくとも約８０％配列同一性、もしくは少なくとも約８５％配列同一性、もしくは少なくとも約９０％配列同一性、もしくは少なくとも約９５％配列同一性、もしくは少なくとも約９８％配列同一性を有する配列を含む任意のペプチド配列を含む。ある特定の実施形態において、コラーゲン結合性ペプチドは、ＷＹＲＧＲＬＧＣ、または少なくとも約８０％配列同一性、もしくは少なくとも約８５％配列同一性、もしくは少なくとも約９０％配列同一性、もしくは少なくとも約９５％配列同一性、もしくは少なくとも約９８％配列同一性を有する任意のペプチドである。ある特定の実施形態において、コラーゲン結合性ペプチドは、Ｃｈｉａｎｇら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：３４８９６−３４９０１（２００２）、Ｈｕｉｚｉｎｇ  ａら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ５：１１４７−１１５６（１９９７）、Ｒｏｍｉｊｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：１５０３５−１５０３９（２００３）、およびＣｈｉａｎｇら、Ｃａｒｄｉｏ．＆  Ｈａｅｍａｔｏ．Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ−Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ７：７１−７５（２００７）（それぞれが参照により本明細書に組み入れられている）に記載されているようなヴォン・ヴィレブランド因子または血小板コラーゲン受容体のコラーゲン結合性ドメインと約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９８％、または約１００％相同である。
【００４２】
適切なヒアルロン酸結合性ペプチドは当技術分野において知られている（例えば、ＷＯ２０１２／１６２５３４参照）。本明細書に記載された様々な実施形態において、合成ペプチドグリカンのペプチド構成要素は、ＧＡＨＷＱＦＮＡＬＴＶＲＧＧ、ＧＤＲＲＲＲＲＭＷＨＲＱ、ＧＫＨＬＧＧＫＨＲＲＳＲ、ＲＧＴＨＨＡＱＫＲＲＳ、ＲＲＨＫＳＧＨＩＱＧＳＫ、ＳＲＭＨＧＲＶＲＧＲＨＥ、ＲＲＲＡＧＬＴＡＧＲＰＲ、ＲＹＧＧＨＲＴＳＲＫＷＶ、ＲＳＡＲＹＧＨＲＲＧＶＧ、ＧＬＲＧＮＲＲＶＦＡＲＰ、ＳＲＧＱＲＧＲＬＧＫＴＲ、ＤＲＲＧＲＳＳＬＰＫＬＡＧＰＶＥＦＰＤＲＫＩＫＧＲＲ、ＲＭＲＲＫＧＲＶＫＨＷＧ、ＲＧＧＡＲＧＲＨＫＴＧＲ、ＴＧＡＲＱＲＧＬＱＧＧＷＧＰＲＨＬＲＧＫＤＱＰＰＧＲ、ＲＱＲＲＲＤＬＴＲＶＥＧ、ＳＴＫＤＨＮＲＧＲＲＮＶＧＰＶＳＲＳＴＬＲＤＰＩＲＲ、ＲＲＩＧＨＱＶＧＧＲＲＮ、ＲＬＥＳＲＡＡＧＱＲＲＡ、ＧＧＰＲＲＨＬＧＲＲＧＨ、ＶＳＫＲＧＨＲＲＴＡＨＥ、ＲＧＴＲＳＧＳＴＲ、ＲＲＲＫＫＩＱＧＲＳＫＲ、ＲＫＳＹＧＫＹＱＧＲ、ＫＧＲＹＳＩＳＲ、ＲＲＲＣＧＱＫＫ、ＫＱＫＩＫＨＶＶＫＬＫ、ＫＬＫＳＱＬＶＫＲＫ、ＲＹＰＩＳＲＰＲＫＲ、ＫＶＧＫＳＰＰＶＲ、ＫＴＦＧＫＭＫＰＲ、ＲＩＫＷＳＲＶＳＫ、およびＫＲＴＭＲＰＴＲＲからなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも約８０％配列同一性、もしくは少なくとも約８０％配列同一性、もしくは少なくとも約８５％配列同一性、もしくは少なくとも約９０％配列同一性、もしくは少なくとも約９５％配列同一性、もしくは少なくとも約９８％配列同一性を有する配列を含む任意のペプチド配列を含み得る。
【００４３】
ヒアルロン酸結合性合成ペプチドグリカンのペプチド構成要素として含むことができる追加のペプチドには、ＲＲＡＳＲＳＲＧＱＶＧＬ、ＧＲＧＴＨＨＡＱＫＲＲＳ、ＱＰＶＲＲＬＧＴＰＶＶＧ、ＡＲＲＡＥＧＫＴＲＭＬＱ、ＰＫＶＲＧＲＲＨＱＡＳＧ、ＳＤＲＨＲＲＲＲＥＡＤＧ、ＮＱＲＶＲＲＶＫＨＰＰＧ、ＲＥＲＲＥＲＨＡＶＡＲＨＧＰＧＬＥＲＤＡＲＮＬＡＲＲ、ＴＲＰＧＧＫＲＧＧＱＶＧＰＰＡＧＶＬＨＧＲＲＡＲＳ、ＮＶＲＳＲＲＧＨＲＭＮＳ、ＤＲＲＲＧＲＴＲＮＩＧＮ、ＫＴＡＧＨＧＲＲＷＳＲＮ、ＡＫＲＧＥＧＲＲＥＷＰＲ、ＧＧＤＲＲＫＡＨＫＬＱＡ、ＲＲＧＧＲＫＷＧＳＦＥＧ、およびＲＱＲＲＲＤＬＴＲＶＥＧからなる群から選択される１個または複数のペプチド、または少なくとも約８０％配列同一性、もしくは少なくとも約８０％配列同一性、もしくは少なくとも約８５％配列同一性、もしくは少なくとも約９０％配列同一性、もしくは少なくとも約９５％配列同一性、もしくは少なくとも約９８％配列同一性を有する配列を含む任意のペプチド配列などのＡｒｇ−Ａｒｇ（Ｒ−Ｒ）モチーフを有するペプチドが挙げられる（例えば、参照により本明細書に組み入れられた、Ａｍｅｍｉｙａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、２００５、１７２４、９４−９９参照）。ある特定の実施形態において、コラーゲン結合性ペプチドは、ＧＡＨＷＱＦＮＡＬＴＶＲＧＧ、または少なくとも約８０％配列同一性、もしくは少なくとも約８０％配列同一性、もしくは少なくとも約８５％配列同一性、もしくは少なくとも約９０％配列同一性、もしくは少なくとも約９５％配列同一性、もしくは少なくとも約９８％配列同一性を有する配列を含む任意のペプチド配列である。別の実施形態において、ペプチドは、ＲＤＧＴＲＹＶＱＫＧＥＹＲ、ＨＲＥＡＲＳＧＫＹＫ、ＰＤＫＫＨＫＬＹＧＶ、およびＷＤＫＥＲＳＲＹＤＶからなる群から選択される（例えば、Ｙａｎｇら、ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ、１９９４、１３、２８６−２９６、およびＧｏｅｔｉｎｃｋら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、１９８７、１０５、２４０３−２４０８（どちらも参照により本明細書に組み入れられている）参照）。
【００４４】
別の実施形態において、ヒアルロン酸結合性ペプチドは、Ｂ−Ｘ７−Ｂ相同体（ｈｏｍｏｌｏｇｙ）からなる群から選択されてもよく、式中、Ｂはリジンまたはアルギニンのいずれかであり、Ｘは任意の非酸性アミノ酸残基（すなわち、アスパラギン酸とグルタミン酸以外の任意のアミノ酸）であり、７個のＸ残基の少なくとも１個が塩基性残基（すなわち、アルギニン、リジン、またはヒスチジン）である。ペプチドはまた、ヒアルロン酸への結合についてのポジティブ選択を利用するファージディスプレイにより選択されてもよい。ヒアルロン酸結合性ペプチドは、それのヒアルロン酸との相互作用により決定されてもよく、分子相互作用を評価するために用いられる技術のいずれかによって測定され得る。例えば、表面プラズモン共鳴、ＥＬＩＳＡ、競合的結合アッセイ、等温滴定熱量測定、アフィニティークロマトグラフィー、レオロジー、または免疫組織化学。「ヒアルロン酸結合性」とみなされるペプチドは、ヒアルロン酸またはヒアルロン酸含有組織と相互作用し得、その相互作用は既知の化学反応基に起因しないものであり得る。相互作用は、ペプチドにおけるアミノ酸残基から生じた疎水性相互作用および電荷相互作用により得る。相互作用は、マイクロプレート上にヒアルロン酸を固定化し、ヒアルロン酸結合性ペプチドとインキュベートし、続いて、発色団を使用するビオチン−アビジンなどの検出技術によって測定されてもよい。相互作用はまた、ヒアルロン酸結合性ペプチドと、または１個もしくは複数のヒアルロン酸結合性ペプチドを含有するペプチドグリカンとインキュベートされているヒアルロン酸含有流体、ゲル、または組織上への力学的影響によって測定されてもよい。
【００４５】
ペプチドの同定のために、ファージディスプレイから選択されたペプチド、またはタンパク質においてヒアルロン酸結合モチーフから同定されるペプチドを合成して、そのヒアルロン酸との相互作用について評価することができる。例えば、Ｂ−Ｘ７−Ｂ配列を、Ｎ末端にビオチン修飾して合成し、ヒアルロン酸コーティング化マイクロプレート上でインキュベートすることができる。用量反応結合曲線を作成して、ペプチドのヒアルロン酸に結合する能力を決定することができる。
【００４６】
同様に、コラーゲン結合性ペプチドについて、コラーゲン結合性について選択されたファージディスプレイライブラリー由来の合成ペプチドを作製することができる。ペプチドを合成して、ＳＰＲ、ＥＬＩＳＡ、ＩＴＣ、アフィニティークロマトグラフィー、または当技術分野において知られた他の技術などのいずれかによってコラーゲンへの結合について評価することができる。例は、固定化コラーゲンを含有するマイクロプレート上でインキュベートされるビオチン修飾化ペプチド配列であり得る。用量反応結合曲線を、ストレプトアビジン−発色団を用いて作成し、ペプチドのコラーゲンに結合する能力を決定することができる。
【００４７】
一実施形態において、
ａ）コンドロイチン硫酸；
ｂ）約１個から約８０個のコラーゲン結合性ペプチド；および
ｃ）約１個から約８０個のヒアルロン酸結合性ペプチド
を含む細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンであって、ｂ）およびｃ）のペプチドが前記グリカンに共有結合しており、かつさらに、コラーゲン結合性ペプチドがＷＹＲＧＲＬＧＣであり、ヒアルロン酸結合性ペプチドがＧＡＨＷＱＦＮＡＬＴＶＲＧＧＧＣである、細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンが本明細書に提供される。ある特定の実施形態において、ペプチドは、Ｎ−［β−マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド（ＢＭＰＨ）などのリンカーを介してグリカンに共有結合している。
別の実施形態において、
ａ）コンドロイチン硫酸；
ｂ）約５個から約２０個のコラーゲン結合性ペプチド；および
ｃ）約５個から約２０個のヒアルロン酸結合性ペプチド
を含む細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンであって、ｂ）およびｃ）のペプチドが前記グリカンにＮ−［β−マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド（ＢＭＰＨ）を介して共有結合しており、かつさらに、コラーゲン結合性ペプチドがＷＹＲＧＲＬＧＣであり、ヒアルロン酸結合性ペプチドがＧＡＨＷＱＦＮＡＬＴＶＲＧＧＧＣである、細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンが本明細書に提供される。
【００４８】
本明細書に記載された様々な実施形態において、本明細書に記載されたペプチドは、１つまたは複数の保存的アミノ酸置換を含めることにより改変することができる。当業者によく知られているように、ペプチドの任意の重要ではないアミノ酸を保存的置換によって変化させることは、そのペプチドの活性を有意には変化させず、その理由は交換アミノ酸の側鎖が、交換されているアミノ酸の側鎖と類似した結合および接触を形成することができるからである。非保存的置換もまた、それらが、ペプチドの結合活性（すなわち、ヒアルロン酸またはコラーゲン結合親和性）に実質的には影響しないとの条件で、可能であり得る。
【００４９】
本明細書に記載された様々な実施形態において、合成ペプチドグリカンは、アグリカナーゼに対して抵抗性である。アグリカナーゼは、アグリカンを切断することが知られた任意の酵素として当技術分野において特徴づけられている。一実施形態において、合成ペプチドグリカンは、メタクリレート、エタクリレート、イタコネート、アクリルアミド、チオール、ペプチド、およびアルデヒドなどの重合可能な基を含有しない。
【００５０】
ペプチドグリカンの合成
本明細書に記載された合成ペプチドグリカンに用いられるペプチド（すなわち、ヒアルロン酸結合性ペプチドおよびコラーゲンペプチド）は、商業的供給元から購入されてもよいし、または当技術分野においてよく知られた方法（例えば、化学的および／またはバイオテクノロジー的方法）を用いて部分的に、もしくは完全に合成されてもよい。ある特定の実施形態において、ペプチドは、当技術分野においてよく知られている固相ペプチド合成プロトコールに従って合成される。別の実施形態において、ペプチドは、よく知られたＦｍｏｃプロトコールに従って固体支持体上で合成され、トリフルオロ酢酸で支持体から切断され、クロマトグラフィーにより当業者に知られた方法に従って精製される。他の実施形態において、ペプチドは、当業者によく知られているバイオテクノロジーの方法を利用して合成される。一実施形態において、所望のペプチドについてのアミノ酸配列情報をコードするＤＮＡ配列が、当業者に知られた組換えＤＮＡ技術によって発現プラスミド（例えば、ペプチドのアフィニティー精製のためにアフィニティータグを組み込むプラスミド）へライゲーションされ、そのプラスミドが、発現のために宿主生物体へトランスフェクションされ、その後、そのペプチドが、宿主生物体または成長培地から、例えば、アフィニティー精製により単離される。組換えＤＮＡテクノロジー方法は、参照により本明細書に組み入れられた、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」、第３版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、（２００１）に記載されており、当業者によく知られている。
【００５１】
ある特定の実施形態において、ペプチドは、グリカンへ直接的に（すなわち、リンカーなしで）共有結合している。そのような実施形態において、合成ペプチドグリカンは、グリカン上の酸性基、アルデヒド基、ヒドロキシ基、アミノ基、またはヒドラゾ基との間の１つまたは複数のアミド結合、エステル結合、またはイミノ結合の形成を通してペプチドをグリカンに共有結合させることにより形成され得る。これらの方法の全ては、当技術分野において知られており、またはこの出願の実施例セクション、もしくは参照により本明細書に組み入れられた、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ  Ｇ．Ｔ．、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、ｐｐ．１６９−１８６（１９９６）にさらに記載されている。スキーム１に示されているように、グリカン（例えば、「ＣＳ」）は、ペプチドをグリカンに共有結合させるためにグリカン上にアルデヒド官能基（例えば、「ｏｘ−ＣＳ」）を供給するために、過ヨウ素酸ナトリウムなどの過ヨウ素酸塩試薬を用いて酸化することができる。そのような実施形態において、ペプチドは、当技術分野において知られた方法を利用して、例えば、還元剤の存在下で、ペプチドの遊離アミノ基を酸化グリカンのアルデヒド官能基と反応させることにより、グリカンに共有結合し得る。
【００５２】
ペプチドがグリカンにリンカーを介して共有結合している実施形態において、酸化グリカン（例えば、「ｏｘ−ＣＳ」）は、ペプチドと接触させる前に、リンカー（例えば、３−（２−ピリジルジチオ）プロピオニルヒドラジド（ＰＤＰＨ）またはＮ−［β−マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド（ＢＭＰＨ）などの任意の適切な二官能性リンカー）と反応させることができる。リンカーは、典型的には、約１個〜約３０個の炭素原子、または約２個〜約２０個の炭素原子を含む。より低分子量のリンカー（すなわち、約２０〜約５００の近似分子量を有するもの）が典型的には用いられる。加えて、リンカーの構造的改変が企図される。例えば、アミノ酸がリンカーに含まれてもよく、そのアミノ酸には、天然に存在するアミノ酸、加えて、β、γ、およびより長鎖のアミノ酸などの通常の合成方法から入手可能なものが挙げられるが、それらに限定されない。
【００５３】
スキーム１において示されているように、一実施形態において、ペプチドは、酸化グリカン（例えば、「ｏｘ−ＣＳ」）のアルデヒド官能基を３−（２−ピリジルジチオ）プロピオニルヒドラジド（ＰＤＰＨ）またはＮ−［β−マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド（ＢＭＰＨ）と反応させて、グリカン中間体（例えば、「ＢＭＰＨ−ＣＳ」）を形成し、さらに、そのグリカン中間体を、少なくとも１つの遊離チオール基（すなわち、−ＳＨ基）を含有するペプチドと反応させて、合成ペプチドグリカンを生じることにより、グリカン（例えば、「ＣＳ」）に共有結合させられる。さらに別の実施形態において、ペプチドの配列は、ＨＡ結合性またはコラーゲン結合性ペプチド配列と末端システイン（Ｃ）との間のスペーサーとして働く１個または複数のアミノ酸残基を含むように改変されてもよい。例えば、グリカン中間体に付着点を供給するために、グリシン−システイン（ＧＣ）またはグリシン−グリシン−グリシン−システイン（ＧＧＧＣ）またはグリシン−セリン−グリシン−システイン（ＧＳＧＣ）セグメントが付加されてもよい。
【化１】
0006603650.tif 000006
【００５４】
したがって、一実施形態において、本明細書に記載された合成ペプチドグリカンは、ａ）グリカンの少なくとも１つの隣接するジオール基を酸化して、少なくとも２つのアルデヒド官能基を有するグリカンを提供するステップ；ｂ）任意でそのグリカンをリンカーと反応させ、そのグリカンを約１個から約８０個までのコラーゲン結合性ペプチドおよび約１個から約８０個までのヒアルロン酸結合性ペプチドと、それらのペプチドがグリカンに共有結合するように反応させるステップにより提供される。
【００５５】
合成ペプチドグリカンは、グリカン（すなわち、酸化グリカンまたはグリカン中間体）に異なる結合親和性を有するペプチドを逐次的に加えることにより、または代わりに、全てのペプチドを同時に加えることにより、合成することができる。合成ペプチドグリカンは、合成における任意の時点で、サイズ排除クロマトグラフィーなどの公知の方法を用いて単離および／または精製することができる。
【００５６】
医薬組成物および投与
細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンを含む医薬組成物であって、合成ペプチドグリカンが、グリカンに共有結合した約１個から約８０個までのコラーゲン結合性ペプチドおよび約１個から約８０個までのヒアルロン酸結合性ペプチドを有するグリカンを含む、医薬組成物が本明細書に開示される。
【００５７】
当技術分野において知られているように、構成要素およびそれらの相対的量は、意図される使用および送達方法によって決定される。医薬組成物は、関節内、椎間、または眼内の送達を含む、経口、局所的、または非経口送達であってもよい。本明細書に記載された実施形態のいずれかにおいて、合成ペプチドグリカンは、単独で、または適切な薬学的担体もしくは希釈剤と組み合わせて、投与することができる。医薬組成物に用いられる希釈剤または担体は、それらが、合成ペプチドグリカンの所望の効果を減少させないように選択することができる。医薬組成物は、任意の適切な形であってもよい。適切な剤形の例には、水溶液、例えば、等張食塩水、５％グルコースにおける溶液、あるいはアルコール、グリコール、エステル、およびアミドなどの他のよく知られた薬学的に許容され得る液体担体が挙げられる。ある特定の実施形態において、医薬組成物は、１つまたは複数のｐＨ緩衝剤、１つまたは複数のイオン強度改変剤、および１つまたは複数の粘度調整剤をさらに含む。
【００５８】
ある特定の実施形態において、医薬組成物は、コラーゲン結合性ペプチドグリカンをさらに含む。適切な「コラーゲン結合性ペプチドグリカン」は、当技術分野において記載されている（例えば、ＵＳ２０１３／０１９０２４６、ＵＳ２０１２／０１００１０６、およびＵＳ２０１１／００２０２９８参照）。ある特定の実施形態において、コラーゲン結合性ペプチドグリカンは、本明細書に記載されているような約１個から約２０個までのコラーゲン結合性ペプチドにコンジュゲートしたコンドロイチン硫酸を含む。ある特定の実施形態において、コラーゲン結合性ペプチドグリカンのコラーゲン結合性ペプチドは、ＷＹＲＧＲＬＧＣである。
【００５９】
ある特定の実施形態において、医薬組成物は、ヒアルロン酸結合性ペプチドグリカンをさらに含む。適切な「ヒアルロン酸結合性ペプチドグリカン」は、当技術分野において記載されている（例えば、ＷＯ２０１２／１６２５３４参照）。ある特定の実施形態において、ヒアルロン酸結合性ペプチドグリカンは、本明細書に記載されているような約１個から約２０個までのヒアルロン酸結合性ペプチドにコンジュゲートしたコンドロイチン硫酸を含む。ある特定の実施形態において、ヒアルロン酸結合性ペプチドグリカンのヒアルロン酸結合性ペプチドは、ＧＡＨＷＱＦＮＡＬＴＶＲＧＧＧＣである。
【００６０】
本明細書に記載された医薬組成物に用いる適切なｐＨ緩衝剤には、例えば、酢酸緩衝剤、ホウ酸緩衝剤、炭酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、およびリン酸緩衝剤、加えて、塩酸、水酸化ナトリウム、酸化マグネシウム、リン酸一カリウム、重炭酸塩、アンモニア、炭酸、塩酸、クエン酸ナトリウム、クエン酸、酢酸、リン酸水素二ナトリウム、ホウ砂、ホウ酸、水酸化ナトリウム、ジエチルバルビツール酸、およびタンパク質、加えて、様々な生物学的緩衝剤、例えば、ＴＡＰＳ、Ｂｉｃｉｎｅ、Ｔｒｉｓ、Ｔｒｉｃｉｎｅ、ＨＥＰＥＳ、ＴＥＳ、ＭＯＰＳ、ＰＩＰＥＳ、カコジル酸塩、またはＭＥＳが挙げられる。
【００６１】
適切なイオン強度改変剤には、例えば、グリセリン、プロピレングリコール、マンニトール、グルコース、デキストロース、ソルビトール、塩化ナトリウム、塩化カリウム、および他の電解質が挙げられる。
【００６２】
適切な粘度調整剤には、イオン性および非イオン性水溶性ポリマー；「カルボマー」ファミリーのポリマーなどの架橋アクリル酸ポリマー、例えば、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（商標）として商業的に入手することが可能であるカルボキシポリアルキレン；ポリエチレンオキシド、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマー、およびポリビニルアルコールなどの親水性ポリマー；ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、およびエーテル化セルロースなどのセルロースポリマーおよびセルロースポリマー誘導体；トラガカントおよびキサンタンガムなどのガム；アルギン酸ナトリウム；ゼラチン、ヒアルロン酸およびその塩、キトサン、ジェラン、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、それらに限定されない。典型的には、製剤が望ましいｐＨに達するのを促進するために、中性または塩基性の作用物質などの非酸性粘度増強剤が用いられる。
【００６３】
いくつかの実施形態において、合成ペプチドグリカンは、ミネラル、アミノ酸、糖、ペプチド、タンパク質、ビタミン（アスコルビン酸など）、またはラミニン、コラーゲン、フィブロネクチン、ヒアルロン酸、フィブリン、エラスチン、またはアグリカン、または上皮成長因子、血小板由来成長因子、トランスフォーミング成長因子β、もしくは線維芽細胞成長因子などの成長因子、およびデキサメタゾンなどのグルココルチコイド、またはイオン性および非イオン性水溶性ポリマーなどの粘弾性改変剤；アクリル酸ポリマー；ポリエチレンオキシド、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマー、およびポリビニルアルコールなどの親水性ポリマー；ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、およびエーテル化セルロースなどのセルロースポリマーおよびセルロースポリマー誘導体；ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、乳酸とグリコール酸のコポリマー、または天然と合成の両方の他のポリマー剤と組み合わすことができる。
【００６４】
非経口製剤は、滅菌非水性溶液として、または発熱物質を含まない滅菌水などの適切な溶媒と共に用いられる乾燥した形として適切に製剤化されてもよい。無菌条件下での、例えば凍結乾燥による、非経口製剤の調製は、当技術分野においてよく知られた標準薬学的技術を用いて容易に達成され得る。
【００６５】
ある特定の実施形態において、合成ペプチドグリカンの溶解性は、増強されることを必要とする場合がある。そのような場合、溶解性は、マンニトール、エタノール、グリセリン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ポロキソマー、および当技術分野において知られた他のものなどの溶解性増強組成物の組み入れなどの適切な製剤技術を用いることにより増加され得る。
【００６６】
合成ペプチドグリカンは、望ましくない汚染物質を除去するために滅菌されてもよく、その汚染物質には、内毒素および感染病原体が挙げられるが、それらに限定されない。合成ペプチドグリカンの構造および生体栄養性（ｂｉｏｔｒｏｐｉｃ）に悪影響をおよぼさない滅菌技術を用いることができる。ある特定の実施形態において、合成ペプチドグリカンは、プロピレンオキシドもしくはエチレンオキシド処理、滅菌濾過、ガスプラズマ滅菌、ガンマ線照射、電子ビーム、および／または過酢酸などの過酸での滅菌を含む通常の滅菌技術を用いて消毒および／または滅菌することができる。一実施形態において、合成ペプチドグリカンは、１つまたは複数の滅菌工程に供することができる。あるいは、合成ペプチドグリカンは、プラスチックラップまたはホイルラップを含む任意の型の容器にラップされてもよく、さらに滅菌されてもよい。
【００６７】
様々な実施形態において、合成ペプチドグリカンは、例えば静脈内に、または筋肉へ、投与することができる。非経口投与のための適切な経路には、血管内、静脈内、動脈内、筋肉内、皮膚、皮下、経皮的、皮内、および表皮内の送達が挙げられる。非経口投与のための適切な手段には、針（マイクロニードルを含む）注射器、注入技術、およびカテーテルに基づいた送達が挙げられる。
【００６８】
本明細書に記載された様々な実施形態において、非経口投与のための製剤は、即時放出および／または放出調節のために製剤化されてもよい。放出調節製剤には、遅延放出、持続放出、パルス放出、制御放出、標的放出、およびプログラム化放出の製剤が挙げられる。したがって、合成ペプチドグリカンは、活性化合物の放出調節を提供する埋め込みデポーとしての投与のための固体、半固体、またはチキソトロピー性液体として製剤化されてもよい。そのような製剤の実例的例には、薬物コーティング化ステントおよびコポリマー酸（ｄｌ−乳酸、グリコール酸）（ＰＧＬＡ）マイクロスフェアが挙げられる。別の実施形態において、合成ペプチドグリカンまたは合成ペプチドグリカンを含む組成物は、適切な場合には、連続的に投与されてもよい。
【００６９】
本明細書に記載された実施形態のいずれかにおいて、合成ペプチドグリカンまたは合成ペプチドグリカンを含む組成物は、任意の適切な方法で患者へ血管内に（例えば、動脈または静脈へ）投与することができる。本明細書に記載された様々な実施形態において、合成ペプチドグリカンまたは合成ペプチドグリカンを含む組成物は、血管インターベンション前、中、または後に患者の血管へ投与することができる。様々な実施形態において、経皮的冠動脈インターベンション（ＰＣＩ）などの血管インターベンションには、例えば、ステント留置、粥腫切除、移植、およびバルーン血管形成などの血管形成が挙げられる。実例的には、血管インターベンションは、冠動脈などの動脈もしくは静脈を一時的に閉鎖することを含むもの（例えば、バルーン血管形成）であり得、またはそれは、動脈もしくは静脈を一時的に閉鎖することを含まないもの（例えば、非バルーン血管形成術、バルーン血管形成を含まないステント留置術など）であり得る。例示的な送達様式には、カテーテル、非経口投与、バルーン上のコーティング、多孔性バルーンを通して、コーティング化ステント、およびそれらの任意の組み合わせ、または血管インターベンション術中の薬物の任意の他の公知の送達方法を挙げることができる。一つの実例的実施形態において、標的血管には、冠動脈、例えば、患者の心臓組織に血液を供給する任意の血管を挙げることができ、生まれつきの冠動脈ならびに患者へ移植されている（例えば、以前の冠動脈バイパス術において）ものを挙げることができる。
【００７０】
非経口投与またはカテーテルに基づいた送達のために合成ペプチドグリカンと共に用いられる例示的な医薬組成物は以下を含み得る：ａ）本明細書に記載されているような合成ペプチドグリカン；ｂ）ｐＨを約ｐＨ４．５〜約ｐＨ９の範囲で提供するための薬学的に許容され得るｐＨ緩衝剤；ｃ）約０〜約３００ミリモルの濃度範囲におけるイオン強度改変剤；およびｄ）約０．２５％〜約１０％全式量の濃度範囲における水溶性粘度改変剤、または任意の個々の構成要素ａ）、ｂ）、ｃ）、もしくはｄ）、またはａ）、ｂ）、ｃ）、およびｄ）の任意の組み合わせ。
【００７１】
合成ペプチドグリカンの適切な用量は、標準方法、例えば、実験動物モデルまたは臨床試験において用量反応曲線を確立することにより、決定することができ、患者状態、処置されることになっている病状、投与経路、および組織分布、ならびに他の治療的処置の同時使用の可能性によって有意に異なり得る。患者に投与される有効量は、体表面積、患者の体重または質量、および患者状態の医師の評価に基づく。様々な例示的な実施形態において、有効用量は、約１ｎｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇまで、１００ｎｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇから約５００μｇ／ｋｇまで、または約１００μｇ／ｋｇから約４００μｇ／ｋｇまでの範囲である。これらの実施形態のそれぞれにおいて、用量／ｋｇは、患者の質量または体重の１キログラムあたりの用量を指す。他の実例的態様において、有効用量は、用量あたり約０．０１μｇから約１０００ｍｇまで、用量あたり１μｇ〜約１００ｍｇ、または用量あたり約１００μｇから約５０ｍｇまで、または用量あたり約５００μｇから約１０ｍｇまで、用量あたり約１ｍｇから１０ｍｇまで、または用量あたり約１ｍｇから約１００ｍｇまで、または用量あたり約１ｍｇから５０００ｍｇまで、または用量あたり約１ｍｇから３０００ｍｇまで、または用量あたり約１００ｍｇから３０００ｍｇまで、または用量あたり約１０００ｍｇから３０００ｍｇまでの範囲である。本明細書に記載された様々な実施形態のいずれかにおいて、有効用量は、用量あたり約０．０１μｇから約１０００ｍｇまで、用量あたり１μｇ〜約１００ｍｇ、約１００μｇ〜約１．０ｍｇ、約５０μｇ〜約６００μｇ、約５０μｇ〜約７００μｇ、約１００μｇ〜約２００μｇ、約１００μｇ〜約６００μｇ、約１００μｇ〜約５００μｇ、約２００μｇ〜約６００μｇ、または用量あたり約１００μｇから約５０ｍｇまで、または用量あたり約５００μｇから約１０ｍｇまで、または用量あたり約１ｍｇから１０ｍｇまでの範囲である。他の実例的実施形態において、有効用量は、１μｇ、１０μｇ、２５μｇ、５０μｇ、７５μｇ、１００μｇ、１２５μｇ、１５０μｇ、２００μｇ、２５０μｇ、２７５μｇ、３００μｇ、３５０μｇ、４００μｇ、４５０μｇ、５００μｇ、５５０μｇ、５７５μｇ、６００μｇ、６２５μｇ、６５０μｇ、６７５μｇ、７００μｇ、８００μｇ、９００μｇ、１．０ｍｇ、１．５ｍｇ、２．０ｍｇ、１０ｍｇ、１００ｍｇ、または１００ｍｇ〜３０グラムであり得る。
【００７２】
合成ペプチドグリカンを投与するための任意の有効な投与計画を用いることができる。例えば、合成ペプチドグリカンは、単回投与の、または複数回投与の連日投与計画として、与えることができる。さらに、連日処置に代わるものとして、スタッガード（ｓｔａｇｇｅｒｅｄ）投与計画、例えば、週あたり１〜５日間を用いることができる。
【００７３】
本明細書に記載された様々な実施形態において、患者は、合成ペプチドグリカンの複数回注射で処置される。一実施形態において、患者は、合成ペプチドグリカンを複数の時点（例えば、約２回〜約５０回までの時点）で、例えば、１２〜７２時間の間隔をおいて、または４８〜７２時間の間隔をおいて、注射される。合成ペプチドグリカンの追加の注射は、最初の注射から数日間または数カ月間おいて、患者に投与することができる。
【００７４】
方法
本明細書に記載された合成ペプチドグリカンは、軟骨、滑液、および硝子体液などのコラーゲンとヒアルロン酸の両方を有する組織を交換し、若返らせ、または補給するのに有用であり得る。
【００７５】
軟骨変性
関節軟骨上のよく潤滑された表面は、滑膜関節の最適な機能性をもたらす。しかしながら、変形性関節症において生じているように、潤滑の低下は、結果として、軟骨分解およびフィブリル化を生じ、それらは次に、関節機能障害および疼痛の一因となる。潤滑の低下はまた、関節リウマチを含む他の型の関節炎において関節機能障害および疼痛をもたらす。
【００７６】
実施例２に示されているように、本明細書に提供される合成ペプチドグリカンは、動物関節の内部表面を裏打ちする組織によって分泌される粘液性糖タンパク質である、ラブリシンの機能の一部を模倣するために用いることができる。したがって、合成ペプチドグリカンは、関節軟骨表面において潤滑を増強し、それにより軟骨の、摩耗によって引き起こされる侵食を低下させる可能性をもつ。合成ペプチドグリカンはまた、ヒアルロン酸およびＩＩ型コラーゲンのような高分子を酵素誘導性分解から保護する可能性をもつ。
【００７７】
したがって、患者において軟骨変性を処置および／または予防する方法であって、本明細書に記載された細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンを含む医薬組成物を、それを必要としている患者に投与することを含む方法が提供される。一実施形態において、患者は、細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンを含む医薬組成物を滑液腔へ注射することにより処置される。
【００７８】
合成ペプチドグリカンが、外傷性分解およびサイトカイン誘発性酵素分解から関節軟骨マトリックスを保護することにより関節軟骨疾患を処置および／または予防するために用いられ得ることもまた企図される。
【００７９】
硝子体液変性
硝子体液は、眼の後部腔を満たす粘弾性のゲル状物質である。硝子体代替物は、例えば、硝子体の不透明化または物理的崩壊および液化が生じている場合、機能障害性硝子体液を置換するために、および網膜手術中の一時的または永久的硝子体代替物として、用いられている。適切な硝子体代替物は、透明で生体適合性であるべきであり、それらは、天然の硝子体に近い密度および屈折率を有するべきである。
【００８０】
したがって、患者において硝子体液変性を処置および／または予防する方法であって、本明細書に記載された細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンを含む医薬組成物を、それを必要としている患者に投与することを含む方法が提供される。
【００８１】
髄核変性
髄核は、脊椎円板に存在するゲル状物質であり、圧縮負荷下で各円板内の全方向に水圧を分配するように機能し、軟骨細胞様細胞、コラーゲン原線維、およびヒアルロン酸鎖を通して凝集するプロテオグリカンアグリカンで構成される。髄核の変性は、結果として、負荷を椎体間に均等かつ効率的に伝達する円板の能力の低下を生じ、線維（ｆｉｂｒｏｓｉｓ）輪として知られた円板の輪状領域の損傷をもたらす。輪における亀裂または断裂は、ヘルニアまたは円板の破裂になり得、円板の領域における神経のインピンジメント、最後には、腰痛または下腿痛を生じる。
【００８２】
髄核のみを交換する試みもまた行われている。髄核の交換は、変性した核の初期の脱水を停止させ、円板を完全な水和状態に戻し、その結果、関連した疼痛を含む変性過程が延期または予防され、力学的機能が椎骨セグメントで回復することが予想される。
【００８３】
本明細書に記載された合成ペプチドグリカンは、線維（ｆｉｂｒｏｓｉｓ）輪に結合し、かつ保護するだろうことが企図される。したがって、患者において線維（ｆｉｂｒｏｓｉｓ）輪変性を処置および／または予防する方法であって、本明細書に記載された細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンを含む医薬組成物を、それを必要としている患者に投与することを含む方法が提供される。患者において髄核変性を処置および／または予防する方法であって、本明細書に記載された細胞外マトリックス結合性合成ペプチドグリカンを含む医薬組成物を、それを必要としている患者に投与することを含む方法もまた提供される。
【００８４】
【表３】
0006603650.tif 000007
【実施例】
【００８５】
実施例１：ペプチドグリカンの合成
試薬
【００８６】
ペプチドＧＡＨＷＱＦＮＡＬＴＶＲＧＧＧＣ（ＧＡＨ）およびＷＹＲＧＲＬＧＣ（ＷＹＲＧＲＬ）をＧｅｎｓｃｒｉｐｔ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）から購入した。Ｎ−［β−マレイミドプロピオン酸］ヒドラジドトリフルオロ酢酸塩（ＢＭＰＨ）をＰｉｅｒｃｅ（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）から購入した。
【００８７】
方法
コラーゲンＩ型結合性およびヒアルロン酸結合性ペプチドグリカンの合成は以前に記載されている（例えば、Ｂｅｒｎｈａｒｄ  Ｊ．Ｃ．、Ｐａｎｉｔｃｈ  Ａ．  Ａｃｔａ  Ｂｉｏｍａｔｅｒ  ２０１２；８：１５４３−１５５０、およびＰａｄｅｒｉ  Ｊ．Ｅ．、Ｐａｎｉｔｃｈ  Ａ．  Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ２００８；９：２５６２−２５６６参照）。本合成ペプチドグリカンを、そこに記載された方法、および以下のように改変された方法に従って、調製した。
【００８８】
コンドロイチン硫酸（１０ｍｇ／ｍＬ）を、０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液ｐＨ５．５中、メタ過ヨウ素酸ナトリウムで酸化した。酸化の程度は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムの濃度により調節した。約４０倍モル過剰ＢＭＰＨをコンドロイチン硫酸と、１×ＰＢＳ  ｐＨ７．２緩衝液中、室温で２時間反応させることにより、ヘテロ二官能性架橋剤ＢＭＰＨを、官能化させたコンドロイチン硫酸にコンジュゲートさせた。ＣＳ−ＢＭＰＨの過剰ＢＭＰＨからの精製中、ＢＭＰＨの消費量を測定することにより、官能性付与の程度を決定した。コンジュゲーションの最終ステップにおいて、ペプチドＷＹＲＧＲＬＧＣおよびＧＡＨＷＱＦＮＡＬＴＶＲＧＧＧＣを水に溶解し、それぞれを、コンドロイチン上のＢＭＰＨ反応基の数の２分の１モル当量で加えた。例えば、平均約２２個のＢＭＰＨ官能基を有するコンドロイチン硫酸を、約１１個のＷＹＲＧＲＬＧＣペプチドおよび約１１個のＧＡＨＷＱＦＮＡＬＴＶＲＧＧＧＣペプチドとコンジュゲートさせた。両方のペプチドを含有する混合物を室温で２時間、反応させ、続いて、超純水における精製および凍結乾燥を行った。
【００８９】
全ての中間体を、ＡＫＴＡ精製装置ＦＰＬＣ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）およびポリアクリルアミドビーズで充填されたカラム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｓ）を用いるサイズ排除クロマトグラフィーにより精製した。最終生成物を、ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５ビーズで充填されたカラムを用いて同様に精製した。合成後、合成ペプチドグリカンは、凍結乾燥して、−８０℃で長期間、保存することができる。
【００９０】
実施例２：ラブリシン模倣体
ラブリシン（ｌｕｂｒｉｃａｎ）模倣体ペプチドグリカンの、軟骨表面間の摩擦力を低減する能力を、以下のように試験した。軟骨プラグを、レオメーターのプレートに接着し、第２の軟骨プラグを、レオメーターの回転固定具に接着した。その２つの軟骨表面に、５Ｎの力を一緒に加え、その後、剪断を適用した。トルクを測定し、それを用いて、表面間の摩擦力を計算した。
レオメーター
１．調整ステップを設定する：
ａ．温度：３７℃
ｂ．垂直力：５Ｎ
ｃ．垂直力耐性：０．１Ｎ
ｄ．持続時間：１ｈｒ
２．ピーク保持ステップを設定する：
ａ．角速度範囲：０．００１〜１００．０ｒａｄ／ｓ
ｂ．サンプルポイント：１８０
ｃ．温度：３７℃
ｄ．持続時間：１ｈｒ
ｅ．ギャップ下限値：１００００μｍ
ｆ．ギャップ上限値：１００μｍ
３．軟骨プラグの重量を測定する。
４．大きい方の軟骨プラグを、大きなペトリ皿の内側に置かれた一片のテープに接着する。ペトリ皿をレオメータープレート上に置き、それを所定の位置に２つのクランプで保持する。
５．小さい方の軟骨プラグを一片のテープに接着し、それをジオメトリーヘッド（２０ｍｍ）上に置く。
６．１０μＬのヒアルロン酸を大きい方のプラグに加え、両方のプラグが接触するまでジオメトリーヘッドを下げる。水和を維持するために、２０ｍＬのＨＢＳＳをペトリ皿に加える。
７．ステップを実行し、要求された時、そのファイルに名前を付ける。
８．時々ＨＢＳＳが蒸発していないかどうかをチェックする。それが蒸発している場合には、さらに加える。
９．ステップが一旦済んだら、Ｄａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓを開き、そのファイルを開く。
１０．そのファイル名の上を右クリックし、Ｔａｂｌｅを選択する。サンプルポイントを含む表が現れる。各サンプルについての異なるステップについて、プルダウンタブが出現し、１回に１ステップを選択することができ、スクリーン上にその値が現れる。
１１．コピーし、Ｅｘｃｅｌにペーストする。
１２．分での時間およびＮ／ｍでのトルクを計算する。
１３．総摩擦力（Ｆ）を以下のように計算する：
【数１】
0006603650.tif 000008
式中、α＝１、Ｍ＝トルク、ｒｏ＝プラグの外側半径、およびｒｉ＝プラグの内側半径。
１４．軟骨プラグの単位面積あたりの平均摩擦力（ｆ）を以下のように計算する：
【数２】
0006603650.tif 000009
式中、ｒｏ＝プラグの外側半径、ｒｉ＝プラグの内側半径、およびＦ＝総摩擦力。
１５．以下を用いて摩擦係数を計算する：μ＝Ｆ／Ｗ、式中、Ｆ＝総摩擦力およびＷ＝重量。
【００９１】
データ
図１は、非損傷軟骨（アグリカン欠乏がない）の場合における摩擦力を示し、本開示によるラブリシン模倣体ペプチドグリカンで、軟骨表面間の摩擦が増加することを示している。図２は、損傷軟骨（変形性関節症をシミュレートするアグリカン欠乏がある）の場合における摩擦力を示し、本開示によるラブリシン模倣体ペプチドグリカンが軟骨に加えられた場合、軟骨表面間の摩擦が減少することを示している。したがって、本開示によるラブリシン模倣体ペプチドグリカンが２つの軟骨表面間に適用された場合、より高い振動剪断において摩擦力が減少し、それが、素早い動作中に軟骨を保護し得ることを示唆した。
【００９２】
実施例３：硝子体液模倣体
方法
本開示による合成ペプチドグリカンは、以下のように試験することができる。粘弾性は、レオメーター、例えば、ＴＡＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＡＲＧ２レオメーターを用いて測定することができる。円錐および平板ジオメトリーまたは平行板ジオメトリーを用いることができる。（例えば、ウシの）硝子体液を、ジオメトリー内に置くことができる。温度は調節することができ、周波数掃引は、約０．１Ｈｚのから約１００Ｈｚまでの範囲（例えば、１Ｈｚ）で実施することができ、貯蔵弾性率、損失弾性率、および複素弾性率は、約０．１Ｐａ〜約１０Ｐａの間（例えば、１０Ｐａ）での振動剪断応力において測定することができる。温度：３７℃。
【００９３】
データ
図３Ａは、未処理の（対照）、ＰＢＳ緩衝液処理された、およびトリプシン処理されたウシ硝子体液におけるレオロジー的測定を示し、トリプシン処理されたウシ硝子体は、より低い粘度を示し、したがって、疾患状態を模倣していた。
【００９４】
図３Ｂおよび図３Ｃにおいて、ＧＡＨは、コンドロイチン硫酸を、それに（ＢＭＰＨを介して）共有結合したヒアルロン酸結合性ペプチド（すなわち、ＧＡＨＷＱＦＮＡＬＴＶＲＧＧＧＣ）と共に含む合成ペプチドグリカンであり、ＷＹＲは、コンドロイチン硫酸を、それに（ＢＭＰＨを介して）共有結合したコラーゲンＩＩ結合性ペプチド（すなわち、ＷＹＲＧＲＬＧＣ）と共に含む合成ペプチドグリカンであり、ＷＹＲＧＡＨは、たった今記載された２つの合成ペプチドグリカンＷＹＲとＧＡＨの混合物である。
【００９５】
図３Ｂは、合成ペプチドグリカンでの処理後の硝子体液機械的強度の回復を示している。
【００９６】
図３Ｃは、硝子体液の機械的強度が合成ペプチドグリカンの存在下で十分に維持されることを示している。
【００９７】
図３Ａ、３Ｂ、および３Ｃに示されたデータに基づいて、本合成ペプチドグリカンは、硝子体液を冒す疾患および障害を処置するために用いられ得ることが企図される。
【図１】
0006603650.tif 000010
【図２】
0006603650.tif 000011
【図３】
0006603650.tif 000012
【配列表】
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