(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物、またはその医薬上許容される塩、溶媒和物又は水和物。
【化１】
0006509445.tif 000051
I
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、Ｆ、−Ｏ−Ｃ1-3アルキルおよびＯＨからなる群から選択され、および
Ｒ2は、Ｈである、または
Ｒ2は、−ＣＨ2−であり、およびＲ1は、−Ｏ−であり、一緒に−ＣＨ2−Ｏ−架橋を形成し、ならびに
Ｒ3は、そのＮ9窒素を介して結合したプリン、アデニン、グアニン、キサンチン、ヒポキサンチンからなる群から選択されるプリン核酸塩基である）
【請求項２】
式Ｉａで表される請求項１記載の化合物、またはその医薬上許容される塩、溶媒和物又は水和物。
【化２】
0006509445.tif 000052
（式中、Ｒ1およびＲ2は、請求項１に記載されるとおり定義される）
【請求項３】
式Ｉｂで表される請求項１記載の化合物、またはその医薬上許容される塩、溶媒和物又は水和物。
【化３】
0006509445.tif 000053
（式中、Ｒ1およびＲ2は、請求項１に記載されるとおり定義される）
【請求項４】
環状（イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド−（２’→５’）−ホスホロチオエート−アデノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート）
【化４】
0006509445.tif 000054
またはその医薬上許容される塩、溶媒和物又は水和物。
【請求項５】
環状（イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド−（２’→５’）−ホスホロチオエート−２’−Ｆ−２’−デオキシアデノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート
【化５】
0006509445.tif 000055
またはその医薬上許容される塩、溶媒和物又は水和物。
【請求項６】
環状（イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド−（２’→５’）−ホスホロチオエート−ＬＮＡ−アデニン−（３’→５’）−ホスホロチオエート）
【化６】
0006509445.tif 000056
またはその医薬上許容される塩、溶媒和物又は水和物。
【請求項７】
環状（イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド−（２’→５’）−ホスホロチオエート−プリン−β−Ｄリボフラノシド−（３’→５’）−ホスホロチオエート）
【化７】
0006509445.tif 000057
またはその医薬上許容される塩、溶媒和物又は水和物。
【請求項８】
請求項４，５，６又は７記載の化合物のナトリウム塩。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物の（Ｓｐ，Ｓｐ）、（Ｒｐ，Ｒｐ）、（Ｓｐ，Ｒｐ）または（Ｒｐ，Ｓｐ）立体異性体。
【請求項１０】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物の（Ｒｐ，Ｒｐ）立体異性体。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の１つまたは複数の化合物を含み、１つまたは複数の不活性担体および／もしくは希釈剤を一緒に含んでもよい、医薬組成物。
【請求項１２】
炎症、アレルギー性疾患、自己免疫性疾患、感染性疾患またはがんから選択される疾患または状態を処置するための、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物を含むワクチン。
【請求項１４】
ワクチンアジュバントを製造するための、請求項１から１０のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１５】
医薬を製造するための、請求項１から１０のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１６】
さらに、１つまたは複数の追加の治療剤を含む、請求項１１又は１２記載の医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１から１０のいずれか１項に記載の１つの化合物を含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記医薬が、炎症、アレルギー性疾患、自己免疫性疾患、感染性疾患およびがんから選択される疾患または状態を処置するためのものである、請求項１５に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、非プリン核酸塩基イミダゾピリダジノン、１つのプリン核酸塩基および１つの非標準の２’，５’ホスホロチオエート部分を特徴とし、サイトカイン産生を誘導する、医薬上許容されるその塩を含む式Ｉの新規環状ジヌクレオチド化合物（「ＣＤＮ」）に関する。本発明は、さらに本発明の化合物を含有する医薬組成物および組合せに、およびＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子の刺激因子）に関連する、またはＳＴＩＮＧによりモジュレートされる疾患の処置のためのそれらの医療用途に関する。特に、本発明の医薬組成物は、炎症、アレルギー性および自己免疫性疾患、感染性疾患、がんの治療のために、またワクチンアジュバントとして適切である。
【背景技術】
【０００２】
免疫系の役割は、病原体および悪性細胞から体を保護することである。しかし、ウイルスおよびがん細胞は、免疫系を逃れる方法を見出す。したがって、免疫療法の目的は、抗原特異的免疫応答を開始させるか、または病原体侵入者またはがん細胞に対する、免疫系の特定の細胞型で既存の応答を再活性化することである。
免疫系は、２つの部門、自然および適応免疫系におおよそ分類することができる数種の特化された系統からなる。首尾よくいった免疫反応のために、両方の部門からの系統は、協調して作用しなければならない。自然免疫系の主要な役割は、適合系と異なり、抗原特異的および持続性でない病原体または悪性細胞に対する迅速な免疫応答を備えることである。病原体またはトランスフォーム細胞の直接死滅に加えて、自然免疫系も、活性化し、続いて適応免疫系を導く。樹状細胞などの抗原提示細胞が、リンパ系組織中でＴ細胞に対するペプチド−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）の複合体の形態での抗原を捕捉し、提示する。特定のサイトカインの分泌とともにこの抗原提示は、抗原特異的エフェクターＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞の活性化および分化に導く。Ｉ型ＩＦＮの欠如が、ウイルス感染または腫瘍細胞に対するＴ細胞依存性免疫応答の減少を生じた場合、抗原提示細胞および他の細胞型によるＩ型インターフェロン（ＩＦＮ）産生は、Ｔ細胞の活性化における主要イベントと考えられる(Zitvogel et al, Nature Reviews Immunology 15, 405 - 414, 2015)。他方では、がん療法の間のＩ型ＩＦＮ特性の存在は、腫瘍浸潤性Ｔ細胞の数の増大および潜在的に好ましい臨床成績と関連している(Sistigu et al, Nature Medicine 20, 1301−1309, 2014)。
【０００３】
マウスでの最近の研究は、腫瘍微小環境でのＩ型ＩＦＮの効率の良い分泌およびがん細胞に対するＴ細胞依存性免疫応答の誘発が、インターフェロン遺伝子のアダプタータンパク質刺激因子（ＳＴＩＮＧ；Ｔｍｅｍ１７３、ＭＰＹＳ、ＭＩＴＡ、ＥＲＩＳとしても公知である）の存在によることを示した(Woo et al, Immunity 41, 5, 830−842, 2014; Corrales et al, Cell Reports 11, 1018−1030, 2015; Deng et al, Immunity 41, 5, 843−852, 2014)。Ｉ型ＩＦＮの存在の重要性は、ＳＴＩＮＧの欠失が、腫瘍微小環境でのＩ型ＩＦＮレベル減少を生じる事実、および数種の腫瘍マウスモデルでの抗腫瘍効果の減少を生じる事実によって強調された。他方では、ＳＴＩＮＧの特異的活性化が、がん細胞に対する改善された抗原特異的Ｔ細胞免疫応答を生じた。
【０００４】
ＳＴＩＮＧは、核酸センサーのファミリーに属し、細胞質ゾルＤＮＡシグナル伝達のためのアダプターである。その基本状態では、ＳＴＩＮＧは、ＥＲで固定されたそのＮ末端ドメインおよび細胞質ゾルに存在するＣ末端ドメインを有する二量体として存在する。タンパク質環状ＧＭＰ−ＡＭＰシンターゼ（ｃＧＡＳ）により発生される環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）は、ＳＴＩＮＧの天然リガンドである(Ablasser et al, Nature 498, 380−384, 2013)。ＳＴＩＮＧに対するＣＤＮの結合は、ＴＡＮＫ結合キナーゼ（ＴＢＫ１）およびインターフェロン調節因子３（ＩＲＦ３）の結合および活性化、ならびにＥＲから核周囲のエンドソームへの再局在化を可能にする立体構造変化を誘導する(Liu et al, Science 347, Issue 6227, 2630-1−2630-14, 2015)。ＴＢＫ１による転写因子ＩＲＦ３およびＮＦ−ｋＢのリン酸化は、Ｉ型ＩＦＮを含めた複数のサイトカインの発現を生じる。
ウイルス感染およびがん療法を含めた数種の悪性腫瘍におけるＩ型ＩＦＮの重要性を考慮すると、ＳＴＩＮＧの特異的活性化を可能にする戦略は、療法的に重要なものである。
【０００５】
国際公開第ＷＯ２０１４／１８９８０５号には、２つのプリン核酸塩基および少なくとも１つの非標準の２’，５’ホスホジエステルまたはホスホロチオエート部分を特徴とし、ＳＴＩＮＧ依存性サイトカイン産生を誘導する環状ジヌクレオチド化合物が記載されている。
国際公開第ＷＯ２０１５／１８５５６５号には、２つのプリン核酸塩基、リボーステトラヒドロフラン環の代わりに１つまたは２つのシクロペンタン、および１つの非標準の２’，５’ホスホジエステル部分を特徴とし、ＳＴＩＮＧをモジュレートする、環状ジヌクレオチド化合物が記載されている。
国際公開第ＷＯ２０１６／１２０３０５号には、２つのプリン核酸塩基、その２’−ＯＨが２’−Ｆで置換されている１つのリボース部分、および１つの非標準の２’，５’ホスホジエステル部分を特徴とし、ＳＴＩＮＧをモジュレートする環状ジヌクレオチド化合物が記載されている。
【０００６】
米国特許出願公開第２０１４／０３２９８８９号、国際公開第ＷＯ２０１４／０９９８２４号、国際公開第ＷＯ２０１５／０１７６５２号、Cell 154, 748−762 (2013), およびMolecular Cell 51, 226−235 (2013)には、２つのプリン核酸塩基、１つの標準の３’，５’および１つの非標準の２’，５’ホスホジエステル部分を特徴とする環状ジヌクレオチド２’３’−ｃＧＡＭＰ（環状［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］）が記載されている。非標準的に連結された２’３’−ｃＧＡＭＰは、３’３’−ｃＧＡＭＰまたは対称性細菌性ｃ−ジ−ＧＭＰより高い親和性を有するヒトＳＴＩＮＧに結合し、Ｉ型インターフェロン産生を誘導する。
国際公開第ＷＯ２０１４／０９３９３６号には、２つのプリン核酸塩基および２つの標準の３’，５’ホスホジエステルまたはホスホロチオエート部分を特徴とし、ＳＴＩＮＧ依存性サイトカイン産生を誘導する環状ジヌクレオチド化合物が記載されている。
【０００７】
米国特許第７，７０９，４５８号には、２つのプリン核酸塩基および２つの標準の３’，５’ホスホジエステル部分を特徴とし、がん細胞増殖を阻害するか、またはがん細胞アポトーシス、特に対称性細菌性ＣＤＮｃ−ジ−ＧＭＰを増大するために使用できる環状ジヌクレオチド化合物が記載されている。
米国特許第７，５９２，３２６号には、２つのプリン核酸塩基および２つの標準の３’，５’ホスホジエステル部分、特に対称性細菌性ＣＤＮｃ−ジ−ＧＭＰを特徴とする免疫賦活性環状ジヌクレオチド化合物が記載されている。
国際公開第ＷＯ２０１６／０９６１７４号および国際公開第ＷＯ２０１６／１４５１０２号には、２つのプリン核酸塩基および２つの標準の３’，５’ホスホジエステルまたはホスホロチオエート部分を特徴とし、ＳＴＩＮＧ依存性サイトカイン産生を誘導する環状ジヌクレオチド化合物が記載されている。
Bioorg.Med.Chem.Lett.18 (2008) 5631−5634には、対称性細菌性ＣＤＮｃ−ジ−ＧＭＰの免疫賦活性モノおよびビスホスホロチオエート類似体が記載されている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
第一の態様では、本発明は、式Ｉ
【化１】
0006509445.tif 000002
I
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、Ｆ、−Ｏ−Ｃ1-3−アルキルおよびＯＨからなる群から選択され、および
Ｒ2は、Ｈである、または
Ｒ2は、−ＣＨ2−である、およびＲ1は、−Ｏ−であり、一緒に、−ＣＨ2−Ｏ−架橋（「ロックト核酸」；「ＬＮＡ」）を形成する、ならびに
Ｒ3は、そのＮ9窒素を介して結合したプリン、アデニン、グアニン、キサンチン、ヒポキサンチンからなる群から選択されるプリン核酸塩基である）
の環状ジヌクレオチド化合物、
アイソフォーム、互変異性体、立体異性体、代謝産物、プロドラッグ、溶媒和物、水和物およびその塩、特に無機または有機塩基を有する生理学的に許容されるその塩、もしくはその組合せ
を提供する。
【０００９】
別の態様では、本発明は、インビトロおよび／またはインビボでＳＴＩＮＧ依存様式でのサイトカイン産生を誘導し、治療で使用するための、すなわち医薬として使用するための適切な薬理学的および薬物動態学的特性を保有する、医薬上許容されるその塩を含めた式Ｉの新規化合物を提供する。
別の態様では、本発明は、ＳＴＩＮＧに関連するか、またはＳＴＩＮＧによりモジュレートされる疾患または状態の処置で使用するための、医薬上許容されるその塩を含めた式Ｉの新規化合物を提供する。
【００１０】
別の態様では、本発明は、炎症、アレルギー性または自己免疫性疾患、例えば、アレルギー性鼻炎または喘息の処置のための、感染性疾患の、またはがんの処置のための、またはワクチンアジュバントとして使用するための、式Ｉの新規化合物または医薬上許容されるその塩を提供する。
別の態様では、本発明は、対象に、治療上有効な量の式Ｉの化合物または医薬上許容されるその塩を投与することを含む、対象におけるＳＴＩＮＧに関連するか、またはＳＴＩＮＧによりモジュレートされる疾患または状態の処置の方法を提供する。
【００１１】
別の態様では、本発明は、患者に、治療上有効な量の式Ｉの化合物または医薬上許容されるその塩を投与することを含む、それを必要とする患者における感染性疾患の、またはがんの処置のための炎症、アレルギー性または自己免疫性疾患、例えば、アレルギー性鼻炎または喘息の処置の方法を提供する。
別の態様では、本発明は、式Ｉの化合物、または医薬上許容されるその塩、および１つまたは複数の医薬上許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
別の態様では、本発明は、ＳＴＩＮＧのモジュレーションが有益である疾患または状態の処置で使用するための、またはＳＴＩＮＧに関連した、または、ＳＴＩＮＧによりモジュレートされた疾患または状態の処置で使用するための医薬の製造における、医薬上許容されるその塩を含めた式Ｉの化合物の使用を提供する。
【００１２】
別の態様では、本発明は、炎症、アレルギー性または自己免疫性疾患、例えば、アレルギー性鼻炎または喘息の処置における使用のための、感染性疾患の、またはがんの処置のための、またはワクチンアジュバントとして使用するための、医薬の製造における式Ｉの化合物、または医薬上許容されるその塩の使用を提供する。
別の態様では、本発明は、式Ｉの化合物、または医薬上許容されるその塩、および少なくとも１つの別の治療剤を含む組合せを提供する。
本発明の別の目的は、式Ｉの化合物、または医薬上許容されるその塩、ならびに少なくとも１つの別の治療剤および１つまたは複数の医薬上許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供することである。
別の態様では、本発明は、治療で使用するための式Ｉの化合物または医薬上許容されるその塩、および少なくとも１つの別の治療剤を含む組合せを提供する。
【００１３】
別の態様では、本発明は、ＳＴＩＮＧのモジュレーションが、有益である疾患または状態の処置で使用するための、またはＳＴＩＮＧに関連した、または、ＳＴＩＮＧによりモジュレートされた疾患または状態の処置で使用するための、式Ｉの化合物または医薬上許容されるその塩、および少なくとも１つの別の治療剤を含む組合せを提供する。
別の態様では、本発明は、炎症、アレルギー性または自己免疫性疾患、感染性疾患およびがんの処置における使用のための、式Ｉの化合物、または医薬上許容されるその塩および少なくとも１つの別の治療剤を含む組合せを提供する
別の態様では、本発明は、患者に、式Ｉの化合物または医薬上許容されるその塩、および少なくとも１つの別の治療剤を含む、治療上有効な量の組合せを投与することを含む、ＳＴＩＮＧのモジュレーションが有益である疾患または状態の、または患者におけるＳＴＩＮＧに関連した、または、ＳＴＩＮＧによりモジュレートされる疾患または状態の処置の方法を提供する。
【００１４】
別の態様では、本発明は、患者に、式Ｉの化合物、または医薬上許容されるその塩および少なくとも１つの別の治療剤を含む、治療上有効な量の組合せを投与することを含む、患者における炎症、アレルギー性もしくは自己免疫性疾患、感染性疾患またはがんの処置の方法を提供する。
別の態様では、本発明は、式Ｉの化合物または医薬上許容されるその塩を含む、ワクチンアジュバントを提供する。
別の態様では、本発明は、抗原もしくは抗原組成物および式Ｉの化合物または医薬上許容されるその塩を含む免疫原性組成物を提供する。
別の態様では、本発明は、疾患の処置または予防で使用するための抗原もしくは抗原組成物および式Ｉの化合物または医薬上許容されるその塩を含む免疫原性組成物を提供する。
別の態様では、本発明は、疾患の処置または予防のための、抗原または抗原組成物を含む免疫原性組成物の製造のための、式Ｉの化合物または医薬上許容されるその塩の使用を提供する。
【００１５】
別の態様では、本発明は、疾患に罹患しているかまたは疑いのあるヒト対象に、抗原もしくは抗原組成物および式Ｉの化合物または医薬上許容されるその塩を含む免疫原性組成物を投与することを含む、疾患を処置または予防する方法を提供する。
別の態様では、本発明は、疾患の処置または予防で使用するための、抗原もしくは抗原組成物および式Ｉの化合物または医薬上許容されるその塩を含むワクチン組成物を提供する。
別の態様では、本発明は、疾患の処置または予防のために、抗原もしくは抗原組成物を含むワクチン組成物の製造のための、式Ｉの化合物または医薬上許容されるその塩の使用を提供する。
【００１６】
別の態様では、本発明は、疾患に罹患しているかまたは疑いのあるヒト対象に、抗原または抗原組成物および式Ｉの化合物、または医薬上許容されるその塩を含むワクチン組成物を投与することを含む、疾患を処置または予防する方法を提供する。
本発明の別の目的は、以前、および以下の説明により、例により当業者に明らかになる。
本発明の化合物は、ヒトＳＴＩＮＧに対する良好な結合親和性、すなわち様々なヒトＳＴＩＮＧ対立遺伝子を担持する細胞における良好な細胞活性、細胞アッセイにおける良好な安定性、および良好な薬物動態学的（ＰＫ）特性などの数種の利点を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
別段の明言がない限り、Ｒ1およびＲ2およびＲ3は、上記および以降のとおり定義される。本発明による化合物の個別の置換基のいくつかの好ましい意味は、以降に示される。これらの定義の任意かつ各々は、互いに組み合わせられうる。
Ｒ1およびＲ2：
第一の実施形態では、Ｒ1およびＲ2は、先に明記されるとおり定義される。
別の実施形態では、Ｒ1およびＲ2は両方ともＨである。
さらに別の実施形態では、Ｒ1はＦであり、Ｒ2はＨである。
さらに別の実施形態では、Ｒ1は、−ＯＨであり、Ｒ2はＨである。
さらに別の実施形態では、Ｒ1は−ＯＣＨ3であり、Ｒ2はＨである。
さらに別の実施態様では、Ｒ1は−Ｏ−であり、Ｒ2はＣＨ2−であり、一緒に−Ｏ−ＣＨ2−架橋を形成する。
【００１８】
Ｒ3：
第一の実施形態では、Ｒ3は、先に明記されるとおり定義される。
別の実施形態では、Ｒ3は、そのＮ9窒素を介して結合したプリンである。
別の実施形態では、Ｒ3は、そのＮ9窒素を介して結合したアデニンである。
さらに別の実施形態では、Ｒ3は、そのＮ9窒素を介して結合したグアニンである。
さらに別の実施形態では、Ｒ3は、そのＮ9窒素を介して結合したキサンチンである。
さらに別の実施形態では、Ｒ3は、そのＮ9窒素を介して結合したヒポキサンチンである。
以下の表は、式Ｉの化合物の別の特定の実施形態Ｉ−１〜Ｉ−１６を表す：
【００１９】
【表１】
0006509445.tif 000003
【００２０】
本発明による化合物の好ましい構造は、式Ｉａ
【化２】
0006509445.tif 000004
Ia
（式中、Ｒ1およびＲ2ならびにその実施形態は、先に記載されるとおり定義される）
で示される。
【００２１】
本発明による化合物の好ましい構造は、式Ｉｂ
【化３】
0006509445.tif 000005
Ib
（式中、Ｒ1およびＲ2ならびにその実施形態は、先に記載されるとおり定義される）
で示される。
【００２２】
本発明による以下の化合物
【化４】
0006509445.tif 000006
0006509445.tif 000007
、それらの互変異性体、および立体異性体、その塩、特に無機または有機塩基を有する生理学的に許容されるその塩、それらの溶媒和物または水和物は、特に好ましい。
【００２３】
本発明の化合物は、ＲｐまたはＳｐ配置のいずれかを有する不斉リン原子を保有する。一般式Ｉ、Ｉａ、Ｉｂ、Ｉａ．１、Ｉａ．２、Ｉａ．３およびＩｂ．１の化合物の全ての立体異性体は、実質的に純粋な形態で、またはその混合物としてのいずれかで、目的の発明により網羅される。実質的に純粋な（Ｒｐ，Ｒｐ）、（Ｒｐ，Ｓｐ）、（Ｓｐ，Ｒｐ）または（Ｓｐ，Ｓｐ）立体異性体として、一般式Ｉ、Ｉａ、Ｉｂ、Ｉａ．１、Ｉａ．２、Ｉａ．３およびＩｂ．１の化合物が、好ましく、特に実質的に純粋な（Ｒｐ，Ｒｐ）立体異性体、すなわち両方のリン原子が、Ｒｐ配置を有するものが好ましい。
【００２４】
本発明による化合物およびそれらの中間体は、当業者に公知であり、有機合成の文献で記載されている合成の方法を使用して得ることができる。好ましくは、化合物は、特に、例の区分で記載されるとおり、以降により十分に説明される調製の方法に類似して得られる。いくつかの場合には、反応スキームを実施するのに採用した配列は、変動しうる。当業者に公知であるが、本明細書で詳細に記載されていないこれらの反応の変法も使用しうる。本発明による化合物を調製するための一般的プロセスは、続くスキームを研究する上で当業者に明らかになろう。出発化合物は、商業上入手可能であるか、文献または本明細書に記載される方法により調製されうるか、同様または類似の手段で調製されうる。反応が実施される前に、化合物における任意の対応の官能基は、従来の保護基を使用して保護されうる。これらの保護基は、当業者に慣れている方法を使用して、反応順序内の適切な段階で再度開裂されうる。
【００２５】
本明細書で開示される環状ジヌクレオチドは、下に詳細に記載されるとおり、または当業者に公知の他の方法により調製されうる。これらのスキームは、制限されることがないこと、および詳細の変動は、本発明の概念から逸脱することなく行われうることは、当業者に理解されるであろう。
【００２６】
環状ジヌクレオチド化合物は、Chem.Rev.113, 7354−7401 (2013), Org.Lett., 12, 3269-3271 (2010), Tetrahedron 49, 1115-1132 (1993), 国際公開第ＷＯ２０１４／１８９８０５号、国際公開第ＷＯ２０１６／０９６１７４号、国際公開第ＷＯ２０１５／１８５５６５号、国際公開第ＷＯ２０１６／１４５１０２号または国際公開第ＷＯ２０１６／１２０３０５号およびそこに引用される参照に記述される方法により得ることができる。
【００２７】
本明細書で使用される場合で、特に定義されない限り、用語「保護基」は、その原子のさらなる反応を防止する、または他の目的のために酸素、窒素またはリン原子に結合される化合物官能基を指す。広範な保護基は、有機合成の分野で当業者に公知であり、例えば、「Protective Groups in Organic Synthesis」 by T.W.Greene and P.G.M.Wuts, Third Edition, 1999で記載されている。
式（Ｉ）の化合物およびその塩は、以降に記載される方法論により調製でき、本発明の別の態様を構築しうる。
【００２８】
当業者は、式（Ｉ）におけるホスホロチオエート部分がＲ配置（ＲP）またはＳ配置（ＳP）で各々存在しうることを認識するであろう。以降に記載される方法論は、当業者に公知のクロマトグラフィー法、例えば、合成の様々な段階での適切な溶媒系およびカラムを用いた、高速液体クロマトグラフィーにより分離されうるリン原子に関して４つまでのジアステレオマーを生じうる。いくつかの場合には、例えば、１つの硫化段階が、ジアステレオ選択性様式で進行する場合、以降に記載される方法論は、合成の様々な段階で当業者に公知のクロマトグラフィー法により分離されうる２つのジアステレオマーのみを優先的に生じうる。
【００２９】
調製の以下の方法内に明白には特定されない置換基は、発明の概要の下に以前に記載される定義を網羅することが理解される。
式（Ｉ’）
【化５】
0006509445.tif 000008
（式中、Ｒ4は、ＯＨであり、Ｒ1も、ＯＨであってよい、式（ＩＩ）
【化６】
0006509445.tif 000009
(II)
（式中、Ｒ4.1は、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）などの適切な保護基を担持する酸素であり、Ｒ1.1も、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）などの適切な保護基を担持する酸素であってよい）
の化合物の脱保護により調製されうる）
の化合物。例えば、Ｒ1.1は、Ｈ、Ｆ、Ｏ−アルキルまたはＯＴＢＳであるか、Ｒ2と一緒に−ＣＨ2−Ｏ−架橋を形成し、Ｒ4.1はＯＴＢＳである。例えば、式（ＩＩ）の化合物を、適切な溶媒、例えば、ピリジンに溶解し、トリエチルアミン、トリヒドロフルオリドおよびトリエチルアミンの混合物で処理し、適切な温度、例えば、２０〜６０℃で、適切な期間、例えば、１〜６時間撹拌する。
【００３０】
式（ＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＩ）
【化７】
0006509445.tif 000010
(III)
（式中、いずれかのＲ3.1は、ベンゾイルなどの適切な保護基を担持するＮＨを表示し、Ｒ3.2は、Ｈ（「保護アデニン」）を表示するか、または
Ｒ3.1は、ＯＨを表示し、Ｒ3.2.は、イソブチリル（「保護グアニン」）のような適切な保護基を担持するＮＨを表示するか、または
Ｒ3.1は、ＯＨを表示し、Ｒ3.2は、Ｈ（「ヒポキサンチン」）を表示するか、または
Ｒ3.1およびＲ3.2は、両方、Ｈ（「プリン」）を表示する）
の化合物の脱保護により調製されうる。
【００３１】
例えば、式（ＩＩＩ）の化合物は、適切な混合物、例えば、メチルアミン、またはメタノールもしくはエタノール中の水性アンモニアに溶解され、適切な温度、例えば、２０〜６０℃で、適切な期間、例えば、１〜２４時間撹拌される。
【００３２】
式（ＩＩＩ）の化合物は、式（ＩＶ）（式中、Ｒ2、Ｒ3.1、Ｒ3.2.、Ｒ1.1およびＲ4.1は、先に明記されるとおり定義される）の化合物の環化およびそれに続く硫化により調製されうる。
【化８】
0006509445.tif 000011
(IV)
【００３３】
例えば、式（ＩＶ）の化合物を、適切な溶媒、例えば、ピリジンに溶解し、適切なカップリング試薬、例えば、２−クロロ−５，５−ジメチル−１，３，２−ジオキサホスホリナン２−オキシド（ＤＭＯＣＰ）またはピバロイルクロリドまたはアダマントイルクロリドで処理し、適切な温度、例えば、２０℃で、適切な期間、例えば、０．１〜２時間撹拌する。環化反応は、適切な硫化試薬、例えば、３Ｈ−１，２−ベンゾジチオール−３−オンまたは元素硫黄での処理によりクエンチし、適切な温度、例えば、２０℃で、適切な期間、例えば、０．１〜２時間撹拌する。
【００３４】
式（ＩＶ）の化合物は、式（Ｖ）の化合物の式（Ｖｌ）の化合物とのカップリングにより調製されうる。式中、Ｒ2、Ｒ3.1、Ｒ3.2、Ｒ1.1およびＲ4.1は、先に明記されるとおり定義される。
【化９】
0006509445.tif 000012
【００３５】
例えば、式（Ｖｌ）の化合物は、適切な溶媒、例えば、アセトニトリルに溶解され、適切な溶媒、例えば、アセトニトリルに溶解される式（Ｖ）の化合物の溶液で処理され、適切なカップリング試薬、例えば、テトラゾール、Ａｃｔｉｖａｔｏｒ４２（登録商標）活性化剤溶液、アセトニトリル中に５−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−テトラゾールを含有する）、ジクロロ酢酸ピリジニウム、またはトリフルオロ酢酸ピリジニウム（またはカップリング試薬の混合物）の存在下で処理されてよく、適切な温度、例えば、２０℃で、適切な期間、例えば、０．１〜２時間撹拌される。カップリング反応は、適切な硫化試薬、例えば、３−（（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチリデン）アミノ）−３Ｈ−１，２，４−ジチアゾール−３−チオン（ＤＤＴＴ）またはフェニルアセチルジスルフィド（ＰＡＤＳ）または３Ｈ−１，２−ベンゾジチオール−３−オン１，１−ジオキシド（Ｂｅａｕｃａｇｅ試薬）との処理でクエンチされ、適切な温度、例えば、２０℃で、適切な期間、例えば、０．１〜２時間撹拌する。溶媒の蒸発の後、残渣を、適切な溶媒、例えば、ジクロロメタンおよび水の混合物に溶解させ、適切な試薬、例えば、ジクロロ酢酸で処理し、適切な温度、例えば、２０℃で、適切な期間、例えば、０．１〜２時間撹拌する。生成物（ＩＶ）を含有する溶液は、適切な溶媒、例えば、ピリジンの添加、および蒸発による濃縮で得られる。
【００３６】
式（Ｖ）の化合物は、式（Ｖｌｌ）（式中、Ｒ2、Ｒ3.1、Ｒ3.2、Ｒ1.1およびＲ4.1は、先に明記されるとおり定義される）の化合物の反応により調製されうる。
【化１０】
0006509445.tif 000013
(VII)
【００３７】
例えば、式（Ｖｌｌ）の化合物を、適切な混合物、例えば、アセトニトリル含有水に溶解し、トリフルオロ酢酸ピリジニウムで処理し、適切な温度、例えば、２０℃で、適切な期間、例えば、１〜３０分間撹拌する。その後、ｔｅｒｔ−ブチルアミンを添加し、混合物を、適切な温度、例えば、２０℃で、適切な期間、例えば、０．１〜１時間撹拌する。生成物を、溶媒の蒸発により単離し、その後、適切な溶媒、例えば、ジクロロメタン含有水に溶解し、ジクロロ酢酸で処理し、適切な温度、例えば、２０℃で、適切な期間、例えば、０．１〜１時間撹拌する。アセトニトリル中の生成物（Ｖ）の濃厚溶液を、例えば、ピリジンの添加により、次いでアセトニトリルで混合物を共沸させることにより得る。
【００３８】
式（Ｖｌ）の化合物は、式（ＶＩＩＩ）（式中、Ｒ4.1は、先に明記されるとおり定義される）の化合物の反応により調製されうる。
【化１１】
0006509445.tif 000014
(VIII)
【００３９】
例えば、適切な溶媒、例えば、アセトニトリルと共沸させた後、式（ＶＩＩＩ）の化合物を、適切な溶媒、例えば、ジクロロメタンに溶解し、活性化剤、例えば、１Ｈ−テトラゾールの存在下で、リン酸化試薬、例えば、２−シアノエチルＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイトと反応させ、適切な温度、例えば、２０°Ｃで、適切な期間、例えば、１〜４８時間撹拌する。
式（ＶＩＩＩ）の化合物は、式（ＩＸ）：
【化１２】
0006509445.tif 000015
(IX)
の化合物の反応により調製されうる。
【００４０】
例えば、式（ＩＸ）の化合物を、適切な溶媒、例えば、ピリジンに溶解し、適切な塩基、例えば、イミダゾールの存在下で、適切なシリル化試薬、例えば、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリドと反応させ、適切な温度、例えば、２０℃で、適切な期間、例えば、１〜４８時間撹拌する。位置異性体２’および３’−シリル化生成物は、水性ワークアップ（ａｑｕｅｏｕｓ  ｗｏｒｋ−ｕｐ）の後単離され、例えば、適切な溶媒系を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより分離されうる。
式（ＩＸ）の化合物は、式（Ｘ）：
【化１３】
0006509445.tif 000016
(X)
の化合物の反応により調製されうる。
【００４１】
例えば、式（Ｘ）の化合物を、適切な溶媒、例えば、ピリジンに溶解し、４，４’−ジメトキシトリチルクロリドと反応させ、適切な温度、例えば、２０℃で、適切な期間、例えば、１〜４８時間撹拌する。
【００４２】
一般式Ｉの化合物、またはその合成中間体は、下に記載されるとおり、それらのジアステレオマーに変換されうる。一般式Ｉの化合物のジアステレオマー混合物を、それ自体公知の方法、例えば、クロマトグラフィーおよび／または分別再結晶を使用して、それらの様々な物理化学的特性を利用することにより、それらのジアステレオマーに変換されうる。
上で記載されるとおり、式Ｉの化合物は、特に医薬上許容される塩への医薬用途のために、塩に変換されうる。
本発明による化合物は、有利に、続く例に記載される方法を使用して得ることもでき、それは、文献から当業者に公知の方法と、この目的のために合わせることもできる。
【００４３】
用語および定義
本明細書で特に定義されない用語は、開示および内容の点で、当業者によりそれらに与えられるであろう意味が付与されるべきである。しかし、本明細書で使用される場合、それとは反対に特定されない限り、以下の用語は、示され、以下の慣例がつけられている意味を有する。
用語「本発明による化合物」、「式（Ｉ）の化合物」、「本発明の化合物」などは、それらの互変異性体、立体異性体、およびその混合物およびその塩を含めた本発明による式（Ｉ）の化合物、特に、そのような互変異性体、立体異性体、およびその塩の溶媒和物および水和物を含めたそのような化合物の医薬上許容されるその塩、ならびびそのような化合物の溶媒和物および水和物を示す。
【００４４】
用語「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」および「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、両方とも防止的、すなわち予防的または治療的、すなわち根治的および／または対症的処置を包含する。したがって、用語「処置」および「処置する」は、上記状態をすでに発生させた患者の治療的処置を、特に顕在化形態で含む。治療的処置は、特定の徴候の症状を軽減するための対症療法、または徴候の状態を逆転または部分的に逆転させるために、またはその疾患の進行を止めるかまたは遅延させるための原因処置でありうる。したがって、本発明の化合物および方法は、例えば、ある期間にわたる治療的処置として、ならびに長期治療として使用されうる。さらに、用語「処置」および「処置する」は、予防的処置、すなわち、上記で記載される状態を発生する危険のある患者の処置を含み、したがって上記危険を減少させる。
この発明が、処置を必要とする患者を指す場合、それは、主に哺乳動物、特にヒトにおける処置に関する。
用語「治療上有効な量」は、（ｉ）特定の疾患もしくは状態を処置もしくは予防する、（ｉｉ）特定の疾患もしくは状態の１つもしくは複数の症状を減弱、寛解もしくは排除する、または（ｉｉｉ）本明細書に記載される特定の疾患もしくは状態の１つまたは複数の症状の発症を予防または遅延させる本発明の化合物の量を意味する。
本明細書で使用される場合、別段の定めがない限り、用語「モジュレートされる」または「モジュレートすること」または「モジュレートする」は、本発明の１つまたは複数の化合物によるＳＴＩＮＧ経路の活性化を指し、この場合には、ＳＴＩＮＧアゴニストを表す。
【００４５】
本明細書で使用される場合、別段の定めがない限り、用語「媒介される」または「媒介すること」または「媒介する」は、（ｉ）特定の疾患または状態の予防を含めた処置、（ｉｉ）特定の疾患または状態の１つまたは複数の症状の減弱化、寛解、もしくは排除または（ｉｉｉ）本明細書に記載される特定の疾患または状態の１つまたは複数の症状の発症を予防または遅延することを指す。
本発明の化合物が、化学名の形態で、および式として表現される場合、何らかの相違がある場合は、式が優先するものとする。
アステリスクは、定義されるとおりコア分子に連結される結合を示すために部分式で使用されうる。
【００４６】
別段の定めがない限り、本明細書および付随の特許請求の範囲を通して、所定の化学式または化学名は、互変異性体および、全ての立体的、光学的および幾何学的異性体（例えば、エナンチオマー、ジアステレオマー、Ｅ／Ｚ異性体など）およびそのラセミ体、ならびに別個のエナンチオマーの様々な比率の混合物、ジアステレオマーの混合物またはこのような異性体およびエナンチオマーが存在する前述の形態のいずれかの混合物、ならびに医薬上許容されるその塩および例えば、遊離化合物の溶媒和物または化合物の塩の溶媒和物を含めた水和物のようなその溶媒和物を含めた塩を包含するに違いない。
【００４７】
一般式Ｉの化合物に関して、本明細書で使用される場合、用語「実質的に純粋な」は、リン原子に関して他の可能性のあるジアステレオマーに比べて少なくとも７５％純度である１つの（Ｒｐ，Ｒｐ）、（Ｒｐ，Ｓｐ）、（Ｓｐ，Ｒｐ）または（Ｓｐ，Ｓｐ）ジアステレオマーを指す。好ましい実施形態では、一般式Ｉの実質的に純粋な化合物は、少なくとも８５％純度、少なくとも９０％純度、少なくとも９５％純度、少なくとも９７％純度、および少なくとも９９％純度である。
語句「医薬上許容される」は、健全な医療的判断の範囲内で、過剰の毒性、刺激、アレルギー反応または他の問題もしくは合併症なしに、ヒトおよび動物の組織と接触して使用するのに適しており、合理的な利益／危険比に比例する、それらの化合物、材料、組成物、および／または剤形を指すために本明細書で使用される。
【００４８】
本明細書で使用される場合、「医薬上許容される塩」は、親化合物が、その塩を塩基と作製することにより修飾される開示の化合物の誘導体を指す。本発明の医薬上許容される塩は、従来の化学的方法により、酸性部分を含む親化合物から合成されうる。一般に、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸形態を、水中またはエーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノールもしくはアセトニトリル、またはその混合物のような有機希釈剤中で十分な量の適切な塩基と反応させることにより調製されうる。代わりに、塩は、イオン交換により、例えば、本発明の化合物の水溶液（遊離酸または塩形態）を陽イオン交換剤で処理することにより調製されうる。
【００４９】
薬理学的活性
本発明による化合物は、ヒトＳＴＩＮＧに良好な結合親和性を示す。結合親和性は、Nat.Chem.Biol.10, 1043−1048 (2014)に記載されるとおり、例えば、シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）ベースの競合結合アッセイにより測定することができる。代わりに、結合親和性は、例えば、Molecular Cell 51, 226−235 (2013)で記載されるとおり等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）により測定されうる。代わりに、結合親和性は、例えば、国際公開第ＷＯ２０１６／１４５１０２号に記載されるとおり、表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）により測定されうる。代わりに、結合親和性は、例えば、国際公開第ＷＯ２０１６／１４５１０２号に記載されるとおり、示差走査型蛍光定量法（ＤＳＦ）により測定されうる。
【００５０】
本発明による化合物は、良好な細胞活性を示す。インビトロサイトカイン誘導は、レポーターセルライン、例えば、ＴＨＰ１細胞で、国際公開第ＷＯ２０１６／０９６１７４号に記載されるのと類似の様式で測定することができる。本発明による化合物は、様々なヒトＳＴＩＮＧ対立遺伝子を担持する細胞で良好な細胞活性を示す。ヒトＳＴＩＮＧは、少なくとも４つの公知変異株（ＷＴ、ＨＡＱ、ＲＥＦ／２３２Ｈ、ＡＱ、Ｑ／２９３Ｑ）に存在する。ヒトＳＴＩＮＧ変異株で様々なＣＤＮの活性を試験するために、ＴＨＰ１−ＳＴＩＮＧ  ＫＯ細胞は、様々なＳＴＩＮＧ変異株をコードするベクターで安定的に形質導入されうる。さらに、インビトロサイトカイン誘導は、ヒト一次ＰＢＭＣまたはヒト樹状細胞で測定されうる。
本発明による化合物は、例えば、ＴＨＰ１細胞、Ｃａｌｕ−３細胞またはヒト肝細胞とインビトロ細胞アッセイで良好な安定性を示す。さらに、本発明による化合物は、溶液および固形状態で、良好な化学的安定性を示す。
【００５１】
さらに、本発明による化合物は、良好な薬物動態学的（ＰＫ）特性を示す。ＰＫ特性は、前臨床動物種、例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、モルモット、ミニブタ、カニクイザル、アカザルで測定されうる。化合物のＰＫ特性は、例えば、以下のパラメーターにより記述されうる。それは、E.Kerns & L.Di (Drug-like properties: concepts, structure design and methods: from ADME to toxicity optimization, Elsevier, 1st ed, 2008)で記載されるとおり、平均滞留時間（ＭＲＴ）、排出半減期（ｔ1/2、すなわち、その当初の値の半分に達する薬物の濃度のために必要とされる時間）、分配の量（ＶD、すなわち、薬物が分配される見かけの量）、曲線下面積（ＡＵＣ、すなわち、単回用量の後の濃度時間曲線の積分）、クレアランス（ＣＬ、すなわち、単位時間当たりの薬物の排除された血漿の量）である。
本発明による特定の化合物は、腫瘍内または静脈内使用後、例えば、マウスＭＣ３８、４Ｔ１、Ｃｏｌｏｎ２６、ＥＭＴ６腫瘍モデルで良好なインビボ薬理学的活性を示す。
良好な細胞活性および／または良好な細胞安定性および／または改善されたＰＫ特性との組合せで良好な結合親和性は、薬理学的効能について低い用量を可能にできる。低い用量は、潜在的に低い副作用を引き起こす患者にとって「薬物負荷（ｄｒｕｇ  ｌｏａｄ）」または「薬物負担（ｄｒｕｇ  ｂｕｒｄｅｎ）」（親薬物およびその代謝産物）の低いこと、および薬物製品についての生産費用が低いという利点を有する。
ヒトＳＴＩＮＧに対する本発明の化合物の結合は、以下のアッセイを使用して実証されうる。
【００５２】
示差走査型蛍光定量法（ＤＳＦ）
材料：
Ｈａｒｄ−Ｓｈｅｌｌ（登録商標）ＰＣＲプレート３８４ウエル薄壁（カタログ番号ＨＳＰ３８０５Ｒ、ＢＩＯ−ＲＡＤ）
ＰＣＲプレート用のＭｉｃｒｏｓｅａｌ（登録商標）「Ｂ」接着性シール（カタログ番号ＭＳＢ−１００１、ＢＩＯ−ＲＡＤ）
ＤＭＳＯ中のＳＹＰＲＯオレンジ色溶液（ＳＩＧＭＡカタログ番号Ｓ５６９２−５００ＵＬ）、濃度「５０００×」
装置：読み取り装置：ＣＦＸ３８４リアルタイムシステム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）
ピペット採取ロボット：ＨａｍｉｌｔｏｎＳｔａｒｌｅｔ
アッセイ緩衝剤：２０ｍＭトリス、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５
標的タンパク質：ヒトＳＴＩＮＧ（ｈＳＴＩＮＧ、残渣１５５〜３４１、Ｎ−末端Ｈｉｓ８タグおよびＴＥＶ開裂部位を有する野生型配列、ＭＷ：２３６０１、５Ｄａ）
タンパク質保存液：ｃ＝アッセイ緩衝剤中の３０９μＭ保存液
試験化合物の最終アッセイ濃度：１００ｕＭ、３ｕＭ標的タンパク質、「５×」ＳＹＰＲオレンジ
【００５３】
アッセイ手順
１）化合物保存溶液およびその希釈液を、アッセイ緩衝剤中で調製した。
２）５ｕｌ蛍光染料保存液（５０００×ＳＹＰＲＯオレンジ）を、５０ｕｌ標的タンパク質（３０９ｕＭ）および９４５ｕｌ緩衝剤と混合した。
３）２ｕｌのこのタンパク質−染料混合物（２５×ＳＹＰＲＯオレンジおよび１５ｕＭタンパク質）を、８ｕｌの化合物溶液に添加した。最終容量は、１０ｕＬであった。
４）特定のウエル位置を、負の対照として使用した。
５）プレートを、重複測定のために調製し、１０００ｇで２分間遠心分離した。
６）測定では、１６０サイクルの０．５℃（０，５  ｄｅｇＣ）を使用した（温度勾配１５ｓ／サイクル、１５℃〜９５℃）。
【００５４】
データ解析：解離曲線は、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ＣＦＸマネジャーで処理された。
ピーク型は、「負」に設定された。例１．１、例２．１および例４．１の場合には、少なくとも２つのＴｍ測定値が平均化された。
測定されたＴｍにおける変化は、表１に示される。
【表２】
0006509445.tif 000017
本発明の化合物の細胞活性は、以下のインビトロＴＨＰ１アッセイを使用して実証されうる。
【００５５】
インビトロサイトカイン誘導
本発明による化合物のサイトカイン誘導活性は、ＴＨＰ１レポーターセルラインを使用することにより実証された。セルラインで発現されるＳＴＩＮＧタンパク質の活性化が、インターフェロン産生の増大を生じる。インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）−誘導性ＳＥＡＰ（分泌された胚性アルカリホスファターゼ）レポーター構築物の安定な組込みにより、官能性インターフェロンシグナル伝達経路を監察しうる。ＩｎｖｉｖｏｇｅｎのＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅ（商標）比色分析酵素アッセイおよび適切な吸光度（ＯＤ）読み取り装置を使用して、ＳＥＡＰの活性が検出されて定量化されうる。この技術は、ＳＴＩＮＧタンパク質の薬理学的修飾を特徴づけるために使用されうる。
【００５６】
ＳＥＡＰ活性の測定は、ヒトＳＴＩＮＧタンパク質およびＩＲＦ誘導性ＳＥＡＰレポーター構築物を安定に発現するＴＨＰ１−Ｂｌｕｅ  ＩＳＧ細胞で実行された。細胞を、３７℃（°）で、湿度９５％および５％ＣＯ2インキュベーターで、１０％仔牛血清、５０μｇ／ｍｌペニシリン−ストレプトマイシン、１００μｇ／ｍｌ  Ｚｅｏｃｉｎおよび１００μｇ／ｍｌ  Ｎｏｒｍｏｃｉｎを伴うＲＰＭＩ１６４０培地中で増殖のために培養した。アッセイ準備済み細胞を、凍結保存として保存した。アッセイのための調製で、細胞を、Ｚｅｏｃｉｎ−／Ｎｏｒｍｏｃｉｎ−不含培地に解凍し、ウエル当たり１５０００細胞／１５μＬの密度でアッセイプレートに分配した。化合物を、５０％水性ＤＭＳＯ中の８または１６ポイントの連続希釈、およびアッセイで０．５％の最終ＤＭＳＯ濃度を確保する培地への最終希釈段階により調製した。５μＬ培地を補足した５μＬの希釈化合物を、プレートに添加し、次いで３７℃で２４時間インキュベーションを行った。
アッセイの日に、ウエル当たり７５μｌのＱｕａｎｔｉ−Ｂｌｕｅ試薬を、プレートの全ウエルに添加し、そのプレートを、さらに３０分間、３７℃でインキュベートした。６２０ｎｍにおけるＯＤを、ＥｎＶｉｓｉｏｎ読み取り装置（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で測定した。
【００５７】
ＥＣ50値およびＨｉｌｌ勾配は、６２０ｎＭにおけるＯＤを使用して、Ｍｅｇａｌａｂソフトウェア（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）を用いて８点または１６点の４パラメトリック非線形曲線フィッティングから導かれた。例１．１、例２．１、例３．１および例４．１ついてのＥＣ50値は、少なくとも２つの測定値の平均値である。表２を参照されたい。
【００５８】
【表３】
0006509445.tif 000018
上記ＴＨＰ１アッセイでは、例１．１は、それぞれのジアステレオマーの例１．２よりいっそう効力がある。ヒトＳＴＩＮＧとの複合体における例１．１のＸ線は、両方のリン原子が、Ｒｐ配置を有することを示す。類似の様式で、より効力のあるそれぞれのジアステレオマーの例２．１、例３．１、例４．１も、両方のリン原子でＲｐ配置を特徴とすると考えられる。
【００５９】
数種の単一ヌクレオチド多型は、環状ジヌクレオチドに対する応答に影響する可能性のあるヒトＳＴＩＮＧ遺伝子で同定された。本発明の化合物の活性を測定するために、様々なヒトＳＴＩＮＧ変異株を発現するＴＨＰ１−ＢＬＵＥ  ＩＳＧレポーターセルラインが、作成された。そうするために、内在性ヒトＳＴＩＮＧは、ＣＲＩＳＰＲ／ＣＡＳ９システムを使用して最初に欠失された：ＴＨＰ１−ＢｌｕｅＩＳＧ細胞は、ＳＴＩＮＧ遺伝子を標的とするオールインワンＣＲＩＳＰＲプラスミド（Ｓｉｇｍａ社から購入され、首尾よくいく形質導入のためのレポーター遺伝子としてｇＲＮＡおよびＧＦＰをコードする）で電気穿孔された。その後、ＧＦＰ陽性細胞を、トランスフェクションの２４時間後選別し、増殖させた。その後、細胞を、半流動性メトセル培地に分散して、単一細胞クローン単離を可能にした。その後、クローンを、Ｑｕａｎｔｉ−ｂｌｕｅレポーターアッセイを使用してｃＧＡＭＰ応答性についてスクリーニングした。非応答性クローンは、ウエスタンブロッティングによるＳＴＩＮＧ損失について、およびＳＴＩＮＧ遺伝子座の配列決定についてその後分析された。
【００６０】
ヒトＳＴＩＮＧ変異株の過剰発現について、確認済みＴＨＰ１−Ｂｌｕｅ  ＩＳＧ  ｈＳＴＩＮＧ  ＫＯクローンを、ｈＳＴＩＮＧの対立遺伝子変異株（ＷＴ、ＨＡＱ、Ｒ２３２Ｈ、ＡＱおよびＲ２９３Ｑ）をコードする個々のレトロウイルス性プラスミド（ＭＳＣＶ−ｉｒｅｓ−ＧＦＰ−Ｂｌａｓｔｉ）で形質導入した。形質導入された細胞を、様々なレベルのＧＦＰ蛍光について選別し、ＳＴＩＮＧ対立遺伝子発現は、ウエスタンブロットにより分析された。親の非修飾ＴＨＰ１−Ｂｌｕｅ  ＩＳＧセルラインから（ｆｏｒｍ）内在性ＳＴＩＮＧレベルに匹敵するレベルで、異所性ＳＴＩＮＧタンパク質（ＷＴ、ＨＡＱ、Ｒ２３２Ｈ、ＡＱおよびＲ２９３Ｑ）を発現する集団を選択し、ＣＤＮ特徴づけのために使用した。本発明の例は、５つ全ての上記変異株で細胞活性を示す。
本発明の化合物の細胞安定性は、以下のとおりに測定された。化合物を、細胞培養培地（１０％ＦＣＳ、１％非必須アミノ酸および１％ピルベートで補足されたＭＥＭ）に溶解させて、１０μＭ最終濃度にし、ヒト肺上皮セルラインＣａｌｕ−３（２４ウエルのプレート上で６００００細胞／ウエル）と、２４時間までの間インキュベートした。細胞培養上清のサンプルを、１、６、２４時間に採取し、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳで定量した。
【００６１】
本発明の化合物のマウスＰＫは、以下の方法を使用して測定された。
マウスＰＫ
動物実験
その化合物を、生理学的ＮａＣｌの溶液に溶解し、１０μｍｏｌ／Ｋｇの用量で、雄のＣ５７ＢＬ／６ＮＲｊマウスに静脈投与した。２０μＬの血液サンプルを、抗凝固剤としてＥＴＤＡを採取することにより、０．２５、０．５、０．７５、１および２時間に収集した。遠心分離により血液血漿を発生させ、−２０℃で保存した。化合物濃度は、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより測定された。測定された濃度−時間関係（二重実験の手段）は、表３に示される。
【００６２】
【表４】
0006509445.tif 000019
したがって、本発明は、医薬として一般式Ｉの化合物に関する。
さらに、本発明は、患者におけるＳＴＩＮＧのモジュレーションにより影響されうる疾患または状態の、または患者におけるＳＴＩＮＧに関連するか、またはＳＴＩＮＧによりモジュレートされる疾患または状態の処置および／または予防のための本発明の一般式Ｉの化合物または医薬組成物の使用に関する。好ましくは、患者は、ヒトである。
【００６３】
さらに別の態様では、本発明は、哺乳動物、好ましくはヒトに、治療上有効な量の本発明の化合物または医薬組成物を投与する段階を含む、そのような処置を必要とする哺乳動物におけるＳＴＩＮＧに関連するか、またはＳＴＩＮＧによりモジュレートされる疾患または状態を処置する方法に関する。
ＳＴＩＮＧのモジュレーションに関連するか、またはＳＴＩＮＧによりモジュレートされるか、または影響されうる疾患および状態としては、炎症、アレルギー性または自己免疫性疾患、例えば、アレルギー性鼻炎または喘息、感染性疾患またはがんが挙げられる。さらに、それらの活性のため、本発明の化合物は、ワクチンアジュバントとして適切である。
自己免疫性疾患としては、それに限定されないが、全身性紅斑性狼瘡が挙げられる。また、乾癬、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）、皮膚筋炎およびシェーグレン症候群（ＳＳ）が挙げられる。
【００６４】
炎症は、外傷に対する血管、細胞および神経学上の応答の群を表す。炎症は、単核球、好中球および顆粒球などの炎症性細胞の組織への移動として特徴づけることができる。これは、通常、内皮バリヤー機能の減少および組織への浮腫に関連する。炎症は、急性または慢性のいずれかとして分類されうる。急性炎症は、有害な刺激に対する体の当初の応答であり、血液から損傷を受けた組織への血漿および白血球の移動の増加により達成される。生化学的事象のカスケードは、局所血管系、免疫系および損傷を受けた組織内の種々の細胞を含む炎症応答を増し、成熟させる。慢性炎症としても公知である長期化炎症は、炎症の部位に存在し、炎症プロセスからの組織の同時の破壊および治癒により特徴づけられる細胞の型における進行性シフトになる。
【００６５】
感染に対する免疫応答の一部として、または外傷に対する急性応答として起こる場合、炎症は、助けになり、正常に自己限定性でありうる。しかし、炎症は、種々の状態下で測定可能でありうる。これは、感染因子に対する応答における過剰炎症の生成を含み、それは、顕著な臓器損傷および死亡を導きうる（例えば、敗血症の状況）。さらに、慢性炎症は、一般に有害であり、膨大な慢性疾患の根源であり、組織に対する重度で不可逆の損傷を引き起こす。そのような状況で、免疫応答は、しばしば、自己組織（自己免疫性）に向けられるが、外来実体に対する慢性応答も、自己組織に対するバイスタンダー損傷になる可能性がある。したがって、抗炎症療法の目的は、この炎症を減らすこと、存在する場合自己免疫性を阻害すること、および生理学的プロセスまたは治癒および組織修復のために向上するのを可能にすることである。
本発明の化合物は、体の任意の組織および臓器の炎症を処置するために使用されうるが、それには、下に例示されるとおりの筋骨格炎症、血管炎症、神経炎症、消化器系炎症、眼の炎症、生殖系の炎症および他の炎症が挙げられる。
【００６６】
筋骨格炎症は、筋骨格系の任意の炎症状態、特に手、手首、肘、肩、顎、脊椎、首、臀部、膝（Ｋｎｅｗ）、足首および足の関節を含めた骨格関節に影響する状態のもの、および腱などの骨に対する組織結合筋に影響する状態を指す。本発明の化合物で処置されうる筋骨格炎症の例としては、関節炎（例えば、変形性膝関節症、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、急性および慢性感染性関節炎、痛風および偽痛風に関連した関節炎、および若年性特発性関節炎を含む）、腱炎、滑膜炎、腱鞘炎、滑液包炎、結合織炎（線維筋痛症）、上顆炎、筋炎および骨炎（例えば、骨ページェット病、恥骨炎および嚢胞性線維性骨炎を含む）が挙げられる。眼の炎症は、眼瞼を含めた眼の任意の構造の炎症を指す。本発明の化合物で処置されうる眼の炎症の例としては、眼瞼炎、眼瞼皮膚弛緩症、結膜炎、涙腺炎、角膜炎、乾性角結膜炎（ドライアイ）、強膜炎、睫毛乱生およびぶどう膜炎が挙げられる。本発明の化合物で処置されうる神経系の炎症の例としては、脳炎、ギラン−バレー症候群、髄膜炎、神経性筋強直症、睡眠発作、多発性硬化症、脊髄炎および統合失調症が挙げられる。
本発明の化合物で処置されうる血管またはリンパ系の炎症の例としては、関節硬化症、関節炎、静脈炎、血管炎およびリンパ管炎が挙げられる。
本発明の化合物で処置されうる消化器系の炎症状態の例としては、胆管炎、胆嚢炎、腸炎、小腸結腸炎、胃炎、胃腸炎、炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎などの）、回腸炎および直腸炎が挙げられる。
【００６７】
本発明の化合物で処置されうる生殖系の炎症状態の例としては、子宮頸管炎、絨毛羊膜炎、子宮内膜炎、精巣上体炎、臍炎、卵巣炎、精巣炎、卵管炎、卵管卵巣膿瘍、尿道炎、腟炎、外陰炎および外陰部痛が挙げられる。
【００６８】
剤は、炎症性構成要素を有する自己免疫性状態を処置するために使用されうる。そのような状態としては、急性汎発性全身性脱毛症（ａｃｕｔｅ  ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｅｄ  ａｌｏｐｅｃｉａ  ｕｎｉｖｅｒｓａｌｉｓｅ）、ベーチェット病、シャーガス病、慢性疲労症候群、自律神経障害、脳脊髄炎、強直性脊椎炎、再生不良性貧血、化膿性汗腺炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵巣炎、セリアック病、クローン病、Ｉ型糖尿病、巨細胞性動脈炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン−バレー症候群、橋本病、ヘノッホ−シェーンライン紫斑病、川崎病、紅斑性狼瘡、顕微鏡的大腸炎、顕微鏡的多発動脈炎、混合性結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、眼球クローヌス・ミオクローヌス運動失調、視神経炎、オルドス甲状腺炎、天疱瘡、結節性多発動脈炎、多発性筋痛、関節リウマチ、ライター症候群、シェーグレン症候群、側頭動脈炎、ウェゲナー肉芽腫症、温式自己免疫性溶血性貧血、間質性膀胱炎、ライム病、モルフェア、乾癬、サルコイドーシス、強皮症、潰瘍性大腸炎および白斑が挙げられる。
【００６９】
剤は、炎症性構成要素を有するＴ細胞媒介性過敏性疾患を処置するために使用されうる。このような状態としては、接触過敏症、接触性皮膚炎（ツタウルシによるものを含めて）、蕁麻疹、皮膚過敏症、呼吸器過敏症（枯草熱、アレルギー性鼻炎）およびグルテン過敏性腸症（セリアック病）が挙げられる。
【００７０】
その剤で処置されうる他の炎症性の状態としては、例えば、虫垂炎、皮膚炎、皮膚筋炎、心内膜炎、結合組織炎、歯肉炎、舌炎、肝炎、化膿性汗腺炎、虹彩炎、喉頭炎、乳腺炎、心筋炎、腎炎、耳炎、膵炎、耳下腺炎、心膜炎、腹膜炎（ｐｅｒｉｔｏｎｏｉｔｉｓ）、咽頭炎、胸膜炎、間質性肺炎、前立腺炎（ｐｒｏｓｔａｔｉｓｔｉｓ）、腎盂腎炎および口内炎、移植片拒絶（腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓（例えば、島細胞）、骨髄、角膜、小腸、皮膚同種移植、皮膚同種移植片および心臓弁異種移植片、血清病（ｓｅｗｒｕｍ  ｓｉｃｋｎｅｓｓ）および移植片対宿主病などの臓器を含む）、急性膵炎、慢性膵炎、急性呼吸促迫症候群、セザリー（Ｓｅｘａｒｙ）症候群、先天性副腎過形成、非化膿性甲状腺炎、がんに関連した高カルシウム血症、天疱瘡、水泡性ヘルペス状皮膚炎、重度多形性紅斑、剥離性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、季節性または通年性アレルギー性鼻炎、気管支喘息、接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、薬物過敏性反応、アレルギー性結膜炎、角膜炎、眼部帯状疱疹、虹彩炎および虹彩毛様体炎（ｏｉｒｉｄｏｃｙｃｌｉｔｉｓ）、脈絡網膜炎、視神経炎、症候性サルコイドーシス、電撃性または播種性肺結核化学療法、成人における特発性血小板減少性紫斑病、成人における続発性血小板減少症、後天性（自己免疫性（ａｕｔｒｏｉｍｍｉｎｅ））溶血性貧血、成人における白血病およびリンパ腫、子供の急性白血病、限局性腸炎、自己免疫性血管炎、多発性硬化症、慢性閉塞性肺疾患、臓器移植拒絶、敗血症が挙げられる。好ましい処置としては、移植拒絶、関節リウマチ、乾癬性関節炎、多発性硬化症、１型糖尿病、喘息、炎症性腸疾患、全身性紅斑性狼瘡、乾癬、慢性肺疾患、および炎症随伴感染性状態（ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｃｃｏｍｐａｎｙｉｎｇ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）（例えば、敗血症）の処置が挙げられる。
【００７１】
一態様では、本発明の化合物を使用して処置される疾患または状態は、がんである。式Ｉの化合物または医薬上許容される塩またはその溶媒和物が、有望で有益な抗腫瘍効果を有しうるがん疾患および状態の例としては、それに限定されないが、肺、骨、膵臓、皮膚、頭部、頚部、子宮、卵巣、胃、結腸、乳房、食道、小腸、腸、内分泌系、甲状腺、副甲状腺、副腎、尿道、前立腺、ペニス、精巣、尿管、膀胱、腎臓または肝臓のがん；直腸がん；肛門領域のがん；卵管、子宮内膜、子宮頚部、膣、外陰部、腎盂、腎細胞の癌腫；軟部組織の肉腫；粘液腫；横紋筋腫；線維腫；脂肪腫；奇形腫；胆管細胞癌；肝芽腫；血管肉腫；血管腫（ｈｅｍａｇｉｏｍａ）；肝細胞癌；線維肉腫；軟骨肉腫；骨髄腫；慢性または急性白血病；リンパ球性リンパ腫；原発性ＣＮＳリンパ腫；ＣＮＳの新生物；骨髄軸椎腫瘍；扁平上皮癌；滑膜肉腫；悪性胸膜中皮腫；脳幹神経膠腫；下垂体腺腫；気管支腺腫；軟骨腫様過誤腫（ｃｈｏｎｄｒｏｍａｔｏｕｓ  ｈａｎｌａｒｔｏｍａ）；中皮腫（ｉｎｅｓｏｔｈｅｌｉｏｍａ）；ホジキン病または１つまたは複数の前述のがんの組合せが挙げられる。
【００７２】
本発明による化合物で処置されうる好ましいがんは、皮膚、肺、肝臓、大腸、脳、胸、卵巣、前立腺がん、膵臓、腎臓、胃、頭部、頚部および尿路上皮性がん、ならびにリンパ腫および白血病である。新たな化合物は、上述の疾患の予防、短期または長期処置のために使用されうるが、手術、放射線療法、または、例えば、細胞増殖抑制性または細胞毒性物質、細胞増殖阻害剤、抗血管新生物質、ステロイドまたは抗体などの他の「最先端の」化合物と組み合わせて使用してもよい。
【００７３】
アジュバントとしてのそれらの役割で、特定の実施形態では、本発明の化合物および組成物は、ワクチンを使用した治療的または予防的戦略でアジュバントとして使用されうる。したがって、本発明の実質的に純粋なＣＤＮ、またはプロドラッグまたは医薬上許容されるその塩は、１つまたは複数の予め測定された抗原に対する免疫応答を刺激するように選択される１つまたは複数のワクチンと一緒に使用されうる。本発明の実質的に純粋なＣＤＮ、またはプロドラッグもしくは医薬上許容されるその塩は、このようなワクチンと一緒に、またはワクチンに加えて提供されうる。
【００７４】
このようなワクチンは、目的の抗原、精製抗原、生ウイルス、または抗原を発現および／または分泌するように組み換えで遺伝子操作された細菌性送達ベクター；抗原を負荷されるか、または抗原をコードする核酸を含む組成物でトランスフェクトされる細胞を含む抗原提示細胞（ＡＰＣ）ベクター、リポソーム抗原送達ビヒクル、または抗原をコードする裸の核酸ベクターを含む、不活化または弱毒化細菌またはウイルスを含む。このリストは、限定することを意図しない。例として、このようなワクチンは、１つまたは複数のＧＭ−ＣＳＦ、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ３、ＩＬ−１２ｐ７０、ＦＬＴ−３リガンドおよびサイトカインを発現および分泌する不活化腫瘍細胞も含みうる。
関連の態様では、本発明は、個人における免疫応答を誘導する、刺激するまたは補助する方法に関する。これらの方法は、本発明の実質的に純粋なＣＤＮ、またはプロドラッグもしくは医薬上許容されるその塩を、個人に投与することを含む。
１日当たり使用可能な一般式Ｉの化合物の用量範囲は、通常、０．０００１〜１０ｍｇ、例えば、０．００１〜１ｍｇである。各投与量単位は、便宜上、０．０００１〜１０ｍｇ、例えば、０．００１〜１ｍｇを含有しうる。
実際の治療上有効な量または治療的投与量は、もちろん、患者の年齢および体重、投与の経路および疾患の重症度のような当業者に公知の因子に依存する。任意の場合に、化合物または組成物は、投与量で、および治療上有効な量を、患者の特徴的な状態に基づいて送達させる手段で投与されるであろう。
本発明による１つまたは複数の追加の治療剤との任意の組合せを含めた化合物、組成物は、粘膜（例えば、経口、舌下、膣、経鼻、頚部等）、腫瘍内、腫瘍周辺、経皮、吸引、または非経口（例えば、皮下、静脈内、筋肉内、動脈内、皮内、くも膜下腔内および硬膜外投与）経路により投与されうる。ほとんどの場合には、静脈内、腫瘍内、腫瘍周辺または皮下投与経路の内の１つが適切である（ｉｓｓｕｉｔａｂｌｅ）。
【００７５】
医薬組成物
本開示の目的のために、医薬組成物は、医薬上許容される担体、アジュバントおよびビヒクルを含む製剤中で、非腸管外で、非経口で、吸引スプレーにより、局所でまたは直腸でを含む多様な手段により投与されうる。本発明の化合物の腫瘍内（直接、腫瘍体積に）または腫瘍周囲（腫瘍体積の周り）投与は、局所的な浸潤性炎症化するＤＣを直接活性化するか、腫瘍細胞アポトーシスを直接促進するか、腫瘍細胞を細胞毒性剤に感作させうる。
【００７６】
本開示の医薬組成物は、無菌注射用水性または油性懸濁液などの無菌注射用調製物の形態でありうる。この懸濁液は、上で記載された適切な分散化または湿潤剤および懸濁化剤のものを使用して、公知技術により製剤化されうる。無菌注射用調製物は、１，３−ブタンジオールの溶液などの非毒性の非経口で許容される希釈剤または溶媒中の無菌注射用溶液または懸濁液でもありうるか、または凍結乾燥粉末として調製される。中でも、使用されうる、許容されるビヒクルおよび溶媒は、水、リンゲル液および等張食塩水である。さらに、無菌固形油は、溶媒または懸濁媒体として従来通り使用されうる。この目的のために、合成モノまたはジグリセリドを含めた任意の無菌の固形油が、使用されうる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸は、同様に、注射剤の調製において使用されうる。
【００７７】
口内での局所投与のために適している製剤としては、香味基剤、通常にはショ糖およびアカシアまたはトラガント中に有効成分を含むロゼンジ剤；ゼラチンおよびグリセリン、またはショ糖およびアカシアのような不活性基材中に有効成分を含むパステル剤；ならびに適切な液体担体中に有効成分を含む含嗽剤が挙げられる。
膣投与のために適した製剤は、有効成分に加えて、適切であることが当技術分野で公知であるような担体を含有する、ペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、フォーム剤またはスプレー製剤として存在しうる。
非経口投与に適した製剤としては、抗酸化剤、緩衝剤、意図されるレシピエントの血液と等張な製剤を供給する静菌剤および溶質を含有しうる水性および非水性等張無菌注射用溶液；懸濁化剤および粘性付与剤を含みうる水性および非水性無菌懸濁液が挙げられる。製剤は、単回用量または複数回用量密閉容器、例えば、アンプルおよびバイアルで存在し、使用の直前に無菌液体担体、例えば、注射用の水の添加のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存されうる。注射溶液および懸濁液は、先に記載される種類の無菌粉末、顆粒および錠剤から調製されうる。
【００７８】
組合せ療法
本発明の化合物は、それら自体でも使用してよく、または適切な免疫応答を誘導する、修飾するまたは刺激するのに十分な量で、医薬上許容される賦形剤と併せてもよい。免疫応答は、制限なしに、特異的免疫応答、非特異的免疫応答、特異的および非特異的応答の両方、自然応答、一次免疫応答、適応免疫性、二次免疫応答、記憶免疫応答、免疫細胞活性化、免疫細胞増殖、免疫細胞分化およびサイトカイン発現を含むことができる。特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物およびその組成物は、１つまたは複数の予め決定された抗原に対する免疫応答を刺激することが意図されるワクチン；アジュバント；ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１経路アンタゴニスト、脂質、リポソーム、化学療法剤、免疫モジュレーション性セルラインなどを含めた１つまたは複数の追加の組成物と組み合わせて投与される。
【００７９】
本明細書に記載される化合物およびその組成物は、追加の治療的または予防的組成物または様式の前、後および／または同時に投与されうる。これらとしては、制限なしに、Ｂ７同時刺激分子、インターロイキン−２、インターフェロン−ｇ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、ＯＸ−４０／ＯＸ−４０リガンド、ＣＤ４０／ＣＤ４０リガンド、サルグラモスチム、レバミソール、ワクシニアウイルス、カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）、リポソーム、ミョウバン、フロイント完全または不完全アジュバント、解毒内毒素、鉱物油；リポレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチドおよび油などの界面活性物質、または炭化水素エマルジョンが挙げられる。両方の型の応答を刺激するものは、同様に使用されうるが、細胞溶解性Ｔ細胞応答対抗体応答を優先的に刺激するＴ細胞免疫応答を誘導する担体が好ましい。剤が、ポリペプチドである場合、ポリペプチド自体またはポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが、投与されうる。担体は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）または樹状細胞のような細胞でありうる。抗原提示細胞としては、マクロファージ、樹状細胞およびＢ細胞のような細胞型が挙げられる。他のプロフェッショナル抗原提示細胞としては、単核球、辺縁帯クッパー細胞、小膠細胞、ランゲルハンス細胞、指状嵌入樹状細胞、濾胞性樹状細胞およびＴ細胞が挙げられる。随意性抗原提示細胞も使用されうる。随意性抗原提示細胞の例としては、星状細胞、濾胞性細胞、内皮および線維芽細胞が挙げられる。担体は、ポリペプチドを発現するように、またはワクチン接種された個人の細胞で続いて発現されるポリヌクレオチドを送達するように形質転換される細菌細胞でありうる。水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウムなどのアジュバントは、ワクチンの能力を増大するために添加して、免疫応答を誘発する、増強するまたは延ばすことができる。別個に、または記載される組成物と組み合わせて使用される、サイトカイン、ケモカイン、およびＣｐＧなどの細菌の核酸配列、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）９アゴニスト、ならびにリポタンパク質、ＬＰＳ、モノホスホリル脂質Ａ、リポテイコ酸、イミキモド、レシキモドを含めたＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９についての追加のアゴニスト、および、さらに、ポリＩ：Ｃなどのレチノイン酸誘導性遺伝子Ｉ（ＲＩＧ−Ｉ）アゴニストなどの追加の材料も、可能性のあるアジュバントである。アジュバントの他の代表例としては、キラヤサポニン（Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ）およびコリネバクテリウム・パルバム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐａｒｖｕｍ）の樹皮から精製される均質なサポニンを含む合成アジュバントＱＳ−２１が挙げられる(McCune et al., Cancer, 1979; 43:1619)。
【００８０】
追加の治療剤との同時投与のための方法は、当技術分野で周知である(Hardman, et al.(eds.) (2001) Goodman and Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th ed., McGraw-Hill, New York, NY; Poole and Peterson (eds.) (2001) Pharmacotherapeutics for Advanced Practice:A Practical Approach, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., PA; Chabner and Longo (eds.) (2001) Cancer Chemotherapy and Biotherapy, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., PA)。一般に、同時投与または一緒の投与は、剤が、同時に、または異なる時間で投与されうる場合、２つ以上の剤で対象を処置することを示す。例えば、そのような剤は、基本的には、同時または異なる時にありうる、投与の同じ経路または異なる経路によりうる別個の投与として単独の対象に送達されうる。そのような剤は、それらが、投与の同じ経路により同時に投与されるように同時投与（例えば、同じ製剤で）で単独の対象に送達されうる。
【００８１】
本発明の化合物のアジュバント特性のため、それらの使用は、他のワクチン、アジュバント、抗原、抗体および免疫モジュレーターを含めた他の治療的様式とも組み合わせられうる。例は、以下に提供される。
【００８２】
アジュバント
本明細書に記載される本発明の化合物およびその組成物に加えて、本発明の組成物または方法は、それらの特性のため、標的とされる腫瘍細胞に存在するがん抗原に応答する免疫系を刺激、またはそうでなければ活用するように作用しうる１つまたは複数の追加の物質をさらに含みうる。そのようなアジュバントとしては、それに限定されないが、脂質、リポソーム、自然免疫性を誘導する不活化細菌（例えば、不活化または弱毒化リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）を介して自然免疫活性化に媒介する組成物、（ＮＯＤ）様受容体（ＮＬＲ）、レチノイン酸誘導性遺伝子系（ＲＩＧ）−Ｉ様受容体（ＲＬＲ）、Ｃ型レクチン受容体（ＣＬＲ）および／または病原体関連分子パターン（「ＰＡＭＰＳ」）が挙げられる。ＰＡＭＰの例としては、リポタンパク質、リポポリペプチド、ペプチドグリカン、ザイモサン、リポ多糖、ナイセリアのポリン、フラジェリン、プロフィリン（ｐｒｏｆｉｌｌｉｎ）、ガラクトセラミド、ムラミルジペプチドが挙げられる。ペプチドグリカン、リポタンパク質およびリポテイコ酸は、グラム陽性の細胞壁構成要素である。リポ多糖は、ほとんどの細菌により発現され、ＭＰＬは、１つの例である。フラジェリンは、病原性および共生細菌により分泌される細菌の鞭毛の構造的構成要素を指す。ガラクトシルセラミドは、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞の活性化剤である。ムラミルジペプチドは、全ての細菌に共通な生理活性ペプチドグリカンモチーフである。
【００８３】
免疫チェックポイント阻害剤
本発明の化合物は、ＣＴＬＡ−４経路アンタゴニスト、ＰＤ−１経路アンタゴニスト、Ｔｉｍ−３経路アンタゴニスト、Ｖｉｓｔａ経路アンタゴニスト、ＢＴＬＡ経路アンタゴニスト、ＬＡＧ−３経路アンタゴニストまたはＴＩＧＩＴ経路アンタゴニストからなる群から選択される免疫チェックポイント阻害剤などの免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて使用されうる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｔｉｍ−３抗体、抗Ｖｉｓｔａ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＬＡＧ−３抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体からなる群から選択される。
【００８４】
本発明の化合物は、ＣＴＬＡ−４経路アンタゴニストと組み合わせて使用されうる。いくつかの実施形態では、組合せは、固形腫瘍または血液系悪性腫瘍を処置するために使用される。ＣＴＬＡ−４は、適応免疫応答の重要な負の調節因子と考えられる。活性化されたＴ細胞は、ＣＤ２８より高い親和性を有する抗原提示細胞でＣＤ８０およびＣＤ８６を結合し、したがってＴ細胞刺激、ＩＬ−２遺伝子発現およびＴ細胞増殖を阻害するＣＴＬＡ−４を上方調節する。ＣＴＬＡ４遮断の抗腫瘍効果は、結腸癌、転移性前立腺がんおよび転移性メラノーマのマウスモデルで観察された。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ−４経路アンタゴニストは、トレメリムマブおよびイピリムマブからなる群から選択される抗ＣＴＬＡ−４抗体分子である。
【００８５】
イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０としても公知であるＣＴＬＡ−４抗体、ＣＡＳ番号４７７２０２−００−９）およびトレメリムマブ（チシリムマブとして以前公知のＩｇＧ２モノクローナル抗体、ＣＰ−６７５，２０６）は、ヒトＣＴＬＡ４に結合し、ＣＤ８０およびＣＤ８６とのその相互作用を防止するヒト化モノクローナル抗体である。類似の戦略により標的にされうる他の負の免疫調節因子としては、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター、トランスフォーミング成長因子ベータ、インターロイキン−１０および血管内皮増殖因子が挙げられる。
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、抗ＣＴＬＡ−４抗体および抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて使用されうる。一実施形態では、その組合せとしては、例えば本明細書に記載されるとおりの抗ＰＤ−１抗体分子および抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えば、イピリムマブが挙げられる。使用できる例示の用量としては、約１〜１０ｍｇ／ｋｇ、例えば３ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−１抗体分子の用量、および抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えば、約３ｍｇ／ｋｇのイピリムマブの用量が挙げられる。
【００８６】
本発明の化合物は、ＰＤ−１経路アンタゴニストと組み合わせて使用できる。いくつかの実施形態では、組合せは、固形腫瘍または血液学上の悪性腫瘍を処置するために使用される。ＰＤ−１は、活性化Ｔ細胞で発現される適応免疫応答の別の負の調節因子である。ＰＤ−１は、Ｂ７−Ｈ１およびＢ７−ＤＣに結合し、ＰＤ−１の関与が、Ｔ細胞活性化を抑制する。抗腫瘍効果は、ＰＤ−１経路遮断で実証された。抗ＰＤ−１抗体分子（例えば、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標））、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標））、およびピディリズマブ）、およびＡＭＰ−２２４は、本発明で利用を見出しうるＰＤ−１経路遮断剤の例として文献で報告されている。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１経路アンタゴニストは、ニボルマブ、ペンブロリズマブまたはピディリズマブからなる群から選択される抗ＰＤ−１抗体分子である。
【００８７】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１経路アンタゴニストは、イムノアドヘシン（例えば、定常部（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合したＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２の細胞外またはＰＤ−１結合部分を含むイムノアドヘシン）である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、ＡＭＰ−２２４（Ｂ７−ＤＣＩｇ；Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ；例えば、国際公開第ＷＯ２０１０／０２７８２７号および国際公開第ＷＯ２０１１／０６６３４２号で開示される）であり、ＰＤ−１およびＢ７−Ｈ１の間の相互作用を遮断するＰＤ−Ｌ２Ｆｃ融合溶解性受容体である。
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１経路アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２阻害剤は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体または抗ＰＤ−Ｌ２抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ−００１０７１８ＣまたはＭＤＸ−１１０５から選択される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体ＭＳＢ００１０７１８Ｃである。ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（Ａ０９−２４６−２としても示される；Ｍｅｒｃｋ  Ｓｅｒｏｎｏ）は、ＰＤ−Ｌ１に結合するモノクローナル抗体である。
【００８８】
本発明の化合物は、ＴＩＭ−３経路アンタゴニストと組み合わせて使用されうる。いくつかの実施形態では、その組合せは、固形腫瘍または血液学的悪性腫瘍を処置するために使用される。いくつかの実施形態では、ＴＩＭ−３経路アンタゴニストは、抗ＴＩＭ−３抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、「ＴＩＭ−３に対する抗体分子およびその使用」と題する、２０１５年８月６日に公開された米国特許出願公開第２０１５／０２１８２７４号で開示される。
本発明の化合物は、ＬＡＧ−３経路アンタゴニストと組み合わせて使用されうる。いくつかの実施形態では、その組合せは、固形腫瘍または血液学的悪性腫瘍を処置するために使用される。いくつかの実施形態では、ＬＡＧ−３経路アンタゴニストは、抗ＬＡＧ−３抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、「ＬＡＧ−３に対する抗体分子およびその使用」と題する、２０１５年３月１３日に出願された米国特許出願公開第２０１５／０２５９４２０号で開示される。
【００８９】
アミノ酸異化
本発明の化合物は、ＩＤＯまたはアルギナーゼ１またはアルギナーゼ２阻害剤などの、骨髄系由来サプレッサー細胞のような免疫抑制性免疫細胞の免疫阻害効果を拮抗するアミノ酸代謝阻害剤と組み合わせて使用することができる。
プリン作動性シグナル伝達経路
本発明の化合物は、ＣＤ３９およびＣＤ７３経路アンタゴニストまたはＡ２Ａ／Ａ２Ｂ受容体阻害剤などのプリン作動性シグナル伝達経路の阻害剤と組み合わせて使用されうる。
【００９０】
ケモカインおよびケモカイン受容体
本発明の化合物は、抑制性免疫細胞の腫瘍微小環境への動員を阻害するケモカインまたはケモカイン受容体アンタゴニストと組み合わせて使用されうる。例えば、限定的でなく、本発明の化合物は、骨髄系由来サプレッサー細胞および調節性Ｔ細胞の炎症を減少させるＣＣＲ２またはＣＣＲ５アンタゴニストと組み合わせて使用されうる。
【００９１】
Ｔ細胞受容体アゴニスト
本発明の化合物は、ＣＤ２８アゴニスト、ＯＸ４０アゴニスト、ＧＩＴＲアゴニスト、ＣＤ１３７アゴニスト、ＣＤ２７アゴニストまたはＨＶＥＭアゴニストなどのＴ細胞受容体アゴニストと組み合わせて使用されうる。
本発明の化合物は、ＣＤ２７アゴニストと組み合わせて使用されうる。例示のＣＤ２７アゴニストとしては、例えば国際公開第ＷＯ２０１２／００４３６７号に記載されるとおり、抗ＣＤ２７アゴニスト性抗体が挙げられる。
本発明の化合物は、ＧＩＴＲアゴニストと組み合わせて使用されうる。いくつかの実施形態では、組合せは、固形腫瘍または血液学的悪性腫瘍を処置するために使用される。例示のＧＩＴＲアゴニストとしては、例えば、ＧＩＴＲ融合タンパク質および抗ＧＩＴＲ抗体（例えば、二価抗ＧＩＴＲ抗体）が挙げられる。
【００９２】
ＴＬＲアゴニスト
本発明の化合物は、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストと組み合わせて使用されうる。本明細書で使用される場合、用語「Ｔｏｌｌ様受容体」（または「ＴＬＲ」）は、微生物生成物を探知する、および／または適応免疫応答を開始させるタンパク質のＴｏｌｌ様受容体ファミリーのメンバー、またはそのフラグメントを指す。一実施形態では、ＴＬＲは、樹状細胞（ＤＣ）を活性化する。Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、病原性微生物を認識する自然免疫系のセンサーとして最初に同定されたパターン認識受容体のファミリーである。ＴＬＲは、ロイシンに富む反復配列の外部ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内ＴＩＲ（Ｔｏｌｌ／ＩＬ−１Ｒ）ドメインを含有する保存膜貫通分子のファミリーを含む。ＴＬＲは、しばしば、「ＰＡＭＰ」（病原体関連分子パターン）として示される微生物における別個の構造を認識する。ＴＬＲに対するリガンド結合は、炎症および免疫に関与した因子の産生を誘導する細胞間シグナル伝達経路のカスケードを引き出す。
【００９３】
当技術分野で公知であり、本発明における使用を見出すＴＬＲアゴニストとしては、それに限定されないが、以下のものが挙げられる。
Ｐａｍ３Ｃｙｓ、ＴＬＲ−１／２アゴニスト；
ＣＦＡ、ＴＬＲ−２アゴニスト；
ＭＡＬＰ２、ＴＬＲ−２アゴニスト；
Ｐａｍ２Ｃｙｓ、ＴＬＲ−２アゴニスト；
ＦＳＬ−１、ＴＬＲ−２アゴニスト；
Ｈｉｂ−ＯＭＰＣ、ＴＬＲ−２アゴニスト；
ポリリボシン酸：ポリリボシチジル酸（ｐｏｌｙｒｉｂｏｃｙｔｉｄｉｃ  ａｃｉｄ）（ポリＩ：Ｃ）、ＴＬＲ−３アゴニスト；
ポリアデノシン−ポリウリジル酸（ポリＡＵ）、ＴＬＲ−３アゴニスト；
ポリ−Ｌ−リジンおよびカルボキシメチルセルロースで安定化されたポリイノシン・ポリシチジル酸（Ｈｉｌｔｏｎｏｌ（登録商標））、ＴＬＲ−３アゴニスト；
モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、ＴＬＲ−４アゴニスト；
ＬＰＳ、ＴＬＲ−４アゴニスト；
細菌のフラジェリン、ＴＬＲ−５アゴニスト；
シアリル−Ｔｎ（ＳＴｎ）、多数のヒトがん細胞およびＴＬＲ−４アゴニストでＭＵＣ１ムチンと関連した炭水化物；
イミキモド、ＴＬＲ−７アゴニスト；
レシキモド、ＴＬＲ−７／８アゴニスト；
ロキソリビン、ＴＬＲ−７／８アゴニスト；および
非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド（ＣｐＧ−ＯＤＮ）、ＴＬＲ−９アゴニスト。
【００９４】
それらのアジュバント品質のため、ＴＬＲアゴニストは、他のワクチン、アジュバントおよび／または免疫モジュレーターと組み合わせて使用するのが好ましく、種々の組合せで組み合わせてよい。したがって、特定の実施形態では、ＳＴＩＮＧに結合し、ＳＴＩＮＧ依存性ＴＢＫ１活性化を誘導するモノ−またはジ−ＦＣＤＮ化合物、および本明細書に記載されるとおり樹状細胞誘導、動員および／または成熟を刺激する１つまたは複数のサイトカインを発現および分泌する不活化腫瘍細胞が、治療目的のための１つまたは複数のＴＬＲアゴニストと一緒に投与されうる。
【００９５】
抗体治療剤
本発明の化合物は、治療的抗体と組み合わせて使用しうる。いくつかの実施形態では、治療的抗体の作用の機構は、抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）である。ＡＤＣＣは、細胞媒介免疫防御の機構であり、それにより免疫系のエフェクター細胞が、標的細胞を活発に溶解し、その膜表面抗原が、特異的抗体により結合されている。それは、体液性免疫応答の一部として抗体が、感染を制限し、含有するように作用できる機構の１つである。古典的なＡＤＣＣは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞に媒介される。マクロファージ、好中球および好酸球も、ＡＤＣＣに媒介しうる。ＡＤＣＣは、トラスツズマブおよびリツキシマブを含めた、腫瘍に対する治療的モノクローナル抗体の作用の重要な機構である。本発明の化合物は、ＡＤＣＣを増強するために作用しうる。
以下は、本発明の化合物と一緒に使用されうる抗体の例示のリストである。
ムロモナブ−ＣＤ３、インフリキシマブ、アダリムマブ、オマリズマブ、ダクリズマブ、リツキシマブ、イブリツモマブ、トシツモマブ、セツキシマブ、トラスツズマブ、アレムツズマブ、Ｌｙｍ−１イピリムマブ、Ｖｉｔａｘｉｎ、ベバシズマブおよびアブシキシマブ。
【００９６】
本発明の化合物と組み合わせて使用されうる追加の治療的抗体としては、プロラクチン受容体（ＰＲＬＲ）阻害剤、ＨＥＲ３阻害剤、ＥＧＦＲ２および／またはＥＧＦＲ４阻害剤、Ｍ−ＣＳＦ阻害剤、抗ＡＰＲＩＬ抗体または抗ＳＩＲＰαもしくは抗ＣＤ４７抗体が挙げられる。
【００９７】
化学療法剤
本明細書に記載される方法の追加の実施形態では、本発明の化合物は、化学療法剤（例えば、小型分子医薬化合物）と組み合わせて使用される。したがって、本方法は、さらに、対象に、追加の処置または組合せ処置として、有効な量の１つまたは複数の化学療法薬を投与することを包含する。特定の実施形態では、１つまたは複数の化学療法剤は、酢酸アビラテロン、アルトレタミン、アンヒドロビンブラスチン、アウリスタチン、ベキサロテン、ビカルタミド、ＢＭＳ１８４４７６、２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−Ｎ−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）ベンゼンスルホンアミド、ブレオマイシン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バリル−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｌ−ポリ−１−Ｌプロリル−ｔブチルアミド、カケクチン、セマドチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、３’，４’−ジデヒドロ−４’−デオキシ−８’−ノルビン−カロイコブラスチン、ドセタキソール、ドセタキセル、シクロホスファミド、カルボプラチン、カルムスチン、シスプラチン、クリプトフィシン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デシタビン、ドラスタチン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、エトポシド、５−フルオロウラシル、フィナステリド、フルタミド、ヒドロキシ尿素およびヒドロキシ尿素タキサン、イホスファミド、リアロゾール、ロニダミン、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、エンザルタミド、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、メルファラン、イセチオン酸ミボブリン、リゾキシン、セルテネフ、ストレプトゾシン、マイトマイシン、メトトレキサート、タキサン、ニルタミド、オナプリストン、パクリタキセル、プレドニムスチン、プロカルバジン、ＲＰＲ１０９８８１、リン酸ストラムスチン、タモキシフェン、タソネルミン、タキソール、トレチノイン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、硫酸ビンデシン、およびビンフルニンからなる群から選択される。
【００９８】
追加の実施形態では、本明細書に記載される方法、本発明の化合物は、本明細書中の方法に記載されるとおりの徴候を処置するための化学療法剤および／または追加の剤と組み合わせて使用される。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、ソトラスタウリン、ニロチニブ、５−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピルフェニル）−Ｎ−エチル−４−（４−（モルホリノメチル）フェニル）イソキサゾール−３−カルボキサミド、ダクトリシブ、８−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−メチル−１−（４−ピペラジン−１−イル−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン、３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−（６−（（４−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アミノ）ピリミジン−４−イル）−１−メチルウレア、ブパリシブ、８−（２，６−ジフルオロ−３，５−ジメトキシフェニル）−Ｎ−（４−（（ジメチルアミノ）メチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）キノキサリン−５−カルボキサミド、（Ｓ）−Ｎ１−（４−メチル−５−（２−（１，１，１−トリフルオロ−２−メチルプロパン−２−イル）ピリジン−４−イル）チアゾール−２−イル）ピロリジン−１，２−ジカルボキサミド、（Ｓ）−１−（４−クロロフェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−（メチル−（（（１ｒ，４Ｓ）−４−（４−メチル−３−オキソピペラジン−１−イル）シクロヘキシル）メチル）アミノ）フェニル）−１，２−ジイドロイソキノリン−３（４Ｈ）−オン、デフェラシロクス、レトロゾール、（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−４−（ヒドロキシメチル）−５−メチルオキサゾリジン−２−オン、（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）−６−（４−クロロフェニル）−２−（２，４−ジメトキシピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４（１Ｈ）−オン、４−（（２−（（（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル）アミノ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル）オキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド、メシル酸イマチニブ、２−フルオロ−Ｎ−メチル−４−（７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル）ベンズアミド、ルキソリチニブ、パノビノスタット、オシロドロスタット、（Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−シクロヘキシル−２−（（Ｓ）−２−（４−（４−フルオロベンゾイル）チアゾール−２−イル）ピロリジン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド、（Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−シクロヘキシル−２−（（Ｓ）−２−（４−（４−フルオロベンゾイル）チアゾール−２−イル）ピロリジン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド、ソニデギブリン酸塩、セリチニブ、７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミド、Ｎ−（４−（（１Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）−３−アミノ−５−メチルシクロヘキシル）ピリジン−３−イル）−６−（２，６−ジフルオロフェニル）−５−フルオロピコリンアミド、２−（２’，３−ジメチル−［２，４’−ビピリジン］−５−イル）−Ｎ−（５−（ピラジン−２−イル）ピリジン−２−イル）アセトアミド、エンコラフェニブ、７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（（１Ｒ，６Ｓ）−９−メチル−４−オキソ−３，９−ジアザビシクロ［４．２．１］−ノナン−３−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミド、ビニメチニブ、ミドスタウリン、エベロリムス、１−メチル−５−（（２−（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ピリジン−４−イル）オキシ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール２−アミン、パシレオチドジアスパルテート、ドビチニブ、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミド、Ｎ６−（２−イソプロポキシ−５−メチル−４−（１−メチルピペリジン−４−イル）フェニル）−Ｎ４−（２−（イソプロピルスルホニル）−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６−ジアミン、３−（４−（４−（（５−クロロ−４−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）アミノ）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）ピペリジン−１−イル）チエタン１，１−ジオキシド、５−クロロ−Ｎ２−（２−フルオロ−５−メチル−４−（１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）ピペリジン−４−イル）フェニル）−Ｎ４−（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ピリミジン−２，４−ジアミン、５−クロロ−Ｎ２−（４−（１−エチルピペリジン−４−イル）−２−フルオロ−５−メチルフェニル）−Ｎ４−（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ピリミジン−２，４−ジアミン、バルスポダールおよびコハク酸バタラニブからなる群から選択される１つまたは複数の剤と組み合わせて使用される。
【００９９】
他の実施形態では、本発明の化合物は、ＰＫＣ阻害剤、ＢＣＲ−ＡＢＬ阻害剤、ＨＳＰ９０阻害剤、ＰＩ３Ｋおよび／またはｍＴＯＲの阻害剤、ＦＧＦＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＦＧＦＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、シトクロムＰ４５０の阻害剤（例えば、ＣＹＰ１７阻害剤）、ＨＤＭ２阻害剤、アロマターゼ阻害剤、ｐ５３および／またはｐ５３／Ｍｄｍ２相互作用の阻害剤、またはＣＳＦ−１Ｒチロシンキナーゼ阻害剤と組み合わせて使用されうる。
【０１００】
適切な調製物としては、例えば、錠剤、カプセル剤、坐剤、溶液剤、特に注射用溶液剤（ｓ．ｃ．、ｉ．ｖ．、ｉ．ｍ．）および注入剤、エリキシル剤、乳剤または分散性粉末剤が挙げられる。医薬上活性な化合物の含量は、全体として組成物の０．１〜９０質量％、好ましくは０．５〜５０質量％の範囲に、すなわち、下で特定される投与量範囲を達成するのに十分である量にあるべきである。必要な場合、特定される用量は、１日に数回与えられる。
上に記載される組み合わせ相手についての投与量は、通常、最低用量の１／５、正常には、正常に推奨される用量の１／１まで推奨される。
【０１０１】
さらに別の態様では、本発明は、患者におけるＳＴＩＮＧに関連するか、ＳＴＩＮＧによりモジュレートされるか、またはそのモジュレーションにより影響されうる疾患または状態を処置するための方法であって、このような処置の必要な患者、好ましくはヒトに、治療上有効な量の本発明の化合物を、上記に記載される治療上有効な量の１つまたは複数の追加の治療剤と組み合わせて投与する段階を含む、方法に関する。
追加の治療剤と組み合わせた本発明による化合物の使用は、同時に、または時間をずらして（ａｔ  ｓｔａｇｇｅｒｅｄ  ｔｉｍｅｓ）行われうる。
【０１０２】
本発明による化合物および１つまたは複数の追加の治療剤は両方、１つの製剤で一緒に、または２つの同一または異なる製剤で別々に、例えばいわゆるキットオブパーツとして存在しうる。
結局、別の態様で、本発明は、本発明による化合物および上記および以降に記載される１つまたは複数の追加の治療剤を含み、１つまたは複数の不活性担体および／または希釈剤と一緒に含んでいてもよい医薬組成物に関する。
本発明の他の特徴および利点は、以下のより詳述される例から明らかになり、それは、例を介して、本発明の原理を例示する。
【０１０３】
本発明による化合物の合成
全般的技術所見
用語「周囲温度」および「室温」は、相互に交換可能に使用され、約２０℃、例えば１５〜２５℃の温度を意味する。
【０１０４】
原則として、1Ｈ  ＮＭＲスペクトルおよび／または質量スペクトルは、調製された化合物から得られた。別段の定めがない限り、全てのクロマトグラフィー操作は、室温で実行された。環状ジヌクレオチド合成の間、溶媒の蒸発は、減圧下で、典型的には、３５℃を越えない水浴温度での回転蒸発により実行された。さらに、環状ジヌクレオチド合成の間、反応は、窒素またはアルゴン下で実行された。
【０１０５】
核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル：1Ｈスペクトルについて、化学シフトは、ＤＭＳＯ溶媒シグナル（２．５０ｐｐｍ）に、または、Ｄ2Ｏでの測定については、ＤＳＳ（４，４−ジメチル−４−シラペンタン−１−スルホン酸）に関係づけられた。31Ｐ  ＮＭＲスペクトルを、1Ｈ／31Ｐの絶対周波数の比較により間接的に参照した（Ｂｒｕｋｅｒ  ＢｉｏＳｐｉｎ  ＧｍｂＨ、ソフトウェア：ＴｏｐＳｐｉｎ、ａｕプログラム：ｘｓｉ）。全ての31Ｐ  ＮＭＲスペクトルを、プロトン脱カップリングで記録した。
【０１０６】
【表５】
0006509445.tif 000020
0006509445.tif 000021
【０１０７】
分析用ＨＰＬＣ−配置：
配置Ａ（勾配ＨＰＬＣ）：
ＶＷＲ／Ｈｉｔａｃｈｉ：Ｌ−２１３０Ｐｕｍｐ；ＶＷＲ／Ｈｉｔａｃｈｉ：Ｌ−２２００自動回収装置；ＶＷＲ／Ｈｉｔａｃｈｉ：Ｌ−２３５０カラムオーブン（３０℃で設定）；ＶＷＲ／Ｈｉｔａｃｈｉ：Ｌ−２４００可変波長ＵＶ／Ｖｉｓ検出器；ＥＺＣｈｒｏｍソフトウェアバージョン３．３．１ＳＰ１。
ＹＭＣ*ＧＥＬ  ＯＤＳ−Ａ１２ｎｍ（１０μｍ；２５０×０．４ｍｍ））チャネルＡ＝水中の２０ｍＭのＴＥＡＦ（ｐＨ６．８）；チャネルＢ＝１００％アセトニトリル、２０ｍＭのＴＥＡＦ（ｐＨ６．８）。勾配：０分  １００％Ａ；３０分  １００％Ｂ；４０分  １００％Ｂ、３０℃；流速：１．０ｍＬ／分；ＵＶ２６１ｎｍ；
【０１０８】
配置Ｂ（均一溶媒性ＨＰＬＣ）：
ＶＷＲ／Ｈｉｔａｃｈｉ：Ｌ−７１００Ｐｕｍｐ；ＶＷＲ／Ｈｉｔａｃｈｉ：Ｌ−７４００  可変波長ＵＶ／Ｖｉｓ検出器；ＶＷＲ／Ｈｉｔａｃｈｉ：Ｄ−７５００統合装置。
分析用ＨＰＬＣ（配置Ｃ；ＹＭＣ*ＧＥＬ  ＯＤＳ−Ａ  １２ｎｍ（１０μｍ；２５０×０．４ｍｍ））１１％アセトニトリル、水中の２０ｍＭのＴＥＡＦ（ｐＨ６．８）；流速：１．０ｍＬ／分；ＵＶ２６４ｎｍ；
【０１０９】
ＬＣ−ＭＳ−分析：
ＨＰＬＣ−Ｓｙｓｔｅｍ：ＶＷＲ／Ｈｉｔａｃｈｉ：Ｌ−２１３０Ｐｕｍｐ；ＶＷＲ／Ｈｉｔａｃｈｉ：Ｌ−２２００自動回収装置；ＶＷＲ／Ｈｉｔａｃｈｉ：Ｌ−２３００カラムオーブン；ＶＷＲ／Ｈｉｔａｃｈｉ：Ｌ−２４５０  ダイオードアレイ検出器；Ａｇｉｌｅｎｔ：ＯｐｅｎＬａｂ
ＭＳ−システム：Ｂｒｕｋｅｒ  Ｅｓｑｕｉｒｅ  ＬＣ６０００  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ
【０１１０】
システムＡ
カラム：Ｋｒｏｍａｓｉｌ１００−５  Ｃ8、５μｍ、５０ｍｍ×３ｍｍ。
流速：０．４ｍＬ／分、３５°Ｃ、ＵＶ−検出範囲：２２０〜３００ｎｍ
質量スペクトル：陰性および陽性エレクトロスプレーイオン化を使用した質量スペクトル計で記録した
溶媒：Ａ：アセトニトリル
Ｂ：水
Ｃ：水中の２０ｍＭのＮＨ4ＨＣＯ3（ｐＨ７）
勾配：時間    A%    B%    C%
0    20    75    5
20   95    0     5
23   95    0     5
24   20    75    5
30   20    75    5
【０１１１】
サンプル調製：サンプル（２μＬ〜１０μＬ）を、１７５μＬアセトニトリルおよび１７５μＬ水に溶解させ、注射容量２μＬ〜１０μＬにした。
【０１１２】
システムＢ
カラム：ＡＣＥ３ＡＱ１１０−３  Ｃ18、５μｍ、５０ｍｍ×３ｍｍ。
流速：０．４ｍＬ／分、３５℃、ＵＶ−検出範囲：２２０〜３００ｎｍ
質量スペクトル：陰性および陽性エレクトロスプレーイオン化を使用した質量スペクトル計で記録した
溶媒：Ａ：アセトニトリル
Ｂ：水
Ｃ：水中の２０ｍＭのＮＨ4ＨＣＯ3（ｐＨ７）
勾配：時間    A%    B%    C%
0      2    93    5
20     60   35    5
23     95   0     5
24     2    93    5
30     2    93    5
【０１１３】
【表６】
0006509445.tif 000022
【０１１４】
【表７】
0006509445.tif 000023
【０１１５】
【表８】
0006509445.tif 000024
【０１１６】
【表９】
0006509445.tif 000025
【０１１７】
【表１０】
0006509445.tif 000026
【０１１８】
中間体の合成
中間体１．１
イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド（１−（β−Ｄ−リボフラノシル）イミダゾ［４，５−ｄ］ピリダジン−４（５Ｈ）−オン）
【化１４】
0006509445.tif 000027
【０１１９】
J.Chem.Soc.Perkin Trans.1 1989, 1769-1774に記載のとおりに、標題化合物を調製した。
中間体１．２
５’−ＤＭＴ−イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド
【化１５】
0006509445.tif 000028
【０１２０】
イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド（中間体１．１、４．００ｇ、１４．９ｍｍｏｌ）を無水ピリジン（３×２０ｍＬ）と共沸させ、真空で乾燥させ、無水ピリジン（２５ｍＬ）に溶解させた。この溶液に、無水ピリジン（１５ｍＬ）中の４，４’−ジメトキシトリチルクロリド（５．０５ｇ、１４．９ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、反応混合物を、１時間、室温で撹拌した。反応混合物を、減圧下で蒸発させ、結果として得られる残渣を、分取逆相ＨＰＬＣ（Ｘ−ＢｒｉｄｇｅＣ１８、アセトニトリル／水／ＮＨ3）により精製した。
ＬＣ−ＭＳ（システムＤ）：
ｔRet＝０．８２分；ＥＳＩ−ＭＳ：５７１［Ｍ＋Ｈ］+
【０１２１】
中間体１．３−ａおよび中間体１．３−ｂ
５’−ＤＭＴ−２’−ＴＢＳ−イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド（中間体１．３−ａ）および５’−ＤＭＴ−３’−ＴＢＳ−イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド（中間体１．３−ｂ）
【化１６】
0006509445.tif 000029
【０１２２】
５’−ＤＭＴ−イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド（中間体１．２、５．３０ｇ、９．２９ｍｍｏｌ）を、無水ピリジン（３×３０ｍＬ）で共沸させ、真空で乾燥させ、無水ピリジン（２０ｍＬ）に溶解させた。この溶液に、イミダゾール（１．９０ｇ、２７．９ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチルクロロジメチルシラン（１．５４ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、６時間、室温で撹拌した。反応混合物を、ジクロロメタンと水とに分割した。有機層を分離し、水層をジクロロメタンで抽出した。合わせた有機抽出物を、ブラインで洗浄し、疎水性フリットを使用して乾燥させ、減圧下で蒸発させた。結果として得られる残渣を、中圧カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ジクロロメタン中の５〜２０％アセトンの勾配）により精製した。
ＬＣ−ＭＳ（システムＦ）：
中間体１．３−ａ：ｔRet＝１．５７分；ＥＳＩ−ＭＳ：６８５［Ｍ＋Ｈ］+
中間体１．３−ｂ：ｔRet＝１．６７分；ＥＳＩ−ＭＳ：６８５［Ｍ＋Ｈ］+
【０１２３】
中間体１．４
５’−ＤＭＴ−３’−ＴＢＳ−２’−ＣＥＰ−イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド
【化１７】
0006509445.tif 000030
【０１２４】
５’−ＤＭＴ−３’−ＴＢＳ−イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド（中間体１．３−ｂ、１．７５ｇ、２．５６ｍｍｏｌ）を、無水アセトニトリル（３×２５ｍＬ）と共沸させ、真空で乾燥させて、無水ジクロロメタン（４５ｍＬ）に溶解させた。この溶液に、２−シアノエチルＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト（１．６２ｍＬ、５．１２ｍｍｏｌ）およびテトラゾール（アセトニトリル中の０．５Ｍ溶液５．６９ｍＬ、２．８５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、室温で、４時間撹拌した。反応混合物を、ジクロロメタンで希釈し、炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を分離し、水層をジクロロメタンで抽出した。合わせた有機抽出物を、疎水性フリットを使用して乾燥させ、減圧下で蒸発させた。結果として得られる残渣を、中圧カラムクロマトグラフィー（シリカゲル（ジクロロメタン中のトリエチルアミンで失活された）、シクロヘキサン中の２０〜１００％酢酸エチル（３％トリエチルアミン）の勾配）により精製した。生成物は、ジアステレオ異性体の混合物として得られた。
ＬＣ−ＭＳ（システムＤ）：
ｔRet＝１．３３分；ＥＳＩ−ＭＳ：８８５［Ｍ＋Ｈ］+
31P NMR (162 MHz, 303 K, CDCl3) δ 150.9および149.7 ppm.
【０１２５】
中間体１．５
５’−ＯＨ−２’−ＴＢＳ−３’−Ｈ−ホスホネート−Ｎ6−Ｂｚ−アデノシン
【化１８】
0006509445.tif 000031
【０１２６】
Ｎ6−Ｂｚ−５’−ＤＭＴ−２’−ＴＢＳ−３’−ＣＥＰ−アデノシン（ＣｈｅｍＧｅｎｅｓから得た、０．８９０ｇ、０．９０ｍｍｏｌ）を、室温で、アセトニトリル（１５ｍＬ）および水（０．０３３ｍＬ，１．８３ｍｍｏｌ、２ｅｑ．）に溶解した。トリフルオロ酢酸ピリジニウム（０．２１０ｇ、１．０９ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ．）を添加し、反応混合物を、室温で１０分間撹拌した。ｔｅｒｔ−ブチルアミン（１０ｍＬ、９５．７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、室温で３０分間撹拌した。反応混合物を、減圧下で蒸発させ、無水アセトニトリル（２５ｍＬ）に再溶解させ、減圧下で蒸発させて、白色から無色の泡状物を得た。残渣を、ジクロロメタン（２５ｍＬ）および水（０．１６２ｍＬ、９ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）に溶解した。ジクロロメタン（２５ｍＬ）中のジクロロ酢酸（０．６７０ｍＬ、８．１２ｍｍｏｌ、９ｅｑ．）を添加し、結果として得られるオレンジ色の溶液を、室温で１０分間撹拌した。ピリジン（１．３１ｍＬ、１６．２３ｍｍｏｌ、１８ｅｑ．）を添加し、反応混合物を、室温で５分間撹拌した。原材料のＬＣ−ＭＳ分析が、中間体１．５の存在を確認した。
ＬＣ−ＭＳ（システムＡ）：
ｔRet＝３．１０分；ＥＳＩ−ＭＳ：５５０［Ｍ＋Ｈ］+
【０１２７】
フラスコに栓をし、注意深く密閉し、＋２℃で、１６時間保存した。溶媒を、減圧下で蒸発させ、残渣を、無水アセトニトリルと共沸させた（４×１５ｍＬ）。最後の蒸発手順の間に、溶液を、およそ５ｍＬの最終共沸混合物に濃縮した。結果として得られる中間体１．５の無水溶液を、次の反応の順序にすぐに使用した。
【０１２８】
中間体１．６
直鎖二量体５’−ＯＨ−３’−ＴＢＳ−イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド−（２’→５’）−シアノエチル−ホスホロチオエート−２’−ＴＢＳ−３’−Ｈ−ホスホネート−Ｎ6−Ｂｚ−アデノシン
【化１９】
0006509445.tif 000032
【０１２９】
５’−ＤＭＴ−３’−ＴＢＳ−２’−ＣＥＰ−イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド（中間体１．４、１．３４０ｇ、１．５１ｍｍｏｌ、１．７ｅｑ．）を、無水アセトニトリル（４×１０ｍＬ）で共沸させた。最後の蒸発手順の間に、溶液を、およそ３ｍＬの最終共沸混合物に濃縮した。結果として得られる溶液を、室温でおよそ５ｍＬ無水アセトニトリル（所望の材料の理論量：０．４９５ｇ、０．９０ｍｍｏｌ）に溶解させた５’−ＯＨ−２’−ＴＢＳ−３’−Ｈ−ホスホネート−Ｎ6−Ｂｚ−アデノシン（中間体１．５）に添加した。反応混合物を、室温で３０分間撹拌した。（（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ−メチリデン）アミノ）−３Ｈ−１，２，４−ジチアゾリン−３−チオン（ＤＤＴＴ）（０．２０３ｇ、０．９９ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ．）を添加し、反応混合物を、室温で３０分間撹拌した。揮発性成分を減圧下で蒸発させ、残渣を、ジクロロメタン（２５ｍＬ）および水（０．１６２ｍＬ、９ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）に溶解させた。ジクロロメタン（２５ｍＬ）中のジクロロ酢酸（１．３４０ｍＬ、１６．２４ｍｍｏｌ、１８ｅｑ．）を添加し、オレンジ色溶液を、室温で２０分間撹拌した。ピリジン（１０ｍＬ）を添加し、反応混合物を、室温で５分間撹拌した。原材料のＬＣ−ＭＳ分析は、ジアステレオ異性体の混合物として中間体１．６の存在を確認した。
ＬＣ−ＭＳ（システムＡ）：
中間体１．６−ａ：ｔRet＝７．３６分；中間体１．６−ｂ：ｔRet＝７．５７分；
ＥＳＩ−ＭＳ：各ジアステレオ異性体について１０６３［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１３０】
フラスコに栓をし、注意深く密閉し、＋２℃で、１６時間保存した。混合物を、減圧下で蒸発させ、残渣を、減圧下で無水ピリジンで同時蒸発させた（２×２０ｍＬ）。４０ｍＬ無水ピリジンの別の部分を添加し、残渣を減圧下で濃縮して、およそ２０ｍＬ総量になった。結果として得られる中間体１．６の無水溶液を、次の反応の順序ですぐに使用した。
【０１３１】
中間体１．７
環状二量体３’−ＴＢＳ−イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド−（２’→５’）−シアノエチル−ホスホロチオエート−２’−ＴＢＳ−Ｎ6−Ｂｚ−アデノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート
【化２０】
0006509445.tif 000033
【０１３２】
２−クロロ−５，５−ジメチル−１，３，２−ジオキサホスホリナン２−オキシド（ＤＭＯＣＰ）（０．５８１ｇ、３．１５ｍｍｏｌ、３．５ｅｑ．）を、およそ２０ｍＬの総量で、無水ピリジン中の粗５’−ＯＨ−３’−ＴＢＳ−イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド−（２’→５’）−ＣＥ−ＰＳ−２’−ＴＢＳ−３’−Ｈ−ホスホネート−Ｎ6−Ｂｚ−アデノシン（中間体１．６）（粗製剤中の所望の材料の理論量：０．９５７ｇ、０．９０ｍｍｏｌ）に添加した。結果として得られる混合物を、室温で、２０分間撹拌した。水（０．５７０ｍＬ、３１．６ｍｍｏｌ、３５．１ｅｑ．）および３Ｈ−１，２−ベンゾジチオール−３−オン（０．２３０ｇ、１．３７ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ．）を添加し、撹拌は、室温で継続した。２０分後、反応混合物を、１５０ｍＬ水中の炭酸水素ナトリウム（４．５００ｇ、５３．６ｍｍｏｌ）の溶液に注ぎ、室温で５分間振盪させ、続いて酢酸エチル／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１５０ｍＬ、１：１）の混合物を添加した。有機相を、分離し、水相を、さらに２回酢酸エチル／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２×７５ｍＬ、１：１）で抽出した。合わせた有機相を、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、続いて減圧下で溶媒の蒸発、および１００ｍＬ無水トルエンとの最終同時蒸発にかけた。原材料を、調製用フラッシュクロマトグラフィー（１６０ｇシリカゲル、ジクロロメタン中の０〜１２．５％ＭｅＯＨの勾配）により精製して、０．７８ｇの純度富化された中間体１．７（ジアステレオマーの混合物）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（システムＡ）：
中間体１．７−ａ：ｔRet＝７．５分；中間体１．７−ｂ：ｔRet＝８．１８分；
中間体１．７−ｃ：ｔRet＝９．０２分；中間体１．７−ｄ：ｔRet＝１０．１７分；
ＥＳＩ−ＭＳ：各ジアステレオ異性体について１０７７［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１３３】
中間体１．８
環状二量体３’−ＴＢＳ−イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド−（２’→５’）−ホスホロチオエート−２’−ＴＢＳ−アデノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート
【化２１】
0006509445.tif 000034
【０１３４】
無水エタノール中の３３％メチルアミン１２５ｍＬを、純度富化された３’−ＴＢＳ−イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド−（２’→５’）−シアノエチル−ホスホロチオエート−２’−ＴＢＳ−Ｎ6−Ｂｚ−アデノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート（中間体１．７；０．７８０ｇ）に添加し、結果として得られる溶液を、室温で４時間撹拌した。全ての揮発性成分を減圧下で蒸発させ、さらに真空で乾燥させて、０．７５８ｇ粗中間体１．８（ジアステレオマーの混合物）を得て、それを次の反応に直接使用した。
ＬＣ−ＭＳ（システムＡ）：
中間体１．８−ａ：ｔRet＝１．４７分；中間体１．８−ｂ：ｔRet＝３．６０分；
中間体１．８−ｃ：ｔRet＝３．９０分；中間体１．８−ｄ：ｔRet＝５．５３分；
ＥＳＩ−ＭＳ：各ジアステレオ異性体について９２０［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１３５】
中間体２．１
５’−ＯＨ−２’−Ｆ−３’−Ｈ−ホスホネート−Ｎ6−Ｂｚ−２’−デオキシアデノシン
【化２２】
0006509445.tif 000035
【０１３６】
Ｎ6−ベンゾイル−５’−ＤＭＴ−２’−Ｆ−２’−デオキシアデノシン−３’−ＣＥＰ（Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒから得た）（１．０５ｇ、１．２０ｍｍｏｌ）を、室温で、アセトニトリル（６ｍＬ）および水（０．０４３ｍＬ、２．４０ｍｍｏｌ、２ｅｑ．）に溶解させた。トリフルオロ酢酸ピリジニウム（２７８ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ．）を添加し、反応混合物を、室温で５分間撹拌した。その後、ｔｅｒｔ−ブチルアミン（６．０ｍＬ、５７．１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、室温で１５分間撹拌した。
その反応混合物を、真空で蒸発させ、無水アセトニトリル（１２ｍＬ）に再溶解させ（２×）、再度真空で蒸発させて、白色から無色の泡状物を得た。その残渣を、ジクロロメタン（１４．４ｍＬ）および水（０．２２ｍＬ、１２．０ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）に溶解させた。ジクロロメタン（６％、１４．４ｍＬ）中のジクロロ酢酸を添加し、結果として得られるオレンジ色の溶液を、室温で１０分間撹拌した。ピリジン（１．６４ｍＬ、２０．３ｍｍｏｌ、１７ｅｑ．）を添加し、反応混合物を、真空で蒸発させ、無水アセトニトリル（３×１１ｍＬ）で共沸させた。最終的に、残っている粗生成物を、さらに３０分間高真空で乾燥させ、さらなる精製なしに使用した。
原材料のＬＣ−ＭＳ分析は、中間体２．１の存在を確認した。
ＬＣ−ＭＳ（システムＥ）：
ｔRet＝０．６４分  ＥＳＩ−ＭＳ：４３８［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１３７】
中間体２．２
直鎖二量体５’−ＯＨ−３’−ＴＢＳ−イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド−（２’→５’）−シアノエチル−ホスホロチオエート−２’−Ｆ−３’−Ｈ−ホスホネート−Ｎ6−Ｂｚ−２’−デオキシアデノシン
【化２３】
0006509445.tif 000036
【０１３８】
５’−ＤＭＴ−３’−ＴＢＳ−２’−ＣＥＰ−イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド（中間体１．４、１．３８ｇ、１．５６ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）を、無水アセトニトリル（１０ｍＬ）に溶解させ、真空で共沸で蒸発させた。この操作を、さらに３回繰り返して、最終蒸発で、フラスコ中に約５ｍＬの共沸混合物を遊離させた。１０片のモレキュラーシーブ（３Å）を添加し、結果として得られる混合物を、室温でおよそ３ｍＬ無水アセトニトリルに溶解させた５’−ＯＨ−２’−Ｆ−３’−Ｈ−ホスホネート−Ｎ6−Ｂｚ−２’−デオキシアデノシン（中間体２．１）（所望の材料の理論量：５２３ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を、室温で５分間撹拌した。（（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ−メチリデン）アミノ）−３Ｈ−１，２，４−ジチアゾリン−３−チオン（ＤＤＴＴ）（２７５ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ、０．９ｅｑ．）を添加し、反応混合物を、室温で３０分間撹拌した。揮発性成分を、真空で蒸発させ、残渣を、ジクロロメタン（２０ｍＬ）および水（０．２１６ｍＬ、１２ｍｍｏｌ、７．７ｅｑ．）に溶解させた。ジクロロメタン中のジクロロ酢酸（６％、１９．２ｍＬ）を添加し、結果として得られるオレンジ色の溶液を、室温で１０分間撹拌した。この期間の後、ピリジン（１２ｍＬ）を添加し、反応混合物を、真空で蒸発させた。最後に、残りの粗生成物を、高真空でさらに３０分間乾燥させ、さらなる精製および特徴づけなしに使用した。
【０１３９】
中間体２．３
環状二量体３’−ＴＢＳ−イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド−（２’→５’）−シアノエチル−ホスホロチオエート−２’−Ｆ−Ｎ6−Ｂｚ−２’−デオキシアデノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート
【化２４】
0006509445.tif 000037
【０１４０】
粗中間体２．２（所望の材料の最大理論量：１．４８ｇ、１．５６ｍｍｏｌ）を、３６ｍＬ無水ピリジンに溶解させ、真空でおよそ２０ｍＬに減少させた。２−クロロ−５，５−ジメチル−１，３，２−ジオキサホスホリナン２−オキシド（ＤＭＯＣＰ）（７７５ｍｇ、４．２０ｍｍｏｌ、２．７ｅｑ．）を添加し、結果として得られる混合物を、室温で５分間撹拌した。水（０．７５ｍＬ、４１．３ｍｍｏｌ、２６．５ｅｑ．）および３Ｈ−１，２−ベンゾジチオール−３−オン（０．３０２ｇ、１．８０ｍｍｏｌ、１．１５ｅｑ．）を添加し、撹拌を、室温で継続した。５分後、反応混合物を、１４０ｍＬ水中の炭酸水素ナトリウム（４．００ｇ、４７．６ｍｍｏｌ）の溶液に注ぎ、室温で５分間撹拌し、次いで酢酸エチル／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１４０ｍＬ、１：１）の混合物を添加した。有機相を分離し、水相をさらに、酢酸エチル／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１：１）で抽出した。有機相を合わせ、溶媒を真空で除去した。
【０１４１】
残っている残渣を、最小量のジクロロメタンに溶解し、調製用フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：１００／０→８０／２０）により精製した。画分を、ＨＰＬＣ−ＭＳにより分析した。生成物含有画分を合わせ、溶媒を真空で除去して、９００ｍｇのジアステレオ異性体の混合物を得た。その材料のＬＣ−ＭＳ分析は、中間体２．３−ａ／ｂ／ｃ／ｄの存在を確認した。
ＬＣ−ＭＳ（システムＥ）：
中間体２．３−ａ：ｔRet＝０．９５分；中間体２．３−ｂ：ｔRet＝０．９８分；
中間体２．３−ｃ：ｔRet＝１．００分；中間体２．３−ｄ：ｔRet＝１．０３分；
ＥＳＩ−ＭＳ：各ジアステレオ異性体について９６５［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１４２】
中間体２．４
環状二量体３’−ＴＢＳ−イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド−（２’→５’）−ホスホロチオエート−２’−Ｆ−２’−デオキシアデノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート
【化２５】
0006509445.tif 000038
【０１４３】
１０ｍＬメタノールおよび１０ｍＬ水性アンモニア（３０〜３３％）に、３００ｍｇ（所望の材料の最大理論量：０．３１ｍｍｏｌ）の中間体２．３を添加した。結果として得られる混合物を、５０℃で１５時間撹拌した。反応混合物を、室温に冷却し、窒素を、３０分間混合物にバブリングした。溶媒を真空で除去し、混合物を無水アセトニトリル（３０ｍＬ）に再溶解し、再度真空で蒸発させた。残渣を無水アセトニトリルで破砕し、ろ過し、５ｍｌＡＣＮで洗浄し、終夜室温で乾燥させた。粗生成物をＤＭＦに溶解し、調製用ＨＰＬＣ（Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ  Ｃ−１８；アセトニトリル／Ｈ2Ｏ／ＮＨ3）により精製した。生成物含有画分を収集し、溶媒を凍結乾燥により除去した。この方法により、全ての４つのジアステレオ異性体は、分離され得たであろう。
材料のＬＣ−ＭＳ分析は、中間体２．４−ａ／ｂ／ｃ／ｄの存在を確認した。
ＬＣ−ＭＳ（システムＣ）：
中間体２．４−ａ：ｔRet＝１．０４分；中間体２．４−ｂ：ｔRet＝１．１０分；
中間体２．４−ｃ：ｔRet＝１．１３分；中間体２．４−ｄ：ｔRet＝１．１５分；
ＥＳＩ−ＭＳ：各ジアステレオ異性体について８０８［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１４４】
中間体３．１
５’−ＯＨ−３’−Ｈ−ホスホネート−Ｎ6−Ｂｚ−ＬＮＡ−アデニン
【化２６】
0006509445.tif 000039
【０１４５】
出発材料として「ＬＮＡ−Ａアミダイト」（ＥＱ−００６３−１０００、Ｅｘｉｑｏｎから得た）を使用することにより、中間体２．１に類似して、中間体３．１を調製した。
原材料のＬＣ−ＭＳ分析は、中間体３．１の存在を確認した。
ＬＣ−ＭＳ（システムＥ）：
ｔRet＝０．６３分；ＥＳＩ−ＭＳ：４４８［Ｍ＋Ｈ］+
【０１４６】
中間体３．２
直鎖二量体５’−ＯＨ−３’−ＴＢＳ−イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド−（２’→５’）−シアノエチル−ホスホロチオエート−３’−Ｈ−ホスホネート−Ｎ6−Ｂｚ−ＬＮＡ−アデニン
【化２７】
0006509445.tif 000040
出発材料として中間体３．１および中間体１．４を使用することにより、中間体２．２に類似して、中間体３．２を調製した。
【０１４７】
中間体３．３
環状二量体３’−ＴＢＳ−イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド−（２’→５’）−シアノエチル−ホスホロ−チオエート−Ｎ6−Ｂｚ−ＬＮＡ−アデニン−（３’→５’）−ホスホロチオエート
【化２８】
0006509445.tif 000041
【０１４８】
出発材料として中間体３．２を使用することにより、中間体２．３に類似して、中間体３．３を調製した。
材料のＬＣ−ＭＳ分析は、中間体３．３−ａ／ｂ／ｃ／ｄの存在を確認した。
ＬＣ−ＭＳ（システムＥ）：
中間体３．３−ａ：ｔRet＝０．９４分；中間体３．３−ｂ：ｔReｔ＝０．９８分；
中間体３．３−ｃ：ｔRet＝０．９９分；中間体３．３−ｄ：ｔRet＝１．０３分；  
ＥＳＩ−ＭＳ：各ジアステレオ異性体について９７５［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１４９】
中間体３．４
環状二量体３’−ＴＢＳ−イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド−（２’→５’）−ホスホロチオエート−ＬＮＡ−アデニン−（３’→５’）−ホスホロチオエート
【化２９】
0006509445.tif 000042
【０１５０】
出発材料として中間体３．３を使用することにより、中間体２．４に類似して、中間体３．４を調製した。
材料のＬＣ−ＭＳ分析は、中間体３．４−ａ／ｂ／ｃ／ｄの存在を確認した。
ＬＣ−ＭＳ（システムＣ）：
中間体３．４−ａ：ｔRet＝０．８１分；中間体３．４−ｂ：ｔRet＝０．８９分；
中間体３．４−ｃ：ｔRet＝０．９１分；中間体３．４−ｄ：ｔRet＝０．９９分；
ＥＳＩ−ＭＳ：各ジアステレオ異性体について８１８［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１５１】
中間体４．１
５’−ＯＨ−２’−ＴＢＳ−３’−Ｈ−ホスホネート−プリン−β−Ｄ−リボフラノシド
【化３０】
0006509445.tif 000043
【０１５２】
Fu et al.Biochemistry 1993, 32, 10629-10637で記載されたとおりに調製できる、５’−ＤＭＴ−２’−ＴＢＳ−３’−ＣＥＰ−プリン−β−Ｄ−リボフラノシドを出発材料として使用することにより、中間体１．５に類似して、中間体４．１を調製した。中間体１．５と対照的に、この中間体を、終夜保存せずに、次の反応配列ですぐに使用した。
原材料のＬＣ−ＭＳ分析は、中間体４．１の存在を確認した。
ＬＣ−ＭＳ（システムＢ）：
ｔRet＝８．５６分；ＥＳＩ−ＭＳ：４３１［Ｍ＋Ｈ］+
【０１５３】
中間体４．２
直鎖二量体５’−ＯＨ−３’−ＴＢＳ−イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド−（２’→５’）−シアノエチル−ホスホロチオエート−２’−ＴＢＳ−３’−Ｈ−ホスホネート−プリン−β−Ｄ−リボフラノシド
【化３１】
0006509445.tif 000044
【０１５４】
中間体１．４および上に記載される中間体４．１を出発材料として使用することにより、中間体１．６に類似して、中間体４．２を調製した。
原材料のＬＣ−ＭＳ分析は、ジアステレオ異性体の混合物としての中間体４．２の存在を確認した。
ＬＣ−ＭＳ（システムＢ）：
中間体４．２−ａ：ｔRet＝１４．８６分；中間体４．２−ｂ：ｔRet＝１５．０１分；
ＥＳＩ−ＭＳ：各ジアステレオ異性体について９４４［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１５５】
中間体４．３
環状二量体３’−ＴＢＳ−イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド−（２’→５’）−シアノエチル−ホスホロ−チオエート−２’−ＴＢＳ−プリン−β−Ｄ−リボフラノシド−（３’→５’）−ホスホロチオエート
【化３２】
0006509445.tif 000045
出発材料として中間体４．２を使用することにより、中間体１．７に類似して、中間体４．３（ジアステレオマーの混合物として）を調製した。
ＬＣ−ＭＳ（システムＢ）：
中間体４．３−ａ：ｔRet＝１５．７６分；中間体４．３−ｂ：ｔRet＝１６．６１分；
中間体４．３−ｃ：ｔRet＝１７．６８分；中間体４．３−ｄ：ｔRet＝１９．２６分；  
ＥＳＩ−ＭＳ：各ジアステレオ異性体について９５８［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１５６】
中間体４．４
環状二量体３’−ＴＢＳ−イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド−（２’→５’）−ホスホロチオエート−２’−ＴＢＳ−プリン−β−Ｄ−リボフラノシド−（３’→５’）−ホスホロチオエート
【化３３】
0006509445.tif 000046
【０１５７】
出発材料として中間体４．３を使用することにより、中間体１．８に類似して、中間体４．４（ジアステレオマーの混合物として）を調製した。
ＬＣ−ＭＳ（システムＢ）：
中間体４．４−ａ：ｔRet＝１０．３１分；中間体４．４−ｂ：ｔRet＝１１．８２分；
中間体４．４−ｃ：ｔRet＝１２．２６分；中間体４．４−ｄ：ｔRet＝１４．４７分；
ＥＳＩ−ＭＳ：各ジアステレオ異性体について９０５［Ｍ＋Ｈ］+。
本発明による化合物の合成
全般的所見：以下の対の化合物は、ジアステレオマーであり、それぞれ、少なくとも１つのリン原子の配置に関して異なる。
例１．１および例１．２；
例２．１および例２．２；
例３．１および例３．２；
例４．１および例４．２。
【０１５８】
例１．１および例１．２
環状（イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド−（２’→５’）−ホスホロチオエート−アデノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート）
【化３４】
0006509445.tif 000047
【０１５９】
３０ｍＬ無水ピリジンおよび１５ｍＬ無水トリエチルアミンを、粗３’−ＴＢＳ−イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド−（２’→５’）−ホスホロチオエート−２’−ＴＢＳ−アデノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート（中間体１．８；０．７６ｇ）に添加した。結果として得られる溶液を、減圧下で濃縮して、およそ５ｍＬ総量にし、次いでトリエチルアミントリヒドロフルオリド（３．５９０ｍＬ、２１．７ｍｍｏｌ）および１１ｍＬ無水トリエチルアミンを同時に添加した。この溶液を、５０℃で３．５時間撹拌した。室温に冷却した後、反応物を、メトキシトリメチルシラン（１０ｍＬ、７２．４ｍｍｏｌ）でクエンチし、さらに任意の過剰のＨＦを消費するまで室温で撹拌した。３０分後、全ての揮発性構成要素を、減圧下で蒸発させ、次いで減圧下で５０ｍＬ無水トルエンと最終同時蒸発させた。残渣をさらに真空で乾燥させて、例１．１および例１．２を含有する原料混合物を得た。
【０１６０】
６５ｍＬ水を添加し、結果として得られる懸濁液を、室温で超音波浴に入れた。１５分後、この懸濁液を、６０ｍＬクロロホルムに注ぎ、有機相を分離した。この抽出をさらに２回、クロロホルムで繰り返した。合わせた有機相を、５０ｍＬ水で抽出し、合わせた生成物を含有する水相を、０．４５μｍのＲｏｔｉｌａｂｏ（登録商標）−ＣＭＥシリンジフィルター（外径３３ｍｍ）でろ過して、特定の構成要素を除去した。生成物溶液を、水で５００ｍＬまで希釈し、２Ｍ塩化ナトリウムで先に再生され水で洗浄されたＱ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）高速陰イオン交換カラム（４０〜１６５μｍ；１２５×３５ｍｍ；約１２０ｍＬ）Ｃｌ-型にかけた。カラムを、水で（２カラム体積）、続いて２５カラム体積を越える水中で０〜１Ｍ重炭酸トリエチルアンモニウム緩衝剤（ＴＥＡＢ、ｐＨ７）の勾配により洗浄した（検出波長２５４ｎｍ）。例１．１および例１．２を、約０．６ＭのＴＥＡＢで異性体の混合物として溶出した。生成物を含有する画分を、減圧下で、およそ１０ｍＬの最終量まで注意深く濃縮した。
例１．１（４回目の溶出）および例１．２（３回目の溶出）の分離は、セミ分取逆相ＨＰＬＣ精製を繰り返すことにより達成された。その生成物溶液を、水中の４％アセトニトリル、２０ｍＭトリエチルアンモニウムホルメート（ｔｒｉｅｔｈｙａｍｍｏｎｉｕｍ  ｆｏｒｍａｔｅ）（ＴＥＡＦ、ｐＨ６．８）で先に平衡にしたＹＭＣ*ＧＥＬ  ＯＤＳ−Ａ１２ｎｍカラム（１０μｍ；２５０×１６ｍｍ；約５０ｍＬ）にかけた。溶出は、水中の４％、６％および２０％アセトニトリル、２０ｍＭのＴＥＡＦ（ｐＨ６．８）の段階勾配で実行された。
【０１６１】
例１．１の調製、ナトリウム塩（「第４の溶出ジアステレオマー」）
例１．１、ＴＥＡ塩の脱塩は、分取逆相中圧液体クロマトグラフィー（ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ｒｅｖｅｒｓｅｄ  ｐｈａｓｅ  ｍｅｄｉｕｍ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）（ＭＰＬＣ）により実行された。生成物溶液（約４０ｍＬ）を、先に水で平衡にしたＭｅｒｃｋのＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ（登録商標）ＲＰ−１８カラム（１５〜２５μｍ；４５０×２５ｍｍ；約２２０ｍＬ）にかけた。そのカラムを水で洗浄して、過剰のＴＥＡＦ緩衝剤を除去した。その後、水中の２％の２−プロパノールを使用して、脱塩例１．１を溶出した。生成物含有画分を、減圧下で部分的に濃縮し、続いて、先に２Ｍ塩化ナトリウムで再生され、水で洗浄したＳＰ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）高速陽イオン交換カラム（４５〜１６５μｍ；１２５×３５ｍｍ；約１２０ｍＬ）Ｎａ+型にかけた。ＵＶ吸光度がもはや検出できなくなるまで、そのカラムを水で洗浄した（検出波長２５４ｎｍ）。生成物含有画分を、減圧下で注意深く蒸発させ、さらに真空で乾燥させて、例１．１を二ナトリウム塩として得た。
【０１６２】
ＨＰＬＣ（配置Ａ）：ｔRet＝８．５６分；
ＥＳＩ−ＭＳ：６９２［Ｍ＋Ｈ］+
1H NMR (400 MHz, 318 K, 500 μL (CD3)2SO + 30 μL D2O) δ 8.70 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 6.07 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.91 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.07 - 4.99 (m, 2H), 4.95 (dd, J = 7.5, 4.5 Hz, 1H), 4.44 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.33 - 4.21 (m, 3H), 4.05 - 3.93 (m, 1H), 3.92 - 3.77 (m, 2H) ppm.
31P NMR (162 MHz, D2O): δ 52.4 (s, 1P), 55.3 (s, 1P) ppm.
【０１６３】
例１．２の調製、ナトリウム塩（「第３の溶出ジアステレオマー」）
ＴＥＡから例１．２のナトリウム、ＴＥＡ塩への脱塩および塩交換は、例１．１、ＴＥＡ塩について記載されるのと類似の様式で実行された。
ＨＰＬＣ（配置Ａ）：ｔRet＝７．７５分；
ＥＳＩ−ＭＳ：６９２［Ｍ＋Ｈ］+
1H NMR (400 MHz, 318 K, 500 μL (CD3)2SO + 30 μL D2O) δ 8.72 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 6.04 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.88 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.25 (dd, J = 8.5, 4.4 Hz, 1H), 5.08 (ddd, J = 11.2, 8.4, 4.5 Hz, 1H), 4.92 (dd, J = 8.2, 4.3 Hz, 1H), 4.37 - 4.27 (m, 1H), 4.27 - 4.21 (m, 3H), 4.08 (dd, J = 11.0, 4.2 Hz, 1H), 3.82 - 3.77 (m, 1H), 3.67 - 3.60 (m, 1H) ppm.
31P NMR (162 MHz, D2O): δ 55.8 (s, 1P), 57.0 (s, 1P) ppm.
【０１６４】
例２．１および例２．２
環状（イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド−（２’→５’）−ホスホロチオエート−２’−Ｆ−２’−デオキシアデノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート
【化３５】
0006509445.tif 000048
【０１６５】
１６ｍｇ（１９μｍｏｌ）の中間体２．４−ｄを、１ｍＬ無水ピリジンおよび４ｍＬ無水アセトニトリルに添加し、溶媒を、真空で共沸で蒸発させた。残渣を、１０ｍＬ無水アセトニトリル中で２回再懸濁し、再度真空で共沸で蒸発させた。８０．７μＬ（１．０ｍｍｏｌ）無水ピリジンおよび１６８μＬ（１．２μｍｏｌ）ＴＥＡを、残渣に添加した後、１０３μＬ（０．６３ｍｍｏｌ）ＴＥＡ*３ＨＦを、シリンジを介して注意深く添加した。結果として得られる混合物を、５０℃で９０分間撹拌した。室温に冷却した後、反応物を、２０ｍＬの炭酸トリエチルアンモニウムの水溶液（濃度＝１ｍｏｌ／Ｌ）の添加によりクエンチした。結果として得られる混合物を、さらに１５分間、室温で撹拌した。混合物を、Ｗａｔｅｒ  Ｓｅｐ  Ｐａｋ  Ｃ１８（著作権（Ｃ））カートリッジ（５ｇ  Ｃ１８−材料、最初に２５ｍＬアセトニトリルで、その後２５ｍＬ水で予備調整された）に注意深くかけ、６０ｍＬの水で洗浄した。後に、１００ｍＬのアセトニトリル／トリエチルアンモニウムアセテート（ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ  ａｃｅｔａｔ）／水混合物（１００ｍＬ水および２５ｍＬアセトニトリルに１ｍＬのトリエチルアンモニウムアセテート水溶液（濃度＝１ｍｏｌ／Ｌ）を添加することにより調製される）を使用することにより、生成物を、カートリッジから溶出した。生成物を含有する画分を合わせ、溶媒を、凍結乾燥により除去した。結果として得られる生成物を、さらに、調製用ＨＰＬＣ（ＡｔｌａｎｔｉｓＣ１８；２０ｍＭ水性ＮＨ４ＯＡｃ／アセトニトリル＝９８／２→８０／２０）により精製した。溶媒をフリーズドライにより除去した後、生成物を、２ｍＬ水に溶解しＢｉｏ−Ｒａｄ  Ｓｐｉｎカラム（２５０ｍｇのＢＴ  ＡＧ５０Ｗ−２樹脂１００〜２００メッシュ水素型で充填し、１Ｍの水性ＮａＯＨ３ｍＬで調整し、その後６ｍＬ水で洗浄して、ｐＨ約７を得た）に注ぎ、１２ｍＬ水で溶出した。最終生成物を含有する画分を合わせ、溶媒をフリーズドライにより除去した。
【０１６６】
例２．１：
ＬＣ−ＭＳ（システムＣ）：
ｔRet＝０．６１分；ＥＳＩ−ＭＳ：６９４［Ｍ＋Ｈ］+
1H NMR (400 MHz, 303 K, D2O) δ ppm 8.73 (s, 1 H), 8.53 (s, 1 H), 8.24 (s, 1 H), 7.96 (s, 1 H), 6.40 (d, J=15.9 Hz, 1 H), 6.26 (d, J=8.6 Hz, 1 H), 5.55 (dd, J=51.1, 3.8 Hz, 1 H), 4.83 - 4.99 (m, 2 H), 4.75 (d, J=4.2 Hz, 1 H), 4.65 (ddd, J=12.2, 9.0, 2.2 Hz, 1 H), 4.53 - 4.59 (m, 2 H), 4.43 - 4.48 (m, 1 H), 4.16 - 4.24 (m, 2 H)
31P NMR (162 MHz, D2O): δ 55.7 (s, 1P), 52.2 (s, 1P) ppm.
【０１６７】
例２．２
出発材料として中間体２．４−ｃを使用することにより、例２．１に類似して、例２．２を調製した。
ＬＣ−ＭＳ（システムＣ）：
ｔRet＝０．３０分；ＥＳＩ−ＭＳ：６９４［Ｍ＋Ｈ］+
1H NMR (400 MHz, 303K, D2O) δ ppm 8.80 (s, 1 H), 8.55 (s, 1 H), 8.24 (s, 1 H), 8.24 (s, 1 H), 6.44 (d, J=15.0 Hz, 1 H), 6.28 (d, J=8.5 Hz, 1 H), 5.54 - 5.73 (m, 1 H), 4.99 - 5.10 (m, 2 H), 4.64 - 4.70 (m, 1 H), 4.58 (d, J=4.4 Hz, 1 H), 4.52 - 4.57 (m, 2 H), 4.37 - 4.45 (m, 1 H), 4.22 (ddd, J=12.3, 3.5, 1.1 Hz, 1 H), 4.08 (ddd, J=11.7, 3.6, 1.7 Hz, 1 H)
31P NMR (162 MHz, D2O): δ 55.5 (s, 1P), 55.9 (s, 1P) ppm.
【０１６８】
例３．１および例３．２
環状（イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド−（２’→５’）−ホスホロチオエート−ＬＮＡ−アデニン−（３’→５’）−ホスホロチオエート）、ナトリウム塩
【化３６】
0006509445.tif 000049
それぞれ、出発材料として中間体３．４−ｄ（例３−１について）および３．４−ｃ（例３−２について）を使用することにより、例２．１および２．２に類似して、例３．１および３．２を調製した。
【０１６９】
例３．１：
ＬＣ−ＭＳ（システムＥ）：
ｔRet＝０．３７分；ＥＳＩ−ＭＳ：７０４［Ｍ＋Ｈ］+
1H NMR (400 MHz, 303 K, D2O) δ ppm 8.79 (s, 1 H), 8.53 (s, 1 H), 8.22 (s, 1 H), 7.95 (s, 1 H), 6.26 (d, J=8.4 Hz, 1 H), 6.14 (s, 1 H), 5.08 (s, 1 H), 4.97 (ddd, J=9.6, 8.4, 4.4 Hz, 1 H), 4.81 (d, J=5.4 Hz, 1 H), 4.82 - 4.70 (m, 3 H), 4.55 (d, J=2.0 Hz, 1 H), 4.35 (dd, J=11.9, 2.7 Hz, 1 H), 4.25 - 4.16 (m, 3 H), 4.08 (d, J=8.5 Hz, 1 H)31P NMR (162 MHz, D2O): δ 56.0 (s, 1P), 53.0 (s, 1P) ppm.
【０１７０】
例３．２：
ＬＣ−ＭＳ（システムＥ）：
ｔRet＝０．２９分；ＥＳＩ−ＭＳ：７０４［Ｍ＋Ｈ］+
1H NMR (400 MHz, 303 K, D2O) δ ppm 8.85 (s, 1 H), 8.56 (s, 1 H), 8.23 (s, 1 H), 8.15 (s, 1 H), 6.26 (d, J=8.4 Hz, 1 H), 6.16 (s, 1 H), 5.20 (s, 1 H), 5.00 (ddd, J=13.0, 8.4, 4.5 Hz, 1 H), 4.87 (d, J=5.0 Hz, 1 H), 4.83 - 4.73 (m, 2 H), 4.62 (d, J=4.5 Hz, 1 H), 4.54 - 4.52 (m, 1 H), 4.47 (dd, J=11.3, 5.0 Hz, 1 H), 4.27 - 4.20 (m, 2 H), 4.12 (dd, J=11.3, 3.1 Hz, 1 H), 4.10 (d, J=8.5 Hz, 1 H).
31P NMR (162 MHz, D2O): δ 57.3 (s, 1P), 55.8 (s, 1P) ppm.
【０１７１】
例４．１および例４．２
環状（イミダゾピリダジノン−β−Ｄ−リボフラノシド−（２’→５’）−ホスホロチオエート−プリン−β−Ｄリボフラノシド−（３’→５’）−ホスホロチオエート）、ナトリウム塩
【化３７】
0006509445.tif 000050
【０１７２】
出発材料として中間体４．４−ｄおよび中間体４．４−ｃを使用することにより、例１．１および１．２に類似して、例４．１および４．２を調製した。例１．１および１．２について記載される手順に加えて、反応を始めさせる前に、出発材料を、無水ピリジンおよび無水トリエチルアミンの２：１混合物を使用することにより、一度共沸させた。
【０１７３】
例４．１：
ＨＰＬＣ（配置Ｂ）：ｔRet＝１０．２２分；
ＥＳＩ−ＭＳ：６７７［Ｍ＋Ｈ］+
1H NMR (400 MHz, 318 K, 500 μL (CD3)2SO + 30 μL D2O) δ 9.16 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 6.06 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.06 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 5.11 - 4.98 (m, 3H), 4.44 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.34 - 4.25 (m, 3H), 4.08 - 3.97 (m, 1H), 3.93 - 3.83 (m, 1H), 3.84 - 3.77 (m, 1H).
31P NMR (162 MHz, D2O): δ 55.3 (s, 1P), 52.6 (s, 1P) ppm.
【０１７４】
例４．２：
ＨＰＬＣ（配置Ｂ）：ｔRet＝５．５０分；
ＥＳＩ−ＭＳ：６７７［Ｍ＋Ｈ］+
1H NMR (400 MHz, 318 K, 500 μL (CD3)2SO + 30 μL D2O) δ 9.16 (s, 1H), 8.94 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 6.04 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.03 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.30 (dd, J = 8.5, 4.3 Hz, 1H), 5.09 (ddd, J = 11.3, 8.4, 4.6 Hz, 1H), 5.01 (dd, J = 8.2, 4.3 Hz, 1H), 4.45 - 4.32 (m, 1H), 4.32 - 4.19 (m, 3H), 4.13 (dd, J = 11.0, 4.1 Hz, 1H), 3.84 - 3.75 (m, 1H), 3.71 - 3.61 (m, 1H).
31P NMR (162 MHz, D2O): δ 55.8 (s, 1P), 57.8 (s, 1P) ppm.