(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
0006498773.tif 000122
［式中、
Ｒ１は、式（Ｉａ）または式（Ｉｂ）：
【化２】
0006498773.tif 000123
で示されるとおりであり；
ＧおよびＧ’は、各々、ＣまたはＮである：ただし、Ｇのうち２個未満またはＧ’のうち２個未満がＮであり；
Ｒ２は、各々独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ５アルキルであり；
Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｏ（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、シアノ、（ＣＨ２）０−５ＮＨ２、またはＮＯ２であり；
ジアゼピン環系中の二重線
【化３】
0006498773.tif 000124
は、各々独立して、単結合または二重結合を表し；
Ｒ５が結合する、すなわち、Ｒ５が結び付く、Ｎとの二重線
【化４】
0006498773.tif 000125
が単結合ならば、Ｒ５は、各々、Ｈであり、二重線が二重結合ならば、不在であり；
Ｒ６が結合する、すなわち、Ｒ６が結び付く、Ｃとの二重線
【化５】
0006498773.tif 000126
が単結合ならば、Ｒ６は、各々、Ｈ、ＯＨ、ＳＯ３Ｎａ、またはＳＯ３Ｋであり、二重線が二重結合ならば、不在であり；
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、各々独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ５アルキル、Ｃ≡Ｃ（ＣＨ２）１−５Ｘ２、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、シアノ、ＮＯ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−８（Ｃ１−３アルキル）、（ＣＨ２）０−５Ｘ２、Ｏ（ＣＨ２）２−５Ｘ２、３−ないし７−員のシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）、５−ないし６−員のアリールまたはヘテロアリール（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）、
【化６】
0006498773.tif 000127
であるか；
あるいは、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９またはＲ１０が、ＮであるＧまたはＧ’に結合する、すなわち、結び付く場合、その時にはＲ７、Ｒ８、Ｒ９またはＲ１０は不在であり；
式（Ｉｂ）中の環Ｃにおける点線はＣ１−Ｃ２、Ｃ２−Ｃ３またはＣ２−Ｒ１１の二重結合が任意に存在することを示し；
Ｒ１１は、Ｈ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、＝ＣＨ（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）１−５Ｘ２、Ｃ≡Ｃ（ＣＨ２）１−５Ｘ２、Ｃ１−Ｃ５アルキル、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、シアノ、ＮＯ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−８（Ｃ１−３アルキル）、（ＣＨ２）０−５Ｘ２、４−ないし７−員のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）、３−ないし７−員のシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）、５−ないし６−員のアリールまたはヘテロアリール（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）であり；
Ｒ１１’は、Ｃ１−Ｃ２、Ｃ２−Ｃ３またはＣ２−Ｒ１１の二重結合が存在するならば、不在であり、そうでなければＨであり；
Ｘは、
【化７】
0006498773.tif 000128
であり；
Ｘ１は、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨ、Ｓ（Ｏ）０−２、３−ないし７−員のシクロアルキレンまたはヘテロシクロアルキレン（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）、６員のアリーレン（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）、あるいは５員のヘテロアリーレン（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）であり；
Ｘ２は、各々独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、Ｏ（Ｃ１−Ｃ３アルキレン）、ＣＯ２Ｈ、Ｎ３、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯ２（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、Ｎ（Ｃ１−Ｃ５アルキル）２、ＳＨ、ＣＨＯ、Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２Ｎ（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、ＮＨＮＨ２、またはＣ（＝Ｏ）ＮＨＮＨ２であり；
ｘおよびｙは、独立して、１、２または３であり；
Ｙは、各々独立して、ＣＨ２、Ｃ＝ＯまたはＣＨＲ１２であり；ここで、Ｒ１２は、各々独立して、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＣ１−Ｃ３アルキルであり；および
Ｙ’およびＹ’’は、独立して、ＣＨ２、Ｃ＝ＯまたはＣＨＲ１２であり、ここでＲ１２は、各々独立して、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＣ１−Ｃ３アルキルである、ただしＹ’およびＹ’’のうち少なくとも１つは存在する（すなわち、関連した下付き文字が１である）］
で示される構造を有するベンゾジアゼピン二量体またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２】
式（ＩＩａ）：
【化８】
0006498773.tif 000129
で示される構造を有する、請求項１に記載のベンゾジアゼピン二量体。
【請求項３】
式（ＩＩａ’）：
【化９】
0006498773.tif 000130
［式中
Ｒ９は、各々独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＭｅ、ＮＨ２、ＮＭｅ２、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−８Ｍｅ、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、または
【化１０】
0006498773.tif 000131
であり；および
Ｘは
【化１１】
0006498773.tif 000132
である］
で示される構造を有する、請求項２に記載のベンゾジアゼピン二量体。
【請求項４】
【化１２】
0006498773.tif 000133
【化１３】
0006498773.tif 000134
【化１４】
0006498773.tif 000135
【化１５】
0006498773.tif 000136
【化１６】
0006498773.tif 000137
からなる群より選択される構造を有する、請求項１に記載のベンゾジアゼピン二量体。
【請求項５】
式（ＩＩｂ）：
【化１７】
0006498773.tif 000138
で示される構造を有する、請求項１に記載のベンゾジアゼピン二量体。
【請求項６】
式（ＩＩｂ’）：
【化１８】
0006498773.tif 000139
［式中： 
Ｒ９はＨ、ＯＨ、ＯＭｅ、ＮＨ２、ＮＭｅ２、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−８Ｍｅ、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、または
【化１９】
0006498773.tif 000140
であり；
Ｒ１１はＨ、＝ＣＨ２、ＣＨ＝ＣＨＭｅ、＝ＣＨＭｅ、Ｃ≡ＣＣＨ２ＮＨ２、
【化２０】
0006498773.tif 000141
であり；および
Ｘは、
【化２１】
0006498773.tif 000142
である］
で示される構造を有する、請求項５に記載のベンゾジアゼピン二量体。
【請求項７】
【化２２】
0006498773.tif 000143
からなる群より選択される構造を有する、請求項１に記載のベンゾジアゼピン二量体。
【請求項８】
式（ＩＩｃ）：
【化２３】
0006498773.tif 000144
［式中：
Ｇ’の１つがＮであり、その他がＣである］
で示される構造を有する、請求項１に記載のベンゾジアゼピン二量体。
【請求項９】
式（ＩＩｃ−０１）：
【化２４】
0006498773.tif 000145
で示される構造を有する、請求項１に記載のベンゾジアゼピン二量体。
【請求項１０】
式（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）または（ＩＩＩｃ’’）：
【化２５】
0006498773.tif 000146
［式中、
Ｒ１は、式（Ｉａ）または式（Ｉｂ）：
【化２６】
0006498773.tif 000147
で示されるとおりであり；
ＧおよびＧ’は、各々、ＣまたはＮである：ただし、Ｇのうち２個未満またはＧ’のうち２個未満がＮであり；
Ｒ２は、各々独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ５アルキルであり；
Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｏ（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、シアノ、（ＣＨ２）０−５ＮＨ２、またはＮＯ２であり；
ジアゼピン環系中の二重線
【化２７】
0006498773.tif 000148
は、各々独立して、単結合または二重結合を表し；
Ｒ５が結合する、Ｎとの二重線
【化２８】
0006498773.tif 000149
が単結合ならば、Ｒ５は、各々、Ｈであり、二重線が二重結合ならば、不在であり；
Ｒ６が結合する、Ｃとの二重線
【化２９】
0006498773.tif 000150
が単結合ならば、Ｒ６は、各々、Ｈ、ＯＨ、ＳＯ３Ｎａ、またはＳＯ３Ｋであり、二重線が二重結合ならば、不在であり；
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、各々独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ５アルキル、Ｃ≡Ｃ（ＣＨ２）１−５Ｘ２、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、シアノ、ＮＯ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−８（Ｃ１−３アルキル）、（ＣＨ２）０−５Ｘ２、Ｏ（ＣＨ２）２−５Ｘ２、３−ないし７−員のシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）、５−ないし６−員のアリールまたはヘテロアリール（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）、
【化３０】
0006498773.tif 000151
であるか；
あるいは、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９またはＲ１０が、ＮであるＧまたはＧ’に結合する場合、その時にはＲ７、Ｒ８、Ｒ９またはＲ１０は不在であり；
式（Ｉｂ）中の環Ｃにおける点線はＣ１−Ｃ２、Ｃ２−Ｃ３またはＣ２−Ｒ１１の二重結合が任意に存在することを示し；
Ｒ１１は、Ｈ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、＝ＣＨ（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）１−５Ｘ２、Ｃ≡Ｃ（ＣＨ２）１−５Ｘ２、Ｃ１−Ｃ５アルキル、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、シアノ、ＮＯ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−８（Ｃ１−３アルキル）、（ＣＨ２）０−５Ｘ２、４−ないし７−員のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）、３−ないし７−員のシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）、５−ないし６−員のアリールまたはヘテロアリール（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）であり；
Ｒ１１’は、Ｃ１−Ｃ２、Ｃ２−Ｃ３またはＣ２−Ｒ１１の二重結合が存在するならば、不在であり、そうでなければＨであり；
Ｒ５０は、各々独立して、Ｈ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、Ｏ（Ｃ２−Ｃ３アルキレン）、Ｏ（Ｃ２−Ｃ３アルキニル）、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＣＮであり；
Ｘは、
【化３１】
0006498773.tif 000152
であり；
Ｘ１は、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨ、Ｓ（Ｏ）０−２、３−ないし７−員のシクロアルキレンまたはヘテロシクロアルキレン（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）、６員のアリーレン（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）、あるいは５員のヘテロアリーレン（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）であり；
Ｘ２は、各々独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、Ｏ（Ｃ１−Ｃ３アルキレン）、ＣＯ２Ｈ、Ｎ３、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯ２（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、Ｎ（Ｃ１−Ｃ５アルキル）２、ＳＨ、ＣＨＯ、Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２Ｎ（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、ＮＨＮＨ２、またはＣ（＝Ｏ）ＮＨＮＨ２であり；
ｘおよびｙは、独立して、１、２または３であり；
Ｙは、各々独立して、ＣＨ２、Ｃ＝ＯまたはＣＨＲ１２であり；ここで、Ｒ１２は、各々独立して、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＣ１−Ｃ３アルキルであり；および
Ｙ’およびＹ’’は、独立して、ＣＨ２、Ｃ＝ＯまたはＣＨＲ１２であり、ここでＲ１２は、各々独立して、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＣ１−Ｃ３アルキルである、ただしＹ’およびＹ’’のうち少なくとも１つは存在し；
Ｔは自己犠牲基であり；
ｔは０または１であり；
ＡＡａおよび各ＡＡｂは、アラニン、β−アラニン、γ−アミノ酪酸、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、γ−カルボキシグルタミン酸、シトルリン、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、ノルロイシン、ノルバリン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリンからなる群より独立して選択され；
ｕは０または１であり；
ｐは１、２、３または４であり；
ｑは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２であり；
ｒは１、２、３、４または５であり；
ｓは０または１であり；
Ｒ３１は
【化３２】
0006498773.tif 000153
であり；
ＸＡは
【化３３】
0006498773.tif 000154
ここで、ｘおよびｙは、各々、１、２または３である：ただし、ｘおよびｙの合計は２または４であり；星印（＊）は、各ＸＡと隣接するＯおよびＲ１との結合の位置を示し；波線
【化３４】
0006498773.tif 000155
は、各ＸＡと、Ｔが存在するならば、Ｔとの、あるいはＴが不在であるならば、ＡＡａとの結合の位置を示す］
で示される構造を有する、ベンゾジアゼピン二量体−リンカー化合物。
【請求項１１】
式（ＩＩＩａ’）：
【化３５】
0006498773.tif 000156
［式中
Ｒ９は、各々独立して、Ｈ、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−４Ｈ、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−４（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、ＯＨ、Ｃｌ、Ｆ、またはＢｒである］
で示される構造を有する、請求項１０に記載のベンゾジアゼピン二量体−リンカー化合物。
【請求項１２】
【化３６】
0006498773.tif 000157
【化３７】
0006498773.tif 000158
【化３８】
0006498773.tif 000159
からなる群より選択される構造を有する、請求項１０に記載のベンゾジアゼピン二量体−リンカー化合物。
【請求項１３】
式（ＩＩＩｂ’）
【化３９】
0006498773.tif 000160
で示される構造を有する、請求項１０に記載のベンゾジアゼピン二量体−リンカー化合物。
【請求項１４】
【化４０】
0006498773.tif 000161
【化４１】
0006498773.tif 000162
【化４２】
0006498773.tif 000163
からなる群より選択される構造を有する、請求項１０に記載のベンゾジアゼピン二量体−リンカー化合物。
【請求項１５】
式（ＩＩＩｃ’）
【化４３】
0006498773.tif 000164
で示される構造を有する、請求項１０に記載のベンゾジアゼピン二量体−リンカー化合物。
【請求項１６】
【化４４】
0006498773.tif 000165
【化４５】
0006498773.tif 000166
【化４６】
0006498773.tif 000167
からなる群より選択される構造を有する、請求項１０に記載のベンゾジアゼピン二量体−リンカー化合物。
【請求項１７】
式（ＩＩＩｃ−０８）
【化４７】
0006498773.tif 000168
で示される構造を有する、請求項１０に記載のベンゾジアゼピン二量体−リンカー化合物。
【請求項１８】
式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（ＩＶｃ）または（ＩＶｃ’’）：
【化４８】
0006498773.tif 000169
【化４９】
0006498773.tif 000170
［式中
Ａｂは抗体であり；
Ｔは自己犠牲基であり；
ｔは０または１であり；
ＡＡａおよび各ＡＡｂは、アラニン、β−アラニン、γ−アミノ酪酸、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、γ−カルボキシグルタミン酸、シトルリン、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、ノルロイシン、ノルバリン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリンからなる群より独立して選択され；
ｕは０または１であり；
ｐは１、２、３または４であり；
ｑは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２であり；
ｒは１、２、３、４または５であり；
ｓは０または１であり；
ＸＡは
【化５０】
0006498773.tif 000171
であって、ここで星印（＊）はＸＡの隣接するＯとの結合の位置を示し、波線
【化５１】
0006498773.tif 000172
はＸＡの、Ｔが存在するとすれば、Ｔとの、あるいはＴが不在とすれば、ＡＡａとの結合の位置を示し；
Ｒ４０は
【化５２】
0006498773.tif 000173
であり；
ここで、Ａｂと結合するＲ４０のオープン価電子帯が星印（＊）で示され、（ＣＨ２）ｒと結合するＲ４０のオープン価電子帯が波線
【化５３】
0006498773.tif 000174
で示され；
ｍは１、２、３または４であり；
Ｒ１は、式（Ｉａ）または式（Ｉｂ）：
【化５４】
0006498773.tif 000175
で示されるとおりであり；
ＧおよびＧ’は、各々、ＣまたはＮである：ただし、Ｇのうち２個未満またはＧ’のうち２個未満がＮであり；
Ｒ２は、各々独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ５アルキルであり；
Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｏ（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、シアノ、（ＣＨ２）０−５ＮＨ２、またはＮＯ２であり；
ジアゼピン環系中の二重線
【化５５】
0006498773.tif 000176
は、各々独立して、単結合または二重結合を表し；
Ｒ５が結合する、Ｎとの二重線
【化５６】
0006498773.tif 000177
が単結合ならば、Ｒ５は、各々、Ｈであり、二重線が二重結合ならば、不在であり；
Ｒ６が結合する、Ｃとの二重線
【化５７】
0006498773.tif 000178
が単結合ならば、Ｒ６は、各々、Ｈ、ＯＨ、ＳＯ３Ｎａ、またはＳＯ３Ｋであり、二重線が二重結合ならば、不在であり；
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、各々独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ５アルキル、Ｃ≡Ｃ（ＣＨ２）１−５Ｘ２、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、シアノ、ＮＯ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−８（Ｃ１−３アルキル）、（ＣＨ２）０−５Ｘ２、Ｏ（ＣＨ２）２−５Ｘ２、３−ないし７−員のシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）、５−ないし６−員のアリールまたはヘテロアリール（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）、
【化５８】
0006498773.tif 000179
であるか；
あるいは、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９またはＲ１０が、ＮであるＧまたはＧ’に結合する場合、その時にはＲ７、Ｒ８、Ｒ９またはＲ１０は不在であり；
式（Ｉｂ）中の環Ｃにおける点線はＣ１−Ｃ２、Ｃ２−Ｃ３またはＣ２−Ｒ１１の二重結合が任意に存在することを示し；
Ｒ１１は、Ｈ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、＝ＣＨ（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）１−５Ｘ２、Ｃ≡Ｃ（ＣＨ２）１−５Ｘ２、Ｃ１−Ｃ５アルキル、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、シアノ、ＮＯ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−８（Ｃ１−３アルキル）、（ＣＨ２）０−５Ｘ２、４−ないし７−員のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）、３−ないし７−員のシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）、５−ないし６−員のアリールまたはヘテロアリール（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）であり；
Ｒ１１’は、Ｃ１−Ｃ２、Ｃ２−Ｃ３またはＣ２−Ｒ１１の二重結合が存在するならば、不在であり、そうでなければＨであり；
Ｒ５０は、各々独立して、Ｈ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、Ｏ（Ｃ２−Ｃ３アルキレン）、Ｏ（Ｃ２−Ｃ３アルキニル）、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＣＮであり；
Ｘは、
【化５９】
0006498773.tif 000180
であり；
Ｘ１は、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨ、Ｓ（Ｏ）０−２、３−ないし７−員のシクロアルキレンまたはヘテロシクロアルキレン（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）、６員のアリーレン（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）、あるいは５員のヘテロアリーレン（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）であり；
Ｘ２は、各々独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、Ｏ（Ｃ１−Ｃ３アルキレン）、ＣＯ２Ｈ、Ｎ３、ＣＯ２（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、Ｎ（Ｃ１−Ｃ５アルキル）２、ＳＨ、ＣＨＯ、Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２Ｎ（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、ＮＨＮＨ２、またはＣ（＝Ｏ）ＮＨＮＨ２であり；
ｘおよびｙは、独立して、１、２または３であり；
Ｙは、各々独立して、ＣＨ２、Ｃ＝ＯまたはＣＨＲ１２であり；ここで、Ｒ１２は、各々独立して、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＣ１−Ｃ３アルキルであり；および
Ｙ’およびＹ’’は、独立して、ＣＨ２、Ｃ＝ＯまたはＣＨＲ１２であり、ここでＲ１２は、各々独立して、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＣ１−Ｃ３アルキルである、ただしＹ’およびＹ’’のうち少なくとも１つは存在する］
で示される構造を有する、ベンゾジアゼピン二量体と、抗体とのコンジュゲート。
【請求項１９】
式（ＩＶａ’）：
【化６０】
0006498773.tif 000181
［式中
Ｒ９は、各々独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＭｅ、ＮＨ２、ＮＭｅ２、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−８Ｍｅ、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、または
【化６１】
0006498773.tif 000182
である］
で示される構造を有する、請求項１８に記載のコンジュゲート。
【請求項２０】
式（ＩＶｂ’）：
【化６２】
0006498773.tif 000183
［式中
Ｒ９は、Ｈ、ＯＨ、ＯＭｅ、ＮＨ２、ＮＭｅ２、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−８Ｍｅ、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、または
【化６３】
0006498773.tif 000184
であり；
Ｘは
【化６４】
0006498773.tif 000185
である］
で示される構造を有する、請求項１８に記載のコンジュゲート。
【請求項２１】
式（ＩＶｃ’）：
【化６５】
0006498773.tif 000186
［式中
Ｒ９はＨ、ＯＨ、ＯＭｅ、ＮＨ２、ＮＭｅ２、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−８Ｍｅ、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、または
【化６６】
0006498773.tif 000187
であり；および
Ｘは
【化６７】
0006498773.tif 000188
である］
で示される構造を有する、請求項１８に記載のコンジュゲート。
【請求項２２】
抗体が、抗−メソテリン、抗−グリピカン−３、抗−ＣＤ７０または抗−フコシルＧＭ１抗体である、請求項１８に記載のコンジュゲート。
【請求項２３】
請求項１８に記載のコンジュゲート、および医薬的に許容される賦形剤を含む、医薬製剤。
【請求項２４】
請求項１８に記載のコンジュゲートを含む、がんを治療するための医薬組成物。
【請求項２５】
がんが、肺がん、卵巣がん、胃がん、腎臓がんまたは肝臓がんである、請求項２４に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、２０１５年１月１４日付け出願の米国仮特許出願番号６２／１０３,１５７、および２０１５年９月９日付け出願の出願番号６２／２１５,９２８の優先権を主張するものであり、それらの内容はすべて出典を明示することにより本明細書に組み込まれるものとする。
【０００２】
（発明の技術分野）
本発明は、ベンゾジアゼピン二量体、それより誘導される二量体−リンカー化合物、およびそのコンジュゲート、ならびにそれらの調製および使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
ベンゾジアゼピン環系を有する数種の天然に存する細胞傷害性化合物が知られている。分子骨格においてジアゼピン環に縮合した５員ピロリジン環のさらなる存在を反映して、かかる化合物は、通常、ピロロベンゾジアゼピンまたはＰＢＤとも称される。一例として、トマイマイシンおよびアントラマイシンが挙げられる。
【化１】
0006498773.tif 000002
【０００４】
ＰＢＤは抗生物質および抗腫瘍活性を有し、その後者の特性によりＰＢＤに抗がん薬としての関心がもたらされる。機構的に、ＰＢＤは配列選択的方式にてＤＮＡのマイナー・グルーブに結合し、結合すると、そのＤＮＡをアルキル化する。異なる置換基の構造活性相関（ＳＡＲ）が研究されてきた（Antonowら、2010；Thurstonら、1999）。
【０００５】
さらなる研究はＰＢＤ二量体が抗がん剤として特別な有望性を示すことを明らかにした。典型的なＰＢＤ二量体のコア構造は、式（Ａ−１）：
【化２】
0006498773.tif 000003
で表すことができ、ここでＸは二量体の２つの半分の単位を連結する架橋基である。
【０００６】
単量体のＰＢＤと同様に、その二量体はＤＮＡのマイナー・グルーブの結合剤−アルキル化剤である。二官能性であるため、二量体によるアルキル化はＤＮＡの架橋をもたらし、ＤＮＡの修復をより困難なものとする。（ＤＮＡのアルキル化はイミン基を介して起こる。イミン基の一つが還元されているＰＢＤはそれでもＤＮＡをアルキル化できるが、それを架橋し得ない。それらは生物学的に未だに活性であるが、一般にそれほどではないにせよ、それらの異なる薬物動態特性はある用途に好ましいかもしれない。）ＰＢＤの抗腫瘍剤としての天然に存する単量体から合成単量体を介する合成二量体への進化について再検討するには、Hartley 2011を参照のこと。
【０００７】
ＰＢＤ二量体のＳＡＲが、Ａ／Ａ’およびＣ／Ｃ’環の置換基、Ｃ／Ｃ’環の不飽和、架橋基Ｘの構造および長さ、およびＢ／Ｂ’環にあるイミン二重結合の酸化または還元、ならびにそのような特徴の組み合わせを通して研究された。Boseら、1992；Gregsonら、1999；Gregsonら、2001aおよび2001b；Gregsonら、2004；Gregsonら、2009；Hartleyら、2012；Howardら、2007；Howardら、2009a；Howardら、2010；Howardら、2013aおよび2013b；Liuら、2007；Thurstonら、1996；Thurstonら、2006；およびThurstonら、2008を参照のこと。上記されるように、大抵のＰＢＤ二量体は、８／８’架橋を介して接合されるが、７／７’架橋も開示されている（Howardら、2009b）。
【０００８】
強い関心を集めている抗がん剤の型は抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ、免疫コンジュゲートとも称される）である。ＡＤＣ中で、治療剤（薬物、ペイロードまたは弾頭とも称される）は抗体（その抗原（腫瘍関連抗原）ががん細胞により発現される）と共有結合する。抗体は、抗原と結合することにより、ＡＤＣをがん部位に送達する。そこで、共有結合が切断されるか、抗体が分解され、治療剤の放出がもたらされる。逆に、ＡＤＣが血流系を循環している間は、治療剤は抗体と共有結合しているため、不活性のままである。かくして、ＡＤＣに使用される治療剤は、それが局所的に放出されるため、従来の化学療法剤と比べてより一層強力（すなわち、細胞傷害能を有する）とすることができる。ＡＤＣを再検討するには、Schramaら、2006を参照のこと。
【０００９】
ＰＢＤ二量体はＡＤＣ中の薬物として提案されている。リンカーと抗体との接続は、Ｃ／Ｃ’環に位置する官能基、架橋基Ｘを介するか、Ｂ／Ｂ’環におけるイミン基を横切って付加することにより行うことができる。Beau-Larvorら、2014；Bouchardら、2013；Commerconら、2013aおよび2013b；Flygareら、2013；Gauzyら、2012；Howard、2104a-2014e；Howardら、2011；Howardら、2013cおよび2013d；Howardら、2014a-2014h；Jeffreyら、2013；Jeffreyら、2014aおよび2014b；およびZhaoら、2014を参照のこと。
【００１０】
もう一つ別の型のベンゾジアゼピン二量体もまた、ＡＤＣにおいて使用されるための治療剤として提案されている。構造的に、この型は、式（Ａ−２）および（Ａ−３）に示されるように、各Ｃ／Ｃ’環にさらにフェニル環が縮合したＰＢＤ二量体として考えられてもよい。Chariら、2013；Liら、2013；Fishkinら、2014；Liら、2014を参照のこと。
【化３】
0006498773.tif 000004
【００１１】
テトラヒドロイソキノリン［２,１−ｃ］［１,４］ベンゾジアゼピンなどの他の環系を有するベンゾジアゼピン化合物も開示されている。Kothakondaら、2004を参照のこと。
本明細書において第１の著者または発明者および年度により引用される文献に関して十分な引用部を本明細書の最後に列挙する。
【発明の概要】
【００１２】
本発明は、新規なベンゾジアゼピン二量体であって、好ましくは少なくとも一つのベンゾジアゼピン単位が、ベンゾジアゼピン環系に縮合したテトラヒドロイソキノリン（ＴＨＩＱ）環系を有する、新規なベンゾジアゼピン二量体を提供する。所望により、ベンゾジアゼピン環系にあるイミン結合は還元され得る。
【化４】
0006498773.tif 000005
【００１３】
二量体は、両方の半分の単位でＴＨＩＱ環系を有することができ（「ＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体」または「ＴＨＩＱホモ二量体」）、あるいは一方の単位でＴＨＩＱ環系を有し、他方の単位で異なる、ＰＢＤ環系などのベンゾジアゼピン環系を有することができる（一般に、「ＴＨＩＱヘテロ二量体」またはこの特定の例では、「ＴＨＩＱ−ＰＢＤ二量体」）。ＴＨＩＤ−ＴＨＩＤ二量体で、２個の単位は、同じとすること（「対称ＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体」）も、異なること（「非対称ＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体」）もできる。
【００１４】
かくして、本発明は、構造式（Ｉ）：
【化５】
0006498773.tif 000006
［式中、
Ｒ１は、式（Ｉａ）または式（Ｉｂ）：
【化６】
0006498773.tif 000007
で示されるとおりであり；
ＧおよびＧ’は、各々、ＣまたはＮである：ただし、Ｇのうち２個未満またはＧ’のうち２個未満がＮであり；
Ｒ２は、各々独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ５アルキルであり；
Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｏ（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、シアノ、（ＣＨ２）０−５ＮＨ２、またはＮＯ２であり；
ジアゼピン環系中の二重線
【化７】
0006498773.tif 000008
は、各々独立して、単結合または二重結合を表し；
Ｒ５が結合する、すなわち、Ｒ５が結び付く、Ｎとの二重線
【化８】
0006498773.tif 000009
が単結合ならば、Ｒ５は、各々、Ｈであり、二重線が二重結合ならば、不在であり；
Ｒ６が結合する、すなわち、Ｒ６が結び付く、Ｃとの二重線
【化９】
0006498773.tif 000010
が単結合ならば、Ｒ６は、各々、Ｈ、ＯＨ、ＳＯ３Ｎａ、またはＳＯ３Ｋであり、二重線が二重結合ならば、不在であり；
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、各々独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ５アルキル、Ｃ≡Ｃ（ＣＨ２）１−５Ｘ２、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、シアノ、ＮＯ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−８（Ｃ１−３アルキル）、（ＣＨ２）０−５Ｘ２、Ｏ（ＣＨ２）２−５Ｘ２、３−ないし７−員のシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）、５−ないし６−員のアリールまたはヘテロアリール（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）、
【化１０】
0006498773.tif 000011
であるか；
あるいは、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９またはＲ１０が、ＮであるＧまたはＧ’に結合する、すなわち、結び付く場合、その時にはＲ７、Ｒ８、Ｒ９またはＲ１０は不在であり；
式（Ｉｂ）中の環Ｃにおける点線はＣ１−Ｃ２、Ｃ２−Ｃ３またはＣ２−Ｒ１１の二重結合が任意に存在することを示し；
Ｒ１１は、Ｈ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、＝ＣＨ（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）１−５Ｘ２、Ｃ≡Ｃ（ＣＨ２）１−５Ｘ２、Ｃ１−Ｃ５アルキル、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、シアノ、ＮＯ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−８（Ｃ１−３アルキル）、（ＣＨ２）０−５Ｘ２、４−ないし７−員のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）、３−ないし７−員のシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）、５−ないし６−員のアリールまたはヘテロアリール（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）であり；
Ｒ１１’は、Ｃ１−Ｃ２、Ｃ２−Ｃ３またはＣ２−Ｒ１１の二重結合が存在するならば、不在であり、そうでなければＨであり；
Ｘは、
【化１１】
0006498773.tif 000012
であり；
Ｘ１は、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨ、Ｓ（Ｏ）０−２、３−ないし７−員のシクロアルキレンまたはヘテロシクロアルキレン（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）、６員のアリーレン（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）、あるいは５員のヘテロアリーレン（置換されていないか、あるいは（ＣＨ２）０−５Ｘ２またはＯ（ＣＨ２）２−５Ｘ２で置換される）であり；
Ｘ２は、各々独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、Ｏ（Ｃ１−Ｃ３アルキレン）、ＣＯ２Ｈ、Ｎ３、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯ２（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、Ｎ（Ｃ１−Ｃ５アルキル）２、ＳＨ、ＣＨＯ、Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２Ｎ（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、ＮＨＮＨ２、またはＣ（＝Ｏ）ＮＨＮＨ２であり；
ｘおよびｙは、独立して、１、２または３であり；
Ｙは、各々独立して、ＣＨ２、Ｃ＝ＯまたはＣＨＲ１２であり；ここで、Ｒ１２は、各々独立して、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＣ１−Ｃ３アルキルであり；および
Ｙ’およびＹ’’は、独立して、ＣＨ２、Ｃ＝ＯまたはＣＨＲ１２であり、ここでＲ１２は、各々独立して、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＣ１−Ｃ３アルキルである、ただしＹ’およびＹ’’のうち少なくとも１つは存在する（すなわち、関連した下付き文字が１である）］
で示されるベンゾジアゼピン二量体またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１５】
もう一つ別の実施態様において、本発明は、標的細胞上の化学物質に特異的または優先的に結合する標的とする部分と共有結合した、好ましくはがん細胞である細胞を標的とする、式（Ｉ）の二量体を含むコンジュゲートを提供する。標的とする部分は抗体であることが好ましく、より好ましくはモノクローナル抗体であり、さらにより好ましくはヒトモノクローナル抗体であり、化学物質は腫瘍関連抗原である。腫瘍関連抗原は、がん細胞の表面に提示される抗原であるか、またはがん細胞により周辺の細胞外間隙に分泌される抗原であり得る。好ましくは、腫瘍関連抗原は、正常な細胞と比べてがん細胞により過剰に発現される抗原であるか、または正常な細胞ではなくがん細胞により発現される抗原である。
【００１６】
もう一つ別の実施態様において、標的とする部分とコンジュゲートするのに適する、反応性官能基を有するリンカー部分と共有結合した式（Ｉ）で示される二量体が提供される。
【００１７】
もう一つ別の実施態様において、がんを患っている対象においてかかるがんを治療する方法であって、該対象に治療的に効果的な量の本発明の二量体または標的とする部分とのそのコンジュゲートを投与することを含む、方法が提供される。もう一つ別の実施態様において、がんを患っている対象にてかかるがんを治療するための医薬を調製するのに、本発明の二量体または標的とする部分とのそのコンジュゲートの使用が提供される。本発明の二量体または標的とする部分とのそのコンジュゲートは、がん細胞のインビトロ、エクスビボまたはインビボにおける増殖を阻害するのにも使用され得る。特に、がんは肺がん、胃がん、卵巣がん、腎臓がんまたは肝臓がんであり得る。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本発明の二量体の調製に使用される種々の中間体を合成するためのスキームを示す。
【図２】本発明の二量体の調製に使用される種々の中間体を合成するためのスキームを示す。
【図３】本発明の二量体の調製に使用される種々の中間体を合成するためのスキームを示す。
【図４】対称的なＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体を調製するための一般的スキームを示す。図４ａは特定のＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体の合成を示す。
【図５】非対称的なＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体を調製するための一般的スキームを示す。
【００１９】
【図６】本発明の二量体を調製するためのスキームであって、ここで２つの二量体の半分の単位を連結する架橋が左右対称ではないところの、スキームを示す。
【図７】図７ａおよび７ｂはＴＨＩＱ−ＰＢＤ二量体を調製するためのスキームを示す。
【図８】非対称的なさらなるＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体を調製するためのスキームを示す。
【図９】もう一つ別のＴＨＩＱ−ＰＢＤ二量体を調製するためのスキームを示す。
【００２０】
【図１０】本発明の二量体を合成するためのスキームであって、ここで２つの二量体の半分の単位を連結する架橋が、ＡＤＣを構築するためのリンカー基を付着するのに適する、アミン基を有するところの、スキームを示す。
【図１１】本発明の二量体を合成するためのスキームであって、ここで２つの二量体の半分の単位を連結する架橋が、ＡＤＣを構築するためのリンカー基を付着するのに適する、アミン基を有するところの、スキームを示す。
【図１２】下記にて「（ａ）型」と称される二量体−リンカー化合物の合成のためのスキームを示す。
【図１３】下記にて「（ａ）型」と称される二量体−リンカー化合物の合成のためのスキームを示す。
【図１４】下記にて「（ｂ）型」と称される二量体−リンカー化合物を製造するのに使用される中間体の合成のためのスキームを示す。
【図１５】下記にて「（ｂ）型」と称される二量体−リンカー化合物を製造するのに使用される中間体の合成のためのスキームを示す。
【図１６】かかる二量体−リンカー化合物のそうして製造された中間体からの合成を示す。
【００２１】
【図１７】下記にてＴＨＩＱ−ＡＺＩ二量体と称される型の二量体を調製するためのスキームを示す。
【図１８】図１８ａおよび１８ｂは、（ａ）型二量体−リンカー化合物を製造するのに適する二量体の合成、およびそこから製造される二量体−リンカーを合わせて示す。
【図１９】さらなるＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体を合成するためのスキームを示す。
【図２０】さらなるＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体を合成するためのスキームを示す。
【図２１】さらなる「（ｂ）型」二量体−リンカー化合物を合成するためのスキームを示す。
【図２２】さらなる「（ｂ）型」二量体−リンカー化合物を合成するためのスキームを示す。
【図２３】トランスグルタミナーゼ介在性コンジュゲーションにおいてアミンドナーとして作用し得るアルキルアミノ基を有する二量体−リンカー化合物の合成に関する。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
定義
「抗体」は全抗体およびいずれかの抗原結合フラグメント（すなわち、「抗原結合部分」）またはその一本鎖変種を意味する。全抗体は、ジスルフィド結合により相互連結される、少なくとも２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖を含むタンパク質である。重鎖は、各々、重鎖可変領域（ＶＨ）と、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む重鎖定常領域とを含む。軽鎖は、各々、軽鎖可変領域（ＶＬまたはＶｋ）と、１つの単一ドメイン、ＣＬを含む軽鎖定常領域とを含む。ＶＨおよびＶＬ領域は、超可変性の領域、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される領域、フレームワーク領域（ＦＲ）をさらに保存して組み入れられた領域にさらに細分割され得る。ＶＨおよびＶＬは、各々、アミノ末端からカルボキシ末端に次の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４で配置された、３つのＣＤＲと、４つのＦＲとを含む。可変領域は抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。定常領域は、抗体と、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および典型的な補体系の第１成分（Ｃｌｑ）を含む、宿主組織または因子との結合を媒介してもよい。抗体が５ｘ１０−８Ｍ以下、より好ましくは１ｘ１０−８Ｍ以下、より好ましくは６ｘ１０−９Ｍ以下、より好ましくは３ｘ１０−９Ｍ以下、さらにより好ましくは２ｘ１０−９Ｍ以下のＫＤで抗原Ｘと結合するならば、抗体は抗原Ｘと「特異的に結合する」と言われる。抗体は、キメラ、ヒト化、または好ましくはヒト抗体であり得る。重鎖定常領域に遺伝子操作を施し、糖鎖形成の型または程度に影響を及ぼし、抗体の半減期を延ばすこと、エフェクター細胞または補体系との相互作用を強化または弱めること、あるいは他のある種の特性を調節することもできる。遺伝子操作は、１個または複数個のアミノ酸の置換、付加または欠失により、またはドメインをもう一つ別の免疫グロブリン型から由来のドメインと置換することにより、あるいはその上記を組み合わせることにより達成され得る。
【００２３】
抗体の「抗原結合フラグメント」および「抗原結合部分」（あるいは簡単に「抗体部分」または「抗体フラグメント」）は、抗原と特異的に結合する能力を保持する抗体の1または複数のフラグメントを意味する。抗体の抗原結合機能は、（ｉ）Ｆａｂフラグメント、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価フラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ヒンジ領域でジスルフィド結合により連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント；（ｉｉｉ）Ｆａｂ’フラグメント、本質的にＦａｂと、ヒンジ領域の一部とを含むフラグメント（例えば、Abbasら、Cellular and Molecular Immunology, 6th Ed., Saunders Elsevier 2007を参照のこと）；（ｉｖ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｖｉ）ＶＨドメインからなる、ｄＡｂフラグメント（Wardら、（1989）Nature 341：544-546）；（ｖｉｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）；および（ｖｉｉｉ）単一ドメイン抗体（nanobody）、単一の可変ドメインと２つの定常ドメインを含有する重鎖可変領域などの、全長抗体のフラグメントにより成されうる。好ましい抗原結合フラグメントはＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆｖ、およびＦｄフラグメントである。さらには、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは、別個の遺伝子によりコード化されるが、それらは、組換え技法を用い、ＶＬおよびＶＨ領域を対にして組をなし、一価分子（一本鎖Ｆｖ、またはｓｃＦｖとして知られる）を形成する単一タンパク質として製造され得るようにする、合成リンカーにより結び付けることができる；例えば、Birdら（1988） Science 242：423-426；およびHustonら（1988）Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85：5879-5883を参照のこと）。そのような一本鎖抗体も抗体の「抗原結合部分」なる語の範囲に含まれる。
【００２４】
「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない、抗体を意味する（例えば、抗原Ｘと特異的に結合する単離された抗体は、抗原Ｘ以外の抗原と特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかしながら、抗原Ｘと特異的に結合する単離された抗体は、他の種からの抗原Ｘ分子などの他の抗原との交差反応性を有してもよい。ある実施態様において、単離された抗体はヒト抗原Ｘと特異的に結合し、他の（ヒト以外の）抗原Ｘ抗原と交差反応しない。その上、単離された抗体は他の細胞材料および／または化学物質が実質的になくてもよい。
【００２５】
「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」は、特定のエピトープに対して単一の結合特異性を示す、単一分子組成物の抗体分子の調製物を意味する。
【００２６】
「ヒト抗体」は、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方がヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン配列から誘導される可変領域を有する（および定常領域をあるとすれば有する）抗体を意味する。ヒト抗体は、天然または合成修飾を含め、その後の修飾を含んでもよい。ヒト抗体はヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン配列（例えば、インビトロでのランダムまたは部位特異的変異により、またはインビボでの体細胞変異により導入される変異体）によりコードされないアミノ酸残基を含んでもよい。しかしながら、「ヒト抗体」は、マウスなどの他の哺乳動物種の生殖細胞系列から由来のＣＤＲ配列をヒトフレームワーク配列に移植した、抗体を含まない。
【００２７】
「ヒトモノクローナル抗体」は、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方がヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列より誘導される可変領域を有する、単一結合特異性を提示する抗体を意味する。１の実施態様において、ヒトモノクローナル抗体は、ヒト以外のトランスジェニック動物、例えばトランスジェニックマウスより得られるＢ細胞を含む、不死化細胞と融合したヒト重鎖導入遺伝子および軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する、ハイブリドーマにより産生される。
【００２８】
「脂肪族」は、（例えば、「Ｃ３脂肪族」、「Ｃ１−５脂肪族」、「Ｃ１−Ｃ５脂肪族」または「Ｃ１〜Ｃ５脂肪族」において見られるように、後の３種の語は１〜５個の炭素原子を有する脂肪族についての同義語である）特定数の炭素原子を有するか、あるいは炭素原子の数が明確に特定されない場合、１ないし４個の炭素原子（不飽和脂肪族基の場合には２ないし４個の炭素）を有する、直鎖または分岐鎖で飽和または不飽和の非芳香族炭化水素の部分を意味する。同様の理解は、Ｃ２−４アルケン、Ｃ４−Ｃ７脂環式等において見られるような、他の型の炭素数にも適用される。
【００２９】
「アルキル」は飽和脂肪族の部分を意味し、炭素数を特定するのに同じ慣習が適用され得る。例として、Ｃ１−Ｃ４アルキルの部分は、限定されないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、ｔ−ブチル、１−ブチル、２−ブチル等を包含する。「アルキレン」は、ＣＨ２ＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２、およびＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２などのアルキル基の二価の対応基を意味する。
【００３０】
「アルケニル」は少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を有する脂肪族の部分を意味し、炭素数を特定するのに同じ慣習が適用され得る。例として、Ｃ２−Ｃ４アルケニルの部分は、限定されないが、エテニル（ビニル）、２−プロペニル（アリルまたはプロパ−２−エニル）、シス−１−プロペニル、トランス−１−プロペニル、Ｅ−（またはＺ−）２−ブテニル、３−ブテニル、１,３−ブタジエニル（ブタ−１,３−ジエニル）等を包含する。
【００３１】
「アルキニル」は少なくとも１個の炭素−炭素三重結合を有する脂肪族の部分を意味し、炭素数を特定するのに同じ慣習が適用され得る。例として、Ｃ２−Ｃ４アルキニル基は、エチニル（アセチレニル）、プロパルギル（プロパ−２−イニル）、１−プロピニル、ブタ−２−イニル等を包含する。
【００３２】
「脂環式」は、１ないし３個の環を有し、各環が３ないし８個（好ましくは、３ないし６個）の炭素原子を有する、飽和または不飽和の、非芳香族炭化水素の部分を意味する。「シクロアルキル」は各環が飽和の脂環式の部分を意味する。「シクロアルケニル」は、少なくとも１個の環が少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を有する、脂環式の部分を意味する。「シクロアルキニル」は、少なくとも１個の環が少なくとも１個の炭素−炭素三重結合を有する、脂環式の部分を意味する。例として、脂環式の部分として、限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプチル、シクロオクチル、およびアダマンチルが挙げられる。好ましい脂環式の部分はシクロアルキルの部分、特にシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが挙げられる。「シクロアルキレン」はシクロアルキル基の二価の対応基を意味する。
【００３３】
「ヘテロ脂環式」は、少なくとも１個の環にて、３個までの（好ましくは１ないし２個の）炭素が、Ｎ、ＯまたはＳより独立して選択されるヘテロ原子と置き換えられる脂環式の部分を意味し、ここでそのＮおよびＳは所望により酸化されてもよく、そのＮは所望により四級化されてもよい。同様に、「ヘテロシクロアルキル」、「ヘテロシクロアルケニル」および「ヘテロシクロアルキニル」は、少なくとも１個の環がそのように修飾されている、各々、シクロアルキル、シクロアルケニル、またはシクロアルキニルの部分を意味する。典型的なヘテロ脂環式の部分として、アジリジニル、アゼチジニル、１,３−ジオキサニル、オキセタニル、テトラヒドロフリル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、テトラヒドロチオピラニルスルホン、モルホリニル、チオモルホリニル、チオモルホリニルスルホキシド、チオモルホリニルスルホン、１,３−ジオキソラニル、テトラヒドロ−１,１−ジオキソチエニル、１,４−ジオキサニル、チエタニル等が挙げられる。「ヘテロシクロアルキレン」はヘテロシクロアルキル基の二価の対応基を意味する。
【００３４】
「アルコキシ」、「アリールオキシ」、「アルキルチオ」および「アリールチオ」は、各々、−Ｏ（アルキル）、−Ｏ（アリール）、−Ｓ（アルキル）および−Ｓ（アリール）素意味する。一例が、各々、メトキシ、フェノキシ、メチルチオおよびフェニルチオである。
「ハロゲン」または「ハロ」はフッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味する。
【００３５】
「アリール」は、各環が３ないし７個の炭素原子を有し、少なくとも１個の環が芳香族である、単環、二環または三環式環系の炭化水素の部分を意味する。該環系中の環は（ナフチルに見られるように）相互に縮合しても、または（ビフェニルに見られるように）相互に結合してもよく、（インダニルまたはシクロヘキシルフェニルに見られるように）非芳香族環と縮合しても結合してもよい。さらなる例として、アリールの部分は、限定されないが、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、ビフェニル、フェナントリル、アントラセニル、およびアセナフチルを包含する。「アリーレン」は、アリール基の二価の対応基、例えば、１,２−フェニレン、１,３−フェニレン、または１,４−フェニレンを意味する。
【００３６】
「ヘテロアリール」は、各環が３ないし７個の炭素原子を有し、少なくとも１個の環が、Ｎ、ＯまたはＳより独立して選択される１ないし４個のヘテロ原子を含有する芳香族である、単環、二環または三環式環系の部分を意味し、ここでそのＮおよびＳは所望により酸化されてもよく、そのＮは所望により四級化されてもよい。そのような少なくとも１個のヘテロ原子を含有する芳香族環は（ベンゾフラニルまたはテトラヒドロイソキノリルに見られるように）他の型の環に縮合してもよく、あるいは（フェニルピリジルまたは２−シクロペンチルピリジルに見られるように）他の型の環に直接結合してもよい。さらなる例として、ヘテロアリールの部分は、ピロリル、フラニル、チオフェニル（チエニル）、イミダゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、Ｎ−オキソピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、キノリニル、イソキノリニル、キナゾリニル、シンノリニル、キノザリニル、ナフチリジニル、ベンゾフラニル、インドリル、ベンゾチオフェニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、フェノチアゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ジベンゾフラニル、カルバゾリル、ジベンゾチオフェニル、アクリジニル等を包含する。「ヘテロアリーレン」はヘテロアリール基の二価の対応基を意味する。
【００３７】
「置換されていないか、または置換されたＣ１−Ｃ５アルキル」あるいは「所望により置換されてもよいヘテロアリール」に見られるように、「置換されていないか、または置換された」あるいは「所望により置換されてもよい」なる語を使用することによるなどの、部分が置換されてもよいことを示す場合、かかる部分は、１または複数の、好ましくは１ないし５個の、より好ましくは１ないし２個の、独立して選択される置換基を有してもよい。置換基および置換パターンは、置換基が結合する部分を考慮して、化学的に安定し、そして当該分野にて公知の技法ならびに本明細書に記載の方法により合成され得る、化合物を提供するように、当業者によって選択され得る。
【００３８】
「アリールアルキル」、「（ヘテロ脂環式）アルキル」、「アリールアルケニル」、「アリールアルキニル」、「ビアリールアルキル」等は、アルキル、アルケニル、またはアルキニルの部分が、場合によっては、アリール、ヘテロ脂環式、ビアリール等で置換されてもよく、部分が、場合によっては、例えば、ベンジル、フェネチル、Ｎ−イミダゾリルエチル、Ｎ−モルホリノエチル等に見られるように、アルキル、アルケニルまたはアルキニルの部分でオープン（未充足）価電子帯であってもよい。反対に、「アルキルアリール」、「アルケニルシクロアルキル」等は、アリール、シクロアルキル等の部分が、場合によっては、アルキル、アルケニル等で置換されてもよく、部分が、場合によっては、例えば、メチルフェニル（トリル）またはアリルシクロヘキシルに見られるような状態であってもよい。「ヒドロキシアルキル」、「ハロアルキル」、「アルキルアリール」、「シアノアリール」等は、アルキル、アリール等の部分が、場合によっては、１または複数の特定の置換基（場合によっては、ヒドロキシル、ハロ等）で置換されてもよいことを意味する。
【００３９】
例えば、許容される置換基は、限定されないが、アルキル（特に、メチルまたはエチル）、アルケニル（特に、アリル）、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、脂環式、ヘテロ脂環式、ハロ（特に、フルオロ）、ハロアルキル（特に、トリフルオロメチル）、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル（特に、ヒドロキシエチル）、シアノ、ニトロ、アルコキシ、−Ｏ（ヒドロキシアルキル）、−Ｏ（ハロアルキル）（特に、−ＯＣＦ３）、−Ｏ（シクロアルキル）、−Ｏ（ヘテロシクロアルキル）、−Ｏ（アリール）、アルキルチオ、アリールチオ、＝Ｏ、＝ＮＨ、＝Ｎ（アルキル）、＝ＮＯＨ、＝ＮＯ（アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）（アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２、−ＯＣ（＝Ｏ）（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）（ヒドロキシアルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２、アジド、−ＮＨ２、−ＮＨ（アルキル）、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ（アリール）、−ＮＨ（ヒドロキシアルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）（アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−ＯＳＯ２（アルキル）、−ＳＨ、−Ｓ（アルキル）、−Ｓ（アリール）、−Ｓ（シクロアルキル）、−Ｓ（＝Ｏ）アルキル、−ＳＯ２（アルキル）、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（アルキル）、−ＳＯ２Ｎ（アルキル）２等を包含する。
【００４０】
置換されている部分が脂肪族の部分である場合、好ましい置換基は、アリール、ヘテロアリール、脂環式、ヘテロ脂環式、ハロ、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、アルコキシ、−Ｏ（ヒドロキシアルキル）、−Ｏ（ハロアルキル）、−Ｏ（シクロアルキル）、−Ｏ（ヘテロシクロアルキル）、−Ｏ（アリール）、アルキルチオ、アリールチオ、＝Ｏ、＝ＮＨ、＝Ｎ（アルキル）、＝ＮＯＨ、＝ＮＯ（アルキル）、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２、−ＯＣ（＝Ｏ）（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）（ヒドロキシアルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２、アジド、−ＮＨ２、−ＮＨ（アルキル）、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ（アリール）、−ＮＨ（ヒドロキシアルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）（アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−ＯＳＯ２（アルキル）、−ＳＨ、−Ｓ（アルキル）、−Ｓ（アリール）、−Ｓ（＝Ｏ）アルキル、−Ｓ（シクロアルキル）、−ＳＯ２（アルキル）、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（アルキル）、および−ＳＯ２Ｎ（アルキル）２である。より好ましい置換基は、ハロ、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、アルコキシ、−Ｏ（アリール）、＝Ｏ、＝ＮＯＨ、＝ＮＯ（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２、アジド、−ＮＨ２、−ＮＨ（アルキル）、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ（アリール）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）（アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２、および−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２である。フェニル、シアノ、ハロ、ヒドロキシル、ニトロ、Ｃ１−Ｃ４アルキルオキシ、Ｏ（Ｃ２−Ｃ４アルキレン）ＯＨ、およびＯ（Ｃ２−Ｃ４アルキレン）ハロが特に好ましい。
【００４１】
置換されている部分が脂環式、ヘテロ脂環式、アリール、またはヘテロアリールの部分である場合、好ましい置換基はアルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、シアノ、ニトロ、アルコキシ、−Ｏ（ヒドロキシアルキル）、−Ｏ（ハロアルキル）、−Ｏ（アリール）、−Ｏ（シクロアルキル）、−Ｏ（ヘテロシクロアルキル）、アルキルチオ、アリールチオ、−Ｃ（＝Ｏ）（アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２、−ＯＣ（＝Ｏ）（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）（ヒドロキシアルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２、アジド、−ＮＨ２、−ＮＨ（アルキル）、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ（アリール）、−ＮＨ（ヒドロキシアルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）（アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−ＯＳＯ２（アルキル）、−ＳＨ、−Ｓ（アルキル）、−Ｓ（アリール）、−Ｓ（シクロアルキル）、−Ｓ（＝Ｏ）アルキル、−ＳＯ２（アルキル）、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（アルキル）、および−ＳＯ２Ｎ（アルキル）２である。より好ましい置換基はアルキル、アルケニル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、シアノ、ニトロ、アルコキシ、−Ｏ（ヒドロキシアルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）（アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２、−ＯＣ（＝Ｏ）（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）（ヒドロキシアルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ２、−ＮＨ（アルキル）、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ（アリール）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）（アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２、および−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２である。Ｃ１−Ｃ４アルキル、シアノ、ニトロ、ハロ、およびＣ１−Ｃ４アルコキシが特に好ましい。
【００４２】
「Ｃ１−Ｃ５アルキル」または「５ないし１０％」に見られるように範囲で示される場合、かかる範囲は、第１の例におけるＣ１およびＣ５、および第２の例における５％および１０％のような、その範囲の端点を含む。
【００４３】
特定の立体異性体が（例えば、構造式中にて関連する立体中心で太文字または破線のくさび形結合により、構造式中で二重結合がＥまたはＺ配置を有すると記載することにより、あるいは立体化学特定命名法を用いることにより）具体的に示されていない限り、立体異性体のすべてが、純粋な化合物ならびにその混合物として、本発明の範囲内に包含される。特記されない限り、本発明は、個々のエナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体、ならびにその組み合わせおよび混合物もすべて包含する。
【００４４】
当業者は化合物が互変異性形態（例えば、ケトおよびエノール形態）、共鳴構造、および双性イオン形態（本明細書で使用される構造式で示される形態と均等な形態）を有し、その構造式がかかる互変異性形態、共鳴構造または双性イオン形態を包含することを理解するであろう。
【００４５】
「医薬的に許容されるエステル」は、インビボにて（例えば、ヒト体内にて）加水分解し、親化合物またはその塩を生成するか、またはそれ自体が親化合物と同様の活性を有する、エステルを意味する。適切なエステルは、Ｃ１−Ｃ５アルキル、Ｃ２−Ｃ５アルケニルまたはＣ２−Ｃ５アルキニルエステル、特に、メチル、エチルまたはｎ−プロピルを包含する。
【００４６】
「医薬的に許容される塩」は、医薬製剤に適する化合物の塩を意味する。化合物が１または複数の塩基性基を有する場合、その塩は、硫酸塩、臭化水素酸塩、酒石酸塩、メシル酸塩、マレイン酸塩、クエン酸塩、リン酸塩、酢酸塩、パモ酸塩（エンボン酸塩）、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、塩化水素酸塩、乳酸塩、メチル硫酸塩、フマル酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、メシル酸塩、ラクトビオン酸塩、スベリン酸塩、トシル酸塩等などの酸付加塩であり得る。化合物が１または複数の酸性基を有する場合、その塩はカルシウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、メグルミン塩、アンモニウム塩、亜鉛塩、ピペラジン塩、トロメタミン塩、リチウム塩、コリン塩、ジエチルアミン塩、４−フェニルシクロヘキシルアズ民塩、ベンザチン塩、ナトリウム塩、テトラメチルアンモニウム塩等などの塩とすることができる。多形性結晶形態および溶媒和物も本発明の範囲内に含まれる。
【００４７】
本願明細書に記載の式中にて、結合手を横切る波線
【化１２】
0006498773.tif 000013
または結合端にある星印（＊）は共有結合部位を示す。例えば、
式：
【化１３】
0006498773.tif 000014
中で、Ｒが
【化１４】
0006498773.tif 000015
であるとの記述は
【化１５】
0006498773.tif 000016
をいう。
【００４８】
本願明細書に記載の式中にて、芳香族環の２個の炭素間を横切る結合手は、その結合手と結合した基がその芳香族環の利用可能ないずれの位置にあってもよいことを意味する。例として、式：
【化１６】
0006498773.tif 000017
は、
【化１７】
0006498773.tif 000018
を示す。
【００４９】
二量体
式（Ｉ）、（Ｉａ）および（Ｉｂ）中、好ましくは、Ｒ２は、各々、Ｍｅである。より好ましくは、各Ｒ２はＭｅであり、各Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８およびＲ１０は（Ｒ７、Ｒ８およびＲ１０に関しては、存在する場合）Ｈである。
【００５０】
式（Ｉ）および（Ｉａ）中、好ましくは、各Ｒ７、Ｒ８およびＲ１０はＨであり、各Ｒ９は、独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＭｅ、ＮＨ２、ＮＭｅ２、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−８Ｍｅ、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、または
【化１８】
0006498773.tif 000019
である。
【００５１】
式（Ｉａ）の好ましい実施態様において、各Ｇ’はＣであり、Ｙ’およびＹ’’は共にＣＨ２である。式（Ｉａ）のもう一つ別の好ましい実施態様において、１つのＧ’はＮであり、Ｙ’はＣＨ２であり、Ｙ’’は不在である（すなわち、関連した下付き文字は０である）。
【００５２】
好ましくは、式（Ｉ）中、Ｘ２は、各々独立して、Ｍｅ、ＣＯ２Ｈ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、Ｎ（Ｃ１−Ｃ５アルキル）２、ＳＨ、ＣＨＯ、Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２Ｎ（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、ＮＨＮＨ２、またはＣ（＝Ｏ）ＮＨＮＨ２である。
【００５３】
式（Ｉｂ）にて、Ｒ１１は、好ましくは、Ｈ、＝ＣＨ２、ＣＨ＝ＣＨＭｅ、＝ＣＨＭｅ、Ｃ≡ＣＣＨ２ＮＨ２、
【化１９】
0006498773.tif 000020
である。
【００５４】
式（Ｉ）にて、Ｘは、好ましくは、
【化２０】
0006498773.tif 000021
であり；ここで、Ｘ１はＣＨ２、ＯまたはＮＨであり；Ｘ２はＣＯ２ＨまたはＮＨ２であり；ｘとｙの合計は２または４である。
【００５５】
より好ましくは、Ｘは
【化２１】
0006498773.tif 000022
である。
【００５６】
好ましくは、式中に２個のベンゾジアゼピン環系があり、その各々に二重線
【化２２】
0006498773.tif 000023
が示される場合、かかる二重線のうち少なくとも１つは二重結合である。
【００５７】
本発明の二量体は、ＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体とすることができ；すなわち、式（Ｉ）中、Ｒ１は式（Ｉａ）で示される基である。そのような二量体は、式（ＩＩａ）：
【化２３】
0006498773.tif 000024
［式中
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、二重線
【化２４】
0006498773.tif 000025
およびＸは、式（Ｉ）に関して、上記の簡単な発明の概要のセクションにて定義されるとおりである］
で表すことができる。
【００５８】
式（ＩＩａ）に係る好ましい実施態様において、ＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体は、式（ＩＩａ’）：
【化２５】
0006498773.tif 000026
［式中
Ｒ９は、各々独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＭｅ、ＮＨ２、ＮＭｅ２、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−８Ｍｅ、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、または
【化２６】
0006498773.tif 000027
であり；および
Ｘは
【化２７】
0006498773.tif 000028
である］
で示される。
【００５９】
ＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体の具体例として：
【化２８】
0006498773.tif 000029
0006498773.tif 000030
0006498773.tif 000031
0006498773.tif 000032
が挙げられる。
【００６０】
特に好ましいＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体は（ＩＩａ−１６）および（ＩＩａ−２０）である。
【００６１】
もう一つ別の実施態様において、本発明の二量体はＴＨＩＱ−ＰＢＤ二量体であり；すなわち、式（Ｉ）中、Ｒ１は式（Ｉｂ）で示される基である。そのような二量体は、式（ＩＩｂ）：
【化２９】
0006498773.tif 000033
［式中
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１１’、二重線
【化３０】
0006498773.tif 000034
環Ｃにおける点線、およびＸは、式（Ｉ）に関して、上記の簡単な発明の概要のセクションにて定義されるとおりである］
で表すことができる。
【００６２】
式（ＩＩｂ）に係る好ましいＴＨＩＱ−ＰＢＤ二量体は、式（ＩＩｂ’）：
【化３１】
0006498773.tif 000035
［式中
Ｒ９はＨ、ＯＨ、ＯＭｅ、ＮＨ２、ＮＭｅ２、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−８Ｍｅ、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、または
【化３２】
0006498773.tif 000036
であり；
Ｒ１１はＨ、＝ＣＨ２、ＣＨ＝ＣＨＭｅ、＝ＣＨＭｅ、Ｃ≡ＣＣＨ２ＮＨ２、
【化３３】
0006498773.tif 000037
であり；および
Ｘは
【化３４】
0006498773.tif 000038
である］
で示される。
【００６３】
ＴＨＩＱ−ＰＢＤ二量体の具体例として、
【化３５】
0006498773.tif 000039
が挙げられる。
【００６４】
特に好ましいＴＨＩＱ−ＰＢＤ二量体が（ＩＩｂ−０３）である。
【００６５】
もう一つ別の実施態様において、本発明の二量体は、ＴＨＩＱ環系を有するベンゾジアゼピン単位、およびアザインドリン（ＡＺＩ）環系を有するベンゾジアゼピン単位を含む（ＴＨＩＱ−ＡＺＩ二量体）。かかる二量体は、式（ＩＩｃ）：
【化３６】
0006498773.tif 000040
［式中
Ｇ’の１つはＮであり、他はＣであり；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、二重線
【化３７】
0006498773.tif 000041
およびＸは、式（Ｉ）に関連する上記の簡単な発明の概要のセクションにて定義されるとおりである］
で示され得る。
【００６６】
ＴＨＩＱ−ＡＺＩ二量体の一例が化合物（ＩＩｃ−０１）：
【化３８】
0006498773.tif 000042
である。
【００６７】
コンジュゲート
概要
本発明の二量体は、治療剤それ自体として使用され得るが、がん細胞の化学物質に特異的または優先的に結合する標的とする部分とのコンジュゲートとして使用されるのが好ましい。好ましくは、標的とする部分が抗体またはその抗原結合部であり、化学物質が腫瘍関連抗原である。
【００６８】
このように、本発明のもう一つ別の実施態様は、本発明の二量体およびリガンドを含む、式（ＩＩ）：
【化３９】
0006498773.tif 000043
［式中、Ｚはリガンドであり、Ｄは本発明の二量体であり、−（ＸＤ）ａＣ（Ｘｚ）ｂ−はＺとＤを連結するものであるから、集合的に、「リンカー部分」または「リンカー」と称される］
で示される、コンジュゲートである。リンカー内で、Ｃは二量体Ｄの意図する生物学的作用の部位で、またはその付近で切断されるように設計された切断基であり；ＸＤおよびＸＺは、それらが、各々、ＤとＣ、およびＣとＺを一定の間隔を置いて離すため、スペーサー部分（または「スペーサー」）と称され；下付き文字のａ、ｂおよびｃは、独立して、０または１である（すなわち、ＸＤ、ＸＺおよびＣの存在は任意である）。下付き文字のｍは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０（好ましくは、１、２、３または４）である。Ｄ、ＸＤ、Ｃ、ＸＺおよびＺは下記においてより詳細に記載される。
【００６９】
リガンドＺ（例えば、抗体）は標的とする機能を遂行する。その抗原または受容体が位置付けられる標的組織または細胞と結合することにより、リガンドＺはコンジュゲートをそこに向かわせる。リガンドＺが抗体である場合、そのコンジュゲートは、時に、抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）または免疫コンジュゲートと称される。好ましくは、標的組織または細胞はがん組織または細胞であり、抗原または受容体は組織関連抗原、すなわちがん細胞により一意的に発現されるか、またはがん細胞以外の細胞と比べて、がん細胞により過剰発現される抗原である。標的組織または細胞で基Ｃを切断して二量体Ｄを放出させ、その細胞傷害性作用を局所的に発揮させる。ある場合には、そのコンジュゲートは飲食作用により標的細胞の中に取り込まれ、その標的細胞内で切断が起こる。このように、二量体Ｄが意図する作用部位に正確に送達され、必要とされる投与量が減少する。また、二量体Ｄは、通常、そのコンジュゲートされた状態では生物学的に不活性であり（あるいは活性が有意に小さく）、それにより標的とされない組織または細胞に対する望ましくない毒性が減少する。抗がん剤は、一般に、細胞に対して毒性であることが極めて多いため、このことは重視すべき事項である。
【００７０】
下付き文字のｍによって反映されるように、リガンドＺの各分子は、リガンドＺがコンジュゲーションのために利用できる部位の数、および利用される実験条件に応じて、１より多くの二量体Ｄとコンジュゲートし得る。当業者であれば、リガンドＺの各々個々の分子が二量体Ｄの整数とコンジュゲートされる一方で、コンジュゲートの調製は、統計的平均を反映して、二量体ＤのリガンドＺに対する非整数割合について分析してもよいことを認識するであろう。この割合は、置換割合（ＳＲ）、または、同意語として、薬物−抗体割合（ＤＡＲ）と称される。
【００７１】
リガンドＺ
好ましくは、リガンドＺは抗体である。便宜と簡潔のために、限定されるものではないが、本明細書のリガンドＺのコンジュゲーションに関する下記の詳細な説明は、それが抗体であるとの文脈で記述されるが、当業者であれば、他の型のリガンドＺが、変更すべき点は変更して、コンジュゲートされ得ることを理解するであろう。例えば、葉酸をリガンドとして有するコンジュゲートは、その表面に葉酸受容体を有する細胞を標的とすることができる（Leamonら、Cancer Res. 2008, 68（23）, 9839）。同じ理由で、下記の詳細な説明は、抗体Ｚを二量体アナログＤに対して１：１（ｍ＝１）の割合で記述する。
【００７２】
好ましくは、リガンドＺは、がん細胞の選択的標的を可能とする、腫瘍関連抗原に拮抗する抗体である。そのような抗原の例として、メソテリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ７０、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４（Ｏ８Ｅとしても知られる）、タンパク質チロシンキナーゼ７（ＰＴＫ７）、グリピカン−３、ＲＧ１、フコシル−ＧＭ１、ＣＴＬＡ−４、およびＣＤ４４が挙げられる。抗体は動物（例えば、ネズミ）、キメラ、ヒト化、または、好ましくはヒト抗体とすることができる。抗体は、好ましくは、モノクローナル、特にヒトモノクローナル抗体である。上記のいくつかの抗原に対するヒトモノクローナル抗体の調製がKormanら、ＵＳ８,６０９,８１６Ｂ２（２０１３；Ｂ７Ｈ４、０８Ｅとしても知られる；特に抗体２Ａ７、１Ｇ１１および２Ｆ９）；Rao-Naikら、８,０９７,７０３Ｂ２（２０１２；ＣＤ１９；特に抗体５Ｇ７、１３Ｆ１、４６Ｅ８、２１Ｄ４、２１Ｄ４ａ、４７Ｇ４、２７Ｆ３および３Ｃ１０）；Kingら、ＵＳ８,４８１,６８３Ｂ２（２０１３；ＣＤ２２；特に抗体１２Ｃ５、１９Ａ３、１６Ｆ７および２３Ｃ６）；Kelerら、ＵＳ７,３８７,７７６Ｂ２（２００８；ＣＤ３０；特に抗体５Ｆ１１、２Ｈ９および１７Ｇ１）；Terrettら、ＵＳ８,１２４,７３８Ｂ２（２０１２；ＣＤ７０；特に抗体２Ｈ５、１０Ｂ４、８Ｂ５、１８Ｅ７および６９Ａ７）；Kormanら、ＵＳ６,９８４,７２０Ｂ１（２００６；ＣＴＬＡ−４；特に抗体１０Ｄ１、４Ｂ６および１Ｅ２）；Visticaら、ＵＳ８,３８３,１１８Ｂ２（２０１３、フコシル−ＧＭ１、特に抗体５Ｂ１、５Ｂ１ａ、７Ｄ４、７Ｅ４、１３Ｂ８および１８Ｄ５）；Kormanら、ＵＳ８,００８,４４９Ｂ２（２０１１；ＰＤ−１；特に抗体１７Ｄ８、２Ｄ３、４Ｈ１、５Ｃ４、４Ａ１１、７D３および５Ｆ４）；Huangら、ＵＳ２００９／０２９７４３８Ａ１（２００９；ＰＳＭＡ、特に抗体１Ｃ３、２Ａ１０、２Ｆ５、２Ｃ６）；Cardarelliら、ＵＳ７,８７５,２７８Ｂ２（２０１１；ＰＳＭＡ；特に抗体４Ａ３、７Ｆ１２、８Ｃ１２、８Ａ１１、１６Ｆ９、２Ａ１０、２Ｃ６、２Ｆ５および１Ｃ３）；Terrettら、ＵＳ８,２２２,３７５Ｂ２（２０１２；ＰＴＫ７；特に抗体３Ｇ８、４Ｄ５、１２Ｃ６、１２Ｃ６ａおよび７Ｃ８）；Terrettら、ＵＳ８,６８０,２４７Ｂ２（２０１４；グリピカン−３；特に抗体４Ａ６、１１Ｅ７および１６Ｄ１０）；Harkinsら、ＵＳ７,３３５,７４８Ｂ２（２００８；ＲＧ１；特に抗体Ａ、Ｂ、ＣおよびＤ）；Terrettら、ＵＳ８,２６８,９７０Ｂ２（２０１２；メソテリン；特に抗体３Ｃ１０、６Ａ４および７Ｂ１）；Xuら、ＵＳ２０１０／００９２４８４Ａ１（２０１０；ＣＤ４４；特に抗体１４Ｇ９.Ｂ８.Ｂ４、２Ｄ１.Ａ３.Ｄ１２および１Ａ９.Ａ６.Ｂ９）；Deshpandeら、ＵＳ８,２５８,２６６Ｂ２（２０１２；ＩＰ１０；特に抗体１Ｄ４、１Ｅ１、２Ｇ１、３Ｃ４、６Ａ５、６Ａ８、７Ｃ１０、８Ｆ６、１０Ａ１２、１０Ａ１２Ｓおよび１３Ｃ４）；Kuhneら、UＳ８,４５０,４６４Ｂ２（２０１３；ＣＸＣＲ４；特に抗体Ｆ７、Ｆ９、Ｄ１およびＥ２）；およびKormanら、ＵＳ７,９４３,７４３Ｂ２（２０１１；ＰＤ−Ｌ１；特に抗体３Ｇ１０、１２Ａ４、１０Ａ５、５Ｆ８、１０Ｈ１０、１Ｂ１２、７Ｈ１、１１Ｅ６、１２Ｂ７、��よび１３Ｇ４）に開示されており；その内容を出典明示により本明細書に組み込むものとする。上記した抗体は、各々、本発明の二量体とのＡＤＣに用いることができる。
【００７３】
リガンドＺは、アフィボディ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、ナノボディ、ユニボディ、ＤＡＲＰｉｎ、アンチカリン、ベルサボディ、デュオカリン、リポカリンまたはアビマーなどの抗体フラグメントまたは抗体模倣物とすることもできる。
【００７４】
リガンドＺ上の数種の異なる反応基のいずれか一つは、リジン残基のε−アミノ基、ペンダント炭水化物部分、カルボン酸基、ジスルフィド基およびチオール基を含む、コンジュゲーション部位とすることができる。各種の反応基は二律背反を示し、利点もあれば欠点もある。コンジュゲーションに適する抗体の反応基を評価するには、例えば、Garnett、Adv. Drug Delivery Rev. 53（2001）, 171-216、およびDubowchikとWalker、Pharmacology & Therapeutics 83（1999）, 67-123（出典明示によりその内容を本明細書の一部とする）を参照のこと。
【００７５】
１の実施態様において、リガンドＺはリジンε−アミノ基を通してコンジュゲートされる。大抵の抗体は複数のリジンε−アミノ基を有し、当該分野で公知の技法を用い、アミド、尿素、チオ尿素またはカルバマート結合を介してコンジュゲートされ得る。しかしながら、コンジュゲート調製において潜在的バッチ間変動をもたらす、多くのε−アミノ基のどれを、どのように反応させるかを制御することは困難である。また、コンジュゲーションは、抗体の未変性コンホメーションを維持するのに重要なε−アミノ基のプロトン化の中和を引き起こすかもしれず、あるいは抗原結合部位で、またはその近くのリジンで、そのいずれも望ましくはないが、起こるかもしれない。
【００７６】
もう一つ別の実施態様において、多くの抗体が糖鎖形成されるように、リガンドＺは炭水化物の側鎖を介してコンジュゲートされ得る。炭水化物の側鎖は過ヨウ素酸で酸化されてアルデヒド基を生成し、それは、順次、アミンと反応して、セミカルバゾン、オキシム、またはヒドラゾンにあるように、イミン基を形成し得る。所望により、イミン基はシアノ水素化ホウ素ナトリウムで還元することによりさらに安定したアミン基に変換されてもよい。炭水化物の側鎖を介するコンジュゲーションに関するさらなる開示については、例えば、Rodwellら、Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 83, 2632-2636（1986）（その内容を出典明示により本明細書の一部とする）を参照のこと。リジンε−アミノ基と同様に、コンジュゲーション部位の位置および化学量論の再現性に関する懸念がある。
【００７７】
さらにもう一つ別の実施態様において、リガンドＺは、カルボン酸基を通してコンジュゲートされ得る。１の実施態様において、末端カルボン酸基に官能基を付与してカルボヒドラジドを生成させ、次にそれをアルデヒドを有するコンジュゲーション部分と反応させる。Fischら、Bioconjugate Chemistry 1992, 3, 147-153を参照のこと。
【００７８】
さらにもう一つ別の実施態様において、抗体Ｚは、抗体Ｚ上のシステイン残基と、コンジュゲートの他の部分にある硫黄とを架橋するジスルフィド結合を通してコンジュゲートされ得る。ある抗体は、例えば、ヒンジ領域に、ジスルフィド基があるが、遊離チオール（スルフヒドリル）基を欠く。そのような場合、天然のジスルフィド基を還元することにより遊離チオール基が生成され得る。そのように生成されたチオール基は次にコンジュゲーションに使用され得る。例えば、Packardら、Biochemistry 1986, 25, 3548-3552；Kingら、Cancer Res. 54, 6176-6185（1994）；およびDoroninaら、Nature Biotechnol. 21（7）, 778-784（2003）（その内容を出典明示により本明細書の一部とする）を参照のこと。ここでも、コンジュゲーション部位の位置および化学量論ならびに抗体未変性コンホメーションの崩壊の可能性に関して懸念がある。
【００７９】
天然のジスルフィド結合を破壊することなく、遊離チオール基を抗体に導入するための多くの方法が知られており、本発明のリガンドＺを用いて実施することができる。利用される方法に応じて、予測可能な数の遊離スルフヒドリルを所定の位置で導入することが可能であるかもしれない。一の方法では、システインが別のアミノ酸と置換されている変異抗体を調製する。例えば、Eigenbrotら、ＵＳ７,５２１,５４１Ｂ２（2009）；Chilkotiら、Bioconjugate Chem. 1994, 5, 504-507；Urnovitzら、ＵＳ４,６９８,４２０（1987）；Stimmelら、J. Biol. Chem., 275（39）, 30445-30450（2000）；Bamら、ＵＳ７,３１１,９０２Ｂ２（2007）；Kuanら、J. Biol. Chem., 269（10）, 7610-7618（1994）；Poonら、J. Biol. Chem., 270（15）, 8571-8577（1995）を参照のこと。もう一つ別の方法において、必要以上のシステインをＣ−末端に加える。例えば、Cumberら、J. Immunol., 149, 120-126（1992）；Kingら、Cancer Res., 54, 6176-6185（1994）；Liら、Bioconjugate Chem., 13, 985-995（2002）；Yangら、Protein Engineering, 16, 761-770（2003）；およびOlafsonら、Protein Engineering Design & Selection, 17, 21-27（2004）を参照のこと。遊離システインを導入する好ましい方法は、Liuら、ＷＯ２００９／０２６２７４Ａ１により教示される方法であり、そこではシステインを含むアミノ酸配列が抗体の重鎖のＣ−末端に加えられる。この方法は既知の数のシステイン残基（重鎖に付き１個の残基）を抗原結合部位から離れた既知の場所に導入する。この段落で引用される参考文献の内容もすべて出典明示により本明細書の一部とする。
【００８０】
さらにもう一つ別の実施態様において、リジンε−アミノ基は、ε−アミノ基をチオールまたはジスルフィド基に変換し、言うなればシステインサロゲートを作製する、２−イミノチオランまたはＮ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）などの試薬を用いて修飾され得る。しかしながら、この方法では、適切なε−アミノ基との関連で、上記と同じコンジュゲーション位置および化学量論の制限に悩まされる。
【００８１】
リンカー成分
上記されるように、本発明のコンジュゲートのリンカー部分は、３つまでの要素：切断可能な基Ｃ、および任意のスペーサーＸＺおよびＸＤを含む。
【００８２】
切断可能な基Ｃは、コンジュゲートが一般に血漿中に循環している間は相対的に安定しているが、コンジュゲートがその意図する作用部位に、すなわち、標的細胞付近に、その細胞に、またはその細胞内に一旦達すれば、容易に切断されるように選択されることが好ましい、生理学的条件下で切断可能な基である。好ましくは、該コンジュゲートは、抗体Ｚが標的細胞の表面に提示される抗原と結合して、標的細胞によって内在化される。その後で、基Ｃの切断が標的細胞の小胞体（初期エンドソーム、後期エンドソーム、または特に、リソソーム）で起こる。
【００８３】
１の実施態様において、基ＣはｐＨ感受性基である。血漿中のｐＨは中性よりもわずかに上であり、一方でリソソーム内部のｐＨは酸性で約５である。かくして、その切断が酸触媒作用である基Ｃは、血漿中の速度よりも、リソソーム内部で桁違いに速い速度で開裂するであろう。適切な酸感受性基の例として、Shenら、ＵＳ４,６３１,１９０（1986）；Shenら、ＵＳ５,１４４,０１１（1992）；Shenら、Biochem. Biophys. Res. Commun. 102, 1048-1054（1981）およびYangら、Proc. Natl Acad. Sci（USA）, 85, 1189-1193（1988）（その内容を出典明示により本明細書の一部とする）により記載されるように、シス−アコニチルアミドおよびヒドラゾンが挙げられる。
【００８４】
もう一つ別の実施態様において、基Ｃはジスルフィドである。ジスルフィドは、環境下のチオール濃度に依存する速度で、チオール−ジスルフィド交換機能により切断され得る。グルタチオンおよび他のチオールの細胞内濃度はその血清中濃度よりも高いため、ジスルフィドの切断速度は細胞内でより速いであろう。さらには、チオール−ジスルフィド交換速度は、ジスルフィドの立体および電子特性を調整すること（例えば、アルキル−アリールジスルフィド対アルキル−アルキルジスルフィド；アリール環上の置換等）によりモジュレートすることができ、血清中安定性および特定の切断速度を高めるジスルフィド結合の設計を可能とする。コンジュゲートにおけるジスルフィド切断可能な基に関するさらなる開示として、例えば、Thorpeら、Cancer Res. 48, 6396-6403（1988）；Santiら、ＵＳ７,５４１,５３０Ｂ２（2009）；Ｎgら、ＵＳ６,９８９,４５２Ｂ２（2006）；Ｎgら、ＷＯ２００２／０９６９１０Ａ１；Boydら、ＵＳ７,６９１,９６２Ｂ２；およびSufiら、ＵＳ２０１０／０１４５０３６Ａ１（その内容を出典明示により本明細書の一部とする）を参照のこと。
【００８５】
好ましい切断可能な基は、血清中のプロテアーゼによって切断されるのとは対称的に、標的細胞の内部にあるプロテアーゼにより選択的に切断されるペプチドである。典型的には、切断可能なペプチド基は、１ないし２０個のアミノ酸、好ましくは１ないし６個のアミノ酸、より好ましくは１ないし３個のアミノ酸を含む。アミノ酸は天然および／または天然以外のα−アミノ酸とすることができる。天然アミノ酸は、遺伝コードによりコードされるアミノ酸、ならびにそれらから誘導されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタマート、シトルリン、およびＯ−ホスホセリンである。この文脈では、「アミノ酸」なる語はまた、アミノ酸アナログおよび模倣物を含む。アナログは、天然アミノ酸と同じ一般的Ｈ２Ｎ（Ｒ）ＣＨＣＯ２Ｈ構造（ただし、Ｒ基は天然アミノ酸の間で認められる基である）を有する化合物である。アナログの例として、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、およびメチオニンメチルスルホニウムが挙げられる。アミノ酸模倣物は、α−アミノ酸の一般的化学構造と異なる構造を有するが、それと同様のように機能する、化合物である。アミノ酸は、遺伝的にコードされるアミノ酸の「Ｌ」立体化学の、ならびにエナンチオマー的に「Ｄ」立体化学のものとすることができる。
【００８６】
好ましくは、基Ｃは、プロテアーゼの切断可能な認識配列である、アミノ酸配列を含む。多数の切断可能な認識配列が当該分野にて知られている。例えば、Matayoshiら、Science 247：954（1990）；Dunnら、Meth. Enzymol. 241：254（1994）；Seidahら、Meth. Enzymol. 244：175（1994）；Thornberry、Meth. Enzymol. 244：615（1994）；Weberら、Meth. Enzymol. 244：595（1994）；Smithら、Meth. Enzymol. 244：412（1994）；およびBouvierら、Meth. Enzymol. 248：614（1995）（その内容を出典明示により本明細書の一部とする）を参照のこと。
【００８７】
細胞により内在化されることを意図としないコンジュゲートでは、基Ｃは、それが標的組織の近傍にある細胞外マトリックスに存在するプロテアーゼ、例えば、すぐ近くにある死細胞により放出されるプロテアーゼ、または腫瘍関連プロテアーゼによって切断されるように選択され得る。典型的な細胞外腫瘍関連プロテアーゼは、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）、チメットオリゴペプチダーゼ（thimet oligopeptidase）（ＴＯＰ）およびＣＤ１０である。
【００８８】
細胞により内在化されるように設計されるコンジュゲートでは、基Ｃは、好ましくは、エンドソームまたはリソソームプロテアーゼにより、特に後者により切断されるように選択されるアミノ酸配列を含む。かかるプロテアーゼの例として、限定されるものではないが、カテプシンＢ、Ｃ、Ｄ、Ｈ、ＬおよびＳ、特に、カテプシンＢが挙げられる。カテプシンＢは、ペプチドを、配列−ＡＡ２−ＡＡ１−（ここで、ＡＡ１は塩基性アミノ酸または強固に水素結合しているアミノ酸（リジン、アルギニンまたはシトルリンなど）であり、ＡＡ２は疎水性アミノ酸（フェニルアラニン、バリン、アラニン、ロイシンまたはイソロイシンなど）である）、例えばＶａｌ−Ｃｉｔ（ここで、Ｃｉｔはシトルリンを意味する）またはＶａｌ−Ｌｙｓで優先的に切断する。（本明細書中、アミノ酸配列は、文脈にて明らかにそうでないと示されない限り、Ｈ２Ｎ−ＡＡ２−ＡＡ１−ＣＯ２Ｈに示されるように、Ｎ−からＣ−の方向に記述される。）Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｌａ、Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、およびＡｓｐ−Ｖａｌ−ＣｉｔもカテプシンＢに関する基質のペプチドモチーフであるが、ある場合には切断速度は遅くなるかもしれない。カテプシン−切断可能な基に関するさらなる情報については、Dubowchikら、Biorg. Med. Chem. Lett. 8, 3341-3346（1998）；Dubowchikら、Bioorg. Med. Chem. Lett., 8, 3347-3352（1998）；およびDubowchikら、Bioconjugate Chem. 13, 855-869（2002）（その内容を出典明示により本明細書の一部とする）を参照のこと。ペプチジルリンカーを切断するのに利用され得る別の酵素はレグマインであり、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎで優先的に切断するリソソームシステインプロテアーゼである。
【００８９】
１の実施態様において、基Ｃは、２個のアミノ酸配列、−ＡＡ２−ＡＡ１−（ここで、ＡＡ１はリジン、アルギニンまたはシトルリンであり、ＡＡ２はフェニルアラニン、バリン、アラニン、ロイシンまたはイソロイシンである）を含む、ペプチドである。もう一つ別の実施態様において、基Ｃは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｃｉｔ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ｃｉｔ、Ｓｅｒ、およびＧｌｕからなる群より選択される、１ないし３個のアミノ酸の配列で構成される。
【００９０】
単一のアミノ酸で構成される切断可能な基Ｃの調製および設計は、Chenら、ＵＳ８,６６４,４０７Ｂ２（2014）（その内容を出典明示により本明細書の一部とする）に開示される。
【００９１】
基Ｃは光切断可能な基でもあり、例えば光に暴露されると切断される、ニトロベンジルエーテルである。
【００９２】
基Ｃは抗体ＺまたはアナログＤと直接結合することができ；すなわち、スペーサーＸＺおよびＸＤが、場合によっては、不在とすることができる。例えば、基Ｃがジスルフィドであるならば、２個の硫黄の一つを抗体Ｚ上のシステイン残基またはその代替基とすることができる。あるいは、基Ｃは抗体の炭水化物側鎖のアルデヒドとヒドラゾン結合を形成し得る。あるいは、基Ｃは抗体Ｚのリジンε−アミノ基とペプチド結合を形成し得る。好ましい実施態様において、二量体Ｄは、二量体Ｄのカルボキシルまたはアミン基と結合したペプチジルを通して、基Ｃと直接的に結合される。
【００９３】
スペーサーＸＺは、存在する場合には、基Ｃと抗体Ｚとの間に、前者が後者と抗原との結合を空間的に干渉しないように、または後者が前者の切断を空間的に干渉しないように、空間的隔離を提供する。さらには、スペーサーＸＺは、コンジュゲートに対して溶解性を増大させるために、または凝集性を低下させるために使用され得る。スペーサーＸＺは、任意の数の組み合わせで組み立てることのできる、１または複数のモジュラーセグメントを含むことができる。スペーサーＸＺに適切なセグメントの例が、
【化４０】
0006498773.tif 000044
であり、ここでその下付き文字ｇは０または１であり、下付き文字ｈは１〜２４、好ましくは２〜４である。これらのセグメントは、次に：
【化４１】
0006498773.tif 000045
説明されるように組み合わせることができる。
【００９４】
スペーサーＸＤは、存在するとすれば、基Ｃと二量体Ｄとの間に、後者が前者の切断を立体的または電子的に干渉しないように、空間的隔離を提供する。スペーサーＸＤはまた、コンジュゲートにさらなる分子の質量および官能性の付加を導入するのに供され得る。一般に、さらなる質量および官能性はコンジュゲートの血清中半減期および他の特性に影響を及ぼすであろう。かくして、スペーサー基の賢明な選択を通して、コンジュゲートの血清中半減期をモジュレートすることができる。スペーサーＸＤは、スペーサーＸＺの文脈にて上記されるように、モジュラーセグメントから組み立てることもできる。
【００９５】
スペーサーＸＺおよび／またはＸＤは、存在するならば、各々、ＺおよびＣ、またはＤおよびＣの間で、好ましくは原子数４〜２５の、より好ましくは原子数４〜２０の線形の分離を提供する。
【００９６】
リンカーは、抗体と薬物を共有的に結び付けることに加えて、他の機能を果たし得る。例えば、リンカーは、コンジュゲーション化学を遂行する間に、または最終のＡＤＣ産物のいずれかにおいて、溶解度を高める、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）基を含有し得る。ＰＥＧ基が存在する場合、それはスペーサーＸＺまたはＸＤのいずれか、あるいはその両方に組み込まれてもよい。ＰＥＧ基での反復単位の数は２〜２０、好ましくは４〜１０とすることができる。
【００９７】
スペーサーＸＺまたはＸＤのいずれか、あるいはその両方は、自己犠牲部分を含むことができる。自己犠牲部分は、（１）基Ｃと、そして抗体Ｚまたは二量体Ｄのいずれかと結合し、および（２）基Ｃからの切断が、場合によっては、結果として、自己犠牲部分がそれ自体を抗体Ｚまたは二量体Ｄから剥離させる、反応を開始させるような構造を有する、部分である。言い換えれば、（基Ｃから切断可能な）体Ｚまたは二量体Ｄから離れた部位での反応は、ＸＺ−ＺまたはＸＤ−Ｄの結合を惹起し、その上で断裂させる。スペーサーＸＤの場合には、自己犠牲部分が存在することが望ましい。というのも、仮にコンジュゲートを切断した後に、スペーサーＸＤまたはその一部が二量体Ｄに結合したままとしたら、その生物学的活性が損なわれるかもしれないからである。自己犠牲部分の使用は、切断可能な基Ｃがポリペプチドである場合に特に望ましく、その場合には、自己犠牲部分は、典型的には、ポリペプチドに隣接して位置付けられる。
【００９８】
パートナー分子Ｄのヒドロキシルまたはアミノ基と結合する典型的な自己犠牲部分（ｉ）−（ｖ）を以下に示す：
【化４２】
0006498773.tif 000046
【００９９】
自己犠牲部分は、点線ａとｂ（または点線ｂとｃ）の間で、文脈を提供するように示される隣接する構造的特徴のある構造部分である。自己犠牲部分（ｉ）および（ｖ）は、二量体Ｄ−ＮＨ２に結合し（すなわち、二量体Ｄはアミノ基を介してコンジュゲートされる）、一方で自己犠牲部分（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｉｖ）は二量体Ｄ−ＯＨに結合する（すなわち、二量体Ｄはヒドロキシルまたはカルボキシル基を介してコンジュゲートされる）。点線ｂでのアミド結合の切断（例えば、ペプチダーゼによる）は、アミドの窒素をアミンの窒素として放出し、点線ａの結合の切断を、場合によっては、結果としてＤ−ＯＨまたはＤ−ＮＨ２の放出をもたらす、反応を開始させる。別法として、自己犠牲反応を引き起こす切断は、構造式（ｖｉ）の場合のように、異なる型の酵素による、例えばβ−グルクロニダーゼによるものとすることができる。ある場合には、自己犠牲基は、構造式（ｖｉｉ）に示されるように、縦一列になって、使用され得る。そのような場合には、点線ｃでの切断が１,６−脱離反応により点線ｂとｃの間の部分の自己犠牲を誘発し、つづいて環化−脱離反応により点線ａとｂの間の部分の自己犠牲を誘発する。自己犠牲部分に関するさらなる開示として、Carlら、J. Med. Chem., 24（3）, 479-480（1981）；Carlら、ＷＯ８１／０１１４５（1981）；Dubowchikら、Pharmacology & Therapeutics, 83, 67-123（1999）；Firestoneら、ＵＳ６,２１４,３４５Ｂ１（2001）；Tokiら、J. Org. Chem. 67, 1866-1872（2002）；Doroninaら、Nature Biotechnology 21（7）, 778-784（2003）（誤植、p. 941）；Boydら、ＵＳ７,６９１,９６２Ｂ２；Boydら、ＵＳ２００８／０２７９８６８Ａ１；Sufiら、WＯ２００８／０８３３１２Ａ２；Feng、ＵＳ７,３７５,０７８Ｂ２；Jeffreyら、ＵＳ８０３９,２７３；およびSenterら、ＵＳ２００３／００９６７４３Ａ１（その内容を出典明示により本明細書の一部とする）を参照のこと。好ましい自己犠牲基は、構造式（ｉ）に示されるように、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）基である。
【０１００】
もう一つ別の実施態様において、抗体を標的とする部分と二量体Ｄとを、切断できないリンカーで連結する：すなわち、要素Ｃが不在である。抗体のデグラデーションとは、結局は、リンカーを、二量体Ｄの生物学的活性に干渉しない、添付した小さな部分に縮小することである。
【０１０１】
コンジュゲーション技法
本発明のコンジュゲートは、好ましくは、本発明のアナログ（下記の式中にてＤで表される）およびリンカー：（ＸＤ）ａ（Ｃ）ｃ（ＸＺ）ｂ（ここでＸＤ、Ｃ、ＸＺ、ａ、ｂ、およびｃは式（ＩＩ）について定義されるとおりである）を含む化合物をまず調製し、式（ＩＩＩ）：
【化４３】
0006498773.tif 000047
［式中、Ｒ３１は、抗体Ｚ上の相補的官能基と反応し、コンジュゲートを形成するのに適する官能基である］
で示されるアナログ−リンカー組成物を形成することにより製造される。適切な基Ｒ３１の例として、アミノ、アジド、シクロオクチン、
【化４４】
0006498773.tif 000048
が挙げられ、ここでＲ３２は、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、メシラート、またはトシラートであり、Ｒ３３はＣｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ、ＯＨ、−Ｏ−Ｎ−スクシンイミジル、−Ｏ−（４−ニトロフェニル）、−Ｏ−ペンタフルオロフェニル、または−Ｏ−テトラフルオロフェニルである。適切な部分Ｄ−（ＸＤ）ａＣ（ＸＺ）ｂ−Ｒ３１を調製するのに一般に使用され得る化学は、Ngら、ＵＳ７,０８７,６００Ｂ２（2006）；Ngら、ＵＳ６,９８９,４５２Ｂ２（2006）；Ngら、ＵＳ７,１２９,２６１Ｂ２（2006）；Ngら、WＯ０２／０９６９１０Ａ１；Boydら、ＵＳ７,６９１,９６２Ｂ２；Chenら、ＵＳ７,５１７,９０３Ｂ２（2009）；Gangwarら、ＵＳ７,７１４,０１６Ｂ２（2010）；Boydら、ＵＳ２００８／０２７９８６８Ａ１；Gangwarら、ＵＳ７,８４７,１０５Ｂ２（2010）；Gangwarら、ＵＳ７,９６８,５８６Ｂ２（2011）；Sufiら、ＵＳ２０１０／０１４５０３６Ａ１；およびChenら、ＵＳ２０１０／０１１３４７６Ａ１（その内容を出典明示により本明細書の一部とする）に開示される。
【０１０２】
好ましくは、反応性官能基−Ｒ３１は、−ＮＨ２、−ＯＨ、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＨ、マレイミド、シクロオクチン、アジド（−Ｎ３）、ヒドロキシルアミノ（−ＯＮＨ２）またはＮ−ヒドロキシスクシンイミドである。特に好ましい官能基−Ｒ３１は：
【化４５】
0006498773.tif 000049
である。
【０１０３】
−ＯＨ基は、抗体にある、例えばアスパラギン酸またはグルタミン酸側鎖上のカルボキシ基でエステル化され得る。
【０１０４】
−ＣＯ２Ｈ基は、抗体にある、−ＯＨ基でエステル化され、あるいはアミノ基（例えば、リジン側鎖上の基）でアミド化され得る。
【０１０５】
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド基は、機能的に活性化されたカルボキシル基を有し、都合よくはアミノ基（例えば、リジンより由来のアミノ基）と反応させることによりアミド化され得る。
【０１０６】
マレイミド基は、ミカエル付加反応において、抗体にある−ＳＨ基（例えば、システインから由来、またはスルフヒドリル官能基を導入するのに抗体を化学的に修飾して得られる基）とコンジュゲートされ得る。
【０１０７】
種々の技法が−ＳＨ基を抗体に導入し得る。好ましい技法において、抗体のリジン残基の側鎖にあるε−アミノ基を２−イミノチオランと反応させて遊離チオ−ル（−ＳＨ）基を導入する。そのチオール基をマレイミドまたは他の求核アクセプター基と反応させてコンジュゲーションを行うことができる：
【化４６】
0006498773.tif 000050
【０１０８】
典型的には、抗体に付き２〜３個のチオールのチオレーションレベルを達成する。代表的な操作として、Congら、2004（その内容を出典明示により本明細書の一部とする）を参照のこと。かくして、１の実施態様において、本発明の二量体とコンジュゲートされる抗体は、イミノチオランとの反応により修飾される、１または複数の（好ましくは２または３個の）リジン残基を有する。
【０１０９】
−ＳＨ基もコンジュゲーションのために使用することができ、それには、その記載されるものの「鏡像」であるミカエル付加反応においてマレイミド基を抗体中に導入するために抗体を修飾した。抗体はＮ−スクシンイミジル４−（マレイミドメチル）−シクロヘキサンカルボキシラート（ＳＭＣＣ）またはそのスルホン酸化した変異体スルホ−ＳＭＣＣを用いてマレイミド基を有するように修飾され得る。その試薬は共にSigma-Aldrichより入手可能である。
【０１１０】
代替となるコンジュゲーション技法は、銅触媒不要の「クリックケミストリー」を利用し、そこではアジド基をシクロオクチンの歪んだアルキン結合と交差して付加し、１,２,３−トリアゾール環を形成する。例えば、Agardら、J. Amer. Chem. Soc. 2004, 126, 15046；Best、Biochemistry 2009, 48, 6571（その内容を出典明示により本明細書の一部とする）を参照のこと。アジドを抗体に、シクロオクチンを薬物部分に配置、あるいはその逆に位置付けることができる。好ましいシクロオクチン基はジベンゾシクロオクチン（ＤＩＢＯ）である。ＤＩＢＯ基を有する種々の試薬がInvitrogen／Molecular Probes, Eugene. Oregonより入手可能である。以下の反応は、ＤＩＢＯ基が抗体（Ａｂ）に結合されている場合のクリックケミストリーのコンジュゲーションを説明する：
【化４７】
0006498773.tif 000051
【０１１１】
さらにもう一つ別のコンジュゲーション技法は、天然に存在しないアミノ酸を抗体に導入し、その天然に存在しないアミノ酸を用いて薬物部分の反応性官能基とコンジュゲートするための官能性を提供することを含む。例えば、天然に存在しないアミノ酸のｐ−アセチルフェニルアラニンは、Tianら、ＷＯ２００８／０３０６１２Ａ２（2008）にて教示されるように、抗体または他のポリペプチドに取り込まれ得る。ｐ−アセチルフェニルアラニンのケト基は、リンカー−薬物部分にあるヒドロキシルアミンとの、オキシムの形成を介する、コンジュゲーション部位であり得る。別法として、天然に存在しないアミノ酸のｐ−アジドフェニルアラニンは、上記されるように、抗体に取り込まれ、クリックケミストリーを介するコンジュゲーションのためのアジド官能基を提供し得る。天然に存在しないアミノ酸はまた、Goerkeら、ＵＳ２０１０／００９３０２４Ａ１（2010）およびGoerkeら、Biotechnol. Bioeng. 2009, 102（2）, 400-416において教示されるように、無細胞系方法を用いて抗体または他のポリペプチドに組み込むこともできる。上述した開示は出典明示により本明細書の一部とする。かくして、１の実施態様において、本発明の二量体とコンジュゲートを製造するのに使用される抗体は、好ましくはｐ−アセチルフェニルアラニンまたはｐ−アジドフェニルアラニン、より好ましくはｐ−アセチルフェニルアラニンである、天然に存在しないアミノ酸と置換される１または複数のアミノ酸を有する。
【０１１２】
さらにもう一つ別のコンジュゲーション技法は、Jegerら、Angew. Chem. Int. Ed. 2010, 49, 9995に従って、トランスグルタミナーゼ酵素（好ましくは、細菌性トランスグルタミナーゼまたはＢＴＧ）を用いる。ＢＴＧは、グルタミンの側鎖であるカルボキシアミド（アミンアクセプター）と、例えば、リジンのε−アミノ基または５−アミノ−ｎ−ペンチル基とすることができる、アルキレンアミノ基（アミンドナー）の間にアミド結合を形成する。典型的なコンジュゲーション反応にて、以下に示されるように、グルタミン残基は抗体に位置付けられ、一方でアルキレンアミノ基はリンカー−薬物部分に位置付けられる：
【化４８】
0006498773.tif 000052
【０１１３】
ポリペプチド鎖にあるグルタミン残基の位置付けはＢＴＧ介在性アミノ基転移に対するその感受性に大きな影響を及ぼす。抗体にグルタミン残基のないものは、通常は、ＢＴＧ基質である。しかしながら、抗体が脱グリコシル化されているならば、グルタミン２９５（Ｑ２９５）のすぐ近くにあるアスパラギン２９７（Ｎ２９７）である糖鎖形成部位はＢＴＧを感受性にする。抗体は、ＰＮＧａｓｅＦ（ペプチド−Ｎ−グリコシダーゼＦ）で処理することにより、酵素を用いて脱グリコシル化され得る。別法として、抗体は定常領域にＮ２９７Ａ変異を導入することによりグリコシドフリーで合成され、Ｎ２９７糖鎖形成部位を取り除くことができる。さらには、抗体でのＮ２９７Ｑ置換が、糖鎖形成を排除するだけでなく、アミンアクセプターでもある、別のグルタミン残基を（位置２９７に）導入することが示された。かくして、１の実施態様において、本発明の二量体とコンジュゲートされる抗体は脱グリコシル化される。もう一つ別の実施態様において、抗体はＮ２９７Ａ置換を有する。当業者であれば、合成後修飾による、またはＮ２９７Ａ変異の導入による脱グリコシル化が、抗体当たり２つのＢＴＧ−反応性グルタミン残基（重鎖に付き１つ、位置２９５）を生成し、一方でＮ２９７Ｑ置換の抗体は４つのＢＴＧ−反応性グルタミン残基（重鎖に付き２つ、位置２９５および２９７）を有するであろうことを理解するであろう。
【０１１４】
コンジュゲーションはまた、Levaryら、PLoS One 2011, 6（4）, e18342；Proft、Biotechnol. Lett. 2010, 32, 1-10；Ploeghら、ＷＯ２０１０／０８７９９４Ａ２（2010）；およびMaoら、ＷＯ２００５／０５１９７６Ａ２（2005）において教示されるように、酵素のソルターゼ（Sortase）Ａを用いて行われうる。ソルターゼＡ認識モチーフ（典型的には、ＬＰＸＴＧであり、ここでＸはいずれか天然のアミノ酸である）は、リガンドＺに位置付けられ、求核アクセプターモチーフ（典型的には、ＧＧＧ）は式（ＩＩＩ）中の基Ｒ３１であってもよく、あるいはその逆であってもよい。
【０１１５】
二量体−リンカー化合物
一般に、本発明の二量体のＡＤＣは、その二量体の官能基に結合したリンカーを含み、そのリンカーは抗体と結合する。利用可能なコンジュゲーション技法の多様性を考慮して、本発明の二量体は、抗体とのコンジュゲーションに適する多くの異な二量体−リンカー化合物に変化させることができる。
【０１１６】
一般に、リンカーを本発明の二量体と結合させるには、以下の図で説明されるように、３種の異なるやり方がある（簡潔にするために環における可変基と共に任意の置換基は図示せず）。
【化４９】
0006498773.tif 000053
【０１１７】
（ａ）型の二量体−リンカー化合物では、リンカーを結合させるための官能基は、２つの半二量体の間にある架橋Ｘに配置付けられる。（ｂ）型の二量体−リンカー化合物では、リンカーはイミン二重結合を横切る付加生成物として結合される。（ｃ）型および（ｃ’）型の二量体−リンカー化合物では、リンカーを結合させるための官能基はＴＨＩＱ、ＡＺＩまたはＰＢＤの二量体単位の「外側の」環に配置付けられる。
【０１１８】
１の実施態様において、（ａ）型の二量体−リンカー化合物は、式（ＩＩＩａ）：
【化５０】
0006498773.tif 000054
［式中
Ｔは自己犠牲基であり；
ｔは０または１であり；
ＡＡａおよび各ＡＡｂは、アラニン、β−アラニン、γ−アミノ酪酸、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、γ−カルボキシグルタミン酸、シトルリン、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、ノルロイシン、ノルバリン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリンからなる群より独立して選択され；
ｕは０または１であり；
ｐは１、２、３または４であり；
ｑは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２（好ましくは２、３、４または８）であり；
ｒは１、２、３、４または５であり；
ｓは０または１であり；
Ｒ３１は
【化５１】
0006498773.tif 000055
であり；
ＸＡは
【化５２】
0006498773.tif 000056
ここで、ｘおよびｙは、各々、１、２または３である：ただし、ｘおよびｙの合計は２または４であり；星印（＊）は、各ＸＡと隣接するＯおよびＲ１との結合の位置を示し；波線
【化５３】
0006498773.tif 000057
は、各ＸＡと、Ｔが存在するならば、Ｔとの、あるいはＴが不在であるならば、ＡＡａとの結合の位置を示し；および
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｇ、Ｙ、および二重線
【化５４】
0006498773.tif 000058
は、式（Ｉ）に関して上記される簡単な発明の概要のセクションにおいて定義されるとおりである］
で表されうる。
【０１１９】
１の好ましい実施態様において、式（ＩＩＩａ）中にて、ｕは１である。
【０１２０】
式（ＩＩＩａ）に係る（ａ）型の好ましい二量体−リンカー化合物は、式（ＩＩＩａ’）：
【化５５】
0006498773.tif 000059
［式中、Ｒ９は、各々独立して、Ｈ、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−４Ｈ、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−４（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、ＯＨ、Ｃｌ、Ｆ、またはＢｒである］
で示される。
【０１２１】
好ましくは、式（ＩＩＩａ）および（ＩＩＩａ’）中、ＸＡは、
【化５６】
0006498773.tif 000060
である。
【０１２２】
（ａ）型の二量体−リンカー化合物の例として、
【化５７】
0006498773.tif 000061
【化５８】
0006498773.tif 000062
【化５９】
0006498773.tif 000063
が挙げられる。
【０１２３】
好ましい下位群の二量体−リンカーは、
【化６０】
0006498773.tif 000064
で示され、ここで下付き文字のｎは２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２である。
【０１２４】
（ａ）型の特に好ましい二量体−リンカーは、（ＩＩＩａ−０３）および（ＩＩＩａ−０４）である。
【０１２５】
もう一つ別の実施態様において、（ｂ）型の二量体−リンカー化合物は、式（ＩＩＩｂ）：
【化６１】
0006498773.tif 000065
［式中
Ｔ、ｔ、ＡＡａ、ＡＡｂ、ｕ、ｐ、ｑ、ｓ、ｒ、およびＲ３１は、式（ＩＩＩａ）において定義されたとおりであり；および
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｘ、Ｙ、およびＧは、上記の簡単な発明の概要のセクションにおいて定義されるとおりである］
で表すことができる。
【０１２６】
１の好ましい実施態様において、式（ＩＩＩｂ）中にて、ｕは１である。
【０１２７】
式（ＩＩＩｂ）に係る（ｂ）型の好ましい二量体は、式（ＩＩＩｂ’）：
【化６２】
0006498773.tif 000066
［式中
Ｒ９は、各々独立して、Ｈ、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−４Ｈ、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−４（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、ＯＨ、Ｃｌ、Ｆ、またはＢｒであり；および
Ｘは、
【化６３】
0006498773.tif 000067
である］
で示される。
【０１２８】
（ｂ）型の二量体−リンカー化合物の例として
【化６４】
0006498773.tif 000068
【化６５】
0006498773.tif 000069
【化６６】
0006498773.tif 000070
が挙げられる。
【０１２９】
１の実施態様において、（ｃ）型の二量体−リンカー化合物は、式（ＩＩＩｃ）：
【化６７】
0006498773.tif 000071
［式中
Ｔ、ｔ、ＡＡａ、ＡＡｂ、ｕ、ｐ、ｑ、ｓ、ｒ、およびＲ３１は、式（ＩＩＩａ）において定義されたとおりであり；および
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｚ、および二重線
【化６８】
0006498773.tif 000072
は、上記の簡単な発明の概要のセクションにおいて定義されるとおりである］
で表すことができる。
【０１３０】
１の好ましい実施態様において、式（ＩＩＩｃ）中にて、ｕは１である。
【０１３１】
式（ＩＩＩｃ）に係る（ｃ）型の好ましい二量体−リンカー化合物は、式（ＩＩＩｃ’）：
【化６９】
0006498773.tif 000073
［式中
Ｒ９はＨ、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−４Ｈ、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−４（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、ＯＨ、Ｃｌ、Ｆ、またはＢｒであり；および
Ｘは
【化７０】
0006498773.tif 000074
である］
で示される。
【０１３２】
（ｃ）型の二量体−リンカー化合物の例として、
【化７１】
0006498773.tif 000075
【化７２】
0006498773.tif 000076
【化７３】
0006498773.tif 000077
が挙げられる。
【０１３３】
（ｃ’）型の好ましい二量体−リンカーは、式（ＩＩＩｃ’’）：
【化７４】
0006498773.tif 000078
［式中
Ｔ、ｔ、ＡＡａ、ＡＡｂ、ｕ、ｐ、ｑ、ｓ、ｒ、およびＲ３１は、式（ＩＩＩａ）において定義されたとおりであり；および
Ｒ５０は、各々独立して、Ｈ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、Ｏ（Ｃ２−Ｃ３アルキレン）、Ｏ（Ｃ２−Ｃ３アルキニル）、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＣＮである］
で示される。
【０１３４】
好ましくは、式（ＩＩＩｃ’’）中において、部分
【化７５】
0006498773.tif 000079
は、
【化７６】
0006498773.tif 000080
である。
【０１３５】
式（ＩＩＩｃ’’）で示される二量体−リンカーの一例が、
【化７７】
0006498773.tif 000081
である。
【０１３６】
特に好ましい（ｃ）／（ｃ’）型の二量体−リンカー化合物が（ＩＩＩｃ−０８）である。
【０１３７】
式（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩａ’）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｂ’）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｃ’）および（ＩＩＩｃ’’）中のＲ３１は、上記されるように、コンジュゲーションを行うために、抗体上の相補的官能基と反応しうる反応性官能基である。
【０１３８】
式（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩａ’）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｂ’）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｃ’）および（ＩＩＩｃ’’）中、−ＡＡａ−［ＡＡｂ］ｐ−は、その長さがｐの値により決定されるポリペプチド（ｐが１ならばジペプチド、ｐが３ならばテトラペプチド等）を表す。ＡＡａはポリペプチドのカルボキシ末端にあり、そのカルボキシル基が二量体のアミンの窒素とペプチド（アミド）結合を形成する。反対に、最後のＡＡｂはそのポリペプチドのアミノ末端にあり、そのα−アミノ基は、ｓが、各々、１であるか、０であるかに応じて、
【化７８】
0006498773.tif 000082
とペプチド結合を形成する。好ましいポリペプチド−ＡＡａ−［ＡＡｂ］ｐ−は、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｌａ、Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ｖａｌ−Ｇｌｎ、およびＡｓｐ−Ｖａｌ−Ｃｉｔであり、Ｈ２Ｎ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＣＯ２Ｈにあるように慣用的にＮからＣの方向に記載される。より好ましくは、該ポリペプチドはＶａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、またはＶａｌ−Ａｌａである。好ましくは、ポリペプチド−ＡＡａ−［ＡＡｂ］ｐ−は、標的（がん）細胞の内部に認められる酵素、例えば、カテプシン、特にカテプシンＢで切断可能である。
【０１３９】
下付き文字のｔが０または１であることで示されるように、自己犠牲基Ｔは式（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩａ’）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｂ’）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｃ’）および（ＩＩＩｃ’’）の二量体−リンカー化合物において所望により存在してもよい。自己犠牲基Ｔが存在する場合、それは、好ましくは、その構造が下記に示される、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）基であり、星印（＊）は二量体のアミンの窒素と結合するＰＡＢＣの末端を示し、波線
【化７９】
0006498773.tif 000083
はポリペプチド−ＡＡａ−［ＡＡｂ］ｐ−と結合する末端を示す。
【化８０】
0006498773.tif 000084
【０１４０】
好ましい実施態様において、式（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩａ’）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｂ’）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｃ’）または（ＩＩＩｃ’’）中にて、Ｒ３１基は
【化８１】
0006498773.tif 000085
である。
【０１４１】
もう一つ別の好ましい実施態様において、式（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩａ’）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｂ’）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｃ’）または（ＩＩＩｃ’’）中にて、Ｒ３１基は
【化８２】
0006498773.tif 000086
である。
【０１４２】
コンジュゲートの調製
この一般的操作は、上記されるように、リジンε−アミノ基と２−イミノチオランとを反応させ、つづいてマレイミド含有の薬物−リンカーの部分と反応させることによって、遊離チオール基の抗体への導入を基礎とする。まず、抗体を５０ｍＭ  ＮａＣｌおよび２ｍＭジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）を含有する０.１Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ８.０）への緩衝液交換に供し、５−１０ｍｇ／ｍＬに濃縮した。チオール化は２−イミノチオランの抗体への添加を通してなされる。２−イミノチオランの添加される量は予備実験により測定することができ、抗体によって様々である。予備実験においては、増大する量の２−イミノチオランを抗体に添加して滴定し、抗体と一緒に室温（約２５℃）で１時間インキュベートした後、抗体をセファデックス（SEPHADEX）（登録商標）Ｇ−２５カラムを用いて５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、５ｍＭグリシン、２ｍＭ  ＤＴＰＡ、ｐＨ５.５中に脱塩処理に付し、ジチオジピリジン（ＤＴＤＰ）と反応させることで導入されたチオール基の数を速やかに測定する。チオール基とＤＴＤＰの反応はチオピリジンの遊離をもたらし、そのことは分光的に３２４ｎｍでモニター観察され得る。試料は、典型的には、０.５−１.０ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度で使用される。吸光度を２８０ｎｍで用い、試料中のタンパク質の濃度を正確に測定し、次に各試料のアリコート（０.９ｍＬ）を０.１ｍＬのＤＴＤＰ（エタノール中５ｍＭストック溶液）と一緒に室温で１０分間インキュベートすることができる。緩衝液単独のブランク試料もＤＴＤＰと一緒に並行してインキュベートする。１０分後に、３２４ｎｍでの吸光度を測定し、１９,８００Ｍ−１のチオピリジンの吸光係数を用いてチオール基の数を定量する。
【０１４３】
典型的には、１個の抗体に付き約２ないし３個のチオール基のチオール化レベルが望ましい。例えば、ある抗体では、このことは１５倍のモル過剰の２−イミノチオランを添加し、つづいて室温で１時間インキュベートすることにより達成され得る。ついで抗体を２−イミノチオランと一緒に所望のモル比でインキュベートし、次にコンジュゲーション緩衝液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、５ｍＭグリシン、２ｍＭ  ＤＴＰＡ、ｐＨ５.５）中に脱塩処理に付した。導入されるチオールの数を上記のように定量しながら、チオール化される材料を氷上に維持する。
【０１４４】
導入されたチオールの数を検証した後、チオールに付き２.５倍モル過剰量の薬物（二量体）−リンカーの部分を添加する。コンジュゲーション反応を、２５％プロピレングリコールおよび５％トレハロースを最終濃度で含有する、コンジュゲーション緩衝液中で進行させる。通常、薬物−リンカーのストック溶液を１００％ＤＭＳＯに溶かす。そのストック溶液をチオール化抗体に直接添加する。
【０１４５】
コンジュゲーション反応混合物を緩やかに攪拌しながら室温で２時間インキュベートする。次に１０倍モル過剰量のＮ−エチルマレイイミド（ＤＭＳＯ中１００ｍＭストック溶液）を該コンジュゲーション混合物に添加し、さらに１時間攪拌し、未反応のチオールを遮断した。
【０１４６】
次に、試料を０.２μフィルターを通して濾過する。材料をＴＦＦビバフロー５０ザルトリウス３０ＭＷＣＯ  ＰＥＳ膜を通して１０ｍｇ／ｍＬのグリシン、２０ｍｇ／ｍＬのソルビトール、１５％アセトニトリル  ｐＨ５.０（５ｘＴＦＦ緩衝液交換容量）に緩衝液交換に供し、未反応のいずれの薬物も除去する。最終処方をＴＦＦで行い、２０ｍｇ／ｍｌのソルビトール、１０ｍｇ／ｍＬのグリシン、ｐＨ５.０とする。
【０１４７】
二量体−リンカー化合物（ここで、リンカーはアミン基を有し、アミン供与体として作用しうる）のトランスグルタミナーゼ介在のコンジュゲーションのために以下の操作を用いることができる。抗体は、トランスグルタミナーゼ反応性グルタミンを有する抗体、例えば、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｑ置換のある抗体とすることができる。コンジュゲーションは、組換え細菌性トランスグルタミナーゼにより抗体：酵素（５：１のモル比）を用いて実施される。コンジュゲーションは、５０ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ８.０）中、３７℃で一夜インキュベートする標準的プロトコルを用いて実施される。得られたコンジュゲートを、５０ｍＭトリス（ｐＨ８.０）で予め平衡にした、プロテインＡカラムを用いて精製する。コンジュゲートは０.１Ｍクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ３.５）で溶出する。その溶出したフラクションを１Ｍトリス（ｐＨ９.０）で中和する。コンジュゲートは２０ｍｇ／ｍＬソルビトール、１０ｍｇ／ｍＬグリシン（ｐＨ５.０）に処方され得る。
【０１４８】
当業者は上記の条件および方法が例示であって、限定するものではなく、コンジュゲーションのための他の方法も当該分野にて知られており、本発明にて用いることができることを理解するであろう。
【０１４９】
コンジュゲート
１の実施態様において、本発明のコンジュゲートは、（ａ）型の二量体−リンカー化合物より誘導され、式（ＩＶａ）：
【化８３】
0006498773.tif 000087
［式中
Ａｂは抗体であり；
Ｒ４０は
【化８４】
0006498773.tif 000088
であり；
ここで、Ａｂと結合するＲ４０のオープン価電子帯が星印（＊）で示され、（ＣＨ２）ｒと結合するＲ４０のオープン価電子帯が波線
【化８５】
0006498773.tif 000089
で示され；
ｍは１、２、３または４であり；
Ｔ、ｔ、ＡＡａ、ＡＡｂ、ｕ、ｐ、ｑ、ｓ、ｒ、およびＸＡは式（ＩＩＩａ）において定義されるとおりであり；および
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｙ、Ｇ、および二重線
【化８６】
0006498773.tif 000090
は、上記の簡単な発明の概要のセクションにて定義されるとおりである］
で示されうる。
【０１５０】
好ましい実施態様において、式（ＩＶａ）中、ｕは１である。
【０１５１】
式（ＩＶａ）に係る好ましいコンジュゲートは、式（ＩＶａ’）：
【化８７】
0006498773.tif 000091
［式中
Ｒ９はＨ、ＯＨ、ＯＭｅ、ＮＨ２、ＮＭｅ２、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−８Ｍｅ、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、または
【化８８】
0006498773.tif 000092
であり；および
ＸＡは
【化８９】
0006498773.tif 000093
であって、ここで星印（＊）は各ＸＡの隣接するＯとの結合の位置を示し、波線
【化９０】
0006498773.tif 000094
は各ＸＡの、Ｔが存在するとすれば、Ｔとの、あるいはＴが不在とすれば、ＡＡａとの結合の位置を示す］
で示される。
【０１５２】
もう一つ別の実施態様において、本発明のコンジュゲートは、（ｂ）型の二量体−リンカー化合物より誘導され、式（ＩＶｂ）：
【化９１】
0006498773.tif 000095
［式中
Ａｂ、Ｒ４０、ｍ、Ｔ、ｔ、ＡＡａ、ＡＡｂ、ｕ、ｐ、ｑ、ｓ、およびｒは、式（ＩＶａ）に関して定義されるとおりであり；および
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｙ、Ｇ、およびＸは、式（Ｉ）に関して上記の簡単な発明の概要のセクションにて定義されるとおりである］
で示すことができる。
【０１５３】
好ましい実施態様において、式（ＩＶｂ）中、ｕは１である。
【０１５４】
式（ＩＶｂ）に係る好ましいコンジュゲートは、式（ＩＶｂ’）：
【化９２】
0006498773.tif 000096
［式中
Ｒ９はＨ、ＯＨ、ＯＭｅ、ＮＨ２、ＮＭｅ２、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−８Ｍｅ、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、または
【化９３】
0006498773.tif 000097
であり；および
Ｘは
【化９４】
0006498773.tif 000098
である］
で示される。
【０１５５】
もう一つ別の実施態様において、本発明のコンジュゲートは、（ｃ）型の二量体−リンカー化合物より誘導され、式（ＩＶｃ）：
【化９５】
0006498773.tif 000099
［式中
Ａｂ、Ｒ４０、ｍ、Ｔ、ｔ、ＡＡａ、ＡＡｂ、ｕ、ｐ、ｑ、ｓ、およびｒは、式（ＩＶａ）に関して定義されるとおりであり；および
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｙ、Ｘ、および二重線
【化９６】
0006498773.tif 000100
は、上記の簡単な発明の概要のセクションにおいて定義されるとおりである］
で示すことができる。
【０１５６】
好ましい実施態様において、式（ＩＶｃ）中、ｕは１である。
【０１５７】
式（ＩＶｃ）に係る好ましいコンジュゲートは、式（ＩＶｃ’）：
【化９７】
0006498773.tif 000101
［式中
Ｒ９はＨ、ＯＨ、ＯＭｅ、ＮＨ２、ＮＭｅ２、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−８Ｍｅ、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、または
【化９８】
0006498773.tif 000102
であり；および
Ｘは
【化９９】
0006498773.tif 000103
である］
で示される。
【０１５８】
もう一つ別の実施態様において、本発明のコンジュゲートは、式（ＩＶＣ’’）：
【化１００】
0006498773.tif 000104
［式中
Ａｂ、Ｒ４０、ｍ、Ｔ、ｔ、ＡＡａ、ＡＡｂ、ｕ、ｐ、ｑ、ｓ、およびｒは、式（ＩＶａ）にて定義されるとおりであり；および各Ｒ５０は、独立して、Ｈ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、Ｏ（Ｃ２−Ｃ３アルキレン）、Ｏ（Ｃ２−Ｃ３アルキニル）、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＣＮである］
で示される構造を有する。
【０１５９】
式（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩａ’）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｂ’）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｃ’）および（ＩＩＩｃ’’）の二量体リンカーに関してポリペプチド−ＡＡａ−［ＡＡｂ］ｐ−および自己犠牲基Ｔについて上記される優先事項は、式（ＩＶａ）、（ＩＶａ’）、（ＩＶｂ）、（ＩＶｂ’）、（ＩＶｃ）、（ＩＶｃ’）および（ＩＶｃ’’）のコンジュゲートにも適用され得る。
【０１６０】
式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（ＩＶｃ）および（ＩＶｃ’’）において、下付き文字ｔおよびｕが共に０であるならば、その場合にはリンカーは切断できない型のものであり、抗体Ａｂの分解に応じて薬物を放出する。もし、ポリエチレングリコール成分の存在が、例えば、薬物−リンカー化合物のコンジュゲーションの間の溶解性を増大させることにより、利益であり、薬物の生物学的活性を干渉しないとすれば、該成分は所望により存在してもよい（すなわち、ｓが１であってもよい）。
【０１６１】
医薬組成物
もう一つ別の態様において、本発明の開示は、本発明の化合物またはそのコンジュゲートを含み、医薬的に許容される担体または賦形剤と一緒に処方された医薬組成物を提供する。抗体またはもう一つ別の薬物などの１または複数のさらなる医薬的に活性な成分を所望により含有してもよい。該医薬組成物は、もう一つ別の治療剤、特にもう一つ別の抗がん剤との併用療法にて投与され得る。
【０１６２】
医薬組成物は１または複数の賦形剤を含んでもよい。使用されてもよい賦形剤は、担体、界面活性剤、増粘剤または乳化剤、固形結合剤、分散または懸濁助剤、可溶化剤、着色剤、矯味矯臭剤、被覆剤、崩壊剤、滑沢剤、甘味剤、保存剤、等張剤、ならびにそれらの組み合わせを包含する。適切な賦形剤の選択および使用は、Gennaro編、Remington：The Science and Practice of Pharmacy、20th Ed.（Lippincott Williams & Wilkins 2003）において教示されており、その開示を出典を明示することで本明細書に組み込むものとする。
【０１６３】
好ましくは、医薬組成物は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄または表皮投与（例えば、注射または注入による投与）に適する。投与経路に応じて、活性化合物を一の材料で被覆し、その化合物を酸の作用から、あるいは該化合物を不活性とするかもしれない他の天然条件から、保護してもよい。「非経口投与」なる語は、腸内投与および局所投与以外の、通常は注射による投与方法を意味し、限定されるものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、皮膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内注射および注入を包含する。あるいはまた、医薬組成物は、局所、表皮または粘膜投与経路などの非経口以外の経路を介して、例えば、鼻腔内に、経口的に、経膣的に、経直腸的に、舌下的にまたは局所的に投与され得る。
【０１６４】
医薬組成物は、滅菌水溶液または分散液の形態であってもよい。それらはまた、マイクロエマルジョン、リポソーム、あるいは高い薬物濃度を達成するのに適した他の秩序だった構造に処方することもできる。該組成物はまた、投与前に水で復元するための凍結乾燥した形態にて提供され得る。
【０１６５】
担体材料と組み合わせて単一剤形を生成することのできる活性成分の量は、治療される対象および個々の投与方法に応じて変化するであろうし、一般には治療効果をもたらす組成物の量であろう。一般に、この量は、１００％中に、約０.０１％ないし約９９％の範囲の活性成分、好ましくは約０.１％ないし約７０％、最も好ましくは約１％ないし約３０％の範囲の活性成分と、医薬的に許容される担体とを組み合わせたものであろう。
【０１６６】
投与方法は治療効果を提供するように調整される。例えば、単一のボーラスで投与されてもよく、数回に分割した用量を経時的に投与してもよく、あるいはその用量は状況の緊急性により示されるように比例的に減少または増加させてもよい。投与を容易にし、投与量を均一にするために、投与単位形態の非経口用組成物を処方するのが特に有利である。「投与単位形態」は、治療される対象のために単回投与に適した、物理的に別個の単位をいい；各単位は、必要とされる医薬担体と合わさって、望ましい治療効果が得られるように算定した、所定量の活性化合物を含有する。
【０１６７】
投与量は、宿主体重１ｋｇ当たり約０.０００１〜１００ｍｇ、より一般的には０.０１〜５ｍｇの範囲にある。例えば、投与量は、０.３ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重または１０ｍｇ／ｋｇ体重とするか、あるいは１−１０ｍｇ／ｋｇの範囲内と、あるいはまた０.１〜５ｍｇ／ｋｇとすることができる。典型的な治療計画は、週に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、月に１回、３ヶ月に１回、または３ないし６ヶ月に１回の投与である。好ましい投与計画は、１ｍｇ／ｋｇ体重または３ｍｇ／ｋｇ体重を静脈内投与を介して、以下の投与スケジュールの１つで投与すること：（ｉ）６回の投与を４週間毎に、ついで３ヶ月毎に；（ｉｉ）３週間毎に；または（ｉｉｉ）３ｍｇ／ｋｇ体重を１回、つづいて１ｍｇ／ｋｇ体重を３週間毎に投与することを包含する。ある方法において、投与量は約１−１０００μｇ／ｍＬの血漿中抗体濃度が得られるように、ある方法では約２５−３００μｇ／ｍＬが得られるように調整される。
【０１６８】
本発明の化合物の「治療的に効果的な量」は、好ましくは、症状の重篤度の減少、無症状の期間の頻度および持続期間の増加、疾患による障害または身体障害の防止をもたらす。例えば、腫瘍を患う対象を治療する場合、「治療的に効果的な量」は、未処理の対象と比べて、好ましくは少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、さらにより好ましくは少なくとも約６０％、その上さらに好ましくは少なくとも約８０％の腫瘍増殖を阻害する。治療用化合物の治療的に効果的な量は、腫瘍の大きさを縮小させるか、そうでなければ、典型的にはヒトであるが、他の哺乳動物とすることもできる対象での徴候を改善することができる。
【０１６９】
医薬組成物は、インプラント、経皮パッチおよびマイクロカプセル化デリバリーシステムを含む、制御放出性または徐放性製剤とすることができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを用いることができる。例えば、Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems、J.R. Robinson編、Marcel Dekker, Inc., New York, 1978を参照のこと。
【０１７０】
治療用組成物は、（１）無針皮下注射装置（例えば、米国特許第５,３９９,１６３号；第５,３８３,８５１号；第５,３１２,３３５号；第５,０６４,４１３号；第４,９４１,８８０号；第４,７９０,８２４号；および第４,５９６,５５６号）；（２）マイクロ注入ポンプ（米国特許第４,４８７,６０３号）；（３）経皮装置（米国第４,４８６,１９４号）；（４）注入装置（米国第ｋ４,４４７,２３３号および第４,４４７,２２４号）；および（５）浸透性装置（米国第４,４３９,１９６号および第４,４７５,１９６号）（それらの開示は出典明示により本明細書に組み込まれる）などの医療装置を通して投与され得る。
【０１７１】
ある実施態様において、医薬組成物は、インビボでの適切な分布を確保するために製剤化され得る。例えば、本発明の治療用化合物が血液脳関門を横切って移動することを確保するために、それらはリポソーム中に処方することができ、それは特異的細胞または器官への選択的輸送を強化するために、さらに標的とする部分を含んでもよい。例えば、米国特許第４,５２２,８１１号；第５,３７４,５４８号；第５,４１６,０１６号；および第５,３９９,３３１号；V.V. Ranade（1989） J. Clin. Pharmacol. 29：685；Umezawaら、（1988） Biochem. Biophys. Res. Commun. 153：1038；Bloemanら（1995）FEBS Lett. 357：140；M. Owaisら（1995）Antimicrob. Agents Chemother. 39：180；Briscoeら（1995）Am. J. Physiol. 1233：134；Schreierら（1994）J. Biol. Chem. 269：9090；KeinanenおよびLaukkanen（1994）FEBS Lett. 346：123；ならびにKillionおよびFidler（1994）Immunomethods 4：273を参照のこと。
【０１７２】
使用
本発明の化合物またはそれらのコンジュゲートは、限定されるものではないが、頭部、頚部、鼻腔、副鼻腔、鼻咽頭、口腔、中咽頭、喉頭、下咽頭、唾液腺および傍神経節の腫瘍を含む頭頸部がん；肝臓および胆道系のがん、特に肝細胞がん；腸がん、特に大腸がん；卵巣がん；小細胞および非小細胞肺がん（ＳＣＬＣおよびＮＳＣＬＣ）；線維肉腫、悪性線維性組織球腫、胎児性横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、神経線維腫、骨肉腫、滑膜肉腫、脂肪肉腫および胞巣状軟部肉腫などの乳がん肉腫；急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）などの白血病；中枢神経系の腫瘍、特に脳がん；多発性骨髄腫（ＭＭ）、ホジキンリンパ腫、リンパ形成細胞性リンパ腫、濾胞性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｂ系統大細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、およびＴ細胞未分化大細胞型リンパ腫を含む、過剰増殖性疾患などの疾患の治療に使用され得る。臨床的に、本明細書に記載の方法の実施および組成物の使用は、成長したがんの大きさまたは数の減少、および／または（該当する場合には）関連する徴候の減少をもたらすであろう。病理学的に、本明細書に記載の方法の実施および組成物の使用は、がん細胞増殖の阻害、がんまたは腫瘍の大きさの減少、さらなる転移の防止、および腫瘍血管新生の阻害などの病理学的に関連する応答を生じさせるであろう。そのような疾患を治療する方法は、治療的に効果的な量の本発明の組み合わせを対象に投与することを含む。該方法は必要に応じて繰り返されてもよい。特に、がんは腎臓、肺、胃、または卵巣のがんとすることができる。
【０１７３】
本発明の化合物またはそれらのコンジュゲートは、抗体、アルキル化剤、血管新生阻害剤、抗代謝産物、ＤＮＡ切断剤、ＤＮＡ架橋剤、ＤＮＡ挿入剤、ＤＮＡ副溝結合剤、エンジイン、熱ショックタンパク質９０阻害剤、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤、免疫調節剤、微小管安定剤、ヌクレオシド（プリンまたはピリミジン）類似体、核外輸送阻害剤、プロテアソーム阻害剤、トポイソメラーゼ（ＩまたはＩＩ）阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、およびセリン／トレオニンキナーゼ阻害剤を含む、他の治療剤と組み合わせて投与され得る。特定の治療剤として、アダリブマブ、アンサミトシンＰ３、アウリスタチン、ベンダムスチン、ベバシズマブ、ビカルタミド、ブレマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カリスタチンＡ、カンプトテシン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、セツキシマブ、シスプラチン、クラドリビン、シタラビン、クリプトフィシン、ダカルバジン、ダサチニブ、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、ダイネマイシンＡ、エポチロン、エトポシド、フロクスウリジン、フルダラビン、５−フルオロウラシル、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、イピリムマブ、ヒドロキシ尿素、イマチニブ、インフリキシマブ、インターフェロン、インターロイキン、β−ラパコン、レナリドミド、イリノテカン、マイタンシン、メクロレタミン、メファラン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトマイシンＣ、ニロチニブ、オキサリプラチン、パクリタキセル、プロカルバジン、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、６−チオグアニジン、チオテパ、テニポシド、トポテカン、トラスツズマブ、トリコスタチンＡ、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびビンデシンが挙げられる。
【０１７４】
実施例
本発明の実施は、例示として提供され、限定するものではない、以下の実施例を参照することによりさらに理解され得る。次の一般的操作は例示であり、当業者であれば別法であるが、同等である方法を用いることができることを理解する。
【０１７５】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトルはブルーカー（Bruker）６００、５００、または４００ＭＨｚ装置で測定され、化学シフトはテトラメチルシラン（δ＝０.０）との関連でｐｐｍ（δ）で報告された。一般に、蒸発は減圧下で実施される。
【０１７６】
これらの２つのＬＣ／ＭＳ分析方法は例示である：
Ａ    カラム：：ウォーターズ（Waters）ＢＥＨ  Ｃ１８、２.０ｘ５０ｍｍ、１.７μｍ粒子；移動相Ａ：水＋０.０５％ＴＦＡ；移動相Ｂ：アセトニトリル＋０.０５％ＴＦＡ；３分間の測定時間で、１.５分間で２−９８％とする；温度：４０℃；流れ：０.８ｍＬ／分；２２０または２５４ｎｍに設定されたＵＶ検出器
Ｂ    カラム：フェノメネックス・ルナ（Phenomenex Luna）２.０ｘ３０ｍｍ、３μｍ粒子；移動相Ａ：１０％アセトニトリル／９０％水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０％アセトニトリル／１０％水＋０.１％ＴＦＡ；４分間の測定時間で、２分間で０−１００％とする；温度：４０℃；流れ：１.０ｍＬ／分；２２０または２５４ｎｍに設定されたＵＶ検出器
【０１７７】
実施例１−中間化合物６
この実施例および図１は、本発明の二量体の調製に用いられる、中間化合物６の合成に関する。
【０１７８】
４−（ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイルクロリド１を以下のように対応するメチルエステルより調製した：４−（ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−ニトロ安息香酸メチル（Harve Chem、１５ｇ、４７.３ミリモル）のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、３５０ｍＬ）中溶液に、ＮａＯＨ水溶液（５６.７ｍＬ、１４２ミリモル、２.５Ｍ）を添加した。反応物を５０℃で５時間攪拌した。該反応物を室温（ＲＴ）に冷却し、次に真空下で濃縮し、ＴＨＦを除去した。残りの水層を水性ＨＣｌ（６Ｎ）を用いてｐＨ２の酸性にした。得られた黄色の沈殿物を濾過し、水で洗浄し、真空下で乾燥させて４−（ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−ニトロ安息香酸（１４.３２ｇ、収率１００％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝３０４.０８；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ  ７.６０（ｓ，１Ｈ）、７.５３−７.４５（ｍ，２Ｈ）、７.４５−７.３１（ｍ，３Ｈ）、７.２９（ｓ，１Ｈ）、５.２３（ｓ，２Ｈ）、３.９８（ｓ，３Ｈ）
【０１７９】
上記のニトロ安息香酸（３.５ｇ、１１.５４ミリモル）のＴＨＦ（１５０ｍＬ）中溶液に、塩化オキサリル（１.２１２ｍＬ、１３.８５ミリモル）を、つづいてＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、５０μＬ）を滴下して加えた。その得られた溶液を室温で２時間攪拌し、ついでそれを真空下で濃縮し、酸クロリド１を黄色の固体として得た。
【０１８０】
酸クロリド１をＴＨＦ（３５ｍＬ）に溶かし、（Ｓ）−ベンジル  １,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボキシラート・ｐ−トルエンスルホン酸塩２（Accela、５.５８ｇ、１２.７０ミリモル）およびトリエチルアミン（４.８３ｍＬ、３４.６ミリモル）のＴＨＦ（８０ｍＬ）中溶液に０℃で滴下して加えた。反応混合物を室温で４時間攪拌し、ついで水でクエンチさせ、濃縮してＴＨＦを除去した。得られた混合物をＥｔＯＡｃで抽出した（３ｘ）。有機層を合わせ、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液で、次にブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。その粗生成物の混合物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（８０ｇ  カラム、ＥｔＯＡｃ／ジクロロメタン（ＤＣＭ）の１５分間における０％から１００％までの勾配）を用いて精製し、エステル３（６.２５ｇ、収率９８％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝５５３；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.９５−７.７２（ｍ，１Ｈ）、７.５７−７.３５（ｍ，５Ｈ）、７.３４−７.０（ｍ，８Ｈ）、７.１４−６.９８（ｍ，１Ｈ）、６.９４−６.６９（ｍ，１Ｈ）、５.３９−５.１９（ｍ，２Ｈ）、５.１９−５.０８（ｍ，１Ｈ）、４.９９（ｑ，Ｊ＝１２.４Ｈｚ，１Ｈ）、４.７５（ｄ，Ｊ＝１７.４Ｈｚ，１Ｈ）、４.６５−４.４０（ｍ，２Ｈ）、４.２８（ｄ，Ｊ＝１５.６Ｈｚ，１Ｈ）、３.８６（ｂｒｓ．，３Ｈ）、３.７１（ｓ，１Ｈ）、３.５０−３.１８（ｍ，１Ｈ）
【０１８１】
エステル３（６.２５ｇ、１１.３１ミリモル）、亜鉛（４.４４ｇ、６７.９ミリモル）およびＮＨ４Ｃｌ（７.２６ｇ、１３６ミリモル）のＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中懸濁液を５０℃で１６時間加熱した。反応物を室温に冷却し、ＭｅＯＨで希釈した。得られた混合物をセライト（登録商標）のパッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃ、ＤＣＭおよびＭｅＯＨで連続して洗浄した。濾液を合わせ、真空下で濃縮した。粗生成物の混合物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（１２０ｇ  カラム、ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭの１５分間における０％から１００％までの勾配）を用いて精製し、ジオン４（４.５ｇ、収率９６％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝４１５；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.４９−７.４０（ｍ，４Ｈ）、７.３２（ｂｒｓ．，６Ｈ）、６.４５（ｓ，１Ｈ）、５.１９（ｓ，２Ｈ）、５.１３（ｄ，Ｊ＝１５.４Ｈｚ，１Ｈ）、４.４７（ｄ，Ｊ＝１５.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.２１（ｔ，Ｊ＝６.７Ｈｚ，１Ｈ）、３.９３（ｓ，３Ｈ）、３.５２（ｄｄ，Ｊ＝１５.４、７.０Ｈｚ，１Ｈ）、３.０２（ｄｄ，Ｊ＝１５.４、６.４Ｈｚ，１Ｈ）
【０１８２】
ジオン４（４.５ｇ、１０.８６ミリモル）のＤＭＦ（５４.３ｍＬ）中溶液を０℃に冷却し、ついでＮａＨ（鉱油中６０％分散液、０.５４ｇ、１３.５７ミリモル）をバッチ式にて添加した。得られた混合物を３０分間攪拌し、ついで（２−（クロロメトキシ）エチル）トリメチルシラン（ＳＥＭ−Ｃｌ、２.３１ｍＬ、１３.０３ミリモル）を添加した。反応物を室温に加温し、１時間攪拌し、ついで水でクエンチさせた。得られた混合物をＥｔＯＡｃで抽出した（３ｘ）。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物の混合物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（８０ｇ  カラム、ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭの１５分間における０％から５０％までの勾配）を用いて精製し、ＳＥＭ−ジオン５（４.６０ｇ、収率７８％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝５４５；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.５９−７.４１（ｍ，２Ｈ）、７.４０−７.２１（ｍ，９Ｈ）、５.４３（ｄ，Ｊ＝９.９Ｈｚ，１Ｈ）、５.２１（ｓ，２Ｈ）、５.１４（ｄ，Ｊ＝１５.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.５０（ｄ，Ｊ＝９.７Ｈｚ，１Ｈ）、４.４１（ｄ，Ｊ＝１５.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.３３−４.１６（ｍ，１Ｈ）、４.１３（ｄ，Ｊ＝７.３Ｈｚ，１Ｈ）、３.９２（ｓ，３Ｈ）、３.８２−３.４６（ｍ，３Ｈ）、３.０６−２.８４（ｍ，１Ｈ）、１.２６（ｔ，Ｊ＝７.２Ｈｚ，１Ｈ）、０.９７（ｄｄｄ，Ｊ＝９.９、６.８、２.６Ｈｚ，２Ｈ）、０.１０−０.０１（ｍ，９Ｈ）
【０１８３】
ＳＥＭ−ジオン５（４.６８ｇ、８.５９ミリモル）およびＰｄ／Ｃ（１０％、０.４５７ｇ）のＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中懸濁液をＨ２バルーン下にて室温で３時間攪拌した。反応物をセライト（登録商標）パッドを通して濾過し、ＥｔＯＨで洗浄し、真空下で濃縮した。粗生成物の混合物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（１２０ｇ  カラム、ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭの１５分間における０％から１００％までの勾配）を用いて精製し、化合物６（３.２３ｇ、収率８３％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝４５５；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.４０−７.２１（ｍ，５Ｈ）、５.９７（ｓ，１Ｈ）、５.４６（ｄ，Ｊ＝９.７Ｈｚ，１Ｈ）、５.１８（ｄ，Ｊ＝１５.４Ｈｚ，１Ｈ）、４.７２（ｄ，Ｊ＝９.７Ｈｚ，１Ｈ）、４.５８−４.２４（ｍ，２Ｈ）、３.９５（ｓ，３Ｈ）、３.８３−３.４４（ｍ，３Ｈ）、３.１４−２.８８（ｍ，１Ｈ）、０.９９（ｔ，Ｊ＝８.０Ｈｚ，２Ｈ）、０.１４（ｓ，９Ｈ）
【０１８４】
実施例２−中間化合物１３
この実施例および図２は、本発明の二量体の調製に用いられる、中間化合物１３の合成に関する。
【０１８５】
酸クロリド１をＴＨＦ（３０ｍＬ）に溶かし、カルボキシラート７（Borzilleriら、ＷＯ２０１４／０４７０２４Ａ１（２０１４）、１.６ｇ、６.３９ミリモル）およびＮＥｔ３（２.６７ｍＬ、１９.２ミリモル）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液に０℃にて滴下して加えた。反応溶液を室温までのゆっくりとした加温に供し、３０分間攪拌した。反応物を水でクエンチさせ、濃縮してＴＨＦを除去した。得られた混合物をＥｔＯＡｃで抽出した（３ｘ）。有機層を合わせ、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液で、ついでブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物の混合物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（８０ｇ  カラム、ＥｔＯＡｃ／ヘキサンの１５分間における０％から１００％までの勾配）を用いて精製し、エチルエステル８（２.６６ｇ、収率７８％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝５３６.４
【０１８６】
エチルエステル８（１.７５ｇ、３.５５ミリモル）、亜鉛（１.３９４ｇ、２１.３２ミリモル）およびＮＨ４Ｃｌ（２.２８１ｇ、４２.６ミリモル）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中懸濁液を５０℃で一夜加熱した。反応混合物をセライト（登録商標）のパッドを通して濾過し、多量のＤＣＭ中２０％ＭｅＯＨで洗浄した。濾液を濃縮し、アミノ−ジオン９を白色の固体（１.２５ｇ、２.９０ミリモル、収率８２％）として得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝４３０.３；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  １０.２６（ｂｒｓ．，１Ｈ）、７.５３−７.３１（ｍ，６Ｈ）、７.２４（ｓ，１Ｈ）、６.９２（ｄ，Ｊ＝７.９Ｈｚ，１Ｈ）、６.７８（ｓ，１Ｈ）、６.５０−６.４１（ｍ，２Ｈ）、５.０７（ｄ，Ｊ＝４.６Ｈｚ，２Ｈ）、５.００−４.８８（ｍ，２Ｈ）、４.８４（ｄ，Ｊ＝１５.０Ｈｚ，１Ｈ）、４.０９（ｄ，Ｊ＝１５.０Ｈｚ，１Ｈ）、４.０１（ｔ，Ｊ＝６.９Ｈｚ，１Ｈ）、３.７５（ｓ，３Ｈ）、３.１２（ｄｄ，Ｊ＝１５.３、７.６Ｈｚ，１Ｈ）、２.７８（ｄｄ，Ｊ＝１５.２、６.２Ｈｚ，１Ｈ）
【０１８７】
アミノ−ジオン９（１.６ｇ、３.７３ミリモル）および塩化トリチル（１.２４６ｇ、４.４７ミリモル）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液に、ＮＥｔ３（０.７７９ｍＬ、５.５９ミリモル）を添加した。反応混合物を室温で３時間攪拌し、濃縮した。粗生成物の混合物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（８０ｇ  カラム、０−５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を用いて精製し、トリチル−ジオン１０を白色の固体（２.２ｇ、３.２７ミリモル、収率８８％）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ８.０１（ｓ，１Ｈ）、７.５０−７.１２（ｍ，２２Ｈ）、６.７７（ｄ，Ｊ＝８.４Ｈｚ，１Ｈ）、６.４７−６.３４（ｍ，２Ｈ）、６.１６（ｄｄ，Ｊ＝８.１、２.４Ｈｚ，１Ｈ）、５.０２（ｂｒｓ．，１Ｈ）、４.９１（ｄ，Ｊ＝１５.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.１８−４.０９（ｍ，２Ｈ）、４.０５（ｔ，Ｊ＝６.９Ｈｚ，１Ｈ）、３.９２（ｓ，３Ｈ）、３.２８（ｄｄ，Ｊ＝１５.４、７.７Ｈｚ，１Ｈ）、２.７５（ｄｄ，Ｊ＝１５.４、６.４Ｈｚ，１Ｈ）
【０１８８】
トリチル−ジオン１０（２.２ｇ、３.２７ミリモル）の０℃でのＤＭＦ（１５ｍＬ）中溶液に、ＮａＨ（鉱油中６０％分散液、０.２３６ｇ、３.９３ミリモル）を添加した。該混合物を３０分間攪拌し、ついでＳＥＭ−Ｃｌ（０.６９７ｍＬ、３.９３ミリモル）を添加した。反応混合物を０℃で２時間攪拌し、ついでそれをブラインでクエンチさせた。反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出した（３ｘ）。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物の混合物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（４０ｇ  カラム、０−５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を用いて精製し、ＳＥＭ−ジオン１１（２.１ｇ、２.６２ミリモル、収率８０％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ−トリチル）＝５６０.４；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.４８−７.４２（ｍ，２Ｈ）、７.４１−７.３２（ｍ，９Ｈ）、７.３１−７.１８（ｍ，１１Ｈ）、６.７７（ｄ，Ｊ＝８.１Ｈｚ，１Ｈ）、６.３８（ｄ，Ｊ＝２.２Ｈｚ，１Ｈ）、６.１９（ｄｄ，Ｊ＝８.３、２.３Ｈｚ，１Ｈ）、５.４５（ｄ，Ｊ＝９.７Ｈｚ，１Ｈ）、５.２１（ｓ，２Ｈ）、５.０８−４.９２（ｍ，２Ｈ）、４.４９（ｄ，Ｊ＝９.７Ｈｚ，１Ｈ）、４.１３−４.０８（ｍ，１Ｈ）、４.０２（ｄ，Ｊ＝１５.２Ｈｚ，１Ｈ）、３.９３（ｓ，３Ｈ）、３.７１（ｔｄ，Ｊ＝９.６、７.０Ｈｚ，１Ｈ）、３.６１（ｔｄ，Ｊ＝９.６、７.２Ｈｚ，１Ｈ）、３.３６（ｄｄ，Ｊ＝１５.５、８.３Ｈｚ，１Ｈ）、２.７２（ｄｄ，Ｊ＝１５.５、６.５Ｈｚ，１Ｈ）、１.０５−０.９２（ｍ，２Ｈ）、０.０６（ｓ，９Ｈ）
【０１８９】
ＳＥＭ−ジオン１１（９５０ｍｇ、１.１８ミリモル）およびＰｄ／Ｃ（１０％、２００ｍｇ）のＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）中懸濁液をＨ２バルーン下にて２日間攪拌した。反応混合物をセライト（登録商標）のパッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃで、ついでＭｅＯＨで洗浄した。濾液を合わせ、濃縮してＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（４０ｇ  カラム、０−１００％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を用いて精製し、化合物１２（５１０ｍｇ、１.０８ミリモル、収率９０％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝４７０.２；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.３３（ｓ，１Ｈ）、７.２７（ｓ，１Ｈ）、７.０９（ｄ，Ｊ＝８.６Ｈｚ，１Ｈ）、６.６７−６.５４（ｍ，２Ｈ）、６.０２（ｓ，１Ｈ）、５.４７（ｄ，Ｊ＝９.７Ｈｚ，１Ｈ）、５.１１（ｄ，Ｊ＝１５.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.７１（ｄ，Ｊ＝９.７Ｈｚ，１Ｈ）、４.２９（ｄ，Ｊ＝１５.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.２２（ｄｄ，Ｊ＝７.７、６.５Ｈｚ，１Ｈ）、３.９４（ｓ，３Ｈ）、３.７９−３.６０（ｍ，４Ｈ）、３.４７（ｄｄ，Ｊ＝１５.４、７.７Ｈｚ，１Ｈ）、２.９０（ｄｄ，Ｊ＝１５.５、６.４Ｈｚ，１Ｈ）、１.０９−０.９４（ｍ，２Ｈ）、０.０５（ｓ，９Ｈ）
【０１９０】
化合物１２（５００ｍｇ、１.０６５ミリモル）の０℃でのＴＨＦ（３ｍＬ）中溶液に、ＮＥｔ３（０.７４２ｍＬ、５.３２ミリモル）を添加した。クロロギ酸アリル１２ａ（５１３ｍｇ、４.２６ミリモル）を滴下して加えた。得られた溶液を０℃で２時間攪拌した。反応物をＭｅＯＨ（５ｍＬ）で希釈し、ＬｉＯＨ水溶液（２ｍＬ、２Ｎ）を添加した。得られた混合物を室温で１６時間攪拌した。反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、ブラインで洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（２４ｇ  カラム、０−１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）に付して精製し、化合物１３を白色の固体（４４０ｍｇ、０.７９５ミリモル、収率７４.６％）として得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝５５４.２；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.３８−７.３０（ｍ，３Ｈ）、７.２７−７.２１（ｍ，２Ｈ）、６.９６（ｓ，１Ｈ）、６.２８（ｓ，１Ｈ）、６.０２−５.８９（ｍ，１Ｈ）、５.４４（ｄ，Ｊ＝９.８Ｈｚ，１Ｈ）、５.３５（ｄｑ，Ｊ＝１７.２、１.５Ｈｚ，１Ｈ）、５.２６（ｄｑ，Ｊ＝１０.４、１.３Ｈｚ，１Ｈ）、５.１０（ｄ，Ｊ＝１５.４Ｈｚ，１Ｈ）、４.７０（ｄ，Ｊ＝９.８Ｈｚ，１Ｈ）、４.６６（ｄ，Ｊ＝５.１Ｈｚ，２Ｈ）、４.４０（ｄ，Ｊ＝１５.４Ｈｚ，１Ｈ）、４.３１−４.２３（ｍ，１Ｈ）、３.９１（ｓ，３Ｈ）、３.７９−３.５８（ｍ，２Ｈ）、３.５１（ｄｄ，Ｊ＝１５.６、７.３Ｈｚ，１Ｈ）、２.９６（ｄｄ，Ｊ＝１５.５、６.４Ｈｚ，１Ｈ）、１.０７−０.９５（ｍ，２Ｈ）、０.０３（ｓ，９Ｈ）
【０１９１】
実施例３−中間化合物１９
この実施例および図３は、本発明の二量体を合成するための中間体として用いられる、化合物１９の合成に関する。
【０１９２】
酸クロリド１をＴＨＦ（３０ｍＬ）に溶かし、カルボキシラート１４（Buchstallerら、ＵＳ２００７／０１９１４２３Ａ１（２００７）、１.６ｇ、５.２１ミリモル）およびＮＥｔ３（２.９ｍＬ、２０.８ミリモル）の０℃でのＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液に滴下して加えた。反応溶液を０℃で２時間攪拌し、ついでそれを水でクエンチさせた。得られた混合物をＥｔＯＡｃで抽出した（３ｘ）。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、ついでＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。次に、得られた混合物をＭｅＯＨ（５０ｍＬ）に溶かした。炭酸カリウム（１ｇ）を加えた。得られた懸濁液を室温で１時間攪拌し、ついでそれをセライト（登録商標）のパッドを通して濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物の混合物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（２２０ｇ  カラム、ＥｔＯＡｃ／ヘキサンの１５分間における０％から５０％までの勾配）を用いて精製し、エステル１５（１.７５ｇ、収率６８％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝４９３.１
【０１９３】
エステル１５（１.７５ｇ、３.５５ミリモル）、亜鉛（１.３９４ｇ、２１.３２ミリモル）およびＮＨ４Ｃｌ（２.２８１ｇ、４２.６ミリモル）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中懸濁液を５０℃で一夜加熱した。次に反応混合物をセライト（登録商標）のパッドを通して濾過し、２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭで洗浄した。濾液を濃縮し、化合物１６（１.２５ｇ、２.９０ミリモル、収率８２％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝４３１.３；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  １０.２５（ｂｒｓ．，１Ｈ）、９.２６（ｓ，１Ｈ）、７.５３−７.３２（ｍ，５Ｈ）、７.２４（ｓ，１Ｈ）、７.０７（ｄ，Ｊ＝８.１Ｈｚ，１Ｈ）、６.７９（ｓ，１Ｈ）、６.７１−６.６０（ｍ，２Ｈ）、５.０８（ｄ，Ｊ＝４.０Ｈｚ，２Ｈ）、４.８３（ｄ，Ｊ＝１５.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.２２（ｄ，Ｊ＝１５.４Ｈｚ，１Ｈ）、４.０８（ｔ，Ｊ＝６.７Ｈｚ，１Ｈ）、３.７６（ｓ，３Ｈ）、３.１６（ｄｄ，Ｊ＝１５.４、６.８Ｈｚ，１Ｈ）、２.８５（ｄｄ，Ｊ＝１５.１、６.３Ｈｚ，１Ｈ）
【０１９４】
化合物１６（１.２５ｇ、２.９０ミリモル）のＤＣＭ（４０ｍＬ）中溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウム（ＰＰＴＳ、０.０７３ｇ、０.２９０ミリモル）およびテトラヒドロピラン（ＴＨＰ、２.８４ｍＬ、２９.０ミリモル）を添加した。反応物を室温で一夜攪拌し、次にＮａＨＣＯ３飽和水溶液でクエンチさせた。得られた混合物をＤＣＭで抽出した（３ｘ）。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物の混合物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（４０ｇ  カラム；０−１００％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を用いて精製し、化合物１７を白色の固体（１.１５ｇ、２.２３５ミリモル、収率７７％）として得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝５１５.３
【０１９５】
化合物１７（１.２ｇ、２.３３２ミリモル）の冷却したＤＭＦ（１０ｍＬ）中溶液に、ＮａＨ（鉱油中６０％分散液、０.１６８ｇ、２.８０ミリモル）を添加した。混合物を０℃で１５分間攪拌し、次に室温への加温に供し、１０分間攪拌し、ついで冷却して０℃に戻した。次にＳＥＭ−Ｃｌ（０.４９６ｍＬ、２.８０ミリモル）を添加した。反応物を０℃で３０分間攪拌し、ついで室温まで加温させ、１時間攪拌した。次に反応物をブラインでクエンチさせた。得られた混合物をＥｔＯＡｃで抽出した（３ｘ）。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物の混合物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（４０ｇ  カラム、０−５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に付して精製し、化合物１８（８７５ｍｇ、１.３５７ミリモル、５８.２％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝６４５.５；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.４８−７.４１（ｍ，２Ｈ）、７.３９−７.２８（ｍ，４Ｈ）、７.２４（ｓ，１Ｈ）、７.１９（ｄ，Ｊ＝８.１Ｈｚ，１Ｈ）、７.０２−６.９２（ｍ，２Ｈ）、５.５１−５.３２（ｍ，２Ｈ）、５.２０（ｓ，２Ｈ）、５.１２（ｄｄ，Ｊ＝１５.３、３.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.５０（ｄｄ，Ｊ＝９.８、１.７Ｈｚ，１Ｈ）、４.３３（ｄｄ，Ｊ＝１５.３、５.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.２２（ｄｄｄ，Ｊ＝７.４、６.５、４.３Ｈｚ，１Ｈ）、３.９１（ｓ，４Ｈ）、３.７６−３.５６（ｍ，３Ｈ）、３.４７（ｄｄ，Ｊ＝１５.４、７.７Ｈｚ，１Ｈ）、２.９２（ｄｄ，Ｊ＝１５.４、６.４Ｈｚ，１Ｈ）、２.０３−１.９２（ｍ，１Ｈ）、１.８８−１.８１（ｍ，２Ｈ）、１.７４−１.５７（ｍ，３Ｈ）、０.９７（ｄｄｄ，Ｊ＝９.７、６.８、２.６Ｈｚ，２Ｈ）、０.０９−０.０１（ｍ，９Ｈ）
【０１９６】
化合物１８（８７５ｍｇ、１.３５７ミリモル）およびＰｄ／Ｃ（１０％、８７ｍｇ）のＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）中懸濁液をＨ２のバルーン下にて２時間攪拌した。次に反応混合物をセライト（登録商標）のパッドを通して濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物の混合物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（４０ｇ  カラム、０−１００％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を用いて精製し、化合物１９を白色の固体（４８５ｍｇ、０.８７４ミリモル、収率６４.４％）として得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝５５５.１；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.３３（ｄ，Ｊ＝０.７Ｈｚ，１Ｈ）、７.２７（ｓ，１Ｈ）、７.２２（ｄ，Ｊ＝８.１Ｈｚ，１Ｈ）、７.０４−６.９５（ｍ，２Ｈ）、６.０１（ｓ，１Ｈ）、５.４６（ｄ，Ｊ＝９.７Ｈｚ，１Ｈ）、５.４４−５.３４（ｍ，１Ｈ）、５.１６（ｄｄ，Ｊ＝１５.３、２.６Ｈｚ，１Ｈ）、４.７１（ｄｄ，Ｊ＝９.７、１.８Ｈｚ，１Ｈ）、４.３５（ｄｄ，Ｊ＝１５.３、４.５Ｈｚ，１Ｈ）、４.２５（ｄｄｄ，Ｊ＝７.７、６.４、４.０Ｈｚ，１Ｈ）、４.０１−３.８７（ｍ，４Ｈ）、３.８０−３.５９（ｍ，３Ｈ）、３.５２（ｄｄ，Ｊ＝１５.５、７.８Ｈｚ，１Ｈ）、２.９５（ｄｄ，Ｊ＝１５.５、６.４Ｈｚ，１Ｈ）、２.０５−１.９６（ｍ，１Ｈ）、１.９２−１.８２（ｍ，２Ｈ）、１.７７−１.６２（ｍ，３Ｈ）、１.０６−０.９７（ｍ，２Ｈ）、０.０５（ｓ，９Ｈ）
【０１９７】
実施例４−  対称的ＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体
図４は対称的ＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体を製造するための一般的スキームを示す。２つの単量体（１／２）を結び付ける架橋は化合物２０ａより由来する。
【化１０１】
0006498773.tif 000105
【０１９８】
Ｘ５基は、Ｉ、Ｂｒ、Ｃｌ、メシラートおよびトシラートなどの脱離基である。ＲＸ基は架橋における構造的可変性をもたせる。当業者であれば、ある場合には、ＲＸにおける官能基が保護される必要のあること、そして必要に応じて合成を行う間に脱保護されてもよいことは明らかであろう。典型例としてのＲＸ基は、
【化１０２】
0006498773.tif 000106
を包含する。
【０１９９】
図４のスキームは一般的適用性があり、ＴＨＩＱ環系の芳香族環は簡潔にするために非置換なものとして記載されている。当業者であれば、該環が上記されるように置換基を担持しうることを理解するであろう。
【０２００】
図４の構想に従って、化合物（ＩＩａ−０２）は次のように合成された。
【０２０１】
化合物６（５０ｍｇ、０.１１ミリモル）、１,５−ジヨードペンタン（１７.８ｍｇ、０.０５５ミリモル）およびＫ２ＣＯ３（１５.２ｍｇ、０.１１ミリモル）のＤＭＦ（１ｍＬ）中懸濁液を室温で１４時間攪拌した。次に反応混合物をＨ２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した（３ｘ）。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物の混合物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（１２ｇ  カラム、ＭｅＯＨ／ＤＣＭの１５分間における０％から１０％までの勾配）を用いて精製し、化合物２１（ここでＲ９は、各々、Ｈである）（２２ｍｇ、収率２１％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝９７７.８
【０２０２】
上記した反応の生成物（２２ｍｇ、０.０２３ミリモル）のＴＨＦ／ＥｔＯＨ（１：１、１ｍＬ）中溶液に、ＬｉＢＨ４のＴＨＦ中溶液（２Ｍ、１１６μＬ、０.２３２ミリモル）を０℃で添加した。反応物をゆっくりと室温への加温に供し、１５分間攪拌し、ついでそれをブラインでクエンチさせた。得られた混合物をクロロホルムで抽出した。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。次に粗生成物をＥｔＯＨ／クロロホルム（１：１、２ｍＬ）に溶かした。シリカゲル（７００ｍｇ）を添加し、つづいて水（０.６ｍＬ）を添加した。得られた懸濁液を室温で２４時間攪拌し、ついで濾過し、１０％ＭｅＯＨ／クロロホルムで洗浄した。濾液を濃縮し、逆相ＨＰＬＣ（カラム：フェノメネックス・ルナ  Ｃ１８  ２０ｘ１００ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０  アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）；移動相Ｂ：９０：１０  アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：１５分間にわたって２０−７０％Ｂとする；流速：２０ｍＬ／分；検出：ＵＶ（２２０ｎｍ））を用いて精製し、二量体（ＩＩａ−０２）（７.５ｍｇ、９.８６マイクロモル、収率４３.８％）を得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝６８５.２；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.５５（ｓ，２Ｈ）、７.４９（ｄ，Ｊ＝５.３Ｈｚ，２Ｈ）、７.４２−７.３１（ｍ，８Ｈ）、６.８２（ｓ，２Ｈ）、５.０３（ｄ，Ｊ＝１５.６Ｈｚ，２Ｈ）、４.５８（ｄ，Ｊ＝１５.４Ｈｚ，２Ｈ）、４.２６−４.０４（ｍ，４Ｈ）、４.００−３.９２（ｍ，８Ｈ）、３.３７−３.２５（ｍ，２Ｈ）、３.２１−３.１０（ｍ，２Ｈ）、２.０２−１.９０（ｍ，４Ｈ）、１.７０（ｄ，Ｊ＝７.３Ｈｚ，２Ｈ）
【０２０３】
図４の一般的スキームに従って、さらなる対称的ＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体を合成した：
（ａ）化合物６および１,３−ジブロモプロパンから由来の二量体（ＩＩａ−０１）：ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝６５７.２；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.５５（ｓ，２Ｈ）、７.４９（ｄ，Ｊ＝５.３Ｈｚ，２Ｈ）、７.４２−７.３０（ｍ，８Ｈ）、６.８７（ｓ，２Ｈ）、５.０３（ｄ，Ｊ＝１５.６Ｈｚ，２Ｈ）、４.５８（ｄ，Ｊ＝１５.４Ｈｚ，２Ｈ）、４.３１（ｔｄｄ，Ｊ＝９.６、６.１、３.６Ｈｚ，４Ｈ）、３.９５（ｓ，６Ｈ）、３.９４（ｓ，２Ｈ）、３.３７−３.２４（ｍ，２Ｈ）、３.２１−３.１０（ｍ，２Ｈ）、２.４４（ｔ，Ｊ＝６.１Ｈｚ，２Ｈ）
（ｂ）化合物６および１−ヨード−２−（２−ヨードエトキシ）エタンより由来の二量体（ＩＩａ−０７）：ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝６８７.２；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.５５（ｓ，２Ｈ）、７.４９（ｄ，Ｊ＝５.３Ｈｚ，２Ｈ）、７.４０−７.３１（ｍ，８Ｈ）、６.８６（ｓ，２Ｈ）、５.０２（ｄ，Ｊ＝１５.４Ｈｚ，２Ｈ）、４.５８（ｄ，Ｊ＝１５.４Ｈｚ，２Ｈ）、４.３６−４.１８（ｍ，４Ｈ）、４.０７−４.００（ｍ，４Ｈ）、３.９７−３.９２（ｍ，８Ｈ）、３.３５−３.２４（ｍ，２Ｈ）、３.２２−３.１２（ｍ，２Ｈ）
（ｃ）化合物１３および１,５−ジヨードペンタンより由来の二量体（ＩＩａ−０８）：ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝８８３.３；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.５５（ｓ，２Ｈ）、７.４９（ｄ，Ｊ＝５.３Ｈｚ，２Ｈ）、７.４４−７.３３（ｍ，６Ｈ）、６.８１（ｓ，２Ｈ）、６.６９（ｓ，２Ｈ）、６.００（ｄｄ，Ｊ＝１７.１、１０.５Ｈｚ，２Ｈ）、５.４０（ｄｄ，Ｊ＝１７.３、１.４Ｈｚ，２Ｈ）、５.３０（ｄｄ，Ｊ＝１０.５、１.２Ｈｚ，２Ｈ）、５.０１（ｄ，Ｊ＝１５.６Ｈｚ，２Ｈ）、４.７１（ｄ，Ｊ＝５.５Ｈｚ，４Ｈ）、４.５３（ｄ，Ｊ＝１５.６Ｈｚ，２Ｈ）、３.９６（ｓ，６Ｈ）、３.３１−３.１９（ｍ，２Ｈ）、３.１７−３.０６（ｍ，２Ｈ）、１.９７（ｂｒｓ．，４Ｈ）、１.７５−１.６６（ｍ，２Ｈ）
【０２０４】
実施例５−  化合物（ＩＩａ−０５）
この実施例および図４ａは、化合物（ＩＩａ−０５）（（６ａＳ,６ａ’Ｓ）−３,３’−（（（５−アミノ−１,３−フェニレン）ビス（メチレン））ビス（オキシ））ビス（２−メトキシ−６ａ,７−ジヒドロベンゾ［５,６］［１,４］ジアゼピノ［１,２−ｂ］イソキノリン−１４（１２Ｈ）−オン））の合成に関連し、図４の一般的合成スキームに従うが、図示されるように保護−脱保護のサイクルを必要とする。
【０２０５】
５−ニトロ−ｍ−キシレン−α,α−ジオール２４ａ（Aldrich、１ｇ、５.４６ミリモル）およびＰｄ／Ｃ（２９１ｍｇ、０.２７３ミリモル）のＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中懸濁液を、Ｈ２のバルーン下、室温にて２時間攪拌した。反応物をセライト（登録商標）を通して濾過し、真空下で濃縮した。粗５−アミノ−１,３−フェニレン）ジメタノール２４ｂをさらに精製することなく次の工程に用いた。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝１５４
【０２０６】
ジメタノール２４ｂ（６００ｍｇ、３.９２ミリモル）、Ｋ２ＣＯ３（６５０ｍｇ、４.７ミリモル）の０℃でのＴＨＦ（１０ｍＬ）中懸濁液に、クロロギ酸アリル１２ａ（０.５ｍＬ、４.７ミリモル）を添加した。反応混合物を０℃で３０分間攪拌し、ついで室温までの加温に供し、室温で３時間攪拌した。次に反応物を水でクエンチさせ、ＥｔＯＡｃで抽出した（２ｘ）。有機層を乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（４０ｇ  カラム、ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭの１５分間における０％から１００％までの勾配）を用いて精製し、カルバミン酸アリル２４ｃ（２００ｍｇ、収率２１.５％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋２３）＝２６１；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ７.３１（ｓ，２Ｈ）、６.９１（ｓ，１Ｈ）、５.９９（ｄｄｔ，Ｊ＝１７.２、１０.６、５.４Ｈｚ，１Ｈ）、５.３６（ｄｑ，Ｊ＝１７.２、１.６Ｈｚ，１Ｈ）、５.２４（ｄｑ，Ｊ＝１０.６、１.４Ｈｚ，１Ｈ）、５.１３（ｔ，Ｊ＝５.７Ｈｚ，２Ｈ）、４.６０（ｄｔ，Ｊ＝５.４、１.３Ｈｚ，２Ｈ）、４.４４（ｄ，Ｊ＝５.５Ｈｚ，４Ｈ）
【０２０７】
上記のカルバミン酸アリル（４６２.５ｍｇ、１.９４９ミリモル）およびトリエチルアミン（０.８１５ｍＬ、５.８５ミリモル）のＤＣＭ（２０ｍＬ）中懸濁液を−１０℃に冷却し、塩化メタンスルホニル（Ｍｓ−Ｃｌ、０.３９５ｍＬ、５.０７ミリモル）で処理した。有機層を氷冷水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮してジメタンスルホナート２４ｄ（７５０ｍｇ、収率９５％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝３９４；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.５２（ｓ，２Ｈ）、７.１５（ｓ，１Ｈ）、７.０４（ｓ，１Ｈ）、６.０９−５.８７（ｍ，１Ｈ）、５.３９（ｄｄ，Ｊ＝１７.２、１.５Ｈｚ，１Ｈ）、５.２９（ｄｄ，Ｊ＝１０.３、１.３Ｈｚ，１Ｈ）、５.２１（ｓ，４Ｈ）、４.６９（ｄｔ，Ｊ＝５.７、１.２Ｈｚ，２Ｈ）、３.０２（ｓ，６Ｈ）
【０２０８】
ジメタンスルホナート２４ｄ（１３５ｍｇ、０.３４３ミリモル）のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、１６ｍＬ）中溶液を化合物６（３１２ｍｇ、０.６８６ミリモル）およびＫ２ＣＯ３（１４２ｍｇ、１.０２９ミリモル）で室温にて２時間処理した。反応物を水でクエンチさせ、ＥｔＯＡｃで抽出した（３ｘ）。混合物を乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（４０ｇ  カラム、ＥｔＯＡｃ／ヘキサンの１５分間における０％から１００％までの勾配）に付して精製し、カルバマート２４ｅ（２５０ｍｇ、収率６６％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋１）＝１１１０；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.５１（ｓ，２Ｈ）、７.３８−７.１３（ｍ，１４Ｈ）、６.９６−６.７５（ｍ，１Ｈ）、６.１２−５.８６（ｍ，１Ｈ）、５.４８（ｄ，Ｊ＝１０.１Ｈｚ，２Ｈ）、５.４３−５.３２（ｍ，１Ｈ）、５.３２−５.２３（ｍ，１Ｈ）、５.２３−４.９９（ｍ，６Ｈ）、４.７４−４.５３（ｍ，４Ｈ）、４.４１（ｄ，Ｊ＝１５.２Ｈｚ，２Ｈ）、４.３０（ｄ，Ｊ＝０.９Ｈｚ，２Ｈ）、３.９６−３.８３（ｍ，６Ｈ）、３.８１−３.４６（ｍ，６Ｈ）、２.９８（ｓ，２Ｈ）、１.１４−０.８５（ｍ，４Ｈ）、０.１３−０.０８（ｍ，１８Ｈ）
【０２０９】
カルバマート２４ｅ（２００ｍｇ、０.１８０ミリモル）の０℃でのＴＨＦ（５ｍＬ）中溶液に、Ｐｄ（Ｐｈ３Ｐ）４（８.３３ｍｇ、７.２０マイクロモル）およびモルホリン（０.０３８ｍＬ、０.４３２ミリモル）を添加した。反応物を０℃で２時間攪拌した。反応混合物を塩化アンモニウム飽和水溶液（５ｍＬ）でクエンチさせ、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で抽出した。有機層をＮａＨＣＯ３飽和水溶液で、ついでＮａＣｌ飽和水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して濃縮した。粗生成物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（４０ｇ  カラム、メタノール／ＤＣＭの１５分間における０％から１０％までの勾配）を用いて精製し、化合物２４ｆ（１６０ｍｇ、収率８７％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋１）＝１０２６；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.３８−７.３０（ｍ，６Ｈ）、７.２８（ｄ，Ｊ＝５.１Ｈｚ，７Ｈ）、６.９２−６.８５（ｍ，１Ｈ）、６.７６（ｄ，Ｊ＝１.１Ｈｚ，２Ｈ）、５.４７（ｄ，Ｊ＝１０.１Ｈｚ，２Ｈ）、５.１８（ｄ，Ｊ＝１５.２Ｈｚ，２Ｈ）、５.０８（ｄ，Ｊ＝８.６Ｈｚ，４Ｈ）、４.６５（ｄ，Ｊ＝１０.１Ｈｚ，２Ｈ）、４.４２（ｄ，Ｊ＝１５.４Ｈｚ，２Ｈ）、４.３０（ｄ，Ｊ＝０.９Ｈｚ，２Ｈ）、３.９２（ｓ，６Ｈ）、３.８２−３.５０（ｍ，８Ｈ）、３.０９−２.９４（ｍ，２Ｈ）、１.１１−０.８８（ｍ，４Ｈ）、０.１０−０.０３（ｍ，１８Ｈ）
【０２１０】
化合物２４ｆ（２２ｍｇ、０.０２１ミリモル）の０℃でのＴＨＦ（２３３μＬ）およびＥｔＯＨ（２３３μＬ）中溶液に、ＬｉＢＨ４（２１４μＬ、０.４２９ミリモル、ＴＨＦ中２Ｍ）を添加した。反応物をゆっくりと室温への加温に供し、室温で２時間攪拌した。反応物を水でクエンチさせ、クロロホルム（２ｘ）で、ついでクロロホルム／ＭｅＯＨ（２ｘ）で抽出した。有機抽出液を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。残渣をクロロホルム／ＥｔＯＨ／水（１：１：１、２ｍＬ）に溶かし、シリカゲル（０.７ｇ）を添加し、反応物を室温で３日間攪拌した。反応混合物をセライト（登録商標）プラグを通して濾過し、クロロホルムで洗浄し、その溶液を濃縮した。残渣を逆相ＨＰＬＣ（カラム：フェノメネックス・ルナ  Ｃ１８  ２０ｘ１００ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０  アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０  アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２０分間にわたって２０−８０％Ｂ；流速：２０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍでのＵＶ）に付して精製し、二量体（ＩＩａ−０５）を得、明黄色固体（８.１ｍｇ、収率４６.３％）として単離した。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋１）＝７３４；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）  ｄ  ７.５７（ｓ，１Ｈ）、７.４７（ｄ，Ｊ＝５.３Ｈｚ，１Ｈ）、７.４３−７.３０（ｍ，４Ｈ）、６.９９−６.７９（ｍ，１Ｈ）、６.７３（ｓ，１Ｈ）、５.４０−４.９０（ｍ，４Ｈ）、４.５９（ｄ，Ｊ＝１５.４Ｈｚ，１Ｈ）、４.１７−３.８５（ｍ，４Ｈ）、３.３９−３.０５（ｍ，２Ｈ）
【０２１１】
実施例６−イミン二重結合の還元
この実施例は、一方または両方のイミン結合の還元した種々のＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体の調製を記載する。
【０２１２】
この実施例の最初のセクションにおいて、調製された二量体は（ＩＩａ−０３）および（ＩＩａ−０４）であった。
【０２１３】
二量体（ＩＩａ−０１）（６ｍｇ、９.１４マイクロモル）の０℃でのＴＨＦ（０.７ｍＬ）中溶液に、ＮａＢＨ４（０.６９１ｍｇ、０.０１８ミリモル）を添加した。得られた混合物を４０分間攪拌し、ついで水でクエンチさせた。混合物をクロロホルムで抽出した（３ｘ）。有機層を合わせ、真空下で濃縮した。二量体（ＩＩａ−０３）（ＬＣＭＳ  （Ｍ＋１）：６５９.１）および（ＩＩａ−０４）（ＬＣＭＳ  （Ｍ＋１）：６６１.１）を逆相ＨＰＬＣ（カラム：フェノメネックス・ルナ  Ｃ１８  ２０ｘ１００ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０  アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０  アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２０分間にわたって１５−６０％Ｂとし；流速：２０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍでのＵＶ）に付して分離した。
【０２１４】
この実施例の次のセクションにて、（６ａＳ,６ａ’Ｓ）−３,３’−（ペンタン−１,５−ジイルビス（オキシ））ビス（２−メトキシ−５,６,６ａ,７−テトラヒドロベンゾ［５,６］［１,４］−ジアゼピノ［１,２−ｂ］イソキノリン−１４（１２Ｈ）−オン）（ＩＩａ−０６）を調製した：二量体（ＩＩａ−０２）（２８ｍｇ、０.０４１ミリモル）のＴＨＦ／ＭｅＯＨ（１：１、１ｍＬ）中溶液に、ＮａＢＨ４（１.５４８ｍｇ、０.０４１ミリモル）を添加した。反応物を室温で２時間攪拌した。別のバッチのＮａＢＨ４（１.５４８ｍｇ、０.０４１ミリモル）を添加し、反応物を室温で一夜攪拌した。次に反応物を水でクエンチさせ、ＤＣＭで抽出した。有機層を合わせ、濃縮し、逆相ＨＰＬＣ（カラム：フェノメネックス・ルナ  Ｃ１８  ２０ｘ１００ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０  アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０  アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２０分間にわたって２０−８０％Ｂとし；流速：２０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍでのＵＶ）に付して精製し、化合物（ＩＩａ−０６）（４.２ｍｇ、５.４９マイクロモル、収率１３.４１％；ＬＣＭＳ  （Ｍ＋１）：６８９.２）を得た。
【０２１５】
実施例７−  非対称性ＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体
この実施例は非対称性ＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体の合成に関する。図５はその合成のための一般的スキームを示す。図中のＲＥおよびＲＥ’基は上記されるように種々の置換基とすることができる。
【０２１６】
この実施例の第１セクションは、次の反応スキームを通して、二量体  （Ｓ）−１０−ヒドロキシ−２−メトキシ−３−（（５−（（（Ｓ）−２−メトキシ−１４−オキソ−６ａ,７,１２,１４−テトラヒドロベンゾ［５,６］［１,４］−ジアゼピノ［１,２−ｂ］イソキノリン−３−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−６ａ,７−ジヒドロベンゾ［５,６］［１,４］ジアゼピノ［１,２−ｂ］イソキノリン−１４（１２Ｈ）−オン（ＩＩａ−１５）を合成することに関する：
【化１０３】
0006498773.tif 000107
【０２１７】
化合物６（２５０ｍｇ、０.５５０ミリモル）およびＫ２ＣＯ３（３０４ｍｇ、２.２００ミリモル）のＤＭＳＯ（５ｍＬ）中懸濁液に、１,５−ジヨードペンタン（８９１ｍｇ、２.７５ミリモル）を添加した。反応物を室温で２時間攪拌し、ついでそれをＥｔＯＡｃで希釈し、ブラインで洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（１２ｇ  カラム、ＭｅＯＨ／ＤＣＭの０−１０％の勾配）に付して精製し、化合物６ａ（２７５ｍｇ、０.４２３ミリモル、収率７７％）を黄色の油状物として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）＝６５１.２；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.３３−７.２４（ｍ，５Ｈ）、７.２１（ｓ，１Ｈ）、５.５０（ｄ，Ｊ＝９.９Ｈｚ，１Ｈ）、５.１５（ｄ，Ｊ＝１５.４Ｈｚ，１Ｈ）、４.６６（ｄ，Ｊ＝９.９Ｈｚ，１Ｈ）、４.４１（ｄ，Ｊ＝１５.４Ｈｚ，１Ｈ）、４.３３−４.２５（ｍ，１Ｈ）、４.０５（ｄ，Ｊ＝８.６Ｈｚ，２Ｈ）、３.８９（ｓ，３Ｈ）、３.８０（ｔｄ，Ｊ＝９.６、６.９Ｈｚ，１Ｈ）、３.７２−３.６２（ｍ，１Ｈ）、３.５６（ｄｄ，Ｊ＝１５.５、７.４Ｈｚ，１Ｈ）、３.２２（ｔ，Ｊ＝６.９Ｈｚ，２Ｈ）、３.００（ｄｄ，Ｊ＝１５.６、６.４Ｈｚ，１Ｈ）、１.９８−１.８０（ｍ，４Ｈ）、１.６７−１.５４（ｍ，２Ｈ）、０.９８（ｄｄｄ，Ｊ＝９.８、６.７、２.９Ｈｚ，２Ｈ）、０.０４（ｓ，９Ｈ）
【０２１８】
化合物６ａ（１３５ｍｇ、０.２０８ミリモル）および化合物１９（１１０ｍｇ、０.１９８ミリモル）のＤＭＳＯ（３ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（８２ｍｇ、０.５９５ミリモル）を添加した。得られた懸濁液を室温で５時間攪拌した。次に反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、水で洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。残渣をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶かした。ＰＰＴＳ（約１５ｍｇ）を添加し、反応物を４０℃で１時間攪拌した。次に反応物を濃縮し、ＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（０−１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、２４ｇ  カラム）に付して精製し、化合物６ｂ（１４１ｍｇ、０.１４２ミリモル、収率７１.６％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝９９３.７；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.３６−７.２９（ｍ，４Ｈ）、７.２７−７.２４（ｍ，１Ｈ）、７.２３−７.１０（ｍ，４Ｈ）、６.９４（ｄ，Ｊ＝２.２Ｈｚ，１Ｈ）、６.７９（ｄｄ，Ｊ＝８.１、２.４Ｈｚ，１Ｈ）、５.５１（ｔ，Ｊ＝９.６Ｈｚ，２Ｈ）、５.１８（ｄｄ，Ｊ＝１９.４、１５.２Ｈｚ，２Ｈ）、４.６９（ｄｄ，Ｊ＝９.９、７.５Ｈｚ，２Ｈ）、４.４２（ｄ，Ｊ＝１５.４Ｈｚ，１Ｈ）、４.３７−４.２６（ｍ，２Ｈ）、４.２２（ｄｄ，Ｊ＝７.７、６.６Ｈｚ，１Ｈ）、４.０９−４.００（ｍ，３Ｈ）、３.８８（ｄ，Ｊ＝２.６Ｈｚ，６Ｈ）、３.８０（ｄｄ，Ｊ＝７.０、４.６Ｈｚ，２Ｈ）、３.６８（ｄｄ，Ｊ＝６.８、５.１Ｈｚ，２Ｈ）、３.６０−３.４３（ｍ，２Ｈ）、３.１０−２.８２（ｍ，２Ｈ）、２.００−１.８７（ｍ，４Ｈ）、１.６９（ｂｒｓ．，２Ｈ）、０.９８（ｔｄ，Ｊ＝６.６、３.３Ｈｚ，４Ｈ）、０.１０−０.０２（ｍ，１８Ｈ）
【０２１９】
化合物６ｂ（１８ｍｇ、０.０１８ミリモル）の−７８℃でのＴＨＦ（０.６ｍＬ）中溶液に、水素化トリエチルホウ素リチウム溶液（ＴＨＦ中１Ｍ、３６２μＬ、０.３６２ミリモル）を添加した。反応物を−７８℃で１時間攪拌し、ついでそれを水（１ｍＬ）でクエンチさせた。次に反応物をクロロホルムで抽出した（３ｘ）。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。残渣をクロロホルム／ＥｔＯＨ（１：１、２ｍＬ）に溶かした。シリカゲル（０.８ｇ）を、つづいて水（０.６ｍＬ）を添加した。得られた懸濁液を室温で１日攪拌し、次に濾過し、１０％ＭｅＯＨ／クロロホルムで洗浄した。濾液を真空下で濃縮し、逆相ＨＰＬＣ（カラム：フェノメネックス・ルナ  Ｃ１８  ２０ｘ１００ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０  アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９０：１０  アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２０分間にわたって２０−８０％Ｂとし；流速：２０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍでのＵＶ）に付して精製し、二量体（ＩＩａ−１５）（４.８ｍｇ、６.１６マイクロモル、収率３４.０％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝７０１.２
【０２２０】
二量体  （Ｓ）−２,１０−ジメトキシ−３−（（５−（（（Ｓ）−２−メトキシ−１４−オキソ−６ａ,７,１２,１４−テトラヒドロベンゾ［５,６］［１,４］−ジアゼピノ［１,２−ｂ］イソキノリン−３−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−６ａ,７−ジヒドロベンゾ［５,６］［１,４］ジアゼピン［１,２−ｂ］イソキノリン−１４（１２Ｈ）−オン（ＩＩａ−１２）の化合物６ｂからの合成は、以下のように実施された。化合物６ｂをＫ２ＣＯ３を用いてヨードメタンでアルキル化し、対応するメトキシ生成物を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝１００７.６。一般に、上記の操作に従ってＬｉＥｔ３ＢＨを用いて還元し、二量体（ＩＩａ−１２）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝７１５.３；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.５５（ｄ，Ｊ＝１.６Ｈｚ，２Ｈ）、７.５０（ｄ，Ｊ＝５.３Ｈｚ，２Ｈ）、７.４１−７.３０（ｍ，５Ｈ）、６.９４−６.８６（ｍ，２Ｈ）、６.８１（ｍ，１Ｈ）、５.０１（ｔ，Ｊ＝１４.９Ｈｚ，２Ｈ）、４.６７−４.４７（ｍ，２Ｈ）、４.２４−４.０１（ｍ，５Ｈ）、３.９６（ｓ，６Ｈ）、３.８６（ｓ，３Ｈ）、３.３４−３.０２（ｍ，４Ｈ）、２.０２−１.８８（ｍ，４Ｈ）
【０２２１】
上記の操作に従って、必要に応じて変更を加え、さらなる非対称的ＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体を合成した：
（ａ）（ＩＩａ−１３）：ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝７５８.３；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.５５（ｄ，Ｊ＝２.２Ｈｚ，２Ｈ）、７.４９（ｄｄ，Ｊ＝５.３、３.４Ｈｚ，２Ｈ）、７.４２−７.３３（ｍ，５Ｈ）、６.９５−６.８９（ｍ，２Ｈ）、６.８６−６.７７（ｍ，２Ｈ）、６.５４（ｂｒｓ．，１Ｈ）、５.５７（ｂｒｓ．，１Ｈ）、５.０２（ｄｄ，Ｊ＝１５.５、１０.９Ｈｚ，２Ｈ）、４.６２−４.５６（ｍ、２Ｈ）、４.２０−４.０２（ｍ，６Ｈ）、３.９６（ｓ，３Ｈ）、３.９６（ｓ，３Ｈ）、３.９０−３.８４（ｍ，３Ｈ）、３.３１−３.０５（ｍ，５Ｈ）、１.９６（ｍ，４Ｈ）
（ｂ）（ＩＩａ−１４）：ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝８０３.３
（ｃ）（ＩＩａ−１７）：ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝７４５.２
【０２２２】
実施例８−  非対称性架橋での二量体
この実施例および図６は、２つの二量体の半分の単位を連結する架橋が左右相称に対称的でない、二量体を製造する合成方法を説明する。具体的な説明は二量体（ＩＩａ−０９）に関するものである。
【０２２３】
ベンジル  （２−ヒドロキシエチル）カルバマート２９（Aldrich、０.７８１ｇ、４ミリモル）およびＮＥｔ３（１.１１５ｍＬ、８.００ミリモル）の溶液に、ｐ−トルエンスルホニルクロリド（ＴｓＣｌ、０.９１５ｇ、４.８０ミリモル）を加えた。反応物を室温で１時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、ＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（０−１００％ＥｔＯＡｃ／ＨＥｘ、４０ｇ  カラム）に付して精製し、トルエンスルホナート３０（０.８５ｇ、２.４３ミリモル、収率６０.８％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝３５０
【０２２４】
化合物６（１６０ｍｇ、０.３５２ミリモル）およびトルエンスルホナート３０（１３５ｍｇ、０.３８７ミリモル）のＤＭＦ（３ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（９７ｍｇ、０.７０４ミリモル）を添加した。得られた懸濁液を室温で２時間攪拌した。反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、水性ＬｉＣｌおよびブラインで連続して洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。その粗材料をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（０−１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２４ｇ  カラム）に付して精製し、化合物３１を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝６３２.３
【０２２５】
化合物３１および１０％Ｐｄ／Ｃ（２５ｍｇ）のＭｅＯＨ（８ｍＬ）中懸濁液をＨ２バルーン下にて５時間攪拌した。次に反応物にＮ２をパージし、セライト（登録商標）のパッドを通して濾過し、濃縮して化合物３２（１５０ｍｇ、０.３０１ミリモル、収率８６％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝４９８；１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.６５（ｄ，Ｊ＝８.２Ｈｚ，１Ｈ）、７.３８−７.２３（ｍ，４Ｈ）、７.２１（ｓ，１Ｈ）、７.０７（ｄ，Ｊ＝７.９Ｈｚ，１Ｈ）、６.９０−６.６４（ｍ，３Ｈ）、５.４１（ｄ，Ｊ＝１０.２Ｈｚ，１Ｈ）、５.１４（ｄ，Ｊ＝１５.３Ｈｚ，１Ｈ）、４.７６（ｄ，Ｊ＝１０.１Ｈｚ，１Ｈ）、４.４４−４.３３（ｍ，２Ｈ）、４.３２−４.１７（ｍ，３Ｈ）、３.８０（ｓ，３Ｈ）、３.７２−３.５０（ｍ，４Ｈ）、３.３９−３.３０（ｍ，２Ｈ）、３.０５−２.９３（ｍ，１Ｈ）、０.９８−０.８７（ｍ，２Ｈ）、０.００（ｓ，９Ｈ）
【０２２６】
化合物３２（６５ｍｇ、０.１３１ミリモル）の０℃でのＤＣＭ（２ｍＬ）中溶液に、ＮＥｔ３（０.０５５ｍＬ、０.３９ミリモル）および２−クロロアセチルクロリド３２ａ（２２.１３ｍｇ、０.１９６ミリモル）を添加した。該溶液を１時間攪拌し、次にＤＣＭで希釈した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。残渣を化合物６（５９.４ｍｇ、０.１３１ミリモル）およびＫ２ＣＯ３（４.２ｍｇ、０.３９２ミリモル）と合わせ、ＤＭＳＯ（１ｍＬ）に懸濁させた。得られた混合物を５０℃で４時間加熱した。室温に冷却した後、反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、ブラインで洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。その粗材料をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（０−１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２４ｇ  カラム）に付して精製し、アセトアミド３３（９５ｍｇ、０.０９６ミリモル、収率７３.３％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝９９２.５
【０２２７】
アセトアミド３３（４０ｍｇ、０.０４０ミリモル）の−７８℃でのＴＨＦ（０.６ｍＬ）中溶液に、ＬｉＥｔ３ＢＨ（０.４ｍＬ、ＴＨＦ中１Ｍ）を添加した。次に反応物を−７８℃で１時間攪拌し、ついでそれを水（１ｍＬ）でクエンチさせた。次に反応混合物をクロロホルムで抽出した（３ｘ）。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。残渣をクロロホルム／ＥｔＯＨ（１：１、２ｍＬ）に溶かした。シリカゲル（０.８ｇ）を、つづいて水（０.６ｍＬ）を添加した。得られた懸濁液を室温で１日攪拌し、次に濾過し、１０％ＭｅＯＨ／クロロホルムで洗浄した。濾液を真空下で濃縮し、逆相ＨＰＬＣ（カラム：フェノメネックス・ルナ  Ｃ１８  ２０ｘ１００ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０  アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０  アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：１５分間にわたって１５−７０％Ｂとし；流速：２０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍでのＵＶ）に付して精製し、二量体（ＩＩａ−０９）（１１ｍｇ、０.０１４ミリモル、収率３５.１％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝７００.２；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.５７（ｄ，Ｊ＝９.５Ｈｚ，２Ｈ）、７.４８（ｄｄ，Ｊ＝５.３、０.９Ｈｚ，２Ｈ）、７.４０−７.３１（ｍ，９Ｈ）、６.８３（ｄ，Ｊ＝４.０Ｈｚ，２Ｈ）、５.０１（ｄ，Ｊ＝１５.６Ｈｚ，２Ｈ）、４.６４−４.５１（ｍ，４Ｈ）、４.２０（ｔｄ，Ｊ＝９.４、５.０Ｈｚ，２Ｈ）、３.９６（ｓ，３Ｈ）、３.９５（ｓ，３Ｈ）、３.９１−３.８２（ｍ，４Ｈ）、３.３４−３.２３（ｍ，２Ｈ）、３.２０−３.１１（ｍ，２Ｈ）
【０２２８】
実施例９−  ＴＨＩＱ−ＰＢＤ二量体
図５の一般的スキームを用い、２個のＴＨＩＱ単量体の単位の一つがＰＢＤ単量体の単位と置き換えられている、ＴＨＩＱ−ＰＢＤ二量体を調製することができる。ＴＨＩＱ単量体の単位をまずアルキル化し、次にＰＢＤ単量体の単位と結合させることができ、あるいはその逆である。
【０２２９】
この実施例ならびに図７ａおよび７ｂは、具体的には二量体（ＩＩｂ−０１） および（ＩＩｂ−０２）を参照して、ＴＨＩＱ−ＰＢＤ二量体の合成を説明する。
【０２３０】
二量体（ＩＩｂ−０１）の調製をまず記載する。その合成スキームが図７ａに概要されており、まずＴＨＩＱがアルキル化される方法を例示として説明する。
【０２３１】
化合物６ａ（上記実施例７、５０ｍｇ、０.０７７ミリモル）、Ｋ２ＣＯ３（３１.９ｍｇ、０.２３１ミリモル）およびジオン３５（ＣＡＳ  Ｒｅｇ．  Ｎｏ．１３２３９１−７０−９、Howardら、２０１４ｃ、４０.３ｍｇ、０.１５４ミリモル）のＤＭＦ（１.５ｍＬ）中懸濁液を５０℃で２時間加熱した。反応物を室温に冷却し、水でクエンチさせた。得られた混合物をＥｔＯＡｃで抽出した（３ｘ）。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗材料をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（２４ｇ  カラム、０−１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）に付して精製し、化合物３６を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝７８５.４
【０２３２】
化合物３６をＤＭＦ（０.５ｍＬ）に溶かした。その溶液を０℃に冷却し、ついでＮａＨ（鉱油中６０％分散液、３.０７ｍｇ、０.０７７ミリモル）およびＳＥＭ−Ｃｌ（０.０１４ｍＬ、０.０７７ミリモル）を連続して添加した。反応物を室温への加温に供し、２時間攪拌した。次に反応物を水でクエンチさせ、ＥｔＯＡｃで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗化合物３７（１４ｍｇ、０.０１５ミリモル、収率２０％）をさらに精製することなく次工程に用いた。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝９１５.７
【０２３３】
粗化合物３７（１４ｍｇ、０.０１５ミリモル）の０℃でのＴＨＦ／ＥｔＯＨ（１：１、１ｍＬ）中溶液に、ＬｉＢＨ４（１０１μｌ、０.２０２ミリモル、ＴＨＦ中２Ｍ）の溶液を添加した。反応物をゆっくりと室温への加温に供し、１５分間攪拌し、ついでそれをブラインでクエンチさせた。得られた混合物をＣＨＣｌ３で抽出した（３ｘ）。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。次に残渣をＥｔＯＨ／クロロホルム（１：１、２ｍＬ）に溶かした。シリカゲル（７００ｍｇ）を、つづいて水（０.６ｍＬ）を添加した。得られた懸濁液を室温で１日攪拌し、ついで濾過し、１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３で洗浄した。濾液を濃縮し、逆相ＨＰＬＣ（カラム：フェノメネックス・ルナ  Ｃ１８  ２０ｘ１００ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０  ＣＨ３ＣＮ：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０  アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２０分間にわたって１５−６０％Ｂとし；流速：２０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍでのＵＶ）に付して精製し、（ＩＩｂ−０１）（０.９２ｍｇ、１.３３０マイクロモル、収率８.６９％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝６２３；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.６９（ｄ，Ｊ＝４.４Ｈｚ，１Ｈ）、７.５７−７.５３（ｍ，２Ｈ）、７.５０（ｄ，Ｊ＝５.１Ｈｚ，１Ｈ）、７.４１−７.３２（ｍ，４Ｈ）、６.８２（ｄ，Ｊ＝１.５Ｈｚ，２Ｈ）、５.０３（ｄ，Ｊ＝１５.６Ｈｚ，１Ｈ）、４.５９（ｄ，Ｊ＝１５.６Ｈｚ，１Ｈ）、４.１８−４.０６（ｍ，４Ｈ）、３.９７（ｓ，３Ｈ）、３.９６（ｓ，３Ｈ）、３.７５（ｄ，Ｊ＝７.３Ｈｚ，４Ｈ）、３.６１（ｄｔ，Ｊ＝１１.８、７.８Ｈｚ，１Ｈ）、３.３４−３.２６（ｍ，１Ｈ）、３.２２−３.１５（ｍ，１Ｈ）、２.３４（ｂｒｓ．，２Ｈ）、２.１１−２.０６（ｍ，１Ｈ）、２.０１−１.９４（ｍ，４Ｈ）、１.７１−１.６６（ｍ，２Ｈ）
【０２３４】
次に二量体（ＩＩｂ−０２）の合成を検討するが、その合成スキームを図７ｂに要約する。この場合、まずＰＢＤ単量体の単位をアルキル化し、次にそれをＴＨＩＱ単量体の単位とカップリングさせる。
【０２３５】
化合物９（２２０ｍｇ、０.５１２ミリモル）のＭｅＯＨ（３ｍＬ）およびＴＨＦ（３ｍＬ）中溶液に、ホルムアルデヒド（３７％水溶液、０.５７２ｍＬ、７.６８ミリモル）および２、３滴の酢酸を添加した。その溶液を室温で１０分間攪拌し、ついでＮａ（ＣＮ）ＢＨ３（１２９ｍｇ、２.０４９ミリモル）を加えた。次に反応物を室温で２時間攪拌し、ついでそれを真空下で濃縮した。粗材料をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（０−１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２４ｇ  カラム）に付して精製し、化合物３８ａ（２３０ｍｇ、０.５０３ミリモル、収率９８％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝４５８
【０２３６】
化合物３８ａ（２３０ｍｇ、０.５０３ミリモル）の０℃でのＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に、ＮａＨ（鉱油中６０％分散液、２５.１ｍｇ、０.６２８ミリモル）を添加した。該混合物を１５分間攪拌し、ついでＳＥＭ−Ｃｌ（０.１１１ｍＬ、０.６２８ミリモル）を添加した。反応物をゆっくりと室温への加温に供し、一夜攪拌した。次に反応物を水でクエンチさせ、ＥｔＯＡｃで抽出した（３ｘ）。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗材料をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（０−１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）に付して精製し、化合物３８ｂを得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝５８８.２
【０２３７】
化合物３８ｂを１０％Ｐｄ／Ｃ（２０ｍｇ）と合わせ、ＥｔＯＨ／ＥｔＯＡｃ（１：１、１０ｍＬ）に懸濁させた。その混合物にＮ２をパージし、次にＨ２のバルーン下で４時間攪拌した。次に反応物をセライト（登録商標）のパッドを通して濾過し、真空下で濃縮した。粗材料をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（０−１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、４０ｇ  カラム）に付して精製し、化合物３８ｃ（１９０ｍｇ、０.３８２ミリモル、収率７６％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝４９８.２；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.４５（ｓ，１Ｈ）、７.２１（ｓ，１Ｈ）、７.１８−７.１０（ｍ，１Ｈ）、６.６９（m.、２Ｈ）、５.５１（ｄ，Ｊ＝９.９Ｈｚ，１Ｈ）、５.１２（ｄ，Ｊ＝１５.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.６５（ｄ，Ｊ＝１０.１Ｈｚ，１Ｈ）、４.３３（ｄ，Ｊ＝１５.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.２４（ｄ，Ｊ＝０.４Ｈｚ，１Ｈ）、３.９１（ｓ，３Ｈ）、３.７９（ｓ，１Ｈ）、３.７２−３.６３（ｍ，１Ｈ）、３.５２−３.４０（ｍ，１Ｈ）、２.９３（ｓ，６Ｈ）、１.０５−０.８９（ｍ，２Ｈ）、０.０３（ｓ，９Ｈ）
【０２３８】
化合物３８ｄは、上記の操作に略従って、調製された。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝３９３.４；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.３８（ｓ，１Ｈ）、７.２７（ｓ，１Ｈ）、６.３４（ｓ，１Ｈ）、５.４６（ｄ，Ｊ＝９.８Ｈｚ，１Ｈ）、４.７０（ｄ，Ｊ＝９.８Ｈｚ，１Ｈ）、４.１９−４.０６（ｍ，１Ｈ）、３.９６（ｓ，３Ｈ）、３.８０−３.６０（ｍ，３Ｈ）、３.６０−３.５３（ｍ，１Ｈ）、３.５０（ｄ，Ｊ＝２.９Ｈｚ，２Ｈ）、２.７８−２.６８（ｍ，１Ｈ）、２.１９−１.９５（ｍ，３Ｈ）、１.０５−０.９６（ｍ，２Ｈ）、０.０８−０.０２（ｍ，９Ｈ）
【０２３９】
化合物３８ｄ（１.２ｇ、３.０６ミリモル）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中懸濁液に、Ｋ２ＣＯ３（１.２６８ｇ、９.１７ミリモル）および１,５−ジヨードペンタン（５.９４ｇ、１８.３４ミリモル）を添加した。反応物を室温で２時間攪拌し、ついでそれを水でクエンチさせた。得られた混合物をＥｔＯＡｃで抽出した（３ｘ）。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗材料をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（２４ｇ  カラム、０−１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）に付して精製し、化合物３８ｅ（１.５２ｇ、２.５８ミリモル、収率８４％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝５８９.１
【０２４０】
化合物３８ｅ（２２.１２ｍｇ、０.０３８ミリモル）および化合物３８ｃ（１７ｍｇ、０.０３４ミリモル）のＤＭＳＯ（１ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（９.４４ｍｇ、０.０６８ミリモル）を添加した。得られた混合物を室温で１４時間攪拌した。次に反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、水およびブラインで連続して洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（０−１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２４ｇ  カラム）に付して精製し、化合物３８ｆ（２７ｍｇ、０.０２８ミリモル、収率８２％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝９５８.３
【０２４１】
化合物３８ｆは、上記の操作に略従って還元することにより、二量体（ＩＩｂ−０２）に変換された。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝６６６.２；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.６８（ｄ，Ｊ＝４.４Ｈｚ，１Ｈ）、７.５４（ｄ，Ｊ＝１.８Ｈｚ，２Ｈ）、７.５２（ｄ，Ｊ＝５.３Ｈｚ，１Ｈ）、７.２３（ｄ，Ｊ＝８.８Ｈｚ，１Ｈ）、６.８２（ｄ，Ｊ＝１.８Ｈｚ，２Ｈ）、６.７３−６.６５（ｍ，２Ｈ）、４.９７（ｄ，Ｊ＝１５.４Ｈｚ，１Ｈ）、４.５３（ｄ，Ｊ＝１５.４Ｈｚ，１Ｈ）、４.２９−４.０３（ｍ，４Ｈ）、３.９６（ｓ，３Ｈ）、３.９２（ｓ，３Ｈ）、３.８４（ｄｄｄ，Ｊ＝１１.７、７.１、４.５Ｈｚ，１Ｈ）、３.７８−３.７２（ｍ，１Ｈ）、３.６６−３.５６（ｍ，１Ｈ）、３.２８−３.１７（ｍ，１Ｈ）、３.０６（ｄｄ，Ｊ＝１５.４、４.２Ｈｚ，１Ｈ）、３.０１−２.９５（ｍ，６Ｈ）、２.３４（ｔｄ，Ｊ＝６.７、３.０Ｈｚ，２Ｈ）、２.１６−１.９０（ｍ，６Ｈ）、１.７８−１.６２（ｍ，３Ｈ）
【０２４２】
実施例１０−  ＴＨＩＱ−ＴＨＩＱ二量体（ＩＩａ−１０）および（ＩＩａ−１１）
この実施例および図８は二量体（ＩＩａ−１０）および（ＩＩａ−１１）の調製に関する。
【０２４３】
化合物６ａ（１００ｍｇ、０.１５４ミリモル）および化合物１３（６８ｍｇ、０.１２３ミリモル）のＤＭＳＯ（３ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（５０.９ｍｇ、０.３６８ミリモル）を添加した。得られた懸濁液を室温で５時間攪拌した。次に反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗材料をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（０−１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、１２ｇ  カラム）に付して精製し、カルバマート３９（１２４ｍｇ、０.１１５ミリモル、収率９４％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝１０７６.３；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.３０（ｄ，Ｊ＝０.９Ｈｚ，６Ｈ）、７.２７−７.１８（ｍ，５Ｈ）、６.８９（ｓ，１Ｈ）、６.０１−５.８８（ｍ，１Ｈ）、５.４９（ｄｄ，Ｊ＝９.９、４.０Ｈｚ，２Ｈ）、５.３４（ｄｄ，Ｊ＝１７.３、１.４Ｈｚ，１Ｈ）、５.２５（ｄｄ，Ｊ＝１０.３、１.１Ｈｚ，１Ｈ）、５.１８−５.０４（ｍ，２Ｈ）、４.７１−４.６２（ｍ，４Ｈ）、４.４０（ｄ，Ｊ＝１５.４Ｈｚ，２Ｈ）、４.３２−４.２２（ｍ，２Ｈ）、４.０９−３.９７（ｍ，４Ｈ）、３.９０−３.８４（ｍ，６Ｈ）、３.８２−３.７３（ｍ，２Ｈ）、３.７１−３.４４（ｍ，５Ｈ）、３.０８−２.９０（ｍ，２Ｈ）、１.９９−１.９０（ｍ，４Ｈ）、１.０４−０.９１（ｍ，４Ｈ）、０.０２（ｓ，９Ｈ）、０.０２（ｓ，９Ｈ）
【０２４４】
カルバマート３９（１２４ｍｇ、０.１１５ミリモル）の０℃でのＤＣＭ（６ｍＬ）中溶液に、モルホリン（０.０８０ｍＬ、０.９２２ミリモル）を添加した。反応物にＮ２をパージした後、Ｐｄ（Ｐｈ３Ｐ）４（１３.３１ｍｇ、０.０１２ミリモル）を加えた。反応物をゆっくりと室温への加温に供し、Ｎ２下で２時間攪拌した。次に反応物を濃縮し、ＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（０−１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）に付して精製し、対応するアニリン化合物（９０ｍｇ、０.０９１ミリモル、収率７９％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝９９２.５
【０２４５】
上記のアニリン化合物（８９ｍｇ、０.０９０ミリモル）の−７８℃でのＴＨＦ（３ｍＬ）中溶液に、ＬｉＥｔ３ＢＨ（ＴＨＦ中１Ｍ、０.４４８ｍＬ、０.４４８ミリモル）を添加した。反応物を−７８℃で１時間攪拌した。次に反応物を水（１ｍＬ）でクエンチさせ、クロロホルムで抽出した（３ｘ）。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。次に残渣をクロロホルム／ＥｔＯＨ（１：１、２ｍＬ）に溶かした。シリカゲル（０.７ｇ）を、つづいて水（０.６ｍＬ）を添加した。得られた懸濁液を室温で１日攪拌し、次に濾過し、１０％ＭｅＯＨ／クロロホルムで洗浄した。濾液を濃縮し、ＨＰＬＣ（カラム：フェノメネックス・ルナ  Ｃ１８  ２０ｘ１００ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０  アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０  アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２０分間にわたって２０−７０％Ｂとし；流速：２０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍでのＵＶ）に付して精製し、二量体（ＩＩａ−１０）（１９ｍｇ、０.０２４ミリモル、収率２７.２％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝７００.２；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.５４（ｄ，Ｊ＝２.４Ｈｚ，２Ｈ）、７.５０（ｔ，Ｊ＝４.７Ｈｚ，２Ｈ）、７.４１−７.３１（ｍ，５Ｈ）、７.１５（ｄ，Ｊ＝８.６Ｈｚ，１Ｈ）、６.８１（ｄ，Ｊ＝１.８Ｈｚ，２Ｈ）、６.７３−６.５９（ｍ，２Ｈ）、５.０２（ｄ，Ｊ＝１５.６Ｈｚ，１Ｈ）、４.９２（ｄ，Ｊ＝１５.４Ｈｚ，１Ｈ）、４.５８（ｄ，Ｊ＝１５.６Ｈｚ，１Ｈ）、４.４７（ｄ，Ｊ＝１５.４Ｈｚ，１Ｈ）、４.２２−４.０３（ｍ，３Ｈ）、４.００−３.７０（ｍ，９Ｈ）、３.３４−３.２５（ｍ，１Ｈ）、３.１８（ｄｔ，Ｊ＝１５.４、４.２Ｈｚ，２Ｈ）、３.０９−３.００（ｍ，１Ｈ）、２.０３−１.９２（ｍ，４Ｈ）、１.７６−１.６３（ｍ，２Ｈ）
【０２４６】
二量体（ＩＩａ−１０）（４.５ｍｇ、６.４３マイクロモル）、Ｆｍｏｃ−ＧＬＹ−ＯＨ（Chem-Impex、３.８２ｍｇ、０.０１３ミリモル）およびＮ,Ｎ,Ｎ′,Ｎ′−テトラメチル−Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＡＴＵ、４.８９ｍｇ、０.０１３ミリモル）のＤＭＦ（０.５ｍＬ）中溶液に、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ、３.３７μＬ、０.０１９ミリモル）を添加した。反応物を室温で４時間攪拌し、ついでピペリジン（１００μＬ）を加えた。得られた混合物を室温で１時間攪拌した。次に粗反応混合物をＤＭＦで希釈し、濾過し、逆相ＨＰＬＣ（カラム：フェノメネックス・ルナ  Ｃ１８  ２０ｘ１００ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０  アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０  アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２０分間にわたって２０−７０％Ｂとし；流速：２０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍでのＵＶ）に付して精製し、二量体（ＩＩａ−１１）（０.９４ｍｇ、１.１８０マイクロモル、収率１８.３５％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝７５７.２
【０２４７】
実施例１１−  ＴＨＩＱ−ＰＢＤ二量体（ＩＩｂ−０３）
この実施例および図９は、ＴＨＩＱ−ＰＢＤ二量体（ＩＩｂ−０３）の調製に関する。
【０２４８】
化合物４１は上記した実施例の操作に略従って調製された。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝４０９.１；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.３２（ｓ，１Ｈ）、７.２５（ｓ，１Ｈ）、６.３０（ｓ，１Ｈ）、５.４５（ｄ，Ｊ＝９.７Ｈｚ，１Ｈ）、４.７１（ｄ，Ｊ＝９.８Ｈｚ，１Ｈ）、４.６５（ｂｒｓ．，１Ｈ）、４.３０（ｄｄ，Ｊ＝７.９、５.９Ｈｚ，１Ｈ）、４.００−３.８４（ｍ，４Ｈ）、３.７９−３.５７（ｍ，３Ｈ）、２.９７（ｄｔ，Ｊ＝１３.５、５.５Ｈｚ，１Ｈ）、２.８６（ｂｒｓ．，１Ｈ）、２.２１−２.０８（ｍ，１Ｈ）、１.００（ｔ，Ｊ＝８.４Ｈｚ，２Ｈ）、０.０３（ｓ，９Ｈ）
【０２４９】
ジオン４１（５００ｍｇ、１.２２４ミリモル）のＤＭＳＯ（３ｍＬ）中溶液に、１,３−ジブロモプロパン４２（１７３０ｍｇ、８.５７ミリモル）およびＫ２ＣＯ３（４２３ｍｇ、３.０６ミリモル）を添加した。反応物を室温で３時間攪拌した。次に反応物を水およびＥｔＯＡｃで抽出した（３ｘ）。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。その粗生成物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（０−１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、４０ｇ  カラム）に付して精製し、ブロモプロポキシ  ＰＢＤ４３（５４０ｍｇ、０.９１８ミリモル、７５％）を白色の泡沫体として得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝５３１.２
【０２５０】
上記の実施例の操作に略従って調製した、ＴＨＩＱ単量体１９（１００ｍｇ、０.１８０ミリモル）、およびブロモプロポキシ  ＰＢＤ４３（１１７ｍｇ、０.１９８ミリモル）のＤＭＳＯ（２ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（６２.３ｍｇ、０.４５１ミリモル）を添加した。その混合物を室温で１６時間攪拌した。次に反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、水およびブラインで連続して洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて濃縮した。得られた混合物をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶かし、ＰＰＴＳ（２０ｍｇ）を加えた。反応物を４０℃で１時間攪拌した。反応物を濃縮し、ＥｔＯＡｃに溶かし、水性ＮａＨＣＯ３で、ついでブラインで洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（０−２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、２４ｇ  カラム）に付して精製し、化合物４５（１５０ｍｇ、０.１６３ミリモル、収率９１％）を得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）＝９１９.３
【０２５１】
化合物４５（１５０ｍｇ、０.１６３ミリモル）のＤＭＳＯ（２ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（６７.７ｍｇ、０.４９０ミリモル）およびヨードメタン（４６.３ｍｇ、０.３２６ミリモル）を加えた。該混合物を室温で１６時間攪拌した。次に反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、水で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物４６をさらに精製することなく次の工程に用いた。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝９３３.５
【０２５２】
粗生成物４６（１５０ｍｇ、０.１６１ミリモル）のＤＣＭ（８０４μＬ）およびＤＭＳＯ（８０４μＬ）中の０℃溶液に、トリエチルアミン（１１２μｌ、０.８０４ミリモル）を、つづいて三酸化硫黄・ピリジン複合体（５１.２ｍｇ、０.３２１ミリモル）を添加した。反応物を室温までの加温に供し、１６時間攪拌した。次に反応物をＤＣＭ（３０ｍＬ）で希釈し、ＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液（１０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（２ｘ１０ｍＬ）およびＮａＨＣＯ３飽和水溶液（１０ｍＬ）で連続して洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。その粗材料をＩＳＣＯシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（２４ｇ  カラム；０−１００％のＥｔＯＡｃ−ＣＨ２Ｃｌ２の勾配）に付して精製し、ケトン４７（１１２ｍｇ、０.０８４ミリモル、収率５２.４％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝９３０.５
【０２５３】
ケトン４７（１１２ｍｇ、０.１２０ミリモル）のＤＣＭ（２ｍＬ）中溶液に、２,６−ルチジン（０.０２８ｍＬ、０.２４１ミリモル）を添加した。次に該溶液を−７８℃に冷却した。次にトリフルオロメタンスルホン酸無水物（０.０３０ｍＬ、０.１８０ミリモル）を滴下して加えた。反応物をゆっくりと０℃までの加温に供し、２時間攪拌した。次に反応物をブラインでクエンチさせ、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（０−１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２４ｇ  カラム）に付して精製し、トリフラート４８（８１ｍｇ、０.０７６ミリモル、収率６３.３％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝１０６２
【０２５４】
スクリュー型キャップのバイアルに、トリフラート４８（８１ｍｇ、０.０７６ミリモル）、４−（４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル）アニリン４８ａ（２０.０３ｍｇ、０.０９１ミリモル）および［１,１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（２.７９ｍｇ、３.８１マイクロモル）を添加した。該バイアルを空にし、Ｎ２で埋め戻した。ＴＨＦ（２ｍＬ）およびＫ３ＰＯ４水溶液（１Ｍ、０.３８μｌ、０.３８ミリモル）を添加した。その混合物をＮ２下の４５℃で２時間攪拌した。反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、ブラインで洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。粗材料をＩＳＣＯシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（１２ｇ  カラム；ＥｔＯＡｃ−ヘキサンの０−１００％の線形勾配）に付して精製し、化合物４９（５３ｍｇ、０.０５３ミリモル、収率６９.１％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝１００６.３；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.４１（ｓ，１Ｈ）、７.３３（ｓ，１Ｈ）、７.２９−７.２０（ｍ，６Ｈ）、６.９１−６.８０（ｍ，２Ｈ）、６.６８（ｄ，Ｊ＝８.６Ｈｚ，２Ｈ）、５.５１（ｄｄ，Ｊ＝１１.９、１０.０Ｈｚ，２Ｈ）、５.１３（ｄ，Ｊ＝１５.４Ｈｚ，１Ｈ）、４.７５（ｄｄ，Ｊ＝１６.８、１０.０Ｈｚ，２Ｈ）、４.６０（ｄｄ，Ｊ＝１０.６、３.４Ｈｚ，１Ｈ）、４.３９（ｄ，Ｊ＝１５.３Ｈｚ，１Ｈ）、４.３３−４.２１（ｍ，５Ｈ）、３.９３（ｓ，３Ｈ）、３.８９（ｓ，３Ｈ）、３.８２（ｓ，３Ｈ）、３.８０−３.７４（ｍ，３Ｈ）、３.６９（tｄｄ，Ｊ＝９.５、７.２、５.０Ｈｚ，２Ｈ）、３.５１（ｄｄ，Ｊ＝１５.５、７.５Ｈｚ，１Ｈ）、３.１２（ｄｄｄ，Ｊ＝１６.１、１０.６、２.１Ｈｚ，１Ｈ）、３.０３−２.８７（ｍ，１Ｈ）、２.４４（ｔ，Ｊ＝５.９Ｈｚ，２Ｈ）、１.０３−０.９２（ｍ，４Ｈ）、０.０４（ｓ，９Ｈ）、０.０３（ｓ，９Ｈ）
【０２５５】
化合物４９（７ｍｇ、６.９６マイクロモル）の−７８℃でのＴＨＦ（１ｍＬ）中溶液に、水素化トリエチルホウ素リチウム溶液（０.０７０ｍＬ、０.０７０ミリモル、ＴＨＦ中１Ｍ）を滴下して加えた。反応物を−７８℃で１時間攪拌し、ついでそれをブラインでクエンチさせた。該混合物を１０％ＭｅＯＨ／クロロホルムで抽出した（３ｘ）。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。残渣をＴＨＦ／ＥｔＯＨ（１：１、２ｍＬ）に溶かした。ギ酸水溶液（０.０５％、１ｍＬ）を添加した。次に反応物を室温で２時間攪拌した。該混合物を水性ＮａＨＣＯ３で中和し、クロロホルムで抽出した（３ｘ）。有機層を合わせ、濃縮し、ＩＳＣＯシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（０−６％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、４ｇ  カラム）に付して精製し、二量体（ＩＩｂ−０３）（２.１ｍｇ、２.６５マイクロモル、収率３８.１％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝７１４.０
【０２５６】
実施例１２−  二量体（ＩＩａ−１６）および（ＩＩａ−１８）
この実施例および図１０および１１は、二量体の２つの単位を結び付ける架橋にてアミン基を有する二量体であって、かかるアミン基がリンカーを結合するのに適切な官能基であるところの二量体の合成に関する（上記の（ａ）型の二量体−リンカー化合物を参照のこと）。
【０２５７】
二量体（ＩＩａ−１６）（（６ａＳ,６ａ’Ｓ）−３,３’−（（アザンジイルビス（エタン−２,１−ジイル））ビス（オキシ））ビス（２−メトキシ−６ａ,７−ジヒドロベンゾ［５,６］［１,４］ジアゼピノ［１,２−ｂ］イソキノリン−１４（１２Ｈ）−オン））を合成するためのスキームを図１０に示す。
【０２５８】
２,２’−アザンジイルジエタノール５０（５ｇ、４７.６ミリモル、Fluka）およびＫ２ＣＯ３（６.５７ｇ、４７.６ミリモル）の０℃でのアセトニトリル（５０ｍＬ）中懸濁液に、クロロギ酸アリル１２ａ（５.０７ｍＬ、４７.６ミリモル）を加え、室温で３時間攪拌した。ＬＣＭＳは生成物の形成を示した。反応混合物を０℃に冷却し、水（２００ｍＬ）でクエンチさせ、ＥｔＯＡｃ（３ｘ１００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液（１００ｍＬ）、水（１００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮してカルバマート５１（２.５５ｇ、１３.４８ミリモル、収率２８.３％）を明黄色の油として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  δ５.９４（ｍ，１Ｈ）、５.３２（ｄｄ，Ｊ＝１７.６、１.６Ｈｚ，１Ｈ）、５.２４（ｄｄ，Ｊ＝１０.４、１.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.６２（ｄ，Ｊ＝６.８Ｈｚ，２Ｈ）、３.８４（ｄ，Ｊ＝１２.４Ｈｚ，２Ｈ）、３.５２（ｓ，２Ｈ）、２.８６（ｓ，２Ｈ）；ＬＣＭＳ：［Ｍ＋１］＝１９０.１
【０２５９】
カルバマート５１（６００ｍｇ、３.１７ミリモル）およびＮＥｔ３（１.７６８ｍＬ、１２.６８ミリモル）の０℃でのＤＣＭ（５ｍＬ）中溶液に、ＴｓＣｌ（１８１４ｍｇ、９.５１ミリモル）／ＤＣＭ（５ｍＬ）を加え、室温で１時間攪拌した。ＬＣＭＳは生成物の形成を示した。反応溶液を濃縮し、その粗生成物をコンビフラッシュ（COMBIFLASH）（登録商標）（８０ｇ  シリカカラムを用い、２５分間にわたって０−７０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンとする）に付して精製し、７０％のフラクションから化合物５２を粘性油（収率５４％）として得た；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  δ  ７.７８（ｍ，４Ｈ）、７.３８（ｍ，４Ｈ）、５.８２（ｍ，１Ｈ）、５.２２（ｍ，２Ｈ）、４.４８（ｍ，２Ｈ）、４.１３（ｍ，４Ｈ）、３.５２（ｍ，４Ｈ）、２.４７（ｓ，６Ｈ）；ＬＣＭＳ：［Ｍ＋Ｎａ］＝５２０.１
【０２６０】
化合物５２（３９.８ｍｇ、０.０８０ミリモル）および化合物６（８０ｍｇ、０.１７６ミリモル）およびＫ２ＣＯ３（３３.２ｍｇ、０.２４０ミリモル）のＤＭＳＯ（１.５ｍＬ）中溶液を５０℃で１９時間攪拌した。ＬＣＭＳは生成物に相当する主要なピークを示した。反応混合物をＡｃＯＨを含有する水（０.０２７ｍＬ、０.４８０ミリモル、３０ｍＬ）中に注いだ。飽和ブライン（１０ｍＬ）を添加し、ＥｔＯＡｃ（３ｘ１５ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、濃縮し、ＩＳＣＯコンビフラッシュ（登録商標）（２４ｇ  カラムを用い、３０分間にわたって０−１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンとする）に付して精製した。７０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンのフラクションから化合物５３（収率６４％）を得た。ＬＣＭＳ  （ｍ＋１）＝１０６２.５
【０２６１】
化合物５３（５４ｍｇ、０.０５１ミリモル）のＴＨＦ（４ｍＬ）中溶液に、モルホリン（０.０２２ｍＬ、０.２５４ミリモル）およびＰｄ（Ｐｈ３Ｐ）４（２.９４ｍｇ、２.５４マイクロモル）を添加し、窒素雰囲気下、室温で２時間攪拌した。ＬＣＭＳは反応の完了を示した。反応混合物を濃縮し、ＩＳＣＯコンビフラッシュ（登録商標）（２４ｇ  カラムを用い、０−８％ＭｅＯＨ／ＤＣＭとする）に付して精製し、化合物５４を白色の固体（収率６４％）として得た。ＬＣＭＳ：（ｍ＋１）＝９７８.５
【０２６２】
化合物５４（３５ｍｇ、０.０３６ミリモル）のＴＨＦ（４ｍＬ）中溶液に、ＬｉＥｔ３ＢＨ（０.１７９ｍＬ、０.１７９ミリモル）を−７６℃で添加した。該溶液を１時間攪拌した。ＬＣＭＳは反応の完了を示した。反応物を冷水（２０ｍＬ）でクエンチさせ、反応混合物をＣＨＣｌ３（３ｘ１０ｍＬ）で抽出した。得られた残渣をＤＣＭ／ＥｔＯＨ／水（１：２：１＝４ｍＬ）およびシリカゲル（１ｇ）で４日間処理した。この混合物を焼結ガラス漏斗を通して濾過し、そのシリカゲルをＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ（８：２、１００ｍＬ）で洗浄した。濾液を高真空下で濃縮し、ＭｅＯＨ／ＤＣＭを用いる２４ｇ  シリカゲルカラムに付して精製した。２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭフラクションより二量体（ＩＩａ−１６）を収率６５％で得た。ＬＣＭＳ：（ｍ＋１）＝６８６.３
【０２６３】
二量体（ＩＩａ−１８）が、２−アミノ−プロパノール−１,３−ジオール５５から出発し、化合物５６、５７、５８および５９を介して進行して、同様にして調製された。
化合物５６：明黄色油、１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  δ  ５.９４（ｍ，１Ｈ）、５.５０（ｂｒｓ，１Ｈ）、５.２９（ｍ，２Ｈ）、４.６０（ｄ，Ｊ＝７.２Ｈｚ，２Ｈ）、３.８３（ｍ，５Ｈ）；ＬＣＭＳ  （ｍ＋１）＝１７６
化合物５７：白色の固体、１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  δ  ７.７８（ｍ，４Ｈ）、７.３８（ｍ，４Ｈ）、５.８８（ｍ，１Ｈ）、５.２５（ｍ，２Ｈ）、５.０２（ｂｒｓ，１Ｈ）、４.５３（ｄ，Ｊ＝５.６Ｈｚ，２Ｈ）、４.０９（ｍ，５Ｈ）、２.４８（ｓ，６Ｈ）
化合物５８：ＭＳ（ｍ＋１）＝１０４８
化合物５９：ＬＣＭＳ  （ｍ＋１）＝９６４.４６
二量体（ＩＩａ−１８）：ＬＣＭＳ  （ｍ＋１）＝６７２.３
【０２６４】
実施例１３−  （ａ）型の二量体−リンカー（ＩＩＩａ−０１）
この実施例および図１２は、（ａ）型の二量体−リンカー（ＩＩＩａ−０１）の調製を記載する。
【０２６５】
１００ｍＬの丸底フラスコに、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ６０（Firestoneら、ＵＳ６,２１４,３４５Ｂ１（２００１）、実施例５６、３６３ｍｇ、０.７３１ミリモル）、ＨＡＴＵ（２７８ｍｇ、０.７３１ミリモル）およびＤＭＦ（２０ｍＬ）を加えた。得られた溶液を０℃で１０分間攪拌し、ついで２,６−ルチジン（０.１１３ｍＬ、０.９７ミリモル）を添加した。該混合物を化合物２４ｆ（５００ｍｇ、０.４８７ミリモル）に加えた。反応混合物をゆっくりと室温への加温に供し、５時間攪拌した。ついで反応物を１０％ＬｉＣｌ溶液でクエンチさせ、ＥｔＯＡｃで抽出した（３ｘ）。有機層を合わせ、１０％ＬｉＣｌで、ついでブラインで洗浄し、その後でＮａ２ＳＯ４で乾燥させて真空下で濃縮した。その粗生成物の混合物をＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（４０ｇ  カラム、ＭｅＯＨ／ＤＣＭの１５分間における０％から１０％までの勾配）に付して精製し、化合物６１ａ（５２０ｍｇ、収率７１％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋１）＝１５０４；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.８３−７.６９（ｍ，４Ｈ）、７.５８（ｂｒｓ．，２Ｈ）、７.４５−７.１７（ｍ，１６Ｈ）、７.１５−６.９３（ｍ，１Ｈ）、５.４５（ｄ，Ｊ＝１０.１Ｈｚ，２Ｈ）、５.２４−４.９７（ｍ，７Ｈ）、４.７１（ｄ，Ｊ＝９.７Ｈｚ，５Ｈ）、４.５６−４.０２（ｍ，８Ｈ）、３.８７（ｓ，６Ｈ）、３.７９−３.４９（ｍ，８Ｈ）、３.０３（ｄ，Ｊ＝６.４Ｈｚ，３Ｈ）、１.７７（ｓ，７Ｈ）、１.０９−０.８２（ｍ，１１Ｈ）、０.１０−０.１０（ｍ，１８Ｈ）
【０２６６】
化合物６１ａ（５８０ｍｇ、０.３８５ミリモル）のＤＭＦ（７.７ｍＬ）中溶液に、ピペリジン（１９１μｌ、１.９２７ミリモル）を加えた。反応物を室温で１時間攪拌した。次に粗生成物の混合物を濃縮し、ＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（４０ｇ  カラム、ＭｅＯＨ／ＤＣＭの１５分間における０％から１０％までの勾配）に付して精製し、化合物６１ｂ（３１８ｍｇ、収率６４％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋１）＝１２８２
【０２６７】
化合物６１ｂ（２００ｍｇ、０.１５６ミリモル）のＴＨＦ（４ｍＬ）中の−７８℃溶液に、ＬｉＥｔ３ＢＨ溶液（０.７８０ｍＬ、０.７８０ミリモル）（ＴＨＦ中１Ｍ）を加えた。反応物を−７８℃で２時間攪拌した。反応物を水でクエンチさせ、クロロホルムで（２ｘ）、次にクロロホルム／ＭｅＯＨで（２ｘ）抽出した。有機抽出液を合わせ、乾燥させて濃縮した。次に残渣をクロロホルム／ＥｔＯＨ／水（１：１：１、４ｍＬ）に溶かし、シリカゲル（０.７ｇ）を加えた。得られた懸濁液を室温で３日間攪拌し、ついでセライト（登録商標）プラグを通して濾過し、クロロホルムで洗浄して濃縮させた。その材料をＤＭＦに溶かし、逆相ＨＰＬＣに付して精製し、化合物６２（５７ｍｇ、収率３６.９％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝９９０；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ７.６２−７.５０（ｍ，２Ｈ）、７.５０−７.２５（ｍ，１２Ｈ）、６.８８−６.６８（ｍ，１Ｈ）、５.３３−４.６７（ｍ，６Ｈ）、４.６６−４.２９（ｍ，３Ｈ）、４.０２−３.６９（ｍ，６Ｈ）、３.４７−２.８４（ｍ，６Ｈ）、２.４６−１.７４（ｍ，２Ｈ）、１.５９（ｂｒｓ．，４Ｈ）、１.０９−０.７４（ｍ，６Ｈ）
【０２６８】
化合物６２（２３ｍｇ、０.０２３ミリモル）および化合物６２ａ（QuantaBioからＭＡＬ−ｄＰＥＧ８−ＮＨＳ（登録商標）エステルとして入手可能；３２ｍｇ、０.０４６ミリモル）のＤＭＳＯ（１.４ｍＬ）中溶液に、２,６−ルチジン（５.４１μｌ、０.０４６ミリモル）を添加した。反応物を室温で２時間攪拌した。粗生成物の混合物を濾過し、逆相ＨＰＬＣ（カラム：ルナ  Ｃ１８  ２０ｘ１００ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０  アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０  アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；勾配：１７分間にわたって２０−７０％Ｂとし；流速：２０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍでのＵＶ）に付して精製した。生成物を含有するフラクションをＰＬ−ＨＣＯ３  ＭＰ  ５００ｍｇカートリッジ（Agilent）に通した。濾液を重力で集め、カラムを４ｍＬのＡＣＮで洗浄した。濾液を集め、濃縮して凍結乾燥させ、二量体−リンカー（ＩＩＩａ−０１）（３ｍｇ、収率３５.８％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋１）＝１５６４
【０２６９】
実施例１４−  （ａ）型二量体−リンカー（ＩＩＩａ−０２）
この実施例および図１３は、（ａ）型二量体−リンカー（ＩＩＩａ−０２）の調製を記載する。
【０２７０】
カルボナート６３（３.９２ｍｇ、３.５０マイクロモル、下記の調製物）および二量体（ＩＩａ−１６）（２ｍｇ、２.９２マイクロモル）のＤＭＳＯ（０.２ｍＬ）中溶液に、ＤＩＥＡ（１.５２８μＬ、８.７５マイクロモル）を添加した。反応混合物を室温で一夜攪拌した。Ｒ−ＨＰＬＣに付し、アセトニトリル／水（０.０５％ギ酸）を用いて３０分間にわたって精製し、生成物を含有するフラクションを得、それを塩基性樹脂（ＰＬ−ＨＣＯ３  ＭＰ−樹脂  １.８ミリモル／ｇ；Agilent Part番号ＰＬ３５４０−Ｃ６０３）を通して濾過し、アセトニトリル（５ｍＬ）で洗浄した。凍結乾燥に付し、二量体−リンカー（ＩＩＩａ−０２）を白色の固体として収率５２％で得た。ＬＣＭＳ  （ｍ＋１）＝１６６６
【０２７１】
当業者であれば、この実施例および上記の実施例の（ａ）型の二量体−リンカー化合物を製造する操作が、変更すべきところは変更して、別の（ａ）型の二量体−リンカー化合物を製造するのに適用され得ることを認識するであろう。
【０２７２】
実施例１５−  （ｂ）型の二量体−リンカー化合物
この実施例および図１４−１６は、（ｂ）型の二量体−リンカー化合物の合成に使用される、化合物７３および７４の調製、ならびにそれらの化合物から由来のかかる二量体−リンカー化合物の調製に関する。
【０２７３】
フラスコに、５−メトキシ−２−ニトロ−４−（（トリイソプロピルシリル）オキシ）安息香酸６４（ＣＡＳ  Ｒｅｇ  Ｎｏ．１４３０７３８−０３−６、９.０ｇ、２４.３６ミリモル）およびＨＡＴＵ（１０.１９ｇ、２６.８ミリモル）／ＤＣＭ（１００ｍＬ）を０℃で充填した。反応混合物を１０分間攪拌し、ＤＩＥＡ（４.６８ｍＬ、２６.８ミリモル）およびイソキノリン６５（ＣＡＳ  Ｒｅｇ  Ｎｏ．２１５９２８−８１−７、７.４３ｇ、２６.８ミリモル）で処理した。反応物を０℃で３時間維持し、次に室温で２４時間攪拌した。反応混合物を飽和ＮＨ４ＣｌおよびＤＣＭに注いだ。有機相を集め、濃縮して残留物とした。その残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ（Biotage））に付し、ヘキサン中１０％−３０％ＥｔＯＡｃで溶出してさらに精製した。生成物を集め、濃縮してアミド６６を明黄褐色の油（１０.１５ｇ、収率６６％）として得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝６２９.６５
【０２７４】
アミド６６（１０.１ｇ、１６.０６ミリモル）のＭｅＯＨ（２００ｍＬ）中溶液を０℃に冷却し、ＮＨ４Ｃｌ（４.２９ｇ、８０ミリモル）および亜鉛粉（５.２５ｇ、８０ミリモル）を加えた。得られた緑色懸濁液を０℃で４５分間攪拌し、次に室温までの加温に一夜供した。反応混合物をセライト（登録商標）パッドを通して（ＭｅＯＨで洗浄しながら）濾過し、濾液を濃縮して残留物とした。その残留物をＤＣＭに溶かし、シリカゲルパッドに負荷した。これを５０％ＥｔＯＡｃおよびヘキサンで流し、アニリン６７（８.０２ｇ、収率８３％）を得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝５９９.３５
【０２７５】
アニリン６７（２５００ｍｇ、４.１７ミリモル）をＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶かし、ピリジン（０.８７８ｍＬ、１０.８５ミリモル）を添加した。その混合物を−７８℃に冷却し、クロロギ酸アリル１２ａ（０.５７９ｍＬ、５.４３ミリモル）を加えた。反応混合物をこの温度で１時間維持し、次に室温までの加温に供した。反応混合物を飽和ＮＨ４ＣｌおよびＤＣＭに注いだ。該混合物をＤＣＭで抽出し、シリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、ヘキサン中１０％−５０％ＥｔＯＡｃで溶出してカルバマート６８（２.５ｇ、収率８８％）を得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝６８３.４０
【０２７６】
カルバマート６８（１.３７２ｇ、２.００９ミリモル）をＭｅＯＨ（２０ｍＬ）に溶かした。ＭｅＯＨ中１０％濃度のＨＣｌ（２ｍＬ、６.５８ミリモル）を添加した。混合物を２０分間放置し、ＮａＨＣＯ３（０.５９１ｇ、７.０３ミリモル）／水でクエンチさせた。該混合物を水で希釈し、ＤＣＭで４回抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。シリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、１０−５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、アルコール６９（９６３ｍｇ、収率８４％）を得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝５６９.２５
【０２７７】
塩化オキサリル（２.０Ｍ、１.４５０ｍＬ、２.９０ミリモル）をＤＣＭ（３０ｍＬ）に溶かし、次に該混合物をドライアイス／アセトン浴にて−７８℃に冷却した。これにＤＭＳＯ（０.５１５ｍＬ、７.２５ミリモル、約２ｍＬのＤＣＭに溶かし、添加の間に凍結することを防止した）を加え、温度を−７８℃に維持した。２０分後、ＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かしたアルコール６９（１.６５ｇ、２.９０ミリモル）を該反応物に添加した。これによりさらに３０分間攪拌させ、つづいてＮＥｔ３（２.０２２ｍＬ、１４.５０ミリモル）を添加した。１０分後、反応物を室温までの加温に供した。これを飽和ＮＨ４Ｃｌでクエンチさせ、ＤＣＭ（２ｘ）で抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、残留物となるまで濃縮させた。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、ヘキサン中３０％−１００％ＥｔＯＡｃで溶出して精製した。生成物を集め、濃縮してアミナール７０を白色の固体（１.５１ｇ、収率９２％）として得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝５６７.３０；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）  δ  ７.３９−７.２４（ｍ，５Ｈ）、７.２２（ｓ，１Ｈ）、６.６７（ｓ，１Ｈ）、５.７５（ｄｄ，Ｊ＝１１.２、５.６Ｈｚ，１Ｈ）、５.３１（ｄｄ，Ｊ＝９.５、４.０Ｈｚ，１Ｈ）、５.２２−５.０７（ｍ，２Ｈ）、４.８４（ｄ，Ｊ＝１５.８Ｈｚ，１Ｈ）、４.６４−４.４９（ｍ，２Ｈ）、４.４４（ｄ，Ｊ＝５.３Ｈｚ，１Ｈ）、３.８７（ｓ，３Ｈ）、３.７７−３.６１（ｍ，１Ｈ）、３.２８−３.０１（ｍ，３Ｈ）、１.３４−１.１８（ｍ，３Ｈ）、１.０９（ｄｄ，Ｊ＝７.４、２.６Ｈｚ，１８Ｈ）
【０２７８】
アミナール７０（７７６ｍｇ、１.３６９ミリモル）をＤＣＭ（１２ｍＬ）に溶かし、２,６−ルチジン（０.６３８ｍＬ、５.４８ミリモル）を添加した。該混合物を氷浴中で冷却し、tert−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホナート（ＴＢＳＯＴｆ、０.９４３ｍＬ、４.１１ミリモル）を添加した。該混合物を３０分間放置し、ＤＣＭで希釈し、ＮａＨＣＯ３飽和溶液でクエンチさせ、ＤＣＭで２回抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させた。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、１０−３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、シリルエーテル７１（９０７.６ｍｇ、１.３３３ミリモル、収率９７％）を得た。１Ｈ−ＮＭＲは精製された材料が約０.２５当量の２,６−ルチジン（約４重量％）で汚染されていることを示したが、何らさらに精製することなく用いた。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝６８１.２５
【０２７９】
シリルエーテル７１（９０７ｍｇ、１.３３２ミリモル）をＤＭＦ（５ｍＬ）および水（０.１ｍＬ）に溶かした。酢酸リチウム（８８ｍｇ、１.３３２ミリモル）を加え、該混合物を一夜放置した。ＤＭＦの大部分を窒素流の下で蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃで希釈し、０.１Ｍクエン酸で２回、次にブラインで１回洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させた。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、３０−７０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、１Ｈ−ＮＭＲによればＥｔＯＡｃをいくらか（約１.３当量；ＥｔＯＡｃの割合を説明するのに収率を調整）含有するフェノール７２（７０７.４ｍｇ、１.１０７ミリモル、収率８３％）を得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝５２５.１０
【０２８０】
フェノール７２（２９０ｍｇ、０.５５３ミリモル）はアセトン（２８００μｌ）に溶かし、炭酸セシウム（１８０ｍｇ、０.５５３ミリモル） および１,５−ジヨードペンタン（４００μＬ、２.６９ミリモル）を添加した。バイアルを密封し、６０℃で一夜加熱した。反応を一夜進行させた後、溶媒を蒸発させ、残渣をＥｔＯＡｃと水の間に分配した。混合物を２回抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて粗残渣を得、それをシリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、１０−５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物７３（３８１ｍｇ、収率９６％）を得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝７２１.１０
【０２８１】
化合物７４はフェノール７２より１,３−ジヨードプロパンを用いて同様にして調製された。
【０２８２】
次に図１５のスキームを検討した場合：化合物６７（２.１ｇ、３.５１ミリモル）をＤＣＭ（３０ｍＬ）に溶かし、ピリジン（０.３ｍＬ、３.７１ミリモル）を添加した。混合物を０℃に冷却した。４−ニトロフェニルカルボノクロリダート６７ａ（０.７０７ｇ、３.５１ミリモル）を添加し、その混合物をこの同じ温度で７分間放置した。化合物７５（ＣＡＳ  Ｒｅｇ．Ｎｏ．１３４３４０７−９１−９、１.３２３ｇ、３.５１ミリモル）およびＤＩＥＡ（０.７５０ｍＬ、４.２９ミリモル）のＤＭＦ（３ｍＬ）中溶液を添加した。該混合物を室温にてロータリーエバポレーターに入れ、ＤＣＭを除去した。２０分後、ＤＭＦを窒素流の下で蒸発させ、次に残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、ヘキサン中１０−１００％ＥｔＯＡｃで溶出して化合物７６（１.５７９ｇ、１.５７５ミリモル、収率４４.９％）を得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝１００２.５０
【０２８３】
化合物７６（１.５７９ｇ、１.５７５ミリモル）のＭｅＯＨ（１４.４ｍＬ）中溶液をＭｅＯＨ中１０％濃度のＨＣｌ（１.６ｍＬ、５.２７ミリモル）で処理した。混合物を３０分間放置し、飽和ＮａＨＣＯ３でクエンチさせ、クロロホルムで抽出した（３ｘ）。有機相を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて残渣を得た。その残渣を、精製のために、同じ反応の（０.８１６ｇの化合物７６で出発する）もう一つ別のバッチと合わせた。粗残渣を合わせ、シリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、２０−１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、カルバマート７７（１.７４１２ｇ、１.９６１ミリモル、収率８２％）を得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝８８８.３０
【０２８４】
塩化オキサリル（２.０Ｍ、１.００ｍＬ、２.０００ミリモル）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液を−７８℃に冷却した。ＤＭＳＯ（０.３４８ｍＬ、４.９０ミリモル）のＤＣＭ（５ｍＬ）中溶液を滴下して加え、その混合物をこの同じ温度で１０分間放置した。カルバマート７７（１７４１.２ｍｇ、１.９６１ミリモル）のＤＣＭ（５ｍＬ）中溶液を滴下して加え、該混合物を再び１５分間放置した。ＮＥｔ３（１.３６６ｍＬ、９.８０ミリモル）を滴下して加え；該混合物をこの同じ温度で５分間放置し、次に冷却浴を取り外し、混合物を室温にまで加温させた。該混合物をＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチさせ、ＤＣＭで２回抽出した。有機相を合わせ、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して蒸発させた。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、５０−８０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物７８（１３７６.７ｍｇ、１.５５４ミリモル、収率７９％）を得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝８８６.３０
【０２８５】
化合物７８（１０４５ｍｇ、１.１７９ミリモル）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かし、２,６−ルチジン（０.５４９ｍＬ、４.７２ミリモル）を加えた。混合物を氷浴で冷却し、ＴＢＳＯＴｆ（０.８１３ｍＬ、３.５４ミリモル）を添加した。１時間後、該混合物をＤＣＭで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して蒸発させた。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、２０−１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製した。いくらか混合したフラクションを得、それをシリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（定組成）で溶出して再び精製した。純粋なフラクションを合わせ、化合物７９（６７６.９ｍｇ、０.６７７ミリモル、収率５７.４％）を得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝１０００.３０
【０２８６】
化合物７９（６７６ｍｇ、０.６７６ミリモル）のＤＭＦ（５ｍＬ）および水（０.１ｍＬ）中溶液を酢酸リチウム（４４.６ｍｇ、０.６７６ミリモル）で処理した。該混合物を一夜放置し、溶媒を窒素流の下で蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃと０.１Ｍクエン酸の間に分配した。相を分離し、有機相を０.１Ｍクエン酸で２回、ブラインで１回洗浄し、次にＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して蒸発させた。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、５０−１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物８０（５４３.６ｍｇ、０.６４４ミリモル、収率９５％）を得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝８４４.３５
【０２８７】
次に図１６を検討した場合、それは上記に製造した中間化合物７３および８０を用いて二量体−リンカー（ＩＩＩｂ−０１）を製造する、スキームを示す。
【０２８８】
化合物７３（３２６ｍｇ、０.４５２ミリモル）および化合物８０（３１８ｍｇ、０.３７７ミリモル）のアセトン（１８８４μｌ）中溶液を炭酸セシウム（１２３ｍｇ、０.３７７ミリモル）で処理する。該混合物を含有するバイアルを密封し、６０℃での加温に供した。反応を一夜進行させた後、反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、０.１Ｍクエン酸およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、残留物となるまで蒸発させた。その残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、５０−８０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製した。この操作により接近して溶出する不純物で汚染された化合物８１（３３８ｍｇ、０.２３５ミリモル、収率６２.４％）を得た。該混合物をさらに精製することなく次の工程に適用した（収率は純度に対して補正されていない）。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝１４３６.６５；ＨＲＭＳ：測定値  Ｍ＋Ｈ＝１４３６.６８８１、計算値＝１４３６.６９１６：ＨＲＭＳ（接近して溶出する不純物）  Ｍ＋Ｈ＝１３７８.６４８５
【０２８９】
化合物８１（１０７ｍｇ、０.０７４ミリモル、上記工程からの混ざった化合物）のＴＨＦ（２ｍＬ）中溶液に、フッ化テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡＦ、１.０Ｍ、０.１６ｍＬ、０.１６０ミリモル）を添加した。その混合物を１０分間放置し、ＥｔＯＡｃで希釈し、水、飽和ＮａＨＣＯ３およびブラインで連続して洗浄し、次にＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。その粗残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、１−１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出して精製し、接近して溶出する不純物で汚染された化合物８２（７１ｍｇ、０.０５９ミリモル、収率７９％）を得た（収率は純度に対して補正されていない）。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｎａ＝１２３０.２５；ＨＲＭＳ：測定値  Ｍ＋Ｈ＝１２０８.５１７０、計算値＝１２０８.５１８７；ＨＲＭＳ（接近して溶出する不純物）  Ｍ＋Ｈ＝１１５０.４７５５
【０２９０】
バイアルに化合物８２（７１ｍｇ、０.０５９ミリモル、上記工程からの不純物）を充填し、ピロリジンのＤＣＭ中０.０４２Ｍ溶液（３.５０ｍＬ、０.１４７ミリモル）を、つづいてパラジウムテトラキストリフェニルホスフィン（４.０７ｍｇ、３.５３マイクロモル）を添加した。その混合物を１時間放置し、ＤＣＭで希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌで洗浄した。その水性部分をＤＣＭで再抽出し、有機相を合わせ、ブラインで洗浄し、そのブライン層を再びＤＣＭで再抽出し、有機相を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して蒸発させた。残渣をＤＭＦに溶かし、プレパラティブＨＰＬＣ（３回注入）（サンファイア  Ｃ１８  プレパラティブＯＢＤカラム  １９ｘ１００ｍｍ、溶媒Ａ＝９５％水、５％ＡＣＮ＋０.１％ＴＦＡ、溶媒Ｂ＝５５％水、９５％ＡＣＮ＋０.１％ＴＦＡ；勾配は１０分間にわたって０−１００％Ｂとし、１２分間保持し、２５４ｎｍのＵＶにおけるフラクションを集めた）に付して精製した。その精製したフラクションをＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ  ＳＰＥ  ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジに通し、生成物を遊離塩基として得た。遊離塩基の溶液を蒸発させて化合物８３（３０ｍｇ、０.０２９ミリモル、収率４９.９％）を得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝１０２２.２５
【０２９１】
バイアルに化合物８３（１８.１０ｍｇ、０.０５９ミリモル）を、つづいてＤＭＦ中０.０５Ｍ  ＤＩＥＡ（０.８ｍＬ、０.０４０ミリモル）を添加した。混合物を一夜放置し、次にＤＭＦ（約０.４ｍＬ）で希釈し、プレパラティブＨＰＬＣ（１回注入）（サンファイアＣ１８プレパラティブＯＢＤカラム  １９ｘ１００ｍｍ、溶媒Ａ＝９５％水、５％ＡＣＮ＋０.１％ＴＦＡ、溶媒Ｂ＝５５％水、９５％ＡＣＮ＋０.１％ＴＦＡ；勾配は１０分間にわたって０−１００％Ｂとし、１２分間保持し、２５４ｎｍのＵＶでフラクションを集めた）に付して精製した。その精製したフラクションをＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ  ＳＰＥ  ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジに通し、二量体−リンカー（ＩＩＩｂ−０１）（１９.６ｍｇ、０.０１５ミリモル、収率５２.２％）を遊離塩基として得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝１２１６；ＨＲＭＳ  測定値：Ｍ＋Ｈ＝１２１５.５３８７、計算値＝１２１５.５３９７
【０２９２】
上記の操作と同様にして、さらなる二量体−リンカー化合物を調製した：
（ａ）化合物７４および８０を用いて二量体−リンカー（ＩＩＩｂ−０３）を調製した：ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝１１８７.２０；ＨＲＭＳ  測定値：Ｍ＋Ｈ＝１１８７.５０８７、計算値＝１１８７.５０８４
（ｂ）二量体−リンカー（ＩＩＩｂ−０１）および（ＩＩＩｂ−０３）をシアノ水素化ホウ素ナトリウムを用いて還元し、各々、二量体−リンカー（ＩＩＩｂ−０５）（ＬＣＭＳ  （Ｍ＋２Ｈ）／２＝６０９.５５；ＨＲＭＳ  測定値：Ｍ＋Ｈ＝１２１７.５５６１、計算値＝１２１７.５５５４）および（ＩＩＩｂ−０６）（ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝１１８９；ＨＲＭＳ  測定値：Ｍ＋Ｈ＝１１８９.５２６８、計算値＝１１８９.５２４１）を得た。
（ｃ）化合物８３を化合物６２ａとカップリングさせることで二量体−リンカー（ＩＩＩｂ−０２）に変換した：ＬＣＭＳ  （Ｍ＋２Ｈ）／２＝７９９.２５；ＨＲＭＳ  測定値：Ｍ＋Ｈ＝１５９６.７３９０、計算値＝１５９６.７３９６
（ｄ）化合物８１をパラジウムテトラキストリフェニルホスフィンで還元し、化合物８４とカップリングさせることで二量体−リンカー（ＩＩＩｂ−０４）に変換した：ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝１３２９；ＨＲＭＳ  測定値：Ｍ＋Ｈ＝１３２９.６２４７、計算値＝１３２９.６２６２
【０２９３】
当業者であれば、（ｂ）型のＴＨＩＱ−ＰＢＤ二量体−リンカー化合物が化合物７３または７４のＰＢＤ均等物あるいは化合物８０を用い、あるいはまた同様に上記の操作に従って製造され得ることを理解するであろう。
【０２９４】
実施例１６−  （ｃ）型の二量体−リンカー
化合物３９（実施例１０）よりアシルオキシカルボニル基を除去することにより調製された化合物８５を、上記の操作と同様にして、化合物６０とカップリングさせ、化合物８６に変換した。
【化１０４】
0006498773.tif 000108
【０２９５】
化合物８６（９.６ｍｇ、１０.０４マイクロモル）および２,６−ジメチルピリジン（２.１５２ｍｇ、０.０２０ミリモル）のＤＭＳＯ（０.７ｍＬ）中溶液に、ＭＡＬ−ｄＰＥＧ（登録商標）８−ＮＨＳエステル（１３.８５ｍｇ、０.０２０ミリモル）のＤＭＳＯ（１００μＬ）中溶液を添加した。反応物を室温で１時間攪拌した。次に該溶液をアセトニトリルで希釈し、濾過し、逆相ＨＰＬＣ（カラム：ルナ  Ｃ１８  ２０ｘ１００ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０  アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０  アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：１５分間にわたって０−７０％Ｂとし；流速：２０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍでのＵＶ）に付して精製した。生成物を含有するフラクションをＰＬ−ＨＣＯ３  ＭＰの５００ｍｇカートリッジ（Agilent）に通した。濾液を重力作用により集め、そのカラムを４ｍＬのＡＣＮで洗浄した。濾液を合わせ、濃縮し、凍結乾燥させて二量体−リンカー（ＩＩＩｃ−０１）（９.４ｍｇ、５.５３マイクロモル、収率５５.０％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝１５３０
【０２９６】
化合物８７（ＬＣＭＳ（Ｍ＋２Ｈ）＝４３５.９）は、変更すべきところは変更して、上記の操作と同様にして、化合物８５より調製された。
【化１０５】
0006498773.tif 000109
【０２９７】
化合物８７（５ｍｇ、５.７５マイクロモル）および２,５−ジオキソピロリジン−１−イル  ６−（２,５−ジオキソ−２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノアート（１.９４９ｍｇ、６.３２マイクロモル）のＤＭＳＯ（０.２ｍＬ）中溶液に、２,６−ルチジン（１.３３９μｌ、０.０１１ミリモル）を添加した。反応物を室温で４時間攪拌した。次に反応物をＤＭＦ（１ｍＬ）で希釈し、濾過し、逆相ＨＰＬＣ（カラム：ルナＣ１８  ２０ｘ１００ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０  アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０  アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：１５分間にわたって２０−８０％Ｂとする；流速：２０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍでのＵＶ）に付して精製した。生成物を含有するフラクションをＰＬ−ＨＣＯ３  ＭＰ  ５００ｍｇカートリッジ（Agilent）に通した。濾液を重力作用により集め、そのカラムを４ｍＬのアセトニトリルで洗浄した。濾液を合わせ、濃縮し、凍結乾燥させて二量体−リンカー（ＩＩＩｃ−０７）（１.８ｍｇ、１.５２４マイクロモル、収率２６.５％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝１０６３.４
【０２９８】
化合物８８は、上記の操作と同様にして、化合物４９より調製された。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝８８４.７
【化１０６】
0006498773.tif 000110
【０２９９】
化合物８４（１２.０３ｍｇ、０.０３９ミリモル）および化合物８８（２３ｍｇ、０.０２６ミリモル）のＤＭＳＯ（０.２ｍＬ）中溶液に、２,６−ルチジン（６.０６μｌ、０.０５２ミリモル）を添加した。反応物を室温で５時間攪拌し、次にＤＣＭで希釈し、ＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィー（０−１５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、１２ｇ  カラム）を用いて精製した。次に所望の生成物を含有するフラクションを濃縮し、淡黄色の泡沫体を得、それをＨ２Ｏ／ＴＨＦ（２：１、４ｍＬ）に溶かし、凍結乾燥させて二量体−リンカー（ＩＩＩｃ−０８）（９.５ｍｇ、７.９４マイクロモル、収率３０.５％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝１０７７.８
【０３００】
実施例１７−  リンカー中に自己犠牲基を有する（ｃ）型の二量体−リンカー
この実施例は、二量体−リンカー化合物の調製であって、リンカーが二量体−リンカー（ＩＩＩｃ−０２）などのＰＡＢＣ自己犠牲基を有する、化合物の調製を説明する。そのリンカー部分は下記に示されるように構成される：
【化１０７】
0006498773.tif 000111
【０３０１】
化合物８９（Firestoneら、ＵＳ６,１２４,３４５Ｂ１（２００１）、実施例５７；０.７５ｇ、１.２４６ミリモル）のＤＭＦ（２ｍＬ）およびＴＨＦ（８ｍＬ）中溶液に、ジエチルアミン（２.８１ｍＬ、２６.９ミリモル）を添加した。反応物をを室温で１.５時間攪拌し、濃縮した。粗生成物をＤＣＭでトリチュレートし、濾過し、真空下で乾燥させ、化合物９０を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝３８０.２；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  １０.０６（ｓ，１Ｈ）、８.１５（ｄ，Ｊ＝７.３Ｈｚ，１Ｈ）、７.５６（ｄ，Ｊ＝８.５Ｈｚ，２Ｈ）、７.２６（ｄ，Ｊ＝８.３Ｈｚ，２Ｈ）、６.００（ｔ，Ｊ＝５.４Ｈｚ，１Ｈ）、５.４３（ｓ，２Ｈ）、５.１３（ｔ，Ｊ＝５.３Ｈｚ，１Ｈ）、４.５６−４.３３（ｍ，３Ｈ）、３.０７−２.９３（ｍ，３Ｈ）、２.００−１.５５（ｍ，５Ｈ）、１.４９−１.３２（ｍ，２Ｈ）、０.９０（ｄ，Ｊ＝６.８Ｈｚ，３Ｈ）、０.８０（ｄ，Ｊ＝６.８Ｈｚ，３Ｈ）
【０３０２】
化合物９０（７９ｍｇ、０.２０９ミリモル）のＤＭＳＯ（２ｍＬ）中溶液に、ＭＡＬ−ｄＰＥＧ（登録商標）８−ＮＨＳエステル（１２０ｍｇ、０.１７４ミリモル）のＤＭＳＯ（１ｍＬ）中溶液を、つづいて２,６−ルチジン（３７.３ｍｇ、０.３４８ミリモル）を添加した。反応物を室温で３時間攪拌した。ビス（４−ニトロフェニル）カルバナート（６３.５ｍｇ、０.２０９ミリモル）のＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液を、つづいて２,６−ルチジン（３７.３ｍｇ、０.３４８ミリモル）を添加した。次に反応物を室温で１２時間攪拌した。次にＤＩＰＥＡ（０.０６１ｍＬ、０.３４８ミリモル）を添加し、反応物を室温で３時間攪拌した。粗生成物の混合物をＤＭＦで希釈し、濾過し、逆相ＨＰＬＣ（カラム：フェノメネックス・ルナ  Ｃ１８  ２０ｘ１００ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０  アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０  アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：１５分間にわたって０−７０％Ｂとする；流速：２０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍでのＵＶ）に付して精製し、化合物６３（４０ｍｇ、０.０３６ミリモル、収率２０.５４％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝１１１９.５
【０３０３】
化合物（ＩＩａ−１０）（３.５ｍｇ、５.００マイクロモル）に、化合物９１（５.６０ｍｇ、５.００マイクロモル）のＤＭＳＯ（０.１６ｍＬ）中溶液を、つづいてＤＩＰＥＡ（２.６２μＬ、０.０１５ミリモル）およびＨＯＡｔ（０.６ｍｇ、５.００マイクロモル）を添加した。反応物を室温で２４時間攪拌し、ＤＭＦで希釈し、濾過し、逆相ＨＰＬＣ（カラム：フェノメネックス・ルナ  Ｃ１８  ２０ｘ１００ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０  アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０  アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：１５分間にわたって２０−８０％Ｂとする；流速：２０ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍでのＵＶ）に付して精製し、二量体−リンカー（ＩＩＩｃ−０２）（２.１ｍｇ、１.１８８マイクロモル、収率２３.７４％）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝１６７９.６
【０３０４】
上記の同様の操作に従って、自己犠牲基を有する、さらなる二量体−リンカー化合物を調製した：
（ＩＩＩｃ−０３）：  ＬＣＭＳ  （Ｍ＋２Ｈ）／２＝８７６.１
（ＩＩＩｃ−０４）：  ＬＣＭＳ  （Ｍ＋２Ｈ）／２＝７９０.５
（ＩＩＩｃ−０５）：  ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝１６５０.９
（ＩＩＩｃ−０６）：  ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝１５９３.９
【０３０５】
当業者であれば、他の（ｃ）型の二量体−リンカー化合物、あるいはまたＰＡＢＣ自己犠牲基または他の基を有する二量体−リンカー化合物が、変更すべきところは変更して、同様に調製され得ることを認識するであろう。
【０３０６】
実施例１８−  ＴＨＩＱ−ＡＺＩ二量体
この実施例および図１７はＴＨＩＱ−ＡＺＩ二量体、特に二量体（ＩＩｃ−０１）の調製に関する。
【０３０７】
パール（Parr）瓶に化合物９０ａ（ＣＡＳ  Ｒｅｇ．Ｎｏ．１２１００４５−５０−３、３.０ｇ、８.２７ミリモル）と、エタノール（６０ｍＬ）および酢酸（１０ｍＬ）に懸濁させた水酸化パラジウム／炭素（２０％、５０重量％；１.０ｇ、０.７１２ミリモル）を充填した。これをパール装置に入れ、５５ｐｓｉの水素を充填した。一夜震盪した後、反応混合物をセライト（登録商標）を通して濾過し、濾液を濃縮して残留物を得た。残渣をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、ヘキサン中２０％−５０％ＥｔＯＡｃで溶出してラセミ生成物（２.４９ｇ、収率８３％）を透明な油として得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝３６５.５５；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ８.４４−８.１６（ｍ，２Ｈ）、７.７９−７.４２（ｍ，１Ｈ）、４.４８（ｂｒｓ．，１Ｈ）、３.７４（ｄ，Ｊ＝６.５Ｈｚ，２Ｈ）、３.３６−３.１８（ｍ，１Ｈ）、３.１８−３.００（ｍ，１Ｈ）、１.６５−１.４９（ｍ，９Ｈ）、０.７５（ｓ，９Ｈ）、０.１１−０.２３（ｍ，６Ｈ）。このラセミ体をキラルＳＦＣクロマトグラフィー（ラックス・セルロース（Lux Cellulose）−２  ２１.２ｘ２５０ｍｍ、５μＭカラム、１４０バールおよび３５℃でＣＯ２中３０％アセトニトリルを用いて溶出）に付してさらに精製し、２本のピークを得た。溶出した第２のピーク（（−）異性体）を集め、アザインドリン９１を無色の油（１.０１g、全収率３４％）として得た。
【０３０８】
バイアルにアザインドリン９１（８５０ｍｇ、２.３３２ミリモル）／ＭｅＯＨ（４ｍＬ）を充填した。これに、ジオキサン中４Ｍ  ＨＣｌ（８.５ｍＬ、３４.０ミリモル）を加えた。反応物を室温で一夜攪拌した。反応混合物を残留物となるまで濃縮し、次にＭｅＯＨおよびエーテルに溶かした。これを再び濃縮し（２ｘ）、脱保護された残渣を得た。この残渣をアセトニトリル（１ｍＬ）と一緒にフラスコに充填した。これに、tert−ブチルジメチルシリルクロリド（ＴＢＳ−Ｃｌ、４４６ｍｇ、２.９６ミリモル）およびイミダゾール（６７１ｍｇ、９.８６ミリモル）を添加し、反応物を室温で２時間攪拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌで洗浄した。有機相を２回洗浄し、次に残留物となるまで濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、クロロホルム中５％（１０％ＮＨ４ＯＨ／ＭｅＯＨ）で溶出して精製した。生成物を集め、濃縮して化合物９２を透明な油として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）  ｄ  ８.００−７.８４（ｍ，２Ｈ）、６.７７（ｂｒｓ．，１Ｈ）、６.４０（ｄ，Ｊ＝５.８Ｈｚ，１Ｈ）、３.９５（ｄｄ，Ｊ＝９.９、５.１Ｈｚ，１Ｈ）、３.５４（ｄ，Ｊ＝５.８Ｈｚ，２Ｈ）、３.０５（ｄｄ，Ｊ＝１６.２、９.９Ｈｚ，１Ｈ）、２.７７−２.５９（ｍ，１Ｈ）、０.８３（ｓ，９Ｈ）、０.０３（ｄ，Ｊ＝７.５Ｈｚ，６Ｈ）
【０３０９】
バイアルに化合物９３（ＣＡＳ  Ｒｅｇ．  Ｎｏ．３１３６４４−４１−６、４２０ｍｇ、０.８６３ミリモル）／ＤＭＦ（５ｍＬ）を充填した。これに、ＨＡＴＵ（８２１ｍｇ、２.１５９ミリモル）を添加した。３０分間放置した後、化合物６５（２５２ｍｇ、０.９０７ミリモル）および化合物９２（２４０ｍｇ、０.９０７ミリモル）ならびにＤＩＰＥＡ（０.７５４ｍＬ、４.３２ミリモル）のＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液を添加した。さらに１時間放置した後、その混合物を約１００ｍＬの水を含有するフラスコに移し、該混合物を１Ｎ  ＨＣｌで酸性にした。得られた固体を濾過で集め、水で洗浄した。その湿った固体を集め、ＤＣＭに溶かし、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して蒸発させた。粗残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、０−１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出して精製し、３種の生成物を得た。中間で溶出するピークはヘテロ二量体のアミド９４（３５３.１ｍｇ、０.３５６ミリモル、収率４１.２％）であった。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝９９２.３０
【０３１０】
アミド９４（２００ｍｇ、０.２０２ミリモル）をＴＨＦ（２ｍＬ）に溶かした。これに水（２００μｌ、１１.１０ミリモル）およびＰ（Ｍｅ）３（６０５μＬ、０.６０５ミリモル）を添加した。約３０分間放置した後、溶媒を蒸発させ、試料をトルエンとの共沸蒸留に付した。残渣をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かした。ピリジン（０.０８ｍＬ、１.００ミリモル）を加え、その混合物を−７８℃に冷却した。クロロギ酸アリル１２ａ（６４.５μＬ、０.６０５ミリモル）を加え、その混合物をその同じ温度で３０分間攪拌し、次に室温までの加温に供した。混合物をＮＨ４Ｃｌでクエンチさせ、ＤＣＭで２回抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して蒸発させた。残渣を再び７：１：１：２  ＡｃＯＨ／ＴＨＦ／ＭｅＯＨ／水（合計３ｍＬ）に溶かし、一夜攪拌した。脱保護はなかなか進まないため、一夜攪拌した後、０.５ｍｌのＭｅＯＨ中１０％ＨＣｌを加え、さらに３０分間経過した後に完全な脱保護が得られた。反応混合物を注意して飽和ＮａＨＣＯ３に移し、それを中和した。該混合物をＤＣＭで３回抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して蒸発させた。粗残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（バイオタージ）に付し、クロロホルム中３−６％（１０％ＮＨ４ＯＨ／ＭｅＯＨ）で溶出して精製した。主要なピークを集め、化合物９５（９５.７ｍｇ、０.１０９ミリモル、収率５４.０％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝８８０.１５
【０３１１】
フラスコにＤＭＳＯ（０.０１８ｍＬ、０.２５６ミリモル）／ＤＣＭ（０.５ｍＬ）を充填し、−７８℃に冷却した。塩化オキサリル（０.０６１ｍＬ、０.１２３ミリモル）を滴下して加えた。その反応混合物をこの同じ温度で１０分間放置し、その時点で化合物９５（４５ｍｇ、０.０５１ミリモル）のＤＣＭ（０.５ｍＬ）を滴下して加えた。３０分間再び放置した後、トリエチルアミン（０.０７１ｍＬ、０.５１１ミリモル）を滴下して加えた。−７８℃で３０分間攪拌した後、冷却浴を取り外し、反応混合物を外界温度までの加温に供した。混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌでクエンチさせ、ＤＣＭで３回抽出した。抽出液をＮＨ４Ｃｌで３回、ブラインで１回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。その粗残渣をＤＣＭ（３ｍＬ）およびピロリジン（０.０１７ｍＬ、０.２０１ミリモル）に溶かし、パラジウムテトラキストリフェニルホスフィン（２.９０ｍｇ、２.５１マイクロモル）を加えた。該混合物を１時間放置し、ＮＨ４Ｃｌで、ついでブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて残留物を得た。該残渣をプレパラティブＨＰＬＣ（サンファイア（sunfire）ＡＣＮ／水＋０.１％ＴＦＡ）に付し、操作を行う前にチューブにあるＮａＨＣＯ３溶液を用いて精製し、その試料を直ちに中和した。主要なピークを集め、過剰量の溶媒を蒸発させ、ついでＤＣＭで抽出することにより予想される生成物を得た。その生成物をバイオタージに付し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ３−６％段階的勾配（各段階で１％ずつ増加）で再び精製した。主要なピークを集め、クロロホルムと何回も共沸蒸留に付し、メタノールを除去し、ＴＨＩＱ−ＡＺＩ二量体（ＩＩｃ−０１）（７ｍｇ、８.３４マイクロモル、収率１６.６０％）を得た。ＬＣＭＳ  （Ｍ＋Ｈ）＝６７２.１５
【０３１２】
実施例１９−  二量体−リンカー（ＩＩＩａ−０３）
化合物９６（Senterら、2010；１０ｍｇ、０.０１４ミリモル）および二量体ＩＩａ−１６（１３.０１ｍｇ、０.０１９ミリモル）のＤＭＳＯ（０.５ｍＬ）中溶液に、ヒューニッヒ塩基（７.１０μＬ、０.０４１ミリモル）を加え、室温で一夜攪拌した。これを島津製（Shimadzu）Ｒ−ＨＰＬＣに付し、エックスブリッジ（XBridge）  プレパラティブＣ１８、５μｍカラムおよび３０分間にわたる５−５５％アセトニトリル／水（０.０５％ギ酸）を用いて精製した。
【化１０８】
0006498773.tif 000112
【０３１３】
２４分のフラクションを集め、二量体−リンカーＩＩＩａ−０３（５.６ｍｇ、４.３６マイクロモル、収率３２.２％）を得た。的確な質量のフラクションを塩基性樹脂（ＰＬ−ＨＣＯ３  ＭＰ−樹脂  １.８ミリモル／ｇ；Agilent Part番号ＰＬ３５４０−番号６０３）を通して濾過し、アセトニトリル（５ｍＬ）で洗浄し、つづいて凍結乾燥に付した。ＭＳ（ｍ＋１）＝１２８４
【０３１４】
実施例２０−  二量体ＩＩａ−２０および二量体−リンカーＩＩＩａ−０４
この実施例および図１８ａおよび１８ｂは二量体（ＩＩａ−２０）および二量体−リンカー（ＩＩＩａ−０４）の合成に関する。
【０３１５】
トリフェニルホスフィン（１.３８５ｇ、５.２８ミリモル）、化合物２０（２ｇ、４.４０ミリモル）および化合物５１（１.１６５ｇ、６.１６ミリモル）のＴＨＦ（１０ｍＬ）中溶液に、じイソプロピルアゾジカルボキシラート（ＤＩＡＤ、１.０２６ｍＬ、５.２８ミリモル）を０℃にて滴下して加えた。室温で一夜攪拌した後、濃縮し、ＩＳＣＯコンビフラッシュ（登録商標）１２０ｇ  カラムに付し、０−１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン溶出液を用いて精製し、アルコール１０８（１.２８ｇ、２.０４５ミリモル、収率４６.５％）を白色の固体として得た。ＭＳ（ｍ＋Ｎａ）＝６４８.２；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ  ７.４８（ｍ，３Ｈ）、７.３３（ｍ，２Ｈ）、７.２２（ｍ，１Ｈ）、５.９３（ｍ，１Ｈ）、５.５０（ｔ，Ｊ＝１０.０Ｈｚ，１Ｈ）、５.３１（ｄ，Ｊ＝１６.０Ｈｚ，１Ｈ）、 ５.２２（ｄｄ，Ｊ＝１０.８、１.６Ｈｚ，１Ｈ）、５.１７（ｄ，Ｊ＝１５.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.７０（ｔ，Ｊ＝１１.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.６３（ｍ，２Ｈ）、４.４３（ｍ，１Ｈ）、４.３０（ｍ，２Ｈ）、４.２２（ｍ，１Ｈ）、３.９７（ｍ，１Ｈ）、３.９０（ｓ，３Ｈ）、３.７９（ｍ，４Ｈ）、３.５７（ｍ，４Ｈ）、３.０１（ｄｄ，Ｊ＝１５.２、２.０Ｈｚ，１Ｈ）、２.０７（ｍ，２Ｈ）、１.８８（ｍ，２Ｈ）、０.９９７（ｍ，２Ｈ）、０.０６（ｓ，９Ｈ）
【０３１６】
アルコール１０８（０.６４ｇ、１.０２３ミリモル）およびトリエチルアミン（ＴＥＡ、０.２１４ｍＬ、１.５３４ミリモル）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中懸濁液を０℃に冷却し、塩化メタンスルホニル（ＭｓＣｌ、０.１０４ｍＬ、１.３３０ミリモル）で処理した。０℃で６０分間攪拌した後、ＬＣＭＳは生成物に５０％変換したことを示した。さらにＴＥＡ（０.２１４ｍＬ、１.５３４ミリモル）およびＭｓＣｌ（０.１０４ｍＬ、１.３３０ミリモル）を添加し、攪拌を１時間続け、変換を完了させた。反応物を氷冷水（３０ｍＬ）でクエンチさせ、ＤＣＭ（２ｘ３０ｍＬ）で抽出し、氷冷水（３０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、ロータリーエバポレーターにてメシラート１０９（０.７１３ｇ、１.０１２ミリモル、収率９９％）に濃縮した。ＭＳ（ｍ＋１）＝７０４.２
【０３１７】
化合物１０６（３３６ｍｇ、０.８５２ミリモル）およびメシラート１０９（５００ｍｇ、０.７１０ミリモル）のＤＭＳＯ（２ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１９６ｍｇ、１.４２１ミリモル）を添加した。反応混合物を５０℃で一夜攪拌した。該反応混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）および水（５０ｍＬ）で希釈した。水層をＥｔＯＡｃで抽出した（２ｘ５０ｍＬ）。有機層を合わせ、濃縮し、ＩＳＣＯコンビフラッシュ（登録商標）８０ｇ  カラム（４５分間にわたって０−１００％の勾配のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出する）に付して精製し、化合物１１０（１８０ｍｇ、０.１８０ミリモル、収率２５.３％）を得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝１００３.３
【０３１８】
化合物１１０（１８０ｍｇ、０.１８０ミリモル）のＴＨＦ（４ｍＬ）中溶液に、水素化トリエチルホウ素リチウム（スーパーハイドライド（SUPER HYDRIDE）（登録商標）、０.８９８ｍＬ、０.８９８ミリモル）を−７６℃で添加した。反応混合物を１時間攪拌した。反応物を冷水（１ｍＬ）でクエンチさせ、ＤＣＭ（３ｘ１０ｍＬ）で抽出した。有機層を濃縮し、ＤＣＭ／ＥｔＯＨ／水（１：２：１＝４ｍＬ）およびシリカゲル（１ｇ）で２日間処理した。この混合物を焼結ガラス漏斗を通して濾過し、そのシリカゲルをＤＣＭ−ＭｅＯＨ（８：２、５０ｍＬ）で洗浄した。濾液を高真空下で濃縮し、１５分間にわたってＭｅＯＨ／ＤＣＭ溶出液を用いる４０ｇ  シリカゲルカラムに付して精製した。９分の１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭフラクションより化合物１１１（１５１ｍｇ、０.１４３ミリモル、収率８０％）を白色の固体として得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝８５６.３
【０３１９】
化合物１１１（１５１ｍｇ、０.１７６ミリモル）のＤＣＭ（３ｍＬ）中溶液に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１０.１９ｍｇ、８.８２マイクロモル）およびピロリジン（０.０５８ｍＬ、０.７０６ミリモル）を添加した。反応混合物を窒素下の室温で攪拌した。濃縮し、ＩＳＣＯ  ２４ｇシリカゲルカラムに付し、０−２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを用いて精製し、二量体（ＩＩａ−２０）（４２ｍｇ、０.０５８ミリモル、収率３２.９％）を白色の固体として得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝６８８.２；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ  ７.５５（ｓ，１Ｈ）、７.４８（ｄ，Ｊ＝５.２Ｈｚ，１Ｈ）、７.４１（ｓ，１Ｈ）、７.２５−７.４０（ｍ，９Ｈ）、７.２１（ｍ，１Ｈ）、６.８５（ｓ，１Ｈ）、６.２７（ｓ，１Ｈ）、５.０３（ｄ，Ｊ＝１５.６Ｈｚ，１Ｈ）、４.８３（ｑ，Ｊ＝１５.６Ｈｚ，２Ｈ）、４.５７（ｄ，Ｊ＝１５.２、１Ｈ）、４.３０（ｍ，２Ｈ）、４.２１（ｔ，Ｊ＝５.２Ｈｚ，２Ｈ）、４.１３（ｍ，１Ｈ）、３.９４（ｓ，３Ｈ）、３.８４（ｓ，３Ｈ）、３.５１（ｓ，１Ｈ）、３.４６（ｄｄ，Ｊ＝１０.８、２.０Ｈｚ，１Ｈ）、３.２０−３.３０（ｍ，６Ｈ）、３.１２（ｄｄ，Ｊ＝１５.２、６.０Ｈｚ，２Ｈ）、２.８３（ｄｄ，Ｊ＝１５.２、５.６Ｈｚ，２Ｈ）
【０３２０】
ｐ−ニトロフェニルカルボナート９６（２０ｍｇ、０.０２７ミリモル）および二量体（ＩＩａ−２０）（２２.３７ｍｇ、０.０３３ミリモル）のＤＭＳＯ（１ｍＬ）中溶液に、ＤＩＰＥＡ（０.０１４ｍＬ、０.０８１ミリモル）を添加した。反応混合物を室温で一夜攪拌した。反応生成物を、Ｒ−ＨＰＬＣに付し、エックスブリッジ  プレパラティブＯＢＤ  Ｃ１８、５μｍカラム（３０ｘ２５０ｍｍ）を用い、４０分間にわたって５−５５％アセトニトリル／水（０.０５％ギ酸）（４回注入）として精製した。３１.８分に集めたフラクションを塩基性樹脂（ＰＬ−ＨＣＯ３  ＭＰ−樹脂  １.８ミリモル／ｇ；Agilent Part番号ＰＬ３５４０−番号６０３）を通して濾過し、アセトニトリル（５ｍＬ）で洗浄した。凍結乾燥に供し、二量体−リンカー（ＩＩＩａ−０４）（８ｍｇ、５.９１マイクロモル、収率２１.７９％）を白色の固体として得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝１２８６.５
【０３２１】
実施例２１−  二量体ＩＩａ−２１
この実施例および図１９は、二量体（ＩＩａ−２１）の合成に関する。
【０３２２】
フェノール７２（６８ｍｇ、０.１３ミリモル）、１,３−ビス（ブロモメチル）ベンゼン９７（１７ｍｇ、０.０６５ミリモル）およびＣｓ２ＣＯ３（４２ｍｇ、０.１３ミリモル）のアセトン（０.４ｍＬ）中懸濁液を４０℃での加温に１時間供した。混合物を０.１Ｍクエン酸でクエンチさせ、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して蒸発させた。その混合物をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、ヘキサン中３０−８０％ＥｔＯＡｃの勾配で溶出して精製し、２種の化合物を得た。最初に溶出したのがモノアルキル化化合物９９（１５.６ｍｇ、収率１７％）：ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝７０７.１０であった。次に溶出したのが二量体９８（１３.５ｍｇ、収率１８％）：ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝１１５１.２０であった。
【０３２３】
二量体９８（１３.５ｍｇ、０.０１２ミリモル）をピロリジンのＤＣＭ中溶液（０.０４２Ｍ、０.７ｍＬ、０.０２９ミリモル）に溶かし、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２.０ｍｇ、１.７マイクロモル）を添加した。該混合物を３０分間攪拌し、ＤＣＭと飽和ＮＨ４Ｃｌの間に分配した。相を分離し、水性フラクションをＤＣＭで２回以上抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、残留物となるまで蒸発させて、それを次にプレパラティブＨＰＬＣ（サンファイア  Ｃ１８  プレパラティブＯＢＤカラム  １９ｘ１００ｍｍ、溶媒Ａ＝９５％水、５％アセトニトリル＋０.１％ＴＦＡ；溶媒Ｂ＝５％水、９５％アセトニトリル＋０.１％ＴＦＡ；１０分間にわたって０−１００％の勾配）に付して精製した。試料を２つの等量の注入液に分割した。生成物を含有するフラクションを合わせ、ＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ  ＳＰＥ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジに通し、アセトニトリルで溶出し、生成物の遊離塩基としての溶液を得た。有機溶媒のほとんどをロータリーエバポレーションで除去し、水を凍結乾燥で除去し、二量体（ＩＩａ−２１）を白色の粉末（５.１８ｍｇ、収率５８％）として得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝７１９.１０；ＨＲＭＳ  測定値：Ｍ＋Ｈ＝７１９.２８５１、計算値：７１９.２８６４
【０３２４】
実施例２２−  二量体ＩＩａ−２２
この実施例および図２０は二量体（ＩＩａ−２２）の調製に関する。
【０３２５】
ジオール１００（０.２５ｇ、１.４０ミリモル、J. Med. Chem. 2011, 4350に基づき調製）およびＮＥｔ３（０.５８ｍＬ、４.１９ミリモル）のＤＣＭ（５ｍＬ）中懸濁液を氷水浴で冷却し、ＭｓＣｌ（０.２５ｍＬ、３.２ミリモル）で処理した。反応混合物をこの同じ温度で２時間攪拌し、次に水を添加してクエンチさせた。二相混合物の層を分離し、水相を一部のＤＣＭで再び抽出した。有機相を合わせ、冷希釈ＨＣｌ（０.０５Ｎ）で、つづいてブラインで洗浄し、次にＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を蒸発させ、メシラート１０１を白色の固体（０.４２５g、収率９１％）として得、それをさらに精製することなく用いた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）  δ  ７.２５（ｓ，１Ｈ）、７.１１（ｓ，２Ｈ）、５.２９−５.１８（ｍ，４Ｈ）、３.０５（ｓ，６Ｈ）
【０３２６】
フェノール７２（９４ｍｇ、０.１８ミリモル）、メシラート１０１（３０ｍｇ、０.０８９ミリモル）およびＣｓ２ＣＯ３（７３ｍｇ、０.２２ミリモル）のアセトン（０.４ｍＬ）中懸濁液を４０℃への加温に１時間供した。該混合物を０.１Ｍクエン酸でクエンチさせ、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。有機相を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して蒸発させた。混合物をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、ヘキサン中３０−８０％の勾配のＥｔＯＡｃで溶出して精製し、二量体１０２（８２.６ｍｇ、収率７７％）を得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝１１９２.１５
【０３２７】
二量体１０２（４１.３ｍｇ、０.０３５ミリモル）を二量体（ＩＩａ−２１）についての方法に従って脱保護し、二量体（ＩＩａ−２２）を白色の粉末（７.０８ｍｇ、収率２６％）として得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝７６０.１０；ＨＲＭＳ  測定値：Ｍ＋Ｈ＝７６０.２８７２、計算値：７６０.２８７８
【０３２８】
実施例２３−  二量体−リンカーＩＩＩｂ−０７およびＩＩＩｂ−０８
この実施例および図２１は、二量体リンカー（ＩＩＩｂ−０７）および（ＩＩＩｂ−０８）の調製に関する。
【０３２９】
化合物１０４ａは、次のように、フェノール８０およびモノアルキル化化合物９９より調製された。フェノール８０（１８.６ｍｇ、０.０２２ミリモル）、化合物９９（１５.６ｍｇ、０.０２２ミリモル）およびＣｓ２ＣＯ３（７.１８ｍｇ、０.０２２ミリモル）をアセトン（０.１１ｍＬ）に懸濁させ、４０℃への加温に１.５時間供した。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、０.１Ｍクエン酸で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させた。粗材料をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、３０−１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、生成物１０４ａ（２３.３ｍｇ、収率７２％）を得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝１４７２.２０
【０３３０】
二量体１０４ａ（２３.３ｍｇ、０.０１６ミリモル）をＴＨＦ（０.４ｍＬ）に溶かし、ＴＢＡＦのＴＨＦ中溶液（０.０３５ｍＬ、１.０Ｍ、０.０３５ミリモル）を加えた。混合物を０.５時間攪拌し、ＥｔＯＡｃと飽和ＮＨ４Ｃｌの間に分配し、相を分離し、水性フラクションをＤＣＭで２回抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、残留物となるまで蒸発させ、次にシリカゲルクロマトグラフィーに付し、ＤＣＭ中０−１０％の勾配のＭｅＯＨで溶出して精製し、化合物１０５ａ（１６.４ｍｇ、収率８３％）を得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｎａ＝１２６５.２５
【０３３１】
二量体１０５ａ（１６.４ｍｇ、０.０１３ミリモル）をピロリジンのＤＣＭ中溶液（０.０４２Ｍ、０.８ｍＬ、０.０３３ミリモル）に溶かし、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１.２ｍｇ、１.０４マイクロモル）を加えた。混合物を１時間攪拌し、ＤＣＭと飽和ＮＨ４Ｃｌの間に分配し、相を分離し、水性フラクションをＤＣＭで２回以上抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、残留物となるまで蒸発させ、アミン１０６ａを得、それをさらに精製することなく用いた（定量的収率が想定される）。
【０３３２】
アミン１０６ａ（１３.７ｍｇ、０.１３ミリモル）をＤＩＰＥＡのＤＭＦ中溶液（０.０５Ｍ、０.３１ｍＬ、０.０１６ミリモル）に溶かし、化合物８４（８ｍｇ、０.０２６ミリモル）を添加した。該混合物を２０時間攪拌し、その時点でそれをＤＭＦで希釈し、プレパラティブＨＰＬＣ（サンファイア  Ｃ１８  プレパラティブＯＢＤカラム  １９ｘ１００ｍｍ、溶媒Ａ＝９５％水、５％アセトニトリル＋０.１％ＴＦＡ；溶媒Ｂ＝５％水、９５％アセトニトリル＋０.１％ＴＦＡ；１０分間にわたって０−１００％の勾配）に付して精製した。生成物を含有するフラクションを合わせ、ＰＬ−ＨＣＯ３−ＭＰ  ＳＰＥ  ５００ｍｇ／６ｍＬカートリッジを通し、アセトニトリルで溶出して生成物の溶液を遊離塩基として得た。有機溶媒のほとんどをロータリーエバポレーションで除去し、水を凍結乾燥で除去し、二量体−リンカー（ＩＩＩｂ−０７）を白色の粉末（７.１０ｍｇ、収率４２％）として得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝１２４９.３５；ＨＲＭＳ  測定値：Ｍ＋Ｈ＝１２４９.５２２１、計算値：１２４９.５２４１
【化１０９】
0006498773.tif 000113
【０３３３】
ビスメシラート１０１（１００ｍｇ、０.１９１ミリモル）を、化合物９９の合成について記載される方法と同様の方法にて、化合物７２と反応させ、モノメシラート１０３（７４.６ｍｇ、収率５１％）を得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝７６４.１０
【０３３４】
モノメシラート１０３（４６.８ｍｇ、０.０６１ミリモル）を、化合物１０４ａの合成について記載される方法と同様の方法にて、化合物８０と反応させ、化合物１０４ｂ（６８.８ｍｇ、収率７４％）を得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝１５１１.９５
【０３３５】
化合物１０４ｂ（６８.８ｍｇ、０.０４６ミリモル）を、化合物１０５ａの合成について記載される方法と同様の方法にて、脱保護し、化合物１０５ｂ（５１.４ｍｇ、収率８８％）を得た。
【０３３６】
化合物１０５ｂ（５１.４ｍｇ、０.０４０ミリモル）を、化合物１０６ａの合成について記載される方法と同様の方法にて、脱保護し、アミン１０６ｂ（４４ｍｇ、収率１００％、次の工程にて粗製物を使用）を得た。
【０３３７】
アミン１０６ｂ（４６.８ｍｇ、０.０６１ミリモル）を、二量体−リンカー（ＩＩＩｂ−０７）の合成について記載される方法と同様の方法にて、化合物８４と反応させ、二量体−リンカー（ＩＩＩｂ−０８）（１３.５ｍｇ、収率２５％）を得た。ＨＲＭＳ  測定値：Ｍ＋Ｈ＝１２９０.５２４５、計算値：１２９０.５２５５
【０３３８】
実施例２４−  二量体−リンカーＩＩＩｂ−０４
この実施例および図２２は、二量体−リンカー（ＩＩＩｂ−０９）の合成に関する。
【０３３９】
ビスヨードエチルエーテル（４６ｍｇ、０.０８８ミリモル）を、化合物９９の合成について記載される方法と同様の方法にて、化合物７２と反応させ、化合物１０７（２９ｍｇ、収率４６％）を得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝７２３.２０
【０３４０】
シリルエーテル７８（４３１ｍｇ、０.４８６ミリモル）をＤＭＦ（２.０ｍＬ）および水（０.０４ｍＬ）に溶かし、酢酸リチウム（３２ｍｇ、０.４８６ミリモル）で処理した。混合物を４０℃までの加温に２.５時間供し、室温でさらに１時間攪拌し、次に溶媒を窒素流の下で（３日間にわたって）除去した。残渣を０.１Ｍクエン酸で処理し、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して蒸発させた。該混合物をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、ＤＣＭ中０−１０％の勾配のＭｅＯＨで溶出して精製し、フェノール１０８（２９７ｍｇ、収率８４％）を得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｈ＝７３０.４０
【０３４１】
モノヨード化合物１０７（２９ｍｇ、０.０４ミリモル）を、化合物１０４ａの合成について記載される方法と同様の方法にて、フェノール１０８と反応させ、化合物１０９（１８.８ｍｇ、収率３５％）を得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｎａ＝１３４７.１５
【０３４２】
化合物１０９（１８.８ｍｇ、０.０１４ミリモル）を、化合物１０６ａの合成について記載される方法と同様の方法にて、脱保護に付し、アミン１１０（１３ｍｇ、収率１００％、次の工程にて粗製物を用いる）を得た。
【０３４３】
アミン１１０（１４ｍｇ、０.０１４ミリモル）を、二量体−リンカー（ＩＩＩｂ−０７）の合成について記載される方法と同様の方法にて、化合物８４と反応させ、二量体−リンカー（ＩＩＩｂ−０９）（８.６ｍｇ、収率５３％）を得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋Ｎａ＝１２３９.７５
【０３４４】
実施例２５−  二量体−リンカーＩＩＩａ−０５、−０６、−０７および−０８
この実施例および図２３は、二量体−リンカーＩＩＩａ−０５、ＩＩＩａ−０６、ＩＩＩａ−０７およびＩＩＩａ−０８の調製に関する。これらの二量体−リンカーは、リンカー構成成分にてアルキルアミノ基を有し、トランスグルタミナーゼ介在性コンジュゲーションにおけるアミンドナーとして供し、ＡＤＣを製造し得る。
【０３４５】
化合物５４（８５０ｍｇ、０.８６９ミリモル）および化合物１１１（ＣＡＳ  Ｒｅｇ. Ｎｏ. ８６３９７１−５３−３、６６６ｍｇ、０.８６９ミリモル）のＮＭＰ（７ｍＬ）中溶液に、ＤＩＰＥＡ（０.２２８ｍＬ、１.３０３ミリモル）を加えた。溶液を室温で一夜攪拌した。ＬＣＭＳは生成物の形成を示した。粗反応物を１２０ｇシリカゲルカラムのCOMBIFLASH（登録商標）クロマトグラフィーに直接供し、ＭｅＯＨ／ＤＣＭで４５分間にわたって溶出した。１８分のフラクションから化合物１１２（０.８ｇ、収率５７％）を白色の固体として得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝１６０５.６
【０３４６】
化合物１１２（０.７ｇ、０.４３６ミリモル）のＴＨＦ（５ｍＬ）中溶液に、ピペリジン（０.５ｍＬ、５.０５ミリモル）を加えた。該溶液を室温で３０分間攪拌した。ＬＣＭＳは反応の完了を示した。濃縮し、８０ｇのCOMBIFLASH（登録商標）シリカゲルカラムでＭｅＯＨ／ＤＣＭを用いて４０分間にわたって精製し、１９−２３分にて３０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭフラクションを得、それから化合物１１３（０.４７５ｇ、０.３４３ミリモル、収率７９％）を白色の固体として得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝１３８３.６；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １０.１１（ｓ，２Ｈ）、８.１３（ｓ，２Ｈ）、７.５７（ｄ，Ｊ＝８.４Ｈｚ，２Ｈ）、７.２３（ｍ，１４ Ｈ）、５.９６（ｔ，Ｊ＝５.６Ｈｚ，２Ｈ）、５.７６（ｓ，１Ｈ）. ５.３９（ｓ，４Ｈ）、５.２６（ｔ，Ｊ＝６.０Ｈｚ，４Ｈ）、５.０８（ｄｄ，Ｊ＝２２.０、１０.４Ｈｚ，４Ｈ）、５.０１（ｓ，２Ｈ）、４.９２（ｄ，Ｊ＝１５.６Ｈｚ，４Ｈ）、４.４７（ｍ，２Ｈ）、４.３１（ｍ，５Ｈ）、４.２１（ｍ，５Ｈ）、４.１０（ｑ，Ｊ＝５.２Ｈｚ，２Ｈ）、３.７６（ｍ，１０ Ｈ）、３.１８（ｄ，Ｊ＝５.２Ｈｚ，２Ｈ）、３.０３（ｍ，６Ｈ）、２.６８（ｍ，２Ｈ）、２.３４（ｍ，２Ｈ）、１.９３（ｍ，３Ｈ）、１.５０−１.７０（ｍ，６Ｈ）、１.３９（ｍ，５Ｈ）、０.８８（ｄ，Ｊ＝６.８Ｈｚ，３Ｈ）、０.７８（ｄ，Ｊ＝６.８Ｈｚ，３Ｈ）、０.７４（ｍ，９Ｈ）、０.０９、０.１０（ｍ，９Ｈ）
【０３４７】
化合物１１３（９７５ｍｇ、０.７０５ミリモル）の−７６℃でのＴＨＦ（１０ｍＬ）中溶液に、ＬｉＥｔ３ＢＨ（SUPERHYDRIDE（登録商標）、３.５２ｍＬ、３.５２ミリモル）を添加した。該溶液を１時間攪拌した。ＬＣＭＳは反応の完了を示した。反応物冷水（１ｍＬ）でクエンチさせ、濃縮した。得られた残渣をＤＣＭ／ＥｔＯＨ／水（１：２：１＝８ｍＬ）およびシリカゲル（１ｇ）で３日間処理した。この混合物を焼結漏斗を通して濾過し、シリカゲルをＤＣＭ−ＭｅＯＨ（８：２、１００ｍＬ）で洗浄した。濾液を高真空下で濃縮し、２４ｇのシリカゲルカラムに付し、１５分間にわたってＭｅＯＨ／ＤＣＭを用いて精製した。２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭフラクションより化合物１１４（４２２ｍｇ、０.３８７ミリモル、収率５４.９％）を白色の固体として得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝１０９１.６
【０３４８】
化合物１１４（６７ｍｇ、０.０６１ミリモル）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル１１５（３０.４ｍｇ、０.０６８ミリモル）のＤＭＦ（１ｍＬ）中溶液に、２,６−ルチジン（０.０１４ｍＬ、０.１２３ミリモル）を添加した。反応混合物を室温で２時間攪拌した。ＬＣＭＳは生成物１１６への変換が略完了したことを示した。ピペリジン（０.１ｍＬ、１.０１０ミリモル）を添加し、反応混合物を室温で１時間攪拌した。反応混合物をＩＳＣＯの１５０ｇＣ１８カラムに注入し、水／アセトニトリル（０.０５％ギ酸）で３０分間にわたって溶出した。２７分の３４％水／アセトニトリルのフラクションを塩基性樹脂（ＰＬ−ＨＣＯ３ＭＰ樹脂  １.８ミリモル／ｇ；Agilent Part＃ＰＬ３５４０−＃６０３）を通して濾過し、アセトニトリル（５ｍＬ）で洗浄した。凍結乾燥に付して、二量体−リンカーＩＩＩａ−０８（２７.５ｍｇ、０.０２０ミリモル、収率３３.１％）を白色固体として得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝１２０４.６
【０３４９】
二量体−リンカーＩＩＩａ−０５（ＭＳ（ｍ＋１）＝１３３８.５）、ＩＩＩａ−０６（ＭＳ（ｍ＋１）＝１５１４.０６）およびＩＩＩａ−０７（ＭＳ（ｍ＋１）＝１２５０.２）は、対応するＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを用い、化合物１１４より同様にして調製された。
【化１１０】
0006498773.tif 000114
【０３５０】
実施例２６−  二量体の生物学的活性
本発明の二量体の、Ｈ２２６肺がん、７８６−Ｏ腎臓がん、Ｎ８７胃がん、および／またはＯＶＣＡＲ３卵巣がんの細胞系に対する、細胞毒性活性を試験した。二量体の細胞増殖を阻害する能力は、ＡＴＰ発光アッセイまたはＭＴＳ細胞増殖アッセイのいずれかで測定され得る。一般に、これらの２つの方法は同等な結果をもたらす。
【０３５１】
これはＡＴＰ発光アッセイのための一般的操作である：細胞を、各々、ＡＴＰのCellTiterGlo（登録商標）アッセイのために、９６−ウェルプレートにて１ｘ１０３細胞／ウェルで３時間播種する。化合物を連続希釈（１：３）にてウェルに添加する。プレートを７２時間インキュベートさせる。Promegaから由来のCellTiterGlo（登録商標）細胞生存能キットを用い、取扱説明書に従って、試験化合物で処理した細胞のＡＴＰ含量を測定する。ＡＴＰ含量の減少は細胞生存性の低下の指標である。ＥＣ５０値−薬剤が細胞生存性を最大効果の５０％まで減少させる濃度は、PRISM（登録商標）ソフトウェア、バージョン５.０（GraphPad Software, La Jolla, CA, USA）を用いて算定され得る。
【０３５２】
ＭＴＳ細胞増殖アッセイを次のように行った。Promega（Madison, WI）製のCellTiter 96 Aqueous Non-Radioactive Cell proliferation Kitを用い、細胞増殖アッセイにおける生存細胞の数を測定する。腫瘍細胞を特定の播種密度で滅菌処理した３８４ウェルの黒色透明底部マトリックスプレートにウェル当たり４０μＬで置き、アッセイを行う前に５％ＣＯ２中３７℃で一夜インキュベートする。翌日、一群の細胞プレート（１０プレート）を用いて０時間の細胞密度を測定し、３−（４,５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウムを４μＬ／ウェルで１０プレートに加え、つづいて５％ＣＯ２中３７℃で３時間インキュベートした。このテトラゾリウム試薬は肝細胞により生体内還元され、水溶液に可溶性のホルマザン生成物を形成する。Envision読取り装置（Perkin Elmer, Boston, MA）で４９０ｎｍの吸光度を測定する。その日のうちに、残りの細胞プレート（Ｔ７２プレート）に化合物を加え、５％ＣＯ２中３７℃でインキュベートする。７２時間後、次に４μＬのＭＴＳ試薬をその細胞プレートに加える。該プレートを５％ＣＯ２中３７℃で３時間さらにインキュベートし、Ａ４９０での吸光度をEnvision読取り装置で測定した。
【０３５３】
結果を表ＩＡに示す：
【表１】
0006498773.tif 000115
【０３５４】
ＤＭＳ７９およびＨ１８７小細胞肺がん細胞系に対して試験したさらなる結果を表ＩＢに示す。
【表２】
0006498773.tif 000116
【０３５５】
実施例２７−  コンジュゲートの生物学的活性
二量体−リンカー化合物を、上記の一般的操作に従って、数種の抗体：抗体４Ａ６（抗グリピカン−３抗体；Terrettら、ＵＳ８,６８０,２４７Ｂ２（2014））；抗体１Ｆ４（抗ＣＤ７０抗体；Cocciaら、ＵＳ２０１０／０１５０９５０Ａ１（2010））；および抗体６Ａ４（抗メソテリン抗体；Terrettら、ＵＳ８,２６８,９７０Ｂ２（2012））とコンジュゲートさせた。これらの抗体のＣＤＲ配列および他の配列ならびに構造情報は上掲の参考文献に開示され、かかる情報は出典明示により本明細書に組み込まれる。
【０３５６】
Ｎ８７胃がん細胞およびＨｅｐ３Ｂ肝臓がん細胞に対する試験を行った。３Ｈチミジンアッセイ（Congら、2014）を用いて活性を測定した。Ｎ８７細胞はメソテリンを発現するが、ＣＤ７０またはグリピカン−３を発現しない。Ｈｅｐ３Ｂ細胞はグリピカン−３を発現するが、メソテリンを発現しない。
【０３５７】
結果を表ＩＩＡおよびＩＩＢに示す。ＰＢＤ−ＰＢＤ二量体−リンカー、化合物Ａ：
【化１１１】
0006498773.tif 000117
の比較データも提供される。
【０３５８】
【表３】
0006498773.tif 000118
【０３５９】
【表４】
0006498773.tif 000119
【０３６０】
抗原フコシルＧＭ１を発現する、ＤＭＳ７９およびＨ１８７小細胞肺がん細胞系に対して試験したさらなる結果を表ＩＩＣに示す。
【０３６１】
【表５】
0006498773.tif 000120
【０３６２】
Ｎ８７、Ｈ２２６、７８６−Ｏがん細胞系に対する、さらなる結果を表ＩＩＤに示す。Ｎ２９７Ａ置換の抗体を上記のようにトランスグルタミナーゼを用いてコンジュゲートさせた。Ｎ２９７Ａ変異はトランスグルタミナーゼのアミン受容体として利用可能なＱ２９５を作製し、理論的に２のＤＡＲを有するコンジュゲートを製造するが、実際には１.５ないし２の範囲のＤＡＲを有するコンジュゲートが得られる。
【０３６３】
Ｎ８７は、メソテリンを発現するが、ＣＤ７０またはフコシルＧＭ１を発現しない、消化管（胃）がん細胞系である。Ｈ２２６は、メソテリンを発現するが、ＣＤ７０またはフコシルＧＭ１を発現しない、肺がん細胞系である。７８６−Ｏは、ＣＤ７０を発現するが、メソテリンまたはフコシルＧＭ１を発現しない、腎臓がん細胞系である。
【０３６４】
【表６】
0006498773.tif 000121
【０３６５】
１の実施態様において、本発明のコンジュゲート中の抗体は、抗−メソテリン、抗−ＣＤ７０、抗グリピカン−３、または抗−フコシルＧＭ１抗体である。
【０３６６】
本発明の上記の詳細な記載は、本発明の特定の部分または態様と主にまたは独占的に関連付けられる一節を包含する。これは簡潔かつ便宜のためであり、特定の特徴はそれを開示する分節だけでなくそれ以上の分節と関連付けることができ、本明細書の開示は異なる分節に認められる情報の適切なすべての組み合わせを包含することを理解すべきである。同様に、本明細書における種々の図表および記載は本発明の特定の実施態様と関連するが、具体的な特徴は特定の図表または実施態様の文脈に開示されており、そのような特徴は他の特徴と組み合わせて、または本発明にて一般的に、他の図表または実施態様の文脈において適度に使用され得ると理解されるべきである。
【０３６７】
さらには、本発明は、特定の好ましい実施態様の観点から詳細に記載されるが、本発明はかかる好ましい実施態様に限定されるものではない。どちらかと言えば、本発明の範囲は添付した特許請求の範囲により定められる。
【０３６８】
参考文献
本明細書中に第１著者（または発明者）および先の日付により省略された形式にて引用される次の参考文献を完全な言及にて以下に提供する。これらの参考文献は、各々、出典を明示することによりあらゆる目的で本明細書に組み込まれる。
【０３６９】
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【図１】
0006498773.tif 000189
【図２】
0006498773.tif 000190
【図３】
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【図４ａ】
0006498773.tif 000192
【図４ｂ】
0006498773.tif 000193
【図５】
0006498773.tif 000194
【図６】
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【図７ａ】
0006498773.tif 000196
【図７ｂ】
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【図８】
0006498773.tif 000198
【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８ａ】
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【図１８ｂ】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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