(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液検体と、核酸を染色する蛍光色素と、赤血球を溶血させる溶血剤とを混合して測定試料を調製する試料調製部と、
前記測定試料に光を照射する光源と、
光が照射された前記測定試料から生じる蛍光、前方散乱光及び側方散乱光を受光し、前記蛍光の強度に対応した蛍光信号、前記前方散乱光の強度に対応した前方散乱光信号、及び側方散乱光の強度に対応した側方散乱光信号を出力する受光部と、
前記蛍光信号及び前記前方散乱光信号の少なくとも一方に基づいて、反応性Ｂリンパ球を反応性Ｔリンパ球と分別して計数する処理部と、
を備える、血液分析装置。
【請求項２】
前記処理部は、前記蛍光信号及び前記側方散乱光信号に基づいて、前記測定試料中の血球からリンパ球を分別し、分別したリンパ球から前記反応性Ｂリンパ球を反応性Ｔリンパ球と分別する、請求項１に記載の血液分析装置。
【請求項３】
前記処理部は、前記側方散乱光と、前記蛍光信号及び前記前方散乱光信号の少なくとも一方と、に基づいて、反応性Ｂリンパ球を反応性Ｔリンパ球と分別して計数する、請求項１又は２に記載の血液分析装置。
【請求項４】
前記処理部は、前記側方散乱光信号および前記蛍光信号、に基づいて、反応性Ｂリンパ球を反応性Ｔリンパ球と分別して計数する、請求項１又は２に記載の血液分析装置。
【請求項５】
前記処理部は、前記蛍光信号及び前記前方散乱光信号の少なくとも一方に基づいて、さらに反応性Ｔリンパ球を反応性Ｂリンパ球と分別して計数する、請求項１乃至４何れか一項に記載の血液分析装置。
【請求項６】
前記処理部から出力された結果を表示する表示部をさらに備え、
前記処理部は、計数した結果を前記表示部に表示させる、請求項１乃至５何れか一項に記載の血液分析装置。
【請求項７】
前記表示部は、反応性Ｂリンパ球数、反応性Ｔリンパ球数、反応性Ｂリンパ球数と反応性Ｔリンパ球数との比、リンパ球数と反応性リンパ球数との比、白血球数と反応性リンパ球数との比からなる群から選ばれた少なくとも１種の情報を表示する、請求項６に記載の血液分析装置。
【請求項８】
測定試料に光を照射したときに生じる蛍光の強度に対応した蛍光信号、前方散乱光の強度に対応した前方散乱光信号、及び側方散乱光の強度に対応した側方散乱光信号を取得する工程と、
前記蛍光信号及び前記前方散乱光信号の少なくとも一方に基づいて、反応性Ｂリンパ球を反応性Ｔリンパ球と分別して計数する工程と、
を備える、血液分析方法。
【請求項９】
前記反応性Ｂリンパ球を反応性Ｔリンパ球と分別して計数する工程において、前記蛍光信号及び前記側方散乱光信号に基づいて、前記測定試料中の血球からリンパ球を分別し、分別したリンパ球から前記反応性Ｂリンパ球を反応性Ｔリンパ球と分別する、請求項８に記載の血液分析方法。
【請求項１０】
前記反応性Ｂリンパ球を反応性Ｔリンパ球と分別して計数する工程において、前記側方散乱光と、前記蛍光信号及び前記前方散乱光信号の少なくとも一方と、に基づいて、反応性Ｂリンパ球を反応性Ｔリンパ球と分別する、請求項８又は９に記載の血液分析方法。
【請求項１１】
前記反応性Ｂリンパ球を反応性Ｔリンパ球と分別して計数する工程において、前記側方散乱光信号および前記蛍光信号、に基づいて、反応性Ｂリンパ球を反応性Ｔリンパ球と分別して計数する、請求項８又は９に記載の血液分析方法。
【請求項１２】
前記蛍光信号及び前記前方散乱光信号の少なくとも一方に基づいて、反応性Ｔリンパ球を反応性Ｂリンパ球と分別して計数する工程をさらに備える、請求項９乃至１１何れか一項に記載の血液分析方法。
【請求項１３】
計数した結果を表示部に表示させる工程をさらに備える、請求項９乃至１２何れか一項に記載の血液分析方法。
【請求項１４】
前記表示部に表示させる工程において、反応性Ｂリンパ球数、反応性Ｔリンパ球数、反応性Ｂリンパ球数と反応性Ｔリンパ球数との比、リンパ球数と反応性リンパ球数との比、白血球数と反応性リンパ球数との比からなる群から選ばれた少なくとも１種の情報を表示する、請求項１３に記載の血液分析方法。
【請求項１５】
コンピュータに、
測定試料に光を照射したときに生じる蛍光の強度に対応した蛍光信号、前方散乱光の強度に対応した前方散乱光信号、及び側方散乱光の強度に対応した側方散乱光信号を取得するステップと、
前記蛍光信号及び前記前方散乱光信号の少なくとも一方に基づいて、反応性Ｂリンパ球を反応性Ｔリンパ球と分別して計数するステップと、
を実行させる、血液分析プログラム。
【請求項１６】
前記反応性Ｂリンパ球を反応性Ｔリンパ球と分別して計数するステップにおいて、前記蛍光信号及び前記側方散乱光信号に基づいて、前記測定試料中の血球からリンパ球を分別し、分別したリンパ球から前記反応性Ｂリンパ球を反応性Ｔリンパ球と分別する、請求項１５に記載の血液分析プログラム。
【請求項１７】
前記反応性Ｂリンパ球を反応性Ｔリンパ球と分別して計数するステップにおいて、前記側方散乱光と、前記蛍光信号及び前記前方散乱光信号の少なくとも一方と、に基づいて、反応性Ｂリンパ球を反応性Ｔリンパ球と分別する、請求項１５又は１６に記載の血液分析プログラム。
【請求項１８】
前記反応性Ｂリンパ球を反応性Ｔリンパ球と分別して計数するステップにおいて、前記側方散乱光信号および前記蛍光信号、に基づいて、反応性Ｂリンパ球を反応性Ｔリンパ球と分別して計数する、１５又は１６に記載の血液分析プログラム。
【請求項１９】
前記蛍光信号及び前記前方散乱光信号の少なくとも一方に基づいて、反応性Ｔリンパ球を反応性Ｂリンパ球と分別して計数するステップをさらに備える、請求項１５乃至１８何れか一項に記載の血液分析プログラム。
【請求項２０】
計数した結果を表示部に表示させるステップをさらに備える、請求項１５乃至１９何れか一項に記載の血液分析プログラム。
【請求項２１】
前記表示部に表示させるステップにおいて、反応性Ｂリンパ球数、反応性Ｔリンパ球数、反応性Ｂリンパ球数と反応性Ｔリンパ球数との比、リンパ球数と反応性リンパ球数との比、白血球数と反応性リンパ球数との比からなる群から選ばれた少なくとも１種の情報を表示する、請求項２０に記載の血液分析プログラム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液分析装置、血液分析方法及び血液分析プログラムに関する。
【背景技術】
【０００２】
正常な末梢血液中には、リンパ球、単球、好塩基球、好酸球及び好中球等の白血球が存在する。ウイルス感染症又は造血器腫瘍等の疾患においては、正常な末梢血液中には存在しない異常な白血球が出現する。異常な白血球としては、例えば、抗原刺激により活性化したリンパ球である反応性リンパ球が挙げられる。
【０００３】
例えば特許文献１には、正常白血球を分類計数することができると共に、芽球と異型リンパ球との判別が可能な白血球の分類計数方法が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１２−２３３７５４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ここで、異型リンパ球には反応性Ｂリンパ球および反応性Ｔリンパ球等が含まれている。しかしながら、特許文献１に記載の方法では、異型リンパ球を分別できるものの、反応性Ｂリンパ球単体については分別および計数を行うことができない。このため、反応性Ｂリンパ球を計数できる血液分析装置及び血液分析方法が望まれている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明に係る血液分析装置は、血液検体、核酸を染色する蛍光色素、および赤血球を溶血させる溶血剤を混合して測定試料を調製する試料調製部と、測定試料に光を照射する光源と、光が照射された測定試料から生じる蛍光、前方散乱光及び側方散乱光を受光し、蛍光の強度に対応した蛍光信号、前方散乱光の強度に対応した前方散乱光信号、及び側方散乱光の強度に対応した側方散乱光信号を出力する受光部と、蛍光信号及び前方散乱光信号の少なくとも一方に基づいて、反応性Ｂリンパ球を分別して計数する処理部と、を備える。
【０００７】
本発明に係る血液分析方法は、測定試料に光を照射したときに生じる蛍光の強度に対応した蛍光信号、前方散乱光の強度に対応した前方散乱光信号、及び側方散乱光の強度に対応した側方散乱光信号を取得する工程と、蛍光信号及び前方散乱光信号の少なくとも一方に基づいて、反応性Ｂリンパ球を分別して計数する工程と、を備える。
【０００８】
本発明に係る血液分析プログラムは、コンピュータに、測定試料に光を照射したときに生じる蛍光の強度に対応した蛍光信号、前方散乱光の強度に対応した前方散乱光信号、及び側方散乱光の強度に対応した側方散乱光信号を取得するステップと、蛍光信号及び前方散乱光信号の少なくとも一方に基づいて、反応性Ｂリンパ球を分別して計数するステップと、を実行させる。
【発明の効果】
【０００９】
本発明により、反応性Ｂリンパ球を計数できる血液分析装置、血液分析方法及び血液分析プログラムを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】本発明の一実施形態に係る血液分析装置の略図的ブロック図である。
【図２】本発明の一実施形態に係る血液分析方法のフローチャートである。
【図３】本発明の一実施形態に係る血液分析方法におけるデータ処理工程のフローチャートである。
【図４】感染症等に罹患した検体の側方散乱光強度と蛍光強度とを軸とするスキャッタグラムの一例である。
【図５】正常な検体の側方散乱光強度と蛍光強度とを軸とするスキャッタグラムの一例である。
【図６】感染症等に罹患した検体の側方散乱光強度と前方散乱光強度とを軸とするスキャッタグラムの一例である。
【図７】正常な検体の側方散乱光強度と前方散乱光強度とを軸とするスキャッタグラムの一例である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明を実施した好ましい形態の一例について説明する。
【００１２】
（血液分析装置１００の構成）
図１は、本実施形態に係る血液分析装置１００の略図的ブロック図である。血液分析装置１００は、フローサイトメトリー法を用いて、血液に含まれる各種血球等に関する情報を分析する装置である。
【００１３】
血液分析装置１００は、試料調製部１０を備えている。試料調製部１０は、分析に用いる測定試料を調製する部分である。試料調製部１０は、血液検体（全血）と、溶血剤および蛍光色素等の各種試薬とを混合することにより、測定試料を調製する。
【００１４】
溶血剤は、赤血球を溶血させる薬剤である。このため、溶血剤を含む測定試料では、赤血球は溶血している。
【００１５】
溶血剤は、例えば、界面活性剤を含んでいることが好ましい。好ましく用いられる界面活性剤としては、例えば、カチオン性界面活性剤等が挙げられる。カチオン性界面活性剤は、強い溶血力を有するためである。カチオン性界面活性剤を用いることで、赤血球を溶血させ、正常白血球及び異常単核球の細胞膜に損傷を与えることができる。このため、正常白血球及び異常単核球が蛍光色素により染色されやすくなる。カチオン性界面活性剤の好ましい例としては、４級アンモニウム塩型界面活性剤、ピリジニウム塩型界面活性剤等が挙げられる。カチオン性界面活性剤の好ましい具体例としては、例えば、構造式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される全炭素数９〜３０の界面活性剤が挙げられる。
【００１６】
【化１】
0006461494.tif 000002
【００１７】
【化２】
0006461494.tif 000003
（式（Ｉ）及び（ＩＩ）において、Ｒ１は、炭素数６〜１８のアルキル基又はアルケニル基である。Ｒ２およびＲ３は、炭素数１〜４のアルキル基又はアルケニル基である。Ｒ４は、炭素数１〜４のアルキル基、アルケニル基又はベンジル基である。Ｘは、ハロゲン原子である。）
【００１８】
Ｒ１としては、炭素数が６、８、１０、１２及び１４のアルキル基又はアルケニル基が好ましく、特に直鎖のアルキル基が好ましい。Ｒ１の好ましい具体例としては、例えば、オクチル基、デシル基、及びドデシル基等が挙げられる。
【００１９】
Ｒ２及びＲ３としては、特にメチル基、エチル基及びプロピル基が好ましい。
【００２０】
Ｒ４としては、メチル基、エチル基及びプロピル基が好ましい。
【００２１】
溶血剤は、例えば、カチオン性界面活性剤に加えて、ノニオン性界面活性剤等のカチオン性界面活性剤以外の界面活性剤を含んでいてもよい。溶血剤は、界面活性剤に加えて、例えば、有機酸や緩衝剤等を含んでいてもよい。
【００２２】
蛍光色素は、核酸を染色する薬剤である。このため、核酸を持たない赤血球は、蛍光色素によってほとんど染色されない。核酸を有する白血球及び有核赤血球等の有核の血球が蛍光色素によって染色される。
【００２３】
蛍光色素としては、例えば、プロピジウムアイオダイド、エチジウムブロマイド、エチジウム−アクリジンヘテロダイマー、エチジウムジアジド、エチジウムホモダイマー−１、エチジウムホモダイマー−２、エチジウムモノアジド、トリメチレンビス［［３‐［［４‐［［（３‐メチルベンゾチアゾール‐３‐イウム）‐２‐イル］メチレン］‐１，４‐ジヒドロキノリン］‐１‐イル］プロピル］ジメチルアミニウム］・テトラヨージド（ＴＯＴＯ−１）、４‐［（３‐メチルベンゾチアゾール‐２（３Ｈ）‐イリデン）メチル］‐１‐［３‐（トリメチルアミニオ）プロピル］キノリニウム・ジヨージド（ＴＯ−ＰＲＯ−１）、Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'‐テトラメチル‐Ｎ，Ｎ'‐ビス［３‐［４‐［３‐［（３‐メチルベンゾチアゾール‐３‐イウム）‐２‐イル］‐２‐プロペニリデン］‐１，４‐ジヒドロキノリン‐１‐イル］プロピル］‐１，３‐プロパンジアミニウム・テトラヨージド（ＴＯＴＯ−３）、又は２‐［３‐［［１‐［３‐（トリメチルアミニオ）プロピル］‐１，４‐ジヒドロキノリン］‐４‐イリデン］‐１‐プロペニル］‐３‐メチルベンゾチアゾール‐３‐イウム・ジヨージド（ＴＯ−ＰＲＯ−３）等が挙げられる。
【００２４】
試料調製部１０において調製された測定試料は、測定部２０に供給される。測定部２０は、光源２１と、受光部２２と、フローセル２３とを有する。測定試料は、フローセル２３に送入される。フローセル２３には、測定試料と共に、シース液が送入される。このシース液と共に測定試料がフローセル２３を通過する。
【００２５】
光源２１は、フローセル２３内の測定試料に対して光を照射する。光源２１は、例えば、半導体レーザー光源等により構成することができる。光源２１が出射する光の波長は、例えば、６３３ｎｍであってもよい。
【００２６】
光源２１からの光が測定試料に対して照射されると、蛍光、側方散乱光及び前方散乱光が生じる。前方散乱光は、前方散乱光受光部２２ａにより受光される。前方散乱光受光部２２ａは、前方散乱光の強度に対応した前方散乱光信号を処理部３０に対して出力する。
【００２７】
処理部３０は、外部に設置されたパーソナルコンピュータの中央処理装置（ＣＰＵ）により構成されている。なお、処理部３０はこれに限られず、血液分析装置１００内部に設けられたマイクロコンピュータの中央処理装置としてもよい。
【００２８】
側方散乱光は、側方散乱光受光部２２ｂにより受光される。側方散乱光受光部２２ｂは、側方散乱光の強度に対応した側方散乱光信号を処理部３０に対して出力する。
【００２９】
蛍光は、蛍光受光部２２ｃにより受光される。蛍光受光部２２ｃは、蛍光の強度に対応した蛍光信号を処理部３０に対して出力する。
【００３０】
これら前方散乱光受光部２２ａ、側方散乱光受光部２２ｂ、蛍光受光部２２ｃにより受光部２２が構成されている。なお、受光部２２は、例えば、フォトダイオード等により構成することができる。
【００３１】
処理部３０は、入力された蛍光信号、側方散乱光信号及び前方散乱光信号に基づいて、測定試料としての血液に含まれる各種血球等に関する情報を演算する。
【００３２】
処理部３０は、蛍光信号及び前方散乱光信号の少なくとも一方に基づいて反応性Ｂリンパ球を検出する。処理部３０は、検出結果に基づいて反応性Ｂリンパ球を計数する。処理部３０は、計数結果としての反応性Ｂリンパ球数を出力する。
【００３３】
より具体的には、処理部３０は、蛍光信号及び側方散乱光信号に基づいて、白血球を、反応性リンパ球と、反応性リンパ球以外の白血球とに分別する。さらに、処理部３０は、蛍光信号及び前方散乱光信号の少なくとも一方に基づいて、反応性リンパ球に含まれる反応性Ｂリンパ球を分別する。なお、処理部３０は、白血球を、リンパ球と、リンパ球以外の血球とに分別した後に、リンパ球から反応性Ｂリンパ球を検出してもよい。
【００３４】
また、処理部３０は、蛍光信号、側方散乱光信号及び前方散乱光信号に基づいて、白血球を、反応性Ｂリンパ球と、反応性Ｂリンパ球以外のリンパ球と、リンパ球以外の白血球等に分別してもよい。リンパ球以外の白血球としては、例えば、単球、好中球、好酸球、好塩基球等が含まれる。
【００３５】
処理部３０には、表示部４０が接続されている。表示部４０は、処理部３０から出力された計数結果を表示する。表示部４０は、少なくとも、反応性Ｂリンパ球数を表示する。表示部４０は、例えば、反応性Ｂリンパ球数、反応性Ｔリンパ球数、反応性Ｂリンパ球数と反応性Ｔリンパ球数との比、リンパ球数と反応性リンパ球数との比、白血球数と反応性リンパ球数との比からなる群から選ばれた少なくとも１種の情報を表示してもよい。
【００３６】
（血液分析装置１００の血液分析方法）
次に、血液分析装置１００における血液分析方法について説明する。
【００３７】
図２に示す通り、血液分析装置１００の血液分析方法は、測定工程Ｓ１およびデータ処理工程Ｓ２を含んでいる。
【００３８】
測定工程Ｓ１において、血液分析装置１００では、まず、試料調製部１０において、血液検体と、核酸を染色する蛍光色素と、赤血球を溶血させる溶血剤とを混合して測定試料を調製する。具体的には、検体容器に収容された血液検体を分注する。次に、分注された血液検体と、蛍光色素と、溶血剤とを混合容器において混合することにより測定試料を得る。
【００３９】
次に、光源２１から測定試料に光を照射する。具体的には、測定試料をシース液と共にフローセル２３に流す。フローセル２３内を流れる測定試料に光源２１からの光を照射する。測定試料に光が入射すると、蛍光、前方散乱光及び側方散乱光が生じる。前方散乱光受光部２２ａは、前方散乱光を受光し、前方散乱光の強度に対応した前方散乱光信号を出力する。側方散乱光受光部２２ｂは、側方散乱光を受光し、側方散乱光の強度に対応した側方散乱光信号を出力する。蛍光受光部２２ｃは、蛍光を受光し、蛍光の強度に対応した蛍光信号を出力する。
【００４０】
次に、データ処理工程Ｓ２において、処理部３０は取得した信号に基づき血球の計数を行う。
【００４１】
データ処理工程Ｓ２では、蛍光信号及び前方散乱光信号の少なくとも一方に基づいて、少なくとも反応性Ｂリンパ球を検出する。反応性Ｂリンパ球の検出結果に基づいて反応性Ｂリンパ球を計数する。計数結果である反応性Ｂリンパ球数を少なくとも出力する。
【００４２】
より具体的には、データ処理工程Ｓ２において、蛍光信号及び側方散乱光信号に基づいて、白血球を、反応性リンパ球と、反応性リンパ球以外の血球とに分別する。データ処理工程Ｓ２では、蛍光信号及び前方散乱光信号の少なくとも一方に基づいて、反応性リンパ球に含まれる反応性Ｂリンパ球を検出する。
【００４３】
データ処理工程Ｓ２において、白血球を、リンパ球と、リンパ球以外の血球とに分別した後に、分別したリンパ球の中からさらに反応性Ｂリンパ球を分別してもよい。また、データ処理工程Ｓ２において、蛍光信号、側方散乱光信号及び前方散乱光信号に基づいて、白血球を反応性Ｂリンパ球と、反応性Ｂリンパ球以外のリンパ球と、リンパ球以外の白血球とに一度に分別してもよい。
【００４４】
より具体的には、例えば、図３に示すように、データ処理工程Ｓ２においては、まず、信号受信工程Ｓ２１において、処理部３０は、受光部２２から蛍光信号、前方散乱光信号及び側方散乱光信号を受信する。また、処理部３０は、得られた測定試料中の各粒子に対応した前方散乱光強度、側方散乱光強度、及び蛍光強度を、粒子毎に関連付けられたデータとして、メモリに記憶する。
【００４５】
次に、検出及び計数工程Ｓ２２において、処理部３０はメモリに記憶された粒子毎の蛍光信号、前方散乱光信号及び側方散乱光信号のデータを、メモリに予め記憶されている解析プログラムを用いて解析を行う。
【００４６】
処理部３０は、まず、蛍光信号及び側方散乱光信号に基づいて、測定試料中の白血球をリンパ球、単球、好中球および好塩基球、好酸球等のサブクラスに分別する。続いて、蛍光信号及び前方散乱光信号の少なくとも一方に基づいて、分別したリンパ球を正常リンパ球、反応性Ｂリンパ球及び反応性Ｔリンパ球等に分別し、それぞれ計数を行う。
【００４７】
次に、結果の記憶工程Ｓ２３において、処理部３０は、検出及び計数工程Ｓ２２における検出及び計数結果を記憶する。表示工程Ｓ２４において、処理部３０は、検出及び計数工程Ｓ２２における検出及び計数結果を表示部４０に表示させる。
【００４８】
本発明者らは、臨床試験との対比実験を行った結果、反応性Ｂリンパ球、反応性Ｔリンパ球、および正常リンパ球では、測定される蛍光強度及び前方散乱光強度が異なることを見出した。具体的には、反応性Ｔリンパ球から得られる蛍光信号及び前方散乱光信号は、通常リンパ球から得られる蛍光信号及び前方散乱光信号よりも強度が強い。また、反応性Ｂリンパ球から得られる蛍光信号及び前方散乱光信号は、通常リンパ球および反応性Ｔリンパ球から得られる蛍光信号及び前方散乱光信号よりも強度が強い。その結果、本発明者らは、蛍光強度及び前方散乱光強度の少なくとも一方に基づいて、反応性Ｂリンパ球と正常リンパ球とを分別し、反応性Ｂリンパ球を計数できることに想到した。また同様に、蛍光強度及び前方散乱光強度の少なくとも一方に基づいて、反応性Ｔリンパ球と正常リンパ球とを分別し、反応性Ｔリンパ球を計数できることに想到した。
【００４９】
より正確に反応性Ｂリンパ球および反応性Ｔリンパ球を計数する観点からは、側方散乱光強度と、蛍光強度及び前方散乱光強度の少なくとも一方とから反応性Ｂリンパ球を計数することが好ましい。さらには、側方散乱光強度、蛍光強度及び前方散乱光強度から反応性Ｂリンパ球を計数することがより好ましい。
【００５０】
（反応性リンパ球の計数方法の一例）
以下、反応性リンパ球の計数方法の一例について、より具体的に説明する。
【００５１】
第１の例における反応性リンパ球の検出及び計数方法について、図４に示すスキャッタグラムを用いて説明する。
【００５２】
まず、蛍光信号及び側方散乱光信号の強度に基づいて、測定試料中の白血球を、リンパ球、単球、好中球および好塩基球、好酸球等のサブクラスに分別する。
【００５３】
次に、第１の例では、図４に示すスキャッタグラムを構成している軸のパラメータである蛍光強度及び側方散乱光強度に基づいて、分別したリンパ球を正常リンパ球と、反応性Ｂリンパ球と、反応性Ｔリンパ球とに分別する。
【００５４】
ここで、リンパ球を正常リンパ球、反応性Ｂリンパ球及び反応性Ｔリンパ球に分別を行う手法としては、例えば、特開平５−１４９８６３号公報に記載の特定方法により各リンパ球を特定し分別することができる。
【００５５】
具体的には、まず、正常リンパ球、反応性Ｂリンパ球及び反応性Ｔリンパ球のそれぞれのリンパ球に対して、固定領域を設定する。固定領域内の各リンパ球の固定領域に対するクラスターへの帰属度が１となるように固定領域を決定する。次に、クラスター内の粒子の分布を基に各クラスター毎に分布の初期重心の位置を求める。次に、求めた初期重心の位置を各クラスターの重心位置として、各固定領域外の粒子について、初期重心の位置までの距離を算出する。算出された距離に基づいてクラスターへの帰属度を求める。各クラスターへの帰属度に応じて各粒子が各クラスターに属するものとして、クラスター毎に重心位置を再び求める。前回の重心位置と今回の重心位置との差が基準値以下であるか否かを判断する。前回の重心位置と今回の重心位置との差が基準値以下となるまで、新たな重心位置の決定を行い、前回の重心位置と今回の重心位置との差が基準値以下となったときに各粒子のクラスターに属する粒子数を算出する。以上の工程により、正常リンパ球と、反応性Ｂリンパ球と、反応性Ｔリンパ球とを特定することができる。ここで、反応性リンパ球数としては、反応性Ｔリンパ球数と反応性Ｂリンパ球数との合計として計数することができる。
【００５６】
ここで、図４に示す感染症等に罹患した検体においては、蛍光強度が高い領域において多数のリンパ球が出現しているのに対し、図５に示す正常な検体においては、蛍光強度が高い領域においてリンパ球がほとんど出現していないことが分かる。
【００５７】
また、各リンパ球を特定する別の方法として、例えば、蛍光信号の強度によって特定する方法でもよい。具体的には、第１の閾値以下の蛍光強度を有するリンパ球を正常リンパ球として検出して計数し、第１の閾値よりも高い第２の閾値と第１の閾値との間の蛍光強度を有するリンパ球を反応性Ｔリンパ球として検出して計数し、第２の閾値以上の蛍光強度を有するリンパ球を反応性Ｂリンパ球として検出して計数してもよい。
【００５８】
上記例では、蛍光強度を用いて各種リンパ球の検出を行った。但し、本発明は、これに限定されない。例えば、図６に示すスキャッタグラムを構成している軸のパラメータである前方散乱光強度に基づいてリンパ球の分別を行ってもよい。図７に示す正常な検体と比較し、図６に示す感染症等に罹患した検体においては、上述した蛍光強度と同様に、前方散乱光強度が高い領域においてリンパ球が出現していることが分かる。ここで、図４および図６からわかる通り、リンパ球を反応性Ｂリンパ球および反応性Ｔリンパ球に分別するに際しては、蛍光強度を用いて分別を行った方がより分離能が高く、好適である。
【００５９】
上述した通り、リンパ球を反応性Ｂリンパ球および反応性Ｔリンパ球に分別するに際しては、少なくとも、蛍光強度のみ、又は、前方散乱光強度のみを用いて各種リンパ球の検出を行ってもよい。また、蛍光強度又は前方散乱光強度のみではなく、蛍光強度および側方散乱光強度、又は前方散乱光強度および側方散乱光強度に基づいてリンパ球の分別を行ってもよい。さらに、蛍光強度、前方散乱高強度及び側方散乱光強度に基づいて各種リンパ球の検出を行ってもよい。
【００６０】
なお、本発明は、上述した血液分析方法を実現するプログラムを、ネットワーク又は各種記憶媒体を介してコンピュータ又は血液分析装置に供給し、そのコンピュータ又は血液分析装置がプログラムを読み出すことにより実行することができる。
【００６１】
（実験例）
以下、血液分析装置１００を用いた本発明による計数結果について、従来手法との対比を行った実験について説明する。
【００６２】
異なる被検者から取得した４８検体それぞれに対し、本発明の方法により計数した反応性Ｔリンパ球の数、および蛍光標識ＣＤ８＋抗体を用いて計数したＣＤ８陽性Ｔリンパ球の数を取得した。本発明の方法により計数した反応性Ｔリンパ球と、蛍光標識ＣＤ８＋抗体を用いて計数したＣＤ８陽性Ｔリンパ球の数との相関係数（correlation coefficient）を求めたところ、０．９３３６となり強い正の相関が得られた。
【００６３】
上述の異なる被検者から取得した４８検体それぞれに対し、顕微鏡を用いて細胞の観察を行い、リンパ球の数に対する異型リンパ球の数の割合を求めた。本発明の方法により計数したリンパ球の数に対する反応性Ｔリンパ球の数の割合と、顕微鏡により求めたリンパ球の数に対する異型リンパ球の数の割合との相関係数を求めたところ、０.８９６８となり強い正の相関が得られた。
【００６４】
以上より、本発明の方法により計数した反応性Ｔリンパ球の数は、Ｔリンパ球でありかつ異型である細胞の数であることがわかり、すなわち反応性Ｔリンパ球の数であることが強く推測される。
【００６５】
続いて、異なる被検者から取得した３３検体それぞれに対し、顕微鏡を用いて細胞の観察を行い、リンパ球の数に対する形質細胞（plasma cell）の数の割合を求めた。本発明の方法により計数したリンパ球の数に対する反応性Ｂリンパ球の数の割合と、顕微鏡により求めたリンパ球の数に対する形質細胞の数の割合との相関係数を求めたところ、０.６１０８となり中程度の正の相関が得られた。
【００６６】
以上より、本発明の方法により計数した反応性Ｂリンパ球は、形質細胞、すなわち反応性Ｂリンパ球であることが強く推定される。
【００６７】
（発明の効果）
本発明により、反応性Ｂリンパ球および反応性Ｔリンパ球をそれぞれ計数できる血液分析装置、血液分析方法および血液分析プログラムを提供することができる。リンパ球はマクロファージ等から抗原提示を受け、活性化されて反応性Ｔリンパ球（ヘルパーＴ細胞）となる。ヘルパーＴ細胞は主にＢリンパ球を刺激し、活性化されたＢリンパ球は反応して抗原特異的な抗体を産生する反応性Ｂリンパ球（形質細胞）となって液性免疫を発生させる。この形質細胞は一般的に末梢血中には存在しないが、感染症や自己免疫疾患、造血腫瘍等に罹患した場合に末梢血にて観察されるため、これらを計数することは疾患の診断に大変有用である。また、これらの細胞を計数し、さらにその推移等を観察することにより、患者の免疫状態を把握することが可能となる。
【符号の説明】
【００６８】
１００  血液分析装置
１０  試料調製部
２０  測定部
２１  光源
２２  受光部
２３  フローセル
３０  処理部
４０  表示部
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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