(57)【要約】本発明は、血液学的な悪性疾患および炎症性疾患の処置のための新規な治療ストラテジーに関する方法を提供する。特に、該方法は、式Ａ2014510729.tif 000046の化合物（式中ＲはＨ、ハロまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり；Ｒ’はＣ１−Ｃ６アルキルである）；またはその薬学的に許容され得る塩；ならびに必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤；ならびに必要に応じてベンダムスチン、リツキシマブおよびオファツムマブからなる群より選択される１つ以上の追加の治療剤の投与を含む。
2014510729.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を処置するための方法であって、そのような処置の必要な被験体に有効量の式Ａ
【化３１】
2014510729.tif 000042
の化合物；または
その薬学的に許容され得る塩；ならびに
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤；ならびに
必要に応じてベンダムスチン、リツキシマブ、レナリドマイドおよびオファツムマブからなる群より選択される１つ以上の追加の治療剤
を投与するステップを含み、
式中ＲはＨ、ハロまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり；Ｒ’はＣ１−Ｃ６アルキルである、方法。
【請求項２】
前記化合物が
【化３２】
2014510729.tif 000043
である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記化合物が
【化３３】
2014510729.tif 000044
である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記癌が血液学的な悪性疾患である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記血液学的な悪性疾患がＢ細胞悪性疾患である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記血液学的な悪性疾患が白血病またはリンパ腫である、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記癌が慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）または非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記癌が低悪性度非ホジキンリンパ腫（ｉＮＨＬ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記化合物および前記１つ以上の治療剤は各々が、少なくとも１サイクルの間に少なくとも１回投与され、該１つ以上の治療剤が前記被験体に、該化合物の投与と同じまたは異なるサイクルで投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記サイクルが７〜４２日間である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記１つ以上の治療剤が前記被験体に、少なくとも１サイクルの少なくとも初日と２日目に投与される、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記１つ以上の治療剤が前記被験体に少なくとも１サイクルの間に毎週投与される、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
５０ｍｇ〜２００ｍｇの前記化合物が前記被験体に１日あたり２回投与される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
５０ｍｇ／ｍ２〜１，５００ｍｇ／ｍ２の前記１つ以上の治療剤が前記被験体に投与される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記化合物が、該化合物および少なくとも１つの薬学的に許容され得る賦形剤を含む薬学的組成物中に存在する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記被験体が標準の化学療法の処置に対して抵抗性である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記被験体が少なくとも１つの肥大リンパ節を有する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記被験体が、ｉ）少なくとも１つの化学療法の処置に不応性であるか、またはｉｉ）化学療法での処置後に再発しているか、またはそれらの組み合わせである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
Ｂ細胞障害を有する被験体を処置する方法であって、
ａ）Ｂ細胞悪性疾患を有する被験体を確認するステップであって、該被験体は、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））、カルフィルゾミブ（ＰＲ−１７１）、ＰＲ−０４７、ジスルフィラム、ラクタシスチン、ＰＳ−５１９、エポネマイシン、エポキソマイシン、アクラシノマイシン、ＣＥＰ−１６１２、ＭＧ−１３２、ＣＶＴ−６３４１７、ＰＳ−３４１、ビニルスルホントリペプチドインヒビター、リトナビル、ＰＩ−０８３、（＋／−）−７−メチルオムラリド、（−）−７−メチルオムラリド、ペリホシン、リツキシマブ、クエン酸シルデナフィル（Ｖｉａｇｒａ（登録商標））、ＣＣ−５１０３、サリドマイド、エプラツズマブ（ｈＬＬ２−抗ＣＤ２２ヒト化抗体）、シンバスタチン、エンザスタウリン、Ｃａｍｐａｔｈ  １Ｈ（登録商標）、デキサメタゾン、ＤＴ  ＰＡＣＥ、オブリメルセン、アンチネオプラストンＡ１０、アンチネオプラストンＡＳ２  １、アレムツズマブ、βアレチン、シクロホスファミド、塩酸ドキソルビシン、ＰＥＧ化リポソーム塩酸ドキソルビシン、プレドニゾン、プレドニゾロン、クラドリビン、硫酸ビンクリスチン、フルダラビン、フィルグラスチム、メルファラン、組み換えインターフェロンα、カルムスチン、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、エトポシド、メルファラン、ドラスタチン１０、インジウムＩｎ１１１モノクローナル抗体ＭＮ−１４、イットリウムＹ９０ヒト化エプラツズマブ、抗胸腺細胞グロブリン、ブスルファン、シクロスポリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、治療用異種リンパ球、イットリウムＹ９０イブリツモマブチウキセタン、シロリムス、タクロリムス、カルボプラチン、チオテパ、パクリタキセル、アルデスロイキン、組み換えインターフェロンα、ドセタキセル、イホスファミド、メスナ、組み換えインターロイキン−１２、組み換えインターロイキン−１１、Ｂｃｌ−２ファミリータンパク質インヒビターＡＢＴ−２６３、デニロイキンジフチトクス、タネスピマイシン、エベロリムス、ペグフィルグラスチム、ボリノスタット、アルボシジブ、組み換えｆｌｔ３リガンド、組み換えヒトトロンボポエチン、リンホカイン活性化キラー細胞、アミホスチン三水和物、アミノカンプトテシン、塩酸イリノテカン、酢酸カスポファンギン、クロファラビン、エポエチンα、ネララビン、ペントスタチン、サルグラモスチム、二酒石酸ビノレルビン、ＷＴ−１アナログペプチドワクチン、ＷＴ１  １２６−１３４ペプチドワクチン、フェンレチニド、イクサベピロン、オキサリプラチン、モノクローナル抗体ＣＤ１９、モノクローナル抗体ＣＤ２０、ω−３脂肪酸、塩酸ミトキサントロン、酢酸オクトレオチド、トシツモマブおよびヨウ素Ｉ１３１トシツモマブ、モテキサフィンガドリニウム、三酸化ヒ素、ティピファルニブ、自家ヒト腫瘍由来ＨＳＰＰＣ−９６、ベルツズマブ、ブリオスタチン１、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、クロラムブシル、ペントスタチン、ルミリキシマブ、アポリズマブ、抗ＣＤ４０、オファツムマブ、テムシロリムス、ベンダムスチン、プリンアナログ、レナリドマイド、アルキル化剤ならびにアントラサイクリン含有治療薬からなる群より選択される少なくとも１つ以上の処置に不応性であるか、または該処置後に再発しているか、またはそれらの組み合わせであるステップ；
ｂ）そのような処置の必要な被験体に、式Ｉ”
【化３４】
2014510729.tif 000045
の化合物、
またはその薬学的に許容され得る塩；ならびに
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤；ならびに
必要に応じてベンダムスチン、リツキシマブ、レナリドマイドおよびオファツムマブからなる群より選択される１つ以上の追加の治療剤
を投与するステップ
を含む方法。
【請求項２０】
前記被験体が、リツキシマブ、アルキル化剤、フルダラビンおよびアントラサイクリン含有治療薬からなる群より選択される少なくとも１つ以上の処置に不応性であるか、または該処置後に再発している、ならびにそれらの組み合わせである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
５０ｍｇ〜２００ｍｇの前記化合物が前記被験体に、少なくとも１サイクル以上の間に１日あたり２回投与される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
５０ｍｇ／ｍ２〜１，５００ｍｇ／ｍ２の前記１つ以上の追加の治療剤が前記被験体に、少なくとも１サイクル以上の間に少なくとも１回投与され、該１つ以上の治療剤が該被験体に、前記化合物の投与と同じまたは異なるサイクルで投与される、請求項１９または２０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
この出願は、２０１１年３月１１日に出願された米国仮特許出願第６１／４５２，０３４号および２０１１年６月３日に出願されたれた同第６１／４９３，３１７号からの優先権を主張し、これらの両方はその全体が参照として援用される。
【０００２】
技術分野
本出願は、治療薬および医薬品化学の分野におけるものである。特に、本出願は、血液学的な悪性疾患および特定の他の状態を処置するための他の治療処置と組み合わせた特定のキナゾリン誘導体の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
３’−リン酸化ホスホイノシチドを介する細胞シグナル伝達は、種々の細胞プロセス、例えば、悪性形質転換、成長因子シグナル伝達、炎症および免疫に関係している。これらのリン酸化シグナル伝達産物を生成することを担う酵素であるホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３−キナーゼ；ＰＩ３Ｋ）は、もともと、ウイルス腫瘍性タンパク質および成長因子レセプターチロシンキナーゼ（ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）およびそのリン酸化誘導体をイノシトール環の３’−ヒドロキシルでリン酸化する）に関連する活性として同定された。
【０００４】
ＰＩ３−キナーゼ活性化は、細胞増殖、分化およびアポトーシスを含めて、ある範囲の細胞応答に関与すると考えられている。
【０００５】
ＰＩ  ３−キナーゼの最初の精製および分子クローニングによって、これがｐ８５およびｐ１１０サブユニットからなるヘテロ二量体であることが明らかになった。４つの異なるクラスのＩ  ＰＩ３Ｋが特定されている（ＰＩ３Ｋα、β、δ、およびγと命名され、各々が別個の１１０ｋＤａの触媒性サブユニットおよび調節性サブユニットからなる）。さらに詳細には、３つの触媒性サブユニット（すなわち、ｐ１１０α、ｐ１１０βおよびｐ１１０δ）は、各々が同じ調節性サブユニット、ｐ８５と相互作用し；一方、ｐ１１０γは、別個の調節性サブユニット、ｐ１０１と相互作用する。ヒト細胞および組織におけるこれらのＰＩＫ３の各々の発現のパターンもまた別個である。
【０００６】
ＰＩ３キナーゼのｐ１１０δの同定は、非特許文献１に記載されている。ヒトｐ１１０δイソ型は、組織限定的な様式で発現されることが観察された。これはリンパ球およびリンパ組織で高レベルで発現され、これによって、このタンパク質は、免疫系でのＰＩ  ３−キナーゼ媒介性のシグナル伝達にある役割を果たし得ることが示唆される。ＰＩ３Ｋのｐ１１０βイソ型はまた、特定の癌においてＰＩ３Ｋ媒介性のシグナル伝達にある役割を果たし得る。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｃｈａｎｔｒｙら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，（１９９７）２７２：１９２３６〜４１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
癌、炎症性疾患および自己免疫疾患に関連しているＰＩ３Ｋ媒介性障害に関する処置の必要性が存在している。具体的には、血液学的な悪性疾患である癌、例えば、白血病およびリンパ腫の処置の必要性が存在している。
【０００９】
慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）に対する既存の化学免疫療法アプローチは、悪性リンパ球の増殖を低減させ、そのアポトーシスを増強することができる。しかしながら、このような有益な効果はリンパ節において限定的であり得る、というのは、既存の薬物は当該部位に有効に浸透し得ないため、および非悪性間質細胞が悪性リンパ球に対して支持をもたらすためである。
【００１０】
ＣＬＬに対する既存の化学療法薬または免疫療法薬としては、シクロホスファミド、クロラムブシル、フルダラビン、リツキシマブ、アレムツズマブ、およびオファツムマブが挙げられる。これらの治療薬は循環悪性リンパ球の死滅に特に有効であるが、悪性リンパ節腫脹の低減には有効性が低い場合があり得る。さらに、これらの治療薬ではリンパ球再分布は誘導されない、またはリンパ球増加症を引き起す。
【００１１】
ＣＬＬを有する患者を処置するために当該分野で必要とされているものは、リンパ球と間質細胞間の化学走性シグナル伝達を調節することができる処置である。さらに、必要とされているものは、リンパ節から循環系内への悪性リンパ球を再分布させるこのようなシグナル伝達結果を低減させることができる処置である。このような再分布により、化学療法剤または免疫療法剤による該細胞のより良好な死滅が可能となることになる。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
要旨
本出願は、これらの化合物を、癌、炎症性および自己免疫性疾患を処置するための他の化学療法薬または免疫療法薬と組み合わせて使用する方法を提供することにより、当該分野における必要性を満たすものである。特に、血液学的な悪性疾患である癌、例えば、白血病およびリンパ腫が本明細書に記載の方法によって処置される。
【００１３】
一局面では、癌を処置するための方法であって、そのような処置の必要な被験体に有効量の式Ａ
【００１４】
【化１】
2014510729.tif 000003
の化合物；または
その薬学的に許容され得る塩；ならびに
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤；ならびに
必要に応じてベンダムスチン、リツキシマブおよびオファツムマブからなる群より選択される１つ以上の追加の治療剤
を投与するステップを含み、
式中ＲはＨ、ハロまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり；Ｒ’はＣ１−Ｃ６アルキルである
方法を提供する。
【００１５】
一実施形態では、上記化合物は
【００１６】
【化２】
2014510729.tif 000004
である。
【００１７】
別の実施形態では、上記化合物は
【００１８】
【化３】
2014510729.tif 000005
である。
【００１９】
前述の実施形態のいくつかでは、上記癌は血液学的な悪性疾患である。
【００２０】
前述の実施形態のいくつかでは、上記血液学的な悪性疾患はＢ細胞悪性疾患である。
【００２１】
前述の実施形態のいくつかでは、上記血液学的な悪性疾患は白血病またはリンパ腫である。
【００２２】
前述の実施形態のいくつかでは、上記癌は慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）または非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。
【００２３】
いくつかの実施形態では、上記癌は低悪性度非ホジキンリンパ腫（ｉＮＨＬ）である。
【００２４】
他の実施形態では、上記化合物および上記１つ以上の治療剤は各々が、少なくとも１サイクルの間に少なくとも１回投与され、上記１つ以上の治療剤は上記被験体に上記化合物の投与と同じまたは異なるサイクルで投与される。
【００２５】
前述の実施形態のいくつかでは、サイクルが７〜４２日間である。
【００２６】
前述の実施形態のいくつかでは、上記１つ以上の治療剤は上記被験体に、少なくとも１サイクルの少なくとも初日と２日目に投与される。
【００２７】
前述の実施形態のいくつかでは、上記１つ以上の治療剤は上記被験体に少なくとも１サイクルの間に毎週投与される。
【００２８】
前述の実施形態のいくつかでは、５０ｍｇ〜２００ｍｇの上記化合物が上記被験体に１日あたり２回投与される。
【００２９】
前述の実施形態のいくつかでは、５０〜１，５００ｍｇ／ｍ２の上記１つ以上の治療剤が上記被験体に投与される。
【００３０】
前述の実施形態のいくつかでは、上記化合物は、上記化合物および少なくとも１つの薬学的に許容され得る賦形剤を含む薬学的組成物中に存在する。
【００３１】
前述の実施形態のいくつかでは、上記被験体は、標準の化学療法の処置に対して抵抗性である。
【００３２】
前述の実施形態のいくつかでは、上記被験体は、少なくとも１つの肥大リンパ節を有する。
【００３３】
前述の実施形態のいくつかでは、上記被験体は、ｉ）少なくとも１つの化学療法の処置に不応性であるか、またはｉｉ）化学療法での処置後に再発しているか、またはそれらの組み合わせである。
【００３４】
別の局面では、癌を処置するための方法であって、そのような処置の必要な被験体に有効量の式Ａ
【００３５】
【化４】
2014510729.tif 000006
の化合物；または
その薬学的に許容され得る塩；ならびに
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤；ならびに
必要に応じてベンダムスチン、リツキシマブ、オファツムマブおよびレナリドマイドからなる群より選択される１つ以上の追加の治療剤
を投与するステップを含み、
式中ＲはＨ、ハロまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり；Ｒ’はＣ１−Ｃ６アルキルである
方法を提供する。
【００３６】
さらに別の局面では、ある状態を処置する方法であって、そのような処置の必要な被験体に有効量の式Ｉ”または式ＩＩ”
【００３７】
【化５】
2014510729.tif 000007
の化合物、
またはその薬学的に許容され得る塩、ならびに
必要に応じてベンダムスチン、リツキシマブおよびオファツムマブからなる群より選択される１つ以上の追加の治療剤
を投与するステップを含み、
上記状態が慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）または低悪性度非ホジキンリンパ腫（ｉＮＨＬ）である
方法を提供する。
【００３８】
一実施形態では、上記被験体は、ｉ）少なくとも１つの化学療法の処置に不応性であるか、またはｉｉ）化学療法での処置後に再発しているか、またはそれらの組み合わせである。
【００３９】
前述の実施形態のいくつかでは、上記化合物および上記１つ以上の治療剤は各々が、少なくとも１サイクルの間に少なくとも１回投与され、上記１つ以上の治療剤は上記被験体に上記化合物の投与と同じまたは異なるサイクルで投与される。
【００４０】
前述の実施形態のいくつかでは、サイクルが７〜４２日間である。
【００４１】
前述の実施形態のいくつかでは、５０ｍｇ〜２００ｍｇの上記化合物が上記被験体に１日あたり２回投与される。
【００４２】
一実施形態では、上記１つ以上の治療剤がベンダムスチンである。
【００４３】
前述の実施形態のいくつかでは、上記ベンダムスチンは上記被験体に、少なくとも１サイクルの少なくとも初日と２日目に投与される。
【００４４】
前述の実施形態のいくつかでは、上記ベンダムスチンは少なくとも６サイクルの間投与される。
【００４５】
前述の実施形態のいくつかでは、上記ベンダムスチンの各々の用量は５０ｍｇ／ｍ２〜１５０ｍｇ／ｍ２である。
【００４６】
前述の実施形態のいくつかでは、該方法が、さらに上記被験体にリツキシマブを投与するステップを含む。
【００４７】
前述の実施形態のいくつかでは、上記リツキシマブは、少なくとも６サイクルの間、各々のサイクルの初日に投与される。
【００４８】
別の実施形態では、上記１つ以上の治療剤がリツキシマブである。
【００４９】
前述の実施形態のいくつかでは、上記リツキシマブは上記被験体に少なくとも１サイクルの間に毎週投与される。
【００５０】
前述の実施形態のいくつかでは、上記リツキシマブの各々の用量は３００ｍｇ／ｍ２〜４００ｍｇ／ｍ２である。
【００５１】
さらに別の実施形態では、上記１つ以上の治療剤がオファツムマブである。
【００５２】
前述の実施形態のいくつかでは、少なくとも１２用量のオファツムマブが６サイクルにわたって投与される。
【００５３】
さらに別の局面では、ある状態を処置する方法であって、そのような処置の必要な被験体に有効量の式Ｉ”または式ＩＩ”
【００５４】
【化６】
2014510729.tif 000008
の化合物、
またはその薬学的に許容され得る塩、ならびに
必要に応じてベンダムスチン、リツキシマブ、オファツムマブおよびレナリドマイドからなる群より選択される１つ以上の追加の治療剤
を投与するステップを含む方法を提供する。
【００５５】
一実施形態では、上記１つ以上の治療剤がレナリドマイドである。
【００５６】
さらに別の局面では、Ｂ細胞障害を有する被験体を処置する方法であって、
ａ）Ｂ細胞悪性疾患を有する被験体を確認するステップであって、上記被験体は、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））、カルフィルゾミブ（ＰＲ−１７１）、ＰＲ−０４７、ジスルフィラム、ラクタシスチン、ＰＳ−５１９、エポネマイシン、エポキソマイシン、アクラシノマイシン、ＣＥＰ−１６１２、ＭＧ−１３２、ＣＶＴ−６３４１７、ＰＳ−３４１、ビニルスルホントリペプチドインヒビター、リトナビル、ＰＩ−０８３、（＋／−）−７−メチルオムラリド、（−）−７−メチルオムラリド、ペリホシン、リツキシマブ、クエン酸シルデナフィル（Ｖｉａｇｒａ（登録商標））、ＣＣ−５１０３、サリドマイド、エプラツズマブ（ｈＬＬ２−抗ＣＤ２２ヒト化抗体）、シンバスタチン、エンザスタウリン、Ｃａｍｐａｔｈ  １Ｈ（登録商標）、デキサメタゾン、ＤＴ  ＰＡＣＥ、オブリメルセン、アンチネオプラストンＡ１０、アンチネオプラストンＡＳ２  １、アレムツズマブ、βアレチン、シクロホスファミド、塩酸ドキソルビシン、ＰＥＧ化リポソーム塩酸ドキソルビシン、プレドニゾン、プレドニゾロン、クラドリビン、硫酸ビンクリスチン、フルダラビン、フィルグラスチム、メルファラン、組み換えインターフェロンα、カルムスチン、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、エトポシド、メルファラン、ドラスタチン１０、インジウムＩｎ１１１モノクローナル抗体ＭＮ−１４、イットリウムＹ９０ヒト化エプラツズマブ、抗胸腺細胞グロブリン、ブスルファン、シクロスポリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、治療用異種リンパ球、イットリウムＹ９０イブリツモマブチウキセタン、シロリムス、タクロリムス、カルボプラチン、チオテパ、パクリタキセル、アルデスロイキン、組み換えインターフェロンα、ドセタキセル、イホスファミド、メスナ、組み換えインターロイキン−１２、組み換えインターロイキン−１１、Ｂｃｌ−２ファミリータンパク質インヒビターＡＢＴ−２６３、デニロイキンジフチトクス、タネスピマイシン、エベロリムス、ペグフィルグラスチム、ボリノスタット、アルボシジブ、組み換えｆｌｔ３リガンド、組み換えヒトトロンボポエチン、リンホカイン活性化キラー細胞、アミホスチン三水和物、アミノカンプトテシン、塩酸イリノテカン、酢酸カスポファンギン、クロファラビン、エポエチンα、ネララビン、ペントスタチン、サルグラモスチム、二酒石酸ビノレルビン、ＷＴ−１アナログペプチドワクチン、ＷＴ１  １２６−１３４ペプチドワクチン、フェンレチニド、イクサベピロン、オキサリプラチン、モノクローナル抗体ＣＤ１９、モノクローナル抗体ＣＤ２０、ω−３脂肪酸、塩酸ミトキサントロン、酢酸オクトレオチド、トシツモマブおよびヨウ素Ｉ１３１トシツモマブ、モテキサフィンガドリニウム、三酸化ヒ素、ティピファルニブ、自家ヒト腫瘍由来ＨＳＰＰＣ−９６、ベルツズマブ、ブリオスタチン１、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、クロラムブシル、ペントスタチン、ルミリキシマブ、アポリズマブ、抗ＣＤ４０、オファツムマブ、テムシロリムス、ベンダムスチン、プリンアナログ、レナリドマイド、アルキル化剤ならびにアントラサイクリン含有治療薬からなる群より選択される少なくとも１つ以上の処置に不応性であるか、または上記処置後に再発しているか、またはそれらの組み合わせであるステップ；
ｂ）そのような処置の必要な被験体に、式Ｉ”
【００５７】
【化７】
2014510729.tif 000009
の化合物、
またはその薬学的に許容され得る塩；ならびに
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤；ならびに
必要に応じてベンダムスチン、リツキシマブ、レナリドマイドおよびオファツムマブからなる群より選択される１つ以上の追加の治療剤
を投与するステップ
を含む方法を提供する。
【００５８】
一実施形態では、上記被験体は、リツキシマブ、アルキル化剤、フルダラビンおよびアントラサイクリン含有治療薬からなる群より選択される少なくとも１つ以上の処置に不応性であるか、または上記処置後に再発している、ならびにそれらの組み合わせである。
【００５９】
前述の実施形態のいくつかでは、５０ｍｇ〜２００ｍｇの上記化合物が上記被験体に、少なくとも１サイクル以上の間に１日あたり２回投与される。
【００６０】
前述の実施形態のいくつかでは、５０ｍｇ／ｍ２〜１，５００ｍｇ／ｍ２の上記１つ以上の追加の治療剤が上記被験体に、少なくとも１サイクル以上の間に少なくとも１回投与され、上記１つ以上の治療剤は上記被験体に上記化合物の投与と同じまたは異なるサイクルで投与される。
【００６１】
さらに別の局面では、Ｂ細胞障害を有する被験体を処置する方法であって、
ａ）Ｂ細胞悪性疾患を有する被験体を確認するステップであって、上記被験体は、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））、カルフィルゾミブ（ＰＲ−１７１）、ＰＲ−０４７、ジスルフィラム、ラクタシスチン、ＰＳ−５１９、エポネマイシン、エポキソマイシン、アクラシノマイシン、ＣＥＰ−１６１２、ＭＧ−１３２、ＣＶＴ−６３４１７、ＰＳ−３４１、ビニルスルホントリペプチドインヒビター、リトナビル、ＰＩ−０８３、（＋／−）−７−メチルオムラリド、（−）−７−メチルオムラリド、ペリホシン、リツキシマブ、クエン酸シルデナフィル（Ｖｉａｇｒａ（登録商標））、ＣＣ−５１０３、サリドマイド、エプラツズマブ（ｈＬＬ２−抗ＣＤ２２ヒト化抗体）、シンバスタチン、エンザスタウリン、Ｃａｍｐａｔｈ  １Ｈ（登録商標）、デキサメタゾン、ＤＴ  ＰＡＣＥ、オブリメルセン、アンチネオプラストンＡ１０、アンチネオプラストンＡＳ２  １、アレムツズマブ、βアレチン、シクロホスファミド、塩酸ドキソルビシン、ＰＥＧ化リポソーム塩酸ドキソルビシン、プレドニゾン、プレドニゾロン、クラドリビン、硫酸ビンクリスチン、フルダラビン、フィルグラスチム、メルファラン、組み換えインターフェロンα、カルムスチン、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、エトポシド、メルファラン、ドラスタチン１０、インジウムＩｎ１１１モノクローナル抗体ＭＮ−１４、イットリウムＹ９０ヒト化エプラツズマブ、抗胸腺細胞グロブリン、ブスルファン、シクロスポリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、治療用異種リンパ球、イットリウムＹ９０イブリツモマブチウキセタン、シロリムス、タクロリムス、カルボプラチン、チオテパ、パクリタキセル、アルデスロイキン、組み換えインターフェロンα、ドセタキセル、イホスファミド、メスナ、組み換えインターロイキン−１２、組み換えインターロイキン−１１、Ｂｃｌ−２ファミリータンパク質インヒビターＡＢＴ−２６３、デニロイキンジフチトクス、タネスピマイシン、エベロリムス、ペグフィルグラスチム、ボリノスタット、アルボシジブ、組み換えｆｌｔ３リガンド、組み換えヒトトロンボポエチン、リンホカイン活性化キラー細胞、アミホスチン三水和物、アミノカンプトテシン、塩酸イリノテカン、酢酸カスポファンギン、クロファラビン、エポエチンα、ネララビン、ペントスタチン、サルグラモスチム、二酒石酸ビノレルビン、ＷＴ−１アナログペプチドワクチン、ＷＴ１  １２６−１３４ペプチドワクチン、フェンレチニド、イクサベピロン、オキサリプラチン、モノクローナル抗体ＣＤ１９、モノクローナル抗体ＣＤ２０、ω−３脂肪酸、塩酸ミトキサントロン、酢酸オクトレオチド、トシツモマブおよびヨウ素Ｉ１３１トシツモマブ、モテキサフィンガドリニウム、三酸化ヒ素、ティピファルニブ、自家ヒト腫瘍由来ＨＳＰＰＣ−９６、ベルツズマブ、ブリオスタチン１、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、クロラムブシル、ペントスタチン、ルミリキシマブ、アポリズマブ、抗ＣＤ４０、オファツムマブ、テムシロリムス、ベンダムスチン、プリンアナログ、レナリドマイド、アルキル化剤ならびにアントラサイクリン含有治療薬からなる群より選択される少なくとも１つ以上の処置に不応性であるか、または上記処置後に再発しているか、またはそれらの組み合わせであるステップ；
ｂ）そのような処置の必要な被験体に、式Ｉ”
【００６２】
【化８】
2014510729.tif 000010
の化合物、
またはその薬学的に許容され得る塩；ならびに
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤；ならびに
必要に応じてベンダムスチン、リツキシマブ、オファツムマブおよびレナリドマイドからなる群より選択される１つ以上の追加の治療剤
を投与するステップ
を含む方法を提供する。
【００６３】
別の局面では、本開示により、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）または低悪性度非ホジキンリンパ腫（ｉＮＨＬ）を処置する方法であって、そのような処置の必要な被験体に有効量の式Ｉ”
【００６４】
【化９】
2014510729.tif 000011
の化合物、
またはその薬学的に許容され得る塩；
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤；ならびに
ベンダムスチン
を投与するステップを含む
方法を提供する。
【００６５】
一実施形態では、上記化合物およびベンダムスチンは各々が、少なくとも１サイクルの間に少なくとも１回投与され、上記ベンダムスチンは上記被験体に上記化合物の投与と同じまたは異なるサイクルで投与される。
【００６６】
前述の実施形態のいくつかでは、サイクルが７〜４２日間である。
【００６７】
前述の実施形態のいくつかでは、上記化合物は上記被験体に少なくとも１サイクルの間に１日あたり２回投与され、上記ベンダムスチンは上記被験体に、少なくとも１サイクルの少なくとも初日と２日目に投与される。
【００６８】
前述の実施形態のいくつかでは、上記ベンダムスチンは少なくとも６サイクルの間投与される。
【００６９】
前述の実施形態のいくつかでは、上記化合物の用量は５０ｍｇ〜２００ｍｇであり、ベンダムスチンの用量は５０ｍｇ／ｍ２〜１５０ｍｇ／ｍ２である。
【００７０】
前述の実施形態のいくつかでは、該方法が、さらに、リツキシマブおよびオファツムマブからなる群より選択される１つ以上の追加の治療剤を投与するステップを含む。
【００７１】
前述の実施形態のいくつかでは、該方法が、さらに、リツキシマブ、オファツムマブおよびレナリドマイドからなる群より選択される１つ以上の追加の治療剤を投与するステップを含む。
【００７２】
さらに別の局面では、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）または低悪性度非ホジキンリンパ腫（ｉＮＨＬ）を処置する方法であって、そのような処置の必要な被験体に有効量の式Ｉ”
【００７３】
【化１０】
2014510729.tif 000012
の化合物、
またはその薬学的に許容され得る塩；
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤；ならびに
リツキシマブ
を投与するステップを含む方法を提供する。
【００７４】
一実施形態では、上記化合物およびリツキシマブは各々が１サイクル中に少なくとも１回投与され、上記リツキシマブは上記被験体に上記化合物の投与と同じまたは異なるサイクルで投与される。
【００７５】
前述の実施形態のいくつかでは、サイクルが７〜４２日間である。
【００７６】
前述の実施形態のいくつかでは、上記化合物は上記被験体に少なくとも１サイクルの間に１日あたり２回投与され、上記リツキシマブは上記被験体に少なくとも１サイクルの間に毎週投与される。
【００７７】
前述の実施形態のいくつかでは、上記化合物の用量は５０ｍｇ〜２００ｍｇであり、上記リツキシマブの用量は３００ｍｇ／ｍ２〜４００ｍｇ／ｍ２である。
【００７８】
前述の実施形態のいくつかでは、該方法が、さらに、ベンダムスチンおよびオファツムマブからなる群より選択される１つ以上の追加の治療剤を投与するステップを含む。
【００７９】
前述の実施形態のいくつかでは、該方法が、さらに、ベンダムスチン、オファツムマブおよびレナリドマイドからなる群より選択される１つ以上の追加の治療剤を投与するステップを含む。
【００８０】
さらに別の局面では、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）または低悪性度非ホジキンリンパ腫（ｉＮＨＬ）を処置する方法であって、そのような処置の必要な被験体に有効量の式Ｉ”
【００８１】
【化１１】
2014510729.tif 000013
の化合物、
またはその薬学的に許容され得る塩；
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤；ならびに
レナリドマイド
を投与するステップを含む方法を提供する。
【００８２】
一実施形態では、上記化合物およびレナリドマイドは各々が１サイクル中に少なくとも１回投与され、上記レナリドマイドが上記被験体に、上記化合物の投与と同じまたは異なるサイクルで投与される。
【００８３】
さらに別の局面では、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）または低悪性度非ホジキンリンパ腫（ｉＮＨＬ）を処置する方法であって、そのような処置の必要な被験体に有効量の式Ｉ”
【００８４】
【化１２】
2014510729.tif 000014
の化合物、
またはその薬学的に許容され得る塩；
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤；ならびに
オファツムマブ
を投与するステップを含む方法を提供する。
【００８５】
前述の実施形態のいくつかでは、上記化合物の用量は５０ｍｇ〜２００ｍｇであり、オファツムマブの用量は２００ｍｇ〜１５００ｍｇである。前述の実施形態のいくつかでは、その後のオファツムマブ用量と異なる初期用量のオファツムマブが投与される。
【図面の簡単な説明】
【００８６】
【図１】図１は、多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞増殖のグラフによるまとめを、化合物Ｉと組み合わせて種々の濃度のサイトカインＩＧＦ−１およびＩＬ−６の関数として、ＬＢ細胞を用いて示す。
【図２】図２は、多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞の細胞増殖のグラフの要約を、種々の濃度の化合物Ｉおよび骨髄間質細胞（ＢＭＳＣ）の有無の関数として４８時間後に示す。
【図３】図３は、種々の濃度の式Ｉの化合物の関数として慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞のアポトーシスのグラフの要約を示す。
【図４】図４は、いくつかの異なる急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）細胞株における、細胞生存度、Ａｋｔ（Ｓｅｒ４７３）リン酸化の減少、およびカスパーゼ３活性化に対する化合物Ｉの効果のまとめのチャートを示す。
【図５】図５は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）細胞株の細胞周期に対する化合物Ｉの効果の要約を示す。
【図６】図６は、乳癌Ｔ４７ＤおよびＨＳ−５７８Ｔ細胞株における細胞増殖に対する種々の濃度の化合物Ｉの効果のグラフの要約を４８時間および７２時間で示す。
【図７】図７は、卵巣ＩＧＲＯＶ−１およびＯＶＣＡＲ−３細胞株の細胞増殖に対する種々の濃度の化合物Ｉの効果のグラフの要約を４８時間および７２時間で示す。
【図８】図８は、多くの白血病およびリンパ腫の細胞株におけるＡｋｔリン酸化に対する化合物Ｉの効果のまとめを示す。
【図９】図９は、種々の造血系癌細胞株におけるＡｋｔおよびｐＡｋｔのＳＤＳ−ＰＡＧＥ画像および提示を化合物Ｉの有無の関数として示しており、ここでは化合物ＩがＡｋｔリン酸化を阻害することが示されている。
【図１０】図１０は、乳癌細胞株におけるアポトーシスおよび生存している細胞の集団の、式Ｉの化合物の種々の濃度の関数としてのグラフの要約を示しており、ここでは、この化合物がアポトーシスを誘導することが示される。
【図１１】図１１は、健康なヒト被験体の血液中での化合物Ｉの濃度をこの化合物の５０、１００および２００ｍｇの用量の経口投与後１２時間にわたって示す。
【図１２】図１２は、化合物Ｉでの処置の２８日（１サイクル）後のマントル細胞リンパ腫と診断されたヒト患者における病変の領域と、処置前の病変の領域との比較を示す。
【図１３】図１３は、式Ｉの化合物での処置の２８日（１サイクル）後の４週間の期間にわたる患者の血液中のＡＬＣ（リンパ球絶対数）を示す。
【図１４】図１４は、化合物Ｉの同じ投与スケジュールまたは１００ｍｇのＢＩＤでの投薬を用いた、７日（Ｄ７）の正常な健常ボランティアの血液中の濃度に比較した、２８日の投与（５０ｍｇ  ＢＩＤ）後６時間にわたる、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）の有無における患者の血液中の化合物Ｉの濃度を示す。
【図１５】図１５は、リンパ腫および白血病細胞株のパネルにおけるＰＩ３Ｋイソ型発現を示す。
【図１６Ａ】図１６Ａは、化合物Ｉに曝された白血病細胞株における細胞生存度およびアポトーシスのデータを示す。
【図１６Ｂ】図１６Ｂでは、アネキシン染色によって、処理された細胞におけるアポトーシスの増大が示される。
【図１７】図１７Ａ〜図１７Ｄは、ＣＬＬ患者細胞における種々のＰＩ３Ｋイソ型発現のＰＡＧＥの結果を示す。
【図１８】図１８は、化合物Ｉの存在下における（Ａ）カスパーゼ３および（Ｂ）ＰＡＲＰ切断の誘導を示す。
【図１９】図１９は、化合物Ｉに対して曝されることによって生じる、予後不良患者由来の慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞のアポトーシスの増大を示しており、ここでは、化合物Ｉは、薬物耐性患者に有効であることが示されている。
【図２０】図２０は、式Ｉの化合物に対して曝されることによって生じる不応性／再発患者からの慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞のアポトーシスの増大を示す。
【図２１】図２１は、０．１、１．０、１０μＭの化合物Ｉの有無におけるホスホ−Ａｋｔ産生の結果を示す。
【図２２】図２２は、好塩基球におけるＰＩ３Ｋシグナル伝達に関するフローサイトメトリーの結果を示しており、ここでは、（Ｂ）抗ＦＣεＲ１または（Ｃ）ｆＭＬＰが、ＣＤ６３発現を刺激なし（Ａ）に比べて増大することが示されている。
【図２３】図２３は、好塩基球における化合物ＩによるＰＩ３Ｋ阻害の阻害を示しており、これは、化合物Ｉがｐ１１０δ経路によって誘導されるＣＤ６３発現の阻害に特に有効であるが、またｐ１１０γ経路によって誘導される発現を阻害するためにマイクロモル濃度で有効であることも示す。
【図２４Ａ】図２４Ａは、（Ａ）健常ボランティアにおける種々の用量での化合物Ｉの単回用量投与の薬物動態学的データを示す。
【図２４Ｂ】図２４Ｂは、（Ｂ）有効投薬量を維持する薬物動態プロフィールを１２時間にわたって示す。
【図２５Ａ】図２５Ａは、（Ａ）グルコースのレベルに対する化合物Ｉの種々の用量の効果を示し、ここでオフターゲット（ｏｆｆ  ｔａｒｇｅｔ）活性はほとんど示されない。
【図２５Ｂ】図２５Ｂは、（Ｂ）インスリンのレベルに対する化合物Ｉの種々の用量の効果を示し、ここでオフターゲット活性はほとんど示されない。
【図２６】図２６Ａは、ＤＬＢＣＬ細胞株のパネルにおけるＰＩ３Ｋイソ型発現を示す。図２６Ｂは、化合物Ｉの有無において、ＤＬＢＣＬ細胞株におけるｐＡｋｔのＳＤＳ−ＰＡＧＥ画像を示す。
【図２７】図２７は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで、ＡＬＬの細胞株におけるＡｋｔおよびＳ６のリン酸化に対する１０μＭ濃度の化合物Ｉの効果を示す。
【図２８】図２８は、化合物Ｉの連続希釈液での処理後のＡｋｔ、Ｓ６、およびＧＳＫ−３βのリン酸化の用量依存性の減少を示す。
【図２９】図２９は、ｃＦＬＩＰの下方制御、カスパーゼ３の切断、およびＰＡＲＰの切断におけるＡＬＬ細胞株に対する化合物Ｉの用量依存性の効果を示す。
【図３０】図３０は、Ａ）ＭＭ細胞株、およびＢ）患者ＭＭ細胞；およびＣ）ＭＭ．１ＳおよびＬＢ細胞における、ｐ１１０δの発現を示す。
【図３１−１】図３１Ａは、ｐ１１０δ  ｓｉＲＮＡ（Ｓｉ）またはコントロールのｓｉＲＮＡ（モック）でトランスフェクトしたＬＢ細胞およびＩＮＡ−６細胞由来のｐ１１０δの発現を示す。
【図３１−２】図３１Ｂは、ｐ１１０δ  ｓｉＲＮＡ（Ｓｉ）またはコントロールのｓｉＲＮＡ（モック）でトランスフェクトした後のＩＮＡ−６細胞増殖のグラフを示す。図３１Ｃは、４８時間、化合物Ｉの有無で培養した生きた細胞の％を示す。図３１Ｄは、４８時間、化合物Ｉを０〜２０μＭの濃度で用いて培養した後の生きたＭＭ細胞の％を示す。図３１Ｅは、７２時間、種々の濃度の化合物Ｉで培養した後の健常ドナー由来の生きた末梢血単核球の％を示す。
【図３１−３】図３１Ｆは、１２０時間、化合物Ｉ（０〜５μＭ）を用いて培養したＩＮＡ−６細胞由来の溶解液のイムノブロットの結果を示す。
【図３２】図３２は、Ａ）化合物ＩまたはＬＹ２９４００２を用いてＩＮＡ−６細胞を１２時間；Ｂ）化合物Ｉを種々の濃度で用いてＩＮＡ−６およびＭＭ．１Ｓ細胞を６時間；Ｃ）ＬＢおよびＩＮＡ−６細胞を化合物Ｉを用いて０〜６時間培養した後のイムノブロットのＡＫＴおよびＥＲＫの発現プロフィールを示す。
【図３３−１】図３３Ａは、化合物Ｉを用いて６時間処理したＩＮＡ−６およびＬＢ  ＭＭ細胞の蛍光および透過電子顕微鏡の画像およびＬＣ３蓄積を示し；矢印はオートファゴソーム（自食胞）を示す。図３３Ｂは、５μＭの化合物Ｉまたは血清飢餓で６時間処理したＩＮＡ−６細胞の蛍光顕微鏡画像を示す。図３３Ｃは、化合物Ｉおよび３−ＭＡ（３−メチルアデニン、自食作用のインヒビターとして公知）の有無で処理したＩＮＡ−６細胞由来のＬＣ３およびベクリン−１タンパク質のレベルのイムノブロットを示す。
【図３３−２】図３３Ｄは、最大１００μＭまでの３−ＭＡでの２４時間の処理後のｐ１１０δ陽性ＬＢ細胞の増殖％を示す。
【図３４−１】図３４は、種々の量のＩＬ−６またはＩＧＦ−１の有無における０、５および１０μＭの化合物Ｉとともに共培養したＡ）ＬＢまたはＢ）ＩＮＡ−６細胞の増殖阻害のレベルを示している；凡例：
【００８７】
【化１３】
2014510729.tif 000015
【図３４−２】図３４Ｃおよび図３４Ｄは、ＢＭＳＣの存在下におけるＭＭ細胞増殖阻害を示す。凡例３４Ｃについてのみ：
【００８８】
【化１４】
2014510729.tif 000016
【００８９】
図３４Ｅは、化合物Ｉまたはコントロールの培地とともに４８時間培養されたＢＭＳＣ由来の培養上清中のＩＬ−６のイムノブロットを示す。図３４Ｆは、ＢＭＳＣの有無で培養した、化合物Ｉで処理したＩＮＡ−６細胞におけるＡＫＴおよびＥＲＫの発現プロフィールのイムノブロットを示す。図３４Ｇは、化合物Ｉで４８時間培養した後の２例の異なる患者でのＢＭＳＣ細胞の増殖％を示す。
【図３５】図３５Ａは、０、１および１０μＭの化合物Ｉで８時間培養し、そして微小管形成が評価されたＨｕＶＥＣ（ヒト臍静脈内皮細胞）の顕微鏡画像を示す。図３５Ｂは、化合物Ｉで処理したＨｕＶＥＣ細胞での内皮細胞管形成をまとめた棒グラフを示す。図３５Ｃは、ＨｕＶＥＣの細胞増殖の％を漸増する培養濃度の化合物Ｉの関数としてあらわしているグラフを示す。図３５Ｄは、化合物Ｉと８時間培養した後のＨｕＶＥＣ細胞溶解液のＡｋｔおよびＥＲＫ発現の低下を示す。
【図３６−１】図３６Ａは、化合物ＩＩの０、１０ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇで処理したヒトＭＭ異種移植片を有するＳＣＩＤマウスにおける腫瘍容積を、時間の関数として図に記しており、ここではヒト異種移植片腫瘍に対する強力なインビボの活性が示される。図３６Ｂは、コントロールのマウスに対して、１２日間化合物ＩＩを用いて処置したマウスでのヒトＭＭ異種移植片由来の腫瘍を比較する写真を示す。図３６Ｃは、０、１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇの化合物ＩＩで処理したヒトＭＭ異種移植片を有するＳＣＩＤマウスの生存率を経時的に示す。
【図３６−２】図３６Ｄは、コントロールと比較して化合物ＩＩで処置したマウスから回収した腫瘍の免疫−組織化学的分析からの画像を示しており；ここでＣＤ３１およびＰ−ＡＫＴ陽性細胞は濃褐色である。図３６Ｅは、コントロールと比較して化合物ＩＩで処置したマウスから回収した腫瘍組織由来のＰＤＫ−１およびＡＫＴレベルを検出するイムノブロットを示す。図３６Ｆは、ＥＬＩＳＡによって決定した、０、１０ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇの化合物ＩＩで４週の処置期間にまたがって処置したマウスで測定したｓＩＬ６Ｒレベルのチャートを示す。
【図３７】図３７Ａは、化合物Ｉと種々の量のボルテゾミブ（Ｂ）とを用いた処理後の生存しているＬＢまたはＩＮＡ−６  ＭＭ細胞の％を示す；凡例：
【００９０】
【化１５】
2014510729.tif 000017
【００９１】
図３７Ｂは、化合物Ｉおよび／またはボルテゾミブで６時間処理したＩＮＡ−６細胞中のＡＫＴのリン酸化のレベルを比較するイムノブロットを示す。
【図３８】図３８は、（Ａ）濾胞性リンパ腫細胞株のパネルにおけるＰＩ３Ｋイソ型発現；（Ｂ）化合物Ｉに対して曝した後のｐＡｋｔ、Ａｋｔ、ｐＳ６およびＳ６の発現の減少；ならびに（Ｃ）化合物Ｉに対して曝した後のＰＡＲＰおよびカスパーゼ−３切断における用量依存性の様式での増大を示す。
【図３９Ａ】図３９は、（Ａ）化合物Ｉの種々の量における初代ＭＣＬ細胞での構成的ＰＩ３Ｋシグナル伝達の量；（Ｂ）生存因子および種々の量の化合物Ｉを含むＭＣＬ細胞株でのｐＡｋｔ産生の減少を示す。
【図３９Ｂ】図３９は、（Ａ）化合物Ｉの種々の量における初代ＭＣＬ細胞での構成的ＰＩ３Ｋシグナル伝達の量；（Ｂ）生存因子および種々の量の化合物Ｉを含むＭＣＬ細胞株でのｐＡｋｔ産生の減少を示す。
【図４０】図４０は、（Ａ）化合物Ｉでの処置前、および（Ｂ）化合物Ｉでの１サイクルの処置後のＣＬＬを有する患者における巨大リンパ節腫脹のコンピューター断層撮影腋窩画像を示す。
【図４１】図４１は、ＰＩ３Ｋδ経路の構成的活性化によりｉＮＨＬおよびＣＬＬにおいて悪性Ｂ細胞の増殖、生存および異常な輸送が駆動されることを示す。
【図４２】図４２は、低悪性度非ホジキンリンパ腫（ｉＮＨＬ）および慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を有する２０名の患者に関する研究における患者の特徴および処置の状況（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ）をまとめた表を示す。
【図４３】図４３は、式Ｉの化合物をベンダムスチン（Ｂ）またはリツキシマブ（Ｒ）と組み合わせてｉＮＨＬまたはＣＬＬを有する患者に投与した研究での安全性プロフィールをまとめた表を示す。
【図４４】図４４は、式Ｉの化合物をベンダムスチン（Ｂ）またはリツキシマブ（Ｒ）と組み合わせてｉＮＨＬまたはＣＬＬを有する患者に投与することの有効性のグラフによるまとめを示す。
【図４５】図４５は、式Ｉの化合物をベンダムスチン（Ｂ）またはリツキシマブ（Ｒ）と組み合わせて投与したときのｉＮＨＬまたはＣＬＬを有する患者における反応率をまとめた表を示す。
【図４６】図４６は、式Ｉの化合物のみを単独薬剤としてＣＬＬを有する患者に投与した研究でのリンパ球数のグラフによるまとめを示す。
【図４７】図４７は、式Ｉの化合物をベンダムスチン（Ｂ）またはリツキシマブ（Ｒ）と組み合わせてＣＬＬを有する患者に投与した研究でのリンパ球数のグラフによるまとめを示す。
【図４８】図４８Ａは、式Ｉの化合物、ベンダムスチンまたは組み合わせたこの２つの薬物での処理後のＣＬＬ細胞生存度を示すコンタープロットを示す。図４８Ｂは、式Ｉの化合物（５μＭ）、ベンダムスチン（１０μＭ）、またはこれらの薬物の組み合わせで処理したＣＬＬ細胞の平均相対生存度を示すグラフを示す（平均値±ＳＥＭ，ｎ＝４）。
【図４９Ａ】図４９Ａは、レナリドマイドおよび種々の量の式Ｉの化合物への曝露の関数としての細胞におけるＰＩ３Ｋ−δ酵素活性のグラフによるまとめを示す。
【図４９Ｂ】図４９Ｂおよび４９Ｃは、ＣＤ１９＋細胞におけるリン酸化に対するレナリドマイドおよび／または式Ｉの化合物の効果を示すイムノブロットアッセイの画像を示す。
【図４９Ｃ】図４９Ｂおよび４９Ｃは、ＣＤ１９＋細胞におけるリン酸化に対するレナリドマイドおよび／または式Ｉの化合物の効果を示すイムノブロットアッセイの画像を示す。
【図４９Ｄ】図４９Ｄおよび４９Ｅは、ＣＤ１９＋細胞におけるタンパク質発現に対するトランスフェクトｓｉＲＮＡまたはナンセンスｓｉＲＮＡの効果を示すイムノブロットアッセイの画像を示す。
【図４９Ｅ】図４９Ｄおよび４９Ｅは、ＣＤ１９＋細胞におけるタンパク質発現に対するトランスフェクトｓｉＲＮＡまたはナンセンスｓｉＲＮＡの効果を示すイムノブロットアッセイの画像を示す。
【図５０Ａ】図５０Ａは、ＣＬＬ患者のＣＤ１９＋細胞におけるＣＤ４０、ＣＤ８６の表面発現に対するレナリドマイドおよび／または式Ｉの化合物の効果のグラフによるまとめを示す。
【図５０Ｂ−１】図５０Ｂは、ＣＬＬ患者のＣＤ１９＋細胞におけるＣＤ４０、ＣＤ８６およびＣＤ１５４のｍＲＮＡ発現に対するレナリドマイドおよび／または式Ｉの化合物の効果のグラフによるまとめを示す。
【図５０Ｂ−２】図５０Ｂは、ＣＬＬ患者のＣＤ１９＋細胞におけるＣＤ４０、ＣＤ８６およびＣＤ１５４のｍＲＮＡ発現に対するレナリドマイドおよび／または式Ｉの化合物の効果のグラフによるまとめを示す。
【図５０Ｃ】図５０Ｃは、ＣＬＬ患者のＣＤ１９＋細胞におけるＣＤ２０に対するレナリドマイドおよび／または式Ｉの化合物の効果のグラフによるまとめを示す。
【図５０Ｄ】図５０Ｄは、ＣＬＬ患者のＣＤ１９＋細胞におけるＩｇＭ濃度に対するレナリドマイドおよび／または式Ｉの化合物の効果のグラフによるまとめを示す。
【図５０Ｅ】図５０Ｅおよび５０Ｆは、ＣＬＬ患者のＣＤ１９＋細胞におけるサイトカインｍＲＮＡ発現に対するレナリドマイドおよび／または式Ｉの化合物の効果のグラフによるまとめを示す。
【図５０Ｆ】図５０Ｅおよび５０Ｆは、ＣＬＬ患者のＣＤ１９＋細胞におけるサイトカインｍＲＮＡ発現に対するレナリドマイドおよび／または式Ｉの化合物の効果のグラフによるまとめを示す。
【図５１】図５１は、低悪性度非ホジキンリンパ腫（ｉＮＨＬ）および慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を有する４９名の患者に関する研究における患者の特徴および処置の状況をまとめた表を示す。
【図５２】図５２は、式Ｉの化合物をベンダムスチン（Ｂ）またはリツキシマブ（Ｒ）と組み合わせてｉＮＨＬまたはＣＬＬを有する患者に投与した研究での安全性プロフィールをまとめた表を示す。
【図５３Ａ】図５３Ａは、式Ｉの化合物をベンダムスチン（Ｂ）またはリツキシマブ（Ｒ）と組み合わせてｉＮＨＬを有する患者に投与することの有効性のグラフによるまとめを示す。
【図５３Ｂ】図５３Ｂは、式Ｉの化合物をベンダムスチン（Ｂ）またはリツキシマブ（Ｒ）と組み合わせてＣＬＬを有する患者に投与することの有効性のグラフによるまとめを示す。
【図５４】図５４は、式Ｉの化合物をベンダムスチン（Ｂ）またはリツキシマブ（Ｒ）と組み合わせて投与したときのｉＮＨＬまたはＣＬＬを有する患者における反応率をまとめた表を示す。
【図５５】図５５は、式Ｉの化合物のみを単独薬剤としてＣＬＬを有する患者に投与した研究でのリンパ球数のグラフによるまとめを示す。
【図５６】図５６は、式Ｉの化合物をベンダムスチン（Ｂ）またはリツキシマブ（Ｒ）と組み合わせてＣＬＬを有する患者に投与した研究でのリンパ球数のグラフによるまとめを示す。
【図５７Ａ】図５７Ａは、式Ｉの化合物、ベンダムスチン、フルダラビン、デキサメタゾンまたは組み合わせたこれらの薬物で処理した後の、４８時間後のＣＬＬ細胞生存度を示すコンタープロットを示す。
【図５７Ｂ】図５７Ｂは、式Ｉの化合物（５μＭ）、ベンダムスチン（１０μＭ）、フルダラビン（１０μＭ）、デキサメタゾン（１０μＭ）または組み合わせたこれらの薬物で処理したＣＬＬ細胞の平均相対生存度を示す棒グラフを示す（平均値±ＳＥＭ，ｎ＝９）。
【図５８Ａ】図５８Ａは、ＦＡＣＳによってＢＨ３プロファイリングした末梢血ＣＬＬ細胞において０．０３μＭの最終濃度のＢＩＭ  ＢＨ３ペプチドによって誘導されたミトコンドリア脱分極を定量化したグラフを示す（ｎ＝３０）。
【図５８Ｂ】図５８Ｂは、ＢＣＬ２、Ｍｃｌ−１およびＢｃｌ−ＸＬに主に依存性のパターンを示す３名の個々の患者からのＢＨ３プロフィールを示す。
【図５８Ｃ】図５８Ｃは、フロントラインＣＬＬ治療完結の６ヶ月間または該期間以内に進行性疾患（ＰＤ）を有する患者と比較した、２００８  ＩＷ−ＣＬＬ診断基準による部分奏効（ＰＲ）または完全奏効（ＣＲ）が得られた処置未経験患者におけるＢＩＭ脱分極を示すグラフである（ｐ＝０．０２４）。
【図５８Ｄ】図５８Ｄは、変異ＩＧＨＶ状態を有する患者（ｎ＝１８）と比較した、非変異ＩＧＨＶ状態を有する患者（ｎ＝７）におけるＢＩＭ脱分極を示すグラフである（ｐ＝０．００２６）。
【図５８Ｅ】図５８Ｅは、生殖細胞系統とのＶＨ相同性の割合とプライミングレベルとの間の相関を示すグラフである（ｐ＝０．００４３）。
【図５９Ａ】図５９Ａおよび５９Ｂは、それぞれ、２４時間および１時間での全ウェル蛍光定量法によって定量化したＣＬＬ細胞接着を示すグラフを示す（それぞれ、片側ｐ＝０．０４５および０．０３２）。
【図５９Ｂ】図５９Ａおよび５９Ｂは、それぞれ、２４時間および１時間での全ウェル蛍光定量法によって定量化したＣＬＬ細胞接着を示すグラフを示す（それぞれ、片側ｐ＝０．０４５および０．０３２）。
【図５９Ｃ】図５９Ｃは、グラフに示したとおりの薬物処理を伴って、ＳｔｒｏｍａＮＫＴｅｒｔの存在下または非存在下で２４時間共培養したＰＢ由来ＣＬＬ細胞をＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩによって評価したＣＬＬ細胞生存度を示すグラフを示す。
【図５９Ｄ】図５９Ｄは、ＳｔｒｏｍａＮＫＴｅｒｔとともにまたはなしおよび化合物ＩありまたはなしでＡＢＴ−７３７の存在下で２４時間培養したＣＬＬ細胞についての用量反応曲線を示す。
【図５９Ｅ】図５９Ｅは、ＳｔｒｏｍａＮＫＴｅｒｔとともにまたはなしおよび化合物ＩありまたはなしでＡＢＴ−２６３の存在下で培養したＣＬＬ細胞についての用量反応曲線を示す。
【図６０Ａ】図６０Ａは、４つのすべての患者サンプルについてのＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩによって測定した凝集ＣＬＬ細胞のアポトーシス割合を示す。
【図６０Ｂ】図６０Ｂは、コントロールと比較したときの、化合物Ｉで処理した間質曝露ＣＬＬ細胞におけるミトコンドリア脱分極を示すグラフを示す（片側ｐ＝０．０７４９）。
【図６０Ｃ】図６０Ｃは、コントロールと比較したときの、ＢＡＤ  ＢＨ３ペプチドおよびＡＢＴ−７３７で化合物Ｉとともに処理した間質曝露ＣＬＬ細胞におけるミトコンドリア脱分極を示すグラフを示す（それぞれ、片側ｐ＝０．０４６２および０．０４６８）。
【発明を実施するための形態】
【００９２】
他に規定しない限り、本明細書に用いられる全ての技術用語、表記および他の科学的用語または専門用語は、本発明が属する当該分野の当業者によって通常理解される意味を有するものとする。いくつかの場合、一般に理解される意味を有する用語は、明確化のため、および／または参照を容易にするために本明細書に定義されており、本明細書におけるこのような定義の包含は必ずしも、当該分野で一般に理解されるものを上回る実質的な相違を示すと解釈されるべきではない。本明細書に記載または言及される多くの技術および手順は、十分理解されており、かつ当業者による従来の方法論を用いて通常使用される。必要に応じて、市販のキットおよび試薬の使用を含む手順は一般には、別段の注記がない限り、製造業者の既定のプロトコールおよび／またはパラメーターに従って行われる。
【００９３】
本明細書に示される一般的な方法の考察は、例示の目的のみを意図する。他の代替的な方法および実施形態は、本開示を概観すれば当業者に明白となるであろう。
【００９４】
接続詞「または（もしくは、あるいは）」と組み合わされる一群の用語は、その群のうち相互排他性である必要があるとは読み取られるべきではなく、別段明記しない限り、「および／または」としても読み取られるべきである。本発明の用語、成分または構成要素は単数で記載されてもよいし、または請求されてもよいが、単数形を明確に言及するという限定でない限り、複数形は、単数形の範囲内であると想定される。
【００９５】
本発明は、癌の処置のための新規な治療ストラテジーに関する方法を提供する。一局面では、本発明は、被験体における癌または自己免疫疾患を
処置する方法を提供し、この方法は、式Ａの化合物
【００９６】
【化１６】
2014510729.tif 000018
【００９７】
であって、
式中Ｒは、Ｈ、ハロもしくはＣ１−Ｃ６アルキルであり；Ｒ’は、Ｃ１−Ｃ６アルキルである化合物；またはその薬学的に許容され得る塩；および必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤をこの被験体に投与する工程を包含する。
【００９８】
特定の実施形態では、ハロはＦであり；かつＲ’はメチル、エチル、またはプロピルである。
【００９９】
特定の実施形態では、Ｒは、構造
【０１００】
【化１７】
2014510729.tif 000019
【０１０１】
を有するキナゾリニル環の５位に結合される。
【０１０２】
特定の実施形態では、Ｒは、構造
【０１０３】
【化１８】
2014510729.tif 000020
【０１０４】
を有するキナゾリニル環の６位に結合される。
【０１０５】
本明細書において用いる「化合物」という用語は、別段特定しない限り、式Ａの化合物、例えば、化合物Ｉ、化合物ＩＩ、または鏡像異性体、例えば、Ｉ”もしくはＩＩ”または鏡像異性混合物を指す。
【０１０６】
「式Ｉの化合物」または「化合物Ｉ」とは、式Ｉの構造：
【０１０７】
【化１９】
2014510729.tif 000021
【０１０８】
の化合物５−フルオロ−３−フェニル−２−［１−（９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）−プロピル］−３Ｈ−キナゾリン−４−オンを指す。
【０１０９】
化合物ＩのＳ−鏡像異性体は、ここで、Ｉ”：
【０１１０】
【化２０】
2014510729.tif 000022
【０１１１】
と指定して示される。
【０１１２】
「式ＩＩ”の化合物」または「化合物ＩＩ”」とは、式ＩＩの構造：
【０１１３】
【化２１】
2014510729.tif 000023
【０１１４】
の化合物２−（１−（９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）エチル）−６−フルオロ−３−フェニルキナゾリン−４（３Ｈ）−オンを指す。
【０１１５】
化合物ＩＩのＳ−鏡像異性体は、ここでＩＩ”：
【０１１６】
【化２２】
2014510729.tif 000024
【０１１７】
と指定して示される。
【０１１８】
一実施形態では、式Ａの化合物は、式Ｉの化合物である。別の実施形態では、式Ａの化合物は式ＩＩの化合物である。特定の実施形態では、この化合物は、Ｒ−鏡像異性体およびＳ−鏡像異性体のラセミ混合物である。特定の実施形態では、この化合物は、鏡像異性体の混合物として用いられ、かつしばしばＳ−鏡像異性体が富化されている。いくつかの実施形態では、この化合物は、主にＳ−鏡像異性体である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法で用いられる式Ａの化合物は、少なくとも８０％Ｓ−鏡像異性体である。特定の実施形態では、この化合物は、主にＳ−鏡像異性体から構成され、ここでこの化合物は、少なくとも６６〜９５％、または８５〜９９％のＳ−鏡像異性体を含む。いくつかの実施形態では、この化合物は、少なくとも９０％または少なくとも９５％のＳ−鏡像異性体という鏡像異性体過剰（ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｉｃ  ｅｘｃｅｓｓ）（ｅ．ｅ．）を有する。いくつかの実施形態では、この化合物は、少なくとも９８％または少なくとも９９％というＳ−鏡像異性体過剰（ｅ．ｅ．）を有する。特定の実施形態では、この化合物は、少なくとも９５％のＳ−鏡像異性体を含む。実施例のセクションで示される細胞および患者の実験では、用いられる化合物Ｉのサンプルは、９５％超のＳ−鏡像異性体であった。
【０１１９】
特定の実施形態では、本明細書に記載される方法で用いられる、式Ｉまたは式ＩＩの化合物は、少なくとも８０％がＳ−鏡像異性体である。特定の実施形態では、式Ｉまたは式ＩＩの化合物は主に、Ｓ−鏡像異性体から構成され、ここでこの化合物は、少なくとも６６〜９５％、または８５〜９９％のＳ−鏡像異性体を含む。いくつかの実施形態では、式Ｉまたは式ＩＩの化合物は、少なくとも９０％または少なくとも９５％のＳ−鏡像異性体という鏡像異性体過剰（ｅ．ｅ．）を有する。いくつかの実施形態では、式Ｉまたは式ＩＩの化合物は、少なくとも９８％または少なくとも９９％というＳ−鏡像異性体過剰（ｅ．ｅ．）を有する。特定の実施形態では、式Ｉまたは式ＩＩの化合物は、少なくとも９５％のＳ−鏡像異性体を有する。実施例のセクションに示される細胞および患者の実験では、用いられる化合物Ｉのサンプルは、９５％超がＳ−鏡像異性体であった。
【０１２０】
特定の実施形態では、この化合物は、他のＰＩ３Ｋイソ型に比較してＰＩ３Ｋ  ｐ１１０δを選択的に阻害する。
【０１２１】
特定の実施形態では、癌とは、血液学的な悪性疾患および／または固形腫瘍である。別の特定の実施形態では、血液学的な悪性疾患は、白血病またはリンパ腫である。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、リンパ腫は、成熟（末梢）Ｂ細胞腫瘍である。特定の実施形態では、成熟Ｂ細胞腫瘍は、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病／小リンパ球性リンパ腫；Ｂ細胞前リンパ球性白血病；リンパ形質細胞性リンパ腫；辺縁帯リンパ腫、例えば、脾性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（＋／−絨毛リンパ球）、節性辺縁帯リンパ腫（＋／−単球様Ｂ細胞）、および粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）型の節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫；ヘアリー細胞白血病；形質細胞性骨髄腫／形質細胞腫；濾胞性リンパ腫、濾胞中心；マントル細胞リンパ腫；びまん性大細胞Ｂ細胞リンパ腫（縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、および原発性滲出性リンパ腫）；およびバーキットリンパ腫／バーキット細胞白血病からなる群より選択される。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、リンパ腫は、多発性骨髄腫（ＭＭ）および非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫、ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症（ＷＭ）またはＢ細胞リンパ腫およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）からなる群より選択される。
【０１２４】
さらなる特定の実施形態では、白血病は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、および小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）からなる群より選択される。急性リンパ性白血病はまた、急性リンパ芽球性白血病としても公知であり、本明細書において交換可能に用いられ得る。両方の用語は、白血球、リンパ球から、骨髄で開始する種類の癌を記述する。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）は、２つのカテゴリー、高悪性度（ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ）ＮＨＬまたは低悪性度（ｉｎｄｏｌｅｎｔ）ＮＨＬのうちの１つにおさまる。高悪性度ＮＨＬは急速に増殖し、患者の死を比較的早くもたらし得る。未処置の生存は、数ヶ月または数週間でさえ測定され得る。高悪性度ＮＨＬの例としては、Ｂ細胞腫瘍、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ／ＮＫ細胞腫瘍、未分化大細胞リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫、前駆Ｔ−リンパ芽球性白血病／リンパ腫、バーキットリンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病（ＨＴＬＶ１＋）、原発性ＣＮＳリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、移植後多形リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、真性組織球性リンパ腫、および芽球性ＮＫ細胞リンパ腫が挙げられる。高悪性度ＮＨＬの最も一般的な種類は、びまん性大細胞型リンパ腫である。
【０１２６】
低悪性度ＮＨＬは、増殖が遅く、かつほとんどの患者では、その疾患が進行段階に進行するまで明白な症状を示さない。低悪性度ＮＨＬを有する患者の無処置の生存は、数年で測定され得る。非限定的な例としては、濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、辺縁帯リンパ腫（例えば、節外性辺縁帯リンパ腫（粘膜関連リンパ組織−ＭＡＬＴリンパ腫とも呼ばれる）、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（単球様Ｂ細胞リンパ腫）、脾性辺縁帯リンパ腫）、およびリンパ形質細胞性リンパ腫（ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症）が挙げられる。
【０１２７】
いくつかの場合には、組織学的形質転換は、例えば、患者の低悪性度ＮＨＬを、高悪性度ＮＨＬに変換し得る。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、本発明は、高悪性度ＮＨＬまたは低悪性度ＮＨＬを有する患者の処置方法を提供する。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、本発明は、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、および小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、および辺縁帯リンパ腫からなる群より選択される状態を有する患者を処置する方法を提供する。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、再発性のまたは不応性の状態を有する患者に施される。
【０１３１】
別の実施形態では、この癌は、乳癌、肺癌、結腸癌または前立腺癌である。
【０１３２】
特定の実施形態では、この癌は、癌のない被験体におけるＰＩ３Ｋ活性に比較して、異常なＰＩ３Ｋ活性に関連する。
【０１３３】
特定の実施形態では、好ましい被験体は、化学療法の処置に対して不応性であるか、または化学療法での処置後に再発している。別の実施形態では、この被験体は、新規の患者である。
【０１３４】
特定の実施形態では、この方法は、この患者においてＰＩ３Ｋδ活性のレベルを低下させる工程を包含する。
【０１３５】
特定の実施形態では、この被験体は、ヒト被験体である。
【０１３６】
公知の治療剤での処置を受ける被験体は、処置に対する抵抗を経験し得る。例えば、ボルテゾミブは、再発性／不応性の、再発性の、および新たに診断されたＭＭについてＦＤＡに承認されたが、幾例かの患者は応答せず、他の例では、ボルテゾミブに対して抵抗性を獲得している。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のキナゾリノン化合物は、公知の治療剤の有効性を相乗的に増強する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物は、本明細書に記載の任意の治療剤を増強し得る。さらに特異的な実施形態では、本明細書に記載の化合物は、プロテアソームインヒビターを相乗的に増強する。前述の実施形態のいくつかでは、この被験体は、化学療法剤の処置に抵抗性である。前述の実施形態のいくつかでは、この被験体は、プロテアソームインヒビターに抵抗性である。前述の実施形態のいくつかでは、この被験体は、ボルテゾミブまたはカルフィルゾミブに抵抗性である。一例では、本明細書に記載の化合物は、ボルテゾミブ誘導性のＭＭ細胞毒性を相乗的に増強する。理論で束縛されるものではないが、いくつかの実施形態では、本明細書に考察される化合物は、ＡＫＴのボルテゾミブ誘導性のリン酸化を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、プロテアソームインヒビター処置に対する抵抗性を克服するために用いられる。いくつかの実施形態では、本発明は、治療剤に対して抵抗性であるか、または治療剤に対する抵抗性を発症した被験体を処置する方法を提供する。
【０１３７】
理論によって束縛されるものではないが、式Ａの化合物と従来の治療薬との間の相乗効果は、本発明の化合物が腫瘍細胞動員を末梢循環に誘導する能力に起因し得る。腫瘍細胞の末梢循環を誘導することで、従来の治療薬が腫瘍に対して作用し、かつ腫瘍をさらに効果的に中和する能力が増大される。この相乗効果は、ＣＬＬ患者で実証されている。
【０１３８】
従って、本発明の方法は、患者に対して式Ａの化合物に加えて、治療上有効な量の少なくとも１つの追加の治療剤および／または治療手順（この患者でこの癌を処置するために選択される）を施す工程を包含する。「治療剤」とは、本明細書において用いる場合、１つ以上の化合物を指してもよい。この治療剤は、標準的な化学療法薬物であっても、または実験的な化学療法薬物であってもよい。この治療剤は、２つ以上の化学療法薬物の組み合わせを含んでもよい。代表的な化学療法薬物の組み合わせは、本明細書においてａ〜ｑに列挙される。特定の治療剤は、処置されている疾患の種類に応じて選択され得る。特定の血液病のための従来の化学療法処置の非限定的な例は、後ろのセクションに記載される。特定の実施形態では、本発明は、造血系の癌の患者、例えば、ＣＬＬ患者を、ボルテゾミブおよび式Ａの化合物（例えば、式Ｉ、ＩＩ、Ｉ”、またはＩＩ”）を用いて処置する方法を提供し、ここでこの組み合わせは、相乗効果を提供する。
【０１３９】
特定の実施形態では、この治療剤は、以下からなる群より選択される：ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））、カルフィルゾミブ（ＰＲ−１７１）、ＰＲ−０４７、ジスルフィラム、ラクタシスチン、ＰＳ−５１９、エポネマイシン、エポキソマイシン、アクラシノマイシン、ＣＥＰ−１６１２、ＭＧ−１３２、ＣＶＴ−６３４１７、ＰＳ−３４１、ビニルスルホントリペプチドインヒビター、リトナビル、ＰＩ−０８３、（＋／−）−７−メチルオムラリド、（−）−７−メチルオムラリド、ペリホシン、リツキシマブ、クエン酸シルデナフィル（Ｖｉａｇｒａ（登録商標））、ＣＣ−５１０３、サリドマイド、エプラツズマブ（ｈＬＬ２−抗ＣＤ２２ヒト化抗体）、シンバスタチン、エンザスタウリン、Ｃａｍｐａｔｈ−１Ｈ（登録商標）、デキサメタゾン、ＤＴ  ＰＡＣＥ、オブリメルセン、アンチネオプラストン（ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｏｎ）Ａ１０、アンチネオプラストンＡＳ２−１、アレムツズマブ、βアレチン、シクロホスファミド、塩酸ドキソルビシン、ＰＥＧ化リポソーム塩酸ドキソルビシン、プレドニゾン、プレドニゾロン、クラドリビン、硫酸ビンクリスチン、フルダラビン、フィルグラスチム、メルファラン、組み換えインターフェロンα、カルムスチン、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、エトポシド、メルファラン、ドラスタチン１０、インジウムＩｎ１１１モノクローナル抗体ＭＮ−１４、イットリウムＹ９０ヒト化エプラツズマブ、抗胸腺細胞グロブリン、ブスルファン、シクロスポリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、治療用異種リンパ球、イットリウムＹ  ９０イブリツモマブチウキセタン、シロリムス、タクロリムス、カルボプラチン、チオテパ、パクリタキセル、アルデスロイキン、組み換えインターフェロンα、ドセタキセル、イホスファミド、メスナ、組み換えインターロイキン−１２、組み換えインターロイキン−１１、Ｂｃｌ−２ファミリータンパク質インヒビターＡＢＴ−２６３、デニロイキンジフチトクス、タネスピマイシン（ｔａｎｅｓｐｉｍｙｃｉｎ）、エベロリムス、ペグフィルグラスチム、ボリノスタット、アルボシジブ、組み換えｆｌｔ３リガンド、組み換えヒトトロンボポエチン、リンホカイン活性化キラー細胞、アミホスチン三水和物、アミノカンプトテシン、塩酸イリノテカン、酢酸カスポファンギン、クロファラビン、エポエチンα、ネララビン、ペントスタチン、サルグラモスチム、二酒石酸ビノレルビン、ＷＴ−１アナログペプチドワクチン、ＷＴ１  １２６−１３４ペプチドワクチン、フェンレチニド（ｆｅｎｒｅｔｉｎｉｄｅ）、イクサベピロン、オキサリプラチン、モノクローナル抗体ＣＤ１９、モノクローナル抗体ＣＤ２０、ω−３脂肪酸、塩酸ミトキサントロン、酢酸オクトレオチド、トシツモマブおよびヨウ素Ｉ１３１トシツモマブ、モテキサフィンガドリニウム、三酸化ヒ素、ティピファルニブ、自家ヒト腫瘍由来ＨＳＰＰＣ−９６、ベルツズマブ、ブリオスタチン１、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、クロラムブシル、ペントスタチン、ルミリキシマブ、アポリズマブ、抗ＣＤ４０、およびオファツムマブ（Ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）、またはそれらの組み合わせ。上記でａ〜ｑで列挙した組��合わせなどの現行のおよび実験的な治療で、治療剤の組み合わせが用いられている。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、治療剤は好ましくは、プロテアソームインヒビターである。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、ある化合物をプロテアソームインヒビターとともに投与する工程を包含する。プロテアソームインヒビターは、天然および合成の化合物を含む。プロテアソームインヒビターの非限定的な例としては、ボルテゾミブ、（［（１Ｒ）−３−メチル−１−（｛（２Ｓ）−３−フェニル−２−［（ピラジン−２−イルカルボニル）アミノ］プロパノイル｝アミノ）ブチル］ボロン酸）、これは、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから「Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標）」として市販されている；カルフィルゾミブ（ＰＲ−１７１）および経口アナログＰＲ−０４７（両方ともＰｒｏｔｅｏｌｉｘ，Ｉｎｃ．が開発）が挙げられる。プロテアソームインヒビターの他の例としては、ジスルフィラム；ラクタシスチン；合成化合物、例えば、ＰＳ−５１９、エポネマイシン、エポキソマイシン、およびアクラシノマイシン；カルパインインヒビター、例えば、ＣＥＰ−１６１２、ＭＧ−１３２、ＣＶＴ−６３４１７、ＰＳ−３４１；ビニルスルホントリペプチドインヒビター；リトナビル；ＰＩ−０８３；（＋／−）−７−メチルオムラリド；ならびに（−）−７−メチルオムラリドが挙げられる。特定の実施形態では、式Ａの化合物は、ボルテゾミブまたはカルフィルゾミブと組み合わせて投与される。さらに特定の実施形態では、式Ｉの化合物は、ボルテゾミブまたはカルフィルゾミブと組み合わせて投与される。他の特定の実施形態では、式ＩＩの化合物は、ボルテゾミブまたはカルフィルゾミブと組み合わせて投与される。特定の実施形態では、式Ａの化合物がリツキシマブまたはオファツムマブと組み合わせて投与される。さらに特定の実施形態では、式Ｉの化合物がリツキシマブまたはオファツムマブと組み合わせて投与される。他の特定の実施形態では、式ＩＩの化合物がリツキシマブまたはオファツムマブと組み合わせて投与される。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、上記治療剤はアルキル化剤である。アルキル化剤の非限定的な例としては、例えば、ブスルファン、メルファラン、クロラムブシル、シクロホスファミド（ｃｌｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、メクロレタミン、ウラムスチン、イホスファミド、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、チオテパ、および白金ベース化学療法薬物、例えば、シスプラチン（ｓｕｃｈ  ａｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、カルボプラチン、ネダプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、トリプラチンテトラニトレートが挙げられる。
【０１４２】
他の実施形態では、本発明の任意の化合物は１つ以上の他の活性治療剤と、患者への同時または逐次投与のための単位投薬形態にて組み合わされ得る。併用療法は同時または逐次レジメンとして投与され得る。逐次投与する場合、上記組み合わせは２回以上の投与で投与され得る。
【０１４３】
一実施形態では、本発明の化合物と１つ以上の他の活性治療剤との共投与は、一般的に、治療有効量の本発明の化合物および１つ以上の他の活性治療剤がどちらも患者の体内に存在するような、本発明の化合物および１つ以上の他の活性治療剤の同時または逐次投与を指す。別の実施形態では、必ずしも上記化合物および治療剤（１つまたは複数）がどちらも患者の体内に存在しているとは限らないが、特定の投与スケジュールにより上記化合物および治療剤が相乗効果をもたらす。
【０１４４】
共投与としては、単位投薬量の１つ以上の他の活性治療剤の投与の前または後での単位投薬量の本発明の化合物の投与；例えば、１つ以上の他の活性治療剤の投与の数秒、数分、数時間または数日以内での本発明の化合物の投与が挙げられる。例えば、単位用量の本発明の化合物がまず投与され、続いて、数秒、数分、数時間または数日以内に単位用量の１つ以上の他の活性治療剤が投与され得る。あるいは、単位用量の１つ以上の他の治療剤がまず投与され、続いて、単位用量の本発明の化合物が数秒、数分、数時間または数日以内に投与され得る。いくつかの場合には、単位用量の本発明の化合物をまず投与し、続いて、ある時間（例えば、１〜１２時間）後に単位用量の１つ以上の他の活性治療剤を投与することが望ましい場合があり得る。他の場合には、単位用量の１つ以上の他の活性治療剤をまず投与し、続いて、ある時間（例えば、１〜１２時間）後に、単位用量の本発明の化合物を投与することが望ましい場合があり得る。いくつかの場合には、単位用量の本発明の化合物をまず投与し、続いて、ある日数（例えば、１〜１２日間）後に、単位用量の１つ以上の他の活性治療剤を投与することが望ましい場合があり得る。他の場合には、単位用量の１つ以上の他の活性治療剤をまず投与し、続いて、ある日数（例えば、１〜１２日間）後に、単位用量の本発明の化合物を投与することが望ましい場合があり得る。いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、数日間、数週間または数ヶ月間にわたる化合物と治療剤の交互投与を伴うものであり得る。
【０１４５】
併用療法により「相乗性」および「相乗効果」がもたらされ得る、すなわち、活性成分を一緒に使用した場合に得られる効果が上記化合物を別々に使用することでもたらされる効果の和より大きくなる。相乗効果は、活性成分を（１）共処方して、組み合わせた処方物で同時に投与もしくは送達する場合に；（２）別々の処方物として、交互にもしくは並行して送達する場合に；または（３）いくつかの他のレジメンによって得られ得る。交互療法で送達する場合、相乗効果は、上記化合物を、例えば、別々の錠剤、丸剤もしくはカプセル剤で、または別々のシリンジでの異なる注射によって逐次投与または送達する場合に得られ得る。一般に、交互療法の間には、有効投薬量の各々の活性成分が逐次、すなわち連続的に投与される。
【０１４６】
一局面では、本発明は、式Ｉの化合物：
【０１４７】
【化２３】
2014510729.tif 000025
【０１４８】
またはその薬学的に許容され得る塩；および少なくとも１つの薬学的に許容され得る賦形剤を含む薬学的組成物を提供する。一実施形態では、この組成物は、Ｓ−鏡像異性体が富化されている。
【０１４９】
別の局面では、本発明は、式ＩＩの化合物：
【０１５０】
【化２４】
2014510729.tif 000026
【０１５１】
またはその薬学的に許容され得る塩；および少なくとも１つの薬学的に許容され得る賦形剤を含む薬学的組成物を提供する。一実施形態では、この組成物は、Ｓ−鏡像異性体が富化されている。
【０１５２】
一局面では、本発明は、患者において、多発性骨髄腫（ＭＭ）を処置する方法を提供し、この方法は、式Ａの化合物および追加の治療剤の組み合わせを投与する工程を包含する。いくつかの実施形態では、式Ａは、化合物ＩまたはＩＩである。特定の実施形態では、式Ａは、化合物Ｉ”である。他の実施形態では、式Ａは、化合物ＩＩ”である。前述の実施形態のいくつかでは、追加の治療剤は、プロテアソームインヒビターである。特定の実施形態では、この追加の治療剤は、ボルテゾミブである。特定の実施形態では、患者において多発性骨髄腫を処置する方法は、化合物Ｉ”をボルテゾミブとともに投与する工程を包含する。特定の実施形態では、患者において多発性骨髄腫を処置する方法は、化合物ＩＩ”をボルテゾミブとともに投与する工程を包含する。前述の実施形態のいくつかでは、化合物Ｉ”またはＩＩ”は、少なくとも６０％という鏡像異性体過剰を有する。前述の実施形態のいくつかでは、化合物Ｉ”またはＩＩ”は少なくとも７０％という鏡像異性体過剰を有する。前述の実施形態のいくつかでは、化合物Ｉ”またはＩＩ”は、少なくとも８０％という鏡像異性体過剰を有する。前述の実施形態のいくつかでは、化合物Ｉ”またはＩＩ”は少なくとも９０％という鏡像異性体過剰を有する。前述の実施形態のいくつかでは、化合物Ｉ”またはＩＩ”は少なくとも９５％という鏡像異性体過剰を有する。前述の実施形態のいくつかでは、化合物Ｉ”またはＩＩ”は少なくとも９８％という鏡像異性体過剰を有する。前述の実施形態のいくつかでは、化合物Ｉ”またはＩＩ”は少なくとも９９％という鏡像異性体過剰を有する。
【０１５３】
特定の実施形態では、治療剤の組み合わせは式Ａの化合物とともに投与され、
ここで、上記組み合わせは
ａ）ベンダムスチン；
ｂ）リツキシマブ；
ｃ）ベンダムスチンおよびリツキシマブ；
ｄ）オファツムマブ；ならびに
ｅ）レナリドマイド
からなる群より選択される。
【０１５４】
別の実施形態では、この化合物は、治療手順と組み合わせて用いられる。特定の実施形態では、この治療手順は、末梢血幹細胞移植、自家造血幹細胞移植、自家骨髄移植、抗体療法、生物学的療法、酵素インヒビター療法、全身照射、幹細胞の注入、幹細胞支持による骨髄アブレーション、インビトロ処理した末梢血幹細胞移植、臍帯血移植、免疫酵素技術、免疫組織化学染色法、薬理学的研究、低−ＬＥＴコバルト−６０ガンマ線療法、ブレオマイシン、従来の手術、放射線療法、高用量化学療法および骨髄非破壊的同種異系造血幹細胞移植からなる群より選択される。
【０１５５】
特定の実施形態では、この方法はさらに、この患者から生物学的サンプルを得る工程；およびこの生物学的サンプルを、血液化学分析、染色体転座分析、針生検、蛍光インサイチュハイブリダイゼーション、実験室バイオマーカー分析、免疫組織化学染色法、フローサイトメトリーまたはそれらの組み合わせからなる群より選択される分析手順によって分析する工程を包含する。
【０１５６】
命名の目的のために、この化合物のキナゾリニルおよびプリニル成分は以下：
【０１５７】
【化２５】
2014510729.tif 000027
【０１５８】
のように番号付けされる。
【０１５９】
本明細書において用いる場合、「アルキル」という用語は、直鎖、分岐鎖、および環状の一価のヒドロカルビル基、およびそれらの組み合わせを包含し、これは、それらが置換されない場合、ＣおよびＨのみを含む。例としては、メチル、エチル、イソブチル、シクロヘキシル、シクロペンチルエチルなどが挙げられる。各々のこのような基における炭素原子の総数は、時に本明細書においては、例えば、基が最大１０個の炭素原子を含み得る場合、これは、１−１０Ｃとして、またはＣ１−Ｃ１０もしくはＣ１−１０として示され得る。
【０１６０】
「ハロ」、とは本明細書において用いる場合、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨードを包含する。フルオロおよびクロロがしばしば好ましい。
【０１６１】
「選択的ＰＩ３Ｋδインヒビター」または「選択的ＰＩ３Ｋβインヒビター」などの用語は、本明細書において用いる場合、ＰＩ３Ｋファミリーの少なくとも１つの他のアイソザイムよりも効果的に、それぞれ、ＰＩ３ＫδまたはＰＩ３Ｋβアイソザイムを阻害する化合物を指す。選択的インヒビターはまた、ＰＩ３Ｋの他のアイソザイムに対して活性である場合もあるが、他のアイソザイムの阻害を同程度達成するにはさらに高濃度を要する。「選択的」とはまた、匹敵する化合物が阻害するよりも特定のＰＩ３−キナーゼを阻害する化合物を記述するのに用いられ得る。「選択的ＰＩ３Ｋδインヒビター」化合物とは、慣習的にかつ一般的に命名されるＰＩ３Ｋインヒビター化合物、例えば、ワートマニンまたはＬＹ２９４００２よりもＰＩＫ３δについてさらに選択的であることが理解される。同時に、ワートマニンおよびＬＹ２９４００２は、「非選択的ＰＩ３Ｋインヒビター」とみなされる。特定の実施形態では、ＰＩ３Ｋδの発現または活性を選択的に負に調節する任意の種類の化合物は、本発明の方法において選択的ＰＩ３Ｋδインヒビターとして用いられ得る。さらに、ＰＩ３Ｋδの発現または活性を選択的に負に調節し、かつ許容され得る薬理学的特性を保有する任意の種類の化合物は、本発明の治療方法において選択的ＰＩ３Ｋδインヒビターとして用いられ得る。理論で束縛されるものではないが、本発明の化合物でｐ１１０δ阻害を標的することによって、血液学的な悪性疾患の処置のための新規なアプローチが得られる。なぜならこの方法は、構成的なシグナル伝達を阻害し、腫瘍細胞の直接破壊が生じるからである。さらに、理論によって束縛されるものではないが、ｐ１１０δ阻害は、腫瘍細胞ホーミング、生存および増殖に重要である微小環境シグナルを抑制する。
【０１６２】
別の実施形態では、ＰＩ３Ｋβの発現または活性を選択的に負に調節する任意の種類の化合物は、本発明の方法における選択的ＰＩ３Ｋβインヒビターとして用いられ得る。さらに、ＰＩ３Ｋβの発現または活性を選択的に負に調節し、かつ許容され得る薬理学的特性を保有する任意の種類の化合物は、本発明の治療方法において、選択的ＰＩ３Ｋβインヒビターとして用いられ得る。
【０１６３】
本明細書において用いる場合、「処置する、治療する」という用語は、障害を阻害すること、すなわち、その発症を停止すること；その障害を救済すること、すなわち、その退行を生じること；またはその障害を緩和すること、すなわち、その障害に関連する症状の少なくとも１つの重篤度を軽減することを指す。いくつかの実施形態では、「処置する」とは、障害の素因があり得るが、まだその障害を有するとは診断されていない動物でその障害が生じることを妨げることを指す。「障害」とは、限定するものではないが、医学的な障害、疾患、状態、症状などを包含するものとする。
【０１６４】
別の局面では、本発明は、好塩基球および／または肥満細胞の機能を抑制し、これによって過剰なまたは所望されない好塩基球および／または肥満細胞の活性によって特徴付けられる疾患または障害の処置を可能にするための方法を包含する。この方法によれば、好塩基球および／または肥満細胞においてホスファチジルイノシトール３−キナーゼδ（ＰＩ３Ｋδ）の発現または活性を選択的に阻害する本発明の化合物が用いられ得る。好ましくは、この方法は、好塩基球および／または肥満細胞によって刺激されるヒスタミン放出を阻害するのに十分な量でＰＩ３Ｋδインヒビターを使用する。従って、このような化合物および他のＰＩ３Ｋδ選択的インヒビターの使用は、ヒスタミン放出によって特徴付けられる疾患、すなわち、アレルギー障害、例としては、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、ＡＲＤＳ、肺気腫、および関連の障害などの障害を処置するのに有用であり得る。
【０１６５】
本発明は、再灌流傷害、すなわち、組織または器官が虚血期間後の再灌流を経験する状況から生じる傷害にあるかまたはその傷害に課せられ得る被験体を処置することにおいて有用性を有し得る。「虚血」という用語は、動脈血の流入の閉塞に起因する局所の組織貧血を指す。一過性の虚血後の再灌流は特徴的に、好中球の活性化および血管内皮を通じた罹患領域への遊出を生じる。活性化好中球の蓄積が次に、反応性酸素代謝物の生成を生じ、これが関与する組織または器官の構成要素を損傷する。この「再灌流傷害」という現象は通常、血管の発作（広範囲の虚血および局所の虚血を含む）、出血性ショック、心筋虚血または心筋梗塞、臓器移植および脳血管けいれんなどの状態に関連する。例えば、再灌流傷害は、心臓バイパス手順の終わりに、または心停止の間に生じ、この時心臓は、一旦血液を受け取ることを妨げられ、再灌流を開始する。ＰＩ３Ｋδ活性の阻害は、このような状況で再灌流傷害の量の低減を生じると期待される。
【０１６６】
特定の実施形態では、本発明は、固形腫瘍を処置する方法を提供する。特定の実施形態では、癌は、乳癌、結腸癌、または前立腺癌である。特定の実施形態では、本発明は、ＰＩ３Ｋβによって媒介される異常または望ましくない細胞のシグナル伝達活性に関連する固形腫瘍を処置する方法を提供する。特定の実施形態では、固形腫瘍は、膵臓癌；膀胱癌；結腸直腸癌；乳癌、例としては、転移性乳癌；前立腺癌、例としては、アンドロゲン依存性およびアンドロゲン非依存性前立腺癌；腎臓癌、例としては、例えば、転移性腎細胞癌腫；肝細胞癌；肺癌、例としては、例えば、小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、細気管支肺胞癌腫（ＢＡＣ）、および肺の腺癌；卵巣癌、例としては、例えば、進行性上皮または原発性腹膜癌；子宮頸癌；胃癌；食道癌；頭頸部癌、例としては、例えば、頭頸部の扁平上皮細胞癌腫；黒色腫；神経内分泌癌、例としては、転移性神経内分泌腫瘍；脳腫瘍、例としては、例えば、神経膠腫、未分化希突起グリオーマ、成人多形成グリア芽細胞腫、および成人未分化星細胞腫；骨癌；および軟部組織肉腫からなる群より選択される。
【０１６７】
ｐ１１０δの遺伝子除去（ａｂｌａｔｉｏｎ）は、免疫系に限定された軽度の表現型を生じることが見出されている。一般的な観察としては、肉眼的な解剖学的異常も行動的な異常もない繁殖性の生物体が挙げられる。組織学的検査によって、主要な器官は正常に見えることが明らかになった。全クラスのＩ  ＰＩ３Ｋ活性は、Ｂ細胞およびＴ細胞で３０〜５０％に低下された。さらに、感染に対する感受性の増大は観察されなかった。さらに、造血系に対する影響としては、正常な末梢血球数、リンパ形成不全の出現、ならびに脾臓およびリンパ節での胚中心の欠損、骨髄でのＢ２２０＋ＩｇＭ＋Ｂ細胞前駆体の数の減少、血清免疫グロブリンのレベルの減少、ならびに胸腺での正常Ｔ細胞発達が挙げられる。
【０１６８】
ｐ１１０δの遺伝子除去は、発癌に重要である骨髄性細胞およびＢ細胞のシグナル伝達に影響する。詳細には、チロシンキナーゼのシグナル伝達、発達、増殖および生存は、骨髄性細胞で影響される。Ｂ細胞機能が最も影響され、これには増殖、分化、アポトーシス、およびＢ細胞生存因子（ＢＣＲ、ＣＤ４０、ＩＬ−４、ケモカイン）に対する応答が挙げられる。従って、本発明は、これらの骨髄性細胞およびＢ細胞の機能のうちの１つ以上が異常であるかまたは望ましくない疾患状態を処置する方法を包含する。
【０１６９】
分子レベルｐ１１０α、ｐ１１０β、ｐ１１０δ、ｐ１１０γ、（ｈｖＰＳ３４、ｍＴＯＲ、ＤＮＡ−ＰＫなど）に対して標的する汎（ｐａｎ）ＰＩ３Ｋインヒビターは、次には、全ての組織を標的する。可能性のある臨床指標としては、癌が挙げられるが、臨床の有害事象としては、癌患者での高インスリン血症が挙げられる。潜在的な臨床指標が癌、関節リウマチ、喘息、アレルギーおよびＣＯＰＤを含む、炎症を媒介する細胞および癌細胞を標的するｐ１１０δ選択的インヒビターの利点は、その処置が十分耐容性であり、かつ高インスリン血症のような副作用が回避されるということである。従って、一局面では、本発明は、インスリン耐性、もしくは２型糖尿病、癌について、関節リウマチ、喘息、アレルギー、ＣＯＰＤ、または本発明の化合物で処置可能である他の状態を有する患者を処置する方法を提供する。過剰なインスリン状態または傾向を有するこのような処置の必要な患者については、本発明の化合物は特に汎−ＰＩ３Ｋインヒビターを上回る利点を有する。特定の実施形態では、式ＩまたはＩ”の化合物が好ましい。なぜなら、それは、インスリンシグナル伝達に有害に影響することなく血液学的な悪性疾患を処置する治療上の利点を提供するからである。
【０１７０】
一実施形態では、本発明は、ＰＩ３Ｋ  ｐ１１０δを阻害する方法に関する。別の実施形態では、本発明は、ＰＩ３Ｋ  ｐ１１０βまたはｐ１１０γを阻害する方法に関する。
【０１７１】
特定の実施形態では、本明細書に記載される方法は、オフターゲット活性をほとんど有さないか、または全く有さない。詳細には、本発明で用いられる式Ｉの化合物は、実施例１６の表３にまとめたものを含む３００を超えるプロテインキナーゼに対して活性をほとんど示さない。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法は、汎−ＰＩ３Ｋインヒビターの投与を含む方法に比較して癌患者で高インスリン血症作用を全く有さないか、または最小限しか有さない。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法は、Ａｋｔリン酸化を媒介する細胞を標的するのに有用である。なぜなら式Ａの化合物は、Ａｋｔリン酸化を阻害するからである。このように、本発明の化合物での処置のために適切な患者は、一実施形態では、リンパ腫、白血病または多発性骨髄腫のような造血系の癌に関連するＡｋｔリン酸化の上昇を呈する患者を選択することによって選択され得る。
【０１７２】
本明細書の方法は、オフターゲットの傾向を回避し、かつレセプターのグラムスクリーニングにおける負の結果（ｈＥＲＧ阻害および有意なＰ４５０阻害を有さない）によって特徴付けられる。
【０１７３】
本発明の方法の別の利点は、安全性薬理学研究で示されるように、有害な心血管系、呼吸器系または中枢神経系の効果がないことである。さらに、ラットおよびイヌにおける２８日の毒性試験は、高い治療指数、例えば、ＮＯＡＥＬ（観察可能な有害効果レベルなし（ｎｏ  ｏｂｓｅｒｖａｂｌｅ  ａｄｖｅｒｓｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｌｅｖｅｌ））＞＞１０μＭを示した。これは、暴露群とその適切なコントロールとの間の毒性学的効果の頻度または重篤度において統計学的に有意な増大も生物学的に有意な増大もない、化合物の最高の実験用量である。有害効果とは、生物体丸ごとの能力に影響し得るか、または追加のチャレンジに対して生物体が応答する能力を低減する、機能障害および／または病理学的病変を生じる任意の効果として規定される。
【０１７４】
特定の実施形態では、本明細書に記載の方法によりリンパ節腫脹が著しく低減され、リンパ球が循環系内に強いられる。このリンパ球再分布は、悪性ＣＬＬ細胞がリンパ節外の低保護環境内に置かれるという潜在的有益性を有する。特定の実施形態では、化学療法および／または免疫療法と式Ａの化合物などの薬剤との共投与によりＣＬＬ細胞の死滅が増強されると同時にリンパ球増加症が低減される。
【０１７５】
別の実施形態では、本発明の方法は、試験の標準的な集団では非遺伝毒性的である。
【０１７６】
本発明の別の利点は、１つまたは２つのＰＩ３Ｋイソ型についての化合物選択性によって、汎−ＰＩ３Ｋ阻害を有する化合物よりも改善された安全性プロフィールを生じるということである。さらに別の利点では、化合物Ｉは、良好な標的カバーを伴う好ましい薬物動態学的プロフィールを有し、かつグルコースまたはインスリンのレベルに対して有害な効果を有さず、かつ正常な健常ボランティアによる通常用いられる治療用量を上回る用量で十分に耐容性である。本発明の別の利点としては、本明細書の実施例に記載されるような広範な血液学的な悪性疾患を処置する能力が挙げられる。
【０１７７】
特定の実施形態では、本発明の方法は、癌を処置することに関する。特定の実施形態では、癌とは、血液学的な悪性疾患である。特定の実施形態では、この血液学的な悪性疾患は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、および非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）からなる群より選択される。特定の実施形態では、この非ホジキンリンパ腫は、大型びまん性Ｂ細胞リンパ腫（ＬＤＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症（ＷＭ）およびリンパ形質細胞性リンパ腫からなる群より選択される。
【０１７８】
ＰＩ３Ｋは、多くの血液学的な悪性疾患に関与しており、化合物Ｉでの処置に関する概念の前臨床的立証が確立されている。下の表は、特定の血液学的な悪性疾患および初代の患者細胞または疾患細胞株に対する作用の方法をまとめている。
【０１７９】
適応症（効能）                式Ａの化合物の効果
慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）  初代患者細胞
アポトーシスを誘導し
生存因子をブロックする
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）      初代患者細胞
ＰＩ３Ｋシグナル伝達をブロックし
増殖を阻害する
急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）  細胞株
ＰＩ３Ｋシグナル伝達をブロックし
アポトーシスを誘導する
非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）    細胞株
（ＭＣＬ、ＤＬＢＣＬ、ＦＬ）    ＰＩ３Ｋシグナル伝達をブロックし
アポトーシスを誘導する
多発性骨髄腫（ＭＭ）            初代患者細胞
２４／２４サンプル中でＰ１１０δが過剰発現される
アポトーシスを誘導する。
【０１８０】
本明細書に提供されるデータによって、本発明の化合物は、リンパ腫および白血病を処置するのに有用であることが示される。リンパ腫および白血病は一般に、ｐ１１０のδイソ型を選択的に発現し、例えば、図１５では、ｐ１１０δは、ほとんどのリンパ腫細胞株で優勢であるが、ｐ１１０αは一般には観察されないことが示される。さらに、図１６Ａで示されるデータによって、６つの異なる白血病細胞株由来の細胞培養物が化合物Ｉに感受性であり、この化合物の５〜１０μＭの濃度で強力に影響されたことが示される。図８および９は、化合物Ｉがいくつかの細胞株ではＡｋｔ（Ｓｅｒ４７３）産生を減少させることを支持する。
【０１８１】
ＣＬＬは、例えば、シグナル伝達目的のために主にｐ１１０δを産生し、かつ少ない程度でｐ１１０γを産生し、従って、ｐ１１０δおよび／またはｐ１１０γを阻害する化合物は、これらの細胞に向かう選択的細胞毒性を示すことが期待される。実施例３は、用量依存性の細胞毒性を、化合物Ｉについて（図３）、予後の劣る患者から収集した細胞（図１９）、および他のＣＬＬ処置に抵抗性であることが示された患者由来の細胞（図２０）を含む、ＣＬＬ細胞において示す。さらに、実施例１３および図１３では、２８日のサイクルにわたって５０ｍｇのＢＩＤの率でＣＬＬ患者に投与された化合物Ｉが有意な治療効果をもたらすことが示される。リンパ球でのＡＬＣ濃度パーセントの低下が観察される。従って、一局面では、本発明では、式Ａの化合物を用いる薬物耐性ＣＬＬを有するＣＬＬ患者を処置するための方法が提供される。他方では、実施例１７によって、シグナル伝達についてｐ１１０αに主に依拠する線維芽細胞の細胞株は、化合物Ｉに感受性ではなかったことが示唆される。従って、一局面では、患者の選択は、シグナル伝達についてｐ１１０αに主に依拠する癌を有する患者を排除する工程を包含し得る。
【０１８２】
式Ａの化合物はまた、Ｂ細胞リンパ腫およびＴ細胞リンパ腫の両方を含むリンパ腫を処置するために有用である。図４のデータによって、６つの異なるＡＬＬ細胞株が、化合物Ｉに対して感受性であって、６つの細胞株の全てで細胞生存度の有意な減少を生じたことが示される。図１２および実施例１２によって、２８日間、５０ｍｇのＢＩＤの化合物Ｉで処置したマントル細胞リンパ腫患者が、腫瘍負荷において平均４４％の低下を経験したことが示される。さらに、図１４では、２８日のサイクルの終わりにＭＣＬ患者が５０ｍｇの用量を投与された後、正常な健常ボランティア（ＮＨＶ）で観察されるレベルに対して同様の血漿レベルの化合物Ｉを経験した；従って、この化合物は、処置のサイクルの経過にわたって過剰に増加することもなく、患者が処置サイクルの経過にわたって代謝の増大によって耐容になることもないことが示される。
【０１８３】
さらに、式Ａまたは式Ｉの化合物は、Ａｋｔリン酸化活性を構成的に発現する造血系の癌を処置するために有用である。実施例８、および図８および９は、構成的Ａｋｔリン酸化を示す癌細胞株を列挙しており、この細胞株には、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ＡＬＬ、悪性組織球増殖症、ＤＬＢＣＬおよびＡＭＬが挙げられる。化合物Ｉに対して細胞を曝すことによって、Ａｋｔリン酸化の減少が生じる。また実施例１９も参照のこと、ここでは、構成的なＡｋｔリン酸化が化合物Ｉによって１３個の細胞株のうち１３個で阻害されたことが示される。
【０１８４】
特定の実施形態では、癌は固形腫瘍である。特定の実施形態では、癌は乳癌、卵巣癌、肺癌、結腸癌または前立腺癌である。図６は、例えば、化合物Ｉが２つの乳癌細胞株の細胞増殖を低減することを示しており、かつ図１０は、３つの異なる乳癌細胞株に対する細胞毒性を示す。同様に、図７は、化合物Ｉが２つの卵巣癌細胞株に対して細胞毒性であることを示す。
【０１８５】
固形腫瘍の処置に関しては、ｐ１１０βに対して良好な活性（例えば、約１μＭ未満、好ましくは約２５０ｎＭのＩＣ５０−実施例１５を参照のこと）を呈する式Ａの化合物を使用することが有利である。なぜなら固形腫瘍はしばしば、ｐ１１０δ以外のまたはｐ１１０δより多く、このアイソザイムを利用するからである。従って、約２５０ｎＭ未満というＩＣ５０を有する式Ａの化合物は、固形腫瘍の処置に好ましく；化合物Ｉ、Ｉ”、ＩＩ、またはＩＩ”は、本明細書に示されるように、この使用に適切である。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される処置のための被験体であって、本明細書に記載される状態のうちの少なくとも１つを有すると診断された被験体は、式Ａの化合物の使用によって処置可能である。いくつかの実施形態では、この被験体は、本明細書で指定された癌を有すると診断されており、かつ従来の化学療法剤の少なくとも１つでの処置に対して難治性であることが証明されている。例えば、プロテアソームインヒビター、自家幹細胞移植、ＣＨＯＰレジメン、リツキシマブ、フルダラビン、アレムツズマブ、従来の抗癌ヌクレオシドアナログ、およびアルキル化剤などの処置に対する応答に失敗した患者は、本明細書に記載される処置の方法に応答することが多い。従って、一実施形態では、本発明の処置は、このような処置の１つもしくは２つ以上を受けている患者に関する。
【０１８７】
特定の実施形態では、本発明の方法は、Ｂ細胞、またはＢリンパ球、関連の疾患に関する。Ｂ細胞は、自己免疫疾患の病因においてある役割を果たす。
【０１８８】
式Ａの化合物（特に、式Ｉ、Ｉ”、ＩＩおよびＩＩ”）は、本明細書に記載される状態、特にヒトの血液学的な癌を有する種々の被験体を処置するのに適切である。いくつかの実施形態では、この被験体は、血液学的な悪性疾患の処置について選択された被験体であって、他の処置後に再発を経験しているか、または他の処置に不応性である被験体である。いくつかの実施形態では、この被験体は、他の癌薬物に対して抵抗性である血液学的な悪性疾患の処置について選択される。いくつかの実施形態では、この被験体は、高レベルのｐ１１０δ活性を呈する血液学的な悪性疾患の処置について選択される。いくつかの実施形態では、この被験体は、比較的低レベルのｐ１１０α活性を呈する血液学的な悪性疾患の処置について選択される。いくつかの実施形態では、この被験体は、Ａｋｔリン酸化活性を構成的に発現する血液学的な悪性疾患の処置について選択される。
【０１８９】
一実施形態では、本明細書に記載の方法は、本明細書に記載の式Ａの化合物を被験体に対して、癌を処置するために用いられる治療と組み合わせて施す工程を包含する。「治療、療法（ｔｈｅｒａｐｙ）」または「処置」とは、本明細書において用いる場合、式Ａの化合物の使用を包含しない、癌を処置するために用いられる任意の周知の従来のまたは実験的な処置形態による癌の処置である。特定の実施形態では、式Ａの化合物と癌または自己免疫疾患を処置するために用いられる従来のまたは実験的な治療との組み合わせによって、この併用なしでの処置によって得られる結果を上回る有益および／または所望の処置結果が得られる。特定の実施形態では、癌を処置するために用いられる治療は、当業者に周知であって、文献中に記載されている。治療（療法）としては、限定するものではないが、化学療法、化学療法の組み合わせ、生物学的療法、免疫療法、放射線療法、ならびにモノクローナル抗体およびワクチンの使用が挙げられる。
【０１９０】
前述の実施形態のいくつかでは、併用方法は、式Ａの化合物を治療の投与期間と同時にまたはその間に与える。前述の実施形態のいくつかでは、式Ａの化合物は、他の化学療法処置と同時に投与される。特定の実施形態では、この併用方法は、式Ａの化合物を、治療を施す前後に投与する。
【０１９１】
前述の実施形態のいくつかでは、この被験体は、少なくとも１つの標準的または実験的な化学療法に対して不応性である。前述の実施形態のいくつかでは、この被験体は、少なくとも２つの標準的または実験的な化学療法に対して不応性である。前述の実施形態のいくつかでは、この被験体は、少なくとも３つの標準的または実験的な化学療法に対して不応性である。前述の実施形態のいくつかでは、この被験体は、少なくとも４つの標準的または実験的な化学療法に対して不応性である。
【０１９２】
前述の実施形態のいくつかでは、この被験体は、フルダラビン、リツキシマブ、アルキル化剤、アレムツズマブおよび上記のａ〜ｑに列挙された化学療法の処置からなる群より選択される少なくとも１つの標準的または実験的な化学療法に対して不応性である。
【０１９３】
前述の実施形態のいくつかでは、この被験体は、フルダラビン、リツキシマブ、アルキル化剤、アレムツズマブおよび上記のａ〜ｑに列挙された化学療法の処置からなる群より選択される少なくとも２つの標準的または実験的な化学療法に対して不応性である。
【０１９４】
前述の実施形態のいくつかでは、この被験体は、フルダラビン、リツキシマブ、アルキル化剤、アレムツズマブおよび上記のａ〜ｑに列挙された化学療法の処置からなる群より選択される少なくとも３つの標準的または実験的な化学療法に対して不応性である。
【０１９５】
前述の実施形態のいくつかでは、この被験体は、フルダラビン、リツキシマブ、アルキル化剤、アレムツズマブおよび上記のａ〜ｑに列挙された化学療法の処置からなる群より選択される少なくとも４つの標準的または実験的な化学療法に対して不応性である。
【０１９６】
この併用投与に関する正確な詳細は、実験的に決定され得る。式Ａの化合物と選択された療法との投与の順序およびタイミングの洗練は、個々の被験体、その被験体で処置される状態の性質、および一般には、担当する医師の判定に対して調整する。
【０１９７】
実験的または標準的な治療の非限定的な例は、下に記載される。さらに、特定のリンパ腫の処置は、Ｃｈｅｓｏｎ，Ｂ．Ｄ．，Ｌｅｏｎａｒｄ，Ｊ．Ｐ．，「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  Ｂ−Ｃｅｌｌ  Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ」Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００８，３５９（６），第６１３〜６２６頁；ならびにＷｉｅｒｄａ，Ｗ．Ｇ．，「Ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｎｄ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ＣＬＬ」Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ２００６，第２８５〜２９４頁に概説されている。米国でのリンパ腫の頻度のパターンは、Ｍｏｒｔｏｎ，Ｌ．Ｍ．，ら、「Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ  Ｐａｔｔｅｒｎｓ  ｂｙ  ＷＨＯ  Ｓｕｂｔｙｐｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ，１９９２〜２００１」Ｂｌｏｏｄ  ２００６，１０７（１），第２６５〜２７６頁に概説されている。
【０１９８】
非ホジキンリンパ腫、特にＢ細胞由来のリンパ腫の処置としては限定するものではないが、モノクローナル抗体の使用、標準的な化学療法アプローチ（例えば、ＣＨＯＰ、ＣＶＰ、ＦＣＭ、ＭＣＰなど）、放射免疫療法、およびそれらの組み合わせ、特に化学療法を組み込んだ抗体療法が挙げられる。
【０１９９】
非ホジキンリンパ腫／Ｂ細胞癌のための結合体化されていないモノクローナル抗体の非限定的な例としては、リツキシマブ、アレムツズマブ、ヒトまたはヒト化抗ＣＤ２０抗体、ルミリキシマブ、抗ＴＲＡＩＬ、ベバシヅマブ、ガリキシマブ、エプラツズマブ、ＳＧＮ−４０、および抗ＣＤ７４が挙げられる。非ホジキンリンパ腫／Ｂ細胞癌の処置に用いられる実験的な抗体剤の非限定的な例としては、オファツムマブ（ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）、ｈａ２０、ＰＲＯ１３１９２１、アレムツズマブ、ガリキシマブ、ＳＧＮ−４０、ＣＨＩＲ−１２．１２、エプラツズマブ、ルミリキシマブ、アポリズマブ、ミラツズマブおよびベバシズマブが挙げられる。任意のモノクローナル抗体を、リツキシマブ、フルダラビン、または化学療法剤／レジメンと組み合わせてもよい。
【０２００】
非ホジキンリンパ腫／Ｂ細胞癌のための化学療法の標準的なレジメンの非限定的な例としては、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン）、ＦＣＭ（フルダラビン、シクロホスファミド、ミトキサントロン）、ＣＶＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチンおよびプレドニゾン）、ＭＣＰ（ミトキサントロン、クロラムブシル、およびプレドニゾロン）、Ｒ−ＣＨＯＰ（リツキシマブに加えてＣＨＯＰ）、Ｒ−ＦＣＭ（リツキシマブに加えてＦＣＭ）、Ｒ−ＣＶＰ（リツキシマブに加えてＣＶＰ）、およびＲ−ＭＣＰ（Ｒ−ＭＣＰ）が挙げられる。
【０２０１】
非ホジキンリンパ腫／Ｂ細胞癌の放射免疫療法の非限定的な例としては、イットリウム−９０−標識イブリツモマブチウキセタン、およびヨウ素−１３１−標識トシツモマブが挙げられる。これらの治療剤は、再発または不応性の濾胞性または低悪性度リンパ腫の被験体での使用について承認されている。
【０２０２】
マントル細胞リンパ腫の治療的な処置としては、併用化学療法、例えば、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン）、ハイパーＣＶＡＤ（多分割シクロホスファミド、ビンクリスチン、ドキソルビシン、デキサメタゾン、メトトレキサート、シタラビン）、およびＦＣＭ（フルダラビン、シクロホスファミド、ミトキサントロン）が挙げられる。さらにこれらのレジメンは、併用療法Ｒ−ＣＨＯＰ、ハイパーＣＶＡＤ−Ｒ、およびＲ−ＦＣＭを形成するためにモノクローナル抗体リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ）を用いて補充されてもよい。他のアプローチとしては、任意の上述の治療と幹細胞移植と、またはＩＣＥ（イホスファミド、カルボプラチンおよびエトポシド）での処置とを組み合わせることが挙げられる。
【０２０３】
マントル細胞リンパ腫を処置する別のアプローチとしては、Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ（Ｒｉｔｕｘａｎ）のようなモノクローナル抗体を用いる免疫療法が挙げられる。リツキシマブはまた、他の低悪性度Ｂ細胞癌、例としては、辺縁帯リンパ腫、ＷＭ、ＣＬＬおよび小リンパ球性リンパ腫に対しても有効である。リツキシマブおよび化学療法剤の併用は、特に、有効である。改変されたアプローチは、放射免疫療法であって、ここではモノクローナル抗体が、放射性同位体粒子、例えば、ヨウ素−１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））およびイットリウム−９０イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））と組み合わされる。別の例では、Ｂｅｘｘａｒ（登録商標）が、ＣＨＯＰでの逐次的処置に用いられる。別の免疫療法の例としては、個々の患者の腫瘍の遺伝的体質に基づく癌ワクチンの使用が挙げられる。リンパ腫ワクチンの例は、ＧＴＯＰ−９９（ＭｙＶａｘ（登録商標））である。
【０２０４】
マントル細胞リンパ腫を処置する別のアプローチとしては、高用量化学療法と組み合わせた自家幹細胞移植が挙げられる。
【０２０５】
マントル細胞リンパ腫を処置する別のアプローチとしては、プロテアソームインヒビター、例えば、Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標）（ボルテゾミブまたはＰＳ−３４１）、または抗血管形成剤、例えば、サリドマイドを、特にリツキサンと組み合わせて投与することが挙げられる。別の処置アプローチは、Ｂｃｌ−２タンパク質の分解をもたらし、かつ他の化学療法剤と組み合わせた化学療法、例えば、オブリメルセン（Ｇｅｎａｓｅｎｓｅ）に対する癌細胞の感受性を増大する薬物の投与である。別の処置アプローチとしては、細胞増殖の阻害およびさらに細胞死さえもたらし得るｍＴＯＲインヒビターの投与が挙げられる；非限定的な例は、テムシロリムス（Ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）（ＣＣＩ−７７９）、およびテムシロリムスとＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）、Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標）または他の化学療法剤との組み合わせである。
【０２０６】
ＭＣＬの他の近年の療法が開示されている（Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ；Ｊａｒｅｓ，Ｐ．２００７）。非限定的な例としては、フラボピリドール（Ｆｌａｖｏｐｉｒｉｄｏｌ）、ＰＤ０３３２９９１、Ｒ−ロスコビチン（ｒｏｓｃｏｖｉｔｉｎｅ）（Ｓｅｌｉｃｉｌｉｂ，ＣＹＣ２０２）、スチリル・スルホン（Ｓｔｙｒｙｌ  ｓｕｌｐｈｏｎｅｓ）、オバトクラックス（Ｏｂａｔｏｃｌａｘ）（ＧＸ１５−０７０）、ＴＲＡＩＬ、抗ＴＲＡＩＬ  ＤＲ４およびＤＲ５抗体、テムシロリムス（Ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）（ＣＣｌ−７７９）、エベロリムス（Ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）（ＲＡＤ００１）、ＢＭＳ−３４５５４１、クルクミン（Ｃｕｒｃｕｍｉｎ）、ボリノスタット（Ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ）（ＳＡＨＡ）、サリドマイド（Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ）、レナリドマイド（ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ）（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標）、ＣＣ−５０１３）、およびゲルダナマイシン（Ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ）（１７−ＡＡＧ）が挙げられる。
【０２０７】
ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症を処置するために用いられる、他の治療剤の非限定的な例としては、ペリホシン、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））、リツキシマブ、クエン酸シルデナフィル（Ｖｉａｇｒａ（登録商標））、ＣＣ−５１０３、サリドマイド、エプラツズマブ（ｈＬＬ２−抗ＣＤ２２ヒト化抗体）、シンバスタチン、エンザスタウリン、キャンパス（ｃａｍｐａｔｈ）−１Ｈ、デキサメタゾン、ＤＴ  ＰＡＣＥ、オブリメルセン、アンチネオプラストンＡ１０、アンチネオプラストンＡＳ２−１、アレムツズマブ、βアレチン、シクロホスファミド、塩酸ドキソルビシン、プレドニゾン、硫酸ビンクリスチン、フルダラビン、フィルグラスチム、メルファラン、組み換えインターフェロンα、カルムスチン、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、エトポシド、メルファラン、ドラスタチン１０、インジウムＩｎ１１１モノクローナル抗体ＭＮ−１４、イットリウムＹ９０ヒト化エプラツズマブ、抗胸腺細胞グロブリン、ブスルファン、シクロスポリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、治療用異種リンパ球、イットリウムＹ９０イブリツモマブチウキセタン、シロリムス、タクロリムス、カルボプラチン、チオテパ、パクリタキセル、アルデスロイキン、組み換えインターフェロンα、ドセタキセル、イホスファミド、メスナ、組み換えインターロイキン−１２、組み換えインターロイキン−１１、Ｂｃｌ−２ファミリータンパク質インヒビターＡＢＴ−２６３、デニロイキンジフチトクス、タネスピマイシン（ｔａｎｅｓｐｉｍｙｃｉｎ）、エベロリムス、ペグフィルグラスチム、ボリノスタット、アルボシジブ、組み換えｆｌｔ３リガンド、組み換えヒトトロンボポエチン、リンホカイン活性化キラー細胞、アミホスチン三水和物、アミノカンプトテシン、塩酸イリノテカン、酢酸カスポファンギン、クロファラビン、エポエチンα、ネララビン、ペントスタチン、サルグラモスチム、二酒石酸ビノレルビン、ＷＴ−１アナログペプチドワクチン、ＷＴ１  １２６−１３４ペプチドワクチン、フェンレチニド（ｆｅｎｒｅｔｉｎｉｄｅ）、イクサベピロン、オキサリプラチン、モノクローナル抗体ＣＤ１９、モノクローナル抗体ＣＤ２０、ω−３脂肪酸、塩酸ミトキサントロン、酢酸オクトレオチド、トシツモマブおよびヨウ素Ｉ−１３１トシツモマブ、モテキサフィンガドリニウム、三酸化ヒ素、ティピファルニブ、自家ヒト腫瘍由来ＨＳＰＰＣ−９６、ベルツズマブ、ブリオスタチン１、およびＰＥＧ化リポソームドキソルビシンヒドロクロリド、ならびにそれらの任意の組み合わせが挙げられる。
【０２０８】
びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）薬物療法を処置するために用いられる他の治療剤の非限定的な例（Ｂｌｏｏｄ  ２００５  Ａｂｒａｍｓｏｎ，Ｊ．）としては、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、エトポシド、ブレオマイシン、ワルデンシュトレームのため列挙される多くの剤、およびそれらの任意の組み合わせ、例えば、ＩＣＥおよびＲ−ＩＣＥが挙げられる。
【０２０９】
ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症を処置するために用いられる治療手順の非限定的な例としては、末梢血幹細胞移植、自家造血幹細胞移植、自家骨髄移植、抗体療法、生物学的療法、酵素インヒビター療法、全身照射、幹細胞の注入、幹細胞支持による骨髄アブレーション、インビトロ処理した末梢血幹細胞移植、臍帯血移植、免疫酵素技術、薬理学的研究、低−ＬＥＴコバルト−６０ガンマ線療法、ブレオマイシン、従来の手術、放射線療法、および骨髄非破壊的同種異系造血幹細胞移植が挙げられる。
【０２１０】
慢性リンパ性白血病を処置するために用いられる他の治療剤の非限定的な例（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ，２００６，Ｆｅｒｎａｎｄｅｓ，Ｄ．）としては、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ）、シクロホスファミド（Ｃｙｌｏｘａｎ，Ｅｎｄｏｘａｎ，Ｅｎｄｏｘａｎａ，Ｃｙｃｌｏｓｔｉｎ）、フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ）、ペントスタチン（Ｎｉｐｅｎｔ）、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｒｉｎ）、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（アドリアマイシン）（登録商標）、アドリブラスチン（Ａｄｒｉｂｌａｓｔｉｎｅ））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ）、プレドニゾン、プレドニゾロン、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ，ＭａｂＣａｍｐａｔｈ）、ワルデンシュトレームのために列挙される多くの剤、ならびに化学療法および化学免疫療法の組み合わせ、例としては、共通の併用レジメン：ＣＶＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン）；Ｒ−ＣＶＰ（リツキシマブ−ＣＶＰ）；ＩＣＥ（イホスファミド、カルボプラチン、エトポシド）；Ｒ−ＩＣＥ（リツキシマブ−ＩＣＥ）；ＦＣＲ（フルダラビン、シクロホスファミド、リツキシマブ）；ならびにＦＲ（フルダラビン、リツキシマブ）が挙げられる。
【０２１１】
特定の実施形態では、上記方法は、上記患者に対してＩまたはＩＩの化合物に加えて、治療有効量の少なくとも１つの治療剤および／または上記患者の上記癌を処置するために選択される治療手順を投与するステップを含む。特定の実施形態では、上記方法は、上記患者に対してＩまたはＩＩの化合物に加えて、ａ）ベンダムスチン；ｂ）リツキシマブ；ｃ）ベンダムスチンおよびリツキシマブ；ｄ）オファツムマブ；ならびにｅ）レナリドマイドからなる群より選択される治療剤の治療有効量の組み合わせを投与するステップを含む。
【０２１２】
本発明の化合物は、当該分野で周知の一般に理解される処方技術を用いて動物被験体への投与のために処方され得る。特定の投与方式に、かつ式Ａの化合物に適切な処方物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，最終版，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡに見出され得る。
【０２１３】
本発明の化合物は、プロドラッグ型、すなわち、被験体に対する投与後、本発明の化合物を放出する保護型で調製され得る。代表的には、保護基は、血流中のような体液中で加水分解され、それによって活性な化合物を放出するか、またはインビボで酸化もしくは還元されて、活性化合物を放出する。プロドラッグの考察は、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ
Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，Ｓｍｉｔｈ，Ｈ．Ｊ．；Ｗｒｉｇｈｔ，第２版、Ｌｏｎｄｏｎ（１９８８）に見出される。
【０２１４】
本発明の化合物は、ニートな化合物として投与され得るが、代表的には、薬学的組成物または処方物の形態でこの化合物を投与することが好ましい。従って、本発明はまた、式Ａの化合物と、生体適合性の薬学的なキャリア、アジュバント、またはビヒクルを含む薬学的組成物を提供する。この組成物は、式Ａの化合物を、唯一の活性部分として、または他の因子、例えば、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチド、オリゴペプチドまたはポリペプチド、薬物またはホルモンとの組み合わせで、賦形剤（単数または複数）もしくは他の薬学的に許容され得るキャリアと混合して含んでもよい。キャリアおよび他の成分は、それらがその処方物の他の成分と適合性であり、かつそのレシピエントに有害でない限り、薬学的に許容され得るとみなしてもよい。
【０２１５】
薬学的組成物は、適切な薬学的に許容され得るキャリアを含むように処方され、かつ必要に応じて、薬学的に用いられ得る調製物中に活性化合物を処理することを容易にする賦形剤および補助剤を含んでもよい。投与方式が一般には、キャリアの性質を決定する。例えば、非経口投与のための処方物は、水溶性型の活性化合物の水溶液を含んでもよい。非経口投与に適切なキャリアは、なかでも、生理食塩水、緩衝化生理食塩水、デキストロース、水および他の生理学的に適合性の溶液から選択され得る。非経口投与のための好ましいキャリアは、生理学的に適合性の緩衝液、例えば、ハンクス溶液、リンゲル液、または生理学的緩衝化生理食塩水である。組織または細胞投与のために、特定の障壁を浸透するために適切な浸透剤が処方物中で用いられる。このような浸透剤は一般には、当該分野で公知である。タンパク質を含む調製物に関しては、処方は、ポリオール（例えば、スクロース）および／またはサーファクタント（例えば、非イオン性サーファクタント）などのような安定化材料を包含し得る。
【０２１６】
あるいは、非経口用途のための処方物は、適切な油状の注射懸濁剤として調製される活性化合物の分散または懸濁物を含んでもよい。適切な親油性溶媒またはビヒクルとしては、脂肪油、例えば、ゴマ油、および合成の脂肪酸エステル、例えば、オレイン酸エチルもしくはトリグリセリド、またはリポソームが挙げられる。水性の注射懸濁剤は、この懸濁剤の粘度を増大する物質、例えば、カルボキシルメチル・セルロース・ナトリウム、ソルビトールまたはデキストランを含んでもよい。必要に応じて、この懸濁剤はまた、適切な安定化剤、またはその化合物の溶解度を増大して、高濃縮溶液の調製を可能にする因子を含んでもよい。活性剤のｐＨ感受性の溶解および／または徐放性の放出をもたらす水性ポリマーはまた、コーティングまたはマトリックス構造物、例えば、メタクリル酸ポリマー、例えば、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）シリーズ（Ｒｏｈｍ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ｉｎｃ．（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）から入手可能）として用いられ得る。エマルジョン、例えば、水中油型分散、および油中水型分散もまた用いられてもよく、必要に応じて、乳化剤また分散剤（界面活性剤；サーファクタント）によって安定化されてもよい。懸濁剤は、懸濁化剤、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天、ガム・トラガカントならびにそれらの混合物を含んでもよい。
【０２１７】
式Ａの活性化合物を含むリポソームがまた、非経口投与のために使用され得る。リポソームは一般に、リン脂質または他の脂質物質に由来する。リポソーム型の組成物はまた、他の成分、例えば、安定化剤、防腐剤、賦形剤などを含んでもよい。好ましい脂質としては、リン脂質およびホスファチジルコリン（レシチン）（天然および合成の両方）が挙げられる。リポソームを形成する方法は、当該分野で公知である。例えば、Ｐｒｅｓｃｏｔｔ（編集），Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．ＸＩＶ，３３頁，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９７６）を参照のこと。
【０２１８】
経口投与に適切な投薬量中に式Ａの化合物を含む薬学的組成物は、当該分野で周知の薬学的に許容され得るキャリアを用いて処方され得る。経口投与のために処方される調製物は、錠剤、丸剤、カプセル（ｃａｐｓｕｌｅｓ）、カシェ剤（ｃａｃｈｅｔｓ）、糖衣錠（ｄｒａｇｅｅｓ）、トローチ剤（ｌｏｚｅｎｇｅｓ）、液剤、ゲル、シロップ、スラリー、エリキシル剤、懸濁剤または粉剤（散剤）の形態であり得る。例えば、経口用途のための薬学的調製物は、活性化合物と固体賦形剤とを合わせること、必要に応じて、得られた混合物を破砕すること、および必要に応じて適切な補助剤を添加した後、顆粒の混合物を処理することによって得て、錠剤または糖衣錠コアを得てもよい。経口処方物は、非経口使用のために記載されたもの、例えば、緩衝化水溶液、懸濁液などに対して同様の種類の液体キャリアを使用してもよい。
【０２１９】
好ましい経口処方物としては、錠剤、糖衣錠およびゼラチンカプセルが挙げられる。これらの調製物は、１つ以上の賦形剤を含み、賦形剤としては限定するものではないが、以下が挙げられる：
ａ）希釈剤、例えば、糖、例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトールまたはソルビトール；
ｂ）結合剤、例えば、ケイ酸アルミニウム・マグネシウム、トウモロコシ、コムギ、イネ、ジャガイモ由来のデンプンなど；
ｃ）セルロース材料、例えば、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびカルボキシルメチル・セルロース・ナトリウム、ポリビニルピロリドン、ゴム、例えば、アラビアゴム、およびトラガカント・ゴム、ならびにタンパク質、例えば、ゼラチンおよびコラーゲン；
ｄ）崩壊剤または可溶化剤、例えば、架橋ポリビニルピロリドン、デンプン、寒天、アルギン酸、またはそれらの塩、例えば、アルギン酸ナトリウムまたは発泡性組成物；
ｅ）滑沢剤、例えば、シリカ、滑石、ステアリン酸またはそのマグネシウム塩もしくはカルシウム塩、およびポリエチレングリコール；
ｆ）香味料および甘味料；
ｇ）着色料または色素（例えば、活性化合物の産物を特定するか、またはその量（投薬量）を特徴付ける）；ならびに
ｈ）他の成分、例えば、防腐剤、安定化剤、膨張剤、乳化剤、溶液促進剤、浸透圧調節のための塩、および緩衝剤。
【０２２０】
いくつかの好ましい経口処方物では、薬学的組成物は、上記の（ａ）群由来の少なくとも１つの物質、または上記の（ｂ）群由来のなくとも１つの物質、または上記の（ｃ）群由来の少なくとも１つの物質、または上記の（ｄ）群由来のなくとも１つの物質、または上記の（ｅ）群由来の少なくとも１つの物質を含む。好ましくはこの組成物は、上記の（ａ）〜（ｅ）の群から選択される２つの群の各々に由来する少なくとも１つの物質を含む。
【０２２１】
ゼラチンカプセルとしては、ゼラチン製の押し込み式（ｐｕｓｈ−ｆｉｔ）カプセル、ならびにゼラチンおよびコーティング、例えば、グリセロールまたはソルビトール製の軟性、密閉カプセルが挙げられる。押し込み式カプセルは、充填剤、結合剤、滑沢剤および／または安定化剤などと混合された活性成分を含んでもよい。軟性カプセルでは、活性化合物は、適切な液体、例えば、脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコール（安定化剤は有無）中に溶解されてもまたは懸濁されてもよい。
【０２２２】
糖衣錠コアは、適切なコーティング、例えば、濃縮糖溶液で提供されてもよく、この溶液はまた、アラビアゴム、滑石、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液および適切な有機溶媒または溶媒混合物を含んでもよい。
【０２２３】
薬学的組成物は、活性化合物の塩として提供され得る。塩は、水性または他のプロトン性溶媒中で、対応する遊離の酸または塩基型よりも可溶性である傾向である。薬学的に許容され得る塩は当該分野で周知である。酸性部分を含む化合物は、適切な陽イオンと薬学的に許容され得る塩を形成し得る。適切な薬学的に許容され得る陽イオンとしては、例えば、アルカリ金属（例えば、ナトリウムまたはカリウム）、およびアルカリ土類（例えば、カルシウムまたはマグネシウム）陽イオンが挙げられる。
【０２２４】
塩基部分を含む構造式（Ａ）の化合物は、適切な酸と薬学的に許容され得る酸付加塩を形成し得る。例えば、Ｂｅｒｇｅらは、Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ，６６：１（１９７７）に詳細に薬学的に許容され得る塩を記載する。この塩は、本発明の化合物の最終の単離および精製の間インサイチュで調製されてもよく、適切な酸と遊離塩基官能基との反応によって別々に調製されてもよい。
【０２２５】
代表的な酸付加塩としては限定するものではないが、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、ジグルコン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩（ｈｅｍｉｓｕｌｆａｔｅ）、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩（イソチオネート）、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩または硫酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチニン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、リン酸塩、またはリン酸水素塩、グルタミン酸塩、重炭酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩およびウンデカン酸塩が挙げられる。薬学的に許容され得る酸付加塩を形成するために使用され得る酸の例としては、限定するものではないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸およびリン酸のような無機酸、ならびにシュウ酸、マレイン酸、コハク酸およびクエン酸のような有機酸が挙げられる。
【０２２６】
塩基性の窒素含有基は、低級アルキルハロゲン化物、例えば、メチル、エチル、プロピル、およびブチルの塩化物、臭化物およびヨウ化物；硫酸ジアルキル、例えば、ジメチル、ジエチル、ジブチル、およびジアミルの硫酸塩；長鎖アルキルハロゲン化物、例えば、デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリルの塩化物、臭化物およびヨウ化物；アリールアルキルハロゲン化物、例えば、ベンジルおよびフェネチルの臭化物；などのような因子で四級化され得る。溶解度または分散性が改変されている産物がそれによって得られる。
【０２２７】
薬学的に許容され得るキャリア中で処方される本発明の化合物を含む組成物は、調製され、適切な容器に入れられ、そして示された状態の処置について表示され得る。従って、ある剤形の本発明の化合物およびその化合物の使用のための説明を含む表示を備える容器などの製品も想定される。キットもまた本発明のもとで想定される。例えば、キットは、ある剤形の薬学的組成物と、医学的状態の処置における組成物の使用のための指示を含む添付文書とを備えてもよい。いずれかの場合、この表示に示される状態としては、炎症性障害、癌などの処置を挙げることができる。
【０２２８】
投与の方法
式Ａの化合物を含む薬学的組成物は、非経口技術および腸内技術を含む、任意の従来の方法によって被験体に投与され得る。非経口の投与方式としては、胃腸管以外の経路、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、髄内、筋肉内、関節内、くも膜下腔内、および脳室内の注射を通じて組成物が投与される投与方式が挙げられる。腸内投与方式としては、例えば、経口（口腔内および舌下を含む）および直腸投与が挙げられる。経上皮投与方式としては、例えば、経粘膜投与および経皮投与が挙げられる。経粘膜投与としては、例えば、腸内投与、ならびに経鼻投与、吸入および深部肺投与；膣投与；ならびに直腸投与が挙げられる。経皮投与としては、受動的または能動的な経皮性（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）または経皮的（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）方式が挙げられ、これには、例えば、パッチおよびイオン導入デバイス、ならびにペースト、軟膏（ｓａｌｖｅｓ）または軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔｓ）の局所塗布が挙げられる。非経口投与はまた、高圧技術、例えば、ＰＯＷＤＥＲＪＥＣＴ（商標）を用いて達成されてもよい。
【０２２９】
外科的技術としては、デポ（リザーバー）組成物の移植、浸透圧ポンプなどが挙げられる。炎症の処置のための好ましい投与経路は、局所化障害、例えば、関節炎のための局所もしくは局部の送達、または分布した障害のための全身送達、例えば、再灌流傷害のためもしくは敗血症のような全身性の状態のための静脈内送達であってもよい。呼吸器に関与する疾患、例えば、慢性閉塞性肺疾患、喘息および肺気腫を含む他の疾患に関しては、投与は、スプレー、エアロゾル、粉末などの吸入または深部肺投与によって達成され得る。
【０２３０】
前述の実施形態のいくつかでは、式Ａの化合物は、化学療法、放射線療法、および／または手術の前、間または後に投与される。選択される処方物および投与の経路は、個々の被験体、その被験体で処置されるべき状態の性質、および一般には担当医の判定に対して調整する。
【０２３１】
式Ａの化合物の治療指数は、細胞をそのようなものとして特定するマーカーを発現する癌細胞に対する標的化送達のために化合物を修飾または誘導体化することによって増強され得る。例えば、化合物は、癌細胞に対して選択的であるかまたは特異的であるマーカーを認識する抗体に連結されてもよく、その結果この化合物は、前に記載されたように、細胞の近傍にもたらされてその効果を局所的に発揮する（例えば、Ｐｉｅｔｅｒｓｚ，ら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ，１２９：５７（１９９２）；Ｔｒａｉｌ，ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６１：２１２（１９９３）；およびＲｏｗｌｉｎｓｏｎ−Ｂｕｓｚａ，ら、Ｃｕｒｒ
Ｏｐｉｎ  Ｏｎｃｏｌ，４：１１４２（１９９２）を参照のこと）。これらの化合物の腫瘍指向性の送達は、とりわけ、放射線療法または化学療法から生じ得る、潜在的な非特異的毒性を最小化することによって治療利益を増強する。別の局面では、式Ａの化合物および放射性同位体または化学療法剤は、同じ抗腫瘍抗体に結合体化されてもよい。
【０２３２】
この因子自体およびこの因子の処方物の特徴は、投与される因子の物理的状態、安定性、インビトロ放出の速度、およびインビボクリアランスの速度に影響し得る。このような薬物動態学的および薬理学的情報は、前臨床のインビトロおよびインビボの研究を通じて収集され得、その後、臨床試験の経過の間にヒトで確認される。従って、本発明の方法で用いられる任意の化合物について、治療有効用量は、生化学的および／または細胞ベースのアッセイから最初に見積もられ得る。次に、投薬量は、特定のＰＩ３Ｋイソ型またはイソ型の組み合わせの発現または活性を調節する所望の循環濃度範囲を達成するように動物モデルで処方され得る。ヒトの研究を行う場合、種々の疾患および状態についての適切な投薬レベルおよび処置の期間に関してさらなる情報が出現する。
【０２３３】
本発明の化合物は十分耐容されるが、処置用量の限界の例は、肝機能試験（ＬＦＴ）の上昇である。ＬＦＴは、患者の肝臓の状態に関する情報を得るための、患者の血清または血漿に対する標準的な臨床生化学的試験を含む。アラニントランスアミナーゼ、アスパラギン酸トランスアミナーゼ、アルカリホスファターゼ、ビリルビンおよびγグルタミルトランスペプチダーゼのようなレベルが正常範囲外であれば、潜在的な肝毒性が警告され得る。治療化合物の投薬は、肝機能試験値の上昇および肝毒性についての引き続く可能性を回避するかまたは低減するように調節され得る。例えば、被験体は、漸増用量の化合物を投与され得る。特定の投与量では、被験体は、正常範囲外のＬＦＴレベルの上昇を始め、これがその投薬量での潜在的な肝毒性を警告する。応答において、この投薬量は、処置医が判定して許容できる範囲までＬＦＴレベルが減少される（例えば、処置されている被験体について正常な範囲内、または正常の約２５％〜５０％の範囲内であるレベル）ような量まで減少され得る。従って、肝機能試験を用いて、化合物の投薬量を滴定してもよい。
【０２３４】
このような化合物の毒性および治療有効性は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％致死用量）およびＥＤ５０（集団の５０％の治療有効用量）を決定するための細胞培養または実験動物において標準的な薬学的手順によって決定され得る。毒性効果と治療効果との間の用量比は、「治療指数」であって、これは代表的には、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比として表現される。大きい治療指数を呈する（すなわち毒性用量が実質的に有効用量より高い）化合物が好ましい。このような細胞培養アッセイおよび追加の動物試験から得られるデータが、ヒトでの使用のためにある範囲の投薬量を処方するのに用いられ得る。このような化合物の投薬量は好ましくは、毒性がほとんどないか全くないＥＤ５０を含む、ある範囲の循環濃度内である。
【０２３５】
投薬量は、処置関連の毒性症状によって制限され得る。肝機能試験の上昇以外のこのような症状としては、貧血、かすみ目、下痢、嘔吐、疲労、粘膜炎、末梢浮腫、発熱（ｐｙｒｅｘｉａ）、末梢神経障害、胸膜滲出、寝汗および起座呼吸、またはそれらの組み合わせが挙げられる。特定の用量では、被験体がこのような症状のうち耐容できないレベルを生じる場合、この投薬量は、処置医が判断して、有害事象が排除され、もう有害事象がないか、または許容できるレベルまで低下されるように低下され得る。
【０２３６】
患者にとって化合物の適切な用量を決定するのにおける別の考慮は、血漿中で所望の濃度が循環することである。特定の実施形態では、血中の化合物の濃度は、投与の時点から１２時間にわたって４０〜３，０００ｎｇ／ｍＬである。別の特定の実施形態では、血中のこの化合物の濃度は、投与の時点から１２時間にわたって７５〜２，０００ｎｇ／ｍＬである。別の特定の実施形態では、血中のこの化合物の濃度は、投与の時点から１２時間にわたって５００〜２，０００ｎｇ／ｍＬである。好ましい実施形態では、血中のこの化合物の濃度は、投与の時点から１２時間にわたって４０〜３，０００ｎｇ／ｍＬであり、ここでこの化合物は、Ｉ、Ｉ”、ＩＩまたはＩＩ”の式であり、かつ約５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇまたは２００ｍｇの量で経口投与される。好ましい実施形態では、血中の化合物の濃度は、投与の時点から１２時間にわたって４０〜３，０００ｎｇ／ｍＬであり、ここでこの化合物は、Ｉの式であり、かつ約５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇまたは２００ｍｇの量で経口投与される。好ましい実施形態では、血中の化合物の濃度は、投与の時点から１２時間にわたって４０〜３，０００ｎｇ／ｍＬであり、ここでこの化合物は、ＩＩの式であり、かつ約５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇまたは２００ｍｇの量で経口投与される。前述の実施形態のいくつかでは、血漿中の最大濃度は、投与の２時間内に達成される。
【０２３７】
特定の実施形態では、式ＩまたはＩＩの化合物の投薬量は、平均で、８〜１２時間の期間にわたって、約１０ｎＭ以上という薬物の血漿濃度を生じるように、および約５００ｎＭ以上、好ましくは約１０００ｎＭ以上というピーク血漿濃度を得るように選択される。特定の実施形態では、式ＩまたはＩＩの化合物の投薬量は、平均で、８〜１２時間の期間にわたって、約１００ｎＭ以上という薬物の血漿濃度を生じるように、および約５００ｎＭ以上、好ましくは約１０００ｎＭ以上というピーク血漿濃度を得るように選択される。特定の実施形態では、式ＩまたはＩＩの化合物の投薬量は、平均で、８〜１２時間にわたって、約２００ｎＭ以上という薬物の血漿濃度を生じるように、および約５００ｎＭ以上、好ましくは約１０００ｎＭ以上のピーク血漿濃度を得るように選択される。
【０２３８】
特定の実施形態では、式Ｉまたは式ＩＩの化合物の投薬量は、この化合物のトラフ濃度が癌細胞のアポトーシスのような治療効果が観察される範囲である血漿濃度を生じるように選択される。特定の実施形態では、式Ｉまたは式ＩＩの化合物の投薬量は、血漿中のＰＩ３Ｋδイソ型活性化のＥＣ５０以上のトラフ血漿濃度を生じるように選択される。特定の実施形態では、式Ｉまたは式ＩＩの化合物の投薬量は、化合物投与から少なくとも１２時間の間、細胞中でＰＩ３Ｋδ活性化のＥＣ５０レベルを超え、かつＰＩ３Ｋγ活性化のＥＣ５０を下回るトラフ血液濃度を生じるように選択される。例えば、全血漿中で、ＰＩ３Ｋδ好塩基球活性化のＥＣ５０値が６５ｎＭであり、かつＰＩ３Ｋγ好塩基球活性化のＥＣ５０値が１１００ｎＭであるならば、選択される化合物の投薬量は、化合物投与から８〜１２時間の間、６０ｎＭ〜１１００ｎＭという化合物のトラフ血漿濃度をもたらす。同様に、投薬量は、ＰＩ３Ｋδ好塩基球活性化のＥＣ５０レベルを超え、ＰＩ３Ｋ−α、−βまたは−γ好塩基球活性化のＥＣ５０レベルを下回るトラフ血液濃度を生じるように選択され得る。インビボにおけるＰＩ３Ｋイソ型活性化または阻害のためのＥＣ５０値は、当業者によって決定され得る。別の実施形態では、薬物のトラフ濃度の上限は突破し得、血漿中のＰＩ３Ｋ−γ、−α、または−βイソ型のＥＣ５０値によっては限定されない。さらに、薬物の血液濃度範囲は、望ましくない副作用を最小化しながら、血液学的な悪性疾患を処置するのに治療上有益であるレベルである。
【０２３９】
例えば、δ−選択的であるが、この化合物は、ｐ１１０γに十分な活性を示して臨床的に有用であり得、すなわち、シグナル伝達についてｐ１１０γに依拠する癌に対して有効であり得る。なぜなら、ｐ１１０γの阻害について有効用量を超える血漿レベルは、他のイソ型、特にαイソ型に対して選択的であるままで達成され得るからである。従って、いくつかの実施形態では、この化合物の投薬量は、ｐ１１０δおよびｐ１１０γを選択的に阻害するために有効な血液濃度を生じるように選択される。
【０２４０】
いくつかの実施形態では、この化合物の投薬量は、化合物投与から８〜１２時間の期間の間、６５ｎＭ〜１１００ｎＭというトラフ血漿濃度をもたらす。前述の実施形態のいくつかでは、この期間とは、化合物投与から少なくとも１２時間である。
【０２４１】
特定の実施形態では、この化合物は、治療上有効な量で投与される。
【０２４２】
特定の実施形態では、この化合物は、２０〜５００ｍｇ／日の用量で投与される。特定の実施形態では、この化合物は、５０〜２５０ｍｇ／日の用量で投与される。
【０２４３】
特定の実施形態では、この化合物は、１用量あたり２５〜１５０ｍｇの用量で投与され、２つの用量は、１日あたりで投与される（例えば、２５〜１５０ｍｇの用量でのＢＩＤ投薬）。好ましい実施形態では、被験体は、１日あたり２回５０ｍｇ〜１００ｍｇという式Ａの化合物で処置される。他の好ましい実施形態では、被験体は、１日あたり２回１５０ｍｇの式Ａの化合物で処置される。
【０２４４】
特定の実施形態では、この方法は、この患者に対して、２０〜５００ｍｇというこの化合物の初回１日用量を投与する工程と、臨床的な有効性が達成されるまでこの用量を一定量ずつ漸増する工程とを包含する。約２５、５０、１００、または１５０ｍｇという増分が用量を増大するために用いられ得る。この投薬量は、毎日、１日おき、週に２回、または週に１回増大され得る。
【０２４５】
特定の実施形態では、この方法は、臨床有効性が達成される、この化合物の同じ用量を投与することによってこの患者を処置し続ける工程、または有効性が維持され得るレベルまで一定量ずつこの用量を減少させる工程を包含する。
【０２４６】
特定の実施形態では、この方法は、この患者に対して、２０〜５００ｍｇというこの化合物の初回１日用量を投与する工程と、少なくとも６日間にわたってこの用量を１日あたり５０〜４００ｍｇの総投薬量まで漸増することを包含する。必要に応じて、この投薬量は、約７５０ｍｇ／日までさらに増大され得る。
【０２４７】
特定の実施形態では、この化合物は、毎日少なくとも２回投与される。
【０２４８】
特定の実施形態では、この化合物は、経口的に、静脈内にまたは吸入によって投与される。好ましくは、この化合物は、経口的に投与される。いくつかの実施形態では、これは、約５０ｍｇという投薬量で経口的にＢＩＤ、約１００ｍｇという投薬量で経口的にＢＩＤ、または約１５０ｍｇという投薬量で経口的にＢＩＤ投与される。
【０２４９】
本発明の方法に関しては、用量のタイミングおよび順序を調節する任意の有効なレジメンを用いてもよい。この因子の投与量は好ましくは、この因子の有効量を含む薬学的な投与量の単位を含む。本明細書において用いる場合、「有効量」とは、ＰＩ３Ｋδの発現もしくは活性を調節するか、および／または１つ以上の薬学的な投薬単位の投与を通じて被験体の生理学的パラメーターにおける測定可能な変化を誘導するのに十分な量を指す。「有効量」とはまた、被験体における疾患または障害を緩和するのに必要な量を指す場合もある。
【０２５０】
式Ａの化合物の適切な投薬範囲は、これらの考慮によって変化するが、一般には、この化合物は、体重あたり１０．０μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ；体重あたり１．０μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、または体重あたり０．５ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇという範囲で投与される。代表的な７０ｋｇヒト被験体に関しては、従って、投薬範囲は１用量あたり７００μｇ〜１０５０ｍｇ；７０μｇ〜７００ｍｇ；または３５ｍｇ〜３５０ｍｇであり、および２用量以上が１日あたりに投与されてもよい。投薬量は、この化合物が、経口的にまたは経皮的に投与される場合、例えば、ｉ．ｖ．投与に比較して高くてもよい。式Ａの化合物の毒性の低下によって、比較的高用量という治療投与が可能になる。前述の実施形態のいくつかでは、本発明の化合物の最大７５０ｍｇ／日までの経口投与が適切である。前述の実施形態のいくつかでは、式Ａの化合物は、５０ｍｇという用量でＢＩＤ投与される。前述の実施形態のいくつかでは、式Ａの化合物は、１００ｍｇという用量でＢＩＤ投与される。前述の実施形態のいくつかでは、式Ａの化合物は、１５０ｍｇという用量でＢＩＤ投与される。前述の実施形態のいくつかでは、式Ａの化合物は、２００ｍｇという用量でＢＩＤ投与される。前述の実施形態のいくつかでは、式Ａの化合物は、３５０ｍｇという用量でＢＩＤ投与される。特定の実施形態では、白血病、リンパ腫および多発性骨髄腫の処置のため、１用量あたり約５０〜３５０ｍｇという投薬量（１日あたり経口的に１回または好ましくは２回投与される）が適切である場合が多い。
【０２５１】
前述の実施形態のいくつかでは、化合物Ｉ”またはＩＩ”の最大７５０ｍｇ／日までの経口投与が好適である。前述の実施形態のいくつかでは、式Ｉ”またはＩＩ”の化合物は、５０ｍｇ  ＢＩＤという用量で投与される。前述の実施形態のいくつかでは、式Ｉ”またはＩＩ”の化合物は、１００ｍｇという用量でＢＩＤ投与される。前述の実施形態のいくつかでは、式Ｉ”またはＩＩ”の化合物は１５０ｍｇという用量でＢＩＤ投与される。前述の実施形態のいくつかでは、式Ｉ”またはＩＩ”の化合物は２００ｍｇという用量でＢＩＤ投与される。前述の実施形態のいくつかでは、式Ｉ”またはＩＩ”の化合物は、３５０ｍｇという用量でＢＩＤ投与される。前述の実施形態のいくつかでは、白血病、リンパ腫および多発性骨髄腫の処置のため、式Ｉ”またはＩＩ”の化合物の１用量あたり約５０〜３５０ｍｇという投薬量（１日あたり経口的に１回または好ましくは２回投与される）が適切である場合が多い。
【０２５２】
この化合物は、単回ボーラス用量として、経時的な用量で、ｉ．ｖ．投与または経皮投与として、または複数の投薬で投与されてもよい。
【０２５３】
投薬は、少なくとも１サイクル継続される。いくつかの実施形態では、上記サイクルは、少なくとも７日間継続され得る。いくつかの実施形態では、上記サイクルは、約２８日である。いくつかの実施形態では、投薬は、約２８日間継続され、次いで少なくとも７日間中断される。いくつかの実施形態では、完全なサイクルは、連続毎日２８日間の投与である。患者における臨床応答の評価は、各々のサイクル後に測定され得る。この臨床結果を用いて、投薬を増大、減少、中断または維持するための決定を行ってもよい。
【０２５４】
投与経路に依存して、適切な用量を体重、体表面積、または臓器の大きさに従って算出し得る。最終の投薬計画は、薬物の作用、例えば、その因子に特異的な活性を改変する種々の要因、疾患状態の同定および重篤度、患者の応答性、患者の年齢、状態、体重、性別および食餌、ならびに任意の感染の重篤度を考慮して、優良医薬品基準（ｇｏｏｄ  ｍｅｄｉｃａｌ  ｐｒａｃｔｉｃｅ）の観点で担当医によって決定される。考慮され得る追加の要因としては、投与の時間および頻度、併用薬物、反応感度、ならびに治療に対する耐性／応答が挙げられる。本明細書に言及される任意の処方物を含む処置に適切な投薬量のさらなる洗練は、特に開示される投薬情報およびアッセイ、ならびにヒト臨床試験で観察される薬物動態学的データに照らして、過度の実験なしに当業者によって慣用的に行われる。適切な投薬量は、用量反応データとともに、体液または他のサンプル中のその因子の濃度を決定するために確立されたアッセイの使用を通じて確認され得る。
【０２５５】
投薬の頻度は、式Ａの化合物の薬物動態学的パラメーターおよび投与経路に依存する。投薬量および投与は、十分なレベルの活性部分を提供するため、または所望の効果を維持するために調節される。従って、薬学的組成物は、その化合物の所望の最小レベルを維持するために必要な場合、単回用量、複数分割用量、連続注入、徐放性デポまたはそれらの組み合わせで投与されてもよい。短時間作用性（すなわち、短い半減期）の薬学的組成物は、１日に１回、または１日に２回以上（例えば、１日に、２、３、または４回）投与され得る。長時間作用性の薬学的組成物は、３〜４日ごとに、毎週、または２週ごとに１回投与され得る。ポンプ、例えば、皮下ポンプ、腹腔内ポンプまたは硬膜下ポンプが、連続注入に好ましい場合がある。
【０２５６】
本発明の方法に好適に応答する被験体としては、一般にヒト患者を含む、医学的被験体および獣医学的被験体が挙げられる。とりわけ、本発明の方法が有用である他の被験体は、ネコ、イヌ、大型の動物、鳥類、例えば、ニワトリなどである。一般には、式Ａの化合物から利益を得る任意の被験体は、本発明の方法の投与に適切である。前述の実施形態のいくつかでは、患者は、ｄｅｌ（１７ｐ）またはｄｅｌ（１１ｑ）の細胞遺伝学的特徴を有する。前述の実施形態のいくつかでは、患者は、リンパ節腫脹を有する。前述の実施形態のいくつかでは、化合物Ｉ、Ｉ”、ＩＩ、またはＩＩ”の使用によって、患者におけるリンパ節腫脹の大きさは低下する。前述の実施形態のいくつかでは、化合物Ｉ、Ｉ”、ＩＩ、またはＩＩ”の使用は、１サイクルの処置後、リンパ節腫脹の大きさを小さくする。前述の実施形態のいくつかでは、化合物Ｉ、Ｉ”、ＩＩ、またはＩＩ”の使用は、１サイクルの処置後、リンパ節腫脹の大きさを少なくとも１０％まで小さくする。前述の実施形態のいくつかでは、化合物Ｉ、Ｉ”、ＩＩ、またはＩＩ”の使用は、１サイクルの処置後、リンパ節腫脹の大きさを少なくとも２５％まで小さくする。前述の実施形態のいくつかでは、化合物Ｉ、Ｉ”、ＩＩ、またはＩＩ”の使用は、１サイクルの処置後、リンパ節腫脹の大きさを少なくとも３０％まで小さくする。前述の実施形態のいくつかでは、化合物Ｉ、Ｉ”、ＩＩ、またはＩＩ”の使用は、１サイクルの処置後、リンパ節腫脹の大きさを少なくとも４０％まで小さくする。前述の実施形態のいくつかでは、化合物Ｉ、Ｉ”、ＩＩ、またはＩＩ”の使用は、１サイクルの処置後、リンパ節腫脹の大きさを少なくとも５０％まで小さくする。前述の実施形態のいくつかでは、化合物Ｉ、Ｉ”、ＩＩ、またはＩＩ”の使用は、１サイクルの処置後、リンパ節腫脹の大きさを少なくとも７５％まで小さくする。
【０２５７】
一局面では、本発明は、ある状態を処置する方法であって、式Ｉ、ＩＩの化合物またはその薬学的に許容され得る塩および１つ以上の治療剤を、そのような処置の必要な被験体に投与するステップを含み、上記状態が癌である方法を提供する。一実施形態では、上記１つ以上の治療剤はプロテアソームインヒビターである。上記１つ以上の治療剤としては、ベンダムスチン、リツキシマブ、オファツムマブおよび／またはレナリドマイドが挙げられ得る。別の実施形態では、上記１つ以上の治療剤としては、ベンダムスチン、リツキシマブ、またはこれらの２つの治療剤の組み合わせが挙げられる。さらに別の実施形態では、上記１つ以上の治療剤としてはオファツムマブが挙げられる。さらに別の実施形態では、上記１つ以上の治療剤としてはレナリドマイドが挙げられる。
【０２５８】
上記１つ以上の治療剤の好適な投薬量範囲は異なり得るが、一般に、上記１つ以上の治療剤は５０ｍｇ／ｍ２〜１，５００ｍｇ／ｍ２の範囲で投与される。一実施形態では、ベンダムスチンが５０ｍｇ／ｍ２〜１５０ｍｇ／ｍ２の範囲で投与される。別の実施形態では、リツキシマブが３００ｍｇ／ｍ２〜４００ｍｇ／ｍ２の範囲で投与される。別の実施形態では、オファツムマブが３００ｍｇ／ｍ２〜１，５００ｍｇ／ｍ２の範囲で投与される。
【０２５９】
式Ａの化合物と組み合わせた上記１つ以上の治療剤の投薬は、少なくとも１サイクル継続され得る。いくつかの実施形態では、式Ａの化合物と組み合わせた上記１つ以上の治療剤の投薬は、少なくとも７日間継続され得る。他の実施形態では、式Ａの化合物と組み合わせた上記１つ以上の治療剤の投薬は、約２８日間継続され得る。いくつかの実施形態では、式Ａの化合物および１つ以上の治療剤は各々が、少なくとも１サイクルの間に少なくとも１回投与される。上記１つ以上の治療剤は上記被験体に上記化合物の投与と同じまたは異なるサイクルで投与され得る。いくつかの実施形態では、上記１つ以上の治療剤は上記被験体に、少なくとも１サイクルの少なくとも初日と２日目に投与される。他の実施形態では、上記１つ以上の治療剤は上記被験体に毎週投与される。患者における臨床応答の評価は各々のサイクルの後に測定され得る。この臨床結果を用いて、投薬の増大、減少、中止または維持の決定が行なわれ得る。
【０２６０】
前述の実施形態のいくつかでは、この状態は、血液学的な悪性疾患である。好ましい実施形態では、この状態は、多発性骨髄腫、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞ＡＬＬ、Ｔ細胞ＡＬＬおよびホジキンリンパ腫からなる群より選択される。
【０２６１】
好ましい実施形態では、この化合物は、実質的にＳ−鏡像異性体から構成される。特定の実施形態では、この化合物は、少なくとも９５％のＳ−鏡像異性体を含む。前述の実施形態のいくつかでは、この化合物および治療剤の投与によって、この化合物および治療剤の組み合わせなしで得られる結果を上回る相乗的な利益が得られる。
【０２６２】
以下の実施例は、本発明を例示するが限定するものではない。下の実施例では、「式Ｉの化合物」または「化合物Ｉ」という言及は、本明細書で示されるＳ−鏡像異性体を指し、そしてこれらの実施例で用いられるサンプルは、キラルＨＰＬＣ方法によって測定する場合９８．２％ｅｅを示す。
【０２６３】
【化２６】
2014510729.tif 000028
【０２６４】
さらに、この化合物の分析によって以下の物質の特徴が明らかになる：
【０２６５】
【数１】
2014510729.tif 000029
【実施例】
【０２６６】
（実施例１）
ＭＭ細胞における細胞増殖の阻害
本実施例は、式Ｉの化合物が、多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞でサイトカイン（ＩＧＦ−１およびＩＬ−６）の細胞増殖刺激性効果を阻害することを示す。ＬＢ細胞（骨髄単球性骨髄腫細胞株）を、コントロール培地と；式Ｉの化合物とを用いて、ＩＬ−６またはＩＧＦ−１のいずれかの有無において、４８時間培養した。ＭＭ細胞増殖に対する式Ｉの化合物の阻害性効果を、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニル四ナトリウム臭化物（ＭＴＴ；Ｃｈｅｍｉｃｏｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）色素吸光度を測定することによって評価した。細胞を、４８時間の培養の最後に４時間、各々のウェルに対して、１０μＬの５ｍｇ／ｍＬのＭＴＴを用いて、続いて０．０４Ｎ  ＨＣｌを含む１００μＬのイソプロパノールでパルスした。吸光度は、分光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて５７０／６３０ｎｍで測定した。結果のまとめは、図１に示す。０．６２５μＭ〜２．５μＭの化合物Ｉに曝すことによって、細胞増殖刺激性サイトカインの存在下でさえＭＭ細胞の増殖は阻害される。
【０２６７】
（実施例２）
細胞毒性に対するＢＭＳＣの効果
本実施例は、骨髄間質細胞（ＢＭＳＣ）が、化合物Ｉ誘導性のＬＢ細胞の細胞毒性に対して防御しないことを示す。ＬＢ細胞をコントロールの培地とともに、および式Ｉの化合物とともに、４８時間、ＢＭＳＣの有無において培養した。細胞増殖は、［３Ｈ］−チミジンの取り込みアッセイを用いて評価した。全てのデータとも、三連の実験の平均（±ＳＤ）を示す。結果のまとめを図２に示す。ＬＢ細胞増殖は、０．６２５μＭ〜１０μＭの化合物Ｉに対して曝した後は、ＢＭＳＣの存在下でさえ低下する。
【０２６８】
（実施例３）
ＣＬＬ細胞のアポトーシスに対する化合物の効果
本実施例は、式Ｉの化合物が、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）患者の細胞でアポトーシスを誘導することを示す。末梢血は、オハイオ州立大学（Ｏｈｉｏ  Ｓｔａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）のＣＬＬ研究共同体（ＣＬＬ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ）を通してＢ−ＣＬＬを有する患者から得た。初代のＣＤ１９陽性細胞を、Ｒｏｓｅｔｔｅ−Ｓｅｐ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて単離した。細胞を、１０％の熱不活性化ウシ胎仔血清、２ｍｍｏｌ／ＬのＬ−グルタミン、およびペニシリン（１００単位／ｍＬ）／ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を補充したＲＰＭＩ  １６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で、３７℃、５％ＣＯ２、および高湿度で維持した。式Ｉの化合物または培地との９６時間のインキュベーション後、５×１０５個の細胞を、ＰＢＳで洗浄し、次いで、２μＬのＡｎｎｅｘｉｎ  Ｖ−ＦＩＴＣストック（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｉｎｃ）および１０μＬの２０μｇ／ｍＬ  ＰＩ（Ｓｉｇｍａ）を含有する結合緩衝液（１０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ、ｐＨ７．４、１５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ  ５ｍｍｏｌ／Ｌ  ＫＣｌ、１ｍｍｏｌ／Ｌ  ＭｇＣｌ２、１．８ｍｍｏｌ／ＬＣａＣｌ２）中で再懸濁した。遮光した領域で室温で１０分間インキュベーションした後、試料を、ＦＡＣＳｃａｎ（商標）（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）でのフローサイトメトリーによって定量化した。
【０２６９】
化合物Ｉを用いるＣＬＬ患者細胞の処理によって、アポトーシスが生じ、その結果は、図３に示されるように用量依存性であると考えられる。
【０２７０】
化合物Ｉ誘導性のアポトーシスは、図１９に示すデータのように、予後の劣る患者由来のＣＬＬ細胞で見られた。
【０２７１】
化合物Ｉ誘導性のアポトーシスはまた、図２０に示されるように、不応性の／再発性の患者由来のＣＬＬ細胞で有効であることが示された。
【０２７２】
（実施例４）
ＡＬＬ細胞株における化合物の効果
本実施例は、式Ｉの化合物が、Ａｋｔリン酸化の低減、ならびにＴ−ＡＬＬおよびＢ−ＡＬＬ（急性リンパ芽球性白血病）の両方の白血病細胞株で細胞死を伴う細胞増殖の低下を生じることを示す。細胞株の生存度アッセイは、ＡｌａｍａｒＢｌｕｅアッセイ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて行った。１００μＬの容積中の細胞（１ウェルあたり１×１０６個）を、９６ウェルの平底プレートに入れ、式Ｉの化合物（２×最終濃度で１ウェルあたり１００μＬ）または培地単独をこのプレートに添加した。全てを四連で行った。細胞を固定時間（４８時間）インキュベートした。インキュベーション後、１０μＬのＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（登録商標）を、各々のウェルに添加した。細胞を４時間インキュベートし、５３０〜５６０ｎｍでの光学密度を、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）Ｍ５プレートリーダー２００１を用いて得た。細胞生存度は、処理された細胞／コントロールのサンプルの間の吸収の割合として表現された。これらの結果を図４に示される表にまとめる。化合物Ｉに曝すことによって、種々のＡＬＬ細胞株で細胞生存度の実質的な減少、およびＡｋｔリン酸化の低下が生じる。
【０２７３】
（実施例５）
ＡＬＬの細胞周期に対する化合物の効果
本実施例は、式Ｉの化合物での急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）細胞株ＣＣＲＦ−ＳＢの処理が、Ｇ０／Ｇ１細胞周期停止を生じることを示す。正常な増殖条件下でのヨウ化プロピジウム染色したＣＣＲＦ−ＳＢ細胞の代表的な蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析、および式Ｉの化合物の存在下の増殖。Ｇ０−Ｇ１、Ｓ、およびＧ２−Ｍ期の細胞の平均割合は、ヒストグラフの下の表で計算される。結果を図５に示す。
【０２７４】
（実施例６）
乳癌細胞の増殖の阻害
本実施例は、式Ｉの化合物が乳癌細胞株の増殖を阻害することを示す。Ｔ４７ＤおよびＨＳ−５７８Ｔ細胞株を、血清に加えて、示した濃度の式Ｉの化合物の存在下で増殖させた。増殖は、ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（登録商標）アッセイ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）９６ウェルプレートによって三連のウェル中で測定した。増殖アッセイの結果は、平均細胞割合の値として表し、図６に示す。
【０２７５】
（実施例７）
卵巣癌細胞株の増殖の阻害
本実施例は、式Ｉの化合物が卵巣癌細胞株の増殖を阻害することを示す。ＩＧＲＯＶ−１およびＯＶＣＡＲ−３細胞株を、血清に加えて示した濃度の式Ｉの化合物も存在する下で増殖させた。増殖は、ＡｌａｍａｒＢｌｕｅアッセイ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）９６ウェルプレートによって三連のウェル中で測定した。増殖アッセイの結果は、平均細胞割合の値として表し、図７に示す。
【０２７６】
（実施例８）
Ａｋｔリン酸化の低減
本実施例によって、式Ｉの化合物は、構成的Ａｋｔリン酸化を示す造血系腫瘍細胞株における構成的Ａｋｔリン酸化を軽減することが示される。白血病およびリンパ腫細胞株の大きいパネルを、構成的Ａｋｔリン酸化について評価した。これらの細胞株は、Ｂ−リンパ腫、Ｔ−リンパ腫、ＡＬＬ、悪性組織球増殖症、ＤＬＢＣＬおよびＡＭＬに相当する。血清非依存性Ａｋｔリン酸化を示す細胞株を、式Ｉの化合物で２時間処理した。その後、細胞を溶解し、サイズ分画し、ホスホ−Ａｋｔ（Ｓｅｒ４７３）に対する抗体で免疫ブロットした。結果を図８に示す。Ａｋｔ（Ｓｅｒ４７３）の減少は、化合物Ｉに対して曝した後、全ての細胞株で達成された。
【０２７７】
（実施例９）
ＤＬＢＣＬに有効な化合物Ｉ
本実施例によって、化合物ＩがＰＩ３Ｋシグナル伝達をブロックし、かつびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞においてアポトーシスを誘導するという証拠が得られる。Ｐ１１０δは、図２６Ａで示されるようにＤＬＢＣＬ細胞株で発現される。図２６Ｂによって、化合物Ｉに対して曝すことで、いくつかのＤＬＢＣＬ細胞株でｐＡＫＴレベルが低下することが示される。
【０２７８】
（実施例１０）
乳癌細胞におけるアポトーシスの誘導
本実施例は、式Ｉの化合物が乳癌細胞株においてアポトーシスを誘導することを示す。ＨＳ−５７８Ｔ、Ｔ４７Ｄ、およびＭＣＦ７の細胞を、式Ｉの化合物または対応するＤＭＳＯ濃度を用いて２４時間処理した。アポトーシス細胞の割合は、Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ−ＦＩＴＣ／７ＡＡＤ染色によって決定した。下の左側の生存細胞（Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ−ＦＩＴＣ／ＰＩ陰性）；下の右側、初期アポトーシス細胞（Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ−ＦＩＴＣ陽性のみ）；上の右側、中後期のアポトーシス細胞（Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ−ＦＩＴＣ／７ＡＡＤ二重陽性）；および上の左側、後期アポトーシス／壊死（７ＡＡＤ陽性のみ）。各象限の細胞の割合は、下の左側の象限（生きた細胞）以外に示される。同様の結果をもたらす３つの異なる実験のうち１つの代表的な実験を図１０に示す。
【０２７９】
（実施例１１）
健常なボランティアにおける７日目の定常状態血液レベル
本実施例は、７日目の健常ヒト被験体の血液における式Ｉの化合物の濃度に関するデータを示す。この濃度は、この研究の７日目に式Ｉの化合物の５０、１００または２００ｍｇのＢＩＤの経口投与後、１２時間の期間にわたってモニターした。図１１では、投与から１２時間の期間にわたる薬物の血漿濃度を追跡している。薬物の最大濃度は、全ての用量について２時間内で達成される。この化合物の５０、１００、または２００ｍｇのＢＩＤの投与によって、少なくとも１２時間、好塩基球中でＰＩ３ＫδのＥＣ５０濃度を超える濃度レベルが生じる。
【０２８０】
さらに、１７〜４００ｍｇの式Ｉの化合物を健常ボランティアに投与した単回用量研究を行った。血液中の化合物の濃度を、投与から２４時間を超えて測定し、その結果を図２４Ａに示す。約６時間では、全ての投与用量について血中の化合物Ｉの濃度は、少なくとも約１００ｎＭである。約１２時間では、５０ｍｇ以上の用量について血中の化合物Ｉの濃度は５０ｎＭを超える。血中の化合物Ｉの最大濃度は投与の２時間内に達成される。
【０２８１】
別の実験では、平均の化合物Ｉの濃度を、健常ボランティア（Ｎ＝６）における５０ｍｇのＢＩＤ投薬の第７日に測定した。平均のトラフ濃度は、ＰＩ３ＫδのＥＣ５０よりも高く、平均のピーク濃度は、ＰＩ３ＫγのＥＣ５０よりも低かった（図２４Ｂ、全血好塩基球活性化アッセイで測定した場合）。本実施例は、５０ｍｇＢＩＤで投与された化合物Ｉの濃度範囲が、少なくとも１２時間、全血中で、ＰＩ３Ｋδ好塩基球活性化のＥＤ５０レベルを上回るが、ＰＩ３Ｋγ好塩基球レベル活性化の最小ＥＤ５０レベルよりも低いことを示す。
【０２８２】
下の表１によって、この研究における被験体の概要が得られ、ここでは式Ｉの化合物の単回用量（ＳＤ）または複数用量（ＭＤ）のいずれかが被験体に対して種々の量で投与される。「ｎ」値は、各々の群における被験体の数を指す。
【０２８３】
【表１】
2014510729.tif 000030
【０２８４】
（実施例１２）
マントル細胞リンパ腫を有する患者での病変に対する効果
本実施例は、式Ｉの化合物での１サイクルの処置（２８日間）後のマントル細胞リンパ腫を有する患者の病変の面積に関するデータを示す。６つの病変の面積を処置の前、および処置のサイクルの後に測定した。式Ｉの化合物の５０ｍｇ  ＢＩＤの２８日間の経口投与に対する応答によって、処置前の面積に比較した病変面積の減少が生じ、腫瘍負荷における４４％の減少が示される。その結果を図１２にみられる棒グラフにまとめる。
【０２８５】
（実施例１３）
処置に対するＣＬＬを有する患者の応答
本実施例は、式Ｉの化合物の経口投与での１サイクル（２８日）の処置後のＣＬＬを有する患者の血中のリンパ球絶対数（ＡＬＣ）の濃度に関するデータを提供する。血液ＡＬＣ濃度は、１サイクルの処置の完了後４週間の期間にわたって測定した。処置の結果としてリンパ球増加症における５５％の減少およびリンパ節腫脹の３８％の減少が観察された。ＡＬＣ濃度の顕著な減少が、第１週〜第２週の間に観察される（図１３）。
【０２８６】
（実施例１４）
健常ボランティアに対するリンパ腫患者の比較
本実施例は、リンパ腫患者における式Ｉの化合物の濃度を、正常な健常ボランティアに対して比較するデータを提供する。マントル細胞リンパ腫を有する患者における化合物の５０ｍｇ  ＢＩＤの経口投与の２８日目、血中の化合物の濃度を、投与後、６時間にわたって測定した。投与の第７日での正常な健常ボランティアにおける５０および１００ｍｇの経口投与の濃度も観察した。その結果を図１４にまとめる。従って、この化合物は、１サイクルの処置の経過にまたがって過剰に増大することもなく、患者が該処置サイクルの経過にまたがって代謝の増大によって耐性になることもない。
【０２８７】
（実施例１５）
種々のキナーゼにおける化合物Ｉの活性
本実施例は、表２にまとめるようなキナーゼのクラスにまたがる化合物ＩのＩＣ５０プロフィールを示す。ｐ１１０δに対して特に活性であるが、化合物Ｉはまた、ｐ１１０γに対しても活性であり、かつその化合物の示す高いＮＯＡＥＬレベルに起因して、ｐ１１０βに対して非毒性用量で治療上有用であるのに十分な活性でさえあった；一方で、ＩＩ−Ｖクラスのホスホイノシチドキナーゼに対して示す活性は小さかった。このようにδ選択性ではあるが、この化合物は、ｐ１１０γに対して臨床的に有用であるために、すなわち、シグナル伝達についてｐ１１０γに依拠するガンに対して有効であるために十分な活性を示し得る。なぜなら、他のイソ型、特にαイソ型に対して選択性であるままで、ｐ１１０γの阻害のための有効投薬量を上回る血漿レベルが達成され得るからである。
【０２８８】
【表２】
2014510729.tif 000031
【０２８９】
（実施例１６）
キノーム・ワイド（ｋｉｎｏｍｅ−ｗｉｄｅ）タンパク質キナーゼスクリーニングにおける化合物Ｉのオフターゲット活性がないこと
本実施例は、化合物Ｉがキノーム・ワイド・タンパク質キナーゼスクリーニングにおいてオフターゲット活性をほとんど有さないかまたは全く有さないことを示す。Ａｍｂｉｔ
ＫＩＮＯＭＥｓｃａｎ（商標）を用いて、３５０個を超えるタンパク質キナーゼのゲノム・ワイド・スクリーニングで、なんら活性を１０μＭで検出できなかった。このスクリーニングにおけるいくつかのキナーゼの例は、下の表３に示される。
【０２９０】
【表３】
2014510729.tif 000032
【０２９１】
（実施例１７）
ｐ１１０δに対する化合物Ｉの選択性
本実施例は、化合物Ｉがイソ型特異的細胞ベースアッセイで測定した場合、ｐ１１０δに選択的であることを示す。
【０２９２】
Ｓｗｉｓｓ−３Ｔ３線維芽細胞およびＲＡＷ−２６４を９６ウェル組織培養プレートに播種して、少なくとも９０％コンフルエンシーに到達させた。細胞を飢餓させてビヒクルまたは化合物Ｉの連続希釈液のいずれかを用いて２時間処理し、それぞれＰＤＧＦまたはＣ５ａを用いて刺激した。Ａｋｔリン酸化および総ＡＫＴをＥＬＩＳＡによって検出した。精製されたＢ細胞をビヒクルまたは化合物Ｉの連続希釈液のいずれかを用いて３０分間室温で処理し、その後、精製されたヤギ抗ヒトＩｇＭを添加した。結果を、ＩｇＭ架橋によって誘導される相対的な［３Ｈ］チミジン取り込みとして表す。
【０２９３】
【表４】
2014510729.tif 000033
【０２９４】
（実施例１８）
白血病およびリンパ腫細胞株におけるｐ１１０δの発現
本実施例は、ＰＩ３Ｋ  ｐ１１０δが広範な白血病およびリンパ腫細胞株で高度に発現されることを示す。
【０２９５】
ＰＩ３Ｋ  ｐ１１０δは、広範な白血病およびリンパ腫細胞株で増殖および生存を促進する。とりわけ検討された細胞型は、ＭＣＬ、ＤＬＢＣＬ、ＡＭＬ、ＡＬＬおよびＣＭＬである。
【０２９６】
リンパ腫および白血病細胞株のパネルにおけるＰＩ３Ｋ  ｐ１１０α、β、γおよびδの発現は、図１５に示す。１０６個の細胞由来のタンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分けて、α、β、γおよびδイソ型に特異的な抗体を用いるウエスタンブロットによって分析した。精製された組み換えｐ１１０タンパク質をコントロールとして用いた。抗アクチン抗体を用いて、サンプルの等しいローディングを評価した。ｐ１１０δは、構成的に高レベルで発現されたが、他のｐ１１０イソ型は極めて可変性であった。ＰＩＫ３ｐ１１０δは、Ｓｕｊｏｂｅｒｔ，ら、Ｂｌｏｏｄ  ２００５  １０６（３），１０６３〜１０６６に考察されるとおり、患者ＡＭＬ細胞で均一に発現されることが公知である。
【０２９７】
（実施例１９）
ｐ１１０δに対する化合物Ｉの阻害性効果
実施例１９では、ｐ１１０δの化合物Ｉによる阻害が、構成的な経路の活性化を有する、白血病およびリンパ腫の細胞株でＰＩ３Ｋシグナル伝達をブロックすることを示す。
【０２９８】
ＰＩ３Ｋ経路は、白血病およびリンパ腫細胞株で調節不全である場合が多い。細胞株のうち４８％、すなわち２７のうち１３が、構成的なｐ−ＡＫＴを有することが見出された。さらに、ＰＩ３Ｋ経路活性化は、ｐ１１０δに依存性である。化合物Ｉは、１３個の細胞株のうち１３個で構成的なＡＫＴリン酸化を阻害することが見出された。
【０２９９】
図９のＰＡＧＥの結果によって、構成的ＡＫＴリン酸化は、Ｂ細胞およびＴ細胞リンパ腫を含む１１個の細胞株の各々において化合物Ｉの存在によって阻害されたことが示される。細胞を１０μＭの化合物Ｉとともに２時間インキュベートした。細胞溶解液をＳＤＳ−ＰＡＧＥで泳動して、ＰＤＶＦ膜に移し、適切な抗体でプローブした。化合物Ｉは、１１個の細胞株のうち１１個で構成的ＡＫＴリン酸化を阻害することが見出された。Ｔ−ＡＬＬおよびＢ−ＡＬＬ細胞株についての追加の細胞株データを図２７に示す。ある範囲の濃度の化合物Ｉ（０．１μＭ〜１０μＭ）に曝された後のＡｋｔおよびＳ６リン酸化の低下は、デンシトメトリーによって定量し、パーセントの変化として表わした（図２８）。
【０３００】
（実施例２０）
化合物Ｉは、白血病細胞株において増殖およびアポトーシスを阻害する。
【０３０１】
実施例２０は、化合物Ｉが白血病細胞株における増殖を阻害し、かつアポトーシスを誘導することを示す。図１６Ａ〜図１６Ｂは、２４時間にわたる化合物Ｉでの処理が、用量依存性の方式で細胞生存度を低下させることを示す。
【０３０２】
ＡＬＬ細胞株での増殖アッセイ（ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（登録商標））は１０％のＦＢＳ血清の存在下で増殖させ、測定値は、２４時間でとった。増殖は、９６ウェルプレート中で三連のウェルで測定した。化合物ＩによるＰＩ３Ｋシグナル伝達の阻害で、細胞周期進行のブロック、および／または細胞死が生じた。６つの白血病細胞株の各々では、生存度は、１０μＭの濃度の化合物Ｉで４０〜５０％まで低下した（図１６Ａ）。
【０３０３】
化合物Ｉによるアポトーシスの誘導。細胞を、ＤＭＳＯ（ビヒクル）、１μＭまたは１０μＭの化合物Ｉを用いて２４時間処理した。アポトーシス細胞の割合は、Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ−ＦＩＴＣ／７ＡＡＤ染色によって決定した。同様の結果を生じる異なる実験のうち代表的な１つの実験を図１６Ｂに示す。
【０３０４】
（実施例２１）
ＣＬＬ細胞におけるｐ１１０δの発現
本実施例は、患者のＣＬＬ細胞におけるＰＩ３Ｋのｐ１１０δおよびｐ１１０  δのイソ型発現を示す。
【０３０５】
ＰＩ３Ｋ媒介性のシグナル伝達経路は、ＣＬＬに関係している。これらの経路は、細胞増殖、アポトーシスの防止および細胞遊走においてある役割を有する。患者のＣＬＬ細胞においてＰＩ３Ｋイソ型発現を決定するために労力を払った。
【０３０６】
ＣＬＬ患者のデモグラフィックスを下の表５にまとめる。
【０３０７】
【表５】
2014510729.tif 000034
【０３０８】
図１７Ａ〜図１７ＤのＰＡＧＥ画像は、患者Ａ〜ＥのＣＬＬ細胞におけるｐ１１０α、ｐ１１０δ、ｐ１１０β、およびｐ１１０γの発現を比較する。ｐ１１０δおよびｐ１１０γは、他のＰＩ３Ｋイソ型に比較して各々の患者で発現される。
【０３０９】
（実施例２２）
化合物Ｉはカスパーゼ３およびＰＡＲＰの切断を誘導する
本実施例は、化合物Ｉがカスパーゼ３およびＰＡＲＰの切断を誘導したことを示す。図１８Ａ〜図１８Ｂは、１、１０μＭの化合物Ｉまたは２５μＭのＬＹ２９４００２の存在下におけるカスパーゼ３およびＰＡＲＰ（ポリ（ＡＤＰ）リボースポリメラーゼ）切断の結果を示す。
【０３１０】
さらなる実験によって、化合物Ｉがカスパーゼ２およびＰＡＲＰ切断を誘導するという証拠が得られる。細胞を、化合物Ｉまたはビヒクル単独を用いて２４時間培養した。その後、細胞を溶解して、サイズ分画し、ＦＬＩＰに対する抗体を用いてイムノブロットした（図２９）。さらに、丸ごとの細胞溶解液を、ＭＤＳ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）マルチスポット９６ウェル  ４スポットプレート（総カスパーゼ−３、切断カスパーゼ３、切断ＰＡＲＰ、およびＢＳＡでコーティング）に添加した。タンパク質を、ＳＵＬＦＯ−ＴＡＧ試薬で標識した抗体で検出して、定量化した。化合物Ｉの５または１０μＭに対して曝した際、カスパーゼ３およびＰＡＲＰの切断において用量依存性の応答が達成された。
【０３１１】
（実施例２３）
化合物ＩはＰＩ３Ｋシグナル伝達をブロックする
本実施例は、化合物Ｉが患者のＡＭＬ細胞におけるＰＩ３Ｋシグナル伝達をブロックすることを示す。ＰＩ３Ｋδは、ＡＭＬ患者細胞におけるシグナル伝達に関与する。図２１では、０．１、１．０、１０μＭの化合物Ｉの有無におけるホスホ−Ａｋｔ産生の結果が示される。これによって、化合物Ｉが患者のＡＭＬ細胞においてホスホ−Ａｋｔ産生を低下させるという証拠が得られる。
【０３１２】
（実施例２４）
好塩基球に基礎をおく全血中でのＰＩ３Ｋシグナル伝達の測定
本実施例は、ＣＤ６３表面発現の誘導によるフローサイトメトリーを用いる好塩基球中でのＰＩ３Ｋシグナル伝達の測定のための全血アッセイを示す。
【０３１３】
好塩基球でのＰＩ３Ｋシグナル伝達の阻害によって、化合物Ｉが有用な薬力学マーカーであることが可能になる。ＰＩ３Ｋシグナル伝達は、ＣＤ６３表面発現によってモニターされる。詳細には、ｐ１１０δは、ＦＣεＲ１シグナル伝達を媒介し、かつｐ１１０γがｆＭＬＰレセプターシグナル伝達を媒介する。好塩基球でのＰＩ３Ｋ媒介性のＣＤ６３発現のフローサイトメトリー分析は、以下の逐次工程を包含する：
１．末梢血を収集する
２．好塩基球刺激（ｆＭＬＰまたは抗−ＦＣεＲ１  Ｍａｂ）
３．好塩基球を標識する（抗ＣＣＲ３−ＦＩＴＣおよび抗ＣＤ６３−ＰＥ）
４．細胞を溶解しかつ固定する
５．フローサイトメトリーによる分析
図２２Ａ〜図２２Ｃは、Ａ）刺激なし、Ｂ）抗ＦＣεＲ１での刺激、またはＣ）ｆＭＬＰでの刺激の結果を比較する。
【０３１４】
図２３は、化合物Ｉは、ｐ１１０δ媒介性のシグナル伝達が最も重要である場合、特に活性であるが、ｐ１１０γが利用される場合も比較的活性であることを示す：これによって、ＳＤ６３発現における５０％低下が、ｐ１１０δ試験について＜＜１μＭ、およびｐ１１０γ試験について約１０μＭで達成された。好塩基球活性化を、Ｆｌｏｗ２ＣＡＳＴ（登録商標）キットを用いてヒト全血で測定した。全血サンプルを、抗ＦｃεＲＩのｍＡｂまたはｆＭＬＰのいずれかでの好塩基球の活性化の前に、ビヒクルまたは化合物Ｉの連続希釈液のいずれかで処理した。細胞を、抗ヒトＣＤ６３−ＦＩＴＣおよび抗ヒトＣＣＲ３−ＰＥのｍＡｂの組み合わせで染色した。ゲートした好塩基球集団内のＣＤ６３陽性細胞のパーセントは、異なる処理群で決定し、ビヒクルコントロールに対して正規化した。
【０３１５】
（実施例２５）
化合物ＩはＣＬＬ患者におけるリンパ節腫脹を軽減する。
【０３１６】
本実施例によって、ｄｅｌ［１７ｐ］を有するＣＬＬ患者での大きいリンパ節腫脹のサイズの減少の証拠が得られる。ｄｅｌ（１７ｐ）を有する患者は、腋窩のリンパ節腫脹があり、これをコンピューター断層撮影（ＣＴ）によって画像化して、５．９ｃｍ×４．１ｃｍというベースラインの測定値を得た（図４０Ａ）。化合物Ｉでの処置の１サイクル後、リンパ節腫脹は、３．８×１．８ｃｍの寸法まで軽減した（図４０Ｂ）。１サイクルの処置は、化合物Ｉの２００ｍｇ  ＢＩＤまたは３５０ｍｇ  ＢＩＤのいずれかの連続経口投与で２８日間であった。
【０３１７】
（実施例２６）
被験体のグルコースおよびインスリンレベルに対する化合物Ｉの限られた効果
本実施例は、化合物Ｉでの処置が、グルコースおよびインスリンのレベルに対して影響がほとんどないかまたは全くないことを示す。化合物Ｉは、最大１０日間までの期間にわたって被験体に対して５０〜２００ｍｇ量をＢＩＤで投与した。血液のグルコースおよびインスリンの濃度を経時的に測定し、図２５Ａ〜図２５Ｂに示されるようにプラシーボの結果と比較した。
【０３１８】
血中グルコース濃度は、さらに最高用量の化合物Ｉでの１０日間の処置の後に定常のままであった。インスリンレベルは、化合物Ｉでの７日間の処置後、正常範囲内のままであった。これによって、化合物Ｉがグルコースおよびインスリンのレベルに対して効果をほとんどまたは全く有さないという証拠が得られる。
【０３１９】
（実施例２７）
材料および方法
本実施例は、多発性骨髄腫の処置における化合物Ｉの使用に関連する、実施例２８〜３５に記載の実験を行う材料および方法についての情報を提供する。
【０３２０】
材料
ｐ１１０δインヒビター化合物Ｉおよび化合物ＩＩは、Ｃａｌｉｓｔｏｇａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，（Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）から提供された。用いられる化合物ＩおよびＩＩのサンプルは、９５％超がＳ鏡像異性体であった。化合物Ｉを、ジメチルスルホキシド中に１０ｍＭで溶解し、インビトロ研究のために−２０℃で保管した。化合物ＩＩは、１％のカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）／０．５％  Ｔｗｅｅｎ  ８０中に溶解して、インビボの研究のために４℃で保管した。組み換えヒトＰ１１０α、β、γおよびδは、０．１％ＢＳＡを含有する無菌のリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）で再構成した。ボルテゾミブは、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）から提供された。３−メチルアデニンは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入した。
【０３２１】
細胞培養
Ｄｅｘ−感受性（ＭＭ．１Ｓ）および抵抗性（ＭＭ．１Ｒ）のヒトＭＭ細胞株は、Ｓｔｅｖｅｎ  Ｒｏｓｅｎ博士（Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔｅｒｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）から贈呈された。Ｈ９２９、ＲＰＭＩ８２２６、およびＵ２６６ヒトＭＭ細胞株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手した。メルファラン抵抗性ＲＰＭＩ−ＬＲ５およびドキソルビシン（Ｄｏｘ）−抵抗性のＲＰＭＩ−Ｄｏｘ４０細胞株は、Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｄａｌｔｏｎ博士（Ｌｅｅ  Ｍｏｆｆｉｔｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｔａｍｐａ，ＦＬ）から贈呈された。ＯＰＭ１形質細胞白血病細胞は、Ｅｄｗａｒｄ  Ｔｈｏｍｐｓｏｎ博士（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｂｒａｎｃｈ，Ｇａｌｖｅｓｔｏｎ）から贈呈された。ＩＬ−６依存性のヒトＭＭ細胞株ＩＮＡ−６は、Ｒｅｎａｔｅ  Ｂｕｒｇｅｒ博士から提供された（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｋｉｅｌ，Ｋｉｅｌ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。ＬＢヒトＭＭ細胞株は、研究室で樹立された。表現型分析では、細胞遺伝学的異常は示されなかった。表現型分析を表６に示す。フローサイトメトリー分析によって規定された、ＬＢ細胞株のＣＤ発現プロフィール。
【０３２２】
【表６】
2014510729.tif 000035
【０３２３】
全てのＭＭ細胞株を、ＲＰＭＩ１６４０培地中で培養した。骨髄間質細胞（ＢＭＳＣ）は、１５％ウシ胎仔血清，２ｍＭのＬ−グルタミン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、および１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｓｉｇｍａ）中で培養した。健常ボランティアから収集した血液サンプルを、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（商標）勾配によって処理して、末梢血単核球（ＰＢＭＮＣ）を得た。患者のＭＭおよびＢＭ細胞は、インフォームド・コンセントをヘルシンキ宣言およびＤａｎａ−Ｆａｒｂｅｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）の治験審査委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄ）による承認を通じて得た後に、ＢＭサンプルから入手した。ＢＭ単核球は、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（商標）密度沈降を用いて分離し、形質細胞を、抗ＣＤ１３８磁気活性化細胞分離マイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡ）での陽性選択によって精製した（＞９５％ＣＤ１３８＋）。腫瘍細胞はまた、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ陰性選択システム（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ，Ｃａｎａｄａ）を用いてＭＭ患者のＢＭからも精製した。
【０３２４】
増殖阻害アッセイ
ＭＭ細胞株、ＰＢＭＣ、およびＢＭＳＣの増殖に対する化合物Ｉの増殖阻害性効果を、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニル四ナトリウム臭化物（ＭＴＴ；Ｃｈｅｍｉｃｏｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｔｅｍｅｃｕｌａ，ＣＡ）色素吸光度を測定することによって評価した。
【０３２５】
ＢＭにおけるパラクリンＭＭ細胞増殖に対する化合物Ｉの効果
ＭＭ細胞（２×１０４細胞／ウェル）を、薬物の有無において、ＢＭＳＣコーティングした９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）中で４８時間培養した。ＤＮＡ合成は、［３Ｈ］−チミジン（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）取り込みによって、４８時間の培養の最後の８時間の間に［３Ｈ］−チミジン（０．５μＣｉ／ウェル）を添加することによって測定した。全ての実験は、四連で行った。
【０３２６】
Ｐ１１０δ発現の一時的なノックダウン
ＩＮＡ−６細胞およびＬＢ細胞を、Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ  Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ  Ｋｉｔ  Ｖ（Ａｍａｘａ  ＢＩｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｇａｉｔｈｅｒｂｕｒｇ，ＭＤ）を用いてｓｉＲＮＡ  ＯＮ−ＴＡＲＧＥＴプラスＳＭＡＲＴプールＰ１１０δまたは非特異的なコントロール二重鎖（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ  Ｌａｆａｙｅｔｔｅ，Ｃｏ）を用いて一時的にトランスフェクトした。
【０３２７】
免疫蛍光
生きているＭＭ細胞（２．５×１０４）を、サイトスピンシステム（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｈａｎｄｏｎ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）を用いて５分間５００ｒｐｍで遠心分離によってガラススライド上にペレットにした。細胞を冷無水アセトンおよびメタノール中で１０分間固定した。固定後、細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で洗浄し、次いでＰＢＳ中の５％ＦＢＳを用いて６０分間ブロックした。次いで、スライドを抗ＣＤ１３８抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，ＣＡ）とともに４℃で２４時間インキュベートし、ＰＢＳ中で洗浄して、ヤギ抗マウスＩｇＧとともに４℃で１時間インキュベートし、Ｎｉｋｏｎ  Ｅ８００蛍光顕微鏡検査を用いて分析した。
【０３２８】
アクリジンオレンジ染色による酸性小胞性オルガネラ（Ａｃｉｄｉｃ  Ｖｅｓｉｃｕｌａｒ  Ｏｒｇａｎｅｌｌｅｓ）（ＡＶＯ）の検出および定量化
自食作用は、細胞質タンパク質の隔離およびＡＶＯの発達によって特徴付けられる。化合物Ｉまたは３ＭＡで処理した細胞においてＡＶＯを検出および定量化するために、生体染色を、アクリジン・オレンジを１μｇ／ｍｌの最終濃度で用いて１５分間行った。サンプルを蛍光顕微鏡下で試験した。
【０３２９】
血管形成アッセイ
化合物Ｉの抗血管形成活性は、インビトロでＡｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ，Ｔｅｍｅｃｕｌａ，ＣＡ）を用いて決定した。ＨＵＶＥＣおよび内皮増殖培地は、Ｌｏｎｚａ（Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）から入手した。ＨＵＶＥＣは、重合したマトリクスゲル上で３７℃で化合物Ｉとともに培養した。８時間後、管形成は、Ｌｅｉｋａ  ＤＭ  ＩＬ顕微鏡検査（Ｌｅｉｃａ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｗｅｔｚｌａｒ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて評価し、ＩＭ５０ソフトウェア（Ｌｅｉｃａ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）で分析した。ＨＵＶＥＣ細胞遊走および再配置を可視化して、分岐ポイントの数をカウントした。
【０３３０】
ウエスタンブロッティング
ＭＭ細胞を、化合物Ｉの有無において培養し；収集し；洗浄し；ラジオイムノ沈殿アッセイ（ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏ  ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ  ａｓｓａｙ）（ＲＩＰＡ）緩衝液、２ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、５ｍ  Ｍ  ＮａＦ、１ｍＭ  フェニルメチルスルホニルフルオライド（５ｍｇ／ｍｌ）を用いて溶解した。全細胞溶解液を、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）分離に供し、Ｐｕｒｅ  Ｎｉｔｒｏｃｅｌｌｕｌｏｓｅ膜（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）に転写して、抗ＡＫＴ、ホスホ（ｐ）−ＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３，Ｔｈｒ  ３０８）、ＥＲＫ１／２、Ｐ−ＥＲＫ１／２、Ｐ−ＰＤＫ１、ＳＴＡＴ、Ｐ−ＳＴＡＴ、Ｐ−ＦＫＲＨＬ、Ｐ−７０Ｓ６Ｋ、ＬＣ３、およびＰＩ３Ｋ／ｐ１１０  α  Ａｂｓ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）；抗ｐ１１０β，ＰＩ３Ｋ／ｐ１１０δ、グリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）、α−チューブリンおよびアクチンＡｂｓ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＣＡ）；ならびに抗ｐ１１０γ  Ａｂ（Ａｌｅｘｉｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）：ならびに抗ＬＣ３  Ａｂ（Ａｂｇｅｎｔ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）でイムノブロットした。
【０３３１】
ＥＬＩＳＡ
ＭＭ細胞と共培養したヒトＢＭＳＣによるサイトカイン分泌を、ＥＬＩＳＡによって評価した。ＢＭＳＣは、種々の濃度の化合物Ｉとともに、ＩＮＡ−６細胞の有無において、９６ウェルプレート中で培養した。４８時間後、上清を回収して、−８０℃で保管し、サイトカインを、ＤｕｏセットＥＬＩＳＡ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｋｉｔｓ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を用いて測定した。全ての測定は、三連で行った。
【０３３２】
ヒトサイトカインアレイ
培養上清中のサイトカインレベルは、Ｐｒｏｔｅｏｍｅ  Ｐｒｏｆｉｌｅｒ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ａｒｒａｙｓ  Ｐａｎｅｌ  Ａ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を用いて評価し、ＢＭＳＣとの共培養物由来の上清を、製造業者の指示に従って、３７のサイトカインに対するＡｂを整列させた膜とともに４時間インキュベートした。
【０３３３】
ヒトＭＭのマウス異種移植片モデル
ＣＢ１７  ＳＣＩＤマウス（４８〜５４日齢）を、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）から購入した。全ての動物研究は、Ｄａｎａ−Ｆａｒｂｅｒ  Ｃａｎｃｅｒ  ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＡｎｉｍａｌ  Ｅｔｈｉｃｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認されたプロトコールによって行った。マウスには、右脇腹に、１００μＬ  ＲＰＭＩ−１６４０中の３×１０６  ＬＢ細胞を皮下注射した。腫瘍が明白であった場合、マウスを毎日２回１０ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇを胃管投与される処置群；およびビヒクル単独を投与されるコントロール群では７匹のマウスに割り当てた。最長の直交腫瘍直径のキャリパー測定を、１日おきに行って、楕円の３Ｄ容積を示す以下の式：４／３×（幅／２）２×（長さ／２）を用いて腫瘍容積を推定する。動物は、腫瘍が２ｃｍに達するかまたはマウスが瀕死とみられた場合に屠殺した。生存は、処置の初日から死亡まで評価した。腫瘍増殖は、処置の初日から最初の屠殺の日（これは、コントロール群では１２日、および処置群では１７日および１９日）までキャリパー測定を用いて評価した。この画像は、キャノンＩＸＹデジタル７００カメラで撮影した。腫瘍画像のエキソビボ分析は、ＬＥＩＣＡ  ＤＭ  ＩＬ顕微鏡およびＬＥＩＣＡ  ＤＦＣ３００  ＦＸカメラを４０ｕ／０．６０（Ｌｅｉｃａ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で用いて得た。
【０３３４】
ヒト胎児の骨移植片を、ＣＢ１７  ＳＣＩＤマウス（ＳＣＩＤ−ｈｕ）に移植した。骨移植４週後、２．５×１０６個のＩＮＡ−６細胞を、１００μｌの最終容積のＲＰＭＩ−１６４０培地中で移植片のヒトＢＭ腔に直接注射した。ＩＮＡ−６細胞由来の可溶性ヒトＩＬ−６レセプター（ｓｈｕＩＬ−６Ｒ）のレベルの増大を、ＳＣＩＤ−ｈｕマウスにおけるＭＭ細胞増殖および疾患の負荷の指標として用いた。マウスは、ＩＮＡ−６細胞注射の約４週後測定可能な血清ｓｈｕＩＬ−６Ｒを生じ、次いで１０もしくは３０ｍｇ／ｋｇの薬物またはビヒクル単独のいずれかを７週間毎日与えられた。血液サンプルを収集し、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ，Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ  ＭＮ）を用いてｓｈｕＩＬ−６Ｒレベルについて評価した。
【０３３５】
統計学的分析
統計学的有意性は、ダン多重比較試験によって決定した。最小レベルの有意性はｐ＜０．０５であった。生存は、カプラン・マイヤー曲線およびログ・ランク分析を用いて評価した。化合物Ｉおよびボルテゾミブの併用効果は、ＣａｌｃｕＳｙｎソフトウェアプログラム（Ｂｉｏｓｏｆｔ，Ｆｅｒｇｕｓｏｎ，ＭＯ）を用いるアイソボログラム分析によって分析した；併用指数（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ）（ＣＩ）＜０．７は、相乗効果を示す。
【０３３６】
（実施例２８）
ＭＭ細胞におけるｐ１１０δの発現
本実施例によって、ｐ１１０δが患者ＭＭ細胞で高度に発現されることが示される。ＰＩ３Ｋ／ｐ１１０発現を評価するために、Ａｂを、これらのイソ型に対して特異的な免疫反応性を有する組み換えヒトＰＩ３Ｋ／ｐ１１０α、β、γ、およびδのタンパク質に対して用いた。１１ＭＭ細胞株（ＭＭ．１Ｓ、ＯＰＭ１、ＯＰＭ２、ＲＰＭＩ８２２６、ＤＯＸ４０、ＬＲ５、ＭＭ．１Ｒ、Ｕ２６６、ＩＮＡ−６、Ｈ９２９、およびＬＢ）におけるｐ１１０δの発現、および２４例の患者ＭＭサンプルを評価して、イムノブロットを図３０Ａおよび３０Ｂに示す。図３０Ａは、特定の抗体を用いるイムノブロットによって検出したＭＭ細胞株におけるｐ１１０−α、−β、−γ、および−δの発現を示す。抗−α−チューブリンＭＡｂは、ローディングコントロールとして働いた。患者ＭＭ細胞中のｐ１１０δは、抗Ｐ１１０δ  Ａｂを用いるイムノブロットによって検出した（図３０Ｂ）。
【０３３７】
抗−ＧＡＰＤＨ  ＭＡｂは、ローディングコントロールとして働いた。ＩＮＡ−６およびＬＢ細胞は強力にｐ１１０δを発現したが、ＭＭ．１Ｓ、ＯＰＭ１、ＭＭ．１Ｒ、Ｄｏｘ４０、Ｕ２６６またはＨ９２９は、ｐ１１０δ発現を欠乏した（図３０Ａ）。
【０３３８】
ＭＭ．１ＳおよびＬＢ細胞におけるｐ１１０δ発現は、免疫蛍光分析によって確認した（図３０Ｃ）。ＳＤＳサンプル緩衝液中のヒト組み換えＰ１１０−α、−β、−γ、−δのタンパク質は、ゲル上でのローディングの前に３分間加熱した。（１レーンあたり１０〜２０μｇ）。組み換えヒトＰ１１０−α、−β、−γ、−δのタンパク質は、イムノブロット分析によって検出した。Ｐ１１０δのレベルは、Ｐ１１０  δ特異的なＦＩＴＣ結合体化二次抗体を用いてＭＭ１ＳおよびＬＢ細胞で測定した。Ｐ１１０δは緑に染色し、核酸（ＤＡＰＩ）は青く染色した。
【０３３９】
ウエスタンブロットは、ｐ１１０δ発現と他のイソ型（α、βおよびγ）の発現との間の相関は明らかにならなかった。重要なことに、全ての患者ＭＭ細胞はまた、ｐ１１０δを発現した（図３０Ｂ）。
【０３４０】
（実施例２９）
ＭＭ細胞における化合物Ｉの細胞毒性
本実施例は、化合物Ｉが、ｐ１１０δを有する細胞に対する選択的細胞毒性を有することを示す。詳細には、化合物Ｉは強力に、ｐ１１０δ陽性ＭＭ細胞ならびに初代患者ＭＭ細胞において細胞毒性を誘導し、健常ドナー由来の末梢血単核球において細胞毒性なしであって、このことは好ましい治療指数を示唆する。
【０３４１】
ＭＭ細胞におけるｐ１１０δノックダウンの増殖阻害効果を評価した。ＬＢおよびＩＮＡ−６細胞を、Ｐ１１０δ  ｓｉＲＮＡ（Ｓｉ）またはコントロールのｓｉＲＮＡ（Ｍｏｃｋ（モック））を用いてトランスフェクトした。２４時間後、Ｐ１１０  δの発現は、ウエスタンブロット分析によって決定した（図３１Ａを参照のこと）。ＩＮＡ−６細胞を、ｐ１１０δ  ｓｉＲＮＡまたはコントロールのｓｉＲＮＡでトランスフェクトし、次いで７２時間培養した。細胞増殖をＭＴＴアッセイによって評価した（図３１Ｂを参照のこと）。データは、コントロールの倍数として表現される、三連の培養の平均値±ＳＤを示す。ｐ１１０δ  ｓｉＲＮＡでのトランスフェクションは、ｐ１１０δを下方制御し、ＭＭ細胞増殖を７２時間で阻害したが、ただしモックｓｉＲＮＡでのトランスフェクションではそうではなかった（図３１Ａおよび３１Ｂ）。ＭＭ細胞株、ＰＢＭＣおよび患者のＭＭ細胞においてｐ１１０δ特異的低分子インヒビター化合物Ｉの増殖阻害性効果を評価した。
【０３４２】
化合物Ｉは、用量依存性および時間依存性の方式で、ＬＢおよびＩＮＡ−６  ＭＭ細胞（ｐ１１０δ陽性）に対する細胞毒性を誘導した；対照的にｐ１１０δ陰性の細胞株では細胞毒性は最小であったことに注意（図３１Ｃ）。図３１Ｃについての凡例：ＬＢ（□）、ＩＮＡ−６（△）、ＲＰＭＩ  ８２２６（○）、ＯＰＭ２（◇）、Ｈ９２９（●）、Ｕ２６６（◆）、ＲＰＭＩ−ＬＲ５（▲）およびＯＰＭ１（■）ＭＭ細胞を、化合物Ｉの有無において４８時間培養した。
【０３４３】
重要なことに、化合物Ｉはまた、最大２０μＭまでの濃度で４例の健常ボランティア由来のＰＢＭＣ中で細胞毒性なしに（図３１Ｅ）、患者ＭＭ細胞に対する細胞毒性を誘導した（図３１Ｄ）。陰性選択によってＢＭから単離された患者のＭＭ細胞を、化合物Ｉで４８時間培養した。健常ドナーから単離された末梢血単核球を化合物Ｉとともに７２時間培養した。データは、未処置のコントロールに対する割合として表す、三連の培養物のＭＴＴアッセイによって評価した、平均値±ＳＤ生存度を示す。これらの結果、化合物Ｉに対する感受性は、Ｐ１１０δ発現に関連していることが強力に示唆され、好ましい治療ウインドウが示唆される。
【０３４４】
化合物Ｉによって誘導される細胞毒性がアポトーシスを介するか否かを決定するために、ウエスタンブロット分析によってカスパーゼおよびＰＡＲＰの切断を検査した。ＩＮＡ−６細胞を化合物Ｉ（０〜５μＭ）とともに１２０時間培養した。全細胞溶解液を、抗カスパーゼ−３、−８、−９、ＰＡＲＰ、およびα−チューブリンＡｂを用いるイムノブロットに供した。ＦＬは、全長タンパク質を示し、ＣＬは切断タンパク質を示す。化合物Ｉで１２０時間処理したＩＮＡ−６  ＭＭ細胞では、カスパーゼ−８、カスパーゼ−９、カスパーゼ−３およびＰＡＲＰの切断の有意な増大が観察された（図３１Ｆ）。これらの結果、化合物Ｉによって誘導される細胞毒性は、少なくとも一部は、カスパーゼ依存性（内因性および外因性の両方）のアポトーシスを介して媒介されることが示される。
【０３４５】
（実施例３０）
化合物ＩによるＡＫＴおよびＥＲＫリン酸化の阻害
本実施例は、化合物ＩによるＡＫＴおよびＥＲＫリン酸化の阻害を示す。
【０３４６】
ＰＩ３Ｋの重要な下流エフェクターは、セリン／トレオニンタンパク質キナーゼＡＫＴであり、これは、キナーゼドメインの活性化ループにおけるＴｈｒ３０８およびＣ末端テールにおけるＳｅｒ４７３のリン酸化によって活性化される。両方の部位のリン酸化には、ＡＫＴのＮ末端プレクストリン相同性ドメインとＰＩ３Ｋによって生成された膜ホスホイノシチドとの間の相互作用が必要である。化合物Ｉが両方のドメインを阻害することが示され、これによってＰ１１０δはＭＭ細胞株におけるＰＩ３Ｋシグナル伝達を担う主要なイソ型であることが示唆される。
【０３４７】
化合物ＩによるＩＮＡ−６細胞中のＡＫＴおよびＥＲＫ経路の阻害を調べた。ＩＮＡ−６細胞を、化合物ＩまたはＬＹ２９４００２を用いて１２時間培養した（図３２Ａ）。アクチンＡｂをローディングコントロールとして用いた。ＩＮＡ−６およびＭＭ．１Ｓ細胞を、化合物Ｉ（０、０．２５、１．０、５．０μＭ）とともに６時間培養した（図３２Ｂ）。ＬＢおよびＩＮＡ−６細胞を、化合物Ｉとともに０〜６時間培養した（図３２Ｃ）。細胞丸ごとの溶解液を、ＡＫＴ、Ｐ−ＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３およびＴｈｒ３０８）、ＥＲＫ１／２、Ｐ−ＥＲＫ１／２、Ｐ−ＰＤＫ１、およびＰ−ＦＫＲＨＬ  抗体を用いてイムノブロットに供した。α−チューブリンをローディングコントロールとして用いる。
【０３４８】
化合物Ｉは、ｐ１１０δ陽性のＩＮＡ−６細胞におけるＡＫＴおよびＥＲＫ１／２のリン酸化を有意にブロックしたが（図３２Ａ）、Ｐ１１０δの発現が低いＭＭ．１Ｓ細胞中のＡＫＴまたはＥＲＫのリン酸化には影響しなかった（図３２Ｂ）。化合物Ｉはまた、時間依存性および用量依存性の様式でＩＮＡ−６およびＬＢ  ＭＭ細胞において上流ＰＤＫ−１および下流ＦＫＨＲＬのリン酸化を有意に阻害し（図３２Ｃ）、さらに、これらの細胞においてＰＩ３Ｋ／ＡＫＴおよびＥＲＫ経路の両方の阻害が確認された。
【０３４９】
（実施例３１）
化合物ＩはＡＶＯ発達および自食作用を誘導する
本実施例は、化合物Ｉがアポトーシスおよび自食作用の両方を誘導する能力を示す。
【０３５０】
ＡＫＴは、自食作用を調節し、これによってＬＢおよびＩＮＡ−６  ＭＭ細胞において自食作用を誘導することにおける化合物Ｉの調査を行った。
【０３５１】
ＩＮＡ−６およびＬＢ  ＭＭ細胞を、５μＭの化合物Ｉで６時間処理した。化合物Ｉの処理は、蛍光顕微鏡検査または透過電子顕微鏡検査によって証明される、ＬＢおよびＩＮＡ−６細胞におけるＬＣ３蓄積を誘導した。オートファゴソーム形成は、ＬＣ３の蓄積によって規定され；矢印はオートファゴソームを示す（図３３Ａ）。
【０３５２】
ＩＮＡ−６細胞を、５μＭの化合物Ｉまたは血清飢餓を用いて６時間処理し、１μｇ／ｍＬのアクリジン・オレンジで１５分間染色し、蛍光顕微鏡検査によって分析した（図３３Ｂ）。
【０３５３】
ＬＣ３およびベクリン−１タンパク質レベルは、化合物Ｉを用い、３−ＭＡの有無において処理したＩＮＡ−６細胞由来の溶解液のＬＣ３およびベクリン−１抗体を用いてウエスタンブロットによって決定した（図３３Ｃ）。ＧＡＰＤＨは、ローディングコントロールとして機能した。
【０３５４】
免疫蛍光分析は、化合物Ｉ（５μＭ、６時間）処理によって誘導されたＩＮＡ−６およびＬＢ細胞において顕著に増大したＬＣ３染色を示した（図３３Ａ）。電子顕微鏡分析によってまた、化合物Ｉで処理されたＭＭ細胞における自己貪食空胞（矢印）の増大が示された。自食作用は酸性小胞オルガネラ（ａｃｉｄｉｃ  ｖｅｓｉｃｕｌａｒ  ｏｒｇａｎｅｌｌｅ）（ＡＶＯ）の発達として特徴付けられるので、アクリジン・オレンジ染色を行った。図３３Ｂに示されるとおり、アクリジン・オレンジでの生体染色によって、化合物Ｉで処理したＬＢおよびＩＮＡ−６細胞におけるＡＶＯの発達が明らかになった。さらに、化合物Ｉでの６時間の処理後、ＩＮＡ−６ＭＭ細胞中で、顕著に増大したＬＣ３−ＩＩおよびベクリン１タンパク質が検出され、これは３−ＭＡ自食作用インヒビターによってブロックされた（図３３Ｃ）。
【０３５５】
ＩＮＡ−６およびＬＢ細胞における細胞毒性は、最大１００μＭまでの濃度の３−ＭＡで誘導されなかった（図３３Ｄ）。ｐ１１０δ陽性ＬＢ細胞（◆）を３−ＭＡ（０〜１００μＭ）を用いて２４時間処理した。データは三連の培養の平均（±ＳＤ）である。
【０３５６】
これらの結果、化合物Ｉは、カスパーゼ／ＰＡＲＰ切断の誘導よりも早期の時点でＡＶＯおよび自食作用の発達を誘導することが示される。
【０３５７】
自食作用は、細胞成分を分解し、細胞の構成要素を再循環し、種々の細胞ストレスに応答する。本実施例では、自食作用の特質であるＬＣ３−ＩＩが、ｐ１１０δ陽性ＭＭ細胞株における化合物Ｉの処理によって誘導される。重要なことに、化合物Ｉでの処理は、自食作用の顕著な増大（細胞質における自己貪食空胞の存在によって証明される）、ＡＶＯの形成、オートファゴソームを有するＬＣ３の微小管関連タンパク質Ｉの膜会合、およびＬＣ３−ＩＩタンパク質の顕著な誘導を生じた。電子顕微鏡分析によって、化合物Ｉがオートファゴソームを誘導したことが確認された。ＬＣ３−ＩＩは、ＬＣ３−Ｉ変換を通して表された。反対に、化合物Ｉによって誘導される自食作用は、自食作用の特異的なインヒビターである３−ＭＡによって抑制された。これらの研究によって、化合物Ｉの早期細胞毒性効果は、自食作用と関連していることが示唆される。
【０３５８】
（実施例３２）
化合物Ｉは、ＢＭＳＣの存在下で細胞増殖を阻害する。
【０３５９】
本実施例は、化合物ＩがＢＭＳＣの存在によるパラクリンＭＭ細胞増殖を阻害する能力を示す。
【０３６０】
ＩＬ−６およびＩＧＦ−１は、ＭＭ細胞において増殖および抗アポトーシスを誘導するので、化合物Ｉを、ＩＮＡ−６およびＬＢ  ＭＭ細胞においてこれらのサイトカインの効果を克服することに関して試験した。ＬＢおよびＩＮＡ−６細胞を、４８時間、
【０３６１】
【化２７】
2014510729.tif 000036
【０３６２】
ＩＬ−６（１および１０ｎｇ／ｍｌ）（図３４Ａ）またはＩＧＦ−１（１０および１００ｎｇ／ｍＬ）（図３４Ｂ）の有無において培養した。ＤＮＡ合成は、７２時間の培養のうち最後の８時間の間［３Ｈ］−チミジン組み込みを測定することによって決定した。データは三連の培養の平均（±ＳＤ）を示す。ＩＬ−６もＩＧＦ−１も化合物Ｉによって誘導される増殖阻害に対して防御しなかった（図３４Ａおよび３４Ｂ）。
【０３６３】
ＢＭ微小環境によって、ＭＭにおける増殖および薬物耐性がもたらされ、これによってＢＭＳＣの存在下での化合物ＩのＭＭ細胞増殖阻害性効果が調査された。
【０３６４】
ＬＢおよびＩＮＡ−６ＭＭ細胞を、４８時間、
【０３６５】
【化２８】
2014510729.tif 000037
【０３６６】
ＢＭＳＣの有無において培養した（図３４Ｃ）。ＤＮＡ合成は、［３Ｈ］−チミジン組み込みによって決定された。データは三連の培養の平均（±ＳＤ）を示す。
【０３６７】
化合物Ｉ（０〜２．５μＭ）で処理したＢＭＳＣ由来の培養上清中のＩＬ−６を、ＥＬＩＳＡによって測定した（図３４Ｄ）。エラーバーはＳＤ（±）を示す。
【０３６８】
ＢＭＳＣを、１．０μＭの化合物Ｉまたはコントロール培地とともに４８時間培養した；培養上清中のサイトカインは、サイトカンアレイを用いて検出した（図３４Ｅ）。
【０３６９】
ＩＮＡ−６細胞（ＢＭＳＣの有無において培養）を化合物を用いて４８時間処理した。総細胞溶解液を、示した抗体を用いてイムノブロッティングに供した（図３４Ｆ）。アクチンをローディングコントロールとして用いた。
【０３７０】
２例の異なる患者由来のＢＭＳＣ（□、◇）を、化合物Ｉ（０〜２０μＭ）とともに４８時間培養した。細胞生存度をＭＴＴアッセイによって評価した（図３４Ｇ）。値は、三連の培養の平均値±ＳＤである。
【０３７１】
重要なことに、化合物Ｉは、増殖およびサイトカイン分泌（図３４Ｃ〜図３４Ｅ）、ならびにＢＭＳＣによって誘導されるＡＫＴおよびＥＲＫのリン酸化（図３４Ｆ）を阻害した。対照的に、ＢＭＳＣにおける有意な増殖阻害は注目されなかった（図３４Ｇ）。これらの結果によって、化合物Ｉは、ＢＭの微小環境の状況でパラクリンＭＭ細胞増殖をブロックすることが示される。
【０３７２】
（実施例３３）
化合物Ｉは、血管形成性ＨｕＶＥＣ管形成を阻害する
本実施例は、化合物ＩがＨｕＶＥＣ管形成を阻害する能力を示す。ＰＩ３Ｋ、特にｐ１１０イソ型の血管形成における役割を調査した。内皮細胞は、腫瘍増殖のための血管形成の必須の調節因子である。ＡｋｔおよびＥＲＫ経路の両方とも、内皮細胞増殖および血管形成の調節に関連する；そして重要なことに、内皮細胞はｐ１１０δを発現する。本実施例はまた、化合物ＩがＡｋｔリン酸化の下方制御に関連するインビトロでの毛細管様管形成をブロックすることも示す。
【０３７３】
血管形成に対するＰ１１０  δ阻害の効果を調査した。ＨｕＶＥＣを、０、１．０、または１０μＭの化合物Ｉを用いて８時間処理し、内皮細胞による管形成を評価した（図３５Ａ）。ＨｕＶＥＣ細胞を、マトリゲル・コーティング表面にプレートして、化合物Ｉの有無において細管を８時間形成させた、内皮細胞管形成は、顕微鏡分析によって測定した（図３５Ｂ）。＊Ｐ＜０．００５。
【０３７４】
ＨｕＶＥＣを化合物Ｉ（０〜２０μＭ）を用いて４８時間培養し、生存度をＭＴＴアッセイによって評価した（図３５Ｃ）。示されるデータは、代表的な実験からの三連のウェルの平均値±ＳＥである。従って、化合物Ｉは、細胞毒性に関連することなく（図３５Ｃ）、用量依存性の様式で毛細管様管形成を阻害した（ｐ＜０．０５）（図３５Ｂ）。
【０３７５】
ＡＫＴおよびＥＲＫ１／２のリン酸化および発現は、化合物Ｉ処理によってＨｕＶＥＣ細胞で顕著に下方制御された。ＨｕＶＥＣは、化合物Ｉ（０〜２００μＭ）を用いて８時間培養され、細胞溶解液は、示した抗体を用いるイムノブロットによって分析された（図３５Ｄ）。アクチンをローディングコントロールとして用いた。
【０３７６】
これらの知見によって、化合物Ｉは、ＡＫＴおよびＥＲＫ活性の下方制御に関連して、血管形成を阻害し得ることが示唆される。
【０３７７】
（実施例３４）
化合物ＩＩは、インビボでＭＭ細胞増殖を阻害する。
【０３７８】
本実施例は、化合物ＩＩがインビボでヒトＭＭ細胞増殖を阻害する能力を示す。
【０３７９】
Ｐ１１０δインヒビターのインビボ有効性は、ＳＣＩＤマウスがヒトＭＭ細胞を皮下注射される異種移植片モデルで評価した。
【０３８０】
５×１０６個のＬＢ細胞を注射されたマウスを、コントロールのビヒクル（●）、および化合物ＩＩ  １０ｍｇ／ｋｇ（□）または３０ｍｇ／ｋｇ（○）を用いて１日２回経口的に処置した。平均の腫瘍容積は、材料および方法にあるように算出した（図３６Ａ）。エラーバーはＳＤ（±）を示す。
【０３８１】
コントロールビヒクル（上のパネル）または化合物ＩＩ（３０ｍｇ／ｋｇ）（下のパネル）を用いて１２日間処置したマウス由来の代表的な全身の画像（図３６Ｂ）。
【０３８２】
化合物ＩＩ（３０ｍｇ／ｋｇ）で処置したマウス（右側のパネル）およびコントロールのマウス（左側のパネル）から回収した腫瘍をＣＤ３１  ＡｂおよびＰ−ＡＫＴ  Ａｂを用いて免疫組織化学分析に供した。ＣＤ３１およびＰ−ＡＫＴ陽性細胞は濃褐色である（図３６Ｄ）
マウスを
【０３８３】
【化２９】
2014510729.tif 000038
【０３８４】
で処置した。生存は、処置の初日から屠殺までカプラン・メイヤー曲線を用いて評価した（図３６Ｃ）。
【０３８５】
腫瘍組織は、コントロールビヒクルまたは化合物ＩＩ（３０ｍｇ／ｋｇ）で処置したマウスから収集した。ＰＤＫ−１およびＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）のリン酸化されたタンパク質レベルを、細胞溶解液のウエスタンブロットによって決定した（図３６Ｅ）。アクチンをローディングコントロールとして用いた。
【０３８６】
ＳＣＩＤマウスにおけるヒト骨チップに移植されたＩＮＡ−６細胞の増殖を、ｓｈｕＩＬ−６Ｒの連続血清測定によってモニターした。マウスを、化合物ＩＩ  １０ｍｇ／ｋｇ（□）、３０ｍｇ／ｋｇ（△）またはコントロールのビヒクル（●）で処置して、ｓｈｕＩＬ−６ＲレベルをＥＬＩＳＡによって毎週決定した（図３６Ｆ）。エラーバーは、ＳＤ（±）を示す。
【０３８７】
化合物ＩＩ（ｐ１１０δインヒビター）は、コントロールのマウス（ｎ＝７）に比較して処置群（ｎ＝７）ではＭＭ腫瘍増殖を有意に減少させた。腫瘍容積の比較によって、コントロール群対処置群の間の統計学的に有意差が示された（対１０ｍｇ／ｋｇ、Ｐ＜０．０５；対３０ｍｇ／ｋｇ、Ｐ＜０．０１）（図３６Ａ）。処置マウス対コントロールマウスにおいて１２日で腫瘍増殖に顕著な低下が観察された（図３６Ｂ）。カプラン・メイヤー曲線およびログ・ランク分析によって、それぞれ、コントロールマウスにおける１５日間（９５％信頼区間、１２〜１７日間）対、１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇの化合物ＩＩ処置群における２３日間（９５％ＣＩ、１５〜３４日間）および３２日間（９５％ＣＩ、２７〜４９日間）の平均全生存期間（ＯＳ）を示した。コントロールのマウスに比較した平均ＯＳにおける統計学的に有意な延長はまた、処置群でも観察された（対１０ｍｇ／ｋｇ、Ｐ＝０．０８６；対３０ｍｇ／ｋｇ，Ｐ＝０．０５６）（図３６Ｃ）。重要なことに、ビヒクル単独または化合物ＩＩのいずれかでの処置は、体重に影響しなかった。さらに、免疫組織化学（図３６Ｄ）およびイムノブロット（図３６Ｅ）分析によって、化合物ＩＩ処置（３０ｍｇ／ｋｇ）がｐ−Ａｋｔおよびｐ−ＰＤＫ−１を有意に阻害し、同様に、ＣＤ３１陽性の細胞および微小血管密度を有意に減少させた（ｐ＜０．０１）ことが確認された（図３６Ｄ）。これによって、化合物ＩＩがＡｋｔ経路の抑制を介してインビボで血管形成を阻害し得ることが示唆される。
【０３８８】
インビボでのヒトＢＭ微小環境の状況においてＭＭ細胞増殖に対する化合物ＩＩの活性を調査するため、ＳＣＩＤ−ｈｕモデル（ここではＩＬ−６依存性のＩＮＡ−６細胞がＳＣＩＤマウスに皮下移植されたヒト骨チップに直接注射される）を用いた。このモデルは、ＩＮＡ−６ヒトＭＭ細胞のヒトＩＬ−６／ＢＭＳＣ依存性の増殖を伴うヒトＢＭ微小環境を再利用する。これらのＳＣＩＤ−ｈｕマウスを化合物ＩＩまたはビヒクル単独を用いて毎日４週間処置して、血清のｓｈｕＩＬ−６Ｒを、腫瘍負荷のマーカーとしてモニターした。図３６Ｆに示されるとおり、化合物ＩＩ処置は、ビヒクルコントロールに比較して腫瘍増殖を有意に阻害した。このモデルにおける有意な腫瘍増殖阻害が、観察され（ＩＮＡ−６細胞によって放出される減少した血清ｓｈｕＩＬ−６Ｒレベルで証明される）、これによってｐ１１０δ阻害がインビボでのＢＭ微小環境のＭＭ増殖促進活性をブロックすることが確認された。まとめると、これらのデータによって、化合物ＩＩによるｐ１１０δの阻害は、ＭＭ増殖をインビボで有意に阻害し、生存を延長することが示される。
【０３８９】
（実施例３５）
化合物Ｉはボルテゾミブと組み合わせて、相乗作用性の細胞毒性を示す。
【０３９０】
本実施例は、化合物Ｉとボルテゾミブを組み合わせて相乗作用性のＭＭ細胞毒性を媒介する効果を示す。
【０３９１】
化合物Ｉとボルテゾミブを組み合わせて相乗作用性のＭＭ細胞毒性を誘導する効果を調査した。ＬＢおよびＩＮＡ−６ＭＭ細胞を
【０３９２】
【化３０】
2014510729.tif 000039
【０３９３】
ボルテゾミブ（０〜５ｎＭ）の有無において培養した。細胞毒性は、ＭＴＴアッセイで評価し；データは四連の培養の平均値±ＳＤである（図３７Ａ）。
【０３９４】
ＩＮＡ−６細胞を、化合物Ｉ（５μＭ）および／またはボルテゾミブ（５ｎＭ）を用いて６時間処理した。ＡＫＴのリン酸化は、ホスホ−ＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）抗体を用いて細胞溶解液のウエスタンブロットによって決定した（図３７Ｂ）。アクチンがローディングコントロールとして機能した。
【０３９５】
化合物Ｉは、ボルテゾミブの細胞毒性を増強する。漸増濃度の化合物Ｉ（１．５〜５．０μＭ）をボルテゾミブ（２．５、５．０ｎＭ）に添加したところ、ＬＢおよびＩＮＡ−６  ＭＭ細胞で相乗作用的な細胞毒性を誘導した（図３７Ａおよび表７）。重要なことに、ボルテゾミブ処理によるホスホ−Ａｋｔの誘導は、化合物Ｉの存在下で阻害された（図３７Ｂ）。
【０３９６】
【表７】
2014510729.tif 000040
（実施例３６）
濾胞性リンパ腫細胞株において有効な化合物Ｉ
本実施例は、化合物ＩがＰＩ３Ｋシグナル伝達をブロックし、濾胞性リンパ腫細胞でアポトーシスを誘導するという証明を提供する。Ｐ１１０δは、図３８Ａで示されるようにＦＬ細胞株中で発現される。特定の細胞株は、この細胞が化合物Ｉに曝された場合に、ｐＡｋｔ、Ａｋｔ、ｐＳ６およびＳ６の産生の減少を示す（図３８Ｂ）。ＰＡＲＰおよびカスパーゼ−３の切断が、化合物Ｉに曝された後、２４時間後に０．１μＭおよび０．５μＭで用量依存性の様式で観察される（図３８Ｃ）。
【０３９７】
（実施例３７）
初代ＭＣＬ細胞において有効な化合物Ｉ
本実施例は、化合物ＩがＭＣＬに対して有効であることを示す。化合物Ｉは、０．１μＭまたは１μＭの化合物Ｉに曝された場合、２例の患者の初代ＭＣＬ細胞における構成的ＰＩ３Ｋシグナル伝達を用量依存性の様式でブロックすることが見出された（図３９Ａ）。化合物Ｉはまた、ＭＣＬ細胞株で生存因子およびケモカインシグナル伝達を阻害することが観察されている。図３９Ｂは、化合物Ｉの存在下で種々の生存因子に曝されたＭＣＬ株におけるｐＡｋｔの有意な減少を示す。
【０３９８】
（実施例３８）
再発性または不応性のＢ細胞悪性疾患を有する患者におけるリツキシマブおよび／またはベンダムスチンと組み合わせた化合物の効果
本実施例は、再発性または不応性のＢ細胞悪性疾患を有する患者におけるリツキシマブおよび／またはベンダムスチンと組み合わせた式Ｉの化合物の安全性および活性を示す。
【０３９９】
データカットオフにおいて、６名のＮＨＬ患者および６名のＣＬＬ患者を含む１２名の患者を本研究に登録した。患者には；メジアン年齢６５（範囲：５５〜８０）歳の男性／女性ｎ＝８（６７％）／４（３３％）、および再発性／不応性疾患ｎ＝８（６７％）／４（３３％）を含めた。以前の治療のメジアン回数は３回（範囲：１〜１１回）であった。すべての患者は式Ｉの化合物を１００ｍｇのＢＩＤで受け；６名の患者はリツキシマブを受け、６名はベンダムスチンを受けた。ＮＨＬを有する１名の患者は、しゃっくりのためベンダムスチンを用量低減し、ＮＨＬを有する１名の患者は、ＡＬＴ／ＡＳＴ増大のため式Ｉの化合物を用量低減した。他の患者はすべて全用量レジメンを受け、許容され得る耐容性であった。臨床応答評価は、２サイクルの組み合わせ処置を終了した６名の患者について入手可能であった。結果を以下の表８に示す。
【０４００】
【表８】
2014510729.tif 000041
したがって、リツキシマブまたはベンダムスチンと組み合わせた式Ｉの化合物の投与は、再発性または不応性のＢ細胞悪性疾患を有する患者において許容され得る安全性および有望な臨床活性を示す。
【０４０１】
（実施例３９）
再発性または不応性のＢ細胞悪性疾患を有する患者におけるリツキシマブおよび／またはベンダムスチンと組み合わせた化合物の効果
本実施例は、再発性または不応性のＢ細胞低悪性度ＮＨＬおよびＣＬＬを有する患者におけるリツキシマブおよび／またはベンダムスチンと組み合わせた式Ｉの化合物の安全性および活性を示す。
【０４０２】
１２名のｉＮＨＬ患者および８名のＣＬＬ患者を含む２０名の患者を登録した。患者の特徴を図４２にまとめている。すべての患者は式Ｉの化合物を、１００ｍｇを経口で１日あたり２回（ＢＩＤ）または１５０ｍｇを経口で１日あたり２回（ＢＩＤ）のいずれかで、その患者が恩恵を被る限り受けた。また、患者は、リツキシマブ（３７５ｍｇ／ｍ２を８週間毎週投与、サイクル１の１日目に開始）、またはベンダムスチン（９０ｍｇ／ｍ２を６サイクルの間の各々のサイクルの１日目と２日目に投与）のいずれかを受けた。腫瘍応答を標準的な診断基準に従って評価した。
【０４０３】
図４３に示すように、組み入れた悪性度分類≧３の有害事象には、主に、既に存在している疾患関連もしくは処置関連の状態に起因しているか、または併発した疾病に起因しているバックグラウンド事象を含めた。ベンダムスチンと化合物Ｉを受けた患者では、悪性度分類≧３の有害事象にＢ−誘発性骨髄抑制（Ｂ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｍｙｅｌｏｓｕｐｒｅｓｓｉｏｎ）を含めた。リツキシマブと化合物Ｉを受けた患者では、悪性度分類≧３の有害事象は稀であり、式Ｉの化合物と明白に関連しているわけではなかった。ｉＮＨＬ特異的一過性ＡＬＴ／ＡＳＴ上昇が観察され；この事象は薬物を中断すると消散し、低用量レベルの式Ｉの化合物で治療を再開すると成功裡に管理された。試験した患者コホートにおいて、式Ｉの化合物に関連する用量制限毒性は観察されなかった。
【０４０４】
図４４に示されるように、ベンダムスチンと化合物Ｉまたはリツキシマブと化合物Ｉの併用療法を受けたｉＮＨＬまたはＣＬＬを有するほぼすべての患者で節サイズの縮小が起こった。
【０４０５】
さらに、ベンダムスチンと化合物Ｉを受けようがリツキシマブと化合物Ｉを受けようが、ｉＮＨＬを有する患者およびＣＬＬを有する患者で高レベルの抗腫瘍活性が観察された。図４５の表にまとめたように、ベンダムスチンと化合物Ｉを受けたｉＮＨＬを有する１名の患者では完全奏効を示した。
【０４０６】
したがって、リツキシマブまたはベンダムスチンと組み合わせた化合物Ｉの投与は、再発性または不応性の低悪性度Ｂ細胞ＮＨＬおよびＣＬＬを有する患者において許容され得る安全性および有望な臨床活性を示す。
【０４０７】
先の研究において、式Ｉの化合物の投与を伴う単独薬剤療法では、図４６に示すように、ＣＬＬを有する患者の約２／３でリンパ球再分布が引き起こされ、これによりリンパ球増加症がもたらされた。対照的に、図４７に示されるように、ベンダムスチンと化合物Ｉまたはリツキシマブと化合物Ｉでの併用療法では、ＣＬＬを有するすべての患者で悪性リンパ球数が減少した。
【０４０８】
したがって、上記で考察した併用療法では、ｉＮＨＬおよびＣＬＬを有する患者では節サイズ縮小と抗腫瘍活性、ならびにＣＬＬを有する患者では悪性リンパ球数の減少において驚くべき効果と優れた結果が得られ、副作用はほとんどない。
【０４０９】
（実施例４０）
慢性リンパ性白血病におけるＢ細胞レセプター（ＢＣＲ）シグナル伝達およびナース様細胞（ＮＬＣ）の生存促進作用に対するベンダムスチンと組み合わせた化合物の効果
本実施例は、ＢＣＲ由来ＣＬＬ細胞の活性化に対するベンダムスチンと組み合わせた式Ｉの化合物の効果を示す。ＢＣＲの抗ＩｇＭとの架橋により、ＣＬＬ細胞生存度がコントロールの１２１±５％まで有意に増大したことがわかった（平均値±ＳＥＭ，ｎ＝１５，＊Ｐ＜０．０５）。この生存促進効果は式Ｉの化合物によって消去され、ＣＬＬ細胞生存度は４８時間でコントロールの８５±３％まで低下した（平均値±ＳＥＭ，ｎ＝１５，＊Ｐ＜０．０５）。また、ＮＬＣとの共培養におけるＣＬＬ細胞生存度も式Ｉの化合物によって、４８時間で未処理コントロールの６４±６％まで有意に低下した（平均値±ＳＥＭ，ｎ＝１０，＊Ｐ＜０．０５）。ＢＣＲ架橋によってＣＬＬ細胞によるケモカインＣＣＬ３およびＣＣＬ４の分泌が誘導され、これをＣＬＬ上清においてＥＬＩＳＡによって定量化した。
【０４１０】
式Ｉの化合物により、上清のＣＣＬ３濃度が４０６０±１３９２ｐｇ／ｍＬから２９０１±１２２０ｐｇ／ｍＬまで、およびＣＣＬ４レベルが５７２１±１７８９ｐｇ／ｍＬから３２２３±１３１１ｐｇ／ｍＬまで有意に低減された（平均値±ＳＥＭ，ｎ＝６，＊Ｐ＜０．０５）。また、ＣＬＬ−ＮＬＣ共培養物において、式Ｉの化合物によって、ＣＬＬ細胞によるＣＣＬ３／４分泌も阻害された。ＣＣＬ３濃度は式Ｉの化合物によって９４３±５３５ｐｇ／ｍＬから１５６±８ｐｇ／ｍＬまで、およびＣＣＬ４濃度は７４３３±４４６３ｐｇ／ｍＬから３１６±５３ｐｇ／ｍＬまで低減された（平均値±ＳＥＭ，ｎ＝５，＊Ｐ＜０．０５）。
【０４１１】
驚くべきことに、式Ｉの化合物によって、ＣＬＬ−ＮＬＣ共培養物におけるＣＸＣＬ１３レベルもまた、１５１±３５から７０±２７ｐｇ／ｍＬまで減少し（平均値±ＳＥＭ，ｎ＝４，＊Ｐ＝０．０５）、このことは式Ｉの化合物がＣＬＬ細胞およびＮＬＣによって表されるＣＬＬ微小環境の両方に対して薬理作用を有することを示す。
【０４１２】
また、本実施例は、式Ｉの化合物とベンダムスチンの組み合わせにより、骨髄間質細胞（ＭＳＣ）とのＣＬＬ細胞の共培養物における間質媒介性薬物耐性が克服され得ることを示す。図４８ａおよび４８ｂに示されるように、両薬物の上記組み合わせは、ＣＬＬ細胞死に対してより高い効果を示す。
【０４１３】
さらに、リンの流れを利用し、式Ｉの化合物が、式Ｉの化合物での処置を受けているＣＬＬ患者から得たサンプルにおいて構成的およびＢＣＲ誘導性のＰＩ３Ｋ経路活性化を阻害することが示された。式Ｉの化合物での処理により、末梢ＣＬＬ細胞においてｐＡｋｔ（Ｔ３０８）が＞９０％下方調節された（ｎ＝１２）。２８日間の式Ｉの化合物での毎日の処置の前と後に採取した１４名のＣＬＬ患者の血漿サンプルを、種々のサイトカインの濃度について分析した。興味深いことに、このような分析により、ベースラインから式Ｉの化合物での処置の２８＋日目までで、ＣＣＬ３（１８６ｐｇ／ｍＬから２９ｐｇ／ｍＬまで）、ＣＣＬ４（３０３から７０ｐｇ／ｍＬまで）、ＣＣＬ２２（１０６７から５３３ｐｇ／ｍＬまで）、ＣＸＣＬ１３（３１６ｐｇ／ｍＬから４０ｐｇ／ｍＬまで）、およびＴＮＦα（１０４から２９ｐｇ／ｍＬまで）の平均血漿レベルの実質的な減少があることが明らかになり、ＣＣＬ３／４およびＣＸＣＬ１３に関する本発明者らのインビトロデータが確認された。
【０４１４】
総合すると、本実施例の結果は、式Ｉの化合物がＢＣＲ媒介性およびＮＬＣ媒介性のＣＬＬ細胞のインビトロにおける生存および活性化を有効に阻害することを示す。また、式Ｉの化合物は、ＣＬＬ細胞に対するベンダムスチンなどの細胞毒性剤の活性を増強する。インビボデータは、式Ｉの化合物により、処理前の高いＣＣＬ３およびＣＣＬ４レベルが低下することを示す。理論によって束縛されるものではないが、このような観察により、ＢＣＲ由来シグナルの阻害がＣＬＬにおける式Ｉの化合物の主要な作用機序であり得るという概念が示唆される。
【０４１５】
（実施例４１）
ＣＬＬにおけるホスファチジルイノシトール３−キナーゼ−δ経路の活性化に対するレナリドマイドと組み合わせた化合物の効果
本実施例は、ＣＬＬを有する患者におけるＰＩ３ｋ−δ経路の活性化に対するレナリドマイドと組み合わせた式Ｉの化合物の効果を示す。
【０４１６】
サンプル収集および培養条件：単離された単核球を陰性Ｂ細胞選択し、培養状態にした。式Ｉの化合物はＣａｌｉｓｔｏｇａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）から提供を受けた。レナリドマイド（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ；Ｃｅｌｇｅｎｅ）を入手し、抽出した。
【０４１７】
フローサイトメトリーアッセイ：ＣＤ２０、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６またはＩｇＧ１（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ  ＣＡ）に対する抗体を表面染色した。
【０４１８】
イムノブロット分析：イムノブロットを行なった。抗体には、抗ＡＫＴ、抗ホスホ−ＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）、抗ＧＳＫ３β、抗ホスホ−ＧＳＫ３β（Ｓｅｒ９）（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）、抗ｐ１１０δ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，ＣＡ）、および抗ＧａｐｄＨ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）を含めた。
【０４１９】
定量的ＲＴ−ＰＣＲ：ＲＮＡをＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて抽出し、ｃＤＮＡをＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて調整した。リアルタイムＰＣＲを予備設計ＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ＡｓｓａｙｓおよびＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７７００配列検出システム（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を用いて行なった。
【０４２０】
ＰＩ３Ｋアッセイ：ＰＩ３ＫアッセイはＣＬＬ細胞の全細胞溶解液において行なった。ＥＬＩＳＡアッセイは製造業者の指示（Ｅｃｈｅｌｏｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｌｔ  Ｌａｋｅ  Ｃｉｔｙ，ＵＴ）に従って行なった。
【０４２１】
トランスフェクション：ＣＬＬ細胞をトランスフェクトした。ｐ１１０δ  ｓｉＲＮＡ（Ａｍｂｉｏｎ，Ａｕｓｔｉｎ，Ｔｘ）を５０ｎＭの最終濃度で使用した。
【０４２２】
免疫グロブリン検出：ＩｇＭの定量化（ｑｕａｎｔｉｚａｔｉｏｎ）を行なった。簡単には、レナリドマイド処理またはビヒクルコントロール処理したＣＬＬ細胞に放射線照射し、ＰＷＭ（５μｇ／ｍＬ）の非存在下または存在下で精製標的Ｂ細胞とともに培養状態にした。
【０４２３】
統計解析：記載の統計学的評価はすべて、ＯＳＵの生物統計学センター（Ｃｅｎｔｅｒ
ｆｏｒ  Ｂｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ）によって先に記載の７の方法を用いて行なった。単独比較で、または多重比較では調整後のα＝０．０５のＰ値を有意とみなした。
【０４２４】
本実施例の結果は、レナリドマイドがＣＬＬ細胞上のＣＤ１５４を、ＡＫＴ、ＩＫＫおよびＮＦ−κＢの核移行の活性化によって上方調節し、ｍＲＮＡの転写と安定化が増大することを示す。汎−インヒビターＬＹ２９４００２でのＣＬＬ細胞の処理によりこのＡＫＴ活性化が拮抗された。
【０４２５】
まず、ＰＩ３−キナーゼ活性化の特異性を確認するため、レナリドマイドでの処理後のＰＩ３Ｋの酵素活性の直接的な増加を調べた。０．５μＭのレナリドマイドありまたはなしで処理したＣＬＬ患者（Ｎ＝９）由来のＣＤ１９＋細胞をＰＩ３−キナーゼ活性について、溶解液への１または１０μＭの式Ｉの化合物の添加ありおよびなしで調べた。結果は、μｇのタンパク質に関して計算した。レナリドマイドによるＰＩ３Ｋ経路を介したシグナル伝達は、４つの触媒性アイソフォーム；ｐ１１０α、ｐ１１０β、ｐ１１０γおよびｐ１１０δによって起こり得る。さらに、低分子インヒビターである式Ｉの化合物によるＰＩ３Ｋ−δの阻害により、ＰＩ３Ｋの酵素活性の増大が抑制されることがわかった（図４９Ａ）。
【０４２６】
次に、式Ｉの化合物でのＰＩ３Ｋ−δの阻害により、レナリドマイドによって誘導されるＡＫＴの下流リン酸化の増大が抑制され得るかどうかの判定において、式Ｉの化合物によるＰＩ３Ｋ−δの阻害によってＰＩ３Ｋ活性の抑制がもたらされた。ＣＬＬ患者（Ｎ＝６）由来のＣＤ１９＋細胞を、０．５μＭのレナリドマイドおよび／または１もしくは１０μＭの式Ｉの化合物ありまたはなしで４８時間インキュベートした。ｓｅｒ４７３におけるＡＫＴリン酸化をイムノブロットによって評価した。図４９Ｂ参照。
【０４２７】
この結果を確認するため、ＧＳＫ３βのリン酸化を評価した。ＣＬＬ患者（Ｎ＝４）由来のＣＤ１９＋細胞を、０．５μＭのレナリドマイドおよび／または１もしくは１０μＭの式Ｉの化合物ありまたはなしで４８時間インキュベートした。ｓｅｒ９におけるＧＳＫ３βのリン酸化をイムノブロットによって評価した。４回の実験のうちの１回の結果を示す。レナリドマイドでの処理によりＧＳＫ３βのリン酸化の増大がもたらされ、これは式Ｉの化合物との共処理によって抑制可能であることがわかり、この場合も、ＰＩ３Ｋ−δとレナリドマイド依存性ＰＩ３Ｋ活性との間に関連性が示唆される。図４９Ｃ参照。
【０４２８】
この結果が実際にＰＩ３Ｋ−δ阻害によるものであることを確認するため、ＣＬＬ細胞においてＰＩ３Ｋ−δをノックダウンした。ＣＬＬ患者（Ｎ＝３）由来のＣＤ１９＋細胞をＰＩ３Ｋ−δ、ＰＩ３Ｋ−γまたはナンセンス標的に対して標的化されるｓｉＲＮＡでトランスフェクトした。ｐ１１０δタンパク質発現をイムノブロットによって評価した。３回の実験のうちの１回の結果を示す。図４９Ｄ参照。
【０４２９】
レナリドマイドは、ＰＩ３Ｋ−δをノックダウンするとＡＫＴのリン酸化を誘導できないことが示された。ＣＬＬ患者（Ｎ＝３）由来のＣＤ１９＋細胞をＰＩ３Ｋ−δ、ＰＩ３Ｋ−γまたはナンセンスに対して標的化されるｓｉＲＮＡでトランスフェクトし、次いで、０．５μＭのレナリドマイドとともにまたはそれなしで４８時間インキュベートした。ｓｅｒ４７３におけるＡＫＴリン酸化をイムノブロットによって評価した。３回の実験のうちの１回の結果を示す。図４９Ｅ参照。
【０４３０】
この所見は、レナリドマイドによるＣＬＬにおけるＰＩ３Ｋ活性化ならびにＣＬＬ細胞上のＮＦ−κＢおよびＣＤ１５４に対するその後の効果はＰＩ３Ｋ−δ依存性経路を利用していることを裏付ける。
【０４３１】
レナリドマイド処理は、以前に、ＣＬＬ細胞の活性化をもたらすことが示されている。この所見を拡張して、レナリドマイドによって抑制されるＰＩ３Ｋ−δの阻害を調べ、Ｂ細胞抗原提示に重要な他の共刺激分子の上方調節が誘導されるかどうかを明らかにした。ＣＬＬ患者（Ｎ＝２５）由来のＣＤ１９＋細胞を０．５μＭのレナリドマイドおよび／または１０μＭの式Ｉの化合物ありまたはなしで４８時間処理した。ＣＤ４０またはＣＤ８６の表面発現を、ＣＤ４０−またはＣＤ８６−ＰＥ抗体およびＩｇＧ１−ＰＥアイソタイプコントロールを用いたフローサイトメトリーによって評価した。式Ｉの化合物での処理により、レナリドマイドによって誘導されるＣＤ４０およびＣＤ８６の上方調節を抑制することができた（それぞれ、ｐ値＝０．０１０２および＜０．０００１）（図５０Ａ）。
【０４３２】
同様に、ＰＩ３Ｋ−δの阻害により、レナリドマイドによって促進されるＣＤ４０、ＣＤ８６、ＣＤ１５４およびＣＤ８０のｍＲＮＡの増大が抑制されることもわかった（すべての遺伝子についてｐ値＜０．００９）（図５０Ｂ）。ＣＬＬ患者（Ｎ＝１５）由来のＣＤ１９＋細胞を０．５μＭのレナリドマイドおよび／または１０μＭの式Ｉの化合物ありまたはなしで４８時間処理した。ＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡに変換させ、ＲＴ−ＰＣＲ分析を行ない、ＣＤ４０、ＣＤ８６およびＣＤ１５４のｍＲＮＡの量を決定した。
【０４３３】
レナリドマイドはＣＤ２０の内在化を誘導することも示されており、式Ｉの化合物との並行処理によってこの効果は抑制された（ｐ値＝０．００５７）（図５０Ｃ）。ＣＬＬ患者（Ｎ＝５）由来のＣＤ１９＋細胞を０．５μＭのレナリドマイドおよび／または１０μＭの式Ｉの化合物ありまたはなしで４８時間処理した。ＣＤ２０の内在化を、ＣＤ２０−ＰＥ抗体およびＩｇＧ１−ＰＥアイソタイプコントロールを用いたフローサイトメトリーによってＣＤ２０の表面発現を定量化することにより評価した。
【０４３４】
正常なＢ細胞に免疫グロブリンの産生を促進させるレナリドマイド処理ＣＬＬ細胞にとってのＣＤ４０−ＣＤ１５４軸の重要性を考慮し、これが起こることが抑制され得るかどうかを明らかにするために式Ｉの化合物を評価した。ＣＬＬ患者（Ｎ＝６）由来のＣＤ１９＋細胞を０．５μＭのレナリドマイドおよび／または１０μＭの式Ｉの化合物ありまたはなしで４８時間処理した。ＣＬＬ細胞に放射線照射し（２０Ｇｙ）、５μｇ／ｍＬのＰＷＭの非存在下または存在下で精製Ｂ細胞との培養状態にした。ＩｇＭの定量化をＥＬＩＳＡ分析によって行なった。レナリドマイド処理ＣＬＬ細胞は、以前５に、および本明細書において高ＩｇＭレベルを有することが示されているが、式Ｉの化合物でのＣＬＬ細胞の処理前ではＩｇＭの産生が完全に抑制されることがわかった（ｐ値＜０．０００１）（図５０Ｄ）。
【０４３５】
最後に、培養状態のＣＬＬ細胞のレナリドマイド処理を試験し、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）および塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂ−ＦＧＦ）の腫瘍細胞産生が促進され得るかどうかを調べた。ＣＬＬ患者（Ｎ＝１５）由来のＣＤ１９＋細胞を０．５μＭのレナリドマイドおよび／または１０μＭの式Ｉの化合物ありまたはなしで４８時間処理した。ＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡに変換させ、ＲＴ−ＰＣＲ分析を行ない、ｂＦＧＦの量を決定した。レナリドマイド処理によってすべての患者においてｂ−ＦＧＦの転写上方調節が増大し（ｐ値＝０．０００４）、式Ｉの化合物の共インキュベーションによってこの上方調節が抑制された（ｐ値＜０．００１）（図５０Ｅ）。
【０４３６】
同様に、レナリドマイド処置によって患者のサブセット（１３名のうち８名）においてＶＥＧＦの転写レベルが増大し、これは、この場合も式Ｉの化合物での処置によって可逆的であった（ｐ値＝０．００２）（図５０Ｆ）。（Ｆ）ＣＬＬ患者（Ｎ＝１３）由来のＣＤ１９＋細胞を０．５μＭのレナリドマイドおよび／または１０μＭの式Ｉの化合物ありまたはなしで４８時間処理した。ＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡに変換させ、ＲＴ−ＰＣＲ分析を行ない、ＶＥＧＦの量を決定した。
【０４３７】
データにより総合的に、ＣＬＬ細胞のレナリドマイド媒介性活性化におけるＰＩ３Ｋ−δ経路の裏付けが示された。このような所見の潜在的関連性は、ＣＬＬにおけるレナリドマイドの使用に関していくつかある。式Ｉの化合物、汎−ＰＩ３−キナーゼインヒビターおよび潜在的にＰＩ３−キナーゼ下流のシグナル伝達に拮抗作用する他の薬剤とレナリドマイドとの組合せはおそらく、この薬剤の免疫調節特性に対して拮抗作用性である。したがって、この併用療法の適用は、免疫調節が所望される場合、慎重にアプローチすべきである。対照的に、レナリドマイドの非免疫調節作用が所望される場合、式Ｉの化合物または代替的なＰＩ３−キナーゼインヒビターなどの薬剤の適用は、その驚くべき効果に鑑みると、免疫活性化、腫瘍再発、およびこの処置と関連しているサイトカイン放出症候群の抑制のために魅力的であり得る。これは、ＶＥＧＦ１６〜１９およびｂ−ＦＧＦ１６、２０、２１（これらは、ＣＬＬ細胞に対して保護効果を有する）などのサイトカインで特に当てはまり得る。実際、処置中に連続サイトカインレベルを調べた再発性ＣＬＬにおけるレナリドマイドの研究の一例では、非応答患者は、応答患者と比較して持続的に高いサイトカインレベル（例えば、ｂ−ＦＧＦ２）を有することがみとめられた。
【０４３８】
（実施例４２）
以前に処置されたＢ細胞悪性疾患を有する患者におけるリツキシマブおよび／またはベンダムスチンと組み合わせた化合物の効果
本実施例は、以前に処置されたＢ細胞悪性疾患を有する患者におけるリツキシマブおよび／またはベンダムスチンと組み合わせた式Ｉの化合物の安全性および活性を示す。
【０４３９】
２７名のｉＮＨＬ患者および２２名のＣＬＬ患者を含む４９名の患者を本研究に登録した。患者の特徴を図５１にまとめている。ベースラインにおいて、患者は、有害な予後の特徴、例えば、高齢であるとか、大きな腺症（ｂｕｌｋｙ  ａｄｅｎｐｏａｔｈｙ）および不応性疾患を有していた。患者はすべて、以前に≧１回の処置レジメンを受けたことがあり、一部は、以前に９回ものレジメンを受けたことがあった。以前の処置には、リツキシマブ、アルキル化剤および／またはフルダラビンが含まれており、ｉＮＨＬを有する患者のほとんどが以前にアントラサイクリン含有治療薬での処置を受けたことがあった。フォローアップは多くの患者で早期に行ない、治療期間は１〜１２サイクルの範囲とした。
【０４４０】
すべての患者は式Ｉの化合物を、１００ｍｇを経口で１日あたり２回（ＢＩＤ）または１５０ｍｇを経口で１日あたり２回（ＢＩＤ）のいずれかで、その患者が恩恵を被る限り受けた。また、患者は、リツキシマブ（３７５ｍｇ／ｍ２を８週間毎週投与、サイクル１の１日目に開始）、またはベンダムスチン（９０ｍｇ／ｍ２を６サイクルの間、各々のサイクルの１日目と２日目に投与）のいずれかを受けた。腫瘍応答を標準的な診断基準に従って評価した。
【０４４１】
図５２に示されるように、悪性度分類≧３の有害事象には、主に、既に存在している疾患、以前の治療による毒性または併発した疾病に起因しているバックグラウンド事象を含めた。ベンダムスチンと式Ｉの化合物を受けた患者では、悪性度分類≧３の有害事象にＢ−誘発性骨髄抑制を含めた。リツキシマブと式Ｉの化合物を受けた患者では、悪性度分類≧３の有害事象は稀であり、式Ｉの化合物と明白に関連しているわけではなかった。ｉＮＨＬ特異的一過性ＡＬＴ／ＡＳＴ上昇が観察され；この事象は薬物を中断すると消散し、低用量レベルの式Ｉの化合物で治療を再開して成功裡に管理された。試験した患者コホートにおいて、式Ｉの化合物による関連する用量制限毒性は観察されなかった。
【０４４２】
図５３Ａおよび５３Ｂに示されるように、ベンダムスチンと式Ｉの化合物またはリツキシマブと式Ｉの化合物の併用療法を受けた、ｉＮＨＬまたはＣＬＬを有するほぼすべての患者で節サイズの縮小が起こった。
【０４４３】
さらに、ベンダムスチンと式Ｉの化合物を受けようがリツキシマブと式Ｉの化合物を受けようが、ｉＮＨＬを有する患者およびＣＬＬを有する患者で高レベルの抗腫瘍活性が観察された。図５４にまとめたように、ベンダムスチンと式Ｉの化合物を受けたｉＮＨＬを有する２名の患者では完全奏効を示した。
【０４４４】
先の研究において、式Ｉの化合物の投与を伴う単独薬剤療法では、図５５に示すように、ＣＬＬを有する患者においてリンパ球再分布が引き起こされ、これにより一過性リンパ球増加症がもたらされた。対照的に、図５６に示されるように、ベンダムスチンと式Ｉの化合物またはリツキシマブと式Ｉの化合物での併用療法では、ＣＬＬを有する患者において悪性リンパ球数がより急速に減少した。
【０４４５】
したがって、上記で考察した併用療法では、ｉＮＨＬとＣＬＬを有する患者では節サイズ縮小と抗腫瘍活性、ならびにＣＬＬを有する患者では悪性リンパ球数の減少において驚くべき効果と優れた結果が得られ、副作用はほとんどない。
【０４４６】
（実施例４３）
骨髄間質細胞（ＭＳＣ）と共培養したＣＬＬ細胞におけるデキサメタゾン、ベンダムスチンおよび／またはフルダラビンと組み合わせた化合物の効果
本実施例は、ＣＬＬ細胞に細胞毒性を有する薬物（例えば、デキサメタゾン、ベンダムスチンおよびフルダラビン）の存在下で、ＣＬＬ細胞をＭＳＣと共培養した場合の、ＣＬＬ細胞に対する式Ｉの化合物の効果を示す。
【０４４７】
ＣＬＬ細胞をＭＳＣと、培地単独（コントロール）中、あるいは示した濃度の式Ｉの化合物、デキサメタゾン、ベンダムスチンもしくはフルダラビンまたは組み合わせたこれらの薬物を含有する培地中で共培養した。
【０４４８】
生存している細胞集団は、明るいＤｉＯＣ６染色およびＰＩ排除を特徴としており、各々のコンタープロットの右下の角にゲーティングした。生存している細胞の割合をこれらのゲートの各々の上部に示す。図５７ａに示されるように、式Ｉの化合物とデキサメタゾン、ベンダムスチンまたはフルダラビンとの組み合わせは、ＣＬＬ細胞死に対してより高い効果を示す。
【０４４９】
薬物処理サンプルの生存度を、それぞれの時点でコントロールサンプルの生存度に対して正規化した（１００％）。図５７ｂは、２４、４８および７２時間後に評価した９例の異なる患者サンプルからの平均値（±ＳＥＭ）を示す。ＭＳＣの存在下でのＣＬＬ細胞生存は、各々の薬物処理培養物からの結果とコントロール培養物からの結果の比較を示すアスタリスクによって示されるように、併用療法によって有意に低下した（Ｐ＜．０５）。例えば、７２時間後、未処理コントロールに対するＣＬＬ細胞生存度は、式Ｉの化合物で９３％（±０．６％）およびベンダムスチンで６０％（±８．７％）であったが、この２つの薬物の組み合わせでは４２．７％（±１１．４％）まで低下した。式Ｉの化合物とフルダラビンまたは式Ｉの化合物とデキサメタゾンの組み合わせでは同等の結果が認められた。
【０４５０】
したがって、この結果は、式Ｉの化合物によって、おそらくＭＳＣ誘導薬物耐性シグナルが妨害されることによりＣＬＬ細胞が細胞毒性剤に対して感受性になった（ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｄ）ことを示す。
【０４５１】
（実施例４４）
ＣＬＬにおけるオファツムマブと組み合わせた化合物の効果
本実施例に、以前にＣＬＬの処置を受けたことがある患者の処置のためのオファツムマブと組み合わせた化合物Ｉの反復サイクル（２８日間／サイクル）のフェーズ１−２試験をまとめる。
【０４５２】
化合物Ｉ（１５０ｍｇを１日２回［ＢＩＤ］）を、２４週間にわたって与えた、オファツムマブの１２回の注入とともに連続的に共投与した。オファツムマブは、３００ｍｇの初期用量で１日目または２日目（化合物Ｉの最初の用量に関連して）のいずれかに投与した。１週間後、オファツムマブを１，０００ｍｇで毎週７用量で、次いで１，０００ｍｇで４週間毎に４用量で投与した。オファツムマブ処置の終了後、各々の被験体は、化合物Ｉを単独薬剤として１５０ｍｇの用量をＢＩＤで、被験体が恩恵を被る限り継続して受けた。
【０４５３】
２１名の患者の全コホートから、１１名の患者のデモグラフィックの予備有効性データが得られた。メジアン［範囲］年齢は６３［５４〜７６］歳であった。患者の大部分（９／１１；８２％）は、大きな腺症（測定された最長寸法が≧５ｃｍのリンパ節が≧１個）を有していた。以前の治療（例えば、アルキル化剤（１０／１１；９０％）、リツキシマブ（９／１１；８２％）、プリンアナログ（８／１１；７２％）、アレムツズマブ（３／１１；２８％）および／またはオファツムマブ（２／１１；１８％）への以前の曝露）のメジアン［範囲］回数は３［１〜６］回であった。データカットオフにおいて、メジアン［範囲］処置期間は５［０〜７］サイクルであった。ほぼすべての被験体（９／１１；８２％）で、最初の２サイクル以内にリンパ節腫脹の顕著で急速な低減が起こった。１１名の患者のうち、１０名がサイクル２の終了時点またはそれ以降に応答評価について評価可能であった。８名の患者（８０％）が、治験担当者によってＨａｌｌｅｋ  Ｍら（Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ：ａ  ｒｅｐｏｒｔ
ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｗｏｒｋｓｈｏｐ  ｏｎ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｕｐｄａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ−Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ  １９９６  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ．Ｂｌｏｏｄ．２００８  Ｊｕｎ  １５；１１１（１２）：５４４６−５６）において公開された診断基準に基づいて判断されるように応答の診断基準を満たしていた。１名の患者ではリンパ節腫脹が低減し、疾患の安定の診断基準を満たし、１名の患者では疾患進行があった。単独薬剤でのＰＩ３Ｋδ阻害で予測された末梢リンパ球数の一過性の増加は、規模も期間も低減された。一過性リンパ球増加症の低減は、化合物Ｉとオファツムマブ（ｏｆｔａｔｕｍｕｍａｂ）の組み合わせによって誘導された。
【０４５４】
安全性の予備データは、上記組み合わせ処置が好ましい安全性プロフィールを有し、骨髄抑制はなかったことを示す。さらに、薬力学的データにより、ＣＬＬ関連ケモカインおよびサイトカイン（ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＸＣＬ１３およびＴＮＦα）の高いベースラインレベルは２８日間の処置後、低下したことが明らかになった。この結果は、化合物Ｉとオファツムマブの組み合わせにより、以前に処置されたＣＬＬを有する患者において十分耐容性であり、非細胞毒性の処置レジメンがもたらされることを示唆している。
【０４５５】
（実施例４５）
ＣＬＬにおけるＢＣＬ−２アンタゴニストと組み合わせた化合物の効果
本実施例は、間質曝露ＣＬＬ細胞に対するＢＣＬ−２アンタゴニストであるＡＢＴ−７３７およびＡＢＴ−２６３と組み合わせた化合物Ｉの効果を示す。
【０４５６】
ＣＬＬ細胞の精製：末梢血、骨髄、およびリンパ節をＣＬＬの診断基準および免疫表現型基準を満たす、同意を得た患者から採取した。末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を血液および組織サンプルから、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｗａｕｋｅｓｈａ，ＷＩ）密度勾配遠心分離を用いて単離した。サンプルは、新鮮状態、または１０％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）含有ウシ胎仔血清（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）中で生存可能に凍結させ、液体窒素中で保存し、後に分析のために解凍した状態のいずれかで分析した。単細胞懸濁液を蛍光標示式細胞分取（ＦＡＣＳ）機での分析のために調製し、ＣＤ１９＋  ＣＬＬ細胞が分析した細胞のおおむね＞８５％を占めていた。
【０４５７】
細胞株：マウスＣＤ１５４＋  Ｌ細胞株を、１０％ＦＢＳ、２．０５ｍＭ  Ｌ−グルタミン（ＨｙＣｌｏｎｅ，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）およびペニシリン−ストレプトマイシン（Ｃｅｌｌｇｒｏ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を補充したＲＰＭＩ  １６４０培地中で維持した。ヒト間質細胞株ＳｔｒｏｍａＮＫＴｅｒｔを理研細胞バンク（つくば，日本）から購入し、１μｇ／ｍＬ  ヒドロコルチゾン、１０％ＦＢＳ、１０％ヒト血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）、２．０５−ｍＭ  Ｌ−グルタミンおよびペニシリン−ストレプトマイシンを補充したα−ＭＥＭ中で維持した。ナース様細胞（ＮＬＣ）は、ＣＬＬを有する患者由来のＰＢＭＣを、１０％ＦＢＳおよびペニシリン−ストレプトマイシン−グルタミンを含むＲＰＭＩ  １６４０完全培地中に１０７細胞／ｍＬ（合計２ｍＬ）の濃度まで懸濁させることによって確立した。細胞を２４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）内で１４日間増殖させた。
【０４５８】
ＣＬＬ細胞と間質細胞の共培養物：ＣＬＬ細胞を、標準化した条件下で、間質細胞株または一次ＮＬＣ上で培養した。簡単には、間質細胞を各々の実験の１日前に、２４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）に３×１０５細胞／ｍＬ／ウェルの濃度で播種し、３７℃で５％ＣＯ２にてインキュベートした。間質細胞のコンフルエンスを位相差顕微鏡検査によって確認し、次いで、ＣＬＬ細胞を間質細胞層上に３×１０６細胞／ｍＬの濃度で添加した。次いで、培養物を化合物で、指定された期間処理した。ＣＬＬ細胞を、分析のために培地で静かにピペッティングすることによって取り出し、次いで、ＰＢＳ中で洗浄した後、分析した。特に記載のない限り、２４時間の共培養時点を使用した。
【０４５９】
細胞生存度の試験および試薬：ＣＬＬ細胞生存度は、ＦＡＣＳによるＡｎｎｅｘｉｎ  Ｖ−ＦＩＴＣ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）およびヨウ化プロピジウム（Ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ  Ｉｏｄｉｎｅ）（ＰＩ）（Ｓｉｇｍａ）の分析によって決定した。ＡＢＴ−７３７、ＡＢＴ−２６３および化合物Ｉは、使用までＤＭＳＯ中で−２０℃にて保存した。
【０４６０】
ＢＨ３プロファイリング：ＣＬＬ患者の末梢血、骨髄およびリンパ節サンプルを、プレートベースの蛍光定量法またはＦＡＣＳ法のいずれかによって分析した。簡単には、ＣＬＬ患者由来のＰＢＭＣを単細胞懸濁液にし、ジギトニン（０．００２％）を用いて静かに透過性にした。蛍光定量法（ｆｌｕｏｒｉｍｔｅｒｙ）ベースの方法では、１００μＭのＪＣ−１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）をこのときに添加し、次いで、細胞を、個々のウェルに個々のＢＨ３−単独ペプチドが含まれた３８４ウェルプレートに負荷した。次いで、ＪＣ１−ＢＨ３アッセイを三連で、Ｔｅｃａｎ  Ｓａｆｉｒｅ  ２において、励起５４５＋／−２０ｎＭおよび発光５９０＋／−２０ｎｍで３時間の時間推移にて実施した。ＦＡＣＳベースの方法では、ＣＬＬ患者ＰＢＭＣ由来の単細胞懸濁液を、ヒトＦｃ  Ｂｌｏｃｋ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、続いて抗ＣＤ１９−Ｖ４５０（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）および抗ＣＸＣＲ４−ＡＰＣ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を用いて染色した。細胞をＰＢＳ中で洗浄し、次いで個々のＦＡＣＳチューブに添加し、各々のチューブには個々のＢＨ３−単独ペプチドを含めた。サンプルを室温で３０分間インキュベートし、１００μＭのＪＣ−１を各々のチューブに添加し、サンプルをさらに３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ測定はＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩで、４０７、４８８および６３３ｎｍのレーザーを用いて行なった。ＪＣ−１を４８８−ｎｍレーザーで、５３０／３０−ｎｍフィルター（ＦＩＴＣ）および５８５／４２−ｎｍフィルター（ＰＥ）を用いて測定し、ミトコンドリア脱分極の程度を、ＰＥシグナルのメジアンの変化のサロゲートを用いて計算した。各々のＢＨ３ペプチドに応答してレポートされたミトコンドリア脱分極を、陰性コントロールであるジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（０％）および陽性コントロールであるミトコンドリア内脱共役剤カルボニルシアニド４−（トリフルオロメトキシ）−フェニルヒドラゾン（ＦＣＣＰ）（１００％）でのＪＣ−１色素のＰＥ蛍光のメジアン変化の割合に対して正規化する。
【０４６１】
カルセインベース接着アッセイ：コンフルエントなＣＤ１５４＋  ＬまたはＳｔｒｏｍａＮＫＴｅｒｔ細胞の単層を、１×１０４細胞／ウェルを９６ウェルプレート内で２４時間プレート培養することによって作製した。次いで、０．５×１０６細胞／ｍｌのＣＬＬ細胞の単細胞懸濁液を１μｇ／ｍＬのカルセイン−ＡＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で１時間標識した。次いで細胞をスピンダウンさせ、化合物またはビヒクルで１〜２４時間処理した。非接着細胞を吸引によって洗い流した。ＣＬＬ細胞接着を蛍光定量法（励起／発光＝４８５／５２０ｎｍ）によって定量化し、Ｎｉｋｏｎ  ＴＥ２０００倒立型生細胞イメージングシステムを用いて直接可視化した。
【０４６２】
データ分析および統計：結果を、平均の標準誤差および反復回数（各々の図に記載）とともに示す。統計比較には、スチューデントの対応ありもしくは対応なしのｔ−検定、マンホイットニーＵ検定、または線形回帰解析を使用した。解析は、ＰＣ用のＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５ソフトウェアを用いて行なった（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）。フローサイトメトリーデータは、ＦＡＣＳ  Ｄｉｖａバージョン６．１．１（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を用いて解析した。臨床応答は２００８  ＩＷ−ＣＬＬ診断基準を用いて評価し、応答群（ｒｅｓｐｏｎｄｅｒｓ）は、最良の応答として完全奏効または部分奏効が得られた患者と定義し、非応答群（ｎｏｎ−ｒｅｓｐｏｎｄｅｒｓ）は、最初の治療の終了の６ヶ月以内に安定な疾患、不応性疾患または進行性疾患を有する患者と定義した。特に記載のない限り、両側ｐ値≦０．０５を統計的に有意とみなした。
【０４６３】
現在、従来の第一選択のＣＬＬ治療を受けている多くの患者は、しばしば再発し、その処置に対して抵抗性となる。種々の間質に曝露されたＣＬＬ細胞は、細胞毒性化学療法（Ｋｕｒｔｏｖａ  ＡＶら  Ｄｉｖｅｒｓｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｅｌｌｓ
ｐｒｏｔｅｃｔ  ＣＬＬ  ｃｅｌｌｓ  ｆｒｏｍ  ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  ａｎｄ  ｄｒｕｇ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ：ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａ  ｒｅｌｉａｂｌｅ  ａｎｄ  ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ  ｓｙｓｔｅｍ  ｔｏ  ａｓｓｅｓｓ  ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｅｌｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄｒｕｇ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｂｌｏｏｄ．２００９；１１４（２０）：４４４１−４４５０）とＢＨ３−模倣物（ＡＢＴ−７３７またはＡＢＴ−２６３など）（Ｖｏｇｌｅｒ  Ｍら  Ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ  ｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＢＣＬ−ＸＬ  ａｎｄ  ＢＣＬ２Ａ１  ｉｎｄｕｃｅｓ  ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ  １０００−ｆｏｌｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ＡＢＴ−７３７  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｂｌｏｏｄ．２００９；１１３（１８）：４４０３−４４１３）の両方での処置に対して抵抗性となるため、間質微小環境内のＣＬＬ細胞は、間質から増殖シグナルまたは抗アポトーシスシグナルを受け、細胞アポトーシスから保護された状態になることがあり得る。したがって、この相互作用に拮抗作用する薬剤により、ＣＬＬにおける間質媒介性耐性が低減され得る。
【０４６４】
式Ｉの化合物により間質微小環境が調節され得る。臨床試験において、化合物ＩとＢＣＲ経路を標的化する他の薬剤で処置したほとんどの患者が、急速で一過性のリンパ球増加症を示した。なんら理論によって束縛されるものではないが、化合物Ｉは間質微小環境を、ＣＸＣＬ１２／１３に向けてのＣＬＬ細胞の化学走性を阻害すること、間質細胞下でのＣＬＬ細胞の遊走を低減させること、ケモカイン分泌を下方調節すること、または他の下流標的（ＡＫＴおよびＥＲＫなど）のリン酸化を阻害することにより調節する可能性がある。化合物ＩがＣＬＬ−間質相互作用をミトコンドリアのアポトーシスまたはプライミングを増大させることにより調節するかどうかを特性評価するため、ＢＨ３プロファイリングを使用し、死滅促進ＢＣＬ−２ファミリータンパク質の死滅促進ＢＨ３ドメイン由来のペプチドによって誘導されるミトコンドリアの透過性化（ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ）を測定した。
【０４６５】
まず、３０名の患者の末梢血由来のＣＬＬ細胞を調べた。ほとんどの患者は以前に処置を受けたことがなく、最近は誰も治療を受けていなかった。ＢＨ３プロファイリングにおいて０．０３μＭの最終濃度で、ＢＩＭ  ＢＨ３ペプチドは、ほとんどの患者サンプルにおいて有意な量の脱分極を誘導し、サンプルの２２／３０（７３．３％）は１時間までに＞５０％の脱分極を有した。図５８Ａに示されるように、ＣＬＬ細胞はアポトーシスに対して高度にプライミングされた。また、ＢＨ３プロファイリングの結果により、ほとんどのＣＬＬ患者サンプルはＢＡＤ  ＢＨ３ペプチドと比べて比較的高い脱分極を示すことが示され、このことから、主にＢＣＬ−２（ｎ＝２３）に依存性であることが示唆される。図５８Ｂに示されるように、いくつかのサンプルは、ＭＣＬ−１（ｎ＝５）またはＢＣＬ−ＸＬ（ｎ＝２）に対してより依存性であることが観察された。図５８Ｃに示されるように、２００８  ＩＷ−ＣＬＬ診断基準による部分奏効（ＰＲ）または完全奏効（ＣＲ）が得られた処置未経験患者からの処置前サンプルは、フロントラインＣＬＬ治療完結の６ヶ月間または該期間以内で、進行性疾患（ＰＤ）を有する患者からのサンプルよりもプライミングされたことが観察された（ｐ＝０．０２４）。図５８Ｄに示されるように、ＢＨ３プロファイリングは、非変異ＩＧＨＶ状態を有する患者（ｎ＝７）が変異ＩＧＨＶ状態を有する患者（ｎ＝１８）よりも有意にプライミングされることを示す（ｐ＝０．００２６）。図５８Ｅに示されるように、生殖細胞系列とのＶＨ相同性の割合はプライミングレベルと正に相関していることが観察された（ｐ＝０．００４３）。したがって、ＣＬＬ細胞はアポトーシスに対して高度にプライミングされること、ＣＬＬ細胞は通常、ＢＣＬ−２依存性であること、ならびにプライミングの増大は臨床応答の改善および非変異ＩＧＨＶと関連していることが観察された。
【０４６６】
次に、間質曝露ＣＬＬ細胞の接着、生存度およびプライミングに対する化合物Ｉのインビトロでの効果を評価した。図５９Ａ〜Ｅは、一般的に、化合物Ｉによって、間質内に隔離されたＣＬＬ細胞が解放され、間質媒介性耐性が克服されることが観察されたことを示す。末梢血由来ＣＬＬ細胞をカルセイン−ＡＭで標識し、ＳｔｒｏｍａＮＫＴｅｒｔと２４時間、化合物Ｉ（１０μＭ）ありまたはなしで共培養し、静かにピペッティングすることによってすすぎ洗浄し、広視野顕微鏡検査によって可視化した。図５９Ａに示されるように、ＳｔｒｏｍａＮＫＴｅｒｔと共培養し、化合物Ｉで処理したＣＬＬ細胞では、２４時間目に示された接着性は低かった。また、図５９Ｂにより、ＣＬＬ細胞の接着の低減は、１時間だけの化合物Ｉでの処理の後（ＣＬＬ細胞死が起こり得る前）であっても検出可能であることが示された。さらに、図５９Ｃにより、化合物Ｉに応答した間質からのＣＬＬ細胞の剥離によりＣＬＬ細胞の死滅の増強がもたらされることが示された。特に、２名の患者について生存度の平均割合をＳＥＭとともに図５９Ｃに示したが、これらの患者ではともに、１００ｎＭのＡＢＴ−７３７または１０μＭの化合物Ｉのいずれか単独に対して著しい間質媒介性耐性が示された。この耐性は、上記２つの化合物の組み合わせによって克服されることが観察された。
【０４６７】
化合物ＩによるＣＬＬ細胞の直接的な死滅を調べることを回避するため、ＡＢＴ−７３７と化合物Ｉの両方に対して耐性である２つのＣＬＬ患者サンプルを間質の存在下で処理した。両方のサンプルにおいて、化合物Ｉにより、間質の存在下におけるＡＢＴ−７３７に対するＣＬＬ細胞の感受性が回復した。さらに、種々の用量のＡＢＴ−７３７およびその経口アナログＡＢＴ−２６３と組み合わせて化合物Ｉ（１０μＭ）で処理した間質曝露ＣＬＬ細胞により、間質曝露ＣＬＬ細胞は、いずれかのＢＨ３模倣物による死滅の用量依存性の増大を示すことが示された。特に、図５９Ｄを参照すると、ＳｔｒｏｍａＮＫＴｅｒｔの存在下ではＡＢＴ−７３７に対する耐性が観察されたが、１０ｎＭという低い濃度のＡＢＴ−７３７で克服され得る。図５９Ｅを参照すると、ＡＢＴ−２６３でも同様の用量反応曲線が得られた。
【０４６８】
ＰＩ３Ｋ阻害によってプライミングの増大により間質曝露ＣＬＬ細胞の感受性が増大したのかどうかを調べるため、ＰＢ由来ＣＬＬ細胞をＳｔｒｏｍａＮＫＴｅｒｔ細胞とともにまたはなしで２４時間培養し、Ａｎｎｅｘｉｎ−ＰＩおよびＢＨ３プロファイリングを用いて調べた。未処理ＣＬＬ細胞では、おおむね、２４時間にわたるエキソビボ培養においてアポトーシスが示された（Ｃｏｌｌｉｎｓ  ＲＪら  Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）ｏｆ  Ｂ−ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋａｅｍｉａ  ｃｅｌｌｓ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｔｈｅｉｒ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．Ｂｒｉｔｉｓｈ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ．１９８９；７１（３）：３４３−３５０）。４つのＣＬＬ患者サンプルの間質共培養により、未処理細胞においてアポトーシスからの保護がもたらされた。特に、図６０Ａを参照すると、二元配置ＡＮＯＶＡ分析により、化合物Ｉの非存在下では、間質によってアポトーシスからの保護がもたらされることが示された。間質の非存在下では、化合物Ｉによって、コントロールよりも多くのアポトーシスが誘導されることが観察された。間質の存在下では、化合物Ｉにより、コントロールよりも有意に多くのアポトーシスが誘導されることが観察された。したがって、間質の存在下または非存在下での、化合物Ｉによる死滅間に有意差は観察されなかった。
【０４６９】
しかしながら、耐性またはアポトーシスからの保護は化合物Ｉによって逆転された。化合物Ｉ（１０μＭ）で処理した間質曝露ＣＬＬ細胞では４０％を超えるアポトーシスが検出されたのに対して、未処理間質曝露ＣＬＬ細胞ではアポトーシスは１０％未満であった。また、図６０Ｂに示されるように、ＢＨ３プロファイリングにより、化合物Ｉで処理した間質曝露ＣＬＬ細胞では、２４時間の時点に未処理細胞と比べてミトコンドリアのプライミングの増大が示されている（ｐ＝０．０７５）ことが示された。図６０Ｃに示されるように、ペプチドとして使用したＢＡＤ  ＢＨ３ペプチドおよびＡＢＴ−７３７の両方で、化合物Ｉで処理したＣＬＬ細胞において有意に多くのミトコンドリア脱分極が誘導された（それぞれ、ｐ＝０．０４６およびｐ＝０．０４７）。このことは、化合物Ｉでの処理により、ミトコンドリアのプライミングの増大およびＢＣＬ−２拮抗作用に対する感受性の増大を伴って、間質からのＣＬＬの剥離がもたらされることを示唆する。
【０４７０】
総合すると、本実施例により、ＰＩ３Ｋ阻害は間質によるＣＬＬ細胞の保護に拮抗作用すること、ならびに化合物ＩはＣＬＬ細胞に対する間質の効果：接着、ミトコンドリアのプライミングの低減、およびＢＣＬ−２を阻害する治療に対する感受性の低減を逆転することにおいて有効であることが示唆された。また、化合物Ｉの有効性は、患者におけるリンパ球再分布と関連している可能性がある。ＣＬＬ細胞を間質から解放することにより、化合物Ｉは、おそらくＣＬＬ細胞が抗アポトーシス間質環境から逸出することを可能にし、それによりそのミトコンドリアのプライミングを増大させ、アポトーシスを受け易くした。また、本実施例によって、ＰＩ３Ｋ阻害とＢＣＬ−２阻害との組み合わせによりＢＣＬ−２阻害に対する応答が増大することが示唆された。
【図２７】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２６】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１−１】
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【図３１−２】
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【図３１−３】
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【図３２】
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【図３３−１】
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【図３３−２】
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【図３４−１】
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【図３４−２】
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【図３５】
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【図３６−１】
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【図３６−２】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９Ａ】
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【図３９Ｂ】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９Ａ】
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【図４９Ｂ】
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【図４９Ｃ】
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【図４９Ｄ】
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【図４９Ｅ】
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【図５０Ａ】
2014510729.tif 000109
【図５０Ｂ−１】
2014510729.tif 000110
【図５０Ｂ−２】
2014510729.tif 000111
【図５０Ｃ】
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【図５０Ｄ】
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【図５０Ｅ】
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【図５０Ｆ】
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【図５１】
2014510729.tif 000116
【図５２】
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【図５３Ａ】
2014510729.tif 000118
【図５３Ｂ】
2014510729.tif 000119
【図５４】
2014510729.tif 000120
【図５５】
2014510729.tif 000121
【図５６】
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【図５７Ａ】
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【図５７Ｂ】
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【図５８Ａ】
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【図５８Ｂ】
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【図５８Ｃ】
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【図５８Ｄ】
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【図５８Ｅ】
2014510729.tif 000129
【図５９Ａ】
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【図５９Ｂ】
2014510729.tif 000131
【図５９Ｃ】
2014510729.tif 000132
【図５９Ｄ】
2014510729.tif 000133
【図５９Ｅ】
2014510729.tif 000134
【図６０Ａ】
2014510729.tif 000135
【図６０Ｂ】
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【図６０Ｃ】
2014510729.tif 000137
【手続補正書】
【提出日】平成25年10月24日(2013.10.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を処置するための組み合わせ物であって、有効量の式Ａ
【化３１】
2014510729.tif 000138
の化合物；または
その薬学的に許容され得る塩；ならびに
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤；ならびに
必要に応じてベンダムスチン、リツキシマブ、レナリドマイドおよびオファツムマブからなる群より選択される１つ以上の追加の治療剤
を含み、
式中ＲはＨ、ハロまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり；Ｒ’はＣ１−Ｃ６アルキルであり、
該組み合わせ物はそのような処置の必要な被験体に投与されることを特徴とする、組み合わせ物。
【請求項２】
前記化合物が
【化３２】
2014510729.tif 000139
である、請求項１に記載の組み合わせ物。
【請求項３】
前記化合物が
【化３３】
2014510729.tif 000140
である、請求項１に記載の組み合わせ物。
【請求項４】
前記癌が血液学的な悪性疾患である、請求項１に記載の組み合わせ物。
【請求項５】
前記血液学的な悪性疾患がＢ細胞悪性疾患である、請求項４に記載の組み合わせ物。
【請求項６】
前記血液学的な悪性疾患が白血病またはリンパ腫である、請求項４に記載の組み合わせ物。
【請求項７】
前記癌が慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）または非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である、請求項１に記載の組み合わせ物。
【請求項８】
前記癌が低悪性度非ホジキンリンパ腫（ｉＮＨＬ）である、請求項１に記載の組み合わせ物。
【請求項９】
前記化合物および前記１つ以上の治療剤は各々が、少なくとも１サイクルの間に少なくとも１回投与され、該１つ以上の治療剤が前記被験体に、該化合物の投与と同じまたは異なるサイクルで投与される、請求項１に記載の組み合わせ物。
【請求項１０】
前記サイクルが７〜４２日間である、請求項９に記載の組み合わせ物。
【請求項１１】
前記１つ以上の治療剤が前記被験体に、少なくとも１サイクルの少なくとも初日と２日目に投与される、請求項９に記載の組み合わせ物。
【請求項１２】
前記１つ以上の治療剤が前記被験体に少なくとも１サイクルの間に毎週投与される、請求項９に記載の組み合わせ物。
【請求項１３】
５０ｍｇ〜２００ｍｇの前記化合物が前記被験体に１日あたり２回投与される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組み合わせ物。
【請求項１４】
５０ｍｇ／ｍ２〜１，５００ｍｇ／ｍ２の前記１つ以上の治療剤が前記被験体に投与される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組み合わせ物。
【請求項１５】
前記化合物が、該化合物および少なくとも１つの薬学的に許容され得る賦形剤を含む薬学的組成物中に存在する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組み合わせ物。
【請求項１６】
前記被験体が標準の化学療法の処置に対して抵抗性である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組み合わせ物。
【請求項１７】
前記被験体が少なくとも１つの肥大リンパ節を有する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組み合わせ物。
【請求項１８】
前記被験体が、ｉ）少なくとも１つの化学療法の処置に不応性であるか、またはｉｉ）化学療法での処置後に再発しているか、またはそれらの組み合わせである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組み合わせ物。
【請求項１９】
Ｂ細胞障害を有する被験体を処置するための組み合わせ物であって、
該組み合わせ物は、
式Ｉ”
【化３４】
2014510729.tif 000141
の化合物、
またはその薬学的に許容され得る塩；ならびに
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤；ならびに
必要に応じてベンダムスチン、リツキシマブ、レナリドマイドおよびオファツムマブからなる群より選択される１つ以上の追加の治療剤
を含み、該被験体は、Ｂ細胞悪性疾患を有することを確認され、そして該被験体は、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））、カルフィルゾミブ（ＰＲ−１７１）、ＰＲ−０４７、ジスルフィラム、ラクタシスチン、ＰＳ−５１９、エポネマイシン、エポキソマイシン、アクラシノマイシン、ＣＥＰ−１６１２、ＭＧ−１３２、ＣＶＴ−６３４１７、ＰＳ−３４１、ビニルスルホントリペプチドインヒビター、リトナビル、ＰＩ−０８３、（＋／−）−７−メチルオムラリド、（−）−７−メチルオムラリド、ペリホシン、リツキシマブ、クエン酸シルデナフィル（Ｖｉａｇｒａ（登録商標））、ＣＣ−５１０３、サリドマイド、エプラツズマブ（ｈＬＬ２−抗ＣＤ２２ヒト化抗体）、シンバスタチン、エンザスタウリン、Ｃａｍｐａｔｈ  １Ｈ（登録商標）、デキサメタゾン、ＤＴ  ＰＡＣＥ、オブリメルセン、アンチネオプラストンＡ１０、アンチネオプラストンＡＳ２  １、アレムツズマブ、βアレチン、シクロホスファミド、塩酸ドキソルビシン、ＰＥＧ化リポソーム塩酸ドキソルビシン、プレドニゾン、プレドニゾロン、クラドリビン、硫酸ビンクリスチン、フルダラビン、フィルグラスチム、メルファラン、組み換えインターフェロンα、カルムスチン、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、エトポシド、メルファラン、ドラスタチン１０、インジウムＩｎ１１１モノクローナル抗体ＭＮ−１４、イットリウムＹ９０ヒト化エプラツズマブ、抗胸腺細胞グロブリン、ブスルファン、シクロスポリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、治療用異種リンパ球、イットリウムＹ９０イブリツモマブチウキセタン、シロリムス、タクロリムス、カルボプラチン、チオテパ、パクリタキセル、アルデスロイキン、組み換えインターフェロンα、ドセタキセル、イホスファミド、メスナ、組み換えインターロイキン−１２、組み換えインターロイキン−１１、Ｂｃｌ−２ファミリータンパク質インヒビターＡＢＴ−２６３、デニロイキンジフチトクス、タネスピマイシン、エベロリムス、ペグフィルグラスチム、ボリノスタット、アルボシジブ、組み換えｆｌｔ３リガンド、組み換えヒトトロンボポエチン、リンホカイン活性化キラー細胞、アミホスチン三水和物、アミノカンプトテシン、塩酸イリノテカン、酢酸カスポファンギン、クロファラビン、エポエチンα、ネララビン、ペントスタチン、サルグラモスチム、二酒石酸ビノレルビン、ＷＴ−１アナログペプチドワクチン、ＷＴ１  １２６−１３４ペプチドワクチン、フェンレチニド、イクサベピロン、オキサリプラチン、モノクローナル抗体ＣＤ１９、モノクローナル抗体ＣＤ２０、ω−３脂肪酸、塩酸ミトキサントロン、酢酸オクトレオチド、トシツモマブおよびヨウ素Ｉ１３１トシツモマブ、モテキサフィンガドリニウム、三酸化ヒ素、ティピファルニブ、自家ヒト腫瘍由来ＨＳＰＰＣ−９６、ベルツズマブ、ブリオスタチン１、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、クロラムブシル、ペントスタチン、ルミリキシマブ、アポリズマブ、抗ＣＤ４０、オファツムマブ、テムシロリムス、ベンダムスチン、プリンアナログ、レナリドマイド、アルキル化剤ならびにアントラサイクリン含有治療薬からなる群より選択される少なくとも１つ以上の処置に不応性であるか、または該処置後に再発しているか、またはそれらの組み合わせであることを特徴とする、組み合わせ物。
【請求項２０】
前記被験体が、リツキシマブ、アルキル化剤、フルダラビンおよびアントラサイクリン含有治療薬からなる群より選択される少なくとも１つ以上の処置に不応性であるか、または該処置後に再発している、ならびにそれらの組み合わせである、請求項１９に記載の組み合わせ物。
【請求項２１】
５０ｍｇ〜２００ｍｇの前記化合物が前記被験体に、少なくとも１サイクル以上の間に１日あたり２回投与される、請求項１９に記載の組み合わせ物。
【請求項２２】
５０ｍｇ／ｍ２〜１，５００ｍｇ／ｍ２の前記１つ以上の追加の治療剤が前記被験体に、少なくとも１サイクル以上の間に少なくとも１回投与され、該１つ以上の治療剤が該被験体に、前記化合物の投与と同じまたは異なるサイクルで投与される、請求項１９または２０に記載の組み合わせ物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８５】
前述の実施形態のいくつかでは、上記化合物の用量は５０ｍｇ〜２００ｍｇであり、オファツムマブの用量は２００ｍｇ〜１５００ｍｇである。前述の実施形態のいくつかでは、その後のオファツムマブ用量と異なる初期用量のオファツムマブが投与される。
例えば、本発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
癌を処置するための方法であって、そのような処置の必要な被験体に有効量の式Ａ
【化３１】
2014510729.tif 000142
の化合物；または
その薬学的に許容され得る塩；ならびに
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤；ならびに
必要に応じてベンダムスチン、リツキシマブ、レナリドマイドおよびオファツムマブからなる群より選択される１つ以上の追加の治療剤
を投与するステップを含み、
式中ＲはＨ、ハロまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり；Ｒ’はＣ１−Ｃ６アルキルである、方法。
（項目２）
前記化合物が
【化３２】
2014510729.tif 000143
である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記化合物が
【化３３】
2014510729.tif 000144
である、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記癌が血液学的な悪性疾患である、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記血液学的な悪性疾患がＢ細胞悪性疾患である、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記血液学的な悪性疾患が白血病またはリンパ腫である、項目４に記載の方法。
（項目７）
前記癌が慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）または非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である、項目１に記載の方法。
（項目８）
前記癌が低悪性度非ホジキンリンパ腫（ｉＮＨＬ）である、項目１に記載の方法。
（項目９）
前記化合物および前記１つ以上の治療剤は各々が、少なくとも１サイクルの間に少なくとも１回投与され、該１つ以上の治療剤が前記被験体に、該化合物の投与と同じまたは異なるサイクルで投与される、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記サイクルが７〜４２日間である、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記１つ以上の治療剤が前記被験体に、少なくとも１サイクルの少なくとも初日と２日目に投与される、項目９に記載の方法。
（項目１２）
前記１つ以上の治療剤が前記被験体に少なくとも１サイクルの間に毎週投与される、項目９に記載の方法。
（項目１３）
５０ｍｇ〜２００ｍｇの前記化合物が前記被験体に１日あたり２回投与される、項目１〜８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４）
５０ｍｇ／ｍ２〜１，５００ｍｇ／ｍ２の前記１つ以上の治療剤が前記被験体に投与される、項目１〜８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１５）
前記化合物が、該化合物および少なくとも１つの薬学的に許容され得る賦形剤を含む薬学的組成物中に存在する、項目１〜８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１６）
前記被験体が標準の化学療法の処置に対して抵抗性である、項目１〜８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１７）
前記被験体が少なくとも１つの肥大リンパ節を有する、項目１〜８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１８）
前記被験体が、ｉ）少なくとも１つの化学療法の処置に不応性であるか、またはｉｉ）化学療法での処置後に再発しているか、またはそれらの組み合わせである、項目１〜８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１９）
Ｂ細胞障害を有する被験体を処置する方法であって、
ａ）Ｂ細胞悪性疾患を有する被験体を確認するステップであって、該被験体は、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））、カルフィルゾミブ（ＰＲ−１７１）、ＰＲ−０４７、ジスルフィラム、ラクタシスチン、ＰＳ−５１９、エポネマイシン、エポキソマイシン、アクラシノマイシン、ＣＥＰ−１６１２、ＭＧ−１３２、ＣＶＴ−６３４１７、ＰＳ−３４１、ビニルスルホントリペプチドインヒビター、リトナビル、ＰＩ−０８３、（＋／−）−７−メチルオムラリド、（−）−７−メチルオムラリド、ペリホシン、リツキシマブ、クエン酸シルデナフィル（Ｖｉａｇｒａ（登録商標））、ＣＣ−５１０３、サリドマイド、エプラツズマブ（ｈＬＬ２−抗ＣＤ２２ヒト化抗体）、シンバスタチン、エンザスタウリン、Ｃａｍｐａｔｈ  １Ｈ（登録商標）、デキサメタゾン、ＤＴ  ＰＡＣＥ、オブリメルセン、アンチネオプラストンＡ１０、アンチネオプラストンＡＳ２  １、アレムツズマブ、βアレチン、シクロホスファミド、塩酸ドキソルビシン、ＰＥＧ化リポソーム塩酸ドキソルビシン、プレドニゾン、プレドニゾロン、クラドリビン、硫酸ビンクリスチン、フルダラビン、フィルグラスチム、メルファラン、組み換えインターフェロンα、カルムスチン、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、エトポシド、メルファラン、ドラスタチン１０、インジウムＩｎ１１１モノクローナル抗体ＭＮ−１４、イットリウムＹ９０ヒト化エプラツズマブ、抗胸腺細胞グロブリン、ブスルファン、シクロスポリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、治療用異種リンパ球、イットリウムＹ９０イブリツモマブチウキセタン、シロリムス、タクロリムス、カルボプラチン、チオテパ、パクリタキセル、アルデスロイキン、組み換えインターフェロンα、ドセタキセル、イホスファミド、メスナ、組み換えインターロイキン−１２、組み換えインターロイキン−１１、Ｂｃｌ−２ファミリータンパク質インヒビターＡＢＴ−２６３、デニロイキンジフチトクス、タネスピマイシン、エベロリムス、ペグフィルグラスチム、ボリノスタット、アルボシジブ、組み換えｆｌｔ３リガンド、組み換えヒトトロンボポエチン、リンホカイン活性化キラー細胞、アミホスチン三水和物、アミノカンプトテシン、塩酸イリノテカン、酢酸カスポファンギン、クロファラビン、エポエチンα、ネララビン、ペントスタチン、サルグラモスチム、二酒石酸ビノレルビン、ＷＴ−１アナログペプチドワクチン、ＷＴ１  １２６−１３４ペプチドワクチン、フェンレチニド、イクサベピロン、オキサリプラチン、モノクローナル抗体ＣＤ１９、モノクローナル抗体ＣＤ２０、ω−３脂肪酸、塩酸ミトキサントロン、酢酸オクトレオチド、トシツモマブおよびヨウ素Ｉ１３１トシツモマブ、モテキサフィンガドリニウム、三酸化ヒ素、ティピファルニブ、自家ヒト腫瘍由来ＨＳＰＰＣ−９６、ベルツズマブ、ブリオスタチン１、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、クロラムブシル、ペントスタチン、ルミリキシマブ、アポリズマブ、抗ＣＤ４０、オファツムマブ、テムシロリムス、ベンダムスチン、プリンアナログ、レナリドマイド、アルキル化剤ならびにアントラサイクリン含有治療薬からなる群より選択される少なくとも１つ以上の処置に不応性であるか、または該処置後に再発しているか、またはそれらの組み合わせであるステップ；
ｂ）そのような処置の必要な被験体に、式Ｉ”
【化３４】
2014510729.tif 000145
の化合物、
またはその薬学的に許容され得る塩；ならびに
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤；ならびに
必要に応じてベンダムスチン、リツキシマブ、レナリドマイドおよびオファツムマブからなる群より選択される１つ以上の追加の治療剤
を投与するステップ
を含む方法。
（項目２０）
前記被験体が、リツキシマブ、アルキル化剤、フルダラビンおよびアントラサイクリン含有治療薬からなる群より選択される少なくとも１つ以上の処置に不応性であるか、または該処置後に再発している、ならびにそれらの組み合わせである、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
５０ｍｇ〜２００ｍｇの前記化合物が前記被験体に、少なくとも１サイクル以上の間に１日あたり２回投与される、項目１９に記載の方法。
（項目２２）
５０ｍｇ／ｍ２〜１，５００ｍｇ／ｍ２の前記１つ以上の追加の治療剤が前記被験体に、少なくとも１サイクル以上の間に少なくとも１回投与され、該１つ以上の治療剤が該被験体に、前記化合物の投与と同じまたは異なるサイクルで投与される、項目１９または２０に記載の方法。
【国際調査報告】
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