(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｉの構造を有し、
【化１】
0006465989.tif 000050
前記Ｒが、フェニル基、それぞれ独立に窒素、酸素または硫黄から選択されるヘテロ原子を１〜３個含有する５〜６員の単環ヘテロアリール基、８〜１０員の二環アリール基、それぞれ独立に窒素、酸素または硫黄から選択されるヘテロ原子を１〜４個含有する８〜１０員の二環ヘテロアリール基、１０〜１４員の三環アリール基、またはそれぞれ独立に窒素、酸素または硫黄から選択されるヘテロ原子を１〜４個含有する１０〜１４員の三環ヘテロアリール基から選択され；
前記Ｒが、置換されないか、１個または独立に選択される複数個のＷ置換基で任意に置換され；
前記Ｗ置換基が、ハロゲン、−ＮＯ２、Ｃ１〜４アルコキシ基、−ＣＮ、Ｃ１〜４ハロゲン化アルキル基、−ＳＯ２ＮＨ２、Ｃ１〜４アルキル基、−Ｃ６Ｈ５、−ＯＣ６Ｈ５、−ＯＣ６Ｈ４ＯＣＨ３、−ＳＣ６Ｈ５、−ＳＣ６Ｈ４ＯＣＨ３、それぞれ独立に窒素、酸素または硫黄から選択されるヘテロ原子を１〜３個含有する５〜６員の単環ヘテロアリール基、それぞれ独立に窒素、酸素または硫黄から選択されるヘテロ原子を１〜３個含有する４〜７員のヘテロシクロアルキル基、またはそれぞれ独立に窒素、酸素または硫黄から選択されるヘテロ原子を１〜４個含有する８〜１０員の二環ヘテロアリール基から選択され；
前記ｎが、０、１または２から選択されることを特徴とするイソチオシアネート系化合物。
【請求項２】
前記Ｒが、フェニル基、フリル基、チエニル基、ピラニル基、ピロニル基、ピリル基、テトラゾリル基、ピラゾリル基、チアゾリル基、イミダゾリル基、オキサゾリル基、ピリジル基、ピリダジニル基、ピリミジル基、ピラジニル基、またはこれらの単環基を任意に縮合してなる２〜３環基から選択されることを特徴とする請求項１に記載のイソチオシアネート系化合物。
【請求項３】
前記Ｒが、フェニル基、フリル基、チエニル基、ピリル基、テトラゾリル基、ベンゾフリル基、ベンゾピラニル基、ベンゾピロニル基、ベンゾチエニル基、インドリル基、ジベンゾフリル基、ジベンゾチエニル基、カルバゾリル基、ピラゾリル基、チアゾリル基、イミダゾリル基、オキサゾリル基、ベンゾチアゾリル基、ベンゾピラゾリル基、ベンゾイミダゾリル基、ベンゾオキサゾリル基、ピリジル基、キノリル基、イソキノリル基、ピリダジニル基、ピリミジル基、ピラジニル基、シノリニル基、キナゾリニル基、キノキサリニル基、フェノキサジニル基、フェノチアジニル基、フェナジニル基、またはプリニル基から選択されることを特徴とする請求項２に記載のイソチオシアネート系化合物。
【請求項４】
前記Ｗ置換基が、ハロゲン、Ｃ１〜４アルコキシ基、−ＣＮ、Ｃ１〜４ハロゲン化アルキル基、−ＳＯ２ＮＨ２、−Ｃ６Ｈ５、−ＯＣ６Ｈ５、−ＯＣ６Ｈ４ＯＣＨ３、−ＳＣ６Ｈ５、−ＳＣ６Ｈ４ＯＣＨ３、それぞれ独立に窒素、酸素または硫黄から選択されるヘテロ原子を１〜３個含有する５〜６員の単環ヘテロアリール基、またはそれぞれ独立に窒素、酸素または硫黄から選択されるヘテロ原子を１〜３個含有する４〜７員のヘテロシクロアルキル基から選択されることを特徴とする請求項１に記載のイソチオシアネート系化合物。
【請求項５】
前記Ｗ置換基が、Ｃｌ、Ｂｒ、−ＯＣＨ３、−ＣＦ３、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＣＮ、−Ｃ６Ｈ５、−ＯＣ６Ｈ５、−ＯＣ６Ｈ４ＯＣＨ３、−ＳＣ６Ｈ５、−ＳＣ６Ｈ４ＯＣＨ３、またはモルホリニルから選択されることを特徴とする請求項１に記載のイソチオシアネート系化合物。
【請求項６】
前記ｎが、１または２から選択されることを特徴とする請求項１に記載のイソチオシアネート系化合物。
【請求項７】
下記の化合物から選択されることを特徴とする請求項１に記載のイソチオシアネート系化合物。
【化２】
0006465989.tif 000051
0006465989.tif 000052
0006465989.tif 000053
【請求項８】
下記の化合物から選択されることを特徴とする請求項１に記載のイソチオシアネート系化合物。
【化３】
0006465989.tif 000054
【請求項９】
有効量の請求項１〜８のいずれか１項に記載のイソチオシアネート系化合物を含有するＸＰＯ１タンパク質阻害剤系医薬品。
【請求項１０】
ＸＰＯ１タンパク質阻害剤系抗炎症薬、ＸＰＯ１タンパク質阻害剤系抗腫瘍薬、またはＸＰＯ１タンパク質阻害剤系抗ウイルス薬であることを特徴とする請求項９に記載のＸＰＯ１タンパク質阻害剤系医薬品。
【請求項１１】
前記ＸＰＯ１タンパク質阻害剤系抗炎症薬が、炎症性腸疾患の治療に用いられる医薬品であり、前記ＸＰＯ１タンパク質阻害剤系抗腫瘍薬が、抗腫瘍転移薬であることを特徴とする請求項１０に記載のＸＰＯ１タンパク質阻害剤系医薬品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規のイソチオシアネート系ＸＰＯ１タンパク質阻害剤及びその製造、用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
生体内のいくつかの特異タンパク質は、特定の輸送タンパク質により細胞核内に輸入されまたは細胞核外に輸出される。これらの輸送タンパク質は、輸入タンパク質と輸出タンパク質（分子を細胞核外に輸出するもの）に分けられる。細胞核内に輸入されまたは細胞核外に輸出されるタンパク質は、特定の輸送タンパク質と相互作用できる核輸入局在配列（ＮＬＳ）または核輸出局在配列（ＮＥＳ）を持つ。ＸＰＯ１（ＣＲＭ１タンパク質とも呼ばれる）は、最も重要な細胞核輸出タンパク質である。
【０００３】
ＸＰＯ１のカーゴタンパク質としては、特異の腫瘍阻害タンパク質、例えばＰ５３、Ｐ２１、ＢＲＣＡ１、ＦＯＸＯｓ、ＢＣＲ−Ａｂ１及びＮＰＭなどが挙げられる。多くの研究から分かるように、ＸＰＯ１タンパク質は、多くの腫瘍種類、例えば卵巣がん、子宮頸がん、骨肉腫、肺がん、膵臓がん、結腸がん、肝臓がん、悪性リンパ腫、白血病において高発現され、しかもこの高発現がこれらの腫瘍の予後不良結果に関与する。腫瘍阻害タンパク質は、過剰発現されたＸＰＯ１により細胞質に輸送され分解され、腫瘍への阻害機能を失う。これは、腫瘍細胞がアポトーシスから逃げる機構の１つであると考えられる（Semin Cancer Biol. 2014, 27:74-86; Biochem Pharmacol. 2012, 83(8):1021-32.）。
【０００４】
腫瘍の転移は、悪性腫瘍が治療されにくく高死亡率を持つ主の原因であり、悪性腫瘍が化学療法、放射線療法に対して耐性を引き起こす原因の１つでもある。また、文献には、抗腫瘍作用を有する化合物の多くは、腫瘍の転移や、放射線療法と化学療法に耐性を持つ腫瘍に対して無効であることが報告されている（Methods Mol Med. 2005; 111:127-48）。抗腫瘍転移作用を有する活性物質は、極めて高い臨床価値を持つが、従来技術にはあまり記載されなかった。上皮細胞から間葉細胞への転換（Epithelial-Mesenchymal Transition, EMT）とは、上皮細胞が形態的に繊維細胞または間葉細胞表現型へ転換して転移能を獲得することであり、腫瘍細胞の転移において重要な役割を演じる。近年、ＥＭＴ経路は、腫瘍転移に関する研究の焦点になっている。Ｅ−カドヘリンは重要な細胞接着分子であり、腫瘍の発生、浸潤及び転移に深く関与する。Ｓｎａｉｌタンパク質は転写因子の１つであり、Ｅ−カドヘリンの転写を直接阻害することができ、細胞転移を促進する作用を有する。多くの証拠から分かるように、悪性腫瘍細胞が転移する前に、Ｓｎａｉｌタンパク質の発現が増加し、Ｅ−カドヘリンの発現レベルが減少するから、腫瘍細胞の転移潜在力が増加する。よって、Ｓｎａｉｌタンパク質の発現を阻害する化合物は、抗腫瘍細胞転移の潜在力を有する。
【０００５】
ＸＰＯ１のカーゴタンパク質は、腫瘍阻害タンパク質のほか、炎症及び免疫過程に関与するいくつかの重要なタンパク質、例えばＩкＢ、Ｃｏｘ−２、ＲＸＲα、Ｃｏｍｍｄ１、ＨＩＦ１なども含む。ＩкＢはＮＦ−кＢタンパク質の阻害剤であり、細胞核においてＮＦ−кＢに結合してその転写機能を失わせるから、ＮＦ−кＢこの炎症及び免疫過程に深く関与するシグナル経路を調節する。ＩкＢは、炎症または免疫の誤調節過程で過剰発現されたＸＰＯ１により細胞質において分解され、ＮＦ−кＢに対する調節作用を失う（Shock. 2008, 29(2):160-6; J Biol Chem. 1999, 274(13):9108-15）。
【０００６】
ＸＰＯ１タンパク質はレチノイド受容体（ＲＸＲα）をも細胞核外に輸出する。ＲＸＲαは、肝臓で高発現され、胆汁酸、コレステロール、脂肪酸、ステロイドなどの代謝調節において中心的役割を果たす。ＸＰＯ１タンパク質は、肝臓炎症の病理過程で高発現されるから、細胞核中のレチノイン酸受容体のレベルが著しく低下する。従って、炎症または免疫誤調節などの病理過程で過剰に発現されたＸＰＯ１タンパク質を阻害することは、潜在的に有益である（J Biol Chem. 2006, 281(22):15434-40）。
【０００７】
炎症性腸疾患（Inflammatory bowel disease, IBD）は、世界中に罹病率が比較的に高く、米国では毎年の患者数が２百万人にのぼる。中国では、炎症性腸疾患のケースも年々増えており、消化器の一般的な疾患及び慢性下痢の主の原因になり、しかも患者の多くは児童及び若年成人である。炎症性腸疾患とは、一般的に言えば、様々な炎症性腸疾患であることを指し、主に潰瘍性大腸炎（Ulcerative colitis）及びクローン病（Crohn's disease）などを含む。炎症性腸疾患の発病機構は、まだ明らかではないが、一般的に免疫系疾患であると考えられる。研究から分かるように、炎症性腸疾患の病理過程には、炎症反応がコントロールできず、いくつかのサイトカイン、例えば腫瘍壊死因子ＴＮＦ−α、インターロイキンＩＬ−６などが過剰に発現され正常の組織臓器を損傷させることがある。よって、炎症性腸疾患を治療するために、通常、前記サイトカインの過剰発現を調節する必要がある（J Clin Invest. 2007; 117(3):514-21）。臨床で炎症性腸疾患を治療するのは、アミノサリチル酸製剤、例えば５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）、スルファサラジンなどを利用することができる。しかし、このような薬品は、軽度の患者にある程度の治療効果を有するが、通常、重度の患者に治療効果がなく、しかも薬品耐性を引き起こしやすい。また、臨床でシクロホスファミド、メトトレキサートなどの免疫抑制剤を使用して自己免疫反応を抑制することも可能であるが、残念ながら、これらの臨床治療手段は、炎症性腸疾患への緩和効果が限られ、しかも肝臓毒性および骨髓抑制毒性などの明らかな毒性や副作用が発生する恐れがある。より安全でより有効な炎症性腸疾患治療剤を探し出すことは、非常に重要の意義を持つ。
【０００８】
前記病理過程のほか、ＸＰＯ１を介する細胞核輸出は、多くのビリオンのパッケージング、完全化、成熟の過程にも深く関与する。例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、インフルエンザウイルス（Ｈ１Ｎ１菌株及び家禽と鳥類のＨ５Ｎ１菌株）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）とＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、 呼吸系発疹ウイルス（ＲＳＶ）、デング熱ウイルス（Ｄｕｎｇｅｅ）、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス、ウエストナイルウイルス、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、及びメルケル細胞ポリオーマウイルス（ＭＣＶ）などが挙げられる（Proc Natl Acad Sci U S A. 2002, 99(22):14440-5; J Virol. 2008, 82(21):10946-52; J Biol Chem. 2009, 284(23):15589-97; J Virol. 2009; 83(11):5353-62）。よって、ＸＰＯ１タンパク質の発現を阻害することは、ウイルス輸送を切断するのにも潜在的に有益である。
【０００９】
莱ふく子は伝統的な漢方薬であり、蘿卜子、蘿白子、菜頭子とも呼ばれ、ラテン名がＳeｍeｎ Ｒａpｈａｎｉであり、アブラナ科植物である大根の成熟種子である。通常、食積気滞、かん腹脹満、噫気、下痢後重、咳嗽痰多、喘急胸満などの症状を緩和するのに使用される。現代漢方薬学の研究結果から分かるように、その主要な有効成分はイソチオシアネート系化合物スルホラフェン（Ｃ６Ｈ９ＮＯＳ２）である。我々は、以前の研究では、スルホラフェン及びその誘導体が良好のＸＰＯ１タンパク質阻害剤であり、極めて良好の潜在的な臨床応用価値を有するという驚くべきことを発見した。
【発明の概要】
【００１０】
さらに、従来技術または本発明者による以前の研究と異なり、特定構造を持つスルホラフェン誘導体が非常に優れたＸＰＯ１タンパク質阻害活性を有することを見出した。
【００１１】
本発明の１つの目的は、アリール基で置換されたイソチオシアネート系化合物であって、一般式Ｉの構造を有することを特徴とする新規のイソチオシアネート系化合物を提供することである。
【００１２】
【化１】
0006465989.tif 000002
【００１３】
前記Ｒが、フェニル基、それぞれ独立に窒素、酸素または硫黄から選択されるヘテロ原子を１〜３個含有する５〜６員の単環ヘテロアリール基、８〜１０員の二環アリール基、それぞれ独立に窒素、酸素または硫黄から選択されるヘテロ原子を１〜４個含有する８〜１０員の二環ヘテロアリール基、１０〜１４員の三環アリール基、またはそれぞれ独立に窒素、酸素または硫黄から選択されるヘテロ原子を１〜４個含有する１０〜１４員の三環ヘテロアリール基から選択され；
前記Ｒが、置換されないか、１個または独立に選択される複数個のＷ置換基で任意に置換され；
前記Ｗ置換基が、ハロゲン、−ＮＯ２、Ｃ１〜４アルコキシ基、−ＣＮ、Ｃ１〜４ハロゲン化アルキル基、−ＳＯ２ＮＨ２、Ｃ１〜４アルキル基、−Ｃ６Ｈ５、−ＯＣ６Ｈ５、−ＯＣ６Ｈ４ＯＣＨ３、−ＳＣ６Ｈ５、−ＳＣ６Ｈ４ＯＣＨ３、それぞれ独立に窒素、酸素または硫黄から選択されるヘテロ原子を１〜３個含有する５〜６員の単環ヘテロアリール基、それぞれ独立に窒素、酸素または硫黄から選択されるヘテロ原子を１〜３個含有する４〜７員のヘテロシクロアルキル基、またはそれぞれ独立に窒素、酸素または硫黄から選択されるヘテロ原子を１〜４個含有する８〜１０員の二環ヘテロアリール基から選択され；
前記ｎが、０、１または２から選択される。
【００１４】
本発明のもう１つの目的は、前記イソチオシアネート系化合物の製造方法を提供することである。かかる製造方法は、下記のステップを含む。
【００１５】
１．ｎ＝１の化合物の製造方法は、下記のステップを含む。 
（１）炭酸カリウムの存在下で、式ｉの化合物をメチルメタンスルホン酸リン酸ジエチルと１２ｈ反応させ、式ｉｉの化合物を製造する。Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を反応溶媒とする。
【００１６】
【化２】
0006465989.tif 000003
【００１７】
（２）クロロホルム溶液に式ｉｉの化合物をｍ−クロロ過安息香酸（ｍ−ＣＰＢＡ）と反応させ、式ｉｉｉの化合物を生成する。
【００１８】
【化３】
0006465989.tif 000004
【００１９】
（３）塩化リチウムの存在下で、トリエチルアミン／テトラヒドロフラン（ＴＥＡ／ＴＨＦ）溶液に式ｉｉｉの化合物をブチル−４−アミノギ酸ブチルエステルアルデヒドと反応させ、式ｉｖの化合物を製造する。
【００２０】
【化４】
0006465989.tif 000005
【００２１】
（４）ジクロロメタン（ＤＣＭ）に式ｉｖの化合物を先にトリフルオロ酢酸と反応させ、その後、ＴＥＡの存在下で、ＤＣＭにチオホスゲン（ＣＳ２）と反応させ、式Ｉの化合物を生成する。
【００２２】
２．ｎ＝２の化合物の製造方法は、下記のステップを含む。 
（１）炭酸カリウムの存在下で、式ｉの化合物をメチルメタンスルホン酸リン酸ジエチルと１２ｈ反応させ、式ｉｉの化合物を製造する。Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を反応溶媒とする。
【００２３】
【化５】
0006465989.tif 000006
【００２４】
（２）クロロホルム溶液に式ｉｉの化合物を２当量のｍ−クロロ過安息香酸（ｍ−ＣＰＢＡ）と反応させ、式ｖの化合物を生成する。
【００２５】
【化６】
0006465989.tif 000007
【００２６】
（３）塩化リチウムの存在下で、トリエチルアミン／テトラヒドロフラン（ＴＥＡ／ＴＨＦ）溶液に式ｖの化合物をブチル−４−アミノギ酸ブチルエステルアルデヒドと反応させ、式ｖｉの化合物を製造する。
【００２７】
【化７】
0006465989.tif 000008
【００２８】
（４）ジクロロメタン（ＤＣＭ）に式ｖｉの化合物を先にトリフルオロ酢酸と反応させ、その後、ＴＥＡの存在下で、ＤＣＭにチオホスゲン（ＣＳ２）と反応させ、式Ｉの化合物を生成する。
【００２９】
３．ｎ＝０の化合物の製造方法は、下記のステップを含む。 
（１）炭酸カリウムの存在下で、式ｉの化合物をメチルメタンスルホン酸リン酸ジエチルと１２ｈ反応させ、式ｉｉの化合物を製造する。Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を反応溶媒とする。
【００３０】
【化８】
0006465989.tif 000009
【００３１】
（２）塩化リチウムの存在下で、トリエチルアミン／テトラヒドロフラン（ＴＥＡ／ＴＨＦ）溶液に式ｉｉの化合物をブチル−４−アミノギ酸ブチルエステルアルデヒドと反応させ、式ｖｉｉの化合物を製造する。
【００３２】
【化９】
0006465989.tif 000010
【００３３】
（３）ジクロロメタン（ＤＣＭ）に式ｖｉｉの化合物を先にトリフルオロ酢酸と反応させ、その後、ＴＥＡの存在下で、ＤＣＭにチオホスゲン（ＣＳ２）と反応させ、式Ｉの化合物を生成する。
【００３４】
本発明のもう１つの目的は、有効量の本発明の前記イソチオシアネート系化合物を含有するＸＰＯ１タンパク質阻害剤系医薬品を提供することである。
【００３５】
本発明の前記イソチオシアネート系化合物は、水における溶解度が非常に高く、ＸＰＯ１タンパク質への阻害活性がアリール基ではない基で置換されたそのほかの類似化合物より遥かに優れ、しかも副作用が極めて低く、生物学的安全性及び生物学的利用能が良好であり、臨床応用に非常に適することから、巨大の潜在的な市場空間及び経済的利益を有する。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
本発明では、２つの図面を示す。
【図１】共焦点レーザー顕微鏡により観察された、代表的化合物Ｉ−０１がＸＰＯ１タンパク質を標的結合して細胞核輸出を阻害する效果図である。
【図２】生体内撮像装置により観察された、代表的化合物Ｉ−０６が卵巣がんの腹膜転移モデルを治療する效果図である。（ａ） 対照群（未投与）；（ｂ） 化合物Ｉ−０６投与３週後（８０ｍｇ／ｋｇ）。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
本発明で使用される用語は、別段の定めがない限り、下記の一般的な意味を有する。
【００３８】
用語「ハロゲン」は、ハロゲン置換基を表し、フルオロ（−Ｆ）、クロロ（−Ｃｌ）、ブロモ（−Ｂｒ）またはヨード（−Ｉ）を指す。用語「ハロゲン化」は、前記ハロゲン置換基で置換されることを表す。
【００３９】
用語「アルキル基」は、直鎖アルキル基、分岐鎖アルキル基またはシクロアルキル基を指す。「Ｃ１〜４アルキル基」を概括的に言及する場合、片末端に遊離結合を有するアルキル基を含む。その例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、１級／２級／３級ブチル基、シクロプロピル基、メチルシクロプロピル基、シクロブチル基が挙げられるが、これらに限定されない。また、原子価結合法を満足する二個または二個以上の遊離結合を有するアルキル基も含む。その例としては、−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）２−、−（ＣＨ２）３−、−（ＣＨ２）４−または−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２）２−が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４０】
用語「フェニル基」は、ベンゼン環アリール基を指し、置換されまたは置換されない−Ｃ６Ｈ５を含む。「−Ｃ６Ｈ５」を言及する場合、置換されないフェニル基のみを指す。
【００４１】
用語「アリール基」は、簡単な芳香環から誘導された官能基または置換基を指し、特別の限定がない限り、炭素環アリール基でもよく、複素環アリール基でもよく、単環アリール基、縮合環アリール基、またはアリール環と非アリール環を縮合してなる多環置換基でもよい。
【００４２】
用語「ヘテロアリール基」は、ヘテロ原子を含有する芳香環から誘導された官能基または置換基を指す。
【００４３】
用語「ハロゲン化アルキル基」は、ハロゲン置換基で置換されたアルキル基を指す。
【００４４】
本発明の前記イソチオシアネート系化合物は、アリール基で置換されたイソチオシアネート系化合物であり、一般式Ｉの構造を有する。
【００４５】
【化１０】
0006465989.tif 000011
【００４６】
前記Ｒは、フェニル基、それぞれ独立に窒素、酸素または硫黄から選択されるヘテロ原子を１〜３個含有する５〜６員の単環ヘテロアリール基、８〜１０員のニ環アリール基、それぞれ独立に窒素、酸素または硫黄から選択されるヘテロ原子を１〜４個含有する８〜１０員の二環ヘテロアリール基、１０〜１４員の三環アリール基、またはそれぞれ独立に窒素、酸素または硫黄から選択されるヘテロ原子を１〜４個含有する１０〜１４員の三環ヘテロアリール基から選択される。
【００４７】
前記Ｒとしては、フェニル基、フリル基、チエニル基、ピラニル基、ピロニル基、ピリル基、テトラゾリル基、ピラゾリル基、チアゾリル基、イミダゾリル基、オキサゾリル基、ピリジル基、ピリダジニル基、ピリミジル基、ピラジニル基、またはこれらの単環基を任意に縮合してなる２〜３環基が好ましく、フェニル基またはフェニル基を有する縮合環アリール基が特に好ましい。前記言及した「任意に縮合」は、それぞれ違う基を縮合してなる縮合環アリール基、例えばフェニル基とそのほかの基を縮合してなるベンゾフリル基、ベンゾチエニル基、インドリル基（ベンゾピリル基）、ジベンゾフリル基、ジベンゾチエニル基、カルバゾリル基（ジベンゾピリル基）、ベンゾチアゾリル基、ベンゾピラゾリル基、ベンゾイミダゾリル基、ベンゾオキサゾリル基、キノリル基（ベンゾピリジル基）、イソキノリル基などを含み、これらの基自体を縮合してなる縮合環アリール基、例えばナフチル基、アントリル基、フェナントリル基、ピレニル基またはフルオレニル基（ジベンゾシクロペンタジエン）も含む。
【００４８】
前記Ｒとしては、フェニル基、アントリル基、フェナントリル基、フリル基、チエニル基、ピリル基、テトラゾリル基、ベンゾフリル基、ベンゾピラニル基、ベンゾピロニル基、ベンゾチエニル基、インドリル基、ジベンゾフリル基、ジベンゾチエニル基、カルバゾリル基、ピラゾリル基、チアゾリル基、イミダゾリル基、オキサゾリル基、ベンゾチアゾリル基、ベンゾピラゾリル基、ベンゾイミダゾリル基、ベンゾオキサゾリル基、ピリジル基、キノリル基、イソキノリル基、ピリダジニル基、ピリミジル基、ピラジニル基、シノリニル基、キナゾリニル基、キノキサリニル基、フェノキサジニル基、フェノチアジニル基、フェナジニル基、またはプリニル基がより好ましい。
【００４９】
前記一般式ＩにおけるＲは、置換されないか、１個または独立に選択される複数個のＷ置換基で任意に置換される。ここで任意に置換されるとは、Ｒ基の任意の位置において実施可能な量の任意の置換基で置換されることを指す。
【００５０】
前記Ｗ置換基は、ハロゲン、−ＮＯ２、Ｃ１〜４アルコキシ基、−ＣＮ、Ｃ１〜４ハロアルキル基、−ＳＯ２ＮＨ２、Ｃ１〜４アルキル基、−Ｃ６Ｈ５、−ＯＣ６Ｈ５、−ＯＣ６Ｈ４ＯＣＨ３、−ＳＣ６Ｈ５、−ＳＣ６Ｈ４ＯＣＨ３、それぞれ独立に窒素、酸素または硫黄から選択されるヘテロ原子を１〜３個含有する５〜６員の単環ヘテロアリール基、それぞれ独立に窒素、酸素または硫黄から選択されるヘテロ原子を１〜３個含有する４〜７員のヘテロシクロアルキル基、またはそれぞれ独立に窒素、酸素または硫黄から選択されるヘテロ原子を１〜４個含有する８〜１０員のニ環ヘテロアリール基から選択される。
【００５１】
好ましい実施態様では、前記Ｗ置換基は、ハロゲン、Ｃ１〜４アルコキシ基、−ＣＮ、Ｃ１〜４ハロアルキル基、−ＳＯ２ＮＨ２、−Ｃ６Ｈ５、−ＯＣ６Ｈ５、−ＯＣ６Ｈ４ＯＣＨ３、−ＳＣ６Ｈ５、−ＳＣ６Ｈ４ＯＣＨ３、それぞれ独立に窒素、酸素または硫黄から選択されるヘテロ原子を１〜３個含有する５〜６員の単環ヘテロアリール基、またはそれぞれ独立に窒素、酸素または硫黄から選択されるヘテロ原子を１〜３個含有する４〜７員のヘテロシクロアルキル基から選択される。より好ましくは、前記Ｗ置換基は、Ｃｌ、Ｂｒ、−ＯＣＨ３、−ＣＦ３、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＣＮ、−Ｃ６Ｈ５、−ＯＣ６Ｈ５、−ＯＣ６Ｈ４ＯＣＨ３、−ＳＣ６Ｈ５、−ＳＣ６Ｈ４ＯＣＨ３、またはモルホリニルから選択される。
【００５２】
前記一般式Ｉにおけるｎは、０、１または２から選択され、好ましくはｎ＝１または２であり、最も好ましくはｎ＝１である。
【００５３】
本発明の前記イソチオシアネート系化合物では、本発明のイソチオシアネート系化合物の好ましい実施態様を得るように、それぞれの具体的な実施手段を任意に組み合わせることができる。
【００５４】
具体的な実施態様では、本発明の前記イソチオシアネート系化合物は、下記化合物から選択される。
【００５５】
【化１１】
0006465989.tif 000012
【００５６】
【化１２】
0006465989.tif 000013
【００５７】
【化１３】
0006465989.tif 000014
【００５８】
本発明の前記イソチオシアネート系化合物は、一般式Ｉで表されるすべての異性体構造の化合物も含む。各構造式のエナンチオマーとジアステレオマー、各不斉中心を有するＲとＳ立体配置の化合物、ＺとＥの二重結合異性体、及びＺとＥ立体配置異性体化合物などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５９】
また、本発明の前記イソチオシアネート系化合物は、更に前記一般式Ｉの化合物から形成される薬学的に許容しうる塩、例えば、人体に対して無毒の薬学的に許容しうる塩も含む。このような無毒の塩としては、好ましくはアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩及びカルシウム塩；ハロゲン化水素酸塩、例えばフッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩及びヨウ化水素酸塩；無機酸塩、例えば硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩及びリン酸塩；有機酸塩、例えばメタンスルホン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩及びマレイン酸；アミノ酸塩、例えばグルタミン酸塩及びアスパラギン酸塩が挙げられる。
【００６０】
本発明は、有効量の本発明の前記イソチオシアネート系化合物を含有するＸＰＯ１タンパク質阻害剤系医薬品を提供する。
【００６１】
具体的な実施態様では、前記ＸＰＯ１タンパク質阻害剤系医薬品は、ＸＰＯ１タンパク質阻害剤系抗炎症薬、ＸＰＯ１タンパク質阻害剤系抗腫瘍薬またはＸＰＯ１タンパク質阻害剤系抗ウイルス薬である。
【００６２】
より具体的な実施態様では、前記ＸＰＯ１タンパク質阻害剤系抗炎症薬は、炎症性腸疾患の治療に用いられる医薬品であり、前記ＸＰＯ１タンパク質阻害剤系抗腫瘍薬は、抗腫瘍転移薬である。
【００６３】
前記抗腫瘍転移薬において言及した腫瘍は、肺がん、乳がん、卵巣がん、結腸がん、膵臓がん、食道がん、骨肉腫、腎臓がん、子宮頸がん、膀胱がん、頭頸部がん、多発性骨髄腫、脳腫瘍、前立腺がん、悪性黒色腫、胃がん、肝臓がん、神経膠腫、口腔がん、鼻咽頭がん、喉頭がん、下垂体腫瘍、軟部組織肉腫、甲状腺がん、精巣がん、胆嚢がん、唾液腺がん、尿道がん、子宮肉腫、白血病、悪性リンパ腫から選択される。
【００６４】
本発明の前記ＸＰＯ１タンパク質阻害剤系医薬品は、その用途に応じて、如何なる製剤とすることができる。かかる製剤としては、経口製剤、例えばタブレット剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、丸剤、細粒剤、錠剤、シロップ剤及びエマルション；注射剤、例えば静脉内注射剤及び筋肉内注射剤；直腸に適用する製剤、油脂性坐剤、水溶性坐薬、軟膏などが挙げられるが、これらに限定されない。これらの製剤は、薬学的に許容し得る担体、例えば、賦形剤、充填剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤、滑剤、分散剤、緩衝剤、pＨ調整剤、保存剤、キレート剤、溶解補助剤、防腐剤、矯味・矯臭剤、無痛化剤、安定剤などを用いて常法により製造することができる。
【００６５】
本発明の前記ＸＰＯ１タンパク質阻害剤系抗腫瘍薬は、単独で使用してもいいし、その他の抗がん手段と併用してもよい。かかる併用は、外科的手術との併用、1種または複数種の西洋薬との併用、漢方薬との併用、放射線治療との併用、遺伝子治療との併用、または生物調整剤との併用から選択される。
【実施例】
【００６６】
本発明を理解させるために、本発明は下記の実施例を示す。当業者は、これらの実施例が本発明の理解を助けるためのものであり、本発明を具体的に限定するものではないと理解すべきである。
【００６７】
実施例１. 化合物Ｉ−０１の製造
【００６８】
【化１４】
0006465989.tif 000015
【００６９】
ステップ１. （２−エチル）−チオフェノール−メチルホスホン酸エチルの製造
【００７０】
【化１５】
0006465989.tif 000016
【００７１】
チオフェノール１.１０ｇと炭酸カリウム１.８８ｇをＤＭＦ溶液４５ｍｌに溶解し、室温でフェニルメタンスルホン酸ホスホン酸ジエチル１.６５ｇをゆっくり滴下し、室温で撹拌し、ＴＬＣにより検出を行ったところ、２時間後はもはや原料が減らないと確認し、反応を終了させた。抽出した有機層を合わせて乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより２.２０ｇの黄色油状液体（収率８８％）を得た。化合物のマススペクトル（ＭＳ）： [Ｍ+Ｈ]+２６０.０。
【００７２】
ステップ２. （２−エチル）−１−ベンゼンスルフィニル−メチルホスホン酸エチルの製造
【００７３】
【化１６】
0006465989.tif 000017
【００７４】
ステップ１で得られた生成物２.６６ｇをクロロホルム溶液２５ｍｌに溶解した後、ｍ−ＣＰＢＡ溶液０.２５ｇをゆっくり滴下した。室温で撹拌し、ＴＬＣにより検出を行ったところ、１時間後はもはや原料が減らないと確認し、反応を終了させた。抽出した有機層を合わせて乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより２.２１ｇの油状液体 （収率８５％）を得た。化合物のマススペクトル（ＭＳ）： [Ｍ+Ｈ]+２７６.３。
【００７５】
ステップ３. 
【００７６】
【化１７】
0006465989.tif 000018
【００７７】
ステップ２で得られた生成物２.７０ｇと塩化リチウム粉末０.１７ｇをＴＥＡ／ＴＨＦ溶液２５ｍｌに溶解した後、この溶液にブチル−４−アミノギ酸ブチルエステルアルデヒド１.１７ｇをゆっくり加えた。室温で撹拌し、ＴＬＣにより検出を行ったところ、０．５時間後はもはや原料が減らないと確認し、反応を終了させた。抽出した有機層を合わせて乾燥し、分取液体クロマトグラフィーＭＰＬＣ（溶離液；ＰＥ：ＥtＯＡｃ＝１：１） により分離を行い、油状液体を得た。その後、トリフルオロ酢酸溶液１０ｍｌに溶解して５ｍｌのＤＣＭを加え、室温で１時間反応させた。抽出した有機層を合わせて乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより２.１０ｇの白色固体を得た。この固体に、チオホスゲン（ＣＳ２）を溶かしたＤＣＭ溶液２５ｍｌをゆっくり滴下した。室温で撹拌し、ＴＬＣにより検出を行ったところ、０．５時間後はもはや原料が減らないと確認し、ＴＥＡ水溶液を加えて反応を終了させた。抽出した有機層を合わせて乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより１.５５ｇの褐黄色油状液体である化合物Ｉ−０１（収率７６％）を得た。化合物Ｉ−０１のマススペクトル（ＭＳ）： [Ｍ+Ｈ]+２０３.３、水素核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲ： ＤＭＳＯ）： δ ７.６６（２Ｈ, ｄ）, δ ７.５２（２Ｈ, ｍ）, δ ７.２７（１Ｈ, ｍ）, δ ６.５６（１Ｈ, ｍ）, δ ６.４２（１Ｈ, ｄ）, δ ３.６７（２Ｈ, ｍ）, δ ２.６４ （２Ｈ, ｍ）。
【００７８】
実施例２. 化合物Ｉ−０４の製造
【００７９】
【化１８】
0006465989.tif 000019
【００８０】
ステップ１. （２−エチル）−ビストリフルオロメチルチオフェノール−メチルホスホン酸エチルの製造
【００８１】
【化１９】
0006465989.tif 000020
【００８２】
３,５−ビストリフルオロメチルチオフェノール２.４６ｇと炭酸カリウム１.４０ｇをＤＭＦ溶液３５ｍｌに溶解し、室温でフェニルメタンスルホン酸ホスホン酸ジエチル１.５０ｇをゆっくり滴下し、室温で撹拌し、ＴＬＣにより検出を行ったところ、２時間後はもはや原料が減らないと確認し、反応を終了させた。抽出した有機層を合わせて乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより３．１３ｇの黄色油状液体（収率８９％）を得た。化合物のマススペクトル（ＭＳ）： [Ｍ+Ｈ]+３９７.１。
【００８３】
ステップ２. （２−エチル）−１−ベンゼンスルフィニル−メチルホスホン酸エチルの製造
【００８４】
【化２０】
0006465989.tif 000021
【００８５】
ステップ１で得られた生成物４．００ｇをクロロホルム溶液５０ｍｌに溶解した後、ｍ−ＣＰＢＡ溶液０.３５ｇをゆっくり滴下した。室温で撹拌し、ＴＬＣにより検出を行ったところ、１時間後はもはや原料が減らないと確認し、反応を終了させた。抽出した有機層を合わせて乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより３．６１ｇの油状液体 （収率９０％）を得た。化合物のマススペクトル（ＭＳ）： [Ｍ+Ｈ]+４１２.３。
【００８６】
ステップ３. 
ステップ２で得られた生成物４．２０ｇと塩化リチウム粉末０.１１ｇをＴＥＡ／ＴＨＦ溶液３５ｍｌに溶解した後、この溶液にブチル−４−アミノギ酸ブチルエステルアルデヒド１.１７ｇをゆっくり加えた。室温で撹拌し、ＴＬＣにより検出を行ったところ、０．５時間後はもはや原料が減らないと確認し、反応を終了させた。抽出した有機層を合わせて乾燥し、分取液体クロマトグラフィーＭＰＬＣ（溶離液；ＰＥ：ＥtＯＡｃ＝１：１） により分離を行い、油状液体を得た。その後、この油状液体をトリフルオロ酢酸溶液１５ｍｌに溶解し、５ｍｌのＤＣＭを加え、室温で１時間反応させた。抽出した有機層を合わせて乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより３．８２ｇの白色固体を得た。この固体に、チオホスゲン（ＣＳ２）を溶かしたＤＣＭ溶液２５ｍｌをゆっくり滴下した。室温で撹拌し、ＴＬＣにより検出を行ったところ、０．５時間後はもはや原料が減らないと確認し、ＴＥＡ水溶液を加えて反応を終了させた。抽出した有機層を合わせて乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより３．１０ｇの褐黄色油状液体である化合物Ｉ−０４（収率８２％）を得た。
【００８７】
【化２１】
0006465989.tif 000022
【００８８】
化合物Ｉ−０４のマススペクトル（ＭＳ）： [Ｍ+Ｈ]+３７３.３、水素核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲ： ＤＭＳＯ）： δ ７.８４（２Ｈ, ｄ）、δ ７.６０（１Ｈ, s）, δ ７.５２（２Ｈ, ｍ）, δ ６.５７（１Ｈ, ｍ）, δ ６.４０（１Ｈ, ｄ）, δ ３.６４（２Ｈ, ｍ）, δ ２.６１ （２Ｈ, ｍ）。
【００８９】
実施例３. 化合物Ｉ−２１の製造
【００９０】
【化２２】
0006465989.tif 000023
【００９１】
ステップ１. ５−トリフルオロメチル−ベンゾチアゾールチオールの製造
【００９２】
【化２３】
0006465989.tif 000024
【００９３】
２−ブロモ−５−トリフルオロメチル−アニリン２.４０ｇとエチルキサントゲン酸カリウム１.２１ｇをＤＭＦ溶液３５ｍｌに溶解し、１２０℃で還流反応させた後、室温で一晩撹拌し反応させた。ＴＬＣにより検出を行ったところ、もはや原料が減らないと確認し、反応を終了させた。希塩酸溶液２５ｍｌで洗浄した。抽出した有機層を合わせて乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより１.７０ｇの油状液体（収率７２％）を得た。化合物のマススペクトル（ＭＳ）： [Ｍ+Ｈ]+２３５.２。
【００９４】
ステップ２. （２−エチル）− ５−トリフルオロメチル−チオフェンチオール−メチルホスホン酸エチルの製造
【００９５】
【化２４】
0006465989.tif 000025
【００９６】
ステップ１で得られた生成物２.３５ｇと炭酸カリウム１.３８ｇをＤＭＦ溶液５０ｍｌに溶解し、室温でフェニルメタンスルホン酸ホスホン酸ジエチル１.５０ｇをゆっくり滴下し、室温で撹拌し、ＴＬＣにより検出を行ったところ、４時間後はもはや原料が減らないと確認し、反応を終了させた。抽出した有機層を合わせて乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより２.２７ｇの黄色油状液体（収率８８％）を得た。化合物のマススペクトル（ＭＳ）： [Ｍ+Ｈ]+２８１.１。
【００９７】
ステップ３. （２−エチル）−１−プロピルチオフェノールスルフィニル−メチルホスホン酸エステルの製造
【００９８】
【化２５】
0006465989.tif 000026
【００９９】
ステップ２で得られた生成物２.８０ｇと炭酸カリウム１.３８ｇをＤＭＦ溶液３５ｍｌに溶解し、室温でフェニルメタンスルホン酸ホスホン酸ジエチル１.５０ｇをゆっくり滴下し、室温で撹拌し、ＴＬＣにより検出を行ったところ、３時間後はもはや原料が減らないと確認し、反応を終了させた。抽出した有機層を合わせて乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより３．１０ｇの黄色油状液体を得た。収率は８１％であった。化合物のマススペクトル（ＭＳ）： [Ｍ+Ｈ]+３８５.２。
【０１００】
ステップ４. 
【０１０１】
【化２６】
0006465989.tif 000027
【０１０２】
ステップ３で得られた生成物３．９０ｇと塩化リチウム粉末０.１１ｇをＴＥＡ／ＴＨＦ溶液２５ｍｌに溶解した後、この溶液にブチル−４−アミノギ酸ブチルエステルアルデヒド１.１７ｇをゆっくり加えた。室温で撹拌し、ＴＬＣにより検出を行ったところ、０．５時間後はもはや原料が減らないと確認し、反応を終了させた。抽出した有機層を合わせて乾燥し、分取液体クロマトグラフィーＭＰＬＣ（溶離液；ＰＥ：ＥtＯＡｃ＝１：１） により分離を行い、油状液体を得た。その後、トリフルオロ酢酸溶液１５ｍｌに溶解して３ｍｌのＤＣＭを加え、室温で１時間反応させた。抽出した有機層を合わせて乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより２.９２ｇの白色固体を得た。この固体に、チオホスゲン（ＣＳ２）を溶かしたＤＣＭ溶液２５ｍｌをゆっくり滴下した。室温で撹拌し、ＴＬＣにより検出を行ったところ、０．５時間後はもはや原料が減らないと確認し、ＴＥＡ水溶液を加えて反応を終了させた。抽出した有機層を合わせて乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより２．７１ｇの褐黄色油状液体である代表的化合物Ｉ−２１（収率８０％）を得た。化合物Ｉ−２１のマススペクトル（ＭＳ）： [Ｍ+Ｈ]+３６２.０、水素核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲ： ＤＭＳＯ）： δ ８.４２ （１Ｈ, ｄ）、δ ８.０５（１Ｈ, ｄ）, δ ７.７４ （１Ｈ, ｍ）, δ ６.７５（１Ｈ, ｍ）, δ ６.３８（１Ｈ, ｄ）, δ ３.６３（２Ｈ, ｍ）, δ ２.４１ （２Ｈ, ｍ）。
【０１０３】
実施例４. 化合物Ｉ−２５の製造
【０１０４】
【化２７】
0006465989.tif 000028
【０１０５】
ステップ１ . （２−エチル）−５−テトラゾールフェニル−メチルホスホン酸エチルの製造
【０１０６】
【化２８】
0006465989.tif 000029
【０１０７】
１−プロピルチオフェノール０.７６ｇと炭酸カリウム１.３８ｇをＤＭＦ溶液５０ｍｌに溶解し、室温でメチルメタンスルホン酸ホスホン酸ジエチル１.５０ｇをゆっくり滴下し、室温で撹拌し、ＴＬＣにより検出を行ったところ、２時間後はもはや原料が減らないと確認し、反応を終了させた。抽出した有機層を合わせて乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより０．７１ｇの黄色油状液体（収率７２％）を得た。化合物のマススペクトル（ＭＳ）： [Ｍ+Ｈ]+２２６.１。
【０１０８】
ステップ２： （２−エチル）−１−プロピルチオフェノールスルフィニル−メチルホスホン酸エチルの製造
【０１０９】
【化２９】
0006465989.tif 000030
【０１１０】
ステップ１で得られた生成物２.２６ｇをクロロホルム溶液１５ｍｌに溶解した後、ｍ−ＣＰＢＡ溶液０.２５ｇをゆっくり滴下した。室温で撹拌し、ＴＬＣにより検出を行ったところ、１時間後はもはや原料が減らないと確認し、反応を終了させた。抽出した有機層を合わせて乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより１.９２ｇの油状液体 （収率８１％）を得た。化合物のマススペクトル（ＭＳ）： [Ｍ+Ｈ]+２４２.３。
【０１１１】
ステップ３：
ステップ２で得られた生成物２.４２ｇと塩化リチウム粉末０.３０ｇをＴＥＡ／ＴＨＦ溶液２５ｍｌに溶解した後、この溶液にブチル−４−アミノギ酸ブチルエステルアルデヒド１.２１ｇをゆっくり加えた。室温で撹拌し、ＴＬＣにより検出を行ったところ、０．５時間後はもはや原料が減らないと確認し、反応を終了させた。抽出した有機層を合わせて乾燥し、分取液体クロマトグラフィーＭＰＬＣ（溶離液；ＰＥ：ＥtＯＡｃ＝１：１） により分離を行い、油状液体を得た。その後、この油状液体をトリフルオロ酢酸溶液１５ｍｌに溶解し、５ｍｌのＤＣＭを加え、室温で１時間反応させた。抽出した有機層を合わせて乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより２.６１ｇの白色固体を得た。この固体に、チオホスゲン（ＣＳ２）を溶かしたＤＣＭ溶液２５ｍｌをゆっくり滴下した。室温で撹拌し、ＴＬＣにより検出を行ったところ、０．５時間後はもはや原料が減らないと確認し、ＴＥＡ水溶液を加えて反応を終了させた。抽出した有機層を合わせて乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより２．４７ｇの黄色油状液体である代表的化合物Ｉ−２５（収率８１％）を得た。
【０１１２】
【化３０】
0006465989.tif 000031
【０１１３】
化合物Ｉ−２５のマススペクトル（ＭＳ）： [Ｍ+Ｈ]+３０５.３、水素核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲ： ＤＭＳＯ）： δ ７.３６（２Ｈ, ｍ）、δ ７.３０（１Ｈ, ｍ）, δ ７.２５（２Ｈ, ｍ）,δ ６.５７（１Ｈ, ｍ）, δ ６.４０（１Ｈ, ｄ）, δ ３.６４（２Ｈ, ｍ）, δ ２.５１ （２Ｈ, ｍ）。
【０１１４】
実施例５. 化合物Ｉ−２７の製造
【０１１５】
【化３１】
0006465989.tif 000032
【０１１６】
ステップ１： ４−フェノキシチオフェノールの製造
【０１１７】
【化３２】
0006465989.tif 000033
【０１１８】
４−フェノキシフェノール１.８６ｇとジメチルアミノ−２−塩化チオカルボニル１.２３ｇ及び水素化ナトリウム０.２４ｇとをＤＭＦ溶液３５ｍｌに溶解し、室温で反応させた。２５ｍｌの水酸化ナトリウム溶液とメタノールで洗浄した後、有機層を抽出し、１.０７ｇの油状液体（収率５２％）を得た。化合物のマススペクトル（ＭＳ）： [Ｍ+Ｈ]+２０２.２。
【０１１９】
ステップ２：
【０１２０】
【化３３】
0006465989.tif 000034
【０１２１】
ステップ１で得られた生成物２.３０ｇと炭酸カリウム１.３８ｇをＤＭＦ溶液３５ｍｌに溶解し、室温でメチルメタンスルホン酸ホスホン酸ジエチル１.５０ｇをゆっくり滴下し、室温で撹拌し、ＴＬＣにより検出を行ったところ、２時間後はもはや原料が減らないと確認し、反応を終了させた。抽出した有機層を合わせて乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより２．５０ｇの黄色油状液体（収率７２％）を得た。化合物のマススペクトル（ＭＳ）： [Ｍ+Ｈ]+３５２.３。
【０１２２】
ステップ３：
【０１２３】
【化３４】
0006465989.tif 000035
【０１２４】
ステップ２で得られた生成物３．５０ｇをクロロホルム溶液３５ｍｌに溶解した後、ｍ−ＣＰＢＡ溶液０.２５ｇをゆっくり滴下した。室温で撹拌し、ＴＬＣにより検出を行ったところ、２時間後はもはや原料が減らないと確認し、反応を終了させた。抽出した有機層を合わせて乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより２．９４ｇの油状液体 （収率８０％）を得た。化合物のマススペクトル（ＭＳ）： [Ｍ+Ｈ]+３６８.３。
【０１２５】
ステップ４：
【０１２６】
【化３５】
0006465989.tif 000036
【０１２７】
ステップ３で得られた生成物３．６０ｇと塩化リチウム粉末０.２５ｇをＴＥＡ／ＴＨＦ溶液３５ｍｌに溶解した後、この溶液にブチル−４−アミノギ酸ブチルエステルアルデヒド１.２１ｇをゆっくり加えた。室温で撹拌し、ＴＬＣにより検出を行ったところ、０．５時間後はもはや原料が減らないと確認し、反応を終了させた。抽出した有機層を合わせて乾燥し、分取液体クロマトグラフィーＭＰＬＣ（溶離液；ＰＥ：ＥtＯＡｃ＝１：１） により分離を行い、油状液体を得た。その後、この油状液体をトリフルオロ酢酸溶液１５ｍｌに溶解し、５ｍｌのＤＣＭを加え、室温で１時間反応させた。抽出した有機層を合わせて乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより２.９５ｇの白色固体を得た。この固体に、チオホスゲン（ＣＳ２）を溶かしたＤＣＭ溶液２５ｍｌをゆっくり滴下した。室温で撹拌し、ＴＬＣにより検出を行ったところ、０．５時間後はもはや原料が減らないと確認し、ＴＥＡ水溶液を加えて反応を終了させた。抽出した有機層を合わせて乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより２．０７ｇの黄色油状液体である化合物Ｉ−２７（収率６３％）を得た。化合物Ｉ−２７のマススペクトル（ＭＳ）： [Ｍ+Ｈ]+３２９.１、水素核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲ： ＤＭＳＯ）： δ ７.６１（２Ｈ, ｍ）、δ ７.２２（２Ｈ, ｍ）, δ ７.１４ （２Ｈ, ｍ）, δ ６.９８ （１Ｈ, ｍ）, δ ６.９２ （２Ｈ, ｍ）, δ ６.５７（１Ｈ, ｍ）, δ ６.４０（１Ｈ, ｄ）, δ ３.６４（２Ｈ, ｍ）, δ ２.５１ （２Ｈ, ｍ）。
【０１２８】
実施例６. 代表的化合物のＸＰＯ１タンパク質への阻害活性の測定
ＮＥＳ（細胞核輸出シグナル、nuclear export signal）は、ＸＰＯ１タンパク質が識別する細胞核輸出シグナルペプチドである。ＸＰＯ１は、生体高分子のＮＥＳ配列のペプチドセグメントを識別することにより、生体高分子を細胞核外に輸出する。ＮＥＳ−ＧＦＰタンパク質は、真核発現プラスミドを用いて緑色蛍光タンパク質ＧＦＰとＮＥＳ配列のペプチドセグメントを共発現させてなるものである。化合物のＮＥＳ−ＧＦＰの細胞局在に対する影響を検出することにより、代表的化合物のＸＰＯ１タンパク質への阻害活性を判定することができる。
【０１２９】
細胞をトリプシンにより消化させ、カウントし、１ウェルあたり１.５×１０４／個で９６ウェルプレートに接種した。１６時間後、リポソームでＮＥＳ−ＧＦＰプラスミドをトランスフェクトさせた。２４時間後、それぞれ代表的化合物溶液、ＳＦＮ分子溶液、ＰＥＩＴＣ分子溶液を加えて２時間作用させた後、１００μlの Ｈｏｃｈｅｓｔ３３２５８ （１ｍｇ／ｍｌ）を加えて細胞核を染色した。共焦点レーザー顕微鏡（オリンパス−ＩＸ７１）によりＮＥＳ−ＧＦＰ核輸出への阻害効果を観察し、百分率で統計した。結果は、図１及び表１に示す。
【０１３０】
本発明では、ＳＦＥはスルホラフェン、ＳＦＮはスルフォラファン（Ｃ６Ｈ１１ＮＯＳ２）、ＰＥＩＴＣはフェニルエチルイソチオシアネート（Ｃ９Ｈ９ＮＳ）であり、実験において対照化合物として使用される。その他の化合物は、下記の構造式を有し、本発明の方法によりそれぞれの対応する原料化合物を用いて製造することができる。
【０１３１】
【化３６】
0006465989.tif 000037
【０１３２】
共焦点レーザー顕微鏡により観察された、代表的化合物Ｉ−０１のＸＰＯ１への阻害効果は、具体的に図１に示される。図１から分かるように、緑色蛍光を発するＮＥＳ−ＧＦＰタンパク質の大部分は、細胞核内に集まっている。これは、代表的化合物がＸＰＯ１タンパク質に対して高い阻害活性を有することを証明している。
【０１３３】
実験結果は、本発明の各代表的化合物がＸＰＯ１タンパク質に対して高い阻害活性を有することを示している。また、本発明の化合物のＸＰＯ１タンパク質への阻害活性が、２つの天然化合物ＳＦＮ及びＰＥＩＴＣより数倍乃至数百倍高く、スルホラフェンを代表とするアリール基ではない基で置換された類似化合物よりも著しく優れていることが分かる。具体的な結果は、表１に示される。
【０１３４】
表１. 本発明の化合物のＸＰＯ１タンパク質への阻害活性（完全阻害濃度）
0006465989.tif 000038
【０１３５】
実施例７. 代表的化合物によるＩＢＤ動物モデル治療後の肉眼的病理変化の評価
８週齢のＳＤ系雄ラット（１群あたり１０匹）を２４時間禁食させた後、ジエチルエーテルで麻痺した。５０％のエタノールとＴＮＢＳ（２,４,６−トリニトロベンゼンスルホン酸）を混合した溶液を調整した。ＩＢＤモデル群では、エチレン樹脂製カテーテルを肛門から５cｍ挿入し、１００ｍｇ／ｋｇの投与量でＴＮＢＳ溶液を注腸した。注腸３０秒後、ＴＮＢＳ溶液が漏れないようにラットを逆さ吊りした。対照群では、ＴＮＢＳを生理食塩水に変えて注腸を行った。ＴＮＢＳまたは生理食塩水による注腸の７日後、動物を犠牲死させ解剖した。各投与群では、ＴＮＢＳによる注腸の前日から、毎日、各代表的化合物、ＳＦＥ、ＳＦＮ、ＰＥＩＴＣを胃内投与により８０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した。投与による治療の２週間後、動物を犠牲死させ解剖した。動物の大腸を取り出し、４％のホルマリン溶液で３０分間固定した。直腸部を撮影できるように動物の大腸を腸間膜側から縦に切り、直腸の重量も測った。肉眼的観察による採点（表２−１）を基に、肉眼的観察による採点基准に従って、直腸部の潰瘍及び出血状況について採点を行った。
【０１３６】
表２−１. 肉眼的観察による採点基準
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【０１３７】
本発明の代表的化合物による治療後の肉眼的判定点数は、具体的に表２−２に示される。結果から分かるように、ＴＮＢＳ注腸群は、生理食塩水注腸群に比べて、結腸組織の潰瘍、出血及び壊死現象が比較的に著しく、肉眼的病理判定点数が比較的に高かった。５−ＡＳＡ投与群、ＳＦＮ投与群、ＰＥＩＴＣ投与群は、結腸組織の出血及び潰瘍現象が僅かに緩和された。これらに対して、各代表的化合物投与群は、結腸組織の損傷度が低く、結腸組織の出血及び潰瘍現象が大きく緩和された。これは、測定された本発明の化合物がＩＢＤに対して良好の保護及び治療効果を持ち、この効果が５−ＡＳＡ投与群、ＳＦＮ投与群、ＰＥＩＴＣ投与群より著しく高く、しかもスルホラフェンを代表とするアリール基ではない基で置換されたイソチオシアネート系化合物よりも著しく優れていることを証明している。
【０１３８】
表２−２. 一部の代表的化合物によるＩＢＤ動物モデル治療後の肉眼的観察の判定点数
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【０１３９】
実施例８. 代表的化合物がＮＦ−кＢシグナル経路を抑制してサイトカインの含有量変化を引き起こす評価実験
炎症性腸疾患は自己免疫疾患である。実験では、本発明の代表的化合物がＸＰＯ１タンパク質を阻害することによりＮＦ−кＢこの免疫系疾患と炎症に直接関与する重要なシグナル経路を調節することを発見した。シグナル経路の下流にある重要なサイトカイン、例えばＴＮＦ−α、ＩＬ−６の含有量変化を測定することにより、代表的化合物の免疫系疾患または炎症への治療效果を判定することができる。実施例７では、ＴＮＢＳモデル形成後の３日目（高罹病期）、ブランク動物群、モデル動物群、投与治療群からそれぞれ３匹の動物の血清を収集し、タンパク質及びｔＲＮＡを抽出し、ＥＬＩＳＡ法により血清中におけるサイトカインであるＴＮＦ−α、ＩＬ−６の含有量を測定した。結果からわかるように、本発明の代表的化合物による治療後の治療群動物は、モデル群に比べて、血清におけるサイトカインであるＴＮＦ−α、ＩＬ−６の含有量が著しく低下した。これは、代表的化合物のＮＦ−кＢシグナル経路への調節效果が著しく、炎症性腸疾患に対して非常に良い治療效果を持つことを示している。代表的化合物によるＩＢＤモデル治療後のＴＮＦ−α、ＩＬ−６の含有量変化は、具体的に表３及び表４に示される。
【０１４０】
表３. 代表的化合物によるＩＢＤ動物モデル治療後の血清ＴＮＦ−α含有量（ｎｇ／ｍｌ）
0006465989.tif 000041
【０１４１】
表４. 代表的化合物によるＩＢＤ動物モデル治療後の血清ＩＬ−６含有量（ｎｇ／ｍｌ）
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【０１４２】
実施例９. 代表的化合物による経口投与の安全性試験
６週齢の雄ＳＤ系ラット及び雌ＳＤ系ラットに胃内投与により化合物溶液（Ｉ−０１：５００ｍｇ／ｋｇ／日、Ｉ−０３：５００ｍｇ／ｋｇ／日、Ｉ−０４：５００ｍｇ／ｋｇ／日、Ｉ−０６：５００ｍｇ／ｋｇ／日、Ｉ−１１： ３００ｍｇ／ｋｇ／日）を連続で６週間投与した（１群あたりｎ＝１０）。結果からわかるように、各投与量群のいずれも、一般状態、体重変化、摂食量または組織病理学的動物異常が見られなかった。これらの結果から、化合物Ｉ−０１、Ｉ−０３、Ｉ−０４、Ｉ−０６の無毒投与量が５００ｍｇ／ｋｇ／日以上、化合物Ｉ−１１の無毒投与量が３００ｍｇ／ｋｇ／日以上であると判定できる。実験結果は、これらの代表的化合物が微毒性の化合物であることを示している。
【０１４３】
実施例１０. 代表的化合物のＨＭＬＥ−Ｓｎａｉl細胞系球体形成への阻害活性の測定
ＨＭＬＥ−Ｓｎａｉl細胞系は、腫瘍細胞転移、ＥＭＴ経路を研究するための最も伝統的な細胞モデルの１つである。ＨＭＬＥ−Ｓｎａｉl細胞系は、Ｓｎａｉlタンパク質の高発現により、その最も著しい特徴の１つが細胞の形態が球状（spheroid）になることである。よって、代表的化合物のＨＭＬＥ−Ｓｎａｉl細胞系球体形成への阻害を測定することにより、代表的化合物がＥＭＴ経路を抑制し腫瘍細胞転移能を阻害することを判定することができる（Cell 2008, 133:704-715）。本発明で使用するＨＭＬＥ−Ｓｎａｉl細胞系は、アメリカマサチューセッツホワイトヘッド研究所のRobert Weinberg博士に贈与された。１.０×１０３個のＨＭＬＥ−Ｓｎａｉl細胞／ｍｌを、１：１の比率でＤＭＥＭ／Ｆ１２を含有する液体培地（Ｂ−２７及びＮ−２添加、アメリカインビトロジェン社から購入）に懸濁させ、球体が形成できるように超低接着培養皿で培養した。７日後、球体を遠心分離で収集し、カウントした。顕微鏡により細胞球状体の形成を評価し、それぞれ１０μg／ｍｌのＳＦＮ分子、１０μg／ｍｌのＰＥＩＴＣ分子、１０μg／ｍｌのドセタキセル（docetaxel）、１０μg／ｍｌの各代表的化合物で２４時間処理後、ＨＭＬＥ−Ｓｎａｉl細胞系球体形成への阻害活性を評価し、結果を表５に示す。ドセタキセルは臨床で使用される一般的な化学療法剤である。
【０１４４】
表５. 代表的化合物のＨＭＬＥ−Ｓｎａｉl細胞系集落形成への阻害活性
0006465989.tif 000043
【０１４５】
表５の補充説明：対照は薬品による処理がされなかった細胞である。表中のデータでは、対照の細胞集落数を１００％とし、薬品による阻害活性を薬品処理群の細胞集落百分率で表す。 
薬品による阻害活性＝（薬品処理群の細胞集落数／対照群の細胞集落数）×１００％。
【０１４６】
結果からわかるように、各代表的化合物は、ＨＭＬＥ−Ｓｎａｉl細胞系の球体形成に対して良好の阻害効果を持ち、阻害活性がドセタキセル、ＳＦＮ及びＰＥＩＴＣより強く、しかもアリール基ではない基で置換された類似化合物よりも優れている。これは、各代表的化合物がＥＭＴ経路を抑制でき、腫瘍細胞転移を阻害する潜在的な良好の治療效果を有することを証明している。
【０１４７】
実施例１１. 代表的化合物の高転移型肺がん細胞株への阻害活性の測定
ＮＣＩ−Ｈ１９７５、ＮＣＩ−Ｈ１６５０は、２つの伝統的な高転移型肺がん細胞株である。代表的化合物のこの２つの細胞株への阻害活性を測定することにより、代表的化合物の転移型肺がんへの治療效果を予備的に判定することができる。肺がん細胞株を１ウェルあたり６０００個／細胞で９６ウェル細胞培養プレートに接種し、３７℃で２４時間培養した。化合物を加えて単独で処理して培養を行った。７２時間後、ＭＴＴ法またはＣＣＫ−８法により化合物の２つの肺がん細胞株への阻害活性を測定した。前記方法によりそれぞれＳＦＮ、代表的化合物などの転移型肺がん細胞株への阻害活性ＩＣ５０値を測定し、結果を表６に示す。
【０１４８】
表６. 一部の代表的化合物の２つの高転移型肺がん細胞株への阻害活性[７２時間、ＩＣ５０（μＭ）]。
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【０１４９】
結果から分かるように、代表的化合物は高転移型肺がん細胞株に対して良好の阻害活性を有する。代表的化合物は、ＳＦＮに比べて、肺がん転移に対してより良好の治療效果を有する。
【０１５０】
実施例１２. 代表的化合物の高転移型結腸がん細胞株への阻害活性の測定
ＳＷ６２０、ＨＣＴ１１６は２つの伝統的な高転移型結腸がん細胞株である。結腸がん細胞株を１ウェルあたり６０００個／細胞で９６ウェル細胞培養プレートに接種し、３７℃で２４時間培養した。化合物を加えて単独で処理して培養を行った。７２時間後、ＭＴＴ法またはＣＣＫ−８法により化合物の２つの高転移型結腸がん細胞株への阻害活性を測定した。前記方法によりそれぞれＳＦＮ、代表的化合物の高転移型結腸がん細胞株への阻害活性ＩＣ５０値を測定し、結果を下記表７に示す。
【０１５１】
表７. 代表的化合物の２つの高転移型結腸がん細胞株への阻害活性 [７２時間、ＩＣ５０ （μＭ）]
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【０１５２】
結果から分かるように、代表的化合物は高転移型結腸がん細胞株に対して良好の阻害活性を有する。代表的化合物は、ＳＦＮ、ＰＥＩＴＣに比べて、結腸がん転移に対してより良好の治療效果を有する。
【０１５３】
実施例１３.代表的化合物の高転移型悪性リンパ腫細胞株への阻害活性の測定
Ｊｅｋｏ−１、Ｒａｊｉ、Ｕ２９３２は、３つの伝統的な高転移型悪性リンパ腫細胞株である。悪性リンパ腫細胞株を１ウェルあたり６０００個／細胞で９６ウェル細胞培養プレートに接種し、３７℃で２４時間培養した。化合物を加えて単独で処理して培養を行った。７２時間後、ＭＴＴ法またはＣＣＫ−８法により化合物の２つの高転移型悪性リンパ腫細胞株への阻害活性を測定した。前記方法によりそれぞれＳＦＮ、ＰＥＩＴＣ、代表的化合物の高転移型悪性リンパ腫細胞株への阻害活性ＩＣ５０値を測定した。代表的化合物の高転移型悪性リンパ腫細胞株Ｊｅｋｏ−１、Ｒａｊｉ、Ｕ２９３２への阻害結果は、下記表８に示される。表から分かるように、本発明の化合物の高転移型悪性リンパ腫細胞株への阻害活性が対照化合物ＳＦＮ、ＰＥＩＴＣより遥かに高く、ＳＦＥを代表とするアリール基ではない基で置換されたイソチオシアネート系化合物よりも著しく高い。
【０１５４】
表８. 代表的化合物の高転移型悪性リンパ腫細胞株への阻害活性[７２時間、ＩＣ５０ （μＭ）]
0006465989.tif 000046
【０１５５】
実施例１４. 代表的化合物の高転移型卵巣がん細胞株への阻害活性の測定
ＨＯ−８９１０、Ａ２７８０は２つの高転移潜在力を持つ卵巣がん細胞株であり、卵巣がん転移治療剤を開発するための伝統的な細胞モデルである。２つの細胞を１ウェルあたり６０００個／細胞で９６ウェル細胞培養プレートに接種し、３７℃で２４時間培養した。代表的化合物を加えて単独で処理して培養を行った。７２時間後、ＭＴＴ法またはＣＣＫ−８法により代表的化合物の高転移型卵巣がん細胞株への阻害活性を測定した。また、前記と類似した方法により、それぞれＳＦＮ、代表的化合物の高転移型卵巣がん細胞株への阻害活性ＩＣ５０値を測定し、結果を表９に示す。
【０１５６】
表９. 代表的化合物の２つの伝統的な卵巣がん薬物耐性細胞株への阻害活性[７２時間、ＩＣ５０ （μＭ）]
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【０１５７】
結果から分かるように、代表的化合物は、ＳＦＮに比べて、高転移型卵巣がん細胞株に対してより良好の阻害活性を有する。これは、代表的化合物が卵巣がんの再発及び転移に対してより良好の潜在的な治療效果を有することを示している。
【０１５８】
実施例１５. 代表的化合物の卵巣がん腹膜転移動物モデルへの治療效果
卵巣がん腹膜転移の動物モデルは、卵巣がん転移治療剤を研究するための最も伝統的な動物モデルの１つである。５〜６週齢で体重が近い雌ヌードマウス（ＢＡＬＢ／ｃ−ｎｕ／ｎｕ）６０匹を選んだ。緑色蛍光タンパク質を安定に発現するＳＫ−ＯＶ３細胞株（高転移型卵巣がん細胞株）を選別し、無血清のＰＲＭＩ１６４０培地で２×１０６／１００μlの細胞懸濁液を調製し、１匹のヌードマウスあたり前記腫瘍細胞懸濁液１００μlを腹腔内注射し、定期的に腫瘍の成長状況を観察し、ヌードラットを続いて飼育した。腫瘍移植の５日後、６０匹の雌ヌードマウスをランダムに１０群に分けて１群あたり６匹にし、それぞれ、ブランク群（０.９％生理食塩水）、治療群（８０ｍｇ／ｋｇの代表的化合物）に腹腔内注射による投与を１日１回、連続で３週間行った。定期的に実体顕微鏡により腫瘍の成長及び転移状況を観察した。３週間後、小動物用生体内撮像装置（Xenogen、上海交通大学医学院）により検出を行い、撮影した。代表的化合物の卵巣がん腹膜転移への阻害状況に基づいて、代表的化合物の卵巣がん腹膜転移動物モデルへの治療效果を評価した。結果は、表１０に示される。表には、Ｔは治療群、Ｃはブランク対照群を表す。Ｔ／Ｃは（化合物治療群のＶ／Ｖ０）／（ブランク対照群のＶ／Ｖ０）であり、Ｖは測定日のマウスの腫瘍体積、Ｖ０は投与開始日のマウスの腫瘍体積を表す。代表的化合物Ｉ−０６の卵巣がん腹膜転移モデルへの治療效果、即ち３週間後の腹腔腫瘍病理改善效果は、具体的に図２に示される。
【０１５９】
表１０. 代表的化合物の卵巣がん転移動物モデルへの治療效果
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【０１６０】
結果から分かるように、代表的化合物は、悪性卵巣がんの腹膜転移に対して良好の阻害效果を有する。代表的化合物は、抗悪性卵巣がんの腹膜転移能がドセタキセル、ＳＦＮおよびＰＥＩＴＣより優れている。
【０１６１】
実施例１６. 代表的化合物のそのほかの高転移型腫瘍細胞株への阻害活性
高転移潜在力を有するそのほかの種類の腫瘍細胞株を１ウェルあたり６０００個／細胞で９６ウェル細胞培養プレートに接種し、３７℃で２４時間培養した。化合物を加えて単独で処理して培養を行った。７２時間後、ＭＴＴ法またはＣＣＫ−８法により化合物の高転移型腫瘍細胞株への阻害活性ＩＣ５０値を測定し、結果を表１１に示す。
【０１６２】
表１１. 代表的化合物のそのほかの高転移型腫瘍細胞株への阻害活性[７２時間、ＩＣ５０ （μＭ）]
0006465989.tif 000049
【０１６３】
結果から分かるように、代表的化合物は、各高転移型腫瘍細胞株に対して良好の阻害活性を有する。代表的化合物は、ＳＦＮに比べて、腫瘍転移に対してより良好の潜在的な治療效果を有する。
【図１】
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【図２】
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