(57)【要約】本発明は、一部には、ＩＧＦ−１受容体シグナル伝達を阻害することを含む、ヒト対象における腫瘍を治療するための方法、腫瘍がかかる治療に反応する可能性がより高いか、それともより低いかを決定する方法、およびかかる方法を実践するための組成物を提供する。具体的な実施形態では、本発明は、ヒトＩＧＦ−１Ｒと結合する完全ヒト、ヒト化、またはキメラ抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体、かかる抗体のＩＧＦ−１Ｒ結合断片および誘導体、ならびにかかる断片を含むＩＧＦ−１Ｒ結合ポリペプチドを提供する。他の実施形態は、かかる抗体、抗体断片、および誘導体ならびにポリペプチドをコードする核酸と、かかるポリヌクレオチドを含む細胞、かかる抗体、抗体断片、および誘導体ならびにポリペプチドを作製する方法と、ＩＧＦ−１Ｒ関連障害または病態を有する対象を治療または診断する方法を含む、かかる抗体、抗体断片、および誘導体ならびにポリペプチドを使用する方法と、前述のものを実践するためのキットとを提供する。【選択図】なし
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者における癌性病態が、ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２によって媒介されるシグナル伝達を低減する治療に反応する可能性が高いかどうかを決定する方法であって、前記患者の血清中のバイオマーカーを評価することを含み、前記バイオマーカーのレベルが、前記治療への反応を予測する、方法。
【請求項２】
前記治療は、ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達経路を通じたシグナル伝達の阻害剤を投与することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒの上流のシグナル伝達を阻害する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２を阻害する、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２の転写または翻訳を阻害する、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２のプロセシングまたは分泌を阻害する、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２に結合する、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの結合を阻害する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記阻害剤は、抗ＩＧＦ−１もしくは抗ＩＧＦ−２抗体、前記抗体の抗原結合断片、単離されたＩＧＦ−１もしくはＩＧＦ−２結合タンパク質、組換えヒトＩＧＦ−１もしくはＩＧＦ−２結合タンパク質、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ４、ＩＧＦＢＰ５、ＩＧＦＢＰ６、またはＩＧＦＢＰ７である、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒの阻害剤である、請求項２に記載の方法。
【請求項１１】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒの小分子阻害剤である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＩＧＦ−１Ｒの小分子阻害剤は、キナーゼ阻害剤である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記小分子阻害剤は、ＯＳＩ−９０６、リンシチニブ、ＢＭＳ−７５４８０７、ＩＮＳＭ−１８、ＸＬ２２８、ＡＸＬ１７１７、ＢＭＳ−５３６９２４、ＮＶＰ−ＡＤＷ７４２、ＧＳＫ６２１６５９Ａ、ＧＳＫ１８３８７０５Ａ、Ａ−９２８６０５、ＡＺＤ４２５３、ＴＡＥ２２６、またはＡＧ１０２４である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記阻害剤は、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体、または前記抗体の抗原結合断片である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗体は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの結合を阻害する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗体は、ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの結合を阻害する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗体は、ＩＧＦ−１Ｒによるシグナル伝達を阻害する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗体は、ＩＧＦ−１Ｒ／インスリン受容体ハイブリッドによるシグナル伝達を阻害する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗体は、ＩＧＦ−１Ｒを下方調節する、請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗体は、完全ヒト、ヒト化、またはキメラである、請求項１４に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体は、ガニツマブ、ＡＭＧ  ４７９、フィギツムマブ、ＣＰ−７５１，８７１、シクスツムマブ、ＩＭＣ−Ａ１２、ダロツズマブ、ＭＫ０６４６、ＲＧ１５０７、ロバツムマブ、ＳＣＨ  ７１７４５４、ＡＶＥ−１６４２ａ、ＭＥＤＩ−５７３、ＢＩＩＢ０２２、ｒｈｕＭａｂ  ＩＧＦＲ、Ｌ１Ｈ１、Ｌ２Ｈ２、Ｌ３
Ｈ３、Ｌ４Ｈ４、Ｌ５Ｈ５、Ｌ６Ｈ６、Ｌ７Ｈ７、Ｌ８Ｈ８、Ｌ９Ｈ９、Ｌ１０Ｈ１０、Ｌ１１Ｈ１１、Ｌ１２Ｈ１２、Ｌ１３Ｈ１３、Ｌ１４Ｈ１４、Ｌ１５Ｈ１５、Ｌ１６Ｈ１６、Ｌ１７Ｈ１７、Ｌ１８Ｈ１８、Ｌ１９Ｈ１９、Ｌ２０Ｈ２０、Ｌ２１Ｈ２１、Ｌ２２Ｈ２２、Ｌ２３Ｈ２３、Ｌ２４Ｈ２４、Ｌ２５Ｈ２５、Ｌ２６Ｈ２６、Ｌ２７Ｈ２７、Ｌ２８Ｈ２８、Ｌ２９Ｈ２９、Ｌ３０Ｈ３０、Ｌ３１Ｈ３１、Ｌ３２Ｈ３２、Ｌ３３Ｈ３３、Ｌ３４Ｈ３４、Ｌ３５Ｈ３５、Ｌ３６Ｈ３６、Ｌ３７Ｈ３７、Ｌ３８Ｈ３８、Ｌ３９Ｈ３９、Ｌ４０Ｈ４０、Ｌ４１Ｈ４１、Ｌ４２Ｈ４２、Ｌ４３Ｈ４３、Ｌ４４Ｈ４４、Ｌ４５Ｈ４５、Ｌ４６Ｈ４６、Ｌ４７Ｈ４７、Ｌ４８Ｈ４８、Ｌ４９Ｈ４９、Ｌ５０Ｈ５０、Ｌ５１Ｈ５１、またはＬ５２Ｈ５２である、請求項１４に記載の方法。
【請求項２２】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２結合タンパク質に影響を及ぼす、請求項２に記載の方法。
【請求項２３】
前記阻害剤は、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ４、ＩＧＦＢＰ５、ＩＧＦＢＰ６、またはＩＧＦＢＰ７に影響を及ぼす、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒの下流シグナル伝達を阻害する、請求項２に記載の方法。
【請求項２５】
前記阻害剤は、Ｒａｓ／Ｒａｆシグナル伝達経路またはＰＩ３Ｋシグナル伝達経路を阻害する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記阻害剤は、Ｓｈｃ、Ｇｒｂ２、ＳＯＳ、Ｒａｓ、Ｒａｆ、ＭＥＫ、ＥＲＫ、Ｅｌｋ−１、ＩＲＳ１、ＰＩ３Ｋ、またはＡＫＴ／ＰＫＢを阻害する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤である、請求項２に記載の方法。
【請求項２８】
前記ｍＴＯＲ阻害剤は、エベロリムスである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記癌性病態は、ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達活性を特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
前記癌性病態は、ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達の阻害剤を使用した治療に反応するタイプの病態である、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
前記患者は、腫瘍を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
前記腫瘍は、固形腫瘍である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記腫瘍は、原発腫瘍である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記腫瘍は、転移性腫瘍である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記腫瘍は、膵臓癌腫瘍、肉腫腫瘍、ユーイング肉腫腫瘍、卵巣腫瘍、乳癌腫瘍、小細胞肺癌腫瘍、非小細胞肺癌腫瘍、活性化ＫＲＡＳ突然変異を有する結腸直腸癌腫瘍、野生型ＫＲＡＳ対立遺伝子を有する結腸直腸癌腫瘍、前立腺癌腫瘍、肝臓癌腫瘍、頭頚部癌腫瘍、カルチノイド腫瘍、胃癌腫瘍、多発性骨髄腫腫瘍、神経内分泌癌腫瘍、副腎細胞癌腫瘍、または肝細胞癌腫瘍である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
前記膵臓癌腫瘍は、転移性膵臓癌腫瘍である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記膵臓癌腫瘍は、局所進行膵臓癌腫瘍である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記癌性病態は、急性リンパ芽球性白血病、副腎皮質癌、ＡＩＤＳ関連癌、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、肛門癌、小児小脳星状細胞腫、小児脳星状細胞腫、基底細胞癌、肝外胆管癌、膀胱癌、骨肉腫／悪性線維性組織球腫骨癌、脳腫瘍（例えば、脳幹神経膠腫、小脳星状細胞腫、脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、上衣腫、髄芽腫、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、視覚路または視床下部神経膠腫）、乳癌、気管支腺腫／カルチノイド、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、胃腸カルチノイド腫瘍、原発不明癌、原発性中枢神経系、小脳星状細胞腫、脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、子宮頸癌、小児癌、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、ユーイング肉腫ファミリー腫瘍、頭蓋外胚細
胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管癌、眼内黒色腫眼癌、網膜芽細胞腫眼癌、胆嚢癌、胃（Ｇａｓｔｒｉｃ）（胃（Ｓｔｏｍａｃｈ））癌、胃腸カルチノイド腫瘍、胚細胞腫瘍（例えば、頭蓋外、性腺外、または卵巣）、妊娠性絨毛性腫瘍、神経膠腫（例えば、成人、小児脳幹、小児脳星状細胞腫、小児視覚路または視床下部）、有毛細胞白血病、頭頚部癌、肝細胞（肝臓）癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、視床下部もしくは視覚路神経膠腫、眼内黒色腫、膵島細胞癌（内分泌膵臓）、カポジ肉腫、腎臓（腎細胞）癌、喉頭癌、白血病（例えば、急性リンパ芽球性、急性骨髄性、慢性リンパ球性、慢性骨髄性、または有毛細胞）、口唇もしくは口腔癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、リンパ腫（例えば、ＡＩＤＳ関連、バーキット、皮膚Ｔ細胞、ホジキン、非ホジキン、または原発性中枢神経系）、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、骨の悪性線維性組織球腫／骨肉腫、髄芽腫、黒色腫、眼内（眼）黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、原発不明転移性扁平上皮頸部癌、多発性内分泌腫瘍症、多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、慢性骨髄増殖性疾患、鼻腔もしくは副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、口腔癌、口腔咽頭癌、骨肉腫／骨の悪性線維性組織球腫、卵巣癌、上皮性卵巣癌、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍、膵臓癌、膵島細胞膵臓癌、副鼻腔もしくは鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、褐色細胞腫、松果体芽腫、脳下垂体腫瘍、形質細胞腫瘍／多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、原発性中枢神経系リンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞（腎臓）癌、腎盂もしくは尿管移行細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、軟部組織肉腫、子宮肉腫、セザリー症候群、非黒色腫皮膚癌、メルケル細胞皮膚癌、小腸癌、軟部組織肉腫、扁平上皮細胞癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、精巣癌、胸腺腫、胸腺癌、甲状腺癌、妊娠性絨毛性腫瘍、原発部位不明癌（Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｆ  Ｕｎｋｎｏｗｎ  Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｓｉｔｅ）、原発部位不明癌（Ｃａｎｃｅｒ  ｏｆ  Ｕｎｋｎｏｗｎ  Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｓｉｔｅ）、尿道癌、子宮内膜子宮癌、子宮肉腫、膣癌、視覚路もしくは視床下部神経膠腫、外陰癌、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、またはウィルムス腫瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項３９】
前記バイオマーカーは、総ＩＧＦ−１、遊離ＩＧＦ−１、総ＩＧＦ−２、遊離ＩＧＦ−２、ＩＧＦＢＰ−１、ＩＧＦＢＰ−２、ＩＧＦＢＰ−３、ＩＧＦＢＰ−４、ＩＧＦＢＰ−５、ＩＧＦＢＰ−６、ＩＧＦＢＰ−７、ＩＧＦ−２／ＩＧＦＢＰ−２の比率、またはＩＧＦＢＰ−２／ＩＧＦＢＰ−３の比率である、請求項１に記載の方法。
【請求項４０】
前記バイオマーカーは、総ＩＧＦ−１であり、より高い総ＩＧＦ−１濃度は、より低い総ＩＧＦ−１濃度よりも、前記患者が前記治療に反応する可能性がより高いことを示す、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記患者の総ＩＧＦ−１濃度は、約１１８ｎｇ／ｍＬ超である場合により高く、約１１８ｎｇ／ｍＬ未満である場合により低い、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記バイオマーカーは、総ＩＧＦ−２であり、より高い総ＩＧＦ−２濃度は、より低い総ＩＧＦ−２濃度よりも、前記患者が前記治療に反応する可能性がより高いことを示す、請求項３９に記載の方法。
【請求項４３】
前記患者の総ＩＧＦ−２濃度は、約１７３４ｎｇ／ｍＬ超である場合により高く、約１７３４ｎｇ／ｍＬ未満である場合により低い、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−１であり、より低いＩＧＦＢＰ−１濃度は、より高いＩＧＦＢＰ−１濃度よりも、前記患者が前記治療に反応する可能性がより高いことを示す、請求項３９に記載の方法。
【請求項４５】
前記患者の総ＩＧＦＢＰ−１濃度は、約３０ｎｇ／ｍＬ超である場合により高く、約３０ｎｇ／ｍＬ未満である場合により低い、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−２であり、より低いＩＧＦＢＰ−２濃度は、より高い総ＩＧＦＢＰ−２濃度よりも、前記患者が前記治療に反応する可能性がより高いことを示す、請求項３９に記載の方法。
【請求項４７】
前記患者の総ＩＧＦＢＰ−２濃度は、約１７０ｎｇ／ｍＬ超である場合により高く、約１７０ｎｇ／ｍＬ未満である場合により低い、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−３であり、より高いＩＧＦＢＰ−３濃度は、より低い総ＩＧＦＢＰ−３濃度よりも、前記患者が前記治療に反応する可能性がより高いことを示す、請求項３９に記載の方法。
【請求項４９】
前記患者の総ＩＧＦＢＰ−３濃度は、約１．９μｇ／ｍＬ超である場合により高く、約１．９μｇ／ｍＬ未満である場合により低い、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−４であり、より高いＩＧＦＢＰ−４濃度は、より低い総ＩＧＦＢＰ−４濃度よりも、前記患者が前記治療に反応する可能性がより高いことを示す、請求項３９に記載の方法。
【請求項５１】
前記患者の総ＩＧＦＢＰ−４濃度は、約４０ｎｇ／ｍＬ超である場合により高く、約４０ｎｇ／ｍＬ未満である場合により低い、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記バイオマーカーは、ＩＧＦ−２／ＩＧＦＢＰ−２の比率であり、ＩＧＦ−２／ＩＧＦＢＰ−２のより高い比率は、ＩＧＦ−２／ＩＧＦＢＰ−２のより低い比率よりも、前記患者が前記治療に反応する可能性がより高いことを示す、請求項３９に記載の方法。
【請求項５３】
前記患者のＩＧＦ−２／ＩＧＦＢＰ−２の比率は、それが約１１超である場合により高い、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−２／ＩＧＦＢＰ−３の比率であり、ＩＧＦＢＰ−２／ＩＧＦＢＰ−３のより低い比率は、前記患者が、ＩＧＦＢＰ−２／ＩＧＦＢＰ−３のより低い比率よりも、前記治療に反応する可能性がより高いことを示す、請求項３９に記載の方法。
【請求項５５】
前記患者のＩＧＦＢＰ−２／ＩＧＦＢＰ−３の比率は、それが約０．０８未満である場合により低い、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記患者を前記治療で治療することを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５７】
前記患者の循環バイオマーカー濃度が、前記患者が前記治療に反応する可能性がより高いことを示す場合、前記患者を前記治療で治療することを更に含む、請求項３９〜５５に記載の方法。
【請求項５８】
前記治療は、ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達経路を通じたシグナル伝達の阻害剤を投与することを含む、請求項５６または５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒの上流のシグナル伝達を阻害する、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２を阻害する、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２の転写または翻訳を阻害する、請求項５８に記載の方法。
【請求項６２】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２のプロセシングまたは分泌を阻害する、請求項５８に記載の方法。
【請求項６３】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２に結合する、請求項５８に記載の方法。
【請求項６４】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの前記結合を阻害する、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記阻害剤は、抗ＩＧＦ−１もしくは抗ＩＧＦ−２抗体、前記抗体の抗原結合断片、単離されたＩＧＦ−１もしくはＩＧＦ−２結合タンパク質、組換えヒトＩＧＦ−１もしくはＩＧＦ−２結合タンパク質、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ４、ＩＧＦＢＰ５、ＩＧＦＢＰ６、またはＩＧＦＢＰ７である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６６】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒの阻害剤である、請求項５８に記載の方法。
【請求項６７】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒの小分子阻害剤である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記ＩＧＦ−１Ｒの小分子阻害剤は、キナーゼ阻害剤である、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記小分子阻害剤は、ＯＳＩ−９０６、リンシチニブ、ＢＭＳ−７５４８０７、ＩＮＳＭ−１８、ＸＬ２２８、ＡＸＬ１７１７、ＢＭＳ−５３６９２４、ＮＶＰ−ＡＤＷ７４２、ＧＳＫ６２１６５９Ａ、ＧＳＫ１８３８７０５Ａ、Ａ−９２８６０５、ＡＺＤ４２５３、ＴＡＥ２２６、またはＡＧ１０２４である、請求項６７に記載の方法。
【請求項７０】
前記阻害剤は、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体、または前記抗体の抗原結合断片である、請求項６６に記載の方法。
【請求項７１】
前記抗体は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの結合を阻害する、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記抗体は、ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの結合を阻害する、請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
前記抗体は、ＩＧＦ−１Ｒを下方調節する、請求項７０に記載の方法。
【請求項７４】
前記抗体は、完全ヒト、ヒト化、またはキメラである、請求項７０に記載の方法。
【請求項７５】
前記抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体は、ガニツマブ、ＡＭＧ  ４７９、フィギツムマブ、ＣＰ−７５１，８７１、シクスツムマブ、ＩＭＣ−Ａ１２、ダロツズマブ、ＭＫ０６４６、ＲＧ１５０７、ロバツムマブ、ＳＣＨ  ７１７４５４、ＡＶＥ−１６４２ａ、ＭＥＤＩ−５７３、ＢＩＩＢ０２２、ｒｈｕＭａｂ  ＩＧＦＲ、Ｌ１Ｈ１、Ｌ２Ｈ２、Ｌ３Ｈ３、Ｌ４Ｈ４、Ｌ５Ｈ５、Ｌ６Ｈ６、Ｌ７Ｈ７、Ｌ８Ｈ８、Ｌ９Ｈ９、Ｌ１０Ｈ１０、Ｌ１１Ｈ１１、Ｌ１２Ｈ１２、Ｌ１３Ｈ１３、Ｌ１４Ｈ１４、Ｌ１５Ｈ１５、Ｌ１６Ｈ１６、Ｌ１７Ｈ１７、Ｌ１８Ｈ１８、Ｌ１９Ｈ１９、Ｌ２０Ｈ２０、Ｌ２１Ｈ２１、Ｌ２２Ｈ２２、Ｌ２３Ｈ２３、Ｌ２４Ｈ２４、Ｌ２５Ｈ２５、Ｌ２６Ｈ２６、Ｌ２７Ｈ２７、Ｌ２８Ｈ２８、Ｌ２９Ｈ２９、Ｌ３０Ｈ３０、Ｌ３１Ｈ３１、Ｌ３２Ｈ３２、Ｌ３３Ｈ３３、Ｌ３４Ｈ３４、Ｌ３５Ｈ３５、Ｌ３６Ｈ３６、Ｌ３７Ｈ３７、Ｌ３８Ｈ３８、Ｌ３９Ｈ３９、Ｌ４０Ｈ４０、Ｌ４１Ｈ４１、Ｌ４２Ｈ４２、Ｌ４３Ｈ４３、Ｌ４４Ｈ４４、Ｌ４５Ｈ４５、Ｌ４６Ｈ４６、Ｌ４７Ｈ４７、Ｌ４８Ｈ４８、Ｌ４９Ｈ４９、Ｌ５０Ｈ５０、Ｌ５１Ｈ５１、またはＬ５２Ｈ５２である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７６】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２結合タンパク質に影響を及ぼす、請求項５８に記載の方法。
【請求項７７】
前記阻害剤は、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ４、ＩＧＦＢＰ５、ＩＧＦＢＰ６、またはＩＧＦＢＰ７に影響を及ぼす、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒの下流シグナル伝達を阻害する、請求項５８に記載の方法。
【請求項７９】
前記阻害剤は、Ｒａｓ／Ｒａｆシグナル伝達経路またはＰＩ３Ｋシグナル伝達経路を阻害する、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記阻害剤は、Ｓｈｃ、Ｇｒｂ２、ＳＯＳ、Ｒａｓ、Ｒａｆ、ＭＥＫ、ＥＲＫ、Ｅｌｋ−１、ＩＲＳ１、ＰＩ３Ｋ、またはＡＫＴ／ＰＫＢを阻害する、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤である、請求項５８に記載の方法。
【請求項８２】
前記ｍＴＯＲ阻害剤は、エベロリムスである、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記反応は、生存期間の増加である、請求項１に記載の方法。
【請求項８４】
前記反応は、無増悪生存期間の増加である、請求項１に記載の方法。
【請求項８５】
前記反応は、客観的反応である、請求項１に記載の方法。
【請求項８６】
前記客観的反応は、病勢安定（ｓｔａｂｌｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）である、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
前記客観的反応は、部分反応である、請求項８５に記載の方法。
【請求項８８】
前記客観的反応は、完全反応である、請求項８５に記載の方法。
【請求項８９】
前記完全反応は、永続的な完全反応である、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
患者における癌病態が、ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達経路を通じたシグナル伝達の阻害剤での治療に反応する可能性が高いかどうかを決定する方法であって、前記患者の前記阻害剤への曝露量を決定することを含み、前記癌病態は、前記患者の前記曝露量が、前記阻害剤で治療された前記癌病態を有する患者の曝露中央値におよそ等しいかそれよりも大きい場合、前記治療に反応する可能性が高い、方法。
【請求項９１】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒの上流のシグナル伝達を阻害する、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２を阻害する、請求項９０に記載の方法。
【請求項９３】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２の転写または翻訳を阻害する、請求項９０に記載の方法。
【請求項９４】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２のプロセシングまたは分泌を阻害する、請求項９０に記載の方法。
【請求項９５】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２に結合する、請求項９０に記載の方法。
【請求項９６】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの前記結合を阻害する、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記阻害剤は、抗ＩＧＦ−１もしくは抗ＩＧＦ−２抗体、前記抗体の抗原結合断片、単離されたＩＧＦ−１もしくはＩＧＦ−２結合タンパク質、組換えヒトＩＧＦ−１もしくはＩＧＦ−２結合タンパク質、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ４、ＩＧＦＢＰ５、ＩＧＦＢＰ６、またはＩＧＦＢＰ７である、請求項６に記載の方法。
【請求項９８】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒの阻害剤である、請求項９０に記載の方法。
【請求項９９】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒの小分子阻害剤である、請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
前記ＩＧＦ−１Ｒの小分子阻害剤は、キナーゼ阻害剤である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記小分子阻害剤は、ＯＳＩ−９０６、リンシチニブ、ＢＭＳ−７５４８０７、ＩＮＳＭ−１８、ＸＬ２２８、ＡＸＬ１７１７、ＢＭＳ−５３６９２４、ＮＶＰ−ＡＤＷ７４２、ＧＳＫ６２１６５９Ａ、ＧＳＫ１８３８７０５Ａ、Ａ−９２８６０５、ＡＺＤ４２５３、ＴＡＥ２２６、またはＡＧ１０２４である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０２】
前記阻害剤は、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体、または前記抗体の抗原結合断片である、請求項９８に記載の方法。
【請求項１０３】
前記抗体または断片は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの結合を阻害する、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記抗体または断片は、ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの結合を阻害する、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０５】
前記抗体または断片は、ＩＧＦ−１Ｒを下方調節する、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０６】
前記抗体または断片は、完全ヒト、ヒト化、またはキメラである、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０７】
前記抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体または断片は、ガニツマブ、ＡＭＧ  ４７９、フィギツムマブ、ＣＰ−７５１，８７１、シクスツムマブ、ＩＭＣ−Ａ１２、ダロツズマブ、ＭＫ０６４６、ＲＧ１５０７、ロバツムマブ、ＳＣＨ  ７１７４５４、ＡＶＥ−１６４２ａ、ＭＥＤＩ−５７３、ＢＩＩＢ０２２、ｒｈｕＭａｂ  ＩＧＦＲ、Ｌ１Ｈ１、Ｌ２Ｈ２、Ｌ３Ｈ３、Ｌ４Ｈ４、Ｌ５Ｈ５、Ｌ６Ｈ６、Ｌ７Ｈ７、Ｌ８Ｈ８、Ｌ９Ｈ９、Ｌ１０Ｈ１０、Ｌ１１Ｈ１１、Ｌ１２Ｈ１２、Ｌ１３Ｈ１３、Ｌ１４Ｈ１４、Ｌ１５Ｈ１５
、Ｌ１６Ｈ１６、Ｌ１７Ｈ１７、Ｌ１８Ｈ１８、Ｌ１９Ｈ１９、Ｌ２０Ｈ２０、Ｌ２１Ｈ２１、Ｌ２２Ｈ２２、Ｌ２３Ｈ２３、Ｌ２４Ｈ２４、Ｌ２５Ｈ２５、Ｌ２６Ｈ２６、Ｌ２７Ｈ２７、Ｌ２８Ｈ２８、Ｌ２９Ｈ２９、Ｌ３０Ｈ３０、Ｌ３１Ｈ３１、Ｌ３２Ｈ３２、Ｌ３３Ｈ３３、Ｌ３４Ｈ３４、Ｌ３５Ｈ３５、Ｌ３６Ｈ３６、Ｌ３７Ｈ３７、Ｌ３８Ｈ３８、Ｌ３９Ｈ３９、Ｌ４０Ｈ４０、Ｌ４１Ｈ４１、Ｌ４２Ｈ４２、Ｌ４３Ｈ４３、Ｌ４４Ｈ４４、Ｌ４５Ｈ４５、Ｌ４６Ｈ４６、Ｌ４７Ｈ４７、Ｌ４８Ｈ４８、Ｌ４９Ｈ４９、Ｌ５０Ｈ５０、Ｌ５１Ｈ５１、またはＬ５２Ｈ５２である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０８】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２結合タンパク質に影響を及ぼす、請求項９０に記載の方法。
【請求項１０９】
前記阻害剤は、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ４、ＩＧＦＢＰ５、ＩＧＦＢＰ６、またはＩＧＦＢＰ７に影響を及ぼす、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
前記阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒの下流シグナル伝達を阻害する、請求項９０に記載の方法。
【請求項１１１】
前記阻害剤は、Ｒａｓ／Ｒａｆシグナル伝達経路またはＰＩ３Ｋシグナル伝達経路を阻害する、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
前記阻害剤は、Ｓｈｃ、Ｇｒｂ２、ＳＯＳ、Ｒａｓ、Ｒａｆ、ＭＥＫ、ＥＲＫ、Ｅｌｋ−１、ＩＲＳ１、ＰＩ３Ｋ、またはＡＫＴ／ＰＫＢを阻害する、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
前記阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤である、請求項９０に記載の方法。
【請求項１１４】
前記ｍＴＯＲ阻害剤は、エベロリムスである、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
前記癌性病態は、ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達活性を特徴とする、請求項９０に記載の方法。
【請求項１１６】
前記癌性病態は、ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達の阻害剤を使用した治療に反応するタイプの病態である、請求項９０に記載の方法。
【請求項１１７】
前記患者は、腫瘍を有する、請求項９０に記載の方法。
【請求項１１８】
前記腫瘍は、固形腫瘍である、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１１９】
前記腫瘍は、原発腫瘍である、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１２０】
前記腫瘍は、転移性腫瘍である、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１２１】
前記腫瘍は、膵臓癌腫瘍、肉腫腫瘍、ユーイング肉腫腫瘍、卵巣腫瘍、乳癌腫瘍、小細胞肺癌腫瘍、非小細胞肺癌腫瘍、活性化ＫＲＡＳ突然変異を有する結腸直腸癌腫瘍、野生型ＫＲＡＳ対立遺伝子を有する結腸直腸癌腫瘍、前立腺癌腫瘍、肝臓癌腫瘍、頭頚部癌腫瘍、カルチノイド腫瘍、胃癌腫瘍、多発性骨髄腫腫瘍、神経内分泌癌腫瘍、副腎細胞癌腫瘍、または肝細胞癌腫瘍である、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１２２】
前記膵臓癌腫瘍は、転移性膵臓癌腫瘍である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
前記膵臓癌腫瘍は、局所進行膵臓癌腫瘍である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２４】
前記患者に、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の用量を投与することを更に含む、請求項２または５６に記載の方法。
【請求項１２５】
前記用量は、１２ｍｇ／ｋｇ用量である、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２６】
前記用量は、２０ｍｇ／ｋｇ用量である、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２７】
前記抗体は、ガニツマブである、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２８】
前記癌性病態は、膵臓癌である、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２９】
前記膵臓癌は、転移性である、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３０】
前記膵臓癌は、局所進行性である、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３１】
前記患者に、前記抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の第２の用量を投与することを
更に含む、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１３２】
前記第２の用量は、前記第１の用量の２週間後に投与される、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３３】
前記患者は、前記抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の少なくとも１回の追加的用量を受容する、請求項１３２に記載の方法。
【請求項１３４】
前記用量は、２週間に１回投与される、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１３５】
請求項３９に列挙される第２のバイオマーカーを評価することを更に含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項１３６】
請求項３９に列挙される第３のバイオマーカーを評価することを更に含む、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１３７】
請求項３９に列挙される第４のバイオマーカーを評価することを更に含む、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１３８】
前記バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−２および総ＩＧＦ−１であ、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１３９】
前記バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦ−２である、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１４０】
前記バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦＢＰ−３である、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１４１】
前記バイオマーカーは、総ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２である、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１４２】
前記バイオマーカーは、総ＩＧＦ−１およびＩＧＦＢＰ−３である、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１４３】
前記バイオマーカーは、ＩＧＦ−２およびＩＧＦＢＰＦ−３である、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１４４】
前記バイオマーカーは、総ＩＧＦ−１、遊離ＩＧＦ−１、総ＩＧＦ−２、遊離ＩＧＦ−２、ＩＧＦＢＰ−１、ＩＧＦＢＰ−３、ＩＧＦＢＰ−４、ＩＧＦＢＰ−５、ＩＧＦＢＰ−６、またはＩＧＦＢＰ−７であり、前記バイオマーカーの前記濃度は、前記癌性病態を有する少なくとも１００人の患者の分析に由来する参照範囲からの中央値よりも大きい、請求項３９に記載の方法。
【請求項１４５】
前記バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−２であり、前記バイオマーカーの前記濃度は、前記癌性病態を有する少なくとも１００人の患者の分析に由来する参照範囲からの中央値未満である、請求項３９に記載の方法。
【請求項１４６】
前記癌病態は、前記患者のＡＵＣｓｓが中央値以上である場合、前記治療に反応する可能性が高い、請求項９０に記載の方法。
【請求項１４７】
前記中央値は、１９．２ｍｇ・ｈ／ｍＬである、請求項１４６に記載の方法。
【請求項１４８】
評価されるのは、治療前の前記バイオマーカーの濃度である、請求項１に記載の方法。
【請求項１４９】
循環バイオマーカーの量を決定することを含む、患者についての予後を評価するための方法であって、前記患者は、癌性病態を有し、前記循環バイオマーカーの量は、前記患者がより良好な予後を有するかどうかを示す、方法。
【請求項１５０】
前記癌性病態は、ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達活性を特徴とする、請求項１４９に記載の方法。
【請求項１５１】
前記癌性病態は、ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達の阻害剤を使用した治療に反応するタイプの病態である、請求項１４９に記載の方法。
【請求項１５２】
前記患者は、腫瘍を有する、請求項１４９に記載の方法。
【請求項１５３】
前記腫瘍は、固形腫瘍である、請求項１５２に記載の方法。
【請求項１５４】
前記腫瘍は、原発腫瘍である、請求項１５２に記載の方法。
【請求項１５５】
前記腫瘍は、転移性腫瘍である、請求項１５２に記載の方法。
【請求項１５６】
前記腫瘍は、膵臓癌腫瘍、肉腫腫瘍、ユーイング肉腫腫瘍、卵巣腫瘍
、乳癌腫瘍、小細胞肺癌腫瘍、非小細胞肺癌腫瘍、活性化ＫＲＡＳ突然変異を有する結腸直腸癌腫瘍、野生型ＫＲＡＳ対立遺伝子を有する結腸直腸癌腫瘍、前立腺癌腫瘍、肝臓癌腫瘍、頭頚部癌腫瘍、カルチノイド腫瘍、胃癌腫瘍、多発性骨髄腫腫瘍、神経内分泌癌腫瘍、副腎細胞癌腫瘍、または肝細胞癌腫瘍である、請求項１５２に記載の方法。
【請求項１５７】
前記膵臓癌腫瘍は、転移性膵臓癌腫瘍である、請求項１５６に記載の方法。
【請求項１５８】
前記膵臓癌腫瘍は、局所進行膵臓癌腫瘍である、請求項１５６に記載の方法。
【請求項１５９】
前記癌性病態は、急性リンパ芽球性白血病、副腎皮質癌、ＡＩＤＳ関連癌、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、肛門癌、小児小脳星状細胞腫、小児脳星状細胞腫、基底細胞癌、肝外胆管癌、膀胱癌、骨肉腫／悪性線維性組織球腫骨癌、脳腫瘍（例えば、脳幹神経膠腫、小脳星状細胞腫、脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、上衣腫、髄芽腫、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、視覚路または視床下部神経膠腫）、乳癌、気管支腺腫／カルチノイド、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、胃腸カルチノイド腫瘍、原発不明癌、原発性中枢神経系、小脳星状細胞腫、脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、子宮頸癌、小児癌、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、ユーイング肉腫ファミリー腫瘍、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管癌、眼内黒色腫眼癌、網膜芽細胞腫眼癌、胆嚢癌、胃（Ｇａｓｔｒｉｃ）（胃（Ｓｔｏｍａｃｈ））癌、胃腸カルチノイド腫瘍、胚細胞腫瘍（例えば、頭蓋外、性腺外、または卵巣）、妊娠性絨毛性腫瘍、神経膠腫（例えば、成人、小児脳幹、小児脳星状細胞腫、小児視覚路または視床下部）、有毛細胞白血病、頭頚部癌、肝細胞（肝臓）癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、視床下部もしくは視覚路神経膠腫、眼内黒色腫、膵島細胞癌（内分泌膵臓）、カポジ肉腫、腎臓（腎細胞）癌、喉頭癌、白血病（例えば、急性リンパ芽球性、急性骨髄性、慢性リンパ球性、慢性骨髄性、または有毛細胞）、口唇もしくは口腔癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、リンパ腫（例えば、ＡＩＤＳ関連、バーキット、皮膚Ｔ細胞、ホジキン、非ホジキン、または原発性中枢神経系）、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、骨の悪性線維性組織球腫／骨肉腫、髄芽腫、黒色腫、眼内（眼）黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、原発不明転移性扁平上皮頸部癌、多発性内分泌腫瘍症、多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、慢性骨髄増殖性疾患、鼻腔もしくは副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、口腔癌、口腔咽頭癌、骨肉腫／骨の悪性線維性組織球腫、卵巣癌、上皮性卵巣癌、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍、膵臓癌、膵島細胞膵臓癌、副鼻腔もしくは鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、褐色細胞腫、松果体芽腫、脳下垂体腫瘍、形質細胞腫瘍／多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、原発性中枢神経系リンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞（腎臓）癌、腎盂もしくは尿管移行細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、軟部組織肉腫、子宮肉腫、セザリー症候群、非黒色腫皮膚癌、メルケル細胞皮膚癌、小腸癌、軟部組織肉腫、扁平上皮細胞癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、精巣癌、胸腺腫、胸腺癌、甲状腺癌、妊娠性絨毛性腫瘍、原発部位不明癌（Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｆ  Ｕｎｋｎｏｗｎ  Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｓｉｔｅ）、原発部位不明癌（Ｃａｎｃｅｒ  ｏｆ  Ｕｎｋｎｏｗｎ  Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｓｉｔｅ）、尿道癌、子宮内膜子宮癌、子宮肉腫、膣癌、視覚路もしくは視床下部神経膠腫、外陰癌、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、またはウィルムス腫瘍である、請求項１４９に記載の方法。
【請求項１６０】
前記循環バイオマーカーは、総ＩＧＦ−１、遊離ＩＧＦ−１、総ＩＧＦ−２、遊離ＩＧＦ−２、ＩＧＦＢＰ−１、ＩＧＦＢＰ−２、ＩＧＦＢＰ−３、ＩＧＦＢＰ−４、ＩＧＦＢＰ−５、ＩＧＦＢＰ−６、ＩＧＦＢＰ−７、ＩＧＦ−２／ＩＧＦＢＰ−２の比率、またはＩＧＦＢＰ−２／ＩＧＦＢＰ−３の比率である、請求項１４９に記載の方法。
【請求項１６１】
前記循環バイオマーカーは、総ＩＧＦ−１であり、より高い総ＩＧＦ−１濃度は、前記患者がより良好な予後を有することを示す、請求項１６０に記載の方法
。
【請求項１６２】
前記患者の総ＩＧＦ−１濃度は、約１１８ｎｇ／ｍＬ超である場合により高く、約１１８ｎｇ／ｍＬ未満である場合により低い、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６３】
前記循環バイオマーカーは、総ＩＧＦ−２であり、より低いＩＧＦ−２濃度は、前記患者がより良好な予後を有することを示す、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１６４】
前記患者の総ＩＧＦ−２濃度は、約１７３４ｎｇ／ｍＬ超である場合により高く、約１７３４ｎｇ／ｍＬ未満である場合により低い、請求項１６３に記載の方法。
【請求項１６５】
前記循環バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−１であり、より低いＩＧＦＢＰ−１濃度は、前記患者がより良好な予後を有することを示す、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１６６】
前記患者の総ＩＧＦＢＰ−１濃度は、約３０ｎｇ／ｍＬ超である場合により高く、約３０ｎｇ／ｍＬ未満である場合により低い、請求項１６５に記載の方法。
【請求項１６７】
前記循環バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−２であり、より低いＩＧＦＢＰ−２濃度は、前記患者がより良好な予後を有することを示す、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１６８】
前記患者の総ＩＧＦＢＰ−２濃度は、約１７０ｎｇ／ｍＬ超である場合により高く、約１７０ｎｇ／ｍＬ未満である場合により低い、請求項１６７に記載の方法。
【請求項１６９】
前記循環バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−３であり、より高いＩＧＦＢＰ−３濃度は、前記患者がより良好な予後を有することを示す、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１７０】
前記患者の総ＩＧＦＢＰ−３濃度は、約１．９μｇ／ｍＬ超である場合により高く、約１．９μｇ／ｍＬ未満である場合により低い、請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７１】
前記循環バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−４であり、より低いＩＧＦＢＰ−４濃度は、前記患者がより良好な予後を有することを示す、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１７２】
前記患者の総ＩＧＦＢＰ−４濃度は、約４０ｎｇ／ｍＬ超である場合により高く、約４０ｎｇ／ｍＬ未満である場合により低い、請求項１７１に記載の方法。
【請求項１７３】
請求項１６０に列挙される第２の循環バイオマーカーの濃度を決定することを更に含む、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１７４】
請求項１５４に列挙される第３の循環バイオマーカーの濃度を決定することを更に含む、請求項１７３に記載の方法。
【請求項１７５】
請求項１５４に列挙される第４の循環バイオマーカーの濃度を決定することを更に含む、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１７６】
前記バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−２および総ＩＧＦ−１である、請求項１７３に記載の方法。
【請求項１７７】
前記バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦ−２である、請求項１７３に記載の方法。
【請求項１７８】
前記バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦＢＰ−３である、請求項１７３に記載の方法。
【請求項１７９】
前記バイオマーカーは、総ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２である、請求項１７３に記載の方法。
【請求項１８０】
前記バイオマーカーは、総ＩＧＦ−１およびＩＧＦＢＰ−３である、請求項１７３に記載の方法。
【請求項１８１】
前記バイオマーカーは、ＩＧＦ−２およびＩＧＦＢＰＦ−３である、請求項１７３に記載の方法。
【請求項１８２】
前述の請求項のいずれかを実践するためのキット。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本出願は、２０１１年２月２日に出願された米国仮出願第６１／４３８，９１８号の利益を主張し、それは参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表への参照
本出願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介した電子形式での配列表と共に出願されている。配列表は、２０１２年１月２６日に作製された、Ａ１６１０ＷＯＰＣＴｓｔ２５．ｔｘｔと題されるテキストファイルとして提供され、それは３８８，９６１バイトのサイズである。配列表の電子形式での情報は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【技術分野】
【０００３】
本出願は、膵臓癌および他の癌等の腫瘍疾患ならびに増殖性疾患の治療に関する方法および組成物を提供する。本出願はまた、膵臓癌等の癌病態を有する対象が、ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２媒介型シグナル伝達の阻害剤での治療に反応する可能性が高いかどうかを決定するための方法および組成物も提供する。
【背景技術】
【０００４】
膵臓癌は、癌の最も侵攻性で致命的な型の１つである。現在の標準ケア（ｓｔａｎｄａｒｄ  ｏｆ  ｃａｒｅ）では、全生存期間中央値は、診断から約６ヶ月である。更なるかつより良好な治療選択肢が緊急に必要とされ、どの患者がかかる治療から便益を得る可能性がより高いかを決定する方法も同様である。
【発明の概要】
【０００５】
一態様では、本発明は、患者における癌性病態が、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２によって媒介されるシグナル伝達を低減する治療に反応する可能性が高いかどうかを決定する方法であって、該患者の血清中の循環バイオマーカーの濃度を決定することを含み、該循環バイオマーカーの量は、該治療への反応を予測する、方法を提供する。一実施形態では、該治療は、ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達経路を通じたシグナル伝達の阻害剤を投与することを含む。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒの上流のシグナル伝達を阻害する。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２を阻害する。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２の転写または翻訳を阻害する。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２のプロセシングまたは分泌を阻害する。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２に結合する。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの結合を阻害する。別の実施形態では、該阻害剤は、抗ＩＧＦ−１もしくは抗ＩＧＦ−２抗体、該抗体の抗原結合断片、単離されたＩＧＦ−１もしくはＩＧＦ−２結合タンパク質、組換えヒトＩＧＦ−１もしくはＩＧＦ−２結合タンパク質、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ４、ＩＧＦＢＰ５、ＩＧＦＢＰ６、またはＩＧＦＢＰ７である。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒの阻害剤である。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒの小分子阻害剤である。別の実施形態では、該ＩＧＦ−１Ｒの小分子阻害剤は、キナーゼ阻害剤である。別の実施形態では、該小分子阻害剤は、ＯＳＩ−９０６、リンシチニブ、ＢＭＳ−７５４８０７、ＩＮＳＭ−１８、ＸＬ２２８、ＡＸＬ１７１７、ＢＭＳ−５３６９２４、ＮＶＰ−ＡＤＷ７４２、ＧＳＫ６２１６５９Ａ、ＧＳＫ１８３８７０５Ａ、Ａ−９２８６０５、ＡＺＤ４２５３、ＴＡＥ２２６、またはＡＧ１０２４である。別の実施形態では、該阻害剤は、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体、または該抗体の抗原結合断片である。別の実施形態では、該抗体は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの結合を阻害する。別の実施形態では、該抗体は、ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２のＩＧＦ−１
Ｒへの結合を阻害する。別の実施形態では、該抗体は、ＩＧＦ−１Ｒを下方調節する。別の実施形態では、該抗体は、完全ヒト、ヒト化、またはキメラである。別の実施形態では、該抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体は、ガニツマブ、ＡＭＧ  ４７９、フィギツムマブ、ＣＰ−７５１，８７１、シクスツムマブ、ＩＭＣ−Ａ１２、ダロツズマブ、ＭＫ０６４６、ＲＧ１５０７、ロバツムマブ、ＳＣＨ  ７１７４５４、ＡＶＥ−１６４２ａ、ＭＥＤＩ−５７３、ＢＩＩＢ０２２、ｒｈｕＭａｂ  ＩＧＦＲ、Ｌ１Ｈ１、Ｌ２Ｈ２、Ｌ３Ｈ３、Ｌ４Ｈ４、Ｌ５Ｈ５、Ｌ６Ｈ６、Ｌ７Ｈ７、Ｌ８Ｈ８、Ｌ９Ｈ９、Ｌ１０Ｈ１０、Ｌ１１Ｈ１１、Ｌ１２Ｈ１２、Ｌ１３Ｈ１３、Ｌ１４Ｈ１４、Ｌ１５Ｈ１５、Ｌ１６Ｈ１６、Ｌ１７Ｈ１７、Ｌ１８Ｈ１８、Ｌ１９Ｈ１９、Ｌ２０Ｈ２０、Ｌ２１Ｈ２１、Ｌ２２Ｈ２２、Ｌ２３Ｈ２３、Ｌ２４Ｈ２４、Ｌ２５Ｈ２５、Ｌ２６Ｈ２６、Ｌ２７Ｈ２７、Ｌ２８Ｈ２８、Ｌ２９Ｈ２９、Ｌ３０Ｈ３０、Ｌ３１Ｈ３１、Ｌ３２Ｈ３２、Ｌ３３Ｈ３３、Ｌ３４Ｈ３４、Ｌ３５Ｈ３５、Ｌ３６Ｈ３６、Ｌ３７Ｈ３７、Ｌ３８Ｈ３８、Ｌ３９Ｈ３９、Ｌ４０Ｈ４０、Ｌ４１Ｈ４１、Ｌ４２Ｈ４２、Ｌ４３Ｈ４３、Ｌ４４Ｈ４４、Ｌ４５Ｈ４５、Ｌ４６Ｈ４６、Ｌ４７Ｈ４７、Ｌ４８Ｈ４８、Ｌ４９Ｈ４９、Ｌ５０Ｈ５０、Ｌ５１Ｈ５１、またはＬ５２Ｈ５２である。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２結合タンパク質に影響を及ぼす。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ４、ＩＧＦＢＰ５、ＩＧＦＢＰ６、またはＩＧＦＢＰ７に影響を及ぼす。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒの下流シグナル伝達を阻害する。別の実施形態では、該阻害剤は、Ｒａｓ／Ｒａｆシグナル伝達経路またはＰＩ３Ｋシグナル伝達経路を阻害する。別の実施形態では、該阻害剤は、Ｓｈｃ、Ｇｒｂ２、ＳＯＳ、Ｒａｓ、Ｒａｆ、ＭＥＫ、ＥＲＫ、Ｅｌｋ−１、ＩＲＳ１、ＰＩ３Ｋ、またはＡＫＴ／ＰＫＢを阻害する。別の実施形態では、該阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤である。別の実施形態では、該ｍＴＯＲ阻害剤は、エベロリムスである。別の実施形態では、該癌性病態は、ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達活性を特徴とする。別の実施形態では、該癌性病態は、ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達の阻害剤を使用した治療に反応するタイプの病態である。別の実施形態では、該患者は、腫瘍を有する。別の実施形態では、該腫瘍は、固形腫瘍である。別の実施形態では、該腫瘍は、原発腫瘍である。別の実施形態では、該腫瘍は、転移性腫瘍である。別の実施形態では、該腫瘍は、膵臓癌腫瘍、肉腫腫瘍、ユーイング肉腫腫瘍、卵巣腫瘍、乳癌腫瘍、小細胞肺癌腫瘍、非小細胞肺癌腫瘍、活性化ＫＲＡＳ突然変異を有する結腸直腸癌腫瘍、野生型ＫＲＡＳ対立遺伝子を有する結腸直腸癌腫瘍、前立腺癌腫瘍、肝臓癌腫瘍、頭頚部癌腫瘍、カルチノイド腫瘍、胃癌腫瘍、多発性骨髄腫腫瘍、神経内分泌癌腫瘍、副腎細胞癌腫瘍、または肝細胞癌腫瘍である。別の実施形態では、該膵臓癌腫瘍は、転移性膵臓癌腫瘍である。別の実施形態では、該膵臓癌腫瘍は、局所進行膵臓癌腫瘍である。別の実施形態では、該癌性病態は、急性リンパ芽球性白血病、副腎皮質癌、ＡＩＤＳ関連癌、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、肛門癌、小児小脳星状細胞腫、小児脳星状細胞腫、基底細胞癌、肝外胆管癌、膀胱癌、骨肉腫／悪性線維性組織球腫骨癌、脳腫瘍（例えば、脳幹神経膠腫、小脳星状細胞腫、脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、上衣腫、髄芽腫、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、視覚路または視床下部神経膠腫）、乳癌、気管支腺腫／カルチノイド、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、胃腸カルチノイド腫瘍、原発不明癌、原発性中枢神経系、小脳星状細胞腫、脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、子宮頸癌、小児癌、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、ユーイング肉腫ファミリー腫瘍、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管癌、眼内黒色腫眼癌、網膜芽細胞腫眼癌、胆嚢癌、胃（Ｇａｓｔｒｉｃ）（胃（Ｓｔｏｍａｃｈ））癌、胃腸カルチノイド腫瘍、胚細胞腫瘍（例えば、頭蓋外、性腺外、または卵巣）、妊娠性絨毛性腫瘍、神経膠腫（例えば、成人、小児脳幹、小児脳星状細胞腫、小児視覚路または視床下部）、有毛細胞白血病、頭頚部癌、肝細胞（肝臓）癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、視床下部もしくは視覚路神経膠腫、眼内黒色腫、膵島細胞癌（内分泌膵臓）、カポジ肉腫、腎臓（腎細胞）癌、喉頭癌、白血病（例えば、急性リンパ芽球性、急性骨髄性、慢性リンパ球性、慢性骨髄性、または有毛細胞）、口唇もしくは口腔癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、リ
ンパ腫（例えば、ＡＩＤＳ関連、バーキット、皮膚Ｔ細胞、ホジキン、非ホジキン、または原発性中枢神経系）、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、骨の悪性線維性組織球腫／骨肉腫、髄芽腫、黒色腫、眼内（眼）黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、原発不明転移性扁平上皮頸部癌、多発性内分泌腫瘍症、多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、慢性骨髄増殖性疾患、鼻腔もしくは副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、口腔癌、口腔咽頭癌、骨肉腫／骨の悪性線維性組織球腫、卵巣癌、上皮性卵巣癌、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍、膵臓癌、膵島細胞膵臓癌、副鼻腔もしくは鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、褐色細胞腫、松果体芽腫、脳下垂体腫瘍、形質細胞腫瘍／多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、原発性中枢神経系リンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞（腎臓）癌、腎盂もしくは尿管移行細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、軟部組織肉腫、子宮肉腫、セザリー症候群、非黒色腫皮膚癌、メルケル細胞皮膚癌、小腸癌、軟部組織肉腫、扁平上皮細胞癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、精巣癌、胸腺腫、胸腺癌、甲状腺癌、妊娠性絨毛性腫瘍、原発部位不明癌（Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｆ  Ｕｎｋｎｏｗｎ  Ｐｒｉｍａｒｙ
Ｓｉｔｅ）、原発部位不明癌（Ｃａｎｃｅｒ  ｏｆ  Ｕｎｋｎｏｗｎ  Ｐｒｉｍａｒｙ
Ｓｉｔｅ）、尿道癌、子宮内膜子宮癌、子宮肉腫、膣癌、視覚路もしくは視床下部神経膠腫、外陰癌、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、またはウィルムス腫瘍である。別の実施形態では、該循環バイオマーカーは、総ＩＧＦ−１、遊離ＩＧＦ−１、総ＩＧＦ−２、遊離ＩＧＦ−２、ＩＧＦＢＰ−１、ＩＧＦＢＰ−２、ＩＧＦＢＰ−３、ＩＧＦＢＰ−４、ＩＧＦＢＰ−５、ＩＧＦＢＰ−６、またはＩＧＦＢＰ−７である。別の実施形態では、該循環バイオマーカーは、総ＩＧＦ−１であり、より高い総ＩＧＦ−１濃度は、より低い総ＩＧＦ−１濃度よりも、該患者が該治療に反応する可能性がより高いことを示す。別の実施形態では、該患者の総ＩＧＦ−１濃度は、約１１８ｎｇ／ｍＬ超である場合により高く、約１１８ｎｇ／ｍＬ未満である場合により低い。別の実施形態では、該循環バイオマーカーは、総ＩＧＦ−２であり、より高い総ＩＧＦ−２濃度は、より低い総ＩＧＦ−２濃度よりも、該患者が該治療に反応する可能性がより高いことを示す。別の実施形態では、該患者の総ＩＧＦ−２濃度は、約１７３４ｎｇ／ｍＬ超である場合により高く、約１７３４ｎｇ／ｍＬ未満である場合により低い。別の実施形態では、該循環バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−１であり、より低いＩＧＦＢＰ−１濃度は、より高いＩＧＦＢＰ−１濃度よりも、該患者が該治療に反応する可能性がより高いことを示す。別の実施形態では、該患者の総ＩＧＦＢＰ−１濃度は、約３０ｎｇ／ｍＬ超である場合により高く、約３０ｎｇ／ｍＬ未満である場合により低い。別の実施形態では、該循環バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−２であり、より低いＩＧＦＢＰ−２濃度は、より高い総ＩＧＦＢＰ−２濃度よりも、該患者が該治療に反応する可能性がより高いことを示す。別の実施形態では、該患者の総ＩＧＦＢＰ−２濃度は、約１７０ｎｇ／ｍＬ超である場合により高く、約１７０ｎｇ／ｍＬ未満である場合により低い。別の実施形態では、該循環バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−３であり、より高いＩＧＦＢＰ−３濃度は、より低い総ＩＧＦＢＰ−３濃度よりも、該患者が該治療に反応する可能性がより高いことを示す。別の実施形態では、該患者の総ＩＧＦＢＰ−３濃度は、約１．９μｇ／ｍＬ超である場合により高く、約１．９μｇ／ｍＬ未満である場合により低い。別の実施形態では、該循環バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−４であり、より高いＩＧＦＢＰ−４濃度は、より低い総ＩＧＦＢＰ−４濃度よりも、該患者が該治療に反応する可能性がより高いことを示す。別の実施形態では、該患者の総ＩＧＦＢＰ−４濃度は、約４０ｎｇ／ｍＬ超である場合により高く、約４０ｎｇ／ｍＬ未満である場合により低い。別の実施形態では、該方法は、該患者を該治療で治療することを更に含む。別の実施形態では、該方法は、該患者の循環バイオマーカー濃度が、該患者が該治療に反応する可能性がより高いことを示す場合、該患者を該治療で治療することを更に含む。別の実施形態では、該治療は、ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達経路を通じたシグナル伝達の阻害剤を投与することを含む。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒの上流のシグナル伝達を阻害する。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２��阻害する。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２
の転写または翻訳を阻害する。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２のプロセシングまたは分泌を阻害する。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２に結合する。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの結合を阻害する。別の実施形態では、該阻害剤は、抗ＩＧＦ−１もしくは抗ＩＧＦ−２抗体、該抗体の抗原結合断片、単離されたＩＧＦ−１もしくはＩＧＦ−２結合タンパク質、組換えヒトＩＧＦ−１もしくはＩＧＦ−２結合タンパク質、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ４、ＩＧＦＢＰ５、ＩＧＦＢＰ６、またはＩＧＦＢＰ７である。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒの阻害剤である。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒの小分子阻害剤である。別の実施形態では、該ＩＧＦ−１Ｒの小分子阻害剤は、キナーゼ阻害剤である。別の実施形態では、該小分子阻害剤は、ＯＳＩ−９０６、リンシチニブ、ＢＭＳ−７５４８０７、ＩＮＳＭ−１８、ＸＬ２２８、ＡＸＬ１７１７、ＢＭＳ−５３６９２４、ＮＶＰ−ＡＤＷ７４２、ＧＳＫ６２１６５９Ａ、ＧＳＫ１８３８７０５Ａ、Ａ−９２８６０５、ＡＺＤ４２５３、ＴＡＥ２２６、またはＡＧ１０２４である。別の実施形態では、該阻害剤は、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体、または該抗体の抗原結合断片である。別の実施形態では、該抗体は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの結合を阻害する。別の実施形態では、該抗体は、ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの結合を阻害する。別の実施形態では、該抗体は、ＩＧＦ−１Ｒを下方調節する。別の実施形態では、該抗体は、完全ヒト、ヒト化、またはキメラである。別の実施形態では、該抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体は、ガニツマブ、ＡＭＧ  ４７９、フィギツムマブ、ＣＰ−７５１，８７１、シクスツムマブ、ＩＭＣ−Ａ１２、ダロツズマブ、ＭＫ０６４６、ＲＧ１５０７、ロバツムマブ、ＳＣＨ  ７１７４５４、ＡＶＥ−１６４２ａ、ＭＥＤＩ−５７３、ＢＩＩＢ０２２、ｒｈｕＭａｂ  ＩＧＦＲ、Ｌ１Ｈ１、Ｌ２Ｈ２、Ｌ３Ｈ３、Ｌ４Ｈ４、Ｌ５Ｈ５、Ｌ６Ｈ６、Ｌ７Ｈ７、Ｌ８Ｈ８、Ｌ９Ｈ９、Ｌ１０Ｈ１０、Ｌ１１Ｈ１１、Ｌ１２Ｈ１２、Ｌ１３Ｈ１３、Ｌ１４Ｈ１４、Ｌ１５Ｈ１５、Ｌ１６Ｈ１６、Ｌ１７Ｈ１７、Ｌ１８Ｈ１８、Ｌ１９Ｈ１９、Ｌ２０Ｈ２０、Ｌ２１Ｈ２１、Ｌ２２Ｈ２２、Ｌ２３Ｈ２３、Ｌ２４Ｈ２４、Ｌ２５Ｈ２５、Ｌ２６Ｈ２６、Ｌ２７Ｈ２７、Ｌ２８Ｈ２８、Ｌ２９Ｈ２９、Ｌ３０Ｈ３０、Ｌ３１Ｈ３１、Ｌ３２Ｈ３２、Ｌ３３Ｈ３３、Ｌ３４Ｈ３４、Ｌ３５Ｈ３５、Ｌ３６Ｈ３６、Ｌ３７Ｈ３７、Ｌ３８Ｈ３８、Ｌ３９Ｈ３９、Ｌ４０Ｈ４０、Ｌ４１Ｈ４１、Ｌ４２Ｈ４２、Ｌ４３Ｈ４３、Ｌ４４Ｈ４４、Ｌ４５Ｈ４５、Ｌ４６Ｈ４６、Ｌ４７Ｈ４７、Ｌ４８Ｈ４８、Ｌ４９Ｈ４９、Ｌ５０Ｈ５０、Ｌ５１Ｈ５１、またはＬ５２Ｈ５２である。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２結合タンパク質に影響を及ぼす。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ４、ＩＧＦＢＰ５、ＩＧＦＢＰ６、またはＩＧＦＢＰ７に影響を及ぼす。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒの下流シグナル伝達を阻害する。別の実施形態では、該阻害剤は、Ｒａｓ／Ｒａｆシグナル伝達経路またはＰＩ３Ｋシグナル伝達経路を阻害する。別の実施形態では、該阻害剤は、Ｓｈｃ、Ｇｒｂ２、ＳＯＳ、Ｒａｓ、Ｒａｆ、ＭＥＫ、ＥＲＫ、Ｅｌｋ−１、ＩＲＳ１、ＰＩ３Ｋ、またはＡＫＴ／ＰＫＢを阻害する。別の実施形態では、該阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤である。別の実施形態では、該ｍＴＯＲ阻害剤は、エベロリムスである。別の実施形態では、該反応は、生存期間の増加である。別の実施形態では、該反応は、無増悪生存期間の増加である。別の実施形態では、該反応は、客観的反応である。別の実施形態では、該客観的反応は、病勢安定（ｓｔａｂｌｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）である。別の実施形態では、該客観的反応は、部分反応である。別の実施形態では、該客観的反応は、完全反応である。別の実施形態では、該完全反応は、永続的な完全反応である。
【０００６】
別の態様では、本発明は、患者における癌病態が、ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達経路を通じたシグナル伝達の阻害剤での治療に反応する可能性が高いかどうかを決定する方法であって、該患者の該阻害剤への曝露量を決定することを含み、該癌病態は、該患者の該曝露量が、該阻害剤で治療された該癌病態を有する患者の曝露中央値におよそ等しいかそれよりも大きい場合、該治療に反応する可能性が高い、方法を提供する。一実施形態では、該
阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒの上流のシグナル伝達を阻害する。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２を阻害する。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２の転写または翻訳を阻害する。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２のプロセシングまたは分泌を阻害する。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２に結合する。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの結合を阻害する。別の実施形態では、該阻害剤は、抗ＩＧＦ−１もしくは抗ＩＧＦ−２抗体、該抗体の抗原結合断片、単離されたＩＧＦ−１もしくはＩＧＦ−２結合タンパク質、組換えヒトＩＧＦ−１もしくはＩＧＦ−２結合タンパク質、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ４、ＩＧＦＢＰ５、ＩＧＦＢＰ６、またはＩＧＦＢＰ７である。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒの阻害剤である。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒの小分子阻害剤である。別の実施形態では、該ＩＧＦ−１Ｒの小分子阻害剤は、キナーゼ阻害剤である。別の実施形態では、該小分子阻害剤は、ＯＳＩ−９０６、リンシチニブ、ＢＭＳ−７５４８０７、ＩＮＳＭ−１８、ＸＬ２２８、ＡＸＬ１７１７、ＢＭＳ−５３６９２４、ＮＶＰ−ＡＤＷ７４２、ＧＳＫ６２１６５９Ａ、ＧＳＫ１８３８７０５Ａ、Ａ−９２８６０５、ＡＺＤ４２５３、ＴＡＥ２２６、またはＡＧ１０２４である。別の実施形態では、該阻害剤は、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体、または該抗体の抗原結合断片である。別の実施形態では、該抗体または断片は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの結合を阻害する。別の実施形態では、該抗体または断片は、ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの結合を阻害する。別の実施形態では、該抗体または断片は、ＩＧＦ−１Ｒを下方調節する。別の実施形態では、該抗体または断片は、完全ヒト、ヒト化、またはキメラである。別の実施形態では、該抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体または断片は、ガニツマブ、ＡＭＧ  ４７９、フィギツムマブ、ＣＰ−７５１，８７１、シクスツムマブ、ＩＭＣ−Ａ１２、ダロツズマブ、ＭＫ０６４６、ＲＧ１５０７、ロバツムマブ、ＳＣＨ  ７１７４５４、ＡＶＥ−１６４２ａ、ＭＥＤＩ−５７３、ＢＩＩＢ０２２、ｒｈｕＭａｂ  ＩＧＦＲ、Ｌ１Ｈ１、Ｌ２Ｈ２、Ｌ３Ｈ３、Ｌ４Ｈ４、Ｌ５Ｈ５、Ｌ６Ｈ６、Ｌ７Ｈ７、Ｌ８Ｈ８、Ｌ９Ｈ９、Ｌ１０Ｈ１０、Ｌ１１Ｈ１１、Ｌ１２Ｈ１２、Ｌ１３Ｈ１３、Ｌ１４Ｈ１４、Ｌ１５Ｈ１５、Ｌ１６Ｈ１６、Ｌ１７Ｈ１７、Ｌ１８Ｈ１８、Ｌ１９Ｈ１９、Ｌ２０Ｈ２０、Ｌ２１Ｈ２１、Ｌ２２Ｈ２２、Ｌ２３Ｈ２３、Ｌ２４Ｈ２４、Ｌ２５Ｈ２５、Ｌ２６Ｈ２６、Ｌ２７Ｈ２７、Ｌ２８Ｈ２８、Ｌ２９Ｈ２９、Ｌ３０Ｈ３０、Ｌ３１Ｈ３１、Ｌ３２Ｈ３２、Ｌ３３Ｈ３３、Ｌ３４Ｈ３４、Ｌ３５Ｈ３５、Ｌ３６Ｈ３６、Ｌ３７Ｈ３７、Ｌ３８Ｈ３８、Ｌ３９Ｈ３９、Ｌ４０Ｈ４０、Ｌ４１Ｈ４１、Ｌ４２Ｈ４２、Ｌ４３Ｈ４３、Ｌ４４Ｈ４４、Ｌ４５Ｈ４５、Ｌ４６Ｈ４６、Ｌ４７Ｈ４７、Ｌ４８Ｈ４８、Ｌ４９Ｈ４９、Ｌ５０Ｈ５０、Ｌ５１Ｈ５１、またはＬ５２Ｈ５２である。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２結合タンパク質に影響を及ぼす。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ４、ＩＧＦＢＰ５、ＩＧＦＢＰ６、またはＩＧＦＢＰ７に影響を及ぼす。別の実施形態では、該阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒの下流シグナル伝達を阻害する。別の実施形態では、該阻害剤は、Ｒａｓ／Ｒａｆシグナル伝達経路またはＰＩ３Ｋシグナル伝達経路を阻害する。別の実施形態では、該阻害剤は、Ｓｈｃ、Ｇｒｂ２、ＳＯＳ、Ｒａｓ、Ｒａｆ、ＭＥＫ、ＥＲＫ、Ｅｌｋ−１、ＩＲＳ１、ＰＩ３Ｋ、またはＡＫＴ／ＰＫＢを阻害する。別の実施形態では、該阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤である。別の実施形態では、該ｍＴＯＲ阻害剤は、エベロリムスである。別の実施形態では、該癌性病態は、ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達活性を特徴とする。別の実施形態では、該癌性病態は、ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達の阻害剤を使用した治療に反応するタイプの病態である。別の実施形態では、該患者は、腫瘍を有する。別の実施形態では、該腫瘍は、固形腫瘍である。別の実施形態では、該腫瘍は、原発腫瘍である。別の実施形態では、該腫瘍は、転移性腫瘍である。別の実施形態では、該腫瘍は、膵臓癌腫瘍、肉腫腫瘍、ユーイング肉腫腫瘍、卵巣腫瘍、乳癌腫瘍、小細胞肺癌腫瘍、非小細胞肺癌腫瘍、活性化ＫＲＡＳ突然変異を有する結腸直腸癌腫瘍、野生型ＫＲＡＳ対立遺伝子を有する結腸直腸癌腫瘍、前立腺癌腫瘍、肝臓癌腫瘍、頭頚部癌腫瘍、カルチノイド腫瘍、胃癌腫瘍、
多発性骨髄腫腫瘍、神経内分泌癌腫瘍、副腎細胞癌腫瘍、または肝細胞癌腫瘍である。別の実施形態では、該膵臓癌腫瘍は、転移性膵臓癌腫瘍である。別の実施形態では、該膵臓癌腫瘍は、局所進行膵臓癌腫瘍である。別の実施形態では、該方法は、該患者に、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の用量を投与することを更に含む。別の実施形態では、該用量は、１２ｍｇ／ｋｇ用量である。別の実施形態では、該用量は、２０ｍｇ／ｋｇ用量である。別の実施形態では、該抗体は、ガニツマブである。別の実施形態では、該癌性病態は、膵臓癌である。別の実施形態では、該膵臓癌は、転移性である。別の実施形態では、該膵臓癌は、局所進行性である。別の実施形態では、該方法は、該患者に、該抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の第２の用量を投与することを更に含む。別の実施形態では、該第２の用量は、第１の用量の２週間後に投与される。別の実施形態では、該患者は、該抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の少なくとも１回の追加的用量を受容する。別の実施形態では、該用量は、２週間に１回投与される。別の実施形態では、本方法は、第２の循環バイオマーカーの濃度を決定することを更に含む。別の実施形態では、本方法は、第３の循環バイオマーカーの濃度を決定することを更に含む。別の実施形態では、本方法は、第４の循環バイオマーカーの濃度を決定することを更に含む。別の実施形態では、該バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−２および総ＩＧＦ−１である。別の実施形態では、該バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦ−２である。別の実施形態では、該バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦＢＰ−３である。別の実施形態では、該バイオマーカーは、総ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２である。別の実施形態では、該バイオマーカーは、総ＩＧＦ−１およびＩＧＦＢＰ−３である。別の実施形態では、該バイオマーカーは、ＩＧＦ−２およびＩＧＦＢＰＦ−３である。別の実施形態では、該循環バイオマーカーは、総ＩＧＦ−１、遊離ＩＧＦ−１、総ＩＧＦ−２、遊離ＩＧＦ−２、ＩＧＦＢＰ−１、ＩＧＦＢＰ−３、ＩＧＦＢＰ−４、ＩＧＦＢＰ−５、ＩＧＦＢＰ−６、またはＩＧＦＢＰ−７であり、該循環バイオマーカーの該濃度は、該癌性病態を有する少なくとも１００人の患者の分析に由来する参照範囲からの中央値よりも大きい。別の実施形態では、該循環バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−２であり、該循環バイオマーカーの該濃度は、該癌性病態を有する少なくとも１００人の患者の分析に由来する参照範囲からの中央値未満である。別の実施形態では、該癌病態は、該患者のＡＵＣｓｓが中央値以上である場合、該治療に反応する可能性が高い。別の実施形態では、該中央値は、１９．２ｍｇ・ｈ／ｍＬである。別の実施形態では、決定されるのは、治療前の該循環バイオマーカーの濃度である。
【０００７】
別の態様では、本発明は、循環バイオマーカーの量を決定することを含む、患者についての予後を決定するための方法を提供し、該患者は、癌性病態を有し、該循環バイオマーカーの量は、該患者がより良好な予後を有するかどうかを示す。一実施形態では、該癌性病態は、ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達活性を特徴とする。別の実施形態では、該癌性病態は、ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達の阻害剤を使用した治療に反応するタイプの病態である。別の実施形態では、該患者は、腫瘍を有する。別の実施形態では、該腫瘍は、固形腫瘍である。別の実施形態では、該腫瘍は、原発腫瘍である。別の実施形態では、該腫瘍は、転移性腫瘍である。別の実施形態では、該腫瘍は、膵臓癌腫瘍、肉腫腫瘍、ユーイング肉腫腫瘍、卵巣腫瘍、乳癌腫瘍、小細胞肺癌腫瘍、非小細胞肺癌腫瘍、活性化ＫＲＡＳ突然変異を有する結腸直腸癌腫瘍、野生型ＫＲＡＳ対立遺伝子を有する結腸直腸癌腫瘍、前立腺癌腫瘍、肝臓癌腫瘍、頭頚部癌腫瘍、カルチノイド腫瘍、胃癌腫瘍、多発性骨髄腫腫瘍、神経内分泌癌腫瘍、副腎細胞癌腫瘍、または肝細胞癌腫瘍である。別の実施形態では、該膵臓癌腫瘍は、転移性膵臓癌腫瘍である。別の実施形態では、該膵臓癌腫瘍は、局所進行膵臓癌腫瘍である。別の実施形態では、該癌性病態は、急性リンパ芽球性白血病、副腎皮質癌、ＡＩＤＳ関連癌、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、肛門癌、小児小脳星状細胞腫、小児脳星状細胞腫、基底細胞癌、肝外胆管癌、膀胱癌、骨肉腫／悪性線維性組織球腫骨癌、脳腫瘍（例えば、脳幹神経膠腫、小脳星状細胞腫、脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、上衣腫、髄芽腫、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、視覚路または視床下部神経膠腫）、乳癌、気管支腺腫／カルチノイド、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、胃腸カルチノイド腫瘍、原発
不明癌、原発性中枢神経系、小脳星状細胞腫、脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、子宮頸癌、小児癌、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、ユーイング肉腫ファミリー腫瘍、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管癌、眼内黒色腫眼癌、網膜芽細胞腫眼癌、胆嚢癌、胃（Ｇａｓｔｒｉｃ）（胃（Ｓｔｏｍａｃｈ））癌、胃腸カルチノイド腫瘍、胚細胞腫瘍（例えば、頭蓋外、性腺外、または卵巣）、妊娠性絨毛性腫瘍、神経膠腫（例えば、成人、小児脳幹、小児脳星状細胞腫、小児視覚路または視床下部）、有毛細胞白血病、頭頚部癌、肝細胞（肝臓）癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、視床下部もしくは視覚路神経膠腫、眼内黒色腫、膵島細胞癌（内分泌膵臓）、カポジ肉腫、腎臓（腎細胞）癌、喉頭癌、白血病（例えば、急性リンパ芽球性、急性骨髄性、慢性リンパ球性、慢性骨髄性、または有毛細胞）、口唇もしくは口腔癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、リンパ腫（例えば、ＡＩＤＳ関連、バーキット、皮膚Ｔ細胞、ホジキン、非ホジキン、または原発性中枢神経系）、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、骨の悪性線維性組織球腫／骨肉腫、髄芽腫、黒色腫、眼内（眼）黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、原発不明転移性扁平上皮頸部癌、多発性内分泌腫瘍症、多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、慢性骨髄増殖性疾患、鼻腔もしくは副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、口腔癌、口腔咽頭癌、骨肉腫／骨の悪性線維性組織球腫、卵巣癌、上皮性卵巣癌、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍、膵臓癌、膵島細胞膵臓癌、副鼻腔もしくは鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、褐色細胞腫、松果体芽腫、脳下垂体腫瘍、形質細胞腫瘍／多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、原発性中枢神経系リンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞（腎臓）癌、腎盂もしくは尿管移行細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、軟部組織肉腫、子宮肉腫、セザリー症候群、非黒色腫皮膚癌、メルケル細胞皮膚癌、小腸癌、軟部組織肉腫、扁平上皮細胞癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、精巣癌、胸腺腫、胸腺癌、甲状腺癌、妊娠性絨毛性腫瘍、原発部位不明癌（Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｆ  Ｕｎｋｎｏｗｎ  Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｓｉｔｅ）、原発部位不明癌（Ｃａｎｃｅｒ  ｏｆ  Ｕｎｋｎｏｗｎ  Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｓｉｔｅ）、尿道癌、子宮内膜子宮癌、子宮肉腫、膣癌、視覚路もしくは視床下部神経膠腫、外陰癌、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、またはウィルムス腫瘍である。別の実施形態では、該循環バイオマーカーは、総ＩＧＦ−１、遊離ＩＧＦ−１、総ＩＧＦ−２、遊離ＩＧＦ−２、ＩＧＦＢＰ−１、ＩＧＦＢＰ−２、ＩＧＦＢＰ−３、ＩＧＦＢＰ−４、ＩＧＦＢＰ−５、ＩＧＦＢＰ−６、またはＩＧＦＢＰ−７である。別の実施形態では、該循環バイオマーカーは、総ＩＧＦ−１であり、より高い総ＩＧＦ−１濃度は、該患者がより良好な予後を有することを示す。別の実施形態では、該患者の総ＩＧＦ−１濃度は、約１１８ｎｇ／ｍＬ超である場合により高く、約１１８ｎｇ／ｍＬ未満である場合により低��。別の実施形態では、該循環バイオマーカーは、総ＩＧＦ−２であり、より低いＩＧＦ−２濃度は、該患者がより良好な予後を有することを示す。別の実施形態では、該患者の総ＩＧＦ−２濃度は、約１７３４ｎｇ／ｍＬ超である場合により高く、約１７３４ｎｇ／ｍＬ未満である場合により低い。別の実施形態では、該循環バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−１であり、より低いＩＧＦＢＰ−１濃度は、該患者がより良好な予後を有することを示す。別の実施形態では、該患者の総ＩＧＦＢＰ−１濃度は、約３０ｎｇ／ｍＬ超である場合により高く、約３０ｎｇ／ｍＬ未満である場合により低い。別の実施形態では、該循環バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−２であり、より低いＩＧＦＢＰ−２濃度は、該患者がより良好な予後を有することを示す。別の実施形態では、該患者の総ＩＧＦＢＰ−２濃度は、約１７０ｎｇ／ｍＬ超である場合により高く、約１７０ｎｇ／ｍＬ未満である場合により低い。別の実施形態では、該循環バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−３であり、より高いＩＧＦＢＰ−３濃度は、該患者がより良好な予後を有することを示す。別の実施形態では、該患者の総ＩＧＦＢＰ−３濃度は、約１．９μｇ／ｍＬ超である場合により高く、約１．９μｇ／ｍＬ未満である場合により低い。別の実施形態では、該循環バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−４であり、より低いＩＧＦＢＰ−４濃度は、該患者がより良好な予後を有することを示す。別の実施形態では、該患者の総ＩＧＦＢＰ−４濃度は
、約４０ｎｇ／ｍＬ超である場合により高く、約４０ｎｇ／ｍＬ未満である場合により低い。別の実施形態では、該方法は、第２の循環バイオマーカーの濃度を決定することを更に含む。別の実施形態では、該方法は、第３の循環バイオマーカーの濃度を決定することを更に含む。別の実施形態では、該方法は、第４の循環バイオマーカーの濃度を決定することを更に含む。別の実施形態では、該バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−２および総ＩＧＦ−１である。別の実施形態では、該バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦ−２である。別の実施形態では、該バイオマーカーは、ＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦＢＰ−３である。別の実施形態では、該バイオマーカーは、総ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２である。別の実施形態では、該バイオマーカーは、総ＩＧＦ−１およびＩＧＦＢＰ−３である。別の実施形態では、該バイオマーカーは、ＩＧＦ−２およびＩＧＦＢＰＦ−３である。
【０００８】
別の態様では、本発明は、前述の方法のいずれかを実践するためのキットを提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１Ａ】軽鎖可変ドメインＬ１〜Ｌ５２および重鎖可変ドメインＨ１〜Ｈ５２をコードするヌクレオチド配列を提供する。
【図１Ｂ】軽鎖可変ドメインＬ１〜Ｌ５２および重鎖可変ドメインＨ１〜Ｈ５２をコードするヌクレオチド配列を提供する。
【図１Ｃ】軽鎖可変ドメインＬ１〜Ｌ５２および重鎖可変ドメインＨ１〜Ｈ５２をコードするヌクレオチド配列を提供する。
【図１Ｄ】軽鎖可変ドメインＬ１〜Ｌ５２および重鎖可変ドメインＨ１〜Ｈ５２をコードするヌクレオチド配列を提供する。
【図１Ｅ】軽鎖可変ドメインＬ１〜Ｌ５２および重鎖可変ドメインＨ１〜Ｈ５２をコードするヌクレオチド配列を提供する。
【図１Ｆ】軽鎖可変ドメインＬ１〜Ｌ５２および重鎖可変ドメインＨ１〜Ｈ５２をコードするヌクレオチド配列を提供する。
【図１Ｇ】軽鎖可変ドメインＬ１〜Ｌ５２および重鎖可変ドメインＨ１〜Ｈ５２をコードするヌクレオチド配列を提供する。
【図１Ｈ】軽鎖可変ドメインＬ１〜Ｌ５２および重鎖可変ドメインＨ１〜Ｈ５２をコードするヌクレオチド配列を提供する。
【図１Ｉ】軽鎖可変ドメインＬ１〜Ｌ５２および重鎖可変ドメインＨ１〜Ｈ５２をコードするヌクレオチド配列を提供する。
【図１Ｊ】軽鎖可変ドメインＬ１〜Ｌ５２および重鎖可変ドメインＨ１〜Ｈ５２をコードするヌクレオチド配列を提供する。
【図１Ｋ】軽鎖可変ドメインＬ１〜Ｌ５２および重鎖可変ドメインＨ１〜Ｈ５２をコードするヌクレオチド配列を提供する。
【図１Ｌ】軽鎖可変ドメインＬ１〜Ｌ５２および重鎖可変ドメインＨ１〜Ｈ５２をコードするヌクレオチド配列を提供する。
【図１Ｍ】軽鎖可変ドメインＬ１〜Ｌ５２および重鎖可変ドメインＨ１〜Ｈ５２をコードするヌクレオチド配列を提供する。
【図２Ａ】軽鎖可変ドメインＬ１〜Ｌ５２のアミノ酸配列を提供する。ＣＤＲおよびＦＲ領域が示される。
【図２Ｂ】軽鎖可変ドメインＬ１〜Ｌ５２のアミノ酸配列を提供する。ＣＤＲおよびＦＲ領域が示される。
【図３Ａ】重鎖可変ドメインＨ１〜Ｈ５２のアミノ酸配列を提供する。ＣＤＲおよびＦＲ領域が示される。
【図３Ｂ】重鎖可変ドメインＨ１〜Ｈ５２のアミノ酸配列を提供する。ＣＤＲおよびＦＲ領域が示される。
【図４】軽鎖可変ドメインＬ１〜Ｌ５２の軽鎖ＣＤＲ１領域のアミノ酸配列を提供する。関連するＣＤＲ配列の群についてのコンセンサス配列もまた、提供される。
【図５】軽鎖可変ドメインＬ１〜Ｌ５２の軽鎖ＣＤＲ２領域のアミノ酸配列を提供する。関連するＣＤＲ配列の群についてのコンセンサス配列もまた、提供される。
【図６】軽鎖可変ドメインＬ１〜Ｌ５２の軽鎖ＣＤＲ３領域のアミノ酸配列を提供する。関連するＣＤＲ配列の群についてのコンセンサス配列もまた、提供される。
【図７】重鎖可変ドメインＨ１〜Ｈ５２の重鎖ＣＤＲ１領域のアミノ酸配列を提供する。関連するＣＤＲ配列の群についてのコンセンサス配列もまた、提供される。
【図８】重鎖可変ドメインＨ１〜Ｈ５２の重鎖ＣＤＲ２領域のアミノ酸配列を提供する。関連するＣＤＲ配列の群についてのコンセンサス配列もまた、提供される。
【図９Ａ】重鎖可変ドメインＨ１〜Ｈ５２の重鎖ＣＤＲ３領域のアミノ酸配列を提供する。関連するＣＤＲ配列の群についてのコンセンサス配列もまた、提供される。
【図９Ｂ】重鎖可変ドメインＨ１〜Ｈ５２の重鎖ＣＤＲ３領域のアミノ酸配列を提供する。関連するＣＤＲ配列の群についてのコンセンサス配列もまた、提供される。
【図１０】介在カスパーゼ（ｃａｓｐａｃｅ）−３開裂部位（太字）を有するヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域（下線）に融合されたヒトＩＧＦ−１Ｒ細胞外ドメインのアミノ酸配列を提供する。
【図１１】ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域（下線）に融合されたヒトインスリン受容体細胞外ドメインのアミノ酸配列を提供する。
【図１２】Ｃ末端でニワトリアビジンと融合されたヒトＩＧＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（シグナルペプチドを含む）のタンパク質配列を提供する。ＩＧＦ−１Ｒ  ＥＣＤにおける開始メチオニン（ｍｅｔ）は、この図において１位と表記される。
【図１３】ヒトカッパ軽鎖抗体定常領域およびヒトＩｇＧ１重鎖抗体定常領域のポリペプチド配列を提供する。
【図１４】４つのファージディスプレイ抗体が、インスリン−受容体−ＦｃまたはマウスＦｃに結合するよりも、ＩＧＦ−１Ｒ−Ｆｃ分子に有意によりよく結合することを例証するグラフを提供する。
【図１５Ａ】ＩＧＦ−１Ｒへの結合に対してＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２と競合する、ある種の抗体の能力を例証するグラフを提供する。
【図１５Ｂ】ＩＧＦ−１Ｒへの結合に対してＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２と競合する、ある種の抗体の能力を例証するグラフを提供する。
【図１６Ａ】３２Ｄ  ｈｕ  ＩＧＦ−１Ｒ＋ＩＲＳ−１細胞の増殖を阻害する、ある種の抗体の能力を例証するグラフを提供する。
【図１６Ｂ】３２Ｄ  ｈｕ  ＩＧＦ−１Ｒ＋ＩＲＳ−１細胞の増殖を阻害する、ある種の抗体の能力を例証するグラフを提供する。
【図１６Ｃ】３２Ｄ  ｈｕ  ＩＧＦ−１Ｒ＋ＩＲＳ−１細胞の増殖を阻害する、ある種の抗体の能力を例証するグラフを提供する。
【図１６Ｄ】３２Ｄ  ｈｕ  ＩＧＦ−１Ｒ＋ＩＲＳ−１細胞の増殖を阻害する、ある種の抗体の能力を例証するグラフを提供する。
【図１６Ｅ】３２Ｄ  ｈｕ  ＩＧＦ−１Ｒ＋ＩＲＳ−１細胞の増殖を阻害する、ある種の抗体の能力を例証するグラフを提供する。
【図１６Ｆ】３２Ｄ  ｈｕ  ＩＧＦ−１Ｒ＋ＩＲＳ−１細胞の増殖を阻害する、ある種の抗体の能力を例証するグラフを提供する。
【図１７Ａ】Ｂａｌｂ／Ｃ  ３Ｔ３  ｈｕ  ＩＧＦ−１Ｒ細胞の増殖を阻害する、ある種の抗体の能力を例証するグラフを提供する。
【図１７Ｂ】Ｂａｌｂ／Ｃ  ３Ｔ３  ｈｕ  ＩＧＦ−１Ｒ細胞の増殖を阻害する、ある種の抗体の能力を例証するグラフを提供する。
【図１７Ｃ】Ｂａｌｂ／Ｃ  ３Ｔ３  ｈｕ  ＩＧＦ−１Ｒ細胞の増殖を阻害する、ある種の抗体の能力を例証するグラフを提供する。
【図１７Ｄ】Ｂａｌｂ／Ｃ  ３Ｔ３  ｈｕ  ＩＧＦ−１Ｒ細胞の増殖を阻害する、ある種の抗体の能力を例証するグラフを提供する。
【図１７Ｅ】Ｂａｌｂ／Ｃ  ３Ｔ３  ｈｕ  ＩＧＦ−１Ｒ細胞の増殖を阻害する、ある種の抗体の能力を例証するグラフを提供する。
【図１７Ｆ】Ｂａｌｂ／Ｃ  ３Ｔ３  ｈｕ  ＩＧＦ−１Ｒ細胞の増殖を阻害する、ある種の抗体の能力を例証するグラフを提供する。
【図１８】ガニツマブ（ＡＭＧ  ４７９）のアミノ酸配列を提供する。
【図１９】コナツムマブ（コナツムマブ）（ＡＭＧ  ６５５）のアミノ酸配列を提供する。
【図２０】転移性膵臓癌を有する患者における、ゲムシタビンを加えたコナツムマブ（ＡＭＧ  ６５５）もしくはガニツマブ（ＡＭＧ  ４７９）またはプラセボの、プラセボ対照での無作為化第二相試験についての研究模式図を提供する。
【図２１】図２０の研究についての全生存期間データを提供する。
【図２２】図２０の試験についての無増悪生存期間データを提供する。
【図２３】ガニツマブ曝露の全生存期間に及ぼす影響を例証するグラフを提供する。
【図２４】ガニツマブ曝露の無増悪生存期間に及ぼす影響を例証するグラフを提供する。
【図２５】非膵臓腫瘍を有する患者において２０ｍｇ／ｋｇで、および膵臓または非膵臓腫瘍を有する患者において１２ｍｇ／ｋｇで観察されたガニツマブＡＵＣｓｓ分布、ならびに膵臓腫瘍を有する患者について２０ｍｇ／ｋｇで予測されたＡＵＣｓｓ分布を例証するグラフを提供する。
【図２６】プラセボならびに１２および２０ｍｇ／ｋｇガニツマブについての、推定された無増悪生存期間プロフィールを提供する。
【図２７】Ｃｏｘ比例ハザードモデルによる、全生存期間と、ＩＧＦバイオマーカーのベースラインレベルとの間の関係の分析を提供する。データは表にされ、ＨＲは、エラーバーが９５％信頼区間を表す、フォレストプロットとしてグラフ表示される。
【図２８Ａ】ＡおよびＢは、Ｃｏｘ比例ハザードモデルによる、ガニツマブまたはプラセボのいずれかで治療された、中央値よりも高いおよび中央値よりも低いＩＧＦバイオマーカーのベースラインレベルを有する下位群の全生存期間の比較を提供する。データは表にされ、ＨＲは、エラーバーが９５％信頼区間を表す、フォレストプロットとしてグラフ表示される。
【図２８Ｂ】ＡおよびＢは、Ｃｏｘ比例ハザードモデルによる、ガニツマブまたはプラセボのいずれかで治療された、中央値よりも高いおよび中央値よりも低いＩＧＦバイオマーカーのベースラインレベルを有する下位群の全生存期間の比較を提供する。データは表にされ、ＨＲは、エラーバーが９５％信頼区間を表す、フォレストプロットとしてグラフ表示される。
【図２９】高い総ＩＧＦ−１および低い総ＩＧＦ−１患者群の間の全生存期間における差異を例証するカプランマイヤー（Ｋａｐｌａｎ−Ｍａｉｅｒ）プロットを提供する。矢印は、ガニツマブ治療された高い総ＩＧＦ−１下位群に対応する線を示す。
【図３０】高い遊離ＩＧＦ−１および低い遊離ＩＧＦ−１患者群の間の全生存期間における差異を例証するカプランマイヤープロットを提供する。矢印は、ガニツマブ治療された高い遊離ＩＧＦ−１下位群に対応する線を示す。
【図３１】高い総ＩＧＦ−２および低い総ＩＧＦ−２患者群の間の全生存期間における差異を例証するカプランマイヤープロットを提供する。矢印は、ガニツマブ治療された高いＩＧＦ−２下位群に対応する線を示す。
【図３２】高い総ＩＧＦＢＰ−２および低い総ＩＧＦＢＰ−２患者群の間の全生存期間における差異を例証するカプランマイヤープロットを提供する。矢印は、ガニツマブ治療された低いＩＧＦＢＰ−２下位群に対応する線を示す。
【図３３】高いＩＧＦＢＰ−３および低いＩＧＦＢＰ−３患者群の間の全生存期間における差異を例証するカプランマイヤープロットを提供する。矢印は、ガニツマブ治療された高いＩＧＦＢＰ−３下位群に対応する線を示す。
【図３４】ＩＧＦ−１受容体シグナル伝達の阻害剤で治療された１２人のヒト被験者の各々について達成された、最良腫瘍反応を例証するグラフを提供する。
【図３５】バイオマーカーの対についての散布プロットを提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明は、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体、抗体断片、および抗体誘導体、例えば、拮抗性抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体、抗体断片、または抗体誘導体等の、ＩＧＦ−１Ｒを作動するまたはそれに拮抗する分子を含む、インスリン様成長因子受容体（「ＩＧＦ−１Ｒ」）に結合する分子に関する組成物、キット、および方法を提供する。また、ＩＧＦ−１Ｒに結合するポリペプチドの全てまたは一部分をコードするヌクレオチドの配列を含む、核酸ならびにそれらの誘導体および断片、例えば、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体、抗体断片、または抗体誘導体の全てまたは一部をコードする核酸、かかる核酸を含むプラスミドとベクター、ならびにかかる核酸および／またはベクターとプラスミドを含む細胞または細胞株も提供される。提供される方法には、例えば、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体等のＩＧＦ−１Ｒに結合する分子を作製、特定、または単離する方法、分子がＩＧＦ−１Ｒに結合するかどうかを決定する方法、分子がＩＧＦ−１Ｒを作動するか、それともそれに拮抗するかを決定する方法、ＩＧＦ−１Ｒに結合する分子を含む薬学的組成物等の組成物を作製する方法、ならびにＩＧＦ−１Ｒを結合する分子を対象に投与するための方法、例えば、ＩＧＦ−１Ｒによって媒介される病態を治療するための方法、ならびにインビボまたはインビトロでＩＧＦ−１Ｒ、ＩＧＦ−１、および／またはＩＧＦ−２の生物活性を作動するまたはそれに拮抗するための方法が含まれる。
【００１１】
ポリヌクレオチドおよびポリペプチド配列は、標準的な１文字または３文字略号を使用して示される。別途指定されない限り、ポリペプチド配列は、左にそれらのアミノ末端および右にそれらのカルボキシ末端を有し、１本鎖核酸配列、および２本鎖核酸配列の最上部の鎖は、左にそれらの５’末端および右にそれらの３’末端を有する。具体的なポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列はまた、それが参照配列からどのように異なるかを説明することによって記載することができる。
【００１２】
具体的な軽鎖および重鎖可変ドメインのポリヌクレオチドおよびポリペプチド配列が図１、２、および３に示され、そこでそれらは、例えば、Ｌ１（「軽鎖可変ドメイン１」）、Ｈ１（「重鎖可変ドメイン１」）等と名称が付けられている。図２および３からの軽鎖および重鎖を含む抗体は、軽鎖ドメインの名称および重鎖可変ドメインの名称を組み合わせることによって示される。例えば、「Ｌ４Ｈ７」は、Ｌ４の軽鎖可変ドメインおよびＨ７の重鎖可変ドメインを含む抗体を示す。
【００１３】
本明細書に別途規定されない限り、本発明に関連して使用される科学用語および学術用語は、当業者によって一般に理解される意味を有するものとする。更に、文脈上他の解釈を要する場合を除き、単数形の用語は、複数形を含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。一般に、本明細書に記載される、細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝子学、ならびにタンパク質化学および核酸化学、ならびにハイブリダイゼーションに関連して使用される、命名法、ならびにそれらの技法は、当該技術分野で周知であり、一般的に使用されるものである。本発明の方法および技法は、別途指定されない限り、一般に、当該技術分野で周知の従来の方法に従って、ならびに本明細書全体を通じて引用され、考察される種々の一般のおよびより具体的な参考文献に記載されるように行われる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）およびＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ
Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ（１９９２）、ならびにＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  
Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９９０）を参照されたく、それらは参照により本明細書に組み込まれる。酵素反応および精製技法は、製造業者の仕様に従って、当該技術分野で一般的に遂行されるように、または本明細書に記載されるように行われる。本明細書に記載される、分析化学、合成有機化学、ならびに創薬および製薬化学に関連して使用される専門用語、ならびにそれらの臨床検査法は、当該技術分野で周知であり、一般的に使用されるものである。標準的な技法を、化学合成、化学分析、医薬調製、製剤化、および送達、ならびに患者の治療に使用することができる。
【００１４】
次の用語は、別途指定されない限り、次の意味を有すると理解されるものとする：
【００１５】
「単離された分子」（ここでの分子は、例えば、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、または抗体である）という用語は、その誘導の起源または源に基づいて、（１）その天然状態でそれに付随する自然随伴性の構成成分を伴わない、（２）同じ種からの他の分子が実質的にない、（３）異なる種からの細胞によって発現される、または（４）自然界で生じない、分子である。故に、化学合成される、またはそれの自然起源である細胞とは異なる細胞系において合成される分子は、その自然随伴性の構成成分から「単離される」ことになる。分子はまた、当該技術分野で周知の精製技法を使用して、単離によって、自然随伴性の構成成分が実質的にないようにされ得る。分子純度または均一性は、当該技術分野で周知の幾つかの手段によってアッセイされ得る。例えば、ポリペプチド試料の純度は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動および当該技術分野で周知の技法を使用したポリペプチドを可視化するためのゲルの染色を使用してアッセイされてもよい。ある種の目的のためには、より高い分解能は、ＨＰＬＣまたは精製のための当該技術分野で周知の他の手段を使用することによって提供され得る。
【００１６】
「ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤」および「ＩＧＦ−１Ｒ拮抗薬」という用語は、交換可能に使用される。各々は、ＩＧＦ−１Ｒの少なくとも１つの機能を検出可能に阻害する分子である。逆に、「ＩＧＦ−１Ｒ作動薬」は、ＩＧＦ−１Ｒの少なくとも１つの機能を検出可能に増加させる分子である。ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤によって引き起こされる阻害は、それがアッセイを使用して検出可能である限り、完全である必要はない。ＩＧＦ−１Ｒの機能の任意のアッセイを使用することができ、それらの例が本明細書に提供される。ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤によって阻害され得る、またはＩＧＦ−１Ｒ作動薬によって増加され得る、ＩＧＦ−１Ｒの機能の例としては、ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−１２、および／または別のＩＧＦ−１Ｒ活性化分子への結合、キナーゼ活性、下流シグナル伝達等が挙げられる。ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤およびＩＧＦ−１Ｒ作動薬のタイプの例としては、抗原結合タンパク質（例えば、ＩＧＦ−１Ｒ阻害抗原結合タンパク質）等のＩＧＦ−１Ｒ結合ポリペプチド、抗体、抗体断片、および抗体誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１７】
「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」という用語は各々、ペプチド結合によって相互に接合された２つ以上のアミノ酸残基を含む分子を指す。これらの用語は、例えば、天然および人工タンパク質、タンパク質配列のタンパク質断片およびポリペプチド類似体（変異タンパク質、変異体、および融合タンパク質等）、ならびに翻訳後あるいは共有結合性もしくは非共有結合性の修飾タンパク質を包含する。ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質は、単量体でも重合体でもあってよい。
【００１８】
本明細書で使用される「ポリペプチド断片」という用語は、対応する完全長タンパク質と比較して、アミノ末端および／またはカルボキシ末端欠失を有するポリペプチドを指す。断片は、例えば、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、５０、７０、８０、９０、１００、１５０、または２００アミノ酸長であり得る。断片はまた、例えば、多くて１，０００、７５０、５００、２５０、２００、１７５
、１５０、１２５、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１５、１４、１３、１２、１１、または１０アミノ酸長でもあり得る。断片は、その末端のいずれかまたは両方において、１つ以上の追加のアミノ酸、例えば、異なる自然発生タンパク質からのアミノ酸の配列（例えば、Ｆｃまたはロイシンジッパードメイン）または人工アミノ酸配列（例えば、人工リンカー配列）を更に含むことができる。
【００１９】
本発明のポリペプチドには、任意の方法および任意の理由で、例えば、（１）タンパク質加水分解に対する感受性を低減する、（２）酸化に対する感受性を低減する、（３）タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変化させる、（４）結合親和性を変化させる、および（４）他の物理化学的または機能的特性を付与または修飾するために、修飾されたポリペプチドが含まれる。類似体には、ポリペプチドの変異タンパク質が含まれる。例えば、単一または多重アミノ酸置換（例えば、保存アミノ酸置換）が、自然発生の配列において行われてもよい（例えば、分子間接触を形成するドメイン（複数可）の外側のポリペプチドの部分において）。「保存アミノ酸置換」は、親配列の構造的特性を実質的に変化させない置換である（例えば、置き換えるアミノ酸は、親配列において生じるヘリックスを破断するか、または親配列を特徴付けるかもしくはその機能性に必要である他のタイプの二次構造を分裂する傾向があるべきでない）。当該技術分野において認識されるポリペプチドの二次および三次構造の例は、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４））、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｃ．Ｂｒａｎｄｅｎ  ａｎｄ  Ｊ．Ｔｏｏｚｅ，ｅｄｓ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９１））、およびＴｈｏｒｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｔ．Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：１０５（１９９１）に記載され、それらは各々、参照により本明細書に組み込まれる。
【００２０】
本発明はまた、ＩＧＦ−１Ｒ結合ポリペプチドの非ペプチド類似体も提供する。非ペプチド類似体は、製薬業界で、テンプレートペプチドの特性に類似した特性を有する薬物として一般的に使用される。これらのタイプの非ペプチド化合物は、「ペプチド模倣体（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｍｉｍｅｔｉｃｓ）」または「ペプチド模倣体（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ）」と称される。Ｆａｕｃｈｅｒｅ，Ｊ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓ．１５：２９（１９８６）、Ｖｅｂｅｒ  ａｎｄ  Ｆｒｅｉｄｉｎｇｅｒ  ＴＩＮＳ  ｐ．３９２（１９８５）、およびＥｖａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０：１２２９（１９８７）、それらは参照により本明細書に組み込まれる。治療上有用なペプチドと構造的に同様であるペプチド模倣体を使用して、同等の治療または予防効果を生み出すことができる。一般に、ペプチド模倣体は、ヒト抗体等の、パラダイムポリペプチド（すなわち、所望の生化学的特性または薬理学的活性を有するポリペプチド）と構造的に同様であるが、−−ＣＨ２ＮＨ−−、−−ＣＨ２Ｓ−−、−−ＣＨ２−−ＣＨ２−−、−−ＣＨ＝ＣＨ−（シスおよびトランス）、−−ＣＯＣＨ２−−、−−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−−、および−−ＣＨ２ＳＯ−−からなる群から選択される結合によって、当該技術分野で周知の方法によって任意に置換された１つ以上のペプチド結合を有する。同じタイプのＤ−アミノ酸でのコンセンサス配列の１つ以上のアミノ酸の系統的置換（例えば、Ｌ−リジンの代わりにＤ−リジン）をまた使用して、より安定なペプチドを生成してもよい。更に、コンセンサス配列または実質的に同一のコンセンサス配列変形を含む拘束性（ｃｏｎｓｔｒａｉｎｅｄ）ペプチドは、当該技術分野で既知の方法によって（Ｒｉｚｏ  ａｎｄ  Ｇｉｅｒａｓｃｈ  Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：３８７（１９９２）、参照により本明細書に組み込まれる）、例えば、ペプチドを環化する分子内ジスルフィド架橋を形成することが可能な内部システイン残基を付加することによって、生成され得る。
【００２１】
ポリペプチド（例えば、抗体）の「変異体」は、別のポリペプチド配列と比べて、１つ
以上のアミノ酸残基がアミノ酸配列の中に挿入される、そこから欠失される、および／またはその中に置換される、アミノ酸配列を含む。本発明の変異体には、融合タンパク質が含まれる。
【００２２】
ポリペプチドの「誘導体」は、別の化学部分、例えば、ポリエチレングリコール、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）、リン酸化、およびグリコシル化等のへの複合体化を介して、化学修飾されたポリペプチド（例えば、抗体）である。別途指定されない限り、「抗体」という用語は、２つの完全長重鎖および２つの完全長軽鎖を含む抗体に加えて、それらの誘導体、変異体、断片、ならびに変異タンパク質を含み、それらの例は後述される。
【００２３】
「抗原結合タンパク質」は、タンパク質抗原に結合する部分、および任意に、抗原結合部分が、抗原結合タンパク質の抗原への結合を促進する立体配座を採用することを可能にする、足場またはフレームワーク部分を含む。抗原結合タンパク質の例としては、抗体、抗体断片（例えば、抗原結合の部分抗体）、抗体誘導体、および抗体類似体が挙げられる。抗原結合タンパク質は、例えば、移植ＣＤＲまたはＣＤＲ誘導体を有する代替タンパク質足場または人工足場を含むことができる。かかる足場には、例えば、抗原結合タンパク質の３次元構造を安定化するために導入された、突然変異を含む抗体由来の足場、ならびに例えば、生体適合性重合体を含む、全合成足場が含まれるが、これらに限定されない。例えば、Ｋｏｒｎｄｏｒｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，Ｖｏｌｕｍｅ
５３，Ｉｓｓｕｅ  １：１２１−１２９、Ｒｏｑｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：６３９−６５４を参照されたい。更に、ペプチド抗体模倣体（「ＰＡＭ」）、ならびに足場としてフィブロネクチン（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｏｎ）構成成分を利用する抗体模倣体に基づく足場を使用することができる。
【００２４】
抗原結合タンパク質は、例えば、自然発生の免疫グロブリンの構造を有することができる。「免疫グロブリン」は、四量体分子である。自然発生の免疫グロブリンにおいて、各四量体は、ポリペプチド鎖の２つの同一の対からなり、各対が、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識に関与する約１００〜１１０以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能に関与する定常領域を定める。ヒト軽鎖は、カッパおよびラムダ軽鎖として分類される。重鎖は、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファ、またはイプシロンとして分類され、それぞれ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥとして抗体のアイソタイプを定める。軽鎖および重鎖内で、可変領域および定常領域は、約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって接合され、このうち重鎖はまた、約１０個以上の更なるアミノ酸の「Ｄ」領域も含む。一般には、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ  ｅｄ．Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい（参照によりその全体が全目的で組み込まれる）。各軽鎖／重鎖対の可変領域は、無傷の（ｉｎｔａｃｔ）免疫グロブリンが２つの結合部位を有するように、抗体結合部位を形成する。
【００２５】
自然発生の免疫グロブリン鎖は、相補性決定領域またはＣＤＲとも呼ばれる３つの超可変領域によって接合された、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般構造を示す。Ｎ末端からＣ末端まで、軽鎖および重鎖の両方は、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４を含む。アミノ酸の各ドメインへの割り当ては、Ｋａｂａｔらの、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．，ＵＳ  Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＰＨＳ，ＮＩＨ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９１−３２４２，１９９１の定義に従う。
【００２６】
「抗体」は、別途明記されない限り、特異的結合に対して無傷の抗体と競合する、無傷の免疫グロブリンまたはその抗原結合部分を指す。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技法によって、または無傷の抗体の酵素開裂もしくは化学開裂によって、産生することができる。抗原結合部分には、とりわけ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂｓ）、および相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、１本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、キメラ抗体、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体、ならびに特異的抗原結合をポリペプチドに付与するのに十分である免疫グロブリンの少なくとも一部分を含有するポリペプチドが含まれる。
【００２７】
Ｆａｂ断片は、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインを有する一価の断片であり、Ｆ（ａｂ’）２断片は、ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を有する二価の断片であり、Ｆｄ断片は、ＶＨおよびＣＨ１ドメインを有し、Ｆｖ断片は、抗体の単一のアームのＶＬおよびＶＨドメインを有し、ｄＡｂ断片は、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、またはＶＨもしくはＶＬドメインの抗原結合断片を有する（米国特許第６，８４６，６３４号、第６，６９６，２４５号、米国出願公開第０５／０２０２５１２号、第０４／０２０２９９５号、第０４／００３８２９１号、第０４／０００９５０７号、第０３／００３９９５８号、Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６，１９８９）。
【００２８】
１本鎖抗体（ｓｃＦｖ）は、ＶＬおよびＶＨ領域がリンカー（例えば、アミノ酸残基の合成配列）を介して接合されて、連続的タンパク質鎖を形成する抗体であり、ここでリンカーは、タンパク質鎖がそれ自体の上に折り重なり、一価の抗原結合部位を形成することを可能にするのに十分に長い（例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−２６およびＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−８３を参照されたい）。二重特異性抗体は、２つのポリペプチド鎖を含む二価の抗体であり、ここで各ポリペプチド鎖は、同じ鎖上に２つのドメインの間の対形成を可能にするには短すぎるリンカーによって接合され、故に、各ドメインが別のポリペプチド鎖上の相補的ドメインと対形成することが可能となる、ＶＨおよびＶＬドメインを含む（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−４８、およびＰｏｌｊａｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−２３を参照されたい）。二重特異性抗体の２つのポリペプチド鎖が同一である場合、それらの対形成からもたらされる二重特異性抗体は、２つの同一の抗原結合部位を有することになる。異なる配列を有するポリペプチド鎖を使用して、２つの異なる抗原結合部位を有する二重特異性抗体を作製することができる。同様に、三重特異性抗体および四重特異性抗体は、同じまたは異なり得る、それぞれ３つおよび４つのポリペプチド鎖を含み、それぞれ３つおよび４つの抗原結合部位を形成する抗体である。
【００２９】
所与の抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）およびフレームワーク領域（ＦＲ）は、Ｋａｂａｔらによる、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．，ＵＳ  Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ
ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＰＨＳ，ＮＩＨ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９１−３２４２，１９９１に記載される体系を使用して特定することができる。１つ以上のＣＤＲを、共有結合性または非共有結合性のいずれかで分子の中に組み込んで、それを抗原結合タンパク質にすることができる。抗原結合タンパク質は、より大きいポリペプチド鎖の一部としてＣＤＲ（複数可）を組み込んでもよく、ＣＤＲ（複数可）を別のポリペプチド鎖に共有結合性で連結してもよく、またはＣＤＲ（複数可）を非共有結合性で組み込んでもよい。ＣＤＲは、抗原結合タンパク質が、対象となる特定の抗原に特異的に結合することを可能にする。
【００３０】
抗原結合タンパク質は、１つ以上の結合部位を有し得る。１つを超える結合部位が存在する場合、その結合部位は、互いに同一であってもよく、または異なってもよい。例えば、自然発生のヒト免疫グロブリンは典型的に、２つの同一の結合部位を有する一方で、「二重特異性」または「二機能性」抗体は、２つの異なる結合部位を有する。
【００３１】
「ヒト抗体」という用語は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する１つ以上の可変領域および定常領域を有する全ての抗体を含む。一実施形態では、可変ドメインおよび定常ドメインの全てが、ヒト免疫グロブリン配列に由来する（完全ヒト抗体）。これらの抗体は、多様な方法で調製されてもよく、それらの例は後述され、ヒト重鎖および／または軽鎖コード遺伝子に由来する抗体を発現するように遺伝子改変される、マウスの対象となる抗原での免疫付与によるものを含む。
【００３２】
ヒト化抗体は、１つ以上のアミノ酸置換、欠失、および／または付加の分だけ、非ヒト種に由来する抗体の配列とは異なる配列を有し、その結果、ヒト化抗体は、それがヒト対象に投与されるとき、非ヒト種抗体と比較して、免疫反応を誘導する可能性がより低く、および／または重症度のより低い免疫反応を誘導する。一実施形態では、非ヒト種抗体の重鎖および／または軽鎖のフレームワークおよび定常ドメインにおけるある種のアミノ酸が、ヒト化抗体を産生するように突然変異させられる。別の実施形態では、ヒト抗体からの定常ドメイン（複数可）が、非ヒト種の可変ドメイン（複数可）に融合される。別の実施形態では、非ヒト抗体の１つ以上のＣＤＲ配列における１つ以上のアミノ酸残基が、それがヒト対象に投与されるとき、非ヒト抗体の有力な免疫原性を低減するように変化させられ、ここで、変化したアミノ酸残基は、ヒト化抗体の抗原への結合が、非ヒト抗体の抗原への結合よりも有意に悪化しないように、抗体のその抗原への免疫特異的結合に必要不可欠でないか、または行われるアミノ酸配列への変化は、保存的変化であるかのいずれかである。ヒト化抗体を作製する方法の例は、米国特許第６，０５４，２９７号、第５，８８６，１５２号、および第５，８７７，２９３号に見出され得る。
【００３３】
「キメラ抗体」という用語は、１つの抗体からの１つ以上の領域および１つ以上の他の抗体からの１つ以上の領域を含有する抗体を指す。一実施形態では、ＣＤＲのうちの１つ以上が、ヒト抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体に由来する。別の実施形態では、ＣＤＲの全てが、ヒト抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体に由来する。別の実施形態では、１つを超えるヒト抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体からのＣＤＲが、キメラ抗体において種々様々に組み合わせられる。例えば、キメラ抗体は、第１のヒト抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の軽鎖からのＣＤＲ１、第２のヒト抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の軽鎖からのＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに第３の抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体からの重鎖からのＣＤＲを含み得る。更に、フレームワーク領域は、同じ抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体のうちの１つに、ヒト抗体等の１つ以上の異なる抗体に、またはヒト化抗体に由来してもよい。キメラ抗体の一例において、重鎖および／または軽鎖の一部分は、特定の種からの抗体と同一、それと同種、もしくはそれに由来するか、または具体的な抗体クラスまたはサブクラスに属している一方で、鎖（複数可）の残りの部分は、別の種からの抗体（複数可）と同一、それと同種、もしくはそれに由来するか、または別の抗体クラスまたはサブクラスに属している。また、所望の生物活性（すなわち、ＩＧＦ−１Ｒを特異的に結合する能力）を示すかかる抗体の断片も含まれる。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、およびＭｏｒｒｉｓｏｎ，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２−０７を参照されたい。
【００３４】
「中和抗体」または「阻害抗体」は、実施例９に記載されるアッセイを使用して、過剰の抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体が、ＩＧＦ−１Ｒに結合されるＩＧＦ−Ｉおよび／またはＩＧＦ−２の量を少なくとも約２０％低減するとき、ＩＧＦ−１Ｒの、ＩＧＦ−Ｉおよび／またはＩＧＦ−２への結合を阻害する抗体である。種々の実施形態では、抗体は、ＩＧＦ−１Ｒ
に結合されるＩＧＦ−Ｉおよび／またはＩＧＦ−２の量を、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、および９９．９％低減する。
【００３５】
「活性化抗体」は、ＩＧＦ−１Ｒを発現する細胞、組織、または生物に付加されるとき、ＩＧＦ−１Ｒを少なくとも約２０％活性化する抗体であり、ここで「１００％活性化」は、同じモル量のＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２によって生理的条件下で達成される活性化のレベルである。種々の実施形態では、抗体は、ＩＧＦ−１Ｒ活性を、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、７５０％、または１０００％活性化する。
【００３６】
抗体の断片または類似体は、当業者により、本明細書の教示に従って、当該技術分野で周知の技法を使用して、容易に調製することができる。断片または類似体の好ましいアミノ末端およびカルボキシ末端は、機能的ドメインの境界の近くで生じる。構造的および機能的ドメインは、ヌクレオチドおよび／またはアミノ酸配列データの、公開のまたは専有の配列データベースとの比較によって特定することができる。電算比較法を使用して、既知の構造および／または機能を有する他のタンパク質において生じる、配列モチーフまたは予測されるタンパク質立体配座ドメインを特定することができる。既知の３次元構造へと折り畳むタンパク質配列を特定するための方法は、既知である。例えば、Ｂｏｗｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５３：１６４を参照されたい。
【００３７】
「ＣＤＲ移植抗体」は、特定の種またはアイソタイプの抗体に由来する１つ以上のＣＤＲ、および同じまたは異なる種またはアイソタイプの別の抗体のフレームワークを含む抗体である。
【００３８】
「多重特異性抗体」は、１つ以上の抗原上の１つを超えるエピトープを認識する抗体である。このタイプの抗体のサブクラスは、同じまたは異なる抗原上の２つの特有のエピトープを認識する「二重特異性抗体」である。
【００３９】
抗原結合タンパク質は、それが１ナノモル以下の解離定数で抗原に結合する場合、抗原（例えば、ヒトＩＧＦ−１Ｒ）に「特異的に結合する」。
【００４０】
「抗原結合ドメイン」、「抗原結合領域」、または「抗原結合部位」は、抗原と相互作用し、抗原に対する抗原結合タンパク質の特異性および親和性に寄与するアミノ酸残基（または他の部分）を含有する、抗原結合タンパク質の部分である。その抗原に特異的に結合する抗体については、これは、そのＣＤＲドメインのうちの少なくとも１つの少なくとも一部を含むであろう。
【００４１】
「エピトープ」は、抗原結合タンパク質によって（例えば、抗体によって）結合される分子の部分である。エピトープは、分子の非隣接部分を含むことができる（例えば、ポリペプチドにおいて、ポリペプチドの一次配列において隣接していないが、ポリペプチドの三次および四次構造の前後関係において、抗原結合タンパク質によって結合されるために相互に十分に近いアミノ酸残基）。
【００４２】
２つのポリヌクレオチドまたは２つのポリペプチド配列の「同一性パーセント」は、ＧＡＰコンピュータプログラム（ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅ、第１０．３版（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）の一部）を使用して、そのデフォルトパラメータを使用して、配列を比較することによって決定される。
【００４３】
「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、および「核酸」という用語は、本明細書全体を通じて交換可能に使用され、ＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）、ヌクレオチド類似体を使用して生成されたＤＮＡまたはＲＮＡの類似体（例えば、ペプチド核酸および非自然発生のヌクレオチド類似体）、およびそれらのハイブリッドを含む。核酸分子は、１本鎖または２本鎖であり得る。一実施形態では、本発明の核酸分子は、本発明の抗体、またはその断片、誘導体、変異タンパク質、もしくは変異体をコードする、隣接オープンリーディングフレームを含む。
【００４４】
２つの１本鎖ポリヌクレオチドは、一方のポリヌクレオチド内のいずれのヌクレオチドも、ギャップの導入を伴わず、かついずれの配列の５’または３’末端における不対のヌクレオチドを伴わずに、他方のポリヌクレオチド内のその相補的ヌクレオチドに対向するように、それらの配列が逆平行配向に整列され得る場合、相互の「相補体」である。ポリヌクレオチドは、２つのポリヌクレオチドが中程度にストリンジェントな条件下で互いにハイブリッド形成し得る場合、別のポリヌクレオチドに「相補的」である。故に、ポリヌクレオチドは、その相補体であることなく、別のポリヌクレオチドに相補的であり得る。
【００４５】
「ベクター」は、それに連結された別の核酸を細胞中に導入するために使用することができる核酸である。ベクターの１つのタイプは、「プラスミド」であり、それは、追加的核酸セグメントがその中に連結反応させられ得る、線状または環状２本鎖ＤＮＡ分子を指す。ベクターの別のタイプは、ウイルスベクター（例えば、複製欠損性レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ関連ウイルス）であり、ここで追加的ＤＮＡセグメントがそのウイルスゲノム中に導入され得る。ある種のベクターは、それらが導入される宿主細胞中での自律複製が可能である（例えば、細菌の複製起源を含む細菌ベクターおよびエピソーム哺乳類ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳類ベクター）は、宿主細胞中への導入時に宿主細胞のゲノム中に組み込まれ、それによって、宿主ゲノムと共に複製される。「発現ベクター」は、選定されたポリヌクレオチドの発現を導くことができるベクターのタイプである。
【００４６】
ヌクレオチド配列は、調節配列がヌクレオチド配列の発現に影響を及ぼす場合（例えば、発現のレベル、タイミング、または場所）、調節配列に「作動可能に連結される」。「調節配列」は、それが作動可能に連結される核酸の発現（例えば、発現のレベル、タイミング、または場所）に影響を及ぼす核酸である。調節配列は、例えば、調節された核酸に対して直接、または１つ以上の他の分子（例えば、調節配列および／または核酸に結合するポリペプチド）の作用を通じて、その効果を発揮することができる。調節配列の例としては、プロモーター、エンハンサー、および他の発現制御要素（例えば、ポリアデニル化シグナル）が挙げられる。調節配列の更なる例は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ，１９９０，Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡおよびＢａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２３：３６０５-０６に記載される。
【００４７】
「宿主細胞」は、核酸、例えば、本発明の核酸を発現させるために使用することができる、細胞である。宿主細胞は、原核生物、例えば、大腸菌であり得るか、またはそれは、真核生物、例えば、単細胞真核生物（例えば、酵母または他の真菌類）、植物細胞（例えば、タバコまたはトマト植物細胞）、動物細胞（例えば、ヒト細胞、サル細胞、ハムスター細胞、ラット細胞、マウス細胞、または昆虫細胞）、もしくはハイブリドーマであり得る。宿主細胞の例としては、サル腎臓細胞のＣＯＳ−７株（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）（Ｇｌｕｚｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ｃｅｌｌ  ２３：１７５を参照されたい）、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １６３）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞もしくはＶｅｇｇｉｅ  ＣＨＯ等のそれらの誘導体および無
血清培地中で増殖する関連する細胞株（Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２８：３１を参照されたい）、またはＤＨＦＲ欠損性であるＣＨＯ株ＤＸ−Ｂ１１（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６−２０を参照されたい）、ＨｅＬａ細胞、ＢＨＫ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １０）細胞株、アフリカミドリザル腎臓細胞株ＣＶ１に由来するＣＶ１／ＥＢＮＡ細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）（ＭｃＭａｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：２８２１を参照されたい）、２９３、２９３  ＥＢＮＡ、もしくはＭＳＲ  ２９３等のヒト胚性腎臓細胞、ヒト表皮Ａ４３１細胞、ヒトＣｏｌｏ２０５細胞、他の形質転換霊長類細胞株、正常２倍体細胞、一次組織、一次外植片、ＨＬ−６０、Ｕ９３７、ＨａＫ、もしくはＪｕｒｋａｔ細胞のインビトロ培養に由来する細胞株が挙げられる。典型的に、宿主細胞は、ポリペプチドコード核酸で形質転換またはトランスフェクトされ得、それが次いで宿主細胞中で発現され得る、培養細胞である。「組換え宿主細胞」という表現は、発現対象の核酸で形質転換またはトランスフェクトされた宿主細胞を表すように使用される。宿主細胞はまた、核酸を含むが、核酸と作動可能に連結されるように調節配列が宿主細胞中に導入されない限り、核酸を所望のレベルで発現しない細胞であり得る。宿主細胞という用語は、特定の対象細胞だけでなく、かかる細胞の子孫または潜在的な子孫も指すことが理解される。例えば、突然変異または環境的影響に起因して、後続の世代においてある種の修飾が起こる場合があるため、かかる子孫は、実際には、親細胞と同一でない場合があるが、本明細書で使用される用語の範囲内に依然として含まれる。
ＩＧＦ−１Ｒ
【００４８】
ＩＧＦ−１Ｒは、膜貫通受容体チロシンキナーゼである（Ｂｌｕｍｅ−Ｊｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｎａｔｕｒｅ  ４１１：３５５−６５）。ヒトＩＧＦ−１Ｒは、小胞体中への移行中に除去される３０アミノ酸シグナルペプチドを含む、１３６７アミノ酸前駆体ポリペプチドとして合成される（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ：Ｐ０８０６９）。ＩＧＦ−１Ｒプロ受容体は、ＥＲ−ゴルジにおける成熟中に、７０８〜７１１位（シグナルペプチド配列に続く第１のアミノ酸から数える）においてプロテアーゼによってグリコシル化および開裂され、ジスルフィド結合によって連結されたままであるα−鎖（１−７０７）およびβ−鎖（７１２−１３３７）の形成をもたらす（Ｂｈａｕｍｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７８：４２７９−８３、Ｃｈｅｒｎａｕｓｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２０：７３４５−５０、Ｊａｃｏｂｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８０：１２２８−３１、ＬｅＢｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２６１：７６８５−８９、Ｅｌｌｅｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ  ３４７：７７１−７９）。細胞表面上に存在するＩＧＦ−１Ｒ（およびＩＮＳＲ）の主要な形態は、１つ以上のジスルフィド結合によって共有結合性で結合される、タンパク分解性でプロセスされグリコシル化（αβ）２される二量体である。
【００４９】
ＩＧＦ−１Ｒの細胞外部分は、α−鎖および、β−鎖の１９１個のアミノ酸（７１２〜９０５）からなる。受容体は、単一の膜貫通スパニング（ｓｐａｎｎｉｎｇ）配列（９０６〜９２９）および機能的チロシンキナーゼを含む４０８残基細胞質ドメインを含有する（Ｒｕｂｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：４３８−４４０）。比較配列解析は、ＩＧＦ−１Ｒが明確な１１個の構造的モチーフからなることを明らかにしている（Ａｄａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  ５７：１０５０−９３、Ｍａｒｉｎｏ−Ｂｕｓｌｊｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，ＦＥＢＳ  Ｌｔｒｓ  ４４１：３３１−３６、Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２：４によって概説される）。細胞外ドメインのＮ末端側の半分は、ＴＮＦ受容体およびラミニン（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｐｒｏｔ
ｅｉｎｓ  ２２：１４１−５３）に存在する反復単位と揃ったジスルフィド結合を有する複数の構造的モジュールからなる高システイン（ＣＲ）領域（１５２〜２９８）によって分離される、Ｌ１（１〜１５１）およびＬ２（２９９〜４６１）（上記のＷａｒｄ  ｅｔ
ａｌ．，２００１）と称される２つの相同ドメインを含有する。Ｌ１−ＣＲ−Ｌ２ドメインの結晶構造は、解決されている（Ｇａｒｒｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ  ３９４：３９５−９９）。Ｌ２ドメインには、３つのフィブロネクチンＩＩＩ型ドメインが続く（上記のＭａｒｉｎｏ−Ｂｕｓｌｊｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８、Ｍｕｌｈｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｃｉ  ２３：４６５−６６、Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ  １６：３１５−２２）。第１のＦｎＩＩＩドメイン（ＦｎＩＩＩ−１、４６１〜５７９）は、１１８アミノ酸長である。第２のＦｎＩＩＩドメイン（ＦｎＩＩＩ−２、５８０〜７９８）は、約１２０アミノ酸長の主要な挿入配列（ＩＤ）によって分裂される。ＩＤドメインは、成熟受容体のα鎖およびβ鎖を分離するフーリンプロテアーゼ開裂部位を含む。第３のＦｎＩＩＩドメイン（ＦｎＩＩＩ−３）は、膜貫通配列の数残基前に終結するβ−鎖（７９９〜９０１）に全体的に位置する。ＩＧＦ−１Ｒチロシンキナーゼの触媒ドメインは、アミノ酸９７３〜１２２９位の間に位置し、その構造は解決されている（Ｆａｖｅｌｙｕｋｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌ  ８：１０５８−６３、Ｐａｕｔｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ９：９５５−６５）。このキナーゼには、２つの調節領域である、膜近傍領域（９３０〜９７２）および１０８アミノ酸Ｃ末端尾部（１２２０〜１３３７）が隣接する（（Ｓｕｒｍａｃｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ  ２１８：３７０−８０、Ｈｏｎｇｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １２：１２３１−３８）。２つの調節領域は、活性化ＩＧＦ−１Ｒチロシンキナーゼによってリン酸化されるときシグナル伝達タンパク質のためのドッキング部位としての機能を果たす、チロシン残基を含有する（Ｂａｓｅｒｇａ（ｅｄ．），１９９８  Ｔｈｅ  ＩＧＦ−１
Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎ  Ｎｏｒｍａｌ  ａｎｄ  Ａｂｎｏｒｍａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ，Ｈｏｒｍｏｎｅｓ  ａｎｄ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ  ｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｎｅｏｐｌａｓｉａ，Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，Ａｄａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  ５７：１０５０−９３によって概説される）。
【００５０】
ＩＧＦ−１Ｒアミノ酸配列は、インスリン受容体と約７０％同一である（ＩＮＳＲ；Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ：Ｐ０６２１３）。それらの受容体の間の最も高い相同性は、チロシンキナーゼドメイン（８４％）に位置し、最も低い同一性は、ＣＲ領域およびＣ末端に位置する。ＩＧＦ−１Ｒはまた、インスリン関連受容体に高度に関連する（約５５％同一）（ＩＲＲ；Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ：Ｐ１４６１６）。
【００５１】
ヒトＩＧＦ−１Ｒは、インスリン様成長因子ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２ならびにインスリン（ＩＮＳ）によって活性化され得る（Ｈｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９：８７９−８６）。ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２は、コードされた非対立遺伝子であり（Ｂｒｉｓｓｅｎｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｎａｔｕｒｅ  ３１０：７８１−８、Ｂｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  ８２：６４５０−５４）、双方の遺伝子は、示差的ＲＮＡスプライシングおよびタンパク質プロセシングによって関連付けられる代替タンパク質を発現する。最も一般的でよく研究されたＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２の成熟型はそれぞれ、７０および６７アミノ酸長である（Ｊａｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｎａｔｕｒｅ  ３０６：６０９−１１、Ｄｕｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｎａｔｕｒｅ  ３１０：７７７−８１）。これらのタンパク質（およびそれらのアイソフォーム）は、１１／２１位においてインスリンＡ−ペプチドに
同一であり、１２／３０位においてインスリンＢ−ペプチドと同一である。
【００５２】
ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２の両方は、脳下垂体によって分泌される成長ホルモンによる厳密な調節下で、肝臓によって大量に分泌される。成長ホルモン（ＧＨ）に反応して、それが今度は、ソマトスタチン（ＳＭＳ）およびＧＨ放出ホルモンによって調節される。ＩＧＦ結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ）もまた、肝臓によって分泌される。ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２は共に、循環において結合され、ＩＧＦ−１Ｒと同じ桁数の親和性でＩＧＦ１およびＩＧＦ２に結合する７つの一連のＩＧＦ結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ  １〜７）によって、不活性型で隔離される。したがって、ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２は、結合されておらず、「生物学的に利用可能」であるときのみ、活性である。これらの結合タンパク質はまた、肝臓および多数の他の組織によって分泌され、遊離ＩＧＦのレベルおよび次に腫瘍組織におけるＩＧＦ−１Ｒの活性を調節することに関して幾つかの機能を果たす。ＩＧＦＢＰ−３は、そのリガンドに対して受容体と競合しながら、血清のＩＧＦ結合能力のほとんどを提供し、ＩＧＦの循環半減期を大幅に延長する。ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２およびＩＧＦＢＰ−３の三元複合体は、酸不安定性サブユニットと一緒に、ＩＧＦリガンド活性の部位で発現されるタンパク質分解酵素によるＩＧＦＢＰ−３のタンパク質加水分解を通じて解離されるまで、安定である。他の６つのＩＧＦＢＰの機能は、それらのＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２結合活性を別として、良好に特徴づけられていない。
【００５３】
ＩＧＦ−１Ｒは、肝臓の肝細胞および成熟Ｂ細胞を除いて、正常な成人動物における全ての細胞型で発現される。ヒト血漿は、高濃度のＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２を含有し、ＩＧＦ−１は、ほとんどの組織において検出することができる。受容体は、臓器サイズおよび恒常性を制御する生理機構の不可欠な構成成分である。特定の理論に拘束されることなく、「ソマトメジン仮説」は、小児期および青年期中に生じる成長ホルモン（ＧＨ）媒介型体成長が、肝臓によって主に産生され分泌されるＩＧＦ−１の内分泌形態に依存すると述べている（Ｄａｕｇｈａｄａｙ，２０００，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ  １４：５３７−４０）。肝臓ＩＧＦ−１の合成は、視床下部ＧＨＲＨ（ＧＨ放出ホルモン）に反応した脳下垂体におけるＧＨ放出によって刺激される。ＩＧＦ−１の血清濃度は、ヒトにおいて、５〜１５歳の間に１００倍を超えて増加する。ＩＧＦ−１の生物学的利用能は、ＩＧＦ結合タンパク質３（ＩＧＦＢＰ３）によって調節され、このうち成長因子のおよそ９９％が結合状態で区画化される。部分的遺伝子欠失から発生する原発性ＩＧＦ−１欠損、およびＧＨ産生またはシグナル伝達における欠陥からもたらされる続発性ＩＧＦ−１欠損は、致死性でない（Ｗｏｏｄｓ，１９９９，ＩＧＦ  Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｉｎ  Ｃｏｎｔｅｍｐｏｒａｒｙ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ  ＩＧＦ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｒ．ａ．Ｒ．Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ，Ｃ．Ｊｒ．Ｔｏｔｏｗａ，ｅｄ．ｓ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＪ：６５１−７４）。罹患した個人は、誕生時に成長遅延を示し、緩慢に成長し、またある種のＣＮＳ異常に直面する可能性がある。
【００５４】
ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達は、ＰＩ３キナーゼ／Ａｋｔ経路のＩＲＳアダプタータンパク質依存性活性化を通じて、細胞増殖および生存を促進する。ＩＧＦ−１Ｒは、シグナルをその主要な基質ＩＲＳ−１〜ＩＲＳ−４およびＳｈｃタンパク質に伝達する（Ｂｌａｋｅｓｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，ＩＧＦ−１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ：ｔｒａｎｓｄｕｃｉｎｇ  ｔｈｅ  ＩＧＦ−１  ｓｉｇｎａｌ  ｉｎｔｏ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｅｖｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｔｈｅ  ＩＧＦ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｒ．Ｇ．ａ．Ｒ．Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ，Ｊｒ．Ｃ．Ｔ．Ｔｏｔｏｗａ，ｅｄ．ｓ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＪ：１４３−６３）。これは、Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＡＰキナーゼおよびＰＩ３キナーゼ／Ａｋｔシグナル伝達経路の活性化をもたらす。しかしながら、ＩＲＳを介したＡｋｔ媒介型細胞生存の誘導は、ほとんどの細胞のＩＧＦ刺激時の優性な経路反応である。図１０を参照されたい。
抗原結合タンパク質
【００５５】
一態様では、本発明は、ＩＧＦ−１Ｒ、例えば、ヒトＩＧＦ−１Ｒに結合する、抗原結合タンパク質（例えば、抗体、抗体断片、抗体誘導体、抗体変異タンパク質、および抗体変異体）を提供する。
【００５６】
本発明による抗原結合タンパク質には、ＩＧＦ−１Ｒの生物活性を阻害する抗原結合タンパク質が含まれる。かかる生物活性の例としては、シグナル伝達分子（例えば、ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２）を結合すること、およびシグナル伝達分子の結合に反応してシグナルを伝達することが挙げられる。
【００５７】
異なる抗原結合タンパク質が、ＩＧＦ−１Ｒの異なるドメインまたはエピトープに結合しても、または異なる作用機構によって作用し得る。例としては、ＩＧＦ−１および／もしくはＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの結合を干渉する、またはシグナル伝達を阻害する抗原結合タンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。作用の部位は、例えば、細胞内（例えば、細胞内シグナル伝達カスケードを干渉することによる）であっても細胞外であってもよい。抗原結合タンパク質は、本発明において使用されるためにＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２誘導性活性を完全に阻害する必要はなく、むしろ、ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２の具体的な活性を低減する抗原結合タンパク質も同様に使用が企図される。（具体的な疾患を治療することにおけるＩＧＦ−１Ｒ結合抗原結合タンパク質についての具体的な作用機構の本明細書における考察は、例証的なものにすぎず、本明細書に提示される方法は、それによって拘束されない。）
【００５８】
ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２は各々、ＩＧＦ−１Ｒへの二相性結合を示すことが観察されている。高い親和性結合は、０．２ｎＭの範囲のＫＤを有することが報告されており、約１０倍高い、高い親和性結合である。故に、一実施形態では、本発明は、ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２のＩＧＦ−Ｒへの高い親和性結合および低い親和性結合の両方を阻害する、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤を提供する。ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの低い親和性結合よりもむしろ高い親和性結合が、ＩＧＦ−１Ｒのチロシンキナーゼ活性を活性化する立体配座変化に要求されることが示唆されている。故に、別の実施形態では、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤は、低い親和性結合と比較して、ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの高い親和性結合を優先的に阻害する。
【００５９】
別の態様では、本発明は、Ｌ１〜Ｌ５２からなる群から選択される軽鎖可変領域および／またはＨ１〜Ｈ５２からなる群から選択される重鎖可変領域を含む抗原結合タンパク質、ならびにそれらの断片、誘導体、変異タンパク質、および変異体（図２および３を参照されたい）を提供する。かかる抗原結合タンパク質は、命名「ＬｘＨｙ」を使用して表すことができ、それらが図２および３において表示されように、「ｘ」は、幾つかの軽鎖可変領域に対応し、「ｙ」は、幾つかの重鎖可変領域に対応する。例えば、図２および３に示されるように、Ｌ２Ｈ１は、Ｌ２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域およびＨ１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する抗原結合タンパク質を指す。図２および３はまた、これらの可変ドメイン配列の各々のＣＤＲおよびフレームワーク領域の場所を示す。各軽鎖および重鎖のＣＤＲ領域はまた、図４〜９において、タイプによっておよび配列類似性によって分類される。本発明の抗原結合タンパク質には、例えば、Ｌ１Ｈ１、Ｌ２Ｈ２、Ｌ３Ｈ３、Ｌ４Ｈ４、Ｌ５Ｈ５、Ｌ６Ｈ６、Ｌ７Ｈ７、Ｌ８Ｈ８、Ｌ９Ｈ９、Ｌ１０Ｈ１０、Ｌ１１Ｈ１１、Ｌ１２Ｈ１２、Ｌ１３Ｈ１３、Ｌ１４Ｈ１４、Ｌ１５Ｈ１５、Ｌ１６Ｈ１６、Ｌ１７Ｈ１７、Ｌ１８Ｈ１８、Ｌ１９Ｈ１９、Ｌ２０Ｈ２０、Ｌ２１Ｈ２１、Ｌ２２Ｈ２２、Ｌ２３Ｈ２３、Ｌ２４Ｈ２４、Ｌ２５Ｈ２５、Ｌ２６Ｈ２６、Ｌ２７Ｈ２７、Ｌ２８Ｈ２８、Ｌ２９Ｈ２９、Ｌ３０Ｈ３０、Ｌ３１Ｈ３１、Ｌ３２Ｈ３２、Ｌ３３Ｈ３３、Ｌ３４Ｈ３４、Ｌ３５Ｈ３５、Ｌ３６Ｈ３６、Ｌ３７Ｈ３７、Ｌ３８Ｈ３８、Ｌ３９Ｈ３９、Ｌ４０Ｈ４０、Ｌ４１Ｈ４１、Ｌ４２Ｈ４２、Ｌ４３Ｈ４３、Ｌ４４Ｈ４４、
Ｌ４５Ｈ４５、Ｌ４６Ｈ４６、Ｌ４７Ｈ４７、Ｌ４８Ｈ４８、Ｌ４９Ｈ４９、Ｌ５０Ｈ５０、Ｌ５１Ｈ５１、およびＬ５２Ｈ５２からなる組み合わせの群から選択される軽鎖および重鎖可変ドメインの組み合わせを有する抗原結合タンパク質が含まれる。
【００６０】
一実施形態では、本発明は、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１残基においてのみ、Ｌ１〜Ｌ５２からなる群から選択される軽鎖可変ドメインの配列とは異なるアミノ酸の配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、抗原結合タンパク質を提供し、ここでかかる各配列差異は独立して、１つのアミノ酸残基の欠失、挿入、または置換のいずれかである。別の実施形態では、軽鎖可変ドメインは、Ｌ１〜Ｌ５２からなる群から選択される軽鎖可変ドメインの配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％同一である、アミノ酸の配列を含む。別の実施形態では、軽鎖可変ドメインは、Ｌ１〜Ｌ５２からなる群から選択される軽鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる、アミノ酸の配列を含む。別の実施形態では、軽鎖可変ドメインは、中程度にストリンジェントな条件下で、Ｌ１〜Ｌ５２からなる群から選択される軽鎖可変ドメインをコードするポリヌクレオチドの相補体とハイブリッド形成するポリヌクレオチドによってコードされる、アミノ酸の配列を含む。別の実施形態では、軽鎖可変ドメインは、中程度にストリンジェントな条件下で、Ｌ１〜Ｌ５２からなる群から選択される軽鎖可変ドメインをコードするポリヌクレオチドの相補体とハイブリッド形成するポリヌクレオチドによってコードされる、アミノ酸の配列を含む。別の実施形態では、軽鎖可変ドメインは、中程度にストリンジェントな条件下で、図１から選択される軽鎖ポリヌクレオチドの相補体とハイブリッド形成するポリヌクレオチドによってコードされる、アミノ酸の配列を含む。
【００６１】
別の実施形態では、本発明は、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１残基においてのみ、Ｈ１〜Ｈ５２からなる群から選択される重鎖可変ドメインの配列とは異なるアミノ酸の配列を含む重鎖可変ドメインを含む、抗原結合タンパク質を提供し、ここでかかる各配列差異は独立して、１つのアミノ酸残基の欠失、挿入、または置換のいずれかである。別の実施形態では、重鎖可変ドメインは、Ｈ１〜Ｈ５２からなる群から選択される重鎖可変ドメインの配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％同一である、アミノ酸の配列を含む。別の実施形態では、重鎖可変ドメインは、Ｈ１〜Ｈ５２からなる群から選択される重鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる、アミノ酸の配列を含む。別の実施形態では、重鎖可変ドメインは、中程度にストリンジェントな条件下で、Ｈ１〜Ｈ５２からなる群から選択される重鎖可変ドメインをコードするポリヌクレオチドの相補体とハイブリッド形成するポリヌクレオチドによってコードされる、アミノ酸の配列を含む。別の実施形態では、重鎖可変ドメインは、中程度にストリンジェントな条件下で、Ｈ１〜Ｈ５２からなる群から選択される重鎖可変ドメインをコードするポリヌクレオチドの相補体とハイブリッド形成するポリヌクレオチドによってコードされる、アミノ酸の配列を含む。別の実施形態では、重鎖可変ドメインは、中程度にストリンジェントな条件下で、図１から選択される重鎖ポリヌクレオチドの相補体とハイブリッド形成するポリヌクレオチドによってコードされる、アミノ酸の配列を含む。
【００６２】
本発明の抗原結合タンパク質の具体的な実施形態は、図２〜９に例証されるＣＤＲおよび／またはＦＲのうちの１つ以上のアミノ酸配列と同一である、１つ以上のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗原結合タンパク質は、図４に例証される軽鎖ＣＤＲ１配列を含む。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、図５に例証される軽鎖ＣＤＲ２配列を
含む。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、図６に例証される軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、図７に例証される重鎖ＣＤＲ１配列を含む。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、図８に例証される重鎖ＣＤＲ２配列を含む。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、図９に例証される重鎖ＣＤＲ３配列を含む。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、図２に例証される軽鎖ＦＲ１配列を含む。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、図２に例証される軽鎖ＦＲ２配列を含む。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、図２に例証される軽鎖ＦＲ３配列を含む。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、図２に例証される軽鎖ＦＲ４配列を含む。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、図３に例証される重鎖ＦＲ１配列を含む。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、図３に例証される重鎖ＦＲ２配列を含む。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、図３に例証される重鎖ＦＲ３配列を含む。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、図３に例証される重鎖ＦＲ４配列を含む。
【００６３】
一実施形態では、本発明は、５、４、３、２、または１つ以下のアミノ酸残基だけ、図２〜９に示されるＣＤＲ配列とは異なる、１つ以上のＣＤＲ配列を含む、抗原結合タンパク質を提供する。
【００６４】
一実施形態では、本発明は、図２〜９に示される、Ｌ１〜Ｌ５２および／またはＨ１〜Ｈ５２からの少なくとも１つのＣＤＲ、ならびに米国特許出願公開第０３／０２３５５８２号、第０４／０２２８８５９号、第０４／０２６５３０７号、第０４／０８８６５０３号、第０５／０００８６４２号、第０５／００８４９０６号、第０５／０１８６２０３号、第０５／０２４４４０８号、ＰＣＴ公開第ＷＯ  ０３／０５９９５１号、第ＷＯ  ０３／１００００８号、第ＷＯ  ０４／０７１５２９Ａ２号、第ＷＯ  ０４／０８３２４８号、第ＷＯ  ０４／０８７７５６号、第ＷＯ  ０５／０１６９６７号、第ＷＯ  ０５／０１６９７０号、または第ＷＯ  ０５／０５８９６７号（それらの各々は、参照によりその全体が全目的で本明細書に組み込まれる）に記載される抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体からの少なくとも１つのＣＤＲ配列を含む、抗原結合タンパク質を提供し、この抗原結合タンパク質は、ＩＧＦ−１受容体に結合する。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、図２〜９に示される、Ｌ１〜Ｌ５２および／またはＨ１〜Ｈ５２からの２、３、４、または５つのＣＤＲ配列を含む。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、米国特許出願公開第０３／０２３５５８２号、第０４／０２２８８５９号、第０４／０２６５３０７号、第０４／０８８６５０３号、第０５／０００８６４２号、第０５／００８４９０６号、第０５／０１８６２０３号、第０５／０２４４４０８号、ＰＣＴ公開第ＷＯ０３／０５９９５１号、第ＷＯ  ０３／１００００８号、第ＷＯ  ０４／０７１５２９Ａ２号、第ＷＯ  ０４／０８３２４８号、第ＷＯ  ０４／０８７７５６号、第ＷＯ  ０５／０１６９６７号、第ＷＯ  ０５／０１６９７０号、または第ＷＯ  ０５／０５８９６７号に記載される抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体からの２、３、４、または５つのＣＤＲ配列を含む。別の実施形態では、抗原結合タンパク質のＣＤＲ３配列のうちの少なくとも１つは、図２、３、６、および９に示される、Ｌ１〜Ｌ５２および／またはＨ１〜Ｈ５２からのＣＤＲ３配列である。別の実施形態では、抗原結合タンパク質の軽鎖ＣＤＲ３配列は、図２および６に示されるＬ１〜Ｌ５２からの軽鎖ＣＤＲ３配列であり、抗原結合タンパク質の重鎖ＣＤＲ３配列は、図３および９に示されるＨ１〜Ｈ５２からの重鎖配列である。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、Ｌ１〜Ｌ５２および／またはＨ１〜Ｈ５２のＣＤＲ配列とは、６、５、４、３、２、１つ、または０の単一のアミノ酸付加、置換、および／または欠失だけ異なる、１、２、３、４、または５つのＣＤＲ配列を含み、抗原結合タンパク質は更に、米国特許出願公開第０３／０２３５５８２号、第０４／０２２８８５９号、第０４／０２６５３０７号、第０４／０８８６５０３号、第０５／０００８６４２号、第０５／００８４９０６号、第０５／０１８６２０３号、第０５／０２４４４０８号、ＰＣＴ公開第ＷＯ０３／０５９９５１号、第ＷＯ  ０３／１００００８号、第ＷＯ  ０４／０７１５２９Ａ２号、第ＷＯ  ０４／０８３２４８号、第ＷＯ  ０４／０８７７５６号、第ＷＯ  ０５／０１６９６７号、
第ＷＯ  ０５／０１６９７０号、または第ＷＯ  ０５／０５８９６７号のＣＤＲ配列とは、６、５、４、３、２、１つ、または０の単一のアミノ酸付加、置換、および／または欠失だけ異なる、１、２、３、４、または５つのＣＤＲ配列を含む。別の実施形態では、米国特許出願公開第０３／０２３５５８２号、第０４／０２２８８５９号、第０４／０２６５３０７号、第０４／０８８６５０３号、第０５／０００８６４２号、第０５／００８４９０６号、第０５／０１８６２０３号、第０５／０２４４４０８号、ＰＣＴ公開第ＷＯ０３／０５９９５１号、第ＷＯ  ０３／１００００８号、第ＷＯ  ０４／０７１５２９Ａ２号、第ＷＯ  ０４／０８３２４８号、第ＷＯ  ０４／０８７７５６号、第ＷＯ  ０５／０１６９６７号、第ＷＯ  ０５／０１６９７０号、または第ＷＯ  ０５／０５８９６７号からのＣＤＲ配列（複数可）。別の実施形態では、ＣＤＲ配列（複数可）は、ＩＧＦ−１受容体の細胞外ドメインのＬ２部分に結合する抗体（複数可）である。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、米国特許出願公開第０３／０２３５５８２号、第０４／０２２８８５９号、第０４／０２６５３０７号、第０４／０８８６５０３号、第０５／０００８６４２号、第０５／００８４９０６号、第０５／０１８６２０３号、第０５／０２４４４０８号、第ＰＣＴ公開第ＷＯ０３／０５９９５１号、第ＷＯ  ０３／１００００８号、第ＷＯ  ０４／０７１５２９Ａ２号、第ＷＯ  ０４／０８３２４８号、第ＷＯ  ０４／０８７７５６号、第ＷＯ  ０５／０１６９６７号、第ＷＯ  ０５／０１６９７０号、または第ＷＯ  ０５／０５８９６７号からの抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体からの、軽鎖ＣＤＲ３配列および／または重鎖ＣＤＲ３配列を含まない。
【００６５】
一実施形態では、本発明は、配列ＲＳＳＱＳＬＬＨＸ１Ｘ２ＧＹＮＸ３ＬＸ４（配列番号２３６）を含む軽鎖ＣＤＲ１を含む、抗原結合タンパク質を提供し、ここでＸ１は、セリンまたはスレオニン残基であり、Ｘ２は、アスパラギン、セリン、またはヒスチジン残基であり、Ｘ３は、チロシンまたはフェニルアラニン残基であり、Ｘ４は、アスパラギン酸塩またはアスパラギン残基である。別の実施形態では、軽鎖ＣＤＲ１は、配列ＴＲＳＳＧＸ１ＩＸ２Ｘ３ＮＹＶＱ（配列番号２３７）を含み、ここでＸ１は、セリンまたはアスパラギン酸塩残基であり、Ｘ２は、アラニンまたはアスパラギン酸塩残基であり、Ｘ３は、セリンまたはアスパラギン残基である。別の実施形態では、軽鎖ＣＤＲ１は、配列ＲＡＳＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＬＸ６（配列番号２３８）を含み、ここでＸ１は、グリシンまたはセリン残基であり、Ｘ２は、イソロイシン、バリン、またはプロリン残基であり、Ｘ３は、セリン、グリシン、またはチロシン残基であり、Ｘ４は、任意のアミノ酸残基であり、Ｘ５は、フェニルアラニン、チロシン、アスパラギン、またはトリプトファン残基であり、Ｘ６は、アラニンまたはアスパラギン残基である。別の実施形態では、Ｘ２は、イソロイシンまたはバリン残基であり、Ｘ３は、グリシンまたはセリン残基であり、Ｘ４は、アルギニン、セリン、アスパラギン、セリン、チロシン、またはイソロイシン残基であり、Ｘ５は、フェニルアラニンまたはチロシン残基である。
【００６６】
一実施形態では、本発明は、配列ＬＸ１Ｘ２Ｘ３ＲＸ４Ｓ（配列番号２３９）を含む軽鎖ＣＤＲ２を含む、抗原結合タンパク質を提供し、ここでＸ１は、グリシンまたはバリン残基であり、Ｘ２は、セリンまたはフェニルアラニン残基であり、Ｘ３は、アスパラギン、チロシン、またはスレオニン残基であり、Ｘ４は、アラニンまたはアスパラギン酸塩残基である。別の実施形態では、ＣＤＲ２は、配列ＡＸ１ＳＸ２ＬＸ３Ｓ（配列番号２４０）を含み、ここでＸ１は、アラニンまたはスレオニン残基であり、Ｘ２は、スレオニンまたはグリシン残基であり、Ｘ３は、グルタミンまたはグルタミン酸塩残基である。別の実施形態では、ＣＤＲ２は、配列Ｘ１Ｘ２ＮＸ３ＲＰＳ（配列番号２４１）を含み、ここでＸ１は、グルタミン酸塩、グルタミン、またはグリシン残基であり、Ｘ２は、アスパラギン酸塩またはリジン残基であり、Ｘ３は、任意のアミノ酸残基である。
【００６７】
一実施形態では、本発明は、配列ＭＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＰＸ６Ｘ７（配列番号２４２）を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗原結合タンパク質を提供し、ここでＸ１は、グルタミン
またはグルタミン酸塩残基であり、Ｘ２は、アラニン、グリシン、セリン、またはスレオニン残基であり、Ｘ３は、ロイシンまたはスレオニン残基であり、Ｘ４は、グルタミン、グルタミン酸塩、またはヒスチジン残基であり、Ｘ５は、スレオニン、トリプトファン、メチオニン、またはバリン残基であり、Ｘ６は、非極性の側鎖残基であり、Ｘ７は、スレオニン、セリン、またはアラニン残基である。別の実施形態では、ＣＤＲ３は、配列ＱＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＰＸ５Ｔ（配列番号２４３）を含み、ここでＸ１は、アルギニン、セリン、ロイシン、またはアラニン残基であり、Ｘ２は、アスパラギン、セリン、またはヒスチジン残基であり、Ｘ３は、セリンまたはアスパラギン残基であり、Ｘ４は、非極性の側鎖残基であり、Ｘ５は、ロイシン、イソロイシン、チロシン、またはトリプトファン残基である。別の実施形態では、ＣＤＲ３は、配列ＱＳＹＸ１ＳＸ２ＮＸ３Ｘ４Ｖ（配列番号２４４）を含み、ここでＸ１は、アスパラギン酸塩またはグルタミン残基であり、Ｘ２は、セリンまたはアスパラギン酸塩残基であり、Ｘ３は、グルタミン、バリン、またはトリプトファン残基であり、Ｘ４は、アルギニン残基であるか、または残基がない。
【００６８】
一実施形態では、本発明は、Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＷＷＳ（配列番号２４５）配列を含む重鎖ＣＤＲ１を含む、抗原結合タンパク質を提供し、ここでＸ１は、セリン残基であるか、または残基がなく、Ｘ２は、セリンまたはアスパラギン残基であり、Ｘ３は、アスパラギン残基およびイソロイシン残基である。別の実施形態では、重鎖ＣＤＲ１は、配列Ｘ１Ｘ２ＹＷＳ（配列番号２４６）を含み、ここでＸ１は、グリシン、アスパラギン、またはアスパラギン酸塩残基であり、Ｘ２は、チロシンまたはフェニルアラニン残基である。別の実施形態では、重鎖ＣＤＲ１は、配列ＳＹＸ１Ｘ２Ｘ３（配列番号２４７）を含み、ここでＸ１は、アラニンまたはグリシン残基であり、Ｘ２は、メチオニンまたはイソロイシン残基であり、Ｘ３は、セリンまたはヒスチジン残基である。
【００６９】
一実施形態では、本発明は、配列Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＧＸ６ＴＸ７ＹＮＰＳＬＸ８Ｓ（配列番号２４８）を含む重鎖ＣＤＲ２を含む、抗原結合タンパク質を提供し、ここでＸ１は、グルタミン酸塩、チロシン、またはセリン残基であり、Ｘ２は、イソロイシンまたはバリン残基であり、Ｘ３は、チロシン、アスパラギン、またはセリン残基であり、Ｘ４は、ヒスチジン、チロシン、アスパラギン酸塩、またはプロリン残基であり、Ｘ５は、セリンまたはアルギニン残基であり、Ｘ６は、セリンまたはアスパラギン残基であり、Ｘ７は、アスパラギンまたはチロシン残基であり、Ｘ８は、リジンまたはグルタミン酸塩残基である。
別の実施形態では、重鎖ＣＤＲ２は、配列Ｘ１ＩＳＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７ＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２４９）を含み、ここでＸ１は、スレオニン、アラニン、バリン、またはチロシン残基であり、Ｘ２は、グリシン、セリン、またはチロシン残基であり、Ｘ３は、セリン、アスパラギン、またはアスパラギン酸塩残基であり、Ｘ４は、グリシンまたはセリン残基であり、Ｘ５は、グリシン、セリン、またはアスパラギン酸塩残基であり、Ｘ６は、セリン、スレオニン、またはアスパラギン残基であり、Ｘ７は、スレオニン、リジン、またはイソロイシン残基である。
【００７０】
一実施形態では、本発明は、配列Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＦＤＩ（配列番号２５０）を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、抗原結合タンパク質を提供し、ここでＸ１は、グルタミン酸塩残基であるか、または残基がなく、Ｘ２は、チロシン、グリシン、またはセリン残基であるか、または残基がなく、Ｘ３は、セリン、アスパラギン、トリプトファン、もしくはグルタミン酸塩残基であるか、または残基がなく、Ｘ４は、セリン、アスパラギン酸塩、トリプトファン、アラニン、アルギニン、スレオニン、グルタミン、ロイシン、もしくはグルタミン酸塩残基であるか、または残基がなく、Ｘ５は、セリン、グリシン、アスパラギン、スレオニン、トリプトファン、アラニン、バリン、またはイソロイシン残基であり、Ｘ６は、アルギニン、グルタミン、チロシン、バリン、アラニン、グリシン、セリン、フェニルアラニン、またはトリプトファン残基であり、Ｘ７は、ロイシン、
アスパラギン、アスパラギン酸塩、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、アラニン、またはヒスチジン残基であり、Ｘ８は、アスパラギン酸塩、セリン、アスパラギン、またはグルタミン残基であり、Ｘ９は、アラニンまたはプロリン残基である。別の実施形態では、重鎖ＣＤＲ３は、配列Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１ＭＤＶ（配列番号２５１）を含み、ここでＸ１は、アラニン残基であるか、または残基がなく、Ｘ２は、グルタミン酸塩、チロシン、もしくはグリシン残基であるか、または残基がなく、Ｘ３は、セリンまたはアルギニン残基であるか、または残基がなく、Ｘ４は、アスパラギン酸塩、グリシン、セリン、またはバリン残基であるか、または残基がなく、Ｘ５は、セリン、グリシン、またはアスパラギン酸塩残基であるか、または残基がなく、Ｘ６は、グリシン、フェニルアラニン、アスパラギン酸塩、セリン、トリプトファン、もしくはチロシン残基であるか、または残基がなく、Ｘ７は、チロシン、トリプトファン、セリン、またはアスパラギン酸塩残基であるか、または残基がなく、Ｘ８は、アスパラギン酸塩、アルギニン、セリン、グリシン、チロシン、またはトリプトファン残基であり、Ｘ９は、チロシン、イソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、またはリジン残基であり、Ｘ１０は、チロシン、フェニルアラニン、アスパラギン酸塩、またはグリシン残基であり、Ｘ１１は、グリシン、チロシン、またはアスパラギン残基である。別の実施形態では、重鎖ＣＤＲ３は、配列Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｙ（配列番号２５２）を含み、ここでＸ１は、アスパラギン酸塩またはバリン残基であるか、または残基がなく、Ｘ２は、グリシン、チロシン、アルギニン、またはアスパラギン酸塩残基であるか、または残基がなく、Ｘ３は、アスパラギン、ロイシン、グリシン、イソロイシン、セリン、バリン、フェニルアラニン、もしくはチロシン残基であるか、または残基がなく、Ｘ４は、ロイシン、セリン、トリプトファン、アラニン、チロシン、イソロイシン、グリシン、またはアスパラギン酸塩残基であるか、または残基がなく、Ｘ５は、グリシン、アラニン、チロシン、セリン、アスパラギン酸塩、またはロイシン残基であり、Ｘ６は、バリン、アラニン、グリシン、スレオニン、プロリン、ヒスチジン、またはグルタミン残基であり、Ｘ７は、グルタミン酸塩、グリシン、セリン、アスパラギン酸塩、グリシン、バリン、トリプトファン、ヒスチジン、またはアルギニン残基であり、Ｘ８は、グルタミン、アラニン、グリシン、チロシン、プロリン、ロイシン、アスパラギン酸塩、またはセリン残基であり、Ｘ９は、非極性の側鎖残基であり、Ｘ１０は、アスパラギン酸塩またはアラニン残基である。別の実施形態では、重鎖ＣＤＲ３は、配列Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＹＦＤＸ１１（配列番号２５３）を含み、ここでＸ１は、グリシン残基であるか、または残基がなく、Ｘ２は、プロリン残基であるか、または残基がなく、Ｘ３は、アルギニンまたはアスパラギン酸塩残基であるか、または残基がなく、Ｘ４は、ヒスチジンまたはプロリン残基であり、Ｘ５は、アルギニンまたはグリシン残基であり、Ｘ６は、アルギニン、セリン、またはフェニルアラニン残基であり、Ｘ７は、アスパラギン酸塩またはセリン残基であり、Ｘ８は、グリシン、トリプトファン、またはチロシン残基であり、Ｘ９は、チロシンまたはアラニン残基であり、Ｘ１０は、アスパラギンまたはトリプトファン残基であり、Ｘ１１は、アスパラギンまたはロイシン残基である。別の実施形態では、重鎖ＣＤＲ３は、配列Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＤＳＳＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２（配列番号２５４）を含み、ここでＸ１は、フェニルアラニン残基であるか、または残基がなく、Ｘ２は、アスパラギンもしくはグリシン残基であるか、または残基がなく、Ｘ３は、チロシンもしくはロイシン残基であるか、または残基がなく、Ｘ４は、チロシンもしくはグリシン残基であるか、または残基がなく、Ｘ５は、グリシン、セリン、またはバリン残基であり、Ｘ６は、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、もしくはグルタミン残基であるか、または残基がなく、Ｘ７は、チロシン、グリシン、もしくはイソロイシン残基であるか、または残基がなく、Ｘ８は、チロシン、ロイシン、もしくはグリシン残基であるか、または残基がなく、Ｘ９は、メチオニン、グリシン、もしくはフェニルアラニン残基であるか、または残基がなく、Ｘ１０は、アスパラギン酸塩もしくはメチオニン残基であるか、または残基がなく、Ｘ１１は、バリン、アスパラギン酸塩、もしくはチロシン残基であるか、または残基がなく、Ｘ１２は、バリン残基であるか、また
は残基がない。
【００７１】
一実施形態では、本発明は、ａ．ｉ．図６に示されるＬ１〜Ｌ５２の軽鎖ＣＤＲ３配列からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ３配列、ｉｉ．ＭＱＡＬＱＴＰＺＴ、ｉｉｉ．ＱＱ（Ｒ／Ｓ）（Ｎ／Ｓ）（Ｓ／Ｎ）ＺＰＬＴ、およびｉｖ．ＱＳＹＤＳＳＮＸＪＶからなる群から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；ｂ．ｉ．図９に示されるＨ１〜Ｈ５２の重鎖ＣＤＲ３配列からなる群から選択されるＣＤＲ３配列とは、総計３つ以下のアミノ酸付加、置換、もしくは欠失だけ異なる重鎖ＣＤＲ３配列、ｉｉ．ＳＲＬＤＡＦＤＩ、ｉｉｉ．ＳＸＹＤＹＹＧＭＤＶ、ｉｖ．ＨＲＸＤＸＡＷＹＦＤＬ、およびｖ．ＤＳＳＧからなる群から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ３；またはｃ．（ａ）の軽鎖ＣＤＲ３配列および（ｂ）の重鎖ＣＤＲ３配列のうちのいずれかを含む、単離された抗原結合タンパク質を提供し、ここで、括弧で囲まれたアミノ酸残基記号は、配列内の同じ位置に対する代替的な残基を同定し、各Ｘは、独立して任意のアミノ酸残基であり、各Ｚは、独立してグリシン残基、アラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、フェニルアラニン残基、メチオニン残基、トリプトファン残基、またはシステイン残基であり、各Ｊは、独立してグルタミン残基、アルギニン残基、バリン残基、またはトリプトファン残基であり、抗原結合タンパク質は、ヒトＩＧＦ−１Ｒに結合する。
【００７２】
図１のヌクレオチド配列、または図２〜９のアミノ酸配列を、例えば、ランダム突然変異誘発によって、または部位特異的突然変異誘発（例えば、オリゴヌクレオチド特異的部位特異的突然変異誘発）によって変化させて、突然変異させられていないポリヌクレオチドと比較して、１つ以上の具体的なヌクレオチド置換、欠失、または挿入を含む、変化したポリヌクレオチドを作り出すことができる。かかる変化を行うための技法の例は、Ｗａｌｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｇｅｎｅ  ４２：１３３；Ｂａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．１９８５，Ｇｅｎｅ  ３７：７３、Ｃｒａｉｋ，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｊａｎｕａｒｙ  １９８５，１２−１９、Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、ならびに米国特許第  ４，５１８，５８４号および第４，７３７，４６２号に記載される。これらのおよび他の方法を使用して、例えば、所望の特性、例えば、誘導体化されていない抗体と比較して、ＩＧＦ−１Ｒに対する増加した親和性、結合活性、もしくは特異性、インビボもしくはインビトロでの増加した活性または安定性、または低減されたインビボ副作用を有する、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の誘導体を作製することができる。
【００７３】
本発明の範囲内での抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の他の誘導体には、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に融合された異種ポリペプチドを含む組換え融合タンパク質の発現等による、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体またはそれらの断片の、他のタンパク質またはポリペプチドとの共有結合性または凝集性（ａｇｇｒｅｇａｔｉｖｅ）複合体が含まれる。例えば、共役ペプチドは、異種シグナル（またはリーダー）ポリペプチド、例えば、酵母アルファ因子リーダー、またはエピトープタグ等のペプチドであってもよい。抗原結合タンパク質含有融合タンパク質は、抗原結合タンパク質の精製または特定を促進するために付加されるペプチドを含むことができる（例えば、ポリ−Ｈｉｓ）。抗原結合タンパク質はまた、Ｈｏｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：１２０４，１９８８、および米国特許第５，０１１，９１２号に記載されるように、ＦＬＡＧペプチドＡｓｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）（配列番号２５５）に連結することができる。ＦＬＡＧペプチドは、高度に抗原性であり、特異的モノクローナル抗体（ｍＡｂ）によって可逆的に結合されたエピトープを提供して、発現組換えタンパク質の迅速なアッセイおよび容易な精製を可能にする。ＦＬＡＧペプチドが所与のポリペプチドに融合される融合タンパク質を調製するのに有用な試薬は、市販されている（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。
【００７４】
１つ以上の抗原結合タンパク質を含有するオリゴマーが、ＩＧＦ−１Ｒ拮抗薬として用いられてもよい。オリゴマーは、共有結合されたまたは非共有結合された二量体、三量体、またはより高いオリゴマーの形態であってもよい。２つ以上の抗原結合タンパク質を含むオリゴマーが使用のために企図され、一例がホモ二量体である。他のオリゴマーには、ヘテロ二量体、ホモ三量体、ヘテロ三量体、ホモ四量体、ヘテロ四量体等が含まれる。
【００７５】
一実施形態は、抗原結合タンパク質に融合されたペプチド部分の間の共有結合性または非共有結合性の相互作用を介して接合される、多数の抗原結合タンパク質を含むオリゴマーに向けられる。かかるペプチドは、ペプチドリンカー（スペーサ）であっても、オリゴマー化を助長する特性を有するペプチドであってもよい。ロイシンジッパーおよび抗体に由来するある種のポリペプチドは、下により詳述されるように、そこに結合された抗原結合タンパク質のオリゴマー化を助長することができるペプチドの中にある。
【００７６】
具体的な実施形態では、オリゴマーは、２〜４つの抗原結合タンパク質を含む。オリゴマーの抗原結合タンパク質は、上述の形態のいずれか、例えば、変異体または断片等の、任意の形態であってもよい。好ましくは、オリゴマーは、ＩＧＦ−１Ｒ結合活性を有する抗原結合タンパク質を含む。
【００７７】
一実施形態では、オリゴマーは、免疫グロブリンに由来するポリペプチドを使用して調製される。抗体由来のポリペプチドの種々の部分（Ｆｃドメインを含む）に融合されたある種の異種ポリペプチドを含む融合タンパク質の調製は、例えば、Ａｓｈｋｅｎａｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８８：１０５３５、Ｂｙｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｎａｔｕｒｅ  ３４４：６７７、およびＨｏｌｌｅｎｂａｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２“Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ”，ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌ．４，ｐａｇｅｓ  １０．１９．１−１０．１９．１１によって、記載されている。
【００７８】
本発明の一実施形態は、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体のＩＧＦ−１Ｒ結合断片を抗体のＦｃ領域に融合することによって作り出される、２つの融合タンパク質を含む二量体に向けられる。二量体は、例えば、融合タンパク質をコードする遺伝子融合体を、適切な発現ベクターの中に挿入すること、組換え発現ベクターで形質転換された宿主細胞中でその遺伝子融合体を発現させること、発現された融合タンパク質が抗体分子と酷似して組み立てられることを可能にすることによって作製することができ、その結果、鎖間ジスルフィド結合がＦｃ部分の間に形成して二量体を産出する。
【００７９】
本明細書で使用される「Ｆｃポリペプチド」という用語は、抗体のＦｃ領域に由来するポリペプチドの天然および変異タンパク質形態を含む。二量体化を促進するヒンジ領域を含有するかかるポリペプチドの切り詰め型もまた、含まれる。Ｆｃ部分（およびそこから形成されるオリゴマー）を含む融合タンパク質は、プロテインＡまたはプロテインＧカラム上での親和性クロマトグラフィーによる容易な精製の利点を提供する。
【００８０】
ＰＣＴ出願第ＷＯ９３／１０１５１号（参照により本明細書に組み込まれる）に記載される、１つの好適なＦｃポリペプチドは、ヒトＩｇＧ１抗体のＮ末端ヒンジ領域からＦｃ領域の天然Ｃ末端まで延長する、１本鎖ポリペプチドである。別の有用なＦｃポリペプチドは、米国特許第５，４５７，０３５号およびＢａｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＥＭＢＯ  Ｊ．１３：３９９２−４００１に記載されるＦｃ変異タンパク質である。この変異タンパク質のアミノ酸配列は、第ＷＯ  ９３／１０１５１号に提示される天然Ｆｃ配列のそれと同一であるが、アミノ酸１９がＬｅｕからＡｌａに変化させられており、アミノ酸
２０がＬｅｕからＧｌｕに変化させられており、かつアミノ酸２２がＧｌｙからＡｌａに変化させられていることを除く。変異タンパク質は、Ｆｃ受容体に対する低減された親和性を示す。
【００８１】
他の実施形態では、ＩＧＦ−１Ｒ抗体の重鎖および／または軽鎖抗の可変部分で、抗体重鎖および／または軽鎖の可変部分を置換してもよい。
【００８２】
代替的に、オリゴマーは、ペプチドリンカー（スペーサペプチド）を含むまたは含まない、多数の抗原結合タンパク質を含む融合タンパク質である。好適なペプチドリンカーの中には、米国特許第４，７５１，１８０号および第４，９３５，２３３号に記載されるものがある。
【００８３】
オリゴマー抗原結合タンパク質を調製するための別の方法は、ロイシンジッパーの使用を伴う。ロイシンジッパードメインは、それらが見出されるタンパク質のオリゴマー化を助長するペプチドである。ロイシンジッパーは、元々、複数のＤＮＡ結合タンパク質において同定され（Ｌａｎｄｓｃｈｕｌｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１７５９）、それ以来、多様な異なるタンパク質において見出されている。既知のロイシンジッパーの中には、二量体化または三量体化する自然発生ペプチドおよびそれらの誘導体がある。可溶性オリゴマータンパク質を産生するのに好適なロイシンジッパードメインの例は、ＰＣＴ出願第ＷＯ９４／１０３０８号に記載され、肺表面活性タンパク質Ｄ（ＳＰＤ）に由来するロイシンジッパーは、参照により本明細書に組み込まれるＨｏｐｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ３４４：１９１に記載される。そこに融合された異種タンパク質の安定な三量体化を可能にする修飾ロイシンジッパーの使用は、Ｆａｎｓｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｓｅｍｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：２６７−７８に記載される。１つのアプローチでは、ロイシンジッパーペプチドに融合された抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体断片または誘導体を含む組換え融合タンパク質が、好適な宿主細胞中で発現させられ、形成する可溶性オリゴマー抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体断片または誘導体が培養上清から回収される。
【００８４】
一態様では、本発明は、ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの結合を干渉する、抗原結合タンパク質を提供する。かかる抗原結合タンパク質は、ＩＧＦ−１Ｒ、またはその断片、変異体、もしくは誘導体に対して作製し、ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの結合を干渉する能力について、従来のアッセイにおいてスクリーニングすることができる。好適なアッセイの例としては、ＩＧＦ−１および／もしくはＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒを発現する細胞への結合を阻害する能力について、抗原結合タンパク質を試験する、またはＩＧＦ−１および／もしくはＩＧＦ−２の細胞表面ＩＧＦ−１Ｒ受容体への結合からもたらされる生体応答もしくは細胞応答を低減する能力について、抗原結合タンパク質を試験する、アッセイがある。
【００８５】
別の態様では、本発明は、ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの結合を遮断するが、インスリンのインスリン受容体（ＩＮＳ−Ｒ）への結合を有意に遮断しない、抗原結合タンパク質を提供する。一実施形態では、抗原結合タンパク質は、ＩＮＳ−Ｒに結合しない。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、インスリンのＩＮＳ−Ｒへの結合を事実上遮断しないような低い親和性で、ＩＮＳ−Ｒに結合する。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、ＩＮＳ−Ｒに結合するが、抗原結合タンパク質が結合したＩＮＳ−Ｒは、依然としてインスリンに結合することができる。別の実施形態では、ＩＧＦ−１Ｒに対する抗原結合タンパク質の選択性は、インスリン受容体に対するその選択性よりも、少なくとも５０倍大きい。別の実施形態では、抗原結合タンパク質の選択性は、インスリン受容体に対するその選択性よりも、１００倍を超えて大きい。
【００８６】
別の態様では、本発明は、種の選択性を示す抗原結合タンパク質を提供する。一実施形態では、抗原結合タンパク質は、１つ以上の哺乳類ＩＧＦ−１Ｒに、例えば、ヒトＩＧＦ−１Ｒ、ならびにマウス、ラット、モルモット、ハムスター、アレチネズミ、ネコ、ウサギ、イヌ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ウマ、ラクダ、および非ヒト霊長類ＩＧＦ−１Ｒのうちの１つ以上に結合する。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、１つ以上の霊長類ＩＧＦ−１Ｒに、例えば、ヒトＩＧＦ−１Ｒ、ならびにカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｏｇｏｕｓ）、マーモセット、アカゲザル、およびチンパンジーＩＧＦ−１Ｒのうちの１つ以上に結合する。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、ヒト、カニクイザル、マーモセット、アカゲザル、またはチンパンジーＩＧＦ−１Ｒに特異的に結合する。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、アレチネズミ、ネコ、ウサギ、イヌ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ウマ、ラクダ、および非ヒト霊長類ＩＧＦ−１Ｒのうちの１つ以上に結合しない。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、マーモセット等の新世界サル種に結合しない。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、ＩＧＦ−１Ｒ以外のいずれの自然発生タンパク質にも特異的結合を示さない。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、哺乳類ＩＧＦ−１Ｒ以外のいずれの自然発生タンパク質にも特異的結合を示さない。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、霊長類ＩＧＦ−１Ｒ以外のいずれの自然発生タンパク質にも特異的結合を示さない。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、ヒトＩＧＦ−１Ｒ以外のいずれの自然発生タンパク質にも特異的結合を示さない。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、マウス、ラット、カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍｏｎｋｅｙ）、およびヒトＩＧＦ−１Ｒに特異的に結合する。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、同様の結合親和性で、マウス、ラット、カニクイザル、およびヒトＩＧＦ−１Ｒに特異的に結合する。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、ヒトＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２の、マウス、ラット、カニクイザル、およびヒトＩＧＦ−１Ｒとの結合を遮断する。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、同様のＫｉで、ヒトＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２の、マウス、ラット、カニクイザル、およびヒトＩＧＦ−１Ｒとの結合を遮断する。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、約０．５７〜約０．６１ｎＭの間のＫｉで、ヒトＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２の、マウス、ラット、カニクイザル、およびヒトＩＧＦ−１Ｒとの結合を遮断する。
【００８７】
当該技術分野で周知の方法を使用して、本明細書の教示に従って、抗原結合タンパク質のＩＧＦ−１Ｒに対する選択性を決定してもよい。例えば、ウェスタンブロット、ＦＡＣＳ、ＥＬＩＳＡ、またはＲＩＡを使用して、選択性を決定することができる。
【００８８】
別の態様では、本発明は、次の特性のうちの１つ以上を有する、ＩＧＦ−１Ｒ結合抗原結合タンパク質（例えば、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体）を提供する：ヒトＩＧＦ−１ＲおよびマウスＩＧＦ−１Ｒの両方に結合する、ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２両方のヒトＩＧＦ−１Ｒへの結合を阻害する、ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２両方のマウスＩＧＦ−１Ｒへの結合を阻害する、ＩＧＦ−１のおよび／またはＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの高い親和性結合を優先的に阻害する、ＩＧＦ−１ＲのＬ２ドメインに結合する、１７時間の曝露後に細胞表面で発現されるＩＧＦ−１Ｒの比較的小さい下方調節を引き起こす（ＭＡＢ３９１（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）と比較して；例えば、ＩＧＦ−１Ｒの量が２０％未満低減される）、２００マイクログラムの週１回用量で４週間後に、ＭＡＢ３９１としてマウスにおけるＣｏｌｏ−２０５またはＭｉａＰａＣａ−２異種移植腫瘍細胞上の細胞表面で発現されるＩＧＦ−１Ｒのあるレベルの下方調節を引き起こす。
【００８９】
本発明の抗原結合タンパク質の抗原結合断片は、従来技法によって産生されてもよい。かかる断片の例としては、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片が挙げられるが、これらに限定されない。遺伝子工学技法によって産生される抗体断片および誘導体もまた、企図される。
【００９０】
更なる実施形態は、キメラ抗体、例えば、非ヒト（例えば、マウス）モノクローナル抗体のヒト化バージョンを含む。かかるヒト化抗体は、既知の技法によって調製されてもよく、抗体がヒトに投与されるとき、低減された免疫原性の利点を提供する。一実施形態では、ヒト化モノクローナル抗体は、マウス抗体の可変ドメイン（またはその抗原結合部位の全てもしくは一部）およびヒト抗体に由来する定常ドメインを含む。代替的に、ヒト化抗体断片は、マウスモノクローナル抗体の抗原結合部位およびヒト抗体に由来する（抗原結合部位を欠いている）可変ドメイン断片を含んでもよい。キメラ抗体および更に操作されたモノクローナル抗体の産生のための手順には、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：３４３９、Ｌａｒｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ７：９３４、およびＷｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，ＴＩＰＳ  １４：１３９に記載される手順が含まれる。一実施形態では、キメラ抗体は、ＣＤＲ移植抗体である。抗体をヒト化するための技法は、例えば、米国特許出願第１０／１９４，９７５号（２００３年２月２７日公開）、米国特許第５，８６９，６１９号、第５，２２５，５３９号、第５，８２１，３３７号、第５，８５９，２０５号、Ｐａｄｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．９：１３３−３９、およびＴａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：１４３２−４１に考察される。
【００９１】
手順は、非ヒト動物におけるヒトまたは部分ヒト抗体を生成するために開発されている。例えば、１つ以上の内在性免疫グロブリン遺伝子が種々の手段によって不活性化されたマウスが、調製されている。ヒト免疫グロブリン遺伝子は、不活性化マウス遺伝子を置換するためにマウスの中に導入されている。動物において産生される抗体は、動物の中に導入されるヒト遺伝物質によってコードされる、ヒト免疫グロブリンポリペプチド鎖を組み込む。一実施形態では、トランスジェニックマウス等の非ヒト動物は、ＩＧＦ−１Ｒポリペプチドに対して向けられる抗体が動物において生成されるように、ＩＧＦ−１Ｒポリペプチドで免疫付与される。好適な免疫原の一例としては、図１０のタンパク質の細胞外ドメインまたは図１０のタンパク質の他の免疫原性断片を含むポリペプチド等の、可溶性ヒトＩＧＦ−１Ｒがある。ヒトまたは部分ヒト抗体の産生のためのトランスジェニック動物の産生および使用のための技法の例は、米国特許第５，８１４，３１８号、第５，５６９，８２５号、および第５，５４５，８０６号、Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｒｏｍ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ  ｉｎ  Ｌｏ，ｅｄ．Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＪ：１９１−２００、Ｋｅｌｌｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３：５９３−９７、Ｒｕｓｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．６８：１８２０−２６、Ｇａｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎ．３０：５３４−４０、Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  Ｒｅｖ．１８：４２１−２５、Ｇｒｅｅｎ，１９９９，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．２３１：１１−２３、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，１９９８，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ３１：３３−４２、Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１８８：４８３−９５、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  Ａ，１９９８，Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ．７：６０７−１４、Ｔｓｕｄａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｇｅｎｏｍｉｃｓｓ．４２：４１３−２１、Ｍｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ．１５：１４６−５６、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，１９９４，Ｃｕｒｒ  Ｂｉｏｌ．４：７６１−６３、Ａｒｂｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１：２４７−６０、Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ．７：１３−２１、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｎａｔｕｒｅ．３６２：２５５−５８、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａ
ｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．９０：２５５１−５５、Ｃｈｅｎ，Ｊ．，Ｍ．Ｔｒｏｕｎｓｔｉｎｅ，Ｆ．Ｗ．Ａｌｔ，Ｆ．Ｙｏｕｎｇ，Ｃ．Ｋｕｒａｈａｒａ，Ｊ．Ｌｏｒｉｎｇ，Ｄ．Ｈｕｓｚａｒ．“Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｇｅｎｅ  ｒｅａｒ範囲ｍｅｎｔ
ｉｎ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ  ｇｅｎｅｒａｔｅｄ  ｂｙ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｄｅｌｅｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＪＨ  ｌｏｃｕｓ．”  ｌｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５（１９９３）：６４７−６５６、Ｃｈｏｉ
ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４：１１７−２３、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８４５−５１、Ｈａｒｄｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｌｏｎｂｅｒｇ
ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−５９、Ｌｏｎｂｅｒｇ，１９９４，Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １１３：４９−１０１、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３：６５−９３、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，１９９６，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８２６、Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０：６２８７−９５、Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ６：５７９−９１、Ｔｏｍｉｚｕｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １６：１３３−４３、Ｔｏｍｉｚｕｋａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＵＳＡ  ９７：７２２−２７、Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＵＳＡ  ９０：３７２０−２４、およびＴｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １５２：２９１２−２０に記載される。
【００９２】
別の態様では、本発明は、ＩＧＦ−１Ｒに結合するモノクローナル抗体を提供する。モノクローナル抗体は、当該技術分野で既知の任意の技法を使用して、例えば、免疫付与スケジュールの完了後にトランスジェニック動物から採取された脾臓細胞を不死化することによって、産生されてもよい。脾臓細胞は、当該技術分野で既知の任意の技法を使用して、例えば、それらを骨髄腫細胞と融合してハイブリドーマを産生することによって、不死化することができる。ハイブリドーマ産生融合手順において使用するための骨髄腫細胞は好ましくは、抗体を産生せず、高い融合効率を有し、所望の融合細胞（ハイブリドーマ）の増殖のみを支持するある種の選択培地中でそれらが増殖できないようにする酵素欠損性である。マウス融合において使用するための好適な細胞株の例としては、Ｓｐ−２０、Ｐ３−Ｘ６３／Ａｇ８、Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８．６５３、ＮＳ１／１．Ａｇ  ４  １、Ｓｐ２１０−Ａｇ１４、ＦＯ、ＮＳＯ／Ｕ、ＭＰＣ−１１、ＭＰＣ１１−Ｘ４５−ＧＴＧ  １．７、およびＳ１９４／５ＸＸ０  Ｂｕｌが挙げられ、ラット融合において使用される細胞株の例としては、Ｒ２１０．ＲＣＹ３、Ｙ３−Ａｇ  １．２．３、ＩＲ９８３Ｆ、および４Ｂ２１０が挙げられる。細胞融合に有用な他の細胞株は、Ｕ−２６６、ＧＭ１５００−ＧＲＧ２、ＬＩＣＲ−ＬＯＮ−ＨＭｙ２、およびＵＣ７２９−６である。
【００９３】
一実施形態では、ハイブリドーマ細胞株は、動物（例えば、ヒト免疫グロブリン配列を有するトランスジェニック動物）に、ＩＧＦ−１Ｒ免疫原で免疫付与すること、免疫動物から脾臓細胞を採取すること、採取された脾臓細胞を骨髄腫細胞株に融合し、それによってハイブリドーマ細胞を生成すること、ハイブリドーマ細胞からハイブリドーマ細胞株を樹立すること、ならびにＩＧＦ−１Ｒポリペプチドを結合する抗体を産生する、ハイブリドーマ細胞株を特定することによって、産生される。かかるハイブリドーマ細胞株、およびそれらによって産生される抗ＩＧＦ−１Ｒモノクローナル抗体が、本発明によって包含
される。
【００９４】
ハイブリドーマ細胞株によって分泌されるモノクローナル抗体は、当該技術分野で既知の任意の技法を使用して精製することができる。ハイブリドーマまたはｍＡｂは、ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２誘導性活性を遮断する能力等の具体的な特性を有するｍＡｂを特定するために、更にスクリーニングされてもよい。かかるスクリーニングの例は、下記の実施例に提供される。
【００９５】
抗体結合部位の中心における相補性決定領域（ＣＤＲ）の分子進化もまた、増加した親和性を有する抗体、例えば、Ｓｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６３：５５１によって記載される、ｃ−ｅｒｂＢ−２に対する増加した親和性を有する抗体を単離するために、使用されている。したがって、かかる技法は、ＩＧＦ−１Ｒに対する抗体を調製する際に有用である。
【００９６】
ＩＧＦ−１Ｒに対して向けられる抗原結合タンパク質を、例えば、アッセイにおいて使用して、インビトロまたはインビボのいずれでも、ＩＧＦ−１Ｒポリペプチドの存在を検出することができる。抗原結合タンパク質はまた、免疫親和性クロマトグラフィーによってＩＧＦ−１Ｒタンパク質を精製する際に用いられてもよい。ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの結合を追加的に遮断することができるそれらの抗原結合タンパク質を使用して、かかる結合からもたらされる生物活性を阻害してもよい。遮断抗原結合タンパク質は、本発明の方法において使用することができる。ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２拮抗薬として機能するかかる抗原結合タンパク質は、癌を含むが、これらに限定されない、任意のＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２誘導性病態を治療する際に用いられてもよい。一実施形態では、トランスジェニックマウスの免疫付与を伴う手順によって生成されるヒト抗ＩＧＦ−１Ｒモノクローナル抗体が、かかる病態を治療する際に用いられる。
【００９７】
抗原結合タンパク質は、ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２誘導性生物活性を阻害するために、インビトロ手順で用いられても、またはインビボで投与されてもよい。ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２の細胞表面ＩＧＦ−１Ｒとの相互作用によって（直接的または間接的に）引き起こされるかまたは悪化する障害（それらの例は上に提供される）は、故に治療され得る。一実施形態では、本発明は、ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２遮断抗原結合タンパク質の、治療を必要とする哺乳動物への、ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２誘導性生物活性を低減するのに有効な量でのインビボ投与を含む、治療法を提供する。
【００９８】
本発明の抗原結合タンパク質には、ＩＧＦ−１の生物活性を阻害し、かつＩＧＦ−２の生物活性も阻害する、部分ヒトおよび完全ヒトモノクローナル抗体が含まれる。一実施形態は、ＩＧＦ−１のおよびＩＧＦ−２の、ヒトＩＧＦ−１Ｒを発現する細胞への結合を少なくとも部分的に遮断する、ヒトモノクローナル抗体に向けられる。一実施形態では、抗体は、トランスジェニックマウスに、ＩＧＦ−１Ｒ免疫原で免疫付与することによって生成される。別の実施形態では、免疫原は、ヒトＩＧＦ−１Ｒポリペプチド（例えば、ＩＧＦ−１Ｒ細胞外ドメインの全てまたは一部を含む可溶性断片）である。ハイブリドーが、ＩＧＦ−１Ｒを結合するモノクローナル抗体を分泌する、かかる免疫マウスに由来するハイブリドーマ細胞株もまた、本明細書に提供される。
【００９９】
ヒト、部分ヒト、またはヒト化抗体、特に、抗体のヒト対象への投与を伴うものが、多くの適用に好適であろうが、他のタイプの抗原結合タンパク質が、ある種の適用には好適であろう。本発明の非ヒト抗体は、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ロバ等の任意の抗体産生動物、または非ヒト霊長類（サル（例えば、カニクイザルまたはアカゲザル
）もしくは類人猿（例えば、チンパンジー）等）に由来し得る。本発明の非ヒト抗体は、例えば、インビトロおよび細胞培養に基づく適用において、または本発明の抗体への免疫反応が生じない、有意でない、予防され得る、懸念事項でない、もしくは所望される任意の他の適用において、使用することができる。一実施形態では、本発明の非ヒト抗体は、非ヒト対象に投与される。別の実施形態では、非ヒト抗体は、非ヒト対象における免疫反応を引き出さない。別の実施形態では、非ヒト抗体は、非ヒト対象と同じ種からのものであり、例えば、本発明のマウス抗体は、マウスに投与される。具体的な種からの抗体は、例えば、その種の動物に所望の免疫原（例えば、可溶性ＩＧＦ−１Ｒポリペプチド）で免疫付与すること、もしくはその種の抗体を生成するための人工系（例えば、具体的な種の抗体を生成するための細菌またはファージディスプレイベース系）を使用することによって、または例えば、抗体の定常領域を他方の種からの定常領域で置換することにより、もしくは抗体の１つ以上のアミノ酸残基を、それが他方の種からの抗体の配列により酷似するように置換することにより、１つの種からの抗体を別の種からの抗体に変換することによって、作製することができる。一実施形態では、抗体は、２つ以上の異なる種からの抗体に由来するアミノ酸配列を含む、キメラ抗体である。
【０１００】
抗原結合タンパク質は、幾つかの従来技法のうちのいずれによって調製されてもよい。例えば、それらは、それらを自然に発現する細胞から精製されても（例えば、抗体は、それを産生するハイブリドーマから精製することができる）、当該技術分野で既知の任意の技法を使用して、組換え発現系において産生されてもよい。例えば、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ：Ａ  Ｎｅｗ  Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｅｓ，Ｋｅｎｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８０）、およびＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｄ（ｅｄｓ．），Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，（１９８８）を参照されたい。
【０１０１】
当該技術分野で既知の任意の発現系を使用して、本発明の組換えポリペプチドを作製することができる。一般に、宿主細胞は、組換え発現ベクターで形質転換され、所望のポリペプチドをコードするＤＮＡを含む。用いられ得る宿主細胞の中には、原核生物、酵母、またはより高等な真核性細胞がある。原核生物には、グラム陰性またはグラム陽性生物、例えば、大腸菌またはバチルス属が含まれる。より高等な真核性細胞には、昆虫細胞および哺乳類源の樹立細胞株が含まれる。好適な哺乳類宿主細胞株の例としては、サル腎臓細胞のＣＯＳ−７株（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）（Ｇｌｕｚｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ｃｅｌｌ  ２３：１７５）、Ｌ細胞、２９３細胞、Ｃ１２７細胞、３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １６３）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ＢＨＫ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １０）細胞株、およびＭｃＭａｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：２８２１によって記載されるＣＶＩ／ＥＢＮＡ細胞株に由来するアフリカミドリザル腎臓細胞株ＣＶＩ（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）が挙げられる。細菌、真菌、酵母、および哺乳類細胞宿主と共に使用するための適切なクローニングおよび発現ベクターは、Ｐｏｕｗｅｌｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８５）によって記載される。
【０１０２】
形質転換細胞は、ポリペプチドの発現を助長する条件下で培養することができ、ポリペプチドは、従来のタンパク質精製手順によって回収することができる。１つのかかる精製手順は、親和性クロマトグラフィー、例えば、それに結合されたＩＧＦ−１Ｒの全てまたは一部分を有するマトリックス上での（例えば、細胞外ドメイン）の使用を含む。本発明における使用のために企図されるポリペプチドには、汚染内在性物質が実質的にない、実質的に同質の組換え哺乳類抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体ポリペプチドが含まれる。
【０１０３】
抗原結合タンパク質は、幾つかの既知の技法のうちのいずれによって、調製され、所望の特性についてスクリーニングされ得る。ある種の技法は、対象となる抗原結合タンパク質（例えば、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体）のポリペプチド鎖（またはその部分）をコードする核酸を単離すること、および組換えＤＮＡ技術を通じて核酸を操作することを伴う。核酸を、対象となる別の核酸に融合するか、または変化させて（例えば、突然変異誘発または他の従来技法によって）、例えば、１つ以上のアミノ酸残基を付加、欠失、または置換してもよい。
【０１０４】
一態様では、本発明は、本発明の抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の抗原結合断片を提供する。かかる断片は、完全に抗体由来配列からなることができるか、追加的配列を含むことができる。抗原結合断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、１本鎖抗体、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体、およびドメイン抗体が挙げられる。他の例は、Ｌｕｎｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３０：５００−０６に提供される。
【０１０５】
１本鎖抗体は、アミノ酸架橋（短いペプチドリンカー）を介して、重鎖および軽鎖可変ドメイン（Ｆｖ領域）断片を連結して、１本のポリペプチド鎖をもたらすことによって、形成されてもよい。かかる１本鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖｓ）は、２つの可変ドメインポリペプチド（ＶＬおよびＶＨ）をコードするＤＮＡの間のペプチドリンカーをコードするＤＮＡを融合することによって、調製されている。結果として生じるポリペプチドは、２つの可変ドメインの間の可動性リンカーの長さに応じて、それら自体の上に折り重なって抗原結合単量体を形成することができるか、またはそれらは多量体（例えば、二量体、三量体、または四量体）を形成することができる（Ｋｏｒｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．１０：４２３、Ｋｏｒｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｂｉｏｍｏｌ．Ｅｎｇ．１８：９５−１０８）。異なるＶＬおよびＶＨ含有ポリペプチドを組み合わせることによって、異なるエピトープに結合する多量体ｓｃＦｖｓを形成することができる（Ｋｒｉａｎｇｋｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｂｉｏｍｏｌ．Ｅｎｇ．１８：３１−４０）。１本鎖抗体の産生のために開発された技法には、米国特許第４，９４６，７７８号、Ｂｉｒｄ，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３、Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９、Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ  ３３４：５４４、ｄｅ  Ｇｒａａｆ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．１７８：３７９−８７に記載されるものが含まれる。本明細書に提供される抗体に由来する１本鎖抗体には、本発明によって包含される可変ドメインの組み合わせＬ１Ｈ１、Ｌ２Ｈ２、Ｌ３Ｈ３、Ｌ４Ｈ４、Ｌ５Ｈ５、Ｌ６Ｈ６、Ｌ７Ｈ７、Ｌ８Ｈ８、Ｌ９Ｈ９、Ｌ１０Ｈ１０、Ｌ１１Ｈ１１、Ｌ１２Ｈ１２、Ｌ１３Ｈ１３、Ｌ１４Ｈ１４、Ｌ１５Ｈ１５、Ｌ１６Ｈ１６、Ｌ１７Ｈ１７、Ｌ１８Ｈ１８、Ｌ１９Ｈ１９、Ｌ２０Ｈ２０、Ｌ２１Ｈ２１、Ｌ２２Ｈ２２、Ｌ２３Ｈ２３、Ｌ２４Ｈ２４、Ｌ２５Ｈ２５、Ｌ２６Ｈ２６、Ｌ２７Ｈ２７、Ｌ２８Ｈ２８、Ｌ２９Ｈ２９、Ｌ３０Ｈ３０、Ｌ３１Ｈ３１、Ｌ３２Ｈ３２、Ｌ３３Ｈ３３、Ｌ３４Ｈ３４、Ｌ３５Ｈ３５、Ｌ３６Ｈ３６、Ｌ３７Ｈ３７、Ｌ３８Ｈ３８、Ｌ３９Ｈ３９、Ｌ４０Ｈ４０、Ｌ４１Ｈ４１、Ｌ４２Ｈ４２、Ｌ４３Ｈ４３、Ｌ４４Ｈ４４、Ｌ４５Ｈ４５、Ｌ４６Ｈ４６、Ｌ４７Ｈ４７、Ｌ４８Ｈ４８、Ｌ４９Ｈ４９、Ｌ５０Ｈ５０、Ｌ５１Ｈ５１、およびＬ５２Ｈ５２）を含むｓｃＦｖｓが含まれるが、これらに限定されない。
【０１０６】
本発明の抗原結合タンパク質（例えば、抗体、抗体断片、および抗体誘導体）は、当該技術分野で既知の任意の定常領域を含むことができる。軽鎖定常領域は、例えば、カッパ型またはラムダ型軽鎖定常領域、例えば、ヒトカッパ型またはラムダ型軽鎖定常領域であり得る。重鎖定常領域は、例えば、アルファ型、デルタ型、イプシロン型、ガンマ型、またはミュー型重鎖定常領域、例えば、ヒトアルファ型、デルタ型、イプシロン型、ガンマ
型、またはミュー型重鎖定常領域であり得る。一実施形態では、軽鎖または重鎖定常領域は、自然発生定常領域の断片、誘導体、変異体、または変異タンパク質である。
【０１０７】
対象となる抗体から、異なるサブクラスまたはアイソタイプの抗体を誘導するための技法、すなわち、サブクラススイッチングが知られている。故に、ＩｇＧ抗体は、例えば、ＩｇＭ抗体に由来してもよく、逆もまた同様である。かかる技法は、所与の抗体（親抗体）の抗原結合特性を有する新たな抗体の調製を可能にするが、それはまた、親抗体のそれとは異なる抗体アイソタイプまたはサブクラスに関連する生物学的特性を示す。組換えＤＮＡ技法が用いられてもよい。具体的な抗体ポリペプチドをコードするクローニングＤＮＡ、例えば、所望のアイソタイプ抗体の定常ドメインをコードするＤＮＡが、かかる手順において用いられてもよい。Ｌａｎｔｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１７８：３０３−１６もまた参照されたい。
【０１０８】
一実施形態では、本発明の抗原結合タンパク質は、図１３のＩｇＧ１重鎖ドメインまたは図１３のＩｇＧ１重鎖ドメインの断片を含む。別の実施形態では、本発明の抗原結合タンパク質は、図１３のカッパ軽鎖定常鎖領域または図１３のカッパ軽鎖定常領域の断片を含む。別の実施形態では、本発明の抗原結合タンパク質は、図１３のＩｇＧ１重鎖ドメインまたはその断片、および図１３のカッパ軽鎖ドメインまたはその断片の両方を含む。
【０１０９】
したがって、本発明の抗原結合タンパク質には、例えば、可変ドメインの組み合わせＬ１Ｈ１、Ｌ２Ｈ２、Ｌ３Ｈ３、Ｌ４Ｈ４、Ｌ５Ｈ５、Ｌ６Ｈ６、Ｌ７Ｈ７、Ｌ８Ｈ８、Ｌ９Ｈ９、Ｌ１０Ｈ１０、Ｌ１１Ｈ１１、Ｌ１２Ｈ１２、Ｌ１３Ｈ１３、Ｌ１４Ｈ１４、Ｌ１５Ｈ１５、Ｌ１６Ｈ１６、Ｌ１７Ｈ１７、Ｌ１８Ｈ１８、Ｌ１９Ｈ１９、Ｌ２０Ｈ２０、Ｌ２１Ｈ２１、Ｌ２２Ｈ２２、Ｌ２３Ｈ２３、Ｌ２４Ｈ２４、Ｌ２５Ｈ２５、Ｌ２６Ｈ２６、Ｌ２７Ｈ２７、Ｌ２８Ｈ２８、Ｌ２９Ｈ２９、Ｌ３０Ｈ３０、Ｌ３１Ｈ３１、Ｌ３２Ｈ３２、Ｌ３３Ｈ３３、Ｌ３４Ｈ３４、Ｌ３５Ｈ３５、Ｌ３６Ｈ３６、Ｌ３７Ｈ３７、Ｌ３８Ｈ３８、Ｌ３９Ｈ３９、Ｌ４０Ｈ４０、Ｌ４１Ｈ４１、Ｌ４２Ｈ４２、Ｌ４３Ｈ４３、Ｌ４４Ｈ４４、Ｌ４５Ｈ４５、Ｌ４６Ｈ４６、Ｌ４７Ｈ４７、Ｌ４８Ｈ４８、Ｌ４９Ｈ４９、Ｌ５０Ｈ５０、Ｌ５１Ｈ５１、およびＬ５２Ｈ５２を含み、所望のアイソタイプ（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＥ、およびＩｇＤ）を有するもの、ならびにそれらのＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２断片が含まれる。更に、ＩｇＧ４が所望される場合、ＩｇＧ４抗体における異質性をもたらす可能性があるＨ鎖内ジスルフィド結合を形成する傾向を緩和するために、Ｂｌｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ６：４０７、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように、ヒンジ領域における点突然変異（ＣＰＳＣＰ→ＣＰＰＣＰ）を導入することもまた所望され得る。
【０１１０】
本発明の抗原結合タンパク質の例は、ガニツマブとしても知られる、ＩｇＧ１抗体ＡＭＧ  ４７９である。ガニツマブは、Ｌ１６Ｈ１６の軽鎖および重鎖可変ドメインを有する。
【０１１１】
更に、異なる特性（すなわち、それらが結合する抗原に対する様々な親和性）を有する抗原結合タンパク質を誘導するための技法もまた、知られている。鎖シャフリングと称される、１つのかかる技法は、しばしばファージディスプレイと称される、糸状バクテリオファージの表面上で免疫グロブリン可変ドメイン遺伝子レパートリーを表示することを伴う。鎖シャフリングを使用して、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９によって記載されるように、ハプテン２−フェニルオキサゾール−５−オンに対する高親和性抗体が調製されている。
【０１１２】
具体的な実施形態では、本発明の抗原結合タンパク質は、実施例に記載されるように測
定して、少なくとも１０６の、ＩＧＦ−１Ｒに対する結合親和性（Ｋａ）を有する。他の実施形態では、抗原結合タンパク質は、少なくとも１０７、少なくとも１０８、少なくとも１０９、または少なくとも１０１０のＫａを示す。
【０１１３】
別の実施形態では、本発明は、ＩＧＦ−１Ｒからの低い解離速度を有する、抗原結合タンパク質を提供する。一実施形態では、抗原結合タンパク質は、１×１０−４  ｓ−１以下のＫｏｆｆを有する。別の実施形態では、Ｋｏｆｆは、５×１０−５  ｓ−１以下である。別の実施形態では、Ｋｏｆｆは、Ｌ１Ｈ１、Ｌ２Ｈ２、Ｌ３Ｈ３、Ｌ４Ｈ４、Ｌ５Ｈ５、Ｌ６Ｈ６、Ｌ７Ｈ７、Ｌ８Ｈ８、Ｌ９Ｈ９、Ｌ１０Ｈ１０、Ｌ１１Ｈ１１、Ｌ１２Ｈ１２、Ｌ１３Ｈ１３、Ｌ１４Ｈ１４、Ｌ１５Ｈ１５、Ｌ１６Ｈ１６、Ｌ１７Ｈ１７、Ｌ１８Ｈ１８、Ｌ１９Ｈ１９、Ｌ２０Ｈ２０、Ｌ２１Ｈ２１、Ｌ２２Ｈ２２、Ｌ２３Ｈ２３、Ｌ２４Ｈ２４、Ｌ２５Ｈ２５、Ｌ２６Ｈ２６、Ｌ２７Ｈ２７、Ｌ２８Ｈ２８、Ｌ２９Ｈ２９、Ｌ３０Ｈ３０、Ｌ３１Ｈ３１、Ｌ３２Ｈ３２、Ｌ３３Ｈ３３、Ｌ３４Ｈ３４、Ｌ３５Ｈ３５、Ｌ３６Ｈ３６、Ｌ３７Ｈ３７、Ｌ３８Ｈ３８、Ｌ３９Ｈ３９、Ｌ４０Ｈ４０、Ｌ４１Ｈ４１、Ｌ４２Ｈ４２、Ｌ４３Ｈ４３、Ｌ４４Ｈ４４、Ｌ４５Ｈ４５、Ｌ４６Ｈ４６、Ｌ４７Ｈ４７、Ｌ４８Ｈ４８、Ｌ４９Ｈ４９、Ｌ５０Ｈ５０、Ｌ５１Ｈ５１、およびＬ５２Ｈ５２からなる組み合わせの群から選択される、軽鎖および重鎖可変ドメイン配列の組み合わせを有する抗体と、実質的に同じである。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、Ｌ１Ｈ１、Ｌ２Ｈ２、Ｌ３Ｈ３、Ｌ４Ｈ４、Ｌ５Ｈ５、Ｌ６Ｈ６、Ｌ７Ｈ７、Ｌ８Ｈ８、Ｌ９Ｈ９、Ｌ１０Ｈ１０、Ｌ１１Ｈ１１、Ｌ１２Ｈ１２、Ｌ１３Ｈ１３、Ｌ１４Ｈ１４、Ｌ１５Ｈ１５、Ｌ１６Ｈ１６、Ｌ１７Ｈ１７、Ｌ１８Ｈ１８、Ｌ１９Ｈ１９、Ｌ２０Ｈ２０、Ｌ２１Ｈ２１、Ｌ２２Ｈ２２、Ｌ２３Ｈ２３、Ｌ２４Ｈ２４、Ｌ２５Ｈ２５、Ｌ２６Ｈ２６、Ｌ２７Ｈ２７、Ｌ２８Ｈ２８、Ｌ２９Ｈ２９、Ｌ３０Ｈ３０、Ｌ３１Ｈ３１、Ｌ３２Ｈ３２、Ｌ３３Ｈ３３、Ｌ３４Ｈ３４、Ｌ３５Ｈ３５、Ｌ３６Ｈ３６、Ｌ３７Ｈ３７、Ｌ３８Ｈ３８、Ｌ３９Ｈ３９、Ｌ４０Ｈ４０、Ｌ４１Ｈ４１、Ｌ４２Ｈ４２、Ｌ４３Ｈ４３、Ｌ４４Ｈ４４、Ｌ４５Ｈ４５、Ｌ４６Ｈ４６、Ｌ４７Ｈ４７、Ｌ４８Ｈ４８、Ｌ４９Ｈ４９、Ｌ５０Ｈ５０、Ｌ５１Ｈ５１、およびＬ５２Ｈ５２からなる組み合わせの群から選択される、軽鎖および重鎖可変ドメイン配列の組み合わせを有する抗体からの１つ以上のＣＤＲを含む抗体と実質的に同じＫｏｆｆにより、ＩＧＦ−１Ｒに結合する。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、図２〜９に例証されるアミノ酸配列のうちの１つを含む抗体と実質的に同じＫｏｆｆにより、ＩＧＦ−１Ｒに結合する。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、図２〜９に例証されるアミノ酸配列のうちの１つを含む抗体からの１つ以上のＣＤＲを含む抗体と実質的に同じＫｏｆｆにより、ＩＧＦ−１Ｒに結合する。
【０１１４】
別の態様では、本発明は、ヒトＩＧＦ−１ＲのＬ２ドメインに結合する抗原結合タンパク質を提供する。Ｌ２ドメインに結合する抗原結合タンパク質は、当該技術分野で既知の任意の技法を使用して作製することができる。例えば、かかる抗原結合タンパク質は、完全長ＩＧＦ−１Ｒポリペプチド（例えば、膜結合型調製において）、ＩＧＦ−１Ｒの可溶性細胞外ドメイン断片（その例は、実施例１に提供される）、またはＬ２ドメインを含むもしくはＬ２ドメインからなるＩＧＦ−１Ｒ細胞外ドメインのより小さい断片（それらの例は、実施例１０に提供される）を使用して、単離することができる。そのように単離された抗原結合タンパク質は、当該技術分野で既知の任意の方法を使用して、それらの結合特異性を決定するためにスクリーニングすることができる（その例は、実施例１０に提供される）。
【０１１５】
別の態様では、本発明は、細胞の表面上で発現されるヒトＩＧＦ−１Ｒに結合する、およびそのように結合されるとき、その細胞の表面上のＩＧＦ−１Ｒの量における有意な低減を引き起こすことなく、その細胞中のＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達活性を阻害する、抗原結合タンパク質を提供する。細胞の表面上および／または内部のＩＧＦ−１Ｒの量を決定
または推定するための任意の方法を使用することができる。一実施形態では、本発明は、細胞の表面上で発現されるヒトＩＧＦ−１ＲのＬ２ドメインに結合する、およびそのように結合されるとき、その細胞の表面からのＩＧＦ−１Ｒの内在化の速度を有意に増加させることなく、その細胞中のＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達活性を阻害する、抗原結合タンパク質を提供する。他の実施形態では、抗原結合タンパク質のＩＧＦ−１Ｒ発現細胞への結合は、約７５％、５０％、４０％、３０％、２０％、１５％、１０％、５％、１％、または０．１％未満の細胞表面ＩＧＦ−１Ｒを内在化させる。別の態様では、抗原結合タンパク質のＩＧＦ−１Ｒ発現細胞への結合は、細胞表面上のＩＧＦ−１Ｒの量の段階的な低減を引き起し、その結果、細胞の抗原結合タンパク質との接触の数時間以内では、細胞表面ＩＧＦ−１Ｒにおける減少は、ほとんどまたは全く検出されないが、細胞の抗原結合タンパク質への曝露の数日または数週間後に、細胞表面ＩＧＦ−１Ｒにおける著しい減少が検出される。
【０１１６】
別の態様では、本発明は、インビトロまたはインビボ（例えば、ヒト対象に投与されるとき）で少なくとも１日の半減期を有する、抗原結合タンパク質を提供する。一実施形態では、抗原結合タンパク質は、少なくとも３日間の半減期を有する。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、４日間以上の半減期を有する。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、８日間以上の半減期を有する。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、誘導体化されていないまたは修飾されていない抗原結合タンパク質と比較してより長い半減期を有するように、誘導体化または修飾される。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、参照により組み込まれる２０００年２月２４日に公開された国際公開第ＷＯ００／０９５６０号に記載されるもの等の、血清半減期を増加させるための１つ以上の点突然変異を含有する。
【０１１７】
本発明は更に、多重特異性抗原結合タンパク質、例えば、二重特異性抗原結合タンパク質、例えば、２つの異なる抗原結合部位または領域を介して、ＩＧＦ−１Ｒの２つの異なるエピトープ、またはＩＧＦ−１Ｒのエピトープおよび別の分子のエピトープに結合する、抗原結合タンパク質を提供する。更に、本明細書に開示される二重特異性抗原結合タンパク質は、他の刊行物への参照により本明細書に記載されるものを含む、本明細書に記載される抗体のうちの１つからのＩＧＦ−１Ｒ結合部位、および本明細書に記載される抗体のうちの別のものからの第２のＩＧＦ−１Ｒ結合領域を含むことができる。代替的に、二重特異性抗原結合タンパク質は、本明細書に記載される抗体のうちの１つからの抗原結合部位、および当該技術分野で既知である別のＩＧＦ−１Ｒ抗体からの、または既知の方法もしくは本明細書に記載される方法によって調製される抗体からの、第２の抗原結合部位を含んでもよい。
【０１１８】
二重特異性抗体を調製する多数の方法は、当該技術分野で既知であり、２００１年４月２０日に出願された米国特許出願第０９／８３９，６３２号に考察される（参照により本明細書に組み込まれる）。かかる方法には、Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７、およびその他（米国特許第４，４７４，８９３号、米国特許第６，１０６，８３３号）によって記載されるハイブリッド−ハイブリドーマ、ならびに抗体断片の化学共役（Ｂｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ
２２９：８１、Ｇｌｅｎｎｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：２３６７、米国特許第６，０１０，９０２号）の使用が含まれる。更に、二重特異性抗体は、組換え手段を介して、例えば、ロイシンジッパー部分（すなわち、ヘテロ二量体を優先的に形成するＦｏｓおよびＪｕｎタンパク質からのもの、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ
ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｉｍｍｎｏｌ．１４８：１５４７）、または米国特許第５，５８２，９９６号に記載される、他の鍵と鍵穴相互作用ドメイン構造を使用することによって、産生することができる。更なる有用な技法には、上記のＫｏｒｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７、米国特許第５，９５９，０８３号、および米国特許第５，８０７，７０６号に
記載されるものが含まれる。
【０１１９】
別の態様では、本発明の抗原結合タンパク質は、抗体の誘導体を含む。誘導体化抗体は、具体的な使用における増加した半減期等の所望の特性を抗体に付与する、任意の分子または物質を含むことができる。誘導体化抗体は、例えば、検出可能（または標識）部分（例えば、放射性、比色性、抗原性、もしくは酵素性分子、検出可能（ｄｅｔｅｃａｂｌｅ）ビーズ（磁気または高電子密度（ｅｌｅｃｔｒｏｄｅｎｓｅ）（例えば、金）ビーズ等）、または別の分子に結合する分子（例えば、ビオチンまたはストレプトアビジン））、治療的もしくは診断的部分（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｏｒ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ｍｏｉｅｔｙ）（例えば、放射性、細胞傷害性、または薬学的活性部分）、または具体的な使用（例えば、ヒト対象等の、対象への投与、または他のインビボまたはインビトロ使用）のための抗体の適合性を増加させる分子を含むことができる。抗体を誘導体化するために使用することができる分子の例としては、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられる。抗体のアルブミン結合性およびＰＥＧ化誘導体は、当該技術分野で周知の技法を使用して調製することができる。一実施形態では、抗体は、トランスチレチン（ＴＴＲ）またはＴＴＲ変異体に共役させられるか、または別の方法で連結される。ＴＴＲまたはＴＴＲ変異体は、例えば、デキストラン、ポリ（ｎ−ビニルピロリドン（ｖｉｎｙｌ  ｐｙｕｒｒｏｌｉｄｏｎｅ））、ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコール（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）ホモ重合体、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシド共重合体、ポリオキシエチレン化ポリオール、およびポリビニルアルコールからなる群から選択される化学物質で、化学修飾することができる。米国特許出願第２００３０１９５１５４号。
【０１２０】
別の態様では、本発明は、本発明の抗原結合タンパク質を使用して、ＩＧＦ−１Ｒに結合する分子についてスクリーニングする方法を提供する。任意の好適なスクリーニング技法を使用することができる。一実施形態では、本発明の抗原結合タンパク質が結合するＩＧＦ−１Ｒ分子、またはその断片は、本発明の抗原結合タンパク質、および別の分子と接触させられ、ここで他方の分子は、それが抗原結合タンパク質のＩＧＦ−１Ｒへの結合を低減する場合、ＩＧＦ−１Ｒに結合している。抗原結合タンパク質の結合は、任意の好適な方法、例えば、ＥＬＩＳＡを使用して、検出することができる。抗原結合タンパク質のＩＧＦ−１Ｒへの結合の検出は、上に考察される抗原結合タンパク質を検出可能に標識することによって、単純化することができる。別の実施形態では、ＩＧＦ−１Ｒ結合分子は、それがＩＧＦ−１Ｒ、ＩＧＦ−１、および／またはＩＧＦ−２媒介型シグナル伝達を阻害するかどうかを決定するために、更に分析される。
核酸
【０１２１】
一態様では、本発明は、単離された核酸分子を提供する。核酸は、例えば、抗原結合タンパク質の全てまたは一部、例えば、本発明の抗体、またはその断片、誘導体、変異タンパク質、もしくは変異体の一方または両方の鎖をコードするポリヌクレオチド、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを特定する、分析する、突然変異させる、または増幅するための、ハイブリダイゼーションプローブ、ＰＣＲプライマー、または配列決定プライマーとして使用するのに十分なポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドの発現を阻害するためのアンチセンス核酸、ならびに前述のものの相補的配列を含む。核酸は、任意の長さであり得る。それらは、例えば、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、７５０、１，０００、１，５００、３，０００、５，０００、もしくはそれを超えるヌクレオチド長であり得、ならびに／あるいは１つ以上の追加的配列、例えば、調節配列を含むか、かつ／またはより大きい核酸、例えば、ベクターの一部であり得る。核酸は、１本鎖または２本鎖であり得、ＲＮＡおよび／またはＤＮＡヌクレオチド、ならびにそれらの人工変異体（例えば、ペプチド核酸）を含むことができる。
【０１２２】
抗体ポリペプチド（例えば、重鎖または軽鎖、可変ドメインのみ、または完全長）をコードする核酸は、ＩＧＦ−１Ｒで免疫付与されたマウスのＢ細胞から単離されてもよい。核酸は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）等の従来の手順によって単離されてもよい。
【０１２３】
図１は、図２および３に示される重鎖の可変領域および軽鎖可変領域をコードする核酸配列を提供する。当業者であれば、遺伝コードの縮重に起因して、図２〜９におけるポリペプチド配列の各々がまた、多数の他の核酸配列によってコードされることを理解するであろう。本発明は、各本発明の抗原結合タンパク質をコードする各縮重ヌクレオチド配列を提供する。
【０１２４】
本発明は更に、具体的なハイブリダイゼーション条件下で、他の核酸（例えば、図１のヌクレオチド配列を含む核酸）とハイブリッド形成する核酸を提供する。核酸をハイブリッド形成するための方法は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９），６．３．１−６．３．６を参照されたい。本明細書に定義されるとき、中程度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、５倍塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）、０．５％ＳＤＳ、１．０ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）を含有する予備洗浄溶液、約５０％ホルムアミド、６倍ＳＳＣのハイブリダイゼーション緩衝液、ならびに５５℃のハイブリダイゼーション温度（または４２℃のハイブリダイゼーション温度で、約５０％ホルムアミドを含有する溶液等の他の同様のハイブリダイゼーション溶液）、および０．５倍ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、６０℃の洗浄条件を使用する。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、４５℃の６倍ＳＳＣ中でハイブリッド形成し、続いて０．１倍ＳＳＣ、０．２％ＳＤＳ中、６８℃で１回以上の洗浄を行う。更に、当業者は、ハイブリダイゼーションおよび／または洗浄条件を操作して、相互に少なくとも６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９８または９９％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸が典型的に、相互にハイブリッド形成されたままとなるように、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーを増加または減少させることができる。ハイブリダイゼーション条件の選定に影響を及ぼす基本的なパラメータおよび好適な条件を考案するためのガイダンスは、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ，ａｎｄ  Ｍａｎｉａｔｉｓ（１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，ｃｈａｐｔｅｒｓ  ９  ａｎｄ  １１、およびＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９５，Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ｓｅｃｔｉｏｎｓ  ２．１０  ａｎｄ  ６．３−６．４）によって述べられ、それは当業者によって、例えば、ＤＮＡの長さおよび／または塩基組成に基づいて、容易に決定することができる。
【０１２５】
変化を、突然変異によって核酸中に導入し、それによって、それがコードするポリペプチド（例えば、抗原結合タンパク質）のアミノ酸配列における変化をもたらすことができる。突然変異は、当該技術分野で既知の任意の技法を使用して導入することができる。一実施形態では、１つ以上の具体的なアミノ酸残基は、例えば、部位特異的突然変異誘発プロトコルを使用して、変化させられる。別の実施形態では、１つ以上の無作為選択残基は、例えば、ランダム突然変異誘発プロトコルを使用して、変化させられる。それがどのように行われようと、突然変異体ポリペプチドを発現させ、所望の特性（例えば、ＩＧＦ−１Ｒへの結合、またはＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの結合の遮断）についてスクリーニングすることができる。
【０１２６】
突然変異は、それがコードするポリペプチドの生物活性を有意に変化させることなく、
核酸中に導入することができる。例えば、非必須アミノ酸残基におけるアミノ酸置換をもたらす、ヌクレオチド置換を行うことができる。一実施形態では、図１に提供されるヌクレオチド配列、またはその所望の断片、変異体、もしくは誘導体は、図２〜９において２つ以上の配列が異なる残基であるように示されるアミノ酸残基の１つ以上の欠失または置換を含むアミノ酸配列をコードするように、突然変異させられる。別の実施形態では、突然変異誘発は、アミノ酸を、図２〜９において２つ以上の配列が異なる残基であるように示される１つ以上のアミノ酸残基に隣接して挿入する。代替的に、１つ以上の突然変異を核酸中に導入して、それがコードするポリペプチドの生物活性（例えば、ＩＧＦ−１Ｒの結合、ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２を阻害すること等）を選択的に変化させることができる。例えば、突然変異は、生物活性を定量的または定性的に変化させることができる。定量的変化の例としては、活性を低減することまたは排除することが挙げられる。定性的変化の例としては、抗原結合タンパク質の抗原特異性を変化させることが挙げられる。
【０１２７】
別の態様では、本発明は、本発明の核酸配列の検出のためのプライマーまたはハイブリダイゼーションプローブとしての使用に好適な核酸分子を提供する。本発明の核酸分子は、本発明の完全長ポリペプチドをコードする核酸配列のほんの一部分、例えば、プローブもしくはプライマーとして使用することができる断片、または本発明のポリペプチドの活性部分（例えば、ＩＧＦ−１Ｒ結合部分）をコードする断片を含むことができる。
【０１２８】
本発明の核酸の配列に基づくプローブを使用して、その核酸、または同様の核酸、例えば、本発明のポリペプチドをコードする転写物を検出することができる。プローブは、標識群、例えば、放射性同位体、蛍光化合物、酵素、または酵素補因子を含むことができる。かかるプローブを使用して、ポリペプチドを発現する細胞を特定することができる。
【０１２９】
別の態様では、本発明は、本発明のポリペプチドまたはその一部分をコードする核酸を含む、ベクターを提供する。ベクターの例としては、プラスミド、ウイルスベクター、非エピソーム哺乳類ベクター、および発現ベクター、例えば、組換え発現ベクターが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３０】
本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞中での核酸の発現に好適な形態で、本発明の核酸を含むことができる。組換え発現ベクターは、発現に使用するための宿主細胞に基づいて選択される、１つ以上の調節配列を含み、それは発現対象の核酸配列に作動可能に連結される。調節配列には、多くのタイプの宿主細胞中でヌクレオチド配列の構成的発現を導く配列（例えば、ＳＶ４０初期遺伝子エンハンサー、Ｒｏｕｓ肉腫ウイルスプロモーター、およびサイトメガロウイルスプロモーター）、ある種の宿主細胞中のみでヌクレオチド配列の発現を導く配列（例えば、組織特異的調節配列、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれるＶｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１１：２８７、Ｍａｎｉａｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｓｃｉｅｎｃｅ
２３６：１２３７を参照されたい）、および具体的な治療または病態に反応して誘導性ヌクレオチド配列の発現を導く配列（例えば、哺乳類細胞中のメタロチオネイン（ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｉｎ）プロモーター、ならびに原核系および真核系の両方におけるｔｅｔ−反応性および／またはストレプトマイシン反応性プロモーター（同文献を参照されたい）が含まれる。発現ベクターの設計が、形質転換対象の宿主細胞の選定、所望されるタンパク質の発現のレベル等のような要因に依存し得ることは、当業者によって理解されるであろう。本発明の発現ベクターを宿主細胞中に導入して、それによって、本明細書に記載される核酸によってコードされる融合タンパク質またはペプチドを含む、タンパク質またはペプチドを産生することができる。
【０１３１】
別の態様では、本発明は、本発明の組換え発現ベクターが導入された宿主細胞を提供す
る。宿主細胞は、任意の原核性細胞（例えば、大腸菌）または真核性細胞（例えば、酵母、昆虫、または哺乳類細胞（例えば、ＣＨＯ細胞））であり得る。ベクターＤＮＡは、従来の形質転換またはトランスフェクション技法を介して、原核性または真核性細胞中に導入することができる。哺乳類細胞の安定なトランスフェクションのために、使用される発現ベクターおよびトランスフェクション技法に応じて、細胞の小さな画分のみが外来ＤＮＡをそれらのゲノム中に組み込み得ることが知られている。これらの組み込み体を特定および選択するために、選択可能マーカー（例えば、抗生物質への耐性について）をコードする遺伝子は、一般に、対象となる遺伝子と共に宿主細胞中に導入される。好ましい選択可能マーカーには、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、およびメトトレキサート等の、薬物への耐性を付与するマーカーが含まれる。導入核酸で安定にトランスフェクトされた細胞は、他の方法の中でも、薬物選択によって特定することができる（例えば、選択可能マーカー遺伝子を組み込んだ細胞が存続するであろう一方で、他の細胞は死滅する）。
適応
【０１３２】
一態様では、本発明は、対象を治療する方法を提供する。方法は、例えば、対象に対して一般に衛生的効果を有し、例えば、それは対象の想定寿命を増加させることができる。代替的に、本方法は、例えば、疾患、障害、病態、または疾病（「病態」）を、治療する、予防する、治癒させる、軽減する、または寛解させる（「治療する」）ことができる。本発明による治療対象の病態の中には、ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−２、および／またはＩＧＦ−１Ｒの不適切な発現または活性を特徴とする病態がある。幾つかのかかる病態において、発現または活性レベルは過度に高く、治療は、本明細書に記載されるＩＧＦ−１Ｒ拮抗薬を投与することを含む。他のかかる病態において、発現または活性レベルは過度に低く、治療は、本明細書に記載されるＩＧＦ−１Ｒ作動薬投与することを含む。
【０１３３】
本発明の方法および組成物を使用して治療することができる病態のタイプの一例は、細胞増殖が関与する病態、例えば、癌性病態である。故に、一実施形態では、本発明は、癌性病態を治療するための組成物および方法を提供する。癌性病態は、本明細書に含まれる組成物、例えば、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体、抗体断片、または抗体誘導体等のＩＧＦ−１Ｒ拮抗抗原結合タンパク質を使用して治療することができる、任意の癌性病態であり得る。癌性病態の例としては、例えば、急性リンパ芽球性白血病、副腎皮質癌、ＡＩＤＳ関連癌、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、肛門癌、小児小脳星状細胞腫、小児脳星状細胞腫、基底細胞癌、肝外胆管癌、膀胱癌、骨肉腫／悪性線維性組織球腫骨癌、脳腫瘍（例えば、脳幹神経膠腫、小脳星状細胞腫、脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、上衣腫、髄芽腫、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、視覚路および視床下部神経膠腫）、乳癌、気管支腺腫／カルチノイド、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、胃腸カルチノイド腫瘍、原発不明癌、原発性中枢神経系、小脳星状細胞腫、脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、子宮頸癌、小児癌、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、ユーイング肉腫ファミリーの腫瘍、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管癌、眼内黒色腫眼癌、網膜芽細胞腫眼癌、胆嚢癌、胃（Ｇａｓｔｒｉｃ）（胃（Ｓｔｏｍａｃｈ））癌、胃腸カルチノイド腫瘍、胚細胞腫瘍（例えば、頭蓋外、性腺外、および卵巣）、妊娠性絨毛性腫瘍、神経膠腫（例えば、成人、小児脳幹、小児脳星状細胞腫、小児視覚路および視床下部）、有毛細胞白血病、頭頚部癌、肝細胞（肝臓）癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、視床下部および視覚路神経膠腫、眼内黒色腫、膵島細胞癌（内分泌膵臓）、カポジ肉腫、腎臓（腎細胞）癌、喉頭癌、白血病（例えば、急性リンパ芽球性、急性骨髄性、慢性リンパ球性、慢性骨髄性、および有毛細胞）、口唇および口腔癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、リンパ腫（例えば、ＡＩＤＳ関連、バーキット、皮膚Ｔ細胞、ホジキン、非ホジキン、および原発性中枢神経系）、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、骨の悪性線維性組織球腫／骨肉腫、髄芽腫、黒色腫、眼内（眼）黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、原発不明転移性扁平上皮頸部癌、多発性内分泌腫瘍症、多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍、菌状息肉腫、骨髄異形成症候
群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、慢性骨髄増殖性疾患、鼻腔および副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、口腔癌、口腔咽頭癌、骨肉腫／骨の悪性線維性組織球腫、卵巣癌、上皮性卵巣癌、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍、膵臓癌、膵島細胞膵臓癌、副鼻腔および鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、褐色細胞腫、松果体芽腫、脳下垂体腫瘍、形質細胞腫瘍／多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、原発性中枢神経系リンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞（腎臓）癌、腎盂および尿管移行細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、軟部組織肉腫、子宮肉腫、セザリー症候群、非黒色腫皮膚癌、メルケル細胞皮膚癌、小腸癌、軟部組織肉腫、扁平上皮細胞癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、精巣癌、胸腺腫、胸腺癌、甲状腺癌、妊娠性絨毛性腫瘍、原発部位不明癌（Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｆ  Ｕｎｋｎｏｗｎ  Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｓｉｔｅ）、原発部位不明癌（Ｃａｎｃｅｒ  ｏｆ  Ｕｎｋｎｏｗｎ  Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｓｉｔｅ）、尿道癌、子宮内膜子宮癌、子宮肉腫、膣癌、視覚路および視床下部神経膠腫、外陰癌、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、ならびにウィルムス腫瘍が挙げられる。
【０１３４】
４つの異なる団体が、放射免疫測定法（「ＲＩＡ」）または免疫組織化学法（「ＩＨＣ」）によって、大半が乳管起源である総計４２５件の乳癌、および４８件の正常な組織または良性検体を研究してきた（Ｐａｐａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：３７３６−４０、Ｈａｐｐｅｒｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  １８３：４１２−１７、Ｅｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ５２：１７５−８４、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ４７：２９５−３０２、Ｓｃｈｎａｒｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  ８９：５０６−１３）。これらの研究は、５〜１０倍の桁で亢進したＩＧＦ−１Ｒ発現が、好ましい予後およびバイオマーカー（ＥＲ＋ＰＲ＋）に関連することを示唆し、エストロゲンおよびＩＧＦが、高分化型腫瘍の維持または進行において協同することを示唆している。同様に、エストロゲンは、ＥＲ＋ＭＣＦ−７乳癌細胞株の増殖および生存に必須であることが示されており、この前後関係において、ＩＧＦ−１Ｒは、エストロゲン治療によって上方調節される（Ｅｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ５２：１７５−８４に概説される）。故に、一実施形態では、本発明は、対象に、本明細書に記載される有効量のＩＧＦ−１Ｒ拮抗薬を投与することを含む、治療を必要とする対象における乳癌を治療する方法を提供する。別の実施形態では、本方法は、ホルモン阻害剤、例えば、エストロゲン阻害剤を投与することを更に含む。
【０１３５】
１２件の結腸腺腫、３６件の原発性結腸直腸腺癌および２７件の対応する転移、ならびに３４件の隣接した正常な組織の集団についての、遡及ＩＧＦ−１Ｒ  ＩＨＣ分析が報告されている（Ｈａｋａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｈｕｍａｎ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ．３０：１１２８−３３）。中程度から強力なＩＨＣ染色の頻度は、病期および腫瘍悪性度（０％正常対９３％転移）が高くなると共に、劇的に増加するように思われた。結果は、ＲＮＡｓｅプロテクションアッセイ（「ＲＰＡ」）によるＲＮＡ分析と一致している（Ｆｒｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｇｕｔ  ４４：７０４−０８）。故に、一実施形態では、本発明は、対象に、本明細書に記載される有効量のＩＧＦ−１Ｒ拮抗薬を投与することを含む、治療を必要とする対象における結腸癌を治療する方法を提供する。
【０１３６】
４０〜８０歳の男性における高い血漿ＩＧＦ−１および低下したＩＧＦｂｐ３は、増加した前立腺癌の危険性に関連する（Ｃｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｓｃｉｅｎｃｅ
２７９：５６３−６）。高いＩＧＦ−１は、乳癌（Ｈａｎｋｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｌａｎｃｅｔ  ３５１：１３９３−９６）、結腸癌（Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ
９１：６２０−２５）、および肺癌（Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ９１：１５１−５６）を含む、他の癌の危険性に関連する。トランスジェニックマウスモデルにおいて、腫瘍発生率は、多様な場所でＩＧＦ−１過剰発現によって増加する（Ｂｏｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７、発癌遺伝子１４：１７２５−３４、ＤｉＧｉｏｖａｎｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６０：１５６１−７０、ＤｉＧｉｏｖａｎｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  ９７：３４５５−６０、Ｈａｄｓｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９：８８９−９８）。これらのマウス研究は、血清および間質の両方での産生ＩＧＦ−１についての役割を指摘する。故に、一実施形態では、本発明は、対象に、本明細書に記載される有効量のＩＧＦ−１Ｒの拮抗薬を投与することを含む、治療を必要とする対象を治療する方法を提供し、ここで拮抗薬は、ＩＧＦ−１によるＩＧＦ−１Ｒの活性化を阻害する。別の実施形態では、対象は、癌を有する。別の実施形態では、対象は、腫瘍を有する。別の実施形態では、癌は、前立腺癌、乳癌、結腸癌、または肺癌である。
【０１３７】
骨は、体内のＩＧＦ−１の主要な源であることが観察されている。故に、一態様では、本発明は、対象の骨内のＩＧＦ−１Ｒを阻害するための組成物および方法を提供する。一実施形態では、本発明のＩＧＦ−１Ｒ阻害剤は、骨内の腫瘍を有するか、またはそれを発症する危険性がある対象に投与される。腫瘍は、例えば、原発性腫瘍または転移性腫瘍であり得る。治療は任意に、対象に、１つ以上の追加的な治療的（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）および／または緩和治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ）、例えば、抗腫瘍治療（例えば、化学療法、放射線療法、または抗ホルモン療法）または骨代謝を阻害する治療（例えば、デノスマブ（Ａｍｇｅｎ  Ｉｎｃ．，Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ，ＣＡ））を施すことを更に含む。
【０１３８】
ＩＧＦ−２は、多様な腫瘍および間質組織において過剰発現される。ＩＧＦ−２レベルは、原発性肝臓癌（Ｃａｒｉａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４８：６８４４−４９）および結腸の腺癌（Ｆｒｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｇｕｔ  ４４：７０４−０８）において、とりわけ高い（４０倍と同程度）ように思われる。過剰増殖障害の多くは、小児腫瘍の増加した発生率に関連する。出生前成長障害ベックウィズ‐ヴィーデマン症候群（ＢＷＳ）または片側過形成のいずれかを有する個人のうちの５〜１０パーセントが、腎芽腫、副腎癌、および神経芽細胞腫等の腫瘍を発症する（Ｍｏｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｔｏｄａｙ  ４：１１０−０５によって概説される）。これらの小児における腫瘍素因は、母系ＩＧＦ−２遺伝子刷り込みのモザイク喪失、またはＩＧＦ−２を担持する父系染色体腕（１１ｐ）の重複であるように思われる。双方の変化は、ＩＧＦ−２発現のレベルを増加させるであろう。モザイク片親性ダイソミーまたはＩＧＦ−２刷り込みの喪失の結果としてのＩＧＦ−２過剰発現はまた、ウィルムス腫瘍においても検出されている。ＩＧＦ−２遺伝子変化が幾つかの正常な組織においても生じるとしても、成長障害は、これらの小児において観察されず、恐らくは罹患した細胞の組織分布を反映している。母系ＩＧＦ−２遺伝子の刷り込みはまた、マウスにおいても生じ、ＩＧＦ−２過剰発現の影響は、ヒトの状況と一致している（Ｃａｒｉａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  １３：２２０−２６、Ｓｃｈｉｒｍａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：２５４９−５６、Ｈａｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １：２０３−０９）。腫瘍および臓器肥大の発生率は、過剰のＩＧＦ−２をトランスジェニック発現するマウスにおいて増加する（Ｃｈｒｉｓｔｏｆｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｎａｔｕｒｅ  ３６９：４１４−１８、Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔ
ｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  ９１：１０３６５−９、Ｗｏｌｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １３５：１８７７−８６、Ｂａｔｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  ７２：１１８９−９３、Ｈａｓｓａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６０：１０７０−７６）。局所ＩＧＦ−２過剰発現は、前立腺腫瘍、乳腺腫瘍、腸腫瘍、肝臓腫瘍、および表皮腫瘍の自発的出現を増加させる。肝臓プロモーターを使用した血漿特異的発現は、肝細胞癌およびリンパ腫を亢進する。故に、一実施形態では、本発明は、対象に、本明細書に記載される有効量のＩＧＦ−１Ｒの拮抗薬を投与することを含む、治療を必要とする対象を治療する方法を提供し、ここで拮抗薬は、ＩＧＦ−２によるＩＧＦ−１Ｒの活性化を阻害する。別の実施形態では、対象は、癌を有する。別の実施形態では、対象は、腫瘍を有する。別の実施形態では、対象は、肝臓癌、結腸の腺癌、ベックウィズ‐ヴィーデマン症候群、片側過形成、腎芽腫、副腎癌、神経芽細胞腫、母系ＩＧＦ−２遺伝子刷り込みのモザイク喪失、父系染色体腕（１１ｐ）の重複、増加したＩＧＦ−２発現、腫瘍（例えば、前立腺腫瘍、乳腺腫瘍、腸腫瘍、肝臓腫瘍、表皮腫瘍、またはウィルムス腫瘍）、臓器肥大、肝細胞癌、またはリンパ腫を有する。
【０１３９】
別の態様では、本発明は、癌が身体の別の部分に広がることを予防もしくは阻害する方法、または身体の別の部分に広がった癌を治療する方法を提供する。一実施形態では、癌は、所属リンパ節に広がっている。別の実施形態では、癌は、転移性である。原発腫瘍は、任意の種類の腫瘍、例えば、腺癌腫瘍（例えば、前立腺腺癌腫瘍、乳癌腫瘍、または腎細胞癌腫瘍）、非小細胞または小細胞肺癌腫瘍、甲状腺癌腫瘍等であり得る。転移性腫瘍の部位は、体内のいずれの場所でもあり得る。それは、例えば、骨、リンパ系、肺、脳、眼、皮膚、膵臓、または肝臓内であり得る。１つの具体的な実施形態では、腫瘍疾患を有する対象は、原発腫瘍が転移することを予防するように、本発明の有効量のＩＧＦ−１Ｒ阻害組成物で治療される。別の具体的な実施形態では、原発腫瘍を有する対象は、原発腫瘍が転移することを阻害するように、本発明の有効量のＩＧＦ−１Ｒ阻害組成物で治療される。別の具体的な実施形態では、転移性腫瘍を有する対象は、続発腫瘍の増殖または広がりが阻害されるように、本発明の有効量のＩＧＦ−１Ｒ阻害組成物で治療される。別の具体的な実施形態では、転移性腫瘍を有する対象は、続発腫瘍のサイズが縮小するように、本発明の有効量のＩＧＦ−１Ｒ阻害組成物で治療される。より具体的な実施形態では、原発腫瘍は、腺癌腫瘍、非小細胞肺腫瘍、小細胞肺腫瘍、または甲状腺癌である。別のより具体的な実施形態では、転移性腫瘍は、骨内である。別のより具体的な実施形態では、転移性腫瘍は、骨内で形成することを予防または阻害される。別のより具体的に規定される実施形態では、本方法は、対象を、本発明のＩＧＦ−１Ｒ阻害組成物、および１つ以上の他の治療（例えば、放射線、ホルモン療法、もしくは化学療法等の、癌細胞を死滅させるもしくは癌細胞の増殖を阻害する治療、またはデノスマブ等の、骨の代謝を阻害する治療）で治療することを含み、それらの非限定的例は、本明細書に提供される。１つ以上の他の治療には、例えば対象の具体的な病態に対する標準ケアおよび／または緩和ケアが含まれ得る。
【０１４０】
特定の理論に拘束されることなく、腫瘍細胞は、化学療法剤、放射線、および抗ホルモン療法のアポトーシス誘導活性に抵抗するために、ＰＩ３キナーゼ／Ａｋｔシグナル伝達経路に依存するように思われる。故に、一実施形態では、本発明は、対象に、本発明のＩＧＦ−１Ｒ拮抗薬、ならびに化学療法剤、放射線、および／または抗ホルモン療法を施すことを含む、治療を必要とする対象を治療する方法を提供する。この概念は、細胞培養モデルおよび齧歯類腫瘍モデルにおいて、アンチセンスおよびドミナントネガティブ突然変異によって、実験的に検証されている（Ｂａｓｅｒｇａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ  １３３２：Ｆ１０５−２６，Ｂａｓｅｒｇａ，２０００，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９：５５７４−８１によって概説さ
れる）。一実施形態では、化学療法剤は、有糸分裂阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗薬、挿入抗生物質（ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｉｎｇ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）、成長因子阻害剤、細胞周期阻害剤、酵素、トポイソメラーゼ阻害剤、抗生存剤（ａｎｔｉ−ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｇｅｎｔｓ）、生体応答調節剤、抗ホルモン剤、例えば、抗アンドロゲン剤、および抗血管新生薬からなる群から選択される。
【０１４１】
本発明のＩＧＦ−１受容体阻害剤と組み合わせて投与することができる化学療法剤の一例は、ＣＰＴ−１１である。ＣＰＴ−１１（塩酸イリノテカン三水和物（Ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ  ｈｙｄｏｒｃｈｌｏｒｉｄｅ  ｔｒｉｈｙｄｒａｔｅ））は、植物アルカロイドである、半合成で水溶性の誘導体カンプトテシンである。ＣＰＴ−１１およびＳＮ３８と呼ばれる関連する代謝産物は、トポイソメラーゼ１（ＴＯＰＯ１）を阻害する。この酵素は、巻き戻しを可能にし、ＤＮＡ複製が進行することを許容する、ＤＮＡにおける可逆的１本鎖切断を導入する。ＴＯＰＯ１の阻害は、ＤＮＡ複製後の１本鎖切断の再連結を予防し、大幅に増加した染色体断片化をもたらす。このＤＮＡ損傷は、ｐ５３およびゲノム完全性を監視する他の系の作用を通じたアポトーシスによる細胞死を促進する。ＣＰＴ−１１の細胞傷害性効果は、一般に、ＤＮＡを複製している（Ｓ期）細胞に限定される。静止状態の細胞は、概して影響を受けない。
【０１４２】
別の実施形態では、本発明は、治療を必要とする対象を、本発明の有効量のＩＧＦ−１Ｒ拮抗薬、および有効量のアポトーシス誘導剤で、治療することを提供する。
【０１４３】
別の実施形態では、ＭＭＰ−２（マトリックス−メタロプロテイナーゼ２）阻害剤、ＭＭＰ−９（マトリックス−メタロプロテイナーゼ９）阻害剤、および／またはＣＯＸ−ＩＩ（シクロオキシゲナーゼＩＩ）阻害剤等の、抗血管新生薬は、本発明の化合物と併用される。有用なＣＯＸ−ＩＩ阻害剤の例としては、ＣＥＬＥＢＲＥＸ（商標）（アレコキシブ）、ＢＥＸＴＲＡ（商標）（バルデコキシブ）、およびＶＩＯＸＸ（商標）（ロフェコキシブ）が挙げられる。有用なマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤の例は、第ＷＯ９６／３３１７２号（１９９６年１０月２４日に公開）、第ＷＯ９６／２７５８３号（１９９６年３月７日に公開）、欧州特許出願第９７３０４９７１．１号（１９９７年７月８日に出願）、欧州特許出願第９９３０８６１７．２号（１９９９年１０月２９日に出願）、国際公開第ＷＯ９８／０７６９７号（１９９８年２月２６日に公開）、国際公開第ＷＯ９８／０３５１６号（１９９８年１月２９日に公開）、国際公開第ＷＯ９８／３４９１８号（１９９８年８月１３日に公開）、国際公開第ＷＯ９８／３４９１５号（１９９８年８月１３日に公開）、国際公開第ＷＯ９８／３３７６８号（１９９８年８月６日に公開）、国際公開第ＷＯ９８／３０５６６号（１９９８年７月１６日に公開）、欧州特許公開第６０６，０４６号（１９９４年７月１３日に公開）、欧州特許公開第９３１，７８８号（１９９９年７月２８日に公開）、国際公開第ＷＯ９０／０５７１９号（１９９０年５月３１日に公開）、国際公開第ＷＯ９９／５２９１０号（１９９９年１０月２１日に公開）、国際公開第ＷＯ９９／５２８８９号（１９９９年１０月２１日に公開）、国際公開第ＷＯ９９／２９６６７号（１９９９年６月１７日に公開）、ＰＣＴ国際出願第ＰＣＴ／ＩＢ９８／０１１１３号（１９９８年７月２１日に出願）、欧州特許出願第９９３０２２３２．１号（１９９９年３月２５日に出願）、英国特許出願第９９１２９６１．１号（１９９９年６月３日に出願）、米国仮出願第６０／１４８，４６４号（１９９９年８月１２日に出願）、米国特許第５，８６３，９４９号（１９９９年１月２６日に発行）、米国特許第５，８６１，５１０号（１９９９年１月１９日に発行）、および欧州特許公開第７８０，３８６号（１９９７年６月２５日に公開）に記載され、それらの全ては、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。一実施形態では、ＭＭＰ阻害剤は、関節痛を示さない阻害剤である。別の実施形態では、ＭＭＰ阻害剤は、他のマトリックス−メタロプロテイナーゼ（すなわち、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−４、ＭＭＰ−５、ＭＭＰ−６、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、およびＭＭＰ−１３
）と比べて、ＭＭＰ−２および／またはＭＭＰ−９を選択的に阻害する。本発明において有用なＭＭＰ阻害剤の幾つかの特定例としては、ＡＧ−３３４０、ＲＯ  ３２−３５５５、ＲＳ  １３−０８３０、および次の一覧に列挙される化合物がある：３−［［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼン−スルホニル］−（１−ヒドロキシカルバモイル−シクロペンチル）−アミノ］−プロピオン酸；３−エキソ−３−［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ］−８−オキサ−ビシクロ［３．２．１］オクタン（ｏ−ｃｔａｎｅ）−３−カルボン酸ヒドロキシアミド、（２Ｒ、３Ｒ）１−［４−（２−クロロ−４−フルオロ−ベンジルオキシ（ｂｅｎ−ｚｙｌｏｘｙ））−ベンゼンスルホニル］−３−ヒドロキシ−３−メチル−ピペリジン−２−カルボン酸ヒドロキシアミド、４−［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ］−テトラヒドロ−ピラン（ｐｙ−ｒａｎ）−４−カルボン酸ヒドロキシアミド、３−［［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホン−イル］−（１−ヒドロキシカルバモイル−シクロブチル）−アミノ］−プロピオン酸、４−［４−（４−クロロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ］−テトラヒドロ−ピラン−４−カルボン酸（ｃａｒｂｏｘｙｌ−ｉｃ  ａｃｉｄ）ヒドロキシアミド、（Ｒ）３−［４−（４−クロロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ］−テトラヒドロ（ｔｅ−ｔｒａｈｙｄｒｏ）−ピラン−３−カルボン酸ヒドロキシアミド、（２Ｒ、３Ｒ）１−［４−（４−フルオロ−２−メチル−ベンジルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−３−ヒドロキシ−３−メチル−ピペリジン（ｐｉ−ｐｅｒｉｄｉｎｅ）−２−カルボン酸ヒドロキシアミド、３−［［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニル］−（１−ヒドロキシカルバモイル−１−メチル−エチル）−アミノ］−プロピオン酸、３−［［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニル］−（４−ヒドロキシカルバモイル−テトラヒドロ−−ピラン−４−イル）−アミノ］−プロピオン酸、３−エキソ−３−［４−（４−クロロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ（ｂｅｎｚｅｎｅｓｕ−ｌｆｏｎｙｌａｍｉｎｏ）］−８−オキサ−イシクロ（ｏｘａ−ｉｃｙｃｌｏ）［３．２．１］オクタン−３−カルボン酸ヒドロキシアミド、３−エンド−３−［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ］−８−オキサ−イシクロ（ｏｘａ−ｉｃｙｃｌｏ）［３．２．１］オクタン−３−カルボン酸ヒドロキシアミド、および（Ｒ）３−［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ベンゼンスルホニルアミノ（ｂ−ｅｎｚｅｎｅｓｕｌｆｏｎｙｌａｍｉｎｏ）］−テトラヒドロ−フラン−３−カルボン酸ヒドロキシアミド、ならびに化合物の薬学的に許容される塩、溶媒和物、誘導体、および他の調製物。
【０１４４】
ＰＥＴＮ遺伝子産物を不活性化する散発性突然変異は、ほとんどのヒト癌で比較的頻繁に生じる（Ｙａｍａｄａ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ  １１４：２３７５−８２、Ｈｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔ  ９３：２４３−５１）。ＰＴＥＮの喪失は、ＩＧＦ−１Ｒおよび他の源から発する刺激シグナルを下方調節する能力の喪失を通じて、Ａｋｔリン酸化状態を存続させる。ｐ５３腫瘍抑制因子の状況はまた、ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達系の活性に影響を及ぼす。基底状態で、ＩＧＦ−１Ｒの基礎転写または構成的転写は、ｐ５３によって、間接的機構を介して抑圧される。Ａｋｔの活性化は、ｍｄｍ２のリン酸化を促進し、それは次いでｐ５３腫瘍抑制因子を結合し、その分解を促進して（Ｍａｙｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，ＴＩＢＳ  ２７：４６２−６７）、増加したＩＧＦ−１Ｒ発現をもたらす。ｐ５３が突然変異によって不活性化されるとき、同様の結果が観察される。Ｓａｏｓ−２（ヒト骨肉腫細胞株）およびＲＤ（横紋筋肉腫細胞株）において一過性で発現されるとき、野生型ｐ５３は、共トランスフェクトされたＩＧＦ−１Ｒプロモーター構築物の活性を抑制することが可能である一方で、腫瘍由来の、ｐ５３の突然変異体バージョンは、何の効果も有さない。ＩＧＦ−１Ｒの増加したレベルが、悪性細胞中のｐ５３喪失に関連する、アポトーシスへの耐性を促進することが提案されている（Ｗｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  ５７：９３２−４２）。故に、一実施形態では、本発明は、対象に、本明細書に記載される有効量のＩＧＦ−１Ｒ拮抗薬を投与することを
含む、治療を必要とする対象における、癌性病態を治療する方法を提供し、ここで癌性病態は、ｐ５３の低減された発現または活性を有する細胞を特徴とする。
【０１４５】
ＷＴ１（ウィルムス腎臓腫瘍抑制因子１タンパク質）もまた、ＩＧＦ−１Ｒプロモーターを結合および抑圧することが示されている。故に、一実施形態では、本発明は、対象に、本明細書に記載される有効量のＩＧＦ−１Ｒ拮抗薬を投与することを含む、治療を必要とする対象における、癌性病態を治療する方法を提供し、ここで癌性病態は、ＷＴ１の低減された発現または活性を特徴とする。
【０１４６】
正常な線維芽細胞の増殖は、Ｒａｓ／Ｒａｆ／Ｍａｐキナーゼを強化し、細胞周期進入（Ｇ０〜Ｇ１移行）を助長するために、規定の培養条件下で、ＩＧＦおよび間質成長因子（例えば、ＰＤＧＦ、ＥＧＦ）の組み合わされた作用を要求することが示されている。ＩＧＦ−１Ｒ（−／−）マウスに由来する線維芽細胞は、成長因子単独、またはＲａｓ／Ｒａｆ／Ｍａｐキナーゼ経路を活性化するほとんどの発癌遺伝子（例えば、発癌性Ｒａｓ）に応答しない。故に、一実施形態では、本発明は、対象に、本明細書に記載されるＩＧＦ−１Ｒ拮抗薬、ならびに成長因子受容体チロシンキナーゼ、例えば、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ−２、ｂｃｒ−ａｂｌ、ＶＥＧＦＲ、キット、ｒａｆ、ｍＴＯＲ、ＣＤＫ１／２、ＶＥＧＦＲ２、ＰＫＣβ、Ｍｅｋ、および／またはＫＤＲ等の、成長因子および／または成長因子受容体を標的とする薬剤を投与することを含む、治療を必要とする対象を治療する方法を提供する。かかる成長因子および／または受容体を標的とする分子の例としては、パニツムマブ（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ／Ａｍｇｅｎ，Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ，ＣＡ）、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ
Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）、ＧＬＥＥＶＥＣ（商標）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ，Ｅａｓｔ
Ｈａｎｏｖｅｒ，ＮＪ）、ＩＲＥＳＳＡ（商標）（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ）、ＥＲＢＩＴＵＸ（商標）、（ＩｍＣｌｏｎｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、ＡＶＡＳＴＩＮ（商標）、（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＰＴＫ７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＳＵ１１２４８（Ｐｆｉｚｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、ＴＡＲＣＥＶＡ（商標）（ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）、４３−９００６（Ｂａｙｅｒ，Ｗｅｓｔ  Ｈａｖｅｎ，ＣＴ）、ＣＣＩ−７７９（Ｗｙｅｔｈ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＮＪ）、ＲＡＤ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＢＭＳ−３８７０３２（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、ＩＭＣ−１Ｃ１１（ＩｍＣｌｏｎｅ）、ＬＹ３３３５３１（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）、ＰＤ  １８４３５２（Ｐｆｉｚｅｒ）、２Ｃ４（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、およびＧＷ２０１６（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ，Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ，ＮＣ）が挙げられる。
【０１４７】
血液悪性腫瘍におけるＩＧＦ−１Ｒの役割は、（Ｎｏｖａｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｉｎｓｕｌｉｎ−Ｌｉｋｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ  ａｎｄ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ  ｉｎ  Ｉｎｓｕｌｉｎ−Ｌｉｋｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ，ＬｅＲｏｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．ｓ，Ｌａｎｄｅｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）によって概説されている。造血器悪性腫瘍におけるＩＧＦ−１Ｒについての機能的役割は、例えば、培養においてＩＧＦ−１Ｒモノクローナル抗体の、形質転換細胞増殖を遮断する能力によって実証される。ＩＧＦ−Ｉは、新鮮に単離されたヒト急性骨髄性白血病芽球および急性リンパ芽球性白血病芽球の増殖を増強することが見出されている。Ｔ細胞悪性腫瘍に関して、ＩＧＦ−Ｉは、ｐｒｅ−Ｔ細胞表現型を担持するマウスリンパ腫細胞の増殖に影響を及ぼすことが示されており、未成熟および成熟原発性ヒトＴ系列急性リンパ芽球性白血病細胞は、多数のＩＧＦ−１Ｒを発現することが見出された。故に、一実施形態では、本発明は、対象に、本明細書に記載されるＩＧＦ−１Ｒの拮抗薬を投与することを含む、治療を必要とする対象における血液悪性腫瘍を治療する方法を提供する。別の実施形態では、悪性腫瘍は、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病
、またはＴ細胞悪性腫瘍である。
【０１４８】
別の態様では、本発明は、本発明の組成物および／または治療法を使用した治療から便益を得る可能性がより高い対象を特定する方法を提供する。かかる方法は、介護者が、治療レジメンを特定の対象の必要性に合わせてよりよく調整することを可能にし、無効なまたは逆効果の治療クールの可能性を低減し得る。一実施形態では、本発明は、対象における標的細胞型がＩＧＦ−１Ｒを発現するかどうかを決定することを含む、対象が、本明細書に記載される組成物または方法を使用した治療に対する候補であるかどうかを決定する方法を提供し、ここで標的細胞型が、ＩＧＦ−１Ｒを発現する場合、対象は、治療に対する候補である。別の実施形態では、本方法は、１標的細胞当たりのＩＧＦ−１Ｒ分子のおよその平均数を決定することを含み、ここで１細胞当たり１０２、１０３、１０４、１０５、または１０６  ＩＧＦ−１Ｒは、対象が治療に対する候補であることを示す。１標的細胞当たりのＩＧＦ−１Ｒ分子のおよその平均数は、当該技術分野で既知の任意の技法を使用して、例えば、ＩＧＦ−１Ｒ結合分子を有する標的細胞型の細胞を含む試料を染色すること、および試料に結合されたＩＧＦ−１Ｒ結合分子の量を検出することによって決定することができ、ここで検出されたＩＧＦ−１Ｒ結合分子の量は、試料中のＩＧＦ−１Ｒ分子の平均数に比例する。別の実施形態では、本方法は、１標的細胞当たりのＩＧＦ−１Ｒ分子のおよその平均数を参照標準と比較することを含み、ここで１標的細胞当たりのＩＧＦ−１Ｒ分子のおよその平均数が、参照標準よりも大きい場合、対象は、本発明の組成物および／または治療法を使用した治療から便益を得る可能性がより高い。別の実施形態では、標的細胞型は、癌性細胞型である。別の実施形態では、標的細胞型は、結腸癌細胞型、乳癌細胞型、ＮＳＣＬＣ細胞型、または白血病細胞型である。
【０１４９】
別の実施形態では、治療に対する候補である対象は、標的細胞型におけるまたは標的細胞型の層における、ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２を検出することによって特定される。別の実施形態では、標的細胞型は、癌性細胞型である。別の実施形態では、標的細胞型は、結腸癌細胞型、乳癌細胞型、ＮＳＣＬＣ細胞型、または白血病細胞型である。
【０１５０】
別の実施形態では、治療に対する候補である対象は、標的細胞型（例えば、腫瘍または他の癌性組織）における活性ＩＧＦ−１Ｒの媒介型シグナル伝達を検出することによって特定され、ここで標的細胞型におけるＩＧＦ−１Ｒ媒介型シグナル伝達は、対象が治療に対する候補であることを示す。例えば、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＲＳアダプター、Ａｋｔ等のＰＩ３／Ａｋｔ経路における分子等の、ＩＧＦ−１Ｒ依存性変化について監視することができる分子の例は、図１０に示される。かかる分子は、例えば、リン酸化状況における変化、例えば、リン酸化における増加について、監視することができる。これらのタンパク質マーカーの活性型を認識するリン酸化特異的抗体は、高度に発達しており、これらの試薬は、実験系における免疫ブロット検出のために確実であることが判明している。
【０１５１】
別の実施形態では、対象における（例えば、腫瘍組織または他の癌性組織対象における）組織が、対象が本発明の治療法および組成物を使用した治療に好ましく反応する可能性がより高いまたは可能性がより低いと特定する分子マーカーを有するかどうかを決定するための、方法および組成物が提供される。任意のかかる分子マーカーを使用することができる。一実施形態では、分子マーカーは、ＥＷＳ遺伝子および転写因子が関与する染色体異常等の、染色体異常（例えば、腫瘍由来の組織における）である。１つの具体的な実施形態では、分子マーカーは、腫瘍または他の癌性組織におけるＥＷＳ−ＦＬＩ染色体転座である。かかる転座は、当該技術分野で既知の任意の方法を使用して検出することができる（例えば、各々、参照によりその全体が全目的で本明細書に組み込まれるＧｉｏｖａｎｎｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．９４：４８９−９６、Ｄｅｌａｔｔｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＮＥＪＭ  ３３１：２９４−９９、およびＺｏｕｂｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ７０：９０８−１
３を参照されたい）。かかる検出方法の例としては、細胞学的分析、蛍光インサイツハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）、ＥＷＳ−ＦＬＩハイブリッド遺伝子の配列分析、ＥＷＳ−ＦＬＩハイブリッド遺伝子の転写産物の検出および／もしくは定量化（例えば、ＲＴ−ＰＣＲ等のＰＣＲに基づく技法、またはインサイツハイブリダイゼーションもしくはノーザンブロット等のハイブリダイゼーションに基づく技法を使用する）、ＥＷＳ−ＦＬＩハイブリッド遺伝子のポリペプチド産物の検出および／もしくは定量化（例えば、インサイツ染色またはウェスタンブロット等の抗体に基づく技法を使用する）、ＥＷＳ−ＦＬＩハイブリッド遺伝子産物に関連する分子もしくは活性の検出および／もしくは定量化、ＥＷＳ−ＦＬＩハイブリッド遺伝子産物の活性に依存する分子もしくは活性の検出および／もしくは定量化、またはのＥＷＳ−ＦＬＩハイブリッド遺伝子産物の活性によって影響を受ける分子もしくは活性検出および／もしくは定量化が挙げられる。別の具体的な実施形態では、腫瘍または他の癌性組織におけるＥＷＳ−ＦＬＩハイブリッド遺伝子産物（例えば、転写の産物または翻訳の産物）の検出は、その腫瘍または癌性組織が、ＥＷＳ−ＦＬＩハイブリッド遺伝子産物が検出されない腫瘍または他の癌性組織よりも、抗ＩＧＦ−１受容体阻害剤、またはＩＧＦ−１受容体シグナル伝達経路を通じたシグナル伝達の別の阻害剤を使用した治療に反応する可能性がより高いことを示す。別の具体的な実施形態では、ＥＷＳ−ＦＬＩ染色体転座を含有する腫瘍または他の癌性組織に由来する試料は、それがＥＷＳ−ＦＬＩハイブリッド遺伝子産物を発現するかどうかを決定するために試験される。ＥＷＳ−ＦＬＩハイブリッド遺伝子産物の検出は、腫瘍または癌性組織が、抗ＩＧＦ−１受容体治療、またはＩＧＦ−１受容体シグナル伝達経路を通じたシグナル伝達の別の阻害剤を使用した治療に反応する可能性がより高いことを示す。
【０１５２】
別の実施形態では、分子マーカーは、シグナル伝達分子における、例えば、キナーゼにおける、突然変異である。突然変異は、例えば、シグナル伝達分子の活性を増加させる、シグナル伝達分子の活性を減少させる、および／またはシグナル伝達分子の活性のリガンド特異性、基質特異性、タイミング、もしくは場所を変化させることができる。幾つかの実施形態では、シグナル伝達分子は、ＲＡＳであり、突然変異は、活性化突然変異である。ＲＡＳ突然変異は、全てのヒト腫瘍の約３分の１において見出される。活性化ＲＡＳ突然変異の例としては、コドン１２、１３、および６１に対する突然変異が挙げられる。活性化ＲＡＳ突然変異の他の例としては、コドン１０、１１、１５、１８、および２２における突然変異が挙げられる。他のタイプの突然変異または他の変化もまた、ＲＡＳ分子を通じたシグナル伝達における不適切な増加を引き起こし得る。かかる他のタイプの変化の例としては、遺伝子増幅、過剰発現、またはＲＡＳ経路の上流活性化が挙げられ、例えば、食道腺癌のおよそ４０％は、増加したＫＲＡＳシグナル伝達をもたらす増幅されたＫＲＡＳ遺伝子を有し、高レベルのＲＡＳ活性は、全ての乳癌腫瘍の約半分において見出され、それは表皮成長因子およびＨＥＲ−２の発現に関連するが、それでもＲＡＳ突然変異は、これらの腫瘍においてまれである。故に、本発明は、亢進したＲＡＳ活性を有する対象を、ＩＧＦ−１受容体シグナル伝達の阻害剤を使用した治療に好ましく反応する可能性がより高いとして特定するための方法、および／またはかかる対象をＩＧＦ−１受容体シグナル伝達の阻害剤で治療する方法を提供する。
【０１５３】
１つの具体的な実施形態では、対象が、少なくとも１つの腫瘍の少なくとも幾つかの細胞において活性化ＫＲＡＳ突然変異を有するかどうかが決定され、ここで活性化ＫＲＡＳ突然変異の存在は、対象が、ＩＧＦ−１受容体シグナル伝達の阻害剤を使用した腫瘍の治療に反応する可能性がより高いことを示す。活性化ＫＲＡＳ突然変異は、当該技術分野で既知のいずれか、例えば、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｅ、およびＧ１２Ｖ等の、コドン１０、１１、１２、１３、１５、１８、２２、５９、６１、および６３に影響を及ぼすものであり得る。ＫＲＡＳ突然変異は、ヒト腫瘍において見出されるＲＡＳ突然変異の最も優勢なタイプである。膵臓の腫瘍（そのうちの７２〜９０％が活性化ＫＲＡＳ突然変異を有する）、結腸または直腸（３２〜５７％）、肺（１５〜５０％）、子宮内膜（５〜５０
％）、胆嚢（１４〜３８％）、および精巣（９〜１２％）、ならびに多発性骨髄腫腫瘍（１６〜３３％）を含めて、多くの腫瘍タイプが、活性化ＫＲＡＳ突然変異を含むことが知られる。Ｆｒｉｄａｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  １７５６：１２７−４４。故に、本発明の種々の実施形態では、対象における腫瘍の少なくとも幾つかの細胞中のＫＲＡＳ突然変異を検出するため、および／または対象をＩＧＦ−１受容体シグナル伝達の阻害剤で治療するための、方法および組成物が提供される。具体的な実施形態では、対象は、膵臓、結腸、直腸、肺、子宮内膜、胆嚢、もしくは精巣の腫瘍、または多発性骨髄腫腫瘍を有する。
【０１５４】
別の実施形態では、ＫＲＡＳの野生型対立遺伝子を有する腫瘍が、ＩＧＦ−１受容体阻害剤で治療される。１つの具体的な実施形態では、腫瘍はまた、パニツムマブまたはセツキシマブ等の、ＥＧＦ受容体阻害剤で治療される。別の具体的な実施形態では、腫瘍は、パニツムマブまたはセツキシマブ等の、ＥＧＦ受容体阻害剤で以前に治療され、ＥＧＦ受容体阻害剤（以前に使用された同じＥＧＦ受容体阻害剤、または別の阻害剤）およびＩＧＦ−１受容体阻害剤の両方で現在治療される。別の具体的な実施形態では、治療される腫瘍は、結腸直腸腫瘍である。
【０１５５】
別の実施形態では、かどうかが決定される。対象における腫瘍から採られた細胞の幾らかの画分は、低減されたＰＴＥＮ活性を有し、ここで低減されたＰＴＥＮ活性は、腫瘍が、ＩＧＦ−１受容体シグナル伝達の阻害に反応する可能性がより低いことを示す。ＰＴＥＮ活性における低減は、任意の好適な方法を使用して検出することができる。例えば、発現レベルは、ＰＴＥＮ  ＲＮＡレベル（例えば、ノーザンブロットまたはインサイツハイブリダイゼーション等のハイブリダイゼーションに基づく方法を介して）、タンパク質レベル（例えば、検出可能に標識された抗ＰＴＥＮ抗体等の検出可能なＰＴＥＮ結合剤を使用して）、またはＰＴＥＮ酵素活性（例えば、他の分子に対するその効果を直接的もしくは間接的に通じたＰＴＥＮ活性を測定することによって、またはＰＴＥＮ、例えば、ＰＴＥＮ  Ｄ３３１Ｇにおける部分的もしくは完全な機能喪失型突然変異等の、ＰＴＥＮ活性の低減を引き起こす突然変異を検出することによって）を検出する方法を使用して、検出することができる。例えば、各々、参照によりその全体が全目的で本明細書に組み込まれる、Ｔｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５７：５２２１−２５、Ｂｏｎｎｅａｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｈｕｍａｎ  Ｍｕｔａｔｉｏｎ  １６：１０９−２２を参照されたい。
【０１５６】
別の態様では、本発明は、患者が、ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２依存性シグナル伝達を低減するレジメンでの治療に対する良好な候補であるかどうかを決定するための、組成物、キット、および方法を提供する。患者が、治療レジメンを開始するための（またはすでに開始した治療レジメンを継続するための）良好な候補であるかどうかを決定することは、それが患者および医療専門家が、より十分な情報に基づいたより有効な治療決定を下すことを可能にするため望ましいことが、当該技術分野で理解される。膵臓癌等の侵攻性のまたは致命的な疾患に対する治療レジメンに対する良好な候補を、良好でない候補から識別することは、特に望ましい。治療レジメンは、ＩＧＦ−１およびまたはＩＧＦ−２の上流または下流の１つ以上の分子を標的とするか、ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２自体のいずれかまたは両方を標的とすることができる。当該技術分野で既知のまたは本明細書に記載される、任意のかかる治療を使用することができる。一実施形態では、治療は、ＩＧＦ−１ＲまたはＩＧＦ−１Ｒ／インスリン受容体ハイブリッドを標的とする。かかる治療の例としては、小分子（ＯＳＩ−９０６、リンシチニブ、ＢＭＳ−７５４８０７、ＩＮＳＭ−１８、ＸＬ２２８、ＡＸＬ１７１７、ＢＭＳ−５３６９２４、ＮＶＰ−ＡＤＷ７４２、ＧＳＫ６２１６５９Ａ、ＧＳＫ１８３８７０５Ａ、Ａ−９２８６０５、ＡＺＤ４２５３、ＴＡＥ２２６、またはＡＧ１０２４等）および抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体（ガニツマブ、ＡＭＧ  ４７９、フィギツムマブ、ＣＰ−７５１，８７１、シクスツムマブ、ＩＭＣ−Ａ
１２、ダロツズマブ、ＭＫ０６４６、ＲＧ１５０７、ロバツムマブ、ＳＣＨ  ７１７４５４、ＡＶＥ−１６４２ａ、ＭＥＤＩ−５７３、ＢＩＩＢ０２２、ｒｈｕＭａｂ  ＩＧＦＲ、Ｌ１Ｈ１、Ｌ２Ｈ２、Ｌ３Ｈ３、Ｌ４Ｈ４、Ｌ５Ｈ５、Ｌ６Ｈ６、Ｌ７Ｈ７、Ｌ８Ｈ８、Ｌ９Ｈ９、Ｌ１０Ｈ１０、Ｌ１１Ｈ１１、Ｌ１２Ｈ１２、Ｌ１３Ｈ１３、Ｌ１４Ｈ１４、Ｌ１５Ｈ１５、Ｌ１６Ｈ１６、Ｌ１７Ｈ１７、Ｌ１８Ｈ１８、Ｌ１９Ｈ１９、Ｌ２０Ｈ２０、Ｌ２１Ｈ２１、Ｌ２２Ｈ２２、Ｌ２３Ｈ２３、Ｌ２４Ｈ２４、Ｌ２５Ｈ２５、Ｌ２６Ｈ２６、Ｌ２７Ｈ２７、Ｌ２８Ｈ２８、Ｌ２９Ｈ２９、Ｌ３０Ｈ３０、Ｌ３１Ｈ３１、Ｌ３２Ｈ３２、Ｌ３３Ｈ３３、Ｌ３４Ｈ３４、Ｌ３５Ｈ３５、Ｌ３６Ｈ３６、Ｌ３７Ｈ３７、Ｌ３８Ｈ３８、Ｌ３９Ｈ３９、Ｌ４０Ｈ４０、Ｌ４１Ｈ４１、Ｌ４２Ｈ４２、Ｌ４３Ｈ４３、Ｌ４４Ｈ４４、Ｌ４５Ｈ４５、Ｌ４６Ｈ４６、Ｌ４７Ｈ４７、Ｌ４８Ｈ４８、Ｌ４９Ｈ４９、Ｌ５０Ｈ５０、Ｌ５１Ｈ５１、もしくはＬ５２Ｈ５２、またはそれらの断片もしくは誘導体等）が挙げられる。
【０１５７】
一実施形態では、本発明は、患者の血清中の循環バイオマーカーの濃度を決定することを含む、患者における癌性病態が、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２によって媒介されるシグナル伝達を低減する治療に反応する可能性が高いかどうかを決定する方法を提供し、ここで循環バイオマーカーの量は、治療への反応を予測する。かかるマーカーの例としては、総ＩＧＦ−１、遊離ＩＧＦ−１、総ＩＧＦ−２、遊離ＩＧＦ−２、ＩＧＦＢＰ−１、ＩＧＦＢＰ−２、ＩＧＦＢＰ−３、ＩＧＦＢＰ−４、ＩＧＦＢＰ−５、ＩＧＦＢＰ−６、およびＩＧＦＢＰ−７が挙げられる。別の実施形態では、患者のＩＧＦＢＰ−１および／またはＩＧＦＢＰ−２レベルが、同じ病態を有する患者についての平均よりも低い場合、患者は、治療に対するより良好な候補である。別の実施形態では、患者の総ＩＧＦ−１、遊離ＩＧＦ−１、総ＩＧＦ−２、遊離ＩＧＦ−２、ＩＧＦＢＰ−３、および／またはＩＧＦＢＰ−４が、同じ病態を有する患者についての平均よりも高い場合、患者は、治療に対するより良好な候補である。
【０１５８】
別の実施形態では、これらのマーカーのうちの２、３、４つの、またはそれを超えるレベルが決定される。合わせて、これらの２つ以上のマーカーは、複合マーカーとして使用される。複合マーカーには、例えば、総ＩＧＦ−１、遊離ＩＧＦ−１、総ＩＧＦ−２、遊離ＩＧＦ−２、ＩＧＦ−２タンパク質配列を含むペプチド、ＩＧＦＢＰ−１、ＩＧＦＢＰ−２、ＩＧＦＢＰ−３、ＩＧＦＢＰ−４、ＩＧＦＢＰ−５、ＩＧＦＢＰ−６および／またはＩＧＦＢＰ−７の相対量が含まれ得る。特定の複合マーカーの例としては、例えば、ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２、ＩＧＦ−１およびＩＧＦＢＰ−１、ＩＧＦ−１およびＩＧＦＢＰ−２、ＩＧＦ−１およびＩＧＦＢＰ−３、ＩＧＦ−１およびＩＧＦＢＰ−４、ＩＧＦ−１およびＩＧＦＢＰ−５、ＩＧＦ−１およびＩＧＦＢＰ−６、ＩＧＦ−１およびＩＧＦＢＰ−７、ＩＧＦ−２およびＩＧＦＢＰ−１、ＩＧＦ−２およびＩＧＦＢＰ−２、ＩＧＦ−２およびＩＧＦＢＰ−３、ＩＧＦ−２およびＩＧＦＢＰ−４、ＩＧＦ−２およびＩＧＦＢＰ−５、ＩＧＦ−２およびＩＧＦＢＰ−６、ＩＧＦ−２およびＩＧＦＢＰ−７の間の、ならびに種々の結合タンパク質、例えば、ＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦＢＰ−３の間の比率または定量的差異が挙げられる。
【０１５９】
循環バイオマーカーの濃度を決定する任意の方法を使用することができる。一実施形態では、循環バイオマーカーに結合する検出可能分子が使用される。かかる分子の例としては、検出可能部分に任意に結合された、抗体または抗体の断片等のタンパク質が挙げられる。
【０１６０】
ＩＧＦ−１を検出するための市販のキットの例としては、Ｅｎｚｏ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｆａｒｍｉｎｇｄａｌｅ，ＮＹ）、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍｓ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｗｅｂｓｔｅｒ，ＴＸ）、Ａｂｎｏｖａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｔａｉｐｅｉ  Ｃｉｔｙ，Ｔａｉｗａｎ）、Ａｎｔｉｇｅｎｉｘ  
Ａｍｅｒｉｃａ  Ｉｎｃ．（Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ  Ｓｔａｔｉｏｎ，ＮＹ）、ＡＲＰ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｃ．（Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）、ＢｉｏＶｅｎｄｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｉｎｃ．（Ｃａｎｄｌｅｒ，ＮＣ）、Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｃａｎｔｏｎ，ＭＡ）、ＤＲＧ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．（Ｍｏｕｎｔａｉｎｓｉｄｅ，ＮＪ）、ＥＩＡａｂ＆ＵＳＣＮＬＩＦＥ（Ｗｕｈａｎ  ＥＩＡａｂ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）（Ｗｕｈａｎ，Ｃｈｉｎａ）、ＧｅｎＷａｙ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＩＢＬ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＧｍｂＨ（Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）、およびＲａｙｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｎｏｒｃｒｏｓｓ，ＧＡ）からのＥＬＩＳＡキットが挙げられる。
【０１６１】
ＩＧＦ−２を検出するための市販のキットの例としては、Ａｎｔｉｇｅｎｉｘ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ｉｎｃ．（Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ  Ｓｔａｔｉｏｎ，ＮＹ）、ＢｉｏＶｅｎｄｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｉｎｃ．（Ｃａｎｄｌｅｒ，ＮＣ）、およびＤｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｗｅｂｓｔｅｒ，ＴＸ）からのＥＬＩＳＡキットが挙げられる。
【０１６２】
ＩＧＦＢＰ−１を検出するための市販のキットの例としては、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）、ＢｉｏＶｅｎｄｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｉｎｃ．（Ｃａｎｄｌｅｒ，ＮＣ）、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｗｅｂｓｔｅｒ，ＴＸ）、Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｃａｎｔｏｎ，ＭＡ）、およびＲａｙｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｎｏｒｃｒｏｓｓ，ＧＡ）からのＥＬＩＳＡキットが挙げられる。
【０１６３】
ＩＧＦＢＰ−２を検出するための市販のキットの例としては、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）、ＢｉｏＶｅｎｄｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｉｎｃ．（Ｃａｎｄｌｅｒ，ＮＣ）、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｗｅｂｓｔｅｒ，ＴＸ）、Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｃａｎｔｏｎ，ＭＡ）、およびＲａｙｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｎｏｒｃｒｏｓｓ，ＧＡ）からのＥＬＩＳＡキットが挙げられる。
【０１６４】
ＩＧＦＢＰ−３を検出するための市販のキットの例としては、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）、ＢｉｏＶｅｎｄｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｉｎｃ．（Ｃａｎｄｌｅｒ，ＮＣ）、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｗｅｂｓｔｅｒ，ＴＸ）、Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｃａｎｔｏｎ，ＭＡ）、ａｎｄ  Ｒａｙｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｎｏｒｃｒｏｓｓ，ＧＡ）、ＥＩＡａｂ＆ＵＳＣＮＬＩＦＥ（Ｗｕｈａｎ  ＥＩＡａｂ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）（Ｗｕｈａｎ，Ｃｈｉｎａ）、Ａｂｎｏｖａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｔａｉｐｅｉ  Ｃｉｔｙ，Ｔａｉｗａｎ）、およびＡｎｔｉｇｅｎｉｘ
Ａｍｅｒｉｃａ  Ｉｎｃ．（Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ  Ｓｔａｔｉｏｎ，ＮＹ）からのＥＬＩＳＡキットが挙げられる。
【０１６５】
ＩＧＦＢＰ−４を検出するための市販のキットの例としては、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）、Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｃａｎｔｏｎ，ＭＡ）、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｗｅｂｓｔｅｒ，ＴＸ）、およびＲａｙｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｎｏｒｃｒｏｓｓ，ＧＡ）からのＥＬＩＳＡキットが挙げられる。
【０１６６】
ＩＧＦＢＰ−５を検出するための市販のキットの例としては、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ
（Ｍｉｎｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）、Ａｎｔｉｇｅｎｉｘ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ｉｎｃ．（Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ  Ｓｔａｔｉｏｎ，ＮＹ）、およびＲａｙｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｎｏｒｃｒｏｓｓ，ＧＡ）からのＥＬＩＳＡキットが挙げられる。
【０１６７】
ＩＧＦＢＰ−６を検出するための市販のキットの例としては、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）およびＲａｙｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｎｏｒｃｒｏｓｓ，ＧＡ）からのＥＬＩＳＡキットが挙げられる。
【０１６８】
別の態様では、本発明は、ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２依存性シグナル伝達を低減するレジメンでの治療を調節または中断すべきかどうかを決定するための、組成物、キット、および方法を提供する。治療レジメンは、ＩＧＦ−１およびまたはＩＧＦ−２の上流または下流の１つ以上の分子を標的とするか、ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２自体のいずれかまたは両方を標的とすることができる。当該技術分野で既知のまたは本明細書に記載される、任意のかかる治療を使用することができる。一実施形態では、治療は、ＩＧＦ−１Ｒおよび／またはＩＧＦ−１Ｒ／インスリン受容体ハイブリッドを標的とする（Ｓｏｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ  ２９０：４１９−２６、Ｂｅｎｙｏｕｃｅｆ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ  ４０３：６０３−１３）。かかる治療の例としては、小分子（ＯＳＩ−９０６、リンシチニブ、ＢＭＳ−７５４８０７、ＩＮＳＭ−１８、ＸＬ２２８、ＡＸＬ１７１７、ＢＭＳ−５３６９２４、ＮＶＰ−ＡＤＷ７４２、ＧＳＫ６２１６５９Ａ、ＧＳＫ１８３８７０５Ａ、Ａ−９２８６０５、ＡＺＤ４２５３、ＴＡＥ２２６、またはＡＧ１０２４等）および抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体（ガニツマブ、ＡＭＧ  ４７９、フィギツムマブ、ＣＰ−７５１，８７１、シクスツムマブ、ＩＭＣ−Ａ１２、ダロツズマブ、ＭＫ０６４６、ＲＧ１５０７、ロバツムマブ、ＳＣＨ  ７１７４５４、ＡＶＥ−１６４２ａ、ＭＥＤＩ−５７３、ＢＩＩＢ０２２、ｒｈｕＭａｂ  ＩＧＦＲ、Ｌ１Ｈ１、Ｌ２Ｈ２、Ｌ３Ｈ３、Ｌ４Ｈ４、Ｌ５Ｈ５、Ｌ６Ｈ６、Ｌ７Ｈ７、Ｌ８Ｈ８、Ｌ９Ｈ９、Ｌ１０Ｈ１０、Ｌ１１Ｈ１１、Ｌ１２Ｈ１２、Ｌ１３Ｈ１３、Ｌ１４Ｈ１４、Ｌ１５Ｈ１５、Ｌ１６Ｈ１６、Ｌ１７Ｈ１７、Ｌ１８Ｈ１８、Ｌ１９Ｈ１９、Ｌ２０Ｈ２０、Ｌ２１Ｈ２１、Ｌ２２Ｈ２２、Ｌ２３Ｈ２３、Ｌ２４Ｈ２４、Ｌ２５Ｈ２５、Ｌ２６Ｈ２６、Ｌ２７Ｈ２７、Ｌ２８Ｈ２８、Ｌ２９Ｈ２９、Ｌ３０Ｈ３０、Ｌ３１Ｈ３１、Ｌ３２Ｈ３２、Ｌ３３Ｈ３３、Ｌ３４Ｈ３４、Ｌ３５Ｈ３５、Ｌ３６Ｈ３６、Ｌ３７Ｈ３７、Ｌ３８Ｈ３８、Ｌ３９Ｈ３９、Ｌ４０Ｈ４０、Ｌ４１Ｈ４１、Ｌ４２Ｈ４２、Ｌ４３Ｈ４３、Ｌ４４Ｈ４４、Ｌ４５Ｈ４５、Ｌ４６Ｈ４６、Ｌ４７Ｈ４７、Ｌ４８Ｈ４８、Ｌ４９Ｈ４９、Ｌ５０Ｈ５０、Ｌ５１Ｈ５１、もしくはＬ５２Ｈ５２、またはそれらの断片もしくは誘導体等）が挙げられる。
【０１６９】
一実施形態では、治療への患者の曝露量が決定される。別の実施形態では、患者の曝露量が、同じ癌性病態に対する同じ治療レジメンを受容する患者の曝露中央値を下回る場合、治療は、中断される。別の実施形態では、患者の曝露量が、同じ癌性病態に対する同じ治療レジメンを受容する患者の曝露中央値を下回る場合、治療の用量または頻度は、増加される。
【０１７０】
前述の方法は、ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２媒介型シグナル伝達阻害に関する他のバイオマーカー、患者層別化法、および有効性監視法、例えば、米国特許第２０１０／０１８４１２５号、米国特許第２０１０／０３１６６３９号、米国特許第２００９／００９２５９６号、米国特許第２００９／０９３４８８号、国際公開第ＷＯ２０１０／１４６０５９号、国際公開第ＷＯ２００９／０７９５８７号、欧州特許第１  ８２８  ２４９号、欧州特許第２  ２４１  ６３４号、国際公開第ＷＯ２０１０／１１９１２６号、米国特許第２０１０／０２４０６６５号、国際公開第ＷＯ２０１０／０２２２６８号、国際公開第ＷＯ２０１０／０４８１２３号、国際公開第ＷＯ２０１０／１３８９０８号、国際公開第ＷＯ２００７／０３５７４４号、国際公開第ＷＯ２００８／１１５４７０号、国際公
開第ＷＯ２００８／１４４３４５号、国際公開第ＷＯ２０１１／０５３７７９号、国際公開第ＷＯ２０１２／００６６８１号、米国特許第７，１２９，０４０号、米国特許第７，２１７，７９５号、国際公開第ＷＯ２０１１／０８７８６８号、国際公開第ＷＯ２００９／１０６５６６号、国際公開第ＷＯ２０１１／１３３６６８号、米国特許第２００９／０２５８３６５号、国際公開第ＷＯ２０１１／０６６２００号、欧州特許第１  ９２６  ９９６号、米国特許第２０１１／０２１７３０９号、米国特許第２０１１／０２７５６４４号、米国特許第７，９３９，２７２号、米国特許第８，０４８，６２１号、米国特許第８，０６２，８３８号、国際公開第ＷＯ２０１１／１０９５７２号、国際公開第ＷＯ２０１１／１０９５８４号、国際公開第ＷＯ２０１１／０８３３９１号、米国特許第２０１１／００６０６０５号、国際公開第ＷＯ２０１１／０３１８６１号、欧州特許第１  ８２８  ２４９号、欧州特許第２  ０３２  ９８９号、欧州特許第２  ２８１  ８４１号、欧州特許第２  ２８３  ８３１号、国際公開第ＷＯ２００９／０７９５８７号、国際公開第ＷＯ２０１２／０００７６３号、米国特許第２０１１／００５２６６７号、米国特許第２０１１／０２６２４５３号、および国際公開第ＷＯ２００９／１２０７６７号に記載されるものと組み合わせることができる。
【０１７１】
本発明の組成物および／または方法をまた、例えば、美容治療に、獣医学的治療において使用して、寿命を増加させる、生殖欠陥を治療する、および多様な増殖関連障害を治療することができる。
治療法
【０１７２】
本明細書に提供されるある種の方法は、対象に、ＩＧＦ−１Ｒ媒介型シグナル伝達の阻害剤を投与することを含む。ＩＧＦ−１Ｒによって媒介される活性またはシグナルの低減をもたらす、任意の治療を使用することができる。かかる治療の例は、Ｓａｃｈｄｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．６：１−１２に提供される。一実施形態では、治療は、対象に、ＩＧＦ−１Ｒによって媒介される活性を低減する物質を投与することを含む。かかる物質の例としては、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＧＦ−１、またはＩＧＦ−２に結合する抗体（それらの断片および誘導体を含む）、ペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｉｅｓ）、およびＡＶＩＭＥＲＳ（商標）（Ａｍｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ，ＣＡ）、ＩＧＦ−１Ｒの可溶性ＩＧＦ−１−および／またはＩＧＦ−２結合誘導体、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−２、ＩＲＳ１、ＳＨＣ、ＧＲＢ２、ＳＯＳ１、ＰＩ３Ｋ、ＳＨＰ２、もしくはＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達カスケードにおいて作用する任意の他の分子に結合する小分子、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２結合タンパク質（およびそれらの誘導体）、阻害性核酸（ｓｉＲＮＡ等）およびそれらの誘導体（ペプチド核酸を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。かかる分子の非限定的の例は、例えば、米国特許第７，３２９，７３４号（２００８年２月１２日に公開）第７，１７３，００５号（２００７年２月６日に発行）、第７，０７１，３００号（２００６年７月４日に発行）、第７，０２０，５６３号（２００６年３月２８日に発行）、第６８７５７４１号（２００５年４月５日に発行）；米国特許出願公開第０７／０２９９０１０号（２００７年１２月２７日に公開）、第０７／０２６５１８９号（２００７年１１月１５日に公開）、第０７／０１３５３４０号（２００７年６月１４日に公開）、第０７／０１２９３９９号（２００７年６月７日に公開）、第０７／０００４６３４  Ａ１号（２００７年１月４日に公開）、第０５／０２８２７６１  Ａ１号（２００５年１２月２２日に公開）、第０５／００５４６３８  Ａ１号（２００５年３月１０日に公開）、第０４／００２３８８７  Ａ１号（２００４年２月５日に公開）、第０３／０２３６１９０  Ａ１号（２００３年１２月２５日に公開）、第０３／０１９５１４７  Ａ１号（２００３年１０月１６日に公開）；ＰＣＴ公開第ＷＯ０７／０９９１７１号（２００７年９月７日に公開）、第ＷＯ０７／０９９１６６号（２００７年９月７日に公開）、第０７／０３１７４５号（２００７年３月２２日に公開）、第ＷＯ０７／０２９１０６号（２００７年３月１５日に公開）、第ＷＯ０７／０２９１０７号（２００７年３月１５日に公開）、第ＷＯ０７／００
４０６０号（２００７年１月１１日に公開）、第ＷＯ０６／０７４０５７  Ａ２号（２００６年７月１３日に公開）、第ＷＯ０６／０６９２０２  Ａ２号（２００６年６月２９日に公開）、第ＷＯ０６／０１７４４３  Ａ２号（２００６年２月１６日に公開）、第ＷＯ０６／０１２４２２  Ａ１号（２００６年２月２日に公開）、第ＷＯ０６／００９９６２
Ａ２号（２００６年１月２６日に公開）、第ＷＯ０６／００９９５０  Ａ２号（２００６年１月２６日に公開）、第ＷＯ０６／００９９４７  Ａ２号（２００６年１月２６日に公開）、第ＷＯ０６／００９９３３  Ａ２号（２００６年１月２６日に公開）、第ＷＯ０５／０９７８００  Ａ１（２００６年１０月２０日）、第ＷＯ０５／０８２４１５  Ａ２号（２００５年９月９日に公開）、第ＷＯ０５／０３７８３６  Ａ２号（２００５年４月２８日に公開）、第ＷＯ０３／０７０９１１  Ａ２号（２００３年８月２８日に公開）、第ＷＯ９９／２８３４７  Ａ２号（１９９９年６月１０日に公開）；欧州特許第ＥＰ１  ７３２  ８９８  Ｂ１号（２００８年１月２３日に公開）、第ＥＰ０  ７３７  ２４８  Ｂ１号（２００７年１１月１４日に公開）、欧州特許出願第ＥＰ１  ４９６  ９３５  Ａ２号（２００５年１月１９日に公開）第ＥＰ１  ４３２  ４３３  Ａ２号（２００４年６月３０日に公開）、およびＤ’ａｍｂｒｏｓｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５６：４０１３−２０に見出すことができ、それらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。かかる分子の特定の例としては、ＯＳＩ−９０６（ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｍｅｌｖｉｌｅｅ，ＮＹ）、ＢＭＳ  ５３６９２４（Ｗｉｔｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．４８：５６３９−４３、Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、ＸＬ２２８（Ｅｘｅｌｅｘｉｓ，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）、ＩＮＳＭ−１８，ＮＤＧＡ、およびｒｈＩＧＦＢＰ−３（Ｉｎｓｍｅｄ，Ｉｎｃ．，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＶＡ、Ｂｒｅｕｈａｈｎ  ｅｔ  ａｌ，２００２００６，Ｃｕｒｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ  Ｒｅｖ．２：１５７−６７、Ｙｏｕｎｇｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ９４：３７−４６、米国特許第６，６０８，１０８号）が挙げられ、それらの参考文献の各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１７３】
一態様では、任意の好適な抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体、抗体断片、または抗体誘導体は、本発明の方法において使用することができる。一実施形態では、抗体、抗体断片、または抗体誘導体は、ＩＧＦ−１Ｒの細胞外ドメインに結合する。別の実施形態では、抗体、抗体断片、または抗体誘導体は、ＩＧＦ−Ｒへの結合に対してＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２と競合する。別の実施形態では、抗体、抗体断片、または抗体誘導体は、ＩＧＦ−１Ｒに結合されるとき、ＩＧＦ−１Ｒに結合するＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２の量を低減する。別の実施形態では、抗体、抗体断片、または抗体誘導体は、ＩＧＦ−１Ｒ細胞外ドメインのＬ１サブドメインに結合する。別の実施形態では、抗体、抗体断片、または抗体誘導体は、ＩＧＦ−１Ｒ細胞外ドメインのＣＲサブドメインに結合する。別の実施形態では、抗体、抗体断片、または抗体誘導体は、ＩＧＦ−１Ｒ細胞外ドメインのＬ２サブドメインに結合する。別の実施形態では、抗体、抗体断片、または抗体誘導体は、ＩＧＦ−１Ｒ細胞外ドメインのＦｎＩＩＩ１サブドメインに結合する。別の実施形態では、抗体、抗体断片、または抗体誘導体は、ＩＧＦ−１Ｒ細胞外ドメインのＦｎＩＩＩ２−ＩＤサブドメインに結合する。別の実施形態では、抗体、抗体断片、または抗体誘導体は、ＩＧＦ−１Ｒ細胞外ドメインのＦｎＩＩＩサブドメインに結合する。（ＩＧＦ−１Ｒ細胞外サブドメインは、下記の実施例１２に定義される。）別の実施形態では、抗体、抗体断片、または抗体誘導体は、１つを超えるＩＧＦ−１Ｒ細胞外ドメインに結合する。本発明の方法において使用することができる抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の非限定的例としては、本明細書でＬ１Ｈ１、Ｌ２Ｈ２、Ｌ３Ｈ３、Ｌ４Ｈ４、Ｌ５Ｈ５、Ｌ６Ｈ６、Ｌ７Ｈ７、Ｌ８Ｈ８、Ｌ９Ｈ９、Ｌ１０Ｈ１０、Ｌ１１Ｈ１１、Ｌ１２Ｈ１２、Ｌ１３Ｈ１３、Ｌ１４Ｈ１４、Ｌ１５Ｈ１５、Ｌ１６Ｈ１６、Ｌ１７Ｈ１７、Ｌ１８Ｈ１８、Ｌ１９Ｈ１９、Ｌ２０、Ｈ２０、Ｌ２１Ｈ２１、Ｌ２２Ｈ２２、Ｌ２３Ｈ２３、Ｌ２４Ｈ２４、Ｌ２５Ｈ２５、Ｌ
２６Ｈ２６、Ｌ２７Ｈ２７、Ｌ２８Ｈ２８、Ｌ２９Ｈ２９、Ｌ３０Ｈ３０、Ｌ３１Ｈ３１、Ｌ３２Ｈ３２、Ｌ３３Ｈ３３、Ｌ３４Ｈ３４、Ｌ３５Ｈ３５、Ｌ３６Ｈ３６、Ｌ３７Ｈ３７、Ｌ３８Ｈ３８、Ｌ３９Ｈ３９、Ｌ４０Ｈ４０、Ｌ４１Ｈ４１、Ｌ４２Ｈ４２、Ｌ４３Ｈ４３、Ｌ４４Ｈ４４、Ｌ４５Ｈ４５、Ｌ４６Ｈ４６、Ｌ４７Ｈ４７、Ｌ４８Ｈ４８、Ｌ４９Ｈ４９、Ｌ５０Ｈ５０、Ｌ５１Ｈ５１、およびＬ５２Ｈ５２として同定される抗体の各々、ならびにそれらのＩＧＦ−１Ｒ結合断片および誘導体が挙げられる。本発明の方法において使用するための抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の他の非限定的例としては、米国特許出願公開第０６／００４０３５８号（２００６年２月２３日に公開）、第０５／０００８６４２号（２００５年１月１３日に公開）、第０４／０２２８８５９号（２００４年１１月１８日に公開）に記載されるもの、例えば、そこに記載される抗体１Ａ（ＤＳＭＺ寄託番号ＤＳＭ  ＡＣＣ  ２５８６）、抗体８（ＤＳＭＺ寄託番号ＤＳＭ  ＡＣＣ  ２５８９）、抗体２３（ＤＳＭＺ寄託番号ＤＳＭ  ＡＣＣ  ２５８８）、および抗体１８；ＰＣＴ公開第ＷＯ０６／１３８７２９号（２００６年１２月２８日に公開）、第ＷＯ０５／０１６９７０号（２００５年２月２４日に公開）、およびＬｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７９：２８５６−６５に記載されるもの、例えば、そこに記載される抗体２Ｆ８、Ａ１２、およびＩＭＣ−Ａ１２；ＰＣＴ公開第ＷＯ０７／０１２６１４号（２００７年２月１日に公開）、第ＷＯ０７／０００３２８号（２００７年１月４日に公開）、第ＷＯ０６／０１３４７２号（２００６年２月９日に公開）、第０５／０５８９６７号（２００５年６月３０日に公開）、第０３／０５９９５１号（２００３年７月２４日に公開）、米国特許出願公開第０５／００８４９０６号（２００５年４月２１日に公開）に記載されるもの、例えば、そこに記載される抗体７Ｃ１０、キメラ抗体Ｃ７Ｃ１０、抗体ｈ７Ｃ１０、抗体７Ｈ２Ｍ、キメラ抗体＊７Ｃ１０、抗体ＧＭ  ６０７、ヒト化抗体７Ｃ１０バージョン１、ヒト化抗体７Ｃ１０バージョン２、ヒト化抗体７Ｃ１０バージョン３、および抗体７Ｈ２ＨＭ；米国特許出願公開第０５／０２４９７２８号（２００５年１１月１０日に公開）、第０５／０１８６２０３号（２００５年８月２５日に公開）、第０４／０２６５３０７号（２００４年１２月３０日に公開）、第０３／０２３５５８２号（２００３年１２月２５日に公開）、Ｍａｌｏｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６３：５０７３−８３に記載されるもの、例えば、そこに記載される抗体ＥＭ１６４、表面再構成（ｒｅｓｕｒｆａｃｅｄ）ＥＭ１６４、ヒト化ＥＭ１６４、ｈｕＥＭ１６４  ｖ１．０、ｈｕＥＭ１６４  ｖ１．１、ｈｕＥＭ１６４  ｖ１．２、およびｈｕＥＭ１６４  ｖ１．３；米国特許第７，０３７，４９８号（２００６年５月２日に発行）、米国特許出願第０５／０２４４４０８号（２００５年１１月３０日に公開）、第０４／００８６５０３号（２００４年５月６日に公開）、Ｃｏｈｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１１：２０６３−７３に記載されるもの、例えば、そこに記載される抗体ＣＰ−７５１，８７１、ＡＴＣＣ受入番号ＰＴＡ−２７９２、ＰＴＡ−２７８８、ＰＴＡ−２７９０、ＰＴＡ−２７９１、ＰＴＡ−２７８９、ＰＴＡ−２７９３、ならびに抗体２．１２．１、２．１３．２、２．１４．３、３．１．１、４．９．２、および４．１７．３を有するハイブリドーマによって産生される抗体の各々；米国特許出願第０５／０１３６０６３号（２００５年６月２３日に公開）、第０４／００１８１９１号（２００４年１月２９日に公開）に記載されるもの、例えば、そこに記載される抗体１９Ｄ１２、およびＡＴＣＣにて番号ＰＴＡ−５２１４の下に寄託されるプラスミド１５Ｈ１２／１９Ｄ１２  ＨＣＡ（γ４）におけるポリヌクレオチドによってコードされる重鎖と、ＡＴＣＣにて番号ＰＴＡ−５２２０の下に寄託されるプラスミド１５Ｈ１２／１９Ｄ１２  ＬＣＦ（κ）におけるポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖とを含む、抗体；米国特許出願第０４／０２０２６５５号（２００４年１０月１４日に公開）に記載されるもの、例えば、そこに記載される抗体ＰＩＮＴ−６Ａ１、ＰＩＮＴ−７Ａ２、ＰＩＮＴ−７Ａ４、ＰＩＮＴ−７Ａ５、ＰＩＮＴ−７Ａ６、ＰＩＮＴ−８Ａ１、ＰＩＮＴ−９Ａ２、ＰＩＮＴ−１１Ａ１、ＰＩＮＴ−１１Ａ２、ＰＩＮＴ−１１Ａ３、ＰＩＮＴ−１１Ａ４、ＰＩＮＴ−１１Ａ５、ＰＩＮＴ−１１Ａ７、ＰＩＮＴ−１１Ａ１２、ＰＩＮＴ−１２Ａ１、ＰＩＮＴ−１２Ａ２、ＰＩＮＴ−１２Ａ３、ＰＩＮＴ−１２Ａ４、お
よびＰＩＮＴ−１２Ａ５；米国特許出願第０７／０２４３１９４号（２００７年１０月１８日に公開）に記載されるもの、例えば、抗体Ｍ１３−Ｃ０６、Ｍ１４−Ｇ１１、Ｍ１４−Ｃ０３、Ｍ１４−Ｂ０１、Ｍ１２−Ｅ０１、およびＭ１２−Ｇ０４、ならびにハイブリドーマＰ２Ａ７．３Ｅ１１、２０Ｃ８．３Ｂ８、Ｐ１Ａ２．２Ｂ１１、２０Ｄ８．２４Ｂ１１、Ｐ１Ｅ２．３Ｂ１２、およびＰ１Ｇ１０．２Ｂ８によって産生される抗体が挙げられる。前述の参考文献の各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。また、ＩＧＦ−１受容体への結合に対して上述の抗体のうちの１つと競合する抗体、抗体断片、または抗体誘導体も、使用に好適である。一実施形態では、抗体、抗体断片、または抗体誘導体は、上述の抗体のうちの１つと同じエピトープに、または上述の抗体のうちの１つのエピトープと重複するエピトープに結合する。
【０１７４】
具体的な実施形態では、本発明の方法は、例えば、対象への投与を介してまたはエクスビボ手順で、内在性ＩＧＦ−１ＲをＩＧＦ−１Ｒ結合抗原結合タンパク質と接触させることを伴う。
【０１７５】
「治療」という用語は、障害の少なくとも１つの症候もしくは他の側面の緩和もしくは予防、または疾患重症度の低減等を包含する。治療は、実行可能な療法を構成するために、完全な治癒を達成する、または疾患のあらゆる症候または症状を根絶する必要はない。関連分野で認識されるように、治療剤として用いられる薬物または他の治療は、所与の病状の重症度を低減してもよいが、治療上有用であると見なされるために疾患のあらゆる症状を消滅させる必要はない。同様に、予防的に投与される治療は、実行可能な予防剤を構成するために、病態の発症を予防することにおいて完全に有効である必要はない。疾患の影響を単純に低減すること（例えば、その症候の数または重症度を低減することによって、病態の発症を遅延させることによって、症候の低減を加速することによって、別の治療の有効性を増加させることによって、または別の有益な効果を生み出すことによって）、または対象において疾患が生じるもしくは悪化する可能性を低減することは、十分である。治療上有用な治療にはまた、一部の患者において有効であるが、他の患者においては有効でない治療も含まれる。本発明の一実施形態は、具体的な障害の重症度を反映する指標のベースラインを上回る持続的な改善を誘導するのに十分な量および時間にわたって、患者にＩＧＦ−１Ｒ拮抗薬を投与することを含む、方法に向けられる。
【０１７６】
治療クールの進行は、任意の好適な技法を使用して監視または測定することができる。腫瘍を治療するために、かかる技法は、腫瘍のサイズ、またはサイズの変化を検出することを含む。腫瘍のサイズは、直接観察、放射線技法等を含む任意の好適な技法を使用して、決定または推定される、その長さ、外周、体積等によって測定することができる。ある種の実施形態では、治療の進行は、ＲＥＣＩＳＴ技法および基準を使用して監視される（参照によりその全体が全目的で本明細書に組み込まれるＴｈｅｒａｓｓｅ  ｅｔ  ａｌ．２０００，Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９２：２０５−１６）。治療の進行はまた、他の方法で、例えば、腫瘍組織の相対的健康度もしくは生長力を、例えば、ＰＥＴスキャンを使用して腫瘍のグルコース取り込みを測定することにより、あるいは腫瘍組織の健康度もしくは生長力に、または治療の有効性に相関する、腫瘍の側面を監視することにより、決定することによって、監視することができる。腫瘍のかかる側面の例としては、特定の遺伝子またはタンパク質の発現レベル、特定のタンパク質のリン酸化状態または他の翻訳後修飾等が挙げられる。
【０１７７】
関連分野で理解されるように、本発明の分子を含む薬学的組成物は、適応に適切な様態で対象に投与される。薬学的組成物は、非経口、局所的、または吸入によるものを含むが、これらに限定されない、任意の好適な技法によって投与されてもよい。注射される場合、薬学的組成物は、例えば、関節内、静脈内、筋肉内、病変内、腹腔内、または皮下経路を介して、ボーラス注射または連続的注入によって、投与することができる。例えば、疾
患または損傷の部位における、局所投与が企図され、経皮送達および移植物からの持続放出も同様に企図される。吸入による送達には、例えば、経鼻または経口吸入、噴霧器の使用、エアロゾル形態での拮抗薬の吸入等が含まれる。他の代替的手段には、点眼が含まれ、経口調製物には、丸薬、シロップ、トローチまたはチューインガムが含まれ、局所調製物は、ローション、ゲル、スプレー、および軟膏等である。
【０１７８】
エクスビボ手順での薬学的組成物の使用もまた、企図される。例えば、患者の血液または他の体液が、エクスビボでＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達の阻害剤と接触させられてもよい。阻害剤は、好適な不溶性マトリックスまたは固形支持物質に結合されてもよい。
【０１７９】
本発明のＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達阻害剤は、生理的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤等の１つ以上の追加的構成成分を含む組成物の形態で投与することができる。任意に、組成物は、追加的に、１つ以上の生理的活性剤、例えば、第２のＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達阻害剤、抗血管新生物質、化学療法物質、麻酔物質等を含み、それらの非排他的例が本明細書に提供される。種々の具体的な実施形態では、組成物は、ＩＧＦ−１Ｒ結合抗原結合タンパク質に加えて、１、２、３、４、５、または６つの生理的活性剤を含む。
【０１８０】
一実施形態では、薬学的組成物は、緩衝液、アスコルビン酸等の酸化防止剤、低分子量ポリペプチド（１０未満のアミノ酸を有するもの等）、タンパク質、アミノ酸、グルコース、スクロース、またはデキストリン等の炭水化物、ＥＤＴＡ等のキレート剤、グルタチオン、安定剤、および賦形剤からなる群から選択される１つ以上の物質と一緒に、ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達の阻害剤を含む。中性緩衝食塩水または同種の血清アルブミンと混合された食塩水は、適切な希釈剤の例である。適切な業界標準に従って、ベンジルアルコール等の防腐剤がまた添加されてもよい。組成物は、希釈剤として適切な賦形剤溶液（例えば、スクロース）を使用して、凍結乾燥物として調合されてもよい。好適な構成成分は、用いられる投薬量および濃度で、受容者に対して非毒性である。薬学的製剤において用いられてもよい構成成分の更なる例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ  Ｅｄ．（１９８０）ａｎｄ  ２０ｔｈ  Ｅｄ．（２０００），Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡに提示される。
【０１８１】
医療従事者が使用するためのキットは、本明細書で考察される病態のうちのいずれかを治療する際に使用するための、本発明のＩＧＦ−１受容体阻害物質およびラベルまたは他の指示書を含む。一実施形態では、キットは、ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達の１つ以上の阻害剤の滅菌調製物を含み、それらは、上に開示される組成物の形態であってもよく、かつ１つ以上のバイアル中にあってもよい。
【０１８２】
投与の投薬量および頻度は、投与経路、用いられる特定の抗原結合タンパク質、治療対象の疾患の性質および重症度、病態が急性であるか慢性であるか、ならびに対象のサイズおよび全身状態のような要因に従って変動してもよい。適切な投薬量は、関連技術分野で既知の手順によって、例えば、用量漸増研究が関与し得る臨床治験において、決定することができる。「断続的投薬」は、対象に複数回用量で治療的化合物（例えば、ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達の阻害剤）を投与する方法を指し、特定の用量および任意のその後の用量の投与の間には、時間の間隔が存在する。治療上有効であるか、あるいは医療上正当化される限り、任意の投薬スケジュールを使用することができる。逐次的投薬の間の間隔は、秒間もしくは分間の桁で非常に短いか、または時間、日間、週間、月間、もしくは更に年間の桁でより長い可能性がある。間隔は、各投薬の間で同じ、例えば、１週もしくは１月当たり１回用量であり得るか、またはそれは投薬から投薬で変動し得る。同様に、治療上活性化合物（例えば、ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達の阻害剤または化学療法剤）の量は、投薬から投薬で変動し得る。一実施形態では、逐次的投薬の間の期間、および各投薬におけ
る治療上活性物質の量は、対象となる薬力学または薬物動態パラメータ（例えば、該物質の血清中濃度またはＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達活性における低減パーセント）を所望の範囲内に保つように選択される。別の実施形態では、投薬の間の間隔、および治療上活性物質の量は、他の基準（例えば、治療クールへの対象の客観的または主観的反応）に従って変動する。
【０１８３】
他の実施形態では、本発明のＩＧＦ−１Ｒシグナル阻害物質は、少なくとも１ヶ月以上の期間にわたって、例えば、１、２、もしくは３ヶ月、６ヶ月、１年にわたって、数年にわたって、または更に無期限に、投与される。慢性病態を治療するために、長期的治療が一般に最も有効である。しかしながら、急性病態を治療するために、より短い期間、例えば、１〜６週間にわたる投与が十分であってもよい。一般に、本発明のＩＧＦ−１Ｒシグナル阻害物質は、患者が、選定された指標（単数または複数）についてのベースラインを上回る、医学的に関連性のあるまたは望ましい度合いの改善を示すまで投与される。
【０１８４】
本発明の具体的な実施形態は、ＩＧＦ−１Ｒ阻害物質を、１回用量につき対象の質量１ｋｇ当たり（「１ｎｇ／ｋｇ／用量」）約１ｎｇの抗原結合タンパク質〜約５０ｍｇ／ｋｇ／用量、より好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ／用量〜約３０ｍｇ／ｋｇ／用量、最も好ましくは約１０ｍｇ／ｋｇ／用量〜約２０ｍｇ／ｋｇ／用量の投薬量で、対象に投与することを伴う。追加的な実施形態では、ＩＧＦ−１Ｒ阻害物質は、ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２媒介型疾患、病態、または障害、例えば、本明細書に開示される医的障害を治療するために、成人に、１ヶ月当たり１回、２週間に１回、１週間当たり１回、１週間当たり２回、または１週間当たり３回以上投与される。注射される場合、１成人投薬当たりの有効量のＩＧＦ−１Ｒ阻害物質は、１〜２０ｍｇ／ｍ２の範囲であってもよく、好ましくはそれは、約５〜１２ｍｇ／ｍ２である。代替的に、均一用量が投与されてもよく、その量は、５〜１００ｍｇ／用量の範囲であってもよい。均一用量に対する１つの範囲は、１回用量につき約２０〜３０ｍｇである。本発明の一実施形態では、２５ｍｇ／用量均一用量が、注射によって反復投与される。注射以外の投与経路が使用される場合、用量は、標準的な医療慣習に従って適切に調整される。治療レジメンの一例は、約２０〜３０ｍｇのＩＧＦ−１Ｒ阻害物質の用量を、１週間当たり１〜３回、少なくとも３週間の期間にわたって注射することを伴うが、所望の度合いの改善を誘導するために、より長い期間にわたる治療が必要な場合がある。小児科の対象（４〜１７歳）について、１つの例示的な好適レジメンは、０．４ｍｇ／ｋｇから、最大で２５ｍｇのＩＧＦ−１Ｒ阻害物質の最大用量を１週間当たり２回または３回投与する、皮下注射を伴う。
【０１８５】
本明細書に提供される方法の具体的な実施形態は、０．５ｍｇ〜５００ｍｇ、好ましくは５０〜３００ｍｇの抗原結合タンパク質の、１週間当たり１回または２回の皮下注射を伴う。別の実施形態は、３ｍｇ以上のＩＧＦ−１Ｒ阻害物質の経肺投与（例えば、噴霧器による）に向けられる。
【０１８６】
本明細書に提供される治療レジメンの他の例としては、対象の体質量１キログラム当たり１、３、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、４００、または５００ミリグラム（ｍｇ／ｋｇ）の本発明のＩＧＦ−１Ｒ阻害剤の用量の皮下または静脈内投与が挙げられる。用量は、対象に１回、または一定の間隔で１回を超えて、例えば、１日１回、週３回、週２回、週１回、月３回、月２回、月１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回、６ヶ月に１回、もしくは年１回、投与することができる。治療の持続期間、ならびに治療の用量および／または頻度に対する任意の変更は、対象の具体的な必要性を満たすために、治療クール中に変化または変動させることができる。
【０１８７】
別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、治療されている障害の重症度を反映する少
なくとも１つの指標における改善、好ましくは持続的な改善を誘導するのに十分な量および時間にわたって、対象に投与される。対象の疾病、疾患、または病態の程度を反映する種々の指標は、治療の量および時間が十分であるかどうかを決定するために評価されてもよい。かかる指標には、例えば、問題となる障害の疾患重症度、症候、または症状の臨床的に認識される指標が含まれる。一実施形態では、改善は、対象が、２〜４週間離れた少なくとも２つの時機に改善を示す場合、持続していると見なされる。改善の度合いは一般に、医師によって決定され、その医師は、徴候、症候、生検、または他の試験結果に基づいてこの決定を下してもよく、また、所与の疾患のために開発された生活の質に関する質問票等の、対象に対して実施される質問票を用いてもよい。対象の病態における改善は、医師または他の健康管理提供者によって、任意の適切な技法を使用して、例えば、検出、測定、または定量化される改善であり得る。かかる技法には、対象を観察すること、対象または対象から採られた試料を試験すること、および直接的または間接的に、対象の病態に関する対象の印象を対象から収集することが含まれるが、これらに限定されない。かかる印象は、対象の健康または福祉の任意の側面、特に、対象の腫瘍疾患によって直接的または間接的に影響を受ける側面に関する可能性がある。かかる側面の例としては、疼痛、不快感、睡眠、食欲、口渇、運動性、体力、柔軟性、および精神状態が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８８】
ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２の亢進したレベルは、例えば、癌（例えば、肺癌、前立腺癌、乳癌、結腸癌）、ならびに先端巨大症および他の過剰増殖障害（例えば、構造的に長身の小児）を含む、幾つかの障害に関連する。所与の障害を有する対象をスクリーニングして、亢進したＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２レベルを有する個人を特定し、それによって、ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達阻害剤での治療から最も便益を得る対象を特定してもよい。故に、本明細書に提供される治療法は任意に、対象のＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２レベルを測定する第１のステップを含む。抗原結合タンパク質は、ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２レベルが正常なレベルまたは望ましいレベルを上回って亢進される対象に投与されてもよい。
【０１８９】
対象のＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２のレベルは、抗原結合タンパク質での治療前、治療中、および／または治療後に、該当する場合それらのレベルにおける変化を検出するために監視されてもよい。幾つかの障害について、亢進したＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２レベルの発生率は、疾患の病期または疾患の具体的な形態のような要因に従って変動してもよい。例えば、対象の血清中の、ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２レベルを測定するために、既知の技法が用いられてもよい。血液試料中のＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２レベルは、任意の好適な技法、例えば、ＥＬＩＳＡを使用して、測定されてもよい。
【０１９０】
本発明の方法および組成物の具体的な実施形態は、抗原結合タンパク質、および１つ以上の追加的ＩＧＦ−１Ｒ拮抗薬、例えば、２つ以上の本発明の抗原結合タンパク質、または本発明の抗原結合タンパク質および１つ以上の他のＩＧＦ−１Ｒ拮抗薬の使用を伴う。更なる実施形態では、抗原結合タンパク質は、単独で、または患者が罹患した病態を治療するのに有用な他の薬剤と組み合わせて、投与される。かかる薬剤の例としては、タンパク質性および非タンパク質性薬物の両方が挙げられる。多数の治療薬が共投与されるとき、投薬量は、関連技術分野で認識されるように、適宜調整されてもよい。「共投与」および併用療法は、同時投与に限定されず、少なくとも１つの他の治療剤を患者に投与することを伴う治療クール中に、抗原結合タンパク質が少なくとも１回投与される治療レジメンもまた含む。
【０１９１】
抗原結合タンパク質と共投与されてもよい他の薬剤の例としては、治療対象の具体的な病態に従って選定される、他の抗原結合タンパク質または治療的ポリペプチドがある。代
替的に、上に考察される具体的な病態のうちの１つを治療する際に有用な非タンパク質性薬物は、ＩＧＦ−１Ｒ拮抗薬と共投与されてもよい。
併用療法
【０１９２】
別の態様では、本発明は、対象をＩＧＦ−１Ｒ阻害抗原結合タンパク質および１つ以上の他の治療で治療する方法を提供する。一実施形態では、かかる併用療法は、例えば、腫瘍における多数の部位または分子標的を攻撃することによって、相乗または相加的効果を達成する。本発明に関連して使用することができる併用療法のタイプには、単一の疾患関連経路における多数の節、標的細胞中の多数の経路、および標的組織内（例えば、腫瘍内）の多数の細胞型を阻害または活性化（適宜）することが含まれる。例えば、本発明のＩＧＦ−１Ｒ阻害剤は、ＩＧＦ−１を阻害する、アポトーシスを促進する、血管新生を阻害する、またはマクロファージを阻害する、治療と組み合わせることができる。別の実施形態では、それだけで使用されるとき、治療上所望される効果を引き出すことができない標的化薬剤を使用して、例えば、癌細胞を感作するか、または他の薬剤の治療効果を増大することができる。別の実施形態では、本発明によるＩＧＦ−１Ｒ阻害剤は、アポトーシスを誘導する細胞傷害性薬物または他の標的化薬剤と組み合わせて使用される。別の実施形態では、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤は、細胞生存（例えば、ＰＫＢ、ｍＴＯＲ）、異なる受容体チロシンキナーゼ（例えば、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ｃ−Ｍｅｔ、ｃ−ｋｉｔ）、または異なる細胞型（例えば、ＫＤＲ阻害剤、ｃ−ｆｍｓ）に関与する異なる標的を阻害する、１つ以上の薬剤と組み合わせて使用される。別の実施形態では、本発明のＩＧＦ−１Ｒ阻害剤は、具体的な病態に対する既存の標準ケアに追加される。治療剤の例としては、ゲムシタビン、タキソール、タキソテール、およびＣＰＴ−１１が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９３】
別の実施形態では、併用療法は、対象に、本明細書に記載されるＩＧＦ−１Ｒ作動薬または拮抗薬のうちの２、３、４、５、６つ、またはそれを超える薬物を投与することを含む。別の実施形態では、本方法は、対象に、ＩＧＦ−１Ｒ媒介型シグナル伝達を一緒に（直接的または間接的に）阻害または活性化する、２つ以上の治療を施すことを含む。かかる方法の例としては、２つ以上のＩＧＦ−１Ｒ阻害抗原結合タンパク質（ｐｒｏｇｅｉｎｓ）の組み合わせ、ＩＧＦ−１Ｒ阻害抗原結合タンパク質ならびに１つ以上の他のＩＧＦ−１、ＩＧＦ−２、および／またはＩＧＦ−１Ｒ作動薬もしくは拮抗薬（例えば、ＩＧＦ−１および／もしくはＩＧＦ−２結合ポリペプチド、ＩＧＦ−１Ｒ結合ポリペプチド、ＩＧＦ−１および／もしくはＩＧＦ−２誘導体、抗ＩＧＦ−１および／もしくはＩＧＦ−２抗体、ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−２、および／もしくはＩＧＦ−１Ｒに対するアンチセンス核酸、またはＩＧＦ−１、ＩＧＦ−２、および／またはＩＧＦ−１Ｒポリペプチドまたは核酸に結合する他の分子）の組み合わせ、あるいはＩＧＦ−１Ｒ阻害抗原結合タンパク質および１つ以上の他の治療（例えば、外科手術、超音波、放射線療法、化学療法、または別の抗癌剤での治療）の組み合わせを使用することが挙げられ、例えば、米国特許第５，４７３，０５４号（１９９５年１２月５日に発行）、第６，０５１，５９３号（２０００年４月１８日に発行）、第６，０８４，０８５号（２０００年７月４日に発行）、第６，５０６，７６３号（２００３年１月１４日に発行）、米国特許出願公開第０３／００９２６３１号（２００３年５月１５日に公開）、第０３／０１６５５０２号（２００３年９月４日に公開）、第０３／０２３５５８２号（２００３年１２月２５日に公開）、第０４／０８８６５０３号（２００４年５月６日に公開）、第０５／０２７２６３７号（２００５年１２月８日に公開）、ＰＣＴ公開第ＷＯ９９／６００２３号（１９９９年１１月２５日に公開）、第ＷＯ０２／０５３５９６号（２００２年７月１１日に公開）、第ＷＯ０２／０７２７８０号（２００２年９月１９日に公開）、第ＷＯ０３／０２７２４６号（２００３年３月３日に公開）、第ＷＯ０３／０２０６９８号（２００３年３月１３日に公開）、第ＷＯ０３／０５９９５１号（２００３年７月２４日に公開）、第ＷＯ０３／１００００８号（２００３年１２月４日に公開）、第ＷＯ０３／１０６６２１号（２００３年１２月２
４日に公開）、第ＷＯ０４／０７１５２９号（２００４年８月２６日に公開）、第ＷＯ０４／０８３２４８号（２００４年９月３０日に公開）、第ＷＯ０４／０８７７５６号（２００４年１０月１４日に公開）、第ＷＯ０５／１１２９６９号（２００５年１２月１日に公開）、Ｋｕｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２５８：６５６１−６６、Ｆｌｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８３：６６４−６６８、Ｃｏｎｏｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  １３３：５６０−６６、Ｒｏｈｌｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍ  １４９：２７６−８１、Ａｒｔｅａｇａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ８４：１４１８−２３、Ａｒｔｅａｇａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ  ４９：６２３７−４１、Ｇａｎｓｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １３５：９６１−６６、Ｇｕｓｔａｆｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２６５：１８６６３−６７、Ｓｔｅｅｌｅ−Ｐｅｒｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍ  １７１：１２４４−５１、Ｃｕｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｍｏｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  ６：９１−１００、Ｓｏｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２６７：１２９５５−６３、Ｘｉｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８９：５３５６−６０、Ｂｒｕｎｎｅｒ
ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｅｕｒｏ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ２９Ａ：５６２−６９、Ｆｕｒｌａｎｅｔｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５３：２５２２−２６、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍ  １９６：９２−９８、Ｋａｌｅｂｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５４：５５３１−３４、Ｌａｈｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｉｎｔｌ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ５８：４５２−５９、Ｚｉａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｕｐｐ  ２４：２６９−７５、Ｊａｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７２：８１８９−９７、Ｓｃｏｔｌａｎｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５８：４１２７−３１、Ｌｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ４９：２４３−５２，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  ２３：２３−３２、Ｄｅ  Ｍｅｙｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １：７６９−８３、Ｈａｉｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  １：１３４９−５３、Ｍａｌｏｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６３：５０７３−８３、Ｂｕｒｔｒｕｍ
ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６３：８９１２−２１、およびＫａｒａｖｉｔａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｈｏｒｍｏｎｅｓ  ３：２７−３６（各々、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載される通りであり、それらが本発明の方法および組成物において用いられてもよい。更に、１つ以上の抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体または抗体誘導体は、１つ以上の分子または他の治療と組み合わせて使用することができ、ここで他の分子（複数可）および／または治療（複数可）は、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＧＦ−１、またはＩＧＦ−２に直接結合することも、それらに影響を及ぼすこともないが、その組み合わせは、癌または過剰増殖障害（例えば、先端巨大症）等の病態を治療または予防するのに有効である。一実施形態では、分子（複数可）および／または治療（複数可）のうちの１つ以上は、治療クール（ｃｏｕｒｓｅ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｙ）における他の分子（複数可）または治療（複数可）のうちの１つ以上によって引き起こされる病態、例えば、吐き気、疲労、脱毛、悪液質、不眠症等を治療または予防する。分子および／または他の治療の組み合わせが使用されるいずれの場合も、個々の分子（複数可）および／または治療（複数可）は、有効である任意の順序で、任意の時間の長さにわたって、例えば、同時に、逐次的に、または交互に投与することができる。一実施形態では、治療法は、１つの分子または他の治療による第１の治療クールを完了した後に、第２の治療クールを開始することを含む。第１の治療クールの終了と第２の治療クールの開始との
間の時間の長さは、総計の治療クールが有効であることを可能にする任意の時間の長さ、例えば、数秒間、数分間、数時間、数日間、数週間、数ヶ月間、または更に数年間であり得る。
【０１９４】
別の実施形態では、本方法は、本明細書に記載されるＩＧＦ−１Ｒ拮抗薬および１つ以上の他の治療（例えば、治療的（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）または緩和治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ））、例えば、抗癌治療（外科手術、超音波、放射線療法、化学療法、または別の抗癌剤での治療等）のうちの１つ以上を施すことを含む。方法が１つを超える治療を対象に投与することを含む場合、投与の順序、タイミング、数、濃度、および容積は、医療的要求および治療の制限によってのみ限定され、すなわち、２つの治療は、対象に、例えば、同時に、逐次的に、交互に、または任意の他のレジメンに従って施すことができることを理解されたい。本明細書に記載されるＩＧＦ−１Ｒ拮抗薬と組み合わせて投与することができる薬剤の例としては、好中球増強剤、イリノテカン、ＳＮ−３８、ゲムシタビン、ハースタチン、またはＩＧＦ−１Ｒ結合ハースタチン誘導体（例えば、に記載される米国特許出願第０５／０２７２６３７号）、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ）、ＩＲＥＳＳＡ（登録商標）（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＢＥＸＸＡＲ（登録商標）（Ｃｏｒｉｘａ，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）、ＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標）（Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）、ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）（Ｉｍｃｌｏｎｅ
Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏ．，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標）（Ｐｆｉｚｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＳＵ−１１２４８（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＢＭＳ−３５４８２５（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ＶＥＣＴＩＢＩＸ（商標）（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ／Ａｍｇｅｎ  Ｉｎｃ．，Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ，ＣＡ）、およびデノスマブ（Ａｍｇｅｎ  Ｉｎｃ．，Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ，ＣＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９５】
別の実施形態では、本発明は、対象の、ＲＡＳシグナル伝達の阻害剤、例えば、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、またはＨＲＡＳの阻害剤での治療前、治療中、または治療後に、対象にＩＧＦ−１受容体シグナル伝達の阻害剤を投与することを含む、腫瘍疾患を治療するための併用療法を提供する。ＲＡＳ活性の任意の阻害剤を使用することができる。ＲＡＳ阻害剤のタイプの例としては、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＲＮＡ干渉、ＲＡＳ翻訳後修飾またはプロセシングの阻害（例えば、ＦＴＩ−２７６およびＦＴＩ−２７７のようなＣＡＡＸペプチド模倣体等のファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤（ＦＴＩ）、ならびにチピファルニブ（Ｒ１１５７７７）、ロナファルニブ（ＳＣＨ６６３３６６）、およびＢＭＳ−２１４６６２）のような非ペプチド模倣体）、ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ阻害剤（ＧＧＴＩ）、組み合わせＦＴＩ／ＧＧＴＩ、ＲＡＳタンパク質分解開裂、メチル化、またはパルミトイル化の阻害剤、免疫学的アプローチ（例えば、活性化されたＲＡＳ突然変異体に対するワクチン接種）、突然変異体ＲＡＳペプチド阻害剤、ならびにＲａｆキナーゼ（例えば、ＢＡＹ  ４３−９００６）、ＭＥＫ（例えば、ＣＩ−１０４０、ＰＤ０３２５９０１、およびＡＲＲＹ−１４２８８６）、およびｍＴＯＲ（例えば、ラパマイシン、ＣＣＩ−７７９、ＲＡＤ００１、およびＡＰ２３５７３）等の下流ＲＡＳエフェクターの阻害剤が挙げられる。参照によりその全体が全目的で本明細書に組み込まれる、Ｆｒｉｄａｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  １７５６：１２７−４４を参照されたい。
【０１９６】
実際のおよび予見的（ｐｒｏｐｈｅｔｉｃ）な実施例の両方である、次の実施例は、本
発明の特定の実施形態または特色を例証するの目的のために提供され、その範囲を限定しない。
実施例１：抗体の調製
【０１９７】
この実施例は、ＩＧＦ−１受容体を認識する抗体を調製する方法を実証する。
ＩＧＦ−１受容体ポリペプチドは、従来技法によってモノクローナル抗体を生成する際の免疫原として用いられてもよい。種々の形態でのポリペプチド、例えば、完全長タンパク質、それらの断片、Ｆｃ融合体等のそれらの融合タンパク質、細胞表面上で組換えタンパク質を発現する細胞等が、免疫原として用いられてもよいことが認識される。
【０１９８】
かかる手順の例を要約すると、フロイント完全アジュバント中で乳化されたＩＧＦ−１Ｒ免疫原を、Ｌｅｗｉｓラットに１０〜１００μＬの範囲の量で皮下注射する。３週間後、免疫動物は、フロイント不完全アジュバント中で乳化された追加的免疫原で追加免疫し、その後３週間毎に追加免疫する。血清試料を、ドットブロットアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着測定法）、または１２５Ｉ−ＩＧＦ−１もしくは１２５Ｉ−ＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒ発現細胞の抽出物への結合の阻害による試験のために、眼窩後採血または尾先端切除によって周期的に採取する。適切な抗体価の検出後、陽性動物に、食塩水中の抗原の最終的な静脈内注射を与える。３〜４日間後、動物を屠殺し、脾臓細胞を採取し、マウス骨髄腫細胞株ＡＧ８６５３に融合する。結果として生じるハイブリドーマ細胞株を、ＨＡＴ選択培地（ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジン）中、多数のマイクロタイタープレート中にプレートして、非融合細胞、骨髄腫ハイブリッド、および脾臓細胞ハイブリッドの増殖を阻害する。
【０１９９】
このようにして生成されたハイブリドーマクローンを、ＩＧＦ−１Ｒとの反応性についてスクリーニングする。ハイブリドーマ上清の最初のスクリーニングは、抗体捕捉、および部分的に精製された１２５Ｉ−ＩＧＦ−１受容体の結合を利用する。このスクリーニング法において陽性であるハイブリドーマを、修正抗体捕捉によって試験して、遮断抗体を産生しているハイブリドーマ細胞株を検出する。ＩＧＦ−１Ｒを発現する細胞への１２５Ｉ−ＩＧＦ−１結合を阻害することが可能なモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを、このようにして検出する。かかるハイブリドーマ（ｈｙｄｒｉｄｏｍａｓ）を次いで、ヌードマウスの腹腔中に注射して、高濃度（＞１ｍｇ／ｍＬ）の抗ＩＧＦ−１Ｒモノクローナル抗体を含有する腹水を得る。結果として生じるモノクローナル抗体は、硫酸アンモニウム沈殿、続いて、ゲル排除クロマトグラフィー、および／または抗体のプロテインＧへの結合に基づく親和性クロマトグラフィーによって、精製されてもよい。
【０２００】
同様の方法を使用して、トランスジェニックマウスにおけるヒト抗体を生成することができる。例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，ｌｎｔｅｒｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：６４７−５６、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：８２１−３０、Ｃｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４：１１７−２３、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１４：８４５−５１、Ｈａｒｄｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ａｎｎａｌｓ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−５９、Ｌｏｎｂｅｒｇ，１９９４，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  Ｅｘｐｅｒ．ｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１１３：４９−１０１、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９９４，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８１２−１３、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，１９９６，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１４：８２６、Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０：６２８７−９５、Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ
ａｌ．，１９９４，ｌｎｔｅｒｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６  ５７９−９１、Ｔｏｍｉｚｕｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １６：１３３−
４３、Ｔｏｍｉｚｕｋａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９７：７２２−２７、Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：３７２０−２４、Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：２９１２−２０、Ｒｕｓｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  Ａｐｒｉｌ
２０００：１８２０−２６、Ｇａｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：５３４−４０、Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｃａｎｃｅｒ
Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  Ｒｅｖ．１８：４２１−２５、Ｇｒｅｅｎ，１９９９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：１１−２３、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，１９９８，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．３１：３３−４２、Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８：４８３−９５、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，１９９８，Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ  ７：６０７−１４、Ｔｓｕｄａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ４２：４１３−２１、Ｍｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−５６、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，１９９６，Ｗｅｉｒ’ｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｖｏｌ．ＩＶ，１９４．１−１９４．７、Ｍｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ２６：２９４−３０７、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌ．４：７６１−６３、Ａｒｂｏｎｅｓ，１９９４，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １：２４７−６０、Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ７：１３−２１、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：２５５−５８、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ９０：２５５１−５５を参照されたい。
実施例２：ヒトＩＧＦ−１Ｒ（ＥＣＤ）−Ｃ３−ｍｕＩｇＧ１の単離
【０２０１】
この実施例は、抗体を産生するのに有用なＩＧＦ−１Ｒの可溶性断片を作製する方法を提供する。
ｐＤＳＲα：ｈｕＩＧＦ−１Ｒ（ＥＣＤ）−Ｃ３−ｍｕＩｇＧ１Ｆｃのクローニング    
プライマー２８３０〜３６：
５’ＡＧＣＡＡＧＣＴＴＣＣＡＣＣＡＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＴＣＣＧＧＡＧＧＡＧＧ  ３’配列番号２５６）
および２８３０〜３８：
５’ＡＴＴＴＧＴＣＧＡＣＴＴＣＧＴＣＣＡＧＡＴＧＧＡＴＧＡＡＧＴＴＴＴＣＡＴ  ３’、配列番号２５７）
を使用して、ヒトＩＧＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（１〜９０６）ｃＤＮＡ配列を増幅した。プライマーは、開始（ｓｔａｒｔ）コドンに先行するＫｏｚａｋ翻訳開始（ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ）配列（上記で下線を引かれる）、後続のサブクローニングのための制限部位、および細胞外ドメインＣ末端の隣に挿入される、カスパーゼ−３部位を含んだ。ＰＣＲを、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ２４００（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ）上で、次の条件下で行った：１サイクルを９５℃で２分間、２３サイクルを９５℃で３０秒間、５８．５℃で３０秒間、および７２℃で３分間、ならびに１サイクルを７２℃で１０分間。最終的な反応条件は、１倍ｐｆｕ  ＴＵＲＢＯ（登録商標）緩衝液（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）、２００μＭ  ｄＮＴＰ、各々２μＭプライマー、５Ｕ  ｐｆｕ  ＴＵＲＢＯ（登録商標）（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、および１ｎｇテンプレートＤＮＡであった。ＰＣＲ産物を、製造業者の指示に従ってＣｌｏｎｔｅｃｈ
Ｎｕｃｌｅｏｓｐｉｎ  Ｃｏｌｕｍｎ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を使用して精製し、Ｈｉｎｄ  ＩＩＩおよびＳａｌ  Ｉ（Ｒｏｃｈｅ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）で消化し、ゲル精製した。ヒトＩＧＦ−１Ｒ挿入物を、Ｈｉｎｄ  Ｉ
ＩＩ／Ｓａｌ  Ｉで消化されたｐＤＳＲα−ｍｕＩｇＧ１中に連結反応させた。挿入物の完全性をＤＮＡ配列決定によって確認した。結果として生じるオープンリーディングフレーム（ＩＧＦ−１Ｒ−Ｃ３−ｍｕＦｃ）によってコードされるタンパク質の配列は、図１０に示される。最終的な発現ベクターｐＤＳＲα：ｈｕＩＧＦ１Ｒ（ＥＣＤ）−Ｃ３−ｍｕＩｇＧ１Ｆｃは、表１に記載される。
【表１−１】
2014510265.tif 000003
【表１−２】
2014510265.tif 000004
ｈｕ  ＩＧＦ−１Ｒ（ＥＣＤ）−Ｃ３−ｍｕＩｇＧ１Ｆｃの発現
【０２０２】
１５マイクログラムの線状化発現ベクターｐＤＳＲα：ｈｕＩＧＦ１Ｒ（ＥＣＤ）−Ｃ３−ｍｕＩｇＧ１Ｆｃを、ＡＭ−１／Ｄ  ＣＨＯｄ細胞中に、ＬＴ１リポフェクション試薬（ＰａｎＶｅｒａ  Ｃｏｒｐ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用してトランスフェクトし、細胞を、細胞培地中へのタンパク質の発現および分泌を可能にする条件下で培養した。ＤＨＦＲ選択培地（１０％透析ウシ胎児血清、１倍ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を補充した、ダルベッコ変法イーグル培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））上で１０〜１４日後、２４のコロニーを選択し、発現レベルをウェスタンブロットによって判定した。このアッセイを行うために、０．５ｍＬの無血清培地を、２４ウェルプレート（Ｆａｌｃｏｎ）中で培養された単一ウェルのコンフルエントな細胞に添加した。馴化培地を４８時間後に回収した。ウェスタンブロッティングのための試料を１０％トリス−グリシンゲル（Ｎｏｖｅｘ）中に泳動させ、０．４５μｍニトロセルロース膜（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）上に、Ｍｉｎｉ  Ｔｒａｎｓ−Ｂｌｏｔ細胞（Ｂｉｏｒａｄ）を使用してブロットした。ブロットされた膜をウサギ抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ抗体でインキュベートし、西洋ワサビペルオキシダーゼ（Ｐｉｅｒｃｅ）で共役させた。最高レベルのＩＧＦ−１Ｒ（ＥＣＤ）−Ｃ３−ｍｕＩｇＧ１Ｆｃを発現するクローンを、ＤＨＦＲ選択培地中に増大させ、２×１０７細胞を、２５０ｍＬの高グルコースＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１０％透析ＦＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１倍グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１倍非必須アミノ酸（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１倍ピルビン酸ナトリウム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中、各々５０個のローラーボトル（Ｃｏｒｎｉｎｇ）の中に植菌した。培地に１０％ＣＯ２／平衡空気のガスを５秒間注入した後、ローラーボトルに蓋をした。ローラーボトルを、３７℃で、０．７５ｒｐｍでスピンしている回転ラック上に保った。
【０２０３】
細胞がおよそ８５〜９０％コンフルエント状態に到達したとき（培養でおよそ５〜６日間）、増殖培地を破棄し、細胞を１００ｍＬ  ＰＢＳで洗浄し、２００ｍＬ産生培地を添加した（５０％ＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）／５０％Ｆ１２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１倍グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１倍非必須アミノ酸（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１倍ピルビン酸ナトリウム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１．５％ＤＭＳＯ（Ｓ
ｉｇｍａ））。馴化培地を採取し、１週間間隔で交換した。結果として生じた３０リットルの馴化培地を、０．４５μｍ酢酸セルロースフィルター（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ａｃｔｏｎ，ＭＡ）に通して濾過した。
ｈｕ  ＩＧＦ−１Ｒ（ＥＣＤ）−Ｃ３−ｍｕＩｇＧ１Ｆｃの精製
【０２０４】
馴化培地からの結果として生じた濾液を、渦巻形カートリッジ（分画分子量＝１０ｋＤａ）を使用して２０倍に濃縮し、次いで、３Ｍ  ＫＣｌ、１Ｍグリシン、ｐＨ９．０で１：１に希釈して、最終塩濃度を１．５Ｍ  ＫＣｌ、０．５Ｍグリシン、ｐＨ９．０にした。この試料を、１．５Ｍ  ＫＣｌ、０．５Ｍグリシン、ｐＨ９．０中で平衡化したｒＰｒｏｔｅｉｎ  Ａ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）に適用した。カラムを４０カラム容積の同じ緩衝液で洗浄し、次いで２０カラム容積の０．１Ｍグリシン−ＨＣｌ、ｐＨ２．８で溶出した。５ｍＬ画分を収集し、即座に１ｍＬの１Ｍトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５で中和した。ｈｕＩＧＦ１Ｒ（ＥＣＤ）−Ｃ３−ｍｕＩｇＧＦｃを含有する画分をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって特定し、プールし、リン酸緩衝食塩水に対して透析した。収量は、馴化培地のうち２．４ｍｇ／Ｌであった。検出された主要なタンパク質種は、成熟α鎖およびβ鎖ならびにマウスＦｃであり、それらの各々は、それらの高められた不均一な分子量に基づいて、適切にグリコシル化されているように思われた。
プロセスされていないＩＧＦ−１Ｒ（ＥＣＤ）、ならびにグリコシル化されているが、タンパク質分解開裂されていないＩＧＦ−１Ｒ（ＣＥＤ）もまた、調製物中に存在した。非還元条件下でのより高い分子量へのバンドのシフトは、ジスルフィド結合がα鎖およびβ鎖を接合したことを示す。最終産物のアミノ末端配列決定は、６０％のタンパク質が、ＩＧＦ−１Ｒ（ＥＣＤ）のα鎖とβ鎖との間で正しくプロセスされた一方で、４０％がプロセスされないままであったことを示した。
実施例３：ヒトＩＮＳＲ（ＥＣＤ）−ｍｕＩｇＧ１の単離
【０２０５】
この実施例は、ヒトインスリン受容体の可溶性断片をクローニングし、発現させる方法を提示する。
ｐＤＳＲα：ｈｕＩＮＳＲ（ＥＣＤ）−ｍｕＩｇＧ１Ｆｃのクローニング
プライマー２８３０〜４０：
５’ＡＧＣＡＡＧＣＴＴＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＣＡＣＣＧＧＧＧＧＣＣＧＧ  ３’配列番号２５９
（Ｈｉｎｄ  ＩＩＩ部位に下線が引かれている）および２８３０〜４１：
５’ＡＴＴＴＧＴＣＧＡＣＴＴＴＴＧＣＡＡＴＡＴＴＴＧＡＣＧＧＧＡＣＧＴＣＴＡ３’配列番号２６０
（Ｓａｌ  Ｉ部位に下線が引かれている）を使用して、ヒトＩＮＳＲ細胞外ドメイン（１〜９２９）を、ＩＮＳＲスプライス変異体のＢ型をコードするＩＮＳＲ親プラスミドから増幅した（Ｕｌｌｒｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ  ３１３：７５６−６１、Ｅｂｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｃｅｌｌ  ４０：７４７−５８）。プライマーは、開始コドンに先行するＫｏｚａｋ翻訳開始配列、および後続のサブクローニングのための制限部位を含んだ。ＰＣＲを、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ２４００上で、次の条件下で行った：１サイクルを９５℃で２分間、３２サイクルを９５℃で３０秒間、５８．５℃で３０秒間、および７２℃で３分間、ならびに１サイクルを７２℃で１０分間。最終的な反応条件は、１倍ｐｆｕ  ＴＵＲＢＯ（登録商標）緩衝液、２００μＭ  ｄＮＴＰ、各々２μＭプライマー、５Ｕ  ｐｆｕ  ＴＵＲＢＯ（登録商標）（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、および１０ｎｇテンプレートＤＮＡであった。ＰＣＲ産物を、製造業者の指示に従ってＮＵＣＬＥＯＳＰＩＮ（登録商標）カラム（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を使用して精製し、Ｈｉｎｄ  ＩＩＩおよびＳａｌ  Ｉ（Ｒｏｃｈｅ）で消化し、ゲル精製した後、Ｈｉｎｄ  ＩＩＩ／Ｓａｌ  Ｉで消化されたｐＤＳＲα−ｍｕＩｇＧ１への連結反応を行った。挿入物の完全性をＤＮＡ配列
決定によって確認した。ＩＮＳＲ−ｍｕＦｃのタンパク質配列は、図１１に示される。最終的な発現ベクターは、表２に記載される。
【表２−１】
2014510265.tif 000005
【表２−２】
2014510265.tif 000006
ｈｕ  ＩＮＳＲ（ＥＣＤ）−Ｃ３−ｍｕＩｇＧ１Ｆｃの発現
【０２０６】
ＡＭ−１／Ｄ  ＣＨＯｄ細胞に、１５μｍの線状化発現ベクターｐＤＳＲａ：ｈｕＩＮＳＲ（ＥＣＤ）−ｍｕＩｇＧ１Ｆｃを、ＦＵＧＥＮＥ（商標）６リポフェクション試薬（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を使用してトランスフェクトし、次いで、細胞培地中へのタンパク質の発現および分泌を可能にする条件下で培養した。コロニーを上述のように選択し、分析した。
ｈｕ  ＩＮＳＲ（ＥＣＤ）−Ｃ３−ｍｕＩｇＧ１Ｆｃの精製
【０２０７】
ｈｕＩＮＳＲ（ＥＣＤ）−ｍｕＩｇＧＦｃを含有する濾過された馴化培地を、渦巻形カートリッジ（分画分子量＝１０ｋＤａ）を使用して１７倍に濃縮し、次いで、３Ｍ  ＫＣｌ、１Ｍグリシン、ｐＨ９．０で１：１に希釈して、最終塩濃度を１．５Ｍ  ＫＣｌ、０．５Ｍグリシン、ｐＨ９．０にした。この試料を、１．５Ｍ  ＫＣｌ、０．５Ｍグリシン、ｐＨ９．０中で平衡化されたｒＰｒｏｔｅｉｎ  Ａ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）に適用した。カラムを４０カラム容積の同じ緩衝液で洗浄し、次いで２０カラム容積の０．１Ｍグリシン−ＨＣｌ、ｐＨ２．８で溶出した。５ｍＬ画分を収集し、即座に１ｍＬの１Ｍトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５で中和した。ｈｕＩＮＳＲ（ＥＣＤ）−ｍｕＩｇＧＦｃを含有する画分をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって特定し、プールし、リン酸緩衝食塩水に対して透析した。収量は、馴化培地のうち０．９ｍｇ／Ｌであった。主要なタンパク質種は、成熟α鎖およびβ鎖ならびにマウスＦｃであった。これらの種の各々は、その高められた不均一な分子量に基づいて、適切にグリコシル化されているように思われた。プロセスされていないＩＮＳＲ（ＥＣＤ）、ならびにグリコシル化されているが、タンパク質分解開裂されていないＩＮＳＲ（ＣＥＤ）もまた、調製物中に存在した。非還元条件下でのより高い分子量へのバンドのシフトは、ジスルフィド結合がα鎖およびβ鎖を接合したことを示した。最終産物のアミノ末端配列決定は、８７％のタンパク質が、ＩＮＳＲ（ＥＣＤ）のα鎖とβ鎖との間で正しくプロセスされた一方で、１３％がプロセスされないままであったことを示した。
実施例３：抗ＩＧＦ−１ＲファージＦａｂについての最初のスクリーニング
【０２０８】
この実施例は、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体を特定する方法を提供する。
【０２０９】
４つの健康なドナーからの末梢血液リンパ球および胃癌を有する１患者からの脾臓リンパ球を使用して構築した、Ｔａｒｇｅｔ  Ｑｕｅｓｔ  Ｑ  Ｆａｂライブラリ（「ＴＱライブラリ」、Ｔａｒｇｅｔ  Ｑｕｅｓｔ，Ｍａａｓｔｒｉｃｈｔ，ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を入手した。ライブラリ多様性は、３．７×１０１０クローンであり、３×１０９重鎖を含有した。源、スクリーニング方法、およびライブラリの特徴付けは、公開されている（ｄｅ  Ｈａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ，１９９９，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７４：１８２１８−３０）。Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（２００μＬ）Ｍ−４５０  Ｕｎｃｏａｔｅｄ（カタログ番号１４０．０２、Ｄｙｎａｌ，Ｌａｋｅ  Ｓｕｃｃｅｓｓ，ＮＹ）をＰＢＳで３回洗浄し、２００μＬのＩＧＦ１Ｒ（ＥＣＤ）−Ｃ３−ｍＦｃ中に再懸濁させて、ＰＢＳ中０．５μＭの濃度にし、４℃で、回転子上で一晩インキュベートした。ＩＧＦ−１Ｒ（ＥＣＤ）−Ｃ３−ｍＦｃコーティングビーズを、１ｍＬのＰＢＳ中２％脱脂粉乳（Ｍ）（２％ＭＰＢＳ）で３回洗浄し、次いで１ｍＬの２％ＭＰＢＳで、室温で１時間ブロッキングした。並行して、７５０μＬのＴＱライブラリ（４×１０１２ｐｆｕ）を、２５０μＬ８％ＭＰＢＳと、室温で３０分〜１時間混合することによって事前ブロッキングした。５００μＬのブロッキングしたビーズのうちの１つを、別のマイクロチューブ中に移し、磁気分離器上でブロッキング溶液から分離した。事前ブロッキングしたファージ混合物を、ブロッキングしたビーズに添加し、回転子上で９０分間、室温でインキュベートした。ビーズ結合ファージを非結合ファージから分離し、次いで、異なる洗浄溶液の間でチューブを交換しながら１ｍＬ２％ＭＰＢＳ／０．１％Ｔｗｅｅｎ  ２０で６回、１ｍＬ
ＰＢＳ／０．１％Ｔｗｅｅｎ  ２０で６回、ＰＢＳで２回洗浄した。結合ファージを１ｍＬの０．１Ｍ  ＴＥＡ（ｐＨ１１）で１０分間溶出し、次いで即座にビーズから分離し、０．５ｍＬの１Ｍトリス．ＨＣｌで中和した。溶出されたファージプールを、５０ｍＬコニカル管中、４ｍＬの２倍ＹＴブロス（水１リットル当たり１０ｇ酵母抽出物、１６ｇバクト−トリプトン、５ｇ  ＮａＣｌ）および５ｍＬのＴＧ１細菌培養（Ｏ．Ｄ．５９０、約０．５）と混合した。感染混合物をインキュベーター中で、３７℃で３０分間インキュベートし、次いで３５００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。細胞ペレットを１５００μＬ２倍ＹＴ−ＣＧブロス中に再懸濁させ、３００μＬを５つの２倍ＹＴ−ＣＧ（１００μｇ／ｍＬカルベニシリンおよび２％グルコースを含有する２倍ＹＴブロス）プレートの各々の上に広げた。３０℃で２０時間のインキュベーション後、４ｍＬの２倍ＹＴ−ＡＧを各プレートに添加し、細胞スクレイパーを用いて細胞をプレートから回収した。このステップを３回反復した。回収された細胞の少量をファージレスキューのために使用した（下記を参照されたい）。残りの細胞懸濁液を３５００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。細胞ペレットを、ペレットサイズの概ね半分の容積である一定量の５０％グリセロール中に懸濁させ、−８０℃で保管した。
【０２１０】
ファージをレスキューするために、プレート増幅された（ｐｌａｔｅｄ−ａｍｐｌｉｆｉｅｄ）細胞懸濁液を使用して、４０ｍＬの２倍ＹＴ−ＣＧに、約０．０５のＯＤ５９０になるまで植菌した。培養を、３７℃で、振盪機上で、ＯＤ５９０  ０．５になるまでインキュベートした。対数期培養物を、感染多重度２０でＭ１３ＫＯ７ヘルパーファージ（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ、カタログ番号１８３１１−０１９、１．１×１０１１  ｐｆｕ／ｍＬ）に感染させ、続いて３７℃で３０分間インキュベーションした。感染した細胞を４０００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。細胞ペレットを２００ｍＬの２倍ＹＴ−ＣＫ（１００μｇ／ｍＬカルベニシリンおよび４０μｇ／ｍＬカナマイシン）中に再懸濁させ、２つの２５０ｍＬフラスコに移し、２７０ｒｐｍで振盪しながら３０℃で２０時間インキュベートした。一晩の培養物を４０００ｒｐｍで２０分間遠心分離して、細胞残屑を除去した。細胞残屑の除去を確実にするために、遠心分離を反復した。約１／５容積のＰＥＧ溶液（２０％ＰＥＧ  ８０００、２．５Ｍ  ＮａＣｌ）を上清に添加して、ファージ粒子を沈殿させた。混合物を氷上で少なくとも１時間インキュベートし、続いて４０００ｒｐｍで２０分間の遠心分離を行って、沈殿したファージ粒子
を収集した。ファージペレットを１ｍＬのＰＢＳ中に再懸濁させ、マイクロチューブに移した。ファージ懸濁液を氷上で１時間放置して、ファージ粒子の完全な懸濁を可能にし、１４，０００ｒｐｍで２分間の遠心分離によって清澄化して、残留の細胞残屑を除去した。ファージ沈殿ステップを反復した。清澄化した後、最終的なファージペレットをＰＢＳ中に懸濁させた。レスキューされたファージ懸濁液を次回の選択に使用した。
【０２１１】
種々の標準結合パラメータの変更を含んだ、４回の選択を行った。２回目の選択は、１回目の選択と同一であった。インプットファージ数および溶出試薬における変形は、第３回目および第４回目で導入した。第３回目の選択については、５×１０１１ｐｆｕのファージを選択し、結合ファージを、１μＭ  ＩＧＦ−１（カタログ番号Ｉ３７６９、Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）または１μＭ濃度のキメラαＩＲ３−ｈｕＦｃ抗体のいずれかで溶出して、２つの第３回目プール、ＴＱ４−３ＩＳおよびＴＱ４−３ＣＡを得た。第４回目の選択を、３回目のプールの両方からのレスキューされたファージプール上で行った。マウスＩｇＧ  ＦｃコーティングＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）（Ｄｙｎａｌ
Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｏｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ）を用いた２回の負の選択を含めることにより、マウスＦｃ結合剤を除去した後、実際のＩＧＦ−１Ｒ選択を行った。負の選択のためのインキュベーション時間は、各々３０分間であった。３．７８×１０１１ｐｆｕのＴＱ４−３ＩＳプールおよび３．７５×１０１２ｐｆｕのＴＱ４−３Ｃプールを別個に選択した。結合ファージを１μＭ  ＩＧＦ−２（カタログ番号Ｉ２５２６、Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で溶出して、２つの第４回目プール、ＴＱ４−４ＩＳＩ２およびＴＱ４−４ＣＡＩ２を得た。約９６〜１９２ファージＤＮＡ挿入物の配列を、各溶出ステップで決定した。
【０２１２】
場合によっては、二次スクリーニングを行った。総ＴＱライブラリ、およびＩＧＦ−１Ｒと対比した数回の選択後に増幅された選択ファージのファージミドＤＮＡ混合物を、製造業者の指示（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）に従ってＤＮＡ  Ｍａｘｉｐｒｅｐキットを使用して調製した。全ての４つのＤＮＡ調製物をＡｓｃ  ＩおよびＥｃｏＲ
Ｉ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）で消化した。結果として生じた２つのＡｓｃ  Ｉ／ＥｃｏＲ  Ｉ断片を、分取０．５％アガロースゲル上で分離した。重鎖を含有する２．１ｋｂ断片を、ＩＧＦ−１Ｒ選択ファージからゲル精製した。軽鎖およびｐＣＥＳ１ベクター部分を含有する３．９ｋｂ断片を、総ＴＱライブラリＤＮＡからゲル精製した。２．１ｋｂ断片を、ＴＱライブラリのＤＮＡ試料からの３．９ｋｂ断片に、３：１比で連結反応させた。連結反応させられたＤＮＡを沈殿させ、それを使用して、ＴＧ１細胞をエレクトロポレーションによって形質転換した。結果として生じた軽鎖シャッフルによる二次ライブラリのライブラリサイズは、８．８×１０８であった。９６の無作為に選ばれたクローンを配列決定した後、７６の固有の軽鎖配列を得たが、それは軽鎖をシャッフルする試みが奏功したことを示している。
【０２１３】
軽鎖シャッフルライブラリをスクリーニングするための結合、洗浄、および溶出条件は、最初のスクリーニングについて記載される条件と本質的に同じであった。しかしながら、より高い親和性を有するＩＧＦ−１Ｒ結合剤、とりわけ、有意に遅いオフ速度（ｏｆｆ−ｒａｔｅｓ）を有するＩＧＦ−１Ｒ結合剤の増幅に対する選択圧を増加させるために、複数の変形を含めた。これらのパラメータは次の通りであった：より高い数のインプットファージ（２−２．７×１０１３ｐｆｕ）、より小さいビーズ容積（第１回目について１００μＬ、第２回目について５０μＬ、および第３回目について２５μＬ）、および最大２０時間まで延長された特定の溶出時間。溶出緩衝液は、第１回目（ＲＤ１）について０．１Ｍ  ＴＥ、ＲＤ２について０．４％ＭＰＢＳ中１μＭ  ＩＧＦ−１、およびＲＤ３について０．４％ＭＰＢＳ中１μＭ  ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２であった。ＲＤ２およびＲＤ３において、１５分間または２時間で溶出された結合剤を破棄した。溶出を継続し、溶出されたファージを８〜１０時間後に、および２０時間後に再び、収集した。
ファージＦａｂ  ＥＬＩＳＡスクリーニング
【０２１４】
９６ウェルの２ｍＬ深さのウェルブロック中で、４８０μＬ／ウェル２倍ＹＴ−ＣＧブロスに、個々のクローンの２０μＬの一晩の培養物を植菌し、次いで３７℃、３００ｒｐｍで３時間インキュベートした。各ウェルに、５０μＬの１：３に希釈したＭ１３ＫＯ７ヘルパーファージを添加して、細胞を感染させた。ブロックを、振盪せずに３７℃で３０分間インキュベートし、次いで更に３０分間、１５０ｒｐｍで穏やかに振盪した。ブロックを３６００ｒｐｍで２０分間遠心分離して、感染した細胞をペレット化した。各ウェル中の細胞ペレットを、４８０μＬの２倍ＹＴ−ＣＫ（１００μｇ／ｍＬカルベニシリンおよび４０μｇ／ｍＬカナマイシンを含有する２倍ＹＴブロス）中に懸濁させ、３０℃で一晩、約２０時間にわたってインキュベートした。細胞残屑を、遠心分離によって３６００ｒｐｍで２０分間分離した。レスキューされたファージ上清をファージＥＬＩＳＡにおいて使用して、個々のクローンのＩＧＦ−１Ｒ特異性、ＩＮＳＲ交差反応性、またはマウスＦｃ結合について確認した。
【０２１５】
３組のＮｕｎｃ  ＭａｘｉＳｏｒｂ  免疫プレートを、それぞれ、ＰＢＳ中、１００μＬ／ウェルの５μｇ／ｍＬのＩＧＦ−１Ｒ−Ｃ３−ｍＦｃ、５μｇ／ｍＬのＩＮＳＲ−ｍＦｃ、または２μｇ／ｍＬのマウスＩｇＧ１（カタログ番号０１０−０１０３、Ｒｏｃｋｌａｎｄ，Ｇｉｌｂｅｒｔｓｖｉｌｌｅ，ＰＡ）で、４℃で一晩コーティングした。コーティングされたプレートを３００μＬ／ウェルのＰＢＳで３回洗浄した。洗浄されたプレートを３００μＬ／ウェル２％ＭＰＢＳで、室温で１時間ブロッキングした。その間に、個々のクローンのレスキューされたファージを、１７０μＬのレスキューされたファージを１７０μＬの４％ＭＰＢＳと混合することによって、事前ブロッキングした。ブロッキングしたプレートを３００μＬ／ウェルＴＢＳＴ（ＴＢＳ：１０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ；Ｔｗｅｅｎ−２０．０．１％）で５回洗浄した。１００μＬ／ウェルの事前ブロッキングしたファージ希釈液を、各組のコーティングされたプレートに分配し、それを室温で、揺動機（ｒｏｃｋｅｒ）上で９０分間インキュベートした。プレートを３００μＬ／ウェルＴＢＳＴで５回洗浄した。２％ＭＰＢＳ中１００μＬ／ウェルの抗Ｍ１３−ＨＲＰ（１：３０００希釈、カタログ番号２７−９４２１−０１、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を分配し、プレートを室温で、揺動機上で１時間インキュベートした。プレートを３００μＬ／ウェルＴＢＳＴで５回洗浄した。１００μＬ／ウェルの基質１−Ｓｔｅｐ（商標）ＡＢＴＳ（（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ、カタログ番号３７６１５）を添加した。プレートを１時間インキュベートした。シグナル検出のためにＯＤ４０５を測定した。
【０２１６】
ファージディスプレイ抗体は、本質的に、インスリン受容体およびマウスＦｃドメインとの何の交差反応性も示さなかった。ＩＧＦ−１Ｒ  ＥＬＩＳＡにおいて観察されたシグナルは、したがって、ＩＧＦ−１Ｒ細胞外ドメインに対して特異的であった。ファージディスプレイ抗体の４つについての同様のアッセイからの結果が、図１４に示される。
【０２１７】
ＩＧＦ−１Ｒ陽性、ＩＮＳＲ、およびｍｕ  ＩｇＧ１陰性のクローンのＤＮＡ挿入物を配列決定した。軽鎖および重鎖可変ドメイン配列の次の組み合わせを有する、５２の固有のＦａｂ配列を同定した：Ｌ１Ｈ１、Ｌ２Ｈ２、Ｌ３Ｈ３、Ｌ４Ｈ４、Ｌ５Ｈ５、Ｌ６Ｈ６、Ｌ７Ｈ７、Ｌ８Ｈ８、Ｌ９Ｈ９、Ｌ１０Ｈ１０、Ｌ１１Ｈ１１、Ｌ１２Ｈ１２、Ｌ１３Ｈ１３、Ｌ１４Ｈ１４、Ｌ１５Ｈ１５、Ｌ１６Ｈ１６、Ｌ１７Ｈ１７、Ｌ１８Ｈ１８、Ｌ１９Ｈ１９、Ｌ２０、Ｈ２０、Ｌ２１Ｈ２１、Ｌ２２Ｈ２２、Ｌ２３Ｈ２３、Ｌ２４Ｈ２４、Ｌ２５Ｈ２５、Ｌ２６Ｈ２６、Ｌ２７Ｈ２７、Ｌ２８Ｈ２８、Ｌ２９Ｈ２９、Ｌ３０Ｈ３０、Ｌ３１Ｈ３１、Ｌ３２Ｈ３２、Ｌ３３Ｈ３３、Ｌ３４Ｈ３４、Ｌ３５Ｈ３５、Ｌ３６Ｈ３６、Ｌ３７Ｈ３７、Ｌ３８Ｈ３８、Ｌ３９Ｈ３９、Ｌ４０Ｈ４０、Ｌ４１Ｈ４
１、Ｌ４２Ｈ４２、Ｌ４３Ｈ４３、Ｌ４４Ｈ４４、Ｌ４５Ｈ４５、Ｌ４６Ｈ４６、Ｌ４７Ｈ４７、Ｌ４８Ｈ４８、Ｌ４９Ｈ４９、Ｌ５０Ｈ５０、Ｌ５１Ｈ５１、およびＬ５２Ｈ５２（ここで「Ｌｘ」は、軽鎖可変ドメイン番号「ｘ」を示し、「Ｈｘ」は、重鎖可変ドメイン番号「ｘ」を示す」。図１は、これらの軽鎖および重鎖可変ドメインの各々のポリヌクレオチド配列を提示する。図２および３は、対応するアミノ酸配列を提示する。
実施例４：ＩｇＧ１発現ベクターへのＶＨおよびＶＬのサブクローニング
【０２１８】
この実施例は、先に同定された可変ドメイン配列を、ＩｇＧ１発現ベクターにサブクローニングする方法を提示する。
ｐＤＳＲα２０およびｐＤＳＲα２０：ｈＩｇＧ１ＣＨの構築
【０２１９】
ｐＤＳＲα２０：ｈＩｇＧ１ＣＨ発現ベクター（国際公開第ＷＯ９０／１４３６３号）は、ｐＤＳＲ１９：ｈＩｇＧ１ＣＨの誘導体である（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２００２年４月５日に出願された米国仮特許出願第６０／３７０，４０７号、「選択的ＯＰＧＬ経路阻害剤としてのヒト抗ＯＰＧＬ中和抗体」を参照されたい）。ｐＤＳＲα１９：ｈＩｇＧ１ＣＨプラスミドは、ラット可変領域／ヒト定常領域ＩｇＧ１（ｒＶｈ／ｈＣｈ１）をコードした。Ｘｂａ  ＩおよびＢｓｍＢ  Ｉ末端ラット抗体可変領域ＰＣＲ産物、線状プラスミドｐＤＳＲα１９：ｈＩｇＧ１  ＣＨ（Ｈｉｎｄ  ＩＩＩおよびＢｓｍＢ  Ｉ末端）からＳａｌ  Ｉ開裂ならびにＢｓｍＢ  ＩおよびＳａｌ  Ｉ断片のゲル単離によって誘導されるヒトＩｇＧ１定常領域（ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３ドメイン）、ならびにＸｂａ  ＩおよびＳａｌ  Ｉ末端を有する線状化ｐＤＳＲα１９の、３ピース連結反応（ｔｈｒｅｅ−ｐｉｅｃｅ  ｌｉｇａｔｉｏｎ）によって、プラスミドを構築した。ｐＤＳＲα２０を、部位特異的突然変異誘発によって、ｐＤＳＲα１９におけるヌクレオチド２５６３をグアノシンからアデノシンに変化させることによって産生した。重鎖発現ベクター、ｐＤＳＲα２０：ｈＩｇＧ１ＣＨラット可変領域／ヒト定常領域ＩｇＧ１（ｒＶｈ／ｈＣｈ１）は、６１６３塩基対であり、表３に記載される７つの機能領域を含有する。
【表３−１】
2014510265.tif 000007
【表３−２】
2014510265.tif 000008
【０２２０】
線状プラスミドｐＤＳＲα２０：ｈＩｇＧ１ＣＨを、ｐＤＳＲ２０：ラット可変領域／ヒト定常領域ＩｇＧ１プラスミドを、制限酵素Ｘｂａ  ＩおよびＢｓｍＢ  Ｉで消化して、ラット可変領域を除去し、ＱＩＡｑｕｉｃｋゲル抽出キットを使用して精製することによって調製した。１．０ｋｂｐヒトＩｇＧ１定常領域ドメインを含有する線状プラスミドｐＤＳＲα２０：ｈＩｇＧ１ＣＨを使用して、抗ＩＧＦ−１Ｒ可変重鎖コード配列を受容した。
抗ＩＧＦ−１Ｒ  ＩｇＧ１重鎖発現クローンの構築
【０２２１】
重鎖の抗ＩＧＦ−１Ｒ可変領域をコードする配列を、相補的オリゴヌクレオチドプライマーを有するファージミドＤＮＡから増幅した。Ｈｉｎｄ  ＩＩＩ部位、Ｘｂａ  Ｉ部位、Ｋｏｚａｋ配列（ＣＣＡＣＣ）、ならびにシグナル配列（翻訳されたペプチドは、ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＲＧＡＲＣである、配列番号２６３）を可変領域の５’末端上に組み込むように、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）のためのプライマーを設計した一方で、ＢｓｍＢ  Ｉ部位をＰＣＲ産物の３’末端上に付加した。ＰＣＲ産物をＸｂａ
ＩおよびＢｓｍＢ  Ｉで消化し、次いでヒトＩｇＧ１定常領域を含有するＸｂａ  Ｉ−ＢｓｍＢ  Ｉ線状ｐＤＳＲα２０：ｈＩｇＧ１ＣＨ発現ベクターにクローニングした。（図１３）。最終的な発現ベクターは、表４に記載される７つの機能領域を含有した。
【表４】
2014510265.tif 000009
抗ＩＧＦ−１Ｒ  ＩｇＧ１可変鎖発現クローンの構築。
【０２２２】
抗ＩＧＦ−１Ｒファージにおいてコードされる軽鎖は、カッパまたはラムダクラスのいずれかであった。それらを、２つのアプローチのうちの１つを使用してクローニングした。Ｈｉｎｄ  ＩＩＩ部位、Ｘｂａ  Ｉ部位、Ｋｏｚａｋ配列（ＣＣＡＣＣ）、およびシグナル配列（翻訳されたペプチドは、ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＲＧＡＲＣである、配列番号２６４）がコード領域の５’末端に付加されるように、相補的プライマーを設計した。エラーのないコード領域を有した鎖を、完全長産物としてクローニングした。完全長軽鎖を、Ｘｂａ  ＩおよびＳａｌ  Ｉ断片として、発現ベクターｐＤＳＲα２０にクローニングした。最終的な発現ベクターは、表５に記載される７つの機能領域を含有した。
【表５】
2014510265.tif 000010
【０２２３】
幾つかのカッパクローンは、天然のヒト定常領域配列と比較したとき、それらの定常領域においてエラーを有した。これらの不一致を排除するために、Ｘｂａ  Ｉ部位を５’末端に、およびＢｓｍＢ  Ｉ部位を３’末端に導入するであろうプライマーで、カッパ可変領域を増幅した。この断片を次いで、５’末端上の適合性ＢｓｍＢ  Ｉおよび３’Ｓａｌ
Ｉ末端を有するヒトカッパ定常領域（図１３）と共に、Ｘｂａ  ＩおよびＳａｌ  Ｉ末端を有するｐＤＳＲα２０に連結反応させた。
実施例５：抗体の一過性発現
【０２２４】
この実施例は、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体を一過性で発現させる方法を提供する。
【０２２５】
抗体を、無血清懸濁液適合２９３Ｔ細胞中で、一過性で発現させた。全てのトランスフェクションを、２５０ｍＬ培養として行った。簡潔に述べると、１．２５×１０８細胞（５．０×１０５細胞／ｍＬ×２５０ｍＬ）を、２，５００ＲＰＭで１０分間、４℃で遠心分離して、馴化培地を除去した。細胞を無血清ＤＭＥＭ中に再懸濁させ、２，５００ＲＰＭで１０分間、４℃で再び遠心分離した。洗浄溶液を吸引した後、細胞を、５００ｍＬスピナーフラスコ培養中、増殖培地［ＤＭＥＭ／Ｆ１２（３：１）＋１倍インスリン−トランスフェリン−セレン補充剤＋１倍Ｐｅｎ  Ｓｔｒｅｐ  Ｇｌｕｔ＋２ｍＭ  Ｌ−グルタミン＋２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ＋０．０１％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８］中に再懸濁させた。スピナーフラスコ培養を、磁気撹拌プレート上で、１２５ＲＰＭで維持し、それを３７℃および５％ＣＯ２で維持された加湿インキュベーター中に配置した。プラスミドＤＮＡを、５０ｍＬコニカル管中、トランスフェクション試薬でインキュベートした。ＤＮＡ−トランスフェクション試薬複合体を、無血清ＤＭＥＭ中、５％の最終的な培養容積で調製した。培養物１ミリリットル当たり１マイクログラムのプラスミドＤＮＡを、最初に無血清ＤＭＥＭに添加し、続いて１μＬ  Ｘ−ＴｒｅｍｅＧｅｎｅ  ＲＯ−１５３９／ｍＬ培養物を添加した。複合体を室温でおよそ３０分間インキュベートし、次いでスピナーフラ
スコ中の細胞に添加した。トランスフェクション／発現を７日間行い、その後、馴化培地を、４，０００ＲＰＭで６０分間、４℃での遠心分離によって採取した。
【０２２６】
最初のトランスフェクションにより、要求される１００μｇ精製抗体を得ることができなかった場合、それらのクローンをローラーボトル中で再発現させた。これらのトランスフェクションは、５％ＦＢＳ＋１倍非必須アミノ酸＋１倍Ｐｅｎ  Ｓｔｒｅｐ  Ｇｌｕｔ＋１倍ピルビン酸ナトリウムを補充したＤＭＥＭにおいて増殖させられ、維持された、２９３Ｔ接着細胞を使用した。およそ４−５×１０７  ２９３Ｔ細胞を、８５０ｃｍ２ローラーボトル中に一晩播種した。翌日、先に播種された細胞を次いで、ＦＵＧＥＮＥ（商標）６トランスフェクション試薬を使用してトランスフェクトした。ＤＮＡ−トランスフェクション試薬混合物を、およそ６．７５ｍＬの無血清ＤＭＥＭ中で調製した。６７５μＬ
ＦＵＧＥＮＥ（商標）６トランスフェクション試薬を最初に添加し、続いて１１２．５μｇプラスミドＤＮＡを添加した。複合体を室温で３０分間インキュベートした。混合物全体を次いでローラーボトルに添加した。ローラーボトルに、５％ＣＯ２ガス混合物を注入し、緊密に蓋をして、０．３５ＲＰＭで回転している回転ラック上の、３７℃のインキュベーターに配置した。トランスフェクションを２４時間行い、その後、培地を、１００ｍＬ  ＤＭＥＭ＋１倍インスリン−トランスフェリン−セレン補充剤＋１倍Ｐｅｎ  Ｓｔｒｅｐ  Ｇｌｕ＋１倍非必須アミノ酸＋１倍ピルビン酸ナトリウムと交換した。典型的に、４８時間間隔で、各ローラーボトルから２〜３回の採取物（１００ｍＬ）を得た。採取された無血清馴化培地を一緒にプールし、４，０００ＲＰＭで３０分間、４℃で遠心分離した。
実施例６：抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体小規模精製
【０２２７】
この実施例は、小規模で抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体を精製するする方法を提供する。
【０２２８】
馴化培地を、０．４５μｍ酢酸セルロースフィルターに通して濾過し、Ｖｉｖａｆｌｏｗ  ２００  ５０Ｋ接線流膜（Ｖｉｖａｓｃｉｅｎｃｅ，Ｇｏｅｔｔｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、およそ８倍に濃縮した。ｒＰｒｏｔｅｉｎ  Ａ  ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗ樹脂（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を、リン酸緩衝食塩水（２．７ｍＭ塩化カリウム、１３８ｍＭ塩化ナトリウム、１．５ｍＭリン酸カリウム、および８．１ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．４）（ＰＢＳ）で４回洗浄し、次いで濃縮培地に直接適用した。使用した樹脂の量は、ＥＬＩＳＡによって決定される抗体濃度に基づき、ここで５μｇ抗体当たり１μＬの樹脂を使用した。培地を、穏やかに撹拌しながら一晩、４℃でインキュベートした。樹脂を５００ｇで１０分間、４℃で遠心分離した。上清を非結合画分としてデカントした。樹脂をＰＢＳで４回、穏やかに撹拌しながら１分間にわたって室温で洗浄し、毎回、５００ｇで１０分間、４℃での遠心分離によって、樹脂を収集した。樹脂を１．５容積の０．１ＭグリシンｐＨ３．０で１０分間、室温でインキュベートすることによって、抗体を溶出した。樹脂を５００ｇで１０分間、４℃で遠心分離し、上清を溶出抗体としてデカントした。上述の溶出ステップを、総計３回の溶出のために反復し、毎回、溶出された物質を、０．０４容積の１．０Ｍトリス−ＨＣｌ、ｐＨ９．２で中和した。試料を、０．２μｍ酢酸セルロースフィルターに通して濾過した。Ｂｒａｄｆｏｒｄ法によって、標準としてヒトＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を使用するＢｉｏ−Ｒａｄ  タンパク質アッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を供給される指示通りに使用して、タンパク質濃度を決定した。試料を、クマシーブリリアントブルー色素で染色された４〜２０％トリス−グリシンＳＤＳポリアクリルアミドゲル（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）ゲルを使用して、ヒトＩｇＧ１、Ｋ標準（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）と比較した。これらの調製物において、汚染タンパク質は何ら可視的でなかった。
実施例７：抗体を発現する安定ＣＨＯクローンの単離
【０２２９】
この実施例は、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体を発現する安定ＣＨＯ細胞株を単離するための方法を提供する。
【０２３０】
ＴＱ１１Ｃ、ＴＱ２５、ＴＱ  ５８、およびＴＱ５９  ＩｇＧ１の安定な発現を、ＡＭ１−Ｄ  ＣＨＯ細胞（米国特許第６，２１０，９２４号、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）の、ｐＤＳＲα２０重鎖および軽鎖ＩｇＧ１発現構築物との共トランスフェクションによって達成した。プラスミドトランスフェクションを、製造業者の指示に従ってＬＦ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用して行った。簡潔に述べると、４×１０６ＡＭ１−Ｄ  ＣＨＯ細胞を、トランスフェクションの２４時間前に、５％ウシ胎児血清、１倍ペニシリン−ストレプトマイシンおよびグルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、非必須アミノ酸（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ピルビン酸ナトリウム、およびＨＴ（０．１ｍＭヒポキサンチンナトリウム、１６ｎＭチミジン、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を補充した１０ｍＬのダルベッコ変法イーグル培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中、１００ｍｍ直径ＦＡＬＣＯＮ（商標）プラスチックペトリ皿（ＢＤ  Ｆａｌｃｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）中にプレートした。およそ１５ｍｇの各ｐＤＳＲα２１−軽鎖および重鎖プラスミドＤＮＡを、Ｐｖｕ  Ｉ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）を使用して線状化し、２ｍＬのＯＰＴＩ−ＭＥＭ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に希釈した。希釈されたプラスミドを、２ｍＬのＯＰＴＩ−ＭＥＭ（登録商標）中に希釈された７５μＬのＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（商標）２０００（ＬＦ２０００、ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬ）と混合し、混合物を２０分間、室温でインキュベートした。翌日、新鮮な増殖培地を添加した。細胞を完全増殖培地中で４８時間培養し、次いで１：２０および１：５０希釈で、ＨＴ−選択培地中にプレートした。トランスフェクションのおよそ２週間後、１２〜２４の可視コロニーを、滅菌クローニングディスク（ＲＰＩ）を使用して２４ウェルプレート中に摘み取った。最高レベルのＴＱ１１Ｃ、ＴＱ２５、ＴＱ５８、およびＴＱ５９  ＩｇＧ１を発現するクローンを、ウェスタン免疫ブロット分析によって特定した。このアッセイを行うために、０．５ｍＬの無血清培地を、２４ウェルプレート（ＢＤ  Ｆａｌｃｏｎ）中で培養された単一ウェルのコンフルエント細胞に添加した。２４時間後、馴化培地を回収し、１０μＬのＣＭを、等容積の負荷緩衝液と混合して、１０％トリス−グリシンポリアクリルアミドタンパク質ゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を泳動させた。ゲルを０．４５μｍ孔径ニトロセルロース膜（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に移し、ウェスタンブロット分析を、１：１０００希釈のヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ  ＩｍｍｕｎｏＰｕｒｅ抗体（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）、および検出薬剤としてＥＣＬを使用して行った。
実施例８：抗体の中規模発現
【０２３１】
この実施例は、安定ＣＨＯ細胞株によって発現される、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体を発現させる方法を提供する。
【０２３２】
実施例７に従って作製されたＣＨＯ細胞株を、スケールアップ発現のためにＴ−１７５組織培養フラスコ（Ｆａｌｃｏｎ）に増大させた。コンフルエントなＴ１７５フラスコ（およそ２〜３×１０７細胞）を使用して、３〜８５０ｃｍ２ローラーボトル（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ａｃｔｏｎ，ＭＡ）に播種し、３つのコンフルエントなローラーボトル（１ローラーボトル当たりおよそ１〜２×１０８細胞）を使用して、２５０ｍＬの高グルコースＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１０％透析ＦＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１倍グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１倍非必須アミノ酸（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１倍ピルビン酸ナトリウム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中、３０のローラーに播種した。培地に、１０％ＣＯ２／平衡空気を５秒間注入した後、ローラーボトルに蓋をした。ローラーボトルを、０．７５ｒｐｍでスピンしている回転ラック上で、３７℃でインキュベートした。
【０２３３】
細胞がおよそ８５〜９０％コンフルエント状態（培養でおよそ５〜６日間）に到達したとき、増殖培地を破棄し、細胞を１００ｍＬ  ＰＢＳで洗浄し、２００ｍＬ産生培地に、（５０％ＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）／５０％Ｆ１２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１倍グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１倍非必須アミノ酸（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１倍ピルビン酸ナトリウム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１．５％ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ）を添加した。馴化培地を、総計４回の採取のために、７日毎に採取した。
【０２３４】
馴化培地を、０．４５μｍ酢酸セルロースフィルターに通して濾過し、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ  Ｓａｒｔｏｃｏｎ  Ｓｌｉｃｅ  Ｄｉｓｐｏｓａｂｌｅ  ３０Ｋ接線流膜（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ  ＡＧ，Ｇｏｅｔｔｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、およそ１０倍に濃縮した。濃縮された物質を１０ｍＬ  ｒＰｒｏｔｅｉｎ  Ａ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムに４℃で適用し、通過画分を非結合画分として収集した。カラムを４カラム容積のＰＢＳで洗浄した。結合試料をおよそ４カラム容積の０．１ＭグリシンｐＨ３．０で溶出した。溶出ピークを収集し、０．０４容積の１．０Ｍトリス−ＨＣｌ、ｐＨ９．２で中和した。溶離液を、１５０容積のＰＢＳに対して、一晩、４℃で透析した。試料を、０．２μｍ酢酸セルロースフィルターに通して濾過し、タンパク質濃度を、１４，０００Ｍ−１の消衰係数を使用して２８０ｎｍでの吸光度を決定することによって測定した。試料を、クマシーブリリアントブルー色素で染色された４〜２０％トリス−グリシンＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを使用して、ヒトＩｇＧ１、Ｋ標準（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ，ＵＳＡ）と比較した。パイロテル・リムルス・アメボサイト・ライセートアッセイ（Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ｏｆ  Ｃａｐｅ  Ｃｏｄ，Ｉｎｃ．，Ｆａｌｍｏｕｔｈ，Ｍａ）を供給される指示通りに使用して、各抗体調製物における内毒素レベルを決定した。
実施例９：ＯＲＩＧＥＮ（登録商標）用量反応競合アッセイ
【０２３５】
この実施例は、ＩＧＦ−１Ｒへのリガンド結合を遮断する抗体の能力を試験するための方法を提供する。
【０２３６】
ＯＲＩＧＥＮ（登録商標）結合アッセイを使用して、製造業者（Ｉｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）によって提供される手順を使用してＴＱ１１Ｃ、ＴＱ２５、ＴＱ  ５８、およびＴＱ５９  ＩｇＧ１抗体が、ＩＧＦ−１Ｒへのリガンド結合を遮断し得るかどうかを決定した。ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２をルテニウムで標識するために、凍結乾燥させたタンパク質をＰＢＳ中に溶解させて、１．０ｍｇ／ｍＬ溶液を得た。ＤＭＳＯ中５ｍｇ／ｍＬの標識原液から、標識（ＩｇｅｎからのＯＲＩ−ＴＡＧ−ＮＨＳエステル、カタログ番号１１００３４）を、５：１（標識：タンパク質）のモル比で、タンパク質に添加した。混合物を室温（２０〜２２℃）で１時間、暗所でインキュベートし、次いで２０μＬの２Ｍグリシンで１０分間、室温で処理した。標識タンパク質を、ＰＢＳ中で平衡化されたＡｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＮＡＰ−５カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）への適用によって遊離標識から分離し、０．３３ｍＬ画分を収集した。画分のタンパク質濃度をＭｉｃｒｏ  ＢＣタンパク質アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）によって決定した。画分２および３は、かなりのタンパク質を含有し、それらを組み合わせた。組み込まれたルテニウム標識の量を、次の式を使用して評価した：ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２のルテニウムトリス−ビピリジル化合物（Ｒｕ（ｂｐｙ）３２＋）標識。
【０２３７】
ヒツジ抗マウスＩｇＧでコーティングされたＤｙｎａｌ  Ｍ４５０常磁性ビーズを、ＩＧＦ−１Ｒ（ＥＣＤ）−Ｃ３−ｍｕＦｃのための固形支持相として使用した。受容体負荷のためのＭ４５０ビーズを、１倍ＰＢＳ、０．０５％ＴＷＥＥＮ（商標）２０（ＩＣＩ  
Ａｍｅｒｉｃａｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ  ＤＥ）０．１％ＢＳＡ、０．０１％アジ化ナトリウムを含有するアッセイ緩衝液で３回洗浄することによって調製した。ＩＧＦ−１Ｒ（ＥＣＤ）−Ｃ３−ｍｕＦｃを、２５μＬアッセイ緩衝液の容積中、１×１０６  Ｍ４５０ビーズ当たり５０ｎｇ受容体の比率で、１時間結合させた。用量反応データを生成するために、抗体または未標識ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２因子を、１ｎＭ  Ｒｕ−ＩＧＦ−１または２ｎＭ  Ｒｕ−ＩＧＦ−２と同時に、漸増濃度（１０−１１Ｍ〜１０−６Ｍ）で添加した。最終反応容積は１００μＬであった。暗所の室温で２時間のインキュベーション後、Ｍ８分析装置（Ｉｇｅｎ）を使用して、遊離ルテニウム標識リガンドを除去し、受容体へのリガンド結合の量を決定した。データを、過剰の未標識増殖ＩＧＦ１またはＩＧＦ−２との競合後に残ったバックグラウンドを減じた、総リガンド結合のパーセントとして表した。競合曲線を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）により、単一構成要素平衡（ｅｑｕｉｌｉｂｉｒｉｕｍ）モデルを使用して生成した。本質的に全ての（＞９８％）結合が、過剰の未標識成長因子と競合させられた。結合分析における陽性対照抗体は、マウス抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体αＩＲ３（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）またはＭＡＢ３９１（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）、２４−５７（Ｂｉｏｃａｒｔａ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、および１Ｈ７（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，ＣＡ）であった。陰性対照抗体は、抗ＣＤ２０抗体であった。リガンド競合データは、図１５に示される。ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２結合反応について観察されたＫｉおよび最大阻害値は、表６に列挙される。
【表６】
2014510265.tif 000011
実施例１０：ＳＰＡ用量反応競合アッセイ
【０２３８】
この実施例は、インスリン（ＩＮＳ）のインスリン受容体（ＩＮＳＲ）との相互作用、ならびにＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒへの相互作用に対する抗体の効果を評価するための、シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）を提示する。
【０２３９】
ＴＱ１１Ｃ、ＴＱ２５、ＴＱ  ５８、およびＴＱ５９  ＩｇＧ１抗体に対するＩＧＦ−１Ｒ結合反応は、１倍ＰＢＳ、０，０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０（Ｍａｌｌｉｎｋｒｏｄｔ）、０．１％ＢＳＡ（ＥＭ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ，ＮＪ）、５０ｎｇ  ＩＧＦ−１Ｒ（ＥＣＤ）−Ｃ３−ｍｕＦｃ、５００μｇ  ＳＰＰＶＴ抗マウスＩｇＧフルオロミクロスフェア（Ａｍｅｒｓｈａｍ）、およびＡｍｅｒｓｈａｍから０．６４ｎＭの最終的な濃度で取得された１２５Ｉ標識ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２を含有した。総反応容積は１００μＬであった。ＩＮＳＲ結合反応は、それらが５０ｎｇ  ＩＮＳＲ
（ＥＣＤ）−ｍｕＦｃおよび０．６４ｎＭ  １２５Ｉ−ＩＮＳ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を含有したことを除いて、同一であった。受容体をＳＰＰＶＴミクロスフェア上に１時間、室温で負荷した後、結合反応の組み立てを行った。用量反応データを生成するために、抗体または未標識成長因子を、１２５Ｉ標識成長因子と同時に、漸増濃度（１０−１１Ｍ〜１０−６Ｍ）で添加した。本質的に全ての結合が、過剰の未標識成長因子と競合させられた。ＳＰＴ  ＰＶＴミクロスフェアの無作為γ刺激によって引き起こされる、受容体非依存性バックグラウンドは、インプット１２５Ｉ  ｃｐｍの０．５％未満であった。データを、過剰の未標識増殖ＩＧＦ１またはＩＧＦ−２との競合後に残ったバックグラウンドを減じた、総リガンド結合のパーセントとして表した。競合曲線を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアにより、単一構成要素平衡モデルを使用して生成した。
実施例１１：ＩＧＦ−１Ｒへの抗体結合
【０２４０】
この実施例は、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体のＩＧＦ−１Ｒへの結合を検出する方法を提供する。
【０２４１】
ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）２０００、センサチップＣＭ５、表面活性Ｐ２０、ＨＢＳ−ＥＰ（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、３．４ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．００５％Ｐ２０、ｐＨ７．４）、アミン結合キット、１０ｍＭ酢酸塩ｐＨ４．５、および１０ｍＭグリシンｐＨ１．５全てを、ＢＩＡＣｏｒｅ，Ｉｎｃ．（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）から購入した。リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ、１倍、塩化カルシウム不含、塩化マグネシウム不含）はＧｉｂｃｏからのものであった。ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、画分Ｖ、ＩｇＧ不含）はＳｉｇｍａからのものであった。組換えプロテインＧ（「ｒＰｒｏｔｅｉｎ  Ｇ」）はＰｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙからのものであった。
【０２４２】
センサチップ表面へのｒＰｒｏｔｅｉｎ  ＧおよびＩＧＦ−１Ｒ−Ｃ３−ｍｕＦｃの固定化を、製造業者の指示に従って、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、３．４ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．００５％Ｐ２０、ｐＨ７．４（ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液）の連続流動を使用して行った。簡潔に述べると、センサチップの表面上のカルボキシル基を、０．２Ｍ  Ｎ−エチル−Ｎ’−（ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）および０．０５Ｍ  Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を含有する６０μＬの混合物を注射することによって活性化させた。特異的表面を、２０〜５０μｇ／ｍＬの間の濃度で１０ｍＭ酢酸塩、ｐＨ４．５中に希釈したｒＰｒｏｔｅｉｎ  Ａ（Ｐｉｅｒｃｅ）またはＩＧＦ−１Ｒ−Ｃ３−ｍＦｃを注射することによって得た。表面上の過剰の反応基を、６０μＬの１Ｍエタノールアミンを注射することによって不活性化した。最終的な固定化レベルは、プロテインＧ表面について５，０００〜６，０００共鳴単位（ＲＵ）、およびＩＧＦ−１Ｒ−ｍＦｃ表面について約７，８００ＲＵであった。ブランクの偽結合参照表面もまた、ＩＧＦ−１Ｒ−ｍＦｃセンサチップ上に調製した。
【０２４３】
ＩＧＦ−１Ｒ−ｍＦｃと抗体との間の相互作用の動態解析を、次のように行った。抗体ならびに陽性対照抗体（抗ＩＲ３−ＣＤＲ−ヒト−マウスキメラ）を、ＰＢＳ＋０．００５％Ｐ２０＋０．１ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ中に希釈し、プロテインＧ表面上に注射して、抗体を捕捉した。ＩＧＦ−１Ｒ−ｍＦｃを、ＰＢＳ＋０．００５％Ｐ２０＋０．１ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ中に５００ｎＭ〜３．９ｎＭで希釈し、各濃度を、捕捉抗体表面上に、ならびにバックグラウンド減算のためにブランクプロテインＧ表面上に、注射した。１０分間の解離後、各表面を、１０ｍＭグリシン、ｐＨ１．５を注射することによって再生した。ＢＩＡ判定、ｖ．３．２（ＢＩＡＣｏｒｅ，Ｉｎｃ．）を使用して、結果として生じたセンサグラムの動態解析を行った。
【０２４４】
溶液親和性分析を、２つの異なる濃度（０．２ｎＭおよび１ｎＭ）の抗体を、ＰＢＳ＋０．００５％Ｐ−２０＋０．１ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ中、様々な濃度（０．０１ｎＭ〜５０
ｎＭ）のＩＧＦ−１Ｒ−ｍＦｃでインキュベートすることによって行った。インキュベーションを室温で少なくとも５時間行って、試料が平衡に到達するのを可能にした。試料を次いで、固定化ＩＧＦ−１Ｒ−ｍＦｃ表面上に注射した。試料注射後、２５μＬの８ｍＭグリシン、ｐＨ１．５を注射することによって、表面を再生した。得られた結合シグナルは、平衡状態で溶液中の遊離抗体に比例する。解離平衡定常（ＫＤ）を、二重曲線１部位均質結合モデル（ＫｉｎＥｘＡ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｖ．２．３，Ｓａｐｉｄｙｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．，Ｂｏｉｓｅ  ＩＤ）を使用して、競合曲線の非線形回帰分析から得た。データは、表７に示される。
【表７】
2014510265.tif 000012
実施例１２：アビジン融合タンパク質のエピトープマッピング
【０２４５】
この実施例は、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体によって結合されるＩＧＦ−１Ｒのエピトープを決定する方法を提供する。
【０２４６】
抗体ＴＱ１１Ｃ、ＴＱ２５、ＴＱ５８、およびＴＱ５９によって結合されるＩＧＦ−１Ｒのサブドメインを、アビジン−ＩＧＦ−１Ｒ融合タンパク質を使用して決定した。各タンパク質を発現するために、ニワトリアビジン配列が、発現ＩＧＦ−１Ｒタンパク質のＣ末端に接合されるように、完全なＩＧＦ−１Ｒ（ＥＣＤ）のコードＤＮＡ配列を、発現ベクターｐＣｅｐ４−アビジン−Ｃにクローニングした。ＥＣＤコード配列（１〜９３２）を、ＰＣＲプライマー２８０４〜２５：
５’ＧＣＡＡＧＣＴＴＧＧＧＡＧＡＡＡＴＣＴＧＣＧＧＧＣＣＡＧ  ３’配列番号２６５
および２８２６〜６８：
５’ＡＴＴＧＣＧＧＣＣＧＣＴＴＣＡＴＡＴＣＣＴＧＴＴＴＴＧＧＣＣＴＧ  ３’配列番号２６６を使用して、親ＩＧＦ−１ＲプラスミドからＰＣＲ増幅した。
【０２４７】
プライマーは、ｐＣｅｐ４アビジン−Ｃへのクローニングのために５’Ｈｉｎｄ  ＩＩＩ部位および３’Ｎｏｔ  Ｉ部位を含む。アビジン−ヒトＩＧＦ−１Ｒ（ＥＣＤ）融合タンパク質のアミノ酸配列は、図１２に示される。エピトープマッピングのために使用したＩＧＦ−１Ｒサブドメイン構築物には、Ｌ１（１−１５１）、ＣＲ（１５２−２９８）、Ｌ２（２９９−４６１）、ＦｎＩＩＩ−１（４６１−５７９）、ＦｎＩＩＩ−２／ＩＤ（５８０−７９８）、ＦｎＩＩＩ−３（７９９−９０１）、Ｌ１＋ＣＲ＋Ｌ２（１−４６１）、およびＬ１＋ＣＲ（１−２９８）が含まれた。各発現プラスミド中に表されるＩＧＦ−１Ｒサブドメインのアミノ酸座標は、括弧内に与えられる。各ドメインのコード配列を、次のプライマー対を使用して、親ＩＧＦ１Ｒ  ｃＤＮＡクローンからＰＣＲ増幅した：Ｌ１：
２８０４〜２５：（配列番号２６５）
２８０４〜１９：
５’ＡＴＴＧＣＧＧＣＣＧＣＣＣＣＡＣＡＴＴＣＣＴＴＴＧＧＧＧＧＣ  ３’配列番号２６７
ＣＲ：
２８０４〜３８：
５’ＡＧＣＡＡＧＣＴＴＧＧＡＣＣＴＧＴＧＴＣＣＡＧＧＧＡＣＣ  ３’配列番号２６８２８０４〜２０：
５’ＡＴＴＧＣＧＧＣＣＧＣＧＣＡＡＧＧＡＣＣＴＴＣＡＣＡＡＧＧＧ  ３’配列番号２６９
Ｌ２：
２８０４〜３９：
５’ＡＧＣＡＡＧＣＴＴＧＣＣＧＡＡＧＧＴＣＴＧＴＧＡＧＧＡＡＧ  ３’配列番号２７０
２８０４〜２３：
５’ＡＴＴＧＣＧＧＣＣＧＣＡＣＴＴＴＣＡＣＡＧＧＡＧＧＣＴＣＴＣ  ３’配列番号２７１
ＦｎＩＩＩ−１：
２８０８〜０８：
５’ＡＧＣＡＡＧＣＴＴＧＧＡＣＧＴＣＣＴＧＣＡＴＴＴＣＡＣＣＴＣ  ３’配列番号２７２
２８０４〜５２：
５’ＡＴＴＧＣＧＧＣＣＧＣＧＧＴＧＣＧＡＡＴＧＴＡＣＡＡＧＡＴＣＴＣ  ３’配列番号２７３
ＦｎＩＩＩ−２＋ＩＤ：
２８０４〜４１：
５’ＡＧＣＡＡＧＣＴＴＧＡＡＴＧＣＴＴＣＡＧＴＴＣＣＴＴＣＣＡＴＴＣ  ３’配列番号２７４
２８０４〜５１：
５’ＡＴＴＧＣＧＧＣＣＧＣＡＧＴＣＣＴＴＧＣＡＡＡＧＡＣＧＡＡＧＴＴＧ  ３’配列番号２７５
ＦｎＩＩＩ−３：
２８０４〜４２：
５’ＡＧＣＡＡＧＣＴＴＧＡＴＧＣＣＣＧＣＡＧＡＡＧＧＡＧＣＡＧ  ３’配列番号２７６
２８０４〜５０：
５’ＡＴＴＧＣＧＧＣＣＧＣＴＴＴＡＡＴＧＧＣＣＡＣＴＣＴＧＧＴＴＴＣ  ３’配列番号２７７
Ｌ１＋ＣＲ＋Ｌ２：
２８０４〜２５：
５’ＡＧＣＡＡＧＣＴＴＧＧＧＡＧＡＡＡＴＣＴＧＣＧＧＧＣＣＡＧ  ３’配列番号２７８
２８０４〜２３（配列番号２７２）
Ｌ１＋ＣＲ：
２８０４〜２５：ＡＧＣ  ＡＡＧ  ＣＴＴ  ＧＧＧ  ＡＧＡＡＴ  ＣＴＧ  ＣＧＧ  ＧＣＣ  ＡＧ（配列番号２７９）
２８０４〜２０（配列番号２７０）
【０２４８】
プライマーは、ＩＧＦ−１Ｒ（ＥＣＤ）について記載されるように、クローニングのためにＨｉｎｄ  ＩＩＩおよびＮｏｔ  Ｉ部位を含んだ。ニワトリアビジン配列（内在性シグナル配列を含む）が、発現ＩＧＦ−１Ｒタンパク質のＮ末端に接合されるように、ＩＧＦ−１Ｒサブドメインを、発現ベクターｐＣｅｐ４アビジン−Ｎにクローニングした。
各アビジン融合タンパク質の発現を、ローラーボトル培養における、ヒト２９３−ＥＢＮＡ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の一過性トランスフェクションによって達成した。細胞を、５％ＦＢＳ＋１倍非必須アミノ酸＋１倍Ｐｅｎ  Ｓｔｒｅｐ  Ｇｌｕｔ＋１倍ピルビ
ン酸ナトリウムを補充したＤＭＥＭにおいて増殖させ、維持した。およそ４〜５×１０７
２９３−ＥＢＮＡ細胞を、８５０ｃｍ２ローラーボトル中に一晩播種した。翌日、先に播種された細胞を次いで、ＦＵＧＥＮＥ（商標）６トランスフェクション試薬を使用して、ｐＣｅｐ４−アビジンプラスミドＤＮＡでトランスフェクトした。ＤＮＡ−トランスフェクション試薬混合物を、およそ６．７５ｍＬ無血清ＤＭＥＭ中で調製した。６７５μＬ
ＦＵＧＥＮＥ（商標）６トランスフェクション試薬を最初に添加し、続いて１１２．５μｇプラスミドＤＮＡを添加した。複合体を室温で３０分間インキュベートした。混合物全体を次いでローラーボトルに添加した。ローラーボトルに、５％ＣＯ２ガス混合物のガスを注入し、緊密に蓋をし、３７℃で、０．３５ＲＰＭで回転している回転ラック上のインキュベーターに配置した。トランスフェクションを２４時間行い、その後、培地を、１００ｍＬ  ＤＭＥＭ＋１倍インスリン−トランスフェリン−セレン補充剤＋１倍Ｐｅｎ  Ｓｔｒｅｐ  Ｇｌｕ＋１倍非必須アミノ酸＋１倍ピルビン酸ナトリウムと交換した。馴化培地の採取および新鮮な培地との交換を、４８時間間隔（２〜３サイクル）で行った。採取された無血清馴化培地を一緒にプールし、１０，０００倍ｇで３０分間、４℃での遠心分離によって清澄化した。
【０２４９】
各馴化培地中のアビジン融合体の濃度を、定量的ＦＡＣＳに基づく方法を使用して決定した。２００μＬ馴化培地中のアビジン融合タンパク質を、５μＬ（約３．５×１０５）のビオチンコーティングされたポリスチレンビーズ（Ｓｐｈｅｒｏｔｅｃｈ、Ｉｎｃ．、Ｌｉｂｅｒｔｙｖｉｌｌｅ、ＩＬ）を用いた、２時間の室温でのインキュベーションによって捕捉した。馴化培地を、３サイクルの遠心分離、および０．５％ＢＳＡ（ＢＰＢＳ）を含有するＰＢＳ中でのアビジンコーティングビーズの再懸濁によって除去した。アビジンビーズを、１ｍＬ  ＢＰＢＳ中、１μｇ／ｍＬのヤギＦＩＴＣ標識抗アビジン抗体（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂ  Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）で染色した。０．５時間のインキュベーション後、抗体ビーズ複合体を、１８００ｒｐｍで５分間の遠心分離によって収集し、ペレットを３回洗浄した。ＦＩＴＣ蛍光を、ＦＡＣＳＣＡＮ（Ｂｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｓｏｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）により検出した。シグナルを、組換えアビジンにより誘導された標準曲線を使用して、タンパク質質量に変換した。エピトープマッピングのために、適切な量（１〜２０ｍＬ）の馴化培地とのインキュベーションによって、ビオチンビーズに、約３．５×１０５ビーズのビーズ当たり５０〜１００ｎｇアビジン融合タンパク質を負荷した。負荷されたビーズを十分に洗浄し、１ｍＬ  ＢＰＢＳ中に再懸濁させた。全ての実験について、ビオチンビーズをＰＢＳ中１０％ＢＳＡでブロッキングした後、融合タンパク質の負荷を行った。
【０２５０】
方法  １、１色アッセイ：ビオチンコーティングポリスチレンビーズにＩＧＦ−１Ｒ（ＥＣＤ）を負荷し、ＩＧＦ−１Ｒサブドメイン融合タンパク質を１ｍＬのＢＰＢＳ中１μｇの抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体と混合した。１時間、室温でのインキュベーション後、４ｍＬ洗浄緩衝液を添加し、抗体ビーズ複合体を、５分間、７５０ｇでの遠心分離によって収集した。ペレットを、４ｍＬのＢＰＢＳ中に再懸濁させることによって、３回洗浄した。アビジンビーズ複合体に結合された抗体を、１ｍＬ  ＢＰＢＳ中、０．５μｇ／ｍＬフィコエリトリン（ＰＥ）標識ヤギ抗ヒトＦ（ａｂ’）２（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）での処理によって検出した。試験抗体は、完全なＩＧＦ−１Ｒ  ＥＣＤおよびＬ２ドメインを含有する、アビジン融合タンパク質に結合することが見出された。Ｌ１、ＣＲ、またはＦｎＩＩＩ−１への結合は、この実験で検出されなかった。Ｌ１ドメインとの比較的弱い反応がまた観察された。
【０２５１】
方法  ２、２色アッセイ：ビオチンビーズに結合された、抗ＩＧＦ−１Ｒモノクローナル抗体およびアビジン融合体の量を同時に監視するために、ＦＩＴＣ標識抗アビジン抗体を含め（１μｇ／ｍＬ）、０．５μｇ／ｍＬ  ＰＥ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ１と組み合わせ
て結合反応に含めた。ビーズを、１色アッセイについて記載されるように、ＦＡＣＳＣＡＮ分析のために調製した。
【０２５２】
方法  ３、抗体競合：フルオレセインでの標識に備えるために、抗体を、透析するか、またはＰＢＳ（ｐＨ８．５）中１ｍｇ／ｍＬの濃度で再懸濁させた。分子プローブ（Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ、カタログ番号Ｆ２１８１）からの標識（［６−フルオレセイン−５−（および−６）−カルボキサミド］  ヘキサン酸、スクシンイミジルエステル５（６）−ＳＦＸ］混合異性体を、ＤＭＳＯ中の標識原液５ｍｇ／ｍＬからのモル比９．５：１（標識：タンパク質）で、タンパク質に添加した。混合物を４℃で一晩、暗所でインキュベートした。標識抗体を、ＰＢＳ中の透析によって、遊離標識から分離した。得られたＦＩＴＣ／抗体比は、３〜８の範囲であった。各競合実験について、ＢＰＢＳ中、５０倍の過剰（１０〜５０μｇ／ｍＬ）の未標識競合剤抗体、アビジン融合タンパク質でコーティングされた３．５×１０５ビオチンビーズを含有した、結合反応を組み立てた。３０分間のプレインキュベーション後、ＦＩＴＣ標識抗体（１μｇ／ｍＬ）を添加した。この時点以降、プロセスは１色法に従った。
【０２５３】
４つの試験抗体の各々は、表８に示されるように、ＩＧＦ−１Ｒ  Ｌ２ドメインに結合する。しかしながら、ＩＧＦ−１Ｒ  Ｌ２ドメインにおける抗体の各々正確なアミノ酸接触は、異なってもよい。
【表８】
2014510265.tif 000013
実施例１３：細胞表面ＩＧＦ−１Ｒへの抗体結合
【０２５４】
この実施例は、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の、細胞表面で発現されるＩＧＦ−１Ｒへの結合を検出するための方法を提供する。
【０２５５】
抗体ＴＱ１１Ｃ、ＴＱ２５、ＴＱ５８、およびＴＱ５９の、細胞表面上で表示されるヒトＩＧＦ−１Ｒに結合する能力を、１細胞当たり約３−４×１０５分子のレベルでヒトＩＧＦ−１Ｒ受容体を過剰発現するように操作された、Ｂａｌｂ／Ｃ  ３Ｔ３線維芽細胞およびＭＣＦ−７ヒト乳癌細胞を使用して判定した。ヒトＩＧＦ−１Ｒ（約３×１０５受容体１細胞当たり）を安定に過剰発現するＢａｌｂ／Ｃ  ３Ｔ３細胞株を、本質的にＰｉｅｔｒｚｋｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ３：１９９−２０５によって記載されるように、レトロウイルスベクターを使用して誘導した。ｈｕＩＧＦ−１Ｒを過剰産生するＭＣＦ−７乳癌細胞を、ｐｃＤＮＡ３．１発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．）でトランスフェクトした。抗ＩＧＦ−１Ｒモノクローナル抗体αＩＲ３およびＰＥ標識ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体（Ｃａｌｔａｇ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）を使用したＦＡＣＳによる選択後、高レベルのｈｕ  ＩＧＦ−１Ｒ（１細胞当たり約４×１０５受
容体）を発現するゼオシン耐性細胞を増大させた。選択および増大のプロセスを４回反復した。
【０２５６】
ＩＧＦ−１Ｒ受容体抗体染色および受容体発現を、ＦＡＣＳによって次のように監視した：細胞を、過剰のＰＢＳ（Ｃａ／Ｍｇ不含）で２回洗浄し、続いて５ｍＬの細胞解離緩衝液（Ｓｉｇｍａ）で１０分間、室温での処理を行うことによって、Ｔ１７５フラスコ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）から放出させた。細胞を遠心分離によって収集し、それらをＰＢＳ中に再懸濁させ、遠心分離することによって、２回洗浄した。一次抗体染色のために、１μｇの抗体を、０．５％ＢＳＡを加えた１００μＬ  ＰＢＳ（ＢＰＢＳ）中に再懸濁させた１０６細胞に添加し、細胞を４℃で１．５時間インキュベートした。細胞を遠心分離によって収集し、ＢＰＢＳで２回洗浄して、非結合一次抗体を除去した。細胞を１００μＬのＢＰＢＳ中に再懸濁させ、１μｇのＦＩＴＣ標識ヤギ抗ヒトＦ（ａｂ’）２（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）で、４℃で３０分間インキュベートした。洗浄して非結合ＦＩＴＣ二次抗体を除去した後、細胞を１ｍＬのＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡ中に再懸濁させ、ＦＩＴＣ細胞蛍光をＦＡＣＳＣＡＮ（Ｂｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｓｏｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）により検出した。蛍光レベルを、既定のＩｇＧ１結合能力を有するＱｕａｎｔｕｍマイクロビーズ（Ｂａｎｇｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｆｉｓｈｅｒｓ，ＩＮ）を使用して絶対受容体レベルに変換して、標準曲線を生成した。製造業者によって提供されるＱｕｉｃｋＣａｌ  ｖ２．１ソフトウェア（Ｖｅｒｉｔｙ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｈｏｕｓｅ，Ｔｏｐｓｈａｍ，ＭＥ）を用いて、データ縮小を行った。
【０２５７】
ＩＧＦ−１Ｒ過剰発現体の抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体標識のピーク蛍光強度は、試験抗体の各々について、親Ｂａｌｂ／Ｃ  ３Ｔ３およびＭＣＦ−７細胞と比べて１０〜２０倍増加した。このは、ＩＧＦ−１Ｒを特異的に結合する抗体について予測された結果である。抗体なしまたはＦＩＴＣ標識二次抗体のみで処理された細胞のバックグラウンド蛍光は、有意でなかった。
実施例１４：ＩＧＦ−１Ｒの阻害
【０２５８】
この実施例は、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体によるＩＧＦ−１Ｒの阻害を検出するする方法を提示する。
３２Ｄ  ｈｕ  ＩＧＦ−１Ｒ＋ＩＲＳ−１細胞阻害
【０２５９】
ヒトＩＧＦ−１Ｒ受容体（１細胞当たり２０Ｋ）およびヒトＩＲＳ−１を共発現するマウス３２Ｄ細胞は、ＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達の分子構成成分を検査するのに有効な系であることが判明している。Ｖａｌｅｎｔｉｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７４：１２４２３−３０。正常な３２Ｄ細胞は、これらの２つの遺伝子産物の比較的低レベルのマウス相同分子種を発現する。３２Ｄ細胞は通常、増殖および生存のために、ＩＬ３を要求した。ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２は、図１６、パネルＡに示されるように、３２Ｄ  ｈｕＩＧＦ−１Ｒ＋ＩＲＳ−１細胞においてＩＬ３を置換することができる。ＩＧＦ−１用量反応曲線に対するＥＣ５０は、約０．５ｎＭであった一方で、ＩＧＦ−２  ＥＣ５０（２．８ｎＭ）は、約６倍高く、ＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒに対するより弱い親和性を反映している。抗体ＴＱ１１Ｃ、ＴＱ２５、ＴＱ５８、およびＴＱ５９の、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２刺激を遮断する能力を評価するために、９６ウェルのマイクロタイタープレートに、５％ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）、および１倍ペニシリン、ストレプトマイシン、グルタミン（Ｇｉｂｏｃｏ／ＢＲＬ）、ならびに漸増濃度の抗体（１０−１２Ｍ〜１０−６Ｍ）を含有するかまたは抗体を含有しない、２００μＬのＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）の容積中、１ウェル当たり３０，０００  ３２Ｄ
ｈｕ  ＩＧＦ−１Ｒ＋ＩＲＳ−１細胞を播種した。抗体との１時間のプレインキュベー
ション後、ＩＧＦ−１（２ｎＭ）、ＩＧＦ−２（８ｎＭ）を添加するか、または何も添加しなかった。抗体添加の２７時間後、３Ｈ−チミジン（１ウェル当たり１μＣｉ）を添加した。２１時間後、細胞を採取し、３Ｈ−チミジンのＤＮＡ中への組み込みを、各試料について決定した。アッセイを三重で行った。抗ＣＤ２０抗体を陰性対照として使用した。抗体ＴＱ１１Ｃ、ＴＱ２５、ＴＱ５８、およびＴＱ５９の各々は、３２Ｄ細胞のＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２媒介型刺激を完全に遮断することが可能であった。添加されたＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２の不在下でのバックグラウンド増殖の低減は、血清ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２の阻害に起因する。結合データを、ＧｒａｐｈＰａｄ  ＰＲＩＺＭ（商標）ソフトウェアを使用して分析した。データは、図１６に示される。
Ｂａｌｂ／Ｃ  ３Ｔ３  ｈｕ  ＩＧＦ−１Ｒ細胞阻害
【０２６０】
ＩＧＦ−１は、ＩＧＦ−１Ｒを過剰発現する（１細胞当たり約１×１０６  ＩＧＦ１Ｒ）マウス胎児由来線維芽細胞（Ｂａｌｂ／Ｃ  ３Ｔ３またはＮＩＨ  ３Ｔ３）の血清飢餓処置培養による３Ｈ−チミジンの組み込みを大幅に刺激する。Ｋａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２６８：２６５５−６１、Ｐｉｅｔｒｚｋｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ３：１９９−２０５。この現象は、Ｂａｌｂ／Ｃ  ３Ｔ３細胞株ｈｕ  ＩＧＦ−１Ｒ過剰発現体におけるＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２の両方で反復された。両方の成長因子が、３Ｈ−チミジン組み込みを約２０倍刺激した。ＩＧＦ−１用量反応曲線のＥＣ５０は、約０．７ｎＭであった一方で、ＩＧＦ−２  ＥＣ５０（４．４ｎＭ）は、７倍高く、ＩＧＦ−２のＩＧＦ−１Ｒに対するより弱い親和性を示している。所与の抗体のＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２刺激を遮断する能力を評価するために、９６ウェルのマイクロタイタープレートに、１０％仔ウシ血清（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）、および１倍ペニシリン、ストレプトマイシン、グルタミン（Ｇｉｂｏｃｏ／ＢＲＬ）を含有する、２００μＬのＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）の容積中、１ウェル当たり１０，０００細胞を播種した。一晩のインキュベーション後、細胞が約８０％コンフルエントとなったとき、増殖培地を、２００μＬ  ＰＢＳで１回洗浄した後、０．１％ＢＳＡを含有する１００μＬ  ＤＭＥＭと交換した。血清飢餓処置の２４時間後、漸増濃度（１０−１２Ｍ〜１０−６Ｍ）での抗体を添加したか、または抗体を全く添加しなかった。抗体での１時間のプレインキュベーション後、ＩＧＦ−１（２ｎＭ）、ＩＧＦ−２（８ｎＭ）、および３Ｈ−チミジン（ｔｈｙｍｉｎｄｉｎｅ）（１ウェル当たり１μＣｉ）を添加した。２１時間後、細胞を採取し、３Ｈ−チミジンのＤＮＡ中への組み込みを、各試料について決定した。アッセイを三重で行った。各試験抗体は、図１７に示されるのうに、Ｂａｌｂ／Ｃ  ３Ｔ３細胞のＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２媒介型刺激を完全に遮断することが可能であった。抗ＣＤ２０抗体を陰性対照として使用した（図１７の「ＣＤ２０」）。
実施例１５：抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体を用いたヒトにおける癌の治療
【０２６１】
この実施例は、ＩＧＦ−１Ｒ経路の阻害が、ヒト被験者における多様なタイプの腫瘍を治療するのに有効であることを実証する。
【０２６２】
表９に示されるように、ヒト被験者を、本明細書でＬ１６として特定される軽鎖可変ドメインおよび本明細書でＨ１６として特定される重鎖可変ドメインを含む、完全ヒト抗ヒトＩＧＦ−１受容体ＩｇＧ１モノクローナル抗体（「治験薬」）を用いた、ヒト初回（Ｆｉｒｓｔ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ）第一相臨床治験における治療のために選択した。
【表９−１】
2014510265.tif 000014
【表９−２】
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【表９−３】
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【表９−４】
2014510265.tif 000017
【０２６３】
本研究のために選択される前に、各被験者は、彼または彼女の具体的な腫瘍疾患に対して利用可能な従来の治療が奏功せず（かかる治療が利用可能であった場合）、支持療法のみを受容していた。
【０２６４】
各被験者を６つの投薬コホートのうちの１つに割り当てた。各々、任意の所与のコホー
トにおける被験者は、同じ用量の治験薬を静脈内で受容した。表９に示されるように、投薬量は、コホート間で、被験者の体質量１キログラム当たり１〜２０ミリグラム（ｍｇ／ｋｇ）の治験薬の範囲であった。治験薬を、１０ｍＭ酢酸塩、ｐＨ５．２、５．０ｗ／ｖ％ソルビトール、および０．００４ｗ／ｖ％ポリソルベート２０中、３０ｍｇ／ｍＬで調合した。治療クール中に、被験者は、彼らの唯一の抗腫瘍治療として治験薬を受容した。被験者はまた、それらの症候の重症度を低減するために、適宜、個別化された緩和ケアを受容した。
【０２６５】
治療への反応を、参照によりその全体が全目的で本明細書に組み込まれるＴｈｅｒａｓｓｅ  ｅｔ  ａｌ．２０００，Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９２：２０５−１６に記載されるように、固形腫瘍における効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ）基準を使用して評価した。簡潔に述べると、第１の用量の投与前に、各被験者にコンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンを与えて、最長径に沿った最大の測定可能な腫瘍の長さ（表９の「ベースライン（ＴＭ）（ｃｍ）」）を決定した。ＣＴスキャンを使用して、治療の開始後のある時点における、同じ直径に沿った同じ腫瘍（表９の「Ｘ日目の腫瘍（ｃｍ）」）を測定した。各かかる測定値を、同じ被験者についてのベースライン腫瘍測定値と比較して、腫瘍サイズの増加または減少パーセントを算出した。図３４および表９に示されるように、被験者のうちの２人は、少なくとも３０％の腫瘍サイズの縮小を示した。これらの被験者のうちの１人は、ＲＥＣＩＳＴによる部分反応者（ｐａｒｔｉａｌ  ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ）（ＰＲ）として分類された。その他の被験者は、腫瘍寸法の１００％縮小を有し、したがって、ＲＥＣＩＳＴによる完全反応者（ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ）（ＣＲ）として分類された。８人の他の被験者は、最良反応として、腫瘍サイズの３０％未満の縮小または２０％未満の増加のいずれかを有し、ＲＥＣＩＳＴ基準を使用して、病勢安定（ＳＤ）を有するとして分類された（これらの被験者のうちの１人は、最良反応として、腫瘍サイズの最初の２％縮小を有したが、後に腫瘍は、２５％のサイズの全体的増加を示したことに留意されたい）。これらの被験者の各々（下に考察されるＣＲ被験者を除く）は、最終的に疾患進行を示し、研究から外された。残りの２人の被験者は、病勢進行（ＰＤ）の最良反応を示す、２０％を超えて増加したＲＥＣＩＳＴ腫瘍測定値を有した。
【０２６６】
ＣＲ被験者は、呼吸が、特に腹臥位の間に困難となる、肺における大きい転移性腫瘍を形成した、典型的なユーイング肉腫（ＥＷＳ−ＦＬＩ遺伝子転座を特徴とする、例えば、各々、参照によりその全体が全目的で本明細書に組み込まれるＤａｇｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ  Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｏｎｃｏｌ．２３：２２１−２４、Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｍｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１８：９７−１０４を参照されたい）を有した。被験者は、１）アドリアマイシンおよびシトキサン、２）イホスファミドおよびビンクリスチン、３）トポテカンおよびビンクリスチン、４）タキソテール、ならびに５）ゲムシタビンを含む、多数の従来の化学療法レジメンに耐性であった。被験者は、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の１２ｍｇ／ｋｇの第１の用量を受容した。被験者は、第１の用量治験薬を受容した２日以内に有意な症候軽減を経験し、彼は、数ヶ月ぶりに腹臥位で快適に眠ることが可能となった。被験者は、その後、１４日間隔で１２ｍｇ／ｋｇの３回用量を受容した。第１の注射の５０日後、被験者のＣＴスキャンにより、ＲＥＣＩＳＴを使用して、９．８ｃｍから２．２ｃｍへのまたは７８％の、ベースライン測定値からの腫瘍サイズの減少が示された。５０日目に、被験者にまたＰＥＴスキャンを与え、それは、標識グルコースの検出可能な取り込みを何も示さず、残りの腫瘍組織のほとんどまたは全てが死滅したことを示した。８５日目に、被験者は、ＣＴスキャンを受け、９．８ｃｍの治療前直径から０ｃｍの、腫瘍の完全な分解を示した。被験者は、１４日間隔で１２ｍｇ／ｋｇの治験薬を受容し続け、４３４日目に依然としてＲＥＣＩＳＴによるＣＲを有した。
【０２６７】
ＰＲ被験者は、中腸カルチノイド腫瘍を有し、治験における３３週間後に、ＲＥＣＩＳ
Ｔ腫瘍寸法が１３．１から６．８ｃｍへとまたは４８％減少する、部分反応を達成した。被験者は、１４日間隔で３ｍｇ／ｋｇの治験薬を受容し続け、６３％の最大ＲＥＣＩＳＴ腫瘍寸法縮小を示した。６５５日目に、被験者が、新たな骨転移を有することが発見され、研究から外された。
【０２６８】
幾つかの被験者は、グレード３または４の血小板減少症を示した。血小板減少症が検出されたいずれの症例も、それは、投薬の中止または中断により自発的に消散した。これらの被験者において特発性出血の症例は認められなかった。
【０２６９】
この研究で、ユーイング肉腫または線維形成性小円形細胞腫瘍のいずれかの診断もまた有した、更なる患者を治療した。これらの被験者の各々は、多数の従来の細胞傷害性化学療法レジメンを有したことがあり、後に進行を示した。１２人のかかる被験者は、２週間間隔で１２ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝６）または２０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝６）の治験薬のいずれかを受容した。表１０は、本研究についての結果を示す。
【表１０】
2014510265.tif 000018
【０２７０】
２人の被験者は、ＲＥＣＩＳＴ基準を使用して、ＳＤの最良反応を有するとして分類された。８日目に、ＰＥＴスキャンにより、彼らのうちの一方は、３２％、他方は、１０％の腫瘍代謝活性の低減を示した。第３の被験者は、８日目に、ＲＥＣＩＳＴによるＰＲ、および代謝活性における５７％低減を達成した。全ての３人の被験者における腫瘍はその後進行したため、それらの被験者は研究から外された。残りの被験者全ては、最良反応として病勢進行を示し、研究から外されたが、彼らのうちの複数は、８日目に、１１％〜３５％の間の代謝活性における低減を示した。
【０２７１】
３人の最良反応者の腫瘍遺伝子型は、入手不可能であった。しかしながら、８日目に代謝活性における低減を示した（しかし最良ＲＥＣＩＳＴ反応がＰＤであった）被験者のうちの２人は、ＥＷＳ−ＦＬＩ転座を含有することが見出された。ＰＤの最良ＲＥＣＩＳＴ反応を示し、かつ８日目に腫瘍代謝活性における変化を示さなかったか、または若干の増加を示した、２人の他の被験者は、転座を有さないことが見出された。
【０２７２】
更なる研究を、カルチノイド腫瘍を有する被験者において行った。５人の被験者に、２
週間間隔で６（ｎ＝１）または２０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝４）の治験薬のいずれかを与えた。結果は、１１表に示される。
【表１１】
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【０２７３】
被験者の各々は、他の治療を試み、それが奏功しなかった後に、本研究に組み入れられた。  被験者１は、ＰＲの最良反応（ＲＥＣＩＳＴ基準による、腫瘍サイズの３２％縮小）を示した。残りの被験者は、ＲＥＣＩＳＴ基準による、腫瘍サイズの２％〜２０％縮小により、ＳＤの最良反応を示した。
【０２７４】
被験者２および３は、それぞれ、３７８日目および２８２日目を過ぎて研究に留まった。被験者１は、病勢進行を示した後、２８８日目に研究から除去された。被験者４は、服薬非遵守のために１１２日目に研究から除去された。被験者５は、肺塞栓を発症した後、１９１日目に研究から除去された。
【０２７５】
更なる研究を、結腸直腸癌（ＣＲＣ）を有する被験者において行った。７人の被験者に、各々、２週間間隔で６ｍｇ／ｋｇのパニツムマブ（ヒト抗ＥＧＦ受容体抗体）、および６（ｎ＝３）または１２ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝４）の治験薬のいずれかを与えた。結果は、表１２に示される。
【表１２】
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【０２７６】
被験者の全ては、標準的な療法に難治性の進行期固形悪性腫瘍を有した。表１２において、「従来のＥＧＦＲ」欄における「あり」は、被験者が、以前に抗ＥＧＦ受容体抗体（パニツムマブまたはセツキシマブのいずれか）で治療されたことがあることを意味する。「最良ＷＨＯ反応」および「８週目のＣＴ変化（ＷＨＯ）」は、ＷＨＯ基準を使用して行われた腫瘍評価を指す（Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ｃａｎｃｅｒ  ４７：２０７−１４、参照によりその全体が全目的で本明細書に組み込まれる）。
【０２７７】
被験者５は、ＰＲの最良ＷＨＯ反応を示した。ＰＲの最良ＷＨＯ反応を経験し、本研究で１９１日目を過ぎて継続した、被験者５の腫瘍は、ＫＲＡＳの野生型対立遺伝子を有することが見出された。本研究を開始する前、被験者５は、４つの従来の化学療法レジメンならびに５サイクルのイリノテカンおよびセツキシマブが奏功しなかった。
【０２７８】
非ＣＲＣ腫瘍を有する３人の被験者もまた、６ｍｇ／ｋｇパニツムマブおよび６ｍｇ／ｋｇの治験薬を受容し、彼らの最良反応がＷＨＯ基準により判定された。これらの被験者のうちのいずれも、以前にＥＧＦ受容体阻害剤で治療されたことがなかった。甲状腺腫瘍を有する第１の被験者は、病勢進行の最良反応を示し、５５日目に研究から除去された。この被験者は、本研究への参加前に、空腹時血糖値が１１３ｍｇ／ｄＬである前糖尿病状態であり、用量を限定するグレード３高血糖症の毒性を経験した。ＧＥ接合部腫瘍を有する第２の被験者は、病勢安定の最良反応を有し、１１４日目に研究から除去された。膵臓腫瘍を有する第３の被験者は、病勢安定の最良反応を有し、１０６日目に研究から除去された。
【０２７９】
更なる研究を、多様な腫瘍タイプを有する被験者において、治験薬をゲムシタビン治療と組み合わせて使用して行った。１１人の被験者に、各々、４週間毎に１０００ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンの３回用量を与え、また、２週間毎に６（ｎ＝６）または１２ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝５）のいずれかの治験薬も与えた。結果は、表１３に示される。
【表１３】
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【０２８０】
１人を除く全ての判定された被験者は、ＷＨＯ基準により病勢安定の最良反応を有した。被験者３は、８日目に病勢進行の最良反応を有し、また、用量を限定するグレード４好中球減少症の毒性（表１３の「ＤＬＴ」）も示した。
実施例１６：分子マーカーと、ＩＧＦ−１受容体シグナル伝達の阻害への反応との相関
【０２８１】
この実施例は、分子マーカーを使用して、被験者が、ＩＧＦ−１受容体シグナル伝達の阻害剤を含む抗腫瘍治療に反応する可能性がより高いか、それともより低いかを決定することができることを実証する。
【０２８２】
ある種のバイオマーカーの存在または不在は、被験者の、ＩＧＦ−１受容体シグナル伝達の阻害剤での治療への反応と相関することが見出された。図３４に示されるように、表９に列挙される被験者のうち、８週間の治療後に疾患進行（ＰＤ）を有する被験者の両方が、契約研究所（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）による保存用ホルマリン固定パラフィン包埋腫瘍切片の免疫組織化学的染色によって評価されたとき、ＰＴＥＮ発現の低減を示した（一方の被験者において腫瘍細胞の１０％におけるＰＴＥＮ発現の完全な喪失、他方の被験者において腫瘍細胞の５％におけるＰＴＥＮの完全な喪失を観察）。病勢安定を有する１人の被験者においてＰＴＥＮ発現は完全に排除された（腫瘍細胞の１００％において不在）（この被験者は、彼の腫瘍ＲＥＣＩＳＴ測定値における４％増加を示した）。ＰＴＥＮ喪失は、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体での治療に対するＰＲまたはＣＲを有したいずれの被験者においても観察されなかった。
【０２８３】
腫瘍細胞の５％におけるＰＴＥＮ発現の完全な喪失を示す被験者はまた、ＰＴＥＮ機能喪失突然変異（Ｄ３３１Ｇ）を有することも見出された。
【０２８４】
システインに対するコドン１２において通常見出されるグリシンを変化させたＫＲＡＳ（すなわち、ＫＲＡＳ  Ｇ１２Ｃ）をコードする遺伝子の活性化突然変異が、中腸カルチ
ノイド腫瘍を有するＰＲ被験者において、および８週間の治療後に病勢安定を有した（ＲＥＣＩＳＴは１％増加した）転移性黒色腫を有する別の被験者において観察された。
【０２８５】
ＰＴＥＮ遺伝子型と、抗ＩＧＦ−１受容体阻害剤での治療に対する反応性との間の関係を更に定義するために、負のＰＴＥＮ状況を示す６つのヒト腫瘍細胞株を特定した。抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体に対するそれらの感受性を、マウス異種移植モデルにおいてインビボで試験した。使用された細胞株は、ＰＣ−３およびＬｎＣａｐ（前立腺）、Ｕ−８７ＭＧ（膠芽腫）、Ｃａｌ−５１（乳）、７８６−０（腎臓）、ならびにＣｏｌｏ−３２０（結腸／カルチノイド）であった。これらの細胞株の各々の５００万個の細胞を、４〜６週齢のメス胸腺欠損ヌードマウスの左脇腹に皮下注射した。平均腫瘍サイズがおよそ２００〜２２０ｍｍ３に到達したとき、マウスを群に無作為に割り当てた（１０匹のマウス／群）。３つの用量（３０、１００、または３００μｇ／用量）の抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体（「抗体」）、またはヒトＩｇＧ１対照（「対照」、３００μｇ／用量）での療法を、無作為化の日に開始し、各研究の終わりまで継続した。抗体または対照の投与を、１週間当たり２回、腹腔内で行った。各動物の腫瘍体積および体重を、カリパスおよび分析用天秤を使用して、１週間当たり２回測定した。データを平均＋／−標準誤差として集めた。いずれの用量群と対照群との間で腫瘍体積における統計的に有意な減少を測定した場合、細胞株を抗体に反応性であると見なした。統計解析のために、反復測定ＡＮＯＶＡ（ＲＭＡＮＯＶＡ）、事後Ｓｃｈｅｆｆｅを用いた。結果は、表１４に示される。異種移植片データは、研究された６つのＰＴＥＮヌルモデルのうちのいずれも、抗体に対して感受性でなかったことを示した。対照的に、全ての感受性異種移植モデルは、野生型ＰＴＥＮ状況を示した。これらのデータは、臨床観察を支持し、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤での治療に対する負の層別化マーカーとしてのＰＴＥＮ状況の使用を支持する。
【表１４】
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実施例１７：転移性膵臓癌を有する患者における、ゲムシタビンを加えたコナツムマブ（ＡＭＧ  ６５５）もしくはガニツマブ（ＡＭＧ  ４７９）またはプラセボの、プラセボ対照、無作為化第二相試験
【０２８６】
この実施例は、転移性膵臓癌患者における第二相臨床研究において、ガニツマブが、全生存期間中央値および無増悪生存期間を増加させたことを実証する。
【０２８７】
転移性膵臓癌患者における、ゲムシタビンを加えたガニツマブ（図１８）またはゲムシタビンを加えたコナツムマブ（図１９）対ゲムシタビンを加えたプラセボを判定するために、３群（ｔｈｒｅｅ−ａｒｍ）プラセボ対照、無作為化第二相試験を行った。
【０２８８】
主要エンドポイントは、６ヶ月全生存率であった。副次的エンドポイントは、反応率（ＲＥＣＩＳＴによる；治験責任医師による定義、中央判定（ｃｅｎｔｒａｌ  ｒｅｖｉｅｗ）なし）、無増悪生存期間（ＰＦＳ、治験責任医師による定義）、全生存期間（ＯＳ）、有害事象および臨床検査値異常の発生率、抗ガニツマブまたは抗コナツムマブ抗体の発生率、ガニツマブおよびコナツムマブの薬物動態、ならびにガニツマブ、コナツムマブ、またはプラセボと組み合わされたときのゲムシタビンの用量強度であった。
【０２８９】
主要な組み込み基準は、組織学的または細胞学的に文書化された膵臓の転移性腺癌、年齢１８歳以上、ＥＣＯＧ  ＰＳ  ０または１、十分な血液学的、肝臓、腎臓、および血液凝固機能、アミラーゼおよびリパーゼ≦２．０×ＵＬＮ、十分に制御された１型または２型糖尿病（プロトコル中に、空腹時血糖＜１６０ｍｇ／ｍＬのみへと補正）、空腹時血糖≦１６０ｍｇ／ｍＬ、ＨｂＡ１ｃ＜８％、ならびに書面の説明と同意であった。
【０２９０】
主要な除外基準は、制御されていない心疾患、およびアジュバントまたは転移性設定における従来の化学療法または放射線であった。
【０２９１】
研究を、１２０人の患者（４０患者／群（ａｒｍ））の計画標本サイズによる推定研究として設計したが、実際の患者の数は、表１５に示されるようにそれより多かった。設計されたように（仮説試験ではなく、推定）、治験は、プラセボについて４５％、コナツムマブまたはガニツマブについて６９％の６ヶ月ＯＳ率の間の差異を検出するのに（標的改善、１０％）、８０％検出力を有した。
【０２９２】
研究模式図は、図２０に示される。
【０２９３】
ベースライン人口統計は、表１５に示される：
【表１５】
2014510265.tif 000023
【０２９４】
ベースラインの病変部位は、表１６に記載される：
【表１６】
2014510265.tif 000024
【０２９５】
ベースラインの病変サイズは、表１７に記載される：
【表１７】
2014510265.tif 000025
【０２９６】
有効性を、全生存期間（ＯＳ）および無増悪生存期間（ＰＦＳ）として決定した。ＯＳおよびＰＦＳ結果は、ベースライン共変量の調整後に強固であった、両方の測定基準における改善を示唆した（年齢、性別、ＥＣＯＧ  ＰＳ状況、肝臓転移、および最長径の腫瘍の和）。結果は、表１８に要約される：
【表１８】
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【０２９７】
全生存期間データは、図２１でグラフにより提示される。無増悪生存期間データは、図２２でグラフにより提示される。
【０２９８】
最良の全体的な腫瘍反応データは、表１９に提示される：
【表１９】
2014510265.tif 000027
【０２９９】
患者の少なくとも５％において生じているグレード３〜５の有害事象は、表２０に提示される：
【表２０】
2014510265.tif 000028
【０３００】
薬物曝露データは、表２１に提示される：
【表２１】
2014510265.tif 000029
【０３０１】
結果は、より高い６ヶ月ＯＳ率（研究の主要エンドポイント、５７％対５０％）、より高い１２ヶ月ＯＳ（３９％対２４％）、より長いＰＦＳ（５．１対２．１ヶ月、ＨＲ０．６５）、より長いＯＳ（８．７対５．９ヶ月、ＨＲ０．６７）、およびより高いＳＤ＋ＰＲ率（５１％対４１％）を含む、転移性膵臓癌における複数の有効性パラメータにわたる傾向を有し、ガニツマブの活性の証拠を示す。研究はまた、より高い６ヶ月ＯＳ率（研究の主要エンドポイント、５９％対５０％）、より長いＰＦＳ（４．０対２．１ヶ月、ＨＲ０．６５）、およびより高いＳＤ＋ＰＲ率（６１％対４１％）を含む、コナツムマブの活性の証拠も示す。両方の薬物の組み合わせも忍容性が良好であった。
実施例１８：転移性膵臓癌を治療するための、ゲムシタビンと組み合わせたガニツマブ（ＡＭＧ  ４７９）についての曝露−反応分析
【０３０２】
転移性膵臓癌を有する３７人の患者（ｍＰＣ、実施例１７に記載される第二相治験から３５人、およびヒト初回研究から２人）、および進行期非膵臓固形腫瘍を有する６２人の患者からプールされたデータを使用して、ガニツマブについての集団ＰＫモデルを構築した。
【表２２】
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【０３０３】
ゲムシタビンを加えたガニツマブまたはゲムシタビンを加えたプラセボのいずれかを受容した、ｍＰＣを有する８０人の患者を、曝露−反応分析に含めた。
【０３０４】
非線形混合効果モデリング（ＮＯＮＭＥＭ）を用いた２コンパートメント動態構造モデ
ルにより、集団ＰＫモデルを構築した。
【０３０５】
経時的な曝露曲線（ＡＵＣｓｓ）の積分として算出した、単変量解析を行って、患者のガニツマブへの曝露の効果を例証した。ガニツマブを受容している患者を曝露に基づいて（ＡＵＣｓｓが中央値（１９．２ｍｇ・ｈ／ｍＬ）以上であった高曝露群と、ＡＵＣｓｓが中央値未満であった低曝露群とに）層別化したとき、Ｃｏｘ比例ハザードモデルを使用してＯＳおよびＰＦＳに及ぼす曝露の影響を判定するために、高曝露群および低曝露群のＯＳおよびＰＦＳについてのカプランマイヤープロットを使用した。前進選択法を用いたＣｏｘ比例ハザードモデルを使用して、潜在的な交絡因子に対して調整して、ＯＳおよびＰＦＳに及ぼす曝露の影響を判定するために多変量解析を行った。全てのベースライン因子が、前進選択モデルにおいて最初の候補であった。前進選択プロセス後、最も統計的に有意な変数を最終的なモデルに追加した。
【０３０６】
多変量解析についてのベースライン因子は、表２３に列挙される：
【表２３】
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【０３０７】
選択される有害事象（聴力および前庭障害、肝臓障害、高血糖症、注入反応、好中球減少症、発疹および皮膚関連毒性、血小板減少症、ならびに静脈塞栓および血栓事象）の発生率に及ぼす曝露の影響を、記述統計により要約した。
【０３０８】
選択される臨床検査値（アスパラギン酸トランスアミナーゼ、アラニントランスアミナーゼ、空腹時血糖、総好中球、および血小板）における変化に及ぼす曝露の影響を、線形回帰によって評価した。
【０３０９】
１２および２０ｍｇ／ｋｇガニツマブＱ２ＷについてのＡＵＣｓｓ分布およびＰＦＳプロフィールを、モンテカルロシミュレーションにより判定した。
【０３１０】
最終的なモデルからのガニツマブＰＫパラメータは、表２４に示される：
【表２４】
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【０３１１】
より高速のクリアランス（ＣＬ）およびより大きい中枢分布容積（Ｖｃ）が、ｍＰＣを有する患者において観察され、それはより低いガニツマブ曝露をもたらした。腫瘍タイプ（膵臓対非膵臓）、ならびにベースライン体重、アルブミン、および血清クレアチニンを、ガニツマブＰＫパラメータの統計的に有意な共変量として特定した。ゲムシタビン共投与は、ガニツマブＰＫパラメータの有意な共変量でなかった。
【０３１２】
全生存期間および無増悪生存期間に対するガニツマブ曝露の影響は、図２３、図２４、および表２５に示される：
【表２５】
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【０３１３】
曝露とＯＳおよびＰＦＳとの間の関連は、プラセボ群（ゼロのＡＵＣｓｓを割り当てられた）からのデータが含まれたか否かに関わらず、有意であった。高曝露群と低曝露群との間のベースライン予後因子における不均衡は、曝露−ＰＦＳおよび曝露−ＯＳ関係を交絡し得る。したがって、多変量解析および感受性解析を行って、これらの関係を確認した。
【０３１４】
ベースライン因子の無増悪生存期間および全生存期間に及ぼす影響は、表２６に示される：
【表２６】
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【０３１５】
より高い曝露およびより低いベースラインＡＬＰは、より長いＯＳおよびＰＦＳに関連し、より低いベースラインクレアチンクリアランス（ｃｒｅａｔｉｎｅ  ｃｌｅａｒａｎｃｅ）（ＣｒＣｌ）は、より長いＰＦＳに関連した。有効性に及ぼす曝露の影響は、潜在的なベースライン因子に対する調整後に残った。
【０３１６】
一般に、ＡＥの発生率は、ガニツマブへの曝露に依存していなかった。グレード３／４高血糖症および血小板減少症の発生率は、高曝露群においてより高く、グレード３／４肝臓障害の発生率は、低曝露群においてより高かった。グレード５のＡＥには、低曝露群における３人の患者（２件の疾患進行、１件の出血）、高曝露群における１人（急性腎不全；患者は、ＩＶ造影剤誘発性腎機能不全の前病歴を有した）、およびプラセボ群における１人（胃腸出血）が含まれた。曝露と選択される臨床検査値との間の関連についての強力な証拠は存在しなかった。
【０３１７】
膵臓または非膵臓腫瘍（シミュレーションによって観察され、予測された）を有する患者における、１２および２０ｍｇ／ｋｇでのガニツマブＡＵＣｓｓ分布は、図２５に示される。
【０３１８】
プラセボならびに１２および２０ｍｇ／ｋｇガニツマブについてのＰＦＳプロフィールの推定は、図２６に示される。プラセボならびに１２および２０ｍｇ／ｋｇガニツマブ用量群における推定された中央ＰＦＳ時間は、それぞれ、２．６、４．７、および６．７ヶ月間であり、より高い用量のガニツマブがＰＦＳを更に改善し得ることを示している。
【０３１９】
要約すると、ｍＰＣを有する患者の間のガニツマブ曝露は、他の腫瘍タイプを有する患者の間で観察されたそれよりも約４０％低かった。ゲムシタビンのガニツマブＰＫに及ぼす影響は、明白でなかった。ＰＦＳおよびＯＳは、高曝露群における患者の間でより長かった。曝露と生存期間の間の関係は、ベースライン予後因子に対する調整後に残った。曝露とほとんどの有害事象の発生率との間の強力な関連は存在しなかった。
実施例１９：バイオマーカーの特定
【０３２０】
生物学的に利用可能なリガンド濃度が、ガニツマブ治療への反応を予測するかどうかを確かめるために、ＩＧＦ−１（遊離および総）、ＩＧＦ−１（総）、および主要な結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ−１、−２、−３、−４）のベースラインレベルと、全生存期間との間の関係を、実施例１７に記載される臨床研究のために行った。
【０３２１】
循環バイオマーカー（遊離ＩＧＦ−１、総ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−ＩＩ、およびＩＧＦＢＰ１−４）のベースラインレベルに関する記述統計は、表２７に要約される：
【表２７】
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【０３２２】
これらのベースラインマーカーのレベルと全生存期間との間の関係を確立するために、Ｃｏｘ比例ハザードモデルを使用して、正規化対数変換マーカー濃度を使用してハザード比（ＨＲ）を算出した。この解析は、正規化対数ベースラインバイオマーカーにおける単位増加に関連する死亡の危険性を試験し、この危険性は、ハザード比として表される。小さい標本サイズのため、プラセボと比べてガニツマブでの治療によって修正される関係から、予後の関連を詳細に分析することは困難であり、すなわち、予測的である。これは、治療効果の追加が、解析に変数を加え、それが試験の検出力に支障を来し、存在し得る有意な予測関係を遮蔽しているためである。しかしながら、この解析において特定される予後関係でさえも、循環している生物学的に利用可能なリガンドと、ＩＧＦ−１Ｒ依存性進行への腫瘍の適合との間の仮設的な関係を知らせ、次に、ＩＧＦ−１Ｒまたは下流シグナ
ル伝達経路を遮断する阻害剤に対する感受性を知らせるため、重要である。
【０３２３】
Ｃｏｘモデルデータは、図２７において表にされ、フォレストプロットとしてグラフ表示される。上述の通告と共に、ハザード比（ＨＲ）は、その対応する９５％ＣＩおよびＰ値と共に、ガニツマブ群およびプラセボ群について独立して推定され、治療状況と共にバイオマーカー効果の有意性修正を、ガニツマブ群およびプラセボ群の両方を使用して試験した。有意性は、交互作用についてのＰ値として表される。この交互作用解析は、過度にストリンジェントであり得るが、交互作用についてのＰ値に関連する任意のマーカーは、ガニツマブ反応を高度に予測する可能性が高い。
【０３２４】
図２７に示されるように、ガニツマブ（ＡＭＧ  ４７９）群において、全生存期間と、総ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−２、ＩＧＦＢＰ−１、ＩＧＦＢＰ−２、およびＩＧＦＢＰ−３のベースラインレベルとの間の有意な関係が観察され、ＩＧＦ系の循環構成成分が膵臓癌における腫瘍進行に関連することを示唆している。この関係は、ガニツマブ治療に予後的であるか、または予測的であるかのいずれかであり得る。後者を試験するために、これらの関係を、プラセボ治療群においてにおいて試験した。この場合、ＩＧＦＢＰ−１およびＩＧＦＢＰ−２について有意な関係が観察された。群の間の差異の有意性、すなわち、ガニツマブ治療に対する特異性（または予測値）を、治療状況との交互作用を試験することによって算出した。０．０５の従来の閾値ｐ値を使用すると、治療効果は、ＩＧＦ−２について有意であり、このマーカーのベースラインレベルがガニツマブへの反応を予測することを示唆している。しかしながら、小さい標本サイズを考慮すると、ストリンジェンシーのより低いｐ値の閾値を使用することができる。より妥当なｐ値カットオフである０．１５を使用する場合、ＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦＢＰ−４は各々、同様に有意性に到達する。いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、膵臓癌におけるこれらのマーカーとＯＳとの関連は、膵臓腫瘍が、増殖および生存のためにＩＧＦ−１Ｒを使用することに適合させられるという仮説、ならびにＩＧＦ−１Ｒリガンドおよびこれらのリガンドの生物学的利用能を調節する結合タンパク質の循環レベルが、腫瘍進行および生存の重要な決定因子であるという仮説を支持する。ベースラインバイオマーカーと治療との間の交互作用項は、これらのマーカーの全てではないが幾つかについて有意である。しかしながら、研究の小さい標本サイズ、および群の間のマーカーの小異（それは予後関係ならびに予測関係を有し得る）は、この試験が予測関係を見逃している場合があることを意味する。
【０３２５】
この仮説を更に試験するために、全体的集団（すなわち、治療群およびプラセボ群の両方）からのマーカーの各々の中央値を閾値として使用し、結果的に高いバイオマーカーおよび低いバイオマーカーとして定義された下位群の間のＯＳについての予測値を、ガニツマブ群における各下位群とプラセボ群からの対応する群とを比較することによって確立した。これは、ＩＧＦ−１Ｒの阻害剤で治療される膵臓癌患者におけるＯＳを予測するためにこれらのマーカーを二分法で使用する、予測値の直接試験を可能にする。
【０３２６】
バイオマーカーにより定義される下位群解析は、バイオマーカーにより定義される低い下位群および高い下位群におけるＯＳに対するガニツマブ治療効果の比較についてのＨＲおよび関連するＰ値と共に、表２８および図２８に示される。ベースラインＩＧＦＢＰ−２に関して、ガニツマブ対プラセボについての低いかつ有意なＨＲが低い下位群において観察されたが、高い下位群においては観察されず、中央値を下回るレベルがガニツマブへの反応に対して予測的であり得ることを示唆している。対照的に、総ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−２、およびＩＧＦＢＰ−３に関して、低いかつ有意なＨＲが高い下位群において観察されたが、低い下位群においては観察されず、ことを示唆している。中央値を上回るレベルがガニツマブへの反応に対して予測的であり得ることを示唆している。
【表２８−１】
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【表２８−２】
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【０３２７】
これらの関係は、これらのマーカーを使用して、ＩＧＦ−１Ｒの阻害剤で治療される膵臓癌患者におけるＯＳを予測することができることを示唆する。これらのデータはまた、ＩＧＦ−１Ｒを阻害する薬物への反応を予測するマーカーがまた、上流（すなわち、リガンドまたは結合タンパク質を調節する薬剤）または下流（すなわち、Ｒａｓ／ＲａｆおよびＰＩ３Ｋシグナル伝達経路の構成的シグナル伝達タンパク質を含むであろうが、これらに限定されないＩＧＦ−１Ｒの下流にある細胞内標的を阻害する薬剤）の経路の任意の場所に対して作用する薬物についてのＯＳも予測するであろうことも示唆する。
【０３２８】
ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤に関して、これらの循環タンパク質とＯＳとの間に予測関係が存在することが示されたところで、次に、これらの予測関係が臨床的に有意義である、すなわち、高いバイオマーカーおよび低いバイオマーカーにより定義される下位群の間のＯＳにおける差異が実質的であることを実証した。これらの関係を表すために、生存する各下位群における患者の分率を時間に対してプロットすることによって、高い下位群および低い下位群についてのＯＳを示す、カプランマイヤープロットを生成した。これらのプロット
は、図２９〜３３に示される。
【０３２９】
総ＩＧＦ−１（図２９、表２９）の場合、ガニツマブ群における高い下位群および低い下位群についての曲線間の明確な隔離が存在する一方で、プラセボ群における相互からの高い下位群および低い下位群についての曲線は、区別がつかない。
【表２９】
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【０３３０】
遊離ＩＧＦ−１（図３０、表２９）について、高い下位群において、プラセボ群の３．５５ヶ月と比較して、ガニツマブ治療群の中央値ＯＳは、１１．１４ヶ月であり、７．５９ヶ月の差異である。
【０３３１】
ＩＧＦ−２（図３１、表２９）に関して、再び、高い下位群および低い下位群ＯＳプロフィール間の差異は、ガニツマブ群において明らかであり、このうち高い下位群は、低い下位群およびプラセボ群の両方の下位群と比較して、改善されたＯＳを示している。
【０３３２】
ＩＧＦＢＰ−２（図３２、表２９）に関して、再び、ガニツマブ群における高い下位群および低い下位群ＯＳプロフィール間の差異は、明らかであるが、この場合、ガニツマブ群における低い下位群は、ガニツマブ群における高い下位群およびプラセボ群の両方の下位群と比較して、改善されたＯＳを示す。
【０３３３】
ＩＧＦＢＰ−３（図３３、表２９）に関して、再び、高い下位群および低い下位群ＯＳプロフィール間の差異は、明らかであり、このうち高い下位群は、低い下位群およびプラセボ群の両方の下位群と比較して、改善されたＯＳを示している。
【０３３４】
これらのマーカーの間の相関の解析（ノンパラメトリックなスピアマンの相関）は、ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２レベルが共に、ＩＧＦＢＰ−３レベルと有意に相関することを明らかにする。図３５に示されるように、ＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦＢＰ−３またはＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦ−２の間の関係は何ら観察されず、これらのマーカーが異なる患者集団を予測し、これらのマーカーの複合パネルとしての組み合わせが、これらのいずれか単独よりも、予測的となろうことを示唆している。
【０３３５】
図３５に示されるように、循環バイオマーカーのうちの多くの間の相関は強力でなく、それらが、有効性の独立した予測因子として動作し得ることを示唆している。これは、これらのマーカーの比が予測的であることを示唆する。バイオマーカー比についての予測の可能性を、個々のバイオマーカー単独と比較するために、ＲＯＣ曲線下面積（ＡＵＣＲＯＣ）として提示される予測値による、受信者動作特性（ｒｅｃｅｉｖｅｒ  ｏｐｅｒａｔｏｒ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ）（ＲＯＣ）の解析を通じて、９ヶ月生存状況の予
測についての感受性および特異性を決定した。比ＩＧＦ−２／ＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦＢＰ−２／ＩＧＦＢＰ−３について、最強の効果を観察した。ＡＵＣＲＯＣは、個々の因子（ＩＧＦ−２：ＡＵＣＲＯＣ＝０．７２７、ＩＧＦＢＰ−２：ＡＵＣＲＯＣ＝０．７７２）よりも、比ＩＧＦ−２／ＩＧＦＢＰ−２（ＡＵＣＲＯＣ＝０．９２）でより高かった。同様に、比ＩＧＦＢＰ−２／ＩＧＦＢＰ−３は、いずれかの因子の単独（ＩＧＦＢＰ−２：ＡＵＣＲＯＣ＝０．７７２、ＩＧＦＢＰ−３  ＡＵＣＲＯＣ＝０．７１５）よりも、高いＡＵＣＲＯＣ（０．９０６）を有した。
【０３３６】
ＯＳに対する治療の効果（ガニツマブ対プラセボ）を、これらの比の中央値よりも高いまたは低い値を有した患者において分析した。ＩＧＦ−２／ＩＧＦＢＰ−２の比率の中央値は、１１．１５０９であった。ＩＧＦＢＰ−２／ＩＧＦＢＰ−３の比率の中央値は、０．０８３４であった。中央値よりも高いＩＧＦ−２／ＩＧＦＢＰ−２比率または中央値よりも低いＩＧＦＢＰ−２／ＩＧＦＢＰ−３比率のいずれかを有する患者は、ＯＳにおけるガニツマブ依存性の増加を示す可能性がより高かった。中央値よりも低いＩＧＦ−２／ＩＧＦＢＰ−２比率および中央値よりも高いＩＧＦＢＰ−２／ＩＧＦＢＰ−３比率を有する患者は、ＯＳにおけるガニツマブ依存性の増加を示す可能性がより低かった。これらの観察は、単一バイオマーカーに基づく下位群分析と一致している（すなわち、中央値よりも低いＩＧＦＢＰ−２、または中央値よりも高いＩＧＦ−２、または中央値よりも高いＩＧＦＢＰ−３を有する患者は、ＯＳにおけるガニツマブ依存性の増加を示す可能性がより高かった）。
【０３３７】
本明細書に引用される各参考文献は、参照によりその全体がその教示の全てのために全目的で本明細書に組み込まれる。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図１Ｅ】
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【図１Ｆ】
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【図１Ｇ】
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【図１Ｈ】
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【図１Ｉ】
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【図１Ｊ】
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【図１Ｋ】
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【図１Ｌ】
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【図１Ｍ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６Ａ】
2014510265.tif 000070
【図１６Ｂ】
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【図１６Ｃ】
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【図１６Ｄ】
2014510265.tif 000073
【図１６Ｅ】
2014510265.tif 000074
【図１６Ｆ】
2014510265.tif 000075
【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
2014510265.tif 000077
【図１７Ｃ】
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【図１７Ｄ】
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【図１７Ｅ】
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【図１７Ｆ】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
2014510265.tif 000089
【図２６】
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【図２７】
2014510265.tif 000091
【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
2014510265.tif 000093
【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【国際調査報告】
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2014510265.tif 000102
2014510265.tif 000103
2014510265.tif 000104
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