(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式によって表される構造を有する化合物：
【化１】
0006510485.tif 000194
（式中、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ４アルキルであり；
Ｒ２は、水素、フルオロ、クロロおよびブロモから選択され；
Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３および−Ｎ（ＣＨ３）２から選択され；および
（ａ）Ｌは、
【化２】
0006510485.tif 000195
であり、およびＡｒは、Ｒ２がフルオロ、クロロもしくはブロモであることを条件として、
【化３】
0006510485.tif 000196
であるか、またはＡｒは、
【化４】
0006510485.tif 000197
であり；あるいは
（ｂ）Ｌは、
【化５】
0006510485.tif 000198
であり、およびＡｒは、Ｒ２がフルオロ、クロロもしくはブロモであることを条件として、
【化６】
0006510485.tif 000199
であるか、またはＡｒは、
【化７】
0006510485.tif 000200
であり；あるいは
（ｃ）Ｌは、
【化８】
0006510485.tif 000201
であり、およびＡｒは、
【化９】
0006510485.tif 000202
であり；あるいは
（ｄ）Ｌは、
【化１０】
0006510485.tif 000203
であり、およびＡｒは、
【化１１】
0006510485.tif 000204
であるか、またはＡｒは、Ｒ３がＣ１−Ｃ４アルキルであることを条件として、
【化１２】
0006510485.tif 000205
であり；あるいは
（ｅ）Ｌは、
【化１３】
0006510485.tif 000206
であり、およびＡｒは、Ｒ２がフルオロ、クロロもしくはブロモであることを条件として、
【化１４】
0006510485.tif 000207
であるか、またはＡｒは、Ｒ３がＣ１−Ｃ４アルキルであることを条件として、
【化１５】
0006510485.tif 000208
である）
またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒ１が、エチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ２が、水素である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２が、フルオロ、クロロまたはブロモである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ３が、Ｃ１−Ｃ４アルキルである、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物。
【請求項６】
下記式によって表される構造を有する、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物：
【化１６】
0006510485.tif 000209
【請求項７】
下記式によって表される構造を有する、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物：
【化１７】
0006510485.tif 000210
【請求項８】
下記式によって表される構造を有する、請求項７に記載の化合物：
【化１８】
0006510485.tif 000211
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１３年３月１５日出願の米国特許仮出願第６１／７８８，４６１号の利益を主張するものである。
【０００２】
タンパク質アルギニンＮ−メチルトランスフェラーゼ５（ＰＲＭＴ５）は、ＰＲＭＴ５遺伝子によってコードされた酵素である。ＰＲＭＴ５のアップレギュレーションは、腫瘍形成に関与すると考えられている。したがって、ＰＲＭＴ５は、癌および非癌臨床的可能性を有する標的である。
【０００３】
ＰＲＭＴ５研究の前進にもかかわらず、強力で効果的な選択的ＰＲＭＴ５インヒビターでもあり、癌およびＰＲＭＴ５が関与する他の疾患の処置に有効でもある化合物は、まだ不足している。これらの要求および他の要求は本発明によって満たされる。
【発明の概要】
【０００４】
本明細書において具体化し本明細書に広く記載する本発明の目的に従って、本発明は、１つの態様では、ＰＲＭＴ５インヒビターとして有用な化合物、それらの製造方法、それらを含む医薬組成物、およびそれらを使用して無制御細胞増殖障害（ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ｏｆ  ｕｎｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）および良性血液疾患を処置する方法に関する。
【０００５】
下記式によって表される構造を有する化合物：
【化１】
0006510485.tif 000002
（式中、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ４アルキルであり；Ｒ２は、水素、フルオロ、クロロおよびブロモから選択され；Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３および−Ｎ（ＣＨ３）２から選択され；および
（ａ）Ｌは、
【化２】
0006510485.tif 000003
であり、およびＡｒは、Ｒ２がフルオロ、クロロもしくはブロモであることを条件として、
【化３】
0006510485.tif 000004
であるか、またはＡｒは、
【化４】
0006510485.tif 000005
であり；あるいは
（ｂ）Ｌは、
【化５】
0006510485.tif 000006
であり、およびＡｒは、Ｒ２がフルオロ、クロロもしくはブロモであることを条件として、
【化６】
0006510485.tif 000007
であるか、またはＡｒは、
【化７】
0006510485.tif 000008
であり；あるいは
（ｃ）Ｌは、
【化８】
0006510485.tif 000009
であり、およびＡｒは、
【化９】
0006510485.tif 000010
であり；あるいは
（ｄ）Ｌは、
【化１０】
0006510485.tif 000011
であり、およびＡｒは、
【化１１】
0006510485.tif 000012
であるか、またはＡｒは、Ｒ３がＣ１−Ｃ４アルキルであることを条件として、
【化１２】
0006510485.tif 000013
であり；あるいは
（ｅ）Ｌは、
【化１３】
0006510485.tif 000014
であり、およびＡｒは、Ｒ２がフルオロ、クロロもしくはブロモであることを条件として、
【化１４】
0006510485.tif 000015
であるか、またはＡｒは、Ｒ３がＣ１−Ｃ４アルキルであることを条件として、
【化１５】
0006510485.tif 000016
である）
またはその医薬的に許容される塩を開示する。
【０００６】
Ｙ３２４、もしくはＦ３２７、もしくはＫ３３３、もしくはＹ３３４、もしくはＶ３６３、もしくはＧ３６５、もしくはＧ３６７、もしくはＰ３７０、もしくはＬ３７１との疎水性相互作用で、またはＹ３２４、もしくはＦ３２７、もしくはＹ３３４との芳香族相互作用で、ＰＲＭＴ５の小領域１との相互作用が可能であり；かつＥ３９２またはＥ４３５またはＥ４４４への水素結合との相互作用、芳香族相互作用または水素結合によるＰＲＭＴ５の小領域２との相互作用、ならびに芳香族相互作用および／またはＥ４３５もしくはＥ４４４への水素結合によるＰＲＭＴ５の小領域３との相互作用、から選択される０、１、２または３種のさらなる相互作用が可能である化合物であって、１０００ダルトン未満の分子量を有する化合物、またはそれらの医薬的に許容される塩も開示する。
【０００７】
医薬的に許容される担体と１つ以上の開示化合物またはそれらの医薬的に許容される塩とを含む医薬組成物も開示する。
【０００８】
哺乳類における無制御細胞増殖障害を処置するための方法であって、前記哺乳類に治療有効量の１つ以上の開示化合物またはその医薬的に許容される塩を投与するステップを含む方法も開示する。
【０００９】
無制御細胞増殖障害のリスク増加について組織をスクリーニングするための方法であって、前記組織の細胞核または細胞質内でのＰＲＭＴ５の過発現を検出するステップを含む方法も開示する。
【００１０】
無制御細胞増殖障害を処置するための方法であって、細胞核または細胞質内でのＰＲＭＴ５の発現が増加された細胞を有する組織を同定するステップ、および前記組織に治療を施すステップを含む方法も開示する。
【００１１】
無制御細胞増殖障害を処置するための方法であって、細胞核または細胞質内でのＰＲＭＴ５の発現が増加された細胞を有すると同定された組織に治療を施すステップを含む方法も開示する。
【００１２】
哺乳類において良性血液疾患を処置するための方法であって、前記哺乳類に治療有効量の小分子ＰＲＭＴ５インヒビターを投与するステップを含む方法も開示する。
【００１３】
哺乳類におけるＰＲＭＴ５を阻害するための方法であって、前記哺乳類に治療有効量の１つ以上の開示化合物またはそれらの医薬的に許容される塩を投与するステップを含む方法も開示する。
【００１４】
開示する化合物および／または組成物の製造方法も開示する。
【００１５】
開示する製造方法の製品も開示する。
【００１６】
開示する化合物および／または組成物を含むキットも開示する。
【００１７】
障害の処置のための医薬品の製造における使用を含めて、開示化合物または開示製品の使用も開示する。
【００１８】
本発明の態様をシステム法定分類などの特定の法定分類にて記載し、特許請求するが、これは単に便宜上であって、本発明の各態様を任意の法定分類にて記載し、特許請求することができることは当業者には理解されるであろう。特に別段の記述がない限り、本明細書に記載するいずれの方法または態様もそのステップを特定の順序で行う必要があると解釈されることを決して意図したものではない。したがって、方法クレームにより、ステップが特定の順序に限定されるべきであることが特許請求の範囲または明細書に具体的に記述されていない場合、いかなる観点でも順序が推断されることを決して意図していない。これは、ステップもしくは操作フローの並びに関する必然性の問題、文法構成もしくは句読法から導かれる明瞭な意味、または本明細書に記載する態様の数もしくはタイプを含めて、解釈のあらゆる可能性のある非明示根拠に適用できる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
本明細書に援用され、本明細書の一部を構成する添付の図面は、本発明のいくつかの態様の例証となり、また本明細書とともに本発明の原理を説明するのに役立つ。
【００２０】
【図１】図１Ａは、計算モデルで描かれたＰＲＭＴ５酵素の３次元構造に関する代表データを示す画像である。このモデルにて酵素補因子ＳＡＨ（黄色で示す）およびフラグメント（青色で示す）をドッキングさせて、ＳＡＨおよび基質アルギニンでの干渉が可能である重要な構造を同定する。図１Ｂは、フラグメント（青色で示す）および連結された分子（ＨＬＣＬ−６１、黄色で示す）を示す画像である。
【００２１】
【図２Ａ】図２Ａは、モデルｈＰＲＭＴ５のＣ末端ドメイン（ａａ３１０〜６３７）（黄色リボン構造）に重ね合わせたｒＰＲＭＴ１（ａａ４１〜３５３、ＰＤＢ  ＩＤ  １ＯＲ８緑色）の結晶構造に関する代表データを示す画像である。灰色および赤紫色矢印は、ＳＡＨおよびアルギニン結合部位をそれぞれ示す。ヒトＰＲＭＴ５のインシリコモデルを構築するためのガイドとして結晶ラットＰＲＭＴ１を使用する比較モデリング。
【００２２】
【図２Ｂ】図２Ｂは、モデルｈＰＲＭＴ５の活性部位内の第一世代ＰＲＭＴ５インヒビターＣＭＰ５（オレンジ色）のドッキング高次構造に関する代表データを示す画像である。ＣＭＰ５の５オングストローム以内のアミノ酸残基を灰色で示し、相互作用残基を黄色棒形式で描く。灰色陰影エリアは、ＳＡＨ補因子結合領域を表し、ピンク陰影エリアは、アルギニン結合ポケットを表す。
【００２３】
【図２Ｃ】図２Ｃは、モデルｈＰＲＭＴ５（黄色リボン）に重ね合わせたｈＰＲＭＴ５のＣ末端ドメイン（ａａ３１０〜６３７、ＰＤＢ  ＩＤ  ４ＧＱＢ）の結晶構造（青色リボン）に関する代表データを示す画像である。この結晶構造は、２０１２年に入手可能になり、今では公的に利用可能である。本発明者らのモデルの重ね合わせた構造は、結晶構造ｈＰＲＭＴ５のものと同一である。
【００２４】
【図２Ｄ】図２Ｄは、最適化されたｈＰＲＭＴ５結晶構造の活性部位内のＣＭＰ５（緑色）のドッキング高次構造に関する代表データを示す画像である。相互作用ａａ残基を青緑色棒形式で示す。ＣＭＰ５は、Ｆ３２７、Ｅ４３５およびＥ４４４と相互作用する形式で結合し、ＳＡＨ／アルギニン基質ポケットへのＳＡＨ補因子ドッキングおよび／またはメチル基の転移に干渉することによってそのＰＲＭＴ５阻害活性を発揮する可能性が高い。
【００２５】
【図２Ｅ】図２Ｅは、モデルｈＰＲＭＴ５でのＣＭＰ５のドッキング高次構造（オレンジ色）と解明されたｈＰＲＭＴ５結晶構造でのＣＭＰ５のもの（緑色）のオーバーレイに関する代表データを示す画像である。モデルＡＡを黄色で示し、結晶ＡＡを青色で示す。
【００２６】
【図２Ｆ】図２Ｆは、対称（Ｓｙｍ）または非対称（Ａｓｙｍ）メチル化Ｈ４（Ｍｅ２）Ｒ３またはＨ３（Ｍｅ２）Ｒ８に対する抗体を使用してＤＭＳＯ、ＣＭＰ５（ＰＲＭＴ５インヒビター）またはＣＭＰ６（非反応性化合物）で処置したＪｅＫｏ細胞の代表的免疫蛍光染色を示す画像である。核を染色するためにＤＡＰＩを使用した。ＣＭＰ５は、ＰＲＭＴ５によって駆動されるエピジェネティックマークに干渉する。
【００２７】
【図２Ｇ】図２Ｇは、選択的ＰＲＭＴ５インヒビターＣＭＰ５および非反応性対照ＣＭＰ６の化学構造を示す図である。
【００２８】
【図２Ｈ】図２Ｈは、ＤＭＳＯ、ＣＭＰ５（１００μＭ）またはＣＭＰ６（１００μＭ）中で実験手順で説明するように行った、ヒストンメチルトランスフェラーゼアッセイに関する代表データを示す図である。これらのメチルトランスフェラーゼアッセイは、ＰＲＭＴ１、ＰＲＭＴ４（両方ともＩ型ＰＲＭＴ）の酵素活性をＰＲＭＴ５およびＰＲＭＴ７（両方ともＩＩ型ＰＲＭＴ）と比較するので、ＰＲＭＴ５についての選択性を実証することが可能である。
【００２９】
【図２Ｉ】図２Ｉは、細胞生存率に関する代表データを示す図である。同数（２ｘ１０５）の正常Ｂ細胞（静止もしくは活性化）または示されているＮＨＬ細胞株を漸増量のＤＭＰ５で処置し、４８時間後にトリパンブルー染色によって細胞生存率を判定した。各グラフのデータは、三重反復での二回の実験の平均値を表し、平均±ＳＤとしてプロットされている。
【００３０】
【図３】図３は、結晶構造情報に基づくＰＲＭＴ５結合モデルの例証となる画像である。
【００３１】
【図４】図４は、より侵襲性の強い悪性挙動についてのバイオマーカーとしてのＰＲＭＴ５の使用、初代ＣＬＬ細胞およびリヒタートランスフォーメーション患者の試料（トランスフォーメーションの数カ月前から数年前）から得た全細胞溶解物におけるＰＲＭＴ５の発現、に関する代表データを示す図である。しかし、さらに続けてＣＬＬから侵襲性のびまん性大Ｂ細胞リンパ腫に形質転換する（リヒタートランスフォーメーション）患者ではＣＬＬ細胞がＰＲＭＴ５を殆どまたは全く発現せず、ＰＲＭＴ５は、この形質転換事象数カ月または数年前に循環ＣＬＬにおいて検出可能になる。
【００３２】
【図５】図５は、頭頸部の扁平上皮癌におけるＰＲＭＴ５発現の代表的染色パターンを示す画像である。
【００３３】
【図６】図６は、核ＰＲＭＴ５と扁平上皮癌患者の生存期間とを相関させるコックス回帰モデルに関する代表データを示す図である。ＰＲＭＴ５の核発現レベルは、これらの患者の生存期間に反比例する。
【００３４】
【図７】図７は、細胞質ＰＲＭＴ５と扁平上皮癌患者の生存期間とを相関させるコックス回帰モデルに関する代表データを示す図である。
【００３５】
【図８】図８は、原発性脳星状細胞腫研究からの代表顕微鏡写真を示す画像である。具体的には、図８Ａは、正常な脳および星状細胞腫のＨ＆Ｅ染色を示す。図８Ｂ〜Ｆは、正常な脳（８Ｂ）、グレードＩ星状細胞腫（８Ｃ）、グレードＩＩ星状細胞腫（８Ｄ）、グレードＩＩＩ星状細胞腫（８Ｅ）およびグレードＩＶ星状細胞腫または多形性グリア芽細胞腫（８Ｆ）におけるＰＲＭＴ５についての免疫組織化学染色である。核染色は、グレードに伴って強くなる。
【００３６】
【図９】図９Ａ〜Ｄは、ＰＲＭＴ５レベルおよび生存期間に関する代表データを示す図である。図９Ａは、神経膠腫グレードによる生存期間のカプラン・マイヤープロットを示す。図９Ｂは、神経膠腫グレードによるＰＲＭＴ５発現指数の分布を示す。図９Ｃは、ＰＲＭＴ５発現指数の関数として全生存期間のカプラン・マイヤープロットを示す。ＧＢＭ患者には、ＰＲＭＴ５レベルと全生存期間の統計的に有意な関連性があった（ログランク  ｐ＜０．０００１）。図９Ｄは、ＧＢＭで死亡した患者における死亡までの時間およびＰＲＭＴ５レベルを示す。ＰＲＭＴ５レベルは、死亡までの時間と継続的に関連付けられる（スピアマンのρ＝−０．５７、ｐ＝０．０００１）。
【００３７】
【図１０】図１０は、ＣＭＰＤ５およびＨＬＣＬ−６１単独でのならびにテモゾロミド（ＴＭＺ）と併用での生存率アッセイに関する代表データを示す図である。
【００３８】
【図１１】図１１は、ＨＬＣＬ−６５およびＨＬＣＬ−６６単独でのならびにＴＭＺと併用での生存率アッセイに関する代表データを示す図である。
【００３９】
【図１２】図１２は、第一世代、第二世代および第三世代ＰＲＭＴ５インヒビターの阻害活性に関する代表データを示す図である。
【００４０】
【図１３】図１３は、ＴＭＺとＣＭＰＤ５、ＨＬＣＬ−６１、ＨＬＣＬ−６５またはＨＬＣＬ−６６いずれかとの相乗効果に関する代表データを示す図である。
【００４１】
【図１４】図１４は、Ｉ型マーク（Ｈ４（ＡＭｅ２）Ｒ３）と比較したＩＩ型  ＰＲＭＴエピジェネティックマーク（Ｈ４（ＳＭｅ２）Ｒ３）の存在についての免疫蛍光スクリーニングに関する代表データを示す図である。
【００４２】
【図１５】図１５は、Ｉ型マーク（Ｈ４（ＡＭｅ２）Ｒ３）と比較したＩＩ型  ＰＲＭＴエピジェネティックマーク（Ｈ４（ＳＭｅ２）Ｒ３）の存在についてのウエスタンブロット分析に関する代表データを示す図である。
【００４３】
【図１６】図１６は、精製ＰＭＲＴ５を使用するヒストンメチルトランスフェラーゼアッセイに関する代表データを示す図である。第三世代ＰＲＭＴ５インヒビターは、より前の世代の薬物と比較して向上した効力を示す。
【００４４】
【図１７】図１７は、ＰＲＭＴ５インヒビター化合物の効力および選択性に関する代表データを示す図である。ＰＲＭＴ１、ＰＲＭＴ４およびＰＲＭＴ７と比較する。
【００４５】
【図１８】図１８は、異なるタイプのＮＨＬ細胞株においてＰＲＭＴ５およびＰＲＣ２酵素は過発現されるがＲＢＬ２レベルは抑制されることを示す代表データを示す図である。ＰＲＭＴ５過発現は、ＲＢ／Ｅ２Ｆ経路をサイレンシングし、リシンメチルトランスフェラーゼ酵素のＰＲＣ２ファミリーの過発現を促進する。
【００４６】
【図１９】図１９は、ＰＲＭＴ５インヒビターがＲＢＬ２を再活性化し、ＰＲＣ２発現を抑制することを示す代表データを示す図である。ＰＲＭＴ５は、ＲＢＬ２を直接抑制し、阻害により、Ｅ２ＦおよびＨＤＡＣ酵素とともに作用してＰＲＣ２をサイレンシングすることができるＲＢＬ２の転写抑圧解除が可能になる。
【００４７】
【図２０】図２０は、ＰＲＭＴ５インヒビターが、ＮＨＬ細胞においてＲＢＬ２を再活性化し、ＰＲＣ２誘導Ｈ３（Ｍｅ３）Ｋ２７を無効にすることを示す代表データを示す図である。
【００４８】
【図２１】図２１は、ＰＲＣ２複合体の成分に関する代表データを示す図である。
【００４９】
【図２２】図２２は、ＰＲＭＴ５阻害が、ＥＺＨ２、ＳＵＺ１２およびＥＥＤのプロモーター領域へのＲＢ１、ＲＢＬ２およびＨＤＡＣ２動員を増進することを実証する代表データを示す図である。活性転写に関連付けられるエピジェネティックマークがＰＲＭＴ５阻害で喪失される。
【００５０】
【図２３】図２３は、ＮＨＬ細胞においてＰＲＭＴ５阻害がＲＢ／Ｅ２Ｆ経路を再活性化し、そしてまたその活性化がＰＲＣ２をサイレンシングさせることを実証する代表データを示す図である。
【００５１】
【図２４】図２４は、ＲＢ／Ｅ２Ｆ経路におけるＰＲＭＴ５の役割の漫画イラストを示す図である。ＰＲＭＴ５を阻害することにより、アルギニンおよびリシン上の抑制エピジェネティックマーク両方に作用する。
【００５２】
【図２５】図２５は、中咽頭扁平上皮癌患者についてのＰＲＭＴ５発現の染色パターンの例証となる代表データを示す画像である。
【００５３】
【図２６】図２６は、中咽頭扁平上皮癌患者についてのＰＲＭＴ５およびｐ１６の染色パターンの例証となる代表データを示す画像である。
【００５４】
【図２７】図２７Ａ〜Ｃは、ＰＲＭＴ５の転写レベル（２７Ａ）ならびにＰＲＭＴ５レンチウイルスおよび空のレンチウイルスベクターを過発現するＡＭＬ細胞の増殖率（２７Ｂおよび２７Ｃ）に関する代表データを示す図である。
【００５５】
【図２８】図２８は、空のベクター（ＥＶ−レンチ）対照に対するレンチ−ＰＲＭＴ５で浸出されたＡＭＬ細胞の増殖能に関する代表データを示す図である。
【００５６】
【図２９】図２９は、ＡＭＬ細胞株および患者初代芽細胞における増殖率に関する代表データを示す図である。
【００５７】
【図３０】図３０は、マウス脾臓および肝臓に対するＰＲＭＴ５過発現の効果に関する代表データを示す図である。
【００５８】
【図３１】図３１は、ＰＲＭＴ５過発現マウスにおける芽細胞の存在を示す代表的ライト・ギムサ染色を示す画像である。
【００５９】
【図３２】図３２は、代表脾臓試料におけるＰＲＭＴ５のアップレギュレーションを実証するｑＲＴ−ＰＣＲ分析からの代表データを示す図である。
【００６０】
【図３３】図３３は、ＡＭＬ試料におけるＰＲＭＴ５阻害の抗白血病活性に関する代表データを示す図である。具体的には、図３３Ａは、メチラーゼ活性に対するＰＲＭＴインヒビターおよび異なるＰＲＭＴ酵素の効果を示す。図３３Ｂは、ＣＭＤＰ１２の存在下での対称ジメチル化Ｈ３（Ｈ３Ｒ８ｍｅ２）およびＨ４（Ｈ４Ｒ３ｍｅ２）のダウンレギュレーションを示す。
【００６１】
【図３４】図３４は、ＨＬＣＬ−６１またはＣＭＰＤ１２とのインキュベーション後のＡＭＬ細胞株および初代芽細胞の増殖率に関する代表データを示す図である。
【００６２】
【図３５】図３５は、ＡＭＬ細胞株および初代腫瘍細胞の増殖能に対する致死未満量のＣＭＰＤ１２の効果に関する代表データを示す図である。
【００６３】
【図３６】図３６は、プログラム細胞死に対するＰＲＭＴ５インヒビターの効果に関する代表データを示す図である。
【００６４】
【図３７】図３７は、ＣＭＰＤ１２で４８時間処置したＡＭＬ細胞株および患者試料における分化の誘導に関する代表データを示す図である。
【００６５】
【図３８】図３８Ａ〜Ｃは、ＡＭＬ細胞におけるＦＬＴ３  ｍＲＮＡおよびタンパク質レベルのＰＲＭＴ５によるアップレギュレーションに関する代表データを示す画像である。具体的には、図３８Ａおよび３８Ｂは、ＰＲＭＴ５とＦＬＴ３間に明らかな物理的会合がないことを実証する免疫沈降アッセイからのデータを示す。図３８Ｃは、全リン酸化ＰＲＭＴ５レベルがＦＬＴ３キナーゼ活性の阻害による影響を受けなかったことを示す。
【００６６】
【図３９】図３９Ａ〜Ｆは、様々な細胞株におけるＰＲＭＴ５の阻害に関する代表データを示す図である。
【００６７】
【図４０】図４０は、ＰＲＭＴ５の過発現が、ＦＬＴ３転写およびタンパク質発現を十分にアップレギュレートすることを実証する代表データを示す図である。
【００６８】
【図４１】図４１は、ＰＲＭＴ５と転写因子ＳＰ１とＮＦκＢのｐ６５サブユニットとの物理的相互作用を実証する代表データを示す画像である。
【００６９】
【図４２】図４２Ａおよび図４２Ｂは、ＰＲＭＴ５阻害後のＳＰ１の局在に関する代表データを示す図である。具体的には、図４２Ａは、ＰＲＭＴ５阻害後のＦＬＴ３のプロモーター領域へのＳＰ１の局在を実証するクロマチン免疫沈降（ＣｈＩＰ）アッセイからの代表データを示す。図４２Ｂは、ＦＬＴ３のプロ−モーター領域へのＳＰ１の局在増進を実証する、ＰＲＭＴ５を異所過発現する細胞におけるＣｈＩＰアッセイからの代表データを示す。
【００７０】
【図４３】図４３Ａおよび４３Ｂは、ＳＰ１の変調によるＦＬＴ３発現の調節に関する代表データを示す図である。具体的には、図４３Ａは、ＳＰ１に特異的なｓｉＲＮＡでのＡＭＬ細胞の一過性トランスフェクションがＳＰ１の十分なノックダウンをもたらし、そしてその結果としてＦＬＴ３のダウンレギュレーションをもたらすことを示す。図４３Ｂは、ＦＬＴ３のプロモーター領域の調節機能を確証する代表データを示す。
【００７１】
【図４４】図４４は、ＰＲＭＴ５阻害後のＳＰ１タンパク質レベルのダウンレギュレーションを実証する代表データを示す画像である。
【００７２】
【図４５】図４５は、レンチ−ＰＲＭＴ５処置細胞におけるＳＰ１およびｐ６５タンパク質のアップレギュレーションを実証する代表データを示す画像である。
【００７３】
【図４６】図４６は、ＰＲＭＴ５によるｍｉＲ−２９ｂレベルの制御に関する代表データを示す図である。
【００７４】
【図４７】図４７は、成熟ｍｉＲ−２９ｂの存在に対するＰＲＭＴ５阻害の効果に関する代表データを示す図である。
【００７５】
【図４８】図４８は、ｍｉＲ−２９ｂエンハンサー部位へのＨ４Ｒ３ｍｅ２局在に対するＰＲＭＴ５阻害の効果に関する代表データを示す図である。
【００７６】
【図４９】図４９は、ｍｉＲ−２９ｂの過発現および抑制によるＳＰ１の調節に関する代表データを示す図である。
【００７７】
【図５０】図５０は、ｍｉＲ−２９ｂ転写に対するＰＲＭＴ５阻害の効果に関する代表データを示す図である。
【００７８】
【図５１】図５１は、ＰＲＭＴ５の過発現によって生ずるｐｒｉ−ｍｉＲ−２９ｂ発現減少を実証する代表データを示す図である。
【００７９】
【図５２】図５２は、ＰＲＭＴ５、サイクリンＤ１およびｐ１６の免疫組織化学染色の代表画像を示す図である。
【００８０】
【図５３】図５３は、核ＰＲＭＴ５発現を有さない（陰性）腫瘍患者と比較した核ＰＲＭＴ５発現を有する（陽性）腫瘍患者の生存期間推定に関する代表データを示す図である。
【００８１】
【図５４】図５４Ａおよび５４Ｂは、ｐ１６陰性腫瘍（５４Ａ）および喫煙ステータス（５４Ｂ）の関数としての核ＰＲＭＴ５発現に関する代表データを示す図である。
【００８２】
【図５５】図５５Ａおよび図５５Ｂは、サイクリンＤ１を過発現した腫瘍患者の生存期間推定（５５Ａ）およびｐ１６陰性腫瘍患者の生存期間推定（５５Ｂ）に関する代表データを示す図である。
【００８３】
【図５６】図５６は、ｐ１６ステータスの関数としてのサイクリンＤ１発現に関する代表データを示す図である。
【００８４】
【図５７】図５７Ａおよび５７Ｂは、ＰＲＭＴ５陰性腫瘍患者の生存期間推定（５７Ａ）およびｐ１６陰性腫瘍患者の生存期間推定（５７Ｂ）に関する代表データを示す図である。
【００８５】
【図５８】図５８は、ＨＮＳＣＣ腫瘍細胞の増殖に対するＨＬＣＬ−７の効果に関する代表データを示す図である。
【００８６】
【図５９】図５９は、ＣＭＰＤ５（５９Ａおよび５９Ｂ）、ＣＭＰＤ７（５９Ｃ）、ＨＬＣＬ−６１／ＣＭＰＤ１２（５９Ｄ）およびＨＬＣＬ−６５／ＣＭＰＤ６５（５９Ｅ）の増殖に関する代表データを示す図である。
【００８７】
【図６０】図６０は、様々な濃度のＨＬＣＬ−６５に応答しての扁平上皮癌遊走に関する代表データを示す図である。
【００８８】
【図６１】図６１Ａ〜Ｄは、いくつかの細胞株における、ＨＬＣＬ−６５に応答しての扁平上皮癌遊走に関する代表データを示す図である。
【００８９】
【図６２】図６２Ａ〜Ｃは、インビボでの複数の細胞のリンパ腫生存期間に対するＰＲＭＴ５阻害の効果に関する代表データを示す図である。具体的には、図６２Ａは、ＰＲＭＴ５  ｓｈＲＮＡの制御発現が、初代ＤＬＢＣＬ腫瘍細胞を生着させたマウスの１００％生存につながることを実証する代表データを示す。図６２Ｂは、ＨＬＣＬ−６５を用いてインビボで得た薬物動態結果に関する代表データを示す。図６２Ｃは、対照と比較してＨＬＣＬ−６５で処置したマウスにおける生存期間向上を実証する代表データを示す。
【００９０】
【図６３】図６３Ａおよび６３Ｂは、ＨＬＣＬ−７（６３Ａ）およびＨＬＣＬ−６１（６３Ｂ）を用いてインビボで得た薬物動態結果に関する代表データを示す図である。
【００９１】
本発明のさらなる利点は、一部は後続の説明の中で述べられ、および一部はその説明から明らかになり、または本発明の実施によって習得することができる。本発明の利点は、添付の特許請求の範囲において特に指摘する要素および組み合わせによって実現および達成されることになる。上述の一般的説明と後続の詳細な説明の両方が例示的および説明的なものに過ぎず、請求項に記載の本発明を制限するものではないことを理解されたい。
【発明を実施するための形態】
【００９２】
以下の本発明の詳細な説明およびその中に含まれる実施例を参照することによって本発明をより容易に理解することができる。
【００９３】
本化合物、組成物、物品、システム、デバイスおよび／または方法を開示および説明する前に、それらは、もちろんそれら自体が様々であり得るので、別段の指定がない限り特定の合成方法に限定されず、また別段の指定がない限り特定の試薬に限定されないことを理解されたい。本明細書において用いる技術は、特定の態様を説明するためのものに過ぎず、限定を意図したものでないことも理解されたい。本明細書に記載するものと同様または等価の方法および材料を本発明の実施または試験において使用することができるが、方法および材料の例を次に説明する。
【００９４】
本明細書で言及するすべての出版物は、出版物が引用されるものに関連して前記方法および／または材料を開示および説明するために、参照により本明細書に援用されている。本明細書において論ずる出版物は、もっぱら本出願の出願日より前のそれらの開示について提供するものである。先行発明を理由にそのような出版物に先行する資格が本発明にないことを是認すると解釈すべきものは本明細書にはない。さらに、本明細書に提供する出版物の日付は、独立して確認する必要があり得る実際の発行日とは異なることもある。
【００９５】
Ａ．定義
本明細書において用いる場合の化合物（有機化合物を含む）命名法は、慣用名、ＩＵＰＡＣ勧告、ＩＵＢＭＢ勧告またはＣＡＳ推奨を用いて得ることができる。１つ以上の立体化学的特徴が存在する場合、立体化学のカーン・インゴルド・プレローグ則を用いて、立体化学的優先順位、Ｅ／Ｚ指定などを表すことができる。当業者は、名前を与えれば、命名規則を用いる化合物構造の系統的還元によって、またはＣＨＥＭＤＲＡＷ（商標）（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｏｆｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、米国）などの市販のソフトウェアによって、化合物の構造を容易に突き止めることができる。
【００９６】
本明細書および添付の特許請求の範囲において用いる場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈による別段の明確な指示がない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「官能基（ａ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｇｒｏｕｐ）」、「アルキル（ａｎ  ａｌｋｙｌ）」または「残基（ａ  ｒｅｓｉｄｕｅ）」への言及は、２つ以上のそのような官能基、アルキルまたは残基の混合物などを含む。
【００９７】
本明細書では「約」ある特定の値から、および／または「約」別の特定の値までとして、範囲を表現することができる。そのような範囲を表現するとき、さらなる態様は、ある特定の値からおよび／または他の特定の値までを含む。同様に、先行語「約」を用いることによって範囲を近似値として表現する場合、その特定の値がさらなる態様を構成することは理解されるであろう。それらの範囲の各々の終点が、他の終点との関係で有意でもあり、他の終点とは無関係に有意でもあることは、さらに理解されるであろう。本明細書には多数の値が開示されおり、その各々が、その値自体に加えて「約」その特定の値としても本明細書に開示されていることも理解される。例えば、値「１０」が開示されている場合には、「約１０」も開示されている。２つの特定の単位間の各単位も開示されていることも理解される。例えば、１０および１５が開示されている場合には、１１、１２、１３および１４も開示されている。
【００９８】
本明細書および結びの特許請求の範囲における組成物中の特定の元素または成分の重量部への言及は、重量部によって表される前記組成物または物品中の前記元素または成分と任意の他の元素または成分の間の重量関係を示す。したがって、２重量部の成分Ｘおよび５重量部の成分Ｙを含有する化合物には、ＸとＹが２：５の重量比で存在し、さらなる成分がその化合物中に含有されているかどうかに関係なくそのような比で存在する。
【００９９】
成分の重量パーセント（重量％）は、相反する具体的な記述がない限り、その成分を含む製剤または組成物の全重量に基づく。
【０１００】
本明細書において用いる場合、用語「任意選択の」または「場合により」は、具体的に記載する事象または状況が発生することができるまたはできないこと、およびその記載が、前記事象または状況が発生する場合とそれが発生しない場合を含むことを意味する。
【０１０１】
本明細書において用いる場合、用語「リガンド」は、受容体に会合または結合して複合体を形成することが可能であり、生物学的効果を媒介、防止または修飾することが可能である、天然または合成分子エンティティーを指す。したがって、用語「リガンド」は、アロステリックモジュレーター、インヒビター、アクチベーター、アゴニスト、アンタゴニスト、天然基質、および天然基質の類似体を包含する。
【０１０２】
本明細書において用いる場合、用語「天然リガンド」および「内因性リガンド」は、同義で用いており、受容体に結合する、自然界で見いだされる、天然に存在するリガンドを指す。
【０１０３】
本明細書において用いる場合、用語「オルソステリック部位」は、受容体上の主要結合部位であって、その受容体に対する内因性リガンドまたはアゴニストによって認識される部位を指す。
【０１０４】
本明細書において用いる場合、用語「アロステリック部位」は、オルソステリック結合部位とは組織分布的に異なるリガンド結合部位を指す。
【０１０５】
本明細書において用いる場合、用語「モジュレーター」は、標的受容体タンパク質の活性を変調させる分子エンティティー（例えば、限定されないが、リガンドおよび開示化合物）を指す。
【０１０６】
本明細書において用いる場合、用語「インヒビター」は、特定の化学反応または他のプロセス（例えば受容体活性）を遅速させるまたは妨げる物質（例えば化合物）を指す。
【０１０７】
本明細書において用いる場合、用語「被験体」は、脊椎動物、例えば、哺乳類、魚類、鳥類、爬虫類または両生類であることができる。したがって、本明細書に開示する方法の被験体は、ヒト、非ヒト霊長類、ウマ、ブタ、ウサギ、イヌ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ネコ、モルモットまたは齧歯動物であることができる。この用語は、特定の年齢および性別を示さない。したがって、雄であろうと、または雌であろうと、成体および新生被験体ならびに胎児を包含することを意図している。１つの態様において、被験体は、哺乳類である。患者は、疾患または障害を患っている被験体を指す。用語「患者」は、ヒトおよび獣医学的被験体を含む。開示する方法の一部の態様において、被験体は、投与ステップ前に処置が必要であると診断されていた。開示する方法の一部の態様において、被験体は、投与ステップ前に処置が必要であると特定されていた。
【０１０８】
本明細書において用いる場合、用語「処置」は、疾患、病的状態または障害を治癒、改善、安定化または予防する目的での患者の医学的管理を指す。この用語は、積極的処置、すなわち、具体的に疾患、病的状態または障害の改善に向けた処置を含み、原因処置、すなわち、関連疾患、病的状態または障害の原因の除去に向けた処置も含む。加えて、この用語は、緩和処置、すなわち、疾患、病的状態または障害の治癒ではなく症状の軽減のために計画された処置；予防的処置、すなわち、関連疾患、病的状態または障害の発症の最小化または部分的もしくは完全阻害に向けた処置；および補助的処置、すなわち、関連疾患、病的状態または障害の改善に向けた別の特定の治療を補うために用いられる処置を含む。様々な態様において、この用語は、哺乳類（例えばヒト）をはじめとする被験体の任意の処置を包含し、（ｉ）疾患にかかりやすいことがあり得るが、その疾患にかかっているとまだ診断されていない被験体において疾患が発生するのを予防すること；（ｉｉ）疾患を阻害すること、すなわち、その発症を阻止すること；または（ｉｉｉ）疾患を軽減すること、すなわち、その疾患の退縮を生じさせることを含む。１つの態様において、前記被験体は、哺乳類、例えば霊長類であり、さらなる態様において、前記被験体は、ヒトである。用語「被験体」は、飼いならされた動物（例えば、ネコ、イヌなど）、家畜（例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギなど）および実験動物（例えば、マウス、ウサギ、ラット、モルモット、ミバエなど）も含む。
【０１０９】
本明細書において用いる場合、用語「予防する」または「予防すること」は、特に事前の行為により、何かが起きないようにする、起きるのを回避する、うまく回避する、未然に防ぐ、阻止するまたは妨げることを指す。低減させる、阻害するまたは予防することを本明細書において用いる場合、特に別段の指示がない限り、他の２つの語の使用も明確に開示している。
【０１１０】
本明細書において用いる場合、用語「診断された」は、当業者、例えば医師による身体検査を受けて、本明細書において開示する化合物、組成物または方法により診断または処置できる状態を有することが判明したことを意味する。
【０１１１】
本明細書において用いる場合、「障害のための処置を必要とすると特定された」などの句は、その障害の処置の必要性に基づいた被験体の選択を指す。例えば、被験体を当業者による以前の診断に基づいて障害の処置が必要であると特定することができ、その後、その障害の処置に付すことができる。１つの態様では、診断を行う者とは異なる者がその特定を行うことができることを企図している。さらなる態様では、投与を、後に投与を行う者が行うことができることも企図している。
【０１１２】
本明細書において用いる場合、用語「投与すること」および「投与」は、被験体に医薬製剤を与える任意の方法を指す。そのような方法は、当業者には周知であり、経口投与、経皮投与、吸入による投与、経鼻投与、局所投与、経膣投与、眼科的投与、耳内投与、脳内投与、直腸投与、舌下投与、口腔投与および非経口投与（注射可能なもの、例えば、静脈内投与、動脈内投与、筋肉内投与および皮下投与を含む）があげられるが、これらに限定されない。投与は、連続的または間欠的であることができる。様々な態様では、製剤を治療的に投与することができ、すなわち、既存の疾患または状態を処置するために投与することができる。さらなる態様では、製剤を予防的に投与することができ、すなわち、疾患または状態の予防のために投与することができる。
【０１１３】
本明細書において用いる場合の用語「接触させること」は、開示化合物と細胞、標的受容体または他の生物学的エンティティーとを、その化合物がその標的の活性に直接、すなわち標的自体と相互作用することにより、または間接的に、すなわちその標的の活性が依存する別の分子、補因子、因子もしくはタンパク質と相互作用することにより、作用することができるように、一緒にすることを指す。
【０１１４】
本明細書において用いる場合、用語「有効量」および「有効な量」は、所望の結果を達成するのに十分であるまたは望ましくない状態に対して効果を及ぼすのに十分である量を指す。例えば、「治療有効量」は、所望の治療結果を達成するのに十分であるまたは望ましくない症状に効果を及ぼすのに十分であるが、一般に、有害副作用を生じさせるには不十分である量を指す。いずれの特定の患者についてもその具体的な治療有効用量は、処置する障害およびその障害の重症度、用いる具体的な組成物、患者の年齢、体重、全体的な健康状態、性別および食事、投与回数、投与経路、用いる具体的な化合物の排泄率、処置期間、用いる具体的な化合物と併用するまたは同時使用する薬物ならびに医学技術分野において周知の同様の因子を含む、様々な因子に依存することになる。例えば、所望の治療効果を達成するために必要なものより低いレベルで化合物の投与を開始し、所望の効果が達成されるまでその投薬量を漸増させることは、十分に当該技術分野の技能の範囲内である。所望される場合、有効日用量を投与のために複数回分に分割することができる。したがって、単回投与組成物は、前記日用量を構成するような量またはその約数を含有することができる。何らかの禁忌がある場合には個々の医師が投薬量を調整できる。投薬量は様々であることができ、投薬量を１日１回以上の投与で１から７日間、投与することができる。所与の医薬製品クラスの適切な投薬量についてのガイダンスを文献の中で見つけることができる。さらなる様々な態様では、製剤を「予防有効量」、すなわち、疾患または状態の予防に有効な量で投与することができる。
【０１１５】
本明細書において用いる場合、「キット」は、そのキットを構成する少なくとも２つの構成要素の集まりを意味する。それらの構成要素は、一緒に所与の目的のための機能性ユニットを構成する。個々のメンバー構成要素は、物理的に一緒にまたは別々に包装されることがある。例えば、そのキットを使用するための取扱説明書を備えているキットは、物理的にその取扱説明書を他の個々のメンバー構成要素とともに含んでもよく、または含まなくてもよい。そうではなく、前記取扱説明書を、コンピュータ可読メモリー素子を用いて供給され得るもしくはインターネットウェブサイトからダウンロードされ得る紙形式もしくは電子形式の独立したメンバー構成要素として供給することができ、または記録された表示として供給することができる。
【０１１６】
本明細書において用いる場合、「取扱説明書（単数または複数）」は、該当する材料またはキットに関する方法を説明する文書を意味する。これらの材料は、次のものの任意の組み合わせを含んでもよい：背景情報、構成要素のリストおよびそれらの入手可能性情報（購入情報など）、キットを使用するための簡単なまたは詳細なプロトコル、トラブルシューティング、参考資料、技術サポート、および任意の他の関連文書。取扱説明書をキットとともに供給することができ、または独立したメンバー構成要素として、コンピュータ可読メモリー素子を用いて供給され得るもしくはインターネットウェブサイトからダウンロードされ得る紙形式もしくは電子形式の独立したメンバー構成要素いずれかとして供給することができ、または記録された表示として供給することができる。取扱説明書は、１つまたは複数の文書を備えることができ、将来アップデートを含むことが意図されている。
【０１１７】
本明細書において用いる場合、用語「治療薬」は、生物（ヒトまたは非ヒト動物）に投与されたとき、局所および／または全身作用によって所望の薬理、免疫原性および／または生理効果を誘導する、任意の合成または天然に存在する活性化合物または組成物を含む。したがって、この用語は、薬物、ワクチンおよび生物製剤（タンパク質、ペプチド、ホルモン、核酸、遺伝子構築物などの分子を含む）と旧来見なされている化合物または化学薬品を包含する。治療薬の例は、Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ（第１４版）、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（第６４版）およびＴｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（第１２版）などの周知の文献に記載されており、それらとしては、限定ではないが、医薬品；ビタミン；ミネラルサプリメント；疾患もしく疾病の処置、予防、診断、治癒もしく緩和に使用される物質；体の構造もしくは機能に作用する物質；または生理環境に置かれた後に生物学的活性もしくはより活性になるプロドラッグがあげられる。例えば、用語「治療薬」は、主要治療領域のすべてにおいて使用するための化合物または組成物を含み、それらとしては、アジュバント；抗感染薬、例えば抗生物質および抗ウイルス薬；鎮痛薬および鎮痛合剤、食欲抑制薬、抗炎症薬、抗てんかん薬、局所および全身麻酔薬、催眠薬、鎮静剤、抗精神病薬、神経弛緩薬、抗うつ薬、抗不安薬、アンタゴニスト、神経遮断薬、抗コリン作用薬およびコリン様作用薬、抗ムスカリン様作用薬およびムスカリン様作用薬、抗アドレナリン作動薬、抗不整脈薬、抗高血圧薬、ホルモンおよび栄養素、抗関節炎薬、抗喘息薬、抗痙攣薬、抗ヒスタミン薬、制吐薬、抗新生物薬、鎮痒薬、解熱薬；鎮痙薬、心血管製剤（カルシウムチャネルブロッカー、β−ブロッカー、β−アゴニストおよび抗不整脈薬を含む）、降圧剤、利尿剤、血管拡張剤；中枢神経系刺激薬；咳および感冒用製剤；うっ血除去薬；診断薬；ホルモン；骨成長刺激薬および骨吸収阻害剤；免疫抑制薬；筋肉弛緩薬；精神刺激薬；鎮静剤；精神安定薬；（天然に存在するものであろうと、化学合成されたものであろうと、または組換え生産されたものであろうと）タンパク質、ペプチドおよびそれらのフラグメント；ならびに核酸分子（二本鎖分子と一本鎖分子両方、遺伝子構築物、発現ベクター、アンチセンス分子などを含む、リボヌクレオチド（ＲＮＡ）またはデオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）いずれかの、２つ以上のヌクレオチドの重合形態）、小分子（例えばドキソルビシン）および他の生物学的に活性な高分子、例えばタンパク質および酵素などがあげられるが、これらに限定されない。前記薬剤は、獣医学的用途を含む医学的用途で、および農業、例えば植物を用いる農業で、ならびに他の分野で使用される生物活性薬剤であってもよい。治療薬という用語は、限定ではないが、医薬品；ビタミン剤；ミネラルサプリメント；疾患もしく疾病の処置、予防、診断、治癒もしく緩和に使用される物質；または体の構造もしくは機能に作用する物質；または所定の生理環境に置かれた後に生物学的に活性もしくはより活性になるプロドラッグも含む。
【０１１８】
本明細書において用いる場合、「ＥＣ５０」は、生物学的プロセスまたはプロセスの構成要素の５０％活性化または増進に必要とされる物質（例えば、化合物または薬物）の濃度を指すことを意図したものである。例えば、ＥＣ５０は、標的活性の適切なアッセイにおいてベースライン応答と最大応答の間の中間点の応答を誘発するアゴニストの濃度を指すことができる。
【０１１９】
本明細書において用いる場合、「ＩＣ５０」は、生物学的プロセスまたはプロセスの構成要素の５０％阻害に必要とされる物質（例えば、化合物または薬物）の濃度を指すことを意図したものである。例えば、ＩＣ５０は、好適なアッセイで判定したときの物質の半最大（５０％）阻害濃度（ＩＣ）を指す。
【０１２０】
用語「医薬的に許容される」は、生物学的にまたは別様に望ましくなくない物質、すなわち、許容しがたいレベルの望ましくない生物学的作用がないまたは有害に相互作用しない物質を記載する。
【０１２１】
本明細書において用いる場合、用語「誘導体」は、親化合物（例えば、本明細書において開示する化合物）の構造から誘導された構造を有する化合物であって、その構造が本明細書に開示するものに十分類似しており、その類似性に基づいて、当業者により請求項に記載の化合物と同じもしくは類似の活性および有用性を呈示すると、または請求項に記載の化合物と同じもしくは類似の活性および有用性を前駆体として誘導すると予想される化合物を指す。例示的誘導体としては、親化合物の塩、エステル、アミド、エステルまたはアミドの塩、およびＮ−オキシドがあげられる。
【０１２２】
本明細書において用いる場合、用語「医薬的に許容される担体」は、滅菌水性または非水性溶液、分散液、懸濁液またはエマルションはもちろん、滅菌注射用溶液または懸濁液に使用直前に再構成するための滅菌粉末も指す。好適な水性および非水性担体、希釈剤、溶媒またはビヒクルの例としては、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、カルボキシメチルセルロースおよび好適なそれらの混合物、植物油（例えばオリーブ油）ならびに注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルがあげられる。例えば、レシチンなどのコーティング材の使用により、分散液の場合は必要粒径の維持により、および界面活性剤の使用により、適正な流動性を維持することができる。これらの組成物は、アジュバント、例えば、保存薬、湿潤剤、乳化剤および分散剤も含有することができる。様々な抗菌および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などを含めることによって、微生物の作用の予防を確実にすることができる。等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウムなどを含めることが望ましいこともあり得る。注射製剤形の長期吸収は、吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含めることによってもたらすことができる。注射用デポー形は、生分解性ポリマー、例えば、ポリラクチド−ポリグリコリド、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）中の薬物のマイクロカプセルマトリックスを形成することによって製造される。薬物のポリマーに対する比および用いる特定のポリマーの性質に依存して、薬物の放出速度を制御することができる。デポー注射製剤は、体組織と適合性であるリポソームまたはマイクロエマルションに薬物を捕捉することによっても調製される。注射製剤は、例えば、細菌保持フィルターによる濾過によって、または滅菌水もしくは他の滅菌注射用媒体に使用直前に溶解するもしくは分散させることができる滅菌固体組成物の形態の滅菌剤を組み込むことによって滅菌することができる。好適な不活性担体としては、ラクトースなどの糖をあげることができる。望ましくは、活性成分の粒子の少なくとも９５重量％は、０．０１から１０マイクロメートルの範囲の有効粒径を有する。
【０１２３】
化学種の残基は、本明細書および結びの特許請求の範囲において用いる場合、特定の反応スキームもしくはその後の製剤化において結果として得られる前記化学種の生成物であるまたは化学製品である部分を、その部分が前記化学種から実際に得られるかどうかに関係なく指す。したがって、ポリエステル中のエチレングリコール残基は、そのエチレングルコールを使用してそのポリエステルを調製したかどうかに関係なく、そのポリエステル中の１つ以上の−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−単位を指す。類似して、ポリエステル中のセバシン酸残基は、そのポリエステルを得るためにセバシン酸またはそのエステルを反応させることによってその残基を得たかどうかに関係なく、そのポリエステル中の１つ以上の−ＣＯ（ＣＨ２）８ＣＯ−部分を指す。
【０１２４】
本明細書において用いる場合、用語「置換されている」は、有機化合物のすべての許容される置換基を含むことを企図したものである。広い態様において、前記許容される置換基は、有機化合物の非環式および環式、分岐および非分岐、炭素環式およびヘテロ環式、ならびに芳香族および非芳香族置換基を含む。実例となる置換基としては、例えば下記の物があげられる。前記許容される置換基は、適切な有機化合物について１つ以上であることができ、および同じであるまたは異なることができる。本開示のために、窒素などのヘテロ原子は、前記ヘテロ原子の原子価を満たす、水素置換基および／または本明細書に記載する有機化合物の任意の許容される置換基を有することができる。本開示は、有機化合物の許容される置換基によって、いかなる形であれ、限定されることを意図しない。また、用語「置換」または「で置換されている」は、そのような置換が置換原子および置換基の許容される原子価に従うという、および置換が結果として安定な化合物、例えば転位、環化、除去などによる変換を自発的に受けない化合物、を生じさせるという、暗黙の条件を含む。ある一定の態様では、相反する明確な指示がない限り、個々の置換基が場合によりさらに置換されている（すなわち、さらに置換されているまたは非置換である）ことがあり得ることも考えられる。
【０１２５】
様々な用語を定義する際、本明細書では様々な特定の置換基を表すための一般記号として「Ａ１」、「Ａ２」、「Ａ３」および「Ａ４」を用いる。これらの記号は、本明細書において開示するものに限定されない任意の置換基であることができ、これらの記号は、ある事例である一定の置換基であると定義されるにもかかわらず、別の事例では何らかの他の置換基であると定義されることもあり得る。
【０１２６】
本明細書において用いる場合の用語「脂肪族」または「脂肪族基」は、直鎖（すなわち非分岐）であってもよく、分岐していてもよく、または環式（縮合、架橋およびスピロ縮合多環式）であってもよく、および完全に飽和されていてもよく、または１つ以上の不飽和単位を含有してもよいが、芳香族ではない炭化水素部分を示す。別段の指定がない限り、脂肪族基は、１〜２０個の炭素原子を含有する。脂肪族基としては、線状または分岐、アルキル、アルケニルおよびアルキニル基、これらのハイブリッド、例えば（シクロアルキル）アルキル、（シクロアルケニル）アルキルまたは（シクロアルキル）アルケニルがあげられるが、それらに限定されない。
【０１２７】
本明細書において用いる場合の用語「アルキル」は、炭素原子数１から２４の分岐または非分岐飽和炭化水素基、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ｓ−ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル、エイコシル、テトラコシルなどである。アルキル基は、環式または非環式であることがあり得る。アルキル基は、分岐しているまたは非分岐であることがあり得る。アルキル基は、置換されているまたは非置換であることがあり得る。例えば、アルキル基は、本明細書に記載のアルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アミノ、エーテル、ハリド、ヒドロキシ、ニトロ、シリル、スルホ−オキソ、またはチオールを含む（しかしこれらに限定されない）１つ以上の基で置換されていることがあり得る。「低級アルキル」基は、１から６個（例えば、１から４個）の炭化水素を含有するアルキル基である。用語アルキル基は、Ｃ１アルキル、Ｃ１−Ｃ２アルキル、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ５アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ７アルキル、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ１−Ｃ９アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、ならびにＣ１−Ｃ２４アルキルまでのおよびＣ１−Ｃ２４アルキルを含む同様のものであることもできる。
【０１２８】
本明細書を通して、「アルキル」は、一般に、非置換アルキル基と置換アルキル基の両方を指すために用いているが、本明細書ではそのアルキル基上の特異的な置換基（単数または複数）を特定することによって置換アルキル基に特異的に言及することもある。例えば、用語「ハロゲン化アルキル」または「ハロアルキル」は、１つ以上のハリド、例えばフッ素、塩素、臭素またはヨウ素、で置換されているアルキル基を特異的に指す。あるいは、用語「モノハロアルキル」は、単一のハリド、例えばフッ素、塩素、臭素またはヨウ素、で置換されているアルキル基を特異的に指す。用語「ポリハロアルキル」は、２つ以上のハリドで独立して置換されているアルキル基を特異的に指し、すなわち、各ハリド置換基は、別のハリド置換基と同じハリドである必要はなく、ハリド置換基の複数の事例が同じ炭素上にある必要もない。用語「アルコキシアルキル」は、１つ以上の、下記のとおりの、アルコキシ基で置換されているアルキル基を特異的に指す。用語「アミノアルキル」は、１つ以上のアミノ基で置換されているアルキル基を特異的に指す。用語「ヒドロキシアルキル」は、１つ以上のヒドロキシ基で置換されているアルキル基を特異的に指す。「アルキル基」をある事例で用い、「ヒドロキシアルキル」などの特異的用語を別の事例で用いる場合、用語「アルキル」が「ヒドロキシアルキル」などのような特異的用語も指さないことを含意することを意図していない。
【０１２９】
このやり方を本明細書に記載する他の基にも用いる。すなわち、「シクロアルキル」などの用語は、非置換シクロアルキル部分と置換シクロアルキル部分の両方を指すが、本明細書ではさらに置換部分を特異的に特定することができ、例えば、特定の置換シクロアルキルを例えば「アルキルシクロアルキル」と呼ぶことができる。類似して、置換アルコキシを例えば「ハロゲン化アルコキシ」と特異的に呼ぶことができ、特定の置換アルケニルは、例えば「アルケニルアルコール」などであることができる。重ねて、「シクロアルキル」などの一般用語および「アルキルシクロアルキル」などの特異的用語を用いるこのやり方は、前記一般用語が前記特異的用語も含まないことを含意することを意図したものではない。
【０１３０】
本明細書において用いる場合の用語「シクロアルキル」は、少なくとも３個の炭素原子で構成された非芳香族炭素系環である。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ノルボルニルなどがあげられるが、これらに限定されない。用語「ヘテロシクロアルキル」は、環の炭素原子のうちの少なくとも１個がヘテロ原子、例えば窒素、酸素、硫黄またはリン（しかしこれらに限定されない）で置換されている、上で定義のシクロアルキル基の１タイプであり、用語「シクロアルキル」の意味の中に含まれる。シクロアルキル基およびヘテロシクロアルキル基は、置換されているまたは非置換であることがあり得る。シクロアルキル基およびヘテロシクロアルキル基は、本明細書に記載のアルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アミノ、エーテル、ハリド、ヒドロキシ、ニトロ、シリル、スルホ−オキソ、またはチオールを含む（しかしこれらに限定されない）１つ以上の基で置換されていることがあり得る。
【０１３１】
本明細書において用いる場合の用語「ポリアルキレン基」は、互いに連結された２つ以上のＣＨ２基を有する基である。ポリアルキレンは、式−（ＣＨ２）ａ−によって表すことができ、この式中の「ａ」は、２から５００の整数である。
【０１３２】
本明細書において用いる場合の用語「アルコキシ」および「アルコキシル」は、エーテル結合によって結合されたアルキルまたはシクロアルキル基を指す。すなわち、「アルコキシ」基は、−ＯＡ１と定義することができ、ここでのＡ１は、上で定義のアルキルまたはシクロアルキルである。「アルコキシ」は、記載したばかりのアルコキシ基のポリマーも含む。すなわち、アルコキシは、−ＯＡ１−ＯＡ２または−ＯＡ１−（ＯＡ２）ａ−ＯＡ３（ここでの「ａ」は、１から２００の整数であり、ならびにＡ１、Ａ２およびＡ３は、アルキルおよび／またはシクロアルキル基である）などのポリエーテルであることができる。
【０１３３】
本明細書において用いる場合の用語「アルケニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含有する構造式を有する、炭素原子数２から２４の炭化水素基である。（Ａ１Ａ２）Ｃ＝Ｃ（Ａ３Ａ４）などの非対称構造は、Ｅ異性体とＺ異性体の両方を含むことを意図したものである。このことは、非対称アルケンが存在する本明細書における構造式で推定することができ、または結合記号Ｃ＝Ｃによって明示的に示されることもあり得る。アルケニル基は、限定されないが、本明細書に記載のアルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハリド、ヒドロキシ、ケトン、アジド、ニトロ、シリル、スルホ−オキソ、またはチオールを含む１つ以上の基で置換されていることがあり得る。
【０１３４】
本明細書において用いる場合の用語「シクロアルケニル」は、少なくとも３個の炭素原子で構成され、かつ少なくとも１個の炭素−炭素二重結合、すなわちＣ＝Ｃを有する、非芳香族炭素系環である。シクロアルケニル基の例としては、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロペンタジエニル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、ノルボルネニルなどがあげられるが、これらに限定されない。用語「ヘテロシクロアルケニル」は、環の炭素原子のうちの少なくとも１個がヘテロ原子、例えば、限定されないが、窒素、酸素、硫黄またはリンで置換されている、上で定義のシクロアルケニル基の１タイプであり、用語「シクロアルケニル」の意味の中に含まれる。シクロアルケニル基およびヘテロシクロアルケニル基は、置換されているまたは非置換であることがあり得る。シクロアルケニル基およびヘテロシクロアルケニル基は、限定されないが、本明細書に記載のアルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハリド、ヒドロキシ、ケトン、アジド、ニトロ、シリル、スルホ−オキソ、またはチオールを含む１つ以上の基で置換されていることがあり得る。
【０１３５】
本明細書において用いる場合の用語「アルキニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含有する構造式を有する、炭素原子数２から２４の炭化水素基である。アルキニル基は、非置換であることもあり得、または、限定されないが、本明細書に記載のアルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハリド、ヒドロキシ、ケトン、アジド、ニトロ、シリル、スルホ−オキソ、またはチオールを含む１つ以上の基で置換されていることもあり得る。
【０１３６】
本明細書において用いる場合の用語「シクロアルキニル」は、少なくとも７個の炭素原子で構成され、かつ少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する、非芳香族炭素系環である。シクロアルキニル基の例としては、シクロへプチニル、シクロオクチニル、シクロノニニルなどがあげられるが、これらに限定されない。用語「ヘテロシクロアルキニル」は、環の炭素原子のうちの少なくとも１個がヘテロ原子、例えば、限定されないが、窒素、酸素、硫黄またはリンで置換されている、上で定義のシクロアルキニル基の１タイプであり、用語「シクロアルキニル」の意味の中に含まれる。シクロアルキニル基およびヘテロシクロアルキニル基は、置換されているまたは非置換であることがあり得る。シクロアルキニル基およびヘテロシクロアルキニル基は、限定されないが、本明細書に記載のアルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハリド、ヒドロキシ、ケトン、アジド、ニトロ、シリル、スルホ−オキソ、またはチオールを含む１つ以上の基で置換されていることがあり得る。
【０１３７】
本明細書において用いる場合の用語「芳香族基」は、分子平面より上および下に環状の非局在π電子雲を有し、前記π雲が（４ｎ＋２）個のπ電子を含有する、環構造を指す。芳香族性についてのさらなる論考は、ＭｏｒｒｉｓｏｎおよびＢｏｙｄ、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（第５版）、第１３章、標題「Ａｒｏｍａｔｉｃｉｔｙ」、４７７〜４９７頁、において見つけることができ、これは参照により本明細書に援用されている。用語「芳香族基」は、アリール基とヘテロアリール基の両方を含む。
【０１３８】
本明細書において用いる場合の用語「アリール」は、限定されないが、ベンゼン、ナフタレン、フェニル、ビフェニル、アントラセンなどを含む任意の炭素系芳香族基を含有する基である。アリール基は、置換されているまたは非置換であることがあり得る。アリール基は、本明細書に記載のアルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、−ＮＨ２、カルボン酸、エステル、エーテル、ハリド、ヒドロキシ、ケトン、アジド、ニトロ、シリル、スルホ−オキソ、またはチオールを含む（しかしこれらに限定されない）１つ以上の基で置換されていることがあり得る。用語「ビアリール」は、アリール基の特異的タイプであり、「アリール」の定義に含まれる。加えて、アリール基は、単環構造であることができ、または縮合環構造であるもしくは１つ以上の架橋基、例えば炭素−炭素結合によって付いている多環構造を含むことができる。例えば、ナフタレンの場合のような縮合環構造によって互いに結合しているまたはビフェニルの場合のような１つ以上の炭素−炭素結合によって付いている２個のアリール基へのビアリール。
【０１３９】
本明細書において用いる場合の用語「アルデヒド」は、式−Ｃ（Ｏ）Ｈによって表される。本明細書を通して、「Ｃ（Ｏ）」は、カルボニル基、すなわちＣ＝Ｏの略記である。
【０１４０】
本明細書において用いる場合の用語「アミン」または「アミノ」は、式−ＮＡ１Ａ２によって表され、この式中のＡ１およびＡ２は、独立して、水素または本明細書に記載のアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリールもしくはヘテロアリール基であることができる。アミノの具体的な例は、−ＮＨ２である。
【０１４１】
本明細書において用いる場合の用語「アルキルアミノ」は、式−ＮＨ（−アルキル）によって表され、この式中のアルキルは、本明細書に記載のとおりである。代表例としては、メチルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルアミノ基、イソプロピルアミノ基、ブチルアミノ基、イソブチルアミノ基、（ｓｅｃ−ブチル）アミノ基、（ｔｅｒｔ−ブチル）アミノ基、ペンチルアミノ基、イソペンチルアミノ基、（ｔｅｒｔ−ペンチル）アミノ基、ヘキシルアミノ基などがあげられるが、これらに限定されない。
【０１４２】
本明細書において用いる場合の用語「ジアルキルアミノ」は、式−Ｎ（−アルキル）２によって表され、この式中のアルキルは、本明細書に記載のとおりである。代表例としては、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ジプロピルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基、ジブチルアミノ基、ジイソブチルアミノ基、ジ（ｓｅｃ−ブチル）アミノ基、ジ（ｔｅｒｔ−ブチル）アミノ基、ジペンチルアミノ基、ジイソペンチルアミノ基、ジ（ｔｅｒｔ−ペンチル）アミノ基、ジヘキシルアミノ基、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−メチル−Ｎ−プロピルアミノ基、Ｎ−エチル−Ｎ−プロピルアミノ基などがあげられるが、これらに限定されない。
【０１４３】
本明細書において用いる場合の用語「カルボン酸」は、式−Ｃ（Ｏ）ＯＨによって表される。
【０１４４】
本明細書において用いる場合の用語「エステル」は、式−ＯＣ（Ｏ）Ａ１または−Ｃ（Ｏ）ＯＡ１によって表され、これらの式中のＡ１は、本明細書に記載のアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリールまたはヘテロアリール基であることができる。本明細書において用いる場合の用語「ポリエステル」は、式−（Ａ１Ｏ（Ｏ）Ｃ−Ａ２−Ｃ（Ｏ）Ｏ）ａ−または−（Ａ１Ｏ（Ｏ）Ｃ−Ａ２−ＯＣ（Ｏ））ａ−によって表され、これらの式中のＡ１およびＡ２は、独立して、本明細書に記載するアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリールまたはヘテロアリール基であることができ、ならびに「ａ」は、１から５００の整数である。「ポリエステル」は、少なくとも２つのカルボン酸基を有する化合物と少なくとも２つのヒドロキシル基を有する化合物の間の反応によって生成される基を記載するために用語として用いられる。
【０１４５】
本明細書において用いる場合の用語「エーテル」は、式Ａ１ＯＡ２によって表され、この式中のＡ１およびＡ２は、独立して、本明細書に記載するアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリールまたはヘテロアリール基であることができる。本明細書において用いる場合の用語「ポリエーテル」は、式−（Ａ１Ｏ−Ａ２Ｏ）ａ−によって表され、これらの式中のＡ１およびＡ２は、独立して、本明細書に記載するアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリールまたはヘテロアリール基であることができ、ならびに「ａ」は、１から５００の整数である。ポリエーテル基の例としては、ポリエチレンオキシド、ポリプロピレンオキシドおよびポリブチレンオキシドがあげられる。
【０１４６】
用語「ハロ」、「ハロゲン」または「ハリド」は、本明細書において用いる場合、同義で用いることができ、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを指す。
【０１４７】
用語「プソイドハリド、「「プソイドハロゲン」または「プソイドハロ」は、本明細書において用いる場合、同義で用いることができ、ハリドに実質的に類似して挙動する官能基を指す。そのような官能基としては、例として、シアノ、チオシアナト、アジド、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ペルフルオロアルキルおよびペルフルオロアルコキシ基があげられる。
【０１４８】
本明細書において用いる場合の用語「ヘテロアルキル」は、少なくとも１個のヘテロ原子を含有するアルキル基を指す。好適なヘテロ原子としては、Ｏ、Ｎ、Ｓｉ、ＰおよびＳがあげられるがこれらに限定されず、この場合、前記窒素、リンおよび硫黄原子は、場合により酸化されており、ならびに前記窒素原子は、場合により四級化されている。ヘテロアルキルは、アルキル基について上で定義したように置換されていることがあり得る。
【０１４９】
本明細書において用いる場合の用語「ヘテロアリール」は、芳香族基であって、その環内に少なくとも１個のヘテロ原子が組み込まれている芳香族基を指す。ヘテロ原子の例としては、窒素、酸素、硫黄およびリンがあげられるがこれらに限定されず、この場合、Ｎ−オキシド、硫黄酸化物および二酸化物が許容されるヘテロ原子置換体である。ヘテロアリール基は、置換されているまたは非置換であることがあり得る。ヘテロアリール基は、限定されないが、本明細書に記載のアルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アミノ、エーテル、ハリド、ヒドロキシ、ニトロ、シリル、スルホ−オキソ、またはチオールを含む１つ以上の基で置換されていることがあり得る。ヘテロアリール基は、単環式であることができ、または代替的に縮合環系であることができる。ヘテロアリール基としては、フリル、イミダゾリル、ピリミジニル、テトラゾリル、チエニル、ピリジニル、ピロリル、Ｎ−メチルピロリル、キノリニル、イソキノリニル、ピラゾリル、トリアゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、イソチアゾリル、ピリダジニル、ピラジニル、ベンゾフラニル、ベンゾジオキソリル、ベンゾチオフェニル、インドリル、インダゾリル、ベンゾイミダゾリル、イミダゾピリジニル、ピラゾロピリジニル、およびピラゾロピリミジニルがあげられるが、これらに限定されない。ヘテロアリール基のさらなる、限定的でない、例としては、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、チオフェニル、ピラゾリル、イミダゾリル、ベンゾ［ｄ］オキサゾリル、ベンゾ［ｄ］チアゾリル、キノリニル、キナゾリニル、インダゾリル、イミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジニル、イミダゾ［１，２−ａ］ピラジニル、ベンゾ［ｃ］［１，２，５］チアジアゾリル、ベンゾ［ｃ］［１，２，５］オキサジアゾリル、およびピリド［２，３−ｂ］ピラジニルがあげられるが、これらに限定されない。
【０１５０】
用語「ヘテロ環」または「ヘテロシクリル」は、本明細書において用いる場合、同義で用いており、環構成員のうちの少なくとも１個が炭素以外である、単および多環式芳香族または非芳香族環系を指す。したがって、この用語は、限定されないが、「ヘテロシクロアルキル」、「ヘテロアリール」、「二環式ヘテロ環」および「多環式ヘテロ環」を含む。ヘテロ環としては、ピリジン、ピリミジン、フラン、チオフェン、ピロール、イソオキサゾール、イソチアゾール、ピラゾール、オキサゾール、チアゾール、イミダゾール、オキサゾール（１，２，３−オキサジアゾール、１，２，５−オキサジアゾールおよび１，３，４−オキサジアゾールを含む）、チアジアゾール（１，２，３−チアジアゾール、１，２，５−チアジアゾールおよび１，３，４−チアジアゾールを含む）、トリアゾール（１，２，３−トリアゾール、１，３，４−トリアゾールを含む）、テトラゾール（１，２，３，４−テトラゾールおよび１，２，４，５−テトラゾールを含む）、ピリダジン、ピラジン、トリアジン（１，２，４−トリアジンおよび１，３，５−トリアジンを含む）、テトラジン（１，２，４，５−テトラジンを含む）、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、アゼチジン、テトラヒドロピラン、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどがあげられる。用語ヘテロシクリル基は、Ｃ２ヘテロシクリル、Ｃ２−Ｃ３ヘテロシクリル、Ｃ２−Ｃ４ヘテロシクリル、Ｃ２−Ｃ５ヘテロシクリル、Ｃ２−Ｃ６ヘテロシクリル、Ｃ２−Ｃ７ヘテロシクリル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロシクリル、Ｃ２−Ｃ９ヘテロシクリル、Ｃ２−Ｃ１０ヘテロシクリル、Ｃ２−Ｃ１１ヘテロシクリル、ならびにＣ２−Ｃ１８ヘテロシクリルまでのおよびＣ２−Ｃ１８ヘテロシクリルを含む同様のものであることもできる。例えば、Ｃ２ヘテロシクリルは、限定されないが、アジリジニル、ジアゼチジニル、ジヒドロジアゼチル、オキシラニル、チイラニルなどをはじめとする、２個の炭素原子と少なくとも１個のヘテロ原子とを有する基を含む。あるいは、例えば、Ｃ５ヘテロシクリルは、限定されないが、ピペリジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ジアゼパニル、ピリジニルなどはじめとする、５個の炭素原子と少なくとも１個のヘテロ原子とを有する基を含む。ヘテロシクリル基が、化学的に可能である場合にはその環内のヘテロ原子によって結合していることもあり、またはそのヘテロシクリル環を構成する炭素のうちの１つによって結合していることもあることは、理解される。
【０１５１】
本明細書において用いる場合の用語「二環式ヘテロ環」または「二環式ヘテロシクリル」は、環構成員の少なくとも１つが炭素以外である環系を指す。二環式ヘテロシクリルは、芳香族環が別の芳香族環と縮合している環系、または芳香族環が非芳香族環と縮合している環系を包含する。二環式ヘテロシクリルは、ベンゼン環が、１、２もしくは３個の環ヘテロ原子を含有する５もしくは６員環に縮合している環系、またはピリジン環が、１、２もしくは３個の環ヘテロ原子を含有する５もしくは６員環に縮合している環系を包含する。二環式ヘテロ環式基としては、インドリル、インダゾリル、ピラゾロ［１，５−ａ］ピリジニル、ベンゾフラニル、キノリニル、キノキサリニル、１，３−ベンゾジオキソリル、２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシニル、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−クロメニル、１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−３−イル；１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−３−イル；および１Ｈ−ピラゾロ［３，２−ｂ］ピリジン−３−イルがあげられるが、これらに限定されない。
【０１５２】
本明細書において用いる場合の用語「ヘテロシクロアルキル」は、原子数３から８の単環、ならびに二および三環式環系を含む、脂肪族、部分不飽和または完全飽和、３から１４員環系を指す。ヘテロシクロアルキル環系は、酸素、窒素および硫黄から独立して選択される１から４個のヘテロ原子を含み、この場合の窒素および硫黄ヘテロ原子は、場合により酸化されていることがあり得、ならびに窒素ヘテロ原子は、場合により置換されていることがあり得る。代表的なヘテロシクロアルキル基としては、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニルおよびテトラヒドロフリルがあげられるが、これらに限定されない。
【０１５３】
本明細書において用いる場合の用語「ヒドロキシル」または「ヒドロキシ」は、式−ＯＨによって表される。
【０１５４】
本明細書において用いる場合の用語「ケトン」は、式Ａ１Ｃ（Ｏ）Ａ２によって表され、この式中のＡ１およびＡ２は、独立して、本明細書に記載のアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリールまたはヘテロアリール基であることができる。
【０１５５】
本明細書において用いる場合の「アジド（ａｚｉｄｅ）」または「アジド（ａｚｉｄｏ）」は、式−Ｎ３によって表される。
【０１５６】
本明細書において用いる場合の用語「ニトロ」は、式−ＮＯ２によって表される。
【０１５７】
本明細書において用いる場合の用語「ニトリル」は、式−ＣＮによって表される。
【０１５８】
本明細書において用いる場合の用語「シリル」は、式−ＳｉＡ１Ａ２Ａ３によって表され、この式中のＡ１、Ａ２およびＡ３は、独立して、水素または本明細書に記載のアルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリールもしくはヘテロアリール基であることができる。
【０１５９】
本明細書において用いる場合の用語「スルホ−オキソ」は、式−Ｓ（Ｏ）Ａ１、−Ｓ（Ｏ）２Ａ１、−ＯＳ（Ｏ）２Ａ１、または−ＯＳ（Ｏ）２ＯＡ１によって表され、これらの式中のＡ１は、水素または本明細書に記載のアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリールもしくはヘテロアリール基であることができる。本明細書を通して、「Ｓ（Ｏ）」は、Ｓ＝Ｏの略記である。用語「スルホニル」は、式−Ｓ（Ｏ）２Ａ１によって表されるスルホ−オキソ基を指すために本明細書では用いており、この式中のＡ１は、水素または本明細書に記載のアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリールもしくはヘテロアリール基であることができる。本明細書において用いる場合の用語「スルホン」は、式Ａ１Ｓ（Ｏ）２Ａ２によって表され、この式中のＡ１およびＡ２は、独立して、本明細書に記載のアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリールまたはヘテロアリール基であることができる。本明細書において用いる場合の用語「スルホキシド」は、式Ａ１Ｓ（Ｏ）Ａ２によって表され、この式中のＡ１およびＡ２は、独立して、本明細書に記載のアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリールまたはヘテロアリール基であることができる。
【０１６０】
本明細書において用いる場合の用語「チオール」は、式−ＳＨによって表される。
【０１６１】
本明細書において用いる場合の「Ｒ１」、「Ｒ２」、「Ｒ３」、「Ｒｎ」（ここでのｎは整数である）は、上に列挙した基のうちに１つ以上を独立して有することができる。例えば、Ｒ１が直鎖アルキル基である場合、そのアルキル基の水素原子のうちの１個は、ヒドロキシル基、アルコキシ基、アルキル基、ハリドなどで場合により置換されていることがあり得る。選択される基に依存して、第一の基は、第二の基の中に組み込まれていることがあり得、または代替的に、第一の基は、第二の基にぶらさがっている（すなわち、付いている）ことがあり得る。例えば、「アミノ基を含むアルキル基」という句に関しては、前記アミノ基は、前記アルキル基の主鎖の中に組み込まれていることがあり得る。あるいは、前記アミノ基は、前記アルキル基の主鎖に付いていることがあり得る。選択される基（単数または複数）の性質によって、第一の基が第二の基に埋め込まれているのか、付いているのかが決まることになる。
【０１６２】
本明細書に記載の本発明の化合物は、「場合により置換されている」部分を含有することがある。一般に、用語「場合により」が前にあろうとなかろうと、用語「置換されている」は、示されている部分の１個以上の水素が好適な置換基で置換されていることを意味する。別段の指示がない限り、「場合により置換されている」基は、基の各々の置換可能な位置に好適な置換基を有してよく、および任意の所与の構造内の１箇所より多くの位置が、指定の基から選択される１つより多くの置換基で置換されていてもよい場合、その置換基は、あらゆる位置で同じであってもよいし、異なってもよい。本発明によって想定される置換基の組み合わせは、好ましくは、安定したまたは化学的に実現可能な化合物を形成する結果となるものである。ある一定の態様では、相反する明確な指示がない限り、個々の置換基は、場合によりさらに置換されている（すなわち、さらに置換されているまたは非置換である）ことがあり得ることも考えられる。
【０１６３】
本明細書において用いる場合の用語「安定した」は、それらの生成、検出およびある一定の態様ではそれらの回収、精製を可能にするための条件、ならびに本明細書に開示する目的の１つ以上のための使用に付されたとき、実質的に改変されない化合物を指す。
【０１６４】
「場合により置換されている」基の置換可能な炭素原子上の好適な一価置換基は、独立して、ハロゲン；−（ＣＨ２）０−４Ｒ〇；−（ＣＨ２）０−４ＯＲ〇；−Ｏ（ＣＨ２）０−４Ｒ〇；−Ｏ−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＯＲ〇；−（ＣＨ２）０−４ＣＨ（ＯＲ〇）２；−（ＣＨ２）０−４ＳＲ〇；Ｒ〇で置換されていてもよい、−（ＣＨ２）０−４Ｐｈ；Ｒ〇で置換されていてもよい、−（ＣＨ２）０−４Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ；Ｒ〇で置換されていてもよい、−ＣＨ＝ＣＨＰｈ；Ｒ〇で置換されていてもよい、−（ＣＨ２）０−４Ｏ（ＣＨ２）０−１ピリジル；−ＮＯ２；−ＣＮ；−Ｎ３；−（ＣＨ２）０−４Ｎ（Ｒ〇）２；−（ＣＨ２）０−４Ｎ（Ｒ〇）Ｃ（Ｏ）Ｒ〇；−Ｎ（Ｒ〇）Ｃ（Ｓ）Ｒ〇；−（ＣＨ２）０−４Ｎ（Ｒ〇）Ｃ（Ｏ）ＮＲ〇２；−Ｎ（Ｒ〇）Ｃ（Ｓ）ＮＲ〇２；−（ＣＨ２）０−４Ｎ（Ｒ〇）Ｃ（Ｏ）ＯＲ〇；−Ｎ（Ｒ〇）Ｎ（Ｒ〇）Ｃ（Ｏ）Ｒ〇；−Ｎ（Ｒ〇）Ｎ（Ｒ〇）Ｃ（Ｏ）ＮＲ〇２；−Ｎ（Ｒ〇）Ｎ（Ｒ〇）Ｃ（Ｏ）ＯＲ〇；−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）Ｒ〇；−Ｃ（Ｓ）Ｒ〇；−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＯＲ〇；−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＳＲ〇；−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＯＳｉＲ〇３；−（ＣＨ２）０−４ＯＣ（Ｏ）Ｒ〇；−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）０−４ＳＲ−、ＳＣ（Ｓ）ＳＲ〇；−（ＣＨ２）０−４ＳＣ（Ｏ）Ｒ〇；−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＮＲ〇２；−Ｃ（Ｓ）ＮＲ〇２；−Ｃ（Ｓ）ＳＲ〇；−（ＣＨ２）０−４ＯＣ（Ｏ）ＮＲ〇２；−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＲ〇）Ｒ〇；−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ〇；−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ〇；−Ｃ（ＮＯＲ〇）Ｒ〇；−（ＣＨ２）０−４ＳＳＲ〇；−（ＣＨ２）０−４Ｓ（Ｏ）２Ｒ〇；−（ＣＨ２）０−４Ｓ（Ｏ）２ＯＲ〇；−（ＣＨ２）０−４ＯＳ（Ｏ）２Ｒ〇；−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ〇２；−（ＣＨ２）０−４Ｓ（Ｏ）Ｒ〇；−Ｎ（Ｒ〇）Ｓ（Ｏ）２ＮＲ〇２；−Ｎ（Ｒ〇）Ｓ（Ｏ）２Ｒ〇；−Ｎ（ＯＲ〇）Ｒ〇；−Ｃ（ＮＨ）ＮＲ〇２；−Ｐ（Ｏ）２Ｒ〇；−Ｐ（Ｏ）Ｒ〇２；−ＯＰ（Ｏ）Ｒ〇２；−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ〇）２；ＳｉＲ〇３；−（Ｃ１−４直鎖もしくは分岐アルキレン）Ｏ−Ｎ（Ｒ〇）２；または−（Ｃ１−４直鎖もしくは分岐アルキレン）Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｎ（Ｒ〇）２であり、ここでの各Ｒ〇は、下で定義するように置換されていてもよく、および独立して、水素、Ｃ１−６脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ、−ＣＨ２−（５〜６員ヘテロアリール環）、または窒素、酸素もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員飽和、部分不飽和もしくはアリール環であり、あるいは、上の定義にもかかわらず、Ｒ〇の２つの独立した存在が、それらの間にある原子（単数または複数）と一緒になって、３〜１２員飽和、部分不飽和またはアリール単または二環式環であって、窒素、酸素または硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有し、下で定義するように置換されていてもよい環を形成する。
【０１６５】
Ｒ〇（またはＲ〇の２つの独立した存在をそれらの間にある原子と一緒に用いることによって形成される環）上の好適な一価置換基は、独立して、−（ＣＨ２）０−２Ｒ●、−（ハロＲ●）、−（ＣＨ２）０−２ＯＨ、−（ＣＨ２）０−２ＯＲ●、（ＣＨ２）０−２ＣＨ（ＯＲ●）２；−（ＯハロＲ●）、−ＣＮ、−Ｎ３、−（ＣＨ２）０−２Ｃ（Ｏ）Ｒ●、−（ＣＨ２）０−２Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）０−２Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−（ＣＨ２）０−２ＳＲ●、−（ＣＨ２）０−２ＳＨ、−（ＣＨ２）０−２ＮＨ２、−（ＣＨ２）０−２ＮＨＲ●、−（ＣＨ２）０−２ＮＲ●２、−ＮＯ２、−ＳｉＲ●３、−ＯＳｉＲ●３、−Ｃ（Ｏ）ＳＲ●、−（Ｃ１−４直鎖もしくは分岐アルキレン）Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、または−ＳＳＲ●であり、ここでの各Ｒ●は、非置換であるか、または「ハロ」が前にある場合は１個以上のハロゲンでもっぱら置換されており、およびＣ１−４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ、または窒素、酸素もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員飽和、部分不飽和もしくはアリール環から独立して選択される。Ｒ〇の飽和炭素原子上の好適な二価置換基としては、＝Ｏおよび＝Ｓがあげられる。
【０１６６】
「場合により置換されている」基の飽和炭素原子上の好適な二価置換基としては、次の物があげられる：＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＮＲ＊２、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）Ｒ＊、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ＊、＝ＮＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ＊、＝ＮＲ＊、＝ＮＯＲ＊、−Ｏ（Ｃ（Ｒ＊２））２−３Ｏ−、または−Ｓ（Ｃ（Ｒ＊２））２−３Ｓ−（ここでのＲ＊の各々の独立した存在は、水素、下で定義するように置換されていてもよいＣ１−６脂肪族、または窒素、酸素もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する非置換５〜６員飽和、部分不飽和もしくはアリール環から選択される）。「場合により置換されている」基のビシナル置換可能な炭素に結合している好適な二価置換基としては、−Ｏ（ＣＲ＊２）２−３Ｏ−があげられ、ここでのＲ＊の各々の独立した存在は、水素、下で定義するように置換されていてもよいＣ１−６脂肪族、または窒素、酸素もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する非置換５〜６員飽和、部分不飽和もしくはアリール環から選択される。
【０１６７】
Ｒ＊の脂肪族基上の好適な置換基としては、ハロゲン、−Ｒ●、−（ハロＲ●）、−ＯＨ、−ＯＲ●、−Ｏ（ハロＲ●）、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−ＮＨ２、−ＮＨＲ●、−ＮＲ●２または−ＮＯ２があげられ、ここでの各Ｒ●は、非置換であるか、または「ハロ」が前にある場合は１個以上のハロゲンでもっぱら置換されており、および独立して、Ｃ１−４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ、または窒素、酸素もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員飽和、部分不飽和もしくはアリール環である。
【０１６８】
「場合により置換されている」基の置換可能な窒素の好適な置換基としては、−Ｒ†、−ＮＲ†２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ†、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ†、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ†２、−Ｃ（Ｓ）ＮＲ†２、−Ｃ（ＮＨ）ＮＲ†２、または−Ｎ（Ｒ†）Ｓ（Ｏ）２Ｒ†があげられ、ここでの各Ｒ†は、独立して、水素、下で定義するように置換されていてもよいＣ１−６脂肪族、非置換−ＯＰｈ、または窒素、酸素もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する非置換５〜６員飽和、部分不飽和もしくはアリール環であり、あるいは、上の定義にもかかわらず、Ｒ†の２つの独立した存在が、それらの間にある原子（単数または複数）と一緒になって、窒素、酸素または硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する非置換３〜１２員飽和、部分不飽和またはアリール単または二環式環を形成する。
【０１６９】
Ｒ†の脂肪族基上の好適な置換基としては、ハロゲン、−Ｒ●、−（ハロＲ●）、−ＯＨ、−ＯＲ●、−Ｏ（ハロＲ●）、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−ＮＨ２、−ＮＨＲ●、−ＮＲ●２または−ＮＯ２があげられ、ここでの各Ｒ●は、非置換であるか、または「ハロ」が前にある場合は１個以上のハロゲンでもっぱら置換されており、および独立して、Ｃ１−４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ、または窒素、酸素もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員飽和、部分不飽和もしくはアリール環である。
【０１７０】
用語「脱離基」は、電子吸引能力を有し、それを用いて結合電子を取って安定した種として置換され得る、原子（または原子団）を指す。好適な脱離基の例としては、ハリドおよびスルホン酸エステル（トリフラート、メシラート、トシラートおよびブロシラートを含むが、これらに限定されない）があげられる。
【０１７１】
用語「加水分解性基」および「加水分解性部分」は、例えば塩基性または酸性条件下で、加水分解を受けることが可能である官能基を指す。加水分解性残基の例としては、限定ではないが、酸ハロゲン化物、活性化カルボン酸、および当該技術分野において公知の様々な保護基（例えば、“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，”Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９９９を参照されたい）があげられる。
【０１７２】
用語「有機残基」は、炭素含有残基、すなわち、少なくとも１個の炭素原子を含む残基を定義するものであり、本明細書において上で定義した炭素含有基、残基またはラジカルを含むが、それらに限定されない。有機残基は、様々なヘテロ原子を含有することができ、または酸素、窒素、硫黄、リンなどを含むヘテロ原子によって別の分子に結合していることがあり得る。有機残基の例としては、アルキルまたは置換アルキル、アルコキシまたは置換アルコキシ、一または二置換アミノ、アミド基などがあげられるが、これらに限定されない。有機残基は、好ましくは、１から１８個の炭素原子、１から１５個の炭素原子、１から１２個の炭素原子、１から８個の炭素原子、１から６個の炭素原子、または１から４個の炭素原子を含むことができる。さらなる態様において、有機残基は、２から１８個の炭素原子、２から１５個の炭素原子、２から１２個の炭素原子、２から８個の炭素原子、２から４個の炭素原子、または２から４個の炭素原子を含むことができる。
【０１７３】
用語「残基」の非常に近い類義語は用語「ラジカル」であり、用語「ラジカル」、本明細書および結びの特許請求の範囲において用いる場合、本明細書に記載する分子のフラグメント、基および置換基を、その分子の調製方法に関係なく、指す。例えば、特定の化合物中の２，４−チアゾリジンジオンラジカルは、チアゾリジンジオンを使用してこの化合物を調製するかどうかに関係なく、構造：
【化１６】
0006510485.tif 000017
を有する。一部の実施形態において、ラジカル（例えばアルキル）は、そのラジカルに結合した１つ以上の「置換基ラジカル」を有することによってさらに修飾されている（すなわち、置換アルキルである）ことがあり得る。所与のラジカル中の原子数は、本明細書中の他の箇所に相反する指示がない限り、本発明にとって決定的でない。
【０１７４】
「有機ラジカル」は、この用語を本明細書において定義し、使用する場合、１つ以上の炭素原子を含有する。有機ラジカルは、例えば、１〜２６個の炭素原子、１〜１８個の炭素原子、１〜１２個の炭素原子、１〜８個の炭素原子、１〜６個の炭素原子、または１〜４個の炭素原子を有することができる。さらなる態様において、有機ラジカルは、２〜２６個の炭素原子、２〜１８個の炭素原子、２〜１２個の炭素原子、２〜８個の炭素原子、２〜６個の炭素原子、または２〜４個の炭素原子を有することができる。有機ラジカルは、多くの場合、その有機ラジカルの炭素原子の少なくとも一部に結合している水素原子を有する。無機原子を含まない有機ラジカルの一例は、５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチルラジカルである。一部の実施形態において、有機ラジカルは、その有機ラジカルにまたはその有機ラジカル内に結合している１〜１０個の無機ヘテロ原子を含有することができ、それらの無機ヘテロ原子としては、ハロゲン、酸素、硫黄、窒素、リンなどがあげられる。有機ラジカルの例としては、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、一置換アミノ、二置換アミノ、アシルオキシ、シアノ、カルボキシ、カルボアルコキシ、アルキルカルボキサミド、置換アルキルカルボキサミド、ジアルキルカルボキサミド、置換ジアルキルカルボキサミド、アルキルスルホニル、アルキルスルフィニル、チオアルキル、チオハロアルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、ヘテロ環式または置換ヘテロ環式ラジカルがあげられるがこれらに限定されず、これらの用語は、本明細書中の他の箇所で定義されている。ヘテロ原子を含む有機ラジカルの少数の非限定的な例としては、アルコキシラジカル、トリフルオロメトキシラジカル、アセトキシラジカル、ジメチルアミノラジカルなどがあげられる。
【０１７５】
「無機ラジカル」は、この用語を本明細書において定義し、使用する場合、炭素原子を含有せず、したがって、炭素以外の原子しか含まない。無機ラジカルは、水素、窒素、酸素、ケイ素、リン、硫黄、セレンならびにハロゲン、例えばフッ素、塩素、臭素およびヨウ素、から選択される原子の結合している組み合わせを含み、前記原子は、個々に存在していることもあり得、またはそれらの化学的に安定な組み合わせで互いに結合していることもあり得る。無機ラジカルは、互いに結合している１０個以下または好ましくは１から６個もしくは１から４個の、上に列挙したような無機原子を有する。無機ラジカルの例としては、アミノ、ヒドロキシ、ハロゲン、ニトロ、チオール、スルファート、ホスファートおよび同様の一般に公知の無機ラジカルがあげられるが、それらに限定されない。無機ラジカルは、それらの内部に結合した周期表の金属元素（例えば、アルカリ金属、アルカリ土類金属、遷移金属、ランタニド金属またはアクチニド金属）を有さないが、そのような金属のイオンは、アニオン性無機ラジカル、例えばスルファート、ホスファートまたは同様のアニオン性無機ラジカルに対する医薬的に許容されるカチオンとして役立つことができることもある。無機ラジカルは、本明細書中の他の箇所で具体的な別段の指示がない限り、半金属元素、例えば、ホウ素、アルミニウム、ガリウム、ゲルマニウム、ヒ素、スズ、鉛もしくはテルル、または同様の希ガス元素を含まない。
【０１７６】
本明細書に記載する化合物は、１つ以上の二重結合を含有することができ、したがって、シス／トランス（Ｅ／Ｚ）異性体はもちろん、他の配座異性体を生じさせる可能性がある。相反する記述がない限り、本発明は、可能性のあるすべてのそのような異性体はもちろん、そのような異性体の混合物も含む。
【０１７７】
相反する記述がない限り、もっぱら実線として示され、楔形または断続線として示されない化学結合を有する式は、可能性のある各異性体、例えば各エナンチオマーおよびジアステレオマー、ならびに異性体の混合物、例えばラセミまたは非ラセミ混合物を企図している。本明細書に記載する化合物は、１つ以上の不斉中心を含有することができ、したがって、ジアステレオマーおよび光学異性体を生じさせる可能性がある。相反する記述がない限り、本発明は、可能性のあるすべてのそのようなジアステレオマーはもちろん、それらのラセミ混合物、それらの実質的に純粋な分割されたエナンチオマー、可能性のあるすべての幾何異性体、およびそれらの医薬的に許容される塩を含む。立体異性体の混合物はもちろん、単離された特定の立体異性体もまた含む。そのような化合物を調製するために用いる合成手順の過程で、または当業者に公知のラセミ化またはエピマー化手順の使用中に、そのような手順の生成物が立体異性体の混合物であることもあり得る。
【０１７８】
多くの有機化合物は、平面偏光面を回転させる能力がある光学活性形で存在する。光学活性化合物を記載する場合、接頭語ＤおよびＬまたはＲおよびＳを使用して、そのキラル中心（単数または複数）の周りの分子の絶対立体配置を示す。接頭語ｄおよびｌまたは（＋）および（−）を用いて、化合物による平面偏光の回転の様子を示し、（−）または  は、化合物が左旋性であることを意味する。（＋）またはｄが接頭語として付けられている化合物は、右旋性である。所与の化学構造について、立体異性体と呼ばれるこれらの化合物は、互いに重ね合わせることができない鏡像であることを除き、同一である。特定の立体異性体は、エナンチオマーと呼ばれることもあり得、そのような異性体の混合物は、多くの場合、エナンチオマー混合物と呼ばれる。エナンチオマーの５０：５０混合物は、ラセミ混合物と呼ばれる。本明細書に記載する化合物の多くは、１つ以上のキラル中心を有することができ、したがって、異なるエナンチオマー形で存在することができる。所望される場合、アスタリスク（＊）を用いてキラル炭素を示すことができる。開示する式中でキラル炭素への結合が直線として描かれている場合、そのキラル炭素の（Ｒ）立体配置と（Ｓ）立体配置の両方、およびしたがってエナンチオマーとそれらの混合物の両方がその式の範囲内に包含されると解釈される。当該技術分野において用いられているように、キラル炭素の周りの絶対立体配置を指定することが所望される場合、キラル炭素への結合の一方を楔形（平面より上の原子への結合）として描くことができ、および一連のまたは楔の短い平行線として描くことができる他方（平面より下の原子への結合）がある。カーン・インゴルド・プレローグ体系を用いて（Ｒ）または（Ｓ）立体配置をキラル炭素に割り当てることができる。
【０１７９】
本明細書に記載する化合物は、それらの天然同位体存在率と非天然存在率の両方で原子を含む。本開示化合物は、１つ以上の原子が、自然界で典型的に見いだされる原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有する原子によって置換されていることを別にすれば、記載するものと同一である同位体標識または同位体置換化合物であることができる。本発明の化合物に組み込むことができる同位体の例としては、水素、炭素、窒素、酸素、硫黄、フッ素および塩素の同位体、例えばそれぞれ２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３５Ｓ、１８Ｆおよび３６Ｃｌがあげられる。化合物は、それらのプロドラッグ、および前記化合物のまたは前記プロドラッグの医薬的に許容される塩をさらに含み、上述の同位体および／または他の原子の他の同位体を含有するこれらのものは、本発明の範囲内である。本発明のある一定の同位体標識化合物、例えば、３Ｈおよび１４Ｃなどの放射性同位体が組み込まれているものは、薬物および／または基質組織分布アッセイにおいて有用である。トリチウム化された、すなわち３Ｈ、および炭素−１４、すなわち１４Ｃ、同位体は、それらの調製の容易さおよび検出可能性のため特に好ましい。さらに、より重い同位体、例えばジュウテリウム、すなわち２Ｈ、は、より大きい代謝安定性の結果として得られるある一定の治療上の利点、例えば、インビボ半減期の増加または必要投薬量の低減をもたらすことができ、それ故、一部の状況では好ましい。一般に、本発明の同位体標識化合物およびそれらのプロドラッグは、容易に入手できる同位体標識試薬を非同位体標識試薬の代わりに用いることによって下記の手順を行うことにより調製することができる。
【０１８０】
本発明に関して記載する化合物は、溶媒和物として存在することができる。場合によっては、溶媒和物を調製するために使用される溶媒は水溶液であり、そのときの溶媒和物を、多くの場合、水和物と呼ぶ。前記化合物は水和物として存在することができ、前記水和物は、例えば、溶媒からのまたは水溶液からの結晶化によって得ることができる。これに関連して、１、２、３またはいずれかの任意の数の溶媒または水分子が本発明による化合物と化合して、溶媒和物および水和物を形成することができる。相反する記述がない限り、本発明は、可能性のあるすべてのそのような溶媒和物を含む。
【０１８１】
用語「共結晶」は、非共有結合性相互作用による２つ以上の分子の物理的会合であって、前記分子がそれらの安定性について恩恵を受ける会合を意味する。この分子複合体の１つ以上の成分が結晶格子に安定した骨格をもたらす。ある一定の事例では、ゲスト分子が無水物または水和物として結晶格子に組み込まれる。例えば、“Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｈａｓｅｓ．Ｄｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏ−ｃｒｙｓｔａｌｓ  Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ  ａ  Ｎｅｗ  Ｐａｔｈ  ｔｏ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ？”Ａｌｍａｒａｓｓｏｎ，Ｏ．，ｅｔ．ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｒｏｙａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１８８９−１８９６，２００４を参照されたい。共結晶の例としては、ｐ−トルエンスルホン酸およびベンゼンスルホン酸があげられる。
【０１８２】
化学物質が、多形形態または修飾形態と呼ばれる、異なる秩序状態で存在する固体を形成することは公知である。多形物質の異なる修飾形態は、それらの物理的特性が大きく異なり得る。本発明による化合物は、特定の修飾形態が準安定性である可能性がある、異なる多形形態で存在することができる。相反する記述がない限り、本発明は、可能性のあるすべてのそのような多形形態を含む。
【０１８３】
一部の態様では、化合物の構造を式：
【化１７】
0006510485.tif 000018
によって表すことができ、これは、式：
【化１８】
0006510485.tif 000019
と等価であると解釈され、これらの式中のｎは、典型的に整数である。すなわち、Ｒｎは、５つの独立した置換基、Ｒｎ（ａ）、Ｒｎ（ｂ）、Ｒｎ（ｃ）、Ｒｎ（ｄ）、Ｒｎ（ｅ）を表すと解釈される。「独立した置換基」とは、各Ｒ置換基を独立して定義することができることを意味する。例えば、一例としてＲｎ（ａ）がハロゲンである場合には、Ｒｎ（ｂ）は、その事例で必ずしもハロゲンであるとは限らない。
【０１８４】
本明細書において開示するある一定の材料、化合物、組成物および成分を購入することができ、または当業者に一般に公知の技術を用いて容易に合成することができる。例えば、本開示化合物および組成物を調製する際に使用する出発原料および試薬は、商業的供給業者、例えば、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（ウィスコンシン州ミルウォーキー）、Ａｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ（ニュージャージー州モリスプレインズ）、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｒｉｃ（ペンシルバニア州ピッツバーグ）もしくはＳｉｇｍａ（ミズーリ州セントルイス）から入手することができ、または参考文献、例えば、Ｆｉｓｅｒ  ａｎｄ  Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第１〜１７巻（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９９１）；Ｒｏｄｄ’ｓ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、第１〜５巻および増刊号（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９８９）；Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ、第１〜４０巻（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９９１）；Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、第４版）；およびＬａｒｏｃｋ’ｓ  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ（ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  Ｉｎｃ．、１９８９）に記載の手順に従って当業者に公知の方法により調製される。
【０１８５】
別段の記述がない限り、本明細書に記載のいずれの方法も、そのステップを特定の順序で行う必要があると解釈されることを決して意図したものではない。したがって、方法クレームによってそのステップが従うべき順序が実際に列挙されていない場合、または本特許請求の範囲もしくは明細書にステップを特定の順序に限定すべきであるという別段の具体的な記述がなり場合、いかなる点でも順序が推断されることを決して意図していない。これは、ステップまたは操作フローの並びに関する必然性の問題、文法構成または句読法から導かれる明瞭な意味、および本明細書に記載する態様の数またはタイプを含めて、解釈のあらゆる可能性のある非明示根拠に適用できる。
【０１８６】
本発明の組成物を調製するために使用することができる成分、ならびに本明細書において開示する方法の中で使用することができる組成物それら自体を開示する。これらおよび他の材料を本明細書において開示するが、これらの材料の組み合わせ、サブセット、相互作用、群などを開示するとき、これらの化合物の様々な個々のおよび集合的な組み合わせおよび順列各々の具体的な言及を明示的に開示することはできないが、各々が本明細書において具体的に企図され、記載されていると解釈される。例えば、特定の化合物が開示され、論じられている場合、および化合物を含む多数の分子に対して行うことができる多数の修飾が論じられている場合、相反する具体的な指示がない限り、可能性がある前記化合物および前記修飾の各々のおよびあらゆる組み合わせおよび順列が具体的に企図されている。したがって、分子Ａ、ＢおよびＣのクラスが開示され、ならびに分子Ｄ、ＥおよびＦのクラスと組み合わせ分子の例、Ａ−Ｄが開示されている場合には、たとえ各々が個々に列挙されていなくても、各々が個々におよび集合的に企図されており、これは、組み合わせ、Ａ−Ｅ、Ａ−Ｆ、Ｂ−Ｄ、Ｂ−Ｅ、Ｂ−Ｆ、Ｃ−Ｄ、Ｃ−ＥおよびＣ−Ｆが考慮され、開示されていることを意味する。同様に、これらの任意のサブセットまたは組み合わせも開示されている。したがって、例えば、Ａ−Ｅ、Ｂ−ＦおよびＣ−Ｅの部分群が考慮され、開示されていることになる。この概念は、限定されないが、本発明の組成物の製造および使用方法におけるステップを含む、本出願のすべての態様に適用される。したがって、行うことができる様々な追加のステップがある場合、本発明の方法の任意の特定の実施形態または実施形態の組み合わせを用いてこれらの追加のステップの各々を行うことができることは理解される。
【０１８７】
本明細書において開示する組成物がある一定の機能を有することは理解される。開示する機能を行うためのある一定の構造的要件を本明細書において開示する。開示する構造に関係付けられる同じ機能を果たすことができる様々な構造があること、およびこれらの構造が同じ結果を概して達成することになることは理解される。
【０１８８】
Ｂ．化合物
１つの態様において、本発明は、ＰＲＭＴ５インヒビターとして有用な化合物に関する。
【０１８９】
開示する各々の誘導体は、場合によりさらに置換されていることがあり得ることが考えられる。任意の１つ以上の誘導体を本発明から場合により省くことができることも考えられる。開示する化合物を開示する方法によって得ることができることは理解される。開示する化合物を開示する使用方法で用いることができることも理解される。
【０１９０】
１．結合
ＰＲＭＴ５結合ドメインには、小領域１（肝要な残基Ｙ３２４、Ｆ３２７、Ｋ３３３、Ｙ３３４、Ｖ３６３、Ｇ３６５、Ｇ３６７、Ｐ３７０、Ｌ３７１）、結合小領域２（肝要な残基Ｋ３９３、Ｄ４１９、Ｍ４２０、Ｒ４２１）および結合小領域３（肝要な残基Ｆ３２７、Ｅ４３５、Ｅ４４４）として定義される、３つの結合小領域がある。これらの結合領域との相互作用は、ＰＲＭＴ５などのＩＩ型ＰＲＭＴに対する特異性を一意的に定義することができる。
【０１９１】
従って、１つの態様において、本発明は、Ｙ３２４、もしくはＦ３２７、もしくはＫ３３３、もしくはＹ３３４、もしくはＶ３６３、もしくはＧ３６５、もしくはＧ３６７、もしくはＰ３７０、もしくはＬ３７１との疎水性相互作用で、またはＹ３２４、もしくはＦ３２７、もしくはＹ３３４との芳香族相互作用で、ＰＲＭＴ５の小領域１との相互作用が可能であり；かつＥ３９２またはＥ４３５またはＥ４４４への水素結合との相互作用、芳香族相互作用または水素結合によるＰＲＭＴ５の小領域２との相互作用、ならびに芳香族相互作用および／またはＥ４３５もしくはＥ４４４への水素結合によるＰＲＭＴ５の小領域３との相互作用、から選択される０、１、２または３種のさらなる相互作用が可能である化合物であって、１０００ダルトン未満の分子量を有する化合物、またはその医薬的に許容される塩に関する。
【０１９２】
さらなる態様において、前記化合物は、Ｙ３２４、もしくはＦ３２７、もしくはＫ３３３、もしくはＹ３３４、もしくはＶ３６３、もしくはＧ３６５、もしくはＧ３６７、もしくはＰ３７０、もしくはＬ３７１との疎水性相互作用が可能である、および／またはＹ３２４、もしくはＦ３２７、もしくはＹ３３４との芳香族相互作用が可能である、二環式または三環式ヘテロ芳香族部分と；Ｅ３９２またはＥ４３５またはＥ４４４への水素結合が可能である少なくとも１つの電子供与基を有する、３Ａと７Ａの間の長さのリンカー部分と；芳香族相互作用および／またはＷ５７９への水素結合が可能である、電子供与および／または電子受容基（単数または複数）で置換されている、単環式または二環式芳香族部分とを含む。さらに他の態様において、前記化合物は、少なくとも１つのカルバゾール部分を有する。さらなる態様において、前記カルバゾール部分は、ＰＲＭＴ５のＳＡＭアデニン領域への結合が可能である。さらなる態様では、リンカー部分を、
【化１９】
0006510485.tif 000020
から選択することができる。
【０１９３】
さらなる態様において、前記リンカー部分は、ＰＲＭＴ５のＳＡＭ／ＡＲＧ領域への結合が可能である。
【０１９４】
２．構造
１つの態様において、本発明は、下記式によって表される構造を有する化合物：
【化２０】
0006510485.tif 000021
（式中、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ４アルキルであり；Ｒ２は、水素、フルオロ、クロロおよびブロモから選択され；Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３および−Ｎ（ＣＨ３）２から選択され；および
（ａ）Ｌは、
【化２１】
0006510485.tif 000022
であり、およびＡｒは、Ｒ２がフルオロ、クロロもしくはブロモであることを条件として、
【化２２】
0006510485.tif 000023
であるか、またはＡｒは、
【化２３】
0006510485.tif 000024
であり；あるいは
（ｂ）Ｌは、
【化２４】
0006510485.tif 000025
であり、およびＡｒは、Ｒ２がフルオロ、クロロもしくはブロモであることを条件として、
【化２５】
0006510485.tif 000026
であるか、またはＡｒは、
【化２６】
0006510485.tif 000027
であり；あるいは
（ｃ）Ｌは、
【化２７】
0006510485.tif 000028
であり、およびＡｒは、
【化２８】
0006510485.tif 000029
であり；あるいは
（ｄ）Ｌは、
【化２９】
0006510485.tif 000030
であり、およびＡｒは、
【化３０】
0006510485.tif 000031
であるか、またはＡｒは、Ｒ３がＣ１−Ｃ４アルキルであることを条件として、
【化３１】
0006510485.tif 000032
であり；あるいは
（ｅ）Ｌは、
【化３２】
0006510485.tif 000033
であり、およびＡｒは、Ｒ２がフルオロ、クロロもしくはブロモであることを条件として、
【化３３】
0006510485.tif 000034
であるか、またはＡｒは、Ｒ３がＣ１−Ｃ４アルキルであることを条件として、
【化３４】
0006510485.tif 000035
である）
またはその医薬的に許容される塩に関する。
【０１９５】
さらなる態様において、前記化合物は、下記式によって表される構造を有する：
【化３５】
0006510485.tif 000036
【０１９６】
さらなる態様において、前記化合物は、下記式によって表される構造を有する：
【化３６】
0006510485.tif 000037
【０１９７】
さらなる態様において、前記化合物は、下記式によって表される構造を有する：
【化３７】
0006510485.tif 000038
【０１９８】
さらなる態様において、前記化合物は、下記式によって表される構造を有する：
【化３８】
0006510485.tif 000039
【０１９９】
さらなる態様において、前記化合物は、下記式によって表される構造を有する：
【化３９】
0006510485.tif 000040
【０２００】
さらなる態様において、前記化合物は、下記式によって表される構造を有する：
【化４０】
0006510485.tif 000041
【０２０１】
さらなる態様において、前記化合物は、下記式によって表される構造を有する：
【化４１】
0006510485.tif 000042
【０２０２】
さらなる態様において、前記化合物は、下記式によって表される構造を有する：
【化４２】
0006510485.tif 000043
【０２０３】
さらなる態様において、前記化合物は、下記式によって表される構造を有する：
【化４３】
0006510485.tif 000044
【０２０４】
さらなる態様において、前記化合物は、下記式によって表される構造を有する：
【化４４】
0006510485.tif 000045
【０２０５】
さらなる態様において、前記化合物は、下記式によって表される構造を有する：
【化４５】
0006510485.tif 000046
【０２０６】
さらなる態様において、前記化合物は、下記式によって表される構造を有する：
【化４６】
0006510485.tif 000047
【０２０７】
さらなる態様において、前記化合物は、下記式によって表される構造を有する：
【化４７】
0006510485.tif 000048
【０２０８】
さらなる態様において、前記化合物は、下記式によって表される構造を有する：
【化４８】
0006510485.tif 000049
【０２０９】
さらなる態様において、前記化合物は、下記式によって表される構造を有する：
【化４９】
0006510485.tif 000050
【０２１０】
好適な置換基を下で説明する。
【０２１１】
ａ．Ｒ１基
１つの態様において、Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ４アルキルである。さらなる態様において、Ｒ１は、Ｃ２−Ｃ４アルキルである。さらなる態様において、Ｒ１は、Ｃ３−Ｃ４アルキルである。さらなる態様において、Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ２アルキルである。さらなる態様において、Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ３アルキルである。さらなる態様において、Ｒ１は、メチル、エチル、プロピルおよびブチルから選択される。さらなる態様において、Ｒ１は、エチル、プロピルおよびブチルから選択される。さらなる態様において、Ｒ１は、メチル、プロピルおよびブチルから選択される。さらなる態様において、Ｒ１は、メチル、エチルおよびブチルから選択される。さらなる態様において、Ｒ１は、メチル、エチルおよびプロピルから選択される。さらなる態様において、Ｒ１は、エチルである。さらなる態様において、Ｒ１は、ｎ−プロピル、ｉ−プロピルまたはシクロプロピルである。さらなる態様において、Ｒ１は、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチルまたはシクロブチルである。
【０２１２】
ｂ．Ｒ２基
１つの態様において、Ｒ２は、水素、フッ素、クロロおよびブロモから選択される。さらなる態様において、Ｒ２は、水素である。さらなる態様において、Ｒ２は、フッ素、クロロまたはブロモである。さらなる態様において、Ｒ２は、水素、クロロまたはブロモである。さらなる態様において、Ｒ２は、水素、フルオロまたはブロモである。さらなる態様において、Ｒ２は、水素、フッ素またはクロロである。さらなる態様において、Ｒ２は、フルオロである。さらなる態様において、Ｒ２は、クロロである。さらなる態様において、Ｒ２は、ブロモである。
【０２１３】
ｃ．Ｒ３基
１つの態様において、Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３および−Ｎ（ＣＨ３）２から選択される。さらなる態様において、Ｒ３は、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３または−Ｎ（ＣＨ３）２である。さらなる態様において、Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、−ＮＨＣＨ３または−Ｎ（ＣＨ３）２である。さらなる態様において、Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、−ＮＨ２または−Ｎ（ＣＨ３）２である。さらなる態様において、Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、−ＮＨ２または−ＮＨＣＨ３である。さらなる態様において、Ｒ３は、−ＮＨＣＨ３または−Ｎ（ＣＨ３）２である。さらなる態様において、Ｒ３は、−ＮＨ２または−Ｎ（ＣＨ３）２である。さらなる態様において、Ｒ３は、−ＮＨ２または−ＮＨＣＨ３である。
【０２１４】
１つの態様に置いて、Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ４アルキルである。さらなる態様において、Ｒ３は、Ｃ２−Ｃ４アルキルである。さらなる態様において、Ｒ３は、Ｃ３−Ｃ４アルキルである。さらなる態様において、Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ２アルキルである。さらなる態様において、Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ３アルキルである。さらなる態様において、Ｒ３は、メチル、エチル、プロピルおよびブチルから選択される。さらなる態様において、Ｒ３は、エチル、プロピルおよびブチルから選択される。さらなる態様において、Ｒ３は、メチル、プロピルおよびブチルから選択される。さらなる態様において、Ｒ３は、メチル、エチルおよびブチルから選択される。さらなる態様において、Ｒ３は、メチル、エチルおよびプロピルから選択される。さらなる態様において、Ｒ３は、エチルである。さらなる態様において、Ｒ３は、ｎ−プロピル、ｉ−プロピルまたはシクロプロピルである。さらなる態様において、Ｒ３は、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチルまたはシクロブチルである。
【０２１５】
ａ．Ａｒ基
１つの態様において、Ａｒは、
【化５０】
0006510485.tif 000051
から選択される。
【０２１６】
さらなる態様において、Ａｒは、
【化５１】
0006510485.tif 000052
である。
【０２１７】
さらなる態様において、Ａｒは、
【化５２】
0006510485.tif 000053
である。
【０２１８】
ｂ．Ｌ基
１つの態様において、Ｌは、
【化５３】
0006510485.tif 000054
から選択される。
【０２１９】
さらなる態様において、Ｌは、
【化５４】
0006510485.tif 000055
から選択される。
【０２２０】
さらなる態様において、Ｌは、
【化５５】
0006510485.tif 000056
から選択される。
【０２２１】
さらなる態様において、Ｌは、
【化５６】
0006510485.tif 000057
から選択される。
【０２２２】
さらなる態様において、Ｌは、
【化５７】
0006510485.tif 000058
から選択される。
【０２２３】
さらなる態様において、Ｌは、
【化５８】
0006510485.tif 000059
から選択される。
【０２２４】
さらなる態様において、Ｌは、
【化５９】
0006510485.tif 000060
であり、およびＡｒは、Ｒ２がフルオロ、クロロもしくはブロモであることを条件として、
【化６０】
0006510485.tif 000061
であるか、またはＡｒは、
【化６１】
0006510485.tif 000062
である。
【０２２５】
さらなる態様において、Ｌは、
【化６２】
0006510485.tif 000063
であり、およびＡｒは、Ｒ２がフルオロ、クロロもしくはブロモであることを条件として、
【化６３】
0006510485.tif 000064
であるか、またはＡｒは、
【化６４】
0006510485.tif 000065
である；あるいは
【０２２６】
さらなる態様において、Ｌは、
【化６５】
0006510485.tif 000066
であり、およびＡｒは、
【化６６】
0006510485.tif 000067
である；あるいは
【０２２７】
さらなる態様において、Ｌは、
【化６７】
0006510485.tif 000068
であり、およびＡｒは、
【化６８】
0006510485.tif 000069
であるか、またはＡｒは、Ｒ３がＣ１−Ｃ４アルキルであることを条件として、
【化６９】
0006510485.tif 000070
である；あるいは
【０２２８】
さらなる態様において、Ｌは、
【化７０】
0006510485.tif 000071
であり、およびＡｒは、Ｒ２がフルオロ、クロロもしくはブロモであることを条件として、
【化７１】
0006510485.tif 000072
であるか、またはＡｒは、Ｒ３がＣ１−Ｃ４アルキルであることを条件として、
【化７２】
0006510485.tif 000073
である。
【０２２９】
さらなる態様において、Ｌは、
【化７３】
0006510485.tif 000074
であり、およびＡｒは、
【化７４】
0006510485.tif 000075
であり、Ｒ２は、フルオロ、クロロもしくはブロモである。
【０２３０】
３．実施例化合物
１つの態様において、化合物は、次の構造のうちの１つ以上のもの：
【化７５】
0006510485.tif 000076
またはそれらの部分群として存在することができる。
【０２３１】
さらなる態様において、化合物は、次の構造のうちの１つ以上のもの：
【化７６】
0006510485.tif 000077
またはそれらの部分群として存在することができる。
【０２３２】
さらなる態様において、化合物は、次の構造のうちの１つ以上のもの：
【化７７】
0006510485.tif 000078
またはそれらの部分群として存在することができる。
【０２３３】
さらなる態様において、化合物は、次の構造のうちの１つ以上のもの：
【化７８】
0006510485.tif 000079
またはそれらの部分群として存在することができる。
【０２３４】
さらなる態様において、化合物は、次の構造のうちの１つ以上のもの：
【化７９】
0006510485.tif 000080
またはそれらの部分群として存在することができる。
【０２３５】
開示する化合物を、開示する方法、組成物、キットおよび使用に関して使用することができることは理解される。
【０２３６】
４．活性
１つの態様において、化合物は、抗増殖アッセイにおいて、約１００μＭ、約５０μＭ、約２５μＭ、約１０μＭ、約５μＭ、約２μＭ、約１μＭ、または約０．５μＭ以下のＩＣ５０を有する。
【０２３７】
さらなる態様において、化合物は、アポトーシス誘導アッセイにおいて、約１００μＭ、約５０μＭ、約２５μＭ、約１０μＭ、約５μＭ、約２μＭ、約１μＭ、または約０．５μＭ以下のＥＣ５０を有する。
【０２３８】
さらなる態様において、化合物は、ＰＲＭＴ５媒介Ｈ４Ｒ３メチル化阻害アッセイおいて約１００μＭ、約５０μＭ、約２５μＭ、約１０μＭ、約５μＭ、約２μＭ、約１μＭ、または約０．５μＭ以下のＩＣ５０を有する。
【０２３９】
Ｃ．化合物の製造方法
１つの態様において、本発明は、無制御細胞増殖障害の処置に有用であることができる、ＰＲＭＴ５インヒビターとして有用な化合物（例えばカルバゾール誘導体）の製造方法に関する。１つの態様において、本発明は、開示する合成操作に関する。さらなる態様において、開示する化合物は、本明細書に記載する合成方法の生成物を含む。さらなる態様において、開示する化合物は、本明細書に記載する合成方法によって生成される化合物を含む。なおさらなる態様において、本発明は、開示する方法の治療有効量の生成物と医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物を含む。なおさらなる態様において、本発明は、医薬品を製造するための方法であって、任意の開示化合物のうちの少なくとも１つの化合物または開示する方法の少なくとも１つの生成物と、医薬的に許容される担体または希釈剤とを併せるステップを含む方法を含む。
【０２４０】
本発明の化合物は、文献で公知である、実施例セクションにおいて例示する、または当業者には明白である他の標準的操作に加えて、開示するスキームに示すような反応を用いることによって調製することができる。下記の実施例は、本発明がより十分に理解されるように提供するものであり、説明に役立つものに過ぎず、下記の実施例を限定と見なすべきではない。本明細書において開示する定義のもとで複数の置換基が許容される場合に、明確にするために、より少ない置換基を有する実施例を示すことがあり得る。
【０２４１】
開示する各方法は、追加のステップ、操作および／または成分をさらに含むことができると考えられる。任意の１つ以上のステップ、操作および／または成分を場合により本発明から省くことができることも考えられる。開示する方法を用いて、開示する化合物を得ることができることは、理解される。開示する方法の生成物を、開示する組成物、キットおよび使用に用いることができることも、理解される。
【０２４２】
１．経路Ｉ
１つの態様では、本発明のカルバゾール類似体を下に示すような合成スキームによって一般に調製することができる。
【化８０】
0006510485.tif 000081
【０２４３】
化合物を一般的形態で表現し、置換基は本明細書の他の箇所の化合物説明で述べるとおりである。より具体的な例を下に示す。
【化８１】
0006510485.tif 000082
【０２４４】
１つの態様では、タイプ１．３の化合物、および類似の化合物、を上の反応スキーム１Ｂに従って調製することができる。したがって、適切なカルバゾール、例えば、上に示したような９Ｈ−カルバゾール（１．４）のアルキル化反応によってタイプ１．６の化合物を調製することができる。適切なカルバゾールは市販されており、または当業者に公知の方法によって適切なカルバゾールを調製する。市販されているかまたは当業者に公知の方法によって調製される適切なアルキルハリド、例えば上に示したような臭化エチル（１．５）、および適切な塩基、例えば水素化ナトリウムの存在下、適切な溶媒、例えば上に示したようなテトラヒドロフラン中で前記アルキル化反応を行う。当業者には理解することができるように、上の反応は、上の特定の反応体に構造が類似している化合物（タイプ１．１および１．２の化合物に類似した化合物）をこの反応で代用して式１．３に類似したカルバゾール類似体を得ることができる一般化アプローチの一例を提供するものである。
【０２４５】
２．経路ＩＩ
１つの態様では、本発明のカルバゾール類似体を下に示すような合成スキームによって一般に調製することができる。
【化８２】
0006510485.tif 000083
【０２４６】
化合物を一般的形態で表現し、置換基は本明細書の他の箇所の化合物説明で述べるとおりである。より具体的な例を下に示す。
【化８３】
0006510485.tif 000084
【０２４７】
１つの態様では、タイプ２．１の化合物、および類似の化合物、を上の反応スキーム２Ｂに従って調製することができる。したがって、適切なカルバゾール、例えば、上に示したような９−エチル−９Ｈ−カルバゾール（１．６）のホルミル化反応（すなわち、ビスルマイヤー・ハックホルミル化）によってタイプ２．２の化合物を調製することができる。適切なカルバゾールは市販されており、または当業者に公知の方法によって適切なカルバゾールを調製する。適切なホルミル化試薬、例えば、上に示したようなオキシ塩化リンおよびジメチルホルムアミドの存在下、適切な非プロトン性溶媒、例えばクロロホルム中、適切な温度、例えば還流条件で前記アルキル化反応を行う。当業者には理解することができるように、上の反応は、上の特定の反応体に構造が類似している化合物（タイプ１．３の化合物に類似した化合物）をこの反応で代用して式２．１に類似した置換カルバゾール類似体を得ることができる一般化アプローチの一例を提供するものである。
【０２４８】
３．経路ＩＩＩ
１つの態様では、本発明のカルバゾール類似体を下に示すような合成スキームによって一般に調製することができる。
【化８４】
0006510485.tif 000085
【０２４９】
化合物を一般的形態で表現し、置換基は本明細書の他の箇所の化合物説明で述べるとおりである。より具体的な例を下に示す。
【化８５】
0006510485.tif 000086
【０２５０】
１つの態様では、タイプ３．１の化合物、および類似の化合物、を上の反応スキーム３Ｂに従って調製することができる。したがって、適切なカルバゾール、例えば、上に示したような９−エチル−９Ｈ−カルバゾール−３−カルバルデヒド（２．２）のハロゲン化（すなわち、臭素化）反応によってタイプ３．２の化合物を調製することができる。適切なカルバゾールは市販されており、または当業者に公知の方法によって適切なカルバゾールを調製する。適切なハロゲン化試薬、例えば、上に示したようなＮ−ブロモスクシンイミドの存在下、適切な非プロトン性溶媒、例えばクロロホルムおよび酢酸中で前記ハロゲン化反応を行う。当業者には理解することができるように、上の反応は、上の特定の反応体に構造が類似している化合物（タイプ２．１の化合物に類似した化合物）をこの反応で代用して式３．１に類似した置換カルバゾール類似体を得ることができる一般化アプローチの一例を提供するものである。所望される場合には、前記ハロゲン化反応を前記ホルミル化反応の前に行うことができることは理解される。
【０２５１】
４．経路ＩＶ
１つの態様では、本発明のカルバゾール類似体を下に示すような合成スキームによって一般に調製することができる。
【化８６】
0006510485.tif 000087
【０２５２】
化合物を一般的形態で表現し、置換基は本明細書の他の箇所の化合物説明で述べるとおりである。より具体的な例を下に示す。
【化８７】
0006510485.tif 000088
【０２５３】
１つの態様では、タイプ４．３の化合物、および類似の化合物、を上の反応スキーム４Ｂに従って調製することができる。したがって、適切なカルバゾール、例えば、上に示したような９−エチル−９Ｈ−カルバゾール−３−カルバルデヒド（２．２）のアルドール縮合によってタイプＨＬＣＬ−６６の化合物を調製することができる。適切なカルバゾールは市販されており、または当業者に公知の方法によって適切なカルバゾールを調製する。適切なメチルケトン、例えば、上に示したような１−（２−メトキシフェニル）エタノン（４．４）の存在下、適切な塩基、例えば、上に示したような炭酸カリウムの存在下、適切なプロトン性溶媒、例えばメタノール中、好適な温度、例えば還流条件で前記アルドール縮合を行う。当業者には理解することができるように、上の反応は、上の特定の反応体に構造が類似している化合物（タイプ４．１および４．２の化合物に類似した化合物）をこの反応で代用して式４．３に類似した置換カルバゾール類似体を得ることができる一般化アプローチの一例を提供するものである。
【０２５４】
５．経路Ｖ
１つの態様では、本発明のカルバゾール類似体を下に示すような合成スキームによって一般に調製することができる。
【化８８】
0006510485.tif 000089
【０２５５】
化合物を一般的形態で表現し、置換基は本明細書の他の箇所の化合物説明で述べるとおりである。より具体的な例を下に示す。
【化８９】
0006510485.tif 000090
【０２５６】
１つの態様では、タイプ５．２の化合物、および類似の化合物、を上の反応スキーム５Ｂに従って調製することができる。したがって、適切なアニリン、例えば、上に示したような４−アミノベンゼンスルホンアミド（５．３）の還元アミノ化によってタイプＨＬＣＬ−３２の化合物を調製することができる。適切なアニリンは市販されており、または当業者に公知の方法によって適切なアニリンを調製する。適切なアルデヒド、例えば、上に示したような９−エチル−９Ｈ−カルバゾール−３−カルバルデヒド（２．２）の存在下、適切な還元剤、例えばトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムの存在下、適切なプロトン性溶媒、例えばジクロロメタン中で前記還元アミノ化を行う。当業者には理解することができるように、上の反応は、上の特定の反応体に構造が類似している化合物（タイプ４．１および５．１の化合物に類似した化合物）をこの反応で代用して式５．２に類似した置換カルバゾール類似体を得ることができる一般化アプローチの一例を提供するものである。
【０２５７】
６．経路ＶＩ
１つの態様では、本発明のカルバゾール類似体を下に示すような合成スキームによって一般に調製することができる。
【化９０】
0006510485.tif 000091
【０２５８】
化合物を一般的形態で表現し、置換基は本明細書の他の箇所の化合物説明で述べるとおりである。より具体的な例を下に示す。
【化９１】
0006510485.tif 000092
【０２５９】
１つの態様では、タイプ５．２の化合物、および類似の化合物、を上の反応スキーム６Ｂに従って調製することができる。したがって、適切なベンジルアミン、例えば、上に示したような（４−（メチルスルホニル）フェニル）メタンアミン塩酸塩（６．３）の還元アミノ化によってタイプＨＬＣＬ−１０の化合物を調製することができる。適切なベンジルアミンは市販されており、または当業者に公知の方法によって適切なベンジルアミンを調製する。適切なアルデヒド、例えば、上に示したような９−エチル−９Ｈ−カルバゾール−３−カルバルデヒド（２．２）の存在下、適切な還元剤、例えばトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムの存在下、適切な塩基、例えばトリエチルアミンの存在下で前記還元アミノ化を行う。当業者には理解することができるように、上の反応は、上の特定の反応体に構造が類似している化合物（タイプ４．１および６．１の化合物に類似した化合物）をこの反応で代用して式６．２に類似した置換カルバゾール類似体を得ることができる一般化アプローチの一例を提供するものである。
【０２６０】
７．経路ＶＩＩ
１つの態様では、本発明のカルバゾール類似体を下に示すような合成スキームによって一般に調製することができる。
【化９２】
0006510485.tif 000093
【０２６１】
化合物を一般的形態で表現し、置換基は本明細書の他の箇所の化合物説明で述べるとおりである。より具体的な例を下に示す。
【化９３】
0006510485.tif 000094
【０２６２】
１つの態様では、タイプ７．４の化合物、および類似の化合物、を上の反応スキーム７Ｂに従って調製することができる。したがって、適切なアニリン、例えば、上に示したような４−（メチルスルホニル）アニリン（７．５）の活性化によってタイプ７．６の化合物を調製することができる。適切なアニリンは市販されており、または当業者に公知の方法によって適切なアニリンを調製する。適切な活性化試薬、例えば、上に示したような１，１’−カルボニルジイミダゾール（７．１）の存在下、適切な塩基、例えばトリエチルアミンの存在下、適切な溶媒、例えばジクロロメタン中で前記活性化を行う。適切なイソシアナート、例えば、上に示したような７．６のカップリング反応によってタイプ７．８の化合物を調製することができる。適切なアミン、例えば、上に記載したような７．７の存在下で前記カップリングを行う。当業者には理解することができるように、上の反応は、上の特定の反応体に構造が類似している化合物（タイプ７．１、７．５、７．６および７．７の化合物に類似した化合物）をこの反応で代用して式７．８に類似した置換カルバマート類似体を得ることができる一般化アプローチの一例を提供するものである。
【０２６３】
８．経路ＶＩＩＩ
１つの態様では、本発明のカルバゾール類似体を下に示すような合成スキームによって一般に調製することができる。
【化９４】
0006510485.tif 000095
【０２６４】
化合物を一般的形態で表現し、置換基は本明細書の他の箇所の化合物説明で述べるとおりである。より具体的な例を下に示す。
【化９５】
0006510485.tif 000096
【０２６５】
１つの態様では、タイプ８．１の化合物、および類似の化合物、を上の反応スキーム８Ｂに従って調製することができる。したがって、適切な尿素、例えば、上に示したような７．８の変換によってタイプＨＬＣＬ−７の化合物を調製することができる。適切な尿素は市販されており、または当業者に公知の方法によって適切な尿素を調製する。適切な求核試薬、例えばアンモニア水の存在下、適切な溶媒、例えばジメチルホルムアミド中で前記変換を行い、続いて適切な酸化剤、例えば、上に示したような過ヨウ素酸ナトリウムとの反応を行う。当業者には理解することができるように、上の反応は、上の特定の反応体に構造が類似している化合物（タイプ７．８の化合物に類似した化合物）をこの反応で代用して式７．８に類似した置換カルバゾール類似体を得ることができる一般化アプローチの一例を提供するものである。開示する製造方法を、開示する化合物、キット、組成物、および使用方法に関して用いることができることは理解される。
【０２６６】
Ｄ．医薬組成物
１つの態様において、本発明は、開示する化合物および開示する方法の生成物を含む、医薬組成物に関する。すなわち、有効量の少なくとも１つの開示化合物、開示する方法の少なくとも１つの生成物、またはその医薬的に許容される塩、溶媒和物、水和物もしくは多形と、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。１つの態様において、本発明は、医薬的に許容される担体と、有効量の少なくとも１つの開示化合物またはその医薬的に許容される塩とを含む、医薬組成物に関する。
【０２６７】
さらなる態様において、前記有効量は、治療有効量である。なおさらなる態様において、前記有効量は、予防有効量である。なおさらなる態様において、前記医薬組成物は、開示する製造方法の生成物である化合物を含む。
【０２６８】
さらなる態様において、前記医薬組成物は、開示化合物を含む。なおさらなる態様において、前記医薬組成物は、開示する製造方法の生成物を含む。
【０２６９】
ある一定の態様において、開示する医薬組成物は、活性成分としての開示化合物（それらの医薬的に許容される塩（単数または複数）を含む）と、医薬的に許容される担体と、場合により他の治療成分またはアジュバントとを含む。本組成物は、経口、直腸、局所および非経口（皮下、筋肉内および静脈内を含む）投与に好適なものを含むが、いずれの所与の症例においても、その最も好適な経路は、特定の宿主、ならびに前記活性成分を投与している状態の性質および重症度に依存することになる。前記組成物を単位剤形で適便に提供することができ、調剤技術分野において周知の任意の方法によって調製することができる。
【０２７０】
本明細書において用いる場合、用語「医薬的に許容される塩」は、医薬的に許容される非毒性塩基または酸から調製された塩を指す。本発明の化合物が酸性である場合、無機塩基および有機塩基を含む、医薬的に許容される非毒性塩基から、その対応する塩を適便に調製することができる。そのような無機塩基から誘導される塩としては、アルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅（第二銅および第一銅）、第二鉄、第一鉄、リチウム、マグネシウム、マンガン（第二マンガンおよび第一マンガン）、カリウム、ナトリウム、亜鉛および同様の塩があげられる。アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、カリウムおよびナトリウム塩が特に好ましい。医薬的に許容される有機非毒性塩基から誘導される塩としては、第一級、第二級および第三級アミンならびに環状アミンおよび置換アミン、例えば天然に存在するおよび合成された置換アミン、の塩があげられる。塩を形成することができる他の医薬的に許容される有機非毒性塩基としては、アルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リシン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミンなどのような、イオン交換樹脂があげられる。
【０２７１】
本明細書において用いる場合、用語「医薬的に許容される非毒性酸」は、無機酸、有機酸、およびそれらから調製された塩、例えば、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、樟脳スルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グルタミン酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、硝酸、パモ酸、パントテン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸などを含む。クエン酸、臭化水素酸、塩酸、マレイン酸、リン酸、硫酸および酒石酸が好ましい。
【０２７２】
詳細には、本発明の化合物、または本発明の化合物の本発明の医薬的に許容される塩を、活性成分として、従来の医薬配合技術に従って均質混合で医薬担体と併せることができる。前記担体は、投与、例えば経口または非経口（静脈内を含む）投与、に望ましい製剤の形態に依存して多種多様な形態をとることができる。したがって、本発明の医薬組成物を、所定量の活性成分を各々が含有する経口投与に好適な別個の単位、例えば、カプセル、カシェ剤または錠剤として提供することができる。さらに、前記組成物を錠剤として、顆粒として、溶液として、水性液体中の懸濁液として、非水性液体として、水中油型エマルションとして、または油中水型液体エマルションとして提供することができる。上で述べた一般的な剤形に加えて、本発明の化合物、および／またはその医薬的に許容される塩（単数または複数）を、制御放出手段および／または送達デバイスによって投与することもできる。前記組成物を任意の調剤方法によって調製することができる。一般に、そのような方法は、活性成分と、１つ以上の必須成分を構成する担体とを会合させるステップを含む。一般に、活性成分と液体担体もしくは微粉固体担体または両方とを均一かつ均質に混合することによって前記組成物を調製する。次いで、その生成物を所望の体裁に適便に成形することができる。
【０２７３】
したがって、本発明の組成物は、医薬的に許容される担体と、本発明の化合物または本発明の化合物の医薬的に許容される塩とを含むことができる。本発明の化合物、またはその医薬的に許容される塩を、１つ以上の他の治療活性化合物との組み合わせで医薬組成物に含めることもできる。
【０２７４】
用いる医薬担体は、例えば、固体、液体または気体であることができる。固体担体の例としては、ラクトース、白土、スクロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシアゴム、ステアリン酸マグネシウムおよびステアリン酸があげられる。液体担体の例は、糖シロップ、ラッカセイ油、オリーブ油および水である。気体担体の例としては、二酸化炭素および窒素があげられる。
【０２７５】
経口剤形のための組成物の調製では、任意の適便な医薬媒質を用いることができる。例えば、水、グリコール、油、アルコール、着香剤、保存薬、着色剤などを使用して、経口液体製剤、例えば、懸濁液、エリキシルおよび溶液を形成することができ、その一方で、担体、例えば、デンプン、糖、微結晶性セルロース、希釈剤、造粒剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤などを使用して、経口固体製剤、例えば、粉末、カプセルおよび錠剤を形成することができる。それらの投与の容易さのため、錠剤およびカプセルは、固体医薬担体が用いられる好ましい経口投薬単位である。場合により、標準的な水性または非水性技術によって錠剤をコーティングすることができる。
【０２７６】
本発明の組成物を含有する錠剤を、場合により１つ以上の補助成分またはアジュバントとともに、圧縮または成形することによって調製することができる。結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤、界面活性剤または分散剤と場合により混合された、粉末または顆粒などの易流動形態の活性成分を、好適な機械で圧縮することによって、圧縮錠剤を調製することができる。不活性液体希釈剤で湿らせた粉末化合物の混合物を好適な機械で成形することによって、成形錠剤を製造することができる。
【０２７７】
本発明の医薬組成物は、活性成分としての本発明の化合物（またはその医薬的に許容される塩）と、医薬的に許容される担体と、場合により１つ以上の追加の治療薬またはアジュバントとを含む。本組成物は、経口、直腸、局所および非経口（皮下、筋肉内および静脈内を含む）投与に好適な組成物を含むが、いずれの所与の症例においても、その最も好適な経路は、特定の宿主、ならびに前記活性成分を投与している状態の性質および重症度に依存することになる。前記医薬組成物を単位剤形で適便に提供することができ、調剤技術分野において周知の任意の方法によって調製することができる。
【０２７８】
非経口投与に好適な本発明の医薬組成物を、水中の活性化合物の溶液または懸濁液として調製することができる。例えばヒドロキシプロピルセルロースなどの好適な界面活性剤を含めることができる。グリセロール、液体ポリエチレングリコール、および油中のそれらの混合物中で分散剤を調製することもできる。さらに、微生物の有害な成長を防止するために保存薬を含めることができる。
【０２７９】
注射剤用に好適な本発明の医薬組成物としては、滅菌水溶液または滅菌水性分散液があげられる。さらに、前記組成物は、そのような滅菌注射用溶液または分散液の即時調製のための滅菌粉末の形態であることができる。全ての場合、最終注射剤形態は、無菌でなければならず、容易に注射できるために有効な流動性でなければならない。前記医薬組成物は、製造および保管条件下で安定でなければならず、したがって、好ましくは、細菌および真菌などの微生物の汚染作用から前記医薬組成物を保護すべきである。前記担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコール）、植物油およびこれらの好適な混合物を含有する、溶媒または分散媒であることができる。
【０２８０】
本発明の医薬組成物は、局所用に好適な形態、例えば、エアロゾル、クリーム、軟膏、ローション、散布剤、マウスウォッシュ、うがい薬などであることができる。さらに、前記組成物は、経皮デバイスでの使用に好適な形態であることができる。これらの製剤は、従来の加工法によって本発明の化合物、またはその医薬的に許容される塩、を用いて調製することができる。例として、親水性材料および水を一緒に約５重量％から約１０重量％の前記化合物と混合して所望の稠度を有するクリームまたは軟膏を生成することによって、クリームまたは軟膏を調製する。
【０２８１】
本発明の医薬組成物は、直腸投与に好適な形態であることができ、この場合の担体は固体である。その混合物が単位用量坐剤を形成することが好ましい。好適な担体としては、カカオ脂、および当該技術分野において一般に使用される他の材料があげられる。坐剤は、先ず前記組成物を軟化または溶融された担体（単数または複数）と混合し、その後、金型の中で冷却して成形することによって、適便に形成することができる。
【０２８２】
上述の担体成分に加えて、上記の医薬製剤は、適宜、１つ以上の追加の担体成分、例えば、希釈剤、緩衝剤、着香剤、結合剤、界面活性剤、増粘剤、滑沢剤、保存薬（抗酸化物質を含む）などを含むことができる。さらに、他のアジュバントを含めて、その製剤を所期のレシピエントの血液と等張性にすることができる。本発明の化合物および／またはその医薬的に許容される塩を含有する組成物を粉末または液体濃縮物形態で調製することもできる。
【０２８３】
しかし、いずれの特定の患者についてもその具体的な用量レベルは、様々な因子に依存することになることは理解される。そのような因子としては、患者の年齢、体重、全体的な健康状態、性別および食事があげられる。他の因子としては、投与回数および経路、排泄率、薬の組み合わせ、ならびに治療を受けている特定の疾患のタイプおよび重症度があげられる。
【０２８４】
したがって、１つの態様において、本発明は、医薬的に許容される担体と、Ｙ３２４、もしくはＦ３２７、もしくはＫ３３３、もしくはＹ３３４、もしくはＶ３６３、もしくはＧ３６５、もしくはＧ３６７、もしくはＰ３７０、もしくはＬ３７１との疎水性相互作用で、またはＹ３２４、もしくはＦ３２７、もしくはＹ３３４との芳香族相互作用で、ＰＲＭＴ５の小領域１との相互作用が可能であり；かつＥ３９２またはＥ４３５またはＥ４４４への水素結合との相互作用、芳香族相互作用または水素結合によるＰＲＭＴ５の小領域２との相互作用、ならびに芳香族相互作用および／またはＥ４３５もしくはＥ４４４への水素結合によるＰＲＭＴ５の小領域３との相互作用、から選択される０、１、２または３種のさらなる相互作用が可能である化合物であって、１０００ダルトン未満の分子量を有する化合物、またはその医薬的に許容される塩、とを含む、医薬組成物に関する。
【０２８５】
さらなる態様において、前記化合物は、Ｙ３２４、もしくはＦ３２７、もしくはＫ３３３、もしくはＹ３３４、もしくはＶ３６３、もしくはＧ３６５、もしくはＧ３６７、もしくはＰ３７０、もしくはＬ３７１との疎水性相互作用が可能である、および／またはＹ３２４、もしくはＦ３２７、もしくはＹ３３４との芳香族相互作用が可能である、二環式または三環式ヘテロ芳香族部分と；Ｅ３９２またはＥ４３５またはＥ４４４への水素結合が可能である少なくとも１つの電子供与基を有する、３Ａと７Ａの間の長さのリンカー部分と；芳香族相互作用および／またはＷ５７９への水素結合が可能である、電子供与および／または電子受容基（単数または複数）で置換されている、単環式または二環式芳香族部分とを含む。さらに他の態様において、前記化合物は、少なくとも１つのカルバゾール部分を有する。さらなる態様において、前記カルバゾール部分は、ＰＲＭＴ５のＳＡＭアデニン領域への結合が可能である。さらなる態様では、リンカー部分を、
【化９６】
0006510485.tif 000097
から選択することができる。
【０２８６】
さらなる態様において、前記リンカー部分は、ＰＲＭＴ５のＳＡＭ／ＡＲＧ領域への結合が可能である。
【０２８７】
１つの態様において、本発明は、医薬的に許容される担体と、下記式によって表される構造を有する化合物、またはその医薬的に許容される塩、とを含む医薬組成物に関する：
【化９７】
0006510485.tif 000098
（式中、Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ４アルキルであり；Ｒ２は、水素、フルオロ、クロロおよびブロモから選択され；Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３および−Ｎ（ＣＨ３）２から選択され；Ｌは、
【化９８】
0006510485.tif 000099
から選択され、Ａｒは、
【化９９】
0006510485.tif 000100
から選択され；ただし、Ｌが、
【化１００】
0006510485.tif 000101
であり、およびＡｒが、
【化１０１】
0006510485.tif 000102
である場合、Ｒ２は、フルオロ、クロロまたはブロモである）。
【０２８８】
さらなる態様において、
（ａ）Ｌは、
【化１０２】
0006510485.tif 000103
であり、およびＡｒは、Ｒ２がフルオロ、クロロもしくはブロモであることを条件として、
【化１０３】
0006510485.tif 000104
であるか、またはＡｒは、
【化１０４】
0006510485.tif 000105
であり；あるいは
（ｂ）Ｌは、
【化１０５】
0006510485.tif 000106
であり、およびＡｒは、Ｒ２がフルオロ、クロロもしくはブロモであることを条件として、
【化１０６】
0006510485.tif 000107
であるか、またはＡｒは、
【化１０７】
0006510485.tif 000108
であり；あるいは
（ｃ）Ｌは、
【化１０８】
0006510485.tif 000109
であり、およびＡｒは、
【化１０９】
0006510485.tif 000110
であり；あるいは
（ｄ）Ｌは、
【化１１０】
0006510485.tif 000111
であり、およびＡｒは、
【化１１１】
0006510485.tif 000112
であるか、またはＡｒは、Ｒ３がＣ１−Ｃ４アルキルであることを条件として、
【化１１２】
0006510485.tif 000113
であり；あるいは
（ｅ）Ｌは、
【化１１３】
0006510485.tif 000114
であり、およびＡｒは、Ｒ２がフルオロ、クロロもしくはブロモであることを条件として、
【化１１４】
0006510485.tif 000115
であるか、またはＡｒは、Ｒ３がＣ１−Ｃ４アルキルであることを条件として、
【化１１５】
0006510485.tif 000116
である。
【０２８９】
開示する組成物を、開示する化合物から調製することができることは理解される。開示する組成物を、開示する使用方法で用いることができることも理解される。
【０２９０】
Ｅ．化合物および組成物の使用方法
開示する化合物、組成物または医薬品の使用方法も開示する。１つの態様において、前記使用方法は、障害の処置に向けたものである。さらなる態様では、開示する化合物を、単一の薬剤として、または薬物を互に併用することがいずれかの薬物単独でより安全または有効である場合には１つ以上の他の薬物と併用で、前記化合物または前記他の薬物に有用性がある上述の疾患、障害および状態の処置、予防、制御、改善またはリスク低減に使用することができる。前記他の薬物（単数または複数）を一般に用いられている経路および量で投与することができ、したがって、開示する化合物と同時にまたは逐次的に投与することができる。開示する化合物を１つ以上の他の薬物と同時に投与する場合、そのような薬物と開示する化合物とを含有する単位剤形の医薬組成物が好ましい。しかし、この併用療法を、重なりのあるスケジュールで投与することもできる。１つ以上の活性化合物と開示する化合物の併用が単一薬剤としてのいずれかのものより効果があり得ることも想定される。
【０２９１】
本発明の医薬組成物および方法は、上述の病的状態の処置に通常利用される本明細書中で述べるような他の治療活性化合物をさらに含むことができる。
【０２９２】
１．スクリーニング方法
１つの態様において、本発明は、無制御細胞増殖障害のリスク増加について組織をスクリーニングするための方法であって、前記組織の細胞核または細胞質におけるＰＲＭＴ５の過発現の検出を含む方法に関する。さらなる態様において、検出は、被験体から組織を採取するステップ、その組織内の細胞の核または細胞質から生体物質を抽出するステップ、その抽出物中のＰＲＭＴ５レベルを測定するステップ、および抽出物ＰＲＭＴ５レベルを対照からのＰＲＭＴ５レベルと比較するステップを含み、前記対照中のＰＲＭＴ５レベルより高い前記抽出物中でのＰＲＭＴ５レベルは、無制御細胞増殖障害のリスク増加を示す。
【０２９３】
さらなる態様では、ＰＲＭＴ５の過発現が組織の細胞核内で検出され、障害は、扁平上皮癌、頭頸部癌、神経膠腫、肺癌およびリンパ腫から選択される。さらなる態様では、ＰＲＭＴ５の過発現が組織の細胞質内で検出され、障害は黒色腫である。
【０２９４】
２．選択的ＰＲＭＴ５阻害
１つの態様において、本発明は、哺乳類におけるＰＲＭＴ５の阻害のための方法であって、Ｙ３２４、もしくはＦ３２７、もしくはＫ３３３、もしくはＹ３３４、もしくはＶ３６３、もしくはＧ３６５、もしくはＧ３６７、もしくはＰ３７０、もしくはＬ３７１との疎水性相互作用で、またはＹ３２４、もしくはＦ３２７、もしくはＹ３３４との芳香族相互作用で、ＰＲＭＴ５の小領域１との相互作用が可能であり；かつＥ３９２またはＥ４３５またはＥ４４４への水素結合との相互作用、芳香族相互作用または水素結合によるＰＲＭＴ５の小領域２との相互作用、ならびに芳香族相互作用および／またはＥ４３５もしくはＥ４４４への水素結合によるＰＲＭＴ５の小領域３との相互作用、から選択される０、１、２または３種のさらなる相互作用が可能である化合物であって、１０００ダルトン未満の分子量を有する、治療有効量の化合物、またはその医薬的に許容される塩、を前記哺乳類に投与するステップを含む方法に関する。
【０２９５】
さらなる態様において、前記化合物は、Ｙ３２４、もしくはＦ３２７、もしくはＫ３３３、もしくはＹ３３４、もしくはＶ３６３、もしくはＧ３６５、もしくはＧ３６７、もしくはＰ３７０、もしくはＬ３７１との疎水性相互作用が可能である、および／またはＹ３２４、もしくはＦ３２７、もしくはＹ３３４との芳香族相互作用が可能である、二環式または三環式ヘテロ芳香族部分と；Ｅ３９２またはＥ４３５またはＥ４４４への水素結合が可能である少なくとも１つの電子供与基を有する、３Ａと７Ａの間の長さのリンカー部分と；芳香族相互作用および／またはＷ５７９への水素結合が可能である、電子供与および／または電子受容基（単数または複数）で置換されている、単環式または二環式芳香族部分とを含む。さらに他の態様において、前記化合物は、少なくとも１つのカルバゾール部分を有する。
【０２９６】
さらなる態様において、前記方法は、治療有効量の、下記式によって表される構造を有する化合物、またはその医薬的に許容される塩、を前記哺乳類に投与するステップを含む：
【化１１６】
0006510485.tif 000117
（式中、Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ４アルキルであり；Ｒ２は、水素、フルオロ、クロロおよびブロモから選択され；Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３および−Ｎ（ＣＨ３）２から選択され；Ｌは、
【化１１７】
0006510485.tif 000118
から選択され、Ａｒは、
【化１１８】
0006510485.tif 000119
から選択される）。
【０２９７】
さらなる態様において、Ｌは、
【化１１９】
0006510485.tif 000120
であり、およびＡｒは、
【化１２０】
0006510485.tif 000121
であり、Ｒ２は、フルオロ、クロロまたはブロモである。
【０２９８】
さらなる態様において、
（ａ）Ｌは、
【化１２１】
0006510485.tif 000122
であり、およびＡｒは、Ｒ２がフルオロ、クロロもしくはブロモであることを条件として、
【化１２２】
0006510485.tif 000123
であるか、またはＡｒは、
【化１２３】
0006510485.tif 000124
であり；あるいは
（ｂ）Ｌは、
【化１２４】
0006510485.tif 000125
であり、およびＡｒは、Ｒ２がフルオロ、クロロもしくはブロモであることを条件として、
【化１２５】
0006510485.tif 000126
であるか、またはＡｒは、
【化１２６】
0006510485.tif 000127
であり；あるいは
（ｃ）Ｌは、
【化１２７】
0006510485.tif 000128
であり、およびＡｒは、
【化１２８】
0006510485.tif 000129
であり；あるいは
（ｄ）Ｌは、
【化１２９】
0006510485.tif 000130
であり、およびＡｒは、
【化１３０】
0006510485.tif 000131
であるか、またはＡｒは、Ｒ３がＣ１−Ｃ４アルキルであることを条件として、
【化１３１】
0006510485.tif 000132
であり；あるいは
（ｅ）Ｌは、
【化１３２】
0006510485.tif 000133
であり、およびＡｒは、Ｒ２がフルオロ、クロロもしくはブロモであることを条件として、
【化１３３】
0006510485.tif 000134
であるか、またはＡｒは、Ｒ３がＣ１−Ｃ４アルキルであることを条件として、
【化１３４】
0006510485.tif 000135
である。
【０２９９】
さらなる態様において、阻害は、選択的阻害である。さらなる態様において、ＰＲＭＴ５に対する前記化合物のＩＣ５０は、Ｉ型アルギニンＮ−メチルトランスフェラーゼ（ＰＲＭＴ）に対する前記化合物のＩＣ５０より少なくとも２倍低い。さらなる態様において、前記ＩＣ５０は、少なくとも３倍低い。さらなる態様において、前記ＩＣ５０は、少なくとも５倍低い。さらなる態様において、ＰＲＭＴ５に対する前記化合物のＩＣ５０は、ＩＩＩ型アルギニンＮ−メチルトランスフェラーゼ（ＰＲＭＴ）に対する前記化合物のＩＣ５０より少なくとも２倍低い。さらなる態様において、前記ＩＣ５０は、少なくとも３倍低い。さらなる態様において、前記ＩＣ５０は、少なくとも５倍低い。
【０３００】
３．処置方法
本明細書において開示する化合物は、ＰＲＭＴ５活性に関連付けられる様々な障害の処置、予防、改善、制御またはリスク低減に有用である。
【０３０１】
１．無制御細胞増殖障害の処置
１つの態様において、本発明は、無制御細胞増殖障害の処置方法に関する。さらなる態様において、投与する化合物は、開示する製造方法の生成物である。なおさらなる態様において、有効量は、治療有効量である。さらにさらなる態様において、有効量は、予防有効量である。
【０３０２】
１つの態様において、前記哺乳類は、ヒトである。さらなる態様において、前記哺乳類は、投与ステップ前に前記障害の処置が必要であると診断されている。さらなる態様において、前記方法は、前記障害の処置を必要とする哺乳類を特定するステップをさらに含む。
【０３０３】
したがって、１つの態様において、本発明は、哺乳類における無制御細胞増殖障害を処置するための方法であって、治療有効量の、下記式によって表される構造を有する化合物、またはその医薬的に許容される塩、を前記哺乳類に投与するステップを含む方法に関する：
【化１３５】
0006510485.tif 000136
（式中、Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ４アルキルであり；Ｒ２は、水素、フルオロ、クロロおよびブロモから選択され；Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３および−Ｎ（ＣＨ３）２から選択され；Ｌは、
【化１３６】
0006510485.tif 000137
から選択され、Ａｒは、
【化１３７】
0006510485.tif 000138
から選択され；ただし、Ｌが、
【化１３８】
0006510485.tif 000139
であり、およびＡｒが、
【化１３９】
0006510485.tif 000140
である場合、Ｒ２は、フルオロ、クロロまたはブロモである）。
【０３０４】
さらなる態様において、
（ａ）Ｌは、
【化１４０】
0006510485.tif 000141
であり、およびＡｒは、Ｒ２がフルオロ、クロロもしくはブロモであることを条件として、
【化１４１】
0006510485.tif 000142
であるか、またはＡｒは、
【化１４２】
0006510485.tif 000143
であり；あるいは
（ｂ）Ｌは、
【化１４３】
0006510485.tif 000144
であり、およびＡｒは、Ｒ２がフルオロ、クロロもしくはブロモであることを条件として、
【化１４４】
0006510485.tif 000145
であるか、またはＡｒは、
【化１４５】
0006510485.tif 000146
であり；あるいは
（ｃ）Ｌは、
【化１４６】
0006510485.tif 000147
であり、およびＡｒは、
【化１４７】
0006510485.tif 000148
であり；あるいは
（ｄ）Ｌは、
【化１４８】
0006510485.tif 000149
であり、およびＡｒは、
【化１４９】
0006510485.tif 000150
であるか、またはＡｒは、Ｒ３がＣ１−Ｃ４アルキルであることを条件として、
【化１５０】
0006510485.tif 000151
であり；あるいは
（ｅ）Ｌは、
【化１５１】
0006510485.tif 000152
であり、およびＡｒは、Ｒ２がフルオロ、クロロもしくはブロモであることを条件として、
【化１５２】
0006510485.tif 000153
であるか、またはＡｒは、Ｒ３がＣ１−Ｃ４アルキルであることを条件として、
【化１５３】
0006510485.tif 000154
である。
【０３０５】
１つの態様において、本発明は、哺乳類における無制御細胞増殖障害を処置するための方法であって、Ｙ３２４、もしくはＦ３２７、もしくはＫ３３３、もしくはＹ３３４、もしくはＶ３６３、もしくはＧ３６５、もしくはＧ３６７、もしくはＰ３７０、もしくはＬ３７１との疎水性相互作用で、またはＹ３２４、もしくはＦ３２７、もしくはＹ３３４との芳香族相互作用で、ＰＲＭＴ５の小領域１との相互作用が可能であり；かつＥ３９２またはＥ４３５またはＥ４４４への水素結合との相互作用、芳香族相互作用または水素結合によるＰＲＭＴ５の小領域２との相互作用、ならびに芳香族相互作用および／またはＥ４３５もしくはＥ４４４への水素結合によるＰＲＭＴ５の小領域３との相互作用、から選択される０、１、２または３種のさらなる相互作用が可能である化合物であって、１０００ダルトン未満の分子量を有する、治療有効量の化合物、またはその医薬的に許容される塩、を前記哺乳類に投与するステップを含む方法に関する。
【０３０６】
さらなる態様において、前記化合物は、Ｙ３２４、もしくはＦ３２７、もしくはＫ３３３、もしくはＹ３３４、もしくはＶ３６３、もしくはＧ３６５、もしくはＧ３６７、もしくはＰ３７０、もしくはＬ３７１との疎水性相互作用が可能である、および／またはＹ３２４、もしくはＦ３２７、もしくはＹ３３４との芳香族相互作用が可能である、二環式または三環式ヘテロ芳香族部分と；Ｅ３９２またはＥ４３５またはＥ４４４への水素結合が可能である少なくとも１つの電子供与基を有する、３Ａと７Ａの間の長さのリンカー部分と；芳香族相互作用および／またはＷ５７９への水素結合が可能である、電子供与および／または電子受容基（単数または複数）で置換されている、単環式または二環式芳香族部分とを含む。さらに他の態様において、前記化合物は、少なくとも１つのカルバゾール部分を有する。
【０３０７】
１つの態様において、本発明は、無制御細胞増殖障害を処置するための方法であって、細胞核または細胞質内でのＰＲＭＴ５発現が増加された細胞を有する組織を同定するステップ、およびその組織に治療を施すステップ含む方法に関する。さらなる態様において、前記方法は、細胞核または細胞質内でのＰＲＭＴ５発現が増加された細胞を有すると同定された組織に治療を施すステップを含む。
【０３０８】
さらなる態様において、前記治療は、積極的治療である。さらなる態様において前記治療は、化学療法、放射線療法、生物学的療法、外科手術、および標的小分子薬の投与から選択される。さらなる態様において、治療は、少なくとも１つのＰＲＭＴ５インヒビターの投与を含む。さらなる態様において、治療は、少なくとも１つのＢＴＫインヒビターの投与を含む。
【０３０９】
さらなる態様では、ＰＲＭＴ５の発現増加が組織の細胞核内にあり、障害は、扁平上皮癌、頭頸部癌、神経膠腫、肺癌およびリンパ腫から選択される。さらなる態様では、ＰＲＭＴ５の発現増加が組織の細胞質内にあり、障害は黒色腫である。
【０３１０】
ある一定の態様において、前記無制御細胞増殖障害は、癌である。さらなる態様において、前記癌は、前立腺癌、肺癌、結腸癌、膵臓癌、頭頸部癌、皮膚癌、脳癌、乳癌、精巣癌および卵巣癌から選択される。さらなる態様において、前記癌は、黒色腫、神経膠腫、リンパ腫および白血病から選択される。
【０３１１】
ｂ．良性血液疾患を処置するための方法
１つの態様において、本発明は、哺乳類における良性血液疾患を処置するための方法であって、前記哺乳類に治療有効量の小分子ＰＲＭＴ５インヒビターを投与するステップを含む方法に関する。さらなる態様において、前記良性血液疾患は、移植後リンパ増殖性疾患、キャッスルマン病（一中心性／多中心性）、Ｘ連鎖リンパ増殖性疾患、慢性活動性ＥＢＶ感染症、伝染性単核症、ＨＨＶ８およびＥＢＶ由来Ｂ細胞リンパ増殖性疾患、ならびにリンパ節炎（菊池病）から選択される。さらなる態様において、前記良性血液疾患は、骨髄増殖性障害（慢性骨髄球性白血病／ＣＭＭＬ、真性赤血球増加症、本態性血小板増加症）および組織球性障害（組織球症Ｘ、ランゲルハンス細胞組織球症、エルドハイム・チェスター病、ロザイ・ドルフマン）から選択される、骨髄性障害である。さらなる態様において、前記良性血液疾患は、鎌状赤血球症である。さらなる態様において、前記良性血液疾患は、βサラセミアである。
【０３１２】
さらなる態様において、前記ＰＲＭＴ５インヒビターは、Ｙ３２４、もしくはＦ３２７、もしくはＫ３３３、もしくはＹ３３４、もしくはＶ３６３、もしくはＧ３６５、もしくはＧ３６７、もしくはＰ３７０、もしくはＬ３７１との疎水性相互作用で、またはＹ３２４、もしくはＦ３２７、もしくはＹ３３４との芳香族相互作用で、ＰＲＭＴ５の小領域１との相互作用が可能であり；かつＥ３９２またはＥ４３５またはＥ４４４への水素結合との相互作用、芳香族相互作用または水素結合によるＰＲＭＴ５の小領域２との相互作用、ならびに芳香族相互作用および／またはＥ４３５もしくはＥ４４４への水素結合によるＰＲＭＴ５の小領域３との相互作用、から選択される０、１、２または３種のさらなる相互作用が可能である化合物であって、１０００ダルトン未満の分子量を有する化合物、またはその医薬的に許容される塩である。
【０３１３】
さらなる態様において、前記ＰＲＭＴ５インヒビターは、Ｙ３２４、もしくはＦ３２７、もしくはＫ３３３、もしくはＹ３３４、もしくはＶ３６３、もしくはＧ３６５、もしくはＧ３６７、もしくはＰ３７０、もしくはＬ３７１との疎水性相互作用が可能である、および／またはＹ３２４、もしくはＦ３２７、もしくはＹ３３４との芳香族相互作用が可能である、二環式または三環式ヘテロ芳香族部分と；Ｅ３９２またはＥ４３５またはＥ４４４への水素結合が可能である少なくとも１つの電子供与基を有する、３Ａと７Ａの間の長さのリンカー部分と；芳香族相互作用および／またはＷ５７９への水素結合が可能である、電子供与および／または電子受容基（単数または複数）で置換されている、単環式または二環式芳香族部分とを含む。
【０３１４】
さらなる態様において、前記ＰＲＭＴ５インヒビターは、下記式によって表される構造を有する化合物、またはその医薬的に許容される塩を含む：
【化１５４】
0006510485.tif 000155
（式中、Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ４アルキルであり；Ｒ２は、水素、フルオロ、クロロおよびブロモから選択され；Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３および−Ｎ（ＣＨ３）２から選択され；Ｌは、
【化１５５】
0006510485.tif 000156
から選択され、Ａｒは、
【化１５６】
0006510485.tif 000157
から選択される）。
【０３１５】
さらなる態様において、Ｌは、
【化１５７】
0006510485.tif 000158
であり、およびＡｒは、
【化１５８】
0006510485.tif 000159
であり、Ｒ２は、フルオロ、クロロまたはブロモである。
【０３１６】
さらなる態様において、
（ａ）Ｌは、
【化１５９】
0006510485.tif 000160
であり、およびＡｒは、Ｒ２がフルオロ、クロロもしくはブロモであることを条件として、
【化１６０】
0006510485.tif 000161
であるか、またはＡｒは、
【化１６１】
0006510485.tif 000162
であり；あるいは
（ｂ）Ｌは、
【化１６２】
0006510485.tif 000163
であり、およびＡｒは、Ｒ２がフルオロ、クロロもしくはブロモであることを条件として、
【化１６３】
0006510485.tif 000164
であるか、またはＡｒは、
【化１６４】
0006510485.tif 000165
であり；あるいは
（ｃ）Ｌは、
【化１６５】
0006510485.tif 000166
であり、およびＡｒは、
【化１６６】
0006510485.tif 000167
であり；あるいは
（ｄ）Ｌは、
【化１６７】
0006510485.tif 000168
であり、およびＡｒは、
【化１６８】
0006510485.tif 000169
であるか、またはＡｒは、Ｒ３がＣ１−Ｃ４アルキルであることを条件として、
【化１６９】
0006510485.tif 000170
であり；あるいは
（ｅ）Ｌは、
【化１７０】
0006510485.tif 000171
であり、およびＡｒは、Ｒ２がフルオロ、クロロもしくはブロモであることを条件として、
【化１７１】
0006510485.tif 000172
であるか、またはＡｒは、Ｒ３がＣ１−Ｃ４アルキルであることを条件として、
【化１７２】
0006510485.tif 000173
である。
［０５８０］
１．併用治療法
ＰＲＭＴ５インヒビターと併用投与することができる薬剤としては、次のものがあげられる：化学療法薬（代謝拮抗物質、アルキル化剤、アントラサイクリンなどを含むが、これらに限定されない）；モノクローナル／ポリクローナル抗体（および関連薬物複合体）；エピジェネティックプロセスを標的にする小分子インヒビター（メチル化抑制剤、ヒストンデアセチラーゼインヒビター、ＥＺＨ２を標的にするヒストンメチルトランスフェラーゼインヒビター、ブロモドメインインヒビターなどを含むが、これらに限定されない）、キナーゼ（ＢＴＫ、ＢＣＲ／ＡＢＬ）、プロテオソーム、オートファゴソーム（クロロキン／ラパマイシン）、生存促進性タンパク質（ＢＣＬ２ファミリー）、ＢＲＡＦ、ＭＥＫ、ＪＡＫ／ＳＴＡＴインヒビター、ＥＧＦＲ、ＰＤＧＦ、ＫＩＴ、免疫修飾剤（サイトカイン、負の調節受容体のインヒビター、例えばＫＩＲ）、核酸治療薬（ノンコーディングＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、アンチセンス、ｓｈＲＮＡ、遺伝子療法薬などを含むが、これらに限定されない）。ＰＲＭＴ５と併用することができる他の処置方法としては、放射線および外科手術があげられる。
【０３１７】
したがって、１つの態様において、本発明は、１つ以上の開示化合物と１つ以上の追加の薬剤とを含む医薬組成物に関する。さらなる態様において、本発明は、ＰＲＭＴ５活性に関係付けられる障害を処置するための方法であって、治療有効量の１つ以上の開示化合物および有効量の１つ以上の追加の薬剤の投与を含む方法に関する。
【０３１８】
開示する併用治療法を、開示する化合物、組成物、キットおよび使用に関して用いることができることは理解される。
【０３１９】
２．医薬品の製造
１つの態様において、本発明は、１つ以上の開示化合物またはその医薬的に許容される塩または開示する製造方法の生成物を含む医薬品の調製方法に関する。さらなる態様において、前記１つ以上の化合物は、開示する製造方法の生成物である。
【０３２０】
さらなる態様において、本発明は、１つ以上の開示化合物またはその医薬的に許容される塩を含む医薬品に関する。さらなる態様において、前記１つ以上の化合物は、開示する製造方法の生成物である。
【０３２１】
開示する方法を、開示する化合物、生成物および医薬組成物を用いて行うことができることは理解される。開示する方法を、開示する使用方法に関して用いることができることも理解される。
【０３２２】
３．化合物の使用
開示する化合物および生成物の使用も提供する。１つの態様において、本発明は、少なくとも１つの開示化合物またはその医薬的に許容される塩の使用に関する。さらなる態様において、使用する化合物は、開示する製造方法の生成物である。
【０３２３】
さらなる態様において、前記使用は、医薬品として使用するための、治療有効量の開示化合物もしくは開示する方法の生成物、またはその医薬的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形を含む医薬組成物を調製するためのプロセスに関する。
【０３２４】
さらなる態様において、前記使用は、治療有効量の開示化合物もしくは開示する方法の生成物、またはその医薬的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形を含む医薬組成物を調製するためのプロセスであって、医薬的に許容される担体を治療有効量の前記化合物または開示する製造方法の前記生成物と均質混合する前記プロセスに関する。
【０３２５】
開示する使用を、開示する化合物、開示する製造方法の生成物、方法、組成物およびキットに関して用いることができることは理解される。
【０３２６】
Ｆ．キット
１つの態様において、本発明は、少なくとも１つの開示化合物またはその医薬的に許容される塩と次のもののうちの１つ以上とを備えているキットに関する：
（ａ）ＰＲＭＴ５活性を増加させることが公知の少なくとも１つの薬剤；
（ｂ）ＰＲＭＴ５活性を減少させることが公知の少なくとも１つの薬剤；
（ｃ）無制御細胞増殖障害を処置することが公知の少なくとも１つの薬剤；
（ｄ）無制御細胞増殖障害のリスクを増加させることが公知の少なくとも１つの薬剤；
（ｅ）良性血液疾患を処置することが公知の少なくとも１つの薬剤；
（ｄ）良性血液疾患のリスクを増加させることが公知の少なくとも１つの薬剤；
（ｇ）ＰＲＭＴ５活性に関連付けられる障害を処置するための取扱説明書；
（ｈ）無制御細胞増殖障害を処置するための取扱説明書；または
（ｉ）良性血液疾患を処置するための取扱説明書；または
（ｊ）癌の処置に関連して前記化合物を投与するための取扱説明書。
【０３２７】
さらなる態様において、前記キットは、開示化合物または開示する製造方法の生成物を備えている。さらなる態様では、前記少なくとも１つの化合物と前記少なくとも１つの薬剤を共に製剤化する。なおさらなる態様では、前記少なくとも１つの化合物と前記少なくとも１つの薬剤を一緒に包装する。
【０３２８】
前記キットは、他の成分と一緒に包装された、共に製剤化されたおよび／または共送達される化合物も備えることができる。例えば、薬物製造業者、薬物再販業者、医師、調剤店または薬剤師は、患者に送達するための開示化合物および／または生成物と別の成分とを備えているキットを提供することができる。
【０３２９】
開示するキットを、開示する化合物、生成物および医薬組成物から調製することができることは理解される。開示するキットを、開示する使用方法に関して用いることができることも理解される。
【実施例】
【０３３０】
Ｇ．実施例
以下の実施例は、ここで特許請求する化合物、組成物、物品、デバイスおよび／または方法の製造および評価方法についての完全な開示および説明を当業者に与えるために提示するものであり、単に本発明の例示を意図したものであり、本発明者らが本発明者らの発明と考えるものの範囲を限定することを意図したものではない。数値（例えば、量、温度など）に関して正確を期すよう努めたが、多少の誤差および偏差を考慮しなければならない。別段の指示がない限り、部は、重量部であり、温度は、℃での温度または周囲温度であり、および圧力は、大気圧またはほぼ大気圧である。
【０３３１】
本発明の化合物のいくつかの調製方法を以下の実施例で例証する。出発原料および必要中間体は、場合によっては市販されており、または出発原料および必要中間体を文献手順に従って、もしくは本明細書において例証するように調製することができる。本発明を例証するために本明細書に実施例を与えるが、いかなる点においても本発明を限定すると解釈すべきでない。実施例は、ＩＵＰＡＣ命名法に従って、概して遊離塩基形態で描写する。本発明を例証するために本明細書に実施例を与えるが、いかなる点においても本発明を限定すると解釈すべきでない。
【０３３２】
１．実験法
ａ．細胞株および初代芽細胞
ＭＶ４−１１およびＴＨＰ−１細胞（ＡＴＣＣ、バージニア州マナッサス）を、１０％ウシ血清を補足したＲＰＭＩ  １６４０培地で維持し、Ｋａｓｕｍｉ−１細胞を２０％ＲＰＭＩ中で培養した。ＡＭＬ患者からの芽細胞を、２０％ウシ胎仔血清と、１％ＨＥＰＥＳバッファーと、ＩＬ−３、ＩＬ−６およびＳＣＦを含有する１ｘ  ＳｔｅｍＳｐａｎサイトカインカクテルＣＣ１００（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カナダＢＣ州バンクーバー）とを補足したＲＰＭＩ１６４０培地で維持した。全ての細胞を３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。ＡＭＬ患者からの初代芽細胞は、オハイオ州立大学（ＯＳＵ）で処置した患者から採集したアフェレーシス血液試料から得、ＯＳＵ白血病組織バンク（Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｂａｎｋ）において保管した。ヘルシンキ宣言に従って、ＯＳＵ治験審査委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄ）承認プロトコルのもとで調査研究に細胞を使用するためのインフォームドコンセントを各患者から得た。
【０３３３】
ｂ．プラスミドおよび一過性トランスフェクション
ＰＲＭＴ５  ｃＤＮＡおよびｓｈＲＮＡを、それぞれ、ｐＣＤＨ１−ＭＳＣＶ−ｇｒｅｅｎ−ｐｕｒｏ−ｃＤＮＡおよびｐＧｒｅｅｎＰｕｒｏ  ｓｈＲＮＡクローニング用レンチベクター（ＳＢＩ  ｓｙｓｔｅｍ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）にクローニングした。ＰＲＭＴ５に特異的なＯｎ−ｔａｒｇｅｔ  ｐｌｕｓ  ｓｉＲＮＡ−ＳＭＡＲＴプール、ＳＰ１およびオフターゲットスクランブル対照をＤｈａｒｍａｃｏｎ（コロラド州ラファイエット）から得た。ロックド核酸（ＬＮＡ）−抗ｍｉＲ−２９ｂインヒビター（ｈｓａ−ｍｉＲ２９ｂ  ｍｅｒｃｕｒｙ  ＬＮＡ  ｍｉｃｒｏＲＮＡ  Ｐｏｗｅｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ；Ｅｘｉｑｏｎ、マサチューセッツ州ウォーバーン）を使用してｍｉＲ−２９ｂをノックダウンし、Ｐｒｅ−ｍｉＲ（商標）ｍｉＲＮＡ  Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ（Ａｍｂｉｏｎ）を使用してｍｉＲ−２９ｂを過発現させた。マイクロＲＮＡトランスフェクションは、各処置のための適正なスクランブル陰性対照を含むｓｉＰＯＲＴ  ＮｅｏＦＸトランスフェクション試薬（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって行った。遺伝子ノックダウンおよび過発現は、Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ  Ｋｉｔ（Ａｍａｘａ、メリーランド州ウォーカーズビル）を使用するエレクトロポレーションまたはレンチウイルスによる感染（ＳＢＩ  ｓｙｓｔｅｍ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ試薬および方法）いずれかによって行った。市販ＰＫＣ４１２（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州セントルイス、＃Ｍ１３２３）およびＦＬＴ３インヒビター（ＣＡＬＢＩＯＣＨＥＭ  ＃３４３０２０）は購入したが、ＨＬＣＬ−６１（Ｃ１２）化合物は、オハイオ州立大学薬学部Ｈｏｎｇｓｈａｎ  Ｌａｉが調製／合成した。
【０３３４】
ｃ．ウエスタン免疫ブロットおよび免疫沈降（ＩＰ）分析
細胞ペレットをＲＩＰＡバッファー（１％ＮＰ−４０、０．１％ＳＤＳ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ８．０）に２０分間懸濁させることによって全細胞溶解物を調製し、その後、１Ｘ  ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ＥＤＴＡ  ｆｒｅｅプロテアーゼインヒビター（Ｒｏｃｈｅ）および１Ｘ  ＰｈｏｓＳｔｏｐ（Ｒｏｃｈｅ）を補足した。溶解物を４〜２０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離し、ＰＶＤＦ膜（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ニュージャージー州ピスカタウェイ）に転写した。０．１％Ｔｗｅｅｎ  ２０を含有する１ｘ  ＴＢＳ中の５％ミルクまたはＢＳＡで１時間、室温で振盪しながら膜をブロックした。ＡＣＴＩＮ、ＧＡＰＤＨおよびＦＬＴ３（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カリフォルニア州サンタクルーズ）、Ｐ６５（Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）、ＰＲＭＴ５およびＳＰ１（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、Ｈ４Ｒ３、Ｈ３Ｒ８、Ｈ３およびＨ４（Ａｂｃａｍ）に対する一次抗体を５％ミルクまたはＢＳＡで１：１０００または１：２０００希釈し、１〜２時間、室温でインキュベートした。１ｘ  ＴＢＳ−Ｔを使用して膜を洗浄し、５％ミルクまたはＢＳＡを含有する１ｘ  ＴＢＳ−Ｔで希釈したＨＲＰ標識二次抗体とともにインキュベートし、洗浄し、ＳｕｐｒｅＳｉｇｎａｌ  Ｗｅｓｔ  Ｄｕｒａ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して現像した。全細胞溶解物（少なくとも５００μｇ）を使用して、Ｃａｔｃｈ  ａｎｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ｖ２．０  Ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）と、ＰＲＭＴ５、ＳＰ１、ｐ６５に対する約４μｇの抗体と、陰性対照としての１μｇの正常ＩｇＧ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）とを使用することによりタンパク質複合体をプルダウンした。変性されたプルダウン試料を、免疫検出にＴｒｕｅＢｌｏｔ  ＩＰ二次抗体（Ｒｏｃｋｌａｎｄ）を使用したことを除いて通常のウエスタンブロット法に付した。
【０３３５】
ｄ．コロニー形成アッセイおよび細胞生存率分析
クローン形成アッセイは、半固体メチルセルロース培地（ＭｅｔｈｏＣｕｌｔ、Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中の１ｘ１０３細胞／ｍＬをプレーティングすることによって構成した。倒立顕微鏡を使用して１０〜１４日後にコロニーを計数した。成長阻害アッセイは、比色ＭＴＳアッセイを用いて測定した：５ｘ１０４細胞を異なる濃度のＣ１２の存在下、９６ウェルプレートにおいて１００μＬの最終量で２４、４８および７２時間、３７℃でプレーティングした。その後、テトラゾリウム化合物［３−（４，５−ジメチル−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム、分子内塩；ＭＴＳ］と電子結合試薬（フェナジンエトスルファート；ＰＥＳ）を含有する、２０μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６Ｗ  ＡＱｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ウィスコンシン州マディソン）を各ウェルに添加した。３７℃で１〜４時間のインキュベーション中に、４９０および６９０ｎｍで光学密度を測定した。細胞生存率を対照試料および６９０ｎｍの参照バックグラウンド波長を基準にして算出した。少なくとも３回の独立した実験を行った。１ｘ１０５濃度で細胞をプレーティングした後１２日より長い間、トリパンブルー排除および倒立顕微鏡を使用して生細胞を計数することによって成長曲線アッセイを行った。
【０３３６】
ｅ．フローサイトメトリーおよび蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）
細胞（１ｘ１０６）を洗浄し、４０μＭフィルター（ＢＤ）に通し、その後、５μＬのアネキシンＶ抗体（アポトーシス検出用）またはＣＤ１１ｂ抗体（成熟検出用）を含有するまたは含有しない２００μＬの結合バッファーに再懸濁させた。１５分のインキュベーション後、細胞をＰＢＳで洗浄し、５００μＬのフローバッファーに再懸濁させ、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析した。アポトーシス検出のために、５μＬのヨウ化プロピジウム（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を細胞に添加した後、フローサイトメトリーを実行した。細胞を濾過し、２％仔ウシ血清を補足した氷冷ＰＢＳで２回洗浄し、ＦＡＣＳバッファーに再懸濁させた後、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ａｒｉａ計器でＧＦＰ陽性細胞についての選別を行った。
【０３３７】
ｆ．クロマチン免疫沈降（ＣｈＩＰ）
１％ホルムアルデヒド中で１０分間、室温で細胞をインキュベートし、氷冷１Ｍグリシンで反応を停止させることによって、架橋クロマチンを調製した。細胞を１％ＳＤＳ溶解バッファー中で超音波処理し、せん断されたクロマチンを使用して、ＳＰ１、ｐ６５（ＣｈＩＰグレード  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、Ｈ４Ｒ３ｍｅ２、Ｈ３Ｒ８ｍｅ２（Ａｂｃａｍ）に対する抗体ならびに陽性対照としてのＲＮＡ  Ｐｏ１  ＩＩおよび陰性対照としての正常ＩｇＧ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）使用することによりタンパク質／ＤＮＡ複合体をプルダウンした。ＱＩＡｑｕｉｃｋ  ＰＣＲ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して逆架橋ＤＮＡ（ｒｅｖｅｒｓｅ  ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｅｄ  ＤＮＡ）を精製し、ＳＹＢＥＲグリーン取り込みと、ＦＬＴ３プロモーター領域（ｓｅｑｕｅｎｃｅＦ：Ｒ：）またはｍｉＲ−２９ｂエンハンサー領域（ｓｅｑｕｅｎｃｅＦ：Ｒ：）いずれかのために設計されたプライマーとを使用して定量的リアルタイムＰＣＲを行った。インプットしたＤＮＡ量を基準にして、および陰性対照ＩｇＧの発現値と比較して、ＤＮＡシグナルを算出した。
【０３３８】
ｇ．ＲＮＡ単離およびリアルタイムＰＣＲ
ＴｒｉＺｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して全ＲＮＡを抽出し、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＩＩＩ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して逆転写に付した。得られたｃＤＮＡを用いて、市販のＴａｑＭａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙプライマーおよびプローブならびに７９００ＨＴ  Ｆａｓｔ  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、定量的リアルタイムＰＣＲを行った。ＴａｑＭａｎ  ＭｉｃｒｏＲＮＡ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて作った逆転写産物を使用して、成熟マイクロＲＮＡレベルを定量した。
【０３３９】
ｈ．ルシフェラーゼレポーターアッセイ
ＦＬＴ３のプロモーター領域（配列番号１：ＣＴＴＡＴＴＧＣＡＡＡＧＡＡＡＡＴＡＡＴＡＡＴＡＡＴＴＴＴＣＡＡＣＴＣＧＡＡＡＡＡＴＴＡＴＧＣＧＡＴＧＡＡＧＡＡＣＡＡＧＡＡＣＴＡＴＴＧＡＧＣＧＧＡＴＧＡＴＴＣＧＣＡＡＣＡＴＣＣＴＣＴＧＧＧＡＴＧＴＡＴＴＴＴＣＴＧＴＧＴＧＴＴＴＴＧＴＴＴＴＧＡＡＧＧＣＴＧＴＴＴＧＴＴＡＡＣＣＴＣＣＣＴＡＡＴＴＧＣＣＴＴＧＧＴＴＧＡＣＡＴＴＧＡＡＡＣＣＣＴＧＣＣＴＧＴＴＴＴＴＣＴＴＧＡＴＣＣＣＧＣＣＧＣＴＧＡＣＴＧＧＧＴＣＣＴＧＡＧＣＡＴＣＣＴＡＧＧＡＧＡＴＧＧＡＧＧＣＡＧＡＧＡＣＡＡＡＧＧＡＡＡＴＣＡＧＴＣＣＡＣＡＡＴＴＡＡＧＡＡＴＧＧＡＡＴＧＧＴＴＣＴＴＡＡＴＧＧＡＡＴＧＣＴＣＧＣＣＴＧＴＧＣＧＣＴＧＧＣＧＧＧＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣＧＴＧＣＣＧＡＧＣＧＧＡＴＴＣＡＧＣＧＣＣＴＴＴＣＴＣＡＧＧＧＣＣＴＣＡＡＡＧＡＴＣＣＣＡＧＣＧＣＡＣＴＡＧＧＡＧＧＧＴＧＧＴＴＴＧＴＧＧＣＴＣＣＣＴＧＣＡＧＴＣＣＣＣＡＣＧＣＣＣＣＧＧＡＴＣＣＡＡＡＣＧＡＣＡＧＡＧＴＴＣＧＧＧＧＡＣＴＣＡＣＡＧＧＧＧＣＡＧＣＡＡＧＧＣＧＧＣＡＧＡＧＣＣＧＣＧＧＡＧＣＣＡＧＴＧＣＡＡＣＴＴＣＴＣＣＧＧＣＧＧＧＡＣＣＧＣＧＣＣＣＡＡＴＣＴＴＣＣＣＣＧＣＣＧＣＡＧＴＣＧＧＧＧＡＧＣＣＣＣＧＧＧＧＧＣＣＧＣＣＧＡＧＣＡＣＡＧＧＣＴＧＣＧＧＡＣＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＡＣＧＴＧＧＧＣＴＣＧＧＣＴＧＣＡＧＣＧＣＴＧＣＧＣＣＡＧＧＣＡＣＣＧＧＣＴＧＣＴＣＧＧＣＴＣＴＧＣＣＣＡＡＣＣＴＣＴＣＣＧＣＴＣＣＣＧＣＣＴＣＧＧＴＣＣＣＴＧＣＣＴＣＴＧＧＧＧＡＧＡＧＧＧＴＴＣＣＴＣＣＣＣＣＣＴＴＣＣＡＣＴＴＴＧＣＡＣＣＡＧＴＣＣＧＡＧＧＧＡＡＴＴＴＧＣＧＧＴＣＧＧＴＧＡＣＧＣＧＣＡＴＣＣＴＴＡＡＧＡＧＡＧＣＣＡＣＣＴＧＣＡＧＣＧＣＧＡＧＧＣＧＣＧＣＣＧＣＴ．ＣＣＡＧＧＣＧＧＣＡＴＣＧＣＡＧＧＧＣＴＧＧＧＣＣＧＧＣＧＣＧＧＣＣＴＧＧＧＧＡＣＣＣＣＧＧＧＣＴＣＣＧＧＡＧＧＣＣＡＴＧＣＣＧＧＣＧＴＴＧＧＣＧＣＧＣＧＡＣＧＧＣＧＧＣＣＡＧＣＴＧＣＣＧＣＴＧＣＴＣＧＧＴＡＡＧＧＣＣＣＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＡＧＣＣＣＣＴＣＧＣＧＧＴＣＣＣＴＣＡＧＣＣＣＣＣＡＣＣＣＣＧＣＡＧＴＧＴＧＧＡＣＣＣＧＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＴＣＣＴＣＣＧＧＣＣＣＡＧＣＣＧＣＣＴＣＧＣＴＣＣＴＣＣＣＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＣＴＴＣＣＡＴＴＧＣＣＴＣＣＣＧＣＧＣＣＣＣＴＣＣＣＣＴＣＴＴＴＣＧＣＧＣＣＣＴＣＣＧＧＡＣＴＣＧＣＣＣＡＣＴＡＣＴＴＧＣＣＴＧＣＧＧＣＣＣＣＧＧＣＧＴＴＴＣＣＣＡＣＣＣＣＧＣＧＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＴＣＴＴＣＴＣＣＧＡＡＧＴＣＴＣＴＣＣ）をｐＧＬ４．１１［ｌｕｃ２Ｐ］ベクターにクローニングした。Ｃ１２の存在下または不在下で、空のベクターまたはＦＬＴ３−プロモータールシフェラーゼプラスミドおよびウミシイタケをＴＨＰ−１細胞にトランスフェクトした。Ｄｕａｌ−Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、ホタルルシフェラーゼおよびウミシイタケルシフェラーゼ活性を測定した。
【０３４０】
ｉ．ＴＨＰ−１異種移植マウスモデル
ＰＲＭＴ５過発現性ＡＭＬ異種移植マウスモデルを産生するために、ＧＦＰで印を付けたＰＲＭＴ５過発現性レンチウイルスをＴＨＰ−１細胞に形質導入した。陽性感染細胞（１ｘ１０６）を、４〜６週齢非肥満糖尿病性重症複合免疫不全γ（ＮＳＧ）マウス（ＮＯＤ．Ｃｇ−ＰｒｋｄｃｓｃｉｄＩｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊ１／ＳｚＪ、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、メイン州バーハーバー）に尾静脈経由で注射した。１０週間後、動物を屠殺し、血液、骨髄、脾臓、肝臓および胸骨をＲＮＡ、タンパク質単離、ライト・ギムサ染色および病理学用に処理した。マウス生存率アッセイを同様に、しかし２ｘ１０６ＴＨＰ−１細胞を注射することによって行い、病気のマウスを採点し、ＡＭＬ徴候が発現し次第、屠殺した。
［０５８１］
ｊ．免疫蛍光アッセイ
Ｉ型マーク（Ｈ４（ＡＭｅ２）Ｒ３）と比較してＩＩ型ＰＲＭＴエピジェネティックマーク（Ｈ４（ＳＭｅ２）Ｒ３）の存在についてスクリーニングするための免疫蛍光アッセイ。細胞株を１４の化合物すべてとともに２４時間インキュベートした。２４時間後、細胞を固定し、ブロックし、ヒストンＨ４Ｒ３の対称ジメチル化および非対称ジメチル化それぞれに対して特異的なｍＡｂで処置した。Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８標識二次Ａｂをヒストンマークの染色に使用した（緑色）。Ｄｒａｑ５を使用して核を染色した（青色）。
［０５８２］
ｋ．抗増殖アッセイ
ＭＴＳ増殖アッセイは、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６（商標）Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ウィスコンシン州マディソン）に従って行った。５ｘ１０５細胞を９６ウェルプレートの各ウェルに３７℃でプレーティングし、２４、４８および７２時間の時点で増殖についてアッセイした。対照の５０％での増殖シグナルを成長のＩＣ５０として使用した。
［０５８３］
ｌ．アポトーシス誘導アッセイ
フローサイトメトリーによって分析した。アネキシン−Ｖ−ＦＩＴＣおよびヨウ化プロピジウム（ＰＩ）を製造業者（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の取扱説明書に従って使用して２４および４８の時点でフローサイトメトリーにより細胞生存率も測定した。
［０５８４］
ｍ．ＰＲＭＴ５媒介Ｈ４Ｒ３メチル化の阻害
ヒストンメチル化をＤＭＳＯおよび１〜４０μＭインヒビター化合物の存在下で行った。行った第一のアッセイは、ＰＲＭＴ５のみでの活性を探求して、１５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．９）と１００ｍＭ  ＫＣｌと５ｍＭ  ＭｇＣｌ２と２０％グリセロールと１ｍＭ  ＥＤＴＡと０．２５ｍＭ  ジチオトレイトールと０．５ｍＭ  フェニルメチルスルホニルフルオリドと２．７５μＣｉのＳ−［３Ｈ］アデノシルメチオニン（ＳＡＭ）（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．，Ｉｎｃ．）とを含有する２５μＬの反応混合物中の、２μｇのＨｅＬａ  Ｓ３コアヒストンおよび５００ｎｇの組換えＰＲＭＴ１（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  カタログ番号１４−４７４）、５００ｎｇの組換えＰＲＭＴ４（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  カタログ番号１４−５７５）、５μＬのアフィニティー精製ｈＳＷＩ／ＳＮＦ会合ＰＲＭＴ５または１５μΛのアフィニティー精製ｈＳＷＩ／ＳＮＦ会合Ｆ１−ＰＲＭＴ７を使用することによりＩＣ５０を算出した。３０℃での１．５時間のインキュベーション後、反応混合物をＷｈａｔｍａｎ  Ｐ−８１濾紙にスポッティングし、１０ｍＬの０．１ｍＭ炭酸ナトリウムバッファー（ｐＨ９．０）で５回洗浄して、取り込まれていない［３Ｈ］ＳＡＭを除去し、メチル化されたペプチドをシンチレーション計数によって検出した。
【０３４１】
ｎ．ＯＰＳＣＣにおけるＰＲＭＴ５インヒビターのインビボ評価
２００２年から２００８年にオハイオ州立大学Ｊａｍｅｓ  Ｃａｎｃｅｒ  ＨｏｓｐｉｔａｌおよびＳｏｌｏｖｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅで処置した患者から得た２２３の外科処置口腔咽頭・頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）試料において、ＰＲＭＴ５およびサイクリンＤ１発現を評定した。パラギン（ｐａｒａｇｇｉｎ）包埋腫瘍からのコアを組織マイクロアレイで整列させた。アレイの切片をＰＲＭＴ５およびサイクリンＤ１について染色した。これらのバイオマーカーの発現を生存期間、ｐ１６ステータス（ヒト乳頭腫ウイルスの代用マーカー）ならびに他の臨床および病理学的変数と相関させた。
【０３４２】
全生存期間を外科手術日から死亡日までの時間と定義した。最終観察日に生存していた患者を生存期間解析のために検定した。危険率および９５％信頼区画（ＣＩ）を算出するために、ならびに全生存期間とＰＲＭＴ５、サイクリンＤ１およびｐ１６との関係を探索するために、単変量Ｃｏｘ回帰モデルを使用した。カテゴリー変数間の関連性をカイ二乗検定によって評定した。ＳＡＳバージョン９．２（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、ノースカロライナ州ケアリー）で解析を行った。
［０５８５］
ｏ．開示化合物の一般合成手順
カルバゾール−アルデヒド（５．５ｍｍｏｌ）と対応するアミン（５ｍｍｏｌ）を１，２−ジクロロエタン（１５ｍＬ）中で混合した。アミンの塩酸塩を使用する場合、同量のトリエチルアミンを反応混合物に添加し、塩を中和した。次いで、反応混合物をトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（７ｍｍｏｌ）で処理し、室温、Ｎ２雰囲気下で、（ＴＬＣによって判定して）反応が完了するまで撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を使用して反応を停止させた。反応生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。次いでその抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ）によって精製して、純粋な生成物を得た（収率：５２〜７０％）。
［０５８６］
（１）ＨＬＣＬ−１の合成
【化１７３】
0006510485.tif 000174
先ず、水素化ナトリウム（１．２ｍｍｏｌ）をＤＭＦに撹拌しながら懸濁させた。次いで、カルバゾール（０．６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液を水素化ナトリウムの懸濁液に室温で滴下した。１時間後、４−（メタンスルホニル）ベンジルブロミド（０．６ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した。ＴＬＣによって反応をモニターし、水によって停止させた。ＥｔＯＡｃを使用して生成物を抽出した。併せた有機層を水によって洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝２：１）によって精製してＨＬＣＬ−１を得た（収率：８２％）。
［０５８７］
（２）ＨＬＣＬ−６およびＨＬＣＬ−７の合成
【化１７４】
0006510485.tif 000175
塩酸４−メチルスルホニルアニリン（５ｍｍｏｌ）を撹拌しながらＣＨ２Ｃｌ２に懸濁させた。トリエチルアミン（５ｍｍｏｌ）をその懸濁液に添加し、得られた反応混合物を室温で３０分間撹拌した。反応物を氷水浴で冷却した。ＣＨ２Ｃｌ２中のＮ，Ｎ０−チオカルボニルジイミダゾール（５ｍｍｏｌ）をその反応混合物に滴下した。次いで、反応混合物を室温で１２時間撹拌させておいた（ＴＬＣを用いて反応をモニターした）。減圧下で溶媒を除去し、その粗製生成物をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝２：１）によって精製して、イソチオシアン酸４−メチルスルホニルを得た（収率：７０％）。３−アミノ−９−エチルカルバゾール（３．８５ｍｍｏｌ）を使用して、還流させながら、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中のイソチオシアン酸４−メチルスルホニル（３．５ｍｍｏｌ）と反応させた。１時間後、反応は完了し、真空濾過によってチオ尿素生成物−ＨＬＣＬ−６を得た（収率：８１％）。さらにＨＬＣＬ−６を酸化させて、ＨＬＣＬ−７を得た。メタ過ヨウ素酸ナトリウム水溶液（２．７５ｍｍｏｌ）をＨＬＣＬ−６（２．５ｍｍｏｌ）とＤＭＦ（２ｍＬ）と水（２ｍＬ）と水酸化アンモニウム溶液（３．７５ｍｍｏｌ）の撹拌混合物に滴下した。反応混合物を６０℃に加熱した。１時間後、反応は完了し、１０％ＮａＯＨ水溶液（１ｍＬ）を添加した。室温でさらに２０分間、撹拌し続けた。その粗製生成物を濾過し、水で洗浄し、乾燥させた。カラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ＝１４０：７：１）を利用して純粋なグアニジン−ＨＬＣＬ−７を得た。
［０５８８］
（３）ＨＬＣＬ−１２の合成
【化１７５】
0006510485.tif 000176
３−カルボキシアルデヒド−９−エチルカルバゾールとｐ−（メチルスルホニル）フェニルヒドラジンの縮合によってＨＬＣＬ−１２を得る。手順は、式Ｉの化合物の合成についての一般手順と同じである。
［０５８９］
（４）ＨＬＣＬ−１７および２０の合成
【化１７６】
0006510485.tif 000177
四酸化オスミウム（０．０６ｍｍｏｌ）とＮ−メチルモルホリンＮ−オキシド（０．６６ｍｍｏｌ）とＴＨＦ（５ｍＬ）と水（２．５ｍＬ）の混合物に室温でＨＬＣＬ−６４（０．６ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、その反応混合物を８５℃に加熱し、一晩、Ｎ２雰囲気下で撹拌した。得られた混合物をセライトのパッドに通して濾過した。フィルターケーキをＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ＝２０：１）によって精製してＨＬＣＬ−１７および２０を得た。
［０５９０］
（５）ＨＬＣＬ−２３の合成
【化１７７】
0006510485.tif 000178
ＨＬＣＬ−２３のアルデヒド前駆体を、アリールアミノアセトアルデヒドジエチルアセタールの形成、続いての加水分解によって合成した。乾燥ジオキサン（５０ｍＬ）中の水素化ナトリウム（１００ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液を室温でカルバゾール（２５ｍｍｏｌ）で処理した。次いで、その反応混合物を加熱して還流させた。４時間後、２−ブロモアセタールアルデヒドジエチルアセタール（５２．５ｍｍｏｌ）をその反応混合物に還流を維持しながら滴下した。さらに３６時間、反応を継続した。過剰な水素化ナトリウムをエタノールによって注意深く破壊した。得られた反応混合物を水に注入し、ヘキサンによって抽出した。併せた有機層を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝１５：１）によって精製して、純粋なジエチルアセタール生成物を薄黄色の油として得た（収率：９２％）。純粋なジエチルアセタール（２３ｍｍｏｌ）をアセトン／水（３０ｍＬ：６ｍＬ）に撹拌しながら溶解した。ｐ−トルエンスルホン酸（９ｍｍｏｌ）をその反応混合物に添加し、次いでそれを加熱して還流させた。４時間後、反応混合物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃによって抽出した。次いで、反応物を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝６：１）によって精製してＨＬＣＬ−２３を得た（収率：７３％）。
［０５９１］
（６）ＨＬＣＬ−６３およびＨＬＣＬ−６４の合成
【化１７８】
0006510485.tif 000179
トリフェニルホスフィン（５ｍｍｏｌ）と４−（メチルスルホニル）ベンジルブロミド（５ｍｍｏｌ）を１０ｍＬクロロホルム中で混合して撹拌した。その反応混合物をＮ２雰囲気下で加熱して還流させた。４時間の還流後、反応混合物を冷エチルエーテルに注入した。白色沈殿を濾過し、エーテルで洗浄し、真空下で乾燥させて収量を得た（収率：８０％）。次いで、その合成されたイリド（４ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（１５ｍＬ）中のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（４ｍｍｏｌ）と混合し、Ｎ２雰囲気下で加熱して還流させた。３時間後、乾燥ＴＨＦ中のカルバゾール−９−アセトアルデヒド（４ｍｍｏｌ、その合成法は上で説明した）を反応混合物に添加し、反応をさらに２時間継続した。ＴＬＣは、反応が完了したことを示した。その反応混合物を真空下で濾過し、濃縮した濾液をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝３：１）によって精製した。ＨＬＣＬ−６３およびＨＬＣＬ−６４をフラッシュクロマトグラフィーによって分離した。ＨＬＣＬ−６３およびＨＬＣＬ−６４の収率は、それぞれ４８％および４０％であった。
［０５９２］
（７）ＨＬＣＬ−６５の合成
【化１７９】
0006510485.tif 000180
ＨＬＣＬ−６５のアルデヒド前駆体を、３−カルボキシアルデヒド−９−エチルカルバゾールの臭素化によって合成した。Ｎ−ブロモスクシンイミド（１１ｍｍｏｌ）を室温、クロロホルム／ＡｃＯＨ（３０ｍＬ／３０ｍＬ）中で３−カルボキシアルデヒド−９−エチルカルバゾール（１０ｍｍｏｌ）と反応させた。１８時間の撹拌後、水で反応を停止させた。ＣＨ２Ｃｌ２を抽出に使用した。併せた有機層を水および飽和食塩水で洗浄した。次いで、その得られた有機溶液を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝１０：１）によって精製して、純粋な生成物を得た（収率：８２％）。
［０５９３］
（８）ＨＬＣＬ−６６の合成
【化１８０】
0006510485.tif 000181
ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の２’−メトキシアセトフェノン（１．１ｍｍｏｌ）および３−カルボキシアルデヒド−９−エチルカルバゾール（１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＫ２ＣＯ３（２．２ｍｍｏｌ）を添加した。その反応混合物を加熱して還流させた。１２時間後、反応は完了し、ＭｅＯＨを蒸発させた。残留物をＥｔＯＡｃ／Ｈ２Ｏ（４：１）に溶解した。有機層を食塩水で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝６：１）によって精製して生成物を得た（収率９５％）。
【０３４３】
２．ＰＲＭＴ５活性の小分子インヒビターの産生
クロマチン再構築複合体および関連コリプレッサー、例えばヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼおよびタンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ５（ＰＲＭＴ５）は、腫瘍サプレッサー（ＴＳＧ）遺伝子発現のサイレンシングに関与し、リンパ様細胞の形質転換の一因となる。マントル細胞（ＭＣＬ）およびＥＢＶ駆動リンパ腫においてＰＲＭＴ５過発現が観察されており、ヒストンデアセチラーゼ２（ＨＤＡＣ２）、メチル−ＣｐＧ結合ドメインタンパク質２（ＭＢＤ２）およびＤＮＡメチルトランスフェラーゼ３ａ（ＤＮＭＴ３ａ）と協奏的に作用して、抗癌活性を有する遺伝子をサイレンシングさせることは証明されている。そのようなエピジェネティック調節異常にはＨＤＡＣ酵素を阻害する薬物（ＨＤＡＣ−Ｉ）またはＤＮＡメチル化を防止する薬物を用いて取り組まれており、この戦略は、血液悪性腫瘍患者を処置する臨床試験において現在検査されている。単剤としてのこれらの化合物の活性は限られており、それ故、エピゲノムを標的にする新規併用アプローチの発見および開発は、重要であり得る。
【０３４４】
ＰＲＭＴ５は、ヒストンタンパク質（Ｈ４Ｒ３およびＨ３Ｒ８）上のアルギニン（Ｒ）残基の対称ジメチル化（Ｓ２Ｍｅ）によって肝要な調節遺伝子の転写をサイレンシングさせ、他のコレプレッサー酵素、例えばＨＤＡＣおよびメチル結合ドメインタンパク質の活性と連携するとより効率的に作用する、ＩＩ型ＰＲＭＴ酵素である（Ｋａｒｋｈａｎｉｓ，Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．３６，６３３−４４１）。ＣｈＩＰ−ｓｅｑ研究により、Ｈ４Ｒ３は、研究された２０のヒストンメチル化部位の中で最も大域抑制的なエピジェネティックマークであることが判明した。ＰＲＭＴ５は、リンパ腫形成に大いに関係のある、ＲＮＡプロセッシング、転写調節およびシグナル伝達経路をはじめとする、多種多様な細胞プロセスにも関与する。ＰＲＭＴ５過発現は、ＭＣＬの病理発生にも関係があり、エプスタイン・バーウイルスによって駆動されるＢ細胞形質転換中に発生する重要事象を意味する。ＰＲＭＴ５は、正常な静止または活性化Ｂ細胞では過発現されず、したがって、この疾患の魅了的な治療標的に当たる。
【０３４５】
ＰＲＭＴ５は、血液腫瘍と固形腫瘍の両方において治療標的として同定されており、前記腫瘍の大部分が、現在は不治であり、新たな処置アプローチを必要とする疾患群を含むものである。有望な化合物は、インビトロおよびインビボ両方の開発プラットフォームで厳密に評価されており、癌における有望な治療標的を選択的に阻害するこの新たな薬物クラスを開発する本発明者らの能力を高めている。この研究に基づき、ＰＲＭＴ５過発現は、癌患者のより攻撃的な臨床挙動およびより不良な全生存期間を随伴する発癌プロセスである。ＰＲＭＴ５発現を阻止するためにｓｉＲＮＡ分子を使用する研究は、癌においてＰＲＭＴ５を阻害する実験的治療アプローチを支持するが、ＲＮＡベースの治療薬の使用は、初期開発段階にあり、現在は実行できない。そのエピジェネティックマークのＰＲＭＴ５過発現および過剰メチル化は、ゲノム規模でのクロマチンおよび遺伝子発現変化を誘発し、それが形質転換Ｂ細胞成長を促進すると考えられ、ＰＲＭＴ５活性の阻害は、癌を阻止することができる成長調節ネットワークの再活性化をもたらすことになると考えられる。ＰＲＭＴ５活性の小分子インヒビターの産生は、新たに発見された癌発生経路を標的にすることが可能であることが可能である「ファースト・イン・クラス」薬物の迅速な開発を可能にし、癌患者を処置するための改善された戦略をもたらす。目下の研究は、候補化合物の選択性および効力の最適化、血液腫瘍と固形腫瘍両方におけるこれらの薬物の抗腫瘍活性およびメカニズムの特徴付け、ならびに前臨床癌モデルにおける単独でのおよびエピジェネティックプロセスを標的にする他のＦＤＡ承認薬物と併用でのＰＲＭＴ５の評価に取り組むものである。
【０３４６】
ＰＲＭＴ５小分子インヒビターは、ＩＩ型ＰＲＭＴ酵素を選択的に標的化することおよび癌におけるエピジェネティックプロセスを標的にする他の薬物と相乗作用することが可能である、新たな薬物クラスに当たる。理論により拘束されることを望まないが、この薬物クラスの有用性は、癌と診断された患者の転帰に対して甚大な効果があるだろう。
【０３４７】
フラグメントに基づく医薬品設計（ＦＢＤＤ）は、高親和性薬物を開発するための有効なアプローチとして最近認知されている。既存薬に再度目的を持たせることが、結果的に薬開発失敗のリスクを減少させる。したがって、薬物フラグメントを利用し、それらを互に連結させることにより、ＰＲＭＴ５インヒビターを開発するための魅力的な戦略が得られた。これに段階的に取り組んだ。（Ａ）先ず、フラグメントライブラリーをＦＤＡ承認薬物データベースから構築した。このライブラリーを、化合物フラグメントの異なる特性に従ってさらにカテゴリー分けした。（Ｂ）カルバゾールフラグメントを本発明者らの以前のリード化合物（Ｂａｉｏｃｃｈｉ，Ｒ．；Ｌｉ，Ｃ．；Ｌｉ，Ｐｌ；Ｙａｎ，Ｆ．国際公開第２０１１０７９２３６号Ａ１パンフレット２００１）の中で同定した。興味深いことに、単純カルバゾール誘導体Ｐｈｉｋａｎ０８３（Ｂｏｅｃｋｌｅｒ，Ｆ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｅｔ  Ｕ．Ｓ．Ａ．１０５，１０３６０−１０３６５）は、Ｙ２２０突然変異を有するｐ５３を安定化することが判明した。それ故、Ｐｈｉｋａｎ０８３をフラグメント１として選択し、化合物ライブラリー中の他の芳香族フラグメントをフラグメント２として選択し、続いてこれら２つのフラグメントを一緒にヒトＰＲＭＴ５触媒ドメインの計算モデルにドッキングさせた（図１Ａおよび１Ｂ；表面を透明化して触媒残基を明らかにする；明確にするために、触媒部位面を覆っている残基を削除して、タンパク質表面を生成する）。
【０３４８】
複数リガンド同時ドッキング（ＭＬＳＤ）と呼ばれるドッキング戦略をＡｕｔｏＤｏｃｋ４プラットフォームで実行した。Ｈｙｂｒｉｄ  ＰＳＯアルゴリズムを使用して、マルチリガンド翻訳および回転の自由度増加について検索した。（Ｃ）天然リガンド（ＳＡＨ）に類似したドッキング位置とドッキングスコアの高い順位を示したフラグメントを選び出した（図１Ａ）。２つのフラグメントを連結させるために複数のリンカーを設計し、連結された分子をそのモデルに再びドッキングした。（Ｄ）最後に、フラグメント結合位置を再現し、かつ高順位の結合エネルギーを示す連結分子を、合成候補として選択した（図１Ｂ）。それらの中で、１４の化合物を合成した（表１）。
【表１】
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【０３４９】
このモデルに基づいて、機能性インヒビターは、ＳＡＭ／ＳＡＨ結合ポケット内のアデニン領域、ＳＡＭ／ＳＡＨポケット内のメチオニン領域、ＳＡＭ／ＳＡＨポケットとアルギニンポケットを連結する溝、および／またはＰＲＭＴ５のアルギニンポケットを占有する。この戦略は、ＩＩ型ＰＲＭＴ酵素に特有のものである。このモデルを図２Ａ〜Ｉで説明する。
【０３５０】
理論により拘束されることを望まないが、選択的ＰＲＭＴ５インヒビター上の置換基は、補因子結合ポケット：ＳＡＭアデニン領域；補因子結合ポケット：ＳＡＭ  Ｍｅｔ領域（ＰＨＥ３２７）；接続ポケット：（ＧＬＵ４４４／ＧＬＵ４３５、ＰＨＥ３２７）；および／またはアルギニン基質ポケット（ＴＲＰ５７９との相互作用）のうちの１つ以上と相互作用することができると考えられる。これらの領域およびそのような相互作用を図３で例証する。有効かつ強力なインヒビターは、近接ＳＡＭ（赤色）ドッキング部位、ＳＡＭ結合ポケットとＡＲＧ結合ポケットを接続するトンネル、およびＡＲＧ結合ポケットの一部分を占有できることが認められた。
【０３５１】
３．バイオマーカーとしてのＰＲＭＴ５核発現使用の評価
ＰＲＭＴ５は、発癌性ウイルス、ＥＢＶによって感染されたＢ細胞において発現し、ＥＢＶ駆動Ｂ細胞形質転換に必要とされる。Ｂ細胞（ＰＲＭＴ５について陰性）を発癌性ウイルス、ＥＢＶで感染させると、ＰＲＭＴ５は、感染後４日という早期に過発現される。第８日まで、核内のＰＲＭＴ５レベルは増加し、ＰＲＭＴ５エピジェネティックマークＳ２ＭｅＨ４Ｒ３およびＳ２ＭｅＨ３Ｒ８は、核クロマチン上全体にわたって分布される。ＰＲＭＴ５発現または活性の遮断は、Ｂリンパ球のＥＢＶ駆動不死化を防止し、これは、ＰＲＭＴ５がＢ細胞形質転換に必要とされることを示唆する。ＰＲＭＴ５の生物学的活性は、Ｂ細胞受容体の持続性シグナル伝達を調節する腫瘍サプレッサー遺伝子の転写抑制に関係する。他の例では、ＰＲＭＴ５は、大部分のＣＬＬ患者循環ＣＬＬ細胞において弱く発現される／発現されない。しかし、ＣＬＬが侵襲性のびまん大Ｂ細胞リンパ腫に形質転換する合併症であるリッタートランスフォーメーション（ＲＴ）を最終的に経験する患者のＣＬＬ患者循環Ｂ細胞では発現される。患者がＲＴになる何カ月もまたは何年も前にＰＲＭＴ５を見つけることができ、これは、Ｂ細胞のＥＢＶ感染で誘導されるＰＲＭＴ５同様、ＰＲＭＴ５が必要ＲＴドライバー事象であることを示す。理論により拘束されることを望まないが、この研究は、ＧＢＭ、頭／頸部扁平上皮癌および肺癌バイオマーカーデータとともに、（腫瘍または血液中での循環遺伝子／遺伝子産物としての）ＰＲＭＴ５検出が癌の感受性かつ特異的マーカーとして役立ち得ることを示す。
【０３５２】
ＰＲＭＴ５は、ＣＬＬ初代細胞および細胞株において可変的に発現されるが、静止（ＲＢ）または活性化（ＡＢ）Ｂ細胞には不在である（データを示さない）。ＲＴ前の１０のＣＬＬ患者Ｂ細胞の予備分析は、上昇したＰＲＭＴ５レベルを明示した。これは、ＰＲＭＴ５調節異常がこの状況でのリンパ腫形成に関係し得ることを示唆している（図４）。ＰＲＭＴ５発現は、核においても細胞質においても起こることができる。核ＰＲＭＴ５発現度は、高グレード神経膠腫（ＧＢＭ）患者における全生存期間に反比例することが明らかになった。同様の研究を頭頸部癌で行って同様の結果を得た。染色パターンを図５に示す。
【０３５３】
扁平上皮癌の研究（女性４８名、男性１８９名；中央値年齢５８歳（３１〜８２歳の範囲）；中央値追跡期間３カ月；病期分類範囲Ｉ〜ＩＶ期）において、染色強度は患者生存期間と強く逆相関することが実証された（図６および表２）。その一方で、細胞質ＰＲＭＴ５染色強度は、扁平上皮癌について有意でなかった（図７）。
【表２】
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【０３５４】
ＰＲＭＴ５発現は、核においても細胞質においても起こることができる。核ＰＲＭＴ５発現度は、高グレード神経膠腫（ＧＢＭ）患者における全生存に反比例することが明らかになった（表３）。
【表３】
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【０３５５】
図８Ａは、正常な脳および神経膠腫の顕微鏡写真（Ｈ＆Ｓ染色）を示す。図８Ｂは、正常な脳におけるＰＲＭＴ５発現を示し；図８Ｃは、グレード１神経膠腫におけるＰＲＭＴ５発現を示し；図８Ｄは、グレードＩＩ神経膠腫におけるＰＲＭＴ５発現を示し；図８Ｅは、グレードＩＩＩ神経膠腫におけるＰＲＭＴ５発現を示し；および図８Ｆは、グレードＩＶ神経膠腫におけるＰＲＭＴ５発現を示す。例えば、ＰＲＭＴ５は、原発性星状細胞腫腫瘍において過発現され、患者生存期間と逆相関する（図９も参照されたい）。
【０３５６】
ＯＧ２細胞を用いて、単独での、またはグリア芽細胞腫（ＧＢＭ）用のＦＤＡ承認薬物であるテモゾロミド（ＴＭＺ）と併用での、ＣＭＰＤ５、ＨＬＣＬ−６１、ＨＬＣＬ−６５およびＨＬＣＬ−５５について、生存率アッセイを行った（図１０および１１；第一世代、第二世代および第三世代ＰＲＭＴ５インヒビターの効力の比較については図１２を参照されたい）。ＯＧ２細胞は、グリア芽細胞腫原発性腫瘍に由来する腫瘍細胞である。ＴＭＺおよびＨＬＣＬ−６６は、相乗的にアポトーシスを誘導することが明らかになった（図１３）。
【０３５７】
４．化合物活性の評価
１４化合物の合成後、これらの化合物の抗増殖およびアポトーシス促進活性をマントル細胞リンパ腫細胞株Ｊｅｋｏにおいて評価した。Ｊｅｋｏの同型培養物をＤＭＳＯおよび化合物中で２４、４８および７２時間インキュベートした。ＦＩＴＣ−アネキシンＶ−ＰＩ染色フローサイトメトリーを用いて、細胞のアポトーシス集団を検出した（表４）。
【表４】
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【０３５８】
ＰＲＭＴ５媒介Ｈ４Ｒ３メチル化阻害結果は、Ｅｐｉｇｅｎａｓｅ（商標）ＲＰＭＴメチルトランスフェラーゼ（ＩＩ型特異的）活性／阻害アッセイキットで得た。２５ｎｇの組換えヒトＲＰＭＴ５／ＭＥＰ５０酵素（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから購入）を各反応に使用した。図１４は、Ｉ型マーク（Ｈ４（ＡＭｅ２）Ｒ３）と比較したＩＩ型ＰＲＭＴエピジェネティックマーク（Ｈ４（ＳＭｅ２）Ｒ３）の存在についての免疫蛍光スクリーニングを示す。
【０３５９】
Ｊｅｋｏ細胞株を２４時間、１４化合物すべてとともにインキュベートした。２４時間後、細胞を固定し、ブロックし、ヒストンＨ４Ｒ３の対称ジメチル化および非対称ジメチル化にそれぞれ特異的なｍＡｂで処置した。Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８標識二次Ａｂをヒストンマークの染色に使用した（緑色）。Ｄｒａｑ５を使用して核を染色した（青色）。図１５は、Ｉ型マーク（Ｈ４（ＡＭｅ２）Ｒ３）と比較したＩＩ型ＰＲＭＴエピジェネティックマーク（Ｈ４（ＳＭｅ２）Ｒ３）の存在の存在に関する免疫ブロット研究を示す。
【０３６０】
これらの結果を踏まえて、化合物がＰＲＭＴ５酵素を直接標的にすることができるかどうか、およびＩＩ型ＰＲＭＴ酵素を選択的に阻害することができるかどうかの判定が可能である酵素阻害アッセイで評価するためにＨＬＣＬ−２３、ＨＬＣＬ−１０、ＨＬＣＬ−６１、ＨＬＣＬ−６４を選択した。ＩＩ型ＰＲＭＴ酵素は、遺伝子転写を抑制し、Ｈ３Ｒ８およびＨ４Ｒ３を対称ジメチル化するが、Ｉ型ＰＲＭＴ酵素は、遺伝子転写を活性化し、Ｈ４Ｒ３を非対称ジメチル化する。このアッセイを行うために精製ＰＲＭＴ５、ＰＲＭＴ１、ＰＲＭＴ４およびＰＲＭＴ７を得た。
【０３６１】
ヒストンメチル化をＤＭＳＯならびに１〜４０μＭのＨＬＣＬ−３２、ＨＬＣＬ−１０、ＨＬＣＬ−６１およびＨＬＣＬ−６４の存在下で行った。行った第一のアッセイは、ＰＲＭＴ５のみでの活性を探求して、１５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．９）と１００ｍＭ  ＫＣｌと５ｍＭ  ＭｇＣｌ２と２０％グリセロールと１ｍＭ  ＥＤＴＡと０．２５ｍＭ  ジチオトレイトールと０．５ｍＭ  フェニルメチルスルホニルフルオリドと２．７５μＣｉのＳ−［３Ｈ］アデノシルメチオニン（ＳＡＭ）（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．，Ｉｎｃ．）とを含有する２５μＬの反応混合物中の、２μｇのＨｅＬａ  Ｓ３コアヒストンおよび５００ｎｇの組換えＰＲＭＴ１（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  カタログ番号１４−４７４）、５００ｎｇの組換えＰＲＭＴ４（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  カタログ番号１４−５７５）、５μＬのアフィニティー精製ｈＳＷＩ／ＳＮＦ会合ＰＲＭＴ５または１５μＬのアフィニティー精製ｈＳＷＩ／ＳＮＦ会合Ｆ１−ＰＲＭＴ７を使用することによりＩＣ５０を算出した。３０℃での１．５時間のインキュベーション後、反応混合物をＷｈａｔｍａｎ  Ｐ−８１濾紙にスポッティングし、１０ｍＬの０．１ｍＭ炭酸ナトリウムバッファー（ｐＨ９．０）で５回洗浄して、取り込まれていない［３Ｈ］ＳＡＭを除去し、メチル化されたペプチドをシンチレーション計数によって検出した。図１６は、４つすべての化合物が約５μＭのＩＣ５０値でＰＲＭＴ５メチル化活性を阻害することを示す。
【０３６２】
図１７について言うと、全ての化合物は、ＰＲＭＴ５酵素を選択的に阻害するが、ＰＲＭＴ１、ＰＲＭＴ４、ＰＲＭＴ７を阻害しない。２０μＭ以上の濃度で、化合物ＨＬＣＬ３２、１０、６１および６４は、ＰＲＭＴ１酵素の非特異的阻害を示す（図１７Ａ）；しかし、１０μＭ濃度でこの非特異的活性は失われ、影響を受けた唯一の酵素がＰＲＭＴ５である（図１７Ｂ）。
【０３６３】
ａ．ＰＲＭＴ５阻害の生物学的活性
癌細胞における他のエピジェネティック経路に対する効果。ＰＲＭＴ５およびＰＲＣ２タンパク質（ＥＺＨ２、ＳＵＺ１２およびＥＥＤ）は、プレ胚中心（ＧＣ）、ＧＣおよびポスト胚中心リンパ腫  図１８Ａ〜Ｄ）において過発現される。公知のＰＲＭＴ５標的であるＲＢＬ２は、プレＧＣ、ＧＣおよびポストＧＣリンパ腫（図１８Ｂおよび図１８Ｄ）において転写レベル（図１８Ｃ）でサイレンシングされる。
【０３６４】
ＰＲＭＴ５インヒビターは、ＲＢＬ２転写（図１９Ａ、１９Ｃおよび１９Ｅ）およびタンパク質発現（図１９Ｂ、１９Ｄおよび１９Ｆ）の回復を促進することが可能である。ＲＢＬ２発現の回復は、ＰＲＣ２転写サイレンシング（図１９Ａ、１９Ｃおよび１９Ｅ）およびタンパク質過発現の喪失（図１９Ｂ、１９Ｄおよび１９Ｆ）と同時に起こった。これは、ＲＢＬ２のＰＲＭＴ５駆動転写サイレンシングをＰＲＣ２遺伝子の調節に関連付けられるかもしれないとう仮説につながった。
【０３６５】
化合物ＨＬＣＬ−５は、ＮＨＬ細胞株においてＲＢＬ２タンパク質発現の回復をもたらし、ＰＲＣ２誘導エピジェネティックマークＨ２（Ｍｅ３）Ｋ２７を無効にする。ＰＲＣ２タンパク質ＥＺＨ２、ＳＵＺ１２およびＥＥＤは、Ｊｅｋｏ、ＰｆｅｉｆｆｅｒおよびＳＵＤＨＬ  ＤＬＢＣＬ細胞において過発現される。各ＰＲＣ２タンパク質および関連エピジェネティックマークＨ２（Ｍｅ３）Ｋ２７のこの発現は、選択的インヒビターＨＬＣＬ−５によるＰＲＭＴ５酵素阻害後、サイレンシングされる（図２０）。理論により拘束されることを望まないが、このデータは、ＰＲＭＴ５の阻害がＰＲＣ２タンパク質発現の変化およびＰＲＣ２駆動エピジェネティックマークリシンメチル化につながり得ることを示唆している。
【０３６６】
ｂ．ＰＲＣ２の成分はＥ２Ｆ標的遺伝子である
ＴＥＳＳプログラムを使用して推定Ｅ２Ｆ結合部位の検索を行った。図２１Ａは、ＥＺＨ２、ＳＵＺ１２およびＥＥＤ遺伝子の転写開始部位の上流１．５ｋｂ領域の模式図を示す。Ｅ２Ｆ１、Ｅ２Ｆ２、Ｅ２Ｆ３、Ｅ２Ｆ４およびＥ２Ｆ６に特異的な抗体を使用するクロマチン免疫沈降（ＣｈＩＰ）実験を用いて、Ｅ２Ｆ１、２、３および４がＪｅｋｏ、ＰｆｅｉｆｆｅｒおよびＳＵＤＨＬ２細胞すべてにおいて濃縮されることを証明した（図２１Ｂ〜Ｄ）。理論により拘束されることを望まないが、このデータは、ＰＲＭＴ５の阻害がエピゲノムを改変することにより非ＰＲＭＴ５標的遺伝子の変化をもたらし得ることを示唆している。
【０３６７】
ｃ．ＰＲＭＴ５インヒビターはＰＲＣ２プロモーターへのＲＢ１、ＲＢＬ２およびＨＤＡＣ２動員を促進する。
プレＧＣリンパ腫Ｊｅｋｏ（ＭＣＬ、図２２Ａ〜Ｃ）、ＧＣリンパ腫系統Ｐｆｅｉｆｅｒ（図２２Ｄ〜Ｆ）およびポストＧＣ系統ＳＵＤＨＬ２（図２３Ａ〜Ｃ）の処置は、ＰＲＣ２遺伝子へのＲＢ１、ＲＢＬ２およびＨＤＡＣ２の動員を促進する。この動員は、Ｈ３Ｋ９アセチル化およびＨ３Ｋ１４アセチル化の喪失につながる。理論により拘束されることを望まないが、このデータは、ＰＲＭＴ５の阻害がリシンアセチル化の変化につながり得ることを示唆している。
【０３６８】
ｄ．ＰＲＭＴ５阻害はＮＨＬ細胞株においてＲＢ／Ｅ２Ｆ経路を活性化してＰＲＣ２標的遺伝子をサイレンシングさせる。
図２３Ｄ〜Ｆについて言うと、プレＧＣ、ＧＣおよびポストＧＣリンパ腫細胞株におけるタンパク質発現プロファイルを、示されているタンパク質について示す（図２３Ｄ）。（ｓｈＲＮＡでの）ＰＲＭＴ５ノックダウン、またはＨＬＣＬ−５でのＰＲＭＴ５阻害は、サイクリンＤ１タンパク質レベルを低下させる結果となる（図２３Ｅ）。ＰＲＭＴ５阻害後のサイクリンＤ１の欠乏は、ＲＢ１腫瘍サプレッサー遺伝子産物のリン酸化の喪失およびＲＢＬ２タンパク質抑制につながる（図２３Ｆ）。理論により拘束されることを望まないが、これは、ＰＲＭＴ５阻害がＲＢ経路の修復につながることを示し得る。
【０３６９】
ＰＲＭＴ５は、ＲＢ／Ｅ２Ｆ経路の修復によってＰＲＣ２を制御する。図２４は、ＰＲＭＴ５インヒビターが、癌において異常調節される最も一般的な経路の１つに対してどのように作用するのかを示す概略図を示す。
【０３７０】
ｅ．頭頸部の扁平上皮癌におけるＰＲＭＴ５発現の役割
中咽頭扁平上皮癌患者におけるＰＲＭＴ５発現は、全生存期間を予測することができ、ｐ１６ステータスに逆相関し得る。ＰＲＭＴ５（ＩＩ型）が細胞シグナル伝達、ＲＮＡプロセッシング、遺伝子転写および細胞輸送に重要であることは判明している。ＰＲＭＴ５活性および発現の改変は、一部の固形腫瘍において腫瘍形成と関連付けられている。頭頸部の扁平上皮癌におけるＰＲＭＴ５発現の役割は、以前にまだ調査されていない。
【０３７１】
組織マイクロアレイ−２００２年〜２００８年にオハイオ州立大学において処置された２３７名の口腔咽頭癌患者−から組織を得た。ＰＲＭＴ５についての染色を行った。細胞核、細胞質および周囲炎症細胞内のＰＲＭＴ５染色強度を０〜３（なし〜高度）で採点した。ｐ１６染色を行った（陽性または陰性）。後ろ向きカルテ調査を用いて、患者の臨床情報のデータベースを確立した。喫煙歴、ＴＮＭ病期分類、および患者の生存期間を含む。染色した組織を図２５に示す。より強い強度＝より不良な生存期間（危険率：０．６８１（ｐ＝０．０４１２））。ｐ１６染色陰性の患者のほうが、有意に高い平均ＰＲＭＴ５核染色強度（ｐ＝０．０１７０）および不良な生存期間を有した（図２６）。
【０３７２】
ＰＲＭＴ５および喫煙ステータスに関して（２試料ｔ検定）、年１０箱超の喫煙歴を有する患者は、年１０箱以下の喫煙歴を有する患者より有意に高い平均核ＰＲＭＴ５染色強度を有した（ｐ＝０．０１２９）。年１０箱超または年１０箱未満の喫煙歴に基づく平均細胞質または炎症細胞ＰＲＭＴ５染色強度に有意差はなかった（それぞれ、ｐ＝０．２７２６、ｐ＝０．６４１３）。
【０３７３】
ＰＲＭＴ５ならびにＴおよびＮ病理分類（クラスカル・ウォリス検定）に関して、病期ＴまたはＮに基づく核、細胞質または炎症細胞ＰＲＭＴ５染色強度に有意差はなかった。
【０３７４】
したがって、ＰＲＭＴ５発現および機能は、口腔咽頭扁平上皮癌の発現および挙動の一翼を担うことができる。核ＰＲＭＴ５染色強度とｐ１６ステータス（腫瘍サプレッサー）の間に反比例関係がある。核ＰＲＭＴ５染色強度は、年１０箱超の喫煙歴を有する患者におけるほうが高い。腫瘍における核ＰＲＭＴ５染色強度は、患者生存期間に反比例する。腫瘍浸潤リンパ球におけるＰＲＭＴ５染色強度は、ＰＲＭＴ５が腫瘍免疫に関係していることを示し得る。ｐ１６陰性扁平上皮癌は、より侵襲性が高く、したがってＰＲＭＴ５インヒビターで処置するために理想的な疾患に当たる。
【０３７５】
５．急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）におけるＰＲＭＴ５インヒビターの評価
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、成人における白血病の最も一般的なタイプである（Ｆｒｏｈｌｉｎｇ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２３，６２８５−６２９５；Ｅｓｔｅｙ，Ｅ．＆  Ｄｏｈｎｅｒ，Ｈ．（２００５）Ｌａｎｃｅｔ  ３６８，１８９４−１９０７；ＭｃＫｅｎｚｉｅ，Ｓ．Ｂ．（２００５）Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｓｃｉ．１８，２８−３７）。ＡＭＬに関連した罹患率および死亡率は年齢により増加するが、ＡＭＬ患者によって達成される全長期生存は、ほんの約３５〜４０％ほどの低さのままである（Ｅｓｔｅｙ，Ｅ．＆  Ｄｏｈｎｅｒ，Ｈ．（２００５）Ｌａｎｃｅｔ  ３６８，１８９４−１９０７；Ｄｏｍｂｒｅｔ，Ｈ．（２０１１）Ｂｌｏｏｄ  １１８，５３６６−５３６７）。ＡＭＬ処置の多大な複雑さは、この疾患の遺伝的に、エピジェネティクス的におよび臨床的に非常に不均一な性質であり、これは、処置のタイプおよび強度の選択を導くための予後的臨床的、細胞遺伝学的および分子的因子の使用の有意性をさらに強調する（Ｍａｒｃｕｃｃｉ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２９，４７５−４８６；Ｄｏｈｎｅｒ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｂｌｏｏｄ  １１５，４５３−４７４）。
【０３７６】
ＡＭＬ症例のおおよそ３０％は、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３遺伝子の内部タンデム複製（Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｔａｎｄｅｍ  Ｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎ）突然変異（ＦＬＴ３−ＩＴＤ）を有し、これは、受容体チロシンキナーゼの構成的活性化をもたらし（Ｋｉｎｄｌｅｒ，Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｂｌｏｏｄ  １１６，５０８９−５１０２；Ｗｅｉｓｂｅｒｇ，Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２９，５１２０−５１３４）、ならびに白血病細胞増殖および生存を支持することによってより不良な臨床転帰を随伴する（Ｓｔｉｒｅｗａｌｔ，Ｄ．Ｌ．ａｎｄ  Ｒａｄｉｃｈ，Ｊ．Ｐ．（２００３）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  ３，６５０−６６５）。加えて、野生型ＦＬＴ３の過発現も負の臨床的有意性を有する。小分子でのＦＬＴ３キナーゼ活性の標的化によって興味深い結果が得られているが、このアプローチは、依然として治療用には程遠い（Ｗｅｉｓｂｅｒｇ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓｉｓｔ．Ｕｐｄａｔ．１２，８１−８９）。ＦＬＴ３に対する標的化合物の選択性の相対的欠如に加えて、非常に多くの耐性メカニズムが発見されている（Ｗｅｉｓｂｅｒｇ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２９，５１２０−５１３４）。酵素的阻害とともにＦＬＴ３転写メカニズムへの干渉は相乗的抗白血病活性を生じさせ得るという仮説が以前に立てられた（Ｂｌｕｍ，Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｂｌｏｏｄ  １１９，６０２５−６０３１）。しかし、このアプローチを有効に遂行するためには、この遺伝子の発現を調節するメカニズムを理解することが必要である。
【０３７７】
発癌性チロシンキナーゼＫＩＴおよびＦＬＴ３の転写を劇的活性化することにＳＰ１転写因子が欠かせないことは、以前に実証されている（Ｂｌｕｍ，Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｂｌｏｏｄ  １１９，６０２５−６０３１；Ｌｉｕ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  １７，３３３−３４７）。理論により拘束されることを望まないが、このデータは、単独でのまたはＮＦκＢのｐ６５サブユニットとの複合体での、ＦＬＴ３のプロモーター領域上へのＳｐ１の局在が、ＦＬＴ３発現のアップレギュレーションに不可欠でもあり、効力もあることを強く示す（Ｂｌｕｍ，Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｂｌｏｏｄ  １１９，６０２５−６０３１）。本明細書では、タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ５（ＰＲＭＴ５）もＦＬＴ３調節に関与すること、およびこの酵素のエピジェネティック活性化がＦＬＴ３転写の抑制をもたらすことを証明する。ＰＲＭＴは、ペプチドのアルギニン残基のグアニジン窒素原子への１つまたは２つのメチル基の転移を触媒する（Ｐａｌ，Ｓ．（２００７）３０６−３１５，ｄｏｉ：１０．１００２／ＪＣＰ；Ｂｅｄｆｏｒｄ，Ｍ．Ｔ．（２００７）Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．１２０，４２４３−４２４６）。今までに１１のメンバーが公知であるＰＲＭＴ酵素ファミリーは、Ｉ型酵素とＩＩ型酵素にカテゴリー分けされる。Ｉ型ＰＲＭＴ（例えば、ＰＲＭＴ１、３、４、６および８）は、アルギニン残基の非対称ジメチル化（ａＤＭＡ）に関与し、その一方でＩＩ型ＰＲＭＴ（例えば、ＰＲＭＴ５、７および９）は、対称ジメチル化（ｓＤＭＡ）事象を触媒する。中間モノメチル化（ＭＭＡ）事象は、両方のタイプのＰＲＭＴによって行われる（Ｐａｌ，Ｓ．（２００７）３０６−３１５，ｄｏｉ：１０．１００２／ＪＣＰ；Ｂｅｄｆｏｒｄ，Ｍ．Ｔ．（２００７）Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．１２０，４２４３−４２４６）。
【０３７８】
ヒストンＨ３、Ｈ４およびＨ２Ａならびにタンパク質ｐ５３、ＭＢＤ２のような複数の基質があるＰＲＭＴ５（Ｊａｎｓｓｏｎ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１０，１４３１−１４３９；Ｇｕｅｚｅｎｎｅｃ，Ｘ．Ｌｅ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）ｄｏｉ：１０．１１２８／ＭＣＢ．２６．３．８４３）は、癌におけるタンパク質機能の新たなレギュレーターとして注目を集めている（Ｂｅｄｆｏｒｄ，Ｍ．Ｔ．ａｎｄ  Ｒｉｃｈａｒｄ，Ｓ．（２００５）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  １８，２６３−２７２）。ＰＲＭＴ５によって誘導される翻訳後変化は、細胞成長および増殖に対して有意な影響を及ぼす（Ｓｃｏｕｍａｎｎｅ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．３７，４９６５−４９７６）。ＰＲＭＴ５の過発現は、血液悪性腫瘍および固形悪性腫瘍（マントル細胞リンパ腫（Ｐａｌ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．（２００７）ＥＭＢＯ  Ｊ．２６，３５５８−３５６９；Ｗａｎｇ，Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．２８，６２６２−６２７７）、肺および膀胱癌（Ｗｅｉ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１１０，１３５１６−１３５２１）、胃癌（Ｋｉｍ，Ｉ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１１，４７３−４８２）および胚細胞腫瘍（ＩＩ型精巣胚細胞腫瘍（ＴＧＣＴ）、すなわち精上皮腫）（Ｅｃｋｅｒｔ，Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．（２００８）ＢＭＣ  Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．８，１０６）において報告されており、有望な治療標的に当たる。より重要なこととして、血液新生物に関連して、突然変異型構成的活性チロシンキナーゼ、ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆは、ＰＲＭＴ５と相互作用することができ、骨髄増殖性疾患において翻訳後リン酸化によりこの酵素の活性を調節することができることが証明されている（Ｌｉｕ，Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  １９，２８３−２９４）。
【０３７９】
本明細書では、ＰＲＭＴ５阻害にはＡＭＬ細胞成長および生存に対する強力な有害効果があることを実証する。理論により拘束されることを望まないが、このデータは、ＰＲＭＴ５が、ＳＰ１およびｍｉＲ−２９ｂをはじめとする、ＦＬＴ３の肝要なレギュレーターとの相互作用、およびその結果として、この発癌性チロシンキナーゼの活性化の変調によって、ＦＬＴ３経路のアップレギュレーションに関与することを示唆している。ＡＭＬ細胞において、ＰＲＭＴ５は、主要ＰＲＭＴ５メチル化マークであるＨ４Ｒ３によって行われるｍｉＲ−２９ｂの抑制によるＳＰ１発現および活性化を強化することによって、ＦＬＴ３レベルをアップレギュレートする。理論により拘束されることを望まないが、これらのデータは、ＰＲＭＴ５がＡＭＬにおけるＦＬＴ３のアップレギュレーションにおいて機能することを示しており、ＦＬＴ３−ＩＴＤ  ＡＭＬ患者が、特にＦＬＴ３−ＩＴＤインヒビターに対して耐性である場合、ＰＲＭＴ５の標的化の恩恵を受け得ることを示唆している。
【０３８０】
ａ．アップレギュレートされたＰＲＭＴ５は白血病増加の一因となる
以前の研究により癌細胞成長の支持に関するＰＲＭＴ５の役割は実証されている（Ｇｕ，Ｚ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．４４６，２３５−２４１；Ｂａｏ，Ｘ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．６１，２０６−２１７；Ｎｉｃｈｏｌａｓ，Ｃ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）ＰｌｏＳ  Ｏｎｅ  ８，ｅ７４７１０）。本明細書において、ＰＲＭＴ５は、ＡＭＬ細胞（原発性患者の試料；ｎ＝６、および患者由来の細胞株；ｎ＝７）において正常骨髄（ｎ＝４）と比較して相対的に高いレベルで発現されることが判明した（Ｐ＝０．０３）（図２７Ａ）。レンチウイルス（レンチ−ＰＲＭＴ５）を使用してＡＭＬ細胞株；ＭＶ４−１１（ＦＬＴ３−ＩＴＤ）およびＴＨＰ−１（ＦＬＴ３−ＷＴ）においてＰＲＭＴ５を異所発現させ、それを空のベクターをトランスフェクトした（レンチ−ＥＶ）陰性対照と比較した。ＰＲＭＴ５のアップレギュレーションをウエスタンブロット法によって確認した（図２３Ｂ挿入画像）。ＰＲＭＴ５アップレギュレーションは、本明細書において上で開示したような成長曲線アッセイおよびコロニー形成アッセイによって測定して、ＡＭＬ細胞増殖能の有意な向上をもたらした。増殖率の３５％を超える増加（成長曲線アッセイ、図２７Ｂ）ならびにＡＭＬ細胞生存およびコロニー形成能力の１．８倍を超える増加（図２８Ａおよび２８Ｂ）をＰＲＭＴ５過発現細胞において立証した。対照的に、ＰＲＭＴ５のノックダウンは、コロニー形成アッセイによって評価して、ＡＭＬ細胞成長を有意に妨げた。このために、ＭＶ４−１１およびＴＨＰ−１細胞株ならびに２つの患者試料（＃１；ＦＬＴ３−ＩＴＤおよび＃２；ＦＬＴ３−ＷＴ）をスクランブル対照（ｓｃ）またはＰＲＭＴ５に対するＲＮＡ干渉（短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）もしくは短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ））いずれかで処置した。対照試料より有意に少ない数のコロニーがＰＲＭＴ５欠乏細胞によって形成された（＞１．６倍、Ｐ＝０．０１）（図２９Ａ〜Ｄ）。理論により拘束されることを望まないが、これらの結果は、ＡＭＬ細胞成長に対するＰＲＭＴ５の積極的寄与を示唆している。
【０３８１】
図２７Ａについて言うと、ＰＲＭＴ５の転写物レベルをｑＲＴ−ＰＣＲ分析によって測定した（＊は、ｐ＜０．０５であり、および＊＊は、ｐ＜０．００５である）。ｔ検定を用いて有意性を算出した。エラーバーはＳＥＭを示す。
【０３８２】
図２７Ｂおよび２７Ｃについて言うと、ＰＲＭＴ５レンチウイルスを過発現するＡＭＬ細胞と空のレンチベクターを過発現するＡＭＬ細胞の増殖率を比較する成長曲線アッセイを例証する。細胞を長期間（＞１０日）にわたって計数した。各処置を三重反復で構成した。ウエスタンブロット法を用いて、レンチ−ＥＶと比較してレンチ−ＰＲＭＴ５処置細胞におけるＰＲＭＴ５過発現を確認し、その際、ＧＡＰＤＨレベルが負荷対照として役立った。
【０３８３】
図２８Ａおよび２８Ｂについて言うと、レンチ−ＰＲＭＴ５または空のベクター（ＥＶ−レンチ）対照で浸出されたＡＭＬ細胞の増殖能を比較するコロニー形成アッセイを例証する。プレーティングの１０〜１４日後にコロニーを計数した。各アッセイを処置ごとに３回の独立した実験で繰り返した。
【０３８４】
図２９Ａ〜Ｄについて言うと、コロニー形成アッセイを用いて、ＰＲＭＴ５  ＲＮＡ干渉（ｓｉＰＲＭＴ５もしくはｓｈＰＲＭＴ５）またはスクランブル対照（ｓｃ）いずれかをトランスフェクトしたＡＭＬ細胞株または初代芽細胞における増殖率を測定した。トランスフェクションを三重反復で行い、ウエスタンブロット法を用いて、ｓｉＰＲＭＴ５またはｓｈＰＲＭＴ５の存在下でのＰＲＭＴ５の十分なダウンレギュレーションを確認した。
【０３８５】
インビボでの白血病増加に対するＰＲＭＴ５の影響を検査するために、ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／ガンマ（ＮＳＧ）マウスに、ＰＲＭＴ５を過発現させるためのレンチ−ＰＲＭＴ５（ＴＨＰ−１／ＰＲＭＴ５）または陰性対照としてのレンチ−ＥＶ（ＴＨＰ−１／ＥＶ）いずれかを安定的に形質導入したＴＨＰ−１（１ｘ１０６）細胞を、尾静脈経由で注射した。注射（生着）１０週間後、各群から３匹のマウスを屠殺し、さらなる分析のために試料／器官を採取した。ＴＨＰ−１／ＰＲＭＴ５を有するマウスは、ＴＨＰ−１／ＥＶ対照マウスより、有意に大きい脾臓（ｐ＝０．０３）および肝臓（ｐ＝０．０３）ならびに数の多い循環芽細胞を有した（図３０、３１Ａおよび３１Ｂ）。より高いＰＲＭＴ５発現が、ＴＨＰ−１／ＰＲＭＴ５生着動物の骨髄、脾臓および血液からのＲＮＡで確認された（図３２）。加えて、ＰＲＭＴ５タンパク質レベルおよびその特異的メチル化マーク、Ｈ３Ｒ８が、ＴＨＰ−１／ＰＲＭＴ５において対照動物より有意に高かった（図３２）。加えて、予備データは、ＴＨＰ−１／ＰＲＭＴ５細胞を生着させたＮＳＧマウスが、ＴＨＰ−１／ＥＶ細胞を生着させたラットより低い生存率を有したことを示す。理論により拘束されることを望まないが、これらのデータは、白血病増加の増進へのＰＲＭＴ５関与を裏付け、白血病細胞機能の変調におけるこのタンパク質の重要性を強調する。
【０３８６】
図３０について言うと、ＰＲＭＴ５を過発現させるためのＴＨＰ−１／ＰＲＭＴ５および陰性対照としてのＴＨＰ−１／ＥＶを生着させたマウスから脾臓を回収した。マウス１匹につき１ｘ１０６細胞を注射し、１０週間後に動物を安楽死させた。ＰＲＭＴ５を過発現しているマウスにおいて肥大した脾臓が観察された。棒グラフは、陰性対照マウスと比較してＰＲＭＴ５過発現動物から採取した脾臓および肝臓サイズ（重量として図示）の有意な増大を表す。
【０３８７】
図３１Ａおよび３１Ｂについて言うと、ＴＨＰ−１／ＰＲＭＴ５生着マウスの血液における血液播種性芽細胞浸潤のライト・ギムサ染色を例証する。赤血球溶解後に染色を行った。正常動物における正常な分化白血球の存在；ＰＲＭＴ５過発現マウスにおける芽細胞の顕著な存在が明確に区別できる。
【０３８８】
図３２について言うと、ＴＨＰ−１／ＥＶ動物に対するＴＨＰ−１／ＰＲＭＴ５マウスにおけるＰＲＭＴ５転写物アップレギュレーションを描写するｑＲＴ−ＰＣＲ分析を示す。脾臓試料での差は統計的に有意であるが、それにもかかわらず、ＰＲＭＴ５過発現モデルにおいて差を評価した。ウエスタンブロット法により、ＴＨＰ−１／ＥＶ正常マウスと比較してＴＨＰ−１／ＰＲＭＴ５マウスからの代表脾臓試料においてＰＲＭＴ５およびそのエピジェネティックマーク、対称ジメチル化Ｈ３（Ｈ３Ｒ８ｍｅ２）、の明白なアップレギュレーションが確認された。抗ＰＲＭＴ５抗体を使用して免疫染色を行い、その後、取り除き、抗Ｈ３Ｒ８抗体で再び染色し、その際、Ｇａｐｄｈレベルが内部負荷対照として役立った。
【０３８９】
ｂ．ＡＭＬ細胞におけるＰＲＭＴ５阻害の抗白血病活性
ＰＲＭＴ５の酵素活性の阻害が、ＡＭＬにおける実行可能な治療戦略になり得るかどうかを試験するために、オハイオ州立大学でヒトＰＲＭＴ５触媒部位のモデルのインシリコスクリーニングによって開発されたＰＲＭＴ５標識Ｃ１２のファースト・イン・クラス単一分子インヒビター（ＨＬＣＬ６１）を使用した。Ｃ１２は、前記スクリーニングで同定された最初の１０，０００化合物から生物学的検証のために選択した８つの化合物のうちの１つであった。この化合物は、触媒ドメインにドッキングして補因子Ｓ−アデノシルメチオニン（ＳＡＭ）メチル−ドナーとアルギニン基質ポケットとの相互作用を遮断するように設計されている。メチラーゼ活性を測定するためにインビトロ酵素アッセイを用いて、Ｃ１２がこれらのインヒビターのうち最も強力であると判定した（図３３Ａ）。さらに、ＰＲＭＴ５を標的にする点でのＣ１２の選択性を、他のＩ型ＰＲＭＴ：ＰＲＭＴ１およびＰＲＭＴ４ならびに他のＩＩ型ＰＲＭＴ；ＰＲＭＴ７に対する無効性によって証明した（図３３Ａ）。Ｃ１２は、ＡＭＬ試料におけるヒストンＨ３およびＨ４のメチル化阻害にも、最も有効であった（図３３Ｂ）。
【０３９０】
ＡＭＬ細胞株および初代患者芽細胞のＣ１２での処置は、ＭＴＳアッセイによって測定して、細胞増殖の用量依存性（１から１００μＭ）阻害をもたらした（図３４ＡおよびＢ、ならびに表５および６）。処置後４８時間の時点で、ＩＣ５０値は、細胞株については２１〜２１．４６μＭの間、および患者試料については３．９８〜８．７２μＭの間であった。コロニー形成アッセイによっても、Ｃ１２の存在下でＡＭＬ細胞株ＭＶ４−１１（ＦＬＴ３−ＩＴＤ＋）、ＴＨＰ−１（ＦＬＴ３−ＷＴ）およびＫａｓｕｍｉ−１（ＫＩＴｍｕｔ）ならびにＡＭＬ患者試料＃１  ＦＬＴ３−ＩＴＤ＋および＃２（ＦＬＴ３−ＷＴ）における成長阻害が実証された。著しく低用量（１００ｎＭ）のＣ１２の存在下で培養したとき、ビヒクル処置対照細胞と比較してＡＭＬ細胞株および芽細胞によって有意に少ないコロニーが形成された（図３５Ａ〜Ｅ）。Ｃ１２によるＰＲＭＴ５阻害は、アポトーシスおよび分化の促進にも有効であった。２５μＭおよび５０μＭのＣ１２で４８時間処置したＡＭＬ細胞株（ＭＶ４−１１（ＦＬＴ３−ＩＴＤ）およびＫａｓｕｍｉ−１（ＫＩＴｍｕｔ））においてアポトーシスの用量依存性増加が観察された（図３６）。ＡＭＬ細胞（ＭＶ４−１１（ＦＬＴ３−ＩＴＤ）およびＫａｓｕｍｉ−１（ＫＩＴｍｕｔ））とＣ１２のインキュベーションは、早期分化マーカーＣＤ１１ｂの用量依存性アップレギュレーションをもたらした（図３７）。２５μＭのＣ１２で処置した初代ＡＭＬ患者試料は、ビヒクル処置細胞と比較してＣＤ１１ｂ発現の＞４倍増加をもたらした（図３７）。これは、造血細胞の分化プロセスにおけるＰＲＭＴ５のさらなる役割を示唆している。理論により拘束されることを望まないが、これらのデータは、単独でのまたは化学療法と併用でのＰＲＭＴ５の臨床的阻害が、ＡＭＬ処置における実行可能な治療標的になり得ることを示唆している。
【表５】
0006510485.tif 000187
【表６】
0006510485.tif 000188
【０３９１】
図３３Ａについて言うと、ＰＲＭＴ５インヒビター化合物および異なるＰＲＭＴ酵素の存在下でメチラーゼ活性を測定するインビトロ酵素アッセイを示す。矢印によって示すＣＭＰＤ１２がＰＲＭＴ５の酵素活性の阻害に関して最も強力であった。ＰＲＭＴ５インヒビターは、ＰＲＭＴ１、ＰＲＭＴ４およびＰＲＭＴ７酵素活性に対して有効でなかった。図３３Ｂについて言うと、ＡＭＬ細胞株におけるウエスタンブロットは、Ｃ１２の存在下で対称ジメチル化Ｈ３（Ｈ３Ｒ８ｍｅ２）およびＨ４（Ｈ４Ｒ３ｍｅ２）のダウンレギュレーションを示すことによって効率的なＰＲＭＴ５阻害を示す。
【０３９２】
図３４Ａおよび３４Ｂについて言うと、比色ＭＴＳアッセイを用いてＰＲＭＴ５インヒビター化合物（ＨＬＣＬ６１またはＣ１２）との４８時間のインキュベーション後にＡＭＬ細胞株および患者からの初代芽細胞の増殖率を測定した。吸光度の用量依存性減少は、代謝活性生細胞の数と間接的に相関する。ＩＣ５０値は、５０％細胞死が達成された化合物濃度を表す。
【０３９３】
図３５Ａ〜Ｅについて言うと、コロニー形成アッセイにより、致死未満量のＣＭＰＤ１２の存在下でＡＭＬ細胞株および初代腫瘍細胞の有意に低減された増殖能が測定された。プレーティングの１０〜１４日後にコロニーを計数し、各処置を三重反復で行った。
【０３９４】
図３６について言うと、ＰＲＭＴ５インヒビターで処置し、細胞表面マーカーアネキシンＶおよびＰＩについて染色したＡＭＬ細胞株のフローサイトメトリー分析は、ＤＭＳＯ処置細胞と比較してアポトーシスおよび死細胞の百分率の用量依存性増加を示す。プログラム細胞死の誘導は、ＦＬＴ３−ＩＴＤ  ＡＭＬ細胞株ＭＶ４−１１でのほうが強かった。
【０３９５】
図３７について言うと、早期分化マーカーＣＤ１１ｂでの染色についてのヒストグラムは、ＣＭＰＤ１２で４８時間処置したＡＭＬ細胞株および患者試料における分化の誘導を示す。ＡＭＬ細胞株におけるＣＤ１１ｂ発現の増加は、用量依存様式に従う。
【０３９６】
ｃ．ＰＲＭＴ５はＦＬＴ３転写を増進することによりＦＬＴ３をアップレギュレートする
ＰＲＭＴ５は、突然変異型構成的活性チロシンキナーゼ、ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ、と相互作用し、そのキナーゼによる翻訳後リン酸化によって調節されると報告されている（Ｌｉｕ，Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  １９，２８３−２９４）。ＡＭＬにおけるＰＲＭＴ５機能メカニズムをよりよく理解するために、ＰＲＭＴ５と発癌性チロシンキナーゼＦＬＴ３間の可能性のある相互作用を検査した。共免疫沈降（Ｃｏ−ＩＰ）アッセイを用いて、ＰＲＭＴ５は、野生型および突然変異ＦＬＴ３（ＭＶ４１１、ＦＬＴ３−ＩＴＤおよびＴＨＰ−１  ＦＬＴ３−ＷＴ）と物理的に相互作用しなかった（図３８Ａおよび３８Ｂ）。さらに、チロシンキナーゼインヒビター（ＴＫＩ）ＰＫＣ４１２または特異的ＦＬＴ３インヒビター（ＣＡＬＢＩＯＣＨＥＭ  ＃３４３０２０）いずれによるＦＬＴ３阻害も、ＰＲＭＴ５発現およびリン酸化レベルを変化させなかった（図３８Ｃ）。しかし、Ｃ１２と、ＰＲＭＴ５特異的ｓｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡでの一過性トランスフェクションの両方で試験して、ＰＲＭＴ５の阻害は、ＭＶ４−１１（ＦＬＴ３−ＩＴＤ）およびＴＨＰ−１（ＦＬＴ３−ＷＴ）細胞ならびにＦＬＴ３−ＩＴＤ患者試料において示されたような野生型または突然変異ＦＬＴ３  ＲＮＡおよびタンパク質の有意なダウンレギュレーションをもたらした（図３９Ａ〜Ｆ）。活性化ＦＬＴ３は、下流エフェクターＳＴＡＴ５によるシグナル伝達により白血病芽細胞の悪性表現型の一因になり得る（Ｓｐｉｅｋｅｒｍａｎｎ，Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ．Ｒｅｓ．９，２１４０−２１５０）。ＰＲＭＴ５ノックダウン後のＦＬＴ３ダウンレギュレーションをさらに確認するために、リン酸化ＳＴＡＴ５レベルを検出することによってキナーゼ活性を測定した。ＰＲＭＴ５阻害によるＦＬＴ３ダウンレギュレーションは、ＳＴＡＴ５のリン酸化（ｐＳＴＡＴ５）低減をもたらした（図３５Ａ〜Ｆ）。これらの結果と一致して、ＴＨＰ−１細胞におけるＰＲＭＴ５の過発現は、ＦＬＴ３  ｍＲＮＡおよびタンパク質発現の明白な増加をもたらした（図４０Ａおよび４０Ｂ）。ＴＨＰ−１細胞は、野生型ＦＬＴ３ならびに低い基礎レベルの内因性ＦＬＴ３発現および活性を有する。したがって、これらの細胞は、実験的に誘導したＦＬＴ３アップレギュレーションを調査および測定するための適切なモデルに当たる。より高いＦＬＴ３レベルがＰＲＭＴ５の過発現と直接相関する同様の観察が、ＴＨＰ−１／ＰＲＭＴ５細胞を生着させたマウスの脾臓において再現された（図４０Ａおよび４０Ｂ）。理論により拘束されることを望まないが、これらのデータは、ＦＬＴ３発現および活性化の正の調節におけるＰＲＭＴ５の役割を示唆している。
【０３９７】
図３８Ａおよび３８Ｂについて言うと、抗ＰＲＭＴ５でのプルダウンおよび抗ＰＲＭＴ５と抗ＦＬＴ３の両方での免疫染色は、ＡＭＬ細胞株におけるＰＲＭＴ５とＦＬＴ３間に明らかな物理的会合がないことを示す。図３８Ｃについて言うと、ＦＬＴ３キナーゼ活性の阻害は、リン酸化ＰＲＭＴ５レベル全体に影響を及ぼさなかった。ＦＬＴ３インヒビターで処置した細胞において全細胞溶解物を使用してリン酸化チロシン残基（抗−ｐ−Ｔｙｒ）をプルダウンした。リン酸化ＥＲＫ１／２（ｐ−ＥＲＫ１／２）レベルをｐ−Ｔｙｒ  ＩＰおよび処置のキナーゼ阻害効果の有効性についての対照として検出した。
【０３９８】
図３９Ａ〜Ｆについて言うと、Ｃ１２またはｓｉＰＲＭＴ５およびｓｈＰＲＭＴ５いずれかで行ったＡＭＬ細胞株および患者試料におけるＰＲＭＴ５の阻害は、ＦＬＴ３  ＲＮＡおよびタンパク質発現の有意なダウンレギュレーションにつながった。ｑＲＴ−ＰＣＲを用いて相対ＰＲＭＴ５  ｍＲＮＡレベルを測定し、ウエスタンブロット法を用いてＰＲＭＴ５、ＦＬＴ３およびＧＡＰＤＨのタンパク質レベルをそれぞれ検出した。
【０３９９】
図４０Ａおよび４０Ｂについて言うと、レンチウイルスを使用する、低い基礎レベルのＦＬＴ３を有するＡＭＬ細胞株ＴＨＰ−１におけるＰＲＭＴ５の異所過発現は、ＦＬＴ３転写およびタンパク質発現を十分にアップレギュレートした。ＰＲＭＴ５過発現のマウスモデルにおいてＴＨＰ−１／ＰＲＭＴ５とＴＨＰ−１／ＥＶを比較する、代表脾臓試料におけるｑＲＴ−ＰＣＲおよびタンパク質検出は、インビボでのＦＬＴ３レベルのＰＲＭＴ５依存性アップレギュレーションを示した。
【０４００】
ｄ．ＰＲＭＴ５はＳＰ１／ＮＦκＢ（ｐ６５）転写複合体を調節することによりＦＬＴ３の転写を変調させる
ＡＭＬにおけるＦＬＴ３発現の肝要なレギュレーター：転写因子ＳＰ１およびＮＦκＢ（ｐｔｒ）で構成されたトランス活性化複合体、は以前に同定されている（Ｌｉｕ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  １７，３３３−３４７；Ｂｌｕｍ，Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｂｌｏｏｄ  １１９，６０２５−６０３１）。それ故、この転写複合体を、ＰＲＭＴ５発現および活性との関係に関して検査した。免疫沈降（ＩＰ）アッセイは、ＰＲＭＴ５がＳＰ１およびＮＦκＢ（ｐ６５）両方と物理的に相互作用することを示した（図４１）。これは、この転写複合体の組み立てにおけるＰＲＭＴ５の潜在的足場機能を示唆し得る。次いで、ＦＬＴ３の調節領域へのこれらの因子の動員および局在に関するＰＲＭＴ５の役割を、クロマチン免疫沈降（ＣｈＩＰ）アッセイとＮＦκＢ（ｐ６５）、ＳＰ１に特異的な抗体とＦＬＴ３のプロモーター領域の予測結合部位を増幅するように設計されたプライマーとを使用して試験した（Ｌｉｕ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｂｌｏｏｄ，２３６４−２３７３；Ｌｉｕ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  １７，３３３−３４７）。ＣｈＩＰ結果は、ＡＭＬ細胞におけるＰＲＭＴ５の阻害がＦＬＴ３のプロモーターへのＳＰ１転写因子の結合の有意な増加につながり得ることを示した（図４２Ａ）。次いで、ＰＲＭＴ５をＭＶ４−１１およびＴＨＰ−１細胞において過発現させ、ＣｈＩＰ実験を繰り返した。ＰＲＭＴ５のアップレギュレーションは、ＦＬＴ３のプロモーター領域上へのＳＰ１の局在の有意な増進につながる（図４２Ｂ）。ＦＬＴ３発現に対するＳＰ１の正の調節効果をｓｉＲＮＡによって媒介されるＳＰ１欠乏によって検証し、その結果、予想どおり、ＦＬＴ３が有意に（＞２．６倍）ダウンレギュレートされた（図４３Ａ）。加えて、ＦＬＴ３活性の変調に関するＰＲＭＴ５の機能的役割を裏付けて、Ｃ１２への曝露後のＰＲＭＴ５の阻害は、ＴＨＰ−１細胞におけるＦＬＴ３応答要素（すなわち、ＦＬＴ３−プロモーター−ルシフェラーゼレポーター）活性を妨げた（図４３Ｂ）。
【０４０１】
図４１について言うと、免疫沈降（ｃｏ−ＩＰ）アッセイは、ＰＲＭＴ５と転写因子ＳＰ１およびＮＦκＢのｐ６５サブユニットとの物理的相互作用を示した。ＰＲＭＴ５、ＳＰ１およびｐ６５に対する抗体（４μｇ）を使用して、ＡＭＬ細胞株から調製した全細胞溶解物からの各々の対応するタンパク質（最低５００μｇ）をプルダウンした。ストリッピングおよび各抗体を追跡する再染色を含む逐次的様式で、免疫染色を実行した。
【０４０２】
図４２Ａについて言うと、クロマチン免疫沈降（ＣｈＩＰ）アッセイは、ＦＬＴ３のプロモーター領域へのＳＰ１の局在、ならびにＰＲＭＴ５阻害後のＦＬＴ３プロモーターへのこの転写因子の結合の有意な減少（これは、ＦＬＴ３  ｍＲＮＡレベルの有意なダウンレギュレーションと同時に起こった）を実証する。図４２Ｂについて言うと、ＰＲＭＴ５を異所過発現した細胞でのＣｈＩＰアッセイは、ＦＬＴ３のプロモーター領域へのＳＰ１の局在を示した。これは、ＦＬＴ３転写の有意なアップレギュレーションと同時に起こった。
【０４０３】
図４３Ａについて言うと、ＳＰ１に特異的なｓｉＲＮＡでのＡＭＬ細胞の一過性トランスフェクションは、ｑＲＴ−ＰＣＲアッセイおよびウエスタンブロット法によって実証するように、ＳＰ１の十分なノックダウンおよび、結果として、ＦＬＴ３のダウンレギュレーションをもたらした。図４３Ｂについて言うと、ＣｈＩＰプライマーを設計したＦＬＴ３のプロモーター領域の調節機能を、ルシフェラーゼレポーターアッセイを用いて確認した。プロモーター部位をルシフェラーゼの前にクローニングし、ＰＲＭＴ５インヒビターの存在または不在下で、ルシフェラーゼ陰性対照またはルシフェラーゼ−ＦＬＴ３−プロモーター構築物をＴＨＰ−１細胞に一過的にトランスフェクトした。ルシフェラーゼ活性をウミシイタケに対しておよびＦＬＴ３活性の尺度として測定し、ＰＲＭＴ５阻害後にルシフェラーゼ活性が有意に減少された。
【０４０４】
一過性トランスフェクションおよびＣ１２処置を用いるＡＭＬ細胞株（ＦＬＴ３−ＩＴＤおよびＦＬＴ３−ＷＴ）におけるＰＲＭＴ５の阻害は、ＳＰ１タンパク質レベルの有意なノックダウンももたらした（図４４）。対照的に、ＴＨＰ−１細胞におけるＰＲＭＴ５の過発現は、ＳＰ１タンパク質の有意なアップレギュレーションをもたらした（図４５）。ＴＨＰ−１／ＰＲＭＴ５生着によって産生したＰＲＭＴ５過発現のインビボマウスモデルにおいて、ＴＨＰ−１／ＥＶ対照マウスと比較してＳＰ１レベルの有意な増加が測定されたので、同様の傾向が立証された（図４５）。加えて、ｑＲＴ−ＰＣＲ分析によると、ＰＲＭＴ５過発現後のＳＰ１タンパク質アップレギュレーションがＳＰ１  ｍＲＮＡレベルの有意義な変化を伴わずにおこった。理論により拘束されることを望まないが、これらのデータは、ＳＰ１／ＮＦκＢ（ｐ６５）トランス活性化活性へのＰＲＭＴ５の寄与が、主として、翻訳後におよびこれらの要素との物理的会合によって媒介されることを示唆している。実際、ｐ６５（ＮＦκＢ）の転写活性増加を機能的にもたらすｐ６５転写因子のＲ３０サブユニットのＰＲＭＴ５誘導ジメチル化が最近の開示に記載されている（Ｗｅｉ，ＦＬ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１１０，１３５１６−１３５２１）。これらのデータは、ＰＲＭＴ５の阻害が、ＦＬＴ３−ＷＴおよびＦＬＴ３−ＩＴＤ  ＡＭＬ細胞両方においてＳＰ１／ＮＦκＢ（ｐ６５）活性化複合体の形成を十分に減少させることができることを示している。理論により拘束されることを望まないが、これらのデータは、利用可能なＳＰ１の増加とこれらの調節要素の物理的近接の助長の両方による、この複合体の組み立ての調節に関するＰＲＭＴ５による二重機能を指摘している。
【０４０５】
図４４について言うと、ＡＭＬ細胞株におけるＰＲＭＴ５阻害後のＳＰ１のタンパク質レベルのダウンレギュレーションを、ウエスタンブロット法を用いて測定した。小分子阻害とｓｉＰＲＭＴ５両方またはｓｉＰＲＭＴ５のみを使用してＰＲＭＴ５阻害を行い、両方の場合、ＰＲＭＴ５の遮断は、アクチンの有意なノックダウンをもたらし、またはＧＡＰＤＨ染色を内部負荷対照として用いた。
【０４０６】
図４５について言うと、レンチ−ＰＲＭＴ５またはレンチ−ＥＶを形質導入したＡＭＬ細胞株におけるウエスタンブロッティングは、陰性対照と比較してレンチ−ＰＲＭＴ５処置細胞におけるアップレギュレートされたＳＰ１および、より小程度に、ｐ６５タンパク質を明らかにした。インビボで正常ＴＨＰ−１／ＥＶ動物と比較して、有意なＳＰ１アップレギュレーションがＴＨＰ−１／ＰＲＭＴ５マウスから採取した脾臓試料のウエスタンブロッティングで再現された。
【０４０７】
ｅ．ＰＲＭＴ５はｍｉＲ−２９ｂ発現を抑制することによりＳＰ１レベルを変調させる
これらのデータは、ＰＲＭＴ５がこの遺伝子の転写を促進するのではなくＳＰ１の発現をタンパク質レベルで増加させることを示すが、ＰＲＭＴ５基質Ｈ４Ｒ３の対称ジメチル化が遺伝子転写を調節（正の調節および負の調節両方）することは証明されている（Ｒｉｃｈａｒｄ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３８８，３７９−３８６；Ｆａｂｂｒｉｚｉｏ，Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．（２００２）ＥＭＢＯ  Ｒｅｐ．３，６４１−６４５。これは、標的発現の可能性のある直接的増進メカニズムを示唆している。ｍｉＲ−２９ｂは、ＳＰ１を直接に標的にし、エピジェネティックなクロマチン再構築メカニズムによってＡＭＬにおいて異常抑制されると以前に報告されている。それ故、ＰＲＭＴ５はｍｉＲ−２９ｂのレプレッサー複合体に加わることができるという仮説を立てた。
【０４０８】
成熟ｍｉＲ−２９ｂ発現は、ＴＨＰ−１／ＰＲＭＴ５マウスからの血液および脾臓において、ＴＨＰ−１／ＥＶ対照からのものと比較して有意に抑制された（図４６）。加えて、Ｃ１２で処置したＭＶ４−１１およびＴＨＰ−１細胞において、ＳＰ１およびＦＬＴ３のＰＲＭＴ５依存性ダウンレギュレーションは、ｍｉＲ−２９レベルの有意な増加と同時に起こった（図４７Ａおよび４７Ｂ）。その後、ＰＲＭＴ５阻害を伴うおよび伴わないＣｈＩＰアッセイを用いてＰＲＭＴ５の可能性のあるドッキング（間接的結合）またはＨ３Ｒ８ｍｅ２および／もしくはＨ４Ｒ３ｍｅ２の可能性のあるドッキング（直接結合）についてｐｒｉ−ｍｉＲ−２９ｂの調節領域をチェックした。ＣｈＩＰデータは、ｐｒｉ−ｍｉＲ−２９ｂの調節領域におけるＰＲＭＴ５の存在を裏付けており、これは、そのメチル化標的の１つ、Ｈ４Ｒ３ｍｅ２、による可能性が最も高い。Ｃ１２でのＰＲＭＴ５の遮断は、この因子のｍｉＲ−２９ｂ調節部位への結合の有意な減少をもたらしたからである（図４８）。ＳＰ１の変調に関するｍｉＲ−２９ｂの効率をＡＭＬ細胞においてｍｉＲ−２９ｂ機能獲得および喪失アッセイによって確認し、ｍｉＲ−２９ｂ過発現細胞においてＳＰ１の有意な抑制が検出されたが、細胞をｍｉＲ−２９ｂノックダウンで処置するとＳＰ１は再発現された（図４９Ａおよび４９Ｂ）。さらに、Ｃ１２を使用するＰＲＭＴ５の阻害は、ｐｒｉ−ｍｉＲ−２９ｂ（ｐｒｉ−ｍｉＲ−２９ｂ−１およびｐｒｉ−ｍｉＲ−２９ｂ−２）転写レベルの実質的かつ用量依存的増加につながった（図５０Ａ〜Ｃ）。対照的に、ＴＨＰ−１／ＰＲＭＴ５マウスにおけるＰＲＭＴ５の悪性過発現は、ｐｒｉ−ｍｉＲ−２９ｂレベルの抑制をもたらした（図５１）。理論により拘束されることを望まないが、これらのデータは、ＰＲＭＴ５が、ｍｉＲ−２９ｂのエンハンサー領域への転写サイレンサーＨ４Ｒ３−ｍｅ２の局在を助長することによりｍｉＲ−２９ｂレベルをダウンレギュレートする可能性があることを示唆している。結果として、ＳＰ１転写活性は、例えば、ｍｉＲ−２９ｂ阻害効果の除去に応答して増加することがあり、そしてまた活性ＳＰ１は、ＦＬＴ３発現を促進することがある。
【０４０９】
図４６について言うと、ｑＲＴ−ＰＣＲ分析を用いて、インビボでＴＨＰ−１／ＰＲＭＴ５マウスにおいて対照ＴＨＰ−１／ＥＶマウスと比較して低減された成熟ｍｉＲ−２９ｂレベルを測定した。ｔ検定を用いて有意性を算出し、１群につきｎ＝３試料を比較した。
【０４１０】
図４７Ａおよび４７Ｂについて言うと、ｑＲＴ−ＰＣＲ分析は、ＰＲＭＴ５阻害で処置したＡＭＬ細胞株における成熟ｍｉＲ−２９ｂの存在の有意な上昇を示す。
【０４１１】
図４８について言うと、ＣｈＩＰアッセイを用いて、ｍｉＲ−２９ｂのエンハンサー領域上へのＨ４Ｒ３ｍｅ２の濃縮（ＰＲＭＴ５によって堆積されたメチル化マーク）を実証した。Ｃ１２でのＰＲＭＴ５の阻害は、ｍｉＲ−２９ｂエンハンサー部位へのＨ４Ｒ３ｍｅ２局在の有意な減少をもたらした。
【０４１２】
図４９Ａおよび４９Ｂについて言うと、ウエスタンブロット法を用いて、ＡＭＬ細胞株におけるｍｉＲ−２９ｂの一過性過発現および抑制後のＳＰ１タンパク質レベルの変化を測定した。
【０４１３】
図５０Ａ〜Ｃについて言うと、ｑＲＴ−ＰＣＲアッセイを用いて、ＰＲＭＴ５阻害後のＡＭＬ細胞株および患者芽細胞におけるｐｒｉ−ｍｉＲ−２９ｂ（アイソフォームｐｒｉ−ｍｉＲ−２９ｂ−１およびｐｒｉ−ｍｉＲ−２９ｂ−２）の転写レベルを測定した。ＰＲＭＴ５活性を阻害したとき、初代ｍｉＲ−２９ｂ発現レベルの用量依存性増加が明白であった。
【０４１４】
図５１について言うと、ｑＲＴ−ＰＣＲ分析は、ＰＲＭＴ５の過発現に起因する、対照マウスと比較してＴＨＰ−１／ＰＲＭＴ５動物からの脾臓試料におけるｐｒｉ−ｍｉＲ−２９ｂ発現の減少を明示する。
【０４１５】
６．口腔咽頭扁平上皮癌（ＯＰＳＣＣ）におけるＰＲＭＴ５インヒビターの評価
肺癌、乳癌、リンパ腫および白血病などの癌からの証拠は、ＰＲＭＴ５が、細胞増殖、細胞周期進行、固定依存性成長およびアポトーシスに作用することによって腫瘍形成を助長することを示唆する。加えて、ＰＲＭＴ５がサイクリンＤ１誘導新生物成長を媒介することが最近証明された。サイクリンＤ１は、サイクリン依存性キナーゼと複合体を形成することにより細胞周期進行を調節する、サイクリンと呼ばれるタンパク質ファミリーに属する。サイクリンＤ１遺伝子の増幅およびそのタンパク質の過発現は、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）において報告されているが、この疾患におけるＰＲＭＴ５の役割およびサイクリンＤ１とＰＲＭＴ５の関連性については殆ど知られていない。図５２について言うと、ＰＲＭＴ５、サイクリンＤ１およびｐ１６の免疫組織化学染色を示す。
【０４１６】
ａ．ＰＲＭＴ５およびサイクリンＤ１の高発現はＯＰＳＣＣ患者における不良な転帰と関連付けられる
単変量解析で、核ＰＲＭＴ５発現は不良な生存期間と関連付けられた（ｐ＝０．０１８５）（図５３ならびに表７および８）。平均核染色強度の１単位増加に対して、死亡の危険が１．７（９５％ＣＩ  １．１、２．６）まで減少した。核ＰＲＭＴ５発現は、ｐ１６ステータスと逆相関し（Ｐ＝０．００４１）（図５０Ａ）、年１０箱超の喫煙歴と直接相関した（ｐ＝０．０１７４）（図５４Ｂ）。サイクリンＤ１発現は、不良な全生存期間と関連付けられた（ｐ＝０．０００２）（図５５Ａ；ｐ１６ステータスの生存期間推定については図５５Ｂを参照されたい）。平均サイクリンＤ１染色率の１単位増加に対して、死亡の危険が２．３倍（９５％ＣＩ  １．５、３．６）増加した。サイクリンＤ１発現は、ｐ１６ステータスと逆相関した（ｐ＜０．０００１）（図５６）。
【表７】
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【表８】
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【０４１７】
核ＰＲＭＴ５−患者内でサイクリンＤ１の発現を比較する部分群生存期間解析において、ＰＲＭＴ５−／サイクリンＤ１−腫瘍患者は、ＰＲＭＴ５−／サイクリンＤ１＋と比較して良好な生存期間を有した（ｐ＝０．００２３）（図５７Ａ）。ｐ１６−患者内で核ＰＲＭＴ５の発現を比較する部分群生存期間解析において、ｐ１６−／ＰＲＭＴ５＋腫瘍患者は、ｐ１６−／ＰＲＭＴ５−と比較して不良な生存期間を有した（ｐ＝０．０５８４）（図５７Ｂ）。多変量モデルでは、核ＰＲＭＴ５およびサイクリンＤ１発現ステータスについての調整後、ｐ１６は、全生存期間と有意に関連付けられた（ｐ＝０．０００３）。ｐ１６陰性であった腫瘍患者にはｐ１６陽性であった者より２．４倍、死亡の危険があった（９５％ＣＩ  １．５、３．９）（表９）。
【表９】
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【０４１８】
理論により拘束されることを望まないが、これらのデータは、サイクリンＤ１およびＰＲＭＴ５が、特にｐ１６陰性癌において、有望な治療標的であることを示唆している。実際、ＨＬＣＬ−７を評価してＨＮＳＣＣ腫瘍細胞に対する効果を判定し、用量依存的に増殖を阻害することを見いだした（図５８）。
【０４１９】
ｂ．ＰＲＭＴ５インヒビター：ＨＬＣＬ−６１、ＨＬＣＬ−６５およびＨＬＣＬ−６６の生物学的評価
複数の細胞株の増殖をＣＭＰＤ５、ＣＭＰＤ７、ＨＬＣＬ−６１、ＨＬＣＬ−６５およびＨＬＣＬ−６６について評価した（図５９Ａ〜Ｅ）。試験した全ての化合物について低マイクロモル範囲で効力が観察された。
【０４２０】
図６０について言うと、ＨＬＣＬ−６６に応答してのＰＲＭＴ５および扁平上皮癌遊走を例証する。遊走は、以前に記載されているように行った（Ｎｏｗｉｃｋｉ，Ｍ．Ｏ．，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｎｅｕｒｏ．Ｏｎｃｏｌ．１０，６９０−６９９）。簡単に言うと、ＨＬＣＬ−６６で処置したＣＡＬ−２７細胞を用いて０、１６および２４時間、遊走スクラッチアッセイ（ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｓｃｒａｔｃｈ  ａｓｓａｙ）を行った。１６時間および２４時間、両方の時点で用量反応方式でギャップが閉鎖された。これは、ＰＲＭＴ５阻害が扁平上皮癌細胞株の遊走活性の喪失につながることを示す。
【０４２１】
図６１Ａ〜Ｄについて言うと、様々な細胞株（例えば、ＵＳＣ−ＨＮ２、ＵＭＳＣＣ−７４ａ、ＵＭＳＣＣ−４７およびＣＡＬ−２７、それぞれ）の、ＰＲＭＴ５および、ＨＬＣＬ６５に応答しての遊走を例証する。本明細書において上で説明したように遊走を行った。
【０４２２】
７．マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）におけるＰＲＭＴ５インヒビターの評価
インビボ研究から得た化合物ＨＬＣＬ−７、ＨＬＣＬ−６１およびＨＬＣＬ−６６の薬物動態データを表１０で説明する。化合物を、Ｔｗｅｅｎ８０製剤中５ｍｇ／ｋｇでの静脈内（ＩＶ）投与またはＤＭＳＯ溶液中２５ｍｇ／ｋｇでの腹腔内（ＩＰ）投与いずれかによって投薬した。
【表１０】
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【０４２３】
制御されたｓｈＲＮＡ欠乏をマウスリンパ腫モデル（Ｅμ−ＢＲＤ２（Ｃｈｕｎｇ，Ｊ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｊ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８８，３５５３４−３５５４７））およびグリア芽細胞腫のヒト異種移植モデル（Ｙａｎ，Ｆ．，ｅｔ  ａｌ（２０１４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎ  Ｐｒｅｓｓ）で評価した。図６２Ａについて言えば、対照ｓｈＲＮＡ（断続線）ではなく、ＰＲＭＴ５  ｓｈＲＮＡ（実線）の制御発現は、マウスに生着させた初代ＤＬＢＣＬ腫瘍細胞の１００％生存につながる。図６２Ｂについて言えば、２５ｍｇ／ｋｇの用量でＩＶおよびＩＰ経路によって送達したＨＬＣＬ−６５のＰＫ実験は、８〜２０μＭの範囲のピーク血漿濃度を示した（ＨＬＣＬ−７およびＨＬＣＬ−６１に関するＰＫデータについては図６３Ａおよび６３Ｂを参照されたい）。最大耐用量（ＭＴＤ、単回用量）が５０ｍｇ／ｋｇで確認された（下の表１１を参照されたい）。準毒性用量（２５ｍｇ／ｋｇ）を使用してＦｃＭＣＬマウスを処置した。対照マウスは、生着後第２０日に開始する末梢血およびリンパ節腫瘍量を発生させた。予備実験は、ＨＬＣＬ−６５（２５ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、１日おき）での処置が、末梢血ＦｃＭＣＬ腫瘍負荷量ではなくリンパ節腫瘍量の発生を制御することにより生存期間改善をもたらすことを示す（図６３Ｃ）。理論により拘束されることを望まないが、このデータは、ＰＲＭＴ５阻害が、リンパ腫形成を助長する微小環境変化につながり得ることを示唆している。
【表１１】
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【０４２４】
８．机上の実施例
ａ．新規実験的治療戦略を探るためのＭＣＬのインビボ前臨床モデル
１つの机上の実施例では、単独でのＰＲＭＴ５インヒビターの活性、ならびにＰＤ０３３２９９１、ＧＳ１１０１等価ＰＩ３Ｋα／δインヒビターＧＤＣ−００３２およびイブルチニブと併用でのＰＲＭＴ５インヒビターの活性を、前臨床マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）のモデルで試験することになる。理論により拘束されることを望まないが、結果は、様々な実験的治療戦略の前臨床活性を調査する直接的機会をもたらすこともあり、または特定の薬物療法に対する耐性に寄与する遺伝的プログラムに関する洞察をもたらすこともある。
【０４２５】
ｂ．ＭＣＬおよびＰＲＭＴ５誘導リンパ腫形成の前臨床モデル
１つの机上の実施例では、ＭＣＬおよびＰＲＭＴ５誘導リンパ腫形成をＦＣ−ｍｕＭＣＬ１モデルで評価する。ＦＣ−ｍｕＭＣＬ１（Ｓｍｉｔｈ，Ｎ．Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２７，１５９２−１５９４）は、非特異的免疫アジュバント、プリスタンで処置したサイクリンＤ１  Ｅｕモデルに由来する系である。このモデルには、サイクリンＤ１過発現、ＭＣＬ表現型（ＣＤ５＋、ＣＤ１９＋、ＣＤ２３−）、およびＭＣＬの特徴的な分子形状の存在を含む、いくつかの利点がある。Ｃ５７Ｂ１６マウスに生着させたときのＦｃ−ＭＣＬモデルは、被検治療戦略の毒性はもちろん、抗腫瘍免疫応答の評価も可能にする、同系、免疫応答性モデル系である。
【０４２６】
第二の机上の実施例では、ＭＣＬおよびＰＲＭＴ５誘導リンパ腫形成を、免疫不全マウス（ＮＳＧ）に有効に生着するヒトＭＣＬ由来細胞株において評価する。このモデル（ＣＣＭＣＬ１）は、Ｚｈａｏら（Ｚａｏ，Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｂｌｏｏｄ  １２２，６４５ａ）によって２０１３  ＡＳＨ集会で最近報告されたものであり、ＮＳＧマウスに初代白血病ＭＣＬ細胞を生着させることによって開発された。この系統は、サイクリンＤ１、ＳＯＸ１１、ＰＡＸ５およびＭＣＬ１を発現し、ＭＣＬ免疫表現型を有する。
【０４２７】
Ｈ．参考文献
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【０４２８】
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【０４３２】
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【０４３４】
Ｚｈａｏ  Ｑ，  Ｒａｎｋ  Ｇ，  ｅｔ  ａｌ．  ＰＲＭＴ５  −ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ４Ｒ３  ｒｅｃｒｕｉｔｓ  ＤＮＭＴ３Ａ，  ｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ａｎｄ  ＤＮＡ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｇｅｎｅ  ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ．  Ｎａｔ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  ２００９；  １６（３）：３０４−１  １．  
【０４３５】
Ｘｕ  Ｘ，  ｅｔ  ａｌ．  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍａｃｈｉｎｅ  ｌｅａｒｎｉｎｇ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｔｏ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ＣｈｌＰ−Ｓｅｑ  ｄａｔａ  ｒｅｖｅａｌｓ  Ｈ４Ｒ３ｍｅ２  ｇｌｏｂａｌｌｙ  ｒｅｐｒｅｓｓｅｓ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．  ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．  ２０１０；  １  １（１）：３９６．  
【０４３６】
Ａｎｃｅｌｉｎ  Ｋ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｌｉｍｐ  １  ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｐｒｍｔ５  ａｎｄ  ｄｉｒｅｃｔｓ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｏｕｓｅ  ｇｅｒｍ  ｃｅｌｌｓ．  Ｎａｔ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ２００６；  ８：  ６２３−６３０．  
【０４３７】
Ｋｉｍ  Ｃ，  Ｌｉｍ  Ｙ，  Ｙｏｏ  ＢＣ，  Ｗｏｎ  ＮＨ，  Ｋｉｍ  Ｓ，  Ｋｉｍ  Ｇ．  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｏｓｔ−  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｄｕｒｉｎｇ  ＨｅＬａ  ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ．  Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ．  ２０１０；  １８００（９）：９７７−９８５．  
【０４３８】
Ｒａｎｋ  Ｇ，  Ｃｅｒｒｕｔｉ  Ｌ，  Ｓｉｍｐｓｏｎ  ＲＪ，  Ｍｏｒｉｔｚ  ＲＬ，  Ｊａｎｅ  ＳＭ，  Ｚｈａｏ  Ｑ．  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ＰＲＭＴ５−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｒｅｐｒｅｓｓｏｒ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｌｉｎｋｅｄ  ｔｏ  ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｆｅｔａｌ  ｇｌｏｂｉｎ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．  Ｂｌｏｏｄ．  ２０１０  Ｍａｙ  ２１．  ［Ｅｐｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ］．  
【０４３９】
Ｍａｊｕｍｄｅｒ  Ｓ，  Ａｌｉｎａｒｉ  Ｌ，  Ｒｏｙ  Ｓ，  Ｍｉｌｌｅｒ  Ｔ，  Ｄａｔｔａ  Ｊ，  Ｓｉｆ  Ｓ，  Ｂａｉｏｃｃｈｉ  Ｒ，  Ｊａｃｏｂ  ＳＴ．  Ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３  ａｎｄ  Ｈ４  ｂｙ  ＰＲＭＴ５  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｒｉｂｏｓｏｍａｌ  ＲＮＡ  ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ．  Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ２０１０；  １０９（３）：５５３−６３．  
【０４４０】
Ｓｃｏｕｍａｎｎｅ  Ａ，  Ｚｈａｎｇ  Ｊ，  Ｃｈｅｎ  Ｘ．  ＰＲＭＴ５  ｉｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｃｅｌｌ−ｃｙｃｌｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｐ５３  ｔｕｍｏｒ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  
２００９；３７（１５）：４９６５−７６．  
【０４４１】
Ｊａｎｓｓｏｎ  Ｍ，  ｅｔ  ａｌ．  Ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｔｈｅ  ｐ５３  ｒｅｓｐｏｎｓｅ．  Ｎａｔ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  ２００８；  １０（１２）：  １４３１−９．
【０４４２】
Ｄｕｒａｎｔ  ＳＴ，  Ｃｈｏ  ＥＣ，  Ｌａ  Ｔｈａｎｇｕｅ  ＮＢ．  ｐ５３  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ-  ｔｈｅ  Ａｒｇ−ｕｍｅｎｔ  ｉｓ  ｃｌｅａｒ．  Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅ．  ２００９；  ８（６）：  ８０１−２．  
【０４４３】
Ｂｅｒｇｅｒ  ＳＬ．  Ｏｕｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｊａｗｓ  ｏｆ  ｄｅａｔｈ：  ＰＲＭＴ５  ｓｔｅｅｒｓ  ｐ５３．  Ｎａｔ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  
２００８；  １０（１２）：  １３８９−９０．  
【０４４４】
Ｔａｎａｋａ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．  ＰＲＭＴ５，  ａ  ｎｏｖｅｌ  ＴＲＡＩＬ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ，  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ＴＲＡＩＬ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｖｉａ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ−ｋａｐｐａＢ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．  Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２００９；  ７（４）：５５７−６９．  
【０４４５】
Ｗａｎｇ  Ｌ，  Ｐａｌ  Ｓ，  Ｓｉｆ  Ｓ．  ＰＲＭＴ５  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｔｈｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＲＢ  ｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｓ  ｉｎ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｎｄ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  ２００８；２８（２０）：６２６２−７７  
【０４４６】
Ｐａｌ  Ｓ，  Ｂａｉｏｃｃｈｉ  ＲＡ，  Ｂｙｒｄ  ＪＣ，  Ｇｒｅｖｅｒ  ＭＲ，  Ｊａｃｏｂ  ＳＴ，  Ｓｉｆ  Ｓ．  ２００７．  Ｌｏｗ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｍｉＲ−９２ｂ￥９６  ｉｎｄｕｃｅ  ＰＲＭＴ５  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｈ３Ｒ８／Ｈ４Ｒ３  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍａｎｔｌｅ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．  ＥＭＢＯ．  Ｖｏｌ．  １５，  ｎｏ．  ２６：  ３５５８−３５６９  ２００７．  
【０４４７】
Ｙａｎ  Ｆ．  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ５  ｅｎｚｙｍｅ  ｉｎ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｍｕｌｔｉｆｏｒｍ．  Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｕｍｂｅｒ  １５８４．  １０１ｓｔ  ＡＡＣＲ  ａｎｎｕａｌ  ｍｅｅｔｉｎｇ，  ２０１０．  
【０４４８】
Ｂｏｓｃｈ  Ｆ，  Ｊａｒｅｓ  Ｐ，  ｅｔ  ａｌ．  ＰＲＡＤ−ｌ／ｃｙｃｌｉｎ  Ｄｌ  ｇｅｎｅ  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ：  ａ  ｈｉｇｈｌｙ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｍａｒｋｅｒ  ｏｆ  ｍａｎｔｌｅ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．  Ｂｌｏｏｄ．  １９９４；  ８４（８）：２７２６−３２．  
【０４４９】
Ｙａｎ  Ｆ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｃｌａｓｓ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ｔｏ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ＰＲＭＴ５  ｅｎｚｙｍｅ  ｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍａｎｔｌｅ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．  Ｂｌｏｏｄ，  Ａｂｓｔｒ  ５９５，  ２０１２．  
【０４５０】
Ａｇｇａｒｗａｌ  Ｐ，  Ｖａｉｔｅｓ  ＬＰ，  Ｋｉｍ  ＪＫ，  Ｍｅｌｌｅｒｔ  Ｈ，  Ｇｕｒｕｎｇ  Ｂ，  Ｎａｋａｇａｗａ  Ｈ，  Ｈｅｒｌｙｎ  Ｍ，  Ｈｕａ  Ｘ，  Ｒｕｓｔｇｉ  ＡＫ，  ＭｃＭａｈｏｎ  ＳＢ，  Ｄｉｅｈｌ  ＪＡ  （２０１０）  Ｎｕｃｌｅａｒ  ｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１／ＣＤＫ４  ｋｉｎａｓｅ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ＣＵＬ４  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｒｉｇｇｅｒｓ  ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ｇｒｏｗｔｈ  ｖｉａ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＰＲＭＴ５  ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  １８（４）：  ３２９−３４０．  
【０４５１】
Ｃｈｏ  ＥＣ，  Ｚｈｅｎｇ  Ｓ，  Ｍｕｎｒｏ  Ｓ，  Ｌｉｕ  Ｇ，  Ｃａｒｒ  ＳＭ，  Ｍｏｅｈｌｅｎｂｒｉｎｋ  Ｊ，  Ｌｕ  ＹＣ，  Ｓｔｉｍｓｏｎ  Ｌ，  Ｋｈａｎ  Ｏ，  Ｋｏｎｉｅｔｚｎｙ  Ｒ，  ＭｃＧｏｕｒａｎ  Ｊ，  Ｃｏｕｔｔｓ  ＡＳ，  Ｋｅｓｓｌｅｒ  Ｂ，  Ｋｅｒｒ  ＤＪ，  Ｔｈａｎｇｕｅ  ＮＢ  Ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｃｏｎｔｒｏｌｓ  ｇｒｏｗｔｈ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｅ２Ｆ−１．  ＥＭＢＯ  Ｊ３１（７）：  １７８５−１７９７．  
【０４５２】
Ｄｏｕｅｉｒｉ  Ｒ，  Ａｎｕｐａｍ  Ｒ，  Ｋｖａｒａｔｓｋｈｅｌｉａ  Ｍ，  Ｇｒｅｅｎ  ＫＢ，  Ｌａｉｒｍｏｒｅ  ＭＤ，  Ｇｒｅｅｎ  ＰＬ  Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  ｈｏｓｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  ＨＴＬＶ−１  ｐ３０  ａｎｄ  ＨＴＬＶ−２  ｐ２８：  ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｉｎｔｏ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ  ｉｎ  ｐａｔｈｏｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ．  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｏｌｏｇｙ  ９：  ６４．  
【０４５３】
Ｇｕ  Ｚ，  Ｇａｏ  Ｓ，  Ｚｈａｎｇ  Ｆ，  Ｗａｎｇ  Ｚ，  Ｍａ  Ｗ，  Ｄａｖｉｓ  ＲＥ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｒｇｉｎｉｎｅ  
ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ５  ｉｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ４４６（２）：  ２３５−２４１．
【０４５４】
Ｇｕ  Ｚ，  Ｌｉ  Ｙ，  Ｌｅｅ  Ｐ，  Ｌｉｕ  Ｔ，  Ｗａｎ  Ｃ，  Ｗａｎｇ  Ｚ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ５  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｏｐｐｏｓｉｔｅ  ｗａｙｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｙｔｏｐｌａｓｍ  ａｎｄ  ｎｕｃｌｅｕｓ  ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ７（８）：  ｅ４４０３３．  
【０４５５】
Ｊｉａｎｇ  Ｗ，  Ｒｏｅｍｅｒ  ＭＥ，  Ｎｅｗｓｈａｍ  ＩＦ  （２００５）  Ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ＤＡＬ−  １／４．  ＩＢ  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｒｇｉｎｉｎｅ  Ｎ−ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ５  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ａ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｍａｎｎｅｒ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ３２９（２）：  ５２２−５３０．  
【０４５６】
Ｌｉａｎｇ  ＪＪ，  Ｗａｎｇ  Ｚ，  Ｃｈｉｒｉｂｏｇａ  Ｌ，  Ｇｒｅｃｏ  ＭＡ，  Ｓｈａｐｉｒｏ  Ｅ，  Ｈｕａｎｇ  Ｈ，  Ｙａｎｇ  ＸＪ，  Ｈｕａｎｇ  Ｊ，  Ｐｅｎｇ  Ｙ，  Ｍｅｌａｍｅｄ  Ｊ，  Ｇａｒａｂｅｄｉａｎ  ＭＪ，  Ｌｅｅ  Ｐ  （２００７）  Ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｄｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｐ４４  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ５  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ  ｔｅｓｔｉｓ  ａｎｄ  ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒ  ｔｕｍｏｒｓ．  Ｊ  Ｕｒｏｌ  １７７（５）：  １９１８−１９２２．  
【０４５７】
Ｌｉｕ  Ｆ，  Ｚｈａｏ  Ｘ，  Ｐｅｒｎａ  Ｆ，  Ｗａｎｇ  Ｌ，  Ｋｏｐｐｉｋａｒ  Ｐ，  Ａｂｄｅｌ−Ｗａｈａｂ  Ｏ，  Ｈａｒｒ  ＭＷ，  Ｌｅｖｉｎｅ  ＲＬ，  Ｘｕ  Ｈ，  Ｔｅｆｆｅｒｉ  Ａ，  Ｄｅｂｌａｓｉｏ  Ａ，  Ｈａｔｌｅｎ  Ｍ，  Ｍｅｎｅｎｄｅｚ  Ｓ，  Ｎｉｍｅｒ  ＳＤ  ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ  −ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＰＲＭＴ５  ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｉｔｓ  ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｍｙｅｌｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  １９（２）：  ２８３−２９４．  
【０４５８】
Ｍａｌｏｎｅｙ  Ａ，  Ｃｌａｒｋｅ  ＰＡ，  Ｎａａｂｙ−Ｈａｎｓｅｎ  Ｓ，  Ｓｔｅｉｎ  Ｒ，  Ｋｏｏｐｍａｎ  ＪＯ，  Ａｋｐａｎ  Ａ，  Ｙａｎｇ  Ａ，  Ｚｖｅｌｅｂｉｌ  Ｍ，  Ｃｒａｍｅｒ  Ｒ，  Ｓｔｉｍｓｏｎ  Ｌ，  Ａｈｅｒｎｅ  Ｗ，  Ｂａｎｅｒｊｉ  Ｕ，  Ｊｕｄｓｏｎ  Ｉ，  Ｓｈａｒｐ  Ｓ，  Ｐｏｗｅｒｓ  Ｍ，  ｄｅＢｉｌｌｙ  Ｅ，  Ｓａｌｍｏｎｓ  Ｊ，  Ｗａｌｔｏｎ  Ｍ，  Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ  Ａ，  Ｗａｔｅｒｆｉｅｌｄ  Ｍ，  Ｗｏｒｋｍａｎ  Ｐ  （２００７）  Ｇｅｎｅ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｈｅａｔ  ｓｈｏｃｋ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ９０  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  １７−ａｌｌｙｌａｍｉｎｏ−１７−ｄｅｍｅｔｈｏｘｙｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６７（７）：  ３２３９−３２５３．  
【０４５９】
Ｍｏｒｇａｎ  ＭＡ，  Ｍｏｕｌｄ  ＡＷ，  Ｌｉ  Ｌ，  Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ  ＥＪ，  Ｂｉｋｏｆｆ  ＥＫ  Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｐｒｄｍｌ／Ｂｌｉｍｐ−１  ＤＮＡ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ａｎｄ  ｃｏｒｅｐｒｅｓｓｏｒ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ．  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ３２（１７）：  ３４０３−３４１３．  
【０４６０】
Ｐａｌ  Ｓ，  Ｂａｉｏｃｃｈｉ  ＲＡ，  Ｂｙｒｄ  ＪＣ，  Ｇｒｅｖｅｒ  ＭＲ，  Ｊａｃｏｂ  ＳＴ，  Ｓｉｆ  Ｓ  （２００７）  Ｌｏｗ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｍｉＲ−９２ｂ／９６  ｉｎｄｕｃｅ  ＰＲＭＴ５  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｈ３Ｒ８／Ｈ４Ｒ３  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍａｎｔｌｅ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．  ＥＭＢＯ  Ｊ  ２６（１５）：  ３５５８−３５６９．  
【０４６１】
Ｐｏｗｅｒｓ  ＭＡ，  Ｆａｙ  ＭＭ，  Ｆａｃｔｏｒ  ＲＥ，  Ｗｅｌｍ  ＡＬ，  Ｕｌｌｍａｎ  ＫＳ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ５  ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｓ  ｔｕｍｏｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ｂｙ  ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ４．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ７１（１６）：  ５５７９−５５８７．  
【０４６２】
Ｒａｎｋ  Ｇ，  Ｃｅｒｒｕｔｉ  Ｌ，  Ｓｉｍｐｓｏｎ  ＲＪ，  Ｍｏｒｉｔｚ  ＲＬ，  Ｊａｎｅ  ＳＭ，  Ｚｈａｏ  Ｑ  （２０１０）  
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ＰＲＭＴ５−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｒｅｐｒｅｓｓｏｒ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｌｉｎｋｅｄ  ｔｏ  ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｆｅｔａｌ  ｇｌｏｂｉｎ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．  Ｂｌｏｏｄ  １１６（９）：  １５８５−１５９２．  
【０４６３】
Ｒｅｕｔｈｅｒ  ＧＷ  Ｒｅｃｕｒｒｉｎｇ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｍｙｅｌｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｎｅｏｐｌａｓｍｓ  ａｌｔｅｒ  ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．  Ａｍ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １（６）：  ７５２−７６２．
【０４６４】
Ｒｏｚａｎ  ＬＭ，  Ｅｌ−Ｄｅｉｒｙ  ＷＳ  （２００６）  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ  ｗｉｔｈ  Ｔｒａｆ４，  ａｎ  ｅｎｉｇｍａｔｉｃ  ｐ５３  ｔａｒｇｅｔ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ  ５（９）：  １２２８−１２３５．  
【０４６５】
Ｔａｅ  Ｓ，  Ｋａｒｋｈａｎｉｓ  Ｖ，  Ｖｅｌａｓｃｏ  Ｋ，  Ｙａｎｅｖａ  Ｍ，  Ｅｒｄｊｕｍｅｎｔ−Ｂｒｏｍａｇｅ  Ｈ，  Ｔｅｍｐｓｔ  Ｐ，  Ｓｉｆ  Ｓ  Ｂｒｏｍｏｄｏｍａｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ７  ｉｎｔｅｒａｃｔｓ  ｗｉｔｈ  ＰＲＭＴ５  ａｎｄ  ＰＲＣ２，  ａｎｄ  ｉｓ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅｉｒ  ｔａｒｇｅｔ  ｇｅｎｅｓ．  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３９（１３）：  ５４２４−５４３８．  
【０４６６】
Ｗａｎｇ  Ｌ，  Ｐａｌ  Ｓ，  Ｓｉｆ  Ｓ  （２００８）  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ５  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｔｈｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＲＢ  ｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｓ  ｉｎ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｎｄ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ２８（２０）：  ６２６２−６２７７．  
【０４６７】
Ｗｅｉ  ＴＹ，  Ｊｕａｎ  ＣＣ，  Ｈｉｓａ  ＪＹ，  Ｓｕ  ＬＪ，  Ｌｅｅ  ＹＣ，  Ｃｈｏｕ  ＨＹ，  Ｃｈｅｎ  ＪＭ，  Ｗｕ  ＹＣ，  Ｃｈｉｕ  ＳＣ，  Ｈｓｕ  ＣＰ，  Ｌｉｕ  ＫＬ，  Ｙｕ  ＣＴ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ５  ｉｓ  ａ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｈａｔ  ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｇｌ  ｃｙｃｌｉｎｓ／ｃｙｃｌｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｋｉｎａｓｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅ  ３−ｋｉｎａｓｅ／ＡＫＴ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｃａｓｃａｄｅ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ  １０３（９）：  １６４０−１６５０．  
【０４６８】
Ｘｕ  Ｚ，  Ｈｅ  Ｙ，  Ｊｕ  Ｊ，  Ｒａｎｋ  Ｇ，  Ｃｅｒｒｕｔｉ  Ｌ，  Ｍａ  Ｃ，  Ｓｉｍｐｓｏｎ  ＲＪ，  Ｍｏｒｉｔｚ  ＲＬ，  Ｊａｎｅ  ＳＭ，  Ｚｈａｏ  Ｑ  Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＷＤＲ５  ｉｎ  ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ｆｅｔａｌ  ｇｌｏｂｉｎ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  ９７（１１）：  １６３２−１６４０．  
【０４６９】
Ｚｈａｎｇ  ＳＪ，  Ａｂｄｅｌ−Ｗａｈａｂ  Ｏ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｅｄ  ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  
ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｍｙｅｌｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｎｅｏｐｌａｓｍｓ．  Ｃｕｒｒ  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｍａｌｉｇ  Ｒｅｐ  ７（１）：  ３４−４２．  
【０４７０】
Ｆｒｏｈｌｉｎｇ，  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ：  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｔｉｃ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  ２３，  ６２８５−６２９５．  
【０４７１】
Ｅｓｔｅｙ，  Ｅ．  ＆  Ｄ５ｈｎｅｒ，  Ｈ．  （２００５）  Ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋａｅｍｉａ．  Ｌａｎｃｅｔ  ３６８，  １８９４−１９０７．  
【０４７２】
ＭｃＫｅｎｚｉｅ，  Ｓ．  Ｂ．  （２００５）  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ｔｈｅ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．  Ｃｌｉｎ．  Ｌａｂ．  Ｓｃｉ．  １８，  ２８−３７．  
【０４７３】
Ｄｏｍｂｒｅｔ，  Ｈ．  （２０１１）  Ｇｅｎｅ  ｍｕｔａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ＡＭＬ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ．  Ｂｌｏｏｄ  １１８，  ５３６６−  ５３６７．  
【０４７４】
Ｍａｒｃｕｃｃｉ，  Ｇ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１  １）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  ａｄｕｌｔ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ：  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  ２９，  ４７５−４８６．  
【０４７５】
Ｄ５ｈｎｅｒ，  Ｈ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｉｎ  ａｄｕｌｔｓ：  ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ  ｆｒｏｍ  ａｎ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｅｘｐｅｒｔ  ｐａｎｅｌ，  ｏｎ  ｂｅｈａｌｆ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ＬｅｕｋｅｍｉａＮｅｔ．  Ｂｌｏｏｄ  １１５，  ４５３−４７４．  
【０４７６】
Ｋｉｎｄｌｅｒ，  Ｔ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  ＦＬＴ３  ａｓ  ａ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔ  ｉｎ  ＡＭＬ：  ｓｔｉｌｌ  ｃｈａｌｌｅｎｇｉｎｇ  ａｆｔｅｒ  ａｌｌ  ｔｈｅｓｅ  ｙｅａｒｓ．  Ｂｌｏｏｄ  １１６，  ５０８９−５１０２．  
【０４７７】
Ｗｅｉｓｂｅｒｇ，  Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  Ｄｒｕｇ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  ｍｕｔａｎｔ  ＦＬＴ３−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ＡＭＬ．  
Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２９，  ５１２０−５１３４．
【０４７８】
Ｓｔｉｒｅｗａｌｔ，  Ｄ．  Ｌ．  ＆  Ｒａｄｉｃｈ，  Ｊ．  Ｐ．  （２００３  ）Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＦＬＴ３  ｉｎ  ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ．  Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．  Ｃａｎｃｅｒ  ３，  ６５０−６６５．  
【０４７９】
Ｗｅｉｓｂｅｒｇ，  Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  ＦＬＴ３  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  ｍｕｔａｎｔ  ＦＬＴ３  −ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ＡＭＬ．  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓｉｓｔ．  Ｕｐｄａｔ．  １２，  ８１−８９．  
【０４８０】
Ｂｌｕｍ，  Ｗ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１２）  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ  ａｎｄ  ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．  Ｂｌｏｏｄ  １１９，  ６０２５−６０３１．  
【０４８１】
Ｌｉｕ，  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  Ｓｐ  １  ／ＮＦｋａｐｐａＢ／ＨＤ  ＡＣ／ｍｉＲ−２９ｂ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｎｅｔｗｏｒｋ  ｉｎ  ΚΓΓ−  ｄｒｉｖｅｎ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  １７，  ３３３−３４７．  
【０４８２】
Ｐａｌ，  Ｓ．  （２００７）  Ｉｎｔｅｒｐｌａｙ  Ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｉｎ  Ｒｅｍｏｄｅｌｅｒｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｒｇｉｎｉｎｅ  Ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ．  ｄｏｉ：  １０．１００２／ＪＣＰ  
【０４８３】
Ｂｅｄｆｏｒｄ，  Ｍ．  Ｔ．  （２００７）  Ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ａｔ  ａ  ｇｌａｎｃｅ．  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．  １２０，  ４２４３−  ４２４６．  
【０４８４】
Ｊａｎｓｓｏｎ，  Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２００８）  Ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｔｈｅ  ｐ５３  ｒｅｓｐｏｎｓｅ．  Ｎａｔ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  １０，  １４３１−１４３９．  
【０４８５】
Ｇｕｅｚｅｎｎｅｃ，  Ｘ．  Ｌｅ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ＭＢＤ２  ／  ＮｕＲＤ  ａｎｄ  ＭＢＤ３  ／  ＮｕＲＤ  ，  Ｔｗｏ  Ｄｉｓｔｉｎｃｔ  Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，  ｄｏｉ：  １０．１  １２８／ＭＣＢ．２６．３．８４３  
【０４８６】
Ｂｅｄｆｏｒｄ，  Ｍ．  Ｔ．  ＆  Ｒｉｃｈａｒｄ，  Ｓ．  （２００５）  Ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ａｎ  ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ  １８，  ２６３−２７２．  
【０４８７】
Ｓｃｏｕｍａｎｎｅ，  Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  ＰＲＭＴ５  ｉｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｃｅｌｌ−ｃｙｃｌｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｐ５３  ｔｕｍｏｒ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ３７，  ４９６５−４９７６．  
【０４８８】
Ｐａｌ，  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）  Ｌｏｗ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｍｉＲ−９２ｂ／９６  ｉｎｄｕｃｅ  ＰＲＭＴ５  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ
Ｈ３Ｒ８／Ｈ４Ｒ３  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍａｎｔｌｅ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．  ＥＭＢＯ  Ｊ．  ２６，  ３５５８−３５６９．  
【０４８９】
Ｗａｎｇ，  Ｌ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２００８）  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ５  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｔｈｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＲＢ  ｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｓ  ｉｎ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｎｄ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．  Ｍｏｌ．
Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２８，  ６２６２−６２７７．  
【０４９０】
Ｗｅｉ，  ＰＬ，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  ＰＲＭＴ５  ｄｉｍｅｔｈｙｌａｔｅｓ  Ｒ３０  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐ６５  ｓｕｂｕｎｉｔ  ｔｏ  ａｃｔｉｖａｔｅ  ＮＦ−  ＫＢ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．  Ｓ．  Ａ．  １１０，  １３５１６−１３５２１．  
【０４９１】
Ｋｉｍ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｇａｓｔｒｉｃ  Ｃａｎｃｅｒ  −  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｇｅｎｅｓ  Ｕｓｉｎｇ  ａ  ｃＤＮＡ  Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ  Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｎｏｖｅｌ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｔａｇｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  Ｇａｓｔｒｉｃ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌｓ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｇａｓｔｒｉｃ  Ｃａｎｃｅｒ  −  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｇｅｎｅｓ  Ｕｓｉｎｇ  ａ  ｃＤＮＡ  Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ  Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｎｏｖｅｌ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ．  ４７３−４８２．
【０４９２】
Ｅｃｋｅｒｔ，  Ｄ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２００８）  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＢＬＩＭＰ  １／ＰＲＭＴ５  ａｎｄ  ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ  ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ２Ａ／Ｈ４  ａｒｇｉｎｉｎｅ  ３  ｄｉｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｆｅｔａｌ  ｇｅｒｍ  ｃｅｌｌｓ，  ＣＩＳ／ＩＧＣＮＵ  ａｎｄ  ｇｅｒｍ  ｃｅｌｌ  ｔｕｍｏｒｓ．  ＢＭＣ  Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．  ８，  １０６．  
【０４９３】
Ｌｉｕ，  Ｆ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＰＲＭＴ５  ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｉｔｓ  ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｍｙｅｌｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  １９，  ２８３−２９４．  
【０４９４】
Ｇｕ，  Ｚ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１２）  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ５  ｉｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｊ．  ４４６，  ２３５−２４１．  
【０４９５】
Ｂａｏ，  Ｘ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＰＲＭＴ５  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｐｏｏｒ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ  ｉｎ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｊ．  Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．  
Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．  ６１，  ２０６−２１７．  
【０４９６】
Ｎｉｃｈｏｌａｓ，  Ｃ，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  ＰＲＭＴ５  ｉｓ  ｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｉｎ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ａｎｄ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ａｎｄ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＭＩＴＦ  ａｎｄ  ｐ２７（Ｋｉｐｌ．）．  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ８，  ｅ７４７１０．  
【０４９７】
Ｓｐｉｅｋｅｒｍａｎｎ，  Ｋ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＦＬＴ３  Ｉｎｄｕｃｅｓ  ＳＴＡＴ５  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｒｉｍａｒｙ  Ａｃｕｔｅ  Ｍｙｅｌｏｉｄ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｂｌａｓｔ  Ｃｅｌｌｓ  
Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＦＬＴ３  Ｉｎｄｕｃｅｓ  ＳＴＡＴ５  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｒｉｍａｒｙ  Ａｃｕｔｅ  Ｍｙｅｌｏｉｄ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｂｌａｓｔ  Ｃｅｌｌｓ  １．  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ９，  ２１４０−２１５０．  
【０４９８】
Ｒｉｃｈａｒｄ，  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ＩＬ−２  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：  ａ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ５  （ＰＲＭＴ５）．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｊ．  ３８８，  ３７９−３８６．  
【０４９９】
Ｆａｂｂｒｉｚｉｏ，  Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  Ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｔｙｐｅ  ＩＩ  ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ＰＲＭＴ５．  ＥＭＢＯ  Ｒｅｐ．  ３，  ６４１−６４５．  
【０５００】
Ｍｅｓｈｉｎｃｈｉ，  Ｓ．  ＆  Ａｐｐｅｌｂａｕｍ，  Ｆ．  Ｒ．  （２００９）  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ＦＬＴ３  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １５，  ４２６３−４２６９．  
【０５０１】
Ｍｏｏｒｅ，  ａ  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１２）  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ＦＬＴ３  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＦＬＴ３−ＩＴＤ＋  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋａｅｍｉａ  ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ  ｉｎ  ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  Ｄ８３５Ｙ  ｍｕｔａｔｉｏｎ：  ａ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｐａｔｔｅｒｎｓ．  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２６，  １４６２−１４７０．  
【０５０２】
Ｋｎａｐｐｅｒ，  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｌｅｓｔａｕｒｔｉｎｉｂ  （ＣＥＰ７０１）  ａｎｄ  ＰＫＣ４１２  ｏｎ  ｐｒｉｍａｒｙ  ＡＭＬ  ｂｌａｓｔｓ：  ｔｈｅ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｖａｒｉｅｓ  ｗｉｔｈ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ  ｏｎ  ＦＬＴ３  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｂｏｔｈ  ＦＬＴ３−ｍｕｔａｔｅｄ  ａｎｄ  ｗｉｌｄ−ｔｙｐｅ  ｃａｓｅｓ．  Ｂｌｏｏｄ  １０８，  ３４９４−５０３．  
【０５０３】
Ｍｉｍｓ，  Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ａｎｔｉ−ｌｅｕｋｅｍｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ  ｖｉａ  ＡＲ−４２−  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｉＲ−２９ｂ：  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ  −ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２７，  ８７１−８７８．
【０５０４】
Ｐａｒｋ，  Ｉ．−Ｋ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  Ａｘｌ  ｉｍｐｅｄｅｓ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＦＬＴ３  ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｔａｎｄｅｍ  ｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ：  
ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ａｘｌ  ａｓ  ａ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔ．  Ｂｌｏｏｄ  １２１，  ２０６４−２０７３．  
【０５０５】
Ｇｋｏｕｎｔｅｌａ，  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１４）  ＰＲＭＴ５  ｉｓ  Ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ｂｕｔ  Ｎｏｔ  Ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｃｙ．  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｖ．  ｄｏｉ：  １０．１００７／ｓｌ２０１５−０１３−９４９０−ｚ  
【０５０６】
Ｐａｌ，  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＳＴ７  ａｎｄ  ＮＭ２３  Ｔｕｍｏｒ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  Ｇｅｎｅｓ  Ｈｕｍａｎ  ＳＷＩ  ／  ＳＮＦ  −Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ＰＲＭＴ５  Ｍｅｔｈｙｌａｔｅｓ  Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３  Ａｒｇｉｎｉｎｅ  ８  ａｎｄ  Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＳＴ７  ａｎｄ  ＮＭ２３  Ｔｕｍｏｒ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  Ｇｅｎｅｓ†．  
ｄｏｉ：  １０．１１２８／ＭＣＢ．２４．２１．９６３０  
【０５０７】
Ｓｍｉｔｈ，  Ｍ．  Ｒ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  Ｍｕｒｉｎｅ  ｍａｎｔｌｅ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｍｏｄｅｌ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ．  
Ｌｅｕｋｅｍｉａ  １１，  １５９２−１５９４．  
【０５０８】
Ｚｈａｏ，  Ｘ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｉｂｒｕｔｉｎｉｂ  Ｗｉｔｈ  ＡＢＴ−１９９，  ａ  ＢＣＬ−２  Ｐａｔｈｗａｙ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ：  Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｓｔｒａｔｅｇｙ  Ｉｎ  ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｍａｎｔｌｅ  Ｃｅｌｌ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ  Ｍｏｄｅｌ．  Ｂｌｏｏｄ  １２２，  ６４５ａ．  
【０５０９】
Ｃｈｕｎｇ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｒｇｉｎｉｎｅ  Ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ５  （ＰＲＭＴ５）  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  Ｉｎｄｕｃｅｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｒｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ  Ｔｕｍｏｒ  
Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  Ｐａｔｈｗａｙ  ａｎｄ  Ｐｏｌｙｃｏｍｂ  Ｒｅｐｒｅｓｓｏｒ  Ｃｏｍｐｌｅｘ  ２  （ＰＲＣ２）  Ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８８，  ３５５３４−３５５４７．  
【０５１０】
Ｙａｎ，  Ｆ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１４）  Ｇｅｎｅｔｉｃ  ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ＰＲＭＴ５  ａｓ  ａ  ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔ  ｉｎ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ．  Ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎ  Ｐｒｅｓｓ．  
【０５１１】
本発明の範囲または精神から逸脱することなく、本発明に様々な変更および変形を加えることができることは、当業者には理解されるであろう。本発明の他の態様は、本明細書の熟考および本明細書において開示する本発明の実施から当業者に明らかになるであろう。本明細書および実施例は、単に例示的なものと見なされることを意図しており、本発明の真の範囲および精神は、後続の特許請求の範囲によって示す。
【図１】
0006510485.tif 000212
【図２Ａ−２Ｂ】
0006510485.tif 000213
【図２Ｃ−２Ｄ】
0006510485.tif 000214
【図２Ｅ】
0006510485.tif 000215
【図２Ｆ−２Ｇ】
0006510485.tif 000216
【図２Ｈ−２Ｉ】
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【図３】
0006510485.tif 000218
【図４】
0006510485.tif 000219
【図５】
0006510485.tif 000220
【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
0006510485.tif 000228
【図１４−１】
0006510485.tif 000229
【図１４−２】
0006510485.tif 000230
【図１５】
0006510485.tif 000231
【図１６】
0006510485.tif 000232
【図１７】
0006510485.tif 000233
【図１８】
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【図１９】
0006510485.tif 000235
【図２０−１】
0006510485.tif 000236
【図２０−２】
0006510485.tif 000237
【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
0006510485.tif 000243
【図２７Ａ−２７Ｃ】
0006510485.tif 000244
【図２８Ａ−２８Ｂ】
0006510485.tif 000245
【図２９Ａ−２９Ｄ】
0006510485.tif 000246
【図３０】
0006510485.tif 000247
【図３１Ａ−３１Ｂ】
0006510485.tif 000248
【図３２】
0006510485.tif 000249
【図３３Ａ−３３Ｂ】
0006510485.tif 000250
【図３４Ａ−３４Ｂ】
0006510485.tif 000251
【図３５Ａ−３５Ｃ】
0006510485.tif 000252
【図３５Ｄ−３５Ｅ】
0006510485.tif 000253
【図３６】
0006510485.tif 000254
【図３７】
0006510485.tif 000255
【図３８Ａ−３８Ｃ】
0006510485.tif 000256
【図３９−１】
0006510485.tif 000257
【図３９−２】
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【図３９−３】
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【図４０】
0006510485.tif 000260
【図４１】
0006510485.tif 000261
【図４２Ａ−４２Ｂ】
0006510485.tif 000262
【図４３Ａ−４３Ｂ】
0006510485.tif 000263
【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
0006510485.tif 000266
【図４７Ａ−４７Ｂ】
0006510485.tif 000267
【図４８】
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【図４９Ａ−４９Ｂ】
0006510485.tif 000269
【図５０Ａ−５０Ｃ】
0006510485.tif 000270
【図５１】
0006510485.tif 000271
【図５２】
0006510485.tif 000272
【図５３】
0006510485.tif 000273
【図５４Ａ−５４Ｂ】
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【図５５Ａ−５５Ｂ】
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【図５６】
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【図５７Ａ−５７Ｂ】
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【図５８】
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【図５９Ａ−５９Ｂ】
0006510485.tif 000279
【図５９Ｃ−５９Ｄ】
0006510485.tif 000280
【図５９Ｅ】
0006510485.tif 000281
【図６０】
0006510485.tif 000282
【図６１Ａ−６１Ｂ】
0006510485.tif 000283
【図６１Ｃ−６１Ｄ】
0006510485.tif 000284
【図６２Ａ−６２Ｂ】
0006510485.tif 000285
【図６２Ｃ】
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【図６３Ａ−６３Ｂ】
0006510485.tif 000287