(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する、単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片であって、  前記抗体が、配列番号３０６／３１４からなる重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列ペア内に含まれる３種の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）と３種の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含む、単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２】
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４からなる群より選択されるアイソタイプを有する、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３】
表面プラズモン共鳴法によって測定される１０−６Ｍ以下のＫＤでＦｅｌ  ｄ１に特異的に結合する、請求項１または２に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４】
配列番号３０６のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項５】
配列番号３１４のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項６】
配列番号３０８／３１０／３１２／３１６／３１８／３２０の重鎖と軽鎖のＣＤＲ配列の組み合わせを含む、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する、単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項７】
配列番号３０６／３１４からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項８】
配列番号４１２に結合する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項９】
１種または複数の薬学的に許容される賦形剤と共に、治療有効量の１種または複数の請求項１〜８のいずれか一項に記載のＦｅｌ  ｄ１に特異的に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を含む、薬学的組成物。
【請求項１０】
１種または複数の薬学的に許容される賦形剤と共に、治療有効量の請求項１〜８のいずれか一項に記載のＦｅｌ  ｄ１に特異的に結合する第１の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片と、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する第２の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を含む、薬学的組成物。
【請求項１１】
請求項１〜８のいずれか一項に記載のＦｅｌ  ｄ１に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体またはその断片をコードする、核酸分子。
【請求項１２】
請求項１１に記載のＦｅｌ  ｄ１に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体またはその断片をコードする核酸分子を含む、発現ベクター。
【請求項１３】
請求項１２に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
【請求項１４】
ネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応を示す患者の処置のための、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応に関連する少なくとも１種の症状または合併症の処置のための、有効量の１種または複数の請求項１〜８のいずれか一項に記載のＦｅｌ  ｄ１に特異的に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片、あるいは、請求項９または１０のいずれかに記載の薬学的組成物、を含む薬学的組成物であって、ネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する前記感受性またはアレルギー反応が防止される、または重症度および／または持続時間が低減される、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する前記感受性またはアレルギー反応に関連する少なくとも１種の症状または合併症が防止または改善される、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する前記感受性またはアレルギー反応の頻度および／または持続時間、またはその重症度が低下される、薬学的組成物。
【請求項１５】
ネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応を示す患者の処置における使用のため、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応に関連する少なくとも１種の症状または合併症の処置のための医薬の製造における請求項９または１０のいずれかに記載の薬学的組成物の使用であって、ネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する前記感受性またはアレルギー反応が防止される、または重症度および／または持続時間が低減される、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する前記感受性またはアレルギー反応に関連する少なくとも１種の症状または合併症が防止または改善される、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する前記感受性またはアレルギー反応の頻度および／または持続時間、またはその重症度が低下される、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ネコアレルゲンＦｅｌ  ｄ１に特異的に結合するヒト抗体およびヒト抗体の抗原結合性断片、前記抗体を含む治療組成物ならびに係る抗体を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｆｅｌ  ｄ１タンパク質は、哺乳動物にのみ見出される小型のジスルフィド結合したヘテロ二量体タンパク質のセクレトグロビンファミリーに属する、分泌型ネコタンパク質である（Ｋｌｕｇ，  Ｊ．ら、（２０００年）、Ａｎｎ．  Ｎ．Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．９２３巻：３４８〜３５４頁）。これは、ヒトにおけるネコアレルギーの主な原因である（Ｐｌａｔｔｓ−Ｍｉｌｌｓ，  Ｔ．Ａ．ら、（１９９７年）、Ｊ．  Ａｌｌｅｒｇｙ
Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１００巻：Ｓ２〜Ｓ２４頁）。ネコアレルギーの患者の約９０〜９５％は、Ｆｅｌ  ｄ１タンパク質に対しＩｇＥ応答を有する（ｖａｎ  Ｒｅｅら、（１９９９年）、Ｊ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０４巻：１２２３〜１２３０頁）。Ｆｅｌ  ｄ１に対しアレルギー応答を経験する患者における症状は、軽度の鼻炎および結膜炎から生死に関わる喘息反応に及び得る。Ｆｅｌ  ｄ１は、皮脂腺および扁平上皮腺（ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｇｌａｎｄ）および扁平上皮細胞によって産生され、舐めることおよび毛づくろいすることによって生皮（ｐｅｌｔ）へと移される（Ｂａｒｔｈｏｌｏｍｅ，  Ｋ．ら、（１９８５年）、Ｊ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７６巻：５０３〜５０６頁；Ｃｈａｒｐｉｎ，  Ｃ．ら、（１９９１年）、Ｊ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．８８巻：７７〜８２頁；Ｄａｂｒｏｗｓｋｉ，  Ａ．Ｊ．（１９９０年）ら、Ｊ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．８６巻：４６２〜４６５頁）。これは、唾液、肛門周囲および涙腺（ｌａｃｈｒｙｍａｌ  ｇｌａｎｄ）にも存在し（Ａｎｄｅｒｓｅｎ，  Ｍ．Ｃ．ら、（１９８５年）、Ｊ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７６巻：５６３〜５６９頁；ｖａｎ  Ｍｉｌｌｉｇｅｎ，  Ｆ．Ｊ．（１９９２年）ら、Ｉｎｔ．  Ａｒｃｈ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ａｐｐｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．９２巻（４号）：３７５〜３７８頁）、主要な貯蔵場所は、皮膚および毛皮であると考えられる（Ｍａｔａ，  Ｐ．ら、（１９９２年）、Ａｎｎ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  ６９巻（４号）：３２１〜３２２頁）。
【０００３】
天然Ｆｅｌ  ｄ１は、およそ１８ｋＤａのヘテロ二量体糖タンパク質である。各ヘテロ二量体は、３個の鎖間ジスルフィド結合によって共有結合により連結された、２種の別個の遺伝子によってコードされた２本のポリペプチド鎖を含む（Ｄｕｆｆｏｒｔ，  ＯＡら、（１９９１年）、Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８巻：３０１〜３０９頁；Ｍｏｒｇｅｎｓｔｅｒｎ，  ＪＰら、（１９９１年）、ＰＮＡＳ  ８８巻：９６９０〜９６９４頁；Ｇｒｉｆｆｉｔｈ，  Ｉ．Ｊ．ら、（１９９２年）、Ｇｅｎｅ  １１３巻：２６３〜２６８頁；Ｋｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，  Ａ．Ｋ．ら、（１９９７年）、Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．３７８巻：８９９〜９０８頁）。鎖１は、７０アミノ酸残基を含み、鎖２は、約９０〜９２アミノ酸残基を含む。２種の鎖は構造的には同様のものであるが、１０〜１５％しか配列同一性を持たない（Ｋａｉｓｅｒ，  Ｌ．ら、（２００３年）、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．２７８巻（３９号）：３７７３０〜３７７３５頁）。各鎖は個々にＦｅｌ  ｄ１と称されることがあるが、完全なタンパク質アレルゲンには両方の鎖が必要とされる。
【０００４】
Ｆｅｌ  ｄ１タンパク質は、動物に対して未知の機能のものであるが、感受性のヒトにおいてＩｇＧまたはＩｇＥ反応を引き起こす（アレルギーまたは喘息反応のいずれかとして）。Ｆｅｌ  ｄ２（アルブミン）およびＦｅｌ  ｄ３（シスタチン）を含む他のネコアレルゲンも公知であるが、産生される抗ネコＩｇＥの６０％〜９０％は、Ｆｅｌ  ｄ１に対するものである（Ｌｅｉｔｅｒｍａｎｎ，  Ｋ．ら、（１９８４年）、Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７４巻：１４７〜１５３頁；Ｌｏｗｅｎｓｔｅｉｎ，  Ｈ．ら、（１９８５年）、Ａｌｌｅｒｇｙ  ４０巻：４３０〜４４１頁；ｖａｎ  Ｒｅｅ，  Ｒ．ら、（１９９９年）、Ｊ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０４巻：１２２３〜１２３０頁；Ｉｃｈｉｋａｗａ，  Ｋ．ら、（２０１１年）、Ｃｌｉｎ．  Ｅｘｐ．  Ａｌｌｅｒｇｙ、３１巻：１２７９〜１２８６頁）。
【０００５】
免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）は、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、枯草熱、アレルギー性喘息、ハチ毒アレルギーおよび食物アレルギーとして顕在化する１型過敏症の原因である。ＩｇＥは、血液中を循環し、好塩基球およびマスト細胞におけるＩｇＥの高親和性ＦｃεＲ１α受容体に結合する。大部分のアレルギー応答において、アレルゲンは、吸入、摂取によりまたは皮膚を通して体内に進入する。続いてアレルゲンは、マスト細胞および好塩基球の表面における高親和性受容体に結合される、予め形成されたＩｇＥに結合し、数個のＩｇＥ分子の架橋をもたらし、様々なアレルギー症状を引き起こすヒスタミンおよび他の炎症性メディエーターの放出を誘発する。
【０００６】
アレルギーの処置は、免疫活性を抑制するためのステロイドおよび喘息症状を軽減するための気管支拡張物質を含む。重症アレルギー患者に対しては脱感作療法も使用される。特定のアレルゲン、例えば、Ｆｅｌ  ｄ１に対し個体を脱感作するために、ペプチドワクチンの組み合わせが検査された（ＵＳ２０１０／０２３９５９９Ａ１およびＥＰ２３８０５９１Ａ２を参照）。抗体は、粘膜組織へのアレルゲン分子の侵入を遮断することができ得るため、あるいはマスト細胞または好塩基球における高親和性受容体に結合されるＩｇＥにアレルゲンが結合する機会を得る前にアレルゲンに結合し、これによりこれらの細胞からのヒスタミンおよび他の炎症性メディエーターの放出を防止することができるため、アレルギーの処置として抗体が提案された。
【０００７】
米国特許第５，６７０，６２６号は、粘膜組織へのアレルゲンの結合を遮断することによる、アレルギー性鼻炎、アレルギー性喘息およびアレルギー性結膜炎等、ＩｇＥ媒介性アレルギー疾患の処置のためのモノクローナル抗体の使用について記載する。米国特許第６，８４９，２５９号は、アレルギーのｉｎ  ｖｉｖｏマウスモデルにおけるアレルギー性炎症を阻害するためのアレルゲン特異的抗体の使用について記載する。ミルクに基づくおよび卵に基づく抗体系が記載されている。例えば、ＵＳ２００３０００３１３３Ａ１は、ネコのフケおよび他のアレルゲンに対する経口寛容を誘導するための、アレルゲンの担体としてのミルクの使用を開示する。マスト細胞に結合するアレルゲンの能力を阻害する分子の使用による、環境中のアレルゲンに対する動物におけるアレルギー応答を低下させるための組成物および方法が、ＵＳ２０１０／０１４３２６６に記載されている。Ｆｅｌ
ｄ１に対する他の抗体が、ｄｅ  Ｇｒｏｏｔら（ｄｅ  Ｇｒｏｏｔら、（１９８８年）、Ｊ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．８２巻：７７８〜７８６頁）によって記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】米国特許出願公開第２０１０／０２３９５９９号明細書
【特許文献２】米国特許第５，６７０，６２６号明細書
【特許文献３】米国特許第６，８４９，２５９号明細書
【特許文献４】米国特許出願公開第２００３／０００３１３３号明細書
【特許文献５】米国特許出願公開第２０１０／０１４３２６６号明細書
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、ネコアレルゲン、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する完全なヒトモノクローナル抗体（ｍＡｂ）およびその抗原結合性断片を提供する。係る抗体は、ネコアレルゲンへと感作患者を曝露した後のｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＦｅｌ  ｄ１アレルゲンの結合に有用となることができ、そのようなものとして、Ｆｅｌ  ｄ１のクリアランスを促進するよう、あるいはマスト細胞または好塩基球の表面における予め形成されたＩｇＥへのアレルゲンの結合を遮断するよう作用することができる。そうすることにより、本発明の抗体は、マスト細胞または好塩基球からのヒスタミンまたは他の炎症性メディエーターの放出を防止し、これにより、ネコアレルゲンに対し感作された患者において観察される有害な効果を防止または減弱化することができる。ある特定の実施形態では、抗体は、くしゃみ、うっ血、鼻詰まり（ｎａｓａｌ  ｂｌｏｃｋａｇｅ）、咳嗽、喘鳴、気管支収縮、鼻炎または結膜炎等、Ｆｅｌ  ｄ１ネコアレルゲンに対し感受性の患者における少なくとも１種の症状を低下、最小化または防止することができ得る。ある特定の実施形態では、抗体は、喘息反応、アナフィラキシー、さらには死亡等、感作個体におけるネコアレルゲンへの曝露に伴うさらにより重篤なｉｎ  ｖｉｖｏ合併症を防止することができ得る。
【００１０】
本発明の抗体は、全長（例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４抗体）であっても、あるいは抗原結合ポーション（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２またはｓｃＦｖ断片）のみを含んでいてもよく、機能性に影響を及ぼすよう、例えば、残存エフェクター機能を排除するよう修飾されていてもよい（Ｒｅｄｄｙら、（２０００年）、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４巻：１９２５〜１９３３頁）。
【００１１】
本発明の第１の態様は、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００１２】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＩｇＡアイソタイプ以外のアイソタイプである。
【００１３】
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４からなる群より選択されるアイソタイプを有する。
【００１４】
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、１０−６Ｍ以下のＫＤでＦｅｌ  ｄ１に特異的に結合する。一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、１．８ｎＭ以下のＫＤでＦｅｌ  ｄ１に特異的に結合する。
【００１５】
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０および４６０からなる群より選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列のいずれか１種の内に含有される３種の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）と、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８および４６８からなる群より選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列のいずれか１種の内に含有される３種の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）とを含む。ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定するための方法および技法は、本技術分野において周知のものであり、本明細書に開示されている規定のＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲの同定に使用することができる。ＣＤＲの境界の同定に使用することのできる例示的な慣例として、例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義およびＡｂＭ定義が挙げられる。一般用語において、Ｋａｂａｔ定義は、配列可変性に基づき、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は、構造的ループ領域の位置に基づき、ＡｂＭ定義は、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａアプローチの折衷である。例えば、Ｋａｂａｔ、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ
ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  Ｍｄ．（１９９１年）；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉら、（１９９７年）、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．２７３巻：９２７〜９４８頁；およびＭａｒｔｉｎら、（１９８９年）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８６巻：９２６８〜９２７２頁を参照されたい。抗体内のＣＤＲ配列を同定するために、公開データベースを利用することもできる。
【００１６】
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１８、６６、１３０、１６２、２４２、３０６、３２２、３７０および４６０からなる群より選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列のいずれか１種の内に含有される３種の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）と、配列番号２６、７４、１３８、１７０、２５０、３１４、３３０、３７８および４６８からなる群より選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列のいずれか１種の内に含有される３種の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）とを含む。
【００１７】
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０および４６０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む。
【００１８】
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１８、６６、１３０、１６２、２４２、３０６、３２２、３７０および４６０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む。
【００１９】
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８および４６８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む。
【００２０】
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２６、７４、１３８、１７０、２５０、３１４、３３０、３７８および４６８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む。
【００２１】
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０および４６０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８および４６８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲとを含む。
【００２２】
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、（ａ）配列番号１８、６６、１３０、１６２、２４２、３０６、３２２、３７０および４６０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、（ｂ）配列番号２６、７４、１３８、１７０、２５０、３１４、３３０、３７８および４６８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲとを含む。
【００２３】
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、
（ａ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４、３４０、３５６、３７２および４６２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメインと、
（ｂ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６、３４２、３５８、３７４および４６４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメインと、
（ｃ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２，２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、３４４、３６０、３７６および４６６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメインと、
（ｄ）配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、３４８、３６４、３８０および４７０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメインと、
（ｅ）配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、３５０、３６６、３８２および４７２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメインと、
（ｆ）配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６、３５２、３６８、３８４および４７４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメインと
を含む。
【００２４】
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、
（ａ）配列番号２０、６８、１３２、１６４、２４４、３０８、３２４、３７２および４６２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメインと、
（ｂ）配列番号２２、７０、１３４、１６６、２４６、３１０、３２６、３７４および４６４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメインと、
（ｃ）配列番号２４、７２、１３６、１６８、２４８、３１２、３２８、３７６および４６６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメインと、
（ｄ）配列番号２８、７６、１４０、１７２、２５２、３１６、３３２、３８０および４７０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメインと、
（ｅ）配列番号３０、７８、１４２、１７４、２５４、３１８、３３４、３８２および４７２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメインと、
（ｆ）配列番号３２、８０、１４４、１７６、２５６、３２０、３３６、３８４および４７４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメインと
を含む。
【００２５】
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０、３３８／３４６、３５４／３６２、３７０／３７８および４６０／４６８からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む。
【００２６】
一実施形態では、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１８／２６、６６／７４、１３０／１３８、１６２／１７０、２４２／２５０、３０６／３１４、３２２／３３０、３７０／３７８および４６０／４６８からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む。
【００２７】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１８／２６、６６／７４、１３０／１３８および１６２／１７０からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む。
【００２８】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１８／２６および３２２／３３０からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む。
【００２９】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１８／２６および３０６／３１４からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む。
【００３０】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１８／２６および３７０／３７８からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む。
【００３１】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２４２／２５０および３０６／３１４からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む。
【００３２】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２４２／２５０および３２２／３３０からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む。
【００３３】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３９６の約１５位〜約２４位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３９６の約８５位〜約１０３位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３９６の約８５位〜約１０４位に及ぶアミノ酸残基；および配列番号３９６の約１１３位〜約１１６位に及ぶアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１種のアミノ酸配列と相互作用する。
【００３４】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３９６の約１５位〜約２４位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する。
【００３５】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３９６の約８５位〜約１０３位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する。
【００３６】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３９６の約８５位〜約１０４位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する。
【００３７】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３９６の約１１３位〜約１１６位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する。
【００３８】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号４０２、４０３、４０４および４１２からなる群より選択される少なくとも１種のアミノ酸配列と相互作用する。
【００３９】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号４０２と相互作用する。
【００４０】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号４０３と相互作用する。
【００４１】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号４０４と相互作用する。
【００４２】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号４２６と相互作用する。
【００４３】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号４１２と相互作用する。
【００４４】
一実施形態では、配列番号４０２、４０３、４０４および／または４２６と相互作用する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１８の重鎖可変領域に含有される３種のＨＣＤＲと、配列番号２６の軽鎖可変領域に含有される３種のＬＣＤＲを含む。
【００４５】
一実施形態では、配列番号４０２、４０３、４０４および／または４２６と相互作用する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２０のＨＣＤＲ１；配列番号２２のＨＣＤＲ２；配列番号２４のＨＣＤＲ３；配列番号２８のＬＣＤＲ１；配列番号３０のＬＣＤＲ２および配列番号３２のＬＣＤＲ３を含む。
【００４６】
一実施形態では、配列番号４１２と相互作用する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３０６の重鎖可変領域に含有される３種のＨＣＤＲと、配列番号３１４の軽鎖可変領域に含有される３種のＬＣＤＲを含む。
【００４７】
一実施形態では、配列番号４１２と相互作用する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３０８のＨＣＤＲ１；配列番号３１０のＨＣＤＲ２；配列番号３１２のＨＣＤＲ３；配列番号３１６のＬＣＤＲ１；配列番号３１８のＬＣＤＲ２および配列番号３２０のＬＣＤＲ３を含む。
【００４８】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ配列番号２０、２２および２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列と、それぞれ配列番号２８、３０および３２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列とを含む。
【００４９】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ配列番号６８、７０および７２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列と、それぞれ配列番号７６，７８および８０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列とを含む。
【００５０】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ配列番号１３２、１３４および１３６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列と、それぞれ配列番号１４０、１４２および１４４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列とを含む。
【００５１】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ配列番号１６４、１６６および１６８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列と、それぞれ配列番号１７２、１７４および１７６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列とを含む。
【００５２】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ配列番号２４４、２４６および２４８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列と、それぞれ配列番号２５２、２５４および２５６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列とを含む。
【００５３】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ配列番号３０８、３１０および３１２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列と、それぞれ配列番号３１６、３１８および３２０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列とを含む。
【００５４】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ配列番号３２４、３２６および３２８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列と、それぞれ配列番号３３２、３３４および３３６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列とを含む。
【００５５】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に結合するヒト抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ配列番号３７２、３７４および３７６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列と、それぞれ配列番号３８０、３８２および３８４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列とを含む。
【００５６】
一実施形態では、本発明は、次の特徴のうち１種または複数を示す、Ｆｅｌ  ｄ１に結合する完全なヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供する：（ｉ）配列番号１８、６６、１３０、１６２、２４２、３０６、３２２、３７０および４６０からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＶＲを含む；（ｉｉ）配列番号２６、７４、１３８、１７０、２５０、３１４、３３０、３７８および４６８からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＶＲを含む；（ｉｉｉ）配列番号２４、７２、１３６、１６８、２４８、３１２、３２８、３７６および４６６からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；ならびに配列番号３２、８０、１４４、１７６、２５６、３２０、３３６、３８４および４７４からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含む；（ｉｖ）配列番号２０、６８、１３２、１６４、２４４、３０８、３２４、３７２および４６２からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；配列番号２２、７０、１３４、１６６、２４６、３１０、３２６、３７４および４６４からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；配列番号２８、７６、１４０、１７２、２５２、３１６、３３２、３８０および４７０からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；ならびに配列番号３０、７８、１４２、１７４、２５４、３１８、３３４、３８２および４７２からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ２ドメインを含む；（ｖ）１０−６以下、好ましくは、１０−９以下のＫＤでＦｅｌ  ｄ１に結合する；（ｖｉ）アナフィラキシーまたは炎症の少なくとも１種の動物モデルにおける有効性を示す；あるいは（ｖｉｉ）Ｆｅｌ  ｄ１との結合に関して参照抗体と競合する。
【００５７】
一実施形態では、「参照抗体」は、例えば、１８／２６、６６／７４、１３０／１３８、１６２／１７０、２４２／２５０、３０６／３１４、３２２／３３０、３７０／３７８および４６０／４６８からなる群より選択される重鎖および軽鎖アミノ酸配列ペアの組み合わせを有する抗体を含むことができる。
【００５８】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に結合する完全なヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８（配列番号３８６）（式中、Ｘ１はＧｌｙであり、Ｘ２はＰｈｅ、ＴｙｒまたはＧｌｙであり、Ｘ３はＴｈｒまたはＳｅｒであり、Ｘ４はＰｈｅまたはＩｌｅであり、Ｘ５はＳｅｒ、Ａｒｇ、ＴｈｒまたはＡｓｎであり、Ｘ６はＡｓｎ、Ｔｈｒ、ＡｓｐまたはＳｅｒであり、Ｘ７はＴｙｒであり、Ｘ８はＡｓｎ、ＴｙｒまたはＡｌａである）を含むＨＣＤＲ１配列と；式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８（配列番号３８７）（式中、Ｘ１はＩｌｅであり、Ｘ２はＴｙｒ、ＳｅｒまたはＡｓｎであり、Ｘ３はＴｙｒ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、ＰｒｏまたはＡｓｐであり、Ｘ４はＡｓｐ、ＡｒｇまたはＳｅｒであり、Ｘ５はＧｌｙ、ＶａｌまたはＳｅｒであり、Ｘ６はＳｅｒ、Ｇｌｙ、ＡｒｇまたはＴｙｒであり、Ｘ７はＴｙｒ、Ａｒｇ、Ｔｈｒ、ＳｅｒまたはＡｓｎであり、Ｘ８はＩｌｅ、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｓｅｒまたは非存在である）を含むＨＣＤＲ２配列と；式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６（配列番号３８８）（式中、Ｘ１はＡｌａであり、Ｘ２はＬｙｓまたはＡｒｇであり、Ｘ３はＡｒｇ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、ＬｅｕまたはＴｈｒであり、Ｘ４はＴｈｒ、Ｐｒｏ、Ａｒｇ、ＧｌｙまたはＧｌｕであり、Ｘ５はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、ＴｙｒまたはＡｓｎであり、Ｘ６はＳｅｒ、Ａｒｇ、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｔｙｒ、ＰｈｅまたはＴｒｐであり、Ｘ７はＴｙｒ、Ｇｌｙ、Ａｒｇ、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、ＨｉｓまたはＡｓｎであり、Ｘ８はＴｙｒ、Ｔｈｒ、ＳｅｒまたはＨｉｓであり、Ｘ９はＶａｌ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏまたは非存在であり、Ｘ１０はＭｅｔ、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｖａｌまたは非存在であり、Ｘ１１はＡｓｐ、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｐｈｅまたは非存在であり、Ｘ１２はＶａｌ、Ａｓｐ、Ｐｈｅまたは非存在であり、Ｘ１３はＰｈｅ、Ａｓｐまたは非存在であり、Ｘ１４はＰｈｅ、Ｔｙｒまたは非存在であり、Ｘ１５はＡｓｐまたは非存在であり、Ｘ１６はＴｙｒまたは非存在である）を含むＨＣＤＲ３配列と；式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２（配列番号３８９）（式中、Ｘ１はＧｌｎであり、Ｘ２はＧｌｙ、ＳｅｒまたはＡｓｐであり、Ｘ３はＩｌｅまたはＶａｌであり、Ｘ４はＳｅｒ、Ｌｅｕ、ＡｓｎまたはＧｌｙであり、Ｘ５はＡｓｎ、Ｔｙｒ、ＧｌｙまたはＳｅｒであり、Ｘ６はＴｙｒ、Ｓｅｒ、ＰｈｅまたはＴｒｐであり、Ｘ７はＳｅｒまたは非存在であり、Ｘ８はＡｓｎまたは非存在であり、Ｘ９はＡｓｎまたは非存在であり、Ｘ１０はＬｙｓまたは非存在であり、Ｘ１１はＧｌｎまたは非存在であり、Ｘ１２はＴｙｒまたは非存在である）を含むＬＣＤＲ１配列と；式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３（配列番号３９０）（式中、Ｘ１はＡｌａ、Ｔｒｐ、Ａｓｐ、Ｔｙｒ、Ｌｙｓ、ＧｌｙまたはＳｅｒであり、Ｘ２はＡｌａまたはＴｈｒであり、Ｘ３はＳｅｒである）を含むＬＣＤＲ２配列と；式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８���Ｘ９（配列番号３９１）（式中、Ｘ１はＧｌｎ、ＬｅｕまたはＨｉｓであり、Ｘ２はＬｙｓ、ＧｌｎまたはＨｉｓであり、Ｘ３はＴｙｒ、ＳｅｒまたはＬｅｕであり、Ｘ４はＴｙｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、ＡｓｐまたはＳｅｒであり、Ｘ５はＳｅｒ、ＡｓｐまたはＡｓｎであり、Ｘ６はＬｅｕ、Ａｌａ、Ｔｙｒ、ＴｈｒまたはＰｈｅであり、Ｘ７はＰｒｏまたはＡｒｇであり、Ｘ８はＬｅｕ、Ｐｈｅ、ＴｙｒまたはＴｈｒであり、Ｘ９はＴｈｒまたは非存在である）を含むＬＣＤＲ３配列とを含む。
【００５９】
一実施形態では、本発明は、表２に示す組み合わせによる、ＶＨ、ＤＨおよびＪＨ生殖系列配列に由来するヌクレオチド配列セグメントにコードされるＨＣＶＲと、ＶＫおよびＪＫ生殖系列配列に由来するヌクレオチド配列セグメントにコードされるＬＣＶＲを含む、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的なヒト抗体または抗原結合性断片を特色とする。
【００６０】
本発明は、修飾されたグリコシル化パターンを有する抗体を包含する。一部の適用では、望ましくないグリコシル化部位を除去するための修飾、例えば、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）機能を増加させるためのフコース部分の除去が有用となり得る（Ｓｈｉｅｌｄら、（２００２年）、ＪＢＣ  ２７７巻：２６７３３頁を参照）。他の適用では、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を修飾するために、ガラクトシル化の修飾を行うことができる。
【００６１】
第２の態様は、Ｆｅｌ  ｄ１への特異的結合に関して、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０および４６０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８および４６８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲとを含む抗体または抗原結合性断片と競合する、単離された抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００６２】
一実施形態は、Ｆｅｌ  ｄ１への特異的結合に関して、配列番号１８、６６、１３０、１６２、２４２、３０６、３２２、３７０および４６０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号２６、７４、１３８、１７０、２５０、３１４、３３０、３７８および４６８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲとを含む抗体または抗原結合性断片と競合する、単離された抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００６３】
関連する実施形態では、本発明は、Ｆｅｌ  ｄ１への特異的結合に関して、配列番号１８／２６、６６／７４、１３０／１３８、１６２／１７０、２４２／２５０、３０６／３１４、３２２／３３０、３７０／３７８および４６０／４６８からなる群より選択される重および軽鎖配列ペア内に含有される重および軽鎖ＣＤＲを含む抗体または抗原結合性断片と競合する、単離された抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００６４】
第３の態様は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０および４６０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８および４６８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲとを含む抗体または抗原結合性断片と同じＦｅｌｄ  １上のエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００６５】
一実施形態は、配列番号１８、６６、１３０、１６２、２４２、３０６、３２２、３７０および４６０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８および４６８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲとを含む抗体または抗原結合性断片と同じＦｅｌ  ｄ１上のエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００６６】
関連する実施形態では、本発明は、配列番号１８／２６、６６／７４、１３０／１３８、１６２／１７０、２４２／２５０、３０６／３１４、３２２／３３０、３７０／３７８および４６０／４６８からなる群より選択される重および軽鎖配列ペア内に含有される重および軽鎖ＣＤＲを含む抗体または抗原結合性断片と同じＦｅｌ  ｄ１上のエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００６７】
第４の態様は、本明細書に記載されているいずれか２種以上の抗体由来のＨＣＶＲアミノ酸配列およびＬＣＶＲアミノ酸配列を含む２個の抗原結合ドメイン（２本の腕）を含む、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する二重特異的抗原結合分子を提供する。
【００６８】
一実施形態では、二重特異的抗原結合分子は、配列番号３７０に表記されているＨＣＶＲアミノ酸配列および配列番号３７８に表記されているＬＣＶＲアミノ酸配列を含む第１の抗原結合ドメインと、配列番号１８に表記されているＨＣＶＲアミノ酸配列および配列番号３７８に表記されているＬＣＶＲアミノ酸配列を含む第２の抗原結合ドメインとを含む。
【００６９】
一実施形態では、二重特異的抗原結合分子は、それぞれ配列番号３７２、３７４および３７６に表記されているアミノ酸配列からなる３種の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）ならびにそれぞれ配列番号３８０、３８２および３８４に表記されているアミノ酸配列からなる３種の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含む第１の抗原結合ドメインと、それぞれ配列番号２０、２２および２４に表記されているアミノ酸配列からなる３種の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）ならびにそれぞれ配列番号３８０、３８２および３８４に表記されているアミノ酸配列からなる３種の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含む第２の抗原結合ドメインとを含む。
【００７０】
一実施形態では、二重特異的抗原結合分子は、配列番号３０６に表記されているＨＣＶＲアミノ酸配列および配列番号３１４に表記されているＬＣＶＲアミノ酸配列を含む第１の抗原結合ドメインと、配列番号１８に表記されているＨＣＶＲアミノ酸配列および配列番号３１４に表記されているＬＣＶＲアミノ酸配列を含む第２の抗原結合ドメインとを含む。
【００７１】
一実施形態では、二重特異的抗原結合分子は、それぞれ配列番号３０８、３１０および３１２に表記されているアミノ酸配列からなる３種の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）ならびにそれぞれ配列番号３１６、３１８および３２０に表記されているアミノ酸配列からなる３種の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）と、それぞれ配列番号２０、２２および２４に表記されているアミノ酸配列からなる３種の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）ならびにそれぞれ配列番号３１６、３１８および３２０に表記されているアミノ酸配列からなる３種の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含む第２の抗原結合ドメインとを含む。
【００７２】
一実施形態では、本発明は、Ｆｅｌ  ｄ１への結合に関して、本発明の二重特異的抗原結合分子のうちいずれか１種と競合する、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的な単離された抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００７３】
一実施形態では、本発明は、本発明の二重特異的抗原結合分子のうちいずれかと同じＦｅｌ  ｄ１上のエピトープに結合する、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的な単離された抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００７４】
一実施形態では、二重特異的抗原結合分子は、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体である。
【００７５】
一実施形態では、二重特異的抗原結合分子は、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体であり、前記ヒトモノクローナル抗体は、単一特異的抗体または二重特異的抗体である。
【００７６】
一実施形態では、本発明は、本明細書に記載されている少なくとも１種の二重特異的抗原結合分子と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む薬学的組成物を提供する。
【００７７】
一実施形態では、本発明は、ネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応を示す患者を処置するため、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応に関連する少なくとも１種の症状または合併症を処置するための方法であって、本発明の二重特異的抗原結合分子のうち１種または複数の有効量または本発明の二重特異的抗原結合分子のうち１種または複数の有効量を含む薬学的組成物を、それを必要とする患者に投与するステップを含み、本発明の二重特異的抗原結合分子または二重特異的抗原結合分子を含む組成物の投与後に、前記患者が、ネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性の低下またはアレルギー反応の減弱化を示す、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対するいかなる感受性またはアレルギー反応も経験しない、あるいは前記患者が、ネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応に関連する少なくとも１種の症状または合併症の低下、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応に関連する少なくとも１種の症状または合併症の頻度および／または持続時間の低下を示す方法を提供する。
【００７８】
一実施形態では、本発明は、ネコ、ネコのフケまたはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対するアレルギー反応の減弱化に有用な、本発明の少なくとも１種の二重特異的抗原結合分子に加えて有効量の第２の治療剤の投与を提供する。第２の治療剤は、コルチコステロイド、気管支拡張物質、抗ヒスタミン薬、エピネフリン、うっ血除去薬、コルチコステロイド、Ｆｅｌ  ｄ１に対する別の異なる抗体およびペプチドワクチンからなる群より選択され得る。
【００７９】
一実施形態では、本発明の１種または複数の二重特異的抗原結合分子の単独または第２の治療剤と組み合わせた処置は、ネコ、ネコのフケまたはＦｅｌ  ｄ１タンパク質へと患者を曝露した後に、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性喘息またはアナフィラキシー応答の低下をもたらし得る。
【００８０】
第５の態様では、本発明は、Ｆｅｌ  ｄ１抗体またはその断片をコードする核酸分子を提供する。本発明の核酸を保有する組換え発現ベクターと、係るベクターが導入された宿主細胞もまた、本発明によって包含されており、抗体の産生を可能にする条件下で該宿主細胞を培養し、産生された抗体を回収することにより抗体を産生する方法も同様である。
【００８１】
一実施形態では、本発明は、配列番号１、１７、３３、４９、６５、８１、９７、１１３、１２９、１４５、１６１、１７７、１９３、２０９、２２５、２４１、２５７、２７３、２８９、３０５、３２１、３３７、３５３、３６９および４５９からなる群より選択される核酸配列またはその少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％相同性を有する実質的に同一の配列にコードされるＨＣＶＲを含む抗体またはその断片を提供する。
【００８２】
一実施形態では、ＨＣＶＲは、配列番号１７、６５、１２９、１６１、２４１、３０５、３２１、３６９および４５９からなる群より選択される核酸配列にコードされる。
【００８３】
一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号９、２５、４１、５７、７３、８９、１０５、１２１、１３７、１５３、１６９、１８５、２０１、２１７、２３３、２４９、２６５、２８１、２９７、３１３、３２９、３４５、３６１、３７７および４６７からなる群より選択される核酸配列またはその少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％相同性を有する実質的に同一の配列にコードされるＬＣＶＲをさらに含む。
【００８４】
一実施形態では、ＬＣＶＲは、配列番号２５、７３、１３７、１６９、２４９、３１３、３２９、３７７および４６７からなる群より選択される核酸配列にコードされる。
【００８５】
一実施形態では、本発明はまた、配列番号７、２３、３９、５５、７１、８７、１０３、１１９、１３５、１５１、１６７、１８３、１９９、２１５、２３１、２４７、２６３、２７９、２９５、３１１、３２７、３４３、３５９、３７５および４６５からなる群より選択されるヌクレオチド配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列にコードされるＨＣＤＲ３ドメインと、配列番号１５、３１、４７、６３、７９、９５、１１１、１２７、１４３、１５９、１７５、１９１、２０７、２２３、２３９、２５５、２７１、２８７、３０３、３１９、３３５、３５１、３６７、３８３および４７３からなる群より選択されるヌクレオチド配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列にコードされるＬＣＤＲ３ドメインとを含む、抗体または抗体の抗原結合性断片を提供する。
【００８６】
一実施形態では、本発明は、配列番号３、１９、３５、５１、６７、８３、９９、１１５、１３１、１４７、１６３、１７９、１９５、２１１、２２７、２４３、２５９、２７５、２９１、３０７、３２３、３３９、３５５、３７１および４６１からなる群より選択されるヌクレオチド配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列にコードされるＨＣＤＲ１ドメインと、配列番号５、２１、３７、５３、６９、８５、１０１、１１７、１３３、１４９、１６５、１８１、１９７、２１３、２２９、２４５、２６１、２７７、２９３、３０９、３２５、３４１、３５７、３７３および４６３からなる群より選択されるヌクレオチド配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列にコードされるＨＣＤＲ２ドメインと、配列番号１１、２７、４３、５９、７５、９１、１０７、１２３、１３９、１５５、１７１、１８７、２０３、２１９、２３５、２５１、２６７、２８３、２９９、３１５、３３１、３４７、３６３、３７９および４６９からなる群より選択されるヌクレオチド配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列にコードされるＬＣＤＲ１ドメインと、配列番号１３、２９、４５、６１、７７、９３、１０９、１２５、１４１、１５７、１７３、１８９、２０５、２２１、２３７、２５３、２６９、２８５、３０１、３１７、３３３、３４９、３６５、３８１および４７１からなる群より選択されるヌクレオチド配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列にコードされるＬＣＤＲ２ドメインとをさらに含む、抗体またはその断片を提供する。
【００８７】
第６の態様は、１種または複数の薬学的に許容される賦形剤と共に、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する１種または複数の単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片の治療有効量を含む薬学的組成物を提供する。
【００８８】
一実施形態では、薬学的組成物は、１種または複数の薬学的に許容される賦形剤と共に、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する２種以上の単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片の治療有効量を含む。
【００８９】
一実施形態では、薬学的組成物は、
ａ）配列番号１８に表記されているアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよび配列番号２６に表記されているアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する単離された第１の完全なヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片と、
ｂ）配列番号６６、１３０、１６２、３０６、３２２、３７０および４６０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲならびに配列番号７４、１３８、１７０、３１４、３３０、３７８および４６８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する単離された第２の完全なヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片と
を含む。
【００９０】
一実施形態では、薬学的組成物は、
ａ）配列番号２４２に表記されているアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよび配列番号２５０に表記されているアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する単離された第１の完全なヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片と、
ｂ）配列番号３０６、３２２および４６０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲならびに配列番号３１４、３３０および４６８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する単離された第２の完全なヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片と
を含む。
【００９１】
一実施形態では、薬学的組成物は、
ａ）配列番号１８／２６からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｆｅｌ
ｄ１に特異的に結合する単離された第１の完全なヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片と、
ｂ）配列番号６６／７４、１３０／１３８、１６２／１７０、３０６／３１４、３２２／３３０、３７０／３７８および４６０／４６８からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する単離された第２の完全なヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片と
を含む。
【００９２】
一実施形態では、薬学的組成物は、
ａ）配列番号１８／２６からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｆｅｌ
ｄ１に特異的に結合する単離された第１のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片と、
ｂ）配列番号１３０／１３８からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する単離された第２のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片と
を含む。
【００９３】
一実施形態では、薬学的組成物は、
ａ）配列番号１８／２６からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｆｅｌ
ｄ１に特異的に結合する単離された第１のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片と、
ｂ）配列番号３２２／３３０からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する単離された第２のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片と
を含む。
【００９４】
一実施形態では、薬学的組成物は、
ａ）配列番号１８／２６からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｆｅｌ
ｄ１に特異的に結合する単離された第１のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片と、
ｂ）配列番号３０６／３１４からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する単離された第２のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片と
を含む。
【００９５】
一実施形態では、薬学的組成物は、
ａ）配列番号１８／２６からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｆｅｌ
ｄ１に特異的に結合する単離された第１のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片と、
ｂ）配列番号３７０／３７８からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する単離された第２のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片と
を含む。
【００９６】
一実施形態では、薬学的組成物は、
ａ）配列番号２４２／２５０からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する単離された第１の完全なヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片と、
ｂ）配列番号３０６／３１４および３２２／３３０からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する単離された第２の完全なヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片と
を含む。
【００９７】
一実施形態では、薬学的組成物は、
ａ）配列番号２４２／２５０からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する単離された第１のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片と、
ｂ）配列番号３０６／３１４からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する単離された第２のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片と
を含む。
【００９８】
一実施形態では、薬学的組成物は、
ａ）配列番号２４２／２５０からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する単離された第１のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片と、
ｂ）配列番号３２２／３３０からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する単離された第２のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片と
を含む。
【００９９】
一実施形態では、薬学的組成物は、配列番号１８／２６、６６／７４、１３０／１３８、１６２／１７０、２４２／２５０、３０６／３１４、３２２／３３０、３７０／３７８および４６０／４６８からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する２種以上の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を含む。
【０１００】
一実施形態では、薬学的組成物は、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する４種の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を含み、前記ヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１８／２６、６６／７４、１３０／１３８および１６２／１７０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む。
【０１０１】
一実施形態では、本発明は、治療有効量の１種または複数の本発明の抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体またはその抗原結合性断片と、治療有効量の第２の治療剤との組み合わせである組成物を特色とする。
【０１０２】
第２の治療剤は、小分子薬、タンパク質／ポリペプチド、抗体、アンチセンス分子またはｓｉＲＮＡ等の核酸分子となり得る。第２の治療剤は、合成であっても天然由来であってもよい。
【０１０３】
第２の治療剤は、本発明の抗体またはその断片と有利に組み合わされるいかなる薬剤であってもよく、例えば、マスト細胞または好塩基球上に存在するＩｇＥへのＦｅｌ  ｄ１の結合を遮断することのできる、本明細書に記載されている抗体以外の第２の抗体となり得る。第２の治療剤はまた、いずれかのアレルゲンに対するアレルギー応答の処置において標準治療として使用されるいかなる薬剤であってもよい。係る第２の治療剤は、抗ヒスタミン薬、エピネフリン、うっ血除去薬、コルチコステロイドまたはペプチドワクチンとなり得る。
【０１０４】
ある特定の実施形態では、第２の治療剤は、本発明の抗体または抗体の抗原結合性断片に伴ういずれかの可能な副作用（複数可）が生じ得る場合、係る副作用（複数可）の相殺または低下に役立つ薬剤となり得る。
【０１０５】
本発明の抗体および薬学的に許容される組成物を併用療法において用いてよいこと、すなわち、抗体および薬学的に許容される組成物は、１種または複数の他の所望の治療薬または医学的手順と同時発生的に、その前に、あるいはその後に投与することができることも認められよう。併用レジメンにおいて用いるための療法（治療薬または手順）の特定の組み合わせは、所望の治療薬および／または手順の適合性ならびに達成されるべき所望の治療効果を考慮に入れるであろう。用いられている療法が、同じ障害に対する所望の効果を達成することができる（例えば、抗体は、同じ障害の処置に使用されている別の薬剤と同時発生的に投与することができる）、あるいは異なる効果を達成することができる（例えば、いずれかの有害効果の制御）ことも認められよう。本明細書において、特定の疾患または状態の処置または防止に通常投与される追加的な治療剤は、処置されている疾患または状態に適切である。
【０１０６】
関連技術分野において認識されている通り、複数の治療薬が同時投与される場合、それと相応に投薬量を調整することができる。
【０１０７】
第７の態様は、ネコ、ネコのフケ、ネコの毛抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応を示す患者を処置するため、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応に関連する少なくとも１種の症状または合併症を処置するための方法であって、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する１種または複数の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片の有効量を、あるいはＦｅｌ  ｄ１に特異的に結合する１種または複数の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその断片の有効量を含む薬学的組成物を、あるいはＦｅｌ  ｄ１に特異的に結合する二重特異的抗原結合分子のうち１種または複数の有効量を、あるいはＦｅｌ  ｄ１に特異的に結合する二重特異的抗原結合分子のうち１種または複数の有効量を含む薬学的組成物を、それを必要とする患者に投与するステップを含み、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体またはその断片のうち１種または複数の投与後に、あるいはＦｅｌ  ｄ１に特異的に結合する二重特異的抗原結合分子のうち１種または複数の投与後に、あるいは前述の抗体または二重特異的抗原結合分子のうちいずれか１種または複数を含む組成物の投与後に、ネコ、ネコのフケ、ネコの毛抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応が防止される、または重症度および／または持続時間が低減される、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応に関連する少なくとも１種の症状または合併症が防止または改善される、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応の頻度および／または持続時間、またはその重症度が低下される方法を提供する。
【０１０８】
一実施形態では、本発明は、ネコ、ネコのフケ、ネコの毛抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応を示す患者の処置における使用のため、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応に関連する少なくとも１種の症状または合併症を処置するための、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する本発明の抗体のうち１種もしくは複数または二重特異的抗原結合分子のうち１種もしくは複数を含む薬学的組成物であって、ネコ、ネコのフケ、ネコの毛抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応が防止される、または重症度および／または持続時間が低減される、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応に関連する少なくとも１種の症状または合併症が防止または改善される、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応の頻度および／または持続時間、またはその重症度が低下される薬学的組成物を提供する。
【０１０９】
一実施形態では、本発明は、ネコ、ネコのフケ、ネコの毛抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応を示す患者の処置における使用のため、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応に関連する少なくとも１種の症状または合併症を処置するための医薬の製造における、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する本発明の抗体のうち１種もしくは複数または二重特異的抗原結合分子のうち１種もしくは複数を含む薬学的組成物の使用であって、ネコ、ネコのフケ、ネコの毛抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応が防止される、または重症度および／または持続時間が低減される、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応に関連する少なくとも１種の症状または合併症が防止または改善される、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応の頻度および／または持続時間、またはその重症度が低下される使用を提供する。
【０１１０】
一実施形態では、本発明は、上に記載されている薬学的組成物の使用であって、組成物が、ネコ、ネコのフケ、ネコの毛抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対するアレルギー反応の減弱化に有用な第２の治療剤と組み合わせて投与される使用を提供する。一実施形態では、本発明は、上に記載されている薬学的組成物の使用であって、第２の治療剤が、コルチコステロイド、気管支拡張物質、抗ヒスタミン薬、エピネフリン、うっ血除去薬、Ｆｅｌ  ｄ１に対する別の異なる抗体およびペプチドワクチンから選択される使用を提供する。
【０１１１】
ある特定の実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する本発明の抗体または二重特異的抗原結合分子は、くしゃみ、うっ血、鼻詰まり、咳嗽、喘鳴、気管支収縮、鼻炎または結膜炎等、Ｆｅｌ  ｄ１ネコアレルゲンに対し感受性の患者における少なくとも１種の症状を低下、最小化または防止することができ得る。
【０１１２】
一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する本発明の抗体または二重特異的抗原結合分子、あるいはＦｅｌ  ｄ１に特異的に結合する本発明の１種または複数の抗体または抗原結合分子のうち１種または複数を含む組成物は、喘息反応、アナフィラキシーショックまたはさらにはアナフィラキシーに起因する死亡を含む、Ｆｅｌ  ｄ１に対するアレルギーに関連するより重篤なｉｎ  ｖｉｖｏ合併症の防止に使用することができる。
【０１１３】
一実施形態では、薬学的組成物は、第２の治療剤と組み合わせて患者に投与される。
【０１１４】
別の実施形態では、第２の治療剤は、抗ヒスタミン薬、エピネフリン、うっ血除去薬、コルチコステロイド、Ｆｅｌ  ｄ１に対する別の異なる抗体、ペプチドワクチン、およびアレルギー反応の重症度の低下またはアレルギー反応に関連する少なくとも１種の症状の改善に有用な他のいずれかの対症療法からなる群より選択される。
【０１１５】
他の実施形態は、次の詳細な説明の総説から明らかになるであろう。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
ＩｇＡアイソタイプ以外のアイソタイプである、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２）
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４からなる群より選択されるアイソタイプを有する、項目１に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目３）
表面プラズモン共鳴法によって測定される１０−６Ｍ以下のＫＤで、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する、項目１または２に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目４）
前記抗体が、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４および３７０からなる群より選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列のいずれか１種の内に含有される３種の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）と、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２および３７８からなる群より選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列のいずれか１種の内に含有される３種の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）とを含む、項目１〜３のいずれかに記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目５）
配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４および３７０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む、項目１〜４のいずれかに記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目６）
配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２および３７８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、項目１〜５のいずれかに記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目７）
（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４および３７０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２および３７８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲとを含む、項目１〜６のいずれか一項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目８）
（ａ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４、３４０、３５６および３７２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメインと、
（ｂ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６、３４２、３５８および３７４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメインと、
（ｃ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２，２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、３４４、３６０および３７６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメインと、
（ｄ）配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、３４８、３６４および３８０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメインと、
（ｅ）配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、３５０、３６６および３８２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメインと、
（ｆ）配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６、３５２、３６８および３８４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメインとを含む、項目１〜７のいずれか一項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目９）
配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０、３３８／３４６、３５４／３６２および３７０／３７８からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、項目１〜８のいずれか一項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体または抗原結合性断片。
（項目１０）
配列番号３９６の約１５位〜約２４位に及ぶアミノ酸残基、配列番号３９６の約８５位〜約１０３位に及ぶアミノ酸残基、配列番号３９６の約８５位〜約１０４位に及ぶアミノ酸残基および配列番号３９６の約１１３位〜約１２７位に及ぶアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１種のアミノ酸配列と相互作用する、項目１〜９のいずれかに記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１１）
配列番号３９６の約１５位〜約２４位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する、項目１０に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１２）
配列番号３９６の約８５位〜約１０３位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する、項目１０に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１３）
配列番号３９６の約８５位〜約１０４位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する、項目１０に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１４）
配列番号３９６の約１１３位〜約１２７位に及ぶアミノ酸残基と相互作用する、項目１０に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１５）
配列番号４０２、４０３、４０４および４１２からなる群より選択される少なくとも１種のアミノ酸配列と相互作用する、項目１〜１０のいずれかに記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１６）
配列番号４０２と相互作用する、項目１５に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１７）
配列番号４０３と相互作用する、項目１５に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１８）
配列番号４０４と相互作用する、項目１５に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１９）
配列番号４１２と相互作用する、項目１５に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２０）
１種または複数の薬学的に許容される賦形剤と共に、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する、項目１〜１９のいずれかに記載の、治療有効量の１種または複数の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を含む薬学的組成物。
（項目２１）
１種または複数の薬学的に許容される賦形剤と共に、項目１〜１９のいずれかに記載の、治療有効量のＦｅｌ  ｄ１に特異的に結合する第１の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片と、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する第２の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片とを含む薬学的組成物。
（項目２２）
ａ）Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する前記単離された第１のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１８に表記されているアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、配列番号２６に表記されているアミノ酸配列を有するＬＣＶＲとを含み、かつ
ｂ）Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する前記単離された第２のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号６６、１３０、１６２、３０６、３２２および３７０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、配列番号７４、１３８、１７０、３１４、３３０および３７８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲとを含む、
項目２１に記載の薬学的組成物。
（項目２３）
ａ）Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する前記単離された第１のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号２４２に表記されているアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、配列番号２５０に表記されているアミノ酸配列を有するＬＣＶＲとを含み、かつ
ｂ）Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する前記単離された第２のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号３０６および３２２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、配列番号３１４および３３０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲとを含む、
項目２１に記載の薬学的組成物。
（項目２４）
ａ）Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する前記単離された第１のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１８／２６からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含み、かつ
ｂ）Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する前記単離された第２のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号６６／７４、１３０／１３８、１６２／１７０、３０６／３１４、３２２／３３０および３７０／３７８からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、
項目２１に記載の薬学的組成物。
（項目２５）
ａ）Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する前記単離された第１のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１８／２６からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含み、かつ
ｂ）Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する前記単離された第２のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１３０／１３８からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、
項目２１に記載の薬学的組成物。
（項目２６）
ａ）Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する前記単離された第１のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１８／２６からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含み、かつ
ｂ）Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する前記単離された第２のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号３２２／３３０からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、
項目２１に記載の薬学的組成物。
（項目２７）
ａ）Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する前記単離された第１のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１８／２６からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含み、かつ
ｂ）Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する前記単離された第２のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号３０６／３１４からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、
項目２１に記載の薬学的組成物。
（項目２８）
ａ）Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する前記単離された第１のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１８／２６からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含み、かつ
ｂ）Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する前記単離された第２のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号３７０／３７８からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、
項目２１に記載の薬学的組成物。
（項目２９）
ａ）Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する前記単離された第１のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号２４２／２５０からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含み、かつ
ｂ）Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する前記単離された第２のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号３０６／３１４および３２２／３３０からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、
項目２１に記載の薬学的組成物。
（項目３０）
ａ）Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する前記単離された第１のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号２４２／２５０からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含み、かつ
ｂ）Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する前記単離された第２のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号３０６／３１４からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、
項目２１に記載の薬学的組成物。
（項目３１）
ａ）Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する前記単離された第１のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号２４２／２５０からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含み、かつ
ｂ）Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する前記単離された第２のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号３２２／３３０からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、
項目２１に記載の薬学的組成物。
（項目３２）
Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する４種の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を含み、前記ヒト抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１８／２６、６６／７４、１３０／１３８および１６２／１７０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、項目２０に記載の薬学的組成物。
（項目３３）
Ｆｅｌ  ｄ１への特異的結合に関して、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４および３７０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２および３７８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲとを含む抗体または抗原結合性断片と競合する、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目３４）
配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４および３７０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２および３７８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲとを含む抗体または抗原結合性断片と同じＦｅｌ  ｄ１上のエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目３５）
項目１〜１９または項目３３〜３４のいずれか一項に記載のＦｅｌ  ｄ１に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体またはその断片をコードする核酸分子。
（項目３６）
項目３５に記載のＦｅｌ  ｄ１に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体またはその断片をコードする核酸分子を含む発現ベクター。
（項目３７）
項目３６に記載の発現ベクターを含有する宿主細胞。
（項目３８）
配列番号３７０に表記されているＨＣＶＲアミノ酸配列および配列番号３７８に表記されているＬＣＶＲアミノ酸配列を含む第１の抗原結合ドメインと、配列番号１８に表記されているＨＣＶＲアミノ酸配列および配列番号３７８に表記されているＬＣＶＲアミノ酸配列を含む第２の抗原結合ドメインとを含む、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する二重特異的抗原結合分子。
（項目３９）
前記第１の抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号３７２、３７４および３７６に表記されているアミノ酸配列からなる３種の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）と、それぞれ配列番号３８０、３８２および３８４に表記されているアミノ酸配列からなる３種の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）とを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号２０、２２および２４に表記されているアミノ酸配列からなる３種の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）と、それぞれ配列番号３８０、３８２および３８４に表記されているアミノ酸配列からなる３種の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）とを含む、項目３８に記載の二重特異的抗原結合分子。
（項目４０）
配列番号３０６に表記されているＨＣＶＲアミノ酸配列および配列番号３１４に表記されているＬＣＶＲアミノ酸配列を含む第１の抗原結合ドメインと、配列番号１８に表記されているＨＣＶＲアミノ酸配列および配列番号３１４に表記されているＬＣＶＲアミノ酸配列を含む第２の抗原結合ドメインとを含む、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する二重特異的抗原結合分子。
（項目４１）
前記第１の抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号３０８、３１０および３１２に表記されているアミノ酸配列からなる３種の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）と、それぞれ配列番号３１６、３１８および３２０に表記されているアミノ酸配列からなる３種の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）とを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号２０、２２および２４に表記されているアミノ酸配列からなる３種の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）と、それぞれ配列番号３１６、３１８および３２０に表記されているアミノ酸配列からなる３種の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）とを含む、項目４０に記載の二重特異的抗原結合分子。
（項目４２）
Ｆｅｌ  ｄ１への結合に関して、項目３８〜４１のいずれかに記載の二重特異的抗原結合分子と競合する、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的な単離された抗体またはその抗原結合性断片。（項目４３）
項目３８〜４１のいずれかに記載の二重特異的抗原結合分子と同じＦｅｌ  ｄ１上のエピトープに結合する、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的な単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目４４）
単一特異的抗体または二重特異的抗体である、項目４２または４３のいずれかに記載の単離された抗体。
（項目４５）
項目３８〜４１のいずれか一項に記載の二重特異的抗原結合分子と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む薬学的組成物。
（項目４６）
ネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応を示す患者を処置するため、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応に関連する少なくとも１種の症状または合併症を処置するための方法であって、前記方法は、項目１〜１９または３３〜３４のいずれかに記載のＦｅｌ  ｄ１に特異的に結合する、有効量の１種または複数の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片、あるいは有効量の項目２０〜３２のいずれかに記載のＦｅｌ  ｄ１に特異的に結合する１種または複数の単離されたヒトモノクローナル抗体またはその断片を含む薬学的組成物、あるいは有効量の項目３８〜４１のいずれか一項に記載の二重特異的抗原結合分子のうち１種または複数、あるいは有効量の項目３８〜４１のいずれか一項に記載の二重特異的抗原結合分子のうち１種または複数を含む薬学的組成物を、それを必要とする患者に投与するステップを含み、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する前記単離されたヒトモノクローナル抗体またはその断片のうち１種または複数の投与後に、あるいはＦｅｌ  ｄ１に特異的に結合する前記二重特異的抗原結合分子のうち１種または複数の投与後に、あるいは前述の抗体または二重特異的抗原結合分子のうちいずれか１種または複数を含む組成物の投与後に、ネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する前記感受性またはアレルギー反応が防止される、または重症度および／または持続時間が低減される、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する前記感受性またはアレルギー反応に関連する少なくとも１種の症状または合併症が防止または改善される、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する前記感受性またはアレルギー反応の頻度および／または持続時間、またはその重症度が低下される、方法。
（項目４７）
ネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対するアレルギー反応の減弱化に有用な、有効量の第２の治療剤を投与するステップをさらに含む、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
前記第２の治療剤が、コルチコステロイド、気管支拡張物質、抗ヒスタミン薬、エピネフリン、うっ血除去薬、Ｆｅｌ  ｄ１に対する別の異なる抗体およびペプチドワクチンからなる群より選択される、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
前記処置が、前記患者をネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に曝露した後に、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性喘息またはアナフィラキシー応答の低下をもたらす、項目４６〜４８のいずれか一項に記載の方法。
（項目５０）
ネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応を示す患者の処置における使用のための、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応に関連する少なくとも１種の症状または合併症の処置のための項目２０〜３２または４５のいずれかに記載の薬学的組成物であって、ネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する前記感受性またはアレルギー反応が防止される、または重症度および／または持続時間が低減される、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する前記感受性またはアレルギー反応に関連する少なくとも１種の症状または合併症が防止または改善される、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する前記感受性またはアレルギー反応の頻度および／または持続時間、またはその重症度が低下される、薬学的組成物。
（項目５１）
ネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応を示す患者の処置における使用のため、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性またはアレルギー反応に関連する少なくとも１種の症状または合併症の処置のための医薬の製造における項目２０〜３２または４５のいずれか一項に記載の薬学的組成物の使用であって、ネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する前記感受性またはアレルギー反応が防止される、または重症度および／または持続時間が低減される、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する前記感受性またはアレルギー反応に関連する少なくとも１種の症状または合併症が防止または改善される、あるいはネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する前記感受性またはアレルギー反応の頻度および／または持続時間、またはその重症度が低下される、使用。
（項目５２）
前記組成物が、ネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対するアレルギー反応の減弱化に有用な第２の治療剤と組み合わせて投与される、項目２０〜３２または４５のいずれかに記載の薬学的組成物の使用。
（項目５３）
前記第２の治療剤が、コルチコステロイド、気管支拡張物質、抗ヒスタミン薬、エピネフリン、うっ血除去薬、Ｆｅｌ  ｄ１に対する別の異なる抗体およびペプチドワクチンから選択される、項目５２に記載の薬学的組成物の使用。
【発明を実施するための形態】
【０１１６】
本方法について記載する前に、記載されている特定の方法および実験条件は変動し得るため、本発明が、係る方法および条件に限定されないことを理解されたい。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることから、本明細書において使用されている用語法が、単に特定の実施形態を説明するためのものであり、限定を企図しないことも理解されたい。
【０１１７】
他に断りがなければ、本明細書において使用されているあらゆる技術および科学用語は、本発明が属する分野における当業者によって一般に理解されているものと同じ意味を有する。本明細書において、用語「約」は、特定の列挙されている数値に関連して使用されている場合、値が、列挙されている値から１％以下で変動し得ることを意味する。例えば、本明細書において、表現「約１００」は、９９および１０１ならびにその間のあらゆる値（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４等）を含む。
【０１１８】
本発明の実施または検査において、本明細書に記載されている方法および材料と類似または同等のいかなる方法および材料を使用してもよいが、好ましい方法および材料を次に説明する。
【０１１９】
定義
本明細書における用語「Ｆｅｌ  ｄ１」または「ＦＥＬＤ１」は、天然／ネイティブ型の、あるいは組換えにより産生された少なくとも１種のＦｅｌ  ｄ１タンパク質を指す。Ｆｅｌ  ｄ１タンパク質は、Ｆｅｌ  ｄ１の鎖１（鎖Ａとも称される）（配列番号３９２）およびＦｅｌ  ｄ１の鎖２（鎖Ｂとも称される）（配列番号３９３）を含む、あるいはこれらからなる。天然Ｆｅｌ  ｄ１タンパク質は、２種の独立的遺伝子に由来する２本の鎖で構成された、およそ１８ｋＤａのヘテロ二量体糖タンパク質である（Ｄｕｆｆｏｒｔ，  Ｏ．Ａ．ら、（１９９１年）、Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８巻：３０１〜３０９頁；Ｋｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，  Ａ．Ｋ．ら、（１９９７年）、Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．３７８巻：８９９〜９０８頁；Ｋａｉｓｅｒ  Ｌ．ら、（２００３年）、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．
Ｃｈｅｍ．２７８巻（３９号）：３７７３０〜３７７３５頁を参照）。組換えにより産生されたＦｅｌ  ｄ１タンパク質は、配列番号３９６としても示されており、この配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１０４１６１８．１（シグナル配列なし、配列番号３９６の１０１位におけるグリシンに相当するＤ２７Ｇ変異あり）由来のＦｅｌ  ｄ１の鎖Ａのアミノ酸残基１９〜８８と直列（ｉｎ−ｌｉｎｅ）で融合された、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１０４１６１９．１（シグナル配列なし）由来のＦｅｌ  ｄ１鎖Ｂのアミノ酸残基１８〜１０９を含有する。本発明の他の組換えにより産生されたＦｅｌ  ｄ１構築物は、配列番号３８５、３９４、３９５および３９７において例証されている。
【０１２０】
Ｆｅｌ  ｄ１の「鎖１」または「鎖Ａ」は、配列番号３９２またはその相同配列のアミノ酸配列を含む、あるいはこれからなるポリペプチドである。用語、配列番号３９２の相同配列は、本明細書において、７０％を超える、好ましくは、８０％を超える、より好ましくは、９０％を超える、さらにより好ましくは、９５％を超える、配列番号３９２に対する同一性を有するポリペプチドを指す。Ｆｅｌ  ｄ１の鎖１のアミノ酸配列はまた、ＧｅｎＢａｎｋにおいて受託番号Ｐ３０４３８または受託番号ＮＰ＿００１０４１６１８．１として提示されており、これらは、成熟タンパク質においては除去されているシグナルペプチドも含む。
【０１２１】
Ｆｅｌ  ｄ１の「鎖２」または「鎖Ｂ」は、配列番号３９３またはその相同配列のアミノ酸配列を含む、あるいはこれからなるポリペプチドである。用語、配列番号３９３の相同配列は、本明細書において、７０％を超える、好ましくは、８０％を超える、より好ましくは、９０％を超える、さらにより好ましくは、９５％を超える、配列番号３９３に対する同一性を有するポリペプチドを指す。Ｆｅｌ  ｄ１の鎖２のアミノ酸配列はまた、ＧｅｎＢａｎｋにおいて受託番号Ｐ３０４４０または受託番号ＮＰ＿００１０４１６１９．１として提示されており、これらは、成熟タンパク質においては除去されているシグナルペプチドを含む。
【０１２２】
用語「Ｆｅｌ  ｄ１断片」は、本明細書において、Ｆｅｌ  ｄ１の少なくとも１個の抗原性部位を含む、あるいはこれからなるポリペプチドを指す。一実施形態では、用語「Ｆｅｌ  ｄ１断片」は、本明細書において、Ｆｅｌ  ｄ１の少なくとも２個の抗原性部位を含む、あるいはこれらからなるポリペプチドを指す。一実施形態では、抗原性部位は、共有結合により連結されている。一実施形態では、抗原性部位は、少なくとも１個のペプチド結合によって連結されている。一実施形態では、２個の抗原性部位は、少なくとも１個のペプチド結合および該抗原性部位間のスペーサーによって連結されている。一実施形態では、少なくとも２個の抗原性部位は、Ｆｅｌ  ｄ１の鎖１およびＦｅｌ  ｄ１の鎖２の両方に由来する。一実施形態では、少なくとも２個の抗原性部位は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ３０４３８のアミノ酸配列２３〜９２およびＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ３０４４０のアミノ酸配列１８〜１０９を含む。一実施形態では、少なくとも２個の抗原性部位は、Ｆｅｌ  ｄ１の鎖１およびＦｅｌ  ｄ１の鎖２の両方に由来する。一実施形態では、少なくとも２個の抗原性部位は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１０４１６１８．１のアミノ酸配列１９〜８８およびＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１０４１６１９．１のアミノ酸配列１８〜１０９を含む。一実施形態では、少なくとも２個の抗原性部位は、配列番号３８５、３９４、３９５、３９６または３９７のいずれかの内のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１断片のいずれかは、天然に存在するＦｅｌ  ｄ１または組換えにより産生されたＦｅｌ  ｄ１に特異的に結合する抗体の産生をｉｎ  ｖｉｖｏにおいて誘導することができる。
【０１２３】
用語「抗体」は、本明細書において、特定の抗原（例えば、Ｆｅｌ  ｄ１）に特異的に結合または相互作用する少なくとも１個の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、いずれかの抗原結合分子または分子複合体を意味する。用語「抗体」は、本明細書において、ジスルフィド結合によって相互接続された２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖である、４本のポリペプチド鎖からなる免疫グロブリン分子（すなわち、「完全抗体分子」）と共に、その多量体（例えば、ＩｇＭ）またはその抗原結合性断片を指すよう企図されている。各重鎖は、重鎖可変領域（「ＨＣＶＲ」または「ＶＨ」）および重鎖定常領域（ドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３からなる）からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（「ＬＣＶＲ」または「ＶＬ」）および軽鎖定常領域（ＣＬ）からなる。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と命名されたより保存された領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と命名された超可変性の領域へとさらに細分することができる。各ＶＨおよびＶＬは、３個のＣＤＲおよび４個のＦＲで構成されており、これらはアミノ末端からカルボキシ末端へと次の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置される。本発明のある特定の実施形態では、抗体（またはその抗原結合性断片）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であってもよく、あるいは天然にまたは人為的に修飾されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、２種以上のＣＤＲの対比（ｓｉｄｅ−ｂｙ−ｓｉｄｅ）解析に基づき定義することができる。
【０１２４】
１個もしくは複数のＣＤＲ残基の置換または１個もしくは複数のＣＤＲの省略も可能である。１個または２個のＣＤＲを結合のために省くことのできる抗体が、科学文献に記載された。Ｐａｄｌａｎら（１９９５年、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．９巻：１３３〜１３９頁）は、発表された結晶構造に基づき、抗体とその抗原との間の接触領域を解析し、ＣＤＲ残基のほんの約５分の１から３分の１が、抗原と実際に接触すると結論づけた。Ｐａｄｌａｎは、１個または２個のＣＤＲが抗原と接触するアミノ酸を持たない、多くの抗体も発見した（Ｖａｊｄｏｓら、（２００２年）、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３２０巻：４１５〜４２８頁も参照）。
【０１２５】
抗原と接触していないＣＤＲ残基は、分子モデリングによっておよび／または経験的に、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ外部に位置するＫａｂａｔ  ＣＤＲの領域から、以前の研究に基づき同定することができる（例えば、ＣＤＲＨ２における残基Ｈ６０〜Ｈ６５は、多くの場合必要とされない）。ＣＤＲまたはその残基（複数可）が省略される場合、これは通常、別のヒト抗体配列または係る配列のコンセンサスにおける相当するポジションを占めるアミノ酸に置換される。ＣＤＲ内の置換のためのポジションおよび置換するためのアミノ酸は、経験的に選択することもできる。経験的な置換は、保存的または非保存的置換となり得る。
【０１２６】
本明細書に開示されている、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する完全なヒトモノクローナル抗体は、相当する生殖系列配列と比較して、重および軽鎖可変ドメインのフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域に１個または複数のアミノ酸置換、挿入および／または欠失を含むことができる。係る変異は、本明細書に開示されているアミノ酸配列を、例えば、公開抗体配列データベースから入手できる生殖系列配列と比較することによって容易に確認することができる。本発明は、本明細書に開示されているアミノ酸配列のいずれかに由来する抗体およびその抗原結合性断片を含み、１個または複数のフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の１個または複数のアミノ酸は、抗体が由来する生殖系列配列の相当する残基（複数可）へと、または別のヒト生殖系列配列の相当する残基（複数可）へと、または相当する生殖系列残基（複数可）の保存的アミノ酸置換へと変異されている（係る配列変化は、本明細書において、「生殖系列変異」とまとめて称される）。当業者であれば、本明細書に開示されている重および軽鎖可変領域配列から始めて、１個または複数の個々の生殖系列変異またはその組み合わせを含む多数の抗体および抗原結合性断片を容易に産生することができる。ある特定の実施形態では、ＶＨおよび／またはＶＬドメイン内のフレームワークおよび／またはＣＤＲ残基の全てが、抗体が由来する本来の生殖系列配列に見出される残基へと逆変異されている。他の実施形態では、ある特定の残基のみが、例えば、ＦＲ１の最初の８アミノ酸の内もしくはＦＲ４の最後の８アミノ酸の内に見出される変異された残基のみまたはＣＤＲ１、ＣＤＲ２もしくはＣＤＲ３の内に見出される変異された残基のみが、本来の生殖系列配列へと逆変異されている。他の実施形態では、フレームワークおよび／またはＣＤＲ残基（複数可）のうち１個または複数が、異なる生殖系列配列（すなわち、抗体が本来由来する生殖系列配列とは異なる生殖系列配列）の相当する残基（複数可）へと変異されている。さらに、本発明の抗体は、フレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の２個以上の生殖系列変異のいかなる組み合わせを含有することもできる、例えば、ある特定の個々の残基は、特定の生殖系列配列の相当する残基へと変異されるが、本来の生殖系列配列とは異なるある特定の他の残基は、維持される、あるいは異なる生殖系列配列の相当する残基へと変異される。１個または複数の生殖系列変異を含有する抗体および抗原結合性断片を得たら、結合特異性の向上、結合親和性の増加、アンタゴニストまたはアゴニスト性の生物学的特性の向上または増強（場合による）、免疫原性の低下等、１種または複数の所望の特性に関して容易に検査することができる。このような一般的な様式で得られる抗体および抗原結合性断片は、本発明の範囲内に包含される。
【０１２７】
本発明はまた、１個または複数の保存的置換を有する、本明細書に開示されているＨＣＶＲ、ＬＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかの改変体を含む完全なヒトモノクローナル抗体を含む。例えば、本発明は、本明細書に開示されているＨＣＶＲ、ＬＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかと比べて、例えば、１０個以下、８個以下、６個以下、４個以下等の保存的アミノ酸置換を有するＨＣＶＲ、ＬＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗体を含む。
【０１２８】
用語「ヒト抗体」は、本明細書において、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する抗体を含むように企図されている。本発明のヒトｍＡｂは、例えば、ＣＤＲ、特にＣＤＲ３において、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列にコードされないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるランダムもしくは部位特異的変異誘発またはｉｎ  ｖｉｖｏにおける体細胞変異によって導入された変異）を含むことができる。しかし、用語「ヒト抗体」は、本明細書において、別の哺乳動物種（例えば、マウス）の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトＦＲ配列に移植されたｍＡｂを含むようには企図されていない。
【０１２９】
本明細書において、表現「抗原結合分子」は、単独で、あるいは１個または複数の追加的なＣＤＲおよび／またはフレームワーク領域（ＦＲ）と組み合わせて、特定の抗原に特異的に結合する少なくとも１個の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、またはこれからなるタンパク質、ポリペプチドまたは分子複合体を意味する。ある特定の実施形態では、抗原結合分子は、抗体または抗体の断片であり、係る用語は、本明細書の他の箇所で定義されている通りである。
【０１３０】
本明細書において、表現「二重特異的抗原結合分子」は、少なくとも第１の抗原結合ドメインおよび第２の抗原結合ドメイン（すなわち、２本の腕）を含むタンパク質、ポリペプチドまたは分子複合体を意味する。二重特異的抗原結合分子内の各抗原結合ドメインは、単独で、あるいは１個または複数の追加的なＣＤＲおよび／またはＦＲと組み合わせて特定の抗原に特異的に結合する少なくとも１個のＣＤＲを含む。本発明の文脈において、第１の抗原結合ドメインは、Ｆｅｌ  ｄ１における第１の抗原に特異的に結合し、第２の抗原結合ドメインは、Ｆｅｌ  ｄ１における第２の別個の抗原に特異的に結合する。
【０１３１】
用語「特異的に結合する」または「〜に特異的に結合する」その他は、抗体またはその抗原結合性断片が、生理的条件下で相対的に安定的に抗原と複合体を形成することを意味する。特異的な結合は、少なくとも約１×１０−６Ｍ以下（例えば、より小さいＫＤはより密接な結合を示す）の平衡解離定数によって特徴付けることができる。２個の分子が特異的に結合するか否か決定するための方法は、本技術分野において周知のものであり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴法その他が挙げられる。本明細書に記載されている通り、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する抗体は、表面プラズモン共鳴法、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）によって同定された。さらに、Ｆｅｌ  ｄ１および１種もしくは複数の追加的な抗原に結合する多特異的抗体またはＦｅｌ  ｄ１の２種の異なる領域（例えば、Ｆｅｌ  ｄ１の鎖１および／または鎖２）に結合する二重特異的抗体であっても、本明細書において、「特異的に結合する」抗体とみなされる。
【０１３２】
用語「高親和性」抗体は、表面プラズモン共鳴法、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）または溶液親和性ＥＬＩＳＡによって測定される、少なくとも１０−８Ｍ、好ましくは１０−９Ｍ、より好ましくは１０−１０Ｍ、さらにより好ましくは１０−１１Ｍ、さらにより好ましくは１０−１２ＭのＫＤとして表現される、Ｆｅｌ  ｄ１に対する結合親和性を有するｍＡｂを指す。
【０１３３】
用語「遅いオフレート」、「Ｋｏｆｆ」または「ｋｄ」とは、表面プラズモン共鳴法、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）によって決定される、１×１０−３ｓ−１以下、好ましくは１×１０−４ｓ−１以下の速度定数でＦｅｌ  ｄ１から解離する抗体を意味する。
【０１３４】
用語、抗体の「抗原結合ポーション」、抗体の「抗原結合性断片」その他は、本明細書において、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、いずれかの天然に存在する、酵素により得ることができる、合成のまたは遺伝子改変したポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。用語、抗体の「抗原結合ポーション」または「抗体断片」は、本明細書において、Ｆｅｌ  ｄ１に結合する能力を保持する抗体の１種または複数の断片を指す。
【０１３５】
特異的な実施形態では、本発明の抗体または抗体断片は、コルチコステロイド、第２の抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体またはエピネフリン、ワクチン、またはＦｅｌ  ｄ１に対するアレルギー応答の処置に有用な他のいずれかの治療部分等、治療部分にコンジュゲートすることができる（「イムノコンジュゲート」）。
【０１３６】
「単離された抗体」は、本明細書において、異なる抗原特異性を有する他の抗体（Ａｂ）を実質的に含まない抗体を指すように企図されている（例えば、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する単離された抗体またはその断片は、Ｆｅｌ  ｄ１以外の抗原に特異的に結合するＡｂを実質的に含まない）。
【０１３７】
「遮断抗体」または「中和抗体」（または「Ｆｅｌ  ｄ１活性を中和する抗体」）は、本明細書において、それとＦｅｌ  ｄ１との結合が、Ｆｅｌ  ｄ１の少なくとも１種の生物学的活性の阻害をもたらす抗体またはその抗原結合ポーションを指すように企図されている。例えば、本発明の抗体は、Ｆｅｌ  ｄ１に対する一次アレルギー応答の防止に役立つことができる。あるいは、本発明の抗体は、Ｆｅｌ  ｄ１に対する二次アレルギー応答、またはくしゃみ、咳嗽、喘息状態またはＦｅｌ  ｄ１が原因のアナフィラキシー応答を含む、Ｆｅｌ  ｄ１に対するアレルギー応答の少なくとも１種の症状を防止する能力を示すことができる。Ｆｅｌ  ｄ１の生物学的活性のこのような阻害は、数種の標準ｉｎ  ｖｉｔｒｏもしくはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ（本明細書に記載されている受動皮膚アナフィラキシーアッセイ等）または本技術分野において公知の他のｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ（例えば、本明細書に記載されている抗体の１種または複数の投与後に、Ｆｅｌ  ｄ１による負荷からの保護を調べるための他の動物モデル）のうち１種または複数により、Ｆｅｌ  ｄ１生物学的活性の１種または複数の指標を測定することによって評価することができる。
【０１３８】
用語「表面プラズモン共鳴法」は、本明細書において、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）システム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ、スウェーデン、ウプサラおよびニュージャージー州ピスカタウェイ）を使用した、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変更の検出による、リアルタイム生体分子相互作用の解析を可能にする光学的現象を指す。
【０１３９】
用語「ＫＤ」は、本明細書において、特定の抗体−抗原相互作用の平衡解離定数を指すように企図されている。
【０１４０】
用語「エピトープ」は、パラトープとして公知の抗体分子の可変領域における特異的抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗原は、２個以上のエピトープを有し得る。よって、異なる抗体は、抗原における異なる区域に結合することができ、異なる生物学的効果を有することができる。用語「エピトープ」はまた、Ｂおよび／またはＴ細胞が応答する、抗原における部位を指す。これはまた、抗体によって結合される抗原の領域を指す。エピトープは、直鎖状であってもコンフォメーション性であってもよい。直鎖状エピトープは、ポリペプチド鎖における隣接するアミノ酸残基によって産生されるエピトープである。コンフォメーション性エピトープは、直鎖状ポリペプチド鎖の異なるセグメント由来の空間的に並置されたアミノ酸によって産生される。ある特定の実施形態では、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基またはスルホニル基等、分子の化学的に活性を有する表面グループである決定基を含むことができ、ある特定の実施形態では、特異的な三次元構造特徴および／または特異的な電荷特徴を有することができる。エピトープは、構造的または機能的エピトープとして定義することもできる。機能的エピトープは一般に、構造的エピトープのサブセットであり、相互作用の親和性に直接的に寄与する残基を有する。近接アミノ酸から形成されるエピトープは典型的には、変性溶媒への曝露において保持されるが、一方、三次フォールディングによって形成されるエピトープは典型的には、変性溶媒による処理において失われる。エピトープは典型的には、独特の空間的コンフォメーションにおいて少なくとも３、より一般的には、少なくとも５または８〜１０アミノ酸を含む。
【０１４１】
用語「実質的同一性」または「実質的に同一」は、核酸またはその断片について言及する場合、後述するＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴまたはＧＡＰ等、配列同一性のいずれか周知のアルゴリズムによって測定され、適切なヌクレオチド挿入または欠失を用いて別の核酸（またはその相補ストランド）と最適に整列されたときに、ヌクレオチド塩基の少なくとも約９０％、より好ましくは少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％または９９％においてヌクレオチド配列同一性が存在することを示す。参照核酸分子に対し実質的同一性を有する核酸分子は、ある特定の事例において、参照核酸分子にコードされるポリペプチドと同じまたは実質的に類似のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードすることができる。
【０１４２】
ポリペプチドに適用する場合、用語「実質的類似性」または「実質的に類似の」は、２種のペプチド配列が、デフォルトギャップ重量を使用してプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴ等により最適に整列されたときに、少なくとも９０％配列同一性、さらにより好ましくは少なくとも９５％、９８％または９９％配列同一性を共有することを意味する。好ましくは、同一ではない残基ポジションは、保存的アミノ酸置換により異なる。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の化学的特性（例えば、電荷または疎水性）を有する側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基により置換される置換である。一般に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能特性を実質的に変化させないであろう。２種以上のアミノ酸配列が、保存的置換により互いに異なる場合、類似性のパーセントまたは度合は、置換の保存的性質を補正するために上向きに調整することができる。この調整を行うための手段は、当業者に周知のものである（例えば、Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９４年）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．２４巻：３０７〜３３１頁を参照）。類似の化学的特性を有する側鎖を有するアミノ酸の群の例として、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン；２）脂肪族−ヒドロキシル側鎖：セリンおよびスレオニン；３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン；４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファン；５）塩基性側鎖：リシン、アルギニンおよびヒスチジン；６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸、ならびに７）硫黄含有側鎖：システインおよびメチオニンが挙げられる。好ましい保存的アミノ酸置換群は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リシン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸およびアスパラギン−グルタミンである。あるいは、保存的置き換えは、Ｇｏｎｎｅｔら、（（１９９２年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６巻：１４４３  ４５頁）に開示されているＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて正の値を有するいずれかの変化である。「中程度に保存的」置き換えは、ＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて負ではない値を有するいずれかの変化である。
【０１４３】
ポリペプチドの配列類似性は、典型的には、配列解析ソフトウェアを使用して測定される。タンパク質解析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む様々な置換、欠失および他の修飾に割り当てられた類似性の尺度を使用して類似の配列を一致させる。例えば、ＧＣＧソフトウェアは、デフォルトパラメータにより使用して、異なる生物種由来の相同ポリペプチド等、密接に関係したポリペプチドの間、あるいは野生型タンパク質とその変異タンパク質との間の配列相同性または配列同一性を決定することのできるＧＡＰおよびＢＥＳＴＦＩＴ等のプログラムを含有する。例えば、ＧＣＧバージョン６．１を参照されたい。ポリペプチド配列は、デフォルトまたは推奨されるパラメータを用いてＦＡＳＴＡを使用して比較することもできる。ＧＣＧバージョン６．１におけるプログラムＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）は、アライメントならびに問い合わせおよび検索配列間の最良の重複の領域のパーセント配列同一性を提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００年）上記参照）。本発明の配列を、異なる生物由来の多数の配列を含有するデータベースと比較する際の別の好ましいアルゴリズムは、デフォルトパラメータを使用したコンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特にＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである（例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、（１９９０年）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．２１５巻：４０３  ４１０頁および（１９９７年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５巻：３３８９  ４０２頁を参照）。
【０１４４】
特異的な実施形態では、本発明の方法における使用のための抗体または抗体断片は、単一特異的、二重特異的または多特異的となり得る。多特異的抗体は、１種の標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的となり得る、あるいは２種以上の標的ポリペプチドのエピトープに特異的な抗原結合ドメインを含有し得る。本発明の文脈において使用することのできる例示的な二重特異的抗体フォーマットは、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）ＣＨ３ドメインおよび第２のＩｇ  ＣＨ３ドメインの使用に関与し、第１および第２のＩｇ  ＣＨ３ドメインは、少なくとも１個のアミノ酸が互いに異なり、少なくとも１個のアミノ酸差は、アミノ酸差を欠く二重特異的抗体と比較して、プロテインＡへの二重特異的抗体の結合を低下させる。一実施形態では、第１のＩｇ  ＣＨ３ドメインは、プロテインＡに結合し、第２のＩｇ  ＣＨ３ドメインは、Ｈ９５Ｒ修飾（ＩＭＧＴエクソンナンバリングによる；ＥＵナンバリングによるＨ４３５Ｒ）等、プロテインＡ結合を低下または消失させる変異を含有する。第２のＣＨ３は、Ｙ９６Ｆ修飾（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＹ４３６Ｆ）をさらに含むことができる。第２のＣＨ３内に見出すことのできるさらなる修飾は、ＩｇＧ１  ｍＡｂの場合、Ｄ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７ＭおよびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７ＭおよびＶ４２２Ｉ）；ＩｇＧ２  ｍＡｂの場合、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２ＮおよびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴ；ＥＵによるＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２ＮおよびＶ４２２Ｉ）；ならびにＩｇＧ４  ｍＡｂの場合、Ｑ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９ＱおよびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＱ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９ＱおよびＶ４２２Ｉ）を含む。上に記載されている二重特異的抗体フォーマットにおける変種は、本発明の範囲内であるとみなされる。
【０１４５】
語句「治療有効量」とは、これを投与した目的であるところの所望の効果を生じる量を意味する。正確な量は、処置の目的に依存し、当業者であれば、公知の技法を使用して確認することができるであろう（例えば、Ｌｌｏｙｄ（１９９９年）Ｔｈｅ  Ａｒｔ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇを参照）。
【０１４６】
本発明の抗体を使用して、ネコ感受性個体を「脱感作」することができる。用語「脱感作する」は、ネコ、ネコのフケまたはその産物、例えば、Ｆｅｌ  ｄ１への曝露に対するネコ感受性個体のアレルギー反応性を減少（これを行わなければネコ感受性個体が経験する筈のレベルに満たないレベルまで）させることとして、本明細書において定義されている。
【０１４７】
概要
イエネコは、多くの屋内アレルゲンの供給源であり、ネコアレルゲンに対する感受性を示す個体における症状の重症度は、比較的軽度の鼻炎および結膜炎から潜在的に生死に関わる喘息状態までに及ぶ（Ｌａｕ，  Ｓ．ら、（２０００年）、Ｌａｎｃｅｔ  ３５６巻：１３９２〜１３９７頁）。ネコに対する係る感受性を示す患者は、ネコのフケおよび生皮に見出される様々な分子に応答性であると考えられるが、主なアレルゲンは、Ｆｅｌ  ｄ１（Ｆｅｌｉｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓアレルゲン１）であると考えられる。ネコに対するアレルギー患者の８０％超が、このアレルゲンに対するＩｇＥ抗体を有することが示された（ｖａｎ  Ｒｅｅ，  Ｒ．ら、（１９９９年）、Ｊ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０４巻：１２２３〜１２３０頁）。
【０１４８】
Ｆｅｌ  ｄ１タンパク質は、約１０〜２０％のＮ結合型炭水化物を含有するおよそ１８ｋＤａのヘテロ二量体酸性糖タンパク質である。各ヘテロ二量体は、２種の別個の遺伝子にコードされる２本のポリペプチド鎖を含む（Ｄｕｆｆｏｒｔ，  ＯＡら、（１９９１年）、Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８巻：３０１〜３０９頁；Ｍｏｒｇｅｎｓｔｅｒｎ，
ＪＰら、（１９９１年）、ＰＮＡＳ  ８８巻：９６９０〜９６９４頁；Ｇｒｉｆｆｉｔｈ，  Ｉ．Ｊ．ら、（１９９２年）、Ｇｅｎｅ  １１３巻：２６３〜２６８頁）。鎖１は、約７０個のアミノ酸残基を含み、鎖２は、約９０〜９２個のアミノ酸残基を含む。天然Ｆｅｌ  ｄ１における２本の鎖を連結する３個の鎖間ジスルフィド結合が提案され（Ｋｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，  Ａ．Ｋ．ら、（１９９７年）、Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．３７８巻：８９９〜９０８頁）、結晶構造における組換えＦｅｌ  ｄ１に対して確認された（Ｋａｉｓｅｒ，  Ｌ．ら、（２００３年）、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．２７８巻：３７７３０〜３７７３５頁；Ｋａｉｓｅｒ，  Ｌ．ら、（２００７年）、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．３７０巻：７１４〜７２７頁）。各鎖は個々に「Ｆｅｌ  ｄ１」と称されることがあるが、完全なタンパク質アレルゲンには両方の鎖が必要とされる。
【０１４９】
Ｆｅｌ  ｄ１は、皮脂腺、扁平上皮腺および扁平上皮細胞によって産生され、舐めることおよび毛づくろいすることによって生皮へと移される（Ｂａｒｔｈｏｌｏｍｅ，  Ｋ．ら、（１９８５年）、Ｊ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７６巻：５０３〜５０６頁；Ｃｈａｒｐｉｎ，  Ｃ．ら、（１９９１年）、Ｊ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．８８巻：７７〜８２頁；Ｄａｂｒｏｗｓｋｉ，  Ａ．Ｊ．（１９９０年）ら、Ｊ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．８６巻：４６２〜４６５頁）。これは、唾液、肛門周囲および涙腺にも存在し（Ａｎｄｅｒｓｅｎ，  Ｍ．Ｃ．ら、（１９８５年）、Ｊ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７６巻：５６３〜５６９頁；ｖａｎ  Ｍｉｌｌｉｇｅｎ，  Ｆ．Ｊ．ら、（１９９２年）、Ｉｎｔ．  Ａｒｃｈ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ａｐｐｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．９２巻：３７５〜３７８頁）、主要な貯蔵場所は、皮膚および毛皮であると考えられる（Ｍａｔａ，  Ｐ．ら、（１９９２年）、Ａｎｎ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  ６９巻（４号）：３２１〜３２２頁）。
【０１５０】
Ｆｅｌ  ｄ１タンパク質は、動物に対し未知の機能のものであるが、感受性のヒトにおいてＩｇＧまたはＩｇＥ反応を引き起こす（アレルギーまたは喘息反応のいずれかとして）。Ｆｅｌ  ｄ２（アルブミン）およびＦｅｌ  ｄ３（シスタチン）を含む他のネコアレルゲンも公知であるが、産生される抗ネコＩｇＥの６０％〜９０％は、Ｆｅｌ  ｄ１に対するものである（Ｌｅｉｔｅｒｍａｎｎ，  Ｋ．ら、（１９８４年）、Ｊ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７４巻：１４７〜１５３頁；Ｌｏｗｅｎｓｔｅｉｎ，  Ｈ．ら、（１９８５年）、Ａｌｌｅｒｇｙ  ４０巻：４３０〜４４１頁；ｖａｎ  Ｒｅｅ，  Ｒ．ら、（１９９９年）、Ｊ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０４巻：１２２３〜１２３０頁；Ｉｃｈｉｋａｗａ，  Ｋ．ら、（２０１１年）、Ｃｌｉｎ．  Ｅｘｐ．  Ａｌｌｅｒｇｙ、３１巻：１２７９〜１２８６頁）。
【０１５１】
免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）は、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、枯草熱、アレルギー性喘息、ハチ毒アレルギーおよび食物アレルギーとして顕在化する１型過敏症の原因である。ＩｇＥは、血液中を循環し、好塩基球およびマスト細胞におけるＩｇＥの高親和性Ｆｃ受容体に結合する。大部分のアレルギー応答において、アレルゲンは、吸入、摂取によりまたは皮膚を通して体内に進入する。続いてアレルゲンは、マスト細胞および好塩基球の表面における高親和性受容体に既に結合している予め形成されたＩｇＥに結合し、数個のＩｇＥ分子の架橋をもたらし、様々なアレルギー症状を引き起こすヒスタミンおよび他の炎症性メディエーターの放出を誘発する。
【０１５２】
ネコアレルギーの処置は、ネコのフケの粗抽出物またはＦｅｌ  ｄ１に由来する短いペプチドのいずれかの増加投薬量の反復的な注射を含む脱感作療法を含む。ネコのフケの粗抽出物を使用して、Ｌｉｌｊａらは、３年間の係る処置の後、ネコに対してアレルギー性の患者が、依然として全身性症状を示したことを実証した（Ｌｉｌｊａ，  Ｑ．ら、（１９８９年）、Ｊ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．８３巻：３７〜４４頁およびＨｅｄｌｉｎら、（１９９１年）、Ｊ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．８７巻：９５５〜９６４頁）。脱感作のためのＦｅｌ  ｄ１に由来する短いペプチドの使用は、ペプチド群とプラセボ対照群との間に有意でない差をもたらした（Ｏｌｄｆｉｅｌｄ，  Ｗ．Ｌ．ら、（２００２年）、Ｌａｎｃｅｔ、３６０巻：４７〜５３頁）。有効性は、大量（７５０ｕｇ）の短いペプチドを患者に投与した場合においてのみ観察された（Ｎｏｒｍａｎ，  Ｐ．Ｓ．ら、（１９９６年）、Ａｍ．  Ｊ．  Ｒｅｓｐｉｒ．  Ｃｒｉｔ．  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．１５４巻：１６２３〜１６２８頁）。さらに、ネコのフケ由来の粗抽出物を与えた患者と、短いＦｅｌ  ｄ１ペプチド処置を与えた患者の両方において喘息反応が報告された。したがって、ネコアレルギー処置の分野において、ネコアレルゲン、特にＦｅｌ  ｄ１に対し感受性の患者を処置するための代替的戦略の必要がある。
【０１５３】
抗体は、粘膜組織へのアレルゲン分子の侵入を遮断することができるため、あるいはマスト細胞または好塩基球における高親和性受容体に結合されるＩｇＥにアレルゲンが結合する機会を得る前にアレルゲンに結合し、これによりこれらの細胞からのヒスタミンおよび他の炎症性メディエーターの放出を防止することができるため、アレルギーのための一般処置戦略として提案された。米国特許第５，６７０，６２６号は、粘膜組織へのアレルゲンの結合を遮断することによる、アレルギー性鼻炎、アレルギー性喘息およびアレルギー性結膜炎等、ＩｇＥ媒介性アレルギー性疾患を処置するためのモノクローナル抗体の使用について記載する。米国特許第６，８４９，２５９号は、アレルギーのｉｎ  ｖｉｖｏマウスモデルにおける、アレルギー性炎症を阻害するためのアレルゲン特異的抗体の使用について記載する。ミルクに基づくおよび卵に基づく抗体系が記載されている。例えば、ＵＳ２００３０００３１３３Ａ１は、ネコのフケおよび他のアレルゲンに対する経口寛容を誘導するための、アレルゲンの担体としてのミルクの使用を開示する。マスト細胞に結合するアレルゲンの能力を阻害する分子の使用による、環境中のアレルゲンに対する動物におけるアレルギー応答を低下させるための組成物および方法が、ＵＳ２０１０／０１４３２６６に記載されている。Ｆｅｌ  ｄ１に対する他の抗体は、ｄｅ  Ｇｒｏｏｔらによって記載されている（ｄｅ  Ｇｒｏｏｔら、（１９８８年）、Ｊ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．８２巻：７７８〜７８６頁）。
【０１５４】
本明細書に記載されている完全なヒト抗体は、Ｆｅｌ  ｄ１に対する特異的な結合を示し、ネコアレルギーを患う患者、特に、Ｆｅｌ  ｄ１アレルゲンに対する感受性を示す患者の処置に有用となり得る。係る抗体の使用は、ネコのフケに対するアレルギーを患う患者を処置する有効な手段となり得る、あるいは抗体は、二次曝露によるＦｅｌ  ｄ１に対する応答の増大化またはアレルギーに伴う随伴症状の防止に使用することができる、あるいはＦｅｌ  ｄ１アレルゲンを持つネコへの一次曝露または二次曝露による症状の再発に伴うアレルギー応答の重症度および／または持続時間の低減に使用することができる。抗体は、単独で、あるいはコルチコステロイドまたはエピネフリンによる処置等が挙げられるがこれらに限定されない、係るアレルギーを処置するための本技術分野において公知の他の治療部分またはモダリティーによる補助的療法として使用することができる。抗体は、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的な第２または第３の異なる抗体と併せて使用することができる。抗体は、アレルゲン特異的免疫療法（ＳＩＴ）と共に使用することができる。
【０１５５】
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、商業的に購入（例えば、Ｉｎｄｏｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、＃ＮＡ−ＦＤ１−２を参照）または組換えにより産生することができる天然Ｆｅｌ  ｄ１等の一次免疫原で免疫化されたマウスから得られる。ある特定の実施形態では、免疫原は、Ｆｅｌ  ｄ１の鎖１またはＦｅｌ  ｄ１の鎖２のいずれかとなり得る、あるいは逐次的にまたは同時発生的に投与される鎖１および鎖２の両方の組み合わせとなり得る。鎖１（ＦＥＬＤ１  Ａとも称される）の全長アミノ酸配列は、配列番号３９２として示される。鎖１の全長アミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ３０４３８およびＮＰ＿００１０４１６１８．１に見出すこともできる。鎖２（ＦＥＬＤ１  Ｂとも称される）の全長アミノ酸配列は、配列番号３９３として示される。鎖２の全長アミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＰＰ３０４４０およびＮＰ＿００１０４１６１９．１に見出すこともできる。
【０１５６】
ある特定の実施形態では、Ｋａｉｓｅｒらに記載されている通り、Ｆｅｌ  ｄ１の２本の鎖の直接的な融合によって、組換えにより産生されたＦｅｌ  ｄ１免疫原を作製して、天然Ｆｅｌ  ｄ１と類似のリフォールディングパターンを有する融合産物を産生することができる（Ｋａｉｓｅｒ，  Ｌ．ら、（２００３年）、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．２７８巻（３９号）：３７７３０〜３７７３５頁）。ある特定の実施形態では、免疫原は、配列番号３８５、３９４、３９５、３９６または３９７の構築物に示すもの等、融合タンパク質となることができ、続いて、二次免疫原、または天然もしくは組換えにより産生されたＦｅｌ  ｄ１の免疫原的に活性な断片により免疫化することができる。
【０１５７】
免疫原は、天然または組換えにより産生されたＦｅｌ  ｄ１の生物学的に活性なかつ／または免疫原性の断片、またはその活性断片をコードするＤＮＡとなり得る。断片は、鎖１または鎖２いずれかのＮ末端またはＣ末端のいずれかに、あるいは鎖１および鎖２の両方のＮ末端またはＣ末端に由来し得る。断片は、Ｆｅｌ  ｄ１に対する抗体を調製するための免疫原として使用されるように、鎖１または鎖２内のいずれかの部位から得ることができる。
【０１５８】
ある特定の実施形態では、免疫原は、次のうちいずれか１種または複数を含む融合タンパク質となり得る。ｉ）Ｆｅｌ  ｄ１の鎖１のアミノ酸残基２３〜９２（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ３０４３８、また、配列番号３９２を参照）のＮ末端と、Ｃ末端を介して直接的に融合したＦｅｌ  ｄ１の鎖２のアミノ酸残基１８〜１０９（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ３０４４０、また、配列番号３９３を参照）；ｉｉ）Ｆｅｌ  ｄ１の鎖２のアミノ酸残基１８〜１０９（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ３０４４０、また、配列番号３９３を参照）のＮ末端に、Ｃ末端を介して融合したＦｅｌ  ｄ１の鎖１のアミノ酸残基２３〜９２（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ３０４３８、また、配列番号３９２を参照）；ｉｉｉ）配列番号３９４または３９６に示す構築物等、Ｆｅｌ  ｄ１の鎖１のアミノ酸残基１９〜８８（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１０４１６１８．１を参照）のＮ末端と、Ｃ末端を介して直接的に融合したＦｅｌ  ｄ１の鎖２のアミノ酸残基１８〜１０９（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１０４１６１９．１を参照）；ｉｖ）Ｆｅｌ  ｄ１の鎖２のアミノ酸残基１８〜１０９（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１０４１６１９．１を参照）のＮ末端に、Ｃ末端を介して融合したＦｅｌ  ｄ１の鎖１のアミノ酸残基１９〜８８（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１０４１６１８．１を参照）。配列番号３９５も参照されたい。ある特定の実施形態では、融合タンパク質は、ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグ等、構築物のＣ末端にタグを有することができる（係る構築物に関して、配列番号３８５、３９６または３９７を参照）。関連する実施形態では、融合タンパク質は、構築物のＣ末端にカップリングされたマウス抗体Ｆｃ領域を有することができる（係る構築物に関して、配列番号３９４または３９５を参照）。ある特定の実施形態では、鎖１および２は、当業者に公知のリンカー、例えば、（Ｇ４Ｓ）３を介してカップリングされる（係る構築物に関して、配列番号３９５および３９７を参照）。
【０１５９】
ある特定の実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する抗体は、前述の領域の断片、または本明細書に記載されている領域のＮもしくはＣ末端のいずれか一方もしくは両方から指定の領域を約５〜約２０アミノ酸残基超えて延長するペプチドを使用して調製することができる。ある特定の実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１特異的抗体の調製において、前述の領域またはその断片のいかなる組み合わせを使用してもよい。ある特定の実施形態では、単一特異的、二重特異的または多特異的抗体を調製するために、Ｆｅｌ  ｄ１の前述の領域またはその断片のうちいずれか１種または複数を使用することができる。
【０１６０】
抗体の抗原結合性断片
他に特に記されていなければ、用語「抗体」は、本明細書において、２本の免疫グロブリン重鎖および２本の免疫グロブリン軽鎖を含む抗体分子（すなわち、「完全抗体分子」）ならびにその抗原結合性断片を包含するものと理解されたい。用語、抗体の「抗原結合ポーション」、抗体の「抗原結合性断片」その他は、本明細書において、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、いずれかの天然に存在する、酵素により得ることができる、合成のまたは遺伝子改変されたポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。用語、抗体の「抗原結合ポーション」または「抗体断片」は、本明細書において、Ｆｅｌ  ｄ１の鎖１および／または鎖２のいずれかに特異的に結合する能力を保持する抗体の１種または複数の断片を指す。抗体断片は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｄＡｂ断片、ＣＤＲを含有する断片または単離されたＣＤＲを含むことができる。抗体の抗原結合性断片は、例えば、完全抗体分子に由来することができ、タンパク質分解による消化、または抗体可変および（任意選択で）定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を含む組換え遺伝子操作技法等、いずれかの適した標準技法を使用する。係るＤＮＡは、公知であるおよび／または例えば、商業的供給源、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ抗体ライブラリーを含む）から容易に入手することができる、あるいは合成することができる。ＤＮＡを配列決定し、化学的にまたは分子生物学的技法を使用することにより操作して、例えば、１個または複数の可変および／または定常ドメインを適した構成へと配置する、またはコドンを導入する、システイン残基を作出する、アミノ酸を修飾、付加もしくは欠失させること等ができる。
【０１６１】
抗原結合性断片の非限定例として、（ｉ）Ｆａｂ断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）Ｆｄ断片；（ｉｖ）Ｆｖ断片；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂ断片；および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位（例えば、ＣＤＲ３ペプチド等、単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））または制約されたＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチドが挙げられる。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディ等）、小モジュラー免疫医薬（ｓｍａｌｌ  ｍｏｄｕｌａｒ  ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）（ＳＭＩＰ）およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメイン等、他の操作された分子も、本明細書における表現「抗原結合性断片」の内に包含されている。
【０１６２】
抗体の抗原結合性断片は、典型的には、少なくとも１個の可変ドメインを含むであろう。可変ドメインは、いかなるサイズまたはアミノ酸組成のものであってもよく、一般に、１個または複数のフレームワーク配列に隣接した、またはこれとインフレームの少なくとも１個のＣＤＲを含むであろう。ＶＬドメインと会合したＶＨドメインを有する抗原結合性断片において、ＶＨおよびＶＬドメインは、いずれかの適した配置において互いに対して位置することができる。例えば、可変領域は二量体となり、ＶＨ−ＶＨ、ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＬ二量体を含有することができる。あるいは、抗体の抗原結合性断片は、単量体ＶＨまたはＶＬドメインを含有することができる。
【０１６３】
ある特定の実施形態では、抗体の抗原結合性断片は、少なくとも１個の定常ドメインに共有結合により連結された少なくとも１個の可変ドメインを含有することができる。本発明の抗体の抗原結合性断片内に見出すことのできる可変および定常ドメインの非限定的な例示的構成として、（ｉ）ＶＨ−ＣＨ１；（ｉｉ）ＶＨ−ＣＨ２；（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＨ３；（ｉｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉ）ＶＨ−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉｉ）ＶＨ−ＣＬ；（ｖｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１；（ｉｘ）ＶＬ−ＣＨ２；（ｘ）ＶＬ−ＣＨ３；（ｘｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｘｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｘｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ２−ＣＨ３；および（ｘｉｖ）ＶＬ−ＣＬが挙げられる。上に列挙する例示的構成のいずれかを含む、可変および定常ドメインのいずれかの構成において、可変および定常ドメインは、互いに直接的に連結されていても、完全または部分的ヒンジまたはリンカー領域により連結されていてもよい。ヒンジ領域は、少なくとも２個（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０個以上）のアミノ酸からなることができ、これにより、単一ポリペプチド分子における隣接する可変および／または定常ドメインの間に可撓性または半可撓性連結がもたらされる。さらに、本発明の抗体の抗原結合性断片は、互いにおよび／または１個または複数の単量体ＶＨまたはＶＬドメインと非共有結合的に会合した（例えば、ジスルフィド結合（複数可）により）、上に列挙する可変および定常ドメイン構成のうちいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（または他の多量体）を含むことができる。
【０１６４】
完全抗体分子と同様に、抗原結合性断片は、単一特異的または多特異的（例えば、二重特異的）となり得る。抗体の多特異的抗原結合性断片は、典型的には、少なくとも２個の異なる可変ドメインを含み、各可変ドメインは、別々の抗原または同じ抗原上の異なるエピトープに特異的に結合することができるであろう。本明細書に開示されている例示的な二重特異的抗体フォーマットを含むいずれかの多特異的抗体フォーマットは、本技術分野において利用できる慣用的な技法を使用して、本発明の抗体の抗原結合性断片の文脈における使用に適合させることができる。
【０１６５】
ヒト抗体の調製
トランスジェニックマウスにおいてヒト抗体を生成するための方法は、本技術分野において公知である。本発明の文脈において、いずれかの係る公知の方法を使用して、Ｆｅｌ
ｄ１に特異的に結合するヒト抗体を作製することができる。
【０１６６】
ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（商標）技術（例えば、ＵＳ６，５９６，５４１、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）を参照）またはモノクローナル抗体を生成するための他のいずれかの公知の方法を使用して、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有する、Ｆｅｌ  ｄ１に対する高親和性キメラ抗体が最初に単離される。ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術は、マウスが抗原刺激に応答してヒト可変領域およびマウス定常領域を含む抗体を産生するように、内在性マウス定常領域遺伝子座に作動可能に連結したヒト重および軽鎖可変領域を含むゲノムを有するトランスジェニックマウスの生成を含む。抗体の重および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡが単離され、ヒト重および軽鎖定常領域をコードするＤＮＡに作動可能に連結される。続いて、ＤＮＡは、完全なヒト抗体を発現することのできる細胞において発現される。
【０１６７】
一般に、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスに、目的の抗原を負荷し、抗体を発現するリンパ性細胞（Ｂ細胞等）をマウスから回収する。リンパ性細胞を骨髄腫細胞株と融合して、不死ハイブリドーマ細胞株を調製し、係るハイブリドーマ細胞株をスクリーニングおよび選択して、目的の抗原に特異的な抗体を産生するハイブリドーマ細胞株を同定することができる。重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離し、重鎖および軽鎖の望ましいアイソタイプ型定常領域に連結することができる。係る抗体タンパク質は、ＣＨＯ細胞等、細胞において産生することができる。あるいは、抗原特異的キメラ抗体または軽および重鎖の可変ドメインをコードするＤＮＡは、抗原特異的リンパ球から直接的に単離することができる。
【０１６８】
最初に、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有する高親和性キメラ抗体が単離される。後述する実験セクションにおける通り、抗体は、親和性、選択性、エピトープ等を含む望ましい特徴に対して特徴付けされ、選択される。マウス定常領域を所望のヒト定常領域と置き換えて、本発明の完全なヒト抗体、例えば、野生型または修飾型ＩｇＧ１またはＩｇＧ４を生成する。選択される定常領域は、特定の用途に応じて変動し得るが、高親和性抗原結合および標的特異性特徴は、可変領域に属する。
【０１６９】
一般に、本発明の抗体は、非常に高い親和性を保有し、典型的には、固相に固定化されたまたは溶液相における抗原への結合により測定された場合の、約１０−１２から約１０−９ＭのＫＤを保有する。マウス定常領域を所望のヒト定常領域と置き換えて、本発明の完全なヒト抗体を生成する。選択される定常領域は、特定の用途に応じて変動し得るが、高親和性抗原結合および標的特異性特徴は、可変領域に属する。
【０１７０】
生物学的同等物
本発明の抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体および抗体断片は、記載されている抗体のアミノ酸配列から変動するがＦｅｌ  ｄ１に結合する能力を保持するアミノ酸配列を有するタンパク質を包含する。係る改変体抗体および抗体断片は、親配列と比較してアミノ酸の１個または複数の付加、欠失または置換を含むが、記載されている抗体の生物学的活性と基本的に同等な生物学的活性を示す。同様に、本発明の抗体コードＤＮＡ配列は、開示されている配列と比較してヌクレオチドの１個または複数の付加、欠失または置換を含むが、本発明の抗体または抗体断片と基本的に生物学的に同等である抗体または抗体断片をコードする配列を包含する。
【０１７１】
２種の抗原結合タンパク質または抗体が、例えば、同じモル濃度の用量にて類似の実験条件下、単一用量（ｄｏｅｓ）または複数用量のいずれかで投与された際に、その吸収の速度および程度が有意差を示さない薬学的同等物または薬学的代替物である場合、両者は生物学的に同等であるとみなされる。いくつかの抗体が、その吸収の程度において同等であるが、その吸収速度においては同等ではない場合において、これら抗体は、同等物または薬学的代替物であるとみなされ、そして係る吸収速度における差が意図的であり、標識において反映され、例えば慢性使用における有効な体内薬物濃度の到達に必須ではなく、試験される特定の薬物製品にとって医学的に無意味であるとみなされるため、これらが生物学的に同等であると依然としてみなされ得る。
【０１７２】
一実施形態では、２種の抗原結合タンパク質は、その安全性、純度および効力において臨床的に有意義な差がない場合、生物学的に同等である。
【０１７３】
一実施形態では、参照産物および生物学的産物の間で切り替えない継続的療法と比較して、免疫原性の臨床的に有意な変化または有効性の減弱化を含む有害効果のリスクにおいて増大が予想されずに、患者に対して、参照産物および生物学的産物の間でこのような切り替えを１回または複数回行うことができる場合、２種の抗原結合タンパク質は、生物学的に同等である。
【０１７４】
一実施形態では、２種の抗原結合タンパク質が両者共に、使用条件（単数または複数）に対し共通の作用機序（単数または複数）によって、係る機序が公知の程度まで作用する場合、２種の抗原結合タンパク質は、生物学的に同等である。
【０１７５】
生物学的同等性は、ｉｎ  ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法によって示すことができる。生物学的同等性の測定は、例えば、（ａ）時間の関数として血液、血漿、血清または他の生体液における抗体またはその代謝物の濃度を測定する、ヒトまたは他の哺乳動物におけるｉｎ  ｖｉｖｏ検査；（ｂ）ヒトｉｎ  ｖｉｖｏバイオアベイラビリティデータと相関され、これを合理的に予測するｉｎ  ｖｉｔｒｏ検査；（ｃ）時間の関数として抗体（またはその標的）の適切な急性薬理学的効果を測定する、ヒトまたは他の哺乳動物におけるｉｎ  ｖｉｖｏ検査；および（ｄ）抗体の安全性、有効性またはバイオアベイラビリティまたは生物学的同等性を確立する十分に制御された臨床治験における検査を含む。
【０１７６】
本発明の抗体の生物学的に同等な改変体は、例えば、残基もしくは配列の様々な置換を行うことによりまたは生物学的活性に必要とされない末端もしくは内部残基もしくは配列を欠失させることにより、構築することができる。例えば、生物学的活性に必須ではないシステイン残基を欠失または他のアミノ酸と置き換えて、復元における不要なまたは不正確な分子内ジスルフィド架橋の形成を防止することができる。他の文脈において、生物学的に同等な抗体は、抗体のグリコシル化特徴を修飾するアミノ酸変化、例えば、グリコシル化を排除または除去する変異を含む抗体改変体を含むことができる。
【０１７７】
抗体の生物学的特徴
一般に、本発明の抗体は、Ｆｅｌ  ｄ１の鎖１または鎖２のいずれかへの、あるいはＦｅｌ  ｄ１の鎖１および鎖２の両方への、あるいは鎖１または鎖２のいずれかの断片への結合により機能することができる。
【０１７８】
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、Ｆｅｌ  ｄ１の鎖１または鎖２のいずれかの少なくともＣ末端領域に位置するエピトープに結合することができる。一実施形態では、抗体は、Ｆｅｌ  ｄ１の鎖１または鎖２のいずれかのＮ末端領域内のエピトープに結合することができる。
【０１７９】
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、ｆｅｌ  ｄ１アレルゲンに対し感受性の患者における、マスト細胞または好塩基球へのＩｇＥの結合を遮断または阻害することにより機能することができる。
【０１８０】
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、そのアミノ酸配列が配列番号３９２（鎖１）および配列番号３９３（鎖２）に示されている、天然Ｆｅｌ  ｄ１タンパク質の全長の鎖１または鎖２の他のいずれかの領域または断片に結合することにより機能することができる。
【０１８１】
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、二重特異的抗体となり得る。本発明の二重特異的抗体は、鎖１における１個のエピトープに結合することができ、鎖２における１個のエピトープにも結合することができる。ある特定の実施形態では、本発明の二重特異的抗体は、鎖１における２個の異なるエピトープに結合することができる。ある特定の実施形態では、本発明の二重特異的抗体は、鎖２における２個の異なるエピトープに結合することができる。ある特定の実施形態では、本発明の二重特異的抗体は、鎖１または鎖２のいずれか一方における同じヘリックス内の２個の異なる部位に結合することができる、あるいは鎖１および鎖２の両方における同じヘリックスに結合することができる。Ｆｅｌ  ｄ１の構造は、Ｋａｉｓｅｒら（Ｋａｉｓｅｒ，  Ｌ．ら、（２００３年）、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．２７８巻（３９号）：３７７３０〜３７７３５頁）により詳細に記載されており、この文献によって、著者らは、Ｆｅｌ  ｄ１が、８個のヘリックス、Ｈ１〜Ｈ４およびＨ５〜Ｈ８からなり、これらは、天然Ｆｅｌ  ｄ１におけるそれぞれ鎖２および１に相当することを記す。
【０１８２】
一実施形態では、本発明は、次の特徴のうち１種または複数を示す、Ｆｅｌ  ｄ１の鎖１および／または鎖２に結合する完全なヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供する：（ｉ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４および３７０からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＶＲを含む；（ｉｉ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２および３７８からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＶＲを含む；（ｉｉｉ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２，２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、３４４、３６０および３７６からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；ならびに配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６、３５２、３６８および３８４からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含む；（ｉｖ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４、３４０、３５６および３７２からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６、３４２、３５８および３７４からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、３４８、３６４および３８０からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なく���も９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；ならびに配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、３５０、３６６および３８２からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ２ドメインを含む；（ｖ）１０−９以下のＫＤで、Ｆｅｌ  ｄ１の鎖１および／または鎖２に結合する；（ｖｉ）ウテログロビンと交差反応も結合もしない；あるいは（ｖｉｉ）Ｆｅｌ  ｄ１特異的マウスＩｇＥを使用した受動皮膚アナフィラキシー（ＰＣＡ）マウスモデルにおいて、ｉｎ  ｖｉｖｏの色素血管外遊出を遮断する。
【０１８３】
一実施形態では、本発明は、組成物の調製のための、本発明の２種以上の完全なヒト抗体またはその断片の組み合わせの使用であって、前記抗体が、Ｆｅｌ  ｄ１の鎖１および／または鎖２に結合し、前記組成物内に含有されている各抗体またはその断片が、次の特徴のうち１種または複数を示す使用を提供する：（ｉ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４および３７０からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＶＲを含む；（ｉｉ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２および３７８からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＶＲを含む；（ｉｉｉ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２，２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、３４４、３６０および３７６からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；ならびに配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６、３５２、３６８および３８４からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含む；（ｉｖ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４、３４０、３５６および３７２からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６、３４２、３５８および３７４からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、���４８、３６４および３８０からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；ならびに配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、３５０、３６６および３８２からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ２ドメインを含む；（ｖ）１０−９以下のＫＤで、Ｆｅｌ  ｄ１の鎖１および／または鎖２に結合する；（ｖｉ）ウテログロビンと交差反応も結合もしない；（ｖｉｉ）Ｆｅｌ  ｄ１特異的マウスＩｇＥを使用した受動皮膚アナフィラキシー（ＰＣＡ）マウスモデルにおいて、ｉｎ  ｖｉｖｏの色素血管外遊出を遮断する；あるいは（ｖｉｉｉ）本発明の第２の抗体またはその抗原結合性断片と組み合わせると、Ｆｅｌ  ｄ１負荷動物の肺における粘膜分泌細胞の頻度を減少させる。
【０１８４】
本発明のある特定のＦｅｌ  ｄ１抗体は、単独でまたは組み合わせて使用されると、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイによって決定される通り、Ｆｅｌ  ｄ１に結合し、その少なくとも１種の生物学的効果を中和することができる。Ｆｅｌ  ｄ１に結合しその活性を中和する本発明の抗体の能力は、本明細書に記載されている通り、結合アッセイまたは活性中和（例えば、アナフィラキシーからの保護）アッセイを含む、当業者に公知のいずれかの標準方法を使用して測定することができる。
【０１８５】
本明細書の実施例４において、結合活性を測定するための非限定的な例示的ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを図解する。実施例４において、ヒト抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体の結合親和性および速度定数を表面プラズモン共鳴法により決定し、Ｔ２００  Ｂｉａｃｏｒｅ機器において測定を行った。
【０１８６】
Ｆｅｌ  ｄ１タンパク質またはペプチドは、タグ付けのため、またはＫＬＨ等の担体分子へのコンジュゲーション目的のため、ある特定の残基の付加または置換を含むように修飾することができる。例えば、ペプチドのＮ末端またはＣ末端のいずれかにシステインを付加することができる、あるいはリンカー配列を付加して、例えば、免疫化のためにＫＬＨへとコンジュゲーションするためのペプチドを調製することができる。Ｆｅｌ  ｄ１に特異的な抗体は、追加的な標識または部分を含有していなくても、あるいはＮ末端またはＣ末端標識または部分を含有していてもよい。一実施形態では、標識または部分は、ビオチンである。結合アッセイにおいて、標識（あるとすれば）の位置は、ペプチドが結合している表面に対するペプチドの配向性を決定することができる。例えば、表面が、アビジンでコーティングされている場合、Ｎ末端ビオチンを含有するペプチドは、ペプチドのＣ末端ポーションが表面に対し遠位となるように配向されるであろう。
【０１８７】
エピトープマッピングおよび関連技術  用語「エピトープ」は、本明細書において、パラトープとして公知の抗体分子の可変領域における特異的な抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗原は、２個以上のエピトープを有し得る。よって、異なる抗体は、抗原における異なる区域に結合することができ、異なる生物学的効果を有することができる。エピトープは、コンフォメーション性または直鎖状のいずれであってもよい。コンフォメーション性エピトープは、直鎖状ポリペプチド鎖の異なるセグメント由来の空間的に並置されたアミノ酸によって産生される。直鎖状エピトープは、ポリペプチド鎖における隣接するアミノ酸残基によって産生されるエピトープである。ある特定の状況において、エピトープは、抗原における糖類、ホスホリル基またはスルホニル基の部分を含むことができる。
【０１８８】
本発明は、例えば、配列番号３９２に示す鎖１（鎖Ａ）または配列番号３９３に示す鎖２（鎖Ｂ）を含む、Ｆｅｌ  ｄ１分子の鎖１または鎖２の１種または複数の領域内、あるいは配列番号３８５、３９４、３９５、３９６または３９７のうちいずれか１種に示す組換えにより産生されたＦｅｌ  ｄ１タンパク質の匹敵する領域内に見出される１個または複数のアミノ酸と相互作用する抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体を含む。抗体が結合するエピトープは、Ｆｅｌ  ｄ１分子の上述の領域またはセグメントのうちいずれかの内に位置する３個以上（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個以上）のアミノ酸の単一の近接配列からなることができる（例えば、鎖１もしくは鎖２のいずれかにおけるまたは鎖１および鎖２の両方にまたがる領域における直鎖状エピトープ）。あるいは、エピトープは、Ｆｅｌ  ｄ１分子の上述の領域またはセグメントのいずれか一方または両方の内に位置する複数の非近接アミノ酸（またはアミノ酸配列）からなることができる（例えば、コンフォメーション性エピトープ）。
【０１８９】
当業者に公知の様々な技法を使用して、抗体が、ポリペプチドまたはタンパク質内の「１個または複数のアミノ酸と相互作用」するか否か決定することができる。例示的な技法として、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂ．、ＮＹ）に記載されているアッセイ等、慣用的なクロスブロッキングアッセイが挙げられる。他の方法として、アラニン走査変異解析、ペプチドブロット解析（Ｒｅｉｎｅｋｅ（２００４年）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２４８巻：４４３〜６３頁）、ペプチド切断解析結晶学試験およびＮＭＲ解析が挙げられる。加えて、抗原のエピトープ切除、エピトープ抽出および化学修飾等の方法を用いることができる（Ｔｏｍｅｒ（２０００年）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ９巻：４８７〜４９６頁）。抗体が相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を同定するために使用することのできる別の方法は、質量分析により検出される水素／重水素交換である。一般用語において、水素／重水素交換方法は、目的のタンパク質を重水素標識するステップと、続いて抗体を重水素標識タンパク質に結合させるステップを含む。次に、タンパク質／抗体複合体を水に移すと、抗体複合体によって保護されるアミノ酸内の交換可能なプロトンは、界面の一部ではないアミノ酸内の交換可能なプロトンよりも遅い速度で重水素から水素への逆交換を受ける。結果として、タンパク質／抗体界面の一部を形成するアミノ酸は、重水素を保持することができ、したがって、界面に含まれていないアミノ酸と比較して相対的により高い質量を示す。抗体の解離後に、標的タンパク質を、プロテアーゼ切断および質量分析による解析に付し、これにより、抗体が相互作用する特異的なアミノ酸に相当する重水素標識残基を明らかにする。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ（１９９９年）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２６７巻（２号）：２５２〜２５９頁；ＥｎｇｅｎおよびＳｍｉｔｈ（２００１年）Ａｎａｌ．  Ｃｈｅｍ．７３巻：２５６Ａ〜２６５Ａ頁を参照されたい。抗原／抗体複合体のＸ線結晶学を、エピトープマッピング目的のために使用することもできる。
【０１９０】
抗原構造に基づく抗体プロファイリング（Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｂａｓｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ）（ＡＳＡＰ）としても公知の修飾支援プロファイリング（Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ−Ａｓｓｉｓｔｅｄ  Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ）（ＭＡＰ）は、化学的にまたは酵素により修飾された抗原表面に対する各抗体の結合プロファイルの類似性に従って、同じ抗原に対する多数のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）をカテゴリー化する方法である（ＵＳ２００４／０１０１９２０）。各カテゴリーは、別のカテゴリーによって表されるエピトープとは明瞭に異なる、あるいはこれと部分的に重複する独特のエピトープを反映することができる。この技術は、特徴付けが遺伝的に別個の抗体に集中され得るような、遺伝的に同一の抗体の迅速なフィルタリングを可能にする。ハイブリドーマスクリーニングに適用される場合、ＭＡＰは、所望の特徴を有するｍＡｂを産生する希少なハイブリドーマクローンの同定を容易にすることができる。ＭＡＰを使用して、本発明の抗体を異なるエピトープに結合する抗体の群へと選別することができる。
【０１９１】
ある特定の実施形態では、抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３９２（鎖１）および配列番号３９３（鎖２）において例証されている天然型の、または配列番号３８５、３９４、３９５、３９６および３９７のいずれかにおいて例証されている組換えによる産生のいずれかの、Ｆｅｌ  ｄ１の鎖１または鎖２において例証されている領域、あるいはこれらの断片のうちいずれか１種または複数の内のエピトープに結合する。ある特定の実施形態では、表１に示す本発明の抗体は、配列番号３９６の約１５位〜約２４位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３９６の約８５位〜約１０３位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３９６の約８５位〜約１０４位に及ぶアミノ酸残基；配列番号３９６の約１１３位〜約１１６位に及ぶアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１種のアミノ酸配列と相互作用する。これらの領域は、配列番号４０２、４０３、４０４、４１２および４２６においてさらに例証されている。
【０１９２】
本発明はまた、本明細書の表１に記載されている特異的な例示的抗体のいずれかまたは表１に記載されている例示的抗体のいずれかのＣＤＲ配列を有する抗体と同じエピトープまたはエピトープのポーションに結合する抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体を含む。同様に、本発明はまた、Ｆｅｌ  ｄ１またはＦｅｌ  ｄ１断片との結合に関して、本明細書の表１に記載されている特異的な例示的抗体のいずれかまたは表１に記載されている例示的抗体のいずれかのＣＤＲ配列を有する抗体と競合する抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体を含む。
【０１９３】
本技術分野において公知の慣用的な方法を使用することにより、抗体が、参照抗Ｆｅｌ
ｄ１抗体と同じエピトープに結合するか、またはこれと結合に関して競合するか否か容易に決定することができる。例えば、被験抗体が、本発明の参照抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体と同じエピトープに結合するか否か決定するため、飽和条件下で参照抗体をＦｅｌ  ｄ１タンパク質またはペプチドに結合させる。次に、このＦｅｌ  ｄ１分子に結合する被験抗体の能力を評価する。被験抗体が、参照抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体との飽和結合後のＦｅｌ  ｄ１に結合することができる場合、被験抗体が、参照抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体とは異なるエピトープに結合すると結論づけることができる。他方では、被験抗体が、参照抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体との飽和結合後のＦｅｌ  ｄ１分子に結合することができない場合、被験抗体は、本発明の参照抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体によって結合されているエピトープと同じエピトープに結合することができる。
【０１９４】
抗体が、結合に関して参照抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体と競合するか否か決定するため、２種の配向性において上に記載されている結合手法を行う。第１の配向性において、参照抗体を飽和条件下でＦｅｌ  ｄ１分子に結合させ、続いて、Ｆｅｌ  ｄ１分子への被験抗体の結合を評価する。第２の配向性において、被験抗体を飽和条件下でＦｅｌ  ｄ１分子に結合させ、続いてＦｅｌ  ｄ１分子への参照抗体の結合を評価する。両方の配向性において、第１の（飽和）抗体のみが、Ｆｅｌ  ｄ１分子に結合することができる場合、被験抗体および参照抗体が、Ｆｅｌ  ｄ１への結合に関して競合すると結論づけられる。当業者に認められる通り、結合に関して参照抗体と競合する抗体は、参照抗体と同一エピトープに必ずしも結合しないが、重複または隣接するエピトープに結合することにより参照抗体の結合を立体的に遮断し得る。
【０１９５】
２種の抗体は、それぞれが抗原への他方の結合を競合的に阻害（遮断）する場合、同じまたは重複するエピトープに結合する。すなわち、１、５、１０、２０または１００倍過剰な一方の抗体は、競合的結合アッセイにおいて測定して、他方の結合を少なくとも５０％だが、好ましくは７５％、９０％またはさらには９９％阻害する（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９０年５０巻：１４９５〜１５０２頁を参照）。あるいは、一方の抗体の結合を低下または排除する抗原における基本的にあらゆるアミノ酸変異が、他方の結合を低下または排除する場合、２種の抗体は、同じエピトープを有する。一方の抗体の結合を低下または排除するいくつかのアミノ酸変異が、他方の結合を低下または排除する場合、２種の抗体は、重複するエピトープを有する。
【０１９６】
続いて、追加の慣用的な実験法（例えば、ペプチド変異および結合解析）を実行して、観察された被験抗体の結合の欠如が、実際に、参照抗体と同じエピトープへの結合によるものであるか、あるいは立体的遮断（または別の現象）が、観察される結合の欠如の原因であるかを確認することができる。このような選別の実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、表面プラズモン共鳴法、フローサイトメトリーまたは本技術分野において利用できる他のいずれかの定量的もしくは定性的抗体結合アッセイを使用して行うことができる。
【０１９７】
イムノコンジュゲート（ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）
本発明は、ネコのフケもしくはネコ、またはネコが存在し得る環境の区域に存在するＦｅｌ  ｄ１アレルゲンに対するアレルギー応答の重症度を低下させることのできる、あるいは鼻炎、結膜炎または呼吸困難等、ネコ、ネコのフケまたはＦｅｌ  ｄ１アレルゲンへの曝露に伴う少なくとも１種の症状またはその重症度を改善することのできる薬剤等、治療部分にコンジュゲートされたヒト抗Ｆｅｌ  ｄ１モノクローナル抗体（「イムノコンジュゲート」）を包含する。係る薬剤は、コルチコステロイド、Ｆｅｌ  ｄ１に対する第２の異なる抗体またはワクチンとなり得る。Ｆｅｌ  ｄ１抗体にコンジュゲートすることのできる治療部分の種類は、処置しようとする状態および達成されるべき所望の治療効果を考慮するであろう。あるいは、所望の治療効果が、鼻炎または結膜炎等が挙げられるがこれらに限定されない、Ｆｅｌ  ｄ１アレルゲンへの曝露に伴う続発症もしくは症状または係る曝露に起因する他のいずれかの状態を処置することである場合、状態の続発症もしくは症状の処置にまたは本発明の抗体のいずれかの副作用の緩和に適切な薬剤をコンジュゲートすることが有利となり得る。イムノコンジュゲートの形成に適した薬剤の例は、本技術分野において公知であり、例えば、ＷＯ０５／１０３０８１を参照されたい。
【０１９８】
多特異的抗体
本発明の抗体は、単一特異的、二重特異的または多特異的となり得る。多特異的抗体は、１種の標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的となり得る、あるいは２種以上の標的ポリペプチドに特異的な抗原結合ドメインを含有し得る。例えば、Ｔｕｔｔら、１９９１年、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７巻：６０〜６９頁；Ｋｕｆｅｒら、２００４年、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２巻：２３８〜２４４頁を参照されたい。本発明の抗体は、別の機能分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質に連結するまたはこれと同時発現させることができる。例えば、抗体またはその断片は、別の抗体または抗体断片等、１種または複数の他の分子実体へと機能的に連結して（例えば、化学的カップリング、遺伝的融合、非共有結合的会合または他の方法により）、第２の結合特異性を有する二重特異的または多特異的抗体を産生することができる。例えば、本発明は、免疫グロブリンの一方の腕が、Ｆｅｌ  ｄ１の鎖１またはその断片に特異的となり、免疫グロブリンの他方の腕が、Ｆｅｌ  ｄ１の鎖２または第２の治療標的に特異的となることができる、あるいは治療部分にコンジュゲートすることができる二重特異的抗体を含む。
【０１９９】
本発明のある特定の例示的実施形態は、二重特異的抗体である二重特異的抗原結合分子を含む。二重特異的抗体の各抗原結合ドメインは、重鎖可変ドメイン（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変ドメイン（ＬＣＶＲ）を含む。ＨＣＶＲは、ＶＨ領域と称することもでき、ＬＣＶＲは、ＶＬ領域と称することもできる。典型的には、各ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲは、４個のＦＲと共に散在する３個のＣＤＲを含み、これらはアミノ末端からカルボキシ末端へと次の順序で配置される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。ＨＣＶＲ内の３個のＣＤＲは、本明細書においてＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３と称することができ、一方、ＬＣＶＲ内の３個のＣＤＲは、本明細書においてＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３と称することができる。
【０２００】
本発明の二重特異的抗原結合分子において、各抗原結合ドメインは、完全抗体分子または抗体の抗原結合性断片を含む、またはこれからなることができる。用語、抗体の「抗原結合ポーション」、抗体の「抗原結合性断片」その他は、本明細書において、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、いずれかの天然に存在する、酵素により得ることができる、合成のまたは遺伝子改変されたポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。抗体の抗原結合性断片は、例えば、タンパク質分解による消化または抗体可変ドメインおよび任意選択で抗体定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を含む組換え遺伝子操作技法等、いずれかの適した標準技法を使用して、完全抗体分子から得られ得る。係るＤＮＡは、公知であるおよび／または例えば、商業的供給源、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ抗体ライブラリーを含む）から容易に入手することができる、または合成することができる。ＤＮＡを配列決定し、化学的にまたは分子生物学的技法を使用することにより操作して、例えば、適した構成へと１種または複数の可変および／または定常ドメインを配置する、あるいはコドンを導入する、システイン残基を作出する、アミノ酸を修飾、付加または欠失させること等ができる。
【０２０１】
本発明の二重特異的抗原結合分子に含まれ得る抗原結合性断片の非限定例として、（ｉ）Ｆａｂ断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）Ｆｄ断片；（ｉｖ）Ｆｖ断片；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂ断片；および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位が挙げられる。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディ等）、小モジュラー免疫医薬（ＳＭＩＰ）およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメイン等、他の操作された分子もまた、本明細書における表現「抗原結合性断片」の内に包含されている。
【０２０２】
抗体の抗原結合性断片は、典型的には、少なくとも１個の可変ドメインを含むであろう。可変ドメインは、いかなるサイズまたはアミノ酸組成のものであってもよく、一般に、１個または複数のフレームワーク配列と隣接するまたはこれとインフレームである少なくとも１個のＣＤＲを含むであろう。ＶＬドメインと会合したＶＨドメインを有する抗原結合性断片において、ＶＨおよびＶＬドメインは、いずれかの適した配置で互いに対して位置することができる。例えば、可変領域は、二量体となり、ＶＨ−ＶＨ、ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＬ二量体を含有することができる。あるいは、抗体の抗原結合性断片は、単量体のＶＨまたはＶＬドメインを含有することができる。
【０２０３】
ある特定の実施形態では、二重特異的抗原結合分子の抗原結合性断片は、少なくとも１個の定常ドメインに共有結合により連結された少なくとも１個の可変ドメインを含有することができる。二重特異的抗原結合分子の抗原結合ドメイン内に見出すことのできる可変および定常ドメインの非限定的な例示的構成として、（ｉ）ＶＨ−ＣＨ１；（ｉｉ）ＶＨ−ＣＨ２；（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＨ３；（ｉｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉ）ＶＨ−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉｉ）ＶＨ−ＣＬ；（ｖｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１；（ｉｘ）ＶＬ−ＣＨ２；（ｘ）ＶＬ−ＣＨ３；（ｘｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｘｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｘｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ２−ＣＨ３；および（ｘｉｖ）ＶＬ−ＣＬを挙げることができる。上に列挙する例示的構成のうちいずれかを含む可変および定常ドメインのいずれかの構成において、可変および定常ドメインは、互いに直接的に連結されていても、あるいは完全または部分的ヒンジまたはリンカー領域により連結されていてもよい。ヒンジ領域は、少なくとも２個（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０個以上）のアミノ酸からなり得、これにより、単一ポリペプチド分子における隣接する可変および／または定常ドメインの間に可撓性または半可撓性連結をもたらされる。さらに、二重特異的抗原結合分子の抗原結合ドメインは、互いにおよび／または１個または複数の単量体ＶＨまたはＶＬドメインと非共有結合的に会合した（例えば、ジスルフィド結合（複数可）により）、上に列挙する可変および定常ドメイン構成のうちいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（または他の多量体）を含むことができる。
【０２０４】
第１の抗原結合ドメインおよび第２の抗原結合ドメインは、互いに直接的にまたは間接的に接続して、二重特異的抗原結合分子を形成することができる。あるいは、第１の抗原結合ドメインおよび第２の抗原結合ドメインはそれぞれ、別々の多量体形成ドメインに接続することができる。ある１個の多量体形成ドメインと別の多量体形成ドメインとの会合は、２個の抗原結合ドメイン間の会合を容易にし、これにより、二重特異的抗原結合分子を形成する。本明細書において、「多量体形成ドメイン」は、同じまたは類似の構造または構成の第２の多量体形成ドメインと会合する能力を有する、いずれかの高分子、タンパク質、ポリペプチド、ペプチドまたはアミノ酸である。例えば、多量体形成ドメインは、免疫グロブリンＣＨ３ドメインを含むポリペプチドとなり得る。多量体形成構成成分の非限定例は、免疫グロブリンのＦｃポーション、例えば、アイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４ならびに各アイソタイプ群内のいずれかのアロタイプから選択されるＩｇＧのＦｃドメインである。ある特定の実施形態では、多量体形成ドメインは、少なくとも１個のシステイン残基を含有する１〜約２００アミノ酸の長さのＦｃ断片またはアミノ酸配列となり得る。他の実施形態では、多量体形成ドメインは、システイン残基または短いシステイン含有ペプチドとなり得る。他の多量体形成ドメインは、ロイシンジッパー、ヘリックス−ループモチーフまたはコイルドコイルモチーフを含むまたはこれからなるペプチドまたはポリペプチドを含む。
【０２０５】
いかなる二重特異的抗体フォーマットまたは技術を使用して、本発明の二重特異的抗原結合分子を作製してもよい。例えば、第１の抗原結合特異性を有する抗体またはその断片は、第２の抗原結合特異性を有する別の抗体または抗体断片等、１種または複数の他の分子実体に機能的に連結して（例えば、化学的カップリング、遺伝的融合、非共有結合的会合または他の方法により）、二重特異的抗原結合分子を産生することができる。
【０２０６】
本発明の文脈において使用することのできる例示的な二重特異的抗体フォーマットは、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）ＣＨ３ドメインおよび第２のＩｇ  ＣＨ３ドメインの使用であって、第１および第２のＩｇ  ＣＨ３ドメインが、互いに少なくとも１個のアミノ酸が異なり、少なくとも１個のアミノ酸の差異が、アミノ酸の差異を欠く二重特異的抗体と比較してプロテインＡへの二重特異的抗体の結合を低下させる使用を含む。一実施形態では、第１のＩｇ  ＣＨ３ドメインは、プロテインＡに結合し、第２のＩｇ  ＣＨ３ドメインは、Ｈ９５Ｒ修飾（ＩＭＧＴエクソンナンバリングによる；ＥＵナンバリングによるＨ４３５Ｒ）等、プロテインＡ結合を低下または消失させる変異を含有する。第２のＣＨ３は、Ｙ９６Ｆ修飾（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＹ４３６Ｆ）をさらに含むことができる。第２のＣＨ３内に見出すことのできるさらなる修飾は、ＩｇＧ１抗体の場合、Ｄ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７ＭおよびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７ＭおよびＶ４２２Ｉ）；ＩｇＧ２抗体の場合、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２ＮおよびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴ；ＥＵによるＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２ＮおよびＶ４２２Ｉ）；ならびにＩｇＧ４抗体の場合、Ｑ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９ＱおよびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＱ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９ＱおよびＶ４２２Ｉ）を含む。上に記載されている二重特異的抗体フォーマットにおける変種は、本発明の範囲内であるとみなされる。
【０２０７】
本発明の文脈において使用することのできる他の例示的な二重特異的フォーマットとして、例えば、ｓｃＦｖに基づくまたはダイアボディ二重特異的フォーマット、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ融合体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）−Ｉｇ、クアドローマ、ノブイントゥーホール（ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ）、共通軽鎖（例えば、ノブイントゥーホールを有する共通軽鎖等）、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＣｒｏｓｓＦａｂ、（ＳＥＥＤ）ボディ、ロイシンジッパー、デュオボディ（Ｄｕｏｂｏｄｙ）、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、二重作用Ｆａｂ（ＤＡＦ）−ＩｇＧおよびＭａｂ２二重特異的フォーマットが挙げられるがこれらに限定されない（例えば、前述のフォーマットの総説に関して、Ｋｌｅｉｎら、２０１２年、ｍＡｂｓ  ４巻：６号、１〜１１頁およびこれに引用されている参考文献を参照）。二重特異的抗体は、ペプチド／核酸コンジュゲーションを使用して構築することもでき、例えば、直交性の化学反応性を有する非天然アミノ酸を使用して、部位特異的抗体−オリゴヌクレオチドコンジュゲートを生成すると、これは、特定された組成、結合価および幾何学を有する多量体の複合体へと自己集合する（例えば、Ｋａｚａｎｅら、Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．［Ｅｐｕｂ：２０１２年１２月４日］を参照）。
【０２０８】
治療的投与および製剤
本発明は、本発明の抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体またはその抗原結合性断片を含む治療組成物を提供する。本発明に従った治療組成物の投与は、静脈内、皮下、筋肉内、鼻腔内を含むがこれらに限定されない適した経路による、製剤に取り込まれて伝達、送達、寛容性その他の向上をもたらす適した担体、賦形剤および他の薬剤と共になされる投与であろう。多数の適切な製剤は、あらゆる薬剤師に公知の処方集に見出すことができる：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ。これらの製剤は、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質（カチオン性またはアニオン性）含有小胞（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）等）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油型および油中水型エマルジョン、エマルジョンカーボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲルならびにカーボワックスを含有する半固体混合物を含む。Ｐｏｗｅｌｌら、「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ
ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」ＰＤＡ（１９９８年）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ  ５２巻：２３８〜３１１頁も参照されたい。
【０２０９】
抗体の用量は、投与しようとする被験体の年齢およびサイズ、標的疾患、状態、投与経路その他に応じて変動し得る。本発明の抗体が、Ｆｅｌ  ｄ１に対する感受性を有する個体におけるネコまたはネコのフケへの曝露に伴う鼻炎または結膜炎を処置するために、あるいはネコアレルゲンに対するアナフィラキシー応答を防止するために、あるいはアレルギー応答の重症度を低減させるために使用される場合、通常、約０．０１〜約３０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは、約０．０２〜約７、約０．０３〜約５または約０．０５〜約３ｍｇ／ｋｇ体重の単一用量で、本発明の抗体を静脈内投与することが有利である。状態の重症度に応じて、処置の頻度および持続時間を調整することができる。ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、少なくとも約０．１ｍｇ〜約８００ｍｇ、約１〜約５００ｍｇ、約５〜約３００ｍｇまたは約１０〜約２００ｍｇ、〜約１００ｍｇもしくは〜約５０ｍｇの初回用量として投与することができる。ある特定の実施形態では、初回用量に続いて、初回用量とおよそ同じまたはこれに満たないものとすることができる量で、抗体またはその抗原結合性断片の第２のまたは複数のその後の用量の投与を行うことができ、その後の用量は、少なくとも１日間〜３日間；少なくとも１週間、少なくとも２週間；少なくとも３週間；少なくとも４週間；少なくとも５週間；少なくとも６週間；少なくとも７週間；少なくとも８週間；少なくとも９週間；少なくとも１０週間；少なくとも１２週間；または少なくとも１４週間隔てられる。
【０２１０】
様々な送達系が公知であり、本発明の薬学的組成物の投与に使用することができ、例えば、リポソーム中のカプセル化、マイクロパーティクル、マイクロカプセル、変異体ウイルスを発現することのできる組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシスが挙げられる（例えば、Ｗｕら、（１９８７年）Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．２６２巻：４４２９〜４４３２頁を参照）。導入の方法として、皮内、経皮、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外および経口経路が挙げられるがこれらに限定されない。組成物は、いずれかの簡便な経路により、例えば、注入またはボーラス注射により、上皮または粘膜皮膚内層（例えば、口腔粘膜、直腸および腸管粘膜等）を通した吸収により投与することができ、他の生物学的に活性な薬剤と共に投与することができる。投与は、全身性であっても局所性であってもよい。
【０２１１】
薬学的組成物は、小胞、特に、リポソームにおいて送達することもできる（例えば、Ｌａｎｇｅｒ（１９９０年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９巻：１５２７〜１５３３頁を参照）。
【０２１２】
ある特定の状況において、薬学的組成物は、放出制御系において送達することができる。一実施形態では、ポンプを使用することができる。別の実施形態では、ポリマー材料を使用することができる。さらに別の実施形態では、放出制御系は、組成物の標的に近接して置くことができ、よって、全身性用量の一部分のみを必要とする。
【０２１３】
注射用調製物は、静脈内、皮下、皮内および筋肉内注射、点滴注入等のための剤形を含むことができる。これらの注射用調製物は、公に知られた方法によって調製することができる。例えば、注射用調製物は、例えば、注射のために従来から使用されてきた無菌水性媒体または油性媒体において、上に記載されている抗体またはその塩を溶解、懸濁または乳化することにより調製することができる。注射用の水性媒体として、例えば、アルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、水素化ヒマシ油のＨＣＯ−５０（ポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物）］等、適切な可溶化剤と組み合わせて使用することのできる、生理食塩水、グルコースを含有する等張性溶液および他の補助的薬剤等が存在する。油性媒体として、例えば、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール等、可溶化剤と組み合わせて使用することができる、ゴマ油、ダイズ油等が用いられている。このように調製された注射液は、好ましくは、適切なアンプル内に充填される。
【０２１４】
本発明の薬学的組成物は、標準的な針およびシリンジにより皮下にまたは静脈内に送達することができる。加えて、皮下送達に関して、ペン型送達装置（ｐｅｎ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｄｅｖｉｃｅ）は、本発明の薬学的組成物の送達において容易に適用される。係るペン型送達装置は、再使用可能または使い捨てとなり得る。再使用可能なペン型送達装置は、一般に、薬学的組成物を含有する交換可能なカートリッジを利用する。カートリッジ内の薬学的組成物が全て投与され、カートリッジが空となったら、空のカートリッジを容易に廃棄し、薬学的組成物を含有する新しいカートリッジと交換することができる。続いて、ペン型送達装置を再使用することができる。使い捨てペン型送達装置において、交換可能なカートリッジは存在しない。寧ろ、使い捨てペン型送達装置は、装置内のリザーバーに保たれた薬学的組成物を予め充填した状態で届けられる。リザーバーから薬学的組成物が空になったら、装置全体が廃棄される。
【０２１５】
多数の再使用可能なペン型および自動注入送達装置が、本発明の薬学的組成物の皮下送達において適用される。例として、ほんの数例ではあるが、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ  Ｍｕｍｆｏｒｄ、Ｉｎｃ．、英国ウッドストック）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、スイス、ブルグドルフ）、ＨＵＭＡＬＯＧ  ＭＩＸ  ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ  ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏ．、インディアナ州インディアナポリス）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ、デンマーク、コペンハーゲン）、ＮＯＶＯＰＥＮ  ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ、デンマーク、コペンハーゲン）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ニュージャージー州フランクリンレイクス）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）およびＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ、ドイツ、フランクフルト）が挙げられるがこれらに確かに限定されない。本発明の薬学的組成物の皮下送達において適用される使い捨てペン型送達装置の例として、ほんの数例ではあるが、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）自動注入装置（Ａｍｇｅｎ、カリフォルニア州サウザンドオークス）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、ドイツ、シュトゥットガルト）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ、Ｌ．Ｐ．）およびＨＵＭＩＲＡ（商標）ペン（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｓ、イリノイ州アボットパーク）が挙げられるがこれらに確かに限定されない。
【０２１６】
有利には、上に記載されている経口または非経口的使用のための薬学的組成物は、活性成分の用量を適合させるのに適した単位用量の剤形へと調製される。単位用量の係る剤形として、例えば、錠剤、丸剤、カプセル、注射（アンプル）、坐剤等が挙げられる。含有されている先述の抗体の量は一般に、単位用量の剤形当たり約５〜約５００ｍｇである；特に注射形態において、先述の抗体は、約５〜約１００ｍｇで、他の剤形では約１０〜約２５０ｍｇで含有されることが好ましい。
【０２１７】
抗体の治療的使用
本抗体は、それ自体とＦｅｌ  ｄ１との相互作用により、ネコ、ネコのフケへのもしくはＦｅｌ  ｄ１タンパク質を含有する環境への個体の曝露後の一次応答、または眼のかゆみ、結膜炎、鼻炎、喘鳴、呼吸困難等、アレルギー応答に伴う少なくとも１種の症状の処置に、あるいはより重篤なアナフィラキシー応答を含むＦｅｌ  ｄ１アレルゲンに対する二次応答の防止に、あるいはネコアレルゲンへの再曝露後の症状の重症度、持続時間および／または頻度の低減に有用である。したがって、本発明の抗体を予防的にまたは治療的に使用できることが想定される。
【０２１８】
本発明のさらにまた別の実施形態では、本抗体は、ネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物および／またはＦｅｌ  ｄ１タンパク質に対する感受性を患う患者を処置するための薬学的組成物の調製に使用される。本発明のさらに別の実施形態では、本抗体は、Ｆｅｌ  ｄ１への一次曝露の重症度を低下させるための、あるいはＦｅｌ  ｄ１に対するアレルギー応答の重症度、持続時間および／または回数を低下させるための薬学的組成物の調製に使用される。本発明のさらなる実施形態では、本抗体は、コルチコステロイド、ワクチン、アレルゲン特異的免疫療法（ＳＩＴ）または当業者に公知の他のいずれかの対症療法を含む、ネコアレルゲンの処置に有用な他のいずれかの薬剤による補助的療法として使用される。
【０２１９】
併用療法
併用療法は、本発明の抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体と、本発明の抗体または本発明の抗体の生物学的に活性な断片と有利に組み合わせることのできるいずれかの追加的な治療剤とを含むことができる。
【０２２０】
例えば、第２の治療剤は、コルチコステロイド等、ネコ、ネコのフケ、ネコの毛もしくはこれらの抽出物またはＦｅｌ  ｄ１への曝露、あるいはネコが存在する環境への曝露後のアレルギー症状の低下に役立つよう用いることができる。抗体は、Ｆｅｌ  ｄ１アレルゲンに特異的なワクチン等、他の療法と併せて使用することもできる。治療的に活性な追加の構成成分（複数可）は、本発明の抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体の投与の前に、これと同時発生的に、またはその後に投与することができる。本開示の目的のために、係る投与レジメンは、第２の治療的に活性を有する構成成分「と組み合わせた」抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体の投与とみなされる。
【０２２１】
投与レジメン
本発明のある特定の実施形態によると、１種または複数の抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体（抗体の組み合わせ）または二重特異的抗原結合分子の複数用量は、定義された時間経過にわたって被験体に投与することができる。本発明のこの態様に係る方法は、本発明の抗体、抗体の組み合わせまたは二重特異的抗原結合分子の複数用量を被験体に逐次的に投与するステップを含む。本明細書において、「逐次的に投与する」は、抗体、抗体の組み合わせまたは二重特異的抗原結合分子の各用量が、異なる時点において、例えば、所定の間隔（例えば、数時間、数日間、数週間または数ヶ月間）によって隔てられた異なる日に被験体に投与されることを意味する。本発明は、抗体、抗体の組み合わせまたは二重特異的抗原結合分子の単一の初回用量と、続く抗体の１または複数の二次用量と、任意選択で続く抗体の１または複数の三次用量を患者に逐次的に投与するステップを含む方法を含む。
【０２２２】
用語「初回用量」、「二次用量」および「三次用量」は、本発明の抗体、抗体の組み合わせまたは二重特異的抗原結合分子の投与の時系列を指す。よって、「初回用量」は、処置レジメンの初めに投与される用量であり（「ベースライン用量」とも称される）；「二次用量」は、初回用量の後に投与される用量であり；「三次用量」は、二次用量の後に投与される用量である。初回、二次および三次用量は全て、同じ量の抗体、抗体の組み合わせまたは二重特異的抗原結合分子を含有することができるが、一般に、投与頻度の観点から互いに異なっていてもよい。しかし、ある特定の実施形態では、初回、二次および／または三次用量に含有されている抗体、抗体の組み合わせまたは二重特異的抗原結合分子の量は、処置過程において互いに変動する（例えば、適宜、上方または下方に調整される）。ある特定の実施形態では、処置レジメンの初めに「負荷用量」として２以上の（例えば、２、３、４または５）用量が投与され、続いてより少ない頻度で投与されるその後の用量（例えば、「維持用量」）が投与される。
【０２２３】
本発明の例示的な一実施形態では、各二次および／または三次用量は、直前の用量から１〜２６（例えば、１、１１／２、２、２１／２、３、３１／２、４、４１／２、５、５１／２、６、６１／２、７、７１／２、８、８１／２、９、９１／２、１０、１０１／２、１１、１１１／２、１２、１２１／２、１３、１３１／２、１４、１４１／２、１５、１５１／２、１６、１６１／２、１７、１７１／２、１８、１８１／２、１９、１９１／２、２０、２０１／２、２１、２１１／２、２２、２２１／２、２３、２３１／２、２４、２４１／２、２５、２５１／２、２６、２６１／２またはそれより長い）週間後に投与される。語句「直前の用量」は、本明細書において、一連の複数の投与において、介在する用量が存在しない順番において丁度次の用量の投与の前に患者に投与される抗体、抗体の組み合わせまたは二重特異的抗原結合分子の用量を意味する。
【０２２４】
本発明の本態様に係る方法は、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する抗体、抗体の組み合わせまたは二重特異的抗原結合分子のいずれかの数の二次および／または三次用量を患者に投与するステップを含むことができる。例えば、ある特定の実施形態では、単一の二次用量のみが、患者に投与される。他の実施形態では、２もしくはそれより多い（例えば、２、３、４、５、６、７、８もしくはそれより多い）二次用量が、患者に投与される。同様に、ある特定の実施形態では、単一の三次用量のみが、患者に投与される。他の実施形態では、２以上の（例えば、２、３、４、５、６、７、８もしくはそれより多い）三次用量が、患者に投与される。
【０２２５】
複数の二次用量を含む実施形態では、各二次用量は、他の二次用量と同じ頻度で投与することができる。例えば、各二次用量は、直前の用量の１〜２週間後に患者に投与することができる。同じく、複数の三次用量を含む実施形態では、各三次用量は、他の三次用量と同じ頻度で投与することができる。例えば、各三次用量は、直前の用量の２〜４週間後に患者に投与することができる。あるいは、二次および／または三次用量が患者に投与される頻度は、処置レジメンの過程にわたって変動し得る。投与の頻度は、医師によって、診察後に個々の患者の必要に応じて処置過程の間に調整することもできる。
【０２２６】
抗体の診断的使用
本発明の抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体を使用して、例えば、診断目的で、試料におけるＦｅｌ  ｄ１を検出および／または測定することもできる。Ｆｅｌ  ｄ１が原因であると考えられるアレルギー応答の確認が、本発明の抗体のうちいずれか１種または複数の使用により、いずれかのＦｅｌ  ｄ１の存在を測定することによってなされ得ることが想定される。Ｆｅｌ  ｄ１の例示的な診断アッセイは、例えば、患者から得られた試料を本発明の抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体と接触させるステップを含むことができ、抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体は、検出可能な標識またはレポーター分子で標識されている、あるいは患者試料からＦｅｌ  ｄ１タンパク質を選択的に単離するための捕捉リガンドとして使用されている。あるいは、未標識の抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体は、それ自体が検出可能に標識されている二次抗体と組み合わせて診断適用において使用することができる。検出可能な標識またはレポーター分子は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓもしくは１２５Ｉ等、放射性同位元素；フルオレセインイソチオシアネートもしくはローダミン等、蛍光もしくは化学発光部分；またはアルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、西洋わさびペルオキシダーゼもしくはルシフェラーゼ等、酵素となり得る。試料におけるＦｅｌ  ｄ１の検出または測定に使用することのできる特異的な例示的アッセイとして、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）および蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）が挙げられる。
【０２２７】
本発明に係るＦｅｌ  ｄ１診断アッセイにおいて使用することのできる試料は、正常または病的状態における、検出可能な量のＦｅｌ  ｄ１タンパク質またはその断片を含有する、患者から得ることができるいずれかの組織または流体試料を含む。一般に、健康／非アレルギー患者（例えば、Ｆｅｌ  ｄ１の存在に伴う感受性に罹患していない患者）から得られる特定の試料におけるＦｅｌ  ｄ１のレベルを測定して、Ｆｅｌ  ｄ１のベースラインまたは標準レベルを最初に確立するであろう。続いて、Ｆｅｌ  ｄ１のこのベースラインレベルは、ネコのフケにおけるＦｅｌ  ｄ１に対する感受性または係る状態に関連する症状を有すると疑われる個体から得られる試料において測定されたＦｅｌ  ｄ１のレベルに対して比較することができる。
【実施例】
【０２２８】
次の実施例は、本発明の方法および組成物を作製および使用する方法の完全な開示および説明を当業者に提供できるように示されており、本発明者らが自身の発明として考慮する範囲の限定を企図しない。使用された数（例えば、量、温度等）に対する正確度を確保するための努力をしたが、一部の実験誤差および偏差が考慮されるべきである。他に断りがなければ、部は、重量部であり、分子量は、平均分子量であり、温度はセ氏温度であり、圧力は大気圧またはその近辺である。
【０２２９】
（実施例１）Ｆｅｌ  ｄ１に対するヒト抗体の生成
次のうちいずれか１種を含む免疫原を使用して、Ｆｅｌ  ｄ１に対する抗体を生成することができる。ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、商業的に購入しても（例えば、Ｉｎｄｏｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから、＃ＬＴＮ−ＦＤ１−１）、多段階カラムクロマトグラフィーによりネコの毛またはフケから単離してもよく（例えば、Ｃｈａｐｍａｎ  ＭＤら、（１９８８年）、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０巻：８１２〜８１８頁を参照）、あるいは組換えにより産生してもよい（Ｆｅｌ  ｄ１の鎖１（鎖ＡまたはＦＥＬＤ１  Ａとも称される；配列番号３９２も参照）の全長アミノ酸配列に関するＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ３０４３８またはＮＰ＿００１０４１６１８．１と、Ｆｅｌ  ｄ１の鎖２（鎖ＢまたはＦＥＬＤ  Ｂとも称される；配列番号３９３も参照）の全長アミノ酸配列に関するＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ３０４４０またはＮＰ＿００１０４１６１９．１を参照）全長天然Ｆｅｌ  ｄ１（ｎＦｅｌ  ｄ１）、あるいはＦｅｌ  ｄ１タンパク質の鎖１もしくは鎖２のいずれかの断片または鎖１および鎖２の両方由来の断片等、一次免疫原で免疫化し、続いて二次免疫原でまたは天然タンパク質の免疫原的に活性な断片で免疫化したマウスから得られる。動物は、鎖１タンパク質単独もしくは鎖２タンパク質単独でのいずれかで、または逐次的にもしくは同時発生的に投与した鎖１および鎖２タンパク質の両方で免疫化することができる。当業者に公知の様々な連結またはスペーサー戦略と共に、鎖１および鎖２のポーションを使用して、様々な構築物を調製することができる。このような構築物を単独でまたは様々な組み合わせで使用して、ｉｎ  ｖｉｖｏで抗体応答を誘発することができる。例えば、配列番号３８５、３９４、３９５、３９６または３９７に例証されている構築物等、組換えＦｅｌ  ｄ１構築物またはこれらの断片を免疫原として使用することができる。
【０２３０】
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、天然Ｆｅｌ  ｄ１の生物学的に活性なおよび／または免疫原性の断片、またはその活性断片をコードするＤＮＡ等、一次免疫原で免疫化されたマウスから得られる。断片は、Ｆｅｌ  ｄ１の鎖１および／または鎖２のいずれかのＮ末端またはＣ末端ドメインに由来することができる。
【０２３１】
ある特定の実施形態では、組換えにより産生されるＦｅｌ  ｄ１免疫原をＫａｉｓｅｒらに記載されている通りＦｅｌ  ｄ１の２本の鎖の直接的な融合によって作製し、天然Ｆｅｌ  ｄ１と類似のリフォールディングパターンを有する融合産物を産生することができる（Ｋａｉｓｅｒ，  Ｌ．ら、（２００３年）、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．２７８巻（３９号）：３７７３０〜３７７３５頁）。ある特定の実施形態では、免疫原は、配列番号３８５、３９４、３９５、３９６または３９７の構築物に示すもの等、融合タンパク質となることができ、続いて二次免疫原または天然もしくは組換えにより産生されたＦｅｌ
ｄ１の免疫原的に活性な断片で免疫化することができる。
【０２３２】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されている試験において使用される組換えＦｅｌ  ｄ１タンパク質構築物は、ｉ）連続的な直列融合体として連結されたＦｅｌ  ｄ１
Ｂ鎖（鎖２）およびＦｅｌ  ｄ１  Ａ鎖（鎖１）（Ｆｅｌ  ｄ１  Ｂ鎖がＮ末端にある）またはｉｉ）Ｆｅｌ  ｄ１  Ａ鎖がＮ末端で、続いて可撓性リンカー［（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３］、続いてＦｅｌ  ｄ１  Ｂが配置された連続的な直列融合体のいずれかからなる。これらの構築物は、下に示す通り、Ｃ末端タグ（ｍｙｃ−ｍｙｃ−Ｈｉｓ６またはマウスＩｇＧ２ａ  Ｆｃ領域）を含むこともできる。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞においてタンパク質を発現させた。ＣＨＯ細胞における発現を促進するために使用される外来性シグナル配列は、配列表に含まれていない。
【０２３３】
ある特定の実施形態では、免疫原は、次のうちいずれか１種または複数を含む融合タンパク質となり得る：ｉ）Ｆｅｌ  ｄ１の鎖１のアミノ酸残基２３〜９２（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ３０４３８と、配列番号３９２も参照）のＮ末端とＣ末端を介して直接的に融合されたＦｅｌ  ｄ１の鎖２のアミノ酸残基１８〜１０９（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ３０４４０と、配列番号３９３も参照）；ｉｉ）Ｆｅｌ  ｄ１の鎖２のアミノ酸残基１８〜１０９（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ３０４４０と、配列番号３９３も参照）のＮ末端にＣ末端を介して融合されたＦｅｌ  ｄ１の鎖１のアミノ酸残基２３〜９２（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ３０４３８と、配列番号３９２も参照）；ｉｉｉ）配列番号３９４または３９６に示す構築物等、Ｆｅｌ  ｄ１の鎖１のアミノ酸残基１９〜８８（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１０４１６１８．１を参照）のＮ末端とＣ末端を介して直接的に融合されたＦｅｌ  ｄ１の鎖２のアミノ酸残基１８〜１０９（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１０４１６１９．１を参照）；ｉｖ）Ｆｅｌ  ｄ１の鎖２のアミノ酸残基１８〜１０９（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１０４１６１９．１を参照）のＮ末端にＣ末端を介して融合されたＦｅｌ  ｄ１の鎖１のアミノ酸残基１９〜８８（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１０４１６１８．１を参照）。配列番号３９５も参照されたい。ある特定の実施形態では、融合タンパク質は、ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグ等、構築物のＣ末端にタグを有し得る（係る構築物に関して、配列番号３８５、３９６または３９７を参照）。関連する実施形態では、融合タンパク質は、構築物のＣ末端にカップリングされたマウスＦｃを有し得る（係る構築物に関して、配列番号３９４または３９５を参照）。ある特定の実施形態では、鎖１および２は、当業者に公知のリンカー、例えば、（Ｇ４Ｓ）３を介してカップリングされている（係る構築物に関して、配列番号３９５および３９７を参照）。
【０２３４】
ある特定の実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的に結合する抗体は、前述の領域の断片、または本明細書に記載されている領域のＮもしくはＣ末端のいずれか一方もしくは両方から指定の領域を約５〜約２０アミノ酸残基超えて延長するペプチドを使用して調製することができる。ある特定の実施形態では、Ｆｅｌ  ｄ１特異的抗体の調製において、前述の領域またはその断片のいかなる組み合わせを使用してもよい。ある特定の実施形態では、単一特異的、二重特異的または多特異的抗体を調製するために、Ｆｅｌ  ｄ１の前述の領域のうちいずれか１種もしくは複数またはその断片を使用することができる。
【０２３５】
上に記す通り、免疫原として使用された全長タンパク質またはその断片を、ヒト免疫グロブリン重およびカッパー軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを含むＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスに、免疫応答を刺激するためのアジュバントと共に直接的に投与した。Ｆｅｌ  ｄ１特異的イムノアッセイにより抗体免疫応答をモニターした。所望の免疫応答が達成されたら、脾細胞を収集し、マウス骨髄腫細胞と融合してその生存能を保ち、ハイブリドーマ細胞株を形成した。ハイブリドーマ細胞株をスクリーニングおよび選択して、Ｆｅｌ  ｄ１特異的抗体を産生する細胞株を同定した。この技法および上に記載されている様々な免疫原を使用して、数種類の抗Ｆｅｌ  ｄ１、キメラ抗体（すなわち、ヒト可変ドメインおよびマウス定常ドメインを保有する抗体）を得た。この様式で生成されたある特定の例示的な抗体を、Ｈ１Ｍ１２３０Ｎ、Ｈ１Ｍ１２３４Ｎ、Ｈ１Ｍ１２４１Ｎ、Ｈ２Ｍ１２３３Ｎ、Ｈ２Ｍ１２３６Ｎ、Ｈ２Ｍ１２３７ＮおよびＨ２Ｍ１２４２Ｎと命名した。
【０２３６】
抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体は、また、Ｕ．Ｓ．２００７／０２８０９４５Ａ１に記載されている通り、骨髄腫細胞に融合することなく抗原陽性Ｂ細胞から直接的に単離した。この方法を使用して、数種類の完全なヒト抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体（すなわち、ヒト可変ドメインおよびヒト定常ドメインを保有する抗体）を得た。この様式で生成された例示的な抗体を、次の通りに命名した：Ｈ４Ｈ２５７４Ｐ、Ｈ４Ｈ２５９０Ｓ、Ｈ４Ｈ２５９２Ｂ、Ｈ４Ｈ２５９４Ｓ、Ｈ４Ｈ２５９７Ｐ、Ｈ４Ｈ２６０６Ｂ、Ｈ４Ｈ２６０７Ｂ、Ｈ４Ｈ２６０８Ｂ、Ｈ４Ｈ２６３６Ｐ、Ｈ４Ｈ２６４５Ｐ、Ｈ４Ｈ２７９３Ｐ、Ｈ４Ｈ２７９７ＰおよびＨ４Ｈ２８６４Ｐ。
【０２３７】
本実施例の方法に従って生成された例示的な抗体の生物学的特性を、下に記す実施例において詳細に説明する。
【０２３８】
（実施例２）重および軽鎖可変領域アミノ酸配列
表１は、Ｆｅｌ  ｄ１に特異的な選択された抗体の重および軽鎖可変領域アミノ酸配列ペアならびにその相当する抗体識別子を表記する。抗体は、典型的には、本明細書において次の命名法に従って参照される：Ｆｃ接頭語（例えば、「Ｈ４Ｈ」、「Ｈ１Ｍ」、「Ｈ２Ｍ」）、続いて数的識別子（例えば、表１に示す通り「１２３２」）、続いて「Ｐ」または「Ｎ」接尾語。よって、この命名法に従うと、抗体は、例えば、「Ｈ１Ｍ１２３２Ｎ」と称され得る。本明細書に使用されている抗体名称におけるＨ４Ｈ、Ｈ１ＭおよびＨ２Ｍ接頭語は、抗体の特定のＦｃ領域を示す。例えば、「Ｈ２Ｍ」抗体は、マウスＩｇＧ２
Ｆｃを有し、一方、「Ｈ４Ｈ」抗体は、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃを有する。当業者が認識するように、Ｈ１ＭまたはＨ２Ｍ抗体は、Ｈ４Ｈ抗体に変換することができ、逆もまた同様であるが、いずれの場合においても、表１に示す数的識別子によって示される可変ドメイン（ＣＤＲを含む）は、そのままであろう。同じ数的抗体名称を有するが、Ｎ、Ｂ、ＳまたはＰの接尾語の文字が異なる抗体は、同一ＣＤＲ配列を有するが、ＣＤＲ配列の外部の領域（すなわち、フレームワーク領域）において配列変種を有する重および軽鎖を有する抗体を指す。よって、特定の抗体のＮ、Ｂ、ＳおよびＰ改変体は、その重および軽鎖可変領域内に同一ＣＤＲ配列を有するが、そのフレームワーク領域内が互いに異なる。
【０２３９】
【表１】
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【０２４０】
（実施例３）可変遺伝子利用解析
産生された抗体の構造を解析するために、抗体可変領域をコードする核酸をクローニングして配列決定した。抗体の核酸配列および予測アミノ酸配列から、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）毎に遺伝子使用（ＶＨ、Ｄ、ＪＨ、ＶＫまたはＪＫ）を同定した。表２は、本発明に従って選択された抗体の遺伝子使用を表記する。
【０２４１】
【表２】
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【０２４２】
（実施例４）表面プラズモン共鳴法によって決定された、Ｆｅｌ  ｄ１への抗体結合
リアルタイム表面プラズモン共鳴法バイオセンサー（Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００またはＢｉａｃｏｒｅ  ２０００）アッセイを使用して、抗Ｆｅｌ  ｄ１モノクローナル抗体への抗原結合の、結合会合および解離速度定数（それぞれｋａおよびｋｄ）ならびに計算された平衡解離定数および解離半減期（それぞれＫＤおよびｔ１／２）を決定した。ポリクローナルウサギ抗マウス抗体（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、＃ＢＲ−１００８−３８）またはモノクローナルマウス抗ヒトＦｃ抗体（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、＃ＢＲ−１００８−３９）のいずれかによりＢｉａｃｏｒｅセンサー表面を誘導体化して、それぞれマウスＦｃ（抗体ＩＤ接頭語Ｈ１Ｍ、Ｈ２Ｍ、Ｈ２ａＭ、Ｈ２ｂＭ）またはヒトＩｇＧ４
Ｆｃ（抗体ＩＤ接頭語Ｈ４Ｈ）と共に発現された抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体を捕捉した。動態学的適合のため、少なくとも２種の異なる濃度（３９０ｐＭ〜６７ｎＭに及ぶ）の天然Ｆｅｌ  ｄ１（Ｉｎｄｏｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、＃ＮＡ−ＦＤ１−２）または組換えバージョンのタンパク質、Ｆｅｌ  ｄ１（Ｂ−Ａ）−ｍｍＨ（配列番号３９６）を、２５℃、流量５０μｌ／分で、ランニングバッファー（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０５％Ｐ２０、３ｍＭ  ＭｇＣｌ２、３ｍＭ  ＣａＣｌ２）において、抗Ｆｅｌ
ｄ１モノクローナル抗体捕捉表面の上に注射した。Ｆｅｌ  ｄ１（Ｂ−Ａ）−ｍｍＨは、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞において発現させ、これは、Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグを有するＦｅｌ  ｄ１  Ａのアミノ酸２３〜９２（アクセッション＃Ｐ３０４３８）と直列で融合されたＦｅｌ  ｄ１  Ｂのアミノ酸１８〜１０９（アクセッション＃Ｐ３０４４０）からなる。抗体−抗原会合を３〜５分間モニターし、捕捉されたモノクローナル抗体からの抗原の解離（ランニングバッファー単独、２５℃）を１０または１５分間モニターした。Ｓｃｒｕｂｂｅｒ  ２．０カーブフィッティングソフトウェアを使用して１：１結合モデルへとデータを加工および適合させることにより、動態学的会合（ｋａ）および解離（ｋｄ）速度定数を決定した。次の通り、動態学的速度定数から結合解離平衡定数（ＫＤ）および解離半減期（ｔ１／２）を計算した：ＫＤ＝ｋｄ／ｋａおよびｔ１／２＝ｌｎ（２）／ｋｄ。異なる抗Ｆｅｌ  ｄ１モノクローナル抗体の結合パラメータを表３および表４に作表する。表３は、捕捉された抗Ｆｅｌ  ｄ１モノクローナル抗体への天然Ｆｅｌ  ｄ１結合に関する２５℃におけるＢｉａｃｏｒｅ親和性を示し、表４は、捕捉された抗Ｆｅｌ  ｄ１モノクローナル抗体への組換えＦｅｌ  ｄ１結合に関する２５℃におけるＢｉａｃｏｒｅ親和性を示す。
【０２４３】
表３に示す通り、検査された２５種の抗体のうち１０種は、２０７ｐＭ〜９８２ｐＭに及ぶ、天然Ｆｅｌ  ｄ１への結合に関して１ｎＭを下回るＫＤ値を示した。表４に示す通り、検査された２５種の抗体のうち１７種は、１４４ｐＭ〜９２４ｐＭに及ぶ、組換えＦｅｌ  ｄ１への結合に関して１ｎＭを下回るＫＤ値を示した。抗体のうち２種、Ｈ４Ｈ２５７４ＢおよびＨ４Ｈ２７９３Ｐは、これらの実験条件下で、組換えＦｅｌ  ｄ１には結合したが、天然Ｆｅｌ  ｄ１には結合しなかった。
【０２４４】
【表３】
0006603269.tif 000004
【０２４５】
【表４】
0006603269.tif 000005
【０２４６】
（実施例５）天然（ｎ）Ｆｅｌ  ｄ１への結合に関する抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体の交差競合
Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄバイオセンサーシステム（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ  Ｉｎｃ．）を使用して結合実験を行い、天然Ｆｅｌ  ｄ１（ｎＦｅｌ  ｄ１；Ｉｎｄｏｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、＃ＮＡ−ＦＤ１−２）に結合する８種の抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体のパネルの交差競合を決定した。０．１ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡを含有するＨＢＳＴバッファー（０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０５％ｖ／ｖ  Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  Ｐ２０）において、２５℃で実験を行った。各結合ステップの間にＨＢＳＴバッファーによる洗浄ステップを行い、結合および洗浄ステップの最中、軌道回転式プレート振盪機を使用して１０００ｒｐｍでプレートを撹拌した。１０ｕｇ／ｍＬの抗体のストック溶液から、第１の抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体（ｍＡｂ−１）を抗ｈＦｃバイオセンサー表面上に２分間捕捉させた（最終捕捉レベルほぼ１．５ｎｍ応答単位）。次に、コーティングされたセンサーチップを、無関係の抗体の１００ｕｇ／ｍＬ溶液により５分間ブロックした。次に、センサーチップを、５００ｎＭのｎＦｅｌ  ｄ１を含有するウェル内に５分間浸し、次に、第２の抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体（ｍＡｂ−２）の５０ｕｇ／ｍＬ溶液を含有するウェル内に浸した。ｍＡｂ−２溶液に、１００ｕｇ／ｍＬの無関係の抗体を補充して、非特異的結合を最小化した。ｍＡｂ−１と予め複合体形成したｎＦｅｌ  ｄ１へのｍＡｂ−２結合の結合応答を、８×８抗体マトリックスについて測定した（表５）。異なるｍＡｂ−１／Ｆｅｌ  ｄ１捕捉表面へのｍＡｂ−２結合の各結合値（表５における列を下に向かう）を、ｍＡｂ−１／Ｆｅｌ  ｄ１／ｍＡｂ−２自己競合値で減算した（ｍＡｂ−１＝ｍＡｂ−２は、表５における対角）。０．１０ｎｍを下回る値は、Ｆｅｌ  ｄ１の共通結合部位へのｍＡｂ−１およびｍＡｂ−２の交差競合を示す。
【０２４７】
４種の抗体、Ｈ４Ｈ２６３６Ｐ、Ｈ４Ｈ１６１６Ｎ、Ｈ４Ｈ２６４５ＰおよびＨ４Ｈ２８６４Ｐは、ｎＦｅｌ  ｄ１への結合に関して互いに双方向性で競合するが、他の抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体のいずれとも競合しない。２種の抗体、Ｈ４Ｈ１２３２ＮおよびＨ４Ｈ２５９７Ｐは、ｎＦｅｌ  ｄ１への結合に関して互いに双方向性で競合する。Ｈ４Ｈ１２３２ＮおよびＨ４Ｈ２５９７Ｐの両方は、Ｈ４Ｈ１３００Ｎと一方向性で競合する。Ｈ４Ｈ１３００Ｎは、ｎＦｅｌ  ｄ１と予め複合体形成しなかったため、Ｈ４Ｈ１３００Ｎとの双方向性競合は決定することができなかった。Ｈ４Ｈ１２３８Ｎは、ｎＦｅｌ  ｄ１への結合に関して抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体のいずれとも競合しなかった。
【０２４８】
【表５】
0006603269.tif 000006
【０２４９】
（実施例６）受動皮膚アナフィラキシー（ＰＣＡ）ｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおける抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体の効果
受動皮膚アナフィラキシー（ＰＣＡ）ｉｎ  ｖｉｖｏモデルを使用して、ｉｎ  ｖｉｖｏマスト細胞脱顆粒を評価した。モデルは、皮膚の局所的区域へのアレルゲン特異的抗血清の皮内注射と、続く色素と抗原の静脈内注射を含む。アレルギー反応は、感作部位における毛細血管拡張および血管透過性の増加を引き起こし、この部位における色素の優先的蓄積をもたらす。色素は、組織から抽出し、分光光度的に定量化することができる。被験抗血清で感作された組織への色素血管外遊出は、無関係の抗血清で感作された組織への血管外遊出と比較される。
【０２５０】
１×リン酸緩衝食塩水中の１ｍｇ／ｍｌミョウバン（Ｐｉｅｒｃｅ、＃７７１６１）の溶液における、ネコの毛抽出物から精製された５μｇ天然Ｆｅｌ  ｄ１タンパク質（Ｉｎｄｏｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、＃ＬＴＮ−ＦＤ１−１）、５μｇの粗ピーナッツアレルゲン抽出物（Ｇｒｅｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、＃ＸＰＦ１７１Ｄ３Ａ２５）または１２５０の生物学的同等性アレルギー単位（ＢＡＵ）の標準化されたネコの毛抽出物（Ｇｒｅｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、＃ＧＴＥ３Ａ０１）でＢａｌｂ／ｃマウスを免疫化することにより、抗血清を生成した。２週間後（１４日目）、感作されたマウスを、初回免疫化に使用されたものと同一の用量のアレルゲンで追加免疫した。追加免疫の２週間後（２８日目）、マウスを屠殺し、血清を採取した。単離された抗血清における総ＩｇＥ濃度をＥＬＩＳＡにより決定した。抗血清の最終濃度を、１×リン酸緩衝食塩水において２４００ｎｇ／ｍＬ  ＩｇＥに希釈した。
【０２５１】
ＰＣＡモデルにおいてマスト細胞脱顆粒に対する抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体の効果を決定するために、上に記載されている通りに生成された抗血清による耳部感作前に、Ｂａｌｂ／ｃマウスの群を先ず、他に断りがなければ一点実験に対しては５ｍｇ／ｋｇの用量（総抗体用量、各抗体２．５ｍｇ／ｋｇ）または用量決定実験に対しては０．０６ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇに及ぶ濃度で、ヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体、抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体または抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体の組み合わせのいずれかを皮下注射した。抗体による前処置の３日後、各マウスのそれぞれ右および左耳における１０μｌの天然Ｆｅｌ  ｄ１由来抗血清または１０μｌのピーナッツ由来抗血清（陰性対照）の皮内注射により、マウスの１群（「天然Ｆｅｌ  ｄ１群」）を感作した。各マウスのそれぞれ右および左耳における２０μＬのネコの毛抽出物由来抗血清または２０μＬのピーナッツ由来抗血清（陰性対照）により、マウスの第２の群（「ネコ抽出物群」）を感作した。感作２４時間後に、天然Ｆｅｌ  ｄ１群におけるマウスを、０．５％（ｗ／ｖ）エバンスブルー色素（Ｓｉｇｍａ、＃Ｅ２１２９）を含有する１×リン酸緩衝食塩水に溶解した０．２５μｇ／ｍＬ天然Ｆｅｌ  ｄ１（Ｉｎｄｏｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、＃ＬＴＮ−ＦＤ１−１）の溶液の静脈内注射（マウス当たり１００μＬ）により負荷した。同じく、感作２４時間後に、ネコ抽出物群におけるマウスを、０．５％（ｗ／ｖ）エバンスブルー色素（Ｓｉｇｍａ、＃Ｅ２１２９）を含有する１×リン酸緩衝食塩水に溶解した２５０ＢＡＵの標準化ネコの毛抽出物［標準化ネコの毛抽出物（Ｇｒｅｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、＃ＧＴＥ３Ａ０１）］で負荷した。抗原負荷１時間後に、マウスを屠殺し、耳を切除し、１ｍＬホルムアミド中に置いて、３日間５６℃でインキュベートして、組織からエバンスブルー色素を抽出した。続いて、ホルムアミドから耳組織を取り出し、過剰な液体を除去するよう拭き取ってから秤量した。各ホルムアミド抽出物の２百マイクロリットルのアリコートを、９６ウェルプレートに二連で移した。得られた上清の吸光度を６２０ｎｍにおいて測定した。検量線を使用して、ＯＤをエバンスブルー色素濃度へと変換した。アイソタイプ対照抗体で処置された群に関して、抗血清で感作された耳の組織へと血管外遊出されたエバンスブルー色素の平均濃度（耳組織重量により正規化）を計算し、Ｆ（アイソタイプ、ａｖｇ）として定義した。Ｆ（アイソタイプ、ａｖｇ）から、Ｆ（ｍＡｂ、ｉ）として定義される抗体処置群のＦｅｌ  ｄ１または抽出物感作耳のエバンスブルー色素の量を減算することにより、抗体前処置に起因するエバンスブルー色素血管外遊出の低下をマウス毎に計算した。次に、この数を、Ｆ（アイソタイプ、ａｖｇ）および抗体処置群のピーナッツ感作耳の色素量［Ｐ（ｍＡｂ、ｉ）］の間の差で割り、１００を掛けて、マウス毎の色素血管外遊出の全体的なパーセント低下を得た（％低下）。
【０２５２】
％低下（マウス当たり）＝１００＊［Ｆ（アイソタイプ、ａｖｇ）−Ｆ（ｍＡｂ、ｉ）］／［Ｆ（アイソタイプ、ａｖｇ）−Ｐ（ｍＡｂ、ｉ）］  。
【０２５３】
次に、抗体群毎に色素漏出の平均パーセント低下を計算した。パーセントエバンスブルー低下の（平均±ＳＤ）として表現される結果を、天然Ｆｅｌ  ｄ１群に関しては表６および表７に、ネコの毛抽出物群に関しては表８に示す。
【０２５４】
表６に示す通り、天然Ｆｅｌ  ｄ１群由来の７群のマウスは、固定された濃度の抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体の特異的組み合わせで処置すると、対照抗体を与えたマウスと比較して、７９％〜１０３％に及ぶ色素血管外遊出の低下を示した。Ｈ４Ｈ２５９０Ｓ／Ｈ４Ｈ１２３８Ｎ、Ｈ４Ｈ２５９０Ｓ／Ｈ４Ｈ２５７４ＰまたはＨ４Ｈ１２３２Ｎ／Ｈ４Ｈ１６１６Ｎの対になった抗体の組み合わせで処置したマウスは、対照抗体を与えたマウスと比較して、色素血管外遊出の３％未満の低下を示し、このモデルにおける検査された抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体の全てが効果的とは限らないことを示した。
【０２５５】
加えて、表７に示す通り、天然Ｆｅｌ  ｄ１群由来のマウスを用いて用量決定実験を行った。単一の抗体は、検査された用量における抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体の組み合わせほどには色素血管外遊出低下において有効ではなかった。
【０２５６】
複数用量レベルにおける抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体の特異的ペア（Ｈ４Ｈ２６３６ＰおよびＨ４Ｈ１２３２Ｎ）と共に、単一（最高）用量レベルにおけるこれら抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体のそれぞれ単独を、表８に示す通り、ネコの毛抽出物で感作および負荷されたマウスを使用したＰＣＡモデルにおいてさらに検査した。２ｍｇ／ｋｇにおいて、これら単一の抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体単独は、２種の抗体の組み合わせほどには色素血管外遊出低下において効果的ではなかった。２ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇの両方におけるＨ４Ｈ２６３６ＰおよびＨ４Ｈ１２３２Ｎの組み合わせは、抗原としてネコの毛抽出物を使用したＰＣＡモデルにおいて、アイソタイプ対照と比較して色素血管外遊出を９０％超低下させた。
【０２５７】
ボンフェローニのポストテストによる二元配置ＡＮＯＶＡによって決定された、アイソタイプ対照と比較して統計的に有意な（ｐ＜０．０５）あらゆる低下を星印（＊）で記す。表において、群毎の使用されたマウスの数（ｎ）を括弧内に記す。
【０２５８】
【表６】
0006603269.tif 000007
【０２５９】
【表７】
0006603269.tif 000008
【０２６０】
【表８】
0006603269.tif 000009
【０２６１】
（実施例７）ｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおける肺炎症における抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体の効果
ｉｎ  ｖｉｖｏマウスモデルにおける肺炎症は、喘息または鼻炎結膜炎（ｒｈｉｎｏｃｏｎｊｕｃｔｉｖｉｔｉｓ）を伴い得る、アレルゲン誘導性肺炎症および粘液蓄積の評価に使用される。モデルは、以前にアレルゲン感作されたマウスへのアレルゲンの反復的鼻腔内投与を含む。アレルゲン関連の炎症は、肺粘液蓄積、肺への好酸球遊走、血清総ＩｇＥおよびアレルゲン特異的ＩｇＧ１レベルの増加を引き起こし得る。
【０２６２】
Ｂａｌｂ／ｃマウスを、１×リン酸緩衝食塩水中の１ｍｇ／ｍＬミョウバン（Ｐｉｅｒｃｅ、＃７７１６１）の溶液におけるネコの毛抽出物から精製された天然Ｆｅｌ  ｄ１タンパク質（Ｉｎｄｏｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、＃ＬＴＮ−ＦＤ１−１）１ｕｇを腹腔内に免疫化した。７日後、感作されたマウスを、１×リン酸緩衝食塩水中の１ｍｇ／ｍＬミョウバンの溶液における１ｕｇの天然Ｆｅｌ  ｄ１を腹腔内に追加免疫した。１７、２１および２５日目に、マウスの群（ｎ＝５）に、ヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体または抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体、Ｈ４Ｈ１２３２ＮおよびＨ４Ｈ２６３６Ｐの２０ｍｇ／ｋｇ（総抗体用量）の１：１組み合わせを皮下注射した。２０、２４および２８日目に、マウスを、２０ｕＬの１×リン酸緩衝食塩水に希釈した０．０５ｕｇの天然Ｆｅｌ  ｄ１を鼻腔内に負荷した。対照マウスを、同じ日に２０ｕＬの１×リン酸緩衝食塩水で負荷した。３２日目に、全マウスを屠殺し、その肺を収集した。マウスの群のための実験的投薬および処置プロトコールを表９に示す。
【０２６３】
マウスの血清における循環総ＩｇＥおよびＦｅｌ  ｄ１特異的（ｓｐｅｃｉｆｃ）ＩｇＧ１を決定するために、針を取り付けた２７Ｇ１／２  １ｍＬ  ＴＢシリンジ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、＃３０９３０６）を使用した致死的心穿刺（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｃａｒｄｉａｃ  ｐｕｎｃｔｕｒｅ）により、マウス毎に血清試料を採取した。ＢＤ
ｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ（登録商標）血清分離器チューブ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、＃３６５９５６）に血液試料を置き、遠心分離し、続いて解析まで貯蔵するために、新たなチューブに血清を移した。
【０２６４】
マウス毎の血清試料における総ＩｇＥ濃度を決定するために、製造者の説明書に従ってサンドイッチＥＬＩＳＡ  ＯＰＴＥＩＡキット（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、＃５５５２４８）を使用した。血清試料を希釈し、９６ウェルプレート上にコーティングされた抗ＩｇＥ捕捉抗体と共にインキュベートした。ビオチン化抗マウスＩｇＥ二次抗体により総ＩｇＥを検出した。精製された西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識マウスＩｇＥを標準として使用した。色素原（ｃｈｒｏｍａｇｅｎ）３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）（ＢＤ  ＯＰＴＥＩＡ基質試薬セット、ＢＤ、＃５５５２１４）を使用して、ＨＲＰ活性を検出した。次に、１Ｍ硫酸の停止溶液を加え、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ５プレートリーダーにおいて４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェアを使用してデータ解析を行った。実験群毎の血清における循環ＩｇＥレベルの平均量は、表１０に示す通りｎｇ／ｍＬ（±ＳＥＭ）として表現する。Ｆｅｌ  ｄ１を鼻腔内に負荷されたマウスは、抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体の組み合わせで処置されると、アイソタイプ対照抗体を与えたマウス［１４０８０（±１５０５）ｎｇ／ｍＬ］と比較して、循環ＩｇＥの量の有意な減少を示した［６６８３（±１３９４）ｎｇ／ｍＬ］。
【０２６５】
各マウス由来の血清試料におけるＦｅｌ  ｄ１特異的ＩｇＧ１レベルを決定するために、ＥＬＩＳＡを利用した。Ｆｅｌ  ｄ１でコーティングされたプレートを、系列希釈したマウス血清試料と共にインキュベートし、続いて抗マウスＩｇＧ１−ＨＲＰコンジュゲート抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、＃５５９６２６）と共にインキュベートした。全試料をＴＭＢ溶液で発色させ、上に記載されている通りに解析した。血清における循環ＩｇＧ１の相対レベルは、力価単位として表した（力価単位は、バックグラウンドの２倍を超えるＯＤ４５０の達成に必要とされる希釈因数を、測定されたＯＤに掛けることにより計算した）。実験群毎の血清における平均循環Ｆｅｌ  ｄ１特異的ＩｇＧ１レベルは、表１１に示す通り力価×１０３（±ＳＥＭ）として表現される。鼻腔内にＦｅｌ  ｄ１を負荷されたマウスは、抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体の組み合わせで処置されると、アイソタイプ対照抗体を与えたマウス［５２６．１（±１４４．０）の力価×１０３］と比較して、血清におけるＦｅｌ  ｄ１特異的ＩｇＧ１レベルの量の有意な減少を示した［１０５．３（±３１．３３）の力価×１０３］。
【０２６６】
細胞浸潤解析のための肺収集：
失血後に、各マウスから右肺を取り出し、ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｉｒｖｉｎｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃９０３３）を含有する小型のペトリ皿に置き、およそ２〜３ｍｍサイズの立方体に刻んだ。次に、この立方体を、ハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）（Ｇｉｂｃｏ、＃１４０２５）に希釈した２０μｇ／ｍＬ  ＤＮＡｓｅ（Ｒｏｃｈｅ、＃１０１０４１５９００１）および０．７Ｕ／ｍＬ  Ｌｉｂｅｒａｓｅ  ＴＨ（Ｒｏｃｈｅ、＃０５４０１１５１００１）の溶液を含有するチューブに移し、５分毎にボルテックスしつつ２０分間、３７℃の水浴に置いた。次に、最終濃度１０ｍＭとなるようエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）（Ｇｉｂｃｏ、＃１５５７５）を加えることにより、この反応を停止した。各肺をすり潰し、７０μｍフィルターを通して濾過し、遠心分離し、続いて肺ペレットを４ｍＬのＡＣＫ溶解バッファー（Ｇｉｂｃｏ、＃１０４９２）に再懸濁して、赤血球を除去した。３分間の室温インキュベーション後に、ＤＭＥＭを加えて、ＡＣＫバッファーを不活性化した。細胞懸濁液を遠心分離し、続いて細胞ペレットを１０ｍＬのＭＡＣＳバッファー溶液［Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ａｕｔｏ  ＭＡＣＳリンス溶液（Ｍｉｌｉｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、＃１３０−０９１−２２２）およびＭＡＣＳ  ＢＳＡ（Ｍｉｌｉｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、＃１３０−０９１−３７６）の混合物］に再懸濁した。再懸濁された試料を、７０μｍフィルターを通して濾過し、１×１０６細胞を９６ウェルＶ字底プレートに蒔いた。次に、細胞を遠心分離し、ペレットを、ＭＡＣＳバッファーに希釈した精製ラット抗マウスＣＤ１６／ＣＤ３２  Ｆｃ  Ｂｌｏｃｋ（ＢＤ
Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｃｌｏｎｅ：２．４Ｇ２、＃５５３１４２）に１５分間４０℃で再懸濁した。細胞を２回洗浄し、続いてＭＡＣＳバッファーに希釈した適切な抗体混合物（表１２に記載）において３０分間４℃で遮光しつつインキュベートした。抗体インキュベーションの後に、ＭＡＣＳバッファーにおいて細胞を２回洗浄し、ＢＤ  ｃｙｔｏｆｉｘ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、＃５５４６５５）に１５分間４℃で遮光しつつ再懸濁した。細胞を洗浄し、ＭＡＣＳバッファーに再懸濁し、続いてフローサイトメトリーによる好酸球の解析のためにＢＤ  ＦＡＣＳチューブ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、＃３５２２３５）に移した。ＣＤ４５＋、ＧＲ１−、ＣＤ１１ｃｌｏ、ＳｉｇｌｅｃＦｈｉの細胞として好酸球を定義した。データは、表１３において、ＣＤ４５＋細胞における好酸球の頻度（±ＳＥＭ）として表現されている。
【０２６７】
表１３に示す通り、Ｆｅｌ  ｄ１を鼻腔内に負荷されたマウスは、抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体の組み合わせで処置すると、抗体を与えないマウス（６７％減少）またはアイソタイプ対照抗体を与えたマウス（４６％減少）と比較して、ＣＤ４５＋細胞集団における好酸球の頻度の有意な減少を示した。
【０２６８】
組織学的解析のための肺収集：
失血後に、左肺を取り出し、１×リン酸緩衝食塩水中の４％（ｗ／ｖ）パラホルムアルデヒド（Ｂｏｓｔｏｎ  Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ、＃ＢＭ−１５５）の５ｍＬの溶液を含有するチューブに置き、室温で３日間貯蔵した。次に、肺試料を拭き取って乾かし、組織学的解析のために７０％エタノールを含有するチューブに移した。切片作製および過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）染色のために、Ｈｉｓｔｏｓｅｒｖ、Ｉｎｃ（メリーランド州ジャーマンタウン）に試料を送った。
【０２６９】
Ｚｅｉｓｓ  ＡｘｉｏＣａｍ  ＭＲｃカメラを備えるＺｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｐｌａｎ  ２  Ｉｍａｇｉｎｇ光学顕微鏡を使用して、各ＰＡＳ染色された肺切片の全区域にわたるおよそ３５枚のデジタル画像を取得した。次に、より小さい画像から全体の肺画像を構築し、色閾値プラグインの補助でＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して解析した。気管支内腔における粘液蓄積の領域を同定し、ユーザーの選択する色閾値により定量化し、同定され別々の色閾値設定により定量化された内腔の総面積に対し正規化した。肺毎の粘液蓄積により占有される気管支内腔のパーセンテージを、［（粘液面積／内腔面積）×１００］として表現し、処置群毎に計算した。平均パーセント肺閉塞（±ＳＥＭ）として表現される結果は、表１４に示されている。
【０２７０】
表１４に示す通り、抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体の組み合わせで処置されたマウスは、肺炎症モデルにおける対照抗体を与えたマウス（１０．８１＋／−１．１３％粘液蓄積）と比較して、肺気管支における粘液蓄積低下の傾向を示した（５．２１＋／−０．８１％粘液蓄積）。マウス群間に、気管支内腔サイズまたは全体的な肺サイズにおける差は観察されなかった。
【０２７１】
【表９】
0006603269.tif 000010
【０２７２】
【表１０】
0006603269.tif 000011
【０２７３】
【表１１】
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【０２７４】
【表１２】
0006603269.tif 000013
【０２７５】
【表１３】
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【０２７６】
【表１４】
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【０２７７】
（実施例８）水素−重水素交換エピトープマッピング
２種の抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体によって認識されるＦｅｌ  ｄ１（Ｆｅｌ  ｄ１鎖ＡおよびＦＥＬＤ１鎖Ｂからなるヘテロ二量体タンパク質）のエピトープを決定するために、水素−重水素（Ｈ／Ｄ）交換試験を、Ｆｅｌ  ｄ１と共複合体形成された抗体毎に行った。Ｈ／Ｄ交換実験前に、Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグおよびＤ２７Ｇ変異（Ｆｅｌ  ｄ１Ｂ−Ａ−ｍｍＨ；配列番号３９６）と共に発現される、ＦＥＬＤ１  Ａのアミノ酸１９〜８８（ＧｅｎＢａｎｋ  アクセッション＃ＮＰ＿００１０４１６１８．１）と直列で融合されたＦｅｌｄ１鎖Ｂのアミノ酸１８〜１０９（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１０４１６１９．１）からなるＣＨＯ細胞に発現される組換えＦｅｌ  ｄ１を、３７℃にて４時間ネイティブ条件下で、ＰＮＧａｓｅ  Ｆ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ、＃０７０４）を使用して脱グリコシル化した。この試験のため、２種の抗ＦＥＬＤ１抗体（Ｈ４Ｈ１２３２ＮおよびＨ４Ｈ２６３６Ｐ）を、製造者のプロトコールに従ってＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）アガロースビーズ（ＧＥ  Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅ、＃１７−０９０６−０１）に共有結合により付着させた。
【０２７８】
Ｈ４Ｈ１２３２Ｎによって認識されるＦｅｌ  ｄ１Ｂ−Ａ−ｍｍＨ結合エピトープをマッピングするために、２セットのＨ／Ｄ交換実験を実行した（全結合および交換反応は室温で実行した）。第１の実験は、「オン溶液／オフビーズ」フォーマット（溶液におけるオン交換、続いてビーズにおけるオフ交換）を使用した。オン交換のため、Ｄ２Ｏで調製されたｐＨ７．４のＰＢＳバッファー（ＰＢＳ−Ｄ）において、脱グリコシル化されたＦｅｌ  ｄ１Ｂ−Ａ−ｍｍＨタンパク質を５および１０分間（２種の別々のサブ実験において）重水素化し、続いてＰＢＳ−Ｄにおける２分間のインキュベーション中にＨ４Ｈ１２３２Ｎビーズに結合させた。次に、Ｈ４Ｈ１２３２Ｎビーズに結合されたＦｅｌ  ｄ１Ｂ−Ａ−ｍｍＨの共複合体を、Ｈ２Ｏで調製されたｐＨ７．４のＰＢＳバッファー（ＰＢＳ−Ｈ）で洗浄し、オン交換時間の半分の時間でＰＢＳ−Ｈにおいてインキュベートし（オフ交換）、Ｈ４Ｈ１２３２Ｎ抗体の結合によって保護されたＦｅｌ  ｄ１Ｂ−Ａ−ｍｍＨ上のエピトープのみの重水素化を維持させた。オフ交換後に、結合したＦｅｌ  ｄ１Ｂ−Ａ−ｍｍＨを、氷冷０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液を使用してビーズから溶出させた。次に、溶出されたＦｅｌ  ｄ１Ｂ−Ａ−ｍｍＨを固定化ペプシン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃２０３４３）で５分間４℃にて消化した。製造者のプロトコールに従ってＺｉｐＴｉｐクロマトグラフィーピペットチップ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、＃ＺＴＣ１８Ｓ０９６）を使用して、得られたペプチドを４℃で脱塩し、続いてＵｌｔｒａｆｌｅＸｔｒｅｍｅマトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）質量分析計（ＭＳ）において直ちに解析した。
【０２７９】
第２の実験は、「オンビーズ／オフビーズ」（ビーズにおけるオン交換、続いてビーズにおけるオフ交換）と称される。この実験のため、脱グリコシル化されたＦｅｌ  ｄ１Ｂ−Ａ−ｍｍＨを先ず、Ｈ４Ｈ１２３２Ｎビーズに結合させ、続いてＰＢＳ−Ｄにおいて５または１０分間（別々のサブ実験において）インキュベートして、オン交換を可能にした。次のステップ（オフ交換、ペプシン消化およびＭＳ解析）は、上述の「オン溶液／オフビーズ」手順に記載されている通りに実行した。検出された全ペプチドの質量中心値または平均質量対電荷比（ｍ／ｚ）を計算し、オン溶液／オフビーズおよびオンビーズ／オフビーズ実験の間で比較した。オンビーズ／オフビーズ手順と比較して、オン溶液／オフビーズ手順後に質量増加を示すペプチドは、抗体結合の結果、交換から保護されるＦｅｌ  ｄ１タンパク質内のアミノ酸を含み、したがって、結合エピトープ領域を明らかにする。
【０２８０】
Ｈ４Ｈ１２３２Ｎビーズに代えてＨ４Ｈ２６３６Ｐビーズを用いた以外は、Ｈ４Ｈ１２３２Ｎに関して上に記載されているものと同じ手順を使用して、抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体Ｈ４Ｈ２６３６ＰへのＦｅｌ  ｄ１Ｂ−Ａ−ｍｍＨ結合に関するＨ／Ｄ交換実験を行った。
【０２８１】
Ｈ４Ｈ１２３２ＮによるＦｅｌ  ｄ１Ｂ−Ａ−ｍｍＨのＨ／Ｄ交換実験において検出された全ペプチドの質量中心ｍ／ｚ値の比較を表１５に示す。液体クロマトグラフィー−マトリックス支援レーザー脱離イオン化（ＬＣ−ＭＡＬＤＩ）ＭＳによって、これらのペプチドを同定した。大部分の消化性ペプチドは、２種の異なるオン交換およびオフ交換時間それぞれの、オン溶液／オフビーズおよびオンビーズ／オフビーズプロトコールの両方に対して類似の質量中心値（差＜０．３ｍ／ｚ単位）を生じた。しかし、Ｆｅｌ  ｄ１Ｂ−Ａ−ｍｍＨ（配列番号３９６）の８５〜１０３、８５〜１０４および１１３〜１２７にまたがるアミノ酸を有する３種のペプチドは、５分間および１０分間実験の両方においてｍ／ｚ質量中心値に＞０．３の差を有していた。オン溶液／オフビーズおよびオンビーズ／オフビーズプロトコール由来のこれらの質量中心値間の差は、表１５において太字で強調されている。別のペプチド、配列番号３９６のアミノ酸１１７〜１２７は、オフ交換後に重陽子保持を示さなかったため、１１３〜１２７ペプチドにおける交換からの保護の領域を、配列番号３９６の残基１１３〜１１６へと低下させることができる。２種の領域、残基８５〜１０４（配列番号４０３）および１１３〜１１６（配列番号４２６）は、オン交換後のＦｅｌ  ｄ１Ｂ−Ａ−ｍｍＨへのＨ４Ｈ１２３２Ｎ結合の結果、完全オフ交換から保護されている。したがって、これら２種のセグメントは、Ｈ／Ｄ交換方法により、Ｆｅｌ  ｄ１Ｂ−Ａ−ｍｍＨタンパク質への抗体Ｈ４Ｈ１２３２Ｎ結合の不連続エピトープとして定義される。
【０２８２】
Ｈ４Ｈ２６３６Ｐと複合体形成されたＦｅｌ  ｄ１Ｂ−Ａ−ｍｍＨのＨ／Ｄ交換実験において検出されたペプチドの質量中心ｍ／ｚ値の比較を表１６に示す。１種のペプチド、ＦＥＬＤ１Ｂ−Ａ−ｍｍＨのアミノ酸１５〜２４のみが、オンビーズ／オフビーズ条件と比較して、オン溶液／オフビーズ条件に関して質量中心ｍ／ｚ値の＞０．３ｍ／ｚの増加を示し、このセグメントが、Ｈ４Ｈ２６３６Ｐの結合によって完全オフ交換から保護されていることを示した。０．３ｍ／ｚを超える質量中心値の差は、表１６において太字で強調されている。したがって、Ｈ／Ｄ交換方法に基づくこの１５〜２４領域（配列番号４１２）内のアミノ酸は、Ｆｅｌ  ｄ１Ｂ−Ａ−ｍｍＨタンパク質への抗体Ｈ４Ｈ２６３６Ｐ結合のエピトープを含む。
【０２８３】
【表１５】
0006603269.tif 000016
【０２８４】
【表１６】
0006603269.tif 000017
【０２８５】
（実施例９）二重特異的抗体の生成
産生されたＦｅｌ  ｄ１二重特異的抗体の説明
本発明に記載されているある特定の抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体のペア由来の重および軽鎖結合ドメインを含む二重特異的抗体を、標準手法を使用して構築した。商業的に購入（例えば、Ｉｎｄｏｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから、＃ＬＴＮ−ＦＤ１−１）または多段階カラムクロマトグラフィーによってネコの毛もしくはフケから単離することのできる（例えば、Ｃｈａｐｍａｎ  ＭＤら、（１９８８年）、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０巻：８１２〜８１８頁を参照）、あるいは組換えにより産生することのできる（Ｆｅｌ  ｄ１の鎖１（鎖ＡまたはＦＥＬＤ１  Ａとも称される；配列番号３９２も参照）の全長アミノ酸配列に関するＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ３０４３８またはＮＰ＿００１０４１６１８．１と、Ｆｅｌ  ｄ１の鎖２（鎖ＢまたはＦＥＬＤ  Ｂとも称される；配列番号３９３も参照）の全長アミノ酸配列に関するＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ３０４４０またはＮＰ＿００１０４１６１９．１を参照）全長天然Ｆｅｌ  ｄ１、あるいはＦｅｌ  ｄ１タンパク質の鎖１もしくは鎖２のいずれかの断片または鎖１および鎖２両方に由来する断片等、一次免疫原でＶｅｌｏｃＩｍｍｕｎｅ（登録商標）マウスを免疫化し、続いて二次免疫原または天然タンパク質の免疫原的に活性な断片で免疫化することによって、本実施例の二重特異的抗体の構築に使用される抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体を得た。一実施形態では、使用される免疫原は、配列番号３９４（Ｆｅｌ  ｄ１鎖２−鎖１−ｍＦｃの直列融合体）または配列番号３９５（リンカーおよび鎖２−ｍＦｃを使用したＦｅｌ  ｄ１鎖１の融合体）に例証されている。
【０２８６】
本実施例に従って産生された二重特異的抗体は、２個の抗原結合ドメイン（すなわち、「結合腕１および２」）を含む。
【０２８７】
Ｈ４Ｈ３４６７Ｄと命名された二重特異的抗体の１種は、抗体Ｈ４Ｈ２８６４Ｐに由来する共通カッパー軽鎖（配列番号３７８）を両方のＦａｂ腕に含む。Ｈ４Ｈ３４６７Ｄの一方のＦａｂ腕は、抗体Ｈ４Ｈ２８６４Ｐ由来の重鎖可変領域（ＶＨ）（配列番号３７０）を利用するが、他方のＦａｂ腕は、Ｈ４Ｈ１２３２Ｎ由来のＶＨ領域（配列番号１８）を利用する。
【０２８８】
Ｈ４Ｈ８７５１Ｄと命名された本発明の第２の二重特異的抗体は、抗体Ｈ４Ｈ２６３６Ｐに由来する共通カッパー軽鎖（配列番号３１４）を両方のＦａｂ腕に含む。Ｈ４Ｈ８７５１Ｄの一方のＦａｂ腕は、Ｈ４Ｈ２６３６Ｐ由来のＶＨ領域（配列番号３０６）を利用するが、他方のＦａｂ腕は、Ｈ４Ｈ１２３２Ｎ由来のＶＨ領域（配列番号１８）を利用する。
【０２８９】
以下の表１７は、実施例９に従って作製された２種の二重特異的抗体の抗原結合ドメインの構成成分パートを提示する。親抗体（二重特異的抗体の調製に使用される）に由来する様々な重鎖および軽鎖可変領域のアミノ酸配列識別子も表１７に提示する。
【０２９０】
【表１７】
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【０２９１】
以下の表１８Ａおよび１８Ｂは、本明細書に記載されている２種の二重特異的抗体に関する、様々な重鎖可変領域（表１８Ａ）および軽鎖可変領域（表１８Ｂ）ならびにこれらの相当する相補性決定領域配列（ＣＤＲ）のアミノ酸配列識別子を表記する。
【０２９２】
【表１８Ａ】
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【０２９３】
【表１８Ｂ】
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【０２９４】
会合および解離値を決定するための二重特異的抗体のＢｉａｃｏｒｅ解析
Ｂｉａｃｏｒｅ  ２０００機器におけるリアルタイム表面プラズモン共鳴法バイオセンサーアッセイを使用して、精製された抗Ｆｅｌ  ｄ１単一特異的および二重特異的抗体への天然Ｆｅｌ  ｄ１（以後、ｎＦｅｌ  ｄ１と称される）結合の、結合会合および解離速度定数（それぞれｋａおよびｋｄ）、平衡解離定数ならびに解離半減期（それぞれＫＤおよびｔ１／２）を決定した。ＣＭ５チップにおいて、ＥＤＣ−ＮＨＳケミストリーを使用して、Ｂｉａｃｏｒｅセンサー表面をモノクローナルマウス抗ヒトＦｃ抗体（ＧＥ、＃ＢＲ−１００８−３９）で誘導体化して、抗Ｆｅｌ  ｄ１単一特異的および二重特異的抗体を捕捉した。Ｂｉａｃｏｒｅ結合試験は全て、２５℃にてＨＢＳＰ＋ランニングバッファー（０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＣａＣｌ２、３ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．０５％ｖ／ｖ界面活性剤Ｐ２０）において行われた。ＨＢＳＰ＋ランニングバッファーにおいて調製された異なる濃度のｎＦｅｌ  ｄ１（Ｉｎｄｏｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、＃ＮＡ−ＦＤ１−２）（６００ｎＭ〜２．３４ｎＭに及ぶ、６倍希釈）を、抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体捕捉表面の上に流量５０μＬ／分で注射した。捕捉されたモノクローナル抗体へのｎＦｅｌ  ｄ１の会合を４分間モニターし、ＨＢＳＰ＋ランニングバッファーにおけるｎＦｅｌ  ｄ１の解離を７分間モニターした。Ｓｃｒｕｂｂｅｒ  ２．０ｃカーブフィッティングソフトウェアを使用して、質量移行限定（ｍａｓｓ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎ）による１：１結合モデルにリアルタイムセンサーグラムを適合させることにより、動態学的会合（ｋａ）および解離（ｋｄ）速度定数を決定した。続いて、次の通り、動態学的速度定数から結合解離平衡定数（ＫＤ）および解離半減期（ｔ１／２）を計算した：ＫＤ（Ｍ）＝ｋｄ／ｋａおよびｔ１／２（分）＝［ｌｎ２／（６０＊ｋｄ）］。
【０２９５】
２５℃における異なる抗Ｆｅｌ  ｄ１単一特異的および二重特異的抗体へのｎＦｅｌ  ｄ１結合の結合動態を表１９に示す。３種の単一特異的抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体は、１５５ｐＭ〜１．６ｎＭに及ぶＫＤ値でｎＦｅｌ  ｄ１に結合した。２種の二重特異的抗Ｆｅｌ  ｄ１抗体、Ｈ４Ｈ３４６７ＤおよびＨ４Ｈ８７５１Ｄは、それぞれ２５０ｐＭおよび３４７ｐＭのＫＤ値でｎＦｅｌ  ｄ１に結合した。
【０２９６】
【表１９】
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【０２９７】
その単一特異的親抗体と比較した、抗Ｆｅｌ  ｄ１二重特異的抗体のｉｎ  ｖｉｖｏ有効性を決定するために、以前に記載された通り（実施例６を参照）、感作および負荷の両方のために天然Ｆｅｌ  ｄ１を使用するＰＣＡ  ｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおいて、これらの抗体をアイソタイプ対照抗体と共に検査した。１ｍｇ／ｋｇ総抗体（２種の抗体を同時に投与する場合、０．５ｍｇ／ｋｇの各抗体を使用した）濃度で、実験群につき８匹のマウスを使用して、この試験における抗体を投与した。色素血管外遊出のパーセント低下±ＳＤとして表現される実験群毎のデータを表２０に示す。
【０２９８】
単一特異的抗体、Ｈ４Ｈ１２３２ＮおよびＨ４Ｈ２８６４Ｐは、それぞれ色素血管外遊出の６７（±２６）％および８１（±２６）％低下を引き起こした。単一特異的抗体、Ｈ４Ｈ１２３２ＮおよびＨ４Ｈ２８６４Ｐの組み合わせは、色素血管外遊出の９８（±３．５）％低下を引き起こし、一方、単一特異的抗体、Ｈ４Ｈ１２３２ＮおよびＨ４Ｈ２８６４Ｐで構成された二重特異的Ｈ４Ｈ３４６７Ｄは、色素血管外遊出の９３（±１１）％低下を引き起こした。
【０２９９】
別の実験において、単一特異的抗体、Ｈ４Ｈ１２３２ＮおよびＨ４Ｈ２６３６Ｐは、それぞれ色素血管外遊出の６４（±３３）％および８．７（±７９）％低下を引き起こした。単一特異的抗体、Ｈ４Ｈ１２３２ＮおよびＨ４Ｈ２６３６Ｐの組み合わせは、色素血管外遊出の９０（±１５）％低下を引き起こし、一方、単一特異的抗体、Ｈ４Ｈ１２３２ＮおよびＨ４Ｈ２６３６Ｐで構成された二重特異的Ｈ４Ｈ８７５１Ｄは、色素血管外遊出の７７（±２０）％低下を引き起こした。
【０３００】
【表２０】
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【配列表】
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