(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的物質を吸着する吸着部位を有するタンパクが担体を介して固定化されている吸着剤であって、
前記タンパクは、可逆結合部位と、共有結合部位を有し、
前記担体は、前記可逆結合部位と可逆結合を形成する配向制御部位と、前記共有結合部位と共有結合を形成する固定化部位を有し、
前記共有結合部位は、求核性官能基を含み、
前記固定化部位は、共有結合形成速度１０３[Ｍ−１ｓ−１]のエポキシド部位を含み、
前記配向制御部位は、ニトリロ三酢酸を含むことを特徴とする吸着剤。
【請求項２】
請求項１において、
前記可逆結合部位が少なくとも２つ以上のヒスチジンを含むことを特徴とする吸着剤。
【請求項３】
請求項２において、
前記可逆結合部位が少なくとも６つ以上のヒスチジンを含むことを特徴とする吸着剤。
【請求項４】
請求項２において、
前記ニトリロ三酢酸が鉄、コバルト、ニッケル、銅、亜鉛のいずれかの金属イオンと金属錯体を形成することを特徴とする吸着剤。
【請求項５】
請求項１において、
前記共有結合部位がアルコール、フェノール、アミン、イミン、イミダゾール、チオール、スルフィド、ジスルフィド、カルボン酸もしくはその共役塩基であることを特徴とする吸着剤。
【請求項６】
請求項１において、
前記担体は担体基材を有し、
前記担体基材と前記配向制御部位が５Å以上の長さの第１のスペーサを介して結合されており、
前記担体基材と前記固定化部位が５Å以上の長さの第２のスペーサを介して結合されていることを特徴とする吸着剤。
【請求項７】
請求項６において、
前記第１のスペーサ及び
前記第２のスペーサがオリゴエチレングリコールを含むことを特徴とする吸着剤。
【請求項８】
請求項６において、
前記担体基材が多糖類、合成樹脂もしくは無機化合物であることを特徴とする吸着剤。
【請求項９】
請求項８において、
前記多糖類がアガロース、セファロース、セルロースもしくはその誘導体であり、
前記合成樹脂がポリスチレン、ポリアルキルメタクリレート、ポリグリシジルメタクリレート、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド、ポリシロキサン、ポリフッ化エチレン、もしくはその誘導体を含む共重合体であり、
前記無機化合物がケイ素、アルミニウム、チタン、鉄、コバルト、亜鉛、ジルコニウムの酸化物、炭酸、リン酸、ホウ酸、ケイ酸、硫酸の塩もしくは水素塩であることを特徴とする吸着剤。
【請求項１０】
請求項８において、前記無機化合物がシリカ、アルミナ、チタニア、ジルコニア、酸化鉄、シリケート、フェライトもしくはハイドロキシアパタイトであることを特徴とする吸着剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タンパクを固定化した吸着剤に係わり、例えばバイオ医薬品精製に用いられる吸着剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
機能性を有する生体分子を担体に固定化し活用する技術は、抗体精製、分析装置、細胞培養、微生物回収、酵素電極、薬剤スクリーニングなど広範な分野において利用されている。
【０００３】
中でも、標的物質を吸着可能なタンパクは、分野を問わず広く用いられており、重要性が高い。なお、このようなタンパクが備える吸着部位はタンパクの一部のみに局在することが多く、タンパクを担体に固定化した際に立体的な要因により吸着部位が利用できなくなる場合がある。
【０００４】
タンパクを担体に固定化する技術としては、物理吸着を用いる手法やアミノ基を介して固定化する手法などがある。しかしどちらも配向を制御することが難しく、タンパクの吸着部位の利用効率に課題が残る。そこで、遺伝子組換えにより一定の配列をタンパクに発現させ、それを用いて配向を制御する技術の開発が求められている。
【０００５】
遺伝子組換えにより発現させた配列によってタンパクを固定化する技術として、プロテインＡのＣ末端にシステインを導入しシステインが有するチオール基を用いる報告があるが、必ずしも効果が得られる手法ではない（特許文献１）。
【０００６】
一方で精製タグを配向制御に用いてタンパクを固定化する技術として、金属錯体を備えた表面にＨＡＴタグを介してタンパクが結合した担体にカルボジイミドを作用させる手法が報告されている（特許文献２）。しかし、金属錯体とカルボジイミドの反応により配向制御が崩れる可能性や、タンパク中のカルボキシル基がカルボジイミドと反応することで活性の低下や望まない配向での固定化が生じる可能性がある。
【０００７】
また、金属錯体と光反応部位を備えた表面にＨｉｓタグを介してタンパクが結合した担体に紫外光を照射する手法も報告されているが、固定化によりタンパクの活性が低下することや光反応のため生産性が低いことから吸着剤には適用しにくい（非特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００８−１０１０２３号公報
【特許文献２】特表２００７−５２９４８７号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｌａｎｇｍｕｉｒ  ２０１３、２９、１１６８７−１１６９４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
バイオ医薬品精製や分析装置には吸着部位を有するタンパクを担体に固定化した吸着剤が用いられるが、タンパクの配向は従来ランダムであり、吸着部位の利用効率が低かった。
【００１１】
上記を鑑み、本発明の目的は、タンパクの吸着部位の利用効率を向上した吸着剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
標的物質を吸着する吸着部位を有するタンパクが担体を介して固定化されている吸着剤であって、前記タンパクは、可逆結合部位と、共有結合部位を有し、前記担体は、前記可逆結合部位と可逆結合を形成する配位制御部位と、前記共有結合部位と共有結合を形成する固定化部位を有し、前記共有結合部位は、求核性官能基を含み、前記固定化部位は、前記求核性官能基と求核置換反応または求核付加反応により反応し得る官能基を含むことを特徴とする。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、タンパクの吸着部位の利用効率を向上した吸着剤を提供できる。これにより、タンパク使用量を削減でき、精製工程の高速化により培養液貯蔵工程の簡略化が可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】本発明の吸着剤１を示す図。
【図２】吸着剤１の製造方法を示す図。
【図３】担体２０の製造方法を示す図。
【図４】抗体医薬品製造工程３００を示す図。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、図面を用いて、本発明の実施形態について説明する。以下の説明は本発明の一実施形態を示すものであり、本発明がこれらの説明に限定されるものではない。また、全図において、同一の機能を有するものは、同一の符号を付け、その説明は一部省略する場合がある。
【００１６】
図１は、本発明を用いて得られる吸着剤１である。吸着剤１は、タンパク１０と担体２０を備える。
【００１７】
タンパク１０は、吸着部位３０と可逆結合部位４０と共有結合部位５０を備える。
【００１８】
担体２０は、担体基材６０と配向制御部位７０と固定化部位８０を備え、担体６０と配向制御部位７０は配向制御部位スペーサ９０で結合されており、担体６０と固定化部位８０は固定化部位スペーサ１００で結合されている。
【００１９】
タンパク１０が備える可逆結合部位４０と担体２０が備える配向制御部位７０は、可逆結合１１０を介して結合していてもよい。可逆結合１１０は金属イオンと配位子の配位結合である。可逆結合及び共有結合の形成後、可逆結合１１０は洗浄工程中に消滅する可能性がある。よって、可逆結合及び共有結合の形成後には、可逆結合部位４０と配向制御部位７０は可逆結合１１０を介して結合している場合と、可逆結合１１０を介さずに結合している場合がある。
【００２０】
タンパク１０が備える共有結合部位５０と担体２０が備える固定化部位８０は、共有結合１２０を介して結合している。
【００２１】
タンパク１０は、天然、遺伝子組換えされたペプチドもしくはタンパクで、例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＬ、免疫グロブリン、アビジン、ストレプトアビジン、レクチン、キネシン、それらを含む複合タンパク、それらの遺伝子組換え体などが挙げられるが、それらに限定されるものではない。
【００２２】
吸着部位３０はタンパク２０上に複数あってもよいし、１つのみでもよい。
【００２３】
可逆結合部位４０は、担体が備える配向制御部位７０と可逆的に結合形成可能な官能基で、生産性の観点から、遺伝子組換えにより導入可能なペプチドやタンパクが好ましく、例えばＨｉｓタグ、ＨＱタグ、ＨＮタグ、ＨＡＴタグ、グルタチオン、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、マルトース結合タンパクなどが挙げられ、より好ましくはＨｉｓタグであるが、それらに限定されるものではない。Ｈｉｓタグは、６個程度の連続するヒスチジン(Ｈｉｓ)残基からなるタグペプチドの一種である。ＨＱタグは、ヒスチジンとグルタミンが交互に連続したペプチドタグ（ＨＱＨＱＨＱ）である。ＨＮタグは、ヒスチジンとアスパラギンが交互に連続したペプチドタグ（ＨＮＨＮＨＮＨＮＨＮＨＮ）である。ＨＡＴタグは、ニワトリの乳酸脱水素酵素由来のペプチドタグ（ＫＤＨＬＩＨＮＶＨＫＥＥＨＡＨＡＨＮＫ）である。Ｈｉｓタグ、ＨＱタグ、ＨＮタグ、ＨＡＴタグは少なくとも２つ以上のヒスチジンを含む。ヒスチジンが多いほど可逆結合を形成しやすい。特にＨｉｓタグは６つのヒスチジンを含むので、より可逆結合を形成しやすい。
【００２４】
共有結合部位５０は、固定化部位８０と潜在的に反応し共有結合を形成可能な官能基で、生産性の観点から、遺伝子組換えを必要とせず、タンパクが通常備えている官能基を共有結合部位として用いるのが好ましく、より好ましくは求核性を有する官能基で、例えばアルコール、フェノール、アミン、イミン、イミダゾール、チオール、スルフィド、ジスルフィド、カルボン酸もしくはその共役塩基が挙げられ、さらに好ましくはアミン、イミン、イミダゾール、チオールもしくはその共役塩基だが、それらに限定されるものではない。
【００２５】
担体基材６０は、板状、ビーズ上、繊維状、膜状、もしくはモノリス状の固体で、好ましくは多糖類、合成樹脂、もしくは無機化合物もしくはそれらの複合材料を含む材料からなり、より好ましくはアガロース、セファロース、セルロース、ポリスチレン、ポリアルキルメタクリレート、ポリグリシジルメタクリレート、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド、ポリシロキサン、ポリフッ化エチレン、シリカ、アルミナ、チタニア、ジルコニア、酸化鉄、フェライト、ハイドロキシアパタイト、シリケートのいずれかを含み、さらに好ましくはアガロース、セファロース、セルロース、ポリスチレン、シリカ、酸化鉄、フェライトのいずれかを含むが、それらに限定されるものではない。
【００２６】
配向制御部位７０は、可逆結合部位４０と特異的に結合する官能基で、例えば、３座以上の配位子の金属錯体、ペプチド、タンパク、タンパク模倣分子、糖、核酸、アプタマーが挙げられ、好ましくはニトリロ三酢酸もしくはイミノ二酢酸もしくは１、４、７−トリアザシクロノナンの鉄、コバルト、ニッケル、銅、亜鉛の錯体、グルタチオン、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、マルトース、であり、生産性の観点からより好ましくはニトリロ三酢酸もしくはイミノ二酢酸の金属錯体である。
【００２７】
固定化部位８０は、好ましくは潜在的に求核性官能基と、求核置換反応もしくは求核付加反応により反応し得る官能基で、例えば酸化エチレン、酸化プロピレン、酸化ブチレン、酸化シクロペンテン、酸化シクロヘキセン、シクロプロパン、シクロオクチン、カルボン酸エステル、リン酸エステル、硫酸エステル、ラクトン、ラクタム、スルトン、トシラート、メシラート、トリフラートを含む構造が挙げられ、より好ましくは酸化エチレンを含む構造だが、それらに限定されるものではない。酸化エチレン、酸化プロピレン、酸化ブチレン、酸化シクロペンテン、酸化シクロヘキセンは実施例で用いたエポキシド部位の一種である。
【００２８】
配向制御部位スペーサ９０は直鎖または枝分かれを有し、望ましくは０−１００Å、より望ましくは１−５０Å、さらに望ましくは５−２０Åであり、例えばポリエチレングリコール、ポリメタクリル酸誘導体、ポリアクリルアミド誘導体、を含む。
【００２９】
固定化部位スペーサ１００は直鎖または枝分かれを有し、望ましくは０−１００Å、より望ましくは１−５０Å、さらに望ましくは５−２０Åであり、例えばポリエチレングリコール、ポリメタクリル酸誘導体、ポリアクリルアミド誘導体、を含む。
【００３０】
図２は、吸着剤１の製造方法である。吸着剤１は、タンパク１０と担体２０を作用させることで製造でき、製造過程は可逆結合形成過程２００および共有結合形成過程２１０を含む。
【００３１】
可逆結合形成過程２００が共有結合形成過程２１０よりも先に進行することでタンパク１０の配向が制御された状態で固定化され、配向が制御されない状態と比べて吸着剤１の吸着容量が向上する。可逆結合形成過程２００が共有結合形成過程２１０よりも先に進行して固定化されたタンパク１０が、固定化されたタンパク１０の全量中に占める割合は、好ましくは１０％以上、より好ましくは４０％以上、さらに好ましくは８０％以上である。なお、反応速度はｐＨや立体障害や共存イオンの影響等により容易に変化し得るので、公知の可逆結合形成過程とそれよりも反応が速いとされる共有結合形成過程の組み合わせの本発明への適用が必ずしも否定されるものではない。
【００３２】
図３は、担体２０の製造方法の一例である。担体２０は、例えば、反応性表面官能基１３０と固定化部位８０を複数備える化合物１４０の反応と、それに引き続く固定化部位８０と配向制御部位７０と反応性官能基１５０を備える配向制御部位原料１６０の反応によって製造可能である。
【００３３】
反応性表面官能基１３０は例えばアルコール、フェノール、アミン、イミン、チオールもしくはその共役塩基で、生産性の観点から望ましくはアミンである。
【００３４】
反応性官能基１５０は例えばアルコール、フェノール、アミン、イミン、チオールもしくはその共役塩基で、生産性の観点から望ましくはアミンである。
【００３５】
図４は、培養工程、細胞除去、精製工程、製剤化から成る抗体医薬品製造工程３００で、吸着剤１の応用例の一例である。精製カラム３１０は、吸着剤１を空カラム３２０に充填して作製される精製装置で、これを用いることで、精製工程を実施可能である。
【実施例１】
【００３６】
実施例１では、共有結合形成速度が小さく、可逆結合形成過程が共有結合形成過程より先に進行する組み合わせについて検討した。
【００３７】
表面にアミノ基を有する担体に、１、４−ブタンジオールジグリシジルエーテル（１０ｗｔ％）と硫酸カリウム（０．４Ｍ）を含む水溶液を６０℃８時間作用させることでエポキシド部位を担体表面に導入した。その後、ＮαＮα−カルボキシメチルリジン（５ｗｔ％）のｐＨ１０緩衝溶液を６０℃２時間作用させることでエポキシド部位の約４０％にニトリロ三酢酸部位を導入した。続いて得られた担体に塩化ニッケルの０．１Ｍ水溶液を作用させることで、ニトリロ三酢酸部位をニッケル錯体とした。このようにして得られた担体にＨｉｓタグ部位を有するプロテインＡ（０．０１ｗｔ％）のｐＨ７．４緩衝溶液を３７℃８時間作用させることで、プロテインＡが固定化された吸着剤とした。ここでは、可逆結合部位はＨｉｓタグ部位であり、共有結合部位はプロテインＡ中に含まれるアミノ基であり、配位制御部位はニトリロ三酢酸部位であり、固定化部位はエポキシド部位である。
【実施例２】
【００３８】
実施例２では、共有結合形成速度が小さく、可逆結合形成過程が共有結合形成過程より先に進行する組み合わせについて検討した。
【００３９】
表面にアミノ基を有する担体に、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル（１０ｗｔ％）と硫酸カリウム（０．４Ｍ）を含む水溶液を６０℃８時間作用させることでエポキシド部位を担体表面に導入した。その後、ＮαＮα−カルボキシメチルリジン（５ｗｔ％）のｐＨ１０緩衝溶液を６０℃２時間作用させることでエポキシド部位の約２３％にニトリロ三酢酸部位を導入した。続いて得られた担体に塩化ニッケルの０．１Ｍ水溶液を作用させることで、ニトリロ三酢酸部位をニッケル錯体とした。このようにして得られた担体にＨｉｓタグ部位を有するプロテインＡ（０．０１ｗｔ％）のｐＨ７．４緩衝溶液を３７℃８時間作用させることで、プロテインＡが固定化された吸着剤とした。
【実施例３】
【００４０】
実施例３では、共有結合形成速度が小さく、可逆結合形成過程が共有結合形成過程より先に進行する組み合わせについて検討した。
【００４１】
表面にアミノ基を有する担体に、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル（１０ｗｔ％）と硫酸カリウム（０．４Ｍ）を含む水溶液を６０℃８時間作用させることでエポキシド部位を担体表面に導入した。その後、ＮαＮα−カルボキシメチルリジン（５ｗｔ％）のｐＨ１０緩衝溶液を６０℃４時間作用させることでエポキシド部位の約４０％にニトリロ三酢酸部位を導入した。続いて得られた担体に塩化ニッケルの０．１Ｍ水溶液を作用させることで、ニトリロ三酢酸部位をニッケル錯体とした。このようにして得られた担体にＨｉｓタグ部位を有するプロテインＡ（０．０１ｗｔ％）のｐＨ７．４緩衝溶液を３７℃８時間作用させることで、プロテインＡが固定化された吸着剤とした。
【実施例４】
【００４２】
実施例４では本発明によって得られる吸着剤の応用について検討した。
【００４３】
実施例３に従って得られる吸着剤を、ｐＨ７．４ＰＢＳ緩衝溶液を用いて直径６０ｃｍの空カラムに高さ２０ｃｍまで充填した。このようにして作製した精製カラムにＩｇＧ（１０００ｇ）と夾雑物を含む緩衝溶液（１００Ｌ）を流速２００ｃｍ／ｈで導入し、ｐＨ７．４ＰＢＳ緩衝溶液を用いて流速２００ｃｍ／ｈで吸着剤を洗浄した。その後、流速２００ｃｍ／ｈでｐＨ３．５のクエン酸緩衝溶液をカラムに導入し、カラムから溶出したＩｇＧを含む溶液を回収し、中和した。ＩｇＧの回収率は９０％で商用抗体精製に適用可能な水準を満たし、さらに一般的な運転条件と比較し、約１／２の吸着剤量削減が可能である。
【００４４】
＜比較例１＞
比較例１では、共有結合形成速度が大きくタンパクの配向が制御されない脂肪族アルデヒドへの求核付加反応について検討した。
【００４５】
表面にアミノ基を有する担体に、グルタルアルデヒド（１ｗｔ％）のｐＨ８．３緩衝溶液を３７℃２時間作用させることで脂肪族アルデヒド部位を担体表面に導入した。その後、ＮαＮα−カルボキシメチルリジン（５ｗｔ％）のｐＨ１０緩衝溶液を３７℃で作用させることで脂肪族アルデヒド部位の一部にニトリロ三酢酸部位を導入した。ニトリロ三酢酸部位の導入率は反応時間によって制御した。続いて得られた担体に塩化ニッケルの０．１Ｍ水溶液を作用させることで、ニトリロ三酢酸部位をニッケル錯体とした。このようにして得られた担体にＨｉｓタグ部位を有するプロテインＡ（０．０１ｗｔ％）のｐＨ７．４緩衝溶液を３７℃８時間作用させることで、プロテインＡが固定化された担体とした。
【００４６】
＜比較例２＞
比較例２では、共有結合形成速度が大きくタンパクの配向が制御されないカルボジイミドにより活性化されたカルボン酸について検討した。
【００４７】
表面にカルボキシル基を有する担体に、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（１ｗｔ％）のｐＨ５．８緩衝溶液を作用させることで担体表面のカルボキシル基を活性化した。その後、ＮαＮα−カルボキシメチルリジン（５ｗｔ％）のｐＨ１０緩衝溶液を３７℃で作用させることで活性化されたカルボキシル基の一部にニトリロ三酢酸部位を導入した。ニトリロ三酢酸部位の導入率は反応時間によって制御した。続いて得られた担体に塩化ニッケルの０．１Ｍ水溶液を作用させることで、ニトリロ三酢酸部位をニッケル錯体とした。このようにして得られた担体にＨｉｓタグ部位を有するプロテインＡ（０．０１ｗｔ％）のｐＨ７．４緩衝溶液を３７℃８時間作用させることで、プロテインＡが固定化された担体とした。
【００４８】
＜比較例３＞
比較例３では、配向制御部位を含まない対照系を検討した。
【００４９】
表面にアミノ基を有する担体に、１、４−ブタンジオールジグリシジルエーテル（１０ｗｔ％）と硫酸カリウム（０．４Ｍ）を含む水溶液を６０℃８時間作用させることでエポキシド部位を担体表面に導入した。得られた担体にＨｉｓタグ部位を有するプロテインＡ（０．０１ｗｔ％）のｐＨ７．４緩衝溶液を３７℃８時間作用させることで、プロテインＡが固定化された担体とした。
【００５０】
＜比較例４＞
比較例４では、固定化部位を含まない対照系を検討した。
【００５１】
表面にアミノ基を有する担体に、１、４−ブタンジオールジグリシジルエーテル（１０ｗｔ％）と硫酸カリウム（０．４Ｍ）を含む水溶液を６０℃８時間作用させることでエポキシド部位を担体表面に導入した。その後、ＮαＮα−カルボキシメチルリジン（５ｗｔ％）のｐＨ１０緩衝溶液を６０℃１６時間作用させることでエポキシド部位にニトリロ三酢酸部位を導入した。続いて得られた担体に塩化ニッケルの０．１Ｍ水溶液を作用させることで、ニトリロ三酢酸部位をニッケル錯体とした。このようにして得られた担体にＨｉｓタグ部位を有するプロテインＡ（０．０１ｗｔ％）のｐＨ７．４緩衝溶液を３７℃８時間作用させることで、プロテインＡが固定化された担体とした。
【００５２】
＜比較例５＞
比較例５ではタンパクの配向制御のない吸着剤について検討した。
【００５３】
比較例３に従って得られる吸着剤を、ｐＨ７．４ＰＢＳ緩衝溶液を用いて直径６０ｃｍの空カラムに高さ２０ｃｍまで充填した。このようにして作製した精製カラムにＩｇＧ（１０００ｇ）と夾雑物を含む緩衝溶液（１００Ｌ）を流速２００ｃｍ／ｈで導入し、ｐＨ７．４ＰＢＳ緩衝溶液を用いて流速２００ｃｍ／ｈで吸着剤を洗浄したところ、精製カラムにＩｇＧが吸着されず、ＩｇＧの一部が漏洩した。
【００５４】
＜活性の比較＞
比較例１、２、３、４および実施例１、２、３で得られた担体の抗体吸着容量を表１に
示す。
【００５５】
【表１】
0006622993.tif 000002
【００５６】
共有結合形成の反応速度定数が大きい系（比較例１および２）では可逆結合形成が先に進行しにくく、配向制御の効果が十分に得られないため、配向制御部位を備えない系（比較例３）とほぼ同等の抗体吸着容量となる。また、固定化部位を備えない系（比較例４）ではタンパクが固定化されないため抗体吸着容量が低い。一方で、共有結合形成の反応速度定数が小さい系（実施例１、２、３）では可逆結合形成が先に進行し配向制御の効果が得られるため、比較例より高い抗体吸着容量が得られる。なお、配向制御の効果は、スペーサ長や配向制御部位の導入率によって変化する（実施例１、２、３）。実施例１、２、３での可逆結合形成速度は約１０４［Ｍ−１ｓ−１］程度であり、共有結合形成速度は約１０３［Ｍ−１ｓ−１］程度である。可逆結合形成速度と共有結合形成速度の関係には、共有結合部位の数、固定化部位の反応性、溶液中のｐＨ、配位制御部位の種類、固定化部位の種類が影響を与えるが、その中で固定化部位の種類の影響が最も大きい。
【００５７】
上記実施形態から明らかなように、吸着部位から、標的物質の排除体積に相当する距離以上離れた位置に存在する可逆結合部位が配位制御部位と可逆結合することで、タンパクの配向が整列する。その状態で共有結合によりタンパクを固定化することで、吸着部位の配向が固定化される。これにより、タンパクの吸着部位の利用効率が向上し、タンパク使用量の削減、精製工程の高速化による培養液貯蔵行程の簡略化が可能となる。
【符号の説明】
【００５８】
１…吸着剤
１０…タンパク
２０…担体
３０…吸着部位
４０…可逆結合部位
５０…共有結合部位
６０…担体基材
７０…配向制御部位
８０…固定化部位
９０…配向制御部位スペーサ
１００…固定化部位スペーサ
１１０…可逆結合
１２０…共有結合
１３０…反応性表面官能基
１４０…化合物
１５０…反応性官能基
１６０…配向制御部位原料
２００…可逆結合形成過程
２１０…共有結合形成過程
３００…抗体医薬品製造工程
３１０…精製カラム
３２０…空カラム
【図１】
0006622993.tif 000003
【図２】
0006622993.tif 000004
【図３】
0006622993.tif 000005
【図４】
0006622993.tif 000006