(57)【要約】本発明は、アルツハイマー病の予防又は治療のためのｐ４０、ＩＬ−１２、又はＩＬ−２３に対する抗体を提供する。本発明はさらに、アルツハイマー病の予防又は治療のための、インターロイキン１２又は２３及びその特異的受容体の対に対するリガンド、特に、抗体、抗体断片、抗体様分子を提供する。同様に、アルツハイマー病の予防又は治療のための、ｐ１９、ｐ３５、ｐ４０、ＩＬ−１２Ｒ−β１、ＩＬ−１２Ｒ−β２、及び／もしくはＩＬ−２３Ｒの遺伝子発現のｓｉＲＮＡ、アンチセンス、もしくは転写因子モジュレーターが提供される。【選択図】図１
2014510707.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルツハイマー病の予防又は治療のための、ｐ４０、インターロイキン１２、又はインターロイキン２３に対する抗体。
【請求項２】
アルツハイマー病の予防又は治療のための、ＩＬ−１２−ＩＬ−１２受容体相互作用の阻害剤及び／又はＩＬ−２３−ＩＬ−２３受容体相互作用の阻害剤であって、
ｐ４０、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ１２受容体、ＩＬ２３受容体、ｐ１９、ｐ３５、ＩＬ−１２Ｒ−β１、ＩＬ−１２Ｒ−β２、及びＩＬ−２３Ｒからなる群のメンバーに対し、１０-8ｍｏｌ／ｌ以下の解離定数で結合可能な、抗体、抗体断片、抗体様分子、６〜３０アミノ酸のオリゴペプチド、及び１０〜７５ヌクレオチド長の核酸アプタマー分子からなる群から選択される化合物、又は
ｐ４０、ｐ３５、ｐ１９、ＩＬ−１２Ｒ−β１、ＩＬ−１２Ｒ−β２、もしくはＩＬ−２３Ｒのタンパク質配列内に含まれる３０以上のアミノ酸の連続アミノ酸配列を含む可溶性ポリペプチド
を含む阻害剤。
【請求項３】
アルツハイマー病の予防又は治療のための、ｐ１９、ｐ３５、ｐ４０、ＩＬ−１２Ｒ−β１、ＩＬ−１２Ｒ−β２、及び／又はＩＬ−２３Ｒの遺伝子発現のモジュレーターであって、
ｐ１９、ｐ３５、ｐ４０、ＩＬ−１２Ｒ−β１、ＩＬ−１２Ｒ−β２、及び／又はＩＬ−２３ＲのいずれかをコードするｍＲＮＡ分子に相補的な配列域を含む、前記ｍＲＮＡ分子の分解のための、一本鎖もしくは二本鎖干渉リボ核酸オリゴマーもしくはその前駆体、又は
ｐ１９、ｐ３５、ｐ４０、ＩＬ−１２Ｒ−β１、ＩＬ−１２Ｒ−β２、及びＩＬ−２３Ｒからなる群のメンバーをコードする遺伝子の調節領域に相補的な配列を含む、一本鎖もしくは二本鎖アンチセンスリボ核酸もしくはデオキシリボ核酸、又は
哺乳動物細胞で動作可能なＲＮＡポリメラーゼプロモーター配列、及び前記干渉リボ核酸オリゴマーもしくはその前駆体をコードする発現配列を含む発現ベクター
を含むモジュレーター。
【請求項４】
アルツハイマー病の予防又は治療のための６−モルホリノ−Ｎ−（（Ｅ）−ｍ−トリルメチレンアミノ）−２−（２−（２−ピリジル）エトキシ）ピリミジン−４−アミン（Ｉ）
【化１】
2014510707.tif 000012
【請求項５】
ウステキヌマブ、ブリアキヌマブ、ＣＥＰ−３７２４８、ＦＭ  ２０２、ＬＹ２５２５６２３、ＭＰ１９６、抗ＩＬ−２３Ｐ１９抗体、抗ＩＬ２３Ｒ抗体、抗ｐ４０抗体、及びＧＸＰ０４からなる群から選択される、アルツハイマー病の予防及び治療のためのポリペプチド。
【請求項６】
レゾルビンＥ１（（５Ｓ，１２Ｒ，１８Ｒ）−５，１２，１８−トリヒドロキシイコサ−６，８，１０，１４，１６−ペンタエン酸）、そのエナンチオマー及びラセミ化合物
【化２】
2014510707.tif 000013
、
レゾルビンＥ２（（５Ｓ，１８Ｒ）−５，１８−ジヒドロキシイコサ−６，８，１１，１４，１６−ペンタエン酸）、そのエナンチオマー及びラセミ化合物
【化３】
2014510707.tif 000014
、
ＲＸ−１００４５、
レゾルビンＤ１（（７Ｓ，８Ｒ，１７Ｒ）−７，８，１７−トリヒドロキシドコサ−４，９，１１，１３，１５，１９−ヘキサエン酸）、そのエナンチオマー及びラセミ化合物
【化４】
2014510707.tif 000015
、
レゾルビンＤ２（（７Ｓ，１７Ｓ）−７，１６，１７−トリヒドロキシドコサ−４，８，１０，１２，１４，１９−ヘキサエン酸）、そのエナンチオマー及びラセミ化合物
【化５】
2014510707.tif 000016
、
レゾルビンＤ３（（４Ｓ，１７Ｓ）−４，１１，１７−トリヒドロキシドコサ−５，７，９，１３，１５，１９−ヘキサエン酸），そのエナンチオマー及びラセミ化合物
【化６】
2014510707.tif 000017
、
レゾルビンＤ４（（４Ｓ，１７Ｓ）−４，５，１７−トリヒドロキシドコサ−６，８，１０，１３，１５，１９−ヘキサエン酸）、そのエナンチオマー及びラセミ化合物  
【化７】
2014510707.tif 000018
、
レゾルビンＤ５（（７Ｓ，１７Ｓ）−７，１７−ジヒドロキシドコサ−５，８，１０，１３，１５，１９−ヘキサエン酸）、そのエナンチオマー及びラセミ化合物
【化８】
2014510707.tif 000019
、
レゾルビンＤ６（（４Ｓ，１７Ｓ）−４，１７−ジヒドロキシドコサ−５，７，１０，１３，１５，１９−ヘキサエン酸）、そのエナンチオマー及びラセミ化合物
【化９】
2014510707.tif 000020
からなるレゾルビンの群から選択される、アルツハイマー病の予防又は治療のための化合物。
【請求項７】
長さが２５アミノ酸残基以下であり、ＴＥＥＥＱＱＹＬ、ＴＥＥＡＱＱＹＬ、ＴＡＡＥＱＱＹＬ、ＴＡＡＥＱＱＹＬ、ＴＡＡＡＱＱＹＬ、ＥＥＥＱＱＹＬ、ＥＥＱＱＹＬ、ＥＱＱＹＬ、ＡＥＥＱＱＹＬ、ＴＥＥＥＱＱＹＬ、ＴＥＥＥＱＱ、ＴＥＥＥＱ、ＴＥＥＥ；ＴＥＥＥＱＡＹＬ、ＴＥＥＥＡＡＹＬ、ＭＥＥＳＫＱＬＱＬ、ＭＡＥＳＫＱＬＱＬ、ＭＡＡＳＫＱＬＱＬ、ＥＳＫＱＬＱＬ、ＭＥＥＳＫＱＬＱＩ、ＭＥＥＳＫＱＬ、ＭＥＥＳＫＱ、ＭＥＥＳＱＱＬＱＩ、ＥＥＳＫＱＬＱＬ、ＶＱＡＡＮＡＬＧＭＥＥＳＫＱＬＱＬＨＬＤＤＬＶＬ、ＬＶＬＤＤＬＨＬＱＬＱＫＳＥＥＭＧＬＡＮＡＡＱＶ、ＬＰＤＥＶＴＣＶ、及びＫＫＹＬＶＷＶＱからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、アルツハイマー病の予防又は治療のためのペプチド。
【請求項８】
１以上のアミノ酸残基がＤ−アミノ酸残基である請求項７に記載のペプチド。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれかに記載の阻害剤又はモジュレーター又は化合物又はペプチドを含む、アルツハイマー病の予防又は治療のための医薬組成物。
【請求項１０】
請求項１〜８のいずれかに記載の阻害剤又はモジュレーター又は化合物又はペプチドを含む、アルツハイマー病の予防又は治療のための剤形。
【請求項１１】
５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、又は７５ｍｇの抗体ウステキヌマブ又はブリアキヌマブを含む、アルツハイマー病の予防又は治療のための注射用剤形。
【請求項１２】
２、３、４、５、又は６カ月の期間にわたる２、３、又は４週間ごとの５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、又は７５ｍｇの抗体ウステキヌマブ又はブリアキヌマブの一注射形態を含む、アルツハイマー病の予防又は治療のための投薬レジメン。
【請求項１３】
アルツハイマー病の予防又は治療の方法であって、請求項１〜８のいずれかに記載の阻害剤又はモジュレーター又は化合物又はペプチドを、それを必要としている患者に投与する工程を含む方法。
【請求項１４】
請求項１〜８のいずれかに記載の阻害剤又はモジュレーターを使用する工程を含む、アルツハイマー病の予防又は治療のための薬剤の製造方法。
【請求項１５】
アルツハイマー病の予防又は治療に好適な化合物を同定する方法であって、
ＩＬ−１２の受容体及び／又はＩＬ−２３の受容体を含むとともに、ＩＬ１２と前記ＩＬ１２受容体との相互作用及び／又はＩＬ２３とＩＬ２３受容体との相互作用に対する検出可能な応答を示す細胞を、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３の存在下並びに前記化合物の存在下で培養する工程と、
前記検出可能な応答を測定する工程と、
前記化合物の存在下での応答を標準的な応答と比較する工程と、
を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルツハイマー病の予防及び治療のための、ＩＬ−１２もしくはＩＬ−２３、又はこれらの受容体のポリペプチド又は核酸阻害剤又はモジュレーターに関する。特に、本発明は、アルツハイマー病の予防及び治療のための抗ｐ４０抗体に関する。
【背景技術】
【０００２】
インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）及びインターロイキン−２３（ＩＬ−２３）は、ＩＬ−１２に対してのｐ３５（インターロイキン１２サブユニットα、Ｕｎｉｐｒｏｔ  ＩＤ  Ｐ２９４５９）又はＩＬ−２３に対してのｐ１９（インターロイキン２３サブユニットα、Ｕｎｉｐｒｏｔ  ＩＤ  Ｑ９ＮＰＦ７）のどちらかと対を成す、ｐ４０（インターロイキン１２サブユニットβ、Ｕｎｉｐｒｏｔ  ＩＤ  Ｐ２９４６０）と呼ばれる共通サブユニットからなるヘテロ二量体サイトカインである（Ｏｐｐｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：７１５−７２５（２０００））。
ＩＬ−１２が、いわゆる、Ｔヘルパー細胞（ＴＨ）１サブセットを分化させる一方で、ＩＬ−２３は、新たにＴＨ１７と命名された新規のエフェクター細胞サブセットの拡大及び生存のための必須因子である。さらに、両因子とも、いくつかの生得的白血球にも影響を与えることがますます理解されるようになっている。
【０００３】
ＩＬ−１２は、ＩＬ−１２Ｒ−β１（Ｕｎｉｐｒｏｔ  ＩＤ  Ｐ４２７０１）とＩＬ−１２Ｒ−β２（Ｕｎｉｐｒｏｔ  ＩＤ：Ｑ９９６６５）によって形成されるヘテロ二量体受容体であるＩＬ−１２受容体（ＩＬ−１２Ｒ）に結合する。ＩＬ−１２Ｒ−β２は、主に、活性化Ｔ細胞及びＮＫ細胞上に見出され、ＴＨ１細胞の発生を促進するサイトカインによって刺激される。
ＩＬ−２３は、ＩＬ−１２Ｒβ１サブユニットとＩＬ−２３Ｒ（Ｕｎｉｐｒｏｔ  ＩＤ：Ｑ５ＶＷＫ５）サブユニットから構成されるそのヘテロ二量体受容体複合体に結合し、それを介してシグナルを伝達する（Ｐａｒｈａｍ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６８：５６９９−５７０８（２００２））。ＩＬ−１２Ｒβ１がＩＬ−１２受容体の一部でもあるのに対し、ＩＬ−２３ＲはＩＬ−２３受容体複合体に特有のものである。
【０００４】
アルツハイマー病（ＡＤ）は、認知症の最も一般的な形態である。ＡＤには治療法が存在しない。本発明者らは、アルツハイマー病に対抗する上でのＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のモジュレーターの正の効果を証明又は示唆するいかなる公表データも承知していない。
【発明の概要】
【０００５】
本発明の主要な特徴は、抗ｐ４０抗体が、関連齧歯類モデルにおけるＡＤの形成に強い影響を及ぼすという驚くべき発見である。任意の理論に束縛されることを望まないが、本発明の調査で生成されたデータは全て、そのインターロイキンヘテロ二量体ＩＬ１２又はＩＬ２３と関連したインターロイキンサブユニットｐ４０と、その生理的受容体との相互作用を阻害することによって、観察された効果が生じることを示している。
【０００６】
本発明の第一の態様によれば、アルツハイマー病の予防又は治療のための、ｐ４０、インターロイキン１２、又はインターロイキン２３に対する抗体が提供される。
一実施形態によれば、アルツハイマー病の治療又は予防のための抗ＩＬ−１２抗体が提供される。一実施形態によれば、アルツハイマー病の治療又は予防のための抗ｐ−４０抗体が提供される。一実施形態によれば、アルツハイマー病の治療又は予防のための抗ＩＬ−２３抗体が提供される。
【０００７】
本発明のこの第一の態様の代替形によれば、アルツハイマー病の予防又は治療のための、ＩＬ−１２とそのＩＬ−１２受容体との相互作用の阻害剤が提供される。或いは、ＡＤの予防又は治療のためのＩＬ−２３−ＩＬ−２３受容体相互作用の阻害剤が提供される。ＩＬ−１２−ＩＬ−１２受容体相互作用又はＩＬ−２３−ＩＬ−２３受容体相互作用の阻害は、炎症反応の低下、及び最終的には、Ａβ斑負荷の強くかつ顕著な低下をもたらす。Ａβ斑負荷は、ＡＤの特徴的指標である。
【０００８】
本発明の第一の態様に係るそのような阻害剤は、各々、ＩＬ−１２又はＩＬ−２３のインターロイキン−インターロイキン受容体対のメンバーのいずれかに向けられ、かつそれらに結合する、抗体、抗体断片、又は抗体様分子であってもよい。
ＩＬ−１２又はＩＬ−２３のサブユニット、すなわち、ｐ１９、ｐ３５、又はｐ４０は、そのような抗体の標的であり得、同様に、ＩＬ−１２Ｒ−β１、ＩＬ−１２Ｒ−β２、及びＩＬ−２３Ｒがそうであるように、ＩＬ１２受容体又はＩＬ２３受容体のサブユニットも標的であり得る。そのような抗体、抗体断片、又は抗体様分子の、その標的からの解離定数は、通常、マイクロモル以下の範囲、例えば、１０-7ｍｏｌ／ｌ未満、１０-8ｍｏｌ／ｌ未満、又は＜１０-9ｍｏｌ／ｌですらある。
【０００９】
本発明の第一の態様に係る好適な阻害剤は、ポリペプチド又はオリゴヌクレオチドが、関心対象の標的に対するその結合親和性によって選択されるファージディスプレイ、リボソームディスプレイ、又はＳＥＬＥＸなどの進化的方法によって開発され得る。さらに、同定された阻害剤の結合親和性は、アミノ酸配列又はヌクレオチド配列の進化のサイクルによって改善され得るし、また、進化した阻害剤の選択は、所要の親和性に基づいて達成され得る。
【００１０】
本発明の第一の態様に係る抗体断片の一例は、Ｆａｂ断片である。Ｆａｂ断片は、抗体の抗原結合断片である。抗体様分子の一例は、「設計アンキリン反復タンパク質」（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｚｕｒｉｃｈ）などの反復タンパク質である。抗体断片と抗体様分子は両方とも、ＩＬ−１２及び／もしくはＩＬ−２３に結合することによるか、細胞外空間からそれぞれのサイトカインを除去することによるか、又はサイトカインとその受容体の間の相互作用を遮断することによって、ＩＬ−１２の生物活性又はＩＬ−２３の生物活性の調節又は阻害をもたらす。
ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３に対する抗体は当技術分野で公知であり、十分に特徴付けられた抗体であるウステキヌマブ（ＣＡＳ  ８１５６１０−６３−０；別名Ｓｔｅｌａｒａ（登録商標）；Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈにより市販されている）及びブリアキヌマブ（ＣＡＳ  Ｎｏ．３３９３０８−６０−０；Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓにより開発された）である。
【００１１】
好ましい実施形態によれば、ＡＤの予防又は治療のための抗体は、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３が生理的なリガンド−受容体相互作用状況で結合する領域内でＩＬ−１２受容体及び／又はＩＬ−２３受容体に結合するが、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３の下流の生理的作用を誘導することはない。
【００１２】
好ましい実施形態によれば、ＡＤの予防又は治療のための抗体は、ＷＯ／２００８／１０６１３４号（「人工抗ＩＬ−２３Ｒ抗体」；Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）もしくはＷＯ／２０１０／０２７７６７号（「人工抗ＩＬ−２３Ｒ抗体、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に記載されている抗ＩＬ２３Ｒ抗体、又はＷＯ／２０１０／０１７５９８号（「抗ＩＬ−１２／ＩＬ−２３抗体」、Ａｒａｎａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｌｔｄ）に記載されている抗ｐ４０抗体である。
【００１３】
ＩＬ−１２及び／もしくはＩＬ−２３又はこれらの受容体に対する抗体は、当技術分野で公知の方法によって、例えば、ウイルス様粒子系を用いたノックアウトマウスの免疫化によるか、又はノックアウトマウスへの組換えタンパク質の注射によって惹起される。
【００１４】
さらに、ＩＬ−１２もしくはＩＬ−２３、又はそれらのそれぞれの受容体に結合するタンパク質及びタンパク質類似体を利用して、本発明を実施することができる。結合抗体及び／又は中和抗体の可変領域ｓｃＦｖを模倣する合成タンパク質又はタンパク質類似体が１つの例であり、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のその受容体上の結合ポケットを模倣する抗体が別の例である。
【００１５】
或いは、本発明の第一の態様に係る阻害剤は、長さが６〜３０アミノ酸のオリゴペプチド又は７５ヌクレオチド以下の核酸アプタマー分子であってもよく、該オリゴペプチド又は核酸アプタマー分子は、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ１２受容体、ＩＬ２３受容体、ｐ１９、ｐ３５、ｐ４０、ＩＬ−１２Ｒ−β１、ＩＬ−１２Ｒ−β２、及びＩＬ−２３Ｒからなる群のメンバーに結合することができる。ＩＬ−１２又はＩＬ−２３シグナル伝達群の該メンバーに対する該オリゴペプチド又は核酸アプタマーの結合は、１０-8ｍｏｌ／ｌ以下の解離定数を特徴とする。
【００１６】
第三の代替形によれば、本発明の第一の態様に係る阻害剤は、ｐ４０、ｐ３５、ｐ１９、ＩＬ−１２Ｒ−β１、ＩＬ−１２Ｒ−β２、又はＩＬ−２３Ｒのアミノ酸配列から取られた長さが３０以上のアミノ酸残基の配列を含む可溶性ポリペプチドであってもよい。
該３０以上のアミノ酸の配列は、ＩＬ−１２Ｒ−β１、ＩＬ−１２Ｒ−β２、もしくはＩＬ−２３Ｒ（配列がインターロイキンポリペプチドの一部である場合）又はインターロイキンポリペプチド（配列が受容体ポリペプチドの一部である場合）に結合し、どちらの結合も、ネイティブのインターロイキン−インターロイキン受容体相互作用の生物学的作用を誘発することなく生じる。任意に、該３０以上のアミノ酸の配列は、Ｆｃ抗体ドメインに連結されている。その論理的根拠は、インターロイキン−インターロイキン受容体対のどちらかに対する可溶性デコイを提供することであり、その場合、デコイは、ネイティブのインターロイキンシグナル伝達に勝る。
【００１７】
この代替形の好ましい一実施形態によれば、可溶性ポリペプチドは、抗体、例えば、免疫グロブリンＧの定常断片Ｆｃに融合したＩＬ−１２受容体又はＩＬ−２３受容体の細胞外ドメインであってもよい。
そのような好ましい実施形態の一例は、Ｇｅｎｅｘｉｎｅ（Ｋｏｒｅａ）から市販されているような、ＩＬ１２−ｐ４０とハイブリッドＦｃドメインからなる免疫融合タンパク質である。該ハイブリッドＦｃドメインは、（ｉ）ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、もしくはＩｇＧ４、又は（ｉｉ）ＩｇＧ４及びＩｇＤのハイブリッドヒトＦｃドメインである（ＵＳ  ２００８３００１８８  Ａ１号）。
【００１８】
本発明の第二の態様によれば、アルツハイマー病の予防又は治療のための、ｐ１９、ｐ３５、ｐ４０、ＩＬ−１２Ｒ−β１、ＩＬ−１２Ｒ−β２、及び／又はＩＬ−２３Ｒの遺伝子発現のモジュレーターが提供される。そのようなモジュレーターは、ｐ１９、ｐ３５、ｐ４０、ＩＬ−１２Ｒ−β１、ＩＬ−１２Ｒ−β２、及び／又はＩＬ−２３ＲのいずれかをコードするｍＲＮＡ分子の分解のための、該ｍＲＮＡ分子に相補的な配列域を含む、一本鎖又は二本鎖の干渉リボ核酸オリゴマー又はその前駆体であってもよい。
【００１９】
ｍＲＮＡの分解又は他の作用によって、遺伝子をサイレンシング又は「ノックダウン」する技術は周知である。過去十年間で、そのようなＲＮＡ駆動性遺伝子発現の干渉の多数の作用機序が発見され、その定義が実用的用途に適用されている。
同定されている技術の例は、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｓｈｍｉＲＮＡ、又はｄｓＲＮＡである。この分野の包括的概観は、Ｐｅｒｒｉｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｕｒ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２０１０，２，ａ００３６４０に見出すことができる。
【００２０】
同様に、モジュレーターは、哺乳動物細胞で動作可能なＲＮＡポリメラーゼプロモーター配列、及び該干渉リボ核酸オリゴマー又はその前駆体をコードする発現配列を含む発現ベクターであってもよい。そのような発現ベクターは、細胞内での干渉ＲＮＡの産生をもたらす。そのような発現ベクターの作製方法及び使用方法は当技術分野で公知である。
【００２１】
或いは、本発明の第二の態様に係るモジュレーターは、ｐ１９、ｐ３５、ｐ４０、ＩＬ−１２Ｒ−β１、ＩＬ−１２Ｒ−β２、及びＩＬ−２３Ｒからなる群のメンバーをコードする遺伝子の調節領域に相補的な配列を含む、一本鎖又は二本鎖アンチセンスリボ核酸又はデオキシリボ核酸であってもよい。
【００２２】
そのようなアンチセンス分子は、長さが１２〜５０ヌクレオチド、好ましくは、１８〜３０ヌクレオチドであり、かつＩＬ−１２又はＩＬ−２３のサブユニットのいずれかのエキソン又はイントロンに含まれる配列を有していてもよい。さらに、ＩＬ−１２又はＩＬ−２３サブユニットのいずれかの転写を調節するプロモーター配列の部分を形成する配列を含み、かつプロモーター領域の鎖の１つに結合するアンチセンス分子を用いてもよい。最後に、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のサブユニットのいずれかの３’ＵＴＲ−非翻訳領域で結合するアンチセンス分子が企図される。
【００２３】
本発明の第三の態様によれば、アルツハイマー病の予防又は治療のための、６−モルホリノ−Ｎ−（（Ｅ）−ｍ−トリルメチレンアミノ）−２−（２−（２−ピリジル）エトキシ）ピリミジン−４−アミン（Ｉ）
【００２４】
【化１】
2014510707.tif 000003
（Ａｐｉｌｉｍｏｄ，Ｓｙｎｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ＳＴＡ  ５３２６）が提供される。この化合物は、ｐ４０転写を駆動する転写因子の細胞内転移を阻害するＩＬ１２及びＩＬ−２３の経口投与型小分子阻害剤である（Ｋｅｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １０，Ｒ１２２（２００８））。
【００２５】
本発明の第四の態様によれば、アルツハイマー病の予防及び治療のための、ポリペプチドのウステキヌマブ（Ｊａｎｓｓｅｎ−Ｃｉｌａｇ）、ブリアキヌマブ（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ＣＥＰ−３７２４８（Ｃｅｐｈａｌｏｎ，Ｉｎｃ）、ＦＭ  ２０２（Ｆｅｍｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＬＹ２５２５６２３（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、ＭＰ１９６（ＴｃＬ  Ｐｈａｒｍａ）、ＷＯ／２００８／１０３４３２号に記載の抗ＩＬ２３抗体（「人工抗ＩＬ−２３Ｐ１９抗体」；Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）、及びＧＰ０４（Ｇｅｎｅｘｉｎｅ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）が提供される。
免疫融合タンパク質であり、かつＩＬ−２３受容体アンタゴニストとして作用するＧＰ０４を除いて、該ポリペプチドは、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、又はそれらの受容体に対する抗体である。
【００２６】
本発明の第五の態様によれば、アルツハイマー病の予防又は治療のためのレゾルビン化合物が提供される。レゾルビン化合物は、ω−３脂肪酸であるエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）又はドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）の酸化によって生成される脂質メディエーターである。それらは、抗炎症特性を有する（Ｓｅｒｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９６，（８）：１０２５−３７，２００２）。
レゾルビンのメンバーであるレゾルビンＥ１は、炎症促進性遺伝子発現、すなわち、ＩＬ−１２／ｐ４０を劇的に減少させる（Ａｒｉｔａ．ｅｔ  ａｌ．ＰＮＡＳ  ２１：７６７１−７６７６，２００５）。同様に、レゾルビンの別のメンバーであるレゾルビンＤ２は、炎症促進性サイトカイン、すなわち、ＩＬ−６、ＩＬ−１β、ＩＬ−２３、及びＴＮＦ−ａのレベルを劇的に低下させる（Ｓｐｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４６１（７２６８），１２８７−１２９１，２００９）。
【００２７】
本発明の第五の態様に係る好ましい実施形態を以下に列挙する：
レゾルビンＥ１（（５Ｓ，１２Ｒ，１８Ｒ）−，５，１２，１８−トリヒドロキシイコサ−６，８，１０，１４，１６−ペンタエン酸）、そのエナンチオマー及びラセミ化合物
【００２８】
【化２】
2014510707.tif 000004
、
レゾルビンＥ２（（５Ｓ，１８Ｒ）−５，１８−ジヒドロキシイコサ−６，８，１１，１４，１６−ペンタエン酸）、そのエナンチオマー及びラセミ化合物
【００２９】
【化３】
2014510707.tif 000005
、
ＲＸ−１００４５（Ｒｅｓｏｌｖｙｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、眼疾患を治療するために局所適用用に製剤化された合成レゾルビン類似体）、
レゾルビンＤ１（（７Ｓ，８Ｒ，１７Ｒ）−７，８，１７−トリヒドロキシドコサ−４，９，１１，１３，１５，１９−ヘキサエン酸）、そのエナンチオマー及びラセミ化合物
【００３０】
【化４】
2014510707.tif 000006
、
レゾルビンＤ２（（７Ｓ，１７Ｓ）−７，１６，１７−トリヒドロキシドコサ−４，８，１０，１２，１４，１９−ヘキサエン酸）、そのエナンチオマー及びラセミ化合物
【００３１】
【化５】
2014510707.tif 000007
、
レゾルビンＤ３（（４Ｓ，１７Ｓ）−４，１１，１７−トリヒドロキシドコサ−５，７，９，１３，１５，１９−ヘキサエン酸）、そのエナンチオマー及びラセミ化合物
【００３２】
【化６】
2014510707.tif 000008
、
レゾルビンＤ４（（４Ｓ，１７Ｓ）−４，５，１７−トリヒドロキシドコサ−６，８，１０，１３，１５，１９−ヘキサエン酸）、そのエナンチオマー及びラセミ化合物
【００３３】
【化７】
2014510707.tif 000009
、
レゾルビンＤ５（（７Ｓ，１７Ｓ）−７，１７−ジヒドロキシドコサ−５，８，１０，１３，１５，１９−ヘキサエン酸）、そのエナンチオマー及びラセミ化合物
【００３４】
【化８】
2014510707.tif 000010
、
レゾルビンＤ６（（４Ｓ，１７Ｓ）−４，１７−ジヒドロキシドコサ−５，７，１０，１３，１５，１９−ヘキサエン酸）、そのエナンチオマー及びラセミ化合物
【００３５】
【化９】
2014510707.tif 000011
。
【００３６】
本発明の別の態様によれば、アルツハイマー病の予防又は治療のためのペプチドが提供され、ここで、このペプチドは、ＴＥＥＥＱＱＹＬ、ＴＥＥＡＱＱＹＬ、ＴＡＡＥＱＱＹＬ、ＴＡＡＥＱＱＹＬ、ＴＡＡＡＱＱＹＬ、ＥＥＥＱＱＹＬ、ＥＥＱＱＹＬ、ＥＱＱＹＬ、ＡＥＥＱＱＹＬ、ＴＥＥＥＱＱＹＬ、ＴＥＥＥＱＱ、ＴＥＥＥＱ、ＴＥＥＥ；ＴＥＥＥＱＡＹＬ、ＴＥＥＥＡＡＹＬ、ＭＥＥＳＫＱＬＱＬ、ＭＡＥＳＫＱＬＱＬ、ＭＡＡＳＫＱＬＱＬ、ＥＳＫＱＬＱＬ、ＭＥＥＳＫＱＬＱＩ、ＭＥＥＳＫＱＬ、ＭＥＥＳＫＱ、ＭＥＥＳＱＱＬＱＩ、ＥＥＳＫＱＬＱＬ、ＶＱＡＡＮＡＬＧＭＥＥＳＫＱＬＱＬＨＬＤＤＬＶＬ、ＬＶＬＤＤＬＨＬＱＬＱＫＳＥＥＭＧＬＡＮＡＡＱＶ、ＬＰＤＥＶＴＣＶ、及びＫＫＹＬＶＷＶＱからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む長さ５〜２５アミノ酸残基である。
【００３７】
これらのペプチドは、ＩＬ−２３受容体及びその誘導体の柔軟性のある領域に対応する。これらのペプチドは、その特定の立体構造の促進又は安定化による細胞外ドメインのオリゴマー化の阻害により、ＩＬ−２３Ｒの生物活性に拮抗する。これらのペプチドの合成方法及びさらなる情報はＷＯ／２００９／００７８４９号に記載されている。
【００３８】
前述の態様の好ましい実施形態によれば、１以上のアミノ酸残基は、Ｄ−アミノ酸残基である。
【００３９】
本発明の別の態様によれば、本発明の上記の態様のうちの１つに係る阻害剤又はモジュレーターを含む、アルツハイマー病の予防又は治療のための医薬組成物が提供される。
【００４０】
同様に、本発明の上記の態様のうちの１つに係る阻害剤又はモジュレーターを含む、アルツハイマー病の予防又は治療のための剤形が提供される。剤形は、腸内投与、例えば、鼻腔投与、口腔投与、直腸投与、経皮投与、もしくは特に経口投与のためのもの、又は吸入形態もしくは坐剤としてのものであってもよい。
タンパク質の経口投与は、ＷＯ２００７０２９２３８Ａ２号（Ｋｉｄｒｏｎ，Ｏｒａｍｅｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｊｅｒｕｓａｌｅｍ，ＩＬ）に記載されている。或いは、皮下、静脈内、肝内、又は筋肉内注射形態などの、非経口投与を用いてもよい。任意に、医薬として許容し得る担体及び／又は賦形剤が存在していてもよい。
【００４１】
該医薬組成物は、約１％〜約９５％の活性成分、好ましくは、約２０％〜約９０％の活性成分を含む。
【００４２】
該医薬組成物の注射形態が好ましい。好ましい実施形態によれば、本発明の上記の態様のいずれかに係る阻害剤又はモジュレーターの溶液は、注射形態として使用する直前に作製することができる。同様に、懸濁液又は分散液、特に、等張の水溶液、分散液、又は懸濁液を利用してもよい。
【００４３】
経口投与用の該医薬組成物には、ゼラチンからなる硬カプセルも、ゼラチンと、グリセロール又はソルビトールなどの可塑剤とからなる密封された軟カプセルも含まれる。これらのカプセルは、顆粒の形態の活性成分を含有していてもよく、又は好適な液体賦形剤に、例えば、油に溶解もしくは懸濁されていてもよい。
【００４４】
一実施形態によれば、アルツハイマー病の予防又は治療のための注射液の剤形は、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、又は７５ｍｇの抗体ウステキヌマブ又はブリアキヌマブを含む。
一実施形態によれば、アルツハイマー病の予防又は治療のための投薬レジメンは、２、３、４、５、又は６カ月の期間にわたる２、３、又は４週間に１回の５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、又は７５ｍｇの抗体ウステキヌマブ又はブリアキヌマブの一注射形態を含む。
【００４５】
例えば、長期間にわたる、例えば、１〜２０日間の投与を可能にする経皮パッチを用いる、該医薬組成物の経皮／腹腔内及び静脈内適用も考慮される。
【００４６】
該医薬組成物の静脈内又は皮下適用は、本発明の好ましい実施様式である。頭蓋内送達が特に好ましい。
【００４７】
活性成分の投薬量は、種、その年齢、重量、及び個々の状態、個々の薬物動態データ、投与様式、並びに投与が予防目的か、治療目的かということにより決まる。約７０ｋｇの体重を有する個体の場合、投与される日用量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０００ｍｇ、好ましくは、約０．５ｍｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇのＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のモジュレーターである。
【００４８】
上記の態様のうちの１つに係る阻害剤又はモジュレーターを含む医薬組成物は、単独で又は１以上の他の治療剤と組み合わせて投与することができる。併用療法は、該医薬組成物とアルツハイマー病の予防又は治療において公知の１以上の他の治療剤の固定された組合せの形態を取り得る。投与は交互であってもよく；或いは、薬物は、互いに独立に、又は固定された組合せの形態で投与してもよい。
【００４９】
考えられる可能な組合せパートナーは、メマンチン（Ｌｕｎｄｂｅｃｋ）、ドネペジル（Ｅｉｓａｉ）、ガランタミン（Ｊａｎｓｓｅｎ）、及びリバスティグミン（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）である。
【００５０】
アルツハイマー病の予防又は治療方法であって、本発明の上記の態様のうちの１つに係る阻害剤又はモジュレーターの使用を含む、方法も本発明の範囲内である。
【００５１】
同様に、アルツハイマー病の予防又は治療のための薬剤の製造方法であって、本発明の上記の態様のうちの１つに係る阻害剤又はモジュレーターを、それを必要としている患者に投与することを含む、方法も提供される。本発明に係る薬剤は、当技術分野で公知の方法によって、特に、従来の混合、コーティング、造粒、溶解、又は凍結乾燥によって製造される。
【００５２】
本発明のまた別の態様によれば、アルツハイマー病の予防又は治療に好適な化合物を同定する方法であって、
−細胞を、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３の存在下で、及びアルツハイマー薬としてのその好適性に関して検討されるべきである化合物の存在下で培養する工程（そのような同定方法に用いられる細胞は、ＩＬ−１２の受容体及び／又はＩＬ−２３の受容体を含み、かつＩＬ１２とＩＬ１２受容体との相互作用及び／又はＩＬ２３とＩＬ２３受容体との相互作用に対する検出可能な応答を示す）
−インターロイキンとその対応する受容体との相互作用に対する細胞の応答を測定する工程、並びに
−該化合物の存在下での応答を、標準的な応答と比較する工程
を含む方法が提供される。
【００５３】
このアッセイに好適な細胞は、ＩＬ−１２又はＩＬ−２３の受容体、及び該受容体の下流の対応するシグナル伝達経路を発現する。そのような細胞とＩＬ−１２又はＩＬ−２３とのインキュベーションは、生理的応答をもたらし得る。上記の態様の好ましい態様によれば、本方法は、脾細胞（脾臓の食細胞）を、ＩＬ−１２又はＩＬ−２３の存在下、組織培養培地中で培養する細胞ベースのバイオアッセイであってもよい。ＩＬ−１２及びＩＬ−２３は、それぞれ、インターフェロンγ及びＩＬ−２２の培地中への放出を刺激する。インターフェロンγ及びＩＬ−２２の放出は、化合物の非存在下及び存在下で測定してもよい。様々な濃度の該化合物をハイスループットの３８４ウェル系で試験することができる。
【００５４】
ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３活性のモジュレーターを、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３（又はその受容体）を候補化合物と接触させることにより同定する。候補化合物の非存在下での対応するＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３（又はその受容体）を用いる対照アッセイを並行して実施する。候補化合物の非存在下でのレベルと比較した、この化合物の存在下での活性の減少は、候補化合物がＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３モジュレーターであることを示す。
【００５５】
ｐ４０含有ヘテロ二量体であるＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３の作用は、ＩＬ−１２及び／もしくはＩＬ−２３、又はそれらのサブユニットｐ４０、ｐ３５、及びｐ１９に対する抗体もしくは抗体断片、又は抗体のＦｃ部分に融合したＩＬ−１２Ｒ及び／又はＩＬ−２３Ｒ細胞外ドメインからなる融合タンパク質（すなわち、サイトカイントラップ）の投与、並びにＩＬ−１２又はＩＬ−２３の受容体へのリガンドの結合を妨げる小分子の投与によって調節することができる。
ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３の産生は、ｓｉＲＮＡをインビトロで用いることによって調節され得るが、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３サブユニットの遺伝子のプロモーター活性を、小分子又はそれぞれの遺伝子の転写に関与する転写因子のサプレッサーで直接抑制することによっても調節され得る。ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３の作用は、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３受容体モジュレーターによって阻害することができる。
さらに、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のターゲッティングは、ＩＬ−１２及び／もしくはＩＬ−２３に対する中和抗体又は抗体断片の投与によるか、又はＩＬ−１２及び／もしくはＩＬ−２３に結合し、それにより、ＩＬ−１２及び／もしくはＩＬ−２３受容体へのその結合を妨げるか、又はＩＬ−１２及び／もしくはＩＬ−２３受容体に結合するタンパク質、タンパク質類似体、又は小さい合成化合物によって達成することができる。ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３受容体への結合を妨げるさらなる方法は、可溶性ＩＬ−１２及び／もしくはＩＬ−２３受容体分子又はその断片を使用することである。
【００５６】
本発明に係る最も好ましいモジュレーターは：
−ウステキヌマブ（Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）、（ｐ４０サブユニットを介して）ＩＬ−１２及びＩＬ−２３をターゲッティングする高親和性の完全ヒト抗体；
−ブリアキヌマブ（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、（ｐ４０サブユニットを介して）ＩＬ−１２及びＩＬ−２３をターゲッティングする完全ヒトモノクローナル抗体；
−ＣＥＰ−３７２４８（Ｃｅｐｈａｌｏｎ，Ｉｎｃ．）、インターロイキン１２／２３経路をターゲッティングするヒト化抗体；
−ＦＭ２０２（Ｆｅｍｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＩＬ−１２及びＩＬ−２３共通のｐ４０サブユニットに対するモノクローナル抗体；
−ＬＹ２５２５６２３（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ＆  Ｃｏ．）、ＩＬ−２３抗体；
−ＭＰ１９６（ＴｃＬ  Ｐｈａｒｍａ  ＳＡＳ）、ＩＬ−２３に対するモノクローナル抗体；
−抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）、ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットをターゲッティングする抗体；
−ＡＴＩ００３（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｃｏｍｐａｎｙ）、ＩＬ−１２アンタゴニスト；
−ＡＤＣ−１０１２（Ａｌｌｉｇａｔｏｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＡＢ）、選択的ＩＬ−２３アンタゴニスト；
−ＡＰＧ２３０５（Ａｌｌｏｓｔｅｒａ  Ｐｈａｒｍａ，Ｉｎｃ．）、経口用ＩＬ−２３受容体阻害剤；
−ＲＸ１０００１（Ｒｅｓｏｌｖｙｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）、ω−３ドコサペンタエン酸に由来する内在性脂質メディエーターのレゾルビンＥ１を含有するＩＬ−２３阻害剤、及びＲＸ１００４５、エイコサペンタエン酸誘導体；
−ＧＸＰ０４（Ｇｅｎｅｘｉｎｅ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）、ＩＬ−２３受容体アンタゴニストとして作用する、ＩＬ−１２ｐ４０及びハイブリッドＦｃからなる免疫融合タンパク質
−抗ＩＬ２３Ｒ抗体、ＷＯ／２００８／１０６１３４号（「人工抗ＩＬ−２３Ｒ抗体」；Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）及びＷＯ／２０１０／０２７７６７号（「人工抗ＩＬ−２３Ｒ抗体」、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に記載されているもの
−抗ｐ４０抗体、ＷＯ／２０１０／０１７５９８号（「抗ＩＬ−１２／ＩＬ−２３抗体」、Ａｒａｎａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｌｔｄ）に記載されているもの。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】アルツハイマー病ＡＰＰＰＳ１マウスの脳におけるＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３の上方調節：１２０日齢のＣ５７ＢＬ／６対照マウスと比較した、プールしたＡＰＰＰＳ１マウス脳細胞の遺伝子発現解析は、骨髄性ＣＤ１１ｂ+ＣＤ４５+細胞画分（ｂ）における炎症性サイトカイン（ＩＬ−２３ｐ１９、ＩＬ−１２／ＩＬ−２３ｐ４０、及びＴＮＦα）の上方調節を示すが、非骨髄性ＣＤ１１ｂ-ＣＤ４５-細胞画分（ａ）では、ＩＬ−１２  ｐ３５のごくわずかな上方調節が認められ、ＩＬ−１２／ＩＬ−２３ｐ４０及びＩＬ−２３ｐ１９の上方調節は認められなかった。単離された出生後ミクログリア細胞培養物の合成Ａβ1-42ペプチド（２２．５μｇ／ｍｌ）による処理により、刺激していない対照（ｃ）と比較したとき、２４時間後に、ほぼ６倍のＩＬ−１２／ＩＬ−２３ｐ４０の上方調節が誘導された。
【図２】ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３サブユニットの遺伝子除去は、アルツハイマー病ＡＰＰＰＳ１マウスにおけるＡβ斑負荷を低下させる  （ａ）サイトカイン欠損ＡＰＰＰＳ１マウスにおけるＡβ負荷を、β−アミロイド反応性抗体４Ｇ８を用いた免疫組織化学的染色により評価した（上列：低倍率写真、スケールバー５００μｍ；下列：形態計測学定量に用いた高倍率画像、スケールバー２００μｍ）。他の多くの人々によって示され、報告されているように、アルツハイマー病ＡＰＰＰＳ１マウスは、早くも１２０日齢で強いＡβ斑負荷を有し、有意な個体間変動も個体内変動も示さない。（ｂ）機能的なＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３シグナル伝達を有する対照アルツハイマー病ＡＰＰＰＳ１マウス（ｎ＝１６）と比較した、１２０日齢のＩＬ−１２及び／もしくはＩＬ−２３サブユニットｐ４０を欠くＡＰＰＰＳ１マウス（Ｉｌ１２ｂ-/-、ｎ＝９）、ｐ１９を欠くＡＰＰＰＳ１マウス（Ｉｌ２３ａ-/-、ｎ＝８）、又はｐ３５を欠くＡＰＰＰＳ１マウス（Ｉｌ１２ａ-/-、ｎ＝１１）におけるβ−アミロイド被覆領域の形態計測学解析。体系的にサンプリングした６μｍ厚の脳切片５０枚ごとに、前頭皮質、頭頂葉皮質、及び後頭皮質（各々１．４ｍｍ2）に相当する３つの皮質領域の免疫染色領域を測定することにより、形態計測学解析を実施した。Ｃｅｌｌ  Ｄソフトウェア（Ｏｌｙｍｐｕｓ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）を援用し、カラーフィルター及び位相解析ツールを用いて、マウス１匹当たり２７カ所の規定領域の立体形態計測学的解析を実施した。（ｃ）ＡＰＰＰＳ１×Ｉｌ１２ｂ-/-マウスと比較したＡＰＰＰＳ１マウスにおける２５０日齢でのβ−アミロイド斑負荷の解析（左：低倍率写真、スケールバー５００μｍ；挿入図：形態計測学定量に用いた高倍率画像、スケールバー２００μｍ；右：ＡＰＰＰＳ１マウス（ｎ＝９）及びＡＰＰＰＳ１×Ｉｌ１２ｂ-/-マウス（ｎ＝６）の形態計測学定量。（ｄ）ＡＰＰＰＳ１動物（ｎ＝９）及びＡＰＰＰＳ１×Ｉｌ１２ｂ-/-動物（ｎ＝６）における２５０日齢でのミクログリア／マクロファージ（左：Ｉｂａ１抗体を用いた組織学的パネル及び形態計測学定量、スケールバー１００μｍ）並びに星状膠細胞（右：ＧＦＡＰ抗体を用いた組織学的パネル及び形態計測学定量、スケールバー１００μｍ）の染色及び定量。各ドットは、１匹のマウスの形態計測学的に評価されたＡβ斑負荷、Ｉｂａ１被覆領域、又はＧＦＡＰ被覆領域の平均を表す。
【図３】アルツハイマー病ＡＰＰＰＳ１マウスに対する抗ｐ４０抗体の末梢投与は、強くかつ統計的に有意なＡβ斑の低下をもたらす  アルツハイマー病ＡＰＰＰＳ１マウスを抗ｐ４０抗体（Ｃ１７．８；ｎ＝８）又はアイソタイプ対照抗体（２Ａ３；ｎ＝４）で処置した。４週齢での０．５ｍｇの抗マウスＩｌ−１２／２３ｐ４０抗体（クローンＣ１７．８、ラットＩｇＧ２ａ）又はそれぞれのラットアイソタイプ対照（クローン２Ａ３）の単回ボーラス腹腔内（ｉ．ｐ．）注射の後、実験の最後（１２０日齢）まで、０．２５ｍｇのそれぞれの抗体の週２回のｉ．ｐ．注射を行なった。処置した動物における斑負荷の代表的な概観及び高倍率画像（４Ｇ８染色；図２と同様のスケールバー）。Ａβ負荷の形態計測学解析（図２に記載の通りに実施）は、抗ｐ４０処置群のみにおける全体に顕著でかつ統計的に有意なＡβ負荷の低下を示し、これは、８匹のＡＰＰＰＳ１マウスのうちの４匹以上で際立っていた。各ドットは、１匹のマウスの形態計測学的に評価されたＡβ斑負荷の平均を表す。
【図４】ＩＬ−１２／ＩＬ−２３  ｐ４０の遺伝子除去は、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）プロセッシングを変化させることなく、ＡＰＰＰＳ１マウスにおけるＡβ斑負荷を低下させる  ２５０日齢のＡＰＰＰＳ１マウス及びＡＰＰＰＳ１×Ｉｌ１２ｂ-/-マウスの大脳半球のホモジネートに対して生化学的解析を実施した。（ａ）可溶性画分（ＳＤＳ、左パネル）及び不溶性画分（ＦＡ、右パネル）でＭｅｓｏＳｃａｌｅ  ＥＬＩＳＡシステムを用いた脳ホモジネートにおけるＡβ４０及びＡβ４２レベルの定量的解析。（ｂ）可溶性（ＳＤＳ）画分（左パネル）におけるＡβトータル及びヒト（トランスジェニック）ＡＰＰのレベルを、その検出及びデンシトメトリー解析に６Ｅ１０抗体を用いるウェスタンブロット解析により評価した。Ａβトータルレベルを不溶性（ＦＡ）画分（右パネル）で同様に解析した。（ｃ）可溶性画分（左パネル）及び不溶性画分（右パネル）中のＡβ４０種とＡβ４２種を、特殊なＳＤＳ−尿素ゲルシステムを用いて分離し、６Ｅ１０抗体で検出し、デンシトメトリー定量により定量した。（ｄ）内在性マウス及びトランスジェニックヒトＡＰＰ並びにＡＰＰの主要なＣ末端切断産物（ＣＴＦα及びＣＴＦ）の発現レベルを、ＡＰＰｃｔ抗体を用いるウェスタンブロット解析により評価し（左パネル）、デンシトメトリースキャニングにより定量した（右パネル、（ｂ）に示されるウェスタンブロットの定量も含む）。（ｅ）主要なＡβ分解酵素であるインスリン分解酵素（ＩＤＥ；左パネル）及びネプリリシン（右パネル）の発現レベルを、特異的抗体を用いるウェスタンブロット解析及びデンシトメトリー定量により解析した。３回以上の独立した実験の代表的なＭｅｓｏｓｃａｌｅの結果、ウェスタンブロット画像、及びデンシトメトリー定量の結果を示す（１群当たりｎ＝３〜７匹のマウス）。ＧＡＰＤＨ又はβ−アクチンを定量用の内部対照として用いた。エラーバーはｓ．ｅ．ｍ．を示す。
【図５】放射線耐性区画におけるＩＬ−１２／ＩＬ−２３  ｐ４０又はＩＬ−１２シグナル伝達の欠損は、アルツハイマー病ＡＰＰＰＳ１マウスにおけるＡβ斑負荷を低下させるのに十分である  再構成の１１週後に１２０日齢で図２と同様に評価したＡβ斑負荷。（ａ）ＡＰＰＰＳ１マウス又はＡＰＰＰＳ１×Ｉｌ１２ｂ-/-マウスを６週齢で致死量放射線照射し、同じ年齢のＣ５７ＢＬ／６マウス（ｗｔ）又はＩｌ１２ｂ-/-マウス（実験群当たりｎ＝３〜７匹の動物）から単離された骨髄で再構成した。２回の代表的な実験のうちの１つを示す。（ｂ）ＡＰＰＰＳ１マウス又はＡＰＰＰＳ１×Ｉｌ１２ｒｂ-/-マウスを６週齢で致死量放射線照射し、Ｃ５７ＢＬ／６マウス又はＩｌ１２ｒｂ-/-マウス（実験群当たりｎ＝４〜８匹の動物）由来の骨髄で再構成した。
【図６】自然免疫の操作は、アルツハイマー病ＡＰＰＰＳ１マウスにおけるＡβ斑負荷を変化させない：ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３シグナル伝達のターゲッティングによるアルツハイマー病のＡβ斑負荷の低下の特異性を示すために、自然免疫機能に必要とされる（かつＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３シグナル伝達とは無関係である）重要なアダプター分子ＭｙＤ８８を欠くマウスをＡＰＰＰＳ１マウスと交配させた。１２０又は２５０日齢のＡＰＰＰＳ１／ＭｙＤ８８-/-マウスは、ＡＰＰＰＳ１／ＭｙＤ８８+/+マウスと比較したとき、Ａβ負荷の変化を示さなかった（ａ、ｂ）。各ドットは、１匹のマウスの形態計測学的に評価された斑負荷の平均を表す。形態計測学的解析は、図２の説明文に記載されている通りに実施された。
【図７】ｉｃｖ抗体を送達したときの高齢マウスの行動解析  脳室内（ｉｃｖ）抗ｐ４０抗体又はアイソタイプ対照抗体処置の６週間後、高齢のｗｔマウス及びＡＰＰＰＳ１マウス（２３０〜２４０日齢）を行動解析に供した。（ａ）移動距離［ｃｍ］として定量されるオープンフィールドアリーナ内での全般的自発運動の評価。１つの記号は、１匹のマウスのデータに相当する。
【図８】高齢のＡＰＰＰＳ１マウスに対する抗ｐ４０抗体の脳室内送達は行動欠陥の改善をもたらす  高齢のｗｔマウス又はＡＰＰＰＳ１マウスを抗ｐ４０抗体（Ｃ１７．８）又はアイソタイプ対照抗体（２Ａ３）で処置した。１９０日齢から始めて、２ｍｇ／ｍｌの濃度及び０．２５μｌ／時間の流速でＡｌｚｅｔミニ浸透圧ポンプを用いて、抗体を脳室内（ｉｃｖ）送達した。処置６週間後、マウスは行動試験を受けた。（ａ）バーンズ迷路−短期記憶保持試験に関する代表的な経路追跡写真（右パネル）及び標的に達するまでの待ち時間の定量（左パネル）。（ｂ）新規物体認識に関する新規物体を探索するのにかかった％時間（左パネル）及び新規物体への％接触（右パネル）の定量。一元配置Ａｎｏｖａ  ｐ値＝０．０８５。各記号は、１匹のマウスのデータに相当する（ｗｔ＋抗ｐ４０  ｎ＝１８；ＡＰＰＰＳ１＋アイソタイプ  ｎ＝８；ＡＰＰＰＳ１＋抗ｐ４０  ｎ＝８）。
【発明を実施するための形態】
【００５８】
本明細書に報告される発明は、適応免疫系のサイトカイン、すなわち、ＩＬ−１２及び／もしくはＩＬ−２３又はその受容体の操作が、アルツハイマー病（ＡＤ）におけるＡβ斑負荷に影響を及ぼすことができる証拠を提供する。ＡＤの発症におけるＩＬ−１２及び／もしくはＩＬ−２３又はその受容体の重要性は、以下の側面によって明らかにされた：
−ＡＤ脳は、特に、ＡＤの特徴的指標であるＡＤβ−アミロイド（Ａβ）に応答する炎症促進性サイトカインの存在を特徴とする炎症成分を示す。
−骨髄性細胞、すなわち、通常、Ａβ斑を取り囲み、脳における炎症性サイトカインの主要な供給源であることが知られているミクログリア及びマクロファージが、年齢をマッチさせた野生型対照と比較したとき、アルツハイマー病ＡＰＰＰＳ１マウスで、例えば、ＩＬ−１２／ＩＬ−２３  ｐ４０及びＩＬ−２３  ｐ１９の強い上方調節を示すことが見出された。
−ＩＬ−１２及び／もしくはＩＬ−２３又はその受容体（例えば、ｐ４０、ｐ１９、ｐ３５、及びｉｌ１２ｒｂ１）の遺伝子除去は、調査した様々な時点（１２０日齢及び２５０日齢）でのアルツハイマー病ＡＰＰＰＳ１マウスのＡβ斑負荷の一貫した、強くかつ顕著な低下をもたらした。
−ＡＤの治療のためのＩＬ−１２及び／もしくはＩＬ−２３又はその受容体の操作の実現可能性を示すために、抗ｐ４０遮断抗体をアルツハイマー病ＡＰＰＰＳ１マウスに末梢（腹腔内）注射し、Ａβ負荷の顕著な低下を誘導した。
−行動試験において、顕著な短期記憶保持の欠如が、ミニ浸透圧ポンプを用いた抗ｐ４０抗体の直接的な脳室内送達によって大幅に改善された。
【００５９】
したがって、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３シグナル伝達の操作は、脳の外側で適用した場合でも、ＡＤに対抗する新たな治療戦略を提供する。
【００６０】
本発明は、以下の図面及び実施例によってさらに例証され、これらから、さらなる実施形態及び利点を得ることができる。
【実施例】
【００６１】
実施例１：ソーティングされたＡＰＰＰＳ１マウスの脳細胞におけるサイトカインレベル
アルツハイマー病（ＡＤ）の病変は、特にＡＤβ−アミロイドに応答する炎症促進性サイトカイン及び活性酸素種の存在を特徴とする炎症成分を示す。ヒトＡＤ試料とトランスジェニックＡＤマウスの両方において、Ａβ斑を取り囲むミクログリア及びマクロファージが炎症性サイトカインの主な供給源であると報告されているので、本発明者らは、この炎症成分をさらに一層特徴付けるために、アルツハイマー病マウスの骨髄性脳細胞をＦＡＣＳソーティングした。まず、本発明者らは、得られた２つの細胞画分（ＣＤ４５+ＣＤ１１ｂ+及びＣＤ４５-ＣＤ１１ｂ-）の定量的ＰＣＲにより、４カ月齢のＡＰＰＰＳ１動物及び年齢をマッチさせた非トランスジェニック同腹子におけるＩＬ−１２、ＩＬ−２３、及びＴＮＦαの発現を評価した。
この解析は、中枢神経系の非骨髄性細胞からなる二重陰性画分におけるＩＬ−１２ｐ３５のおよそ１．６倍の上方調節を示したが、評価された他のサイトカインを検出することはできなかった（図１ａ）。対照的に、本発明者らは、年齢をマッチさせた同腹子対照と比較して、ＡＰＰＰＳ１マウスのミクログリア及び脳マクロファージを含む二重陽性画分においてＩＬ−１２／ＩＬ−２３ｐ４０及びＩＬ−２３ｐ１９の強い上方調節を観察した（図１ｂ）。さらに、単離された出生後ミクログリア細胞培養物の合成Ａβ1-42ペプチド（２２．５μｇ／ｍｌ）による処理により、ＴＮＦα、ＩＬ−２３ｐ１９、及び最も顕著にはＩＬ−１２／ＩＬ−２３ｐ４０の大幅な上方調節が誘導され、これにより、刺激していないミクログリア対照培養物と比べてほぼ６倍の増加が得られた（図１ｃ）。
ＡＰＰＰＳ１トランスジェニック動物におけるＩＬ−１２及びＩＬ−２３サブユニットとＡβ病変の潜在的な関連を立証するために−ＣＮＳ自己免疫疾患のモデルにおけるその影響を除いて、ＩＬ−１２／ＩＬ−２３は、神経変性疾患において役割を果たすことがこれまで記載されていない−並びにＩＬ−１２及びＩＬ−２３サブユニットの阻害がＡＤマウスにおける疾患進行を変化させることができるかどうかを検証するために、ＡＤマウスにおいてＩＬ−１２及びＩＬ−２３サブユニットをターゲッティングする遺伝学的実験及び応用実験を実施した。
【００６２】
実施例２：ＩＬ−１２／ＩＬ−２３サブユニットのノックアウトは、ＡＰＰＰＳ１マウスにおけるＡβ斑負荷を低下させる
Ａβ発症に対するＩＬ−１２及びＩＬ−２３の影響を直接調べるために、本発明者らは、ＡＰＰＰＳ１マウスを以下のものと交配した。
（１）ＩＬ−１２及びＩＬ−２３の共通の構成要素を欠くｐ４０-/-（遺伝子名：Ｉｌ１２ｂ-/-）マウス（Ｍａｇｒａｍ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ７９５：６０−７０（１９９６））、
（２）ＩＬ−１２に欠損があるｐ３５-/-（遺伝子名：Ｉｌ１２ａ-/-）マウス（Ｍａｔｔｎｅｒ，Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２６：１５５３−１５５９（１９９６））、及び
（３）ＩＬ−２３に欠損があるｐ１９-/-（遺伝子名：Ｉｌ２３ａ-/-）マウス（Ｃｕａ，Ｄ．Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４２１：７４４−７４８（２００３））。
【００６３】
１２０日齢で、ｐ４０を欠くサイトカイン欠損ＡＰＰＰＳ１マウス（ＡＰＰＰＳ１×Ｉｌ１２ｂ-/-マウス、ｎ＝９）、ｐ３５を欠くサイトカイン欠損ＡＰＰＰＳ１マウス（ＡＰＰＰＳ１×Ｉｌ１２ａ-/-マウス、ｎ＝１１）、及びｐ１９を欠くサイトカイン欠損ＡＰＰＰＳ１マウス（ＡＰＰＰＳ１×Ｉｌ２３ａ-/-マウス、ｎ＝８）は全て、年齢をマッチさせたＡＰＰＰＳ１対照マウスと比較して、詳細な形態計測学的解析（図２ａ及び２ｂ）で判断したとき、皮質Ａβ斑負荷の大幅な低下を示した。
しかしながら、この効果は、ｐ４０を欠くＡＰＰＰＳ１マウスで最も顕著であった。同様の結果は、２５０ｄで解析したときに得られ、この場合、ＡＰＰＰＳ１／ｐ４０-/-（ＡＰＰＰＳ１×Ｉｌ１２ｂ-/-）マウスは、年齢をマッチさせた対照と比較してＡβ斑負荷の有意な低下を示した（図２ｃ）。この観察により、単にサイトカイン欠損だけが斑形成の動力学に影響を及ぼすという可能性が排除される。斑負荷の低下に付随して、ＡＰＰＰＳ１／ｐ４０-/-（ＡＰＰＰＳ１×Ｉｌ１２ｂ-/-）マウス（図２ｄ）における星状細胞及びミクログリア反応が低下した。
【００６４】
実施例３：抗ｐ４０抗体の末梢投与は、遺伝的ｐ４０除去の効果を模倣する
本発明者らの知見をさらに具体化するために、及びｐ４０シグナル伝達のターゲッティングを新規の介入アプローチとして用いてＡＤを治療することができることを証明するために、本発明者らは、アルツハイマー病ＡＰＰＰＳ１マウスにおけるｐ４０シグナル伝達を薬理学的に遮断した。アルツハイマー病ＡＰＰＰＳ１マウスを抗ｐ４０抗体（Ｃ１７．８；ｎ＝８）又はアイソタイプ対照抗体（２Ａ３；ｎ＝４）で処置した。
４週齢での０．５ｍｇの抗マウスＩｌ−１２／２３ｐ４０抗体（クローンＣ１７．８、ラットＩｇＧ２ａ）又はそれぞれのラットアイソタイプ対照（クローン２Ａ３）の単回ボーラス腹腔内（ｉ．ｐ．）注射の後、実験の最後（１２０日齢）まで、０．２５ｍｇのそれぞれの抗体の週２回のｉ．ｐ．注射を行なった。ＡＰＰＰＳ１マウスが最も堅牢なＡβ斑担持ＡＤマウスモデルであるという事実にもかかわらず（このマウスモデルでは、Ａβ負荷の低下の達成は、仮にあるとしても、困難である）、抗ｐ４０処置群のみにおけるＡβ負荷の全体に顕著でかつ有意な低下があり、これは、８匹のＡＰＰＰＳ１マウスのうちの４匹以上で際立っていた（図３）。抗ｐ４０抗体処置ＡＰＰＰＳ１マウスは全て、実験の終了時に血清中のｐ４０遮断活性を示した（ＥＬＩＳＡで評価した場合；データは示さない）。
【００６５】
実施例４：ＩＬ−１２／ＩＬ−２３ｐ４０のノックアウトは、ＡＰＰプロセッシングを変化させることなく、ＡＰＰＰＳ１マウスにおけるＡβ負荷を低下させる
ＡＰＰＰＳ１／ｐ４０-/-（ＡＰＰＰＳ１×Ｉｌ１２ｂ-/-）マウスの免疫組織学的表現型（図２）をその後の生化学的解析で具体化した。図４は、２５０ｄでの、機能的ｐ４０サブユニットを有するＡＰＰＰＳ１マウスと比較したＡＰＰＰＳ１／ｐ４０-/-（ＡＰＰＰＳ１×Ｉｌ１２ｂ-/-）マウスにおける可溶性（ＳＤＳ）画分及び不溶性（ＦＡ）画分中のＡβ４０種及びＡβ４２種の低下を示している（図４ａ〜ｃ）。このＡβ−ペプチドの低下は、Ａβ４０とＡβ４２の比率の変化を伴わず、これは、原理的にＡβ負荷の低下をもたらし得るγ−セクレターゼの切断パターンに対するＩＬ−１２／ＩＬ−２３  ｐ４０の直接的な効果と相反する（図４ｃ）。
また、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の発現、及びγ−セクレターゼの直接的な基質であるα−ＣＴＦとβ−ＣＴＦの比率は、ＡＰＰＰＳ１マウスと比較して、ＡＰＰＰＳ１／ｐ４０-/-（ＡＰＰＰＳ１×Ｉｌ１２ｂ-/-）マウスで変化しなかった（図４ｄ）。さらに、脳における２つの主要なＡβ分解酵素であるＩＤＥ及びネプリリシンのレベルは、ＡＰＰＰＳ１マウスとＡＰＰＰＳ１／ｐ４０-/-（ＡＰＰＰＳ１×Ｉｌ１２ｂ-/-）マウスで同一であった（図４ｅ）。
【００６６】
これらの生化学的知見は、マウスのアルツハイマー病遺伝子に焦点を当てたＰＣＲ−アレイ実験（ＳＡ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって明らかにされる、ＡＰＰＰＳ１／ｐ４０-/-（ＡＰＰＰＳ１×Ｉｌ１２ｂ-/-）マウスと比較した２５０日齢のＡＰＰＰＳ１の脳におけるＡＤ関連遺伝子の発現の差の欠如によって支持される。
【００６７】
実施例５：放射線耐性区画におけるＩＬ−１２／ＩＬ−２３  ｐ４０欠損はＡβ斑負荷を低下させるのに十分である
ＡＰＰＰＳ１マウスにおけるｐ４０作用部位を詳細に調べるために、放射線耐性造血区画（すなわち、ＣＮＳ）又は放射線感受性造血区画においてｐ４０を欠く骨髄（ＢＭ）キメラマウスを作製した。
養子移植６週間後のコンジェニックドナーマーカーについての血液のフローサイトメトリー解析により、再構成の成功が示され（データは示さない）；その後、マウスを老化させ、最終的に１２０日で免疫組織化学ベースの形態計測学解析によりＡβ斑負荷について解析した。実験の終了時に、ミクログリアは、予想通り、中枢神経系（ＣＮＳ）に進入するドナー細胞に置き換わらなかった（データは示さない）。Ｉｌ１２ｂ-/-骨髄を受容したＡＰＰＰＳ１×Ｉｌ１２ｂ-/-レシピエント（Ｉｌ１２ｂ-/-→ＡＰＰＰＳ１×Ｉｌ１２ｂ-/-）は、先に記載したｐ４０依存的表現型を保持し（図５ａ）、放射線照射及び再構成それ自体は脳アミロイド症に影響を及ぼさないことを示した。
放射線耐性区画におけるｐ４０遺伝子の喪失を示すＩｌ１２ｂ+/+→ＡＰＰＰＳ１×Ｉｌ１２ｂ-/-マウスは、未操作のＡＰＰＰＳ１×Ｉｌ１２ｂ-/-マウスと同様のＡβ斑負荷の低下を示した（図５ａ）。重要なことに、Ｉｌ１２ｂ-/-→ＡＰＰＰＳ１×Ｉｌ１２ｂ+/+キメラマウスは、ベースライン対照と比較したとき、Ａβ斑負荷の減少を示さなかった（図５ａ）。これは、ＣＮＳ常在細胞によるｐ４０発現が、アルツハイマー病ＡＰＰＰＳ１マウスにおけるＡβ斑負荷を調節することができることを示している。
【００６８】
ＡＤマウスにおけるアミロイド負荷に対するＩＬ−１２及びＩＬ−２３シグナル伝達の影響を検証するために、ＩＬ−１２受容体とＩＬ−２３受容体の両方によって共有され、かつＩＬ−１２／２３ｐ４０媒介性シグナルの伝達に必要とされる共通サブユニットであるＩＬ−１２β１受容体を欠くさらなるＢＭキメラマウス（Ｉｌ１２ｒｂ１-/-）（Ｗｕ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５９：１６５８−１６６５（１９９７））を作出した。
この手法により、ＣＮＳ由来ｐ４０発現及びＡβ媒介性ｐ４０発現の標的の決定も可能になった。アミロイド形成の悪化におけるＩＬ−１２／ＩＬ−２３シグナル伝達の役割と一致して、ＣＮＳ常在細胞におけるＩＬ−１２β１受容体の欠如は、Ａβ斑負荷の劇的な低下をもたらした（図５ｂ）。これらのデータは、ＣＮＳの放射線耐性区画、すなわち、ミクログリアにおけるＩＬ−１２／ＩＬ−２３シグナル伝達の欠如が脳アミロイド症を軽減するのに十分であることを示している。
【００６９】
実施例６：自然免疫の重要分子の操作によって、アルツハイマー病ＡＰＰＰＳ１マウスにおけるＡβ斑負荷は変化しない
ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３シグナル伝達のターゲッティングによるアルツハイマー病のＡβ斑負荷の低下の特異性を証明するために、自然免疫機能、例えば、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）シグナル伝達に必要とされる（かつＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３シグナル伝達とは無関係である）共通アダプター分子ＭｙＤ８８を欠くマウスをＡＰＰＰＳ１マウスと交配させた。
Ａβ病変における特定のＴＬＲの関与の可能性について文献中にいくつかの証拠があるにもかかわらず、詳細な形態計測学的解析により評価された半接合体ＡＰＰＰＳ１／ＭｙＤ８８+/-及びＡＰＰＰＳ１／ＭｙＤ８８+/+対照マウスと比較したとき、ＡＰＰＰＳ１／ＭｙＤ８８-/-マウスは、１２０又は２５０日齢で同様の斑負荷を示した（図６）。
Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ（登録商標）電気化学発光システムを用いたＡβ４０及びＡβ４２のＳＤＳ可溶性及び不溶性画分の生化学的解析もまた、ＭｙＤ８８欠損ＡＰＰＰＳ１マウス及び対照ＡＰＰＰＳ１マウスの大きな違いを示さなかった。このように、ＡＰＰＰＳ１マウスの免疫系のさらに別の変化、例えば、ＭｙＤ８８分子の欠失は、ＡＰＰＰＳ１マウスにおけるＡβ負荷の量を変化させず、アルツハイマー病におけるＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３シグナル伝達のターゲッティングの特異性を証明している。
【００７０】
実施例７：行動実験
抗ｐ４０処置が、既に確立している疾患表現型に対する機能的影響を有するかどうかを明らかにするために、本発明者らは、高齢のＡＤマウスを抗ｐ４０抗体で処置した。早期発症型でかつ侵襲性のＡβ斑病変にもかかわらず、ＡＰＰＰＳ１マウスは、約８カ月齢まで検出可能でなく、かつわずかな行動試験に制限される、軽度の行動表現型しか示さない。
この点を考慮し、また、本発明者らの先の知見により、ｐ４０依存的な抗アミロイド原性効果の媒介における放射線耐性中枢区画の重要性が確認されているので、本発明者らは、ミニ浸透圧ポンプを用いて、中和抗ｐ４０抗体を１９０日齢のＡＰＰＰＳ１マウスの側脳室に６０日間直接送達した。ＡＰＰＰＳ１マウス（抗ｐ４０又はアイソタイプ対照抗体で処置）は、ｗｔ動物（抗ｐ４０抗体で処置）と比較して、自発運動行動−運動行動に基づく任意の認知的検定の前提条件−の制御試験で何ら異常を示さなかったが（図７）、アイソタイプ処置ＡＰＰＰＳ１マウスは、３つの異なる認知的作業：恐怖条件付け文脈学習（示さず）、バーンズ迷路（図８ａ）、及び新規物体認識（図８ｂ）において測定可能な行動の欠陥を示す。特に、バーンズ迷路試験においてＡＰＰＰＳ１マウスで観察された短期記憶保持の顕著な欠陥は、抗ｐ４０抗体での処置により、大幅に改善された（図８ａ）。
同様に、ＡＰＰＰＳ１マウスによって示された皮質及び海馬依存的新規物体認識作業の明白な欠陥は、抗ｐ４０処理により、ｗｔ同腹子と同程度の正常なレベルにまで戻した（図８ａ）。したがって、ｐ４０シグナル伝達のターゲッティングによるＡβ斑病変の発症に対する観察された有益な効果を超えて、脳室内（ｉｃｖ）抗ｐ４０処置は、既に十分に確立しているＡβ斑病変がこのモデルにおいてこの遅い時点で実現しているにもかかわらず、高齢のＡＰＰＰＳ１マウスで観察される行動障害及び認知障害を改善することが証明された。
【図１】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図８】
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【国際調査報告】
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