(57)【要約】  Ｎｒｆ２調節経路に関連する疾病、疾患、又は病気を治療するあるいは防止する化合物及び方法であって、対象の、自己免疫疾患、網膜症や腎症などの糖尿病関連併存疾患、白血病および関連する癌の骨髄移植、骨髄欠損、先天性代謝異常、その他の免疫疾患、酸化的ストレス、呼吸器感染、虚血、神経変性疾患、放射線損傷、化学療法による好中球減少、自己免疫性および先天性好中球減少疾患を含む、疾病、疾患、又は病気を治療あるいは防止し、コルチコステロイド反応性を回復させる化合物及び方法を提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学式（Ｉａ）：
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を特徴とする化合物であって、
ここで、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４及びＲ５は、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４及びＲ５の少なくとも一つがアルコキシル基であるとの条件で、それぞれ、Ｈとアルコキシル基からなる群から個別に選択され、
Ｒ６とＲ７は、Ｒ６とＲ７の少なくとも一方がＣＦ３又はＮＯ２であるとの条件で、それぞれ、Ｈ，ＣＦ３及びＮＯ２からなる群から個別に選択され、
Ｒ８はＨであり、
Ｒ６又はＲ７がＣＦ３であれば、Ｒ１とＲ３、又はＲ２とＲ３，またはＲ１とＲ４は両方がアルコキシル基にならないとの更なる仮定の下、
化学式（Ｉａ）の化合物とその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物において、化学式（Ｉａ）の化合物が、以下の化学式：
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からなる群から選択されたものである化合物と、その薬学的に許容可能な塩であることを特徴とする化合物。
【請求項３】
請求項２に記載の化合物において、化学式（Ｉａ）の化合物が、以下の化学式：
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からなる群から選択される化合物と、その薬学的に許容可能な塩であることを特徴とする化合物。
【請求項４】
請求項３に記載の化合物において、化学式（Ｉａ）の化合物が、以下の化学式：
2014510064.tif 000024
からなる群から選択されたものである化合物と、その薬学的に許容可能な塩であることを特徴とする化合物。
【請求項５】
請求項４に記載の化合物において、化学式（Ｉａ）の化合物が、以下の化学式：
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である化合物と、その薬学的に許容可能な塩であることを特徴とする化合物。
【請求項６】
化学式（Ｉａ）の化合物を含む医薬組成物と、その薬学的に許容可能な塩。
【請求項７】
請求項６に記載の医薬組成物が更に、副腎皮質コステロイド、抗生物質、及びこれらの組み合わせからなる群から選択した一またはそれ以上の化学物質を含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項８】
請求項７に記載の医薬組成物において、前記副腎皮質コステロイドが、デキサメタゾン、フルニソリド、フルチカゾンプロピオン酸エステル、トリアムシノロンアセトニド、ベクロメタゾンジプロピオネート、ブデソニド、プレドニゾン、プレドニゾロン、及びメチルプレドニゾロンからなる群から選択されることを特徴とする医薬組成物。
【請求項９】
請求項７に記載の医薬組成物において、当該医薬組成物が吸入又は経口投与用に製剤されていることを特徴とする医薬組成物。
【請求項１０】
Ｎｒｆ２で調整した経路に関連する疾病、疾患、又は病気を治療又は防止する方法において、化学式（Ｉｂ）の化合物及びその薬学的に許容可能な塩：
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ここで、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４及びＲ５は、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４及びＲ５の少なくとも一つがアルコキシル基であるとの条件で、それぞれ、Ｈとアルコキシル基からなる群から個別に選択され、
Ｒ６，Ｒ７及びＲ８は、Ｒ６，Ｒ７及びＲ８の少なくとも一つがＣＦ３又はＮＯ２であるとの条件で、それぞれ、Ｈ，ＣＦ３及びＮＯ２からなる群から個別に選択される：
を、Ｎｒｆ２生物活性、又はＮｒｆ２発現を増やすのに有効量、対象に投与するステップと、これによって前記疾病、疾患又は病気を治療又は防止する方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法において、化学式（Ｉｂ）の化合物が：
2014510064.tif 000027
から選択された化合物と、その薬学的に許容可能な塩であることを特徴とする方法。
【請求項１２】
請求項１０に記載の方法において、化学式（Ｉｂ）の化合物が：
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から選択された化合物と、その薬学的に許容可能な塩であることを特徴とする方法。
【請求項１３】
請求項１０に記載の方法において、、化学式（Ｉｂ）の化合物が：
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から選択された化合物と、その薬学的に許容可能な塩であることを特徴とする方法。
【請求項１４】
請求項１１に記載の方法において、化学式（Ｉｂ）の化合物が：
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である化合物と、その薬学的に許容可能な塩であることを特徴とする方法。
【請求項１５】
請求項１０に記載の方法において、前記疾病、疾患、又は病気が自己免疫疾患であることを特徴とする方法。
【請求項１６】
請求項１５に記載の方法において、前記自己免疫疾患が、急性移植片対宿主病、自己免疫内耳疾患、炎症性腸疾患、リウマチ性関節炎、乾癬、乾癬性関節炎、多発性硬化症、強皮症、紅斑性狼瘡、強直性脊椎炎、好中球減少症、ブドウ膜炎からなる群から選択されることを特徴とする方法。
【請求項１７】
請求項１０に記載の方法において、前記疾病、疾患、又は病気が、糖尿病に併存する疾患に関連するであることを特徴とする方法。
【請求項１８】
請求項１７に記載の方法において、前記糖尿病に併存する疾患に関連する疾病、疾患、又は病気が、網膜症と腎症からなる群から選択されることを特徴とする方法。
【請求項１９】
請求項１０に記載の方法において、前記疾病、疾患、又は病気が、白血病とそれに関連する癌、骨髄機能不全、先天性代謝異常、及び免疫疾患のための骨髄移植の予後の改善に関連することを特徴とする方法。
【請求項２０】
請求項１０に記載の方法において、前記疾病、疾患、又は病気が、参加的ストレスに関連することを特徴とする方法。
【請求項２１】
請求項２０に記載の方法において、前記参加的ストレスに関連する疾病、疾患、又は病気が、炎症性肺疾患、間質性肺線維症、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、肺気腫、敗血症、敗血性ショック、髄膜炎、脳炎、出血、虚血性障害、脳虚血、心筋虚血、認知障害、及び神経変性疾患、からなる群から選択されることを特徴とする方法。
【請求項２２】
請求項２０に記載の方法において、当該方法が、上皮下線維症、粘液化生、または気道リモデリングに関連する構造的変化、を低減することを特徴とする方法。
【請求項２３】
請求項２１に記載の方法において、前記神経変性疾患が、アルツハイマー疾患（ＡＤ）、クロイツフェルト・ヤコブ病、ハンチントン病、レビー小体病、ピック病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、神経線維腫症、及び認知障害からなる群から選択されることを特徴とする方法。
【請求項２４】
請求項２１に記載の方法において、当該方法が、虚血性障害の後の細胞死を防止又は低減することを特徴とする方法。
【請求項２５】
請求項２４に記載の方法において、当該方法が、対象の神経組織の細胞死を低減することを特徴とする方法。
【請求項２６】
請求項１０に記載の方法において、当該方法が、対象のコルチコステロイド反応を回復させることを特徴とする方法。
【請求項２７】
請求項２６に記載の方法において、前記対象が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、重度の喘息、急性移植片対宿主疾患、自己免疫内耳疾患、炎症性腸疾患、及びリウマチ性関節炎からなる群から選択された疾病、疾患、又は病気を発症するリスクがあることを特徴とする方法。
【請求項２８】
請求項２６に記載の方法が更に、化学式（Ｉｂ）の化合物と組み合わせてコルチコステロイドを対象に投与するステップを具えることを特徴とする方法。
【請求項２９】
請求項２８に記載の方法において、前記コルチコステロイドが、デキサメタゾン、フルニソリド、フルチカゾンプロピオン酸エステル、トリアムシノロンアセトニド、ベクロメタゾンジプロピオネート、ブデソニド、プレドニゾン、プレドニゾロン、及びメチルプレドニゾロンからなる群から選択されることを特徴とする方法。
【請求項３０】
請求項１０に記載の方法において、前記疾病、疾患、又は病気が、呼吸器感染を含むことを特徴とする方法。
【請求項３１】
請求項３０に記載の方法において、前記対象が、急性呼吸器感染、慢性気管支炎、嚢胞性線維症、及び免疫疾患症候群からなる群から選択された疾病、疾患、又は病気に罹患するリスクがあることを特徴とする方法。
【請求項３２】
請求項３０に記載の方法において、前記対象が喫煙者であるあるいはあった、肺気腫である、あるいはＣＯＰＤであることを特徴とする方法。
【請求項３３】
請求項３０に記載の方法において、前記呼吸器感染が、緑膿菌、無莢膜型のインフルエンザ菌、モラクセラ・カタラーリス、肺炎レンサ球菌、黄色ブドウ球菌、ライノウイルス、コロナウイルス、インフルエンザＡ及びＢ、パラインフルエンザ、アデノウイルス、及び呼吸系発疹ウイルスからなる群から選択された感染性因子に関連することを特徴とする方法。
【請求項３４】
請求項３０に記載の方法が更に、対象の組織又は器官内の細菌定着を治療又は防止するステップを具えることを特徴とする方法。
【請求項３５】
請求項３４に記載の方法において、前記組織が粘膜であることを特徴とする方法。
【請求項３６】
請求項３４に記載の方法において、前記器官が肺であることを特徴とする方法。
【請求項３７】
請求項３４に記載の方法が更に、化学式（Ｉｂ）の化合物と組み合わせて、抗生物質を投与するステップを具えることを特徴とする方法。
【請求項３８】
請求項３０に記載の方法において、化学式（Ｉｂ）の化合物の投与が、マクロファージによる細菌排除を高めることを特徴とする方法。
【請求項３９】
請求項１０に記載の方法において、前記方法が、対象の放射線障害又は化学療法障害を治療又は防止するステップを具えることを特徴とする方法。
【請求項４０】
請求項３９に記載の方法において、当該方法が、造血症候群、胃腸症候群、脳血管症候群、脳脊髄損傷、肺疾患の影響、敗血症、腎不全、肺炎、粘膜炎、線維症、皮膚損傷、好中球減少症、柔組織への影響からなる群から選択された粘膜関門を治療又は防止するステップを具えることを特徴とする方法。
【請求項４１】
請求項４０に記載の方法において、当該方法が、骨髄の形成不全又は無形成、汎血球減少症、炎症体質、出血、創傷治癒の遅延からなる群から選択された造血症候群の症状を治療又は防止することを特徴とする方法。
【請求項４２】
請求項４０に記載の方法において、当該方法が、腸陰窩の欠損、粘膜関門の破壊、腹痛、下痢、むかつき、嘔吐からなる群から選択された胃腸症候群の症状を治療又は防止するステップを具えることを特徴とする方法。
【請求項４３】
請求項３９に記載の方法において、当該方法が、放射線火傷からの皮膚損傷を治療又は防止するステップを具えることを特徴とする方法。
【請求項４４】
請求項４３に記載の方法において、前記皮膚損傷が、上皮の欠損、真皮の欠損、筋肉の欠損、及び骨の欠損からなる群から選択されることを特徴とする方法。
【請求項４５】
請求項３９に記載の方法において、当該方法が、放射線治療に関連する肺線維症又は食堂損傷を防止することを特徴とする方法。
【請求項４６】
請求項３９に記載の方法において、当該方法が、炎症を治療又は防止することを特徴とする方法。
【請求項４７】
請求項３９に記載の方法において、前記放射線損傷が、放射線治療、事故による放射線被ばく、および核攻撃からなる群から選択された一またはそれ以上の放射線暴露事象から生じた放射線暴露に関連することを特徴とする方法。
【請求項４８】
請求項３９に記載の方法において、当該方法が、肺細胞、内皮細胞、肺内皮細胞、平滑筋細胞、上皮細胞、肺胞細胞からなる群から選択された細胞の細胞死又は損傷を防止することを特徴とする方法。
【請求項４９】
請求項３９に記載の方法において、前記化学式（Ｉｂ）の化合物が、放射線損傷の前、間、又は後に投与されることを特徴とする方法。
【請求項５０】
請求項４９に記載の方法において、前記化学式（Ｉｂ）の化合物が、対象が放射線に暴露された後、約１時間乃至１２時間の間に投与されることを特徴とする方法。
【請求項５１】
請求項４９に記載の方法において、前記化学式（Ｉｂ）の化合物が、対象が放射線に暴露される前に投与されることを特徴とする方法。
【請求項５２】
請求項１０に記載の方法において、前記疾病、疾患、又は病気が好中球減少であることを特徴とする方法。
【請求項５３】
請求項５２に記載の方法において、前記好中球減少が、化学療法、自己免疫、先天性好中球減少症からなる群から選択された病気によって生じることを特徴とする方法。
【請求項５４】
請求項１０に記載の方法において、当該方法が、Ｎｒｆ２の転写又は翻訳を上げることを特徴とする方法。
【請求項５５】
請求項１０に記載の方法において、前記化学式（Ｉｂ）の化合物が、抗酸化反応エレメント（ＡＲＥ）との結合、核内蓄積、及び目的遺伝子の転写誘導からなる群から選択されたＮｒｆ２の生物活性を上げることを特徴とする方法。
【請求項５６】
請求項５５に記載の方法において、前記Ｎｒｆ２目的遺伝子が、ＭＡＲＣＯ、ＨＯ−１、ＮＱＯ１、ＧＣＬｍ、ＧＳＴα１、ＴｒｘＲ５Ｐｘｒ１、ＧＳＲ５、Ｇ６ＰＤＨ、γＧＣＬｍ、ＧＣＬｃ、Ｇ６ＰＤ、ＧＳＴα３、ＧＳＴｐ２、ＳＯＤ２、ＳＯＤ３、及びＧＳＲからなる群から選択されることを特徴とする方法。
【請求項５７】
請求項１０に記載の方法において、前記化学式（Ｉｂ）の化合物が、Ｎｒｆ２のＫｅａｐ１抑制を低減することを特徴とする方法。
【請求項５８】
請求項５７に記載の方法において、前記化学式（Ｉｂ）の化合物が、Ｎｒｆ２とのＫｅａｐ１結合を妨害することを特徴とする方法。
【請求項５９】
放射線損傷を治療又は防止するキットにおいて、治療的有効量の化学式（Ｉａ）の化合物と、前記キットの使用指示書を具えることを特徴とするキット。
【請求項６０】
Ｎｒｆ２の生物活性又はＮｒｆ２の発現を高めるのに有効な量の化学式（Ｉａ）の化合物を含む一またはそれ以上の粒子を分散させ、対象の肺組織にある当量の当該粒子を送達するデバイス。
【請求項６１】
請求項６０に記載のデバイスにおいて、当該デバイスが、吸入器、定量吸入器、ドライパウダー吸入器からなる群から選択されることを特徴とするデバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
〔関連発明の相互参照〕
本出願は、２０１１年２月２５日に出願された米国仮出願番号第６１／４４６，７１６号及び２０１１年６月２３日に出願された米国仮出願番号第６１／５００，２７２号に対する優先権を主張するものであり、各出願は全体が参照として本明細書に組み込まれている。
【０００２】
〔連邦支援の研究開発〕
本発明は、国立衛生研究所による助成ＨＬ０８１２０５及びＡＩ０８０５４１の下に政府支援によりなされたものである。
【背景技術】
【０００３】
核因子赤血球−２関連因子２（Ｎｒｆ２）は、基本的なロイジッパー転写因子であり、細胞酸化還元ホメオスタシスを維持する転写プログラムを調整し、酸化外傷から細胞を保護する。Ｎｒｆ２は、これらの遺伝子プロモータに基づいた、抗酸化剤応答配列（ＡＲＥ）への特異的結合により標的遺伝子の転写を開始する。Ｎｒｆ２調整転写プログラムは、γ−グルタミルシステイン合成酵素修飾因子サブユニット（ＧＣＬｍ）、γ−グルタミルシステイン合成触媒サブユニット（ＧＣＬｃ）、ヘム細胞再生−１、過酸化物不均化酵素、グルタチオン還元酵素（ＧＳＲ）、グルタチオン過酸化酵素、チオレドキシン、チオレドキシン還元酵素、ペルオキシレドキシン（ＰＲＤＸ）、システイングルタミン酸塩トランスポータ（ＳＬＣ７Ａ１１）、相互解毒酵素（ＮＡＤＰ（Ｈ））キノン酸化還元酵素（ＮＱＯ１）、ＧＳＴ，ＵＤＰ−グルコルシル転写酵素、及びＭＲＰ１とＭＲＰ２を含む幾つかのＡＴＰ依存薬物流出ポンプを初めとする、広範囲の遺伝子スペクトルを含む。
【０００４】
Ｎｒｆ２は、ＡＲＥ関連解毒作用、抗酸化遺伝子、防衛システムに必要な分子を強調的に発現増加させて細胞と多数の組織を保護する。Ｎｒｆ２−活性化は、酸化ストレスと炎症を抑制し、神経を保護することを示している。従って、Ｎｒｆ２生物学的活性と発現を増大させる治療戦略を用いて、神経変性異常を含む酸化ストレスに関連した疾病、障害、又は疾患を治療又は防止できる。
【発明の概要】
【０００５】
いくつかの態様において、ここに開示された主題は、Ｎｒｆ２調整経路に関連する疾病、障害、又は疾患を治療又は防止する、及びコルチコステロイド応答性を回復させる化合物と方法を提供するものである。この疾病、障害、又は疾患には、網膜症と腎症、白血病とそれに関連する癌の骨髄移植、骨髄機能不全、先天性代謝異常、及びその他の免疫不全、参加ストレス、呼吸器感染、虚血、神経変性疾患、放射線傷害、化学療法傷害、化学療法、好中球減少障害に起因する好中球減少症が含まれる。
【０００６】
特定の態様において、ここに開示された主題は、式（Ｉａ）で表される化合物と、その薬学的に許容可能な塩を提供する。
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ここで、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４及びＲ５は、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４及びＲ５の少なくとも一つがアルコキシル基であるとの条件で、それぞれ、Ｈとアルコキシル基からなる群から個別に選択され、
Ｒ６，Ｒ７及びＲ８は、Ｒ６とＲ７の少なくとも一方がＣＦ３又はＮＯ２であるとの条件で、それぞれ、Ｈ，ＣＦ３及びＮＯ２からなる群から個別に選択され、
Ｒ６又はＲ７がＣＦ３であれば、Ｒ１とＲ３、又はＲ２とＲ３，またはＲ１とＲ４は両方がアルコキシル基にならないとの更なる仮定の下、Ｒ８はＨである。
【０００７】
別の態様において、ここに開示した主題は、Ｎｒｆ２調節経路に関連する疾病、障害、又は疾患を治療又は防ぐ方法を提供する。この方法は、Ｎｒｆ２の生物学的活性又はＮｒｆ２発現を増加させるのに有効な量の式（Ｉｂ）で示す化合物と、その薬学的に許容可能な塩を被験者に投与して、これにより疾病、障害、又は疾患を治療又は防ぐステップを具える。
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ここで、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４及びＲ５は、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４及びＲ５の少なくとも一つがアルコキシル基であるとの条件で、それぞれ、Ｈとアルコキシル基からなる群から個別に選択され、
Ｒ６，Ｒ７及びＲ８は、Ｒ６，Ｒ７，及びＲ８の少なくとも一つがＣＦ３又はＮＯ２であるとの条件で、それぞれ、Ｈ，ＣＦ３及びＮＯ２からなる群から個別に選択される。
【０００８】
いくつかの態様において、この疾病、障害、又は疾患は自己免疫疾患である。特定の態様において、この自己免疫疾患は、移植片対宿主疾患、自己免疫内耳疾患、炎症性腸疾患、リウマチ性関節炎、乾癬、乾癬性関節炎、多発性硬化症、強皮症、狼瘡、強直性脊椎炎、好中球減少症、及びぶどう膜炎から成る群から選択される。
【０００９】
その他の態様において、ここに開示した主題は、網膜症と腎症を含むがこれに限定されない糖尿病に関連する併存疾患を治療又は防ぐ化合物と方法を提供する。
【００１０】
さらなる態様において、ここに開示した主題は、白血病とこれに関連する癌の骨髄移植の転帰を改善し、骨髄機能不全、先天性代謝異常、及び免疫不全を治療する組成物及び方法を提供する。
【００１１】
所定の実施形態において、疾病、障害、又は疾患は、酸化ストレス、例えば肺炎症、肺繊維症、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺気腫、敗血症、敗血性ショック、髄膜炎、脳炎、出血、虚血障害、脳虚血、心臓虚血、認知障害、及び神経変性症に関連する。
【００１２】
さらなる態様において、ここに開示した方法は、被験者、例えば、例えば、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、重症喘息、急性移植片対宿主病、自己免疫内耳疾患、炎症性腸疾患、及びリウマチ性関節炎から成る群から選択された疾病、障害、又は疾患を持つ、あるいは発症する危険がある被験者のコルチコステロイド応答性回復させる。
【００１３】
さらなる他の態様において、この疾病、障害、又は疾患は、例えば、急性呼吸器感染、慢性気管支炎、嚢胞性線維症、及び免疫不全症候群から成る群から選択された疾病、障害、又は疾患をもつ、あるいは発症する危険がある被験者の呼吸器感染症を含む。
【００１４】
さらなる態様において、ここに開示した方法は、例えば、放射線治療、不慮の放射線被曝、又は核攻撃によって生じる放射線障害を持つ被験者の放射線障害を治療又は防ぐ方法を含む。
【００１５】
いくつかの態様において、ここに開示した主題は、化学療法に起因する好中球減少症、自己免疫疾患、及び先天性好中球減少異常の被験者を治療する方法を提供する。
【００１６】
その他の態様において、ここに開示した主題は、放射線障害を治療する又は防ぐキットを提供する。このキットは、治療的有効量の式（Ｉａ）の化合物と、当該キットを使用するための指示書を具える。
【００１７】
さらなるその他の態様において、ここに開示した主題は、Ｎｒｆ２の生物学的活性及びＮｒｆ２の発現を増大させるに有効量の式（Ｉａ）の化合物を含む１またはそれ以上の粒子を分散させ、被験者の肺組織に投与量の粒子を送達する装置を提供する。いくつかの態様において、この装置は、噴霧器、計量式吸入器、又は乾燥粉末吸入器である。
【００１８】
上述したここに開示した主題の所定の態様は、ここに開示した主題によって全体的又は部分的に対処され、その他の態様は、以下に最も良く記載された実施例と図面を参照して記載を読むと明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
一般的な用語でここに開示した主題を記載したので、必ずしも実寸で描かれていない添付図面を以下に説明をする。
【００２０】
【図１】図１は、カルコン誘導体の構造的活性関係を示す。
【図２】図２は、ここに開示したカルコン誘導体を用いて治療した後の小腸のＮｒｆ２調節遺伝子の発現を示す。マウス（ｎ＝４）には、強制飼養によって、ビークル（ＤＣＰ−１０％  ＤＭＳＯ＋１０％発色団＋８０％リン酸緩衝性食塩水）又はカルコン誘導体又はスルホラファン（５０ｍｇ／ｋｇ体重）を与え、２４時間後に小腸を採取した。Ｎｒｆ２調節遺伝子ＧＣＬＭとＮＱＯ１の発現は、Ｎｒｆ２活性の代理マーカとしてのｑＲＴ−ＰＣＲにより組織内で分析した。βアクチンを標準化に用いた。データは３つの個々の発現を示している。ここに示した値は、三倍ウェル（Ｐ≦０．０５）の±ＳＤ平均である。
【図３】図３は、化合物２ａで処置した後のＮＱＯ１−ＡＲＥルシフェラーゼ活性のレベルを示す。ＮＱＯ１−ＡＲＥルシフェラーゼ活性は、化合物２ｂ又はスルフォラファン（ＳＦＮ）又はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で処置した後、安定的にトランスフェクトしたＢｅａｓ−２Ｂを用いて測定した。化合物２ｂに暴露した結果、相対発光輝度（ＲＬＩ）としてのルシフェラーゼ活性に著しい濃度依存増大が生じた。データは、３つの個々の実験を示す。ここに示した値は、三倍ウェル（Ｐ≦０．０５）の±ＳＤ平均である。
【図４】図４は、化合物２ｂで処置した後のＮｒｆ２調節遺伝子の発現を示す。ヒトの気管支上皮細胞（Ｂｅａｓ−２Ｂ）を１６〜２０時間、表示した濃度で処置した。Ｎｒｆ２調節遺伝子ＧＣＬＭ，ＨＯ１，及びＮＱＯ１の発現を、Ｎｒｆ２活性の代理マーカとしてのｑＲＴ−ＰＣＴにより組織内で分析した。βアクチンを標準化に用いた。データは、３つの個々の実験を示す。ここに示した値は、三倍ウェル（Ｐ≦０．０５）の±ＳＤ平均である。
【図５】図５は、化合物２ｂで処置した後のＮｒｆ２調節遺伝子の時間に依存した増加を示す。ヒトの気管支上皮細胞（Ｂｅａｓ−２Ｂ）を様々な時点で化合物（１０μＭ）で処置した。Ｎｒｆ２調節遺伝子ＧＣＬＭ，ＨＯ１，及びＮＱＯ１の発現をａＲＴ−ＰＣＲによって組織内で分析した。βアクチンを標準化に用いた。データは、３つの個々の実験を示す。ここに示した値は、三倍ウェル（Ｐ≦０．０５）の±ＳＤ平均である。
【図６】図６は、化合物２ｂによるＮｒｆ２遺伝子の活性が、活性酸素種（ＲＯＳ）生成と無関係であることを示す。ヒトの気管支上皮細胞（Ｂｅａｓ−２Ｂ）を、抗酸化剤Ｎ−アセチルシステイン（１０ｍＭＮＡＣ）の存在下で化合物２ｂ（１０μＭ）を用いて処置した。処置後と、ＮＱＯ１，ＨＯ−１，及びＧＣＬＭのＮｒｆ２主導による発現の２４時間後に、細胞を採取した。βアクチンを標準化に用いた。データは、３つの個々の実験を示す。ここに示した値は、三倍ウェル（Ｐ≦０．０５）の±ＳＤ平均である。
【図７】図７は、全身照射（７．６Ｇｙ）の１時間後に、化合物２ｂで処置したマウスの生存率を示す。１回目の照射後、４８時間毎に化合物２ｂ又はビークルを追加で５回投与した。死亡率を３０日間監視した（ｎ＝１０マウス／ｇｐ）。
【図８】図８Ａは、細胞中のＮｒｆ２の調節を図で示し、図８Ｂは、その他の遺伝子を上方制御する際のＮｒｆ２の役割を示す（従来技術）。
【図９】図９Ａと９Ｂは、６．９Ｇｙ（Ａ）と７．１Ｇｙ（Ｂ）の照射量で全身照射した後のマウスの生存率と、照射後２４時間で化合物２ｂ又はビークル（ＰＥＧ−２００）を投与したマウスの生存率を示す。
【図１０】図１０は、７．３Ｇｙ照射量で全身照射した後のマウスの生存率と、照射後１時間、６時間、又は２４時間に化合物２ｂ又はビークルを投与したマウスの生存率を示す。
【図１１】図１１Ａ〜１１Ｃは、６．９Ｇｙ照射量で全身照射した後の造血回復と、照射後２４時間に化合物２ｂ又はビークルを投与した場合の造血回復を示す。造血回復は、図１１Ａでは白血球細胞、好中球、及びリンパ級の縦モード分析により示されており、図１１Ｂでは、照射後２２日目に計数した全白血球細胞数、赤血球細胞数、及び血小板計数により示されており、図１１Ｃでは、照射後７日目と２１日目に骨髄の細胞充実性についてのＨ＆Ｅ染色による病理組織学的分析によって示されている。
【図１２】図１２Ａは、骨髄単核細胞中の、図１２Ｂは肺組織中の、図１２Ｃは、小腸組織中の、Ｎｒｆ２活性（ＮＱＯ１，ＨＯ−１，ＧＣＬＭ）マーカの分析を示す。
【図１３】図１３Ａは、６．９Ｇｙでの照射量で全身照射し、化合物２ｂ又はビークル投与後の全骨髄単核細胞のレベルを示し、図１２Ｂは、ＦＡＣＳ分析による造血幹細胞の部分母集団頻度を示し、図１２Ｃは、生存造血幹細胞の全数を示す。
【図１４】図１４は、可逆性好中球減少を誘発したマウスへの化合物２ｂの効果を示す。好中球は、表示の時間に末梢血中で分析した。
【図１５】図１５Ａと１５Ｂは、自己免疫脳脊髄炎を誘発したマウスへの化合物２ｂの効果を示す。マウスは、化合物２ｂの予防効果（図１５Ａ）と、治療効果（図１５Ｂ）について評価した。
【図１６】図１６Ａと１６Ｂは、喘息を誘発したマウスへの化合物２ｂの効果を示す。マウスは、気道炎症（図１６Ａ）と、気道過敏性（図１６Ｂ）について評価した。
【図１７】図１７は、マウスマクロファージのバクテリア駆除能力についての化合物２ｂの効果を示す。
【図１８】図１８は、リポ多糖類で誘発した炎症を抑制するマウスマクロファージの能力についての化合物２ｂの効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
ここに開示した主題を添付図面を参照して以下に詳細に説明する。ここで、ここに開示した主題の全てではないが幾つかの実施形態を説明する。説明全体を通じて同じ参照符号は同じ構成要素を示す。ここに開示した主題は、様々な形態で実施することができ、ここで開示した実施形態に限定されるものと解釈すべきでない。むしろこれらの実施形態は、この開示が適用可能な法的要件を満たすように説明される。事実、ここに開示した主題の多くの変形例及びその他の実施形態はここに開示した主題の技術分野に属し、上記の説明と添付図面に示した教示の恩恵を受ける当業者が思いつく。従って、ここに開示した主題は、開示した特定の実施形態に制限されず、変形例とその他の実施形態も添付した特許請求の範囲の権利範囲に含むことを意図していることを理解すべきである。
【００２２】
核内因子赤血球系２ｐ４５関連因子２（Ｎｒｆ２）は、活性酸素からの細胞の保護と幾つかの細胞保護経路の増大による炎症を保護する際に中心的役割を果たす。このような細胞保護経路としては、フリーラジカルを除去し分解する抗酸化酵素が挙げられる。フェーズＩＩ酵素は求電子試薬を解毒し、プロテアソーム系は損傷を受けたタンパク質を除去する。Ｎｒｆ２欠乏マウスは、活性酸素により敏感で、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、放射線誘発正常組織傷害、及び神経変性疾患を含む、幾つかの炎症性疾患の重症化を示す。Ｎｒｆ２の活性化によって参加ストレスと炎症を抑制することで、これらの疾患に関連する炎症を防ぐ。従って、Ｎｒｆ２は、活性酸素に関連した異常の治療の有望な創薬標的であり、炎症を抑制することで自己免疫疾患を防ぐ。
【００２３】
いくつかの実施形態において、ここに開示した主題は、Ｎｒｆ２を活性化するカルコン誘導体を提供し、マウス組織中の抗酸化及び抗炎症防御を上げる。以下に詳述するように、ここに開示した化合物は、自己免疫疾患、網膜症、腎傷害、白血病とこれに関連する癌のための骨髄移植、骨髄機能不全、先天性代謝異常、及びその他の免疫不全、酸化ストレス、呼吸器感染症、局所貧血、神経変性疾患、放射線傷害、化学療法に起因する好中球減少、自己免疫、先天性好中球減少病等の、糖尿病に関連する合併症を治療又は防ぐ、及びコルチコステロイド応答性の回復に用いることができる。
【００２４】
１．Ｎｒｆ２活性化因子としてのカルコン誘導体
抗酸化応答配列（ＡＲＥ）のＮｒｆ２が媒介する活性化は、フェーズＩＩデトックスの保護機能を支配する分子機構と活性酸素と炎症に対する抗酸化酵素を中心的部分である。「Ｎｒｆ２ポリペプチド」は、タンパク質又は変異タンパク質、或いはその断片を意味し、少なくとも遺伝子データバンクのアクセス番号ＮＰＪ３０６１６４（ヒト核因子（赤血球系誘導２）様２）と実質的に同じアミノ酸配列を含み、Ｎｒｆ２生物学的活性（例えば、抗酸化剤応答配列（ＡＲＥ）への結合による標的遺伝子の活性化、抗酸化剤の発現の調節、及び異物代謝遺伝子）を持つ。
【００２５】
Ｎｒｆ２は、その抑制因子であるＫｅａｐによって細胞質中に配列されている。各種誘導体、特に、Ｍｉｃｈａｅｌ受容体によるＫｅａｐ１中のシステイン残渣物の変異により，Ｋｅａｐ１をＮｒｆ２から解離させる配座が変わり、これにより核へのＮｒｆ２の展座が誘発される。「Ｋｅａｐ１ポリペプチド」は、遺伝子データバンクのアクセス番号ＡＡＨ２１９５７と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを意味する。「Ｋｅａｐ１核酸分子」は、Ｋｅａｐ１ポリペプチド又はその断片をエンコードする核酸分子を意味する。
【００２６】
代表的なＮｒｆ２調節遺伝子機能を表１にまとめる。
2014510064.tif 000005
【００２７】
カルコンすなわち１，２−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２-ｐｒｏｐｅｎ−１−ｏｎｅｓは、広範囲の生物学的特性を有すると報告されているＭｉｃｈａｅｌ受容体である、ここに開示した主題は、一連のカルコン誘導体の合成を開示しており、これはヒトの気管支上皮細胞のＮｒｆ２活性に試験した。正のＮｒｆ２活性を示す８つのカルコン誘導体が決定され、マウスモデルでさらに試験された。これらの８つのカルコンのうち、２−トリフルオロメチル−２’−メトキシカルコン（２ｂ）が、マウスのＮｒｆ２の有力な活性因子であることがわかった。さらに、定量的構造活性関係が明らかになり、Ｎｒｆ２活性化の可能な機序が提供される。
【００２８】
Ａ．式（Ｉａ）の化合物
いくつかの実施形態において、ここに開示された主題は、式（Ｉａ）で示す化合物を提供している。
2014510064.tif 000006
ここで、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４及びＲ５は、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４及びＲ５の少なくとも一つがアルコキシル基であるとの条件で、それぞれ、Ｈとアルコキシル基からなる群から個別に選択され、
Ｒ６とＲ７は、Ｒ６とＲ７の少なくとも一方がＣＦ３又はＮＯ２であるとの条件で、それぞれ、Ｈ，ＣＦ３及びＮＯ２からなる群から個別に選択され、
Ｒ６又はＲ７がＣＦ３であれば、Ｒ１とＲ３、又はＲ２とＲ３，またはＲ１とＲ４は両方がアルコキシル基にならないとの更なる仮定の下、Ｒ８はＨである。
【００２９】
式（Ｉａ）の化合物を生成する方法を以下の実施例１に示す。式（Ｉａ）の代表的な化合物を表２に示す。なお、式（Ｉａ）の化合物は、表２の化合物２ｅ，２ｇ，２ｈ，３ｇ，及び３ｈを含まない。
【００３０】
用語「個別に選択された」を用いる場合、置換基は（例えば、群Ｒ１，Ｒ２等のＲ群、又は「ｍ」と「ｎ」等の変数）を意味し、特に指定がない限り、同じか又は異なる。例えば、Ｒ１とＲ２は両方共アルキルで置換でき、又はＲ１は水素であってもよく、Ｒ２は置換アルキル等であってもよい。
【００３１】
用語「アルコキシル」又は「アルコキシ」は、ここでは交換不能に用いており、酸素原子を介して、親分子部分に結合された飽和（つまり、アルキル−Ｏ−）群又は不飽和（つまり、アルケニル−Ｏ−とアルキニル−Ｏ−）群を指す。いくつかの実施形態において、例えば、メトキシル、エトキシル、プロポキシル、イソプロピル、ｎ−ブトキシル、ｓｅｃ−ブトキシル、ｒ−ブトキシル、及びｎ−ペントキシル、ネオペントキシル、ｎ−ヘキソキシ等を含む、直鎖、分岐、又は環状、飽和又は不飽和オキソ−炭化水素鎖Ｃ１−２０を含む。
【００３２】
ここで用いた用語「ハロ」、「ハロゲン化合物」、又は「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、又はヨード群を表す。さらに、「ハロアルキル」等の用語は、モノハロアルキルとポリハロアルキルを含むことを意味している。例えば、用語「ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル」は、トリフロオロメチル、つまり２，２，２−トリフロオロエチル、４−クロロブチル、３−ブロモプロピル等を含むことを意味しているが、これに限定されない。
【００３３】
用語「ニトロ」は、−ＮＯ２群を示す。
【００３４】
いくつかの実施形態においては、式（Ｉａ）で示す化合物は、
2014510064.tif 000007
とその薬学的に許容可能な塩から成る群から選択される。
【００３５】
その他の実施形態においては、式（Ｉａ）で示す化合物は、
2014510064.tif 000008
とその薬学的に許容可能な塩から成る群から選択される。
【００３６】
さらなる実施形態においては、式（Ｉａ）で示す化合物は、
2014510064.tif 000009
とその薬学的に許容可能な塩から成る群から選択される。
【００３７】
特定の実施形態において、式（Ｉａ）で示す化合物は、
2014510064.tif 000010
とその薬学的に許容可能な塩から成る群から選択される。
【００３８】
本明細書及び特許請求の範囲を通して、所定の化学式又は名称は、すべての互変体、同族体、光学異性体、立体異性体、並びにこれらの異性体及び混合物が存在するラセミ混合物に及ぶ。
【００３９】
Ｂ．式（Ｉａ）と式（Ｉｂ）で示す医薬組成物
いくつかの実施形態において、ここに開示した主題は、式（Ｉａ）と式（Ｉｂ）で示す化合物と、例えば、薬学的に許容可能な医薬品賦形剤と混合した１またはそれ以上の追加治療薬を、これと組み合わせて、式（Ｉａ）又は（Ｉｂ）で示す１つ以上の化合物を含む医薬組成物等の薬学的に許容可能な塩を提供する。ここで用いた用語「薬学的に許容可能な医薬品賦形剤」は、１またはそれ以上の相溶性のある個体又は液体充填剤、希釈剤、又は被験者への投与に適した被包物質を意味する。当業者であれば、医薬組成物が、この化合物の薬学的に許容可能な塩を含むことを認識するだろう。
【００４０】
用語「薬学的に許容可能な塩」は、ここで記載した化合物に見られる特定の置換基部分に応じて、比較的毒性の少ない酸又は塩基を用いて用意した活性化合物の塩を含むことを意味している。本開示の化合物が、比較的塩基性の官能性を含む場合、水無しで又は適切な不活性溶媒のいずれかで、この化合物の中性形を十分な量の所望の酸と接触させて酸付加塩を得ることができる。薬学的に許容可能な塩基添加塩の例としては、ナトリウム、カリウム、アンモニア、有機アミン、マグネシウム塩、又は類似の塩が挙げられる。本開示の化合物が、比較的基本的な官能性を含む場合、水無しで又は適切な不活性溶媒のいずれかで、この化合物の中性形を十分な量の所望の酸と接触させて酸付加塩を得ることができる。薬学的に許容可能な酸付加塩の例としては、塩化水素、臭化水素、窒素、炭酸、一水素炭素、リン、一水素カリウム、リン酸二水素、硫黄、一水素硫黄、ヨウ化水素又は亜リン酸等の無機酸から導出された酸、並びに酢、プロピオン、イソブチル、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルフォン酸、ｐ−トリルスルフォン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルフォン酸等の比較的非毒性有機酸から導出した塩が挙げられる。また、上に挙げたものは、アルギン酸等のアミノ塩、グルグロン酸又は乳汁等の有機酸の塩を含む（例えば、Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ”，Ｊｏｕｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９７７，６６，１−１９参照）本開示の特定化合物は、化合物を塩基又は酸付加塩のいずれかに変換可能な塩基性官能基又は酸性官能基の両方を含む。
【００４１】
当業者であれば、ある種の置換基をここに開示した化合物に付加して、それらの化合物を塩形成しやすくすることを理解するだろう。例えば、酸性官能基は、陽イオンで安定な塩を形成でき、塩基性官能基は、酸で安定な塩を形成できる。一般的に、親薬剤とカウンタイオンのｐＫａ（解離定数Ｋａの対数パラメータであり、特定のｐＨで物質のイオン化の程度を反映する）には少なくとも３単位の差がなければならない。非常に弱い塩基性の親薬剤分子については、塩形成剤の選択は、塩化水素（ｐＫａ＝−６．１）、硫黄（ｐＫａ１＝−３．０，ｐＫａ２＝−１．９６）又はメタンスルホン酸塩（ｐＫａ＝−１．２）等の強酸であり、親薬剤分子のプロトン付加を確実にすることが好ましい。より塩基性が高い親薬剤分子は、リン酸（ｐＫａ１＝２．１５，ｐＫａ２＝７．２，ｐＫａ３＝１２．３８）、酒石（ｐＫａ＝２．９３）、酢酸（ｐＫａ＝４．７６）、及び安息香酸（ｐＫａ＝４．２）等の弱酸で塩を形成できる。非常に弱い酸性親薬剤分子については、ナトリウム（ｐＫａ＝１４．８）、カリウム（ｐＫａ＝１６．０）、又はカルシウム（ｐＫａ＝１２．９）等の強塩基性陽イオンが、親薬剤分子を確実に脱プロトンするのに好ましい。より酸性の強い親薬剤分子は、亜鉛（ｐＫａ＝８．９６）、コリン（ｐＫａ＝８．９）、及びジエタノールアミン（ｐＫａ＝９．６５）等の弱陽イオンで安定した塩を形成できる。強酸から強塩基までの相対酸／塩基強度からリストに挙げた、安定な塩形成に適切な代表的な官能基としては、スルホン酸（ｐＫａ１＝−１．２，ｐＫａ２＝−０．７）、カルボキシ酸（ｐＫａ１＝４．２，ｐＫａ２＝−４．７）、イミド（ｐＫａ＝８．２）、フェノール、チオール（ｐＫａ＝１０）、スルホナミド（ｐＫａ＝１０〜１１）、アミド（ｐＫａ＝１３〜１４）、ピリジン／ピリジル（ｐＫａ＝５．２）、イミン（ｐＫａ＝９．２）、アリールアミン（ｐＫａ＝９．３）、アルキルアミン（ｐＫａ＝９．８〜１１）、アミジン（ｐＫａ＝１２．４）、グアニジン（ｐＫａ＝１３．７）、及び第４級アンモニウム等を含むがこれらに限定されない。Ｗｅｒｍｕｔｈ，Ｃ．Ｇ．，Ｔｈｅ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｏｒｙ，３ｒｄ  ｅｄ．，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，ｐｐ．７５１−７５５（２００８）参照。
【００４２】
塩形成に加えて、本開示は、プロドラッグ形態の化合物を提供する。ここで記載した化合物のプロドラッグは、生理学的条件の下で、化学的変化を容易に受け本開示の化合物を提供する化合物である。さらに、プロドラッグは、体外環境で化学的又は生化学的方法で本開示の化合物に変換できる。例えば、適切な酵素又は化学的試薬を用いて貼付剤リザーバ中に置くと、プロドラッグは、本開示の化合物にゆっくり変化する。
【００４３】
本開示のある種の化合物は、水酸化物形態を含む不溶性形態並びに溶媒和形態で存在できる。一般に、溶媒和形態は、不溶性形態に等しく、本開示の範囲内に包含される。本開示のある種の化合物は、多数の結晶又はアモルファス形態で存在し得る。一般に、全ての物理的形態は、本開示で意図した用途の面で同じであり、本開示の範囲内にあることを意図している。
【００４４】
本開示に係る化合物は、広い用量範囲にわたって有効である。例えば、成人を治療する際に、１日当たり０．０１〜１０００ｍｇ、０．５〜１００ｍｇ、１〜５０ｍｇ、及び５〜４０ｍｇの投与量が、用い得る投与量の例である。正確な投与量は、投与経路、化合物の投与形態、治療する被験者、治療する被験者の体重、治療する医者の好みと経験によるであろう。本開示での使用に適した医薬組成物は、その意図した目的を達成するのに十分な量の有効成分が含まれる化合物を含む。有効量の決定は、ここに記載した詳細な開示を鑑み、当業者の能力の範囲内にある。
【００４５】
治療を行う特殊な症状に応じて、この医薬は液体又は固体剤形に形成して、全身に又は局所的に投与し得る。当業者に周知なように、この薬品は、例えば、時間決めの又は持続した低放出形態で送達される。剤形と投与技術は、レミンドンに記載されている。ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（２０ｔｈｅｄ）Ｌｉｍｐｉｎｃｏｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）。薬剤の適切な投薬経路には、経口、ほほ、吸入噴霧、経バッカル、舌下、直腸、皮下、経膣、経粘膜、経鼻、又は腸投与；筋肉内、皮下、骨髄注射、並びに髄こう、直接心室、静脈、関節内、胸骨滑膜内、肝臓内、病変内、頭蓋内、腹腔内、鼻孔内、又は眼球内注射、又はその他の送達様式を含む。
【００４６】
注射用に、本開示の薬剤は、Ｈａｎｋ溶液、Ｒｉｎｇｅｒ溶液、又は生理的食塩水緩衝液等の生理的に互換性のある緩衝液等の水溶液で処方希釈し得る。この経粘膜投与をするために、浸透すべきバリヤに適した浸透剤を処方に用いている。この浸透剤はこの分野で一般的に知られている。
【００４７】
本開示を実践するために、ここで開示した化合物を処方する薬理学的に許容可能な不活性ビークルを適した用量で用いることは本開示の範囲内にある。ビークルを適切に選択し適切な製造方法を用いることで、本開示の組成物、特に、溶液として処方された組成物は、静脈注射等により非経口的に投与し得る。この化合物は、この分野で周知の薬学的に許容可能な塩を用いて経口投与に適した用量に迅速に処方できる。このビークルにより、治療を受ける被験者（例えば、患者）がより経口摂取するために、本開示の化合物を錠剤、丸薬、カプセル、液剤、ゲル、シロップ、スラリ―、懸濁液等に処方できる。
【００４８】
鼻孔又は吸入送達するために、本開示の薬剤は当業者に周知の方法で処方することもでき、この薬剤は例えば、生理的食塩水、ベンジルアルコール、吸収プロモータ、及びフルオロカチオン等、防腐剤といった物質を溶解、希釈、又は拡散する例を含むがこれらに限定されない。
【００４９】
有効成分に加えて、これらの医薬組成物は、活性化合物を薬学的に用いる製剤にする処理を容易にする、賦形剤と補助物質を含む適切な薬学的に許容可能な担体を含み得る。経口投与用に処方された製剤は、錠剤、糖衣薬、カプセル、又は溶液の形態を取り得る。
【００５０】
経口投与用の薬学的製剤は、活性化合物を固体賦形剤と組み合わせ、必要に応じて、結果として得られた混合物を粉砕し、所望であれば、補助物質を添加した後に、細粒混合物を処理して、錠剤又は糖衣丸の核を得る。適切な、特にラクトース、スクロース、マンニトール又はソルビトールなどの医薬品添加物、例えば、トウモロコシ澱粉、小麦澱粉、米澱粉、じゃがいも澱粉、ゲル化、ガム、トラガント、メチルセルロース、ヒドロキシルプロピルメチルーセルロース、カリウムカルボキシルメチルーセルロース（ＣＭＣ）、及び／又はポリビニルピロリドン（ＰＶＰ、ポビドン）を含む。所望であれば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、又はアルギン酸、又はアルギン酸ナトリウム等のを添加し得る。
【００５１】
糖衣丸の核には適切なコーティングが施されている。この目的のために、濃縮糖液を用い得ることができ、これはアラビアゴム、滑石、ポリビニルピロリドン、カーボポールゲル、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及び／又は二酸化チタン、ラッカー溶液、及び適切な有機溶媒又は溶媒混合液を選択的にて含み得る。染料またはピグメントを錠剤又は糖衣丸コーティングに添加して、異なる活性化合物投与量を同定又は特徴付けることができる。
【００５２】
経口使用可能な医薬品は、セラチンでできた押しはめカプセル、並びにゼラチンでできた密封ソフトカプセル、及びグリセロール又はソルドール等の可塑剤を含む。押しはめカプセルは、有効成分を乳糖等の充填剤、澱粉等の結合剤、及び／又は酒石、又はステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、及び選択的に安定剤等を含んでいてもよい。ソフトカプセルにおいて、有効成分は、脂肪油、液体パラフィン、又は液体ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の適切な液体に溶かす又は懸濁させることができる。また、安定剤を添加してもよい。
【００５３】
特定の実施形態においては、医薬組成物は、更にコルチコステロイド、抗生物質、及びその組み合わせから成る群から選択された１つ以上の薬剤を含む。特定の実施形態においては、コルチコステロイドは、デキサメタゾン、フルニソリド、フルチカゾン、プロピオン酸塩、トリアムシノロンアセトイミド、ベクロメタゾンジプロピオネート、ブデソニド、プレドニゾン、プレドニゾロン、及びメチルプレドニゾンから成る群から選択される。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、吸入又は経口投与用に処方される。
【００５４】
いくつかの実施形態において、ここに開示した主題は、放射線傷害を治療又は防ぐキットを提供し、このキットは、治療上有効量の式（Ｉａ）の化合物とキットの使用指示書を含む。
【００５５】
さらなる実施形態において、ここに開示した主題は、Ｎｒｆ２の生化学活性又はＮｒｆ２発現を増大させるのに有効な量の式（Ｉａ）の化合物を含む１つ以上の粒子を分散させ、被験者の肺組織に一当量分の粒子を送達する装置を提供する。特定の実施形態において、この装置は、噴霧器、計量式吸入器、及び乾燥粉末吸入器から成る群から選択される。
【００５６】
Ｂ．Ｎｒｆ２調整経路に関連する疾病、障害、疾患を治療及び防止する方法
【００５７】
いくつかの実施形態において、以下に詳述するように、ここに開示した主題は、Ｎｒｆ２調節経路に関連する疾病、障害、疾患を治療又は防ぐ方法を提供する。この方法は、Ｎｒｆ２生物学的活性又はＮｒｆ２発現を増大させるのに十分な量の式（Ｉｂ）で示す化合物とその薬学的に許容可能な塩を被験者に投与するスッテプを具え、これにより疾病、障害、又は疾患を治療又は防ぐことができる。
2014510064.tif 000011
ここで、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４及びＲ５は、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４及びＲ５の少なくとも一つがアルコキシル基であるとの条件で、それぞれ、Ｈとアルコキシル基からなる群から個別に選択され、
Ｒ６，Ｒ７及びＲ８は、Ｒ６，Ｒ７及びＲ８の少なくとも一つがＣＦ３又はＮＯ２であるとの条件で、それぞれ、Ｈ，ＣＦ３及びＮＯ２からなる群から個別に選択される。
【００５８】
「Ｎｒｆ２発現又は生物学的活性」は、抗酸化剤応答配列（ＡＲＥ）への結合、核蓄積、標的遺伝子の転写誘導を意味するか、又はＫｅａｐ１ポリペプチドに結合することを意味する。
【００５９】
いくつかの実施形態において、式（Ｉｂ）で示す化合物：
2014510064.tif 000012
からなる群から選択される化合物と、その薬学的に許容可能な塩である。
【００６０】
なおその他の実施形態において、式（Ｉｂ）で示す化合物は：
2014510064.tif 000013
からなる群から選択される化合物と、その薬学的に許容可能な塩である。
【００６１】
さらなる実施形態において、式（Ｉｂ）で示す化合物は：
2014510064.tif 000014
からなる群から選択される化合物と、その薬学的に許容可能な塩である。
【００６２】
特定の実施形態において、式（Ｉｂ）で示す化合物は：
2014510064.tif 000015
からなる群から選択される化合物と、その薬学的に許容可能な塩である。
【００６３】
ここで用いられているように、「治療する」、「治療」といった用語は、疾病、障害又は疾患の原因を低下、抑制、減衰、軽減、停止させる、あるいは、疾病、障害、疾患、及び／又はこれに関連する症状の発達又は進行を安定させることを意味する。除外するものではないが、疾病、疾患、又は疾患の治療は、疾病、障害、疾患及び／又はこれに関連する症状を完全に取り除くことを必要としない。
【００６４】
ここで用いたように、用語「予防」、「予防する」、「予防」、及び「予防的治療」等は、疾病、障害、又は疾患を持っていないが、発症する危険性のある被験者の疾病、障害、又は疾患を発する可能性を低減させることを指す。このため、いくつかの実施形態においては、薬剤を予防的に用いて疾病、障害、又は疾患の発症を防止するか、又は疾病、障害、又は疾患の再発を防止することができる。
【００６５】
「薬剤」は、式（Ｉｂ）に示す化合物又はその他の薬剤、例えば、ペプチド、核酸分子、又は式（Ｉｂ）で示す化合物と組み合わせて投与するその他の小分子化合物を意味している。
【００６６】
より詳しく言うと、用語「治療薬」は、生物の機能に影響を与える可能性のある物質を意味する。このような薬剤は、例えば、天然に存在する半合成又は合成薬剤でもよい。例えば、治療薬は、有機体の特定の機能を標的にした薬剤であってもよい。治療薬は、抗生物質又は栄養剤でもよい。治療薬は、宿主生物中の疾病、障害、又は疾患の発生や進行を低減、抑制、軽減、減少、阻止、又は安定させ得る。
【００６７】
治療薬の用語「有効量」は、所望の生物学的応答を導出するのに必要な薬剤量を指す。当業者には自明なように、薬剤の有効量は、所望の生物学的終点、送達すべき薬剤、医薬組成物の成分、標的組織又は細胞等の要因に応じて変わる。より詳しく言うと、用語「有効量」は、所望の効果を生むのに必要な量、例えば、重症度、持続期間、進行、又は疾病、障害、疾患、又は１つ以上の症状の発生を低減又は改善する。疾病、障害、又は疾患の進行の防止、疾病、障害、又は疾患を退行させる、疾病、障害、又は疾患に関連する症状の発現、発症又は進展を防止する；又はその他の治療の予防又は治療効果を向上又は改善するための量をいう。
【００６８】
ここに開示した方法に係る化合物の有効量は、例えば、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１０００ｍｇ／ｋｇの範囲、又はある実施形態では、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲、又はある実施形態では、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの範囲である。当業者が認識しているように、有効量は治療した障害、投与経路、賦形剤の使用、被験者の年齢と性別、及びその他の薬剤の使用等の治療処置との同時使用に応じても変わる。所望の生物学的応答を達成するのに必要な化合物の量は、他の目的に有効な化合物量と異なることは自明である。
【００６９】
「と組み合わせて」は、同時、連続的、又はこれらの組み合わせのいずれか１つ又はそれ以上の治療薬を用いた式（Ｉｂ）の化合物の投与を意味する。したがって、式（Ｉｂ）で示す化合物の組み合わせを投与した細胞又は被験者は、細胞又は被験者中に両方の薬剤を組み合わせた効果がある限り、式（Ｉｂ）で示す化合物と治療薬を一時（つまり、同時に）又は異なる時間で（つまり、同じ日又は別の日に、連続的に又はいずれかの順序で）に受けることができる。連続的に投与する場合、薬剤を１，５，１０，３０，６０，１２０，１８０，２４０分内、又はそれ以上の時間に投与できる。他の実施形態において、連続的に投与する薬剤は、１，５，１０，１５，２０日内、又はそれ以上の日数内に投与できる。式（Ｉｂ）で示す化合物と１つ以上の治療薬とを同時に投与する場合、式（Ｉｂ）で示す化合物又はそれ以上の治療薬を各々が含む個別の医薬組成物として、細胞又は被検者に投与できる、あるいは、単一の化合物として細胞に接触させるか、両方の薬剤を含む単一の医薬組成物として、被検者に投与できる。
【００７０】
組み合わせて投与した場合、生物学的応答を誘発する各薬剤の各々の有効濃度は、単独で投与したときの、各薬剤の有効濃度より低くてもよく、これにより薬剤が単一の薬剤として投与された場合必要である投与量に対して１又はそれ以上の投与量を低減することができる。複数薬剤の効果は、付加的又は相乗的が望ましいが、必ずしもそうである必要はない。薬剤は複数回投与してもよい。
【００７１】
ここに開示した方法は、用語「被検者」に含まれることを意図している全ての脊椎動物に有効であると理解されるが、それらの多くの実施形態においてここで開示した方法で治療された被検者は、ヒトの被検者が望ましく、従って、「被検者」は、現在の症状や病気の治療、又は症状や病気が発症するのを防止する予防的治療といった医学的目的のために人間の被検者を含み、又は医学的、獣医学的、又は研究目的のための動物の被検体を含む。適切な動物の被検体としては、例えば、人間、猿、類人猿等の霊長類；牛、牡牛等のウシ属；例えば、羊等のヒツジ等のヒツジ属；山羊等のヤギ属；例えば、豚、雄豚等のブタ属；例えば、馬、ロバ、縞馬等の馬属；野生と飼い猫を含むネコ属；犬を含むイヌ属；兎、野兎等を含むウサギ属；ネズミ、ラット等を含む齧歯類が挙げられるが、それらに限定されない。いくつかの実施形態において、被験者は、胎児、新生児、幼児、子供、及び成人を含む人間であるが、それらに限定されない。また、「被検者」は、症状や病気に悩まされている又は悩まされている疑いのある患者を含むことができる。従って、用語「被検者」と「患者」は、ここでは交換可能に用いられている。
【００７２】
１．自己免疫疾患の治療方法
いくつかの実施形態において、ここに開示した主題は、Ｎｒｆ２調節経路に関連した自己免疫疾患、障害、及び疾病を治療又は防ぐに方法を提供する。この方法は、式（Ｉｂ）で示す化合物をＮｒｆ２生物学的活性又はＮｒｆ２発現を増大させるのに有効量で被検者に投与するステップを具え、これにより自己免疫疾患、障害、又は疾病を治療又は防止できる。特定の理論に束縛されなければ、ここに開示した化合物は、効能のある免疫調節薬として作用し、Ｎｒｆ２信号伝達経路が活性化されると、炎症を抑えることで被検者が自己免疫疾患に罹患するのを防ぐと考えられる。例えば、以下に詳述するように、図１５に示す多発性硬化症に関連したデータは、Ｎｒｆ２のここに開示した活性剤が免疫調節薬でもあることを示している。
【００７３】
いくつかの実施形態において、この自己免疫疾患は、急性移植片対宿主病、自己免疫内耳疾患、炎症性腸疾患、リューマチ正関節炎、乾癬、乾癬性関節炎、多発性硬化症、皮膚硬化症、狼瘡、強直性脊椎炎、好中球減少症、及びぶどう膜炎から成る群から選択される。特定の理論に束縛されなければ、これらの疾患は、主としてＴｈ１とＴｈ１７炎症によって媒介され、Ｎｒｆ２経路を活性化することでこれらの炎症の伝達物質を抑制できると考えられる。
【００７４】
他の実施形態において、ここに開示した主題は、網膜症と腎症を含むがこれに限定されない糖尿病に関連した合併症の治療又は予防する組成物と方法を提供する。ここで用いたように、用語「合併症」は、原疾患又は障害に加えて１又はそれ以上の異常（又は、病気）の存在、又は被検者へのこの付加的な異常や病気の影響のいずれかを含む。「合併症」は、（ｉ）被検者の他の症状と同時であるが独立している医学的状態、及び／又は（ｉｉ）同じ被検者の別の症状を引き起こす、別の症状によって引き起こされた、さもなければ別の症状に関連した被検者の医学的状態を含む。
【００７５】
さらなる別の実施形態においては、ここに開示した主題は、白血病に関連する癌のための骨髄移植結果を改善し、及び骨髄欠乏症、代謝の先天異常、及び免疫不全を治療する組成物と方法を提供する。Ｎｒｆ２を活性化することは血液新生を刺激するとも考えられている。例えば、図１１及び図１４、並びに、Ｍｅｒｃｈａｎｔ，ＡＡ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ｒｅｄｏｘ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  Ｎｒｆ２  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｍｕｒｉｎｅ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ  ｏｆ  ＲＯＳ  ｌｅｖｅｌｓ，Ｂｌｏｏｄ  ２０１１；１１８（２５）：６５７２−６５７９参照
【００７６】
２．ストレスに関連する疾病、障害、又は疾患の治療方法
酸化ストレスに関連する疾病、傷害、又は疾患を治療する方法は、ＰＣＴ特許出願公開ＷＯ２００７／００５８７９に開示されており、その全体は本明細書に参照として組み込まれている。酸化ストレスは、細胞、組織、又は器官中の活性酸素種（ＲＯＳ）により引き起こされる酸化的損傷と述べている。活性酸素種（例えば、自由基、活性陰イオン）は、内因性代謝反応で生成される。活性酸素種の外因性発生源としては、タバコの煙と環境汚染が挙げられる。自由基と細胞成分間の反応により、膜脂質、必須タンパク質、及びＤＮＡ中の多価不飽和脂肪酸等の巨大分子が変性することになる。自由基の生成が抗酸化活性を超えたときに酸化ストレスが生じる。従って、「酸化ストレス」は、活性酸素種に呼応した細胞損傷又は分子変性を意味する。「酸化ストレスに関連した疾病又は障害」は、酸化ストレスの増大に特徴付けられる病状を意味する。酸化ストレスは、アルツハイマー病、パーキンソン病、炎症疾患、神経性疾患、心臓病、ＨＩＶ、慢性疲労症候群、肝炎、癌、自己免疫疾患及び老化を含む様々な病態を意味する。
【００７７】
いくつかの実施形態において、ここに開示した主題は、酸化ストレスに関連した疾病、障害、又は疾患を治療する方法を提供する。Ｎｒｆ２のレベルが低下した哺乳類は、肺炎症、敗血症、虚血傷害に関連した神経細胞死を含む、酸化ストレスに関連する組織損傷が特に生じ易い。Ｎｒｆ２は、酸化ストレスに対して保護し、虚血傷害に関連した神経細胞死を低減する。このため、Ｎｒｆ２の発現又は生物学的活性を増大させる薬剤は、肺炎症、肺線維症、喘息、慢性腸閉塞疾患（ＣＯＰＤ）、成人性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）を含む、酸化ストレスレベルの増大又は抗酸化剤レベルの低減に関連した疾病又は疾患を防止又は治療するのに有用である。
【００７８】
３．酸化ストレスと肺障害
酸化ストレスは、喘息、ＣＯＰＤ，及び肺気腫を含む肺障害の病因に関与している。「炎症性肺疾患」とは、気道炎症、間欠性可逆性気道閉塞、気道過敏症、過度の粘液分泌、又はサイトカイン産生の増大（例えば、免疫グロブリンＥとＴｈ２サイトカインレベルの上昇）により特徴付けられる疾病、障害、又は疾患を意味する。
【００７９】
特に、Ｎｒｆ２活性化の増大は、気道リモデリングの低下に関連している（Ｒａｎｇａｓａｍｙ，Ｔ．，ｅｔ  ａ．，Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｒｆ２  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ｓｅｖｅｒｅ  ａｉｒｗａｙ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｓｔｈｍａ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２００５，２０２，４７−５９）。気道リモデリングは、繊維芽細胞の増殖の結果生じる。リモデリングの増大は、ＣＯＰＤ，喘息、及び特発性肺線維症（ＩＰＦ）等の幾つかの肺疾患に関連している。Ｎｒｆ２の生物学的活性又は発現を増大させる化合物と戦略は、ＣＯＰＤ，喘息、及びＩＰＦの結果として生じる、肺線維症線と気道リモデリングの治療又は低減に有効である。
【００８０】
Ｎｒｆ２マウスの肺は、不完全な抗酸化反応を呈し、喘息の悪化、気道炎症の悪化、及び気道過敏症（ＡＨＲ）の増大に至る。「抗酸化反応」とは、Ｎｒｆ２調節遺伝子の発現又は活性の増大を意味する。代表的なＮｒｆ２調節遺伝子をここに示す（表１参照）。酸化ストレスに対して肺を保護する重要な宿主因子は、喘息にかかり易さを決定し、又は関連する炎症を抑制することでリスク修飾因子として作用する。肺中のＮｒｆ２調節遺伝子は、ヘム酸化添加酵素−１（ＨＯ−Ｉ）、γ−グルタミルシステイン合成酵素（γ−ＧＣＳ）、及びＧＳＴ群の幾つかの員といった関連する抗酸化剤のほとんど全てを含む。したがって、Ｎｒｆ２発現又は生物学的活性を増大させる方法は、酸化ストレス、炎症、及び線維症に関連する肺疾患の治療に有効である。この病気は、慢性気管支炎、肺気腫、肺の炎症、肺線維症、間質性肺疾患、及び上皮下線維増生、粘液細胞異形成で特徴付けられるその他の肺疾患や肺障害、及び気道リモデリングに関連したその他の構造変化を含むがこれらに限定されない。
【００８１】
４．虚血と神経変性疾患
Ｎｒｆ２は、ＡＲＥ調節解毒作用と抗酸化遺伝子、及び各々の特定環境で防衛システムに求められる分子を協調的に上方制御することで細胞と多組織を保護する。Ｎｒｆ２の役割は、一過性虚血に続く神経組織のアポプトーシスを低減する神経保護薬分子とされている。「虚血性傷害」は、低酸素症に反応する細胞、組織、又は器官の機能の負の変性を意味している。また、「再潅流傷害」は、一過性閉塞後の血流再開に応答する細胞、組織、器官の機能の負の変性を意味している。
【００８２】
従って、いくつかの実施形態において、ここに開示した主題は、神経細胞死を含むがこれに限定されない細胞死を含む様々な疾患を治療する組成物と方法を提供する。一実施形態において、Ｎｒｆ２の発現又は生物学的活性を増大させる薬剤は、虚血性傷害（例えば、心筋梗塞、発作、又は再潅流傷害、脳損傷、発作、多発性梗塞性痴呆、二次失血又はその他の原疾患から生じる血流中断に起因）、並びに神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）クロイツヘルツ−ヤコブ病、ハンチントン病、レビー小体病、ピック病、パーキンソン病、筋委縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、及び神経線維腫症）を含む細胞死のレベルの増加で特徴付けられる病気又は疾患を治療又は防止するのに有効である。「神経変性疾患」は、神経細胞アポトーシスと神経細胞壊死を含む、神経細胞死が増えることによって特徴づけられる疾病又は障害を意味する。
【００８３】
５．副腎皮質ステロイド耐性の回復及び呼吸器感染症を治療する方法
副腎皮質ステロイド耐性を回復させ及び呼吸器感染症を治療する方法は、ＰＣＴ特許出願公開ＷＯ２０１１／０９４５９８号に開示されており、その全体が本明細書中に組み込まれている。「副腎皮質ステロイド剤耐性」とは、副腎皮質ステロイド感受性の減少を意味する。
【００８４】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）は、肺機能の進行性疾患により特徴付けられ、慢性気管支炎と肺気腫の両方を含む。ＣＯＰＤは、世界的に５番目に高い死因である。タバコの煙に晒されることが、先進国におけるＣＯＰＤ発症の主たる危険因子である。ＣＯＰＤに罹患した患者は、度々病状が悪化するが、これは主としてバクテリアやウィルス感染又は環境汚染に晒されることに起因する。これらの病状悪化は、合併症、死亡率、及び医療費増大の主要な要因である。
【００８５】
バクテリアによる病状悪化のうちで、無莢膜型インフルエンザ菌（ＮＴＨＩ）が、最も流行しており、緑膿菌（ＰＡ）は、重症のＣＯＰＤで重要になる。進行したＣＯＰＤに罹患経験のある患者は、平均して、年に２〜３回病状が悪化する。臨床試験と動物実験は、タバコの喫煙が、肺胞のマクロファージによる不完全なバクテリア食菌作用を引き起こし、バクテリアのコロニーを形成して肺の炎症を増大させる結果となることを示した。現在のところ、バクテリアのコロニー形成を抑制し、感染性ＣＯＰＤ病状悪化を防ぐことのできる有効な治療法は存在しない。
【００８６】
ＣＯＰＤに対する現在の治療法は効果が限られている。副腎皮質ステロイドは、喘息に対する非常に有効な抗炎症薬であるが、副腎皮質ステロイド剤感受性が低いため、ＣＯＰＤの治療効果は限られている。吸入副腎皮質ステロイド剤の大量投与は、ＣＯＰＤへの対処に広く用いられているが、たった約２０％〜２５％しか悪化を低減させず、病気の進行や生存率を変えられない。全身に副腎皮質ステロイドを大量投与して、急性の重傷ＣＯＰＤ悪化を治療しているが、たった９％しか入院期間を短縮しない。
【００８７】
ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）２の不活性化による副腎皮質ステロイド耐性は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の効果的治療への障壁である。ここに開示した主題は、Ｓ−ニトロシル化が、赤血球系２関連因子２（Ｎｒｆ２）の転写因子と核因子を標的にすることで逆転できるＣＯＰＤの肺胞マクロファージのＨＤＡＣ２の不活性化に関与している主要な翻訳後修飾であるとの発見に少なくとも部分的に基づいている。スルフォラファン、Ｎｒｆ２の小分子活性剤、グルタチオンに依存した脱ニトロシル化によるＨＤＡＣ２機能を回復させることで、これによりインターロイキン−８プロモータ中のヒストンの脱アセチル化とＣＯＰＤに罹患した患者からの肺胞マクロファージ中の糖質コルチコイドレセプターを増加できる。一酸化窒素合成酵素阻害のみと比較して、スルフォラファン治療は、ＣＯＰＤに罹患した患者からの肺胞マクロファージ中のサイトカイン生成に対するコルチコステロイドの抑圧的作用を復旧する。スルホラファンは、ＨＤＡＣ２機能とタバコの煙に晒されたマウスからの肺胞マクロファージのコルチコステロイド感受性を回復させる。このため、Ｎｒｆ２は、ＣＯＰＤ中のコルチコステロイド耐性の逆転とその他のコルチコステロイド耐性の炎症性疾患（例えば、重度の喘息、急性移植片対宿主病、自己免疫内耳炎、炎症性腸疾患、及びリューマチ関節炎）の新規な薬剤標的である。
【００８８】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を罹患した患者は、未知のメカニズムによる不完全なマクロファージ食作用能力に起因する肺自己免疫機能傷害を持っている。この症状により周期的なバクテリア感染とＣＯＰＤの急性悪化を引き起こし、合併症と死亡率を高める主要な感染源となるバクテリアのコロニー化を形成する結果となる。ここに開示した主題は、少なくとも部分的に、スルフォラファン治療による転写因子Ｎｒｆ２の活性が、ＣＯＰＤを罹患している患者からの肺胞マクロファージによる、臨床分離株微生物インフルエンザ（ＮＴＨＩ）と緑膿菌（ＰＡ）のバクテリア認識、食作用及び除去能力を回復させる、との発見に基づいている。分子の研究により、Ｎｒｆ２が、その酸化防止機能とは別に、クラスＡ消去剤レセプターＭＡＲＣＯの直接転写の上方制御によるマクロファージ食作用能力を改善することが判明した。スルフォラホン治療により、ＭＡＲＣＯ及び阻害されたバクテリアのコロニー形成（ＮＴＨＩ又はＰＡ）、及びタバコの煙に６ケ月間慢性的に晒した後の野生マウスの肺の炎症を増大させることで、肺胞マクロファージの食作用能力が回復した。これらの知見は、治療手段としてＮｒｆ２を標的にすることでＭＡＲＣＯの増加を確認し、抗菌性防御を改善し、この経路がＣＯＰＤのバクテリアによる悪化を防止するとして標的にできることを示唆した。
【００８９】
従って、Ｎｒｆ２の発現又は生物学的活性を増大させる薬剤（例えば、式（Ｉｂ）で示す化合物）は、コルチコステロイド耐性、並びに呼吸器感染症、特に慢性閉塞性肺疾患、肺気腫、及び関連する症状の治療に有効である。そのため、ここに開示した主題は、単独で又はコルチコステロイド（例えば、デキサメタゾン、フルニオリド、フルタゾンプロピオン酸塩、トラニルシプロミンアセトニド、ヘクロメタソーム、ジプロピオネート、ブデソニド、プレドニン、プレドニソロン、及びメチルプレドニソロン）と組み合わせてＮｒｆ２活性を増大させる薬剤を含むコルチコステロイドをリバースする成分を提供する。
【００９０】
他の実施形態において、ここに開示した主題は、バクテリア感染症、特に、ＣＯＰＤを発症又は発症の危険性のある被験者、慢性気管支炎の被験者、喫煙者、及び嚢胞性線維症又は被験者の免疫システムの有効性を低下させる自己免疫不全症候群の被験者に生じたバクテリア感染症を治療する化合物を提供する。
【００９１】
コルチコステロイド耐性に関連する症状としては、ＣＯＰＤ中のコルチコステロイド耐性、重症喘息を含む喘息、急性移植片対宿主病、自己免疫内耳疾患、炎症性腸疾患、リューマチ性関節炎、並びにＣＯＰＤに関連した感染症と関連する症状（例えば、喫煙、慢性気管支炎）を含むバクテリア感染症があるがこれらに限定されない。
【００９２】
「炎症性肺疾患」は、肺の中の単核細胞（単細胞／マクロファージ、リンパ球）、好中球、及び線維芽細胞を増加させる病理学的症状も意味する。代表的な炎症性肺疾患には、バクテリア、ビールス、又は真菌感染症、環境汚染（例えば、粒子状物質、自動車排気ガス、アレルギー）、慢性閉塞性肺疾患、喘息、急性肺傷害／急性呼吸器疾患症候群又は炎症があるがこれらに限定されない。
【００９３】
「コルチコステロイド応答性を回復する」とは、コルチコステロイド治療に対する感受性が低い被験者のコルチコステロイドの抗炎症動作を増大させることを意味する。回復は完全である必要はないが、少なくとも約１０％，２５％，３０％，５０％，７５％以上の感受性の増加であることを意味する。
【００９４】
「コルチコステロイド不感受性の回復」とは、コルチコステロイド治療に対して感受性が低い被験者のサイトカイン産生に対するコルチコステロイドの抑制作用の回復を意味し、これによりコルトステロイド不感受性でない被験者に通常用いられるレベルに近い被験者に効能を発揮するのに必要なレベルが低くなる。
【００９５】
「呼吸器感染症」は、呼吸系（例えば、肺及びそれに関連する組織）に影響を与える感染症を意味する。代表的な呼吸器感染には、グラム陰生細菌又はグラム陽性細菌（例えば、緑膿菌、類型不能出血性インフルエンザ、モラクセラカタラーリス、肺炎連鎖球菌、連鎖球菌アウレウス）又はウイルス（例えば、ライノウイルス、コロナウィルス、インフルエンザＡ及びＢ、パラインフルエンザ、アデノウィルス、及び呼吸器合抱体ウイルス）が挙げられるがこれらに限定されない。
【００９６】
６．放射線損傷の治療方法
放射線傷害は、全身が照射を受けたとき又は体の一部のみが照射を受けたときのいずれでも、外部照射から起こる。放射線傷害は、例えば、原子力発電所の事故又は核攻撃など、不慮の被曝時に、放射線に関連して起こることがある。事故による被曝又は核攻撃も、環境に放出された広範囲に撒き散らされた放射線粒子による内部放射線被曝を引き起こすことがある。放射線被曝は、短期及び／又は長期の障害を引き起こす。急性放射線症候群の臨床コンポーネントとしては、放射線被曝後に数日か数週間内に発症する造血、胃腸、及び脳血管性症候群が挙げられる。放射線被曝後の肺線維腫等の長期にわたる障害は、通常組織損傷に関連している。
【００９７】
放射線被曝後の健康への影響は、急速に分割する正常細胞への損傷により生じる。故意でない（例えば、原子力発電所の事故又は核攻撃）又は意図した（例えば、癌治療）による傷害の治療又は軽減に関する治療は、このような健康への影響を扱う際にきわめて重要である。
【００９８】
高線量の放射線に全身が被曝した場合、急性放射線症候群が、放射線被曝後の数分又は数日以内に現れる。２Ｇｙと６Ｇｙの線量で、造血系は著しい損傷を受け、免疫抑制、感染症、及び出血を引き起こす。適切な治療をしないと、おそらく６０日内に死に至るだろう。６Ｇｙを超える照射量の場合、消化管に著しい損傷が生じ、重症の吐き気、嘔吐、下痢、腸粘膜の潰瘍、及び敗血症に至る全身感染になる。これらの照射量では、２週間から４週間のうち死に至るだろう。２０Ｇｙを超える照射量の場合、中枢神経系と脳神経系への著しい損傷を引き起こし、２日以内に死に至るであろう。
【００９９】
腫瘍を除去及び／又は癌の再発を防ぐ等の治療目的の場合、硬い上皮腫瘍への放射線量は、約６０Ｇｙ〜８０ＧＹの範囲である。ところが、脳や食堂中の腫瘍を小さくして痛みを軽減するなどの鎮痛治療時には、患者は、２Ｇｙ分画で約２０Ｇｙ〜４０Ｇｙ被曝する。放射線治療により、急性及び晩発副作用を引き起こすことがある。治療を受けた体の領域に応じた、放射線治療後の急性及び晩発副作用として、唾液腺（例えば、ドライマウス又は味覚消失）、粘膜領域（例えば、口腔粘膜炎、ＧＩ粘膜炎、及び食道炎）、肺（例えば、肺炎と線維症）、及び脳（例えば、記憶喪失）への損傷が挙げられる。
【０１００】
放射線の中毒作用は、酸化ストレスにより開始し、細胞死、組織損傷、及び促進炎症を引き起こす。酸化ストレス（抗酸化剤）、細胞死（抗アポプトシース剤又は細胞生存因子）、及び炎症（抗炎症剤）を抑制する薬剤は、放射線傷害を制限する可能性のある薬剤である。「放射線防護体」は、放射線被曝に先立って投与されたとき、放射線損傷から保護する薬剤である。「放射線類似作用薬」は、放射線被曝後に投与したとき、放射線損傷を低減する薬剤である。緊急の場合、放射線被曝後（例えば、放射線被曝後２４時間）に有効な放射線類似作用薬は、有望な薬剤候補である。
【０１０１】
放射線損傷を低減する方法は、ＰＣＴ特許出願ＷＯ２０１０／１５０２４５号に開示されており、その全体が本明細書中に組み込まれている。「放射線傷害」は、イオン化放射への被曝に関連した、細胞、組織、又は器官のあらゆる損傷を意味する。放射線損傷の例としては、造血症候群、胃腸症候群、脳血管症候群、中枢神経系症候群、肺への影響、敗血症、腎不全、肺炎、粘膜炎、腸炎、線維症、皮膚損傷、好中球減少、及び軟組織への影響等が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０２】
従って、いくつかの実施形態において、ここに開示した主題は、放射線傷害を治療又は防止するのに有効な組成物と方法を提供する。ここに開示した主題は、放射線被曝に関連した細胞と組織損傷に対してＮｒｆ２保護を活性化し、この傷害に応じて死亡率を低減する化合物の発見に少なくとも部分的に基づいている。
【０１０３】
ａ．放射線傷害
急性照射線症候群の臨床的コンポーネントには、被曝の数日又は数週間内に起こる造血症候群、胃腸症候群、及び脳血管症候群が挙げられる。骨髄の形成不全又は欠血症により特徴付けられる造血症候群は、身体の大部分又は全身放射線被曝に関連して起こる。これらの造血が変化すると、汎結球減少、感染への素因、出血が生じ、傷の治りが遅くなる。造血に対するこれらの放射線の影響のいずれか１つは致命的になることがある。胃腸症候群は、腹痛、下痢、吐き気、嘔吐、及び感染への患者の素因により特徴付けられる。放射線は、腸陰窩欠失と粘膜バリヤに異常を誘発する。熱又は放射線熱傷からの皮膚傷害は、表皮又は真皮の欠損により特徴付けられる。皮膚への傷害は、小さな領域に留まるだろうが、軟組織に深く浸透して下部にある筋肉や骨に達する。
【０１０４】
ｂ．放射線損傷のメカニズム
照射により生成されたＲＯＳと求電子は、急性及び慢性病的損傷を引き起こす際の主要な要因である。ＲＯＳは、生体分子への酸化障害を誘発し、造血細胞、内皮細胞、及び上皮細胞のアポプトーシスを引き起こす。被験者の造血細胞が喪失すると、免疫応答障害が生じ、被験者が二次感染症に罹りやすくなる。内皮細胞と上皮細胞の死滅が増加すると、粘膜バリヤの喪失と組織障害が生じる。腸又は肺のバリヤが喪失すると、バクテリアが体循環へ移行して、全身炎症と敗血症を引き起こす。これらの障害は、局所炎症を引き起こし、組織リモデリングと線維症になる。要するに、照射が酸化ストレス、アポトーシス、及び炎症を悪化させ、しばしば致命的な多臓器不全に至る。ＲＯＳが誘発される秋影響をブロックする治療は、放射線傷害を軽減し治療する。
【０１０５】
他の実施形態において、ここに開示した主題は、化学療法傷害の治療又は防止に有効な組成物と方法を提供する。「化学療法傷害」とは、癌患者等のに化学療法を行ったことから生じる傷害又は副作用を意味する。ここに開示した主題は、化学療法暴露に関連する細胞と組織損傷に対するＮｒｆ２防御を活性化する化合物の発見に少なくとも部分的に基づく組成物と方法を提供する。
【０１０６】
ｃ．好中球減少症の治療方法
従って、いくつかの実施形態において、ここに開示した主題は、化学療法に起因する好中球減少症、自己免疫疾患、及び先天性好中球異常を罹患した患者を治療又は予防する方法を提供する。好中球減少症は、血流中の多数の好中球が減少する症状である。好中球は白血球の一種であり、多形核白血球としても知られている。好中球減少症は、感染と戦う身体の能力に影響を与えることがある。上述したように、Ｎｒｆ２を活性化すると、造血を刺激すると考えられている。例えば、図１１と１４、並びにMerchant, AA, et al., The redox-sensitive transcription factor Nrf2 regulates murine hematopoietic stem cell survival independently of ROS levels. Blood, 2011; 118(25): 6572-6579参照。
【０１０７】
特段の定めがない限り、ここで用いた全ての技術的及び科学的用語は、本発明が属する当業者が共通に理解している意味を持っている。
【０１０８】
用語「ａ」、「ａｎ」と「ｔｈｅ」を請求項を含む本出願中で用いたとき、長年の特許法の慣例に従い、それれは「１つ以上」を指す。よって、例えば、文脈が明白に逆（例えば、複数の被験者）等でない限り、「被験者」への言及は、複数の被験者を含む。
【０１０９】
本出願中と請求項を通して、文脈が別の意味を要求しない限り、用語「ｃｏｍｐｒｉｓｅ」、「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」、及び「ｃｏｍｐｒｉｓｎｇ」は、非排他的の意味で用いる。同様に、「ｉｃｌｕｄｅ」とその文法的異形は、非制限的に用いることを意図しているため、リスト中の項目の列挙は、リスト項目と置換又はリスト項目に追加できる他の同様の項目を排除しない。
【０１１０】
本出願と添付した請求項のために、特段の定めがない限り、量、大きさ、次元、比率、形状、式、パラメータ、割合、パラメータ、量、特性、及びその他の本出願と請求項中で用いた数値を示す全ての数は、値、量、又は範囲と明白に用いられなくとも、用語「ａｂｏｕｔ」は、全ての場合において変更されることがあると理解すべきである。従って、逆の意味で用いられない限り、以下の明細書と添付した請求の範囲に示した数値パラメータは、正確でもまたそうであるある必要もないが、許容範囲、変換係数、四捨五入、測定誤差等、及びここに開示した主題により得ることを求める所望の特性に応じて、当業者に周知にその他の要因を反映して、要望通り近似及び／又は大きい又は小さくとも良い。例えば、用語「ａｂｏｕｔ」は、値を示すとき、変形例が開示した方法を実行又は開示組成物を用いるのに適切であるので、ある実施形態では±１００％、ある実施形態では±５０％、ある実施形態では±２０％、ある実施形態では±１０％、ある実施形態では±５％、ある実施形態では±１％、ある実施形態では±０．５％、及びある実施形態では±０．１％の特定量からの変化を包含することを意味する。
【０１１１】
また、１つ以上の数字又は数値範囲に関して用いたとき、用語「ａｂｏｕｔ」は、ある範囲内の全ての数字、及び数値範囲の上又は下の境界を超える範囲を含む全てのこの値を指すものと理解すべきである。終点による数値範囲の列挙は、全ての数、例えば、その端数を含む整数、その範囲を包摂（例えば、１〜５の列挙は、１，２，３，４，及び５、並びに例えば、１．５，２．２５，３．７５，及び４．１等のその端数を含む）とその範囲内の任意の範囲を含む。
【実施例】
【０１１２】
以下の実施例は、ここに開示した代表的実施例を実施する当業者へのガイダンスを含む。本開示と当業者の一般的レベルを鑑みると、以下の実施例はあくまで例示を意図したものであり、当業者であれば、ここに開示した主題の範囲を逸脱しないで、様々な改変、変更、及び代替可能であることを理解できる。合成の説明と以降の実施例は、あくまで例示を意図しており、その他の方法による開示の化合物を生成する任意の方法に限定すると解釈すべきではない。
【０１１３】
実施例１
マウスとヒトの肺上皮細胞におけるＮｒｆ２活性剤としてのカルコン誘導体
核因子−赤血球２ｐ４５関連因子２（Ｎｒｆ２）は、正常細胞の細胞質に存在する塩基性ロイシンジッパー（ｂ−ＺＩＰ）転写因子である。炎症性刺激、環境毒生物、酸化及び求電子性ストレスに応答していったん活性化されると、Ｎｒｆ２が、細胞質阻害物質、Ｋｅｌｃｈ様ＥＣＩＩ−関連タンパク質１（Ｋｅａｐ１）から分離し、核から転座し、その他の結合相手と共に標的遺伝子の抗酸化剤応答配列（ＡＲＥ）に結合して、転写誘導を引き起こす。Kensler, T.W., et al., Cell survival response to environmental stresses via the Keap1-Nrf2-ARE pathway. Annu.Ref.Pharmacool.Toxicol. 2007, 47, 89-116; Rangasamy, T., et al., Disruption of Nrf2 enhances susceptibility to severe airway inflammation and asthma in mice. J. Exp. Med. 2005, 202, 47-59; Sussan, T.E., et al., Targeting Nrf2 with the triterpenoid CDDO-imidazolide attenuates cigarette smoke-induced emphysema and cardiac dyfunction in mice. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2009, 106, 250-255; Thimmulappa, R.K., et al., Identification of Nrf2-regulated genes induced by the chemopreventive agent sulforaphance by oligonucleotide microarray. Cancer Res. 2002, 62, 5196-5203.
【０１１４】
Ｋｅａｐ１−Ｎｒｆ２系は、酸化及び／又は求電子ストレスに対する細胞保護的な遺伝子発現の主要な調節経路である。Ｋｅａｐ１は、このシステムにおいてストレスセンサタンパク質として機能する。ストレスがかかっていない状態で、Ｋｅａｐ１は、Ｎｒｆ２活性を恒常的に抑圧するが、酸化物や求電子はＫｅａｐ１活性を抑圧し、これによりＮｒｆ２活性化を誘発する。Misra, V., et al., Global expression profiles from C57BL/61 and DBA/2J mouse lungs to determine aging-related genes. Physiological Genomics. 2007, 31, 529-440; Surh, Y.J., et al., Nrf2 as a Master Redox Switch in Turning on the Cellular Signaling Involved in the Induction of Cytoprotective Genes by Some Chemopreentive Phytochemicals. Planta Med. 2008, 74, 1526-1529; Singh A., et al., RNAi-mediated silencing of nuclear factor erythroid-2-related factor 2 gene expression in non-small cell lung cancer inhibits tumor growth and increases efficacy of chemotherapy. Cancer Res. 2008, 68, 7975-7984.
【０１１５】
Ｋｅａｐ１に加え、タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）、細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）、ｐ３８分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）、フォスファジルイノシトール３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、及びタンパク質キナーゼＲＮＡ様小胞体キナーゼ（ＰＥＲＫ）等のタンパク質キナーゼの活性化が、Ｎｒｆ２の活性化のために示されている。Niture, S.K.,et al., Antioxidant-induced modification of IRrf2 eysteine 151 and PKC-delta-mediated phosphorylation of Nrf2 serine 40 are both required for stabilization and nuclear translocation of Nrf2 and increased drug resistance. J. Cell Sci. 2009, 122, 4452-4464; Cheng,S.E.,et al.,Cigarette smoke particle-phase extract induces HO-1 expression in human tracheal smooth muscle cells: role of the c-Src/NADPH oxidase/MAPK/Nrf2 signaling pathway.Free Radical Bioi.Med.2010,48,1410-1422;Nioi,P.,et al.,Identification of a novel Nrf2-regulated antioxidant response element(ARE)in the mouse NAD(P)H:quinone exidoreductase 1 gene:reassessment of the ARE consensus sequence. Biochem. J. 2003, 374,337-348; Chartoumpekis, D., et al., Simvastation lowers reactive oxygen species level by Nrf2 activation via P13K/Akt pathway. Biochem.Biophys. Res. Commun. 2010, 396, 463-466; Cullinan, S.B.; Diehl, J.A. PERK-dependent activation of Nrf2 contributes to redox homeostasis and cell survival following endoplasmic reticulum stress. J. Biol. Chem 2004, 279, 20108-10117.
【０１１６】
Ｎｒｆ２調節遺伝子は、ほとんど全ての関連する抗酸化剤と、ヘムオキシゲナーゼ１（ＨＯ−１）、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ、キノン酸化還元酵素１（ＮＱＯ１）、グルタミン酸システイン合成酵素調節サブユニット（ＧＣＬＭ）、ｙ−グルタミルシステイン生成酵素、グルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＰｘ），及び多数のグルタチオンＳ−転移酵素属といった、細胞保護遺伝子を含む。Surh, Y.J., et al., as a Master Redox Switch in Turning on the Cellular Signaling Involved in the Induction of Cytoprotective Genes by Some Chemopreventive Phytochemicals. Planta Med. 2008, 74, 1526-1539; Giudice, A., et al., Review of molecular Mechanisms Involved in the Activation of the Rrf2-ARE Signaling Pathway by Chemopreventive Agents.Transcription Factors:Methods and Protocols. 2010, 37-73; Wan, J.K;  Diaz-Sanchez,D.Antioxidant enzyme induction:A new protective approach against the adverse effects of diesel exhaust particles. Inhal. Toxicol. 2007, 19, 177-182;  Singh, A., et al., Glutathione peroxidase 2, the mafor cigarette smoke-inducible isoform of GPX in lungs, is regulated by Nrf2. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 2006, 35, 639-650;  Lin, H. J., et al., Glutachione transferase GSTT1, broccoli, and prevalence of colorectal adenomas.  Pharmacogenetics. 2002, 12, 175-179;  Kirsch, M.; De Groot, H. NAD(P)H, a directly operating antioxidant? FASEB J. 2001, 15, 1569-1574.  Lee, J. S; Surh, Y. J. Nrf2 as a novel molecular target for chemoprevention.  Cancer Lett. 22005, 224, 171-184, that express an ARE in their promoter. Nguyen, T., et al., Regulatory mechanisms controlling gene expression medicated by the antioxidant response element. Annu. Rev. Pharmacool. Toxico.  2003, 43, 233-260.
【０１１７】
Ｎｒｆ２シグナルを活性化する小分子は、潜在的な抗がん剤又は治療薬として研究されている。ＡＲＥで調整した遺伝子発現の強力な誘導因子として機能する様々な食品化合物及び合成化合物が示されており、例えば、スルフォラファンなどの化学発がん抑制作用を発揮する。Thimmulappa, R．K., et al., Identification of Nrf2-regulated genes induced by the chemopreventive agent sulforaphane by oligonucleotide microarray.  Cancer Res. 2002, 62, 5196-5203;  Dinkova-Kostova, A.T., et al., Direct evidence that sulfhydryl groups of Keap1 are the sensors regulating induction of phase 2 enzymes that protect against carcinogens and oxidants. Proc. Natl. Acad. Sci. U>S>A> 2002, 99, 11908-11913;  Yu, R., et al., Role of mitogen-activated protein kinase pathway in the induction of phase ＩＩdetoxifing enzymes by chemials. J. Biol. Chem. 1999, 274, 27545-27552;  McMahon, M., et al., Keap1-dependent proteasomal degradation of transcription factor Nrf2 contributes to the negative regulation of antioxidant response element-driven gene expression. J. Biol. Chem. 2003, 278, 21592-21600, dithiolethione;  Kwak, M.K., et al., Enhanced expression of the transcription factor Nrf2 by cancer chemopreventive agents:  Role of antioxidant response element-like sequences in the nrf2 promoter. Mol. Cell. Biol. 2002, 22, 2883-2892;  Kwak, M.., et al., Modulation of gene expression by cancer chemopreventive dithiolethiones through the Keap1-Nrf2 pathway - Identification of novel gene clusters for cell survival. J. Biol. Chem. 2003, 278, 8135-8145;  Kwak, M.K., et al., Role of phase 2 enzyme induction in chemoprotection by dithiolethiones.  Mutal. Res. 2001, 480-1, 305-315, curcumin and caffeic acid phenethyl ester (CAPE).  Balogun, E., et al., Curcumin activates the haem oxygenase-1 gene via regulation of Nrf2 and the antioxidant-responsive element.  Biochem. J. 2003, 371, 887-895.  クルクミンもＣＡＰＥも、α、β−不飽和ケトン部分を持っており、したがってＫｅａｐ１中に存在するシステインチオールを修飾させることができる、Ｍｉｃｈａｅｌアクセプタとして作用する。
【０１１８】
カルコン又は１，２−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２-ｐｒｏｐｅｎ−１−ｏｎｅｓは、Ｍｉｃｈａｅｌアクセプタであり、フラボノイド族に属する天然物質の重要な一群を構成している。Go, M.L., et al., Chalcones:  An update on cytotoxic and chemoprotective properties. Curr. Med. Chem. 2005, 12, 483-499;  Dimmock, J. R., et al., Bioactivities of chalcones.  Curr. Med. Chem. 1999, 6, 1125-1149.  カルコンは、抗ガン作用を含む多くの生物学的特性を持つことが報告されている。Xia, Y., et al., Antitumor agent. Part 202: Novel 2'-amino chalcons: Design, synthesis and biological evaluation.  Bioorg. Med. Cham. Lett. 2000, 10, 699-701;  Bois, F., et al., Halogenated chalcones with high-affinity binding to P-glycoprotein:  Potential modulators of multidrug reistance.  J. Med. Chem. 1998, 41, 4161-4164, anti-malarial, Liu, M., et al., Antimalarial alkoxylated andhydroxylated chalcones:  Structure-activity relationship analysis.  J. Med. Chem. 2001. 44, 4443-4452;  Dominguez, J. N., et al., Synthesis of quinolinyl chalcones and evaluation of their antimalarial activity.  Eur. J. Mad. Chem. 2001, 36, 555-560, anti-inflammatory and antileishmanial, Hsieh, H.K., et al., Synthesis and anti-inflammatory effect of calcones and related componds.  Pharm. Res. 1998, 15, 39-46;  Hsieh, H.K., et al., Synthesis and anti-inflammatory effect of chalcones.  J. Pharm. Pharmacol. 2000, 52, 163-171;  Herencia, F., et al., Synthesis and anti-inflammatory activity of chalcone derivatives.  Bioorg. Med. Chem. Lett. 1998, 8, 1169-1174, anti-tuberclulosis, Lin, Y.M., et al., Chalcones and flavonoids as anti-tuberculosis agent.  Biorg. Med. Chem. 2002, 10, 2795-2802, nitric oxide inhibition, Rojas, J., et al., The synthesis and effect of fluorinated chalcone derivatives on nitric oxide production. Bioorg. Med. Che. Lett. 2002, 12-1951-1954;  Herencia, F., et al., 4-dimethylamino-3', 4'-dimethoxychalcone downregulates iNOS expression and exerts anti-inflammatory effect.  Free Radial Biol. Med. 2001, 30, 43-50, anti-mitotic, Ducki, S., et al., Potent antimitotic and cell growth inhibitory properties of substituted chalcons.  Bioorg. Med. Chem. Lett. 1998, 8, 1051-1056, analgesic, antipyretic, antioxidant, Maria, K., et al., Synthesis and anti-Inflammatory Activity of Chalcones and Related Mannich Bases.  Med. Chem. 2008, 4, 586-596;  Viana, G.S.B., et al., Analgesic and anti-inflammatory affects of chalcones isolated from Myracrodruon urundeuva Allemao.  Phytomedicine. 2003, 10, 189-195;  Cheng, J. H., et al., Synthesis and cytotoxic, anti-inflammatory, and anti-oxidant activities of 2', 5'-dialkoxylchalcones as cnacer chemopreventive agents. Biorg. Med. Chem. 2008, 44, 16,7270-7276;  Heidari, M. R., et al., Evaluation of Anti-inflammatory and Analgesic Activity of novel Rigid 3,4-Dihydoroxy Chalcone in Mice.  Natural Compounds and Their Role in Apoptotic Cell Signaling Pathways. 2009, 1171, 399-406, antibacterial, anti-HIV, Cheenpracha, S., et al., Anti-HIV-1 protease activity of compounds from Boesenbergia pandurata.  Biorg. Med. Chem. 2006, 14, 1710-1714, antifungal, Svetaz. L., et al., Antifungal chalcones and new caffeic acid esters from Zuccagnia punctate acting against soybean infecting fungi.  J. Agric. Food. Chem. 2004, 52, 3297-3300, and antiprotozoal activities. Saavedra, M. J., et a., Antimicrobial activity of phenolics and glucosinolate hydrolysis products and their synergy with streptomycin against pathogenic bacteria. Med. Chem. 2010, 6, 174-183;  Aponte, J. C., et al., Synthesis, cytotoxicity, and anti-Trypanosoma cruzi activity of new chalcones. J. Med. Chem. 2008, 51, 6230-6234;  Lahtchev, K. L., et al., Antifungal activity of chalcones:  A mechanistic study using various yeast strains.  Eur. J. Med. Chem. 2008. 43, 2220-2228.
【０１１９】
カルコンは、また、胃の保護剤であると報告されている。Batovska, D.I.: Todorova, I.T. Trends in utilization of the pharmacological potential of chalcones.  Curr Clin Pharmacol. b2010, 5, 1-29, anti-mutagenec, and anti-tumorogenic.  Torigoe, T., et al., Anti-mutagenic chalcones-antagonizing the mutagenicity of benzo (A) pyrene on salmonella-typhimurium. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1983, 112, 833-842;  Lee, S.A., et al., Blockade of Four-Transmembrane L6 Family Member 5 (TM4SF5)-Mediated Tumorigenicity in Hepatocytes by a Synthetic Chalcone Derivative.  Hepatology. 2009, 49, 1316-1325;  Shibata, S., Anti-tumerigenic chalcones. Stem Cells, 1994, 12, 44-52.
【０１２０】
天然カルコン及び合成カルコンには、原発性の卵巣がん細胞の強力な増殖抑制効果があると報告されている。Devincenzo, R., et al., Effect of synthetic and naturally-occurring chalcones on ovarian-cancer cell-growth-structure-activity-relationships.  Anti-Cancer Drug Des. 1995, 10, 481-490, and in gastric cancer cells;  Shibata, S., Anti-tumerigenic chalcones.  Stem Cells. 1994, 12, 44-52. カルコンは、α、β−不飽和ケトンで分離された二つの芳香環を含む。このユニークな構造は、これらの分子の様々な活性の原因となる。Go, M.L., et al., Chalcones:  An update on cytotoxic and chemoprotective properties.  Curr. Med．Chem. 2005, 12, 483-499.カルコン中のα、β−不飽和カルボニルの実体は、柔求電子剤であり、これは、アミノ基やヒドロキシル基などの硬求核試薬ではなく、チオールなどの柔求核試薬を引き付ける。カルコンは、核酸上でアミノ基とヒドロキシル基と反応しそうになく、したがって、癌の化学療法で使用されるアルキル化剤に共通して関連する変異原性と発現性を誘発しそうにない。Dimmock, J. R., et al.m Bioactivities of chalcones. Curr. Med. Chem. 1999, 6, 1125-1149.
【０１２１】
カルコンの生物学的潜在力は、細胞アポトーシスと細胞増殖に関する様々なタンパク質とのカルコンの相互作用である。Wei. B. L., et al., Synthetic 2', 5'-dimethoxychalcones as G(2)/M arrest-medicated apoptosis-inducing agents and inhibitors of nitric oxide production in rat macrophages.  Eur. J. Med. Chem. 2007, 42, 660-668; Takahashi, T., et al., Isoliquiritigenin, a flavonoid from licorice, reduces prostaglandin E-2 and nitric oxide, causes apoptosis, and suppresses aberrant crypt foci development. Cancer Sci. 2004, 95, 448-453
【０１２２】
多くの近年の研究は、カルコンの抗炎症作用が、ＩＫ８の劣化とｃ−ＪｕｎＮ−末端キナーゼ（ＪＮＫ）とｃ−Ｊｕｎのリン酸化によって治療される、ＮＦ−ＫＢ経路の阻害に起因するとしている。Lee, J. H., et al., Blockade of nuclear factor-kappa B signaling pathway and anti-inflammatory activity of cardamomin, a chalcone analog from Alpinia conchigera.  J. Pharmacol. Exp. Ther. 2006, 316, 271-278;  Ban, H.S., et al., Inhibition of lipopolysaccharide-induced expression  of  inducible  nitric  oxide  synthase  and  tumor  necrosis  factor-alpha  by  2'-hydroxychalcone  derivatives in RAW 264.7 cells.  Biochem. Pharmacal. 2004, 67-1549-1557;  Liu, Y.C., et al., Chalcone inhibits the activation of NF-kappa Band STAT3 in endothelial cells via endogenous electrophile.  Life Sci. 2007, 80, 1420-1430.
【０１２３】
カルコンの求電子α、β−不飽和カルボニル部分によって、Ｎｒｆ２／ＡＲＥ経路が活性化され、第２段階の解毒酵素発現を誘導することが報告されている。Foresti, R., et al., Differential activation of heme oxygenese-1 by chalcones and rosolic acid in endothelial cells.  J. Phamacol. Exp. Ther. 2005, 312, 686-693;  Wu, C.C., et al., Upregulation of endothelial heme oxygenase-1 expression through the activation of the JNK pathway by sublethaｌ  concentratons of acrolein.  Taxicol. Appl. Phamacol. 2006, 214-244-252.  この部分は求電子剤として作用し、チオレドキシンの遊離スルフヒドリル基及びタンパク質中のシステイン残基と反応する。Liu, Y. C., et al., Chalcone inhibits the activation of NF-kappa Band STAT3 in endothelial cells via endogenous electrophile.  Life Sci. 2007, 80, 1420-1430;  Foresti, R., et al., Differential activation of heme oxygenese-1 by chalcones and rosolic acid in endothelial cells.  J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005, 312, 686-693;  Wu, C.C., et al., Upregulation of endothelial heme oxygenase-1 expression through the activation of the JNK pathway by sublethal concentrations of acrolein. Taxicol. Appl. Pharmacol. 2006, 214, 244-252; Shibata, T., et al., Thioredoxin as a molecular target of cyclopentenone prostaglandins.  Free Radical Biol. Med. 2003, 35, 384.
【０１２４】
求電子性植物化学物質が、チイルラジカルを生じさせることがあることも報告されており、これは、Ｎｒｆ２を含む細胞内ターゲットのスリフヒドリル残基と相互作用することがある。Heiss, E., et al., Nuclear factor kappa B is a molecular target for sulforaphane-mediated anti-inflammatory mechanisms. J. Biol. Chem. 2001, 276, 32008-32105. これらの研究は、α、β−不飽和カルボニル部分を介した内因性求電子活性が、カルコンの抗酸化特性及び抗炎症特性に関連することを示している。
【０１２５】
Ａ．化学的性質
カルコンは、例えばエタノール又はメタノールなどの極性溶媒中の、アルデヒドの塩基触媒のクライゼン−シュミット縮合によって容易に合成できる。カルコンの伝統的な合成には、水酸化ナトリウムなどの強塩基が使用される。Liu, M., et al., Antimalarial alkoxylated and hydroxylated chalcons; Structure-activity relationship analysis. J. Med. Chem. 2001, 44, 4443-4452;  Herencia, F., et al., Synthesis and anti-inflammatory activity of chalcone derivatives.  Bioorg. Med. Chem. Lett. 1998, 8, 1169-1174;  Ducki, S., et al., Potent antimitotic and cell growth inhibitory properties of substituted chalcones.  Bioorg. Med. Che. Lett. 1998, 8, 1051-1056;  Micheli, F., et al., A combinatorial approach to [1,5] benzothiazepine derivatives as potential antibacterial agents.  J. Comb. Chem. 2001. 3, 224-228, KOH, Lin, H. J., et al., Glutathione transferase GSTT1, broccoli, and prevalence of colorectal adenomas.  Pharmacogenetics. 2002, 12, 175-179; Bu, X. Y., et al., A facile synthesis of 6-C-prenylflavanones. Synthesis-Stuttgart. 1997, 1246-1248, Ba(OH)2, Sinisterra, J.V., et al., An improved procedure for the Claisen-Schmidt reaction.  Synthesis-Stuttgart.. 1984, 502-504;  Alcantara, A. R., et al., Synthesis of 2'-hydroxychalcones and related-compounds in interfacial solid-liquid conditions. Tetrahedron Lett. 1987, 28, 1515-1518, hydrotalcites, Climent, M.J., et al., Activated hydrotalcites as catalysts for the synthesis of chacones of pharmaceutical interest.  J. Catal. 2004, 221, 474-482, and LiHMDS, Daskiewicz, J. B., et al., Organolithium mediated synthesis of prenylchalcones as potential inhibitors of chemoresistance.  Tetrahedron Lett. 1999, 40, 7095-7098, calcined NaNO3/natural catalyst by lithium nitrate.  An efficient synthesis of chalcones.  Catal. Commun. 2002, 3, 335-339.
【０１２６】
カルコンは、例えば、ＡｌＣｌ３などの酸触媒あるドール縮合によっても合成できる。Calloway, N.O.; Green, L.D. Reactions in the presence of metallic halides I beta-unsaturated ketone formation as a side reaction in Friedel-Crafts cylations.  J. Am. Chem. Soc.  1937, 59, 809-811, BF３ or dry HCl, Szell, T.; Sohar, I., New nitrochalcones.  Can. J. Chem. 1969, 47, 1254-1258, Zn(bpy)(OAc)2, Irie, K;  Watanabe, K., Aldol condensations with metal(II)complex catalysts. Bull. Chem. Soc. Jpn. 1980, 53, 1366-1371, Cp2ZrH2/NiCl2, Nakano, T., et a., Cross-condensation reactions of cycloalkanones withaldehydes and primary alcohols under the influence of zirconocene complexes. J. Org. Chem. 1987, 52, 2239-2244, and RuCl３ (for cyclic and acyclic ketons) Iranpoor, N.;  Kazemi, F. RuCl３ catalyses aldol condensations of aldehydes and ketones.  Tetrahedron. 1998, 54, 9475-9480. 鈴木カップリングも、カルコン誘導体の合成に使用されていた。Eddaria, S., et al., An efficient synthesis of chalcones based on the Suzuki reaction. Tetrahedron Lett. 2003, 44. 5359-5363.
【０１２７】
これらの手順の不利益としては、長い反応時間、高い反応温度、複雑な反応条件、及び高価で市販されていない試薬などがある。近年、温和な条件下での二重活性化触媒として、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏを用いたアルデヒドとケトンの縮合によるカルコンの効率が良く容易な合成が報告されている。Bhagat, S., et al.  LiOH・H2O as a novel dual activation catalyst for highly efficient and easy synthesis of 1,3-diaryl-2-propenones by Claisen-Schmidt condensation under mild conditions. J. Mol. Catal. A-Chem. 2006, 244, 20-24.
【０１２８】
ここに開示されている主題は、ここに開示されているすべてのカルコンは生物の合成と同じ条件を使用している。すなわち、適宜に置換したアセトフェノンをエタノールに溶解させ、次いで、触媒量のＬｉＨ・Ｈ２Ｏを加えた。反応混合物を室温で１５分間撹拌し、所望の置換ベンザルデヒドを加えた。」は、完了まで室温で行い、結晶化によって、あるいはシリカゲルフラッシュクロマトグラフィによって、相当のカルコン誘導体（１ａ−５１）を単離した（表２）。全てのカルコン誘導体は、１Ｈ，１３Ｃ  ＮＭＲ、及びＨＲＭＳで特徴づけた。
2014510064.tif 000016
2014510064.tif 000017
2014510064.tif 000018
＊表示されているデータは３度の独立した実験の代表的値である。
ここに示す値は、４つのウエルの平均±ＳＤ値である。
【０１２９】
Ｂ．バイオロジィ
Ｎｒｆ２で調整したヒト肺上皮細胞の細胞保護遺伝子の発現を活性化するカルコン誘導体の効力
ここに開示したカルコン誘導体のＮｒｆ２を活性化する効力を調べるために、抗酸化遺伝子であり、Ｎｒｆ２の良く特徴づけられた転写標識であるＧＣＬＭとＮＡＤＰＨ−ＮＱＯ１の発現を、代理マーカーとして測定した。「マーカー」は疾病、障害、あるいは疾患に関連する発現レベル又は活性が変化したタンパク質又はポリヌクレオチドを意味する。Ｎｒｆ２の酸化物又は小分子活性剤が、細胞又は野生型組織中にあるが、Ｎｒｆ２が欠如したマウスにはないＧＣＬＭとＮＱＯ１を増加させることは以前から示されていた。Osburn, W.O., et al., Genetic or pharmacologic amplification of Nrf2 siglanling inhibits acute inflammatory liver injury in mice.  Toxicol. Sci. 2008, 104(1), 218-227。
【０１３０】
ここに開示した主題において、新規なＮｒｆ２活性化因子を検査するために、正常なヒト気管支上皮細胞（Ｂｅａｓ−２Ｂ）をカルコン誘導体（１０μＭ）で１６時間処理して、定量ＲＴ−ＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）によって、ＧＣＬＭとＮＱＯ１の発現を分析した。良く知られたＮｒｆ２の強力活性剤であるスルフォラファンを、陽性対照として含めた。ＧＣＬＭとＮＱＯ１の発現を誘発する５９のカルコン誘導体を特定した（表２）。遺伝子発現の分析と同時に、カルコン誘導体の細胞毒性を、ＭＴＴアッセイを用いて調べた。全部で２０のカルコンが、例えば、スルフォラファンなどの陽性対照より高いＮｒｆ２調整転写標的の誘発を示した（表３）。
2014510064.tif 000019
【０１３１】
２．予備的構造−活性の関係
構造−活性の関係についての分析は、Ｂ環に置換基を持たないカルコン誘導体１ａ−１ｉが活性でないことを示した。Ｂ環にトリフルオロメチル（ＣＦ３）置換基がある同様の誘導体の活性は、著しく活性を強化した。ＣＦ３置換基の位置も、これらの化合物の活性と細胞毒性に重要である。一般的に、Ｂ環のオルト位にＣＦ３置換基があるカルコン誘導体が、最も活性が高い化合物であり（表２、項目１３−２４）、次いで、パラ置換基（表２、項目３７−４７）、メタ置換基（表２、項目２５−３６）であった。また、細胞毒性のデータは、オルト位がＣＦ３で置換されたカルコンは、非細胞毒性であった。この見解は、カルボニルとＣＦ３の間の４番目の結合分離が誘導活性に影響する可能性があることを示している。Ｂ環のオルト位におけるニトロ（ＮＯ２）置換基によって、有意に活性が下がり、毒性が高くなった（表２、項目４８−５９、及び表３、項目１９−２１）。したがって、これらのデータに基づいて、ＧＣＬＭ及びＮＱＯ１遺伝子の４倍を超える誘導及び９５％を超える細胞生存率を示したこれらのカルコン誘導体のみを、更なる分析用に選択した。これらの基準に基づいて、Ｎｒｆ２活性を増やす効力を示した２０の化合物のうち、化合物２ａ−ｆ、２ｋ、及び２ｌを更なる分析用に選択した。
【０１３２】
３．マウスモデルを用いたＮｒｆ２を活性化する主な同定化合物のインビボでの効力
インビトロスクリーニングで同定したＮｒｆ２経路を活性化する８つの主なカルコンの効力を、マウスモデルで評価した。まず、化合物を溶解させる様々な配合組成を評価したところ、ＤＣＰ（１０％ＤＭＳＯ＋１０％クレモホールＥＬ＋８０％リン酸緩衝生理食塩水）配合組成が、経口ルートによるこれらの化合物の送達について最大溶解度を提供した。マウスに単回投与のビークル、又は試験化合物、又は陽性対照としてスルフォラファン、を強制飼養として体重１ｋｇ当たり５０ｍｇの１回投与量を与え、２４時間後に小腸を摘出した。Ｎｒｆ２で調整した遺伝子ＧＣＬＭとＮＱＯ１の発現を、ｑＲＴ−ＰＣＲによって組織中で分析した。試験を行った８つの化合物すべてで、小腸におけるＧＣＬＭとＮＱＯ１の発現を増えた。しかしながら、化合物２ｂが、Ｎｒｆ２活性の最も効果的な誘導物質であった（図２）。２ｂで処置したマウスの小腸のＧＣＬＭとＮＱＯ１の発現は、ビークルに比べて、それぞれ、６倍及び１０倍高かった。同様に、２ｂで処置した小腸のＧＣＬＭとＮＱＯ１の発現は、スルフォラファンに比べて、それぞれ、３倍及び５倍高かった。総合して、２ｂをＮｒｆ２の最も効力のある活性因子として選択し、さらに研究した。
【０１３３】
４．Ｎｒｆ２は、化合物２ｂによる抗酸化遺伝子の誘導に不可欠である
化合物２ｂによるＮｒｆ２の誘導を、細胞ベースのアッセイによって更に特徴づけた。Ｎｒｆ２は、これらの遺伝子の促進領域にあるＡＲＥに結合することによって、ＮＱＯ１とＧＣＬＭの発現を増やす。Bloom, D., et al., Site-directed mutagenesis of cysteine to serine in the DNA binding region of Nrf2 decreases its capacity to upregulate antioxidant response element-medicated expression and antioxidant induction of NAD(P)H: quinone oxidoreductasel gene.  Oncoene. 2002, 21, 2191-2200.ＡＲＥが化合物２ｂによってＮＱＯ１の転写制御を仲介するかどうかも測定した。ＮＱＯ１−ＡＲＥシーケンスの存在下でのルシフェラーゼ遺伝子の発現を、化合物２ｂで処置した安定して導入されたＢｅａｓ−２Ｂ細胞を用いて測定した。化合物２ｂの暴露の結果、化学発光ベースのアッセイによって測定した通り、ルシフェラーゼ活性に有意な濃度依存性増加がみられた（図３）。これらの結果は、化合物２ｂによるＮＱＯ１遺伝子の導入におけるＡＲＥ配列を暗示している。ＡＲＥを介した抗酸化位遺伝子の転写活性化は、Ｎｒｆ２に大きく依存しており、これは、化合物２ｂがＮｒｆ２活性化を介して抗酸化遺伝子を上方制御することを示唆している。
【０１３４】
５．濃度と時間的経過の研究
次いで、Ｎｒｆ２による抗酸化位遺伝子、ＧＣＬＭ、ＮＱＯ１、及びＨＯ１のｍＲＮＡレベルについての化合物２ｂの濃度依存効果を調べた。処置後２４時間でのこれらの遺伝子の発現を、Ｂｅａｓ−２Ｂ細胞中の化合物２ｂの様々な濃度（２．５、５、１０、２０μＭ）で測定した。図５に示すように、化合物２ｂは、濃度に依存してＮｒｆ２で調整した遺伝子発現を有意に増やした。細胞毒性がない最大濃度（２０μＭ）では、ＧＣＬＭとＮＱＯ１の発現が、それぞれ、約５倍と２０倍に増えた。興味深いことに、Ｎｒｆ２遺伝子の著しい濃度依存活性が観察された。１０μＭの化合物２ｂでは、ＨＯ−１の発現は、スルフォラファンに比べて６倍高かった（図４）。
【０１３５】
時間的経過に関して、抗酸化遺伝子（ＧＣＬＭ、ＮＱＯ１、及びＨＯ−１）の発現を、Ｂｅａｓ−２Ｂ細胞において化合物２ｂ（１０μＭ）で処置した後、６時間、１２時間、２４時間、及び４８時間で測定した。時間的経過の研究では、化合物２ｂでの処置後６時間で、ＧＣＬＭ（約７倍）とＨＯ−１（約１５０倍）の誘導が最も高いことを示した（図５）。ＧＣＬＭとＨＯ−１の発現は、化合物２ｂで処置した後６時間で低くなり、４８時間でビークルに匹敵した。ＮＱＯ１の発現は、２４時間で最も高くなり、ビークルに比較して、化合物２ｂでの処置後４８時間でも、有意に上がり続けた。まとめると、これらの結果は、化合物２ｂがＮｒｆ２で調整した抗酸化防衛の強力な活性化剤であることを示唆している。
【０１３６】
６．化合物２ｂによるＮｒｆ２の活性化は、ＲＯＳ生成から独立している
マイケルアクセプタである様々な求電子剤および化合物によるＮｒｆ２の活性化は、ＲＯＳの生成、及び／又はレドックス環境、及び／又はＫｅａｐ１における直接システイン修飾の変化に起因する。Nguyen, T., et al, The Nrf2-antioxidant response element signaling pathway and its activation by oxidative stress.  J. Biol. Chem. 2009, 284, 13291-13295; McMahon, M., et al, Keap1 perceives stress via three sensors for the endogenous signaling molecules nitric oxide, zinc, and alkenals. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2010, 107, 18838-18843.ＲＯＳの発生またはレドックスの変化によって化合物２ｂがＮｒｆ２が活性化するかどうかも調べた。Ｂｅａｓ−２Ｂ細胞を、Ｎ−アセチル−システイン（ＮＡＣ、１０ｍＭ）と共に、又はＮ−アセチル−システイン（ＮＡＣ、１０ｍＭ）なしで、化合物２ｂと共保温して、２４時間後にＧＣＬＭ、ＮＱＯ１、及びＨＯ１の発現を測定した。化合物２ｂは、ＮＡＣの存在下で、Ｎｒｆ２で調整した抗酸化遺伝子の発現を増やす可能性があると考えられた（図６）。ＮＡＣ単独では、Ｎｒｆ２で調整した遺伝子の誘導を示さなかった。まとめると、これらの結果は、Ｎｒｆ２の化合物２ｂによる活性化は、ＲＯＳ又はレドックスの変化に依存することを示唆している。
【０１３７】
まとめると、細胞ベースとマウスモデルの一連のカルコン誘導体をスクリーニングした結果、例えば、化合物２ｂといった新規カルコンが、Ｎｒｆ２シグナル経路の強力な活性化剤として同定された。
【０１３８】
Ｃ．実験セクション
１．化学的性質
ａ．一般的な方法
予め被覆したメルクシリカゲル６０Ｆ２５４プレート上にＴＬＣｓを流して、紫外線下で観察した。生成物を単離して、結晶化により、あるいはテレダイン社のＩＳＣＯ  Ｒｆ  フラッシュクロマトグラフィシステムを用いて、溶離剤としてヘキサンとエチルアセテートで精製した。１Ｈ（４００ＭＨｚ）、１３Ｃ（１０１ＭＨｚ）、ｇＣＯＳＹ、及びｇＨＳＱＣ  ＮＭＲスペクトルを、内部標準としてＴＭＳを用いて、バリアン４００−ＭＲ分光光度計に取り込んだ。化学シフト（δ）は、ｐｐｍで表され、結合定数（Ｊ）はＨｚで表され、分裂パターンは以下のように記載されている。ｓ＝一重項；ｄ＝二重項；ｔ＝三重項；ｑ＝四重項；ｍ＝多重項；ｄｄ＝二重項の二重項；ｄｔ＝三重項の二重項；ｔｄ＝二重項の三重項；ｄｄｄ＝二重項の二重項の二重項。生成物と純度分析を照合するために、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＸＤＢ−Ｃ−１８カラム（５ｍｍ，４．６×１５０ｍｍ）を用いたＡｇｉｌｅｎｔ  ６２１０  Ｔｉｍｅ−Ｏｆ−Ｆｌｉｇｈｔ（ＴＯＦ） 質量検出器付Ａｇｉｌｅｎｔ  １２００シリーズのシステムに、流量０．９ｍＬ／分、溶剤システム水（０．１％のギ酸）／アセトニトリル（ＡＣＮ）を用いて、ＬＣ−ＭＳを取り込んだ（勾配：５０％ＡＣＮ＠０分、８０％ＡＣＮ＠７分、８０％ＡＣＮ＠１０分、及び５０％ＡＣＮ＠１５分）。化学物質はすべて、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ所在）から入手し、さらに生成することなく使用した。
【０１３９】
ｂ．カルコン合成の一般的手順
ここに開示されたカルコンは、スキーム１に記載した一般的方法で合成した。
2014510064.tif 000020
【０１４０】
スキーム１．ここに開示したカルコンを合成する一般的手順
１４ｍＬのバイアルで、置換したアセトフェノン（１．２５ｍｍｏｌ）と、リチウムハイドロオキサイドモノハイドレート（０．２５１ｍｍｏｌ）を、エタノール（５ｍＬ）に溶解させ、混合物を室温（ＲＴ）で１０分間撹拌し、次いで、置換したベンザルデヒド（１．２７２ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、反応混合物を室温で撹拌して、２５％のエチルアセテート／ヘキサンを溶媒系として用いてＴＬＣでモニタした。２時間後、５０ｍＬの撹拌氷水に注いで、撹拌反応物を急冷した。冷水で急冷した後生成物が沈殿したら、フィルタで濾して、熱いエタノールを用いて結晶化した。いくつかの実施例では、急冷した後水溶液中に粘着性のある塊が観察された。これらのケースでは、エチルアセテート（３×５０ｍＬ）で生成物を抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物を、エチルアセテート／ヘキサンを溶媒システムとして使用して、極性オーダを上げるフラッシュクロマトグラフィによって精製した。
【０１４１】
（Ｅ）−１−（２−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−ｐｈｅｎｙｌｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（１ｂ）：７１％の収率で、黄色油として得た。1H NMR (400 MHz, DMS) δ =7.76 -7.67 (m, 2H), 7.56 -7.46 (m, 3H), 7.44 -7.37 (m, 4H), 7.18 (d, 7 =7.9 Hz, 1H), 7.05 (td, 7 =7.5, 0.9 Hz, 1H), 3.85 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 192.60, 158.17, 142.97, 135.01, 133.53, 130.94, 129.98, 129.45, 129.23, 128.97, 127.41, 121.01, 112.79, 56.27. LC-MS (ESI-TOF): m/z 239.1072 ([Ci6H1402 + H]+ calcd. 239.1067). 純度９８．０２％（ｒｔ  ７．２１分）
【０１４２】
（Ｅ）−１−（３−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−ｐｈｅｎｙｌｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（１ｃ）：５４％の収率で、黄色油として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.95 -7.85 (m, 3H), 7.78 -7.70 (m, 2H), 7.62 -7.58 (m, 1H), 7.49 (d, 7 =8.0 Hz, 1H), 7.47 -7.42 (m, 3H), 7.23 (ddd, 7 =8.2, 2.6, 0.8 Hz, 1H), 3.84 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 189.36, 159.99, 144.57, 139.42, 135.07, 131.12, 130.40, 129.42, 129.36, 122.51, 121.52, 119.69, 113.41, 55.83. LC-MS (ESI-TOF): m/z 239.1071 ([C16H1402 + H]+ calcd. 239.1067). 純度９８．５２％（ｒｔ  ７．８４分）
【０１４３】
（Ｅ）−１−（４−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−ｐｈｅｎｙｌｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（１ｄ）：７６％の収率で、黄色油として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.16 (d, 7 = 9.0 Hz, 2H), 7.94 (d, 7 = 15.6 Hz, 1H), 7.90 -7.83 (m, 2H), 7.69 (d, 7 = 15.6 Hz, 1H), 7.44 (dd, 7 = 5.1, 1.9 Hz, 3H), 7.07 (d, 7 = 9.0 Hz, 2H), 3.85 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 187.79, 163.68, 143.60, 135.24, 131.39, 130.88, 130.85, 129.33, 129.24, 122.43, 114.48, 56.03. LC-MS (ESI-TOF): m/z 239.1068 ([Ci6H1402 + H]+ calcd. 239.1067). 純度１００．００％（ｒｔ  ７．３６分）
【０１４４】
（Ｅ）−３−ｐｈｅｎｙｌ−１−（２，４−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（１ｅ）：４０％の収率で、黄色油として得た。1H NMR (400 MHz, cdcl3) δ = 7.76 (d, 7 =8.6 Hz, 1H), 7.68 (d, 7 = 15.8 Hz, 1H), 7.60 (dd, 7 =7.3, 1.8 Hz, 2H), 7.52 (d, 7 =15.8 Hz, 1H), 7.43 -7.34 (m, 3H), 6.57 (dd, 7 =8.6, 2.2 Hz, 1H), 6.50 (d, 7 =2.1 Hz, 1H), 3.91 (s,3H), 3.87 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ = 189.73, 164.44, 160.71, 141.62, 135.32, 132.51, 130.65, 129.43, 128.78, 127.52, 121.79, 106.46, 99.07, 56.42, 56.06. LC-MS (ESI-TOF): m/z 269.1171 ([Ci7H1603 + H]+ calcd. 269.1172). 純度９６．００％（ｒｔ  ７．２５分）
【０１４５】
（Ｅ）−３−ｐｈｅｎｙｌ−１−（２，６−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（１ｆ）：６０％の収率で、白色個体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 7.72 -7.58 (m, 2H), 7.45 -7.31 (m, 4H), 7.17 (d, 7 =16.2 Hz, 1H), 6.97 (d, 7 = 16.2 Hz, 1H), 6.74 (d, J =8.4 Hz, 2H), 3.70 (s, 6H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ = 194.53, 157.29, 144.91, 134.61, 131.35, 131.11, 129.43, 129.04, 129.01, 118.25, 104.86, 56.24. LC-MS (ESI- TOF): m/z 269.1175 ([Ci7H1603 + H]+ calcd. 269.1172). 純度１００．００％（ｒｔ  ６．１９分）
【０１４６】
（Ｅ）−３−ｐｈｅｎｙｌ−１−（２，５−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（１ｇ）：６２％の収率で、黄色油として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 7.76 -7.67 (m, 2H), 7.50 (d, 7 = 16.0 Hz, 1H), 7.43 (d, 7 =2.7 Hz, 3H), 7.40 (d, 7 =12.2 Hz, 1H), 7.14 -7.09 (m, 2H), 7.03 (dd, 7 = 2.6, 0.8 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.73 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ =192.17, 153.47, 152.36, 143.16, 135.00, 130.98, 129.67, 129.46, 128.99, 127.25, 119.02, 114.36, 114.33, 56.80, 56.00. LC-MS (ESI-TOF): m/z 269.1170 ([Ci7H1603 + H]+ calcd. 269.1172). 純度９８．５９％（ｒｔ  ７．３１分）
【０１４７】
（Ｅ）−３−ｐｈｅｎｙｌ−１−（３，４−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（１ｈ）：６２％の収率で、黄色油として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.95 (d, 7 =15.6 Hz, 1H), 7.93 - 7.85 (m, 3H), 7.70 (d, 7 = 15.6 Hz, 1H), 7.60 (d, 7 = 2.0 Hz, 1H), 7.44 (dd, 7 = 1.9, 5.1 Hz, 3H), 7.09 (d, 7 = 8.5 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.84 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 187.77, 153.67, 149.23, 143.53, 135.25, 130.89, 130.87, 129.32, 129.27, 123.87, 122.36, 111.31, 111.11, 56.23, 56.02. LC-MS (ESI-TOF): m/z 269.1173 ([C17H1603 + H]+ calcd. 269.1172). 純度９７．８７％（ｒｔ  ６．３３分）
【０１４８】
（Ｅ）−３−ｐｈｅｎｙｌ−１−（３，５−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（１ｉ）：６６％の収率で黄色油として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.94 -7.86 (m, 3H). 7.73 (d, 7 =15.6 Hz, 1H), 7.44 (dd, 7 = 2.6, 3.8 Hz, 3H), 7.25 (d, 7 =2.3 Hz, 2H), 6.78 (t, 7 = 2.3 Hz, 1H), 3.82 (s, 6H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 189.16, 161.14, 144.70, 140.05, 135.06, 131.12, 129.48, 129.33, 122.46, 106.71, 105.53, 56.01. LC-MS (ESI-TOF): m/z 269.1176 ([Ci7H1603 + H]+ calcd. 269.1172). 純度１００．００％（ｒｔ  ８．０９分）
【０１４９】
（Ｅ）−３−ｐｈｅｎｙｌ−１−（３，４，５−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（１ｊ）：６８％の収率で白色個体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.99 -7.85 (m, 3H), 7.73 (d, 7 = 15.5 Hz, 1H), 7.52 -7.36 (m, 5H), 3.89 (s, 6H), 3.75 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 188.34, 153.37, 144.31, 142.44, 135.15, 133.39, 131.03, 129.42, 129.32, 122.35, 106.62, 60.64, 56.67. LC-MS (ESI-TOF): m/z 299.1284 ([Ci8H1804 + H]+ calcd. 299.1278). 純度１００．００％（ｒｔ  ６．９７分）
【０１５０】
（Ｅ）−３−ｐｈｅｎｙｌ−１−（２，３，４−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（１ｋ）：６６％の収率で白色固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 7.73 (dd, 7 = 6.8, 2,8 Hz, 2H), 7.54 (d, 7 =15.9 Hz, 1H), 7.48 -7.39 (m, 4H), 7.37 (d, 7 =8.7 Hz, 1H), 6.93 (d, 7 = 8.8 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 3.77 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ = 190.50, 157.16, 153.34, 142.86, 142.07, 135.08, 130.88, 129.47, 128.89, 126.98, 126.58, 125.60, 108.34, 62.16, 60.96, 56.54. LC-MS (ESI-TOF): m/z 299.1275 ([C18H1804 + H]+ calcd. 299.1278). 純度１００．００％（ｒｔ  ７．１９分）
【０１５１】
（Ｅ）−３−ｐｈｅｎｙｌ−１−（２，４，６−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（１ｌ）：７１％の収率で、黄色油として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 7.64 (dd, 7 = 6.6, 3.1 Hz, 2H), 7.39 (dd, 7 =5.1, 1.8 Hz, 3H), 7.19 (d, 7 =16.1 Hz, 1H), 6.94 (d, 7 =16.1 Hz, 1H), 6.30 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.70 (s, 6H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ = 193.70, 162.41, 158.53, 143.97, 134.81, 130.90, 129.46, 129.40, 128.91, 111.45, 91.53, 56.26, 55.91. LC-MS (ESI-TOF): m/z 299.1276 ([Ci8H1804 + H]+ calcd. 299.1278). 純度１００．００％（ｒｔ  ６．２３分）
【０１５２】
（Ｅ）−１−ｐｈｅｎｙｌ−３−（２−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（２ａ）：６４％の収率で、黄色個体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 8.35 (d, 7 =7.8 Hz, 1H), 8.25 -8.15 (m, 2H), 8.05 (d, 7 = 15.3 Hz, 1H), 7.98 (dd, 7 = 15.5 Hz, 2.0 Hz, 1H), 7.89 -7,76 (m, 2H), 7.76 -7.65 (m, 2H), 7.61 (t, 7 = 7.7 Hz, 2H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ = 189.33, 138.24 (d, 7 = 1.8 Hz), 137.47, 134.01, 133.42, 133.22 (d, 7 = 1.5 Hz), 130.99, 129.32, 129.26, 129, 16, 127.96 (q, 7 =29.2 Hz), 126.64, 126.62 (q, 7 =6.0 Hz), 124,61 (q, 7 = 274.5 Hz). LC-MS (ESI-TOF): m/z 277.0833 ([Ci6HiiF3o + H]+ calcd. 277.0835).純度１００．００％（ｒｔ  ６．９７分）
【０１５３】
（Ｅ）−１−（２−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（２−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（２ｂ）：７２％の収率で、黄色油として得た。1H NMR (400 MHz, cdcl3) δ =7.90 -7.82 (m, 1H), 7.71 (d, 7 = 7.8 Hz, 1H), 7.63 (d, 7 = 7.8 Hz, 1H), 7.55 (dd, 7 = 7.6 Hz, 1.8, 1H), 7.50 (t, 7 = 7.6 Hz, 1H), 7.45 -7.36 (m, 2H), 7.22 (d, 7 = 15.7 Hz, 1H), 6.97 (td, 7 = 7.5 Hz, 0.8 Hz, 1H), 6.92 (d, 7 =8.4 Hz, 1H), 3.82 (s, 4H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ =192.21, 158.40, 136.83 (d, 7 = 2.1 Hz), 134.05, 133.58, 133.29 (d, 7 = 1.6 Hz), 131.30, 130.82, 130.15, 128,79, 128.58, 127.81 (q, 7 = 29.2 Hz), 126.68 (q, 7 =5.2 Hz), 124.55 (q, 7 = 274.5 Hz), 121.07, 112.76, 56.31. LC-MS (ESI-TOF): m/z 304.0940 ([C17H13 F3O2 + H]+ calcd. 307.0940).純度９６．４０％（ｒｔ  ８．６９分）
【０１５４】
（Ｅ）−１−（３−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（２−ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（２ｃ）：２６％の収率で、黄色個体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 8.35 (d, 7 = 7.9 Hz, 1H), 8.06 -7.94 (m, 2H), 7.88 -7.76 (m, 3H), 7.72 -7.63 (m, 2H), 7.52 (t, 7 = 7.9 Hz, 1H), 7.28 (ddd, 7 = 8.2 Hz, 2.7 Hz, 0.8 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H). *H NMR (400 MHz, cdcl3) δ = 8.13 (d, 7 = 15.6 Hz, 1H), 7.83 (d, 7 = 7.8 Hz, 1H), 7.74 (d, 7 = 7.8 Hz, 1H), 7.60 (dd, 7 =13.7 Hz, 7.1 Hz, 2H), 7.55 -7.47 (m, 2H), 7.41 (dd, 7 =15.9 Hz, 8.5 Hz, 2H), 7.15 (dd, 7= 8.2 Hz, 1.9 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ = 189.12, 160.04, 138.92, 138.33 (d, 7 =2.2 Hz), 133.41, 133.21 (d, 7 = 1.7 Hz), 131.00, 130.47, 129.32, 127.96 (d, 7 =29.2 Hz), 126.71, 126.62 (d, 7 =6.0 Hz), 124.62 (d, J =273.5 Hz), 121.69, 120.04, 113.64, 55.86. LC-MS (ESI-TOF): m/z 304.0945 ([Ci7H13F302 + H]+ calcd. 307.0940).純度１００．００％（ｒｔ  ９．１３分）
【０１５５】
（Ｅ）−１−（４−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（２−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（２ｄ）：３７％の収率で、黄色個体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ =8.34 (d, 7 =7.9 Hz, 1H), 8.24 -8.17 (m, 2H), 8.04 (d, 7 = 15.3 Hz, 1H), 7.95 (dd, 7 =15.4 Hz, 2.2, 1H), 7.87 -7.76 (m, 2H), 7.67 (t, 7 = 7.6 Hz, 1H), 7.16 -7.07 (m, 2H), 3.89 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ = 187.42, 164.00, 137.46 (d, 7 = 2.2 Hz), 133.45 (d, 7 = 1.6 Hz), 133.38, 131.63, 130.78, 130.40, 129.21, 127.87 (d, 7 = 29.2 Hz), 126.67,126.58 (d, 7 = 6.0 Hz), 124.64 (d, 7 = 274.5 Hz), 114.58, 56.08. LC-MS (ESI-TOF): m/z 304.0944 ([Ci7H13F302 + H]+ calcd. 307.0940).純度１００．００％（ｒｔ  ８．７５分）
【０１５６】
（Ｅ）−１−（２，４−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（２−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（２ｅ）：５０％の収率で、黄色個体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 8.07 (d, 7 = 7.6 Hz, 1H), 7.79 (dt, 7 = 14.8 Hz, 7.9 Hz, 3H), 7.69 -7.60 (m, 3H), 6.71 (d, 7 = 2.3 Hz, 1H), 6.67 (dd, 7 = 8.6 Hz, 2.3 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.87 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ = 189.18, 164.88, 161.01, 135.47 (d, 7 = 2.0 Hz), 133.64 (d, 7 = 1.3 Hz), 133.59, 132.74, 131.55, 130.55, 128.69, 127.74 (d, 7 = 29.2 Hz), 126.64 (d, 7 = 6.0 Hz), 124.62 (d, 7 = 274.5 Hz) 121.23, 106.69, 99.04, 56.50, 56.13. LC-MS (ESI-TOF): m/z 337.1050 ([Ci8H15F303 + H]+ calcd. 337.1046). 純度１００．００％（ｒｔ  ８．７１分）
【０１５７】
（Ｅ）−１−（２，６−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（２−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（２ｆ）：６７％の収率で、白色固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.07 (s, 1H), 8.01 (d, 7 = 7.9 Hz, 1H), 7.74 (d, 7 = 7.8 Hz, 1H), 7.61 (t, 7= 7.8 Hz, 1H), 7.38 (t, 7= 8.4 Hz, 1H), 7.30 (d, 7 = 16.3 Hz; 1H), 7.14 (d, J =16.2 Hz, 1H), 6.74 (d, 7 = 8.5 Hz, 2H), 3.70 (s, 6H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 194.45, 157.36, 142.84, 135.92, 132.43, 131.45, 130.69, 130.41, 130.26 (q, 7 =31.1 Hz), 127.17 (q, 7 =3.6 Hz), 125.92 (q, 7 = 3.8 Hz), 124.38 (q, 7 = 272.5 Hz), 118.22, 104.90, 56.27. LC-MS (ESI-TOF): m/z 337.1045 ([Ci8H15F303 + H]+ calcd. 337.1046).純度１００．００％（ｒｔ  ７．６８分）
【０１５８】
（Ｅ）−１−（２，５−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（２−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（２ｇ）：８０％の収率で、黄色個体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 8.09 (d, 7 = 7.9 Hz, 1H), 7.83 (d, 7 = 8.0 Hz, 1H), 7.80 -7.72 (m, 2H), 7.65 (t, 7 = 7.6 Hz, 1H), 7.51 (d, 7 = 15.7 Hz, 1H), 7.16 (d, 7 = 1.8 Hz, 2H), 7.09 (t, 7 = 1.8 Hz, IH), 3.83 (s, 3H), 3.76 (s, 3H). 1JC NMR (101 MHz, DMSO) δ = 191.72, 153.50, 152.64, 136.95 (d, 7 =2.1 Hz), 133.59, 133.28 (d, 7 = 1.7 Hz), 131.14, 130.86, 128.96, 128.79, 127.82 (q, 7 = 29.2 Hz), 126.69 (q, 7 =16.6 Hz), 124.56 (d, 7 =273.5 Hz), 119.72, 114.41, 114.33, 56.80, 56.04. LC-MS (ESI-TOF): m/z 337.1049 ([Ci8H15F303 + H]+ calcd. 337.1046). 純度１００．００％（ｒｔ  ８．７６分）
【０１５９】
（Ｅ）−１−（３，４−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（２−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（２ｈ）：７２％の収率で、黄色個体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ =8.33 (d, 7 = 7.8 Hz, IH), 8.04 (d, 7 =15.3 Hz, IH), 7.96 (dd, 7 =6.2 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.94 (d, 7= 2.0 Hz, IH), 7.84 (d, 7 =7.8 Hz, IH), 7.80 (t, 7 =7.6 Hz, IH), 7.67 (t, 7 =7.7 Hz, IH), 7.63 (d, 7 =2.0 Hz, IH), 7.13 (d, 7 =8.5 Hz, IH), 3.89 (s, 3H), 3.87 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ = 187.44, 154.02, 149.31, 137.42 (d, 7 =2.0 Hz), 133.49 (d, 7 =1.0 Hz), 133.37, 130.76, 130.44, 129.26, 127.85 (q, 7 =29.2 Hz), 126.66, 126.58 (q, 7 =5.2 Hz), 124.65 (q, 7 = 273.5 Hz), 124.22, 111.40, 111.28, 56.28, 56.07. LC-MS (ESI-TOF): m/z 337.1048 ([Ci8H15 F303 + H]+ calcd. 337.1046).純度１００．００％（ｒｔ  ７．７７分）
【０１６０】
（Ｅ）−１−（３，５−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（２−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（２ｉ）：７２％の収率で、黄色油として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ =8.36 (d, 7 =7.9 Hz, IH), 7.98 (s, 2H), 7.85 (d, 7 =7.8 Hz, IH), 7.80 (t, 7 = 7.6 Hz, IH), 7.68 (t, 7 =7.6 Hz, IH), 7.30 (d, 7 =2.2, Hz 2H), 6.83 (t, 7 =2.2 Hz, IH), 3.85 (s, 6H). *H NMR (400 MHz, cdcl3) δ = 8.12 (d, 7 = 13.9 Hz, IH), 7.82 (d, 7 =7.8 Hz, IH), 7.73 (d, 7 =7.8 Hz, IH), 7.61 (t, 7 =7.6 Hz, IH), 7.51 (t, 7 =7.7 Hz, IH), 7.35 (d, 7 =15.6 Hz, IH), 7.14 (d, 7 =2.2 Hz, 2H), 6.69 (t, 7 = 2.1 Hz, IH), 3.86 (s, 7H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ = 188.97, 161.20, 139.53, 138.45 (d, 7 = 2.2 Hz), 133.39, 133.18 (d, 7 = 1.6 Hz), 131.00, 129.40, 127.96 (q, 7 =29.2 Hz), 126.67, 129.60 (q, 7 = 5.2 Hz), 124.62 (q, 7 =273.5 Hz), 106.93, 105.88, 56.05. LC-MS (ESI-TOF): m/z 337.1047 ([Ci8H15F303 + H]+ calcd. 337.1046).純度１００．００％（ｒｔ  ９．３７分）
【０１６１】
（Ｅ）−１−（３，４，５，Ｓ．Ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（２−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（２ｊ）：８０％の収率で、黄色個体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ =8.31 (d, 7 = 7.8 Hz, IH), 8.02 (d, 7 =15.2 Hz, IH), 7.95 (dd, 7 =15.4 Hz, 2.1 Hz, IH), 7.83 (d, 7 = 8.0 Hz, IH), 7.78 (d, 7 =7.7 Hz, IH), 7.66 (t, 7 =7.6 Hz, IH), 7.44 (s, 2H), 3.88 (s, 6H), 3.76 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ =188.07, 153.41, 142.77, 138.14 (d, 7 =2.0), 133.37, 132.86, 130.91, 129.40, 127.77 (q, 7 = 29.2 Hz), 126.61, 126.61 (q, 7 = 5.0 Hz), 124.63 (q, 7 = 274.5 Hz), 106.86, 60.66, 56.68. LC-MS (ESI-TOF): m/z 367.1160 ([Ci9H17F304 + H]+ calcd. 367.1152).純度１００．００％（ｒｔ  ８．３８分）
【０１６２】
（Ｅ）−１−（２，３，４−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙ）−３−（２−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（２ｋ）：５８％の収率で、黄色個体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ =8.10 (d, 7 = 7.7 Hz, 1H), 7.80 (dt, 7= 22.4,7.7 Hz, 3H), 7.66 (t, 7 = 7.6 Hz, 1H), 7.56 (d, 7 = 15.5 Hz, 1H), 7.46 (d, 7 = 8.8 Hz, 1 H), 6.97 (d, 7 =8.9 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 3.80 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ = 189.74, 157.66, 153.66, 142.08, 136.44 (d, 7= 2.1 Hz), 133.60, 133.46 (d, 7 =2.0 Hz), 131.02, 130.73, 128.71, 127.78 (d, 7 =29.2 Hz), 126.66 (d, 7 = 5.0 Hz), 125.95 (d, 7 = 7.0 Hz), 124.59 (d, 7 = 274.5 Hz), 108.48, 62.21, 60.98, 56.60. LC-MS (ESI-TOF): m/z 367.1152 ([Ci9H17F304 + H]+ calcd. 367.1152)純度９６．１７％（ｒｔ  ８．７０分）
【０１６３】
（Ｅ）−１−（２，４，６−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（２−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（２ｌ）：７２％の収率で、黄色個体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ =8.04 (d, 7 = 7.8 Hz, 1H), 7.77 (d, 7 =7.7 Hz, 1H), 7.71 (t, 7 =7.5 Hz, 1H), 7.60 (t, 7 =7.6 Hz, 1H), 7.48 (dd, 7 = 15.9 , 2.2 Hz, 1H), 7.01 (d, 7 = 15.8 Hz, 1H), 6.30 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.70 (s, 6H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ =193.37, 162.78, 162.78, 158.71, 138.33 (d, 7 =2.2 Hz), 133.51, 133.07, 130.80, 128.83, 127.58 (q, 7 = 29.2 Hz), 126.61 (q, 7 = 6.0 Hz); 124.46 (q, J =274.5 Hz), 110.73, 91.34, 56.23, 55.96. LC-MS (ESI-TOF): m/z 367.1157 ([Ci9H17F304 + H]+ calcd. 367.1152).純度９６．１７％（ｒｔ  ７．５８分）
【０１６４】
（Ｅ）−１−ｐｈｅｎｙｌ−３−（３−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（３ａ）：６８％の収率で、白色固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.36 (s, 1H), 8.26 -8.18 (m, 3H), 8.15 (d, 7 = 15.7 Hz, 1H), 7.89 -7.78 (m, 2H), 7.75 -7.67 (m, 2H), 7.64 -7.57 (m, 2H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 189.51,142.61, 137.72, 136.28, 133.83, 133.36, 130.38, 130.26 (q, 7 =28.1 Hz), 127.14 (q, 7 = 3.8 Hz), 125.62 (q, 7 =3.7 Hz), 124.15 (q, 7 = 272.5 Hz), 124.38. LC-MS (ESI-TOF): m/z 277.0840 ([Ci6HnF30 + H]+ calcd. 277.0835). 純度１００．００％（ｒｔ  ９．２０分）
【０１６５】
（Ｅ）−１−（２ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（３−ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（３ｂ）：４５％の収率で、黄色油として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.57 (t, 7 =1.9 Hz, 1H), 8.29 -8.19 (m, 2H), 7.73 (t, 7 =8.0 Hz, 1H), 7.69 -7.61 (m, 2H), 7.61 -7.57 (m, 1H), 7.57 -7.52 (m, 1H), 7.22 (d, 7 =7.9 Hz, 1H), 7.08 (td, 7 = 7.5, 0.9 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H). LC-MS (ESI-TOF): m/z 304.0941 ([Ci7H13F302 + H]+t calcd. 307.0940). 純度９６．００％（ｒｔ  ８．８８分）
【０１６６】
（Ｅ）−１−（３−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（３−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（３ｃ）：２１％の収率で、白色個体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.35 (s, 1H), 8.21 (d, 7 =7.8 Hz, 1H), 8.11 (d, 7 =15.7 Hz, 1 H), 7.87 -7.77 (m, 3H), 7.70 (t, 7 =7.78 Hz, 1H), 7.66 (dd, 7 =1.6, 2.5 Hz, 1H), 7.52 (t, 7 =7.94 Hz, 1H), 7.27 (ddd, 7 =0.8, 2.6, 8.2 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 189.28, 160.03, 142.68, 139.18, 136.27, 133.32, 130.41, 130.36, 130.25 (q, 7 =31.2 Hz), 127.15 (q, J =3.7 Hz), 125.72 (q, 7= 3.7 Hz), 124.50 (q, 7= 272.5 Hz), 124.46, 121.70, 119.76, 113.68, 55.85. LC-MS (ESI-TOF): m/z 304.0945 ([CnH^Oz + H]+ calcd. 307.0940). 純度１００．００％（ｒｔ  ９．３５分）
【０１６７】
（Ｅ）−１−（４−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（３ｄ）：５９％の収率で、白色個体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.33 (s, 1H), 8.24-8.20 (m, 2H), 8.18 (d, 7 = 7.8 Hz, 1H), 8.13 (d, 7 = 15.7 Hz, 1H), 7.82 -7.74 (m, 2H), 7.69 (t, 7 =7.8 Hz, 1H), 7.14 -7.07 (m, 2H), 3.88 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 187.69, 163.85, 141.74, 136.45, 133.23, 131.57, 130.67, 130.34, 130.24 (q, 7 = 32.7 Hz), 126.93 (q, 7 =3.8 Hz), 125.49 (q, 7 =3.7 Hz), 124.52 (q, 7 =272.5 Hz), 124.45, 114.49, 56.05. LC-MS (ESI-TOF): m/z 304.0951 ([Ci7H13F302 + H]+ calcd. 307.0940). Purity 100.00% (rt 8.99 min).純度１００．００％（ｒｔ  ８．９９分）
【０１６８】
（Ｅ）−１−（２，４−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（３−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（３ｅ）：５２％の収率で、白色個体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.11 -8.03 (m, 2H), 7.77 (d, 7 =7.8 Hz, 1H), 7.72 -7.58 (m, 4H), 6.70 (d, 7 =2.3 Hz, 1H), 6.66 (dd, 7 = 2.3, 8.6 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.86 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, d2o) δ 189.57, 164.52, 160.77, 139.58, 136.52, 132.49, 131.97, 130.39, 130.18 (q, 7 =31.2 Hz), 129.38, 126.69 (q, 7 =3.7 Hz), 125.52 (q, 7 = 3.8 Hz, H), 124.37 (q, 7 = 272.5 Hz), 121.55, 106.44, 99.03, 56.38, 56.02. LC-MS (ESI-TOF): m/z 337.1044 ([Ci8H15F303 + H]+ calcd. 337.1046). 純度１００．００％（ｒｔ  ８．９３分）
【０１６９】
（Ｅ）−１−（２，６−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（３−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（３ｆ）：７２％の収率で、淡黄色油として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ =8.07 (d, 7 =7.8 Hz, 1H), 7.76 (d, 7 =7.8, 1H), 7.71 (dd, 7 =11.4 Hz, 4.0 Hz, 1H), 7.61 (t, 7 =7.6 Hz, 1H), 7.45 (d, 7 =2.1 Hz, 1H), 7.40 (dd, 7 = 11.1 Hz, 5.7 Hz, 1H), 7.02 (d, 7 = 15.9 Hz, 1H), 6.75 (d, 7 = 8.4 Hz, 2H), 3.70 (s, 6H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ = 194.52, 157.33, 139.62 (d, 7 =2.2 Hz), 133.52, 132.81 (d, 7 =1.6 Hz), 132.57, 131.77, 131.02, 128.90, 127.59 (q, 7 = 30.2 Hz), 126.64 (q, 7 =5.7 Hz), 124.38 (q, 7 == 274.5 Hz), 117.44, 104.69, 56.22. LC-MS (ESI-TOF): m/z 337.1050 ([Ci8H15F303 + H]+ calcd. 337.1046).純度９８．６５％（ｒｔ  ７．８３分）
【０１７０】
（Ｅ）−１−（２，５−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（３−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（３ｇ）：７１％の収率で、黄色油として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.12 (s, 1H), 8.08 (d, 7 =7.8 Hz, 1 H), 7.79 (d, 7 =7.8 Hz, 1H), 7.67 (t, 7 = 7.8 Hz, 1H), 7.62 (d, 7 = 16.1 Hz, 1H), 7.55 (dd, 7 = 0.9,16.0 Hz, 1H), 7.18 -7.12 (m, 2H), 7.09 -7.03 (m, 1H), 3.82 (d, 7 =0.8 Hz, 3H), 3.76 (d, 7 = 0.9 Hz, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 192.15, 153.49, 152.47, 141.17, 136.27, 132.29, 130.48, 130.27 (q, 7 = 31.2 Hz), 129.50, 129.14, 127.06 (q, 7 = 3.7 Hz), 125.83 (q, 7 =3.3 Hz), 124.42 (d, 7 =272.5 Hz), 119.20, 114.42, 114.37, 56.84, 56.04. LC-MS (ESI-TOF): m/z 337.1048 ([Ci8H15F303 + H]+ calcd. 337.1046). 純度９６．６％（ｒｔ  ８．９６分）
【０１７１】
（Ｅ）−１−（３，４−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（３−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（３ｈ）：６４％の収率で、白色個体として得た。1H NMR (400 MHz, d2o) δ 8.11 (dd, 7 = 11.7, 8.7 Hz, 3H), 7.98 -7.91 (m, 1H), 7.79 (dd, 7 =19.6,12.0 Hz, 3H), 7.63 (d, J =1.9 Hz, 1H), 7.13 (d, 7 = 8.5 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.87 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, d2o) δ 187.59, 153.86, 149.24, 141.43, 139.26 (d, 7 = 1.3 Hz), 130.59, 130.23 (d, 7 =31.2 Hz), 129.74, 126.02 (q, 7 = 3.7 Hz), 125.06, 124.45 (d, 7 = 272.5 Hz), 124.08, 111.29, 111.13, 56.21, 56.00. LC-MS (ESI-TOF): m/z 337.1041 ([Ci8H15F303 + H]+ calcd. 337.1046). 純度９８．４７％（ｒｔ  ８．０３分）
【０１７２】
（Ｅ）−１−（３，５−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（３−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（３ｉ）：７２％の収率で、淡黄色固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.34 (s, 1H), 8.22 (d, 7 = 7.S Hz, 1H), 8.08 (d, 7 = 15.7 Hz, 1H), 7.88 -7.77 (m, 2H), 7.70 (t, 7 = 7.8 Hz, 1 H), 7.32 (d, 7 = 2.3 Hz, 2H), 6.83 (t, 7 =2.2 Hz, 1H), 3.85 (s, 6H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 189.08, 161.18, 142.83, 139.77, 136.24, 133.33, 130.33, 130.24 (q, 7 = 32.2 Hz), 127.17 (q, 7 =3.6 Hz), 125.85 (q, 7 =3.7 Hz), 124.50 (q, 7 =273.5 Hz), 124.36, 106.98, 105.52, 56.03. LC-MS (ESI-TOF): m/z 337.1049 ([Ci8H15F303 + H]+ calcd. 337.1046).純度１００．００％（ｒｔ  ９．５５分）
【０１７３】
（Ｅ）−１−（３，４，５−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（３−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（３ｊ）：６０％の収率で、白色個体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.28 -8.19 (m, 2H), 8.06 (d, 7 = 15.7 Hz, 1H), 7.86 -7.75 (m, 2H), 7.69 (t, 7 =7.8 Hz, 1H), 7.44 (s, 2H), 3.89 (s, 6H), 3.76 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 188.34, 153.39, 142.69, 142.48, 136.33, 133.16, 132.95, 130.33, 130.24 (q, 7 = 32.2 Hz), 127.13 (q, 7 = 3.7 Hz), 126.02 (q, 7 =3.7 Hz), 124.49 (q, 7 = 272.5 Hz), 124.34, 106.90, 60.66, 56.75. LC-MS (ESI-TOF): m/z 367.1155 ([Ci9H17F304 + H]+ calcd. 367.1152).純度９６．１７％（ｒｔ  ８．６１分）
【０１７４】
（Ｅ）−１−（２，３，４−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（３−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（３ｋ）：４６％の収率で、黄色油として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.13 (s, 1H), 8.09 (d, 7 = 7.8 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 7,7 Hz, 1H); 7.71 -7.56 (m, 3H), 7.42 (d, 7 = 8.7 Hz, 1H), 6.96 (d, 7 =8.9 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.85 (s, 3H), 3.80 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 190.46, 157.30, 153.41, 142.11, 140.87, 136.36, 132.23, 130.49, 130.27 (q, 7 = 31.2 Hz), 128,92, 126.96 (q, 7 =3.7 Hz), 126.42, 125.69, 125.66 (q, J = 5.0 Hz), 124.43 (q, 7 =272.5 Hz), 108.33, 62.14, 60.97, 56.57. LC-MS (ESI-TOF): m/z 367.1157 ([Ci9H17F30 4 + H]+ calcd. 367.1152). 純度９７．９９％（ｒｔ８．８３分）
【０１７５】
（Ｅ）−１−（２，４，６−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（３−ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（３ｌ）：６９％の収率で、淡黄色油として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.05 (s, 1H), 8.00 (d, 7 = 7.8 Hz, 1H), 7.73 (d, 7 = 7.8 Hz, 1H), 7.61 (t, 7 = 7.8 Hz, 1H), 7.32 (d, 7 = 16.2 Hz, 1H), 7.11 (d, 7 = 16.2 Hz, 1H), 6.30 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.70 (s, 6H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 193.58, 162.54, 158.63, 141.94, 136.11, 132.29, 130.39, 130.24 (q, 7 =30.2 Hz), 127.00 (d, 7 =4.0 Hz), 125.81 (d, 7 = 4.0 Hz), 124.40 (q, 7 = 31 272.5 Hz), 111.35, 91.55, 56.27, 55.93. LC-MS (ESI-TOF): m/z 367.1154 ([Ci9H17F304 + H]+ calcd. 367.1152). 純度１００．００％（ｒｔ  ７．８６分）
【０１７６】
（Ｅ）−１−ｐｈｅｎｙｌ−３−（４−ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（４ａ）：５９％の収率で、白色個体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.20 -8.11 (m, 3H), 8.08 (d, 7 = 15.7 Hz, 2H), 7.83 -7.75 (m, 3H), 7.72 -7.65 (m, 1H), 7.62 -7.54 (m, 2H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) 5189.53, 142.43, 139.13 (d, 7= 1.3 Hz), 137.68, 133.87,130.49 (q, 7 =32.2 Hz), 129.91, 129.30, 129.11, 126.14 (q, 7 = 3.8 Hz), 125.13, 124.44 (q, 7 = 272.5 Hz). LC-MS (ESI-TOF): m/z 277.0834 ([Ci6HnF30 + H]+ calcd, 277.0835).純度１００．００％（ｒｔ  ９．３５分）
【０１７７】
（Ｅ）−１−（２−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（４−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（４ａ）：７９％の収率で、黄色油として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.97 (d, 7 =8.1 Hz, 2H), 7.79 (d, 7 = 8.2 Hz, 2H), 7.72 (d, 7 = 8.2 Hz, 1H), 7.61 -7.48 (m, 6H), 7.22 (d, 7 = 8.0 Hz, 1H), 7.08 (td, 7 = 7.5, 0.9 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.86 (s, 2H). LC-MS (ESI-TOF): m/z 304.0948 ([Ci7H13F302 + H]+ calcd. 307.0940).純度９４．００％（ｒｔ  ９．０９分）
【０１７８】
（Ｅ）−１−（３−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−４−（４−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（４ｂ）：６１％の収率で、白色個体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.14 (d, 7 =8.1 Hz, 2H), 8.07 (d, 7 = 15.7 Hz, 1H), 7.85 -7.80 (m, 3H), 7.79 (d, 7 = 4.3 Hz, 1H), 7.67 -7.62 (m, 1 H), 7.52 (t, 7 =7,9 Hz, 1H), 7.27 (dd, 7 = 8.2, 2.6 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 189.29, 160.04, 142.49, 139.13, 13.50 (d, 7 = 31.2 Hz), 130.45, 129.95, 126.12 (q, 7 = 3.7 Hz), 124.5 (d, 7 =272.46 Hz), 125.20, 121.65, 119.90, 113.58, 55.86. LC-MS (ESI-TOF): m z 304.0943 ([CnH^Oz + H]+ calcd. 307.0940).純度１００．００％（ｒｔ  ９．５２分）
【０１７９】
（Ｅ）−１−（４−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（４−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（４ｄ）：５６％の収率で、白色個体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.23 -8.01 (m, 5H), 7.76 (dd, 7 = 21.4, 11.6 Hz, 3H), 7.08 (d, 7 = 8.2 Hz, 2H), 3.86 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 187.70, 163.89, 141.58, 139.30, 131.55, 130.60, 130.32 (d, 7 = 32.2 Hz), 129.78, 126.11 (dd, 7 =3.8 Hz), 125.18, 124.5 (d, 7 =272.5 Hz), 114.55,56.06. LC-MS (ESI-TOF): m/z 304.0940 ([CnH^Oz + H]+ calcd. 307.0940). 純度１００．００％（ｒｔ  ９．１３分）
【０１８０】
（Ｅ）−１−（２，４−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（４−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（４ｅ）：４０％の収率で、オフホワイト個体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.92 (d, 7 = 7.4 Hz, 2H), 7.76 (d, 7 =7.5 Hz, 2H), 7.70 -7.50 (m, 3H), 6.74 -6.57 (m, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.84 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 189.45, 164.74, 160.94, 139.41, 132.65, 130.12) q, J= 32.2 Hz), 130.10, 129.33, 126.21 (dd, 7= 3.5 Hz), 124.50 (d, 7= 272.5 Hz), 121.48, 106.62, 99.07, 56.48, 56.10. LC-MS (ESI-TOF): m/z 337.1046 ([Ci8H15F303 + H]+ calcd. 337.1046). 純度９６．３５％（ｒｔ  ９．１３分）
【０１８１】
（Ｅ）−１−（２，６−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（４−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（４ｆ）：６４％の収率で、淡黄色固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.92 (d, 7 = 8.3 Hz, 2H), 7.75 (d, 7 = 8,2 Hz, 2H), 7.41 (t, 7 = 8.4 Hz, 1H), 7.29 (d, 7 = 16.2 Hz, 1H), 7.13 (d, 7 =16.2 Hz, 1H), 6.77 (d, 7 = 8.5 Hz, 2H), 3.73 (s, 6H). 13C NMR (101 153.39, 149.18, 142.64, 139.01, 134.20, 132.84, 131.45, 130.35, 130.12, 126.80, 125.16, 106.80, 60.66, 56.65. LC-MS (ESI-TOF): m/z 344.1130 ([Ci8H17N06 + H]+ calcd. 344.1129). 純度９９．００％（ｒｔ  ６．２５分）
【０１８２】
（Ｅ）−１−（２，３，４−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（２−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（５ｋ）：３２％の収率で、淡白色個体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 8.07 (d, 7 = 8.0 Hz, 1H), 7.97 (d, 7 = 7.6 Hz, 1H), 7.85 -7.75 (m, 2H), 7.67 (t, 7 = 7.7 Hz, 1H), 7.43 (dd, 7 = 12.2 Hz, 3.2 Hz, 2H), 6.95 (d, 7 =8.8 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 3.77 (s, 3H). LC-MS (ESI-TOF): m/z 344.1127 ([Ci8H17N06 + H]+t calcd. 344.1129). 純度１００．００％（ｒｔ  ６．５２分）
【０１８３】
（Ｅ）−１−（２，４，６−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−３−（２−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ（５ｌ）：６１%の収率で、黄色固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ = 8.03 (dd, 7 =8.1 Hz, 1.0, 1H), 7.93 (d, 7 =7.7 Hz, 1H), 7.75 (t, 7 = 7.6 Hz, 1H), 7.64 (t, 7 = 7.8 Hz, 1H), 7.53 (d, 7 =15.9 Hz, 1H), 6.92 (d, 7 = 15.9 Hz, 1H), 6.30 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.72 (s, 6H). 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ = 193.25, 162.76, 158.80, 148.78, 138.79, 134.30, 133.17, 131.33, 130.06, 129.61, 125.18, 110.82, 91.42, 56.26, 55.94. LC-MS (ESI-TOF): m/z 344.1141 ([Ci8H17N06 + H]+ calcd. 344.1129). 純度１００．００％（ｒｔ  ５．７７分）
【０１８４】
２．バイオロジィ
ａ．細胞培養及び処理
ヒト気管支上皮（Ｂｅａｓ−２Ｂ）細胞を、１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ、１００ｍｇ／Ｌのゲンタミシン及びゲネチシンを添加したＤＭＥＭ：Ｆ１２（ｐＨ７．４）中で培養した。Ｂｅａｓ−２Ｂ細胞を、４８−ウエルプレートで２４時間成長させて、ＤＭＳＯ中に溶かした一連のカルコン誘導体で数回処置した。ＤＭＳＯの濃度は０．１％を超えないようにした。ＲＮＡを単離して、１６時間後に遺伝子発現を測定した。
【０１８５】
ｂ．細胞生存判別試験
ここに開示したカルコン誘導体の細胞毒性を、トリパンブルー色素排除試験を用いて分析し、記載した被食分析メチルチアゾオリジフェニル−テトラゾリウム  ブロミド（ＭＴＴ）試験によって、更に確認した。Kumar, S., et al., A chromone analog inhibits TNF-alpha induced expression of cell adhesion molecules on human endothelial cells via blocking NF-kappaB activation. Bioorg. Mad. Chem. 2007, 15, 2952-2962。簡単に言うと、Ｂｅａｓ−２Ｂ細胞をカルコン類似体又はＤＭＳＯ単独（０．１％、ビークルとして）で２４時間処理した。培養が終わる４時間前に培地を取り除き、１００μＬのＭＴＴ（無血清培地中、５ｍｇ／ｍＬ）を各ウエルに加えた。４時間後ＭＴＴを取り除いて、ＰＢＳで細胞を洗浄し、１００μＬのＤＭＳＯを各ウエルに加えて、不水溶性ＭＴＴ−ホルマザン結晶を溶かした。プレートリーダに、５７０ｎｍで吸光度を記録した（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ所在）。
【０１８６】
ｃ．安定した形質転換体の生成
Ｂｅａｄ−２Ｂ細胞を、３μｇのＮＱＯ１−ＡＲＥレポータプラズミドと、０．３μｇのｐＵＢ６空ベクトル（インビトロゲン）で形質転換して、ＡＲＥルシフェラーゼレポータプラズミドを過剰発現したＢｅａｓ−２Ｂ細胞を取得した。濃度６μｇ／ｍＬのブラストサイジンを用いて、安定した形質転換体を選択した。安定したクローンを拡大させ、ＡＲＥルシフェラーゼの発現用にスクリーニングした。Micheli, F., et al., A combinatorial approach to [1,5]benzothiazepine derivatives as potential antibacterial agents. J. Comb. Chem. 2001, 3, 224-228。
【０１８７】
ｄ．ＡＲＥレポータ試験
ＮＱＯ１−ＡＲＥルシフェラーゼを安定的に発現しているＢｅａｓ−２Ｂ細胞を、９６−ウエルプレートに、試験化合物と共に培養する前に１６時間、１０，０００細胞／ウエルの密度で植えつけた。次の日に、細胞を、表示した濃度の化合物２ｂで処理した。細胞を、更に、溶剤として使用したＤＭＳＯで処理した。ルシフェラーゼ試験キット（Ｐｒｏｍｅｇａ社、Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ所在）を用いて１６時間露出させたのち、レポータ活性を測定した。ルシフェラーゼ活性の増加レベルが、Ｎｒｆ２活性の度合いを反映している。Singh, A., et al, dysfunctional KEAP1-NRF2 interaction in non-small-cell lung cancer. PLoS Mad. 2006, 3, 1866-1876。
【０１８８】
ｅ．インビボ検査におけるマウス
マウスに関するすべての実験は、米国動物福祉法で設定された基準、ＮＩＨガイドライン及びジョーンズ・ホプキン大学動物実験委員会の方針及び手順に基づいて行った。Ｃ５７ＢＬ／６マウス（オス、７週齢）をＡＩＮ７６Ａ食餌（Ｈａｒｌａｎ  Ｔｅｋｌａｎｄ社、Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ所在）で維持して、不断給水を行い、ある温度（２０−２３℃の範囲）で、１２時間の明／暗サイクルで、ハウスに入れた。マウスをカルコン類似体（５０ｍｇ／体重１ｋｇ）、ビークル、または陽性対照としてスルフォラファンで、強制飼養処置した。２４時間の処置の後、小腸を摘出し、分析を行うまで−８０℃で保存した。
【０１８９】
ｆ．ＲＮＡ抽出及び遺伝子発現分析
全ＲＮＡを、Ｑｉａｇｅｎ  ＲＮｅａｓｙ  キット（Ｑｉａｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社、Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ所在）を用いて細胞／組織から抽出し、製造者（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ，ＵＳＡ所在）の推奨によりランダムヘキサマとＭｕｌｔｉＳｃｒｉｂｅ逆転写酵素を用いて、逆転写を行った。Ｎｒｆ２、ＮＱＯ１、ＨＯ１、及びＧＣＬＭの定量的なリアルタイムでのＲＴ−ＰＣＲ分析を、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ社からのオン・デマンド分析プライマとプローブセットを用いて行った。ＡＢＩ７０００Ｔａｑｍａｎ  システム（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ，ＵＳＡ所在）を用いて、試験を行った。正規化にはβ−アクチンを用いた。
【０１９０】
３．統計
値は、平均±ＳＥで表示しており、スチューデントｔ−試験で分析した。差は、Ｐ≦０．０５で有意である。
【０１９１】
実施例２
２−ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ−２’−ｍｅｔｈｏｘｙｃｈａｌｏｎｅは全身を放射線に暴露させたマウスの死亡率を低下させる
放射線障害は、放射線治療、事故による被曝、あるいはテロリストや戦時の活動による核の脅威において、外部照射や、全身照射、又は体の一部の照射から生じることがある。放射線暴露は、例えば、肺線維症といった、短期（急性放射線症候群）あるいは長期の疾患を引き起こす。急性放射線症候群の臨床的要素には、造血症候群、胃腸症候群、および脳血管症候群が含まれ、これは数日から数週間以内に生じる。
【０１９２】
造血症候群は、かなりの身体部分あるいは全身の放射線暴露に伴って見られ、骨髄の形成不全又は無形性が特徴である。これらの変化によって、感染に対する汎血球減少症傾向、出血、創傷治癒不良が生じ、これらはすべて死の一因となる。
【０１９３】
胃腸症候群では、放射線が、腸陰窩の欠損と、粘膜関門の障害を引き起こす。これらの変化によって、腹部通、下痢、吐き気、嘔吐が生じ、患者が感染症にかかりやすくなる。
【０１９４】
皮膚症候群には、熱及び放射線によるやけどから生じる皮膚損傷が含まれ、上皮と真皮の欠損が特徴である。皮膚に対する損傷は、小さな領域のみにわたるが、柔組織へと深く拡大し、下にある筋肉や骨までに達することがある。
【０１９５】
放射線障害のメカニズム
放射線照射によって発生するＲＯＳと求電子が、急性及び慢性の病的生涯を引き起こす鍵である。ＲＯＳは、生体分子に参加的損傷を誘発し、造血細胞、内皮細胞、及び上皮細胞のアポトーシスを引き起こす。造血細胞の欠乏によって、免疫応答に障害が起こし、患者が二次障害にかかりやすくなる。内皮細胞と外皮細胞の死滅が多くなると、粘膜関門がなくなり組織が損傷する。腸又は肺の粘膜関門が失われると、細菌が体循環に転流し、全身性炎症や敗血症を引き起こすことがある。一方、組織の損傷は、組織再形成と線維症につながる局部炎症を引き起こす。まとめると、放射線は、多器官損傷としにつながることがある、酸化性ストレス、アポトーシス、及び炎症を誘発する。ＲＯＳで誘発される悪影響をブロックするような治療が、放射線に誘発される損傷の緩和と治療に役立つ。
【０１９６】
Ｎｒｆ２は抗酸化遺伝子の主要な調整剤である。Ｎｒｆ２が、肺、小腸、肝臓、及び脳などの様々な器官での、化学活性因子又はストレス因子に反応する抗酸化物質を含む、細胞保護遺伝子ネットワークの主要な調整剤であることは報告されている。Ｎｒｆ２で調整された抗酸化物質に関連する遺伝子には、直接的な抗酸化物質（ＳＯＤ１、ヘム・オキシゲナーゼ−１（Ｈｍｏｘ１）およびＮＱＯ１）と、グルタチオン経路（フルタチオン・ペルオキシダーゼ（Ｇｐｘ）、グルタチオン・リダクターゼ、グルタミン酸システインリガーゼ（触媒及び修飾因子サブユニット）、チオレドキシン経路（チオレドキシン・リアクターゼ（Ｔｘｎｒｄ１）、ペルオキシレドキシン（Ｐｒｄｘ））に関連する遺伝子、並びに、ＮＡＤＰＨ再生酵素（グルコース６−リン酸デヒドロゲナーゼ（Ｇ６ＰＤ）、ホスホグルコン酸デヒドロゲナーゼ（Ｐｇｄ）、及びマレイン酸酵素１（Ｍｅ１））と、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）などの生体異物デトックス酵素、が含まれる。更に、Ｎｒｆ２は、表３に記載した、活性酸素種（ＲＯＳ）活性窒素種（ＲＮＳ）、及び放射線暴露の後に生じた求電子によって生じる病理学的損傷を減衰させる抗酸化物質と協奏して、いくつかの他の遺伝子を調整する。
【０１９７】
強力なＮｒｆ２活性化物質である２−ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ−２’−ｍｅｔｈｏｘｙｃｈａｌｏｎｅが、致死線量照射後の生存率を改善するかどうかを測定するために、放射線を当てたマウスに、２−ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ−２’−ｍｅｔｈｏｘｙｃｈａｌｏｎｅ（２００μｍｏｌ／体重１ｋｇ）又はビークル（１００％ＰＥＧ）を強制飼養して処置した。化合物２ｂを用いた処置を、放射線照射後１時間と２４時間で開始した。化合物２ｂ又はビークルを、最初の投与後４８時間ごとに５回追加投与した。ビークルで処置したマウスは、７．１３Ｇｙと７．３Ｇｙに暴露させた後、２５％及び１０％の生存率を示した（ＬＤ７０/３０；３０日以内に７０％が死亡）。図７を参照。更に、別の実験では、ビークルで処置したグループの平均生存期間がほぼ１５日から、高い線量で放射線照射を行った２４時時間後に、化合物２ｂで処置したマウスでは２６日に伸びた（７．３Ｇｙ，ＬＤ１００／３０；３０日以内に１００％が死亡）ことが観察された。図１０乃至図１２を参照。
【０１９８】
７．３Ｇｙ  ＴＢＩの２４時間後に、化合物２ｂで処置したマウスで、造血再構成を３０日間にわたって評価した。ＣＢＣ分析では、化合物２ｂで処置をした放射線を照射したマウスに、ＷＢＣの有意な回復が見られた。まとめると、これらのデータは、２−ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ−２’−ｍｅｔｈｏｘｙｃｈａｌｏｎｅが、放射線暴露後に、造血再構成を有意に改善し、死亡率を下げることを示唆している。
【０１９９】
実施例３
２−ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ−２’−ｍｅｔｈｏｘｙｃｈａｌｏｎｅの放射線防護と放射線緩和効果
Ｎｒｆ２は、その細胞質アンカであるＫｅａｐ１からかい離させることによる、および、抗酸化物質、ＤＮＡ修復、プロテアソーム、及び求電子デトックスタンパク質を符号化する遺伝子を含む転写プログラムを上方制御することによって、酸化的障害に反応して活性化する（図８；Ｂｏｕｔｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；Ｋｅｎｓｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）。これらの細胞保護防衛プログラムは、参加的ストレスと相互反応するとともに、ＤＮＡ、タンパク質、及び脂質の細胞毒性酸化的障害副産物を修復して取り除く。Ｎｒｆ２ヌル細胞又はマウスは、脂質過酸化副産物、タンパク質カルボニル、ＤＮＡダメージ、及び細胞死の増加を示している。Ｎｒｆ２の薬理学的活性、酸化前及び酸化後の損傷は、タンパク質カルボニルを減少させ、細胞死を抑制する。最近では、Ｎｒｆ２が、組織の修復と造血幹細胞自己再生に不可欠である、Ｎｏｔｃｈ１の転写発現を調整することが示されている。Ｎｒｆ２ヌル細胞は、正常に機能したいノッチシグナルを示し、Ｎｒｆ２ヌルマウスは、正常に機能しない組織再生を示している（Ｍａｌｈｏｔｒａ  ｅｔ  ａｌ．２０１０）。Ｎｒｆ２の活性化は、組織再生を増加させた（Ｍａｌｈｏｔｒａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。放射線で誘発された造血障害は、細胞死を介在し、及び／又は、造血幹細胞の再生を害するので、Ｎｒｆ２は、限定するものではないが、造血及びＧＩ症候群を含む放射線障害を緩和する潜在的な薬剤ターゲットである。単一の抗酸化スカベンジャと異なり、小分子ターゲットＮｒｆ２は、放射線緩和物質としてより有効であり、放射線により誘発される生涯から前進を保護する広い範囲にわたる細胞保護タンパク質を上方制御する。更に、放射線治療を行う間に生じる正常な組織損傷を抑制する強力な放射線保護物質として使用することができる。
【０２００】
死亡率と造血症候群をていげんする化合物２ｂの治療既往化を調べるために、マウスを全身照射（ＴＢＩ）した。Ｃ５７ＢＬ／６（８週齢、オス）に、固形資料を不断給餌して、非酸性水を与えた。マウスに、ＡＥＣＬガンマ細胞４０照射器（Ａｔｏｍｉｃ  Ｅｎｅｒｇｙ社、カナダ）の中でＴＢＩ（０．６５Ｇｙ／分）を行った。化合物２ｂをＤＭＳＯ：ＰＥＧ−２００（１：１００）に溶かした。ＴＢＩの１時間、６時間、又は２４時間後に、化合物２ｂ（用量４００ｍｇ／Ｋｇ、経口投与）なたがビークル（ＰＥＧ−２００）で処置を開始した。第１回目の投与後、４８時間ごとに化合物２ｂ又はビークルを５回追加投与した。
【０２０１】
図９は、ＴＢＩ後の生存率に関するＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ分析を表すデータを示す。マウスは、６．９Ｇｙまたは７．１ＧｙのＴＢＩを行った２４時間後に、化合物２ｂ又はビークル（ＰＥＧ−２００）を傾向で投与され、４８時間ごとに５回追加投与を行った。３０日間、毎日死亡数をモニタした。６．９Ｇｙまたは７．１ＧｙのＴＢＩを行った２４時間後に、化合物２ｂで処置したマウスは、ビークルで処置したマウスに比べて、生存率がそれぞれ９０％と６０％と、著しく改善した（図９）。
【０２０２】
ＴＢＩを行った２４時間後より早く化合物２ｂを投与したとしてもマウスの生存率が改良されるかどうかを調べるために、ＴＢＩを行った後、１時間、６時間、あるいは２４時間後に、化合物２ｂ又はビークルをマウスに経口投与した（７．３Ｇｙ ）。最初の投与後、４８時間ごとに、化合物２ｂ又はビークルを５回追加投与した。３０日間、毎日、死亡数をモニタした。化合物２ｂは、ビークルで処置したマウスに比べて、ＴＢＩの１時間後及び６時間後に処置したマウスの生存率を、それぞれ、約６０％と５０％に、著しく改善した（図１０）。照射後１時間又は６時間でビークルで処置したマウスの死亡率百分率は、１００％であった（データは図示せず）。更に、マウスの生存率は、照射後２４時間より百化合物２ｂを投与した方が、良好であった。
【０２０３】
実施例４
２−ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ−２’−ｍｅｔｈｏｘｙｃｈａｌｏｎｅが造血回復を促進する
化合物２ｂが造血回復を促進できるかどうかを調べるために、６．９Ｇｙ（ＬＤ３０/０）で全身照射を行った２４時間後に、マウスに化合物２ｂ又はビークルを経口投与した。最初の投与後、４８時間ごとに化合物２ｂ又はビークルを５回追加投与した。表示した時間に、マウス群を殺した。表示した日に心臓穿刺により抹消血を回収し、Ｈｅｍａｖｅｔ  ９５０ＦＳ（Ｐ＜０．０５、ｎ＝３／群）を用いて白血球百分率数を分析した。大腿骨を固定し、脱灰し、サジタル平面に沿って切り取って、ヘマトキシリン・エオジンで染色して骨髄細胞性を分析した。
【０２０４】
化合物２ｂで処置したマウスは、ビークルで処置したマウスに比べて、照射後、白血球（ＷＢＣ）、好中球、リンパ球が、より早い時期に増加した（図１１Ａ）。照射後２２日目に、化合物２ｂで処置したマウスのＷＢＣ、赤血球（ＲＢＣ）、及び血小板に有意な増加がみられた（図１１Ｂ）。７日目と２０日目に化合物２ｂで処置したマウスから単離した骨髄のＨ＆Ｅ染色での病理組織学的分析によると、ビークルで処置したマウスから単離した骨髄に比べて、骨髄細胞性が増えていることがわかった（図１１Ｃ）。
【０２０５】
このように、ここに開示したデータは、死亡率と造血症候群を緩和する化合物２ｂの治療効果を示している。
【０２０６】
実施例５
２−ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ−２’−ｍｅｔｈｏｘｙｃｈａｌｏｎｅの作用機序
化合物２ｂが、放射線照射したマウスのＮｒｆ２で調整した抗酸化物質を増やせるかどうかを確認するために、Ｎｒｆ２活性（ＮＱＯ１、ＨＯ−１、及びＧＣＬＭ）の薬力学的（ＰＤ）マーカを放射線照射マウスの、骨髄単核細胞（ＢＭ−ＭＣ）、消化管、及び肺でモニタした（図１２）。ビークル又は薬剤で処置した放射線照射（６．９Ｇｙ）マウスから１２日目に採取した、骨髄（図１２Ａ）、肺（図１２Ｂ）及び小腸（図１２Ｃ）で、ＮＱＯ１、ＨＯ−１、及びＧＣＬＭを分析した。
【０２０７】
Ｎｒｆ２で調整した抗酸化物質は、薬物で処置した放射線照射マウスの、ＢＭ−ＭＮＣ、消化管、肺において、ビークルで処置したマウスに比べて著しく増えた（図１２）。これらのデータは、化合物２ｂがＮｒｆ２で調整した抗酸化物質を増やすことを示している。
【０２０８】
化合物２ｂが放射線照射マウスの骨髄単核細胞と造血幹細胞のレベルを上げることができるかどうかを確認するために、マウスに、放射線照射（６．９Ｇｙ）後２４時間で、化合物２ｂを単回投与で処置した。ＢＭ−ＭＮＣの総数と、造血幹細胞亜集団を、化合物２ｂの処置後２４時間で、放射線照射したマウスで分析した。
【０２０９】
図１３は、ＢＭ−ＭＮＣの総数（パネルＡ）と、ＦＡＣＳ分析による造血幹細胞亜集団の頻度（パネルＢ）、細胞アッセイを形成しているコロニィで評価した生存造血幹細胞の総数（パネルＣ）（ビークルに比較してＰ＜０．０５；ｎ＝５）を示す。四肢ごと（大腿と脛骨）の総ＢＭ−ＭＮＣ（図１３）と造血幹前駆細胞（ＨＳＰＣ、ｃｋｉｔ＋、ｓｃａ−１＋ｌｉｎ−）、造血幹細胞（ＨＳＣ、ｃｋｉｔ＋、ｓｃａ１＋、ｌｉｎ−及びＣＤ１５０＋、ＣＤ４８−）と、多能性前駆細胞（ＭＰＰ、ｃｋｉｔ＋、ｓｃａ−１＋、ｌｉｎ−及びＣＤ１５０−、ＣＤ４８−）が、ビークルで処置したマウスに比べて化合物２ｂで処置したマウスで、有意に高かった（図１３Ｂ）。コロニー形成細胞アッセイも、ビークルで処置したマウスに比べて化合物２ｂで処置したマウスで造血幹細胞の増加を示した（図１３Ｃ）。
【０２１０】
ここに開示したデータは、化合物２ｂの潜在的な作用メカニズムが、Ｎｒｆ２で調整した抗酸化防衛を増強することによって、造血幹細胞の生存率を高めることを示す。
【０２１１】
実施例６
化学療法で誘発した好中球減少治療としての２−ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ−２’−ｍｅｔｈｏｘｙｃｈａｌｏｎｅ
好中球が異常に低いレベルにある状態である、好中球減少は治療未経験患者の２５％乃至４０％において、通常の化学療法計画で生じ、その重症度は化学療法計画の用量強度に依存する。好中球減少とその続発性感染合併症は、がん化学療法の最も普通の用量制限毒性を表している。好中球減少はまた、病院での滞在を長引かせ、モニタリングを増やし、診断及び治療コストを上げるとともに、患者の生活の質を低下させる。
【０２１２】
化合物２ｂが化学療法で誘発された好中球減少を抑えるかどうかを調べるために、マウスを二つの用量のシクロホスファミド（腹腔内注射、０日と５日）で処置して、６−７日間持続する可逆好中球減少を誘発した。第１の用量のシクロホスファミドを投与した直後と、その後調査期間中、４８時間ごとに、化合物２ｂ又はビークルでの処置を行った。表示した時間で、マウス群を犠牲にした。抹消血を回収して、Ｈｅｍａｖｅｔ９５０Ｓを用いて血球百分率数を分析した。ビークルでの処置に比べて、化合物２ｂでの処置が好中球減少期間を有意に短くした。
【０２１３】
実施例７
多発性硬化症治療としての２−ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ−２’−ｍｅｔｈｏｘｙｃｈａｌｏｎｅ
多発性硬化症（ＭＳ）は、中枢神経系に作用する自己免疫性炎症性疾患である。これは、米国で少なくとも３５万人、全世界では２．５百万の患者がおり、ＭＳの社会経済上の負担は、心的外傷についで２番目である。臨床的朝貢と症状は、患者によって異なるが、運動障害、感覚障害、自律神経障害と認識障害が含まれる。近年の研究は、ＭＳの発症が、Ｔｈ−１とＴｈ−１７の炎症によって媒介されることを提言している。未公開データは、Ｎｒｆ２がＴｈ１７炎症を抑制し、したがって、Ｎｒｆ２の小分子活性化因子が、ＭＳとその他のＴｈ−１７で引き起こされる、乾癬、乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、腸疾患、などの自己免疫疾患の治療の潜在的候補になりうることを提言している。
【０２１４】
Ｔｈ１７細胞媒介自己免疫疾患の良く特徴づけられたモデルである、ＭＳ，実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）用のマウスモデルを、薬剤候補の前臨床硬化を調べるために、広範囲にわたって使用した。ＥＡＥは、完全フロインドアジュバント中のミエリン乏突起膠細胞（ＭＯＧ）ペプチドを用いた皮下注射と百日咳毒素の腹腔内注射によって誘発される。ＥＡＥの誘発は、１２−１６日に生じ、確立された客観的基準によって記録される。化合物２ｂ処置の効果を、ＥＡＥモデルで評価した。完全フロインドアジュバント（ＣＦＡ）中の乳化ＭＯＧ３３−５５でマウスに免疫力を付けた。
【０２１５】
予防効果を評価するために、０日でのＭＯＧ免疫付与後、マウス（ｎ＝５）を化合物２ｂ（４００ｍｇ／ｋｇ、経口）又はビークル（予防モード）で研究期間中隔日で処置した（図１５Ａ）。治療効果（ｎ＝５）を評価するために、化合物２ｂ又はビークルでの処置を、ＭＯＧ免疫付与後９日目に開始し、その後、研究期間中隔日に処置を行った（図１５Ｂ）。予防及び治療の量モードで、化合物２ｂが、ビークルに比べてＥＡＥの開始と臨床的重症性を有意に遅らせた（図１５）。
【０２１６】
実施例８
アレルギー性喘息治療としての２−ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ−２’−ｍｅｔｈｏｘｙｃｈａｌｏｎｅ
喘息は、世界中で３０億人以上の患者がおり、毎年２５万人が死亡している（Ａｄｃｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。最近の２０年で、喘息の患者数は２倍になり、米国の人口の１０％以上が喘息にかかっており、子供たちの入院の主因となっている（Ａｋｉｎｂａｍｉ  ａｎｄ  Ｓｃｈｏｅｎｄｏｒｆ，２００２）。アレルギー性喘息は、複雑な炎症性疾患であり、通常、無害なアレルギー誘発物質が、気道炎症、断続的な可逆気道閉塞、気道過敏（ＡＨＲ）、過剰粘液産生、高レベルＩｇＥ及びＴｈ２サイトカインによって特徴づけられる反応を引き起こす。空中を浮遊するアレルギー誘発物質が肺に吸引され、肺胞に付着する。ここで、アレルギー誘発物質が、プロフェッショナル抗原提示細胞（樹枝状細胞（ＤＣｓ）などのＡＰＣｓ）によって結合し、リンパ節で未感作Ｔ細胞に提示される。Ｔｈ２極性Ｔ細胞は、アレルギー誘発物質に反応する気道損傷及び／又は閉塞の主要原因である
【０２１７】
新たな証拠がアレルギー性喘息の炎症の調節におけるＮｒｆ２の重要な役割を表示している。Ｎｒｆ２の欠乏は、オボアルブミン（ＯＶＡ）攻撃後の脾細胞におけるＴｈ２サイトカイン（ＩＬ−４及びＩＬ−３）をより多く発現させ、これはＮｒｆ２がＴｈ２炎症を調整することを意味している。臨床実験は、重い喘息を持つ子供は健康な対照より、酸化的ストレスが大きく、血漿と気道洗浄中のグルタチオン濃度が低いことを示している。（Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。最近の研究は、喘息患者ではＮｒｆ２信号経路が不完全であることを提言している。Dworski, Free Radic. Biol. Med. 2011, Jul. 15; 51(2): 516-21; Michaeloudes, Am. J. Respir. Crit. Care. Med. 2011 Oct. 15; 184(8): 894-903。
【０２１８】
化合物２ｂの処置で抑制されたマウスモデルでのアレルギー性喘息を評価するために、ＯＶＡで誘発した喘息の標準マウスモデルを用いた（Ｒａｎｇａｓａｍｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。マウスを腹腔注射で感作させ（０日、１４日）、ＯＶＡで経鼻攻撃させた（２１日乃至２４日）。マウスを、４００ｍｇ／マウスの化合物２ｂ（ＴＭＣともいう）またはビークルで、感作及び攻撃フェーズの間に隔日で、処置した。ＯＶＡ攻撃の最後の投与後２４時間で、気道炎症（図１６Ａ）と気道の過敏反応性（ＡＨＲ）（図１６Ｂ）を評価した。起動炎症と気道過敏反応（ＡＨＲ）によって評価した通り、予防モードにおける化合物２ｂでの処置が、アレルギー誘発性喘息からマウスを防衛することが分かった（図１６）。
【０２１９】
実施例９
ＣＯＰＤ治療としての２−ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ−２’−ｍｅｔｈｏｘｙｃｈａｌｏｎｅ
ＣＯＰＤは、進行性非可逆性気流制限によって特徴づけられる、主要な世界規模の公衆衛生問題である（Ｙｏｓｈｉｄａ  ａｎｄ  Ｔｕｄｅｒ，２００７）。ＣＯＰＤは、慢性気管支炎によって生じる気腫（肺胞破壊）と気道狭窄を含む。ＣＯＰＤは、生活の質を大きく害し、身体障害にかかりやすくするとともに、高額な医療費を引き起こし、早期に死に至らしめる。米国では約１６００万人が、ＣＯＰＤにかかっており、年間１２５，０００人が死亡し、年に２００−３００億ドルのコストが生じている（Ｗｉｓｅ，２００４）。ＣＯＰＤは、過去３０年間で死亡率が高くなっている唯一の死因であり、現在は、４番目の死因である（Ｂａｒｎｅｓ，２００７）。ＣＯＰＤは、主に喫煙によって主に引き起こされるが、インドアでのバイオマス燃料吸引、環境粒子、病原体（細菌及びウィルス）など、その他の吸引した有毒物質を重要な病院的因子として裏付ける証拠が増加している（Ｈｏｇｇ  ａｎｄ  Ｔｉｍｅｎｓ，２００８）。ＣＯＰＤの発病は、慢性異常気道炎症と、肺の細胞外マトリックスのリモデリングを誘引する酸化的損傷と、粘液分泌の増大、肺胞細胞アポトーシスの増大対細胞修復及び増殖障害、及び持続性炎症によって媒介される（Ｙｏｓｈｉｄａ  ａｎｄ  Ｔｕｄｅｒ，２００７）。ＣＯＰＤは、呼吸困難、咳、しばしば臨床的悪化を伴う痰の産生、などの呼吸器症状を悪化させる症状（ＣＯＰＤ−関連）の発現として述べた、頻繁で再発する急性増悪によって複雑になる（ＦＥＶ１の低下）（Ｖｅｅｒａｍａｃｈａｎｅｎｉ  ａｎｄ  Ｓｅｔｈｉ，２００６；Ｗｅｄｚｉｃｈａ  ａｎｄ  Ｓｅｅｍｕｎｇａｌ，２００７）。これらの憎悪の頻度は、肺機能の低下との相関性を示しており、これはＣＯＰＤ患者の実質的な罹患と死亡の原因である（Ｄｏｎａｌｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２；Ｋａｎｎｅｒ  ｅｔ  ａ．，２００１；Ａｎｚｕｅｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。
【０２２０】
ＣＯＰＤは、低下した肺の先天的免疫防御、特に、肺胞マクロファージの機能低下した食細胞能力に関連している。ＣＯＰＤの増悪が、分類不可能なインフルエンザ菌（ＮＴＨＩ）、肺炎連鎖球菌、カタラリス菌、緑膿菌（ＰＡ）、黄色ブドウ球菌などの細菌感染によって大きく生じることを裏付ける証拠が多くある（Ｗｅｄｚｉｃｈａ  ａｎｄ  Ｓｅｅｍｕｎｇａｌ，２００７）。現在は、ＣＯＰＤ増悪を制限する有効な治療法はない。抗生物質での治療は、抗生物質抵抗率が上がり、長期の使用による副作用のため、止められている。副腎皮質ステロイドでの治療は、ＣＯＰＤ患者で副腎皮質ステロイドに対する抵抗力がつくため、効果が制限されている。
【０２２１】
Ｎｒｆ２の強かが、マクロファージの食細胞能力を改善し、ＣＯＰＤ患者又は煙草の煙に露出させたマウスから単離したマクロファージにおけるＬＰＳで誘発された炎症の抑制を改善することが最近わかった。
【０２２２】
化合物２ｂがマクロファージによる細菌排除を強化するかどうかを評価するために、正常なマウスを化合物２ｂ（５μＭ又は１０μＭ）で１６−２０時間処置し、腹腔マクロファージをマウスから単離し、この腹腔マクロファージを緑膿菌（ＰＡ）で培養した。４時間後、血液寒天培地にプレーティングすることによって、無細胞ビークル中での菌の負担を評価した。この研究は、ビークルでの処置に比べて、コロニー形成単位（ＣＦＵ）によって示すように、化合物２ｂが培地中での細菌の負担を著しく低減したことを示している（図１７）。
【０２２３】
化合物２ｂがＬＰＳで誘発される炎症を抑制するかどうかを調べるために、正常なマウスを化合物２ｂ（５μＭ又は１０μＭ）で、１６−２０時間処置し、マウスから腹腔マクロファージを単離し、この腹腔マクロファージをＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍＬ）で培養した。４時間後、マクロファージによる無細胞培地中のＴＮＦ−α分泌を、ＥＬＩＳＡによって分析した。この研究の結果は、ビークルでの処置に比べて、マウスを化合物２ｂで処置すると、マクロファージによってＬＰＳで誘発したＴＮＦ−α分泌に有意な低下がみられたことを示す。
【０２２４】
文献
明細書に記載されているすべての刊行物、特許出願、特許、及びその他の文献は、ここに開示されている主題が関連する当業者のレベルを示している。全ての刊行物、特許出願、特許、及びその他の文献は、それぞれの刊行物、特許出願、特許、及びその他の文献が、引用として組み込まれていることを特別かつ個別に示されているかのように、引用によりここに組み込まれている。多くの特許出願、特許、及びその他の文献がここに引用されているが、これらの文献は、これらの文書のいずれもがこの分野における共通の一般的知識の一部を形成している旨の承認を構成しない。
【０２２５】
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【０２２６】
上述の主題は、理解を明確にするために図解と実施例によって詳細に記載したが、当業者は、特許請求の範囲内において所定の変更及び変形を成しうるものと考えられる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【国際調査報告】
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