(57)【要約】結腸直腸がん（ＣＲＣ）および乳がんを含むがこれらに限定されない種々のがんの処置に有用であるスチルベン類似体および薬学的組成物を開示する。このハロゲン化スチルベン類似体はスチルベン環上に窒素ヘテロアリール基および／またはアミノ基を含む。本開示の利点は、抗新生物活性を有するハロゲン化スチルベン類似体および組成物、ならびに上記ハロゲン化スチルベン類似体または組成物の１つまたは複数を投与することによって、患者におけるがん細胞成長を阻害するかつ／またはがんを処置する方法を含む。
2014512337.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）：
【化５】
2014512337.tif 000007
（式中、ＲａおよびＲｂは独立に、Ｈ、アルキル、ハロ、アルコキシ、シアノであり；ＸはＡｒ１上の少なくとも１つのハロゲンを表し；Ａｒ１およびＡｒ２のそれぞれはアリールまたはヘテロアリールであり、これらはハロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアルキルアミノ、ジアルキルアミノのＮ−オキシド、トリアルキルアンモニウム、メルカプト、アルキルチオ、アルカノイル、ニトロ、ニトロシル、シアノ、アルコキシ、アルケニルオキシ、アリール、ヘテロアリール、スルホニル、スルホンアミド、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１ＣＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＮＲ１２Ｒ１３（式中、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３は独立にＨ、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたはフッ素である）でさらに置換されていてよく；Ｒ１〜Ｒ１０は独立に、Ｈ、ハロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ジアルキルアミノのＮ−オキシド、アリールアルキルアミノ、ジアルキルオキシアミノ、トリアルキルアンモニウム、メルカプト、アルキルチオ、アルカノイル、ニトロ、ニトロシル、シアノ、アルコキシ、アルケニルオキシ、アリール、ヘテロアリール、スルホニル、スルホンアミド、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１ＣＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＮＲ１２Ｒ１３であり；ＲｃはＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリールであり、Ｒｄはアルキル基であり、Ｚは非共有電子対、Ｈ、アルキル、酸素であり；ただし、式（Ｉ）について：Ａｒ２は該アリール環中に少なくとも１つの窒素原子または該アリール環上に少なくとも１つの窒素置換基を含み、式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）について：Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つはハロゲンであり、Ｒ６〜Ｒ１０の少なくとも１つは窒素含有置換基である）
による化合物。
【請求項２】
式（ＩＩ）を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つが塩素および／またはフッ素置換基であり、Ｒ６〜Ｒ１０の少なくとも１つがＮＲｃＲｄＺ置換基（式中、ＲｃはＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリールであり、Ｒｄはアルキル基であり、Ｚは非共有電子対、Ｈ、アルキル、酸素である）である、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つがフッ素置換基であり、Ｒｄが低級アルキル基である、請求項２または３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つが塩素置換基であり、Ｒｄが低級アルキル基である、請求項２または３に記載の化合物。
【請求項６】
式（ＩＩＩ）を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
（Ｅ）−４−（２−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（３−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（４−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン；（Ｅ）−４−（２−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジフェニルアニリン；（Ｅ）−１−（４−（２−フルオロスチリル）フェニル）−４−メチルピペラジン；（Ｅ）−４−（２−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルナフタレン−１−アミン；（Ｅ）−２−（４−（２−フルオロスチリル）フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール；（Ｅ）−４−（２，３−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２，４−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２，５−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−２−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−３−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン；（Ｅ）−４−（３，４−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（３，５−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−（２，３，６−トリフルオロスチリル）アニリン；（Ｅ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−（２，４，６−トリフルオロスチリル）アニリン；（Ｅ）−４−（２−クロロ−６−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２，６−ジクロロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロフェネチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；および（Ｅ）−２−ベンズアミド−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに記載の化合物の代謝産物。
【請求項９】
（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンオキシド；（Ｅ）−４−（２−クロロ−６−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンオキシド；（Ｅ）−４−（２，６−ジクロロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンオキシド；（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ−メチルアニリン、（Ｅ）−４−（２−クロロ−６−フルオロスチリル）−Ｎ−メチルアニリン；（ＥおよびＺ）−４−（２，６−ジクロロスチリル）−Ｎ−メチルアニリン；および（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルベンゼンアミニウムヨージドからなる群から選択される、請求項８に記載の代謝産物。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれかに記載の化合物のビオチン化誘導体。
【請求項１１】
（Ｅ）−Ｎ−（２−（２，６−ジフルオロスチリル）−５−（ジメチルアミノ）フェニル）−５−（２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド；（Ｅ）−Ｎ−（４−（２，６−ジフルオロスチリル）フェニル）−５−（２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド；（Ｅ）−Ｎ−（４−（２，６−ジフルオロスチリル）フェニル）−Ｎ−メチル−５−（２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド；およびＮ−（２−（４−（２，６−ジフルオロスチリル）フェニル）−４−オキソ−８，１１−ジオキサ−２，５−ジアザトリデカン−１３−イル）−５−（２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミドからなる群から選択される、請求項１０に記載のビオチン化誘導体。
【請求項１２】
式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）：
【化６】
2014512337.tif 000008
（式中、ＲａおよびＲｂは独立に、Ｈ、アルキル、ハロ、アルコキシ、シアノであり；ＸはＡｒ１上の少なくとも１つのハロゲンを表し；Ａｒ１およびＡｒ２のそれぞれはアリールまたはヘテロアリールであり、これらはハロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアルキルアミノ、ジアルキルアミノのＮ−オキシド、トリアルキルアンモニウム、メルカプト、アルキルチオ、アルカノイル、ニトロ、ニトロシル、シアノ、アルコキシ、アルケニルオキシ、アリール、ヘテロアリール、スルホニル、スルホンアミド、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１ＣＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＮＲ１２Ｒ１３（式中、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３は独立にＨ、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたはフッ素である）でさらに置換されていてよく；Ｒ１〜Ｒ１０は独立に、Ｈ、ハロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ジアルキルアミノのＮ−オキシド、アリールアルキルアミノ、ジアルキルオキシアミノ、トリアルキルアンモニウム、メルカプト、アルキルチオ、アルカノイル、ニトロ、ニトロシル、シアノ、アルコキシ、アルケニルオキシ、アリール、ヘテロアリール、スルホニル、スルホンアミド、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１ＣＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＮＲ１２Ｒ１３であり；ＲｃはＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリールであり、Ｒｄはアルキル基であり、Ｚは非共有電子対、Ｈ、アルキル、酸素であり；ただし式（Ｉ）について：Ａｒ２は該アリール環中に少なくとも１つの窒素原子または該アリール環上に少なくとも１つの窒素置換基を含み、式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）について：Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つはハロゲンであり、Ｒ６〜Ｒ１０の少なくとも１つは窒素含有置換基である）
からなる群から選択される化合物を含む組成物。
【請求項１３】
前記化合物が式（ＩＩ）の化合物であって、ここで、Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つが塩素および／またはフッ素置換基であり、Ｒ６〜Ｒ１０の少なくとも１つがＮＲｃＲｄＺ置換基（式中、ＲｃはＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリールであり、Ｒｄはアルキル基であり、Ｚは非共有電子対、Ｈ、アルキル、酸素である）である化合物である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記化合物が式（ＩＩ）の化合物であって、ここで、Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つがフッ素置換基であり、Ｒｄが低級アルキル基である化合物である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
前記化合物が式（ＩＩＩ）の化合物である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１６】
請求項１〜７のいずれかに記載の化合物の代謝産物を含む組成物。
【請求項１７】
薬学的に許容されるキャリアをさらに含む、請求項１２〜１６のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
増大したメチオニンアデノシルトランスフェラーゼ２Ａ（ＭＡＴ２Ａ）の生物学的活性またはレベルと関連する障害を処置するための、請求項１２〜１７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１９】
がんを処置するための、請求項１２〜１７のいずれかに記載の組成物。
【請求項２０】
処置される前記がんが、結腸がん、乳がん、肺がん、前立腺がんおよび肝臓がんからなる群から選択される、１９に記載の組成物。
【請求項２１】
増大したメチオニンアデノシルトランスフェラーゼ２Ａ（ＭＡＴ２Ａ）の生物学的活性またはレベルと関連する障害を処置するための医薬品の製造における、請求項１２〜１７のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項２２】
がんを処置するための医薬品の製造における、請求項１２〜１７のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項２３】
前記がんが、結腸がん、乳がん、肺がん、前立腺がんおよび肝臓がんからなる群から選択される、請求項２２に記載の使用。
【請求項２４】
被験体におけるＭＡＴ２Ａの生物学的活性またはレベルを低下させるための、式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）：
【化７】
2014512337.tif 000009
（式中、ＲａおよびＲｂは独立に、Ｈ、アルキル、ハロ、アルコキシ、シアノであり；ＸはＡｒ１上の少なくとも１つのハロゲンを表し；Ａｒ１およびＡｒ２のそれぞれはアリールまたはヘテロアリールであり、これらはハロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアルキルアミノ、ジアルキルアミノのＮ−オキシド、トリアルキルアンモニウム、メルカプト、アルキルチオ、アルカノイル、ニトロ、ニトロシル、シアノ、アルコキシ、アルケニルオキシ、アリール、ヘテロアリール、スルホニル、スルホンアミド、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１ＣＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＮＲ１２Ｒ１３（式中、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３は独立にＨ、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたはフッ素である）でさらに置換されていてよく；Ｒ１〜Ｒ１０は独立に、Ｈ、ハロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ジアルキルアミノのＮ−オキシド、アリールアルキルアミノ、ジアルキルオキシアミノ、トリアルキルアンモニウム、メルカプト、アルキルチオ、アルカノイル、ニトロ、ニトロシル、シアノ、アルコキシ、アルケニルオキシ、アリール、ヘテロアリール、スルホニル、スルホンアミド、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１ＣＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＮＲ１２Ｒ１３であり；ＲｃはＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリールであり、Ｒｄはアルキル基であり、Ｚは非共有電子対、Ｈ、アルキル、酸素であり；ただし式（Ｉ）について：Ａｒ２は該アリール環中に少なくとも１つの窒素原子または該アリール環上に少なくとも１つの窒素置換基を含み、式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）について：Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つはハロゲンであり、Ｒ６〜Ｒ１０の少なくとも１つは窒素含有置換基である）
の化合物からなる群から選択される化合物についての方法の使用。
【請求項２５】
複合タンパク質サンプル中のＭＡＴ２Ａのレベルを検出するための検出可能に標識された式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物の使用であって、該標識された化合物が該サンプル中に存在するＭＡＴ２Ａと結合する条件下で、検出可能に標識された式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物を該複合タンパク質の混合物と接触させるステップと；結合した該ＭＡＴ２Ａを単離するステップと；任意の非結合タンパク質を除去するステップと、該サンプル中の該検出可能に標識された化合物と結合した該ＭＡＴ２Ａの該レベルを検出するステップとを含む使用。
【請求項２６】
前記検出可能に標識された化合物がビオチン化された化合物であり、前記検出をウエスタンブロッティング、親和性クロマトグラフィー、ＨＰＬＣ、ＦＰＬＣ、イオン交換、サイズ排除および質量分析からなる群から選択される方法で実施する、請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
被験体におけるがんを診断するための検出可能に標識された式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物の使用であって、（１）該被験体からのタンパク質を含むサンプルを得るステップと，（２）検出可能に標識された式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物を該サンプル中のタンパク質と接触させてＭＡＴＡ２と結合させ、該サンプル中のＭＡＴ２Ａのレベルを検出するステップと；（３）該サンプル中のＭＡＴ２Ａの該レベルを正常な対照標準のそれと比較するステップとを含み、該サンプル中のＭＡＴ２Ａの該レベルが正常な対照標準のそれより統計的に高い場合、がんの診断が指示されるステップとを含む使用。
【請求項２８】
被験体から得られる前記サンプルが、乳がん細胞、前立腺がん細胞、結腸直腸がん細胞、肺がん細胞、結腸がん細胞、膀胱がん細胞、頭頸部がん細胞、腸がん細胞、卵巣がん細胞または皮膚がん細胞から選択されるがん細胞を含む生検サンプルである、請求項２７に記載の使用。
【請求項２９】
式（Ｉ）、式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）の１つもしくは複数の化合物または１つもしくは複数の薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグまたは代謝産物で処置を受けるための候補者である被験体を特定するための検出可能に標識された式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物の使用であって；（１）該被験体からタンパク質サンプルを得るステップと；（２）検出可能に標識された式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物を該サンプル中のタンパク質と接触させてＭＡＴＡ２と結合させ、該サンプル中のＭＡＴ２Ａのレベルを検出するステップと；（３）該サンプル中のＭＡＴ２Ａの該レベルを正常な対照標準のそれと比較するステップであって、その結果として、該サンプル中のＭＡＴ２Ａの該レベルが該正常な対照標準のそれより統計的に高い場合、該被験体が式（Ｉ）、式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）の化合物または１つもしくは複数の薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグまたは代謝産物で処置するための候補者であることが指示されるステップ、とを含む使用。
【請求項３０】
複合タンパク質サンプル中のＭＡＴ２Ａのレベルを検出するための、請求項１〜９のいずれかに記載の検出可能に標識された形態の化合物を含む診断試薬。
【請求項３１】
請求項３０に記載の診断試薬を含む診断キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本願は、２０１１年１月２８日に出願された米国仮特許出願第６１／４３７，３４１号、２０１１年２月３日に出願された米国仮特許出願第６１／４３９，１１８号の双方の利益を主張し、これらの米国仮特許出願の全体の開示はともに、本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
政府支援の研究に関する陳述
本発明は、国立衛生研究所により授与された２Ｐ２０  ＲＲ０２０１７１の下、政府支援により成された。合衆国政府は本発明に一定の権利を有する。
【０００３】
技術分野
本開示は、抗新生物活性を有する化合物を対象とする。具体的には、本開示は、ハロゲン化スチルベン類似体、およびスチルベン類似体の特定の分子標的を特定し、患者にスチルベン類似体を投与することによって該患者におけるがん細胞成長を阻害する方法を対象とする。さらに、本開示は、スチルベン類似体の直接的標的であるメチオニンアデノシルトランスフェラーゼ２Ａ（ＭＡＴ２Ａ）および複合タンパク質混合物中のＭＡＴ２Ａのレベルを検出する方法を対象とする。
【背景技術】
【０００４】
背景
レスベラトロール（ｔｒａｎｓ−または（Ｅ）−３，５，４’−トリヒドロキシスチルベン（１））（図１）は、植物中で産生され、赤ワインの有益な成分として一般に広く使われているフィトアレキシンである。レスベラトロール、そのｃｉｓ−または（Ｚ）−異性体（２）および他のスチルベン誘導体、プテロスチルベン（３）はある抗がん活性を示す（図１）。最近、本発明者らは、ブルーベリー中に見出されるレスベラトロールおよびスチルベンであるプテロスチルベンが、Ｗｎｔ／β−カテニンシグナル伝達を阻害することによって少なくとも部分的に結腸がん細胞を阻害することを発見した。非特許文献１。
【０００５】
Ｗｎｔ／β−カテニンシグナル伝達は、発生および腫瘍形成において重要な役割を果たし、Ｗｎｔシグナル伝達の調節解除は腫瘍の形成をもたらす。結腸直腸がんの９０％超はＡＰＣまたはβ−カテニン中に変異を含み、これらの変異はβ−カテニンを安定化させ、Ｗｎｔシグナル伝達を活性化する。これらの変異を含む細胞は構成的にＷｎｔシグナル伝達を活性化し、強力な増殖を被り、これは最終的にがんをもたらす。シグナル伝達カスケードの様々なポイントでＷｎｔ／β−カテニン経路を妨害し遮断することは、結腸がんの化学的防止法および治療法のための魅力的な目標である。
【０００６】
β−カテニンの上流シグナル伝達を標的とし、β−カテニン分解を促進するいくつかのＷｎｔインヒビターが特定されている。これらの作用物質は、正常細胞およびいくつかのＡＰＣ変異結腸がん細胞におけるＷｎｔシグナル伝達を阻害するが、これらは、β−カテニン変異を含む結腸がん細胞においては効果的ではない場合がある。他のいくつかのＷｎｔインヒビターも報告されている。しかし、副作用がヒトにおけるその使用可能性を限定している。それらが十分な効力と非常に低い毒性を有していれば、食物中に見出される天然産物は、潜在的にがん用の理想的な化学的防止および治療剤である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｚｈａｎｇ、Ｗ．ら、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ２０１１年、５４巻、１２８８〜９７頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、レスベラトロールおよびプテロスチルベンより強力であり、がんおよび他の病気を処置するために使用できる化合物のニーズが依然としてある。有害な副作用を示さない化合物に対しても特にニーズがある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
開示の要旨
本開示の利点は、抗新生物活性を有するハロゲン化スチルベン類似体および組成物、ならびに上記ハロゲン化スチルベン類似体または組成物の１つまたは複数を投与することによって、患者におけるがん細胞成長を阻害するかつ／またはがんを処置する方法を含む。
【００１０】
本開示の一態様は、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、肝臓がんおよび乳がんを含むがこれらに限定されないヒトの悪性および良性のがんの処置のためにがん細胞などの過剰増殖性細胞を死滅させるのに有用なハロゲン化スチルベン類似体を対象とする。本開示のこの態様では、がん性細胞に対して抗新生物活性を有する特定のハロゲン化スチルベン類似体を提供する。本開示のハロゲン化スチルベン類似体は式（Ｉ）：
Ｘ−Ａｒ１−ＣＲａ＝ＣＲｂ−Ａｒ２
による化合物
（式中、ＲａおよびＲｂは独立に、Ｈ、アルキル、ハロ、アルコキシ、シアノであり；ＸはＡｒ１上の少なくとも１つのハロゲン、例えばフッ素、塩素、臭素またはヨウ素置換基を表し；Ａｒ１およびＡｒ２のそれぞれはアリール、例えばフェニル、ナフチルおよびヘテロアリール、例えばピリジル、ピロリジル（ｐｙｒｏｌｉｄｙｌ）、ピペリジル、ピリミジル、インドリル、チエニルであり、これらはハロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアルキルアミノ、ジアルキルアミノのＮ−オキシド、トリアルキルアンモニウム、メルカプト、アルキルチオ、アルカノイル、ニトロ、ニトロシル、シアノ、アルコキシ、アルケニルオキシ、アリール、ヘテロアリール、スルホニル、スルホンアミド、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１ＣＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＮＲ１２Ｒ１３（式中、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３は独立にＨ、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたはフッ素である）でさらに置換されていてよく；ただし、Ａｒ２はアリール環中に少なくとも１つの窒素原子またはアリール環上に少なくとも１つの窒素置換基；例えばＮＲｃＲｄＺ置換基（式中、ＲｃはＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリールであり、Ｒｄはアルキル基であり、Ｚは非共有電子対、Ｈ、アルキル、酸素である）を含む）
；または薬学的に許容されるその塩を含む。
【００１１】
本開示の他の実施形態では、上記ハロゲン化スチルベン類似体は式（ＩＩ）の化合物：
【００１２】
【化１】
2014512337.tif 000003
（式中、ＲａおよびＲｂのそれぞれは上記定義通りであり；Ｒ１〜Ｒ１０は独立に、Ｈ、ハロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ジアルキルアミノのＮ−オキシド、アリールアルキルアミノ、ジアルキルオキシアミノ、トリアルキルアンモニウム、メルカプト、アルキルチオ、アルカノイル、ニトロ、ニトロシル、シアノ、アルコキシ、アルケニルオキシ、アリール、ヘテロアリール、スルホニル、スルホンアミド、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１ＣＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＮＲ１２Ｒ１３（式中、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３は独立にＨ、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたはフッ素である）である；ただし、Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つはハロゲン、例えばフッ素および／または塩素であり；Ｒ６〜Ｒ１０の少なくとも１つは窒素含有置換基、例えばＮＲｃＲｄＺ置換基（式中、ＲｃはＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリールであり、Ｒｄはアルキル基であり、Ｚは非共有電子対、Ｈ、アルキル、酸素である）である）
または薬学的に許容されるその塩を含む。
【００１３】
本開示の他の実施形態では、上記ハロゲン化スチルベン類似体は式（ＩＩＩ）による化合物：
【００１４】
【化２】
2014512337.tif 000004
（式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒａ、ＲｂおよびＮＲｃＲｄＺは上記定義と同じである）
または薬学的に許容されるその塩を含む。
【００１５】
本開示は、上記ハロゲン化スチルベン類似体のビオチン化誘導体および上記ハロゲン化スチルベン類似体の代謝産物も包含する。
【００１６】
本開示はさらに、上記ハロゲン化スチルベン類似体、例えば式（Ｉ）、式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の１つもしくは複数の化合物および／または式（Ｉ）、（ＩＩ）および／または（ＩＩＩ）による化合物の１つもしくは複数の薬学的に許容される塩の薬学的組成物を薬剤用キャリアと組み合わせて包含する。本開示の一態様では、上記薬学的組成物は有効量の少なくとも１つのハロゲン化スチルベン類似体を含む。
【００１７】
本開示は、ヒトなどの哺乳動物におけるがんを処置する、例えばがん細胞成長を阻害する、かつ／または腫瘍成長を阻害する、あるいは過剰増殖性細胞に関連する疾患を処置する方法をさらに対象とする。本開示のこの態様の１つの実施形態では、がんの処置を必要とする患者に、該患者のがん細胞成長を処置／阻害するのに十分な治療有効量の１つもしくは複数のハロゲン化スチルベン類似体、その薬剤用の塩および／または組成物を投与する。
【００１８】
本開示のこの態様の他の実施形態では、結腸直腸がんに罹患している患者に、患者におけるがん細胞成長を阻害するのに十分な治療有効量の１つもしくは複数のハロゲン化スチルベン類似体、その薬剤用の塩および／または組成物を投与する。他の実施形態では、乳がんを阻害または処置するのに十分な治療有効量の１つもしくは複数のハロゲン化スチルベン類似体、その薬剤用の塩および／または組成物。
【００１９】
さらに他の実施形態では、加齢に関連したがんに罹患している患者に、患者におけるがん細胞成長を阻害するのに十分な治療有効量の１つもしくは複数のハロゲン化スチルベン類似体、その薬剤用の塩および／または組成物を投与する。加齢に関連したがんの非限定的な例は、より高齢の個体、例えば６５才以上の高齢者においてより起こりやすい前立腺がん、乳がん、肺がんおよび結腸直腸がんを含む。
【００２０】
本開示の他の態様では、有効量のハロゲン化スチルベン類似体で細胞を処理することによって、酵素、メチオニンＳ−アデノシルトランスフェラーゼの阻害剤を用いて、細胞におけるＷｎｔシグナル伝達および／または他の経路を破壊するための方法を提供する。これらの類似体は、メチオニンアデノシルトランスフェラーゼ２Ａ（ＭＡＴ２Ａ）を阻害し、遺伝子発現および腫瘍成長を制御するＤＮＡメチル化およびタンパク質メチル化の主要供与体である細胞のＳ−アデノシル−メチオニン（ＳＡＭ）を減少させることができる。ＳＡＭは代謝経路における重要な因子でもある。したがって、本開示に記載するハロゲン化スチルベン類似体は、糖尿病などの代謝性疾患の処置のための薬物候補でもある。
【００２１】
本開示はさらに、ＭＡＴ２Ａの生物学的活性またはレベルの増大と関連する障害の処置のための、式（Ｉ）、式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の１つもしくは複数の化合物および／または１つもしくは複数の薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグまたは代謝産物を含む薬学的組成物を包含する。関連する実施形態では、ＭＡＴ２Ａの生物学的活性またはレベルの増大と関連する障害はがんである。他の実施形態では、そのがんは結腸がん、乳がん、肺がん、前立腺がんまたは肝臓がんである。
【００２２】
本開示は、有効量のハロゲン化スチルベン類似体、例えば式（Ｉ）、式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の１つもしくは複数の化合物および／または１つもしくは複数の薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグまたは代謝産物の組成物を被験体に投与するステップを含む、該被験体におけるＭＡＴ２Ａの生物学的活性またはレベルの増大と関連する障害を処置する方法も対象とする。関連する実施形態では、ＭＡＴ２Ａの生物学的活性またはレベルの増大と関連する障害はがんである。他の実施形態では、そのがんは結腸がん、乳がん、肺がん、前立腺がんまたは肝臓がんである。
【００２３】
本開示は、被験体におけるＭＡＴ２Ａ活性を調節する方法であって、該被験体に有効量の式（Ｉ）、式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の１つもしくは複数の化合物および／または１つもしくは複数の薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグまたは代謝産物を投与するステップを含む方法も対象とする。関連する実施形態では、ＭＡＴ２Ａ活性の調節は、被験体におけるＭＡＴ２Ａの生物学的活性またはレベルを低下させることを含む。他の関連実施形態では、ＭＡＴ２Ａ活性の調節は、ＳＡＭおよび／またはＳ−アデノシルホモシステイン（ＳＡＨ）合成を減少させることを含む。
【００２４】
本開示は、複合タンパク質サンプル中のＭＡＴ２Ａのレベルを検出する方法であって、前記標識された化合物が該サンプル中に存在するＭＡＴ２Ａと結合する条件下で、検出可能に標識された式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物を前記複合タンパク質混合物に接触させるステップと；結合したＭＡＴ２Ａを単離するステップと；任意の非結合タンパク質を除去するステップと該サンプル中の検出可能に標識された化合物と結合したＭＡＴ２Ａのレベルを検出するステップとを含む方法も対象とする。関連する実施形態では、結合したＭＡＴ２Ａの単離を、親和性に基づく分離方法によって実施する。他の関連実施形態では、（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物をビオチン化する。他の関連実施形態では、検出は、ウエスタンブロット、ＨＰＬＣ、ＦＰＬＣ、イオン交換、サイズ排除、蛍光分光法、ＵＶ−Ｖｉｓ分光法または質量分析法で実施される。
【００２５】
本開示はさらに被験体におけるがんを診断する方法であって：（１）該被験体からタンパク質を含むサンプルを得るステップと、（２）検出可能に標識された式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物を該サンプル中のタンパク質と接触させてＭＡＴＡ２と結合させ、前記サンプル中のＭＡＴ２Ａのレベルを検出するステップと；（３）該サンプル中のＭＡＴ２Ａのレベルを正常な対照標準のそれと比較して、該サンプル中のＭＡＴ２Ａのレベルが正常な対照標準のそれより統計的に高い場合、がんの診断が指示されるステップとを含む方法を対象とする。関連する実施形態では、ステップ（２）における検出を、段落［００２４］に記載した方法に従って実施する。他の関連実施形態では、被験体から得られるサンプルは、乳がん細胞、前立腺がん細胞、結腸直腸がん細胞、肺がん細胞、結腸がん細胞、膀胱がん細胞、頭頸部がん細胞、腸がん細胞、卵巣がん細胞または皮膚がん細胞から選択されるがん細胞を含む生検サンプルである。
【００２６】
本開示はさらに、式（Ｉ）、式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）の１つもしくは複数の化合物あるいは１つもしくは複数の薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグまたは代謝産物で処置を受けるための候補者である被験体を特定する方法であって；（１）被験体からタンパク質サンプルを得るステップと；（２）検出可能に標識された式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物をサンプル中のタンパク質と接触させてＭＡＴＡ２と結合させ、前記サンプル中のＭＡＴ２Ａのレベルを検出するステップと；（３）サンプル中のＭＡＴ２Ａのレベルを正常な対照標準のそれと比較して、サンプル中のＭＡＴ２Ａのレベルが正常な対照標準のそれより統計的に高い場合、該被験体が式（Ｉ）、式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）の化合物または１つもしくは複数の薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグまたは代謝産物で処置するための候補者であることが指示されるステップを含む方法に関する。関連する実施形態では、ステップ（２）における検出は、段落［００２４］に記載した方法に従って実施する。
【００２７】
本開示はさらに、本開示の化合物を含むキットを対象とする。関連する実施形態では、このキットは式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の１つまたは複数の化合物を含む。他の関連実施形態では、このキットは、併用療法で使用するための１つもしくは複数の他の治療化合物または組成物を含む。
【００２８】
他の実施形態では、このキットは、診断試薬として使用するための、検出可能に標識された式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物を含む診断キットであってよい。他の関連実施形態では、標識された化合物は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の１つもしくは複数の化合物のビオチン化誘導体である。他の実施形態では、このキットは、標識された式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物の標識の結合パートナーを含む。
【００２９】
本開示の追加的な利点は、本開示を実施することを考慮した最良の方式を単に例示することにより本開示の好ましい実施形態のみが示され説明されている以下の詳細な記載から当業者に容易に明らかである。本開示はその他の異なる実施形態が可能であり、そのいくつかの詳細は、すべて本開示から逸脱することなく、種々の明らかな関連において改変が可能であることを理解されよう。したがって、図面および説明は本来例示と見なされるべきであり、限定的なものと見なされるべきではない。
【００３０】
添付の図面を参照する。ここで、同じ参照数字表示を有する要素は全体を通して類似の要素を表す。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】図１は、抗新生物活性を有する天然に存在するスチルベンの構造を示す図である。構造１はｔｒａｎｓ−レスベラトロールであり、２はｃｉｓ−レスベラトロールであり、３はプテロスチルベンである。
【図２】図２は、特定のスチルベン類似体および１，２−ジアリールエタンの一般的合成の概略図である。凡例：ａ、（１）ｎ−ＢｕＬｉ、ＴＨＦ；（２）ＡｒＣＨＯ；ｂ、（１）ＮａＨ、ＤＭＦ；（２）ＡｒＣＨＯ；ｃ、Ｈ２、Ｐｄ−Ｃ、ＴＨＦ。
【図３】図３は、本開示のフッ素化および／または塩素化スチルベン類似体のいくつかの潜在的代謝産物の化学構造を示す図である。
【図４】図４は、ハロゲン化スチルベン類似体のビオチン誘導体の合成の概略図である。凡例：ａ、ＳｎＣｌ２、ＨＣｌ、ＨＯＡｃ；ｂ、ＣＮＢｒ；ｃ、ビオチニルクロリド、Ｅｔ３Ｎ、ＴＨＦ；ｄ、ビオチン、ＨＯＢｔ、ＥＤＣ、Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＦ；ｅ、（＋）−ビオチニル−ヨードアセトアミジル−３，６−ジオキサオクタンジアミン、Ｋ２ＣＯ３、ＥｔＯＨ。
【図５−１】図５（Ａ）は、本開示の種々のモノフッ素化スチルベンの化学構造を提供する図である。図５（Ｂ）は、４−アミノスチルベン（４ｃ）が３０μＭでＷｎｔ標的遺伝子を抑制することを示すウエスタンブロットである。図５（Ｃ）は、４−スチリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン（４ｄ）が３０μＭで４−メトキシスチルベン（４ｂ）より活性であることを示すウエスタンブロットである。
【図５−２】図５（Ｄ）は、４−（２−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン（４ｅ）および４−（３−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン（４ｆ）が１０μＭでＷｎｔ標的遺伝子を抑制することを示すウエスタンブロットである。図５（Ｅ）は、４ｅ中のジメチルアミノフェニル基の効果を示すウエスタンブロットである。図５（Ｆ）は、ＣＲＣ細胞の増殖の阻害における、（４ｅ）の効力とレスベラトロールおよびプテロスチルベンのそれとを比較して示すグラフである。
【図６−１】図６（Ａ）は、本開示のいくつかのジハロゲン化Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノスチルベン類似体４および飽和類似体５ｒの化学構造を提供する図である。図６（Ｂ）は、ジハロゲン化Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノスチルベン４ｏ、４ｍおよび４ｒが１０μＭでＷｎｔ標的遺伝子を抑制することを示すウエスタンブロットである。
【図６−２】図６（Ｃ）は、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ類似体（４ｐおよび４ｑ）のオルト−およびメタ−異性体がパラ−異性体（４ｒ）ほど活性でないことを示すウエスタンブロットである。図６（Ｄ）は、トリハロゲン化Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノスチルベン類似体（４ｖおよび４ｗ）が活性なＷｎｔインヒビターであることを示すウエスタンブロットである。図６（Ｅ）は、化合物４ｒが０．５μＭでＷｎｔ標的遺伝子を抑制することを実証するウエスタンブロットである。
【図７】図７は、インビトロおよびインビボでのＣＲＣ細胞増殖に対する本開示のハロゲン化類似体の効果を実証する図である。図７（Ａ）は、本開示の種々の化合物の０．１、０．３および１μＭでのＣＲＣ細胞増殖の阻害を示すグラフである。図７（Ｂ）は、ＬＳ１７４ＣＲＣ細胞（２×１０６）を両側腹部に皮下注射した後、化合物４ｒまたはコーンオイルで処置した代表的なヌードマウスを示す図である。図７（Ｃ）は、化合物４ｒおよびコーンオイルで処置したヌードマウスの体重のグラフである。図７（Ｄ）は、化合物４ｒまたはコーンオイルで処置したマウスにおける腫瘍容積のグラフである。統計的有意性をスチューデントのｔ検定によって計算した（＊ｐ＜０．０５）。
【図８】図８（Ａ）は、Ｐｒｏｍｅｇａ  ＧｌｏＭａｘ（登録商標）照度計で検出された３６５ｎＭでの蛍光を示す棒グラフである。図８（Ｂ）は、化合物４ｓが活性なＷｎｔインヒビターであることを示すウエスタンブロットである。８（Ｃ）は、化合物４ｒ（１０μＭ）およびレスベラトロール（１００μＭ）が、ＬＳ１７４細胞中のＷｎｔ／β−カテニン標的のタンパク質レベルを低下させることを示すウエスタンブロットである。図８（Ｄ）は、化合物４ｒがＷｎｔ標的遺伝子の転写を抑制することを示すウエスタンブロットである。
【図９】図９は、スチルベン類似体標的の親和性精製に関する図である。図９（Ａ）は、本開示のハロゲン化スチルベン類似体のビオチン化誘導体１３を示す図である。図９（Ｂ）は、タンパク質マーカー（１）、ビオチン−スチルベン類似体−ビーズ（２）、ストレプトアビジンビーズ単独（３）および無関係のビオチン標識ビーズ（４）からの溶出物の銀染色を示す図である。
【図１０】図１０は、ＭＡＴ２Ａと直接相互作用させた本開示のハロゲン化スチルベン類似体を示す図である。ＧＳＴ−ＭＡＴ２ＡおよびＧＳＴ−ＭＡＴ２Ｂ融合タンパク質はＥ．ｃｏｌｉから発現させ精製した。これらのタンパク質を、ビオチン化誘導体１３を含めるか含めないで、ストレプトアビジンビーズとともにインキュベートした。結合タンパク質を２．５ｍＭのＤ−ビオチンで溶出させ、抗−ＧＳＴ−Ａｂを用いてウエスタンブロットにより分析した。
【図１１】図１１は、ハロゲン化スチルベンが、ＳＡＭおよびＳＡＨの産生におけるＭＡＴ２Ａ活性を阻害するのにレスベラトロールより強力であることを示す図である。図１１Ａは、ＬＳ１７４結腸がん細胞における、ＳＡＭレベルに対する、１０μＭの化合物４ｒ対３０μＭのレスベラトロールの効果を示す図である。図１１Ｂは、結腸がん細胞における、ＳＡＭレベルに対する、３μＭの化合物４ｄｄおよび１０μＭの化合物４ｒ対３０μＭのレスベラトロールの効果を示す図である。図１１Ｃは、結腸がん細胞における、ＳＡＨレベルに対する、３μＭの化合物４ｄｄおよび１０μＭの化合物４ｒ対３０μＭのレスベラトロールの効果を示す図である。
【図１２】図１２は、ＭＡＴ２ＡおよびＭＡＴ２Ｂががん細胞増殖に必須であり、転写レベルでのその阻害ががん細胞増殖を減少させることを示す図である。ＭＡＴ２Ａ遺伝子（１２Ａ）およびＭＡＴ２Ｂ遺伝子（１２Ｂ）をｓｈＲＮＡでノックダウンさせると、肝臓がん細胞系Ｈｅｐ３Ｂの増殖（１２Ｃ）を阻害することが示されている。
【図１３】図１３は、結腸がん細胞の増殖に対するＭＡＴ２ＡおよびＭＡＴ２Ｂ遺伝子阻害の効果についての時間経過試験を示す図である。図１３Ａは、ＭＡＴ２ＡおよびＭＡＴ２Ｂ  ｓｈＲＮＡによるＨＴ２９細胞増殖の阻害を示す図である。図１３Ｂは、ＭＡＴ２ＡおよびＭＡＴ２Ｂ  ｓｈＲＮＡによるＬＳ１７４Ｔ細胞増殖の阻害を示す図である。
【図１４】図１４は、本開示のハロゲン化スチルベン類似体が結腸がん細胞の増殖を阻害することを示すチャートである。
【図１５】図１５は、本開示のハロゲン化スチルベン類似体が肝臓がん細胞の増殖を阻害することを例示するチャートである。
【図１６】図１６は、ヌードマウスにおける異種移植腫瘍の阻害に対するハロゲン化スチルベン４ｄｄの効果を示すチャートである。
【図１７−１】図１７は、乳がん（１７Ａ）、肺がん（１７Ｂおよび１７Ｃ）、カルチノイド腫瘍（１７Ｄ）および前立腺がん（１７Ｅ）細胞系の増殖に対する、選択されたハロゲン化スチルベン類似体の阻害効果を示す図である。
【図１７−２】図１７は、乳がん（１７Ａ）、肺がん（１７Ｂおよび１７Ｃ）、カルチノイド腫瘍（１７Ｄ）および前立腺がん（１７Ｅ）細胞系の増殖に対する、選択されたハロゲン化スチルベン類似体の阻害効果を示す図である。
【図１７−３】図１７は、乳がん（１７Ａ）、肺がん（１７Ｂおよび１７Ｃ）、カルチノイド腫瘍（１７Ｄ）および前立腺がん（１７Ｅ）細胞系の増殖に対する、選択されたハロゲン化スチルベン類似体の阻害効果を示す図である。
【図１８】図１８Ａは、ハロゲン化スチルベン類似体についての結合試験を実施するために調製された変異体ＭＡＴ２Ａ（Ｋ２６５Ｌ）を示す図である。図１８Ｂは、ＭＡＴ２Ａの端部欠失（ＭＡＴ２Ａショート）が、ハロゲン化スチルベン類似体のＭＡＴ２Ａとの結合に影響を及ぼさないことを示す図である。図１８Ｃは、変異体ＭＡＴ２Ａ（ＭＡＴ２Ａ−Ｋ２６５Ｌ）が、ハロゲン化スチルベン類似体と結合するその能力を部分的に喪失することを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
開示の詳細な説明
本開示は、酵素メチオニンアデノシルトランスフェラーゼ２Ａ（ＭＡＴ２Ａ）（遺伝子ＩＤ：４１４４；ヌクレオチドＮＭ＿００５９１１；アミノ酸ＩＤ：ＮＰ＿００５９０２）の新規な阻害剤に関する。これらの化合物は、ＭＡＴ２Ａレベルおよび／またはその酵素産生物（すなわち、Ｓ−アデノシル−メチオニン（ＳＡＭまたはＡｄｏＭｅｔ））の調節が症状または疾患を改善するのに効果的である、任意の疾患および／または状態を処置または防止するのに有用である。ＭＡＴ２Ａの阻害は、ＳＡＭレベルの低下およびＳＡＭの下流のメチル化反応またはメチル化生成物の減少をもたらすことができる。したがって、本開示は、ＭＡＴ２Ａに関連する障害の処置または防止のための化合物、組成物および方法を提供する。そうした疾患または障害には、がんなどの増殖性障害または糖尿病などの代謝障害、心臓疾患、老化、肥満ならびにアルツハイマー病およびパーキンソン病などの神経変性障害が含まれるがこれらに限定されない。
【００３３】
定義
「アルキル」という用語は、当該技術分野で理解されているものであり、直鎖アルキル基、分枝鎖アルキル基、シクロアルキル（脂環式）基、アルキル置換シクロアルキル基およびシクロアルキル置換アルキル基を含む飽和脂肪族基を含む。特定の実施形態では、直鎖または分枝鎖アルキルはその主鎖中に約３０個以下の炭素原子（例えば、直鎖についてはＣ１〜Ｃ３０、分枝鎖についてはＣ３〜Ｃ３０）を有する、あるいは約２０個以下の炭素原子を有する。同様に、シクロアルキルはその環構造中に約３〜約１０個の炭素原子、あるいは環構造中に約５、６または７個の炭素を有する。本明細書で使用する「アルキル」という用語は、ハロ置換アルキルも含む。
【００３４】
「アラルキル」という用語は、当該技術分野で理解されているものであり、アリール基（例えば、芳香族基または複素芳香族基）で置換されたアルキル基を指す。
【００３５】
「アルケニル」および「アルキニル」という用語は、当該技術分野で理解されているものであり、長さおよび可能な置換が上記アルキルと類似しているが、少なくとも１つの二重結合または三重結合をそれぞれ含む不飽和脂肪族基を指す。
【００３６】
炭素の数が別段指定されていない限り、「低級アルキル」は、上記定義通りであるが、その主鎖構造中に１〜約１０個の炭素（Ｃ１〜Ｃ１０）、例えば１〜約６個の炭素原子（Ｃ１〜Ｃ６）を有するアルキル基を指す。同様に、「低級アルケニル」、「低級アルキル、「低級アミノ」、「低級アルキニル」等は類似した鎖長を有する。
【００３７】
「単位用量（ｕｎｉｔ  ｄｏｓｅ）」または「投薬量（ｄｏｓａｇｅ）」という用語は、被験体において使用するのに適している物理的に分離した単位を指し、各単位はその投与、すなわち適切な経路および処置レジメンと関連して、上記で論じた所望の応答をもたらすように計算された所定量の治療組成物を含む。処置の回数と単位用量の両方に応じて投与される量は、所望の防止または効果に依存する。
【００３８】
「処置する（ｔｒｅａｔ）」および「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、治療的処置と予防的または防止的手段の両方を指し、ここでその目的は、望ましくない病理学的変化または障害、例えばがんの発生または拡大を防止または減速させる（低下させる）ことである。本開示の目的のために、有益なまたは所望の臨床結果には、検出可能であっても検出不可能であってもよい、症状の軽減、疾患の程度の縮小、疾患の安定した（すなわち、悪化していない）状態、疾患進行の遅延または減速、病状の改善または緩和、および寛解（部分的かまたは全体的な）が含まれるがこれらに限定されない。例えば、「処置」は、腫瘍または転移のサイズの定性的または定量的な（例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％またはそれより多い）減少を含むことができ、あるいは転移成長を低下させるまたは防止することができる。「処置」は、処置を受けなかった場合に予想される生存期間と比較して生存期間を延長させることも意味することができる。
【００３９】
処置を必要とする者は、状態もしくは障害をすでに有する者ならびにその状態もしくは障害になりやすい者またはその状態もしくは障害が防止されるべき者を含む。
【００４０】
「治療有効量」という語句は、（ｉ）特定の疾患、状態または障害を処置または防止する、（ｉｉ）特定の疾患、状態または障害の１つもしくは複数の症状を減弱させる、改善するまたは排除する、あるいは（ｉｉｉ）本明細書に記載る特定の疾患、状態または障害の１つもしくは複数の症状の発現を防止するまたは遅延させる本開示の化合物の量を意味する。がんの場合、治療有効量の薬物は、がん細胞の数を減少させる；腫瘍のサイズを縮小させる；末梢器官へのがん細胞の浸潤を阻害する（すなわち、ある程度遅延させ、好ましくは停止させる）；腫瘍転移を阻害する（すなわち、ある程度遅延させ、好ましくは停止させる）；腫瘍成長をある程度阻害する；かつ／またはそのがんに関連する症状の１つまたは複数をある程度和らげることができる。その薬物が、存在するがん細胞の成長を防止しかつ／または該細胞を死滅させることができる程度まで、その薬物は細胞増殖抑制性かつ／または細胞傷害性であり得る。がん治療のために、効能は、例えば疾患進行までの時間（ＴＴＰ）を評価するかつ／または応答速度（ＲＲ）を決定することによって測定することができる。
【００４１】
「がん」および「がん性」という用語は、制御されていない細胞成長で典型的に特徴付けられる哺乳動物における生理学的状態を指すまたは記載する。「腫瘍」は１つまたは複数のがん性細胞を含む。がんの例には、これらに限定されないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫および白血病またはリンパ性悪性腫瘍が含まれる。そうしたがんのより具体的な例には、扁平細胞がん（例えば、上皮扁平細胞がん）、小細胞肺がん、非小細胞肺がん（「ＮＳＣＬＣ」）、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌腫を含む肺がん、腹膜のがん、肝細胞がん、胃腸がんを含む胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ  ｏｒ  ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、膵臓がん、膠芽腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、肝腫大、乳がん、結腸がん、直腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜または子宮の癌腫、唾液腺癌腫、腎臓がん（ｋｉｄｎｅｙ  ｏｒ  ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝臓癌腫、肛門癌腫、陰茎癌腫ならびに頭頸部がんが含まれる。
【００４２】
本出願で使用する「プロドラッグ」という用語は、親化合物または薬物と比較して細胞に対する細胞傷害性がより少ない可能性があり、より活性な親の形態へ、酵素的にまたは加水分解的に活性化または転換させることができる、本開示の化合物の前駆体または誘導体の形態を指す。本開示のプロドラッグには、これらに限定されないが、より活性な細胞傷害性がない薬物へ転換させることができる、ホスフェート含有プロドラッグ、チオホスフェート含有プロドラッグ、サルフェート含有プロドラッグ、ペプチド含有プロドラッグ、Ｄ−アミノ酸修飾プロドラッグ、グリコシル化プロドラッグ、β−ラクタム含有プロドラッグ、必要に応じて置換されたフェノキシアセトアミド含有プロドラッグ、必要に応じて置換されたフェニルアセトアミド含有プロドラッグ、５−フルオロシトシンおよび他の５−フルオロウリジンプロドラッグが挙げられる。
【００４３】
「代謝産物」は、体内での代謝によって、特定の化合物またはその塩から産生される産物である。化合物の代謝産物は、当該技術分野で公知の慣行的技法を用いて特定することができ、その活性は本明細書に記載するものなどのテストを用いて決定することができる。そうした産物は、例えば、投与された化合物の酸化、還元、加水分解、アミド化、脱アミド化、エステル化、脱エステル化、酵素的切断などによって得ることができる。
【００４４】
「複合タンパク質サンプル」という用語は、あるサンプルを、精製されたタンパク質サンプルから識別するために使用される。複合タンパク質サンプルは複数のタンパク質を含み、追加的に他の混入物質を含み得る。複合タンパク質サンプルの非限定的な例には、腫瘍組織、生検サンプル、血清または細胞抽出物が挙げられる。
【００４５】
「対照標準サンプル」は、比較する目的で用いられる任意のサンプル、標準またはレベルを意味する。「正常な対照標準サンプル」は、同一被験体から取った事前のサンプル、がんを有していない被験体、がんを有しているが転移性疾患を有していないと診断されている被験体、がん、転移性疾患またはその両方のいずれかについて処置されている被験体、良性腫瘍を有する被験体からのサンプル、あるいは１人もしくは複数の健常被験体からの特定の組織のサンプルまたは１人もしくは複数の健常被験体からの組織のプールされたサンプルであってよい。
【００４６】
本明細書で用いる「ＭＡＴ２Ａの生物学的活性」または「ＭＡＴ２Ａ生物学的活性」という語句は、メチオニンアデノシルトランスフェラーゼ２Ａ（ＭＡＴ２Ａ）酵素のすべての固有の生物学的特性を指す。ＭＡＴ２Ａの生物学的特性には、これらに限定されないが、ＡＴＰのアデノシル基のメチオニンの硫黄原子への転移を触媒してＳ−アデノシル−メチオニン（ＳＡＭまたはＡｄｏＭｅｔ）を産生すること；がん細胞における異常な細胞成長および増殖に関与すること；メチル基供与体としてのＳＡＭの作用を介して細胞内メチル化反応を容易にすることが挙げられる。
【００４７】
本明細書で用いる「標識された」または「検出可能に標識された」という用語は、本開示の化合物に、ビオチン／ストレプトアビジン、抗原／抗体などの結合パートナーで、または例えば、これらに限定されないがＵＶ／Ｖｉｓ分光光度計、フローサイトメーター、蛍光検出装置などの計測手段によって、または肉眼によって観察または検出することができる物理的または化学的応答を誘発する物質を共有結合的かもしくは非共有結合的に結合させることを意味する。多種多様の標識および標識技法が当該技術分野で周知である。適切な標識には、ビオチン、放射性核種、例えば３２Ｐ、３５Ｓ、３Ｈ、酵素、基質、補因子、インヒビター、蛍光部分、化学発光部分、磁性粒子などが含まれる。
【００４８】
検出の目的で本開示の標識された化合物をＭＡＴ２Ａと結合させることを指す場合、「結合する（ｂｉｎｄ  ｔｏ）」という語句は、タンパク質および他の生物製剤の不均一集団の存在下でＭＡＴ２Ａの存在を決定づける結合反応を指す。したがって、結合アッセイ条件下で、例えば、本開示の標識された化合物はＭＡＴ２Ａと結合し、サンプル中に存在する他のタンパク質とは有意の量で結合しない。ウエスタンブロット、フローサイトメトリーおよびＦＡＣＳ分析、免疫組織化学的検査などの様々な慣用的検出手段を、標識された化合物のＭＡＴ２Ａへの結合を検出するために使用することができる。例えばウエスタンブロットまたは免疫蛍光アッセイの説明については、例えばＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ．、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、ＮＹ（１９８８年）を参照されたい。一般的に、特異的または選択的結合反応は、バックグラウンドシグナルまたはノイズの少なくとも２倍であり、より一般的にはバックグラウンドの１０〜１００倍超である。
【００４９】
したがって、本開示は、本開示の化合物を、その代謝産物を得るのに十分な期間、哺乳動物と接触させることを含むプロセスで産生される化合物を含む、本開示の化合物の代謝産物を含む。
【００５０】
治療剤
ハロゲン化スチルベン類似体、ならびに過剰増殖性細胞を減少させるまたはＭＡＴ２Ａ活性に関連する疾患または障害を処置することにおけるその使用を本明細書で開示する。本開示のハロゲン化スチルベン類似体は抗腫瘍活性を示す、すなわち、その化合物に曝露されるがん細胞は死滅し、損傷を受け、かつ／または腫瘍成長が阻害される。これらの類似体は、とりわけ結腸直腸がん、肝臓がん、乳がんを含むヒトのがんの処置のために有用である。
【００５１】
本開示のハロゲン化スチルベン類似体は、式（Ｉ）による化合物：
Ｘ−Ａｒ１−ＣＲａ＝ＣＲｂ−Ａｒ２
（式中、ＲａおよびＲｂは独立に、Ｈ、アルキル、ハロ、アルコキシ、シアノであり；ＸはＡｒ１上の少なくとも１つのハロゲン、例えばフッ素、塩素、臭素またはヨウ素置換基を表し；Ａｒ１およびＡｒ２のそれぞれはアリール、例えばフェニル、ナフチルおよびヘテロアリール、例えばピリジル、ピロリジル、ピペリジル、ピリミジル、インドリル、チエニルであり、これらはハロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアルキルアミノ、ジアルキルアミノのＮ−オキシド、トリアルキルアンモニウム、メルカプト、アルキルチオ、アルカノイル、ニトロ、ニトロシル、シアノ、アルコキシ、アルケニルオキシ、アリール、ヘテロアリール、スルホニル、スルホンアミド、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１ＣＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＮＲ１２Ｒ１３（式中、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３は独立にＨ、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたはフッ素である）でさらに置換されていてよく；ただし、Ａｒ２はアリール環中に少なくとも１つの窒素原子またはアリール環上に少なくとも１つの窒素置換基；例えばＡｒ２上にＮＲｃＲｄＺ置換基（式中、ＲｃはＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリールであり、Ｒｄはアルキル基であり、Ｚは非共有電子対、Ｈ、アルキル、酸素である））を含む。好ましくは、ヘテロアリール基は、その環が２〜５個の炭素原子および１〜３個のヘテロ原子を含む単環式環であり、これは本明細書で「（Ｃ２〜Ｃ５）ヘテロアリール」と称される。この実施形態は、薬学的に許容される式（Ｉ）の塩および式（Ｉ）のビオチン化誘導体も含む。炭素−炭素二重結合上の置換基はｃｉｓ配置であってもｔｒａｎｓ配置であってもよい。本開示の一態様では、Ｘは１、２もしくは３個のフッ素置換基であり、かつ／またはＸは１、２もしくは３個の塩素置換基であり、かつ／またはＸはＡｒ１上の少なくとも１つのフッ素および少なくとも１つの塩素を表す。本開示の他の態様では、Ｘは１つもしくは複数のフッ素および／または塩素であり、ＲｃはＨまたは低級アルキルであり、Ｒｄは低級アルキルである、または薬学的に許容されるその塩もしくはそのビオチン化誘導体である。
【００５２】
他の実施形態では、本開示は、式（ＩＩ）の化合物：
【００５３】
【化３】
2014512337.tif 000005
（式中、ＲａおよびＲｂは上記定義通りであり、Ｒ１〜Ｒ１０は独立に、Ｈ、ハロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ジアルキルアミノのＮ−オキシド、アリールアルキルアミノ、ジアルキルオキシアミノ、トリアルキルアンモニウム、メルカプト、アルキルチオ、アルカノイル、ニトロ、ニトロシル、シアノ、アルコキシ、アルケニルオキシ、アリール、ヘテロアリール、スルホニル、スルホンアミド、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１ＣＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＮＲ１２Ｒ１３（式中、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３は独立にＨ、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたはフッ素である）であり；ただし、Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つはハロゲン、例えばフッ素および／または塩素であり；Ｒ６〜Ｒ１０の少なくとも１つは窒素含有置換基、例えばＮＲｃＲｄＺ置換基（式中、ＲｃはＨ、アルキル、例えば低級アルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリールであり、Ｒｄはアルキル基であり、Ｚは非共有電子対、Ｈ、アルキル、酸素である）である）
または薬学的に許容されるその塩もしくはそのビオチン化誘導体を含む。
【００５４】
本開示の他の実施形態では、Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つは塩素および／またはフッ素置換基であり；Ｒ６〜Ｒ１０の少なくとも１つはＮＲｃＲｄＺ（式中、ＲｃはＨまたは低級アルキルであり、Ｒｄは低級アルキルである）である。特定の実施形態では、Ｒ１〜Ｒ５の１つ、２つもしくは３つはフッ素または塩素基であり；一方、特定の実施形態では、Ｒ１およびＲ５はそれぞれフッ素および／または塩素基である、例えばＲ１およびＲ５が２つともフッ素である、２つとも塩素であるかまたはフッ素および塩素基がそれぞれ１つ、のいずれかである。他の実施形態では、Ｒ１およびＲ４はそれぞれフッ素および／または塩素基である、例えばＲ１およびＲ４が２つともフッ素である、２つとも塩素であるかまたはフッ素および塩素基がそれぞれ１つ、のいずれかである。
【００５５】
他の実施形態では、本開示は、式（ＩＩＩ）による化合物：
【００５６】
【化４】
2014512337.tif 000006
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒａ、ＲｂおよびＮＲｃＲｄＺは上記定義と同じである）または薬学的に許容されるその塩もしくはそのビオチン化誘導体を含む。本開示の一態様では、Ｒａ、ＲｂはどちらもＨであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３またはＲ５の１つもしくは複数はフッ素または塩素であり、ＲｃはＨまたは低級アルキル、例えばメチル、エチル、プロピル基であり、Ｒｄは低級アルキル、例えばメチル、エチル、プロピル基である。本開示の他の態様では、Ｒａ、ＲｂはどちらもＨであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３またはＲ５の少なくとも２つはフッ素および／または塩素である、または薬学的に許容されるその塩もしくはそのビオチン化誘導体である。
【００５７】
本開示の他の実施形態では、ハロゲン化スチルベン類似体は、アリール環の２’または３’位に少なくとも１つのフッ素または塩素を有するジハロゲン化Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノスチレンである。他の実施形態では、このスチルベン類似体は２’位にフッ素を有し、６’位に他のフッ素を有する。他の実施形態では、このスチルベン類似体は２’位にフッ素を有し、６’位に塩素を有する。他の実施形態では、このスチルベン類似体は２’位に塩素を有し、６’位に他の塩素を有する。
【００５８】
他の実施形態では、このスチルベン類似体は、少なくとも１つのフッ素または塩素が２’または３’位にあるジハロゲン化Ｎ−メチルアミノスチレンである。
【００５９】
本開示の具体的なハロゲン化スチルベン類似体には、（Ｅ）−４−（２−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（３−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（４−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン；（Ｅ）−４−（２−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジフェニルアニリン；（Ｅ）−１−（４−（２−フルオロスチリル）フェニル）−４−メチルピペラジン；（Ｅ）−４−（２−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルナフタレン−１−アミン；（Ｅ）−２−（４−（２−フルオロスチリル）フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール；（Ｅ）−４−（２，３−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２，４−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２，５−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−２−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−３−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン；（Ｅ）−４−（３，４−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（３，５−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−（２，３，６−トリフルオロスチリル）アニリン；（Ｅ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−（２，４，６−トリフルオロスチリル）アニリン；（Ｅ）−４−（２−クロロ−６−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２，６−ジクロロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロフェネチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；および（Ｅ）−２−ベンズアミド−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンが含まれる。
【００６０】
合成
式（Ｉ）〜式（ＩＩＩ）の化合物を含む本開示の化合物は、本明細書で開示する方法または当該技術分野で公知の他の任意の方法で調製することができる。当業者は、本開示の類似体を得るために手順をどのように改変するかを知っている。さらに、化合物は下記および実施例１〜３に記載する方法またはその修正版を用いて調製することができる。
【００６１】
図２は、本開示の特定のハロゲン化スチルベン類似体の一般的合成の概略図である。本開示の追加的なハロゲン化スチルベン類似体は、本開示に照らして同様の方法または当該技術分野で公知の、公知の合成手順を用いて作製することができる。例えば、図２で示すように、それぞれホスホニウム塩またはホスホン酸ジエチルを用いたアルデヒドとのウィッティヒ反応またはワズワース・エモンズ反応のいずれかによって、（Ｅ）−スチルベン（４）が良好な収量で得られる。標準的な文献の手順によるアルブーゾフ反応を用いて、ホスホニウム塩を対応する臭化ベンジルおよびトリフェニルホスフィンから調製し、ホスホン酸ジエチルを対応する臭化ベンジルおよび亜リン酸トリエチルから調製した。化合物は完全に特性評価され、純度は燃焼分析で確立した（９５％超）。
【００６２】
オルト、メタおよびパラという用語は、当該技術分野で理解されている用語であり、それぞれ１，２−、１，３−および１，４−二置換ベンゼンを指す。例えば１，２−ジメチルベンゼンとオルト−ジメチルベンゼンという名称は同義語である。
【００６３】
本開示はハロゲン化スチルベン類似体の潜在的代謝産物も包含する。これらにはスチルベン類似体、例えばＮ−オキシドへの酸化を施されたジアルキルアミノ（ｄｉａｌｋｙａｍｉｎｏ）置換基を有する一般式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）が含まれる。一実施形態では、この化合物は、２’または３’位に少なくとも１つのフッ素または塩素を有するジハロゲン化Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノスチレンのＮ−オキシドである。これらの潜在的代謝産物は、メチル化または脱メチル化を施されたＮ，Ｎ−ジアルキルアミノ基を有するハロゲン化スチルベン類似体も含む。一実施形態では、そのスチルベン類似体は、２’または６’位に少なくとも１つのフッ素または塩素を有するジハロゲン化Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムスチレンハライドである。一実施形態では、その類似体は、２’または３’位に少なくとも１つのフッ素または塩素を有するジハロゲン化Ｎ−メチルアミノスチレンである。一実施形態では、その類似体は２’または３’位に少なくとも１つのフッ素または塩素を有するジハロゲン化Ｎ，Ｎ−メチルヒドロキシアミノスチレンである。
【００６４】
本開示は、ハロゲン化スチルベン類似体のビオチン化誘導体も包含する。そうしたビオチン化誘導体はこれらの薬剤のための分子標的を特定するのに有用である。式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）によって包含されるスチルベン類似体を合成し、ビオチン化誘導体に転換させた。生物学的活性を保持するビオチン化誘導体を、これらの化合物のための分子酵素標的、メチオニンＳ−アデノシルトランスフェラーゼを特定するために使用した。
【００６５】
本開示の特定の実施形態では、本開示のハロゲン化スチルベン類似体または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物もしくはプロドラッグは過剰増殖性細胞の成長を阻害する。本開示の特定の実施形態では、本開示のハロゲン化スチルベン類似体または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物もしくはプロドラッグは、メチオニンアデノシルトランスフェラーゼ２Ａ（ＭＡＴ２Ａ）活性を阻害し、ＭＡＴ２Ａに関連する疾患または状態、例えばその維持および／または拡大がＭＡＴ２Ａを必要とする疾患および状態において有用である。
【００６６】
本開示の化合物の代謝産物
本明細書に記載する式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）のインビボでの代謝産物も本開示の範囲内に包含される。そうした産物は、例えば、投与された化合物の酸化、還元、加水分解、アミド化、脱アミド化、エステル化、脱エステル化、酵素的切断などによって得ることができる。
【００６７】
したがって、本開示は、その代謝産物を得るのに十分な期間、本開示の化合物を哺乳動物と接触させることを含むプロセスで産生される化合物を含む、式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物の代謝産物を含む。
【００６８】
代謝産物は一般に、検出可能に標識された、例えば放射性標識された（例えば、ＣまたはＨ同位体）本開示の化合物を調製し、検出可能な用量（例えば、約０．５ｍｇ／ｋｇ超）でラット、マウス、モルモット、サルなどの動物またはヒトに非経口にこれを投与し、代謝を起こさせるのに十分な時間（一般に約３０秒間〜３０時間）を与え、尿、血液または他の生物学的サンプルからのそれの転換産物を単離することによって特定される。これらの産物は、それらが検出可能に標識されているので容易に単離される（その他のものは、代謝産物中に残存するエピトープと結合できる抗体の使用によって単離される）。代謝産物の構造は、慣用的な様式、例えばＭＳ、ＬＣ／ＭＳまたはＮＭＲ分析で決定される。一般に、代謝産物の分析は、当業者に周知の慣用的な薬物代謝試験と同じ方法で行われる。代謝産物が別の方法でインビボにおいて見出されない限り、代謝産物は、本開示の化合物の治療投与のための診断アッセイにおいて有用である。式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物の可能性のある代謝産物の例を図３に示し、実施例２に従って合成する。
【００６９】
本開示の化合物のプロドラッグ
本開示の化合物に加えて、本開示はそうした化合物の薬学的に許容されるプロドラッグも含む。プロドラッグは、アミノ酸残基または２つ以上（例えば、２つ、３つまたは４つ）のアミノ酸残基のポリペプチド鎖がアミドまたはエステル結合を介して本開示の化合物の遊離アミノ、ヒドロキシまたはカルボン酸基と共有結合している化合物を含む。アミノ酸残基には、これらに限定されないが、３つの文字記号で一般に指定される２０の天然に存在するアミノ酸が含まれ、また、ホスホセリン、ホスホトレオニン、ホスホチロシン、４−ヒドロキシプロリン、ヒドロキシジン、デスモシン（ｄｅｍｏｓｉｎｅ）、イソデスモシン（ｉｓｏｄｅｍｏｓｉｎｅ）、γカルボキシグルタメート、馬尿酸、オクタヒドロインドール−２−カルボン酸、スタチン（ｓｔａｔｉｎｅ）、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸、ペニシラミン、オルニチン、３−メチルヒスチジン、ノルバリン、βアラニン、γアミノ酪酸、シトルリン、ホモシステイン、ホモセリン、メチル−アラニン、パラ−ベンゾイルフェニルアラニン、フェニルグリシン、プロパルギルグリシン、サルコシン、メチオニンスルホンおよびｔｅｒｔ−ブチルグリシンも含まれる。
【００７０】
他のタイプのプロドラッグも包含される。例えば、本開示の化合物の遊離カルボキシル基を、アミドまたはアルキルエステルとして誘導体化することができる。他の例として、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、（１９９６年）１９巻：１〜１５頁に概説されているようにして遊離ヒドロキシ基を含む本開示の化合物を、そのヒドロキシ基を、これらに限定されないがホスフェートエステル、ヘミスクシネート、ジメチルアミノアセテートまたはホスホリルオキシメチルオキシカルボニル基などの基に転換させることによってプロドラッグとして誘導体化することができる。ヒドロキシおよびアミノ基のカルバメートプロドラッグも含まれ、また、カーボネートプロドラッグ、ヒドロキシ基のスルホン酸エステルおよび硫酸エステルも含まれる。アシル基が、これらに限定されないがエーテル、アミンおよびカルボン酸官能基を含む基で必要に応じて置換されているアルキルエステルであってよいか、またはアシル基が上記したようなアミノ酸エステルである、（アシルオキシ）メチルおよび（アシルオキシ）エチルエーテルとしてのヒドロキシ基の誘導体化も包含される。この種のプロドラッグはＪ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．、（１９９６年）、３９巻：１０頁に記載されている。より具体的な例は、（Ｃ１−Ｃ６）アルカノイルオキシメチル、１−（（Ｃ１−Ｃ６）アルカノイルオキシ）エチル、１−メチル−１−（（Ｃ１−Ｃ６）アルカノイルオキシ）エチル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシカルボニルオキシメチル、Ｎ−（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシカルボニルアミノメチル、スクシノイル、（Ｃ１−Ｃ６）アルカノイル、α−アミノ（Ｃ１−Ｃ４）アルカノイル、アリールアシルおよびα−アミノアシルまたはα−アミノアシル−α−アミノアシル（ここで各α−アミノアシル基は天然に存在するＬ−アミノ酸から独立に選択される）、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（Ｏ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）２またはグリコシル（ヘミアセタール形態の炭水化物のヒドロキシル基の取り外しによって得られるラジカル）などの基での水素原子の置き換えを含む。
【００７１】
プロドラッグ誘導体の他の例については、例えばａ）Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ、Ｈ．  Ｂｕｎｄｇａａｒｄによる編集（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、１９８５年）およびＭｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、４２巻、３０９〜３９６頁、Ｋ．  Ｗｉｄｄｅｒらによる編集（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８５年）；ｂ）Ａ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、Ｋｒｏｇｓｇａａｒｄ−Ｌａｒｓｅｎ  ａｎｄ  Ｈ．  Ｂｕｎｄｇａａｒｄによる編集、第５章「Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」Ｈ．  Ｂｕｎｄｇａａｒｄによる、１１３〜１９１頁（１９９１年）；ｃ）Ｈ．  Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、８巻：１〜３８頁（１９９２年）；ｄ）Ｈ．  Ｂｕｎｄｇａａｒｄら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、７７巻：２８５頁（１９８８年）；およびｅ）Ｎ．  Ｋａｋｅｙａら、Ｃｈｅｍ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｂｕｌｌ．、３２巻：６９２頁（１９８４年）を参照されたい。そのそれぞれを参照により本明細書に明確に組み込む。
【００７２】
薬学的組成物
本開示は、少なくとも１つのハロゲン化スチルベン類似体、例えば式（Ｉ）、式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の１つもしくは複数の化合物および／または式（Ｉ）、（ＩＩ）および／または（ＩＩＩ）による化合物の１つもしくは複数の薬学的に許容される塩を薬剤用キャリアと組み合わせて含む薬学的組成物も包含する。本開示の一態様では、薬学的組成物は有効量の少なくとも１つのハロゲン化スチルベン類似体を含む。本開示の他の実施形態では、薬学的組成物はジハロゲン化Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノスチルベン類似体および薬学的に許容されるキャリアを含む。
【００７３】
本開示の化合物を未加工の（ｒａｗ）化学物質として投与することもできるが、それらを薬学的組成物として提供することが好ましい。さらなる態様によれば、本開示は、式（Ｉ）〜式（ＩＩＩ）の化合物または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグもしくは代謝産物の化合物または化合物の混合物を、１つもしくは複数の薬剤用キャリア、賦形剤（ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ）または添加物および必要に応じて１つもしくは複数の他の治療成分と一緒に含む薬学的組成物を提供する。キャリア（複数可）は、その処方物（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）の他の成分と適合し、かつそのレシピエントに有害でないという意味で「許容される」ものでなければならない。「薬学的に許容されるキャリア」という用語は、ビヒクルおよび希釈剤（ｄｉｌｕｅｎｔ）を含む。
【００７４】
薬学的組成物を調製するために、用量を作製するための慣用的な薬学的混合技術に従って、治療有効量の本開示によるハロゲン化スチルベン類似体の１つまたは複数を薬学的に許容されるキャリアと密に混合することができる。キャリアは、とりわけゲル剤、クリーム剤、軟膏剤、ローション剤および時間放出型埋め込み製剤（ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）を含む、投与、例えば経口、局所または非経口投与のために望ましい製剤形態に応じて、様々な形態をとることができる。経口剤形での薬学的組成物の調製において、通常の薬剤用媒体のいずれかを用いることができる。したがって、懸濁剤、エリキシル剤および液剤などの液体経口製剤のためには、水、グリコール、油、アルコール、香味剤、防腐剤、着色剤などを含む適切なキャリアおよび添加物を用いることができる。散剤、錠剤、カプセル剤などの固体経口製剤のため、および坐剤などの固体製剤のために、デンプン、糖キャリア、例えばデキストロース、マンニトール、ラクトースおよび関連キャリア、希釈剤、造粒剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤などを含む適切なキャリアおよび添加物を使用することができる。所望される場合、錠剤またはカプセル剤は、標準的な技術により腸溶コーティングされていても、徐放性であってもよい。
【００７５】
一実施形態では、組成物を、埋没物およびマイクロカプセル化送達系を含む制御放出処方物などの、身体からの急速な排出に対して活性化合物（複数可）を保護するキャリアとともに調製する。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸などの生分解性の生体適合性ポリマーを使用することができる。そうした処方物を調製するための方法は当業者に明らかである。
【００７６】
薬学的に許容されるキャリアは、投与に望ましい経路、例えば経口または非経口（静脈内を含む）に応じて様々な形態をとることができる。デンプン、糖、微結晶性セルロース、希釈剤、造粒剤、滑沢剤、結合剤および崩壊剤などのキャリアを、散剤、カプセル剤およびカプレット剤などの経口固体製剤の場合に使用することができ、固体経口製剤の方が液体製剤より好ましい。好ましい固体経口製剤は、その投与の容易さのため、錠剤またはカプセル剤である。所望される場合、錠剤を標準的な水性または非水性技術によってコーティングすることができる。経口型および非経口型の徐放性剤形も使用することができる。
【００７７】
リポソーム懸濁物も薬学的に許容されるキャリアであり得る。これは、当業者に公知の方法に従って調製することができる。例えば、リポソーム処方物は、適切な脂質（複数可）を無機溶媒に溶解し、次いでそれを蒸発させ、乾燥した脂質の薄膜をその容器の表面上に残すことによって調製することができる。次に活性化合物の水性溶液をその容器中に導入する。次いで容器を手動で旋回させて、容器の側部から脂質物質を遊離させ、脂質凝集体を分散させ、それによってリポソーム懸濁物を形成させる。当業者に周知の他の調製方法を、本開示のこの態様において用いることもできる。
【００７８】
ある実施形態では、本開示の組成物は、式（Ｉ）〜式（ＩＩＩ）の化合物または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグもしくは代謝産物の、投与部位に近接するかまたはそれから離れた組織への持続した連続的送達を可能にする。生物学的に活性な薬剤は、局所的または全身的な生物学的、生理学的または治療上の効果の提供を可能にする。例えば式（Ｉ）〜式（ＩＩＩ）の化合物または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグもしくは代謝産物は、機能の中でとりわけ、がん細胞もしくはがん幹細胞を死滅させる、または腫瘍成長もしくは転移を制御または抑制するように作用することができる。
【００７９】
投与のための処方物および投薬量
本開示のハロゲン化スチルベン化合物に基づく薬学的処方物は、式（Ｉ）〜式（ＩＩＩ）の化合物または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグもしくは代謝産物の少なくとも１つを、糖尿病、心臓疾患、老化、肥満、アルツハイマー病またはパーキンソン病などのＭＡＴ２Ａ活性に関連する新形成、がんおよび他の疾患および状態を処置するための治療有効量で、必要に応じて薬学的に許容される添加物、キャリアおよび／または賦形剤と組み合わせて含む。当業者は、本開示による１つまたは複数の化合物の治療有効量は処置される状態、その重症度、用いられる処置レジメン、使用する薬剤の薬物動態ならびに処置を受ける患者（動物またはヒト）によって変動することを理解されよう。
【００８０】
本開示の処方物は、経口、非経口（皮下、皮内、筋肉内、静脈内、腫瘍内および関節内を含む）、直腸および局所（皮膚、頬側、舌下および眼内を含む）投与に適したものならびに吸入による投与のためのものを含む。最も適切な経路は、レシピエントの状態および障害に依存し得る。処方物の例は当業者に周知であり、それらを調製するための一般的方法は標準的な任意の薬学学校教科書、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴＨＥ  ＳＣＩＥＮＣＥ  ＡＮＤ  ＰＲＡＣＴＩＣＥ  ＯＦ  ＰＨＡＲＭＡＣＹ、第２１版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔに見出される。本開示の処方物は、単位剤形で好都合に提供することができ、薬学の技術分野で周知の方法のいずれかによって調製することができる。すべての方法は、化合物または薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物（「活性成分」）を、１つもしくは複数の補助成分を構成するキャリアと混合するステップを含む。一般に、処方物は、活性成分を液体キャリアもしくは微粉化した固体キャリアまたはその両方と均一にかつ密に混合し、ついで、必要ならその生成物を所望の処方物に成形することによって調製する。経口処方物は当業者に周知であり、それらを調製するための一般的方法は標準的な任意の薬学学校教科書、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴＨＥ  ＳＣＩＥＮＣＥ  ＡＮＤ  ＰＲＡＣＴＩＣＥ  ＯＦ  ＰＨＡＲＭＡＣＹ、第２１版に見出される。その開示全体を参照により本明細書に組み込む。
【００８１】
薬物の組成物における、本開示の活性化合物、すなわち式（Ｉ）〜式（ＩＩＩ）の化合物または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグもしくは代謝産物の少なくとも１つの濃度は、その薬物の吸収、分布、不活性化および排出速度ならびに当業者に公知の他の因子に依存する。投薬値は、軽減させようとする状態の重症度によっても変動することに留意すべきである。組成物は一度に投与することも、または、可変の時間間隔で投与されるより少ないいくらかの用量に分割することもできる。
【００８２】
経口組成物は一般に不活性希釈剤または食用キャリアを含む。これらを、ゼラチンカプセル中に封入させるかまたは錠剤中に圧縮させることができる。経口治療投与の目的で、活性化合物またはそのプロドラッグ誘導体を賦形剤と共に組み入れて、錠剤、トローチ剤またはカプセル剤の形態で使用することができる。薬学的に適合する結合剤および／またはアジュバント物質をその組成物の一部として含めることができる。
【００８３】
錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などは、以下の非限定的な成分または類似した性質の化合物：微結晶性セルロース、トラガカントゴムまたはゼラチンなどの結合剤；デンプンまたはラクトースなどの賦形剤、アルギン酸またはトウモロコシデンプンなどの分散剤；ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素などの流動促進剤；スクロースまたはサッカリンなどの甘味剤；あるいはペパーミント、サリチル酸メチルまたは果実香味料（ｆｒｕｉｔ  ｆｌａｖｏｒｉｎｇ）などの香味剤のいずれかを含むことができる。投薬単位形態がカプセル剤である場合、それは、上記のいずれかに加えて脂肪油などの液体キャリアを含むことができる。さらに、投薬単位形態は、投薬単位の物理的形態を改変する種々の他の物質、例えば糖、セラックまたは腸溶性薬剤のコーティングを含むことができる。
【００８４】
例えば、錠剤は必要に応じてコーティングするかまたは割線入れすることができ、その中の活性成分が徐放、遅延放出または制御放出されるように処方することができる。経口および非経口の徐放性薬物送達系は当業者に周知であり、経口または非経口で投与される薬物の徐放を実現する一般的方法は、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴＨＥ  ＳＣＩＥＮＣＥ  ＡＮＤ  ＰＲＡＣＴＩＣＥ  ＯＦ  ＰＨＡＲＭＡＣＹ、第２１版に見出される。
【００８５】
活性化合物は、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウェハ剤などの構成成分として投与することもできる。シロップ剤は、活性化合物に加えて、甘味剤としてのスクロースまたはフルクトースおよび特定の防腐剤、染料および着色剤ならびに香味剤を含むことができる。
【００８６】
本開示の特定の実施形態では、ハロゲン化スチルベン類似体を、薬学的に許容されるキャリア、賦形剤または添加物との混合物として処方する。一般に、この薬学的組成物は経口投与可能な形態で投与されるが、いくつかの状態を処置するために、いくつかの他の処方物を局所、非経口、静脈内、筋肉内、経皮、頬側、皮下を介して、あるいは坐剤としてまたは眼もしくは眼球経路を含む他の経路で投与することができる。静脈内および筋肉内用処方物は一般に、滅菌食塩水で投与される。勿論、当業者は、本明細書の教示の範囲内で処方物を改変して、薬学的組成物を不安定にするまたはその治療活性を損なうことなく、特定の投与経路のための多くの処方物を提供することができる。患者に最大の有益な効果がもたらされるように本発明の化合物の薬物動態を管理するために、具体的な化合物の投与経路および投薬レジメンを改変することも十分に当業者の技術の範囲内である。
【００８７】
特定の薬学的剤形では、上記化合物のプロドラッグ形態が好ましい場合がある。当業者は、本発明の化合物をいかにたやすくプロドラッグ形態に改変して、宿主生物または患者内の標的部位への活性化合物の送達を容易にするかを理解されよう。通常の技術者（ｒｏｕｔｉｎｅｅｒ）は、本発明の化合物を宿主生物または患者内の標的部位に送達して上記化合物の目的とする効果を最大化することにおいて、適切な場合には、プロドラッグ形態の好都合な薬物動態パラメーターも利用する。
【００８８】
式（Ｉ）〜式（ＩＩＩ）の化合物または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグもしくは代謝産物のいずれかを含む薬学的組成物は、単位剤形で好都合に提供することができ、薬学の技術分野で周知の方法のいずれかによって調製することができる。好ましい単位投薬量の処方物は、活性成分もしくは薬学的に許容されるその塩の有効用量またはその適切な画分を含むものである。予防または治療用量の大きさは一般に、処置を受ける状態の性質および重症度ならびに投与経路によって異なる。その用量、および恐らくその投薬頻度は個々の患者の年齢、体重および応答によっても変わる。一般に、合計日用量（単一用量または分割用量で）は約０．１ｍｇ／日〜約７０００ｍｇ／日、または約０．１ｍｇ／日〜約１００ｍｇ／日、または約１０ｍｇ／日〜約１００ｍｇ／日、または約２０ｍｇ〜約１００ｍｇ、約２０ｍｇ〜約８０ｍｇまたは約２０ｍｇ〜約６０ｍｇの範囲である。いくつかの実施形態では、合計日用量は約１０ｍｇ／日〜約５００ｍｇ／日または約１００ｍｇ／日〜約５００ｍｇ／日の範囲であってよい。さらに、子供、６５歳を超える患者および腎臓または肝臓の機能に障害のある患者には、最初に低用量を施し、個々の応答および／または血中濃度に基づき投薬量を用量設定することが推奨される。当業者に明らかなように、ある場合にはこれらの範囲外の投薬量を用いることが必要となる場合がある。さらに、臨床医または担当医は、個々の患者の応答にあわせて、どのようにしてどの時点で治療を中断、調整または終了させるかを理解していることに留意されたい。
【００８９】
あるいは、成人において最初の臨床試験で使用するための本開示の化合物の最大安全開始用量は、例えば、最大安全投薬量を推定するためのＦＤＡ指針に従って決定することができる。これらの指針は、動物実験で使用した投薬量を用いてヒトでの試験で使用する安全投薬量を外挿するためのガイダンスを提供している。食品医薬品局医薬品評価研究センターによる、健常な成人志願者での治療のための初期臨床試験における最大安全開始用量を推定する工業用ガイダンス（Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，  Ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍａｘｉｍｕｍ  Ｓａｆｅ  Ｓｔａｒｔｉｎｇ  Ｄｏｓｅ  ｉｎ  Ｉｎｉｔｉａｌ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｉｎ  Ａｄｕｌｔ  Ｈｅａｌｔｈｙ  Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ，  Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （ＣＤＥＲ））、２００５年７月を参照されたい。
【００９０】
ある実施形態では、本開示の治療有効処方物中に含められる化合物の量は、ＭＡＴ２Ａ活性に関連する状態を処置するのに有効な量である。一般に、剤形中の本発明の好ましい化合物の治療有効量は、使用する化合物、処置を受ける状態および投与経路に応じて通常約０．０２５ｍｇ／ｋｇ（患者の）よりやや少なめ〜約２．５ｇ／ｋｇの範囲であり、特定の実施形態では約２．５〜約５ｍｇ／ｋｇまたは約２．５〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲あるいはそれよりかなり多い量であるが、この投薬量範囲に対する例外も本開示で考慮することができる。いくつかの実施形態では、本開示のハロゲン化スチルベン類似体を約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲の量で投与する。
【００９１】
本開示の活性化合物、すなわち式（１）〜式（ＩＩＩ）の化合物または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグもしくは代謝産物の少なくとも１つを、処置を受ける患者に深刻な毒性作用をもたらすことなく、所望の適応のための治療有効量を患者に送達するのに十分な量で、薬学的に許容されるキャリアまたは希釈剤中に含める。
【００９２】
特定の実施形態では、活性化合物は、これらに限定されないが、単位剤形当たり１〜３０００ｍｇ、好ましくは５〜５００ｍｇの活性成分を含有するものを含む適切な任意の単位剤形で好都合に投与される。通常１０〜２５０ｍｇの経口投薬量が好都合である。
【００９３】
患者または被験体に投与される本開示の組成物の実際の投薬量は体重、状態の重症度、処置を受ける疾患の種類、以前または同時並行の治療的介入、患者の特発性疾患などの身体的および生理学的因子ならびに投与経路によって決定することができる。投与に責任のある医師（ｐｒａｃｔｉｔｉｏｎｅｒ）は、いずれにしても、個々の被験体のために組成物中の活性成分（複数可）の濃度および適切な用量（複数可）を決定する。
【００９４】
特定の実施形態では、薬学的組成物は、例えば少なくとも約０．１％の活性化合物、すなわち式（１）〜式（ＩＩＩ）の化合物または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグもしくは代謝産物の少なくとも１つを含むことができる。他の実施形態では、活性化合物は、例えばその単位の重量の約１％〜約７５％または約５％〜約５０％、およびその中で導出可能な任意の範囲を含むことができる。他の非限定的な例では、用量は、投与当たり約１マイクログラム／ｋｇ／体重、約５マイクログラム／ｋｇ／体重、約１０マイクログラム／ｋｇ／体重、約５０マイクログラム／ｋｇ／体重、約１００ミリグラム／ｋｇ／体重、約１５０ミリグラム／ｋｇ／体重、約２００ミリグラム／ｋｇ／体重、約３００ミリグラム／ｋｇ／体重、約４００ミリグラム／ｋｇ／体重またはそれより多く、およびその中で導出可能な任意の範囲を含むこともできる。本明細書で挙げた数字から導出可能な範囲の非限定的な例では、約５０マイクログラム／ｋｇ／体重〜約５０ミリグラム／ｋｇ／体重または約５０マイクログラム／ｋｇ／体重〜約５０ミリグラム／ｋｇ／体重等の範囲で投与することができる。
【００９５】
投与経路
当業者は理解されるように、本開示の方法に従って、上述した本開示のハロゲン化スチルベン類似体または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物もしくはプロドラッグを、選択された投与経路に応じて様々な形態で被験体に投与することができる。本開示の活性化合物は、例えば経口、非経口、頬側、舌下、鼻、直腸、パッチ、ポンプまたは経皮投与で投与することができ、薬学的組成物はそれに応じて処方される。非経口投与には、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、腫瘍内、経上皮、鼻、肺内、髄腔内、直腸および局所の投与方式が含まれる。非経口投与は、選択された期間にわたる持続注入によってもよい。
【００９６】
あるいは、本開示の化合物を、例えば経口、局所ならびに静脈内、筋肉内、眼または眼球、腹腔内、頬内、経皮および坐剤形態を含む非経口を含む任意の投与経路のための処方物中に組み込むことができる。
【００９７】
処置方法
ある実施形態では、本開示は被験体におけるＭＡＴ２Ａの生物学的活性に関連する障害を処置するための方法であって、有効量の式（Ｉ）、式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の１つもしくは複数の化合物および／または１つもしくは複数の薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグまたは代謝産物の化合物または組成物を被験体に投与するステップを含む方法を対象とする。
【００９８】
一実施形態では、ＭＡＴ２Ａに関連する障害は腫瘍および／またはがんである。したがって、ある実施形態では、本開示は、有効量の１つもしくは複数の本開示のハロゲン化スチルベン類似体および／または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグまたは代謝産物をそうした治療を必要とする患者に投与するステップを含む、腫瘍および／またはがんを処置するための方法も対象とする。例えば、本開示は、種々のがんおよびその合併症を処置する方法を意図する。より具体的には、本開示は、悪性の腫瘍またはがんを含む良性がんおよび悪性がんの成長を阻害するための方法であって、その腫瘍を、阻害もしくは治療上の有効な量または濃度のハロゲン化スチルベン類似体または薬学的に許容される塩または薬学的に許容されるその組成物の少なくとも１つに曝露させるステップを含む方法に関する。とりわけ、眼または眼球のがん、直腸がん、結腸がん、子宮頸がん、前立腺がん、乳がん、肝臓がんおよび膀胱がんおよび加齢に関連したがんなどの内部悪性腫瘍の処置を、本開示で意図する。
【００９９】
したがって、本開示の化合物および／または組成物は、患者としての動物、特にヒトを含む哺乳動物を処置するのに有用である。したがって、過剰増殖性障害、特に本明細書で開示するようながんまたは他の疾患に苦しむヒトおよび他の動物、特に哺乳動物を、必要に応じて薬学的に許容されるキャリアまたは希釈剤中の、有効量の本開示によるハロゲン化スチルベン類似体もしくはその誘導体または薬学的に許容されるその塩の１つもしくは複数を単独または他の公知の薬剤と併用して（処置される疾患に応じて）患者に投与することによって処置することができる。本開示による処置は、放射線処置もしくは外科手術または他の抗がん剤の投与などの他の慣用的ながん治療と併用した本開示の化合物および／または組成物の投与によることもできる。
【０１００】
特定の実施形態では、本開示は、そのために治療用のハロゲン化スチルベン類似体または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグもしくは代謝産物の被験体の細胞または組織への送達が治療的有用性があると考えられる、任意の疾患の処置において用途を見出すことができる。そうした疾患の例には、過剰増殖性疾患および静止状態の悪性疾患が含まれる。特定の実施形態では、その疾患は、固形組織または血液細胞のがんなどの過剰増殖性疾患である。本開示のハロゲン化スチルベン類似体または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグもしくは代謝産物で処置できる静止状態の悪性疾患には、例えば慢性リンパ球性白血病が含まれる。
【０１０１】
例えば、本開示のハロゲン化スチルベン類似体または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグもしくは代謝産物の化合物または組成物を、過剰増殖性疾患を処置するために投与することができる。過剰増殖性疾患は、がん、平滑筋腫、アデノーマ、脂肪腫、血管腫、線維腫、前腫瘍性病変（腺腫様過形成および前立腺上皮内腫瘍など）、上皮内がん、口腔毛状白斑または乾癬であってよい。
【０１０２】
がんは固形腫瘍、転移がんまたは非転移がんであってよい。特定の実施形態では、そのがんは、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、胸部、結腸、食道、十二指腸、小腸、大腸、結腸、直腸、肛門、歯肉、頭部、腎臓、肝臓、肺、鼻咽頭、首、卵巣、前立腺、皮膚、胃、睾丸、舌または子宮から発生する可能性がある。特定の実施形態では、そのがんは卵巣がんである。特定の態様では、そのがんは化学療法抵抗性のがん、すなわち難治性形態（ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ  ｆｏｒｍ）のがんであってよい。
【０１０３】
生理学的状態の変化を含むがん以外の疾患も本開示に包含される。例えば、糖尿病は、根底にあるシグナル伝達変化、すなわちインスリンへの耐性およびＩＲＳを介した下流シグナル伝達の活性化の障害が関係していることが分かっている（Ｂｕｒｋｓ  Ｄ  Ｊ，  Ｗｈｉｔｅ  Ｍ  Ｆ．  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ２００１年２月；５０巻Ｓｕｐｐｌ  １：Ｓ１４０〜５頁）。同様に、循環器疾患は、ＰＫＣファミリーなどの複数経路を含む心臓細胞の肥大が関係していることが分かっている（Ｍａｌｈｏｔｒａ  Ａ．  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ２００１年９月；２２５巻（１−）：９７〜１０７頁）。関節リウマチなどの炎症性疾患は、ケモカイン受容体および破壊された下流シグナル伝達が関係していることが公知である（Ｄ’Ａｍｂｒｏｓｉｏ  Ｄ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２００３年２月；２７３巻（１〜２号）：３〜１３頁）。
【０１０４】
本開示の他の態様では、細胞を有効量の本開示のハロゲン化スチルベン類似体と接触させることによって、該細胞におけるＷｎｔシグナル伝達を中断させるための方法を提供する。Ｗｎｔシグナル伝達経路は、胚形成およびがんにおけるその役割が最も良く知られているタンパク質の複雑なネットワークを記載するが、成体動物における正常な生理学的過程にも関与する。標準的なＷｎｔ経路は、Ｗｎｔタンパク質がフリズルドファミリーの細胞表面受容体と結合し、受容体がディシェベルドファミリータンパク質（Ｄｉｓｈｅｖｅｌｌｅｄ  ｆａｍｉｌｙ  ｐｒｏｔｅｉｎ）を活性化させるようにし、最終的に、核に達するβ−カテニンの量の変化をもたらしたときに生じる一連のイベントに関係している。ディシェベルド（ＤＳＨ）は、Ｗｎｔ結合によって活性化された場合、アキシン（Ａｘｉｎ）、ＧＳＫ−３およびタンパク質ＡＰＣを含むタンパク質の第２複合体を阻害する膜結合性Ｗｎｔ受容体複合体の主要構成成分である。アキシン／ＧＳＫ−３／ＡＰＣ複合体は通常β−カテニン細胞内シグナル伝達分子のタンパク質分解を促進する。このβ−カテニン破壊複合体が阻害された後、細胞質β−カテニンのプールは安定し、一部のβ−カテニンは核中に入り、ＴＣＦ／ＬＥＦファミリー転写因子と相互作用して特異的な遺伝子発現を促進させることができる。本開示のこの態様では、細胞を、細胞におけるＷｎｔシグナル伝達を中断するのに十分な量の本開示の１つまたは複数の化合物と接触させる。
【０１０５】
併用治療
本開示の活性化合物、すなわち式（Ｉ）、式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の１つもしくは複数の化合物および／または１つもしくは複数の薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグまたは代謝産物を、所望の作用を損なうことのない他の活性物質または他の抗がん剤、特定の例では所望の処置または標的に応じて抗生物質、抗真菌剤、抗炎症剤（ａｎｔｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｉｅｓ）、抗ウイルス性化合物または明らかな薬理的効果を有する他の薬剤などの所望の作用を補う物質と混合することもできる。
【０１０６】
本開示の方法および組成物はさらに、本開示の化合物の治療効果または保護効果を増進させ、かつ／または他の抗がんまたは抗過剰増殖治療の治療効果を増大させることができる併用治療を提供する。治療方法および予防方法ならびに組成物は、がん細胞の死滅および／または細胞の過剰増殖の阻害などの所望の効果を達成するのに効果的な組み合わせた量で提供することができる。このプロセスは、細胞を、第２治療としての例えば治療用核酸、例えば化学療法剤または遺伝子発現の阻害剤と接触させることを含むことができる。組織、腫瘍または細胞を、本開示の化合物または組成物および１つもしくは複数の追加の抗がん処置を接触させることができる。例えば、追加の抗がん処置は、化学療法剤、抗ホルモン剤、放射線治療、外科的治療または免疫治療を含むことができる。
【０１０７】
化学療法剤の例には、アルキル化剤、例えばチオテパおよびシクロホスファミド；アルキルスルホネート、例えばブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン、例えばベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパおよびウレドーパ；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド（ｔｒｉｅｔｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、トリエチレンチオホスホラミド（ｔｒｉｅｔｈｉｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）およびトリメチロールメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含むエチレンイミンおよびメチルメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）；アセトゲニン（特にブラタシンおよびブタラシノン）；カンプトテシン（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼルシンおよびビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ−２１８９およびＣＢｌ−ＴＭｌを含む）；エレウテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えばクロラムブシル、クロルナファジン、シクロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムベキン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａ）、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチンおよびラニムスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）；抗生物質、例えばエンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンガムマールおよびカリケアマイシンオメガール；ダイネマイシンＡを含むダイネマイシン；ビスフォスフォネート、例えばクロドロネート；エスペラマイシン；ならびにネオカルジノスタチンクロモフォアおよび関連色素タンパク質エンジイン抗生物質（ａｎｔｉｏｂｉｏｔｉｃ）クロモフォア、アクラシノマイシン（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎ）、アクチノマイシン、アントラマイシン（ａｕｔｈｒａｒｎｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン（ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えばマイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン（ｎｏｇａｌａｒｎｙｃｉｎ）、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗物質、例えばメトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸類似体、例えばデノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリン類似体、例えばフルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えばアンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、例えばカルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗アドレナリン剤、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充剤、例えばフロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビスアントレン；エダトラキセート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジコン；エルホルミチン；エリプチニウム酢酸塩；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン；マイタンシノイド、例えばマイタンシンおよびアンサミトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ多糖複合体）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ−２毒素、ベラキュリンＡ、ロリジンＡおよびアンギジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えばパクリタキセルおよびドセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）；クロラムブシル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金配位複合体、例えばシスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；イリノテカン（例えば、ＣＰＴ−Ｉ  ｌ）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ｄｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｌｈｙｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えばレチノイン酸；カペシタビン；シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ニトロソウレア、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ｐｌｉｃｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン、エトポシド（ＶＰ１６）、タモキシフェン、ラロキシフェン、エストロゲン受容体結合剤、タクソ��ル、パクリタキセル、ドセタキセル、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｅｎ）、ナベルビン、ファルネシル−タンパク質トランスフェラーゼ（ｔａｎｓｆｅｒａｓｅ）阻害剤、トランス白金、５−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチンおよびメトトレキサートならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体が含まれる。
【０１０８】
処方物には、例えばタモキシフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、Ａ−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹｌ  １７０１８、オナプリストンおよびトレミフェンを含む、抗エストロゲン剤および選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）などの腫瘍におけるホルモン作用を制御または阻害するように作用する抗ホルモン剤；例えば４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロール、エキセメスタン、ホルメスタン（ｆｏｒｍｅｓｔａｎｉｅ）、ファドロゾール、ボロゾール、レトロゾールおよびアナストロゾールなどの、副腎におけるエストロゲン産生を制御する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤；およびフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリドおよびゴセレリンなどの抗アンドロゲン剤；ならびにトロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、例えばＰＫＣ−α、ＲａＩｆおよびＨ−Ｒａｓなどの異常（ａｂｈｅｒａｎｔ）細胞増殖にかかわるシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの；ＶＥＧＦ発現阻害剤およびＨＥＲ２発現阻害剤などのリボザイム；遺伝子治療ワクチンなどのワクチンならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体も含まれる。
【０１０９】
ある実施形態では、式（Ｉ）、式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の１つもしくは複数の化合物および／または１つもしくは複数の薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグまたは代謝産物を含む本明細書で示す治療用処方物または組成物は、第２の抗がん処置に対して、その前、その間、その後または様々な組合せで投与することができる。投与は同時から、数分間まで、数日間まで、数週間までの範囲の間隔であってよい。ハロゲン化スチルベン含有組成物を追加の抗がん剤とは別個に患者へ提供する実施形態では、２つの薬剤が患者に対して有利な複合効果を依然として発揮することができるように、一般に、各送達時点間で、相当な期間が経ってしまわないことを確実にすることになる。そうした場合、互いに約１２〜２４時間または７２時間以内で、より好ましくは互いに約６〜１２時間以内で、患者に遺伝子発現治療の阻害剤および抗がん治療の阻害剤を投与できるよう企図する。ある状況では、処置のための期間を、それぞれの投与の間で、数日間（２、３、４、５、６または７）から数週間（１、２、３、４、５、６、７または８）が経過するように相当延長することが望ましいことがある。
【０１１０】
１日（２４時間の期間）以内に、１回または複数回の薬剤（複数可）投与を患者に施すことができる。さらに処置過程の後、抗がん処置が施されない期間が存在することが企図される。この期間は、患者の状態、例えば患者の予後、体力、健康等に応じて１、２、３、４、５、６、７日間および／または１、２、３、４、５週間および／または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２カ月またはそれより長く続いてよい。
【０１１１】
患者への本開示の任意の化合物または治療剤の投与は、もしあればその薬剤の毒性を考慮しながら、そうした化合物の投与のための一般的プロトコルに従う。したがって、いくつかの実施形態では、併用療法に起因する毒性を監視するステップがある。処置サイクルは必要に応じて繰り返されることが期待される。様々な標準的治療法ならびに放射線および外科的介入を、上記の治療法と併用して適用し得ることも企図される。
【０１１２】
特定の態様では、標準的治療法には化学療法、放射線療法、免疫療法、外科的治療または遺伝子治療が含まれ、本明細書に記載する併用療法と組み合わせて用い得ることが企図される。
【０１１３】
製造品
本開示の他の実施形態では、上に記載した疾患および障害の処置に有用な材料を含む製造品または「キット」を提供する。一実施形態では、キットは、式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の少なくとも１つの化合物および／または１つもしくは複数の薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグまたは代謝産物を含む容器を含む。
【０１１４】
キットは、その容器上またはその容器と関連するラベルまたは添付文書をさらに含むことができる。「添付文書」という用語は、治療用製品の市販パッケージ中に慣用的に添えられる指示を指すのに用いられ、この文書は適応症、使用法、投薬量、投与法、そうした治療用製品の使用に関する禁忌および／または警告についての情報を含む。適切な容器には、例えば瓶、バイアル、シリンジ、ブリスターパック等が含まれる。容器はガラスまたはプラスチックなどの様々な材料で形成させることができる。容器は、その状態を処置するのに効果的である式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物またはその処方物を保持することができ、滅菌したアクセスポートを有することができる（例えば、該容器は皮下注射針で穴が開けられるストッパーを有する静脈内液剤バックまたはバイアルであってよい）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物である。ラベルまたは添付文書は、組成物ががんなどの選択された状態を処置するのに使用されることを表示する。
【０１１５】
ある実施形態では、キットは、２つの別個の薬学的組成物、すなわち：本開示の化合物を含むものと第２の薬学的化合物を含むものを包含する。他の実施形態では、アッセイまたは診断用キットは、本開示の標識された化合物と、インビボまたはインビトロでその標的と結合したとき該標識された化合物を検出するのに必要な１つまたは複数の試薬を包含する。関連する実施形態では、キットは、検出アッセイを実施するのに必要なステップを記載する添付文書を含む。
【０１１６】
他の実施形態では、本開示のキットは、組成物を注入するための、好ましくは滅菌した形態で包装された針または注射器および／または包装されたアルコールパッドをさらに含む。臨床医または患者がハロゲン化スチルベン化合物を投与するための指示が必要に応じて含められる。
【０１１７】
診断方法および診断用プローブ
本開示の他の態様は、リンカー部分（疎水性リンカー、親水性リンカー、光切断可能なリンカー、レドックス反応により切断可能なリンカー）を備えた一般式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）を有する化合物であって、ここで、そのリンカー部分が標識分子（標識はフルオロフォア、ビオチン、種々のポリマービーズおよび異なる反応基であってよい）と共有結合する化合物を提供する。例示的なビオチン化類似体を、図４に示し、以下の実施例３に従って合成した。
【０１１８】
ビオチン化された場合、本開示の化合物は、複合体サンプルからのＭＡＴ２Ａの放射線を用いない検出および定量のための適切な手段を提供し、この手段は慣行的に用いられる放射アッセイに対する有用な代替アプローチを提供する。したがって、本開示の他の態様は、複合タンパク質サンプル中のＭＡＴ２Ａの存在またはレベルを検出または監視するための診断試薬としてのビオチン化されたスチルベン類似体の使用に関する。複合タンパク質サンプルは複数のタンパク質を含み、さらに他の混入物質を含み得る。複合タンパク質サンプルの非限定的な例には、腫瘍組織、生検、血清および細胞抽出物が挙げられる。
【０１１９】
一実施形態では、本開示は、複合タンパク質サンプル中のＭＡＴ２Ａのレベルを検出、監視または分析する方法であって、それによって前記標識された化合物がＭＡＴ２Ａと共有結合的に接合する条件下で式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の標識された化合物を複合タンパク質混合物に加えるステップと；親和性に基づく適切な分離方法によって接合されたＭＡＴ２Ａを単離し、非結合タンパク質を除去し、その分離に続いてＭＡＴ２Ａのレベルを検出するステップとを含む方法に関する。関連する実施形態では、検出を、式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物から放出された蛍光シグナルを測定することによって実施することができる。他の関連実施形態では、検出を、リンカーを介して式（１）〜（ＩＩＩ）の化合物に結合した標識から放出された蛍光シグナルを測定することによって実施することができる。検出ステップは、複合タンパク質混合物を分離し分析するために当業者に公知の種々の分析手順を用いて実施することもできる。これらの分析手順には、クロマトグラフ法、例えばＨＰＬＣ、ＦＰＬＣ、イオン交換、サイズ排除、質量分析などが含まれる。
【０１２０】
検出可能な標識を本開示の化合物に結合させるために使用できるリンカー部分は、図４に示すリンカーのいずれであってもよい。あるいは、リンカー部分は反復アルキレンオキシ構造（ポリエチレングリコールすなわち「ＰＥＧ」）を含むリンカー部分であってよい。したがって、当業者は、ＭＡＴ２Ａに対する本開示の化合物の追加的特異性を提供するために、該化合物のリンカー部分を選択することができる。
【０１２１】
リンカー部分には、とりわけ、エーテル、ポリエーテル、ジアミン、エーテルジアミン、ポリエーテルジアミン、アミド、ポリアミド、ポリチオエーテル、ジスルフィド、シリルエーテル、０〜３個の脂肪族不飽和部位を有するアルキルまたはアルケニル鎖（直鎖または分枝鎖およびその一部は環状であってよい）アリール、ジアリールまたはアルキル−アリール基が含まれる。通常、アミノ酸およびオリゴペプチドは好ましくないが、使用する場合には２〜３個の炭素原子を有するアミノ酸、例えばグリシンおよびアラニンが通常使用される。リンカー部分のアリール基は１個または複数のヘテロ原子（例えば、Ｎ、ＯまたはＳ原子）を含むことができる。上記で参照した原子の数では、別段の指定のない限り、基における原子の数に関して水素は除外される。結合以外である場合、リンカー部分は約１〜６０個の原子、通常１〜３０個の原子を有し、これらの原子にはＣ、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｐ等、特にＣ、ＮおよびＯが含まれ、一般に約１〜１２個の炭素原子および約０〜８個、通常０〜６個のヘテロ原子を有する。
【０１２２】
ある実施形態では、化合物−ＭＡＴ２Ａ複合体が捕捉され、反応混合物の他の構成成分が洗浄により除去されるように、本開示の化合物に関連する検出可能な標識を有することが望ましい。標識は一般に約１ｋＤａ未満である。ビオチン、特に、ビオチンによってストレプトアビジンから容易に置き換えることができるデチオビオチンおよびデイミノビオチンなどの類似体は、慣用的な標識またはリガンドである。しかし、好都合な条件下で捕捉し放出させることができる任意の低分子で十分である。
【０１２３】
生物学的分子、例えばタンパク質の親和性精製は当該技術分野で公知であり、分子結合パートナーに対する標的分子の結合親和性を利用することによって分子の精製を可能にする。親和性精製法の例は、融合タグタンパク質精製、アビジン−ビオチン系、プルダウンアッセイなどである。
【０１２４】
他の実施形態では、本開示は、被験体におけるがんを診断する方法であって：（１）式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の標識された化合物を、患者から得られた複合タンパク質サンプル中のタンパク質と接触させてその化合物をサンプル中のＭＡＴ２Ａタンパク質と結合させ、該タンパク質を検出するステップと；（２）サンプル中のＭＡＴ２Ａのレベルを正常な対照標準サンプル中のそれと比較し、サンプル中のＭＡＴ２Ａのレベルが正常な対照標準サンプル中のそれより統計的に高い場合、がんの診断が示されるステップとを含む方法に関する。関連する実施形態では、そのサンプルは、例えば乳がん細胞、前立腺がん細胞、結腸直腸がん細胞、肺がん細胞、結腸がん細胞、膀胱がん細胞、頭頸部がん細胞、腸がん細胞、卵巣がん細胞または皮膚がん細胞から選択されるがん細胞を含む生検サンプルである。
【０１２５】
他の実施形態では、本開示は、本開示の化合物での処置を受けるための候補者である被験体を特定する方法であって；（１）被験体からタンパク質サンプルを得るステップと；（２）検出可能に標識された式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物を複合タンパク質サンプル中に存在するタンパク質と接触させ、前記サンプル中のＭＡＴ２Ａに結合させてそれを検出するステップと；（３）サンプル中のＭＡＴ２Ａのレベルを正常な対照標準サンプル中に存在するＭＡＴ２Ａと比較し、サンプル中のＭＡＴ２Ａのレベルが正常な対照標準のそれより統計的に高い場合、被験体が本開示の１つまたは複数の化合物で処置するための候補者であることが指示されるステップとを含む方法に関する。関連する実施形態では、タンパク質サンプルは生検サンプル、組織サンプル、血清サンプル、尿サンプルなどである。必要なら、タンパク質分離キットなどの慣用的なツールを、未加工の生検（ｒａｗ  ｂｉｏｐｓｙ）、組織、血液または尿サンプルからタンパク質サンプルを得るために使用することができる。他の関連実施形態では、標識された化合物は式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）のビオチン化された化合物である。
【実施例】
【０１２６】
以下の実施例は本開示の特定の好ましい実施形態をさらに例示するためであり、現実には、限定するものではない。当業者は、慣行的実験しか用いないで、本明細書に記載する特定の物質および手順に対する多くの均等物を理解し、また確認することができる。
【０１２７】
（実施例１）
スチルベン類似体の合成
材料および方法：化学物質はＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ（４ｃ）もしくはＴＣＩ（４ｄ）から購入するか、または文献の手順に従って合成した。溶媒は、別段の記載のない限り、さらに精製することなく市場の供給業者からのものを使用した。核磁気共鳴スペクトルはＶａｒｉａｎ装置を用いて測定した（別段の記載のない限り１Ｈ、４００ＭＨｚ；１３Ｃ、１００ＭＨｚ）。ＬＲＭＳ電子衝撃（ＥＩ）イオン化質量スペクトルをＴｈｅｒｍｏＦｉｎｎｉｇａｎ  ＰｏｌａｒｉｓＱ（イオントラップ質量分析計）を用いて７０ｅＶで記録した。サンプルを加熱可能な直接プローブ注入口を経由して導入した。高分解能電子衝撃（ＥＩ）イオン化質量スペクトルを、ＪＥＯＬ  ＪＭＳ−７００Ｔ  ＭＳｔａｔｉｏｎ（磁気セクタ装置）を用いて２５ｅＶで、１０，０００超の分解能で記録した。サンプルを加熱可能な直接プローブ注入口を経由して導入した。対照標準質量を得るためにペルフルオロケロセン（ｐｆｋ）を使用した。ＭＡＬＤＩ質量スペクトルは、ＤＨＢ（２，５−ジヒドロキシ安息香酸）マトリックスを用いてＢｒｕｋｅｒ  Ｕｔｒａｆｌｅｘｓｔｒｅｍｅ飛行時間型質量分析計（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）で得た。化合物の純度は燃焼分析で確立して９５％超であった。元素分析はＡｔｌａｎｔｉｃ  Ｍｉｃｒｏｌａｂｓ、Ｉｎｃ．、Ｎｏｒｃｒｏｓｓ、ＧＡで測定した。化合物は、別段の指定のない限り、分取層ＭｅｒｃｋシリカゲルＦ２５４によるクロマトグラフィーを行なった。
【０１２８】
基本手順Ａ。−７８℃で４ｍＬの無水ＴＨＦ中に懸濁させた１．５ｍｍｏｌのトリフェニルホスホニウムブロミドに、２．２５ｍｍｏｌ（１．５当量（ｅｑ））のｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中に１．６Ｍ）を加えた。この反応の基本的な概略図については図２を参照されたい。この混合物を３０分間かけて２５℃に加温し、１ｍＬの無水ＴＨＦ中の２．２５ｍｍｏｌのアルデヒドを加えた。混合物を２４時間撹拌し、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させた。生成物を、以下に挙げた個々のスチルベンについて注記したようにして、クロマトグラフィーおよび／または再結晶化により精製した。
【０１２９】
基本手順Ｂ。４ｍＬの無水ＤＭＦ中の１．５ｍｍｏｌのホスホン酸ジエチルの０℃での溶液に、２．２５ｍｍｏｌ（１．５ｅｑ）のＮａＨ（ヘキサンで洗浄して油分を除去した）を加えた。この反応の基本的な概略図については図２を参照されたい。混合物を２０分間撹拌し、１ｍＬの無水ＤＭＦ中の１．５ｍｍｏｌのアルデヒドを滴下添加した。混合物を２５℃で２４時間撹拌し、氷でクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させた。生成物を、以下に挙げた個々のスチルベンについて注記したようにして、クロマトグラフィーおよび／または再結晶化により精製した。
【０１３０】
（Ｅ）−４−ヒドロキシスチルベン（４ａ）の合成。７ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中の２１０ｍｇ（１ｍｍｏｌ）の（Ｅ）−４−メトキシスチルベン（４ｂ）に−１０℃でのジクロロメタン中の１．２８ｍＬの１Ｍ  ＢＢｒ３（１．３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を−５℃で４時間撹拌し、冷水に注加してクエンチした。生成物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、１：１０  ＣＨ３ＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２を用いるクロマトグラフィーを行い８５ｍｇ（４３％）の４ａを得た。ｍｐ１８４〜１８５℃。
【０１３１】
（Ｅ）−４−メトキシスチルベン（４ｂ）の合成。手順Ｂ。収率８７％。無色結晶：ｍｐ１３６〜１３７℃。
【０１３２】
（Ｅ）−４−（２−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン（４ｅ）の合成。手順Ｂ。収率８４％。アセトニトリルからの淡黄色結晶。ｍｐ１２４〜１２６℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  ７．７３−７．６８  （ｍ，  １Ｈ），  ７．４６  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ７．２６−７．０９  （ｍ，  ４Ｈ），  ７．０８  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．８Ｈｚ），  ６．７５  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝９．２Ｈｚ），  ２．９８  （ｓ，  ６Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  １６０．１８  （ｄ，  Ｊ＝２４５．９Ｈｚ），  １５０．８５，  １３１．６７  （ｄ，  Ｊ＝４．６Ｈｚ），  １２８．０８  （ｄ，  Ｊ＝８．４Ｈｚ），  １２７．９３  （Ｃ２個），  １２６．８  （ｄ，  Ｊ＝４．５Ｈｚ），  １２６．１４  （ｄ，  Ｊ＝１２．１Ｈｚ），  １２５．４６，  １２４．５９  （ｄ，  Ｊ＝３．１Ｈｚ），  １１５．６４  （ｄ，  Ｊ＝２２．０Ｈｚ），  １１５．４９  （ｄ，  Ｊ＝４．６Ｈｚ），  １１２．４４  （Ｃ２個），  ３９．６９  （Ｃ２個）。  ＭＳ：ｍ／ｚ（％）２４１（１００）、２４０（７４）、２２５（３２）、１９７（２０）、１９６（２０）、１７７（１８）、１７６（１３）。分析。Ｃ１６Ｈ１６ＦＮについての計算値：Ｃ、７９．６４；Ｈ、６．６８。実測値：Ｃ、７９．７７；Ｈ、６．８０。
【０１３３】
（Ｅ）−４−（３−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン（４ｆ）の合成。手順Ｂ。収率６５％。アセトニトリルからの淡黄色結晶。ｍｐ１４７〜１４８℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  ７．４２  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．４Ｈｚ），  ７．３５−７．２５  （ｍ，  ３Ｈ），  ７．１７  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．４Ｈｚ），  ６．９６  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．８Ｈｚ），  ６．９３−６．８８  （ｍ，  １Ｈ），  ６．７２  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ２．９５  （ｓ，  ６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  １６３．４７  （ｄ，  Ｊ＝２４１．４Ｈｚ），  １５０．８２，  １４１．３６  （ｄ，  Ｊ＝７．６Ｈｚ），  １３０．６６，  １３０．４２  （ｄ，  Ｊ＝８．４Ｈｚ），  １２７．９７  （Ｃ２個），  １２５．２２，  １２２．６３  （ｄ，  Ｊ＝２．２Ｈｚ），  １２２．２４  （ｄ，  Ｊ＝２．２Ｈｚ），  １１３．１２  （ｄ，  Ｊ＝２１．３Ｈｚ），  １１２．４３  （Ｃ２個），  １１１．９６  （ｄ，  Ｊ＝２２．０Ｈｚ），  ３９．６９  （Ｃ２個）。ＭＳ：ｍ／ｚ（％）２４１（１００）、２４０（６９）、２２５（２５）、１９７（２０）、１９６（１８）、１７７（１６）、１７６（１０）。分析。Ｃ１６Ｈ１６ＦＮについての計算値：Ｃ、７９．６４；Ｈ、６．６８。実測値：Ｃ、７９．８６；Ｈ、６．６７。
【０１３４】
（Ｅ）−４−（４−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン（４ｇ）の合成。手順Ｂ。収率６４％。アセトニトリルからの淡黄色結晶。ｍｐ１９７〜１９８℃。分析。Ｃ１６Ｈ１６ＦＮについての計算値：Ｃ、７９．６４；Ｈ、６．６８。実測値：Ｃ、７９．８５；Ｈ、６．６４。
【０１３５】
（Ｅ）−４−（２−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン（４ｈ）の合成。手順Ｂ。収率５１％。ヘキサンからの淡黄色結晶。ｍｐ７８〜７９℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  ７．６９−７．６５  （ｍ，  １Ｈ），  ７．４０  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ７．２４−７．０８  （ｍ，  ４Ｈ），  ７．０４  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．４Ｈｚ），  ６．７１  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ３．４２  （ｑ，  ４Ｈ，  Ｊ＝７．２Ｈｚ），  １．１６  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ＝７．２Ｈｚ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  １６０．１３  （ｄ，  Ｊ＝２４２．２Ｈｚ），  １４８．０４，  １３１．７３  （ｄ，  Ｊ＝４．５Ｈｚ），  １２８．２４  （Ｃ２個），  １２７．９１  （ｄ，  Ｊ＝７．６Ｈｚ），  １２６．７０  （ｄ，  Ｊ＝４．５Ｈｚ），  １２６．２７  （ｄ，  Ｊ＝１１．４Ｈｚ），  １２４．５７  （ｄ，  Ｊ＝３．８Ｈｚ），  １２４．４９，  １１５．６２  （ｄ，  Ｊ＝２２．０Ｈｚ），  １１４．８２  （ｄ，  Ｊ＝３．８Ｈｚ），  １１１．７６  （Ｃ２個），  ４４．１９  （Ｃ２個），  １２．２１  （Ｃ２個）。ＭＳ：ｍ／ｚ（％）２６９（３４）、２５５（１９）、２５４（１００）、２２６（２２）、２２５（２０）、１９７（１６）、１９６（１７）。分析。Ｃ１８Ｈ２０ＦＮについての計算値：Ｃ、８０．２６；Ｈ、７．４８。実測値：Ｃ、８０．０７；Ｈ、７．６１。
【０１３６】
（Ｅ）−４−（２−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジフェニルアニリン（４ｉ）の合成。手順Ｂ。収率６０％。ヘキサンからの淡黄色結晶。ｍｐ１１４〜１１５℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  ７．７７−７．７３  （ｍ，  １Ｈ），  ７．５４  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．４Ｈｚ），  ７．３４−７．０６ （ｍ，  １５Ｈ），  ７．０２  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  １６０．３９  （ｄ，  Ｊ＝２４５．９Ｈｚ），  １４８．００，  １４７．７３，  １３１．５８，  １３０．８７  （ｄ，  Ｊ＝４．５Ｈｚ），  １２９．６３，  １２８．９０  （ｄ，  Ｊ＝８．３Ｈｚ），  １２７．８８，  １２７．２３  （ｄ，  Ｊ＝３．８Ｈｚ），  １２５．５８  （ｄ，  Ｊ＝１２．０Ｈｚ），  １２４．７５，  １２４．７１，  １２３．５３，  １２３．２５，  １１８．７８  （ｄ，  Ｊ＝３．８Ｈｚ），  １１５．７６  （ｄ，  Ｊ＝２２．０Ｈｚ）。ＭＳ：ｍ／ｚ（％）３６５（１００）、３６４（１２）、２５４（１３）。分析。Ｃ２６Ｈ２０ＦＮについての計算値：Ｃ、８５．４５；Ｈ、５．５２。実測値：Ｃ、８５．５９；Ｈ、５．６９。
【０１３７】
（Ｅ）−１−（４−（２−フルオロスチリル）フェニル）−４−メチルピペラジン（４ｊ）の合成。手順Ｂ。収率６５％。アセトニトリルからの淡黄色結晶。ｍｐ１４２〜１４４℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  ７．７２−７．６９  （ｍ，  １Ｈ），  ７．４８  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ７．２８−７．０９  （ｍ，  ５Ｈ），  ６．９６  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ３．２２  （ｔ，  ４Ｈ，  Ｊ＝５．２Ｈｚ），  ２．４８  （ｔ，  ４Ｈ，  Ｊ＝５．２Ｈｚ），  ２．５４  （ｓ，  ３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  １６０．２７  （ｄ，  Ｊ＝２４５．２Ｈｚ），  １５１．５９，  １３１．３４  （ｄ，  Ｊ＝５．３Ｈｚ），  １２８．４２  （ｄ，  Ｊ＝８．４Ｈｚ），  １２７．９７，  １２７．８１  （Ｃ２個），  １２６．９８  （ｄ，  Ｊ＝３．８Ｈｚ），  １２５．９０  （ｄ，  Ｊ＝１２．１Ｈｚ），  １２６．６２  （ｄ，  Ｊ＝３．８Ｈｚ），  １１６．８５  （ｄ，  Ｊ＝３．８Ｈｚ），  １１５．６９  （ｄ，  Ｊ＝２２．０Ｈｚ），  １１５．４６  （Ｃ２個），  ５５．０９  （Ｃ２個），  ４８．３４  （Ｃ２個），  ４５．７０。ＭＳ：ｍ／ｚ（％）２９６（１００）、２８１（４２）、２２６（２４）、２１１（４６）、１９７（２８）、１９６（４２）、１７７（２８）。分析。Ｃ１９Ｈ２１ＦＮ２についての計算値：Ｃ、７７．００；Ｈ、７．１４。実測値：Ｃ、７７．２２；Ｈ、７．４９。
【０１３８】
（Ｅ）−４−（２−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルナフタレン−１−アミン（４ｋ）の合成。手順Ｂ。収率１８％。ヘキサンからの黄色結晶：Ｅｔ２Ｏ。ｍｐ５６〜５８℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  ８．３３−８．２７  （ｍ，  ２Ｈ），  ８．０９  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．４Ｈｚ），  ７．９５−７．９１  （ｍ，  １Ｈ），  ７．８０  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝８．０Ｈｚ），  ７．５８−７．５２  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．３６−７．１５  （ｍ，  ４Ｈ），  ７．２８  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．４Ｈｚ），  ２．９０  （ｓ，  ６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲｍ（アセトン−ｄ６）：  δ  １６０．４９  （ｄ，  Ｊ＝２４６．７Ｈｚ），  １５１．６６，  １３２．８５，  １２９．４１，  １２９．１０  （ｄ，  Ｊ＝８．４Ｈｚ），  １２８．９２，  １２８．３８  （ｄ，  Ｊ＝４．６Ｈｚ），  １２７．６７  （ｄ，  Ｊ＝３．８Ｈｚ），  １２６．２７，  １２５．７８  （ｄ，  Ｊ＝１２．２Ｈｚ），  １２５．１７，  １２４．９２，  １２４．７４  （ｄ，  Ｊ＝３．０Ｈｚ），  １２４．２５，  １２４．０３，  １２１．７５  （ｄ，  Ｊ＝３．８Ｈｚ），  １１５．７８  （ｄ，  Ｊ＝２２．０Ｈｚ），  １１４．１９，  ４４．６２。ＭＳ：ｍ／ｚ（％）２９１（１００）、２９０（２８）、２７６（７０）、２６１（４０）、２４７（２２）、２４６（１５）。分析。Ｃ２０Ｈ１８ＦＮについての計算値：Ｃ、８２．４５；Ｈ、６．２３。実測値：Ｃ、８２．４２；Ｈ、６．２２。
【０１３９】
（Ｅ）−２−（４−（２−フルオロスチリル）フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール（４ｌ）の合成。手順Ｂ。収率４７％。ヘキサンからの無色結晶。ｍｐ６０〜６１℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  ７．８２−７．７８  （ｍ，  １Ｈ），  ７．６５  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．０Ｈｚ），  ７．３５−７．２９  （ｍ，  １Ｈ），  ７．２６  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．０Ｈｚ），  ７．２２−７．１３  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．０８  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１．２Ｈｚ），  ６．９６  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝０．８Ｈｚ），  ３．８１  （ｓ，  ３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  １６０．６５  （ｄ，  Ｊ＝２４６．７Ｈｚ），  １４５．３９，  １２９．５３  （ｄ，  Ｊ＝８．３Ｈｚ），  １２８．８９，  １２７．６６  （ｄ，  Ｊ＝３．０Ｈｚ），  １２４．９８  （ｄ，  Ｊ＝１１．４Ｈｚ），  １２４．７１  （ｄ，  Ｊ＝３．８Ｈｚ），  １２２．７３  （ｄ，  Ｊ＝３．８Ｈｚ），  １２２．１８，  １１６．９９  （ｄ，  Ｊ＝５．３Ｈｚ），  １１５．８３  （ｄ，  Ｊ＝２２．０Ｈｚ），  ３２．０４。ＭＳ：ｍ／ｚ（％）２０２（１７）、２０１（５９）、１８６（２０）、１８３（１００）、１６８（２５）、１４６（１６）、１２８（１７）。分析。Ｃ１２Ｈ１１ＦＮ２についての計算値：Ｃ、７１．２７；Ｈ、５．４８。実測値：Ｃ、７１．２４；Ｈ、５．６１。
【０１４０】
（Ｅ）−４−（２，３−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン（４ｍ）の合成。手順Ａ。収率８８％。黄色結晶。ｍｐ１３２〜１３３℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  ７．５０−７．４３  （ｍ，  ３Ｈ），  ７．２４  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．４Ｈｚ），  ７．１６−７．０７  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．０３  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．４Ｈｚ），  ６．７３  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ２．９６  （ｓ，  ６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  １５１．０９，  １５１．０２  （ｄｄ，  Ｊ１＝２４３．６Ｈｚ，  Ｊ２＝１２．９Ｈｚ），  １４７．８７  （ｄｄ，  Ｊ１＝２４６．３Ｈｚ，  Ｊ２＝１２．９Ｈｚ，）  １３３．１８  （ｄ，  Ｊ＝５．３Ｈｚ），  １２８．１９  （Ｃ２個），  １２４．９５，  １２４．５６  （ｄｄ，  Ｊ１＝７．６Ｈｚ，  Ｊ２＝４．５Ｈｚ，  Ｃ２個），  １２１．７８  （ｔ，  Ｊ＝３．０Ｈｚ），  １１４．６５  （ｄ，  Ｊ＝１７．４Ｈｚ），  １１４．２４  （ｔ，  Ｊ＝３．８Ｈｚ），  １１２．３８  （Ｃ２個），  ３９．６４  （Ｃ２個）。ＭＳ：ｍ／ｚ（％）２５９（１００）、２５８（７８）、２４３（２５）、２１４（１６）、１９５（１６）。分析。Ｃ１６Ｈ１５Ｆ２Ｎについての計算値：Ｃ、７４．１１；Ｈ、５．８３。実測値：Ｃ、７４．０１；Ｈ、５．７１。
【０１４１】
（Ｅ）−４−（２，４−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン（４ｎ）の合成。手順Ｂ。収率５８％。アセトニトリルからの黄色結晶。ｍｐ１３９〜１４０℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  ７．７８−７．７２  （ｍ，  １Ｈ），  ７．４４  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．４Ｈｚ），  ７．１７  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．４Ｈｚ），  ７．０４−６．９７  （ｍ，  ３Ｈ），  ６．７５  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝９．２Ｈｚ），  ２．９８  （ｓ，  ６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  １６１．６５  （ｄｄ，  Ｊ１＝２４５．２Ｈｚ，  Ｊ２＝１２．１Ｈｚ），  １６０．００  （ｄｄ，  Ｊ１＝２４８．６Ｈｚ，  Ｊ２＝１２．１Ｈｚ，）  １５０．８７，  １３１．５４  （ｄｄ，  Ｊ１＝４．５Ｈｚ，  Ｊ２＝２．３Ｈｚ），  １２７．８９  （Ｃ２個），  １２５．３４，  １２２．８４  （ｄｄ，  Ｊ１＝１２．１Ｈｚ，  Ｊ２＝３．８Ｈｚ），  １１４．５６  （ｔ，  Ｊ＝１．６Ｈｚ），  １１２．４３  （Ｃ２個），  １１１．７３  （ｄｄ，  Ｊ１＝２１．３Ｈｚ，  Ｊ２＝３．８Ｈｚ，  Ｃ２個），  １０３．８５  （ｔ，  Ｊ＝２６．２Ｈｚ），  ３９．６８  （Ｃ２個）。ＭＳ：ｍ／ｚ（％）２５９（１００）、２５８（７１）、２４３（３０）、２１５（１５）、１９５（１４）。分析。Ｃ１６Ｈ１５Ｆ２Ｎについての計算値：Ｃ、７４．１１；Ｈ、５．８３。実測値：Ｃ、７４．２５；Ｈ、５．７７。
【０１４２】
（Ｅ）−４−（２，５−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン（４ｏ）の合成。手順Ａ。収率７７％。黄色結晶。ｍｐ１４６〜１４７℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  ７．５１−７．４６  （ｍ，  ３Ｈ），  ７．２８  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．４Ｈｚ），  ７．１８−７．１２  （ｍ，  １Ｈ），  ７．０３  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．４Ｈｚ），  ７．００−６．９５  （ｍ，  １Ｈ），  ６．７６  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ２．９９  （ｓ，  ６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  １５９．２８  （ｄｄ，  Ｊ＝２３６．０Ｈｚ），  １５６．２２  （ｄｄ，  Ｊ＝２４１．４Ｈｚ），  １５１．０９，  １３３．０４  （ｄ，  Ｊ＝３．８Ｈｚ），  １２８．２１  （Ｃ２個），  １２４．９４，  １１６．９７  （ｄｄ，  Ｊ１＝２５．５Ｈｚ，  Ｊ２＝９．６Ｈｚ，  Ｃ２個），  １１４．０８  （ｄｄ，  Ｊ１＝２４．７Ｈｚ，  Ｊ２＝８．７Ｈｚ，  Ｃ２個），  １１２．３８  （Ｃ２個），  １１２．１２  （ｄ，  Ｊ＝４．５Ｈｚ），  ３９．６４  （Ｃ２個）。ＭＳ：ｍ／ｚ（％）２５９（１００）、２５８（８４）、２４３（２９）、２１５（１８）、１９５（１７）。分析。Ｃ１６Ｈ１５Ｆ２Ｎについての計算値：Ｃ、７４．１１；Ｈ、５．８３。実測値：Ｃ、７４．６３；Ｈ、５．９０。
【０１４３】
（Ｅ）−２−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン（４ｐ）の合成。手順Ｂ。収率９２％。黄色油状物。１Ｈ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  ７．７８  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．８Ｈｚ），  ７．６５  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ１＝７．６Ｈｚ，  Ｊ２＝１．６Ｈｚ），  ７．３６−７．２６  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．１２−７．０３  （ｍ，  ５Ｈ），  ２．７４  （ｓ，  ６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  １６１．０６  （ｄｄ，  Ｊ１＝２４２．２Ｈｚ，  Ｊ２＝７．６Ｈｚ，  Ｃ２個），  １５２．７７，  １３３．８１  （ｔ，  Ｊ＝８．０Ｈｚ），  １３１．２５，  １２９．１９，  １２８．５９  （ｔ，  Ｊ＝１１．０Ｈｚ），  １２６．７２，  １２２．６５，  １１８．４６，  １１５．３１  （ｔ，  Ｊ＝１５．６Ｈｚ），  １１３．８４，  １１１．９２  （ｄｄ，  Ｊ１＝１９．４Ｈｚ，  Ｊ２＝６．８Ｈｚ，  Ｃ２個），  ４４．３１  （Ｃ２個）。ＭＳ：ｍ／ｚ（％）２５９（１００）、２５８（１４）、１３２（８）。分析。Ｃ１６Ｈ１５Ｆ２Ｎについての計算値：Ｃ、７４．１１；Ｈ、５．８３。実測値：Ｃ、７４．３８；Ｈ、５．７９。
【０１４４】
（Ｅ）−３−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン（４ｑ）の合成。手順Ｂ。収率５３％。ヘキサンからの無色結晶。ｍｐ６９〜７１℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  ７．３８  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．８Ｈｚ），  ７．３３−７．２６  （ｍ，  １Ｈ），  ７．２１−７．１８  （ｍ，  １Ｈ），  ７．１１  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１７．２Ｈｚ），  ７．０７−７．００  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．９３−６．９１  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．７２−６．６９  （ｍ，  １Ｈ），  ２．９６  （ｓ，  ６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  １６１．０３  （ｄｄ，  Ｊ１＝２４８．２Ｈｚ，  Ｊ２＝７．６Ｈｚ，  Ｃ２個），  １５１．３８，  １３８．０３，  １３６．８３  （ｔ，  Ｊ＝８．０Ｈｚ），  １２９．４６，  １２８．７０  （ｔ，  Ｊ＝１１．０Ｈｚ），  １１４．８７  （ｔ，  Ｊ＝１６．０Ｈｚ），  １１４．８１，  １１４．０９，  １１２．９８，  １１１．９１  （ｄｄ，  Ｊ１＝１９．４Ｈｚ，  Ｊ２＝６．５Ｈｚ，  Ｃ２個），  １１１．２１，  ３９．９３  （Ｃ２個）。ＭＳ：ｍ／ｚ（％）２５９（１００）、２５８（５２）、２３９（３１）、２３８（３３）、２２３（１６）、２２２（３７）。分析。Ｃ１６Ｈ１５Ｆ２Ｎについての計算値：Ｃ、７４．１１；Ｈ、５．８３。実測値：Ｃ、７４．３０；Ｈ、５．７８。
【０１４５】
（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン（４ｒ）の合成。手順Ｂ。収率９４％。ヘキサンからの薄黄色結晶。ｍｐ１１２〜１１３℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  ７．４５  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．４Ｈｚ），  ７．３５  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．８Ｈｚ），  ７．２７−７．２０  （ｍ，  １Ｈ），  ７．０１−６．９８  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．９１  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１６．８Ｈｚ），  ６．７５  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝９．２Ｈｚ），  ２．９８  （ｓ，  ６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  １６０．８２  （ｄｄ，  Ｊ１＝２４７．９Ｈｚ，  Ｊ２＝８．０Ｈｚ，  Ｃ２個），  １５１．１０，  １３５．９９  （ｔ，  Ｊ＝８．３Ｈｚ），  １２７．９７  （Ｃ２個），  １２７．５７  （ｔ，  Ｊ＝１１．３Ｈｚ），  １２５．４１，  １１５．５０  （ｔ，  Ｊ＝１６．０Ｈｚ），  １１２．４０  （Ｃ２個），  １１１．７９  （ｄｄ，  Ｊ１＝１９．０Ｈｚ，  Ｊ２＝６．８Ｈｚ，  Ｃ２個），  １０９．７３，  ３９．６５  （Ｃ２個）。ＭＳ：ｍ／ｚ（％）２５９（１００）、２５８（７１）、２４３（２５）、１９５（１１）。分析。Ｃ１６Ｈ１５Ｆ２Ｎについての計算値：Ｃ、７４．１１；Ｈ、５．８３。実測値：Ｃ、７４．０８；Ｈ、５．７９。
【０１４６】
（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン（４ｓ）の合成。手順Ｂ。収率５７％。ヘキサンからの黄色結晶。ｍｐ７０〜７１℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  ７．４３  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．４Ｈｚ），  ７．３４  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．８Ｈｚ），  ７．２７−７．２０  （ｍ，  １Ｈ），  ７．０１−６．９８  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．８９  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．８Ｈｚ），  ６．７２  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ３．４３  （ｑ，  ４Ｈ，  Ｊ＝７．２Ｈｚ），  １．１６  （ｔ，  ６Ｈ，  Ｊ＝７．２Ｈｚ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  １６０．８０  （ｄｄ，  Ｊ１＝２４７．１Ｈｚ，  Ｊ２＝８．０Ｈｚ，  Ｃ２個），  １４８．３０，  １３６．０７  （ｔ，  Ｊ＝８．３Ｈｚ），  １２８．２９  （Ｃ２個），  １２７．３７  （ｔ，  Ｊ＝１０．６Ｈｚ），  １２４．４５，  １１５．６２  （ｔ，  Ｊ＝１６．０Ｈｚ），  １１１．７８  （ｄｄ，  Ｊ１＝１９．０Ｈｚ，  Ｊ２＝６．８Ｈｚ，  Ｃ２個），  １１１．７３  （Ｃ２個），  １０９．０７，  ４４．２０  （Ｃ２個），  １２．２０  （Ｃ２個）。ＭＳ：ｍ／ｚ（％）２８７（４４）、２７２（１００）、２４４（２１）、２４３（１５）。分析。Ｃ１８Ｈ１９Ｆ２Ｎについての計算値：Ｃ、７５．２４；Ｈ、６．６６。実測値：Ｃ、７５．１２；Ｈ、６．７９。
【０１４７】
（Ｅ）−４−（３，４−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン（４ｔ）の合成。手順Ａ。収率５９％。ヘキサンからの黄色結晶。ｍｐ１５９〜１６０℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  ７．５０−７．４４  （ｍ，  １Ｈ），  ７．４１  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ７．３２−７．２８  （ｍ，  １Ｈ），  ７．２７−７．２０  （ｍ，  １Ｈ），  ７．１１  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．０Ｈｚ），  ６．９２  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．４Ｈｚ），  ６．７１  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ２．９５  （ｓ，  ６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  １５０．８２，  １５０．５６  （ｄｄ，  Ｊ１＝２４３．９Ｈｚ，  Ｊ２＝１２．９Ｈｚ），  １４８．９９  （ｄｄ，  Ｊ１＝２４４．３Ｈｚ，  Ｊ２＝１２．９Ｈｚ），  １３０．５５  （ｄ，  Ｊ＝３．０Ｈｚ），  １２７．９１  （Ｃ２個），  １２５．１６，  １２２．７１  （ｄ，  Ｊ＝６．１Ｈｚ），  １２２．６８  （ｄ，  Ｊ＝６．１Ｈｚ），  １２１．６８  （ｄ，  Ｊ＝２．３Ｈｚ），  １１７．４９  （ｄ，  Ｊ＝１７．４Ｈｚ），  １１３．９６  （ｄ，  Ｊ＝１７．５Ｈｚ），  １１２．４３  （Ｃ２個），  ３９．６８  （Ｃ２個）。ＭＳ：ｍ／ｚ（％）２５９（１００）、２５８（８２）、２４３（３６）、２１５（２２）、１９５（１６）。分析。Ｃ１６Ｈ１５Ｆ２Ｎについての計算値：Ｃ、７４．１１；Ｈ、５．８３。実測値：Ｃ、７４．２４；Ｈ、５．７９。
【０１４８】
（Ｅ）−４−（３，５−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン（４ｕ）の合成。手順Ａ。収率５１％。黄色結晶。ｍｐ１３６〜１３７℃。分析。Ｃ１６Ｈ１５Ｆ２Ｎについての計算値：Ｃ、７４．１１；Ｈ、５．８３。実測値：Ｃ、７４．３８；Ｈ、５．７０。
【０１４９】
（Ｅ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−（２，３，６−トリフルオロスチリル）アニリン（４ｖ）の合成。手順Ｂ。収率４５％。ヘキサンからの淡黄色結晶。ｍｐ９１〜９２℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  ７．４８  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝９．２Ｈｚ），  ７．３９  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．８Ｈｚ），  ７．２２−７．１４  （ｍ，  １Ｈ），  ７．０６−７．００  （ｍ，  １Ｈ），  ６．８９  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．８Ｈｚ），  ６．７６  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．０Ｈｚ），  ３．００  （ｓ，  ６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  １５６．０９  （ｄｄｄ，  Ｊ１＝２４３．９Ｈｚ，  Ｊ２＝５．３Ｈｚ，  Ｊ３＝２．４Ｈｚ），  １５１．３１，  １４７．９４  （ｍ，  Ｃ２個），  １３７．１７  （ｔ，  Ｊ＝８．４Ｈｚ），  １２８．２３  （Ｃ２個），  １２４．８９，  １１７．４３  （ｄｄ，  Ｊ１＝１７．１Ｈｚ，  Ｊ２＝１２．１Ｈｚ），  １１４．０２  （ｄｄ，  Ｊ１＝１９．４Ｈｚ，  Ｊ２＝１０．２Ｈｚ），  １１２．３３  （Ｃ２個），  １１１．２１  （ｄｄｄ，  Ｊ１＝２５．５Ｈｚ，  Ｊ２＝７．６Ｈｚ，  Ｊ３＝３．８Ｈｚ），  １０８．９９，  ３９．５９  （Ｃ２個）。ＭＳ：ｍ／ｚ（％）２７７（１００）、２７６（８３）、２６１（２４）、２１４（１６）、２１３（１２）。分析。Ｃ１６Ｈ１４Ｆ３Ｎについての計算値：Ｃ、６９．３０；Ｈ、５．０９。実測値：Ｃ、６９．５０；Ｈ、４．９７。
【０１５０】
（Ｅ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−（２，４，６−トリフルオロスチリル）アニリン（４ｗ）の合成。手順Ｂ。収率６３％。ヘキサンからの淡黄色結晶。ｍｐ１２７〜１２８℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  ７．４５  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ７．２９  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．８Ｈｚ），  ６．９１  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ６．８３  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．８Ｈｚ），  ６．７５  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ２．９９  （ｓ，  ６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  １６０．８７  （ｍ，  Ｃ３個），  １５１．０９，  １３５．５９  （ｍ，  Ｃ２個），  １２７．９５  （Ｃ２個），  １２５．２５，  １１２．３９  （Ｃ２個），  １０８．８０，  １００．６５  （ｄｄ，  Ｊ１＝３０．７  Ｈｚ，  Ｊ２＝２５．８Ｈｚ，  Ｃ２個），  ３９．６４  （Ｃ２個）。ＭＳ：ｍ／ｚ（％）２７７（１００）、２７６（７５）、２６１（２９）。分析。Ｃ１６Ｈ１４Ｆ３Ｎについての計算値：Ｃ、６９．３０；Ｈ、５．０９。実測値：Ｃ、６９．４９；Ｈ、４．９９。
【０１５１】
（Ｅ）−４−（２−クロロ−６−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン（４ｘ）の合成。手順Ｂ。収率９０％。黄色結晶、ヘキサンからの結晶。ｍｐ４２〜４４℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  ７．４３  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ７．３６−７．３３  （ｍ，  １Ｈ），  ７．２７−７．１３  （ｍ，  ３Ｈ），  ６．９４  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．８Ｈｚ），  ６．７３  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ２．９５  （ｓ，  ６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  １６０．７４  （ｄ，  Ｊ＝２４９．１Ｈｚ），  １５１．０２，  １３６．８７  （ｄ，  Ｊ＝１２．１Ｈｚ），  １３３．３５  （ｄ，  Ｊ＝６．１Ｈｚ），  １２８．５１  （ｄ，  Ｊ＝１０．１Ｈｚ），  １２８．３１  （Ｃ２個），  １２６．２８  （ｄ，  Ｊ＝３．４Ｈｚ），  １２４．７２，  １２４．５９  （ｄ，  Ｊ＝１４．８Ｈｚ），  １１５．５５  （ｄ，  Ｊ＝２３．５Ｈｚ），  １１３．９１  （ｄ，  Ｊ＝２．１Ｈｚ），  １１２．５８  （Ｃ２個），  ４０．３０  （Ｃ２個）。ＭＳ：ｍ／ｚ（％）２７７（３７）、２７６（３６）、２７５（１００）、２７４（３１）、２２５（１９）。分析。Ｃ１６Ｈ１５ＣｌＦＮについての計算値：Ｃ、６９．６９；Ｈ、５．４８。実測値：Ｃ、６９．６８；Ｈ、５．６１。
【０１５２】
（Ｅ）−４−（２，６−ジクロロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン（４ｙ）の合成。手順Ｂ。収率７８％。ヘキサンからの黄色結晶。ｍｐ９６〜９７℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  ７．４８−７．４４  （ｍ，  ４Ｈ），  ７．２５−７．２１  （ｍ，  １Ｈ），  δ  ７．１１  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．８Ｈｚ），  ６．９４  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．４Ｈｚ），  ６．７７  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ２．９９  （ｓ，  ６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  １５１．１９，  １３７．６３，  １３５．３６，  １３４．１８，  １２８．９７  （Ｃ２個），  １２８．１８  （Ｃ２個），  １２８．０２  （Ｃ２個），  １２４．７９，  １１７．４０，  １１２．４１  （Ｃ２個），  ３９．６８  （Ｃ２個）。ＭＳ：ｍ／ｚ（％）２９３（６５）、２９２（３２）、２９１（１００）、２２１（４０）、２２０（３０）。分析。Ｃ１６Ｈ１５Ｃｌ２Ｎについての計算値：Ｃ、６５．７７；Ｈ、５．１７。実測値：Ｃ、６５．５２；Ｈ、５．１７。
【０１５３】
（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロフェネチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン（５ｒ）の合成。１０ｍＬのＴＨＦ中の１５０ｍｇ（０．５８ｍｍｏｌ）の４ｒに５０ｍｇの１０％Ｐｄ−Ｃを加えた。混合物を４０ｐｓｉでＰａｒｒ振とう機上で５時間水素化させた。混合物をＣｅｌｉｔｅに通してろ過し、１：１０  ＥｔＯＡｃ：ヘキサンを用いるクロマトグラフィーを行い１１０ｍｇ（７６％）の５ｒを得た：ヘキサンからの無色結晶。ｍｐ４２〜４３℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  ７．３１−７．２３  （ｍ，  １Ｈ），  ７．０２  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．４Ｈｚ），  ６．９８−６．９２  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．６６  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．４Ｈｚ），  ２．９０−２．８９  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．８５  （ｓ，  ６Ｈ），  ２．７７−２．７３  （ｍ，  ２Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  １６１．６８  （ｄｄ，  Ｊ１＝２４４．１Ｈｚ，  Ｊ２＝８．７Ｈｚ，  Ｃ２個），  １４９．６２，  １２８．９８，  １２８．９４  （Ｃ２個），  １２８．１５  （ｔ，  Ｊ＝１０．３Ｈｚ），  １１７．３６  （ｔ，  Ｊ＝２０．５Ｈｚ），  １１２．８８  （Ｃ２個），  １１１．２２  （ｄｄ，  Ｊ１＝１９．４Ｈｚ，  Ｊ２＝７．２Ｈｚ，  Ｃ２個），  ４０．１０  （Ｃ２個），  ３４．７３，  ２４．７５。ＭＳ：ｍ／ｚ（％）２６１（４０）、１３４（１００）、１１８（２７）、９１（２２）。分析。Ｃ１６Ｈ１７Ｆ２Ｎについての計算値：Ｃ、７３．５４；Ｈ、６．５６。実測値：Ｃ、７３．５３；Ｈ、６．４９。
【０１５４】
（実施例２）
ハロゲン化スチルベン類似体の代謝産物の合成
基本手順：ＣＨＣｌ３（３ｍＬ）中の４（０．７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、７０％ｍ−ＣＰＢＡ（０．７ｍｍｏｌ、１当量（ｅｑｕｉｖ））を０℃で少しづつ添加した。得られた混合物を室温で５時間撹拌した。混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液および水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。生成物を、以下に挙げた個々のアミンＮ−オキシドについて注記したようにして、クロマトグラフィーで精製した。
【０１５５】
（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンオキシド（４ｚ）の合成。収率７２％。Ｒｆ＝０．３１（１：５  ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。ｍｐ１００〜１０３℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  ８．１１  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．４Ｈｚ），  ７．７２  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ７．４３−７．３５  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．２１−７．１５  （ｍ，  ３Ｈ），  ３．４０  （ｓ，  ６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  １６０．８５  （ｄｄ，  Ｊ１＝２４９．０Ｈｚ，  Ｊ２＝７．６Ｈｚ，  Ｃ２個），  １５６．３５，  １３７．３０，  １３４．６０  （ｔ，  Ｊ＝７．６Ｈｚ），  １３０．１３  （ｔ，  Ｊ＝１０．７Ｈｚ），  １２７．４２  （Ｃ２個），  １２１．６７  （Ｃ２個），  １１６．４０，  １１４．４４  （ｔ，  Ｊ＝１５．２Ｈｚ），  １１２．７６  （ｄｄ，  Ｊ１＝１９．０Ｈｚ，  Ｊ２＝６．１Ｈｚ，  Ｃ２個），  ６３．９２  （Ｃ２個）．  ＨＲＭＳ（ＥＩ）  Ｃ１６Ｈ１５Ｆ２ＮＯについての計算値：２７５．１１２１。実測値：２７５．１１２０。
【０１５６】
（Ｅ）−４−（２−クロロ−６−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンオキシド（４ａａ）の合成。収率５４％。黄色固体。Ｒｆ＝０．３４（１：５  ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。ｍｐ８２〜８４℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  ８．２１  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ７．７３  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ７．４３  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．４Ｈｚ），  ７．３８−７．３２  （ｍ，  ３Ｈ），  ７．２６−７．２１  （ｍ，  １Ｈ），  ３．５０  （ｓ，  ６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  １６１．２９  （ｄ，  Ｊ＝２４９．８Ｈｚ），  １５６．４１，  １３７．４１，  １３５．２０  （ｄ，  Ｊ＝１２．１Ｈｚ），  １３４．４０  （ｄ，  Ｊ＝５．３Ｈｚ），  １２９．４１  （ｄ，  Ｊ＝１０．６Ｈｚ），  １２６．９８  （Ｃ２個），  １２６．０６  （ｄ，  Ｊ＝３．０Ｈｚ），  １２３．９３  （ｄ，  Ｊ＝１４．４Ｈｚ），  １２１．４１  （Ｃ２個），  １２０．３１  （ｄ，  Ｊ＝１．５Ｈｚ），  １１５．１９  （ｄ，  Ｊ＝２３．６Ｈｚ），  ６３．２７  （Ｃ２個）．  ＨＲＭＳ（ＥＩ）  Ｃ１６Ｈ１５ＣｌＦＮＯについての計算値：２９１．０８２６。実測値：２９１．０８２８。
【０１５７】
（Ｅ）−４−（２，６−ジクロロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンオキシド（４ｂｂ）の合成。収率８０％。Ｒｆ＝０．１９（１：１０  ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２）。ｍｐ８０〜８２℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  ８．１３  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝９．２Ｈｚ），  ７．７１  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝９．２Ｈｚ），  ７．５５  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．４Ｈｚ），  ７．３４  （ｔ，  １Ｈ，  Ｊ＝８．０Ｈｚ），  ７．２２  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．８Ｈｚ），  ７．１１  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．８Ｈｚ），  ３．４１  （ｓ，  ６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  １５６．３１，  １３６．５２，  １３６．１２，  １３４．５１，  １３４．１１，  １２９．９７，  １２９．３４  （Ｃ２個），  １２７．２４  （Ｃ２個），  １２３．８５  （Ｃ２個），  １２１．４９  （Ｃ２個），  ６３．７８  （Ｃ２個）．  ＨＲＭＳ（ＥＩ）  Ｃ１６Ｈ１５Ｃｌ２ＮＯについての計算値：３０７．０５３１。実測値：３０７．０５３０。
【０１５８】
（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ−メチルアニリン（４ｃｃ）の合成。１５ｍＬのアセトン中の１ｇ（３．８６ｍｍｏｌ）の４ｒおよび８２０ｍｇ（７．７２ｍｍｏｌ、２ｅｑｕｉｖ）の臭化シアンの溶液を１６時間還流させた。混合物を冷却し、アルゴン気流下で濃縮した。残留物をエーテルで摩砕し、一緒にしたエーテル性抽出物を混合し濃縮した。生成物を２５ｍＬの濃ＨＣｌと３時間還流させた。混合物を２Ｍ  ＮａＯＨ溶液で中和し、エーテルで抽出し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ濃縮した。生成物を、１：５  ＥｔＯＡｃ−ヘキサンを用いるクロマトグラフィーで精製して３２０ｍｇ（３４％）の４ｃｃを黄色固体として得た：ｍｐ５１〜５２℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ    ７．３２  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ７．２９−７．２１  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．１４−７．０６  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．７９  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．４Ｈｚ），  ６．５５  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ６．０２  （ｑ，  １Ｈ，  Ｊ＝５．２Ｈｚ），  ２．７０  （ｄ，  ３Ｈ，  Ｊ＝５．２Ｈｚ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  １６０．３６  （ｄｄ，  Ｊ１＝２４６．８Ｈｚ，  Ｊ２＝８．０Ｈｚ，  Ｃ２個），  １５０．８８，  １３６．３５  （ｔ，  Ｊ＝７．５Ｈｚ），    １２８．４２  （Ｃ２個），  １２７．９６  （ｄ，  Ｊ＝１０．７Ｈｚ），  １２４．５３，  １１５．３２  （ｔ，  Ｊ＝１５．５Ｈｚ），  １１２．３３  （ｄｄ，  Ｊ１＝１９．１Ｈｚ，  Ｊ２＝６．８Ｈｚ，  Ｃ２個），  １１２．０９  （Ｃ２個），  １０８．８６，  ２９．９３。ＭＳ：ｍ／ｚ（％）２４６（３０）、２４５（１００）、２４４（１５）。分析。Ｃ１５Ｈ１３Ｆ２Ｎについての計算値：Ｃ、７３．４５；Ｈ、５．３４。実測値：Ｃ、７３．３１；Ｈ、５．２６。
【０１５９】
（Ｅ）−４−（２−クロロ−６−フルオロスチリル）−Ｎ−メチルアニリン（４ｄｄ）の合成。４ｃｃを調製するために用いた手順を、１ｇ（３．６３ｍｍｏｌ）の４ｘおよび７６４ｍｇ（７．２６ｍｍｏｌ、２ｅｑｕｉｖ）の臭化シアンを用いて繰り返して生成物を得た。これを１：５  ＥｔＯＡｃ−ヘキサンを用いるクロマトグラフィーで精製して４００ｍｇ（４２％）の４ｄｄを黄色固体として得た：ｍｐ４３〜４５℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  ７．３７−７．３１  （ｍ，  ３Ｈ），  ７．２７−７．２１  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．１８  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．４Ｈｚ），  ６．８８  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．４Ｈｚ），  ６．５６  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ６．０４  （ｑ，  １Ｈ，  Ｊ＝５．２Ｈｚ），  ２．７１  （ｄ，  ３Ｈ，  Ｊ＝５．２Ｈｚ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  １６０．７５  （ｄ，  Ｊ＝２４８．０Ｈｚ），  １５０．９８，  １３７．２４  （ｄ，  Ｊ＝１２．２Ｈｚ），  １３３．３０  （ｄ，  Ｊ＝６．１Ｈｚ），  １２８．４９  （Ｃ２個），  １２８．３３  （ｄ，  Ｊ＝９．９Ｈｚ），  １２６．２８  （ｄ，  Ｊ＝３．１Ｈｚ），  １２４．７３  （ｄ，  Ｊ＝１４．５Ｈｚ），  １２４．４０，  １１５．５４  （ｄ，  Ｊ＝２２．９Ｈｚ），  １１３．１２  （ｄ，  Ｊ＝２．２Ｈｚ），  １１２．１１  （Ｃ２個），  ２９．９４。ＭＳ：ｍ／ｚ（％）２６１（１００）、２２７（１５）、２１３（２５）。分析。Ｃ１５Ｈ１３ＣｌＦＮについての計算値：Ｃ、６８．８４；Ｈ、５．０１。実測値：Ｃ、６８．６７；Ｈ、５．０５。
【０１６０】
（ＥおよびＺ）−４−（２，６−ジクロロスチリル）−Ｎ−メチルアニリン（４ｅｅ）の合成。４ｃｃを調製するために用いた手順を、１ｇ（３．４２ｍｍｏｌ）の４ｙおよび７２０ｍｇ（６．８４ｍｍｏｌ、２ｅｑｕｉｖ）の臭化シアンを用いて繰り返して生成物を得た。これを、１：５  ＥｔＯＡｃ−ヘキサンを用いるクロマトグラフィー（複数回、各回で２つの展開液（ｔｗｏ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ）を用いて）で精製して３９０ｍｇ（４１％）の４ｅｅを異性体の９：１  Ｅ：Ｚ混合物として得た。これは黄色油状物であった。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  ７．４９  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．４Ｈｚ），  ７．３５  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．４Ｈｚ），  ７．２４  （ｔ，  １Ｈ，  Ｊ＝８．０Ｈｚ），  ６．９９  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．４Ｈｚ），  ６．８２  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．４Ｈｚ），  ６．５５  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．４Ｈｚ），  ６．０１  （ｑ，  １Ｈ，  Ｊ＝５．２Ｈｚ），  ２．７０  （ｄ，  ３Ｈ，  Ｊ＝５．２Ｈｚ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  １５０．４５，  １３７．４０，  １３４．６９，  １３３．３６，  １２８．８６  （Ｃ２個），  １２８．２８，  １２７．９７  （Ｃ２個），  １２３．４７，  １１６．０９  （Ｃ２個），  １１１．５７  （Ｃ２個），  ２９．５０．  ＨＲＭＳ（ＥＩ）  Ｃ１５Ｈ１３Ｃｌ２Ｎについての計算値：２７７．０４２５。実測値：２７７．０４２５。
【０１６１】
（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルベンゼンアミニウムヨージド（４ｆｆ）の合成。アセトン（２ｍＬ）中の２００ｍｇ（０．７７ｍｍｏｌ）の４ｒの溶液に、ＣＨ３Ｉ  ３２８ｍｇ（２．３１ｍｍｏｌ、３ｅｑｕｉｖ）を加えた。得られた混合物を８時間還流させた。生成した沈殿物をろ過により収集し、エチルエステルで洗浄し、残留溶媒を真空下で除去して２００ｍｇ（６４％）の４ｆｆを白色固体として得た：ｍｐ１９８〜１９９℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  ７．９８  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ７．９１  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝９．２Ｈｚ），  ７．４７−７．３８  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．２９  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．８Ｈｚ），  ７．２３−７．１７  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．６２  （ｓ，  ９Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  １６０．３０  （ｄｄ，  Ｊ１＝２４９．１Ｈｚ，  Ｊ２＝７．４Ｈｚ，  Ｃ２個），  １４６．７２，  １３８．４４，  １３３．０４  （ｔ，  Ｊ＝７．８Ｈｚ），  １３０．００  （ｔ，  Ｊ＝１０．８Ｈｚ），  １２８．０５  （Ｃ２個），  １２１．０３  （Ｃ２個），  １１７．４４，  １１３．５８  （ｔ，  Ｊ＝１５．５Ｈｚ），  １１２．２３  （ｄｄ，  Ｊ１＝１９．２Ｈｚ，  Ｊ２＝５．７Ｈｚ，  Ｃ２個），  ５６．４５  （Ｃ３個）．  分析。Ｃ１７Ｈ１８Ｆ２ＩＮについての計算値：Ｃ、５０．８９；Ｈ、４．５２。実測値：Ｃ、５１．１０；Ｈ、４．４９。
【０１６２】
（実施例３）
ハロゲン化スチルベンのビオチン化類似体の合成
この実施例では、いくつかの生物学的に活性なビオチン標識ハロゲン化スチルベン類似体、特にフッ素化Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノスチルベン（ＦＩＤＡＳまたはＦＩＤＡＳ剤）を調製した。図４に示すように、ＦＩＤＡＳ剤とビオチンの間に可変スペーサーを有するいくつかのビオチン−ＦｌＤＡＳ化合物を調製した。ビオチン複素環を欠いているまたはビオチンだけを有する他のアミドの合成によって、これらの分子のビオチン部分にではなくスチルベンに活性が存在することを確認した。２つの末端間の最適のスペーサー長を決定し、ビオチン−ＦｌＤＡＳおよびストレプトアビジンビーズについての結合および溶出条件を確立した。
【０１６３】
（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−ニトロアニリン（６）の合成。１５ｍＬの無水ＤＭＦ中の１．６３ｇ（６．１８ｍｍｏｌ、１．２ｅｑｕｉｖ）のジエチル２，６−ジフルオロベンジルホスホネートの０℃での溶液に、３１０ｍｇ（７．７２ｍｍｏｌ、１．５ｅｑｕｉｖ）の６０％ＮａＨを加えた。混合物を３０分間撹拌し、８ｍＬの無水ＤＭＦ中の１．０ｇ（５．１５ｍｍｏｌ）の４−（ジメチルアミノ）−３−ニトロベンズアルデヒドの溶液を１０分間かけて加えた。混合物を０℃で２時間撹拌し、冷水に注加した。沈殿物をろ過により収集し、アセトニトリルから再結晶化させて１．１ｇ（７０％）の６を赤色結晶として得た：ｍｐ１５２〜１５３℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  ７．８１  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ７．６８  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．４Ｈｚ），  ７．３８−７．３０  （ｍ，  １Ｈ），  ７．１７  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝３．２Ｈｚ），  ７．１０−７．０３  （ｍ，  ３Ｈ），  ７．０１  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．８Ｈｚ），  ３．１  （ｓ，  ６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  δ  １６０．７６  （ｄｄ，  Ｊ１＝２４８．３Ｈｚ，  Ｊ２＝７．５Ｈｚ，  Ｃ２個），  １５０．５６，  １５０．０３，  １２９．６６  （ｔ，  Ｊ＝８．７Ｈｚ），  １２８．７３  （ｔ，  Ｊ＝１０．７Ｈｚ），  １２８．０８，  １１８．２０，  １１６．１６，  １１４．９２  （ｔ，  Ｊ＝１．６Ｈｚ），  １１４．５２  （ｔ，  Ｊ＝１５．１Ｈｚ），  １１１．７４  （ｄｄ，  Ｊ１＝１９．７Ｈｚ，  Ｊ２＝６．５Ｈｚ，  Ｃ２個），  １０６．０１，  ３９．３１  （Ｃ２個）．  ＨＲＭＳ（ＥＩ）  Ｃ１６Ｈ１４Ｆ２Ｎ２Ｏ２についての計算値：３０４．１０２３。実測値：３０４．１０１６。
【０１６４】
（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ１，Ｎ１−ジメチルベンゼン−１，３−ジアミン（７）の合成。７ｍＬの濃ＨＣｌ中の５ｇ（２６．４ｍｍｏｌ、８．５ｅｑｕｉｖ）のＳｎＣｌ２の溶液を１００ｍＬの氷酢酸中の０．９５ｇ（３．１ｍｍｏｌ）の６の溶液に滴下添加した。混合物を２５℃で約１２時間撹拌した。沈殿物をろ過により収集し、５ｍＬの氷酢酸で洗浄し、２００ｍＬの水に懸濁させた。水性懸濁物をＮａＯＨでｐＨ９〜１０に調節し、Ｅｔ２Ｏで抽出した。一緒にしたエーテル性抽出物を水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残留物をエタノールから再結晶化させて５９０ｍｇ（６９％）の７を黄色結晶として得た：ｍｐ９７〜９８℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  ７．４１  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．４Ｈｚ），  ７．２７  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ７．２４−７．１８  （ｍ，  １Ｈ），  ７．１２−７．０５  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．６１  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．４Ｈｚ），  ６．１０  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ１＝８．８Ｈｚ，  Ｊ２＝２．４Ｈｚ），  ６．０３  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝２．８Ｈｚ），    ５．０５  （ｂｒ．ｓ，  ２Ｈ），  ２．８７  （ｓ，  ６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  １６０．２５  （ｄｄ，  Ｊ１＝２４６．０Ｈｚ，  Ｊ２＝７．９Ｈｚ，  Ｃ２個），  １５１．９５，  １４７．９８，  １３２．３９  （ｔ，  Ｊ＝７．１Ｈｚ），  １２７．４５  （ｔ，  Ｊ＝１１．１Ｈｚ），  １２７．０６，  １１６．１１  （ｔ，  Ｊ＝１５．１Ｈｚ），  １１２．２０  （ｄｄ，  Ｊ１＝１８．７Ｈｚ，  Ｊ２＝６．８Ｈｚ，  Ｃ２個），  １１１．３９，  １０８．２１，  １０３．５２，  ９９．０７，  ４０．２８  （Ｃ２個）。ＭＳ：ｍ／ｚ（％）２７５（２１）、２７４（１００）、２７３（３３）、２５７（１５）、２１１（１６）。分析。Ｃ１６Ｈ１６Ｆ２Ｎ２についての計算値：Ｃ、７０．０６；Ｈ、５．８８。実測値：Ｃ、７０．１８；Ｈ、５．９４。
【０１６５】
（Ｅ）−１，３−ジフルオロ−２−（４−ニトロスチリル）ベンゼン（８）の合成。２０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中の９５６ｍｇ（２ｍｍｏｌ）の（４−ニトロベンジル）トリフェニルホスホニウムブロミドおよび２８４ｍｇ（２ｍｍｏｌ）の２，６−ジフルオロベンズアルデヒドの溶液に、５ｍＬの０．４８Ｍ  ＮａＯＨ溶液（２．４ｍｍｏｌ、１．２ｅｑｕｉｖ）を１０分間かけて滴下添加した。赤色溶液を５０℃で１時間加熱した。有機層を分離し、飽和ＮａＨＳＯ３水溶液および水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させた。残留物をエタノールから再結晶化させて３６０ｍｇ（６９％）の８を淡黄色結晶として得た：ｍｐ１３６〜１３７℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  ８．２３  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ７．９３  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ７．５０  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．８Ｈｚ），  ７．４６−７．４０  （ｍ，  １Ｈ），  ７．３７  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．８Ｈｚ），  ７．２３−７．１７  （ｍ，  ２Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  １６０．７９  （ｄｄ，  Ｊ１＝２４９．４Ｈｚ，  Ｊ２＝７．３Ｈｚ，  Ｃ２個），  １４７．２７，  １４３．８１，  １３３．３５  （ｔ，  Ｊ＝７．９Ｈｚ），  １３０．８２  （ｔ，  Ｊ＝１０．７Ｈｚ），  １２８．２１  （Ｃ２個），  １２４．４６  （Ｃ２個），  １１９．７０  （ｔ，  Ｊ＝１．６Ｈｚ），  １１３．７９  （ｔ，  Ｊ＝１５．１Ｈｚ），  １１２．６５  （ｄｄ，  Ｊ１＝１９．５Ｈｚ，  Ｊ２＝５．９Ｈｚ，  Ｃ２個）。ＭＳ：ｍ／ｚ（％）２６１（６１）、２３１（６７）、２１４（４５）、１９４（３４）、１８３（１００）。分析。Ｃ１４Ｈ９Ｆ２ＮＯについての計算値：Ｃ、６４．３７；Ｈ、３．４７。実測値：Ｃ、６４．５６；Ｈ、３．４２。
【０１６６】
（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）アニリン（９）の合成。７の調製について記載した手順を、２０ｍＬの氷酢酸中の３００ｍｇ（１．１５ｍｍｏｌ）の８および３ｍＬの濃ＨＣｌ中の１．８５ｇ（９．７６ｍｍｏｌ、８．５ｅｑｕｉｖ）のＳｎＣｌ２を用いて繰り返し、２５℃で約１２時間撹拌し、水でクエンチした後、沈殿物を得た。沈殿物をろ過により収集し、５ｍＬの氷酢酸で洗浄し、８０ｍＬの水に懸濁した。水性懸濁物をＮａＯＨでｐＨ９〜１０に調節し、Ｅｔ２Ｏで抽出した。一緒にしたエーテル性抽出物を水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。生成物をヘキサンから再結晶化させて２２０ｍｇ（８３％）の９を無色結晶として得た：ｍｐ７４〜７５℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  ７．２８  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ７．２７−７．２２  （ｍ，  １Ｈ），  ７．２１  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．８Ｈｚ），  ７．１３−７．０６  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．７７  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．８Ｈｚ），  ６．５７  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），    ５．４３  （ｓ，  ２Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  １６０．３５  （ｄｄ，  Ｊ１＝２４６．８Ｈｚ，  Ｊ２＝８．０Ｈｚ，  Ｃ２個），  １５０．０６，  １３６．４１  （ｔ，  Ｊ＝７．９Ｈｚ），  １２８．４２  （Ｃ２個），  １２７．９９  （ｔ，  Ｊ＝１０．３Ｈｚ），  １２４．６８，  １１５．３１  （ｔ，  Ｊ＝１５．１Ｈｚ），  １１４．２９  （Ｃ２個），  １１２．３３  （ｄｄ，  Ｊ１＝１９．１Ｈｚ，  Ｊ２＝６．３Ｈｚ，  Ｃ２個），  １０８．８４。ＭＳ：ｍ／ｚ（％）２３２（１８）、２３１（１００）、１８３（１３）。分析。Ｃ１４Ｈ１１Ｆ２Ｎについての計算値：Ｃ、７２．７２；Ｈ、４．７９。実測値：Ｃ、７２．７７；Ｈ、４．８３。
【０１６７】
（Ｅ）−Ｎ−（２−（２，６−ジフルオロスチリル）−５−（ジメチルアミノ）フェニル）−５−（２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド（１０）の合成。２００ｍｇ（０．８２ｍｍｏｌ）のビオチンに８ｍＬ（０．１１ｍｏｌ）のＳＯＣｌ２を加えた。混合物を２５℃１時間撹拌した。混合物を濃縮し、ベンゼン（１５ｍＬ部分×２）と共蒸発させて酸塩化物を得た。５ｍＬの無水ＴＨＦ中の１８６ｍｇ（０．６８ｍｍｏｌ）の７および８３ｍｇ（０．８２ｍｍｏｌ、１．２ｅｑｕｉｖ）のＥｔ３Ｎの溶液に、８ｍＬの無水ＴＨＦ中の酸塩化物を滴下添加した。混合物を２５℃で２時間撹拌し、水に注加し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。一緒にした有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて生成物を得た。これを１：１０  ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２を用いるクロマトグラフィーで精製して２００ｍｇ（５９％）の１０を黄色固体として得た：ｍｐ１８３〜１８４℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  ９．５１（ｓ，  １Ｈ），  ７．６１  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ７．４０  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．４Ｈｚ），  ７．３２−７．２４  （ｍ，  １Ｈ），  ７．１５−７．０９  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．８０  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．８Ｈｚ），  ６．６７−６．６１  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．４５  （ｓ，  １Ｈ），  ６．３６  （ｓ，  １Ｈ），  ４．３１−４．２８  （ｍ，  １Ｈ），  ４．１５−４．１１  （ｍ，  １Ｈ），  ３．１２−３．０７  （ｍ，  １Ｈ），  ２．９３  （ｓ，  ６Ｈ），  ２．８０  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ１＝１２．４Ｈｚ，  Ｊ２＝５．２Ｈｚ），  ２．５７  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１２．４Ｈｚ），  ２．３１  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ＝７，２Ｈｚ），  １．６９−１．３５  （ｍ，  ６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  １７１．９０，  １６３．１４，  １６０．４０  （ｄｄ，  Ｊ１＝２４７．６Ｈｚ，  Ｊ２＝７．９Ｈｚ，  Ｃ２個），  １５１．０３，  １３７．３５，  １３２．０５  （ｔ，  Ｊ＝８．０Ｈｚ），  １２８．２７  （ｔ，  Ｊ＝１１．０Ｈｚ），  １２６．３６，  １２０．４４，  １１５．４０  （ｔ，  Ｊ＝１５．０Ｈｚ），  １１２．３６  （ｄｄ，  Ｊ１＝１９．１Ｈｚ，  Ｊ２＝６．４Ｈｚ，  Ｃ２個），  １１０．９３，  １１０．６５，  １１０．２０，  ６１．４７，  ５９．６４，  ５５．８６，  ４０．４０  （Ｃ２個），  ４０．３１，  ３６．１１，  ２８．７０，  ２８．５５，  ２５．８４．  ＨＲＭＳ（ＥＩ）  Ｃ２６Ｈ３０Ｆ２Ｎ４Ｏ２Ｓについての計算値：５００．２０５７。実測値：５００．２０４７。
【０１６８】
（Ｅ）−Ｎ−（４−（２，６−ジフルオロスチリル）フェニル）−５−（２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド（１１）の合成。３ｍＬの無水ＤＭＦ中の１００ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ、１ｅｑｕｉｖ）のビオチンの懸濁物に、６６ｍｇ（０．４９ｍｍｏｌ、１．２ｅｑｕｉｖ）の１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物、９４ｍｇ（０．４９ｍｍｏｌ、１．２ｅｑｕｉｖ）のＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩および７９ｍｇ（０．７８ｍｍｏｌ、１．９ｅｑｕｉｖ）のＥｔ３Ｎを加えた。混合物を１０分間撹拌し、９５ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ）の９を加えた。混合物を２５℃で２４時間撹拌し、水に注加した。沈殿物をろ過により収集し、１：１  ＥｔＯＡｃ−ＭｅＯＨを用いるクロマトグラフィーを行い１２０ｍｇ（６６％）の１１を白色結晶として得た：ｍｐ２７８〜２８０℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  ９．９９  （ｓ，１Ｈ），  ７．６４  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ７．５６  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ７．３７−７．２９  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．１９−７．１２  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．０２  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．４Ｈｚ），  ６．４４  （ｓ，  １Ｈ），  ６．３６  （ｓ，  １Ｈ），  ４．３３−４．２９  （ｍ，  １Ｈ），  ４．１６−４．１３  （ｍ，  １Ｈ），  ３．１５−３．１０  （ｍ，  １Ｈ），  ２．８３  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ１＝１２．８Ｈｚ，  Ｊ２＝４．８Ｈｚ），  ２．５８  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１２．０Ｈｚ），  ２．３３  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ＝７，２Ｈｚ），  １．７０−１．３３  （ｍ，  ６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  １７１．７０，  １６３．１３，  １６０．５３  （ｄｄ，  Ｊ１＝２４７．８Ｈｚ，  Ｊ２＝７．７Ｈｚ，  Ｃ２個），  １４０．０９，  １３５．２８  （ｔ，  Ｊ＝７．９Ｈｚ），  １３１．７７，  １２９．１８  （ｔ，  Ｊ＝１０．７Ｈｚ），  １２７．６９  （Ｃ２個），  １１９．５４  （Ｃ２個），  １１４．６１  （ｔ，  Ｊ＝１５．５Ｈｚ），  １１３．２５，  １１２．４５  （ｄｄ，  Ｊ１＝１９．１Ｈｚ，  Ｊ２＝６．３Ｈｚ，  Ｃ２個），  ６１．４８，  ５９．６３，  ５５．８２，  ４０．２８，  ３６．７０，  ２８．６７，  ２８．５３，  ２５．５０．  ＨＲＭＳ（ＥＩ）  Ｃ２４Ｈ２５Ｆ２Ｎ３Ｏ２Ｓについての計算値：４５７．１６３６。実測値：４５７．１６５０。分析。Ｃ２４Ｈ２５Ｆ２Ｎ３Ｏ２Ｓについての計算値：Ｃ、６３．００；Ｈ、５．５１。実測値：Ｃ、６２．８２；Ｈ、５．４７。
【０１６９】
（Ｅ）−Ｎ−（４−（２，６−ジフルオロスチリル）フェニル）−Ｎ−メチル−５−（２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド（１２）の合成。１０を調製するために用いた手順を、１６７ｍｇ（０．６８ｍｍｏｌ）の４ｃｃおよび２００ｍｇ（０．８２ｍｍｏｌ、１．２ｅｑｕｉｖ）のビオチンを用いて繰り返して生成物を得た。これを１：１０  ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２を用いるクロマトグラフィーで精製して１３０ｍｇ（４１％）の１２を無色固体として得た：ｍｐ９１〜９３℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  ７．７１  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．０Ｈｚ），  ７．４１−７．３６  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．３３  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．４Ｈｚ），  ７．２１−７．１４  （ｍ，  ３Ｈ），  ６．３８  （ｓ，  １Ｈ），  ６．３３  （ｓ，  １Ｈ），  ４．３０−４．２６  （ｍ，  １Ｈ），  ４．０９−４．０６  （ｍ，  １Ｈ），  ３．１７  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．０５−３．００  （ｍ，  １Ｈ），  ２．８０  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ１＝１２．２Ｈｚ，  Ｊ２＝５．２Ｈｚ），  ２．５６  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１２．４Ｈｚ），  ２．０９  （ｂｒ．ｓ，  ２Ｈ），  １．５８−１．１８  （ｍ，  ６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  １７１．９６，  １６３．１３，  １６０．６１  （ｄｄ，  Ｊ１＝２４８．０Ｈｚ，  Ｊ２＝７．６Ｈｚ，  Ｃ２個），  １４４．４０，  １３４．７１  （ｔ，  Ｊ＝７．９Ｈｚ），  １２９．８０  （ｔ，  Ｊ＝１１．１Ｈｚ），  １２８．２７  （Ｃ２個），  １２８．０７，  １２８．０１，  １１５．７０  （Ｃ２個），  １１４．３５  （ｔ，  Ｊ＝１５．１Ｈｚ），  １１２．５４  （ｄｄ，  Ｊ１＝１９．１Ｈｚ，  Ｊ２＝６．４Ｈｚ，  Ｃ２個），  ６１．４２，  ５９．６２，  ５５．７５，  ４０．２７，  ３７．２０，  ３３．６４，  ２８．５４，  ２８．４３，  ２５．３２．  ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ  Ｃ２５Ｈ２８Ｆ２Ｎ３Ｏ２Ｓ［ＭＨ＋］についての計算値：４７２．１８７０。実測値４７２．１８７２。
【０１７０】
Ｎ−（２−（４−（２，６−ジフルオロスチリル）フェニル）−４−オキソ−８，１１−ジオキサ−２，５−ジアザトリデカン−１３−イル）−５−（２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド（１３）の合成。１ｍＬの無水エタノール中の３４ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ、１．５ｅｑｕｉｖ）の４ｃｃの溶液に、５０ｍｇ（０．０９２ｍｍｏｌ）の（＋）−ビオチニル−ヨードアセトアミジル−３，６−ジオキサオクタンジアミンおよび２０ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ、１．５ｅｑｕｉｖ）の無水Ｋ２ＣＯ３を加えた。混合物を１２時間還流させ、ろ過し濃縮した。生成物を１：１０  ＣＨ３ＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２を用いるクロマトグラフィーを行い１６ｍｇ（２６％）の１３を透明ガラス状物として得た。これは結晶化しなかった。単離した初期生成物は純粋な（Ｅ）−異性体であったが、濃縮の間に、低い温度でも、（Ｅ／Ｚ）−異性体の混合物へと急速に平衡に達した。異性体の比は、アセトン−ｄ６中、約１０：９０からＤＭＳＯ−ｄ６中、６０：４０までの範囲の溶媒で様々であった。この異性化は必然的にＮＭＲスペクトルを複雑なものとした。以下に報告するデータは主要な（Ｅ）−異性体についてのものである：１Ｈ  ＮＭＲ  （アセトン−ｄ６）：  ７．４８  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ），  ７．４２−７．３５  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．３０−７．２２  （ｍ，  １Ｈ），  ７．１３  （ｂｒ．ｓ，  １Ｈ），  ７．０５−７．００  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．９５  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１６．８Ｈｚ），  ６．７５  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝９．２Ｈｚ），    ５．８７  （ｓ，  １Ｈ），  ５．６４  （ｓ，  １Ｈ），  ４．５１−４．４６  （ｍ，  １Ｈ），  ４．３４−４．２９  （ｍ，  １Ｈ），  ３．９７  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．５９−３．４５  （ｍ，  ８Ｈ），  ４．４２−３．２９  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．２３−３．１７  （ｍ，  １Ｈ），  ３．１３  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．９２  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ１＝１２．４Ｈｚ，  Ｊ２＝４．８Ｈｚ），  ２．６９  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１２．４Ｈｚ），  ２．１８  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ＝７．２Ｈｚ）  １．８１−１．３９  （ｍ，  ６Ｈ）．  ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳであることを注記  Ｃ３３Ｈ４４Ｆ２Ｎ５Ｏ５Ｓ［ＭＨ＋］についての計算値：６６０．３０３０。実測値６６０．３０４０。
【０１７１】
（実施例４）
天然スチルベン類似体レスベラトロールおよびプテロスチルベンはＷｎｔシグナル伝達を阻害する
材料および方法：本出願のこのおよび他の実施例における結果を得るために以下の材料および方法を用いた。
【０１７２】
細胞培養および形質移入。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、ＨＣＴ１１６細胞およびＳＷ４８０細胞を、１０％ウシ胎仔血清および１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＤＭＥＭ培地（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ）中で成長させた。ＬＳ１７４Ｔ細胞を、５％ウシ胎仔血清および１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ培地（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ）中で成長させた。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、Ｚｈａｎｇ，  Ｗ．ら、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ２００６年、２６巻、２０５５〜２０６４頁（参照により本明細書に組み込む）に記載されているようにしてリン酸カルシウム法を用いて一時的に形質移入した。
【０１７３】
ウエスタンブロット。ウエスタンブロットを以下の抗体：β−カテニン（Ｓｉｇｍａ、Ｃ２２０６）、ｃ−Ｍｙｃ（Ｅｐｉｔｏｍｉｃｓ、１４７２−１）、アキシン２（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、２１５１）、β−アクチン（Ｓｉｇｍａ、Ａ１９７８）、ＴＣＦ４（Ｅｐｉｔｏｍｉｃｓ、２１１４−１）およびｐｙｇｏｐｕｓ２（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ｓｃ−７４８７８）、サイクリンＤ１（Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、２９２６）を用いて実施した。
【０１７４】
ＲＴ−ＰＣＲ。ＬＳ１７４細胞をＤＭＳＯまたはＷｎｔインヒビターで処理した。３６時間後、ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙキット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて単離した。ＲＴ−ＰＣＲをＺｈａｎｇら、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ２００６年、２６巻、２０５５〜２０６４頁に記載されているようにして実施した。以下のプライマーを使用した：β−アクチン：５’−ＣＡＡＣＣＧＣＧＡＧＡＡＧＡＴＧＡＣ−３’（配列番号０１）、５’−ＡＧＧＡＡＧＧＣＴＧＧＡＡＧＡＧＴＧ−３’（配列番号０２）；サバイビン（ｓｕｒｉｖｉｖｉｎ）：５’−ＣＡＴＴＣＧＴＣＣＧＧＴＴＧＣＧＣＴＴＴＣＣ−３’（配列番号０３）、５’−ＧＣＧＣＡＣＴＴＴＣＴＣＣＧＣＡＧＴＴＴＣＣ−３’（配列番号０４）；ｃ−Ｍｙｃ：５’−ＴＧＧＧＣＴＧＴＧＡＧＧＡＧＧＴＴＴＧ−３’（配列番号０５）、５’−ＴＡＴＧＴＧＧＡＧＣＧＧＣＴＴＣＴＣＧ−３’（配列番号０６）；アキシン２：５’−ＣＡＣＣＡＣＣＡＣＣＡＣＣＡＣＣＡＴＴＣ−３’（配列番号０７）、５’−ＧＣＡＴＣＣＡＣＴＧＣＣＡＧＡＣＡＴＣＣ−３’（配列番号０８）；ＴＣＦ４：５’−ＣＡＣＣＡＣＡＴＣＡＴＡＣＧＣＴＡＣＡＣ−３’（配列番号０９）、５’−ＣＧＡＣＣＴＴＴＧＣＴＣＴＣＡＴＴＴＣＣ−３’（配列番号１０）；ｐｙｇｏｐｕｓ２：５’−ＧＧＣＣＧＧＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＧ−３’（配列番号１１）、５’−ＴＣＣＡＣＣＴＣＣＡＧＴＧＣＴＧＴＡＧ−３’（配列番号１２）；Ｌｇｒ５：５’−ＣＣＴＧＣＴＴＧＡＣＴＴＴＧＡＧＧＡＡＧＡＣ−３’（配列番号１３）、５’−ＡＴＧＴＴＣＡＣＴＧＣＴＧＣＧＡＴＧＡＣ−３’（配列番号１４）；ＣＤ４４：５’−ＣＡＧＡＡＴＧＧＣＴＧＡＴＣＡＴＣＴＴＧ−３’（配列番号１５）、５’−ＣＡＡＡＴＧＣＡＣＣＡＴＴＴＣＣＴＧＡＧ−３’（配列番号１６）；Ｋｉ６７：５’−ＡＣＡＧＡＧＴＧＣＴＣＡＡＣＡＡＣＴＴＣ−３’（配列番号１７）、５’−ＧＣＴＴＧＣＡＧＡＧＣＡＴＴＴＡＴＣＡＧ−３’（配列番号１８）。
【０１７５】
ルシフェラーゼおよび細胞増殖アッセイ。ＨＥＫ２９３Ｔを、０．２μｇのＳｕｐｅｒ８ｘＴＯＰＦｌａｓｈレポーターおよび０．０５μｇのＲｅｎｉｌｌａルシフェラーゼレポーターを用いて１２ウェルプレート中で一時的に形質移入した。１２時間後培地を変更した。６時間後、細胞をＤＭＳＯまたはＷｎｔインヒビターで１２時間処理し、次いで２５ｍＭ  ＬｉＣｌまたはＷｎｔ馴化培地で処理した。１２時間後、細胞を収穫し、ルシフェラーゼ活性をデュアル型ルシフェラーゼレポーターアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ  ＷＩ）で測定した。すべての条件を３連で行い、各実験を少なくとも２回実行した。細胞増殖アッセイについては、ＣＲＣ細胞を、２日間（２ｄ）および４日間（４ｄ）、ＤＭＳＯまたは阻害剤で処理した。細胞の数および生存率をＶｉ−Ｃｅｌｌ細胞生存率分析器で分析した。
【０１７６】
ヌードマウスの腫瘍異種移植片。Ｚｈａｎｇら、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ２００６年、２６巻、２０５５〜２０６４頁に記載されているようにして、ＬＳ１７４またはＨＴ２９結腸がん細胞（２×１０６）を、６〜８週のＣ５７ＢＬ／６Ｊ無胸腺ヌードマウスの両側腹部に皮下注射した。化合物４ｒまたは４ｄｄをコーンオイルまたはＰＥＧ４００に溶解した。マウスを、２０ｍｇ／ｋｇ／日の４ｒでｉｐ注射または強制経口投与（５０μｌ／マウス）で処置した。対照マウスを同一容積のコーンオイルまたはＰＥＧ４００で処置した。体重および腫瘍成長を週２回１カ月間分析した。腫瘍サイズをデジタルノギスで測定した。腫瘍容積を次式：Ｖ＝１／２ＬＷ２（ｍｍ３）により計算した。
【０１７７】
免疫蛍光。カバーグラス上において成長した細胞を４％パラホルムアルデヒドで、室温で２０分間固定した。細胞を０．３％（ｗ／ｖ）Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を含むＰＢＳで透過処理し、ＰＢＳ中の５％正常ヤギ血清で３０分間ブロックした。抗−β−カテニン抗体（１：３００、Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）をブロッキング溶液に希釈し、細胞とともに終夜インキュベートした。細胞をＰＢＳで３回洗浄し、さらに、ＰＢＳに希釈したＡｌｅｘａ−４８８標識抗ウサギＩｇＧ（１：５００）で４０分間インキュベートした。カバーグラスを洗浄し、スライドグラス上に載せ、Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＦＷ１０００共焦点顕微鏡で調べ、写真撮影した。カバーグラス上で成長した細胞を蛍光化合物でそれぞれ２時間、６時間、１２時間および２４時間処理した。処理した細胞を、４％パラホルムアルデヒドで、室温で２０分間固定した。次いで細胞をＰＢＳで３回洗浄し、スライドグラス上に載せ、Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＦＷ１０００共焦点顕微鏡を用いて４０５ｎｍ波長の蛍光下で調べ、写真撮影した。
【０１７８】
ＣＲＣの防止および処置のためのＷｎｔ経路阻害剤を特定するために、植物からのいくつかの抗がん剤を、ＴｏｐＦｌａｓｈレポーターアッセイを用いてスクリーニングした。ＴｏｐＦｌａｓｈレポーターをＨＥＫ２９３Ｔ細胞に形質移入し、ルシフェラーゼレポーターを活性化させるために、細胞をＷｎｔ３Ａ馴化培地で処理した。レスベラトロール（１００μＭ）はＷｎｔ誘導ルシフェラーゼ活性を著しく阻害した。レスベラトロールがβ−カテニン分解を制御するかどうかを決定するために、細胞を、ＧＳＫ−３を阻害しβ−カテニンを安定化させる２５ｍＭ  ＬｉＣｌで処理した。このアッセイにおいて、ＬｉＣｌはＷｎｔ３Ａ馴化培地より強力にレポーターを活性化した。レスベラトロールはＬｉＣｌ誘導Ｗｎｔシグナル伝達を強力に阻害した。これは、その分解ではなくβ−カテニン活性を調節することによって、レスベラトロールがＷｎｔシグナル伝達を阻害することを示唆している。エモジンは植物から得られる抗がん剤である；これは多くの未精製レスベラトロール産物中に存在する。エモジンはＷｎｔシグナル伝達に対しては影響を及ぼさなかった。Ｚｈａｎｇら、Ｊ．  ｏｆ  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ５４巻、１２８８〜１２９７頁（２０１１年）を参照されたい。
【０１７９】
これらの結果を確認するために、β−カテニン標的遺伝子を、ウエスタンブロットおよびＲＴ−ＰＣＲでＬＳ１７４ＣＲＣ細胞において分析した。β−カテニンの標的である、ｃ−ＭｙｃおよびサイクリンＤ１のタンパク質レベルはレスベラトロールによって低下するが、その異性体、ｃｉｓ−または（Ｚ）−レスベラトロールでは低下しない。サイクリンＢ１レベルは低下し、一方ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１レベルは増大した。これはｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１発現がｃ−Ｍｙｃによって抑制されるという事実と一致する。β−カテニンレベルはレスベラトロールによって影響を受けなかった。次に、β−カテニンの標的遺伝子のｍＲＮＡレベルをＲＴ−ＰＣＲを用いて分析した。サバイビン、Ｌｇｒ５、ＣＤ４４およびｃ−Ｍｙｃの発現はレスベラトロール処理細胞中で減少した。細胞増殖マーカー、Ｋｉ６７も減少した。これらの結果によって、レスベラトロールがＣＲＣ細胞中の内在性Ｗｎｔ標的遺伝子を阻害することが確認された。
【０１８０】
多くのスチルベン誘導体も抗がん活性を示す。これらの化合物の構造／活性関係を決定するために、いくつかのレスベラトロール類似体をテストした。プテロスチルベンはＷｎｔシグナル伝達を阻害することが分かった。細胞成長に対するレスベラトロールおよびプテロスチルベンの効果を決定するために、２ｄおよび４ｄの間、ＬＳ１７４ＣＲＣ細胞をレスベラトロールおよびプテロスチルベンで処理した。どちらの化合物も細胞増殖を阻害した。同様の結果が他のＣＲＣ系で観察された。これらのアッセイにおいて、プテロスチルベンはレスベラトロールより活性であった。これは、Ｗｎｔ標的タンパク質レベルを測定するためのウエスタンブロットを含むアッセイは、Ｗｎｔ阻害およびＣＲＣ抑制について他のレスベラトロール類似体を特定するのに有効であることを示唆している。
【０１８１】
（実施例５）
ハロゲン化スチルベン類似体は強力なＷｎｔ阻害剤である
一群のスチルベン類似体を設計し合成した（図２、３、５Ａおよび６Ａ）。種々のモノ置換ヒドロキシル、アルコキシ、アミノおよびＮ，Ｎ−ジアルキルアミノスチルベンを、ウエスタンブロットアッセイを用いて分析した（図５Ｂ、５Ｃ）。これらの置換基のうち、ＣＲＣ細胞において、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ置換基を有する（Ｅ）−４−スチリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン（４ｄ）は３０μＭでＷｎｔの標的遺伝子、アキシン２およびｃ−Ｍｙｃを強力に抑制した（図５Ｃ）。しかし、４ｄの溶解性は劣っており、これは１０μＭ未満の濃度では効果的ではなかった（データは示されていない）。その溶解性および活性を改善するために、化合物４ｄを２’−フルオロ４ｅ、３’−フルオロ４ｆおよび４’−フルオロ４ｇ置換基で改変した（図５Ｄ）。化合物４ｅと４ｆは１０μＭ、（Ｅ）−４−（２−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンでどちらも良好な活性を有していた。化合物（４ｅ）はすべてのモノフルオロ置換化合物の中で最も良好であった。化合物４ｅ内のＮ，Ｎ−ジメチルアミノ基の改変物も分析し、（Ｅ）−４−（２−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン（４ｈ）中のＮ，Ｎ−ジエチルアミノ基も１０μＭで活性であるが化合物４ｅほどは強力ではなく、化合物４ｉ中のＮ，Ｎ−ジフェニルアミノ基は不活性であることが分かった（図５Ｅ）。これらの類似体はβ−カテニンレベルに対して影響を及ぼさなかった。これは、それらがβ−カテニン活性には影響を及ぼすが、その安定性には影響を及ぼさないことをさらに示している。化合物４ｅ、レスベラトロールおよびプテロスチルベンのＣＲＣ細胞成長に対する影響を比較し、細胞増殖アッセイにおいて、４ｅは顕著により良好な阻害剤であることが分かった（図５Ｆ）。
【０１８２】
化合物４ｄと比べて化合物４ｅに認められる改善された活性に基づいて、フッ素置換基の少なくとも１つが２’−または３’位にあるジハロゲン化Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノスチルベンを合成した（図６Ａ）。２’−フルオロおよび二重結合に対してオルトまたはメタ位に他のフルオロを有する化合物（化合物４ｍ、４ｏおよび４ｒ）は化合物４ｅより活性である（図６Ｂ）。（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン（化合物４ｒ）が最良の活性を有していた。化合物４ｒのオルト−およびメタ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ類似体（すなわち、化合物４ｐおよび４ｑ）は化合物４ｒほど活性ではなく、これは、化合物４ｒ中のパラ−ジメチルアミノがその活性のために重要であることを示している（図６Ｃ）。化合物４ｒの構造に基づいて、フッ素置換基のうちの２つが２’−および６’位にある、２つのトリハロゲン化（ｔｒｉｈａｌｏｇｅｎｔａｔｅｄ）ジメチルアミノスチルベンを合成した（化合物４ｖおよび４ｗ）（図６Ｄ）。化合物４ｖおよび４ｗは１０μＭで活性であるが、これらは化合物４ｒに対して有意の改善を示さなかった。化合物４ｒ中のスチルベン炭素−炭素二重結合を、１，２−ジアリールエタン化合物５ｒにおいて飽和単結合に還元した場合、その活性は失われた。これは、二重結合が生物学的活性に必須であることを示唆している（図６Ｄ）。ＬＳ１７４ＣＲＣ細胞を異なる投与量の化合物４ｒで処理し、化合物４ｒは２．５μＭでＷｎｔ標的遺伝子を著しく阻害し、０．５μＭでもなお活性であることが分かった（図６Ｅ）。例えば、ウエスタンブロットおよび細胞増殖アッセイに基づいて、スチルベン４ｒは、レスベラトロールおよびプテロスチルベンより１０〜１００倍強力であることが判明した。
【０１８３】
（実施例６）
ハロゲン化スチルベン類似体はインビトロおよびインビボでＣＲＣを阻害する
この実施例では、本開示のスチルベン類似体のＣＲＣ細胞成長に対する効果を分析した。ウエスタンブロットの結果と一致して、スチルベン化合物４ｒは細胞増殖アッセイにおいて化合物４ｅより強力であった。これはＬＳ１７４細胞増殖をナノモル濃度で阻害した（図７Ａ）。化合物４ｒのインビボでの腫瘍成長に対する効果をテストするために、ＬＳ１７４細胞を、２つの群に無作為化された無胸腺ヌードマウスの側腹部に皮下注射した。マウスの１つの群を、コーンオイルに溶解した化合物４ｒ（２０ｍｇ／ｋｇ／日）で腹腔内（ｉｐ）注射により処置した。対照マウスを、同一容積のコーンオイル（５０μＬ）でｉｐ注射により処置した。週２回、マウスの体重を量り、腫瘍を測定した。化合物４ｒで処置したマウスと対照マウスは１カ月以内で体重に有意差はなかった（図７Ｂおよび７Ｃ）。これは、化合物４ｒがこの投与量で有意な毒性作用をもたないことを示唆している。しかし、４ｒ処置により腫瘍異種移植片の成長は有意に阻害された（図７Ｄ）。
【０１８４】
したがって、この実施例で示されるように、本開示のハロゲン化スチルベン類似体は、インビトロとインビボの両方でＣＲＣを阻害することができる。別の試験では、マウスは少なくとも２００ｍｇ／ｋｇのハロゲン化スチルベン類似体、ＦｌＤＡＳ  ４ｄｄに耐容性があることが分かった。１週間後これらのマウスの体重は減少したが、４ｄｄ処置を停止した後正常な体重に戻った（データは示されていない）。
【０１８５】
（実施例７）
ハロゲン化スチルベン類似体は核におけるＷｎｔシグナル伝達を阻害する
本開示のスチルベン類似体、特に（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン（化合物４ｓ）（図８）は３６５ｎｍで強い蛍光を示すが（図８Ａ）、化合物４ｓは化合物４ｒより僅かに活性が低い（図８Ｂ）。それでも、化合物４ｓはこれらの化合物の作用部位の機構研究に十分に役立つものである。ＬＳ１７４細胞を１０μＭの化合物４ｓで２時間、６時間、１２時間および２４時間処理した。細胞を固定し、共焦点蛍光顕微鏡検査で分析した。化合物４ｓは、２時間で核および細胞質の全体にわたって局在化していることが分かった。１２時間後、化合物４ｓの核レベルは低下した（データは示されていない。Ｚｈａｎｇら、Ｊ．  ｏｆ  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ５４巻、１２８８〜１２９７頁（２０１１年）を参照されたい）。これらの化合物のβ−カテニン局在化に対する効果を試験するために、ＬＳ１７４細胞を１０μＭの化合物４ｒで２４時間処理した。細胞を固定し、β−カテニンの局在化を免疫蛍光検査で分析した。核のβ−カテニンレベルは、ＤＭＳＯ処理した細胞と比較して化合物４ｒ処理した細胞では低下した。しかし有意なレベルの核β−カテニンが、化合物４ｒ処理した細胞の核において依然検出された。これは、化合物４ｒが、β−カテニンのレベルおよび局在化の制御以外の機序によってもＷｎｔシグナル伝達を阻害できることを示唆した。β−カテニンの下流因子を分析し、ＣＲＣ細胞において、化合物４ｒおよびレスベラトロールによってＴＣＦ４およびｐｙｇｏｐｕｓ２のタンパク質レベルが低下していることが分かった（図８Ｃ）。ＲＴ−ＰＣＲアッセイは、化合物４ｒがＷｎｔ標的遺伝子の転写を強力に阻害することを示唆している。これはＴＣＦ４遺伝子も阻害したが、ｐｙｇｏｐｕｓ２遺伝子に対してはそれほど影響を及ぼさなかった。これは、これらのハロゲン化スチルベン類似体がＷｎｔ／媒介転写を複数のレベルで阻害することを示唆している（図８Ｄ）。
【０１８６】
（実施例８）
ハロゲン化スチルベン類似体についての標的特定
材料および方法：本出願におけるこのおよび他の実施例における結果を得るために以下の材料および方法を用いた。
【０１８７】
ウエスタンブロットおよび細胞増殖アッセイ。がん細胞におけるＷｎｔシグナル伝達活性に対するフッ素化Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノスチルベン（ＦＩＤＡＳまたはＦＩＤＡＳ剤）の活性を、ｃ−Ｍｙｃ、アキシン２などのＷｎｔ標的遺伝子に対する抗体を用いてウエスタンブロットで分析した。ＦｌＤＡＳ剤のがん細胞成長に対する効果を、細胞生存率分析器（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ｖｉ−Ｃｅｌｌ  ＸＲ）を用いて分析した。これらのアッセイはこれまでに記載されている（Ｚｈａｎｇら、Ｊ．  ｏｆ  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ５４巻、１２８８〜１２９７頁（２０１１年）を参照されたい）。
【０１８８】
レンチウイルス媒介ｓｈＲＮＡアッセイ。ＭＡＴ２ＡおよびＭＡＴ２ＢのためのＳｈＲＮＡコンストラクトをＳｉｇｍａから注文した。２９３Ｔ細胞を、レンチウイルスパッケージングプラスミドｐｓＰＡＸ２およびｐＭＤ２．Ｇならびに対照またはＭＡＴ２Ａ／２Ｂ  ｓｈＲＮＡプラスミドで形質移入した。レンチウイルスストックを形質移入後４８時間に収集した。ＨＴ２９細胞系、ＬＳ１７４Ｔ細胞系およびＨｅｐ３Ｂ細胞系をレンチウイルスストックで１２時間感染させ、次いで新鮮培地中で３６〜４８時間成長を維持した。感染した細胞系を、増殖アッセイ用に１２ウェルプレート中に播種した。ＳｈＲＮＡ効率を、ｐｃＤＮＡ３．１−ＭＡＴ２Ａ／２ＢプラスミドおよびｐＬＫＯ．１−ｓｈＲＮＡプラスミドで共形質移入した２９３Ｔ細胞からの溶解物を用いて、ウエスタンブロットによりテストした。
【０１８９】
タンパク質精製。ＦｌＤＡＳ標的を精製するために、ＬＳ１７４Ｔ細胞溶解物を、ストレプトアビジンビーズおよびビオチン化されたＦｌＤＡＳ試薬１３（図４および１０Ａを参照）で、４℃で終夜インキュベートした。ビーズを細胞溶解緩衝液で３回洗浄した。結合タンパク質を２．５ｍＭ  Ｄ−ビオチンで溶出させた。精製されたサンプルを４〜１２％勾配のＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離し、銀染色またはＳｙｐｒｏ  Ｒｕｂｙ蛍光染色で分析した。ビオチン化類似体のサンプル中に特異的に存在するタンパク質バンドを切り出し、先に記載したようにしてＬＣ−ＭＳ／ＭＳで分析した（Ｚｈａｎｇら、Ｎｏｖｅｌ  ｃｒｏｓｓ  ｔａｌｋ  ｏｆ  Ｋｒｕｐｐｅｌ−ｌｉｋｅ  ｆａｃｔｏｒ  ４  ａｎｄ  ｂｅｔａ−ｃａｔｅｎｉｎ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｎｏｒｍａｌ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒ  ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ．  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ２００６年、２６巻、２０５５〜６４頁を参照されたい）。
【０１９０】
ＭＡＴ２ＡおよびＭＡＴ２ＢをｐＧＥＸ６ｐ３ベクター中にクローン化した。コンストラクトをＥ．ｃｏｌｉ  ＢＬ２１に形質移入させた。ＧＳＴ−融合タンパク質をＩＰＴＧで誘導し、先に記載したようにしてグルタチオンビーズで精製した（Ｌｉｕ、ｂｅｔａ−Ｔｒｃｐ  ｃｏｕｐｌｅｓ  ｂｅｔａ−ｃａｔｅｎｉｎ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ−ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｘｅｎｏｐｕｓ  ａｘｉｓ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １９９９年、９６巻、６２７３〜８頁を参照されたい）。結合アッセイのために、精製されたタンパク質を、上記したようにストレプトアビジンビーズおよびビオチン化されたＦｌＤＡＳ１３とともにインキュベートした。溶出したタンパク質を、ＧＳＴ、ＭＡＴ２ＡまたはＭＡＴ２Ｂに対する抗体を用いてウエスタンブロットで分析した。
【０１９１】
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによるＳＡＭおよびＳＡＨ分析。ＬＣ−ＭＳ／ＭＳシステムは、Ｖａｒｉａｎ１２００Ｌ三連四重極質量分析計を連結した２つのＶａｒｉａｎ  ＰｒｏＳｔａｒ  ２１０  ＬＣポンプからなるものであった。分離をＨｙｐｅｒｃａｒｂカラム（５０ｍｍ×２．１ｍｍ、３ｍｍ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＃３５００３−０５２１３０）で実施した。勾配溶出を９８％溶液Ａ（水中の０．１％ギ酸）で開始させ、続いて８分間で３８％溶液Ｂ（アセトニトリル中の０．１％ギ酸）に増大させた。次いでカラムを９０％Ｂで５分間フラッシュし、９８％Ａでさらに８分間かけて再生させた。流速は０．２５ｍＬ／分であった。３分目と１１分目の間、溶離液を質量分析計のイオン源に切り替えた。ＳＡＭ（ｍ／ｚ３９９→２５０）、ＳＡＨ（ｍ／ｚ３８５→２５０）および［ｄ−４］−ＳＡＨ（ｍ／ｚ３８９→１３６）について前駆体生成物の転移を監視した。最適のイオン源パラメーターは：キャピラリー電圧：ＳＡＭとＳＡＨの両方について３２Ｖ、衝突エネルギー：ＳＡＭおよびＳＡＨについてそれぞれ９Ｖおよび７Ｖ、ニードル電圧：５０００Ｖおよびシールド電圧：６００Ｖであった。乾燥用ガスとして窒素を３００℃の温度で使用し、インターフェースヒーターを５０℃に設定した。乾燥用ガスおよび噴霧用ガスはそれぞれ２０および５０ｐｓｉに設定した。
【０１９２】
細胞ベースのＳＡＭ分析。ＬＳ１７４Ｔ細胞を、５％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地で培養した。細胞をＦＩＤＡＳ試薬で２４時間または４８時間処理した。細胞を収穫し計量した。除タンパク質のために過塩素酸（０．４Ｍ）を細胞ペレット（１００μｌ／１０ｍｇ）に加えた。サンプルを激しく混合し、１０，０００ｇで遠心分離した。６０μｌの上清を２０μｌの内部標準（５μｇ／ｍｌのＳＡＨ−ｄ４）と混合した。サンプルを２．５Ｍ  Ｋ２ＨＰＯ４でｐＨ５〜７に調節し、氷上に１５分間保持して過塩素酸カリウムを沈澱させた。サンプルを２回、１００００ｇで１５分間遠心分離した。５ｕｌの上清を、従来の文献に基づく方法を改変して用いてＬＣ−ＭＳ／ＭＳで分析した（Ｋｒｉｊｔら、Ｊ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ  Ｂ  Ａｎａｌｙｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  ８７７巻、２０６１〜６頁（２００９年）を参照されたい）。ＳＡＭおよびＳＡＨの標準品は、０．４Ｍ過塩素酸（ＰＣＡ）での段階希釈して調製した。個々の較正点は０．０５、０．５、５、５０μｇ／ｍｌであった。
【０１９３】
ＳＡＭ合成。５ｍｇの精製ＭＡＴ２Ａを、５００ｍｌ反応溶液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ．Ｃｌ、５０ｍＭ  ＫＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２）中の１ｍＭ  Ｌ−メチオニンおよび１ｍＭ  ＡＴＰとともに、２５℃で５分間インキュベートした。反応を５００ｍｌ  ０．４Ｍ過塩素酸で停止させ、２．５Ｍ  Ｋ２ＨＰＯ４で中和した。上記したようにして、サンプルを、氷上に１５分間保持して過塩素酸カリウムを沈澱させた。ＳＡＭをＬＣ−ＭＳ／ＭＳで分析した。
【０１９４】
この実施例では、本開示のビオチン化化合物を使用することによって、本明細書に記載するハロゲン化スチルベン類似体のための直接的標的としてメチオニンアデノシルトランスフェラーゼ２Ａ（ＭＡＴ２Ａ）を精製し特定することができた。
【０１９５】
ＣＲＣ細胞溶解物をストレプトアビジンビーズ±ビオチン−ＦｌＤＡＳ（図９Ａ）とともにインキュベートし、結合タンパク質を２．５ｍＭ  Ｄ−ビオチンで溶出させた。精製されたサンプルを４〜１２％勾配のＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離し、銀染色法により分析した（図９Ｂ）。２つの特異的なタンパク質バンドを同定した。これらのバンドをＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＴＯＦ法およびＬＣ−ＭＳ／ＭＳ質量分析法により分析した。両方の方法により、これらの２つのバンドは、上部バンドがメチオニンアデノシルトランスフェラーゼ２Ａ（ＭＡＴ２Ａ）であり、下部バンドがメチオニンアデノシルトランスフェラーゼ２Ｂ（ＭＡＴ２Ｂ）であることが確認された（図９Ｂ）。
【０１９６】
ＭＡＴ２ＡとＭＡＴ２Ｂは互いに結合し複合体を形成するので、どのサブユニットがＦＩＤＡＳ試薬と直接相互作用するかを決定するために、組み換え型ＭＡＴ２ＡおよびＭＡＴ２Ｂを精製し、ＦＩＤＡＳとの相互作用についてテストした。簡単に説明すると、ＧＳＴ−ＭＡＴ２ＡおよびＧＳＴ−ＭＡＴ２Ｂ融合タンパク質をＥ．ｃｏｌｉから発現させ精製した。これらのタンパク質を、ビオチン化誘導体１３を用いるか用いないでストレプトアビジンビーズでインキュベートした（図９Ａ）。結合タンパク質を２．５ｍＭ  Ｄ−ビオチンで溶出させ、抗−ＧＳＴ−Ａｂを用いたウエスタンブロットで分析した。ＭＡＴ２Ａはビオチン化されたＦｌＤＡＳ試薬と直接結合し；ＭＡＴ２ＢはＭＡＴ２Ａを介してＦｌＤＡＳ試薬と間接的に結合することが分かった（図１０）。
【０１９７】
（実施例９）
ＭＡＴ２Ａ酵素活性に対するハロゲン化スチルベン類似体の効果
メチオニンアデノシルトランスフェラーゼは、ＡＴＰおよびＬ−メチオニンからのＳ−アデノシルメチオニン（ａｄｅｎｏｓｌｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ）（ＳＡＭまたはＡｄｏＭｅｔ）合成の反応を触媒する。哺乳動物において、３種類のメチオニンアデノシルトランスフェラーゼ、ＭＡＴＩ／ＩＩＩおよびＭＡＴＩＩが存在する。ＭＡＴＩおよびＩＩＩはα１サブユニット（ＭＡＴ１Ａによりコードされている）の四量体または二量体であり、成体肝臓中に発現する。ＭＡＴ２ＡはＩＩ型メチオニンアデノシルトランスフェラーゼの触媒サブユニット（α２）をコードする。ＭＡＴ２Ｂはα２の制御サブユニットをコードする。ＭＡＴ２ＡおよびＭＡＴ２Ｂは増殖性の細胞およびがんにおいて広範に発現する。ＭＡＴ２Ａは、ＤＮＡメチル化およびタンパク質メチル化を含む多くの細胞メチル化反応のための主要なメチル供与体である、ＳＡＭの細胞レベルを制御する。
【０１９８】
ＦｌＤＡＳ試薬がＭＡＴ２Ａの酵素活性を阻害するかどうかをテストするために、ＡｄｏＭｅｔ（ＳＡＭ）およびＳＡＨ（Ｓ−アデノシルホモシステイン）を検出し分析する（データは示されていない）ためのＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法を開発した。さらに、Ｌ−メチオニンおよびＡＴＰからＳＡＭを合成するためのインビトロでの方法を開発した。結果は、レスベラトロールと化合物４ｒはどちらもＳＡＭ合成におけるＭＡＴ２Ａ活性を阻害し、１０μＭの化合物４ｒは、３０μＭのレスベラトロールよりも、ＬＳ１７４細胞中でのＭＡＴ２Ａ活性を大幅に低下させることを示している。これらのデータは、４ｒが、ＭＡＴ２Ａ阻害においてレスベラトロールより著しく強力であることを示唆している（図１１Ａ）。ＳＡＭおよびＳＡＨの阻害についてのアッセイにおける他のハロゲン化スチルベン類似体のテストにより、化合物４ｄｄは、ＭＡＴ２Ａの阻害ならびにＳＡＭおよびＳＡＨの低下において４ｒよりさらに強力であることが示された（図１１Ｂおよび１１Ｃ）。図１１Ｂおよび１１Ｃにおいて、それぞれＳＡＭおよびＳＡＨ濃度の低下をもたらすことにおける３μＭの４ｄｄの効果を、１０ｕＭの４ｒおよび３０ｕＭのレスベラトロールと比較した。これらの結果は、化合物４ｄｄは、レスベラトロールより大幅に強力である化合物４ｒよりもさらに強力であることを示している。
【０１９９】
（実施例１０）
細胞増殖に対するＭＡＴ２ＡおよびＭＡＴ２Ｂ遺伝子阻害の効果
この実施例では、細胞増殖に対するＭＡＴ２Ａ遺伝子およびＭＡＴ２Ｂ遺伝子の阻害の効果を試験した。細胞増殖におけるＭＡＴ２ＡおよびＭＡＴ２Ｂの生物学的機能を試験するために、ＭＡＴ２Ａ遺伝子またはＭＡＴ２Ｂ遺伝子の発現をｓｈＲＮＡでノックダウンした（図１２Ａおよび１２Ｂ）。ＭＡＴ２Ａ  ｓｈＲＮＡとＭＡＴ２Ｂ  ｓｈＲＮＡはどちらも肝臓がん細胞Ｈｅｐ３Ｂの増殖を阻害した（図１２Ｃ）。ＭＡＴ２ＡおよびＭＡＴ２Ｂが結腸がん細胞増殖に必要であるかどうかをテストするために、ＭＡＴ２Ａ遺伝子およびＭＡＴ２Ｂ遺伝子を、結腸がん細胞、ＬＳ１７４ＴおよびＨＴ２９においてノックダウンさせた。ＬＳ１７４ＴおよびＨＴ２９における細胞増殖に対するＭＡＴ２ＡおよびＭＡＴ２Ｂの阻害の効果についての時間経過試験において、ＭＡＴ２Ａ  ｓｈＲＮＡとＭＡＴ２Ｂ  ｓｈＲＮＡはどちらも結腸がん細胞の増殖を阻害し、がん細胞増殖の阻害において、ＭＡＴ２Ａの阻害はＭＡＴ２Ｂの阻害より効果的であることが判明した（図１３Ａおよび１３Ｂ）。
【０２００】
（実施例１１）
インビトロでの細胞増殖に対するハロゲン化スチルベン類似体の代謝産物の効果
上記に示したようにして、本開示のハロゲン化スチルベンのいくつかの代謝産物を合成した（実施例２および図３）。この試験において、細胞増殖に対するこれらの代謝産物の一部の効果を試験した。化合物４ａａ、４ｄｄおよび４ｅｅは、レスベラトロールならびに化合物４ｒより著しく効果的であった（図１４および１５）。
【０２０１】
（実施例１２）
マウスにおける、インビボでの細胞増殖に対するハロゲン化スチルベン類似体の代謝産物の効果
この試験において、ハロゲン化スチルベン類似体の代謝産物の経口効能をマウスでテストした。
【０２０２】
異種移植したヌードマウスを、上記およびＺｈａｎｇら、Ｊ．  ｏｆ  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ５４巻、１２８８〜１２９７頁（２０１１年））に記載されているプロトコルに従って開発した。簡単に説明すると、ＨＴ２９細胞をヌードマウスの側腹部に皮下注射した。次いでマウスを、ＰＥＧ４００に溶解した化合物４ｄｄ、２０ｍｇ／ｋｇを用い強制経口投与により処置した。実施例７に記載したように、コーンオイルに溶解した化合物４ｒのＩＰ注射により、異種移植片の腫瘍成長が阻害された。ここで、本開示のハロゲン化スチルベンはＰＥＧ４００およびシクロデキストリン（ｃｙｃｌｅｄｅｘｔｒａｎ）などの他の溶媒にも溶解することができることも分かった。
【０２０３】
この結果は、４ｄｄが、体重に対して何ら有害作用をもたらすことなく、異種移植された腫瘍の成長を著しく阻害することを示している（図１６）。
【０２０４】
（実施例１３）
ハロゲン化スチルベン類似体は他のタイプのがんを阻害する
上記で論じたように、本開示のハロゲン化スチルベン類似体はＭＡＴ２Ａと結合し酵素機能を阻害し、これは結腸がん細胞増殖の阻害をもたらす。例えば、肝臓がんにおいて、ＭＡＴ１Ａの発現は減少するが、ＭＡＴ２Ａの発現は増大することが分かっているので（Ｃａｉら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ２４巻、１０９０〜７頁（１９９６年）を参照されたい）、出願者らは、本開示の化合物は、他のタイプのがん、特にＭＡＴ２Ａの活性または発現が増大するがんの増殖を阻害するはずであると仮定した。
【０２０５】
この仮説をテストするために、いくつかのがん細胞系を本開示のハロゲン化スチルベン類似体で処理した。結果は、ハロゲン化スチルベン類似体が他のタイプのがんも阻害できることを示している。図１７に示すように、本開示の化合物は乳がん（図１７Ａ）、肺がん（図１７ＢおよびＣ）、カルチノイド腫瘍（図１７Ｄ）および前立腺がん（図１７Ｅ）細胞系の細胞増殖を阻害した。
【０２０６】
（実施例１４）
ＭＡＴ２Ａとハロゲン化スチルベン類似体の結合試験
本開示のハロゲン化スチルベン類似体がＭＡＴ１Ａとも結合するかどうかをテストするために、Ｈｉｓタグ付きＭＡＴ１ＡをＥ．ｃｏｌｉ中にクローン化しそれから精製した。インビトロでの結合アッセイを実施した。結果は、試験したこれらの化合物はＭＡＴ２Ａだけに結合し、ＭＡＴ１Ａには結合しないことを示している（図１８Ｂ）。公開されているＭＡＴ構造によれば、いくつかの主要残基が基質結合および触媒作用に関与している。これらの主要残基の中で、リシン２６５はＭＡＴ１ＡとＭＡＴ２Ａの間、および異なる種の間で保存される。リシン２６５がロイシンに変異すると（Ｋ２６５Ｌ、図１８Ａ）、ＭＡＴ２Ａと化合物１３との間の結合は著しく減少し、これはＫ２６５が本開示の化合物との結合に関与していることを示唆している（図１８Ｃ）。総合すれば、ＦｌＤＡＳ試薬はＭＡＴ２Ａの特異的な阻害剤であり、複数のがんならびに代謝性疾患のための有望な薬物の候補である。
【０２０７】
（実施例１５）
他のＭＡＴ２Ａ関連疾患または障害の阻害におけるハロゲン化スチルベン類似体の効能
ＭＡＴ２Ａは、Ｂ型肝炎感染症によって肝臓において誘導されることも示されている（Ｌｉｕら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２８６巻、１７１６８〜８０頁（２０１１年））。本開示の化合物はＭＡＴ２Ａを阻害しＳＡＭを減少させるのに効果的であるので、これらの化合物は、これらに限定されないが糖尿病などの代謝性障害、心臓疾患、老化、肥満ならびにアルツハイマー病およびパーキンソン病などの神経変性疾患を含む、ＭＡＴ２Ａが関与する可能性がある任意の疾患または状態を処置するのに効果的であるはずである。
【０２０８】
本開示の好ましい実施形態およびその多用途性の実施例だけを本開示に示し記載している。本開示は種々の他の組合せおよび環境で用いることができ、本明細書で明示されたような本発明の概念の範囲内での変更または改変が可能であることを理解すべきである。したがって、例えば当業者は、慣行的実験しか用いないで、本明細書に記載する特定の物質、手順および配置に対する多くの均等物を理解するまたは確認することができる。そうした均等物は本開示の範囲内であると考えられ、以下の特許請求の範囲によって包含される。本開示で引用される学術論文を含むあらゆる特許および／または出版物を参照により本明細書に明確に組み込む。
【図１】
2014512337.tif 000010
【図２】
2014512337.tif 000011
【図３】
2014512337.tif 000012
【図４】
2014512337.tif 000013
【図５−１】
2014512337.tif 000014
【図５−２】
2014512337.tif 000015
【図６−１】
2014512337.tif 000016
【図６−２】
2014512337.tif 000017
【図７】
2014512337.tif 000018
【図８】
2014512337.tif 000019
【図９Ａ】
2014512337.tif 000020
【図９Ｂ】
2014512337.tif 000021
【図１０】
2014512337.tif 000022
【図１１】
2014512337.tif 000023
【図１３】
2014512337.tif 000024
【図１４】
2014512337.tif 000025
【図１５】
2014512337.tif 000026
【図１６】
2014512337.tif 000027
【図１７−１】
2014512337.tif 000028
【図１７−２】
2014512337.tif 000029
【図１７−３】
2014512337.tif 000030
【図１８】
2014512337.tif 000031
【図１２】
2014512337.tif 000032
【手続補正書】
【提出日】平成26年2月14日(2014.2.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）：
【化５】
2014512337.tif 000033
（式中、ＲａおよびＲｂは独立に、Ｈ、アルキル、ハロ、アルコキシ、シアノであり；ＸはＡｒ１上の少なくとも１つのハロゲンを表し；Ａｒ１およびＡｒ２のそれぞれはアリールまたはヘテロアリールであり、これらはハロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアルキルアミノ、ジアルキルアミノのＮ−オキシド、トリアルキルアンモニウム、メルカプト、アルキルチオ、アルカノイル、ニトロ、ニトロシル、シアノ、アルコキシ、アルケニルオキシ、アリール、ヘテロアリール、スルホニル、スルホンアミド、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１ＣＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＮＲ１２Ｒ１３（式中、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３は独立にＨ、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたはフッ素である）でさらに置換されていてよく；Ｒ１〜Ｒ１０は独立に、Ｈ、ハロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ジアルキルアミノのＮ−オキシド、アリールアルキルアミノ、ジアルキルオキシアミノ、トリアルキルアンモニウム、メルカプト、アルキルチオ、アルカノイル、ニトロ、ニトロシル、シアノ、アルコキシ、アルケニルオキシ、アリール、ヘテロアリール、スルホニル、スルホンアミド、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１ＣＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＮＲ１２Ｒ１３であり；ＲｃはＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリールであり、Ｒｄはアルキル基であり、Ｚは非共有電子対、Ｈ、アルキル、酸素であり；ただし、式（Ｉ）について：Ａｒ２は該アリール環中に少なくとも１つの窒素原子または該アリール環上に少なくとも１つの窒素置換基を含み、式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）について：Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つはハロゲンであり、Ｒ６〜Ｒ１０の少なくとも１つは窒素含有置換基である）
による化合物。
【請求項２】
式（ＩＩ）を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つが塩素および／またはフッ素置換基であり、Ｒ６〜Ｒ１０の少なくとも１つがＮＲｃＲｄＺ置換基（式中、ＲｃはＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリールであり、Ｒｄはアルキル基であり、Ｚは非共有電子対、Ｈ、アルキル、酸素である）である、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つがフッ素置換基であり、Ｒｄが低級アルキル基である、請求項２または３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つが塩素置換基であり、Ｒｄが低級アルキル基である、請求項２または３に記載の化合物。
【請求項６】
式（ＩＩＩ）を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
（Ｅ）−４−（２−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（３−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（４−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン；（Ｅ）−４−（２−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジフェニルアニリン；（Ｅ）−１−（４−（２−フルオロスチリル）フェニル）−４−メチルピペラジン；（Ｅ）−４−（２−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルナフタレン−１−アミン；（Ｅ）−２−（４−（２−フルオロスチリル）フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール；（Ｅ）−４−（２，３−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２，４−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２，５−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−２−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−３−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン；（Ｅ）−４−（３，４−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（３，５−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−（２，３，６−トリフルオロスチリル）アニリン；（Ｅ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−（２，４，６−トリフルオロスチリル）アニリン；（Ｅ）−４−（２−クロロ−６−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２，６−ジクロロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロフェネチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；および（Ｅ）−２−ベンズアミド−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに記載の化合物の代謝産物。
【請求項９】
（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンオキシド；（Ｅ）−４−（２−クロロ−６−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンオキシド；（Ｅ）−４−（２，６−ジクロロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンオキシド；（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ−メチルアニリン、（Ｅ）−４−（２−クロロ−６−フルオロスチリル）−Ｎ−メチルアニリン；（ＥおよびＺ）−４−（２，６−ジクロロスチリル）−Ｎ−メチルアニリン；および（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルベンゼンアミニウムヨージドからなる群から選択される、請求項８に記載の代謝産物。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれかに記載の化合物のビオチン化誘導体。
【請求項１１】
（Ｅ）−Ｎ−（２−（２，６−ジフルオロスチリル）−５−（ジメチルアミノ）フェニル）−５−（２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド；（Ｅ）−Ｎ−（４−（２，６−ジフルオロスチリル）フェニル）−５−（２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド；（Ｅ）−Ｎ−（４−（２，６−ジフルオロスチリル）フェニル）−Ｎ−メチル−５−（２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド；およびＮ−（２−（４−（２，６−ジフルオロスチリル）フェニル）−４−オキソ−８，１１−ジオキサ−２，５−ジアザトリデカン−１３−イル）−５−（２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミドからなる群から選択される、請求項１０に記載のビオチン化誘導体。
【請求項１２】
式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）：
【化６】
2014512337.tif 000034
（式中、ＲａおよびＲｂは独立に、Ｈ、アルキル、ハロ、アルコキシ、シアノであり；ＸはＡｒ１上の少なくとも１つのハロゲンを表し；Ａｒ１およびＡｒ２のそれぞれはアリールまたはヘテロアリールであり、これらはハロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアルキルアミノ、ジアルキルアミノのＮ−オキシド、トリアルキルアンモニウム、メルカプト、アルキルチオ、アルカノイル、ニトロ、ニトロシル、シアノ、アルコキシ、アルケニルオキシ、アリール、ヘテロアリール、スルホニル、スルホンアミド、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１ＣＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＮＲ１２Ｒ１３（式中、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３は独立にＨ、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたはフッ素である）でさらに置換されていてよく；Ｒ１〜Ｒ１０は独立に、Ｈ、ハロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ジアルキルアミノのＮ−オキシド、アリールアルキルアミノ、ジアルキルオキシアミノ、トリアルキルアンモニウム、メルカプト、アルキルチオ、アルカノイル、ニトロ、ニトロシル、シアノ、アルコキシ、アルケニルオキシ、アリール、ヘテロアリール、スルホニル、スルホンアミド、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１ＣＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＮＲ１２Ｒ１３であり；ＲｃはＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリールであり、Ｒｄはアルキル基であり、Ｚは非共有電子対、Ｈ、アルキル、酸素であり；ただし式（Ｉ）について：Ａｒ２は該アリール環中に少なくとも１つの窒素原子または該アリール環上に少なくとも１つの窒素置換基を含み、式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）について：Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つはハロゲンであり、Ｒ６〜Ｒ１０の少なくとも１つは窒素含有置換基である）
からなる群から選択される化合物を含む組成物。
【請求項１３】
前記化合物が式（ＩＩ）の化合物であって、ここで、Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つが塩素および／またはフッ素置換基であり、Ｒ６〜Ｒ１０の少なくとも１つがＮＲｃＲｄＺ置換基（式中、ＲｃはＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリールであり、Ｒｄはアルキル基であり、Ｚは非共有電子対、Ｈ、アルキル、酸素である）である化合物である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記化合物が式（ＩＩ）の化合物であって、ここで、Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つがフッ素置換基であり、Ｒｄが低級アルキル基である化合物である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
前記化合物が式（ＩＩＩ）の化合物である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１６】
請求項１〜７のいずれかに記載の化合物の代謝産物を含む組成物。
【請求項１７】
薬学的に許容されるキャリアをさらに含む、請求項１２〜１６のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
増大したメチオニンアデノシルトランスフェラーゼ２Ａ（ＭＡＴ２Ａ）の生物学的活性またはレベルと関連する障害を処置するための、請求項１２〜１７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１９】
がんを処置するための、請求項１２〜１７のいずれかに記載の組成物。
【請求項２０】
処置される前記がんが、結腸がん、乳がん、肺がん、前立腺がんおよび肝臓がんからなる群から選択される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
増大したメチオニンアデノシルトランスフェラーゼ２Ａ（ＭＡＴ２Ａ）の生物学的活性またはレベルと関連する障害を処置するための医薬品の製造における、請求項１２〜１７のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項２２】
がんを処置するための医薬品の製造における、請求項１２〜１７のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項２３】
前記がんが、結腸がん、乳がん、肺がん、前立腺がんおよび肝臓がんからなる群から選択される、請求項２２に記載の使用。
【請求項２４】
被験体におけるＭＡＴ２Ａの生物学的活性またはレベルを低下させるための組成物であって、式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）：
【化７】
2014512337.tif 000035
（式中、ＲａおよびＲｂは独立に、Ｈ、アルキル、ハロ、アルコキシ、シアノであり；ＸはＡｒ１上の少なくとも１つのハロゲンを表し；Ａｒ１およびＡｒ２のそれぞれはアリールまたはヘテロアリールであり、これらはハロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアルキルアミノ、ジアルキルアミノのＮ−オキシド、トリアルキルアンモニウム、メルカプト、アルキルチオ、アルカノイル、ニトロ、ニトロシル、シアノ、アルコキシ、アルケニルオキシ、アリール、ヘテロアリール、スルホニル、スルホンアミド、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１ＣＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＮＲ１２Ｒ１３（式中、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３は独立にＨ、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたはフッ素である）でさらに置換されていてよく；Ｒ１〜Ｒ１０は独立に、Ｈ、ハロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ジアルキルアミノのＮ−オキシド、アリールアルキルアミノ、ジアルキルオキシアミノ、トリアルキルアンモニウム、メルカプト、アルキルチオ、アルカノイル、ニトロ、ニトロシル、シアノ、アルコキシ、アルケニルオキシ、アリール、ヘテロアリール、スルホニル、スルホンアミド、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１ＣＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＮＲ１２Ｒ１３であり；ＲｃはＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリールであり、Ｒｄはアルキル基であり、Ｚは非共有電子対、Ｈ、アルキル、酸素であり；ただし式（Ｉ）について：Ａｒ２は該アリール環中に少なくとも１つの窒素原子または該アリール環上に少なくとも１つの窒素置換基を含み、式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）について：Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つはハロゲンであり、Ｒ６〜Ｒ１０の少なくとも１つは窒素含有置換基である）
の化合物からなる群から選択される化合物を含む、組成物。
【請求項２５】
複合タンパク質サンプル中のＭＡＴ２Ａのレベルを検出するための検出可能に標識された式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物の使用であって、該標識された化合物が該サンプル中に存在するＭＡＴ２Ａと結合する条件下で、検出可能に標識された式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物を該複合タンパク質の混合物と接触させるステップと；結合した該ＭＡＴ２Ａを単離するステップと；任意の非結合タンパク質を除去するステップと、該サンプル中の該検出可能に標識された化合物と結合した該ＭＡＴ２Ａの該レベルを検出するステップとを含む使用。
【請求項２６】
前記検出可能に標識された化合物がビオチン化された化合物であり、前記検出をウエスタンブロッティング、親和性クロマトグラフィー、ＨＰＬＣ、ＦＰＬＣ、イオン交換、サイズ排除および質量分析からなる群から選択される方法で実施する、請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
被験体におけるがんを診断するための組成物であって、前記組成物は、検出可能に標識された式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物を含み、そして前記組成物は、該被験体から得られたタンパク質を含むサンプル中のタンパク質と接触させられてＭＡＴＡ２と結合し、該サンプル中のＭＡＴ２Ａのレベルが検出されることを特徴とし、該サンプル中のＭＡＴ２Ａの該レベルが正常な対照標準のそれと比較され、該サンプル中のＭＡＴ２Ａの該レベルが正常な対照標準のそれより統計的に高い場合、がんの診断が指示される、組成物。
【請求項２８】
被験体から得られる前記サンプルが、乳がん細胞、前立腺がん細胞、結腸直腸がん細胞、肺がん細胞、結腸がん細胞、膀胱がん細胞、頭頸部がん細胞、腸がん細胞、卵巣がん細胞または皮膚がん細胞から選択されるがん細胞を含む生検サンプルである、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
式（Ｉ）、式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）の１つもしくは複数の化合物または１つもしくは複数の薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグまたは代謝産物で処置を受けるための候補者である被験体を特定するための組成物であって、前記組成物は、検出可能に標識された式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物を含み、そして前記組成物は、該被験体から得られたタンパク質サンプル中のタンパク質と接触させられてＭＡＴＡ２と結合し、該サンプル中のＭＡＴ２Ａのレベルが検出されることを特徴とし、該サンプル中のＭＡＴ２Ａの該レベルが正常な対照標準のそれと比較され、その結果として、該サンプル中のＭＡＴ２Ａの該レベルが該正常な対照標準のそれより統計的に高い場合、該被験体が式（Ｉ）、式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）の化合物または１つもしくは複数の薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグまたは代謝産物で処置するための候補者であることが指示される、組成物。
【請求項３０】
複合タンパク質サンプル中のＭＡＴ２Ａのレベルを検出するための、請求項１〜９のいずれかに記載の検出可能に標識された形態の化合物を含む診断試薬。
【請求項３１】
請求項３０に記載の診断試薬を含む診断キット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
他の実施形態では、このキットは、診断試薬として使用するための、検出可能に標識された式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物を含む診断キットであってよい。他の関連実施形態では、標識された化合物は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の１つもしくは複数の化合物のビオチン化誘導体である。他の実施形態では、このキットは、標識された式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物の標識の結合パートナーを含む。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）：
【化５】
2014512337.tif 000036
（式中、ＲａおよびＲｂは独立に、Ｈ、アルキル、ハロ、アルコキシ、シアノであり；ＸはＡｒ１上の少なくとも１つのハロゲンを表し；Ａｒ１およびＡｒ２のそれぞれはアリールまたはヘテロアリールであり、これらはハロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアルキルアミノ、ジアルキルアミノのＮ−オキシド、トリアルキルアンモニウム、メルカプト、アルキルチオ、アルカノイル、ニトロ、ニトロシル、シアノ、アルコキシ、アルケニルオキシ、アリール、ヘテロアリール、スルホニル、スルホンアミド、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１ＣＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＮＲ１２Ｒ１３（式中、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３は独立にＨ、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたはフッ素である）でさらに置換されていてよく；Ｒ１〜Ｒ１０は独立に、Ｈ、ハロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ジアルキルアミノのＮ−オキシド、アリールアルキルアミノ、ジアルキルオキシアミノ、トリアルキルアンモニウム、メルカプト、アルキルチオ、アルカノイル、ニトロ、ニトロシル、シアノ、アルコキシ、アルケニルオキシ、アリール、ヘテロアリール、スルホニル、スルホンアミド、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１ＣＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＮＲ１２Ｒ１３であり；ＲｃはＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリールであり、Ｒｄはアルキル基であり、Ｚは非共有電子対、Ｈ、アルキル、酸素であり；ただし、式（Ｉ）について：Ａｒ２は該アリール環中に少なくとも１つの窒素原子または該アリール環上に少なくとも１つの窒素置換基を含み、式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）について：Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つはハロゲンであり、Ｒ６〜Ｒ１０の少なくとも１つは窒素含有置換基である）
による化合物。
（項目２）
式（ＩＩ）を含む、項目１に記載の化合物。
（項目３）
Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つが塩素および／またはフッ素置換基であり、Ｒ６〜Ｒ１０の少なくとも１つがＮＲｃＲｄＺ置換基（式中、ＲｃはＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリールであり、Ｒｄはアルキル基であり、Ｚは非共有電子対、Ｈ、アルキル、酸素である）である、項目２に記載の化合物。
（項目４）
Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つがフッ素置換基であり、Ｒｄが低級アルキル基である、項目２または３に記載の化合物。
（項目５）
Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つが塩素置換基であり、Ｒｄが低級アルキル基である、項目２または３に記載の化合物。
（項目６）
式（ＩＩＩ）を含む、項目１に記載の化合物。
（項目７）
（Ｅ）−４−（２−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（３−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（４−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン；（Ｅ）−４−（２−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジフェニルアニリン；（Ｅ）−１−（４−（２−フルオロスチリル）フェニル）−４−メチルピペラジン；（Ｅ）−４−（２−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルナフタレン−１−アミン；（Ｅ）−２−（４−（２−フルオロスチリル）フェニル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール；（Ｅ）−４−（２，３−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２，４−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２，５−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−２−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−３−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン；（Ｅ）−４−（３，４−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（３，５−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−（２，３，６−トリフルオロスチリル）アニリン；（Ｅ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−（２，４，６−トリフルオロスチリル）アニリン；（Ｅ）−４−（２−クロロ−６−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２，６−ジクロロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロフェネチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン；および（Ｅ）−２−ベンズアミド−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンからなる群から選択される、項目１に記載の化合物。
（項目８）
項目１〜７のいずれかに記載の化合物の代謝産物。
（項目９）
（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンオキシド；（Ｅ）−４−（２−クロロ−６−フルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンオキシド；（Ｅ）−４−（２，６−ジクロロスチリル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンオキシド；（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ−メチルアニリン、（Ｅ）−４−（２−クロロ−６−フルオロスチリル）−Ｎ−メチルアニリン；（ＥおよびＺ）−４−（２，６−ジクロロスチリル）−Ｎ−メチルアニリン；および（Ｅ）−４−（２，６−ジフルオロスチリル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルベンゼンアミニウムヨージドからなる群から選択される、項目８に記載の代謝産物。
（項目１０）
項目１〜７のいずれかに記載の化合物のビオチン化誘導体。
（項目１１）
（Ｅ）−Ｎ−（２−（２，６−ジフルオロスチリル）−５−（ジメチルアミノ）フェニル）−５−（２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド；（Ｅ）−Ｎ−（４−（２，６−ジフルオロスチリル）フェニル）−５−（２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル
）ペンタンアミド；（Ｅ）−Ｎ−（４−（２，６−ジフルオロスチリル）フェニル）−Ｎ−メチル−５−（２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド；およびＮ−（２−（４−（２，６−ジフルオロスチリル）フェニル）−４−オキソ−８，１１−ジオキサ−２，５−ジアザトリデカン−１３−イル）−５−（２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミドからなる群から選択される、項目１０に記載のビオチン化誘導体。
（項目１２）
式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）：
【化６】
2014512337.tif 000037
（式中、ＲａおよびＲｂは独立に、Ｈ、アルキル、ハロ、アルコキシ、シアノであり；ＸはＡｒ１上の少なくとも１つのハロゲンを表し；Ａｒ１およびＡｒ２のそれぞれはアリールまたはヘテロアリールであり、これらはハロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアルキルアミノ、ジアルキルアミノのＮ−オキシド、トリアルキルアンモニウム、メルカプト、アルキルチオ、アルカノイル、ニトロ、ニトロシル、シアノ、アルコキシ、アルケニルオキシ、アリール、ヘテロアリール、スルホニル、スルホンアミド、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１ＣＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＮＲ１２Ｒ１３（式中、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３は独立にＨ、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたはフッ素である）でさらに置換されていてよく；Ｒ１〜Ｒ１０は独立に、Ｈ、ハロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ジアルキルアミノのＮ−オキシド、アリールアルキルアミノ、ジアルキルオキシアミノ、トリアルキルアンモニウム、メルカプト、アルキルチオ、アルカノイル、ニトロ、ニトロシル、シアノ、アルコキシ、アルケニルオキシ、アリール、ヘテロアリール、スルホニル、スルホンアミド、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１ＣＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＮＲ１２Ｒ１３であり；ＲｃはＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリールであり、Ｒｄはアルキル基であり、Ｚは非共有電子対、Ｈ、アルキル、酸素であり；ただし式（Ｉ）について：Ａｒ２は該アリール環中に少なくとも１つの窒素原子または該アリール環上に少なくとも１つの窒素置換基を含み、式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）について：Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つはハロゲンであり、Ｒ６〜Ｒ１０の少なくとも１つは窒素含有置換基である）
からなる群から選択される化合物を含む組成物。
（項目１３）
前記化合物が式（ＩＩ）の化合物であって、ここで、Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つが塩素および／またはフッ素置換基であり、Ｒ６〜Ｒ１０の少なくとも１つがＮＲｃＲｄＺ置換基（式中、ＲｃはＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリールであり、Ｒｄはアルキル基であり、Ｚは非共有電子対、Ｈ、アルキル、酸素である）である化合物である、項目１２に記載の組成物。
（項目１４）
前記化合物が式（ＩＩ）の化合物であって、ここで、Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つがフッ素置換基であり、Ｒｄが低級アルキル基である化合物である、項目１２に記載の組成物。
（項目１５）
前記化合物が式（ＩＩＩ）の化合物である、項目１２に記載の組成物。
（項目１６）
項目１〜７のいずれかに記載の化合物の代謝産物を含む組成物。
（項目１７）
薬学的に許容されるキャリアをさらに含む、項目１２〜１６のいずれかに記載の組成物。
（項目１８）
増大したメチオニンアデノシルトランスフェラーゼ２Ａ（ＭＡＴ２Ａ）の生物学的活性またはレベルと関連する障害を処置するための、項目１２〜１７のいずれかに記載の組成物。
（項目１９）
がんを処置するための、項目１２〜１７のいずれかに記載の組成物。
（項目２０）
処置される前記がんが、結腸がん、乳がん、肺がん、前立腺がんおよび肝臓がんからなる群から選択される、１９に記載の組成物。
（項目２１）
増大したメチオニンアデノシルトランスフェラーゼ２Ａ（ＭＡＴ２Ａ）の生物学的活性またはレベルと関連する障害を処置するための医薬品の製造における、項目１２〜１７のいずれかに記載の組成物の使用。
（項目２２）
がんを処置するための医薬品の製造における、項目１２〜１７のいずれかに記載の組成物の使用。
（項目２３）
前記がんが、結腸がん、乳がん、肺がん、前立腺がんおよび肝臓がんからなる群から選択される、項目２２に記載の使用。
（項目２４）
被験体におけるＭＡＴ２Ａの生物学的活性またはレベルを低下させるための、式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）：
【化７】
2014512337.tif 000038
（式中、ＲａおよびＲｂは独立に、Ｈ、アルキル、ハロ、アルコキシ、シアノであり；ＸはＡｒ１上の少なくとも１つのハロゲンを表し；Ａｒ１およびＡｒ２のそれぞれはアリールまたはヘテロアリールであり、これらはハロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアルキルアミノ、ジアルキルアミノのＮ−オキシド、トリアルキルアンモニウム、メルカプト、アルキルチオ、アルカノイル、ニトロ、ニトロシル、シアノ、アルコキシ、アルケニルオキシ、アリール、ヘテロアリール、スルホニル、スルホンアミド、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１ＣＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＮＲ１２Ｒ１３（式中、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３は独立にＨ、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたはフッ素である）でさらに置換されていてよく；Ｒ１〜Ｒ１０は独立に、Ｈ、ハロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ジアルキルアミノのＮ−オキシド、アリールアルキルアミノ、ジアルキルオキシアミノ、トリアルキルアンモニウム、メルカプト、アルキルチオ、アルカノイル、ニトロ、ニトロシル、シアノ、アルコキシ、アルケニルオキシ、アリール、ヘテロアリール、スルホニル、スルホンアミド、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、ＮＲ１１ＣＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＯ（Ｒ１３）、ＮＲ１１ＣＯＮＲ１２Ｒ１３であり；ＲｃはＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリールであり、Ｒｄはアルキル基であり、Ｚは非共有電子対、Ｈ、アルキル、酸素であり；ただし式（Ｉ）について：Ａｒ２は該アリール環中に少なくとも１つの窒素原子または該アリール環上に少なくとも１つの窒素置換基を含み、式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）について：Ｒ１〜Ｒ５の少なくとも１つはハロゲンであり、Ｒ６〜Ｒ１０の少なくとも１つは窒素含有置換基である）
の化合物からなる群から選択される化合物についての方法の使用。
（項目２５）
複合タンパク質サンプル中のＭＡＴ２Ａのレベルを検出するための検出可能に標識された式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物の使用であって、該標識された化合物が該サンプル中に存在するＭＡＴ２Ａと結合する条件下で、検出可能に標識された式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物を該複合タンパク質の混合物と接触させるステップと；結合した該ＭＡＴ２Ａを単離するステップと；任意の非結合タンパク質を除去するステップと、該サンプル中の該検出可能に標識された化合物と結合した該ＭＡＴ２Ａの該レベルを検出するステップとを含む使用。
（項目２６）
前記検出可能に標識された化合物がビオチン化された化合物であり、前記検出をウエスタンブロッティング、親和性クロマトグラフィー、ＨＰＬＣ、ＦＰＬＣ、イオン交換、サイズ排除および質量分析からなる群から選択される方法で実施する、項目２５に記載の使用。
（項目２７）
被験体におけるがんを診断するための検出可能に標識された式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物の使用であって、（１）該被験体からのタンパク質を含むサンプルを得るステップと，（２）検出可能に標識された式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物を該サンプル中のタンパク質と接触させてＭＡＴＡ２と結合させ、該サンプル中のＭＡＴ２Ａのレベルを検出するステップと；（３）該サンプル中のＭＡＴ２Ａの該レベルを正常な対照標準のそれと比較するステップとを含み、該サンプル中のＭＡＴ２Ａの該レベルが正常な対照標準のそれより統計的に高い場合、がんの診断が指示されるステップとを含む使用。
（項目２８）
被験体から得られる前記サンプルが、乳がん細胞、前立腺がん細胞、結腸直腸がん細胞、肺がん細胞、結腸がん細胞、膀胱がん細胞、頭頸部がん細胞、腸がん細胞、卵巣がん細胞または皮膚がん細胞から選択されるがん細胞を含む生検サンプルである、項目２７に記載の使用。
（項目２９）
式（Ｉ）、式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）の１つもしくは複数の化合物または１つもしくは複数の薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグまたは代謝産物で処置を受けるための候補者である被験体を特定するための検出可能に標識された式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物の使用であって；（１）該被験体からタンパク質サンプルを得るステップと；（２）検出可能に標識された式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物を該サンプル中のタンパク質と接触させてＭＡＴＡ２と結合させ、該サンプル中のＭＡＴ２Ａのレベルを検出するステップと；（３）該サンプル中のＭＡＴ２Ａの該レベルを正常な対照標準のそれと比較するステップであって、その結果として、該サンプル中のＭＡＴ２Ａの該レベルが該正常な対照標準のそれより統計的に高い場合、該被験体が式（Ｉ）、式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）の化合物または１つもしくは複数の薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグまたは代謝産物で処置するための候補者であることが指示されるステップ、とを含む使用。
（項目３０）
複合タンパク質サンプル中のＭＡＴ２Ａのレベルを検出するための、項目１〜９のいずれかに記載の検出可能に標識された形態の化合物を含む診断試薬。
（項目３１）
項目３０に記載の診断試薬を含む診断キット。
【国際調査報告】
2014512337.tif 000039
2014512337.tif 000040
2014512337.tif 000041
2014512337.tif 000042