(57)【要約】本発明は、例えば、ナノ粒子の表面を改変して、ｉｎ  ｖｉｖｏ循環時間および標的化送達性能を増大させるための改善された方法および化合物をもたらすために、ホスホン酸コンジュゲートおよび該ホスホン酸コンジュゲートを調製する方法を提供する。本発明は、例えば、ナノ粒子の表面を改変して、ｉｎ  ｖｉｖｏ循環時間および標的化送達性能を増大させるための改善された方法および化合物を可能にするために、ホスホン酸コンジュゲートおよび該ホスホン酸コンジュゲートを調製する方法を提供する。
2014527071.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化４５】
2014527071.tif 000051
（式中、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はそれぞれ、独立して、結合および連結基からなる群より選択され；
Ｒ１は、ナノ粒子、結合成分、標的化剤、診断剤、ステルス剤および四脚型提示成分からなる群より選択され；
Ｒ２はそれぞれ、独立して、ステルス剤、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、カルボン酸またはカルボン酸エステル、ホスホン酸またはホスホン酸エステル、スルホン酸またはスルホン酸エステル、およびヒドロキシからなる群より選択され；
Ｒ３およびＲ４はそれぞれ、独立して、Ｈ、ナノ粒子、結合成分、標的化剤、診断剤およびステルス剤からなる群より選択され、ここで、Ｒ３またはＲ４の少なくとも１つは、Ｈ以外であり；
ｎは、０〜２の整数である）の化合物。
【請求項２】
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４の少なくとも１つが、親水性非免疫原性水溶性連結基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記親水性非免疫原性水溶性連結基が、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリカルボキシラート、多糖およびデキストランからなる群より選択される、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
前記標的化剤がアプタマーである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
前記診断剤が、放射性作用物質、蛍光剤または造影剤である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
前記ステルス剤が、デンドリマー、ポリアルキレンオキシド、ポリビニルアルコール、ポリカルボキシラート、多糖およびヒドロキシアルキルデンプンからなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
前記ステルス剤がポリアルキレンオキシドである、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
前記ポリアルキレンオキシドが、ＰＥＧ１００〜ＰＥＧ１００００の範囲のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
前記ポリアルキレンオキシドが、ＰＥＧ１００、ＰＥＧ５００、ＰＥＧ１０００、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ５０００およびＰＥＧ１００００からなる群より選択されるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である、請求項６に記載の化合物。
【請求項１０】
前記ステルス剤が、連結基で互いに連結された少なくとも２つのＰＥＧ分子を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ１が、式：
【化４６】
2014527071.tif 000052
（式中、
Ｌ５およびＬ６はそれぞれ、独立して、結合および連結基からなる群より選択され；
Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、独立して、標的化剤、診断剤およびステルス剤からなる群より選択される）を有する四脚型提示成分である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ３およびＲ４がそれぞれ、独立して、脂質およびコレステロールからなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ１がステルス剤であり；Ｒ３およびＲ４がそれぞれ結合成分であり、独立して、脂質およびコレステロールからなる群より選択され、ここで、該結合成分がナノ粒子に結合している、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
前記脂質が、飽和Ｃ１０−Ｃ２２アルキルまたは不飽和Ｃ１０−Ｃ２２アルキルである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
ｎが０である、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ１が結合成分であり；Ｒ３およびＲ４が、独立して、標的化剤、診断剤およびステルス剤からなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ１が、ＰＥＧ１００、ＰＥＧ５００、ＰＥＧ１０００、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ５０００およびＰＥＧ１００００からなる群より選択されるステルス剤である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ１が結合成分であり、該結合成分がリン脂質である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１９】
前記リン脂質が、式：
【化４７】
2014527071.tif 000053
（式中、Ｒ７およびＲ８はそれぞれ、独立して、飽和Ｃ１０−２４アルキル基もしくは不飽和Ｃ１０−２４アルキル基または飽和Ｃ１０−２４アルカノイル基もしくは不飽和Ｃ１０−２４アルカノイル基、および置換飽和Ｃ１０−２４アルキル基もしくは置換不飽和Ｃ１０−２４アルキル基または置換飽和Ｃ１０−２４アルカノイル基もしくは置換不飽和Ｃ１０−２４アルカノイル基からなる群より選択される）を有する、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ１およびＲ２がそれぞれステルス剤であり；Ｒ３およびＲ４がそれぞれ、脂質およびコレステロールからなる群より独立して選択される結合成分であり；ｎが１である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２１】
ホスホン酸コンジュゲートを調製する方法であって、式：Ｈ２Ｎ（Ｌ１）−（Ｒ１）を有する第一アミン化合物、式：Ｏ＝Ｃ［（Ｌ２）−（Ｒ２）］ｎを有するカルボニル化合物、および式：
【化４８】
2014527071.tif 000054
を有するＨ−ホスホン酸化合物を、式：
【化４９】
2014527071.tif 000055
（式中、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はそれぞれ、独立して、結合および連結基からなる群より選択され；
Ｒ１は、ナノ粒子、結合成分、標的化剤、診断剤、ステルス剤および四脚型提示成分からなる群より選択され；
Ｒ２はそれぞれ、独立して、ステルス剤、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、カルボン酸またはカルボン酸エステル、ホスホン酸またはホスホン酸エステル、スルホン酸またはスルホン酸エステル、およびヒドロキシからなる群より選択され；
Ｒ３およびＲ４はそれぞれ、独立して、Ｈ、結合成分、標的化剤、診断剤およびステルス剤からなる群より選択され、ここで、Ｒ３またはＲ４の少なくとも１つは、Ｈ以外であり；
ｎは、０〜２の整数であり、ｎが０または１である場合、該カルボニル化合物はアルデヒドである）を有するホスホン酸コンジュゲートを形成するのに十分な条件下で結合させる工程を含む、方法。
【請求項２２】
前記第一アミン化合物、前記カルボニル化合物および前記Ｈ−ホスホン酸化合物を、それぞれ１：２：２のモル比で結合させる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記第一アミン化合物および前記カルボニル化合物を結合させてから、前記Ｈ−ホスホン酸化合物と結合させる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記Ｈ−ホスホン酸化合物および前記カルボニル化合物を結合させてから、前記第一アミン化合物と結合させる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
２つの前記Ｈ−ホスホン酸化合物を隣接させてリポソームの二重層に結合させてから、前記第一アミン化合物および前記カルボニル化合物と結合させる、請求項２１に記載の方法であって、ここで、Ｒ３およびＲ４がそれぞれ、独立して、脂質およびコレステロールからなる群より選択される、方法。
【請求項２６】
式：
【化５０】
2014527071.tif 000056
（式中、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はそれぞれ、独立して、結合および連結基からなる群より選択され；
Ｒ１は、ナノ粒子、結合成分、標的化剤、診断剤およびステルス剤からなる群より選択され；
Ｒ２は、独立して、ステルス剤、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、カルボン酸またはカルボン酸エステル、ホスホン酸またはホスホン酸エステル、スルホン酸またはスルホン酸エステル、およびヒドロキシからなる群より選択され；
Ｒ３およびＲ４はそれぞれ、独立して、Ｈ、ナノ粒子、結合成分、標的化剤、診断剤およびステルス剤からなる群より選択され、ここで、Ｒ３またはＲ４の少なくとも１つは、Ｈ以外であり；
Ｒ９は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル基であり；
ｎは、０〜２の整数である）の化合物。
【請求項２７】
Ｒ３およびＲ４がそれぞれ、独立して、脂質およびコレステロールからなる群より選択され；Ｌ３およびＬ４がそれぞれ結合である、請求項２６に記載の化合物。
【請求項２８】
前記脂質が、飽和Ｃ１０−Ｃ２２アルキルまたは不飽和Ｃ１０−Ｃ２２アルキルである、請求項２７に記載の化合物。
【請求項２９】
Ｒ１がステルス剤である、請求項２６に記載の化合物。
【請求項３０】
前記ステルス剤が、ＰＥＧ１００、ＰＥＧ５００、ＰＥＧ１０００、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ５０００およびＰＥＧ１００００からなる群より選択される、請求項２９に記載の化合物。
【請求項３１】
Ｒ９がＣ１−Ｃ６アルキルであり、Ｌ１が結合である、請求項２６に記載の化合物。
【請求項３２】
ホスホン酸コンジュゲートを調製する方法であって、式：ＨＮ［（Ｌ１）−（Ｒ１）］（Ｒ５）を有する第二アミン化合物、式：Ｏ＝Ｃ［（Ｌ２）−（Ｒ２）］ｎを有するカルボニル化合物、および式：
【化５１】
2014527071.tif 000057
を有するＨ−ホスホン酸化合物を、式：
【化５２】
2014527071.tif 000058
（式中、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はそれぞれ、独立して、結合および連結基からなる群より選択され；
Ｒ１は、ナノ粒子、結合成分、標的化剤、診断剤およびステルス剤からなる群より選択され；
Ｒ２は、独立して、ステルス剤、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、カルボン酸またはカルボン酸エステル、ホスホン酸またはホスホン酸エステル、スルホン酸またはスルホン酸エステル、およびヒドロキシからなる群より選択され；
Ｒ３およびＲ４はそれぞれ、独立して、Ｈ、結合成分、標的化剤、診断剤およびステルス剤からなる群より選択され、ここで、Ｒ３またはＲ４の少なくとも１つは、Ｈ以外であり；
Ｒ９は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル基からなる群より選択され；
ｎは、０〜２の整数であり、ｎが０である場合、該カルボニル化合物はホルムアルデヒドである）を有するホスホン酸コンジュゲートを形成するのに十分な条件下で結合させる工程を含む、方法。
【請求項３３】
請求項１または２６に記載の化合物を含む標的化送達組成物であって、Ｒ３およびＲ４がそれぞれ、ナノ粒子に結合した結合成分であり、Ｒ１が、標的化剤、診断剤およびステルス剤からなる群より選択される、標的化送達組成物。
【請求項３４】
前記ナノ粒子がリポソームであり、Ｒ３およびＲ４がそれぞれ該リポソームの二重層に結合しており、独立して、脂質およびコレステロールからなる群より選択される、請求項３３に記載の標的化送達組成物。
【請求項３５】
請求項１または２６に記載の化合物を含む標的化送達組成物であって、Ｒ１がナノ粒子またはナノ粒子に結合した結合成分であり、Ｒ３およびＲ４がそれぞれ、独立して、標的化剤、診断剤およびステルス剤より選択される、標的化送達組成物。
【請求項３６】
前記ナノ粒子がリポソームであり、Ｒ１が該リポソームの二重層に結合しており、独立して、脂質およびコレステロールからなる群より選択される、請求項３５に記載の標的化送達組成物。
【請求項３７】
被験体におけるがん状態を処置または診断するための方法であって、請求項３３または３５に記載の標的化送達組成物であって、該状態を処置または診断するのに十分な治療剤または診断剤を含み、Ｒ１、Ｒ３およびＲ４の少なくとも１つが標的化剤である標的化送達組成物を該被験体に投与する工程を含む、方法。
【請求項３８】
前記ナノ粒子がリポソームであり、前記治療剤が該リポソームに封入されているか、該リポソームに包埋されているか、または該リポソームに係留されている、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記治療剤が、ドキソルビシン、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔｉｂｉｎｅ）およびタキサンからなる群より選択される抗がん剤である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
標的化治療処置についての被験体の適性を判定する方法であって、請求項３３または３５に記載の標的化送達組成物であって、Ｒ１、Ｒ３およびＲ４の少なくとも１つが標的化剤であり、前記ナノ粒子が診断剤を含む、標的化送達組成物を該被験体に投与する工程、および該被験体をイメージングして該診断剤を検出する工程を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本願は、米国仮特許出願第６１／５２９，６９４号への優先権の利益を主張し、この米国仮特許出願の全体の内容は、本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
政府支援の研究開発下でなされた発明に対する権利に関する陳述
適用なし。
【０００３】
コンパクトディスクで提出した「配列表」、表、またはコンピュータプログラムを列挙している付録への参照
該当なし。
【背景技術】
【０００４】
発明の背景
現在のところ、大部分の治療剤および診断剤は、患者に全身投与される。残念なことに、現在の送達方法はいくつかの不利な点を有することがあり、例えば、薬物が患者の非標的部位で活性化することによる治療薬の有効性の低下および副作用が挙げられる。これらの欠点のいくつかに対処しようとして、診断剤および治療剤に結合したナノ粒子の標的化送達は、有望かつ新たな薬物送達様式を提示する。
【０００５】
しかしながら、ある特定の状況下では、ナノ粒子は患者の免疫系によって拒絶され、ナノ粒子が薬物送達の標的に到達し得る前に処理され得る。これらの問題に対処するために、ナノ粒子の表面を改変することができる。例えば、リポソームなどのナノ粒子は、一般的には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基をそれらの表面に取り込んでｉｎ  ｖｉｖｏ性能を高めるように改変される。一般に、リポソームのＰＥＧ改変を達成するのに用いられる一般的なアプローチは２つある。あるアプローチは、脂質−ＰＥＧ分子を組み合わせて、機械的手段（例えば、押し出し）でリポソーム製剤を形成することを含む。別のアプローチでは、リポソームをプリアセンブルし、続いて、脂質がリポソーム二重層に入ることができる条件下で、適切な配置のＰＥＧ−脂質で処理することにより、リポソーム表面に結合したＰＥＧを有するリポソームを形成することができる。
【０００６】
近年、標的化薬物送達法の開発にいくらかの進歩が見られるが、さらなる改良の必要性が依然としてある。例えば、ナノ粒子を改変するための現在のアプローチが提供する、ナノ粒子に対して行うことができる改変の数は、ごく限られている。本発明は、これらのおよび他の必要性に対処する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
発明の簡単な概要
本発明は、例えば、ナノ粒子の表面を改変して、ｉｎ  ｖｉｖｏ循環時間および標的化送達性能を増大させるための改善された方法および化合物を可能にするために、ホスホン酸コンジュゲート（ｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）および該ホスホン酸コンジュゲートを調製する方法を提供する。
【０００８】
本発明の一態様では、本発明のホスホン酸コンジュゲートは、式：
【化１】
2014527071.tif 000003
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はそれぞれ、以下により詳細に記載される）の化合物を含むことができる。
【０００９】
別の態様では、本発明は、式：
【化２】
2014527071.tif 000004
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ９、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、以下により詳細に記載される）の化合物を含む。
【００１０】
さらに別の態様では、本発明は、ホスホン酸コンジュゲートを調製する方法であって、式：Ｈ２Ｎ（Ｌ１）−（Ｒ１）を有する第一アミン化合物、式：Ｏ＝Ｃ［（Ｌ２）−（Ｒ２）］ｎを有するカルボニル化合物、および式：
【化３】
2014527071.tif 000005
を有するＨ−ホスホン酸化合物（ｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）を、式：
【化４】
2014527071.tif 000006
を有するホスホン酸コンジュゲートを形成するのに十分な条件下で結合させる（ｃｏｍｂｉｎｅ）工程を含む方法を含み、該ホスホン酸コンジュゲート、第一アミン化合物、カルボニル化合物およびＨ−ホスホン酸化合物は、以下により詳細に記載される。
【００１１】
さらに別の態様では、本発明は、ホスホン酸コンジュゲートを調製する方法であって、式：ＨＮ［（Ｌ１）−（Ｒ１）］（Ｒ９）を有する第二アミン化合物、式：Ｏ＝Ｃ［（Ｌ２）−（Ｒ２）］ｎを有するカルボニル化合物、および式：
【化５】
2014527071.tif 000007
を有するＨ−ホスホン酸化合物を、式：
【化６】
2014527071.tif 000008
を有するホスホン酸コンジュゲートを形成するのに十分な条件下で結合させる工程を含む方法を含み、該ホスホン酸コンジュゲート、第二アミン化合物、カルボニル化合物およびＨ−ホスホン酸化合物は、以下により詳細に記載される。
【００１２】
本発明のホスホン酸コンジュゲートおよびそれらの作製方法は、多数の独自の態様を薬物送達および画像診断の領域に提供する。例えば、本発明は、ナノ粒子が、標的化薬物送達に使用され得るステルスナノ粒子へと変換されるのを容易にすることができる化合物を作製するためのロバストかつ簡便な方法を提供する。ある特定の場合では、ホスホン酸コンジュゲートは、ナノ粒子表面のステルス剤の密度を増大させる独自の能力を提供するので、より低い密度で有効ではない場合がある様々なステルス剤の使用について、さらなる柔軟性を可能にすることができる。加えて、ホスホン酸コンジュゲートは、ナノ粒子表面の問題のステルス剤または他の成分、例えば標的化剤にさらなる安定性を提供する様式で生成することができる。他の利点の中では、ホスホン酸コンジュゲートは、正荷電基および／または負荷電基を取り込んで、ナノ粒子の表面特性の改変を容易にすることができる。改変ナノ粒子を作製する際の柔軟性はまた、特定の治療用途および／または診断用途に適合するようにされたナノ粒子であって、患者への投与後に長期のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を有することができるナノ粒子にすることができる。
【００１３】
本明細書および図面の他の部分を参照することによって、本発明の本質および利点についてのさらなる理解を実現することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、本発明のホスホン酸コンジュゲートを生成するための合成方法の例を示す。
【００１５】
【図２】図２は、本発明のホスホン酸コンジュゲートを生成するための合成方法の例を示す。
【００１６】
【図３】図３は、本発明のホスホン酸コンジュゲートを作製するための合成方法の例を示す。
【００１７】
【図４】図４は、本発明のホスホン酸コンジュゲートをリポソーム表面に作製するための合成方法の例を示す。
【００１８】
【図５】図５は、本発明のホスホン酸コンジュゲートをリポソーム表面に作製するための合成方法の例を示す。
【００１９】
【図６】図６は、本発明の例示的な実施形態にしたがって、亜リン酸ジフェニルを１−アルカノールと混合してホスホン酸水素ジアルキルを形成するための一般的な反応スキームを示す。
【００２０】
【図７】図７は、本発明の例示的な実施形態にしたがって、コンジュゲートを調製するための一般的な反応スキームを示す。
【００２１】
【図８】図８は、本発明の例示的な実施形態にしたがって、コンジュゲートを調製するための別の一般的な反応スキームを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
発明の詳細な説明
Ｉ．定義
本明細書において使用される場合、記号
【化７】
2014527071.tif 000009
は単結合を意味し、
【化８】
2014527071.tif 000010
は二重結合を意味し、
【化９】
2014527071.tif 000011
は三重結合を意味し、
【化１０】
2014527071.tif 000012
は単結合または二重結合を意味する。
【００２３】
本明細書において使用される場合、用語「アルキル」は、それ自体でまたは別の置換基の一部として、特に明記しない限り、指定された数の炭素原子（すなわち、Ｃ１０−２４は、１０個〜２４個の炭素を意味する）を有する直鎖状または分岐鎖状の炭化水素ラジカルを意味する。いくつかの実施形態では、アルキル基は、１個〜３６個の炭素の範囲であり得る。ある特定の実施形態では、アルキル基は、１個〜１０個の炭素または１個〜２０個の炭素の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、アルキル基は、飽和しているものでもよいし不飽和のものでもよく、ならびに、置換されているものでもよいし非置換のものでもよい。
【００２４】
本明細書において使用される場合、用語「置換された」は、親分子または基に結合している基を指す。例えば、シアノ置換基を有するアルキル基は、シアノ置換アルキル基である。適切な置換基としては、限定されないが、ハロ、シアノ、アルキル、アミノ、ヒドロキシ、アルコキシ、およびアミドが挙げられる。
【００２５】
本明細書において使用される場合、用語「Ｈ−ホスホン酸化合物」は、Ｈ−Ｐ（Ｏ）（ＯＬ３−Ｒ３）（ＯＬ４−Ｒ４）の一般式を有する化合物を指し、本明細書においてさらに記載される。
【００２６】
本明細書において使用される場合、用語「第一アミン化合物」は、一般に、Ｈ２Ｎ（Ｌ１）−（Ｒ１）の一般式を有する化合物を指し、本明細書においてさらに記載される。
【００２７】
本明細書において使用される場合、用語「第二アミン化合物」は、一般に、ＨＮ［（Ｌ１）−（Ｒ１）］（Ｒ９）の一般式を有する化合物を指し、本明細書においてさらに記載される。
【００２８】
本明細書において使用される場合、用語「カルボニル化合物」は、一般に、Ｏ＝Ｃ［（Ｌ２）−（Ｒ２）］ｎの一般式を有する化合物を指し、本明細書においてさらに記載される。
【００２９】
本明細書において使用される場合、用語「標的化送達組成物」は、本発明のホスホン酸コンジュゲートに結合したナノ粒子の組成物を指し、これの詳細は、本明細書においてさらに記載される。本発明の組成物は、治療組成物として、診断組成物として、または治療組成物および診断組成物の両方として使用することができる。ある特定の実施形態では、上記組成物は、本明細書においてさらに記載されるように、被験体または試験試料における特定の標的に標的化することができる。
【００３０】
本明細書において使用される場合、用語「ナノ粒子」は、様々なサイズ、形状、種類、および用途の粒子を指し、これらは、本明細書においてさらに記載される。当業者によって認識されるように、ナノ粒子の特性、例えば、サイズは、ナノ粒子の種類および／または用途、ならびに当技術分野において一般に周知の他の要因に依存し得る。一般に、ナノ粒子は、約１ｎｍ〜約１０００ｎｍのサイズの範囲であり得る。他の実施形態では、ナノ粒子は、約１０ｎｍ〜約２００ｎｍのサイズの範囲であり得る。さらに他の実施形態では、ナノ粒子は、約５０ｎｍ〜約１５０ｎｍのサイズの範囲であり得る。ある特定の実施形態では、ナノ粒子は、腎排泄限界よりサイズが大きく、例えば、直径が約６ｎｍより大きい。他の実施形態では、ナノ粒子は、肝臓による血流からのクリアランスを回避するのに十分小さく、例えば、直径が１０００ｎｍより小さい。ナノ粒子としては、球体、円錐体、スフェロイド、および当技術分野において一般に公知の他の形状を挙げることができる。ナノ粒子は、中空（例えば、コアの外側が中実（ｓｏｌｉｄ）で、コアの内側が中空）でもよいし中実でもよく、中空層と中実層または様々な中実層とで多層化されていてもよい。例えば、ナノ粒子は、中実コア領域および中実外側封入領域を含むことができ、これらの両方を架橋することができる。ナノ粒子は、脂質、ポリマー、磁性材料、またはシリカ、金、および酸化鉄などの金属材料などを含む様々な物質の中の１つの物質または任意の組み合わせから構成され得る。脂質としては、脂肪、ワックス、ステロール、コレステロール、脂溶性ビタミン、モノグリセリド、ジグリセリド、リン脂質、スフィンゴ脂質、糖脂質、カチオン性脂質またはアニオン性脂質、誘導体化脂質、およびカルジオリピンなどを挙げることができる。ポリマーとしては、一般にブロックコポリマー、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）、ポリエチレングリコール、アクリル酸ポリマー、カチオン性ポリマー、ならびにナノ粒子を作製するのに使用するための当技術分野において公知の他のポリマーを挙げることができる。いくつかの実施形態では、ポリマーは、生分解性および／または生体適合性であり得る。ナノ粒子としては、リポソーム、ミセル、リポタンパク質、脂質コーティングバブル、ブロックコポリマーミセル、ポリマーソーム、ニオソーム、量子ドット、酸化鉄粒子、金粒子、デンドリマー、またはシリカ粒子を挙げることができる。ある特定の実施形態では、脂質単層または脂質二重層は、脂質によってコーティングされ得る材料から構成されるナノ粒子、例えば、ポリマーナノ粒子を完全または部分的にコーティングすることができる。いくつかの実施形態では、リポソームとしては、多層ベシクル（ＭＬＶ）、大単層ベシクル（ＬＵＶ）、および小単層ベシクル（ＳＵＶ）を挙げることができる。
【００３１】
本明細書において使用される場合、用語「治療剤」は、有効量で存在する場合、それを必要とする被験体に所望の治療効果を生じさせる化合物または分子を指す。本発明は、本明細書においてさらに記載されるように、広い範囲の治療剤、ならびにナノ粒子およびホスホン酸コンジュゲートと併せたこれらの使用を意図する。
【００３２】
本明細書において使用される場合、用語「診断剤」は、被験体または試験試料に検出することができる成分を指し、本明細書においてさらに記載される。
【００３３】
本明細書において使用される場合、用語「連結基」は、コンジュゲートの一部分を連結するホスホン酸コンジュゲートの一部を指す。例えば、連結基Ｌ３は、Ｒ３（例えば、結合成分）を、ホスホン酸コンジュゲートのリンに結合した酸素に連結することができる。調製されるホスホン酸コンジュゲート、および化合物に所望される特性に応じて、容易に入手可能なモノマー成分から連結基をアセンブルして、標的化剤と、例えばナノ粒子に結合され得るホスホン酸コンジュゲートの他の部分との適切な分離を実現することができる。
【００３４】
本明細書において使用される場合、用語「標的化剤」は、標的に対して特異的である分子を指す。ある特定の実施形態では、標的化剤としては、標的リガンドの低分子模倣体（例えば、ペプチド模倣リガンド）、標的リガンド（例えば、ＲＧＤペプチド含有ペプチド、もしくは葉酸アミド）、または特定の標的に特異的な抗体もしくは抗体断片を挙げることができる。標的化剤は、疾患の特定の発症段階と関連し得る器官、組織、細胞、細胞外マトリックス成分、および／または細胞内コンパートメントにおける標的を含む多種多様な標的に結合することができる。いくつかの実施形態では、標的としては、がん細胞、特にがん幹細胞を挙げることができる。標的としては、細胞表面の抗原、またはがん細胞に存在するかもしくは正常組織と比較してがん細胞ではより優勢な抗原である腫瘍マーカーをさらに挙げることができる。ある特定の実施形態では、標的化剤としては、葉酸誘導体、Ｂ−１２誘導体、インテグリンＲＧＤペプチド、ＲＧＤ模倣体（Ｔｅｍｍｉｎｇ，Ｋら、Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｕｐｄａｔｅｓ  ８：３８１−４０２（２００５）；Ｌｉｕ，Ｓ．，Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍ．３（５）：４７２−８７（２００６））、ＮＧＲ誘導体、ソマトスタチン受容体に結合するソマトスタチン誘導体またはペプチド、例えば、オクトレオチドおよびオクトレオテートなどをさらに挙げることができる。いくつかの実施形態では、標的化剤は、核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）またはペプチドから構成され、特定の標的に結合するアプタマーであり得る。標的化剤は、受容体標的、特に、腫瘍に関連して発現される受容体標的に特異的または非特異的に結合するように設計することができる。受容体標的の例としては、限定されないが、ＭＵＣ−１、ＥＧＦＲ、クローディン４、ＭＵＣ−４、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ７、ＦＯＬ１Ｒ、ソマトスタチン受容体４、Ｅｒｂ−Ｂ２（赤芽球性白血病発がん遺伝子相同体２）受容体、ＣＤ４４受容体、およびＶＥＧＦ受容体−２キナーゼが挙げられる。
【００３５】
本明細書において使用される場合、用語「ステルス剤」は、ナノ粒子の表面特性を改変することができる分子を指し、本明細書においてさらに記載される。
【００３６】
本明細書において使用される場合、用語「四脚型提示成分（ｔｅｔｒａｐｏｄａｌ  ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）」は、一般式：
【化１１】
2014527071.tif 000013
（式中、Ｌ５、Ｌ６、Ｒ５およびＲ６は、本明細書においてさらに記載される）を有する分子を指す。いくつかの実施形態では、Ｌ５およびＬ６はそれぞれ、独立して、結合および連結基からなる群より選択され；Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、独立して、Ｃ１−Ｃ３６アルキル、標的化剤、診断剤およびステルス剤からなる群より選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ５および／またはＲ６は、水素であり得る。
【００３７】
本明細書において使用される場合、用語「に包埋された」は、ナノ粒子の表面の、またはその表面の近傍の薬剤の位置を指す。ナノ粒子に包埋された薬剤は、例えば、リポソームの二重層膜内に位置してもよいし、ナノ粒子の外側ポリマーシェル内に、そのシェル内に含まれるように位置してもよい。
【００３８】
本明細書において使用される場合、用語「に封入された」は、ナノ粒子の内側に囲い込まれているかまたは完全に含まれている薬剤の位置を指す。リポソームの場合、例えば、治療剤および／または診断剤を、リポソームの水性内部に存在するように封入することができる。次いで、リポソームを不安定化するか、または封入された薬剤の放出を他の方法で生じさせることを目的とするある特定の条件によって、このような封入された薬剤の放出を誘発することができる。
【００３９】
本明細書において使用される場合、用語「に係留された」は、成分の１つまたは複数が空間内で自由に動き回ることができるような、ある成分の別の成分への結合を指す。ある特定の例示的な実施形態では、結合成分を、ナノ粒子周囲の溶液中で自由に動き回るようにナノ粒子に係留することができる。いくつかの実施形態では、結合成分は、ナノ粒子の表面に係留され、表面から離れて伸長することができる。
【００４０】
本明細書において使用される場合、用語「脂質」は脂質分子を指し、脂肪、ワックス、ステロール、コレステロール、コレステロール誘導体、脂溶性ビタミン、モノグリセリド、ジグリセリド、Ｃ８−Ｃ３６アルキル、リン脂質、スフィンゴ脂質、糖脂質、カチオン性脂質またはアニオン性脂質、および誘導体化脂質などを挙げることができる。脂質は、ミセル、単層、および二重層膜を形成することができる。ある特定の実施形態では、脂質は、リポソームに自己組織化することができる。他の実施形態では、脂質は、単層または二重層としてナノ粒子の表面を覆うことができる。
【００４１】
本明細書において使用される場合、用語「アプタマー」は、特定の標的に特異的に結合する天然に存在しないオリゴヌクレオチド（典型的には、２０〜２００ヌクレオチド）を指す。「天然に存在しない」は、天然のヌクレオチド（Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｕ）の天然に存在しない配列、ならびに天然に存在しないヌクレオチドまたは修飾ヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチドを包含する。例えば、「Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒｓ（登録商標）」は、鏡像核酸を有するアプタマー、すなわち、天然に存在するＤ立体配置の代わりにＬキラル立体配置にあるアプタマーである。アプタマーは、分子内相互作用を介して、固有の三次元構造を形成し、かつ／または例えば、一次構造もしくは二次構造からの誘導適合機構を介して標的に結合すると構造を変化させることができる。標的へのアプタマーの結合は、従来の相補的核酸ハイブリダイゼーション、例えば、二重らせん形成または三重らせん形成によって媒介されないが、アプタマーの一部は、このようなハイブリダイゼーションに関与することができる。例えば、アプタマーは一般に、分子内ヘアピン構造および他の三次元構造を形成する。アプタマーは、任意の方法または方法の組み合わせによって選択することができる。指数関数的富化によるリガンドの系統的進化（ＳＥＬＥＸ（商標））またはその変法は、この分野において一般に使用されている。基本のＳＥＬＥＸ（商標）法は、例えば、米国特許第５，５６７，５８８号明細書に記載されている。基本方法に対する多数の変法、例えば、米国特許出願公開第２０１００１５０４１号明細書に記載されているｉｎ  ｖｉｖｏ  ＳＥＬＥＸ（商標）も使用することができる。ＭＯＮＯＬＥＸ（商標）は、例えば、Ｎｉｔｓｃｈｅら、（２００７）ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ７：４８、および国際公開第０２／２９０９３号パンフレットに記載されている別の選択法である。腫瘍細胞内に注入される核酸ライブラリを使用するｉｎ  ｖｉｖｏ選択も可能である（例えば、Ｍｉら、（２０１０）Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１：２２を参照のこと）。本発明に使用するためのアプタマーは、限定されないが、ＭＵＣ−１、ＥＧＦＲ、クローディン４、ＭＵＣ−４、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ７、ＦＯＬ１Ｒ、ソマトスタチン受容体４、Ｅｒｂ−Ｂ２（赤芽球性白血病発がん遺伝子相同体２）受容体、ＣＤ４４受容体、ＶＥＧＦ受容体−２キナーゼ、およびヌクレオリンを含む様々な標的に結合するように設計することができる。
【００４２】
本明細書において使用される場合、用語「被験体」は、寿命の任意の段階にある任意の哺乳動物、特にヒトを指す。
【００４３】
本明細書において使用される場合、用語「投与する」、「投与された」、または「投与すること」は、本発明の標的化送達組成物を投与する方法を指す。本発明の標的化送達組成物は、局所投与、非経口投与、静脈内投与、皮内投与、筋肉内投与、結腸投与、直腸投与、または腹腔内投与を含む様々な方法で投与することができる。非経口投与および静脈内投与は、好ましい投与方法である。標的化送達組成物は、組成物または製剤の一部として投与することもできる。
【００４４】
本明細書において使用される場合、状態、疾患、障害、または症候を「処置する」または状態、疾患、障害、または症候の「処置」という用語は、（ｉ）疾患、障害、または症候を阻害すること、すなわち、その発達を停止すること；および（ｉｉ）疾患、障害、または症候を軽減すること、すなわち、疾患、障害、または症候の後退を引き起こすことを包含する。当技術分野において公知であるように、全身送達対局所送達、年齢、体重、全体的な健康、性別、食事、投与時間、薬物相互作用、および状態の重症度についての調整が必要であり得、当業者による通常の実験によって確認することができる。
【００４５】
本明細書において使用される場合、用語「製剤」は、被験体に投与するための成分の混合物を指す。例えば、関節内（関節内）経路、静脈内経路、筋肉内経路、腫瘍内経路、皮内経路、腹腔内経路、ならびに皮下経路などによる非経口投与に適切な製剤は、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および製剤を意図されたレシピエントの血液と等張性にする溶質を含有することができる水性および非水性の等張性滅菌注射液剤、ならびに懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、および保存剤を含むことができる水性滅菌懸濁剤および非水性滅菌懸濁剤を含む。注射液剤および懸濁剤は、滅菌粉末、顆粒、および錠剤からも調製することができる。標的化送達組成物の製剤は、単位用量または複数回用量の密閉容器、例えば、アンプルおよびバイアルで提供することができる。標的化送達組成物は、単独でまたは他の適切な成分と組み合わせて、口または鼻部を通じた吸入を介して投与されるエアロゾル製剤（すなわち、これらは、「噴霧する」ことができる）にすることができる。エアロゾル製剤は、加圧された許容され得る噴霧剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、および窒素などの中に入れることができる。直腸投与に適切な製剤としては、例えば、坐剤基剤とともに有効量の標的化送達組成物を含む坐剤が挙げられる。適切な坐剤基剤としては、天然または合成のトリグリセリドまたはパラフィン炭化水素が挙げられる。加えて、標的化送達組成物と、基剤（例えば、液体トリグリセリド、ポリエチレングリコール、およびパラフィン炭化水素が挙げられる）との組み合わせを含有するゼラチン直腸カプセルを使用することも可能である。ある特定の実施形態では、製剤は、局所投与することもできるし、点眼剤の形態で投与することもできる。
本発明の実施形態
ＩＩ．概要
【００４６】
本発明のホスホン酸コンジュゲートおよびそれらの作製方法は、多数の独自の態様を薬物送達および画像診断の領域に提供する。例えば、本発明は、ナノ粒子が、標的化薬物送達に使用され得るステルスナノ粒子へと変換されるのを容易にすることができる化合物を作製するためのロバストかつ簡便な方法を提供する。ある特定の場合では、ホスホン酸コンジュゲートは、ナノ粒子表面のステルス剤の密度を増大させる独自の能力を提供するので、より低い密度で有効ではない場合がある様々なステルス剤の使用について、さらなる柔軟性を可能にすることができる。加えて、ホスホン酸コンジュゲートは、ナノ粒子表面の問題のステルス剤または他の成分、例えば標的化剤にさらなる安定性を提供する様式で生成することができる。
【００４７】
さらに、ホスホン酸化合物は、様々な方法によってナノ粒子に組み入れることができる。例えば、本明細書において記載される方法を使用してＨ−ホスホン酸化合物を生成して、次いで、Ｈ−ホスホン酸化合物がナノ粒子表面に存在するように、ナノ粒子と組み合わせることができる。例えば、Ｈ−ホスホン酸化合物を組み込むことによってＨ−ホスホン酸化合物をナノ粒子と組み合わせて、ナノ粒子を作製することができる。他の場合では、ナノ粒子を生成し、そしてＨ−ホスホン酸化合物をナノ粒子表面に結合させることにより、ナノ粒子表面を改変することができる。改変ナノ粒子を作製する際の柔軟性は、例えば、特定の治療用途および／または診断用途に適合するようにされたナノ粒子であって、患者への投与後に長期のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を有することもできるナノ粒子にすることができる。
ＩＩＩ．ホスホン酸コンジュゲート
【００４８】
一態様では、本発明の化合物は、式：
【化１２】
2014527071.tif 000014
（式中、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はそれぞれ、独立して、結合および連結基からなる群より選択され；Ｒ１は、ナノ粒子、結合成分、標的化剤、診断剤、ステルス剤および四脚型提示成分からなる群より選択され；Ｒ２はそれぞれ、独立して、ステルス剤、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、カルボン酸またはカルボン酸エステル、ホスホン酸またはホスホン酸エステル、スルホン酸またはスルホン酸エステル、およびヒドロキシからなる群より選択され；Ｒ３およびＲ４はそれぞれ、独立して、Ｈ、ナノ粒子、結合成分、標的化剤、診断剤およびステルス剤からなる群より選択され、Ｒ３またはＲ４の少なくとも１つは、Ｈ以外であり；ｎは、０〜２の整数である）の化合物を含むことができる。
【００４９】
別の態様では、本発明の化合物は、式：
【化１３】
2014527071.tif 000015
（式中、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はそれぞれ、独立して、結合および連結基からなる群より選択され；Ｒ１は、ナノ粒子、結合成分、標的化剤、診断剤およびステルス剤からなる群より選択され；Ｒ２は、独立して、ステルス剤、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、カルボン酸またはカルボン酸エステル、ホスホン酸またはホスホン酸エステル、スルホン酸またはスルホン酸エステル、およびヒドロキシからなる群より選択され；Ｒ３およびＲ４はそれぞれ、独立して、Ｈ、ナノ粒子、結合成分、標的化剤、診断剤およびステルス剤からなる群より選択され、Ｒ３またはＲ４の少なくとも１つは、Ｈ以外であり；Ｒ９は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル基であり；ｎは、０〜２の整数である）の化合物を含むことができる。
ナノ粒子
【００５０】
多種多様なナノ粒子を、本発明に使用することができる。当業者によって認識されるように、ナノ粒子の特性、例えば、サイズは、ナノ粒子の種類および／または用途、ならびに当技術分野において一般に周知の他の要因に依存し得る。適切な粒子は、球体、スフェロイド、平型、板形状、管、立方体、立方形、長円形、楕円、円柱、円錐体または角錐であり得る。適切なナノ粒子は、最大寸法（例えば、直径）のサイズが約１ｎｍ〜約１０００ｎｍ、約１０ｎｍ〜約２００ｎｍ、および約５０ｎｍ〜約１５０ｎｍの範囲であり得る。
【００５１】
適切なナノ粒子は、当技術分野において一般に公知の様々な材料で作製することができる。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、脂質、ポリマー、またはシリカ、金、および酸化鉄などの金属材料などを含む１つの物質または様々な物質の任意の組み合わせを含むことができる。ナノ粒子の例としては、限定されないが、リポソーム、ミセル、リポタンパク質、脂質コーティングバブル、ブロックコポリマーミセル、ポリマーソーム、ニオソーム、酸化鉄粒子、金粒子、シリカ粒子、デンドリマー、または量子ドットを挙げることができる。
【００５２】
いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、飽和脂質または不飽和脂質から部分的または完全に構成されるリポソームである。適切な脂質としては、限定されないが、脂肪、ワックス、ステロール、コレステロール、コレステロール誘導体、脂溶性ビタミン、モノグリセリド、ジグリセリド、リン脂質、スフィンゴ脂質、糖脂質、および誘導体化脂質などを挙げることができる。いくつかの実施形態では、適切な脂質としては、両親媒性脂質、中性脂質、非カチオン性脂質、アニオン性脂質、カチオン性脂質、または疎水性脂質を挙げることができる。ある特定の実施形態では、脂質としては、細胞膜に典型的に存在する脂質、例えばリン脂質および／またはスフィンゴ脂質を挙げることができる。適切なリン脂質としては、限定されないが、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）が挙げられる。適切なスフィンゴ脂質としては、限定されないが、スフィンゴシン、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシド、スルファチド、ガングリオシド、およびフィトスフィンゴシンが挙げられる。他の適切な脂質としては、脂質抽出物、例えば、卵ＰＣ、心臓抽出物、脳抽出物、肝臓抽出物、およびダイズＰＣを挙げることができる。いくつかの実施形態では、ダイズＰＣとしては、ヒドロダイズＰＣ（Ｈｙｄｒｏ  Ｓｏｙ  ＰＣ）（ＨＳＰＣ）を挙げることができる。カチオン性脂質としては、限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジオレオイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、Ｎ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、Ｎ−（１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＡＰ）、Ｎ−（１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、およびＮ，Ｎ−ジメチル−２，３−ジオレイルオキシ）プロピルアミン（ＤＯＤＭＡ）が挙げられる。非カチオン性脂質としては、限定されないが、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジミリストイルホスファチジルセリン（ＤＭＰＳ）、ジステアロイルホスファチジルセリン（ＤＳＰＳ）、ジオレオイルホスファチジルセリン（ＤＯＰＳ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、およびジオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシラート��ＤＯＰＥ−ｍａｌ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイル−ホスファチジル−エタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１６−Ｏ−モノメチルＰＥ、１６−Ｏ−ジメチルＰＥ、１８−１−トランスＰＥ、１−ステアロイル−２−オレオイル−ホスファチジルエタノールアミン（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ）（ＳＯＰＥ）、１，２−ジエライドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ｐｈｏｐｈｏｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ）（トランスＤＯＰＥ）、およびカルジオリピンが挙げられる。ある特定の実施形態では、脂質としては、ＰＥＧ化脂質などの誘導体化脂質を挙げることができる。誘導体化脂質としては、例えば、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００、コレステロール−ＰＥＧ２０００、ＤＳＰＥ−ポリグリセロール、または当技術分野において一般に周知の他の誘導体を挙げることができる。
【００５３】
脂質の任意の組み合わせを、リポソームなどのナノ粒子を構築するのに使用することができる。ある特定の実施形態では、リポソームの脂質組成は、リポソームの特性、例えば、漏出速度、安定性、粒子サイズ、ゼータ電位、タンパク質結合性、ｉｎ  ｖｉｖｏ循環、および／または腫瘍、肝臓、および脾臓などの組織への蓄積に影響を与えるように調整することができる。例えば、ＤＳＰＣおよび／またはコレステロールを使用して、リポソームからの漏出を減少させることができる。ＤＳＰＧおよび／またはＤＯＴＡＰなどの負または正に荷電した脂質は、リポソームの表面電荷に影響を与えるように含めることができる。いくつかの実施形態では、リポソームは、約１０種類以下の脂質、または約５種類以下の脂質、または約３種類以下の脂質を含むことができる。いくつかの実施形態では、存在する特定の種類の脂質のモル百分率（ｍｏｌ％）は、典型的には、リポソームなどのナノ粒子中に存在する総脂質の約０％〜約１０％、約１０％〜約３０％、約３０％〜約５０％、約５０％〜約７０％、約７０％〜約９０％、約９０％〜１００％を含む。本明細書において記載される脂質はリポソームに含めることもできるし、または該脂質は、ポリマーナノ粒子などの本発明のナノ粒子をコーティングするのに使用することもできる。コーティングは、ナノ粒子を部分的または完全に囲むものでもよく、単層および／または二重層を含むことができる。
【００５４】
他の実施形態では、ナノ粒子の一部または全部は、ポリマー、例えば、ブロックコポリマー、またはナノ粒子を作製するための技術分野で公知の他のポリマーを含むことができる。いくつかの実施形態では、ポリマーは、生分解性および／または生体適合性であり得る。適切なポリマーとしては、限定されないが、ポリエチレン、ポリカーボネート、ポリ酸無水物、ポリヒドロキシ酸、ポリプロピルフマレート（ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌｆｕｍｅｒａｔｅ）、ポリカプロラクトン、ポリアミド、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル、ポリ（オルトエステル）、ポリシアノアクリレート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリシアノアクリレート、ポリ尿素、ポリスチレン、ポリアミン、およびこれらの組み合わせを挙げることができる。いくつかの実施形態では、例示的な粒子としては、シェル架橋クネデル（ｓｈｅｌｌ  ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｅｄ  ｋｎｅｄｅｌ）を挙げることができ、これは、以下の参考文献：Ｂｅｃｋｅｒら、米国特許出願第１１／２５０８３０号明細書；Ｔｈｕｒｍｏｎｄ，Ｋ．Ｂら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１９（２８）６６５６（１９９７））；Ｗｏｏｌｅｙ，Ｋ．Ｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．，３（９）：１３９７−１３９９（１９９７）；Ｗｏｏｌｅｙ，Ｋ．Ｌ．，Ｊ．Ｐｏｌｙ．Ｓｃｉ．：Ｐａｒｔ  Ａ：Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｃｈｅｍ．，３８：１３９７−１４０７（２０００）にさらに記載されている。他の実施形態では、適切な粒子としては、ポリ（乳酸ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）を挙げることができる（Ｆｕ，Ｋら、Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．，２７：１００−１０６（２０００））。
【００５５】
さらに他の実施形態では、ナノ粒子は、シリカ、金、および酸化鉄などの本質的に金属である材料から部分的または完全に構成され得る。いくつかの実施形態では、シリカ粒子は、中空、多孔質、および／またはメソポーラスであり得る（Ｓｌｏｗｉｎｇ，Ｉ．Ｉら、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．，６０（１１）：１２７８−１２８８（２００８））。金粒子は、以下の例示的な参考文献によって示されているように、当技術分野において一般に公知である：Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙａ，Ｒ．＆Ｍｕｋｈｅｒｊｅｅ，Ｐ．，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．，６０（１１）：１２８９−１３０６（２００８）。酸化鉄粒子または量子ドットも使用することができ、当技術分野において周知である（ｖａｎ  Ｖｌｅｒｋｅｎ，Ｌ．Ｅ．＆Ａｍｉｊｉ，Ｍ．Ｍ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．，３（２）：２０５−２１６（２００６））。ナノ粒子としては、限定されないが、ウイルス粒子およびセラミック粒子も挙げられる。
ナノ粒子との結合
【００５６】
ある特定の実施形態では、結合成分は、ナノ粒子に存在する反応基に結合成分を共有結合させるのに使用され得る官能基を含むことができる。官能基は、例えば、アルキレン部分またはヘテロアルキレン部分の末端位置などの結合成分のどこにでも位置することができる。多種多様な官能基が当技術分野において一般に公知であり、いくつかのクラスの反応、例えば、限定されないが、求核置換（例えば、アミンおよびアルコールのハロゲン化アシルまたは活性エステルとの反応）、求電子置換（例えば、エナミン反応）、ならびに炭素−炭素および炭素−ヘテロ原子多重結合への付加（例えば、マイケル反応またはディールス−アルダー付加）の下で反応することができる。これらのおよび他の有用な反応は、例えばＭａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３ｒｄ  Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８５；およびＨｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，１９９６で考察されている。適切な官能基としては、例えば、（ａ）限定されないが、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、Ｎ−ヒドロキシベンズトリアゾールエステル、酸ハロゲン化物、アシルイミダゾール、チオエステル、ｐ−ニトロフェニルエステル、アルキル、アルケニル、アルキニル、および芳香族エステルを含むカルボキシル基およびこれらの種々の誘導体；（ｂ）エステル、エーテル、アルデヒドなどに変換することができるヒドロキシル基（ｃ）ハロアルキル基であって、ハロゲン化物を、求核基、例えば、アミン、カルボキシラートアニオン、チオールアニオン、カルボアニオン、またはアルコキシドイオンなどで、後に置き換えることができ、それにより、ハロゲン原子の部位において新しい基の共有結合をもたらすハロアルキル基；（ｄ）例えば、マレイミド基などの、ディールス−アルダー反応に関与することができるジエノフィル基；（ｅ）例えば、イミン、ヒドラゾン、セミカルバゾン、もしくはオキシムなどのカルボニル誘導体の形成を介して、またはグリニャール付加もしくはアルキルリチウム付加などの反応を介して後続の誘導体化が可能であるようなアルデヒド基またはケトン基；（ｆ）例えば、スルホンアミドを形成するためのアミンとの後続の反応のためのハロゲン化スルホニル基；（ｇ）ジスルフィドに変換することができるか、またはハロゲン化アシルと反応することができるチオール基；（ｈ）例えば、アシル化、アルキル化、または酸化され得るアミン基またはスルフヒドリル基；（ｉ）例えば、付加環化、アシル化、マイケル付加などを起こすことができるアルケン；ならびに（ｊ）例えば、アミンおよびヒドロキシル化合物と反応することができるエポキシドを挙げることができる。いくつかの実施形態では、クリック化学ベースのプラットフォームを用いて、ナノ粒子に結合成分を結合させることができる（Ｋｏｌｂ，Ｈ．Ｃ．，Ｍ．Ｇ．Ｆｉｎｎ  ａｎｄ  Ｋ．Ｂ．Ｓｈａｒｐｌｅｓｓ，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｅｄ．４０（１１）：２００４（２００１））。いくつかの実施形態では、結合成分は、１つの官能基、またはナノ粒子との複数の共有���合をもたらす複数の官能基を含むことができる。
【００５７】
表１は、本発明に使用され得る官能基のさらなる非限定的かつ代表的なリストを提供する。
表１．共役化学反応についての例示的な官能基のペア
【表１】
2014527071.tif 000016
【００５８】
他の実施形態では、結合成分は、非共有結合性の相互作用によってナノ粒子に結合させることができ、これらとしては、限定されないが、親和性相互作用、金属配位、物理的吸着、疎水性相互作用、ファンデルワールス相互作用、水素結合相互作用、磁気相互作用、静電相互作用、双極子−双極子相互作用、抗体結合相互作用、および相補性ＤＮＡ同士間のハイブリダイゼーション相互作用などを挙げることができる。いくつかの実施形態では、結合成分は、例えば、ナノ粒子に組み込まれる脂質またはリン脂質であり得る。ある特定の実施形態では、脂質またはリン脂質は、ナノ粒子の脂質二重層部分に存在してもよく、この場合、ある特定の実施形態では、ナノ粒子はリポソームである。例えば、結合成分は、脂質二重層の疎水性領域および／または親水性領域と部分的または完全に相互作用する脂質またはリン脂質（例えば、飽和しているものでもよいし不飽和のものでもよいＣ８−Ｃ３６アルキル）であり得る。いくつかの実施形態では、結合成分は、ナノ粒子との非共有結合性相互作用を可能にする１つの基を含むことができるが、複数の基も意図される。例えば、複数のイオン電荷を使用することによって、結合成分とナノ粒子との間の十分な非共有結合性相互作用を生じさせることができる。代替の実施形態では、結合成分は、複数の脂質が、リポソームの二重層膜、またはナノ粒子上にコーティングされた二重層もしくは単層と相互作用するように、複数の脂質を含むことができる。ある特定の実施形態では、周囲の溶液の条件を改変して非共有結合性相互作用を破壊し、それにより、ナノ粒子から結合成分を解離させることができる。
【００５９】
本明細書においてさらに記載されるように、本発明の化合物のいくつかは、結合成分としてＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５および／またはＲ６を含むことができる。いくつかの実施形態では、結合成分は、フェニル基、コレステロール、または脂質、例えば飽和Ｃ１０−Ｃ２４アルキル基もしくは不飽和Ｃ１０−Ｃ２４アルキル基、または置換飽和Ｃ１０−Ｃ２４アルキル基もしくは置換不飽和Ｃ１０−Ｃ２４アルキル基を含むことができる。ある特定の例示的な実施形態では、結合成分は、結合成分と脂質二重層との会合を容易にするように選択することができる。例えば、二重結合の長さ、部位および幾何的配置ならびに／またはアルキル基の置換を選択して、脂質二重層での所望レベルの組み込みを提供して、例えば、標的化剤および／またはステルス剤などの他の成分をディスプレイすることによるリポソームの表面特性の改変を可能にすることができる。
【００６０】
いくつかの実施形態では、ホスホン酸コンジュゲートは、連結基Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｌ５および／またはＬ６によってナノ粒子に直接結合させることができる。これらの実施形態では、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、および／またはＲ６は、ナノ粒子であり得る。他の実施形態では、Ｒ１は結合成分であり、該結合成分はリン脂質である。Ｒ１がリン脂質である実施形態のいくつかでは、リン脂質は、式：
【化１４】
2014527071.tif 000017
（式中、Ｒ７およびＲ８はそれぞれ、独立して、飽和Ｃ１０−２４アルキル基もしくは不飽和Ｃ１０−２４アルキル基または飽和Ｃ１０−２４アルカノイル基もしくは不飽和Ｃ１０−２４アルカノイル基、および置換飽和Ｃ１０−２４アルキル基もしくは置換不飽和Ｃ１０−２４アルキル基または置換飽和Ｃ１０−２４アルカノイル基もしくは置換不飽和Ｃ１０−２４アルカノイル基から選択される）を有する。ある特定の実施形態では、Ｒ７およびＲ８はそれぞれ、独立して、飽和Ｃ１０−１８アルキル基もしくは不飽和Ｃ１０−１８アルキル基または飽和Ｃ１０−１８アルカノイル基もしくは不飽和Ｃ１０−１８アルカノイル基、および置換飽和Ｃ１０−１８アルキル基もしくは置換不飽和Ｃ１０−１８アルキル基または置換飽和Ｃ１０−１８アルカノイル基もしくは置換不飽和Ｃ１０−１８アルカノイル基から選択される。適切なアルカノイル基としては、限定されないが、デカノイル、ウンデカノイル、ラウロイル、トリデカノイル、ミリストイル、ペンタデカノイル、パルミトイル、ヘプタデカノイル、ステアロイル、ノナデカノイル、およびアラキドイルなどが挙げられる。当技術分野において一般に公知の、および本明細書において記載される他のリン脂質も使用することができる。
【００６１】
いくつかの実施形態では、ホスホン酸コンジュゲートは、ナノ粒子の表面特性（例えば、親水性特性または疎水性特性）を改変するように調製することができる。例えば、正荷電基および負荷電基をコンジュゲートに含め、ナノ粒子とさらに組み合わせることができる。ある特定の実施形態では、酸性基をコンジュゲートに含めて、リポソーム表面に負電荷を取り込ませることができる。本明細書において提供されるように、本発明のコンジュゲートは、表面特性を改変するのに使用され得る［Ｌ２−Ｒ２］ｎ基を含むことができる。ｎは、０、１または２の整数であり得る。いくつかの実施形態では、Ｌ２は、結合または連結基であり得る。Ｒ２としては、限定されないが、ステルス剤、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、カルボン酸もしくはカルボン酸エステル、ホスホン酸もしくはホスホン酸エステル、スルホン酸もしくはスルホン酸エステル、またはヒドロキシを挙げることができる。
連結基
【００６２】
連結基は、本発明のホスホン酸コンジュゲートの別の特徴である。当業者であれば、様々な連結基が当技術分野において公知であり、例えば、以下の参考文献：Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，２ｎｄＥｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．（２００８）に見出し得ることを認識することができる。本発明の連結基を使用して、化合物の異なる部分間に間隔（ｓｐａｃｉｎｇ）を提供するなど、さらなる特性を化合物に提供することができる。この間隔を使用して、例えば、ナノ粒子から離れて位置する標的化剤が標的に結合することができる場合に、例えば、ナノ粒子によって引き起こされる立体障害問題を克服することができる。いくつかの実施形態では、連結基を使用して、化合物の物理的特性を変化させることができる。
【００６３】
いくつかの実施形態では、本発明のホスホン酸コンジュゲートは、それぞれが独立して連結基または結合であり得るＬ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｌ５およびＬ６を含む。ある特定の実施形態では、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｌ５およびＬ６はそれぞれ、独立して、親水性非免疫原性水溶性連結基であるように選択することができる。本発明の親水性非免疫原性水溶性連結基としては、限定されないが、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリカルボキシラート、多糖、およびデキストランを挙げることができる。当業者であれば、上で考察した間隔の検討事項などのある特定の用途のために、連結基の長さおよび／または化学特性を選択することができることを認識する。
【００６４】
他の実施形態では、連結基は、例えば、Ｃ１−３０アルキレン連結基または類似のヘテロアルキレン連結基（炭素鎖が、Ｏ、ＮおよびＳから選択される１個〜１０個のヘテロ原子が途中に挿入されているアルキレン連結基）であり得る。あるいは、いくつかの実施形態では、連結基としては、フェニレン環またはヘテロアリールカウンターパートなどのアリール部分を挙げることができる。さらに他の実施形態では、連結基としては、アミド基、アミノ基、ケト基、およびヒドロキシル基で置換されたアルキレン連結基またはヘテロアルキレン連結基を挙げることができる。
ステルス剤
【００６５】
いくつかの実施形態では、ホスホン酸コンジュゲートは、少なくとも１つのステルス剤を含むことができる。例えば、ある特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、独立して、ステルス剤であるように選択することができる。ステルス剤は、ナノ粒子が互いにおよび血液細胞または血管壁に粘着するのを防ぐことができる。ある特定の実施形態では、ステルスナノ粒子、例えばステルスリポソームは、ナノ粒子が被験体に投与される場合に、免疫原性および／または反応原性を減少させることができる。ステルス剤はまた、被験体内でのナノ粒子の血液循環時間を増加させることができる。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、例えば、ナノ粒子がステルス剤から部分的もしくは完全に構成されるか、またはナノ粒子がステルス剤でコーティングされるように、ステルス剤を含むことができる。本発明に使用するためのステルス剤としては、当技術分野において一般に周知のものを挙げることができる。適切なステルス剤としては、限定されないが、デンドリマー、ポリアルキレンオキシド、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリカルボキシラート、多糖、および／またはヒドロキシアルキルデンプンを挙げることができる。結合成分に関して上に記載したように、ステルス剤は、共有結合および／または非共有結合を介して、本発明のホスホン酸コンジュゲートに結合させることができる。
【００６６】
ある特定の実施形態では、ステルス剤としては、ポリアルキレンオキシド、例えば「ポリエチレングリコール」を挙げることができるが、これは当技術分野において周知であり、一般に、エチレンオキシドのオリゴマーまたはポリマーを指す。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は直鎖状でもよいし分岐状でもよく、分岐状のＰＥＧ分子は、中心コアから出るさらなるＰＥＧ分子を有することができ、かつ／または複数のＰＥＧ分子は、ポリマー骨格にグラフトすることができる。当技術分野において理解されているように、ポリエチレングリコールはある分子量分布で生成することができ、その分布を使用してＰＥＧの種類を特定することができる。例えば、ＰＥＧ５００は、当技術分野において一般に公知の方法によって測定した場合に約５００ｇ／ｍｏｌの平均分子量を有するＰＥＧ分子の分布によって特定される。あるいは、ＰＥＧは、以下の式：Ｈ−［Ｏ−（ＣＨ２）２］ｍ−ＯＨ（式中、ｍは、このポリマーに存在するモノマーの数である（例えば、ｍは、１〜２００の範囲であり得る））によって表すことができる。例えば、ＰＥＧ１００の分布では、ｍが２に等しいＰＥＧポリマーを挙げることができる。別の例では、ＰＥＧ１０００としては、ｍが２３に等しいＰＥＧ分子を挙げることができる。あるいは、ＰＥＧ５０００としては、ｍが１１４に等しいＰＥＧ分子を挙げることができる。
【００６７】
ある特定の実施形態では、ＰＥＧとしては、低分子量または高分子量のＰＥＧ、例えばＰＥＧ１００、ＰＥＧ５００、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ３４００、ＰＥＧ５０００、ＰＥＧ１００００、またはＰＥＧ２００００を挙げることができる。いくつかの実施形態では、ＰＥＧは、ＰＥＧ１００〜ＰＥＧ１００００、またはＰＥＧ１０００〜ＰＥＧ１００００、またはＰＥＧ１０００〜ＰＥＧ５０００の範囲であり得る。ある特定の実施形態では、ステルス剤は、ＰＥＧ５００、ＰＥＧ１０００、ＰＥＧ２０００、またはＰＥＧ５０００であり得る。ある特定の実施形態では、ＰＥＧは、メチルエーテル、アルコール、またはカルボン酸を末端に有することができる。ある特定の実施形態では、ステルス剤としては、それぞれが連結基で互いに連結された少なくとも２つのＰＥＧ分子を挙げることができる。連結基としては、上記のもの、例えばアミド結合（ａｍｉｄｅ  ｌｉｎｋａｇｅ）を挙げることができる。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ化脂質は、ナノ粒子、例えばリポソームの二重層に、ナノ粒子を「ステルス」にするのに十分な量で存在し、ここで、ステルスナノ粒子は、減少した免疫原性を示す。
治療剤
【００６８】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、治療剤、診断剤、またはこれらの組み合わせを含むことができる。ある特定の実施形態では、治療剤および／または診断剤は、本発明のホスホン酸コンジュゲートと直接結合させることができる。例えば、治療剤および／または診断剤は、ホスホン酸コンジュゲートに共有結合させることができる。他の実施形態では、治療剤および／または診断剤は、本発明のホスホン酸コンジュゲートと結合したナノ粒子内、該ナノ粒子上、または該ナノ粒子周囲のどこにでも存在することができる。いくつかの実施形態では、治療剤および／または診断剤は、ナノ粒子に包埋するか、ナノ粒子に封入するか、またはナノ粒子に係留することができる。ある特定の実施形態では、ナノ粒子はリポソームであり、診断剤および／または治療剤は、該リポソームに封入されている。
【００６９】
本発明に使用される治療剤は、被験体における状態を処置するように向けられた任意の薬剤を含むことができる。一般に、限定されないが、Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ（Ｕ．Ｓ．Ｐ．），Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１０ｔｈＥｄ．，ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ，２００１；Ｋａｔｚｕｎｇ，Ｅｄ．，Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ／Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ，８ｔｈｅｄ．，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２１，２０００；Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ；および／またはＴｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，１８ｔｈｅｄ．，２００６，Ｂｅｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｅｒｋｏｗ，Ｅｄｓ．，Ｍｅｒｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ；または、動物の場合には、Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，９ｔｈｅｄ．，Ｋａｈｎ  Ｅｄ．，Ｍｅｒｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ，２００５（これらの文献はすべて、参照により本明細書に組み込まれる）に列挙されている薬剤を含む当技術分野において公知の任意の治療剤を使用することができる。
【００７０】
治療剤は、処置されることが所望される疾患の種類に応じて選択することができる。例えば、ある特定の種類のがんまたは腫瘍、例えば、癌、肉腫、白血病、リンパ腫、骨髄腫、および中枢神経系がん、ならびに固形腫瘍および混合腫瘍は、同じまたは場合により異なる治療剤の投与を伴い得る。ある特定の実施形態では、被験体におけるがん状態を処置するかまたは該がん状態に影響を与えるように治療剤を送達することができ、治療剤としては、化学療法剤、例えば、アルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、および他の抗がん剤を挙げることができる。いくつかの実施形態では、上記薬剤としては、アンチセンス剤、マイクロＲＮＡ剤、ｓｉＲＮＡ剤および／またはｓｈＲＮＡ剤を挙げることができる。
【００７１】
いくつかの実施形態では、治療剤としては、限定されないが、アバスチン、ドキソルビシン、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔｉｂｉｎｅ）、またはタキサン、例えば、パクリタキセルおよびドセタキセルを含む抗がん剤または細胞傷害剤を挙げることができる。さらなる抗がん剤としては、限定されないが、２０−ｅｐｉ−１，２５ジヒドロキシビタミンＤ３，４−イポメアノール、５−エチニルウラシル、９−ジヒドロタキソール、アビラテロン、アシビシン、アクラルビシン、アコダゾール塩酸塩、アクロニン、アシルフルベン、アデシペノール、アドゼレシン、アルデスロイキン、全ての−ｔｋアンタゴニスト、アルトレタミン、アンバムスチン、アンボマイシン、酢酸アメタントロン、アミドックス（ａｍｉｄｏｘ）、アミホスチン、アミノグルテチミド、アミノレブリン酸、アムルビシン、アムサクリン、アナグレリド、アナストロゾール、アンドログラホリド、新脈管形成阻害剤、アンタゴニストＤ、アンタゴニストＧ、アンタレリクス（ａｎｔａｒｅｌｉｘ）、アントラマイシン、；抗背側形態形成タンパク質−１（ａｎｔｉ−ｄｏｒｓａｌｉｚｉｎｇ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ−１）、抗エストロゲン剤、アンチネオプラストン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アフィディコリングリシネート、アポトーシス遺伝子モジュレーター、アポトーシス制御因子、アプリン酸、ＡＲＡ−ＣＤＰ−ＤＬ−ＰＴＢＡ、アルギニンデアミナーゼ、アスパラギナーゼ、アスペルリン、アスラクリン、アタメスタン、アトリムスチン、アキシナスタチン１、アキシナスタチン２、アキシナスタチン３、アザシチジン、アザセトロン、アザトキシン、アザチロシン、アゼテパ、アゾトマイシン、バッカチンＩＩＩ誘導体、バラノール、バチマスタット、ベンゾクロリン、ベンゾデパ、ベンゾイルスタウロスポリン、ベータラクタム誘導体、β−アレチン、ベタクラマイシンＢ、ベツリン酸、ＢＦＧＦ阻害剤、ビカルタミド、ビサントレン、ビサントレン塩酸塩、ビスアジリジニルスペルミン、ビスナフィド、ジメシル酸ビスナフィド、ビストラテンＡ、ビゼレシン、ブレオマイシン、硫酸ブレオマイシン、ＢＲＣ／ＡＢＬアンタゴニスト、ブレフレート、ブレキナルナトリウム、ブロピリミン、ブドチタン、ブスルファン、ブチオニンスルホキシイミン、カクチノマイシン、カルシポトリオール、カルホスチンＣ、カルステロン、カンプトテシン誘導体、カナリアポックスＩＬ−２、カペシタビン、カラセミド、カルベチマー、カルボプラチン、カルボキサミド−アミノ−トリアゾール、カルボキシアミドトリアゾール、カレストＭ３、カルムスチン、ｃａｍ７００、軟骨由来阻害因子、カルビシン塩酸塩、カルゼレシン、カゼインキナーゼ阻害剤、カスタノスペルミン、セクロピンＢ、セデフィンゴール、セトロレリクス、クロラムブシル、クロリン、クロロキノキサリンスルホンアミド、シカプロスト、シロレマイシン、シスプラチン、ｃｉｓ−ポルフィリン、クラドリビン、クロミフェン類似体、クロトリマゾール、コリスマイシンＡ、コリスマイシンＢ、コンブレタスタチンＡ４、コンブレタスタチン類似体、コナゲニン、クランベシジン８１６（ｃｒａｍｂｅｓｃｉｄｉｎ  ８１６）、クリスナトール、メシル酸クリスナトール、クリプトフィシン８、クリプトフィシンＡ誘導体、キュラシンＡ、シクロペンタアントラキノン、シクロホスファミド、シクロプラタム、シペマイシン、シタラビン、シタラビンオクホスフェート、細胞溶解因子、シトスタチン、ダカルバジン、ダクリキシマブ、ダクチノマイシン、ダウノルビシン塩酸塩、デシタビン、デヒドロジデムニンＢ、デスロレリン、デキシホスファミド、デキソルマプラチン、デクスラゾキサン、デクスベラパミル、デザグアニン、メシル酸デザグアニン、ジアジコン、ジデムニンＢ、ジドックス、ジエチルノルスペルミン、ジヒドロ−５−アザシチジン、ジオキサマイシン、ジフェニルスピロムスチン、ドセタキセル、ドコサノール、ドラセトロン、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、ドキソルビシン塩酸塩、ドロロキシフェン、クエン酸ドロロキシフェン、プロピオン酸ドロモスタノロン、ドロナビノール、ズアゾマイシン（ｄｕａｚｏｍｙｃｉｎ）、デュオカルマイシンＳＡ、エブセレン、エコムスチン、エダトレキサート、エデルホシン、エドレコロマブ、エフロミチン、塩酸エフロミチン、エレメン、エルサミトルシン、エミテフール、エンロプラチン、エンプロメート、エピプロピジン、エピルビシン、エピルビシン塩酸塩、エプリステリド、エルブロゾール、赤血球遺伝子療法ベクターシステム、塩酸エソルビシン、エストラムスチン、エストラムスチン類似体、リン酸エストラムスチンナトリウム、エストロゲンアゴニスト、エストロゲンアンタゴニスト、エタニダゾール、エトポシド、リン酸エトポシド、エトプリン、エキセメスタン、ファドロゾール、塩酸ファドロゾール、ファザラビン、フェンレチニド、フィルグラスチム、フィナステリド、フラボピリドール、フレゼラスチン、フロクスウリジン、フルアステロン、フルダラビン、リン酸フルダラビン、塩酸フルオロダウノルニシン、フルオロウラシル、フルオロシタビン、ホルフェニメクス、フォルメスタン、ホスキドン、ホストリエシン、ホストリエシンナトリウム、ホテムスチン、ガドリニウムテキサフィリン、硝酸ガリウム、ガロシタビン、ガニレリクス、ゼラチナーゼ阻害剤、ゲムシタビン、塩酸ゲムシタビン、グルタチオン阻害剤、ヘプスルファム、ヘレグリン、ヘキサメチレンビスアセトアミド、ヒドロキシウレア、ヒペリシン、イバンドロン酸、イダルビシン、塩酸イダルビシン、イドキシフェン、イドラマントン、イホスファミド、イルモホシン、イロマスタット、イミダゾアクリドン、イミキモド、免疫賦活ペプチド、インスリン様増殖因子−１受容体阻害剤、インターフェロンアゴニスト、インターフェロンアルファ−２Ａ、インターフェロンアルファ−２Ｂ、インターフェロンアルファ−Ｎ１、インターフェロンアルファ−Ｎ３、インターフェロンベータ−ＩＡ、インターフェロンガンマ−ＩＢ、インターフェロン、インターロイキン、イオベングアン、ヨードドキソルビシン、イプロプラチン、イリノテカン、塩酸イリノテカン、イロプラクト、イルソグラジン、イソベンガゾール、イソホモハリコンドリンＢ、イタセトロン、ジャスプラキノリド、カハラリドＦ、ラメラリン−Ｎトリアセテ���ト、ランレオチド、酢酸ランレオチド、レイナマイシン、レノグラスチム、硫酸レンチナン、レプトルスタチン、レトロゾール、白血病抑制因子、白血球アルファインターフェロン、酢酸ロイプロリド、ロイプロリド／エストロゲン／プロゲステロン、リュープロレリン、レバミゾール、リアロゾール、塩酸リアロゾール、直鎖ポリアミン類似体、親油性二糖ペプチド、親油性白金化合物、リッソクリナミド７（ｌｉｓｓｏｃｌｉｎａｍｉｄｅ  ７）、ロバプラチン、ロンブリシン（ｌｏｍｂｒｉｃｉｎｅ）、ロメトレキソール、ロメトレキソールナトリウム、ロムスチン、ロニダミン、ロソキサントロン、塩酸ロソキサントロン、ロバスタチン、ロキソリビン、ルルトテカン（ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ）、ルテチウムテキサフィリン、リソフィリン、溶解性ペプチド、メイタンシン（ｍａｉｔａｎｓｉｎｅ）、マンノスタチンＡ、マリマスタット、マソプロコール、マスピン、マトリライシン阻害剤、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、メイタンシン、塩酸メクロレタミン、酢酸メゲストロール、酢酸メレンゲストロール、メルファラン、メノガリル、メルバロン、メルカプトプリン、メテレリン、メチオニナーゼ、メトトレキセート、メトトレキセートナトリウム、メトクロプラミド、メトプリン、メツレデパ、微細藻類プロテインキナーゼＣ阻害剤、ＭＩＦ阻害剤、ミフェプリストン、ミルテホシン、ミリモスチム、ミスマッチ二本鎖ＲＮＡ、ミチンドミド、ミトカルシン、ミトクロミン、ミトギリン、ミトグアゾン、ミトラクトール、ミトマルシン、マイトマイシン、マイトマイシン類似体、ミトナフィド、ミトスペル、ミトタン、マイトトキシン線維芽細胞増殖因子−サポリン、ミトキサントロン、塩酸ミトキサントロン、モファロテン、モルグラモスチム、モノクローナル抗体、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、モノホスホリル脂質ａ／ミオバクテリウム細胞壁ＳＫ、モピダモール、多剤耐性遺伝子阻害剤、多発性腫瘍抑制因子１に基づく療法、マスタード抗がん剤、ミカペルオキシドＢ、マイコバクテリア細胞壁抽出物、ミコフェノール酸、ミリアポロン、ｎ−アセチルジナリン、ナファレリン、ナグレスチプ、ナロキソン／ペンタゾシン、ナパビン、ナフテルピン、ナルトグラスチム、ネダプラチン、ネモルビシン、ネリドロン酸、中性エンドペプチダーゼ、ニルタミド、ニサマイシン、一酸化窒素モジュレーター、窒素酸化物抗酸化剤、ニトルリン、ノコダゾール、ノガラマイシン、ｎ−置換ベンズアミド、０６−ベンジルグアニン、オクトレオチド、オキセノン、オリゴヌクレオチド、オナプリストン、オンダンセトロン、オラシン、経口サイトカイン誘導物質、オルマプラチン、オサテロン、オキサリプラチン、オキサウノマイシン、オキシスラン、パクリタキセル、パクリタキセル類似体、パクリタキセル誘導体、パラウアミン、パルミトイルリゾキシン、パミドロン酸、パナキシトリオール、パノミフェン、パラバクチン、パゼリプチン、ペグアスパラガーゼ、ペルデシン、ペリオマイシン、ペンタムスチン、ペントサンポリサルフェートナトリウム、ペントスタチン、ペントロゾール、硫酸ペプロマイシン、ペルフルブロン、ペルホスファミド、ペリリルアルコール、フェナジノマイシン、フェニル��セテート、ホスファターゼ阻害剤、ピシバニール、塩酸ピロカルピン、ピポブロマン、ピポスルファン、ピラルビシン、ピリトレキシム、塩酸ピロキサントロン、プラセチンＡ、プラセチンＢ、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター、白金錯体、白金化合物、白金−トリアミン錯体、プリカマイシン、プロメスタン、ポルフィマーナトリウム、ポルフィロマイシン、プレドニムスチン、塩酸プロカルバジン、プロピルビス−アクリドン、プロスタグランジンＪ２、前立腺癌抗アンドロゲン剤、プロテアソーム阻害剤、プロテインＡに基づく免疫モジュレーター、プロテインキナーゼＣ阻害剤、タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤、ピューロマイシン、塩酸ピューロマイシン、プルプリン、ピラゾフリン、ピラゾロアクリジン、ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキシエチレンコンジュゲート、ＲＡＦアンタゴニスト、ラルチトレキセド、ラモセトロン、ＲＡＳファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ＲＡＳ阻害剤、ＲＡＳ−ＧＡＰ阻害剤、脱メチル化レテリプチン、レニウムＲＥ１８６エチドロネート、リゾキシン、リボプリン、リボザイム、ＲＩＩレチナミド、ＲＮＡｉ、ログレチミド、ロヒツキン、ロムルチド、ロキニメクス、ルビギノンＢ１、ルボキシル、サフィンゴール、塩酸サフィンゴール、サイントピン、ｓａｒｃｎｕ、サルコフィトールＡ、サルグラモスチム、ＳＤＩ  １模倣体、セムスチン、老化由来阻害因子１（ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  １）、センスオリゴヌクレオチド、シグナル伝達阻害剤、シグナル伝達モジュレーター、シムトラゼン、単鎖抗原結合タンパク質、シゾフィラン（ｓｉｚｏｆｕｒａｎ）、ソブゾキサン、ボロカプテイトナトリウム、フェニル酢酸ナトリウム、ソルベロール、ソマトメジン結合タンパク質、ソネルミン、スパルホス酸ナトリウム、スパルホス酸、スパルソマイシン、スピカマイシンＤ、塩酸スピロゲルマニウム、スピロムスチン、スピロプラチン、スプレノペンチン、スポンギスタチン１、スクアラミン、幹細胞阻害剤、幹細胞分裂阻害剤、スチピアミド、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ストロメライシン阻害剤、スルフィノシン、スロフェヌル、超活性血管作用性腸ペプチドアンタゴニスト、スラジスタ、スラミン、スワインソニン、合成グリコサミノグリカン、タリソマイシン、タリムスチ
ン、タモキシフェンメチオジド、タウロムスチン、タザロテン、テコガランナトリウム、テガフール、テルラピリリウム、テロメラーゼ阻害剤、塩酸テロキサントロン、テモポルフィン、テモゾロミド、テニポシド、テロキシロン、テストラクトン、テトラクロロデカオキシド、テトラゾミン、タリブラスチン、サリドマイド、チアミプリン、チオコラリン、チオグアニン、チオテパ、トロンボポエチン、トロンボポエチン模倣体、チマルファシン、サイモポエチン受容体アゴニスト、チモトリナン、甲状腺刺激ホルモン、チアゾフリン、スズエチルエチオプルプリン、チラパザミン、二塩化チタノセン、塩酸トポテカン、トプセンチン、トレミフェン、クエン酸トレミフェン、全能性幹細胞因子、翻訳阻害剤、酢酸トレストロン、トレチノイン、トリアセチルウリジン、トリシリビン、リン酸トリシリビン、トリメトレキセート、グルクロン酸トリメトレキセート、トリプトレリン、トロピセトロン、塩酸ツブロゾール、ツロステリド、チロシンキナーゼ阻害剤、チロホスチン（ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ）、ＵＢＣ阻害剤、ウベニメクス、ウラシルマスタード、ウレデパ、尿生殖洞由来増殖阻害因子、ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト、バプレオチド、バリオリンＢ、ベラレソール、ベラミン、ベルジン、ベルテポルフィン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、ビンデシン、硫酸ビンデシン、硫酸ビネピジン、硫酸ビングリシネート、硫酸ビンロイロシン、ビノレルビン、酒石酸ビノレルビン、硫酸ビンロシジン、ビンキサルチン、硫酸ビンゾリジン、ビタキシン、ボロゾール、ザノテロン、ゼニプラチン、ジラスコルブ、ジノスタチン、ジノスタチンスチマラマー、またはゾルビシン塩酸塩を挙げることができる。
【００７２】
いくつかの実施形態では、治療剤は、２つ以上の治療剤の投与を含む薬剤カクテルの一部であり得る。例えば、シスプラチンおよびオキサリプラチンの両方を有するリポソームを投与することができる。加えて、治療剤は、免疫刺激アジュバント、例えば、アルミニウムゲルもしくはアルミニウム塩のアジュバント（例えば、リン酸アルミニウム（ａｌｕｍｉｍｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）または水酸化アルミニウム）、リン酸カルシウム、エンドトキシン、およびトール様受容体アジュバントなどの前、それらの後、またはそれらとともに送達することができる。
【００７３】
本発明の治療剤は、治療用途に使用するための放射性核種も含むことができる。例えば、１１１Ｉｎなどのオージェ電子のエミッターを、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）または１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）などのキレートと結合させて、処置に使用するべき標的化送達組成物、例えばリポソームに含めることができる。他の適切な放射性核種および／または放射性核種−キレートの結合としては、限定されないが、ベータ放射性核種（１７７Ｌｕ、１５３Ｓｍ、８８／９０Ｙ）とＤＯＴＡ、６４Ｃｕ−ＴＥＴＡ、１８８／１８６Ｒｅ（ＣＯ）３−ＩＤＡ；１８８／１８６Ｒｅ（ＣＯ）トリアミン（環状または直鎖状）、１８８／１８６Ｒｅ（ＣＯ）３-Ｅｎｐｙ２、および１８８／１８６Ｒｅ（ＣＯ）３−ＤＴＰＡを挙げることができる。
【００７４】
上記のように、本発明に使用される治療剤は、ナノ粒子に包埋するか、ナノ粒子に封入するか、またはナノ粒子に係留するなどの様々な方法でナノ粒子に結合させることができる。治療剤の充填は、例えば、以下の参考文献：ｄｅ  Ｖｉｌｌｉｅｒｓ，Ｍ．Ｍら、Ｅｄｓ．，Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ（２００９）；Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，Ｇ．，Ｅｄ．，Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ｉｎｔｏ  ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（２００６）に開示されている当技術分野において公知の様々な方法によって行うことができる。一実施形態群では、１つまたは複数の治療剤をリポソームに充填することができる。リポソームの充填は、例えば、能動的または受動的に行うことができる。例えば、治療剤がリポソーム内に封入されるように、溶液中でのリポソームの自己組織化プロセスの間に治療剤を含めることができる。ある特定の実施形態では、治療剤は、リポソーム二重層に、または多重膜リポソームの複数の層内に包埋することもできる。代替の実施形態では、治療剤は、リポソームに能動的に充填することができる。例えば、治療剤を含有する溶液に対して二重層膜を透過性にするような条件（例えば、エレクトロポレーション）にリポソームを曝露し、それにより、治療剤がリポソームの内部体積に入ることを可能にすることができる。
診断剤
【００７５】
本発明に使用される診断剤は、例えば、以下の参考文献：Ａｒｍｓｔｒｏｎｇら、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｍａｇｉｎｇ，５ｔｈＥｄ．，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２００４）；Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，Ｖ．Ｐ．，Ｅｄ．，Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ａｇｅｎｔｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（１９９５）；Ｖａｌｌａｂｈａｊｏｓｕｌａ，Ｓ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍａｇｉｎｇ：Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ｆｏｒ  ＰＥＴ  ａｎｄ  ＳＰＥＣＴ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ（２００９）に示されている当技術分野において公知の任意の診断剤を挙げることができる。ある特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、独立して、診断剤であるように選択することができる。診断剤は、限定されないが、γ放射シグナル、放射性シグナル、エコー源性シグナル、光学シグナル、蛍光シグナル、吸収シグナル、磁気シグナル、または断層撮影シグナルを含む検出可能なシグナルを提供および／または増強する薬剤を含む様々な方法によって検出することができる。診断剤をイメージングするための技術としては、限定されないが、単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）、光学的イメージング、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、Ｘ線イメージング、およびγ線イメージングなどを挙げることができる。
【００７６】
いくつかの実施形態では、診断剤は、例えば、様々な画像診断技術に使用される金属イオンに結合するキレーターを含むことができる。例示的なキレーターとしては、限定されないが、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、［４−（１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカ−１−イル）メチル］安息香酸（ＣＰＴＡ）、シクロヘキサンジアミン四酢酸（ＣＤＴＡ）、エチレンビス（オキシエチレンニトリロ）四酢酸（ＥＧＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、クエン酸、ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、イミノ二酢酸（ＩＤＡ）、トリエチレンテトラアミン六酢酸（ＴＴＨＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラ（メチレンホスホン酸）（ＤＯＴＰ）、１，４，８，１１−テトラアザシクロドデカン−１，４，８，１１−四酢酸（ＴＥＴＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）、およびこれらの誘導体が挙げられる。
【００７７】
放射性同位体は、本明細書において記載される診断剤のいくつかに組み込むことができ、放射性同位体としては、γ線、ポジトロン、β粒子およびα粒子、ならびにＸ線を放出する放射性核種を挙げることができる。適切な放射性核種としては、限定されないが、２２５Ａｃ、７２Ａｓ、２１１Ａｔ、１１Ｂ、１２８Ｂａ、２１２Ｂｉ、７５Ｂｒ、７７Ｂｒ、１４Ｃ、１０９Ｃｄ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、３Ｈ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３０Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、１３Ｎ、１５Ｏ、３２Ｐ、３３Ｐ、２１２Ｐｂ、１０３Ｐｄ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、４７Ｓｃ、１５３Ｓｍ、８９Ｓｒ、９９ｍＴｃ、８８Ｙおよび９０Ｙが挙げられる。ある特定の実施形態では、放射性作用物質としては、１１１Ｉｎ−ＤＴＰＡ、９９ｍＴｃ（ＣＯ）３−ＤＴＰＡ、９９ｍＴｃ（ＣＯ）３−ＥＮＰｙ２、６２／６４／６７Ｃｕ−ＴＥＴＡ、９９ｍＴｃ（ＣＯ）３−ＩＤＡ、および９９ｍＴｃ（ＣＯ）３トリアミン（環状または直鎖状）を挙げることができる。他の実施形態では、作用物質としては、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、１５３Ｓｍ、８８／９０Ｙ、６２／６４／６７Ｃｕ、または６７／６８Ｇａを含むＤＯＴＡおよびその種々の類似体を挙げることができる。いくつかの実施形態では、リポソームは、例えば、以下の参考文献：Ｐｈｉｌｌｉｐｓら、Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｄｉｓｃｉｐｌｉｎａｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ：Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｎａｎｏｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１（１）：６９−８３（２００８）；Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，Ｖ．Ｐ．＆Ｗｅｉｓｓｉｇ，Ｖ．，Ｅｄｓ．Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ２ｎｄ  Ｅｄ．：Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ（２００３）；Ｅｌｂａｙｏｕｍｉ，Ｔ．Ａ．＆Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，Ｖ．Ｐ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｍｏｌ．Ｉｍａｇｉｎｇ  ３３：１１９６−（２００６）；Ｍｏｕｇｉｎ−Ｄｅｇｒａｅｆ，Ｍら、Ｉｎｔ’ｌ  Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ３４４：１１０−１１７（２００７）に示されているようなキレートに結合した脂質、例えばＤＴＰＡ−脂質を組み込むことによって放射標識することができる。
【００７８】
他の実施形態では、診断剤としては、光学剤、例えば、蛍光剤、リン光剤、および化学発光剤などを挙げることができる。多数の剤（例えば、色素、プローブ、標識、または指示薬）が当技術分野において公知であり、本発明に使用することができる。（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｔｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ−Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｔｅｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（２００５）を参照のこと）。蛍光剤としては、様々な有機および／もしくは無機の低分子、または様々な蛍光タンパク質、およびこれらの誘導体を挙げることができる。例えば、蛍光剤としては、限定されないが、シアニン、フタロシアニン、ポルフィリン、インドシアニン、ローダミン、フェノキサジン、フェニルキサンテン、フェノチアジン、フェノセレナジン、フルオレセイン、ベンゾポルフィリン、スクアライン、ジピロロピリミドン、テトラセン、キノリン、ピラジン、コリン、クロコニウム、アクリドン、フェナントリジン、ローダミン、アクリジン、アントラキノン、カルコゲノピリリウム類似体、クロリン、ナフタロシアニン、メチン色素、インドレニウム色素、アゾ化合物、アズレン、アザアズレン、トリフェニルメタン色素、インドール、ベンゾインドール、インドカルボシアニン、ベンゾインドカルボシアニン、および４，４−ジフルオロ−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセンの一般構造を有するＢＯＤＩＰＹ（商標）誘導体、ならびに／またはこれらの任意のコンジュゲートおよび／もしくは誘導体を挙げることができる。使用され得る他の剤としては、限定されないが、例えば、フルオレセイン、フルオレセイン−ポリアスパラギン酸コンジュゲート、フルオレセイン−ポリグルタミン酸コンジュゲート、フルオレセイン−ポリアルギニンコンジュゲート、インドシアニングリーン、インドシアニン−ドデカアスパラギン酸コンジュゲート、インドシアニン−ポリアスパラギン酸コンジュゲート、イソスルファンブルー、インドールジスルホネート、ベンゾインドールジスルホネート、ビス（エチルカルボキシメチル）インドシアニン、ビス（ペンチルカルボキシメチル）インドシアニン、ポリヒドロキシインドールスルホネート、ポリヒドロキシベンゾインドールスルホネート、リジッドヘテロ原子インドールスルホネート（ｒｉｇｉｄ  ｈｅｔｅｒｏａｔｏｍｉｃ  ｉｎｄｏｌｅ  ｓｕｌｆｏｎａｔｅ）、インドシアニンビスプロパン酸、インドシアニンビスヘキサン酸、３，６−ジシアノ−２，５−［（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（カルボキシメチル）アミノ］ピラジン、３，６−［（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］ピラジン−２，５−ジカルボン酸、３，６−ビス（Ｎ−アザテジノ）ピラジン−２，５−ジカルボン酸、３，６−ビス（Ｎ−モルホリノ）ピラジン−２，５−ジカルボン酸、３，６−ビス（Ｎ−ピペラジノ）ピラジン−２，５−ジカルボン酸、３，６−ビス（Ｎ−チオモルホリノ）ピラジン−２，５−ジカルボン酸、３，６−ビス（Ｎ−チオモルホリノ）ピラジン−２，５−ジカルボン酸Ｓ−オキシド、２，５−ジシアノ−３，６−ビス（Ｎ−チオモルホリノ）ピラジンＳ，Ｓ−ジオキシド、インドカルボシアニンテトラスルホネート、クロロインドカルボシアニン、および３，６−ジアミノピラジン−２，５−ジカルボン酸が挙げられる。
【００７９】
当業者であれば、使用される特定の光学剤が、励起に使用される波長、皮膚組織下の深さ、当技術分野において一般に周知の他の要因に依存し得ることを認識する。例えば、光学剤についての最適な吸収極大または、励起極大は、使用される剤に応じて変化し得るが、一般に、本発明の光学剤は、電磁スペクトルの紫外（ＵＶ）、可視、または赤外（ＩＲ）範囲の光を吸収するか、またはこれらの光によって励起される。イメージングについては、近ＩＲで吸収および放出する色素（約７００〜９００ｎｍ、例えば、インドシアニン）が好ましい。内視鏡的方法を使用する局所視覚化については、可視範囲で吸収する任意の色素が適切である。
【００８０】
いくつかの実施形態では、本発明のプロセスにおいて使用される非イオン化放射線は、約３５０ｎｍ〜約１２００ｎｍの波長の範囲であり得る。例示的な一実施形態では、蛍光剤は、電磁スペクトルの可視部分の青色範囲の波長（約４３０ｎｍ〜約５００ｎｍ）を有する光によって励起することができ、電磁スペクトルの可視部分の緑色範囲の波長（約５２０ｎｍ〜約５６５ｎｍ）で発光する。例えば、フルオレセイン色素は、約４８８ｎｍの波長を有する光で励起することができ、約５２０ｎｍの発光波長を有する。別の例として、３，６−ジアミノピラジン−２，５−ジカルボン酸は、約４７０ｎｍの波長を有する光で励起することができ、約５３２ｎｍの波長で蛍光を発する。別の実施形態では、光学剤の励起波長および発光波長は、電磁スペクトルの近赤外範囲に入り得る。例えば、インドシアニングリーンなどのインドシアニン色素は、約７８０ｎｍの波長を有する光で励起することができ、約８３０ｎｍの発光波長を有する。
【００８１】
さらに他の実施形態では、診断剤は、限定されないが、例えば、ヨウ素系Ｘ線造影剤、超常磁性酸化鉄（ＳＰＩＯ）、およびガドリニウムまたはマンガンの錯体などを含む当技術分野において一般に周知の磁気共鳴（ＭＲ）造影剤およびＸ線造影剤を含むことができる。（例えば、Ａｒｍｓｔｒｏｎｇら、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｍａｇｉｎｇ，５ｔｈＥｄ．，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２００４）を参照のこと）。いくつかの実施形態では、診断剤は、磁気共鳴（ＭＲ）イメージング剤を含むことができる。例示的な磁気共鳴剤としては、限定されないが、常磁性剤、および超常磁性剤などが挙げられる。例示的な常磁性剤としては、限定されないが、ガドペンテト酸、ガドテル酸、ガドジアミド、ガドリニウム、ガドテリドール、マンガホジピル、ガドベルセタミド、クエン酸第二鉄アンモニウム、ガドベン酸、ガドブトロール、またはガドキセト酸を挙げることができる。超常磁性剤としては、限定されないが、超常磁性酸化鉄およびフェリステンを挙げることができる。ある特定の実施形態では、診断剤は、例えば、以下の参考文献：Ｈ．Ｓ  Ｔｈｏｍｓｅｎ，Ｒ．Ｎ．Ｍｕｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｒ．Ｆ．Ｍａｔｔｒｅｙ，Ｅｄｓ．，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｃｏｎｔｒａｓｔ  Ｍｅｄｉａ，（Ｂｅｒｌｉｎ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，１９９９）；Ｐ．Ｄａｗｓｏｎ，Ｄ．Ｃｏｓｇｒｏｖｅ  ａｎｄ  Ｒ．Ｇｒａｉｎｇｅｒ，Ｅｄｓ．，Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒａｓｔ  Ｍｅｄｉａ（ＩＳＩＳ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｅｄｉａ  １９９９）；Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，Ｖ．Ｐ．，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１：１８３−２１５（２０００）；Ｂｏｇｄａｎｏｖ，Ａ．Ａら、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．３７：２７９−２９３（１９９９）；Ｓａｃｈｓｅ，Ａら、Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ  ３２（１）：４４−５０（１９９７）に示されているＸ線造影剤を挙げるができる。Ｘ線造影剤の例としては、限定されないが、イオパミドール、イオメプロール、イオヘキソール、イオペントール、イオプロミド、イオシミド、イオベルソール、イオトロラン、イオタスル、イオジキサノール、イオデシモール、イオグルカミド、イオグルニド、イオグラミド、イオサルコール、イオキシラン、イオパミロン、メトリザミド、イオビトリドール、およびイオシメノールが挙げられる。ある特定の実施形態では、Ｘ線造影剤としては、イオパミドール、イオメプロール、イオプロミド、イオヘキソール、イオペントール、イオベルソール、イオビトリドール、イオジキサノール、イオトロラン、およびイオシメノールを挙げることができる。
【００８２】
上記治療剤と同様に、診断剤は、例えば、ナノ粒子に包埋され、ナノ粒子に封入され、またはナノ粒子に係留される工程を含む様々な方法でナノ粒子に結合させることができる。同様に、診断剤の充填は、例えば、以下の参考文献：ｄｅ  Ｖｉｌｌｉｅｒｓ，Ｍ．Ｍら、Ｅｄｓ．，Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ（２００９）；Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，Ｇ．，Ｅｄ．，Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ｉｎｔｏ  ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（２００６）に開示されている当技術分野において公知の様々な方法によって行うことができる。
標的化剤
【００８３】
いくつかの実施形態では、本発明のホスホン酸コンジュゲートは、少なくとも１つの標的化剤も含むことができる。例えば、ある特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、独立して、標的化剤であるように選択することができる。一般に、本発明の標的化剤は、器官、組織、細胞、細胞外マトリックス、または細胞内領域に関連した標的などの、対象とする任意の標的に結合することができる。ある特定の実施形態では、標的は、がん状態などの特定の疾患状態に関連し得る。あるいは、標的化剤は、例えば、細胞、組織、および／または被験体の特定の疾患および／または特定の状態を示す標的を有することができる１つまたは複数の特定の種類の細胞を標的にすることができる。いくつかの実施形態では、標的化剤は、受容体などの唯一の標的に特異的であり得る。適切な標的としては、限定されないが、ＤＮＡ、ＲＮＡなどの核酸、またはこれらの改変誘導体を挙げることができる。適切な標的としては、限定されないが、タンパク質、例えば、細胞外タンパク質、受容体、細胞表面受容体、腫瘍マーカー、膜貫通タンパク質、酵素、または抗体も挙げることができる。適切な標的としては、例えば、細胞表面に存在し得る単糖、二糖、または多糖などの炭水化物を挙げることができる。ある特定の実施形態では、適切な標的としては、ＭＵＣ−１およびＭＵＣ−４などのムチン、ＥＧＦＲなどの増殖因子受容体、クローディン４、ヌクレオリンなどの核小体リンタンパク質、ＣＣＲ７などのケモカイン受容体、ソマトスタチン受容体４、Ｅｒｂ−Ｂ２（赤芽球性白血病発がん遺伝子相同体２）受容体、ＣＤ４４受容体、ならびにＶＥＧＦ受容体−２キナーゼなどの受容体を挙げることができる。
【００８４】
ある特定の実施形態では、標的化剤としては、標的リガンドの低分子模倣体（例えば、ペプチド模倣リガンド）、標的リガンド（例えば、ＲＧＤペプチド含有ペプチド、もしくは葉酸アミド）、または特定の標的に特異的な抗体もしくは抗体断片を挙げることができる。いくつかの実施形態では、標的化剤としては、葉酸誘導体、Ｂ−１２誘導体、インテグリンＲＧＤペプチド、ＮＧＲ誘導体、およびソマトスタチン受容体に結合するソマトスタチン誘導体またはペプチド、例えば、オクトレオチドおよびオクトレオテートなどをさらに挙げることができる。
【００８５】
本発明の標的化剤としては、アプタマーも挙げることができる。アプタマーは、対象とする標的に結合する（ａｓｓｏｃｉａｔｅ）または結合する（ｂｉｎｄ）ように設計することができる。アプタマーは、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、および／またはペプチドから構成され得、アプタマーの特定の側面は、当技術分野において周知である。（例えば、Ｋｌｕｓｓｍａｎ，Ｓ．，Ｅｄ．，Ｔｈｅ  Ａｐｔａｍｅｒ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ（２００６）；Ｎｉｓｓｅｎｂａｕｍ，Ｅ．Ｔ．，  Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２６（８）：４４２−４４９（２００８）を参照のこと）。本発明では、適切なアプタマーは、直鎖状であっても、環化されていてもよく、約１５０塩基未満（すなわち、約１５０ｍｅｒ未満）を有するオリゴヌクレオチドを含むことができる。アプタマーは、約１００塩基〜約１５０塩基または約８０塩基〜約１２０塩基の長さの範囲であり得る。ある特定の実施形態では、アプタマーは、約１２塩基〜約４０塩基、約１２塩基〜約２５塩基、約１８塩基〜約３０塩基、または約１５塩基〜約５０塩基の範囲であり得る。アプタマーは、適切な標的（これは疾患状態で存在または発現しており、限定されないが、本明細書において言及される標的部位を含む）とともに使用するために開発することができる。
ＩＶ．ホスホン酸コンジュゲートおよび結合成分を調製する方法
【００８６】
ホスホン酸コンジュゲートは、様々な方法で生成することができる。一態様では、本発明は、ホスホン酸コンジュゲートを調製する方法であって、式：Ｈ２Ｎ（Ｌ１）−（Ｒ１）を有する第一アミン化合物、式：Ｏ＝Ｃ［（Ｌ２）−（Ｒ２）］ｎを有するカルボニル化合物、および式：
【化１５】
2014527071.tif 000018
を有するＨ−ホスホン酸化合物を、式：
【化１６】
2014527071.tif 000019
（式中、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はそれぞれ、独立して、結合および連結基からなる群より選択され；Ｒ１は、ナノ粒子、結合成分、標的化剤、診断剤、ステルス剤および四脚型提示成分からなる群より選択され；Ｒ２はそれぞれ、独立して、ステルス剤、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、カルボン酸またはカルボン酸エステル、ホスホン酸またはホスホン酸エステル、スルホン酸またはスルホン酸エステル、およびヒドロキシからなる群より選択され；Ｒ３およびＲ４はそれぞれ、独立して、Ｈ、結合成分、標的化剤、診断剤およびステルス剤からなる群より選択され、ここで、Ｒ３またはＲ４の少なくとも１つは、Ｈ以外であり；ｎは、０〜２の整数であり、ｎが０または１である場合、該カルボニル化合物はアルデヒドである）を有するホスホン酸コンジュゲートを形成するのに十分な条件下で結合させる工程を含む方法を含む。
【００８７】
別の態様では、本発明は、ホスホン酸コンジュゲートを調製する方法を含む。上記方法は、式：ＨＮ［（Ｌ１）−（Ｒ１）］（Ｒ９）を有する第二アミン化合物、式：Ｏ＝Ｃ［（Ｌ２）−（Ｒ２）］ｎを有するカルボニル化合物、および式：
【化１７】
2014527071.tif 000020
を有するＨ−ホスホン酸化合物を、式：
【化１８】
2014527071.tif 000021
（式中、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はそれぞれ、独立して、結合および連結基からなる群より選択され；Ｒ１は、ナノ粒子、結合成分、標的化剤、診断剤およびステルス剤からなる群より選択され；Ｒ２は、独立して、ステルス剤、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、カルボン酸またはカルボン酸エステル、ホスホン酸またはホスホン酸エステル、スルホン酸またはスルホン酸エステル、およびヒドロキシからなる群より選択され；Ｒ３およびＲ４はそれぞれ、独立して、Ｈ、結合成分、標的化剤、診断剤およびステルス剤からなる群より選択され、ここで、Ｒ３またはＲ４の少なくとも１つは、Ｈ以外であり；Ｒ９は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル基からなる群より選択され；ｎは、０〜２の整数であり、ｎが０である場合、該カルボニル化合物はホルムアルデヒドである）を有するホスホン酸コンジュゲートを形成するのに十分な条件下で結合させる工程を含む。
【００８８】
一般に、ホスホン酸コンジュゲートを作製するのに使用される反応は、Ｈ−ホスホン酸化合物、カルボニル化合物、および第一アミン化合物または第二アミン化合物を含む。合成では、これらの化合物を任意の順序で結合させて、最終ホスホン酸コンジュゲートを得ることができる。例えば、いくつかの実施形態では、第一アミン化合物または第二アミン化合物およびカルボニル化合物を結合させて中間化合物を形成してから、Ｈ−ホスホン酸化合物と結合させて、最終ホスホン酸コンジュゲートを形成することができる。他の実施形態では、Ｈ−ホスホン酸化合物をカルボニル化合物と結合させて中間化合物を形成してから、第一アミン化合物または第二アミン化合物と結合させて、最終ホスホン酸コンジュゲートを形成することができる。ある特定の実施形態では、必要な化合物を１回の反応で一緒に結合させて、最終ホスホン酸コンジュゲートを生成することができる。ある特定のコンジュゲートの場合、Ｈ−ホスホン酸化合物、カルボニル化合物および第一アミン化合物の比は、２：２：１であり得る。他のコンジュゲートの場合、Ｈ−ホスホン酸化合物、カルボニル化合物および第二アミン化合物の比は、１：１：１であり得る。異なる化合物の比は、特定の反応条件および所望のホスホン酸コンジュゲートに依存する。
【００８９】
本明細書において提供されるように、Ｈ−ホスホン酸化合物、第一アミン化合物または第二アミン化合物、およびカルボニル化合物を含む反応を使用して、結合成分、標的化剤、診断剤、治療剤、ステルス剤またはこれらの組み合わせを含むことができる多種多様な化合物を生成することができる。例えば、図１および図２に示されているように、Ｈ−ホスホン酸化合物、カルボニル化合物および第一アミン化合物を２：２：１の比で結合させて、本発明のホスホン酸コンジュゲートを形成することができる。図１に示されているように、ホスホン酸コンジュゲートは、ＰＥＧ１００〜ＰＥＧ１００００の範囲のＰＥＧ基としてＲ１を含むことができる。Ｒ３およびＲ４はまた、例えば、リポソームの二重層膜への結合を容易にするように、Ｃ１−Ｃ２０アルキル基から選択することができる。この特定の例では、ｎは０であり、そしてこの場合にカルボニル化合物は、ホルムアルデヒドである。同様に、図２に示されているように、カルボニル化合物は、ｎを１としておよびＲ２をメチル基として有することができ、これにより、図１においてホスホン酸コンジュゲートの構造を変化させる。当業者であれば、本明細書において開示されるホスホン酸コンジュゲートの範囲を生成するのに使用され得る様々な可能な組み合わせを認識する。
【００９０】
いくつかの実施形態では、ホスホン酸コンジュゲートは、例えば、ナノ粒子表面から伸長することができる提示アセンブリ（ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ａｓｓｅｍｂｌｙ）を提供するように生成することができる。図３に示されているように、脂質分子は、第一アミン、およびＲ７およびＲ８（これは、例えばＣ１−Ｃ２０アルキル基であり得る）を含むことができる。この例では、ｎは０であり、Ｌ３およびＬ４は、結合、または短いアルキレン基（例えば、Ｃ１−Ｃ６）、または所望の間隔もしくは特定用途に望ましい他の特性を可能にする他の連結基であり得る。示されているように、脂質分子をＨ−ホスホン酸化合物およびホルムアルデヒドとそれぞれ１：２：２の比で結合させて、Ｒ３およびＲ４の四脚型アセンブリ（ｔｅｔｒａｐｏｄａｌ  ａｓｓｅｍｂｌｙ）を表わすホスホン酸コンジュゲートを形成することができる。
【００９１】
ある特定の実施形態では、これらの化合物を作製する方法は、ナノ粒子と組み合わせて、出発材料の１つ（例えば、Ｈ−ホスホン酸化合物）をナノ粒子に結合させる一方で、ホスホン酸コンジュゲートの合成を可能にすることができる。図４の例に示されているように、脂質二重層膜における２つの隣接するＨ−ホスホン酸化合物を２当量のカルボニル化合物Ｏ＝Ｃ［（Ｌ２）−（Ｒ２）］ｎおよび１当量の第一アミン化合物Ｈ２Ｎ（Ｌ１）−（Ｒ１）と結合させて、本発明のホスホン酸コンジュゲートをナノ粒子表面に生成することができる。例えば、図４に示されているように、Ｒ３およびＲ４は、リポソームの脂質二重層に包埋されている結合成分、例えばＣ１−Ｃ２０アルキル基であり得る。次いで、Ｈ−ホスホン酸化合物を有する調製したリポソームを第一アミン化合物（これは、例えば、ＰＥＧ１００〜ＰＥＧ１００００の範囲のＰＥＧなどのステルス剤を含む）と結合させることができる。カルボニル化合物を含むヒドロホスホニル化反応の後、ステルス剤がリポソーム表面にディスプレイされることにより、リポソームをステルスリポソームに変換することができる。
【００９２】
図５に示されているように、同様の方策を使用して、ナノ粒子表面から伸長する提示アセンブリを生成することができる。脂質分子としては、表面から伸長する第一アミンおよび、例えば脂質二重層に包埋されるＣ１−Ｃ２０アルキル基であり得る、Ｒ７およびＲ８を含むことができる。２当量のＨ−ホスホン酸化合物およびホルムアルデヒドを結合させる場合、ヒドロホスホニル化反応は、２つのＨ−ホスホン酸化合物間に橋架けを形成し、さらにはＲ５およびＲ６をリポソーム表面に提示することができる（この場合、Ｒ５およびＲ６は、ＰＥＧ１００〜ＰＥＧ１００００の範囲のＰＥＧなどのステルス剤であり得る）。上により詳細に記載したように、連結基Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、独立して、所望の間隔もしくは特定用途に望ましい他の特性を可能にするように、連結基または結合として選択することができる。当業者であれば、本発明のホスホン酸コンジュゲートをナノ粒子表面に生成するのに使用され得る様々な合成方法を認識する。
【００９３】
当業者によって認識されるように、本明細書において記載される合成反応スキームの出発材料および中間体は、所望により、従来の技術（限定されないが、ろ過、蒸留、結晶化、およびクロマトグラフィーなどが挙げられる）を使用して単離および精製することができる。このような材料は、物理定数およびスペクトルデータを含む従来の手段を使用して特性決定することができる。特に反対の指示がない限り、本明細書において記載される反応は、約−７８℃〜約１５０℃または約０℃〜約１２５℃の反応温度範囲、いくつかの実施形態では約室温（または周囲温度）、例えば約２０℃で、大気圧の不活性雰囲気下で行うことができる。本明細書において記載される反応は様々な溶媒中で行うことができ、これらは、本明細書において記載される中間生成物または最終生成物を生成するのに使用される特定の反応に依存し得る。いくつかの実施形態では、反応溶媒としては、非プロトン性溶媒（例えば、ＴＨＦまたはエーテル）などの有機溶媒を挙げることができる。ある特定の実施形態では、反応溶媒は水性溶媒であり得、さらなる緩衝剤、塩、および添加物などを含むことができる。本明細書において記載されるある特定の反応は、例えば、本明細書において記載されるある特定の化合物を精製するための還流条件を含むことができる。
【００９４】
ヒドロホスホニル化反応は、本発明のホスホン酸コンジュゲートをナノ粒子上に生成するのにいくつかの利点を提供するが、他の方法を使用して該化合物を作製することができる。例えば、Ｈ−ホスホン酸化合物、第一アミン化合物および第二アミン化合物、ならびにカルボニル化合物を一緒に反応させて、本発明のホスホン酸コンジュゲートを形成することができる。続いて、ホスホン酸コンジュゲートをナノ粒子に結合させることができる。いくつかの実施形態では、標準的な方法（例えば、押し出し）を使用して最初にリポソームを生成し、続いて、ホスホン酸コンジュゲートをリポソームに結合させることによって、ホスホン酸コンジュゲートをリポソームへと組み込むことができる。他の実施形態では、リポソームの形成中に、例えば、ホスホン酸コンジュゲートおよび脂質成分を一緒に乾燥し、次いで混合物を水溶液に再懸濁して、二重層に結合したホスホン酸コンジュゲートを有するリポソームを形成することによって、ホスホン酸コンジュゲートをリポソーム二重層へと組み込むことができる。
【００９５】
他の合成手順を使用して、ホスホン酸コンジュゲートを生成することができることも意図される。例えば、図１に示されているようにＲ１およびＬ１を含む第一アミン化合物を、Ｒ３およびＲ４を含有しないＨ−ホスホネートと反応させることができる。このような実施形態では、Ｌ３およびＬ４は、Ｒ３および／またはＲ４（例えば、標的化剤、ステルス剤または診断剤を挙げることができる）への結合のための官能基を含む連結基であり得る。したがって、Ｒ３および／またはＲ４をＬ３およびＬ４の官能基と反応させて、最終ホスホン酸コンジュゲートを生成することができる。当業者であれば、本発明のホスホン酸コンジュゲートを生成するための他の可能な合成順序がいくつかあることを認識する。例えば、Ｒ３およびＲ４は同じものでもよく、したがって例えば、Ｒ３およびＲ４がそれぞれ標的化剤である場合、Ｌ３およびＬ４はそれぞれ、標的化剤と反応して本発明のホスホン酸コンジュゲートを生成することができる官能基を含有することができる。
ナノ粒子
【００９６】
本明細書において提供されるように、本発明は、当技術分野において一般に公知の様々な方法によって生成することができるナノ粒子の使用を含み、このようなナノ粒子を作製する方法は、所望される特定のナノ粒子に依存し得る。当技術分野において利用可能な任意の測定技術を使用して、標的化送達組成物およびナノ粒子の特性を決定することができる。例えば、動的光散乱、Ｘ線光電子顕微鏡法、粉末Ｘ線回折、走査電子顕微鏡法（ＳＥＭ）、透過型電子顕微鏡法（ＴＥＭ）、および原子間力顕微鏡法（ＡＦＭ）などの技術を使用して、ナノ粒子および／または標的化送達組成物の平均サイズおよび分散度を決定することができる。
【００９７】
本発明に使用されるリポソームは、当技術分野において一般に周知の様々な技術を使用して作製することができる。（例えば、Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ａ．Ｐ．，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，２ｎｄＥｄｉｔｉｏｎ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ（２００３）；Ｌａｓｉｃ，Ｄ．Ｄ．，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｅ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  ＬＬＣ（１９９７）を参照のこと）。例えば、リポソームは、限定されないが、例えば、押し出し、撹拌、超音波処理、逆相蒸発、水溶液中の自己組織化、電極ベースの形成技術、およびマイクロフルイディック指向型形成技術（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃ  ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）などの技術によって生成することができる。ある特定の実施形態では、大単層ベシクル（ＬＵＶ）および／または小単層ベシクル（ＳＵＶ）を含むことができる、多層および／または単層であるリポソームを生成するための方法を使用することができる。溶液中のリポソームの自己組織化と同様に、ミセルは、両親媒性分子が、ミセルを形成するのに十分な溶液条件下で溶解される場合にミセルを形成するように、当技術分野において一般に周知の技術を使用して生成することができる。脂質コーティングバブルおよびリポタンパク質も、当技術分野において公知の方法を使用して構築することができる（例えば、Ｆａｒｏｏｋ，Ｕ．，Ｊ．Ｒ．Ｓｏｃ．Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ，６（３２）：２７１−２７７（２００９）；Ｌａｃｋｏら、Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ａｓ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｖｅｈｉｃｌｅｓ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（２００７）を参照のこと）。
【００９８】
本発明に使用され得るポリマーナノ粒子を作製する方法は、当技術分野において一般に周知である（例えば、Ｓｉｇｍｕｎｄ，Ｗら、Ｅｄｓ．，Ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｉｎ  Ｎａｎｏ−ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  ＬＬＣ（２００９）；Ｋａｒｎｉｋら、Ｎａｎｏ  Ｌｅｔｔ．，８（９）：２９０６−２９１２（２００８）を参照のこと）。例えば、ブロックコポリマーが溶液中で自己組織化してポリマーソームおよび／またはブロックコポリマーミセルを形成することができるように、当技術分野において公知の合成方法を使用して、ブロックコポリマーを作製することができる。ニオソームは、当技術分野において公知であり、様々な技術および組成物を使用して作製することができる（Ｂａｉｌｌｉｅ  Ａ．Ｊら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，３８：５０２−５０５（１９８８））。磁性粒子および／または金属粒子は、当技術分野において公知の任意の方法、例えば、共沈、熱分解、およびマイクロエマルジョンを使用して構築することができる。（Ｎａｇａｒａｊａｎ，Ｒ．＆Ｈａｔｔｏｎ，Ｔ．Ａ．，Ｅｄｓ．，Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ，Ｐａｓｓｉｖａｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚａｔｉｏｎ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ（２００８）も参照のこと）。金粒子およびこれらの誘導体は、当技術分野において一般に公知の様々な技術、例えば、Ｔｕｒｋｅｖｉｃｈ法、Ｂｒｕｓｔ法、Ｐｅｒｒａｕｔ法、またはソノリシスを使用して作製することができる（Ｇｒｚｅｌｃｚａｋら、Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｒｅｖ．，３７：１７８３−１７９１（２００８）も参照のこと）。いくつかの実施形態では、結合成分は、硫黄−金係留化学反応によって結合させることができる。量子ドットまたは半導体ナノ結晶は、コロイド合成技術などの当技術分野において公知の任意の方法を使用して合成することができる。一般に、量子ドットは、セレン化カドミウム、硫化カドミウム、ヒ化インジウム、およびリン化インジウムなどを含む半導体材料などの様々な材料から構成され得る。
他の結合成分
【００９９】
本明細書において記載されるように、本発明のホスホン酸コンジュゲートは、標的化剤、ステルス剤、診断剤、治療剤および結合成分などの成分を含むことができる。当業者であれば、ホスホン酸コンジュゲートに含まれる種々の成分の組み合わせを生成するのに使用され得る一般に周知の標準的な技術を認識する。例えば、結合成分に関して上に記載したように、標的化剤、ステルス剤、診断剤、治療剤は、共有結合および／または非共有結合を介して、本発明のホスホン酸コンジュゲートに結合させることができる。
【０１００】
標的化剤に関して、ある特定の実施形態では、標的化剤は、アプタマーを含むことができる。特定の標的用のアプタマーを、当技術分野において公知の技術、例えば、限定されないが、ＳＥＬＥＸ（商標）（指数関数的富化によるリガンドの系統的進化）もしくはＭｏｎｏＬｅｘ（商標）技術（ＡｐｔａＲｅｓ  ＡＧの１ラウンドのアプタマー単離手順）などのｉｎ  ｖｉｔｒｏ選択法、ｉｎ  ｖｉｖｏ選択法、またはこれらの組み合わせを使用して同定することができる。（例えば、Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ，Ａ．Ｄ．＆Ｓｚｏｓｔａｋ，Ｊ．Ｗ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４６（６２８７）：８１８−２２；Ｂｏｃｋら、Ｎａｔｕｒｅ  ３５５（６３６０）：５６４−６（１９９２）を参照のこと）。いくつかの実施形態では、本明細書において開示されるように、上記方法を使用して、対象とする特定の標的部位に結合させるのに使用され得る特定のＤＮＡ配列またはＲＮＡ配列を同定することができる。特定のアプタマーの配列が一旦同定されたら、ホスホロアミダイト合成などの当技術分野において公知の様々な方法でアプタマーを構築することができる。ペプチドアプタマーについては、様々な同定技術および製造技術を使用することができる（例えば、Ｃｏｌａｓ，Ｐ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．７：２（２００８）；Ｗｏｏｄｍａｎ，Ｒら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３５２（５）：１１１８−３３（２００５）を参照のこと）。
【０１０１】
様々な方法によって、アプタマーをＨ−ホスホン酸化合物、第一アミン化合物および第二アミン化合物、ならびにカルボニル化合物に結合させることができる。例えば、Ｈ−ホスホン酸化合物および／または第一アミン化合物もしくは第二アミン化合物における連結基をアプタマーの３’末端または５’末端と反応させることができる。代替の実施形態では、１つの核酸をＨ−ホスホン酸化合物および第一アミン化合物もしくは第二アミン化合物における連結基に同時に付加することによって、アプタマーを連続合成することができる。当業者であれば、アプタマーを本発明のホスホン酸コンジュゲートに含めるのに使用され得る周知の技術を認識する。
Ｖ．標的化送達組成物を投与する方法
【０１０２】
本発明はまた、ホスホン酸コンジュゲートを含む標的化送達組成物を含む。一態様では、本発明は、本明細書において記載されるホスホン酸コンジュゲートを含む標的化送達組成物であって、Ｒ３およびＲ４がそれぞれ、ナノ粒子に結合した結合成分であり、Ｒ１が標的化剤、診断剤およびステルス剤から選択される標的化送達組成物を含む。上により詳細に記載したように、結合成分は、いくつかの方法でナノ粒子に結合することができ、例えば、結合成分は、リポソームの二重層と結合する脂質であり得る。ある特定の実施形態では、標的化送達組成物はリポソームを含むことができ、Ｒ３およびＲ４はそれぞれリポソームの二重層に結合され得、独立して、脂質またはコレステロールであり得る。他の実施形態では、ホスホン酸コンジュゲートのＲ１は、ナノ粒子、またはナノ粒子に結合した結合成分であり得、Ｒ３およびＲ４はそれぞれ、標的化剤、診断剤またはステルス剤であり得る。
【０１０３】
本発明の標的化送達組成物および方法は、被験体に関連する任意の疾患、障害、および／または状態を処置および／または診断するのに使用することができる。一実施形態では、本発明の方法は、被験体におけるがん状態を処置または診断するための方法であって、ナノ粒子に結合した本発明のホスホン酸コンジュゲートを含む標的化送達組成物であって、該状態を処置または診断するのに十分な治療剤または診断剤も含み、Ｒ１、Ｒ３およびＲ４の少なくとも１つが標的化剤である標的化送達組成物を該験体に投与する工程を含む方法を含む。ある特定の実施形態では、がん状態としては、本発明の標的化送達組成物の標的化剤が標的とする受容体を十分に発現する（例えば、細胞表面に、または血管系に）がんを挙げることができる。
【０１０４】
別の実施形態では、本発明の方法は、標的化治療処置についての被験体の適性を判定する方法であって、本明細書において記載されるナノ粒子およびホスホン酸コンジュゲートを含む標的化送達組成物であって、該ホスホン酸コンジュゲートまたはナノ粒子が診断剤を含む標的化送達組成物を該被験体に投与する工程、および該被験体をイメージングして該診断剤を検出する工程を含み、Ｒ１、Ｒ３およびＲ４の少なくとも１つが標的化剤である方法を含む。
投与
【０１０５】
いくつかの実施形態では、本発明は、標的化送達組成物および生理学的に（すなわち、薬学的に）許容され得るキャリアを含むことができる。本明細書において使用される場合、用語「キャリア」は、治療剤などの薬物のための希釈剤またはビヒクルとして使用される典型的には不活性の物質を指す。この用語は、組成物に粘着性の品質を付与する典型的には不活性の物質も包含する。典型的には、生理学的に許容され得るキャリアは、液体形態で存在する。液体キャリアの例としては、生理食塩水、リン酸塩緩衝液、通常の緩衝食塩水（１３５〜１５０ｍＭのＮａＣｌ）、水、緩衝水、０．４％食塩水、０．３％グリシン、および安定性を増強するための糖タンパク質（例えば、アルブミン、リポタンパク質、グロブリンなど）などが挙げられる。生理学的に許容され得るキャリアは、投与される特定の組成物によって、ならびに組成物を投与するのに使用される特定の方法によって部分的には決定されるので、本発明の医薬組成物の多種多様な適切な製剤が存在する（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ，２００５を参照のこと）。
【０１０６】
本発明の組成物は、慣例的な周知の滅菌技術によって滅菌してもよいし、滅菌条件下で生成してもよい。水溶液は、使用のためにパッケージされ得るか、または無菌条件下でろ過し、凍結乾燥することができ、その凍結乾燥調製物は、投与前に滅菌水溶液と合わされる。組成物は、生理的条件に近づけるために、必要に応じて薬学的に許容され得る補助物質、例えば、ｐＨ調整剤および緩衝剤、張度調整剤、および湿潤剤など、例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、モノラウリン酸ソルビタン、およびオレイン酸トリエタノールアミンを含有することができる。糖（例えば。凍結乾燥標的化送達組成物のための安定剤）も、組成物を安定化させるために含めることができる。
【０１０７】
選択された標的化送達組成物は、単独でまたは他の適切な成分と組み合わせて、吸入を介して投与されるエアロゾル製剤（すなわち、これらは、「噴霧する」ことができる）にすることができる。エアロゾル製剤は、加圧された許容され得る噴霧剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、および窒素などの中に入れることができる。
【０１０８】
直腸投与に適切な製剤としては、例えば、坐剤基剤とともに有効量のパッケージされた標的化送達組成物を含む坐剤が挙げられる。適切な坐剤基剤としては、天然または合成のトリグリセリドまたはパラフィン炭化水素が挙げられる。加えて、選択された標的化送達組成物と、例えば、液体トリグリセリド、ポリエチレングリコール、およびパラフィン炭化水素を含む基剤との組み合わせを含有するゼラチン直腸カプセルを使用することも可能である。
【０１０９】
例えば、関節内（関節内）経路、静脈内経路、筋肉内経路、腫瘍内経路、皮内経路、腹腔内経路、ならびに皮下経路などによる非経口投与に適切な製剤は、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および製剤を意図されたレシピエントの血液と等張性にする溶質を含有することができる水性および非水性の等張性滅菌注射液剤、ならびに懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、および保存剤を含むことができる水性および非水性滅菌懸濁液を包含する。注射液剤および懸濁剤は、滅菌粉末、顆粒、および錠剤からも調製することができる。本発明の実施において、組成物は、例えば、静脈内注入によって、局所に、腹腔内に、嚢内に、または髄腔内に投与することができる。非経口投与および静脈内投与は、好ましい投与方法である。標的化送達組成物の製剤は、単位用量または複数回用量の密閉容器、例えば、アンプルおよびバイアルで提供することができる。
【０１１０】
医薬調製物は、好ましくは、単位剤形である。このような形態では、調製物は、適切な量の活性成分、例えば、標的化送達組成物を含有する単位用量にさらに小分けされる。単位剤形は、パッケージされた調製物とすることができ、パッケージは、別々の量の調製物を含有する。組成物は、所望により、他の適合した治療剤も含有することができる。
【０１１１】
がんを処置するための治療用途において、本発明の医薬組成物に用いられる治療剤および／または診断剤を含む標的化送達組成物は、毎日約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１０００ｍｇ／ｋｇの初期投与量で投与することができる。約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの１日量範囲を使用することができる。しかしながら、投与量は、患者の要求事項、処置される状態の重症度、および使用される標的化送達組成物に応じて変更することができる。例えば、投与量は、特定の患者において診断されたがんの種類および病期を考慮して経験的に決定することができる。患者に投与される用量は、本発明との関連において、経時的に患者における有益な治療応答に影響を与えるのに十分であるべきである。用量のサイズはまた、特定の患者における特定の標的化送達組成物の投与に付随する、あらゆる有害な副作用の存在、性質、および程度によって決定される。特定の状況に適切な投与量を決定することは、従事者の技量の範囲内である。一般に、処置は、標的化送達組成物の最適用量未満であるより少ない投与量で開始する。その後、投与量は、状況下で最適の効果に到達するまで、少しずつ増加させる。便宜上、所望により、総１日投与量を分割して、１日の間に一部ずつ投与することができる。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、本発明の標的化送達組成物は、疾患、障害、および／または状態を診断するのに使用することができる。いくつかの実施形態では、標的化送達組成物は、被験体におけるがん状態、例えば、肺がん、乳がん、膵がん、前立腺がん、子宮頸がん、卵巣がん、結腸がん、肝がん、および食道がんなどを診断するのに使用することができる。いくつかの実施形態では、疾患状態を診断する方法は、標的化送達組成物を使用して、被験体の体内の腫瘍を物理的に検出および／または位置決定する工程を含むことができる。例えば、腫瘍は、本発明の標的化送達組成物の標的化剤が標的とする受容体を十分に発現する（例えば、細胞表面に、または血管系に）がんに関するものであり得る。いくつかの実施形態では、標的化送達組成物は、がん以外の疾患、例えば、増殖性疾患、心血管疾患、胃腸疾患、尿生殖器疾患、神経疾患、筋骨格疾患、血液系疾患、炎症疾患、自己免疫疾患、および関節リウマチなどを診断するのにも使用することができる。
【０１１３】
本明細書において開示されるように、本発明の標的化送達組成物は、本質的に検出可能な特性を有する診断剤を含むことができる。被験体における診断剤の検出において、標的化送達組成物、または標的化送達組成物である部分を有する粒子の集団を、被験体に投与することができる。次いで、診断剤をイメージングするための技術、例えば、単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）、光学的イメージング、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、Ｘ線イメージング、およびγ線イメージングなどを使用して被験体をイメージングすることができる。本明細書において記載されるイメージング技術はいずれも、他のイメージング技術を組み合わせて使用することができる。いくつかの実施形態では、イメージングのための放射性同位体を粒子に組み込むことにより、被験体において標的化送達組成物をｉｎ  ｖｉｖｏで追跡することが可能になる。例えば、標的化送達組成物の生体分布および／または排出を測定し、必要に応じて患者の処置を変更するのに使用することができる。例えば、患者の処置および／または診断を最適化するのに、より多くのまたはより少ない標的化送達組成物が必要となる場合がある。
標的化送達
【０１１４】
ある特定の実施形態では、本発明の標的化送達組成物は、治療剤または診断剤を標的化様式で放出するように被験体に送達することができる。例えば、標的化送達組成物が被験体における標的に送達され得ると、次いで、ナノ粒子などの標的化送達組成物に包埋されたか、該標的化送達組成物に封入されたか、または該標的化送達組成物に係留された治療剤が、標的近傍の溶液条件に基づいて送達され得る。例えば、ｐＨ、および塩濃度などの溶液条件は、治療剤が標的近傍の領域に短期間または長期間にわたる放出を誘発することができる。あるいは、酵素は、標的化送達組成物から治療剤または診断剤を切断することによって、放出を開始することができる。いくつかの実施形態では、標的化送達組成物は、エンドサイトーシスによって細胞の内部領域に送達され、場合によりその後にリソソームなどの細胞の内部コンパートメント内で分解され得る。当業者であれば、治療剤または診断剤の標的化送達が、当技術分野において一般に公知の様々な方法を使用して行うことができることを認識する。
キット
【０１１５】
本発明はまた、疾患状態を処置および／または診断するために、被験体に標的化送達組成物を投与するためのキットを提供する。このようなキットは、典型的には、がん状態などの疾患状態を処置および／または診断するのに必要な２つ以上の構成要素を含む。構成要素としては、本発明の標的化送達組成物、試薬、容器、および／または器材（ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ）を挙げることができる。いくつかの実施形態では、キットにおける容器は、使用前に放射標識される放射性薬品を含む標的化送達組成物を含有することができる。キットは、標的化送達組成物を投与するのに必要な反応構成要素（ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）またはバッファーのいずれかをさらに含むことができる。さらに、標的化送達組成物を凍結乾燥形態にして、次いで投与前に再構成することができる。
【０１１６】
ある特定の実施形態では、本発明のキットは、患者の疾患状態を処置および／または診断するのに使用される１つまたは複数の構成要素を含むことができるパッケージングアセンブリを含むことができる。例えば、パッケージングアセンブリは、本明細書において記載される標的化送達組成物の少なくとも１つを収容する容器を含むことができる。個別の容器は、患者への投与前に標的化送達組成物と混合することができる他の賦形剤または剤を含むことができる。いくつかの実施形態では、医師は、特定の患者に必要な処置または診断に応じて、ある特定の構成要素および／またはパッケージングアセンブリを選択および適合させることができる。
【０１１７】
本明細書において記載される実施形態は、例示目的のためのものにすぎず、当業者であれば、それらを踏まえて種々の改変または変更が示唆されるであろうし、該改変または変更は、本出願の精神および範囲、ならびに添付の特許請求の範囲内に含まれると理解されよう。本明細書において引用されるすべての刊行物、特許、および特許出願は、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１１８】
当業者が本発明をより明確に理解し実施することができるように、以下の調製物および実施例を示す。それらは、本発明の範囲を限定するものとみなすべきではなく、その例示的かつ代表的なものにすぎないとみなすべきである。
【実施例】
【０１１９】
ＶＩ．実施例
これらの化合物を調製するのに使用される出発材料および試薬は、一般に、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．などの商業供給業者から入手可能であるか、または科学文献および特許文献および参考文献、例えばＦｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １−１５；Ｒｏｄｄ’ｓ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９８９，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １−５  ａｎｄ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｌｓ；およびＯｒｇａｎｉｃ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １−４０に記載されている手順にしたがって当業者に一般に公知の方法によって調製される。以下の合成反応スキームは、本発明の化合物を合成することができるいくつかの方法の例示的なものにすぎず、これらの合成反応スキームに対する種々の改変を行うことができ、当業者であれば、本出願に含まれる開示を参照して該改変が示唆されるであろう。
【０１２０】
合成反応スキームの出発材料および中間体は、所望により、従来の技術（限定されないが、ろ過、蒸留、結晶化、およびクロマトグラフィーなどが挙げられる）を使用して単離および精製することができる。このような物質は、物理定数およびスペクトルデータを含む従来の手段を使用して特性決定することができる。
実施例１
ホスホン酸水素ジアルキルの調製
【０１２１】
一般的な合成手順を使用してホスホン酸水素ジアルキルを生成し、さらに反応させて本発明の化合物のいくつかを形成することができた。図６に示されているように、一般的な反応スキームは、亜リン酸ジフェニルを１−アルカノールと結合させて、ホスホン酸水素ジアルキルを形成することであった。以下のホスホン酸水素ジアルキルを以下のように調製した：
【表２】
2014527071.tif 000022
【０１２２】
２〜５ｍＬマイクロウェーブバイアル中に、３〜６ｍｍｏｌの亜リン酸ジフェニルおよび２．１当量の１−アルカノールを添加した。２当量（容量による）の無水ピリジンをバイアルに注入し、蓋を圧着することによってバイアルを密閉した。Ｂｉｏｔａｇｅ（商標）Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ  Ｒｅａｃｔｏｒを使用して、反応混合物をマイクロ波放射に１００℃で３０分間曝露した。３１Ｐ  ＮＭＲによって、ＣＤＣｌ３中の反応混合物を完了について検査した。
【０１２３】
反応混合物を１００ｍＬ丸底フラスコに移し、７０℃で回転蒸発させて、溶媒を除去した。ヘキサン／酢酸エチル勾配を使用する順相シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（Ｃ１２生成物）、またはアセトン沈殿（Ｃ１４〜Ｃ２２生成物）によって、粗生成物の残留物を精製した。各場合において、ＭＳおよびＮＭＲのデータは、所望の生成物と一致していた。
実施例２
ホスホン酸水素ジオクタデシルの調製
【化１９】
2014527071.tif 000023
【０１２４】
機械的撹拌器および熱電対を備える１２５ｍＬ丸底フラスコ（ＲＢＦ）に、１−オクタデカノール（２５．４１ｇ、０．０９３９モル（ｍｏｌｅ）、２．２当量）、亜リン酸ジフェニル（１０．０ｇ、０．０４２７モル、１．０当量）、およびピリジン（４．０５３ｇ、０．５１２４モル、１．２当量）を添加し、混合物を７５℃に加熱した。２．５時間後、３１Ｐ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）によって、反応の完了を検査した：７．８ｐｐｍにおける生成物、４．２ｐｐｍにおける中間体ホスホン酸フェニルモノ−オクタデシル、０．３５ｐｐｍにおけるリン酸ジフェニル。反応は、約９４％（積分による）の生成物、１．５％の中間体および４．６％の５．５ｐｐｍピークを示した。混合物を４０〜５０℃に冷却し、約５０ｍＬのジクロロメタンをゆっくりと添加して、材料が固化して撹拌器に固着するのを防いだ。混合物を１５０ｍＬのジクロロメタンでさらに希釈し、分液漏斗に移した。混合物を５０ｍＬの水で洗浄し、７５ｍＬの３Ｎ塩酸で３回抽出し、各７５ｍＬの水および食塩水でさらに洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ロータリーエバポレーター（ｒｏｔｏｖａｐ）で濃縮して透明な液体を得、これを静置するとゆっくりと固化した。
【０１２５】
機械的撹拌器を備える清浄な２５０ｍＬ  ＲＢＦに、１００ｍＬのアセトンを添加した。プラスチックピペットによって、濃縮生成物を撹拌アセトンに周囲温度で添加した；液体からふわふわした白色の固体が沈殿した。混合物を１時間撹拌してから、一層のＳｈａｒｋｓｋｉｎ（商標）ペーパーで覆ったＷｈａｔｍａｎ（商標）＃４のろ紙でろ過して、ふわふわした白色のウェットケーキを得た。ウェットケーキを真空下、周囲温度で一晩乾燥させた。収量：１９．１１ｇ（７６．３％）。ＨＲＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値５８７．５５２５、実測値５８７．５５２５；［Ｍ＋Ｎａ］＋計算値６０９．５３４６、実測値６０９．５３３９。ＨＬＰＣ−ＭＳ：５８７．２５［Ｍ＋Ｈ］＋、６０４．１７［Ｍ＋ＮＨ４］＋、６０９．５８［Ｍ＋Ｎａ］＋、３１Ｐ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）＝７．７３４ｐｐｍ。１Ｈおよび１３Ｃ  ＮＭＲは、所望の構造と一致していた。
【０１２６】
あるいは、最初の反応が完了したと判断した後に、２５０ｍＬ蒸留フラスコ中の粗反応混合物をクーゲルロール蒸留装置内に入れて、フラスコを高真空下に置き、クーゲルロールオーブンを約１．５時間にわたって６０℃から１２０℃まで１０℃の増分で徐々に加温し、１２０℃に３時間保持することによって、揮発物質を除去した。ドライアイス／アセトン浴中で、留出物受器を冷却した。蒸留が完了した後、２５０ｍＬ蒸留フラスコ中の液化した高温の生成物を、タールを塗った１２５ｍＬガラス保存瓶に注ぎ、冷却するとその中で生成物が固化した。これにより、生成物を白色のろう状固体として得た。３１Ｐ  ＮＭＲ分光法によって、一定分量のこの固体をＣＤＣｌ３中の溶液として調べたところ、約δ７．７２の単一ピークが示された。１Ｈおよび１３Ｃ  ＮＭＲによって観測可能な唯一の生成物中の不純物は、最初の１−オクタデカノールであり、単離した生成物の約１５ｍｏｌ％を占めていた。
実施例３
ホスホン酸水素ジオレイルの調製
【化２０】
2014527071.tif 000024
【０１２７】
機械的撹拌器および熱電対を備える１２５ｍＬ  ＲＢＦに、オレイルアルコール（３０．８５ｇ、０．１１５ｍｏｌ、２．２当量）、亜リン酸ジフェニル（１２．２３ｇ、０．０５２２ｍｏｌ、１当量）、およびピリジン（４．９６ｇ、０．０６２７ｍｏｌ、１．２当量）を添加した。混合物を３時間にわたって６５℃に加熱した。３１Ｐ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、７．７６ｐｐｍ）によって、反応の完了を検査した。混合物を＜５０℃に冷却し、５０ｍＬのジクロロメタンを添加した。混合物を１５０ｍＬのジクロロメタンでさらに希釈し、分液漏斗に移した。混合物を５０ｍＬの水で洗浄し、７５ｍＬの３Ｎ塩酸で３回抽出し、各７５ｍＬの水および食塩水でさらに洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して無色の油を得た。このニートオイルを２５０ｍＬ分液漏斗に移し、５０ｍＬのアセトニトリル（ＡＣＮ）で６回洗浄した。収量：１９．８６ｇ（６５．２％）。高分解能質量分析（ＨＲＭＳ）：［Ｍ＋Ｎａ］＋計算値６０５．５０３３、実測値６０５．５０１５：３１Ｐ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）＝７．７３４ｐｐｍ。１Ｈおよび１３Ｃ  ＮＭＲは、所望の構造と一致している。
実施例４
ホスホン酸水素ジコレステリルの調製
【化２１】
2014527071.tif 000025
【０１２８】
機械的撹拌器および熱電対を備える２５０ｍＬ  ＲＢＦに、コレステロール（４４．４２ｇ、０．１１４９ｍｏｌ）、亜リン酸ジフェニル（１２．２３、０．０５２２ｍｏｌ）、およびピリジン（４．９５７、０．０６２７ｍｏｌ）を添加した。混合物を８５〜９０℃に加熱したところ、この温度で固体から撹拌可能な流体（ｆｌｕｉｄ  ｍａｓｓ）になった。一晩加熱した後、３１Ｐ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）によって反応の完了を検査したところ、主要ピークは４．３１ｐｐｍであり、これが所望の生成物であることをＨＲＭＳによって確認した。混合物を＜５０℃に冷却し、１００ｍＬのクロロホルムを添加して、固体を溶解させた。混合物を１５０ｍＬのクロロホルムでさらに希釈し、分液漏斗に移した。混合物を５０ｍＬの水で洗浄し、５０ｍＬの３Ｎ塩酸で３回抽出し、各５０ｍＬの水および食塩水でさらに洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ロータリーエバポレーターで濃縮してオレンジ色の粘性油を得た（これを静置するとゆっくりと固化した）。
【０１２９】
機械的撹拌器を備える清浄な５００ｍＬ  ＲＢＦに、２００ｍＬのアセトンを添加した。プラスチックピペットによって、濃縮生成物を撹拌アセトンに周囲温度で添加した；液体からふわふわした白色の固体が沈殿した。混合物を一晩撹拌してから、Ｗｈａｔｍａｎ（商標）＃４およびＳｈａｒｋｓｋｉｎ（商標）ペーパーでろ過して、ふわふわしたオフホワイトの粉末を得た。このウェットケーキを真空下、周囲温度で一晩乾燥させた。収量は、２９．６９ｇ（６９．４％）であった。ＨＲＭＳ：［Ｍ＋Ｎａ］＋計算値８４１．６５９８、実測値８４１．６５９９；３１Ｐ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）４．３１ｐｐｍ；１Ｈおよび１３Ｃ  ＮＭＲは、所望の構造と一致していた。
実施例５
四脚型Ｃ１８−ＰＥＧ１０００−ＯＭｅの調製
【０１３０】
テトラキス（オクタデシル）（（（２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４，４７，５０，５３，５６，５９，６２，６５，６８，７１−テトラコサオキサトリヘプタコンタン−７３−イル）アザンジイル）ビス（メチレン））ビス（ホスホネート）（本明細書において、四脚型Ｃ１８−ＰＥＧ１０００−ＯＭｅと称される）
【化２２】
2014527071.tif 000026
【０１３１】
図７は、四脚型Ｃ１８−ＰＥＧ１０００−ＯＭｅを調製するための一般的な反応スキームを示しており、上記実施例２に記載したように、最初に、ホスホン酸水素ジオクタデシルを作製することによってこれを調製した。次に、四脚型Ｃ１８−ＰＥＧ１０００−ＯＭｅを以下のように生成した：三角形の撹拌羽根を備える１０ｍＬ  Ｋｏｎｔｅｓ  ｍｉｃｒｏｆｌｅｘバイアルを、ホスホン酸水素ジオクタデシル（１．０ｇ、１．７０４ｍｍｏｌ、２当量）、パラホルムアルデヒド（７６．７ｍｇ、２．５６ｍｍｏｌ、３当量）、および単分散ＰＥＧ１０００（Ｑｕａｎｔａ  Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ、０．９２７ｇ、０．８５２ｍｍｏｌ、１当量）で満たした。蓋をしっかりと締め、バイアルを７５℃に加温し、２４〜７２時間撹拌した。蒸発光散乱検出器（ＥＬＳＤ）を備える逆相（Ｃ４、３００Ａ）ＨＰＬＣを使用する分析のために、反応物を定期的にサンプリングした。反応が不完全であると判断した場合、所望の生成物へのさらなる変換を助けるために、さらなるパラホルムアルデヒドを添加してもよい。反応物が生成物への十分な変換に達した場合、反応物を冷却し、得られたろう状固体を精製した。
【０１３２】
超音波処理およびわずかな加熱を使用して、粗反応物をイソプロピルアルコールに溶解させた。流量３０ｍＬ／分によるＷａｔｅｒｓカラム（Ｃ４、３００Ａ、５μｍ、１９ｘ１５０ｍｍ）の逆相クロマトグラフィーによって、粗溶液（典型的には、１０〜１５ｍｇ／ｍＬ）を精製した。使用した溶媒は、アセトニトリル（０．０５％ＴＦＡ）および水（０．０５％ＴＦＡ）であった。以下は、使用した勾配法である；
【表３】
2014527071.tif 000027
【０１３３】
所望の生成物を含有する画分を真空下で還元し、凍結乾燥して固体にする（単離収量：０．３３４ｇ、理論収量：１．４０ｇ、収率：２３．８％）。ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２２８７．７ｍ／ｚ。蒸発光散乱検出を使用するＨＰＬＣ分析：９９面積パーセント。３１Ｐ  ＮＭＲは、所望の構造と一致していた。
実施例６
四脚型Ｃ１８−ＰＥＧ２０００−ＯＭｅの調製
【０１３４】
テトラキス（オクタデシル）−（２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４，４７，５０，５３，５６，５９，６２，６５，６８，７１，７４，７７，８０，８３，８６，８９，９２，９５，９８，１０１，１０４，１０７，１１０，１１３，１１６，１１９，１２２，１２５，１２８，１３１，１３４−ペンタテトラコンタオキサヘキサトリアコンタヘクタン−１３６−イルアザンジイル）ビス（メチレン）ビス（ホスホネート）（本明細書において、四脚型Ｃ１８−ＰＥＧ２０００−ＯＭｅと称される）
【化２３】
2014527071.tif 000028
【０１３５】
四脚型Ｃ１８−ＰＥＧ２０００−ＯＭｅを生成するための合成工程は、上記実施例５で開示したものと類似していた。最初に、実施例２で開示した同じ方法によって、ホスホン酸水素ジオクタデシルを調製した。次に、四脚型Ｃ１８−ＰＥＧ２０００−ＯＭｅを以下のように生成した：三角形の撹拌羽根を備える１０ｍＬ  Ｋｏｎｔｅｓ  ｍｉｃｒｏｆｌｅｘバイアルを、ホスホン酸水素ジオクタデシル（０．５８７ｇ、１．０ｍｍｏｌ、２当量）、パラホルムアルデヒド（９０．１ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ、６当量）、および多分散ＰＥＧ２０００（ＮＡＮＯＣＳ）（１．０ｇ、０．５０ｍｍｏｌ、１当量）で満たした。蓋をしっかりと締め、バイアルを７５℃に加温し、２４〜７２時間撹拌した。少しの試料を定期的に回収し、イソプロパノール（ＩＰＡ）／水に溶解させ、ＥＬＳＤ検出器を備える逆相（Ｃ４、３００Ａ）高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）を使用して分析した。反応が不完全であると判断した場合、所望の生成物へのさらなる変換を助けるために、さらなるパラホルムアルデヒドを添加してもよい。反応が生成物への十分な変換に達した場合、反応物を冷却し、得られたろう状固体を精製した。
【０１３６】
超音波処理およびわずかな加熱を使用して、粗反応物をＩＰＡ／水（約３〜５％の水）に溶解させた。粗溶液は、典型的には、１５〜２５ｍｇ／ｍＬであった。Ｃ４シリカパッキング（５μｍ、３００Ａ）を含有するカラムでの逆相クロマトグラフィーによって、所望の生成物を得た。使用した溶媒は、ＡＣＮ（０．０５％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ））および水（０．０５％ＴＦＡ）であった。以下は、流量３０ｍＬ／分によるＷａｔｅｒｓ（商標）カラム（Ｃ４、５μｍ、１９ｘ１５０ｍｍ）とともに使用した勾配法である：
【表４】
2014527071.tif 000029
【０１３７】
所望の生成物を含有する画分を真空下で還元し、凍結乾燥によって単離する。単離収量（精製物質）：０．３３５ｇ（２０．８％）。高分解能質量分析（Ｈｉｇｈ  Ｒｅｓ．＿ＭＳ）：擬似マススペクトル［Ｍ＋２Ｎａ］２＋＝１６２８．１４７２；検出マススペクトル［Ｍ＋２Ｎａ］２＋＝１６２８．１４９１。ＨＰＬＣ（ＥＬＳＤ）：単一ピーク：保持時間（約７．８８分）＝＞９８面積パーセント。ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｎａ］２＋＝１６１６．９ｍ／ｚ。３１Ｐ  ＮＭＲは、所望の構造と一致していた。
実施例７
四脚型Ｃ１４−ＰＥＧ１０００−ＯＭｅの調製
【化２４】
2014527071.tif 000030
【０１３８】
テトラキス（テトラデシル）（（（２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４，４７，５０，５３，５６，５９，６２，６５，６８，７１−テトラコサオキサトリヘプタコンタン−７３−イル）アザンジイル）ビス（メチレン））ビス（ホスホネート）（本明細書において、四脚型Ｃ１４−ＰＥＧ１０００−ＯＭｅと称される）
【０１３９】
ホスホン酸水素ジオクタデシルに代えてホスホン酸水素ジテトラデシルを用い、以下の量を使用したことを除いて、手順は、実施例５の四脚型Ｃ１８−ＰＥＧ１０００−ＯＭｅについてのものと同じであった：ホスホン酸水素ジテトラデシル（０．４０４ｇ、０．８５２ｍｍｏｌ、２当量）、パラホルムアルデヒド（０．０７７ｇ、２．５６ｍｍｏｌ、６当量）、および単分散ＰＥＧ１０００（Ｑｕａｎｔａ  Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ（商標））（０．４６４ｇ、０．４２６ｍｍｏｌ、１当量）。Ｗａｔｅｒｓ（商標）カラム（Ｃ４、３００Ａ、５μｍ、１９ｘ１５０ｍｍ）の逆相クロマトグラフィーの後、所望の生成物を含有する画分を合わせ、真空下で還元し、凍結乾燥して半固体にした；単離収量０．４９６ｇ（５６．５％）。ＥＬＳＤ検出を使用するＨＰＬＣ分析：＞９９％（面積による）。３１Ｐ  ＮＭＲは、所望の構造と一致していた。
実施例８
他の四脚型アルキル−ＰＥＧホスホン酸コンジュゲートの調製
【０１４０】
他の四脚型アルキル−ＰＥＧホスホン酸コンジュゲートも調製することができる。実施例１の一般的なスキームに記載したように、ホスホン酸水素ジアルキル（例えば、Ｃ１２、Ｃ１６、およびＣ２２）を調製することができる。次いで、実質的には実施例６に記載した手順を使用して、Ｃ１２−、Ｃ１６−、およびＣ２２−ＰＥＧ１０００−ＯＭｅホスホン酸コンジュゲートを調製することができる。しかしながら、Ｃ１２−、Ｃ１６−、およびＣ２２−ＰＥＧ１０００−ＯＭｅコンジュゲート（これらはそれぞれ以下に示す）の場合、反応は、１−オクタデカノールを使用することに代えて、それぞれ１−ドデカノール、１−ヘキサデカノールおよび１−ドコサノールを含むことができる。ＨＲＭＳおよび／またはＬＲＭＳならびに３１Ｐ  ＮＭＲは、これらの誘導体それぞれの所望の構造と一致していた。
【０１４１】
テトラキス（ドデシル）（（（２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４，４７，５０，５３，５６，５９，６２，６５，６８，７１−テトラコサオキサトリヘプタコンタン−７３−イル）アザンジイル）ビス（メチレン））ビス（ホスホネート）（Ｃ１２／単分散ＰＥＧ１０００）。化学式：Ｃ９９Ｈ２０３ＮＯ３０Ｐ２、分子量：１９４９．６１ｇ／ｍｏｌ。
【化２５】
2014527071.tif 000031
【０１４２】
テトラキス（ヘキサデシル）（（（２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４，４７，５０，５３，５６，５９，６２，６５，６８，７１−テトラコサオキサトリヘプタコンタン−７３−イル）アザンジイル）ビス（メチレン））ビス（ホスホネート）（Ｃ１６／単分散ＰＥＧ１０００）。  化学式：Ｃ１１５Ｈ２３５ＮＯ３０Ｐ２、分子量：２１７４．０３ｇ／ｍｏｌ。
【化２６】
2014527071.tif 000032
【０１４３】
テトラキス（ドコシル）（（（２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４，４７，５０，５３，５６，５９，６２，６５，６８，７１−テトラコサオキサトリヘプタコンタン−７３−イル）アザンジイル）ビス（メチレン））ビス（ホスホネート）（Ｃ２２／単分散ＰＥＧ１０００）。  化学式：Ｃ１３９Ｈ２８３ＮＯ３０Ｐ２、分子量：２５１０．６７ｇ／ｍｏｌ。
【化２７】
2014527071.tif 000033
【０１４４】
同様に、上記工程のいくつかにしたがって、様々な長さのＰＥＧ分子（例えば、ＰＥＧ１００〜ＰＥＧ１００００またはより高分子量（ＭＷ）のＰＥＧ）を有するコンジュゲートを調製することができる。例えば、四脚型Ｃ１８ホスホノ−メチルアミノ−ＰＥＧ５０００−ＯＭｅコンジュゲートは、ＰＥＧ１０００に代えて多分散ＰＥＧ５０００を使用することを除いて、実施例６の工程にしたがって調製することができる。四脚型Ｃ１８ホスホノ−メチルアミノ−ＰＥＧ５０００−ＯＭｅコンジュゲートの化学構造は、以下のとおりである：
【０１４５】
テトラキス（オクタデシル）−（２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４，４７，５０，５３，５６，５９，６２，６５，６８，７１，７４，７７，８０，８３，８６，８９，９２，９５，９８，１０１，１０４，１０７，１１０，１１３，１１６，１１９，１２２，１２５，１２８，１３１，１３４，１３７，１４０，１４３，１４６，１４９，１５２，１５５，１５８，１６１，１６４，１６７，１７０，１７３，１７６，１７９，１８２，１８５，１８８，１９１，１９４，１９７，２００，２０３，２０６，２０９，２１２，２１５，２１８，２２１，２２４，２２７，２３０，２３３，２３６，２３９，２４２，２４５，２４８，２５１，２５４，２５７，２６０，２６３，２６６，２６９，２７２，２７５，２７８，２８１，２８４，２８７，２９０，２９３，２９６，２９９，３０２，３０５，３０８，３１１，３１４，３１７，３２０，３２３，３２６，３２９，３３２，３３５，３３８，３４１，３４４，３４７−ヘキサデカヘクタオキサペンタコンタトリクタン−３４９−イル）アザンジイル）ビス（メチレン）ビス（ホスホネート）、化学式：Ｃ３０５Ｈ６１５ＮＯ１２１Ｐ２、精密質量：６２９１．１５、分子量：６２９５．０３ｇ／ｍｏｌ。
【化２８】
2014527071.tif 000034
実施例９
【０１４６】
ジ（２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２−ウンデカオキサテトラトリアコンタン−３４−イル）ホスホネート
【化２９】
2014527071.tif 000035
【０１４７】
丸底フラスコ中で、２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２−ウンデカオキサテトラトリアコンタン−３４−オール（２．００ｇ、３．８７ｍｍｏｌ）をトルエンに溶解させた。共沸蒸留によって、この溶液を乾燥させた。次いで、残ったトルエンをストリップして除去した。次いで、ピリジン（０．０９２ｇ、１．１６ｍｍｏｌ）および亜リン酸ジフェニル（０．４５ｇ、１．９４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を６５℃で１６時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、１５ｍＬのジクロロメタンに溶解させ、３．０ｇのＤｏｗｅｘ  ＷＢＡ樹脂と一緒に３０分間撹拌した。ジクロロメタン溶液を樹脂ビーズからろ過し、揮発物質を蒸発させて黄色の油にした。この油を１，２，４−トリメチルベンゼンに溶解させ、揮発物質を減圧下で除去し、フェノール副生成物を共沸除去した。所望の生成物（１．３４ｇ）を油として得た。ＨＲＭＳ：計算値：（Ｍ＋２Ｎａ）／２＝５６２．２８４２、（Ｍ＋Ｎａ）＝１１０１．５７９２、測定値：（Ｍ＋２Ｎａ）／２＝５６２．２８１８、（Ｍ＋Ｎａ）＝１１０１．５７５１。３１Ｐ  ＮＭＲ：９．２２ｐｐｍ。１Ｈ  ＮＭＲ、１３Ｃ  ＮＭＲ、および１３Ｃ  ＡＰＴ  ＮＭＲは、構造と一致している。化学式：Ｃ４６Ｈ９５ＮＯ２５Ｐ、分子量：１０７８．５９ｇ／ｍｏｌ。
実施例１０
【０１４８】
３−（（（２−（ビス（（ジ（２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２−ウンデカオキサテトラトリアコンタン−３４−イル）ホスホリル）メチル）アミノ）エトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）プロパン−１，２−ジイルジステアラート
【化３０】
2014527071.tif 000036
【０１４９】
ＤＳＰＥ（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、０．４５ｇ、０．６０ｍｍｏｌ）、実施例９で調製したジ（２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２−ウンデカオキサテトラトリアコンタン−３４−イル）ホスホネート（１．３４ｇ、１．２４ｍｍｏｌ）、パラホルムアルデヒド（０．０５４ｇ、１．８１ｍｍｏｌのホルムアルデヒド）、およびジメチルホルムアミド（２．０ｍＬ）をシンチレーションバイアルに添加した。バイアルに蓋をして、７５℃で２４時間加熱した。反応混合物をストリップし、メタノールに溶解させ、Ｄｏｗｅｘ  ＷＢＡ樹脂（１．０ｇ）で処理した。このメタノール溶液を樹脂ビーズからろ過し、ストリップして黄色の油にした。この油を１５ｍＬの８０／２０水／イソプロピルアルコールに溶解させ、Ｇｒａｃｅ  Ｖｙｄａｃ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃ−４逆相パッキングを充填したカラムに通し、水／イソプロピルアルコール溶離液を使用するクロマトグラフィーを行った。所望の画分を冷凍し、凍結乾燥して、０．３３７ｇの目的化合物を白色の粉末として得た。ＬＲＭＳ測定値：（Ｍ＋２Ｈ）／２＝１４６５、（Ｍ＋２Ｎａ）／２＝１４８７、（Ｍ＋３Ｈ）／３＝９７７。ＨＲＭＳ：計算値：（Ｍ−Ｈ）２９２７．７５０５、測定値：（Ｍ−Ｈ）２９２７．７５７０。３１Ｐ  ＮＭＲ測定値２５．９６ｐｐｍおよび−０．２１ｐｐｍ。１Ｈ  ＮＭＲ、１３Ｃ  ＮＭＲ、および１３Ｃ  ＡＰＴ  ＮＭＲは、構造と一致している。ＨＰＬＣ分析（ＥＬＳＤ）により、所望の生成物のピークについて、９９．８面積％であることが分かった。化学式：Ｃ１３５Ｈ２７２ＮＯ５８Ｐ３、分子量：２９２８．７６ｇ／ｍｏｌ。
実施例１１
【０１５０】
テトラフェニル−（２−メトキシエチルアザンジイル）ビス（メチレン）ジホスホネート。化学式：Ｃ２９Ｈ３１ＮＯ７Ｐ２、精密質量：５６７．１６、分子量５６７．５１ｇ／ｍｏｌ。
【化３１】
2014527071.tif 000037
【０１５１】
以下の手順を使用して、この化合物を調製した。２−メトキシエチルアミン（３ｇ、４０ｍｍｏｌ；３．４４ｍＬ）をホルムアルデヒド（２．４ｇ；３２０ｍｍｏｌ、６．５ｍＬの３７％Ｈ２Ｏ溶液）およびジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（３０ｍＬ）と合わせた。亜リン酸ジフェニル（ＤＰＰ）（２０．６ｇ、８８ｍｍｏｌ；２．２当量）を混合物にゆっくりと添加した。短い初期発熱反応の後、混合物を室温で１２時間撹拌した。ＨＰＬＣにより反応の完了が示された後、ＤＭＦを蒸発させた。残留物を酢酸エチル（ＥＡ）（２００ｍＬ）に溶解させ、飽和ＫＨＳＯ４および食塩水で洗浄した。層を分離し、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、揮発物質を真空下、ロータリーエバポレーターで除去した。残った油をＥＡ／ヘキサン混合液（１：４）に溶解させ、シリカプラグに通してろ過した。次いで、ＥＡ／ヘキサン混合液（１：１）を用いて、生成物をシリカから溶出させた。溶媒を蒸発させて、１５．６ｇ（２７ｍｍｏｌ；６９％）を透明の油として得た。ＬＣ／ＭＳ：ＭＨ＋＝５６８．２１Ｈおよび３１Ｐ  ＮＭＲは、構造と一致している。
実施例１２
【０１５２】
テトラオクタデシル−（２−メトキシエチルアザンジイル）ビス（メチレン）ジホスホネート。化学式：Ｃ７７Ｈ１５９ＮＯ７Ｐ２、精密質量：１２７２．１６、分子量：１２７３．０４ｇ／ｍｏｌ。
【化３２】
2014527071.tif 000038
【０１５３】
実質的には実施例１１の手順を使用してこの分子を調製したが、亜リン酸ジフェニル（ＤＰＰ）に代えてホスホン酸水素ジテトラデシルを用い、そして、反応は、実施例５のようにＤＭＦ溶媒を用いず（すなわち、溶媒なし）、反応バイアル（１０ｍＬ）およびテフロン（登録商標）コーティングした回転羽根を使用して行い、実施例５に記載したように作製および単離した。
実施例１３
【０１５４】
３−（ビス（（ビス（オクタデシルオキシ）ホスホリル）メチル）アミノ）プロパン酸。化学式：Ｃ７７Ｈ１５７ＮＯ８Ｐ２、精密質量：１２８６．１４、分子量１２８７．０２ｇ／ｍｏｌ。
【化３３】
2014527071.tif 000039
【０１５５】
この化合物を以下のように調製した：耐圧瓶中で、ＤＭＦ溶液（２０ｍＬ）中、撹拌しながら、ホスホン酸ジオクタデシル（５．８７ｇ、１０ｍｍｏｌ）をβ−アラニン（０．４５ｇ、５ｍｍｏｌ）およびホルムアルデヒド（６ｍＬの３７％水溶液）と８０℃で２日間反応させた。反応混合物を取り出し、揮発物質を慎重に蒸発させ、残留物をＣＨＣＬ３（２００ｍＬ）に溶解させた。有機層を１０％ＫＨＳＯ４および食塩水（各５０ｍｌ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させて油にした。数時間撹拌した後、残った油を約１００ｍＬのアセトンと混合し、細かい白色の沈殿物をろ別した。収量：粗製物として５．４ｇ（４．２ｍｍｏｌ：８４％）。３１Ｐ  ＮＭＲ  ２４．５０３ｐｐｍ。ＨＲＭＳ：計算値ＭＨ＋１２８７．１３８４；実測値ＭＨ＋＝１２８７．１４７７。
実施例１４
【０１５６】
２−（ビス（（ビス（オクタデシルオキシ）ホスホリル）メチル）アミノ）酢酸。化学式：Ｃ７６Ｈ１５５ＮＯ８Ｐ２、精密質量：１２７２．１２、分子量：１２７２．９９ｇ／ｍｏｌ。
【化３４】
2014527071.tif 000040
【０１５７】
実施例１３と同様に、ＤＭＦ中、ホスホン酸ジオクタデシルをグリシンおよびホルムアルデヒドと反応させることによって、この化合物を調製した。実施例１３に示したのと同様の方法で、生成物を単離した。３１Ｐ  ＮＭＲおよびＨＲＭＳによって、構造を確認した。
実施例１５
【０１５８】
テトラオクタデシル（７８−メチル−７５−オキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４，４７，５０，５３，５６，５９，６２，６５，６８，７１−テトラコサオキサ−７４，７８−ジアザノナヘプタコンタン−７９−イル）ビス（メチレン）ジホスホネート。化学式：Ｃ１２６Ｈ２５６Ｎ２Ｏ３１Ｐ２、分子量：２３５７．３２ｇ／ｍｏｌ。
【化３５】
2014527071.tif 000041
【０１５９】
ＤＣＭ溶液（２０ｍＬ）中、ＴＢＴＵ（Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート）（４８ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）（０．１７５ｍＬ）の存在下で、３−（ビス（（ビス（オクタデシルオキシ）ホスホリル）メチル）アミノ）プロパン酸（１２８ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）をｍ−ｄＰＥＧ２４−アミン（１０８ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。（図８を参照のこと）。室温で１２時間撹拌した後、混合物をジクロロメタン（ＤＣＭ）（１００ｍＬ）で希釈し、１０％ＫＨＳＯ４および食塩水で洗浄した。ＤＣＭ溶液をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、溶媒を蒸発させて、２２０ｍｇの透明の油を（粗物質として）得、これをＣ４、３００Ａ  ｒｐｈｐｌｃによって精製し、凍結乾燥して、所望の生成物を得ることができた。ＭＳ：Ｍ＋Ｎａ＋＝２，３７９．７３および３１Ｐ  ＮＭＲは構造と一致している。
実施例１６
【０１６０】
ジオクタデシル（７８−メチル−７５−オキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４，４７，５０，５３，５６，５９，６２，６５，６８，７１−テトラコサオキサ−７４，７８−ジアザノナヘプタコンタン−７９−イル）ホスホネート（Ｃ１８／Ｎ−メチルβ−アラニン／ＰＥＧ１０００）。化学式：Ｃ９０Ｈ１８３Ｎ２Ｏ２８Ｐ、精密質量：１７７１．２７、分子量：１７７２．３９ｇ／ｍｏｌ。
【化３６】
2014527071.tif 000042
【０１６１】
実質的には実施例１５に概説した同じ反応条件および精製手順を使用して、ＴＢＴＵの存在下で、実施例１３で形成した３−（ビス（（ビス（オクタデシルオキシ）ホスホリル）メチル）アミノ）プロパン酸をｍ−ｄＰＥＧ２４−アミンと反応させることによって、この化合物を合成することができる。
実施例１７
【０１６２】
ジオクタデシル（７８−カルボキシル−７５−オキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４，４７，５０，５３，５６，５９，６２，６５，６８，７１−テトラコサオキサ−７４，７８−ジアザノナヘプタコンタン−７９−イル）ホスホネート（Ｃ１８／Ｎ−メチルβ−アラニン／ＰＥＧ１０００カルボキシラート）。化学式：Ｃ９２Ｈ１８５Ｎ２Ｏ３０Ｐ、精密質量：１８２９．２７、分子量：１８３０．４２ｇ／ｍｏｌ。
【化３７】
2014527071.tif 000043
【０１６３】
実質的には実施例１５に概説した同じ反応条件および精製手順を使用して、ＴＢＴＵの存在下で、実施例１３で形成した３−（ビス（（ビス（オクタデシルオキシ）ホスホリル）メチル）アミノ）プロパン酸をアミノ−ＰＥＧ２４−カルボン酸エステル（ｃａｂｏｘｙｌａｔｅ  ｅｓｔｅｒ）と反応させてこのエステルを得ることによって、この化合物を合成することができる。このエステルの酸への加水分解を塩基性または酸性条件下で達成し、Ｃ４逆相ＨＰＬＣによって生成物のカルボキシラートを単離し、同様の画分を合わせ、凍結乾燥して、実質的に純粋な生成物を得ることができる。
実施例１８
【０１６４】
ジオクタデシル１５８−メチル−７７，１５５−ジオキソ−２，４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，４３，４６，４９，５２，５５，５８，６１，６４，６７，７０，７３，８０，８２，８５，８８，９１，９４，９７，１００，１０３，１０６，１０９，１１２，１１５，１１８，１２１，１２４，１２７，１３０，１３３，１３６，１３９，１４２，１４５，１４８，１５１−ペンタコンタオキサ−７６，１５４，１５８−トリアザノナペンタコンタヘクタン−１５９−イルホスホネート（Ｃ１８／Ｎ−メチルβ−アラニン／ＰＥＧ１０００アミド連結ＰＥＧ１０００）。
【化３８】
2014527071.tif 000044
【０１６５】
実質的には実施例１５のカップリング手順および精製スキームを使用して、実施例１５の生成物を取得し、それをアミノ−ＰＥＧ  ＯＭｅ（分子量（ＭＷ）１０００）と反応させることによって、この化合物を調製することができる。
実施例１９
【０１６６】
２−（（（ビス（（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−１０，１３−ジメチル−１７−（（Ｒ）−６−メチルヘプタン−２−イル）−２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イルオキシ）ホスホリル）メチル）（メチル）アミノ）酢酸（ジコレステロール／サルコシン）。化学式：Ｃ５８Ｈ９８ＮＯ５Ｐ、精密質量：９１９．７２、分子量：９２０．３８ｇ／ｍｏｌ。
【化３９】
2014527071.tif 000045
【０１６７】
この化合物を以下のように調製した：ＤＭＦ中、ホスホン酸水素ジコレステリル（５．０ｇ、０．００６ｍｏｌ）をサルコシン（０．５４ｇ、０．００６ｍｏｌ）およびホルムアルデヒド（２．２ｇ、０．０３ｍｏｌ）と、不均質な混合物として、７５℃で反応させた。７５℃で４時間後、所望のジコレステロールホスホニルメチルサルコシンへの９％の変換が得られた。さらに一部のホルムアルデヒド（２．２ｇ、０．０３ｍｏｌ）を添加し、反応温度を８５℃に上昇させた。８５℃で１６時間後、所望の２−（（（ビス（（３Ｓ，８Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１７Ｒ）−１０，１３−ジメチル−１７−（（Ｒ）−６−メチルヘプタン−２−イル）−テトラデカヒドロ−２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イルオキシ）ホスホリル）メチル）（メチル）アミノ）酢酸への５５％の変換が得られ、冷却すると反応混合物から黄色の固体が沈殿した。ろ過（黄色の固体）によって生成物を単離し、３１Ｐ  ＮＭＲ（２２．５ｐｐｍ）によって特性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）を確認した。９５％クロロホルム／５％ＭｅＯＨを使用してシリカゲル（１５ｇ）で、粗製二脚型コレステロールサルコシン（７００ｍｇ）を精製した。
実施例２０
【０１６８】
２−（（（ビス（オクタデシルオキシ）ホスホリル）メチル）（メチル）アミノ）酢酸（Ｃ１８／サルコシン）。化学式：Ｃ４０Ｈ８２ＮＯ５Ｐ、精密質量：６８７．５９、分子量：６８８．０６ｇ／ｍｏｌ。
【化４０】
2014527071.tif 000046
【０１６９】
この化合物を以下のように調製した：機械的撹拌器および熱電対を備えるＲＢＦ（２５０ｍＬ）に、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）中のホスホン酸水素ジオクタデシル（１．９８ｇ、０．００３ｍｏｌ）、サルコシン（０．３０ｇ、０．００３ｍｏｌ）およびホルムアルデヒド（１．１ｇ、０．０１３ｍｏｌ）を、７５℃で添加した。２時間後、３１Ｐ  ＮＭＲ（２４．４ｐｐｍ）によって、２−（（ビス（オクタデシルオキシ）ホスホリル）（メチル）アミノ）酢酸への７６％の変換が観察された。反応を７５℃でさらに４時間継続すると、８８．５％の変換がもたらされた。この時点で、反応混合物を周囲温度に冷却し、薄オレンジ色のスラリーを得た。水（５０ｍＬ）を添加し、混合物を周囲温度でさらに３０分間撹拌した。ろ過によって、生成物を薄オレンジ色の固体として単離した。この固体を３０〜４０℃のオーブン中で一晩乾燥させた（２．０ｇ）。単離した固体について、３１Ｐ  ＮＭＲ（２４．３ｐｐｍ）によって、最終純度８１．３％の二脚型Ｃ１８サルコシンであることを確認した。ＨＰＬＣ−ＭＳ（６８９．６Ｍ＋Ｈ＋）。１３Ｃおよび１Ｈ  ＮＭＲは、指定の構造と一致していた。
実施例２１
【０１７０】
３−（（（ビス（オクタデシルオキシ）ホスホリル）メチル）（メチル）アミノ）プロパン酸（Ｃ１８／Ｎ−メチルβ−アラニン）。化学式：Ｃ４１Ｈ８４ＮＯ５Ｐ、精密質量：７０１．６１、分子量：７０２．０８ｇ／ｍｏｌ。
【化４１】
2014527071.tif 000047
【０１７１】
実質的には実施例２０と同じ手順を使用してこの化合物を調製したが、サルコシンをメチルβ−アラニンに替えた。Ｃ４逆相ＨＰＬＣでの精製および単離の後、予想したＭＳおよび３１Ｐ  ＮＭＲが得られた。
実施例２２
【０１７２】
２−（（（ビス（（Ｚ）−オクタデカ−９−エニルオキシ）ホスホリル）メチル）（メチル）アミノ）酢酸（Ｃ１８オレイル／サルコシン）。化学式：Ｃ４０Ｈ７８ＮＯ５Ｐ、精密質量：６８３．５６、分子量：６８４．０２ｇ／ｍｏｌ。
【化４２】
2014527071.tif 000048
【０１７３】
この化合物を以下のように調製した：機械的撹拌器および熱電対を備えるＲＢＦ（２５０ｍＬ）に、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）中のホスホン酸水素ジオレイル（１．９６ｇ、０．００３ｍｏｌ）、サルコシン（０．３０ｇ、０．００３ｍｏｌ）およびホルムアルデヒド（１．１ｇ、０．０１３ｍｏｌ）を、７５℃で添加した。反応を７５℃で４時間行った。３１Ｐ  ＮＭＲ（約２４ｐｐｍ）によって、所望の２−（（ビス（（Ｚ）−オクタデカ−９−エニルオキシ）ホスホリル）（メチル）アミノ）酢酸への約８９％の変換が観察された。反応混合物を周囲温度に一晩冷却し、次いで蒸発させて油にした。１３Ｃおよび１Ｈ  ＮＭＲならびにＬＣＭＳによって、生成物を確認した。
実施例２３
【０１７４】
２−（（１−（ビス（オクタデシルオキシ）ホスホリル）−３−エトキシ−３−オキソエチル）（メチル）アミノ）酢酸。化学式：Ｃ４３Ｈ８６ＮＯ７Ｐ、精密質量：７５９．６１４１９、分子量：７６０．１２ｇ／ｍｏｌ。
【化４３】
2014527071.tif 000049
【０１７５】
２５ｍＬ丸底フラスコ中で、４ｍＬトルエンおよび４ｍＬジメチルスルホキシド中のサルコシン（０．２１ｇ、２．３ｍｍｏｌ）、ホスホン酸水素ジオクタデシル（０．６９ｇ、１．２ｍｍｏｌ）、１−オクタデカノール（０．６３ｇ、２．３ｍｍｏｌ）およびグリオキシル酸エチル（０．３６ｇ、１．８ｍｍｏｌ）を、アルゴン下、１００℃で１６時間撹拌した。３１Ｐ  ＮＭＲによって、ＣＤＣｌ３中の反応混合物を検査したところ、有意な所望の生成物（２４．８ｐｐｍ）の存在が示された。５％水酸化アンモニウムを含有するクロロホルム／イソプロパノール勾配を使用して、順相フラッシュクロマトグラフィーによって反応混合物を精製し、所望の２−（（１−（ビス（オクタデシルオキシ）ホスホリル）−３−エトキシ−３−オキソエチル）（メチル）アミノ）酢酸を得た。
実施例２４
【０１７６】
２−（（（ビス（オクタデシルオキシ）ホスホリル）（ホスホノ）メチル）（メチル）アミノ）酢酸。化学式：Ｃ４０Ｈ８３ＮＯ８Ｐ２、分子量：７６８．０４ｇ／ｍｏｌ。
【化４４】
2014527071.tif 000050
【０１７７】
実質的には実施例２３の手順に従うことによって標題化合物を調製することができるが、グリオキシル酸エチルを同様の割合でホルミルホスホン酸（Ｗａｇｅｎｋｎｅｃｈｔ，Ｊ．Ｈ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ（１９７６），１２３（５），６２０−４、米国特許第４５６８４３２号明細書および国際公開第９８５０３９１号）に替える。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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