【事件の表示】
　特許第３２９２４８１号「マンノース含有飼料及びその製造方法」の請求項１ないし３に係る特許に対する特許異議の申立てについて、次のとおり決定する。
【結　論】
　訂正を認める。
　特許第３２９２４８１号の請求項１ないし３に係る特許を維持する。
【理　由】
１．手続の経緯
　特許第３２９２４８１号の請求項１ないし３に係る発明は、平成１０年８月４日（優先権主張平成９年８月１５日、日本国）に国際出願されたものであって、平成１４年３月２９日にその発明について特許権の設定登録がなされ、その後、その特許について、異議申立人不二製油株式会社により特許異議の申立てがなされ、取消の理由が通知され、その指定期間内である平成１５年５月２７日に訂正請求がなされたものである。
　
２．訂正の適否についての判断
ア．訂正の内容
（ａ）特許請求の範囲の請求項３の「コプラミール１ｇ当り１〜１００ユニットのへミセルラーゼを含む溶液を、コプラミールに対して重量で３倍量以下の量を作用させて、コプラミール中のマンナンの少なくとも一部をマンノースに分解して遊離させ、得られたマンノース含有コプラミールを飼料に加えてマンノース含有飼料を得ることを特徴とするマンノース含有飼料の製造方法。」を、
「セルロシンＨＣ１００、セルロシンＨＣ、セルロシンＴＰ２５、セルロシンＧＭ５（以上阪急バイオインダストリ一株式会社製）、またはスミチームＡＣＨ（新日本化学工業株式会社製）から選ばれる酵素をコプラミール１ｇ当り１〜１００ユニット含む溶液を、コプラミールに対して重量で３倍量以下の量を作用させて、コプラミール中のマンナンの少なくとも一部をマンノースに分解して遊離させ、得られたマンノース含有コプラミールを飼料に加えて請求項１記載のマンノース含有飼料を得ることを特徴とするマンノース含有飼料の製造方法。」と訂正する。
　
イ．訂正の目的の適否、新規事項の有無、及び拡張・変更の存否
　上記訂正事項（ａ）は、「ヘミセルラーゼ」を「セルロシンＨＣ１００、セルロシンＨＣ、セルロシンＴＰ２５、セルロシンＧＭ５（以上阪急バイオインダストリー株式会社製）、またはスミチームＡＣＨ（新日本化学工業株式会社製）から選ばれる酵素」に限定し、「マンノース含有飼料」を請求項１に係る発明のマンノース含有飼料に限定するものであるから、特許請求の範囲の減縮を目的とした明細書の訂正に該当する。
　そして、上記訂正事項（ａ）は、訂正前の明細書第４頁下から第２行〜第５頁第３行にある、「セルロシンＨＣ１００、セルロシンＨＣ、セルロシンＴＰ２５、セルロシンＧＭ５（以上阪急バイオインダストリ一株式会社製）、スミチームＡＣ、スミチームＡＣＨ（以上新日本化学工業株式会社製）ガマナーゼ（ノボノルディスクインダストリー社製）等の市販の酵素も使用することができる」記載、および、同第４頁７行〜第６頁１４行に記載のマンンノース含有飼料の製造方法に関する記載に基づいているものであるから、新規事項の追加に該当せず、また特許請求の範囲を実質的に拡張または変更するものではない。
　
ウ．むすび
　以上のとおりであるから、上記訂正は、特許法第１２０条の４第２項及び第３項において準用する特許法第１２６条第２項から第４項までの規定に適合するので、当該訂正を認める。
　
３．特許異議の申立てについて
ア．申立ての理由の概要
　申立人不二製油株式会社は、甲第１〜１０号証を提出し、請求項１ないし３に係る発明の特許は、特許法第２９条第２項の規定に違反してされたものであり、また、請求項１に係る発明の特許は、特許法第２９条第１項第３号の規定に違反してされたものであり、さらに、請求項３に係る発明の特許は、その明細書が特許法第３６条第６項第２号に規定する要件を満たしていない特許出願に対してされたものであるから取り消されべきものである旨主張している。
　　
イ．本件発明
　特許第３２９２４８１号の請求項１ないし３に係る発明は、上記訂正に係る訂正明細書の特許請求の範囲の請求項１ないし３に記載された次の事項により特定されるとおりのものである。
「【請求項１】コプラミールにへミセルラーゼ溶液を作用させてマンノースを遊離させることにより、コプラミール中のマンナンの少なくとも一部がマンノースに分解されており、そのマンノースを３〜３０重量％含有するマンノース含有コプラミールを含むマンノース含有飼料。
【請求項２】前記のマンノース含有コプラミールを飼料全量の０．０１〜２重量％含むことを特徴とする、請求項１記載のマンノース含有飼料。
【請求項３】セルロシンＨＣ１００、セルロシンＨＣ、セルロシンＴＰ２５、セルロシンＧＭ５（以上阪急バイオインダストリー株式会社製）、またはスミチームＡＣＨ（新日本化学工業株式会社製）から選ばれる酵素をコプラミール１ｇ当り１〜１００ユニット含む溶液を、コブラミールに対して重量で３倍量以下の量を作用させて、コプラミール中のマンナンの少なくとも一部をマンノースに分解して遊離させ、得られたマンノース含有コプラミールを飼料に加えて請求項１記載のマンノース含有飼料を得ることを特徴とするマンノース含有飼料の製造方法。」　
　
ウ．甲号証記載の発明
　甲第１号証（Ｔｈｅ Ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．７．Ｎｏ．１，１５−２４，Ｊｕｎｅ ｌ９９６）には、下記の事項が記載されている。
（ａ）［タイトル（訳文第１頁２〜３行）］
　マンナナーゼ処理コプラミール（ＭＴＣＭ）の代謝可能エネルギー及びＭＴＣＭ給餌ブロイラーの生育パフォーマンス
（ｂ）［要約（訳文第１頁６〜１８行）］
　マンナナーゼを産生するストレプトミセス ｓｐ．ｎｏ．１７ を、固体基質発酵（ＳＳＦ）によるコプラミールの加水分解に用いた。４Ｌの培養液を組立バイオリアクター中のコプラミールｌｋｇに植菌した。マンナナーゼ処理コプラミール（ＭＴＣＭ）を分析したところ、粗繊維の大きな減少とエネルギー価の大きな増加を示した。８週齢雄ブロイラーへの強制給餌により求められた見かけの代謝可能エネルギーは、ＭＴＣＭにおいて１００％以上増加した。ＭＴＣＭ実施を評価するためのブロイラーにおける給餌試験は、未処理コプラミール（ＵＣＭ）と比較するため、同様な給餌成分により行った。コプラミールの粗繊維が２５％以上減少したとき、大いに期待できる結果が得られた。餌料の消費は、ＭＴＣＭ餌料で飼育されたブロイラーにおいて低下していたが、ＭＴＣＭ餌料で飼育されたブロイラーは、平均的に週当たり予想通りの大きな体重増加を示した。ＭＴＣＭ餌料で飼育されたブロイラーは、ＵＣＭ餌料で飼育されたブロイラーに比べて、予想通りの優れた餌料効率を有していた。
（ｃ）［第１６頁右欄２〜末行（訳文第２頁下から３行〜第３頁末行）］
　固相発酵によるマンナナーゼ処理コブラミールの生産
Ｂａｔａｎｇａｓの餌料工場から得たコプラミール１００ｋｇをプールし、プラスチック容器に収容し、冷蔵温度で保存した。本プロセスには、コプラミールに生体を植菌し、コプラミール繊維を加水分解するマンナナーゼ酵素を増殖させ、また産生させることを含む。かかる方法を説明する概略図を図１に示す。加水分解後、コプラミールを乾燥させ（６０℃で２日間）、低温の室内で保存し、さらなる分析に供した。最も粗繊維が減少したマンナナーゼ処理コプラミールを、近似組成（ｐｒｏｘｉｍａｔｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）、総エネルギー値、及び見かけの代謝エネルギー（ＡＭＥ）を考察する試料として用いた。
（図１）
シード培養培地
（ココナッツ水＋０．２％ＮＨ４Ｎ０３、ｐＨ６．０　坂口フラスコに１００ｍＬずつ）
↓　傾斜培養後３〜４日のストレプトミセスｓｐ．ｎｏ．１７を植菌
植菌培地
↓　３５℃で３日間振盪
シード培養
　植菌培養物を２０Ｌファーメンターで２４時間培養。シード培養物１０％　を、同じシード培地に植菌
　　培養条件：ｌｖｖｍの曝気、２００ｒｐｍでの撹拌、温度３５℃
↓
植菌
　バイオリアクター内で５日間固相発酵
　（コプラミールにおけるシード培養物を滅菌コプラミールに植菌植菌の　割合は１：４）
↓
加水分解されたコプラミールを回収
↓
乾燥（６０℃で２日間）
↓
マンナナーゼ処理コプラミール
（ｄ）［第１８頁３、４行（訳文第６頁１、２行）］
　表１　固相発酵によるココナツ水培地で増殖したストレプトミセス ｓｐ．ｎｏ．１７を用いたマンナナーゼ処理コプラミールにおける粗繊維の減少量
（ｅ）［第１８頁表２の上１〜４行（訳文第６頁表２の上１〜３行）］
　表２の結果は、灰分及び粗タンパク質が増加し、粗繊維が減少したことを示している。繊維含有量の減少は、総エネルギー価の増加が示すように、コプラミールのガラクトマンナンの単糖（ｓｉｍｐｌｅ ｓｕｇａｒｓ）への酵素分解を示している。
（ｆ）［第１９頁左欄下から４行〜右欄末行（訳文第８頁表５の上１〜４行）］
　実験餌を１０％及び１５％のマンナン処理コプラミール及び未処理コプラミールを用いて窒素量及びカロリーが等量となるように調製した。成分組成及び栄養組成を表５及び表６に示す。家禽や豚に給餌する未処理コプラミールのレベルは通常約１０％であることから、約１０％レベルの未処理コプラミールを対照標準とした。
（ｇ）［第１９頁左欄６行〜右欄１行（訳文第７頁７〜８行）］
　ガラクトマンナンを加水分解して得た糖は、鳥類が新陳代謝しやすい糖であるため、結果としてＡＭＥが増加した。
（ｈ）［第２３頁左欄下から２行〜右欄末行（訳文第１１頁１８〜末行）］
　本研究調査期間を通じて必ずしも大幅に優れた餌料変換物とはいえないけれども、前記給餌期間を通して未処理コプラミールを与えたブロイラーと比較して、マンナナーゼ処理コプラミールを与えたブロイラーが一貫して優れた餌料効率性は、マンナナーゼを有するコプラミールを加水分解するとコプラミールの餌料効率を向上させることを示している。この向上性は、コプラミールを加水分解後、粗繊維が減少して代謝可能な炭水化物が増加する結果として、代謝可能なエネルギーが増加することによるものと考えられる。
　上記記載を総合すると、甲第１号証には、「コプラミールにストレプトミセス ｓｐ．ｎｏ．１７のシード培養物を作用させて、コプラミール中のガラクトマンナンが加水分解されており、その加水分解物を含有するコプラミールを含む餌料。」が記載されているものと認める。
　
　甲第２号証 （Ｊａｐａｎ．Ｊ．Ｔｒｏｐ．Ａｇｒ．３２（４）：２０８−２１４，１９８８）には、下記の事項が記載されている。
（ａ）［タイトル（訳文第１頁２〜４行）］
　Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍの粗酵素によるコプラ搾油残渣（ブラウンコプラミール）からβ−１，４−マンノトリオースの新しい調製法
（ｂ）［要約（訳文第１頁７〜８行）］
　コプラ搾油残渣をβ−マンナナーゼで加水分解し、その糖液中の単糖類と二糖類を酵母により資化させ、マンノトリオースを調製する方法を開発した。
（ｃ）［要約（訳文第１頁９〜１６行）］
　コプラ搾油残渣４８０ｇ（マンナンとして１５１ｇを含む）にＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍ Ｎｏ．６１８の粗酵素４８００ｍｌを加え、ｐＨ５、５５℃で１時間酵素反応を行った。この加水分解液は単糖・二糖・三糖類から成り、他のオリゴ糖類はほとんど検出されなかった。次に、加水分解液から固形分を除いた糖液（全糖として８３．７ｇを含む）にＣａｎｄｉｄａ　ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ の酵母を植菌し、３６時間の培養によって単糖類と二糖類のみを資化させた。酵母を分離した糖液（全糖として２５．４ｇを含む）を脱色、脱塩、濃縮し、２３．１ｇのマンノトリオースを得た。
（ｄ）［第２０９頁右欄２８〜３３行（訳文第４頁７〜１０行）］
　ブラウンコプラミール３ｇと酵素溶液３０ｍｌ（高水準の濃度；全マンナナーゼ活性として４２ユニット、若しくは低水準の濃度；全マンナナーゼ活性として４．２ユニット）をＴ字型の試験管に入れ、混合物をｐＨ５で５５℃にてＭｏｎｏｄシェーカー上でプレインキュベーションした。
（ｅ）［第２１２頁右欄２１〜２６行（訳文第６頁下から２行〜第７頁２行）］
　従って、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　β−マンナナーゼによるガラクトマンナンの分解から生じた最終生成物５）’６）はガラクトースとマンノースの残基から成る数種類のガラクトマンノオリゴ糖類の他にマンノースとマンノオリゴ糖類であった。
（ｆ）［第２１０頁Ｆｉｇ．１（訳文第８頁２〜６行）］
　図１．マンノビオース、マンノトリオース生成へ与える酵素濃度の影響を示す。Ｈは、４２ユニット／反応液３０ｍｌ、Ｌは、４．２ユニット／反応液３０ｍｌの場合の薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）である。Ａは、上から、標準のマンノース、マンノビオース、マンノトリオース、マンノテトラオース、マンノペンタオースである。Ｇａｌは、標準のガラクトースである。
（ｇ）［第２１２頁Ｆｉｇ．４（訳文第８頁下から７〜末行）］
　図４．マンノトリオース調製における、種々の段階での糖サンプルの薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）である。Ａは、上から標準のマンノース、マシノビオース、マンノトリオース、マンノテトラオースである。（Ａ）は、マンナナーゼ系によるブラウンコプラミールの酵素的加水分解物であり、（Ｂ）は、酵素的加水分解物媒体で酵母が成長した後の糖液であり、（Ｃ）は、マンノトリオースである。（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）は、Ｆｉｇ．３のそれに対応する。
（ｈ）［第２０９頁左欄２０〜２３行（訳文第２頁下から３〜１行）］
　コプラミールは糖を４７．７％含んでおり、その構成は、６６．０％のマンノース、５．８％のガラクトース、２２．５％のグルコース、４．０％のアラビノース及び１．７％のキシロースであった。
（ｉ）［第２０９頁右欄４〜８行（訳文第３頁１６〜１８行）］
　酵素活性の１ユニットを上記の条件で１μｍｏｌのマンノースに相当する還元糖を１分間に遊離する量であると定義した。
（ｊ）［第２１２頁右欄下から１７〜３行（訳文第７頁４〜１２行）］
　β−マンナナーゼとα−ガラクトシターゼが共存する酵素系はコプラガラクトマンナンからのガラクトマンノオリゴ糖類の生成を防ぐために必須である。Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍ　Ｎｏ．６１８は培養液で両方の酵素を効率よく生成する。このように、菌株の酵素系はガラクトマンナン加水分解物中でガラクトマンノーオリゴ糖類を生成しなかった（図１−Ｈ、及び１−Ｌ）。さらに、かかる酵素系でガラクトマンナンを加水分解した際に生じた産物は、より高い酵素濃度のときは単糖類とマンノビオースであり（図１−Ｈ）、より低い酵素濃度のときは上記二つの糖類に加えマンノトリオースであった（図１−Ｌ）。
　
　甲第３号証（「酵素ハンドブック」株式会社朝倉書店発行，１９９９年９月２０日第１０刷）には、下記の事項が記載されている。
（ａ）［第５０２頁 ”３．２．１．２５　β−Ｄ−Ｍａｎｎｏｓｉｄｅ”の項］
〔系統名〕β−Ｄ−Ｍａｎｎｏｓｉｄｅ　 ｍａｎｎｏｈｙｄｒｏｌａｓｅ〔別　名〕 Ｍａｎｎａｎａｓｅ，Ｍａｎｎａｓｅ
〔反　応〕　β−Ｄ−マンノシドの非還元末端から分解
　
　甲第４号証（「生化学辞典（第２版）」株式会社東京化学同人発行，１９９５年４月１日第６刷）には、下記の事項が記載されている。
（ａ）［第１３０３頁 ”β−マンノシダーゼ”の項］
β−マンノシダーゼ＝マンナーゼ，マンナナーゼ．β結合をもつマンナンの非還元末端のマンノース残基を工キソ様式で加水分解する酵素で，系統名はβ−Ｄ−マンノシドマンノヒドロラーゼ，ＥＣ３．２．１．２５．
　
　甲第５号証 （Ｊａｐａｎ．Ｊ．Ｔｒｏｐ．Ａｇｒ．２７（３）：１４０−１４８，１９８３）には、下記の事項が記載されている。
（ａ）［要約（訳文第１頁７〜１３行）］
　本研究では、アクチノミセスに属する菌株由来の菌体外β−１，４マンナナーゼ系のいくつかの特性について説明した。フィリピンの様々な地域から４００以上の土壌サンプルを収集し、単離源とした。コプラマンナンを炭素源とした寒天培地プレートで培養した際に、２０菌株がコロニーの周囲に明瞭な帯域を形成することが分かった。その後、マンナナーゼ系の詳細について調べるために、マンナナーゼを産出する菌株として、４菌株を液体培養により選択した。
（ｂ）［第１４２頁左欄５〜１１行（訳文第４頁１６〜１９行）］
　糖の測定　還元糖をソモジ法（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１６０，６１，１９４５）で測定した。酵素反応により加水分解したコプラマンナンの平均重合度（Ｄ．Ｐ．）を、総還元糖量（Ｔ．Ｒ．Ｓ）と直接型還元糖（Ｄ．Ｒ．Ｓ．）の比率により計算した。
（ｃ）［第１４３頁右欄２７行〜１４５頁右欄１行目（訳文第７頁６〜２３行）］
　マンナナーゼによるコプラマンナンの加水分解　１．０％のコプラマンナンを含む反応混合液を用いて、それぞれの至適ｐＨで、２４時間、４０℃にて酵素反応を行った。３，０００ｒｐｍで遠心分離を行って得た上清液の還元力を、反応時間にして１、３、８、及び２４時間後に測定した。加水分解の経時的変化を図４に示す。コプラマンナンの加水分解は、酵素反応の初期段階において急速に進行したが、３時間後には、速度が大幅に低下した。コプラマンナンのＤ．Ｐ．及び可溶化を調べるため、２４時間後の上清液をＩＮのＨ２Ｓ０４で加水分解して、Ｔ．Ｒ．Ｓ．を測定した。その結果を表ＩＶに示す。各反応混合液の濁りは、反応時間にして３時間後に消失し、２４時間後には、９５％のコプラマンナンが可溶化した。一方、各加水分解物のＤ．Ｐ．は、２前後であった（表ＩＶ）。反応時間にして１、３、８、及び２４時間後の、各反応混合液の上清液の糖類を、ペーパークロマトグラフィーで同定した。反応時間にして１時間後では、マンノース（Ｍ１）、マンノビオース（Ｍ２）、マンノトリオース（Ｍ３）、マンノテトラオース（Ｍ４）及びその他のマンノオリゴ糖が検出されたが、Ｍ３及びＭ４は、時間の経過とともに量が減少していることがわかった。反応時間にして２４時間後に、Ｍ１及びＭ２の透明なスポットとともに未確認オリゴ糖の蓄積が認められた（図５）。
（ｄ）［第１４６頁Ｆｉｇ．５（訳文第１２頁下から３行〜第１３頁１行）］
　マンナナーゼによるコプラマンナンの加水分解の経時的変化に関するペーパークロマトグラム
Ａ；マンノース．マンノビオース、マンノトリオース及びマンノテトラオースの標準のサンプル
　
甲第６号証 （Ｊａｐａｎ．Ｊ．Ｔｒｏｐ．Ａｇｒ．２９（３）：１６７−１７２，１９８５）には、下記の事項が記載されている。
（ａ）［要約（訳文第１頁７〜１３行）］
　コプラマンナン７７．６ｇ（ポリマンノースとして６０．０ｇを含む）をストレプトミセスｓｐ．ｎｏ．１７のβ−マンナナーゼ（粗酵素）を用いて、４０℃で１２時間加水分解した。加水分解液の糖組成は、β−１，４マンノビオース７１％、マンノース１２％、β−１，４マンノトリオース９％及び未同定のオリゴ糖８％であった。この組成をもつ糖液を活性炭クロマトグラフィーで分離し、アルコール溶液からマンノビオースの結晶３３．９ｇを得た。ポリマンノースに対する結晶マンノビオースの収率は５６．５％であった。
（ｂ）［第１６７頁左欄第８〜１１行（訳文第１頁下から６〜４行））］
　ストレプトミセスｓｐ．のマンナナーゼ［（１→４）−β−Ｄ−マンナンマンナノヒドロラーゼ、エンド−１，４−β−Ｄ−マンナナーゼ。ＥＣ３．２．１．７８）］
（ｃ）［第１７０頁右欄１７〜２１行（訳文第５頁下から４〜２行）］
　熱帯地方では、大量のココナッツ油粕コプラミールが、コプラから搾油する過程で副産物として排出される。かかるコプラミールは、乾物の状態で５０％以上のマンナンを含む。
　
　甲第７号証（特開平８−３８０６４号公報）には、下記の事項が記載されている。
（ａ）【発明の名称】有害細菌の感染を予防する飼料
（ｂ）【請求項１】マンノース類、シアル酸類およびラクト−Ｎ−フコペンタオースから選ばれる１種以上を有害細菌の感染予防成分として配合することを特徴とする飼料。
【請求項２】マンノース類がマンノース；メチル−α−マンノシド；マンノオリゴ糖；またはグアーガム、ローカストビーンガムまたは酵母から得られるマンナンの酵素および／または酸による加水分解物である請求項１記載の飼料。
（ｃ）【００１２】本発明に用いられるマンノース類は、マンノースを含有する原料を酵素および／または酸による加水分解を含む方法で調製した混合物でもよく、またはそれらの分画品や市販品も使用可能である。具体的に例を挙げると、例えばマンノース類は、グアーガムを原料とする低粘度ガラクトマンナン（商品名「グアファイバー」、明治製菓（株）製）や乳酵母（商品名「プロティベル」、ベル・インダスドリーズ製）より得られる多糖画分を、硫酸等による酸加水分解又はマンナナーゼ等による酵素加水分解をすることにより得ることができる。
（ｄ）【００１４】このようにして得られたマンノース類またはシアル酸類またはラクト−Ｎ−フコペンタオースは、それ自体またはその濃縮物または賦形剤等の添加物を加えて、飼料に０．０５％〜５．０％好ましくは０．１〜１．０％添加するのが適当である。また、これらマンノース類またはシアル酸類またはラクト−Ｎ−フコペンタオースは、飲水に添加してもさしつかえない。賦形剤は特に限定されず、乳糖、炭酸カルシウム、脱脂粉乳、コーングリッツ等を用いることができる。
（ｅ）【００１６】本発明の飼料は、例えば鶏の場合、食中毒を引き起こす恐れのあるサルモネラ属細菌、病原性大腸菌、キャンピロバクター属細菌、クロストリジウム・パーフリンゲンス等の腸管への付着を阻害することにより、感染を予防することができる。
（ｆ）【００２０】の【表２】には、鶏病原性大腸菌の付着阻害試験における供試試料（添加量）としてマンノース（Ｍａｎ２））（０．１％）を添加した場合の付着率（％）が４９＊であり、この値がｔ検定で有意差（ｐ＜０．０１）があること。
　
（８）甲第８号証（特開平７−２３６４２９号公報）には、以下の事項が記載されている。
（ａ）【発明の名称】マンノオリゴ糖類含有飼料
（ｂ）【請求項１】マンノオリゴ糖類を配合することを特徴とする家畜用飼料
（ｃ）【発明が解決しようとする課題】本発明は、従来のオリゴ糖類に比べ、全く未利用のマンノオリゴ糖類の方が家畜用飼料としての生産性に優れる事と、特に家畜産業上重要である鶏卵の品質向上にマンノオリゴ糖類が有用であることに基づいて、畜産業界にマンノオリゴ糖類含有飼料を提供することを目的とする。
（ｄ）【課題を解決するための手段】本発明に用いるマンノオリゴ糖類は、マンナンを含む素材を酵素分解して得られる。マンナンとは、マンノースを主な構成成分とする多糖類をいう。例えばその由来、構成などにより分類して示せば以下のものが挙げられる。
（ｅ）【０００５】本発明では、前述のマンナンを構成成分とするものから選択されたマンナン含有組成物やマンナンそのものを酵素により分解することにより得られる。使用する酵素はβ−マンノシターゼ（β−Ｄ−ｍａｎｎｏｓｉｄｅｍａｎｏｈｙｄｒｏｉａｓｅ．ＥＣ ３．２．１．２５）群から選ばれる微生物由来のものを用いる。
（ｆ）【０００５】コプラミールは低廉な熱帯植物性廃棄物の利用として本発明を実施するに適する原料となる。この場合も前記のグアーガムの酵素分解（参考例）方法に準ずれば良いが、朴貴根らのＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍ　Ｎｏ．６１８の事例（Ｊａｐａｎ Ｊ．Ｔｒｏｐ．Ａｇｒ．，３２巻４号ｐ．２０８〜２１４（１９８８））を採用すると良い。本発明に用いるオリゴ糖類は、例えばコプラミールにβ−マンナーゼとα−ガラクトシターゼを作用して得られる糖組成物であって、マンノビオースとマンノトリオースを主成分とし、単糖類が混合している糖類である。
（ｇ）【０００７】【製造例】前培養、生産培地としてはコプラミール４％、ＫＨ２ＰＯ４１％、ペプトン０．９％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ　０．０５％、酵母エキス０．２％、およびコーンスティーブリカー０．５％、ｐＨ５．４よりなる液体培地を使用する。あらかじめフラスコによる前培養した種菌を５％（ｖ／ｖ）、酵素生産培地４０▲リットル▼を投入、殺菌してなる６０▲リットル▼容量の発酵槽で９６時間通気、攪拌培養をおこなう。十分に所望の酵素生産が終了した段階で発酵槽の温度を５０℃に上げ２回に分けて蒸煮コプラミール１ｋｇを発酵槽へ投入し酵素反応、分解を５０時間攪拌条件下で実施する。得られる反応物をプレコート濾過機にて完全に不溶物を取り除き、全容をスプレードライヤーにて噴霧乾燥しマンノオリゴ糖を２５％含む標品が調整できる。
　
　上記コプラミールについての記載である（ｆ）、（ｇ）の記載から、甲第８号証には「コプラミールにβ−マンナーゼとα−ガラクトシターゼを作用して得られ、マンノビオースとマンノトリオースを主成分とし、単糖類が混合している糖類を含む飼料。」が記載されているものと認められる。
　
　甲第９号証（「日本標準飼料成分表（１９７５年版）」社団法人中央畜産会発行）には、以下の事項が記載されている。
（ａ）［第７８及び７９頁下から５行］
　第７８頁下から５行の ”飼料名”の欄に「ヤシ粕」、第７９頁の同行（下から５行）の”備考”欄に「コプラミール」
（ｂ）［１３０頁右欄］
　”飼料名”の欄に「ヤシ粕」、”組成・消化率・栄養価／牛用・豚用、鶏用”の欄に「４８ ６２ ７８」
　
　甲第１０号証［コッコエースのパンフレット］には、下記の事項が記載されている。
（ａ）「コッコエースの成分］
　コッコエース中には、マンノース系の糖質が約３０％含まれています（マンノース単糖としては約１０％）。その他の成分として腸内の細菌叢を整えるオリゴ糖や多糖などの繊維質を豊富に含んでおり、蛋白質や脂肪も含有しています。
　
エ．対比・判断 
（請求項１に係る発明について）                                
（１）請求項１に係る発明と甲第１号証に記載の発明を対比すると、甲第１号証のストレプトミセスｓｐ．ｎｏ．１７は、マンナナーゼを産出し、このマンナナーゼがコプラミール中のマンナンを加水分解するものであり、本件特許明細書に記載の「本発明に用いられるヘミセルラーゼとしては、コプラミールに作用してマンノースを遊離するものものであれれば特に限定されず、マンナナーゼ（マンナーゼ）、マンノシダーゼ等のマンナン分解酵素が挙げられる。」からみれば、甲第１号証のマンナナーゼはヘミセルラーゼであり、甲第６号証のコプラマンナンを加水分解しているストレプトミセスｓｐ．ｎｏ．１７の加水分解物は、マンノース、マンノビオース、マンノトリオースであるから、
両者は、
「コプラミールにへミセルラーゼ溶液を作用させてマンノースを遊離させることにより、コプラミール中のマンナンの少なくとも一部がマンノースに分解されたコプラミールを含む飼料。」である点で一致し、下記の点で相違する。
（相違点）
　請求項１に係る発明では、マンノースを３〜３０重量％含有するのに対し、甲第１号証に記載の発明では、マンノース含量が不明な点。
　
　上記相違点について検討する。
　甲第１号証には、「繊維含有量の減少は、総エネルギー価の増加が示すように、コプラミールのガラクトマンナンの単糖（ｓｉｍｐｌｅ ｓｕｇａｒｓ）への酵素分解を示している。」（前記３．ウの甲第１号証の（ｅ））と記載されているが、甲第１号証で用いているストレプトミセスｓｐ．ｎｏ．１７は、甲第６号証に記載の「ストレプトミセスｓｐ．のマンナナーゼ（１→４）−β−Ｄ−マンナンマンナノヒドロラーゼ、エンド−１，４−β−Ｄ−マンナナーゼ。ＥＣ３．２．１．７８）」（前記３．ウの甲第６号証の（ｂ））および乙第１号証（「酵素ハンドブック」株式会社朝倉書店発行，１９８３年３月１日第２刷）に記載の「３．２．１．７８　Ｅｎｄｏ−１，４−β−Ｄ−ｍａｎｎａｎａｓｅ・・・グルコマンナンの１，４−β−Ｄ−マンノシド結合をランダムに分解」（第５１８頁左欄）からは、甲第３、４号証に記載のマンナンの非還元末端のマンノース残基をエキソ様式で加水分解する酵素とは認められず、さらに、甲第６号証には、コプラマンナンをストレプトミセスｓｐ．ｎｏ．１７から産生したβ−マンナナーゼを用いて加水分解した加水分解液が、β−１，４マンノビオース７１％、マンノース１２％、β−１，４マンノトリオース９％及び未同定のオリゴ糖８％であること（前記３．ウの甲第６号証の（ａ））が記載されていることからしても、上記（ｓｉｍｐｌｅ ｓｕｇａｒｓ）がマンノースのような単糖のみを指すものとは理解し難いし、コプラマンナンをストレプトミセスｓｐ．ｎｏ．１７から産生したβ−マンナナーゼを用いて加水分解した加水分解液が、甲第５号証には、平均重合度で１．７４であること（第１４５頁右欄Ｔａｂｌｅ　４）、甲第６号証には、β−１，４マンノビオース７１％、マンノース１２％、β−１，４マンノトリオース９％及び未同定のオリゴ糖８％であること（前記３．ウの甲第６号証の（ａ））が記載されているが、これらは、コプラミールから抽出したコプラマンナンを、ストレプトミセスｓｐ．ｎｏ．１７から産生、精製したβ−マンナナーゼを用いるものであって、甲第１号証に記載の発明のストレプトミセスｓｐ．ｎｏ．１７のシード培養物を用い、該シード培養物が産生するβ−マンナナーゼをコプラミール自体に作用させるものとは相違し、しかも、シード培養物も生成されたマンノースを資化することから、上記甲第５、６号証の記載をもって、甲第１号証に記載の発明がマンノースを３〜３０重量％含有しているとすることはできない。
　また、甲第７号証には、有害細菌の感染予防成分としてマンノース類を０．０５％〜５．０％好ましくは０．１〜１．０％飼料に配合すること（前記３．ウの甲第７号証の（ｄ））は記載されているが、マンノース含有処理物としてコプラミールについての記載はないし、甲第１号証に記載の発明は、ストレプトミセスｓｐ．ｎｏ．１７のシード培養物を用いβ−マンナナーゼによりコプラミール中のマンナンを加水分解したコプラミールを用いるものであって、マンノース量の調整を図るものではないからは、請求項１に係る発明は、甲第１〜７号証に記載された発明から当業者が容易になし得たものとすることはできない。
　　
（２）請求項１に係る発明と甲第８号証に記載の発明を対比すると、甲第８号証に記載の発明のβ−マンナーゼは、請求項１に係る発明のヘミセルラーゼであるから、両者は、「コプラミールにへミセルラーゼ溶液を作用させてマンノースを遊離させることにより、コプラミール中のマンナンの少なくとも一部がマンノースに分解されており、そのマンノースを含むマンノース含有飼料。」である点で一致し、下記の点で相違する。
（相違点）　
　請求項１に係る発明では、飼料はコプラミール中のマンナンの少なくとも一部がマンノースに分解されており、そのマンノースを３〜３０重量％含有するマンノース含有コプラミールを含むのに対し、甲第８号証に記載の発明では、飼料に含まれる糖類中でのマンノース含量は不明であり、マンノース等の糖類を分離した後のコプラミールを含まない点。
　
　上記相違点について検討する。
　甲第８号証に記載のコプラミールに対して採用することがよいとされている「Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍ　Ｎｏ．６１８」（前記３．ウの甲第８号証の（ｆ））は、甲第２号証に記載の菌株（前記３．ウの甲第２号証の（ｃ））であって、β−マンナナーゼとα−ガラクトシダーゼを生成し、その生成された酵素によりガラクトマンナンを加水分解した生成物は、単糖類、マンノビオースおよびマンノトリオースであること（前記３．ウの甲第２号証の（ｊ））が記載されているが、乙第４号証（特開昭６３−３０９１９６号公報）の上記「Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍ　Ｎｏ．６１８」の産生した酵素（参考例２（５頁））をコプラミールに作用させた実施例１、２（６頁）の記載からは、上記単糖類は、マンノースが含まれているとしてもガラクトースとグルコースを主体とするものであり、同じく乙第５号証（特開昭６３−２０９５８６号公報）の参考例２（６頁）の記載では、マンノース含量は１．２％であることからすれば、甲第８号証に記載の発明のコプラミールから得られた糖類はマンノースが３〜３０重量％含まれているものとは認められないから、甲第１号証に、コプラミールにへミセルラーゼ溶液を作用させたコプラミールを飼料に含ませること、甲第９号証に、コプラミールを飼料として用いることが記載されているとしても、請求項１に係る発明が甲１〜９号証に記載の発明から当業者が容易になし得たものとすることはできない。
　
　そして、請求項１に係る発明は、マンノースを３〜３０重量％含有するマンノース含有コプラミールを飼料に含ませることにより、明細書記載の顕著な効果を奏するものであるから、甲第１号証に記載された発明とすることはできず、また、甲第１〜１０号証に記載の発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものとすることはできない。
　
（請求項２に係る発明について）
　請求項２に係る発明は、請求項１に係る発明を更に限定したものであるから、上記請求項１に係る発明についての判断と同様の理由により、上記甲号各証に記載された発明から当業者が容易に発明をすることができたものではない。
　
（請求項３に係る発明について）
（１）特許法第２９条第２項違反について
　請求項３に係る発明は、請求項１に係る発明を製造する方法であるから、上記請求項１に係る発明についての判断と同様の理由により、上記甲号各証に記載された発明から当業者が容易に発明をすることができたものではない。
（２）特許法第３６条第６項第２号違反について
　本件特許明細書の記載は、上記（ａ）の訂正により明確となったから、請求項３に係る発明は、特許法第３６条第６項第２号に規定する要件を満たさない特許出願に対してされたものとすることはできない。
　
オ．むすび
　以上のとおりであるから、特許異議申立ての理由および証拠によっては、請求項１ないし３に係る発明の特許を取り消すことはできない。
　また、他に請求項１ないし３に係る発明の特許を取り消すべき理由を発見しない。
　よって、結論のとおり決定する。
【異議決定日】
平成１６年３月１８日（２００４．３．１８）
【訂正の要旨】
審決（決定）の【理由】欄参照。
（５４）【発明の名称】
マンノース含有飼料及びその製造方法
（５７）【特許請求の範囲】
　【請求項１】　コプラミールにヘミセルラーゼ溶液を作用させてマンノースを遊離させることにより、コプラミール中のマンナンの少なくとも一部がマンノースに分解されており、そのマンノースを３〜３０重量％含有するマンノース含有コプラミールを含むマンノース含有飼料。
　【請求項２】　前記のマンノース含有コプラミールを飼料全量の０．０１〜２重量％含むことを特徴とする、請求項１記載のマンノース含有飼料。
　【請求項３】　
セルロシンＨＣ１００、セルロシンＨＣ、セルロシンＴＰ２５、セルロシンＧＭ５（以上阪急バイオインダストリー株式会社製）、またはスミチームＡＣＨ（新日本化学工業株式会社製）から選ばれる酵素を
ト含
請求項１記載の
【発明の詳細な説明】
発明の分野
　本発明は取扱性に優れ、かつ安価に製造することのできるマンノース含有飼料及びその製造方法に関するものである。
関連技術の記載
　産業廃棄物問題は、社会問題となって久しく、各方面の努力にもかかわらず解決の糸口はなかなか見えてこないもどかしさがある。食品加工工場から排出される食品廃棄物は、原料中の非消化物や不味物を取り除き、特定の有効成分を取り出して利用した後の残留物である。これらには、蛋白質や炭水化物、脂肪分、繊維素等が含まれているので、例えば、ビール粕、豆腐粕、フスマ、ミカンジュース粕等の食品廃棄物の多くは、現在飼料として利用されている。しかし、これらの食品廃棄物の多くは水分含量が高いため、保存性が悪いという欠点がある。また、円高により海外から安い飼料が輸入され、酪農家は取り扱いやすい輸入飼料に頼る傾向がある。
　椰子油抽出残渣の粉砕物であるコプラミールについても、国内ではそのほとんどが、牛や豚の飼料として用いられている。しかし、コプラミール自体は繊維がやや多く、アミノ酸組成もあまり良くないので、鶏の飼料としては不適当である（飼料の基礎知識、東洋経済新報社、５８頁、（１９７０））という問題点があった。
　また、マンノースには、腸管を経由して起こる有害細菌の感染を予防する効果があることが確認されており、マンノースを有害細菌の感染予防成分として含有する飼料が提案されている（特開平８−３８０６４号公報）。
　従来、マンノースは、木材やこんにゃく等に含まれるグルコマンナンやグァーガム等に含まれるガラクトマンナンを酸や酵素によって分解することによって製造されている。
　しかし、天然の原料から各種のマンナンを抽出する操作は煩雑な操作とコストがかかるため、このようにして製造したマンノースを添加した飼料が高価になるという問題点があった。また、このようにして製造したマンノースは粉末状又は水溶液であるため、これを飼料に均一になるように混合するのは困難であるという問題点があった。さらに、多量のマンナン抽出残渣が発生し、このマンナン抽出残渣は、アミノ酸、糖質などが除かれているため飼料として利用するには不適であり、新たな産業廃棄物問題を引き起こすという問題点があった。
発明の記載
発明の要旨
　本発明は、コプラミールを利用して製造される取扱性に優れ、容易かつ安価に製造することができるマンノース含有飼料及びその製造方法を提供する。
図面の簡単な説明
　図１は、本発明の飼料を投与した鶏（ａ）、および比較として酵素処理をしていない通常のコプラミールを投与した鶏（ｂ）、配合飼料のみを投与した鶏（ｃ）について、サルモネラ菌を強制経口投与したのちの、盲腸糞中のサルモネラ菌の数を経時的に測定したものである。
好ましい実施態様の記載
　本発明者は、コプラミール中のマンナンの少なくとも一部をマンノースに分解して得られるマンノース含有コプラミールが取扱性に優れ、しかも容易かつ安価に製造することができるのでマンノース含有飼料として極めて有意に使用できるということを見出し、本発明を完成するに至った。
　すなわち、第１の発明は、コプラミールにヘミセルラーゼ溶液を作用させてマンノースを遊離させることにより、コプラミール中のマンナンの少なくとも一部がマンノースに分解されており、そのマンノースを３〜３０重量％含有するマンノース含有コプラミールを含むマンノース含有飼料を要旨とするものである。
　特に、本発明は、前記のマンノース含有コプラミールを飼料全量の０．０１〜２重量％含むことを特徴とする上記のマンノース含有飼料を要旨とするものである。
　さらに、第２の発明は、コプラミール１ｇ当り１〜１００ユニットのヘミセルラーゼを含む溶液を、コプラミールに対して重量で３倍量以下の量を作用させて、コプラミール中のマンナンの少なくとも一部をマンノースに分解して遊離させ、得られたマンノース含有コプラミールを飼料に加えてマンノース含有飼料を得ることを特徴とするマンノース含有飼料の製造方法を要旨とするものである。
　以下、本発明を詳細に説明する。
　本発明のマンノース含有飼料は、コプラミールを原料とし、コプラミール中のマンナンの一部又は全部を分解してマンノースを遊離させたものである。
　コプラミールは、ココ椰子果実内部の核肉を乾燥させて得られる椰子油搾油原料であるコプラから、椰子油を抽出した後の残渣の粉砕物のことであり、通常、マンナンを約３０重量％程度含有する。本発明のマンノース含有飼料の原料となるコプラミールとしては、通常の椰子油製造工程において産出されるものであれば、特に起源、製法等を限定するものではない。
　コプラミールのマンナンの分解％は、特に限定されるものではないが、１０〜１００重量％が好ましく、特に３０〜１００％分解されていることが好ましい。
　本発明マンノース含有コプラミールの水分含量としては、５〜２０重量％が好ましく、さらに５〜１３重量％が好ましい。コプラミール中の水分含量が２０重量％より多くなると、腐敗がおこりやすくなるために好ましくない。
　本発明のマンノース含有コプラミールはそのまま飼料としてもよく、また、その他の飼料に配合して使用してもよい。
　配合飼料に、マンノース含有コプラミールを添加する場合、配合飼料中のマンノース含量が０．００１〜０．６重量％となる量、通常、配合飼料に対してマンノース含有コプラミールを０．０１〜２重量％、好ましくは０．１〜１重量％添加することが望ましい。添加量は通常有効性と経済性の観点できめればよい。
　次に、本発明のマンノース含有飼料の製造方法について説明する。
　本発明に用いられるヘミセルラーゼとは、植物細胞壁においてセルロースと結合して存在する多糖であるヘミセルロースに対して作用する酵素のことであり、本発明に用いられるヘミセルラーゼとしては、コプラミールに作用してマンノースを遊離するものであれば特に限定されず、マンナナーゼ（マンナーゼ）、マンノシダーゼ等のマンナン分解酵素が挙げられる。このような酵素の由来としては、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、糸状菌（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ａｃｕｌｅａｔｕｓ、Ａ．ａｗａｍｏｒｉ、Ａ．ｎｉｇｅｒ、Ａ．ｕｓａｍｉｉ、Ｈｕｍｉｃｏｌａ　ｉｎｓｏｌｅｎｓ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｈａｒｚｉａｎｕｍ、Ｔ．ｋｏｎｉｎｇｉ、Ｔ．ｎｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ、Ｔ．ｖｉｒｉｄｅ）、担子菌（Ｃｏｒｔｉｃｉｕｍ、Ｐｙｃｎｏｐｏｒｕｓ　ｃｏｃｃｉｎｅｕｓ）等が挙げられるが、好適にはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ由来の酵素が望ましい。その中でも特にＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ由来のマンナナーゼを用いることが好ましい。
　これらのヘミセルラーゼは上記の菌株を培養した培養上清もしくは菌体中に生産されるが、本発明においては、これらのヘミセルラーゼを含有するいかなる画分を使用してもよい。また、必要に応じてヘミセルラーゼを含有する画分を常法により精製あるいは部分精製したものを使用してもよい。
　また、セルロシンＨＣ１００、セルロシンＨＣ、セルロシンＴＰ２５、セルロシンＧＭ５（以上阪急バイオインダストリー株式会社製）、スミチームＡＣ、スミチームＡＣＨ（以上新日本化学工業株式会社製）ガマナーゼ（ノボノルディスクインダストリー社製）等の市販の酵素も使用することができる。
　本発明でいうヘミセルラーゼ溶液とは、このようなヘミセルラーゼを含むものであれば特に限定されるものではなく、例えば、このようなヘミセルラーゼを水に懸濁した溶液等が挙げられる。
　コプラミールに作用させる酵素の量はコプラミール１ｇ当たり１〜１００ユニット、さらに好ましくは１０〜５０ユニットが適当であり、酵素濃度は酵素溶液をコプラミールに対して重量比で好ましくは３倍量以下、さらに０．５〜３倍量、特に１〜２倍量で使用し得る濃度が好ましい。酵素溶液の量が３倍量より多いと、コプラミールの水分量が多くなり、雑菌等が繁殖しやすくなるため、そのまま飼料として用いるには不向きとなり、また、飼料として用いるのに適当な水分量とするには、乾燥に手間やコストがかかるために好ましくない。また、０．５倍量より少なくても特に問題はないが、酵素溶液が均一に接触しないため、マンノースの遊離量があまり多くならず好ましくない。
　コプラミールに酵素溶液を接触させる方法としては、コプラミールに酵素が均一に接触するようにすることが好ましく、例えばコプラミールに酵素溶液を添加してすばやく攪拌する方法、酵素溶液を含む容器にコプラミールを添加してすばやく攪拌する方法、平面上にコプラミールを分散させておいて各種噴霧装置を用いて均一に酵素溶液を噴霧する方法等が挙げられ、工業的には、ニーダー、リボンブレンダー、ナウタミキサー（細川ミクロン（株）、ＤＡＬＴＯＮ（株）製）等の混合攪拌機を用いることができる。
　コプラミールに酵素溶液を作用させる条件としては、通常の酵素反応に用いられる条件であれば特に問題はないが、使用する酵素の最適作用条件で反応させることが望ましい。反応の温度としては、酵素が失活しない条件下で反応を行うのが望ましいが、反応液の腐敗を防止するために微生物が増殖しにくい温度で反応することが望ましく、２０〜９０℃、好ましくは４０〜８０℃、さらに好ましくは５０〜７５℃がよい。反応時間としては、使用する酵素の量に依存するが、通常３時間から２４時間の間に設定するのが作業上好ましい。
　本発明においては、このようにして得られたマンノース含有飼料を乾燥させて水分含量を５〜２０重量％、さらに好ましくは５〜１３重量％とすることが好ましい。
　乾燥方法としては、真空乾燥機、真空攪拌乾燥機、ドラム乾燥機、バンド乾燥機、フラッシュドライヤー、流動層式乾燥機等を用いて乾燥させればよい。乾燥の際の温度としては、雑菌の生育を抑え、さらにマンノースを分解させないために６０〜１４０℃、好ましくは８０〜１２０℃がよい。
実施例
　以下、実施例により本発明を具体的に説明する。
実施例１
　コプラミール（マンナン含量３０％、脂肪分１０％、水分７．２％）１００ｇに、セルロシンＧＭ５（阪急バイオインダストリー株式会社製マンナナーゼ、力価１０，０００ユニット／ｇ）０．３ｇを水１００ｍｌに懸濁した液（コプラミールに対して重量で１倍量）を均一になるように噴霧した後、６０℃で１２時間放置した。反応終了後、真空乾燥機（ヤマト株式会社製、Ｖａｃｃｕｍ　Ｄｒｙｉｎｇ　Ｏｖｅｎ　ＤＰ３２）にて８０℃、５時間真空乾燥し、マンノース含有飼料を得た。
　この飼料を水に懸濁させて飼料中の糖成分を水に溶解させた後、この溶液中の糖成分を高速液体カラムクロマトグラフィーを用いて定量した。分析用カラムはバイオラッド社製アミネックスＨＰＸ−８７Ｐを用い、カラム温度は８５℃、流速０．６ｍｌ／ｍｉｎとした。糖の検出は示差屈折計を用い、標準品の定量値からマンノースの含有量を求めた結果、飼料１００ｇ中に１３ｇのマンノースが蓄積していた。また、飼料中の水分含量を常圧加熱乾燥法によって測定した結果、７．０％であった。
実施例２
　コプラミール（マンナン含量３０％、脂肪分１０％、水分７．２％）１００ｇに、スミチームＡＣＨ（新日本化学工業株式会社製ヘミセルラーゼ、力価５０，０００ユニット／ｇ）０．１ｇを水１３０ｍｌに懸濁した液（コプラミールに対して重量比で１．３倍量）を均一になるように噴霧した後、５０℃で１５時間放置した。反応終了後、真空乾燥機（ヤマト株式会社製、Ｖａｃｃｕｍ　Ｄｒｙｉｎｇ　Ｏｖｅｎ　ＤＰ３２）にて９０℃、１０時間真空乾燥し、マンノース含有飼料を得た。この飼料中の糖を実施例１と同様にして定量した結果、１００ｇ中に１５ｇのマンノースが蓄積していた。また、水分含量は６．５％であった。
実施例３
　コプラミール１ｋｇ（マンナン含量３０％、脂肪分１０％，水分７．２％）に１．８Ｎ　ＨＣｌ０．５Ｌを加え、万能混合撹拌機（三英製作所株式会社製）を用い、５分間混合した。混合物のｐＨは３．０であった。これに、セルロシンＧＭ５（阪急バイオインダストリー株式会社製マンナナーゼ、力価１０，０００ユニット／ｇ）０．５ｇ及びスミチ−ムＡＣＨ（新日本化学工業株式会社製ヘミセルラーゼ，力価５０，０００ユニット／ｇ）０．５ｇを懸濁させた水１Ｌ（コプラミ−ルに対して重量で１倍量）を加え、５分間混合した。混合後、６０℃で２４時間放置した。反応終了後、真空乾燥機（ヤマト株式会社製、Ｖａｃｃｕｍ　Ｄｒｙｉｎｇ　Ｏｖｅｎ　ＤＰ３２）にて１００℃、１０時間真空乾燥し、マンノ−ス含有コプラミールを得た。このコプラミール中の糖を実施例１と同様にして定量した結果、コプラミール１００ｇ中に１１ｇのマンノースが蓄積していた。また、水分含量は１０．０％であった。
飼料の性能評価
　実施例３で作製したマンノース含有コプラミールを含むマンノース含有飼料を用いて鶏におけるサルモネラ菌の排菌試験を行った。
　７１週齢の白レグ種採卵鶏（ジュリア）６羽に、下記表１に示す組成の配合飼料に上記のマンノース含有コプラミールを１重量％を添加した飼料を２５日間にわたり、１日１羽当たり０．１ｋｇ（またはトータル供与量２．５ｋｇ）不断供与した。飼料供与後、１８日目にサルモネラ菌（農林水産省家畜衛生試験場より分与されたＳａｌｍｏｎｅｌｌａ　Ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ野外株）を８．０×１０５個／ｍｌを含む菌液１ｍｌをカテーテルにより強制経口投与した。
　飼料供与後１４日（コントロール）及びサルモネラ投与後１日、３日及び７日の朝に排出された盲腸糞を個体別に採材し、以下のようにしてサルモネラ数を測定した。
　また、比較のため、上記のマンノース含有飼料に代えて、酵素処理していないコプラミールを１％含む配合飼料（比較例１）及び配合飼料のみ（比較例２）を用いて同様にサルモネラの排菌試験を行った。
　その結果を図１に示す。図中、ａは本発明の飼料を投与した鶏、ｂは酵素処理していないコプラミールを含む配合飼料を投与した鶏、およびｃは配合飼料のみを投与した鶏の盲腸糞中のサルモネラ菌の数を示す。
　図１は、鶏におけるサルモネラの排菌試験の結果を示す図であり、縦軸にサルモネラの排菌数の対数値を、横軸にサルモネラ投与後の日数を示している。
　以上の結果から、本発明のマンノース含有飼料はサルモネラの排菌効果を有していることがわかる。
（サルモネラ数の測定方法）
　盲腸糞１ｇに滅菌リン酸緩衝生理食塩液を加えて１０倍に希釈し、十分混合して試料原液とした。次いで、試料原液を、滅菌生理食塩水を用いて公比１０で段階的に希釈し１００倍希釈液及び１０００倍希釈液を調製した。
　試料原液、１００倍希釈液及び１０００倍希釈液を、それぞれＳＳ寒天平板培地およびブリリアントグリーン寒天平板培地に０．１ｍｌずつ塗抹して３７℃で２４時間培養し、各平板培地上に生育した定型的集落を計測した。さらに、集落より釣菌してリジン脱炭酸試験用、ＳＩＭ寒天培地及びＴＳＩ寒天培地（クリグラー培地の変法で腸内細菌確認用培地）に摂取して３７℃で２４時間培養して性状の確認を行い、この集落がサルモネラと認められた場合には、サルモネラ免疫血清を用いて血清型の確認を行い、サルモネラＯ９群と認められた集落数に、試料原液あるいは希釈液の希釈倍率を乗じて１ｇ当たりのサルモネラ菌数を算出した。
　本発明のマンノース含有飼料は、サルモネラ菌の感染予防成分として注目されているマンノースを含有しているので、飼料として有用である。
　さらに、原料としてコプラミールを使用しているため、産業廃棄物問題の解決手段としても有用である。
　また、本発明の製造方法によれば、このようなマンノース含有飼料を容易にかつ安価に製造することができる。