(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
0006559324.tif 000055
［式中：
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、Ｃ１−６アルキル、ハロＣ１−６アルキル、水素、ハロゲン、アミノ、シアノ、ピロリジニル、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルコキシ、ハロＣ１−６アルコキシ、Ｃ３−７シクロアルキルＣ１−６アルコキシ、フェニルＣ１−６アルコキシ、ヒドロキシＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルスルファニルＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルスルホニルＣ１−６アルコキシ、シアノＣ１−６アルコキシ、アミノＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルアミノＣ１−６アルコキシ、ジＣ１−６アルキルアミノＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルスルホニルアミノＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルコキシカルボニルアミノＣ１−６アルコキシ、ピラゾリルＣ１−６アルコキシ、トリアゾリルＣ１−６アルコキシ、及び単環式ヘテロシクロアルキルＣ１−６アルコキシより独立して選択され、ここで単環式ヘテロシクロアルキルは、Ｎ含有単環式ヘテロシクロアルキルであり；
Ｒ５とＲ６は、水素、Ｃ１−６アルキル、ハロＣ１−６アルキル、又はＣ２−６アルケニルより独立して選択される］
の化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマー。
【請求項２】
Ｒ１が水素であり；
Ｒ２は、Ｃ１−６アルコキシであり；
Ｒ３は、Ｃ１−６アルコキシ、ハロＣ１−６アルコキシ、ヒドロキシＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルスルホニルＣ１−６アルコキシ、シアノＣ１−６アルコキシ、アミノＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルコキシカルボニルアミノＣ１−６アルコキシ、モルホリニルＣ１−６アルコキシ、又はテトラヒドロピラニルＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ４は、水素であり；
Ｒ５は、水素であり；
Ｒ６は、水素、Ｃ１−６アルキル、又はＣ２−６アルケニルである、
請求項１に記載の式Ｉの化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマー。
【請求項３】
Ｒ２がメトキシである、請求項１又は請求項２に記載の式Ｉの化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマー。
【請求項４】
Ｒ３が、ハロＣ１−６アルコキシ、ヒドロキシＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルコキシ、シアノＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルコキシカルボニルアミノＣ１−６アルコキシ、又はテトラヒドロピラニルＣ１−６アルコキシである、
請求項１〜請求項３のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマー。
【請求項５】
Ｒ６がＣ１−６アルキルである、請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマー。
【請求項６】
Ｒ１が水素であり；
Ｒ２は、メトキシであり；
Ｒ３は、メトキシ、トリフルオロエトキシ、ヒドロキシジメチルプロポキシ、メトキシプロポキシ、メチルスルホニルプロポキシ、シアノプロポキシ、アミノペントキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノペントキシ、モルホリニルエトキシ、又はテトラヒドロピラニルメトキシであり；
Ｒ４は、水素であり；
Ｒ５は、水素であり；
Ｒ６は、水素、メチル、イソプロピル、イソブチル、又はプロパ−２−エニルである、
請求項１〜請求項３に記載の式Ｉの化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマー。
【請求項７】
Ｒ３が、トリフルオロエトキシ、ヒドロキシジメチルプロポキシ、メトキシプロポキシ、シアノプロポキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノペントキシ、又はテトラヒドロピラニルメトキシである、
請求項１〜請求項６のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマー。
【請求項８】
Ｒ６がイソブチルである、請求項１〜請求項７のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマー。
【請求項９】
９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−６，７−ジヒドロピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
９，１０−ジメトキシ−６−メチル−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−アリル−９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−イソプロピル−９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−イソブチル−１０−メトキシ−９−（３−メトキシプロポキシ）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−９−（テトラヒドロピラン−４−イルメトキシ）−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−イソブチル−１０−メトキシ−９−（３−メチルスルホニルプロポキシ）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−イソブチル−１０−メトキシ−９−（２−モルホリノエトキシ）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
９−（３−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−プロポキシ）−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
９−（３−シアノプロポキシ）−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
９−［５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペントキシ］−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
９−（５−アミノペントキシ）−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸塩酸塩
より選択される、請求項１に記載の化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマー。
【請求項１０】
６−イソブチル−１０−メトキシ−９−（３−メトキシプロポキシ）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−９−（テトラヒドロピラン−４−イルメトキシ）−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
９−（３−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−プロポキシ）−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
９−［５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペントキシ］−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸
より選択される、請求項１に記載の化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマー。
【請求項１１】
以下の工程：
（ａ）式（Ａ）：
【化２】
0006559324.tif 000056
の化合物の加水分解、又は
（ｂ）式（Ｂ）：
【化３】
0006559324.tif 000057
の化合物の加水分解
［式中、Ｒ１〜Ｒ６は、請求項１〜請求項８のいずれか１項に定義される通りであり、Ｒ８は、Ｃ１−６アルキル、ハロＣ１−６アルキル、Ｃ３−７シクロアルキルＣ１−６アルキル、フェニルＣ１−６アルキル、ヒドロキシＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルスルファニルＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルスルホニルＣ１−６アルキル、シアノＣ１−６アルキル、アミノＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルアミノＣ１−６アルキル、ジＣ１−６アルキルアミノＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルスルホニルアミノＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシカルボニルアミノＣ１−６アルキル、ピラゾリルＣ１−６アルキル、トリアゾリルＣ１−６アルキル、又は単環式ヘテロシクロアルキルＣ１−６アルキルであり、ここで単環式ヘテロシクロアルキルは、Ｎ含有単環式ヘテロシクロアルキルであり；Ｒ１１は、Ｃ１−６アルキルである］
を含んでなる、請求項１〜請求項１０のいずれか１項に記載の化合物の製造の方法。
【請求項１２】
治療活性物質としての使用のための、請求項１〜請求項１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
請求項１〜請求項１０のいずれか１項に記載の化合物と治療上不活性な担体を含んでなる医薬組成物。
【請求項１４】
ＨＢＶ感染の治療又は予防のための、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１〜請求項１０のいずれか１項に記載の化合物の、ＨＢＶ感染の治療又は予防用医薬品の製造への使用。
【請求項１６】
ＨＢｓＡｇ産生又は分泌の阻害のための、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
ＨＢＶ感染の治療又は予防のための、請求項１〜請求項１０のいずれか１項に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、哺乳動物における治療及び／又は予防に有用な有機化合物に、そして特にＨＢＶ感染を治療するのに有用なＨＢｓＡｇ（ＨＢＶ表面抗原）阻害剤及びＨＢＶ  ＤＮＡ産生阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、医薬活性を有する新規の６，７−ジヒドロピリド［２，１−ａ］フタラジン−２−オン類、それらの製造、それらを含有する医薬組成物、及び医薬品としてのそれらの潜在的な使用に関する。
【０００３】
本発明は、式Ｉ：
【０００４】
【化１】
0006559324.tif 000002
【０００５】
［式中、Ｒ１〜Ｒ６は、下記に記載される通りである］の化合物に、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマーに関する。
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）は、エンベロープのある、一部二本鎖のＤＮＡウイルスである。コンパクトな３．２ｋｂ  ＨＢＶゲノムは、４つの重複したオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）からなり、これは、コア、ポリメラーゼ（Ｐｏｌ）、エンベロープ、及びＸタンパク質をコードする。最も長いのがＰｏｌ  ＯＲＦであって、エンベロープＯＲＦは、その内側に位置し、一方、ＸのＯＲＦとコアのＯＲＦには、Ｐｏｌ  ＯＲＦと重なる部分がある。ＨＢＶの生活環には、１）弛緩型環状ＤＮＡ（ＲＣ  ＤＮＡ）からの閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）の産生と、２）プレゲノムＲＮＡ（ｐｇＲＮＡ）の逆転写によるＲＣ  ＤＮＡの産生という、２つの主要なイベントがある。宿主細胞への感染に先立って、ＨＢＶゲノムは、ビリオン内部で、ＲＣ  ＤＮＡとして存在する。ＨＢＶビリオンは、ヒト肝細胞の表面に存在する負電荷を帯びたプロテオグリカンへ非特異的に結合することによって（Schulze, A., P. Gripon & S. Urban. Hepatology, 46, (2007), 1759-68）、そして肝細胞タウロコール酸ナトリウム共輸送ポリペプチド（ＮＴＣＰ）受容体へのＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓＡｇ）の特異的な結合を介して（Yan, H. et al. J Virol, 87, (2013), 7977-91）宿主細胞へ侵入することが可能であることが実証された。ビリオンがその細胞に入ると、ウイルスのコアと被包化されたＲＣ  ＤＮＡは、宿主因子によって、核内局在化シグナルを介して、Ｉｍｐβ／Ｉｍｐα核内輸送受容体により核内へ輸送される。核の内部では、宿主ＤＮＡ修復酵素がＲＣ  ＤＮＡをｃｃｃＤＮＡへ変換する。ｃｃｃＤＮＡは、すべてのウイルスｍＲＮＡの鋳型として作用して、それ自体が感染個体におけるＨＢＶ存続の原因となる。ｃｃｃＤＮＡより産生される転写産物は、プレゲノムＲＮＡ（ｐｇＲＮＡ）とサブゲノムＲＮＡという２つのカテゴリーへ群分けされる。サブゲノム転写産物は、３種のエンベロープ（Ｌ、Ｍ、及びＳ）とＸタンパク質をコードして、ｐｇＲＮＡは、プレコア、コア、及びＰｏｌのタンパク質をコードする（Quasdorff, M. & U. Protzer. J Viral Hepat, 17, (2010), 527-36）。ＨＢＶ遺伝子発現又はＨＢＶ  ＲＮＡ合成の阻害は、ＨＢＶのウイルス複製及び抗原産生の阻害をもたらす（Mao, R. et al. PLoS Pathog, 9, (2013), e1003494; Mao, R. et al. J Virol, 85, (2011), 1048-57）。例えば、ＩＦＮ−αは、ＨＢＶの共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）微小染色体からのｐｇＲＮＡ及びサブゲノムＲＮＡの転写を減少させることによってＨＢＶ複製とウイルスのＨＢｓＡｇ産生を阻害することが示された（Belloni, L. et al. J Clin Invest, 122, (2012),529-37; Mao, R. et al. J Virol, 85, (2011), 1048-57）。ＨＢＶウイルスのすべてのｍＲＮＡは、キャッピングされてポリアデニル化されてから、翻訳のために細胞質へ移送される。細胞質においては、新たなビリオンの組立てが開始されて、新生のｐｇＲＮＡがウイルスのＰｏｌとともにパッケージされて、一本鎖ＤＮＡ中間体を介した、ｐｇＲＮＡのＲＣ  ＤＮＡへの逆転写を開始することが可能になる。ＲＣ  ＤＮＡを含有する成熟したヌクレオキャプシドは、細胞脂質とウイルスのＬ、Ｍ、及びＳタンパク質と一緒に被包されてから、この感染性のＨＢＶ粒子は、細胞内膜での出芽によって放出される（Locarnini, S. Semin Liver Dis, (2005), 25 Suppl 1, 9-19）。興味深いことに��感染性ビリオンより数で大いに優る非感染性の粒子も産生される。これらの空のエンベロープ粒子（Ｌ、Ｍ、及びＳ）は、サブウイルス粒子と呼ばれる。重要にも、サブウイルス粒子は、感染性粒子と同じエンベロープタンパク質を共有するので、それらは、宿主免疫系に対するデコイとして作用すると推測されて、ＨＢＶワクチンに使用されてきた。このＳ、Ｍ、及びＬエンベロープタンパク質は、３種の異なる開始コドンを含有する単一のＯＲＦより発現される。この３種のタンパク質は、そのＣ末端に、Ｓドメインという２２６ａａ配列を共有する。ＭとＬは、追加のプレＳドメイン、プレＳ２とプレＳ２及びプレＳ１をそれぞれ有する。しかしながら、ＨＢｓＡｇエピトープを有するのは、Ｓドメインである（Lambert, C. & R. Prange.Virol J, (2007), 4, 45）。
【０００６】
ウイルス感染の制御には、感染後数分〜数時間以内に応答して、ウイルスの初期増殖に影響を及ぼして、慢性及び永続性の感染の発現を制限することが可能である、宿主の自然免疫系の厳格な監視が求められる。ＩＦＮとヌクレオシ（チ）ド類似体に基づいた現行の治療薬が利用可能であるにもかかわらず、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）の感染は、肝硬変と肝細胞癌へのより高いリスクを有する推定３億５千万人の慢性キャリアが懸念される、重大な全世界の医療問題であることに変わりはない。
【０００７】
感染した肝臓のウイルスクリアランスにおいて中心的な役割を担うのは、ＨＢＶ感染へ応答した、肝細胞及び／又は肝内免疫細胞による、抗ウイルスサイトカインの分泌である。しかしながら、慢性の感染患者では、宿主細胞認識システムと後続の抗ウイルス反応に対抗するためにウイルスが採用する様々なエスケープ戦略のために、弱い免疫応答しか示せない。
【０００８】
多くの観測事実は、いくつかのＨＢＶウイルスタンパク質が、ウイルス認識のシグナル伝達システムと後続のインターフェロン（ＩＦＮ）抗ウイルス活性に干渉することによって、宿主細胞の初期応答に対抗し得ることを示した。この中でも、ＨＢＶエンプティサブウイルス粒子（ＳＶＰｓ、ＨＢｓＡｇ）の過剰分泌は、慢性感染患者（ＣＨＢ）において観測される免疫寛容状態の維持へ参画する場合がある。ＨＢｓＡｇや他のウイルス抗原へ永続的に曝露されると、ＨＢＶ特異的Ｔ細胞の枯渇、又は進行性の機能障害をもたらす可能性がある（Kondo et al. Journal of Immunology (1993), 150, 4659-4671; Kondo et al. Journal of Medical Virology (2004), 74, 425-433; Fisicaro et al. Gastroenterology, (2010), 138, 682-93）。さらに、ＨＢｓＡｇについては、単球、樹状細胞（ＤＣ）、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のような免疫細胞の機能を直接的な相互作用によって抑制することが報告されている（Op den Brouw et al. Immunology, (2009b), 126, 280-9; Woltman et al. PLoS One, (2011), 6, e15324; Shi et al. J Viral Hepat. (2012), 19, e26-33; Kondo et al. ISRN Gasteroenterology, (2013), Article ID 935295）。
【０００９】
ＨＢｓＡｇの定量は、慢性Ｂ型肝炎における予後判定と治療応答にとって有意義なバイオマーカーである。しかしながら、ＨＢｓＡｇ消失の達成とセロコンバージョンは、慢性感染患者でにおいてめったに観測されないが、依然として究極の治療目標となっている。ヌクレオシ（チ）ド類似体のような現行の治療薬は、ＨＢＶ  ＤＮＡ合成を阻害する分子であるが、ＨＢｓＡｇレベルを低下させることに指向していない。ヌクレオシ（チ）ド類似体は、長期療法であったとしても、ＨＢｓＡｇクリアランス率が自然に観測されるレベル（−１％〜２％の間）と同等であることが実証されている（Janssen et al. Lancet, (2005), 365, 123-9; Marcellin et al. N. Engl. J. Med., (2004), 351, 1206-17; Buster et al. Hepatology, (2007), 46, 388-94）。故に、ＨＢＶ治療のためにＨＢｓＡｇを標的とすることへの未充足な医療ニーズがある（Wieland, S. F. & F. V. Chisari. J Virol, (2005), 79, 9369-80; Kumar et al. J Virol, (2011), 85, 987-95; Woltman et al. PLoS One, (2011), 6, e15324; Op den Brouw et al. Immunology, (2009b), 126, 280-9）。
【発明の概要】
【００１０】
本発明の目的は、式Ｉの新規化合物、それらの製造、本発明に準拠した化合物に基づく医薬品、及びそれらの生産、並びに、式Ｉの化合物の、ＨＢＶ阻害剤としての使用とＨＢＶ感染の治療又は予防への使用である。式Ｉの化合物は、優れた抗ＨＢＶ活性を示す。
【００１１】
本発明は、式Ｉ：
【００１２】
【化２】
0006559324.tif 000003
【００１３】
［式中：
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、Ｃ１−６アルキル、ハロＣ１−６アルキル、水素、ハロゲン、アミノ、シアノ、ピロリジニル、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルコキシ、ハロＣ１−６アルコキシ、Ｃ３−７シクロアルキルＣ１−６アルキルオキシ、フェニルＣ１−６アルキルオキシ、ヒドロキシＣ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルスルファニルＣ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルスルホニルＣ１−６アルキルオキシ、シアノＣ１−６アルキルオキシ、アミノＣ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルアミノＣ１−６アルキルオキシ、ジＣ１−６アルキルアミノＣ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノＣ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルスルホニルアミノＣ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルコキシカルボニルアミノＣ１−６アルキルオキシ、ピラゾリルＣ１−６アルキルオキシ、トリアゾリルＣ１−６アルキルオキシ、及び単環式ヘテロシクロアルキルＣ１−６アルキルオキシより独立して選択され、ここで単環式ヘテロシクロアルキルは、Ｎ含有単環式ヘテロシクロアルキルであり；
Ｒ５とＲ６は、水素、Ｃ１−６アルキル、ハロＣ１−６アルキル、又はＣ２−６アルケニルより独立して選択される］の化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマーに関する。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
諸定義
本明細書に使用するように、「Ｃ１−６アルキル」という用語は、単独で、又は組合せにおいて、１〜６個、特に１〜４個の炭素原子を含有する飽和した直鎖又は分岐鎖アルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１−ブチル、２−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、等を意味する。特別な「Ｃ１−６アルキル」基は、メチル、エチル、イソプロピル、及びｔｅｒｔ−ブチルである。
【００１５】
「Ｃ２−６アルケニル」という用語は、少なくとも１つの二重結合がある、２〜６個の炭素原子の一価の直鎖又は分岐鎖炭化水素基を意味する。特別な態様では、Ｃ２−６アルケニルが、少なくとも１つの二重結合がある、２〜４個の炭素原子を有する。アルケニルの例には、エテニル、プロぺニル、プロパ−２−エニル、イソプロぺニル、ｎ−ブテニル、及びイソブテニルが含まれる。特別な「Ｃ２−６アルケニル」基は、プロパ−２−エニルである。
【００１６】
「Ｃ３−７シクロアルキル」という用語は、単独で、又は組合せにおいて、３〜７個の炭素原子、特に３〜６個の炭素原子を含有する飽和炭素環、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、等を意味する。特別な「Ｃ３−７シクロアルキル」基は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、及びシクロヘキシルである。
【００１７】
「Ｃ１−６アルコキシ」という用語は、単独で、又は組合せにおいて、Ｃ１−６アルキル−Ｏ−基（ここで「Ｃ１−６アルキル」は、上記に定義される通りである）、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、２−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペントキシ、ヘキシルオキシ、オクチルオキシ、等を意味する。特別な「Ｃ１−６アルコキシ」基は、メトキシ、エトキシ、及びプロポキシである。
【００１８】
「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素を意味する。
「ハロＣ１−６アルキル」という用語は、該Ｃ１−６アルキル基の水素原子の少なくとも１つが同じか又は異なるハロゲン原子、特にフルオロ原子によって置換されたＣ１−６アルキル基を意味する。ハロＣ１−６アルキルの例には、モノフルオロ−、ジフルオロ−又はトリフルオロ−メチル、−エチル、又は−プロピル、例えば、３，３，３−トリフルオロプロピル、３，３−ジフルオロプロピル、２−フルオロエチル、２，２−ジフルオロエチル、２，２，２−トリフルオロエチル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、又はトリフルオロメチルが含まれる。特別な「ハロＣ１−６アルキル」基は、ジフルオロメチル又はトリフルオロメチルである。
【００１９】
「ハロＣ１−６アルコキシ」という用語は、該Ｃ１−６アルコキシ基の水素原子の少なくとも１つが同じか又は異なるハロゲン原子、特にフルオロ原子によって置換されたＣ１−６アルコキシ基を意味する。ハロＣ１−６アルコキシの例には、モノフルオロ−、ジフルオロ−又はトリフルオロ−メトキシ、−エトキシ、又は−プロポキシ、例えば、フルオロプロポキシ、ジフルオロプロポキシ、トリフルオロプロポキシ、フルオロエトキシ、ジフルオロエトキシ、トリフルオロエトキシ、フルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、又はトリフルオロメトキシが含まれる。特別な「ハロＣ１−６アルコキシ」基は、３−フルオロプロポキシ、３，３−ジフルオロプロポキシ、３，３，３−トリフルオロプロポキシ、２−フルオロエトキシ、２，２−ジフルオロエトキシ、２，２，２−トリフルオロエトキシ、フルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、又はトリフルオロメトキシである。
【００２０】
「アミノ」という用語は、式：−ＮＲ’Ｒ”の基を意味し、ここでＲ’とＲ”は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ３−７シクロアルキル、ヘテロＣ３−７シクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールである。あるいは、Ｒ’とＲ”は、それらが付く窒素と一緒に、ヘテロＣ３−７シクロアルキルを形成することができる。
【００２１】
「カルボニル」という用語は、単独で、又は組合せにおいて、基：−Ｃ（Ｏ）−を意味する。
「シアノ」という用語は、単独で、又は組合せにおいて、基：−ＣＮを意味する。
【００２２】
「Ｃ１−６アルキルスルファニル」という用語は、基：−Ｓ−Ｒ’（ここでＲ’は、上記に定義されるようなＣ１−６アルキル基である）を意味する。Ｃ１−６アルキルスルファニルの例には、メチルスルファニルとエチルスルファニルが含まれる。
【００２３】
「Ｃ１−６アルキルスルホニル」という用語は、基：−ＳＯ２−Ｒ’（ここでＲ’は、上記に定義されるようなＣ１−６アルキル基である）を意味する。Ｃ１−６アルキルスルホニルの例には、メチルスルホニルとエチルスルホニルが含まれる。
【００２４】
「単環式ヘテロシクロアルキル」という用語は、Ｎ、Ｏ、及びＳより選択される１、２、又は３個の環ヘテロ原子を含んでなり、残る環原子が炭素である、４〜７個の環原子の一価で飽和又は部分不飽和の単環式環系である。単環式ヘテロシクロアルキルの例は、アジリジニル、オキシラニル、アゼチジニル、オキセタニル、ピロリジニル、２−オキソ−ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリジニル、チアゾリジニル、ピペリジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペラジニル、モルホリニル、２−オキソ−モルホリニル、２−オキソ−ピペラジニル、チオモルホリニル、１，１−ジオキソ−チオモルホリン−４−イル、１，１−ジオキソチオラニル、アゼパニル、ジアゼパニル、ホモピペラジニル、又はオキサゼパニルである。特別な「単環式ヘテロシクロアルキル」基は、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、１，１−ジオキソチオラニル、モルホリニル、２−オキソ−ピロリジニル、２−オキソ−モルホリニル、及び２−オキソ−ピペラジニルである。
【００２５】
「Ｎ含有単環式ヘテロシクロアルキル」という用語は、そのヘテロ原子の少なくとも１個がＮである、単環式ヘテロシクロアルキルを意味する。Ｎ含有単環式ヘテロシクロアルキルの例は、アゼチジニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリジニル、チアゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、アゼパニル、ジアゼパニル、ホモピペラジニル、又はオキサゼパニルである。特別な「Ｎ含有単環式ヘテロシクロアルキル」基は、ピロリジニル、２−オキソ−ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロピラニル、及びモルホリニルであって、より特別には、テトラヒドロピラニルとモルホリニルである。
【００２６】
「エナンチオマー」という用語は、互いに重ね合わせることができない鏡像である、化合物の２つの立体異性体を意味する。
「ジアステレオマー」という用語は、２個以上のキラル中心があって、それらの分子が互いの鏡像ではない立体異性体を意味する。ジアステレオマーは、異なる物理特性、例えば、融点、沸点、スペクトル特性、及び反応性を有する。
【００２７】
本発明による化合物は、その医薬的に許容される塩の形態で存在し得る。「医薬的に許容される塩」という用語は、式Ｉの化合物の生物学的有効性及び特性を保持して、好適な毒性のない有機若しくは無機酸又は有機若しくは無機塩基より形成される、慣用の酸付加塩又は塩基付加塩を意味する。酸付加塩には、例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、及び硝酸のような無機酸由来のものと、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、等のような有機酸由来のものが含まれる。塩基付加塩には、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、及び四級アンモニウム水酸化物（例えば、水酸化テトラメチルアンモニウムのような）由来のものが含まれる。ある医薬化合物の塩への化学的修飾は、物理的及び化学的安定性、吸湿性、流動性、及び溶解性が改善された化合物を入手するための、製薬化学者によく知られた技術である。それについては、例えば、Bastin R. J., et. al., Organic Process Research & Development 2000, 4, 427-435 に記載されている。特別であるのは、式Ｉの化合物のナトリウム塩である。
【００２８】
１個又は数個のキラル中心を含有する一般式Ｉの化合物は、ラセミ化合物、ジアステレオマー混合物としても、また光学的に活性な単一の異性体としても存在し得る。ラセミ化合物は、既知の方法に従って、エナンチオマーへ分離させることができる。特に、結晶化によって分割され得るジアステレオマー塩は、ラセミ混合物より、例えば、Ｄ若しくはＬ−酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、乳酸、又はカンファースルホン酸のような光学活性酸との反応によって形成される。
【００２９】
ＨＢｓＡｇの阻害剤
本発明は、（ｉ）一般式Ｉ：
【００３０】
【化３】
0006559324.tif 000004
【００３１】
［式中：
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、Ｃ１−６アルキル、ハロＣ１−６アルキル、水素、ハロゲン、アミノ、シアノ、ピロリジニル、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルコキシ、ハロＣ１−６アルコキシ、Ｃ３−７シクロアルキルＣ１−６アルキルオキシ、フェニルＣ１−６アルキルオキシ、ヒドロキシＣ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルスルファニルＣ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルスルホニルＣ１−６アルキルオキシ、シアノＣ１−６アルキルオキシ、アミノＣ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルアミノＣ１−６アルキルオキシ、ジＣ１−６アルキルアミノＣ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノＣ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルスルホニルアミノＣ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルコキシカルボニルアミノＣ１−６アルキルオキシ、ピラゾリルＣ１−６アルキルオキシ、トリアゾリルＣ１−６アルキルオキシ、及び単環式ヘテロシクロアルキルＣ１−６アルキルオキシより独立して選択され、ここで単環式ヘテロシクロアルキルは、Ｎ含有単環式ヘテロシクロアルキルであり；
Ｒ５とＲ６は、水素、Ｃ１−６アルキル、ハロＣ１−６アルキル、又はＣ２−６アルケニルより独立して選択される］を有する化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマーを提供する。
【００３２】
本発明の別の態様は、（ｉｉ）Ｒ１が水素であり； 
Ｒ２は、Ｃ１−６アルコキシであり；
Ｒ３は、Ｃ１−６アルコキシ、ハロＣ１−６アルコキシ、ヒドロキシＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルスルホニルＣ１−６アルコキシ、シアノＣ１−６アルコキシ、カルボキシＣ１−６アルコキシ、アミノＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルコキシカルボニルアミノＣ１−６アルコキシ、モルホリニルＣ１−６アルコキシ、又はテトラヒドロピラニルＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ４は、水素であり；
Ｒ５は、水素であり；
Ｒ６は、水素、Ｃ１−６アルキル、又は２−６アルケニルである、式Ｉの化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマーである。
【００３３】
本発明のさらなる態様は、（ｉｉｉ）Ｒ１が水素であり；
Ｒ２は、メトキシであり；
Ｒ３は、メトキシ、トリフルオロエトキシ、ヒドロキシジメチルプロポキシ、メトキシプロポキシ、メチルスルホニルプロポキシ、シアノプロポキシ、カルボキシブトキシ、アミノペントキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノペントキシ、モルホリニルエトキシ、又はテトラヒドロピラニルメトキシであり；
Ｒ４は、水素であり；
Ｒ５は、水素であり；
Ｒ６は、水素、メチル、イソプロピル、イソブチル、又はプロパ−２−エニルである、式Ｉの化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマーである。
【００３４】
本発明の別の態様は、（ｉｖ）Ｒ２がメトキシであって、残るすべての置換基は、本明細書の上記に示した意義を有する、式Ｉの化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマーである。
【００３５】
本発明の別の態様は、（ｖ）Ｒ３が、ハロＣ１−６アルコキシ、ヒドロキシＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルコキシ、シアノＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルコキシカルボニルアミノＣ１−６アルコキシ、又はテトラヒドロピラニルＣ１−６アルコキシであって、残るすべての置換基は、本明細書の上記に示した意義を有する、式Ｉの化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマーである。
【００３６】
本発明のさらなる態様は、（ｖｉ）Ｒ３が、トリフルオロエトキシ、ヒドロキシジメチルプロポキシ、メトキシプロポキシ、シアノプロポキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノペントキシ、又はテトラヒドロピラニルメトキシであって、残るすべての置換基は、本明細書の上記に示した意義を有する、式Ｉの化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマーである。
【００３７】
本発明の別の態様は、（ｖｉｉ）Ｒ６がＣ１−６アルキルであって、残るすべての置換基は、本明細書の上記に示した意義を有する、式Ｉの化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマーである。
【００３８】
本発明のさらなる態様は、（ｖｉｉｉ）Ｒ６がイソブチルであって、残るすべての置換基は、本明細書の上記に示した意義を有する、式Ｉの化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマーである。
【００３９】
本発明による式Ｉの特別な化合物は、以下：
９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−６，７−ジヒドロピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
９，１０−ジメトキシ−６−メチル−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−アリル−９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−イソプロピル−９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−イソブチル−１０−メトキシ−９−（３−メトキシプロポキシ）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−９−（テトラヒドロピラン−４−イルメトキシ）−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−イソブチル−１０−メトキシ−９−（３−メチルスルホニルプロポキシ）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−イソブチル−１０−メトキシ−９−（２−モルホリノエトキシ）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
９−（３−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−プロポキシ）−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
９−（４−カルボキシブトキシ）−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
９−（３−シアノプロポキシ）−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
９−［５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペントキシ］−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
９−（５−アミノペントキシ）−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸塩酸塩、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマーである。
【００４０】
１０．６−イソブチル−１０−メトキシ−９−（３−メトキシプロポキシ）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−９−（テトラヒドロピラン−４−イルメトキシ）−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
９−（３−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−プロポキシ）−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
９−［５−（Ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペントキシ］−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸より選択される、請求項１に記載の化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマー。
【００４１】
より特別には、本発明は、以下の式Ｉの化合物：
６−イソブチル−１０−メトキシ−９−（３−メトキシプロポキシ）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−９−（テトラヒドロピラン−４−イルメトキシ）−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
９−（３−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−プロポキシ）−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
９−［５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペントキシ］−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマーに関する。
【００４２】
合成
本発明の化合物は、どの慣用の手段によっても製造することができる。下記のスキームと実施例では、上記の化合物並びにそれらの出発材料を合成するのに適した方法を提供する。すべての置換基、特にＲ１〜Ｒ６は、他に断らなければ、上記に定義した通りである。さらに、そして他に明確に述べなければ、すべての反応、反応条件、略語、及び記号は、有機化学の当業者によく知られた意味を有する。
【００４３】
中間体の一般的な合成経路（スキーム１）
スキーム１
【００４４】
【化４】
0006559324.tif 000005
【００４５】
式Ｖの中間体は、スキーム１に従って製造することができる。化合物ＩＩを０〜８０℃の温度でＤＭＦＤＭＡと反応させて化合物ＩＩＩを得て、これをｔ−ＢｕＯＫのような塩基の存在下にギ酸エチルと反応させてから、生じる反応混合物を塩酸のような酸で処理して、化合物ＩＶを得る。化合物ＩＶをＥｔＯＨのような好適な溶媒において室温〜１００℃の温度でＮ−アミノカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルと反応させて、化合物Ｖを得る。
【００４６】
化合物Ｉの一般的な合成経路（スキーム２）
スキーム２
【００４７】
【化５】
0006559324.tif 000006
【００４８】
式Ｉの化合物は、スキーム２［式中、Ｘは、ハロゲンであり；Ｙは、ハロゲン又はトリフレートであり；Ｑ１は、ハロゲン、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、又は−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−（４−メチルフェニル）であり；Ｒ１１は、Ｃ１−６アルキルである］に従って製造することができる。置換されたベンゼンＶＩの、Ｋ２ＣＯ３のような塩基の存在下での化合物Ｖとの反応により化合物ＶＩＩを得て、これが分子内カップリング反応を受けて、化合物ＶＩＩＩを得る。このカップリング反応は、ＤＭＡのような好適な溶媒において、ＰｄＢｒ２のようなＰｄ触媒とＫＯＡｃのような好適な塩基の存在下に室温〜１５０℃の温度で行うことができる。化合物ＶＩＩＩをアセトニトリル又はＤＭＦのような溶媒においてＫ２ＣＯ３のような塩基の存在下にハロゲン化物、メシレート、又はトシレートと反応させて、化合物ＶＩＩＩ−１を得る。化合物ＶＩＩＩ−１の、ＤＣＭのような好適な溶媒におけるＴＦＡ又はＨＣｌのような酸での加水分解、又はＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏ又はＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏのような好適な溶媒における水酸化リチウムのような塩基での加水分解によって、式Ｉの化合物を得る。
【００４９】
化合物Ｉ−１の一般的な合成経路（スキーム３）
スキーム３
【００５０】
【化６】
0006559324.tif 000007
【００５１】
式Ｉ−１の化合物は、スキーム３［式中、Ｑ１は、ハロゲン、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、又は−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−（４−メチルフェニル）であり；Ｒ８は、Ｃ１−６アルキル、ハロＣ１−６アルキル、Ｃ３−７シクロアルキルＣ１−６アルキル、フェニルＣ１−６アルキル、ヒドロキシＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルスルファニルＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルスルホニルＣ１−６アルキル、シアノＣ１−６アルキル、アミノＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルアミノＣ１−６アルキル、ジＣ１−６アルキルアミノＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルスルホニルアミノＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシカルボニルアミノＣ１−６アルキル、ピラゾリルＣ１−６アルキル、トリアゾリルＣ１−６アルキル、又は単環式ヘテロシクロアルキルＣ１−６アルキルであり（ここで単環式ヘテロシクロアルキルは、Ｎ含有単環式ヘテロシクロアルキルである）；Ｒ１１は、Ｃ１−６アルキルである］に従って製造することができる。化合物ＶＩＩＩ−２の水素化による脱ベンジル化をエタノールのような溶媒においてＰｄ／Ｃの存在下に行って、化合物ＶＩＩＩ−３を得る。次いで、化合物ＶＩＩＩ−３を、ＤＭＦのような溶媒においてＫ２ＣＯ３のような塩基の存在下にハロゲン化物、メシレート、又はトシラートと反応させて、ＶＩＩＩ−４を得る。化合物ＶＩＩＩ−４の、ＤＣＭのような好適な溶媒におけるＴＦＡ又はＨＣｌのような酸での加水分解、又はＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏ又はＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏのような好適な溶媒における水酸化リチウムのような塩基での加水分解によって、式Ｉ−１の化合物を得る。
【００５２】
本発明はまた、以下の工程：
（ａ）式（Ａ）：
【００５３】
【化７】
0006559324.tif 000008
【００５４】
の化合物の、酸又は塩基を使用することによる加水分解、又は
（ｂ）式（Ｂ）：
【００５５】
【化８】
0006559324.tif 000009
【００５６】
の化合物の、酸又は塩基を使用することによる加水分解
［式中、Ｒ１〜Ｒ６、Ｒ８、及びＲ１１は、他に断らなければ、上記のように定義される］を含んでなる、式Ｉの化合物の製造のための方法に関する。
【００５７】
工程（ａ）と工程（ｂ）において、酸は、例えば、ＴＦＡ又はＨＣｌであり；又は塩基は、例えば、水酸化リチウム又は水酸化ナトリウムである。
式Ｉの化合物は、上記の方法に従って製造される場合、本発明の目的でもある。
【００５８】
本発明はまた、治療活性物質として使用のための式Ｉの化合物に関する。
別の態様は、本発明の化合物と治療上不活性な担体、希釈剤、又は賦形剤を含有する医薬組成物又は医薬品、並びに、本発明の化合物を使用してそのような組成物及び医薬品を製造する方法を提供する。１つの例では、式（Ｉ）の化合物を、周囲温度で、適正なｐＨで、そして所望される度合いの純度で、生理学的に許容される担体（即ち、製剤投与形態へ利用される投与量及び濃度でレシピエントに対して毒性のない担体）と混合することによって製剤化し得る。製剤のｐＨは、化合物の特別な使用とその濃度に主に依存するが、好ましくは、約３〜約８のあらゆる範囲に及ぶ。１つの例では、式（Ｉ）の化合物を酢酸塩緩衝液においてｐＨ５で製剤化する。別の態様において、式（Ｉ）の化合物は、無菌である。該化合物は、例えば、固形性又は非晶性の組成物として、凍結乾燥製剤として、又は水溶液剤として保存し得る。
【００５９】
組成物は、良好な医療行為に一致したやり方で製剤化、投薬、及び投与される。この文脈において考慮すべき要因には、治療される特別な障害、治療される特別な哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与の方法、投与の計画、及び医療従事者に知られた他の要因が含まれる。投与される化合物の「有効量」は、そのような考慮事項によって支配されるものであって、ＨＢｓＡｂを阻害するのに必要な最小量である。例えば、そのような量は、正常細胞、又はその哺乳動物全体にとって毒性のある量未満であり得る。
【００６０】
１つの例において、非経口的に投与される本発明の化合物の投薬当たりの医薬有効量は、患者の体重１ｋｇにつき、１日当たり約０．０１〜１００ｍｇ、あるいは約０．０１〜１００ｍｇの範囲にあって、使用される化合物の典型的な初回範囲は、０．３〜１５ｍｇ／ｋｇ／日であろう。別の態様では、錠剤及びカプセル剤のような経口の単位剤形は、好ましくは、本発明の化合物の約０．１〜約１０００ｍｇを含有する。
【００６１】
本発明の化合物は、経口、局部（頬内及び舌下が含まれる）、直腸、膣、経皮、非経口、皮下、腹腔内、肺内、皮内、髄腔内、及び硬膜外、及び鼻腔内と（局所治療が所望されるならば）病巣内の投与が含まれる、どの好適な手段によっても投与してよい。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下の投与が含まれる。
【００６２】
本発明の化合物は、例えば、錠剤、散剤、カプセル剤、溶液剤、分散液剤、懸濁液剤、シロップ剤、スプレー剤、坐剤、ゲル剤、乳液剤、パッチ剤、等といったどの簡便な投与形態でも投与してよい。そのような組成物は、医薬製剤における慣用の成分、例えば、希釈剤、担体、ｐＨ調整剤、甘味剤、増嵩剤、及びさらなる有効成分を含有してよい。
【００６３】
典型的な製剤は、本発明の化合物と担体又は賦形剤を混合することによって調製される。好適な担体及び賦形剤は、当業者によく知られている。この製剤には、薬物（即ち、本発明の化合物又はその医薬組成物）の洗練された提示を提供するか又はその製剤製品（即ち、医薬品）の製造に役立てるために、１以上の緩衝剤、安定化剤、界面活性剤、湿潤剤、滑沢剤、乳化剤、懸濁剤、保存剤、抗酸化剤、不透明化剤、流動促進剤、加工助剤、着色剤、甘味剤、芳香剤、香味剤、希釈剤、及び他の既知の添加剤も含めてよい。
【００６４】
好適な経口剤形の例は、約０．１〜１０００ｍｇの本発明の化合物を約０〜２０００ｍｇの無水乳糖、約０〜２０００ｍｇのクロスカルメロースナトリウム、約０〜２０００ｍｇのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）Ｋ３０、及び約０〜２０００ｍｇのステアリン酸マグネシウムと複合して含有する錠剤である。最初に、粉末化した諸成分を一緒に混合して、次にＰＶＰの溶液と混合する。生じる組成物は、慣用の機器を使用して、乾燥させ、造粒し、ステアリン酸マグネシウムと混合して、錠剤の形態へ圧縮することができる。本発明の化合物（例えば、０．１〜１０００ｍｇ）を好適な緩衝溶液剤（例、リン酸塩緩衝液）に溶かし、所望されるならば等張化剤（例、塩化ナトリウムのような塩）を加えることによって、エアゾール製剤の例を調製することができる。この溶液剤は、例えば、０．２ミクロンのフィルターを使用して濾過して、不純物や混在物を除去してよい。
【００６５】
故に、ある態様には、式Ｉの化合物又はその立体異性体又は医薬的に許容される塩を含んでなる医薬組成物が含まれる。さらなる態様には、式Ｉの化合物又はその立体異性体又は医薬的に許容される塩を医薬的に許容される担体又は賦形剤と一緒に含んでなる医薬組成物が含まれる。
【００６６】
以下の実施例Ａと実施例Ｂは、本発明の典型的な組成物を例示するが、単にその代表として役立つものである。
実施例Ａ
以下の組成の錠剤の製造のために、式Ｉの化合物を有効成分として、それ自体が既知のやり方で使用することができる：
１錠あたり
有効成分                                  ２００ｍｇ
微結晶性セルロース                        １５５ｍｇ
コーンスターチ                            ２５ｍｇ
タルク                                    ２５ｍｇ
ヒドロキシプロピルメチルセルロース        ２０ｍｇ
４２５ｍｇ
実施例Ｂ
以下の組成のカプセル剤の製造のために、式Ｉの化合物を有効成分として、それ自体が既知のやり方で使用することができる：
１カプセルあたり
有効成分                                １００．０ｍｇ
コーンスターチ                            ２０．０ｍｇ
乳糖                                      ９５．０ｍｇ
タルク                                      ４．５ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム                    ０．５ｍｇ
２２０．０ｍｇ
適応症と治療の方法
本発明の化合物は、ＨＢｓＡｇの産生又は分泌を阻害することとＨＢＶ遺伝子発現を阻害することができる。従って、本発明の化合物は、ＨＢＶ感染の治療又は予防に有用である。
【００６７】
本発明は、式Ｉの化合物の、ＨＢｓＡｇ産生又は分泌の阻害への使用に関する。
本発明は、式Ｉの化合物の、ＨＢＶ  ＤＮＡ産生の阻害への使用に関する。
本発明は、式Ｉの化合物の、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害への使用に関する。
【００６８】
本発明は、式Ｉの化合物の、ＨＢＶ感染の治療又は予防への使用に関する。
式Ｉの化合物の、ＨＢＶ感染に関連した疾患の治療又は予防に有用な医薬品の製造への使用は、本発明の１つの目的である。
【００６９】
本発明は、式Ｉの化合物の、ＨＢＶ感染の治療又は予防用医薬品の製造への使用に特に関する。
別の態様には、ＨＢＶ感染の治療又は予防のための方法が含まれ、該方法は、式Ｉの化合物、その立体異性体、互変異性体、プロドラッグ、コンジュゲート、又は医薬的に許容される塩の有効量を投与することを含む。
非限定的に、本発明は以下の態様を含む。
［態様１］
式Ｉ：
【化１】
0006559324.tif 000010
［式中：
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、Ｃ１−６アルキル、ハロＣ１−６アルキル、水素、ハロゲン、アミノ、シアノ、ピロリジニル、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルコキシ、ハロＣ１−６アルコキシ、Ｃ３−７シクロアルキルＣ１−６アルコキシ、フェニルＣ１−６アルコキシ、ヒドロキシＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルスルファニルＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルスルホニルＣ１−６アルコキシ、シアノＣ１−６アルコキシ、アミノＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルアミノＣ１−６アルコキシ、ジＣ１−６アルキルアミノＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルスルホニルアミノＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルコキシカルボニルアミノＣ１−６アルコキシ、ピラゾリルＣ１−６アルコキシ、トリアゾリルＣ１−６アルコキシ、及び単環式ヘテロシクロアルキルＣ１−６アルコキシより独立して選択され、ここで単環式ヘテロシクロアルキルは、Ｎ含有単環式ヘテロシクロアルキルであり；
Ｒ５とＲ６は、水素、Ｃ１−６アルキル、ハロＣ１−６アルキル、又はＣ２−６アルケニルより独立して選択される］
の化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマー。
［態様２］
Ｒ１が水素であり；
Ｒ２は、Ｃ１−６アルコキシであり；
Ｒ３は、Ｃ１−６アルコキシ、ハロＣ１−６アルコキシ、ヒドロキシＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルスルホニルＣ１−６アルコキシ、シアノＣ１−６アルコキシ、カルボキシＣ１−６アルコキシ、アミノＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルコキシカルボニルアミノＣ１−６アルコキシ、モルホリニルＣ１−６アルコキシ、又はテトラヒドロピラニルＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ４は、水素であり；
Ｒ５は、水素であり；
Ｒ６は、水素、Ｃ１−６アルキル、又はＣ２−６アルケニルである、
態様１に記載の式Ｉの化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマー。
［態様３］
Ｒ１が水素であり；
Ｒ２は、メトキシであり；
Ｒ３は、メトキシ、トリフルオロエトキシ、ヒドロキシジメチルプロポキシ、メトキシプロポキシ、メチルスルホニルプロポキシ、シアノプロポキシ、カルボキシブトキシ、アミノペントキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノペントキシ、モルホリニルエトキシ、又はテトラヒドロピラニルメトキシであり；
Ｒ４は、水素であり；
Ｒ５は、水素であり；
Ｒ６は、水素、メチル、イソプロピル、イソブチル、又はプロパ−２−エニルである、
態様１又は態様２に記載の式Ｉの化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマー。
［態様４］
Ｒ２がメトキシである、態様１〜態様３のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマー。
［態様５］
Ｒ３が、ハロＣ１−６アルコキシ、ヒドロキシＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルコキシ、シアノＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルコキシカルボニルアミノＣ１−６アルコキシ、又はテトラヒドロピラニルＣ１−６アルコキシである、
態様１〜態様４のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマー。
［態様６］
Ｒ３が、トリフルオロエトキシ、ヒドロキシジメチルプロポキシ、メトキシプロポキシ、シアノプロポキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノペントキシ、又はテトラヒドロピラニルメトキシである、
態様１〜態様５のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマー。
［態様７］
Ｒ６がＣ１−６アルキルである、態様１〜態様６のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマー。
［態様８］  Ｒ６がイソブチルである、態様１〜態様７のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマー。
［態様９］
９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−６，７−ジヒドロピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
９，１０−ジメトキシ−６−メチル−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−アリル−９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−イソプロピル−９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−イソブチル−１０−メトキシ−９−（３−メトキシプロポキシ）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−９−（テトラヒドロピラン−４−イルメトキシ）−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−イソブチル−１０−メトキシ−９−（３−メチルスルホニルプロポキシ）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−イソブチル−１０−メトキシ−９−（２−モルホリノエトキシ）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
９−（３−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−プロポキシ）−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
９−（４−カルボキシブトキシ）−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
９−（３−シアノプロポキシ）−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
９−［５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペントキシ］−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
９−（５−アミノペントキシ）−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸塩酸塩
より選択される、態様１に記載の化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマー。
［態様１０］
６−イソブチル−１０−メトキシ−９−（３−メトキシプロポキシ）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−９−（テトラヒドロピラン−４−イルメトキシ）−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
９−（３−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−プロポキシ）−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸；
９−［５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペントキシ］−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸
より選択される、態様１に記載の化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はエナンチオマー、又はジアステレオマー。
［態様１１］
以下の工程：
（ａ）式（Ａ）：
【化２】
0006559324.tif 000011
の化合物の加水分解、又は
（ｂ）式（Ｂ）：
【化３】
0006559324.tif 000012
の化合物の加水分解
［式中、Ｒ１〜Ｒ６は、態様１〜態様８のいずれか１項に定義される通りであり、Ｒ８は、Ｃ１−６アルキル、ハロＣ１−６アルキル、Ｃ３−７シクロアルキルＣ１−６アルキル、フェニルＣ１−６アルキル、ヒドロキシＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルスルファニルＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルスルホニルＣ１−６アルキル、シアノＣ１−６アルキル、アミノＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルアミノＣ１−６アルキル、ジＣ１−６アルキルアミノＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルスルホニルアミノＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシカルボニルアミノＣ１−６アルキル、ピラゾリルＣ１−６アルキル、トリアゾリルＣ１−６アルキル、又は単環式ヘテロシクロアルキルＣ１−６アルキルであり、ここで単環式ヘテロシクロアルキルは、Ｎ含有単環式ヘテロシクロアルキルであり；Ｒ１１は、Ｃ１−６アルキルである］
を含んでなる、態様１〜態様１０のいずれか１項に記載の化合物の製造の方法。
［態様１２］
治療活性物質としての使用のための、態様１〜態様１０のいずれか１項に記載の化合物。
［態様１３］
態様１〜態様１０のいずれか１項に記載の化合物と治療上不活性な担体を含んでなる医薬組成物。
［態様１４］
態様１〜態様１０のいずれか１項に記載の化合物の、ＨＢＶ感染の治療又は予防への使用。
［態様１５］
態様１〜態様１０のいずれか１項に記載の化合物の、ＨＢＶ感染の治療又は予防用医薬品の製造への使用。
［態様１６］
態様１〜態様１０のいずれか１項に記載の化合物の、ＨＢｓＡｇ産生又は分泌の阻害、又はＨＢｓＡｇ産生又は分泌の阻害のための使用。
［態様１７］
ＨＢＶ感染の治療又は予防のための、態様１〜態様１０のいずれか１項に記載の化合物。
［態様１８］
態様１１の方法に従って製造される場合の、態様１〜態様１０のいずれか１項に記載の化合物。
［態様１９］
ＨＢＶ感染の治療又は予防のための方法であって、態様１〜態様１０のいずれか１項に定義されるような化合物の治療有効量を投与することを含む、前記方法。
［態様２０］
本明細書の上記に記載されるような発明。
【実施例】
【００７０】
本発明は、以下の実施例を参照することによって、より完全に理解されよう。しかしながら、それらは、本発明の範囲を制限するものと解釈してはならない。
本明細書に使用する略語は、以下の通りである：
μＬ：        マイクロリットル
μｍ：        マイクロメートル
μＭ：        １リットルあたりのマイクロモル数
ＤＭＦ：      ジメチルホルムアミド
ＤＭＦＤＭＡ：  Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール
ＤＭＡ：      Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン
ＤＭＳＯ−ｄ６：  重水素化ジメチルスルホキシド
ＥｔＯＡｃ：  酢酸エチル
ｈ又はｈｒ：  時間
ｈｒｓ：      時間（複数）
ＩＣ５０：      半数阻害濃度
ＨＰＬＣ：    高速液体クロマトグラフィー
ＬＣ／ＭＳ：  液体クロマトグラフィー／質量分析法
ＭＥＴＨＡＮＯＬ−ｄ４：  過重水素化メタノール
Ｍ：          モル濃度
ｍｇ：        ミリグラム
ＭＨｚ：      メガヘルツ
ｍｉｎ：      分
ｍＬ：        ミリリットル
ｍＭ：        １リットルあたりのミリモル数
ｍｍ：        ミリメートル
ｍｍｏｌ：    ミリモル
ＭＳ（ＥＳＩ）：  質量分析法（電子スプレーイオン化）
ＮＭＲ：      核磁気共鳴
Ｎ２：        窒素
ｒｔ：        室温
Ｐｄ／Ｃ：    活性炭担持パラジウム
ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ：  分取用高速液体クロマトグラフィー
ＴＦＡ：      トリフルオロ酢酸
δ：          化学シフト
ｔ−ＢｕＯＫ：  ｔｅｒｔ−ブチル酸カリウム
全般的な実験条件
中間体と最終化合物は、以下の機器の１つを使用して、フラッシュクロマトグラフィーによって精製した：ｉ）Biotage SP1 システム及び Quad 12/25 Cartridge モジュール。ｉｉ）ISCO combi-フラッシュクロマトグラフィー機器。シリカゲルのブランド及び孔径：ｉ）KP-SIL 60A（オングストローム）、粒径：４０〜６０μｍ；ｉｉ）ＣＡＳ登録番号：Silica Gel：63231-67-4，粒径：４７〜６０ミクロンシリカゲル；ｉｉｉ）ＺＣＸ（Qingdao Haiyang Chemical 株式会社製）、空孔：２００〜３００又は３００〜４００。
【００７１】
中間体と最終化合物は、ＸＢｒｉｄｇｅＴＭＰｅｒｐ  Ｃ１８（５μｍ，ＯＢＤＴＭ  ３０×１００ｍｍ）カラム又はＳｕｎＦｉｒｅＴＭＰｅｒｐ  Ｃ１８（５μｍ，ＯＢＤＴＭ  ３０×１００ｍｍ）カラムを使用する逆相カラムでの分取用ＨＰＬＣによって精製した。
【００７２】
ＬＣ／ＭＳスペクトルは、Acquity Ultra Performance LC-3100 質量検出器又は Acquity Ultra Performance LC-SQ 検出器を使用して入手した。標準的なＬＣ／ＭＳ条件は、以下の通りであった（操作時間：３分）：
酸性条件：Ａ：Ｈ２Ｏ中０．１％ギ酸；Ｂ：アセトニトリル中０．１％ギ酸；
塩基性条件：Ａ：Ｈ２Ｏ中０．０５％  ＮＨ３・Ｈ２Ｏ；Ｂ：アセトニトリル；
中性条件：Ａ：Ｈ２Ｏ；Ｂ：アセトニトリル。
【００７３】
質量スペクトル（ＭＳ）：全般的には、親質量を示すイオンだけを報告して、他に述べなければ、引用される質量イオンは、正の質量イオン（Ｍ＋Ｈ）＋である。
マイクロ波支援反応は、Biotage Initiator Sixty 又は CEM Discover において行った。
【００７４】
ＮＭＲスペクトルは、Bruker Avance 400 MHz を使用して入手した。
空気感受性の試薬が関わるすべての反応は、アルゴン雰囲気下で実施した。他に述べなければ、試薬は、市販の供給業者より受け取ったままで、さらに精製せずに使用した。
【００７５】
製造の実施例
実施例１：９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−６，７−ジヒドロピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸
【００７６】
【化９】
0006559324.tif 000013
【００７７】
工程１：２−（ジメチルアミノメチレン）−３−オキソ−ブタン酸ｔｅｒｔ−ブチルの製造
【００７８】
【化１０】
0006559324.tif 000014
【００７９】
３−オキソブタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３０．０ｇ，０．１９モル）の１，４−ジオキサン（５００ｍＬ）中の撹拌溶液へＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（１１３．０ｇ，０．９５モル）を加えた。この混合物を２５℃で１６時間撹拌してから、減圧下で濃縮した。残渣をＨ２Ｏ（３００ｍＬ）で希釈した。生じる混合物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて減圧下で濃縮して、粗製の２−（ジメチルアミノメチレン）−３−オキソ−ブタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（４０．０ｇ）を濃黄色の液体として得て、これをさらに精製せずに次の工程にそのまま使用した。
【００８０】
工程２：４−オキソピラン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの製造
【００８１】
【化１１】
0006559324.tif 000015
【００８２】
２−（ジメチルアミノメチレン）−３−オキソ−ブタン酸ｔｅｒｔ−ブチル（４０．０ｇ，０．１９モル）とギ酸エチル（２７．８ｇ，０．３６モル）のＴＨＦ（７００ｍＬ）中の撹拌溶液へｔ−ＢｕＯＫ（５２．６ｇ，０．４７モル）を０℃で少量ずつ加えた。次いで、この混合物をそのまま２５℃へ温めて、同じ温度で１６時間撹拌した。次いで、この反応物を、１Ｍ塩酸を加えることによってクエンチした。生じる混合物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液と塩水（brine）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、４−オキソピラン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（９．５ｇ）を濃黄色の固形物として得た。
【００８３】
工程３：１−エチル−４−オキソ−ピリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの製造
【００８４】
【化１２】
0006559324.tif 000016
【００８５】
Ｎ−アミノカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（７．０ｇ，５３．０ミリモル）と４−オキソピラン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（６．９ｇ，３５．３ミリモル）の無水ＥｔＯＨ（７０ｍＬ）懸濁液を還流下に振り混ぜながら４８時間加熱した。次いで、この混合物を室温へ冷やして濃縮して粗製の１−エチル−４−オキソ−ピリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．４ｇ）を得て、これをさらに精製せずに次の工程に使用した。
【００８６】
工程４：１−ブロモ−２−（クロロメチル）−４，５−ジメトキシ−ベンゼンの製造
【００８７】
【化１３】
0006559324.tif 000017
【００８８】
（２−ブロモ−４，５−ジメトキシ−フェニル）メタノール（１．０ｇ，４．０５ミリモル）とＳＯＣｌ２（０．３２ｍＬ，４．４６ミリモル）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中の混合物を室温で３時間撹拌した。次いで、この反応混合物を濃縮して、１−ブロモ−２−（クロロメチル）−４，５−ジメトキシ−ベンゼン（１．１ｇ）を得て、これをさらに精製せずに次の工程に使用した。
【００８９】
工程５：１−［２−（２−ブロモ−４，５−ジメトキシ−フェニル）−１−メチル−エチル］−４−オキソ−ピリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの製造
【００９０】
【化１４】
0006559324.tif 000018
【００９１】
１−エチル−４−オキソ−ピリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．４ｇ，４．５２ミリモル）、１−ブロモ−２−（クロロメチル）−４，５−ジメトキシ−ベンゼン（２．４ｇ，９．０３ミリモル）、及びＫ２ＣＯ３（１．３ｇ，９．０３ミリモル）のアセトン（２０ｍＬ）中の混合物を撹拌しながら５０℃で２時間加熱した。次いで、この混合物を室温へ冷やして、水（２０ｍＬ）で希釈した。生じる混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて減圧下で濃縮して、１−［２−（２−ブロモ−４，５−ジメトキシ−フェニル）−１−メチル−エチル］−４−オキソ−ピリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．６ｇ）を得て、これをさらに精製せずに次の工程に使用した。
【００９２】
工程６：９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−６，７−ジヒドロピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの製造
【００９３】
【化１５】
0006559324.tif 000019
【００９４】
１−［２−（２−ブロモ−４，５−ジメトキシ−フェニル）−１−メチル−エチル］−４−オキソ−ピリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（４．０ｇ，７．４２ミリモル）、ＰｄＢｒ２（９９ｍｇ，０．３７ミリモル）、及びＫＯＡｃ（１．４５ｇ，１４．８４ミリモル）のＤＭＡ（１５ｍＬ）中の混合物を撹拌しながら１２０℃で一晩加熱した。次いで、この混合物を室温へ冷やして、濾過した。濾液を減圧下で濃縮してから水（３０ｍＬ）で希釈した。この混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて濃縮して粗製の９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−６，７−ジヒドロピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．０ｇ）を得て、これをさらに精製せずに次の工程に使用した。
【００９５】
工程７：９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−６，７−ジヒドロピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸の製造
【００９６】
【化１６】
0006559324.tif 000020
【００９７】
ＴＨＦ（５ｍＬ）とＨ２Ｏ（５ｍＬ）の混合溶媒中の９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−６，７−ジヒドロピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１００ｍｇ，０．２８ミリモル）の溶液へＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１１８ｍｇ，２．８ミリモル）を加えた。この混合物を撹拌しながら９０℃で３時間加熱した。この混合物を室温へ冷やして、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて減圧下で濃縮した。残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製して、９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−６，７−ジヒドロピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（１０ｍｇ）を淡黄色の固形物として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.87 (d, 6H) 4.09-4.34 (m, 2H), 7.05 (br. s., 1H), 7.13-7.33 (m, 1H), 7.38-7.52 (m, 1H), 7.58 (br. s., 1H), 8.26-8.53 (m, 1H); MS obsd. (ESI+) [(M+H)+]: 303.
実施例２：９，１０−ジメトキシ−６−メチル−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸
【００９８】
【化１７】
0006559324.tif 000021
【００９９】
工程１：９，１０−ジメトキシ−６−メチル−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの製造
【０１００】
【化１８】
0006559324.tif 000022
【０１０１】
９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−６，７−ジヒドロピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１００ｍｇ，０．２８ミリモル）、Ｋ２ＣＯ３（７７ｍｇ，０．５６ミリモル）、及びＣＨ３Ｉ（１７４mＬ，２．８ミリモル）のアセトニトリル（１０ｍＬ）中の混合物を撹拌しながら９０℃で３時間加熱した。この混合物を室温へ冷やして、水（１０ｍＬ）で希釈した。生じる混合物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて濃縮して粗製の９，１０−ジメトキシ−６−メチル−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（９５ｍｇ）を得て、これをさらに精製せずに次の工程に使用した。
【０１０２】
工程２：９，１０−ジメトキシ−６−メチル−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸の製造
【０１０３】
【化１９】
0006559324.tif 000023
【０１０４】
９，１０−ジメトキシ−６−メチル−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（９５ｍｇ，０．２６ミリモル）とＣＦ３ＣＯＯＨ（１ｍＬ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中の混合物を室温で３時間撹拌した。この混合物を減圧下で濃縮して残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製して、９，１０−ジメトキシ−６−メチル−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（１０ｍｇ）を淡黄色の固形物として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2.65 (s, 3H) 3.81-3.94 (m, 7H) 4.33-4.43 (m, 2H) 7.00-7.11 (m, 1H) 7.50-7.57 (m, 1H) 7.60-7.66 (m, 1H) 8.57 (s, 1H); MS obsd. (ESI+) [(M+H)+]: 317。
【０１０５】
実施例３：６−アリル−９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸
【０１０６】
【化２０】
0006559324.tif 000024
【０１０７】
工程１：６−アリル−９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの製造
【０１０８】
【化２１】
0006559324.tif 000025
【０１０９】
９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−６，７−ジヒドロピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１００ｍｇ，２７９マイクロモル）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液へ臭化アリル（５０．６ｍｇ，４１９マイクロモル）と炭酸カリウム（７７．１ｍｇ，５５８マイクロモル）を加えた。生じる混合物を撹拌しながら６０℃で１６時間加熱してから、濾過した。濾液を減圧下で濃縮して、６−アリル−９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得て、これをさらに精製せずに次の工程に使用した。
【０１１０】
工程２：６−アリル−９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸の製造
【０１１１】
【化２２】
0006559324.tif 000026
【０１１２】
粗製の６−アリル−９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１００ｍｇ）のＤＣＭ（２ｍＬ）溶液へ２，２，２−トリフルオロ酢酸（６５μＬ）を加えた。この混合物を室温で５時間撹拌してから、減圧下で濃縮した。残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製して、６−アリル−９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（２８ｍｇ）を得た。1H NMR (400MHz, DMSO) δ ppm 8.46 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.04-5.87 (m, 1H), 5.17 (m, 1H), 5.03 (m, 1H), 4.53-4.36 (m, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 3.41 (d, 2H); MS obsd. (ESI+) [(M+H)+]: 343。
【０１１３】
実施例４：６−イソプロピル−９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸
【０１１４】
【化２３】
0006559324.tif 000027
【０１１５】
工程１：６−イソプロピル−９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの製造
【０１１６】
【化２４】
0006559324.tif 000028
【０１１７】
９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−６，７−ジヒドロピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（６０ｍｇ，１６７マイクロモル）のＤＭＦ（２ｍＬ）溶液へ炭酸カリウム（４６．３ｍｇ，３３５マイクロモル）と硫酸ジイソプロピル（６１ｍｇ，３３５マイクロモル）を加えた。この混合物を撹拌しながら８０℃で１４時間加熱してから、濾過した。濾液を減圧下で濃縮して、粗製の６−イソプロピル−９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得て、これをさらに精製せずに次の工程に使用した。
【０１１８】
工程２：６−イソプロピル−９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸の製造
【０１１９】
【化２５】
0006559324.tif 000029
【０１２０】
粗製の６−イソプロピル−９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（６２ｍｇ）のＤＣＭ（５ｍＬ）溶液へＴＦＡ（６２μＬ）を加えた。この混合物を室温で３時間撹拌してから、減圧下で濃縮した。残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製して、６−イソプロピル−９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（４ｍｇ）を得た。1H NMR (400MHz, DMSO) δ ppm 8.16 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 4.37-4.28 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.89 (s, 3H), 2.53-2.51 (m, 1H), 1.39 (d, 6H); MS obsd. (ESI+) [(M+H)+]: 345。
【０１２１】
実施例５：６−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸
【０１２２】
【化２６】
0006559324.tif 000030
【０１２３】
工程１：９，１０−ジメトキシ−６−（２−メチルアリル）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの製造
【０１２４】
【化２７】
0006559324.tif 000031
【０１２５】
９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−６，７−ジヒドロピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１００ｍｇ，２７９マイクロモル）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液へ３−ブロモ−２−メチルプロパ−１−エン（７５．３ｍｇ，５５８マイクロモル）と炭酸カリウム（７７．１ｍｇ，５５８マイクロモル）を加えた。この混合物を撹拌しながら６０℃で１６時間加熱してから、濾過した。濾液を減圧下で濃縮して、粗製の９，１０−ジメトキシ−６−（２−メチルアリル）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１３０ｍｇ）を得て、これをさらに精製せずに次の工程に使用した。
【０１２６】
工程２：９，１０−ジメトキシ−６−（２−メチルアリル）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸の製造
【０１２７】
【化２８】
0006559324.tif 000032
【０１２８】
粗製の９，１０−ジメトキシ−６−（２−メチルアリル）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１３０ｍｇ，２６８マイクロモル）のＤＣＭ（２ｍＬ）溶液へＴＦＡ（９９．２μＬ）を加えた。この混合物を室温で５時間撹拌してから、減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーによって精製して、９，１０−ジメトキシ−６−（２−メチルアリル）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（３０ｍｇ）を得た。
【０１２９】
工程３：６−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸の製造
【０１３０】
【化２９】
0006559324.tif 000033
【０１３１】
９，１０−ジメトキシ−６−（２−メチルアリル）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（３０ｍｇ，８４．２マイクロモル）のＥｔＯＨ（３ｍＬ）溶液へＰｄ／Ｃ（６ｍｇ）を加えた。この混合物を水素の雰囲気下に室温で１６時間撹拌した。この混合物を濾過して、濾液を減圧下で濃縮して、６−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−２−オキソ−６，７−ジヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（１３ｍｇ）を得た。1H NMR (400MHz, DMSO) δ ppm 8.40 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 4.42 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 2.55 (d, 2H), 1.69-1.56 (m, 1H), 0.91 (d, 6H); MS obsd. (ESI+) [(M+H)+]: 359。
【０１３２】
実施例６：６−イソブチル−１０−メトキシ−９−（３−メトキシプロポキシ）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸
【０１３３】
【化３０】
0006559324.tif 000034
【０１３４】
工程１：５−ベンジルオキシ−２−ブロモ−４−メトキシ−ベンズアルデヒドの製造
【０１３５】
【化３１】
0006559324.tif 000035
【０１３６】
２−ブロモ−５−ヒドロキシ−４−メトキシ−ベンズアルデヒド（２５ｇ，１０８ミリモル）のＭｅＣＮ（５００ｍＬ）溶液へ（クロロメチル）ベンゼン（１３．７ｇ，１０８ミリモル）と炭酸カリウム（２９．９ｇ，２１６ミリモル）を加えた。この混合物を撹拌しながら８０℃で１５時間加熱した。室温へ冷やした後で、この混合物を濾過した。濾液を減圧下で濃縮した。残渣を塩水とＤＣＭの間で分配した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて減圧下で濃縮して、５−（ベンジルオキシ）−２−ブロモ−４−メトキシ−ベンズアルデヒド（３４．２ｇ，９６．９ミリモル）を得て、これをさらに精製せずに次の工程に使用した。
【０１３７】
工程２：（５−ベンジルオキシ−２−ブロモ−４−メトキシ−フェニル）メタノールの製造
【０１３８】
【化３２】
0006559324.tif 000036
【０１３９】
５−（ベンジルオキシ）−２−ブロモ−４−メトキシ−ベンズアルデヒド（３５ｇ，１０６ミリモル）のＭｅＯＨ（６００ｍＬ）溶液へＮａＢＨ４（４ｇ，１０６ミリモル）を０℃で少量ずつ加えた。この反応混合物をそのまま室温へ温め、室温で３時間撹拌してから、水でクエンチした。この混合物を減圧下で濃縮した。残渣を塩水とＤＣＭの間で分配した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて減圧下で濃縮して、（５−（ベンジルオキシ）−２−ブロモ−４−メトキシ−フェニル）メタノール（３２．５ｇ，１００ミリモル）を得て、これをさらに精製せずに次の工程に使用した。
【０１４０】
工程３：１−ベンジルオキシ−４−ブロモ−５−（クロロメチル）−２−メトキシ−ベンゼンの製造
【０１４１】
【化３３】
0006559324.tif 000037
【０１４２】
（５−（ベンジルオキシ）−２−ブロモ−４−メトキシ−フェニル）メタノール（５ｇ，１４．７ミリモル）のＤＣＭ（５０ｍＬ）溶液へＳＯＣｌ２（１．６１ｍＬ，２２ミリモル）を室温で滴下した。この混合物を室温で２時間撹拌してから減圧下で濃縮して、１−（ベンジルオキシ）−４−ブロモ−５−（クロロメチル）−２−メトキシ−ベンゼン（５ｇ，１３．８ミリモル、収率：９３．６％）を得て、これをさらに精製せずに次の工程に使用した。
【０１４３】
工程４：１−［（５−ベンジルオキシ−２−ブロモ−４−メトキシ−フェニル）メチル−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−アミノ］−４−オキソ−ピリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの製造
【０１４４】
【化３４】
0006559324.tif 000038
【０１４５】
１−（ベンジルオキシ）−４−ブロモ−５−（クロロメチル）−２−メトキシ−ベンゼン（５．０ｇ，１４．６ミリモル）のＭｅＣＮ（１００ｍＬ）溶液へ炭酸カリウム（４．０５ｇ，２９．３ミリモル）と１−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−４−オキソ−１，４−ジヒドロピリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１４ｇ，２９．３ミリモル）を加えた。この混合物を撹拌しながら８０℃で５時間加熱した。室温へ冷やした後で、この混合物を濾過した。濾液を減圧下で濃縮して、残渣をカラムクロマトグラフィーによって精製して、１−［（５−ベンジルオキシ−２−ブロモ−４−メトキシ−フェニル）メチル−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−アミノ］−４−オキソ−ピリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５．３ｇ，７．７５ミリモル）を得た。
【０１４６】
工程５：９−ベンジルオキシ−１０−メトキシ−２−オキソ−６，７−ジヒドロピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルと９−ベンジルオキシ−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３，６−ジカルボン酸ジｔｅｒｔ−ブチルの製造
【０１４７】
【化３５】
0006559324.tif 000039
【０１４８】
１５ｍＬのマイクロウェーブバイアルへ１−［（５−ベンジルオキシ−２−ブロモ−４−メトキシ−フェニル）メチル−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−アミノ］−４−オキソ−ピリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（７００ｍｇ，１．１４ミリモル）、臭化パラジウム（ＩＩ）（９０．８ｍｇ，３４１マイクロモル）、酢酸カリウム（２２３ｍｇ，２．２７ミリモル）、及びＤＭＦ（５ｍＬ）を加えた。このバイアルに蓋をして、マイクロ波下に１００℃で５時間加熱した。この混合物を濾過して、濾液を減圧下で濃縮して、９−ベンジルオキシ−１０−メトキシ−２−オキソ−６，７−ジヒドロピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルと９−ベンジルオキシ−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３，６−ジカルボン酸ジｔｅｒｔ−ブチルの混合物を得て、これをさらに精製せずに次の工程に使用した。
【０１４９】
工程６：９−ベンジルオキシ−１０−メトキシ−２−オキソ−６，７−ジヒドロピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸の製造
【０１５０】
【化３６】
0006559324.tif 000040
【０１５１】
９−ベンジルオキシ−１０−メトキシ−２−オキソ−６，７−ジヒドロピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルと９−ベンジルオキシ−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３，６−ジカルボン酸ジｔｅｒｔ−ブチル（４．０ｇ）の粗製混合物のＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液へＴＦＡ（２０ｍＬ）を加えた。この混合物を室温で１５時間撹拌してから、減圧下で濃縮した。残渣を石油エーテル／酢酸エチル（１０：１，Ｖ／Ｖ）の混合溶媒で処理した。この混合物を濾過して、濾過ケークを減圧下で乾燥させて、９−ベンジルオキシ−１０−メトキシ−２−オキソ−６，７−ジヒドロピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（２．０ｇ）を得た。
【０１５２】
工程７：９−ベンジルオキシ−１０−メトキシ−２−オキソ−６，７−ジヒドロピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸メチルの製造
【０１５３】
【化３７】
0006559324.tif 000041
【０１５４】
９−ベンジルオキシ−１０−メトキシ−２−オキソ−６，７−ジヒドロピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（０．７０ｇ，１．８５ミリモル）のＭｅＯＨ（２０ｍＬ）懸濁液へ触媒量の濃硫酸（５０μＬ）を加えた。この混合物を８０℃で２０時間加熱した。この混合物を減圧下で濃縮して、残渣を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で中和した。生じる混合物をＤＣＭで抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて減圧下で濃縮して、９−ベンジルオキシ−１０−メトキシ−２−オキソ−６，７−ジヒドロピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸メチル（７０３ｍｇ，１．７９ミリモル）を得た。
【０１５５】
工程８：９−ベンジルオキシ−１０−メトキシ−６−（２−メチルアリル）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸の製造
【０１５６】
【化３８】
0006559324.tif 000042
【０１５７】
９−ベンジルオキシ−１０−メトキシ−２−オキソ−６，７−ジヒドロピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸メチル（０．２０ｇ，５１０マイクロモル）のＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液へ水素化ナトリウム（６１．２ｍｇ，１．５３ミリモル）を０℃で加えた。この混合物を３０分間撹拌してから、３−ブロモ−２−メチルプロパ−１−エン（２７５ｍｇ，２．０４ミリモル）を加えた。生じる混合物をそのまま室温へ温めて、室温で４０時間撹拌した。この混合物へ水と水酸化ナトリウム（４０．８ｍｇ，１．０２ミリモル）を加えた。生じる混合物をさらに２時間撹拌してから、６Ｍ塩酸で酸性化して、ＤＣＭで抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて減圧下で濃縮して、粗製の９−ベンジルオキシ−１０−メトキシ−６−（２−メチルアリル）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（２４１ｍｇ）を得て、これをさらに精製せずに次の工程に使用した。
【０１５８】
工程９：９−ヒドロキシ−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸の製造
【０１５９】
【化３９】
0006559324.tif 000043
【０１６０】
粗製の９−ベンジルオキシ−１０−メトキシ−６−（２−メチルアリル）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（２４１ｍｇ）のＥｔＯＨ（１５ｍＬ）溶液へＰｄ／Ｃ（５０ｍｇ）を加えた。この混合物を水素雰囲気下に室温で１６時間撹拌した。次いで、この混合物を濾過して、濾液を減圧下で濃縮して、粗製の９−ヒドロキシ−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（１２３ｍｇ）を得て、これをさらに精製せずに次の工程に使用した。
【０１６１】
工程１０：６−イソブチル−１０−メトキシ−９−（３−メトキシプロポキシ）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸の製造
【０１６２】
【化４０】
0006559324.tif 000044
【０１６３】
粗製の９−ヒドロキシ−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（６０ｍｇ）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液へ炭酸カリウム（７４．２ｍｇ，５３７マイクロモル）と１−ブロモ−３−メトキシプロパン（６１．６ｍｇ，４０２マイクロモル）を加えた。この混合物を撹拌しながら１００℃で３時間加熱してから、室温へ冷やした。この混合物へ水（３ｍＬ）と水酸化ナトリウム（１０．７ｍｇ，２６８マイクロモル）を加えた。生じる混合物を室温で２時間撹拌してから６Ｍ塩酸で酸性化して、ＤＣＭで抽出した。有機層を減圧下で濃縮して、残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製して、６−イソブチル−１０−メトキシ−９−（３−メトキシプロポキシ）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（１７ｍｇ）を得た。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.40 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.10 (s, 1H), 4.46-4.36 (m, 2H), 4.11 (t, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.48 (t, 2H), 3.26 (s, 3H), 2.55 (d, 2H), 2.05-1.95(m, 2H), 1.69-1.57 (m, 1H), 0.91 (d, 6H); MS obsd. (ESI+) [(M+H)+]: 417。
【０１６４】
実施例７：６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸
【０１６５】
【化４１】
0006559324.tif 000045
【０１６６】
粗製の９−ヒドロキシ−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（６０ｍｇ）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液へ炭酸カリウム（７４．２ｍｇ，５３７マイクロモル）と１，１，１−トリフルオロ−２−ヨードエタン（１６９ｍｇ，８０５マイクロモル）を加えた。この混合物を撹拌しながら１００℃で２０時間加熱した。室温へ冷やした後で、この反応混合物を１Ｍ塩酸とＤＣＭの間で分配した。有機層を減圧下で濃縮して、残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製して、６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（７ｍｇ）を得た。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.42 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 4.90-4.78 (m, 2H), 4.48-4.35 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 2.54 (d, , 2H), 1.66-1.56 (m, 1H), 0.91 (d, 6H); MS obsd. (ESI+) [(M+H)+]: 427。
【０１６７】
実施例８：６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−９−（テトラヒドロピラン−４−イルメトキシ）−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸
【０１６８】
【化４２】
0006559324.tif 000046
【０１６９】
粗製の９−ヒドロキシ−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（６０ｍｇ）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液へ炭酸カリウム（７４．２ｍｇ，５３７マイクロモル）と４−（ヨードメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン（９１ｍｇ，４０２マイクロモル）を加えた。この混合物を撹拌しながら１００℃で３時間加熱してから、室温へ冷やした。上記の混合物へ水（３ｍＬ）と水酸化ナトリウム（１０．７ｍｇ，２６８マイクロモル）を加えた。生じる混合物を室温で２時間撹拌してから、６Ｍ塩酸で酸性化した。この混合物を塩水とＤＣＭの間で分配した。有機層を分離させて減圧下で濃縮した。残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製して、６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−９−（テトラヒドロピラン−４−イルメトキシ）−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（５ｍｇ）を得た。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 8.60 (s, 1H), 7.20 (s, 1H), 7.04 (s, 1H), 6.72 (s, 1H), 4.36-4.16 (m, 2H), 4.08-4.01 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.92 (d, 2H), 3.52-3.43 (m, 2H), 2.53 (d, 2H), 2.24-2.19 (m, 1H), 2.05-1.99 (m, 1H), 1.69-1.60 (m, 2H), 1.54-1.42 (m, 2H), 0.96 (d, 6H). MS obsd. (ESI+) [(M+H)+]: 443.
実施例９：６−イソブチル−１０−メトキシ−９−（３−メチルスルホニルプロポキシ）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸
【０１７０】
【化４３】
0006559324.tif 000047
【０１７１】
粗製の９−ヒドロキシ−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（６０ｍｇ）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液へ炭酸カリウム（７４．２ｍｇ，５３７マイクロモル）と４−メチルベンゼンスルホン酸３−（メチルスルホニル）プロピル（１１８ｍｇ，４０２マイクロモル）を加えた。この混合物を撹拌しながら１００℃で３時間加熱してから、室温へ冷やした。上記の混合物へ水（３ｍＬ）と水酸化ナトリウム（１０．７ｍｇ，２６８マイクロモル）を加えた。生じる混合物を室温で２時間撹拌してから、６Ｍ塩酸で酸性化した。この混合物を塩水とＤＣＭの間で分配した。有機層を分離させて減圧下で濃縮した。残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製して、６−イソブチル−１０−メトキシ−９−（３−メチルスルホニルプロポキシ）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（７．８ｍｇ）を得た。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.40 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 4.44-4.38 (m, 2H), 4.22-4.15(m, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.27-3.22 (m, 2H), 3.04 (s, 3H), 2.54 (d, 2H), 2.23-2.16 (m, 2H), 1.66-1.56 (m, 1H), 0.91 (d, 6H); MS obsd. (ESI+) [(M+H)+]: 465.
実施例１０：６−イソブチル−１０−メトキシ−９−（２−モルホリノエトキシ）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸
【０１７２】
【化４４】
0006559324.tif 000048
【０１７３】
粗製の９−ヒドロキシ−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（５７ｍｇ）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液へ炭酸カリウム（８８．１ｍｇ，６３７マイクロモル）と４−（２−ブロモエチル）モルホリン臭化水素酸塩（８７．６ｍｇ，３１９マイクロモル）を加えた。この混合物を撹拌しながら１００℃で３時間加熱してから、室温へ冷やした。上記の混合物へ水（３ｍＬ）と水酸化ナトリウム（１０．２ｍｇ，２５５マイクロモル）を加えた。生じる混合物を室温で２時間撹拌してから、６Ｍ塩酸で酸性化した。この混合物を塩水とＤＣＭの間で分配した。有機層を分離させて減圧下で濃縮した。残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製して、６−イソブチル−１０−メトキシ−９−（２−モルホリノエトキシ）−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（１０ｍｇ）を得た。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 8.60 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.05 (s, 1H), 6.75 (s, 1H), 4.30-4.23 (m, 4H), 3.95 (s, 3H), 3.76-3.73 (m, 4H), 2.93-2.89 (m, 2H), 2.65-2.62 (m, 4H), 2.53 (d, 2H), 1.68-1.61 (m, 1H), 0.97 (d, 6H); MS obsd. (ESI+) [(M+H)+]: 458.
実施例１１：９−（３−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−プロポキシ）−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸
【０１７４】
【化４５】
0006559324.tif 000049
【０１７５】
粗製の９−ヒドロキシ−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（５７ｍｇ，１２７マイクロモル）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液へ炭酸カリウム（８８．１ｍｇ，６３７マイクロモル）と３−ブロモ−２，２−ジメチルプロパン−１−オール（８５．２ｍｇ，５１０マイクロモル）を加えた。この混合物を撹拌しながら１００℃で３時間加熱してから、室温へ冷やした。上記の混合物へ水（３ｍＬ）と水酸化ナトリウム（１０．２ｍｇ，２５５マイクロモル）を加えた。生じる混合物を室温で２時間撹拌してから、６Ｍ塩酸で酸性化した。この混合物を塩水とＤＣＭの間で分配した。有機層を分離させて減圧下で濃縮した。残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製して、９−（３−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−プロポキシ）−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（７ｍｇ）を得た。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.39 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 4.67-4.61 (m, 1H), 4.42-4.37 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.78 (s, 2H), 3.30-3.28 (m, 2H), 2.54 (d, 2H), 1.65-1.58 (m, 1H), 0.95 (s, 6H), 0.90 (d, 6H); MS obsd. (ESI+) [(M+H)+]: 431.
実施例１２：９−（４−カルボキシブトキシ）−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸
【０１７６】
【化４６】
0006559324.tif 000050
【０１７７】
粗製の９−ヒドロキシ−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（５７ｍｇ，１２７マイクロモル）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液へ炭酸カリウム（８８．１ｍｇ，６３７マイクロモル）と５−ブロモペンタン酸メチル（７４．６ｍｇ，３８２マイクロモル）を加えた。この混合物を撹拌しながら１００℃で３時間加熱してから、室温へ冷やした。上記の混合物へ水（３ｍＬ）と水酸化ナトリウム（２０．４ｍｇ，５１０マイクロモル）を加えた。生じる混合物を室温で２時間撹拌してから、６Ｍ塩酸で酸性化した。この混合物を塩水とＤＣＭの間で分配した。有機層を分離させて減圧下で濃縮した。残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製して、９−（４−カルボキシブトキシ）−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（７ｍｇ）を得た。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.39 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 4.44-4.36 (m, 2H), 4.09-4.03 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 2.53 (d, 2H), 2.33-2.26 (m, 2H), 1.81-1.73 (m, 2H), 1.69-1.59 (m, 3H), 0.91 (d, 6H). MS obsd. (ESI+) [(M+H)+]: 445.
実施例１３：９−（３−シアノプロポキシ）−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸
【０１７８】
【化４７】
0006559324.tif 000051
【０１７９】
粗製の９−ヒドロキシ−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（５７ｍｇ，１２７マイクロモル）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液へ炭酸カリウム（８８．１ｍｇ，６３７マイクロモル）と４−ブロモブタンニトリル（５６．６ｍｇ，３８２マイクロモル）を加えた。この混合物を撹拌しながら１００℃で３時間加熱してから、室温へ冷やした。上記の混合物へ水（３ｍＬ）と水酸化ナトリウム（１０．２ｍｇ，２５５マイクロモル）を加えた。生じる混合物を室温で２時間撹拌してから、６Ｍ塩酸で酸性化した。この混合物を塩水とＤＣＭの間で分配した。有機層を分離させて減圧下で濃縮した。残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製して、９−（３−シアノプロポキシ）−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（１０ｍｇ）を得た。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.40 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 4.45-4.36 (m, 2H), 4.16-4.09 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 2.70-2.62 (m, 2H), 2.54 (d, 2H), 2.09-2.05 (m, 2H), 1.66-1.57 (m, 1H), 0.91 (d, 6H). MS obsd. (ESI+) [(M+H)+]: 412.
実施例１４：９−［５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペントキシ］−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸
【０１８０】
【化４８】
0006559324.tif 000052
【０１８１】
粗製の９−ヒドロキシ−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（５７ｍｇ，１２７マイクロモル）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液へ炭酸カリウム（８８．１ｍｇ，６３７マイクロモル）と４−メチルベンゼンスルホン酸５−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ペンチル（１３７ｍｇ，３８２マイクロモル）を加えた。この混合物を撹拌しながら１００℃で３時間加熱してから、室温へ冷やした。上記の混合物へ水（３ｍＬ）と水酸化ナトリウム（１０．２ｍｇ，２５５マイクロモル）を加えた。生じる混合物を室温で２時間撹拌してから、６Ｍ塩酸で酸性化した。この混合物を塩水とＤＣＭの間で分配した。有機層を分離させて減圧下で濃縮した。残渣を分取用ＨＰＬＣによって精製して、９−［５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペントキシ］−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（１３ｍｇ）を得た。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.39 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.83-6.77 (m, 1H), 4.43-4.36 (m, 2H), 4.07-4.00 (m, 2H), 3.89 (s, 3H), 2.97-2.89 (m, 2H), 2.54 (d, 2H), 1.79-1.71 (m, 2H), 1.66-1.56 (m, 1H), 1.46-1.34 (m, 13H), 0.90 (d, 6H). MS obsd. (ESI+) [(M+H)+]: 530.
実施例１５：９−（５−アミノペントキシ）−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸塩酸塩
【０１８２】
【化４９】
0006559324.tif 000053
【０１８３】
９−［５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペントキシ］−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸（８ｍｇ，１５．１マイクロモル）のＭｅＣＮ（０．５ｍＬ）溶液へ塩酸（５．５１μＬ，１８１マイクロモル）を加えた。この混合物を室温で２時間撹拌してから減圧下で濃縮して、９−（５−アミノペントキシ）−６−イソブチル−１０−メトキシ−２−オキソ−７Ｈ−ピリド［２，１−ａ］フタラジン−３−カルボン酸塩酸塩（７ｍｇ）を得た。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.40 (s, 1H), 7.90-7.79 (m, 3H), 7.61 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 4.45-4.36 (m, 2H), 4.09-4.02 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 2.85-2.76 (m, 2H), 2.56-2.52 (m, 2H), 1.83-1.77 (m, 2H), 1.67-1.58 (m, 3H), 1.52-1.42 (m, 2H), 0.91 (d, 6H); MS obsd. (ESI+) [(M+H)+]: 430。
【０１８４】
生物学的実施例
実施例１６  材料と方法
ＨＢＶ細胞系
１０％胎仔ウシ血清（Invitrogen）と２００ｍｇ／Ｌの最終濃度でのＧ４１８（Invitrogen）を補充して５％  ＣＯ２において３７℃で維持した、ＤＭＥＭ＋Ｇｌｕｔａｍａｘ−Ｉ培地（Invitrogen，カリフォルニア州カールスバッド、アメリカ）において、恒常的にＨＢＶを発現する細胞系であるＨｅｐＧ２．２．１５細胞（Acs et al. Proc Natl Acad Sci USA, 84, (1987), 4641-4）を培養した。
【０１８５】
ＨＢｓＡｇアッセイ
ＨｅｐＧ２．２．１５細胞を、白色の９６ウェルプレート中へ１．５×１０４個の細胞／ウェルで、同一２検体で播いた。この細胞をＤＭＳＯ中の化合物の３倍系列希釈液で処理した。すべてのウェルにおいて最終ＤＭＳＯ濃度は１％であって、薬物無しの対照としてＤＭＳＯを使用した。
【０１８６】
ＨＢｓＡｇ化学発光イムノアッセイ（ＣＬＩＡ）キット（Autobio Diagnostics 社、鄭州、中国、カタログ番号：ＣＬ０３１０−２）を使用して、分泌されたＨＢＶ抗原のレベルを半定量的に測定した。検出には、５０μＬ／ウェルの培養上清を使用して、ＨＢｓＡｇ化学発光免疫アッセイ（ＣＬＩＡ）キット（Autobio Diagnostics 社、鄭州、中国、カタログ番号：ＣＬ０３１０−２）を使用してＨＢｓＡｇを定量し、その上清の５０μＬをＣＬＩＡアッセイプレートへ移して、各ウェルへ５０μＬの酵素コンジュゲート試薬を加えた。このプレートを密封して、室温で１時間、穏やかに振り混ぜた。上清−酵素混合物を捨てて、ウェルを３００μＬのＰＢＳで６回洗浄した。残余の液体は、吸収性ティッシュペーパーの上でＣＬＩＡプレートを裏返すことによって除去した。各ウェルへ２５μＬの基質Ａと基質Ｂを加えた。１０分のインキュベーションの後で、ルミノメータ（Mithras LB 940 マルチモード・マイクロプレートリーダー）を使用して輝度を測定した。用量応答曲線を作成して、E-WorkBook Suite（ID Business Solutions 社、ギルドフォード、イギリス）を使用することによって、ＩＣ５０値を外挿した。ＩＣ５０は、ＨＢｓＡｇ分泌が「薬物無し」対照と比較して５０％抑制される場合の化合物濃度（又は条件付き培地の対数希釈度）と定義した。
【０１８７】
式Ｉによる化合物について、本明細書に記載のようにＨＢｓＡｇを阻害するその能力を検定した。上記アッセイにおいて本実施例を検定して、５０μＭ未満のＩＣ５０を有することを見出した。式Ｉの特別な化合物は、１．０μＭ未満のＩＣ５０を有することを見出した。ＨＢｓＡｇアッセイの結果を表１に示す。
【０１８８】
表１：活性データのリスト
【０１８９】
【表１】
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