【事件の表示】
　特許第３１９４９６４号「臓器または組織保護剤」の請求項１ないし６に係る特許に対する特許異議の申立てについて、次のとおり決定する。
【結　論】
　訂正を認める。
　特許第３１９４９６４号の請求項１ないし６に係る特許を維持する。
【理　由】
１．手続の経緯
　特許第３１９４９６４号に係る出願は、平成８年４月４日に特許出願され、平成１３年６月１日にその特許権の設定登録がなされ、その後、足立泰守から特許異議の申立てがなされ、取消理由が通知され、その指定期間内である平成１５年９月２日に特許権者から明細書の訂正が請求され（その後取り下げられた）、再度取消理由が通知され、その指定期間内である平成１６年２月５日に特許権者から明細書の訂正が請求されたものである。
　
２．訂正の適否についての判断
ア．訂正事項
　特許権者により請求された明細書の訂正事項は以下のとおりである。
ａ．特許請求の範囲の請求項１中の「下記式（１）：（式（１）の記載は省略する。）［式中、Ｒ１はＣ１〜Ｃ８のアルコキシ基または環状アミノ基を、Ｒ２はシアノ基またはニトロ基を、Ｒ３は水素原子またはＣ１〜Ｃ４のアルキル基を示す。］で表されるフェニルチアゾール誘導体」及び請求項２〜６の「上記式（１）で表されるフェニルチアゾール誘導体」を「２−（３−シアノ−４−イソブチルオキシフエニル）−４−メチル−５−チアゾ一ルカルボン酸」に訂正する。
ｂ．明細書第３頁２５行の「Ｃ１〜Ｃ８のアルコキシ基または環状アミノ基」を「イソブチルオキシ基」と、同頁２５〜２６行の「シアノ基またはニトロ基」を「シアノ基」と、同頁２６行の「水素原子またはＣ１〜Ｃ４のアルキル基」を「水素原子」と、第４頁２１〜２７行の「Ｃ１〜Ｃ８のアルコキシ基または環状アミノ基を表す。かかるＣ１〜Ｃ８のアルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペンチルオキシ、イソペンチルオキシ、ヘキシルオキシ、オクチルオキシ基等が挙げられる。また、かかる環状アミノ基の例としては、ピロリジノ、ピペリジノ、モルフォリノ、ピペラジニル基等が挙げられる。なかでもＲ１としては、Ｃ２〜Ｃ６のアルコキシ基が好ましく、特にイソブトキシ基が好ましい」を「イソブチルオキシ基を表す」と、同頁２８〜２９行の「またはニトロ基を表すが、Ｒ２としてはシアノ基が好ましい」を「を表す」と、第４頁３０行〜第５頁第２行の「またはＣ１〜Ｃ４のアルキル基を表す。かかるＣ１〜Ｃ４のアルキル基としては、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル基等が挙げられる。Ｒ３としては、メチル基が好ましい」を「を表す」と訂正する。
　
イ．訂正の可否に対する判断
　上記訂正事項ａは特許請求の範囲の減縮を目的とし、また、上記訂正事項ｂは訂正事項ａにともなう、特許請求の範囲の記載と発明の詳細な説明の記載との不整合を解消するための、明りょうでない記載の釈明を目的とするものであって、いずれも特許明細書に記載した事項の範囲内においてされたものであり、かつ、実質上特許請求の範囲を拡張し又は変更するものでもない。
　
ウ．むすび
　以上のとおりであるから、上記訂正は、いずれも特許法第１２０条の４第２項並びに同条第３項において準用する同法第１２６条第２項及び第３項の規定に適合するので、当該訂正を認める。
　
３．特許異議の申立てについての判断
ア、申立ての理由の概要
　特許異議申立人足立泰守の申し立てた理由は概略以下のとおりであり、下記の証拠を提出している。
ａ．本件請求項１〜６に係る特許発明は、甲第１号証に記載された発明と同一であるから、特許法第２９条第１項第３号の規定により特許を受けることができない。
ｂ．本件請求項１〜６に係る特許発明は、甲第１号証に記載された発明に基づいて、その発明の属する技術の分野における通常の知識を有するものが容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。
ｃ．本件請求項１〜６に係る特許発明は、甲第１号証に記載された発明と同一であるから、特許法第３９条第１項の規定により特許を受けることができない。
　なお、平成１５年６月２３日付け取消理由通知書においては、本件請求項１〜６に係る特許発明は、下記の先願発明と同一であると認められるので、特許法第３９条第１項の規定により特許を受けることができないとした。
　　　　　　　　　　　　　　　記
　甲第１号証：特開平５−５１３１８号公報
　先願：特願平９−２３３３７０号（特許第３１８２５５６号、上記甲第１号証の分割出願）
　
イ．訂正明細書の請求項１〜６に係る発明
　本件特許明細書は上記のとおりの訂正請求が認められるから、その請求項１〜６に係る発明（以下、「本件発明１〜６」という。）は、以下のものである。
「【請求項１】２−（３−シアノ−４−イソブチルオキシフェニル）−４−メチル−５−チアゾールカルボン酸および／またはその塩を有効成分として含有する、臓器の虚血−再灌流障害に伴う疾患の治療剤組成物。
【請求項２】２−（３−シアノ−４−イソブチルオキシフェニル）−４−メチル−５−チアゾールカルボン酸および／またはその塩を有効成分として含有する、活性酸素の発生に起因する臓器の虚血−再灌流障害に伴う疾患の治療剤組成物。
【請求項３】２−（３−シアノ−４−イソブチルオキシフェニル）−４−メチル−５−チアゾールカルボン酸および／またはその塩を有効成分として含有する、活性酸素の発生に起因する心、肝、脳、腎、消化管、または肺の虚血−再灌流障害に伴う疾患の治療剤組成物。
【請求項４】２−（３−シアノ−４−イソブチルオキシフェニル）−４−メチル−５−チアゾールカルボン酸および／またはその塩を有効成分として含有する、臓器の虚血−再灌流障害に伴う疾患の防御剤組成物。
【請求項５】２−（３−シアノ−４−イソブチルオキシフェニル）−４−メチル−５−チアゾールカルボン酸および／またはその塩を有効成分として含有する、活性酸素の発生に起因する臓器の虚血−再灌流障害に伴う疾患の防御剤組成物。
【請求項６】２−（３−シアノ−４−イソブチルオキシフエニル）−４−メチル−５−チアゾールカルボン酸および／またはその塩を有効成分として含有する、活性酸素の発生に起因する心、肝、脳、腎、消化管、または肺の虚血−再灌流障害に伴う疾患の防御剤組成物。」
　
ウ．判断
理由ａ．について
　本件発明１〜６に係る有効成分は、訂正により、２−（３−シアノ−４−イソブチルオキシフエニル）−４−メチル−５−チアゾールカルボン酸および／またはその塩に特定されたところ、甲第１号証には一般式（Ａ）
で表されるアゾール誘導体が記載され、ここで、Ｘは硫黄原子を採り得るからチアゾール環を有する化合物を包含するものである。
　しかしながら、このチアゾール環の５位に結合する基として記載している置換基の中で本件発明１〜６の置換基に相当すると請求人が主張する低級アルコキシカルボニル基は、上記訂正により本件発明１〜６に記載の置換基とは異なるものとなったから、甲第１号証に記載の一般式（Ａ）で表される化合物は本件発明１〜６の有効成分とは異なるものであり、本件発明１〜６は甲第１号証に記載されているということはできない。
　
理由ｂ．について
　甲第１号証には、理由ａ．で記載した一般式（Ａ）で表されるアゾール誘導体において、基Ｒ１はシアノ基或いはアルコキシ基で置換されているフェニル基となり得ること（公報第２頁第１欄７〜８行、同２８行等）、Ｒ２は低級アルコキシカルボニル基となり得ること（公報第２頁第２欄３２〜３４行等）、Ｒ３は低級アルキル基であり得ること（公報第２頁第１欄７〜９行等）、及びＸは硫黄原子であり得ること（公報第３頁第３欄１〜２行）、が記載されている。
　また、甲第１号証の段落【００１５】には、上記一般式（Ａ）で表されるアゾール誘導体又はその塩の薬理作用について、「本発明の化合物は、好中球からの活性酸素の放出を抑制し、又は活性酸素種を除去する活性を有する。従って、過酸化脂質の生体内合成を防止する作用乃至これを低下させる作用を発揮する。よって、上記化合物は、上記活性酸素種の過剰発生、過酸化脂質の生体内蓄積、或いはこれらに対する防御機構の欠損に起因する各種障害乃至疾患の予防及び治療剤として有用である。より具体的には、本発明薬剤は、虚血及び血液再開通に伴う障害から各種組織細胞を保護するような薬剤、例えばストレス潰瘍等の消化器潰瘍に対する治療剤；心筋梗塞・不整脈等の心臓虚血疾患に対する治療剤；脳出血・脳梗塞・一過性脳虚血発作等の脳血管疾患に対する治療剤；移植・微小循環不全等に依る障害に対する肝及び腎機能改善剤；又は虚血以外の原因で異常に発生した活性酸素に依ると考えられる各種細胞障害を抑制する様な薬剤、例えばベーチェット病・皮膚血管炎・潰瘍性大腸炎・悪性リウマチ・関節炎・動脈硬化・糖尿病等の治療剤として医薬品分野で有用である。」（公報第１１頁１９欄１６〜３３行）と記載されている。
　そこで、本件発明１〜６と甲第１号証に記載の発明を対比すると、両者はともに、虚血及び血液再開通に伴う障害に係る疾患の予防及び治療に有効なチアゾール誘導体であって、そのような障害を有する臓器として消化器、心臓、脳、肝臓及び腎臓を対象とするものであるが、理由ａ．で述べたとおり、本件発明１〜６の治療剤又は防御剤の有効成分は５位にカルボン酸又はその塩を有するものであるのに対して、甲第１号証に記載の化合物はカルボン酸エステルを有し得るものである点で相違している。
　次に、本件発明の有効成分が有する薬理作用について検討する。
　本件特許明細書には、虚血−再還流後に生じる障害の原因となる活性酸素の生成について、（ｉ）キサンチンオキシダーゼ（以下、「ＸＯＤ」という。）がキサンチン及びヒポキサンチンを尿酸に代謝し、この尿酸代謝時に大量の活性酸素である酸素アニオンラジカル（Ｏ２−）を副生成物として生じること、及び、（ｉｉ）白血球が虚血の際に、ケミカル・メディエーターによって活性化され、虚血部位に集積して活性酸素が発生することを記載しており（公報第３欄２８〜４８行）、かつ、本件発明の治療剤又は防御剤組成物は、いずれの場合にも活性酸素の発生による障害に対して有効であることを明らかにしている。即ち、（ｉ）については、「・・フェニルチアゾール誘導体は、強力なキサンチンオキシダーゼ阻害活性を示す化合物群であり、高尿酸血症および痛風の治療薬として用いられる（国際公開ＷＯ９２／０９２７９号パンフレット）」（公報第４欄２６〜４２行）と記載されており、本件発明の組成物の有効成分がＸＯＤ阻害作用により活性酸素の生成を抑制することを示唆している。また、（ｉｉ）については、本件明細書の実施例３において、本件発明の組成物が白血球に対する強力なメディエーターの１つであるＬＴＢ４の発生を抑制することを示している。
　このように、本件発明１〜６は、虚血−再還流障害の病態が種々の活性酸素の産生に基づく症状であることに鑑み、治療剤及び防御剤に含有される有効成分がＸＯＤ阻害活性に加えて、白血球を活性化するケミカル・メディエーターの産生をも抑制する作用を有することを見い出して、該有効成分を治療剤及び防御剤に使用しているのに対して、甲第１号証に記載の発明は、アゾール誘導体等が単に好中球からの活性酸素の放出を抑制し、又は活性酸素種を除去する活性を有する旨を一般的に記載し、その作用をラット心臓の冠動脈閉鎖−再還流時における心室性不整脈発生に対する作用として確認しているだけであって、白血球に対する具体的な作用の態様、及び活性酸素の異なる発生原因に対する抑制作用については明らかにしていない。
　また、請求人提出の平成１５年９月２日付け意見書の第６頁第１０行以下の記載によれば、本件発明のカルボン酸化合物とこれに対応する甲第１号証に記載のエステル化合物のＸＯＤ阻害作用については著しい差異があり、カルボン酸化合物がより一層強力な阻害活性を有していることがわかるのであり、このため、本件発明１〜６の組成物の有効成分であるチアゾールカルボン酸又はその塩についても、そのエステル化合物に比較して優れた薬理作用を有するであろうことが理解し得る。
　したがって、当業者が、甲第１号証に記載の発明に基づいて本件発明１〜６を容易に想到し得たということはできない。
  
 理由ｃ．について
　先願発明である特願平９−２３３３７０号に記載のアゾール誘導体又はその塩は、理由ａ．で述べたと同様な理由によって、訂正された本件発明の遊離のカルボン酸とはなり得ないものであるから、本件特許発明と上記先願発明とは同一とはいえない。
　
４．むすび
　以上のとおりであるから、特許異議申立の理由及び証拠によっては本件請求項１ないし６に係る発明の特許を取り消すことはできない。
　また、他に本件請求項１ないし６に係る発明の特許を取り消すべき理由を発見しない。
　よって、結論のとおり決定する。
【異議決定日】
平成１６年２月２３日（２００４．２．２３）
【訂正の要旨】
審決（決定）の【理由】欄参照。
（５４）【発明の名称】
臓器または組織保護剤
（５７）【特許請求の範囲】
　【請求項１】　
２−（３−シアノ−４−イソブチルオキシフェニル）−４−メチル−５−チアゾールカルボン酸
　【請求項２】　
２−（３−シアノ−４−イソブチルオキシフェニル）−４−メチル−５−チアゾールカルボン酸
　【請求項３】　
２−（３−シアノ−４−イソブチルオキシフェニル）−４−メチル−５−チアゾールカルボン酸
　【請求項４】　
２−（３−シアノ−４−イソブチルオキシフェニル）−４−メチル−５−チアゾールカルボン酸
　【請求項５】　
２−（３−シアノ−４−イソブチルオキシフェニル）−４−メチル−５−チアゾールカルボン酸
　【請求項６】　
２−（３−シアノ−４−イソブチルオキシフェニル）−４−メチル−５−チアゾールカルボン酸
【発明の詳細な説明】
技術分野
　本発明は、虚血−再灌流後に生じる活性酸素の発生に起因する障害に伴う種々の疾患の治療剤または防御剤に関する。
背景技術
　近年、心臓を始めとする各種臓器において、虚血状態およびそれに続く血流の再灌流によって大量の活性酸素が発生し、それが種々の疾患を誘発する因子の一つであることが判明してきている。すなわち、血栓などによって血管内の血流が中断すると、その血管の支配領域における虚血状態が生じる。この場合、その部位における組織は酸素の供給が途絶され、危険な状態となる。これがある程度長時間保持されると、組織は壊死状態に陥り、いったんこの状態となると回復は不可能である。そこで、血液の再灌流を可能なかぎり速く達成させ、組織が永久損傷を受ける前に救うことが重要である。
　ところが、血液の再灌流が組織の壊死の前に達成されたとしても、この再灌流自体が低酸素状態の組織に対して有害な影響を及ぼす。このような現象が虚血−再灌流障害と言われている。
　正常状態においては、核酸の代謝産物であるキサンチンおよびヒポキサンチンは細胞中に低濃度で存在し、キサンチンデヒドロゲナーゼにより尿酸に変換される。ところが虚血状態では、ＡＴＰの再合成が低下してＡＤＰおよびＡＭＰが蓄積し、核酸の代謝産物であるキサンチンおよびヒポキサンチンの濃度は著明に増大する。さらには血液の再灌流が生じた際に、キサンチンデヒドロゲナーゼがキサンチンオキシダーゼに変換される。この生成されたキサンチンオキシダーゼは、酸素を電子受容体としてキサンチンおよびヒポキサンチンを尿酸に代謝する。この場合に大量に副生成物として生じた酸素アニオンラジカル（Ｏ２−）こそが活性酸素であり、虚血−再灌流障害の一因を担うものである。さらにはこれより二次的に過酸化水素、ヒドロキシラジカルなどの他の活性酸素種が産生されることによって、さらに障害が増悪されるものと考えられる。
　一方、この経路以外にも白血球が活性酸素の発生源となることが知られている。白血球は虚血の際にロイコトリエンなどのケミカル・メディエーターによって活性化され、虚血部位に集積し、活性酸素を発生して虚血−再灌流障害に重要な役割を果たすと言われている。
　これらの活性酸素の発生は、心筋梗塞を始めとして、脳梗塞、肺血栓症、その他種々の臓器における血栓症などの各種虚血性疾患において、その予後の悪化に関与していると考えられている。同様に、血流を一時的に途絶する必要のある冠動脈バイパス術などの各種手段、経皮経管的冠動脈形成術、血栓溶解剤適応時の障害、あるいは臓器移植時などの多くの手術、処置においても、それらの予後の悪化に関与していることが指摘されている。したがって、活性酸素の発生を抑制する物質は、これらの障害に予防に有用と考えられる。
　これまでに、活性酸素の発生を抑制する物質として、キサンチンオキシダーゼの阻害剤であって痛風の治療薬として用いられているアロプリノールや、特開平３−１５７３８５号公報記載のキサンチンオキシダーゼ阻害剤が、虚血−再灌流による臓器障害に対する抑制効果の観点から検討されてきた。しかしながら、虚血−再灌流障害のモデルを用いた動物実験の結果には、有効であるというもの（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，１９８４，７４，ｐｐ１１５６−１１６４、Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１９８７，１４０，ｐｐ２０３−２０７）と、必ずしも有効ではないというもの（Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１９８８，８（３），ｐｐ５８０−５８４、Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｉｎ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１９９３，１９３，ｐｐ２７５−２８３）があって議論の分かれるところであり、今だ実用には至っていないのが現状である。
　一方上記以外にも、発生した活性酸素の消去剤としてＳＯＤなどが開発中であるが、これらに関しても現在のところ実用化には至っていない。
　なお、下記式（１）
［式中、Ｒ１はＣ１〜Ｃ８のアルコキシ基または環状アミノ基を、Ｒ２はシアノ基またはニトロ基を、Ｒ３は水素原子またはＣ１〜Ｃ４のアルキル基を示す。］
で表されるフェニルチアゾール誘導体は、強力なキサンチンオキシダーゼ阻害活性を示す化合物群であり、高尿酸血症および痛風の治療薬として用いられる（国際公開ＷＯ９２／０９２７９号パンフレット）。しかし、上記式（１）で表される化合物が、活性酸素発生による各種臓器の虚血−再灌流障害に対してどのような影響を及ぼすかについては知られていない。
　したがって、本発明が解決しようとする課題は、虚血−再灌流後などに生じる活性酸素の発生に起因する障害に伴う、さまざまの疾患の治療剤または防御剤を得るところにある。
発明の開示
　そこで本発明者らは、上記式（１）で表される化合物が、虚血−再灌流障害に対していかなる影響を及ぼすかについて研究を行った。その結果、これらの化合物が、たとえば虚血−再灌流障害に伴う臓器または組織障害への抑制作用を有すること、さらに、これらの化合物が虚血−再灌流障害に関与する白血球を活性化するケミカル・メディエーターの産生を抑制する作用を有することを見い出し、本発明に到達したものである。
　すなわち本発明に従えば、下記式（１）
［式中、Ｒ１は
イソブチルオキシ基
基を
子を
で表されるフェニルチアゾール誘導体および／またはその塩を有効成分として含有する、臓器または組織障害の治療剤組成物または防御剤組成物が提供される。
　本発明に従えば、さらに上記式（１）で表されるフェニルチアゾール誘導体を用いた臓器または組織障害の治療方法、あるいは防御方法、予防方法が提供される。
　本発明はまた、上記式（１）で表されるフェニルチアゾール誘導体の臓器または組織障害の治療のための使用、あるいは防御、予防のための使用である。
図面の簡単な説明
　図１は、虚血−再灌流処置を施したラットの血清Ｃｒｅ値に対する本発明薬剤の有効成分投与の効果を示すグラフ図である。
　図２は、虚血−再灌流処置を施したラットの血清ＢＵＮ値に体する本発明薬剤の有効成分投与の効果を示すグラフ図である。
　図３は、培養細胞のロイコトリエン−Ｂ４の産生に対する本発明薬剤の有効成分添加の効果を示すグラフ図である。
　図４は、ＤＮＦＢ感作マウスの生存率に対する本発明薬剤の有効成分投与の影響を示すグラフ図である。
　図５は、ＤＮＦＢ感作マウスの体重に対する本発明薬剤の有効成分投与の影響を示すグラフ図である。
　図６は、ＤＮＦＢ感作マウスの免疫反応惹起後の耳介厚の変化に対する本発明薬剤の有効成分投与の影響を示すグラフ図である。
発明を実施するための最良の形態
　上記式（１）において、Ｒ１は
イソブチルオキシ基を表す
を表す
を表す
　これらの有効成分は、公知の方法で適当な賦形剤等を用いて、軟カプセル剤、硬カプセル剤、錠剤、シロップ剤などの経口剤、注射剤、または外用剤とすることにより使用できる。
　かかる賦形剤としては、植物油（例えばトウモロコシ油、綿実油、ココナッツ油、アーモンド油、落花生油など）、中鎖脂肪酸グリセリドなどの油状エステル、鉱物油、ワセリン、動物油脂、セルロース誘導体（結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース）、ポリビニルピロリドン、デキストリン、乳頭、マンニトール、ソルビトール、デンプンなどが挙げられる。
　有効成分の投与量は、通常０．１−３００ｍｇ／日程度で、好ましくは１−５０ｍｇ／日程度であり、投与回数は通常１−３回／日であるので、このような条件を満たすように製剤を調整するのが好ましい。
　また、本発明薬剤の安全性については、有効成分として２−（３−シアノ−４−イソブチルオキシフェニル）−４−メチル−５−チアゾールカルボン酸についてのラットを用いた急性毒性試験を行ったところ、３００ｍｇ／ｋｇまで単回で経口投与しても死亡は全く認められなかった。
　本発明薬剤の有効成分である前記式（１）で表される化合物は、例えば国際公開ＷＯ９２／０９２７９号パンフレット記載の方法により合成することができる。
　本発明の薬剤は、臓器障害または組織障害の治療または防御に適用される。かかる臓器障害または組織障害としては、臓器の虚血−再灌流障害に伴う疾患が挙げられる。たとえば、活性酸素の発生に起因する臓器の虚血−再灌流障害に伴う疾患等にも適用される。具体的には、活性酸素の発生に起因する心、肝、脳、腎、消化管、または肺における虚血−再灌流障害に伴う疾患が例示される。
実施例
　以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明する。
［実施例１］
　以下の組成の錠剤を調製した。
　　２−（３−シアノ−４−イソブチルオキシフェニル）−４−メチル−５−チアゾールカルボン酸
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５０ｍｇ
　　ラクトース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２３０ｍｇ
　　ポテトスターチ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　８０ｍｇ
　　ポリビニルピロリドン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１１ｍｇ
　　ステアリン酸マグネシウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５ｍｇ
　　全量　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３７６ｍｇ
　上記のフェニルチアゾール誘導体、ラクトース、およびポテトスターチをよく混合し、それにポリビニルピロリドンの２０％エタノール溶液を一様に浸透させた。その後、２０ｎｍのメッシュでろ過し、４５℃で乾燥させ、さらに１５ｎｍのメッシュでろ過した。このようにしてできた顆粒を、ステアリン酸マグネシウムと混合し、これを打錠して錠剤化した。
［実施例２］
　虚血−再灌流障害に対する作用を検討するために、ラットを用いて以下のように腎臓の虚血−再灌流障害モデルを作製し、本発明薬剤の有効成分投与の効果を検討した。
　ＳＤ系ラット（オス、６週齢）をペントバルビタールナトリウム麻酔下で開腹し、両側腎動脈を剥離した後、動脈用クリップで血流を完全に途絶させ、虚血状態とした。６０分間の虚血後、クリップを外して血流を再開通させて再灌流状態とした。切開した腹部を縫合してケージに戻し、餌および水を自由摂取させた。再灌流２４時間後に、エーテル麻酔下で開腹し、腹部大動脈より採血を行った。
　採取した血液から遠心機により血清を分離した後、腎機能障害のパラメーターである血中尿素窒素（ＢＵＮ）についてはウレアーゼ・インドフェノール法により、血清クレアチニン（Ｃｒｅ）の量についてはヤッフェ法により、それぞれ自動分析装置（日立製作所７０７０）を用いて測定した。
　有効成分の２−（３−シアノ−４−イソブチルオキシフェニル）−４−メチル−５−チアゾールカルボン酸を０．５％メチルセルロース水溶液に懸濁し、虚血とする６０分前に、５０ｍｇ／ｋｇ／４ｍｌの用量で経口投与した。また、対照群および偽手術群には溶媒である０．５％メチルセルロース水溶液４ｍｌを経口投与した。各群の例数は、偽手術群が７、対照群および薬物投与群は６であった。得られた結果を各群につき平均値±標準偏差で表した。ここで、対照群との有意差検定はＷｅｌｃｈのｔ−検定により行った。
　図１に血清Ｃｒｅの測定結果を示した。これによると、虚血−再灌流処置を施したラットの血清Ｃｒｅは３．６±０．４ｍｇ／ｄｌと、偽手術ラット（０．４±０．０）と比較して明らかに高値を示した。これに対して、本発明薬剤の有効成分を投与したものは、Ｃｒｅの増加が有意に抑制されていた（２．３±１．１、ｐ＜０．０５）。
　図２には血清ＢＵＮの測定結果を示した。虚血−再灌流処置を施したラットの血清ＢＵＮは、１５１．３±１６．８ｍｇ／ｄｌと、偽手術ラット（１９．３±１．７）と比較して明らかに高値を示した。これに対して本発明薬剤の有効成分を投与したものは、ＢＵＮの増加が抑制されている傾向が認められた。
［実施例３］
　白血球に対する強力なケミカル・メディエーターのひとつであり、虚血−再灌流障害の病態に関与しているといわれているロイコトリエンの産生に対する本発明薬剤の影響を、培養細胞を用いて検討した。すなわち、１０％ウシ胎児血清含有ダルベッコ改変イーグル培地中で培養したＲＢＬ−１細胞（大日本製薬より購入）を５×１０６個／ｍｌの細胞密度に調整し、１ｍｌ播種した。そこに、本発明薬剤の有効成分である２−（３−シアノ−４−イソブチルオキシフェニル）−４−メチル−５−チアゾールカルボン酸、もしくは対照としてのアロプリノールを、ジメチルスルホキシド溶液に溶解して添加した。それらを３７℃で５分間インキュベーションした後、氷中に浸して１０分間放置した。次に、Ｃａ−イオノフォアであるＡ２３１８７の２×１０−５ｍｏｌｅを、最終濃度２５ｍＭとなるよう添加し、再び３７℃で１５分間インキュベートした後、氷中に浸して再度１０分間放置した。これを３０００ｒｐｍで１０分間遠心して細胞を沈降させた後、その上清中のロイコトリエン−Ｂ４（ＬＢＴ４）を酵素免疫測定法により定量した。得られた結果は各群につき平均値±標準偏差で表した。ここで、対照群との有意差検定は、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較により行った。
　図３にＬＴＢ４の測定結果を示した。これによれば、本発明薬剤の有効成分であるフェニルチアゾール誘導体１×１０−８ｍｏｌｅの添加（最終濃度１０μＭは）、ＬＴＢ４の産生を有意に抑制した（ｐ＜０．００１）。一方、アロプリノールは１×１０−８ｍｏｌｅの添加まで（最終濃度１０μＭまで）全く影響を認めなかった。
［実施例４］
　従来より痛風の治療薬として用いられているキサンチンオキシダーゼの阻害剤であるアロプリノールは、臨床使用中にアレルギー反応に代表される副作用を生じ、時として死に至る重篤な場合のあることが知られており（Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１９８４，７６，ｐｐ４７−５６、Ｔｈｅ　Ａｎｎａｌｓ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ，１９９３，２７，ｐｐ３３７−３４３）、使用に際し十分な注意が必要である。そこで本発明の有効成分について、かかる副作用がないかをマウスのアレルギー性皮膚炎モデルを用いて検討した。
　ＢＡＬＢ／ｃマウス（オス、８週齢）の腹部から胸部にかけてをバリカンとシェーバーを用いて除毛し、その１日後および２日後に除毛した部位に０．５％ジニトロフルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）エタノール溶液（１００μｌ／匹／日）を塗布して感作した。本発明の有効成分である２−（３−シアノ−４−イソブチルオキシフェニル）−４−メチル−５−チアゾールカルボン酸およびアロプリノール（各３，１０，３０，１００ｍｇ／ｋｇ／１０ｍｌ／日）は、０．５％メチルセルロース水溶液に懸濁し、感作と同時に経口投与した。なお、用いた動物の例数は、本発明の有効成分投与剤、アロプリノール投与例とも、３，１０ｍｇ／ｋｇ／日投与群では８例、３０，１００ｍｇ／ｋｇ／日投与群では１０例であった。対照としては、溶媒である０．５％メチルセルロース水溶液１０ｍｌ／ｋｇを８例の動物に経口投与した。
　上記薬剤を投与したマウスの経時的な生存率および体重を最終感作の６日後まで記録した。感作群で生存した固体については、最終感作の６日後に、０．３％ＤＮＦＢアセトン−オリーブオイル（４：１）混合溶液（１０μｌ×表裏／耳）を片耳に塗布し誘発を行った。他方の耳にはアセトン−オリーブオイル（４：１）混合溶液（１０μｌ×表裏／耳）を塗布した。誘発前ならびに誘発の２４時間後および４８時間後に耳介厚測定装置（尾崎製作所、Ｇ−１Ａ）を用いて耳介厚を測定した。
　体重および耳介厚の変化の結果は、各群につき平均値±標準誤差で表した。ここで、対照群との有意差検定は、Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較検定により行った。
　各薬物投与後の生存率の推移を図４に示した（最終感作日を０日とした）。本発明薬剤の有効成分の投与例では、１００ｍｇ／ｋｇ／日の条件で認められた１例以外は全例生存していた。これに対し、アロプリノール投与群では、より低用量から用量依存的かつ経時的に生存率が低下した。
　各薬物投与後の生存例の体重の推移を図５に示した（最終感作日を０日とした）。本発明薬剤の有効成分であるフェニルチアゾール誘導体は、動物の体重に有意な変化を及ぼさなかったのに対し、アロプリノールは３０，１００ｍｇ／ｋｇの用量で動物の体重を有意に低下させた（それぞれＰ＜０．０１，０．０５）。
　さらに、生存例における免疫反応惹起後の耳介厚の変化を図６に示した（惹起時を０時間とした）。本発明薬剤の有効成分であるフェニルチアゾール誘導体投与群では耳介厚増加に対し影響を及ぼさなかった。これに対し、アロプリノールの３０ｍｇ／ｋｇで有意な耳介厚増加の増強作用がみられ、アレルギー反応の増悪が認められた（Ｐ＜０．０５）。
　上記実施例２〜４の結果は、本発明の薬剤が、たとえば虚血−再灌流障害に起因するさまざまな病態において、臓器および組織保護剤として有効であることを示している。しかも、その作用発現過程において、ＬＴＢ４などのケミカル・メディエーターの産生阻害を介した白血球からの活性酸素発生を抑制する効果も併せて認められることがある点で、従来のキサンチン・オキシダーゼ阻害剤より優れていることを示している。このほか本発明の薬剤は、従来のキサンチンオキシダーゼの阻害剤であって痛風の治療薬として用いられているアロプリノールで認められたアレルギー反応増悪や死亡などの重篤な副作用がなく、より安全性に優れたものであることも明らかになった。