(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
メタボリックシンドローム（ＭｅｔＳ）が血中総アディポネクチン値を測定するための採血から４年以内に発症することを予防するために、運動及び／又は食事に関する生活指導が必要な対象者を選別する方法であって、
被験者の血中の総アディポネクチン値を測定することと、
前記総アディポネクチン値が６．２μｇ／ｍＬ以下である被験者を選別すること、
とを含み、
前記被験者は男性である、
被験者の選別方法。
【請求項２】
６．２μｇ／ｍＬ以下の血中総アディポネクチン値を持つ被験者を選別し、前記被験者に運動及び／又は食事に関する生活指導を行なうことを含み、
前記被験者は男性である、
ＭｅｔＳが血中総アディポネクチン値を測定するための採血から４年以内に発症することを予防する方法。
【請求項３】
被験者が血中総アディポネクチン値を測定するための採血から４年以内にＭｅｔＳを発症する可能性を示す指標として、被験者の血中総アディポネクチン値を使用する方法であって、
血中総アディポネクチン値が６．２μｇ／ｍＬ以下である場合に、前記可能性があることを示し、
前記被験者は男性である、
方法。
【請求項４】
血中総アディポネクチン値が６．２μｇ／ｍＬ以下の被験者に対して、
運動及び／又は食事に関する生活指導を行うことを含み、
前記被験者は男性である、
ＭｅｔＳが血中総アディポネクチン値を測定するための採血から４年以内に発症する危険性を下げる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、メタボリックシンドローム（糖・脂質代謝異常）発症の危険性を予測するための方法である。特に、壮年期の男性労働者の血中のアディポネクチン濃度を指標として、メタボリックシンドローム発症の危険性を予測する方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】  内臓脂肪型肥満を基盤とした心血管疾患リスクファクターの重積、いわゆるメタボリックシンドロームは近年日本でも増加傾向にあり重大な医学的、社会的問題となってきている。従来、脂肪組織は余分なエネルギーを貯蔵するためだけの臓器と考えられてきたが、近年様々な生理活性物質いわゆるアディポサイトカインを分泌する内分泌臓器として生体内の免疫や炎症反応、エネルギー代謝などを制御していることが明らかとなっている。
アディポサイトカインには炎症性サイトカインでありインスリン抵抗性を惹起するＴＮＦ−α、血栓形成を促進するＰＡＩ−１、血管平滑筋の遊走・増殖を惹起するＨＢ−ＥＧＦなどの悪玉アディポカインと食欲抑制作用を有するレプチンやインスリン抵抗性を改善するアディポネクチンなどの善玉アディポカインが含まれる。内臓脂肪が蓄積した状態ではこれらアディポサイトカインの分泌異常が生じており，それが糖・脂質代謝異常を引き起こすと考えられている。
善玉アディポカインのひとつであるアディポネクチンは脂肪細胞から特異的に分泌されるにもかかわらず、肥満患者、特に内臓脂肪型肥満患者において血中濃度が低下するという特徴を有する。血中アディポネクチン濃度は脂質・血圧・ＣＲＰなどの心血管疾患のリスクファクターと逆相関し、低アディポネクチン血症は糖尿病、高血圧、冠動脈疾患の独立した危険因子であることが報告されている。【０００３】  アディポネクチン遺伝子を欠損させたマウスを用いた基礎研究において、アディポネクチンはインスリン抵抗性改善作用、抗炎症作用、抗動脈硬化作用を有することが明らかとなっている。アディポネクチンは、エネルギー消費臓器である肝臓や骨格筋において脂肪酸燃焼や糖の利用を促進し、糖新生を抑制することで代謝改善作用を発揮する。インスリン抵抗性改善薬として臨床的に使用されているチアゾリジン誘導体はアディポネクチンの血中濃度を上昇させることが知られており、その有用性の機序のひとつと考えられている。またアディポネクチンは心血管細胞にも直接作用し、心肥大、虚血再灌流障害や心筋梗塞後のリモデリングを抑制し心保護的に働くことが報告されている。以上よりアディポネクチンはメタボリックシンドロームを基盤とした心血管疾患におけるバイオマーカーとしてのみならず、新たな治療薬のターゲットとしても非常に注目されている（特許文献１と２）。【０００４】  また、バイオマーカーとしてのアディポネクチンは、ＰＴＣＡ（ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓｔｒａｎｓｌｕｍｉｎａｌ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ａｎｇｉｏｐｌａｓｔｙ）を受けた虚血性心疾患（ＩＨＤ：ｉｓｃｈｅｍｉｃ  ｈｅａｒｔ  ｄｉｓｅａｓｅ）患者において、アディポネクチン（１μｇ／ｍＬ）の上昇は心血管疾患リスク（心筋梗塞、狭心症）を減少させることが知られている。しかしながら、アディポネクチンの血中濃度には性差があり、バイオマーカーとしての使用を困難にしている。例えば、ヒトにおいては、血中の高分子量アディポネクチン濃度は、女性は男性の約２倍と高値である。更に、アディポネクチンは男性においては、インスリン抵抗性により強く関与していることが示唆されるが、女性の場合にはインスリン抵抗性との関連が弱いとの報告もある（非特許文献１）。このように、アディポネクチンは、その多様な効果が知られているものの、バイオマーカーとしての基準はあまり明確のものではなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】ＷＯ２０１０／０３５８５
【特許文献２】特表２０１１−５２１２４８号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】吉政康直、平成１７年度厚生労働科学研究費補助金  子ども家庭総合研究事業分担研究報告書「循環器病危険因子の性差に関する研究」
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】  本発明は、メタボリックシンドローム発症の危険性を予測する方法を提供するものであり、具体的には、バイオマーカーとしてのアディポネクチンにカットオフ値を設定し、発症の危険性の評価基準とすることを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】  過去の疫学調査よりメタボリックシンドローム（ＭｅｔＳ）は２型糖尿病の危険因子として見なされており、ＭｅｔＳの発症を抑制することによって２型糖尿病発症の予防が可能になると考えられている。このために、ＭｅｔＳ発症に寄与する種々の影響因子が検討され、脂肪細胞から分泌されるアディポカインの寄与が大きいと考えられている。その中でも特に、アディポネクチンとＭｅｔＳとの関連性が強いと報告されている。しかし、これらの報告では、断面調査からの報告が多数を占めており、ＭｅｔＳ発症に対するアディポネクチンのカットオフ値について検討した報告例は少ない。
そこで、本発明者は、徳島県の男性労働者における２００８年から４年間の追跡調査の成績をもとに、メタボリックシンドローム発症に対するアディポネクチンのカットオフ値を検討した。まず、図１に示すように、血中の総アディポネクチン濃度を４つの領域（≦４．９、５．０〜６．６、６．７〜８．８、≧８．９）に分けて、その中に該当する被験者の４年間の追跡調査から、健康維持期間の相対比率（以後、生存時間解析法における加速モデルで算出したｔｉｍｅ  ｒａｔｉｏを健康維持期間の相対比率とする）を算定した。総アディポネクチン濃度が、８．９μｇ／ｍＬ以上の被験者の健康維持期間の相対比率（ＴＲ）を１として、それより低い３つのアディポネクチン領域の被験者の健康維持期間の相対比率を算定した。その結果、図１に示す健康維持期間の相対比率が得られた。総アディポネクチン濃度が５．０〜６．６μｇ／ｍＬの被験者の場合、健康維持期間の相対比率が統計的有意差を持って大きく減少し、ＭｅｔＳを発症し易くなっている。
そこで本発明者らは、更に上記アディポネクチン領域を精査し、アディポネクチンのカットオフ値の算定を試みた。このカットオフ値が算定できれば、その値を基準にして、その数値を下回る被験者の場合には、健康維持期間の相対比率が減少することになる。
加速モデルで用いる生存時間分布として、本発明者らはワイブル分布、指数分布、ガンマ分布の３種を用いて検討を行った。その結果、カットオフ値として、６．２μｇ／ｍＬを得ることができた。この値を指標として使用し、上記４年間の追跡調査の結果を整理すると、図２示される健康維持期間の相対比率（ＴＲ）が算出できた。即ち、血中の総アディポネクチン濃度が６．２μｇ／ｍＬ以下の被験者は、この値より高い総アディポネクチン濃度を持つ被験者と比較すると、ＴＲ値が０．２２と計算され、ＭｅｔＳ発症の危険性が約４．５倍に増大することが示された。
以上のように、本発明者らは、ＭｅｔＳ発症の危険性の増大を予測できる指標として、血中の総アディポネクチン濃度のカットオフ値を見出し、本発明を完成させた。【０００９】  即ち、本発明の要旨は以下の通りである。
（１）メタボリック・シンドローム（ＭｅｔＳ）の発症予防のために、運動と食事に関する生活指導が必要な対象者を選別する方法であって、
被験者の血液サンブル中の総アディポネクチン値を測定し、６．２μｇ／ｍＬ以下のアディポネクチン値を持つ被験者を選別することを特徴とする、被験者の選別方法。
（２）６．２μｇ／ｍＬ以下の血中総アディポネクチン値を持つ被験者を選別して、運動と食事に関する生活指導を行なうことを特徴とする、ＭｅｔＳの発症予防方法。
（３）ＭｅｔＳ発症の危険性の予測方法であって、
血中総アディポネクチン値が６．２μｇ／ｍＬ以下の被験者において、そうでない被験者よりも短い期間にＭｅｔＳ発症することを予測する方法。
【発明の効果】
【００１０】  本発明は、健常人におけるメタボリックシンドローム発症の危険性の予測方法である。即ち、健常人のアディポネクチンの血中濃度に一定の閾値（６．２μｇ／ｍＬ以下）を定め、これを越えてアディポネクチンの血中濃度が悪化した被験者は、そうでない被験者と比較して、より短い時間内（ＴＲが約０．２２）にメタボリックシンドロームを発症していることが示された。
このように、上記総アディポネクチン濃度の値を指標として、アディポネクチン濃度の変動に注意すれば、健常人におけるメタボリックシンドローム発症予測を適切に評価することができる。それ故、アディポネクチンの血中濃度が６．２μｇ／ｍＬ以下の被験者にとっては、発症の危険性が明瞭に自覚できることになる。そのことから、被験者の行動変容が起こり易くなり、被験者が積極的に発症の危険性を回避するために行動する。その結果、メタボリックシンドロームの前段階の被験者は、早期に運動治療、食事コントロール等を適切に行なうことができ、メタボリックシンドロームへの移行頻度を大きく低減させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】全アディポネクチンの血中濃度の４つの数値範囲における、健康維持期間の相対比率（ＴＲ値）を算出し、相互比較を行った図である。
【図２】全アディポネクチンの血中濃度が６．２μｇ／ｍＬ以下の数値を持つ被験者とそれより高い値を持つ被験者を区分して、上記ＴＲ値で評価した図である。血中の総アディポネクチン濃度が６．２μｇ／ｍＬ以下の被験者は、それより高い濃度の被験者と対比すると、健康維持期間の相対比率が大きく減少しており、約４．５分の１に短縮されていることが示されている。即ち、血中の総アディポネクチン濃度が６．２μｇ／ｍＬ以下の被験者は、メタボリックシンドロームを発症し易くなっていることが示されている。
【発明を実施するための形態】
【００１２】  本発明の「メタボリックシンドローム（ＭｅｔＳ）」とは、公知の基準（ａ  ｊｏｉｎｔ  ｓｔａｔｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ＩＤＦ，ＮＨＬＢＩ，ＡＨＡ，ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｒｔ  Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  Ｏｂｅｓｉｔｙ）に該当するものを言う。即ち、内臓脂肪が過剰にたまっている場合には、糖尿病や高血圧症、脂質異常症といった生活習慣病を併発し易くなっている。しかも、まだ病気とは診断されない予備群でも、動脈硬化が急速に進行するとされている。
本発明で「アディポネクチン」とは、脂肪細胞より分泌されるアディポサイトカインの１つであり、２４４個のアミノ酸からなる蛋白質であり、血中には３量体を基本にして、数種類の多量体が存在すると報告されている。最近、１２〜１８量体に相当する高分子量アディポネクチンの存在比率などが、より病態を反映するとの報告もなされている。本発明では、アディポネクチンの総濃度が病態を反映することに変わりがないことから、アディポネクチンの血中濃度としては、アディポネクチンの総濃度と高分子量アディポネクチンの濃度等を区別せず使用する。なお、高分子量アディポネクチンの濃度を測定した場合には、その存在比率からアディポネクチンの総濃度に換算して評価する。
なお、アディポネクチンの生理活性としては、インスリン感受性の亢進、動脈硬化の抑制、抗炎症、心筋肥大の抑制などが報告されている。アディポネクチンの血中濃度は内臓脂肪量に逆相関するとされており、ヒトの正常値の範囲はアディポネクチンの総濃度として５〜１５μｇ／ｍｌであると報告されている。
本発明のアディポネクチンの血中濃度の測定は、公知の方法に準じて測定し、算出することができる。例えば、酵素、抗体等を使用する生物学的方法（特に免疫学的方法）、血糖値の測定に使用可能な光学的方法などの公知の方法に基づき、各々血液（血清ないし血漿）サンプルから、常法に従って測定することができる。
本発明では、総アディポネクチン濃度３．１〜８．３μｇ／ｍｌの領域において、０．１μｇ／ｍｌ毎にカットオフ値を設定して生存時間解析を行った。その結果、６．２μｇ／ｍｌの数値が、カットオフ値としてＭｅｔＳ発症を予測するのに最も適切であることが見出された。
【００１３】  本発明で「生活指導」とは、健康の維持向上を図るための療法のことを言い、例えばサプリメントや健康補助食品の摂取や運動及び／又は栄養に関する介入療法などを挙げることができる。特に、食事や運動に関する適切な生活指導を行ない、特定健診レベルでの数値管理を行なうことを言う。例えば、糖代謝異常の数値管理としては、特定保健指導レベルの基準値としてＨｂＡ１ｃ（ＮＧＳＰ値）は５．６％未満、空腹時血糖値は１００ｍｇ／ｄＬ未満になるように、適切な生活習慣指導や肥満の是正などが行なわれている。
【実施例】
【００１４】  次に実施例を挙げて本発明を更に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例１】
【００１５】総アディポネクチン値におけるカットオフ値の検討
（１）評価対象
ａ）対象被験者：
２００８年の疫学調査を受けた徳島県男性労働者（２０−６０歳）：４６７名
なお、次の被験者は対象から除外されている。
（除外基準）食後受診者、未採血者、測定値欠損者、既にＭｅｔＳと診断されている者
ｂ）解析対象：
ＭｅｔＳ発症の有無を追跡できた３６５名
ｃ）追跡期間：
４年間（２００８年−２０１２年）
ｄ）評価データ：
対象者から採取したデータは、血糖値、インスリン濃度、その他の血中因子（アディポネクチン、遊離脂肪酸、中性脂肪（トリグリセリド）、ＨＤＬ−コレステロール、インターロイキン−６、インターロイキン−１８、高感度ＣＲＰ等）、生活習慣（栄養素摂取量、日常生活の活動度）、バックグラウンド（年齢、薬剤使用歴、既往歴、家族歴、飲酒習慣、喫煙習慣等）、身体計測（身長、体重、腹囲、ヒップ周囲、体脂肪率、血圧等）である。なお、１０時間以上の絶食後に採血し、血中の因子を測定した。【００１６】（２）データ処理
ａ）血中の総アディポネクチン濃度：
被験者の血清をヒトアディポネクチンラテックスキット（大塚製薬）により測定した。測定値を４つの領域（４．９以下、５．０〜６．６、６．７〜８．８、８．９以上）に区分し、加速モデルを使用して、８．９（μｇ／ｍＬ）以上のアディポネクチン濃度を持つ被験者の健康維持期間の相対比率を１として、それ以下の各アディポネクチン領域の被験者の健康維持期間の相対比率を算定した。その結果を図１に示す。
ｂ）診断基準
以下の表１の基準に基づいて、メタボリックシンドローム（ＭｅｔＳ）の有無を診断した（ａ  ｊｏｉｎｔ  ｓｔａｔｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ＩＤＦ，ＮＨＬＢＩ，ＡＨＡ，Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｒｔ  Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  Ｏｂｅｓｉｔｙ）。【００１７】
【表１】
0006512590.tif 000002
［注記］上記５項目中、３項目以上該当するとメタボリックシンドロームと判定。【００１８】ｃ）エンドポイント：
ＭｅｔＳ発症件数：      ４５例
ｄ）調整因子：
年齢、ＢＭＩ、喫煙習慣、飲酒習慣、運動習慣【００１９】（３）解析方法
図１の総アディポネクチン濃度３．１〜８．３μｇ／ｍＬの範囲において、ＭｅｔＳの発症予測の指標を求めるために、血中の総アディポネクチン濃度とＭｅｔＳ発症件数に対して、代表的な生存時間解析の手法である加速モデルを用い、ワイブル分布、指数分布、ガンマ分布をあてはめて評価を行った。
なお、低リスク群（アディポネクチンが高濃度の被験者群）、高リスク群（アディポネクチンが低濃度の被験者群）の２群に分けるカットオフ値の候補の中から、対数尤度を用いてデータがモデルに当てはまったものを選択した。
ａ）ワイブル分布：
ワイブル分布で計算し、対数尤度が大きい順に５つの結果を以下の表２に示した。【００２０】
【表２】
0006512590.tif 000003
0006512590.tif 000004
［注記］
調整因子は、年齢、ＢＭＩ、喫煙習慣、飲酒習慣、運動習慣である。
１）被験者を総アディポネクチン濃度で２群に区分する際のカットオフ値
２）ＭｅｔＳを発症するまでの健康維持期間の相対比率を表す。カットオフ値が６．２の場合、その値以下の被験者が４年以内にＭｅｔＳを発症する可能性が、より高い数値の被験者と比較して約４．５倍高いことを表している。【００２１】ｂ）指数分布：
指数分布で計算し、対数尤度が大きい順に５つの結果を以下の表３に示した。【００２２】
【表３】
0006512590.tif 000005
［注記］
調整因子は、年齢、ＢＭＩ、喫煙習慣、飲酒習慣、運動習慣である。
１）は上記と同じ意味を表す。
２）も上記と同じであり、カットオフ値が６．２の場合、その値以下の被験者が４年以内にＭｅｔＳを発症する可能性は、より高い数値の被験者と比較して約３倍高いことを表している。【００２３】ｃ）ガンマ分布：
ガンマ分布で計算し、対数尤度が大きい順に５つの結果を以下の表４に示した。【００２４】
【表４】
0006512590.tif 000006
0006512590.tif 000007
［注記］
調整因子は、年齢、ＢＭＩ、喫煙習慣、飲酒習慣、運動習慣である。
１）は上記と同じ意味を表す。
２）も上記と同じであり、カットオフ値が６．２の場合、その値以下の被験者が４年以内にＭｅｔＳを発症する可能性は、より高い数値の被験者と比較して約４．５倍高いことを表している。【００２５】（４）結論
表２〜４の結果より、検討した３つの分布すべてにおいて、カットオフ値を６．２μｇ／ｍＬにすると、最も適切にＭｅｔＳ発症を予測できることが示された。
なお、上記３つの分布の計算手法において、どの分布手法が本アディポネクチン濃度のカットオフ値を求めるのに最適であるのかを判断するため、赤池情報量基準（ＡＩＣ）を用いて評価した。その結果、ＡＩＣが最も小さいものとして（小さいほうが良い）、ワイブル分布が選択された。なお、ワイブル分布の下での９５％信頼区間は下記の通りになっている。【００２６】
【表５】
0006512590.tif 000008
【００２７】  以上のことから、壮年期の男性労働者が多い集団では、図２に示されるように総アディポネクチン濃度が６．２μｇ／ｍＬ以下の被験者は、そうでない被験者よりもＭｅｔＳを発症する危険性が約４．５倍（＝１／０．２２）高いことが示された。
【産業上の利用可能性】
【００２８】  本発明のＭｅｔＳ発症の患者選別方法によれば、被験者の血液データ（血中のアディポネクチン濃度が６．２μｇ／ｍＬ以下）を用いて、メタボリックシンドローム発症の危険性の高い被験者を早期に選別できる。それ故、発症前または発症初期のステージで食生活や運動習慣の改善や治療が開始でき、メタボリックシンドロームへの移行を回避することができる。即ち、アディポネクチンの血中濃度６．２μｇ／ｍＬを指標にして、これ以下の数値の被験者については、数年（約４年）以内にＭｅｔＳを発症する危険性が約４．５倍高いと予測できる。従って、本発明は、メタボリックシンドロームの初期診断と治療にとって、極めて有用な被験者の選別方法の発明である。
【図１】
0006512590.tif 000009
【図２】
0006512590.tif 000010