(57)【要約】患者の体重増加を低減する、体重減少を誘導する、高血糖を治療する、血中グルコースレベルを低減する、または血中グルコースレベルを正常化するために、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを、それを必要とする患者に投与するための方法が提供される。一局面において、体重増加を低減する、または体重減少を誘導する方法が提供され、この方法は、それを必要とする成人に、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを約１ｍｇ〜約４０ｍｇの週間用量で投与することを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
体重増加を低減する、または体重減少を誘導する方法であって、それを必要とする成人に、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを約１ｍｇ〜約４０ｍｇの週間用量で投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記週間用量が、約２ｍｇ〜約１０ｍｇである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記成人が、過体重、ＩＩ型真性糖尿病、インスリン抵抗性、アルコール性肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、または代謝症候群を有する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
高血糖を治療する、血中グルコースレベルを低減する、または血中グルコースレベルを正常化する方法であって、それを必要とする成人に、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを１週間当たり約１ｍｇ〜約４０ｍｇの週間用量で投与することを含む、方法。
【請求項５】
前記週間用量が、約２ｍｇ〜約１０ｍｇである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記成人が、Ｉ型真性糖尿病、ＩＩ型真性糖尿病、または妊娠性糖尿病を有する、請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
前記半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドが、週１回投与される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドが、週２回投与される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドが、ＧＩＰ有効性率の約１０倍以内のＧＬＰ−１有効性率を呈する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドが、ＧＩＰ受容体でのＥＣ５０の約１０倍以内のＧＬＰ−１受容体でのＥＣ５０を有する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドが、少なくとも１％のＧＩＰ有効性率、または少なくとも１％のＧＬＰ−１有効性率を呈する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドが、約４日〜約７日の半減期を呈する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドが、約３０，０００ダルトン〜約６０，０００ダルトンの分子量を有するポリエチレングリコール部分を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ポリエチレングリコール部分が、約４０，０００ダルトンの分子量を有する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドが、配列番号５〜９４、９９〜１６９、１７３〜４１３のうちのいずれか、または配列番号５〜９４、９９〜１６９、１７３〜４１３のうちのいずれかと比較して、最大６個のアミノ酸修飾を含むアミノ酸配列である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドが、配列番号７５、９９〜１０３、１４０、１５３、１６６、および２６１のうちのいずれか、または配列番号７５、９９〜１０３、１４０、１５３、１６６、および２６１のうちのいずれかと比較して、最大６個のアミノ酸修飾を含むアミノ酸配列である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
第２の治療薬を投与することをさらに含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記第２の治療薬が、抗糖尿病薬である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記第２の治療薬が、抗肥満薬である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドが、薬学的組成物中で投与される、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記薬学的組成物が、皮下注射、静脈内注射、または筋肉内注射を介して投与される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記薬学的組成物が、皮下注射により投与される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドの投与が、インスリンレベルの増加、グルコースレベルの減少、Ｃ−ペプチドレベルの増加、ＨｂＡ１ｃレベルの減少、もしくはフルクトサミンレベルの減少、または任意のこれらの組み合わせをもたらす、請求項１または４に記載の方法。
【請求項２４】
前記半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドが、充てん済みシリンジから投与される、請求項２０〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（優先権の主張）
本出願は、２０１１年６月２３日に出願された米国仮特許出願第６１／５００，２２９号および２０１０年１２月２２日に出願された米国仮特許出願第６１／４２６，３３８号に対する優先権を主張する。
【０００２】
（電子的に提出された資料の参照による組み込み）
本明細書と同時に提出され、以下のように同定される、コンピュータ可読ヌクレオチド／アミノ酸配列の一覧は、参照することによりその全体が組み込まれる：２０１１年１２月２２日に作製された１つの２８５，６８８バイトＡＳＣＩＩ（テキスト）ファイル、ファイル名「４５７０８Ａ＿ＳｅｑＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」。
【背景技術】
【０００３】
（技術背景）
開示の分野
この開示は、概して、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを投与する方法に関する。より具体的に、本開示は、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドの投与を通して、体重増加を低減する、もしくは体重減少を誘導するための方法、および高血糖を治療する、血中グルコースレベルを低減する、または血中グルコースレベルを正常化するための方法に関する。
関連技術に関する簡単な説明
【０００４】
ＩＩ型真性糖尿病（すなわち、２型糖尿病）は、米国内の糖尿病例の約９０％を占める状態の混成群である。２型糖尿病は、インスリン抵抗性および減少したインスリン分泌の組み合わせにより引き起こされる。肥満患者の減量は、インスリン抵抗性の改善および糖尿病症状の改善と関連付けられる。
【０００５】
経口抗糖尿病薬には、スルホニル尿素、ビグアニド、メグリチニド、チアゾリジンジオン、およびα−グルコシダーゼ阻害薬という５つの広く認識されている群がある。２型糖尿病の治療は、通常、これらの経口薬の１つ以上を初期治療として選択することを伴う（例えば、非特許文献１を参照）。しかしながら、多剤の使用にもかかわらず、糖尿病の全体制御は、依然として不適切である。糖尿病を患う人のわずか４９．８％が、全米糖尿病協会が目標とする７％未満のＨｂＡ１ｃを達成しているに過ぎない。代わりに、糖尿病を患う人の２９．７％が、８％を超えるＨｂＡ１ｃを有する（例えば、非特許文献２を参照）。
【０００６】
インクレチンホルモン、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、およびグルコース依存性インスリン分泌促進ペプチド（ＧＩＰ）は、自然発生するペプチドホルモンである。ＧＬＰ−１およびＧＩＰの両方は、インスリン合成およびグルコース依存的に分泌を刺激し、低血糖をもたらさない（例えば、非特許文献３および非特許文献４を参照）。
【０００７】
ＧＬＰ−１は、糖尿病の補助療法として有効であることが示された。ＧＬＰ−１療法は、体重減少と関連付けられるが、吐き気も伴い、これはＧＬＰ−１類似体で治療される患者の２０％以上で発生する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｃｈａｒｐｅｎｔｉｅｒ  Ｇ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｍｅｔａｂ．Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．（２００２）１８（Ｓｕｐｐ．３）：Ｓ７０〜Ｓ７６
【非特許文献２】Ｒｅｓｎｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ（２００６）２９：５３１〜５３７
【非特許文献３】Ｎａｕｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．（１９９３）７６：９１２〜９１７
【非特許文献４】Ｉｒｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｇｕｌ．Ｐｅｐｔ．（２００９）１５３：７０〜７６
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の一態様は、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを、約１ｍｇ〜約４０ｍｇ、もしくは約４ｍｇ〜約３０ｍｇ、もしくは約４〜約２０ｍｇ、もしくは約１０〜約２０ｍｇ、もしくは約２〜約１０ｍｇの総週間用量で、成人に投与することによって、それを必要とする成人において（例えば、その成人は、過体重、ＩＩ型真性糖尿病、インスリン抵抗性、アルコール性肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、または代謝症候群を有する）、体重増加を低減する、または体重減少を誘発するための方法を提供する。
【００１０】
本発明の別の態様は、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを、約１ｍｇ〜約４０ｍｇ、もしくは約４ｍｇ〜約３０ｍｇ、もしくは約４〜約２０ｍｇ、もしくは約１０〜約２０ｍｇ、もしくは約２〜約１０ｍｇの総週間用量で、成人に投与することによって、それを必要とする成人において（例えば、その成人は、Ｉ型真性糖尿病、ＩＩ型真性糖尿病、または妊娠性糖尿病を有する）、高血糖を治療する、血中グルコースレベルを低減する、または血中グルコースレベルを正常化するための方法を提供する。
【００１１】
半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、典型的に、少なくとも１％のＧＩＰ有効性率、または少なくとも１％のＧＬＰ−１有効性率を有する。いくつかの実施形態では、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、ＧＩＰ有効性率の約１０倍以内のＧＬＰ−１有効性率を呈する。あるいは、いくつかの実施形態では、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、ＧＩＰ受容体でのＥＣ５０の約１０倍以内のＧＬＰ−１受容体でのＥＣ５０を呈する。これらの実施形態のいずれかでは、例えば、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、約４〜約１０日、または約４〜約７日の半減期を呈する。これらの実施形態のいずれかでは、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドの投与は、インスリンレベルの増加、グルコースレベルの減少、Ｃ−ペプチドレベルの増加、ＨｂＡ１ｃレベルの減少、もしくはフルクトサミンレベルの減少、または任意のこれらの組み合わせをもたらすことができる。
【００１２】
半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、単独で、または第２の治療薬（例えば、抗糖尿病薬および／または抗肥満薬）と併せて、列挙した総週間用量をもたらす任意の頻度で投与され得る（例えば、週１回、週２回投与）。
【００１３】
いくつかの実施形態では、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、約３０，０００ダルトン〜約６０，０００ダルトン（例えば、約４０，０００ダルトン）の総分子量を有する、１つ以上の親水性ポリマー部分を含む。半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドの非限定例としては、配列番号５〜９４、９９〜１６９、１７３〜４１３、例えば、ＧＩＰもしくはＧＬＰ−１活性の少なくとも１０％を保持する配列番号５〜９４、９９〜１６９、１７３〜４１３に対して、最大１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個までのアミノ酸修飾を有するアミノ酸配列、または配列番号５〜９４、９９〜１６９、１７３〜４１３のＰＥＧ誘導体のいずれかが挙げられる。例えば、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、配列番号７５、９９〜１０３、１４０、１５３、１６６、および２６１のいずれかを含むことができる。
【００１４】
半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、例えば、皮下、静脈内、または筋肉内注射を通して、滅菌薬学的組成物中で投与され得る。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】グルコース負荷へのβ細胞応答に対する用量の範囲の影響を評価するために、健常な男女対象において行った、第１相無作為化プラセボ対照正対照二部研究の結果を表す。ヒト対象には、プラセボ、または４ｍｇ、８ｍｇ、もしくは１６ｍｇの半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを投与し、インスリン分泌率を測定した。用量依存性、用量比例性のインスリン分泌率（ＩＳＲ）の増加は、プラセボと比較して、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドによる治療後に認められた。
【図２Ａ】グルコース負荷へのβ細胞応答に対する用量の範囲の影響を評価するために、健常な男女対象において行った、第１相無作為化プラセボ対照正対照二部研究の結果を表す。ヒト対象には、プラセボ、または４ｍｇ（図２Ａ）もしくは８ｍｇ（図２Ｂ）の半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを投与し、０〜１２ｍｇ／ｋｇ／分の速度でグルコース注入して、血漿グルコースレベルを測定した。
【図２Ｂ】グルコース負荷へのβ細胞応答に対する用量の範囲の影響を評価するために、健常な男女対象において行った、第１相無作為化プラセボ対照正対照二部研究の結果を表す。ヒト対象には、プラセボ、または４ｍｇ（図２Ａ）もしくは８ｍｇ（図２Ｂ）の半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを投与し、０〜１２ｍｇ／ｋｇ／分の速度でグルコース注入して、血漿グルコースレベルを測定した。
【図３】４ｍｇ、８ｍｇ、または１６ｍｇの半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを投与し、０〜１２ｍｇ／ｋｇ／分の速度でグルコース注入した対象におけるＣ−ペプチドレベルを比較する実験の結果を示す。
【図４】ＢＹＥＴＴＡ、または４ｍｇ、８ｍｇ、もしくは１６ｍｇの半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを投与した対象において、４時間にわたって血漿アセトアミノフェンの出現を比較する。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ２０１０／０１１４３９号に記載される、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、糖尿病を含む高血糖を治療するため、ならびに体重増加を低減する、または体重減少を誘導するために有用であることがわかった。これらのペプチドは、ＧＬＰ−１単独と比較して、優れた減量効果を提供する。半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、例えば、循環血液中の長い半減期（例えば、約５〜６日）に起因して長い作用期間を有し、より長い間隔での投与を可能にする（例えば、週１回投与、またはさらには隔週投与）。
【００１７】
任意の特定理論に拘束されるものではないが、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、現在のＧＬＰ−１療法と比較して、同様の、または優れたグルコース低下効果および減量効果を示すが、吐き気または嘔吐などの胃腸忍容性問題の発生率も低減した。
【００１８】
半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、多様な動物モデルにおいて、グルコース正常化および減量特性を呈した。脂肪の少ないマウスおよびラットでは、そのようなペプチドは、グルコースチャレンジに対する耐性の改善をもたらす。食餌誘導性肥満マウスでは、そのようなペプチドは、食物摂取および体重増加の両方を低減した。
【００１９】
半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドの第１相無作為化プラセボ対照連続単一漸増用量研究では（実施例１を参照）、単一用量の半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを、０．１ｍｇから開始して最大３２ｍｇの範囲まで、皮下（ＳＣ）注射により健常な男性ボランティアに投与した。それぞれの用量は良好に忍容され、副作用、臨床的に重要な検査所見、またはＥＣＧ所見とは関連しなかった。
【００２０】
第１相無作為化プラセボ対照正対照二部研究では（実施例２を参照）、研究の第１部において、健常な男女対象は、プラセボの皮下（ＳＣ）注射および正の対照としてＢＹＥＴＴＡ（登録商標）（Ａｍｙｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）のＳＣ注射を受けた。研究の第２部において、対象は、プラセボのＳＣ注射および半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドＳＣ注射を受けた。４ｍｇ、８ｍｇ、および１６ｍｇの半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドの投与は、胃内容排出に対する効果なしに、段階的グルコース注入の間に用量依存的にインスリン分泌を増加させた。
定義
【００２１】
本明細書で使用するとき、用語「ペプチド」は、３個以上のアミノ酸、典型的に１００個または５０個未満のアミノ酸の配列を包含し、このアミノ酸は、自然発生するアミノ酸、または非自然発生のアミノ酸である。非自然発生のアミノ酸は、インビボで自然に発生しないアミノ酸を指すが、それにもかかわらず、本明細書に記載されるペプチド構造に組み込まれ得る。
【００２２】
本明細書で使用するとき、用語「ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド」は、ＧＬＰ−１およびＧＩＰ受容体の両方において活性を呈するペプチドを指す。そのようなペプチドは、任意に、検出可能なグルカゴン活性を有しないか、または比較的低いグルカゴン活性を有する場合がある（例えば、ＧＬＰ−１もしくはＧＩＰ受容体と比較して、グルカゴン受容体では少なくとも１０倍低い有効性率、または少なくとも１００倍低い有効性）。
【００２３】
本明細書で使用するとき、用語「半減期延長」は、長い作用期間および／または減少した除去速度を有するペプチドを指す。例えば、長い作用期間は、ジペプチダーゼＩＶ分裂に対する抵抗および／または異種部分に対する共役に起因し得、循環血液中の半減期を延長する（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、アルブミン、またはＦｃ領域もしくはその断片）。
【００２４】
本明細書で使用するとき、一般的な用語「ポリエチレングリコール」または「ＰＥＧ」は、一般式Ｈ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＨ（式中、ｎは少なくとも９）により表される、分枝鎖または直鎖のエチレンオキシドおよび水の縮合ポリマーの混合を指す。
【００２５】
本明細書で使用するとき、用語「ＰＥＧ化」および同様の用語は、１つ以上のポリエチレングリコール部分を化合物に結合することにより、その自然状態から修飾された化合物を指す。「ＰＥＧ化半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド」は、例えば、約３０，０００ダルトン〜約６０，０００ダルトンのＰＥＧの総分子量で、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドに共有結合された１つ以上のＰＥＧ鎖を有する、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを指す。
【００２６】
本明細書で使用するとき、アミノ酸「修飾」は、アミノ酸の置換、付加、または欠失を指し、ヒトタンパク質において一般に認められる２０個のアミノ酸のいずれか、ならびに非定型または非自然発生アミノ酸との置換または付加を含む。本出願全体で、数字による特定アミノ酸位置に対するすべての言及（例えば、２８位）は、天然グルカゴンにおけるその位置でのアミノ酸（配列番号１）またはその任意の類似体において対応するアミノ酸位置でのアミノ酸を指す。例えば、本明細書における「２８位」に対する言及は、配列番号１の第１のアミノ酸が欠失されたペプチドにおいて対応する２７位を意味する。同様に、本明細書における「２８位」に対する言及は、１つのアミノ酸が配列番号１のＮ末端の前に付加されたペプチドの対応する２９位を意味する。非定型アミノ酸の商業的供給元としては、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）、ＣｈｅｍＰｅｐ  Ｉｎｃ．（Ｍｉａｍｉ，ＦＬ）、およびＧｅｎｚｙｍｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）が挙げられる。非定型アミノ酸は、商業的供給元から購入され得る、デノボ合成され得る、または他のアミノ酸から化学的に修飾もしくは派生し得る。
【００２７】
本明細書で使用するとき、アミノ酸「置換」は、異なるアミノ酸残基による１つのアミノ酸残基の置き換えを指す。
【００２８】
本明細書で使用するとき、用語「保存アミノ酸置換」は、１つのアミノ酸と、類似の特性、例えば、大きさ、電荷、疎水性、親水性、および／または芳香性を有する別のアミノ酸との置き換えとして本明細書に定義され、以下の５つの群のうちの１つにおける交換を含む。
Ｉ．小型の脂肪族、非極性またはわずかに極性の残基：
Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ
ＩＩ．極性の負電荷残基ならびにそれらのアミドおよびエステル：
Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、システイン酸およびホモシステイン酸
ＩＩＩ．極性の正電荷残基：
Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ；オルニチン（Ｏｒｎ）
ＩＶ．大型の脂肪族、非極性残基：
Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｃｙｓ、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、ホモシステイン
Ｖ．大型の芳香族残基：
Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、アセチルフェニルアラニン
【００２９】
本明細書で使用するとき、用語「天然グルカゴン」は、配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチドを指し、用語「天然ＧＩＰ」は、配列番号４のアミノ酸配列からなるペプチドを指し、用語「天然ＧＬＰ−１」は、ＧＬＰ−１（７−３６）アミド（配列番号３のアミノ酸配列からなる）、ＧＬＰ−１（７−３７）酸（配列番号２のアミノ酸配列からなる）、またはそれら２つの化合物の混合を指定する総称である。本明細書で使用するとき、任意のさらなる指定がない場合、「グルカゴン」、「ＧＩＰ」、または「ＧＬＰ−１」に対する一般的な言及は、それぞれ天然グルカゴン、天然ＧＩＰ、または天然ＧＬＰ−１を意味することが意図される。
【００３０】
本明細書で使用するとき、ペプチドに対する一般的な言及は、修飾されたアミノおよびカルボキシ末端を有するペプチドを包含することが意図される。例えば、末端カルボン酸の代わりにアミド基を含むアミノ酸鎖は、標準アミノ酸を指定するアミノ酸配列により包含されることが意図される。
【００３１】
本明細書で使用するとき、第２の受容体に対する第１の受容体の分子の「選択性」という用語は、以下の比率を指す。第２の受容体での分子のＥＣ５０／第１の受容体での分子のＥＣ５０。例えば、第１の受容体において１ｎＭのＥＣ５０および第２の受容体において１００ｎＭのＥＣ５０を有する分子は、第２の受容体に対して第１の受容体について１００倍の選択性を有する。
【００３２】
本明細書で使用するとき、ＧＬＰ−１有効性率は、ＧＬＰ−１のＥＣ５０を半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドのＥＣ５０で割って１００％を掛けたものである。
【００３３】
本明細書で使用するとき、ＧＩＰ有効性率は、ＧＩＰのＥＣ５０を半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドのＥＣ５０で割って１００％を掛けたものである。
【００３４】
本明細書で使用するとき、グルカゴン有効性率は、グルカゴンのＥＣ５０を半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドのＥＣ５０で割って１００％を掛けたものである。
【００３５】
本明細書で使用するとき、用語「治療する」は、特定疾患もしくは状態の予防、または特定疾患もしくは状態と関連付けられた症状の緩和、および／または該症状の予防もしくは排除を含む。例えば、本明細書で使用するとき、用語「糖尿病を治療する」は、概して、グルコース血中レベルを正常レベルの方向に変化させることを指し、所与の状況に応じて血中グルコースレベルを増減させることを含んでよい。
【００３６】
用語「非経口」は、消化管を通らないが、皮下、筋肉内、髄腔内、または静脈内などのいくつかの他の経路によるものを意味する。
【００３７】
本明細書で使用するとき、用語「薬学的に許容される担体」は、例えば、リン酸緩衝生理食塩水、水、乳剤、例えば、油／水または水／油乳剤、および様々な種類の湿潤剤などの標準的な薬学的担体のうちのいずれかを含む。この用語は、ヒトを含む動物において使用するための、米国連邦政府の規制当局により承認された薬剤、および米国薬局方に列挙される薬剤のうちのいずれもを包含する。
【００３８】
本明細書で使用するとき、用語「薬学的に許容される塩」は、生物学的または他の面で望ましくない、親化合物の生物活性を保持する化合物の塩を指す。本明細書に開示される化合物の多くは、アミノ基および／もしくはカルボキシル基、またはそれに類似する基の存在によって、酸および／または塩基塩を形成することができる。
【００３９】
薬学的に許容される塩基付加塩は、無機および有機塩基から調製され得る。無機塩基に由来する塩には、単なる例として、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、およびマグネシウム塩が挙げられる。有機塩基に由来する塩としては、これらに限定されないが、一次アミン、二次アミン、および三次アミンの塩が挙げられる。
【００４０】
薬学的に許容される酸付加塩は、無機および有機酸から調製され得る。無機酸に由来する塩としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などが挙げられる。有機酸に由来する塩としては、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエン−スルホン酸、サリチル酸などが挙げられる。
ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドの実施形態
【００４１】
本明細書に記載される発明は、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを、それを必要とする成人に投与する方法に関する。ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドおよびそのようなペプチドの半減期延長版は、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１０／０１１４３９において網羅的に説明されている。
【００４２】
いくつかの実施形態では、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、（ａ）国際公開第ＷＯ２０１０／０１１４３９号の配列番号５〜９４、９９〜１６９、および１７３〜２６２に対応する配列番号５〜９４、９９〜１６９、および１７３〜２６２、（ｂ）参照することにより本明細書に組み込まれる、米国仮特許出願第６１／２９，８８１２号における配列番号１９〜２８および３３〜３６に対応する、配列番号２６３〜２７７のうちのいずれか、（ｃ）配列番号１７８〜４１３のうちのいずれか、（ｄ）最大２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のさらなる修飾を含む（例えば、保存置換を含む）、１つ以上のアミノ酸修飾を有する前述のペプチドのうちのいずれかの任意の類似体、または（ｅ）類似体がＧＬＰ−１およびＧＩＰ受容体での親ペプチドの所望の活性（例えば、少なくとも１％、１０％、２０％、３０％、４０％、または５０％）を保持するならば、前述のペプチドのいずれかのＰＥＧ化誘導体のうちのいずれかである、またはいずれかを含む。国際公開第ＷＯ２０１０／０１１４３９号は、変更され得るアミノ酸に関するいくつかのガイダンスも提供し、加えて、本発明は、付加、欠失、非保存置換、および／または１、２、５、７、８、１０、１１、１２、１３、１４、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２４、２７、２８、または２９位のうちの１つ以上において非保存置換を有するペプチドを考慮する。ペプチドおよび類似体は、配列番号１〜４１３のうちのいずれかのＰＥＧ化誘導体をもたらすように、１つ以上の付加アミノ酸配列（例えば、融合タンパク質として）または１つ以上のＰＥＧ鎖を含む付加異種部分を含んでよい。いくつかの例示的実施形態では、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、配列番号７５、９９〜１０３、１４０、１５３、１６６、および２６１のうちのいずれかである。例えば、ＰＥＧ化などの場合によっては、親ペプチドは、最初に調製された後にＰＥＧ化されてよいが、類似体は、後次に修飾される親ペプチドを調製することよりもむしろ、デノボ合成により調製されることが理解される。
【００４３】
いくつかの実施形態では、ＧＩＰ受容体での半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドのＥＣ５０は、約２０倍、約１５倍以内、または好ましくは約１０倍、９倍、８倍、７倍、６倍、５倍、４倍、３倍、もしくは約２倍以内で、ＧＬＰ−１受容体でのそのＥＣ５０とは異なる（より高いまたは低い）。いくつかの実施形態では、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、約２０倍、約１５倍以内、または好ましくは約１０倍、９倍、８倍、７倍、６倍、５倍、４倍、３倍、もしくは約２倍以内で、ＧＩＰ有効性率とは異なる（より高いまたは低い）ＧＬＰ−１有効性率を呈する。例示的実施形態では（例えば、本明細書に記載の実施形態のうちのいずれかでは）、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、ＧＩＰ有効性率の少なくとも約１％、少なくとも約５％、または少なくとも約１０％を呈する。例示的実施形態では（例えば、本明細書に記載の実施形態のうちのいずれかでは）、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、少なくとも約１％のＧＬＰ−１有効性率を呈する。いくつかの実施形態では、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、グルカゴン受容体における天然グルカゴンの活性の約１０％以下、例えば、約１〜１０％、約０．１〜１０％、または約０．１％超であるが約１０％未満を有する。本明細書に記載の実施形態のうちのいずれかでは、例えば、ＧＬＰ−１受容体に対する半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドの選択性は、ＧＩＰ受容体と比較して、１００倍未満であるか、またはＧＬＰ−１有効性率をＧＩＰ有効性率で割った割合は、１００未満、約２０、１５、１０、９、８、７、６、または５未満である。
【００４４】
半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、例えば、循環血液中の長い半減期（例えば、約５〜６日）に起因して長い作用期間を有し、より長い間隔での投与（例えば、週１回投与、隔週投与）を可能にする。いくつかの実施形態では、本発明に従って使用される半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、約３〜約１５日、例えば、約３〜５、３〜６、３〜７、３〜８、３〜９、３〜１０、３〜１１、３〜１２、３〜１３、３〜１４、３〜１５、４〜５、４〜６、４〜７、４〜８、４〜９、４〜１０、４〜１１、４〜１２、４〜１３、４〜１４、４〜１５、５〜６、５〜７、５〜８、５〜９、５〜１０、５〜１１、５〜１２、５〜１２、５〜１４、５〜１５、６〜７、６〜８、６〜９、６〜１０、６〜１１、６〜１２、６〜１３、６〜１４、または６〜１５日の範囲の半減期を有する。いくつかの実施形態では、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、約１０日〜約３０日以内、例えば約２０日以内に完全除去を経る。
【００４５】
例えば、長い作用期間は、ジペプチダーゼＩＶ分裂に対する抵抗または低減した感受性、および／または循環血液中の半減期を延長する異種部分に対する共役に起因し得る。ジペプチダーゼＩＶ分裂に対する抵抗または低減した感受性は、例えば、（「ＤＰＰ−ＩＶ保護アミノ酸」に対する）１位および／または２位のアミノ酸修飾により提供される。適切な置換の例としては、１位でのＤ−ヒスチジン、α，α−ジメチルイミダゾール酢酸（ＤＭＩＡ）、Ｎ−メチルヒスチジン、α−メチルヒスチジン、イミダゾール酢酸、デスアミノヒスチジン、ヒドロキシル−ヒスチジン、アセチル−ヒスチジン、もしくはホモ−ヒスチジン、または２位でのＤ−セリン、Ｄ−アラニン、バリン、グリシン、Ｎ−メチルセリン、もしくはα−アミノイソブチル酸（ＡＩＢ）が挙げられる。
【００４６】
作用期間を延長する異種部分の例としては、これらに限定されないが、アシル基もしくはアルキル基；ジペプチドプロドラッグ部分（例えば、アミドもしくはエステル結合を介して結合される）、または他のプロドラッグ部分；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）もしくは他の親水性ポリマー；アルブミンもしくは他の血漿タンパク質；免疫グロブリンのＦｃ領域もしくはその断片；ｒＰＥＧが挙げられる。そのような成分は、当該技術分野において既知である。例えば、アシル化もしくはアルキル化、親水性ポリマー、アルブミン、または他の血漿タンパク質、および免疫グロブリンのＦｃ領域もしくはその断片は、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１０／０１１４３９号において説明される。エステルプロドラッグ部分は、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２００９／０９９７６３号において説明され、アミドプロドラッグ部分は、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１０／０７１８０７号において説明される。組み換えＰＥＧ、またはｒＰＥＧは、国際公開第ＷＯ２００９／０２３２７０において説明される。
【００４７】
いくつかの実施形態では、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、国際公開第ＷＯ２０１０／０１１４３９号に記載されるように、アミノ酸１６、１７、２０、２１、２４、または２９位のいずれかにおいて、２９位の後はＣ末端延長（例えば、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９）内の付加アミノ酸（例えば、３０位）において、またはＣ末端アミノ酸（例えば、４０、４１、４２、もしくはそれ以上）において、親水性ポリマーに共有結合されるアミノ酸を含む。例示的実施形態では、この親水性ポリマーは、これらの位置のうちのいずれかにおいて、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、Ｏｒｎ、ホモシステイン、またはアセチル−フェニルアラニン残基に共有結合される。例示的親水性ポリマーとしては、国際公開第２０１０／０１１４３９号に記載されるように、例えば、総分子量約２０，０００ダルトン〜約４０，０００ダルトンの１つ以上のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖が挙げられる。いくつかの実施形態では、ポリエチレングリコールポリマーは、約３０，０００ダルトン〜約６０，０００ダルトン、または約３０，０００ダルトン〜約５０，０００ダルトン（例えば、４０，０００ダルトン）の分子量を有する。
【００４８】
異種部分
【００４９】
本明細書で使用するとき、用語「異種部分」は、用語「共役部分」と同義であり、それが付着されるペプチドとは異なる任意の分子を指す（化学的または生化学的、自然発生または非コード化）。いくつかの実施形態では、異種部分は、別のペプチドまたはタンパク質である。いくつかの実施形態では、異種部分は、血漿タンパク質、例えば、アルブミン、トランスフェリン、フィブリノゲン、およびグロブリンである。いくつかの実施形態では、血漿タンパク質は、アルブミンまたはトランスフェリンである。
【００５０】
いくつかの実施形態では、異種部分は、免疫グロブリン（Ｉｇ）のＦｃ部分、またはその断片もしくは修飾された類似体、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、またはＩｇＭ、好ましくはＦｃＲｎ結合部位を保持する断片である。Ｆｃ領域は、免疫グロブリンのリサイクルおよび循環血液への返送などの活性を実行する（半減期延長をもたらす）、Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合に関与するＩｇ重鎖のＣ末端領域である。例えば、いくつかの定義に従って、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、重鎖のＣｙｓ２２６からＣ末端まで広がる。ＦｃＲｎ受容体に結合するＩｇＧのＦｃ部分の領域は、Ｘ線結晶学に基づいて説明されている（Ｂｕｒｍｅｉｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．１９９４，Ｎａｔｕｒｅ  ３７２：３７９）。ＦｃとＦｃＲｎとの主要な接触域は、ＣＨ２ドメインとＣＨ３ドメインとの接合部付近であり、ＣＨ２ドメインのアミノ酸残基２４８、２５０〜２５７、２７２、２８５、２８８、２９０〜２９１、３０８〜３１１、および３１４、ならびにＣＨ３ドメインのアミノ酸残基３８５〜３８７、４２８、および４３３〜４３６を含む。いくつかの共役部分は、ＡＤＣＣおよびＣＤＣに関与するＦｃγＲの結合部位（複数可）を含む場合もしくは含まない場合があり、またはＡＤＣＣもしくはＣＤＣを低減するように設計された修飾を含んでよい。
【００５１】
いくつかの実施形態では、異種部分はポリマーである。いくつかの実施形態では、ポリマーは、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレンおよびその誘導体（ポリアルキレングリコール、ポリアルキレンオキシド、ポリアルキレンテレフタレートを含む）、アクリル系およびメタクリル系エステルのポリマー（ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、およびポリ（オクタデシルアクリレート）を含む）、ポリビニルポリマー（ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、ポリビニルハロゲン化物、ポリ（ビニル酢酸）、およびポリビニルピロリドン、ポリグリコリド、ポリシロキサン、ポリウレタンおよびそのコポリマーを含む）、セルロース（アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシ−プロピルメチルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、セルロース酢酸、セルロースプロピオネート、セルロース酢酸ブチラート、セルロース酢酸フタレート、カルボキシルエチルセルロース、セルロース三酢酸、およびセルロース硫酸ナトリウム塩を含む）、ポリプロピレン、ポリエチレン（ポリ（エチレングリコール）、ポリ（エチレンオキシド）、およびポリ（エチレンテレフタレート）を含む）、ならびにポリスチレンからなる群から選択される。
【００５２】
いくつかの態様では、ポリマーは、生分解性ポリマーであり、合成生分解性ポリマー（例えば、乳酸およびグリコール酸のポリマー、ポリ無水物、ポリ（オルト）エステル、ポリウレタン、ポリ（ブチル酸）、ポリ（バレリアン酸）、およびポリ（ラクチド−コカプロラクトン））、ならびに天然生分解性ポリマー（例えば、アルギン酸塩および他の多糖類（デキストランおよびセルロースを含む）、コラーゲン、その化学誘導体（置換、化学基の付加、例えば、アルキル、アルキレン、ヒドロキシル化、酸化、および当業者により日常的に行われる他の修飾）、アルブミンおよび他の親水性タンパク質（例えば、ゼインならびに他のプロラミンおよび疎水性タンパク質））、ならびに任意のコポリマーまたはそれらの混合を含む。
【００５３】
いくつかの態様では、ポリマーは、生接着性ポリマー、例えば、その教示が本明細書に組み込まれる、Ｈ．Ｓ．Ｓａｗｈｎｅｙ，Ｃ．Ｐ．Ｐａｔｈａｋ  ａｎｄ  Ｊ．Ａ．Ｈｕｂｂｅｌｌ  ｉｎ  Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，１９９３，２６，５８１−５８７により記載される生体内分解性ヒドロゲル、ポリヒアルロン酸、カゼイン、ゼラチン、グルチン、ポリ無水物、ポリアクリル酸、アルギニン酸、キトサン、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、およびポリ（オクタデシルアクリレート）である。
【００５４】
いくつかの実施形態では、ポリマーは、水溶性ポリマーまたは親水性ポリマーである。適切な水溶性ポリマーは、当該技術分野において既知であり、例えば、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ；Ｋｌｕｃｅｌ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ；Ｍｅｔｈｏｃｅｌ）、ニトロセルロース、ヒドロキシプロピルエチルセルロース、ヒドロキシプロピルブチルセルロース、ヒドロキシプロピルペンチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース（Ｅｔｈｏｃｅｌ）、ヒドロキシエチルセルロース、様々なアルキルセルロースおよびヒドロキシアルキルセルロース、様々なセルロースエーテル、セルロース酢酸、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ビニル酢酸／クロトン酸コポリマー、ポリ−ヒドロキシアルキルメタクリレート、ヒドロキシメチルメタクリレート、メタクリル酸コポリマー、ポリメタクリル酸、ポリメチルメタクリレート、マレイン無水物／メチルビニルエーテルコポリマー、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナトリウムおよびカルシウム、ポリアクリル酸、酸性カルボキシポリマー、カルボキシポリメチレン、カルボキシビニルポリマー、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンコポリマー、ポリメチルビニルエーテルコマレイン無水物、カルボキシメチルアミド、カリウムメタクリレートジビニルベンゼンコポリマー、ポリオキシエチレングリコール、ポリエチレンオキシド、ならびにそれらの誘導体、塩、および組み合わせが挙げられる。
【００５５】
いくつかの実施形態では、異種部分は炭水化物である。いくつかの実施形態では、炭水化物は、単糖類（例えば、グルコース、ガラクトース、フルクトース）、二糖類（例えば、スクロース、ラクトース、マルトース）、オリゴ糖（例えば、ラフィノース、スタキオース）、多糖類（スターチ、アミラーゼ、アミロペクチン、セルロース、キチン、カロース、ラミナリン、キシラン、マンナン、フコイダン、ガラクトマンナン）である。
【００５６】
いくつかの実施形態では、異種部分は脂質である。脂質は、いくつかの実施形態では、脂肪酸、エイコサノイド、プロスタグランジン、ロイコトリエン、トロンボキサン、Ｎ−アシルエタノールアミン、グリセロ脂質（例えば、一置換、二置換、三置換グリセロール）、グリセロリン脂質（例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン）、スフィンゴ脂質（例えば、スフィンゴシン、セラミド）、ステロール脂質（例えば、ステロイド、コレステロール）、プレノール脂質、サッカロ脂質、またはポリケチド、油、ろう、コレステロール、ステロール、脂溶性ビタミン、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド、リン脂質である。
【００５７】
親水性ポリマー
【００５８】
増加した流体力学半径および増加した血清半減期を付与する好適な親水性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、ＰＯＧ）、ポリオキシエチル化ソルビトール、ポリオキシエチル化グルコース、ポリオキシエチル化グリセロール（ＰＯＧ）、ポリオキシアルキレン、ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒド、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、モノメトキシ−ポリエチレングリコール、モノ−（Ｃ１−Ｃ１０）アルコキシ−またはアリールオキシ−ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロース、ポリアセタール、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリ（β−アミノ酸）（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、ポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー（ＰＰＧ）、および他のポリアルキレンオキシド、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、コロン酸または他の多糖ポリマー、フィコール、またはデキストラン、およびそれらの混合物である。デキストランは、主にα１−６結合により結合される、グルコースサブユニットの多糖ポリマーである。デキストランは、多くの分子量範囲内、例えば、約１ｋＤ〜約１００ｋＤ、または約５、１０、１５または２０ｋＤ〜約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０または９０ｋＤで使用可能である。
【００５９】
ペプチドに付着される１つ以上の親水性部分、例えば、ポリエチレングリコール鎖は、いくつかの実施形態に従って、約２０，０００ダルトン〜約６０，０００ダルトンの範囲から選択される総分子量を有する。いくつかの実施形態では、ポリエチレングリコール鎖は、約５００〜約５，０００ダルトン、または約１，０００〜約５，０００ダルトンの範囲から選択される分子量を有する。別の実施形態では、親水性部分、例えば、ポリエチレングリコール鎖は、約２０，０００ダルトン〜約６０，０００ダルトンの分子量を有する。さらに他の例示的実施形態では、親水性部分、例えば、ポリエチレングリコール鎖は、約３０，０００〜約５０，０００ダルトン（例えば、４０，０００ダルトン）の総分子量を有する。例えば、２つの２０，０００ダルトンＰＥＧ鎖を、ペプチドの同一位置または異なる位置に付着させて、総分子量４０，０００ダルトンを達成することができる。
【００６０】
線状または分枝状親水性ポリマーが考慮される。得られる共役の調製は、本質的に単分散または多分散であってよく、ペプチド当たり約０．５、０．７、１、１．２、１．５、または２以上のポリマー部分を有する。
【００６１】
いくつかの実施形態では、ペプチドの天然アミノ酸は、親水性部分と架橋するために適した側鎖を有するアミノ酸と置換され、ペプチドに対する親水性部分の結合を促進する。例示的アミノ酸としては、Ｃｙｓ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、ホモ−Ｃｙｓ、またはアセチルフェニルアラニン（Ａｃ−Ｐｈｅ）が挙げられる。他の実施形態では、親水性基を含むように修飾されたアミノ酸は、Ｃ末端でペプチドに付加される。
【００６２】
化学ＰＥＧ（例えば、組み換えＰＥＧ（ｒＰＥＧ）分子）に類似する延長配座を形成することができる付属ペプチドは、国際特許出願公開第ＷＯ２００９／０２３２７０号および米国特許出願公開第ＵＳ２００８／０２８６８０８号に記載される。ｒＰＥＧ分子は、ポリエチレングリコールではない。いくつかの態様では、ｒＰＥＧ分子は、グリシン、セリン、グルタミン酸、アスパラギン酸、アラニン、またはプロリンのうちの１つ以上を含むポリペプチドである。いくつかの態様では、ｒＰＥＧは、ホモポリマー、例えば、ポリ−グリシン、ポリ−セリン、ポリ−グルタミン酸、ポリ−アスパラギン酸、ポリ−アラニン、またはポリ−プロリンである。他の実施形態では、ｒＰＥＧは、２つのタイプの反復アミノ酸、例えば、ポリ（Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）、ポリ（Ｇｌｙ−Ｇｌｕ）、ポリ（Ｇｌｙ−Ａｌａ）、ポリ（Ｇｌｙ−Ａｓｐ）、ポリ（Ｇｌｙ−Ｐｒｏ）、ポリ（Ｓｅｒ−Ｇｌｕ）などを含む。いくつかの態様では、ｒＰＥＧは、３つの異なるタイプのアミノ酸、例えば、ポリ（Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ）を含む。特定の態様では、ｒＰＥＧは、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドの半減期を増加させる。いくつかの態様では、ｒＰＥＧは、正味の正電荷または正味の負電荷を含む。いくつかの態様では、ｒＰＥＧは、二次構造を欠損する。いくつかの実施形態では、ｒＰＥＧは、１０個のアミノ酸を超える、または等しい長さであり、いくつかの実施形態では、長さが約４０〜約５０個のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、付属ペプチドは、ペプチド結合またはプロテイナーゼ切断部位を通して、本発明のペプチドのＮ−末端またはＣ−末端に融合される。いくつかの態様では、ｒＰＥＧは、親和性タグを含む、または５ｋＤａを超えるＰＥＧに結合される。
【００６３】
アシル化またはアルキル化
【００６４】
いくつかの実施形態では、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、非天然アシル基またはアルキル基を含むアミノ酸を含む（例えば、以前にアシル化／アルキル化したアミノ酸をペプチドに組み込むこと、または合成後のペプチドのアシル化／アルキル化など、それがどのように調製されるかにかかわらず、本明細書においてそれぞれ「アシル化アミノ酸」または「アルキル化アミノ酸」と呼ばれる）。アシル基またはアルキル基は、ペプチドのアミノ酸に直接、またはスペーサを介してペプチドのアミノ酸に間接的に共役結合され得る。ペプチドは、親水性ポリマーが結合される同一のアミノ酸位置、または異なるアミノ酸位置でアシル化されてよい。
【００６５】
アシル基またはアルキル基は、任意の大きさであってよく、任意の長さの炭素鎖を含むことができ、線状または分枝状であり得る。本発明のいくつかの例示的実施形態では、アシル基は、Ｃ４〜Ｃ３０脂肪酸である。例えば、アシル基は、Ｃ４脂肪酸、Ｃ６脂肪酸、Ｃ８脂肪酸、Ｃ１０脂肪酸、Ｃ１２脂肪酸、Ｃ１４脂肪酸、Ｃ１６脂肪酸、Ｃ１８脂肪酸、Ｃ２０脂肪酸、Ｃ２２脂肪酸、Ｃ２４脂肪酸、Ｃ２６脂肪酸、Ｃ２８脂肪酸、またはＣ３０脂肪酸のうちのいずれかであり得る。いくつかの実施形態では、アシル基は、Ｃ８〜Ｃ２０脂肪酸、例えば、Ｃ１４脂肪酸またはＣ１６脂肪酸である。
【００６６】
他の例示的実施形態では、アルキル基は、Ｃ４〜Ｃ３０アルキルである。例えば、アルキル基は、Ｃ４アルキル、Ｃ６アルキル、Ｃ８アルキル、Ｃ１０アルキル、Ｃ１２アルキル、Ｃ１４アルキル、Ｃ１６アルキル、Ｃ１８アルキル、Ｃ２０アルキル、Ｃ２２アルキル、Ｃ２４アルキル、Ｃ２６アルキル、Ｃ２８アルキル、またはＣ３０アルキルのうちのいずれかであり得る。いくつかの実施形態では、アルキル基は、Ｃ８〜Ｃ２０アルキル、例えば、Ｃ１４アルキルまたはＣ１６アルキルであり得る。
【００６７】
いくつかの実施形態では、アシル基は胆汁酸であり、それらに限定されないが、コール酸、ケノデオキシコール酸、デオキシコール酸、リトコール酸、タウロコール酸、グリココール酸、およびコレステロール酸を含む。
【００６８】
半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドの治療的使用
【００６９】
半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる第ＷＯ２０１０／０１１４３９号に記載されるように、肥満を治療する、体重減少を誘導する（例えば、体重の減少により測定される）、体脂肪分布を正常化する、体重増加を予防もしくは低減する、および／または食欲を低減するために有用である。
【００７０】
一態様では、本発明は、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＬＰ共作動薬ペプチドを約１ｍｇ〜約４０ｍｇの週用量で成人に投与することにより、それを必要とする成人において体重増加を低減する、または体重減少を誘導する方法に関する。体重増加を低減する、または体重減少を誘導するための方法は、様々な原因に起因する、薬物誘導性肥満を含む過体重および肥満を治療する、血管疾患（冠状動脈疾患、心筋梗塞、脳卒中、末梢血管疾患、虚血性再かん流など）、高血圧、ＩＩ型糖尿病の発症、高脂血症、および筋骨格疾患を含む肥満と関連付けられる合併症を低減するために有用であると予想される。そのような方法は、インスリン抵抗性またはＩＩ型糖尿病、高血圧、高脂血症、またはこれらの危険因子の組み合わせなどの心血管疾患の他の危険因子を持つ患者における肥満に特に有用であることも予想される。
【００７１】
本発明のこの態様に関するいくつかの実施形態では、成人は、任意の段階の非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）もしくは任意の段階のアルコール性肝疾患、またはアルコール誘導性肝疾患を有する。ＮＡＦＬＤは、単純な脂肪肝（脂肪症）から非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝硬変（不可逆的な進行性の肝臓瘢痕）に及ぶ肝疾患の広いスペクトルを指す。ＮＡＦＬＤの全段階は、共通して肝臓の細胞（肝細胞）内に脂肪の蓄積（脂肪浸潤）を有する。単純な脂肪肝は、炎症または瘢痕のない肝細胞内のあるタイプの脂肪（例えば、トリグリセリド）の異常な蓄積である。ＮＡＳＨでは、脂肪蓄積は、様々な程度の肝臓の炎症（肝炎）および瘢痕（線維症）と関連付けられる。炎症細胞は、肝細胞を破壊し得る（肝細胞壊死）。用語「脂肪性肝炎」および「脂肪性壊死」では、「脂肪性」は脂肪浸潤を指し、「肝炎」は肝臓の炎症を指し、「壊死」は破壊された肝細胞を指す。ＮＡＳＨは、最終的に肝臓の瘢痕（線維症）、次いで不可逆的な進行性の瘢痕（肝硬変）に至る可能性がある。ＮＡＳＨによりもたらされる肝硬変は、ＮＡＦＬＤスペクトルの最終かつ最も重篤な段階である（Ｍｅｎｄｌｅｒ，Ｍｉｃｈｅｌ，“Ｆａｔｔｙ  Ｌｉｖｅｒ：Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  Ｆａｔｔｙ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ（ＮＡＦＬＤ）ａｎｄ  Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  Ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ（ＮＡＳＨ），”ｅｄ．Ｓｃｈｏｅｎｆｉｅｌｄ，Ｌｅｓｌｉｅ  Ｊ．，ＭｅｄｉｃｉｎｅＮｅｔ．ｃｏｍ，Ａｕｇｕｓｔ  ２９，２００５）。
【００７２】
アルコール性肝疾患は、アルコールの過剰消費に関連する、またはそれにより引き起こされる３つの病理的に異なる肝疾患：脂肪肝（脂肪症）、慢性または急性肝炎、および肝硬変を包含する。アルコール性肝炎は、軽度の肝炎から、疾患の唯一の表示である異常な臨床検査を伴う、黄疸（ビリルビン保持により引き起こされる黄色皮膚）、肝性脳症（肝不全により引き起こされる神経機能障害）、腹水（腹部の流体蓄積）、出血性食道静脈瘤（食道内の静脈瘤）、異常な血液凝固および昏睡などの合併症を伴う重篤な肝機能障害にまで及び得る。組織学的に、アルコール性肝炎は、肝細胞の膨化変性、好中球および場合によってはマロリー体を伴う炎症（細胞性中間フィラメントタンパク質の異常な凝集）を伴う特徴的所見を有する。肝硬変は、線維症と組み合わされる肝臓内の結節の広がりにより解剖学的に特徴付けられる（Ｗｏｒｍａｎ，Ｈｏｗａｒｄ  Ｊ．，“Ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ”，Ｃｏｌｕｍｂｉａ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒウェブサイト）。
【００７３】
本発明のこの実施形態における治療方法は、以下のうちの１つ、２つ、３つ以上の低減を含む。肝脂肪含有量、肝硬変の発生または進行、肝細胞がんの発生、炎症の兆候、例えば、異常な肝酵素レベル（例えば、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼＡＳＴおよび／またはアラニンアミノトランスフェラーゼＡＬＴ、またはＬＤＨ）、血清フェリチンの上昇、血清ビリルビンの上昇、および／または線維症の兆候、例えば、ＴＧＦ−βレベルの上昇。好適な実施形態では、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを使用して、単純な脂肪肝（脂肪症）を超えて進行し、炎症または肝炎の兆候を呈する患者を治療する。そのような方法は、例えば、ＡＳＴおよび／またはＡＬＴレベルの低減をもたらす場合がある。
【００７４】
本発明のこの態様に関するいくつかの実施形態では、成人は、代謝症候群を有する。代謝症候群Ｘ、インスリン抵抗症候群、またはＲｅａｖｅｎ症候群としても知られる代謝症候群は、５，０００万を超えるアメリカ人に影響を及ぼす疾患である。代謝症候群は、典型的に、以下の危険因子のうちの少なくとも３つ以上のクラスタ化を特徴とする。（１）腹部肥満（腹部内および周囲の過剰な脂肪組織）、（２）粥腫発生の脂質異常症（高トリグリセリド、低ＨＤＬコレステロール、および高ＬＤＬコレステロールを含む、血中脂質障害であり、動脈壁内のプラークの蓄積を強化する）、（３）血圧の上昇、（４）インスリン抵抗または耐糖能異常、（５）プロトロンビン状態（例えば、血中の高フィブリノゲンまたはプラスミノゲン活性化阻止因子−１）、および（６）炎症性状態（例えば、血中の上昇Ｃ反応性タンパク質）。他の危険因子は、加齢、ホルモン不均衡、および遺伝的素因を含んでよい。
【００７５】
代謝症候群は、アテローム性動脈硬化症（ＡＳＣＶＤ）と呼ばれる、血管プラークの蓄積に関連する、冠動脈性心疾患および他の障害、例えば、脳卒中および末梢血管疾患のリスクの増加と関連付けられる。代謝症候群の患者は、その初期段階のインスリン抵抗状態から、完全なＩＩ型糖尿病に進行する場合があり、ＡＳＣＶＤのリスクをさらに増大させる。任意の特定理論に縛られるものではないが、インスリン抵抗、代謝症候群、および血管疾患の間の関係は、インスリン刺激性血管拡張の障害、酸化的ストレスの強化に起因するインスリン抵抗に関連するＮＯアベイラビリティの低減、および脂肪細胞由来ホルモン、例えばアディポネクチンの異常（Ｌｔｅｉｆ  ａｎｄ  Ｍａｔｈｅｒ，Ｃａｎ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．２０（ｓｕｐｐｌ．Ｂ）：６６Ｂ−７６Ｂ（２００４））を含む、１つ以上の同時発症機序を伴ってよい。
【００７６】
２００１  米国コレステロール教育プログラム成人治療パネル（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｏｒｅｓｔｅｒｏｌ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｇｒａｍ  Ａｄｕｌｔ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｐａｎｅｌ（ＡＴＰ  ＩＩＩ））に従って、同一個人の以下の特性のうちのいずれか３つが、代謝症候群の基準を満たす。（ａ）腹部肥満（男性では１０２ｃｍを超える胴囲、女性では８８ｃｍを超える胴囲）、（ｂ）血清トリグリセリド（１５０ｍｇ／ｄＬ以上）、（ｃ）ＨＤＬコレステロール（男性では４０ｍｇ／ｄＬ以下、女性では５０ｍｇ／ｄＬ以下）、（ｄ）血圧（１３０／８５以上）、および（ｅ）空腹時血中グルコース（１１０ｍｇ／ｄＬ以上）。世界保健機関（ＷＨＯ）に従って、インスリンレベルの高い個人（上昇した空腹時血中グルコースまたは上昇した食後グルコース単独）は、以下の基準のうちの少なくとも２つをもって代謝症候群の基準を満たす。（ａ）腹部肥満（０．９を超える胴囲対腰囲の比、少なくとも３０ｋｇ／ｍ２の体格指数、または３７インチを超える腰囲測定値）、（ｂ）少なくとも１５０ｍｇ／ｄＬのトリグリセリドレベルまたは３５ｍｇ／ｄＬ未満のＨＤＬコレステロールを示すコレステロールパネル、（ｃ）１４０／９０以上の血圧、または高血圧の治療を受けている）（Ｍａｔｈｕｒ，Ｒｕｃｈｉ，“Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ，”ｅｄ．Ｓｈｉｅｌ，Ｊｒ．，Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｃ．，ＭｅｄｉｃｉｎｅＮｅｔ．ｃｏｍ，Ｍａｙ  １１，２００９）。
【００７７】
本明細書の目的で、個人が２００１  米国コレステロール教育プログラム成人治療パネルまたはＷＨＯに記載される基準のいずれかまたは両方を満たす場合、その個人は、代謝症候群に罹患していると見なされる。
【００７８】
別の態様では、本発明は、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＬＰ共作動薬ペプチドを約１ｍｇ〜約４０ｍｇの週用量で成人に投与することにより、それを必要とする成人において、高血糖を治療する、血中グルコースレベルを低減する、または血中グルコースレベルを正常化する（例えば、血中グルコースレベルが正常に戻る、例えば、血中グルコースレベルが正常よりも高い場合、血中グルコースレベルを低下させる）方法に関する。高血糖を治療するためのそのような方法は、インスリン依存性または非インスリン依存性のいずれかである糖尿病（例えば、Ｉ型真性糖尿病、ＩＩ型真性糖尿病、または妊娠性糖尿病）を含む、様々な種類の高血糖に有用であること、ならびに腎症、網膜症、および血管疾患を含む糖尿病の合併症を低減することが予想される。したがって、いくつかの実施形態では、成人は、Ｉ型真性糖尿病、ＩＩ型真性糖尿病、または妊娠性糖尿病を有する。
【００７９】
いくつかの実施形態では、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドの投与は、インスリンレベルの増加、グルコースレベルの減少、Ｃ−ペプチドレベルの増加、ＨｂＡ１ｃレベルの減少、フルクトサミンレベルの減少、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される生物学的応答をもたらす。インスリンレベルの増加は、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドの投与が、糖尿病を有効に治療していることを示し、グルコースレベルの減少は、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドの投与が、血糖レベルを低減するように作用して、高血糖を治療することを示す。
【００８０】
ＨｂＡ１ｃレベルは、血中グルコース濃度に依存するが（すなわち、血中グルコース濃度が高いほど、ＨｂＡ１ｃレベルが高い）、血中グルコース濃度の日内変動により影響を受けない。代わりに、それらは、過去約４週間の平均血中グルコースレベルを表し、最近２週間に強く偏っている。ＨｂＡ１ｃレベルの減少は、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドの投与が、長期間にわたって平均血中グルコースレベルを低減することを示す。
【００８１】
Ｃ−ペプチドは、インスリンのＡ鎖とＢ鎖との間のリンカーとして機能し、小胞体におけるインスリンの効率的なアセンブリ、折り畳み、および処理を促進する。高レベルのＣ−ペプチドは、概して高レベルの内因性インスリン産生を示すが、低レベルのＣ−ペプチドは、概して低レベルのインスリン産生を示す。Ｃ−ペプチドレベルの増加は、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドの投与が、インスリンの産生を増加させることを示す。
【００８２】
フルクトサミンを使用して、血漿グルコース濃度を同定することができる。概して、フルクトサミン濃度が高いほど、平均血中グルコースレベルが高い。正常なフルクトサミンレベルは、患者が糖尿病でないこと、または患者が良好に糖尿病を管理していることのいずれかを示す場合がある。フルクトサミンレベルの増加は、患者の平均グルコースが過去２〜３週間にわたって上昇したことを示す。フルクトサミンレベルの減少は、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドの投与が、平均血中グルコースレベルを低減することを示す。
【００８３】
いくつかの実施形態では、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、単独で、または有効量の１つ以上の二次治療薬と併せて投与され得る。いくつかの実施形態では、二次治療薬は、抗糖尿病薬、抗肥満薬、またはそれらの混合である。当該技術分野において既知である、または調査中の抗糖尿病薬としては、インスリン、スルホニル尿素、例えば、トルブタミド（Ｏｒｉｎａｓｅ）、アセトヘキサミド（Ｄｙｍｅｌｏｒ）、トラザミド（Ｔｏｌｉｎａｓｅ）、クロルプロパミド（Ｄｉａｂｉｎｅｓｅ）、グリピジド（Ｇｌｕｃｏｔｒｏｌ）、グリブリド（Ｄｉａｂｅｔａ、Ｍｉｃｒｏｎａｓｅ、Ｇｌｙｎａｓｅ）、グリメピリド（Ａｍａｒｙｌ）、またはグリクラジド（Ｄｉａｍｉｃｒｏｎ）；メグリチニド、例えば、レパグリニド（Ｐｒａｎｄｉｎ）またはナテグリニド（Ｓｔａｒｌｉｘ）；ビグアニド、例えば、メトホルミン（Ｇｌｕｃｏｐｈａｇｅ）またはフェンホルミン；チアゾリジンジオン、例えば、ロシグリタゾン（Ａｖａｎｄｉａ）、ピオグリタゾン（Ａｃｔｏｓ）、またはトログリタゾン（Ｒｅｚｕｌｉｎ）、または他のＰＰＡＲγ阻害薬；炭水化物の消化を阻害するαグルコシダーゼ阻害薬、例えば、ミグリトール（Ｇｌｙｓｅｔ）、アカルボース（Ｐｒｅｃｏｓｅ／Ｇｌｕｃｏｂａｙ）；エキセナチド（Ｂｙｅｔｔａ）またはプラムリニチド；ジペプチジルペプチダーゼ−４（ＤＰＰ−４）阻害薬、例えば、ビルダグリプチンまたはシタグリプチン；ＳＧＬＴ（ナトリウム依存性グルコース輸送体１）阻害薬；グルコキナーゼ活性剤（ＧＫＡ）；グルカゴン受容体拮抗薬（ＧＲＡ）；またはＦＢＰａｓｅ（フルクトース１，６−ビスホスファターゼ）阻害薬が挙げられる。例えば、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、インスリンとともに投与され得る。
【００８４】
当該技術分野において既知である、または調査中の抗肥満薬としては、レプチンおよび線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ−２１）、食欲抑制剤、例えば、フェネチルアミン系刺激剤、フェンテルミン（任意にフェンフルラミンまたはデキスフェンフルラミンとともに）、ジエチルプロピオン（Ｔｅｎｕａｔｅ（登録商標））、フェンジメトラジン（Ｐｒｅｌｕ−２（登録商標）、Ｂｏｎｔｒｉｌ（登録商標））、ベンズフェタミン（Ｄｉｄｒｅｘ（登録商標））、シブトラミン（Ｍｅｒｉｄｉａ（登録商標）、Ｒｅｄｕｃｔｉｌ（登録商標））；リモナバント（Ａｃｏｍｐｌｉａ（登録商標））、他のカンナビノイド受容体拮抗薬；オキシントモジュリン；フルオキセチン塩酸塩（Ｐｒｏｚａｃ）；Ｑｎｅｘａ（トピラメートおよびフェンテルミン）、Ｅｘｃａｌｉａ（ブプロピオンおよびゾニサミド）もしくはＣｏｎｔｒａｖｅ（ブプロピオンおよびナルトレキソン）；またはキセニカル（Ｏｒｌｉｓｔａｔ）もしくはＣｅｔｉｌｉｓｔａｔ（ＡＴＬ−９６２としても知られる）、またはＧＴ３８９−２５５に類似するリパーゼ阻害薬が挙げられる。
【００８５】
用量および投与
【００８６】
半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＬＰ共作動薬ペプチドは、約１ｍｇ〜約４０ｍｇの週用量（総週用量）で投与され得る。例えば、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＬＰ共作動薬ペプチドは、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、および約４０ｍｇの週用量で投与され得る。いくつかの実施形態では、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＬＰ共作動薬ペプチドは、約４ｍｇ〜約３０ｍｇの週用量で投与され得る。例えば、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＬＰ共作動薬ペプチドは、約４ｍｇ、約１２ｍｇ、約２０ｍｇ、もしくは約３０ｍｇ、または約４ｍｇ〜約２０ｍｇ、または約４ｍｇ〜約１２ｍｇ、または約６ｍｇ〜約３０ｍｇ、または約６ｍｇ〜約２０ｍｇ、または約６ｍｇ〜約１２ｍｇ、または約８ｍｇ〜約３０ｍｇ、または約８ｍｇ〜約２０ｍｇ、または約１２ｍｇ〜約３０ｍｇ、または約１２ｍｇ〜約２５ｍｇ、または約１２ｍｇ〜約２０ｍｇ、または約１０ｍｇ〜約３０ｍｇ、または約１０ｍｇ〜約２５ｍｇ、または約１０ｍｇ〜約２０ｍｇの週用量で投与され得る。いくつかの実施形態では、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＬＰ共作動薬ペプチドは、約２ｍｇ〜約１０ｍｇの週用量で投与され得る。例えば、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＬＰ共作動薬ペプチドは、約２ｍｇ、約４ｍｇ、約６ｍｇ、約８ｍｇ、もしくは約１０ｍｇ、約２ｍｇ〜約８ｍｇ、または約２ｍｇ〜約６ｍｇ、または約２ｍｇ〜約４ｍｇ、または約４ｍｇ〜約１０ｍｇ、または約４ｍｇ〜約８ｍｇ、または約４ｍｇ〜約６ｍｇの週用量で投与され得る。
【００８７】
示される用量は、約３５ｋＤ〜６５ｋＤ、または約３５ｋＤ〜約５５ｋＤの範囲、例えば、約４５ｋＤの分子量の半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＬＰ共作動薬ペプチド用である。本発明は、異なる分子量のペプチドに対して等しいモル用量を考慮する。したがって、本発明は、約２３ｎｍｏｌ〜約９３０ｎｍｏｌの週用量、または約９３ｎｍｏｌ〜約４６５ｎｍｏｌの週用量を考慮する。適切な週間投与量（ｍｇ）は、容易に計算される。例えば、約４０〜５０ｋＤ分子量のペプチドに対する１２ｍｇ用量は、約２０〜２５ｋＤ分子量のペプチドに対する６ｍｇ用量のモル等量である。
【００８８】
半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＬＰ共作動薬ペプチドは、所望の総週間投与量をもたらす任意の頻度で（例えば、２週間に１回、１０日毎、週１回、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、または毎日）該成人に投与され得る。所望の週用量が約４ｍｇである場合、例えば、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、８ｍｇで２週間に１回、４ｍｇで１週間に１回、または２ｍｇで１週間に２回投与され得る。所望の週用量が約１２ｍｇである場合、例えば、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、２４ｍｇで２週間に１回、１２ｍｇで１週間に１回、または６ｍｇで１週間に２回投与され得る。所望の週用量が約２０ｍｇである場合、例えば、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、４０ｍｇで２週間に１回、２０ｍｇで１週間に１回、または１０ｍｇで１週間に２回投与され得る。所望の週用量が約３０ｍｇである場合、例えば、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、６０ｍｇで２週間に１回、３０ｍｇで１週間に１回、または１５ｍｇで１週間に２回投与され得る。
【００８９】
等量の低減用量（体表面積または体重に比例して低減される）は、平均体重よりも低いヒト、十代のヒト、または子供に投与されてよい。例えば、平均成人男性の体表面積の約半分のヒトに対して調整された総週間投与量１２ｍｇは、総週間投与量６ｍｇである。別の例として、平均７０ｋｇのヒトに対する週間１２ｍｇは、１週間当たり約０．１７ｍｇ／ｋｇに等しく、平均７０ｋｇのヒトに対する週間２０ｍｇは、１週間当たり約０．２８ｍｇ／ｋｇに等しい。したがって、例えば、本発明は、約０．０２９ｍｇ／ｋｇ〜約０．１４３ｍｇ／ｋｇ（すなわち、７０ｋｇのヒトに対して２ｍｇ〜１０ｍｇ）、または１週間当たり約０．０５７ｍｇ／ｋｇ〜約０．２８ｍｇ／ｋｇ（すなわち、７０ｋｇのヒトに対して４ｍｇ〜２０ｍｇ）、または１週間当たり約０．０１４ｍｇ／ｋｇ〜約０．５ｍｇ／ｋｇ（すなわち、７０ｋｇのヒトに対して１ｍｇ〜３５ｍｇ）での半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドの投与を考慮する。
【００９０】
薬学的製剤および投与経路
【００９１】
半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、任意に許容される希釈剤、担体、賦形剤、またはそれらの混合を含む、薬学的組成物中で投与され得る。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は無菌であり、例えば、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の純度レベルを有する。
【００９２】
いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ（例えば、約１ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約１６ｍｇ／ｍＬ、約１７ｍｇ／ｍＬ、約１８ｍｇ／ｍＬ、約１９ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２１ｍｇ／ｍＬ、約２２ｍｇ／ｍＬ、約２３ｍｇ／ｍＬ、約２４ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２７ｍｇ／ｍＬ、約２８ｍｇ／ｍＬ、約２９ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約３１ｍｇ／ｍＬ、約３２ｍｇ／ｍＬ、約３３ｍｇ／ｍＬ、約３４ｍｇ／ｍＬ、約３５ｍｇ／ｍＬ、約３６ｍｇ／ｍＬ、約３７ｍｇ／ｍＬ、約３８ｍｇ／ｍＬ、約３９ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約４１ｍｇ／ｍＬ、約４２ｍｇ／ｍＬ、約４３ｍｇ／ｍＬ、約４４ｍｇ／ｍＬ、約４５ｍｇ／ｍＬ、約４６ｍｇ／ｍＬ、約４７ｍｇ／ｍＬ、約４８ｍｇ／ｍＬ、約４９ｍｇ／ｍＬ、および約５０ｍｇ／ｍＬ）の濃度で半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬を含む。
【００９３】
一実施形態では、薬学的組成物は、滅菌され、任意に様々な容器内に保管される水溶液を含む。いくつかの実施形態では、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを使用して、注射の準備ができている事前処方された溶液を調製することができる。他の実施形態では、薬学的組成物は、凍結乾燥された粉末を含む。薬学的組成物は、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを患者に投与するための使い捨てデバイスを含む、キットの一部としてさらに包装され得る。容器またはキットは、周囲室温または冷蔵温度で保管するためにラベル表示されてよい。
【００９４】
一実施形態では、キットには、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを患者に投与するためのデバイス、例えば、シリンジニードル、ペンデバイス、ジェットインジェクタ、または他の無針インジェクタが提供される。キットは、代替または付加的に、１つ以上の容器、例えば、バイアル、管、瓶、単一または複数チャンバの充てん済みシリンジ、カートリッジ、注入ポンプ（外部または埋め込み型）、ジェットインジェクタ、充てん済みペンデバイスなどを含んでよく、任意に半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを凍結乾燥形態で、または水溶液中に含有する。好ましくは、キットは、使用指示書も含む。いくつかの実施形態では、キットのデバイスは、エアロゾル分注デバイスであり、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、エアロゾルデバイス内に事前包装される。別の実施形態では、キットは、シリンジおよび針を備え、一実施形態では、滅菌半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、シリンジ内に事前包装される。
【００９５】
半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、非経口、例えば、静脈内、腹腔内、皮下または筋肉内、髄腔内、経皮、直腸内、経口、経鼻、または吸入を含む、任意の標準投与経路を使用して患者に投与され得る。非経口注射または例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、１２、または２４時間の期間にわたる長時間の注射が可能である。いくつかの実施形態では、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを含む薬学的組成物は、非経口注射を介して、例えば、皮下注射、静脈内注射、または筋肉内注射により投与される。
【００９６】
いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、本開示の半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドもしくはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体、ならびに／または１つ以上の薬学的に許容される成分を含む。参照することによりその全体が組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｉｘｔｅｅｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８０）は、薬学的に許容される組成物を処方する際に使用される様々な成分、およびその調製のための既知の技法を開示する。任意の従来の薬剤が、薬学的組成物と適合不可能である場合を除いて、薬学的組成物におけるその使用が考慮される。相補的活性成分もまた組成物に組み込まれ得る。
【００９７】
いくつかの実施形態では、薬学的に許容される成分は、糖（例えば、グルコース、スクロース、トレハロース、ラクトース、フルクトース、マルトース、デキストラン、グリセリン、デキストラン、メリビオース、メレジトース、ラフィノース、マンノトリオース、スタチオース、マルトース、ラクツロース、マルツロース、もしくはイソ−マルツロース、またはこれらの糖の組み合わせ）、糖アルコール（例えば、グリコール、グリセロール、エリスリトール、トレイトール、アラビトール、キシリト−ル、リビトール、マンニトール、ソルビトール、ズルシトール、イジトール、イソマルト、マルチトール、ラクチトール、もしくはグルシトール、またはこれらの糖アルコールの組み合わせ）、塩（例えば、塩化ナトリウム）、乳化剤もしくは界面活性剤（例えば、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノオレエートなどのポリソルベート、またはエチレンオキシドおよびプロピレンオキシドの他のブロックコポリマー）、リオプロテクタント、およびそれらの混合からなる群から選択される。例えば、糖または糖アルコールなどの賦形剤は、例えば、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、または２５〜４５ｍｇ／ｍＬ、例えば、３５ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。
【００９８】
薬学的組成物は、生理的に適合可能なｐＨ、例えば、約ｐＨ４〜約ｐＨ１１を達成するように処方されてよい。いくつかの実施形態では、薬学的組成物のｐＨは、例えば、約７〜１０である。他の実施形態では、薬学的組成物のｐＨは、例えば、約４〜７、または４．５〜約５．５、例えば、約５である。
【００９９】
ある実施形態では、薬学的組成物は、生理的に適合可能なｐＨを達成するように、緩衝剤を含んでよい。緩衝剤は、例えば、リン酸緩衝液（例えば、ＰＢＳ）、トリエタノールアミン、トリス、ビチン、ＴＡＰＳ、トリシン、ＨＥＰＥＳ、ＴＥＳ、ＭＯＰＳ、ＰＩＰＥＳ、カコジレート、ＭＥＳ、酢酸、クエン酸、コハク酸、ヒスチジン、または他の薬学的に許容される緩衝液などを所望のｐＨで緩衝することができる任意の化合物を含んでよい。ある実施形態では、緩衝液の強度は、少なくとも０．５ｍＭ、少なくとも１ｍＭ、少なくとも５ｍＭ、少なくとも１０ｍＭ、少なくとも２０ｍＭ、少なくとも３０ｍＭ、少なくとも４０ｍＭ、少なくとも５０ｍＭ、少なくとも６０ｍＭ、少なくとも７０ｍＭ、少なくとも８０ｍＭ、少なくとも９０ｍＭ、少なくとも１００ｍＭ、少なくとも１２０ｍＭ、少なくとも１５０ｍＭ、または少なくとも２００ｍＭである。いくつかの実施形態では、緩衝液の強度は、３００ｍＭを超えない（例えば、最大２００ｍＭ、最大１００ｍＭ、最大９０ｍＭ、最大８０ｍＭ、最大７０ｍＭ、最大６０ｍＭ、最大５０ｍＭ、最大４０ｍＭ、最大３０ｍＭ、最大２０ｍＭ、最大１０ｍＭ、最大５ｍＭ、最大１ｍＭ）。例えば、緩衝液濃度は、約２ｍＭ〜約１００ｍＭ、または約１０ｍＭ〜約５０ｍＭであり得る。
【０１００】
本明細書に記載される治療方法、薬学的組成物、キット、および他の類似の実施形態に関するすべての説明は、ペプチドに対する言及が、薬学的に許容される塩、エステル、複合体、またはそのプロドラッグをすべて含むことが理解される。本発明の特定の実施形態は、様々な特徴を示す以下の非限定例においてさらに説明される。これらの実施形態の多くの変型例が実施されてよく、本明細書における開示全体を考慮して理解されるため、実施例は、本発明の範囲を制限するものと見なされてはならない。
【０１０１】
例示的実施形態
【０１０２】
Ａ．例示的実施形態
【０１０３】
例示的実施形態では、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、ＧＩＰ作動薬活性を有するグルカゴンの類似体（配列番号１）であり、以下の特徴を有する。
（ａ）  ＧＩＰ作動薬活性を付与する１位のアミノ酸修飾
（ｂ）  以下からなる群から選択される修飾
（ｉ）  ｉ位およびｉ＋４位のアミノ酸の側鎖間またはｊ位およびｊ＋３位のアミノ酸の側鎖間のラクタム架橋（ｉは、１２、１３、１６、１７、２０、または２４であり、ｊは、１７である）。
（ｉｉ）  類似体の１６、２０、２１、および２４位のアミノ酸のうちの１つ、２つ、３つ、またはすべてが、α，α−二置換アミノ酸と置換される。
（ｃ）  所望のＧＩＰおよびＧＬＰ−１活性を保持する、さらに１〜１０個（例えば、最大２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個）のアミノ酸修飾。
【０１０４】
このセクションでの例示的実施形態のうちのいずれかでは、１位のアミノ酸は、イミダゾール側鎖を欠損するアミノ酸、任意に大型芳香族アミノ酸（例えば、Ｔｙｒ）である。例示的実施形態のうちのいずれかでは、ペプチドは、１６位および２０位のアミノ酸間（例えば、ＧｌｕとＬｙｓとの間）にラクタム架橋を有することができる。例示的実施形態のうちのいずれかでは、α，α−二置換アミノ酸は、ＡＩＢであってよく、任意に１６位のアミノ酸は、正電荷アミノ酸である。例示的実施形態のうちのいずれかでは、正電荷アミノ酸は、式ＩＶのアミノ酸であり、
【化１】
2014501762.tif 000002
式中、ｎは、１〜７であり、Ｒ１およびＲ２のそれぞれは独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１８アルキル、（Ｃ１−Ｃ１８アルキル）ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ１８アルキル）ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ１８アルキル）ＳＨ、（Ｃ０−Ｃ４アルキル）（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ０−Ｃ４アルキル）（Ｃ２−Ｃ５複素環）、（Ｃ０−Ｃ４アルキル）（Ｃ６−Ｃ１０アリール）Ｒ７、および（Ｃ１−Ｃ４アルキル）（Ｃ３−Ｃ９ヘテロアリール）からなる群から選択され、Ｒ７は、ＨまたはＯＨであり、式ＩＶのアミノ酸の側鎖は、遊離アミノ基、任意にホモＬｙｓ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、または２，４−ジアミノブチル酸（Ｄａｂ）を含む。
【０１０５】
いくつかの例示的実施形態では、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、ＧＩＰ作動薬活性を有するグルカゴンの類似体（配列番号１）であり、以下の特徴を有する。１０位のアシル化アミノ酸、または２９位のアミノ酸に対する１〜２１個のアミノ酸Ｃ末端の延長は、アシル化アミノ酸を含み、さらに任意に（ｉ）ＧＩＰ作動薬活性を付与する１位のアミノ酸修飾、および（ｉｉ）（Ａ）ｉ位およびｉ＋４位のアミノ酸の側鎖間、またはｊ位およびｊ＋３位のアミノ酸の側鎖間のラクタム架橋（ｉは、１２、１３、１６、１７、２０、または２４であり、ｊは１７である）、および（Ｂ）類似体の１６、２０、２１、および２４位のアミノ酸の１つ、２つ、３つ、またはすべては、α，α−二置換アミノ酸と置換される、のうちの少なくとも１つまたは両方、ならびに（ｉｉｉ）最大１０個（例えば、最大２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個）のさらなるアミノ酸修飾を有する。任意に、１６位のアミノ酸は正電荷アミノ酸である。
【０１０６】
例示的実施形態のうちのいずれかでは、ペプチドは、２７、２８、および２９位の１つ、２つ、またはすべてのアミノ酸修飾、例えば、（ａ）大型脂肪族アミノ酸、任意にＬｅｕと置換される２７位のＭｅｔ、（ｂ）小型脂肪族アミノ酸、任意にＡｌａと置換される２８位のＡｓｎ、（ｃ）小型脂肪族アミノ酸、任意にＧｌｙと置換される２９位のＴｈｒ、または（ｄ）（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）のうちの２つまたはすべての組み合わせも含む。２位のアミノ酸は、任意にＤＰＰ−ＩＶ保護アミノ酸、例えば、α，α二置換アミノ酸（例えば、ＡＩＢ）である。例示的実施形態のうちのいずれかでは、ペプチドは、Ｃ末端アミドまたはエステルを有する。例示的実施形態のうちのいずれかでは、ペプチドは、２９位のアミノ酸、例えば、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳに対して１〜２１個のアミノ酸Ｃ末端の延長を含み、任意にその延長の１〜６個のアミノ酸は、正電荷アミノ酸である。
【０１０７】
Ｂ．例示的実施形態
【０１０８】
いくつかの例示的実施形態では、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、ＧＩＰ作動薬活性を有するグルカゴンの類似体（配列番号１）であり、以下の特徴を有する。１０位のアシル化アミノ酸、または２９位のアミノ酸に対する１〜２１個のアミノ酸Ｃ末端の延長は、アシル化アミノ酸を含み、任意に（ｉ）ＧＩＰ作動薬活性を付与する１位のアミノ酸修飾、および（ｉｉ）（Ａ）ｉ位およびｉ＋４位のアミノ酸の側鎖間、またはｊ位およびｊ＋３位のアミノ酸の側鎖間のラクタム架橋（ｉは、１２、１３、１６、１７、２０、または２４であり、ｊは１７である）、および（Ｂ）類似体の１６、２０、２１、および２４位のアミノ酸の１つ、２つ、３つ、またはすべては、α，α−二置換アミノ酸と置換される、のうちの少なくとも１つまたは両方、ならびに（ｉｉｉ）所望のＧＩＰおよびＧＬＰ−１活性を保持する、最大１０個（例えば、最大２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個）のさらなるアミノ酸修飾を有する。任意に、１６位のアミノ酸は正電荷アミノ酸である。
【０１０９】
例示的実施形態のうちのいずれかでは、ペプチドは、２７、２８、および２９位の１つ、２つ、またはすべてのアミノ酸修飾、例えば、（ａ）大型脂肪族アミノ酸、任意にＬｅｕと置換される２７位のＭｅｔ、（ｂ）小型脂肪族アミノ酸、任意にＡｌａと置換される２８位のＡｓｎ、（ｃ）小型脂肪族アミノ酸、任意にＧｌｙと置換される２９位のＴｈｒ、または（ｄ）（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）のうちの２つまたはすべての組み合わせも含む。２位のアミノ酸は、任意にＤＰＰ−ＩＶ保護アミノ酸、例えば、α，α二置換アミノ酸（例えば、ＡＩＢ）である。例示的実施形態のうちのいずれかでは、ペプチドは、Ｃ末端アミドまたはエステルを有する。例示的実施形態のうちのいずれかでは、ペプチドは、２９位のアミノ酸、例えば、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳに対して１〜２１個のアミノ酸Ｃ末端の延長を含み、任意にその延長の１〜６個のアミノ酸は、正電荷アミノ酸である。
【０１１０】
いくつかの例示的実施形態では、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、ＧＩＰ作動薬活性を有するグルカゴンの類似体（配列番号１）であり、以下の特徴を有する。（ａ）ＧＩＰ作動薬活性を付与する１位のアミノ酸修飾は、例えば、イミダゾール側鎖を欠損するアミノ酸とのＨｉｓの置換である、（ｂ）ｉ位およびｉ＋４位のアミノ酸の側鎖間またはｊ位およびｊ＋３位のアミノ酸の側鎖間のラクタム架橋（ｉは、１２、１３、１６、１７、２０、または２４であり、ｊは、１７である）、（ｃ）２７、２８、および２９位の１つ、２つ、またはすべてのアミノ酸修飾、ならびに（ｄ）所望のＧＩＰおよびＧＬＰ−１活性を保持する、１〜９個（例えば、最大２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個）のさらなるアミノ酸修飾。
【０１１１】
このセクションでの例示的実施形態のうちのいずれかでは、１位のアミノ酸は、イミダゾール側鎖を欠損するアミノ酸、任意に大型芳香族アミノ酸（例えば、Ｔｙｒ）である。例示的実施形態のうちのいずれかでは、ペプチドは、１６位および２０位のアミノ酸間（例えば、ＧｌｕとＬｙｓとの間）にラクタム架橋を有することができる。例示的実施形態のうちのいずれかでは、ペプチドは、（ａ）大型脂肪族アミノ酸、任意にＬｅｕと置換される２７位のＭｅｔ、（ｂ）小型脂肪族アミノ酸、任意にＡｌａと置換される２８位のＡｓｎ、（ｃ）小型脂肪族アミノ酸、任意にＧｌｙと置換される２９位のＴｈｒも含む。２位のアミノ酸は、任意にＤＰＰ−ＩＶ保護アミノ酸、例えば、α，α二置換アミノ酸（例えば、ＡＩＢ）である。例示的実施形態のうちのいずれかでは、ペプチドは、Ｃ末端アミドまたはエステルを有する。例示的実施形態のうちのいずれかでは、ペプチドは、２９位のアミノ酸、例えば、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳに対して１〜２１個のアミノ酸Ｃ末端の延長を含み、任意にその延長の１〜６個のアミノ酸は、正電荷アミノ酸である。
【０１１２】
いくつかの例示的実施形態では、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、ＧＩＰ作動薬活性を有するグルカゴンの類似体（配列番号１）であり、以下の特徴を有する。（ａ）ＧＩＰ作動薬活性を付与する１位のアミノ酸修飾、（ｂ）類似体の１６、２０、２１、および２４位のアミノ酸の１つ、２つ、３つ、またはすべてが、α，α−二置換アミノ酸、例えば、ＡＩＢと置換される、（ｃ）２７、２８、および２９位の１つ、２つ、またはすべてのアミノ酸修飾、ならびに（ｄ）所望のＧＩＰおよびＧＬＰ−１活性を保持する、１〜９個（例えば、最大２、３、４、５、６、７、８、９個）のさらなるアミノ酸修飾。
【０１１３】
このセクションでの例示的実施形態のうちのいずれかでは、１位のアミノ酸は、イミダゾール側鎖を欠損するアミノ酸、任意に大型芳香族アミノ酸（例えば、Ｔｙｒ）である。例示的実施形態のうちのいずれかでは、ペプチドは、１６位および２０位のアミノ酸間（例えば、ＧｌｕとＬｙｓとの間）にラクタム架橋を有することができる。例示的実施形態のうちのいずれかでは、ペプチドは、（ａ）大型脂肪族アミノ酸、任意にＬｅｕと置換される２７位のＭｅｔ、（ｂ）小型脂肪族アミノ酸、任意にＡｌａと置換される２８位のＡｓｎ、（ｃ）小型脂肪族アミノ酸、任意にＧｌｙと置換される２９位のＴｈｒも含む。２位のアミノ酸は、任意にＤＰＰ−ＩＶ保護アミノ酸、例えば、α，α二置換アミノ酸（例えば、ＡＩＢ）である。例示的実施形態のうちのいずれかでは、ペプチドは、Ｃ末端アミドまたはエステルを有する。例示的実施形態のうちのいずれかでは、ペプチドは、２９位のアミノ酸、例えば、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳに対して１〜２１個のアミノ酸Ｃ末端の延長を含み、任意にその延長の１〜６個のアミノ酸は、正電荷アミノ酸である。
【０１１４】
いくつかの例示的実施形態では、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、ＧＩＰ作動薬活性を有するグルカゴンの類似体（配列番号１）であり、以下の特徴を有する。（ａ）ＧＩＰ作動薬活性を付与する１位のアミノ酸修飾、（ｂ）１６位の式ＩＶのアミノ酸、
【化２】
2014501762.tif 000003
式中、ｎは、１〜７であり、Ｒ１およびＲ２のそれぞれは独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１８アルキル、（Ｃ１−Ｃ１８アルキル）ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ１８アルキル）ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ１８アルキル）ＳＨ、（Ｃ０−Ｃ４アルキル）（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ０−Ｃ４アルキル）（Ｃ２−Ｃ５複素環）、（Ｃ０−Ｃ４アルキル）（Ｃ６−Ｃ１０アリール）Ｒ７、および（Ｃ１−Ｃ４アルキル）（Ｃ３−Ｃ９ヘテロアリール）からなる群から選択され、Ｒ７は、ＨまたはＯＨであり、式ＩＶのアミノ酸の側鎖は、遊離アミノ基を含む、（ｃ）２０位のα，α−二置換アミノ酸、例えば、ＡＩＢ、（ｄ）２７、２８、および２９位の１つ、２つ、またはすべてのアミノ酸修飾、ならびに（ｅ）所望のＧＩＰおよびＧＬＰ−１活性を保持する、１〜９個（例えば、最大２、３、４、５、６、７、８、９個）のさらなるアミノ酸修飾。
【０１１５】
このセクションでの例示的実施形態のうちのいずれかでは、１位のアミノ酸は、イミダゾール側鎖を欠損するアミノ酸、任意に大型芳香族アミノ酸（例えば、Ｔｙｒ）である。例示的実施形態のうちのいずれかでは、ペプチドは、（ａ）大型脂肪族アミノ酸、任意にＬｅｕと置換される２７位のＭｅｔ、（ｂ）小型脂肪族アミノ酸、任意にＡｌａと置換される２８位のＡｓｎ、（ｃ）小型脂肪族アミノ酸、任意にＧｌｙと置換される２９位のＴｈｒも含む。例示的実施形態のうちのいずれかでは、（ｂ）における式ＩＶのアミノ酸は、ホモＬｙｓ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、または２，４−ジアミノブチル酸（Ｄａｂ）である。２位のアミノ酸は、任意にＤＰＰ−ＩＶ保護アミノ酸、例えば、α，α二置換アミノ酸（例えば、ＡＩＢ）である。例示的実施形態のうちのいずれかでは、ペプチドは、Ｃ末端アミドまたはエステルを有する。例示的実施形態のうちのいずれかでは、ペプチドは、２９位のアミノ酸、例えば、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳに対して１〜２１個のアミノ酸Ｃ末端の延長を含み、任意にその延長の１〜６個のアミノ酸は、正電荷アミノ酸である。
【０１１６】
他の任意の修飾は、
（ａ）Ｄ−Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｎ−メチル−Ｓｅｒ、ＡＩＢ、Ｖａｌ、またはα−アミノ−Ｎ−ブチル酸と置換される２位のＳｅｒ、
（ａ）Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、またはＶａｌと置換される１０位のＴｙｒ、
（ｂ）１０位のＬｙｓに対するアシル基の結合、
（ｃ）ＡｒｇまたはＩｌｅと置換される１２位のＬｙｓ、
（ｄ）Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、ホモグルタミン酸、ホモシステイン酸、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、またはＡＩＢと置換される１６位のＳｅｒ、
（ｅ）Ｇｌｎと置換される１７位のＡｒｇ、
（ｆ）Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、またはＧｌｙと置換される１８位のＡｒｇ、
（ｇ）Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、シトルリン、Ａｒｇ、Ｏｒｎ、またはＡＩＢと置換される２０位のＧｌｎ、
（ｈ）Ｇｌｕ、ホモグルタミン酸、ホモシステイン酸と置換される２１位のＡｓｐ、
（ｉ）Ｉｌｅと置換される２３位のＶａｌ、
（ｊ）Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｌａ、またはＡＩＢと置換される２４位のＧｌｎ、および
（ｋ）２、５、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２４、２７、２８、および２９位のうちのいずれかでの同類置換
を含む。
【０１１７】
Ｃ．例示的実施形態
【０１１８】
例示的実施形態では、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、ＧＩＰ作動薬活性を有するグルカゴンの類似体（配列番号１）であり、
（ａ）１位のイミダゾール側鎖を含むアミノ酸、
（ｂ）１６位の式ＩＶのアミノ酸、
【化３】
2014501762.tif 000004
式中、ｎは、１〜７であり、Ｒ１およびＲ２のそれぞれは独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１８アルキル、（Ｃ１−Ｃ１８アルキル）ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ１８アルキル）ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ１８アルキル）ＳＨ、（Ｃ０−Ｃ４アルキル）（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ０−Ｃ４アルキル）（Ｃ２−Ｃ５複素環）、（Ｃ０−Ｃ４アルキル）（Ｃ６−Ｃ１０アリール）Ｒ７、および（Ｃ１−Ｃ４アルキル）（Ｃ３−Ｃ９ヘテロアリール）からなる群から選択され、Ｒ７は、ＨまたはＯＨであり、式ＩＶのアミノ酸の側鎖は、遊離アミノ基を含む、
（ｃ）２０位のα，α−二置換アミノ酸、
（ｄ）所望のＧＩＰおよびＧＬＰ−１活性を保持する、配列番号１に対する最大１０個（例えば、最大２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個）の追加のアミノ酸修飾と、
を含む。
【０１１９】
このセクションでの例示的実施形態のうちのいずれかでは、１位のアミノ酸は、ＨｉｓまたはＨｉｓ誘導体であり得る。例示的実施形態のうちのいずれかでは、（ｂ）における式ＩＶのアミノ酸は、ホモＬｙｓ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、または２，４−ジアミノブチル酸（Ｄａｂ）であり得る。例示的実施形態のうちのいずれかでは、α，α−二置換アミノ酸は、それぞれがα炭素に結合される、Ｒ１およびＲ２を含み、Ｒ１およびＲ２のそれぞれは独立して、ヒドロキシルと任意に置換されるＣ１−Ｃ４アルキル、アミド、チオール、ハロからなる群から選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、それらが付着されるα炭素と一緒に環を形成し、任意にＡＩＢである。２位のアミノ酸は、任意にＤＰＰ−ＩＶ保護アミノ酸、例えば、α，α二置換アミノ酸（例えば、ＡＩＢ）である。例示的実施形態のうちのいずれかでは、ペプチドは、Ｃ末端アミドまたはエステルを有する。任意に、ペプチドは、２９位のアミノ酸、例えば、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳに対して１〜２１個のアミノ酸Ｃ末端の延長、またはその同類置換配列を含む。
【０１２０】
Ｄ．例示的実施形態
【０１２１】
例示的実施形態では、本開示の半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、（ｉ）１位にイミダゾール側鎖を含むアミノ酸、（ｉｉ）２位にＤＰＰ−ＩＶ保護アミノ酸、（ｉｉｉ）任意に９、１０、１２、１６、２０、または３７〜４３位のいずれかにアシル化アミノ酸またはアルキル化アミノ酸（任意にアシル基またはアルキル基が、スペーサを介してアミノ酸に結合される）、（ｉｖ）１６〜２１位の１つ以上にαヘリックス安定化アミノ酸、および（ｖ）所望のＧＩＰおよびＧＬＰ−１活性を保持する、天然グルカゴンに対する最大１０個（例えば、最大２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個）の追加のアミノ酸修飾を含む、天然グルカゴンの類似体である。
【０１２２】
このセクションでの例示的実施形態のうちのいずれかでは、１位のアミノ酸は、ＨｉｓまたはＨｉｓ誘導体であり得る。例示的実施形態のうちのいずれかでは、２位のアミノ酸は、α，α−二置換アミノ酸である。例示的実施形態のうちのいずれかでは、α，α−二置換アミノ酸は、それぞれがα炭素に結合される、Ｒ１およびＲ２を含み、Ｒ１およびＲ２のそれぞれは独立して、ヒドロキシルと任意に置換されるＣ１−Ｃ４アルキル、アミド、チオール、ハロからなる群から選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、それらが付着されるα炭素と一緒に環を形成し、任意にＡＩＢもしくはＡＣＰＣである。例示的実施形態のうちのいずれかでは、グルカゴン類似体は、２０位のα，α二置換アミノ酸などのαヘリックス安定化アミノ酸を含む。
【０１２３】
例示的実施形態のうちのいずれかでは、ペプチドは、Ｔｒｐケージ構造を形成するアミノ酸配列を含む、２９位のアミノ酸に対する１〜２１個のアミノ酸Ｃ末端の延長、任意にＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、またはその同類置換配列を含み、任意に少なくとも１つの電荷アミノ酸を含む。
【実施例】
【０１２４】
実施例１：半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、約５日の半減期延長に十分耐えた
【０１２５】
健常な男性対象において、第１相無作為化プラセボ対照連続単一漸増二期間研究を行い、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドの安全性、忍容性、薬物動態（ＰＫ）、および薬力学（ＰＤ）特性を評価した。病歴、身体検査、ＥＣＧ、および日常検査（例えば、血液、化学、血液学、尿検査、および薬物スクリーニング）に基づいて全体的に良好な健康状態にある、体格指数２０ｋｇ／ｍ２〜３０ｋｇ／ｍ２の健常な成人男性対象（約１８〜５５歳）が研究に対して選ばれた。実施例のすべてにおいて試験した半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、配列番号１５３であった。
【０１２６】
対象は群にランダム化した。各群１、２、３、４、５、および６は、それぞれ０．１ｍｇ、０．３ｍｇ、１ｍｇ、２ｍｇ、４ｍｇ、および８ｍｇの半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを受けた患者６名およびプラセボを受けた患者２名で構成した。各群１’、２’、および３’は、それぞれ１６ｍｇ、２４ｍｇ、および３２ｍｇの半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを受けた患者６名およびプラセボを受けた患者２名で構成した。
【０１２７】
少なくとも１０時間の夜間絶食後、対象は、研究薬物またはプラセボの単回投与を腹部の皮下（ＳＣ）注射として受けた。空腹時インスリン、グルコース、およびグルカゴンレベルのための血液試料を、１日目の投与前（投与前３０分以内）、ならびに２、３、４、５、６、および７日目に採取した。薬物動態分析のための血漿試料は、１日目の投与前および投与後０．５、１、２、４、８、および１２時間、ならびに２、３、４、５、６、７、１４、２８、および３５日目に採取した。対象は、副作用、体重、およびバイタルサインについて３５日間モニターされた。
【０１２８】
研究の間に、血漿ＡＵＣ０−τ、ＡＵＣ０−ｉｎｆ、およびＣｍａｘは、研究薬物の投与とともに増加し、明らかなｔ１／２は、約５日であった。半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、０．１ｍｇ〜３２ｍｇの範囲の用量で、ＡＵＣおよびＣｍａｘの両方に比例する投与量を考慮した。用量０．１ｍｇで、平均Ｃｍａｘは１８３ｐＭであり、ＡＵＣ（ＡＵＣ０−１４４）は１２，３４９ｐＭ・ｈｒであった。用量８ｍｇで、平均Ｃｍａｘは１２，９８９ｐＭであり、ＡＵＣ（ＡＵＣ０−１４４）は１，３８２，３７６ｐＭ・ｈｒであった。用量３２ｍｇで、平均Ｃｍａｘは５４．８ｎＭであり、ＡＵＣ（ＡＵＣ０−ｌａｓｔ）は１２，５８２ｎＭ・ｈｒであった。
【０１２９】
認められた最大血漿濃度までの時間（Ｔｍａｘ）は、最小量の半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド（１６ｍｇで１１２．５時間）を投与された対象の場合、より高濃度の半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド（２４ｍｇで５６．０時間、３２ｍｇで８０．０時間）を投与された対称よりも高かった。
【０１３０】
半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドの絶対的バイオアベイラビリティは、１００％であり、その累積指数は１．７〜２倍であった。治療は概して安全であり、良好に忍容された。
【０１３１】
空腹時インスリン、グルコース、およびグルカゴンレベルについて、健常な対象において予想されるように、用量依存性の傾向は認められなかった。しかしながら、治療群は、プラセボ群と比較して、毎日の平均空腹時グルコースレベルにおいて、７日目までにベースから数値的に大幅な低減を有する傾向があった（プラセボ：７８．７ｍｇ／ｄＬ、１６ｍｇ用量：７６．５ｍｇ／ｄＬ、２４ｍｇ用量：７２．７ｍｇ／ｄＬ、３２ｍｇ用量：７１．７ｍｇ／ｄＬ）。これらの低減は、研究の健常対象に対して正常な範囲内であったが、糖尿病患者における減少の程度は、臨床的に重要である可能性がある。
実施例２：半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドはインスリン分泌を用量依存的に増加させた
【０１３２】
健常な男女対象において第１相無作為化プラセボ対照正対照二部研究を行い、グルコース負荷へのβ細胞応答に対する用量範囲の効果を評価し、胃内容排出に対するこれらの用量の効果を査定した。β細胞機能は、段階的なグルコース注入に応答する肝前性インスリン分泌の計算により査定した。胃内容排出は、消化されたアセトアミノフェンの血漿出現の測定により査定した。
【０１３３】
第１部（第１群）の対象は、１日目に２回のプラセボ皮下（ＳＣ）注射を２時間おきに腹部に受けた後、２日目に２回のＢＹＥＴＴＡ（Ａｍｙｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）５μｇ皮下（ＳＣ）注射を２時間おきに（計１０μｇ）腹部に受けた。第２部の間、第２群の対象は、１日目にプラセボを受けた後、２日目に８ｍｇの半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを受けた。第３群の対象は、１日目にプラセボを受けた後、２日目に４ｍｇの半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを受けた。第４群の対象は、１日目にプラセボを受けた後、２日目に１６ｍｇの半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを受けた。
第１部（第１群）
【０１３４】
１日目に、１０時間以上の夜間断食後、第１部（第１群）の対象は、−１２０分時にプラセボの単回ＳＣ注射を受けた。−１２０分時に体重を測定し、段階的グルコース注入を計算した。グルコース、Ｃ−ペプチド、インスリン、および安全性臨床検査のための血液試料は、−１２０、−１５、および−１０分時に採取した。−１０分時に、対象はアセトアミノフェンエリキシル剤１０００ｍｇを水２４０ｍＬとともに摂取した。０分時に、グルコース（２０％デキストロース）の段階的注入を開始し、第２のプラセボＳＣ注射を投与して、グルコース、Ｃ−ペプチド、インスリン、および安全性臨床検査のための血液試料を採取した。グルコースは、計２．５時間、速度２、４、６、８、および１２ｍｇ／ｋｇ／分で注入した。グルコース注入の各レベルは、３０分間維持された。グルコース、Ｃ−ペプチド、およびインスリンのための血液試料は、それぞれ３０分の注入期間の間、１０、２０、および３０分時に再度採取した。血漿アセトアミノフェン濃度のための血液試料は、−１０、３０、６０、９０、１２０、１５０、１８０、２１０、２４０、３００、および４８０分時に採取した。１２誘導心電図（ＥＣＧ）は、２１０分時に行った。
【０１３５】
２日目に、１０時間以上の夜間断食後、第１群の対象は、−１２０分時にＢＹＥＴＴＡ５μｇをＳＣ注入により受けた。グルコース、Ｃ−ペプチド、およびインスリンのための血液試料は、−１２０、−１５、および−１０分時に採取した。−１０分時に、対象は、アセトアミノフェンエリキシル剤１０００ｍｇを水２４０ｍＬとともに摂取した。０分時に、グルコース（２０％デキストロース）の段階的注入を開始し、第２のＢＹＥＴＴＡ５μｇＳＣ注射を対象に投与して、Ｃ−ペプチド、インスリン、グルコース、および安全性臨床検査のための血液試料を採取した。グルコースは、計２．５時間、速度２、４、６、８、および１２ｍｇ／ｋｇ／分で注入した。グルコース注入の各レベルは、３０分間維持された。ＢＹＥＴＴＡ濃度のための血液試料は、０、６０、および１２０分時に採取した。グルコース、Ｃ−ペプチド、およびインスリンのための血液試料は、各３０分の注入期間の間、１０、２０、および３０分時に採取した。血漿アセトアミノフェン濃度のための血液試料は、−１０、３０、６０、９０、１２０、１５０、１８０、２１０、２４０、３００、および４８０分時に採取した。１２誘導ＥＣＧは、２１０分時に行った。
【０１３６】
３日目に、安全性臨床検査のための血液試料を採取し、１２誘導ＥＣＧを行った。第１群の対象は、３日目の夜に調査場所から解放された。
第２部（第２群〜第４群）
【０１３７】
１日目に、１０時間以上の夜間断食後、第２部（第２群〜第４群）の対象は、−１２０分時にプラセボの単回ＳＣ注入を受けた。−１２０分時に体重を測定し、段階的グルコース注入を計算した。グルコース、Ｃ−ペプチド、インスリン、および安全性臨床検査のための血液試料は、−１５および−１０分時に採取した。−１０分時に、対象は、アセトアミノフェンエリキシル剤１０００ｍｇを水２４０ｍＬとともに摂取した。０分時に、グルコース（２０％デキストロース）の段階的注入を開始し、グルコース、Ｃ−ペプチド、およびインスリンのための血液試料を採取した。グルコースは、計２．５時間、速度２、４、６、８、および１２ｍｇ／ｋｇ／分で注入した。グルコース注入の各レベルは、３０分間維持された。グルコース、Ｃ−ペプチド、およびインスリンのための血液試料は、各３０分の注入期間の間、１０、２０、および３０分時に再度採取した。血漿アセトアミノフェン濃度のための血液試料は、−１０、３０、６０、９０、１２０、１５０、１８０、２１０、２４０、３００、および４８０分時に採取した。１２誘導ＥＣＧは、２１０分時に行った。
【０１３８】
２日目に、１０時間以上の夜間断食後、グルコース、Ｃ−ペプチド、およびインスリンのための血液試料は、−１０分時に採取した。対象は、０分時に半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドの注射を受けた。第２群の対象は、８ｍｇの半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを受け、第３群の対象は、４ｍｇの半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを受け、第４群の対象は、１６ｍｇの半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを受けた。０分時に、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド濃度、Ｃ−ペプチド、インスリン、グルコース、および安全性臨床検査のための血液試料を採取した。１２誘導ＥＣＧは、２１０分時に行った。
【０１３９】
３日目および４日目に、安全性臨床検査のための血液試料を採取した。
【０１４０】
５日目に（半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドの投与から７２時間後）、１０時間以上の夜間断食後、グルコース、Ｃ−ペプチド、およびインスリンのための血液試料は、−１５分時および−１０分時に採取した。−１０分時に、対象は、アセトアミノフェンエリキシル剤１０００ｍｇを水２４０ｍＬとともに摂取した。０分時に、グルコース（２０％デキストロース）の段階的注入を開始し、グルコース、Ｃ−ペプチド、インスリン、安全性検査試験、および半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド濃度のための血液試料を採取した。グルコースは、計２．５時間、速度２、４、６、８、および１２ｍｇ／ｋｇ／分で注入した。グルコース注入の各レベルは、３０分間維持された。グルコース、Ｃ−ペプチド、およびインスリンのための血液試料は、各３０分の注入期間の間、１０、２０、および３０分時に採取した。血漿アセトアミノフェン濃度のための血液試料は、−１０、３０、６０、９０、１２０、１５０、１８０、２１０、２４０、３００、および４８０分時に採取した。半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド濃度のための血液試料は、１２０分時に採取した。１２誘導ＥＣＧは、２１０分時に行った。
【０１４１】
第２群〜第４群の対象は、７日目の夜まで調査場所に拘束された。６日目および７日目に、安全性臨床検査のための血液試料を採取した。７日目に、１２誘導ＥＣＧを行った。
結果
【０１４２】
第１部の間、ＢＹＥＴＴＡによる治療後に、グルコース注入速度の各増加とともに、インスリン分泌速度においてグルコース用量依存性の増加が認められた。各グルコース注入速度（ｍｇ／ｄＬ当たり０．１２μＩＵ／ｍＬ）でのプラセボとＢＹＥＴＴＡとの間のインスリン分泌速度における最小二乗（ＬＳ）平均変化の治療比較は、統計的に有意であった（ｐ＜０．０００１）。
【０１４３】
ＢＹＥＴＴＡによる治療は、プラセボと比較して、アセトアミノフェン吸収の著しい遅延と関連付けられた。対象は、ＢＹＥＴＴＡによる治療から３０分〜２１０分後に、より低いＣｍａｘおよびＴｍａｘの変化を有した。結果は、公開されている胃内容排出に対するＢＹＥＴＴＡの効果と一致する。
【０１４４】
第２部の間、インスリン分泌速度（ＩＳＲ）における用量依存性、用量比例性の増加は、プラセボと比較して、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドによる治療後に認められた。最大用量（１６ｍｇ）のインスリン分泌速度は、約４４％増加した（ｐ＝０．００１）。プラセボ群と１６ｍｇ半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド群との間（０．０７μＩＵ／ｍＬ）、プラセボ群と８ｍｇ半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド群との間（０．０４μＩＵ／ｍＬ）、プラセボ群と４ｍｇ半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド群との間（０．０３μＩＵ／ｍＬ）、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド８ｍｇ群と１６ｍｇ群との間（ｍｇ／ｄＬ当たり０．０３μＩＵ／ｍＬ）、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド４ｍｇ群と１６ｍｇ群との間（ｍｇ／ｄＬ当たり０．０４μＩＵ／ｍＬ）、および半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド４ｍｇ群と８ｍｇ群との間（ｍｇ／ｄＬ当たり０．０１μＩＵ／ｍＬ）の各グルコース注入速度でのインスリン分泌速度における最小二乗（ＬＳ）平均変化の治療比較は、統計的に有意であった（それぞれｐ＜０．００１、ｐ＜０．００１、およびｐ＜０．００１、ｐ＜０．０００１、ｐ＜０．０００１、およびｐ＝０．００６７）。結果を図１に示す。すべての半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド用量群は、プラセボ群よりも高いインスリン分泌速度を示した。半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド１６ｍｇ群は、４ｍｇ／ｋｇ／分〜１２ｍｇ／ｋｇ／分のグルコース注入速度で、他の２つの半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド治療群よりも一貫して高いインスリン分泌速度を示した。
【０１４５】
概して、すべての半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド用量群は、すべてのグルコース注入速度において、プラセボ群よりも低いグルコースレベルを有した。概して、各グルコース注入速度において、他の半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド用量群と比較して、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド１６ｍｇ群にグルコース低値が認められた。半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド１６ｍｇ群および８ｍｇ群の場合、注入速度８ｍｇ／ｋｇ／分と１２ｍｇ／ｋｇ／分との間にグルコースレベルの増加はなかった。図２Ａは、プラセボと４ｍｇ用量の半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドとの比較結果を示す。図２Ｂは、プラセボと８ｍｇ用量の半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドとの比較結果を示す。
【０１４６】
プラセボ群と半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド１６ｍｇ群との間（ｍｇ／ｄＬ当たり０．４３μＩＵ／ｍＬ）、プラセボ群と半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド８ｍｇ群との間（ｍｇ／ｄＬ当たり０．３５μＩＵ／ｍＬ）、プラセボ群と半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド４ｍｇ群（ｍｇ／ｄＬ当たり０．２７μＩＵ／ｍＬ）、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド８ｍｇ群と１６ｍｇ群との間（ｍｇ／ｄＬ当たり０．０８μＩＵ／ｍＬ）、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド４ｍｇ群と１６ｍｇ群との間（ｍｇ／ｄＬ当たり０．１７μＩＵ／ｍＬ）、および半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド４ｍｇ群と８ｍｇ群との間（ｍｇ／ｄＬ当たり０．０９μＩＵ／ｍＬ）の各グルコース注入速度でのインスリンのＬＳ平均変化の治療比較は、統計的に有意であった（それぞれｐ＜０．０００１、ｐ＜０．０００１、ｐ＜０．０００１、ｐ＝０．０３１６、ｐ＜０．０００１、およびｐ＝０．０２５１）。
【０１４７】
認められたインスリン分泌速度の増加と一致して、Ｃ−ペプチドレベルの用量依存性、用量比例性の増加は、プラセボと比較して、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドによる治療後に認められた（図３）。プラセボ群と半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド１６ｍｇ群との間（ｍｇ／ｄＬ当たり０．０５ｎｇ／ｍＬ）、プラセボ群と半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド８ｍｇ群との間（ｍｇ／ｄＬ当たり０．０３ｎｇ／ｍＬ）、プラセボ群と半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド４ｍｇ群との間（ｍｇ／ｄＬ当たり０．０２ｎｇ／ｍＬ）、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド８ｍｇ群と１６ｍｇ群との間（ｍｇ／ｄＬ当たり０．０２ｎｇ／ｍＬ）、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド４ｍｇ群と１６ｍｇ群との間（ｍｇ／ｄＬ当たり０．０３ｎｇ／ｍＬ）、および半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド４ｍｇ群と８ｍｇ群との間（ｍｇ／ｄＬ当たり０．０１ｎｇ／ｍＬ）の各グルコース注入速度でのＣペプチドのＬＳ平均変化の治療比較は、統計的に有意であった（それぞれｐ＜０．０００１、ｐ＜０．０００１、ｐ＜０．０００１、ｐ＜０．０００１、ｐ＜０．０００１、およびｐ＝０．００５５）。概して、グルコース注入速度の各増加とともに、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドによる治療後のＣ−ペプチドのグルコース用量依存性の増加が認められた。
【０１４８】
半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、アセトアミノフェンの吸収における著しい遅延と関連付けられなかった。高用量の半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドにおいて、より低いＣｍａｘに向かう傾向があったが、Ｔｍａｘは、プラセボと著しく異ならなかっただけでなく、吸収された総アセトアミノフェン（ＡＵＣ０−４ｈｒ）もまたプラセボと著しく異ならなかった。図４は、４ｍｇ、８ｍｇ、および１６ｍｇ用量でのＢＹＥＴＴＡと半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドの（ＡＵＣ０−４ｈｒ）を比較する。半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、グルコース注入に応答するインスリン分泌を増加させる用量では、胃内容排出を遅延させない。
【０１４９】
用量４ｍｇ、８ｍｇ、および１６ｍｇの半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドは、胃内容排出に対する影響なしに、段階的グルコース注入の間、用量依存的にインスリン分泌を増加させた。４ｍｇ用量の半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドを投与された患者は、平均して、増加したインスリン分泌速度、増加したＣ−ペプチドレベル、およびグルコース注入に応答してグルコース低値を呈した。
実施例３：ＩＩ型真性糖尿病の患者における半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドの効果
【０１５０】
２型糖尿病を診断された安定したメトホルミン単独療法（すなわち、研究前の少なくとも約２ヶ月間は同一用量）中の男女患者（１８〜７０歳）に対して、少なくとも約６．５％および１０．５％未満のＨｂＡ１ｃレベルで、ランダム化プラセボ対照連続複数漸増用量研究を行う。他の基準は、空腹時グルコースレベル１１０ｍｇ／ｄＬ〜２００ｍｇ／ｄＬ、体格指数２７ｋｇ／ｍ２〜４０ｋｇ／ｍ２、収縮期血圧１５５ｍｍＨｇ未満、拡張期血圧９５ｍｍＨｇ未満、重要な他の疾患または合併症の履歴がないことを含む。
【０１５１】
患者は、４群にランダム化される。第１群は、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド４ｍｇを受ける患者８名およびプラセボを受ける患者２名で構成される。第２群は、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド１２ｍｇを受ける患者８名およびプラセボを受ける患者２名で構成される。第３群は、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド２０ｍｇを受ける患者８名およびプラセボを受ける患者２名で構成される。第４群は、半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチド３０ｍｇを受ける患者８名およびプラセボを受ける患者２名で構成される。
【０１５２】
患者は、１、８、１５、２２、２９、および３６日目に、１週間当たり計６オンスの研究薬物のＳＣ用量を受ける。食物耐性試験は、１、４、３６、４３、および５０日目に行う。これらの日に、夜間絶食後（すなわち、１０時間）、空腹時インスリン、グルコース、グルカゴン、およびＣ−ペプチドのための血液試料を採取する。患者は、Ｓｕｓｔａｃａｌ朝食（１６ｏｚ）を約１０分かけて摂取する。インスリン、グルコース、グルカゴン、およびＣ−ペプチドのための血液試料は、Ｓｕｓｔａｃａｌ摂取の開始から１０分後に再度採取し、Ｓｕｓｔａｃａｌ摂取の終了から３時間の期間にわたって継続する。食物耐性試験に続いて、患者は、研究薬物の単回ＳＣ注射を受ける（４日目および４３日目を除く）。血漿ＰＫのための連続時限血液試料は、研究薬物の注射前および注射後に採取する。
【０１５３】
在宅末梢血グルコース値は、１週間当たり少なくとも６回記録する。研究を通して、化学検体（例えば、アルカリホスファターゼ、アミラーゼ、ナトリウム、カリウム、総タンパク質、カルシウム、塩化物、重炭酸塩、グルコース、クレアチンホスホキナーゼ、乳酸脱水素酵素、アラニンアミノトランスフェラーゼ、アルブミン、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、総／直接／間接ビリルビン、血中尿素窒素、クレアチニン）、血液学検体（例えば、ヘモグロビン、ヘマトクリット、赤血球数、白血球数および差異、平均赤血球ヘモグロビン濃度、網状赤血球数、平均赤血球容積、平均赤血球ヘモグロビン、血小板数）、脂質（例えば、低密度リポタンパク質コレステロール、高密度リポタンパク質コレステロール、総コレステロール、トリグリセリド）、凝集（活性化部分トロンボプラスチン時間、プロトロンビン時間、国際標準比）、尿検査において得られる検体（例えば、ｐＨ、特定重力、タンパク質、グルコース、白血球エステラーゼ、ビリルビン、血液、硝酸、ケトン）、および卵胞刺激ホルモンを含む検体を定期的に測定する。
【０１５４】
薬物動態変数を査定する。加えて、査定される薬力学変数は、インスリン、グルコース、グルカゴン、Ｃ−ペプチド、ＨｂＡ１ｃ、およびフルクトサミンを含む。半減期延長ＧＬＰ−１／ＧＩＰ共作動薬ペプチドの投与は、これらのパラメータのうちの１つ以上において、生物学的応答をもたらすと予想される。例えば、インスリンレベルの増加、グルコースレベルの減少、Ｃ−ペプチドレベルの増加、ＨｂＡ１ｃレベルの減少、フルクトサミンレベルの減少、およびそれらの組み合わせが認められる場合がある。
【０１５５】
刊行物、特許出願、および特許を含む、本明細書で引用されるすべての参照文献は、各参照文献が参照することにより組み込まれることが個別かつ特異的に示され、その全体が本明細書に記載されるのと同程度まで、参照することにより本明細書に組み込まれる。
【０１５６】
本発明を説明する文脈における（特に以下の請求項の文脈における）用語「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」ならびに類似の指示対象の使用は、本明細書において別段の指示がない限り、または明らかに文脈と矛盾しない限り、単数および複数の両方を網羅すると解釈されるものである。用語「備える（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、および「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」は、他に指定のない限り、非制限用語として解釈されるものとする（すなわち、「含むが、これらに限定されない」を意味する）。
【０１５７】
本明細書における値の範囲の列挙は、本明細書において別段の指示がない限り、単にその範囲および各終点内に含まれる各別個の値を個別に言及する省略方法として役立つにすぎず、各別個の値および終点は、本明細書において個別に列挙されるかのように、本明細書に組み込まれる。
【０１５８】
本明細書に記載されるすべての方法は、本明細書において別段の指示がない限り、またはそうでなければ明らかに文脈と矛盾しない限り、任意の適切な順序で行われ得る。本明細書において提供される任意およびすべての実施例、または例示的言語（例えば、「など」）の使用は、単に、本発明をより明らかにするためであり、別段の主張がない限り、本発明の範囲を制限しない。本明細書におけるどの言語も、任意の非請求要素を本発明の実施に必須であると示すと解釈されてはならない。
【０１５９】
本発明を実行するための発明者らに知られている最良形態を含む、本発明の好適な実施形態が本明細書において説明される。それらの好適な実施形態の変異型は、前述の説明を読むことにより、当業者に明らかとなるであろう。発明者らは、熟練者がそのような変異型を適切に用いることを期待し、発明者らは、本発明が、本明細書に特異的に記載されるものとは別の方法で実施されることを意図する。したがって、この発明は、適用可能な法により許可されるように、本明細書に添付の請求項に列挙される主題のすべての修正および相当物を含む。さらに、そのすべての可能な変異型における上述の要素の任意の組み合わせは、本明細書において別段の指示がない限り、またはそうでなければ明らかに文脈と矛盾しない限り、本発明により包含される。
【図４】
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【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【配列表】
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