(57)【要約】一般式  【数１】  ［Ｐｄ２ＩＩ（μ−ＳＲ）２（ＮＨ３）４］・｛ＣｕＩｋ（ＳＲ）ｍ｝  （Ｉ）（式中、ＳＲは、グルタチオンおよびアセチルシステインの残基を含む群から選択されるチオレートリガンドの残基である、ｋ＝２〜１４、ｍ≧３ｋである）を有するパラジウム（ＩＩ）の機能的二核性チオレート架橋配位化合物および銅（Ｉ）の修飾チオレート複合体を組み合わせた、チオールの均一選択的酸化のパラジウム−銅触媒が提案される。触媒の組み合わせ、薬理学的組み合わせ、医薬組成物、および表示された触媒に基づく患者の生物に対する治療作用の方法も提案される【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式
［Ｐｄ２ＩＩ（μ−ＳＲ）２（ＮＨ３）４］・｛ＣｕＩｋ（ＳＲ）ｍ｝  （Ｉ）
（式中
ＳＲは、グルタチオンおよびアセチルシステインの残基を含む群から選択されるチオレートリガンドの残基であり、
ｋ＝２〜１４、
ｍ≧３ｋ）
を有する、パラジウム（ＩＩ）の機能的二核性チオレート架橋配位化合物および銅（Ｉ）の修飾チオレート複合体を組み合わせた、チオールの均一選択的酸化のパラジウム−銅触媒。
【請求項２】
その酸化が触媒機能に付される前記チオールがＮ−アセチル−システインである、請求項１記載の触媒。
【請求項３】
その酸化が触媒機能に付される前記チオールが、Ｎ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシンである、請求項１記載の触媒。
【請求項４】
前記酸化が、チオール残基間のジスルフィド結合の形成を伴うチオールの均一選択的酸化である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の触媒。
【請求項５】
パラジウム（ＩＩ）および対応するチオールの単核アミネート複合体と、銅（ＩＩ）および対応するチオールの塩から形成する複合体との反応によって得られる請求項１記載の触媒。
【請求項６】
Ｐｄ：Ｃｕの前記モル比が１：０．１〜１：２の範囲内にある、請求項１記載の触媒。
【請求項７】
Ｐｄ：Ｃｕの前記モル比が１：０．２〜１：１の範囲内にある、請求項６記載の触媒。
【請求項８】
療法で使用するための請求項１記載の触媒。
【請求項９】
アセチルシステイン、グルタチオン、それらの溶媒和物および塩から選択されるチオールによって、そして請求項１記載の触媒によって形成される触媒の組み合わせ。
【請求項１０】
前記触媒が、前記チオール１モルあたり１・１０−２〜１・１０−７ｇの量で存在する、請求項９記載の組み合わせ。
【請求項１１】
アセチルシステインジスルフィドおよび／またはグルタチオン、それらの溶媒和物および塩、ならびに請求項１記載の触媒からなる群から基本的になる、請求項９記載の組み合わせ。
【請求項１２】
療法における使用のための請求項９記載の組み合わせ。
【請求項１３】
請求項９から１２による触媒の組み合わせおよび請求項９から１２による組み合わせの成分との付加反応に関与することができる薬理活性化合物からなる、薬理学的組み合わせ。
【請求項１４】
薬理活性化合物の治療活性を増進するための、請求項１３記載の組み合わせ。
【請求項１５】
前記薬理活性化合物が、プリンもしくはピリミジン塩基またはそれらの誘導体から選択される医薬または生物活性分子である、請求項１４記載の組み合わせ。
【請求項１６】
感染性および非感染性疾患の療法で使用するための請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の組み合わせ。
【請求項１７】
前記薬理活性化合物がイノシンである、請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の組み合わせ。
【請求項１８】
前記薬理活性化合物がリバビリンである、請求項１５記載の組み合わせ。
【請求項１９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の触媒または請求項９〜１８のいずれか１項に記載の組み合わせと薬剤的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
【請求項２０】
前記薬理活性化合物の治療活性を増進する、請求項１９記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記薬理活性化合物の治療活性を増進するための患者の生物に対する治療作用の方法であって、これを必要とする患者に、有効量の請求項１〜８のいずれか１項に記載の触媒、請求項９〜１２もしくは１３〜１８のいずれか１項に記載の組み合わせ、または請求項１９〜２０のいずれか１項に記載の組成物を投与する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生物無機化学、医化学、および医学、特に医薬品調製の分野に関し、生物無機化学、薬理学、医学および獣医学診療で用いることができる。
【背景技術】
【０００２】
それらの薬物動態学および／もしくは薬力学を最適化することによって、ならびに／または医薬品の分子の化学的修飾によって毒性を低減する、および／またはそれを他の化合物（複数可）とともに使用することによって、薬理学的分子の治療有効性を高めることは、それらの活性を生理学的至適用量で提示する新世代の製剤製品を作製するための領域の１つである。
【０００３】
したがって、その構成中にアモキシシリンおよびクラブラン酸を含有するアモキシクラブ、および腎臓酵素ジヒドロペプチダーゼの特異的阻害剤であるシラスタチンと組み合わせたイミペネムを含有するチエナムをはじめとする多数の併用剤が公知である。クラブラン酸は、細菌酵素によるアモキシシリンの分解を防止し、一方、シラスタチンは、腎臓におけるイミペネムの代謝を阻害し、このことは腎臓および尿路中の不変の抗生物質の濃度を実質的に増加させる。
【０００４】
しかし、病気の治療のために潜在的に有用であるが、それらに対する耐性の１つまたは別の形態を呈するために所望の効果を提供しない多くの他の医薬品がある。
【０００５】
現時点で、物質Ｎ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシンジスルフィド（ＧＳＳＧ）または酸化グルタチオンが公知であり、これは、それ自体様々な薬理活性を有する。特に、酸化グルタチオンは、様々な種類の化学的修飾：リン酸化、グルタチオン付加、酸化などを実施するプロセスを開始することができることが判明し、これは、リガンドに対して高い親和性を有し、生理学的機能を果たす能力を有する特定の構造形態の形成に先行する。酸化グルタチオンは、抗ウイルス作用、抗菌作用、抗腫瘍作用、および抗線維化作用を含む身体の防御反応の複合体を制御する広範囲のサイトカインの産生を増大させることができることが示されている。多数の薬理学的溶液が、糖尿病、虚血性心疾患、ウイルス性肝炎、悪性腫瘍、化膿性感染症などをはじめとする様々な疾患の治療のための薬理活性分子と組み合わせた酸化グルタチオンおよびシスプラチンの複合化合物を含む複合体の作製のために提案されている。特に、薬理学的溶液は、ウイルス性Ｂ型肝炎およびウイルス性Ｃ型肝炎の薬剤耐性形態に関して、酸化グルタチオンとの有機塩の形態で使用されるイノシンの抗ウイルス活性を増大させるために提案されている（ＲＵ２１５３３５０、ＲＵ２１５３３５１）。
【０００６】
しかし、ＲＵ２１５３３５０で開示されている酸化グルタチオン生成物の構成には、その使用が毒性および変異原性作用の危険を伴う白金（Ｐｔ）の複合化合物であるシスプラチンが含まれる。それは実際、最小量で使用される場合に触媒効果を示す白金である。
【０００７】
繰り返し投与された場合の、酸化グルタチオン調製物の構成中の白金の毒性作用の危険性は、細胞に関する実験で証明され、この場合、複合白金化合物を５日間にわたって毎日導入すると、培養物の増殖活性が抑制され、死に至る。酸化グルタチオンの使用はさらに、可能な薬理学的溶液に対してある制限を加える。なぜなら、それは主に非経口投与の医薬形態の作製を可能にするからである。
【０００８】
したがって、薬理学的分子の治療有効性を、腸、非経口および他の可能な投与方法の医薬形態の作製に好適なそれらの薬物動態学および／または薬力学を最適化することによって、増強する能力を有する新規製品を開発する必要性が存在する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
一般式
［Ｐｄ２ＩＩ（μ−ＳＲ）２（ＮＨ３）４］・｛ＣｕＩｋ（ＳＲ）ｍ｝  （Ｉ）
（式中
ＳＲは、グルタチオンおよびアセチルシステインの残基を含む群から選択されるチオレートリガンドの残基であり、
ｋ＝２〜１４、
ｍ≧３ｋ）
を有する、パラジウム（ＩＩ）の機能的二核性チオレート架橋配位化合物および銅（Ｉ）の修飾チオレート複合体を組み合わせるチオールの均一選択的酸化のパラジウム−銅触媒を提案することによって、この課題が解決される。
【００１０】
好ましくは、酸化は、チオール残基間のジスルフィド結合の形成を伴うチオールの均一選択的酸化であり、この際、その酸化が触媒機能に付されるチオールはＮ−アセチル−システインまたはＮ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシンである。
【００１１】
好ましくは、触媒は、パラジウム（ＩＩ）および対応するチオールの単核アミネート複合体と、銅（ＩＩ）の塩および対応するチオールから形成される複合体との反応によって得られる。
【００１２】
熟慮の上で、本発明の触媒中のＰｄ：Ｃｕのモル比は、１：０．１〜１：２の範囲内、さらに好ましくは１：０．２〜１：１の範囲内にある。
【００１３】
本発明の触媒を療法で使用することができる。
【００１４】
アセチルシステイン、グルタチオン、それらの溶媒和物および塩から選択されるチオールと本発明の触媒とにより形成される触媒の組み合わせも提案される。
【００１５】
好ましくは、触媒は、組み合わせ中、チオール１モルあたり１・１０−２〜１・１０−７ｇの量で存在する。提案された組み合わせは、本質的に、アセチルシステインジスルフィドおよび／またはグルタチオン、それらの溶媒和物および塩、ならびに本発明の触媒のみからなる可能性がある。
【００１６】
本発明の組み合わせを療法で用いることができる。
【００１７】
表示された触媒の組み合わせおよび薬理活性化合物を含み、その組み合わせの成分との付加反応に参加することができる薬理学的組み合わせも提案される。
【００１８】
この組み合わせを使用して、薬理活性化合物の治療活性を高めることが望ましい。
【００１９】
表示された薬理活性化合物は、プリンもしくはピリミジン塩基またはそれらの誘導体から選択される医薬または生物活性分子であり得る。
【００２０】
この組み合わせを感染性および非感染性疾患の治療で用いることができる。
【００２１】
薬理活性化合物は、例えば、リバビリンであり得る。
【００２２】
さらに提案されるのは、記載される触媒または組み合わせおよび薬剤的に許容される賦形剤を含む医薬組成物である。そのような医薬組成物は、薬理活性化合物の治療活性を高める。
【００２３】
さらに提案されるのは、薬理活性化合物の治療活性を高めるための患者の生命体に対する治療作用の方法であって、この場合、これを必要とする患者に、有効量の本発明による、組み合わせまたは組成物を投与する。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
グラフ資料の説明
【図１】図１は、系：「ＧＳＨ：Ｈ２Ｏ２：［ＰｄＩＩ２（μ−ＳＧ）２（ＮＨ３）４］・｛ＣｕＩｎ（ＳＲ）ｍ｝」中のＰｄ：Ｃｕのモル数の比の関数としてのＮ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシンジスルフィドの蓄積を示す（ｔｇ（α）は、Ｐｄ−Ｃｕ触媒の存在下での過酸化水素によるグルタチオン酸化の反応についての傾斜、Ｌ＝ｎ（Ｃｕ）／ｎ（Ｐｄ）、２５±０．１℃、СＧＳＨ  ２ｍｇ／ｍｌ、рН  ６．０、Сｐｄ  ３．４ｅ−６モル／リットル）。
【図２】図２は、二核性パラジウム複合体［Ｐｄ２（μ−ＳＧ）２（ＮＨ３）４］２＋と比較した、過酸化水素によるＮ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシンの酸化の反応における｛ＣｕＩｋ（ＳＲ）ｍ｝複合体の相対的触媒有効性を示す（２５±０．１℃、СＧＳＨ＝２ｍｇ／ｍｌ、рН＝５．３、СＭ＝６．５ｅ−６モル／リットル）。
【図３】図３は、パラジウムおよび銅複合体による、そして２成分Ｐｄ−Ｃｕ触媒によるＮ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシンの酸化の曲線を示す（２５±０．１℃、СＧＳＨ  ２ｍｇ／ｍｌ、рН  ６．０、СＭ  ６．３ｅ−６モル／リットル）。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
発明の詳細な明細
シスプラチンを使用せず、または別の金属を使用して得られた調製物Ｎ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシンジスルフィドを使用する本発明者らの努力の結果、低い治療効果が得られた。
【００２６】
本発明者らは、ＲＵ２１５３３５０の方法によって得られるＮ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシンジスルフィドの薬理学的活性の多くは、ペプチド特性の分子の組成物中のスルフヒドリル基のジスルフィドへの接触酸化をもたらす能力と関連づけられることを見出した。
【００２７】
本発明者らは、制御可能な触媒作用を実施する必要性を確認し、これは提案された本発明の触媒を活用して達成される。
【００２８】
パラジウム（ＩＩ）の二核性チオレート架橋配位化合物に添加される銅（Ｉ）のチオレート複合体は、速度を有意に変えることができるが、チオールの酸化の程度を変えることはできない。一例として、図１は、系「ＧＳＨ−Ｈ２Ｏ２：［ＰｄＩＩ２（μ−ＳＧ）２（ＮＨ３）４］・｛ＣｕＩｋ（ＳＲ）ｍ｝」中のＰｄ：Ｃｕ比の関数としての、Ｎ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシンジスルフィド（ＧＳＳＧ）の蓄積の曲線を示す。
【００２９】
図１で示される結果からわかるように、Ｐｄ：Ｃｕ比が１：０から１：２まで変化するにつれて、銅（Ｉ）イオンによって修飾されたパラジウム触媒の触媒有効性は増大する。
【００３０】
Ｃｕ２＋イオンはそれ自体、チオアミノ酸の酸化を有効に触媒することができ、自身の中に−Ｓ−Ｓ−結合を形成することは周知である。したがって、提案されたＰｄ−Ｃｕ２成分触媒系中のＰｄ：Ｃｕ比の変化の領域を確認するために、本発明者らは、パラジウム（ＩＩ）の二核性チオレート架橋複合体、銅（Ｉ）のチオレート複合体、およびそれらの相互作用の触媒有効性を分けて考えた。
【００３１】
二核性パラジウム複合体によるチオールの酸化
チオールＲＳＨの接触酸化では、パラジウムの最も重要な機能の１つは、配位複合体（チオレートイオンＲＳ−をパラジウムイオンに添加し、続いてそれらを酸化し、配位多面体を破壊して得られる生成物）の形成である。
【００３２】
金属の配位圏中に入るチオレートイオンの空間的近接は、チオレートイオンＲＳ−が二座ブリッジ配位を支援し、その結果、Ｐｄ２ＩＩ（μ−ＳＲ）２骨格が形成される二核性パラジウム（ＩＩ）複合体で容易に達成される可能性がある。
【００３３】
チオレートイオンの酸化に関して、本発明者らは、パラジウム（ＩＩ）の二核性ヒドロキソ架橋アンモニウム複合体−［Ｐｄ２（μ−ＯＨ）２（ＮＨ３）４］２＋が関与する触媒回路を考え、それについて以下の反応を主要な反応として調べた：
［Ｐｄ２（μ−ＯＨ）２（ＮＨ３）４］２＋＋２ＲＳＨ・［Ｐｄ２（μ−ＳＲ）２（ＮＨ３）４］２＋＋２Ｈ２Ｏ  （５）
［Ｐｄ２（μ−ＳＲ）２（ＮＨ３）４］２＋＋Ｈ２Ｏ２・｛［Ｐｄ２（μ−ＳＲ）２（ＮＨ３）４（ＯＨ）２］２＋｝＃  （６）
｛［Ｐｄ２（μ−ＳＲ）２（ＮＨ３）４（ＯＨ）２］２＋｝＃・［Ｐｄ２（μ−ＯＨ）２（ＮＨ３）４］２＋＋ＲＳＳＲ  （７）
【００３４】
式（５）および（７）は、触媒［Ｐｄ２（μ−ＯＨ）２（ＮＨ３）４］２＋が消費され、再度再生される段階を構成する。反応（６）は主段階であり、これによって、不安定な中間体パラジウム複合体｛［Ｐｄ２（μ−ＳＲ）２（ＮＨ３）４（ＯＨ）２］２＋｝の形成が可能である。
【００３５】
量子化学の計算により、過酸化水素による二核性金属骨格Ｐｄ２ＩＩ（μ−ＳＲ）２の酸化において、中間体二元金属化合物で最もエネルギー効率が高いのは、両ＯＨ基を１つのパラジウム原子へ添加することであり、中間体を、骨格ＰｄＩＩＰｄＩＶ（μ−ＳＲ）２を有する二核性混合原子価複合体とみなすことが可能になる。この骨格は、還元されると、次にチオレートブリッジ基を酸化する。
【００３６】
配位化合物の量子化学計算は、ｐｒｏｇｒａｍ  Ｊａｇｕａｒ  ７．５．による６−３１Ｇ**  ｂａｓｅにおけるＤＦＴ  Ｂ３ＬＹＰの方法によって実施した。Ｐｄ原子について、本発明者らは対応する原子価の塩基を有するＨＷ骨格の有効な擬ポテンシャルを使用した。垂直振動の振動数の分析により、形状の最適化によって得られた化合物の全構造は、気相中でポテンシャルエネルギー表面上の最小値に相当することが明らかになった。化合物の溶媒和のエネルギーを、分極可能な連続体モデルで算出した。基本関数の数を減少させるために、グルタチオン、アセチルシステイン、またはチオグリコール酸ＲＳＨの分子を最も基本的なチオールであるСＨ３ＳＨによってモデル化した。
【００３７】
中間体配位化合物ＰｄＩＩＰｄＩＶの不安定性の理由は、その内部空間に酸化剤（イオンＰｄＩＶ）および還元剤（リガンドμ−ＳＲ）が存在し、その空間内のレドックスプロセスに至ることに関連する。このプロセスは、チオール配位ブリッジ対からの２個の電子の、イオンＰｄＩＶへの同時移動を含み、その結果、Ｐｄ−ＳＲブリッジ結合が破壊され、２個のチオールラジカルＲＳ・がジスルフィドＲ２Ｓ２に一体化される。その後、還元されたパラジウム二量体の配位圏中で、以前はＰｄＩＶに配位していたリガンドОН−のブリッジ位置への分子内再編成が起こる。結果として、化合物［Ｐｄ（ＮＨ３）２（μ−ＯＨ）］２２＋が形成され、これは検討中の触媒回路の始まりである（スキーム１）。
【００３８】
【化１】
2014510618.tif 000002
【００３９】
過酸化水素（Ｏ２または任意の他の酸化剤）の非存在下で、二核性チオレート架橋パラジウム（ＩＩ）複合体の水溶液は、チオアミノ酸の酸化を触媒しないことに注意すべきである。
【００４０】
高性能液体クロマトグラフィー（ＨＥＬＣ）法によって実施した、過酸化水素によるグルタチオン（ＧＳＨ）の酸化プロセスに対する化合物［Ｐｄ２（μ−ＳＧ）２（ＮＨ３）４］２＋の触媒作用の有効性の評価によって、現在使用されているシス−［Ｐｔ（ＮＨ３）２Ｃｌ２］よりも高い（約３０％）触媒有効性が明らかになった。
【００４１】
銅（Ｉ）複合体によるチオールの酸化
銅（ＩＩ）の単純な塩、例えばＣｕＣｌ２またはＣｕＢｒ２を水溶液中に入れると、それらは水和（ａｑｕｏｔａｔｅｄ）され、付随して、その後加水分解が起こり、銅（ＩＩ）のオリゴ核（ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅａｒ）アクアヒドロキソ−複合体が形成される。
【００４２】
チオールを含有する水溶液中の銅（ＩＩ）のこれらのアクアヒドロキソ−複合体はほぼ即座に還元され、銅（Ｉ）のチオレート複合体ＣｕＩｋ（ＳＲ）ｍ（式中、ｋ＝２〜１４、ｍ≧３ｋ）が形成される。ＣｕＩｋ（ＳＲ）ｍの組成および構造は、二核性（ｋ＝２）から１４環（ｋ＝１４）配位化合物まで及ぶ最も多様な性質を有する可能性があり；異なる構造の化合物の混合物が形成されることはまれではない。しかし、これらの複合体の組成および構造がどのようなものであっても、それらはすべて、非常に弱いものであっても任意の所定の酸化剤の作用下で、−Ｓ−Ｈ基をジスルフィドブリッジ−Ｓ−Ｓ−に酸化するプロセスを効果的に触媒する。
【００４３】
一例として、図２は、二核性パラジウム複合体［Ｐｄ２（μ−ＳＧ）２（ＮＨ３）４］２＋と比較した、過酸化水素によるグルタチオンの酸化反応におけるＣｕＩｋ（ＳＲ）ｍ複合体の相対的触媒有効性の調査結果を示す。
【００４４】
図２で示される結果からわかるように、ＣｕＩｋ（ＳＲ）ｍ複合体は酸化プロセスの触媒として著しくさらに効果的に作用する。しかし、ＣｕＩｋ（ＳＲ）ｍを含有するグルタチオンジスルフィドの水溶液は、１Ｈ  ＮＭＲ、ＩＲ分光法およびＨＥＬＣデータによると不安定であり、好気条件で、結果として得られるジスルフィドのより完全な酸化プロセスが３０〜６０分で開始する。これにより、チオールをそれらのジスルフィド形態にする酸化の選択的触媒としてのＣｕＩｋ（ＳＲ）ｍ配位化合物の使用が事実上不可能になる。
【００４５】
Ｃｕ−Ｐｄ触媒を使用したチオールの酸化
銅−パラジウム触媒［Ｐｄ２ＩＩ（μ−ＳＲ）２（ＮＨ３）４］・｛ＣｕＩｋ（ＳＲ）ｍ｝を使用する触媒系の実験的研究により、二核性チオレート架橋パラジウム（ＩＩ）化合物［Ｐｄ２ＩＩ（μ−ＳＲ）２（ＮＨ３）４］と比較して、それらのはるかに高い触媒有効性が証明される（図３）。しかし、銅ＣｕＩｋ（ＳＲ）ｍのチオレート複合体を含有する酸化グルタチオンＧＳＳＧの水溶液と異なり、Ｐｄ−Ｃｕ触媒を含有する水溶液は、１Ｈ  ＮＭＲ、ＩＲ分光法、およびＨＥＬＣによると、銅原子の濃度がパラジウムイオン濃度を超えない場合の分解のプロセスに対して安定である。好気条件でＰｄ：Ｃｕ比を１：１以上上回ることに付随して、ＧＳＳＧの低速分解が起こる。したがって、わずか１：２の比Ｐｄ：Ｃｕで、ＧＳＳＧの濃度の減少は、約１週間で９６％のレベルに達する。
【００４６】
研究により、Ｐｄ−Ｃｕ触媒中のＰｄ：Ｃｕ比は、触媒の作用活性を変える必要性に応じて、１：０．２〜１：２の範囲内にあることが示される。
【００４７】
まとめると、チオールＧＳＨのＧＳＳＧへのソフトな選択的酸化プロセスに関して、パラジウム（ＩＩ）の二核性チオレート架橋複合体は酸化触媒の主な機能を果たし、一方、銅（Ｉ）のチオレート複合体はそれらの触媒活性を変更する、または換言すれば、それらの触媒活性を制御する化学部位と見なされるべきであると結論づけることができる。
【００４８】
したがって、機能的二核性パラジウム配位化合物［Ｐｄ２ＩＩ（μ−ＳＲ）２（ＮＨ３）４］を、チオールの媒体中で銅（Ｉ）複合体の対応するチオレート誘導体に変換される銅塩ＣｕＸ２（式中、Ｘ＝Ｃｌ−またはＢｒ−）から形成される制御部位｛ＣｕＩｋ（ＳＲ）ｍ｝を有するグルタチオンまたはアセチルシステインの二座ブリッジ配位と組み合わせることは、パラジウムＰｄ２ＩＩおよびＣｕＩ複合体に基づく触媒系の活性を制御するための最も有効なアプローチの１つを提示する。
【００４９】
機能的化学部位［Ｐｄ２ＩＩ（μ−ＳＲ）２（ＮＨ３）４］と比較した一般式［Ｐｄ２ＩＩ（μ−ＳＲ）２（ＮＨ３）４］・｛ＣｕＩｋ（ＳＲ）ｍ｝のパラジウム−銅触媒の触媒有効性の増加は、過酸化水素がＰｄＩＩイオンではなく、｛ＣｕＩｋ（ＳＲ）ｍ｝イオンを酸化するという事実による。
【００５０】
レドックス反応により式｛ＣｕＩＩｋ（ＳＲ）ｍ｝を形成する化学制御部位
｛ＣｕＩｋ（ＳＲ）ｍ｝＋２Ｈ２Ｏ２＝｛ＣｕＩＩｋ（ＳＲ）ｍ｝＋２ＯＨ・＋２ＯＨ−
は、スキーム２によると機能的部位［Ｐｄ２ＩＩ（μ−ＳＲ）２（ＮＨ３）４］の酸化剤の役割を果たす。
【００５１】
【化２】
2014510618.tif 000003
【００５２】
ｄ−エレメントの配位化合物のレドックス反応について、２つの一般的な種類の遷移状態、いわゆる内部空間型および外部空間型が存在する。外部空間型について、２つの金属のイオンの配位殻は互いに接触しない。内部空間型について、２つの金属のイオンは、両配位殻によって共有されるブリッジリガンドによって結合する。
【００５３】
量子化学計算の結果から、二核性金属骨格Ｐｄ２ＩＩに基づく触媒系において、中間混合型Ｃｕ−Ｐｄ二元金属中心が水溶液中で形成されることが示された：［ＣｕＩＩ（μ−ＳＲ）２ＰｄＩＩ］＃（金属間化合物（ｉｎｔｅｒｍｅｔａｌｌｉｄｅ））、これは｛ＣｕＩｋ（ＳＲ）ｍ｝と［ＰｄＩＩ（μ−ＳＲ）ＰｄＩＶ（ＯＨ）２］とに容易に不均化される。
【００５４】
最外分子軌道（ＭО）の構造の分析は、ＰｄＩＩイオンのみを含有する二核性複合体に基づくものよりも、混合型Ｃｕ−Ｐｄ配位化合物に基づく触媒系の方が反応性が速いことが実験的に見出されることを明らかにする。
【００５５】
触媒プロセスでの金属の原子ｄ軌道（ｄ−АО）の関与は、多くの場合、プロセスの高エネルギーの活性化を決定する分子軌道（ＭＯ）の対称性により反応段階の発生のための障害を取り除く。対称性によって禁止される反応のための金属イオンによる触媒作用の説明における主な観念は、遷移金属のイオンがエネルギーに関して互いに近くにある接近可能なｄ−ＡＯを有することである。これにより、金属イオンに配位する分子が、それらの電子を金属のあるｄ軌道に引き渡し、金属の他のｄ軌道から電子を受け取ることが可能になる。
【００５６】
中心ＣｕＩＩ（μ−ＳＲ）２ＰｄＩＩを有する配位化合物中の最外ＭＯの性質の分析により、その最高被占分子軌道（ＨＯＭＯ）が大部分は銅のｄ−ＡＯからなり、イオンＰｄＩＶを含有する酸化生成物を形成するために好適でないことが示された。プロセスが起こるためには、１対の電子を、ＰｄＩＩの大部分の４ｄ軌道を有する最低被占分子軌道（ＬＵＭＯ）に移す必要がある。これらのＭＯのエネルギー差が小さいほど、遷移状態を達成するために必要な経費が少ない。混合型二元金属中心ＣｕＩＩ（μ−ＳＲ）２ＰｄＩＩを有する検討中の配位化合物では、これらの軌道間のエネルギー差は２．６１ｅＶである。中心ＰｄＩＩ（μ−ＳＲ）２ＰｄＩＩを有する配位化合物では、対応する占有軌道と非占有軌道とのエネルギー差ははるかに大きく：４．１８ｅＶである（ＰｔＩＩ（μ−ＳＲ）２ＰｔＩＩについては、４．７９ｅＶである）。
【００５７】
したがって、ＣｕＩおよびＰｄＩＩの一時的に形成された混合型複合体に基づくチオールの選択的酸化のための触媒系は、類似のＰｄＩＩ複合体に基づく系よりも高い活性を有する。これの理由は、銅ｄ軌道のエネルギー論のレベルである。
【００５８】
サイクル中の中間体二元金属中心［ＣｕＩＩ（μ−ＳＲ）２ＰｄＩＩ］＃の形成は、一般式［Ｐｄ２ＩＩ（μ−ＳＲ）２（ＮＨ３）４］｛ＣｕＩｋ（ＳＲ）ｍ｝の触媒の触媒有効性の増加の原因であり、一方、適切に決められた数の活性な二元金属中心［ＣｕＩＩ（μ−ＳＲ）２ＰｄＩＩ］＃は、パラジウム−銅触媒の全体的な活性の変化を可能にする。
【００５９】
本発明の提案された触媒を、Ｎ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシンおよび／またはＮ−アセチル−Ｌ−システインジスルフィドとカップリングさせることができ、天然の生物学的活性および触媒活性の両方を有する組み合わせが形成される。過剰のチオールにより、少量および極少量の触媒を直ちに、触媒サイクルに必要な基質をそれに提供するのと同時に、調製し、使用することが可能になる。
【００６０】
調製物の構成中のＮ−アセチル−システインおよび／またはＮ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシンジスルフィドの遊離分子は、カチオン性もしくはアニオン性形態のいずれか、または天然の分子の形態であり得る。
【００６１】
カウンターイオンは、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、セレン、マンガン、亜鉛、バナジウムおよび他の化学元素のカチオンなどの無機イオン、または生物学的活性を有する種々の化学基由来の有機分子のアミノ酸、脂肪族および芳香族イオンなどの有機化合物のイオンであり得る（実施例１２）。
【００６２】
本発明による組み合わせは、他の薬理活性化合物、特にプリンおよび／またはピリミジン塩基、それらの誘導体、またはそれらに基づく化合物も含有する可能性がある（実施例１０および１１）。
【００６３】
薬理活性化合物により、治療目的で使用される任意の物質であって、医薬および／または生物活性物質の分子を構成するもの、特に、プリンおよび／またはピリミジン塩基ならびにそれらに基づく化合物、例えば：アデノシン（９−β−Ｄ−リボフラノシルアデニン）、グアノシン（９−β−Ｄ−リボフラノシルグアニジン）、デスオキシアデノシン（９−β−Ｄ−デスオキシリボフラノシルアデニン）、デスオキシグアノシン（９−β−Ｄ−デスオキシリボフラノシルグアニジン）、９−β−Ｄ−リボフラノシルアデニンモノ、ジ、トリホスフェート、９−β−Ｄ−リボフラノシルグアニジンモノ、ジ、トリホスフェート、９−β−Ｄ−デスオキシリボフラノシルアデニンモノ、ジ、トリホスフェート（コルジセピン）、９−β−Ｄ−デスオキシリボフラノシルグアニジンモノ、ジ、トリホスフェート、シチジン（４−アミノ−１−［３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−２−イル］ピリミジン−２−オン）、１−［（２Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシ）テトラヒドロフラン−２−イル］−５−ピリジン−２，４−ジオン、デスオキシシチジン（４−アミノ−１−［４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−２−イル］ピリミジン−２−オン）、チミジンまたはデスオキシチミジン１−［（２Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシ）テトラヒドロフラン−２−イル］−５−メチルピリジン−２，４−ジオン、イノシン９−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−６，９−ジヒドロ−３Н−プリン−６−オン、リバベリン：１−（３，４−ジヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−テトラヒドロフラン−２−イル）−１Н−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド、ザナミビル（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−４−［（ジアミノメチリデン）アミノ］−３−アセトアミド−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１，２，３−トリヒドロキシプロピル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６−カルボン酸、ファルムシクロビル（Ｆａｒｍｃｙｃｌｏｖｉｒ）：２−［２−（２−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）エチル］−１，３−プロパンジオールジアセテート（エステル）、ガンシクロビル．（２−アミノ−１，９−ジヒドロ−９−２−ヒドロキシ−１−（ヒドロキシメチル）エトキシメチル−６Н−プリン−６−オン）、ジドブジン（３’−アジド−３’−デスオキシチミジン）、アシクロビル：２−アミノ−９−（（２−ヒドロキシエトキシ）メチル）−１Ｈ−プリン−６（９Ｈ）−オン、フルオロウラシル：５−フルオロ−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン、１−（２，３−ジデスオキシ−ベータ−Ｄ−グリセロペント−２−エノフラノシル）チミジン、フルオロチオウラシル：５−フルオロ−１Ｈ−ピリミジン−２−チオン−４−オン、チオウラシル：１Ｈ−ピリミジン−２−チオン−４−オン、Ｓ−アデノシルホモシステイン：４［５−（６−アミノ−プリン−９−イル）−３，４−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−２−イルメチルスルファニル］−２−メルカプト−ブタン酸、Ｓ−アデノシルメチオニン：（２Ｓ）−２−アミノ−４−［［（２Ｓ，３Ｓ��４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノプリン−９−イル）−３，４−ジヒドロキシオキソラン−２−イル］メチル−メチルスルホニオ］ブタノエート、環状アデノシンモノホスフェート（ｃＡＭＰ）６−（６−アミノ−プリン−９−イル）−２−オキソ−テトラヒドロ−２λ−５−フロ［３，２−ｄ］［１，２，３］ｄ−イソオキソホスフィン−２，７ジオール、８−クロロ−ｃＡＭＰ：６−（６−アミノ−８クロロ−プリン−９−イル）−２−オキソテトラヒドロ−２λ−５−フロ［３，２−ｄ］［１，２，３］ｄ−イソオキソホスフィン−２，７ジオール、Ｎ６，２’−О−ジブチリル−８−ＳＨ−ｃＡＭＰ、Ｎ６，２’−О−ジブチリル−８−ＳＨ−ｃＡＭＰ、環状グアノシンモノホスフェートｃＧＭＰ、Ｎ６−モノブチリル−８−Ｓ−メチル−ｃＡＭＰ、ホルミシン：２−（７−アミノ−１Р−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−３−イル）−５−ヒドロキシメチル−テトラヒドロフラン−３，４−ジオール、−メチルイソグアノシン：６−アミノ−１−メチル−１，９−ジヒドロ−プリン−２−オンを意味する。
【００６４】
薬理活性化合物を、過剰のＮ−アセチル−システインおよび／またはＮ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシンジスルフィドとファンデアワールス力（イオン結合、水素結合および他の非共有結合）によって結合させることができる。
【００６５】
本発明による組み合わせは、当該技術分野で公知の方法により、本発明のパラジウム−銅触媒の化学的性質の特色を考慮して、（Ｎ−アセチル−システインおよび／またはＮ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシンの）ジスルフィドおよび薬理活性物質から調製することができる。好ましくは、調製物中の本発明による触媒の割合は、脂肪族チオール−Ｎ−アセチル−システインおよび／またはＮ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシンのジスルフィド１モルあたり１・１０−２〜１・１０−７ｇである。
【００６６】
本発明によって提案されるパラジウム−銅触媒または本発明の触媒の組み合わせを用いて、プリンおよび／もしくはピリミジン塩基またはそれらに基づく誘導体の治療活性を増強することができる。本明細書の文脈では、薬理活性化合物の治療有効性の増加とは、１回量（ｏｎｅｔｉｍｅ）もしくはレジメン用量の減少、または全体的な毒性の低下およびこの薬理活性化合物について通常の治療用量以下を投与した場合のさらに著しい治療効果が達成されることである。
【００６７】
本発明によるパラジウム−銅触媒、本発明による触媒の組み合わせおよび薬理学的組み合わせを医薬組成物の形態で使用することができる。
【００６８】
本発明による医薬組成物を得るために、薬剤的に許容される賦形剤を使用する。特に、これらは無機または有機ビヒクルである。ラクトース、コーンスターチまたはその誘導体、タルク、ステアリン酸またその塩などを、例えば錠剤、シェルコート錠、ロゼンジおよびハードゼラチンカプセル用ビヒクルとして用いることができる。ソフトゼラチンカプセルに好適なビヒクルは、例えば、植物油、ワックス、脂肪、半固体および液体ポリオールナドである。溶液およびシロップを製造するために好適なビヒクルは、例えば、水，ポリオール、サッカロース、転化糖、グルコースなどである。坐剤に好適なビヒクルは、例えば、天然または凝固油、ワックス、脂肪、半液体または液体ポリオールなどである。
【００６９】
さらに、医薬組成物は、保存料、可溶化剤、安定剤、矯味矯臭剤、乳化剤、甘味料、着色剤、中和剤、浸透圧を調節するための塩、緩衝液、マスキング剤または抗酸化剤および他の必須成分を含有する可能性がある。
【００７０】
本発明によるパラジウム−銅触媒または触媒の組み合わせおよび自身の有効性を増強する薬理活性物質が、同じ投与形態中または別の投与形態中のどちらにも存在する可能性がある。それらを別の投与形態で投与することは、同時に（２つの個体投与形態、例えば錠剤の同時摂取、特に同じシリンジ中の同時注射）またはまず患者に１つの投与形態、次いで他の投与形態を与えるかまたは投与する場合、連続して実施することができる。投与の間隔は、好ましくは１時間を超えないが、相乗効果が観察される時間まで増大させることができる。最適投与シーケンスは、その有効性が増強される薬理活性物質の薬物動態学および薬力学（摂取速度、分布、除去速度、細胞または器官屈性または全身的屈性の特性）に依存し、それぞれ特定の物質について個々に選択することができる。
【００７１】
投与されるパラジウム−銅触媒の量は、触媒の組成物中のＰｄおよびＣｕの物質占有率によって決定され、これは、各金属についての一日所要量以下である可能性がある。そうでなければ、配位化合物の組成物で投与されるｄ−金属の量は、治療結果を達成するための必要性によって決定される。
【００７２】
治療結果は、患者の体重１ｋｇあたり１・１０−３〜１・１０−８ｇの量で投与することによって達成することができ、これは、体重１ｋｇあたり１×１０−２〜１×１０−５モルのジスルフィドの組み合わせ量のジスルフィドの量に換算される。
【００７３】
一般的に、本発明による生成物および方法はすべて、別法として、本明細書中で開示されるか、または従来技術から当業者に公知である任意の好適な成分および段階を含む、これらかなる、または本質的にこれらからなる可能性があり、そして本発明によるそのような生成物または方法は、先行技術から公知の生成物もしくは方法で使用される、または本発明の技術的結果を達成するために必須ではない、任意の所定の成分、または段階、または目的を付加的もしくは代替的に排除する可能性がある。
【００７４】
実施例
本発明を以下の特定の実施例により説明する。
【００７５】
実施例１．パラジウム（ＩＩ）とＮ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシン（ＧＳＨ）のアンモニア処理した複合体に基づくＰｄ−Ｃｕ触媒の製造
５０ｍｇ（２３７マイクロモル）のシス−［Ｐｄ（ＮＨ３）２Ｃｌ２］を、７５ｍｇ（２４４マイクロモル）のＧＳＨを含有する溶液１０ｍｌ中に入れ、超音波浴中で、明黄色溶液が形成されるまで均質化する。得られた系に、２０ｍｇ（１１７マイクロモル）のＣｕＣｌ２・２Ｈ２Ｏを含有する溶液５ｍｌを注ぎ、結果として得られる明緑色溶液のｐＨを水酸化ナトリウムの溶液（約０．０１Ｍ）で５．０〜５．２に補正する。
【００７６】
得られた触媒溶液を用いて、水溶性チオール（例えば、ＧＳＨまたはアセチルシステイン）の酸化を実施することができる。
【００７７】
得られた触媒溶液中で、パラジウム対銅のモル比は２：１である。
【００７８】
実施例２．パラジウム（ＩＩ）とグルタチオンのアンモニア処理した複合体に基づくＰｄ−Ｃｕ触媒の製造およびＮ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシンジスルフィド（ＧＳＳＧ）の合成のためのその使用。
【００７９】
段階１．パラジウム（ＩＩ）とグリシルシステイニルグルタメートのアンモニア処理した複合体の製造
１０ｍｇ（４７．３マイクロモル）のシス−［Ｐｄ（ＮＨ３）２Ｃｌ２］を冷たい状態で１０〜１５ｍｌの蒸留水中に分散させ、結果として得られた懸濁液に１４５ｍｇ（０．４７３ミリモル）のＧＳＨを添加し、均一な明黄色溶液が得られるまで混合を磁気ブレンダー上でおこなう。
【００８０】
段階２．Ｐｄ−Ｃｕ触媒の製造
先に得られた反応混合物に、８．０６ｍｇ（４７．３マイクロモル）の塩化銅（ＩＩ）二水和物を含有する溶液５ｍｌを注ぐ。結果として得られた黄緑色の触媒溶液のｐＨを、水酸化ナトリウムの０．１Ｍ溶液で５．５〜５．８の値にする。
【００８１】
段階３．ＧＳＳＧの合成のためのＰｄ−Ｃｕ触媒系の使用
ガラス製品中に２９．０９ｇ（０．９４６ミリモル）のＧＳＨを量り分け、混合しながら１５０〜２００ｍｌの蒸留水中に注ぎ、０〜１５℃まで冷却する。別に、５０〜６０ｍｌの蒸留水中に３．７８ｇのＮａＯＨ（０．９４６ミリモル）を溶解させ、結果として得られる溶液をＧＳＨの懸濁液中に激しく撹拌しながら、反応物が１５〜２０℃を超えて昇温しないようにしながら注ぎ、そして透明な均一溶液が得られるまで混合する。反応混合物のｐＨを水酸化ナトリウムの０．１Ｍ溶液で５．５〜５．８に修正する。得られた反応系に、先に調製された触媒溶液を注ぎ、そして、激しく撹拌しながら、反応混合物が１５℃を超えて昇温しないようにして、１Ｍの新たに調製された過酸化水素溶液５０ｍｌを少量ずつ注ぐ。反応を、ＨＥＬＣで完了についてモニターする。
【００８２】
反応の完了および滅菌ろ過後、溶液を凍結させ、真空昇華（親液性）乾燥に付す。
【００８３】
得られた調製物中の「Ｎ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシンジスルフィドのナトリウム塩：パラジウム：銅」のモル比は、１０００：１：１である。
【００８４】
実施例３。パラジウム（ＩＩ）とＮ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシン（ＧＳＨ）とのアンモニア処理した複合体に基づくＰｄ−Ｃｕ触媒の製造およびリボフラノシルハイポキサンチン二ナトリウムのグリシルシステイニルグルタメートを得るためのその使用。
【００８５】
段階１．パラジウム（ＩＩ）とＧＳＨとのアンモニア処理した複合体の製造
２０ｍｇ（９４．６マイクロモル）のシス−［Ｐｄ（ＮＨ３）２Ｃｌ２］を２０ｍｌの蒸留水中に冷状態で溶解させ、結果として得られた懸濁液に３０ｍｇ（９７．６マイクロモル）のＧＳＨを添加し、そして均一な明黄色溶液が得られるまで混合をおこなう。
【００８６】
段階２．Ｐｄ−Ｃｕ触媒の製造
先に得られた反応混合物に、１４．５２ｍｇ（８５．２マイクロモル）の塩化銅（ＩＩ）二水和物を含有する溶液５ｍｌ中に注ぐ。結果として得られた黄緑色の触媒溶液のｐＨを水酸化ナトリウムの０．０１Ｍ溶液で５．５〜６．０の値にする。
【００８７】
段階３．リボフラノシルハイポキサンチン二ナトリウムのＮ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシンを得るためのＰｄ−Ｃｕ触媒系の使用
ガラス製品中に５８．１９ｇ（０．１８９モル）のＧＳＨを量り分け、混合しながら２００ｍｌの蒸留水中に注ぎ、０〜１５℃まで冷却する。別に、５０〜６０ｍｌの蒸留水中に７．５７ｇのＮａＯＨ（０．１８９モル）を溶解させ、そして結果として得られる溶液をＧＳＨの懸濁液中に激しく混合しながら、反応物が１５〜２０℃を超えて昇温しないようにして注ぎ、そして透明な均一溶液が得られるまで混合する。必要ならば、反応混合物のｐＨを０．１Ｍの水酸化ナトリウム溶液で５．５〜６．０に修正する。得られた反応系に、先に調製された触媒溶液を注ぎ、ガラス製品を氷浴（５〜１０℃）に移し、そして１Ｍの新たに調製された過酸化水素溶液１００〜１０２ｍｌ（約０．１モル）を、激しく混合しながら４５〜６０分にわたって少量ずつ注ぐ。反応をＨＥＬＣВ法により完了についてモニターする。
【００８８】
別に、１５０ｍｌの熱蒸留水（６０〜７０℃）中に、２５．３８ｇ（０．０９５モル）のリボフラノシルハイポキサンチン（イノシン）を溶解させる。完全に溶解させた後、溶液を室温まで冷却し、反応混合物中に注ぐ。滅菌ろ過後、溶液を凍結させ、真空昇華（親液性）乾燥に付す。
【００８９】
得られた調製物中のＧＳＳＧ：イノシン：パラジウム：銅のモル比は、１０００：１０００：１：０．９である。
【００９０】
実施例４．パラジウム（ＩＩ）とＮ−アセチル−Ｌ−システインの二核性配位化合物のアンモニア処理した誘導体に基づくＰｄ−Ｃｕ触媒の製造。
１２０ｍｇ（５６８マイクロモル）のシス−［Ｐｄ（ＮＨ３）２Ｃｌ２］を、超音波浴中、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン（６４８．５ｍｇ、３．９７ミリモル）の水溶液２０ｍｌ中に、均一な黄色溶液が形成されるまで分散させる。結果として得られた系に、４８．４ｍｇ（２８４マイクロモル）のＣｕＣｌ２．２Ｈ２Ｏを含有する溶液５ｍｌを注ぐ。析出した白色沈殿を、水酸化ナトリウムの０．１Ｍ溶液により反応系をрН４．５〜５．０にアルカリ化しながら溶解させる。
【００９１】
結果として得られた触媒の黄緑色溶液を用いて、水溶性チオール（例えば、還元グルタチオンもしくはアセチルシステイン）を酸化することができるか、または後の使用のために凍結乾燥することができる。
【００９２】
結果として得られる触媒溶液中のパラジウムと銅の量のモル比は２：１である。
【００９３】
実施例５．Ｐｄ（ＩＩ）とＮ−アセチル−Ｌ−システインの二核性配位化合物のアンモニア処理した誘導体に基づくＰｄ−Ｃｕ触媒の製造およびＮ−アセチル−Ｌ−システインジスルフィドのナトリウム塩の合成のためのその使用。
【００９４】
段階１．パラジウム（ＩＩ）とＮ−アセチル−Ｌ−システインのアンモニア処理した複合体の製造
１６ｍｇ（７５．７マイクロモル）のシス−［Ｐｄ（ＮＨ３）２Ｃｌ２］を超音波浴中、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン（１２３．５ｍｇ、７５７マイクロモル）の水溶液２０ｍｌ中に、均一な黄色溶液が得られるまで分散させる。
【００９５】
段階２．Ｐｄ−Ｃｕ触媒の製造
得られた溶液に、６．５ｍｇ（３７．８マイクロモル）のＣｕＣｌ２・２Ｈ２Ｏを含有する溶液５ｍｌを注ぐ。結果として得られた触媒溶液を、水酸化リチウムの飽和溶液でｐＨ４．５〜５．０にアルカリ化する。
【００９６】
段階３．Ｎ−アセチル−Ｌ−システインのナトリウム塩を得るためのＰｄ−Ｃｕ触媒系の使用
２５０ｍｌの蒸留水中に、２４．７ｇ（０．１５１モル）のＮ−アセチル−Ｌ−システインを溶解させ、触媒の溶液を注ぎ、そして結果として得られる溶液に、激しい撹拌下で、６．３５ｇ（０．１５１モル）の水酸化ナトリウムを添加する。Ｈ２Ｏ中にＮａＯＨを完全に溶解させた後、溶液のｐＨを水酸化ナトリウムの飽和溶液によって５．５〜６．０に修正し、そして１０〜１５℃まで冷却する。
【００９７】
結果として得られる溶液に、冷状態で、少量ずつ、激しい撹拌下で、過酸化水素の１Ｍ溶液（約８０ｍｌ）を添加し、反応混合物の温度が１５〜２０℃を超えて上昇しないようにする。反応をＨＥＬＣВ法により完了についてモニターする。
【００９８】
反応の完了および滅菌ろ過後、溶液を凍結させ、真空昇華（親液性）乾燥に付す。
【００９９】
得られた調製物中の「Ｎ−アセチル−Ｌ−システインジスルフィド：パラジウム：銅のナトリウム塩」のモル比は１０００：１：０．５である。
【０１００】
実施例６．Ｐｄ（ＩＩ）とＮ−アセチル−Ｌ−システインの二核性配位化合物のアンモニア処理した誘導体に基づくＰｄ−Ｃｕ触媒の製造およびＮ−アセチル−Ｌ−システインジスルフィドのリチウム塩の合成のためのその使用
【０１０１】
段階１．パラジウム（ＩＩ）とＮ−アセチル−Ｌ−システインのアンモニア処理した複合体の製造
１６ｍｇ（７５．７マイクロモル）のシス−［Ｐｄ（ＮＨ３）２Ｃｌ２］を超音波浴中、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン（１２３．５ｍｇ、７５７マイクロモル）の水溶液２０ｍｌ中に、均一な黄色溶液が得られるまで分散させる。
【０１０２】
段階２．Ｐｄ−Ｃｕ触媒の製造
得られた溶液に、６．５ｍｇ（３７．８マイクロモル）のＣｕＣｌ２・２Ｈ２Ｏを含有する溶液５ｍｌを注ぐ。結果として得られた触媒溶液を水酸化リチウムの飽和溶液でｐＨ４．５〜５．０にアルカリ化する。
【０１０３】
段階３．Ｎ−アセチル−Ｌ−システインのリチウム塩を得るためのＰｄ−Ｃｕ触媒系の使用
２５０ｍｌの蒸留水中に、２４．７ｇ（０．１５１モル）のＮ−アセチル−Ｌ−システインを溶解させ、触媒の溶液を注ぎ、そして結果として得られる溶液に、激しい撹拌下で、６．３５ｇ（０．１５１モル）の水酸化リチウム一水和物を添加する。ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏを完全に溶解させた後、溶液のｐＨを水酸化リチウムの飽和溶液により５．５〜６．０に修正し、そして１０〜１５℃まで冷却する。
【０１０４】
冷状態の結果として得られる溶液に、少量ずつ、激しい撹拌下で、過酸化水素の１Ｍ溶液（約８０ｍｌ）を添加し、反応混合物の温度が１５〜２０℃を超えて上昇しないようにする。反応をＨＥＬＣВ法により完了についてモニターする。
【０１０５】
反応の完了および滅菌ろ過後、溶液を凍結させ、真空昇華（親液性）乾燥に付す。
【０１０６】
得られた調製物中の「Ｎ−アセチル−Ｌ−システインジスルフィドのリチウム塩：パラジウム：銅」のモル比は１０００：１：０．５である。
【０１０７】
実施例７．Ｐｄ（ＩＩ）とＮ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシンジスルフィド（ＧＳＨ）の二核性配位化合物のアンモニア処理した誘導体に基づくＰｄ−Ｃｕ触媒の製造およびＮ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシンジスルフィドのリチウム塩の合成のためのその使用
【０１０８】
段階１．パラジウム（ＩＩ）とＧＳＨのアンモニア処理した複合体の製造
２１．１ｍｇ（１００マイクロモル）のシス−［Ｐｄ（ＮＨ３）２Ｃｌ２］を超音波浴中、ＧＳＨ（３０７．５ｍｇ、１ミリモル）の水溶液２０ｍｌ中に、均一な黄色溶液が得られるまで分散させる。
【０１０９】
段階２．Ｐｄ−Ｃｕ触媒の製造
得られた溶液に、３４．１ｍｇ（２００マイクロモル）のＣｕＣｌ２・２Ｈ２Ｏを含有する溶液５ｍｌを注ぐ。結果として得られた触媒溶液を水酸化リチウムの飽和溶液でｐＨにアルカリ化する。
【０１１０】
段階３．Ｎ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシンジスルフィドのリチウム塩を得るためのＰｄ−Ｃｕ触媒系の使用
４００〜５００ｍｌの蒸留水中に、６１．５ｇ（０．２モル）のＧＳＨを溶解させ、触媒の溶液を注ぎ、そして結果として得られる溶液に、激しい撹拌下で、８．３９ｇ（０．２モル）の水酸化リチウム一水和物を添加する。ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏを完全に溶解させた後、溶液のｐＨを水酸化リチウムの飽和溶液により５．５−５．８に修正し、そして１０〜１５℃まで冷却する。
【０１１１】
冷状態の結果として得られる溶液に、少量ずつ、激しい撹拌下で、過酸化水素の１Ｍ溶液（約１１０ｍｌ）を添加し、反応混合物の温度が１５℃を超えて上昇しないようにする。反応をＨＥＬＣВ法により完了についてモニターする。
【０１１２】
反応の完了および滅菌ろ過後、溶液を凍結させ、真空昇華（親液性）乾燥に付す。
【０１１３】
得られた調製物中のＮ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシンジスルフィドのリチウム塩：パラジウム：銅のモル比は１０００：１：２である。
【０１１４】
実施例８．Ｐｄ（ＩＩ）とＮ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシン（ＧＳＨ）の二核性配位化合物のアンモニア処理した誘導体に基づく触媒の製造およびグリシルシステイニルグルタメート１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−１Ｈ−１，２，４−トリアゾロ−３−カルボキシアミド（ＧＳＳＧ−リバビリン）のジスルフィドの合成のためのその使用
【０１１５】
段階１．パラジウム（ＩＩ）とＧＳＨのアンモニア処理した複合体の製造
２０ｍｇ（９４．６マイクロモル）のシス−［Ｐｄ（ＮＨ３）２Ｃｌ２］を超音波浴中、２０ｍｌのＧＳＨ水溶液（２９１ｍｇ、９４７マイクロモル）中に均一な黄色溶液が得られるまで分散させる。
【０１１６】
段階２．Ｐｄ−Ｃｕ触媒の製造
得られた溶液に、２４．２ｍｇ（１４２マイクロモル）のＣｕＣｌ２・２Ｈ２Ｏを含有する溶液５ｍｌを注ぐ。結果として得られた触媒溶液を水酸化ナトリウムの０．０１Ｍ溶液でｐＨ５．５〜８．０までアルカリ化する。
【０１１７】
段階３．ＧＳＳＧ−リバビリンを得るためのＰｄ−Ｃｕ触媒系の使用
４００〜５００ｍｌの蒸留水中に８７．３ｇ（０．２８４モル）のＧＳＨを溶解させ、触媒溶液および１１．３５ｇ（０．２８４モル）の水酸化ナトリウムの５０ｍｌの水中溶液を激しい撹拌下で注ぐ。溶液のｐＨ水酸化ナトリウムの０．１Ｍ溶液により５．５〜５．８に修正し、そして１０〜１５℃まで冷却する。
【０１１８】
冷状態の結果として得られる溶液に、少量ずつ、激しい撹拌下で、過酸化水素の１Ｍ溶液（約１５０ｍｌ）を添加し、反応混合物の温度が１５℃を超えて上昇しないようにする。反応をＨＥＬＣВ法により完了についてモニターする。
【０１１９】
別に、１００〜１５０ｍｌの熱蒸留水（６０〜７０℃）中に３４．６５ｇ（０．１４２モル）のリバビリンを溶解させる。完全に溶解させた後、溶液を室温まで冷却し、反応混合物中に注ぐ。
【０１２０】
反応の完了および滅菌ろ過後、溶液を凍結させ、真空昇華（親液性）乾燥に付す。
【０１２１】
得られた調製物中のＧＳＳＧのナトリウム塩：リバビリン：パラジウム：銅のモル比は、１０００：１０００：１：１．５である。
【０１２２】
実施例９．細胞成長に対して作用する場合の白金化合物およびパラジウム−銅触媒の生物学的活性および毒性の比較評価。
【０１２３】
白金化合物は、免疫系の細胞作動因子によるサイトカインの産生に対するそれらの刺激作用の中心にあるペプチド特性の分子のスルフヒドリル基の酸化的修飾反応における触媒作用、抗生物質に対する多剤耐性の反応の選択的阻害、ならびに多くの慢性および社会的に重大な病気（乾癬、神経変性およびウイルス性疾患）の中心にある自己免疫反応の発生を抑制する能力ののために、薬理学的活性を有する。
【０１２４】
したがって、白金化合物は、薬理学的溶液で求められ、ペプチド特性の分子のスルフヒドリル基の酸化的修飾反応における触媒作用によって影響を受ける多数の内因的特性を有する。しかし、白金化合物は高い毒性を有し、その機序は触媒活性に関連しない。白金化合物の毒性は急性型のものである。すなわち、白金の最大許容可能濃度を超えると、白金を含有する物質が投与または体内に取り込まれる際にかなり急速に現れる。白金が最大許容可能濃度より低い物質の構成で投与される場合、様々な器官の組織中で白金の緩徐な蓄積が起こる可能性がある能性がある。この場合、白金化合物の毒性作用は後で現れるか、または特徴的な中毒パターンを伴って全く現れないが、白金の変異原性作用は悪性腫瘍発現の原因としての働きをする可能性がある。
【０１２５】
脂肪族チオール（Ｎ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシン−ＧＳＨ、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン）ならびにｄ−金属パラジウムおよび銅の配位化合物に基づく合成触媒（実施例１、４）はさらに、ペプチド特性の分子および白金配位化合物に特有な薬理学的に望ましいチオール含有分子の構成におけるチオールの酸化の化学的反応における触媒活性によって特徴づけられる。パラジウムおよび銅化合物は、白金化合物と比べると毒性ではなく、内因的突然変異誘発性または催奇形作用を有しない。白金化合物の触媒活性が薬理学的に望ましい効果（白金化合物の毒性作用が望ましいガン疾患の化学療法を含む）と関連するならば、脂肪族チオールＧＳＨ、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン、ならびにｄ−金属パラジウムおよび銅の配位化合物の生物学的効果を白金配位化合物の生物学的活性と比較する必要があった。Ａ４３１細胞を配位化合物への曝露の対象として選択した。脂肪族チオールとの白金配位化合物の作用の生化学的態様をそれらにおいてかなり徹底的に調査した。細胞応答の性質により、ＧＳＨならびにｄ−金属パラジウムおよび銅、Ｎ−アセチル−Ｌ−システインならびにｄ−金属パラジウムおよび銅、ならびに酸化グルタチオンおよび白金の配位化合物に基づく触媒の細胞に対する作用における類似性および／または相違の評価が可能になった。
【０１２６】
研究の目的。脂肪族チオールＧＳＨ、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン、ならびにｄ−金属パラジウムおよび銅の配位化合物に基づく触媒の、ならびに酸化グルタチオンおよび白金の配位化合物の、細胞培養物の成長に対する影響を研究するため。
【０１２７】
調査した化合物は、脂肪族チオールＮ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシンならびにｄ−金属パラジウムおよび銅の配位化合物に基づく触媒（化合物１、実施例１および２の記載にしたがって合成）、Ｎ−アセチル−Ｌ−システインならびにｄ−金属パラジウムおよび銅の配位化合物に基づく触媒（化合物２、実施例４、５の記載にしたがって合成）、ならびに酸化グルタチオンおよびシスプラチンの配位化合物（化合物３、特許第２１５３３５０号の本文に記載された技術にしたがって合成）であった。
【０１２８】
調査のための試料の調製
研究される化合物を＋４℃で保持し；実験開始直前に、物質を脱イオン化水（ｓｕｐｅｒ  Ｑ）中に溶解させた。初期溶液の濃度は、実験で使用される濃度を１０００倍以上上回る。調製された濃縮溶液を＋４℃にて５時間以下で保持する。
【０１２９】
投与経路
化合物を細胞培地に研究される最終濃度まで添加した。
【０１３０】
投与回数
一連の実験のうちの１つにおいて、調製物を細胞に一度に添加し、細胞を４８時間インキュベートした。
【０１３１】
実験の表示された期間の別のシリーズで、調製物を細胞に対して１日に１回、２４時間後ごとに５回添加し、細胞を１２０時間インキュベートした。対照シリーズでは、対応する体積の生理溶液を投与した。
【０１３２】
濃度
全ての化合物を、０．１５マイクロモル／ｍｌ（濃度は過剰の脂肪族チオールジスルフィドの含有量に換算して計算した）の最終濃度になるように添加した；
【０１３３】
効果を評価するための基準
２４および４８時間後の培養物中の生および死細胞の特性を第１シリーズの実験および第２シリーズの実験で２４、４８、７２、９６、１２０時間後に測定した。
【０１３４】
使用した細胞系
Ａｌｌ−Ｒｕｓｓｉａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｃｙｔｏｌｏｇｙ，  Ｒｕｓｓｉａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｓｔ．  Ｐｅｔｅｒｓｂｕｒｇ）から得られるА４３１系のヒト類表皮ガンの細胞。
【０１３５】
細胞培養条件
細胞をＣＯ２インキュベータ（Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中、＋３７℃にて５％の含有量のＣＯ２とともに培養した。細胞をこれらの条件下で培養物の単層が形成されるまで増殖させ、次いでそれらを研究される化合物の作用に付す。
【０１３６】
細胞培養培地
細胞培養のために、我々はゲンタマイシンＫ（８０ｍｇ／ｌ）、Ｌ−グルタミン（３００ｍｇ／ｌ）および胎児血清（ＰＡＡ，  Аｕｓｔｒｉａ）を１０％の最終濃度になるように添加した培地ＤＭＥＭ（ООО  “ＰａｎＥｋｏ”，  Ｍｏｓｃｏｗ）を使用した。実験開始の１日前に、等量の細胞（１０００／２．５ｍｃｌ（４００×１０−３／ｍｌ）を血清の含有量が減少した（０．５％）培地に移した。
【０１３７】
細胞成長動力学
А４３１細胞をペトリ皿（Ｎｕｎｃ）上に１００００／ＣＭ２の濃度で蒔き、１０〜１５％の単分子層に達した翌日、それらを研究される調製物の作用に付す。
【０１３８】
染色のための細胞の調製
А４３１細胞の培養培地を死んだ脱離細胞の完全分析のために試験管（Ｆａｌｋｏｎ）中に集め、一方、ペトリ皿中の細胞をＰＢＳ（これを集められた培地と合わせた）で洗浄し、そしてＶｅｒｓｅｎ（Ｐａｎｅｋｏ）中０．２５％トリプシン溶液で、約１０分間室温にて、細胞が脱離するようになるまで処理した。細胞を次いで自動ピペットでとることによって懸濁させ、そしてあらかじめ集められた培地と合わせた。試料を５分間４００ｇで室温にて遠心分離し、上清を除去し、そして沈殿物をリン酸塩緩衝液ＰＢＳ  ｐＨ７．４中に再懸濁させた。
【０１３９】
ヨウ化プロピジウムでの細胞の染色
ヨウ化プロピジウムを細胞懸濁液に５０ｍｃｇ／ｍｌの濃度になるまで、フローサイトフルオロメーターＢｒｕｋｅｒ  ＡＣＲ  １０００での測定の５〜１０分前に添加した。この染色は、損傷した細胞膜を透過することができ、染色された細胞は死んでいる。
【０１４０】
結果を統計処理する方法
得られた結果の統計処理は、応用プログラムパッケージ“ＳＴＡＴＩＳＴＩＣＡ  ６．０”を用いてパソコンで実施した。
【０１４１】
細胞の増殖活性および死に対する実験した化合物の影響の結果
得られたデータによると、調査した化合物は全て、細胞培地上に投与されると増殖活性を刺激する（表１）。
【０１４２】
【表１】
2014510618.tif 000004
【０１４３】
知見は、細胞培養に対する実験した化合物の１回の作用において、対照シリーズと比較して増殖活性が刺激されることを証明する。発見された効果は、全ての研究された物質について同等である。死細胞の数の基準により、対照と比較して化合物１および２の作用についてそれらの数が２倍以上減少し、化合物３（５０〜６０％）の作用については若干少ないことがわかる。異なる配位化合物の作用に対する細胞培養の応答についての結果の類似性は、一般的な作用機序およびそれに対する細胞応答の目安の１つである。投与される金属の１回量は比較的少ない。シスプラチンは細胞に対して毒性であることを考慮するならば、明らかに１回投与は複合体についての脂肪族チオールおよびシスプラチン、またはシスプラチン自体の効果が示されるには十分ではなく、これらは配位化合物の分解に際して遊離する可能性がある。この点に関して、細胞を１２０時間インキュベーションし、２４時間ごとに１回、各研究化合物に細胞を５回暴露して、実験を構成した。結果を表２に示す。
【０１４４】
【表２】
2014510618.tif 000005
【０１４５】
実験結果により、対照群および全ての研究化合物へ曝露した群の両方で、１日後の細胞の実際上同じ増殖活性が明らかになる。対照と比較して、研究化合物への暴露の１日後の細胞死は少ないという以前に見出された法則も維持される。しかし、第２日およびその翌日の配位化合物グルタチオンジスルフィドとシスプラチンの細胞に対する作用は、培養の増殖活性および増強された細胞死において、対象における類似したインジケータの値のほぼ２倍の減少をもたらす。一方で、化合物１および化合物２の細胞培養に対する作用は、実際上、細胞数を日々直線的に増大させ、比較的一定なレベルのそれらの死をもたらした。
【０１４６】
知見をまとめると、一方で、全体として研究した化合物の活性により決定され、また一方で、配位化合物を形成する金属の生物学的対象に対する作用の特色を反映するある法則を示す。全ての研究した配位化合物に暴露された場合、２４時間後の細胞の成長および死のそのような類似の動力学は、金属や脂肪族チオールに関係なくそれらの作用機序の類似性を示す。しかし、配位化合物は培養培地から除去されず、このことは、全てのその後の投与はそれらの濃度を増大させることを意味する。リガンドが積極的に代謝可能な構造であるという事実を考慮する場合、金属複合体の遊離は論理的な仮定条件である。シスプラチンは安定な分子である。複合化合物の構成において非毒性であるが、シスプラチンはリガンドの分解に際してその細胞毒性生物学的作用を呈する。この点に関して、我々は、死細胞の活発な増加と低い増殖活性とを観察した。閉じた系において、シスプラチンだけでなく、シスプラチンで修飾されたヌクレオチドも、核酸の合成反応に関与する場合に細胞毒性作用を有することは除外されない。
【０１４７】
ｄ−金属パラジウムおよび銅の生物学的活性は、シスプラチンとは異なる。パラジウムおよびその化合物は、生物学的には、比較的中性の分子である。銅は生物元素であり、エネルギー遊離、解毒、生体分子の生理学的に調節された合成および分解の反応に関与する様々な酵素の組成物中の細胞によって積極的に使用される。この点に関して、ｄ−金属パラジウムおよび銅の脂肪族チオールの配位化合物に基づく触媒の生物学的にプラスの効果が実験の条件で見出された。
【０１４８】
結論。したがって、脂肪族チオールＮ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシンおよびＮ−アセチル−Ｌ−システインとｄ−金属パラジウムおよび銅の配位化合物に基づく触媒は、酸化グルタチオンおよびシスプラチンの配位化合物に特有な細胞に対する類似した作用機序によって特徴づけられるが、それらは配位に内因的な毒性がない。これに関連して、脂肪族チオールＮ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシンおよびＮ−アセチル−Ｌ−システインとｄ−金属パラジウムおよび銅の配位化合物の脂肪族チオールの複合化合物に基づく触媒を、ペプチド特性の分子の組成物中でジスルフィドを形成するためのチオールの酸化的修飾反応における触媒活性を必要とする様々な長さの療法のための医薬とともに薬理学的溶液中で使用することができる。
【０１４９】
実施例１０  酸化グルタチオンおよびシスプラチンの配位化合物ならびにＮ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシン、パラジウムおよび銅の配位化合物に基づく触媒の、イノシンの抗ウイルス活性を高める能力の比較評価。
特許第ＲＵ２１５３３５０号および同第ＲＵ２１５３３５１号は、イノシンの抗ウイルス活性を、好ましくはシスプラチンおよび酸化グルタチオンの配位化合物の使用で高めるための薬理学的溶液を検討する。増強効果は、好ましくは、化合物シスプラチンおよび酸化グルタチオンの標的の、イノシンの作用に関するその親和性を増強する複合酸化的修飾反応を触媒する能力により達成される。イノシンの抗ウイルス効果を増強する機序が配位化合物の触媒活性に関連するならば、本発明の薬剤は類似したさらに顕著な作用を有するはずである。なぜなら、それらはシスプラチンおよび酸化グルタチオンの配位化合物と比べてより高い触媒活性により区別されるからである。
【０１５０】
研究の目的：酸化グルタチオンおよびシスプラチンの配位化合物と組み合わせたイノシンならびにＮ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシンパラジウムおよび銅の配位化合物に基づく触媒の抗ウイルス活性の比較評価
【０１５１】
研究した化合物
薬理学的組成物（ＰＣ）１−本発明の薬剤を含有するリボフラノシルハイポキサンチン二ナトリウムのＮ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシン（実施例３で提示する合成）
【０１５２】
薬理学的組成物（ＰＣ）２−シスプラチンおよび酸化グルタチオンの配位化合物を含有するリボフラノシルハイポキサンチン二ナトリウムのＮ−グルタミル−Ｌ−システイニル−グリシン（特許第２１５３３５０号、同第２１５３３５１号で提示される技術による合成）
【０１５３】
実験モデル
−ベネズエラウマ脳炎（ＶＥＥ）のウイルス−病原菌株トリニダード。実験動物のその後の感染のためのウイルスを含有する材料の蓄積は、９〜１１日令のニワトリ胚（３０〜５０）を用いて実施した。まず第１に、ウイルス含有懸濁液の５連続１０倍希釈を調製した。ウイルス含有懸濁液の各希釈について、０．２ｍｌを発生中のニワトリ胚の尿膜腔液中に導入した。ウイルス含有懸濁液の注射部位を溶融したパラフィンで覆った。次に、発生中のニワトリ胚を（３７±０，５）℃の温度のサーモスタット中に１８時間入れ、オボスコープ（ｏｖｏｓｃｏｐｅ）によってその生存度を定期的にチェックする。インキュベーション時間が終わった後、発生中のニワトリ胚の生存度をサーモスタット中で評価し、生きている胚の「残骸（ｃａｒｃａｓｓ）」から、抗生物質（１ｍｌあたり１００単位換算のペニシリン、１ｍｌあたり２００単位のストレプトマイシン）を添加した生理溶液を用いて、ウイルス含有物質の１０％懸濁液を調製した。結果として得られた懸濁液を１５００〜２００００ｒｐｍで＋（３±０．５）℃の温度にて１０分間遠心分離した。１．０ｍｌの体積を有するバイアル中に上清液をデカントし、実験動物（マウス）の後の感染のために使用した。初期ウイルス力価は１０７〜１０８ＬＤ５０／ｍｌであった。
【０１５４】
−リフトバレー熱（ＲＶＦ）のウイルス−病原菌株８−８７。実験動物の感染のためのウイルス含有物質の蓄積は、３〜５日令仔マウス（１０〜１５）を使用して実施する。まず、ウイルス含有物質の５連続１０倍希釈を調製した。各希釈について、０．０２ｍｌを仔マウスの脳に導入し、それらを２４〜４８時間観察下に置き、その後、エーテルを用いて動物を屠殺し、大脳を摘出し、３つの検体を一度にペニシリンバイアル中に入れ、これを−（２０±０．５）℃の温度の冷凍庫中で保管した。この後、大脳の１０％懸濁液をウイルス含有物質として使用した。初期ウイルス力価は１０５〜１０６ＬＤ５０／ｍｌであった；
【０１５５】
−ダニ媒介性脳炎（ＴＢＥ）ウイルス−病原菌株アブセタロブ（Ａｂｓｅｔａｒｏｖ）。実験動物の感染のためのウイルス含有物質の蓄積を仔マウスで実施した。まず、ウイルス含有物質の５連続１０倍希釈を、あらかじめ感染したマウスの脳の１０％懸濁液の遠心分離物または凍結乾燥状態から再水和させたウイルス含有物質を用いて調製した。各希釈について、０．０２ｍｌを仔マウスの脳に導入し、それらを２４〜４８時間観察下に置き、その後、エーテルを用いて動物を屠殺し、大脳を摘出し、３つの検体を一度にペニシリンバイアル中に入れ、これを−（２０±０．５）℃の温度の冷凍庫中で保管した。この後、大脳の１０％懸濁液をウイルス含有物質として使用した。初期ウイルス力価は１０２−１０３ＬＤ５０／ｍｌであった。
【０１５６】
薬理学的組成物１および２の有効性を評価する研究を、体重１６〜１８ｇの非近交系オスマウス（３６０匹）で実施した。
【０１５７】
研究は、ＮＩＩＴ（ＭＢＺ）  ＦＧＵ  “ＧｏｓＮＩＩＩ  ＶＭ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｒｕｓｓｉａｎ  Ｍｉｎｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｄｅｆｅｎｓｅ”の実験的生物学的モデルのクリニックで１週間の隔離期間を過ごしたマウスを使用した。
【０１５８】
各病原体について、我々は白色非近交系マウスに対してＬＤ５０を測定し、Ｉ．  Ｐ．  Ａｓｈｍａｒｉｎ  ａｎｄ  Ａ．  Ａ．  Ｖｏｒｏｂ’ｙｅｖの変法のＫｅｒｂｅｒ法によりこの基準を計算した。
【０１５９】
研究した調製物の有効性は、実験群（対応する調製物を投与されたもの）および対照群中の動物の生存率を比較することによって決定した。実験および対照群中の生存する動物のパーセンテージをＧｅｎｅｓ  Ｖ．Ｓの表から決定した。感染した動物の観察を２１日間実施し、各日に、実験および対照群の生きている動物数および死んだ動物数を記録した。
【０１６０】
結果の統計処理方法
実験結果の統計処理は、伝統的な統計処理法を実施する特別なプログラムを用いてパソコンで実施した：
【０１６１】
薬理学的組成物１および２の抗ウイルス活性の研究からの結果
ＯＯＶＩの実験モデルの全てにおいて、薬理学的組成物１および２の有効性を、２つのスキーム：
−感染の２４時間前、感染と同時、感染後２４時間、４８時間および７２時間（スキーム１−緊急予防）；
−感染と同時、感染後２４時間、４８時間および７２時間（スキーム２−早期原因療法）
を用いて評価した。
【０１６２】
薬理学的組成物１および２を、３０ｍｇ／ｋｇ体重（１０ｍｃｇ／マウス）の１回量で０．５ｍｌの体積で皮下投与した。
【０１６３】
ＶＥＥでの実験的感染における薬理学的組成物１および２の有効性
【０１６４】
調査の結果を表３に示す。
【０１６５】
【表３】
2014510618.tif 000006
【０１６６】
表３に提示したデータは、評価した調製物が、実験的ＶＥＥに関連して保護作用を示したことを証明する。所定の条件で最も有効なのは、ＰＭ１であることが判明した。調製物をスキーム１（感染の２４時間前、感染と同時、感染後２４時間、４８時間および７２時間）により使用する場合、ＶＥＥウイルスの感染量に関係なく、感染したマウスの生存率は、対照における１００％死亡率に対して、１００％のレベルであった。しかし、調製物がスキーム２によって使用される場合（感染と同時、感染後２４時間、４８時間および７２時間）、これらの条件で、病原体の感染量に応じて、保護効果は１００％（１２ＬＤ５０の量の病原体に感染した場合）および１００％（２ＬＤ５０の量の病原体に感染した場合）のレベルであった。ＰＣ２を使用する場合、病原体の感染量に依存した保護インジケータは、ＰＣ１を使用する場合よりも４０〜６０％低かった。
【０１６７】
したがって、実施した研究に基づいて、実験的ＶＥＥ感染に関して評価した調製物の最も有効なものはＰＣ１であったと結論づけることができ、これは本特許による薬剤を含む。緊急予防スキームで使用されたＰＣ１は、対照において１００％死亡率に対して、感染した動物の１００％保護を提供した。
【０１６８】
実験的ＲＶＦウイルス感染における薬理学的組成物１および２の有効性
調査結果を表４に示す。
【０１６９】
【表４】
2014510618.tif 000007
【０１７０】
表４に提示したデータは、ＲＶＦに関連した最良の保護効果はＰＣ１を使用することによって得られたことを証明する。使用したスキームに関係なく、調製物は、対照における１００％死亡率に対して、感染したマウスの１００％保護をもたらした。薬理学的組成２は、所定の条件で実際上無効であった。
【０１７１】
実験的ウイルス感染（実験的ダニ媒介性脳炎）における薬理学的組成物１および２の有効性。
調査結果を表５に示す。
【０１７２】
【表５】
2014510618.tif 000008
【０１７３】
提示されたデータから次の様に、全ての評価した調製物は、２ＬＤ５０の量の病原体に感染した動物で使用される場合、実際上同じ保護有効性を示し、対照におけるそれらの１００％死亡率に対して、感染したマウスの８０〜１００％の生存率を保証した。同時に、調製物が１２ＬＤ５０の量の病原体に感染した動物で使用される場合、ＰＣ１は、これらの条件で、ＰＣ２よりも有効であることが証明された。
【０１７４】
結論
実施した研究の結果から、総合すれば、薬理学的組成物１および２が抗ウイルス活性を有すると結論づけることができる。しかし、本発明の薬剤を含むＰＣ１は、酸化グルタチオンおよびシスプラチンの配位化合物を含む薬理学的組成物２と比較してより顕著な抗ウイルス活性を有していた。
【０１７５】
実施例１１。本発明の薬剤の、リバビリンの抗ウイルス活性を増強する能力の測定。
リバビリンは特定の抗ウイルス製品である。ウイルスで感染した細胞に対するその作用はイノシンと類似している。本発明の薬剤は、タンパク質の酸化的修飾のプロセスを刺激することができ、イノシンの抗ウイルス効果を増強した。イノシンおよびリバビリンの抗ウイルス性作用の類似性により、我々は、本発明の薬剤による１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド（薬局方製品リバビリン（登録商標）の有効成分）の抗ウイルス効果の増強の可能性を仮定することができる。
【０１７６】
研究の目的：本発明の薬剤の、１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン］−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミドの抗ウイルス活性を増強する能力を評価すること。
【０１７７】
研究化合物
本発明の薬剤とカップリングさせた薬理学的組成物１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド（実施例８で示した合成）−調製物１。
【０１７８】
“Ｋａｎｏｎｆａｒｍａ  Ｐｒｏｄａｋｓｈｎ”（Ｒｕｓｓｉａ）によって製造された薬局方抗ウイルス性製品リバビリン（登録商標）−調製物２。
【０１７９】
実験モデル
研究を、実施例１０で記載された実験モデルに関して実施した。各モデルにおける病原体の感染量は１０ＬＤ５０に相当した。
【０１８０】
調製物１および２の抗ウイルス活性の研究からの結果
ＯＯＶＩの全ての実験モデルに関して、調製物１および２の有効性を、２つのスキームでそれらを用いることによって評価した：
−感染前２４時間、感染と同時、感染後２４時間、４８時間および７２時間（スキーム１−緊急予防）；
−感染と同時、感染後２４時間、４８時間および７２時間（スキーム２−早期原因療法）。
【０１８１】
調製物１および２を０．５ｍｌの体積で皮下投与した。
調製物１：３０ｍｇ／ｋｇ体重（１０ｍｃｇ／マウス）の１回量
調製物２：３０ｍｇ／ｋｇ体重（１０ｍｃｇ／マウス）の１回量
【０１８２】
実験的ウイルス感染（ベネズエラウマ脳炎（ＶＥＥ））における調製物１および２の有効性。
調査結果を表６に示す。
【０１８３】
【表６】
2014510618.tif 000009
【０１８４】
表６に示したデータは、評価した調製物が、ＶＥＥでの実験的感染に関して体内に導入された場合に保護効果の形成に関して互いに異なっていたことを証明した。
【０１８５】
調製物１は、どちらの投与スキームについても対照における１００％死亡率（ｐ＜０．０５）に対して８０％のレベルの感染マウスの生存率を保証し、一方、調製物２（リバビリン）の類似した効果は５０％を超えなかった。
【０１８６】
したがって、実施した研究に基づいて、我々は、本発明の薬剤とカップリングした薬局方製品リバビリン（登録商標）の活性成分である調製物１が、ＶＥＥでの実験的感染に対する保護および治療有効性に関して薬局方製品リバビリン（登録商標）の作用を１．５〜２．０倍上回ったと結論づけることができる。
【０１８７】
調製物１および２の実験的ウイルス感染（リフトバレー熱（ＲＶＦ））における有効性
調査結果を表７に示す。
【０１８８】
【表７】
2014510618.tif 000010
【０１８９】
表７に示されるデータは、ＲＶＦでの実験的感染に関する調製物１の保護および治療効果は調製物２よりも高度に発現されることの証拠になる。特に、調製物１の保護効果は７０％であ瑠のに対して、調製物２については３０％であり、対照では１００％の死亡率であった。
【０１９０】
したがって、実施した研究に基づいて、本発明者らは、本発明の薬剤とカップリングさせた薬局方製品リバビリン（登録商標）の活性成分である調製物１は、薬局方製品リバビリン（登録商標）の作用を、実験的ウイルス感染に対する保護および治療有効性に関して、２倍以上上回ったと結論づけることができる。
【０１９１】
実験的ウイルス感染（ダニ媒介性脳炎（ＴＢＥ））における調製物１および２の有効性
調査結果を表８に示す。
【０１９２】
【表８】
2014510618.tif 000011
【０１９３】
示されたデータから次のように、調製物１は、１０ＬＤ５０の量の病原体に感染した動物で用いられる場合に、使用したスキームに関係なく、実際上同一の保護有効性を示し、対照におけるそれらの１００％死亡率に対して、感染したマウスの７０〜８０％の生存率を保証した。同時に、調製物２を感染した動物において使用した場合、有効性はそれほど顕著でないことが判明した。調製物は、その投与のために使用したスキームに関係なく、５０％の保護レベルをもたらし、これは調製物１よりも１０〜３０％低かった。
【０１９４】
したがって、実施した研究に基づいて、我々は、本発明の薬剤とカップリングさせた薬局方製品リバビリン（登録商標）の活性成分である調製物１は、実験的ウイルス感染に対する保護および治療有効性に関して、薬局方製品リバビリン（登録商標）の作用を１．５〜１．８倍上回ったと結論づけることができる。
【０１９５】
結論
実施された研究結果から、総合すれば、我々は、本発明の薬剤が、薬局方製品リバビリン（登録商標）の活性成分である１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミドの抗ウイルス作用を増強したと結論づけることができる。この点に関して、本発明の薬剤の使用は、人間や動物のウイルス性疾患の治療および予防のための新世代創薬のための薬理学的溶液の見込みがある可能性がある。
【０１９６】
実施例１２。Ｎ−アセチル−Ｌ−システインジスルフィドのリチウム塩の形態で投与されたリチウムイオンの血液刺激（ｈｅｍｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ）活性に対する本発明の薬剤の影響。
【０１９７】
現時点で、長期貯蔵で保持することができる有効な血液刺激剤はない。医療において、濃度におけるリチウムの血液刺激活性が知られており、中枢神経系の機能に対するリチウムの負の影響と関連する。
【０１９８】
調査の目標。本発明の薬剤のリチウムイオンの血液刺激作用を増強する能力を測定すること。
【０１９９】
調査のための研究化合物の溶液の調製
結晶性物質を４℃で保持し；実験の開始直前に、物質を生理溶液中に溶解させた。溶液を、滅菌層流ボックス中、０．２２ｍｃｍフィルターであるＭｉｌｌｅｘ−ＧＳ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に通すことによって滅菌した。
【０２００】
調査のモデル。
体重１４０〜１６０ｇの白色ランダム雑種（ｒａｎｄｏｍ−ｂｒｅｅｄ）オスラットであって、１２０ｍｇ／ｋｇの１回量のシクロホスファン（ＣＰｈ）を生理溶液中で皮下投与したものに関して調査を実施した。
【０２０１】
４つの実験動物群を形成した。
１：研究化合物の溶媒（生理溶液）の注射を受けたインタクト動物（溶媒対照）；
２：ＣＰｈの注射を受け、その後、生理溶液を治療薬として投与された動物（対照）；
実験群：
３：シクロホスファンの注射を受け、その後、リチウムイオン、Ｎ−アセチル−Ｌ−システインジスルフィド、および本発明の薬剤を生理溶液中に１０ｍｇ／ｋｇ（配位化合物量７．８×１０−８Ｍ／ｋｇ）を含有する薬理学的組成物１を治療薬（ＰＣ１を実施例６での記載にしたがって合成した）として投与された動物
４：シクロホスファンの注射を受け、その後、Ｃ−Ｌｉを生理溶液中治療薬（調製物２）として１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与された動物；
５：シクロホスファンの注射の注射を受け、その後、炭酸リチウムを生理溶液中治療薬（調製物３）として３ｍｇ／ｋｇの用量（１０ｍｇのシステインのリチウム塩中のリチウムイオン（０．５５）の割合に基づいて算出された炭酸リチウムの量、同様の量のリチウムが３ｍｇの炭酸リチウム中に含まれる）で投与された動物；
６：シクロホスファンの注射の注射を受け、その後、アセチルシステインジスルフィドを生理溶液中治療薬（調製物４）として９．５ｍｇ／ｋｇの用量で投与された動物；
研究調製物を、シクロホスファンの投与の３日後に投与した。
【０２０２】
調査した動物，
血液学的研究のために、尾静脈から、ＣＰｈの投与後３、７、および１４日間血液を採取した。各シリーズの最後（３、７、および１４日）で、エーテル過量摂取によって実験動物を安楽死させ、尾静脈および大腿骨の骨髄から血液を採取した。
【０２０３】
分析したインジケータ
この調査で、我々は、血液細胞パターン（赤血球、血小板、白血球、リンパ球および好中球、そしてさらにはＥＳＲの数）ならびに骨髄を、実験した化合物の血液抑制（ｈｅｍｏｄｅｐｒｅｓｓｅｄ）動物への７日間投与について評価した。
【０２０４】
調査の結果
血液パターンの調査結果を表９〜１１に示す。
【０２０５】
【表９】
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＊р０．０５  生物学的対照と比較して；
＊＊р０．０５  シクロホスファン対照と比較して
【０２０６】
【表１０】
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＊р０．０５  生物学的対照と比較して；
＊＊р０．０５  シクロホスファン対照と比較して
【０２０７】
【表１１】
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＊р０．０５  生物学的対照と比較して；
＊＊р０．０５  シクロホスファン対照と比較して
１２０ｍｇ／ｋｇの用量のシクロホスファンは、絶対的および相対的リンパ球減少症の血液のエレメントの全ての形態においてかなり顕著な血球減少症を引き起こし、１４日で発現は最大であった（１〜３）。
本発明の薬剤とカップリングしたＮ−アセチル−Ｌ−システインジスルフィドのリチウム塩の形態で投与されたリチウムは顕著な血液刺激効果を発揮し、これは血液パターンの事実上完全な回復で表される。Ｎ−アセチル−Ｌ−システインジスルフィド、およびＮ−アセチル−Ｌ−システインジスルフィドのリチウム塩、および炭酸リチウムの作用は、薬理学的組成物１と異なり、プラスの傾向の形態で表され、これは全体として見ると血液刺激効果として評価することができる（表１〜３）。
【０２０８】
結論
実施された研究の結果は、総合すれば、本発明の薬剤とカップリングしたＮ−アセチル−Ｌ−システインジスルフィドのリチウム塩である薬理学的組成物１の形態のリチウムは血液刺激作用を有し、一方、本発明の薬剤なしで、炭酸塩またはＮ−アセチル−Ｌ−システインジスルフィドの形態で投与されたリチウムは血液刺激作用を提供しなかった。
【０２０９】
したがって、本発明の薬剤は、リチウムイオンの特異的血液刺激活性を増強する能力によって特徴付けられる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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