(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液がんに罹患した患者の治療に対する応答性を予測するインビトロの方法であって、前記方法は、治療前に前記がん患者から得られた試料中の１つ又は複数のＭＤＭ２タンパク質発現細胞型の相対量を検出すること、及び医薬による治療に対する前記患者の応答を予測するためのバイオマーカーとして、ＭＤＭ２タンパク質を発現する細胞の前記相対量又はパーセンテージ（％）を使用することを含み、ここで医薬は、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物を含み、かつ前記ＭＤＭ２タンパク質発現細胞型又はバイオマーカーは、（ｉ）ＣＤ４５ｄｉｍ細胞；（ｉｉ）ＣＤ４５ｄｉｍ及びＣＤ３４＋細胞；（ｉｉｉ）ＣＤ４５ｄｉｍ及びＣＤ１１７（ｃ−ｋｉｔ）＋細胞；（ｉｖ）ＣＤ４５ｄｉｍ及びＣＤ３４＋並びにＣＤ１１７（ｃ−ｋｉｔ）＋細胞からなる群から選択され、前記ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤が、式（Ｂ）の化合物４−｛［２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸
0006608439.tif 000020
及び
式（Ｃ）の化合物４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸  １−ｍＰＥＧ−カルボニルオキシ−エチル  エステル（ｍＰＥＧ、平均ＭＷ、〜２０００）
0006608439.tif 000021
から選択される、方法。
【請求項２】
前記方法が、
ａ）血液がん患者から得られた試料中のＭＤＭ２タンパク質発現ＣＤ４５ｄｉｍ芽球細胞の前記相対量を検出することと；
ｂ）ａ）で得られたＭＤＭ２タンパク質発現ＣＤ４５ｄｉｍ芽球細胞の相対量を、同じがんを有する患者からの標準値と比較すること；
とを含み、
ａ）で検出された量が前記標準値を上回る場合、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物を含む医薬が投与されることが決定される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
がんが、血液悪性腫瘍である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記患者が、白血病に罹患している、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項５】
前記患者が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）に罹患している、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ＭＤＭ２タンパク質発現ＣＤ４５ｄｉｍ芽球細胞の相対量が、フローサイトメトリーによって検出される、請求項１から５の何れか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記患者から得られた試料が、血液試料又は骨髄試料である、請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
治療前に前記患者から得られた前記試料中に検出されたＭＤＭ２タンパク質発現ＣＤ４５ｄｉｍ芽球細胞の相対量が４５％又は５５％を超える場合に、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物を含む前記医薬が投与されることが決定される、請求項１から７の何れか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記方法が、
ａ）ＡＭＬに罹患している患者から得られた血液または骨髄試料中のＭＤＭ２タンパク質発現ＣＤ４５ｄｉｍ芽球細胞の相対量をフローサイトメトリーにより検出することと；
ｂ）ａ）で得られたＭＤＭ２タンパク質発現ＣＤ４５ｄｉｍ芽球細胞の相対量を、同じがんを有する患者からの標準値と比較すること；
とを含み、
ａ）で検出された量が前記標準値を上回る場合、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物を含む医薬が投与されることが決定される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物を含む医薬が、シタラビンと、又はシタラビンとアントラサイクリンの組み合わせと同時又は逐次的に組み合わせて投与されることが決定される、請求項１から９の何れか一項に記載の方法。
【請求項１１】
ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤を有効成分として含む医薬を投与する前に、血液がん患者のｐ５３遺伝子変異状態を検出する工程を更に含む、請求項１から１０の何れか一項に記載の方法。
【請求項１２】
血液がん治療を必要とする患者において、血液がんを治療するための医薬であって、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物を含み、治療前に前記がん患者から得られた試料中のＭＤＭ２タンパク質発現ＣＤ４５ｄｉｍ芽球細胞の相対量が４５％又は５５％を上回る場合に、該医薬が投与され、前記ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤が、式（Ｂ）の化合物４−｛［２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸
0006608439.tif 000022
及び
式（Ｃ）の化合物４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸  １−ｍＰＥＧ−カルボニルオキシ−エチル  エステル（ｍＰＥＧ、平均ＭＷ、〜２０００）
0006608439.tif 000023
から選択される、医薬。
【請求項１３】
患者が、白血病に罹患している、請求項１２に記載の医薬。
【請求項１４】
患者が、ＡＭＬに罹患している、請求項１２又は１３に記載の医薬。
【請求項１５】
試料が、治療前に患者から得られた血液又は骨髄試料であり、ＭＤＭ２タンパク質発現ＣＤ４５ｄｉｍ芽球細胞の相対量がフローサイトメトリーによって検出される、請求項１２から１４の何れか一項に記載の医薬。
【請求項１６】
ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物を含む医薬であって、フローサイトメトリーにより検出された、ＡＭＬに罹患している患者からの血液又は骨髄試料中のＭＤＭ２タンパク質発現ＣＤ４５ｄｉｍ芽球細胞の相対量が、同じがんを有する患者からの標準値と比較して、該標準値を上回る場合、該医薬が投与される、請求項１２に記載の医薬。
【請求項１７】
ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物を含む医薬が、シタラビンと、又はシタラビンとアントラサイクリンの組み合わせと同時又は逐次的に組み合わせて投与される、請求項１２から１６の何れか一項に記載の医薬。
【請求項１８】
ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤を有効成分として含む医薬を投与する前に、がん患者のｐ５３遺伝子変異状態が更に検出される、請求項１２から１７の何れか一項に記載の医薬。
【請求項１９】
ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物を含む医薬による治療に対する応答を予測するためのキットであって；
ａ）血液がんに罹患している患者から血液又は骨髄試料を得るための手段；
ｂ）その試料からＭＤＭ２タンパク質発現ＣＤ４５ｄｉｍ芽球細胞の相対量、及び場合によりｐ５３遺伝子変異状態をも検出する方法の説明書；
ｃ）ｂ）で検出されたパラメーターについての標準値及びそれらの使用法の説明書を含むコンパレーターモジュール；並びに
ｄ）ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物を含む医薬
を含む、キット。
【請求項２０】
ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物が、請求項１２に記載の医薬において使用される化合物である、請求項１９に記載のキット。
【請求項２１】
ＢＡＸ、ＲＰＳ２７Ｌ、ＥＤＡ２Ｒ、ＸＰＣ、ＤＤＢ２、ＦＤＸＲ、ＭＤＭ２、ＣＤＫＮ１Ａ、ＴＲＩＡＰ１、ＢＢＣ３、ＣＣＮＧ１、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、又はＣＤＫＮ２Ａからなる群から選択される少なくとも１つの遺伝子のレベルを検出すること、及び組み合わせスコア（ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｓｃｏｒｅ）「Ｓ」を得るために、その値を、請求項１に記載のＭＤＭ２タンパク質発現細胞の相対量と組み合わせること、及び化合物に対する患者の応答を予測するためのバイオマーカーとしてその組み合わせスコア「Ｓ」を使用することを更に含む方法であって、ここで該化合物がＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤である、請求項１から１１の何れか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記方法が以下の工程：
ａ）ベースライン時に患者から得られた血液及び／又は骨髄生検試料中のＭＤＭ２タンパク質発現ＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞の相対量（％）（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）を測定する工程と；
ｂ）ＲＴ−ＰＣＲによって前記試料中のＭＤＭ２、ＸＰＣ、ＢＢＣ３及びＣＤＫＮ２ＡのｍＲＮＡ発現レベルを測定し、次式に従って３−遺伝子シグネチャースコアＳ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲを計算する工程と：
Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＝ＧＸＰＣ＋ＧＢＢＣ３−ＧＣＤＫＮ２Ａ又は
Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＝ＧＸＰＣ＋ＧＢＢＣ３＋ＧＭＤＭ２
（式中、Ｇｘ＝２ｄｅｌｔａ−ＣＰｘ及びｄｅｌｔａ−ＣＰｘ＝ＣＰｈｏｕｓｅｋｅｅｐｅｒ−ＣＰｘである）；
ｃ）値Ｓを計算するために、ａ）及びｂ）で得られた値を用いて、以下のアルゴリズムの１つに従って多変量解析を適用する工程と：
Ｓ＝Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ；又は
Ｓ＝Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）；又は
Ｓ＝Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＋ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）；
ｄ）ｃ）で得られた前記「Ｓ」の値を、同じがんを有する患者から得られた標準値と比較する工程；
とを含み、
ｃ）で得られた「Ｓ」の値が前記標準値を上回っている場合、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物が投与されることが決定される、治療に対する血液がんに罹患した患者の応答性を予測するためのインビトロでの方法である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記方法が以下の工程：
ａ）ベースライン時に患者から得られた血液及び／又は骨髄生検試料中のＭＤＭ２タンパク質発現ＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞の相対量（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ（％））を測定する工程と；
ｂ）ＲＴ−ＰＣＲによって前記試料中のＭＤＭ２、ＸＰＣ、ＢＢＣ３及びＣＤＫＮ２ＡのｍＲＮＡ発現レベルを測定し、次式に従って４−遺伝子シグネチャースコアＳ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲを計算する工程と：
Ｓ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＝ＧＭＤＭ２＋ＧＸＰＣ＋ＧＢＢＣ３−ＧＣＤＫＮ２Ａ
（式中、Ｇｘ＝２ｄｅｌｔａ−ＣＰｘ及びｄｅｌｔａ−ＣＰｘ＝ＣＰｈｏｕｓｅｋｅｅｐｅｒ−ＣＰｘである）；
ｃ）値Ｓを計算するために、ａ）及びｂ）で得られた値を用いて、以下のアルゴリズムの１つに従って多変量解析を適用する工程と：
Ｓ＝Ｓ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ；又は
Ｓ＝Ｓ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）；又は
Ｓ＝Ｓ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＋ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）；
ｄ）ｃ）で得られた前記「Ｓ」の値を、同じがんを有する患者から得られた標準値と比較する工程；
とを含み、
ｃ）で得られた「Ｓ」の値が前記標準値を上回っている場合、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物が投与されることが決定される、治療に対する血液がんに罹患した患者の応答性を予測するためのインビトロでの方法である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
がん患者がＡＭＬに罹患しており、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤が、請求項１に記載の方法において使用される化合物である、請求項２２又は２３に記載の方法。
【請求項２５】
血液がんに罹患している患者を治療するための医薬であって、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物を含み、請求項２２又は２３の方法に記載の値「Ｓ」が検出され、「Ｓ」の値が標準値を上回る場合に前記治療が開始又は継続される、医薬。
【請求項２６】
患者のｐ５３変異状態、年齢又はＥＣＯＧスコアの群から独立して選択される少なくとも１つの追加の共変量を更に含む、請求項１、２２又は２３の何れか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
ＴＰ５３遺伝子は、がんの発達の間の保護において重要な役割を果たす腫瘍抑制タンパク質をコードする。Ｐ５３は、細胞周期を調節する多細胞生物において極めて重要であり、従って、がんの予防に関与する腫瘍抑制因子として作用する。更に、Ｐ５３は、アポトーシス、ＤＮＡ修復及び老化といった細胞周期のコントロールに関与する複数の遺伝子を制御する転写因子である。
【０００２】
非ストレス条件下では、ｐ５３タンパク質のレベルは、ＭＤＭ２の転写がｐ５３によって駆動される負のフィードバックループを介して、ＭＤＭ２（Ｍｕｒｉｎｅ  Ｄｏｕｂｌｅ  Ｍｉｎｕｔｅ  ２）により制御される。ＭＤＭ２タンパク質はＴＰ５３タンパク質に結合し、そのトランス活性化ドメインをブロックする。ＭＤＭ２は、ユビキチン依存性分解のためのｐ５３をマーキングするｐ５３ユビキチンリガーゼとして機能することもできる。
【０００３】
ＭＤＭ２を過剰発現する細胞では、Ｐ５３は活性化されておらず、そのため増殖停止及びアポトーシスが効率よく行われない。Ｐ５３−ＭＤＭ２相互作用の遮断は、Ｐ５３機能を回復させる可能性があり、がん治療の新規アプローチとなりうるものである。ＭＤＭ２アンタゴニストによる腫瘍細胞の処置は、ｐ５３が、遺伝子転写の活性化及び細胞周期停止及びアポトーシスの誘導を含む、その下流の機能を媒介することを可能にするはずである。
【０００４】
ＴＰ５３突然変異は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）においてまれであり、これらの悪性腫瘍の発症において主要な重要性を有するとは一般に考えられていない。しかし、ＭＤＭ２は、ＡＭＬにおいて頻繁に過剰発現されることが見出されており、ｐ５３機能の無効化を介して腫瘍形成能及びアポトーシス耐性を増強することができる。野生型ｐ５３を有するＡＭＬ細胞株及び１６の一次ａＡＭＬ試料は、ｐ５３依存性アポトーシスの誘導によってＭＤＭ２アンタゴニスト（阻害剤）に応答することが見出された。これらの知見は、ＡＭＬの治療戦略としてのｐ５３−ＭＤＭ２相互作用の標的化の根拠を裏付けている。
【０００５】
薬物の提案された作用機序に基づいて、このクラスの薬物が有効であるためには、機能的ｐ５３タンパク質及び関連経路エフェクター分子の存在が必要とされる。全ての患者が機能性ｐ５３タンパク質及び関連する経路エフェクター分子を有するわけではない。患者が治療から恩恵を受けることができるかどうかをよりよく判定するために、治療に最も反応する可能性が高い患者を同定するための予測分子検査を発見する必要がある。ＭＤＭ２アンタゴニストに対する応答能を評価するための一つの手法は、ＴＰ５３遺伝子が変異するかどうかを評価することである。しかしながら、これは、がんにおいて多数の変異がＴＰ５３に見られるという事実により複雑になっている。これら変異の全てがｐ５３タンパク質の活性に干渉するわけではないことが、更にＴＰ５３変異テストの解釈を複雑にしている。加えて、野生型ＴＰ５３細胞株及び患者の、ＭＤＭ２アンタゴニストに対する応答には幅がある。また、ｐ５３変異を有する多くのＡＭＬ患者は、ＭＤＭ２アンタゴニスト治療に非応答性であるが、そのような治療に対して耐久性のある応答を示す特定のｐ５３変異を有する患者が残ることが観察されている。従って、容易に解釈できる診断ツールに基づいてＭＤＭ２アンタゴニストに対する応答性を予測可能にすることは、ＭＤＭ２アンタゴニストの臨床開発において、未だ満たされていない需要である。
【０００６】
ある種のＭＤＭ２タンパク質を発現する幹細胞の量に基づくバイオマーカーが、ＭＤＭ２アンタゴニスト療法に最も応答する可能性が高い患者を選択する手段を提供できることが今や見出されている。この方法は、特にｐ５３変異状態、年齢及び臨床エンドポイントの識別においてより高い感度及び特異性を有するアルゴリズムについてのＥＣＯＧのパフォーマンスステータスを含む、他のバイオマーカー評価と組み合わせる可能性も有している。
【発明の概要】
【０００７】
一実施態様において、本発明は、ＭＤＭ２阻害剤による治療に対するがん患者の応答を決定するための方法であって、治療前にその患者から得られた試料中に検出された％ＭＤＭ２陽性細胞が高いほど、前記患者が有益な臨床的エンドポイントに達する可能性が高くなることを特徴とする方法を提供し、ここで、ＭＤＭ２陽性（又はＭＤＭ２発現）細胞は、ＣＤ４５ｄｉｍ芽球細胞、ＣＤ１１７＋（ｃ−ｋｉｔ）及びＣＤ３４＋幹細胞、又はそれらの組み合わせからなる群より選択される。
【０００８】
別の態様において、本発明は、がん患者の、治療法に対する応答を予測する方法に関し、この場合の患者治療法は、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物を用いた治療を含み、前記方法は：
ａ）がん患者から予め得られた試料中のＣＤ４５ｄｉｍ芽球細胞及び／又はＣＤ１１７＋（ｃ−ｋｉｔ）及び／又はＣＤ３４＋幹細胞のレベルを測定して、このレベルを表す１つ又は複数の値を得る工程；又は
ｂ）がん患者から予め得られた試料中のＭＤＭ２発現ＣＤ４５ｄｉｍ細胞及び／又はＣＤ１１７＋（ｃ−ｋｉｔ）及び／又はＣＤ３４＋幹細胞の％を測定する工程；及び
ｃ）工程ａ）及び／又はｂ）の一又は複数の値を、一又は一組の基準値と比較する工程
を含む。
【０００９】
ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物（ＭＤＭ２−阻害剤、ＭＤＭ２−アンタゴニストは、当技術分野で既知である。ＭＤＭ２−阻害剤及びその作製方法は、例えば、米国特許第８３５４４４４Ｂ２号、並びに国際公開第２００７／０６３０１３号、国際公開第２０１０／０３１７１３号及び国際公開第２０１１／０９８３９８号に開示されており、これらはその全体が本明細書に包含される。更なるＭＤＭ２−阻害剤が国際公開第２０１３／１３５６４８号に開示されており、これはその全体が本明細書に包含される。米国特許第８３５４４４４Ｂ２号、並びに国際公開第２０１０／０３１７１３号、国際公開第２０１１／０９８３９８号は、例えば、式Ｉ、ＩＩ及びＩＩａの化合物を開示している。
0006608439.tif 000002
国際公開第２０１３／１３５６４８号は、例えば式ＩＩＩの化合物を開示している。
0006608439.tif 000003
【００１０】
一態様において、本発明は、がん患者の、治療法に対する応答を予測する方法に関し、この場合の患者治療法は、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物（「ＭＤＭ２阻害剤」）、具体的には米国特許第８３５４４４４Ｂ２号の実施例、又は国際公開第２００７／０６３０１３号、国際公開第２０１０／０３１７１３号、国際公開第２０１１／０９８３９８号及び国際公開第２０１３／１３５６４８号に開示されたＭＤＭ２阻害剤を用いた治療を含む。
【００１１】
更なる態様において、本発明は、新生物疾患、例えばがんを、治療を必要とする患者において治療する方法であって、ＭＤＭ２陽性細胞型のレベルを表す１つ又は複数の値を検出するために患者から得られた試料中のＭＤＭ２陽性細胞型のレベルを、又は検出可能なＭＤＭ２表現型（ｅｘｐｒｅｓｓａｎｔ）を発現するそのような細胞の％を測定すること、及び前記値が基準レベルを上回る場合に、本明細書で更に定義される一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ若しくはＩＩＩの化合物又はその薬学的に許容される誘導体を含む医薬により患者を治療することを含み、ここで、前記細胞型は、ＣＤ４５ｄｉｍ細胞、ＣＤ１１７＋（ｃ−ｋｉｔ）及びＣＤ３４＋幹細胞からなる群から選択される細胞型の１つ又は複数である。
【００１２】
更に別の態様において、本発明は、本明細書で定義されるＭＤＭ２阻害剤を含む医薬によるがん患者の治療の応答を予測するためのキットであって、ＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞、ＣＤ１１７＋（ｃ−ｋｉｔ）及びＣＤ３４＋幹細胞から選択される１つ又は複数の細胞型のレベルを測定するために必要な試薬を含み、必要に応じて前記患者から得られた試料中のｐ５３遺伝子変異状態を測定することを含む。このキットはまた、試料中の応答レベルが比較される標準値又は標準値のセットを含む比較モジュールを、そのような比較を行う方法の説明書と共に含む。キットはまた、本明細書で定義されるＭＤＭ２阻害剤との組み合わせのための１つ又は複数の他の治療的に活性な薬剤を含み得る。
【００１３】
更に好ましくは、キットは、ＭＤＭ２阻害剤、好ましくは、具体的に米国特許第８３５４４４４Ｂ２号、又は国際公開第２００７／０６３０１３号、国際公開第２０１０／０３１７１３号、国際公開第２０１１／０９８３９８号及び国際公開第２０１３／１３５６４８号に開示されているＭＤＭ２−阻害剤；又は式ＩＩａ又はＩＩＩによる化合物；又は本明細書に開示される特定のＭＤＭ２−阻害剤を含む。
【００１４】
このように、本発明は、ＭＤＭ２アンタゴニスト療法に対する感受性を同定するための方法に関する。更に、本発明は、血液中のＭＤＭ２タンパク質発現細胞の量について、治療前（ベースライン時）に患者を試験することにより、ＭＤＭ２アンタゴニストを用いてがん患者を治療するための方法に関し、ここで、前記ＭＤＭ２タンパク質発現細胞が、ＣＤ４５ｄｉｍ（ｂｌｓｔ）細胞及び／又はＣＤ１１７＋（ｃ−ｋｉｔ）及び／又はＣＤ３４＋幹細胞から選択される。
【００１５】
本発明はまた、がん、より詳細には急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）に罹患している患者の、本明細書で定義されるＭＤＭ２阻害剤、又は前記ＭＤＭ２阻害剤とシタラビン（Ａｒａ−Ｃ）及び／又はアントラサイクリンとの組み合わせによる治療に対する応答を決定するための予測メカニズムとしてのＣＤ４５ｄｉｍ細胞、ＣＤ１１７＋（ｃ−ｋｉｔ）及び／又はＣＤ３４＋幹細胞の使用にも関する。
【００１６】
本発明はまた、ＭＤＭ２アンタゴニスト療法に対する感受性を同定するための上記方法の何れかに関し、ＢＡＸ、ＲＰＳ２７Ｌ、ＥＤＡ２Ｒ、ＸＰＣ、ＤＤＢ２、ＦＤＸＲ、ＭＤＭ２、ＣＤＫＮ１Ａ、ＴＲＩＡＰ１、ＢＢＣ３、ＣＣＮＧ１、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、又はＣＤＫＮ２Ａからなる群から選択される少なくとも１つの遺伝子のレベルを検出すること、及び組み合わせスコア（ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｓｃｏｒｅ）「Ｓ」を得るために、その値を、上記の方法の何れかに従って検出されたＭＤＭ２タンパク質発現細胞の相対量と組み合わせること、及び化合物に対する患者の応答を予測するためのバイオマーカーとしてその組み合わせスコア「Ｓ」を使用することを更に含み、ここでその化合物は、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤である。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】電子ゲーティングによる生きた細胞、ＣＤ４５ｄｉｍ／ＳＳＣ低芽球及びＣＤ３４＋芽球の同定。
【図２】ＣＤ４５ｄｉｍ芽球集団及びＣＤ４５ｄｉｍ／ＣＤ３４陽性芽球集団におけるＭｄｍ２陽性細胞の同定。Ｍｄｍ２陽性の境界線を描くために、アイソタイプコントロール（上の２つのドットプロット）が使用される。
【図３】ＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞におけるＭＤＭ２タンパク質の発現対最良総合効果；（ａ）変異体ｐ５３を含む；及び（ｂ）変異体ｐ５３なし。
【図４ａ】ＡＭＬ臨床試験（識別子：ＮＰ２９６７９、パート１及び２）における患者の応答による組み合わせスコア「Ｓ」の相関（ＣＲ、非ＣＲ）、ここでは「Ｓ」は実施例２の４−遺伝子シグネチャー及びＭＤＭ２陽性ＣＤ４５ｄｉｍ芽球細胞の相対量（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）を用いて計算される；ｐ５３変異体患者を含む：  ４ａ  ｉ）  Ｓ＝Ｓ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ，  ４ａ  ｉｉ）  Ｓ＝Ｓ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ），  ４ａ  ｉｉｉ）  Ｓ＝Ｓ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＋ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）；「Ｓ」は実施例２の４−遺伝子シグネチャー及びＭＤＭ２陽性ＣＤ４５ｄｉｍ芽球細胞の相対量（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）を用いて計算される；ｐ５３野生型（ｗｔ）患者のみを含む：  ４ａ  ｉｖ）  Ｓ＝Ｓ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ，  ４ａ  ｖ）  Ｓ＝Ｓ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ），  ４ａ  ｖｉ）  Ｓ＝Ｓ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＋ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）．
【図４ｂ】ＡＭＬ臨床試験（識別子：ＮＰ２９６７９、パート１及び２）における患者の応答による組み合わせスコア「Ｓ」の相関（ＣＲ、非ＣＲ）、ここでは「Ｓ」は実施例２の３−遺伝子シグネチャー及びＭＤＭ２陽性ＣＤ４５ｄｉｍ芽球細胞の相対量（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）を用いて計算される；ｐ５３変異体患者を含む：  ４ｂ  ｉ）  Ｓ＝Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ，  ４ｂ  ｉｉ）  Ｓ＝Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ），  ４ｂ  ｉｉｉ）  Ｓ＝Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＋ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）；「Ｓ」は実施例２の３−遺伝子シグネチャー及びＭＤＭ２陽性ＣＤ４５ｄｉｍ芽球細胞の相対量（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）を用いて計算される；ｐ５３野生型（ｗｔ）患者のみを含む：  ４ｂ  ｉｖ）  Ｓ＝Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ，  ４ｂ  ｖ）  Ｓ＝Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ），  ４ｂ  ｖｉ）  Ｓ＝Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＋ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）．
【図５】ＡＭＬ臨床試験（識別子：ＮＰ２９６７９、パート１及び２）における患者の応答によるＭＤＭ２（ｉ）、ＢＢＣ３（ｉｉ）、ＸＰＣ（ｉｉｉ）又はＣＤＫＮ２Ａ（ｉｖ）の各々単独のｍＲＮＡ発現レベルに基づいたスコアの相関；ｐ５３野生型（ｗｔ）及びｐ５３変異体患者を含む。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
発明の詳細な記載
一実施態様において、本発明の方法における使用のためのＭＤＭ２−ｐ５３相互作用を阻害する化合物（「ＭＤＭ２阻害剤」又は「ＭＤＭ２アンタゴニスト」）は、任意のＭＤＭ２阻害剤、好ましくは小分子ＭＤＭ２阻害剤である。別の実施態様において、前記ＭＤＭ２阻害剤は、米国特許第８，３５４，４４４（Ｂ２）号、又は国際公開第２００７／０６３０１３号、国際公開第２０１０／０３１７１３号、国際公開第２０１１／０９８３９８号及び国際公開第２０１３／１３５６４８号に具体的に開示されている化合物である。
【００１９】
一実施態様において、本発明による方法に使用されるＭＤＭ２−阻害剤は、式Ｉの化合物
0006608439.tif 000004
（式中、
Ｘは、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、シアノ、ニトロ、エチニル、シクロプロピル、メチル、エチル、イソプロピル、ビニル及びメトキシからなる群より選択され、
Ｙは、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＯＨ、ニトロ、低級アルキル、シクロアルキル、低級アルコキシ、低級アルケニル、シクロアルケニル、低級アルキニル、アリール、ヘテロアリール、複素環、ＣＯＯＲ’、ＯＣＯＲ’、ＣＯＮＲ’Ｒ”、ＮＲ’ＣＯＲ”、ＮＲ”ＳＯ２Ｒ’、ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”及びＮＲ’Ｒ”からなる群より独立して選択される一つ〜四つの基であり、ここで
Ｒ’及びＲ”は、Ｈ、低級アルキル、置換低級アルキル、低級シクロアルキル、置換低級シクロアルキル、低級アルケニル、置換低級アルケニル、低級シクロアルケニル、置換低級シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環、又は置換複素環から独立して選択され、
Ｒ’とＲ”が独立して結合し、置換若しくは無置換シクロアルキル、置換若しくは無置換シクロアルケニル、置換若しくは無置換ヘテロアリール又は置換若しくは無置換複素環から選択される環状構造を形成する場合、
Ｒ１及びＲ２の一方は、低級アルキル、
置換低級アルキル、低級アルケニル、置換低級アルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環、置換複素環、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、及び置換シクロアルケニルからなる群より選択され、他方は水素又は低級アルキルであり，
Ｒ３はＨ又は低級アルキルであり，
Ｒ４及びＲ５の一方は、低級アルキル、置換低級アルキル、低級アルケニル、置換低級アルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環、置換複素環、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル，及び置換シクロアルケニルからなる群より選択され、他方は水素であり、
Ｒ６及びＲ７は、（ＣＨ２）ｎ−Ｒ’、（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’ＣＯＲ”、（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”、（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＲ’、（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２）ｎ−ＯＲ’、（ＣＨ２）ｎ−ＳＲ’、（ＣＨ２）ｎ−ＳＯＲ’、（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２Ｒ’、（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＲ’、（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、（ＣＨ２）ｎ−ＳＯＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ’、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＲ’、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’ＣＯＲ”、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＲ’、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２Ｒ’、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＲ’、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ’、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＲ’、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’ＣＯＲ”、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＲ’、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２Ｒ’、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＲ’、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯＮＲ’Ｒ”、（ＣＨ２）ｐ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”、−ＣＯＲ’、−ＳＯＲ’及びＳＯ２Ｒ’からなる群から選択され、ここでＲ’及びＲ’’は上記の通りであり、
ｍ、ｎ及びｐは、独立して０から６である）、及び
その薬学的に許容される塩及びエステルである。
【００２０】
この実施態様の範囲内において、好ましい式Ｉの化合物は、式ＩＩに示す立体化学構造を有し得る。
0006608439.tif 000005
【００２１】
一実施態様において、本発明による方法において使用のためのＭＤＭ２阻害剤は、式ＩＩａの化合物であり
0006608439.tif 000006
式中、
Ｒ６は−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ’であり、
Ｒ’はシクロヘキシルであるか、又は
１又は２の炭素原子がＮ、Ｓ又はＯによって置換されてよく、且つ前述のシクロヘキシル又は芳香族炭化水素が、低級アルキル、低級−アルケニル、低級−アルキニル、ジオキソ−低級−アルキレン（例えば、ベンゾジオキシル基を形成する）、ハロゲン、ヒドロキシ、ＣＮ、ＣＦ３、ＮＨ２、Ｎ（Ｈ、低級−アルキル）、Ｎ（低級−アルキル）２、アミノカルボニル、カルボキシ、ＮＯ２、低級−アルコキシ、チオ−低級−アルコキシ、低級−アルキルスルホニル、アミノスルホニル、低級−アルキルカルボニル、低級−アルキルカルボニルオキシ、低級−アルコキシカルボニル、低級−アルキル−カルボニル−ＮＨ、フルオロ−低級−アルキル、フルオロ−低級−アルコキシ、低級−アルコキシ−カルボニル−低級−アルコキシ、カルボキシ−低級−アルコキシ、カルバモイル−低級−アルコキシ、ヒドロキシ−低級−アルコキシ、ＮＨ２−低級−アルコキシ、Ｎ（Ｈ、低級−アルキル）−低級−アルコキシ、Ｎ（低級−アルキル）２−低級−アルコキシ、低級−アルキル−１−オキシラニル−低級−アルコキシ−低級−アルキル、２−オキソ−ピロリジン−１−イル，（１，１−ジオキソ）−２−イソチアゾリジン、３−低級−アルキル  スルフィニル、置換又は無置換複素環式環、置換又は無置換アリール環、置換又は無置換ヘテロアリール環、トリフルオロ−低級−アルキルスルホニルアミノ−アリール、低級−アルキル  スルホニルアミノカルボニル、低級−アルキル  スルホニルアミノカルボニル−アリール、ヒドロキシカルバモイル−フェニル、ベンジルオキシ−低級−アルコキシ、モノ−又はジ−低級アルキル置換アミノ−スルホニル及びハロゲン、ヒドロキシ、ＮＨ２、Ｎ（Ｈ、低級アルキル）又はＮ（低級アルキル）２で置換されてもよい低級−アルキルから独立に選択される基により一度又は二度置換可能である、５〜１０員の単環式又は二環式芳香族炭化水素であり；
ｎは、０又は１である。
【００２２】
この実施態様の範囲内において、
Ｒ６は−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ’であり、
Ｒ’はそれぞれ無置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシカルボニル、カルボキシ、カルボキシ Ｃ１−６アルコキシ、オキソ及びＣＮから独立して選択される置換基により一度又は二度置換可能である、フェニル、ピリジニル、ピラジニル又はピリミジニルであり；
ｎは０である、式ＩＩａの化合物が好ましい。
【００２３】
別の実施態様において、本発明による方法において使用のためのＭＤＭ２阻害剤は、式ＩＩＩの化合物
0006608439.tif 000007
（式中、
ＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、シアノ、ニトロ、エチニル、シクロプロピル、メチル、エチル、イソプロピル、ビニル及びメトキシからなる群より選択され、
Ｙは、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＯＨ、ニトロ、低級アルキル、シクロアルキル、低級アルコキシ、低級アルケニル、シクロアルケニル、低級アルキニルからなる群より独立して選択される一つ〜四つの基であり、
Ｚは低級アルコキシであり，
Ｒ１は低級アルキル、置換低級アルキル、低級アルケニル、置換低級アルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環、置換複素環、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、及び置換シクロアルケニルからなる群より選択され、
Ｒ２は
0006608439.tif 000008
（式中、ＷはＦ、Ｃｌ又はＢｒであり、
ＶはＨ又はＦである）から選択される置換フェニルであり、
Ｒ３は、水素、低級アルキル又は置換低級アルキルから選択され，
Ｒ４は
0006608439.tif 000009
から選択され、
Ｒ５は低級アルキル、置換低級アルキル、複素環、置換複素環、シクロアルキル、置換シクロアルキル、天然及び非天然アミノ酸、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−ＯＣＨ３、−（ＮＣＨ２ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、−（ＮＣＨ２ＣＨ２）ｎ−ＯＣＨ３及び
−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ６）２（式中、
ｎは３から６０、好ましくは３から４５であり，
Ｒ６は水素又はベンジルである）からなる群より選択される）；又は
その薬学的に許容される塩又はエステルである。
【００２４】
この実施態様の範囲内において、
ＸはＨ、Ｆ又はＣｌから選択され、
ＹはＨ、Ｆ又はＣｌから選択され、
Ｒ１は低級アルキル又は置換低級アルキルであり、
Ｒ３は水素又は低級アルキルであり、
Ｒ５は、低級アルキル、置換低級アルキル、天然及び非天然アミノ酸、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−ＯＣＨ３、−（ＮＣＨ２ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、−（ＮＣＨ２ＣＨ２）ｎ−ＯＣＨ３、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ６）２（式中、ｎは３から６０、好ましくは３から４５である）からなる群より選択され、
Ｒ６は水素である式ＩＩＩの化合物；又は
その薬学的に許容される塩が好ましい。
【００２５】
更に、この実施態様の範囲内において、
ＸはＨ、Ｆ又はＣｌから選択され；
ＹはＨ、Ｆ又はＣｌから選択され；
ＺはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ１はＣ１−６アルキルであり；
Ｒ２は
0006608439.tif 000010
（式中、
ＷはＦ、Ｃｌ又はＢｒであり；
ＶはＨ又はＦである）
であり、
Ｒ３は水素又はＣ１−６アルキルであり；
Ｒ４は−Ｃ（Ｏ）−Ｒ５（式中、
Ｒ５は、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−ＯＨ；−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−ＯＣＨ３；及び−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ６）２（ｎは３から６０であり、Ｒ６は水素である）からなる群より選択される）である式ＩＩＩの化合物；又は
その薬学的に許容される塩が好ましい。
【００２６】
更に具体的には、ｎは３から５５、更に好ましくはｎは３から４５である。この実施態様の範囲内において、Ｒ５が−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−ＯＣＨ３であり、ｎが４０から６０である化合物が特に好ましい。
【００２７】
本明細書において記載がある場合は、種々の基は、低級アルキル、低級−アルケニル、低級−アルキニル、ジオキソ−低級−アルキレン（例えば、ベンゾジオキシル基を形成する）、ハロゲン、ヒドロキシ、ＣＮ、ＣＦ３、ＮＨ２、Ｎ（Ｈ、低級−アルキル）、Ｎ（低級−アルキル）２、アミノカルボニル、カルボキシ、ＮＯ２、低級−アルコキシ、チオ−低級−アルコキシ、低級−アルキルスルホニル、アミノスルホニル、低級−アルキルカルボニル、低級−アルキルカルボニルオキシ、低級−アルコキシカルボニル、低級−アルキル−カルボニル−ＮＨ、フルオロ−低級−アルキル、フルオロ−低級−アルコキシ、低級−アルコキシ−カルボニル−低級−アルコキシ、カルボキシ−低級−アルコキシ、カルバモイル−低級−アルコキシ、ヒドロキシ−低級−アルコキシ、ＮＨ２−低級−アルコキシ、Ｎ（Ｈ、低級−アルキル）−低級−アルコキシ、Ｎ（低級−アルキル）２−低級−アルコキシ、低級−アルキル−１−オキシラニル−低級−アルコキシ−低級−アルキル、２−オキソ−ピロリジン−１−イル，（１，１−ジオキソ）−２−イソチアゾリジン、３−低級−アルキル  スルフィニル、置換又は未置換複素環式環、置換又は未置換アリール環、置換又は未置換ヘテロアリール環、トリフルオロ−低級−アルキルスルホニルアミノ−アリール、低級−アルキル  スルホニルアミノカルボニル、低級−アルキル  スルホニルアミノカルボニル−アリール、ヒドロキシカルバモイル−フェニル、ベンジルオキシ−低級−アルコキシ、モノ−又はジ−低級アルキル置換アミノ−スルホニル、及びハロゲン、ヒドロキシ、ＮＨ２、Ｎ（Ｈ、低級アルキル）又はＮ（低級アルキル）２で置換可能な低級アルキルからなる群より独立に選択される、１〜５の又は、好ましくは１〜３の、置換基で置換される。シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環式環に好ましい置換基は、ハロゲン、低級アルコキシ、低級アルキル、ヒドロキシカルボニル、カルボキシ、カルボキシ  低級アルコキシ、オキソ及びＣＮである。アルキルに好ましい置換基は、アルコキシ及びＮ（低級アルキル）２である。
【００２８】
用語「アルキル」は、１から約７の炭素原子を有する基を含み、１から約２０の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖飽和炭化水素基を指す。特定の実施態様においては、アルキル置換基は低級アルキル置換基であってもよい。用語「低級アルキル」は、１から６の炭素原子を有するアルキル基を指し、特定の実施態様においては１から４の炭素原子を有するアルキル基を指す。アルキル基の例には、限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、及びｓ−ペンチルが含まれる。
【００２９】
本明細書で使用される「シクロアルキル」は、炭素原子のみからなり、いずれの環も飽和されている任意の安定な単環系又は多環系を指すことを意図しており、用語「シクロアルケニル」は、炭素原子のみからなり、その少なくとも一つの環が部分的に不飽和である任意の安定な単環系又は多環系を指すことを意図している。シクロアルキルの例には、限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、アダマンチル、シクロオクチル、［２．２．２］ビシクロオクタン又は［３．３．０］ビシクロオクタンなどのビシクロオクタン、［４．３．０］ビシクロノナンなどのビシクロノナン、及び［４．４．０］ビシクロデカン（デカリン）などのビシクロデカンを含むビシクロアルキル、又はスピロ化合物が含まれる。シクロアルケニルの例には、限定されないが、シクロペンテニル又はシクロヘキセニルが含まれる。
【００３０】
本明細書で使用される用語「アルケニル」は、一つの二重結合を含み、２から６の、好ましくは２から４の炭素原子を有する、直鎖又は分岐鎖不飽和脂肪族炭化水素基を意味する。このような「アルケニル基」の例として、ビニルエチニル、アリル、イソプロペニル、１−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、２−エチル−１−ブテニル、３−メチル−２−ブテニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、４−ペンテニル、４−メチル−３−ペンテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、４−ヘキセニル及び５−ヘキセニルが挙げられる。
【００３１】
本明細書で使用される用語「アルキニル」は、一つの三重結合を含み、２から６の、好ましくは２から４の炭素原子を有する、直鎖又は分岐鎖不飽和脂肪族炭化水素基を意味する。このような「アルキニル基」の例として、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、３−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−ペンチニル、４−ペンチニル、１−ヘキシニル、２−ヘキシニル、３−ヘキシニル、４−ヘキシニル及び５−ヘキシニルが挙げられる。
【００３２】
定義において使用される用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素、好ましくはフッ素及び塩素を意味する。
【００３３】
「アリール」は、一価の単環又は二環式芳香族炭素環式炭化水素基、好ましくは６から１０員の芳香環系を意味する。好ましいアリール基には、限定されないが、フェニル、ナフチル、トリル、及びキシリルが含まれる。アリール基が二環式である場合、好ましい基は１，３−ジオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−５−イル基である。
【００３４】
「ヘテロアリール」は、２つ以下の環を含有する芳香族複素環系を意味する。好ましいヘテロアリール基には、限定されないが、チエニル、フリル、インドリル、ピロリル、ピリジニル、ピラジニル、オキサゾリル、チアキソリル（ｔｈｉａｘｏｌｙｌ）、キノリニル、ピリミジニル、イミダゾール、置換又は無置換のトリアゾリル、及び置換又は無置換のテトラゾリルが含まれる。
【００３５】
二環式のアリール又はヘテロアリールの場合、一つの環がアリールであり他方の環がヘテロアリールであり、且つ両方の環が置換又は無置換であり得る。
【００３６】
「ヘテロ環」又は「複素環」は、１から３の炭素原子が窒素、酸素又は硫黄原子から選択されるヘテロ原子により置き換えられている、置換又は無置換の５から８員の単環又は二環式の非芳香族炭化水素を意味する。例には、ピロリジン−２−イル；ピロリジン−３−イル；ピペリジニル；モルホリン−４−イルなどが含まれ、これらは順に置換することができる。「ヘテロ原子」は、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される原子を意味する。
【００３７】
「アルコキシ、アルコキシル又は低級アルコキシ」は、酸素原子に結合した上記低級アルキル基の何れかを指す。典型的な低級アルコキシ基には、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ又はプロポキシ、ブチルオキシなどが含まれる。アルコキシの意味に更に含まれるものとしては、複数のアルコキシ側鎖、例えばエトキシエトキシ、メトキシエトキシ、メトキシエトキシエトキシなど、及び置換アルコキシ側鎖、例えばジメチルアミノエトキシ、ジエチルアミノエトキシ、ジメトキシ−ホスホリルメトキシなどがある。
【００３８】
本明細書において使用される用語「ｍＰＥＧ」はメトキシポリエチレングリコールを意味し、これは市販されている（例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ又はＩＤ  Ｂｉｏｃｈｅｍ（Ｋｏｒｅａ））。ｍＰＥＧの分子量の分布は、製造者及び／又はバッチによって変動し得る。本発明の一実施態様において、ｍＰＥＧは、約１５００Ｄａから約３０００Ｄａの平均分子量（ＭＷ）を有する。本発明の別の実施態様において、ｍＰＥＧは、約２０００Ｄａから約２２００Ｄａの平均ＭＷを有する。平均ＭＷは、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析によって決定される。
【００３９】
薬学的に許容される塩及びエステル、担体、賦形剤などの「薬学的に許容される誘導体」は、特定の化合物が投与される対象にとって薬理学的に受容可能であり、実質的に非毒性であることを意味する。
【００４０】
「薬学的に許容される塩」は、本発明の化合物の生物学的有効性及び特性を保持しており、かつ好適な非毒性の有機酸若しくは無機酸又は有機塩基若しくは無機塩基から形成される一般的な酸付加塩又は塩基付加塩を指す。酸付加塩の例は、無機酸、例えば塩化水素酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、及び硝酸から誘導されるもの、並びに有機酸、例えばｐ-トルエンスルホン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、トリフルオロ酢酸等から誘導されるものを含む。塩基付加塩の例は、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、及び第四級アンモニウム水酸化物、例えばテトラメチルアンモニウム水酸化物から誘導されるものを含む。薬学的化合物（すなわち薬物）の塩への化学的修飾は、化合物の物理的及び化学的安定性、吸湿性、流動性及び溶解性の向上を得るための、薬剤師にとって周知の技法である。例えば、Anselら、Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems(1995)の４５６〜４５７頁を参照されたい。
【００４１】
「ＥＣＯＧスケール」又は「ＥＣＯＧパフォーマンスステータス」という用語は、患者の疾患（がん）がどのように進行しているかを評価するために科学者及び医師によって開発されたパラメーター又は基準を意味する。このスケールは、米国東海岸がん臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）によって開発され、当業者に周知である。詳細は例えば、Oken, M.M. et al, Am. J. Clin. Oncol., 1982, 649-655を参照。
【００４２】
一実施態様において、本発明による特定のＭＤＭ２阻害剤は、化合物Ａ（ＲＧ７１１２）とも呼ばれる式（Ａ）の化合物である。
0006608439.tif 000011
この化合物とその製造方法は、例えば国際公開第２００７／０６３０１３号に開示されている。
【００４３】
別の実施態様において、本発明による方法において使用のためのＭＤＭ２阻害剤は、式（Ｂ）の４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸である。
0006608439.tif 000012
この化合物及びその製造方法は、例えば国際公開第２０１１／０９８３９８号に開示されている。
【００４４】
本発明による別の特定の化合物は、２−（（１−（４−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−シアノ−５−ネオペンチルピロリジン−２−カルボキサミド）−３−メトキシベンゾイルオキシ）エトキシ）カルボニルアミノ）酢酸である。
【００４５】
本発明による別の特定の化合物は、２−（（（４−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−シアノ−５−ネオペンチルピロリジン−２−カルボキサミド）−３−メトキシベンゾイルオキシ）メトキシ）−カルボニルアミノ）酢酸である。
【００４６】
本発明による更なる化合物は、３−オキソ−２，４，７，１０，１３，１６，１９−ヘプタオキサイコシル  ４−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−シアノ−５−ネオペンチルピロリジン−２−カルボキサミド）−３−メトキシベンゾアートである。
【００４７】
本発明による特定の化合物は、４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸  １−ｍＰＥＧ−カルボニルオキシ−エチル  エステル（ｍＰＥＧ、平均ＭＷ、〜２０００）である。
【００４８】
本発明による特定の化合物は、４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸  １−ｍＰＥＧ−カルボニルオキシ−エチル  エステル（ｍＰＥＧ、平均ＭＷ、〜２２００）である。
【００４９】
本発明による特定の化合物は、４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸  １−ｍＰＥＧ−カルボニルオキシ−メチル  エステル（ｍＰＥＧ、平均ＭＷ、〜２０００）である。
【００５０】
本発明による特定の化合物は、３−オキソ−２，４，７，１０，１３−ペンタオキサテトラデシル  ４−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−シアノ−５−ネオペンチルピロリジン−２−カルボキサミド）−３−メトキシベンゾアートである。
【００５１】
本発明による特定の化合物は、２７−オキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２８−デカオキサトリアコンタン−２９−イル  ４−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロフェニル）−４−シアノ−５−ネオペンチルピロリジン−２−カルボキサミド）−３−メトキシベンゾアートである。
【００５２】
本発明による特定の化合物は、４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸  １−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−２−（（Ｒ）−１，２−ジヒドロキシ−エチル）−４，５−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−３−イルオキシカルボニルオキシ］−エチル  エステルである。
【００５３】
本発明による別の特定の化合物は、４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸  １−（２−｛２−［２−（２−ジベンジルオキシホスホリルオキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシカルボニルオキシ）−エチル  エステルである。
【００５４】
また、本発明による特定の化合物は、４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸  １−（２−｛２−［２−（２−ホスホノオキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシカルボニルオキシ）−エチル  エステルである。
【００５５】
また、本発明による特定の化合物は、式（Ｃ）の４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸  １−ｍＰＥＧ−カルボニルオキシ−エチル  エステル（ｍＰＥＧ、平均ＭＷ、〜２０００）である。
0006608439.tif 000013
平均ＭＷ：〜２６９５
この化合物及びその製造方法は、例えば国際公開第２０１３／１３５６４８号に開示されている。
【００５６】
また、本発明による特定の化合物は、式（Ｄ）の４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸  １−ｍＰＥＧ−カルボニルオキシ−エチル  エステル（ｍＰＥＧ、平均ＭＷ、〜２２００）である。
0006608439.tif 000014
平均ＭＷ：〜２９００
この化合物及びその製造方法は、例えば国際公開第２０１３／１３５６４８号に開示されている。
【００５７】
本発明によれば、がんに罹患した患者の治療に対する応答性を予測する方法が提供され、前記方法は、治療前（ベースライン時）に前記がん患者から得られた試料中の１つ又は複数のＭＤＭ２タンパク質発現細胞型の相対量を検出すること、及び医薬による治療に対する前記患者の応答を予測するためのバイオマーカーとして、ＭＤＭ２タンパク質を発現する細胞の前記相対量又はパーセンテージ（％）を使用することを含み、ここで医薬は、本明細書で定義されるＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物を含み、かつ前記ＭＤＭ２タンパク質発現細胞型又はバイオマーカーは、ＣＤ４５ｄｉｍ細胞、ＣＤ１１７＋（ｃ−ｋｉｔ）及び／又はＣＤ３４＋幹細胞、又はそれらの組み合わせのサブセットからなる群から選択される。
【００５８】
一実施態様において、方法はインビトロの方法である。
【００５９】
別の実施態様において、ＣＤ４５ｄｉｍ細胞、ＣＤ１１７＋（ｃ−ｋｉｔ）及びＣＤ３４＋幹細胞から選択されるＭＤＭ２発現細胞型のそれぞれの相対量（％）は、前記ＭＤＭ２阻害剤による治療に対する前記患者の応答を予測するためのバイオマーカーとして使用することができる。別の実施態様において、前記細胞型の組み合わせサブセットを使用することもできる。この実施態様のうちで、好ましいサブセットは、ｉ）ＭＤＭ２陽性ＣＤ１１７＋（ｃ−ｋｉｔ）及びＣＤ４５ｄｉｍ細胞の相対量（％）；又はｉｉ）ＭＤＭ２陽性ＣＤ３４＋及びＣＤ４５ｄｉｍ細胞の相対量（％）；又はｉｉｉ）ＭＤＭ２陽性ＣＤ３４＋及びＣＤ１１７＋及びＣＤ４５ｄｉｍ細胞の相対量（％）；又はｉｖ）ＭＤＭ２陽性ＣＤ４５ｄｉｍ細胞の相対量（％）である。
【００６０】
従って、別の実施態様において、本発明は、がんに罹患した患者の治療に対する応答性を予測する方法を提供し、前記方法は、治療前（ベースライン時）に前記がん患者から得られた試料中の少なくともＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞の相対量を検出すること、及び医薬による治療に対する前記患者の応答を予測するためのバイオマーカーとして、ＭＤＭ２タンパク質を発現するＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞の前記相対量又はパーセンテージ（％）を使用することを含み、ここで医薬は、本明細書で定義されるＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物を含む。この実施態様及び上記の実施態様の範囲内で、「量」は、治療前（ベースライン時）に前記がん患者から得られた試料中に検出された同じ型の全ての細胞のうち、所与の型のＭＤＭ２発現細胞、例えば、ＣＤ４５ｄｉｍ、ＣＤ３４＋又はＣＤ１１７＋のパーセント（％）で示される相対量である。細胞の検出は、当業者に公知の任意の手段、好ましくはフローサイトメトリーによって行うことができる。
【００６１】
一実施態様において、本方法は連続可変測定である。好ましくは、本方法は、多変量アプローチに基づいており、従って１つ又は複数の組の変数を考慮する。本発明によれば、上のパラグラフ［００５９］で定義したＭＤＭ２発現細胞のサブセットが好ましい変数である。別の実施態様において、本発明による多変量アプローチは、付加的な変量として患者の年齢及び／又はＥＣＯＧスコアを更に含む。期待される治療結果を表す群に患者を層別化するための多変量解析の基本原理は、当業者、例えば、臨床腫瘍学者に周知である。本発明の１つの目的は、本明細書で定義される特定のＭＤＭ２発現細胞及びサブセット（例えば、パラグラフ［００５９］参照）の相対量を単独で又は患者の年齢及び／又はＥＣＯＧスコアと一緒に、前記分析における変量として定義することである。
【００６２】
別の実施態様において、本発明は、例えば、ＭＤＭ２アンタゴニスト療法に応答する可能性が最も高い患者を同定する臨床データ（研究番号ＮＰ２８６７９、パート１及び２）に基づいてＭＤＭ２タンパク質を発現するＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞の量によって特徴付けられる閾値（又はカットオフ）又は１組の値、例えば範囲を同定する。この量は、全てのＣＤ４５ｄｉｍ芽球細胞のうちのＭＤＭ２発現細胞のパーセント（％）で示される相対量である。この量は、好ましくはフローサイトメトリーにより検出され、少なくとも４５％、好ましくは少なくとも５０％のＭＤＭ２タンパク質発現ＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞によって特徴付けられる。それらのレベルを上回るＭＤＭ２タンパク質を発現するＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞を有する患者は、ＭＤＭ２阻害剤（ＭＤＭ２アンタゴニスト）による治療に応答する可能性が最も高く、すなわち、有益な臨床的エンドポイントに達する可能性が最も高い。用語「応答」は、本明細書において更に定義される。前記ＭＤＭ２発現ＣＤ４５ｄｉｍ芽球細胞の相対量は、治療前のがん患者から得られた試料中で測定され、従って、本明細書で定義されるＭＤＭ２阻害剤による前記がん患者の治療の予後及び／又は予測バイオマーカーとして役立つ可能性を有する。別の実施態様において、上記のパラグラフ［００５９］のｉ）〜ｉｖ）で定義された細胞の特定のサブセットの閾値は１０％；又は１５％又は２０％である。それらのレベルを上回るＭＤＭ２タンパク質発現細胞の相対量を有する患者は、ＭＤＭ２阻害剤（ＭＤＭ２アンタゴニスト）による治療に応答する可能性が最も高く、すなわち、有益な臨床的エンドポイントに達する可能性が最も高い。
【００６３】
一実施態様において、がん（又は「腫瘍性疾患」）は、乳がん、前立腺がん、子宮頸がん、卵巣がん、胃がん、結腸直腸がん（すなわち、結腸がん及び直腸がんを含む）、膵臓がん、肝臓がん、脳腫瘍、神経内分泌がん、肺がん、腎臓がん、血液悪性腫瘍、メラノーマ並びに肉腫からなる群より選択される。別の実施態様において、がんは、白血病、リンパ腫及び多発性骨髄腫を含む血液悪性腫瘍からなる群から選択される。また別の実施態様において、がんは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、又は骨髄異型性症候群（ＭＤＳ）、又は骨髄増殖性疾患（ＭＰＮ）である。
【００６４】
本明細書で使用する「応答」という用語は、臨床的エンドポイントを満たすことを意味する。好ましくは、例えば、プラセボ又は標準治療と比較した場合、臨床的エンドポイントは患者にとって有益である。一実施態様において、臨床的エンドポイント又は応答は、全生存期間（ＯＳ）、無増悪生存期間（ＰＦＳ）又は無再発生存期間（ＥＦＳ）を意味する。別の実施態様において、応答という用語は、完全寛解（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ、ＣＲ）、部分応答（ＰＲ）、不完全な血小板回復を伴う完全寛解（ＣＲｉ）、血液学的改善（ＨＩ）、又は（Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ−Ｆｒｅｅ  Ｓｔａｔｅ、ＭＬＦＳ）を意味する。
【００６５】
用語「ＭＤＭ２発現細胞」又は「ＭＤＭ２陽性細胞」又は「ＭＤＭ２タンパク質発現細胞」は、ＭＤＭ２タンパク質発現ＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞、ＣＤ３４＋及びＣＤ１１７＋（ｃ−ｋｉｔ）幹細胞からなる群から選択される細胞型を意味する。
【００６６】
ＭＤＭ２タンパク質発現細胞の「相対量」は、上記で定義したのと同じ型の細胞の全ての細胞のうちのＭＤＭ２タンパク質発現細胞のパーセント（％）を意味する。一実施態様において、「相対量」という用語は、患者の試料中に検出された同じ型の全ての細胞のうちの、約３０％〜約１００％、又は約４５％〜約１００％のＭＤＭ２陽性細胞を意味する。別の実施態様において、「相対量」という用語は、約４５％〜約９０％、又は約５５％〜約８５％、又は約６５％〜約８０％、又は約７０％〜約７５％のＭＤＭ２タンパク質発現細胞を意味する。別の実施態様において、「相対量」という用語は、少なくとも約４５％、又は少なくとも約５５％、又は少なくとも約６５％、又は少なくとも約７５％のＭＤＭ２タンパク質発現細胞を意味する。別の実施態様において、上記の相対量は、ＭＤＭ２陽性ＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞の量を指し、ＭＤＭ２陽性ＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞の量は、試料中の全てのＣＤ４５芽球細胞に対するものである。幾つかの型の細胞（サブセット）が分析に使用される場合、用語「相対量」はまた、前記サブセット内の細胞の総数に基づくＭＤＭ２発現細胞のパーセンテージを意味し得る。
【００６７】
前記ＭＤＭ２タンパク質発現細胞の相対量は、治療前（ベースライン時）に前記がん患者から得られた任意の適切な試料中で測定することができる。一実施態様において、前記試料は血液試料である。別の実施態様において、前記試料は骨髄試料である。当業者に知られている任意の技術が、前記ＭＤＭ２タンパク質発現細胞の前記相対量を検出するために適用可能である。一実施態様において、前記ＭＤＭ２タンパク質発現細胞、特にＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞の相対量は、フローサイトメトリーによって検出される。
【００６８】
一実施態様において、患者は、本明細書で定義されるがんに罹患した人である。別の実施態様において、患者は、例えばＡＭＬのような血液学的障害を患っている。
【００６９】
別の実施態様において、本発明は、ＭＤＭ２阻害剤による治療に対するがん患者の応答を決定するための方法を提供し、以下の工程：
ａ）患者から試料を採取する工程；
ｂ）試料中のＭＤＭ２タンパク質発現細胞の相対量を測定する工程；
ｃ）患者からの前記相対量を標準値、例えば同じがんを有する患者から得られた値と比較する工程；及び
ｄ）ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物を投与する工程
を含む。
この実施態様の範囲内において、本方法が治療に対する患者の応答の予測方法として適用される場合、ａ）の試料は治療開始前に得られ、ｂ）のＭＤＭ２タンパク質発現細胞は、ＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞、ＣＤ１１７＋（ｃ−ｋｉｔ）及びＣＤ３４＋からなる群の１つ又は複数から選択される。
【００７０】
別の実施態様において、本発明は、ＭＤＭ２阻害剤を含む療法に応答する可能性が高いがんに罹患している患者を同定するインビトロの方法を提供し、この方法は、
ａ）治療の前にその患者から得られた試料中のＭＤＭ２タンパク質発現細胞の相対量を測定すること；
ｂ）前記相対量を基準レベルと比較すること；及び
ｄ）試料中のＭＤＭ２タンパク質発現細胞の相対量が前記基準レベルを上回る場合、前記患者を前記ＭＤＭ２阻害剤を含む療法に応答する可能性が高いと同定する工程
を含み、ここで、
ａ）のＭＤＭ２タンパク質発現細胞は、ＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞、ＣＤ１１７＋（ｃ−ｋｉｔ）及びＣＤ３４＋からなる群の１つ又は複数から選択される。
【００７１】
これらの実施態様の範囲内で、基準レベルを上回るａ）で得られた相対量は、ＭＤＭ２阻害剤による治療に応答する患者の高い可能性を示し、一方、前記レベルを下回る相対量は、前記患者がその治療に反応する可能性が低いことを示す。
【００７２】
ＭＤＭ２アンタゴニスト予測ＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞のシグネチャーのパフォーマンスは、ＮＰ２８６７９白血病試験（図３）由来の検体を用いて臨床的状況で試験される。用量漸増試験の一部として処置された３０人のＡＭＬ患者は、フローサイトメトリーによって分析可能な全血液検体を提供した。臨床応答エンドポイントは、５つのカテゴリーに階層化された：完全寛解（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ、ＣＲ）、不完全な血小板回復を伴う完全寛解（ＣＲｉ）、Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ−Ｆｒｅｅ  Ｓｔａｔｅ（ＭＬＦＳ）、部分応答（ＰＲ）、血液学的改善（ＨＩ）、及び進行性疾患（ＰＤ）。血液白血病試料をベースラインスクリーニングで収集した。試料をフローサイトメトリーで分析し、ＣＤ４５ｄｉｍ芽球細胞について特徴付けられ、次いでこれらの細胞のサブセット内で、ＭＤＭ２タンパク質発現に対して陽性と評価されるＣＤ４５ｄｉｍ細胞の％を更に特徴とした。次いで、ＭＤＭ２のベースライン％細胞陽性を、応答者（ＣＲ、ＣＲｉ、ＭＬＦＳ）と非応答者（ＰＲ、ＨＩ、ＰＤ）との間の有意な関連性について試験した。
【００７３】
従って、一実施態様において、本発明は、ＭＤＭ２阻害剤による治療に対するがん患者の応答を決定するための方法であって、治療前にその患者から得られた試料中に検出されたＭＤＭ２陽性ＣＤ４５ｄｉｍ芽球細胞の％が高いほど、例えば、臨床薬理学の当業者に周知のＲＯＣ（ＡＵＣ）値及び分析によって示されるように、前記治療に対する前記患者の応答の可能性が高いことを特徴とする方法を提供する。
【００７４】
別の実施態様において、本発明は、ＭＤＭ２阻害剤による治療に対するがん患者の応答を決定するための方法を提供し、以下の工程：
ａ）患者から試料を採取する工程；
ｂ）試料中のＭＤＭ２タンパク質発現ＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞の相対量を測定する工程；
ｃ）患者からの前記相対量を標準値、例えば同じがんを有する患者から得られた値と比較する工程；及び
ｄ）ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物を投与する工程
を含む。
本方法を治療に対する患者の応答の予測方法として適用する場合、ａ）の試料は治療の開始前に得られる。
【００７５】
別の実施態様において、本発明は、ＭＤＭ２阻害剤を含む療法に応答する可能性が高いがんに罹患している患者を同定するインビトロの方法を提供し、この方法は、
ａ）治療の前にその患者から得られた試料中のＭＤＭ２タンパク質発現ＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞の相対量を測定する工程；
ｂ）前記相対量を基準レベルと比較する工程；及び
ｄ）試料中のＭＤＭ２タンパク質発現ＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞の相対量が前記基準レベルを上回る場合、前記患者を前記ＭＤＭ２阻害剤を含む療法に応答する可能性が高いと同定する工程
を含む。
【００７６】
一実施態様において、基準レベルを上回るａ）で得られた相対量は、ＭＤＭ２阻害剤による治療に応答する患者の高い可能性を示し、一方、前記レベルを下回る相対量は、前記患者がその治療に反応する可能性が低いことを示す。
【００７７】
一実施態様において、ａ）で取得される試料は、血液白血病試料、又は骨髄生検試料である。
【００７８】
一実施態様において、ＭＤＭ２−阻害剤は、具体的に米国特許第８３５４４４４Ｂ２号、又は国際公開第２００７／０６３０１３号、国際公開第２０１０／０３１７１３号、国際公開第２０１１／０９８３９８号及び国際公開第２０１３／１３５６４８号に開示されている化合物；又は式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ又はＩＩＩによる化合物、又はそれらの組み合わせである。別の実施態様において、本発明に従って使用されるＭＤＭ２阻害剤は、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物である。
【００７９】
別の実施態様において、ＭＤＭ２阻害剤は、式（Ｂ）の化合物４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸である。
0006608439.tif 000015
【００８０】
更に別の実施態様において、ＭＤＭ２阻害剤は、式（Ｃ）の化合物４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸  １−ｍＰＥＧ−カルボニルオキシ−エチル  エステル（ｍＰＥＧ、平均ＭＷ、〜２０００）である。
0006608439.tif 000016
（平均ＭＷ：〜２６９５）．
【００８１】
更に別の実施態様において、ＭＤＭ２阻害剤は、式（Ｄ）の化合物４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸  １−ｍＰＥＧ−カルボニルオキシ−エチル  エステル（ｍＰＥＧ、平均ＭＷ、〜２２００）である。
0006608439.tif 000017
（平均ＭＷ：〜２９００）．
【００８２】
本発明に従って使用するためのＭＤＭ２−阻害剤は、当業者に公知である。式ＩＩ、ＩＩＡ又は（Ｂ）の化合物、それらを製造する方法並びにそれらを含有する薬学的製剤は、例えば、米国特許第８，３５４，４４４号又は国際公開第２０１１／０９８３９８号に開示されている。式ＩＩＩ又は（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物及びその製剤は、例えば国際公開第２０１３／１３５６４８号に開示されている。前記ＭＤＭ２阻害剤を患者に投与する目的で、これらの化合物は、薬物送達の当業者に周知の技術に従って薬学的製剤として加工することができる。
【００８３】
本発明の１つの実施態様において、化合物（Ｂ）は、そのアモルファス形態で分子的に分散している経口剤形として投与される。別の実施態様において、化合物（Ｂ）は、核心重量の約８０％（重量／重量）に相当するコポビドン（ＰＶＰ ＶＡ ６４）と共に化合物（Ｂ）を噴霧乾燥して得られた固体分散体を、好ましくはマンニトール、微結晶性セルロース、ラクトース一水和物又は二酸化ケイ素から選択される賦形剤（核心重量の６．８％から最大１０．８％まで）；クロスカルメロースナトリウム又はクロスポビドンから選択される１つ又は２つの崩壊剤（４重量％／核心重量）；流動促進剤（１重量％／核心重量）、好ましくはコロイド状二酸化ケイ素；及び潤滑剤（０．２重量％／核心重量）のステアリン酸マグネシウムと、タンブルミキサーを用いて更にブレンドすることを特徴とする、単位用量固形製剤で投与する。化合物（Ｂ）の上記剤形並びに他の適用可能な剤形は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１４／１１４５７５号に開示されている。
【００８４】
式ＩＩＩ、又は（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物の薬学的製剤は、経口、鼻及び／又は非経口又は静脈内投与に適したものを含む。製剤は、便利に単位剤形で提供することができ、薬学の分野において周知の任意の方法により調製することができる。一実施態様において、式（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物は、約０．１ｍｇ〜約１００ｍｇの化合物（Ｉ）、約１０ｍＭ〜約１００ｍＭの緩衝剤、約２５ｍｇ〜約１２５ｍｇの凍結乾燥増量剤及び等張性ビルダーを含む静脈内投与のための安定な凍結乾燥製剤で提供される。結果として得られる製剤は、ＨＣｌ又はＮａＯＨでの調整により約５〜７のｐＨを有しなければならない。別の実施態様において、式（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物を滅菌水中の０．９％塩化ナトリウムにボルテックスにより溶解し、次いで静脈内投与のためにセプタム密封バイアルにフィルターを通して濾過する。これは静脈内投与のために凍結乾燥製剤として投与することが好ましい。これらの調製物、並びに式ＩＩＩ、又は（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物の他の適用可能な調製物は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる国際特許出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２０１４／０６２９８２号に開示されている。
【００８５】
患者に対する本発明のＭＤＭ２阻害剤の投与のための用量及び投薬スケジュールは、同様に当業者に知られており、例えば国際公開第２０１３／１３９６８７号又は米国特許出願第１４／２１７９２９号（ＵＳ２０１４０２００２５５Ａ１として公開）に開示される。本発明によれば、式ＩＩＩの化合物、特に式（Ｃ）及び（Ｄ）の化合物は、式（Ｂ）の化合物のプロドラッグである。従って、式（ＩＩＩ）の化合物、特に式（Ｃ）及び（Ｄ）の化合物は、患者の血漿中の式（Ｂ）の化合物の有効量を達成するように投与される。従って、一実施態様において、本発明による医薬は、式（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物を含み、その化合物は、２８日の治療サイクルのうち、最大約７日目まで、好ましくは最大約５日目までの投与期間、１〜７日目に、又は好ましくは１〜５日目に、式（Ｂ）の化合物を、約５０〜約３０００ｍｇ／日、又は約８０〜約２５００ｍｇ／日、又は約８０〜約１６００ｍｇ／日、又は約２００〜約１６００ｍｇ／日、又は約４００〜約１６００ｍｇ／日、又は約４００〜約１２００ｍｇ／日、又は約４００〜約１０００ｍｇ／日、又は約４００〜約８００ｍｇ／日、又は約４００〜約６００ｍｇ／日の量で送達するように投与され、その後に約２１〜約２３日、好ましくは約２３日までの休止期間が続くことを特徴とする。１日の投与量、すなわちｍｇ／日で表される化合物（Ｂ）の量は、単回投与（ｑｄ）又は２回投与（ＢＩＤ）として投与することができる。２回の投与量が与えられる場合、それらは好ましくは等量で朝に１回、午後に１回、投与される。別の実施態様において、本発明の医薬は、式（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物を含み、その化合物は、２８日の治療サイクルのうち、最大５日間の投与期間、式（Ｂ）の化合物を、１〜５日目に約２００〜約１２００ｍｇ／日、又は約４００〜約１２００ｍｇ／日の量で送達するように投与され、その後に２３日間の休止期間が続くことを特徴とする。別の実施態様において、式（Ｂ）の化合物は、直接的に、すなわち式ＩＩＩ又は（Ｃ）又は（Ｄ）のプロドラッグを介することなく、及び上記の経口剤形を使用して投与することもできる。従って、本発明の別の実施態様において、式（Ｂ）の化合物は、２８日の治療サイクルのうち、最大５日間の投与期間、式（Ｂ）の化合物を非晶質形態で、及び約２００〜約１２００ｍｇ／日、又は約４００〜約１２００ｍｇ／日の量で提供する固体の経口剤形、例えばフィルムコーティング錠剤を使用して投与され、その後に２３日間の休止期間が続く。
【００８６】
本明細書で定義されるＭＤＭ２阻害剤を含む医薬は、所与のタイプのがんについて公知の別の治療と組み合わせて投与することができる。例えば、ＡＭＬの治療の場合、ＭＤＭ２阻害剤は、好ましくは、シタラビンと、又はシタラビン及びアントラサイクリンと組み合わされる。本発明によるシタラビンの治療的有効量（又は「有効量」）は、相乗的、すなわち相加効果以上を達成するのに有効な量を意味する。シタラビンはＡＭＬの骨格療法として長年使用されているので、例えば臨床医などの当業者にとって、ヒトの有効用量及び耐容用量に関する多くの情報が利用可能である。例えば、シタラビンは、ＡＭＬの治療において（誘導レジメン）高用量で、例えば１〜６日に１２時間毎に２時間にわたり３ｇ／ｍ２（静脈内）までの量で単剤として投与することができることが判明した。白血病の治療におけるシタラビンの使用についての総説は、例えば、“Nicholas D. Reese, Gary J. Schiller; Curr Hematol Malig Rep, 2013, 8:141-148"に記載されている。特定の併用療法（例えば、急性非リンパ球性白血病の誘導療法）では、他の抗がん剤と組み合わせた通常のシタラビン用量は、連続静脈内注入（１〜７日目）により１００ｍｇ／ｍ２／日又は１２時間毎に１００ｍｇ／ｍ２（１〜７日目）である。（例えば、ｗｗｗ．ｈｏｓｐｉｒａ．ｃｏｍを参照）。
【００８７】
同様に、臨床腫瘍学者などの当業者は、アントラサイクリンに基づくがん療法の利用可能性及び使用を十分に認識している。そのような治療オプションの広範なレビューは、例えば：G. Minotti et al, Anthracyclines: Molecular Advances and Pharmacologic Developments in Antitumor Activity and Cardiotoxicity, Pharmacological Reviews, 2004, Vol. 56 No. 2, 185-229に提供されている。
【００８８】
別の実施態様において、本発明によるＭＤＭ２阻害剤、好ましくは式ＩＩＩ、又は（Ｂ）、又は（Ｃ）、又は（Ｄ）の化合物は、本明細書で定義されるがんの治療のための化合物コビメチニブと組み合わせて投与される。コビメチニブのための剤形、用量及び投与計画は、例えば、公開されたｃｏＢＲＩＭ第ＩＩＩ相試験（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ識別子ＮＣＴ０１６８９５１９）から入手可能である。コビメチニブのＮＣＴ０１６８９５１９試験で使用される前記剤形、用量及び投与計画は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００８９】
本明細書で定義されるＭＤＭ２陽性細胞、特にＭＤＭ２陽性ＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞で得られた情報は、患者の応答／治療結果をより正確に識別するために、ｐ５３遺伝子変異状態に関して使用することができる。患者のｐ５３遺伝子変異状態は、改善された感受性及び／又は特異性を有する本発明のＭＤＭ２阻害剤による治療に対する前記患者の応答を検出するための追加のマーカーとして役立ち得る。従って、更に別の実施態様において、本発明は、本明細書において前に開示したように、がん患者から得られた試料中において、本明細書で定義されるＭＤＭ２発現細胞、特にＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞の％を測定する何れかの方法であって、前記患者の試料中のｐ５３遺伝子変異の状態を検出する工程を更に包含する方法を提供する。この実施態様の範囲では、ｐ５３遺伝子の変異状態は、好ましくは野生型である。しかしながら、ｐ５３遺伝子変異の検出は、一般に、本明細書中に開示されるＭＤＭ２阻害剤に応答するか、又はＭＤＭ２阻害剤による治療の恩恵を受ける患者の可能性についての排除基準として理解されるべきではない。従って、更に別の実施態様において、本発明は、有益な臨床的エンドポイントを満たす、すなわち治療に応答する前記患者の可能性のより洗練された予測を提供するために、本明細書で定義されるＭＤＭ２発現細胞、特にＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞の％、及びｐ５３変異状態の組み合わせ多変量解析を提供する。
【００９０】
治療の方法
更に別の実施態様において、本発明はまた、本明細書で定義されるＭＤＭ２タンパク質発現細胞、特にＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞の相対的な量が、標準レベル、１組の標準レベル又は治療前のレベルに対する感受性について、がんに罹患している患者から得られた試料、好ましくは血液又は骨髄試料から最初に検出され、次いでＭＤＭ２阻害剤が投与される治療の方法を含む。好ましくは、前記ＭＤＭ２−阻害剤は、上記に定義されたように、一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩの化合物、又はその薬学的に許容される誘導体であり、更に好ましくは、式ＩＩａ又はＩＩＩの化合物、又はその薬学的に許容される誘導体である。前記化合物は、当業者には周知のように、薬学的組成物中において投与され得る。恒温動物、とくにヒトへの、鼻腔、頬側、直腸といった投与、又は特に経口投与のための、及び静脈内、筋肉内又は皮下投与といった非経口投与のための組成物が、特に好ましい。より詳細には、静脈内投与のための組成物が好ましい。
【００９１】
この実施態様の範囲において、一般式Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩ、好ましくはＩＩａ又はＩＩＩの化合物、又はその薬学的に許容される誘導体を、単独で又は一又は複数の他の治療剤と組み合わせて投与することができる。可能な併用療法は、固定された組み合わせ、又は交互に又は互いに独立して与えられる、本発明の化合物と一又は複数の他の治療剤との投与、又は固定された組み合わせと一又は複数の他の治療剤との併用投与の形態をとることができる。
【００９２】
またこの実施態様の範囲において、一般式Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩ、好ましくはＩＩａ又はＩＩＩの化合物、又はその薬学的に許容される誘導体を、特に腫瘍治療のために、化学療法（細胞傷害性療法）、標的療法、内分泌療法、放射線療法、免疫療法、外科的介入、又はこれらの組み合わせと組み合わせて投与することができる。上記のように、他の治療戦略との関連でアジュバント療法と同様に、長期療法が等しく可能である。他の可能な治療は、腫瘍退縮後の患者の状態を維持するための治療、又は例えばリスクのある患者における化学予防療法である。
【００９３】
キット及び装置
一態様において、本発明はキット、及び別の態様では、本明細書で定義される一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ；又はＩＩａ若しくはＩＩＩ；又は（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）若しくは（Ｄ）又は薬学的に許容されるその誘導体の化合物に対して、好ましくは被験者（又は患者）のがんの応答を予測するための装置に関し、前記キットは、特に血液又は骨髄試料の採取のための試料採取のための手段、ツール又は装置と、前記試料中の本明細書で定義されるＭＤＭ２タンパク質発現細胞、特にＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞の相対量を検出する方法の説明書とを含む。
【００９４】
キット及び装置はまた、好ましくは、試料中の本明細書で定義されるＭＤＭ２タンパク質発現細胞、特にＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞のレベルを比較する標準値又は１組の標準値を含むコンパレーターモジュールを含むことができる。
【００９５】
別の実施態様において、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物を含む医薬を用いた治療に対する応答を予測するためのキットであって；
ａ）がん、特に、白血病、特にＡＭＬのような血液学的障害に罹患している患者から試料、好ましくは血液又は骨髄試料を得るための手段；
ｂ）好ましくはフローサイトメトリーを使用すること、及び場合により前記患者のｐ５３遺伝子変異状態、年齢及び／又はＥＣＯＧスコアから選択される追加の変量を検出することにより、その試料からの本明細書で定義される１つ又は複数のＭＤＭ２タンパク質発現細胞型、特にＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞の相対量を検出する方法の説明書；
ｃ）標準値及びそれらの使用法の説明書を含むコンパレーターモジュール；及び
ｄ）ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物を含む医薬
を提供する。
【００９６】
更に別の実施態様において、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物は、本明細書で定義される式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ；又はＩＩａ若しくはＩＩＩ；又は（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）若しくは（Ｄ）又は薬学的に許容されるその誘導体の化合物である、上記に記載のキットが提供される。標準値又は１組の標準値は、上記のように決定され得る。
【００９７】
更に別の実施態様において、ＭＤＭ２阻害剤（アンタゴニスト）による治療に対する患者の応答を予測するバイオマーカーとして、本明細書で定義されるＭＤＭ２タンパク質発現細胞、特にＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞の使用が提供される。
予測遺伝子シグネチャーとの組み合わせ
【００９８】
別の実施態様において、本方法、すなわち、本明細書中で前に定義した任意の実施態様によるＭＤＭ２タンパク質発現細胞の相対量（％）の検出は、別の共変量として、ベースライン時に同じ患者の試料から検出された遺伝子シグネチャの評価と組み合わせることができる。適切な遺伝子シグネチャー及びそれらを得るための方法は、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＰＣＴ／ＥＰ２０１４／０６４０３９に開示されている。そのような組み合わせは、本明細書で定義されるＭＤＭ２阻害剤による治療から患者の臨床的利益のより正確な予測を提供し得る特定のアルゴリズム（多変量解析）を適用することによって行われる。改善された精度は、すでに強力なバイオマーカー（ＭＤＭ２発現細胞；又は遺伝子シグネチャー）の何れか単独と比較して、例えば、多変量解析のためのＡＵＣの増加（すなわち、０．９３から０．９５への）及びｐ値の１０−３から１０−５への増加によって実証することができる。
【００９９】
従って、一実施態様において、本発明は、がんに罹患した患者の治療に対する応答性を予測する方法であって、前記方法は、ａ）前記患者から１つ又は複数の試料を採取する工程；ｂ）工程ａ）で得られた前記試料中の少なくとも１つのＭＤＭ２タンパク質発現細胞型の相対量（％）を測定する工程；ｃ）工程ａ）で得られた試料において表１に従って少なくとも１つの遺伝子の発現レベルを検出する工程；ｄ）ａ）及びｂ）の情報を用いて多変量解析を適用して値（組み合わせスコア「Ｓ」）を計算する工程；ｅ）「Ｓ」の値を標準値（又は基準値）と比較する工程；及びｆ）「Ｓ」の値が前記標準値を上回る場合に、前記患者を治療に応答する可能性が高いと同定する工程を含み；ここで前記治療は、前記患者に、本明細書で前に定義したＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤（ＭＤＭ２−阻害剤）として作用する化合物を投与することを含む。
0006608439.tif 000018
【０１００】
この実施態様の範囲内において、方法は好ましくはインビトロの方法である。患者はがん患者であり、用語「がん」は本明細書において前に定義されている。工程ｂ）及びｃ）における測定のための試料は同じであっても異なっていてもよく、前に定義した通りである。好ましくは、同じ又は異なる試料は、治療開始前（ベースライン時）に前記患者から採取された血液及び／又は骨髄試料である。工程ｂ）における「相対量」及び「ＭＤＭ２発現細胞型」という用語は、本明細書において前に定義した通りである。好ましくは、ＭＤＭ２タンパク質発現細胞型は、ＣＤ４５ｄｉｍ細胞、ＣＤ１１７＋（ｃ−ｋｉｔ）及びＣＤ３４＋幹細胞から選択される。本明細書において前に定義したように、１つの単一細胞型又は前記細胞型の組み合せサブセットの相対量を使用することができる。前記細胞型の測定は、好ましくはフローサイトメトリーによって、上記に定義されるように実施される。方法の工程ｃ）における「少なくとも１つの遺伝子」の検出は、表１に記載の１３の遺伝子のうち、２、又は３、又は４、又は５、又は６、又は７、又は８、又は９、又は１０、又は１１、又は１２の遺伝子を含む１つの単一又は合計レベルの検出、又は全１３遺伝子の検出を含む。遺伝子の検出は、好ましくは、ＰＣＴ／ＥＰ２０１４／０６４０３９に開示されており、かつ当業者には周知である例えばＲＴ−ＰＣＲ（リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応）又はアレイ技術によるｍＲＮＡ発現レベルの検出を意味する。ベースライン時のｍＲＮＡ発現レベルをＲＴ−ＰＣＲによって測定する場合、患者のシグネチャースコアは、ベースライン（すなわち、治療前）で測定された相対的発現レベル（２ｄｅｌｔａ−ＣＰ）の合計に、インビトロで観察された方向を乗じたものから計算される。工程ｄ）で得られた組み合わせスコア「Ｓ」は、ｂ）で得られたＭＤＭ２フロー測定値から得られた値のｃ）で得られた遺伝子シグネチャースコアとの乗算又は加算に基づいて解釈される。好ましくは、前記組み合わせスコア「Ｓ」は、ｂ）で得られたＭＤＭ２フロー測定値の、表２にリストされているアルゴリズムによる３−遺伝子又は４−遺伝子シグネチャースコアとの乗算又は加算に基づいて計算される。
0006608439.tif 000019
【０１０１】
表２のアルゴリズムに従って得られる組み合わせスコア「Ｓ」は、前記ＭＤＭ２阻害剤による治療に対する患者の応答と相関する。一実施態様において、標準値（又は基準値）を上回る「Ｓ」の値は、前記ＭＤＭ２阻害剤による治療に応答するか、又はその恩恵を受ける可能性があることを示し、一方前記標準値を下回る相対量は、前記患者がその治療に応答する可能性が低いか、又はその治療の恩恵を受ける可能性が低いことを示す。標準値は、「Ｓ」を計算するために使用されるアルゴリズムに依存し得る。例えば、３−遺伝子又は４−遺伝子シグネチャーをＳの計算に使用する場合、又はｌｏｇ２スケールが適用される場合、基準レベルは異なる（図４を参照）。用語「応答」は、本明細書で前に定義した通りである。同様に、用語「ＭＤＭ２阻害剤」は、上で定義した通りである。好ましくは、そのようなＭＤＭ２阻害剤は、本明細書で前に定義した薬学的製剤の何れかを含む、本明細書で定義される式ＩＩａ、又はＩＩＩ、又は（Ｂ）、又は、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物である。別の実施態様において、前記ＭＤＭ２阻害剤は、前に本明細書に開示されているように、他の薬学的に活性な化合物と、例えばシタラビン又はコビメチニブと組み合わせることもできる。
【０１０２】
一実施態様において、３−又は４−遺伝子シグネチャースコアが、上記の方法の工程ｃ）において使用される。３−遺伝子シグネチャーは、ＸＰＣ、ＢＢＣ３及びＣＤＫＮ２Ａ；又はＭＤＭ２、ＸＰＣ及びＢＢＣ３のｍＲＮＡ発現レベルからなり、４−遺伝子シグネチャーは、ＭＤＭ２、ＸＰＣ、ＢＢＣ３及びＣＤＫＮ２ＡのｍＲＮＡ発現レベルからなる。ｍＲＮＡ発現レベルをＲＴ−ＰＣＲによって測定する場合、患者のシグネチャースコアは、ベースライン（すなわち、治療前）で測定された相対的発現レベル（２ｄｅｌｔａ−ＣＰ）の合計に、インビトロで観察された方向を乗じたものから計算され、４−遺伝子シグネチャースコアとして定義される：Ｓ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＝ＧＭＤＭ２＋ＧＸＰＣ＋ＧＢＢＣ３−ＧＣＤＫＮ２Ａ、ここでＧｘ＝２ｄｅｌｔａ−ＣＰｘ及びｄｅｌｔａ−ＣＰＭＤＭ２＝ＣＰｈｏｕｓｅｋｅｅｐｅｒ−ＣＰＭＤＭ２、ｄｅｌｔａ−ＣＰＸＰＣ＝ＣＰｈｏｕｓｅｋｅｅｐｅｒ−ＣＰＸＰＣ、ｄｅｌｔａ−ＣＰＢＢＣ３＝ＣＰｈｏｕｓｅｋｅｅｐｅｒ−ＣＰＢＢＣ３、ｄｅｌｔａ−ＣＰＣＤＫＮ２Ａ＝ＣＰｈｏｕｓｅｋｅｅｐｅｒ−ＣＰＣＤＫＮ２Ａ．用語「ハウスキーパー（ｈｏｕｓｅｋｅｅｐｅｒ）」は、任意の適切な制御遺伝子を意味する。本発明の一実施態様において、「ハウスキーパー」は、内在性制御遺伝子としてのＴＭＥＭ５５Ｂである。
ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗは、選択された細胞型、例えばＣＤ４５ｄｉｍ芽球細胞集団における検出可能なＭＤＭ２タンパク質発現を有する細胞のパーセンテージを示すものとする。ＭＤＭ２  ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗのタンパク質発現測定とＲＴ−ＰＣＲに基づく４−遺伝子シグネチャースコアＳ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲとを組み合わせることにより、組み合わせスコア「Ｓ」を以下の３つの方法で算出することができる：
Ｓ＝Ｓ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ；又は
Ｓ＝Ｓ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）；又は
Ｓ＝Ｓ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＋ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）．
同様に、スコア計算からＧＭＤＭ２を省略した３−遺伝子シグネチャースコアＳ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＝ＧＸＰＣ＋ＧＢＢＣ３−ＧＣＤＫＮ２Ａが与えられた場合、組み合わせスコア「Ｓ」は同じ方法で計算することができる：
Ｓ＝Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ；又は
Ｓ＝Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）；又は
Ｓ＝Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＋ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）．
同様に、組み合わせスコア「Ｓ」を計算するための上記の方法は、スコア計算からＧＣＤＫＮ２Ａを省略した３−遺伝子シグネチャースコアＳ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＝ＧＸＰＣ＋ＧＢＢＣ３＋ＧＭＤＭ２にも適用することができる。
【０１０３】
２標本ウィルコクソン順位和検定を使用して、曲線下面積（ＡＵＣ）の分類の計算を介して、上記の６つの定義の何れかに基づくシグネチャースコアが応答者と非応答者を有意に区別できるかどうかを試験することによって、組み合わせシグネチャースコア「Ｓ」は、ＮＰ２９６７９試験（適応症：ＡＭＬ）パート１及び２の臨床応答と相関していた。
従って、一実施態様において、上記の方法の工程ｂ）は、
ｉ）ＭＤＭ２陽性ＣＤ４５ｄｉｍ細胞；又は
ｉｉ）ＭＤＭ２陽性ＣＤ１１７＋（ｃ−ｋｉｔ）及びＣＤ４５ｄｉｍ細胞；又は
ｉｉｉ）ＭＤＭ２陽性ＣＤ３４＋及びＣＤ４５ｄｉｍ細胞；又は
ｉｖ）ＭＤＭ２陽性ＣＤ３４＋及びＣＤ１１７＋及びＣＤ４５ｄｉｍ細胞の相対量の検出を含み；ｉ）〜ｉｖ）の下で得られた値のそれぞれはＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗと表される；
工程ｃ）は、ＲＴ−ＰＣＲによる３遺伝子シグネチャーのｍＲＮＡレベルの検出を含み、ここで、３−遺伝子シグネチャーは、ＸＰＣ、ＢＢＣ３及びＣＤＫＮ２Ａ、又はＭＤＭ２、ＸＰＣ及びＢＢＣ３を含み、Ｓ３−ｇｅｎｅと表される；
工程ｄ）における組み合わせスコア「Ｓ」は、
Ｓ＝Ｓ３−ｇｅｎｅ×ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ；又は
Ｓ＝Ｓ３−ｇｅｎｅ×ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）；又は
Ｓ＝Ｓ３−ｇｅｎｅ＋ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）
からなる群から選択されるアルゴリズムに従って多変量解析によって計算され；かつ
工程ａ）、ｅ）及びｆ）は、上で定義した通りである。
【０１０４】
別の実施態様において、上記の方法の工程ｂ）は、
ｉ）ＭＤＭ２陽性ＣＤ４５ｄｉｍ細胞；又は
ｉｉ）ＭＤＭ２陽性ＣＤ１１７＋（ｃ−ｋｉｔ）及びＣＤ４５ｄｉｍ細胞；又は
ｉｉｉ）ＭＤＭ２陽性ＣＤ３４＋及びＣＤ４５ｄｉｍ細胞；又は
ｉｖ）ＭＤＭ２陽性ＣＤ３４＋及びＣＤ１１７＋及びＣＤ４５ｄｉｍ細胞の相対量の検出を含み；ｉ）〜ｉｖ）の下で得られた値のそれぞれはＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗと表される；
工程ｃ）は、ＲＴ−ＰＣＲによる４遺伝子シグネチャーのｍＲＮＡレベルの検出を含み、ここで、４−遺伝子シグネチャーは、ＭＤＭ２、ＸＰＣ、ＢＢＣ３及びＣＤＫＮ２Ａを含み、Ｓ４−ｇｅｎｅと表される；
工程ｄ）における組み合わせスコア「Ｓ」は、
Ｓ＝Ｓ４−ｇｅｎｅ×ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ；又は
Ｓ＝Ｓ４−ｇｅｎｅ×ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）；又は
Ｓ＝Ｓ４−ｇｅｎｅ＋ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）
からなる群から選択されるアルゴリズムに従って多変量解析によって計算され；
工程ａ）、ｅ）及びｆ）は、上で定義した通りである。
【０１０５】
更に別の実施態様において、がんに罹患した患者の治療に対する応答性を予測するためのインビトロでの方法が提供され、前記方法は以下の工程を含む：
ａ）ベースライン時に患者から血液及び／又は骨髄生検試料を採取する工程；
ｂ）ａ）で得られた試料中のＭＤＭ２タンパク質発現ＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞の相対量（％）（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）を測定する工程；
ｃ）ＲＴ−ＰＣＲによってａ）で得られた試料中のＭＤＭ２、ＸＰＣ、ＢＢＣ３及びＣＤＫＮ２ＡのｍＲＮＡ発現レベルを測定し、次式に従って３−遺伝子シグネチャースコアＳ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲを計算する工程：
Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＝ＧＸＰＣ＋ＧＢＢＣ３−ＧＣＤＫＮ２Ａ又は
Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＝ＧＸＰＣ＋ＧＢＢＣ３＋ＧＭＤＭ２
（式中、Ｇｘ＝２ｄｅｌｔａ−ＣＰｘ及びｄｅｌｔａ−ＣＰｘ＝ＣＰｈｏｕｓｅｋｅｅｐｅｒ−ＣＰｘである）；
ｄ）値Ｓを計算するために、ｂ）及びｃ）で得られた値を用いて、以下のアルゴリズムの１つに従って多変量解析を適用する工程：
Ｓ＝Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ；又は
Ｓ＝Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）；又は
Ｓ＝Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＋ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）；
ｅ）ｄ）で得られた前記「Ｓ」の値を標準値、例えば同じがんを有する患者から得られた値と比較する工程；及び
ｆ）ｄ）で得られた「Ｓ」の値が前記標準値を上回っている場合、本明細書で定義されるＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物、好ましくは式ＩＩａ、ＩＩＩ、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物を投与する工程。
この実施態様の範囲内において、「標準値」（又は基準値）は、工程ｄ）で適用されるアルゴリズムに従って異なっていても良い。従って、好ましい実施態様において、Ｓ＝Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗに従って「Ｓ」が計算される場合、工程ｅ）に従った比較のための標準値は、約５０、又は約１００、又は約１５０である（図４ｂ ｉｉ）及びｖ）を参照）。別の好ましい実施態様において、Ｓ＝Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）に従って「Ｓ」が計算される場合、工程ｅ）に従った比較のための標準値は、約８、又は約１０、又は約１２、又は約１５である（図４ｂ ｉ）及びｉｖ）を参照）。別の好ましい実施態様において、Ｓ＝Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＋ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）に従って「Ｓ」が計算される場合、工程ｅ）に従った比較のための標準値は、約７、又は約８、又は約８．５、又は約９である（図４ｂ ｉｉｉ）及びｉｖ）を参照）。
【０１０６】
更に別の実施態様において、がんに罹患した患者の治療に対する応答性を予測するためのインビトロでの方法が提供され、前記方法は以下の工程を含む：
ａ）ベースライン時に患者から血液及び／又は骨髄生検試料を採取する工程；
ｂ）ａ）で得られた試料中のＭＤＭ２タンパク質発現ＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞の相対量（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ（％））を測定する工程；
ｃ）ＲＴ−ＰＣＲによってａ）で得られた試料中のＭＤＭ２、ＸＰＣ、ＢＢＣ３及びＣＤＫＮ２ＡのｍＲＮＡ発現レベルを測定し、次式に従って４−遺伝子シグネチャースコアＳ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲを計算する工程：
Ｓ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＝ＧＭＤＭ２＋ＧＸＰＣ＋ＧＢＢＣ３−ＧＣＤＫＮ２Ａ
（式中、Ｇｘ＝２ｄｅｌｔａ−ＣＰｘ及びｄｅｌｔａ−ＣＰｘ＝ＣＰｈｏｕｓｅｋｅｅｐｅｒ−−ＣＰｘである）；
ｄ）値Ｓを計算するために、ｂ）及びｃ）で得られた値を用いて、以下のアルゴリズムの１つに従って多変量解析を適用する工程：
Ｓ＝Ｓ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ；又は
Ｓ＝Ｓ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）；又は
Ｓ＝Ｓ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＋ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）；
ｅ）ｄ）で得られた前記「Ｓ」の値を標準値、例えば同じがんを有する患者から得られた値と比較する工程；及び
ｆ）ｄ）で得られた「Ｓ」の値が前記標準値を上回っている場合、本明細書で定義されるＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物、好ましくは式ＩＩａ、ＩＩＩ、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物を投与する工程。
この実施態様の範囲内において、「標準値」（又は基準値）は、工程ｄ）で適用されるアルゴリズムに従って異なっていても良い。従って、好ましい実施態様において、Ｓ＝Ｓ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗに従って「Ｓ」が計算される場合、工程ｅ）に従った比較のための標準値は、約２００、又は約３００、又は約４００、又は約４５０、又は約５００である（図４ａ ｉ）及びｉｖ）を参照）。別の好ましい実施態様において、Ｓ＝Ｓ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）に従って「Ｓ」が計算される場合、工程ｅ）に従った比較のための標準値は、約２７、又は約３０、又は約３３、又は約３６、又は約４０である（図４ａ ｉｉ）及びｖ）を参照）。別の好ましい実施態様において、Ｓ＝Ｓ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＋ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）に従って「Ｓ」が計算される場合、工程ｅ）に従った比較のための標準値は、約１０、又は約１０．５、又は約１１、又は約１１．５、又は約１２である（図４ａ ｉｉｉ）及びｖｉ）を参照）。
【０１０７】
別の実施態様において、上記の実施態様の何れかで定義された組み合わせスコア「Ｓ」は、治療中、すなわち、本明細書中で前に定義したＭＤＭ２阻害剤によるがん患者の治療のモニタリング中に使用される。この実施態様の範囲内において、上記の方法の何れかによる工程ａ）の試料は治療中に採取され、ｄ）で得られた組み合わせスコアが対応する標準値を上回る場合に治療が継続される。
【０１０８】
別の実施態様において、本発明は、本明細書で定義されるＭＤＭ２阻害剤による治療に対するがん患者の応答を決定するための方法であって、本明細書で前に定義した何れかのアルゴリズムに従って得られた組み合わせスコア「Ｓ」が高いほど、例えば、臨床薬理学の当業者に周知のＲＯＣ（ＡＵＣ）値及び分析によって示されるように、前記治療に対する前記患者の応答の可能性が高いことを特徴とする方法を提供する。
【０１０９】
上記で定義された方法／アルゴリズムの何れかに従って得られた組み合わせスコア「Ｓ」は、治療に対する患者の応答／利益を更に正確に識別するために、ｐ５３遺伝子変異状態との関連で使用することができる。患者のｐ５３遺伝子変異状態は、改善された感受性及び／又は特異性を有する本明細書に記載のＭＤＭ２阻害剤による治療に対する前記患者の応答を検出するための追加のマーカーとして役立ち得る。従って、更に別の実施態様において、本発明は、前記患者の試料中のｐ５３遺伝子変異状態を検出する工程を更に含む、本明細書で定義される組み合せスコア「Ｓ」を得るための方法の何れかを提供する。この実施態様の範囲では、ｐ５３遺伝子の変異状態は、好ましくは野生型である。しかしながら、ｐ５３遺伝子変異の検出は、一般に、本明細書中に開示されるＭＤＭ２阻害剤に応答するか、又はＭＤＭ２阻害剤による治療の恩恵を受ける患者の可能性についての排除基準として理解されるべきではない。従って、更に別の実施態様において、本発明は、有益な臨床的エンドポイントを満たす、すなわち治療に応答する前記患者の可能性のより洗練された予測を提供するために、上記に定義される遺伝子シグネチャースコア、好ましくは３−及び４−遺伝子シグネチャースコアを有する、本明細書で定義されるＭＤＭ２発現細胞、特にＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞の％、及びｐ５３変異状態を組み合わせる組み合わせ多変量解析を提供する。更に別の実施態様において、この多変量解析における更なる共変量は、患者の年齢及び／又はＥＣＯＧスコアである。
【０１１０】
別の実施態様において、本発明は、がん患者を治療するための方法であって、上記で定義された方法の何れか１つに従って組み合わせスコア「Ｓ」を得ること、及び「Ｓ」の前記値が、本明細書において前に定義した標準値又は基準値を上回る場合、ＭＤＭ２阻害剤を前記患者に投与することを含む、方法を提供する。一実施態様において、ＭＤＭ２阻害剤は、本明細書で前に定義した通りである。別の実施態様において、ＭＤＭ２阻害剤は、上記に定義される式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物である。別の実施態様において、前記がん患者から得られた試料においても検出されるｐ−５３変異状態は、好ましくは野生型である。
【０１１１】
一態様において、本発明はキット、及び別の態様では、本明細書で定義される一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ；又はＩＩａ若しくはＩＩＩ；又は（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）若しくは（Ｄ）又は薬学的に許容されるその誘導体の化合物に対して、好ましくは被験者（又は患者）のがんの応答を予測するための装置に関し、前記キットは、特に血液又は骨髄試料の採取のための試料採取のための手段、ツール又は装置と、前記試料中の本明細書で定義されるＭＤＭ２タンパク質発現細胞、特にＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞の相対量及び前記試料中の表１に記載の１つ又は複数の遺伝子、好ましくは３−又は４−遺伝子シグネチャーのｍＲＮＡレベルを検出する方法の説明書とを含む。
【０１１２】
キット及び装置はまた、検出された、ＭＤＭ２タンパク質発現細胞の相対量及びｍＲＮＡレベルから組み合わせスコア「Ｓ」を得る方法の説明書を含む。
キット及び装置はまた、好ましくは、患者の試料から得られた「Ｓ」の値が比較される
標準値又は１組の標準値を含むコンパレーターモジュールを含むことができる。
【０１１３】
別の実施態様において、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物を含む医薬を用いた治療に対する応答を予測するためのキットであって；
ａ）がん、特に、白血病、特にＡＭＬのような血液学的障害に罹患している患者から試料、好ましくは血液又は骨髄試料を得るための手段；
ｂ）ｉ）好ましくはフローサイトメトリーを使用することにより、その試料からの本明細書で定義される１つ又は複数のＭＤＭ２タンパク質発現細胞型、特にＣＤ４５ｄｉｍ（芽球）細胞の相対量、
ｉｉ）好ましくはＲＴ−ＰＣＲを使用することにより、ＸＰＣ、ＢＢＣ３、ＣＤＫＮ２Ａ及び場合によりＭＤＭ２のｍＲＮＡ発現レベル
を検出し；及び
ｉｉｉ）場合により患者のｐ５３遺伝子変異状態、年齢及び／又はＥＣＯＧスコアから選択される共変量
を検出する方法の説明書；
ｃ）標準値及びそれらの使用法の説明書を含むコンパレーターモジュール；及び
ｄ）ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物を含む医薬
を含むキットを提供する。
【０１１４】
更に別の実施態様において、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物は、本明細書で定義される式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ；又はＩＩａ若しくはＩＩＩ；又は（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）若しくは（Ｄ）又は薬学的に許容されるその誘導体の化合物である、上記に記載のキットが提供される。標準値又は１組の標準値は、上記のように決定され得る。
【０１１５】
以下の実施例は、本発明を説明するためのものであって、限定するものではない。
【実施例】
【０１１６】
実施例１
この実施例は、フローサイトメトリーを使用して試験ＮＰ２８６７９（パート１及び２）に参加する患者から得られたＭＤＭ２発現ＣＤ４５ｄｉｍ芽球細胞の相対量の検出を記載する。
【０１１７】
材料
ＣＤ３４  ＰｅｒＣＰ  ＢＤ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｈｉｎｓｏｎ）カタログ番号３４０６６６
スポンサー付ＣＲＯにより注文製造されたＣＤ４５  ＡＦ７００
Ｍｄｍ２  ＡＦ６４７  Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号ｓｃ−５３０４ＡＦ６４７
Ｐｅｒｍ  Ｂｕｆｆｅｒ  ＩＩＩ  ＢＤ  カタログ番号５５８０５０
ＢＤ  Ｌｙｓｅ／Ｆｉｘ  カタログ番号５５８０４９
スポンサー付ＣＲＯのＳＯＰに従って注文製造された１％ＢＳＡを含むＰＢＳ
【０１１８】
染色手順
細胞を以下の手順に従って染色した：適切なドナーの１００μｌの血液を適切に標識したチューブに添加した。続いて、ＣＤ３４以外の表面マーカーを、抗体蛍光色素コンジュゲートを添加することによって染色し、又はそれぞれのアイソタイプ対照が使用された。次いで、チューブをボルテックスし、室温で暗所で２０分間インキュベートした。ＰＢＳ  ＢＳＡ緩衝液で洗浄した後、チューブを遠心分離し、デカントした。次に、予熱した１×ＢＤ  Ｌｙｓｅ／固定溶液２ｍｌを添加し、チューブをボルテックスし、３７℃の水浴中で１５分間インキュベートした。インキュベーション後、チューブを遠心分離し、上清をデカントした。２回の洗浄工程の後、細胞内染色のための適切な抗体又はアイソタイプ対照を、ＢＤ  Ｌｙｓｅ／Ｆｉｘ  Ｐｅｒｍ緩衝液を用いてＰＢＳ／ＢＳＡにより添加した。ＣＤ３４又はそれぞれのアイソタイプを添加した。チューブを室温で暗所で３０分間インキュベートした。次いで、チューブをＰＢＳ／ＢＳＡを用いて２回洗浄し、最後にＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩフローサイトメーターでの獲得のために５００μｌに再懸濁した。２５０，０００事象が獲得された。
【０１１９】
結果出力のための電子ゲーティング
結果の生成のために、ＷｉｎｌｉｓｔやＦｌｏｗｊｏなどのフローサイトメトリー解析ソフトウェアを使用する必要がある。最初に、ゲートが通常のサイズ（前方散乱、ＦＳＣ）及び粒状の特性（側方散乱、ＳＳＣ）を有する全ての細胞の周りに描かれる：総有核細胞ゲート（ＴＮＣ、図１のＲ１）。次いで、このＴＮＣサブセット内で、ＡＭＬ芽球集団を、ｄｉｍＣＤ４５発現及び低側方散乱特性を有する細胞の周囲の領域を描くことによって同定する（図１のＲ３）。芽球集団は、ＣＤ３４陽性又は陰性芽球をゲーティングすることによって更に精製することができる（図１、それぞれＲ６及びＲ３９）。ＣＤ３４陽性の閾値は、それぞれのチャンネルにおいてアイソタイプ対照染色を用いることによって同定することができる（図示せず）。
【０１２０】
次に、図２に示すように、ＣＤ４５ｄｉｍ一般芽球集団及びＣＤ３４を更に発現するより洗練された芽球集団をドットプロットで表示する。Ｍｄｍ２染色の代わりに使用されるアイソタイプ対照を使用して、Ｍｄｍ２陽性の閾値を設定することができる（図２の上の２つのパネル）Ｍｄｍ２認識抗体を含む染色条件が図２の下に示されている。Ｍｄｍ２陽性と定義される領域に入る細胞集団は、それぞれの芽球親集団内のＭｄｍ２発現細胞の割合を計算することによって決定される。
【０１２１】
式（Ｂ）のＭＤＭ２阻害剤による治療に対する患者の応答とＭＤＭ２発現ＣＤ４５ｄｉｍ芽球細胞の相対量の相関
試験ＮＰ２８６７９（パート１及び２）に参加している患者について、ＭＤＭ２発現ＣＤ４５ｄｉｍ芽球細胞の相対量を上記の方法に従って得て、前記量を前記患者の応答に対してプロットした（図３）。部分応答（ＰＲ）が応答者のグループに含まれているかいないかに応じて、治療前のＭＤＭ２発現細胞の相対量が、式（Ｂ）のＭＤＭ２阻害剤による治療に対するその患者の応答を示すことが示される。特に、患者の試料中に検出された全てのＣＤ４５芽球細胞のうち、ＭＤＭ２陽性ＣＤ４５ｄｉｍ芽球細胞の％が高いほど、例えば、ＲＯＣ（ＡＵＣ）値及び分析によって示されるように、その患者について改善された臨床的エンドポイントの利益（「応答」）の可能性が高いことが実証される。
【０１２２】
実施例２
この実施例は、本明細書で定義される組み合わせスコア「Ｓ」の計算、及び試験ＮＰ２８６７９（パート１及び２）に参加する患者の応答とのその相関を記載する。ＭＤＭ２陽性ＣＤ４５ｄｉｍ細胞の相対量を実施例１に従って検出し、ベースライン時のＭＤＭ２、ＸＰＣ、ＢＢＣ３及びＣＤＫＮ２ＡのｍＲＮＡ発現レベルをＲＴ−ＰＣＲによって測定した。血液又は骨髄の何れかから単離した全ＲＮＡをＵＶ吸収によって定量する。各ＰＣＲ反応について、固定された全ＲＮＡ入力が使用される。ＰＣＲは、Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓからの独自のＤＮＡポリメラーゼを用いて行われる。ポリメラーゼは逆転写が可能であるため、ＲＮＡからの直接的な増幅及び検出は遺伝子特異的プライマーの単一のセットとの１つの反応で行われる。リアルタイムＰＣＲは、標的核酸及び対照核酸の増幅及び検出のためのプライマー及びＴａｑＭａｎ（登録商標）プローブを用いたＴａｑＭａｎ（登録商標）技術を利用する。３つの反応ウェルを使用して４つの標的遺伝子を検出する。各反応ウェルにおいて、内因性対照が含まれる。ｃｏｂａｓ（登録商標）ｚ４８０アナライザーが増幅及び検出に使用される。
【０１２３】
Ｃｙｃｌｅ−ｔｏ−ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ値（Ｃｐ）は、搭載のＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ（登録商標）（ＬＣ）４８０ソフトウェアを使用して各蛍光チャネルについて計算される。ＴＭＥＭ５５Ｂを内在性コントロール遺伝子として発現の正規化が行われ、ここで標的遺伝子（ｘ）の相対的発現レベル（濃度）はＧｘ＝２ｄｅｌｔａ−ＣＰｘと定義され（式中ｄｅｌｔａ−Ｃｐｘ＝Ｃｐ（ＴＭＥＭ）−Ｃｐｘであり）、標的遺伝子（ｘ）はＭＤＭ２、ＢＢＣ３、ＸＰＣ及びＣＤＫＮ２Ａである。
【０１２４】
次いで、患者のシグネチャースコアを、ベースライン（すなわち治療前）で測定された相対的発現レベル（Ｇｘ）の合計に、インビトロで観察された方向を乗じたものから計算され、４−遺伝子シグネチャースコアＳ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＝ＧＭＤＭ２＋ＧＸＰＣ＋ＧＢＢＣ３−ＧＣＤＫＮ２Ａと定義される。同様に、３−遺伝子シグネチャースコアは、Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＝ＧＸＰＣ＋ＧＢＢＣ３−ＧＣＤＫＮ２Ａと定義される。
【０１２５】
組み合わせスコア「Ｓ」のその後の計算のために、ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗはＣＤ４５ｄｉｍ芽球集団における検出可能なＭＤＭ２タンパク質発現を有する細胞のパーセンテージを示すものとする。ＭＤＭ２  ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗのタンパク質発現測定とＲＴ−ＰＣＲに基づく４−遺伝子シグネチャースコアＳ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲとを組み合わせることにより、組み合わせスコア「Ｓ」を以下の３つの方法で算出した：
１．Ｓ＝Ｓ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ；
２．Ｓ＝Ｓ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）；
３．Ｓ＝Ｓ４−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＋ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）．
【０１２６】
同様に、スコア計算からＧＭＤＭ２を省略した３−遺伝子シグネチャースコアＳ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＝ＧＸＰＣ＋ＧＢＢＣ３−ＧＣＤＫＮ２Ａが与えられた場合、「Ｓ」は同じ方法で計算された：
１．Ｓ＝Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ；
２．Ｓ＝Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ×ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）；
３．Ｓ＝Ｓ３−ｇｅｎｅ−ＲＴ−ＰＣＲ＋ｌｏｇ２（ＳＭＤＭ２−ｆｌｏｗ）．
【０１２７】
２標本ウィルコクソン順位和検定を使用して、曲線下面積（ＡＵＣ）の分類の計算を介して、上記の６つの定義の何れかに基づくシグネチャースコアが応答者と非応答者を有意に区別できるかどうかを試験することによって、結果として組み合わせシグネチャースコア「Ｓ」は、ＡＭＬに罹患している患者による臨床試験（ＮＰ２９６７９試験のパート１及び２）において見られる臨床応答と相関していた。結果を図４ａ及び４ｂに示す。ＭＤＭ２、ＢＢＣ３、ＸＰＣ及びＣＤＫＮ２Ａ単独のそれぞれのｍＲＮＡ発現レベルと患者の応答とを相関させる比較データを図５に示す。
【図１】
0006608439.tif 000024
【図２】
0006608439.tif 000025
【図３ａ】
0006608439.tif 000026
【図３ｂ】
0006608439.tif 000027
【図４ａ−０１】
0006608439.tif 000028
【図４ａ−０２】
0006608439.tif 000029
【図４ａ−０３】
0006608439.tif 000030
【図４ｂ−０１】
0006608439.tif 000031
【図４ｂ−０２】
0006608439.tif 000032
【図４ｂ−０３】
0006608439.tif 000033
【図５−０１】
0006608439.tif 000034
【図５−０２】
0006608439.tif 000035