(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を治療するための医薬の製造における、下記の構造を有する化合物の使用。
【化１】
0006512714.tif 000082
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本特許出願は、米国仮出願第６１／９１４，５９０号（２０１３年１２月１１日出願）の優先権の利益を主張する。優先権出願の全開示は、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
政府支援に関する記述
本発明は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈの助成金番号ＣＡ０７８２３０による米国政府支援を受けて部分的になされた。したがって、米国政府は、本発明について一定の権利を有し得る。
【０００３】
本開示は、ｃ−Ｍｙｃ阻害剤である化合物属を提供する。本開示はさらに、腫瘍を治療するための方法であって、有効量の開示されるｃ−Ｍｙｃ阻害剤を投与することを含む方法を提供する。
【背景技術】
【０００４】
癌原遺伝子ｃ−ｍｙｃは、細胞増殖を制御する転写因子（Ｍｙｃ）をコードする。Ｍｙｃはまた、細胞周期の調節、細胞成長、血管形成、アポトーシスおよび腫瘍形成において役割を果たす。Ｍｙｃはほぼすべての癌に関与し、ほぼすべてのヒト癌において、Ｍｙｃの機能獲得が見られる。突然変異、染色体再構成、発現増加または遺伝子増幅の結果として、腫瘍では、Ｍｙｃの活性が増加し得る。ｃ−Ｍｙｃ発現の上昇またはダウンレギュレートは、広範囲のヒト癌で検出されており、悪性の低分化腫瘍に関連していることが多い。このような癌としては、結腸癌、乳癌、子宮頸部癌、小細胞肺癌、骨肉腫、神経膠芽腫、メラノーマおよび骨髄性白血病が挙げられる。
【０００５】
その幅広い病原的な重要性により、Ｍｙｃは重要な癌標的である。しかしながら、低分子阻害剤にとっては、Ｍｙｃは困難な標的であった。強力かつ有効な低分子Ｍｙｃ阻害剤の同定において、概念的困難性および実際的困難性の両方があった。概念的障害は、必須の細胞活性を制御する遺伝子を阻害することに関する懸念を反映している。Ｍｙｃの標的化に関する主な実際的困難性は、低分子の結合部位として機能し得るポケットまたは溝が存在しないことである。当技術分野で公知の低分子Ｍｙｃ阻害剤は、インビボ用途のための効力および適切な薬物動態特性を欠く。
【０００６】
当技術分野では、ｃ−Ｍｙｃ媒介性の発癌活性およびシグナル伝達経路を阻害するための優れた手段、ならびに癌を治療および予防するためのより有効な治療が必要である。本開示は、当技術分野におけるこのおよび他の満たされていないニーズに対処する。
【発明の概要】
【０００７】
一態様では、本開示は、式１：
【化１】
0006512714.tif 000002
【０００８】
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立して、フラン−２−イル、フラン−３−イル、フラン−４−イル、４−ハロベンジル、３−ハロベンジル、５−ハロベンジル、ジハロベンジル、トリハロベンジル、テトラハロベンジル、ペンタハロベンジル、
【化２】
0006512714.tif 000003
0006512714.tif 000004
【０００９】
からなる群より選択され；
ハロは、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードであり；ただし、Ｒ３がフラニルである場合、Ｒ１は、
【化３】
0006512714.tif 000005
【００１０】
であり得ない）の構造を有する化合物を提供する。好ましくは、Ｒ１は
【化４】
0006512714.tif 000006
【００１１】
であり、Ｒ３は
【化５】
0006512714.tif 000007
【００１２】
またはフラニルであり、Ｒ２は
【化６】
0006512714.tif 000008
【００１３】
、フラニル、
【化７】
0006512714.tif 000009
【００１４】
、および
【化８】
0006512714.tif 000010
【００１５】
からなる群より選択される。
【００１６】
本開示はさらに、癌を治療するための医薬組成物であって、式１：
【化９】
0006512714.tif 000011
【００１７】
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立して、フラン−２−イル、フラン−３−イル、フラン−４−イル、４−ハロベンジル、３−ハロベンジル、５−ハロベンジル、ジハロベンジル、トリハロベンジル、テトラハロベンジル、ペンタハロベンジル、
【化１０】
0006512714.tif 000012
0006512714.tif 000013
【００１８】
からなる群より選択され；
ハロは、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードである）の構造を有する化合物を含む医薬組成物を提供する。好ましくは、Ｒ１は
【化１１】
0006512714.tif 000014
【００１９】
であり、Ｒ３は
【化１２】
0006512714.tif 000015
【００２０】
またはフラニルであり、Ｒ２は
【化１３】
0006512714.tif 000016
【００２１】
、フラニル、
【化１４】
0006512714.tif 000017
【００２２】
、および
【化１５】
0006512714.tif 000018
【００２３】
からなる群より選択される。
【００２４】
本開示はさらに、癌を治療するための方法であって、式１：
【化１６】
0006512714.tif 000019
【００２５】
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立して、フラン−２−イル、フラン−３−イル、フラン−４−イル、４−ハロベンジル、３−ハロベンジル、５−ハロベンジル、ジハロベンジル、トリハロベンジル、テトラハロベンジル、ペンタハロベンジル、
【化１７】
0006512714.tif 000020
【００２６】
からなる群より選択され；
ハロは、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードである）の構造を有する有効量の化合物を投与することを含む方法を提供する。好ましくは、Ｒ１は
【化１８】
0006512714.tif 000021
【００２７】
であり、Ｒ３は
【化１９】
0006512714.tif 000022
【００２８】
またはフラニルであり、Ｒ２は
【化２０】
0006512714.tif 000023
【００２９】
、フラニル、
【化２１】
0006512714.tif 000024
【００３０】
、および
【化２２】
0006512714.tif 000025
【００３１】
からなる群より選択される。
【００３２】
本発明のさらなる態様および実施形態、ならびに本発明の具体的な性質および利点は、本明細書の残りの部分および添付の特許請求の範囲に記載されている。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】ＫＪ−Ｐｙｒ−９が、鳥レトロウイルスによる一次細胞のＭｙｃ依存性形質転換を防止することを示す。Ｍｙｃ（ＲＣＡＳ（Ａ）−ＡＴＧ−Ｍｙｃ）を含有する鳥ウイルスの１０２、１０３または１０４倍希釈物をニワトリ胚性線維芽細胞に感染させた。栄養寒天培地で細胞をオーバーレイし、１０日間維持した。上：ＭＹＣ−ＭＡＸに対する結合を、ＭＡＸ−ＭＡＸとの相互作用と比較した、ＫＪ−Ｐｙｒ−４、ＫＪ−Ｐｙｒ−６、ＫＪ−Ｐｙｒ−９およびＫＪ−Ｐｙｒ−１０の蛍光偏光データ。下：４つの化合物の構造。
【図２】ＫＪ−Ｐｙｒ−９の反応用量と、ＭＹＣ、Ｎ−ＭＹＣ、ｖ−Ｓｒｃ、ＰＩ３Ｋ  Ｈ１０４７Ｒおよびｖ−Ｊｕｎによって誘導される発癌性形質転換との対比を示す。単一のニワトリ胚由来の細胞を用いて行った代表的な実験からのデータ。
【図３Ａ】細胞増殖に対するＫＪ−Ｐｙｒ−９の効果を示す。ＮＣＩ−Ｈ４６０（ＡＴＣＣ）の増殖に対するＫＪ−Ｐｙｒ−９の効果の用量反応曲線。
【図３Ｂ】細胞増殖に対するＫＪ−Ｐｙｒ−９の効果を示す。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１（ＮＣＩ）の増殖に対するＫＪ−Ｐｙｒ−９の効果の用量反応曲線。
【図３Ｃ】細胞増殖に対するＫＪ−Ｐｙｒ−９の効果を示す。ＳＵＭ−１５９ＰＴ（Ａｓｔｅｒａｎｄ）の増殖に対するＫＪ−Ｐｙｒ−９の効果の用量反応曲線。
【図４】ＭＤＡ−ＭＢ−２３１およびＮＣＩ−Ｈ４６０細胞におけるＮＤＲＧ発現に対するＫＪ−Ｐｙｒ−９の効果を示す。ＲＰＭＩ培地中でＮＣＩ−Ｈ４６０細胞を成長させ、ＤＭＥＭ培地中でＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を成長させた；培地は両方とも、１０％ＦＢＳを含有していた。ＫＪ−Ｐｙｒ−９および１００５８−Ｆ４を２０μＭの濃度で追加し、ウエスタンブロット分析前に、細胞を２４時間処理した。
【図５Ａ】ＫＪ−Ｐｙｒ−９が、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞の異種移植片の成長を妨げることを示す。５×１０６個のＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞をマウスの左右の脇腹に皮下注射した。腫瘍が１００ｍｍ３の体積に達したら、１０ｍｇ／ｋｇ  ＫＪ−ＰＹＲ−９をマウスの半身に毎日腹腔内注射し、ビヒクルのみを他の半身に投与した。腫瘍成長を３１日間追跡した。処置動物および未処置動物の腫瘍体積。
【図５Ｂ】ＫＪ−Ｐｙｒ−９が、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞の異種移植片の成長を妨げることを示す。５×１０６個のＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞をマウスの左右の脇腹に皮下注射した。腫瘍が１００ｍｍ３の体積に達したら、１０ｍｇ／ｋｇ  ＫＪ−ＰＹＲ−９をマウスの半身に毎日腹腔内注射し、ビヒクルのみを他の半身に投与した。腫瘍成長を３１日間追跡した。処置動物および未処置動物の腫瘍重量。
【図５Ｃ】ＫＪ−Ｐｙｒ−９が、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞の異種移植片の成長を妨げることを示す。５×１０６個のＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞をマウスの左右の脇腹に皮下注射した。腫瘍が１００ｍｍ３の体積に達したら、１０ｍｇ／ｋｇ  ＫＪ−ＰＹＲ−９をマウスの半身に毎日腹腔内注射し、ビヒクルのみを他の半身に投与した。腫瘍成長を３１日間追跡した。腫瘍体積の時間経過。
【図６Ａ】バーキットリンパ腫由来細胞株が、ＫＪ−Ｐｙｒ−９によって阻害されることを示す。Ａｋａｔａ。１ウェル当たり１０３個の細胞を９６ウェルプレートに播種し、示されている濃度のＫＪ−Ｐｙｒ−９で７２時間処理した。レザズリン蛍光によって、細胞増殖を決定した。
【図６Ｂ】バーキットリンパ腫由来細胞株が、ＫＪ−Ｐｙｒ−９によって阻害されることを示す。Ｒａｍｏｓ。１ウェル当たり１０３個の細胞を９６ウェルプレートに播種し、示されている濃度のＫＪ−Ｐｙｒ−９で７２時間処理した。レザズリン蛍光によって、細胞増殖を決定した。
【図６Ｃ】バーキットリンパ腫由来細胞株が、ＫＪ−Ｐｙｒ−９によって阻害されることを示す。Ｒａｊｉ。１ウェル当たり１０３個の細胞を９６ウェルプレートに播種し、示されている濃度のＫＪ−Ｐｙｒ−９で７２時間処理した。レザズリン蛍光によって、細胞増殖を決定した。
【図７Ａ】ｖ−ｍｙｃ形質転換ウズラ胚線維芽細胞およびヒト白血病の増殖に対するＫＪ−Ｐｙｒ−９の効果を示す。示されている濃度で化合物を一次ウズラ胚線維芽細胞（ＱＥＦ）（これは、癌遺伝子ｖ−ｍｙｃ（Ｑ８、ＱＥＦ／ＭＣ２９）、ｖ−ｊｕｎ（ＶＪ）によって、またはメチルコラントレン（ＱＴ６）によって形質転換したウズラ細胞株である）およびヒト皮膚線維芽細胞（ｈＦＢ）、非接着成長白血病細胞株Ｋ−５６２、ＭＯＬＴ−４、ＨＬ−６０または腺癌細胞株ＳＷ−４８０に追加した。対照として、化合物の溶媒ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を細胞に追加した。化合物の追加の２４時間後に、顕微鏡写真を撮影した。
【図７Ｂ】ｖ−ｍｙｃ形質転換ウズラ胚線維芽細胞および癌細胞株の増殖に対するＫＪ−Ｐｙｒ−９の効果を示す。示されている濃度で化合物を一次ウズラ胚線維芽細胞（ＱＥＦ）（これは、癌遺伝子ｖ−ｍｙｃ（Ｑ８、ＱＥＦ／ＭＣ２９）、ｖ−ｊｕｎ（ＶＪ）によって、またはメチルコラントレン（ＱＴ６）によって形質転換したウズラ細胞株である）およびヒト皮膚線維芽細胞（ｈＦＢ）、非接着成長白血病細胞株Ｋ−５６２、ＭＯＬＴ−４、ＨＬ−６０または腺癌細胞株ＳＷ−４８０に追加した。対照として、化合物の溶媒ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を細胞に追加した。化合物の追加の２４時間後に、顕微鏡写真を撮影した。
【図８Ａ】ヒト癌細胞株で試験した第１シリーズの化合物（ＣＧ−ＲＳ−４４〜−１０３）の細胞毒性効果を示す：Ｄａｕｄｉ。
【図８Ｂ】ヒト癌細胞株で試験した第１シリーズの化合物（ＣＧ−ＲＳ−４４〜−１０３）の細胞毒性効果を示す：Ｋ５６２。
【図８Ｃ】ヒト包皮線維芽細胞（ＨＦＦ）で試験した化合物の非特異的細胞毒性を示す。
【図９Ａ】Ｄａｕｄｉで試験した第２シリーズの化合物の細胞毒性効果を示す。
【図９Ｂ】Ｋ５６２で試験した第２シリーズの化合物の細胞毒性効果を示す。
【図９Ｃ】ＨＦＦで試験した化合物の非特異的細胞毒性を示す。
【図１０】漸増濃度の選択化合物の存在下で培養した場合の、４つの異なる細胞株の細胞生存率を示す。
【図１１】ＣＥＦフォーカスアッセイにおけるＡＴＧ−Ｍｙｃの阻害に関するＫＪ−Ｐｙｒ−９類似体化合物のスクリーニングの結果を示す。図に示されているように、各化合物を１０μＭの濃度で調べた。化合物濃度の後ろに記載されている下２桁は、異なる化合物の内部名称に対応する。本研究では、２バッチの化合物ＣＧ−ＲＳ−４４（図では「４４」と記されている）を試験した。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
Ｉ．概要
本発明は、ｃ−Ｍｙｃ阻害化合物、ならびにｃ−Ｍｙｃシグナル伝達経路の阻害および癌の治療におけるそれらの使用に関する。Ｍｙｃは、基本的なヘリックス−ループ−ヘリックスロイシンジッパー（ｂＨＬＨ−ＬＺ）タンパク質のファミリーに属する転写調節因子であり、ｂＨＬＨ−ＬＺタンパク質ＭＡＸと二量体化して機能的になる。ＭＹＣ−ＭＡＸヘテロ二量体は、Ｅ−Ｂｏｘモチーフ（パリンドロームＤＮＡ配列）に優先的に結合する。ＭＹＣは、２つの分子レベルでの転写に影響を与える。転写因子として、それは、標的遺伝子のプロモーターに結合して、転写活性を刺激または抑制し得る。ＭＹＣ機能獲得を示す癌細胞における転写の増幅因子として、それは、既存の転写プログラムの活性を増強する。両方の状況において、ＭＹＣは、ＭＡＸと二量体化して有効になるはずである。ヒトゲノムは、３つのＭＹＣ遺伝子と、対応するタンパク質（ｃ−ＭＹＣ、Ｎ−ＭＹＣおよびＬ−ＭＹＣ）とを含有する。特に断りのない限り、ＭＹＣは、本明細書では、ｃ−ＭＹＣタンパク質を示すために使用される。ｃ−Ｍｙｃはまた、転写抑制因子として作用し得る。それは、Ｍｉｚ−１転写因子に結合し、ｐ３００共活性化因子を置換することによって、Ｍｉｚ−１標的遺伝子の発現を阻害する。加えて、Ｍｙｃは、ＤＮＡ複製の制御において直接的な役割を有する。
【００３５】
Ｗｎｔ、ＳｈｈおよびＥＧＦなどの様々な細胞増殖シグナルによって、（ＭＡＰＫ／ＥＲＫ経路を介して）Ｍｙｃは活性化される。その標的遺伝子の発現を改変することによって、Ｍｙｃの活性化は、多数の生物学的効果をもたらす。最初に発見されたのは、その細胞増殖駆動能力（サイクリンをアップレギュレートし、ｐ２１をダウンレギュレートする）であったが、それはまた、細胞成長の調節（リボソームＲＮＡおよびタンパク質をアップレギュレートする）、アポトーシス（Ｂｃｌ−２をダウンレギュレートする）、分化および幹細胞自己複製において非常に重要な役割を果たす。Ｍｙｃは、非常に強力な癌原遺伝子であり、非常に多くの場合に、多くの種類の癌においてアップレギュレートされていることが見出されている。Ｍｙｃの過剰発現は、おそらくはＤＮＡ過剰複製を通じて、遺伝子増幅を刺激する。本明細書で使用されるｃ−Ｍｙｃシグナル伝達経路またはｃ−Ｍｙｃ媒介性細胞活性は、Ｍｙｃの活性化の結果として生じる任意の生化学的効果または細胞応答を指す。
【００３６】
要約すると、ｃ−Ｍｙｃは、様々な成長促進遺伝子および抗アポトーシス遺伝子を駆動し、癌において過剰発現していることが多い。したがって、ｃ−Ｍｙｃによって引き起こされる発癌性形質転換の阻害は、固形腫瘍および白血病の両方の治療において幅広い有用性を有する強力な化学療法戦略に相当する。本発明は、ＭＹＣ−ＭＡＸ相互作用を阻害して、広範囲の癌を治療することができる化合物属を提供する。本発明はまた、様々な治療用途において、本明細書に記載されるＭｙｃ阻害化合物および誘導体化合物を用いるための方法を提供する。
【００３７】
ＩＩ．ｃ−Ｍｙｃ阻害化合物
以下の実施例に詳述されるように、本発明は、いくつかの公知の化合物のｃ−Ｍｙｃ阻害活性に関する本発明者らの発見に部分的に基づくものである。これらの化合物は、当初は溶液相生物学的スクリーニングのために調製されたＫｒｏｈｎｋｅピリジン化合物のコンビナトリアルライブラリに由来するものであった（Ｆｕｊｉｍｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｃｈｅｍ．５：６２７−６３１，２００３）。ＭＹＣ−ＭＡＸ相互作用の蛍光偏光スクリーニングによって、前記化合物のいくつかの新規のｃ−Ｍｙｃ阻害活性を同定した。同定した化合物は、細胞培養においてＭｙｃ誘発性発癌性形質転換を阻害し、Ｍｙｃ過剰発現ヒトおよび鳥類細胞の増殖を妨げ、Ｍｙｃ媒介性転写調節を減少させることができる。加えて、前記化合物は、Ｍｙｃ過剰発現ヒト癌細胞の異種移植物の成長を有効に遮断し得る。本明細書に例示される特定のＭｙｃ阻害化合物は、４−（２−（フラン−２−イル）−６−（４−ニトロフェニル）ピリジン−４−イル）ベンズアミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−９）、５−（２−（フラン−２−イル）−６−（４−ニトロフェニル）ピリジン−４−イル）フラン−２−カルボキサミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−１０）、５−（２−（フラン−２−イル）−６−（４−メトキシフェニル）ピリジン−４−イル）フラン−２−カルボキサミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−６）、４’−（２−（フラン−２−イル）−６−フェニルピリジン−４−イル）−［１，１’−ビフェニル］−４−カルボキサミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−４）である。それらの構造は、図１に示されている。
【００３８】
本明細書に例示されるｃ−Ｍｙｃ阻害化合物に加えて、これらの化合物から改変および合成され得る誘導体化合物もまた、本発明の方法の実施に適切であり得る。これらの公知の化合物に由来するいくつかのｃ−Ｍｙｃ阻害化合物は、以下に詳細に記載される。例えば、ＫＪ−Ｐｙｒ−９、１０、６または４に比べて、それらの誘導体化合物のいくつかは、異なる一価基または多価基で置換されている１つ以上の一価基または多価基を有し得る。前記置換基は、例えば、Ｈ；ハロゲン；直鎖状、環状または分岐鎖状アルキル；直鎖状、環状または分岐鎖状アルケニル；直鎖状、環状または分岐鎖状アルキニル；ハロ−アルキル、−アルケニルまたは−アルキニル；ＣＮ；ＣＦ３；アリール、およびアリール環のいずれかまたはすべてのＨ基が異なる基で置換されている置換アリール基；アリール環のいずれかまたはすべての基が異なる基で置換されている複素環基および置換複素環基；カルボキシル；カルボニル、アルコキシル；アルキルオキシアルカン；アルコキシカルボニル；アリールオキシル、ヘテロシクリルオキシル；ヒドロキシル；アミン；アミド；アミノ；第４級アミノ；ニトロ；スルホニル；アルキルアミン；シリル、シロキシル；飽和Ｃ−Ｃ結合；不飽和Ｃ−Ｃ結合；エステル、エーテル、アミノ；アミド、ウレタン、カルボニル、アセチルおよびケチル基；ヘテロ原子（Ｎ、ＳおよびＯを含む）；ポリマー基；およびアミノ酸であり得る。いくつかの誘導体化合物では、１個以上の水素原子は、低級アルキル基で置換され得る。様々な誘導体化合物を機能試験（例えば、本明細書に例示される増殖阻害アッセイ）に供して、それらのｃ−Ｍｙｃ阻害活性を確認し得る。
【００３９】
いくつかの実施形態では、類似のまたは改善された特性を有する変異体化合物または誘導体化合物は、例示的なｃ−Ｍｙｃ阻害化合物（リード化合物）の合理的最適化によって得られ得る。改善された活性を有する化合物を同定するために、合理的設計によって生成した化合物を機能試験またはスクリーニングにさらに供してもよい。このような変異体化合物を設計およびスクリーニングするための詳細な方法は、以下に記載される。本明細書に例示される様々なｃ−Ｍｙｃ阻害化合物およびそれらの変異体または誘導体はすべて、有機化学の通常の慣例方法、または本明細書もしくはＦｕｊｉｍｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｃｈｅｍ．５：６２７−６３１，２００３に記載されているプロトコールを使用して容易に調製され得る。
【００４０】
一態様では、本発明は、ｃ−Ｍｙｃシグナル伝達経路の阻害剤であって、改善された特性を有する阻害剤を同定するための方法を提供する。前記方法は、（ａ）４−（２−（フラン−２−イル）−６−（４−ニトロフェニル）ピリジン−４−イル）ベンズアミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−９）、５−（２−（フラン−２−イル）−６−（４−ニトロフェニル）ピリジン−４−イル）フラン−２−カルボキサミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−１０）、５−（２−（フラン−２−イル）−６−（４−メトキシフェニル）ピリジン−４−イル）フラン−２−カルボキサミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−６）および４’−（２−（フラン−２−イル）−６−フェニルピリジン−４−イル）−［１，１’−ビフェニル］−４−カルボキサミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−４）からなる群より選択されるリードｃ−Ｍｙｃ阻害化合物の１つ以上の構造類似体を合成すること、（ｂ）前記類似体に対して機能アッセイを実施して、リード阻害化合物のものと比べて改善された生物学的特性または薬学的特性を有する類似体を同定することを含む。いくつかの好ましい方法では、用いられるリードｃ−Ｍｙｃ阻害化合物は、４−（２−（フラン−２−イル）−６−（４−ニトロフェニル）ピリジン−４−イル）ベンズアミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−９）または５−（２−（フラン−２−イル）−６−（４−ニトロフェニル）ピリジン−４−イル）フラン−２−カルボキサミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−１０）である。スクリーニングすべき改善された生物学的特性または薬学的特性は、例えば、ｃ−Ｍｙｃ媒介性シグナル伝達活性の阻害に関して増強された活性であり得る。あるいは、改善された生物学的特性または薬学的特性は、例えば、腫瘍細胞の成長の阻害に関して増強された活性、例えば結腸癌、乳癌、子宮頸癌、小細胞肺癌、骨肉腫、神経膠芽腫、メラノーマまたは骨髄性白血病の成長に対する増強された阻害活性であり得る。
【００４１】
例示として、上記公知の化合物に由来する多数の類似体化合物または変異体化合物の合成および活性は、以下に記載されている。
【００４２】
ＩＩＩ．いくつかの例示的なｃ−Ｍｙｃ阻害化合物の合成スキームおよび活性
以下の表は、合成およびアッセイした例示的な構造体を示し、それらのコード名と共に、アッセイデータを示す。
【表１】
0006512714.tif 000026
【表２】
0006512714.tif 000027
【表３】
0006512714.tif 000028
【表４】
0006512714.tif 000029
【表５】
0006512714.tif 000030
【表６】
0006512714.tif 000031
【表７】
0006512714.tif 000032
【表８】
0006512714.tif 000033
【表９】
0006512714.tif 000034
【００４３】
ＣＧ−ＲＳ−４４はＫＤＪ−Ｐｙｒ−９とも称され、ＣＧ−ＲＳ−５０はＫＤＪ−Ｐｙｒ−１０とも称されることに留意すべきである。
【００４４】
上記化合物によって明らかなように、本発明は、ＭＹＣ−ＭＡＸ  ＰＰＩの新たな一連の低分子アンタゴニストを提供する。この化合物ファミリーの最も強力なメンバーは、ナノモル親和性でＭｙｃおよびＭＹＣ−ＭＡＸの両方に結合し得る。これらの化合物はまた、ＭＹＣ駆動性発癌性形質転換およびＭｙｃ誘導性転写調節を阻害する。それらは、いくつかのヒト癌細胞株の生存率および増殖能力に対する強力な効果を示した。白血病細胞の場合、これらの効果は特に顕著であるが、それらは、固形腫瘍に由来する細胞株にも及ぶ。これらの分子の有望な薬物動態特性はまた、さらなるインビボ研究を可能にした。これらのＭＹＣ−ＭＡＸ  ＰＰＩ阻害剤は、Ｍｙｃ駆動性異種移植腫瘍の成長を妨げ、腫瘍成長を遮断し得る。
【００４５】
固体支持体上でいくつかの類似体化合物を調製するための手順を以下に示す。
【化２３】
0006512714.tif 000035
【００４６】
スキーム１．Ｒｉｎｋアミド固体支持体上における化合物の調製
固体支持体ＳＪ２−８６上への化合物の固定化
４−カルボキシベンズアルデヒド（０．７２ｇ、４．８ｍｍｏｌ、３．０当量）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（０．７４ｇ、４．８ｍｍｏｌ、３．０当量）およびＮ，Ｎ′−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）（０．７６ｍＬ、０．６１ｇ、４．８ｍＬ、３．０当量）を脱保護Ｒｉｎｋアミド樹脂（２．２ｇ、０．７３ｍｍｏｌ／ｇ、１．６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（８．０ｍＬ）懸濁液に追加した。１２時間激しく振盪した後、吸引下でろ過によって溶媒を除去し、ＤＭＦ、ＭｅＯＨおよびＣＨ２Ｃｌ２（３×３×１０ｍＬ）で樹脂を逐次洗浄した。ネガティブフリーアミンＴＮＢＳ試験により、樹脂上のアミンの定量的アシル化を確認した。
【００４７】
化合物ＳＪ２−９０
ベンズアルデヒド官能化樹脂ＳＪ２−８６（１．０ｇ、０．６６ｍｍｏｌ／ｇ、０．６６ｍｍｏｌ）を２−アセチルフラン（０．１７ｇ、１．５ｍｍｏｌ、２．０当量）および粉末ＬｉＯＨ（３６ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ、２．０当量）のジメトキシエタン（ＤＭＥ）（９．８ｍＬ）およびＨ２Ｏ（０．２０ｍＬ）混合物に懸濁した。３６時間激しく振盪した後、吸引下でろ過によって溶媒を除去し、酢酸、ＤＭＦ、ＭｅＯＨおよびＣＨ２Ｃｌ２（４×３×１０ｍＬ）で樹脂を逐次洗浄した。１時間にわたってトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を使用して切断した樹脂の小サンプルのＬＣ−ＭＳ分析によって、反応の完了を確認した。不完全な反応を繰り返した。化合物ＳＪ２−９０は、その強力な固有の蛍光により、ＵＶ−Ｖｉｓクロマトグラムにおいて、２１４ｎｍの特徴的な負の吸光度シグナルを示す。
【００４８】
化合物ＳＪ２−９７の以下の合成によって示される方法を使用して、フェナシルピリジニウムブロミドを得た。
【００４９】
化合物ＳＪ２−９７
ピリジン（８０ｕＬ、１．０ｍｍｏｌ、２．０当量）を、激しく撹拌しながら２−ブロモ−４’−フルオロアセトフェノン（０．１１ｇ、０．５０ｍｍｏｌ）の無水テトラヒドロフラン（２．０ｍＬ）溶液に追加した。約２０分後に、無色の沈殿物の形成が見られ、撹拌を２０時間継続した。ろ過によって沈殿物を単離し、最小量の冷ジエチルエーテルで洗浄し、真空下で乾燥して、無色の結晶性固体としてＳＪ２−９７を得た（０．１４７ｇ、定量）。
【００５０】
化合物ＳＪ２−１１６
フェナシルピリジニウムＳＪ２−９７（８９ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を樹脂ＳＪ２−９０樹脂（０．１７ｇ、０．１０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．０ｍＬ）、酢酸（１．３ｍＬ）およびＮＨ４ＯＡｃ（０．２３ｇ、３．０ｍｍｏｌ、３０当量）懸濁液に追加した。懸濁液を９０℃で６０時間撹拌した。ＤＭＦ、ＭｅＯＨおよびＣＨ２Ｃｌ２（３×３×５ｍＬ）で樹脂を逐次洗浄した。ＴＦＡ（４．０ｍＬ）によって樹脂から生成物を２時間かけて切断し、真空下で蒸発乾固し、分取シリカＴＬＣ（Ｒｆ＝（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、９３：７）０．５５）によって精製して、淡黄色の固体としてＳＪ２−１１６（４．５９ｍｇ、１２．８％）を得、その純度および同一性をＬＣ−ＭＳによってさらに確認した。
【００５１】
構造−活性関係研究のための様々な類似体は、上記手順を使用して調製される。
【００５２】
化合物溶液の調製手順
スキーム２．ＫＤＪ−９および類似体の液相合成
化合物ＳＪ２−１２３
ＭｅＯＨ（２．５ｍＬ）中で、２−アセチルフラン（５５ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ（１２ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を１時間撹拌してから、メチル４−ホルミル安息香酸（８２ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を追加した。約４５分後、厚い無色の沈殿物が形成し、懸濁液をさらに１時間４５分間激しく撹拌した。次いで、遠心分離によって沈殿物を分離し、酢酸（３％、３．０ｍＬ）を上清に追加し、さらに遠心分離によってさらなる沈殿物を単離した。合わせた固体を真空下で乾燥して、無色の固体（８８．５ｍｇ、６９．１％）としてＳＪ２−１２３を得た。
【００５３】
化合物ＳＪ２−１３６
酢酸（２４ｍＬ）およびＤＭＦ（３６ｍＬ）の混合物中で、カルコンＳＪ２−１２３（０．６０ｇ、２．４ｍｍｏｌ）、フェナシルピリジニウムブロミドＳＪ２−１２７（０．７６ｇ、２．４ｍｍｏｌ）およびＮＨ４ＯＡｃ（５．４ｇ、７１ｍｍｏｌ、３０当量）を９０℃で２４時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）を追加し、続いて、ガス放出が停止するまで粉末ＮａＨＣＯ３を少しずつ追加した。混合物を真空下で乾燥し、無色になるまでＣＨ２Ｃｌ２／アセトン（１：１）で残留物を洗浄した。この溶液を真空下で蒸発させ、得られた固体を、溶離液として純粋なＣＨ２Ｃｌ２（Ｒｆ＝０．５７）を使用してシリカゲルクロマトグラフィー（８．０×４．５ｃｍ）によって精製して、淡黄色の固体としてＳＪ２−１３６（０．４６３ｇ、４８．２％）を得た。
【００５４】
化合物ＳＪ２−１４０
ＬｉＯＨ（９６ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（５．０ｍＬ）溶液を、ＳＪ２−１３６（０．４０ｇ、１．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４５ｍＬ）溶液に追加し、７２時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を、溶離液としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９５：５）（Ｒｆ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、９５：５）＝０．２６）を使用してシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（６．５×４．５ｃｍ）によって精製して、淡黄色の固体（０．３８ｇ、９８．４％）としてＳＪ２−１４０を得た。
【００５５】
化合物ＫＤＪ−９
塩化オキサリル（０．３９ｍＬ、０．５７ｇ、４．５ｍｍｏｌ、５．０当量）を、ＳＪ２−１４０（０．３５ｇ、０．９０ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２７ｍＬ）およびＤＭＦ（０．１３ｍＬ）溶液に追加し、２０時間撹拌した。濃ＮＨ３（２０ｍＬ）を追加し、混合物を３０分間激しく撹拌した。ロータリーエバポレーションによって有機相を蒸発させ、得られた沈殿物をろ過によって水相から分離した。真空乾燥した残留物を、溶離液としてＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（３．０→５．０％）（Ｒｆ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、９５：５）＝０．３４）を使用してシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（５×４．５ｃｍ）によって精製して、淡黄色の固体としてＫＤＪ−９（０．３４ｇ、９７．９％）を得た。
【化２４】
0006512714.tif 000036
【００５６】
ＩＶ．治療用途
本明細書に記載されるｃ−Ｍｙｃ阻害化合物は、様々な治療または予防（例えば、抗腫瘍）用途において有用であり得る。それらは、ｃ−Ｍｙｃ媒介性細胞活性を抑制もしくは阻害するために、および癌を治療するために、または腫瘍（特に、Ｍｙｃ依存性腫瘍）の発生を予防するために容易に用いられ得る。したがって、本発明は、細胞（例えば、腫瘍細胞）におけるｃ−Ｍｙｃ媒介性生化学的活性またはｃ−Ｍｙｃシグナル伝達経路を阻害するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、細胞は、被験体（例えば、癌に罹患している被験体）中に存在する。いくつかの実施形態では、本発明の治療用途は、被験体における腫瘍の発生の予防または癌の治療を対象とする。典型的には、本発明の治療方法は、有効量の本明細書に記載されるｃ−Ｍｙｃ阻害剤（例えば、ＫＪ−Ｐｙｒ−９またはその誘導体）を含む医薬組成物を被験体に投与することを伴う。本発明のスクリーニング方法にしたがって同定され得る新規ｃ−Ｍｙｃ阻害剤も用いられ得る。
【００５７】
別の態様では、本発明は、細胞におけるｃ−Ｍｙｃシグナル伝達経路を阻害するための方法を提供する。前記方法は、有効量の本明細書に開示される化合物、例えば４−（２−（フラン−２−イル）−６−（４−ニトロフェニル）ピリジン−４−イル）ベンズアミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−９）、５−（２−（フラン−２−イル）−６−（４−ニトロフェニル）ピリジン−４−イル）フラン−２−カルボキサミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−１０）、５−（２−（フラン−２−イル）−６−（４−メトキシフェニル）ピリジン−４−イル）フラン−２−カルボキサミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−６）および４’−（２−（フラン−２−イル）−６−フェニルピリジン−４−イル）−［１，１’−ビフェニル］−４−カルボキサミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−４）からなる群より選択される化合物、それらの誘導体または類似体（例えば、本明細書に例示される類似体化合物）およびそれらの薬学的に許容され得る塩と細胞を接触させることを含む。本発明のいくつかの方法では、用いられる化合物は、４−（２−（フラン−２−イル）−６−（４−ニトロフェニル）ピリジン−４−イル）ベンズアミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−９）または５−（２−（フラン−２−イル）−６−（４−ニトロフェニル）ピリジン−４−イル）フラン−２−カルボキサミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−１０）である。いくつかの他の方法では、用いられる化合物は、親化合物ＫＪ−Ｐｙｒ−９、ＫＪ−Ｐｙｒ−１０、ＫＪ−Ｐｙｒ−６またはＫＪ−Ｐｙｒ−４の誘導体または変異体である。これらの誘導体化合物または変異体化合物では、親化合物の１つ以上の一価基または多価基は、異なる一価基または多価基で置換されている。置換基は、Ｈ；ハロゲン；直鎖状、環状または分岐鎖状アルキル；直鎖状、環状または分岐鎖状アルケニル；直鎖状、環状または分岐鎖状アルキニル；ハロ−アルキル、−アルケニルまたは−アルキニル；ＣＮ；ＣＦ３；アリール、およびアリール環のいずれかまたはすべてのＨ基が異なる基で置換されている置換アリール基；アリール環のいずれかまたはすべての基が異なる基で置換されている複素環基および置換複素環基；カルボキシル；カルボニル、アルコキシル；アルキルオキシアルカン；アルコキシカルボニル；アリールオキシル、ヘテロシクリルオキシル；ヒドロキシル；アミン；アミド；アミノ；第４級アミノ；ニトロ；スルホニル；アルキルアミン；シリル、シロキシル；飽和Ｃ−Ｃ結合；不飽和Ｃ−Ｃ結合；エステル、エーテル、アミノ；アミド、ウレタン、カルボニル、アセチルおよびケチル基；ヘテロ原子Ｎ、ＳおよびＯ；ポリマー基；およびアミノ酸からなる群より独立して選択され得る。前記方法のいくつかでは、親化合物の１個以上の水素は、低級アルキル基で置換されている。
【００５８】
本発明のいくつかの方法は、腫瘍細胞におけるｃ−Ｍｙｃシグナル伝達経路の阻害を対象とする。例えば、前記方法は、結腸癌、乳癌、子宮頸癌、小細胞肺癌、骨肉腫、神経膠芽腫、メラノーマまたは骨髄性白血病の細胞におけるｃ−Ｍｙｃシグナル伝達経路を阻害するために使用され得る。これらの方法のいくつかでは、腫瘍細胞は、インビボで被験体内に存在する。前記化合物は、本明細書に記載される医薬組成物で被験体に投与され得る。
【００５９】
関連の態様では、本発明は、被験体における細胞の成長または増殖を阻害する方法を提供する。これらの方法は、ｃ−Ｍｙｃシグナル伝達活性を阻害する有効量の化合物を被験体に投与することを伴う。投与される化合物は、４−（２−（フラン−２−イル）−６−（４−ニトロフェニル）ピリジン−４−イル）ベンズアミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−９）、５−（２−（フラン−２−イル）−６−（４−ニトロフェニル）ピリジン−４−イル）フラン−２−カルボキサミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−１０）、５−（２−（フラン−２−イル）−６−（４−メトキシフェニル）ピリジン−４−イル）フラン−２−カルボキサミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−６）および４’−（２−（フラン−２−イル）−６−フェニルピリジン−４−イル）−［１，１’−ビフェニル］−４−カルボキサミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−４）、それらの誘導体または類似体（例えば、本明細書に例示される類似体化合物）およびそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される。
【００６０】
前記方法のいくつかでは、投与される化合物は、４−（２−（フラン−２−イル）−６−（４−ニトロフェニル）ピリジン−４−イル）ベンズアミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−９）または５−（２−（フラン−２−イル）−６−（４−ニトロフェニル）ピリジン−４−イル）フラン−２−カルボキサミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−１０）である。いくつかの他の方法では、投与される化合物は、親化合物ＫＪ−Ｐｙｒ−９、ＫＪ−Ｐｙｒ−１０、ＫＪ−Ｐｙｒ−６またはＫＪ−Ｐｙｒ−４の誘導体または変異体である。誘導体化合物または変異体化合物では、親化合物の１つ以上の一価基または多価基は、異なる一価基または多価基で置換されている。置換基は、Ｈ；ハロゲン；直鎖状、環状または分岐鎖状アルキル；直鎖状、環状または分岐鎖状アルケニル；直鎖状、環状または分岐鎖状アルキニル；ハロ−アルキル、−アルケニルまたは−アルキニル；ＣＮ；ＣＦ３；アリール、およびアリール環のいずれかまたはすべてのＨ基が異なる基で置換されている置換アリール基；アリール環のいずれかまたはすべての基が異なる基で置換されている複素環基および置換複素環基；カルボキシル；カルボニル、アルコキシル；アルキルオキシアルカン；アルコキシカルボニル；アリールオキシル、ヘテロシクリルオキシル；ヒドロキシル；アミン；アミド；アミノ；第４級アミノ；ニトロ；スルホニル；アルキルアミン；シリル、シロキシル；飽和Ｃ−Ｃ結合；不飽和Ｃ−Ｃ結合；エステル、エーテル、アミノ；アミド、ウレタン、カルボニル、アセチルおよびケチル基；ヘテロ原子Ｎ、ＳおよびＯ；ポリマー基；およびアミノ酸からなる群より独立して選択され得る。いくつかの方法では、親化合物の１個以上の水素は、低級アルキル基で置換されている。
【００６１】
前記方法のいくつかは、被験体における腫瘍細胞の成長または増殖の阻害を対象とする。例えば、前記方法は、結腸癌、乳癌、子宮頸癌、小細胞肺癌、骨肉腫、神経膠芽腫、メラノーマまたは骨髄性白血病の細胞の成長を阻害するために使用され得る。
【００６２】
別の関連の態様では、本発明は、被験体における癌を治療するための、または腫瘍の発生を予防するための方法を提供する。これらの方法は、ｃ−Ｍｙｃシグナル伝達活性を阻害する治療有効量の化合物を被験体に投与することを伴う。前記化合物は、４−（２−（フラン−２−イル）−６−（４−ニトロフェニル）ピリジン−４−イル）ベンズアミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−９）、５−（２−（フラン−２−イル）−６−（４−ニトロフェニル）ピリジン−４−イル）フラン−２−カルボキサミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−１０）、５−（２−（フラン−２−イル）−６−（４−メトキシフェニル）ピリジン−４−イル）フラン−２−カルボキサミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−６）および４’−（２−（フラン−２−イル）−６−フェニルピリジン−４−イル）−［１，１’−ビフェニル］−４−カルボキサミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−４）、それらの誘導体または類似体（例えば、本明細書に例示される類似体化合物）およびそれらの薬学的に許容され得る塩からなる群より選択される。これらの方法のいくつかでは、用いられる化合物は、４−（２−（フラン−２−イル）−６−（４−ニトロフェニル）ピリジン−４−イル）ベンズアミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−９）または５−（２−（フラン−２−イル）−６−（４−ニトロフェニル）ピリジン−４−イル）フラン−２−カルボキサミド（ＫＪ−Ｐｙｒ−１０）である。いくつかの他の方法では、ＫＪ−Ｐｙｒ−９、ＫＪ−Ｐｙｒ−１０、ＫＪ−Ｐｙｒ−６またはＫＪ−Ｐｙｒ−４化合物の類似体、誘導体または変異体が使用される。前記方法のいくつかでは、結腸癌、乳癌、子宮頸癌、小細胞肺癌、骨肉腫、神経膠芽腫、メラノーマおよび骨髄性白血病からなる群より選択される腫瘍に罹患している被験体の治療を対象とする。
【００６３】
本発明の組成物および方法を用いる治療に適切な癌および腫瘍は、様々な組織および器官に存在するものであり得る。それらはとしては、癌細胞、腫瘍細胞（悪性腫瘍細胞を含む）、ならびにこれらの組織および／または器官の構成細胞に見られるものも挙げられ得る。例としては、脳腫瘍（多形性膠芽腫など）、脊髄腫瘍、上顎洞癌、膵臓腺癌、歯肉癌、舌癌、口唇癌、上咽頭癌、中咽頭癌、下咽頭癌、喉頭癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、肺癌、胸膜腫瘍、癌性腹膜炎、癌性胸膜炎、食道癌、胃癌、結腸癌、胆管癌、胆嚢癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、膀胱癌、前立腺癌、陰茎癌、精巣腫瘍、副腎癌、子宮頸部癌、子宮内膜癌、膣癌、外陰癌、卵巣癌、繊毛上皮癌、悪性骨腫瘍、軟組織肉腫、乳癌、皮膚癌、悪性メラノーマ、基底細胞腫瘍、白血病、骨髄化生を伴う骨髄線維症、悪性リンパ腫腫瘍、ホジキン病、形質細胞腫および神経膠腫が挙げられる。
【００６４】
一般に、治療は、所望の薬理学的効果および／または生理学的効果を得るように、被験体、組織または細胞に影響を与えるべきである。前記効果は、疾患またはその兆候もしくは症候を完全または部分的に予防するという点で予防的であり得る。それはまた、異常なｃ−Ｍｙｃ発現もしくは生化学的活性に関連するか、もしくはこれらによって媒介される疾患もしくは障害（例えば、腫瘍増殖）の部分的もしくは完全な治癒、または前記障害に起因する有害効果の改善という点で治療的であり得る。適切な被験体としては、無脊椎動物、脊椎動物、哺乳動物、特にヒトが挙げられる。本発明に記載されるｃ−Ｍｙｃ阻害化合物は単独で、または公知の抗腫瘍薬（抗新生物薬）、腫瘍転移阻害剤、血栓形成の阻害剤、関節破壊の治療薬、鎮痛薬、抗炎症薬、免疫調節剤（または免疫刺激剤）および／もしくは免疫抑制剤を含む様々な薬物（これらは、有効または有利に作用する限り、特定の種に限定されずに用いられ得る）のいずれかと併せて使用され得る。
【００６５】
前記化合物は、治療を必要とする被験体に単独で投与され得る。より好ましくは、それらは、様々な薬理学的に許容され得る添加剤のいずれかと混合して医薬組成物または調製物の形態で投与される。例えば、前記化合物は、経口適用、局所適用、非経口適用などに適切な便利な医薬組成物または製剤の形態で投与され得る。本発明の医薬組成物は、当技術分野で周知の通常実施される方法にしたがって調製され得る。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，２０ｔｈｅｄ．，２０００；およびＳｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８を参照のこと。医薬組成物は、好ましくは、ＧＭＰ条件下で製造される。非経口投与のための製剤は、例えば、賦形剤、滅菌水、または生理食塩水、ポリアルキレングリコール、例えばポリエチレングリコール、植物性オイル、または水素化》ナフタレンを含有し得る。生体適合性生分解性ラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマー、またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーは、前記化合物の放出を制御するために使用され得る。本発明の分子のための他の潜在的に有用な非経口送達系としては、エチレン−酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透圧ポンプ、埋め込み型注入システムおよびリポソームが挙げられる。吸入のための製剤は、賦形剤、例えばラクトースを含有し得るか、または例えばポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、グリココレートおよびデオキシコレートを含有する水溶液であり得るか、または点鼻薬の形態でもしくはゲルとして投与するための油性溶液であり得る。
【００６６】
ｃ−Ｍｙｃ阻害化合物を含有する医薬組成物は、治療有効量または治療有効用量で局所投与または全身投与され得る。それらは、非経口投与され、経腸投与され、注射、急速注入、鼻咽頭吸収、皮膚吸収によって投与され、直腸投与され、経口投与され得る。本発明の方法で使用するためのｃ−Ｍｙｃ阻害剤は、所望の治療効果（例えば、腫瘍の発生および成長に関連する症候の排除または改善）を達成するのに十分な量で被験体に投与されるべきである。典型的には、本発明の医薬組成物に用いられる治療有効量または有効用量のｃ−Ｍｙｃ阻害剤は、細胞におけるｃ−Ｍｙｃシグナル伝達活性を阻害するか、または被験体における腫瘍成長を遅延もしくは抑制するべきである。下記のように、被験体に毒性ではなく、所望の治療反応を達成するのに有効な有効成分の量が得られるように、本発明の医薬組成物中の有効成分の実際の投与量レベルを変化させ得る。
【００６７】
選択される投与量レベルは、用いられる本発明の特定の組成物の活性を含む様々な薬物動態学的因子、投与経路、投与時間、用いられる特定の化合物の排出速度に依存する。それはまた、治療期間、他の薬物、用いられる特定の組成物と組み合わせて使用される化合物および／または材料、年齢、性別、体重、状態、一般的健康、および治療される被験体の病歴、ならびに類似の要因に依存する。最適な投与量を決定するための方法は、当技術分野で、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，２０ｔｈｅｄ．，２０００に記載されている。所定のｃ−Ｍｙｃ阻害化合物について、当業者であれば、通常実施される薬学的方法を使用することによって、ｃ−Ｍｙｃを阻害する薬剤の有効量を容易に特定し得る。インビトロ研究またはインサイチュー研究で使用される投与量は、医薬組成物のインビボ投与に有用な量に関する有用なガイダンスを提供し得、動物モデルを使用して、特定の障害の治療のための有効投与量を決定し得る。典型的には、医薬有効投与量は、治療すべき被験体の体重１ｋｇ当たり約０．００１〜１００ｍｇ／であろう。
【００６８】
本明細書に記載されるｃ−Ｍｙｃ阻害化合物および他の治療レジメンは、通常、複数回で被験体に投与される。単回投与間の間隔は、日、週、月または年であり得る。被験体で使用されるｃ−Ｍｙｃ阻害化合物および他の治療剤の血中レベルを測定することによって示されるように、間隔はまた、不規則であり得る。いくつかの方法では、投与量は、１〜１０００μｇ／ｍｌ、いくつかの方法では２５〜３００μｇ／ｍｌまたは１０〜１００μｇ／ｍｌの血漿化合物濃度を達成するように調整される。あるいは、治療剤は持続放出製剤として投与され得、この場合、必要な投与頻度は少ない。投与量および頻度は、被験体におけるｃ−Ｍｙｃ阻害化合物および他の薬物の半減期に応じて変化する。投与量および投与頻度は、処置が予防的または治療的であるかに依存して変化し得る。予防用途では、比較的低投与量が、長期間にわたって比較的低頻度間隔で投与される。いくつかの被験体は、残りの寿命のために、治療を受け続け得る。治療用途では、疾患の進行が軽減または終結するまで、好ましくは、被験体が疾患の症候の部分的または完全な改善を示すまで、比較的短い間隔での比較的高投与量が必要とされることもある。その後、被験体は、予防レジメンを投与され得る。
【００６９】
フェナシルピリジニウム塩の一般的な合成手順：窒素下で、４’−ニトロ−２−ブロモアセトフェノン（４．９ｇ、２０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（８０ｍＬ）に室温で溶解した。ピリジン（６．４ｍＬ、８０ｍｍｏｌ）を滴下した。得られた混濁溶液を約６時間撹拌し、ろ過した。エーテル（４０ｍＬ×３）でフィルターケーキを洗浄し、真空下で乾燥して、６．０ｇのピリジニウム塩を得た。ＣＧ−ＲＳ−４６（２．６ｇ）、ＣＧ−ＲＳ−５２（１．２ｇ）、ＣＧ−ＲＳ−５３（１．２ｇ）、ＣＧ−ＲＳ−５６（１．０ｇ）、ＣＧ−ＲＳ−５７（１．０ｇ）、ＣＧ−ＲＳ−６０（６９０ｍｇ）、ＣＧ−ＲＳ−６３（１．０５ｇ）、ＣＧ−ＲＳ−６５（２８６ｍｇ）、ＣＧ−ＲＳ−６９（４００ｍｇ）、ＣＧ−ＲＳ−７１（５７０ｍｇ）、ＣＧ−ＲＳ−８０（２．６ｇ）およびＣＧ−ＲＳ−８１（２．４ｇ）の調製では、同様の手順を行った。
【００７０】
フェナシルピリジニウム塩の一般的な合成スキーム。
【化２５】
0006512714.tif 000037
【００７１】
［実施例］
以下の実施例は、本発明を限定するためではなく、例示のために提供される。
【００７２】
［実施例１］新規Ｍｙｃ阻害剤の同定および生化学的活性
スクリーニング：ＭＹＣ−ＭＡＸ二量体化の阻害について、蛍光偏光を用いて低分子化合物のＫｒｏｈｎｋｅピリジンライブラリ（Ｆｕｊｉｍｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｃｈｅｍ．５：６２５−６３１，２００３）をスクリーニングすることによって、有効なＭｙｃ阻害剤を同定した。ヒトＭＹＣおよびＭＡＸ  ｂＨＬＨ−ＬＺドメインを大腸菌で発現させ、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５９４で標識したＥ−ｂｏｘ  ＤＮＡ二重鎖と結合させた。これら３つの要素を混合すると、ＭＹＣおよびＭＡＸはヘテロ二量体化し、Ｅ−ｂｏｘ  ＤＮＡに結合する。この結合は、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５９４シグナルの蛍光偏光の増加をもたらす。この複合体の形成を阻害する化合物は蛍光偏光を減少させ、この活性を、ＭＹＣ−ＭＡＸ二量体化の阻害剤のスクリーニングに使用した。混合物を用いて、１回目のライブラリスクリーニングを行った。最も強力な阻害を示した混合物を個々の化合物として再合成し、再スクリーニングして、図１に示されている４つの有効な分子を得た。ＭＹＣ−ＭＡＸおよびＭＡＸ−ＭＡＸに対するこれらの各化合物の相対的結合親和性を上記のように再評価したところ、選択した４つの構造体は、ＭＡＸ−ＭＡＸ二量体よりもＭＹＣ−ＭＡＸに対して有意に高い親和性を示した。
【００７３】
阻害の特異性：ニワトリ胚線維芽細胞（ＣＥＦ）におけるＭｙｃ誘発性発癌性形質転換のアッセイを、生物学的状況におけるＭｙｃの阻害を決定するための二次スクリーニングとして使用した。ＡＴＧ−Ｍｙｃ（これは、ＡＴＧ開始コドンに代えて非標準ＣＴＧ開始コドン有するヒトＭｙｃ変異体である）の発現を媒介するレトロウイルス発現ベクターＲＣＡＳをＣＥＦに感染させた。ＡＴＧ開始コドンは、発癌性形質転換においてより高い発現およびより大きな効力を媒介して、細胞単層における局所微小腫瘍の形成をもたらす。この二次スクリーニングでは、Ｍｙｃの発癌活性に対して、ＫＪ−Ｐｙｒ−９およびＫＪ−Ｐｙｒ−１０のみが有効であった（表１）。本発明者らは、細胞効果を示すことができないのはおそらく、培養培地への化合物の溶解度が低いためであると推測する。ＫＪ−Ｐｙｒ−９は、選択した４つの化合物の中で最高の水溶解度を有していたので、ＫＪ−Ｐｙｒ−９を用いてすべてのさらなる実験を行った。
【表１０】
0006512714.tif 000038
【００７４】
ＣＥＦにおける癌遺伝子誘導性細胞形質転換のアッセイを使用して、Ｍｙｃに対するＫＪ−Ｐｙｒ−９の選択性も決定した。ＡＴＧ−Ｍｙｃ、Ｎ−Ｍｙｃおよび３つの無関係な癌タンパク質（ｖ−Ｓｒｃ、ｖ−Ｊｕｎおよびホスファチジルイノシトール３−キナーゼのＨ１０４７Ｒ変異体）に対して、ＫＪ−Ｐｙｒ−９を試験した（図２）。Ｎ−ＭｙｃおよびＡＴＧ−Ｍｙｃの発癌活性は、ＫＪ−Ｐｙｒ−９によって強力に阻害されたのに対して、無関係な癌タンパク質は、影響を受けなかったか（ｖ−Ｓｒｃ）、または有意に高い濃度で阻害された（ｖ−Ｊｕｎ、ＰＩ３Ｋ  Ｈ１０４７Ｒ）。
【００７５】
Ｍｙｃに対するＫＪ−Ｐｙｒ−９の結合：ＫＪ−Ｐｙｒ−９は、水への溶解度が低い（１２．５μＭ）。この制限のため、分析超遠心分離、等温熱量測定および非共有結合質量分析などの多くの一般に使用される方法は、直接結合の明確な証拠を提供することができない。しかしながら、本発明者らは、ＫＪ−Ｐｙｒ−９およびＭｙｃに関して、後方散乱干渉（ＢＳＩ）（Ｂａｋｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：３５７−３６０，２０１１）を使用して、直接的な相互作用を実証し、結合定数を決定することができた。表２に示されている結果は、ＫＪ−Ｐｙｒ−９が、Ｍｙｃ（６．５ｎＭ）およびＭＹＣ−ＭＡＸヘテロ二量体（１３．４ｎＭ）に直接結合するが、ＭＡＸホモ二量体（＞１ｕＭ）には弱く結合するだけであることを示している。このデータは、ＫＪ−Ｐｙｒ−９が、不完全な単量体型ＭＹＣに結合することができ、インタクトなＭＹＣ−ＭＡＸ複合体を解離させ得ることを示唆している。対照的に、同じライブラリの別のメンバーのＫＪ−Ｐｙｒ−１はニトロ置換基を欠いており、Ｍｙｃ阻害活性を有しておらず、Ｍｙｃにはるかに弱く（２３０ｎＭ）結合する。この化合物を形質転換アッセイにおいても試験したところ、Ｍｙｃ阻害剤として有効ではないことが見出された。
【表１１】
0006512714.tif 000039
【００７６】
ＫＪ−Ｐｙｒ−９が細胞に侵入して、機能性ＭＹＣ−ＭＡＸ複合体の形成を特異的に妨げる能力を試験するために、本発明者らは、ウミシイタケルシフェラーゼ（Ｒｌｕｃ）をベースとするタンパク質断片相補性アッセイ（ＰＣＡ）を適用した。ＲｌｕｃをベースとするＰＣＡセンチネルは、インビボにおけるＰＰＩのダイナミクスを研究するために設計および使用されている（Ｂａｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１１０：８５３１−８５３６，２０１３；およびＳｔｅｆａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０４：１６９１６−１６９２１，２００７）。このアッセイの利点は、リアルタイムでタンパク質複合体形成の絶対値が報告されることである。本発明者らは、全長ＭＡＸタンパク質、およびＭＹＣ中のＣ末端ＭＡＸ相互作用ドメイン（ＭＹＣ３３２−４３９）を伴うＰＰＩをベースとする効率的および高感度なＰＣＡバイオセンサーを使用した。このアッセイにより、ＫＪ−Ｐｙｒ−９は、本実施例で対照として使用したプロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ）調節サブユニット（ＲＩＩ：ＲＩＩ）のホモ二量体をベースとする無関係なバイオセンサーに対する効果と比較して、ＭＹＣ３３２−４３９とＭＡＸとの複合体形成を選択的に減少させたことが示された。ＫＪ−Ｐｙｒ−９はまた、ＭＹＣ−ＭＡＸヘテロ二量体化よりも少ない程度ではあるが、ＭＡＸホモ二量体化を妨げた。これらのデータは、本明細書に開示される阻害化合物が細胞に侵入して、ＭＹＣ−ＭＡＸ複合体形成を特異的に妨げることを示唆している。
【００７７】
［実施例２］Ｍｙｃ阻害剤は、Ｍｙｃ媒介性細胞活性をアンタゴナイズする
細胞増殖に対する効果：Ｍｙｃ活性の上昇は、多くの癌細胞株の増殖に必須である。本発明者らは、Ｍｙｃ活性の増加に依存することが公知である３つの細胞株に対してＫＪ−ＰＹＲ−９を試験した：ＮＣＩ−Ｈ４６０、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１およびＳＵＭ−１５９ＰＴ。ＫＪ−Ｐｙｒ−９の濃度は様々であるが、３つの細胞株すべての増殖が阻害された（図３）。加えて、ｃ−Ｍｙｃの構成的高発現を示すバーキットリンパ腫細胞株は、ＫＪ−Ｐｙｒ−９に対して高度に感受性である（図６）。選択した増殖鳥類細胞およびヒト細胞に対しても、ＫＪ−Ｐｙｒ−９を評価した（図７）。正常ウズラ胚線維芽細胞（ＱＥＦ）、およびｖ−ｊｕｎ癌遺伝子によって、または化学発癌物質メチルコラントレンによって腫瘍形成的に形質転換したＱＥＦは、その成長がごくわずかに阻害されただけであったのに対して、ｖ−ｍｙｃによって形質転換した細胞は、有意により大きな影響を受けた（図７Ａ）。ヒト線維芽細胞および異なるヒト癌細胞株でも、同様の結果が得られた。特に、高レベルのＭｙｃ癌原遺伝子を発現する白血病細胞株Ｋ−５６２、ＭＯＬＴ−４およびＨＬ−６０は、それらの増殖が強力に阻害されたのに対して、ヒト線維芽細胞または結腸癌細胞株ＳＷ−４８０は、影響を受けなかった（図７Ｂ）。
【００７８】
成長培地中の高い血清濃度は、阻害剤の抗増殖活性を低下させた。ウシ血清アルブミンを低血清培地に補充しても、阻害剤の活性は影響を受けなかったので、この効果は、血清タンパク質に対する化合物の結合によるものではなかった。むしろ、阻害剤の活性の減少は、血清がもたらす成長因子によって引き起こされている可能性がある。
【００７９】
ＭｙｃのＭｙｃ転写活性の妨害：Ｍｙｃは、多数の標的遺伝子の転写に影響を与え、活性化因子また抑制因子として機能し得る。本発明者らは、Ｍｙｃ阻害の存在下および非存在下でＮＤＲＧ１（Ｎ−ｍｙｃ  ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｇｅｎｅ  １）の発現を決定することにより、Ｍｙｃの転写活性に対するＫＪ−Ｐｙｒ−９の効果を調べた。ＮＤＲＧ１は、この遺伝子の抑制因子として作用するＭｙｃの直接的な転写標的である。比較のために、本発明者らは、ＭＹＣ−ＭＡＸ二量体化の以前に同定された阻害剤（これは、不完全な単量体に結合し、Ｍｙｃが、ＭＡＸとの相互作用に必要なコンホメーションをとるのを妨げる）（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．６：２３９９−２４０８，２００７；およびＨｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．３４：１４８０−１４８９，２００６）を使用した。ＫＪ−Ｐｙｒ−９および１００５８−Ｆ４は両方とも、ＮＤＲＧ１発現の増加を引き起こす（図４）。しかしながら、ＫＪ−Ｐｙｒ−９は、Ｍｙｃレベルに対してごくわずかな効果を及ぼすのに対して、１００５８−Ｆ４は、Ｍｙｃレベルの強力な減少を引き起こす。この観察結果は、これら２つのＭｙｃ阻害剤が、異なる機構によって機能することを示唆している。
【００８０】
ＫＪ−Ｐｙｒ−９のインビボ活性：以前のＭｙｃ阻害剤は、動物モデル研究では有効ではなかった。これらの失敗は、不十分なＭｙｃ親和性および低い薬物動態特性によるものであった。本発明者らは、マウスおよびラットでＫＪ−Ｐｙｒ−９の薬物動態特性を調査し、達成可能な血中ＫＪ−Ｐｙｒ−９濃度は、インビトロにおけるｃ−Ｍｙｃ阻害を引き起こすのに十分であることを見出した（実施例３を参照のこと）。本発明者らは、１０ｍｇ／ｋｇの用量では、急性毒性の兆候を観察しなかった。むしろ驚くべきことに、ＫＪ−Ｐｙｒ−９は血液脳関門を越えて、血中よりも脳組織においてより高濃度で存在していた。
【００８１】
ＫＪ−Ｐｙｒ−９のインビボ有効性を試験するために、マトリゲルに懸濁したＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞の異種移植片をヌードマウスの左右の脇腹に皮下注射した。腫瘍が１００ｍｍ３の平均体積に達したら、腹腔内注射により、１０ｍｇ／ｋｇ  ＫＪ−Ｐｙｒ−９またはビヒクル対照でマウスを３１日間にわたって毎日処置した。処置の８日後に、ＫＪ−Ｐｙｒ−９による腫瘍成長の阻害が認められた。３１日までに、ＫＪ−Ｐｙｒ−９処置動物における腫瘍体積は、有意に増加しなかった（図５）。実験の終了時に、腫瘍を摘出し、計量した。重量測定結果は体積測定と一致しており、ＫＪ−Ｐｙｒ−９が腫瘍成長を停止する能力が確認された（図５）。ＫＪ−Ｐｙｒ−９による処置は、動物の体重に対して効果を及ぼさなかった。
【００８２】
腫瘍細胞における薬物活性を決定するために、凍結腫瘍サンプルからタンパク質溶解物を調製し、ウエスタンブロットによって分析した。これらのブロットにより、Ｍｙｃ抑制標的ＮＤＲＧ１の発現は、ＫＪ−Ｐｙｒ−９による処置によって有意に増強されたことが示された。この増強の程度は、腫瘍間で異なっていた。ＮＤＲＧ１の免疫蛍光染色および組織学的分析により、このばらつきは、異なる腫瘍内の壊死領域の量の差異が原因であったことが示唆された。これらの観察結果は、ＫＪ−Ｐｙｒ−９が腫瘍組織に侵入して、Ｍｙｃの転写活性を阻害したことを示唆している。
【００８３】
［実施例３］本発明で使用したいくつかの材料および方法
蛍光偏光アッセイ。ＭＹＣおよびＭＡＸのＨｉｓタグ付ｂＨＬＨ−ＬＺドメインを大腸菌で発現させ、Ｈｉｓトラップによって精製した。５−カルボキシフルオレセインをＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ−５９４に代えた以外はＫｉｅｓｓｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆ｂｉｏｌｏｇｙ  １３（７）：７４５−７５１，２００６に記載されているように、蛍光偏光アッセイを行った。
【００８４】
ウミシイタケルシフェラーゼベースのタンパク質断片相補性アッセイ。１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を補充したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で、ＨＥＫ２９３細胞を成長させた。２４ウェルプレートフォーマットにおいて、示されているＲｌｕｃ−ＰＣＡ発現構築物を一過性過剰発現させた。トランスフェクションの２４時間後または４８時間後、２０μＭ  ＫＪ−Ｐｙｒ−９でコンフルエント細胞を処理した。処理後、成長培地を交換し、細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に再懸濁した。細胞懸濁液を白壁９６ウェルプレートに移し、ＬＭａｘ  ＩＩ  ３８４照度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用した生物発光分析に供した。Ｒｌｕｃ基質のベンジルコエレンテラジンをインタクトな細胞（５μＭ；Ｎａｎｏｌｉｇｈｔ）に追加した後、Ｒｌｕｃ生物発光シグナルを１０秒間統合した。イムノブロット（ＩＢ）分析では、Ｆ［１］融合（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，ＭＡＢ４４１０）またはＦ［２］融合（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，ＭＡＢ４４００）ハイブリッドタンパク質を検出するための抗ウミシイタケルシフェラーゼ抗体を使用した。
【００８５】
細胞培養における発癌性形質転換のアッセイ。Ｄｕｆｆ＆Ｖｏｇｔ，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ３９：１８−３０，１９６９；およびＢｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ＆Ｄｅｖ．４：１６７７−１６８７，１９９０に以前に記載されているように、ニワトリ胚線維芽細胞（ＣＥＦ）の培養物で、発癌性形質転換を決定した。示されているウイルスの一連の１０倍希釈物をＣＥＦに感染させた。化合物を栄養寒天オーバーレイに追加した。さらなる化合物を含有するオーバーレイを、実験終了時点まで３日ごとに追加した。ヒトｃ−ＭｙｃのＣＴＧ開始コドンをＡＴＧに変化させる部位特異的突然変異誘発によって、ＡＴＧ−Ｍｙｃを作製した。次いで、それをレトロウイルス発現ベクターＲＣＡＳ（Ａ）．ｓｆｉ（Ａｏｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：１４９５０−１４９５５，１９９８）に挿入した。
【００８６】
後方散乱干渉データは、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｅｎｓｉｎｇ  Ｉｎｃ．，Ｎａｓｈｖｉｌｌｅ，ＴＮ  ３７２０３によって構築した機器で収集した。ＭＹＣおよびＭＡＸ  ｂＨＬＨ−ＬＺドメインのＨｉｓタグ付マルトース結合タンパク質融合体をクローニングし、大腸菌で発現させた。Ｎｉ−ＮＴＡカラムクロマトグラフィーによってこれらの融合タンパク質を精製し、Ｓｌｉｄｅ−ａ−Ｌｙｚｅｒ  ｃａｓｓｅｔｔｅｓ（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって６０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、９ｍＭ  ＭｇＣｌ２、３ｍＭ  ＥＤＴＡに緩衝液交換した。一定量のＭＹＣ、ＭＡＸまたはＭＹＣ−ＭＡＸヘテロ二量体を漸増量のＫＪ−Ｐｙｒ−９と混合し、後方散乱干渉によって分析した。得られた屈折率の変化をプロットし、ロジスティック曲線にフィッティングして、Ｋｄを決定した。
【００８７】
細胞株。ヒト癌細胞株は、ＮＣＩ−Ｈ４６０（ＡＴＣＣ）（大細胞肺癌）、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１（ＮＣＩ）（乳腺腺癌）、ＳＵＭ−１５９ＰＴ（Ａｓｔｅｒａｎｄ）（エストロゲン非依存性乳癌）およびＳＷ−４８０（ＡＴＣＣ）（結腸直腸癌）である。Ｋ−５６２、ＭＯＬＴ−４およびＨＬ−６０は、それぞれ急性転化の慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、および急性骨髄性白血病に由来する。ヒト不死化線維芽細胞（ｈＦＢ）は、Ｊ．Ｔｒｏｐｐｍａｉｒ（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｉｎｎｓｂｒｕｃｋ，Ａｕｓｔｒｉａ）によって提供された。Ｈａｒｔｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０６：５６０４−５６０９，２００９に記載されているように、ウズラ（Ｃｏｔｕｒｎｉｘ  ｊａｐｏｎｉｃａ）胚線維芽細胞（ＱＥＦ）および樹立ウズラ細胞株Ｑ８、ＱＥＦ／ＭＣ２９、ＶＪ、ＱＴ６の細胞培養を実施した。
【００８８】
細胞増殖アッセイ。アッセイでは、酸化還元色素レサズリンによる染色を使用して、製造業者（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ  ＷＩ）のプロトコールにしたがって、細胞生存率を測定した。９６ウェルプレートの１００μｌウェル当たり１０３個の細胞を播種し、２．５％ＦＢＳの存在下で成長させた。ＤＭＥＭ中でＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を培養し、ＨＡＭ’ｓ  Ｆ１２中でＳＵＭ−１５９ＰＴ細胞を培養し、ＲＰＭＩ中でＮＣＩ−Ｈ４６０細胞を培養した。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞をＫＪ−Ｐｙｒ−９に２１６時間曝露し、１２０時間および１９２時間の時点で、化合物を含有する新鮮培地を加えた；ＳＵＭ−１５９ＰＴ細胞を前記化合物に１２０時間曝露し、４８時間の時点で、適切な化合物濃度の新鮮培地を加えた；化合物と共にＮＣＩ−Ｈ４６０細胞を７２時間成長させた。
【００８９】
ＫＪ−Ｐｙｒ−９によるヒト細胞Ｋ−５６２、ＭＯＬＴ−４、ＨＬ−６０およびＳＷ−４８０ならびにウズラ細胞の処理。接着細胞型を試験するために、１．５×１０５個の細胞をＭＰ−２４皿に播種し、３７℃で一晩インキュベートした。翌日、培養培地を、１３５ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＫＣｌ、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２および１ｍＭ  ＣａＣｌ２およびＫＪ−Ｐｙｒ−９化合物（最終濃度２５μＭまたは５０μＭ（ＤＭＳＯで原液から希釈））を含有する２００μｌのＥＣＢ緩衝液と交換した。細胞を３７℃で３０分間インキュベートした。次いで、前記化合物を含有する８００μｌの細胞培養培地を追加し、細胞を３７℃でさらに２４時間インキュベートした。懸濁液中で成長させた細胞（Ｋ−５６２、ＭＯＬＴ−４、ＨＬ−６０）の場合、遠心分離により１．５×１０５個の細胞を回収し、前記化合物を含有する２００μｌのＥＣＢ緩衝液に再懸濁した。３７℃で３０分間インキュベートした後、前記化合物を含有する８００μｌの培養培地を追加し、上記のように細胞をインキュベートした。前記化合物による処理の２４時間後、細胞の顕微鏡写真を撮影した。
【００９０】
薬物動態。１０：１０：８０  Ｔｗｅｅｎ−８０：ＤＭＳＯ：５％デキストロース／水に溶解した１０ｍｇ／ｋｇ  ＫＪ−Ｐｙｒ−９を３匹のマウスに腹腔内注射した。４時間の時点において、血漿中および脳内のＫＪ−Ｐｙｒ−９の濃度は、それぞれ３．５および１２．４μＭであった。１ｍｇ／ｋｇをラットに静脈内投与した；血漿中排出半減期は、約１．８４時間（ラット）であった。
【００９１】
異種移植実験。５×１０６個のＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を１０匹の８週齢雌性ヌードマウス（ＨＳＤ：無胸腺ヌード）の左右の脇腹に皮下注射した。注射前に、細胞を高濃度のマトリゲル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に懸濁した。外部キャリパーにより測定した場合に腫瘍の平均体積が１００ｍｍ３に達するまで、異種移植腫瘍を成長させた。この時点において、マウスを２群に分けた。腹腔内注射により１０ｍｇ／ｋｇ  ＫＪ−ＰＹＲ−９を一方に毎日投与し、ビヒクルのみを他方に毎日投与した。腫瘍体積およびマウス体重を毎日測定した。すべての場合において使用したビヒクルは、１０：１０：８０ＤＭＳＯ：Ｔｗｅｅｎ−８０：５％デキストロースの水溶液であった。マウスを３１日間処置した。実験終了時にマウスを安楽死させ、腫瘍を摘出した。腫瘍を計量した。各腫瘍サンプルを組織学のためにホルマリンで固定し、ウエスタンブロッティングのために凍結した。ＴＳＲＩ  ＩＡＣＵＣの承認を得て、すべての脊椎動物実験を行った。
【００９２】
ＮＤＲＧ１の免疫蛍光染色。腫瘍組織を４％パラホルムアルデヒドで一晩固定し、脱水し、パラフィン包埋した。すべてのサンプルを５μｍで切片化した。タンパク質局在化のための切片処理は、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌに従った。ＮＤＲＧ１に対する一次抗体は、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ（＃５１９６）製であった。Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌの説明書を使用して、ポリクローナル一次抗体の標準的な免疫組織化学手順を適用した。二次抗体としてＦＩＴＣ結合ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ  Ｆ−０３８２）を使用して、ＮＤＲＧ１および核の染色を実施し、ＰｒｏＬｏｎｇ  Ｇｏｌｄ  Ａｎｔｉｆａｄｅ  ｗｉｔｈ  ＤＡＰＩ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，＃８９６１Ｓ）にマウントした。Ｈａｍａｍａｔｓｕ  ｄｉｇｉｔａｌ  ＣＣＤ  ｃａｍｅｒａを用いて、４０倍の倍率（顕微鏡対物レンズ）で顕微鏡写真を撮影した。
【００９３】
統計方法。（長さ）×（幅）２を使用して、腫瘍体積を計算した。Ｒ統計プログラム（Ｗｕ  ａｎｄ  Ｈｏｕｇｈｔｏｎ，Ｊ．Ｂｉｏｐｈａｒｍａ．Ｓｔａｔ．１９：７５５−７６２，２００９）に実装されているＥｆｒｏｎ’ｓ  Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ（ＩＳＢＮ：０４１２０４２３１２）法を使用して、腫瘍体積を評価した。１０６無作為化のブートストラップ再サンプリングを使用して、平均体積および９０％信頼区間を決定し、ｇｇｐｌｏｔ２  ｐａｃｋａｇｅ（ＩＳＢＮ：０３８７９８１４０３）を使用してグラフ化した。１０６無作為化の再サンプリング置換法を使用して、Ｐ値を決定した。
【００９４】
［実施例４］細胞増殖アッセイ
Ｋ５６２、Ｄａｕｄｉ、ＮＣＩ−Ｈ４６０および／またはＨＦＦはすべて、ＡＴＣＣから入手し、製造業者が推奨するように成長させた。処理の前日に、Ｋ５６２、Ｄａｕｄｉ、ＮＣＩ−Ｈ４６０および／またはＨＦＦをそれぞれ細胞３，０００個、１０，０００個、３，０００個、４，０００個／ウェルで組織培養処理９６ウェルプレートに１００μｌで播種した。プレートを３７℃で一晩インキュベートした。ハイグレードＤＭＳＯ（ＳＩＧＭＡ，Ｄ８４１８）中で、Ｍｙｃ阻害剤を調製した。無血清培地中で系列希釈または単一希釈の化合物を調製し、細胞に３回反復で追加した（５０μｌ／ウェル）。３７℃で３日間インキュベートした後、以下のように細胞増殖を分析した：１０μｌの色素溶液（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６（登録商標）Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ，Ｐｒｏｍｅｇａ）を各ウェルに追加した。プレートを３７℃で２〜４時間インキュベートした。次いで、１００μｌの可溶化／停止溶液を各ウェルに追加し、プレートを撹拌しながら室温で１時間インキュベートした。９６ウェルプレートリーダー（Ｆｌｅｘｓｔａｔｉｏｎ  ３，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ）を使用して、吸光度を５７０ｎｍで記録した。ＧｒａｐｈＰａｄ  ｐｒｉｓｍでデータを分析し、非線形回帰フィット（Ｌｏｇ（阻害剤）対反応−可変勾配方程式）を使用して適用した際に、ＩＣ５０値を計算した。
【００９５】
単回投与（２０μＭ）における化合物の試験結果を図８および９に示す。選択化合物の用量反応を図１０に示す。ＨＦＦは、Ｍｙｃ非依存性の正常細胞である。非特異的細胞殺傷の対照として、それらをこの設定で使用した。これは、抗癌細胞増殖剤としてのＭｙｃ阻害剤の可能性を示す。
【００９６】
［実施例５］いくつかのＣＧ−ＲＳ−４４誘導体化合物の阻害活性の検証
ＡＴＧ−ＭｙｃのＣＥＦフォーカスアッセイを使用して、本発明者らは、化合物ＣＧ−ＲＳ−４４（ＫＪ−ＰＹＲ−９）がＡＴＧ−Ｍｙｃの阻害および特異性を提供することを最初に確認した。このデータは、０〜２０μＭの濃度範囲の化合物（０、１．２５、２．５、５、１０および２０μＭで試験）における用量依存性阻害を示している。次いで、本発明者らは、ＡＴＧ−Ｍｙｃフォーカス形成の阻害について、１５個のＣＧ−ＲＳ−４４類似体の活性を調べた。結果を図１１に示す。具体的には、（化合物ＣＧ−ＲＳ−４４それ自体に加えて）化合物ＣＧ−ＲＳ−４７、ＣＧ−ＲＳ−７０およびＣＧ−ＲＳ−１２９は、１０μＭの濃度でフォーカス形成をもたらさなかった。これらの化合物は、１０μＭでフォーカス形成を完全に阻害したことから、ＣＧ−ＲＳ−４４と同程度か、またはおそらくそれ以上に機能する。加えて、化合物ＣＧ−ＲＳ−５０、ＣＧ−ＲＳ−５４、ＣＧ−ＲＳ−５５およびＣＧ−ＲＳ−５６はまた、いくらかの阻害活性を示したが、化合物ＣＧ−ＲＳ−５８、−６１、−６４、−９０、−９１、−１０６、−１２３または−１２８を使用した場合には、阻害が見られなかった。さらに、化合物ＣＧ−ＲＳ−７０または−１２９では、細胞成長のわずかな減少が観察された。また、ＣＥＦアッセイにおいて、ＩＣ５０値を測定して、いくつかの化合物のＭｙｃ阻害活性を調べた。この研究の結果により、化合物ＣＧ−ＲＳ−４４は、試験したすべての類似体（化合物ＣＧ−ＲＳ−４７、−７０および−１０９Ｂを含む）よりもＡＴＧ−Ｍｙｃフォーカス形成をよく阻害したことが示された。
【００９７】
類似体化合物の阻害活性の特異性も調べた。簡潔に言えば、いくつかのＭｙｃ類似体（ｖ−ｓｒｃ、Ｈ１０４７Ｒおよびｖ−ｊｕｎを含む）に対する阻害活性について、ＣＥＦＩ特異性アッセイにおいて、化合物ＣＧ−ＲＳ−４７、−７０、−１２９および−１０９Ｂを分析した。これらの結果は、これらのＣＧ−ＲＳ−４４誘導体化合物がすべて、Ｍｙｃの阻害について、Ｍｙｃ類似体よりもいくらかの特異性を示したことを示している。
【００９８】
［実施例６］アルドール生成物および目的化合物の合成
ＣＧ−ＲＳ−４０の合成
以下の化合物４−ホルミルベンズアミド（７．０ｇ、４７ｍｍｏｌ）および２−アセチルフラン（３．９ｍＬ、３９ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下のＲＢフラスコに入れた。ＴＨＦ（２８０ｍＬ）を追加し、次いで、粉末ＬｉＯＨ（９３４ｍｇ、３９ｍｍｏｌ）を追加した。得られた混濁混合物を室温で一晩撹拌した。この時点において、ＬＣは、微量の２−アセチルフラン、主に所望の生成物および４−ホルミルベンズアミド（約２０％）を示した。２．２ｍＬの酢酸を含む２０ｍＬの水でクエンチした。水および酢酸エチルを追加し、層を分離した。２０％ＩＰＡの酢酸エチル溶液で水層を２回抽出した。有機部分を合わせ、濃縮した。得られた固体をエーテル（７０ｍＬ）で処理し、加熱し、デカントした。これをさらに２回繰り返した。固体を１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（３０ｍＬ）でトリチュレートし、ろ過し、１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１０ｍＬ）で洗浄した。固体重量４．４ｇ。ろ液を濃縮し、ｉｓｃｏ２２０ｇシリカカートリッジで精製した。これにより、白色の固体としてさらなる５５０ｍｇが得られた。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）２４２。
【化２６】
0006512714.tif 000040
【００９９】
ＣＧ−ＲＳ−４８の合成
【化２７】
0006512714.tif 000041
【０１００】
以下の化合物５−ホルミルフラン−２−カルボキサミド（２．６ｇ、１８ｍｍｏｌ）および２−アセチルフラン（１．５ｍＬ、１５ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下のＲＢフラスコに入れた。ＴＨＦ（１０６ｍＬ）を追加し、次いで、粉末ＬｉＯＨ（３６０ｍｇ、１５ｍｍｏｌ）を追加した。得られた混濁混合物を室温で一晩撹拌した。２８時間後、１ｍＬの酢酸を含む１０ｍＬの水でクエンチした。さらなる水および酢酸エチルを追加し、層を分離した。２０％ＩＰＡの酢酸エチル溶液（１００ｍＬ）で水層を２回抽出した。有機部分を合わせ、水、食塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮した。得られた固体を１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（３０ｍＬ）でトリチュレートし、ろ過し、１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１０ｍＬ×３）で洗浄した。乾燥固体重量２．０ｇ  約９０％純粋。さらなる精製を行わなかった。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）２３２。
【０１０１】
５−ホルミルフラン−２−カルボキサミドの合成
５−ヒドロキシメチルフラン−２−カルボキサミド（４７０ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）を室温でＤＣＭ（６ｍＬ）およびＴＨＦ（６ｍＬ）に溶解し、デス−マーチン試薬（１．６ｇ、３．７ｍｍｏｌ）を追加した。この時点において、ＴＬＣは、主に所望の生成物（出発物質と比較して非極性）を示した。通常の水性処理およびメタノール単離により、３００ｍｇの所望の生成物が得られた。
【０１０２】
５−ヒドロキシメチルフラン−２−カルボキサミドの合成
メチル（５−ヒドロキシメチル）フランカルボキシレート（１２ｇ）、ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）および濃ＮＨ４ＯＨ（７０ｍＬ）を圧力反応器に入れた。１００℃に加熱し、２４時間後、ＴＬＣは、主に２つの極性のスポットが残存しており、出発物質が残存していないことを示した。ロータリーエバポレーターで濃縮し、得られた固体を約５５ｍＬのＩＰＡに入れ、加熱して完全に溶解した。室温に冷却すると、固体が分離し始め、ろ過し、乾燥した（２．４ｇ）。次いで、母液を濃縮して体積を半分にし、１．３ｇの第２のクロップを得た。
【０１０３】
ＣＧ−ＲＳ−８６の合成
【化２８】
0006512714.tif 000042
【０１０４】
以下の化合物４−ホルミルベンズアミド（１．４９ｇ、１０ｍｍｏｌ）および４’−ブロモアセトフェノン（１．７ｇ、８．３ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下のＲＢフラスコに入れた。ＴＨＦ（６０ｍＬ）を追加し、次いで、粉末ＬｉＯＨ（２００ｍｇ、８．３ｍｍｏｌ）を追加した。得られた混濁混合物を室温で一晩撹拌した。この時点において、ＬＣは、大部分が所望の生成物であることを示した。酢酸水溶液を追加して、反応をクエンチした。水および酢酸エチルを追加し、層を分離した。２０％ＩＰＡの酢酸エチル溶液で水層を２回抽出した。有機部分を合わせ、水で洗浄した。濃縮して白色の固体を得た；得られた固体をエーテル（５０ｍＬ）で処理し、超音波処理し、沈殿のために確保した。ろ過し、エーテル（６０ｍＬ×３）で複数回洗浄し、乾燥した（１．５４ｇ）（これは、９０〜９５％純粋である）。さらなる精製を行わなかった。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）３３０。
【０１０５】
ＣＧ−ＲＳ−８９の合成
【化２９】
0006512714.tif 000043
【０１０６】
ＣＧ−ＲＳ−８６の合成に記載されているのと同様の手順にしたがって、４−ホルミルベンズアミド（２．３ｇ、１５．６ｍｍｏｌ）および２’−ブロモアセトフェノン（２．４ｇ、１２ｍｍｏｌ）の反応により、１．８３ｇの生成物を得た。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）３３０。
【０１０７】
ＣＧ−ＲＳ−１０５の合成
【化３０】
0006512714.tif 000044
ＣＧ−ＲＳ−８６の合成に記載されているのと同様の手順にしたがって、４−ホルミルベンズアミド（１．５ｇ、１０ｍｍｏｌ）および６−ブロモピリジン−２−イルメチルケトン（１．５ｇ、７．５ｍｍｏｌ）の反応により、６５０ｍｇのアルドール生成物を得た。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）３３１。
【０１０８】
ＣＧ−ＲＳ−１０７の合成
【化３１】
0006512714.tif 000045
【０１０９】
ＣＧ−ＲＳ−８６の合成に記載されているのと同様の手順にしたがって、４−ホルミルベンズアミド（７４５ｍｇ、５ｍｍｏｌ）および５−ブロモピリジン−２−イルメチルケトン（８００ｍｇ、４ｍｍｏｌ）の反応により、３２０ｍｇのアルドール生成物を得た。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）３３１。
【０１１０】
ＣＧ−ＲＳ−１１２の合成
【化３２】
0006512714.tif 000046
【０１１１】
ＣＧ−ＲＳ−８６の合成に記載されているのと同様の手順にしたがって、４−ホルミルベンズアミド（４５０ｍｇ、３ｍｍｏｌ）および４−アセチルピリジン（２９０ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）の反応により、３００ｍｇのアルドール生成物を得た。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）２５３。
【０１１２】
ＣＧ−ＲＳ−１２２の合成
【化３３】
0006512714.tif 000047
【０１１３】
ＣＧ−ＲＳ−８６の合成に記載されているのと同様の手順にしたがって、４−ホルミルベンズアミド（１ｇ、６．７ｍｍｏｌ）および３−アセチルピリジン（６５０ｍｇ、５．４ｍｍｏｌ）の反応により、４５０ｍｇのアルドール生成物を得た。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）２５３。
【０１１４】
ＣＧ−ＲＳ−１２４の合成
【化３４】
0006512714.tif 000048
【０１１５】
ＣＧ−ＲＳ−８６の合成に記載されているのと同様の手順にしたがって、４−ホルミルベンズアミド（１ｇ、６．７ｍｍｏｌ）および２−アセチルピリジン（６５０ｍｇ、５．４ｍｍｏｌ）の反応により、６００ｍｇのアルドール生成物を得た。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）２５３。
【０１１６】
ＣＧ−ＲＳ−１４５の合成
【化３５】
0006512714.tif 000049
【０１１７】
以下の化合物メチル４−ホルミル安息香酸（１．６４ｇ、１０ｍｍｏｌ）および２−アセチルフラン（０．８４ｍＬ、８．３ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下のＲＢフラスコに入れた。ＴＨＦ（５０ｍＬ）を追加し、次いで、粉末ＬｉＯＨ（２００ｍｇ、８．３ｍｍｏｌ）を追加した。得られた混濁混合物を室温で５時間撹拌した。この時点において、ＬＣは、主に出発物質を示したので、数ｍＬのＭｅＯＨを追加し、さらに３時間撹拌し続けた。酢酸水溶液を追加して、反応をクエンチした。水および酢酸エチルを追加し、層を分離した。酢酸エチルで水層を抽出した。合わせた有機部分を水で２回洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、ろ過し、濃縮して、２．８ｇの粗生成物を得た。２２０ｇシリカカートリッジを使用して精製した。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）２５７。
【０１１８】
目的化合物の一般的な合成手順：
ＣＧ−ＲＳ−４４の合成
固体ＣＧ−ＲＳ−４０およびＣＧ−ＲＳ−３２を窒素下のＲＢフラスコに入れた。ＤＭＦを追加すると、固体が赤色調の混濁溶液になり、次いで、酢酸を追加すると、淡黄色になった。最後に、ＮＨ４ＯＡｃを追加すると、この溶液がやや赤色調でやや透明になる。５０℃の予熱油浴中に入れ、次いで、９０℃に加熱し、この温度で２時間維持した。この時点において、ＬＣは、主に所望の生成物が残存しており、出発物質が残存していないことを示した。放熱して室温に冷却した。過剰の水を追加することによってクエンチし、少しの間撹拌した。固体が分離し、ろ過し、水で数回洗浄した。固体を最小量のＤＣＭに溶解し、２２０ｇシリカカートリッジにロードし、溶出（１００％ＤＣＭで最大５分間、次いで、５〜２５分に０〜５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭに上昇させ、２５〜４５分に５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを維持）した。画分１５０〜１７３を合わせ、濃縮し、数ｍＬのＭｅＯＨを追加し、トリチュレートし、固体をろ過し、乾燥した（１．５ｇの褐色の固体）。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ６．７２（ｄｄ，Ｊ＝３．５１，１．７６Ｈｚ，１Ｈ）７．３９（ｄ，Ｊ＝３．２２Ｈｚ，１Ｈ）７．４８（ｓ，１Ｈ）７．９２（ｓ，１Ｈ）８．０２−８．０７（ｍ，２Ｈ）８．０８−８．１６（ｍ，４Ｈ）８．２９−８．４０（ｍ，３Ｈ）８．５７（ｄ，Ｊ＝９．０８Ｈｚ，２Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）３８６。
【０１１９】
目的化合物の代表的な合成スキーム：
【化３６】
0006512714.tif 000050
【０１２０】
ＣＧ−ＲＳ−５０の合成
【化３７】
0006512714.tif 000051
【０１２１】
固体ＣＧ−ＲＳ−４８（２．０ｇ、８．６ｍｍｏｌ）およびＣＧ−ＲＳ−３２（３．１ｇ、９．５ｍｍｏｌ）を窒素下のＲＢフラスコに入れた。ＤＭＦ（４０ｍＬ）を追加し、続いて酢酸（２０ｍＬ）を追加し、次いで、ＮＨ４ＯＡｃ（１６．６ｇ、２１５ｍｍｏｌ）を追加した。５０℃の予熱油浴中に入れ、次いで、９０℃に加熱し、この温度で１．５時間維持した。この時点において、ＬＣは、主に所望の生成物が残存しており、出発物質が残存していないことを示した。放熱して室温に冷却した。過剰の水を追加することによってクエンチし、少しの間撹拌した。固体が分離し、ろ過し、水で数回洗浄した。高真空下で乾燥し、次いで、固体をＤＣＭ（約５ｍＬ）に溶解し、２２０ｇシリカカートリッジにロードし、溶出（１００％ＤＣＭで最大１０分間、次いで、１０〜３０分に０〜４％ＭｅＯＨ／ＤＣＭに上昇させ、３０〜４５分に４％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを維持）した。画分１８５〜２３０を合わせ、濃縮し、残留イソプロパノール（約５０ｍＬ）を追加し、トリチュレートし、固体をろ過し、乾燥した（１．０４ｇの黄色の固体）。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ６．７３（ｄｄ，Ｊ＝３．５１，１．７６Ｈｚ，１Ｈ）７．２５（ｄ，Ｊ＝３．５１Ｈｚ，１Ｈ）７．３５（ｄ，Ｊ＝２．６３Ｈｚ，１Ｈ）７．６４（ｄ，Ｊ＝３．５１Ｈｚ，１Ｈ）７．６７（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．９２（ｓ，１Ｈ）８．１８−８．２８（ｍ，２Ｈ）８．３８（ｄ，Ｊ＝８．７８Ｈｚ，２Ｈ）８．４６（ｓ，１Ｈ）８．５４（ｄ，Ｊ＝９．０８Ｈｚ，２Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）３７６。
【０１２２】
ＣＧ−ＲＳ−４７の合成
【化３８】
0006512714.tif 000052
【０１２３】
固体ＣＧ−ＲＳ−４０（２４１ｍｇ、１ｍｍｏｌ）およびＣＧ−ＲＳ−４６（３３３ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を窒素下のＲＢフラスコに入れた。ＤＭＦ（５ｍＬ）を追加し、続いて酢酸（２．５ｍＬ）を追加し、次いで、ＮＨ４ＯＡｃ（２．３ｇ、２５ｍｍｏｌ）を追加した。５０℃の予熱油浴中に入れ、次いで、９０℃に加熱し、この温度で１時間維持した。この時点において、ＬＣは、主に所望の生成物を示した。放熱して室温に冷却した。過剰の水を追加することによってクエンチし、少しの間撹拌した。固体が分離し、ろ過し、水で数回洗浄した。エーテル（３０ｍＬ×３）で洗浄し、高真空下で乾燥した。固体を最小量のＤＣＭに溶解し、４０ｇシリカカートリッジにロードし、溶出（０〜２０分に０〜５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）した。画分１５〜５５を合わせ、濃縮し、乾燥した（１２０ｍｇの褐色の固体）。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ６．７２（ｄｄ，Ｊ＝３．２２，１．７６Ｈｚ，１Ｈ）７．３８（ｄ，Ｊ＝３．５１Ｈｚ，１Ｈ）７．４７（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．８６−７．９４（ｍ，１Ｈ）７．９６−８．１６（ｍ，８Ｈ）８．３２（ｄ，Ｊ＝１．１７Ｈｚ，１Ｈ）８．５１（ｄ，Ｊ＝８．４９Ｈｚ，２Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）３６６。
【０１２４】
ＣＧ−ＲＳ−５４の合成
【化３９】
0006512714.tif 000053
【０１２５】
固体ＣＧ−ＲＳ−４０（１５０ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）およびＣＧ−ＲＳ−５２（２３７ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）を窒素下のＲＢフラスコに入れた。ＤＭＦ（４ｍＬ）を追加し、続いて酢酸（２ｍＬ）を追加し、次いで、ＮＨ４ＯＡｃ（１．２ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）を追加した。５０℃の予熱油浴中に入れ、次いで、９０℃に加熱し、この温度で２時間維持した。この時点において、ＬＣは、主に所望の生成物を示した。放熱して室温に冷却した。過剰の水を追加することによってクエンチし、少しの間撹拌した。固体が分離し、ろ過し、水で数回洗浄し、乾燥した。固体をＤＣＭに入れ、次いで、ＩＰＡ（１０ｍＬ）を追加し、ロータリーエバポレーターで濃縮した。暗色の残留物を最小量のＤＣＭに溶解し、４０ｇシリカカートリッジにロードし、溶出（１０分まで１００％ＤＣＭ、１０〜２５分に０〜４％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５〜３０分に４％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）した。画分４９〜５５を合わせ、濃縮した（１２０ｍｇの淡褐色の固体）。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ６．７２（ｄ，Ｊ＝１．７６Ｈｚ，１Ｈ）７．３７（ｄ，Ｊ＝２．９３Ｈｚ，１Ｈ）７．４７（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．８２−７．９７（ｍ，３Ｈ）８．００−８．１９（ｍ，６Ｈ）８．２９（ｓ，１Ｈ）８．５１（ｄ，Ｊ＝７．９０Ｈｚ，２Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）４０９。
【０１２６】
ＣＧ−ＲＳ−５５の合成
【化４０】
0006512714.tif 000054
【０１２７】
固体ＣＧ−ＲＳ−４０（１５０ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）およびＣＧ−ＲＳ−５３（２４６ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）を窒素下のＲＢフラスコに入れた。ＤＭＦ（４ｍＬ）を追加し、続いて酢酸（２ｍＬ）を追加し、次いで、ＮＨ４ＯＡｃ（１．２ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）を追加した。５０℃の予熱油浴中に入れ、次いで、９０℃に加熱し、この温度で４時間維持した。この時点において、ＬＣは、主に所望の生成物を示した。放熱して室温に冷却した。後処理および精製手順は、ＣＧ−ＲＳ−５４と同様である（淡黄色の固体、９５ｍｇ）。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ６．７１（ｄｄ，Ｊ＝３．３７，１．６１Ｈｚ，１Ｈ）７．３５（ｄ，Ｊ＝３．２２Ｈｚ，１Ｈ）７．５１（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，３Ｈ）７．９０（ｓ，１Ｈ）７．９９−８．１７（ｍ，６Ｈ）８．２２（ｓ，１Ｈ）８．４１（ｄ，Ｊ＝８．７８Ｈｚ，２Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）４２５。
【０１２８】
ＣＧ−ＲＳ−５８の合成
【化４１】
0006512714.tif 000055
【０１２９】
固体ＣＧ−ＲＳ−４０（１５０ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）およびＣＧ−ＲＳ−５７（２４３ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）を窒素下のＲＢフラスコに入れた。ＤＭＦ（４ｍＬ）を追加し、続いて酢酸（２ｍＬ）を追加し、次いで、ＮＨ４ＯＡｃ（１．２ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）を追加した。５０℃の予熱油浴中に入れ、次いで、９０℃に加熱し、この温度で１時間維持した。この時点において、ＬＣは、主に所望の生成物を示した。放熱して室温に冷却した。後処理および精製手順は、ＣＧ−ＲＳ−５４と同様である（淡黄色の固体、１２５ｍｇ）。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ３．２８（ｄ，Ｊ＝１０．５４Ｈｚ，３Ｈ）６．７２（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．３９（ｄ，Ｊ＝３．２２Ｈｚ，１Ｈ）７．４３−７．５７（ｍ，１Ｈ）７．９２（ｓ，１Ｈ）７．９９−８．２２（ｍ，８Ｈ）８．３１（ｓ，１Ｈ）８．５５（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，２Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）４１９。
【０１３０】
ＣＧ−ＲＳ−６１の合成
【化４２】
0006512714.tif 000056
【０１３１】
固体ＣＧ−ＲＳ−４０（１５０ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）およびＣＧ−ＲＳ−６０（２５８ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）を窒素下のＲＢフラスコに入れた。ＤＭＦ（４ｍＬ）を追加し、続いて酢酸（２ｍＬ）を追加し、次いで、ＮＨ４ＯＡｃ（１．２ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）を追加した。５０℃の予熱油浴中に入れ、次いで、９０℃に加熱し、この温度で２時間維持した。この時点において、ＬＣは、主に所望の生成物を示した。放熱して室温に冷却した。後処理および精製手順は、ＣＧ−ＲＳ−５４と同様である（褐色の固体、１２０ｍｇ）。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ６．６２−６．７７（ｍ，１Ｈ）７．３７（ｄ，Ｊ＝２．９３Ｈｚ，１Ｈ）７．４７（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．８１−７．９７（ｍ，３Ｈ）８．００−８．１９（ｍ，６Ｈ）８．２７（ｓ，１Ｈ）８．４３（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，２Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）４４１。
【０１３２】
ＣＧ−ＲＳ−６４の合成
【化４３】
0006512714.tif 000057
【０１３３】
固体ＣＧ−ＲＳ−４０（１５０ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）およびＣＧ−ＲＳ−６３（２２９ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）を窒素下のＲＢフラスコに入れた。ＤＭＦ（４ｍＬ）を追加し、続いて酢酸（２ｍＬ）を追加し、次いで、ＮＨ４ＯＡｃ（１．２ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）を追加した。５０℃の予熱油浴中に入れ、次いで、９０℃に加熱し、この温度で１時間維持した。この時点において、ＬＣは、主に所望の生成物を示した。放熱して室温に冷却した。後処理および精製手順は、ＣＧ−ＲＳ−５４と同様である（淡褐色の固体、１００ｍｇ）。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ３．８９（ｓ，３Ｈ）６．６３−６．８１（ｍ，１Ｈ）７．３７（ｄ，Ｊ＝３．５１Ｈｚ，１Ｈ）７．４２−７．５３（ｍ，１Ｈ）７．９１（ｓ，１Ｈ）７．９９−８．１９（ｍ，８Ｈ）８．２８（ｓ，１Ｈ）８．４５（ｄ，Ｊ＝８．４９Ｈｚ，２Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）３９９。
【０１３４】
ＣＧ−ＲＳ−６６の合成
【化４４】
0006512714.tif 000058
【０１３５】
固体ＣＧ−ＲＳ−４０（１５０ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）およびＣＧ−ＲＳ−６５（２４３ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）を窒素下のＲＢフラスコに入れた。ＤＭＦ（４ｍＬ）を追加し、続いて酢酸（２ｍＬ）を追加し、次いで、ＮＨ４ＯＡｃ（１．２ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）を追加した。５０℃の予熱油浴中に入れ、次いで、９０℃に加熱し、この温度で２時間維持した。この時点において、ＬＣは、主に所望の生成物を示した。放熱して室温に冷却した。過剰の水を追加することによってクエンチし、少しの間撹拌した。固体が分離し、ろ過し、水で数回洗浄し、エーテルで３回洗浄した。残留物をＤＣＭ（約１ｍＬ）に溶解し、４０ｇシリカカートリッジにロードし、溶出（５分まで１００％ＤＣＭ、５〜３０分に０〜１５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）した。画分４９〜５４を合わせ、濃縮した（７０ｍｇの淡褐色の固体）。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ６．７２（ｄ，Ｊ＝１．４６Ｈｚ，１Ｈ）７．３８（ｄ，Ｊ＝３．２２Ｈｚ，１Ｈ）７．４４（ｓ，３Ｈ）７．８８−７．９９（ｍ，３Ｈ）８．００−８．１５（ｍ，６Ｈ）８．２７（ｓ，１Ｈ）８．４８（ｄ，Ｊ＝８．４９Ｈｚ，２Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）４２０。
【０１３６】
ＣＧ−ＲＳ−６７ＡおよびＣＧ−ＲＳ−６７Ｂの合成
【化４５】
0006512714.tif 000059
【０１３７】
ＣＧ−ＲＳ−６４（５０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を圧力容器に入れ、ＭｅＯＨ（２ｍＬ）および濃ＮＨ４ＯＨ（２ｍＬ）を追加した。得られた溶液を１００℃に加熱し、一晩維持した。この時点において、ＬＣは、酸およびアミドの両方が残存しており、エステルが残存していないことを示した。内容物を濃縮し、残留物をＤＣＭに入れ、数滴の酢酸を追加し、再度濃縮した。残留物を１２ｇシリカカートリッジで精製し、溶出（５分まで１００％ＤＣＭ、５〜３０分に０〜２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、３０〜３５分に２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）した。
【０１３８】
トップ画分は、アミド（重量１０ｍｇ）である。データ：ＣＧ−ＲＳ−６７Ａ：１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）μｐｐｍ  ６．７１（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．３７（ｓ，１Ｈ）７．４１−７．５０（ｍ，２Ｈ）７．９０（ｓ，１Ｈ）７．９８−８．１５（ｍ，８Ｈ）８．２５（ｓ，１Ｈ）８．３７（ｄ，Ｊ＝７．６１Ｈｚ，２Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）３８４。
【０１３９】
極性画分は、酸（重量１９ｍｇ）である。ＣＧ−ＲＳ−６７Ｂ：１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ６．６８−６．７５（ｍ，１Ｈ）７．３７（ｄ，Ｊ＝２．６４Ｈｚ，１Ｈ）７．４６（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．９１（ｓ，１Ｈ）８．００−８．１５（ｍ，８Ｈ）８．２６（ｓ，１Ｈ）８．４１（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，２Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）３８５。
【０１４０】
ＣＧ−ＲＳ−７０の合成
【化４６】
0006512714.tif 000060
【０１４１】
固体ＣＧ−ＲＳ−４０（２６２ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）およびＣＧ−ＲＳ−６９（４００ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を窒素下のＲＢフラスコに入れた。ＤＭＦ（６ｍＬ）を追加し、続いて酢酸（２ｍＬ）を追加し、次いで、ＮＨ４ＯＡｃ（２．１ｇ、２７．５ｍｍｏｌ）を追加した。５０℃の予熱油浴中に入れ、次いで、９０℃に加熱し、この温度で３時間維持した。この時点において、ＬＣは、主に所望の生成物を示した。放熱して室温に冷却した。過剰の水を追加することによってクエンチし、少しの間撹拌した。固体が分離し、ろ過し、水で数回洗浄し、乾燥した。固体をＤＣＭに入れ、次いで、ＩＰＡ（１０ｍＬ）を追加し、ロータリーエバポレーターで濃縮した。暗色の残留物を最小量のＤＣＭに溶解し、４０ｇシリカカートリッジにロードし、溶出（１０分まで１００％ＤＣＭ、１０〜２５分に０〜５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５〜３０分に５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）した。生成物を含有する画分を合わせ、濃縮した（２０ｍｇの淡褐色の固体、およびわずかに不純な１００ｍｇ）。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ３．９０（ｓ，３Ｈ）６．６７−６．７７（ｍ，１Ｈ）７．３４（ｄ，Ｊ＝２．６４Ｈｚ，１Ｈ）７．４６（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．６９（ｔ，Ｊ＝７．７６Ｈｚ，１Ｈ）７．９１（ｓ，１Ｈ）８．００−８．１５（ｍ，７Ｈ）８．２３（ｓ，１Ｈ）８．５５（ｄ，Ｊ＝７．６１Ｈｚ，１Ｈ）８．８１（ｓ，１Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）３９９。
【０１４２】
ＣＧ−ＲＳ−７２の合成
【化４７】
0006512714.tif 000061
【０１４３】
固体ＣＧ−ＲＳ−４０（１５０ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）およびＣＧ−ＲＳ−７１（２１８ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）を窒素下のＲＢフラスコに入れた。ＤＭＦ（４ｍＬ）を追加し、続いて酢酸（２ｍＬ）を追加し、次いで、ＮＨ４ＯＡｃ（１．２ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）を追加した。５０℃の予熱油浴中に入れ、次いで、９０℃に加熱し、この温度で３時間維持した。この時点において、ＬＣは、主に所望の生成物を示した。放熱して室温に冷却した。後処理および精製手順は、ＣＧ−ＲＳ−５４と同様である（淡褐色の固体、１２０ｍｇ）。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）μｐｐｍ  ６．０９（ｓ，２Ｈ）６．６９（ｄｄ，Ｊ＝３．２２，１．７６Ｈｚ，１Ｈ）７．０５（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，１Ｈ）７．３２（ｄ，Ｊ＝２．９３Ｈｚ，１Ｈ）７．４５（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．８４−７．９０（ｍ，３Ｈ）７．９２（ｄ，Ｊ＝１．１７Ｈｚ，１Ｈ）７．９９−８．０８（ｍ，４Ｈ）８．１０（ｓ，２Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）３８５。
【０１４４】
ＣＧ−ＲＳ−７３の合成
【化４８】
0006512714.tif 000062
【０１４５】
ＣＧ−ＲＳ−７０（１００ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を圧力容器に入れ、ＭｅＯＨ（５ｍＬ）および濃ＮＨ４ＯＨ（５ｍＬ）を追加した。得られた溶液を１００℃に加熱し、一晩維持した。この時点において、ＬＣは、酸およびアミドの両方が残存しており、エステルが残存していないことを示した。内容物を濃縮し、残留物をＩＰＡに入れ、数滴の酢酸を追加し、再度濃縮した。残留物を４０ｇシリカカートリッジで精製し、溶出（５分まで１００％ＤＣＭ、５〜２５分に０〜２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５〜３２分に３０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭに上昇）した。
【０１４６】
画分４８〜６０はアミドおよび酸の両方を含有するので、合わせて濃縮し、次の工程で用いた。酸のみを含有するいくつかの画分を合わせ、濃縮して、８ｍｇの酸を得た。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ６．７１（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）６．７５−７．１１（ｍ，１Ｈ）７．３４（ｄ，Ｊ＝３．８１Ｈｚ，１Ｈ）７．４６（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．６１−７．７２（ｍ，１Ｈ）７．９１（ｓ，１Ｈ）８．００−８．１４（ｍ，７Ｈ）８．２２（ｓ，１Ｈ）８．５１（ｓ，１Ｈ）８．７９（ｓ，１Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）３８５。
【０１４７】
ＣＧ−ＲＳ−７５の合成
【化４９】
0006512714.tif 000063
【０１４８】
ＣＧ−ＲＳ−７３からの酸およびアミドの混合物（６０ｍｇ）を窒素下の室温でＴＨＦ（４ｍＬ）およびＭｅＯＨ（１ｍＬ）の混合物に入れた。トリメチルシリルジアゾメタン（２Ｍエーテル溶液、１５０μＬ）を追加し、１時間撹拌し続けた。この時点において、ＴＬＣは、主にアミドおよびエステルを示したので、数滴の酢酸を追加し、１０分間撹拌し続けた。この溶液を濃縮し、１２シリカカートリッジで精製した。淡褐色の固体（５ｍｇ）としてアミドを得た。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ６．６８−６．７５（ｍ，１Ｈ）７．３８（ｄ，Ｊ＝３．２２Ｈｚ，１Ｈ）７．４９（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ）７．６１（ｔ，Ｊ＝７．７６Ｈｚ，１Ｈ）７．９０（ｓ，１Ｈ）７．９６（ｄ，Ｊ＝７．９１Ｈｚ，１Ｈ）８．００−８．１８（ｍ，７Ｈ）８．２４（ｓ，１Ｈ）８．４３（ｄ，Ｊ＝８．４９Ｈｚ，１Ｈ）８．６８（ｓ，１Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）３８４。
【０１４９】
ＣＧ−ＲＳ−９０の合成
【化５０】
0006512714.tif 000064
【０１５０】
固体ＣＧ−ＲＳ−８６（１．５４ｇ、４．７ｍｍｏｌ）およびＣＧ−ＲＳ−８７（１．６７ｇ、５．１７ｍｍｏｌ）を窒素下のＲＢフラスコに入れた。ＤＭＦ（３０ｍＬ）を追加し、続いて酢酸（１５ｍＬ）を追加し、次いで、ＮＨ４ＯＡｃ（約９ｇ、１１８ｍｍｏｌ）を追加した。５０℃の予熱油浴中に入れ、次いで、９０℃に加熱し、この温度で３時間維持した。この時点において、ＬＣは、主に所望の生成物を示した。放熱して室温に冷却した。過剰の水を追加することによってクエンチし、少しの間撹拌した。固体が分離し、ろ過し、水で数回洗浄し、乾燥した（赤色調の褐色の固体１．７６ｇ）。１２５ｍｇの粗製物質をＤＣＭ（１ｍＬ）に入れ、１２ｇシリカゲルカートリッジにロードした。カラムを溶出（１０分まで１００％ＤＣＭ、１０〜２５分に０〜５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５〜３０分に５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）した。淡褐色の固体（４５ｍｇ）として生成物を得た。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（５９９ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ７．４７（ｓ，１Ｈ）７．７１−７．７５（ｍ，２Ｈ）７．９１（ｓ，１Ｈ）８．０４（ｄ，Ｊ＝８．４９Ｈｚ，２Ｈ）８．１１（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）８．１７（ｄ，Ｊ＝８．４９Ｈｚ，２Ｈ）８．３２（ｄ，Ｊ＝８．４９Ｈｚ，２Ｈ）８．３４−８．４０（ｍ，３Ｈ）８．４４（ｓ，１Ｈ）８．６１（ｄ，Ｊ＝９．０８Ｈｚ，２Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）４７４。
【０１５１】
ＣＧ−ＲＳ−９１の合成
【化５１】
0006512714.tif 000065
【０１５２】
固体ＣＧ−ＲＳ−８９（１．５４ｇ、４．７ｍｍｏｌ）およびＣＧ−ＲＳ−８７（１．６７ｇ、５．１７ｍｍｏｌ）を窒素下のＲＢフラスコに入れた。ＤＭＦ（３０ｍＬ）を追加し、続いて酢酸（１５ｍＬ）を追加し、次いで、ＮＨ４ＯＡｃ（約９ｇ、１１８ｍｍｏｌ）を追加した。５０℃の予熱油浴中に入れ、次いで、９０℃に加熱し、この温度で３時間維持した。この時点において、ＬＣは、主に所望の生成物を示した。放熱して室温に冷却した。後処理および精製手順は、ＣＧ−ＲＳ−９０に記載されている。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（５９９ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ７．４１（ｔｄ，Ｊ＝７．６９，１．６１Ｈｚ，１Ｈ）７．４６（ｓ，１Ｈ）７．５４（ｔ，Ｊ＝７．４７Ｈｚ，１Ｈ）７．７３（ｄｄ，Ｊ＝７．６１，１．４６Ｈｚ，１Ｈ）７．７９（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，１Ｈ）８．０３（ｄ，Ｊ＝７．６１Ｈｚ，３Ｈ）８．０６−８．１４（ｍ，３Ｈ）８．３４（ｄ，Ｊ＝９．０８Ｈｚ，２Ｈ）８．４８（ｄ，Ｊ＝１．１７Ｈｚ，１Ｈ）８．５５（ｄ，Ｊ＝８．７８Ｈｚ，２Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）４７４。
【０１５３】
ＣＧ−ＲＳ−１０６の合成
【化５２】
0006512714.tif 000066
【０１５４】
固体ＣＧ−ＲＳ−１０５（６５０ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ）およびＣＧ−ＲＳ−８７（６９８ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）を窒素下のＲＢフラスコに入れた。ＤＭＦ（１２ｍＬ）を追加し、続いて酢酸（６ｍＬ）を追加し、次いで、ＮＨ４ＯＡｃ（３．８ｇ、４９ｍｍｏｌ）を追加した。５０℃の予熱油浴中に入れ、次いで、９０℃に加熱し、この温度で３時間維持した。この時点において、ＬＣは、主に所望の生成物を示した。放熱して室温に冷却した。過剰の水を追加することによってクエンチし、少しの間撹拌した。固体が分離し、ろ過し、水で数回洗浄し、ジエチルエーテルで複数回洗浄し、乾燥した。前記のように、固体を４０ｇシリカカートリッジで精製した。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（５９９ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）μｐｐｍ  ７．２５−７．３５（ｍ，１Ｈ）７．４７（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．７７（ｄ，Ｊ＝７．６１Ｈｚ，１Ｈ）７．９７（ｔ，Ｊ＝７．７６Ｈｚ，１Ｈ）８．０３−８．１４（ｍ，５Ｈ）８．３６（ｄ，Ｊ＝８．７８Ｈｚ，２Ｈ）８．５４（ｓ，２Ｈ）８．５９−８．６８（ｍ，２Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）４７５。
【０１５５】
ＣＧ−ＲＳ−１０９の合成
【化５３】
0006512714.tif 000067
【０１５６】
以下のＣＧ−ＲＳ−９０（１２０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルピペラジン（７０μＬ、０．６２５ｍｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（３１ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）およびジオキサン（３ｍＬ）を不活性雰囲気下の室温でマイクロ波反応容器に入れた。ＮａＯｔｂｕ（６０ｍｇ、０．６２５ｍｍｏｌ）を追加し、続いて、触媒Ｐｄ２ｄｂａ３（２３ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）を追加し、得られた赤色調の暗色の溶液を、窒素を使用した真空圧力サイクルに３回供した。マイクロ波反応器に入れ、４時間かけて１０５℃に加熱し、２ｍＬのＤＭＦをこの暗色の溶液に追加し、ろ過し、２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１０ｍＬ×３）でリンスし、ろ液を濃縮し、４０ｇシリカカートリッジで精製した。生成物を低収率で得た（５ｍｇ）。データ：ＨＰＬＣ  ＲＴ＝３．６６，ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）４９４。
【０１５７】
ＣＧ−ＲＳ−１１５の合成
【化５４】
0006512714.tif 000068
【０１５８】
以下のＣＧ−ＲＳ−１０６（１２０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、モルホリン（５５μＬ、０．６２５ｍｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（３１ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）およびジオキサン（４．５ｍＬ）を不活性雰囲気下の室温でマイクロ波反応容器に入れた。ＮａＯｔｂｕ（６０ｍｇ、０．６２５ｍｍｏｌ）を追加し、続いて、Ｐｄ２ｄｂａ３（２３ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）を追加し、得られた赤色調の暗色の溶液を、窒素を使用した真空圧力サイクルに３回供した。マイクロ波反応器に入れ、４時間かけて１０５℃に加熱し、２ｍＬのＤＭＦをこの暗色の溶液に追加し、ろ過し、２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１０ｍＬ×３）でリンスし、ろ液を濃縮し、４０ｇシリカカートリッジで精製した。淡黄色の固体として生成物を低収率で得た（４ｍｇ）。データ：ＨＰＬＣ  ＲＴ＝４．２２，ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）４８２。
【０１５９】
ＣＧ−ＲＳ−１１６の合成
【化５５】
0006512714.tif 000069
【０１６０】
以下のＣＧ−ＲＳ−９０（１２０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、モルホリン（５５μＬ、０．６２５ｍｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（３１ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）およびジオキサン（５ｍＬ）を不活性雰囲気下の室温で乾燥二つ口ＲＢフラスコに入れた。ＮａＯｔｂｕ（６０ｍｇ、０．６２５ｍｍｏｌ）を追加し、続いて、触媒Ｐｄ２ｄｂａ３（２３ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）を追加し、得られた赤色調の暗色の溶液を、窒素を使用した真空圧力サイクルに３回供した。３６時間かけて１００℃に加熱し、放熱して室温に冷却した。反応内容物をセライトパッドに通してろ過し、ＤＣＭ（３０ｍＬ）、酢酸エチル（３０ｍＬ）および１：１  ＤＣＭ／ＥＡ（３０ｍＬ）でリンスした。ろ液を濃縮し、１２ｇシリカカートリッジで精製した。淡黄色の固体として１６ｍｇの生成物を得た。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（５９９ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ３．１９−３．２４（ｍ，４Ｈ）３．７１−３．７９（ｍ，４Ｈ）７．０７（ｄ，Ｊ＝８．７８Ｈｚ，２Ｈ）７．４５（ｓ，１Ｈ）８．０３（ｄ，Ｊ＝８．４９Ｈｚ，３Ｈ）８．１３（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，４Ｈ）８．２１−８．２７（ｍ，４Ｈ）８．２９（ｓ，１Ｈ）８．３６（ｄ，Ｊ＝９．０８Ｈｚ，３Ｈ）８．６０（ｄ，Ｊ＝９．０８Ｈｚ，２Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）４８１。
【０１６１】
ＣＧ−ＲＳ−１２３の合成
【化５６】
0006512714.tif 000070
【０１６２】
固体ＣＧ−ＲＳ−１２１（１．３ｇ、３．９ｍｍｏｌ）およびＣＧ−ＲＳ−８７（１．４ｇ、４．３ｍｍｏｌ）を窒素下のＲＢフラスコに入れた。ＤＭＦ（２０ｍＬ）を追加し、続いて酢酸（１０ｍＬ）を追加し、次いで、ＮＨ４ＯＡｃ（７．５ｇ、９７．５ｍｍｏｌ）を追加した。５０℃の予熱油浴中に入れ、次いで、９０℃に加熱し、この温度で３時間維持した。この時点において、ＬＣは、主に所望の生成物を示した。放熱して室温に冷却した。過剰の水を追加することによってクエンチし、少しの間撹拌した。固体が分離し、ろ過し、水で数回洗浄し、乾燥した（黄褐色の固体）。２５０ｍｇの粗製物質をＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＭＦ混合物（約１ｍＬ）に入れ、４０ｇシリカゲルカートリッジにロードした。カラムを溶出（５分まで１００％ＤＣＭ、５〜２５分に０〜５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５〜３２分に５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）した。淡褐色の固体（３８ｍｇ）として生成物を得た。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（５９９ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ７．４７（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）８．０１−８．１４（ｍ，５Ｈ）８．２６（ｄｄ，Ｊ＝８．４９，２．０５Ｈｚ，１Ｈ）８．３６（ｄ，Ｊ＝８．４９Ｈｚ，２Ｈ）８．５０−８．５８（ｍ，２Ｈ）８．６０−８．６８（ｍ，３Ｈ）８．８６（ｄ，Ｊ＝２．０５Ｈｚ，１Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）４７５。
【０１６３】
ＣＧ−ＲＳ−１２５の合成
【化５７】
0006512714.tif 000071
【０１６４】
固体ＣＧ−ＲＳ−１２２（１００ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）およびＣＧ−ＲＳ−８７（１４０ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を窒素下のＲＢフラスコに入れた。ＤＭＦ（３ｍＬ）を追加し、続いて酢酸（１．５ｍＬ）を追加し、次いで、ＮＨ４ＯＡｃ（８００ｍｇ、１０．４ｍｍｏｌ）を追加した。５０℃の予熱油浴中に入れ、次いで、９０℃に加熱し、この温度で３時間維持した。この時点において、ＬＣは、主に所望の生成物を示した。放熱して室温に冷却した。過剰の水を追加することによってクエンチし、少しの間撹拌した。固体が分離し、ろ過し、水で数回洗浄し、乾燥し、暗色の残留物が残った。残留物をＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物で処理し、ろ過し、同じ溶媒系で数回リンスした。濃縮し、１２ｇシリカカートリッジで精製し、褐色の固体として２４ｍｇの所望の生成物を得た。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（５９９ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ６．７９（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．０４（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．４８（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．５８（ｄｄ，Ｊ＝７．７６，４．８３Ｈｚ，１Ｈ）８．０６（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，２Ｈ）８．１２（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）８．２０（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，２Ｈ）８．３７（ｄ，Ｊ＝８．４９Ｈｚ，２Ｈ）８．４８（ｄ，Ｊ＝１３．４７Ｈｚ，２Ｈ）８．６１−８．７４（ｍ，３Ｈ）９．５３（ｓ，１Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）３９７。
【０１６５】
ＣＧ−ＲＳ−１２８の合成
【化５８】
0006512714.tif 000072
【０１６６】
固体ＣＧ−ＲＳ−１２４（２５２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）およびＣＧ−ＲＳ−８７（３５５ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を窒素下のＲＢフラスコに入れた。ＤＭＦ（８ｍＬ）を追加し、続いて酢酸（４ｍＬ）を追加し、次いで、ＮＨ４ＯＡｃ（１．９３ｇ、２５ｍｍｏｌ）を追加した。５０℃の予熱油浴中に入れ、次いで、９０℃に加熱し、この温度で３時間維持した。この時点において、ＬＣは、主に所望の生成物を示した。放熱して室温に冷却した。ＣＧ−ＲＳ−１２５に記載されているのと同様の後処理および精製手順により、目的化合物を得た。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（５９９ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ７．４７（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．５２（ｄ，Ｊ＝１２．３０Ｈｚ，１Ｈ）７．９９−８．１５（ｍ，６Ｈ）８．３８（ｄ，Ｊ＝８．７８Ｈｚ，２Ｈ）８．５３（ｓ，１Ｈ）８．６３（ｄ，Ｊ＝７．９１Ｈｚ，１Ｈ）８．６６（ｄ，Ｊ＝８．７８Ｈｚ，２Ｈ）８．７１−８．７７（ｍ，２Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）３９７。
【０１６７】
ＣＧ−ＲＳ−１２９の合成
【化５９】
0006512714.tif 000073
【０１６８】
固体ＣＧ−ＲＳ−１２７（２５２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）およびＣＧ−ＲＳ−８７（３５５ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を窒素下のＲＢフラスコに入れた。ＤＭＦ（８ｍＬ）を追加し、続いて酢酸（４ｍＬ）を追加し、次いで、ＮＨ４ＯＡｃ（１．９３ｇ、２５ｍｍｏｌ）を追加した。５０℃の予熱油浴中に入れ、次いで、９０℃に加熱し、この温度で３時間維持した。この時点において、ＬＣは、主に所望の生成物を示した。放熱して室温に冷却した。ＣＧ−ＲＳ−１２５に記載されているのと同様の後処理および精製手順により、目的化合物を得た。データ：ＨＰＬＣ  ＲＴ＝３．４６，ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）３９７。
【０１６９】
ＣＧ−ＲＳ−１３０の合成
【化６０】
0006512714.tif 000074
【０１７０】
固体ＣＧ−ＲＳ−４４（１００ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を窒素下で０℃のＤＭＦ（３ｍＬ）に入れた。数分間撹拌した後、ＮａＨ（１６ｍｇ、６０％分散液、０．３９ｍｍｏｌ）を追加し、５分間撹拌し続け、この時点において、ＭｅＩ（１６μＬ、０．２６ｍｍｏｌ）を追加した。室温に加温しながら撹拌し続けた。２時間後、ＴＬＣは、出発物質を含む３つのスポットを示した。水でクエンチし、通常の後処理および精製により、所望の生成物（７ｍｇ）を得た。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（５９９ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ２．８０（ｄ，Ｊ＝４．１０Ｈｚ，３Ｈ）６．７２（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．３９（ｄ，Ｊ＝３．２２Ｈｚ，１Ｈ）７．８９−７．９４（ｍ，１Ｈ）８．００（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，２Ｈ）８．０８−８．１６（ｍ，３Ｈ）８．３２−８．４１（ｍ，３Ｈ）８．５８（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，３Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）４００。
【０１７１】
ＣＧ−ＲＳ−１３１の合成
【化６１】
0006512714.tif 000075
【０１７２】
固体ＣＧ−ＲＳ−４４（１９３ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を窒素下で０℃のＤＭＦ（６ｍＬ）に入れた。数分間撹拌した後、ＮａＨ（９６ｍｇ、６０％分散液、２ｍｍｏｌ）を追加し、５分間撹拌し続け、この時点において、ＭｅＩ（１２５μＬ、２ｍｍｏｌ）を追加した。室温に加温しながら撹拌し続けた。一晩撹拌した後、ＴＬＣは、主に単一のスポットを示した。水でクエンチし、通常の後処理により、１７０ｍｇの粗生成物を得、このうちの５０ｍｇを精製し、残りを次の工程で用いた。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（５９９ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ２．８４−３．０９（ｍ，６Ｈ）６．７２（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．３９（ｄ，Ｊ＝３．２２Ｈｚ，１Ｈ）７．５７（ｄ，Ｊ＝７．９１Ｈｚ，２Ｈ）７．９１（ｓ，１Ｈ）７．９９−８．１６（ｍ，３Ｈ）８．２６−８．４４（ｍ，３Ｈ）８．５７（ｄ，Ｊ＝８．４９Ｈｚ，２Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）４１４。
【０１７３】
ＣＧ−ＲＳ−１３４の合成
【化６２】
0006512714.tif 000076
【０１７４】
ＣＧ−ＲＳ−４４（７７ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を窒素下の室温でＤＣＭ（２ｍＬ）に入れた。数分間撹拌した後、ＴＦＡＡ（４４μＬ）を追加し、続いて、ＴＥＡ（６０μＬ）を追加した。室温で２時間撹拌した後、ＴＬＣおよびＬＣは両方とも、所望の生成物を示した。ＤＣＭを追加し、次いで、水を追加し、層を分離した。ＤＣＭで水層を抽出し、合わせた有機部分を水で２回洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）した。粗生成物を１２ｇシリカカートリッジで精製して、黄色の固体として４３ｍｇの所望の化合物を得た。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（５９９ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ６．７２（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．４０（ｄ，Ｊ＝３．２２Ｈｚ，１Ｈ）７．９２（ｓ，１Ｈ）８．０３（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，２Ｈ）８．１１（ｓ，１Ｈ）８．２２（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，２Ｈ）８．３１−８．４１（ｍ，３Ｈ）８．５７（ｄ，Ｊ＝８．４９Ｈｚ，２Ｈ）．ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）３６８。
【０１７５】
ＣＧ−ＲＳ−１３６の合成
【化６３】
0006512714.tif 000077
【０１７６】
以下のＣＧ−ＲＳ−１２３（２４０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、モルホリン（１０９μＬ、１．２５ｍｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（６２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびジオキサン（７ｍＬ）を不活性雰囲気下の室温で乾燥二つ口ＲＢフラスコに入れた。ＮａＯｔｂｕ（１２０ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）を追加し、続いて、触媒Ｐｄ２ｄｂａ３（４６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を追加し、得られた赤色調の暗色の溶液を、窒素を使用した真空圧力サイクルに３回供した。２４時間かけて１００℃に加熱し、放熱して室温に冷却した。反応内容物をコットンプラグに通してろ過し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物で数回リンスした。ろ液を濃縮し、ＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解し、４０ｇシリカカートリッジで精製した。黄色の固体として３２ｍｇの生成物を得た。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（５９９ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ３．２８−３．５１（ｍ，４Ｈ）３．７６（ｂｒ．ｓ．，４Ｈ）６．６４−７．１６（ｍ，１Ｈ）７．３６−７．６０（ｍ，２Ｈ）８．０５（ｓ，５Ｈ）８．３０−８．５２（ｍ，４Ｈ）８．５２−８．６９（ｍ，２Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）４８２。
【０１７７】
ＣＧ−ＲＳ−１３７の合成
【化６４】
0006512714.tif 000078
【０１７８】
以下のＣＧ−ＲＳ−１２３（２４０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルピペラジン（１３９μＬ、１．２５ｍｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（６２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびジオキサン（７ｍＬ）を不活性雰囲気下の室温で乾燥二つ口ＲＢフラスコに入れた。ＮａＯｔｂｕ（１２０ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）を追加し、続いて、触媒Ｐｄ２ｄｂａ３（４６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を追加し、得られた赤色調の暗色の溶液を、窒素を使用した真空圧力サイクルに３回供した。２４時間かけて１００℃に加熱し、放熱して室温に冷却した。反応内容物をコットンプラグに通してろ過し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物で数回リンスした。ろ液を濃縮し、ＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解し、４０ｇシリカカートリッジで精製した。黄色の固体として２８ｍｇの生成物を得た。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（５９９ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ２．３３（ｂｒ．ｓ．，３Ｈ）２．６１（ｂｒ．ｓ．，４Ｈ）３．３２−３．４１（ｍ，４Ｈ）７．４５（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．５１（ｄ，Ｊ＝２．３４Ｈｚ，１Ｈ）８．０５（ｓ，４Ｈ）８．１０（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）８．３３−８．４０（ｍ，３Ｈ）８．４１−８．４７（ｍ，２Ｈ）８．５５−８．６５（ｍ，３Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）４９５。
【０１７９】
ＣＧ−ＲＳ−１４３の合成
【化６５】
0006512714.tif 000079
【０１８０】
以下のＮＨ４ＯＨ．ＨＣｌ（７０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（２７６ｍｇ、２ｍｍｏｌ）のエタノール（３ｍＬ）溶液を乾燥ＲＢフラスコに入れた。５分間撹拌し、次いで、ＣＧ−ＲＳ−１４０（１００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を追加し、次いで、加熱還流した。６時間還流した後、反応混合物をロータリーエバポレーターで濃縮した。ＭｅＯＨを追加し、ろ過し、次いでより多くのメタノールで洗浄し、濃縮した。オルトギ酸トリエチル（約５ｍＬ）を残留物に追加し、一晩かけて１４０〜１５０℃に加熱した。放熱して冷却し、濃縮した。残留物を１２ｇシリカカートリッジで精製した；約３ｍｇの所望の生成物を得た。データ：ＨＰＬＣ  ＲＴ＝４．３２，ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）４１１。
【０１８１】
ＣＧ−ＲＳ−１４７の合成
【化６６】
0006512714.tif 000080
【０１８２】
固体ＣＧ−ＲＳ−１４５（５１２ｍｇ、２ｍｍｏｌ）およびＣＧ−ＲＳ−８７（７１１ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）を窒素下のＲＢフラスコに入れた。ＤＭＦ（１０ｍＬ）を追加し、続いて酢酸（５ｍＬ）を追加し、次いで、ＮＨ４ＯＡｃ（４．６ｇ、６０ｍｍｏｌ）を追加した。５０℃の予熱油浴中に入れ、次いで、９０℃に加熱し、この温度で３時間維持した。この時点において、ＬＣは、主に所望の生成物を示した。放熱して室温に冷却した。過剰の水を追加することによってクエンチし、少しの間撹拌した。固体が分離し、ろ過し、水で数回洗浄し、乾燥した。固体をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解し、シリカゲル（８ｇ）を追加し、濃縮した。固体をシリカゲルプラグにロードし、精製した。黄色の固体（３３０ｍｇ）として生成物を得た。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（５９９ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ３．８８（ｓ，３Ｈ）６．７１（ｄｄ，Ｊ＝３．２２，１．７６Ｈｚ，１Ｈ）７．３８（ｄ，Ｊ＝３．２２Ｈｚ，１Ｈ）７．９１（ｓ，１Ｈ）８．０３−８．２１（ｍ，５Ｈ）８．３５（ｄ，Ｊ＝９．６６Ｈｚ，３Ｈ）８．５６（ｄ，Ｊ＝８．７８Ｈｚ，２Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）４０１。
【０１８３】
ＣＧ−ＲＳ−１４８の合成
【化６７】
0006512714.tif 000081
【０１８４】
固体ＣＧ−ＲＳ−１４７（６０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３ｍＬ）に入れ、１Ｍ  ＬｉＯＨ水溶液（０．３ｍＬ、０．３ｍｍｏｌ）を追加した。得られた溶液を室温で一晩撹拌した。この時点において、ＬＣは、出発物質のみを示したので、別の１Ｍ  ＬｉＯＨ水溶液（０．３ｍＬ、０．３ｍｍｏｌ）を追加した。３時間かけて５０℃に加熱した。この時点において、ＴＬＣは、出発物質が残存していないことを示したので、放熱した。室温に冷却した。酢酸エチルおよび水を追加し、層を分離した。次いで、酢酸エチルで水層を洗浄し、ｐＨ約５に酸性化した。ＤＣＭで２回抽出し、両方の有機層が化合物を有するので、これを合わせ、乾燥し、濃縮した。１２ｇシリカカートリッジで精製して、白色の固体として３２ｍｇの所望の化合物を得た。データ：１Ｈ  ＮＭＲ（５９９ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ６．７１（ｄｄ，Ｊ＝３．２２，１．４６Ｈｚ，１Ｈ）７．３９（ｄ，Ｊ＝３．２２Ｈｚ，１Ｈ）７．９１（ｓ，１Ｈ）８．０２−８．２０（ｍ，５Ｈ）８．２８−８．４２（ｍ，３Ｈ）８．５７（ｄ，Ｊ＝８．７８Ｈｚ，２Ｈ）１３．１５（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）。ＥＳＩ（ｍ／ｚ）＝（Ｍ＋Ｈ）３８７。
【０１８５】
本明細書に記載される実施例および実施形態は、単なる例示目的のものであり、その様々な修正または変更が当業者に示唆され、本出願の精神および権限、ならびに添付の特許請求の範囲内に含まれると理解される。本明細書に記載されるものと類似または同等の任意の方法および材料を、本発明の実施または試験に使用し得るが、好ましい方法および材料が記載されている。
【０１８６】
本明細書で引用されるすべての刊行物、ＧｅｎＢａｎｋ配列、ＡＴＣＣ寄託物、特許および特許出願は、それぞれが個々にそのように示されているかのように、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０】
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【図１１】
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