【事件の表示】
　特許第３０５４３７１号「アルミニウム結合能の低い治療用ヒトアルブミン」の請求項１、２に係る特許に対する特許異議の申立てについて、次のとおり決定する。
【結　論】
　訂正を認める。
　特許第３０５４３７１号の請求項１に係る特許を維持する。
【理　由】
１．手続の経緯
　本件特許第３０５４３７１号発明は、平成９年１月２８日（パリ条約による優先権主張１９９６年１月３０日、スペイン国）に特許出願され、平成１２年４月７日にその特許権の設定登録がされた。これに対して、アルファ　セラピューティク　コーポレイション及びデルタ、バイオテクノロジー、リミテッドにより特許異議申立てがされ、平成１３年５月３０日付けで取消理由が通知され、その指定期間内に特許権者より訂正請求（後日取下）がされ、当審からの審尋に対して特許権者からの回答がされた後、再度の取消理由が通知され、その指定期間内である平成１６年５月１１日に訂正請求書が提出されたものである。
　　
２．訂正請求についての
(a) 訂正の内容
特許請求の範囲の請求項１〜２に
「【請求項１】水性媒質中で安定かつ等張であるようにタンパク質濃度を好ましくは５％、２０％または２５％、あるいは静脈内投与できる他の治療的濃度に調製し、タイプIIガラスバイアルに入れた治療用ヒトアルブミン溶液の最終組成物中のクエン酸濃度が０.５ mMより濃くないことを特徴とする、アルミニウム結合能の低い、ヒト血漿の分画から由来するヒトアルブミン含有治療用組成物。
【請求項２】水性媒質中で安定かつ等張であるようにタンパク質濃度を好ましくは５％、２０％または２５％、あるいは静脈内投与できる他の治療的濃度に調製し、タイプIIガラスバイアルに入れた治療用ヒトアルブミン溶液の最終組成物中のクエン酸濃度が０.０３７ mMより少ないことを特徴とする、アルミニウム結合能の低い、ヒト血漿の分画から由来するヒトアルブミン含有治療用組成物。」
とあるのを、請求項２を削除し、
「【請求項１】フラクションＶに相当する、Cohnのフラクション法により得たクエン酸抗凝集化ヒト血漿から出発し、
　該CohnのフラクションＶを得た後、クロマトグラム法または熱凝集法のいずれも使用せず、一価金属塩を含有する透析溶液でダイアフィルトレーションし、
　水性媒質中で安定かつ等張であるようにタンパク質濃度を好ましくは５％、２０％または２５％、あるいは静脈内投与できる他の治療的濃度に調製し、タイプIIガラスバイアルに入れた治療用ヒトアルブミン溶液の最終組成物中のクエン酸濃度が０.０３７ mMより少ないことを特徴とする、アルミニウム結合能の低い、ヒト血漿の分画から由来するヒトアルブミン含有治療用組成物。」
と訂正する。
　　
(b) 訂正の適否　　
　上記訂正は、請求項２を削除し、請求項１に記載された「ヒトアルブミン含有治療用組成物」のクエン酸濃度を、請求項２に記載されていたクエン酸濃度「０.０３７ mMより少ない」と限定し、さらに原料及び精製方法について、願書に添付された明細書（以下、特許明細書という。）の実施例１に記載されている方法である「フラクションＶに相当する、Cohnのフラクション法により得たクエン酸抗凝集化ヒト血漿から出発し、
　該CohnのフラクションＶを得た後、クロマトグラム法または熱凝集法のいずれも使用せず、一価金属塩を含有する透析溶液でダイアフィルトレーションし」と限定したものであるから、特許明細書に記載された範囲内のものであって、特許請求の範囲の減縮に該当し、また、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものでもない。
　　　
　以上のとおりであるから、上記訂正請求は、特許法第１２０条の４第２項並びに同条第３項で準用する第１２６条第２項及び第３項の規定に適合するので、当該訂正を認める。
　　
３．特許異議申立について　
３−１　本件発明
　上記のとおり、訂正は認められるから、本件請求項１に係る発明（以下、本件発明という。）は、特許請求の範囲に記載された事項によって特定される次のとおりのものである。
　
「フラクションＶに相当する、Cohnのフラクション法により得たクエン酸抗凝集化ヒト血漿から出発し、
　該CohnのフラクションＶを得た後、クロマトグラム法または熱凝集法のいずれも使用せず、一価金属塩を含有する透析溶液でダイアフィルトレーションし、
　水性媒質中で安定かつ等張であるようにタンパク質濃度を好ましくは５％、２０％または２５％、あるいは静脈内投与できる他の治療的濃度に調製し、タイプIIガラスバイアルに入れた治療用ヒトアルブミン溶液の最終組成物中のクエン酸濃度が０.０ ３７mMより少ないことを特徴とする、アルミニウム結合能の低い、ヒト血漿の分画から由来するヒトアルブミン含有治療用組成物。」
　
３−２　取消理由１（特許法第２９条第１項第３号）について
３−２−１　刊行物の記載
　平成１３年５月３０日付け取消理由で引用された刊行物には、それぞれ以下の事項が記載されている。
　
刊行物１（特開平４−２１０６４６号公報：特許異議申立人アルファ　セラピューティク　コーポレイション（以下、異議申立人１という。）の甲第２号証、特許異議申立人デルタ、バイオテクノロジー、リミテッド（以下、異議申立人２という。）の甲第１号証）
(1) コーン氏の冷アルコール分画によって得られた第Ｖ画分ペーストを蒸留水に溶解、ｐＨ調整、ろ過などの処理をして得たアルブミン水溶液を、陰イオン交換体、次いで陽イオン交換体処理をし、更に得られた溶液に安定化剤を添加してアルブミン濃度が２５％になるように調製した後、所定量を表面を亜硫酸ガス処理した軟質ガラス容器に分注してアルブミン製剤を得て、軟質ガラス容器にて４０℃、３ヶ月保存した場合、分注前及び保存後もアルミニウム濃度が５０ppb 未満であること、硬質ガラス容器では分注前、保存後のアルミニウム濃度がそれぞれ５０ppb未満、１２０ppbであったこと（実施例１、実験例及び第２表）
(2) 注射剤用の保存容器の素材としては硬質ガラス（ホウケイ酸ガラス、ＵＳＰによるガラスの分類ではクラスＩ）と、表面を脱アルカリ処理した軟質ガラス（ソーダ石灰ガラス、ＵＳＰによるガラス分類ではクラスII）が知られていること（１頁右下欄〜２頁左上欄）
　
刊行物２(特開平７−３３８００号公報：異議申立人２が提出した甲第２号証)
(3) アルファグロブリンを充分に変性させるために一定時間一定温度で低ヘモグロビン源である血漿アルブミンを加熱し次に該アルブミンを処理するのに先立って得られた変性アルファグロブリンを除去することを特徴とするアルミニウムを実質的に含有せず貯蔵容器からアルミニウムが吸収されないようにして長い貯蔵寿命の間実質的にアルミニウムがない状態に保つヒト血清アルブミンの調製方法（特許請求の範囲請求項２）
(4) コーン第Ｖ画分ペーストを蒸留水に懸濁し、ろ過して得た溶液にＳＰＡ３Ａアルコールを添加し、このアルコール性アルブミン濾過物を５０℃に上昇させ２時間保持し、８℃に冷却した。これをＤＥＡＥセファデックスで処理し、濾過器を用いて変性したグロブリン及びＤＥＡＥセファデックスを除去した。次いで限外濾過し、更に３％単純塩を用いて３容分交換し、アルブミン溶液を得、容器中に調合し、アルブミン濃度が２４.７％（サンプル＃3388-70Ａ）及び２６.５ ％（サンプル＃ 3388-70Ｅ）であるアルブミン溶液が得たこと、及び、そのアルミニウム含量が２９ppb 未満であること（【０００８】〜【０００９】）
(5) アルミニウム含有容器中に４０℃で２ヶ月間貯蔵したとき、単量体アルブミンのアルミニウム濃度がほぼ３０ppb であったこと（図１）
　　　　
刊行物４（特開平７−３３０６２６号公報：異議申立人２の甲第４号証）
(6) コーン氏の冷アルコール分画によって得られた第Ｖ画分ペーストを陰イオン交換体、次いで陽イオン交換体にかけ、更にアルブミン濃度が２５％になるように調製した後、所定量をバイアルに分注して加熱処理してアルブミン製剤を得ること（実施例１）及びこのアルブミン製剤のアルミニウム含量が５０ ppb未満であったこと（参考例２及び表３）
　
刊行物５（特開平７−１２６１８２号公報：異議申立人２の甲第５号証）
(7) 容器に充填した遺伝子操作により発現されるヒト血清アルブミン製剤の滅菌方法が記載され、その場合のアルブミン濃度が２５％、充填容器が、ガラス性容器、ポリエチレン性容器、脱アルカリ処理した軟質ガラス容器等、であること（請求項１及び【００３０】）　　
　
刊行物６（特開平７−１７０９９４号公報：異議申立人２が提出した甲第６号証）には、
(8)遺伝子操作により発現されるヒト血清アルブミンの脱色方法が記載され、その場合のアルブミン濃度が２５％、充填容器が、ガラス性容器、ポリエチレン性容器、脱アルカリ処理した軟質ガラス容器等、であること（請求項１及び【００３５】）
　
３−２−２　対比・判断
　刊行物１、２及び４に記載のヒト血清アルブミン製剤は、コーン氏の冷アルコール分画によって得られた第Ｖ画分ペーストを原料（摘示事項(1)(4)(6)）とし、この第Ｖ画分はクエン酸抗凝集化血漿からのCohnのフラクション法によるフラクションＶ（以下、単にフラクションＶという。）に相当することは明らかであるから、本件発明と原料を同じくするものである。しかし、刊行物１及び４に記載のアルブミン製剤は、それぞれ陰イオン及び陽イオン交換体処理というクロマトグラム法によって精製されたもの（摘示事項(1)(6)）であり、刊行物２に記載のアルブミン製剤は、少なくともフラクションＶ水溶液にＳＰＡ３Ａアルコールを添加、加熱することによってアルファグロブリン変性させて除去する熱凝集法による工程（摘示事項(3)(4)）を含む精製方法によって精製されたものである。
　また、刊行物５及び６に記載のヒトアルブミン製剤は原料が遺伝子操作により発現されたヒトアルブミン（摘示事項(7)(8)）であって、フラクションＶとは異なるものである。
　一般に、天然物から特定の有効成分を精製分離する場合、処理条件や分離方法によって分離できる不純物成分は異なるから、同じ天然物を原料としても、有効成分と共に含まれる微量の不純物成分の組成が異なるものが得られる。また、原料の天然物が異なれば、そこに含まれる成分は異なるから、そこから分離する特定の有効成分が同じでも、不純物などの成分・組成は異なり、組成物自体としては異なったものとなる。
　そうすると、刊行物１及び刊行物４に記載のアルブミン製剤は、陰イオン交換体及び陽イオン交換体処理というクロマトグラム法によって精製したものであり、また、刊行物２に記載のアルブミン製剤は少なくとも熱凝集法をも含む方法で精製したものであるから、同じ原料であるフラクションＶから出発しても、クロマトグラム法または熱凝集法のいずれも使用せずに、一価金属塩を含有する透析用液でダイアフィルトレーションして得た本件発明のヒトアルブミン製剤と同一のものとはいえない。また、刊行物５及び６に記載のアルブミン製剤は、フラクションＶとは異なる遺伝子操作により発現したヒトアルブミンを原料とするものであるから、本件発明のアルブミン製剤とは異なるものである。
　したがって、本件発明は、刊行物１、２及び４〜６のいずれに記載された発明でもない。
　
３−３　取消理由２（特許法第２９条第２項）について
３−３−１　刊行物の発明
　上記取消理由通知で、上記刊行物１、２、４〜６と共に引用した刊行物３には以下の事項が記載されている。
刊行物３（Fertigungsvorschrift Filling and packaging procedure, Human-Albumin Behring 20% (Behringwerke AG)(1988)：異議申立人２の甲第３号証）
(9)タイプIIガラス容器に充填された２０％濃度のヒトアルブミン製剤（１頁Ｉ及びII．1.1）
　
３−３−２　対比・判断
　刊行物１には、アルブミン製剤の保存容器と製剤中のアルミニウム濃度の関係（摘示事項(1)(2)）が記載されているが、組成物中のクエン酸濃度とガラス容器及びアルミニウム遊離との関係については記載されていない。
　刊行物２には、アルブミン製剤中の保存時のアルミニウム濃度について（摘示事項(5)）記載されているが、クエン酸濃度については記載されていないし、ガラス容器におけるアルミニウムの遊離がクエン酸濃度と関連していることについては記載されていない。
　刊行物３には単にタイプIIガラス容器に充填されたアルブミン製剤のアルブミン濃度２０％（摘示事項 (9)）が記載されているだけで、クエン酸濃度は何等記載されていない。
　刊行物４には、アルブミン製剤の保存前のアルミニウム濃度（摘示事項(6)）が記載されているが、クエン酸濃度は全く記載されていない。
　刊行物５及び６には、アルブミン製剤の滅菌方法や脱色方法（摘示事項(7)(8)）が記載されているが、アルブミン製剤中のクエン酸濃度は記載されていない。
　そうすると、刊行物１〜６のいずれにも、アルブミン製剤のクエン酸濃度が全く記載されていないので、これらの記載に基づいてアルブミン製剤における最終組成物のクエン酸濃度を０.０３７ mMより少なくすることは、当業者が容易に想到できるものではない。
　そして、本件発明は、特許明細書に、「初期アルミニウム濃度（ｔ＝０）は同じオーダーであり、３つのケースともすべて非常に低い（２５ ppb以下）けれども、クエン酸濃度は３つのケースでかなり相違しており（注:クエン酸濃度が０.７１mM、０.１２mM、０.０３７mMの３種）、これが高温（４５℃）の高温貯蔵期間中におけるアルミニウムの増加に直接関係していると思われることである。……アルブミン中のクエン酸が０.７１ mM存在したケースではアルミニウム遊離速度は３.５９０６ppb／日であり、他方、アルブミン中に存在するクエン酸濃度が＜０.０３７ mMであったケースでは、アルミニウム遊離速度は０.１４２２ppb／日であり、この２つのケースの間ではクエン酸濃度の差に伴ってアルミニウム遊離速度には３.５９０６／０.１４２２＝２５倍の差がでている。」（【００１９】〜【００２０】）及び「異なるガラス表面処理を受けた２つのグループのガラス容器を使用した動的アルミニウム遊離試験で得られた線形相関と遊離速度のグラフ曲線の傾斜が僅差であることを考慮すると、クエン酸の存在量が十分に減少されたレベル（技術的検出限界＜０.０１１g/l近辺）であるならば、ガラスの種類はアルミニウムの遊離速度の決定的ファクターとはならないとの結論に到達する。」（【００２２】）と記載されているように、フラクションＶを、クロマトグラム法または熱凝集法のいずれも使用せず、一価金属塩を含有する透析用液でダイアフィルトレーションすることによって、タイプIIガラスバイアルに入れた治療用ヒトアルブミン溶液の最終組成物中のクエン酸濃度を０.０３７ mM（０.０１１g/l近辺）の濃度以下にすることができ、この濃度に限定したことにより、バイアルのガラスの種類を問わずに、アルミニウムの遊離が抑制される、つまり、アルミニウム結合能の低い、という優れた効果を奏するものである。
　したがって、本件発明は、刊行物１〜６に記載された発明に基いて当業者が容易に発明をすることができたものではない。
　
３−４　取消理由３（特許法第２９条の２）について
３−４−１　先願明細書の記載
　上記取消理由通知に引用した先願明細書には、以下の事項が記載されている。
先願明細書（特願平７−２１８２３５号の願書に最初に添付した明細書（特開平８−１７６０１０号公報参照）：異議申立人１が提出した甲第１号証）
(10)血漿タンパク質の混合液から血漿由来の治療用溶液を調製する方法であって、非アルブミンタンパク質および不純物・製造デブリからアルブミンを分離するために、分配剤としてカプリル酸ナトリウムを使用する段階を含む改良法（特許請求の範囲の請求項１）
(11)本発明によれば、カプリル酸ナトリウムは、次に、コーン画分IV−１流出液に添加され、それが、湿潤性を変え、α-およびβ−グロブリンを不溶化するか、これらの不溶なタンパク質からアルブミンを分配する。……次いで、カプリル酸ナトリウム処理溶液を、細菌の増殖を阻止するために、約１８℃か、それ以下に低く冷却し、遠心する。その後、ＤＥＡＥセファデックス約１ｇを、濾過を助けるために流出液に添加する。次いで、カプリル酸流出液を、深さ０.２ミクロン・メンブランフィルターを通して清澄化し、ＤＥＡＥ濾液を調製する。……次に、ＤＥＡＥセファデックス清澄化濾液は、Rhomicon型限外濾過器で限外濾過され、金属混入物、エタノールおよび塩類を除去するために、カプリル酸ナトリウム、ダイアフィルトレーションバッファーの少なくとも７容の交換量に対してダイアフィルトレーションされる（【００３０】〜【００３７】）
(12)本明細書記載の方法は、スケールアップにより次のデータを得た：
タンパク質濃度：　２４.０３％タンパク質
ＣＡＥ：          １００％アルブミン
　　　………………
アルミニウム（アルブミンは明らかに誤記である）：　７.５３ppb
　　　………………
クエン酸　　　　　５ppm未満
　　　………………
カプリル酸：　　　０.０８６Ｍ　選択的に結合　（【００４３】）
　
３−４−２　対比・判断
　先願明細書におけるクエン酸濃度５ppmは０.０２６mMに相当し、アルブミン製剤は、通常、静脈注射剤として用いられるから、先願明細書には、水性媒質中で安定かつ等張であるように調製した、アルブミン７.５３ppb、クエン酸０.０２６ mM未満、カプリル酸 ０.０８６Ｍ（ダイアフィルトレーションにより０．０７モルに低下する。）を含有し、ほぼ２５％のアルブミン製剤（摘示事項(12)）が記載されている。
　しかし、本件発明のアルブミン製剤は、安定化のためにカプリル酸ナトリウムを添加しても、０.０１６Ｍである（【００２３】）から、先願明細書に記載されたカプリル酸を０.０８６Ｍないし０．００７Ｍ含むアルブミン製剤とは同一ではない。
　また、先願明細書のフランクションIV−１流出液からのアルブミン製剤の精製法（摘示事項(11)）をみると、ダイアフィルトレーションによる工程もあるが、その前にＤＥＡＥイオン交換処理というクロマトグラム法を用いた工程を行っている。
　本件発明は、精製法としてクロマトグラム法を除いており、既に述べたように精製法によって組成物の成分・組成は異なるのであるから、先願明細書に記載されたアルブミン製剤と同一の組成物であるとはいえない。
　したがって、本件発明は、先願明細書に記載された発明とは同一ではない。
　
　また、特許異議申立人が提出したその他の証拠を検討しても、本件発明についての特許を取り消すべき理由を発見しない。
　　
４．むすび
　以上のとおりであるから、本件特許は、特許法第２９条又は第２９条の２の規定に違反してされたものではない。
　
　よって、結論のとおり決定する。
【異議決定日】
平成１６年６月１５日（２００４．６．１５）
【訂正の要旨】
審決（決定）の【理由】欄参照。
（５４）【発明の名称】
アルミニウム結合能の低い治療用ヒトアルブミン
（５７）【特許請求の範囲】
　【請求項１】　フラクションＶに相当する、Ｃｏｈｎのフラクション法により得たクエン酸抗凝集化ヒト血漿から出発し、
　該ＣｏｈｎのフラクションＶを得た後、クロマトグラム法または熱凝集法のいずれも使用せず、一価金属塩を含有する透析溶液でダイアフィルトレーションし、
　水性媒質中で安定かつ等張であるようにタンパク質濃度を好ましくは５％、２０％または２５％、あるいは静脈内投与できる他の治療的濃度に調製し、タイプＩＩガラスバイアルに入れた治療用ヒトアルブミン溶液の最終組成物中のクエン酸濃度が０．０３７ｍＭより少ないことを特徴とする、アルミニウム結合能の低い、ヒト血漿の分画から由来するヒトアルブミン含有治療用組成物。
【発明の詳細な説明】
　【０００１】
　本発明はその溶液が実際に入れられている容器または入れ物から浸出する多価金属を吸収、固定する能力が低いという特徴を有する治療用ヒトアルブミン組成物に関する。
　本発明は主として静脈内投与のための治療用血漿タンパク質の分野で使用されるものであり、アルブミン溶液に特に好適に使用されるものであるが、同様な挙動を示す他のタンパク質についても適用されうるものである。
　【０００２】
　いずれの薬学的製剤にとっても必須の１つの重要な特徴は有効期限までの安定性である。
　長期間の安定性を達成するためには、活性成分に起こることが想定される構造的または機能的変化を確定する必要がある。製品内で起こる品質の劣化または変化が所望されない毒性化合物の生成を招く場合があり、かかる生成物の最大許容レベルは薬局方または他の規則によって規制されている。
　【０００３】
　静脈内に投与される血漿タンパク質の場合、そして汚染物質がアルミニウムのような特定物質である場合には、その汚染物質濃度はできる限り低くおさえなければならない。なぜならば、痕跡量であってもその毒性がアルツハイマー型老年痴呆、透析性脳疾患などと呼ばれている障害を引き起こす可能性を考慮しなければならないからである。（Ｋｌｅｉｎ，Ｇｏｒｄｏｎ　Ｌ．の「非経口製品中のアルミニウム：大量および少量の非経口投与についての医学的展望」Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　＆　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，４３（３），１２０−１２４（１９８９）参照）。
　【０００４】
　毒性研究の結果から静脈投与されたアルミニウムは組織と器官（脳）に蓄積する可能性があり、腎臓機能障害のある患者の場合では、それが十分に排除されないため毒性作用のおそれがあることが判明している。
　このために、欧州の保健担当局ではタンパク質濃度が５％、２０％または２５％の溶液における注射用アルブミン中のアルミニウム濃度を２００ｐｐｂ（μｇ／ｌ）以下にすべきことを規定している。
　もちろん、アルブミン中のアルミニウム濃度の最高限度はその製剤の製造直後の測定値のみに限られるのでなく、有効期限の切れるまで守られなければならない。
　【０００５】
　現在治療用ヒトアルブミンの有効寿命が制限されている理由の１つは、時間の経過とともにアルミニウム濃度が上昇することにある。このアルミニウム濃度の増加はアルブミンの容器として使用されているガラス容器からアルミニウムが吸収されるためである。
　この製剤を入れるために使用されているガラス容器はその結晶網目から抽出されうるアルミニウムを無視できない量含有していることが知られている。（Ｈｏｉｂｅｒｇ，Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｐ．の「非経口投与製品中のアルミニウム：化学的関心と規制措置　の概観」Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　＆　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，４３（３），１２７−１３１（１９８９）参照）。
　【０００６】
　アルカリ抽出性の低い中性ガラスまたはホウケイ酸塩ガラス（タイプＩのガラス）から製造された市販のガラスバイアル（またはアンプル）は標準表面処理を施されたケイ酸塩ガラス（アンモニウム塩または酸化イオウ処理：タイプＩＩのガラス）よりもアルミニウムの含有量が高い。すなわち、アルカリプルーフであることはガラスからのアルミニウム遊離の可能性とは直接関係ない。したがって、タイプＩのガラスよりもタイプＩＩの標準的市販ガラスを使用する方が好ましい。
　【０００７】
　比較的高い温度（これは２５乃至３５℃の環境温度と理解されたい）で貯蔵した場合に主に起こるアルミニウムの増加の問題は最近の技術でも解決されていない（Ｑｕａｇｌｉａｒｏ，Ｄ．Ａ．等「注射用アルブミン中のアルミニウム」Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　＆　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，４２（６），１８７−１９０（１９８８）参照）。
　【０００８】
　製造直後のみならず有効期限の終わりまでアルブミン溶液中のアルミニウム濃度レベルを２００ｐｐｂ（μｇ／ｌ）以下に保持するために、アルブミンは低温においてエタノールでヒト血漿を分画する方法すなわちコーンの方法（Ｃｏｈｎ　ｍｅｔｈｏｄ，Ｃｏｈｎ，Ｙ等：Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．６８，４５９−４７５（１９４６）のすべての工程において常に外部からのアルミニウム汚染を排除しながら製造されている（アルミニウムを含有していないまたは低アルミニウム含量の清澄濾過器の使用、酸性媒体中で予備洗滌された濾材の使用、新規に製造された酸またはアルカリ試薬の使用など）。アルブミンを取得するための出発物質としてフラクションＶ（Ｃｏｈｎの番号づけによる）を使用して限外濾過透析技術を導入するとアルミニウム濃度を２００ｐｐｂ（μｇ／ｌ）以下のレベルまで減少させることが可能である。この方法は、最初１９８７年にＳｃｏｔｔｉｓｈ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｂｌｏｏｄ　Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ　Ｓｅｒｖｉｃｅによって導入され（ＭｃＢａｙ，Ｗ．Ｅ．等、「アルミニウムとヒトアルブミン溶液」Ｂｒｉｔｉｓｈ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ，２９５，１０６２（１９８７）参照）、次にスイス赤十字と共同してＭｉｌｌｉｐｏｒｅ社によって導入された（内部情報）。このあと、類似の方法がＫａｂｉによって記載されている（国際特許願ＷＯ９１／００２９０）。
　【０００９】
　これらの方法は透析中に多価金属を一価金属でイオン交換してアルブミンから洗い出すことを基本とするものである。すなわち、アルミニウムのごとき金属イオンの量は、タンパク質（高分子量を有する）を保留し膜孔よりも小さいイオンまたは分子をふるい出すことできる１０ＫＤまたは３０ＫＤの分離膜を使用したダイアフィルトレーションによって減少させることができる。
　【００１０】
　この洗滌操作はアルミニウムのごとき多価金属の置換を可能にする一価イオン（たとえば塩化ナトリウム）の濃度を高くしておかなければ容易には実施できない。一価イオン（たとえば塩化ナトリウム）の濃度を一定に保持する１つの方法は一定容量での透析濾過の公知技術を使用することである。アルブミンの透析濾過のための現在の方法はアルミニウム（および他の物質）の濃度を２００ｐｐｂ以下にする目的で、かつまたＣｏｈｎの方法で出発物質として使用される分画であるフラクションＶ中に存在するであろうエタノールと過剰の塩類（塩化ナトリウムあるいは他の遊離低分子化合物）の濃度を減少させる目的で導入されたものである。この方法によりアルミニウムイオン濃度を２００ｐｐｂ以下まで減少させることは可能であり、一価イオンを有する塩（塩化ナトリウム）によって形成された透析溶液３容量を使用すれば５０ｐｐｂ以下の数値も達成可能である。
　【００１１】
　しかしながら、得られたアルミニウム濃度が２００ｐｐｂ（μｇ／ｌ）である溶液を溶液の最終容器（タイプＩガラスまたタイプＩＩガラスの溶液）に入れて室温（２５乃至３５℃）で貯蔵すると（安定性検定）、時間の経過につれてそのアルミニウム濃度は徐々に増加し、有効期限（たとえば３年間）の末日においては容易に規定限度の２００ｐｐｂ（μｇ／ｌ）を超過してしまう。
　したがって、主にアルブミンであるタンパク質溶液をガラス容器に入れて保存または貯蔵している間にアルミニウムが増加するという現象を技術的に解決する方法を見つけ出すという課題がいぜんとして残されていたのである。
　【００１２】
　本発明の目的は、通常の温度よりも高い温度（室温またはそれ以上の温度）で貯蔵することができる、または、その有効寿命または使用期限が長くなった、アルミニウム結合能の低いアルブミン製剤を提供することである。
　【００１３】
　本願発明以前には、（ガラス）容器からのアルミニウムの遊離はもっぱら金属を結合して運搬するアルブミンの能力のせいであり、したがって使用するガラスの組成または表面を変えること（非標準的特殊ガラスの製造）なしにはこの問題を解決することは不可能であると一般に信じられてきた。
　本発明者等によって行われた研究の結果、アルブミンをバイアル中に貯蔵している間のアルミニウム増加現象の原因となるものを明らかに提示することが可能となり、上記した不都合の克服された治療用ヒトアルブミンのための最終的製剤を開発することが可能となった。
　【００１４】
　治療用アルブミンを製造するための、新鮮または復元ヒト血漿は抗凝集剤溶液を含有しており、その抗凝集剤溶液の処方には常にクエン酸イオンが存在している。
　血漿分画間でのクエン酸（イオン）の分布を調べた結果、この陰イオンが相当量アルブミンの製造のための出発物質として使用されるフラクションＶ中に存在することが観察された（フラクションＶの分離のために使用される系によって異なるが、血漿中の初期クエン酸含量の約１０乃至２０％）。
　このクエン酸混入はＣｏｈｎの方法によって製造されたすべてのアルブミン溶液で起こり、出発物質のフラクションＶの溶液はダイアフィルトレーションにより２００ｐｐｂ以下あるいはさらに５０ｐｐｂまたはそれ以下の程度までアルミニウムを除去されているという事実にもかかわらず、最終製品（たとえばタンパク質２０％の製剤）の最終組成分中のクエン酸の通常濃度は１ミリモル／リットルを超えている。
　【００１５】
　本発明者等はガラス容器に貯蔵されたアルブミン溶液中に存在するクエン酸（出発物質として使用されるフラクションＶ中には常に存在する）がその溶液を入れたガラス容器からのアルミニウムの遊離を促進することを発見した。このことは実験的に証明されており、アルミニウムの遊離速度とクエン酸の濃度との間には対数関数的対応が見られる。したがって、クエン酸濃度をフラクションＶでの数値よりも低いレベルまで減少させるべきである。そのメカニズムは現在のところまだ良くわかっていないが、アルミニウムの遊離はアルブミン−クエン酸複合体間の平衡に基づくものであり、イオン電荷によりそれが解離すると、アルミニウムをガラスから移動させることのできる遊離クエン酸が増えるものと想定される。遊離クエン酸陰イオンの不存在では、アルブミンそれ自体ではアルミニウムを捕獲することはできない。これは、アルブミンが良好なキャリヤーでありそしていずれの多価金属とも強力に会合できるという事実にもかかわらず真実である。
　【００１６】
　これらの研究の結果として、本発明者等は、アルブミン溶液の最終組成物が、好ましくは、水性媒質中において、安定かつ等張であるようにタンパク質濃度５％、２０％または２５％、または、静脈内投与のために許容される他の治療的濃度に調整され、好ましくは標準的市販ガラス（タイプＩＩ）の容器（バイアル）に入れられ、その際のアルブミン溶液の最終組成物中のクエン酸含量が０．５ｍＭに等しいかまたはそれ以下、より好ましくは０．０３７ｍＭ以下であればアルミニウムの増加を顕著に低下させることができることを見いだした。
　【００１７】
　得られる製品は各種基準ならびに欧州の規定を満足しており、アルミニウム濃度は２００ｐｐｂ（μｇ／ｌ）以下、一般的にはその濃度は５０ｐｐｂ（μｇ／ｌ）以下である。すなわち、得られる製品は、各種貯蔵条件においてアルミニウムの最高含有濃度に関して定められた規定限度を超過することなく、２５±１０℃の温度で３年以上安定である。
　以下、本発明を非限定的実施例によってさらに詳細に説明する。
　【００１８】
　【実施例】
実施例１
　抗凝集剤としてＡＣＤ（クエン酸／デキストロース）を含有している新鮮な冷凍血漿の３つのグループをＣｏｈｎの方法によって分画しフラクションＶを得た。ダイアフィルトレーションして、調整無菌バルク中２０％タンパク質濃度となるように調整した後、各グループを無菌条件下で標準タイプＩＩガラス（ＢＳＮ社）の５０ｍｌ容器（首の直径２０ｍｍ）に入れて密封した。続いて、低温殺菌（６０℃で１０時間）と加速検疫隔離（３１℃で１４日間）にかけた。
　このあと、各バッチのクエン酸濃度を測定しアルミニウム加速遊離試験を実施した。すなわち、この２０％パックアルブミンを４５℃の温度に曝し、その時にアルブミン内へ遊離されるアルミニウムの量を調べた。アルミニウムの含有濃度はいずれの場合もいくつかの異なる曝露時間（貯蔵期間）後に測定された。
　得られた結果は表１に記載されている。また、図１には試験結果がそれぞれのクエン酸濃度における曝露時間とアルミニウム濃度（縦軸）との関係を表すグラフで示されている。
　【表１】
　【００１９】
　注目すべきことは、初期アルミニウム濃度（ｔ＝０）は同じオーダーであり、３つのケースともすべて非常に低い（２５ｐｐｂ以下）けれども、クエン酸濃度は３つのケースでかなり相違しており、これが高温（４５℃）の高温貯蔵期間中におけるアルミニウムの増加に直接関係していると思われることである。
　線形相関はすべてのケースで有意（主としてクエン酸０．７１ｍＭを含有するケースとクエン酸０．１２ｍＭを含有するケース）であり、それ故アルミニウム遊離速度の傾斜の相違もまた有意である。
　【００２０】
　アルブミン中にクエン酸が０．７１ｍＭ存在したケースではアルミニウム遊離速度は３．５９０６ｐｐｂ／日であり、他方、アルブミン中に存在するクエン酸濃度が＜０．０３７ｍＭであったケースでは、アルミニウム遊離速度は０．１４２２ｐｐｂ／日であり、この２つのケースの間ではクエン酸濃度の差にともなってアルミニウム遊離速度には３．５９０６／０．１４２２＝
２５倍
　【００２１】
実施例２
　安定剤（カプリル酸ナトリウムとトリプトファンナトリウム）ならびに等張剤（塩化ナトリウム）によって安定化され、中性ｐＨに調整された最終的アルブミンの各種バッチを濾過して無菌化した。
　各溶液を２等分して無菌条件下で５０ｍｌ容器（首の直径２０ｍｍ）に入れた。容器の一方のグループは標準的な市販のタイプＩＩガラス（ＢＳＮ社）の容器でありそして他方のグループは特殊な表面処理（メタ重亜硫酸塩）を受けたガラスであった。これら容器内のクエン酸濃度とアルミニウム濃度を測定したところ、処理された３つのバッチのアルブミン製剤中のクエン酸濃度は技術的定量限界以下（＜０．０１１ｇ／ｌすなわち＜０．０３７ｍＭ）であった。これらのバッチを４５℃の温度の加速アルミニウム遊離試験にかけた。各バッチから試料を取って時間の経過にともなうアルミニウム遊離の量を測定した。
　得られた結果は次表に示すとおりであった。
　【表２】
　【００２２】
　異なるガラス表面処理を受けた２つのグループのガラス容器を使用した動的アルミニウム遊離試験で得られた線形相関と遊離速度のグラフ曲線の傾斜が僅差であることを考慮すると、クエン酸の存在量が十分に減少されたレベル（技術的検出限界＜０．０１１ｇ／ｌ近辺）であるならば、ガラスの種類はアルミニウムの遊離速度の決定的ファクターとはならないとの結論に到達する。
　【００２３】
実施例３
　それぞれ０．０１６Ｍのカプリル酸ナトリウムとトリプトファンナトリウムで安定化された、タンパク質含量２０％、塩化ナトリウム０．１５Ｍを含有しｐＨ７．０±０．２に調整された同じ最終アルブミン溶液を０．２２μｍ膜を使用して濾過して無菌化した。
　この溶液を５０ｍｌタイプＩＩガラス容器に入れ、これに既知量のクエン酸ナトリウムを添加しそして６０℃で１０時間加熱殺菌した。これらの溶液を４５℃で貯蔵することにより加速アルミニウム遊離試験にかけた。
　表３に記載した期間後、試料を採取してアルミニウム濃度を測定した。
　【表３】
　【００２４】
　この試験結果はアルブミンとガラス容器が同じバッチに対して計画的に添加されたクエン酸がアルミニウムの加速遊離に及ぼす作用を明確に示している。同様に、この表はクエン酸濃度が＜０．０３７ｍＭのアルブミン溶液とクエン酸濃度が１．８ｍＭのアルブミン溶液との間の４５℃、１５０日貯蔵後の最終アルミニウム濃度レベルの顕著な差を明確に示している。すなわち、前者のアルミニウム濃度は４３．６ｐｐｂであるのに対して、後者のアルミニウム濃度は７２１．６ｐｐｂである。したがって、クエン酸すなわちクエン酸残基のわずかな混入があってもアルミニウムの遊離が大いに促進されることがわかる。
【図面の簡単な説明】
　【図１】
　５０ｍｌタイプＩＩガラス容器に入れた２０％ヒトアルブミン組成物を加速アルミニウム遊離試験（４５℃）にかけた時に得られたクエン酸濃度とアルミニウム遊離速度との関係を示すグラフである。