(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ニコチアナ種の植物材料を受け取ることと、
１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを前記植物材料から溶媒に抽出するのに十分な時間の間および条件下で、前記植物材料を前記溶媒と接触させることと、
前記１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含有する前記溶媒を、前記抽出された植物材料から分離することと、
前記１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含有する前記溶媒を精製して、乾燥重量基準で少なくとも５０重量％の前記１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含む単離物を提供することと、
前記単離物を、ニコチン、タバコ材料または使用時に燃焼されない他の植物材料を含有する、喫煙物品、無煙タバコ製品、またはエアロゾル生成デバイスにおける使用に適合されたタバコ組成物に添加することと、
を含む、タバコ組成物を製造する方法。
【請求項２】
前記ニコチアナ種の植物材料が、葉の形態である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ニコチアナ種の植物材料が、未乾燥の形態で提供される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ニコチアナ種の植物材料が、ガルパオ・コミュン（Ｇａｌｐａｏ  ｃｏｍｍｕｎｓ）植物から得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記溶媒が、メタノールを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含有する前記溶媒が、乾燥重量基準で少なくとも０．２重量％の前記１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含有する前記溶媒が、乾燥重量基準で少なくとも０．５重量％の前記１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含有する前記溶媒が、乾燥重量基準で少なくとも０．８重量％の前記１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記精製するステップが、少なくとも７０重量％の前記１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含む単離物を提供する、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記精製するステップが、少なくとも９０重量％の前記１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含む単離物を提供する、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドが、ｏ−メチル化ケンフェロール化合物、ｏ−メチル化ケルセチン化合物、およびｏ−メチル化ルテオリン化合物からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドが、ケルセチンメチルエーテル、ケルセチンジメチルエーテル、ケルセチントリメチルエーテル、ケルセチンテトラメチルエーテル、ケルセチンペンタメチルエーテル、ケンフェロールメチルエーテル、ケンフェロールジメチルエーテル、ケンフェロールトリメチルエーテル、およびケンフェロールテトラメチルエーテルからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ケルセチンメチルエーテルが、ケルセチン３−メチルエーテル、ケルセチン４′−メチルエーテル、ケルセチン４−メチルエーテルからなる群から選択され、前記ケルセチントリメチルエーテルが、ケルセチン３，３′，４′−トリメチルエーテルであり、前記ケンフェロールメチルエーテルが、ケンフェロール３−メチルエーテル、ケンフェロール４′−メチルエーテル、およびケンフェロール５−メチルエーテルからなる群から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記単離物が、前記単離物が吸着されるタバコ材料または非タバコ材料の形態で添加される、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記タバコ組成物が、喫煙物品における使用に適合され、前記単離物が、タバコストリップに適用されるケーシング配合物もしくはトップドレッシング配合物の形態で、または再構成タバコ材料の成分の形態で添加される、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記タバコ組成物中の前記単離物の量が、前記喫煙物品中の前記タバコ材料の総乾燥重量基準で、５ｐｐｍ〜５重量％である、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
ニコチン、タバコ材料または使用時に燃焼されない他の植物材料を含有する、喫煙物品、無煙タバコ製品、またはエアロゾル生成デバイスにおける使用のためのタバコ組成物であって、乾燥重量基準で５０％以上の１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含む、ニコチアナ種の植物からの単離物を含む、タバコ組成物。
【請求項１８】
前記単離物が、乾燥重量基準で７０％以上の１つ以上のｏ−メチルフラボノイドを含む、請求項１７に記載のタバコ組成物。
【請求項１９】
前記単離物が、乾燥重量基準で９０％以上の１つ以上のｏ−メチルフラボノイドを含む、請求項１７に記載のタバコ組成物。
【請求項２０】
前記１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドが、ｏ−メチル化ケンフェロール化合物、ｏ−メチル化ケルセチン化合物、およびｏ−メチル化ルテオリン化合物からなる群から選択される、請求項１７に記載のタバコ組成物。
【請求項２１】
前記１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドが、ケルセチンメチルエーテル、ケルセチンジメチルエーテル、ケルセチントリメチルエーテル、ケルセチンテトラメチルエーテル、ケルセチンペンタメチルエーテル、ケンフェロールメチルエーテル、ケンフェロールジメチルエーテル、ケンフェロールトリメチルエーテル、およびケンフェロールテトラメチルエーテルからなる群から選択される、請求項１７に記載のタバコ組成物。
【請求項２２】
前記ケルセチンメチルエーテルが、ケルセチン３−メチルエーテル、ケルセチン４′−メチルエーテル、ケルセチン４−メチルエーテルからなる群から選択され、前記ケルセチントリメチルエーテルが、ケルセチン３，３′，４′−トリメチルエーテルであり、前記ケンフェロールメチルエーテルが、ケンフェロール３−メチルエーテル、ケンフェロール４′−メチルエーテル、およびケンフェロール５−メチルエーテルからなる群から選択される、請求項２１に記載のタバコ組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タバコから作製される、もしくはそれに由来する、またはそうでなければタバコもしくはタバコの成分を組み込み、ヒト消費を意図する製品に関する。特に注目されるのは、ニコチアナ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ）種からの植物もしくは植物の部分から得られる、またはそれに由来する原料もしくは成分である。
【背景技術】
【０００２】
紙巻タバコ、葉巻、およびパイプは、タバコを様々な形態で用いる人気のある喫煙物品である。そのような喫煙物品は、タバコを加熱するか、または燃やすことによって用いられ、喫煙者によって吸入され得るエアロゾル（例えば、煙）を生成する。紙巻タバコ等の人気のある喫煙物品は、実質的に円筒ロッド状構造を有し、包装紙によって囲まれた刻みタバコ（例えば、カットフィラー形態）等の喫煙可能な材料の装入物、ロール、または円柱を含み、それによっていわゆる「タバコロッド」を形成する。通常、紙巻タバコは、タバコロッドとの末端間関係で整列された円筒フィルター要素を有する。典型的に、フィルター要素は、「プラグラップ」として知られる紙材料によって外接される可塑化酢酸セルローストウを含む。特定の紙巻タバコは、複数のセグメントを有するフィルター要素を組み込み、それらのセグメントのうちの１つは、活性炭粒子を含むことができる。典型的に、フィルター要素は、「チッピング紙」として知られる外接包装材料を使用して、タバコロッドの一端に取り付けられる。吸い込まれた主流煙の周囲空気による希釈を提供するために、チッピング材料およびプラグラップを穿孔することも望ましくなる。紙巻タバコは、喫煙者がその一端に点火し、タバコロッドを燃やすことによって用いられる。次に、喫煙者は、紙巻タバコの反対端（例えば、フィルター端）で吸い込むことによって、主流煙を自身の口に受ける。
【０００３】
紙巻タバコ製造に使用されるタバコは、典型的に、ブレンド形態で使用される。例えば、一般に「アメリカンブレンド」と称される特定の人気のあるタバコブレンドは、熱風乾燥タバコ、バーレータバコ、およびオリエンタルタバコの混合物を含み、多くの場合、再構成タバコおよび加工タバコ茎等の特定の加工タバコを含む。特定の紙巻タバコブランドの製造に使用されるタバコブレンド内の各種タバコの正確な量は、ブランド毎に異なる。しかしながら、多くのタバコブレンドの場合、熱風乾燥タバコがブレンドの比較的大部分を構成し、一方オリエンタルタバコは、ブレンドの比較的一部を構成する。例えば、Ｔｏｂａｃｃｏ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ，Ｖｏｇｅｓ（編）４４〜４５頁（１９８４）、Ｂｒｏｗｎｅ，Ｔｈｅ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｃｉｇａｒｅｔｔｅｓ，第３版、４３頁（１９９０）およびＴｏｂａｃｃｏ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（編）３４６頁（１９９９）を参照されたい。
【０００４】
タバコは、いわゆる「無煙」形態で楽しまれることもできる。特に人気のある無煙タバコ製品は、何らかの形態の加工タバコまたはタバコ含有配合物を、使用者の口に挿入することによって用いられる。例えば、それぞれが参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｃｈｗａｒｔｚの米国特許第１，３７６，５８６号、Ｌｅｖｉの同第３，６９６，９１７号、Ｐｉｔｔｍａｎらの同第４，５１３，７５６号、Ｓｅｎｓａｂａｕｇｈ，Ｊｒ．らの同第４，５２８，９９３号、Ｓｔｏｒｙらの同第４，６２４，２６９号、Ｔｉｂｂｅｔｔｓの同第４，９９１，５９９号、Ｔｏｗｎｓｅｎｄの同第４，９８７，９０７号、Ｓｐｒｉｎｋｌｅ，ＩＩＩらの同第５，０９２，３５２号、Ｗｈｉｔｅらの同第５，３８７，４１６号、Ｗｉｌｌｉａｍｓの同第６，６６８，８３９号、Ｗｉｌｌｉａｍｓの同第６，８３４，６５４号、Ａｔｃｈｌｅｙらの同第６，９５３，０４０号、Ａｔｃｈｌｅｙらの同第７，０３２，６０１号、およびＡｔｃｈｌｅｙらの同第７，６９４，６８６号、Ｗｉｌｌｉａｍｓの米国特許公開第２００４／００２０５０３号、Ｑｕｉｎｔｅｒらの同第２００５／０１１５５８０号、Ｓｔｒｉｃｋｌａｎｄらの同第２００５／０２４４５２１号、Ｓｔｒｉｃｋｌａｎｄらの同第２００６／０１９１５４８号、Ｈｏｌｔｏｎ，Ｊｒ．らの同第２００７／００６２５４９号、Ｈｏｌｔｏｎ，Ｊｒ．らの２００７／０１８６９４１号、Ｓｔｒｉｃｋｌａｎｄらの同第２００７／０１８６９４２号、Ｄｕｂｅらの同第２００８／００２９１１０号、Ｒｏｂｉｎｓｏｎらの同第２００８／００２９１１６号、Ｍｕａらの同第２００８／００２９１１７号、Ｒｏｂｉｎｓｏｎらの同第２００８／０１７３３１７号、Ｅｎｇｓｔｒｏｍらの同第２００８／０１９６７３０号、Ｎｅｉｌｓｅｎらの同第２００８／０２０９５８６号、Ｃｒａｗｏｒｄらの同第２００８／０３０５２１６号、Ｍｕａらの同第２００９／００２５７３８号、Ｂｒｉｎｋｌｅｙらの同第２００９／００２５７３９号、Ｅｓｓｅｎらの同第２００９／００６５０１３号、Ｋｕｍａｒらの同第２００９／０２９３８８９号、Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅらの同第２０１０／００１８５４０号、Ｇｅｒａｒｄｉらの同第２０１０／００１８５４１号、Ｇａｏらの同第２０１０／０２９１２４５号、Ｍｕａらの同第２０１１／０１３９１６４号、Ｃｏｌｅｍａｎ，ＩＩＩらの同第２０１１／０１７４３２３号、Ｂｅｅｓｏｎらの同第２０１１／０２４７６４０号、Ｃｏｌｅｍａｎ，ＩＩＩらの同第２０１１／０２５９３５３号、Ｃａｎｔｒｅｌｌらの同第２０１２／００３７１７５号、Ｈｕｎｔらの同第２０１２／００５５４９４号、Ｓｅｂａｓｔｉａｎらの同第２０１２／０１０３３５３号、Ｂｙｒｄらの同第２０１２／０１２５３５４号、Ｃａｎｔｒｅｌｌらの同第２０１２／０１３８０７３号、およびＣａｎｔｒｅｌｌらの同第２０１２／０１３８０７４号、Ａｒｎａｒｐらの国際公開第０４／０９５９５９号、Ａｔｃｈｌｅｙらの国際公開第０５／０６３０６０号、Ｅｎｇｓｔｒｏｍの国際公開第０５／００４４８０号、Ｂｊｏｒｋｈｏｌｍの国際公開第０５／０１６０３６号、Ｑｕｉｎｔｅｒらの国際公開第０５／０４１６９９号、およびＡｔｃｈｌｅｙの国際公開第１０／１３２４４４号に記載される無煙タバコ配合物、原料、および加工方法の種類を参照されたい。
【０００５】
無煙タバコ製品の一種は、「嗅ぎタバコ」と称される。一般に「スヌース」と称される湿性嗅ぎタバコ製品の代表的な種類は、欧州、特にスウェーデンにおいて、Ｓｗｅｄｉｓｈ  Ｍａｔｃｈ  ＡＢ、Ｆｉｅｄｌｅｒ  ＆  Ｌｕｎｄｇｒｅｎ  ＡＢ、Ｇｕｓｔａｖｕｓ  ＡＢ、Ｓｋａｎｄｉｎａｖｉｓｋ  Ｔｏｂａｋｓｋｏｍｐａｇｎｉ  Ａ／Ｓ、およびＲｏｃｋｅｒ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ＡＢ等の会社によって、または会社を通じて製造されてきた。米国において入手可能なスヌース製品は、Ｃａｍｅｌ  Ｓｎｕｓ  Ｆｒｏｓｔ、Ｃａｍｅｌ  Ｓｎｕｓ  Ｏｒｉｇｉｎａｌ、およびＣａｍｅｌ  Ｓｎｕｓ  Ｓｐｉｃｅという商品名で、Ｒ．Ｊ．Ｒｅｙｎｏｌｄｓ  Ｔｏｂａｃｃｏ  Ｃｏｍｐａｎｙによって市販されている。例えば、Ｂｒｙｚｇａｌｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，１Ｎ１８００  Ｌｉｆｅ  Ｃｙｃｌｅ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ，Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｌｉｆｅ  Ｃｙｃｌｅ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｌｏｏｓｅ  ａｎｄ  Ｐｏｒｔｉｏｎ  Ｓｎｕｓ（２００５）も参照されたい。さらに、スヌース製造に関連する特定の品質標準は、いわゆるＧｏｔｈｉａＴｅｋ標準として構築された。代表的な無煙タバコ製品も、Ｈｏｕｓｅ  ｏｆ  Ｏｌｉｖｅｒ  Ｔｗｉｓｔ  Ａ／ＳによるＯｌｉｖｅｒ  Ｔｗｉｓｔ；Ｕ．Ｓ．Ｓｍｏｋｅｌｅｓｓ  Ｔｏｂａｃｃｏ  Ｃｏ．によるコペンハーゲン湿性タバコ、コペンハーゲンパウチ、Ｓｋｏａｌ  Ｂａｎｄｉｔｓ、Ｓｋｏａｌ  Ｐｏｕｃｈｅｓ、ＳｋｏａｌＤｒｙ、Ｒｏｏｓｔｅｒ、Ｒｅｄ  Ｓｅａｌロングカット、Ｈｕｓｋｙ、およびＲｅｖｅｌ  Ｍｉｎｔ  Ｔｏｂａｃｃｏ  Ｐａｃｋｓ；Ｐｈｉｌｉｐ  Ｍｏｒｒｉｓ  ＵＳＡによるＭａｒｌｂｏｒｏ  Ｓｎｕｓおよび「ｔａｂｏｋａ」；Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｎｕｆｆ  Ｃｏｍｐａｎｙ，ＬＬＣによるＬｅｖｉ  Ｇａｒｒｅｔｔ、Ｐｅａｃｈｙ、Ｔａｙｌｏｒ′ｓ  Ｐｒｉｄｅ、Ｋｏｄｉａｋ、Ｈａｗｋｅｎ  Ｗｉｎｔｅｒｇｒｅｅｎ、Ｇｒｉｚｚｌｙ、Ｄｅｎｔａｌ、Ｋｅｎｔｕｃｋｙ  Ｋｉｎｇ、およびＭａｍｍｏｔｈ  Ｃａｖｅ；Ｒ．Ｊ．Ｒｅｙｎｏｌｄｓ  Ｔｏｂａｃｃｏ  ＣｏｍｐａｎｙによるＣａｍｅｌ  Ｓｎｕｓ、Ｃａｍｅｌ  Ｏｒｂｓ、Ｃａｍｅｌ  Ｓｔｉｃｋｓ、およびＣａｍｅｌ  Ｓｔｒｉｐｓという商品名で市販されている。市販されている他の例示的な無煙タバコ製品としては、Ｓｗｉｓｈｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．によるＫａｙａｋ湿性スヌースおよびＣｈａｔｔａｎｏｏｇａ  Ｃｈｅｗ噛みタバコ  、およびＰｉｎｋｅｒｔｏｎ  Ｔｏｂａｃｃｏ  Ｃｏ．ＬＰによるＲｅｄｍａｎ噛みタバコと称されるものが挙げられる。
【０００６】
長年にわたって、タバコ製品に用いられるタバコ材料の全体的な特色または性質を変化させるための様々な処理方法および添加剤が提案されてきた。例えば、添加剤または処理プロセスは、タバコ材料の化学もしくは感覚特性を変化させるため、または喫煙可能なタバコ材料の場合、そのタバコ材料を含む喫煙物品によって生成される主流煙の化学もしくは感覚特性を変化させるために用いられた。紙巻タバコの煙の感覚属性は、香味材料を紙巻タバコの様々な成分に組み込むことによって強化され得る。例示的な香味添加剤としては、メタノールおよびメイラード反応の生成物、例えば、ピラジン、アミノ糖、およびアマドリ化合物が挙げられる。アメリカン紙巻タバコブレンドは、典型的に、リコリスまたはココア粉末等の香味原料、および高果糖コーンシロップ等の糖源を含むケーシング組成物を含有する。参照により本明細書に組み込まれる、Ｌｅｆｆｉｎｇｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｏｂａｃｃｏ  Ｆｌａｖｏｒｉｎｇ  ｆｏｒ  Ｓｍｏｋｉｎｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｒ．Ｊ．Ｒｅｙｎｏｌｄｓ  Ｔｏｂａｃｃｏ  Ｃｏｍｐａｎｙ（１９７２）も参照されたい。場合によっては、熱の使用を伴う処理プロセスは、加工タバコに所望の色もしくは視覚的特色、所望の感覚特性、または所望の物理的性質もしくは質感を付与することができる。タバコ組成物における使用のための香味および芳香組成物を調製するための様々なプロセスは、それぞれが参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｏｏｋｅｒの米国特許第３，４２４，１７１号、Ｌｕｔｔｉｃｈの同第３，４７６，１１８号、Ｏｓｂｏｒｎｅ，Ｊｒ．らの同第４，１５０，６７７号、Ｒｏｂｅｒｔｓらの同第４，９８６，２８６号、Ｗｈｉｔｅらの同第５，０７４，３１９号、Ｗｈｉｔｅらの同第５，０９９，８６２号、Ｓｅｎｓａｂａｕｇｈ，Ｊｒ．の同第５，２３５，９９２号、Ｒａｙｍｏｎｄらの同第５，３０１，６９４号、Ｃｏｌｅｍａｎ，ＩＩＩらの同第６，２９８，８５８号、Ｃｏｌｅｍａｎ，ＩＩＩらの同第６，３２５，８６０号、Ｃｏｌｅｍａｎ，ＩＩＩらの同第６，４２８，６２４号、Ｄｕｂｅらの同第６，４４０，２２３号、Ｃｏｌｅｍａｎ，ＩＩＩの同第６，４９９，４８９号、およびＷｈｉｔｅらの同第６，５９１，８４１号、Ｃｏｌｅｍａｎ，ＩＩＩの米国特許出願公開第２００４／０１７３２２８号、およびＣｏｌｅｍａｎ，ＩＩＩらの同第２０１０／００３７９０３号に記載されている。
【０００７】
無煙タバコの感覚属性は、特定の香味材料の組み込みによって強化することもできる。例えば、それぞれが参照により本明細書に組み込まれる、Ｗｉｌｌｉａｍｓの米国特許出願公開第２００２／０１６２５６２号、Ｗｉｌｌｉａｍｓの同第２００２／０１６２５６３号、Ａｔｃｈｌｅｙらの同第２００３／００７０６８７号、Ｗｉｌｌｉａｍｓの同第２００４／００２０５０３号、Ｂｒｅｓｌｉｎらの同第２００５／０１７８３９８号、Ｓｔｒｉｃｋｌａｎｄらの同第２００６／０１９１５４８号、Ｈｏｌｔｏｎ，Ｊｒ．らの同第２００７／００６２５４９号、Ｈｏｌｔｏｎ，Ｊｒ．らの同第２００７／０１８６９４１号、Ｓｔｒｉｃｋｌａｎｄらの同第２００７／０１８６９４２号、Ｄｕｂｅらの同第２００８／００２９１１０号、Ｒｏｂｉｎｓｏｎらの同第２００８／００２９１１６号、Ｍｕａらの同第２００８／００２９１１７号、Ｒｏｂｉｎｓｏｎらの同第２００８／０１７３３１７号、およびＮｅｉｌｓｅｎらの同第２００８／０２０９５８６号を参照されたい。
【０００８】
喫煙物品および／または無煙タバコ製品の製造に有用なタバコ（ならびにタバコ組成物および配合物）の特色および性質を変化させるための追加の組成物および方法を提供することが望ましい。具体的に、タバコ由来の風味豊かな材料を使用して、タバコ組成物および配合物の特色および性質を変化させるための組成物および方法を開発することが望ましい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国特許第１，３７６，５８６号明細書
【特許文献２】米国特許第３，６９６，９１７号明細書
【特許文献３】米国特許第４，５１３，７５６号明細書
【特許文献４】米国特許第４，５２８，９９３号明細書
【特許文献５】米国特許第４，６２４，２６９号明細書
【特許文献６】米国特許第４，９９１，５９９号明細書
【特許文献７】米国特許第４，９８７，９０７号明細書
【特許文献８】米国特許第５，０９２，３５２号明細書
【特許文献９】米国特許第５，３８７，４１６号明細書
【特許文献１０】米国特許第６，６６８，８３９号明細書
【特許文献１１】米国特許第６，８３４，６５４号明細書
【特許文献１２】米国特許第６，９５３，０４０号明細書
【特許文献１３】米国特許第７，０３２，６０１号明細書
【特許文献１４】米国特許第７，６９４，６８６号明細書
【特許文献１５】米国特許出願公開第２００４／００２０５０３号明細書
【特許文献１６】米国特許出願公開第２００５／０１１５５８０号明細書
【特許文献１７】米国特許出願公開第２００５／０２４４５２１号明細書
【特許文献１８】米国特許出願公開第２００６／０１９１５４８号明細書
【特許文献１９】米国特許出願公開第２００７／００６２５４９号明細書
【特許文献２０】米国特許出願公開第２００７／０１８６９４１号明細書
【特許文献２１】米国特許出願公開第２００７／０１８６９４２号明細書
【特許文献２２】米国特許出願公開第２００８／００２９１１０号明細書
【特許文献２３】米国特許出願公開第２００８／００２９１１６号明細書
【特許文献２４】米国特許出願公開第２００８／００２９１１７号明細書
【特許文献２５】米国特許出願公開第２００８／０１７３３１７号明細書
【特許文献２６】米国特許出願公開第２００８／０１９６７３０号明細書
【特許文献２７】米国特許出願公開第２００８／０２０９５８６号明細書
【特許文献２８】米国特許出願公開第２００８／０３０５２１６号明細書
【特許文献２９】米国特許出願公開第２００９／００２５７３８号明細書
【特許文献３０】米国特許出願公開第２００９／００２５７３９号明細書
【特許文献３１】米国特許出願公開第２００９／００６５０１３号明細書
【特許文献３２】米国特許出願公開第２００９／０２９３８８９号明細書
【特許文献３３】米国特許出願公開第２０１０／００１８５４０号明細書
【特許文献３４】米国特許出願公開第２０１０／００１８５４１号明細書
【特許文献３５】米国特許出願公開第２０１０／０２９１２４５号明細書
【特許文献３６】米国特許出願公開第２０１１／０１３９１６４号明細書
【特許文献３７】米国特許出願公開第２０１１／０１７４３２３号明細書
【特許文献３８】米国特許出願公開第２０１１／０２４７６４０号明細書
【特許文献３９】米国特許出願公開第２０１１／０２５９３５３号明細書
【特許文献４０】米国特許出願公開第２０１２／００３７１７５号明細書
【特許文献４１】米国特許出願公開第２０１２／００５５４９４号明細書
【特許文献４２】米国特許出願公開第２０１２／０１０３３５３号明細書
【特許文献４３】米国特許出願公開第２０１２／０１２５３５４号明細書
【特許文献４４】米国特許出願公開第２０１２／０１３８０７３号明細書
【特許文献４５】米国特許出願公開第２０１２／０１３８０７４号明細書
【特許文献４６】国際公開第２００４／０９５９５９号
【特許文献４７】国際公開第２００５／０６３０６０号
【特許文献４８】国際公開第２００５／００４４８０号
【特許文献４９】国際公開第２００５／０１６０３６号
【特許文献５０】国際公開第２００５／０４１６９９号
【特許文献５１】国際公開第２０１０／１３２４４４号
【特許文献５２】米国特許第３，４２４，１７１号明細書
【特許文献５３】米国特許第３，４７６，１１８号明細書
【特許文献５４】米国特許第４，１５０，６７７号明細書
【特許文献５５】米国特許第４，９８６，２８６号明細書
【特許文献５６】米国特許第５，０７４，３１９号明細書
【特許文献５７】米国特許第５，０９９，８６２号明細書
【特許文献５８】米国特許第５，２３５，９９２号明細書
【特許文献５９】米国特許第５，３０１，６９４号明細書
【特許文献６０】米国特許第６，２９８，８５８号明細書
【特許文献６１】米国特許第６，３２５，８６０号明細書
【特許文献６２】米国特許第６，４２８，６２４号明細書
【特許文献６３】米国特許第６，４４０，２２３号明細書
【特許文献６４】米国特許第６，４９９，４８９号明細書
【特許文献６５】米国特許第６，５９１，８４１号明細書
【特許文献６６】米国特許出願公開第２００４／０１７３２２８号明細書
【特許文献６７】米国特許出願公開第２０１０／００３７９０３号明細書
【特許文献６８】米国特許出願公開第２００２／０１６２５６２号明細書
【特許文献６９】米国特許出願公開第２００２／０１６２５６３号明細書
【特許文献７０】米国特許出願公開第２００３／００７０６８７号明細書
【特許文献７１】米国特許出願公開第２００４／００２０５０３号明細書
【特許文献７２】米国特許出願公開第２００５／０１７８３９８号明細書
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｔｏｂａｃｃｏ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ，Ｖｏｇｅｓ（Ｅｄ．）ｐ．４４−４５（１９８４）
【非特許文献２】Ｂｒｏｗｎｅ，Ｔｈｅ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｃｉｇａｒｅｔｔｅｓ，３ｒｄ  Ｅｄ．，ｐ．４３（１９９０）
【非特許文献３】Ｔｏｂａｃｃｏ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄｓ．）ｐ．３４６（１９９９）
【非特許文献４】Ｂｒｙｚｇａｌｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，１Ｎ１８００  Ｌｉｆｅ  Ｃｙｃｌｅ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ，Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｌｉｆｅ  Ｃｙｃｌｅ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｌｏｏｓｅ  ａｎｄ  Ｐｏｒｔｉｏｎ  Ｓｎｕｓ（２００５）
【非特許文献５】Ｌｅｆｆｉｎｇｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｏｂａｃｃｏ  Ｆｌａｖｏｒｉｎｇ  ｆｏｒ  Ｓｍｏｋｉｎｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｒ．Ｊ．Ｒｅｙｎｏｌｄｓ  Ｔｏｂａｃｃｏ  Ｃｏｍｐａｎｙ（１９７２）
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、喫煙物品および無煙タバコ製品等の種々のタバコ製品において用いられるタバコ組成物への組み込みに有用なニコチアナ種の植物からの単離成分を含む、ニコチアナ種からの材料（例えば、タバコ由来材料）を提供する。本発明は、ニコチアナ種（例えば、タバコ材料）から成分を単離するための方法、ならびにそれらの成分およびそれらの成分を組み込むタバコ材料を加工するための方法も提供する。
【００１２】
特に、本発明はｏ−メチル化フラボノイド化合物を提供する。驚くべきことに、これらの化合物は、本明細書に記載される量では以前に報告されていなかった。本発明の一態様において、１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドをニコチアナ種の植物から抽出し、単離する方法が提供され、ニコチアナ種の植物材料を受け取ることと、１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを植物材料から溶媒に抽出するのに十分な時間の間および条件下で、植物材料を溶媒と接触させることと、１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含有する溶媒を、抽出された植物材料から分離することと、１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含有する溶媒を精製して、乾燥重量基準で少なくとも約５０重量％の１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含む単離物を提供することと、を含む。
【００１３】
特定の実施形態において、ニコチアナ種の植物材料は、葉の形態であり得る。いくつかの実施形態において、ニコチアナ種の植物材料は、未乾燥の形態で提供される。植物材料の源は異なり得るが、例示的な実施形態において、ニコチアナ種の植物材料は、ガルパオ・コミュン（Ｇａｌｐａｏ  ｃｏｍｍｕｎｓ）植物から得られる。
【００１４】
抽出に使用される溶媒は異なり得る。例えば、特定の実施形態において、溶媒は、アルコール溶媒、例えば、メタノールを含む。いくつかの実施形態において、溶媒は、例えば、絶対形態または非絶対形態で使用されるように、本質的にメタノールからなり得る（例えば、水を組み込む）。特定の実施形態において、溶媒は、アルコール溶媒（例えば、メタノール）と、そこに混和できる微量の１つ以上の溶媒との共溶媒混合物であり得る。
【００１５】
いくつかの実施形態において、１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含有する溶媒は、乾燥重量基準で少なくとも約０．２重量％、少なくとも約０．５重量％、または少なくとも約０．８重量％の１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含む。特定の実施形態において、精製するステップは、少なくとも約７０重量％の１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドまたは少なくとも約９０重量％の１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含む単離物を提供する。
【００１６】
本明細書に記載される方法に従って提供される特定の種類のｏ−メチル化フラボノイドは、例えば、ｏ−メチル化ケンフェロール化合物、ｏ−メチル化ケルセチン化合物、およびｏ−メチル化ルテオリン化合物からなる群から選択され得る。化合物の種類としては、限定されないが、ケルセチンメチルエーテル、ケルセチンジメチルエーテル、ケルセチントリメチルエーテル、ケルセチンテトラメチルエーテル、ケルセチンペンタメチルエーテル、ケンフェロールメチルエーテル、ケンフェロールジメチルエーテル、ケンフェロールトリメチルエーテル、およびケンフェロールテトラメチルエーテルが挙げられる。特定の例示的な化合物としては、限定されないが、ケルセチン３−メチルエーテル、ケルセチン４′−メチルエーテル、およびケルセチン４−メチルエーテルからなる群から選択されるケルセチンメチルエーテル；ケルセチン３，３′，４′−トリメチルエーテル；ならびにケンフェロール３−メチルエーテル、ケンフェロール４′−メチルエーテル、およびケンフェロール５−メチルエーテルからなる群から選択されるケンフェロールメチルエーテルが挙げられる。
【００１７】
この方法は、いくつかの実施形態において、喫煙物品、無煙タバコ製品、またはニコチンおよび／もしくはタバコ材料、または使用時に燃焼されない他の植物材料を含有するエアロゾル生成デバイスにおける使用に適合されたタバコ組成物に単離物を添加することをさらに含み得る。例えば、単離物は、単離物が吸着されるタバコ材料または非タバコ材料の形態で添加され得る。いくつかの実施形態において、タバコ組成物は、喫煙物品における使用に適合され、単離物は、タバコストリップに適用されるケーシング配合物もしくはトップドレッシング配合物の形態で、または再構成タバコ材料の成分の形態で添加される。タバコ組成物に添加される単離物の量は、例えば、喫煙物品中のタバコ材料の総乾燥重量に基づいて、約５ｐｐｍ〜約５重量％であり得る。他の実施形態において、単離物は、薬学的組成物または栄養補助食品の組成物に組み込まれることができる。
【００１８】
本発明の別の態様において、ニコチアナ種の植物からの単離物、またはその成分が提供され、この単離物は、乾燥重量基準で約５０％以上の１つ以上のｏ−メチル化フラボノイド、乾燥重量基準で約７０％以上の１つ以上のｏ−メチルフラボノイド、または乾燥重量基準で約９０％以上の１つ以上のｏ−メチルフラボノイドを含む。特定の実施形態において、喫煙物品、無煙タバコ製品、またはニコチンおよび／もしくはタバコ材料、または使用時に燃焼されない他の植物材料を含有するエアロゾル生成デバイスにおける使用のためのタバコ組成物が提供され、タバコ組成物は、本明細書において提供される単離物を含む。
【００１９】
本発明は、制限なく以下の実施形態を含む。
【００２０】
実施形態１：１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドをニコチアナ種の植物から抽出し、単離する方法であって、ニコチアナ種の植物材料を受け取ることと、１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを植物材料から溶媒に抽出するのに十分な時間の間および条件下で、植物材料を溶媒と接触させることと、１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含有する溶媒を、抽出された植物材料から分離することと、１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含有する溶媒を精製して、乾燥重量基準で少なくとも約５０重量％の１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含む単離物を提供することと、を含む、方法。
【００２１】
実施形態２：ニコチアナ種の植物材料が、葉の形態である、任意の前述または後述の実施形態に記載の方法。
【００２２】
実施形態３：ニコチアナ種の植物材料が、未乾燥の形態で提供される、任意の前述または後述の実施形態に記載の方法。
【００２３】
実施形態４：ニコチアナ種の植物材料が、ガルパオ・コミュン植物から得られる、任意の前述または後述の実施形態に記載の方法。
【００２４】
実施形態５：溶媒が、メタノールを含む、任意の前述または後述の実施形態に記載の方法。
【００２５】
実施形態６：１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含有する溶媒が、乾燥重量基準で少なくとも約０．２重量％の１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含む、任意の前述または後述の実施形態に記載の方法。
【００２６】
実施形態７：１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含有する溶媒が、乾燥重量基準で少なくとも約０．５重量％の１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含む、任意の前述または後述の実施形態に記載の方法。
【００２７】
実施形態８：１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含有する溶媒が、乾燥重量基準で少なくとも約０．８重量％の１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含む、任意の前述または後述の実施形態に記載の方法。
【００２８】
実施形態９：精製するステップが、少なくとも約７０重量％の１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含む単離物を提供する、任意の前述または後述の実施形態に記載の方法。
【００２９】
実施形態１０：精製するステップが、少なくとも約９０重量％の１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含む単離物を提供する、任意の前述または後述の実施形態に記載の方法。
【００３０】
実施形態１１：１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドが、ｏ−メチル化ケンフェロール化合物、ｏ−メチル化ケルセチン化合物、およびｏ−メチル化ルテオリン化合物からなる群から選択される、任意の前述または後述の実施形態に記載の方法。
【００３１】
実施形態１２：１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドが、ケルセチンメチルエーテル、ケルセチンジメチルエーテル、ケルセチントリメチルエーテル、ケルセチンテトラメチルエーテル、ケルセチンペンタメチルエーテル、ケンフェロールメチルエーテル、ケンフェロールジメチルエーテル、ケンフェロールトリメチルエーテル、およびケンフェロールテトラメチルエーテルからなる群から選択される、任意の前述または後述の実施形態に記載の方法。
【００３２】
実施形態１３：ケルセチンメチルエーテルが、ケルセチン３−メチルエーテル、ケルセチン４′−メチルエーテル、ケルセチン４−メチルエーテルからなる群から選択され、ケルセチントリメチルエーテルが、ケルセチン３，３′，４′−トリメチルエーテルであり、ケンフェロールメチルエーテルが、ケンフェロール３−メチルエーテル、ケンフェロール４′−メチルエーテル、およびケンフェロール５−メチルエーテルからなる群から選択される、任意の前述または後述の実施形態に記載の方法。
【００３３】
実施形態１４：単離物を、喫煙物品、無煙タバコ製品、またはニコチンもしくはタバコ材料または使用時に燃焼されない他の植物材料を含有するエアロゾル生成デバイスにおける使用に適合されたタバコ組成物に添加することをさらに含む、任意の前述または後述の実施形態に記載の方法。
【００３４】
実施形態１５：単離物が、該単離物が吸着されるタバコ材料または非タバコ材料の形態で添加される、任意の前述または後述の実施形態に記載の方法。
【００３５】
実施形態１６：タバコ組成物が、喫煙物品における使用に適合され、単離物が、タバコストリップに適用されるケーシング配合物もしくはトップドレッシング配合物の形態で、または再構成タバコ材料の成分の形態で添加される、任意の前述または後述の実施形態に記載の方法。
【００３６】
実施形態１７：タバコ組成物中の単離物の量が、喫煙物品中のタバコ材料の総乾燥重量基準で、約５ｐｐｍ〜約５重量％である、任意の前述または後述の実施形態に記載の方法。
【００３７】
実施形態１８：単離物を薬学的組成物または栄養補助食品の組成物に組み込むことをさらに含む、任意の前述または後述の実施形態に記載の方法。
【００３８】
実施形態１９：乾燥重量基準で約５０％以上の１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含む、ニコチアナ種の植物からの単離物またはその成分。
【００３９】
実施形態２０：単離物が、乾燥重量基準で約７０％以上の１つ以上のｏ−メチルフラボノイドを含む、任意の前述または後述の実施形態に記載の単離物。
【００４０】
実施形態２１：単離物が、乾燥重量基準で約９０％以上の１つ以上のｏ−メチルフラボノイドを含む、任意の前述または後述の実施形態に記載の単離物。
【００４１】
実施形態２２：１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドが、ｏ−メチル化ケンフェロール化合物、ｏ−メチル化ケルセチン化合物、およびｏ−メチル化ルテオリン化合物からなる群から選択される、任意の前述または後述の実施形態に記載の単離物。
【００４２】
実施形態２３：１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドが、ケルセチンメチルエーテル、ケルセチンジメチルエーテル、ケルセチントリメチルエーテル、ケルセチンテトラメチルエーテル、ケルセチンペンタメチルエーテル、ケンフェロールメチルエーテル、ケンフェロールジメチルエーテル、ケンフェロールトリメチルエーテル、およびケンフェロールテトラメチルエーテルからなる群から選択される、任意の前述または後述の実施形態に記載の単離物。
【００４３】
実施形態２４：ケルセチンメチルエーテルが、ケルセチン３−メチルエーテル、ケルセチン４′−メチルエーテル、ケルセチン４−メチルエーテルからなる群から選択され、ケルセチントリメチルエーテルが、ケルセチン３，３′，４′−トリメチルエーテルであり、ケンフェロールメチルエーテルが、ケンフェロール３−メチルエーテル、ケンフェロール４′−メチルエーテル、およびケンフェロール５−メチルエーテルからなる群から選択される、任意の前述または後述の実施形態に記載の単離物。
【００４４】
実施形態２５：喫煙物品、無煙タバコ製品、またはニコチン、タバコ材料、または使用時に燃焼されない他の植物材料を含有するエアロゾル生成デバイスにおける使用のためのタバコ組成物であって、任意の前述または後述の実施形態に記載の単離物を含む、タバコ組成物。
【００４５】
本開示のこれらおよび他の特徴、態様、および利点は、下で簡単に説明される添付の図面と一緒に、以下の詳細な説明を読むことから明らかとなるであろう。本発明は、そのような特徴または要素が、本明細書における特定の実施形態の説明において明示的に組み合わされているかどうかにかかわらず、上記実施形態のうちの２つ、３つ、４つ、またはそれ以上の任意の組み合わせ、ならびに本開示に記載される任意の２つ、３つ、４つ、またはそれ以上の特徴の組み合わせを含む。本開示は、開示される発明の任意の分離可能な特徴または要素が、その様々な態様および実施形態のうちのいずれかにおいて、文脈上別途明確な指示がない限り、組み合わせ可能であることが意図されると見なされるべきであるように、総合的に読まれることが意図される。本発明の他の態様および利点は、以下から明らかとなるであろう。
【００４６】
本発明の実施形態の理解を提供するために、必ずしも原寸で描かれていない添付の図面が参照され、参照番号は、本発明の例示的な実施形態の成分を指す。図面は単なる例示であり、本発明を制限すると見なされてはならない。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】紙巻タバコの形態を有する喫煙物品の展開斜視図であり、紙巻タバコの喫煙可能な材料、包装材料成分、およびフィルター要素を示す。
【図２】製品の幅にわたって取られた無煙タバコ製品の実施形態の断面図であり、本発明の無煙タバコ組成物で充填された外部パウチを示す。
【発明を実施するための形態】
【００４８】
ここで本発明は、以降でより完全に説明される。本発明は、しかしながら、多くの異なる形態で具体化されてよく、本明細書に記載される実施形態に限定されると見なされるべきではなく、むしろこれらの実施形態は、本開示が包括的かつ完全となり、本発明の範囲を当業者に完全に伝えるように提供される。本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈上別途明確な指示がない限り、複数の指示対象を含む。「乾燥重量％」または「乾燥重量基準」に関する言及は、乾燥原料（すなわち、水を除く全ての原料）に基づく重量を指す。
【００４９】
本発明は、タバコ材料から抽出されたｏ−メチル化フラボノイド、タバコ材料からｏ−メチル化フラボノイドを抽出するためのプロセス、およびタバコ材料から抽出されたｏ−メチル化フラボノイドを組み込む製品を提供する。有利に、ｏ−メチル化フラボノイドは、著しい量のタバコ材料から抽出され得る。本発明に従って、ｏ−メチル化フラボノイドは、一般に、その特定の特徴を強化するために、タバコ材料または非タバコ材料に適用され得る抽出物の形態で提供される。特定の実施形態において、ｏ−メチル化フラボノイドは、それらの既知の健康効果のために（例えば、栄養補助食品または薬学的製品において）用いられる。
【００５０】
フラボノイドは、一般に、フェニルプロパノイド経路に由来する二次代謝物である、２つまたは３つのフェニル環を有するケトン含有化合物であると理解されている。一般に、フラボノイドは、フラボノール、フラボン、アントシアニジン、イソフラボノイド（イソフラボンおよびイソフラボノール）、ならびにネオフラボノイドとして分類され得る。一般にフラボノイドであると見なされる他の化合物群は、フラボノン、アントシアニジン、カテキン、ジヒドロフラボノール、およびカルコンを含む。天然に存在するフラボノイドは、例えば、グリコシドとして（糖部分に結合される）、またはアグリコンとして（糖部分に結合されない）存在し得る。いくつかの実施形態において、それらは、Ｏ−グリコシド（酸原子に結合された糖部分を有する）またはＣ−グリコシド（炭素原子に結合された糖部分を有する）であり得、他に断りのない限り、本明細書におけるフラボノイドに関する言及は、グリコシド（Ｏ−グリコシドおよびＣ−グリコシド）およびアグリコン形態の両方を包含することが意図される。
【００５１】
８，０００超の異なるフラボノイドが、様々な植物源から単離され、特定されたことが報告された。特定のニコチアナ種における前述の例示的なフラボノイドとしては、限定されないが、ルチン、アピゲニン、ケルセチン、およびイソケルセチンが挙げられる。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｋａｕｓｈｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．（２０１０），３（５）：１１４４−１１４５、Ｆａｔｈｉａｚａｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．（２００６）３：２２２−２２７、Ｗｏｌｌｅｎｗｅｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｚ．Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃｈ（２００５）６０ｃ：６６１−６７０、およびＲｏｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００３）６２：５２７−５３６を参照されたい。
【００５２】
Ｏ−メチル化フラボノイドは、ヒドロキシル基のうちの１つ以上が、メトキシ（Ｏ−メチル）基と置き換えられるフラボノイドである。Ｏ−メチル化フラボノイドは、一般に、フラボノイドに対するＯ−メチルトランスフェラーゼ酵素の作用によって形成される。極わずかな量のｏ−メチル化フラボノイドは、タバコ材料中に存在することが以前に見出された。例えば、全てが参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｏｄｇｍａｎ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ  ｏｆ  Ｔｏｂａｃｃｏ  ａｎｄ  Ｔｏｂａｃｃｏ  Ｓｍｏｋｅ（２００９），ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，５２４頁、Ｒｏｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００３）６２：５２７−５３６、Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｓｏ，Ｔ．Ｃ．，Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，ａｎｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｔｏｂａｃｃｏ  Ｐｌａｎｔ（１９９０），Ｉｄｅａｌｓ，Ｉｎｃ．６００頁、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（１９６０）２５（１１）：２０６３−２０６４、およびＦｒａｎｋｅｎｂｕｒｇ，Ｗ．Ｇ．；Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔ，Ｍａｒｃｈ  Ｉｓｓｕｅ（１９４９）、３１５−３３０頁を参照されたい。実際に、一般に植物界において、これらの化合物は、非常に少量で見出される（典型的に、見出される場合は約０．０１重量％未満）。
【００５３】
本発明の特定の実施形態に従って、タバコ材料から有利に抽出および単離されるｏ−メチル化フラボノイドは、フラボノールである（例えば、ｏ−メチル化ケルセチン、ｏ−メチル化ケンフェロール、ならびにその類似体および異性体）。抽出および単離され得る他のｏ−メチル化フラボノイドとしては、ｏ−メチル化フラバノノール（例えば、ｏ−メチル化ジヒドロケンフェロール）およびｏ−メチル化フラボン（例えば、ｏ−メチル化ルテオリン）が挙げられる。特定の実施形態において、相当量のｏ−メチル化フラボノイドを、タバコ植物から（例えば、タバコ植物またはその部分からの抽出物の形態で）得ることができる。
【００５４】
本開示の製品は、何らかの形態のニコチアナ種の植物を組み込み、最も好ましくは、それらの組成物または製品は、何らかの形態のタバコを組み込む。ニコチアナ種からの植物の選択は異なり得、特に、１つまたは複数のタバコの種類は異なってよい。用いることができるタバコとしては、熱風乾燥またはバージニア（例えば、Ｋ３２６）、バーレー、天日乾燥（例えば、カテリニ（Ｋａｔｅｒｉｎｉ）、プレリップ（Ｐｒｅｌｉｐ）、コモティニ（Ｋｏｍｏｔｉｎｉ）、キサンチ（Ｘａｎｔｈｉ）、およびヤンボル（Ｙａｍｂｏｌ）タバコを含む、インディアン・カルヌールおよびオリエンタルタバコ）、メリーランド、暗色、暗色火力乾燥、暗色空気乾燥（例えば、パサンダ（Ｐａｓｓａｎｄａ）、クバノ（Ｃｕｂａｎｏ）、ジャティン（Ｊａｔｉｎ）、およびベズキ（Ｂｅｚｕｋｉ）タバコ）、明色空気乾燥（例えば、ノースウィスコンシンおよびガルパオタバコ）、インディアン空気乾燥、赤色ロシアおよびルスティカ（Ｒｕｓｔｉｃａ）タバコ、ならびに他の様々な珍しいまたは特産タバコが挙げられる。様々な種類のタバコ、栽培活動、および収穫活動に関する説明は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｔｏｂａｃｃｏ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（編）（１９９９）に記載されている。ニコチアナ種は、遺伝子組み換えまたは交配技法を使用して導出され得る（例えば、タバコ植物を遺伝的に操作または交配して、特定の成分、特徴、または属性の産生を増減させるか、または他に変化させることができる）。本発明における使用に好適なニコチアナ種の種類に関する追加情報は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｄｕｂｅらの米国特許出願公開第２０１２／０１９２８８０号に見出され得る。タバコ植物は、温室、栽培箱、または野外で栽培され得るか、または水耕栽培され得る。
【００５５】
ニコチアナ種は、そこに存在する様々な化合物の含有量に対して選択され得る。例えば、植物は、それらの植物が、そこから単離されることが所望される化合物のうちの１つ以上を比較的高い量で産生することに基づいて選択され得る。特定の実施形態において、ニコチアナ種の植物（例えば、ガルパオ・コミュンタバコ）は、それらの豊富な葉面化合物のために特異的に栽培される。いくつかの実施形態において、ガルパオ・コミュンおよび「粘性の」葉を有する他の種類の植物（例えば、オリエンタル種）が特に好ましい。特定の実施形態において、ニコチアナ・グルトニサ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ  ｇｌｕｔｏｎｉｓａ）が使用されてよい。
【００５６】
本発明に従って使用されるニコチアナ種の植物の１つまたは複数の部分は異なり得る。例えば、植物の事実上全て（例えば、全植物）を収穫し、そのようなものとして用いることができる。代替として、植物の様々な部分または小片を収穫するか、または収穫後にさらなる使用のために分離することができる。例えば、葉、茎、幹、根、ラミナ、花、種子、および様々な部分、ならびにそれらの組み合わせを、さらなる使用または処理のために単離することができる。本発明の植物材料は、したがって、ニコチアナ種の植物の全植物または任意の部分を含んでよい。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｏｌｅｍａｎ，ＩＩＩらの米国特許出願公開第２０１１／０１７４３２３号、およびＤｕｂｅらの同第２０１２／０１９２８８０号に記載されるタバコ植物の部分を参照されたい。
【００５７】
ニコチアナ種の植物は、未成熟形態または成熟形態のいずれかで用いることができ、参照により本明細書に組み込まれる、Ｄｕｂｅらの第２０１２／０１９２８８０号に記載されるように、未乾燥形態または乾燥形態のいずれかで使用され得る。タバコ材料は、冷蔵、冷凍、乾燥（例えば、凍結乾燥もしくは噴霧乾燥）、照射、黄変、加熱、調理（例えば、焙煎、揚げ、もしくは沸騰）、発酵、漂白等の様々な処理プロセスに供され得るか、またはそうでなければ後の使用のための貯蔵もしくは処理に供される。例示的な加工技法は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｒｉｎｋｌｅｙらの米国特許出願公開第２００９／００２５７３９号、およびＣｏｌｅｍａｎ，ＩＩＩらの同第２０１１／０１７４３２３号に記載されている。
【００５８】
ニコチアナ種の植物の少なくとも一部分は、参照により本明細書に組み込まれる、２０１２年４月１１日に出願されたＭａｒｓｈａｌｌらの米国特許出願第１３／４４４，２７２号、および２０１２年７月１９日に出願されたＭｏｌｄｏｖｅａｎｕの米国特許出願第１３／５５３，２２２号に記載されるように、収穫前または後に、酵素および／またはプロバイオティクスで処理され得る。
【００５９】
ニコチアナ種の植物の収穫された１つまたは複数の部分を、物理的に加工することができる。植物の１つまたは複数の部分は、個別の部分または小片に分離され得る（例えば、根を幹から取り除くことができ、茎を幹から取り除くことができ、葉を幹および／または茎から取り除くことができ、花びらを花の残りの部分から取り除くことができる）。植物の収穫された１つまたは複数の部分は、部分または小片にさらに分割され得る（例えば、フィラー型小片、顆粒、粒子、または微粉末として特徴付けられ得る小片または部分に刻まれる、切断される、粉砕される、微粉化される、製粉される、またはすり潰される）。植物の収穫された１つまたは複数の部分は、（例えば、圧縮されるか、またはロール処理に供されることによって）外力または圧力に供され得る。そのような加工条件を実行するとき、植物の収穫された１つまたは複数の部分は、その天然の含水量（例えば、その収穫直後の含水量）、植物の収穫された１つまたは複数の部分に水分を添加することによって達成される含水量、または植物の収穫された１つまたは複数の部分の乾燥から生じる含水量に近似する含水量を有することができる。そのようなものとして、植物の収穫された１つまたは複数の部分は、タバコ製品の成分等として使用され得るか、またはさらに加工され得る。
【００６０】
特定の実施形態において、ニコチアナ種の植物の１つまたは複数の部分は、その中に含有される１つ以上の成分を、より有用な（例えば、より濃縮された）形態で提供するように処理される。ニコチアナ植物またはその部分からの様々な化合物または化合物の混合物は、本明細書に提供される方法によって単離され得る。本明細書において使用される場合、「単離された成分」または「植物単離物」は、ニコチアナ種の植物またはその部分から分離された化合物または化合物の複合混合物である。単離された成分は、単一の化合物、同様の化合物の同種混合物（例えば、香味化合物の異性体）、または異なる化合物の異種混合物（例えば、好ましくは望ましい感覚属性を有する、異なる種類の様々な化合物の複合混合物）であり得る。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｏｌｅｍａｎ，ＩＩＩらの米国特許出願公開第２０１１／０１７４３２３号、Ｃｏｌｅｍａｎ，ＩＩＩらの同第２０１１／０２５９３５３号、Ｄｕｂｅらの同第２０１２／０１９２８８０号、Ｄｕｂｅらの同第２０１２／０１９２８８２号、およびＢｙｒｄ，Ｊｒ．らの同第２０１２／０２１１０１６号における単離されたタバコ成分および単離のための技法に関する説明を参照されたい。
【００６１】
所望の成分または所望の成分の混合物は、様々な手段によってニコチアナ種の植物から単離され得る。典型的な分離プロセスは、溶媒抽出（例えば、極性溶媒、有機溶媒、または超臨界流体を使用する）、クロマトグラフィー（例えば、分取液体クロマトグラフィー）、清澄化、蒸留、濾過（例えば、超濾過）、再結晶化、および／または溶媒−溶媒区画）等の１つ以上のプロセスステップを含み得る。いくつかの実施形態において、ニコチアナ種の植物または部分は、例えば、特定の化合物を、より効率的な分離に使用可能な所望の化合物にするように前処理される。いくつかの実施形態において、所望の化合物を単離および／または精製するために、複数の方法が使用される。
【００６２】
いくつかの実施形態において、その単離された化合物または混合物は、それらの化合物が化学変換を受けるような条件に供され得る。例えば、ニコチアナ種の植物またはその部分から得られるタバコ材料は、化学変換を引き起こすように処理され得るか、または他の原料と混合され得る。いくつかの実施形態において、そこから得られる抽出物、または単離された化合物（複数可）（単離物）は、化学変換を引き起こすように処理され得るか、または他の原料と混合され得る。タバコ材料、抽出物、または単離された化合物の化学変換または修飾は、そのタバコ材料、抽出物、または単離された化合物（複数可）の特定の化学的および物理的特性（例えば、その感覚属性）の変化をもたらし得る。例示的な化学修飾プロセスは、酸／塩基反応、加水分解、酸化、加熱、および／または酵素処理によって実行されることができ、そのようなものとして、化合物は、様々な分解反応を受け得る。例示的な化学変換技法は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｏｌｅｍａｎ，ＩＩＩらの米国特許出願公開第２０１１／０１７４３２３号、およびＣｏｌｅｍａｎ，ＩＩＩらの同第２０１１／０２５９３５３号に記載されている。
【００６３】
特定の実施形態において、タバコ材料、抽出物、または単離物は、分解産生物を提供するように処理される。分解産生物は、本発明に従って抽出および／または単離された化合物から産生される任意の化合物である。分解産生物は、そのような化合物から天然に形成され得るか、または加速された分解プロセスによって（例えば、化合物の分解を加速させるための熱および／または化学物質の添加によって）産生されることができる。これらの化合物は、例えば、酸化（例えば、Ｈ２Ｏ２または他の酸化剤を用いる処理を通じて）および／または加水分解反応によって分解され得る。
【００６４】
いくつかの実施形態において、タバコ材料、抽出物、または単離物は、直接使用されるが、例えば、材料を低温殺菌するか、またはそうでなければ材料を化学的に改変するために、タバコ材料、抽出物、または単離物を熱処理することが望ましい場合がある。この熱処理は、ニコチアナ種の植物から１つ以上の成分を単離するための本明細書に記載されるプロセスのうちのいずれかの前または後に行われ得る。例えば、タバコ材料は、タバコ材料、水、およびリジン、グリシン、ヒスチジン、アラニン、メチオニン、グルタミン酸、アスパラギン酸、プロリン、フェニルアラニン、バリン、アルギニン、二価および三価カチオン、アスパラギナーゼ、サッカリド、フェノール化合物、還元剤、遊離チオール基を有する化合物、酸化剤（例えば、過酸化水素）、酸化触媒、植物抽出物、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される添加剤を混合して、湿性タバコ混合物を形成すること、および湿性タバコ混合物を少なくとも約６０℃の温度で加熱して、熱処理されたタバコ混合物を形成することによって熱加工され得る。一実施形態において、処理されたタバコ抽出物は、水、ＮａＯＨ、および添加剤（例えば、リジン）の存在下、約８８℃で約６０分間熱処理される。そのような熱処理は、アスパラギンとタバコ材料中の還元糖との反応から生じるアクリルアミド産生を防ぐのを助けることができ、ある程度の低温殺菌を提供することができる。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｈｅｎらの米国特許公開第２０１０／０３００４６３号を参照されたい。熱処理されたタバコ単離物が、本発明の無煙タバコ製品において使用される特定の実施形態において、製品は、非常に低いアクリルアミド含有量を特徴とし得る。例えば、いくつかの実施形態において、無煙タバコ製品は、約５００ｐｐｂ（ｎｇ／ｇ）未満、約４００ｐｐｂ未満、約３００ｐｐｂ未満、約２００ｐｐｂ未満、または約１００ｐｐｂ未満のアクリルアミド含有量を特徴とする。
【００６５】
ニコチアナ種の植物からの１つ以上の成分の単離のための本明細書に開示される１つ以上の方法に従って、そのようにして得られる任意の液体材料を、必要に応じてさらに加工することができる。例えば、溶媒（例えば、水）の少なくとも一部分を除去することによって、液体の溶解または分散成分を濃縮するように適合された方法で、液体を加工することができる。濃縮ステップは、抽出された水性液体から水を除去し、増加した濃度の様々な化合物を有する粉末を提供することができる。
【００６６】
タバコ材料を、本明細書に記載される他の単離ステップの代わりに、またはそれに加えて使用され得る、さらなる処理ステップに供することもできる。例えば、いくつかの実施形態において、単離物は、例えば、全てが参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙｙａらの米国特許公開第２００７／０１８６９４０号、Ｒｅｅｓらの同第２０１１／００４１８５９号、およびＪｏｎｓｓｏｎらの同第２０１１／０１５９１６０号、ならびに２０１１年５月１９日に出願されたＢｙｒｄらの米国特許出願第１３／１１１，３３０号に記載されるインプリントポリマーまたは非インプリントポリマーと接触するようになる。分子インプリントまたは非インプリントポリマーによる処理を使用して、Ｎ′−ニトロソルニコチン（ＮＮＮ）、（４−メチルニトロサミノ）−１−（３−ピリジル）−１−ブタノン（ＮＮＫ）、Ｎ′−ニトロソアナタビン（ＮＡＴ）、およびＮ′−ニトロソアナバシン（ＮＡＢ）を含むタバコ特異的ニトロサミン（ＴＳＮＡ）；ベンズ［ａ］アントラセン、ベンゾ［ａ］ピレン、ベンゾ［ｂ］フルオランテン、ベンゾ［ｋ］フルオランテン、クリセン、ジベンズ［ａ，ｈ］アントラセン、およびインデノ［１，２，３−ｃｄ］ピレンを含むポリ芳香族炭化水素（ＰＡＨ）；または他のホフマン検体等の抽出物の特定の成分を除去することができる。
【００６７】
特定の実施形態において、溶媒抽出を使用して、ニコチアナ種の植物から所望の成分または混合物を単離する。例示的な抽出および分離溶媒または担体としては、水、アルコール（例えば、メタノールもしくはエタノール）炭化水素（例えば、ヘプタンおよびヘキサン）、ジエチルエーテル、塩化メチレン、超臨界二酸化炭素、およびそれらの組み合わせが挙げられる。特定の実施形態において、１つ以上のアルコール、例えば、メタノールを含む溶媒が使用される。いくつかの実施形態において、溶媒は、例えば、絶対または非絶対形態で使用されるように（例えば、水を組み込む）、本質的にメタノールからなり得る。溶媒は、特定の実施形態において、アルコール溶媒（例えば、メタノール）と、そこに混和できる少量の１つ以上の溶媒との共溶媒混合物でもあり得る。ニコチアナ種から成分を抽出するために有用な例示的な技法は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｆａｇｇの米国特許第５，０６５，７７５号、ならびにＣｏｌｅｍａｎ，ＩＩＩらの出願公開第２０１１／０２５９３５３号、およびＢｙｒｄ，Ｊｒ．らの同第２０１２／０２１１０１６号において説明または参照される。
【００６８】
抽出プロセスの条件は異なり得る。いくつかの実施形態において、ニコチアナ種の植物は、溶媒と複合されて（例えば、懸濁液またはスラリーの形態の）材料を形成する。特定の実施形態において、湿性材料を形成するように添加される溶媒の量は、材料の総重量に基づいて、少なくとも約５０重量％、または少なくとも約６０重量％、または少なくとも約７０重量％であり得る。場合によっては、溶媒の量は、少なくとも約８０重量％または少なくとも約９０重量％として記載され得る。
【００６９】
様々な試薬を抽出溶媒に添加することができる。いくつかの実施形態において、抽出を促進するように、加工助剤が添加される。加工助剤は、所望の成分（複数可）の抽出溶媒への抽出を促進する任意の薬剤である。例えば、好適な加工助剤としては、限定されないが、鉱物酸および酵素が挙げられる。界面活性剤および共溶媒を含むが、これらに限定されない様々な他の添加剤を、抽出プロセスにおいて使用することができる。
【００７０】
抽出を達成するために必要な時間の量は、抽出が行われる温度および圧力に部分的に依存する。例えば、いくつかの実施形態において、材料を昇温に加熱すること、および／または材料を加圧することは、抽出の速度を増加させる。抽出プロセスの時間範囲は、典型的に、少なくとも約３０分（例えば、少なくとも約１時間または少なくとも約２時間）であり、典型的に、約２４時間未満（例えば、約１２時間未満または約８時間未満）であるが、本発明から逸脱することなく他の期間を使用することができる。いくつかの実施形態において、複数の抽出を行って、そこから追加の化合物を抽出することができる。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｈａｖｋｉｎ−Ｆｒｅｎｋｅｌの米国特許出願公開第２００８／０２５４１４９号を参照されたい。
【００７１】
特定の実施形態において、抽出物は、相当量のｏ−メチル化フラボノイドを含む。ｏ−メチル化フラボノール、ｏ−メチル化フラボン、ｏ−メチル化アントシアニジン、ｏ−メチル化イソフラボノイド（イソフラボンおよびイソフラボノール）、およびｏ−メチル化ネオフラボノイドのいくつかの混合物を含み得る。ｏ−メチル化フラボノイドは、グリコシドとして、またはアグリコンとして存在し得る。いくつかの実施形態において、本発明に従う抽出物中のｏ−メチル化フラボノイドの量は、乾燥重量基準で抽出化合物の少なくとも約０．１％である（例えば、乾燥重量基準で抽出化合物の約０．１〜約１．５％）。特定の実施形態において、抽出物は、乾燥重量基準で約０．３％以上、約０．５％以上、約０．８％以上、または約１％以上のｏ−メチル化フラボノイドを含むことができる（例えば、約１％）。特定の実施形態において、ｏ−メチル化フラボノイド含有抽出物は、メタノール抽出物であるが、他の溶媒（例えば、他のアルコール溶媒）を使用することができる。
【００７２】
いくつかの実施形態において、複数の連続分離プロセスを用いて、試料を所望の方法で精製および精錬することができる。例えば、溶媒抽出物または蒸留物は、いくつかの実施形態において、例えば、相対量の特定の望ましい化合物、例えば、特定の風味豊かな、または香りの良い化合物を増加させることによって、抽出物または蒸留物の化学組成物を変化させる追加の分離ステップに供され得る。いくつかの実施形態において、抽出物または蒸留物は、濾過によって処理され得る。別の例として、上記プロセスのうちの１つ（例えば、溶媒抽出または蒸留）は、１つ以上のクロマトグラフ法と組み合わされてよい。いくつかの実施形態において、試料は、フラッシュクロマトグラフィーによって単離される化合物（複数可）と同様の条件下で溶出することが知られている１つ以上の化合物を除去するように最初に処理される。他の実施形態において、試料は溶解され、クロマトグラフ分離に直接供され得る。
【００７３】
いくつかの実施形態において、分取液体クロマトグラフィーを使用して、関心の特定の化合物をタバコ材料（例えば、タバコ抽出物もしくは蒸留物）から単離および／または精製する。いくつかの実施形態において、関心の１つまたは複数の化合物は、標準の溶出時間に基づいて、分取液体クロマトグラフィーを使用して単離される。様々な自動商用分取ＬＣシステムは、Ｗａｔｅｒｓ、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、およびＢｉｏ−Ｒａｄを含む製造者から入手可能である。使用される分取ＬＣシステムの特定のパラメータは、所望のレベルの分解能を達成するために、当業者によって変更され得る。例えば、溶媒は、関心の化合物（複数可）を溶解するのに十分な任意の溶媒または溶媒の混合物であってよい。この溶媒は、例えば、水、メタノール、エタノール、酢酸エチル、ジエチルエーテル、塩化メチレン、クロロホルム、石油エーテル、および／またはヘキサンであってよい。このシステムは、無勾配または勾配溶媒システムを用いて操作され得る（すなわち、時間の関数として２つ以上の溶媒の比率を変更する）。いくつかの実施形態において、溶媒システムは、関心の化合物と混合物中に存在する他の化合物との間に最良の分解能を提供するように選択され得る。このシステムの流量は、例えば、約１０ｍＬ／分から約１００ｍＬ／分まで変更され得る（例えば、約３６ｍＬ／分）。
【００７４】
いくつかの実施形態において、フラッシュクロマトグラフィーを使用して、関心の特定の化合物をタバコ抽出物から単離および／または精製する。フラッシュクロマトグラフィーシステムは、当該技術分野において既知であり、例示的なシステムは、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｔｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４２：２９２３−２９２５（１９７８）およびＡｎｄｒｅｗｓの米国特許第４，５９１，４４２号において論じられている。様々な自動商用フラッシュクロマトグラフィーシステムは、Ｂｉｏｔａｇｅ、Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ、Ｇｒａｃｅ  Ｄａｖｉｓｏｎ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、およびＢｕｃｈｉを含む製造者から入手可能である。カラムが典型的に、比較的大きな粒径を有し（例えば、約３０〜４０μｍ）、より多量の試料（およびより濃縮された試料）を収容することができ、１回の注入当たりより多くの関心の化合物（複数可）が単離されるのを許すため、フラッシュクロマトグラフィーは、かなり大量の化合物を提供することが望ましい場合がある。
【００７５】
使用されるフラッシュクロマトグラフィーシステムの特定のパラメータは、所望のレベルの分解能を達成するために、当業者によって変更され得る。例えば、溶媒は、関心の化合物（複数可）を溶解するのに十分な任意の溶媒または溶媒の混合物であってよい。この溶媒は、例えば、メタノール、エタノール、酢酸エチル、ジエチルエーテル、塩化メチレン、クロロホルム、石油エーテル、および／またはヘキサンであってよい。このシステムは、無勾配または勾配溶媒システムを用いて操作され得る（すなわち、時間の関数として２つ以上の溶媒の比率を変更する）。いくつかの実施形態において、溶媒システムは、関心の化合物と混合物中に存在する他の化合物との間に最良の分解能を提供するように選択され得る。このシステムの流量は、例えば、約２０ｍＬ／分から約２００ｍＬ／分まで変更され得る（例えば、約１５０ｍＬ／分）。
【００７６】
フラッシュクロマトグラフィーは、十分な純度レベルで関心の化合物（複数可）を提供する場合としない場合がある。特定の実施形態において、関心の化合物（複数可）に対応する分画は、関心の化合物（複数可）を十分な純度レベルで含む単離物を付与するように回収、複合、および濃縮され得る（すなわち、関心の化合物（複数可）が、十分な重量％の単離物中に存在する場合）。例えば、本発明の単離物は、関心の化合物（複数可）を、約７５重量％超、約８０重量％超、約８５重量％超、約９０重量％超、約９５重量％超、約９８重量％超、または約９９重量％超の量で含むことができる。いくつかの実施形態において、フラッシュクロマトグラフィーから得られた分画を、分取液体クロマトグラフィーを使用してさらに分解することができる。
【００７７】
溶媒を蒸発させる熱処理、逆浸透膜処理、噴霧乾燥、または凍結乾燥等の溶媒除去の様々な方法が用いられ得る。一実施形態において、濃縮プロセスは、半密閉容器中の抽出液体を加熱して、水の一部分を蒸発させることを包含することができる。液体が加熱される温度および圧力は異なり得る。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｄｕｂｅらの米国特許公開第２０１２／０１５２２６５号に記載される溶媒除去技法を参照されたい。
【００７８】
本発明に従って得られるタバコ単離物の形態は異なり得る。典型的に、単離物は、固体、液体、または半固体、もしくはゲル形態である。配合物は、型枠、絶対形、または純形で使用され得る。タバコ単離物の固体形態は、噴霧乾燥形態および凍結乾燥形態を含み得る。タバコ単離物の液体形態は、水性または有機溶媒担体に含有された配合物を含むことができる。
【００７９】
タバコ単離物は、様々な量の１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含むことができる。特定の実施形態において、タバコ単離物は、単一のｏ−メチル化フラボノイドを含有する。他の実施形態において、タバコ単離物は、ｏ−メチル化フラボノイドの混合物を含有する。例えば、特定の実施形態において、ケルセチン、ケンフェロール、および／またはルテオリンのｏ−メチル化類似体は、本明細書に記載される抽出物および単離物中に存在する。
【００８０】
本明細書に記載される方法に従って抽出され、本明細書に記載される抽出物および単離物中に存在するｏ−メチル化フラボノイドは異なり得る。少なくとも１つのＯ−メチル基は、フラボノイド上に存在する。しかしながら、少なくとも１つのＯ−メチル基の位置は異なり得る。ｏ−メチル化部分の数も異なり得る。例えば、特定の実施形態において、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つのＯ−メチル部分は、フラボノイド上に存在する。本発明に従って得ることができる特定の例示的なフラボノイドとしては、限定されないが、ケルセチンメチルエーテル（例えば、ケルセチン３−メチルエーテル、ケルセチン４′−メチルエーテル、ケルセチン４−メチルエーテル）、ケルセチンジメチルエーテル、ケルセチントリメチルエーテル（例えば、ケルセチン３，３′，４′−トリメチルエーテル）、ケルセチンテトラメチルエーテル、ケルセチンペンタメチルエーテル、ケンフェロールメチルエーテル（例えば、ケンフェロール３−メチルエーテル、ケンフェロール４′−メチルエーテル、ケンフェロール５−メチルエーテル）、ケンフェロールジメチルエーテル、ケンフェロールトリメチルエーテル、およびケンフェロールテトラメチルエーテルが挙げられる。
【００８１】
本発明に従って調製された単離物は、異なるレベルの純度を有し得る。例えば、特定の実施形態において、単一のｏ−メチル化フラボノイドを含む単離物は、乾燥重量基準で少なくとも約５０重量％の純度、少なくとも約６０重量％の純度、少なくとも約７０重量％の純度、少なくとも約８０重量％の純度、少なくとも約９０重量％の純度、または少なくとも約９５重量％の純度で提供され得る。いくつかの実施形態において、これらの純度レベルは、上で具体的に列挙されるものを含む、任意の特定のｏ−メチル化フラボノイドに適用することが意図される。いくつかの実施形態において、単離物は、複数のｏ−メチル化フラボノイドを含んでよく、この単離物は、少なくとも約５０重量％、少なくとも約６０重量％、少なくとも約７０重量％、少なくとも約８０重量％、少なくとも約９０重量％、または少なくとも約９５重量％の複数のｏ−メチルフラボノイドを含有する。言い換えれば、本発明に従って調製された単離物は、主に１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドを含むことができる。再度、いくつかの実施形態におけるこれらの純度は、上の段落に列挙されるものを含む、任意のｏ−メチル化フラボノイドに適用する。例示的な単離物は、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１０％未満、または約５％未満の不純物（すなわち、ｏ−メチル化フラボノイド以外の化合物）を含み得る。
【００８２】
本発明のプロセスに従って生成されたタバコ単離物は、様々な組成物の材料として有用である。そのようなタバコ単離物の使用は、一般にタバコ組成物の文脈において説明されるが、そのような配合物は、多くの他の種類の組成物において適用可能であり得ることに留意されたい。
【００８３】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるタバコ抽出物および単離物は、タバコ組成物に組み込まれ、特にタバコ組成物は、喫煙物品または無煙タバコ製品に組み込まれる。本発明に従って、タバコ製品は、本発明に従って１つ以上のタバコ由来の単離物と複合されたタバコを組み込む。つまり、タバコ製品の一部分は、本発明に従って調製された何らかの形態のタバコ単離物配合物からなり得る。いくつかの実施形態において、タバコ抽出物または単離物は、タバコ材料の上に吸着される。特定の実施形態において、本発明の抽出物または単離物は、非タバコ材料に添加され得る。
【００８４】
非タバコ材料は、ニコチアナ種の植物以外の供給源から得られる任意の材料であり得る。例えば、本発明の抽出物または単離物が吸着され得る、可能な非タバコ材料としては、限定されないが、野菜、果物、または他の繊維性植物材料からのパルプ（例えば、加工されたサトウキビパルプまたはセルロース材料）、水抽出処理の結果として水溶性成分の除去後に得られるパルプ、またはその組み合わせが挙げられる。「吸着」という用語は、本明細書において使用される場合、吸収および吸着を含む任意の既知のプロセスによる、水性タバコ抽出物の基質（すなわち、タバコ材料または非タバコ材料）への組み込みを指すことに留意されたい。
【００８５】
本明細書に記載されるタバコ単離物のタバコ組成物への添加は、タバコ単離物の性質およびタバコ組成物の種類に応じて、タバコ組成物を種々の方法で強化することができる。例示的な単離物は、タバコ製品に風味および／または香りを提供するのに役立つことができる（例えば、組成物は、タバコ組成物またはそこから導出される煙の感覚特徴を改変することができる）。他の単離物は、タバコ組成物内で結合剤またはフィラー機能等の機能的な目的を果たすことができる。特定の単離物は、タバコ製品の１つ以上の伝統的な成分の代わりとして役立ち得る。例えば、特定の実施形態において、本発明の抽出物および単離物は、オリエンタルタバコを連想させる風味および香りを提供すると説明され得る。
【００８６】
本発明のタバコ単離物が添加されるタバコ製品は異なり得、タバコまたはその何らかの成分を製品の使用者に送達するように構成または適合された任意の製品を含んでよい。例示的なタバコ製品としては、喫煙物品（例えば、紙巻タバコ）、無煙タバコ製品、およびニコチンおよび／もしくはタバコ材料、または使用時に燃焼されない他の植物材料を含有するエアロゾル生成デバイスが挙げられる。本発明のタバコ単離物のタバコ製品への組み込みは、例えば、単離物をタバコまたは他の植物材料に吸収させること、またはそうでなければ単離物を担体材料と関連付けることによる（上でさらに詳細に説明される）、配合物の担体としてタバコ材料または非タバコ植物材料の使用を含み得る。本発明の配合物のための担体として役立ち得るタバコの種類は異なり得、様々な乾燥タバコ材料（例えば、熱風乾燥もしくは空気乾燥タバコ）またはその部分（例えば、タバコラミナもしくはタバコ茎）を含む、本明細書において論じられるタバコの種類のうちのいずれかを含むことができる。配合物が添加されるタバコ材料の物理的構成も異なり得、タバコ材料を、刻まれた形態もしくは微粒子の形態で、またはシート（例えば、再構成タバコシート）の形態で、または全葉形態で含むことができる。
【００８７】
したがって、本明細書に提供されるタバコ単離物は、いくつかの実施形態において、喫煙物品の製造における組成物として使用され得る。例えば、本発明に従って調製された配合物は、ケーシング材料と混合され得、ケーシング原料として、またはトップドレッシングとしてタバコに適用され得る。なおもさらに本発明の配合物は、紙巻タバコの製造プロセス中、紙巻タバコのフィルターに（例えば、フィルタープラグ、プラグラップ、もしくはチッピング紙に）組み込まれ得るか、または紙巻タバコ包装紙の、好ましくは内面に組み込まれ得る。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｄｕｂｅらの米国特許公開第２０１２／０１９２８８０号に記載される喫煙物品において使用されるタバコ単離物に関連する説明および参照文献を参照されたい。代表的なタバコブレンド、非タバコ成分、およびそこから製造される代表的な紙巻タバコも、上記のＤｕｂｅらの参照文献に記載されている。
【００８８】
図１を参照すると、紙巻タバコの形態であり、本発明の配合物を含有することができる喫煙物品の特定の代表的な成分を有する喫煙物品１０が示される。紙巻タバコ１０は、外接する包装材料１６に含有される喫煙可能なフィラー材料（例えば、約０．３〜約１．０ｇのタバコ材料等の喫煙可能なフィラー材料）の装入物またはロールの略円筒状ロッド１２を含む。ロッド１２は、従来「タバコロッド」と称される。タバコロッド１２の末端は、喫煙可能なフィラー材料を露出するように開いている。紙巻タバコ１０は、包装材料１６に適用される１つの任意の帯２２（例えば、デンプン、エチルセルロース、またはアルギン酸ナトリウム等のフィルム形成剤を含むプリントコーティング）を有するとして示され、その帯は、紙巻タバコの長手方向軸に対して垂直方向に紙巻タバコに外接している。この帯２２は、包装材料の内面（例えば、喫煙可能なフィラー材料に面する）またはあまり好ましくないが、包装材料の外面にプリントされ得る。
【００８９】
タバコロッド１２の一端には、点火端１８があり、口端２０には、フィルター要素２６が位置付けられる。フィルター要素２６は、フィルター要素およびタバコロッドが末端間関係で軸方向に整列し、好ましくは互いに隣接するように、タバコロッド１２の一端に隣接して位置付けられる。フィルター要素２６は、略円筒形状を有してよく、その直径は、タバコロッドの直径に本質的に等しい場合がある。フィルター要素２６の末端は、そこを通る空気および煙の通過を許す。
【００９０】
通気または空気希釈された喫煙物品は、それぞれがチッピング材料およびプラグラップを通じて伸長する、一連の穿孔３０等の任意の空気希釈手段とともに提供され得る。任意の穿孔３０は、レーザー穿孔技法等の当業者に知られている様々な技法によって作製され得る。代替として、いわゆるオフライン空気希釈技法を（例えば、多孔質紙プラグラップおよび事前に穿孔されたチッピング紙の使用を通じて）使用することができる。本発明の配合物は、限定されないが、タバコ装入物の成分として、包装紙の成分として（例えば、紙に含まれるか、または紙の内部もしくは外部にコーティングされる）、接着剤として、フィルター要素成分として、喫煙物品の成分のうちのいずれかに、および／または喫煙物品の任意の領域に位置するカプセル内に組み込まれることができる。
【００９１】
本発明の配合物は、いわゆる「電子タバコ」を含む、使用時に燃焼されることを意図しないニコチンおよび／またはタバコ材料（もしくはそのいくらかの部分または成分）を含有するエアロゾル生成デバイスに組み込むこともできる。これらの種類の喫煙物品には、燃えてエアロゾルを提供する、および／またはエアロゾル形成材料を加熱する燃焼可能な燃料源を用いるものがある。エアロゾル形成組成物を加熱するために、バッテリー駆動の加熱要素を用いるものもある。風味のある蒸気、目に見えるエアロゾル、または風味のある蒸気と目に見えるエアロゾルとの混合物を生成する種類の喫煙物品について説明する例示的な参照文献としては、参照により本明細書に組み込まれる、Ｄｕｂｅらの米国特許公開第２０１２／０１９２８８０号に記載されるものが挙げられる。
【００９２】
本発明の配合物は、粉末湿性嗅ぎタバコ（例えば、スヌース）；粉末乾燥嗅ぎタバコ；噛みタバコ；ペレットタバコ小片；押出もしくは形成されたタバコストリップ、小片、ロッド、円筒、もしくはスティック；微細化砕粉；粉末小片および成分の細かく分割もしくは粉砕された凝集体；フレーク状小片；成形タバコ小片；ガム；テープ状フィルムのロール：易水溶性もしくは水分散性フィルムもしくはストリップ；溶融性組成物；糖衣錠；トローチ；または外殻および内部領域を有するカプセル状材料等の無煙タバコ製品に組み込まれ得る。様々な種類の無煙タバコ製品は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｄｕｂｅらの米国特許公開第２０１２／０１５２２６５号において説明または参照されている。
【００９３】
図２を参照すると、本発明の配合物を含むタバコ製品の代表的なスヌースの種類が示される。特に図２は、無煙タバコ組成物４４を含有する水透過性外部パウチ４２を有する無煙タバコ製品４０を示す。このタバコ製品の成分のうちのいずれかは、本明細書に記載されるタバコ単離物を含み得る（例えば、パウチ裏地の内部もしくは外部、またはそこに含有される無煙タバコ組成物の一部分）。
【００９４】
本発明の配合物の使用から利益を享受することができる多くの例示的な無煙タバコ組成物は、本発明のタバコ単離物の担体として役立ち得る、刻まれた、または微粒子のタバコ材料を含む。本発明の無煙タバコ組成物は、水溶性ポリマー結合剤材料および任意に、使用時に口腔内でゆっくり分解する溶解性組成物を提供する他の原料を含むこともできる。特定の実施形態において、無煙タバコ組成物は、口腔内で溶融する（単なる溶解とは対照的に）溶融性組成物を提供する脂質成分、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｃａｎｔｒｅｌｌらの米国特許公開第２０１２／００３７１７５号に記載される組成物を含むことができる。
【００９５】
ある特定の無煙タバコ製品の実施形態において、本発明の組成物は、ジャガイモ、ビーツ（例えば、甜菜）、穀物、豆、リンゴ等から選択される植物材料等の非タバコ植物材料に添加される。非タバコ植物材料は、加工形態で使用され得る。特定の好ましい実施形態において、非タバコ植物材料は、抽出形態で使用されることができ、そのようなものとして、特定の溶媒可溶性成分の少なくとも一部分は、その材料から除去される。非タバコ抽出植物材料は、典型的に高度に抽出され、相当量の植物材料の水溶性部分が除去されたことを意味する。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｅｅｓｏｎらの米国特許公開第２０１１／０２４７６４０号を参照されたい。
【００９６】
さらなる原料は、本発明に従う無煙タバコ組成物と混合され得るか、またはそうでなければそこに組み込まれ得る。原料は人工であり得るか、またはハーブもしくは生物学的供給源から得ることができるか、またはそれらに由来し得る。例示的な種類の原料としては、塩（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウム、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム等）、天然甘味料（例えば、果糖、スクロース、グルコース、マルトース、バニリン、エチルバニリングルコシド、マンノース、ガラクトース、ラクトース等）、人工甘味料（例えば、スクラロース、サッカリン、アスパルテーム、アセサルフェームＫ、ネオテーム等）、有機および無機フィラー（例えば、穀物、加工穀物、膨化穀物、マルトデキストリン、デキストロース、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、コーンスターチ、ラクトース、マンニトール、キシリトール、ソルビトール、微細化セルロース等）、結合剤（例えば、ポビドン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および他の修飾されたセルロース型の結合剤、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、デンプンベースの結合剤、アラビアガム、レシチン等）、ｐＨ調整剤もしくは緩衝剤（例えば、金属水酸化物、好ましくはアルカリ金属水酸化物、例えば、水酸化ナトリウムおよび水酸化カリウム、ならびに他のアルカリ金属緩衝剤、例えば、金属炭酸塩、好ましくは炭酸カリウムもしくは炭酸ナトリウム、または金属重炭酸塩、例えば、重炭酸ナトリウム等）、着色剤（例えば、カラメル着色料および二酸化チタン等を含む染料および色素）、保湿剤（例えば、グリセリン、プロピレングリコール等）、特定の酸／塩基複合物、口腔ケア添加剤等の泡立ち材料（例えば、タイム油、ユーカリ油、および亜鉛）、保存剤（例えば、ソルビン酸カリウム等）、シロップ（例えば、ハチミツ、高果糖コーンシロップ等）、分解助剤（例えば、微晶質セルロース、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、デンプングリコール酸ナトリウム、前糊化コーンスターチ等）、香味剤および香味混合物、抗酸化剤、ならびにそれらの混合物が挙げられる。例示的な封入添加剤は、例えば、参照により本明細書に既に組み込まれているＡｔｃｈｌｅｙの国際公開第２０１０／１３２４４４号に記載される。参照により本明細書に組み込まれる、Ｈｕｎｔらの米国特許公開第２０１２／００５５４９４号、およびＢｙｒｄらの同第２０１２／０１９９１４５号に記載される無煙タバコ原料も参照されたい。
【００９７】
タバコ組成物またはタバコ製品に組み込まれる本発明のタバコ単離物の量は、単離物の所望の機能、単離物の化学的構成、および単離物が添加されるタバコ組成物の種類に依存し得る。タバコ組成物に添加されるタバコ単離物の量は異なり得るが、典型的に、組成物が添加されるタバコ組成物の総乾燥重量に基づいて、約５０重量％を超えない。例えば、タバコ組成物に添加されるタバコ単離物の量は、タバコ組成物の総乾燥重量に基づいて、約０．２５重量％〜約２５重量％、または約１重量％〜約１０重量％の範囲内であり得る。
【００９８】
本出願の方法に従って提供される単離されたｏ−メチルフラボノイドは、タバコ製品の分野以外の用途を見出すこともできる。例えば、特定のフラボノイドは、植物の生態に対するそれらの潜在的な利益が認められる。特定のフラボノイドは、紫外線に対する保護、病原性微生物および他の害虫からの防御、花粉の繁殖力および発芽の促進、細菌性結節遺伝子の活性化、および植物成長および酵素活性の調節において利益を提供することができる。
【００９９】
フラボノイドは、一般に、ヒトおよび動物に対するそれらの健康上の利益が認められ、医薬品および／または栄養補助食品の成分として組み込まれ得る（食用原料を含有する製品を包含すると理解され、食事を補助することが意図される。これらの製品は、丸薬、カプセル、錠剤、粉末、または液体形態での摂取が意図され、従来の食品としての使用を意味しない）。フラボノイドは、果物および野菜の栄養価に寄与する。フラボノイドは、フリーラジカルおよび活性酸素種に対する抗酸化活性を提供することが報告され、エストロゲン作用および抗癌作用を示した（例えば、抗増殖、分化およびアポトーシスの促進）。他の報告は、抗炎症作用、抗潰瘍作用、抗糖尿病作用、抗アレルギー作用、抗ウイルス作用、抗菌作用、抗真菌作用、抗不安作用、抗腫瘍作用、抗血栓作用、および抗動脈硬化作用について記述している。フラボノイドは、肝疾患、白内障、および心血管疾患において、保護的役割を果たすことがさらに示唆された。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉｅｎｃｉａ（２０１１）１（１）：２５−４１、Ｃｕｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ（２００８）１１２（１０）：２２４１−２２４８、およびＴａｐａｓ．，Ａ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．（２００８），７（９月）：１０８９−１０９９、ならびにそこに引用される参照文献を参照されたい。
【０１００】
Ｏ−メチル化フラボノイドは、そのような利益を示すことができ、これらの目的で使用され得る。実際に、非メチル化類似体と比較して、特定のｏ−メチル化フラボノイドは、優れた代謝安定性、腸吸収、および輸送を示すことが見出された。参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｅｒｎｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ（２０１１）１６（２）：１４１８−１４２５、Ｗｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ＆  Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ（２００６），３４：１７８６−１７９２、Ｓｐｅｎｃｅｒ，Ｊ．Ｎｕｔｒ．（２００３），１３３（１０）：３２５５５−３２６１５を参照されたい。これらの利点に留意して、ｏ−メチル化フラボノイドに対する様々な合成経路が提案された（すなわち、天然フラボノイドの１つ以上のヒドロキシ基をメチル化することによる）。本発明は、１つ以上の天然に存在するｏ−メチル化フラボノイドの比較的純粋な単離物を直接提供する。
【０１０１】
本発明に従って、１つ以上のｏ−メチル化フラボノイドのタバコ由来単離物は、当該技術分野において既知の任意の手段によって、栄養補助食品または薬学的配合物に組み込まれ得る。単離物は、配合物に直接導入され得るか、または配合物に組み込む前に、別の種類の材料（例えば、セルロース等の植物材料）に吸着され得る。ｏ−メチル化フラボノイド単離物は、一般に、いくらかの所望の効果を誘発するのに十分な量で提供される。いくつかの実施形態において、１つ以上の追加の生物学的に活性な化合物は、同じ薬学的組成物または栄養補助食品の組成物に組み込まれる。典型的に、本明細書に記載される単離物に加えて、薬学的組成物および栄養補助食品の組成物は、様々な薬学的に許容される賦形剤および添加剤を含む（例えば、糖、代替糖、デンプン、フィラー、塩、香味剤、緩衝剤、保存剤等）。薬学的産生における様々な考慮事項の概要については、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ′ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版；Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，１９９０）を参照されたい。
実験
【０１０２】
本発明の態様は、以下の実施例によってより完全に説明され、本発明の特定の態様を説明するように記載されるが、その限定として見なされるものではない。
【０１０３】
未乾燥のガルパオ・コミュンタバコ葉のメタノール抽出物を得る。粗質量分析は、タバコ中の既知の化合物に対応しないいくつかの非常に激しい質量ピークを示す（２９９．０６、３１３．０７、３１５．０５、３２７．０５、３２９．０７、３４１．１１、および３４３．１０の質量において）。抽出物の構成をさらに評価するために、０．１グラムの抽出物を、１０ｍＬのＭｅＯＨを含有するフラスコに添加する。軌道攪拌器上２５０ｒｐｍで３０分間、混合物を攪拌する。次に、分析のために、ＭｅＯＨ抽出物を、Ｗｈａｔｍａｎ０．４５μｍフィルターシリンジに通してＬＣバイアルに濾過する。
【０１０４】
Ｔｈｅｒｍｏ  ＬＴＱ−Ｏｒｂｉｔｒａｐ高解像度質量分析計に連結されたＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ上、負エレクトロスプレーイオン化モードで、ＭｅＯＨ抽出物中の未特定の化合物の定性分析を行う。スペクトル中の小さい単離質量幅を選択すること、およびその質量幅をクロマトグラフ全体に適用することによって、強化された抽出イオンクロマトグラムを生成する（例えば、質量ピーク３２９．０６９７の場合、抽出イオンクロマトグラムに選択された幅は、３２９．０６９０〜３２９．０７１０であった）。この試料の場合、３つのクロマティックピークが観察される。理論によって制限されることを意図しないが、３つのピークは、３つの異なる異性体または異なるメトキシ化の位置に対応すると考えられる。
【０１０５】
下部構造を確認するために、未知の質量のＭＳ２およびＭＳ３断片化パターンを、３−Ｏ−メチルケルセチン、イソラムネチン（ケルセチン類似体）、ラムネチン（ケルセチン類似体）、およびケンフェリド（ケンフェロール類似体）の高純度標準試料（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから入手）のＭＳ２およびＭＳ３断片化パターンと比較する。ＭＳ２実験において、標準ならびに抽出化合物は、メチル基および中性電荷に対応する親質量からの質量損失を示す。このパターンは、Ｏ−メチル化フラボノイドの予測される性質と一致する。ＭＳ３実験の結果は、同様の断片化パターンを同様に明らかにする。全ての場合において、メトキシ化フラボノイドに対する未知の質量ピークおよび予測される実験式は、７ｐｐｍ以内であり、予測される実験式が高い確実性で一致することを示す。
【０１０６】
抽出物中の各化合物の濃度を推定するために、抽出されたイオンクロマトグラムから本実験において示された領域数を、オリエンタルタバコ試料中のスクロースエステルに対する既知の領域数と比較する。既知の実行シーケンス中に生成されたルチン外部較正曲線に基づいて、既知の領域数は、葉の乾燥重量の０．１〜０．２％の範囲内の濃度に対応する。そのようなオリエンタルタバコ葉は、ガルパオ・コミュンよりも葉面化学において約４〜５倍低く濃縮されることが知られており、結果として抽出物（ｏ−メチル化フラボノイド）中の化合物の濃度は、乾燥重量基準で約１％以上となる。
【図１】
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【図２】
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