(57)【要約】  本発明は、構造式Ｉを満たす化合物。【化１３】2014522417.tif 000015［ここで、Ｇは、式ＩＩを満たし、ＨＯ−ＣＨ２−｛ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−Ｏ｝ｍ−ＣＨ２−｛Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ＣＨ２｝ｑ―                                                                        式ＩＩそれぞれのｎは独立して１から３０の整数であり；ｍは１から１０の整数であり；ｑは０又は１である。］を開示する。これらの化合物は、温度感受性リポソームの脂質二重層に添加され得るものであり、３７℃でリポソーム含有物の漏れを防止し、循環からのクリアランスを抑制する。
2014522417.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造式Ｉを満たす化合物。
【化９】
2014522417.tif 000011
［ここで、Ｇは、式ＩＩを満たし、
ＨＯ−ＣＨ２−｛ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−Ｏ｝ｍ−ＣＨ２−｛Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ＣＨ２｝ｑ―
式ＩＩ
それぞれのｎは独立して１から３０の整数であり；ｍは１から１０の整数であり；ｑは０又は１である。］
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であり、次の式ＩＩＩ、式ＩＶ及びこれらの組み合わせからなる群から選択される化合物。
【化１０】
2014522417.tif 000012
【化１１】
2014522417.tif 000013
【請求項３】
請求項１又は２のいずれか一項に記載の化合物であり、ｍが２から６、好ましくは２又は３である、化合物。
【請求項４】
請求項１乃至３のいずれか一項に記載の化合物であり、それぞれのｎが１２から１８、好ましくは１３、１５又は１７である、化合物。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物であり、式Ｖを満たす化合物。
【化１２】
2014522417.tif 000014
［ここで、ｒはそれぞれ独立して１から３０の整数、及び差（ｒ−ｓ）は０から５、より好ましくは１から３である。］
【請求項６】
温度感受性キャリアであり、キャビティを囲む脂質二重層シェルを含み、前記脂質二重層が、請求項１乃至５のいずれか一項に記載の、１又複数の化合物を含む、温度感受性キャリア。
【請求項７】
請求項６に記載の温度感受性キャリアであり、治療薬物、造影剤及びこれらの組み合わせからなる群から選択される活性成分を含む、温度感受性キャリア。
【請求項８】
請求項１乃至５のいずれか一項に記載の化合物の、温度感受性キャリアの脂質二重層シェルへの添加物としての使用。
【請求項９】
治療及び造影方法それぞれに、含まれる物質のインビボ放出で使用するための請求項６又は７のいずれか一項に記載の温度感受性キャリアであり、前記方法が前記キャリアのいずれかを動物、好ましくはヒトに投与すること、及びそこに含まれる物質のインビボ放出に影響を与えることを含む、温度感受性キャリア。
【請求項１０】
請求項６又は７のいずれか一項に記載のキャリアと、少なくとも１つの薬物を含む、薬物送達システム。
【請求項１１】
請求項６又は７のいずれか一項に記載のキャリアと、少なくとも１つのＭＲＩ造影強化物質を含む、イメージングシステム。
【請求項１２】
請求項６又は７のいずれか一項に記載のキャリア、少なくとも１つの薬物、及び少なくとも１つのＭＲＩ造影強化物質を含む、造影化薬物送達システム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬物又は診断試薬の標的化局在送達のための温度感受性キャリア（担体）の分野に属する。本発明は脂質模倣化合物に関し、特に、含まれる温度感受性材料放出のために好適なリポソームなどのキャリアを含み、及び温度応答性放出キャリアの手段による薬物及び／又は造影剤の局在化送達に関する。
【背景技術】
【０００２】
ほとんど１つの組織に局在化する多くの疾患は、全身投与された薬物で治療され得る。標準的癌治療のよく知られた例は、全身投与化学療法であり、これは望ましくない生体内分布及び毒性により前記患者へ大きな副作用を生じる結果となる。これらの薬剤の治療窓（可能範囲）は通常は、一方では前記疾患組織での治療濃度を必要と、他方では、標的とされていない肝臓、脾臓などの器官には毒性効果を最小化することが求められる。
【０００３】
例えば、ナノキャリアからの細胞増殖抑制剤の局所放出は、標準治療と比較してより効果的治療及びより広い治療窓を約束するものである。局所的薬物送達はまた、肝臓癌などの場合にしばしばおこる外科的治療などの他の治療選択肢が危険すぎる場合に重要となる。局所的薬物送達はまた、冠状動脈のアテローム性動脈硬化などの心血管疾患（ＣＶＤ）の多くの適応症のための好ましい治療となってきている。
【０００４】
磁気共鳴（ＭＲＩ）や超音波造影などの医学用造影技術は、治療計画で使用されるだけでなく、画像による案内の下で局所的薬物送達を制御するために使用され得る。収束超音波は、いくつかの利点を持つということから、局所的薬物送達を誘導するための好ましい方法である。この技術は、非侵襲性であり、疾患組織に収束させることができ、回りの組織に及ぼす悪影響は非常に限定的なものである。超音波は薬物送達のために２つの種類のトリガーを与え得る。第１は、前記標的化された組織が、体温から１００℃までの温度範囲で、約１／２度の精度で制御されて加熱され得る、ということである。第２は、前記超音波は強い圧力振動であり、これにより機械力に基く薬物送達を促進する、ことである。
【０００５】
当業者は、薬物又は造影化合物などの材料放出のためのキャリアシステムを提供する際にいくつかの困難に直面している。従って、例えば前記キャリアシステムは、前記材料が十分な量で負荷され得るように設計される必要がある。特に、前記放出されるべき材料が薬物を含む場合、前記キャリアシステムは外部刺激に感受性であることが必要であり、前記刺激は例えば温度や圧力の（局所的）変化であり、これにより薬物の迅速かつ局所的放出を可能にするものである。さらに、前記薬物送達プロセスは完全に制御される必要があり、即ち治療サイトでの前記薬物放出はインビボで測定可能であり、薬物放出の量及び速度は続く刺激適用の決定のための入力パラメータとして利用される必要があり、それにより薬物送達が造影案内フィードバックループで制御され得るものとなる。
【０００６】
リポソーム薬物治療の効果の大きな改善は、外部刺激の手段により薬物の放出を引き起こす（トリガー）ことで得られ得る。包埋（カプセル化）分子の放出を引き起こすための１つの方法は温度感受性リポソームを使用することである。この場合、前記薬物放出は前記リポソーム膜の溶融相転移温度（Ｔｍ）を超える温度で生じる。Ｔｍで、前記脂質膜の変化は、ゲル状態から液体状相へ変移することで生じる。この変移は、溶質及び水の前記膜への透過性を大きく増加させる。ｌｙｓｏ−ＰＣ、アセチル化ＭＰＰＣ及び血小板活性化因子（ＰＡＦ）などのリポソーム二重層内のホスファチジルコリンの導入は、前記リポソームの性質に大きな効果を与える。１９８８年、Ｂｒａｔｔｏｎらは、これらの脂質が、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）系リポソームのＴｍを下げるために使用され得る、ということを示した。Ｎｅｅｄｈａｍらは、ｌｙｓｏ−ＰＣ／ＤＰＰＣ／ＤＰＰＥ−ＰＥＧ２０００からなる低温度感受性リポソーム（ＬＴＳＬ）を設計し、これは温和な温熱条件（３９から４２℃）に応じて秒の時間で包埋されたドキソルビシン（ＴｈｅｒｍｏＤｏｘ（登録商標））を放出するものである。前記Ｔｍに近い温度で温度感受性システムの内部から水溶液を迅速に放出させることは、過渡的孔形成によるとされた。これらの孔は、ｌｙｓｏ−ＰＣ及びＰＥＧ化リン脂質などのミセル形成リン脂質の存在下安定である。さらに、前記過渡的孔形成は、前記脂質二重層内の横方向拡散によりリゾ脂質の蓄積によるとされた。ドキソルビシンを負荷したｌｙｓｏ−ＰＣ（Ｒ＝Ｃ１５Ｈ３１、図１）系ＬＴＳＬと外部から適用された領域温度増加と組み合わせることは、温度誘導薬物送達の効果改善を示した。前記腫瘍でリポソーム蓄積に依存する代わりに、ドキソルビシンの温度感受性リポソーム製剤（処方物）を注入後１時間の間で温熱療法が適用された。この細胞増殖抑制剤は、前記腫瘍の微小血管に放出され、続いて腫瘍細胞に取り込まれた。ドキソルビシン負荷ｌｙｓｏ−ＰＣ系ＬＴＳＬは、針系ＲＦ切除と組み合わせて薬物送達に適用することに成功したが、３７℃での血漿中でのリポソーム製剤の安定性は最適ではなく、１時間で４０％までのドキソルビシン放出を示す。
【０００７】
被験者に、治療的及び／又は診断薬物を局所的に送達するための温度感受性キャリアの分野において、より長い循環時間、ヒトの正常温度（３７℃）で活性物質のより少ない漏れ、及び前記システムからのより遅い除去（クリアランス）を可能とするキャリアを提供する必要性が存在する。
【０００８】
この要求に対処する参考文献として、Ｌａｒｓ  Ｈ．Ｌｉｎｄｎｅｒらの、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４、Ｖｏｌｕｍｅ  １０、Ｉｓｓｕｅ  ６、２１６８−２１７８が参照できる。ここで、リポソームは、ＤＰＰＣ（１、２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）及びＤＳＰＣ（１、２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）に加えて第３の成分に基き製造される。かかる第３の成分は、ＤＰＰＧＯＧ（１、２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセログリセロール）である。得られる３成分リポソームは、３７℃でより漏れが少なく、循環系からのクリアランスが少ないことを示す。
【０００９】
Ｌｉｎｄｎｅｒらによる前記方法は構造的により複雑であり、リン脂質に限定されるものである。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｌａｒｓ  Ｈ．  Ｌｉｎｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４、Ｖｏｌｕｍｅ  １０、Ｉｓｓｕｅ  ６、２１６８−２１７８．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
従って望ましいことは、少なくとも同じ程度の３７℃での漏れを防止し、少なくとも同じ程度のゆっくりとしたクリアランスを持ち、かつ複雑でないリポソーム構造に基づく、温度感受性リポソームを得るための合成ツールが与えられることである。さらに、望ましいことは、Ｌｉｎｄｎｅｒらにより開示されるリポソームよりもより遅いクリアランスを示す温度感受性リポソームを与える合成ツールを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
前記要求を満たすために、１つの側面で本発明は式Ｉの化合物を提供する。
【００１３】
【化１】
2014522417.tif 000003
ここで、Ｇは式ＩＩを満たす基を表す。
ＨＯ−ＣＨ２−｛ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−Ｏ｝ｍ−ＣＨ２−｛Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ＣＨ２｝ｑ―
式ＩＩ
ここでそれぞれのｎは独立して１から３０の整数であり；ｍは１から１０の整数であり；ｑは０又は１である。
【００１４】
他の側面では本発明は温度感受性キャリアに関し、これはキャビティを囲む脂質二重層シェルを含み、前記脂質二重層が上で定めた１又は複数の化合物を含む。
【００１５】
さらなる側面で本発明は、上で定めた式Ｉの化合物の、温度感受性キャリアの脂質二重層シェルへの添加物としての使用である。
【００１６】
さらなる側面で、前記温度感受性キャリアは、治療又は診断薬物の局所的投与のために提供され、前記キャリアはキャビティを囲む脂質二重層シェル及び／又は前記薬物を含むキャビティを含み、前記脂質二重層が上で定めた式Ｉの化合物を含む。
【００１７】
他の側面では本発明は、治療及び造影方法それぞれへの、含まれる物質のインビボ放出での使用のための前記いずれかのキャリアに関し、動物、好ましくはヒトへの投与、及びそれに含まれる物質のインビボ放出に影響を与えることを含む。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は、前記脂質二重層に１１５、３（以下説明）を含み、水性内腔にドキソルビシンと［Ｇｄ（ＨＰＤＯ３Ａ）（Ｈ２Ｏ）］を含む、温度感受性リポソームのクライオ透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）画像を示す。
【図２】図２は、１１５、３を含むＴＳＬの内腔のドキソルビシンの包埋化（カプセル化）の時間経過を示すグラフである。
【図３】図３は、５０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）中に、１１５、３を含むＴＳＬについて、３７℃及び４２℃でのドキソルビシンの高温での放出を示すグラフである。
【図４】図４は、５０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）中に、１１５、３を含むＴＳＬの、２５℃から５５℃（加熱勾配は０．５℃／分）への直線的温度増加の間の蛍光を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
理解されるべきことは、本発明はここで記載された実施態様及び式には限定されないということである。さらに理解されるべきことは、特許請求の範囲で用語「含む」は、他の要素又はステップを除外するものではないということである。不定冠詞又は定冠詞が使用される場合、「１つの」、「前記」などの単数表現は、特に断りがない限り複数を含むものである。
【００２０】
本発明は、脂質二重層を含むキャリアに関する。具体的にはかかるシェルはキャビティを囲み、半透過性であり、通常リン脂質を含む。前記キャリアは、粒子サイズが数ミクロンから数十ミクロンであるミクロキャリア、及び粒子サイズが数十から数百ナノメートルであるナノキャリアを含む。本発明において、前記キャリアは以後リポソームとして参照される。
【００２１】
リポソームは一般的に、球状ベシクルであり、キャビティ又は内腔を囲む二重膜を含む。前記二重層は少なくとも１つのリン脂質からなり、コレステロールを含んでいても含まなくてもよい。リポソームは、天然由来のリン脂質と、混合脂質鎖（卵ホスファチジルエタノールアミンなど）とからなるか、又はジオレオイルホスファチジルコリンエタノールアミン（ＤＯＰＥ）などの純粋な界面活性成分からなり得る。用語リポソームは、本発明の説明で使用されるように、通常ミセルと記載される脂質球状物を含む。
【００２２】
半透過性シェルの典型的例はまた、リン脂質二重層を含む半透過性膜で見いだされる。リン脂質二重層は、小さい無電荷溶質に対して最も透過性である。リポソームは、リン脂質二重奏に基き製造され得る。
【００２３】
広い意味で、本発明は、さらなるリン脂質成分をリポソームの脂質二重層の構成部分とするよりはむしろ、前記脂質二重層内に別に取り込まれ得る脂質模倣化合物を提供するものである。前記化合物は、特に温度感受性リポソームなどの温度感受性キャリアの脂質二重層に混合されて前記キャリアの循環時間を延長させる効果を持つものである。
【００２４】
脂質模倣化合物
本発明は、１つの側面で、脂質模倣物自体を含む。この化合物は前記式（Ｉ）を満たす。好ましくは、前記化合物は、以下の式ＩＩＩ、式ＩＶの化合物、及びそれらの組み合わせ化合物からなる群から選択される。
【００２５】
【化２】
2014522417.tif 000004
【００２６】
【化３】
2014522417.tif 000005
ここで、前記整数ｍ及びｎは前記の意味を持つ。好ましくは、ｍは２から６、より好ましくは２から４及び最も好ましくは２又は３である。好ましくはそれぞれのｎは独立して８から２４、より好ましくはそれぞれ独立して１２から１８及び最も好ましくはそれぞれ独立して１３、１５又は１７である。
【００２７】
【化４】
2014522417.tif 000006
好ましい実施態様では、前記化合物は下式Ｖを満たすものであり、ここでＧは前記の意味であり、ｒ及びｓはそれぞれ独立して１から３０の整数を表し、差（ｒ−ｓ）は相対的に小さく、即ち１０を下回り、好ましくは０から５であり、より好ましくは１から３である。
【００２８】
本発明の化合物は、温度感受性キャリアの脂質二重層に導入され得るものである。これらは一般的には、キャリアが製造される脂質内に混合することで導入される。これらは好ましくは、前記脂質二重層の５％から５０％、好ましくは１０％から３０％で存在する。
【００２９】
温度感受性リポソームのリン脂質二重層内の本発明の脂質模倣化合物の導入は、既定温度で薬物の迅速かつ定量的放出を可能にする。この温度誘導転移はまた、導入された造影プローブの加熱による放出のために利用され得る（例えば、Ｔ１、Ｔ２、ＣＥＳＴ  ＭＲＩ造影剤）。さらには、脂質模倣物の導入は、ＭＲ造影案内薬物送達の分野で重要な、体温と温熱療法間でＭＲ造影強化を最大化するために膜間水交換速度を調節するために利用され得る。さらに、前記脂質模倣物は電荷を持たず、これによりゼータ電位はＬｉｎｄｎｅｒらのリン酸基を含む脂質の場合に比較してより負とはならず、前記リポソームのゼータ電位に正の効果を与える。
【００３０】
得られたリポソームは、ＤＰＰＧＯＧ系の前記リポソームと同じ程度又はより長い循環挙動を示すことが可能となる。
【００３１】
リン脂質
好ましい脂質二重層（一般的に脂質から作製され得る）はリン脂質に基づくものである。
【００３２】
リン脂質は、一般的に、ホスファチジルコリン、ホスファチジル−エタノールアミン、ホスファチジルセリン及びホスファチジル−イノシトールとして参照される。本発明では、好ましくはホスファチジルコリンを使用する。
【００３３】
温度感受性キャリア
本発明は、温度感受性であるキャリアに関する。これは、前記キャリアの物理的又は化学的状態がその温度に依存することを意味する。
【００３４】
興味対象分子を包み込み、体温（即ち３７℃）では変化せず、被験者が耐えることができる他の非体温で破壊される全ての温度感受性キャリアが使用され得る。本発明のキャリアは、限定されるものではないが、温度感受性ミクロ粒子及びナノ粒子、温度感受性ポリマーソーム、温度感受性リポソーム、温度感受性ナノベシクル及び温度感受性ナノ球体を含む。
【００３５】
前記温度感受性ナノベシクルは一般的に、１００ｎｍまでの直径を持つ。この発明において、１００ｎｍを超え、通常５０００ｎｍまでのベシクルはミクロベシクルと考えられる。用語ベシクルとは全てのタイプのミクロ又はナノベシクルを記載する。リポソームベシクルなどのベシクルは、一般的に、任意興味対象物質を含むキャビティを含む。これは本発明では、前記のように好ましい。
【００３６】
温度感受性ポリマーソームは、限定されるものではないが、全てのポリマーベシクルを含み、これはミクロベシクル及びナノベシクルを含む。温度感受性リポソームは、限定されるものではないが、全てのリポソームを含み、これは例えばＰＥＧ化リポソームなどの長い半減期を持つものを含む。
【００３７】
本発明で使用する温度感受性リポソームは、理想的にはその構造を３７℃、即ちヒト体温で保持されるが、高温、好ましくは前記ヒト体温よりもわずかに高い温度、好ましくは発熱体温を超える温度で破壊されるものである。通常は約４２℃が、熱案内薬物送達のための非常に有用な温度である。
【００３８】
前記温度感受性キャリア破壊を促進するように温度感受性薬物キャリアの温度を上げるために必要な熱が使用され得る。熱は、全ての生理的に許容され得る方法により適用できるが、好ましくは、高い局所発熱を誘導することが可能な収束エネルギー源の使用による。前記エネルギーは、例えばマイクロ波、超音波、磁気誘導、赤外線又は光エネルギーにより与えられる。
【００３９】
温度感受性リポソームは、当技術分野で知られている。本発明によるリポソームは当技術分野で知られる種々の技術で製造され得る。例えば、米国特許第４、２３５、８７１号；国際公開第９６／１４０５７号；Ｎｅｗ  ＲＲＣ、Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：Ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ（１９９０）、３３−１０４；Ｌａｓｉｃ、Ｄ．Ｄ．、Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｆｒｏｍ  ｐｈｙｓｉｃｓ  ｔｏ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、１９９３；Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８３）などである。
【００４０】
本発明のリポソーム内に薬物又は他の物質を取り込むことは、また、全ての従来方法を用いて実施され得る。本発明のリポソーム組成物を製造する際に、酸化防止剤などの安定化剤及び他の添加物が、本発明の目的を実質的に阻害しない限り使用され得る。
【００４１】
薬物キャリア
１つの側面で、本発明は、薬物などの生物的活性成分（生物活性剤）の局所的送達のために好適なキャリアに関する。以下用語「生物的活性成分」とは、短く「薬物」とし、前記キャリアを「薬物キャリア」とする。本発明において薬物キャリアとは、被験者の体内で放出され得るように生物活性成分がその上に又はその中に含まれる材料を意味する。
【００４２】
前記薬物キャリアはＭＲＩの対象とされるヒトの体内に導入される。これは、例えば血液中への注射、又は体液中へ前記キャリアを導入する他の方法でなされ得る。
【００４３】
薬物は、治療、介護、予防、又は疾患又は障害の診断のために使用され、又は生理的又は精神的健康のために使用される化学物質である。本発明に含まれる案内送達は、ほとんどの場合治療剤（即ち厳密な意味で薬物であり、疾患又は障害の治療又は予防のためのものである）であるが、また、診断目的で投与される試薬のためでもある。他の生物活性成分（即ち機能性食品成分などの治療又診断剤ではない）は、一般的には、案内及び／又はモニターされた送達の対象ではないが、望まれる場合には本発明を用いて行える。
【００４４】
本発明の最適な使用は、標的化治療即ち、標的化送達のための薬物の場合に達成されるものであり、というのはかかる送達は本発明により利用可能となるモニターすることから最も利益を得るからである。これには、例えばそこに送達されるべき腫瘍治療における成分、冠状動脈のアテローム性動脈硬化症などの心血管障害の治療又は予防での成分、又は抗血栓剤又は、てんかん、アルツハイマー病、パーキンソン病又は脳卒中などの治療で使用され得るような神経修飾物質などの血液脳関門を通過する必要がある剤を含む。
【００４５】
標的化薬物送達の案内及びモニターから得られる利点はまた、標的化診断剤にも応用可能である。標的化治療と同様に、ここではまた癌が位置特異的送達が重要となる分野である。
【００４６】
本発明の使用に好適な生物活性剤は、生物学的に活性な成分（剤）を含み、治療薬物、内因性分子、及び抗体を含む薬学的に活性な剤；栄養分子；化粧剤；診断剤；及びイメージングのための追加の造影剤を含む。ここで使用されるように、活性剤は活性剤の薬学的に許容される塩を含む。
【００４７】
本発明の薬物キャリアは、親水性又は疎水性生物活性剤のいずれも含み得る。親水性生物活性剤は、前記キャリア内の水性区画に包埋され、一方疎水性生物活性剤は前記キャリアの疎水性領域、例えばリポソームの脂質二重層に導入され得る。核酸、炭水化物及び、一般的にタンパク質及びペプチドは水溶性であるか親水性である。例えば、小分子、脂質、リポ多糖類、ポリヌクレオチド及びアンチセンスヌクレオチド（遺伝子治療剤）がまた含まれる。導入され得る、かかる生物活性剤は、従って非ペプチド、非タンパク質薬物を含む。本発明において、ポリマー性の薬物を導入することが可能であり、また、分子量が１５００ｇ／ｍｏｌの比較的小さい分子、又は５００ｇ／ｍｏｌよりも小さい分子も導入され得る。
【００４８】
従って本発明において生物活性剤としての使用に含まれる化合物は、治療又は予防効果のある全ての化合物を含む。これは、組織成長、細胞成長、細胞分化に影響する化合物、免疫応答などの生体作用を起こす化合物又は１又は複数の生物過程でいずれかの役割を果たす化合物である。非限定的例示は、抗菌剤（抗菌、抗ウイルス剤および抗真菌剤を含む）、抗ウイルス剤、抗腫瘍剤、トロンビン阻害剤、抗血栓薬、血栓解剤、線維素溶解薬、攣縮インヒビター、カルシウムチャネル遮断薬、血管拡張薬、降圧剤、抗菌剤、抗生物質、表面糖タンパク質受容体の阻害剤、抗血小板薬、抗有糸分裂、微小管阻害剤、抗分泌剤、アクチン阻害剤、リモデリングの阻害、抗代謝産物、抗増殖剤（抗血管新生剤を含む）、抗癌化学療法剤、ステロイド抗炎症または非ステロイド性抗炎症剤、免疫抑制剤、成長ホルモン拮抗薬、成長因子、ドーパミンアゴニスト、放射線治療の薬剤、細胞外マトリックス成分、ＡＣＥ阻害薬、フリーラジカルスカベンジャー、キレート剤、酸化防止剤、抗ポリメラーゼ、と光線力学療法剤である。
【００４９】
比較的小さいペプチドはアミノ酸の数（例えば、ジ、トリ、テトラペプチドなど）で参照される。アミノ結合に比較的少ない数のペプチドはまた、オリゴペプチドと呼ばれ（５０アミノ酸まで）、一方比較的多い数（５０アミノ酸を超える）のペプチドはポリペプチド又はタンパク質と呼ばれる。アミノ酸残基ポリマーであることに加えて、あるタンパク質はさらに、いわゆる四次構造で特徴付けられ、これはいくつかのポリペプチドの集合体であり、アミド結合で化学的に結合することは必ずしも必要ではなく、一般的に当業者に知られる、静電力やファンデルワールス力などので結合されたものである。用語、ペプチド、タンパク質又はこれらの混合物とは、ここでは全ての前記説明した可能性を含む。
【００５０】
通常は、タンパク質及び／又はペプチドはその生物活性に基き選択される。選択されるポリマーに依存して、本発明の製造方法で得られる生成物は、タンパク質及びペプチドの制御放出のために非常に適するものである。具体的な実施態様では、タンパク質及びペプチドは成長因子である。
【００５１】
負荷されたポリマー中に有利に含まれ得る、ペプチド又はタンパク質を含むペプチド又はタンパク質又は物質の他の例は、限定されるものではないが、免疫ペプチド又は免疫タンパク質であり、これには限定されるものではないが、次のものが含まれる。
【００５２】
ジフテリア毒素と破傷風毒素などの毒素。
【００５３】
アデノウイルス、エプスタイン−バールウイリス、肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、ヘルペスウイルス、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、インフルエンザウイルス、日本脳炎ウイルス、麻疹ウイルス、パピローマウイルス、パラミクソウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、風疹ウイルス、ワクシニア（天然痘）ウイルス及び黄熱病ウイルスなどのウイルス表面抗原またはウイルス断片。
【００５４】
百日咳菌、ヘリコバクターピロリ、破傷風菌、コリネバクテリウム・ジフテリア、大腸菌、インフルエンザ菌、クレブシエラ属、レジオネラニューモフィラ、ウシ型結核菌、結核らい、ミコバクテリウム結核、淋菌、髄膜炎菌、プロテウス属、緑膿菌、サルモネラ属、シゲラ属、黄色ブドウ球菌、化膿連鎖球菌、ビブリオコレラやエルシニアペスト菌などの最興味領域表面抗原又はその断片。
【００５５】
三日熱マラリア原虫（マラリア）、熱帯熱マラリア原虫（マラリア）、卵形マラリア原虫（マラリア）、四日熱マラリア原虫（マラリア）、熱帯リーシュマニア（リーシュマニア症）、ドノバンリーシュマニア（リーシュマニア症）、リーシュマニアブランジリエンシス（リーシュマニア症）、トリパノソーマロードセンス（睡眠病）、トリパノソーマガンビア（睡眠病）、クルーズトリパノソーマ（シャーガス病）、マンソン住血吸虫（住血吸虫症）、ビルハルツ住血吸虫（住血吸虫症）、日本住血吸虫（住血吸虫症）、旋毛（旋毛虫症）、ストロンギロイデス十二指腸（鉤虫）、アンシクロストマ十二指腸（鉤虫）、アメリカ鉤虫（鉤虫）、ブケリアバンクロフト（フィラリア）、マレーマラヤ（フィラリア）、ロアロア（フィラリア）、ジペタロネマペルスタリス（フィラリア）、ドラクンクラメジメンシス（フィラリア）、および回旋糸状虫（フィラリア）などの疾患原因帰省中の表面抗原又はその断片。
【００５６】
ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭなどの免疫グロブリン、抗狂犬病免疫グロブリン及び抗牛痘免疫グロブリン。
【００５７】
ボツリヌス抗毒素、ジフテリア抗毒素、ガス壊疽抗毒素、破傷風抗毒素などの抗毒素。
【００５８】
口蹄疫に対する免疫応答を引き起こす抗原。
【００５９】
卵胞刺激ホルモン、プロラクチン、アンギオゲニン、上皮成長因子、カルシトニン、エリスロポエチン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン、インスリン、成長ホルモン、成長因子、インスリン様１、２骨格成長因子、ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、神経成長因子、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）黄体、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＴＲＨ）、バソプレシン、コレシストキニン、および副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモンなどのホルモン及び成長因子；インターフェロン、インターロイキン、コロニー刺激因子、及び腫瘍壊死因子などのサイトカイン：ウロキナーゼ、腎臓プラスミノーゲン活性化因子などの線維素溶解酵素；及びプロテインＣ、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、ＶＩＩ因子とアンチトロンビンＩＩＩなど凝固因子。
【００６０】
他のタンパク質又はペプチドの例は、アルブミン、心房性ナトリウム利尿因子、レニン、スーパーオキシドジスムターゼ、α１−アンチトリプシン、肺表面活性タンパク質、バシトラシン、ベスタチン、シドスポリン、デルタ睡眠誘発ペプチド（ＤＳＩＰ）、エンドルフィン、グルカゴン、グラミシジン、メラニン阻害要因、ニューロテンシン、オキシトシン、ソマスタチン、テルプロチド、血清チミド因子、サイモシン、ＤＤＡＶＰ、デルモルフィン、のＭｅｔ−エンケファリン、ペプチドグリカン、サチエチン、チモペンチン、フィブリン分解産物、ＤＥＳ−エンケファリン−α−エンドルフィン、性腺刺激ホルモン放出ホルモン、ロイプロリド、α−ＭＳＨ及びメトケファミドである。
【００６１】
アルトレタミン、フルオロウラシル、アムサクリン、ヒドロキシカルバミド、アスパラギナーゼ、イフォスファミド、ブレオマイシン、ロムスチン、ブスルファン、メルファラン、クロラムブシル、メルカプトプリン、クロマチン、メトトレキサート、シスプラチン、マイトマイシン、シクロホスファミド、プロカルバジン、シタラビン、テニポシド、ダカルバジン、チオテパ、抗腫瘍剤ダクチノマイシン、チオグアニン、ダウノルビシン、トレオスルファン、ドキソルビシン、チオフォスファミド、エストラムシン、ビンブラスチン、エトグルシド、ビンクリスチン、エトポシド、ビンデシン及びとパクリタキセルなどの抗腫瘍剤。
【００６２】
抗菌剤には以下が含まれる：アンピシリン、ナフシリン、アモキシシリン、オキサシリン、アズロシリン、ペニシリンＧ、カルベニシリン、ペニシリンＶ、ジクロキサシリン、フェネチシリン、フロキサシリン、ピペラシリン、メシリナム、スルベニシリン、メチシリン、チカルシリン、メズロシリン、セファロスポリン：セファクロル、セファロチン、セファドロキシル、セファピリン、セファマンドール、セフラジン、セファトリジン、セルスルフォジン、セファゾリン、セフタジム、セフォラニド、セフトリアキソン、セフォキシチン、セフロキシム、セファセトリル、ラタモキセフ、及びセファレキシンなどの抗生物質。アミカシン、ネオマイシン、ジベカシン、カナマイシン、ゲンタマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシンなどのアミノグリコシド。アムホテリシンＢ、ノボビオシン、バシトラシン、ナイスタチン、クリンダマイシン、ポリミキシン、コリスチン、ロバマイシン、エリスロマイシン、スペクチノマイシン、リンコマイシン、バンコマイシン、クロルテトラサイクリン、オキシテトラサイクリン、デメクロサイクリン、ロリテトラサイクリン、ドキシサイクリン、テトラサイクリン及びミノサイクリンなどのテトラサイクリンなどのマクロライド。クロロアンフェニコール、リファマイシン、リファムピシン及びチアンフェノコールなどの他の抗生物質。
【００６３】
スルホンアミド、スウファジアジン、スルファメチゾール、スルファジメトキシン、スルファメトキサゾール、スルファジミジン、スルファメトキシピリダジン、スウファフラゾール、スルファフェナゾール、スルファレン、スルフィソミジン、スルファメラジン、スルフィソキサゾール及びトリメトプリムをスルファメトキサゾール又はスルファメトロールと組み合わせる化学療法剤。
【００６４】
メタンアミン、キノロン（ノルフロキサシン、シノキサシン）、ナリディキシン酸、ニトロ−化合物（ニトロフラントイン、ニフロトイノール）及びオキソリン酸などの尿路消毒剤。
【００６５】
メトロニダゾールなどの嫌気性感染用薬物。
【００６６】
アミノサリチル酸、イソニアジド、シクロセリン、リファンピシン、エタムブトール、チオカルリド、エチオンアミド及びバイオマイシンなどの結核薬剤。
【００６７】
アミチオゾン、リファムピシン、クロファジミン、ナトリウムスルホキソン及びジアミノジフェニルスルホン（ＤＤＳ、ダプソン）などのハンセン病薬剤。
【００６８】
アムホテリシンＢ、ケトコナゾール、クロトリマゾール、ミコナゾール、エコナゾール、ナタマイシン、フルシトシン、ｎナイスタチン及びグリセオフルビンなどの抗真菌剤。
【００６９】
アシクロビル、イドクスウリジン、アマンチジン、メチサゾン、シタラビン、ビダラビン及びガンシクロビルなどの抗ウイルス剤。
【００７０】
クロロキン、イオードキノール、クリオキノール、メトロニダゾール、ジヒドロエメチン、パロモマイシン、ジロキサニド、フロアセチニダゾール及びエメチンなどのアメーバ症の化学療法。
【００７１】
クロロキン、ピリメタミン、ヒドロキシクロロキン、キニーネ、メフロキン、スルファドキシン／ピリメタミン、ペンタミジン、ナトリウムスラミン、プリマキン、トリメトプリム及びプログアニルなどの抗マラリア薬。
【００７２】
アンチモンカリウム酒石酸、ニリダゾール、アンチモンナトリウムジメルカプトスクシネート、オキサムニキン、ベフェニウム、ピペラジン、ジクロロフェン、プラジカンテル、ジエチルカルバマジン、ピランテルパルモエート、ヒカントン、ピリビウムパモエート、レバミゾール、スチボフェン、メベンダゾール、テトラミゾール、メトリフォネート、チオベンダゾール及びニクロサミドなどの抗蠕虫病薬剤。
【００７３】
アセチルサリチル酸、メフェナム酸、アクロフェナク、ナプロキセン、アゾプロパノン、ニフルム酸、ベンジダミン、オキシフェンブタゾン、ジクロフェナク、ピロキシカム、フェノプロフェン、ピルプロフェン、フルルビプロフェン、ナトリウムサリチレート、イブプロフェンサリンダク、インドメタシン、チアプロフェン酸、ケトプロフェン及びトルメチンなどの抗炎症剤。
【００７４】
コルヒチン及びアロプリノールなどの抗痛風薬。
【００７５】
アルフェンタニル、メタドン、ベジトラミド、モルヒネ、ブプレノルフィン、ニコモルヒネ、ブトルファノール、ペンタゾシン、コデイン、ペチジン、デキストロモラミド、ピリトアラニド、デキストロプロポキシフェン、スフェンタニル及びフェンタニルなど中枢作用（オピオイド）鎮痛薬。
【００７６】
アルチカイン、メピバカイン、ブピバカイン、プリロカイン、エチドカイン、リドカイン及びテトラカインなどの局所麻酔薬。
【００７７】
アマンチジン、ジフェンヒドラミン、アポモルヒネ、エトプロパジン、ベンズトロピンメシル酸、レルゴトリル、ビペリデン、レボドパ、ブロモクリプチン、リスリド、カルビドパ、メチキセン、クロロフェノキサミン、オルフェナドリン、サイクリミン、プロシクリジン、デキセチミド及びトリヘキシルフェニジルなどのパーキンソン病薬剤。
【００７８】
バクロフェン、カリソプロドール、クロルメザノン、クロルゾキサゾン、シクロベンザ、ダントロレン、ジアゼパム、フェバルバメート、メフェノキサロン、メフェネシン、メトキサロン、メトカルバモール及びトルペリゾンなどの中枢作用筋弛緩剤。
【００７９】
コルチコステロイドは次を含む。
【００８０】
コルチソール、デソキシコルチコステロン及びフルオロヒドロコルチゾンなどのミネラロコルチコステロイド。
【００８１】
ベクロメタゾン、ベタメタゾン、コルチゾン、デキサメタゾン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルトロン、フルオロメトロン、フレプレドニソロン、フルランドレノリド、ハルシノニド、ヒドロコルチゾン、メドリゾン、メチルプレドニゾロン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン及びトリアムシノロン（アセトニド）などのグルココルチコステロイド。
【００８２】
アンドロゲンは次を含む。
【００８３】
ダナゾール、フルオキシメステロン、メステトロン、メチルテストステロン、テストステロン及びその塩などの治療に用いるアンドロゲンステロイド。
【００８４】
カルステロン、ナンドロロンとその塩、ドロモスタノロン、オキサンドロロン、エチルエステレノール、オキシメトロン、メタンドリオール、スタノゾロールメタンドロステノロン及びテストラクトンなどの治療に使用される同化ステロイド。
【００８５】
シプロテロンアセテートなどの抗アンドロゲン。
【００８６】
ジエチルスチルベストロール、エストラジオール、エストリオール、エチニルエストラジオール、メストラノール及びキネストロールなどの治療に用いるエストロゲンステロイドを含有するエストロゲン。
【００８７】
クロロトリアニセン、クロミフェン、エタモキシトリフェトール、ナフォキシジン及びタモキシフェンなどの抗エストロゲン。
【００８８】
アリルエストレノール、デソゲストレル、ジメチステロン、ジドロゲステロン、エチニルエステレノール、エチステロン、エチナジオールアセテート、エチノジオール、ヒドロキシプロゲステロン、レボノルゲストレル、リネストレノール、メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、ノルエチンドロン、ノルエチステロン、ノルエチノドレル、ノルゲストレル、及びプロゲステロンなどのプロゲスチン。
【００８９】
甲状腺薬は次を含む。
【００９０】
レボチロニン及びリオチロジンなどの治療で使用される抗甲状腺剤、カルビマゾール、メチマゾール、メチルチオウラシル及びプロピルチオウラシルなどの治療に用いられる抗甲状腺薬。
【００９１】
水溶性である生物活性剤のほか、抗酸化剤、イオン、キレート剤、染料、造影化合物などの他の水溶性化合物が導入され得る。
【００９２】
好ましい治療剤は、癌（例えば抗腫瘍）及び心血管疾患の分野である。
【００９３】
ナノ粒子又はリポソーム製剤に好適はリポソーム薬物誘導体を製造する方法は当技術分野で知られている（米国特許第５５３４４９９号には、治療薬のリン脂質の脂肪酸鎖への共有結合が記載されている）。
【００９４】
本発明の薬物はまたプロドラッグであり得る。
【００９５】
前記薬物は、前記キャリアの分画、例えばリポソームの前記キャビティ及び／又は前記シェルの、内側、外側又は両方に存在し得る。前記薬物の分配は、常磁性化学シフト試薬又は常磁性試薬などの、前記薬物キャリア中に含まれる他の試薬の分配とは独立する。薬物の組み合わせを使用することができ、これらの薬物のいずれかは、例えばリポソームのキャビティ及び／又はシェル内の、薬物キャリアの内部、外部又は両方の画分内に存在し得る。
【００９６】
造影剤
他の側面では、本発明は、好ましくはＭＲＩのための造影剤として好適なキャリアに関する。この目的で、前記キャリアは、（前記キャビティ内、前記シェル内又はそれらの表面）に造影を強調し得る物質を含む。これらの物質は、ＣＥＳＴ  ＭＲＩ造影強調剤と同様にＴ１及び／又はＴ２造影強調剤を含む。
【００９７】
ほとんど全てのＭＲＩスキャンは、全ての組織の全身にわたり非常に高濃度に存在するバルク水分子の画像に基づくものである。異なる組織間の造影は臨床情報を得るには十分ではなく、ガドリニウムの低分子量錯体などのＭＲＩ造影強調剤（ＣＡ）が投与される。これらの常磁性錯体は、水分子のプロトンの縦緩和（Ｔ１）及び横緩和時間（Ｔ２）を減少させる。又はマンガンはＴ１造影剤として作用する。前記キャリアは、１Ｈ−ＮＭＲ、１９Ｆ−ＮＭＲ又はその両方のための造影強調剤を含み得る。本発明においてまた、Ｔ１、Ｔ２と組み合わせた１９Ｆ−ＮＭＲで、及び好ましくは１Ｈ−ＮＭＲでのＣＥＳＴ造影を含む全てを１つとする考え方として実現され得る。
【００９８】
ＣＥＳＴ  ＭＲＩ
好ましい実施態様では、本発明はまた、ＣＥＳＴ  ＭＲＩ造影強調に関する。この方法は、ＭＲＩで決定される、選択された磁気的前飽和プロトンからバルクの水分子へ化学的交換依存飽和移動（ＣＥＳＴ）を利用することで画像造影を生成するために供される。
【００９９】
ＣＥＳＴ  ＭＲＩで使用される場合、キャビティを囲む半透過性シェルを持つ本発明の好ましいキャリア、即ち温度感受性キャビティは、最適化ＣＥＳＴ造影強調に寄与するものである。
【０１００】
これらのキャリアの利点は、前記ＣＥＳＴ造影強化は、プロトンプールと相互作用する前記キャビティに含まれる常磁性化学シフト試薬又は前記キャビティ内にまた存在する他のＭＲＩ分析物に基き行われる、ということである。
【０１０１】
本発明は、好ましい実施態様で、全てのCＥＳＴタイプの造影強化への温度感受性薬物放出に関し、好ましくはこれまで利用されてきた以上の進歩したＣＥＳＴ方法の利用を可能にする。
【０１０２】
常磁性化学シフト試薬と組み合わせたＣＥＳＴ（パラ（常磁性）ＣＥＳＴ）の方法は、ＣＥＳＴ造影試薬の常磁性シフトしたプロトンのプールの磁化が選択的に、高周波（ＲＦ）照射適用により飽和されるものである。この飽和がバルク分子にプロトン交換により移動することで、前記ＣＥＳＴ造影試薬の環境の励起可能な水プロトンの量を低減させる。そこで、バルク水強度の減少が観測され、これによりＭＲＩ画像での（負の）造影強化を生成するために使用され得ることとなる。
【０１０３】
高ＣＥＳＴ効果を得るための試みは、常磁性シフト試薬（例えば、Ｎａ［Ｔｍ（ｄｏｔｍａ）（Ｈ２Ｏ）］）を含む溶液の水分子の大部分を利用することに基づくものであり、ここで、「Ｈ４ｄｏｔｍａ」は、α、α’、α’’、α’’’−テトラメチル−１、４、７、１０−四酢酸を表し、ｄｏｍａは前記リガンドのそれぞれ４つの脱プロトンした四アニオン形を表し、これは化学的にシフトされるプロトンのプロフィールを与え、それにより選択的にＲＦパルスで飽和され得る。このシステムがキャリア、例えばリポソーム中に包埋される場合、前記磁気飽和は前記キャリアの外のバルク水分子（これは化学シフトを受けない）に移動する（ＬｉｐｏＣＥＳＴ）。磁気移動の程度及び造影強化の程度は、前記キャリアのシェル、例えばリン脂質膜を通過する水の拡散の速度、同じく前記キャリアの内部の水の量により決定される。
【０１０４】
最適な水交換速度は、前記キャリア内のプロトンプールと前記キャリア外のバルク水の間の化学シフトに関連される。リポソーム内部の水分子に誘導される常磁性シフトは２つの主な寄与からなる：前記水分子とシフト試薬間の直接双極子相互作用により化学シフト（δｄｉｐ）、及びバルク磁化率効果により生じる化学シフト（δｂｍｓ）である。全体の常磁性シフトはこれらの寄与の和である。
δ＝δｄｉｐ＋δｂｍｓ                  （１）
δｂｍｓは球状粒子では０であるが、異方性粒子では重要となる。非球状粒子は磁場で力を受けて、それらが磁力線に沿って配列させる。リポソームの場合には、前記リン脂質膜に伴って常磁性分子を持つ場合にはこの効果はさらに増加する。
【０１０５】
非球状リポソームを用いるＣＥＳＴについての参考文献は、Ｔｅｒｒｅｎｏ、Ｅ．らのＡｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．４６、９６６−９６８（２００７）である。
【０１０６】
本発明では、常磁性シフト試薬は前記キャリア内又はキャリア上に任意の方法で含まれることが可能である。前記キャビティ内の試薬とプールの両方を含むことでプロトンプールとの十分な相互作用を持つシフト試薬を持つことが好ましい。
【０１０７】
前記常磁性化学シフト試薬は基本的には任意の常磁性試薬であって、溶液又は分散液中の比較的多数の水分子を、回りのバルク水分子のプロトンに対してそれらのＭＲ共鳴周波数により化学的にシフトされるプロトンプールとするものである。前記リポソームはシェルを含み、これは基本的にプロトンがその直接環境と交換されることを可能にするものであることから、選択的ＲＦパルスにより生じる飽和が、負荷された温度感受性薬物キャリアの環境へ移動されることとなる。そこで、磁気共鳴イメージングの実施において、前記温度感受性薬物キャリアの直接環境は、他のバルク水分子と比較してシグナル強度が減少し、減少シグナル強度により前記造影剤の直接環境を検出することを可能にする。前記常磁性化学シフト試薬は常磁性化合物、即ち常磁性を持つ任意の化合物を含む。好ましくは前記上記常磁性化合物は、常磁性イオン、例えばキレートリガンドで錯体化された金属イオンを含む。常磁性イオンは当業者に知られておりここで説明しない。例えば、第１及び第２遷移金属であり、明示的にはクロム、マンガン、鉄であり、同じくガドリニウム、ユーロピウム、ディスプロシウム、ホルミウム、エルビウム、ツリウム、イットリビウムなどのランタニドである。
【０１０８】
常磁性化学シフト試薬は、常磁性イオンへの強い結合が可能であり、金属イオンが水と相互作用し、又は他の好適なプロトン源と相互作用し得る好適なキレート構造を持つ。好ましいキレート構造については参考文献として、Ｐ．Ｃａｒａｖａｎらの、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．、９９、２２９３−２３５２（１９９９）が挙げられる。好ましくは、水は少なくとも前記常磁性試薬の金属に一時的であっても配位される。常磁性性シフト機構に関しては、参考文献として、Ｊ．Ａ．Ｐｅｔｅｒｓらの、Ｐｒｏｇ．Ｎｕｃｌ．Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．Ｓｐｅｃｔｒ．、２８、２８３−３５０（１９９９）が挙げられる。ひとつの実施態様では、前記キレート構造自体がまた、交換可能なプロトン、例えばヒドロキシル、アミン又はアミドプロトンを含む。
【０１０９】
好ましくは、常磁性性化学シフト試薬は、例えば、１、４、７、１０−テトラアザシクロドデカン−１、４、７、１０−四酢酸（Ｈ４ｄｏｔａ）、１、４、７、１０−テトラアザシクロドデカン−α、α’、α’’、α’’’−テトラメチル−１、４、７、１０−四酢酸（Ｈ４ｄｏｔｍａ）及び常磁性試薬内で軸配位水分子を可能にする関連するリガンドから誘導される大環状ランタニド（ＩＩＩ）キレートなどのキレート構造で配位されたランタニドイオンを含む。この参考文献はＡｉｍｅらの、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．、４４、５５１３−５５１５（２００５）である。多くの同様の類似する又は異なるキレート基が、デンドリマー又はポリマー構造と組み合わされデンドリマー又はポリマー化学シフト試薬を与える。デンドリマー又はポリマー常磁性化合物を用いる一般的利点は、非常に効果的な常磁性錯体濃度が達成されることであり、しかも単核常磁性化合物を用いる場合と同様の溶液の浸透圧を増加させることがない、ということである。この参考文献は、Ｅ．Ｔｅｒｒｅｎｏ、Ａ．Ｂａｒｇｅ、Ｌ．Ｂｅｌｔｒａｍｉ、Ｇ．Ｃｒａｖｏｔｔｏ、Ｄ．Ｄ．Ｃａｓｔｅｌｌｉ、Ｆ．Ｆｅｄｅｌｉ、Ｂ．Ｊｅｂａｓｉｎｇｈ、Ｓ．Ａｉｍｅの、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ、２００８、６００−６０２である。
【０１１０】
好ましくは常磁性化学シフト試薬は水溶性である。好適な化学シフト試薬は当業者に知られている。前記ＣＥＳＴ造影剤は、前記シフト試薬とプロトンプールとが十分な相互作用をして化学的にシフトされたプロトンのプールを与える限り、なんら特別な化学シフト試薬を必要とするものではない。
【０１１１】
好ましくは、常磁性シフト試薬は、金属イオンと、多座配位子リガンドのリガンドを含む金属錯体である。より好ましくは、前記化学シフト試薬とプロトンプールとの相互作用が配位の形で提供されるものである。従って、金属錯体が、少なくとも１つの水分子の配位のために残される金属の少なくとも１つの配位サイトを持つことが好ましい。
【０１１２】
好適な脂溶性化学シフト試薬の例は、［Ｌｎ（ｈｐｄｏ３ａ）（Ｈ２Ｏ）］（１）、［Ｌｎ（ｄｏｔａ）（Ｈ２Ｏ）］−（２）、［Ｌｎ（ｄｏｔｍａ）（Ｈ２Ｏ）］−（３）、［Ｌｎ（ｄｏｔａｍ）（Ｈ２Ｏ）］３＋（４）、及び［Ｌｎ（ｄｔｐａ）（Ｈ２Ｏ）］２−（５）及びこれらの誘導体及び関連する化合物である（ここでＬｎはランタニドイオンである）。
【０１１３】
好ましくは、常磁性化学シフト試薬は、以下の式１から５に示されるランタニド錯体である。
【０１１４】
【化５】
2014522417.tif 000007
ここで、ランタニドは、Ｅｕ３＋、Ｄｙ３＋、Ｈｏ３＋、Ｅｒ３＋、Ｔｍ３＋、Ｙｂ３＋、であり、好ましくはＴｍ３＋又はＤｙ３＋である。
【０１１５】
常磁性化学シフト試薬は通常は、１ｍＭから２０００ｍＭ、好ましくは１０ｍＭから１０００ｍＭ及びより好ましくは５０ｍＭから２００ｍＭの量で前記試薬中に含まれる。
【０１１６】
前記金属含有化合物は、前記キャビティ内、即ちリポソームの内部区画内に、溶解、乳化、懸濁させるか又はその他の均一又は不均一に分布させる。又は、少なくとも１つの共有結合又は非共有結合又はこれらの組み合わせで前記リポソームの外側区画に結合され得る。さらに、同じか又は少なくとも１つ異なる金属含有化合物が前記区画内に同時に存在し得る。
【０１１７】
常磁性試薬と前記薬物は、前記薬物自体が適切な金属を含む場合、１つであり同じであってよい。
【０１１８】
さらなる造影強化剤
本発明の造影強化剤は、Ｔ１、Ｔ２又はＴ２＊減少試薬を含み得る。この参考文献は、Ａｉｍｅらの、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、２００７、１２９、２４３０−２４３１である。また、全てを１つにする概念は、Ｔ１、Ｔ２又はＴ２＊とＣＥＳＴコントラス剤から実現され得る。
【０１１９】
前記温度感受性薬物キャリアの内部及びバルク水プロトン間の化学シフトの差は、前記温度感受性薬物キャリア膜に、化学シフト試薬である必要はないさらなる常磁性試薬を与えることで強化され得る。従って、前記磁場での非球状キャリアの方向が影響を受け、前記のバルク磁化率効果が強化される。前記さらなる常磁性試薬は、好ましくは、両親媒性化合物であり、ランタニド錯体を含み（前記両親媒性化合物のより極性側に）、かつ疎水性分子相互作用に基づく前記温度感受性薬物キャリアでの前記脂質二重層に統合されるか配列される傾向を持つ非極性尾（ｔａｉｌ）部分を持つ。これらの両親媒性常磁性錯体は例えば以下の化合物である。
【０１２０】
【化６】
2014522417.tif 000008
１９Ｆ及び１Ｈ−ＮＭＲ組み合わせ造影強化
本発明発明において、１９Ｆ及び１Ｈ−ＮＭＲの好適な組み合わせは種々の方法で実現され得る。
【０１２１】
従って、二重又は多重ラベル化ＭＲ造影が、ＣＥＳＴ機構及び／又は１９ＦＭＲを用いて生成され得る。又は、多重ＭＲ造影は、前記キャリアに存在する金属含有化合物によりイメージングされる被分析物（通常は水のプロトン）の縦緩和時間（Ｔ１）又は横緩和時間（Ｔ２）の変更を通じて生成され得る。これらの造影強化機構のいずれもがさらに任意の組み合わせで使用され得る。
【０１２２】
前記二重／多重ラベル化ＭＲＩ造影は、前記キャリアの物理的状態に依存して、従来のＭＲ装填を連続的又は交互に用いてモニターされるか、又は１Ｈ及び１９ＦＭＲなどのデュアルチューニングスペクトルメーターシステムで組み合わせシーケンスを用いて同時にモニターされる。
【０１２３】
この側面で、本発明はまた、薬物送達をモニター及び／又は案内する際の、同時二重核ＭＲイメージングの使用に関する。
【０１２４】
温度感受性リポソーム中のＣＥＳＴ及び１９Ｆ造影試薬の組み合わせは、ＣＥＳＴ及び１９ＦＭＲＩの手段で、独立してかつ同時に薬物送達方法過程をモニターする機会を提供する。２つの異なるＭＲシグナルをモニターすることは、対応する二重ラベル化ＭＲ技術により実行される。この方法はいくつかの可能な利点を導く。従って、前記薬物負荷粒子の空間分布をＣＥＳＴ  ＭＲＩにより薬物放出の前に評価できること；１ＨＣＥＳＴ及び１９ＦＭＲシグナルは、放出薬物量に比例し、フィードバックループを用いてインビボで投与された送達薬物の定量的制御を可能にすること；離れた位置サイトで前記キャリアからの薬物放出が、例えば温度感受性リポソームの場合には例えばＲＦや超音波などを用いた加熱などの局所的刺激により誘導され得る；前記ＣＥＳＴＭＲ造影強化は自由に切り替えることができること、である。
【０１２５】
１９Ｆ造影剤
ＭＲ検出可能な１９Ｆは、天然には身体に存在せず、即ち１９ＦＭＲＩは本質的に添加された１９Ｆ造影剤の使用に基づくものである。
【０１２６】
１９ＦＭＲ造影のための造影強化剤は、好ましくは多数の磁気的に等価なフッ素基を持つ（感度は分子あたりの磁気的に等価なＦ原子の数に比例する）。ＣＥＳＴ  ＭＲＩとの組み合わせの観点から、使用される前記１９ＦＭＲ造影剤は好ましくは水溶性であり、かつ特に好ましくは高水溶性が可能となるように電荷を持つものである。リン脂質シェルでの応用の観点から、好ましい１９Ｆ造影剤は、リン脂質に強く結合するものではなく、又はリン脂質に強く付随するものではない。ヒト又は動物身体内へのそれらの放出の観点から、前記１９Ｆ造影剤は好ましくは低毒性でありかつ高生体適合性である。
【０１２７】
好ましい１９Ｆ造影剤は、脂肪族炭化水素の全Ｆ置換類似体が利用され得る。
【０１２８】
本発明は、以下の非限定的例示及び添付された非限定的図面に基きさらに説明される。
【実施例】
【０１２９】
実施例１：
（２Ｓ）−９、１３、１７、１８−テトラヒドロキシ−５−オキソ−４、７、１１、１５−テトラオキサオクタデカン−１、２−ジイルジパルミテート１１５、３の合成：スキーム１参照
【０１３０】
【化７】
2014522417.tif 000009
スキーム１：（２Ｓ）−９、１３、１７、１８−テトラヒドロキシ−５−オキソ−４、７、１１、１５−テトラオキサオクタデカン−１、２−ジイルジパルミテート１１５、３の合成
トリエステル１１５、３は、（Ｒ）−３−ヒドロキシプロパン−１、２−ジイルジパルミテート（１０８）を酸誘導体１０７でエステル化し、次に中間体トリエステル１０９を酸性脱保護基化して製造した。酸誘導体１０７は、トリグリセリドの誘導体であり、これはグリセリドユニット鎖がゾルケタール（１０１）の２−（（アリルオキシ）メチル）オキシラン（１０２）への付加により導入された。ここで得られた生成物１０３を酸化してエポキシド１０４とし、前記エポキシドをベンジルアルコールで開環させて１０５を形成した。１０中のテトラヒドロピラニルエーテルとして前記残るヒドロキシル基の保護及びベンジル基の除去後、アルコール１０６が得られ、これはブロモ酢酸と反応させて酸誘導体１０７に変換した。
【０１３１】
実施例２：
３−（３−（２、３−ジヒドロキシプロポキシ）−２ヒドロキシプロポキシ）プロパン−１、２−ジイルジステアレート（２１７、２）の合成：スキーム２参照
【０１３２】
【化８】
2014522417.tif 000010
スキーム２：３−（３−（２、３−ジヒドロキシプロポキシ）−２ヒドロキシプロポキシ）プロパン−１、２−ジイルジステアレート（２１７、２）の合成
トリグリセリド誘導体を形成する主鎖を含む生成物１０３はスキーム１に示されるように合成された。テトラヒドロピラニルエーテルとして前記ヒドロキシ基の保護して前記アリル基のエポキシ化後、化合物１１０が得られ、これはエポキシ環がセシウムステアレートで開環されてモノエステル１１１を形成した。１１１の残るヒオロキシル基をステアリン酸でエステル化した後、酸で脱保護して生成物２１７、２を得た。
【０１３３】
実施例３
［Ｇｄ（ｈｐｄｏ３ａ）（Ｈ２Ｏ）］などのＭＲＩ造影剤、及びドキソルビシンなどの薬物の放出を引き起こすために、脂質模倣物（１ｎ、Ｒ）を含む温度感受性リポソームを作製した。温度感受性リポソーム剤は、ＤＰＰＣ：ＤＳＰＣ：１１５、３＝５０：２０：３０（モル比）として調製した。前記脂質をクロロホルム／メタノール（４：１体積／体積）に溶解し、前記溶媒を減圧下蒸発させて薄い均一な脂質膜を形成させ、これをさらに一晩窒素気流下で乾燥させた。前記膜の水和は、６０℃で、２５０ｍＭの［Ｇｄ（ＨＰＤＯ３Ａ）（Ｈ２Ｏ）］を含む、１２０ｍＭの１２０ｍＭの（ＮＨ４）２ＳＯ４緩衝液（ｐＨ＝５．４）を用いて６０℃で行った。懸濁物を６０℃で、４００ｎｍフィルター（２回）、２００ｎｍフィルター（２回）及び１００ｎｍフィルター（５回）を通過させて押し出した。押出後、前記リポソーム外部の緩衝液（［Ｇｄ（ＨＰＤＯ３Ａ）（Ｈ２Ｏ）］を含む）を、ＰＤ−１０カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を通してゲルろ過することで、ＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水（ＨＢＳ）（ｐＨ７．４、７０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１３７ｍＭのＮａＣｌ）に交換した。ＤＯＸのＨＢＳ溶液（５ｍｇ／ｍＬ）を前記リポソームに添加し（２０：１リン脂質対ＤＯＸ重量比）、３７℃でインキュベーションした。インキュベーション後、前記リポソーム外部ＤＯＸを前記リポソームを他のＰＤ−１０カラムに通すことで除去した。リポソームのＴｍ及び流体力学直径は、示差走査熱量計（ＤＳＣ）及び動的光散乱（ＤＬＳ）によりそれぞれ決定された。脂質二重層内のリポソーム内の１１５、３を含むリポソームは、流体力学直径が１１１ｎｍ（２００ｎｍＰＣフィルターを通して押し出した後）であり、Ｔｍが４１．９℃であった。
【図１】
2014522417.tif 000016
【図２】
2014522417.tif 000017
【図３】
2014522417.tif 000018
【図４】
2014522417.tif 000019
【手続補正書】
【提出日】平成25年12月17日(2013.12.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造式Ｉを満たす化合物。
【化９】
2014522417.tif 000020
［ここで、Ｇは、式ＩＩを満たし、
ＨＯ−ＣＨ２−｛ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−Ｏ｝ｍ−ＣＨ２−｛Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ＣＨ２｝ｑ―
式ＩＩ
それぞれのｎは独立して１から３０の整数であり；ｍは２から１０の整数であり；ｑは０又は１である。］
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であり、次の式ＩＩＩ、式ＩＶ及びこれらの組み合わせからなる群から選択される化合物。
【化１０】
2014522417.tif 000021
【化１１】
2014522417.tif 000022
【請求項３】
請求項１又は２のいずれか一項に記載の化合物であり、ｍが２から６、好ましくは２又は３である、化合物。
【請求項４】
請求項１乃至３のいずれか一項に記載の化合物であり、それぞれのｎが１２から１８、好ましくは１３、１５又は１７である、化合物。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物であり、式Ｖを満たす化合物。
【化１２】
2014522417.tif 000023
［ここで、Ｇは、式ＩＩを満たし、
ＨＯ−ＣＨ２−｛ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−Ｏ｝ｍ−ＣＨ２−｛Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ＣＨ２｝ｑ―
式ＩＩ
それぞれのｎは独立して１から３０の整数であり；ｍは１から１０の整数であり；ｒはそれぞれ独立して１から３０の整数、及び差（ｒ−ｓ）は１から５、より好ましくは１から３である。］
【請求項６】
温度感受性キャリアであり、キャビティを囲む脂質二重層シェルを含み、前記脂質二重層が、請求項１乃至５のいずれか一項に記載の、１又複数の化合物を含む、温度感受性キャリア。
【請求項７】
請求項６に記載の温度感受性キャリアであり、治療薬物、造影剤及びこれらの組み合わせからなる群から選択される活性成分を含む、温度感受性キャリア。
【請求項８】
請求項１乃至５のいずれか一項に記載の化合物の、温度感受性キャリアの脂質二重層シェルへの添加物としての使用。
【請求項９】
治療及び造影方法それぞれに、含まれる物質のインビボ放出で使用するための請求項６又は７のいずれか一項に記載の温度感受性キャリアであり、前記方法が前記キャリアのいずれかを動物、好ましくはヒトに投与すること、及びそこに含まれる物質のインビボ放出に影響を与えることを含む、温度感受性キャリア。
【請求項１０】
請求項６又は７のいずれか一項に記載のキャリアと、少なくとも１つの薬物を含む、薬物送達システム。
【請求項１１】
請求項６又は７のいずれか一項に記載のキャリアと、少なくとも１つのＭＲＩ造影強化物質を含む、イメージングシステム。
【請求項１２】
請求項６又は７のいずれか一項に記載のキャリア、少なくとも１つの薬物、及び少なくとも１つのＭＲＩ造影強化物質を含む、造影化薬物送達システム。
【国際調査報告】
2014522417.tif 000024
2014522417.tif 000025