(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗微生物製剤であって、
（ａ）脂肪族カルボン酸銀を含む銀含有材料であって、前記脂肪族カルボン酸銀の銀が公称原子価２を有し、前記銀含有材料に含まれる全ての銀含有化合物の銀についての平均原子価が少なくとも１．１である、銀含有材料と、
（ｂ）担体基剤と
を含み、
前記銀含有材料が前記基剤内に分散されており、
前記銀含有材料は、９を超える炭素数または平均炭素数を有する少なくとも二価のカルボン酸銀を含み、
前記製剤の総銀含有量または前記銀含有材料の総銀含有量が、０．０００５％〜７％の範囲内であり、
前記製剤が、クリーム剤、乳剤または軟膏剤の形状を有する、
抗微生物製剤。
【請求項２】
前記製剤がカルボン酸を含有し、
前記カルボン酸は、前記カルボン酸銀の対応するカルボン酸であり、
前記カルボン酸の前記カルボン酸銀に対するモル比が、少なくとも０．０１、少なくとも０．５、少なくとも１．５または少なくとも３である、
請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
前記平均原子価が少なくとも１．５である、請求項１または２に記載の製剤。
【請求項４】
局所皮膚病態の治療のための医薬であって、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗微生物製剤を含む医薬。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗微生物製剤または請求項４に記載の医薬を製造する方法であって、
（ａ）カルボン酸と酸化銀（ＩＩ）とを混合して反応混合物を生成するステップと、
（ｂ）前記反応混合物を加熱してカルボン酸銀（ＩＩ）製剤中の前記脂肪族カルボン酸銀を生成するステップと、
を含む方法。
【請求項６】
カルボン酸銀（ＩＩ）製剤を担体基剤と混合してクリーム剤、乳剤または軟膏剤を作製することをさらに含む、請求項５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は２０１４年１月２７日出願の米国特許仮出願第６１／９３１，９４４号に優先権を主張し、同仮出願は全体が記載されているかのように、あらゆる目的で本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、抗生物質製剤および方法、より詳しくは、局所抗生物質銀（ＩＩ)製剤、その製造方法、およびその使用方法に関する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
慢性および急性の両方の局所創傷の治療において相当の進歩がなされてきたが、安定で有効な局所抗生物質製剤および医療用デバイスの作製においてさらなる改善が必要であると発明者らは考えており、本開示および特許請求の範囲の主題はこの必要性を満たすことを意図している。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明の教示によれば、（ａ）脂肪族カルボン酸銀の銀が公称原子価２を有する、脂肪族カルボン酸銀を含む抗微生物剤を含む、少なくとも１種の銀含有化合物であって、少なくとも１．１の平均原子価を有する少なくとも１種の銀含有化合物と、（ｂ）担体基剤とを含む抗微生物製剤であって、少なくとも１種の銀含有化合物が基剤内に分散されている抗微生物製剤が提供される。
【０００５】
本発明の一態様によれば、皮膚組織への塗布に好適な抗微生物製剤が提供され、製剤は、（ａ）カルボン酸塩の銀が公称原子価２または少なくとも２を有する、少なくとも１種のカルボン酸銀を含む少なくとも１種の銀含有化合物であって、少なくとも１．１の平均原子価を有する少なくとも１種の銀含有化合物と、（ｂ）担体基剤とを含み、少なくとも１種の銀含有化合物は基剤内に緊密に分散されており、製剤は少なくとも４．０、少なくとも４．１、少なくとも４．２または少なくとも４．３の反射単位（ＲＵ）の標準白色度値を有し、製剤は少なくとも０．１０％、少なくとも０．２０％、少なくとも０．３０％、少なくとも０．５０％、少なくとも０．７０％、少なくとも１．００％、少なくとも１．５％、少なくとも２．０％、少なくとも２．５％または少なくとも３．０％の総銀濃度を有する。
【０００６】
本発明の一態様によれば、皮膚組織への局所塗布での使用に好適な抗微生物製剤が提供され、製剤は、カルボン酸銀の銀が少なくとも２の公称原子価を有する少なくとも1種のカルボン酸銀を含む抗微生物剤を含む、少なくとも１種の銀含有化合物であって、少なくとも１．１の平均原子価を有する少なくとも１種の銀含有化合物を含む。
【０００７】
本発明の一態様によれば、局所皮膚病態の治療薬の製造におけるカルボン酸銀の使用が提供され、カルボン酸銀の銀は、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９もしくは２．０または実質的に２．０の公称原子価を有する。
【０００８】
本発明の一態様によれば、皮膚組織への塗布に好適な抗微生物製剤が提供され、製剤は、（ａ）カルボン酸銀の銀が少なくとも１．１の公称原子価を有する、少なくとも１種のカルボン酸銀を含む抗微生物剤を含む少なくとも１種の銀含有化合物と、（ｂ）担体基剤とを含む。
【０００９】
本発明の一態様によれば、カルボン酸銀（ＩＩ）またはカルボン酸銀（ＩＩ）製剤を製造する方法が提供され、該方法は、（ａ）カルボン酸と酸化銀（ＩＩ）を混合して、反応混合物を生成するステップと、（ｂ）反応混合物を加熱して、脂肪族カルボン酸銀を生成するステップをと含み、脂肪族カルボン酸銀の銀は公称原子価２を有する。
【００１０】
得られた反応混合物、またはその中のカルボン酸銀（ＩＩ）を担体基剤と混合して、カルボン酸銀（ＩＩ）製剤を製造することもできる。
【００１１】
反応温度は、少なくとも５０℃、少なくとも６０℃または少なくとも７０℃、より典型的には少なくとも８０℃、少なくとも８４℃または少なくとも８６℃であり得る。反応温度は、高くても１３５℃、高くても１２５℃、高くても１１５℃、高くても１１０℃、高くても１０７℃、高くても１０５℃、高くても１０３℃、高くても１００℃、高くても９８℃、高くても９６℃または高くても９４℃であり得る。反応温度は、６０℃〜１１０℃、８０℃〜１１０℃、８０℃〜１０５℃、８４℃〜１０５℃、８４℃〜１００℃、８４℃〜９８℃、８４℃〜９６℃または８６℃〜９６℃の範囲内であり得る。
【００１２】
反応混合物は、ステップ（ｂ）の少なくとも一部のあいだ、より典型的には実質的にステップ（ｂ）のあいだ中、撹拌され得る。
【００１３】
カルボン酸は、必要に応じて、酸化銀（ＩＩ）と混合する前に、予め加熱してもよい。典型的に、カルボン酸は、この混合ステップの前に液体状にする。
【００１４】
１種の溶媒または複数の溶媒を加えて、反応混合物の一部を形成してもよい。好ましくは、そのようないかなる溶媒も、酸化銀（ＩＩ）による酸化に影響されてはならず、または主として影響されてはならず、カルボン酸を少なくとも部分的に溶解するように選択することができる。
【００１５】
反応混合物が淡色になった後、加熱を短縮してよい。淡色になるのは、目視でまたは機器で観察することができる。
【００１６】
記載の好適な実施形態のさらなる特徴によれば、製剤はクリーム剤、乳剤または軟膏剤の形状である。
【００１７】
記載の好適な実施形態のさらなる特徴によれば、製剤の総銀含有量または少なくとも１種の銀含有化合物の総銀含有量は、０．０００５重量％〜２０重量％、０．０００５重量％〜１２重量％、０．０００５重量％〜７重量％、０．０００５重量％〜３．５重量％、０．０００５重量％〜３重量％、０．０００５重量％〜２．５重量％、０．００１重量％〜３．５重量％、０．００５重量％〜３．５重量％、０．０１重量％〜３．５重量％、０．０３重量％〜３．５重量％、０．０５重量％〜３．５重量％、０．１０重量％〜３．５重量％、０．３０重量％〜３．５重量％、０．５重量％〜３．５重量％、０．７重量％〜３．５重量％または０．９重量％〜３．５重量％の範囲内である。
【００１８】
記載の好適な実施形態のさらなる特徴によれば、脂肪族カルボン酸含有量はＡｇ４Ｏ４重量に基づいて少なくとも０．１重量％であり、製剤は白色または少なくともわずかに灰色がかった白色である。
【００１９】
記載の好適な実施形態のさらなる特徴によれば、脂肪族カルボン酸含有量はＡｇ４Ｏ４重量に基づいて少なくとも０．１重量％であり、製剤は白色または少なくともわずかに灰色がかった白色である。
【００２０】
記載の好適な実施形態のさらなる特徴によれば、製剤は典型的に、少なくとも３．４、少なくとも３．５、少なくとも３．６、少なくとも３．７、少なくとも３．８または少なくとも３．９の反射単位（ＲＵ）の標準白色度値を有し、Ａｇ４Ｏ４重量に基づいて少なくとも０．１重量％〜１．７重量％の範囲内を有する。
【００２１】
記載の好適な実施形態のさらなる特徴によれば、少なくとも１種の銀含有化合物の総銀含有量は、Ａｇ４Ｏ４重量に基づいて０．０９重量％〜１．７重量％の範囲内であり、製剤は少なくとも４．０、少なくとも４．１、少なくとも４．２または少なくとも４．３の反射単位（ＲＵ）の標準白色度値を有する。
【００２２】
記載の好適な実施形態のさらなる特徴によれば、少なくとも１種の銀含有化合物の総銀含有量は、０．８重量％〜３．４重量％の範囲内であり、製剤は少なくとも３．５、少なくとも３．６、少なくとも３．７、少なくとも３．８または少なくとも３．９の反射単位（ＲＵ）の標準白色度値を有する。
【００２３】
記載の好適な実施形態のさらなる特徴によれば、カルボン酸銀および担体基剤は、製剤が２４０ｎｍの紫外線（ＵＶ）に１２時間たえず曝される標準的なＵＶ光処置の後、製剤の標準白色度値が、処置前の製剤の最初の白色度値の０．６ＲＵ内、０．５ＲＵ内、０．４ＲＵ内、０．３ＲＵ内または０．２ＲＵ内にとどまるように選択される。
【００２４】
記載の好適な実施形態のさらなる特徴によれば、カルボン酸銀および担体基剤は、製剤が２４０ｎｍの紫外線（ＵＶ）に１２時間たえず曝される標準的なＵＶ光処置の後、製剤のＵＶ処置後の白色度値が少なくとも３．５反射単位（ＲＵ）、少なくとも３．６ＲＵ、少なくとも３．７ＲＵ、少なくとも３．８ＲＵ、少なくとも３．９ＲＵ、少なくとも４．０ＲＵまたは少なくとも４．１ＲＵにとどまるように選択される。
【００２５】
記載の好適な実施形態のさらなる特徴によれば、製剤は、０．３０重量％〜３．５重量％、０．４重量％〜３．５重量％、０．５重量％〜３．５重量％、０．６重量％〜３．５重量％、０．７重量％〜３．５重量％、０．３０重量％〜３重量％、０．４重量％〜３重量％、０．５重量％〜３重量％または０．６重量％〜３重量％の範囲内でカルボン酸銀を含有する。
【００２６】
記載の好適な実施形態のさらなる特徴によれば、平均原子価は、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９または約２．０である。
【００２７】
記載の好適な実施形態のさらなる特徴によれば、製剤は５％未満、４％未満、３％未満、２．５％未満、２．０％未満、１．５％未満、１．２％未満、１％未満、０．８％未満、０．６％未満または０．４％未満の酸化亜鉛を含有する。
【００２８】
記載の好適な実施形態のさらなる特徴によれば、製剤は、５％未満、４％未満、３％未満、２．５％未満、２．０％未満、１．５％未満、１．２％未満、１％未満、０．８％未満、０．６％未満または０．４％未満の白色化剤、例えば無機白色化剤を含有する。
【００２９】
記載の好適な実施形態のさらなる特徴によれば、白色化剤と少なくとも１種の銀含有化合物との重量比は、７：１未満、５：１未満、３：１未満、２：１未満、１．５：１未満、１．２：１未満、１：１未満、０．８：１未満、０．６：１未満、０．４：１未満、０．３：１未満、０．２：１未満、０．１：１未満または０．０５：１未満である。
【００３０】
記載の好適な実施形態のさらなる特徴によれば、白色化剤は、二価の塩もしくは二価の酸化物、例えばカルシウム塩もしくは酸化カルシウム、またはマグネシウム塩もしくは酸化マグネシウムを含む、これらを主に含んでいる、または実質的にこれらからなる。
【００３１】
記載の好適な実施形態のさらなる特徴によれば、製剤は、フッ化銀（ＩＩ）（ＡｇＦ２）、ピコリン酸銀（ＩＩ）（Ｃ１２Ｈ８ＡｇＮ２Ｏ４）またはその環もしくは芳香環に窒素原子を１つ有する他の任意の銀（ＩＩ）含有化合物、酸化銀（Ｉ）および酸化銀（ＩＩ）からなる群から選択される銀含有化合物を全体で、１０％未満、９％未満、８％未満、６％未満、４％未満、２％未満、１％未満、０．５％未満、０．２％未満、０．１％未満または０．０５％未満含有する。
【００３２】
記載の好適な実施形態のさらなる特徴によれば、少なくとも１種のカルボン酸銀は、４０未満、３８未満、３６未満、３４未満、３３未満、３２未満、３１未満、３０未満、２９未満、２８未満、２７未満、２５未満、２３未満、２２未満もしくは２１未満の炭素数または平均炭素数を有する二価のまたは少なくとも二価のカルボン酸銀を含む。
【００３３】
記載の好適な実施形態のさらなる特徴によれば、少なくとも１種のカルボン酸銀は、９を超える、１０を超えるもしくは１１を超える炭素数または平均炭素数を有する二価のまたは少なくとも二価のカルボン酸銀を含む。
【００３４】
記載の好適な実施形態のさらなる特徴によれば、炭素数または平均炭素数は、１１超４０未満、１３超４０未満、１４超４０未満、１１超３８未満、１１超３６未満、１１超３４未満、１１超３２未満、１１超３１未満、１１超３０未満、１１超２９未満、１１超２８未満、または１１超２７未満である。
【００３５】
記載の好適な実施形態のさらなる特徴によれば、製剤は、任意選択で、少なくとも２の公称原子価を有するカルボン酸銀の対応するカルボン酸を含む、少なくとも１種のカルボン酸を含有し、対応するカルボン酸とカルボン酸銀とのモル比は任意選択で少なくとも０．０１、少なくとも０．０２５、少なくとも０．０５、少なくとも０．１、少なくとも０．２、少なくとも０．５、少なくとも１．０、少なくとも１．５、少なくとも２または少なくとも３である。
【００３６】
記載の好適な実施形態のさらなる特徴によれば、カルボン酸塩の炭化水素構造は、完全飽和構造、一不飽和構造および多価不飽和構造からなる群の少なくとも１つから選択される。
【００３７】
さらなる特徴によれば、カルボン酸塩の骨格構造は、炭化水素直鎖および炭化水素分岐鎖からなる群から選択される少なくとも１つの構造を含む。
【００３８】
さらなる特徴によれば、カルボン酸塩の骨格構造は、環構造および芳香族構造からなる群から選択される少なくとも１つの構造を含む。
【００３９】
さらなる特徴によれば、カルボン酸塩はケトカルボン酸のカルボン酸銀を含む。
【００４０】
さらなる特徴によれば、製剤は、２５℃で、少なくとも２５ｃＰ、少なくとも１００ｃＰ、少なくとも２５０ｃＰ、少なくとも５００ｃＰ、少なくとも１，０００ｃＰ、少なくとも５，０００ｃＰ、少なくとも２０，０００ｃＰ、少なくとも５０，０００ｃＰ、少なくとも１５０，０００ｃＰ、少なくとも５００，０００ｃＰ、少なくとも１，０００，０００ｃＰ、少なくとも３，０００，０００ｃＰまたは少なくとも１０，０００，０００ｃＰの粘度を有する。
【００４１】
さらなる特徴によれば、製剤は特定の総銀含有量を有し、および製剤内の元素銀の濃度は特定の総銀含有量の多くても５０％、多くても３０％、多くても１５％、多くても５％、多くても３％または多くても１％である。
【００４２】
さらなる特徴によれば、担体基剤は、蜜ろう、ワセリン、液体ワックスエステル、油およびポリエチレンワックスからなる群から選択される材料を含み得る、または主に含み得る油性材料を含む、または油性材料を主に含む。
【００４３】
本発明は、添付の図面を参照して、単なる一例として本明細書において記述する。ここで特に図面を詳細に参照すると、強調すべき点は、詳細が、本発明の好適な実施形態の単なる一例であり、および単に例示的な考察の目的のために示されており、ならびに本発明の原理および概念的態様の最も有用かつ容易に理解される説明であると考えられるものを提供するために示されていることである。この点に関しては、本発明の根本的な理解のために必要である以上に詳細に本発明の構造上の詳細を示そうとしておらず、図面に伴う説明により、本発明のいくつかの形態が実際にどのように具体化され得るかは当業者には明らかである。全図面を通して、同じ符号を用いて同じ要素を表わす。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】実施例４の反応生成物の電子スピン共鳴（ＥＳＲ）スペクトルを示す。
【図２】ピコリン酸銀（ＩＩ）の比較ＥＳＲスペクトルを示す。
【図３】実施例６の反応生成物対パルミチン酸供給材料のスペクトルの赤外（ＩＲ）分光プロットを示す。
【図４】黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）２５９２３を用いた実施例１８〜２９の脂肪族カルボン酸銀（ＩＩ）の抗菌性能を経時的に示す棒グラフである。
【図５】大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）３５２１８を用いた実施例１８〜２９の脂肪族カルボン酸銀（ＩＩ）の抗菌性能を経時的に示す棒グラフである。
【図６】カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）１０２３１を用いた実施例１８〜２９の脂肪族カルボン酸銀（ＩＩ）の抗真菌性能を経時的に示す棒グラフである。
【図７】二ステアリン酸銀（９０％）と二ベヘン酸銀（１０％）の混合物のＥＳＲスペクトルを示す。
【図８】：蜜ろう（１９．８％）とホホバ油（７９．５％）とを含む基剤中にそれぞれ、（１）Ａｇ４Ｏ４（０．７％）、（２）Ａｇ２Ｏ（０．７％）および（４）ピコリン酸銀（ＩＩ）（０．７％）を含む製剤対実質的に同じ基剤中に０．７％二ステアリン酸銀を含有する本発明の製剤の製剤白色度の棒グラフである。
【図９】以下を含む従来技術の酸化銀（ＩＩ）製剤のＵＶ曝露前後の製剤白色度の棒グラフである：（１）Ａｇ４Ｏ４（０．１％）、（２）Ａｇ４Ｏ４（０．７％）、（３）Ａｇ４Ｏ４（１．５％）および（４）Ａｇ４Ｏ４（３％）。
【図１０】以下を含む従来技術の酸化銀（Ｉ）製剤のＵＶ曝露前後の製剤白色度の棒グラフである：（１）Ａｇ２Ｏ（０．１％）、（２）Ａｇ２Ｏ（０．７％）、（３）Ａｇ２Ｏ（１．５％）および（４）Ａｇ２Ｏ（３％）。
【図１１】Ａｇ４Ｏ４および蜜ろうから生成された本発明の製剤のＵＶ曝露前後の製剤白色度の棒グラフである。
【図１２】Ａｇ４Ｏ４および種々の無機白色化剤を含有する従来技術の製剤のＵＶ曝露前後の製剤白色度の棒グラフである。
【図１３】一部の製剤が種々の無機白色化剤を含有する、Ａｇ４Ｏ４および蜜ろうから生成された本発明の製剤のＵＶ曝露前後の製剤白色度の棒グラフである。
【図１４】種々の基剤中にカルボン酸銀（ＩＩ）を含有する本発明の製剤のＵＶ曝露前後の製剤白色度の棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００４５】
本発明に従う、カルボン酸銀（ＩＩ）製剤の原理、これらの製剤の製造方法、およびその使用方法は、図面および付随する説明を参照してよりよく理解することができる。
【００４６】
本発明の少なくとも一実施形態を詳細に説明する前に、本発明はその応用が以下の説明に記載の詳細に限定されないことを理解すべきである。本発明は、別の実施形態をとることができ、または種々の方法で実行もしくは行うことができる。また、本明細書で用いられる表現および用語は説明のためであり、限定するとみなすべきではないことを理解すべきである。
【００４７】
Ａｇ４Ｏ４（四酸化四銀）は、局所製剤中の他の成分に対して特に反応することもあり、それによって製剤の安定性が損なわれ得る。さらにこの製剤は、残念なことに暗褐色または黒色に変色し得る。
【００４８】
本発明者らは、抗微生物特性を有するカルボン酸銀（ＩＩ）製剤を調製する方法を見出した。そのような製剤の多くは、有利にも、淡色（例えば、淡黄色、黄褐色もしくは灰色がかった白色）または白色の外観を有し得る。
【００４９】
酸化銀（ＩＩ）および酸化銀（Ｉ）を含有する製剤とは、著しく、しかも大きく異なって、本発明の製剤は、銀含有抗微生物剤の濃度が増加しても、黒ずみを示さないか、またはせいぜいわずかな黒ずみしか示さないであろう。
【００５０】
本発明の製剤中のカルボン酸銀（ＩＩ）は、典型的に公称原子価２または少なくとも２を有し得る。製剤中のこれらのカルボン酸銀（ＩＩ）の濃度は、少なくとも２０ｐｐｍ、および１５重量％まで、または２０重量％まで、またはそれ以上であり得る。一部の実施形態において、これらのカルボン酸銀（ＩＩ）の濃度は、少なくとも３０ｐｐｍ、少なくとも１００ｐｐｍ、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１０％、少なくとも０．３％、少なくとも０．５％、少なくとも０．７％、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも５％、少なくとも７％、少なくとも１０％、少なくとも１５％または少なくとも２０％である。強調しなければならないのは、２０ｐｐｍもの低い濃度が、抗微生物剤または抗生物質の観点から、非常に有効であることが判明したことである。
【００５１】
一部の実施形態において、これらのカルボン酸銀の濃度は、多くても１０％、多くても７％、多くても５％、多くても３．５％、多くても３％または多くても２．５％である。一部の実施形態において、これらのカルボン酸銀の濃度は、２０ｐｐｍ〜５０％、２０ｐｐｍ〜４５％、２０ｐｐｍ〜４０％、２０ｐｐｍ〜３０％、２０ｐｐｍ〜２０％、２０ｐｐｍ〜１５％、２０ｐｐｍ〜１０％、２０ｐｐｍ〜５％、１００ｐｐｍ〜３％、０．０５％〜３％、０．１％〜３％、０．２％〜３％、０．３％〜３％、０．５％〜３％または０．７〜３％の範囲内である。
【００５２】
本発明の製剤は、抗生物質特性を有することが判明した、すなわちこれらの製剤は少なくとも１つの種またはタイプの微生物を攻撃して破壊することができるが、ヒト細胞および哺乳動物細胞に対して相対的不活性を選択的に示す。より典型的に、抗生物質は、通常、皮膚、体表創、褥瘡などに生息する少なくとも１つの種またはタイプの微生物を選択的に攻撃して破壊するが、ヒトおよび哺乳動物の皮膚細胞に対して相対的不活性を示す。
【実施例】
【００５３】
次に、上記の説明と共に、本発明を非限定的な様式で例示する以下の実施例を参照する。
【００５４】
これらの実施例では、使用した微生物は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｔｙｐｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手した大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）３５２１８と黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）２５９２３、およびカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）１０２３１であった。
【００５５】
材料および装置に関して、酸化銀（ＩＩ）は、Ａｍｅｓ  Ｇｏｌｄｓｍｉｔｈ  Ｉｎｃ．  （Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，ＵＳＡ）から入手した。酸化銀（ＩＩ）は、典型的に少なくとも９０重量％のＡｇ４Ｏ４を含有し、ＡｇＯおよびＡｇ２Ｏを多少含むこともある。
【００５６】
Ａｇ２Ｏ（カタログ番号Ｓ１０９０）は酸化銀（Ｉ）としても知られており、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，ＵＳＡ）から入手した。
【００５７】
４−フェニル酪酸および２−エチル−ヘキサン酸は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  （それぞれ、商品番号Ｐ２１００５および５３８７０１）から入手した。
【００５８】
ＳＹＴＯ（登録商標）細菌計数キットおよびＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｆｕｎｇａ  Ｌｉｇｈｔ（商標）Ｙｅａｓｔ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ｋｉｔは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｉｎｃ．（Ｔｅｘａｓ，ＵＳＡ）から入手した。細菌培養ブロスおよび培地は、Ｒｅｍｅｌ  Ｉｎｃ．（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＵＳＡ）から入手した。
【００５９】
微生物振盪インキュベーター（モデル３１１ＤＳ、Ｌａｂｎｅｔ  Ｉｎｃ．）およびＡｔｔｕｎｅ  フローサイトメーター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｉｎｃ．）は、それぞれ細菌培養および細菌アッセイで使用した。
【００６０】
１Ｈおよび１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ−３００分光計で得た。化学シフトは、内部標準として用いるＭｅ４Ｓｉ（ＴＭＳ）から低磁場のｐｐｍで表す。値を、δスケールで示す。
【００６１】
低分解能質量スペクトル（ＬＲＭＳ）も、ＥＳＩ（電子スプレーイオン化）を使用してＱ−ＴＯＦマイクロ（Ｗａｔｅｒｓ  ＵＫ）分光計で得た。
【００６２】
融点はＦｉｓｈｅｒ−Ｊｏｈｎｓ装置で測定し、補正しなかった。
【００６３】
銀元素分析は、Ｉｎｄｕｃｔｉｖｅｌｙ−Ｃｏｕｐｌｅｄ  Ｐｌａｓｍａ（ＩＣＰ）  Ａｔｏｍｉｃ  Ｅｍｉｓｓｉｏｎ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ（Ｕｌｔｉｍａ  ２，Ｊｏｂｉｎ  Ｙｖｏｎ  Ｈｏｒｉｂａ）によって行った。
【００６４】
電子スピン共鳴（ＥＳＲ）スペクトルは、Ｘ−バンドＥｌｅｘｓｙｓ  Ｅ５００  ＥＰＲ分光計（Ｂｒｕｋｅｒ，  Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）で得た。
【００６５】
実施例１
本発明による製剤（例えば、軟膏剤およびカルボン酸銀濃縮物）を生成する例示的な一般的手順は、以下の通りである。
【００６６】
酸化銀（ＩＩ）粉末を、秤量皿で量る。典型的に室温で固体であるカルボン酸含有材料を反応容器に入れて量り、典型的に８８〜９３℃の範囲内の温度に加熱して、液体媒質を得る。黒色の酸化銀（ＩＩ）粉末をこの熱い液体に加え、反応混合物を激しく撹拌する。この段階が終わるまで温度を８８〜９３℃に維持しながら、撹拌し続ける。典型的に、反応混合物を８８〜９３℃に維持すると、溶液は徐々に淡色になる。一般的な色の変化を観察することができ、反応混合物の色は、黒色（酸化銀（ＩＩ）の添加後）からオリーブグリーン、濃い黄色へと変化し得る。多くの場合、反応混合物の色は、淡い黄色へと変化し続け、さらに灰色がかった白色、最終的に白色に変化し得る。
【００６７】
特定のカルボン酸塩の性質、酸化銀（ＩＩ）とカルボン酸官能基とのモル比、混合条件（粘度を含む）および温度に応じて、反応時間は約１．５〜４８時間であり得る。任意選択で、製剤内のＡｇ４Ｏ４の存在を確実にするために、反応を意図的に短縮してもよい。
【００６８】
特に粘性のカルボン酸含有材料の場合、反応混合物の粘度は、低級カルボン酸（例えば、Ｃ１２酸）を加えることによって、低級（低炭素数）カルボン酸銀（例えばＣ１２カルボン酸銀（ＩＩ））を加えることによって、またはこれまでに生成したカルボン酸銀（ＩＩ）のバッチから生成物材料の一部を戻すことによって、低下させることができる。
【００６９】
実施例１からの生成物材料に、さらなる製剤化を行ってもよい。例えば、生成物材料を、油および／または液体ワックスエステル、例えばホホバ油と混合してもよい。任意選択で、１種または複数のカルボン酸銀（Ｉ）を製剤に混和してもよい。また、１種または複数の精油、例えばパルマローザ油を加えてもよい。混合物を約４０℃より下まで冷却する間、典型的に０．５〜２時間、撹拌を続けてもよい。次いで、製剤を貯蔵容器に注いでもよい。
【００７０】
実施例２
本発明による乳剤ベースのカルボン酸銀（ＩＩ）組成物および製剤を生成する例示的な一般的手順は、以下の通りである。製剤容器中で、水などの液体を好ましくは増粘剤、例えばベントナイトまたはヘクトライトと高速で混合または混和してもよい。好ましくは加熱したカルボン酸銀（ＩＩ）を加えながら、混合し続けてもよい。任意選択で、精油、例えばパルマローザ油を加えてもよい。
【００７１】
場合によっては、カルボン酸塩を製剤容器に入れる前に、液体ワックスエステルを加熱して、カルボン酸銀（ＩＩ）と混合してもよい。
【００７２】
高濃度の増粘剤（例えば、４〜７％のベントナイト）はより濃厚なクリーム剤に関連し得るが、低濃度の増粘剤（例えば、１〜２％のベントナイト）は比較的低粘度を有するクリーム剤に関連し得る。
【００７３】
実施例３
蜜ろうおよび／またはカルボン酸３０ｇをホットプレート上で、典型的に、約１００℃の温度で融解させる。蜜ろうおよび／または脂肪酸が融解した後、ＡｇＯを１ｇ加える。確実に混合物が燃えないように注意を払うべきである。
【００７４】
混合物は、最初の暗黒色から典型的に淡い色になり、最終的に淡黄色、灰色がかった白色、または白色になる。次いで、乳化ワックス２０ｇを約９０℃で融解し、続いて上記の反応混合物に加えて、激しく撹拌する。次いで、温度を約７５℃までゆっくりと低下させてもよい。温度が低すぎると、乳化ワックスが硬化することがあるので、下げすぎないように注意を払うべきである。
【００７５】
それとは別に、水６８０ｇとベントナイト粘土７０ｇを高せん断ブレンダー内で混和させてもよい。次いで、混合物を高の設定で約６０分間、混和させてもよい。
【００７６】
続いて、混和プロセス操作を続けながら、ホホバ油２４０ｇを上記の混合物に加えてもよい。この時点で、Ａｇ−蜜ろう／カルボン酸−乳化混合物５０ｇをエマルジョンに加えながら、十分な混和を４０分間続ける。最終生成物は、カルボン酸銀（ＩＩ）を含有するエマルジョンであり得る。
【００７７】
実施例４
Ａｇ４Ｏ４（０．３ｇ、２４．２２ｍｍｏｌ）と４−フェニル酪酸（芳香族脂肪族カルボン酸）（３．９７ｇ、２．４２ｍｍｏｌ）との混合物を９０℃で終夜撹拌した。最初は黒色だった反応混合物は、最終的に白色になった。得られた白色固体の約１０ｍｇの試料を水および少量の濃アンモニアと混合し、次いでこの溶液のＥＳＲスペクトルを得た。図１に示す得られたＥＳＲスペクトルは、Ａｇ＋２などのフリーラジカルの存在を示している。以下に記載する種々の試験手順に基づいて、反応生成物はジ−４−フェニル酪酸銀（ＩＩ）である。
【００７８】
ピコリン酸Ａｇ（ＩＩ）のＥＳＲスペクトルを比較目的で、図２に示す。
【００７９】
実施例５
実施例４に記載のものと同様の反応を、Ａｇ４Ｏ４（０．２ｇ、１．６１ｍｍｏｌ）を用いて行ったが、４−フェニル酪酸を分岐脂肪族カルボン酸である２−エチルヘキサン酸（１．８６ｇ、１０ｍｍｏｌ）、と入れ替えた。最初は黒色だった反応混合物は、徐々に淡色になり、最終的に白色になった。白色固体について行った１３Ｃ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−Ｄ６）により、２−エチルヘキサン酸中でｐｐｍδが得られ、ＣＯＯＨ炭素は１７７．３４ｐｐｍの化学シフトを有するが、単離した銀塩中のＣＯＯ−炭素は１７９．４ｐｐｍの化学シフトを有する。
【００８０】
実施例６
Ａｇ４Ｏ４  ３．０ｇをパルミチン酸４０ｇに加えた。反応混合物を９０℃〜１１０℃の範囲内で終夜維持し、白色のワックス状物質を得た。
【００８１】
この物質を赤外（ＩＲ）分光分析に送り、結果をこの合成で使用したパルミチン酸のスペクトルと比較した。得られたＩＲプロットを図３に示す。
【００８２】
波数１５１９および約１４２０（分解されてない）でのピークは、カルボン酸塩のＣＯＯ−非対称および対称伸縮振動を示し得る。１５１９のピークは、”Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  ｏｆ  Ｓｉｌｖｅｒ  Ｂｅｈｅｎａｔｅ”，  Ｔｈｅｒｍｏｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ  ４４０（２００６）１−６，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  ＰｒｅｓｓにＬｉｕらによって報告されたベヘン酸銀のピークと正確に一致する。これらのピークは、パルミチン酸試料には無い。
【００８３】
加えて、波数１７０３でのＣ＝Ｏ伸縮および波数１２９６でのＣ−Ｏ伸縮は、脂肪酸から生成物で減少し、ＣＯＯＨ基の数が減少していることを示唆する。
【００８４】
これらの証拠の断片は、カルボン酸銀錯体の形成を強く示唆している。
【００８５】
実施例７〜１０
実施例７〜１０で行った反応のすべては、約０．０１２モルの銀を含有するＡｇ４Ｏ４  １．５ｇを用いて行った。これらの反応は、媒質または溶媒としてｎ−ドコサノールを使用して行い、ｎ−ドコサノールおよび脂肪酸の重量は、合計４０ｇであった。使用したパルミチン酸は、９７．４％のパルミチン酸を含み、純粋な材料との相違をモル算出に入れた。
【００８６】
結果を表１にまとめる。モル比２：１（ＡｇＯに基づいて、カルボン酸基：Ａｇ４Ｏ４）およびそれを超える比の場合、白色固体を得たが、モル比１．６：１の場合、淡い茶色の固体が得られた。Ａｇ４Ｏ４と反応するために十分量のカルボン酸が存在せず、したがって、残っていたＡｇ４Ｏ４が溶媒と反応したか、またはおそらく一部は未反応のままであったことは明らかである。
【００８７】
カルボン酸塩中の銀の原子価の追加的裏づけを以下に示す。
【００８８】
【表１】
0006622218.tif 000002
【００８９】
実施例１１〜１４
実施例１１〜１４で行った反応のすべては、約０．０１２モルの銀を含有するＡｇ４Ｏ４１．５ｇを用いて行った。これらの反応は、媒質または溶媒としてｎ−ドコサノールを使用して行い、ｎ−ドコサノールおよび脂肪酸の重量は、合計４０ｇであった。使用したベヘン酸は、８９．３％のベヘン酸を含んでおり、純粋な材料からの相違をモル算出に入れた。
【００９０】
結果を表２にまとめる。
【００９１】
【表２】
0006622218.tif 000003
【００９２】
２：１を超えるモル比の場合、白色固体を得た。実施例１３では、Ａｇ４Ｏ４と反応するベヘン酸（０．３ｇ少ない）がわずかに少なく、反応混合物は淡い茶色になった。上述のように、Ａｇ４Ｏ４と反応するために十分量のカルボン酸が存在せず、したがって過剰のＡｇ４Ｏ４は溶媒と反応したか、またはおそらく一部は未反応のままだったことは明らかである。
【００９３】
２：１をかなり下回る１：１のモル比では、反応混合物は茶色がかった灰色になった。
【００９４】
実施例１５〜１７
実施例７のパルミチン酸銀（ＩＩ）、実施例１１のベヘン酸銀（ＩＩ）および実施例４の４−フェニル酪酸銀（ＩＩ）のそれぞれを、蜜ろうとホホバ油とを含有する基剤に加えて、実施例１５〜１７（１％／２０％の蜜ろう／７９％のホホバ油）製剤を生成した。製剤は、物理的および化学的安定性を示した。パルミチン酸銀（ＩＩ）（実施例１５）、ベヘン酸銀（ＩＩ）（実施例１６）および４−フェニル酪酸銀（ＩＩ）の製剤のそれぞれを３〜１２ヵ月にわたり試験して、長期の物理的および化学的安定性を評価した。製剤の分解は観察されず、物理的な相分離は実質的になく、製剤は時間が経っても淡色／白色を保持した。
【００９５】
カルボン酸銀（ＩＩ）の他の試料を進行中の経時変化試験の対象とする。カルボン酸銀（ＩＩ）の種々の製剤が加速試験手順で紫外（ＵＶ）光に供されている。種々の比較実施例と共に、結果を以下の実施例８４〜１０４に示す。
【００９６】
実施例１８〜２９
Ａｇ４Ｏ４と種々の脂肪族カルボン酸との間の一連の反応は、一般的に実施例１に示した合成手順に従って行った。各合成において、特定のカルボン酸（Ｃ８からＣ２６の範囲）８０ｇまたは蜜ろう８０ｇを反応器に移した。
【００９７】
これらの脂肪族カルボン酸はすべて、融点が９０℃未満である。必要に応じて、特定のカルボン酸または複数のカルボン酸が融解した後、温度を約９０〜１００℃にゆっくりと上昇させてもよい。反応は、低温では明らかに遅くなり得るかまたは反応が起こらないこともあるが、約１０５℃を超えると種々の副反応が起こり得るか、または副反応が主反応になり得る。
【００９８】
続いて、Ａｇ４Ｏ４  ３ｇを加え、反応が起こっている間、反応混合物を撹拌した。一般的な色の変化を観察した。反応混合物の色は、一般的に黒色（黒色の酸化銀（ＩＩ）粉末を加えた後）からオリーブグリーン、濃い黄色へと変化した。多くの場合、反応混合物の色は、最初に淡い黄色に変化していき、さらなる反応時間で灰色がかった白色に、最終的に白色に変化した。
【００９９】
特定の脂肪酸に応じて、反応は一般に、約３〜３０時間内に完了するように見えた。
【０１００】
約３２０ｇのホホバ油を約８８℃に加熱し、反応が完了したように思われた後、反応混合物に加えた。次いで、反応混合物を約３０秒間ホモジナイズし、約４０℃に徐々に冷却して、貯蔵容器に移した。
【０１０１】
反応の結果を下記の表３にまとめる。
【０１０２】
【表３】
0006622218.tif 000004
【０１０３】
実施例３０
１．ＡＴＣＣのガイドラインに従って、最初に細菌細胞を、３１１ＤＳインキュベーター内でトリプシン大豆寒天を含有する培養フラスコに播種した。
２．細菌細胞は９０％コンフルエンスに達するために約３０時間を要する。次いで、これらの細胞を１０ｍＬのブロスを含有する複数の試験管にそれぞれ播種した。各試験管に同じ細胞数を維持するように注意を払った。
３．各実験の時点で、対照の試験管にも播種した。
４．生物学的安全キャビネット内で無菌のペーパーディスクを扱い、その中に１％の試験製剤を慎重に塗抹した。
５．次いで塗抹したペーパーディスクを、細菌ブロスを含む試験管に入れ、試験管を振盪インキュベーター内に配置した。同時に、「空の」ペーパーディスクを対照の細菌ブロスに入れた。
６．種々の製剤、および種々の実験時間を用いてこのプロセスを数回繰り返した。
【０１０４】
実施例３１
１．指定した時点（２０〜１８０分）で、細菌を特定の製剤で処置して、対応する対照と共に試験管をインキュベーターから取り出した。無菌ピンセットを使用して、ペーパーディスクを取り除いて廃棄し、次いで細菌を５０００ｇで３０秒間遠心分離した。
２．２ｍＬの新しいトリプシン大豆ブロスに細菌ペレットを再懸濁した。
３．この時点で、２μＬのＳＹＴＯ（登録商標）細菌染料（成分Ａ）を細胞に加えて、５分間インキュベートした。
４．インキュベーション後、１０μＬの成分Ｂを加え、さらに５分間インキュベーションを続けた。次いで、フローサイトメーターを使用して試料を分析した。フローサイトメーターは、結果を対照のパーセンテージとして表し、スケールとしてそのパーセンテージを用いて細胞数を計算上決定することができる。
５．ＳＹＴＯ（登録商標）染料による染色性に基づいて、細菌数を確認する。成分は約１５日後に分解し始めることから、新しいキットを２週間ごとに使用した。
【０１０５】
上述の技術を使用して、試料を細胞生存率に関して分析し、以下に示すように、結果を記録した。
【０１０６】
実施例３２〜４１
脂肪族カルボン酸銀（ＩＩ）の抗菌性能−黄色ブドウ球菌
上述の技術を使用して、黄色ブドウ球菌２５９２３を用い、実施例１８〜２９のほとんどの脂肪族カルボン酸銀（ＩＩ）の抗菌性能を評価した。経時的結果を図４に棒グラフで示す。
【０１０７】
４時間にわたる測定の間、１０種の銀（ＩＩ）含有製剤のすべてが抗菌活性を示した。１０種の製剤のうち、Ｃ１２を上回る炭素数を有する製剤は、４時間後、細菌数が対照値の約１／５〜１／３まで減少したことから、特に有効であるように思われた。
【０１０８】
実施例４２〜５１
上述の技術を使用して、大腸菌３５２１８を用い、実施例１８〜２９のほとんどの脂肪族カルボン酸銀（ＩＩ）の抗菌性能を評価した。経時的結果を図５に棒グラフで示す。
【０１０９】
４時間にわたる測定の間、１０種の銀（ＩＩ）含有製剤のすべてが抗菌活性を示した。１０種の製剤のうち、Ｃ１２を上回る炭素数を有する製剤は、４時間後、細菌数が対照値の約０〜１／３まで減少したことから、特に有効であるように思われた。
【０１１０】
実施例５２
１．真菌試料を指定した時点（２０〜１８０分）で特定の製剤で処置した後、対応する対照と共に試験管をインキュベーターから取り出した。無菌的なピンセットを使用して、ペーパーディスクを取り除いて廃棄し、次いで真菌試料を１０００ｇで６０秒間遠心分離した。
２．２ｍＬの新しいサブロー液体培地に真菌ペレットを再懸濁した。
３．この時点で、１０μＬのＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｆｕｎｇａ  Ｌｉｇｈｔ（商標）Ｙｅａｓｔ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ｋｉｔを細胞に加えて、５分間インキュベートした。
４．次いで、フローサイトメーターを使用して試料を分析した。フローサイトメーターは、結果を対照のパーセンテージとして表し、スケールとしてそのパーセンテージを用いて細胞数を計算上決定することができる。
５．ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｆｕｎｇａ  Ｌｉｇｈｔ（商標）Ｙｅａｓｔ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ｋｉｔを用いる染色性に基づいて、真菌数を確認する。成分は約１５日後に分解し始めることから、新しいキットを２週間ごとに使用した。
【０１１１】
実施例５３〜６２
上述の技術を使用して、カンジダ・アルビカンス１０２３１を用い、実施例１８〜２９のほとんどの脂肪族カルボン酸銀（ＩＩ）の抗真菌性能を評価した。経時的結果を図６に棒グラフで示す。
【０１１２】
４時間にわたる測定の間、１０種の銀（ＩＩ）含有製剤のすべては抗真菌活性を示した。１０種の製剤のうち、Ｃ１２を上回る炭素数を有する製剤は、６時間後、細菌数が一般的に、半分以上減少し、より典型的には対照値と比較して、約６０〜７５％減少したことから、特に有効であるように思われた。
【０１１３】
実施例６３
合成手順は、一般的に実施例１に示した手順によって行った。反応容器中でパルミチン酸３０ｇを約９８℃に加熱した。
【０１１４】
続いて、Ａｇ４Ｏ４  ３ｇを加え、反応混合物を約４８時間にわたり撹拌した。最初は黒色酸化銀（ＩＩ）粉末により黒色であった反応混合物の色は、最終的に白色になった。
【０１１５】
生成した濃縮パルミチン酸銀（ＩＩ）（ジパルミチン酸銀（ＩＩ）としても知られている）は算出濃度が約４６％であり、残りは主に過剰なパルミチン酸からなっていた。
【０１１６】
実施例６４
一般的に実施例３に示す手順によって乳剤を調製した。約６８０ｇの水を高せん断ブレンダーに加え、次いでベントナイト粘土７０ｇをそれに加えた。混合物を高の設定で６０分間、混和した。
【０１１７】
ビーカーでホホバ油２４０ｇを約９３℃に加熱し、実施例６２の濃縮パルミチン酸銀（ＩＩ）製剤１０ｇを加えた。次いで、混合物を１分間ホモジナイズした。
【０１１８】
次いで、この混合物を水−ベントナイト基剤に加え、この新しい混合物を高速で約４０分間撹拌した。
【０１１９】
得られた製剤は、約０．５％のパルミチン酸銀（ＩＩ）を含有する乳剤であった。
【０１２０】
実施例６５
実施例６４に示した手順によって乳剤を調製したが、実施例６３の濃縮パルミチン酸銀（ＩＩ）製剤を２ｇのみ加えた。
【０１２１】
得られた製剤は、約０．１％のパルミチン酸銀（ＩＩ）を含有する乳剤であった。
【０１２２】
実施例６６〜６８
実施例１に記載のプロセスを用いて、Ａｇ４Ｏ４  １．４ｇを加熱した蜜ろうに加え、混合してカルボン酸銀（ＩＩ）を生成した。
【０１２３】
次いで、蜜ろうに融解したカルボン酸銀（ＩＩ）５０ｇを、別々の容器中の５０ｇのすでに融解してあるワセリン（実施例６６）、ＡＣ−６２９（実施例６７）およびヤシ油（実施例６８）に加え、約８０℃に加熱した。次いで、各混合物をホモジナイズし、冷却した。
【０１２４】
これらの３種の軟膏剤のすべては、強力な抗微生物剤として作用することがわかった。
【０１２５】
実施例６９〜７１
前の実施例に記載のように、Ａｇ４Ｏ４を加熱した蜜ろうに加えた。
【０１２６】
次いで、蜜ろうに融解したカルボン酸銀（ＩＩ）１０ｇを、別々の容器中の５０ｇのすでに融解してあるワセリン（実施例６９）、ＡＣ−６２９（実施例７０）およびヤシ油（実施例７１）に加え、約８０℃に加熱した。次いで、各混合物をホモジナイズし、冷却した。
【０１２７】
これらの３種の軟膏剤のすべては、強力な抗微生物剤として作用することがわかった。
【０１２８】
実施例７２
カルボン酸銀（Ｉ）とホホバ油に基づく軟膏剤を、一般的に実施例１により調製したが、市販のパルミチン酸銀（Ｉ）を使用した。
【０１２９】
約２．２重量％のカルボン酸銀を含有する軟膏剤は、抗微生物活性を示すことがわかった。
【０１３０】
実施例７３
カルボン酸銀（Ｉ）に基づく軟膏剤を、一般的に実施例６６によって調製したが、蜜ろうと反応させる酸化銀（ＩＩ）の代わりに、市販のステアリン酸銀（Ｉ）を使用した。
【０１３１】
約１．３重量％のカルボン酸銀を含有する軟膏剤は、抗微生物活性を示すことがわかった。
【０１３２】
実施例７４
実施例２２からのパルミチン酸銀（ＩＩ）と実施例７２からのパルミチン酸銀（Ｉ）を別々に加熱し、１：６の比で混合して、混合カルボン酸銀（ＩＩ）−銀（Ｉ）の製剤を生成した。得られた製剤は、抗微生物活性を示すことがわかった。
【０１３３】
実施例７５
実施例２１からのラウリン酸銀（ＩＩ）と実施例７２からのパルミチン酸銀（Ｉ）を別々に加熱し、１：９の比で混合した。得られた製剤は、抗微生物活性を示すことがわかった。
【０１３４】
実施例７６
クリーム剤または軟膏剤中の銀に結合している有機酸の決定、およびその中で見い出されたカルボン酸銀中の銀イオンの酸化状態の決定は、以下のように行うことができる。
【０１３５】
クリーム剤の試料をトルエンと混合して、親油性物質を取り除き、固相または半固相中に有機塩を残した。混合物を遠心分離して、上清をデカントした。残留物をエーテルで洗浄して、残っている微量のトルエンを取り除き、次いで残留物を乾燥させた。
【０１３６】
次いで、この残留物を過剰量のトリフルオロ酢酸と混合して、いかなるカルボン酸銀もトリフルオロ酢酸銀に変換し、カルボン酸塩を対応する遊離カルボン酸として遊離させた。得られた混合物を蒸発させた。残留物をエーテルと混合して、遠心分離し、次いで上清を分離して蒸発させた。
【０１３７】
エーテルの蒸発後に得られた残留物を１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣ１３）によって分析した。残留物は、以下の特性を有するスペクトルを生じた：ｐｐｍδ０．９０（ｔ、３Ｈ）、１．２５（ｂｓ、２８Ｈ）、１．６１（ｑ、２Ｈ）、２．２４（ｔ、２Ｈ）。このことは、存在する化合物がステアリン酸であることを示している。しかし、１．２５ｐｐｍでのピークの積分により、少量のさらなる水素が存在することが示され、これは少量（存在する酸の１０％未満）のベヘン酸に起因し得る。
【０１３８】
クリーム剤とトルエンを混合して得られた残留物（２０７ｍｇ）の第２の試料を少量の濃硝酸に溶解した。この硝酸溶液をエーテルで洗浄し、エーテルをデカントして、水相を水で希釈した。
【０１３９】
ＩＣＰによる銀元素分析により、得られた銀の量（３３．６ｍｇ／Ｌ）が約９７％の精度で、二ステアリン酸銀（９０％）と二ベヘン酸銀（１０％）との混合物中の銀の算出濃度と一致したことが明らかとなった。
【０１４０】
９０／１０の二ステアリン酸／ニベヘン酸で構成される場合、２０７ｍｇの残留物は３２．５ｍｇ／Ｌの銀の算出値を与える。３２．５ｍｇ／Ｌのこの理論値は、３３．６ｍｇ／Ｌの実測値の３％以内であり、銀イオンの酸化状態がＡｇ＋２であったことを示している。得られた塩がＡｇ＋１イオンであったならば、２０７ｍｇの残留物中の銀の算出量は４９ｍｇ／Ｌであったであろう。
【０１４１】
さらに、図７に示す得られたＥＳＲスペクトルは、Ａｇ＋２の存在を確証すると思われる。
【０１４２】
実施例７７
製剤の反射率、明度または白色度を以下の通りに評価した。約１ｇの特定の試料（典型的に、軟膏剤またはクリーム剤）を５ｃｍ×５ｃｍの面積の白い綿布の上に広げ、典型的に金属製へらを使用して均一に塗布する。
【０１４３】
ＬａｂＳｃａｎ  ＸＥ分光光度計装置（ＨｕｎｔｅｒＬａｂ，ＶＡ）を用いて、各試料の反射率を評価した。この装置の作動原理は、光反射の特性に関係する。綿布試料は、真っ暗な容器に保存されている。反射率を測定するために、装置は制御された反復パルスの光に試料を曝す。試料の明度は、一般に反射率と相関しており、高い値は、より明るい試料に対応する。
【０１４４】
分光光度計は、３７５ｎｍ〜７５０ｎｍの波長範囲と、１０ｎｍの光学解像度を有する。分光光度計は、０°／４５°の幾何学を用いて、反射色を測定する。
実施例７８
【０１４５】
製剤の反射率は、紫外線への曝露時間の関数として以下のように評価した。実施例７４に記載のＬａｂＳｃａｎ  ＸＥ分光光度計を使用した。各試料を光源により発生した紫外線に連続的に曝露した。連続ＵＶ曝露は、Ｃｏｌｅ−Ｐａｒｍｅｒ（登録商標）によって販売されている２５４ｎｍ、６Ｗ  ＵＶ電球を介して行われる。ＵＶ光源と試料または製剤との間の距離は、１８インチ（約４５．７ｃｍ）であった。
【０１４６】
試料調製は、実質的に、実施例７４に記載のものと同じあった。最初の測定（「０時間」）の後、典型的に１２または２４時間後、紫外線への曝露の間に追加の測定を行った。
【０１４７】
実施例７９〜８３
図８は、蜜ろう（１９．８％）およびホホバ油（７９．５％）を含有する基剤中にそれぞれ、（１）Ａｇ４Ｏ４（０．７％）、（２）Ａｇ２Ｏ（０．７％）、および（４）ピコリン酸銀（ＩＩ）（０．７％）を含む製剤対実質的に同じ基剤中に０．７％二ステアリン酸銀を含む本発明の製剤に関する製剤白色度をプロットする棒グラフである。
【０１４８】
実施例８４〜８７
図９は、ホホバ油と蜜ろうを約４：１の重量比で含有する基剤中にそれぞれ、（１）Ａｇ４Ｏ４（０．１％）、（２）Ａｇ４Ｏ４（０．７％）、（３）Ａｇ４Ｏ４（１．５％）、および（４）Ａｇ４Ｏ４（３％）を含む従来技術の製剤に関する製剤白色度をプロットする棒グラフである。ＵＶ曝露前の最初の測定後、追加の測定を紫外光への曝露から１２時間後に行った（実施例７７〜７８を参照されたい）。
【０１４９】
実施例８８〜９１
図１０は、ホホバ油と蜜ろうを約４：１の重量比で含有する基剤中にそれぞれ、（１）Ａｇ２Ｏ（０．１％）、（２）Ａｇ２Ｏ（０．７％）、（３）Ａｇ２Ｏ（１．５％）、および（４）Ａｇ２Ｏ（３％）を含有する従来技術の製剤に関する製剤白色度をプロットする棒グラフである。ＵＶ曝露前の最初の測定後、追加の測定を紫外光への曝露から１２時間後に行った（実施例７７〜７８を参照されたい）。
【０１５０】
実施例９２〜９５
図１１は、本発明による製剤の製剤白色度をプロットする棒グラフであり、製剤は、ホホバ油と蜜ろうを約４：１の重量比で含有する基剤中にそれぞれ、
（１）カルボン酸銀（ＩＩ）（Ａｇ４Ｏ４に基づいて０．１％）；（２）カルボン酸銀（ＩＩ）（Ａｇ４Ｏ４に基づいて０．７％）；（３）カルボン酸銀（ＩＩ）（Ａｇ４Ｏ４に基づいて１．５％）；および（４）カルボン酸銀（ＩＩ）（Ａｇ４Ｏ４に基づいて３％）を含有する。カルボン酸銀（ＩＩ）はＡｇ４Ｏ４および蜜ろうから生成した。ＵＶ曝露前の最初の測定後、追加の測定を紫外線への曝露から１２時間後に行った（実施例７７〜７８を参照されたい）。
【０１５１】
実施例９６〜９８
図１２は、各々ホホバ油と蜜ろうを約４：１の重量比で含有する基剤中にそれぞれ、（１）５％ＺｎＯと０．７％Ａｇ４Ｏ４、（２）５％ＭｇＯと０．７％Ａｇ４Ｏ４および（３）５％ＴｉＯ２と０．７％Ａｇ４Ｏ４を含む従来技術の製剤に関する製剤白色度をプロットする棒グラフである。ＵＶ曝露前の最初の測定後、追加の測定を紫外光への曝露から１２時間後に行った（実施例７７〜７８を参照されたい）。
【０１５２】
実施例９９〜１０１
図１３は、本発明による製剤の製剤白色度をプロットする棒グラフであり、製剤は、ホホバ油と蜜ろうを約４：１の重量比で含有する基剤中にそれぞれ、（１）カルボン酸銀（ＩＩ）（Ａｇ４Ｏ４に基づいて０．７％）と５％ＺｎＯ；（２）カルボン酸銀（ＩＩ）（Ａｇ４Ｏ４に基づいて０．７％）と５％ＭｇＯ；および（３）カルボン酸銀（ＩＩ）（Ａｇ４Ｏ４に基づいて０．７％）と５％ＴｉＯ２を含有する。カルボン酸銀（ＩＩ）は、Ａｇ４Ｏ４と蜜ろうから生成した。ＵＶ曝露前の最初の測定後、追加の測定を紫外光への曝露から１２時間後に行った（実施例７７〜７８を参照されたい）。
【０１５３】
実施例１０２〜１０４
図１４は、本発明による製剤の製剤白色度をプロットする棒グラフであり、製剤は、（１）ワセリン基剤中にカルボン酸銀（ＩＩ）（Ａｇ４Ｏ４に基づいて０．７％）；（２）ＡＣ−６２９基剤中にカルボン酸銀（ＩＩ）（Ａｇ４Ｏ４に基づいて０．７％）；（３）ヤシ油基剤中にカルボン酸銀（ＩＩ）（Ａｇ４Ｏ４に基づいて０．７％）を含有する。カルボン酸銀（ＩＩ）はＡｇ４Ｏ４と蜜ろうから生成した。ＵＶ曝露前の最初の測定後、追加の測定を紫外光への曝露から１２時間後に行った（実施例７７〜７８を参照されたい）。
【０１５４】
実施例１０５〜１１３
カルボン酸銀（ＩＩ）の製剤は、実施例２１〜２９に示す手順によって調製したが、酸化銀（ＩＩ）は２．４ｇ（３ｇの代わりに）を用いた。気密プラスチック貯蔵容器に保管した後、製剤の色およびテクスチャを３ヵ月に一回モニターした。これらの製剤は、室温で３ヵ月、６ヵ月、９ヵ月または１年の貯蔵後に相分離または黒ずみ／変色を示さなかった。１４ヵ月の貯蔵から現在まで、製剤は、同様に新しく生成したカルボン酸銀（ＩＩ）製剤と実質的に同じに見える。その上、年数を経た製剤は、強い抗微生物活性を示し続けた。
【０１５５】
実施例１１４  
ウイルスアッセイプロトコル
正常なＮＲＫ  ５２Ｅ（ラット腎上皮細胞）の播種：
１．細胞の実質的に同じ基本溶液を３種作製する。各溶液は増殖培地１ｍＬ当たり細胞１・１０６個を有する。
溶液１：対照溶液；
溶液２：第２の基本溶液に、すべてホホバ油と蜜ろうを約３．５：１で含有する基剤中に、ＡｇＯに基づいて０．７％のカルボン酸銀（ＩＩ）と、アルコール（６７％）含有０．２％液体と、水（３３％）と、微量のニオイヒバ抽出物とを含有する、約０．１重量％の本発明のいぼ用ホメオパシー製剤を加える；および
溶液３：第３の基本溶液に、いずれもホホバ油と蜜ろうを約５：１で含有する基剤中に、ＡｇＯに基づいて０．７％のカルボン酸銀（ＩＩ）と、サリチル酸（１２％）とを含有する、約０．１重量％の本発明のいぼ用スティックを加える。
２．これらの３種の溶液をすべてボルテックスし、
３．６ウェルプレートに増殖培地１．０ｍＬと細胞とを加え、次いで
４．５％ＣＯ２を含むインキュベーター内で、３７℃で、これらのプレートをインキュベートする。およそ１２〜２４時間後、細胞は約９０〜１００％コンフルエントになっているはずである。
感染用アデノウイルスを準備する：
１．それぞれ２ｍＬのＰＢＳを含有する４本の試験管を準備する；
２．第１の試験管にウイルス試料２０μＬを加える；
３．十分にボルテックスする。
細胞にウイルスを感染させる：
１．各ウェルから５ｍＬの培地をピペットで取り、捨てる。ここで、１ｍＬの培地が各単層に残っているはずである。
２．各ウェルにウイルス溶液１００μＬ加える。この時点で、６ウェルプレートは、対照、ホメオパシーとテラシルの併用およびサリチル酸とテラシルの併用に関して３枚あるはずで、それぞれにアデノウイルスを感染させた。
３．感染した単層（複数）を３７℃で２４時間インキュベートする。
寒天の重層：
１．１２１℃で２０分間オートクレーブすることによって、４％アガロースの蒸留水溶液の無菌液を調製する。
２．アガロース液を３７℃に冷却する。
３．３種の試料の各ウェルに３ｍＬのアガロースを静かに重ねていき、１５分間凝固させる。
４．１０％ＣＯ２下、３７℃の加湿インキュベーターにプレート（複数）を移す。
感染後４８〜７２時間で、濃い紫色のプラークが見えるようになる。プラークは肉眼で見え、および光源の上部にウェルプレートを置くことによって計数することができる。
【０１５６】
実施例１１５〜１１６
ウイルスアッセイ−結果
【０１５７】
【表４】
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【０１５８】
実施例１１７
Ａｇ４Ｏ４とリノール酸（多価不飽和ω−６脂肪酸）の間の反応は、一般的に実施例１に記載の合成手順によって行った。室温で液体のリノール酸を反応容器で約９３℃に加熱した。
【０１５９】
その後、Ａｇ４Ｏ４  ３．７５ｇを加え、反応が起きている間、反応混合物を撹拌した。反応混合物の色は、黒色の酸化銀（ＩＩ）粉末を加えた後、濃い灰色から黄色、灰色がかった白色へと徐々に変わった。生成された白色の固体は、溶液から分離可能で、抗微生物効能を示した。
【０１６０】
実施例１１８
Ａｇ４Ｏ４とオレイン酸（一価不飽和脂肪酸）の間の反応は、一般的に実施例１１７に記載の合成手順によって、同量のＡｇ４Ｏ４および脂肪酸を用いて行った。反応混合物の色は、黒色の酸化銀（ＩＩ）粉末を加えた後、濃い灰色から黄色、灰色がかった白色へと徐々に変わった。生成された白色の固体は、溶液から分離可能で、抗微生物効能を示した。リノール酸の変換は、オレイン酸の変換より急速に起こるように見えた。
【０１６１】
本発明の製剤において、ケトン部分が、炭化水素鎖の長さ（酸部分から１〜２位内を除いて）に沿った水素部分の代用となり得ると、本発明者らは考えている。そのような構造は、合成の間、酸化銀（ＩＩ）による攻撃にほとんど影響されないであろう。同様に、ハロゲン部分、最も典型的に塩素部分も、一般的に、炭化水素鎖の長さに沿った水素部分の代用となり得る。
【０１６２】
本明細書に記載の方法は、特にカルボン酸、より具体的には、１０５℃未満、より典型的には１０２℃未満、１００℃未満、９８℃未満、９６℃未満、９３℃未満または９０℃未満の融点を有する、脂肪酸などの脂肪族カルボン酸に好適であることが分かった。これらの温度をはるかに下回る融点を有するカルボン酸は、さらにかなり容易にカルボン酸（Ａｇ＋２）に変換する傾向があった。
【０１６３】
一価不飽和酸および多価不飽和酸の変換は、対応する飽和酸に関して比較的容易に起こり得る。
【０１６４】
本明細書および以下の特許請求の範囲の項で用いる場合、化学薬剤または製剤に関して、「抗微生物」という用語は、微生物に有害である、またはその増殖を阻害する物質を指す。
【０１６５】
本明細書および以下の特許請求の範囲の項で用いる場合、「抗生物質」という用語は、少なくとも１つの種またはタイプの微生物を選択的に攻撃して破壊するが、一方、ヒトおよび／または哺乳動物の細胞に対しては比較的不活性を示す物質を指す。より典型的に、抗生物質は、通常、皮膚、体表創、褥瘡などに生息する少なくとも１つの種またはタイプの微生物を選択的に攻撃して破壊するが、ヒトおよび哺乳動物の皮膚細胞に対してはある程度の不活性を示す。「抗生物質」という用語は、具体的には、抗微生物性保存剤、抗真菌性保存剤と抗菌性保存剤の両方を除外することを意味する。そのような抗真菌性保存剤としては、安息香酸およびアスコルビン酸およびそのアルカリ塩などの化合物、ならびにｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、エチル、プロピルおよびブチル（パラベン）などのフェノール化合物が挙げられるが、これに限定されるものではない。抗菌性保存剤としては、第四級アンモニウム塩、アルコール、フェノール、水銀およびビグアニジンなどの化合物が挙げられるが、これに限定されるものではない。「抗生物質」という用語は、具体的には、食卓塩、酢、硝酸ナトリウム、亜硝酸ナトリウムおよび亜硫酸塩などの抗微生物性保存剤を除外することを意味する。「抗生物質」という用語は、具体的には、酸化銀（Ｉ）および酸化銀（ＩＩ）などの酸化銀、スルファジアジン銀、ならびに重篤な皮膚損傷、例えば褥瘡、皮膚潰瘍および穿刺創の治療において有効である、または日常的な皮膚創傷の治療において有効であるいかなる他の局所抗生物質も含むことを意味するが、これに限定されるものではない。「抗生物質」という用語は、具体的には、「古典的な」局所抗生物質、例えばバシトラシン、ネオマイシン、エリスロマイシンおよびクロラムフェニコールを含むことを意味する。さらなる局所抗生物質は、当業者にとって、容易に理解することができる。
【０１６６】
本明細書および以下の特許請求の範囲の項で用いる場合、抗生物質または製剤に関して「治療的有効量」という用語は、少なくとも１種の局所感染症の治療で陽性の結果を生むのに十分な量を指す。
【０１６７】
本明細書および以下の特許請求の範囲の項で用いる場合、製剤または医療機器内の抗生物質に関して、「治療的有効濃度」という用語は、少なくとも１種の局所感染症の治療で陽性の結果を生むのに十分な、製剤または医療機器内の抗生物質の濃度を指す。
【０１６８】
本明細書および以下の特許請求の範囲の項で用いる場合、「パーセント」または「％」という用語は、特に示さない限り、重量パーセントを指す。
【０１６９】
本明細書および以下の特許請求の範囲の項で用いる場合、「Ａｇ４Ｏ４重量に基づいて」という用語は、材料の銀の重量含有量に（ＡｇＯ／Ａｇ）の因数または約１．１４８を掛けることによって得られる重量に基づくことを指す。
【０１７０】
同様に、本明細書および以下の特許請求の範囲の項で用いる場合、「比」という用語は、特に示さない限り、重量比を指す。
【０１７１】
本明細書および以下の特許請求の範囲の項で用いる場合、「酸化銀（ＩＩ）」という用語は、その単位構造が実質的に１：１のモル比で銀と酸素を含有する酸化銀を指す。「酸化銀（ＩＩ）」という用語は、特に、Ａｇ４Ｏ４（Ａｇ２Ｏ３・Ａｇ２Ｏとして表すことが多い）およびＡｇＯを含むことを意味する。
【０１７２】
本明細書および以下の特許請求の範囲の項で用いる場合、カルボン酸銀中の銀に関して、「公称原子価」という用語は、カルボン酸銀化合物（分子、塩、錯体など）内の銀の平均原子価を指す。したがって、例として、Ａｇ（ＯＯＣＲ）３・ＡｇＯＯＣＲとして表されるカルボン酸銀（ＩＩ）の銀は、公称原子価２を有する。
【０１７３】
本明細書および以下の特許請求の範囲の項で用いる場合、カルボン酸に関して「対応する」という用語は、カルボン酸銀の酸性型を指す。したがって、パルミチン酸はパルミチン酸銀の対応するカルボン酸である。
【０１７４】
本明細書および以下の特許請求の範囲の項で用いる場合、「銀含有化合物」という用語は、具体的には、金属銀（Ａｇ０）を除外することを意味する。「銀含有化合物」という用語は、具体的には、解離した銀種および／または錯体を形成している銀種を含むことを意味する。
【０１７５】
本明細書および以下の特許請求の範囲の項で用いる場合、「酸化銀（Ｉ）」という用語は、その単位構造が実質的に２：１のモル比で銀と酸素を含有する酸化銀を指す。「酸化銀（Ｉ）」という用語は、具体的にはＡｇ２Ｏを含むことを意味する。
【０１７６】
本明細書および以下の特許請求の範囲の項で用いる場合、「標準白色度値」などの用語は、実施例７７に詳述されている手順を指すことを意味する。
【０１７７】
本明細書および以下の特許請求の範囲の項で用いる場合、「標準的な紫外線（ＵＶ）処理」などの用語は、実施例７８に詳述されている手順を指すことを意味する。
【０１７８】
本明細書および以下の特許請求の範囲の項で用いる場合、製剤内の成分に関して、「主として含む」、「主として〜からなる」などの用語は、少なくとも３０重量％の含有量を指し；
「主に含む」、「主に〜からなる」なとの用語は、少なくとも５０重量％の含有量を指し；
「大部分が含む」、「大部分が〜からなる」などの用語は、少なくとも６５重量％の含有量を指す。
【０１７９】
明確にするために、別々の実施形態に関連して記載されている本発明のいくつかの特徴は、一つの実施形態の組み合わせで提供されてもよい。反対に、簡潔にするために、一つの実施形態の文脈で記載されている本発明の種々の特徴は、別々に、または任意の適切な副組み合わせで提供されてもよい。
【０１８０】
本発明はその特定の実施形態と組み合わせて記載されているが、多くの代替物、修正および変更が当業者にとって明らかであることは明白である。したがって、添付の特許請求の範囲の趣旨および広い範囲内に含まれるそのような代替物、修正および変更のすべてを包含することを意図する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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