(57)【要約】本明細書に記載の発明は、再構成によって静脈内注射用の液剤を提供するためのEC145を含有する固形医薬組成物、とりわけ、周囲温度での十分な保存安定性を有し、投与前に水性希釈剤に再溶解させることができる、EC145を含有する凍結乾燥固形医薬組成物ならびにその製造方法、該組成物を含む製剤、および癌の処置のために該組成物を用いる方法に関する。
2014510791.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
EC145および増量剤を含有する固形医薬組成物。
【請求項２】
(a)該増量剤が、ブドウ糖、グルコース、グリシン、イノシトール、マンニトール、ソルビトール、スクロース、ポリエチレングリコール(PEG)、もしくはポリビニルピロリジン(PVP)、またはそれらの組み合わせ（個々にまたは組み合わせて約3％〜約20％の範囲で）、ならびに/あるいはアルギニンまたはプロリン（個々にまたは組み合わせて約0.1 M〜約0.5 Mの範囲で）を含むか;
(b)該増量剤が、ブドウ糖、イノシトール、マンニトール、ソルビトールもしくはスクロース、またはそれらの組み合わせ（個々にまたは組み合わせて約3％〜約6％の範囲で）、ならびに/あるいはアルギニンまたはプロリン（個々にまたは組み合わせて約0.1 M〜約0.5 Mの範囲で）を含むか;
(c)該増量剤が、約3％〜約10％のグリシンまたはマンニトールを含むか;
(d)該増量剤が、約3％〜約4％のマンニトールおよび0％〜約1％のスクロースを含むか;あるいは、
(e)該増量剤が、約3％マンニトールを含む、
請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
さらなる賦形剤を含有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
該賦形剤がバッファーを含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
該バッファーが、ジスルフィド結合を還元しない抗酸化物質である、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
(a)該バッファーのpHが、約5.0〜約8.0であるか;
(b)該バッファーのpHが、約5.7〜約6.6であるか;
(c)該バッファーのpHが、約6.0〜約6.6であるか;あるいは、
(d)該バッファーのpHが、約6.2 ± 0.2である、
請求項４に記載の組成物。
【請求項７】
(a)該バッファーが、アスコルビン酸、ソルビン酸、ギ酸、乳酸、フマル酸、酒石酸、グルタミン酸、酢酸、クエン酸、グルコン酸、ヒスチジン、リンゴ酸、リン酸またはコハク酸のバッファーを含むか;
(b)該バッファーが、アスコルビン酸、乳酸、酒石酸、クエン酸、グルコン酸、リンゴ酸、イソクエン酸または2-ヒドロキシ酪酸のバッファーを含むか;あるいは、
(c)該バッファーが、クエン酸バッファーを含む、
請求項４に記載の組成物。
【請求項８】
(a)該バッファーの濃度が、約20 mM〜150 mMであるか;
(b)該バッファーの濃度が、約100 mMであるか、または100 mMであるか;あるいは、
(c)該バッファーの濃度が、約50 mMであるか、または50 mMである、
請求項４に記載の組成物。
【請求項９】
該バッファーがpH 6.2 クエン酸バッファーである、請求項４に記載の組成物。
【請求項１０】
(a)該固形物が、重量で、2.8部のEC145に対して約27部のクエン酸三ナトリウム二水和物、約1.5部のクエン酸、および約40〜80部のマンニトールに相当するか;あるいは、
(b)該固形物が、重量で、2.8部のEC145に対して約27部のクエン酸三ナトリウム二水和物、約1.5部のクエン酸、および約60部のマンニトールに相当する、
請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
該固形物が凍結乾燥固形医薬組成物である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
該EC145がX線アモルファスである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
該固形物のラマンスペクトルが、図3に示されるものと実質的に同一のスペクトル（約1606 cm-1でのピークを含む）を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
該固形物の粉末X線回折パターンが、図2に示されるものと実質的に同一のパターンを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
動的蒸気吸着/脱着における65％相対湿度での％重量増加が:(a)約20％もしくは20％か、(b)約10％もしくは10％か、または(c)約5％もしくは5％を超えない固体分散液である、請求項４に記載の組成物。
【請求項１６】
残留水を除いた乾燥ベースの重量対重量において、該固体成分が:
(a)約5-10部のEC145、約75-90部のバッファー、および約150-750部の増量剤か;
(b)約8.6部のEC145、約81部のクエン酸三ナトリウム二水和物、約4.6〜4.8部のクエン酸、および約180部のグリシンか;
(c)約8.6部のEC145、約81部のクエン酸三ナトリウム二水和物、約4.6〜4.8部のクエン酸、および約600部のグリシンか;
(d)約8.6部のEC145、約81部のクエン酸三ナトリウム二水和物、約4.6〜4.8部のクエン酸、および約180部のマンニトールか;あるいは、
(e)約8.6部のEC145、約81部のクエン酸三ナトリウム二水和物、約4.6〜4.8部のクエン酸、および約600部のマンニトール、
に相当する固体分散液である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
該残留水含量が約1.5〜約5重量％である、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
請求項１に記載のEC145および増量剤を含有しており、適宜、バッファーをさらに含有する凍結乾燥固形医薬組成物を製造する方法であって、EC145および増量剤の水溶液（該溶液は、適宜、バッファーをさらに含有する）を凍結乾燥させることを含む、該方法。
【請求項１９】
工程(i)および(ii):
(i)EC145、本明細書の実施態様のいずれかに記載の増量剤、および適宜、本明細書の実施態様のいずれかに記載のバッファー、ならびに水性溶媒を含有する液体組成物を、第一乾燥工程の前に-20℃以下で完全に凍結させること;ならびに、
(ii)EC145、本明細書の実施態様のいずれかに記載の増量剤、および適宜、本明細書の実施態様のいずれかに記載のバッファー、ならびに水性溶媒を含有する液体組成物の凍結混合物から水性溶媒を除去するのに効率的な圧力まで低下するように減圧する（ここで、該温度は約-50℃以下に維持されている）ことを含む、第一乾燥工程の最初の工程、
のうちの1つ以上を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
EC145、増量剤、水性溶媒、および適宜、バッファーを含む液体組成物を凍結乾燥させることを含む方法によって製造される、EC145を含有する凍結乾燥固形医薬組成物。
【請求項２１】
工程(i)および(ii):
(i)EC145、増量剤、水性溶媒、および適宜、バッファーを含む液体組成物を、第一乾燥工程の前に-20℃以下で完全に凍結させること;ならびに、
(ii)EC145、増量剤、水性溶媒、および適宜、バッファーを含む液体組成物の凍結混合物から水性溶媒を除去するのに効率的な圧力まで低下させるように減圧すること（ここで、第一乾燥の最初の工程において、該温度を約-50℃に維持する）を含む第一乾燥工程の最初の工程、
のうちの1つ以上を含む方法によって製造される、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
(a)該増量剤が、ブドウ糖、グルコース、グリシン、イノシトール、マンニトール、ソルビトール、スクロース、ポリエチレングリコール(PEG)、もしくはポリビニルピロリジン(PVP)、またはそれらの組み合わせ（個々にまたは組み合わせて約3％〜約20％の範囲で）ならびに/あるいはアルギニンまたはプロリン（個々にまたは組み合わせて約0.1 M〜約0.5 Mの範囲で）を含むか;
(b)該増量剤が、ブドウ糖、イノシトール、マンニトール、ソルビトールもしくはスクロース、またはそれらの組み合わせ（個々にまたは組み合わせて約3％〜約6％の範囲で）、ならびに/あるいはアルギニンまたはプロリン（個々にまたは組み合わせて約0.1 M〜約0.5 Mの範囲で）を含むか;
(c)該増量剤が、約3％〜約10％のグリシンまたはマンニトールを含むか;
(d)増量剤が、約3％〜約4％のマンニトールおよび0％〜約1％のスクロースを含むか;あるいは、
(e)該増量剤が、約3％のマンニトールを含む、
請求項２０に記載の組成物。
【請求項２３】
(a)pHが約5.0〜約8.0であるか;
(b)pHが約5.7〜約6.6であるか;
(c)pHが約6.0〜約6.6であるか;あるいは、
(d)pHが約6.2 ± 0.2である
バッファーを含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２４】
該EC145がX線アモルファスである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２５】
該固形物のラマンスペクトルが、図3に示されるものと実質的に同一のスペクトル（約1606 cm-1でのピークを含む）を含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２６】
該固形物の粉末X線回折パターンが、図2に示されるものと実質的に同一のパターンを含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２７】
請求項１または２０に記載のEC145を含有する固形医薬組成物を含む製剤。
【請求項２８】
アンプルまたは密封バイアルをさらに含む、請求項２７に記載の製剤。
【請求項２９】
密封バイアルをさらに含む、請求項２８に記載の製剤。
【請求項３０】
該医薬組成物がクエン酸バッファーを含む、請求項２７に記載の製剤。 
【請求項３１】
複数用量形態である、請求項２７に記載の製剤。
【請求項３２】
単回用量形態である、請求項２７に記載の製剤。
【請求項３３】
水性希釈剤を用いた希釈または再構成によって、2.0 mLの水性で無菌の液剤として静脈内投与用のEC145を含有する液剤を提供し、1.4 mg/mLのEC145を含有する請求項３２に記載の用量単位。
【請求項３４】
該EC145が、周囲温度(25℃±2℃)で1年間にわたって、94％以上というEC145の純度規格を維持することができる、請求項２７に記載の製剤。
【請求項３５】
請求項１または２０に記載のEC145および増量剤を含有する固形物の再構成によって得られる、医薬組成物。
【請求項３６】
成分としてpH 6.2 クエン酸バッファー、マンニトールおよび注射用水を含有する水性で無菌の液剤中に、EC145を1.4 mg/mLの濃度で含有する、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
工程:
(a)請求項１または２０に記載の固形医薬組成物を医薬的に許容される溶媒に溶解させて医薬的に許容される液剤を製造すること、ならびに、
(b)該液剤を、それを必要としている患者に投与すること、
のうちの少なくとも1つを含む、機能的に活性な葉酸受容体を有する腫瘍を有する患者を処置するための方法。
【請求項３８】
該腫瘍が卵巣腫瘍または肺腫瘍である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
該腫瘍が卵巣腫瘍である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
該腫瘍が白金製剤耐性卵巣腫瘍である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
該患者を、ペグ化リポソーマルドキソルビシンを用いてかまたはペグ化リポソーム形態ではないドキソルビシンを用いてさらに処置する、請求項３７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、35 U.S.C. § 119(e)の下において、米国仮出願第61/474,428号（2011年４月12日出願）の優先権を主張し、引用によりその全般が本明細書に明確に援用される。
【技術分野】
【０００２】
本明細書に記載の発明は、再構成によって静脈内注射用の液剤を提供するためのEC145を含有する固形医薬組成物に関するものであり、とりわけ、周囲温度での十分な保存安定性を有し、投与前に水性希釈剤に再溶解することができる、EC145を含有する凍結乾燥固形医薬組成物およびその製造方法、該組成物を含有する製剤、ならびに癌の処置における該組成物の使用方法に関するものである。
【背景技術】
【０００３】
（本発明の背景および概要）
葉酸-標的薬剤が開発されており、癌治療薬として臨床試験中である。EC145（vintafolideとしても知られる）は、葉酸に結合した、高い効力のビンカアルカロイド細胞傷害性化合物であるデスアセチルビンブラスチンヒドラジド(DAVLBH)を含有する。EC145分子は、上皮性腫瘍（非小細胞肺癌(NSCLC)、卵巣、子宮内膜および腎癌を含む）、およびその他（卵管および原発性腹膜癌を含む）の表面に高濃度で見られる葉酸受容体を標的とする。EC145は葉酸受容体を発現する腫瘍に結合して、正常組織を避けながら、癌細胞に直接的にビンカ部分を送達すると考えられている。従って、結合すると、EC145はエンドサイトーシスを介して癌細胞に入り、DAVLBHを放出し、細胞死を引き起こすか、まあるいは細胞機能を阻害する。EC145は、CAS登録番号（Chemical Abstracts Registry Number） 742092-03-1であり、以下の式で表される。
【化１】
2014510791.tif 000003
EC145
本明細書で用いられる用語EC145は、文脈によって、化合物、またはその医薬的に許容される塩を意味し;該化合物は、電離型（プロトン化形態を含む）で、固体、溶液または懸濁液として存在してもよい。
【０００４】
EC145は、特許文献１に記載されており;具体的な使用および静脈内投与のための水性液体 pH 7.4, リン酸緩衝製剤が特許文献２に記載されている。特許文献２に記載の通り、安定性を確保するために該水性液体製剤を凍結状態で保存する必要がある。この必要性を回避するために、周囲温度での十分な安定性を有する製剤が必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第7,601,332号
【特許文献２】WO 2011/014821
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本明細書に記載の発明は、再構成によって静脈内注射用の液剤を提供するためのEC145を含有する固形医薬組成物に関するものであり、とりわけ、周囲温度での十分な保存安定性を有し、投与前に水性希釈剤に再溶解することができる、EC145を含有する凍結乾燥固形医薬組成物およびその製造方法、該組成物を含有する製剤、ならびに癌の処置における該組成物の使用方法に関するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本明細書に記載の本発明の一態様として、周囲温度での十分な保存安定性を有し、投与前に水性希釈剤に再溶解することができる凍結乾燥固形物である、EC145の医薬組成物を提供する。
【０００８】
本発明の別の態様において、周囲温度での十分な保存安定性を有し、投与前に水性希釈剤に再溶解することができるX線アモルファスの固形物であるEC145の医薬組成物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図1は、凍結乾燥EC145の粉末X線回折(XRPD)パターンを示す。
【図２】図2は、凍結乾燥されたpH 6.2 クエン酸緩衝EC145製剤（3％マンニトール含有）の粉末X線回折パターンを示す。
【図３】図3は、凍結乾燥されたpH 6.2 クエン酸緩衝EC145製剤（3％マンニトール含有）のラマンスペクトルを示す。
【図４】図4は、凍結乾燥されたpH 6.2 クエン酸緩衝EC145製剤（3％マンニトール含有）(一番上)、凍結乾燥プラセボ製剤(上から2番目)、凍結乾燥EC145(下から2番目)、および以前のバッチの凍結乾燥EC145(一番下)のラマンスペクトルのオーバーレイを示す。
【図５】図5は、凍結乾燥されたpH 6.2 クエン酸緩衝EC145製剤（3％マンニトール含有）(一番上)、凍結乾燥プラセボ製剤(上から2番目)、凍結乾燥EC145(下から2番目)、および以前のバッチの凍結乾燥EC145(一番下)のラマンスペクトルの1500〜1650 cm-1の展開のオーバーレイを示す。
【図６】図6は、凍結乾燥EC145の13C CP/MAS NMRスペクトル（176.5 ppmでのグリシンを外部標準として）を示す。
【図７】図7は、凍結乾燥されたpH 6.2 クエン酸緩衝EC145製剤（3％マンニトール含有）の13C CP/MAS NMRスペクトルを示す。
【図８】図8は、凍結乾燥されたpH 6.2 クエン酸緩衝EC145製剤（3％マンニトール含有）の赤外スペクトル(DRIFTS)を示す。
【図９】図9は、凍結乾燥されたpH 6.2 クエン酸緩衝EC145製剤（3％マンニトール含有）の、DSC(左スケール, 左および底部の曲線)およびTGA(右スケール, 上部および右の曲線)サーモグラムを示す。
【図１０】図10は、50 mM クエン酸バッファー/pH 6.2中に調製したEC145の固体分散液（1.4 mg/mLEC145および3％グルコースを含む）の変調（modulated）DSCサーモグラムの曲線を示す。
【図１１】図11は、50 mM クエン酸バッファー/pH 6.2中に調製したEC145の固体分散液（1.4 mg/mLEC145および3％グルコースを含む）の動的蒸気吸着/脱着等温線を示す。
【図１２】図12は、50 mM クエン酸バッファー/pH 6.2中に調製したEC145の固体分散液（1.4 mg/mL EC145および3％グリシンを含む）の変調DSCサーモグラムの曲線を示す。
【図１３】図13は、50 mM クエン酸バッファー/pH 6.2中に調製したEC145の固体分散液（1.4 mg/mL EC145および3％グリシンを含む）の動的蒸気吸着/脱着等温線を示す。
【図１４】図14は、50 mM クエン酸バッファー/pH 6.2中に調製したEC145の固体分散液（1.4 mg/mL EC145および10％グリシンを含む）の変調DSCサーモグラムの曲線を示す。
【図１５】図15は、50 mM クエン酸バッファー/pH 6.2中に調製したEC145の固体分散液（1.4 mg/mL EC145および10％グリシンを含む）の動的蒸気吸着/脱着等温線を示す。
【図１６】図16は、50 mM クエン酸バッファー/pH 6.2中に調製したEC145の固体分散液（5.1 mg/mL EC145および3％グリシンを含む）の変調DSCサーモグラムの曲線を示す。
【図１７】図17は、50 mM クエン酸バッファー/pH 6.2中に調製したEC145の固体分散液（1.4 mg/mL EC145および3％マンニトールを含む）動的蒸気吸着/脱着等温線を示す。
【図１８】図18は、50 mM クエン酸バッファー/pH 6.2中に調製したEC145の固体分散液（1.4 mg/mL EC145および10％マンニトールを含む）の変調DSCサーモグラムの曲線を示す。
【図１９】図19は、50 mM クエン酸バッファー/pH 6.2中に調製したEC145の固体分散液（1.4 mg/mL EC145および10％マンニトールを含む）の動的蒸気吸着/脱着等温線を示す。
【図２０】図20は、50 mM クエン酸バッファー/pH 6.2中に調製したEC145の固体分散液（5.2 mg/mL EC145および3％マンニトールを含む）の変調DSCサーモグラムの曲線を示す。
【図２１】図21は、50 mM クエン酸バッファー/pH 6.2中に調製したEC145の固体分散液（5.3 mg/mL EC145および3％PEG400を含む）の変調DSCサーモグラムの曲線を示す。
【図２２】図22は、50 mM クエン酸バッファー/pH 6.2中に調製したEC145の固体分散液（1.4mg/mL EC145および3％PVP10を含む）の変調DSCサーモグラムの曲線を示す。
【図２３】図23は、50 mM クエン酸バッファー/pH 6.2中に調製したEC145の固体分散液（1.4mg/mL EC145および3％PVP10を含む）の動的蒸気吸着/脱着等温線を示す。
【図２４】図24は、50 mM クエン酸バッファー/pH 6.2中に調製したEC145の固体分散液（1.4mg/mL EC145および3％PVP10を含む）の動的蒸気吸着/脱着等温線を示す。
【図２５】図25は、50 mM クエン酸バッファー/pH 6.2中に調製したEC145の固体分散液（1.4 mg/mL EC145および3％スクロースを含む）のDSCサーモグラムの曲線を示す。
【図２６】図26は、50 mM クエン酸バッファー/pH 6.2中に調製したEC145の固体分散液（1.4 mg/mL EC145および3％スクロースを含む）の動的蒸気吸着/脱着等温線を示す。
【図２７】図27は、50 mM クエン酸バッファー/pH 6.2中に調製したEC145の固体分散液（1.4 mg/mL EC145および20％スクロースを含む）のDSCサーモグラムの曲線を示す。
【図２８】図28は、50 mM クエン酸バッファー/pH 6.2中に調製したEC145の固体分散液（1.4 mg/mL EC145および20％スクロースを含む）の動的蒸気吸着/脱着等温線を示す。
【図２９】図29は、50 mM クエン酸バッファー/pH 6.2中に調製したEC145の固体分散液（5.2 mg/mL EC145および3％スクロースを含む）のDSCサーモグラムの曲線を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
（実施態様の例の詳細な説明）
本発明の一実施態様は、EC145および増量剤を含有する固形医薬組成物である。上記の通り、該用語EC145は、化合物またはその医薬的に許容される塩を意味し;該化合物は電離型（プロトン化形態を含む）として存在してもよい。EC145の溶液のpHを調整（例えば1.0 N塩酸または1.0 N水酸化ナトリウム溶液の使用によって）してもよいこと、ならびに、該溶液から水を除去することで対応する医薬的に許容される塩が得られることが理解されるであろう。
【００１１】
本明細書の記載において、文脈に従って、EC145を含む固形医薬組成物の成分は、重量対重量(w/w)ベースでの乾燥重量または相対乾燥重量として提示されうる。あるいは、溶液（水の除去により該固形医薬組成物を提供し、該固形物は水性希釈剤を用いた再構成によって対応する水性医薬組成物を提供する）の成分を、例えば、モル濃度またはパーセント(％)濃度として記載してもよい。概して、本明細書の記載において、pHは、1.4 mg/mLの計算濃度でEC145がもたらされるように注射用水で固形組成物を希釈して測定され;該増量剤は、その濃度での％重量/体積である。
【００１２】
安定化剤としても知られる増量剤は、いずれの許容される増量剤であってよい。本明細書に記載の医薬組成物に関して、一実施態様において、該増量剤は、ブドウ糖、グルコース、グリシン、イノシトール、マンニトール、ソルビトール、スクロース、ポリエチレングリコール(PEG)（例えばPEG400）、もしくはポリビニルピロリジン(PVP)（例えばPVP10）、またはそれらの組み合わせ（個々にまたは組み合わせて約3％〜約20％の範囲で）、ならびに/あるいはアルギニンまたはプロリン（個々にまたは組み合わせて約0.1 M〜約0.5 Mの範囲で）を含む。本明細書に記載の医薬組成物に関して、一実施態様において、該増量剤は、ブドウ糖、イノシトール、マンニトール、ソルビトールもしくはスクロース、またはそれらの組み合わせ（個々にまたは組み合わせて3％〜約6％の範囲で）ならびに/あるいはアルギニンまたはプロリン（個々にまたは組み合わせて約0.1 M〜約0.5 Mの範囲で）を含む。別の実施態様において、該増量剤は約3％〜約10％のグリシンまたはマンニトールを含む。別の実施態様において、該増量剤は約3％〜約4％のマンニトールおよび0％〜約1％のスクロースを含む。別の実施態様において、該増量剤は約3％のマンニトールを含む。別の実施態様において、該増量剤をEC145と一緒に用いて凍結乾燥組成物を製造することができる。
【００１３】
本明細書に記載の該固形医薬組成物の別の実施態様は、さらなる賦形剤を含有する実施態様である。
【００１４】
一実施態様において、該さらなる賦形剤はバッファーを含む。一実施態様において、該バッファーのpHは約5.0〜約8.0である。別の実施態様において、該バッファーのpHは約5.7〜約6.6である。別の実施態様において、該バッファーのpHは約6.0〜約6.6である。別の実施態様において、該バッファーのpHは約6.2 ± 0.2である。
【００１５】
該バッファーは、指定のpH範囲および生理学的適合性について許容されるバッファー（製薬分野で公知のもの）のいずれであってよい。加えて、バッファーは、安定剤として（例えば、ジスルフィド結合を還元しない抗酸化物質として）さらに作用しうる。一実施態様において、該バッファーは、アスコルビン酸、ソルビン酸、ギ酸、乳酸、フマル酸、酒石酸、グルタミン酸、酢酸、クエン酸、グルコン酸、ヒスチジン、リンゴ酸、リン酸またはコハク酸のバッファーを含む。別の実施態様において、該バッファーは、アスコルビン酸、乳酸、酒石酸、クエン酸、グルコン酸、リンゴ酸、イソクエン酸または2-ヒドロキシ酪酸のバッファーを含む。
【００１６】
一実施態様において、上記バッファーの濃度は約20 mM〜150 mMである。一実施態様において、該バッファーはクエン酸バッファーを含む。一実施態様において、上記バッファーの濃度は、約100 mMであるか、または100 mMである。別の実施態様において、上記バッファーの濃度は、約50 mMであるか、または50 mMである。バッファーのさらなる実施態様は、該バッファーがpH 6.2のクエン酸バッファーであるものである。
【００１７】
一実施態様において、該固形医薬組成物は、該固形物が、重量で2.8部（part）のEC145に対して約27部のクエン酸三ナトリウム二水和物、約1.5部のクエン酸、および約40〜80部のマンニトールに相当するものである。別の実施態様において、該固形医薬組成物は、該固形物が、重量で2.8部のEC145に対して約27部のクエン酸三ナトリウム二水和物、約1.5部のクエン酸、および約60部のマンニトールに相当するものである。
【００１８】
本明細書に記載の固形医薬組成物の実施態様のいずれかにおける組成物の一実施態様は、該固形物が凍結乾燥固形医薬組成物であるものである。
【００１９】
本明細書に記載の固形医薬組成物の実施態様のいずれかにおける組成物の一実施態様は、該EC145がX線アモルファスであるものである。
【００２０】
本明細書に記載の固形医薬組成物の実施態様のいずれかにおける組成物の一実施態様は、該固形物のラマンスペクトルが、図3に示されるものと実質的に同一のスペクトル（約1606 cm-1でのピークを含む）を含むものである。
【００２１】
本明細書に記載の固形医薬組成物の実施態様のいずれかにおける組成物の一実施態様は、該固形物の粉末X線回折パターンが図2に示されるものと実質的に同一のパターンを含むものである。
【００２２】
上記の組成物は、以下の記載および図面に示される通り、各々、固体分散液として得られてもよく、さらに、動的蒸気吸着/脱着で特徴付けられる。上記組成物のいずれかの一実施態様において、該組成物は、動的蒸気吸着/脱着における65％相対湿度での％重量増大が約20％または20％を超えない固体分散液である。別の実施態様において、動的蒸気吸着/脱着における65％相対湿度での％重量増大は約10％または10％を超えない。別の実施態様において、動的蒸気吸着/脱着における65％相対湿度での％重量増大は約5％または5％を超えない。
【００２３】
上記の組成物は、各々、固体分散液として得られてもよく、さらに、残留水を除いた乾燥ベースの重量対重量で特徴付けられる。一実施態様において、該固体成分は、約5〜10部のEC145、約75〜90部のバッファーおよび約150〜750部の増量剤に相当する。別の実施態様において、該固体成分は、約5〜10部のEC145、約75〜90部のクエン酸バッファーおよび約150〜750部の増量剤（例えばマンニトール）に相当する。一実施態様において、該固体成分は、約8.6部のEC145、約81部のクエン酸三ナトリウム二水和物、約4.6〜4.8部のクエン酸、および約180部のグリシンに相当する。一実施態様において、該固体成分は、約8.6部のEC145、約81部のクエン酸三ナトリウム二水和物、約4.6〜4.8部のクエン酸、および約600部のグリシンに相当する。一実施態様において、該固体成分は、約8.6部のEC145、約81部のクエン酸三ナトリウム二水和物、約4.6〜4.8部のクエン酸、および約180部のマンニトールに相当する。一実施態様において、該固体成分は、約8.6部のEC145、約81部のクエン酸三ナトリウム二水和物、約4.6〜4.8部のクエン酸、および約600部のマンニトールに相当する。
【００２４】
上記の固体分散液に関して、一実施態様において、残留水の含量は約1.5〜約5重量％である。
【００２５】
本発明の別の実施態様として、EC145および増量剤を含有し、適宜、本明細書の実施態様のいずれかに記載のバッファーをさらに含有する、凍結乾燥固形医薬組成物の製造方法であって、EC145および増量剤の水溶液（適宜、さらにバッファーを含む）を凍結乾燥させることを含む、該製造方法について記載する。実施例セクションにおいて、そのような方法の具体的な例示を提供する。
【００２６】
一実施態様において、アモルファスのEC145を含有する凍結乾燥医薬組成物の製造方法であって、工程(i)および(ii):
(i)EC145、本明細書の実施態様のいずれかに記載の増量剤、ならびに適宜、本明細書の実施態様のいずれかに記載のバッファー、および水性溶媒を含有する液体組成物を、第一乾燥工程の前に-20℃以下で完全に凍結させること;ならびに、
(ii)EC145、本明細書の実施態様のいずれかに記載の増量剤、ならびに適宜、本明細書の実施態様のいずれかに記載のバッファー、および水性溶媒を含有する液体組成物の凍結混合物から水性溶媒を除去するのに効率的な圧力まで低下するように減圧する（ここで、該温度は約-50℃以下に維持されている）ことを含む、第一乾燥工程の最初の工程
のうちの1つ以上を含む該方法について記載する。
【００２７】
別の実施態様において、X線アモルファスのEC145を含有する凍結乾燥医薬組成物を製造する方法であって、以下の工程を含む該方法について記載する:(a)凍結乾燥品用の容器中の、EC145、増量剤、ならびに適宜、本明細書の実施態様のいずれかに記載のバッファーおよび水性溶媒を含有する液体組成物を提供すること;(b)該組成物を約-20℃〜約-50℃の温度まで冷却すること;(c)該組成物を約-20℃〜約-50℃の温度まで凍結させること（ここで、凍結混合物を得るのに十分な時間、該温度を維持する）;(d)該凍結混合物を、凍結混合物から水性溶媒を除去するのに効率的な圧力まで低下するように減圧すること（ここで、第一乾燥の最初の工程に十分な時間、温度を約-50℃に維持する）、そして、減圧しながら、該凍結混合物の温度を第一乾燥の温度まで変化させること（ここで、該第一乾燥の温度は約-37℃であり、第一乾燥が完了するのに十分な時間維持する）を含む第一乾燥工程で処理すること;(e)該組成物を、該組成物から水性溶媒を除去するのに効率的な圧力まで低下するように減圧すること、そして、減圧しながら、該組成物の温度を第二乾燥温度まで変化させること（ここで、該第二乾燥温度は約20℃であり、第二乾燥が完了するのに十分な時間、該第二乾燥温度を維持する）を含む、第二乾燥工程で処理すること;(f)該真空槽を不活性ガスで充填し戻すこと;そして、(g)該凍結乾燥製剤用の容器を密封すること。
【００２８】
本発明の実施態様として、EC145を含有する凍結乾燥固形医薬組成物が記載され、それは、EC145、増量剤、適宜、バッファーおよび水性溶媒を含有する液体組成物を凍結乾燥させることを含む方法によって、製造される。別の実施態様において、工程(i)および(ii):
(i)EC145、増量剤、水性溶媒、および適宜、バッファーを含む液体組成物を、第一乾燥工程の前に-20℃以下で完全に凍結させること;ならびに、
(ii)EC145、増量剤、水性溶媒、および適宜、バッファーを含む液体組成物の凍結混合物から水性溶媒を除去するのに効率的な圧力まで低下するように減圧することを含む第一乾燥工程の最初の工程（ここで、該第一乾燥の最初の工程の間、該温度を約-50℃に維持する）、
のうちの1つ以上を含む方法によって製造される上記の組成物が記載される。
【００２９】
上記のいずれかについて、実施態様は、該増量剤が、ブドウ糖、グルコース、グリシン、イノシトール、マンニトール、ソルビトール、スクロース、ポリエチレングリコール(PEG)、もしくはポリビニルピロリジン(PVP)、またはそれらの組み合わせ（個々にまたは組み合わせて約3％〜約20％の範囲で）、ならびに/あるいはアルギニンまたはプロリン（個々にまたは組み合わせて約0.1 M〜約0.5 Mの範囲で）を含む組成物である。上記のいずれかについて、実施態様は、該増量剤が、ブドウ糖、イノシトール、マンニトール、ソルビトール、もしくはスクロース、またはそれらの組み合わせ（個々にまたは組み合わせて約3％〜約6％の範囲で）、ならびに/あるいはアルギニンまたはプロリン（個々にまたは組み合わせて約0.1 M〜約0.5 Mの範囲で）を含む組成物である。上記のいずれかについて、実施態様は、該増量剤が約3％〜約10％のグリシンまたはマンニトールを含む組成物である。上記のいずれかについて、実施態様は、該増量剤が約3％〜約4％のマンニトールおよび0％〜約1％のスクロースを含む組成物である。上記のいずれかについて、実施態様は、該増量剤が約3％のマンニトールを含む組成物である。
【００３０】
上記のいずれかについて、別の実施態様は、pHが約5.0〜約8.0であるバッファーを含む組成物である。上記のいずれかについて、別の実施態様は、pHが約5.7〜約6.6であるバッファーを含む組成物である。上記のいずれかについて、別の実施態様は、pHが約6.0〜約6.6であるバッファーを含む組成物である。上記の別の実施態様は、pHが約6.2 ± 0.2であるバッファーを含む組成物である。
【００３１】
上記のいずれかについて、実施態様は、該EC145がX線アモルファスである組成物である。上記のいずれかについて、実施態様は、該固形物のラマンスペクトルが図3に示されるものと実質的に同一のスペクトル（約1606 cm-1でのピークを含む）を含む組成物である。上記のいずれかについて、実施態様は、該固形物の粉末X線回折パターンが図2に示されるものと実質的に同一のパターンを含む組成物である。
【００３２】
本発明の一実施態様において、本明細書中の実施態様のいずれかに記載のEC145を含有する固形医薬組成物を含む製剤を記載する。一実施態様において、該製剤はアンプルまたは密封バイアルをさらに含有する。一実施態様において、該製剤は、密封バイアルをさらに含有する。該製剤のいずれかについての実施態様は、該医薬組成物がクエン酸バッファーを含む製剤である。上記の一実施態様において、該製剤は複数用量形態である。上記の別の実施態様において、該製剤は単回用量形態である(すなわち、単位用量形態または用量単位)。上記用量単位の一実施態様は、水性希釈剤を用いた希釈または再構成によって、EC145を含有する静脈内投与用の液剤を2.0 mLの水性で無菌の液剤として提供するものであり、該用量単位は1.4 mg/mLのEC145を含む。
【００３３】
上記の実施態様のいずれかについて、一実施態様は、該製剤が、周囲温度(25℃±2℃)で1年間にわたって、94％以上というEC145の純度規格を維持することができるものである。
【００３４】
さらなる実施態様は、上記実施態様のいずれかに記載のEC145および増量剤を含有する固形物の再構成によって得られる医薬組成物である。一実施態様は、成分としてpH 6.2 クエン酸バッファー、マンニトールおよび注射用水を含有する水性で無菌の液剤中に、EC145を1.4 mg/mLの濃度で含有する上記組成物である。
【００３５】
本発明の実施態様は、機能的に活性な葉酸受容体を有する腫瘍を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程:
(a)上記の実施態様のいずれかに記載の固形医薬組成物を医薬的に許容される溶媒に溶解させて、医薬的に許容される液剤を製造すること、および、
(b)該液剤を、それを必要としている患者に投与すること、
のうちの少なくとも1つを含む該方法である。
上記の一実施態様は、該腫瘍が卵巣腫瘍または肺腫瘍であるものである。上記の一実施態様は、該腫瘍が卵巣腫瘍であるものである。上記の一実施態様は、該腫瘍が白金製剤耐性卵巣腫瘍であるものである。上記の方法のいずれかについて、一実施態様は、該患者を、ペグ化リポソーマルドキソルビシンを用いてか、またはペグ化リポソーム形態ではないドキソルビシンを用いて、さらに処置するものである。一実施態様において、処置には、患者における悪性細胞の細胞増殖を低減させることが含まれる。
【００３６】
本明細書で用いられる通り、固体分散液とは、溶液または懸濁液からエバポレートプロセスによって得られる固形物を意味する。一実施態様において、該分散液は水溶液から得られる。一実施態様において、該エバポレートプロセスは凍結乾燥である。
【００３７】
本明細書で用いられる通り、周囲温度での十分な安定性とは、該EC145が周囲温度(25℃±2℃)で1年間にわたって、94％以上というEC145の純度規格を維持することができることを意味する。
【００３８】
製薬分野において用語「アモルファスの」は、多くの場合、固相で完全にランダムに配向している物質を説明することを意図している。該定義は本明細書に記載の発明に関して制限が多い。本明細書で用いる用語「アモルファスの」は、例えば、本発明の方法に従って分析される組成物のAPIまたは賦形剤成分に適用される場合、該用語が粉末X線回折分野の当業者によって一般的に用いられる通り、該成分の粉末X線回折パターンが「ハロー」（しばしば「アモルファスのハロー」と称される）をもたらしうることを意味する。該ハローは、結晶化合物のパターンにおいて見られるピークより顕著に幅広く、実際に、走査角度の大部分を占めうる。該ハローは、完全にランダムに配向した固体の指標でありうるが、ナノ結晶の物質または他の無秩序固体（ある程度の秩序度（ただし結晶性物質のものより小さいスケールで）を有する）の指標でもありうる。本明細書で用いる用語「X線アモルファスの」は、回折パターンが1つ以上のアモルファスのハローを示す物質を意味する。本明細書で用いる用語「X線アモルファスの」および「アモルファスの」は、他に特別の定めのない限り、同義である。
【００３９】
本明細書および添付の特許請求の範囲を目的として、他に記載のない限り、本明細書および特許請求の範囲で用いられる、量、パーセンテージもしくは比率、および他の数値を表す全ての数は、全ての場合において用語「約」によって修飾されるものとして理解される。従って、それと異なる記載がない限り、以下の明細書および添付の特許請求の範囲に記載される数値パラメータは近似値であり、それは本発明が得ようとする望ましい特性に応じて変化してもよい。最低でも、また特許請求の範囲への均等論の適用を制限しようとするものでもなく、各数値パラメータは、少なくとも、報告された有効数字を考慮し、通常の四捨五入法を適用することによって解釈されるべきである。しかしながら、いずれの測定数値は、本質的に、その具体的な試験測定結果で見いだされた標準偏差から得られるある特定の誤差を含む。当然のことながら、該粉末X線回折スペクトルにおいて、°2θ(または対応するd-間隔)についての正確な測定値は、分析される特定のサンプルおよび用いられる特定の分析方法に応じて変化しうる。少なくとも±0.1 °2θ、および場合によっては少なくとも±0.2 °2θの範囲の値が典型的でありうる。異なる装置で別個に調製されたサンプルにおける測定値は、±0.1 °2θおよび/または±0.2 °2θ以上である変動性をもたらしうる。当然のことながら、ラマンスペクトルにおいて、波長または波数(cm-1)についての正確な測定値は、分析される特定のサンプルおよび用いられる特定の分析方法に応じて変化しうる。少なくとも±1°cm-1の範囲の値が、異なる装置での同一のサンプルについて典型的でありうる。ロット間差（とりわけ異なる製剤の）はより大きいものであってよく;従って、異なる装置で別個に調製されたサンプルにおける測定値は変動性をもたらしうる（それは、特にブロードのピークに対して、±4° cm-1以上、または場合によって±6° cm-1以上である）。
【００４０】
本発明の実施態様を、以下に列挙する項によってさらに説明する:
1.EC145および増量剤を含有する固形医薬組成物。
2.(a)該増量剤が、ブドウ糖、グルコース、グリシン、イノシトール、マンニトール、ソルビトール、スクロース、ポリエチレングリコール(PEG)、もしくはポリビニルピロリジン(PVP)、またはそれらの組み合わせ（個々にまたは組み合わせて約3％〜約20％の範囲で）、ならびに/あるいはアルギニンまたはプロリン（個々にまたは組み合わせて約0.1 M〜約0.5 Mの範囲で）を含むか;
(b)該増量剤が、ブドウ糖、イノシトール、マンニトール、ソルビトールもしくはスクロース、またはそれらの組み合わせ（個々にまたは組み合わせて約3％〜約6％の範囲で）、ならびに/あるいはアルギニンまたはプロリン（個々にまたは組み合わせて約0.1 M〜約0.5 Mの範囲で）を含むか;
(c)該増量剤が約3％〜約10％のグリシンまたはマンニトールを含むか;
(d)該増量剤が約3％〜約4％のマンニトールおよび0％〜約1％のスクロースを含むか;あるいは、
(e)該増量剤が約3％マンニトールを含む、
第1項に記載の組成物。
3.さらに賦形剤を含有する、第1または2項に記載の組成物。
4.該賦形剤がバッファーを含む、第3項に記載の組成物。
5.該バッファーが、ジスルフィド結合を還元しない抗酸化物質である、第4項に記載の組成物。
6.(a)該バッファーのpHが約5.0〜約8.0であるか;(b)該バッファーのpHが約5.7〜約6.6であるか;(c)該バッファーのpHが約6.0〜約6.6であるか;あるいは、(d)該バッファーのpHが約6.2 ± 0.2である、第4または5項に記載の組成物。
7.(a)該バッファーが、アスコルビン酸、ソルビン酸、ギ酸、乳酸、フマル酸、酒石酸、グルタミン酸、酢酸、クエン酸、グルコン酸、ヒスチジン、リンゴ酸、リン酸またはコハク酸のバッファーを含むか;(b)該バッファーが、アスコルビン酸、乳酸、酒石酸、クエン酸、グルコン酸、リンゴ酸、イソクエン酸または2-ヒドロキシ酪酸のバッファーを含むか;あるいは、(c)該バッファーがクエン酸バッファーを含む、第4〜6項のいずれかに記載の組成物。
8.(a)該バッファーの濃度が約20 mM〜150 mMであるか;(b)該バッファーの濃度が約100 mMであるかまたは100 mMであるか;あるいは、(c)該バッファーの濃度が約50 mMであるかまたは50 mMである、第4〜7項のいずれかに記載の組成物。
9.該バッファーがpH 6.2のクエン酸バッファーである、第4項に記載の組成物。
10.(a)該固形物が、重量で、2.8部のEC145に対して約27部のクエン酸三ナトリウム二水和物、約1.5部のクエン酸、および約40〜80部のマンニトールに相当するか;あるいは、
(b)該固形物が、重量で、2.8部のEC145に対して約27部のクエン酸三ナトリウム二水和物、約1.5部のクエン酸、および約60部のマンニトールに相当する、
第1項に記載の組成物。
11.該固形物が凍結乾燥固形医薬組成物である、第1〜10項のいずれかに記載の組成物。
12.該EC145がX線アモルファスである、第1〜11項のいずれかに記載の組成物。
13.該固形物のラマンスペクトルが、図3に示されるものと実質的に同一のスペクトル（約1606 cm-1でのピークを含む）を含む、第1項に記載の組成物。
14.該固形物の粉末X線回折パターンが、図2に示されるものと実質的に同一のパターンを含む、第1項に記載の組成物。
15.動的蒸気吸着/脱着における65％相対湿度での％重量増加が:(a)約20％または20％か、(b)約10％または10％か、あるいは(c)約5％または5％を超えない固体分散液である、第4項に記載の組成物。
16.固体分散液であって、残留水を除く乾燥ベースの重量対重量で、該固体成分が:(a)約5〜10部のEC145、約75〜90部のバッファー、および約150〜750部の増量剤か;(b)約8.6部のEC145、約81部のクエン酸三ナトリウム二水和物、約4.6〜4.8部のクエン酸、および約180部のグリシンか;(c)約8.6部のEC145、約81部のクエン酸三ナトリウム二水和物、約4.6〜4.8部のクエン酸、および約600部のグリシンか;(d)約8.6部のEC145、約81部のクエン酸三ナトリウム二水和物、約4.6〜4.8部のクエン酸、および約180部のマンニトールか;または(e)約8.6部のEC145、約81部のクエン酸三ナトリウム二水和物、約4.6〜4.8部のクエン酸、および約600部のマンニトールに相当する、
第1項に記載の組成物。
17.該残留水の含量が約1.5〜約5重量％である、第16項に記載の組成物。
18.EC145および増量剤を含有し、適宜、第1〜17項のいずれか1項に記載のバッファーをさらに含有する、凍結乾燥固形医薬組成物の製造方法であって、EC145および増量剤の水溶液（該溶液は、適宜、バッファーをさらに含有する）を凍結乾燥させることを含む、該方法。
19.工程(i)および(ii):
(i)EC145、本明細書中の実施態様のいずれかに記載の増量剤、ならびに適宜、本明細書の実施態様のいずれかに記載のバッファー、および水性溶媒を含有する液体組成物を、第一乾燥工程の前に-20℃以下で完全に凍結させること;および、
(ii)EC145、本明細書中の実施態様のいずれかに記載の増量剤、ならびに適宜、本明細書の実施態様のいずれかに記載のバッファー、および水性溶媒を含有する液体組成物の凍結混合物から水性溶媒を除去するのに効率的な圧力まで低下するように減圧する（ここで、該温度を約-50℃以下で維持する）ことを含む第一乾燥工程の最初の工程、
のうちの1つ以上を含む、第18項に記載の方法。
20.EC145、増量剤、水性溶媒、および適宜、バッファーを含む液体組成物を凍結乾燥させることを含む方法によって製造される、EC145を含有する凍結乾燥固形医薬組成物。
21.工程(i)および(ii):
(i)EC145、増量剤、水性溶媒、および適宜、バッファーを含む液体組成物を、第一乾燥工程の前に-20℃以下で完全に凍結させること;および、
(ii)EC145、増量剤、水性溶媒、および適宜、バッファーを含む液体組成物の凍結混合物から水性溶媒を除去するのに効率的な圧力まで低下するように減圧する（ここで、第一乾燥の最初の工程の間、該温度を約-50℃以下で維持する）ことを含む第一乾燥工程の最初の工程、
のうちの1つ以上を含む方法によって製造される、第20項に記載の組成物。
22.(a)該増量剤が、ブドウ糖、グルコース、グリシン、イノシトール、マンニトール、ソルビトール、スクロース、ポリエチレングリコール(PEG)、もしくはポリビニルピロリジン(PVP)、またはそれらの組み合わせ（個々にまたは組み合わせて約3％〜約20％の範囲で）、ならびに/あるいはアルギニンまたはプロリン（個々にまたは組み合わせて約0.1 M〜約0.5 Mの範囲で）を含むか;
(b)該増量剤が、ブドウ糖、イノシトール、マンニトール、ソルビトールもしくはスクロース、またはそれらの組み合わせ（個々にまたは組み合わせて約3％〜約6％の範囲で）、ならびに/あるいはアルギニンまたはプロリン（個々にまたは組み合わせて約0.1 M〜約0.5 Mの範囲で）を含むか;
(c)該増量剤が、約3％〜約10％のグリシンまたはマンニトールを含むか;
(d)該増量剤が、約3％〜約4％のマンニトールおよび0％〜約1％のスクロースを含むか;あるいは、
(e)該増量剤が、約3％のマンニトールを含む、
第20または21項に記載の組成物。
23.(a)pHが約5.0〜約8.0であるか;(b)pHが約5.7〜約6.6であるか;(c)pHが約6.0〜約6.6であるか;あるいは、(d)pHが約6.2±0.2であるバッファーを含む、第20〜22項のいずれかに記載の組成物。
24.該EC145がX線アモルファスである、第20〜23項のいずれかに記載の組成物。
25.該固形物のラマンスペクトルが、図3に示されるものと実質的に同一のスペクトル（約1606 cm-1でのピークを含む）を含む、第20項に記載の組成物。
26.該固形物の粉末X線回折パターンが、図2に示されるものと実質的に同一のパターンを含む、第20項に記載の組成物。
27.第1〜17項または第20〜26項のいずれかに記載のEC145を含有する固形医薬組成物を含む製剤。
28.アンプルまたは密封バイアルをさらに含有する、第27項に記載の製剤。
29.密封バイアルをさらに含有する、第28項に記載の製剤。
30.該医薬組成物がクエン酸バッファーを含む、第27項に記載の製剤。
31.該製剤が複数用量形態である、第27〜30項のいずれかに記載の製剤。
32.該製剤が単回用量形態である、第27〜30項のいずれかに記載の製剤。
33.水性希釈剤を用いて希釈または再構成することによって、EC145を含有する静脈内投与用の液剤を2.0 mLの水性で無菌の液剤として提供し、1.4 mg/mLのEC145を含む、第32項に記載の用量単位。
34.該EC145を、周囲温度(25℃±2℃)で1年間にわたって、94％以上というEC145についての純度規定で維持することができる、第27〜33項のいずれかに記載の製剤。
35.EC145および第1〜17項または第20〜26項のいずれかに記載の増量剤を含有する固形物の再構成によって得られる医薬組成物。
36.成分としてpH 6.2のクエン酸バッファー、マンニトールおよび注射用水を含有する水性で無菌の液剤中に、EC145を1.4 mg/mLの濃度で含有する、第35項に記載の組成物。
37.機能的に活性な葉酸受容体を持つ腫瘍を有する患者の処置方法であって、工程:
(a)第1〜17項または第20〜26項のいずれかに記載の固形医薬組成物を医薬的に許容される溶媒中に溶解させて医薬的に許容される液剤を製造すること、ならびに、
(b)該液剤を、それを必要としている患者に投与すること、
のうちの少なくとも1つを含む、該方法。
38.該腫瘍が卵巣腫瘍または肺腫瘍である、第37項に記載の方法。
39.該腫瘍が卵巣腫瘍である、第38項に記載の方法。
40.該腫瘍が白金製剤耐性卵巣腫瘍である、第39項に記載の方法。
41.該患者を、ペグ化リポソーマルドキソルビシンまたはペグ化リポソーム形態でないドキソルビシンでさらに処置する、第37〜40項のいずれか1項に記載の方法。
【００４１】
以下の実施例は本発明の特定の実施態様をさらに例示するものである;しかしながら、以下の例示的な実施例は決して本発明を制限するものと解釈されるべきではない。
【実施例】
【００４２】
（実施例）
材料
EC145 API(活性製剤)は、US 7,601,332またはWO 2011/014821の記載に従って製造した。
【００４３】
他の物質、機器および装置は、商業的供給源（以下:注射用水(WFI); クエン酸三ナトリウム二水和物, EMD 1.06432.0500; クエン酸, JT Baker 0122-01; マンニトール, JT Baker 2553-01; アルゴン; 窒素; フィルター, Pall 12122; 管類; バイアル, Wheaton # 223685 / W008230, 5 mL, 20 mm, Tubing, Type I Glass; ストッパー, (West pharmaceutical  #19700021または19700022) 20 mm, S 10 F451, 4432/50 Gray w/ B2-40 coating (serum stopper); 圧着, Blue (serum stopperを用いる); ストッパー, West 20 mm 4432/50, S-87-J, Gray w/ B2-44 coating (split skirt 凍結乾燥ストッパー); 圧着, Helvoet Pharma 110009704, Brown 6028 (split skirt 凍結乾燥ストッパーを用いる); Milli-Q水, Millipore Direct Q 3 UV System; リン酸ナトリウム一塩基性一水和物, Mallinckrodt 7868; リン酸ナトリウム二塩基性二水和物, Fisher S472-500; 塩化ナトリウム, Mallinckrodt 7581; 塩化カリウム, Fisher P330-500; クエン酸ナトリウム二水和物, Aldrich 39,807-1; スクロース, Sigma S3929-1KG; 水酸化ナトリウム, JT Baker 3278-01; 塩酸, EMD HX0603P-S; 氷酢酸, EMD AX0074-6; 酢酸トリエチルアミン, Fisher, 04885-1; 5 N 水酸化アンモニウム, Acros, AC612570010; アセトニトリル, Sigma-Aldrich 34851-4L; HPLCカラム Waters Symmetry C18, 3.5 μm, 4.6 x 75mm, P/N WAT066224; ガードカラム Waters Symmetry C18, 5 μm, 3.9 x 20 mm, P/N WAT054225を含む）から得る。
【００４４】
機器および装置
HPLC: Waters 2487 Dual λ 吸光度検出器を備えたWaters Alliance 2695; HPLC: PDA検出器を備えたAgilent 1200; pHメーター, pH-08, Corning 340; オートクレーブ, Hotpack Steam Sterilizer, PE5-004; オーブン, VWR 1370FM; オーブン, Gruenberg dry heat oven; 天秤, Sartorius R300S; 天秤, Sartorius CP34001; ポンプ, Watson Marlow 505S; ピペッタ, Eppendorf Repeater Plus, （50 mL Combitipsを用いる）; 凍結乾燥機: FTS LyoStar II（LyoManager II Data Collectionを備えている）; 打栓機, Westcapper NPW-500, 5A-018.
【００４５】
実施例
凍結乾燥されたEC145
総量22 mLである2バイアルのEC145の水溶液を周囲温度で解凍し、4つの20 mL 凍結乾燥バイアルに移し入れた。該バイアルを、約1.5時間、冷凍庫に移した。LABCONCO凍結乾燥機を用いて凍結乾燥を行った（-72℃(棚温度)まで予冷した後、サンプルを設置した）。サンプルを、-20℃で〜30分間、その後20℃でさらに38.5時間、凍結乾燥させた。得られた綿毛状の淡黄色の固形物を、さらなるキャラクタリゼーションのために1つのバイアルに合わせた。
【００４６】
製剤
水性製剤:
1.4 mg/mLのEC145の濃度にてEC145を提供するように用いられうる製剤を以下に提供する。EC145の2.5 mg ボーラス投与を提供するために単一のバイアルを用いる。
【００４７】
実施例
pH 7.4, リン酸緩衝 EC145製剤
以下の製剤は、静脈内(IV)投与用のEC145製剤(DP)を、Flurotech（商標）でコーティングされたゴム栓を備えた使い捨ての透明ガラスバイアル中の2.0 mLの水性で無菌の液剤, pH7.4として提供する（それは不活性ガス下において凍結保存される）。各バイアルは1.4 mg/mLのEC145を含む。該製剤の定量的組成は、以下の表に示される。単一のバイアルは、EC145の2.5 mgのボーラス投与を提供するように用いられる。この製剤は、10 mM リン酸バッファー、pH 7.4; 138 mM 塩化ナトリウム、および2.7 mM 塩化カリウムを提供する。
EC145 製剤成分
【表１】
2014510791.tif 000004
【００４８】
実施例
pH 6.2 クエン酸緩衝 EC145製剤
以下の製剤は、50 mM クエン酸緩衝 pH 6.2 EC145 溶液である、液剤を提供する。
EC145 製剤成分
【表２】
2014510791.tif 000005
【００４９】
凍結乾燥用の製剤:
実施例
pH 6.2 クエン酸緩衝 EC145製剤（3％マンニトール含有）
以下の製剤は、凍結乾燥および再構成に有用な増量剤として3％マンニトールを含むpH 6.2 クエン酸緩衝 EC145溶液である液剤を提供する。
EC145 製剤成分
【表３】
2014510791.tif 000006
【００５０】
実施例
pH 6.2 クエン酸緩衝 EC145製剤（4％マンニトール/1％スクロース含有）
上記の3％マンニトールについてと同一の製剤だが、80 mg マンニトールおよび20 mg スクロースを含む。
【００５１】
実施例
プラセボのpH 6.2 クエン酸緩衝 製剤（3％マンニトール含有）
以下の製剤は、凍結乾燥および再構成に有用な増量剤として3％マンニトールを含むpH 6.2 クエン酸緩衝溶液である、プラセボ液剤（欠如）を提供する。
プラセボ生成物成分
【表４】
2014510791.tif 000007
【００５２】
実施例
凍結乾燥されたEC145およびプラセボ医薬組成物の製造
3％マンニトールを含むEC145バイアル、4％マンニトール/1％スクロースを含むEC145バイアル、およびプラセボバイアル(EC145 APIなし)を用いて、凍結乾燥サイクルを行った。プローブをEC145液剤バイアルおよびプラセボバイアル内に設置し、該サイクル中の溶液温度を記録した。最終生成物を空気に曝露させる前に、凍結乾燥機中でバイアルの栓を閉めた状態で、該サイクルの全てをアルゴンで充填し戻した。栓を閉めた直後に、該バイアルを圧着し、ラベルした。
様々なパラメータでの多数の凍結乾燥の実施において、3％マンニトールを含むバイアルと4％マンニトール/1％スクロースを含むバイアルの間に明らかな差違は見うけられなかった。
【００５３】
実施例
製剤プロセスの説明
大きなフラスコを過剰量のWFIで充填し、不活性ガスで30分間スパージし、酸素含量を＜1.0 ppmまで減らす。製剤を開始する前に、工程内試験を用いて酸素含量を確認する。製剤プロセス全体を通して、製剤溶液上において一定の陽圧不活性ガスブランケットを維持した。
凍結したEC145原体(API)溶液を冷凍庫から取り出し、20℃-25℃に温度制御された循環水浴において解凍する。解凍されたAPI溶液を、製剤化するAPI溶液の量を決定するために風袋の重量を測定した、不活性ガスでパージした容器に加えた。溶液中の密度およびEC145濃度に基づいて、風袋重量を測定した容器に加えた溶液の重量を用いて、1.4 mg EC145/mLで満たすために利用できる総最終溶液を決定する。
撹拌子を有する容器を重量測定し、最終充填量のWFIの総量の62.5％で充填する。マンニトールを加えて、3％マンニトールの最終濃度にする。クエン酸ナトリウムを該容器に加えた後、スパージしたWFIですすぐ。クエン酸を該容器に加えた後、スパージしたWFIですすぐ。スパージした溶液を、全てのクエン酸が溶解するまで混合する。
pHメーターをpH4および7の緩衝標準液（buffer standard）を用いて標準化して、溶液のpHを測定する。該pHが6.0-6.2でない場合、pHを、1.0Mクエン酸または1.0Mクエン酸ナトリウムを用いて調整する。
EC145を遮光するために容器をホイルで覆う。EC145原体溶液を、撹拌および不活性ガスでスパージしながら該製剤化容器に加える。該原体含有容器を、WFI溶液を用いて2回すすぐ。該混合液を、視覚的に均一な混合液が得られるまで、スパージしながら撹拌する。最終目標製剤の重量を測定し、目標重量になるまでWFIを該溶液に加える。
該溶液を、蠕動ポンプを用いて、0.22ミクロンの無菌フィルター（予め湿らせ、バブルポイント試験を行った）によって濾過する。濾過プロセスの間中ずっと、受け取り容器を不活性ガスでパージし続ける。濾過後、該プロセスの間ずっと効率的な濾過が維持されることを確実なものとするために、バブルポイント試験を繰り返す。
充填ヘッド（fill head）を、2.03 g(2.0 mL, 2.8 mg EC145)のEC145製剤溶液を各バイアルに供給するようにキャリブレーションする。充填プロセスの間、充填量を常にチェックする。
充填プロセスの間、栓をバイアルの中間まで入れる。
凍結乾燥トレーにおいて、熱電対を適当なバイアル中に設置し、該トレーを、規定のサイクルにより凍結乾燥させる。
【００５４】
実施例
凍結乾燥サイクル
上記の3％マンニトールを含むpH6.2 クエン酸緩衝 EC145溶液(2 mL／5 mLバイアル)を用いた以下の凍結乾燥サイクルによって、良好なケーク状である凍結乾燥されたEC145製剤が得られる（それは、水中で容易に再構成され、高いAPI純度(＞95％)を保持する）。
バイアルを、アルゴンでスパージし、2 mLのEC145製剤を充填し、半分入れた位置においてsplit skirt 凍結乾燥ストッパーで栓をする。トレーを満たして栓をしたらすぐに、それを5℃にて凍結乾燥機に設置する。
1.  凍結乾燥機棚を5℃まで予め冷却する。
2.  満たしたトレーを予め冷却した棚に設置する。
3.  設置が完了したら凍結乾燥サイクルを開始する。
4.  棚温度を5℃にて30-60分間保持する。
別法として、棚を-50℃〜5℃まで予め冷却することで、満たされたトレーを予め冷却する時間を減らすことができる;工程4は必要ない場合もある。
5.  棚温度を-50℃まで迅速に勾配させる。
6.  該棚温度を-50℃にて60〜360分間保持する。
7.  50〜150 mTorrまでチャンバー圧を下げる。
8.  該棚温度を-50℃にて180〜1740分間保持する。
9.  該棚温度を73分間にわたって-37℃まで勾配させる(0.20℃/分)。
10.  該棚温度を-37℃にて60〜720分間保持する。
11.  該棚温度を150分間にわたって-20℃まで勾配させる(0.11℃/分)。
12.  該棚温度を-20℃にて60〜360分間保持する。
13.  棚温度を60〜360分かけて20℃〜30℃まで勾配させる。
14.  棚温度を20℃〜30℃にて60〜600分間保持する。
15.  チャンバーを、アルゴンまたは窒素を用いて12.5 psia(870 mbar)まで充填し戻す。
16.  棚を畳み崩す(バイアルを完全に栓で塞ぐ)。
17.  濾過空気を用いて大気圧まで充填し戻す。
18.  凍結乾燥機から取り出す。
【００５５】
上記の凍結乾燥サイクルの特定の実施例（最初に5℃で30分間冷却することを含む）を、以下のとおり要約形式で示す:
【表５】
2014510791.tif 000008
その後、バイアルの蓋をして、各バイアル中の良好なケーク状の最終生成物を得る。
【００５６】
実施例
固形製剤のキャラクタリゼーション
粉末X線回折(XRPD)
図1は、凍結乾燥EC145の粉末X線回折(XRPD)スペクトルを示す。図2は、凍結乾燥された、pH 6.2 クエン酸緩衝EC145製剤（3％マンニトール含有）の粉末X線回折パターンを示す。
XRPDパターンは、PANalytical X'Pert PRO MPD 回折計を用いて集めた（Optix ロングファインフォーカス線源を用いて生じさせたCu放射線の入射ビームを使用）。楕円形の段階的多層膜ミラーを用いて、検体を介して検出器上へとCu Kα X線の焦点を合わせた。分析の前に、シリコン検体(NIST SRM 640d)を分析して、Si 111ピーク位置を検証した。該サンプルの検体を、3 μm 厚膜の間に入れ、透過幾何学で分析した。ビームストップ、短い散乱線除去エクステンション（short antiscatter extension）、およびヘリウム雰囲気を用いて、空気により生じたバックグラウンドを最小化した。入射および回折ビーム用のソーラースリットを用いて軸発散からの広がりを最小化した。回折パターンを、検体から240 mmに位置する走査位置敏感型検出器(X'Celerator)およびデータ収集装置ソフトウェア v. 2.2bを用いて集めた。該パターンについてのデータ収集パラメータ（発散スリット(DS)（該ミラーの前）および入射ビーム散乱線除去スリット(SS)を含む）は以下である:
X線管: Cu(1.54059 Å); 電圧:  45 kV; アンペア数:  40 mA; 走査範囲:  1.01-39.99 °2θ; ステップ幅:  0.017 °2θ; 積算時間: 1937 秒; 走査速度:  1.2°/分; スリット:  DS:  1/2°;  SS:  ヌル（null）; 回転時間:  1.0秒; モード:  透過; ヌルの短い散乱線除去エクステンション（null short AS ext.）使用; He使用.
【００５７】
ラマンスペクトル
図3は、凍結乾燥された、pH 6.2 クエン酸緩衝EC145製剤（3％マンニトール含有）のラマンスペクトルを示す。
図4は、凍結乾燥された、pH 6.2 クエン酸緩衝EC145製剤（3％マンニトール含有）(一番上)、凍結乾燥プラセボ製剤(上から2番目)、凍結乾燥EC145(下から2番目)、および以前のバッチの凍結乾燥EC145(一番下)のラマンスペクトルのオーバーレイを示す。
図5は、凍結乾燥された、pH 6.2 クエン酸緩衝EC145製剤（3％マンニトール含有）(一番上)、凍結乾燥プラセボ製剤(上から2番目)、凍結乾燥EC145(下から2番目)、および以前のバッチの凍結乾燥EC145(一番下)のラマンスペクトルの1500〜1650 cm-1の展開のオーバーレイを示す。
ラマンスペクトルを、ゲルマニウム(Ge)検出器を備えたNexus 670 FT-IR分光光度計(Thermo Nicolet)に接続されたFT-ラマンモジュールで得た。波長検証は硫黄およびシクロヘキサンを用いて行った。各サンプルを、分析のために、ペレットホルダーにサンプルを設置することによって調製した。1 W未満のNd:YVO4レーザー出力(1064 nm 励起波長)を用いてサンプルを照射した。各スペクトルは、4 cm-1のスペクトル分解能にて採取した1024の同時添加（co-added）スキャンを表す。
【００５８】
13C CP/MAS NMR分光法
図6は、凍結乾燥EC145の13C CP/MAS NMRスペクトル（176.5 ppmでのグリシンを外部標準として）を示す。図7は、凍結乾燥された、pH 6.2 クエン酸緩衝EC145製剤（3％マンニトール含有）の13C CP/MAS NMRスペクトルを示す。
固体13C交差分極マジック角回転(CP/MAS)NMRスペクトルを、Varian UNITYINOVA-400分光計において周囲温度で得た(ラーモア周波数:  13C = 100.543 MHz, 1H = 399.787 MHz)。該サンプルを、4 mm ペンシルタイプジルコニアローター（PENCIL type zirconia rotor）中にパックし、該マジック角にて12 kHzで回転させた。スペクトルを、収集時間中、位相変調(SPINAL-64)高出力1Hデカップリング（2.5 μsedの1H パルス幅(90°)、2または5 msecの勾配振幅（ramped amplitude）交差分極接触時間、30または50 msecの収集時間、走査間で5-300秒の遅延、および45 kHzのスペクトル幅を用いる）を用いて得た。自由誘導減衰(FID)を、Varian VNMR 6.1C ソフトウェア（65536ポイントおよび指数関数（line broadening factor = 20または50 Hz）で）を用いて処理し、シグナル・ノイズ比を改善した。該FIDの最初の3つのデータポイントを、VNMR線形予測アルゴリズムを用いて逆予測して、平坦なベースラインを得た。該スペクトルピークの化学シフトは、176.5 ppmでのグリシンのカルボニル炭素共鳴を外部標準とした。該スペクトルのデータ収集および処理パラメータは以下の通りである:  周囲温度; シーケンス: xpolvt1rho1; Rexa.遅延: 5.000 sec; 収集時間: 0.030 sec; 分光幅: 44994.4 Hz (447.514 ppm); 1600走査; 収集ポイント: 2700; 交差分極接触時間: 2 msec.
【００５９】
赤外分光法
図8は、凍結乾燥された、pH 6.2 クエン酸緩衝EC145製剤（3％マンニトール含有）の赤外スペクトル(DRIFTS)を示す。
IRスペクトルを、Ever-Glo mid/far IR源、臭化カリウム(KBr)ビームスプリッター、および重水素化硫酸トリグリシン(DTGS)検出器を備えた、Magna-IR 560（登録商標）フーリエ変換赤外(FT IR)分光光度計(Thermo Nicolet)で得た。波長検証は、NIST SRM 1921b(ポリスチレン)を用いて実施した。拡散反射アクセサリー(the Collector（商標）, Thermo Spectra-Tech)をサンプリングのために用いた。サンプルをKBrと物理的に混合し、直径13 mmのカップに入れ、該材料を平らにすることによってサンプルを調製した。各スペクトルは、4 cm-1のスペクトル分解能にて採取した256の同時添加（co-added）スキャンを表す。バックグラウンドのデータセットを、KBr粉末を用いて得た。Log 1/R (R = 反射率)スペクトルは、これら2つのデータセットの互いに対する比を取った後、Kubelka-Munk単位に変換することによって、得た。
【００６０】
熱分析
図9は、凍結乾燥されたpH 6.2 クエン酸緩衝EC145製剤（3％マンニトール含有）の、DSC(左スケール, 左および底部の曲線)およびTGA(右スケール, 上部および右の曲線)サーモグラムを示す。
DSCは、TA装置Q2000示差走査熱量計を用いて実施した。温度キャリブレーションを、NIST 追跡可能なインジウム金属を用いて実施した。サンプルを、アルミニウムDSCパン中に設置し、蓋で覆い、重量を正確に記録した。秤量したアルミニウムパン（サンプルパンとして設定）を、セルのリファレンス側に設置した。示されるデータに関して、サンプルのサイズは、T0にて圧着されたパン中に2.0500 mgであって;該走査は、-30℃〜250℃、10℃/分で実行した。
TG分析を、TA装置Q5000 IR熱重量分析計を用いて実施した。温度キャリブレーションを、ニッケルおよびAlumel（商標）を用いて実施した。各サンプルを、アルミニウムパンに設置した。該サンプルを密閉した後、蓋に穴を空けてTG炉に入れた。該炉を、窒素下において加熱した。示されるデータに関して、該サンプルサイズは2.7780 mgであって;該走査は、0℃〜350℃、10℃/分で実行した。
【００６１】
実施例
安定性研究:
水性のpH 7.4 リン酸緩衝EC145製剤(液剤)（5℃で冷蔵保存）、および凍結乾燥された、pH 6.2 クエン酸緩衝EC145製剤（3％マンニトール含有）(凍結乾燥, 2つの開発ロットLyo AおよびLyo B、ならびに上記の表に記載の通り製造したロットLyo C)についての25℃±2℃（注射用水での希釈による再構成物での測定）での安定性研究を、以下の表に提供する。
【表６】
2014510791.tif 000009
【００６２】
実施例
（EC145の固体分散液選別）
以下の表に示す通り、2つの異なる添加量(3％および10もしくは20％(w/v))で6つの異なる賦形剤（グルコース、グリシン、マンニトール、PEG400、PVP10、およびスクロースを含む）、および異なる濃度でEC145を用いて、EC145の固体分散液選別を行った。固体分散液サンプルを、以下の凍結乾燥条件に従って、50 mM クエン酸バッファー, pH 6.2中において、凍結乾燥により調製した。
【表７】
2014510791.tif 000010
【００６３】
結果
凍結乾燥生成物の視覚的所見
【表８】
2014510791.tif 000011
* 表中に特別に記載のない限り、ケークがスパーテルの先端で壊れた場合、該固形物は乾燥していて綿毛状であるように見えた。
【００６４】
分析番号により指定されたサンプルを、標準的なEC145液体クロマトグラフィーアッセイを用いて、不純物特性についてさらに分析した。
上記の表中の固体分散液の残留水を除く推定組成（重量で）を、以下の表に指定する。いずれの場合においても、該溶液を、凍結乾燥の前に6 mLの体積にした。
凍結乾燥生成物の推定される無水ベースの組成物
【表９】
2014510791.tif 000012
#  60 μLの143 mg/m LEC145溶液が該最終6 mL溶液に含まれる;様々なバッファー/賦形剤媒体を用いて6 mLまで（最終的なEC145濃度 1.4 ml/mL）希釈。
【００６５】
凍結乾燥物（lyophile）の物理的特性
各凍結乾燥物の物理的特性を視覚的に観察した。上記の表に示す通り、ほとんどの組成物が滑らかな表面を有するケークを形成した。
グリシンおよび高濃度のEC145（5 mg/mLで）を含む製剤において、泡状のケークが観察された。1.4 mg/mLのEC145、およびEC145を有しないプラセボサンプルで、粉末が観察された。3％PEG400を含む製剤は凍結乾燥の間に潮解した。20％PEG400を含む製剤は、凍結乾燥チャンバー中で、温度が-20℃に昇温するにつれて、融解した。20％グルコースを含む製剤は、20℃での第二乾燥の間に潮解した(ケークが崩壊し、泡状の液体となった)。
許容される物理的特性を有する固形物を、グルコース、グリシン、マンニトール、PVP10、およびスクロースからの固体分散液選別の条件下において得た。PEG400を有する分散液において潮解が生じた。
【００６６】
凍結乾燥物の固体キャラクタリゼーション
EC145の固体分散液を、固体用の技法、とりわけ、組成物の'フィンガープリント'を得るための、クオリティが高くてバックグラウンドが低い粉末x線回折(XRPD)およびフーリエ変換赤外(FTIR)分光法、ガラス転移温度(Tg)を決定するための示唆走査熱量測定(変調型)、吸湿性評価のための動的(水)蒸気吸着分析、物理的変化(例えば、ケーク崩壊温度)を観察するための高温顕微鏡観察、および水分含量を測定するためのカール・フィッシャー滴定を用いてキャラクタライズした。
グルコース、PVP10、およびスクロースから得た固体分散液サンプルは、X線アモルファスであると決定されたが、グリシンおよびマンニトールからのものは結晶性物質を含んでいた。全ての分散液は非常に吸湿性であると思われた（蒸気吸着/脱着分析の間の顕著な重量変化で示される）。全般的に、より低い賦形剤の添加（3％）から調製した固形物は、より高い賦形剤の添加（10または20％）からのものよりも多くの水分を保持していた。
結晶性成分が、グリシンおよびマンニトールを含む分散液において観察された。凍結乾燥の間にグリシンおよびマンニトールが結晶化するので、DSCサーモグラムから決定されたガラス転移温度は、該分散液中のアモルファスの物質のほんの一部からのものである。該Tg値は、分散の混和性評価のための有用な評価基準でない。
X線アモルファスの物質を、グルコース、PVP10、およびスクロースを含む分散液から得た。EC145および該賦形剤は吸湿性が高いので、該Tg値は水分含量に顕著に影響された。Tgと、グルコースおよびPVP10を含む固形物に添加するEC145との間に相関はなかった。EC145および3％スクロースを含む固形物において、2つのガラス転移現象（すなわちTg1(51−53℃)およびTg2(123−124℃)）が観察された。しかしながら、プラセボサンプルおよび20％スクロースを含むEC145分散液においては、より低い温度(32−38℃)で、ただ1つのTgが観察された。
サンプル中のEC145含量が低いこと、ならびにEC145および賦形剤からのIRシグナルが重なっていることに起因して、全ての分散液中において、EC145に帰属するIRスペクトルを明確に同定できない。分散液中のEC145に起因している可能性があるわずかな相違が、異なるEC145添加物での二次微分IRスペクトルにおいて観察された。
分析番号1〜14により指定されるサンプルについて得られた不純物プロファイルにおいて、各々のサンプルについての全不純物は4％未満であった。
【００６７】
（詳細なキャラクタリゼーション）
グルコースを有する固体分散液
グルコースを用いて4つの組成物を調製した: 3％グルコースを有するプラセボサンプル、3％および20％グルコース中の1.4 mg/mLのEC145、および3％グルコース中の5.2 mg/mLのEC145。20％グルコース中に調製したサンプルは20℃での第二乾燥の間に潮解し、そのさらなるキャラクタリゼーションは行わなかった。
プラセボサンプルのDSCサーモグラムは、30.6℃でただ1つのガラス転移現象を示した（おそらくアモルファスのグルコースに起因する）。
3％グルコース中の1.4 mg/mLのEC145から調製した固形物はX線アモルファスであると決定された。XRPDパターンは、1〜32°の2θで2つの広範な散漫散乱極大を特色とする。ガラス転移現象は、16.9℃にて観察された(図10)。同様の相転移はまた、高温顕微鏡観察によって23−33℃で観察された。このガラス転移温度は、プラセボサンプルにおいて観察されたものよりも低い。このサンプルにおける該低いガラス転移温度は高い水分含量(カール・フィッシャーにより5.8％)によってもたらされるものでありうる。
該DVS結果によって、該物質は非常に吸湿性であることが示唆された。該物質は、5％RHでの平衡化によって、無視できる程度の重量変化を示した。しかしながら、吸着工程の間に約137％という顕著な重量増加が観察された（75〜95％RHで最大量が得られた）。同様に、脱着工程の間に126％という顕著な重量減少が観察された。わずかなヒステリシスが観察された(図11)。該試験の完了後にサンプルが潮解した。
3％グルコース中の5.2mg/mLのEC145から調製した固形物のDSCサーモグラムは、44.0℃でガラス転移現象を示した（それはプラセボおよび低いEC145添加量のサンプルにおいて観察されたものより高い）。高いEC145添加量についての高いガラス転移温度は、EC145およびグルコース間の潜在的な相互作用を示しうる。しかしながら、低いEC145添加量で相反する結果が観察された。
要約すると、グルコース中のEC145の固体分散液はX線アモルファスであると決定された。該物質は非常に吸湿性である。137％および126％という重量変化が、各々、吸着および脱着工程において観察された。低いガラス転移温度(Tg, 〜17℃)が1.4 mg/mLのEC145を含む分散液において観察され、より高いTg（〜44℃）が5.2 mg/mLのEC145を含む分散液において観察された。2つの分散液における異なるTg値は、異なるEC145濃度かまたは異なる水分含量によってもたらされるのかもしれない。サンプル中の低いEC145含量ならびにEC145および賦形剤からのシグナル間の重なりに起因して、EC145に帰属するIRスペクトルを明確に同定できない。
【００６８】
グリシンを有する固体分散液
グリシンを用いて4つの組成物を調製した: 3％グリシンを有するプラセボサンプル、3％および10％グリシン中の1.4 mg/mLのEC145、および3％グリシン中の5.2 mg/mLのEC145。
プラセボサンプルのDSCサーモグラムは、39.9℃でただ1つのガラス転移現象を示した（おそらくアモルファスのグリシンに起因する）。
3％グリシン中の1.4 mg/mLのEC145から調製した固形物のXRPDパターンは、結晶相および散漫錯乱を示唆するいくつかの特徴を示した。散漫錯乱は、別個のアモルファスの相（無秩序/不完全な、結晶性またはナノ結晶性成分）に起因しうる。
3％グリシン中の1.4 mg/mLのEC145から調製した固形物のDSCサーモグラムは、24.3℃でガラス転移現象を示した後、182.8℃で広範な吸熱を示した(図12)（結晶性成分の融解に起因している可能性がある）。
該DVS結果によって、該物質は非常に吸湿性であることが示唆された。該物質は、5％RHでの平衡化によって無視できる程度の重量変化を示した。しかしながら、吸着工程の間に約103％という顕著な重量増加が観察された（75〜95％RHで最大量が得られた）。同様に、95％という顕著な重量減少が、脱着工程において観察された(図13)。95〜65％RHで顕著なヒステリシスであった。
サンプル中の水分含量は、カール・フィッシャー滴定によって3.68％であると決定された。
1.4 mg/mL EC145/10％グリシンを含む物質は、結晶性であると決定された。DSCサーモグラムは、43.0℃で弱いガラス転移現象を示した後、融解に起因する180.5℃での広範な吸熱を示した(図14)。高温顕微鏡観察によって、173℃で結晶性成分の融解が起こり得ることも観察された。
該DVS結果によって、該物質は、グリシン添加量が低いものよりも吸湿性が低いことが示唆された。5％RHでの平衡化による無視できる重量変化を示した。しかしながら、吸着工程の間に約74％という顕著な重量増加が観察された（75〜95％RHで最大量が得られた）。同様に、69％という顕著な重量減少が、脱着工程の間に観察された(図15)。顕著なヒステリシスが観察された。
サンプル中の水分含量は、カール・フィッシャー滴定によって、1.87％であると決定された。
3％グリシン中の5.1mg/mLのEC145から作製した固形物のDSCサーモグラムは、25.5℃でのガラス転移現象を示した後、182.5℃での広範な吸熱を示した(図16)。
要約すると、EC145／グリシンの固体分散液は、低いグリシン添加量にて部分的に結晶性であって、高いグリシン添加量にて結晶性であると決定される。低いグリシン添加量である物質は、高いグリシン添加量であるものよりも、より吸湿性であってより多くの水を含んでいた。そのことに一致して、低いグリシン添加量(3％)であるEC145分散液において低いTg(24−26℃)が観察され、高いグリシン添加量(10％)である分散液およびプラセボサンプルにおいて高いTg(40−43℃)が観察された。このことは、異なる水分含量の結果かもしれない。該分散液中においてグリシンが結晶化されるため、DSCサーモグラムから決定されたガラス転移温度は、該分散液中のアモルファスの物質のほんの一部からのものである。該Tg値は、該分散液の混和性評価に対する有用な判断基準ではない。EC145含量が低く、EC145および該賦形剤からのIRシグナルが重なっているので、EC145に帰属するIRスペクトルを明確に同定することができない。
【００６９】
マンニトールを有する固体分散液
マンニトールを用いて4つの組成物を調製した: 3％マンニトールを有するプラセボサンプル、3％および10％マンニトール中の1.4 mg/mLのEC145、ならびに3％マンニトール中の5.2 mg/mLのEC145。
プラセボサンプルのDSCサーモグラムは、10.9℃でただ1つのガラス転移現象を示した（おそらくアモルファスのマンニトールに起因する）。140℃以上での2つの鋭い吸熱性イベントは、結晶性成分の融解に起因している可能性がある。
3％マンニトール中の1.4 mg/mLのEC145から調製した固形物のXRPDパターンは、結晶相および散漫錯乱を示唆するいくつかの特徴を示した。散漫錯乱は、別個のアモルファスの相（無秩序/不完全な、結晶性またはナノ結晶性成分）に起因しうる。
3％マンニトール中の1.4 mg/mLのEC145から調製した固形物のDSCサーモグラムは、30.4℃でガラス転移現象を示した後、143.6℃で主要な吸熱性イベントを示した。高温顕微鏡観察によって、〜140℃で流動が観察された（結晶性生物の融解に起因している可能性がある）。
該DVS結果によって、該物質は非常に吸湿性であることが示唆された。該物質は、5％RHでの平衡化によって、無視できる程度の重量変化を示した。しかしながら、吸着工程の間に約81％という顕著な重量増加が観察された（75〜95％RHで最大量が得られた）。同様に、74％という顕著な重量減少が、脱着工程において観察された（顕著にヒステリシス）(図17)。
サンプル中の水分含量は、カール・フィッシャー滴定によって、4.52％であると決定された。
1.4 mg/mL EC145/10％マンニトールを含む物質は、結晶性であると決定された。該DSCサーモグラムは、137.0および156.7℃で、結晶性成分の融解に起因する2つの主要な吸熱性イベントを示した(図18)。ガラス転移現象は観察されなかった。また、高温顕微鏡観察によって、流動の証拠が〜132℃で観察され、粒子の円形化が〜138℃で観察された。
該DVS結果によって、該物質は、マンニトール添加量が低いものよりも吸湿性が低いことが示唆された。5％RHでの平衡化によって、無視できる程度の重量変化を示した。しかしながら、吸着工程の間に約57％という顕著な重量増加が観察された（75〜95％RHで最大量が得られた）。同様に、55％という顕著な重量減少が、脱着工程の間に観察された(図19)。小さなヒステリシスが観察された。
サンプル中の水分含量は、カール・フィッシャー滴定によって、1.92％であると決定された。
3％マンニトール中の5.2mg/mLのEC145から得た固形物のDSCサーモグラムは、15.5℃でガラス転移現象を示した後、142.7℃で広範な吸熱を示した(図20)。
要約すると、EC145／マンニトールの固体分散液は、低いマンニトール添加量にて部分的に結晶性であって、高いマンニトール添加量にて結晶性であると決定される。マンニトール添加量が低い物質は、マンニトール添加量が高いものよりも、より吸湿性であってより多くの水を含んでいた。マンニトールを有するプラセボサンプルにおいて〜11℃でのTgが観察され、5.2 mg/mL EC145および3％マンニトールを含むサンプルにおいてわずかに高い〜16℃でのTgが観察された。1.4 mg/mL EC145および3％マンニトールを含むサンプルにおいて最も高いTg(〜30℃)が観察された。このことは、異なるEC145濃度または異なる水分含量の結果かもしれない。該分散液中においてマンニトールが結晶化するため、DSCサーモグラムから決定されたガラス転移温度は、該分散液中のアモルファスの物質のほんの一部からのものである。該Tg値は、該分散液の混和性評価に対する有用な判断基準ではない。EC145含量が低く、EC145および該賦形剤からのIRシグナルが重なっているので、EC145に帰属するIRスペクトルを明確に同定することができない。
【００７０】
PEG400を有する固体分散液
PEG400を用いて4つの組成物を調製した: 3％PEG400を有するプラセボサンプル、3％および10％PEG400中の1.4 mg/mLのEC145、3％PEG400中の5.3 mg/mLのEC145。分散液（5.3 mg/mL EC145および3％PEG400を含む）から固形物を得た。他の分散液は凍結乾燥の間に潮解した。
5.3 mg/mL EC145から得た固形物を、FTIRおよびmDSCによってキャラクタライズした。該DSCサーモグラムは、3.1℃で主要な吸熱を示した(図21)（氷の融解に起因する可能性がある）。該IRスペクトルは、このサンプルに特有の特徴を示す。
要約すると、PEG400を有する固体分散液は、高い水分含量に起因して、成功しなかった。
【００７１】
PVP10を有する固体分散液
PVP10を用いて3つの組成物を調製した: 3％PVP10を有するプラセボサンプル、3％PVP10中の1.4 mg/mLのEC145、および3％PVP10中の5.2 mg/mLのEC145。20％PVP10を有する分散液は成功しなかった。EC145が20％PVP溶液中で沈殿した。
プラセボサンプルのDSCサーモグラムは、54.7℃でガラス転移現象を示した。54.7℃でのTgは、蒸発によって引き起こされる主要な吸熱性イベントと重なった。従って、推定Tg値は真値を示していなくてもよい。
1.4 mg/mL EC145/3％PVP10を含むサンプルは、X線アモルファスであると決定された。該XRPDパターンは、1〜25°の2θで3つの広範な散漫錯乱極大を特色とする。
該DSCサーモグラムは、65.0℃でガラス転移現象を示した(図22)。65.0℃でのTgは、蒸発によって引き起こされる主要な吸熱性イベントと重なった。従って、推定Tg値は真値を示していなくてもよい。100℃以上のそのような熱イベントの原因は不明であった。
高温顕微鏡観察によって、〜177℃で流動が観察された（分解に起因する可能性がある）。
該DVS結果によって、該物質は非常に吸湿性であることが示唆された。該物質は、5％RHでの平衡化によって、無視できる程度の重量変化を示した。しかしながら、吸着工程の間に約121％という顕著な重量増加が観察された（75〜95％RHで最大量が得られた）。同様に、脱着工程の間に111％という顕著な重量減少が、観察された（顕著なヒステリシス）(図23)。該試験の完了後にサンプルが潮解した。
サンプル中の水分含量は、カール・フィッシャー滴定によって、3.52％であると決定された。
5.2 mg/mL EC145/3％PVP10のDSCサーモグラムは、50.0℃でガラス転移現象を示した(図24)。50.0℃でのTgは、蒸発によって引き起こされる主要な吸熱性イベントと重なった。従って、推定Tg値は真値を示していなくてもよい。100℃以上のそのような熱イベントの原因は不明であった。
要約すると、EC145／PVP10の固体分散液はX線アモルファスであると決定された。該物質は非常に吸湿性である。吸着および脱着工程、各々において、121％および111％という重量変化が観察された。50−65℃で観察されたTgは、PVP10に起因している可能性がある。異なる組成物におけるTg値間の差異は、おそらく、サンプル中の異なる水分含量の結果である。サンプル中のEC145含量が低く、EC145および該賦形剤からのIRシグナルが重なっているので、EC145に帰属するIRスペクトルを明確に同定することができない。
【００７２】
スクロースを有する固体分散液
スクロースを用いて4つの組成物を調製した: 3％スクロースを有するプラセボサンプル、3％および20％スクロース中の1.4 mg/mLのEC145、ならびに3％スクロース中の5.2 mg/mLのEC145。
プラセボサンプルのDSCサーモグラムは、37.5℃でただ1つのガラス転移現象を示した（おそらくアモルファスのスクロースに起因する）。
3％スクロース中の1.4 mg/mL EC145として調製した固形物は、X線アモルファスであると決定された。該XRPDパターンは、約4〜19°の2θで2つの広範な散漫錯乱極大ならびに15°の2θでのショルダーを特色とする。
該DSCサーモグラムは、53.1℃および123.4℃で2つのガラス転移現象を示した(図25)。53.1℃でのTgは、蒸発によって引き起こされる吸熱性イベントと重なった。従って、推定Tg値は真値を示していなくてもよい。高温顕微鏡観察によって、約143℃で流動が観察された。
該DVS結果によって、該物質は非常に吸湿性であることが示唆された。該物質は、5％RHでの平衡化によって、無視できる程度の重量変化を示した。しかしながら、吸着工程の間に約127％という顕著な重量増加が観察された（75〜95％RHで最大量が得られた）。同様に、脱着工程の間に114％という顕著な重量減少が観察された（いくらかヒステリシス）(図26)。該試験の完了後にサンプルが潮解した。
サンプル中の水分含量は、カール・フィッシャー滴定によって、5.57％であると決定された。
20％スクロース中の1.4 mg/mLのEC145として作製した固形物のXRPDパターンは、X線アモルファスの物質の特徴を示し、3％スクロース中のものと同様であると思われた。
該DSCサーモグラムは、32.0℃でただ1つのガラス転移現象を示した(図27)（おそらく、アモルファスのスクロースに起因する）。高温顕微鏡観察によって、〜100℃範囲で、流動が観察された。
該DVS結果によって、該物質は、スクロース添加量が低いものよりも吸湿性が低いことが示唆された。該物質は、5％RHでの平衡化によって、無視できる程度の重量変化を示した。しかしながら、吸着工程の間に、約63％という顕著な重量増加が観察された（75〜95％RHで最大量が得られた）。同様に、脱着工程において、53％という顕著な重量減少が観察された(図28)。該脱着工程の間、顕著なヒステリシスであった。該試験の完了後にサンプルが潮解した。
サンプル中の水分含量は、カール・フィッシャー滴定によって、4.28％であると決定された。
5.2 mg/mL EC145/3％スクロースから調製したサンプルのDSCサーモグラムは、50.8℃および124.3℃での2つのガラス転移現象を特徴とすることにより、1.4mg/mL EC145および3％スクロースを含むサンプルのものと同様である(図29)。50.8℃でのTgは、蒸発によって引き起こされる主要な吸熱性イベントと重なった。従って、推定Tg値は真値を示していなくてもよい。
要約すると、EC145／スクロースの固体分散液はX線アモルファスであると決定された。低いスクロース添加量(3％)である物質は、高いスクロース添加量(20％)であるものよりも、吸湿性が高く、より多くの水を含む。EC145および3％スクロースを含むサンプルにおいて、2つのガラス転移現象、すなわち、Tg1(51−53℃)およびTg2(123−124℃)が観察された。プラセボサンプルおよび20％スクロースを含むEC145分散液において、低温(32−38℃)でのただ1つのTgが観察された。これは、分散液中の異なるスクロース濃度またはEC145とスクロース間の潜在的相互作用の結果であるかもしれない。サンプル中のEC145含量が低く、EC145および該賦形剤からのIRシグナルが重なっているので、EC145に帰属するIRスペクトルを明確に同定することができない。
【００７３】
（実験方法）
凍結乾燥
分散液選別のために、濃縮したEC145（214 mg/mL）を水中に調製し、様々な賦形剤（グルコース、グリシン、マンニトール、PEG400、PVP10、およびスクロースを含む）の存在下において、50 mM クエン酸バッファー, pH 6.2中に最終濃度1.4 mg/mLまで希釈した。グルコース、PEG400、PVP10およびスクロースについては3および20％、あるいはグリシンおよびマンニトールについては3％および10％での各賦形剤の2つの添加量の、計12個の組成物を調製した。1濃度の賦形剤(3％)での5 mg/mLでのEC145サンプルも調製した。1濃度(3％)のみで賦形剤の6つのプラセボサンプルを、固体分散液組成物(EC145含有)との比較のために調製した。
計29個の組成物を、賦形剤の添加量に応じて約200 mg〜1.2 gのスケールで調製した。約6 mLの各組成物を、10-mLの凍結乾燥バイアルに添加した。3％添加量での賦形剤について、各組成物を2つずつ調製した。
異なる賦形剤を異なる濃度で有するEC145溶液を、-80℃の冷凍庫で凍結させ、予め冷却したLABCONCO凍結乾燥機に入れた。第一乾燥は、棚温度を-55℃で140時間、-50℃で24時間、-45℃で24時間、そして-20℃で25.5時間にセットして実施した。第二乾燥は、20℃で20.5時間実施した。凍結乾燥の間の真空度（vacuum reading）は約0.06 Torrであった。
凍結乾燥チャンバーの内部において減圧下でサンプルバイアルの蓋をした。凍結乾燥機から取り出してすぐにバイアルをパラフィルムで密封した。
【００７４】
分析的試験のためのサンプルの処理
多重サンプリングの間に水分が奪われるのを避けるために、各テスト用に、適切な量のサンプルを、薄明かりの下で窒素中において、各々きれいなバイアルにサブサンプリングした。
【００７５】
（機器技法）
変調DSC
MDSCデータを、冷蔵冷却システム（refrigerated cooling system）(RCS)を備えたTA装置Q2000示差走査熱量計で得た。温度キャリブレーションを、NIST-追跡可能なインジウム金属を用いて実施した。サンプルをアルミニウムDSCパンに設置し、重量を正確に記録した。該パンを蓋で覆い、該蓋を圧着した。秤量および圧着済みのアルミニウムパンをセルのリファレンス側に設置した。データを、平均昇温速度2℃/分（-50〜200℃）で、変調の振幅 ±1℃および60秒周期を用いて得た。報告されたガラス転移温度は、温度曲線に対するリバーシングヒートフローの逐次変化の屈曲点から得る。
【００７６】
動的蒸気吸着/脱着(DVS)
水分吸着/脱着データを、VTI SGA-100蒸気吸着分析装置で集めた。NaClおよびPVPを、キャリブレーション標準として用いた。分析の前にサンプルを乾燥させなかった。吸着および脱着データを、窒素パージ下において、10％のRH増加量にて5〜95％相対湿度(RH)の範囲にわたって集めた。分析用に用いた平衡状態判断基準は、5分で0.0100％未満の重量変化（最大平衡化時間 3時間）であった。データを、サンプルの初期の水分含量に対して補正しなかった。
【００７７】
FTIR
IRスペクトルを、Ever-Glo mid/far IR源、臭化カリウム(KBr)ビームスプリッター、および重水素化硫酸トリグリシン(DTGS)検出器を備えたNexus 670（登録商標）フーリエ変換赤外(FT-IR)分光光度計(Thermo Nicolet)で得た。波長検証はNIST SRM 1921b(ポリスチレン)を用いて実施した。データ取得のために、ゲルマニウム(Ge)結晶とともに減衰全反射(ATR)アクセサリー(Thunderdome（商標）, Thermo Spectra-Tech)を用いた。各スペクトルは、4 cm-1のスペクトル分解能で採取した256の同時添加スキャンを示す。各スペクトルに対するデータ取得パラメータは、本明細書のデータセクション中の上記イメージに示される。バックグラウンドのデータセットを、純粋なGe結晶を用いて得た。Log 1/R (R = 反射率)スペクトルは、これら2つのデータセットの互いに対する比を取ることによって得た。サンプルを、Ge結晶において無溶媒（neat）で分析した。
スペクトル解析を、OMNICソフトウェアを用いて実施した。二次微分スペクトルを、Norris微分を用いて、セグメント長を5に設定し、セグメント間のギャップを5に設定して、得た。
【００７８】
高温顕微鏡観察
画像取得のためのSPOT Insight（商標）カラーデジタルカメラを備えたLeica DM LP 顕微鏡上の、TMS93コントローラーを有するLinkam FTIR 600 ホットステージを用いて、高温顕微鏡観察を実施した。SPOTソフトウェア(v. 4.5.9)を用いて画像を取得した。温度キャリブレーションを、USP 融点測定用標準（melting point standard）を用いて実施した。サンプルをカバーガラス上に設置し、第2のカバーガラスをサンプルの最上部に設置した。ステージを加熱しながら、各サンプルを、交差ポラライザおよび一次赤色コンペンセータ（first order red compensator）とともに20 x 0.4 N.A 対物レンズを用いて、視覚的に観察した。
【００７９】
カール・フィッシャー滴定
水定量のための電量的カール・フィッシャー(KF)分析を、Mettler Toledo DL39 KF滴定装置を用いて実施した。分析の前にブランクの滴定を行った。サンプルを、乾燥窒素雰囲気下において調製し、予め乾燥させたバイアル中の約1 mLのドライハイドラナール-クーロマットAD中に抽出した。上清を、セプタムを介してKF電量計に加え、10秒間混合した。その後、電気化学的酸化によってヨウ素を製造する（2 I- → I2 + 2e-）発生電極（generator electrode）を用いて、該サンプルを滴定した。再現性を保証するために、2回反復して行った。
【００８０】
XRPD
XRPDパターンを、PANalytical X'Pert PRO MPD回折計を用いて集めた（Optix ロングファインフォーカス線源を用いて生じさせたCu放射線の入射ビームを使用）。楕円形の段階的多層膜ミラーを用いて、検体を通過させて検出器上へとCu Kα X線の焦点を合わせた。分析の前に、シリコン検体(NIST SRM 640d)を分析して、Si 111ピーク位置を検証した（NISTが認証している位置と一致）。該サンプルの検体を、3 μmの厚膜の間に入れ、透過幾何学で分析した。ビームストップおよび短い散乱線除去エクステンション（short antiscatter extension）を用いて、空気により生じたバックグラウンドを最小化した。入射および回折ビーム用のソーラースリットを用いて軸発散からの広がりを最小化した。回折パターンを、検体から240 mmに位置する走査位置敏感型検出器(X'Celerator)およびデータ収集装置ソフトウェアv.2.2bを用いて集めた。各パターンについてのデータ収集パラメータは、本明細書のデータセクションにおいて上記イメージに示される（発散スリット(DS)（該ミラーの前）および入射ビーム散乱線除去スリット(SS)を含む）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【国際調査報告】
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