(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
PCOS(多嚢胞性卵巣症候群)の治療のための、コロハ種子から得られた単一ハーブ抽出物を有効成分とする医薬組成物であって、前記ハーブ抽出物が、7.13％の1種のフロスタノールサポニン、4.61％のもう1種のフロスタノールサポニン、15.10％のトリゴネオシドIV a、29.36％のグリコシドF及び43.80％のプロトディオシンを含む5種類のフロスタノールサポニンの相乗的混合物を含む、医薬組成物。
【請求項２】
個体反応及び臨床的評価に応じて、前記ハーブ抽出物の効果的な用量が1日あたり1グラム、500mgのカプセル剤の形状で1日2回、30〜90日の範囲の期間である、PCOSの治療のための請求項1に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明は、500mgのカプセル剤としての経口剤形で、1日2回、30〜90日の期間与えられた場合におけるPCOS(多嚢胞性卵巣症候群(Poly Cystic Ovarian Syndrome))の効果的な治療のための単一ハーブ抽出物に関する。抽出物は、特定の抽出方法を用いて、単一ハーブすなわちコロハの種子から得られた。
【背景技術】
【０００２】
PCOSについて:多嚢胞性卵巣症候群(PCOS)は、女性の最も一般的な内分泌系障害1つである。PCOSには、完全に理解されていないさまざまな原因があるが、主に遺伝性疾患であるという証拠がある。多嚢胞性卵巣症候群(PCOS)は、女性のホルモンが不均衡になるという点が問題であり、一般に排卵障害を伴う。多嚢胞性卵巣症候群(PCOS)は、女性集団の10〜15%に影響を及ぼす内分泌系障害である。この症候群は、出産年齢の女性において、最も一般的なホルモン障害を示す。
【０００３】
疾患の症状及び重症度は、女性の間で大きく異なる。PCOSの女性において、思春期の生理的高インスリン血症は、高アンドロゲン血症及び無排卵の発症をもたらす誘発因子となる場合がある。
【０００４】
原因:多嚢胞性卵巣症候群には、インスリン抵抗性をともなう酸化的症候群と関連付けられる基本的な原因がある。多くの場合この症候群に伴うインスリン抵抗性、及び結果として生じる高インスリン血症は、症候群それ自体の発病だけでなく、臨床症状においても重要な役割を果たす。PCOSに典型的な慢性無排卵は、閉鎖卵胞(嚢胞になる)数の増加、及び卵巣の間質における間質組織の増加をもたらす。
【０００５】
PCOSに関する機構: 正常な状態では、女性は、各月経周期で1回の排卵に加わる1個の主席卵胞を生産する。その過程は、原始卵胞集団が増殖を開始するように誘導されたときに始まる。一連の誘導が、卵巣に存在する一次、二次、三次及びグラーフ卵胞を生じさせる。主席卵胞になる能力は、すべての卵胞に共有される特徴ではなく、その特性を欠く卵胞は、アンドロゲン増加による閉鎖によって死ぬ。ヒトの女性では、最初の7百万個の卵胞のうち約400個のみが閉鎖を生き延びて主席卵胞を生じさせる。
【０００６】
PCOS患者では卵胞形成の過程が正常に進行しない。PCOSにおいて、小型グラーフステージ(small graafian stages)への誘導及び増殖である第1の段階は機能するが、排卵可能な主席卵胞の選択である最終段階は規則的に起きない。生卵胞が約6mmステージを超えて成長することはほとんどない。この状態は、どのようにしてかは不明だが多数の小型グラーフ卵胞(一般に嚢胞と呼ばれる)の蓄積をもたらし、そこでは、莢膜間質細胞(TIC)が異常に多量のアンドロゲンを生産する。しかし、顆粒膜細胞(GC)はアロマターゼ酵素を発現してアンドロゲン基質を芳香族化してエストラジオールにすることができない。その結果、継続した高アンドロゲン血症の状態が生じる。問題は、「デフォルト」機構によって閉鎖卵胞がアンドロゲン性卵胞になることにも一部起因する自己永続性である。閉鎖卵胞のアロマターゼ活性が低いので、アンドロステンジオンは、優先的にテストステロンに代謝され、したがって卵巣内でジヒドロテストステロンへと代謝される(Polsonら、(1988):Polycystic ovarie-a common finding in normal women、The Lancet、331巻、8590号、1988年4月16日、870〜872頁、DOI:10.1016/S0140-6736(88)91612-1)。
【０００７】
PCOSの診断
-  婦人科超音波検査-小型卵巣卵胞を特異的に探し、PCOSの検出を助ける。小型卵巣卵胞は、卵巣機能が妨害されて排卵できない結果であると信じられており、この状態の典型である希発月経又は無月経という形で現れる。PCOSでは、すなわち、いくつかの卵胞が5〜7mmのサイズまででそれ以上は成長しない、いわゆる「卵胞停止」がある。単一卵胞は排卵前のサイズ(16mm以上)に達しない。
-  腹腔鏡検査-肥厚した、滑らかな、真珠色の卵巣の外表面を示す場合がある。
-  ホルモンレベルの増加-アンドロステンジオン及びテストステロンを含むアンドロゲン(男性ホルモン)の血清(血液)レベルが上昇する場合がある。超常的なレベルを示すPCOS患者の約60%で測定すると、遊離のテストステロンレベルは最も良いと考えられる。国際単位で測定した場合、LH(黄体形成ホルモン)のFSH(卵胞刺激ホルモン)に対する比はPCOSの女性で上昇する。
-  抗ミュラー管ホルモン(AMH)はPCOSで増加し、その診断基準の一部となる場合がある。
【０００８】
治療:PCOS用に処方される医薬品薬剤は、以下を含む。
i.エストロゲン及びプロゲスチンホルモンの組合せ:経口避妊薬、膣リング、又は皮膚パッチ剤。これらのホルモンは、不規則な月経出血又は月経周期の欠如を補正する。
ii.合成プロゲスチン:子宮内膜を構築及び脱落させる。この脱落は、子宮がんを防止する。
iii.アンドロゲン低下スピロノラクトン(アルダクトン):利尿剤。多くの場合エストロゲン-プロゲスチン療法で用いられる。
iv.メトホルミン(グルコファージ):この糖尿病薬は、インスリン、血糖レベル及びアンドロゲンレベルを制御するためのより新しいPCOS治療である。
v.クロミフェン(クロミッド、セロフェン)(排卵誘発剤)及びゴナドトロピン注射(LH及びFSH)。
vi.メドロキシプロゲステロン酢酸エステル(Medroprogesterone acetate)
vii.ゴナドトロピン放出ホルモンアゴニスト
viii.グルココルチコイド
ix.ケトコナゾール、フルタミド、フィナステライド及びメトホルミン。
(出典:http://www.webmd.com)
【０００９】
しかし、副作用のあるPCOSを治療するためのホルモンの組合せも含むので、治療はPCOSの効果的な治療に特異的ではない。したがって、多嚢胞性卵巣症候群を治療するためのより安全な製剤、例えばハーブ抽出物由来、を開発することが必要である。
【００１０】
PCOS治療のためのハーブ抽出物
先行技術
米国特許出願第20070298049号(2003)は、多嚢胞性卵巣症候群(PCOS)を治療するための治療薬剤を開示している。薬剤は活性成分としてマッシュルームの抽出物を含み、あるとしてもごくわずかな副作用を示す。薬剤は排卵を誘導する場合に効果的であり、出産を望む女性ばかりでなく、未婚の又は若い女性にとっても安全に入手可能である。PCOSの効果的な治療のために経口で与えられるコロハ種子由来のフロスタノールサポニン抽出物を開示し、マッシュルーム又はその抽出物を全く含まないので、本発明は、この先行技術とは異なる。
【００１１】
米国特許出願第8062680号(2005)は、患者における多嚢胞性卵巣症候群の治療方法を開示し、この方法は、薬学的に許容される賦形剤と共に患者へ投与することを含み、組成物は、天然ハーブ、すなわちイワベンケイ(vizRhodiolarosea)の根抽出物、アメリカニンジン(Panaxquinquefolius)の根抽出物、パフィア(Pfaffiapaniculada)、その他の有効量を含む。一方本発明においては、そのようなハーブは全く用いられていない。それはハーブの混合物ではなく、単一ハーブの種子すなわちコロハから得られた抽出物である。
【００１２】
国際特許出願第2008119131号(2007)は、いくつかのハーブ、すなわちShu Di Radix rehmanniae、Shan Yao Radix disocorea、Shan Yu Rou Fructuscorniofficinalis、その他を含むPCOS治療のための組成を開示している。一方本発明においては、そのようなハーブは全く用いられていない。それはこれらのハーブの混合物ではなく、単一ハーブすなわちコロハの種子から得られた、明確に定義された抽出物である。
【００１３】
中国特許出願第102847081号(2011)は、PCOS治療のためのハーブの複合体混合物を開示している。しかし本発明はハーブの複合体混合物ではなく、単一ハーブすなわちコロハの種子から得られた、明確に定義された抽出物である。コロハは先行技術特許において全く開示されていない。
【００１４】
国際特許出願第2013136257号(2012)は、活性成分としてテリハボク(Calophyllum)種に属する植物の抽出物の治療有効量、及び任意選択で薬学的に許容される担体を含むハーブ組成を開示している。組成物は、インスリン抵抗性、高血糖、2型糖尿病、多嚢胞性卵巣症候群関連のような代謝障害の治療で用いられる錠剤、カプセル剤又は顆粒剤の形で経口投与のために製剤化される。しかし本発明においては、経口で与えられた場合にPCOS治療で効果的なコロハ種子由来のフロスタノールサポニン抽出物が用いられる。テリハボク種のハーブは、本発明では全く用いられていない。
【００１５】
文献
Wanら(2007)は、PCOSを治療するためにニッケイの使用を開示した。患者は経口的にニッケイ抽出物へ曝露され、良好な結果を示した(The effect of cinnamon extract on insulin resistance parameters in polycystic ovary syndrome: a pilot study Fertility and Sterility、88巻、1号、2007年7月、240〜243頁)。一方、本発明は、経口で与えられた場合にPCOSの治療で効果的な、コロハ種子由来のフロスタノールサポニン抽出物の使用を開示する。ニッケイ抽出物は、本発明では全く用いられていない。
【００１６】
Ethan Baschら(2003)はコロハの治療的応用を概説した(Therapeutic Applications of Fenugreek, Alternative Medicine Review、8巻、1号、2003、20〜27頁)。コロハ及びその抽出物は、糖尿病の治療において良好な治療的応用性があり、脂質レベルを低下させることも明らかになった。このレビューは、PCOS治療のためのコロハ抽出物の使用を明確に開示していない。更に、本発明で開示されたコロハ種子の抽出物は、特異的で、分析的に定義された抽出物である。
【００１７】
Kassem A.ら(2006)は、コロハ種子全体の避妊作用を評価した。彼らの研究では、30%コロハ種子を含む食餌にウサギを曝露した。処理した動物において、種子は繁殖前エストロゲン濃度に対して有意な効果があった(Evaluation of the potential antifertility effect of fenugreek seeds in male and female rabbits、Contraception、73巻、3号、2006年3月、301〜306頁、DOI:10.10l61j.contraception.2005.08.020)。しかし、KassemらはPCOSの治療のためのいかなる製剤又はコロハ抽出物を明確に開示していない。
【００１８】
Bashtian M. H.ら(2013)はPCOSの女性の治療のためのメトホルミンを用いたアジュバント療法としてのコロハ種子抽出物の効果を開示している。それは、前向き無作為化、二重盲検、プラセボ対照試験であった。女性は、メトホルミン(500mg剤形)と共にコロハ種子の含水アルコール抽出物のカプセル剤(500mg剤形)を受けるために無作為に割り当てられ、改善について評価した。結果は、集団でPAO(多嚢胞性出現卵巣(polycystic appearing ovaries))の有意な減少を示した。(Evaluation of Fenugreek (Trigonellafoenum-graceum L.)、Effects Seeds Extract on Insulin Resistance in Women with Polycystic Ovarian Syndrome、Iran J Pharm Res. 2013年春、12(2):475〜481頁)。
【００１９】
研究で用いられた抽出物及びその調製方法は、Bashtianによって下記のように開示された。
【００２０】
乾燥及び新鮮なコロハ種子(25Kg)を商業的供給源から得た。種子を蒸留水中で洗浄し、冷却条件下、ミキサーで微粉末にすりつぶした。得られた粉末をろ過した白エタノール(white ethanol)(70%w/w)で抽出した。エタノール抽出物を凍結乾燥した。凍結乾燥した抽出物は、2600gであった。25%リン酸三カルシウムを乾燥させた抽出物に添加した。粉末混合物をグラインダーで破砕し、20メッシュのふるいに通した。粉末含有のカプセル剤調製のために、カプセル充填機を用いた。各カプセル剤の平均質量は525mg(500mg乾燥抽出物)であった。プラセボカプセルは、1%タルトラジンで着色したラクトース粉末で充填した(525mg)。
【００２１】
対照的に、本発明は、コロハ種子から得られた単一の含水アルコール抽出物ではなく、相乗的割合で存在する5種類のフロスタノールサポニンの精製抽出物であり、本発明人によって開発された独自の工程によってコロハ種子から得られ、そのために本発明人はインドで特許の補助金を申請した。2008年6月17日付けの「A NOVEL PROCESS FOR EXTRACTION OF FUROSTANOLIC SAPONINS FROM FENUGREEK SEEDS」と題する特許出願第1439/DEL/2008号、続いて国際特許出願番号-PCT/IN2008/000559、後に出願され補助金を受けた米国特許第8217165 B2号及び分割特許米国特許第8754205(B2)号、欧州で出願された出願番号EP 08 808 174.0を参照のこと。
【００２２】
抽出物の分析フィンガープリントを図1に示す。抽出物の組成を下記Table 1(表1)に示す。
【００２３】
【表１】
0006465974.tif 000002
【００２４】
Bashtian M. H.らは、本発明の抽出物、上記Table 1(表1)のようなコロハ種子由来の5種類のフロスタノールサポニンの、特異的に定義された相乗的抽出物を予測していない。Bashtianらによって開示された抽出物と本発明の抽出物との間の有意な違いは、下記の表のようである。
【００２５】
【表２】
0006465974.tif 000003
【００２６】
したがって、単一ハーブすなわちコロハの種子から得られ、相乗的割合で存在する5種類のフロスタノールサポニンを含み、本発明人によって開発された独自の工程によってコロハ種子から抽出された、本発明の特定の抽出物の使用を予測した先行技術はない。抽出物の分析プロファイル(LCMSフィンガープリント)を図1に示す。個体反応及び臨床的評価に応じて、各500mgを2カプセルの用量で、30〜90日の間で変化する期間、経口で投与された場合、抽出物はPCOS治療に効果的である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２７】
【特許文献１】米国特許出願第20070298049号
【特許文献２】米国特許出願第8062680号
【特許文献３】国際特許出願第2008119131号
【特許文献４】中国特許出願第102847081号
【特許文献５】国際特許出願第2013136257号
【特許文献６】特許出願第1439/DEL/2008号
【特許文献７】国際特許出願番号-PCT/IN2008/000559
【特許文献８】米国特許第8217165 B2号
【特許文献９】米国特許第8754205 B2号
【特許文献１０】EP 08 808 174.0
【非特許文献】
【００２８】
【非特許文献１】Polsonら、(1988):Polycystic ovarie-a common finding in normal women、The Lancet、331巻、8590号、1988年4月16日、870〜872頁、DOI:10.1016/S0140-6736(88)91612-1
【非特許文献２】http://www.webmd.com
【非特許文献３】Wanら、The effect of cinnamon extract on insulin resistance parameters in polycystic ovary syndrome: a pilot study Fertility and Sterility、88巻、1号、2007年7月、240〜243頁
【非特許文献４】Ethan Baschら、Therapeutic Applications of Fenugreek, Alternative Medicine Review、8巻、1号、2003、20〜27頁
【非特許文献５】Kassem A.ら、Evaluation of the potential antifertility effect of fenugreek seeds in male and female rabbits、Contraception、73巻、3号、2006年3月、301〜306頁、DOI:10.10l61j.contraception.2005.08.020
【非特許文献６】Bashtian M. H.ら、Evaluation of Fenugreek (Trigonellafoenum-graceum L.)、Effects Seeds Extract on Insulin Resistance in Women with Polycystic Ovarian Syndrome、Iran J Pharm Res. 2013年春、12(2):475〜481頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２９】
本発明の目的は、経口で摂取した場合にPCOS治療で効果的な単一ハーブすなわちコロハから得られたハーブ抽出物を開示することである。
【００３０】
本発明の別の目的は、コロハ種子から得られ、相乗的割合で存在する5種類のフロスタノールサポニンを含む、PCOS治療のためのハーブ抽出物を開示することである。
【００３１】
本発明の更に別の目的は、卵巣体積の減少、嚢胞サイズの減少、嚢胞の完全な分解、及び不妊女性の妊娠の可能性の増加をもたらし、コロハ種子の抽出物から得られた経口組成を開示することである。
【００３２】
本発明の最後の目的は、前記抽出物を1日あたり1グラムの用量、500mgのカプセル剤の形状で1日2回、30〜90日までの期間、個体反応及び臨床的評価に応じて投与することを含むPCOS治療の方法を開示することである。
【課題を解決するための手段】
【００３３】
本発明は、500mgのカプセル剤としての経口剤形で、1日2回、30〜90日の範囲の期間与えられた場合におけるPCOS(多嚢胞性卵巣症候群)の効果的な治療のための単一ハーブ抽出物を開示する。抽出物は、特定の抽出方法を用いてコロハ種子から得られ、Table 1(表1)(7頁)のような相乗的割合で存在する5種類のフロスタノールサポニンを含み、図1のような分析プロファイルを有する。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】コロハ種子由来の5種類のフロスタノールサポニン抽出物の分析的フィンガープリント(LCMSプロファイル)の図である。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
本発明は、コロハ種子から得られ、経口で与えられた場合にPCOS治療に適した、5種類の化合物の相乗的混合物を含むフロスタノールサポニン抽出物を開示する。抽出物の組成を上記Table 1(表1)に、分析プロファイルを図1に開示する。
【００３６】
用量
上記製剤の剤形は、粉末の500mgカプセル剤の形状に調製した。倫理委員会の正当な承認後、これについて、PCOS治療における臨床的有効性を評価した。投与された用量は、1日あたり2カプセル、朝食後及び夕食後であった。抽出物の投与期間は、30日から90日(3カ月)の間で変化した。試験に参加した被験者数は50例であり、年齢群は18〜45歳であった。治療の結果を下記に示す。
【００３７】
【表３】
0006465974.tif 000004
【００３８】
【表４】
0006465974.tif 000005
【００３９】
コロハ種子抽出物の摂取で月経周期に有意な改善がみられた。最後の来院の終了時に、71%の患者は通常周期であり、19%の患者は長期化した周期を報告し、約10%は原発性不妊症を報告した。
【００４０】
試験結果は以下に要約される。
a.本発明のコロハ種子抽出物は、PCOS患者で卵巣体積の有意な減少を引き起こす。
b.試験集団の46%は嚢胞サイズの減少を示した
c.試験集団の36%は嚢胞の完全な分解を示した
d.患者の12%は妊娠した
e.患者の71%は治療の終了時に通常の月経周期を報告した
f.全体的にみて、患者の94%は好ましい反応があるか、又はコロハ抽出物投与から利益を得た。
【００４１】
安全性プロファイル
抽出物の安全性プロファイルを評価した。患者の血清肝機能検査、血清腎機能検査及び血液像に有意な変化は観察されなかった。500mgの用量で1日2回、30〜90日の間で変化する期間で、本発明の分析的に定義された抽出物の投与は、PCOSの治療において効果的な結果をもたらすことが臨床結果に基づいて結論づけられた。
【００４２】
本発明の使用方法
抽出物を各500mgのカプセル剤形にする。経口で1日2回、30〜90日の間で変化する期間投与した場合、抽出物はPCOSの治療において効果的な結果をもたらした。
【００４３】
新規性  -  本発明は、単一ハーブ由来の新規ハーブ抽出物、及び先行技術では開示されていないPCOS治療のためのその使用方法を開示する。抽出物は、単一ハーブすなわちコロハの種子から抽出された5種類のフロスタノールサポニンの相乗的混合物を含む(7頁のTable 1(表1)及び図1)。1日あたり1グラムの用量で(500mgカプセル剤、1日2回)、30〜90日の範囲の期間、経口で与えられた場合、抽出物はPCOSの治療において効果的である。
【００４４】
進歩性  -  進歩性は、単一ハーブから得られた抽出物を用いたPCOSの治療のための知識の技術的進歩、及びその使用方法(一定期間の1日あたりの用量、すなわち、患者反応に基づいた臨床的助言及び評価により、500mgカプセル剤の形状で1日あたり1グラム、30〜90日の範囲の期間に1日2回摂取)の開示にある。新規抽出物は、単一ハーブすなわちコロハの種子から単離され、適した用量で与えられた場合、PCOSの治療に効果的な5種類のフロスタノールサポニン(7頁のTable 1(表1)、及び図1)の相乗的混合物を含む。
【００４５】
産業上の利用  -  前記抽出物は、PCOSの治療に適しており、工業規模で製造できる。
【００４６】
本発明は、特定の実施形態に関して記載したが、この記載は、限定の意味で解釈されることを意図していない。開示された実施形態のさまざまな変更、並びに本発明の代替の実施形態は、本発明の記載、及び本発明を実行する最良の形態に関して当業者に明らかになるであろう。したがって、定義された本発明の精神と範囲から逸脱せずにそのような変更を行うことができ、これらも本発明の範囲内であると見なされることが想定される。
【図１】
0006465974.tif 000006