(57)【要約】  ＴＮＦ−αに結合するキメラ、ＣＤＲグラフティングおよびヒト化抗体を含むＴＮＦ−α結合性タンパク質を提供する。結合性タンパク質はＴＮＦ−αに対する高いアフィニティを有し、ＴＮＦ−α活性を中和する。結合性タンパク質は完全長抗体またはそのＴＮＦ−α結合性部分でありうる。結合性タンパク質の製造方法および使用方法も記載されている。ＴＮＦ−α結合性タンパク質は、例えば、ＴＮＦ−α活性が有害である疾患または障害に罹患したヒト対象における、ＴＮＦ−αの検出およびＴＮＦ−α活性の抑制に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５または配列番号４６を含む抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２】
配列番号３１（ＣＤＲ−Ｈ１）の残基３１−３５、配列番号３１（ＣＤＲ−Ｈ２）の残基５０−６６、配列番号３１（ＣＤＲ−Ｈ３）の残基９９−１１３、配列番号３２（ＣＤＲ−Ｌ１）の残基２４−３４、配列番号３２（ＣＤＲ−Ｌ２）の残基５０−５６または配列番号３２（ＣＤＲ−Ｌ３）の残基８９−９７を含む少なくとも１つのＣＤＲを含む、ＴＮＦαに結合しうる抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項３】
結合性タンパク質が少なくとも３つのＣＤＲを含む、請求項２に記載の結合性タンパク質。
【請求項４】
少なくとも３つのＣＤＲが、
（ａ）配列番号３１（ＣＤＲ−Ｈ１）の残基３１−３５、配列番号３１（ＣＤＲ−Ｈ２）の残基５０−６６および配列番号３１（ＣＤＲ−Ｈ３）の残基９９−１１３、または
（ｂ）配列番号３２（ＣＤＲ−Ｌ１）の残基２４−３４、配列番号３２（ＣＤＲ−Ｌ２）の残基５０−５６および配列番号３２（ＣＤＲ−Ｌ３）の残基８９−９７
の可変ドメインＣＤＲセットを含む、請求項３に記載の結合性タンパク質。
【請求項５】
少なくとも２つの可変ドメインＣＤＲセットを含む、請求項４に記載の結合性タンパク質。
【請求項６】
結合性タンパク質が、
（ａ）配列番号３１（ＣＤＲ−Ｈ１）の残基３１−３５、配列番号３１（ＣＤＲ−Ｈ２）の残基５０−６６および配列番号３１（ＣＤＲ−Ｈ３）の残基９９−１１３、ならびに
（ｂ）配列番号３２（ＣＤＲ−Ｌ１）の残基２４−３４、配列番号３２（ＣＤＲ−Ｌ２）の残基５０−５６および配列番号３２（ＣＤＲ−Ｌ３）の残基８９−９７
の両方を含む、請求項５に記載の結合性タンパク質。
【請求項７】
ヒトアクセプターフレームワークを更に含む、請求項６に記載の結合性タンパク質。
【請求項８】
ヒトアクセプターフレームワークが配列番号１０〜１９または配列番号２０〜３０のいずれか１つを含む、請求項７に記載の結合性タンパク質。
【請求項９】
ヒトアクセプターフレームワークが少なくとも１つのフレームワーク領域アミノ酸置換を含み、フレームワークのアミノ酸配列がヒトアクセプターフレームワークの配列に対して少なくとも６５％同一であり、ヒトアクセプターフレームワークと同一である少なくとも７０個のアミノ酸残基を含む、請求項７または８に記載の結合性タンパク質。
【請求項１０】
ヒトアクセプターフレームワークが、ＣＤＲに隣接した残基、グリコシル化部位残基、稀有残基、ヒトＴＮＦ−αと相互作用しうる残基、ＣＤＲと相互作用しうる残基、カノニカル（ｃａｎｏｎｉｃａｌ）残基、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との接触残基、バーニア（Ｖｅｒｎｉｅｒ）領域内の残基、およびチョチア（Ｃｈｏｔｈｉａ）により定義された可変領域鎖ＣＤＲ１とカバト（Ｋａｂａｔ）により定義された第１重鎖フレームワークとの間で重複する領域内の残基に、少なくとも１つのフレームワーク領域アミノ酸置換を含む、請求項８に記載の結合性タンパク質。
【請求項１１】
残基が１Ｈ、２Ｈ、６７Ｈ、６９Ｈ、７１Ｈ、８２Ｈ、８５Ｈ、９１Ｈおよび２Ｌ、４３Ｌ、４４Ｌ、４９Ｌ、７１Ｌまたは８７Ｌである、請求項１０に記載の結合性タンパク質。
【請求項１２】
結合性タンパク質がコンセンサスヒトアクセプターを含む、請求項１１に記載の結合性タンパク質。
【請求項１３】
（ａ）配列番号３３、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１および配列番号４２を含む可変重鎖ポリペプチド、ならびに
（ｂ）配列番号３５、配列番号３６、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５および配列番号４６を含む可変軽鎖ポリペプチド
を含む、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項１４】
結合性タンパク質が、以下のそれぞれのアミノ酸配列：
配列番号３１および配列番号３２；
配列番号３３および配列番号３５；
配列番号３３および配列番号４３；
配列番号３３および配列番号４４；
配列番号３３および配列番号３６；
配列番号３３および配列番号４５；
配列番号３３および配列番号４６；
配列番号３４および配列番号３５；
配列番号３４および配列番号４３；
配列番号３４および配列番号４４；
配列番号３４および配列番号３６；
配列番号３４および配列番号４５；
配列番号３４および配列番号４６；
配列番号３７および配列番号３５；
配列番号３７および配列番号４３；
配列番号３７および配列番号４４；
配列番号３７および配列番号３６；
配列番号３７および配列番号４５；
配列番号３７および配列番号４６；
配列番号３８および配列番号３５；
配列番号３８および配列番号４３；
配列番号３８および配列番号４４；
配列番号３８および配列番号３６；
配列番号３８および配列番号４５；
配列番号３８および配列番号４６；
配列番号３９および配列番号３５；
配列番号３９および配列番号４３；
配列番号３９および配列番号４４；
配列番号３９および配列番号３６；
配列番号３９および配列番号４５；
配列番号３９および配列番号４６；
配列番号４０および配列番号３５，
配列番号４０および配列番号４３；
配列番号４０および配列番号４４；
配列番号４０および配列番号３６；
配列番号４０および配列番号４５；
配列番号４０および配列番号４６；
配列番号４１および配列番号３５；
配列番号４１および配列番号４３；
配列番号４１および配列番号４４；
配列番号４１および配列番号３６；
配列番号４１および配列番号４５；
配列番号４１および配列番号４６；
配列番号４２および配列番号３５；
配列番号４２および配列番号４３；
配列番号４２および配列番号４４；
配列番号４２および配列番号３６；
配列番号４２および配列番号４５；または
配列番号４２および配列番号４６
を含む可変重鎖ポリペプチドおよび可変軽鎖ポリペプチドを含む、請求項１３に記載の結合性タンパク質。
【請求項１５】
結合性タンパク質が免疫グロブリン分子、ジスルフィド結合Ｆｖ、モノクローナル抗体、ｓｃＦｖ、キメラ抗体、単一ドメイン抗体、ＣＤＲグラフティング抗体、ジアボディ、ヒト化抗体、多重特異性抗体、Ｆａｂ、二重特異性抗体、ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質、Ｆａｂ’、二重特異性抗体、Ｆ（ａｂ’）２またはＦｖである、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項１６】
結合性タンパク質が、ヒトＩｇＭ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、ヒトＩｇＥ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、ヒトＩｇＧ３定常ドメインまたはヒトＩｇＡ定常ドメインを含む、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項１７】
配列番号２または配列番号３のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域を更に含む、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項１８】
配列番号４または配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域を更に含む、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項１９】
結合性タンパク質がヒトＴＮＦ−αを中和しうる、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項２０】
結合性タンパク質が、表面プラズモン共鳴による測定で少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１または少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１の、標的に対するオン（ｏｎ）速度定数（Ｋｏｎ）を有する、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項２１】
結合性タンパク質が、表面プラズモン共鳴による測定で多くとも約１０−３ｓ−１、多くとも約１０−４ｓ−１、多くとも約１０−５ｓ−１または多くとも約１０−６ｓ−１の、標的に対するオフ（ｏｆｆ）速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項２２】
結合性タンパク質が、多くとも約１０−７Ｍ、多くとも約１０−８Ｍ、多くとも約１０−９Ｍ、多くとも約１０−１０Ｍ、多くとも約１０−１１Ｍ、多くとも約１０−１２Ｍまたは多くとも１０−１３Ｍの、標的に対する解離定数（ＫＤ）を有する、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項２３】
結合性タンパク質が、多くとも約１０−７Ｍ、多くとも約１０−８Ｍ、多くとも約１０−９Ｍ、多くとも約１０−１０Ｍ、多くとも約１０−１１Ｍ、多くとも約１０−１２Ｍまたは多くとも１０−１３Ｍの、ＴＮＦ−αに対する解離定数（ＫＤ）を有する、請求項２２に記載の結合性タンパク質。
【請求項２４】
結合性タンパク質が、免疫接着分子、イメージング剤、治療用物質または細胞毒性物質を更に含む、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項２５】
イメージング剤が放射能標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識またはビオチンである、請求項２４に記載の結合性タンパク質。
【請求項２６】
放射能標識が３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍである、請求項２５に記載の結合性タンパク質。
【請求項２７】
治療用または細胞毒性物質が代謝拮抗物質、アルキル化物質、抗生物質、増殖因子、サイトカイン、抗血管新生物質、抗有糸分裂物質、アントラサイクリン、毒素およびアポトーシス性物質である、請求項２４に記載の結合性タンパク質。
【請求項２８】
結合性タンパク質がヒトグリコシル化パターンを有する、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項２９】
結合性タンパク質が結晶化結合性タンパク質である、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項３０】
請求項１に記載の結合性タンパク質アミノ酸配列をコードする単離された核酸。
【請求項３１】
請求項１に記載の結合性タンパク質アミノ酸配列をコードする単離された核酸を含むベクター。
【請求項３２】
ベクターがｐｃＤＮＡ、ｐＴＴ、ｐＴＴ３、ｐＥＦＢＯＳ、ｐＢＶ、ｐＪＶ、ｐＨｙｂＥまたはｐＢＪである、請求項３１に記載のベクター。
【請求項３２】
請求項３１に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項３３】
宿主細胞が原核細胞である、請求項３２に記載の宿主細胞。
【請求項３４】
宿主細胞が真核細胞である、請求項３２に記載の宿主細胞。
【請求項３５】
真核細胞が原生生物細胞、動物細胞、植物細胞、真菌細胞、哺乳類細胞、鳥類細胞または昆虫細胞である、請求項３４に記載の宿主細胞。
【請求項３６】
真核細胞がエス・セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞またはＳＦ９細胞である、請求項３５に記載の宿主細胞。
【請求項３７】
ＴＮＦ−αに結合しうる結合性タンパク質を産生するのに十分な条件下、請求項３２に記載の宿主細胞を培地内で培養する工程を含む、ＴＮＦ−αに結合しうるタンパク質の製造方法。
【請求項３８】
請求項３７に記載の製造方法により製造されるタンパク質。
【請求項３９】
請求項１または請求項３７に記載の結合性タンパク質と医薬として許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項４０】
ＴＮＦ−α活性が有害である障害を治療するための少なくとも１つの追加的物質を更に含む、請求項３９に記載の医薬組成物。
【請求項４１】
追加的物質が、治療用物質、イメージング物質、細胞毒性物質、血管新生インヒビター、キナーゼインヒビター、共刺激分子ブロッカー、接着分子ブロッカー、抗サイトカイン抗体またはその機能性フラグメント、メトトレキセート、シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６、検出可能な標識またはレポーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋肉弛緩薬、麻酔薬、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗微生物薬、抗乾癬薬、コルチコステロイド、タンパク質同化ステロイド、エリスロポエチン、免疫化、免疫グロブリン、免疫抑制物質、成長ホルモン、ホルモン補充療法薬、放射性医薬品、抗うつ薬、抗精神病薬、興奮薬、喘息治療薬、ベータアゴニスト、吸入ステロイド、経口ステロイド、エピネフリンまたはその類似体、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストである、請求項４０に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
請求項３９に記載の組成物の有効量を哺乳動物に投与する工程を含む、哺乳動物の治療方法。
【請求項４３】
ヒトＴＮＦ−α活性が低減するように、ヒトＴＮＦ−αを請求項１に記載の結合性タンパク質と接触させることを含む、ヒトＴＮＦ−α活性を低減するための方法。
【請求項４４】
ＴＮＦ−α活性が有害である障害に罹患しているヒト対象においてヒトＴＮＦ−α活性を低減するための方法であって、ヒト対象におけるヒトＴＮＦ−α活性が低減するように、請求項１に記載の結合性タンパク質をヒト対象に投与することを含む方法。
【請求項４５】
ＴＮＦ−α活性が有害である疾患または障害に対する対象の治療方法であって、治療が達成されるように、請求項１に記載の結合性タンパク質を対象に投与することによる治療方法。
【請求項４６】
障害が自己免疫および／または炎症障害である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４６】
障害がクローン病、尋常性乾癬、関節リウマチ、乾癬性関節炎、骨関節炎、若年性特発性関節炎、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、強直性脊椎炎、インスリン依存性糖尿病、自己免疫性糖尿病、アレルギーおよび自己免疫ブドウ膜炎である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４７】
障害が、呼吸障害；喘息；アレルギー性および非アレルギー性喘息；感染による喘息；呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染による喘息；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；気道炎症を伴う状態；好酸球増加症；線維症および過剰粘液産生；嚢胞性線維症；肺線維症；アトピー性障害；アトピー性皮膚炎；蕁麻疹；湿疹；アレルギー性鼻炎；アレルギー性胃腸炎；皮膚の炎症性および／または自己免疫状態；胃腸器官の炎症および／または自己免疫状態；炎症性腸疾患（ＩＢＤ）；潰瘍性大腸炎；クローン病；肝臓の炎症および／または自己免疫状態；肝硬変；肝線維症；Ｂ型および／またはＣ型肝炎ウイルスによって引き起こされる肝線維症；強皮症；腫瘍または癌；肝細胞癌；神経膠芽腫；リンパ腫；ホジキンリンパ腫；ウイルス感染；細菌感染；寄生虫感染症；ＨＴＬＶ−１感染；防御１型免疫応答の発現の抑制、およびワクチン接種中の防御１型免疫応答の発現の抑制である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
請求項１に記載の結合性タンパク質を、第２物質の投与の前、それと同時またはその後で投与することを含む、ＴＮＦ−αが有害である障害に罹患した患者の治療方法であって、第２物質が、以下のものに結合しうる抗体またはそのフラグメント：ヒトＩＬ−１２；ＰＧＥ２；ＬＰＡ；ＮＧＦ；ＣＧＲＰ；ＳｕｂＰ；ＲＡＧＥ；ヒスタミン；ヒスタミン受容体ブロッカー；ブラジキニン；ＩＬ−１アルファ；ＩＬ−１ベータ；ＶＥＧＦ；ＰＬＧＦ；メトトレキセート；コルチコステロイド；グルココルチコイド受容体モジュレーター；シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６または非ステロイド性抗炎症物質である、治療方法。
【請求項４９】
請求項１に記載の結合性タンパク質を、第２物質の投与の前、それと同時またはその後で投与することを含む、ＴＮＦ−αが有害である障害に罹患した患者の治療方法であって、第２物質が、ＴＮＦアンタゴニスト；ＴＮＦ受容体の可溶性断片；ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト；ＴＮＦ変換酵素（ＴＡＣＥ）インヒビター；ムスカリン性受容体アンタゴニスト；ＴＧＦ−ベータアンタゴニスト；インターフェロンガンマ；ピルフェニドン（ｐｅｒｆｅｎｉｄｏｎｅ）；化学療法剤、メトトレキセート、レフルノミド；シロリムス（ラパマイシン）またはその類似体、ＣＣＩ−７７９；ＣＯＸ２またはｃＰＬＡ２インヒビター；ＮＳＡＩＤ；免疫調節物質；ｐ３８インヒビター；ＴＰＬ−２、ＭＫ−２およびＮＦｋＢインヒビター；ブデノシド；上皮増殖因子；コルチコステロイド；シクロスポリン；スルファサラジン；アミノサリチル酸；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼインヒビター；メサラミン；オラサラジン；バルサラジド；抗酸化物質；トロンボキサンインヒビター；ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；抗ＩＬ−１ｂ抗体；抗ＩＬ−６抗体；増殖因子；エラスターゼインヒビター；ピリジニル−イミダゾール化合物；ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８、ＩＬ−２９、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２、ＩＬ−３３、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦまたはＰＤＧＦの抗体またはアゴニスト；ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０またはそれらのリガンドの抗体；ＦＫ５０６；ラパマイシン；ミコフェノール酸モフェチル；イブプロフェン；プレドニゾロン；ホスホジエステラーゼインヒビター；アデノシンアゴニスト；抗血栓剤；補体インヒビター；アドレナリン作動性物質；ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼインヒビター；ＩＬ−１β変換酵素インヒビター；ＴＮＦａ変換酵素インヒビター；Ｔ細胞シグナリングインヒビター；メタロプロテイナーゼインヒビター；６−メルカプトプリン；アンジオテンシン変換酵素インヒビター；可溶性サイトカイン受容体；可溶性ｐ５５  ＴＮＦ受容体；可溶性ｐ７５  ＴＮＦ受容体；ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ；抗炎症性サイトカイン；ならびにＴＧＦｂから選択される、治療方法。
【請求項５０】
対象への投与が、少なくとも非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、腔内、腹腔内、小脳内、脳室内、結腸内、子宮頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、髄腔内、滑液嚢内、胸内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬、舌下、鼻腔内または経皮によるものである、請求項４０〜４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５１】
（ｉ）請求項１に記載のＴＮＦ−α結合性タンパク質またはそのＴＮＦ−α結合性部分とサンプルを接触させ、
（ｉｉ）サンプル中のＴＮＦ−αとＴＮＦ−α結合性タンパク質またはその結合性部分との複合体の形成を検出する（サンプル中の対照サンプルまたは関連ＴＮＦ−αのものと比較した場合の、サンプル中の複合体の形成の統計的に有意な変化）ことを含む、サンプル中のヒトＴＮＦ−αを検出する方法。
【請求項５２】
サンプルが全血、血漿、血清、尿、唾液または組織生検である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５３】
ヒト対象におけるヒトＴＮＦ−αを検出する方法であって、
（ｉ）請求項１に記載のＴＮＦ−α結合性タンパク質またはそのＴＮＦ−α結合性部分を、ヒトＴＮＦ−αへのＴＮＦ−α結合性タンパク質またはそのＴＮＦ−α結合性部分の結合を可能にする条件下、試験対象または対照対象に投与し、
（ｉｉ）結合性タンパク質またはその結合性部分とＴＮＦ−αとの複合体の形成を検出することを含み、ここで、対照対象と比較した場合またはより早い時点での試験対象における複合体の形成と比較した場合の、試験対象における複合体の形成の統計的に有意な変化が、ＴＮＦ−αの存在を示す、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
ＴＮＦ−α結合性タンパク質、ならびに急性および慢性免疫疾患、例えば関節リウマチ、骨関節症、乾癬、多発性硬化症および他の自己免疫疾患の予防および／または治療におけるその用途を提供する。
【背景技術】
【０００２】
ＴＮＦ−αに結合しうる改良された抗体が当技術分野において必要とされている。
【発明の概要】
【０００３】
（概括）
ＴＮＦ−αへの結合能、高いアフィニティでのＴＮＦ−αへの結合能ならびにＴＮＦ−αに結合し中和する能力を有する結合性タンパク質、ＣＤＲグラフティング抗体、ヒト化抗体ならびにそれらのフラグメントの新規ファミリーを提供する。配列番号３１〜４６のいずれかのアミノ酸配列を含む、ＴＮＦ−αに結合しうる抗体およびその抗原結合性部分も提供する。
【０００４】
（詳細な説明）
ＴＮＦ−α結合性タンパク質、例えば、ＴＮＦ−αに結合する抗体またはその抗原結合性部分を提供する。種々の態様は、抗体および抗体フラグメント、ならびにそれらの医薬組成物、ならびにそのような抗体およびそのフラグメントを製造するための核酸、組換え発現ベクターおよび宿主細胞に関する。ヒトＴＮＦ−αを検出するための、およびヒトＴＮＦ−αをインビトロまたはインビボのいずれかで抑制するための、および遺伝子発現を調節するための、該結合性タンパク質の使用方法も含まれる。
【０００５】
本明細書中で特に定められていない限り、本明細書中で用いられる科学技術用語は、当業者に一般に理解されている意味を有するものとする。該用語の意味および範囲は明らかなはずであるが、潜在的多義性が存在する場合には、本明細書に記載されている定義がいずれの辞書的または非本質的定義にも優先する。更に、文脈に矛盾しない限り、単数形用語はその複数形を含むものとし、複数形用語はその単数形を含むものとする。特に示されていない限り、「または」なる語は「および／または」を含む。「含み」、「含む」または「含んでいた」なる語の使用は限定的なものではない。また、特に示されていない限り、「要素」または「成分」のような語は、１つの単位を含む要素および成分ならびに２以上のサブユニットを含む要素および成分の両方を含む。
【０００６】
該方法および技術は、一般に、細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、タンパク質および核酸化学およびハイブリダイゼーション、分析化学、合成有機化学、医化学および薬化学、医薬製剤、処方および運搬、ならびに患者の治療の分野でよく知られた通常の方法により行われる。そのような技術は、本明細書中で引用されている参考文献にも記載されている。酵素反応および精製技術は、当技術分野で一般に公知のとおりに、またはさもなければ本明細書に記載されているとおりに、製造業者の仕様に従い行われる。
【０００７】
「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」なる語は、アミノ酸の重合鎖を意味するものとして互換的に用いられる。「ポリペプチド」なる語は、天然または人工タンパク質、タンパク質断片、およびタンパク質配列の類似体を含む。ポリペプチドは単量体または重合体でありうる。
【０００８】
「単離されたタンパク質」または「単離されたポリペプチド」なる語は、その天然状態で付随する成分を伴わないタンパク質またはポリペプチドを意味する。例えば、それは同一種由来の他のタンパク質または細胞成分を実質的に含有せず、異なる種からの細胞により発現され、あるいは天然に存在しない。したがって、化学合成された、またはそれが天然で由来する細胞とは異なる細胞系において合成されたポリペプチドは、その天然で付随する成分から「単離」されていることになる。また、タンパク質は、当技術分野でよく知られたタンパク質精製を用いる単離により、天然で付随する成分を実質的に含有しない状態にされうる。
【０００９】
「回収」なる語は、例えば当技術分野でよく知られたタンパク質精製を用いる単離により、ポリペプチドのような化学種を、天然で付随する成分を実質的に含有しない状態にする方法を意味する。
【００１０】
「ヒトＴＮＦ−α」（本明細書ではｈＴＮＦ−αと略される）なる語は二量体サイトカインタンパク質を含む。該用語は、３つの１７．５ｋＤ  ＴＮＦ−αタンパク質を含むホモ三量体タンパク質を含む。該ホモ三量体タンパク質は「ＴＮＦ−αタンパク質」と称される。ヒト「ＴＮＦ−α」なる語は、標準的な組換え発現法により製造されうる組換えヒトＴＮＦ−α（ＴＮＦ−α）を含むと意図される。ヒトＴＮＦ−αの配列を表１に示す。
【００１１】
【表１】
2014503202.tif 000002
【００１２】
「生物活性」なる語は、分子の、全ての固有生物学的特性を意味する。ＴＮＦ−αの生物学的特性はＴＮＦ受容体への結合を含むが、これに限定されるものではない。
【００１３】
抗体、タンパク質またはペプチドが第２の化学種と相互作用することに関する「特異的結合」または「特異的に結合する」なる語は、該相互作用が、該化学種上の特定の構造（例えば、抗原決定基またはエピトープ）の存在に依存すること、例えば、抗体が、全てのタンパク質ではなく特定のタンパク質構造を認識し、それに結合することを意味する。抗体がエピトープ「Ａ」に特異的である場合、標識された「Ａ」および該抗体を含有する反応における、エピトープＡを含有する分子（すなわち、遊離した標識されていないＡ）の存在は、該抗体に結合した標識されたＡの量を減少させるであろう。
【００１４】
「結合性タンパク質」なる語は任意の抗体またはその抗原結合性部分を含むが、これらに限定されるものではない。結合性タンパク質はまた、標的に対する結合アフィニティを維持している他の構築物を含む。幾つかの場合には、それらの結合性タンパク質は抗体またはその抗原結合性部分に対する構造的類似性を有することがあり、それらはまた、それらを抗体またはその抗原結合性部分から区別する構造的相違を有することがある。
【００１５】
「抗体」なる語は、広義には、４本のポリペプチド鎖、すなわち、２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖から構成される任意の免疫グロブリン（Ｉｇ）分子、またはＩｇ分子の必須のエピトープ結合特性を保有する、その任意の機能性フラグメント、突然変異体、変異体もしくは誘導体を意味する。そのような突然変異体、変異体または誘導体抗体形態は当技術分野で公知であり、その非限定的な実施形態を後記に記載する。
【００１６】
完全長抗体においては、各重鎖は重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶＨと略される）および重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は３つのドメイン、すなわち、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３から構成される。各軽鎖は軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶＬ）および軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は１つのドメイン、すなわち、ＣＬから構成される。ＶＨおよびＶＬ領域は更に、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される、超可変性の領域、およびそのなかに介在する、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される、より保存された領域に細分される。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端へ以下の順序で配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。免疫グロブリン分子は、いずれかのタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスのものでありうる。
【００１７】
抗体の「抗原結合性部分」なる語は、抗原（例えば、ｈＴＮＦα）に特異的に結合する能力を保有する、抗体の１以上のフラグメントを意味する。抗体の抗原結合機能は完全長抗体のフラグメントにより果たされうる。そのような抗体実施形態は、二重特異性、二重特異的または多重特異性形態（すなわち、２以上の異なる抗原に特異的に結合する形態）でありうる。抗体の「抗原結合性部分」なる語に含まれる結合性フラグメントの例には、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価フラグメントであるＦａｂフラグメント、（ｉｉ）ヒンジ領域においてジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント；（ｖ）単一可変ドメインを含むｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄら，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６，Ｗｉｎｔｅｒら，ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９０／０５１４４）；ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が含まれる。更に、Ｆｖフラグメントの２つのドメインであるＶＬおよびＶＨは別々の遺伝子によりコードされているが、それらは、ＶＬおよびＶＨ領域がペアになって一価分子を形成するようにそれらが単一タンパク質鎖として製造されることを可能にする合成リンカーにより、組換え法を用いて連結されうる（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知である；例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３を参照されたい）。そのような一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）も抗体の「抗原結合性部分」なる語に含まれると意図される。一本鎖抗体の他の形態、例えばジアボディも含まれる。ジアボディは二価二重特異性抗体であり、この場合、ＶＨおよびＶＬドメインは単一ポリペプチド鎖上で発現されるが、同一鎖上のそれらの２つのドメインの対形成が可能となるには短過ぎるリンカーを用いており、したがって、それらのドメインは別の鎖の相補的ドメインと対形成し、２つの抗原結合部位を形成する（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら，（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋら，（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３を参照されたい）。そのような抗体結合部分は当技術分野で公知である（ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ編，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（２００１）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ．７９０  ｐｐ．（ＩＳＢＮ  ３−５４０−４１３５４−５））。
【００１８】
「抗体構築物」なる語は、リンカーポリペプチドまたは免疫グロブリン定常ドメインに連結された１以上の抗原結合部分を含むポリペプチドを意味する。リンカーポリペプチドは、ペプチド結合により連結された２以上のアミノ酸残基を含み、１以上の抗原結合性部分を連結するために使用される。そのようなリンカーポリペプチドは当技術分野でよく知られている（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋら（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３を参照されたい）。免疫グロブリン定常ドメインは重（γ）鎖または軽（カッパおよびデルタ）鎖定常ドメインを意味する。ヒトＩｇＧ重鎖および軽鎖定常ドメインアミノ酸配列は当技術分野で公知であり、表２に示される。
【００１９】
【表２】
2014503202.tif 000003
【００２０】
更にまた、抗体またはその抗原結合性部分は、１以上の他のタンパク質またはペプチドとの該抗体または抗原結合性部分の共有結合または非共有結合により形成される、より大きな免疫接着分子の一部でありうる。そのような免疫接着分子の例には、四量体ｓｃＦｖ分子を形成させるためのストレプトアビジンコア領域の使用（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖら（１９９５）Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍ．６：９３−１０１）、ならびに二価およびビオチン化ｓｃＦｖ分子を形成させるためのシステイン残基、マーカーペプチドおよびＣ末端ポリヒスチジンタグの使用（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖら（１９９４）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：１０４７−１０５８）が含まれる。抗体の抗原結合性部分、例えばＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメントは、完全抗体のそれぞれパパインまたはペプシン消化のような通常の技術を用いて、完全抗体から製造されうる。更に、抗体、その抗原結合性部分および免疫接着分子は、本明細書に記載されている標準的な組換えＤＮＡ技術を用いて得られうる。
【００２１】
「単離された抗体」なる語は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含有しない抗体を意味する（例えば、ｈＴＮＦαに特異的に結合する単離された抗体は、ｈＴＮＦα以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含有しない）。しかし、ｈＴＮＦαに特異的に結合する単離された抗体は、他の抗原、例えば他の種に由来するＴＮＦα分子に対する交差反応性を有しうる。さらに、単離された抗体は、他の細胞性物質および／または化学物質を実質的に含有しないことが可能である。
【００２２】
「ヒト抗体」なる語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を含む。該ヒト抗体は、例えばＣＤＲ、特にＣＤＲ３において、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってはコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダムもしくは部位特異的突然変異誘発により又はインビボでの体細胞突然変異により導入された突然変異）を含みうる。しかし、「ヒト抗体」なる語は、別の哺乳類種（例えば、マウス）の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列上にグラフト化された抗体を含むことを意図しない。
【００２３】
「組換えヒト抗体」なる語は、組換え手段により製造、発現、作製もしくは単離された全てのヒト抗体、例えば、宿主細胞内にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現された抗体（後記第ＩＩ節で更に詳しく説明される）、組換え組合せ（コンビナトリアル）ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ（１９９７）ＴＩＢ  Ｔｅｃｈ．１５：６２−７０；ＡｚｚａｚｙおよびＨｉｇｈｓｍｉｔｈ（２００２）Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５：４２５−４４５；ＧａｖｉｌｏｎｄｏおよびＬａｒｒｉｃｋ（２００２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２９：１２８−１４５；ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＣｈａｍｅｓ（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ２１：３７１−３７８）、ヒト免疫グロブリン遺伝子に関してトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒら，（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０：６２８７−６２９５；ＫｅｌｌｅｒｍａｎｎおよびＧｒｅｅｎ（２００２）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３：５９３−５９７；Ｌｉｔｔｌｅら（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ２１：３６４−３７０を参照されたい）、または他のＤＮＡ配列へのヒト免疫グロブリン遺伝子配列のスプライシングを含むいずれかの他の手段により製造、発現、作製もしくは単離された抗体を含むと意図される。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する。しかし、ある実施形態においては、そのような組換えヒト抗体はインビトロ突然変異誘発（あるいは、ヒトＩｇ配列に関してトランスジェニックである動物が使用される場合には、インビボ体細胞突然変異誘発）に付され、したがって、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列に由来しそれらと関連しているがインビボにおいてヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然で存在しない可能性のある配列である。
【００２４】
「キメラ抗体」なる語は、１つの種からの重鎖および軽鎖可変領域配列と、別の種からの定常領域配列とを含む抗体、例えば、ヒト定常領域に連結されたマウス重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体を意味する。
【００２５】
「ＣＤＲグラフティング（グラフト化）抗体」なる語は、１つの種からの重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体であって、ＶＨおよび／またはＶＬ領域のＣＤＲ領域の１以上の配列が別の種のＣＤＲ配列で置換されている抗体、例えば、ヒトＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ３）の１以上がマウスＣＤＲ配列で置換された、ヒト重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体を意味する。
【００２６】
「ＣＤＲ」なる語は抗体可変配列内の相補性決定領域を意味する。重鎖および軽鎖の可変領域のそれぞれにおいて、該可変領域のそれぞれに関する、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と称される３つのＣＤＲが存在する。「ＣＤＲセット」なる語は、抗原結合部位の単一可変領域（すなわち、ＶＨまたはＶＬ）内に存在する３つのＣＤＲの群を意味する。これらのＣＤＲの厳密な境界は、様々な系に従い様々に定義されている。Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔら（１９８７，１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍａｒｙｌａｎｄ））により記載されている系は、抗体の任意の可変領域に適用可能な明確な残基番号付け系を提供するだけでなく、それらの３つのＣＤＲを定める厳密な残基境界をも提供する。これらのＣＤＲはＫａｂａｔ  ＣＤＲと称されうる。Ｃｈｏｔｈｉａら（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７ならびにＣｈｏｔｈｉａら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３）は、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ内の或る小部分が、アミノ酸配列レベルで大きな多様性を有するにもかかわらず、ほぼ同じペプチドバックボーンコンホメーションを取ることを見出した。これらの小部分はＬ１、Ｌ２およびＬ３またはＨ１、Ｈ２およびＨ３と命名された。ここで、「Ｌ」および「Ｈ」は、それぞれ軽鎖および重鎖領域を示す。これらの領域はＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲと称されることがあり、これらは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複する境界を有する。Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複するＣＤＲを定める他の境界はＰａｄｌａｎら（１９９５）ＦＡＳＥＢ  Ｊ．９：１３３−１３９およびＭａｃＣａｌｌｕｍ（１９９６）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２（５）：７３２−７４５に記載されている。更に他のＣＤＲ境界の定義は前記系の１つに厳密に従わないかもしれないが、それでも、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲに重複している。尤も、特定の残基もしくは残基群または更にはＣＤＲ全体は抗原結合に有意な影響を及ぼさないという予測または実験的知見を考慮して、それらは短く又は長くなっていることがある。ある実施形態は、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｉａにより定義されたＣＤＲを用いているが、本発明で用いられる方法は、これらの系のいずれに従い定義されたＣＤＲをも用いることが可能である。
【００２７】
「Ｋａｂａｔ番号付け」、「Ｋａｂａｔ定義」および「Ｋａｂａｔ標識」なる語は本明細書中では互換的に用いられる。これらの用語は、抗体またはその抗原結合性部分の重鎖および軽鎖可変領域内のアミノ酸残基を番号付けする系を意味する（Ｋａｂａｔら（１９７１）Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２−３９１およびＫａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈおよび  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２）。重鎖可変領域の場合、超可変領域は、ＣＤＲ１ではアミノ酸３１〜３５位、ＣＤＲ２ではアミノ酸５０〜６５位、そしてＣＤＲ３ではアミノ酸９５〜１０２位の範囲である。軽鎖可変領域の場合、超可変領域は、ＣＤＲ１ではアミノ酸２４〜３４位、ＣＤＲ２ではアミノ酸５０〜５６位、そしてＣＤＲ３ではアミノ酸８９〜９７位の範囲である。
【００２８】
過去２０年間にわたる可変重鎖および軽鎖領域のアミノ酸配列の膨大な公開データベースの増大および分析は可変領域配列内のフレームワーク領域（ＦＲ）とＣＤＲ配列との間の典型的な境界の理解につながっており、Ｋａｂａｔ番号付け、Ｃｈｏｔｉａ番号付け又は他の系に従いＣＤＲを当業者が正確に決定することを可能にしている。例えば、Ｍａｒｔｉｎ，Ｉｎ  ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ編，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ，２００１），第３１章，４３２−４３３頁を参照されたい。可変重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）領域のアミノ酸配列内のＫａｂａｔ  ＣＤＲのアミノ酸配列を決定するための有用な方法を以下に示す。
【００２９】
ＣＤＲ−Ｌ１アミノ酸配列を特定するためには：
ＶＬ領域のアミノ末端からの約２４個のアミノ酸残基から開始する；
ＣＤＲ−Ｌ１配列の前の残基は常にシステイン（Ｃ）である；
ＣＤＲ−Ｌ１配列の後の残基は常にトリプトファン（Ｗ）残基であり、典型的にはＴｒｐ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ（Ｗ−Ｙ−Ｑ）であるが、Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ（Ｗ−Ｌ−Ｑ）、Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ（Ｗ−Ｆ−Ｑ）およびＴｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ（Ｗ−Ｙ−Ｌ）でもある；
長さは典型的には１０〜１７アミノ酸残基である；
ＣＤＲ−Ｌ２アミノ酸配列を特定するためには：
ＣＤＲ−Ｌ１の末端の後の常に１６残基から開始する；
ＣＤＲ−Ｌ２配列の前の残基は一般にＩｌｅ−Ｔｙｒ（Ｉ−Ｙ）であるが、Ｖａｌ−Ｔｙｒ（Ｖ−Ｙ）、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ（Ｉ−Ｋ）およびＩｌｅ−Ｐｈｅ（Ｉ−Ｆ）でもある；
長さは常に７アミノ酸残基である；
ＣＤＲ−Ｌ３アミノ酸配列を特定するためには：
ＣＤＲ−Ｌ２の末端の後の常に３３アミノ酸から開始する；
ＣＤＲ−Ｌ３アミノ酸配列の前の残基は常にシステイン（Ｃ）である；
ＣＤＲ−Ｌ３配列の後の残基は常にＰｈｅ−Ｇｌｙ−Ｘ−Ｇｌｙ（Ｆ−Ｇ−Ｘ−Ｇ）（配列番号６）（ここで、Ｘは任意のアミノ酸である）である；
長さは典型的には７〜１１アミノ酸残基である；
ＣＤＲ−Ｈ１アミノ酸配列を特定するためには：
ＶＨ領域のアミノ末端からの約３１アミノ酸残基、および常にシステイン（Ｃ）の後の９残基から開始する；
ＣＤＲ−Ｈ１配列の前の残基は常にＣｙｓ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｘ（配列番号７）（ここで、Ｘは任意のアミノ酸である）である；
ＣＤＲ−Ｈ１配列の後の残基は常にＴｒｐ（Ｗ）、典型的にはＴｒｐ−Ｖａｌ（Ｗ−Ｖ）であるが、Ｔｒｐ−Ｉｌｅ（Ｗ−Ｉ）およびＴｒｐ−Ａｌａ（Ｗ−Ａ）でもある；
長さは典型的には５〜７アミノ酸残基である；
ＣＤＲ−Ｈ２アミノ酸配列を特定するためには：
常にＣＤＲ−Ｈ１の末端の後の１５アミノ酸残基から開始する；
ＣＤＲ−Ｈ２配列の後の残基は典型的にはＬｅｕ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ（Ｌ−Ｅ−Ｗ−Ｉ−Ｇ）（配列番号８）であるが、他の変異体でもある；
ＣＤＲ−Ｈ２配列の後の残基はＬｙｓ／Ａｒｇ−Ｌｅｕ／Ｉｌｅ／Ｖａｌ／Ｐｈｅ／Ｔｈｒ／Ａｌａ−Ｔｈｒ／Ｓｅｒ／Ｉｌｅ／Ａｌａ（Ｋ／Ｒ−Ｌ／Ｉ／Ｖ／Ｆ／Ｔ／Ａ−Ｔ／Ｓ／Ｉ／Ａ）である；
長さは典型的には１６〜１９アミノ酸残基である；
ＣＤＲ−Ｈ３アミノ酸配列を特定するためには：
常にＣＤＲ−Ｈ２の末端の後の３３アミノ酸残基、および常にシステイン（Ｃ）’の後の３アミノ酸残基から開始する；
ＣＤＲ−Ｈ３配列の前の残基は常にＣｙｓ−Ｘ−Ｘ（Ｃ−Ｘ−Ｘ）（ここで、Ｘは任意のアミノ酸である）、典型的にはＣｙｓ−Ａｌａ−Ａｒｇ（Ｃ−Ａ−Ｒ）である；
ＣＤＲ−Ｈ３配列の後の残基は常にＴｒｐ−Ｇｌｙ−Ｘ−Ｇｌｙ（Ｗ−Ｇ−Ｘ−Ｇ）（配列番号９）（ここで、Ｘは任意のアミノ酸である）である；
長さは典型的には３〜２５アミノ酸残基である。
【００３０】
「アクセプター」および「アクセプター抗体」なる語は、フレームワーク領域の１以上のアミノ酸配列の少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％または１００％を提供またはコードする抗体または核酸配列を意味する。幾つかの実施形態においては、「アクセプター」なる語は、定常領域を提供またはコードする抗体アミノ酸または核酸配列を意味する。更にもう１つの実施形態においては、「アクセプター」なる語は、フレームワーク領域および定常領域の１以上を提供またはコードする抗体アミノ酸または核酸配列を意味する。特定の実施形態においては、「アクセプター」なる語は、フレームワーク領域の１以上のアミノ酸配列の少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％または１００％を提供またはコードするヒト抗体アミノ酸または核酸配列を意味する。この実施形態においては、アクセプターは、ヒト抗体の特定の位置の１以上に存在しない少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個または少なくとも１０個のアミノ酸残基を含有しうる。アクセプターフレームワーク領域および／またはアクセプター定常領域は、例えば、生殖系列抗体遺伝子、成熟抗体遺伝子、機能性抗体（例えば、当技術分野でよく知られた抗体、開発中の抗体または商業的に入手可能な抗体）から誘導または入手されうる。
【００３１】
「カノニカル（ｃａｎｏｎｉｃａｌ）」残基なる語は、Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９０７およびＣｈｏｔｈｉａら（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７９９により定義される特定のカノニカルＣＤＲ構造を定めるＣＤＲまたはフレームワーク内の残基を意味する。Ｃｈｏｔｈｉａらによると、多数の抗体のＣＤＲの決定的に重要な位置は、アミノ酸配列レベルでの大きな多様性にもかかわらず、ほぼ同一のペプチドバックボーンコンホメーションを有する。各カノニカル構造は、主として、ループを形成するアミノ酸残基の連続的断片に関するペプチドバックボーンねじれ角の組合せを定める。
【００３２】
「ドナー」および「ドナー抗体」なる語は、１以上のＣＤＲを提供する抗体を意味する。特定の実施形態においては、ドナー抗体は、フレームワーク領域が入手または誘導された抗体とは異なる種からの抗体である。ヒト化抗体の場合、「ドナー抗体」なる語は、１以上のＣＤＲを提供する非ヒト抗体を意味する。
【００３３】
「フレームワーク」または「フレームワーク配列」なる語は、可変領域からＣＤＲを除いた残存配列を意味する。ＣＤＲ配列の厳密な定義は様々な系により決定されうるため、フレームワーク配列の意味もそれに応じて様々に解釈される。また、６個のＣＤＲ（軽鎖のＣＤＲ−Ｌ１、−Ｌ２および−Ｌ３ならびに重鎖のＣＤＲ−Ｈ１、−Ｈ２および−Ｈ３）は軽鎖および重鎖上のフレームワーク領域を各鎖上の４個の小領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）に分割し、ここで、ＣＤＲ１はＦＲ１とＦＲ２との間に位置し、ＣＤＲ２はＦＲ２とＦＲ３との間に位置し、ＣＤＲ３はＦＲ３とＦＲ４との間に位置する。その他により命名されるフレークワーク領域は、特定の小領域をＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３またはＦＲ４として定めることなく、単一の天然に存在する免疫グロブリン鎖の可変領域内の組合されたＦＲを表す。１つのＦＲはそれらの４個の小領域の１つを表し、複数のＦＲは、フレークワーク領域を構成する４つの小領域の２以上を表す。
【００３４】
ヒト重鎖および軽鎖アクセプター配列は当技術分野で公知である。１つの実施形態においては、ヒト重鎖および軽鎖アクセプター配列は、Ｖ−ｂａｓｅ（ｈｔｔｐ：／／ｖｂａｓｅ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／）またはＩＭＧＴ（登録商標）、ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）（ｈｔｔｐ：／／ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ／ｔｅｘｔｅｓ／ＩＭＧＴｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ／ＬｏｃｕｓＧｅｎｅｓ／）に列挙されている配列から選択される。もう１つの実施形態においては、ヒト重鎖および軽鎖アクセプター配列は、表３および表４に記載されている配列から選択される。
【００３５】
【表３】
2014503202.tif 000004
【００３６】
【表４】
2014503202.tif 000005
【００３７】
「生殖系列抗体遺伝子」または「遺伝子断片」なる語は、特定の免疫グロブリンの発現のための遺伝的再編成および突然変異を招く成熟過程を受けていない非リンパ系細胞によりコードされる免疫グロブリン配列を意味する（例えば、Ｓｈａｐｉｒｏら（２００２）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（３）：１８３−２００；Ｍａｒｃｈａｌｏｎｉｓら（２００１）Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．４８４：１３−３０（２００１）を参照されたい）。種々の実施形態によりもたらされる利点の１つは、生殖系列抗体遺伝子が、成熟抗体遺伝子の場合より、種における個体に特徴的な必須アミノ酸配列構造を保存している可能性が高く、したがって、その種で治療用に使用された場合に外来物として認識される可能性が低いという認識から生じるものである。
【００３８】
「鍵」残基なる語は、抗体、特にヒト化抗体の結合特異性および／またはアフィニティに、より大きな影響を及ぼす、可変領域内の或る残基を意味する。鍵残基には、以下の１以上が含まれるが、それらに限定されるものではない：ＣＤＲに隣接する残基、潜在的グリコシル化部位（Ｎ−またはＯ−グリコシル化部位でありうる）、稀有残基、該抗原と相互作用しうる残基、ＣＤＲと相互作用しうる残基、カノニカル残基、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との接触残基、バーニア領域内の残基、および可変重鎖ＣＤＲ１のＣｈｏｔｉａ定義と第１重鎖フレームワークのＫａｂａｔ定義とで重複する領域内の残基。
【００３９】
「ヒト化抗体」なる語は、非ヒト種（例えば、マウス）からの重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体であるが、ＶＨおよび／またはＶＬ配列の少なくとも一部が、より「ヒト様」となるように、すなわち、ヒト生殖系列可変配列に、より類似したものとなるように改変されている抗体を意味する。１つのタイプのヒト化抗体はＣＤＲグラフティング抗体であり、この場合、非ヒトＣＤＲ配列がヒトＶＨおよびＶＬ配列内に導入されていて、対応する非ヒトフレームワーク（ＦＲ）配列に取って代わっている。例えば、「ヒト化抗体」は、ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク（ＦＲ）領域と非ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有する相補性決定領域（ＣＤＲ）とを含む、関心のある抗原に免疫特異的に結合する抗体またはその変異体、誘導体、類似体もしくはフラグメント（断片）である。ＣＤＲの文脈における「実質的」なる語は、非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を有するＣＤＲに関するものである。ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）の実質的に全てを含み、ここで、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全ては非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）のものに対応し、フレームワーク領域の全て又は実質的に全てはヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。１つの実施形態においては、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）（典型的にはヒト免疫グロブリンのもの）の少なくとも一部を含む。幾つかの実施形態においては、ヒト化抗体は、軽鎖と、重鎖の少なくとも可変ドメインとの両方を含有する。該抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４領域を含みうる。幾つかの実施形態においては、ヒト化抗体はヒト化軽鎖だけを含有する。幾つかの実施形態においては、ヒト化抗体はヒト化重鎖だけを含有する。特定の実施形態においては、ヒト化抗体は、軽鎖のヒト化可変ドメインおよび／またはヒト化重鎖だけを含有する。
【００４０】
該ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥを含む任意のクラス、ならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４（これらに限定されるものではない）を含む任意のイソタイプの免疫グロブリンから選択されうる。該ヒト化抗体は２以上のクラスまたはイソタイプからの配列を含むことが可能であり、個々の定常ドメインは、当技術分野でよく知られた技術を用いて所望のエフェクター機能を最適化するように選択されうる。
【００４１】
ヒト化抗体のフレームワークおよびＣＤＲ領域は親配列に厳密に対応している必要はなく、例えば、ドナー抗体ＣＤＲまたはコンセンサスフレームワークは少なくとも約１個のアミノ酸残基の置換、挿入および／または欠失により突然変異誘発されることが可能であり、その結果、その部位のＣＤＲまたはフレームワーク残基はドナー抗体またはコンセンサスフレームワークに対応していないことが可能である。特定の実施形態においては、そのような突然変異は広範なものではない。通常、該ヒト化抗体残基の少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、そして少なくとも約９５％は親ＦＲおよびＣＤＲ配列のものに対応しているであろう。「コンセンサスフレームワーク」なる語はコンセンサス免疫グロブリン配列内のフレームワーク領域を意味する。「コンセンサス免疫グロブリン配列」なる語は、関連免疫グロブリン配列のファミリーにおける最も頻繁に見出されるアミノ酸（またはヌクレオチド）から形成される配列を意味する（例えば、Ｗｉｎｎａｋｅｒ，（１９８７）Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ（Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙを参照されたい）。したがって、「コンセンサス免疫グロブリン配列」は「コンセンサス可変ドメイン」および／または「コンセンサス定常ドメイン」を含みうる。そして「コンセンサス可変ドメイン」は１以上の「コンセンサスフレームワーク領域」および／または１以上の「コンセンサスＣＤＲ」を含みうる。免疫グロブリンのファミリーにおいては、コンセンサス配列内の各位置は、該ファミリーにおけるその位置に最も頻繁に見出されるアミノ酸により占有されている。２つのアミノ酸が等しく頻繁に見出される場合、いずれかがコンセンサス配列内に含まれうる。
【００４２】
「バーニア」領域なる語は、ＦｏｏｔｅおよびＷｉｎｔｅｒ（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７−４９９に記載されているとおり、ＣＤＲ構造を調節し抗原に対する嵌合を微調整しうる、フレームワーク残基の部分集合を意味する。バーニア領域残基は、ＣＤＲの基礎をなす層を形成し、ＣＤＲの構造および抗体のアフィニティに影響を及ぼしうる。
【００４３】
「多価結合性タンパク質」なる語は、本明細書においては、２以上の抗原結合性部位を含む結合性タンパク質を示すために用いられる。１つの実施形態においては、多価結合性タンパク質は、３以上の抗原結合性部位を有するように操作され、一般に、天然に存在する抗体ではない。「多重特異性結合性タンパク質」なる語は、２以上の関連または無関連標的に結合しうる結合性タンパク質を意味する。二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合性タンパク質は、２以上の抗原結合性部位を含む結合性タンパク質であり、四価または多価結合性タンパク質である。そのようなＤＶＤ結合性タンパク質は単一特異性（すなわち、１つの抗原に結合可能）または多重特異性（すなわち、２以上の抗原に結合可能）でありうる。２つの重鎖ＤＶＤポリペプチドと２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドとを含むＤＶＤ結合性タンパク質はＤＶＤ−Ｉｇ（商標）分子と称される。ＤＶＤ−Ｉｇの各半分は重鎖ＤＶＤポリペプチドおよび軽鎖ＤＶＤポリペプチドおよび２つの抗原結合性部位を含む。各結合性部位は重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインとを含み、抗原結合性部位１個当たり合計６個のＣＤＲが抗原結合に関与している。ＤＶＤ結合性タンパク質およびＤＶＤ結合性タンパク質の製造方法は米国特許第７，６１２，１８１号に開示されている。
【００４４】
１つの態様は、ＴＮＦαに結合しうる結合性タンパク質を含むＤＶＤ結合性タンパク質に関する。１つの実施形態においては、該ＤＶＤ結合性タンパク質はＴＮＦ−αおよび第２の標的に結合しうる。
【００４５】
「中和」なる語は、結合性タンパク質がサイトカインに結合する場合の、該サイトカインの生物活性の中和を意味する。１つの実施形態においては、中和結合性タンパク質は、ｈＴＮＦ−αへの結合がｈＴＮＦ−αの生物活性の抑制をもたらす、中和抗体である。１つの実施形態においては、中和結合性タンパク質はｈＴＮＦ−αに結合し、ｈＴＮＦ−αの生物活性を少なくとも約１２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％またはそれ以上低下させる。中和結合性タンパク質によるｈＴＮＦαの生物活性の抑制は、当技術分野でよく知られたｈＴＮＦ−α生物活性の１以上の指標を測定することにより評価されうる。例えば、Ｌ９２９細胞に対するＴＮＦαの細胞毒性の中和。
【００４６】
「活性」なる語は、抗原に対する抗体（例えば、ＴＮＦ−α抗原に結合する抗ｈＴＮＦ−α抗体）の結合特異性／アフィニティのような活性、および／または抗体（例えば、ｈＴＮＦ−αに結合することによりｈＴＮＦ−αの生物活性を抑制する抗ｈＴＮＦ−α抗体）の中和効力（例えば、Ｌ９２９細胞に対するＴＮＦαの細胞毒性の中和）を含む。
【００４７】
「エピトープ」なる語は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合しうる任意のポリペプチド決定基を含む。ある実施形態においては、エピトープ決定基は、分子の、化学的に活性な表面基、例えばアミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニルを含み、ある実施形態においては、特定の三次元構造特性および／または特定の電荷特性を含む。エピトープは、抗体が結合する、抗原の領域である。したがって、エピトープは、特定の結合相手上の相補的部位に結合することが知られている抗原（またはその断片）の領域のアミノ酸残基からなる。抗原断片は２以上のエピトープを含有しうる。ある実施形態において、抗体が抗原に特異的に結合すると言えるのは、それがタンパク質および／または巨大分子の複合混合物内のその標的抗原を優先的に認識する場合である。したがって、エピトープは、特定の結合相手上の相補的部位に結合することが知られている抗原（またはその断片）の領域のアミノ酸残基からなる。抗原断片は２以上のエピトープを含有しうる。
【００４８】
「表面プラズモン共鳴」なる語は、例えばＢＩＡＣＯＲＥ系（Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ｃｏｍｐａｎｙ），Ｕｐｐｓａｌａ，ＳｗｅｄｅｎおよびＰｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）を使用して、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することによりリアルタイムの生物特異的相互作用の分析を可能にする光学的現象を意味する。更に詳細な説明は、Ｊｏｎｓｓｏｎら（１９９３）Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９−２６；Ｊｏｎｓｓｏｎら（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １１：６２０−６２７；Ｊｏｈｎｓｓｏｎら（１９９５）Ｊ．  Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．８：１２５−１３１；およびＪｏｈｎｎｓｏｎら（１９９１）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８：２６８−２７７を参照されたい。
【００４９】
「Ｋｏｎ」なる語は、当技術分野で公知のとおり、例えば抗体／抗原複合体を形成するための、抗原への結合性タンパク質（例えば、抗体）の会合に関するオン（ｏｎ）速度定数を意味する。「Ｋｏｎ」は「会合速度定数」または「Ｋａ」なる語としても公知であり、これらは本明細書においては互換的に用いられる。抗体のその標的抗原への結合の速度または抗体と抗原との間の複合体形成の速度を示すこの値は、式：
抗体（「Ａｂ」）＋抗原（「Ａｇ」）→Ａｂ−Ａｇ
によっても示される。
【００５０】
「Ｋｏｆｆ」なる語は、当技術分野で公知のとおり、例えば抗体／抗原複合体からの、結合性タンパク質（例えば、抗体）の解離に関するオフ（ｏｆｆ）速度定数を意味する。「Ｋｏｆｆ」は「解離速度定数」または「Ｋｄ」なる語としても公知であり、これらは本明細書においては互換的に用いられる。この値は、抗体のその標的抗原からの解離の速度、または遊離抗体および抗原へのＡｂ−Ａｇ複合体の経時的な分離を示し、以下の式：
Ａｂ＋Ａｇ←Ａｂ−Ａｇ
により示される。
【００５１】
本明細書において互換的に用いられる「平衡解離定数」または「ＫＤ」なる語は、平衡時に力価測定において、または解離速度定数（ｋｏｆｆ）を会合速度定数（ｋｏｎ）により割り算することにより得られる値を意味する。会合速度定数、解離速度定数および平衡解離定数は、抗原に対する抗体の結合アフィニティを表すために用いられる。会合および解離速度定数を決定するための方法は当技術分野でよく知られている。蛍光に基づく技術の利用は、高い感度、および平衡時の生理的バッファー中のサンプルを検査する能力をもたらす。他の実験アプローチおよび装置、例えばＢＩＡＣＯＲＥ（生体分子相互作用分析）アッセイも用いられうる（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ｃｏｍｐａｎｙ），Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎから入手可能な装置）。また、Ｓａｐｉｄｙｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｂｏｉｓｅ，Ｉｄａｈｏ）から入手可能なＫｉｎＥｘＡ（登録商標）（Ｋｉｎｅｔｉｃ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙ）アッセイも用いられうる。
【００５２】
「標識（された）結合性タンパク質」なる語は、該結合性タンパク質が何であるかを示す標識を有するタンパク質を意味する。１つの実施形態においては、標識は、検出可能なマーカー、例えば、放射能標識アミノ酸の取り込み、またはマーカー付きアビジン（例えば、光学的方法または比色法により検出されうる蛍光マーカーまたは酵素活性を含有するストレプトアビジン）により検出されうるビオチン化部分の、ポリペプチドへの結合である。ポリペプチドに対する標識の例には以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：放射性同位体または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏおよび／または１５３Ｓｍ）；蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミンおよびランタニドりん光体）、酵素標識（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）；化学発光マーカー；ビオチニル基；第２のレポーターにより認識される所定ポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパーペア配列、二次抗体に対する結合部位、金属結合ドメインおよびエピトープタグ）；および磁性物質、例えばガドリニウムキレート。
【００５３】
「抗体コンジュゲート」なる語は、第２の化学的部分（例えば、治療用または細胞毒性物質）に化学的に連結された結合性タンパク質（例えば、抗体）を意味する。「物質」なる語は、化合物、化合物の混合物、生物学的巨大分子、または生物学的材料から調製された抽出物を示す。１つの実施形態においては、該治療用または細胞毒性物質には、百日咳毒素、タキソール（ｔａｘｏｌ）、サイトカラシン（ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ）Ｂ、グラミシジン（ｇｒａｍｉｃｉｄｉｎ）Ｄ、臭化エチジウム、エメチン（ｅｍｅｔｉｎｅ）、マイトマイシン（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ）、エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、テノポシド（ｔｅｎｏｐｏｓｉｄｅ）、ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）、ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）、コルヒシン（ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ）、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトザントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、ミトラマイシン（ｍｉｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アクチノマイシン（ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）Ｄ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン（ｐｒｏｃａｉｎｅ）、テトラカイン（ｔｅｔｒａｃａｉｎｅ）、リドカイン（ｌｉｄｏｃａｉｎｅ）、プロプラノロール（ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ）およびピューロマイシン（ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ）ならびにそれらの類似体またはホモログが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００５４】
「結晶」または「結晶化」なる語は、結晶の形態で存在する抗体またはその抗原結合性部分に関するものである。結晶は物質の固体状態の一形態であり、これは、アモルファス固体状態または液体結晶状態のような他の形態から区別される。結晶は、原子、イオン、分子（例えば、抗体のようなタンパク質）または分子集合体（例えば、抗原／抗体複合体）の、規則的な反復性三次元配列から構成される。これらの三次元配列は、当分野で十分に理解されている特定の数学的関係に従い配置されている。結晶において反復される基本単位、すなわち、ビルディングブロック（構成単位）は、非対称単位と称される。ある与えられた十分に定められた結晶対称に合致する配置における非対称単位の反復は結晶の「単位格子」を与える。全ての三次元における規則的な並進による単位格子の反復は結晶を与える。ＧｉｅｇｅおよびＤｕｃｒｕｉｘ（１９９９）Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓおよび  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，２ｎｄ  ｅａ．，ｐｐ．２０  １−１６，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）を参照されたい。
【００５５】
「ポリヌクレオチド」なる語は２以上のヌクレオチドの重合形態を意味し、リボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドまたはいずれかのタイプのヌクレオチドの修飾形態を含む。該用語はＤＮＡまたはＲＮＡの一本鎖および二本鎖形態を含む。
【００５６】
「単離（された）ポリヌクレオチド」なる語は、天然でそれに付随する、または天然でそれに機能的に連結されている、またはより大きな配列の一部として天然でそれと共に存在するポリヌクレオチドの全部または一部を伴わないポリヌクレオチド（例えば、ゲノム、ｃＤＮＡもしくは合成由来のもの、またはそれらの組合せ）を意味する。
【００５７】
「ベクター」なる語は、それに連結されている別の核酸を運搬しうる核酸分子を意味する。１つのタイプのベクターは「プラスミド」であり、これは、追加的ＤＮＡ断片が連結されうる環状二本鎖ＤＮＡループを意味する。もう１つのタイプのベクターはウイルスベクターであり、この場合、ウイルスゲノム内に追加的ＤＮＡ断片が連結されうる。あるベクターは、それが導入される宿主細胞において自律複製する能力を有する（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳類ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳類ベクター）は宿主細胞内への導入に際して宿主細胞のゲノム内に組込まれることが可能であり、それにより、宿主ゲノムと共に複製されうる。更に、あるベクターは、それが機能的に連結されている遺伝子の発現を導きうる。そのようなベクターは本明細書においては「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と称される。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、しばしば、プラスミドの形態である。プラスミドは、最も一般的に使用される形態のベクターであるため、本明細書においては「プラスミド」および「ベクター」は互換的に用いられうる。しかし、該実施形態は、同等の機能を果たすウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）のような他の形態の発現ベクターを含むと意図される。
【００５８】
「機能的に連結（された）」なる語は、意図される様態で機能するような成分の配置を意味する。コード配列に「機能的に連結」された制御配列は、該制御配列に適合した条件下で該コード配列の発現が達成されるように連結されている。「機能的に連結」された配列は、関心のある核酸に隣接した発現制御配列、およびトランスで作用する（すなわち、関心のある核酸とは異なる核酸分子上に位置するが、それでも、関心のある核酸に対する制御をもたらす）発現制御配列、および関心のある核酸と同じ核酸分子上に位置するが、該関心核酸から或る距離を隔てて位置する発現制御配列を含む。「発現制御配列」なる語は、それが連結されているコード配列の発現およびプロセシングを行うのに必要なポリヌクレオチド配列を意味する。発現制御配列には、適当な転写開始、終結、プロモーターおよびエンハンサー配列；効率的ＲＮＡプロセシングシグナル、例えばスプライシングおよびポリアデニル化シグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列；翻訳を効率的に増強する配列（すなわち、コザックコンセンサス配列）；タンパク質安定性を増強する配列；所望により、タンパク質分泌を増強する配列が含まれる。そのような制御配列の性質は宿主生物に応じて様々であり、原核生物においては、そのような制御配列は一般にプロモーター、リボソーム結合部位および転写終結配列を包含し、真核生物においては、一般に、そのような制御配列はプロモーターおよび転写終結配列を包含する。「制御配列」なる語は、発現およびプロセシングのために存在が必須である成分を含むと意図され、存在することが有利である追加的成分、例えばリーダー配列および融合相手の配列をも含みうる。
【００５９】
本明細書中で定義される「形質転換」は、外在性ＤＮＡが宿主細胞に進入する任意の過程を意味する。形質転換は、例えば、原核または真核宿主細胞内への外来核酸配列の挿入のための当技術分野でよく知られた種々の方法を用いて、天然または人工的条件下で行われうる。該方法は、形質転換される宿主細胞に基づいて選択され、ウイルス感染、エレクトロポレーション、リポフェクションおよび粒子射出（これらに限定されるものではない）を含みうる。そのような「形質転換」細胞には、自律複製性プラスミドとして又は宿主染色体の一部として宿主挿入ＤＮＡが複製されうる安定に形質転換された細胞が含まれる。それらにはまた、挿入されたＤＮＡまたはＲＮＡを一定期間にわたり一過性に発現する細胞が含まれる。
【００６０】
「組換え宿主細胞」（または単に「宿主細胞」）なる語は、外在性ＤＮＡが導入された細胞を意味する。そのような用語は、個々の対象細胞だけでなく、そのような細胞の後代をも意味すると理解されるべきである。突然変異または環境的影響により、後続世代において、ある修飾が生じうるため、そのような後代は、実際には、親細胞と同一でない可能性があるが、「宿主細胞」なる語の範囲内に尚も含まれる。１つの実施形態においては、宿主細胞には、生物界のいずれかから選択される原核細胞および真核細胞が含まれる。１つの実施形態においては、真核細胞には、原生生物、真菌、植物および動物細胞が含まれる。１つの実施形態においては、宿主細胞には、原核細胞系である大腸菌(Ｅ．ｃｏｌｉ)；哺乳類細胞系であるＣＨＯ、ＨＥＫ２９３およびＣＯＳ；昆虫細胞系であるＳｆ９；ならびに真菌細胞であるサッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００６１】
組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成ならびに組織培養および形質転換（例えば、エレクトロポレーションおよびリポフェクション）には、標準的な技術が用いられうる。酵素反応および精製技術は、製造業者の説明に従い、または当技術分野で一般に行われているとおりに、または本明細書に記載されているとおりに行われうる。前記技術および方法は、一般に、当技術分野でよく知られている通常の方法に従い、ならびに本明細書の全体にわたって引用され記載されている種々の全般的な及びより具体的な参考文献に記載されているとおりに行われうる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい。
【００６２】
「トランスジェニック生物」なる語は、トランスジーンを含有する細胞を有する生物を意味し、ここで、該生物（または該生物の祖先）内に導入されたトランスジーンは、該生物内で天然では発現されないポリペプチドを発現する。「トランスジーン」は、トランスジェニック生物が発生する細胞のゲノム内に安定かつ機能的に組込まれたＤＮＡ構築物であり、トランスジェニック生物の細胞型または組織の１以上におけるコード化遺伝子産物の発現を導く。
【００６３】
「調節」および「モジュレーション」なる語は互換的に用いられ、関心のある分子の活性（例えば、ｈＴＮＦ−αの生物活性）の変化または改変を意味する。モジュレーションは、関心のある分子の或る活性または機能の大きさの増加または減少でありうる。分子の典型的な活性および機能には、結合特性、酵素活性、細胞受容体活性およびシグナル伝達が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００６４】
それに対応して、「モジュレーター」なる語は、関心のある分子の活性または機能（例えば、ｈＴＮＦ−αの生物活性）を変化させ又は改変しうる化合物を意味する。例えば、モジュレーターは、該モジュレーターの非存在下で観察される活性または機能の大きさと比較して、分子の或る活性または機能の大きさの増加または減少を引き起こしうる。ある実施形態においては、モジュレーターはインヒビターであり、これは、分子の活性または機能の少なくとも１つの大きさを減少させる。典型的なインヒビターには、タンパク質、ペプチド、抗体、ペプチボディ、炭水化物または小さな有機分子が含まれるが、これらに限定されるものではない。ペプチボディは例えばＷＯ０１／８３５２５に記載されている。
【００６５】
「アゴニスト」なる語は、関心のある分子と接触した場合に、該アゴニストの非存在下で観察される活性または機能の大きさと比較して該分子の或る活性または機能の大きさの増加を引き起こすモジュレーターを意味する。関心のある特定のアゴニストには、ＴＮＦ−αポリペプチドまたはポリペプチド、核酸、炭水化物、またはｈＴＮＦ−αに結合するいずれかの他の分子が含まれうるが、これらに限定されるものではない。
【００６６】
「アンタゴニスト」または「インヒビター」なる語は、関心のある分子と接触した場合に、該アンタゴニストの非存在下で観察される活性または機能の大きさと比較して該分子の或る活性または機能の大きさの減少を引き起こすモジュレーターを意味する。関心のある特定のアンタゴニストには、ｈＴＮＦ−αの生物活性または免疫活性を遮断またはモジュレーションするものが含まれる。ｈＴＮＦ−αのアンタゴニストおよびインヒビターには、タンパク質、核酸、炭水化物、またはｈＴＮＦ−αに結合するいずれかの他の分子が含まれうるが、これらに限定されるものではない。
【００６７】
「有効量」なる語は、障害またはその症状の１以上の重症度および／または持続時間を軽減または改善し、障害の進行を妨げ、障害の退縮を引き起こし、障害に関連した１以上の症状の再発、発生、開始または進行を妨げ、障害を検出し、あるいは別の療法（例えば、予防用または治療用物質）の予防または治療効果を増強または改善するのに十分である療法の量を意味する。
【００６８】
「生物学的サンプル」なる語は、生きている生物または以前は生きていた生物からの、いずれかの量の物質を含む。そのような生物には、ヒト、マウス、ラット、サル、イヌ、ウサギおよび他の動物が含まれるが、これらに限定されるものではない。そのような物質には、血液、血清、尿、滑液、細胞、生物、組織、骨髄、リンパ節および脾臓が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００６９】
Ｉ．ヒトＴＮＦ−αに結合する抗体
１つの態様は、高いアフィニティ、遅いオフ（ｏｆｆ）速度および高い中和能でＴＮＦに結合する単離されたマウスモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分を提供する。第２の態様は、ＴＮＦ−αに結合するキメラ抗体を提供する。第３の態様は、ＴＮＦ−αに結合するＣＤＲグラフティング抗体またはその抗原結合性部分を提供する。第４の態様は、ＴＮＦ−αに結合するヒト化抗体またはその抗原結合性部分を提供する。１つの実施形態においては、該抗体またはその一部分は、単離された抗体である。１つの実施形態においては、該抗体は中和ヒト抗ＴＮＦ−α抗体である。
【００７０】
Ａ．抗ＴＮＦ−α抗体の製造方法
抗体は、当技術分野で公知の幾つかの技術のいずれかにより製造されうる。
【００７１】
１．ハイブリドーマ技術を用いる場合の抗ＴＮＦ−αモノクローナル抗体
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え体およびファージ提示技術またはそれらの組合せの利用を含む当技術分野で公知の多種多様な技術を用いて製造されうる。例えば、モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術、例えば、当技術分野で公知であり例えばＨａｒｌｏｗら，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  ｅｄ．，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら編，ｉｎ：  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓおよび  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  “Ｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．３（総編集者：Ｊ．Ｌ．Ｔｕｒｋ）（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）に教示されているものを用いて製造されうる。「モノクローナル抗体」なる語は、ハイブリドーマ技術により製造された抗体には限定されない。「モノクローナル抗体」なる語は、任意の真核生物、原核生物またはファージクローンを含む単クローンから誘導された抗体を意味し、それが製造された方法に関するものではない。
【００７２】
ハイブリドーマ技術を用いて特異的抗体を製造しスクリーニングするための方法は当技術分野で常套的なものであり、よく知られている。１つの実施形態は、モノクローナル抗体を作製する方法を提供し、また、抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を培養することを含む方法により製造された抗体を提供し、ここで、１つの実施形態においては、該ハイブリドーマは、抗原で免疫化されたマウスから単離された脾細胞を骨髄腫細胞と融合させ、該融合から生じたハイブリドーマを、ポリペプチドに結合しうる抗体を分泌するハイブリドーマクローンに関してスクリーニングすることにより作製される。簡潔に説明すると、マウスをＴＮＦ−α抗原で免疫化することが可能である。１つの実施形態においては、該ＴＮＦ−α抗原は、免疫応答を刺激するためにアジュバントと共に投与される。そのようなアジュバントには、完全もしくは不完全フロイントアジュバント、ＲＩＢＩ（ムラミルジペプチド）またはＩＳＣＯＭ（免疫刺激性複合体）が含まれる。そのようなアジュバントは、該ポリペプチドを、それを局所沈着物中に隔離することにより、迅速な分散を防ぎ、あるいはそれは、マクロファージに関して走化性である因子および免疫系の他の成分を分泌するように宿主を刺激する物質を含有しうる。１つの実施形態においては、ポリペプチドが投与される場合、該免疫化計画は、数週間にわたる、該ポリペプチドの、２以上の投与を含むであろう。
【００７３】
ＴＮＦ−α抗原での動物の免疫化の後、該動物から抗体および／または抗体産生細胞が得られうる。該動物からの採血または該動物の犠死により、該動物から抗ＴＮＦ−α抗体含有血清を得る。該血清は、該動物から得られたままの状態で使用されることが可能であり、あるいは該血清から免疫グロブリン画分が得られることが可能であり、あるいは該血清から抗ＴＮＦ−α抗体が精製されることが可能である。このようにして得られた血清または免疫グロブリンはポリクローナルであり、したがって一連の不均一な特性を有する。
【００７４】
免疫応答が検出されたら（例えば、抗原ＴＮＦ−αに特異的な抗体がマウス血清中で検出されたら）、該マウス脾臓を摘出し、脾細胞を単離する。ついで該脾細胞を、よく知られた技術により、いずれかの適当な骨髄腫細胞（例えば、ＡＴＣＣから入手可能な細胞系Ｐ２０からの細胞）と融合させる。ハイブリドーマを選択し、クローニングする（これは、限界希釈により行う）。ついで、当技術分野で公知の方法により、該ハイブリドーマを、ＴＮＦ−αに結合しうる抗体を分泌する細胞に関してアッセイする。一般に高レベルの抗体を含有する腹水が、陽性ハイブリドーマクローンでマウスを免疫化することにより得られうる。
【００７５】
もう１つの実施形態においては、該免疫化動物から抗体産生不死化ハイブリドーマが製造されうる。免疫化後、該動物を犠死させ、当技術分野でよく知られているとおりに、脾Ｂ細胞を不死化骨髄腫細胞と融合させる。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，前掲を参照されたい。１つの実施形態においては、該骨髄腫細胞は免疫グロブリンポリペプチドを分泌しない（非分泌細胞系）。融合および抗生物質選択の後、ＴＮＦ−αもしくはその一部分、またはＴＮＦ−αを発現する細胞を使用して、該ハイブリドーマをスクリーニングする。１つの実施形態においては、酵素結合イムノアッセイ（ＥＬＩＳＡ）またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）を用いて、初期スクリーニングを行う。ＥＬＩＳＡスクリーニングの一例はＰＣＴ公開番号ＷＯ  ００／３７５０４に記載されている。
【００７６】
抗ＴＮＦ−α抗体産生ハイブリドーマを選択し、クローニングし、後記で更に詳しく記載されているとおり、活発なハイブリドーマ成長、高い抗体産生および望ましい抗体特性を含む望ましい特性に関して更にスクリーニングする。インビボで同系動物において、免疫系を欠く動物（例えば、ヌードマウス）において、またはインビトロで細胞培養において、ハイブリドーマを培養し、増殖させることが可能である。ハイブリドーマの選択、クローニングおよび増殖のための方法は当業者によく知られている。
【００７７】
１つの実施形態においては、該ハイブリドーマは前記のマウスハイブリドーマである。もう１つの実施形態においては、該ハイブリドーマは、非ヒト非マウス種、例えばラット、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシまたはウマにおいて産生される。もう１つの実施形態においては、該ハイブリドーマはヒトハイブリドーマであり、この場合、ヒト非分泌性骨髄腫を、抗ＴＮＦ−α抗体を発現するヒト細胞と融合させる。
【００７８】
特異的エピトープを認識する抗体フラグメントは公知技術により作製されうる。例えば、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメントは、パパイン（Ｆａｂフラグメントを製造する場合）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを製造する場合）のような酵素を使用する免疫グロブリン分子のタンパク質分解切断により製造されうる。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは可変領域、軽鎖定常領域および重鎖のＣＨ１ドメインを含有する。
【００７９】
２．ＳＬＡＭを用いる場合の抗ＴＮＦ−αモノクローナル抗体
もう１つの態様においては、米国特許第５，６２７，０５２号、ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９２／０２５５１およびＢａｂｃｏｏｋら（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：７８４３−７８４８に記載されている選択リンパ球抗体法（ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｅｔｈｏｄ）（ＳＬＡＭ）と当技術分野で呼ばれている方法を用いて、単一の単離されたリンパ球から組換え抗体を製造する。この方法においては、関心のある抗体を分泌する単一細胞（例えば、免疫化動物から誘導されたリンパ球）を、抗原特異的溶血プラークアッセイを用いてスクリーニングする。この場合、抗原ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−αのサブユニットまたはそれらの断片を、例えばビオチンのようなリンカーを使用してヒツジ赤血球に結合させ、それを使用して、ＴＮＦ−αに対する特異性を有する抗体を分泌する単一細胞を特定する。関心のある抗体分泌細胞の特定の後、逆転写ＰＣＲにより、重鎖および軽鎖可変領域ｃＤＮＡを該細胞からレスキューし、ついで、哺乳類宿主細胞、例えばＣＯＳまたはＣＨＯ細胞内で、適当な免疫グロブリン定常領域（例えば、ヒト定常領域）のコンテクストで、これらの可変領域を発現させることが可能である。インビボで選択されたリンパ球から誘導された、増幅免疫グロブリン配列でトランスフェクトされた宿主細胞を次いで、例えば、該トランスフェクト化細胞をパンニングして、ＴＮＦ−αに対する抗体を発現する細胞を単離することにより、更なる分析およびインビトロでの選択に付すことが可能である。該増幅免疫グロブリン配列を更に、例えばインビトロアフィニティ成熟法（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９７／２９１３１およびＷＯ  ００／５６７７２に記載されているもの）により、インビトロで操作することが可能である。
【００８０】
３．トランスジェニック動物を使用する場合の抗ＴＮＦ−αモノクローナル抗体
もう１つの実施形態においては、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部または一部を含む非ヒト動物をＴＮＦ−α抗原で免疫化することにより、抗体を製造する。１つの実施形態においては、該非ヒト動物は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の大断片を含む、マウス抗体産生を欠損している操作マウス系統であるＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）トランスジェニックマウスである。例えば、Ｇｒｅｅｎら（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．７：１３−２１ならびに米国特許第５，９１６，７７１号、第５，９３９，５９８号、第５，９８５，６１５号、第５，９９８，２０９号、第６，０７５，１８１号、第６，０９１，００１号、第６，１１４，５９８号および第６，１３０，３６４号を参照されたい。また、ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９１／１０７４１、ＷＯ  ９４／０２６０２、ＷＯ  ９６／３４０９６、ＷＯ  ９６／３３７３５、ＷＯ  ９８／１６６５４、ＷＯ  ９８／２４８９３、ＷＯ  ９８／５０４３３、ＷＯ  ９９／４５０３１、ＷＯ  ９９／５３０４９、ＷＯ  ００／０９５６０およびＷＯ  ００／３７５０４も参照されたい。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）トランスジェニックマウスは完全ヒト抗体の成体様ヒトレパトワを産生し、抗原特異的ヒトモノクローナル抗体を産生する。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）トランスジェニックマウスは、ヒト重鎖遺伝子座およびｘ軽鎖遺伝子座のメガベースサイズの生殖系列配置ＹＡＣ断片の導入により、ヒト抗体レパトワの約８０％を含有する。Ｍｅｎｄｅｚら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．１５：１４６−１５６ならびにＧｒｅｅｎおよびＪａｋｏｂｏｖｉｔｓ（１９９８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８：４８３−４９５を参照されたい。
【００８１】
４．組換え抗体ライブラリーを使用する場合の抗ＴＮＦ−αモノクローナル抗体
該抗体を製造するために、インビトロ法も用いられうる。この場合、抗体ライブラリーをスクリーニングして、所望の結合特異性を有する抗体を特定する。組換え抗体ライブラリーのそのようなスクリーニングのための方法は当技術分野でよく知られており、例えば以下のものに記載されている方法を含む：米国特許第５，２２３，４０９号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９２／１８６１９、ＷＯ  ９１／１７２７１、ＷＯ  ９２／２０７９１、ＷＯ  ９２／１５６７９、ＷＯ  ９３／０１２８８、ＷＯ  ９２／０１０４７、ＷＯ  ９２／０９６９０；ＷＯ  ９７／２９１３１；Ｆｕｃｈｓら（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３６９−１３７２；Ｈａｙら（１９９２）Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ３：８１−８５；Ｈｕｓｅら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら（１９９３）ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：７２５−７３４；Ｈａｗｋｉｎｓら（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６；Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８；Ｇｒａｍら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：３５７６−３５８０；Ｇａｒｒａｒｄら（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７３−１３７７；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら（１９９１）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９：４１３３−４１３７；およびＢａｒｂａｓら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：７９７８−７９８２、および米国特許公開第２００３／０１８６３７４号。
【００８２】
該組換え抗体は、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−αの一部分で免疫化された対象からのものでありうる。あるいは、該組換え抗体ライブラリーは、ナイーブ対象、すなわち、ＴＮＦ−αで免疫化されていない者からのもの、例えば、ヒトＴＮＦ−αで免疫化されていないヒト対象からのヒト抗体ライブラリーでありうる。ヒトＴＮＦ−αを含むペプチドで組換え抗体ライブラリーをスクリーニングし、それにより、ＴＮＦ−αを認識する抗体を選択することにより、抗体を選択する。そのようなスクリーニングおよび選択を行うための方法は当技術分野でよく知られており、例えば、前段落における参考文献に記載されている。ｈＴＮＦ−αに対する特定の結合アフィニティを有する抗体（例えば、特定のｋｏｆｆ速度定数でヒトＴＮＦ−αから解離するもの）を選択するためには、表面プラズモン共鳴の当技術分野で公知の方法を用いて、所望のｋｏｆｆ速度定数を有する抗体を選択することが可能である。ｈＴＮＦ−αに対する特定の中和活性を有する抗体（例えば、特定のＩＣ５０を有するもの）を選択するためには、ｈＴＮＦ−α活性の抑制を評価するための当技術分野で公知の標準的な方法が用いられうる。
【００８３】
１つの態様は、ヒトＴＮＦ−αに結合する単離された抗体またはその抗原結合性部分に関する。１つの実施形態においては、該抗体は中和抗体である。種々の実施形態においては、該抗体は組換え抗体またはモノクローナル抗体である。
【００８４】
例えば、該抗体は、当技術分野で公知の種々のファージ提示法を用いることによっても製造されうる。ファージ提示法においては、機能性抗体ドメインが、それらをコードするポリヌクレオチド配列を含有するファージ粒子の表面上に提示される。特に、レパトワまたは組合せ抗体ライブラリー（例えば、ヒトまたはマウス）から発現された抗原結合性ドメインを提示させるために、そのようなファージが使用されうる。関心のある抗原に結合する抗原結合性ドメインを発現するファージは、例えば、標識抗原、または固体表面もしくはビーズに結合もしくは捕捉された抗原を使用して、該抗原で選択または特定されうる。これらの方法において使用されるファージは、典型的には、ファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩタンパク質に組換え的に融合しているＦａｂ、Ｆｖまたはジスルフィドにより安定化されたＦｖ抗体ドメインを伴ってファージから発現されるｆｄおよびＭ１３結合性ドメインを含む繊維状ファージである。該抗体を製造するために用いられうるファージ提示法の例には、以下のもの開示されているものが含まれる：Ｂｒｉｎｋｍａｎｎら（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８２：４１−５０；Ａｍｅｓら（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８４：１７７−１８６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら（１９９４）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：９５２−９５８；Ｐｅｒｓｉｃら（１９９７）Ｇｅｎｅ  １８７  ９−１８；Ｂｕｒｔｏｎら（１９９４）Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５７：１９１−２８０；ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４；ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９０／０２８０９；ＷＯ  ９１／１０７３７；ＷＯ  ９２／０１０４７；ＷＯ  ９２／１８６１９；ＷＯ  ９３／１１２３６；ＷＯ  ９５／１５９８２；ＷＯ  ９５／２０４０１；ならびに米国特許第５，６９８，４２６号；第５，２２３，４０９号；第５，４０３，４８４号；第５，５８０，７１７号；第５，４２７，９０８号；第５，７５０，７５３号；第５，８２１，０４７号；第５，５７１，６９８号；第５，４２７，９０８号；第５，５１６，６３７号；第５，７８０，２２５号；第５，６５８，７２７号；第５，７３３，７４３号および第５，９６９，１０８号。
【００８５】
ファージ選択後、該ファージから抗体コード領域を単離し、それを使用して、ヒト抗体を含む完全抗体またはいずれかの他の所望の抗原結合性フラグメントを得ることが可能であり、該抗体コード領域は、哺乳類細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母および細菌を含むいずれかの所望の宿主内で発現されうる（例えば、本明細書に詳細に記載されているとおりに行われうる）。例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２フラグメントを組換え製造するための技術も、当技術分野で公知の方法、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９２／２２３２４；Ｍｕｌｌｉｎａｘら（１９９２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １２（６）：８６４−８６９；Ｓａｗａｉら（１９９５）Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３４：２６−３４；およびＢｅｔｔｅｒら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１−１０４３に開示されているものを用いて利用されうる。一本鎖Ｆｖおよび抗体を製造するために用いられうる技術の例には、米国特許第４，９４６，７７８号および第５，２５８，４９８号；Ｈｕｓｔｏｎら（１９９１）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２０３：４６−８８；Ｓｈｕら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：７９９５−７９９９；ならびにＳｋｅｒｒａら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０３８−１０４１に記載されているものが含まれる。
【００８６】
ファージ提示による組換え抗体ライブラリーのスクリーニングの代替手段として、大きな組合せライブラリースクリーニングするための当技術分野で公知の他の方法が二重特異性抗体の特定のために適用されうる。１つのタイプの代替的発現系は、ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９８／３１７００ならびにＲｏｂｅｒｔｓおよびＳｚｏｓｔａｋ（１９９７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：１２２９７−１２３０２に記載されているとおりの、組換え抗体ライブラリーがＲＮＡ−タンパク質融合体として発現されるものである。この系においては、ｍＲＮＡとそれがコードするペプチドまたはタンパク質との間に、それらの３’末端にピューロマイシン（ペプチジルアクセプター抗生物質である）を含有する合成ｍＲＮＡのインビトロ翻訳により共有結合融合が生じる。したがって、コード化ペプチドまたはタンパク質（例えば、抗体またはその一部分）の特性（例えば、二重特異性抗原への該抗体またはその一部分の結合）に基づいて、特異的ｍＲＮＡがｍＲＮＡの複合混合物（例えば、組合せライブラリー）から富化されうる。そのようなライブラリーのスクリーニングから回収された、抗体またはその一部分をコードする核酸配列は、前記のとおり（例えば、哺乳類宿主細胞内で）、組換え手段により発現されることが可能であり、更に、最初に選択された配列内に突然変異が導入されたｍＲＮＡ−ペプチド融合体の追加的ラウンドのスクリーニングによる、または前記のとおりの組換え抗体のインビトロでのアフィニティ（親和性）成熟のための他の方法による更なるアフィニティ成熟に付されることが可能である。
【００８７】
もう１つのアプローチにおいては、該抗体は、当技術分野で公知の酵母提示法を用いることによっても製造されうる。酵母提示法においては、抗体ドメインを酵母細胞壁に連結し、それらを酵母の表面上に提示するために、遺伝的方法が用いられる。特に、そのような酵母は、レパトワまたは組合せ抗体ライブラリー（例えば、ヒトまたはマウス）から発現された抗原結合性ドメインを提示するために使用されうる。該抗体を製造するために用いられうる酵母提示法の例には、米国特許第６，６９９，６５８号に開示されているものが含まれる。
【００８８】
Ｂ．組換えＴＮＦ−α抗体の製造
抗体は、当技術分野で公知の幾つかの技術のいずれかにより製造されうる。例えば、宿主細胞からの発現が挙げられ、この場合、重鎖および軽鎖をコードする発現ベクターが標準的な技術により宿主細胞内にトランスフェクトされる。「トランスフェクション」なる語の種々の形態は、外在性ＤＮＡを原核または真核宿主細胞内に導入するために一般的に用いられる多種多様な技術、例えばエレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどを含むと意図される。原核または真核宿主細胞のいずれにおいても、１つの実施形態においては哺乳類宿主細胞において、該抗体を発現させることが可能であるが、真核細胞（および特に哺乳類細胞）は、適切に折り畳まれており免疫学的に活性な抗体を構築し分泌する可能性が原核細胞の場合より高い。
【００８９】
組換え抗体を発現させるための哺乳類宿主細胞には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えばＫａｕｆｍａｎおよびＳｈａｒｐ（１９８２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−６２１に記載されているＤＨＦＲ選択マーカーと共に使用される、ＵｒｌａｕｂおよびＣｈａｓｉｎ（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６−４２２０に記載されているｄｈｆｒ−  ＣＨＯ細胞を含む）、ＮＳ０骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞およびＳＰ２細胞が含まれる。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターを哺乳類宿主細胞内に導入したら、該宿主細胞における該抗体の発現、および宿主細胞が培養される培地内への該抗体の分泌を可能にするのに十分な期間にわたって、該宿主細胞を培養することにより、該抗体を産生産生させる。標準的なタンパク質精製方法を用いて、該培地から抗体を回収することが可能である。
【００９０】
機能性抗体フラグメント、例えばＦａｂフラグメントまたはｓｃＦｖ分子を製造するためにも、宿主細胞が使用されうる。前記方法の変法も該実施形態の範囲内であると理解されるであろう。例えば、抗体の軽鎖および／または重鎖の機能性フラグメントをコードするＤＮＡで宿主細胞をトランスフェクトすることが望ましいかもしれない。組換えＤＮＡ技術は、関心のある抗原への結合に必要でない軽鎖および重鎖の一方または両方のＤＮＡの一部または全部を除去するためにも使用されうる。そのようなトランケート化ＤＮＡ分子から発現される分子も該抗体に含まれる。また、一方の重鎖および一方の軽鎖が抗体であり、他方の重鎖および軽鎖が、関心のある抗原以外の抗原に特異的である、二官能性抗体が、標準的な化学的架橋法により抗体を第２の抗体に架橋することにより製造されうる。
【００９１】
抗体またはその抗原結合性部分の組換え発現のための典型的な系においては、抗体重鎖と抗体軽鎖との両方をコードする組換え発現ベクターをリン酸カルシウム媒介性トランスフェクションによりｄｈｆｒ−  ＣＨＯ細胞内に導入する。該組換え発現ベクターにおいては、該抗体重鎖および軽鎖遺伝子はそれぞれ、該遺伝子の高レベルの転写を駆動するためにＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節要素に機能的に連結されている。該組換え発現ベクターはまた、該ベクターでトランスフェクトされたＣＨＯ細胞の、メトトレキセート選択／増幅を用いる選択を可能にするＤＨＦＲ遺伝子を含有する。選択された形質転換宿主細胞を、該抗体重鎖および軽鎖の発現が可能となるように培養し、完全抗体を培地から回収する。該組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、該抗体を培地から回収するためには、標準的な分子生物学的技術を用いる。更にまた、組換え抗体が合成されるまで適当な培地内で宿主細胞を培養することによる組換え抗体の合成方法を提供する。該方法は更に、該組換え抗体を培地から単離することを含みうる。
【００９２】
１．抗ｈＴＮＦ−α抗体
表５はマウス抗ｈＴＮＦ−α抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列の一覧である。
【００９３】
【表５】
2014503202.tif 000006
【００９４】
２．抗ｈＴＮＦ−αキメラ抗体
キメラ抗体は、由来する動物種によって異なる抗体部分を含有する分子、例えば、マウスモノクローナル抗体に由来する可変領域とヒト免疫グロブリン定常領域とを有する抗体である。キメラ抗体の製造方法は当技術分野で公知であり、実施例に詳細に記載されている。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２；Ｏｉら（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４；Ｇｉｌｌｉｅｓら（１９８９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２５：１９１−２０２；ならびに米国特許第５，８０７，７１５号、第４，８１６，５６７号および第４，８１６，３９７号を参照されたい。また、適当な抗原特異性のマウス抗体分子からの遺伝子を、適当な生物活性のヒト抗体分子からの遺伝子と共にスプライシングすることによる、「キメラ抗体」の製造のために開発された技術が用いられうる（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：８５１−８５５；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら（１９８４）Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：６０４−６０８；Ｔａｋｅｄａら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４５２−４５４）。
【００９５】
１つの実施形態においては、第１節に記載されているマウスモノクローナル抗ヒトＴＮＦ−α抗体の重鎖定常領域をヒトＩｇＧ１定常領域で置換することにより、該キメラ抗体を製造する。
【００９６】
３．抗ＴＮＦ−α  ＣＤＲグラフティング抗体
ＣＤＲグラフティング（ＣＤＲグラフト化）抗体は、ＶＨおよび／またはＶＬのＣＤＲ領域の１以上がマウス抗体のＣＤＲ配列で置換されている、ヒト抗体からの重鎖および軽鎖可変領域配列を含む。いずれかのヒト抗体からのフレームワーク配列がＣＤＲグラフティングのための鋳型として働きうる。しかし、そのようなフレームワーク上への一直線の鎖の置換は、しばしば、抗原に対する結合アフィニティの幾らかの低下を招く。ヒト抗体が元のマウス抗体に対して相同になればなるほど、マウスＣＤＲとヒトフレームワークとの組合せが、アフィニティを低下させうる該ＣＤＲにおける欠損を招く可能性は低くなるであろう。したがって、１つの実施形態においては、ＣＤＲは別として、マウス可変フレームワークを置換するために選択されるヒト可変フレームワークは、マウス抗体可変領域フレームワークに対して少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、約１００％の配列同一性を有する。ＣＤＲグラフティング抗体の製造方法は当技術分野で公知であり、そのようなＣＤＲグラフティング抗体のヒト化と共に実施例において（また、ＥＰ特許番号ＥＰ  ０  ２３９  ４００；ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９１／０９９６７；米国特許第５，２２５，５３９号、第５，５３０，１０１号および第５，５８５，０８９号も参照されたい）；ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）またはリサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（ＥＰ特許番号ＥＰ  ０  ５９２  １０６およびＥＰ  ０  ５１９  ５９６；Ｐａｄｌａｎ（１９９１）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら（１９９４）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．７（６）：８０５−８１４；Ｒｏｇｕｓｋａら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：９６９−９７３）および鎖シャフリング（米国特許第５，５６５，３５２号）と共に詳細に記載されている。
【００９７】
特定の実施形態は、表６に記載されているとおり、ＶＨおよび／またはＶＬ鎖を有するＣＤＲグラフティング抗体を提供する。
【００９８】
【表６】
2014503202.tif 000007
【００９９】
４．抗ｈＴＮＦ−αヒト化抗体
ヒト化抗体は、ヒト種からの１以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）およびヒト免疫グロブリン分子からのフレームワーク領域を有する抗体分子である。公知のヒトＩｇ配列は例えば以下のものに開示されている：ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｅｎｔｒｅｚ−  ／ｑｕｅｒｙ．ｆｃｇｉ；ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／ｐｈａｇｅ／ｈｄｂ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｓｃｉｑｕｅｓｔ．ｃｏｍ／；ｗｗｗ．ａｂｃａｍ．ｃｏｍ／；ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／ｏｎｌｉｎｅｃｏｍｐ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｐｕｂｌｉｃ．ｉａｓｔａｔｅ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｐｅｄｒｏ／ｒｅｓｅａｒｃｈ＿ｔｏｏｌｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｍｇｅｎ．ｕｎｉ−ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ．ｄｅ／ＳＤ／ＩＴ／ＩＴ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｗｈｆｒｅｅｍａｎ．ｃｏｍ／ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ／ＣＨ−  ０５／ｋｕｂｙ０５．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｌｉｂｒａｒｙ．ｔｈｉｎｋｑｕｅｓｔ．ｏｒｇ／１２４２９／Ｉｍｍｕｎｅ／Ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｈｈｍｉ．ｏｒｇ／ｇｒａｎｔｓ／ｌｅｃｔｕｒｅｓ／１９９６／ｖｌａｂ／；ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍｒｃ７／ｍ−  ｉｋｅｉｍａｇｅｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／；ｍｃｂ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／ＢｉｏＬｉｎｋｓ／Ｉｍｍｕｎｏ−  ｌｏｇｙ．ｈｔｍｌ．ｗｗｗ．ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙｌｉｎｋ．ｃｏｍ／；ｐａｔｈｂｏｘ．ｗｕｓｔｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｈｃｅｎｔｅｒ／ｉｎｄｅｘ．−  ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｈｃｌ／；ｗｗｗ．ｐｅｂｉｏ．ｃｏｍ／ｐａ／３４０９１３／３４０９１３．ｈｔｍｌ−  ；ｗｗｗ．ｎａｌ．ｕｓｄａ．ｇｏｖ／ａｗｉｃ／ｐｕｂｓ／ａｎｔｉｂｏｄｙ／；ｗｗｗ．ｍ．ｅｈｉｍｅ−ｕ．ａｃｊｐ／．ａｂｏｕｔ．ｙａｓｕｈｉｔｏ−  ／Ｅｌｉｓａ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ．ｃｏｍ／ｔａｂｌｅ．ａｓｐ；ｗｗｗ．ｉｃｎｅｔ．ｕｋ／ａｘｐ／ｆａｃｓ／ｄａｖｉｅｓ／ｌｉｎ−  ｋｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｆｃｃｌ／ｐｒｏｔｏｃｏｌ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｓａｃ−ｎｅｔ．ｏｒｇ／ｓｉｔｅｓ＿ｇｅｏ．ｈｔｍｌ；ａｘｉｍｔｌ．ｉｍｔ．ｕｎｉ−ｍａｒｂｕｒｇ．ｄｅ／．ａｂｏｕｔ．ｒｅｋ／ＡＥＰ−  Ｓｔａｒｔ．ｈｔｍｌ；ｂａｓｅｒｖ．ｕｃｉ．ｋｕｎ．ｎｌ／．ａｂｏｕｔ．ｊｒａａｔｓ／ｌｉｎｋｓｌ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｒｅｃａｂ．ｕｎｉ−ｈｄ．ｄｅ／ｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｕ．ｅｄｕ／；ｗｗｗ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｉｍｔ−ｄｏｃ／ｐｕ−  ｂｌｉｃ／ＩＮＴＲＯ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／Ｖ＿ｍｉｃｅ．ｈｔｍｌ；ｉｍｇｔ．ｃｎｕｓｃ．ｆｒ：８１０４／；ｗｗｗ．ｂｉｏｃｈｅｍ．ｕｃｌ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍａｒｔｉｎ／ａｂｓ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｂａｔｈ．ａｃ．ｕｋ／；ａｂｇｅｎ．ｃｖｍ．ｔａｍｕ．ｅｄｕ／ｌａｂ／ｗｗｗａｂｇｅｎ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｕｎｉｚｈ．ｃｈ／．ａｂｏｕｔ．ｈｏｎｅｇｇｅｒ／ＡＨＯｓｅｍ−  ｉｎａｒ／Ｓｌｉｄｅ０１．ｈｔｍｌ��ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｂｋ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｕｂｃｇ０７ｓ／；ｗｗｗ．ｎｉｍｒ．ｍｒｃ．ａｃ．ｕｋ／ＣＣ／ｃｃａｅｗｇ／ｃｃａｅｗｇ．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍｒｃ７／ｈ−  ｕｍａｎｉｓａｔｉｏｎ／ＴＡＨＨＰ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ／ｓｔａｔ＿ａｉｍ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｓｃｉ．ｍｉｓｓｏｕｒｉ．ｅｄｕ／ｓｍｉｔｈｇｐ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｉｏｃ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏ−  ｕｔ．ｆｍｏｌｉｎａ／Ｗｅｂ−ｐａｇｅｓ／Ｐｅｐｔ／ｓｐｏｔｔｅｃｈ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｊｅｒｉｎｉ．ｄｅ／ｆｒ  ｒｏｄｕｃｔｓ．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｐａｔｅｎｔｓ．ｉｂｍ．ｃｏｍ／ｉｂｍ．ｈｔｍｌ．Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ（１９８３）。免疫原性を低下させ、あるいは結合、アフィニティ、オン速度、オフ速度、特異性、半減期または当技術分野で公知のいずれかの他の適当な特性を低減、増強または修飾するために、そのような移入配列が使用されうる。
【０１００】
抗原結合を改変、改善するために、ヒトフレームワーク領域内のフレームワーク残基をＣＤＲドナー抗体からの対応残基で置換することが可能である。これらのフレームワーク置換は、当技術分野でよく知られた方法、例えば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を特定するための、ＣＤＲおよびフレームワーク残基の相互作用のモデリング、ならびに特定の位置における特異なフレームワーク残基を特定するための配列比較により特定される（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７を参照されたい）。三次元免疫グロブリンモデルは一般に入手可能であり、当業者によく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の可能な三次元コンホメーション構造を図示し表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらの表示の精査は、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能な役割の分析、すなわち、候補免疫グロブリンのその抗原への結合能に影響を及ぼす残基の分析を可能にする。このようにして、ＦＲ残基を選択し、コンセンサス配列および移入配列から構築して、望ましい抗体特性、例えば、標的抗原に対するアフィニティの増加を達成することが可能である。一般に、ＣＤＲ残基は抗原結合への影響に直接的および最も実質的に関与している。抗体は、種々の技術、例えば以下のものに記載されている技術（それらに限定されるものではない）を用いてヒト化されうる：Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６；Ｓｉｍｓら（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６−２３０８；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；Ｃａｒｔｅｒら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：４２８５−４２８９；Ｐｒｅｓｔａら（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３−２６３２；Ｐａｄｌａｎ（１９９１）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら（１９９４）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．７（６）：８０５−８１４；Ｒｏｇｕｓｋａら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：９６９−９７３；ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９１／０９９６７、ＷＯ  ９９／０６８３４（ＰＣＴ／ＵＳ９８／１６２８０）、ＷＯ  ９７／２００３２（ＰＣＴ／ＵＳ９６／１８９７８）、ＷＯ  ９２／１１２７２（ＰＣＴ／ＵＳ９１／０９６３０）、ＷＯ  ９２／０３４６１（ＰＣＴ／ＵＳ９１／０５９３９）、ＷＯ  ９４／１８２１９（ＰＣＴ／ＵＳ９４／０１２３４）、ＷＯ  ９２／０１０４７（ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４）、ＷＯ  ９３／０６２１３（ＰＣＴ／ＧＢ９２／０１７５５）、ＷＯ  ９０／１４４４３、ＷＯ  ９０／１４４２４およびＷＯ  ９０／１４４３０；欧州公開番号ＥＰ  ０５９２１０６、ＥＰ  ０５１９５９６およびＥＰ  ０２３９４００；米国特許第５，５６５，３３２号、第５，７２３，３２３号、第５，９７６，８６２号、第５，８２４，５１４号、第５，８１７，４８３号、第５，８１４，４７６号、第５，７６３，１９２号、第５��７２３，３２３号、第５，７６６，８８６号、第５，７１４，３５２号、第６，２０４，０２３号、第６，１８０，３７０号、第５，６９３，７６２号、第５，５３０，１０１号、第５，５８５，０８９号、第５，２２５，５３９号および第４，８１６，５６７号。
【０１０１】
Ｃ．抗体および抗体産生細胞系の製造
１つの実施形態においては、抗ＴＮＦ−α抗体は、例えば、当技術分野で公知の幾つかのインビトロおよびインビボアッセイのいずれかによるアッセイで、ＴＮＦ−α活性を低減または中和する高い能力を示す。
【０１０２】
特定の実施形態においては、単離された抗体またはその抗原結合性部分はヒトＴＮＦ−αに結合し、ここで、該抗体またはその抗原結合性部分は、表面プラズモン共鳴により測定された場合、約０．１ｓ−１またはそれ未満のｋｏｆｆ速度定数でヒトＴＮＦ−αから解離し、あるいはそれは約１×１０−６Ｍまたはそれ未満のＩＣ５０でヒトＴＮＦ−α活性を抑制する。あるいは、該抗体またはその抗原結合性部分は、表面プラズモン共鳴により測定された場合、約１×１０−２ｓ−１またはそれ未満のｋｏｆｆ速度定数でヒトＴＮＦ−αから解離することが可能であり、あるいは約１×１０−７Ｍまたはそれ未満のＩＣ５０でヒトＴＮＦ−α活性を抑制することが可能である。あるいは、該抗体またはその抗原結合性部分は、表面プラズモン共鳴により測定された場合、約１×１０−３ｓ−１またはそれ未満のｋｏｆｆ速度定数でヒトＴＮＦ−αから解離することが可能であり、あるいは約１×１０−８Ｍまたはそれ未満のＩＣ５０でヒトＴＮＦ−α活性を抑制することが可能である。あるいは、該抗体またはその抗原結合性部分は、表面プラズモン共鳴により測定された場合、約１×１０−４ｓ−１またはそれ未満のｋｏｆｆ速度定数でヒトＴＮＦ−αから解離することが可能であり、あるいは約１×１０−９Ｍまたはそれ未満のＩＣ５０でヒトＴＮＦ−α活性を抑制することが可能である。あるいは、該抗体またはその抗原結合性部分は、表面プラズモン共鳴により測定された場合、約１×１０−５ｓ−１またはそれ未満のｋｏｆｆ速度定数でヒトＴＮＦ−αから解離することが可能であり、あるいは約１×１０−１０Ｍまたはそれ未満のＩＣ５０でヒトＴＮＦ−α活性を抑制することが可能である。あるいは、該抗体またはその抗原結合性部分は、表面プラズモン共鳴により測定された場合、約１×１０−５ｓ−１またはそれ未満のｋｏｆｆ速度定数でヒトＴＮＦ−αから解離することが可能であり、あるいは約１×１０−１１Ｍまたはそれ未満のＩＣ５０でヒトＴＮＦ−α活性を抑制することが可能である。
【０１０３】
ある実施形態においては、該抗体は、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＤ定常領域のような重鎖定常領域を含む。１つの実施形態においては、該重鎖定常領域はＩｇＧ１重鎖定常領域またはＩｇＧ４重鎖定常領域である。更に、該抗体はカッパ軽鎖定常領域またはラムダ軽鎖定常領域のいずれかの軽鎖定常領域を含みうる。もう１つの実施形態においては、該抗体はカッパ軽鎖定常領域を含む。あるいは、該抗原結合性部分は、例えばＦａｂフラグメントまたは一本鎖Ｆｖフラグメントでありうる。
【０１０４】
抗体エフェクター機能を改変するための、Ｆｃ部分におけるアミノ酸残基の置換は、当技術分野で公知である（米国特許第５，６４８，２６０号および第５，６２４，８２１号）。抗体のＦｃ部分は、幾つかの重要なエフェクター機能、例えばサイトカイン誘導、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）ならびに抗体および抗原−抗体複合体の半減期／クリアランス速度をもたらす。幾つかの場合には、これらのエフェクター機能は治療用抗体に望ましいが、他の場合には、治療目的によっては、不必要または更には有害である可能性があるであろう。あるヒトＩｇＧイソタイプ、特にＩｇＧ１およびＩｇＧ３は、それぞれＦｃγＲおよび補体Ｃ１ｑへの結合によりＡＤＣＣおよびＣＤＣをもたらす。新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）は、抗体の循環半減期を決定する極めて重要な成分である。更にもう１つの実施形態においては、該抗体のエフェクター機能が改変されるように、少なくとも１つのアミノ酸残基が該抗体の定常領域、例えば該抗体のＦｃ領域において置換されている。
【０１０５】
１つの実施形態は、標識された結合性タンパク質を提供し、ここで、抗体またはその抗原結合性部分は誘導体化されており、または別の機能性分子（例えば、別のペプチドまたはタンパク質）に連結されている。例えば、標識された結合性タンパク質は、抗体もしくはその抗原結合性部分を（化学的カップリング、遺伝的融合、非共有結合などにより）１以上の他の分子、例えば別の抗体（例えば、二重特異性抗体またはジアボディ）、検出可能な物質、細胞毒性物質、医薬物質、および／または該抗体もしくはその抗原結合性部分の、別の分子（例えば、ストレプトアビジンコア領域またはポリヒスチジンタグ）との結合を媒介しうるタンパク質もしくはペプチドに機能的に連結させることにより誘導されうる。
【０１０６】
抗体または抗原結合性部分が誘導体化される場合に使用されうる有用な検出可能な物質には、蛍光化合物が含まれる。典型的な蛍光検出可能物質には、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、５−ジメチルアミン−１−ナフタレンスルホニルクロリド、フィコエリトリンなどが含まれる。抗体はまた、検出可能な酵素、例えばアルカリホスファターゼ、ホースラデッィシュペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼなどで誘導体化されうる。抗体が検出可能酵素で誘導体化される場合、それは、検出可能な反応産物を産生するために該酵素が利用する追加的な試薬を加えることにより検出される。例えば、該検出可能物質であるホースラディッシュペルオキシダーゼが存在する場合、過酸化水素およびジアミノベンジジンの添加は着色反応産物を与え、これは検出可能である。また、抗体はビオチンにより誘導体化されることが可能であり、アビジンまたはストレプトアビジン結合の間接的測定により検出されうる。
【０１０７】
もう１つは結晶化結合性タンパク質を提供する。もう１つの実施形態は、本明細書に開示されている完全抗ＴＮＦ−α抗体およびそのフラグメントの結晶、ならびにそのような結晶を含む製剤および組成物に関する。１つの実施形態においては、該結晶化結合性タンパク質は、該結合性タンパク質の可溶性対応物より長いインビボ半減期を有する。もう１つの実施形態においては、該結合性タンパク質は結晶化後に生物活性を保有する。
【０１０８】
結晶化結合性タンパク質は、当技術分野で公知の方法に従い、およびＰＣＴ公開番号ＷＯ  ０２／７２６３６に開示されているとおりに製造されうる。
【０１０９】
もう１つの実施形態はグリコシル化結合性タンパク質を提供し、ここで、抗体またはその抗原結合性タンパク質は１以上の炭水化物残基を含む。新生インビボタンパク質産物は、翻訳後修飾として公知の更なるプロセシングを受けうる。特に、糖（グリコシル）残基が酵素により付加されることがあり、この過程はグリコシル化として公知である。共有結合オリゴ糖側鎖を含有する生じるタンパク質はグリコシル化タンパク質または糖タンパク質として公知である。タンパク質グリコシル化は、関心のあるタンパク質のアミノ酸配列、および該タンパク質が発現される宿主細胞に左右される。生物は、その生物によって異なるグリコシル化酵素（例えば、グリコシルトランスフェラーゼおよびグリコシダーゼ）を産生することがあり、その生物によって異なる利用可能な基質（例えば、ヌクレオチド糖）を有しうる。そのような要因により、タンパク質グリコシル化パターンおよびグリコシル残基の組成は、個々のタンパク質が発現される宿主系によって異なりうる。有用なグリコシル残基には、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、ｎ−アセチルグルコサミンおよびシアル酸が含まれるが、これらに限定されるものではない。１つの実施形態においては、該グリコシル化結合性タンパク質は、グリコシル化パターンがヒトのものとなるように、グリコシル残基を含む。
【０１１０】
タンパク質グリコシル化が異なれば、それによって生じるタンパク質特性も異なりうることが、当業者に公知である。例えば、微生物宿主、例えば酵母において産生され、酵母内在性経路を利用してグリコシル化された治療用タンパク質の効力は、哺乳類細胞、例えばＣＨＯ細胞系において発現された同じタンパク質の場合と比較して低下しうる。そのような糖タンパク質はまた、ヒトにおいて免疫原性であることがあり、投与後のインビボ半減期の短縮を示しうる。ヒトおよび他の動物における特異的受容体は特異的グリコシル残基を認識し、血流からの該タンパク質の迅速な消失を促進しうる。他の悪影響には、タンパク質フォールディング、可溶性、プロテアーゼに対する感受性、トラフィッキング、輸送、区画化、分泌、他のタンパク質または因子による認識、抗原性またはアレルゲン性における変化が含まれうる。したがって、実施者は、グリコシル化の特異的組成およびパターン（例えば、ヒト細胞において、または意図される対象動物の種特異的細胞において産生されるものと同じ又は少なくとも類似したグリコシル化組成およびパターン）を有する治療用タンパク質を好みうる。
【０１１１】
宿主細胞のものと異なるグリコシル化タンパク質の発現は、異種グリコシル化酵素を発現するように該宿主細胞を遺伝的に修飾することにより達成されうる。当技術分野で公知の技術を用いて、実施者は、ヒトタンパク質グリコシル化を示す抗体またはその抗原結合性部分を製造することが可能である。例えば、ある酵母株は、天然に存在しないグリコシル化酵素を発現するように遺伝的に修飾されていて、その結果、これらの酵母株において産生されたグリコシル化タンパク質（糖タンパク質）は、動物細胞、特にヒト細胞の場合と同じタンパク質グリコシル化を示す（米国特許第７，４４９，３０８号および第７，０２９，８７２号）。
【０１１２】
更に、関心のあるタンパク質は、種々のグリコシル化酵素を発現するように遺伝的に操作された宿主細胞のライブラリーを使用して発現されることが可能であり、この場合、該ライブラリーの一員である宿主細胞は、変異グリコシル化パターンを有するその関心のあるタンパク質を産生する、と当業者により理解されるであろう。ついで実施者は、特定の新規グリコシル化パターンを有する、関心のあるタンパク質を選択し、単離することが可能である。１つの実施形態においては、特別に選択された新規グリコシル化パターンを有するタンパク質は、改善または改変された生物学的特性を示す。
【０１１３】
Ｄ．抗ＴＮＦ−α抗体の用途
該結合性タンパク質、例えば抗ヒトＴＮＦ−α抗体またはその抗原結合性部分は、ヒトＴＮＦ−αに結合するそれらの能力を考慮すると、当技術分野で利用可能な、抗体に基づく免疫検出系を用いて、ＴＮＦ−α（例えば、生物学的サンプル、例えば、全血、血清、血漿、尿、唾液または組織サンプルにおけるもの）を検出するために使用されうる。そのような免疫検出系には、免疫沈降、免疫ブロット法（ウエスタンブロット）、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、組織免疫組織化学法、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、サンドイッチイムノアッセイ、抗体に基づくアフィニティ法（例えば、アフィニティビーズ、アフィニティカラム）、免疫競合アッセイ、免疫チップアッセイ（シリコンチップに結合された結合性タンパク質）および蛍光標示式細胞分取（ＦＡＣＳ）が含まれるが、これらに限定されるものではない。幾つかの免疫検出系では、ＴＮＦ−α結合性タンパク質（またはその結合性部分）（またはその部分）は固体基体に結合される。これは、抗体分子を同じ固体基体に結合させるための当技術分野で利用可能な方法を用いて行われ、この場合、結合された結合性タンパク質は、個々の免疫検出系における使用中に、ヒトＴＮＦ−αへのその結合能を保有する。そのような固体基体には、セルロースに基づく濾紙（例えば、セルロース、ニトロセルロース、酢酸セルロース）、ナイロンフィルター、プラスチック表面（例えば、マイクロタイタープレート、抗体ディップスティック）、ガラス基体（例えば、フィルター、ビーズ、スライド、ガラスウール）、重合体粒子（例えば、アガロース、ポリアクリルアミド）およびシリコンチップが含まれるが、これらに限定されるものではない。例えば、インビトロのサンプル（例えば、生物学的サンプル、例えば、全血、血清、血漿、組織、尿、唾液、組織生検）中のＴＮＦ−αの存在を検出するための方法において、免疫検出系が使用されうる。そのような方法は、疾患または障害、例えば免疫細胞関連障害を診断するために用いられうる。該方法は、（ｉ）試験サンプルまたは対照サンプルを、本明細書に記載されているＴＮＦ−α結合性タンパク質またはそのＴＮＦ−α結合性部分と接触させ、（ｉｉ）該試験サンプル中または該対照サンプル中の該抗ＴＮＦ−α結合性タンパク質（またはその結合性部分）とＴＮＦ−αとの複合体の形成を検出することを含み、ここで、該対照サンプルと比較した場合（またはより早い時点で採取された別の試験サンプル中の該複合体の形成と比較した場合）の、該試験サンプル中の該複合体の形成の統計的に有意な変化は、該サンプル中のＴＮＦ−αの存在を示す。
【０１１４】
もう１つの例としては、インビボ（例えば、被験者におけるインビボイメージング）においてヒトＴＮＦ−αの存在を検出するための方法が用いられうる。該方法は、疾患または障害、例えばＴＮＦ−α関連障害を診断するために用いられうる。該方法は、（ｉ）本明細書に記載されているＴＮＦ−α結合性タンパク質またはそのＴＮＦ−α結合性部分を、ＴＮＦ−αへの該結合性タンパク質またはそのＴＮＦ−α結合性部分の結合を可能にする条件下、試験対象（被験者）または対照対象に投与し、（ｉｉ）該試験サンプル中または該対照サンプル中の該結合性タンパク質またはその結合性部分とＴＮＦ−αとの複合体の形成を検出することを含み、ここで、該対照対象と比較した場合（またはより早い時点での該試験対象における該複合体の形成と比較した場合）の、該試験対象における該複合体の形成の統計的に有意な変化は、ＴＮＦ−αの存在を示す。
【０１１５】
サンプル（例えば、生物学的サンプル）中のＴＮＦ−αを検出するための方法は、サンプルを、本明細書に記載されているＴＮＦ−α結合性タンパク質（またはそのＴＮＦ−α結合性部分）と接触させ、ＴＮＦ−αに結合した該結合性タンパク質（またはその結合性部分）または未結合の結合性タンパク質（または未結合のその結合性部分）を検出し、それにより、該サンプル中のＴＮＦ−αを検出することを含む。結合した又は未結合の結合性タンパク質（またはその部分）の検出を促進するために、該結合性タンパク質（またはその部分）は、検出可能な物質で直接的または間接的に標識される。そのような検出可能な物質は当技術分野で公知であり、限定的なものではないが、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質および放射性物質を包含する。適当な酵素の例には、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ｂ−カラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが含まれる。適当な補欠分子族複合体の例には、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが含まれる。適当な発光物質の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンが含まれる。発光物質の一例にはルミノールが含まれる。適当な放射性物質の例には、放射性同位体３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏおよび１５３Ｓｍが含まれる。
【０１１６】
該結合性タンパク質を標識する代わりに、検出可能な物質で標識された組換えヒト（ｒｈ）ＴＮＦ−α標準物および未標識のＴＮＦ−α結合性タンパク質を使用する競合イムノアッセイにより、サンプル（例えば、生物学的流体）中でヒトＴＮＦ−αをアッセイすることが可能である。このアッセイにおいては、該サンプル、該標識ｒｈＴＮＦ−α標準物および該ＴＮＦ−α結合性タンパク質を一緒にし、該未標識結合性タンパク質に結合した標識ｒｈＴＮＦ−α標準物の量を決定する。該サンプル中のヒトＴＮＦ−αの量は、該抗ＴＮＦ−α結合性タンパク質に結合した標識ｒｈＴＮＦ−α標準物の量に反比例する。同様に、ヒトＴＮＦ−αはまた、検出可能な物質で標識されたｒｈＴＮＦ−α標準物および未標識の抗ＴＮＦ−α結合性タンパク質を使用する競合イムノアッセイにより、サンプルにおいてアッセイされうる。
【０１１７】
１つの実施形態においては、該抗体および抗原結合性部分はインビトロおよびインビボの両方においてヒトＴＮＦ−α活性を中和しうる。したがって、そのような結合性タンパク質は、例えば、ｈＴＮＦ−αを含有する細胞培養において、またはヒト対象において、または抗体が交差反応するＴＮＦ−αを有する他の哺乳類対象において、ＴＮＦ−α活性を抑制するために使用されうる。１つの実施形態は、ｈＴＮＦ−α活性が抑制されるように、ｈＴＮＦ−αを抗体または抗原結合性部分と接触させることを含む、ｈＴＮＦ−α活性を抑制するための方法を提供する。例えば、ｈＴＮＦ−αを含有する又は含有する疑いのある細胞培養において、培地内のｈＴＮＦ−α活性を抑制するために、抗体または抗原結合性部分を該培地に加えることが可能である。
【０１１８】
もう１つの実施形態は、好ましくは、ＴＮＦ−α活性が有害である疾患または障害に罹患している対象から、対象におけるｈＴＮＦ−α活性を低減するための方法を提供する。そのような疾患または障害に罹患している対象におけるＴＮＦ−α活性を低減するための方法を提供し、該方法は、該対象におけるＴＮＦ−α活性が低減するように、抗体または抗原結合性部分を該対象に投与することを含む。もう１つの実施形態においては、該ＴＮＦ−αはヒトＴＮＦ−αであり、該対象はヒト対象である。あるいは、該対象は、抗体が結合しうるＴＮＦ−αを発現する哺乳動物でありうる。更にまた、該対象は、（例えば、ＴＮＦ−αの投与により、またはＴＮＦ−αトランスジーンの発現により）ＴＮＦ−αが導入された哺乳動物でありうる。結合性タンパク質は治療目的でヒト対象に投与されうる。更に、結合性タンパク質は、該結合性タンパク質が結合しうるＴＮＦ−αを発現する非ヒト哺乳動物に獣医学的目的で又はヒト疾患の動物モデルとして投与されうる。後者に関しては、そのような動物モデルは、抗体の治療効力の評価（例えば、投与量および投与時間経過の試験）に有用でありうる。
【０１１９】
「ＴＮＦ−α活性が有害である障害」なる語は、該障害に罹患している対象におけるＴＮＦ−αの存在が該障害の病態生理を引き起こすこと又は該障害の悪化に寄与する要因であることが示されている又はその疑いのある疾患および他の障害を含むと意図される。したがって、ＴＮＦ−α活性が有害である障害は、ＴＮＦ−α活性の低減が該障害の症状および／または進行を軽減すると予想される障害である。そのような障害は、例えば、該障害に罹患している対象の生物学的流体中のＴＮＦ−αの濃度の増加（例えば、該対象の血清、血漿、滑液などにおけるＴＮＦ−αの濃度の増加）により実証されることが可能であり、これは、例えば、本明細書に記載されている抗ＴＮＦ−α結合性タンパク質を使用して検出されうる。該抗体で治療されうる障害の非限定的な例には、該結合性タンパク質の医薬組成物に関して後記の節に記載されている障害が含まれる。
【０１２０】
Ｄ．医薬組成物
結合性タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合性部分と、医薬として許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。抗体を含む医薬組成物は、障害もしくはその１以上の症状の診断、検出、モニター、予防、抑制、治療、処置もしくは改善または研究（これらに限定されるものではない）において使用される。特定の実施形態においては、組成物は１以上の結合性タンパク質を含む。もう１つの実施形態においては、該医薬組成物は、１以上の結合性タンパク質、およびＴＮＦ−α活性が有害である障害を治療するための抗体以外の１以上の予防用または治療用物質を含む。更にもう１つの実施形態においては、障害またはその１以上の症状の予防、治療、処置または改善において有用であることが知られている又はそれらにおいて使用されたことがある若しくは現在使用されている予防用または治療用物質。これらの実施形態においては、該組成物は更に、担体、希釈剤または賦形剤を含みうる。
【０１２１】
該結合性タンパク質は、対象への投与に適した医薬組成物中に配合されうる。典型的には、該医薬組成物は、結合性タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合性部分と、医薬として許容される担体とを含む。「医薬として許容される担体」なる語は、生理的に適合しうる全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌および抗真菌物質、等張化および吸収遅延剤などを含む。医薬として許容される担体の例には、水、塩類液、リン酸緩衝食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどの１以上およびそれらの組合せが含まれる。等張化剤、例えば糖、多価アルコール、例えばマンニトール、ソルビトールまたは塩化ナトリウムを該組成物中に加えることが好ましいかもしれない。医薬として許容される担体は更に、該抗体またはその抗原結合性部分の貯蔵寿命または有効性を増大させる少量の補助物質、例えば湿潤又は乳化剤、保存剤またはバッファーを含みうる。
【０１２２】
種々の運搬系が公知であり、１以上の結合性タンパク質、あるいは１以上の抗体と、障害またはその１以上の症状の予防、処理、治療または改善に有用な予防用または治療用物質との組合せを投与するために使用可能であり、例えば、リポソーム中の封入、微粒子、マイクロカプセル、該抗体または抗体フラグメントを発現しうる組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシス（ＷｕおよびＷｕ（１９８７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２）、レトロウイルスまたは他のベクターの一部としての核酸の構築などが挙げられる。予防用または治療用物質の投与方法には、非経口投与（例えば、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内および皮下）、硬膜外投与、腫瘍内投与および粘膜投与が含まれるが、これらに限定されるものではない（米国特許第６，０１９，９６８号、第５，９８５，３２０号、第５，９８５，３０９号、第５，９３４，２７２号、第５，８７４，０６４号、第５，８５５，９１３号、第５，２９０，５４０号および第４，８８０，０７８号；ならびにＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９２／１９２４４、ＷＯ  ９７／３２５７２、ＷＯ  ９７／４４０１３、ＷＯ  ９８／３１３４６およびＷＯ  ９９／６６９０３）。１つの実施形態においては、結合性タンパク質、併用療法または組成物は、Ａｌｋｅｒｍｅｓ  ＡＩＲ（登録商標）肺薬物運搬技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）を用いて投与される。該予防用または治療用物質は、いずれかの簡便な経路により、例えば、注入またはボーラス注射により、上皮または粘膜皮膚裏打ち層（例えば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜など）を介した吸収により投与されることが可能であり、他の生物学的に活性な物質と共に投与されうる。投与は全身的または局所的でありうる。
【０１２３】
特定の実施形態においては、該予防用または治療用物質を、治療を要する領域に、例えば局所的注入、注射またはインプラントにより、局所的に投与することが望ましいかもしれない。インプラントは、例えばシアラスチック（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜、重合体、繊維性マトリックス（例えば、Ｔｉｓｓｕｅｌ（登録商標））またはコラーゲンマトリックスのような膜およびマトリックスを含む多孔性または非孔性物質のものでありうる。１つの実施形態においては、障害またはその症状を予防、治療、処置および／または改善するために、対象の罹患領域に局所的に１以上の抗体の有効量を投与する。もう１つの実施形態においては、障害またはその症状を予防、治療、処置および／または改善するために、対象の罹患領域に局所的に、１以上の抗体の有効量を、結合性タンパク質以外の１以上の療法（例えば、１以上の予防用または治療用物質）の有効量と組合せて投与する。
【０１２４】
もう１つの実施形態においては、該予防用または治療用物質はコントロールリリース（制御放出）または徐放系において運搬されうる。１つの実施形態においては、コントロールリリースまたは徐放を達成するためにポンプが使用されうる（例えば、Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３；Ｓｅｆｔｏｎ（１９８７）ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１−２４０；Ｂｕｃｈｗａｌｄら（１９８０）Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７−５１６；Ｓａｕｄｅｋら（１９８９）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４−５７９）。もう１つの実施形態においては、該療法のコントロールリリースまたは徐放を達成するために、重合体（高分子）物質が使用されうる（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，（ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ編）（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，１９８４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎおよび  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，（ＳｍｏｌｅｎおよびＢａｌｌ編）（Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８４）；ＬａｎｇｅｒおよびＰｅｐｐａｓ（１９８３）Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．Ｃ２３：６１−１２６を参照されたい；また、Ｌｅｖｙら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０−１９２；Ｄｕｒｉｎｇら（１９８９）Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．  ２５：３５１−３５６；Ｈｏｗａｒｄら（１９８９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５−１１２）；米国特許第５，６７９，３７７号、第５，９１６，５９７号、第５，９１２，０１５号、第５，９８９，４６３号および第５，１２８，３２６号；ならびにＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９９／１５１５４およびＷＯ  ９９／２０２５３を参照されたい）。徐放製剤において使用される重合体の例には、限定的なものではないが以下のものが含まれる：ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリラート）、ポリ（メチルメタクリラート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン−コ−ビニルアセタート）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）、およびポリオルトエステル。１つの実施形態においては、徐放製剤において使用される重合体は不活性であり、浸出性不純物を含有せず、貯蔵時に安定であり、無菌であり、生分解性である。更にもう１つの実施形態においては、コントロールリリースまたは徐放系は予防または治療標的に接近して配置され、したがって、全身投与量のごく一部を要するに過ぎない（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，Ｊ．Ｍ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  ６，Ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｖｏｌ．ＩＩ，Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓおよび  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，（ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ編）（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，１９８４），ｐｐ．���１５−１３８を参照されたい）。
【０１２５】
コントロールリリース系はＬａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３による総説において考察されている。１以上の治療用物質を含む徐放製剤を製造するためには、当業者に公知のいずれかの技術が用いられうる。例えば、米国特許第４，５２６，９３８号，ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９１／０５５４８およびＷＯ  ９６／２０６９８；ならびにＮｉｎｇら（１９９６）Ｒａｄｉｏｔｈｅｒ．Ｏｎｃｏｌ．３９：１７９−１８９；Ｓｏｎｇら（１９９６）ＰＤＡ  Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．５０：３７２−３７７；Ｃｌｅｅｋら（１９９７）Ｐｒｏｃｅｅｄ  Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：８５３−８５４；ならびにＬａｍら（１９９７）Ｐｒｏｃｅｅｄ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：７５９−７６０を参照されたい。
【０１２６】
該組成物が、予防用または治療用物質をコードする核酸である、特定の実施形態においては、該核酸は、そのコード化予防用または治療用物質の発現を促進するためにインビボで投与されうる。これは、適当な核酸発現ベクターの一部としてそれを構築し、それが細胞内状態となるようにそれを投与することにより行われうる。該投与は、例えば、レトロウイルスベクター（米国特許第４，９８０，２８６号を参照されたい）の使用により、あるいは直接注射により、あるいは微粒子射出（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ，Ｄｕｐｏｎｔ）または脂質もしくは細胞表面受容体での被覆またはトランスフェクト化剤の使用により、あるいは核に進入することが知られているホメオボックス様ペプチド（例えば、Ｊｏｌｉｏｔら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：１８６４−１８６８を参照されたい）に連結させてそれを投与することにより行われうる。あるいは、核酸は、細胞内および宿主細胞ＤＮＡ内に、相同組換えによる発現により導入されうる。
【０１２７】
医薬組成物は、その意図される投与経路に適合するように製剤化される。投与経路の例には、非経口、例えば静脈内、皮内、皮下、経口、鼻腔内（例えば、吸入）、経皮（例えば、局所）、経粘膜および直腸投与が含まれるが、これらに限定されるものではない。特定の実施形態においては、該組成物は、ヒトへの静脈内、皮下、筋肉内、経口、鼻腔内または局所投与に適した医薬組成物として、通常の方法に従い製剤化される。典型的には、静脈内投与用の組成物は無菌等張性水性バッファー中の溶液である。必要に応じて、該組成物は、安定剤、および注射部位の疼痛を軽減するための例えばリグノカムネ（ｌｉｇｎｏｃａｍｎｅ）のような局所麻酔薬をも含みうる。
【０１２８】
該組成物を局所投与する場合、該組成物は、軟膏剤、クリーム剤、経皮パッチ、ローション剤、ゲル剤、シャンプー、噴霧剤、エアゾール剤、溶液剤（水剤）、乳剤の形態または当業者によく知られた他の形態で製剤化されうる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓおよび  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，１９ｔｈ  ｅｄ．，（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，１９９５）を参照されたい。非噴霧可能局所剤形の場合、局所適用に適しており好ましくは水より大きな粘性率を有する担体または１以上の賦形剤を含む粘性ないし半固体または固体形態が典型的に使用される。他の適当な製剤には、懸濁剤、散剤、リニメント剤、ロウ剤などが含まれるが、これらに限定されるものではない。１つの実施形態においては、そのような製剤は滅菌され、または例えば浸透圧のような種々の特性に影響を及ぼすための補助物質（例えば、保存剤、安定剤、湿潤剤、バッファーまたは塩）と混合される。他の適当な局所剤形には、噴霧可能なエアゾール剤が含まれ、この場合、例えば固体または液体不活性担体と組合された有効成分が、加圧揮発性物質（例えば、気体プロペラント、例えばＦＲＥＯＮ（登録商標））との混合物として、またはスクィーズボトル内に充填される。所望により、医薬組成物および剤形に保湿剤または湿潤剤も加えられうる。そのような追加的成分の例は当技術分野でよく知られている。
【０１２９】
該方法が組成物の鼻腔内投与を含む場合、該組成物は、エアゾール形態、噴霧剤、ミストまたは滴剤の形態で製剤化されうる。特に、予防用または治療用物質は、適当なプロペラント（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適当な気体）の使用により、加圧パックまたはネブライザーから、エアゾール噴霧剤の形態で簡便に運搬されうる。加圧エアゾールの場合、一定量を運搬するための弁を設けることにより投与単位が定められうる。吸入器または通気器において使用されるカプセル剤およびカートリッジ剤（例えばゼラチンから構成されるもの）は、該化合物と適当な粉末基剤（例えば、ラクトースまたはデンプン）との粉末混合物を含有するように製剤化されうる。
【０１３０】
該方法が経口投与を含む場合、組成物は、錠剤、カプセル剤、カシェ剤、ゲルカップ、溶液剤（水剤）、懸濁剤などの形態で経口投与用に製剤化されうる。錠剤またはカプセル剤は、医薬として許容される賦形剤、例えば、結合剤（例えば、前ゼラチン化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、充填剤（例えば、ラクトース、微晶質セルロースまたはリン酸水素カルシウム）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ）、崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプンまたはナトリウムデンプングリコラート）、または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）を使用して、通常の手段により製造されうる。錠剤は、当技術分野でよく知られた方法によりコーティングされうる。経口投与用の液体製剤は溶液剤、シロップ剤または懸濁剤（これらに限定されるものではない）の形態をとりうる。あるいはそれらは、使用前に水または他の適当なビヒクルで還元（再構成）するための乾燥製品として提供されうる。そのような液体製剤は、医薬として許容される添加剤、例えば、懸濁化剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または水素化可食脂肪）、乳化剤（例えば、レシチンまたはアカシア）、非水性ビヒクル（例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコールまたは分別植物油）および保存剤（例えば、メチルまたはプロピル−ｐ−ヒドロキシ安息香酸またはソルビン酸）を使用して、通常の手段により製造されうる。該製剤は、適当な場合には、バッファー塩、香味剤、着色剤および甘味剤をも含有しうる。経口投与用の製剤は、適切には、予防用または治療用物質の遅延放出、コントロールリリースまたは徐放用に製剤化されうる。
【０１３１】
該方法は、エアゾール化剤が配合された組成物の、例えば吸入器またはネブライザーの使用による肺投与を含みうる。例えば、米国特許第６，０１９，９６８号、第５，９８５，３２０号、第５，９８５，３０９号、第５，９３４，２７２号、第５，８７４，０６４号、第５，８５５，９１３号、第５，２９０，５４０号および第４，８８０，０７８号；ならびにＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９２／１９２４４、ＷＯ  ９７／３２５７２、ＷＯ  ９７／４４０１３、ＷＯ  ９８／３１３４６およびＷＯ  ９９／６６９０３を参照されたい。特定の実施形態においては、抗体、併用療法および／または組成物は、Ａｌｋｅｒｍｅｓ  ＡＩＲ（登録商標）肺薬物運搬技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）を用いて投与される。
【０１３２】
該方法は、注射（例えば、ボーラス注射または連続的注入）による非経口投与用に製剤化された組成物の投与を含みうる。注射用製剤は、添加された保存剤を含有する単位投与形（例えば、アンプル内または多用量容器内）として提供されうる。該組成物は油性または水性ビヒクル中の懸濁剤、溶液剤または乳剤のような形態をとることが可能であり、懸濁化剤、安定剤および／または分散剤のような製剤化用物質を含有しうる。あるいは、該有効成分は、使用前に適当なビヒクル（例えば、無菌発熱物質非含有水）で還元（再構成）するための粉末形態でありうる。
【０１３３】
該方法は更に、デポ製剤として製剤化された組成物の投与を含みうる。そのような長時間作用性製剤は移植（例えば、皮下または筋肉内）または筋肉内注射により投与されうる。したがって、例えば、該組成物は、適当な重合体物質または疎水性物質（例えば、許容される油中のエマルションとしてのもの）またはイオン交換樹脂で、または難溶性誘導体（例えば、難溶性塩）として製剤化されうる。
【０１３４】
該方法は、中性または塩形態として製剤化された組成物の投与を含む。医薬として許容される塩には、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などから誘導されるもののような陰イオンと共に形成されるもの、およびナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどから誘導されるもののような陽イオンと共に形成されるものが含まれる。一般に、組成物の成分は、別々に、または単位投与形として、例えば、活性物質の量を表示しているアンプルまたは薬袋のような密閉容器内の凍結乾燥粉末または無水濃縮物として、一緒に混合されて供給される。投与方法が注入である場合には、組成物は、医薬等級の無菌水または塩類液を含有する注入ボトルで分注されうる。投与方法が注射によるものである場合には、投与前に成分が混合されうるように、注射用無菌水または塩類液のアンプルが提供されうる。
【０１３５】
１つの実施形態においては、１以上の該予防用もしくは治療用物質または医薬組成物は、該物質の量を表示しているアンプルまたは薬袋のような密閉容器内にパッケージング（包装）される。１つの実施形態においては、１以上の該予防用もしくは治療用物質または医薬組成物は密閉容器内の凍結乾燥粉末または無水濃縮物として供給され、対象への投与のための適当な濃度に（例えば、水または塩類液）で還元（再構成）されうる。１つの実施形態においては、１以上の該予防用もしくは治療用物質または医薬組成物は、少なくとも約５ｍｇ、少なくとも約１０ｍｇ、少なくとも約１５ｍｇ、少なくとも約２５ｍｇ、少なくとも約３５ｍｇ、少なくとも約４５ｍｇ、少なくとも約５０ｍｇ、少なくとも約７５ｍｇまたは少なくとも約１００ｍｇの単位投与量で、密閉容器内の無菌凍結乾燥粉末として供給される。該凍結乾燥予防用もしくは治療用物質または医薬組成物は、その元の容器内で２℃〜８℃で貯蔵されるべきであり、該予防用もしくは治療用物質または医薬組成物は、還元（再構成）された後、約１週間以内、約５日以内、約７２時間以内、約４８時間以内、約２４時間以内、約１２時間以内、約６時間以内、約５時間以内、約３時間以内または約１時間以内に投与されるべきである。もう１つの実施形態においては、１以上の該予防用もしくは治療用物質または医薬組成物は、該物質の量および濃度を表示している密閉容器内の液体形態で供給される。１つの実施形態においては、該投与組成物の液体形態は、少なくとも約０．２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約２．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約７５ｍｇ／ｍｌまたは少なくとも約１００ｍｇ／ｍｌで密閉容器内で供給される。該液体形態は、その元の容器内で２℃〜８℃で貯蔵されるべきである。
【０１３６】
該結合性タンパク質は、非経口投与に適した医薬組成物中に含有されうる。１つの態様においては、該結合性タンパク質は、約０．１〜約２５０ｍｇ／ｍｌの抗体を含有する注射可能溶液として製造される。該注射可能溶液は、フリントまたは琥珀色バイアル、アンプルまたは前充填シリンジ内の液体または凍結乾燥剤形から構成されうる。該バッファーは、最適には約５〜約１０ｍＭの、ｐＨ５．０〜７．０（最適にはｐＨ約６．０）のＬ−ヒスチジン（約１〜約５０ｍＭ）でありうる。他の適当なバッファーには、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウムが含まれるが、これらに限定されるものではない。該溶液の毒性を改変するために、約０〜約３００ｍＭ（例えば、液体剤形では約１５０ｍＭ）の濃度の塩化ナトリウムが使用されうる。凍結乾燥剤形の場合、凍結保護剤、主に、約０〜約１０％  スクロース（例えば、約０．５〜約１．０％）が含まれうる。他の適当な凍結保護剤には、トレハロースおよびラクトースが含まれる。凍結乾燥剤形の場合、増量剤、主に、約１〜約１０％  マンニトール（例えば、約２〜約４％）が含まれうる。液体および凍結乾燥剤形の両方において、安定剤、主に、約１〜約５０ｍＭ  Ｌ−メチオニン（最適には約５〜約１０ｍＭ）が使用されうる。他の適当な増量剤として、グリシン、アルギニンが、約０〜約０．０５％  ポリソルベート−８０（最適には約０．００５〜約０．０１％）として含まれうる。追加的な界面活性剤には、ポリソルベート２０およびＢＲＩＪ界面活性剤が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０１３７】
該組成物は種々の形態でありうる。これらには、例えば、液体、半固体および固体剤形、例えば、液体溶液（例えば、注射可能および注入可能な溶液）、分散剤（分散液）または懸濁剤、錠剤、丸剤、散剤、リポソームおよび坐剤が含まれる。該形態は、意図される投与方法および治療用途に左右される。典型的な組成物は、注射可能または注入可能な溶液、例えば、他の抗体でのヒトの受動免疫に使用されるものに類似した組成物の形態である。１つの実施形態においては、投与方法は非経口的（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内）である。１つの実施形態においては、該抗体は静脈内注入または注射により投与される。もう１つの実施形態においては、該抗体は筋肉内または皮下注射により投与される。
【０１３８】
治療用組成物は、典型的には、無菌であり、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならない。該組成物は、溶液、マイクロエマルション、分散液、リポソームまたは高い薬物濃度に適した他の秩序だった構造として製剤化されうる。無菌の注射可能溶液は、必要量の該活性化合物（例えば、抗体またはその抗原結合性部分）を、必要に応じて前記成分の１つ又は組合せと共に、適当な溶媒中に含有させ、ついで濾過滅菌を行うことにより製造されうる。一般に、分散液は、該活性化合物を、基礎分散媒および前記のものからの必要な他の成分を含有する無菌ビヒクル中に含有させることにより製造される。無菌の注射可能溶液の製造のための無菌凍結乾燥粉末の場合には、典型的な製造方法は、有効成分およびいずれかの追加的な所望の成分の粉末を、予め滅菌濾過されたその溶液から与える真空乾燥および噴霧乾燥である。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングの使用により、分散液の場合には、必要な粒径の維持により、および界面活性剤の使用により維持されうる。注射可能組成物の持続的吸収は、吸収を遅らせる物質、例えばモノステアラート塩およびゼラチンを該組成物中に含有させることによりもたらされうる。
【０１３９】
多数の治療用途の場合、投与の典型的な経路／方法は皮下注射、静脈内注射または注入であるが、該抗体および抗原結合性部分は、当技術分野で公知の種々の方法により投与されうる。当業者により理解されるとおり、投与の経路および／または方法は、所望の結果に応じて様々なものとなるであろう。ある実施形態においては、該活性化合物は、インプラント、皮内パッチおよびマイクロカプセル化運搬系を含むコントロールリリース製剤のように、該化合物の迅速な放出を防ぐ担体を使用して製造されうる。生分解性生体適合性重合体、例えばエチレンビニルアセタート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸が使用されうる。そのような製剤の多数の製造方法は特許されており、または当業者に一般に公知である。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄおよび  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８を参照されたい。
【０１４０】
ある実施形態においては、抗体またはその抗原結合性部分は、例えば不活性希釈剤または同化可能可食担体と共に経口投与されうる。該化合物（および所望により他の成分）はまた、硬もしくは軟殻ゼラチンカプセル内に封入され、または錠剤へと圧縮され、または対象の食事に直接加えられうる。経口治療投与の場合、該化合物は賦形剤と共に配合され、摂食可能な錠剤、バッカル錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウエファーなどの形態で使用されうる。非経口投与以外で化合物を投与するためには、該化合物を、その不活性化を防ぐ物質でコーティングすること、または該化合物を該物質と共投与することが必要かもしれない。
【０１４１】
補助活性化合物も該組成物中に配合されうる。ある実施形態においては、結合性タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合性部分）は、ＴＮＦ−α活性が融合である障害を治療するのに有用である１以上の追加的治療用物質と共配合される、および／または該追加的治療用物質と共投与される。例えば、抗ｈＴＮＦ−α抗体または抗原結合性部分は、他の標的に結合する１以上の追加的抗体（例えば、他のサイトカインに結合する、または細胞表面分子に結合する抗体）と共配合されること、および／または該追加的抗体と共投与されることが可能である。更に、１以上の抗体は前記治療用物質の２以上と組合せて使用されうる。そのような併用（組合せ）療法は、有利には、投与される治療用物質の、より低い投与量を用いて、種々の単独療法に伴う考えられうる毒性または合併症を避けることが可能である。
【０１４２】
ある実施形態においては、ＴＮＦ−αに対する抗体またはそのフラグメントは、当技術分野で公知の、半減期を延長するビヒクルに連結される。そのようなビヒクルには、Ｆｃドメイン、ポリエチレングリコールおよびデキストランが含まれるが、これらに限定されるものではない。そのようなビヒクルは、例えば米国特許第６，６６０，８４３号および公開ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９９／２５０４４に記載されている。
【０１４３】
特定の実施形態においては、結合性タンパク質または別の予防用もしくは治療用物質のポリペプチドの１以上をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子は、遺伝子治療により障害またはその１以上の症状を治療、予防、処置または改善するために投与される。遺伝子治療は、対象への発現核酸または発現可能核酸の投与により行われる療法を意味する。この実施形態においては、該核酸は、予防または治療効果をもたらす結合性タンパク質または治療用もしくは予防用物質の、そのコード化結合性ポリペプチドを産生する。
【０１４４】
当技術分野で利用可能な遺伝子治療のための任意の方法が用いられうる。遺伝子治療の方法の総説としては、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら（１９９３）Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍ．１２：４８８−５０５；ＷｕおよびＷｕ（１９９１）Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ３：８７−９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ（１９９３）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：９２６−９３２；ならびにＭｏｒｇａｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ（１９９３）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｃ．（１９９３）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１１（５）：１５５を参照されたい。用いられうる組換えＤＮＡ技術の当技術分野で一般に公知の方法はＡｕｓｕｂｅｌら（編）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９３）；およびＫｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒおよび  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９０）に記載されている。遺伝子治療の種々の方法の詳細な説明はＵＳ  ２００５／００４２６６４に開示されている。
【０１４５】
ＴＮＦ−αは、例えば以下のような、免疫および炎症因子が関わる種々の疾患に関連した病理において役割を果たしている：自己免疫疾患、特に炎症に関連したもの、例えばクローン病、乾癬（尋常性乾癬を含む）、関節炎（関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症または若年性特発性関節炎を含む）、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、強直性脊椎炎、糖尿病（インスリン依存性糖尿病または自己免疫性糖尿病を含む）、アレルギー、および自己免疫ブドウ膜炎。したがって、本発明における結合性タンパク質は、これらの疾患を治療するために使用されうる。もう１つの実施形態においては、該障害は呼吸障害；喘息；アレルギー性および非アレルギー性喘息；感染による喘息；呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染による喘息；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；気道炎症を伴う状態；好酸球増加症；線維症および過剰粘液産生；嚢胞性線維症；肺線維症；アトピー性障害；アトピー性皮膚炎；蕁麻疹；湿疹；アレルギー性鼻炎；アレルギー性胃腸炎；皮膚の炎症性および／または自己免疫状態；胃腸器官の炎症および／または自己免疫状態；炎症性腸疾患（ＩＢＤ）；潰瘍性大腸炎；肝臓の炎症および／または自己免疫状態；肝硬変；肝線維症；Ｂ型および／またはＣ型肝炎ウイルスによって引き起こされる肝線維症；強皮症；腫瘍または癌；肝細胞癌；神経膠芽腫；リンパ腫；ホジキンリンパ腫；ウイルス感染；細菌感染；寄生虫感染症；ＨＴＬＶ−１感染；防御１型免疫応答の発現の抑制、ワクチン接種中の防御１型免疫応答の発現の抑制、神経変性疾患、ニューロン再生および脊髄損傷である。
【０１４６】
ＴＮＦ−αはまた、免疫および炎症因子が関わる種々の疾患に関連した病理において役割を果たしている可能性がある。これらの疾患には以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：後天性免疫不全症候群；後天性免疫不全関連疾患；後天性悪性貧血；急性冠状動脈症候群；急性および慢性疼痛（種々の形態の疼痛）；急性特発性多発性神経炎；臓器移植に関連した急性免疫疾患；臓器移植に関連した急性または慢性免疫疾患；急性炎症性脱髄性多発神経根障害；急性虚血；急性肝疾患；急性リウマチ熱；急性横断性脊髄炎；アジソン病；成人（急性）呼吸窮迫症候群；成人スティル病；アルコール性肝硬変；アルコール性肝障害；アレルギー疾患；アレルギー；脱毛症；円形脱毛症；アルツハイマー病；アナフィラキシー；強直性脊椎炎；強直性脊椎炎関連肺疾患；抗リン脂質抗体症候群；再生不良性貧血；動脈硬化症；関節症；喘息；アテローム病／動脈硬化症；アテローム性動脈硬化症；アトピー性アレルギー；アトピー性湿疹；アトピー性皮膚炎；萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症；自己免疫性水疱性疾患；自己免疫性皮膚炎；自己免疫性糖尿病；連鎖球菌の感染に関連した自己免疫障害；自己免疫性腸疾患；自己免疫性溶血性貧血；自己免疫性肝炎；自己免疫性難聴；自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）；自己免疫媒介性低血糖症；自己免疫性心筋炎；自己免疫性好中球減少症；自己免疫性発卵巣不全；自己免疫性血小板減少症（ＡＩＴＰ）；自己免疫性甲状腺疾患；自己免疫性ブドウ膜炎；閉塞性細気管支炎；ベーチェット病；眼瞼炎；気管支拡張症；水疱性類天疱瘡；悪液質；心血管疾患；破壊的抗リン脂質症候群；セリアック病；頸椎症；クラミジア、コレオサタティス（ｃｈｏｌｅｏｓａｔａｔｉｓ）；慢性活動性肝炎；慢性好酸球性肺炎；慢性疲労症候群；臓器移植に関連した慢性免疫疾患；慢性虚血；慢性肝疾患；慢性皮膚粘膜カンジダ症；瘢痕性類天疱瘡；多発性硬化症のリスクを伴う臨床孤立症候群（ＣＩＳ）；分類不能型原発性免疫不全症（分類不能型原発性低ガンマグロブリン血症）；間質性肺疾患に関連した結合組織疾患；結膜炎；クームス陽性溶血性貧血；小児発症性精神障害；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；クローン病；特発性自己免疫性肝炎；特発性線維化肺胞炎；涙嚢炎；うつ病；強皮症皮膚炎；皮膚筋炎；皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患；糖尿病性網膜症；糖尿病；拡張型心筋症；円盤状エリテマトーデス；椎間板ヘルニア；椎間板脱出；播種性血管内凝固；薬物誘発性肝炎；薬物誘発性間質性肺疾患；薬物誘発性免疫溶血性貧血；心内膜炎；子宮内膜症；眼内炎；腸炎性滑膜炎；上強膜炎；多形紅斑；重症多形紅斑；女性不妊症；線維症；線維性肺疾患；妊娠類天疱瘡；巨細胞性動脈炎（ＧＣＡ）；糸球体腎炎；甲状腺腫自己免疫甲状腺機能低下（橋本病）；グッドパスチャー症候群；痛風性関節炎；移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）；グレーブス病；Ｂ群連鎖球菌（ＢＧＳ）感染症；ギラン−バレー症候群（ＢＧＳ）；ヘモジデリン沈着関連肺疾患；枯草熱；心不全；溶血性貧血；ヘーノホ−シェーライン紫斑病；Ｂ型肝炎；Ｃ型肝炎；ヒューズ症候群；ハンチントン舞踏病；甲状腺機能亢進症；副甲状腺機能低下症；特発性白血球減少症；特発性血小板減���症；特発性パーキンソン病；特発性間質性肺炎；異常肝疾患；ＩｇＥ媒介性アレルギー；免疫性溶血性貧血；封入体筋炎；感染症；感染性眼炎症性疾患；炎症性腸疾患；炎症性脱髄性疾患；炎症性心疾患；炎症性腎疾患；インスリン依存性糖尿病；間質性肺炎；ＩＰＦ／ＵＩＰ；虹彩炎；若年性慢性関節炎；若年性悪性貧血；若年性関節リウマチ（ＪＲＡ）；川崎病；角膜炎；眼球乾燥症候群；クスマウル疾患またはクスマウル−マイヤー病；ランドリー麻痺；ランゲルハンス細胞組織球症；線状ＩｇＡ疾患；網状皮斑；ライム関節炎；リンパ球浸潤性肺疾患；黄斑変性症；特発性男性不妊またはＮＯＳ；悪性疾患；顕微鏡的腎臓血管炎；顕微鏡的多発性血管炎；混合性結合組織疾患関連肺疾患；モルブス・ベクテレブ（Ｍｏｒｂｕｓ  Ｂｅｃｈｔｅｒｅｖ）；運動ニューロン障害；粘膜性類天疱瘡；多発性硬化症（すべてのサブタイプ：一次的進行性、二次的進行性、再発性寛解など）；多臓器不全；筋痛脳炎／慢性疲労症候群；重症筋無力症；骨髄異形成症候群；心筋梗塞；心筋炎；ネフローゼ症候群；神経根障害；神経障害；非アルコール性脂肪性肝炎；非Ａ非Ｂ型肝炎；視神経炎；臓器移植拒絶；変形性関節症；骨溶解；卵巣癌；卵巣機能不全；膵炎；寄生虫疾患；パーキンソン病；少数関節性ＪＲＡ；類天疱瘡；落葉状天疱瘡；尋常性天疱瘡；末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）；末梢血管疾患（ＰＶＤ）；末梢動脈疾患（ＰＡＤ）；水晶体生成性ブドウ膜炎；静脈炎；結節性多発性動脈炎（または結節性動脈周囲炎）；多発性軟骨炎；リウマチ性多発性筋痛；白毛症；多関節性ＪＲＡ；多内分泌腺不全症候群；多発性筋炎；Ｉ型多腺不全およびＩＩ型多腺不全；リウマチ性多発筋痛（ＰＭＲ）；感染後間質性肺疾患；炎症後間質性肺疾患；ポスト・ポンプ（ｐｏｓｔ  ｐｕｍｐ）症候群；早発卵巣不全；原発性胆汁性肝硬変；原発性粘液水腫；パーキンソン病；原発性硬化性胆管炎；原発性硬化性肝炎；原発性血管炎；前立腺および直腸癌および造血悪性疾患（白血病およびリンパ腫）；前立腺炎；乾癬；１型乾癬；２型乾癬；乾癬性関節炎；乾癬性関節症；結合組織疾患に続発する肺高血圧；結節性多発性動脈炎の肺症状；赤芽球ろう；原発性副腎不全；放射線線維症；反応性関節炎；ライター病；再発性視神経脊髄炎；腎疾患ＮＯＳ；再狭窄；関節リウマチ；関節リウマチ関連間質性肺疾患；リウマチ性心疾患；ＳＡＰＨＯ（滑膜炎、にきび、膿疱症、増殖症および骨炎）；サルコイドーシス；統合失調症；シュミット症候群；強皮症；続発性アミロイドーシス；ショック肺；強膜炎；坐骨神経痛；続発性副腎機能低下症；敗血症症候群；敗血症性関節炎；敗血性ショック；血清陰性関節症；シリコーン関連結合組織疾患；シェーグレン病関連肺疾患；シェーグレン症候群；スネドン‐ウィルキンソン皮膚病；精子自己免疫；脊椎関節症；脊椎炎強直症；スティーブンス−ジョンソン症候群（ＳＪＳ）；スティル病；脳卒中；交感性眼炎；全身性炎症応答症候群；全身性エリテマトーデス；全身性エリテマトーデス関連肺疾患；全身性硬化症；全身性硬化症関連間質性肺疾患；高安病／動脈炎；側頭動脈炎；Ｔｈ２型およびＴｈ１型タイプ媒介性疾患；甲状腺炎、毒素性ショック症候群；トキソプラズマ網膜炎；中毒性表皮壊死症；横断性脊髄炎；ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子１型受容体（ＴＮＦＲ）関連周期性症候群）；黒色表皮症を伴うＢ型インスリン抵抗性；１型アレルギー反応；１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性またはルポイド肝炎）；２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）；ＩＩ型糖尿病；潰瘍性大腸炎関節症；潰瘍性大腸炎；蕁麻疹、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）；ブドウ膜炎；血管炎びまん性肺疾患；血管炎、春季カタル；ウイルス性網膜炎；白斑；フォークト−小柳−原田症候群（ＶＫＨ症候群）；ウェゲナー肉芽腫症；滲出型黄斑変性；創傷治癒；エルシニアおよびサルモネラ関連関節症。
【０１４７】
ＴＮＦ−α結合性タンパク質またはその抗原結合性部分は、単独で、または例えば自己免疫および炎症疾患の治療に有用な追加的治療用物質と組合されて、そのような疾患を治療するために使用されうる。該結合性タンパク質またはその抗原結合性部分は、単独で、または追加的物質（例えば、治療用物質）組合されて使用されうる、と理解されるべきである。該追加的物質は、その意図される目的に基づいて、当業者により選択される。例えば、該追加的物質は、該抗体により治療されている疾患または状態を治療するために有用であると当技術分野で認識されている治療用物質でありうる。該追加的物質はまた、該治療用組成物に有益な特性を付与する物質（例えば、該組成物の粘度に影響を及ぼす物質）でありうる。
【０１４８】
該組合せは、本明細書に記載されているＴＮＦ−α結合性タンパク質またはその抗原結合性フラグメントおよび後記の少なくとも１つの追加的物質を含む。該組合せはまた、形成される組成物がその意図される機能を果たしうるような組合せであれば、２以上の追加的物質、例えば、２個または３個の追加的物質を含みうる。
【０１４９】
１つの実施形態においては、組合せは、ＴＮＦ−α結合性タンパク質またはその抗原結合性フラグメント、および以下のものに結合しうる抗体またはそのフラグメント：ヒトＩＬ−１２；ＰＧＥ２；ＬＰＡ；ＮＧＦ；ＣＧＲＰ；ＳｕｂＰ；ＲＡＧＥ；ヒスタミン；ヒスタミン受容体ブロッカー；ブラジキニン；ＩＬ−１アルファ；ＩＬ−１ベータ；ＶＥＧＦ；ＰＬＧＦ；メトトレキセート；コルチコステロイド；グルココルチコイド受容体モジュレーター；シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６または非ステロイド性抗炎症物質を含む。
【０１５０】
もう１つの実施形態においては、典型的な組合せは、本明細書に記載されているＴＮＦ−α結合性タンパク質またはその抗原結合性フラグメント、および非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、例えばイブプロフェンを含む。他の典型的な組合せは、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合性フラグメント、およびコルチコステロイド、例えばプレドニゾロンを含む。ステロイド使用の副作用は、該ＴＮＦ−α結合性タンパク質と組合せて、患者を治療する際に必要とされるステロイド用量を漸減させることにより軽減または除去されうる。抗体または抗体部分が組合されうる、関節リウマチに対する治療用物質の非限定的な例には、以下のものが含まれる：サイトカイン抑制性抗炎症薬（ＣＳＡＩＤ）；他のヒトサイトカインまたは増殖因子、例えばＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、インターフェロン、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦ、ＴＮＦファミリーメンバー、例えばＴＲＡＩＬ、ＦＡＳＬ、ＡＰＲＩＬなどの抗体またはアンタゴニスト、およびプロスタグランジン、例えばＰＧＥ２、Ｓ１Ｐ、ＬＰＡなどのような疾患の脂質メディエータに対する抗体。他の疾患メディエータには、スクレロスチン（ｓｃｌｅｒｏｓｔｉｎ）、ＮＧＦ、サブスタンスＰ、ＣＧＲＰおよび他の疼痛メディエータが含まれる。抗体またはその抗原結合性フラグメントは、以下のものに対する抗体：ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０、ＣＴＬＡのような細胞表面分子、またはそれらリガンド、例えばＣＤ１５４（ｇｐ３９またはＣＤ４０Ｌ）と組合されうる。
【０１５１】
ＴＮＦ−α結合性タンパク質またはその抗原結合性フラグメントと組合せるための典型的な治療用物質は、自己免疫および後続の炎症カスケードにおける種々の点において阻害し、例えば以下のものを含む：キメラ、ヒト化またはヒトＴＮＦ抗体のようなＴＮＦアンタゴニスト、Ｄ２Ｅ７（ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９７／２９１３１）、ＣＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、ＣＤＰ  ５７１および可溶性ｐ５５またはｐ７５  ＴＮＦ受容体、それらの誘導体（ｐ７５ＴＮＦＲ１ｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））またはｐ５５ＴＮＦＲ１ｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ）、そしてまた、ＴＮＦ−α変換酵素（ＴＡＣＥ）インヒビター、および他のＩＬ−１インヒビター（インターロイキン−１変換酵素インヒビター、ＩＬ−１ＲＡなど）。該抗体およびその抗原結合性フラグメントと組合せるための他の物質には、インターロイキン１１、ＴＮＦ−α機能と並行して、依存的に又は共同的に作用する物質、例えばＩＬ−１８アンタゴニスト（例えば、ＩＬ−１８結合性タンパク質、例えば、抗体または可溶性ＩＬ−１８受容体またはその抗原結合性フラグメント）が含まれる。該抗体およびその抗原結合性フラグメントと組合せるための追加的物質には、非枯渇性（ｎｏｎ−ｄｅｐｌｅｔｉｎｇ）抗ＣＤ４インヒビター、共刺激経路ＣＤ８０（Ｂ７．１）またはＣＤ８６（Ｂ７．２）のアンタゴニスト、例えば抗体、可溶性受容体、アンタゴニスト性リガンドまたはそれらの抗原結合性フラグメントが含まれる。
【０１５２】
該結合性タンパク質またはその抗原結合性部分は、例えば以下のような、関節リウマチの治療のための物質とも組合されうる：メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、６−ＭＰ、アザチオプリン  スルファサラジン（ａｚａｔｈｉｏｐｒｉｎｅ  ｓｕｌｐｈａｓａｌａｚｉｎｅ）、メサラジン（ｍｅｓａｌａｚｉｎｅ）、オルサラジン  クロロキニン／ヒドロキシクロロキニン（ｏｌｓａｌａｚｉｎｅ  ｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｉｎｅ／ｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ）、ペンシラミン（ｐｅｎｃｉｌｌａｍｉｎｅ）、オーロチオマラート（ａｕｒｏｔｈｉｏｍａｌａｔｅ）（筋肉内および経口）、アザチオプリン（ａｚａｔｈｉｏｐｒｉｎｅ）、コルヒシン（ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ）、コルチコステロイド（経口、吸入および局所注射）、ベータ−２  アドレナリン受容体アゴニスト（サルブタモール（ｓａｌｂｕｔａｍｏｌ）、テルブタリン（ｔｅｒｂｕｔａｌｉｎｅ）、サルメテラール（ｓａｌｍｅｔｅｒａｌ））、キサンチン（テオフィリン（ｔｈｅｏｐｈｙｌｌｉｎｅ）、アミノフィリン（ａｍｉｎｏｐｈｙｌｌｉｎｅ））、クロモグリカート（ｃｒｏｍｏｇｌｙｃａｔｅ）、ネドクロミル（ｎｅｄｏｃｒｏｍｉｌ）、ケトチフェン（ｋｅｔｏｔｉｆｅｎ）、イプラトロピウム（ｉｐｒａｔｒｏｐｉｕｍ）およびオキシトロピウム（ｏｘｉｔｒｏｐｉｕｍ）、シクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ）、ＦＫ５０６、ラパマイシン（ｒａｐａｍｙｃｉｎ）、ミコフェノール酸モフェチル（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌａｔｅ  ｍｏｆｅｔｉｌ）、レフルノミド（ｌｅｆｌｕｎｏｍｉｄｅ）、ＮＳＡＩＤ、例えばイブプロフェン（ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ）、コルチコステロイド、例えばプレドニゾロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、ホスホジエステラーゼインヒビター、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体インヒビター、アドレナリン作動性物質、ＴＮＦ−αまたはＩＬ−１のような炎症性サイトカインによるシグナリングを阻害する物質（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８およびＭＡＰキナーゼインヒビター）、ＩＬ−１ベータ変換酵素インヒビター、ＴＮＦ−α変換酵素（ＴＡＣＥ）インヒビター、Ｔ細胞シグナリングインヒビター、例えばキナーゼインヒビター、メタロプロテイナーゼインヒビター、スルファサラジン（ｓｕｌｆａｓａｌａｚｉｎｅ）、アザチオプリン（ａｚａｔｈｉｏｐｒｉｎｅ）、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素インヒビター、可溶性サイトカイン受容体およびその誘導体（例えば、ｐ５５またはｐ７５  ＴＮＦ受容体および誘導体ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ（商標）およびｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ））、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）、抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３およびＴＧＦβ）、セレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）、葉酸、硫酸ヒドロキシクロロキン、ロフェコキシブ（ｒｏｆｅｃｏｘｉｂ）、エタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）、インフリキシマブ（ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）、ナプロキセン（ｎａｐｒｏｘｅｎ）、バルデコキシブ（ｖａｌｄｅｃｏｘｉｂ）、スルファサラジン（ｓｕｌｆａｓａｌａｚｉｎｅ）、メチルプレドニ���ロン（ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、メロキシカム（ｍｅｌｏｘｉｃａｍ）、酢酸メチルプレドニゾロン、金ナトリウムチオマラート、アスピリン、トリアムシノロンアセトニド（ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ  ａｃｅｔｏｎｉｄｅ）、プロポキシフェンナプシラート（ｐｒｏｐｏｘｙｐｈｅｎｅ  ｎａｐｓｙｌａｔｅ）／ａｐａｐ、フォラート、ナブメトン（ｎａｂｕｍｅｔｏｎｅ）、ジクロフェナック（ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ）、ピロキシカム（ｐｉｒｏｘｉｃａｍ）、エトドラック（ｅｔｏｄｏｌａｃ）、ジクロフェナック（ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ）ナトリウム、オキサプロジン（ｏｘａｐｒｏｚｉｎ）、オキシコドン（ｏｘｙｃｏｄｏｎｅ）ｈｃｌ、酒石酸水素ヒドロコドン／ａｐａｐ、ジクロフェナック（ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ）ナトリウム／ミソプロストール（ｍｉｓｏｐｒｏｓｔｏｌ）、フェンタニル（ｆｅｎｔａｎｙｌ）、アナキンラ（ａｎａｋｉｎｒａ）、ヒト組換え体、トラマドール（ｔｒａｍａｄｏｌ）ｈｃｌ、サルサラート（ｓａｌｓａｌａｔｅ）、スリンダック（ｓｕｌｉｎｄａｃ）、シアノコバラミン（ｃｙａｎｏｃｏｂａｌａｍｉｎ）／ｆａ／ピリドキシン、アセトアミノフェン、アレンドロン酸ナトリウムナート、プレドニゾロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、硫酸モルヒネ、塩酸リドカイン、インドメタシン（ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ）、グルコサミンｓｕｌｆ／コンドロイチン、アミトリプチリン（ａｍｉｔｒｉｐｔｙｌｉｎｅ）ｈｃｌ、スルファジアジン（ｓｕｌｆａｄｉａｚｉｎｅ）、オキシコドン（ｏｘｙｃｏｄｏｎｅ）ｈｃｌ／アセトアミノフェン（ａｃｅｔａｍｉｎｏｐｈｅｎ）、オロパタジン（ｏｌｏｐａｔａｄｉｎｅ）ｈｃｌ、ミソプロストール（ｍｉｓｏｐｒｏｓｔｏｌ）、ナプロキセン（ｎａｐｒｏｘｅｎ）ナトリウム、オメプラゾール（ｏｍｅｐｒａｚｏｌｅ）、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、リツキシマブ（ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）、ＩＬ−１  ＴＲＡＰ、ＭＲＡ、ＣＴＬＡ４−ＩＧ、ＩＬ−１８  ＢＰ、抗ＩＬ−１８、抗ＩＬ１５、ＢＩＲＢ−７９６、ＳＣＩＯ−４６９、ＶＸ−７０２、ＡＭＧ−５４８、ＶＸ−７４０、ロフルミラスト（Ｒｏｆｌｕｍｉｌａｓｔ）、ＩＣ−４８５、ＣＤＣ−８０１およびメソプラム（Ｍｅｓｏｐｒａｍ）。
【０１５３】
ＴＮＦ−α結合性タンパク質（例えば、抗体）またはその抗原結合性部分が組合されうる、炎症性腸疾患に対する治療用物質の非限定的な例には、以下のものが含まれる：ブデノシド（ｂｕｄｅｎｏｓｉｄｅ）；上皮増殖因子、コルチコステロイド、シクロスポリン、スルファサラジン（ｓｕｌｆａｓａｌａｚｉｎｅ）、アミノサリシラート、６−メルカプトプリン、アザチオプリン（ａｚａｔｈｉｏｐｒｉｎｅ）、メトロニダゾール（ｍｅｔｒｏｎｉｄａｚｏｌｅ）、リポキシゲナーゼインヒビター、メサラミン（ｍｅｓａｌａｍｉｎｅ）、オルサラジン（ｏｌｓａｌａｚｉｎｅ）、バルサラジド（ｂａｌｓａｌａｚｉｄｅ）、抗酸化物質、トロンボキサンインヒビター、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、抗ＩＬ−１モノクローナル抗体、抗ＩＬ−６モノクローナル抗体、増殖因子、エラスターゼインヒビター、ピリジニル−イミダゾール化合物、他のヒトサイトカインまたは増殖因子、例えばＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦに対する抗体またはアンタゴニスト。抗体またはその抗原結合性部分は、細胞表面分子、例えばＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０およびそれらのリガンドに対する抗体と組合されうる。該結合性タンパク質または抗原結合性部分は、メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン（ｒａｐａｍｙｃｉｎ）、ミコフェノール酸モフェチル（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌａｔｅ  ｍｏｆｅｔｉｌ）、レフルノミド（ｌｅｆｌｕｎｏｍｉｄｅ）、ＮＳＡＩＤ、例えばイブプロフェン（ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ）、コルチコステロイド、例えばプレドニゾロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、ホスホジエステラーゼインヒビター、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体インヒビター、アドレナリン作動性物質、ＴＮＦ−αまたはＩＬ−１のような炎症性サイトカインによるシグナリングを阻害する物質（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８およびＭＡＰキナーゼインヒビター）、ＩＬ−１α変換酵素インヒビター、ＴＮＦ−α変換酵素インヒビター、Ｔ細胞シグナリングインヒビター、例えばキナーゼインヒビター、メタロプロテイナーゼインヒビター、スルファサラジン（ｓｕｌｆａｓａｌａｚｉｎｅ）、アザチオプリン（ａｚａｔｈｉｏｐｒｉｎｅ）、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素インヒビター、可溶性サイトカイン受容体およびその誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５  ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）および抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３およびＴＧＦβ）とも組合されうる。
【０１５４】
本明細書に記載されているＴＮＦ−α結合性タンパク質またはその抗原結合性部分が組合されうる、クローン病に対する治療用物質の典型例には、以下のものが含まれる：ＴＮＦアンタゴニスト、例えば抗ＴＮＦ抗体、Ｄ２Ｅ７（ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９７／２９１３１；ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））、ＣＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、ＣＤＰ  ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））およびｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ））インヒビター、他のＴＮＦアンタゴニスト、例えばゴリムマブ（Ｇｏｌｉｍｕｍａｂ）（シンポニ（Ｓｉｍｐｏｎｉ））およびＰＤＥ４インヒビター。結合性タンパク質またはその抗原結合性部分は、コルチコステロイド、例えばブデノシド（ｂｕｄｅｎｏｓｉｄｅ）およびデキサメタゾン（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）と組合されうる。結合性タンパク質またはその抗原結合性部分は、スルファサラジン（ｓｕｌｆａｓａｌａｚｉｎｅ）、５−アミノサリチル酸およびオルサラジン（ｏｌｓａｌａｚｉｎｅ）のような物質、ならびに炎症性サイトカイン、例えばＩＬ−１の合成または作用を阻害する物質、例えばＩＬ−１α変換酵素インヒビターおよびＩＬ−１ＲＡとも組合されうる。結合性タンパク質またはその抗原結合性部分はまた、Ｔ細胞シグナリングインヒビター、例えばチロシンキナーゼインヒビターである６−メルカプトプリンと共に使用されうる。結合性タンパク質またはその抗原結合性部分はＩＬ−１１と組合されうる。結合性タンパク質またはその抗原結合性部分は以下のものと組合されうる：メサラミン（ｍｅｓａｌａｍｉｎｅ）、プレドニゾン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）、アザチオプリン（ａｚａｔｈｉｏｐｒｉｎｅ）、メルカプトプリン（ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ）、インフリキシマブ（ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）、メチルプレドニゾロン（ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）ナトリウムスクシナート、ジフェノキシラート／ａｔｒｏｐスルファート、塩酸ロペラミド（ｌｏｐｅｒａｍｉｄｅ）、メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、オメプラゾール（ｏｍｅｐｒａｚｏｌｅ）、フォラート、シプロフロキサシン（ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ）／デキストロース−水、酒石酸水素ヒドロコドン／ａｐａｐ、塩酸テトラサイクリン、フルオシノニド（ｆｌｕｏｃｉｎｏｎｉｄｅ）、メトロニダゾール（ｍｅｔｒｏｎｉｄａｚｏｌｅ）、チメロサール（ｔｈｉｍｅｒｏｓａｌ）／ホウ酸、コレスチラミン（ｃｈｏｌｅｓｔｙｒａｍｉｎｅ）／スクロース、塩酸シプロフロキサシン（ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、硫酸ヒヨスチアミン、塩酸メペリジン（ｍｅｐｅｒｉｄｉｎｅ）、塩酸ミダゾラム（ｍｉｄａｚｏｌａｍ）、オキシコドン（ｏｘｙｃｏｄｏｎｅ）ｈｃｌ／アセトアミノフェン（ａｃｅｔａｍｉｎｏｐｈｅｎ）、塩酸プロメタジン（ｐｒｏｍｅｔｈａｚｉｎｅ）、リン酸ナトリウム、スルファメトキサゾール（ｓｕｌｆａｍｅｔｈｏｘａｚｏｌｅ）／トリメトプリム（ｔｒｉｍｅｔｈｏｐｒｉｍ）、セレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）、ポリカルボフィル（ｐｏｌｙｃａｒｂｏｐｈｉｌ）、プロポキシフェン（ｐｒｏｐｏｘｙｐｈｅｎｅ）ナプシラート、ヒドロコルチゾ���（ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ）、総合ビタミン、バルサラジド（ｂａｌｓａｌａｚｉｄｅ）二ナトリウム、リン酸コデイン／ａｐａｐ、コレセベラム（ｃｏｌｅｓｅｖｅｌａｍ）ｈｃｌ、シアノコバラミン、葉酸、レボフロキサシン（ｌｅｖｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、メチルプレドニゾロン（ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、ナタリズマブ（ｎａｔａｌｉｚｕｍａｂ）およびインターフェロン−ガンマ。
【０１５５】
ＴＮＦα結合性タンパク質または抗原結合性部分が組合されうる、多発性硬化症に対する治療用物質の非限定的な例には、以下のものが含まれる：コルチコステロイド、プレドニゾロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、メチルプレドニゾロン（ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、アザチオプリン（ａｚａｔｈｉｏｐｒｉｎｅ）、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、シクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ）、メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、４−アミノピリジン、チザニジン（ｔｉｚａｎｉｄｉｎｅ）、インターフェロン−β１ａ（ＡＶＯＮＥＸ（登録商標）；Ｂｉｏｇｅｎ）、インターフェロン−β１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ（登録商標）；Ｃｈｉｒｏｎ／Ｂｅｒｌｅｘ）、インターフェロンα−ｎ３（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｆｕｊｉｍｏｔｏ）、インターフェロン−α（Ａｌｆａ  Ｗａｓｓｅｒｍａｎｎ／Ｊ＆Ｊ）、インターフェロンβ  １Ａ−ＩＦ（Ｓｅｒｏｎｏ／Ｉｎｈａｌｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ペグインターフェロン（Ｐｅｇｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ）α  ２ｂ（Ｅｎｚｏｎ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）、コポリマー（Ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ）１（Ｃｏｐ−１；ＣＯＰＡＸＯＮＥ（登録商標）；Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）、高圧酸素、静脈内投与用免疫グロブリン、クラブリビン（ｃｌａｂｒｉｂｉｎｅ）、他のヒトサイトカインまたは増殖因子およびそれらの受容体、例えばＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１Ａ、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、およびＰＤＧＦに対する抗体またはアンタゴニストまたはインヒビター。抗体またはその抗原結合性部分は、細胞表面分子、例えばＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０またはそれらのリガンドに対する抗体と組合されうる。該抗体またはその抗原結合性部分は、ＦＫ５０６、ラパマイシン（ｒａｐａｍｙｃｉｎ）、ミコフェノール酸モフェチル（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌａｔｅ  ｍｏｆｅｔｉｌ）、レフルノミド（ｌｅｆｌｕｎｏｍｉｄｅ）、ＮＳＡＩＤ、例えばイブプロフェン（ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ）、ホスホジエステラーゼインヒビター、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体インヒビター、アドレナリン作動性物質、ＴＮＦ−αまたはＩＬ−１のような炎症性サイトカインによるシグナリングを阻害する物質（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８およびＭＡＰキナーゼインヒビター）、ＩＬ−１β変換酵素インヒビター、ＴＡＣＥインヒビター、Ｔ細胞シグナリングインヒビター、例えばキナーゼインヒビター、メタロプロテイナーゼインヒビター、スルファサラジン（ｓｕｌｆａｓａｌａｚｉｎｅ）、アザチオプリン（ａｚａｔｈｉｏｐｒｉｎｅ）、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素インヒビター、可溶性サイトカイン受容体およびその誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５  ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）、抗炎症性サイトカイン（例えば���ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３およびＴＧＦβ）、ＣＯＰＡＸＯＮＥ（登録商標）ならびにカスパーゼインヒビター、例えばカスパーゼ−１のインヒビターのような物質とも組合されうる。
【０１５６】
該ＴＮＦ−α結合性タンパク質またはその抗原結合性部分は以下のような物質とも組合されうる：アレムツズマブ（ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ）、ドロナビノール（ｄｒｏｎａｂｉｎｏｌ）、ウニメド（Ｕｎｉｍｅｄ）、ダクリズマブ（ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ）、ミトザントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、塩酸キサリプロデン（ｘａｌｉｐｒｏｄｅｎ）、ファムプリジン（ｆａｍｐｒｉｄｉｎｅ）、酢酸グラチラマー（ｇｌａｔｉｒａｍｅｒ）、ナタリズマブ（ｎａｔａｌｉｚｕｍａｂ）、シンナビドール（ｓｉｎｎａｂｉｄｏｌ）、ａ−イムノカイン（ｉｍｍｕｎｏｋｉｎｅ）ＮＮＳＯ３、ＡＢＲ−２１５０６２、ＡｎｅｒｇｉＸ．ＭＳ、ケモカイン受容体アンタゴニスト、ＢＢＲ−２７７８、カラグアリン（ｃａｌａｇｕａｌｉｎｅ）、ＣＰＩ−１１８９、ＬＥＭ（リポソーム封入ミトザントロン）、ＴＨＣ．ＣＢＤ（カンナビノイドアゴニスト）ＭＢＰ−８２９８、メソプラム（ｍｅｓｏｐｒａｍ）（ＰＤＥ４インヒビター）、ＭＮＡ−７１５、抗ＩＬ−６受容体抗体、ニューロバックス（ｎｅｕｒｏｖａｘ）、ピルフェニドン  アロトラップ（ｐｉｒｆｅｎｉｄｏｎｅ  ａｌｌｏｔｒａｐ）１２５８（ＲＤＰ−１２５８）、ｓＴＮＦ−Ｒ１、タランパネル（ｔａｌａｍｐａｎｅｌ）、テリフルノミド（ｔｅｒｉｆｌｕｎｏｍｉｄｅ）、ＴＧＦ−β２、チプリモチド（ｔｉｐｌｉｍｏｔｉｄｅ）、ＶＬＡ−４アンタゴニスト（例えば、ＴＲ−１４０３５、ＶＬＡ４  Ｕｌｔｒａｈａｌｅｒ，Ａｎｔｅｇｒａｎ−ＥＬＡＮ／Ｂｉｏｇｅｎ）、インターフェロンガンマアンタゴニスト。
【０１５７】
ＴＮＦ−α結合性タンパク質またはその抗原結合性部分が組合されうる、アンギナの治療または予防のための治療用物質の非限定的な例には、アスピリン、ニトログリセリン、一硝酸イソソルビド（ｉｓｏｓｏｒｂｉｄｅ）、コハク酸メトプロロール（ｍｅｔｏｐｒｏｌｏｌ）、アテノロール（ａｔｅｎｏｌｏｌ）、酒石酸メトプロロール（ｍｅｔｏｐｒｏｌｏｌ）、ベシル酸アモロジピン（ａｍｌｏｄｉｐｉｎｅ）、塩酸ジルチアゼム（ｄｉｌｔｉａｚｅｍ）、二硝酸イソソルビド（ｉｓｏｓｏｒｂｉｄｅ）、硫酸水素クロピドグレル（ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ）、ニフェジピン（ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ）、アトルバスタチン（ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ）カルシウム、塩化カリウム、フロセミド（ｆｕｒｏｓｅｍｉｄｅ）、シンバスタチン（ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ）、ベラパミル（ｖｅｒａｐａｍｉｌ）ｈｃｌ、ジゴキシン（ｄｉｇｏｘｉｎ）、塩酸プロプラノロール（ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ）、カルベジロール（ｃａｒｖｅｄｉｌｏｌ）、リシノプリル（ｌｉｓｉｎｏｐｒｉｌ）、スピロノラクトン（ｓｐｉｒｏｎｏｌａｃｔｏｎｅ）、ヒドロクロロチアジド（ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｏｔｈｉａｚｉｄｅ）、マレイン酸エナラプリル（ｅｎａｌａｐｒｉｌ）、ナドロール（ｎａｄｏｌｏｌ）、ラミプリル（ｒａｍｉｐｒｉｌ）、エノキサパリン（ｅｎｏｘａｐａｒｉｎ）ナトリウム、ヘパリンナトリウム、バルサルタン（ｖａｌｓａｒｔａｎ）、塩酸ソタロール（ｓｏｔａｌｏｌ）、フェノフィブラート（ｆｅｎｏｆｉｂｒａｔｅ）、エゼチミブ（ｅｚｅｔｉｍｉｂｅ）、ブメタニド（ｂｕｍｅｔａｎｉｄｅ）、ロサルタン（ｌｏｓａｒｔａｎ）カリウム、リシノプリル（ｌｉｓｉｎｏｐｒｉｌ）／ヒドロクロロチアジド、フェロジピン（ｆｅｌｏｄｉｐｉｎｅ）、カプトプリル（ｃａｐｔｏｐｒｉｌ）およびフマル酸ビソプロロール（ｂｉｓｏｐｒｏｌｏｌ）。
【０１５８】
結合性タンパク質またはその抗原結合性部分が組合されうる、強直性脊椎炎の治療または予防のための治療用物質の非限定的な例には、以下のものが含まれる：イブプロフェン（ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ）、ジクロフェナック（ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ）およびミソプロストール（ｍｉｓｏｐｒｏｓｔｏｌ）、ナプロキセン（ｎａｐｒｏｘｅｎ）、メロキシカム（ｍｅｌｏｘｉｃａｍ）、インドメタシン（ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ）、ジクロフェナック（ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ）、セレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）、ロフェコキシブ（ｒｏｆｅｃｏｘｉｂ）、スルファサラジン（ｓｕｌｆａｓａｌａｚｉｎｅ）、メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、アザチオプリン（ａｚａｔｈｉｏｐｒｉｎｅ）、ミノサイクリン（ｍｉｎｏｃｙｃｌｉｎ）、プレドニゾン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）、エタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）およびインフリキシマブ（ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）。
【０１５９】
ＴＮＦ−α結合性タンパク質またはその抗原結合性部分が組合されうる、喘息の治療または予防のための治療用物質の非限定的な例には、以下のものが含まれる：アルブテロール（ａｌｂｕｔｅｒｏｌ）、サルメテロール（ｓａｌｍｅｔｅｒｏｌ）／フルチカゾン（ｆｌｕｔｉｃａｓｏｎｅ）、モンテルカスト（ｍｏｎｔｅｌｕｋａｓｔ）ナトリウム、プロピオン酸フルチカゾン（ｆｌｕｔｉｃａｓｏｎｅ）、ブデソニド（ｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅ）、プレドニゾン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）、サルメテロール（ｓａｌｍｅｔｅｒｏｌ）キシナフォアート、レバルブテロール（ｌｅｖａｌｂｕｔｅｒｏｌ）ｈｃｌ、硫酸アルブテロール（ａｌｂｕｔｅｒｏｌ）／イプラトロピウム（ｉｐｒａｔｒｏｐｉｕｍ）、プレドニゾロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）ナトリウムホスファート、トリアムシノロンアセトニド（ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ  ａｃｅｔｏｎｉｄｅ）、二プロピオン酸ベクロメタゾン（ｂｅｃｌｏｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、臭化イプラトロピウム（ｉｐｒａｔｒｏｐｉｕｍ）、アジスロマイシン（ａｚｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）、塩酸ピルブテロール（ｐｉｒｂｕｔｅｒｏｌ）、プレドニゾロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、無水テオフィリン（ｔｈｅｏｐｈｙｌｌｉｎｅ）、メチルプレドニゾロン（ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）ナトリウムスクシナート、クラリスロマイシン（ｃｌａｒｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）、ザフィルルカスト（ｚａｆｉｒｌｕｋａｓｔ）、フマル酸フォルモテロール（ｆｏｒｍｏｔｅｒｏｌ）、インフルエンザウイルスワクチン、メチルプレドニゾロン（ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、アモキシシリン（ａｍｏｘｉｃｉｌｌｉｎ）三水和物、フルニソリド（ｆｌｕｎｉｓｏｌｉｄｅ）、アレルギー注射、クロモリン（ｃｒｏｍｏｌｙｎ）ナトリウム、塩酸フェクソフェナジン（ｆｅｘｏｆｅｎａｄｉｎｅ）、フルニソリド（ｆｌｕｎｉｓｏｌｉｄｅ）／メントール、アモキシシリン（ａｍｏｘｉｃｉｌｌｉｎ）／クラブラナート、レボフロキサシン（ｌｅｖｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、吸入補助装置、グアイフェネシン（ｇｕａｉｆｅｎｅｓｉｎ）、デキサメタゾン（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）ナトリウムホスファート、モキシフロキサシン（ｍｏｘｉｆｌｏｘａｃｉｎ）ｈｃｌ、ドキシサイクリン（ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ）ヒクラート、グアイフェネシン（ｇｕａｉｆｅｎｅｓｉｎ）／ｄ−メトルファン（ｍｅｔｈｏｒｐｈａｎ）、ｐ−エフェドリン（ｅｐｈｅｄｒｉｎｅ）／コド（ｃｏｄ）／クロルフェニル（ｃｈｌｏｒｐｈｅｎｉｒ）、ガチフロキサシン（ｇａｔｉｆｌｏｘａｃｉｎ）、塩酸セチリジン（ｃｅｔｉｒｉｚｉｎｅ）、モメタゾン（ｍｏｍｅｔａｓｏｎｅ）フロアート、サルメテロール（ｓａｌｍｅｔｅｒｏｌ）キシナフォアート、ベンゾナタート、セファレキシン（ｃｅｐｈａｌｅｘｉｎ）、ｐｅ／ヒドロコドン（ｈｙｄｒｏｃｏｄｏｎｅ）／クロルフェニル（ｃｈｌｏｒｐｈｅｎｉｒ）、セチリジン（ｃｅｔｉｒｉｚｉｎｅ）ｈｃｌ／プソイドエフェド（ｐｓｅｕｄｏｅｐｈｅｄ）、フェニルエフリン（ｐｈｅｎｙｌｅｐｈｒｉｎｅ）／コド（ｃｏｄ）／プロメタジン（ｐｒｏｍｅｔｈａｚｉｎｅ）、コデイン（ｃｏｄｅｉｎｅ）／プロメタジ��（ｐｒｏｍｅｔｈａｚｉｎｅ）、セフプロジル（ｃｅｆｐｒｏｚｉｌ）、デキサメタゾン（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、グアイフェネシン（ｇｕａｉｆｅｎｅｓｉｎ）／プソイドエフェドリン（ｐｓｅｕｄｏｅｐｈｅｄｒｉｎｅ）、クロルフェニラミン（ｃｈｌｏｒｐｈｅｎｉｒａｍｉｎｅ）／ヒドロコドン（ｈｙｄｒｏｃｏｄｏｎｅ）、ネドクロミル（ｎｅｄｏｃｒｏｍｉｌ）ナトリウム、硫酸テルブタリン（ｔｅｒｂｕｔａｌｉｎｅ）、エピネフリン（ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ）、メチルプレドニゾロン（ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）および硫酸メタプロテレノール（ｍｅｔａｐｒｏｔｅｒｅｎｏｌ）。
【０１６０】
ＴＮＦ−α結合性タンパク質またはその抗原結合性部分が組合されうる、ＣＯＰＤの治療または予防のための治療用物質の非限定的な例には、以下のものが含まれる：硫酸アルブテロール（ａｌｂｕｔｅｒｏｌ）／イプラトロピウム（ｉｐｒａｔｒｏｐｉｕｍ）、臭化イプラトロピウム、サルメテロール（ｓａｌｍｅｔｅｒｏｌ）／フルチカゾン（ｆｌｕｔｉｃａｓｏｎｅ）、アルブテロール（ａｌｂｕｔｅｒｏｌ）、サルメテロール（ｓａｌｍｅｔｅｒｏｌ）キシナフォアート、プロピオン酸フルチカゾン（ｆｌｕｔｉｃａｓｏｎｅ）、プレドニゾン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）、無水テオフィリン（ｔｈｅｏｐｈｙｌｌｉｎｅ）、メチルプレドニゾロン（ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）ナトリウムスクシナート、モンテルカスト（ｍｏｎｔｅｌｕｋａｓｔ）ナトリウム、ブデソニド（ｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅ）、フマル酸ホルモテノール（ｆｏｒｍｏｔｅｒｏｌ）、トリアムシノロンアセトニド（ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ  ａｃｅｔｏｎｉｄｅ）、レボフロキサシン（ｌｅｖｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、グアニフェネシン（ｇｕａｉｆｅｎｅｓｉｎ）、アジトロマイシン（ａｚｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）、ジプロピオン酸ベクロメタゾン（ｂｅｃｌｏｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、レバルブテロール（ｌｅｖａｌｂｕｔｅｒｏｌ）ｈｃｌ、フルニソリド（ｆｌｕｎｉｓｏｌｉｄｅ）、セフトリアキソン（ｃｅｆｔｒｉａｘｏｎｅ）ナトリウム、アモキシシリン（ａｍｏｘｉｃｉｌｌｉｎ）三水和物、ガチフロキサシン（ｇａｔｉｆｌｏｘａｃｉｎ）、ザフィルルカスト（ｚａｆｉｒｌｕｋａｓｔ）、アモキシシリン（ａｍｏｘｉｃｉｌｌｉｎ）／クラブラナート、フルニソリド（ｆｌｕｎｉｓｏｌｉｄｅ）／メントール、クロルフェニラミン（ｃｈｌｏｒｐｈｅｎｉｒａｍｉｎｅ）／ヒドロコドン（ｈｙｄｒｏｃｏｄｏｎｅ）、硫酸メタプロテレノール（ｍｅｔａｐｒｏｔｅｒｅｎｏｌ）、メチルプレドニゾロン（ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、モメタゾン（ｍｏｍｅｔａｓｏｎｅ）フロアート、ｐ−エフェドリン（ｅｐｈｅｄｒｉｎｅ）／コド（ｃｏｄ）／クロルフェニル（ｃｈｌｏｒｐｈｅｎｉｒ）、酢酸ピルブテロール（ｐｉｒｂｕｔｅｒｏｌ）、ｐ−エフェドリン（ｅｐｈｅｄｒｉｎｅ）／ロラタジン（ｌｏｒａｔａｄｉｎｅ）、硫酸テルブタリン（ｔｅｒｂｕｔａｌｉｎｅ）、臭化チオトロピウム（ｔｉｏｔｒｏｐｉｕｍ）、（Ｒ，Ｒ）−ホルモテロール（ｆｏｒｍｏｔｅｒｏｌ）、ＴｇＡＡＴ、シロミラスト（ｃｉｌｏｍｉｌａｓｔ）およびロフルミラスト（ｒｏｆｌｕｍｉｌａｓｔ）。
【０１６１】
ＴＮＦ−α結合性タンパク質またはその抗原結合性部分が組合されうる、ＨＣＶの治療または予防のための治療用物質の非限定的な例には、以下のものが含まれる：インターフェロン−アルファ−２ａ、インターフェロン−アルファ−２ｂ、インターフェロン−アルファ−ｃｏｎ１、インターフェロン−アルファ−ｎ１、ペジル化（ｐｅｇｙｌａｔｅｄ）インターフェロン−アルファ−２ａ、ペジル化インターフェロン−アルファ−２ｂ、リバビリン（ｒｉｂａｖｉｒｉｎ）、ペグインターフェロンアルファ−２ｂ＋リバビリン、ウルソデオキシコール酸、グリシリジン酸、チマルファシン（ｔｈｙｍａｌｆａｓｉｎ）、マキサミン（ｍａｘａｍｉｎｅ）、ＶＸ−４９７、および以下の標的：ＨＣＶポリメラーゼ、ＨＣＶプロテアーゼ、ＨＣＶヘリカーゼ、ＨＣＶ  ＩＲＥＳ（内部リボソーム進入部位）への介入によりＨＣＶを治療するために使用されるいずれかの化合物。
【０１６２】
ＴＮＦ−α結合性タンパク質またはその抗原結合性部分が組合されうる、特発性肺線維症の治療または予防のための治療用物質の非限定的な例には、以下のものが含まれる：プレドニゾン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）、アザチオプリン（ａｚａｔｈｉｏｐｒｉｎｅ）、アルブテロール（ａｌｂｕｔｅｒｏｌ）、コルヒチン（ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ）、硫酸アルブテロール、ジゴキシン（ｄｉｇｏｘｉｎ）、ガンマインターフェロン、メチルプレドニゾロン（ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）ソド（ｓｏｄ）スクシ（ｓｕｃｃ）、ロラゼパム（ｌｏｒａｚｅｐａｍ）、フロセミド（ｆｕｒｏｓｅｍｉｄｅ）、リシノプリル（ｌｉｓｉｎｏｐｒｉｌ）、ニトログリセリン、スピロノラクトン、シクロホスファミド、臭化イプラトロピウム（ｉｐｒａｔｒｏｐｉｕｍ）、アクチノマイシン（ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）ｄ、アルテプラーゼ（ａｌｔｅｐｌａｓｅ）、プロピオン酸フルチカゾン（ｆｌｕｔｉｃａｓｏｎｅ）、レボフロキサシン（ｌｅｖｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、硫酸メタプロテレノール（ｍｅｔａｐｒｏｔｅｒｅｎｏｌ）、硫酸モルヒネ、オキシコドン（ｏｘｙｃｏｄｏｎｅ）ＨＣｌ、塩化カリウム、トリアムシノロンアセトニド（ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ  ａｃｅｔｏｎｉｄｅ）、無水タクロリムス（ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）、カルシウム、インターフェロン−アルファ、メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、ミコフェノール酸モフェチル（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌａｔｅ  ｍｏｆｅｔｉｌ）およびインターフェロン−ガンマ−１ｂ。
【０１６３】
ＴＮＦ−α結合性タンパク質またはその抗原結合性部分が組合されうる、心筋梗塞の治療または予防のための治療用物質の非限定的な例には、以下のものが含まれる：アスピリン、ニトログリセリン、酒石酸メトプロロール（ｍｅｔｏｐｒｏｌｏｌ）、エノキサパリン（ｅｎｏｘａｐａｒｉｎ）ナトリウム、ヘパリンナトリウム、硫酸水素クロピドグレル（ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ）、カルベジロール（ｃａｒｖｅｄｉｌｏｌ）、アテノロール（ａｔｅｎｏｌｏｌ）、硫酸モルヒネ、コハク酸メトプロロール（ｍｅｔｏｐｒｏｌｏｌ）、ワルファリン（ｗａｒｆａｒｉｎ）ナトリウム、リシノプリル（ｌｉｓｉｎｏｐｒｉｌ）、一硝酸イソソルビド（ｉｓｏｓｏｒｂｉｄｅ）、ジゴキシン、フロセミド（ｆｕｒｏｓｅｍｉｄｅ）、シンバスタチン（ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ）、ラミプリル（ｒａｍｉｐｒｉｌ）、テネクテプラーゼ（ｔｅｎｅｃｔｅｐｌａｓｅ）、マレイン酸エナラプリル（ｅｎａｌａｐｒｉｌ）、トルセミド（ｔｏｒｓｅｍｉｄｅ）、レタバース（ｒｅｔａｖａｓｅ）、ロサルタン（ｌｏｓａｒｔａｎ）カリウム、キナプリル（ｑｕｉｎａｐｒｉｌ）ｈｃｌ／ｍａｇ  ｃａｒｂ、ブメタニド（ｂｕｍｅｔａｎｉｄｅ）、アルテプラーゼ（ａｌｔｅｐｌａｓｅ）、エナラプリラト（ｅｎａｌａｐｒｉｌａｔ）、アミオダロン（ａｍｉｏｄａｒｏｎｅ）塩酸、チロフィバン（ｔｉｒｏｆｉｂａｎ）ｈｃｌ  ｍ−水和物、ジルチアゼム（ｄｉｌｔｉａｚｅｍ）塩酸、カプトプリル（ｃａｐｔｏｐｒｉｌ）、イルベサルタン（ｉｒｂｅｓａｒｔａｎ）、バルサルタン（ｖａｌｓａｒｔａｎ）、塩酸プロプラノロール（ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ）、フォシノプリル（ｆｏｓｉｎｏｐｒｉｌ）ナトリウム、塩酸リドカイン（ｌｉｄｏｃａｉｎｅ）、エプチフィバチド（ｅｐｔｉｆｉｂａｔｉｄｅ）、セファゾリン（ｃｅｆａｚｏｌｉｎ）ナトリウム、硫酸アトロピン（ａｔｒｏｐｉｎｅ）、アミノカプロン酸、スピロノラクトン、インターフェロン、ソタロール（ｓｏｔａｌｏｌ）塩酸、塩化カリウム、ドキュセート（ｄｏｃｕｓａｔｅ）ナトリウム、ドブタミン（ｄｏｂｕｔａｍｉｎｅ）ｈｃｌ、アルプラゾラム（ａｌｐｒａｚｏｌａｍ）、プラバスタチン（ｐｒａｖａｓｔａｔｉｎ）ナトリウム、アトルバスタチン（ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ）カルシウム、塩酸ミダゾラム（ｍｉｄａｚｏｌａｍ）、塩酸メペリジン（ｍｅｐｅｒｉｄｉｎｅ）、二硝酸イソソルビド（ｉｓｏｓｏｒｂｉｄｅ）、エピネフリン（ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ）、ドパミン（ｄｏｐａｍｉｎｅ）塩酸、ビバリルジン（ｂｉｖａｌｉｒｕｄｉｎ）、ロスバスタチン（ｒｏｓｕｖａｓｔａｔｉｎ）、エゼチミブ（ｅｚｅｔｉｍｉｂｅ）／シンバスタチン（ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ）、アバシミブ（ａｖａｓｉｍｉｂｅ）およびカリポリド（ｃａｒｉｐｏｒｉｄｅ）。
【０１６４】
ＴＮＦ−α結合性タンパク質またはその抗原結合性部分が組合されうる、乾癬の治療または予防のための治療用物質の非限定的な例には、以下のものが含まれる：カルシポトリエン（ｃａｌｃｉｐｏｔｒｉｅｎｅ）、プロピオン酸クロベタゾール（ｃｌｏｂｅｔａｓｏｌ）、トリアムシノロンアセトニド（ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ  ａｃｅｔｏｎｉｄｅ）、プロピオン酸ハロベタゾール（ｈａｌｏｂｅｔａｓｏｌ）、タザロテン（ｔａｚａｒｏｔｅｎｅ）、メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、フルオシノニド（ｆｌｕｏｃｉｎｏｎｉｄｅ）、ベタメタゾン（ｂｅｔａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）ジプロプ（ｄｉｐｒｏｐ）増強体、フルオシノロンアセトニド（ｆｌｕｏｃｉｎｏｌｏｎｅ  ａｃｅｔｏｎｉｄｅ）、アシトレチン（ａｃｉｔｒｅｔｉｎ）、タールシャンプー、吉草酸ベタメタゾン（ｂｅｔａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、モメタゾン（ｍｏｍｅｔａｓｏｎｅ）フロアート、ケトコナゾール（ｋｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ）、プラモキシン（ｐｒａｍｏｘｉｎｅ）／フルオシノロン（ｆｌｕｏｃｉｎｏｌｏｎｅ）、吉草酸ヒドロコルチゾン（ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ）、フルランドレノリド（ｆｌｕｒａｎｄｒｅｎｏｌｉｄｅ）、尿素、ベタメタゾン（ｂｅｔａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、プロピオン酸クロベタゾール（ｃｌｏｂｅｔａｓｏｌ）／ｅｍｏｌｌ、プロピオン酸フルチカゾン（ｆｌｕｔｉｃａｓｏｎｅ）、アジスロマイシン（ａｚｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）、ヒドロコルチゾン、保湿剤、葉酸、デソニド（ｄｅｓｏｎｉｄｅ）、ピメクロリムス（ｐｉｍｅｃｒｏｌｉｍｕｓ）、コールタール、二酢酸ジフロラゾン（ｄｉｆｌｏｒａｓｏｎｅ）、葉酸エタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）、乳酸、メトキサレン（ｍｅｔｈｏｘｓａｌｅｎ）、ｈｃ／ビスマスｓｕｂｇａｌ／ｚｎｏｘ／ｒｅｓｏｒ、酢酸メチルプレドニゾロン（ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、プレドニゾン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）、日焼け止め、ハルシノニド（ｈａｌｃｉｎｏｎｉｄｅ）、サリチル酸、アントラリン（ａｎｔｈｒａｌｉｎ）、クロコルトロン（ｃｌｏｃｏｒｔｏｌｏｎｅ）ピバラート、石炭抽出物、コールタール／サリチル酸、コールタール／サリチル酸／硫黄、デソキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｉｍｅｔａｓｏｎｅ）、ジアゼパム（ｄｉａｚｅｐａｍ）、皮膚軟化薬、フルオシノニド／皮膚軟化薬、鉱油／ヒマシ油／ｎａ  ｌａｃｔ、鉱油／ラッカセイ油、石油／イソプロピルミリスタート、ソラレン（ｐｓｏｒａｌｅｎ）、サリチル酸、石鹸／トリブロムサラン（ｔｒｉｂｒｏｍｓａｌａｎ）、チメロサール（ｔｈｉｍｅｒｏｓａｌ）／ホウ酸、セレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）、インフリキシマブ（ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）、シクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ）、アレファセプト（ａｌｅｆａｃｅｐｔ）、エファリズマブ（ｅｆａｌｉｚｕｍａｂ）、タクロリムス（ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）、ピメクロリムス（ｐｉｍｅｃｒｏｌｉｍｕｓ）、ＰＵＶＡ、ＵＶＢおよびスルファサラジン（ｓｕｌｆａｓａｌａｚｉｎｅ）。
【０１６５】
ＴＮＦ−α結合性タンパク質またはその抗原結合性部分が組合されうる、乾癬性関節炎の治療または予防のための治療用物質の非限定的な例には、以下のものが含まれる：メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、エタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）、ロフェコキシブ（ｒｏｆｅｃｏｘｉｂ）、セレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）、葉酸、スルファサラジン（ｓｕｌｆａｓａｌａｚｉｎｅ）、ナプロキセン（ｎａｐｒｏｘｅｎ）、レフルノミド（ｌｅｆｌｕｎｏｍｉｄｅ）、酢酸メチルプレドニゾロン（ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、インドメタシン（ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ）、硫酸ヒドロキシクロロキン（ｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ）、プレドニゾン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）、スリンダック（ｓｕｌｉｎｄａｃ）、ベタメタゾン（ｂｅｔａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）ジプロップ（ｄｉｐｒｏｐ）増強体、インフリキシマブ（ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）、メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、フォラート、トリアムシノロンアセトニド（ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ  ａｃｅｔｏｎｉｄｅ）、ジクロフェナック（ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ）、ジメチルスルホキシド、ピロキシカム（ｐｉｒｏｘｉｃａｍ）、ジクロフェナック（ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ）ナトリウム、ケトプロフェン（ｋｅｔｏｐｒｏｆｅｎ）、メロキシカム（ｍｅｌｏｘｉｃａｍ）、メチルプレドニゾロン（ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、ナブメトン（ｎａｂｕｍｅｔｏｎｅ）、トルメチン（ｔｏｌｍｅｔｉｎ）ナトリウム、カルシポトリエン（ｃａｌｃｉｐｏｔｒｉｅｎｅ）、シクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ）、ジクロフェナック（ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ）ナトリウム／ミソプロストール（ｍｉｓｏｐｒｏｓｔｏｌ）、フルオシノニド（ｆｌｕｏｃｉｎｏｎｉｄｅ）、硫酸グルコサミン（ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ）、金ナトリウムチオマラート、酒石酸水素ヒドロコドン（ｈｙｄｒｏｃｏｄｏｎｅ）／ａｐａｐ、イブプロフェン（ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ）、リセドロナート（ｒｉｓｅｄｒｏｎａｔｅ）ナトリウム、スルファジアジン（ｓｕｌｆａｄｉａｚｉｎｅ）、チオグアニン（ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ）、バルデコキシブ（ｖａｌｄｅｃｏｘｉｂ）、アレファセプト（ａｌｅｆａｃｅｐｔ）およびエファリズマブ（ｅｆａｌｉｚｕｍａｂ）。
【０１６６】
ＴＮＦ−α結合性タンパク質またはその抗原結合性部分が組合されうる、再狭窄の治療または予防のための治療用物質の非限定的な例には、以下のものが含まれる：シロリムス（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、エベロリムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）、タクロリムス（ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）、ＡＢＴ−５７８およびアセトアミノフェン（ａｃｅｔａｍｉｎｏｐｈｅｎ）。
【０１６７】
ＴＮＦ−α結合性タンパク質またはその抗原結合性部分が組合されうる、坐骨神経痛の治療または予防のための治療用物質の非限定的な例には、以下のものが含まれる：酒石酸水素ヒドロコドン／ａｐａｐ、ロフェコキシブ（ｒｏｆｅｃｏｘｉｂ）、シクロベンザプリン（ｃｙｃｌｏｂｅｎｚａｐｒｉｎｅ）ｈｃｌ、メチルプレドニゾロン（ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、ナプロキセン（ｎａｐｒｏｘｅｎ）、イブプロフェン（ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ）、オキシコドン（ｏｘｙｃｏｄｏｎｅ）ｈｃｌ／アセトアミノフェン（ａｃｅｔａｍｉｎｏｐｈｅｎ）、セレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）、バルデコキシブ（ｖａｌｄｅｃｏｘｉｂ）、酢酸メチルプレドニゾロン（ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、プレドニゾン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）、リン酸コデイン（ｃｏｄｅｉｎｅ）／ａｐａｐ、トラマドール（ｔｒａｍａｄｏｌ）ｈｃｌ／アセトアミノフェン（ａｃｅｔａｍｉｎｏｐｈｅｎ）、メタキサロン（ｍｅｔａｘａｌｏｎｅ）、メロキシカム（ｍｅｌｏｘｉｃａｍ）、メトカルバモール（ｍｅｔｈｏｃａｒｂａｍｏｌ）、塩酸リドカイン（ｌｉｄｏｃａｉｎｅ）、ジクロフェナック（ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ）ナトリウム、ガバペンチン（ｇａｂａｐｅｎｔｉｎ）、デキサメタゾン（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、カリソプロドール（ｃａｒｉｓｏｐｒｏｄｏｌ）、ケトロラックトロメタミン（ｋｅｔｏｒｏｌａｃ  ｔｒｏｍｅｔｈａｍｉｎｅ）、インドメタシン（ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ）、アセトアミノフェン（ａｃｅｔａｍｉｎｏｐｈｅｎ）、ジアゼパム（ｄｉａｚｅｐａｍ）、ナブメトン（ｎａｂｕｍｅｔｏｎｅ）、オキシコドン（ｏｘｙｃｏｄｏｎｅ）ｈｃｌ、チザニジン（ｔｉｚａｎｉｄｉｎｅ）ｈｃｌ、ジクロフェナック（ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ）ナトリウム／ミソプロストール（ｍｉｓｏｐｒｏｓｔｏｌ）、プロポキシフェン（ｐｒｏｐｏｘｙｐｈｅｎｅ）ナプシラート／ａｐａｐ、ａｓａ／オキシコド（ｏｘｙｃｏｄ）／オキシコドン（ｏｘｙｃｏｄｏｎｅ）ｔｅｒ、イブプロフェン（ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ）／ヒドロコドン（ｈｙｄｒｏｃｏｄｏｎｅ）ｂｉｔ、トラマドール（ｔｒａｍａｄｏｌ）ｈｃｌ、エトドラック（ｅｔｏｄｏｌａｃ）、プロポキシフェン（ｐｒｏｐｏｘｙｐｈｅｎｅ）ｈｃｌ、アミトリプチリン（ａｍｉｔｒｉｐｔｙｌｉｎｅ）ｈｃｌ、カリソプロドール（ｃａｒｉｓｏｐｒｏｄｏｌ）／コデインｐｈｏｓ／ａｓａ、硫酸モルヒネ、総合ビタミン、ナプロキセン（ｎａｐｒｏｘｅｎ）ナトリウム、クエン酸オルフェナドリン（ｏｒｐｈｅｎａｄｒｉｎｅ）およびテマゼパム（ｔｅｍａｚｅｐａｍ）。
【０１６８】
ＴＮＦ−α結合性タンパク質またはその抗原結合性部分が組合されうる、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の治療または予防のための治療用物質の非限定的な例には、以下のものが含まれる：ＮＳＡＩＤ、例えばジクロフェナック（ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ）、ナプロキセン（ｎａｐｒｏｘｅｎ）、イブプロフェン（ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ）、ピロキシカム（ｐｉｒｏｘｉｃａｍ）、インドメタシン（ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ）ＣＯＸ２インヒビター、例えばセレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）、ロフェコキシブ（ｒｏｆｅｃｏｘｉｂ）、バルデコキシブ（ｖａｌｄｅｃｏｘｉｂ）、抗マラリア薬、例えばヒドロキシクロロキン（ｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ）、ステロイド、例えばプレドニゾン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）、プレドニゾロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、ブデノシド（ｂｕｄｅｎｏｓｉｄｅ）、デキサメタゾン（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、細胞毒、例えばアザチオプリン（ａｚａｔｈｉｏｐｒｉｎｅ）、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、ミコフェノール酸モフェチル（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌａｔｅ  ｍｏｆｅｔｉｌ）、メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、ＰＤＥ４インヒビターまたはプリン合成インヒビター、例えばＣＥＬＬＣＥＰＴ（登録商標）。結合性タンパク質またはその抗原結合性部分は以下のような物質とも組合されうる：スルファサラジン（ｓｕｌｆａｓａｌａｚｉｎｅ）、５−アミノサリチル酸、オルサラジン（ｏｌｓａｌａｚｉｎｅ）、Ｉｍｕｒａｎ、および炎症性サイトカイン、例えばＩＬ−１の合成、産生または作用を阻害する物質、例えばカスパーゼインヒビター、例えばＩＬ−１β変換酵素インヒビターおよびＩＬ−１ｒａ。結合性タンパク質またはその抗原結合性部分は、Ｔ細胞シグナリングインヒビター、例えばチロシンキナーゼインヒビター、またはＴ細胞活性化分子を標的化する分子、例えばＣＴＬＡ−４−ＩｇＧまたは抗Ｂ７ファミリー抗体。結合性タンパク質または抗原結合性部分は以下のものと組合されうる：ＩＬ−１１または抗サイトカイン抗体、例えばホノトリズマブ（ｆｏｎｏｔｏｌｉｚｕｍａｂ）（抗ＩＦＮｇ抗体）または抗受容体受容体抗体、例えば抗ＩＬ−６受容体抗体、およびＢ細胞表面分子に対する抗体。結合性タンパク質または抗原結合性部分はまた、以下のものと共に使用されうる：ＬＪＰ  ３９４（アベチムス（ａｂｅｔｉｍｕｓ））、Ｂ細胞を枯渇または不活性化する物質、例えばリツキシマブ（ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）（抗ＣＤ２０抗体）、リンホスタット（ｌｙｍｐｈｏｓｔａｔ）−Ｂ（抗ＢｌｙＳ抗体）、ＴＮＦアンタゴニスト、例えば抗ＴＮＦ抗体、Ｄ２Ｅ７（ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９７／２９１３１；ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））、ＣＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、ＣＤＰ  ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））およびｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ））。
【０１６９】
該医薬組成物はＴＮＦα結合性タンパク質またはその抗原結合性部分「治療的有効量」または「予防的有効量」を含みうる。「治療的有効量」は、所望の治療結果を達成するための、必要な投与における及び期間にわたる、有効な量を意味する。本明細書に記載されている結合性タンパク質またはその抗原結合性タンパク質の治療的有効量は、当業者により決定されることが可能であり、個体の病態、年齢、性別および体重ならびに個体において所望の応答を惹起する該抗体またはその抗原結合性部分の能力のような要因に応じて変動しうる。治療的有効量はまた、該抗体またはその抗原結合性部分のいずれかの毒性の又は有害な作用より、治療的に有益な作用が勝っている場合のものである。「予防的有効量」は、所望の予防効果を達成するための、必要な投与における及び期間にわたる、有効な量を意味する。典型的には、疾患の発症前またはより早い病期で対象において予防用量が用いられるため、予防的有効量は治療的有効量より少ないであろう。
【０１７０】
投与計画は、最適な所望の応答（例えば、治療または予防応答）をもたらすように調節されうる。例えば、単一ボーラスが投与されることが可能であり、幾つかの分割量が経時的に投与されることが可能であり、あるいは治療状況の要求に応じて用量が比例的に低減または増加されることが可能である。投与の容易さ及び投与の均一性のためには、非経口組成物を単位投与形に製剤化することが特に有利である。単位投与形は、治療すべき哺乳類対象に対する単位投与として適した物理的に分離した単位を意味し、各単位は、必要な医薬担体と共に、所望の治療効果をもたらすよう計算された活性化合物の所定量を含有する。該単位投与形の仕様は、（ａ）活性化合物の特有の特性および達成すべき個々の治療または予防効果、ならびに（ｂ）個体における感受性の対処のためのそのような活性化合物の調剤技術に固有の制限によって決まり、直接的に左右される。
【０１７１】
ＴＮＦα結合性タンパク質またはその抗原結合性部分の治療的または予防的有効量の典型的な非限定的な範囲は約０．１〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約１〜約１０ｍｇ／ｋｇである。投与量値は、軽減すべき状態のタイプおよび重症度によって変動しうる。いずれかの個々の対象の場合、具体的な投与計画は、該組成物を投与する又は該組成物の投与を監督する者の専門的判断および個々の要求に応じて経時的に調節されるべきである。本明細書に記載されている投与量範囲は典型例に過ぎず、特許請求されている組成物の範囲または実施を限定するものではない。
【０１７２】
本明細書に記載されている組成物および方法の、他の適当な修飾および応用は明らかであり、該開示または本明細書に開示されている実施形態の範囲から逸脱することなく、適当な均等物を用いて行われうることが、当業者に容易に理解されるであろう。本実施形態は、以下の実施例を参照することにより、より明らかに理解されるであろう。該実施例は例示目的で記載されているに過ぎず、限定的なものではない。
【実施例】
【０１７３】
［実施例１］：抗ヒトＴＮＦ−αモノクローナル抗体の作製
マウス抗ヒトＴＮＦ−αモノクローナル抗体を以下のとおりに得る。
【０１７４】
［実施例１．１］：ヒトＴＮＦ−α抗原でのマウスの免疫化
完全フロイントアジュバントまたはＩｍｍｕｎｏｅａｓｙアジュバント（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）と混合された２０マイクログラムの組換え精製ヒトＴＮＦ−α（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）を５匹の６〜８週齢のＢａｌｂ／Ｃマウス、５匹のＣ５７Ｂ／６マウスおよび５匹のＡＪマウスに第１日に皮下注射する。第２４日、第３８日および第４９日に、不完全フロイントアジュバントまたはＩｍｍｕｎｏｅａｓｙアジュバントと混合された２０マイクログラムの組換え精製ヒトＴＮＦ−α抗原を同じマウスに皮下注射する。第８４日または第１１２日または第１４４日に、１μｇの組換え精製ヒトＴＮＦ−α抗原をマウスに静脈内注射する。
【０１７５】
［実施例１．２］：ハイブリドーマの作製
実施例１．１に記載されている免疫化マウスから得られた脾細胞を、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５に記載されている確立された方法により、ＳＰ２／Ｏ−Ａｇ−１４細胞と５：１の比で融合させて、ハイブリドーマを得る。融合産物を、９６ウェルプレート内の、アザセリンおよびヒポキサンチンを含有する選択培地内で、ウェル当たり２．５×１０６個の脾細胞の密度でプレーティングする。融合の７〜１０日後、肉眼的ハイブリドーマコロニーが観察される。ハイブリドーマコロニーを含有する各ウェルからの上清を、ＴＮＦ−αに対する抗体の存在に関して、ＥＬＩＳＡにより試験する。ついで、ＴＮＦ−α特異的活性を示す上清を、Ｌ９２９バイオアッセイにおいてＴＮＦ−αを中和する能力の存在に関して試験する（実施例２．７に記載されているとおり）。
【０１７６】
［実施例１．３］：抗ヒトＴＮＦ−αモノクローナル抗体の特定および特徴づけ
ＴＮＦ−αに結合する抗体、およびＴＮＦ−αに特異的に結合しうる抗体、および特に、Ｌ９２９バイオアッセイにおいて５ｎＭまたはそれ未満のＩＣ５０値を有する抗体を産生するハイブリドーマを拡大させ、限界希釈によりクローニングする。
【０１７７】
ハイブリドーマ細胞を、１０％  低ＩｇＧウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ  ＃ＳＨ３０１５１，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）を含有する培地内で増殖させる。平均２５０ｍＬの各ハイブリドーマ上清（クローン集団由来のもの）を集め、濃縮し、標準的な方法によるプロテインＡアフィニティクロマトグラフィーにより精製する。ＴＮＦ−α活性を精製ｍＡｂが抑制する能力を、実施例２．７に記載されているとおり、Ｌ９２９バイオアッセイを用いて決定する。
【０１７８】
［実施例１．４］：各マウス抗ヒトＴＮＦ−αモノクローナル抗体の可変領域のアミノ酸配列の決定
各アミノ酸配列決定のために、約１０×１０６個のハイブリドーマ細胞を遠心分離により単離し、加工して、全ＲＮＡを単離する。これは、Ｔｒｉｚｏｌ（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を該製造業者の説明に従い使用して行う。ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を該製造業者の説明に従い使用して、全ＲＮＡを第１鎖ＤＮＡ合成に付す。ポリ（Ａ）＋  ＲＮＡを選択するために第１鎖合成をプライミングするために、オリゴ（ｄＴ）を使用する。ついで該第１鎖ｃＤＮＡ産物を、マウス免疫グロブリン可変領域の増幅のために設計されたプライマー（Ｉｇ−Ｐｒｉｍｅｒ  Ｓｅｔｓ，Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用するＰＣＲにより増幅する。ＰＣＲ産物をアガロースゲル上で分離し、切り出し、精製し、ついでＴＯＰＯ  Ｃｌｏｎｉｎｇキットを使用してｐＣＲ２．１−ＴＯＰＯベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）内にサブクローニングし、ＴＯＰ１０化学的コンピテント大腸菌(Ｅ．ｃｏｌｉ)（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）内に形質転換する。コロニーＰＣＲを該形質転換体上で行って、インサートを含有するクローンを特定する。ＱＩＡｐｒｅｐ  Ｍｉｎｉｐｒｅｐキット（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）を使用して、インサートを含有するクローンからプラスミドＤＮＡを単離する。Ｍ１３フォワードおよびＭ１３リバースプライマー（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈａｎｏｖｅｒ  ＭＤ）を使用して、該可変重鎖または可変軽鎖ＤＮＡ配列を決定するために、該プラスミド内のインサートを両鎖上で配列決定する。該抗ＴＮＦ−αモノクローナル抗体の可変重鎖および可変軽鎖配列を表５に示す。
【０１７９】
［実施例２］：組換え抗ヒトＴＮＦ−α抗体
［実施例２．１］：組換えキメラ抗ヒトＴＮＦ−α抗体の構築および発現
マウス抗ヒトＴＮＦ−αモノクローナル抗体ＭＡＫ１９９の重鎖定常領域をコードするＤＮＡを、細菌内の相同組換えにより、２個のヒンジ−領域アミノ酸突然変異を含有するヒトＩｇＧ１定常領域をコードするｃＤＮＡ断片により置換した。これらの突然変異は、２３４位（ＥＵ番号付け）のロイシンからアラニンへの変化、および２３５位のロイシンからアラニンへの変化である（Ｌｕｎｄら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：２６５７）。これらの抗体のそれぞれの軽鎖定常領域をヒトカッパ定常領域により置換した。ｐＨｙｂＥ発現プラスミド（米国特許公開第ＵＳ  ２００９０２３９２５９号）内に連結されたキメラ重鎖および軽鎖ｃＤＮＡのコトランスフェクションにより、完全長キメラ抗体をＨＥＫ２９３−６Ｅ細胞内で一過性に発現させた。組換えキメラ抗体を含有する細胞上清をプロテインＡセファロースクロマトグラフィーにより精製し、結合抗体を酸バッファーの添加により溶出した。抗体を中和し、ＰＢＳ中に透析した。
【０１８０】
ついで該精製キメラ抗ヒトＴＮＦ−αモノクローナル抗体を、ＥＬＩＳＡにより、ｈＴＮＦ−αタンパク質へのそれらの結合能に関して試験して、抗原結合を確認した。
【０１８１】
［実施例２．２］：ＣＤＲグラフティング抗ヒトＴＮＦ−α抗体の構築
当技術分野でよく知られた標準的な方法を適用することにより、モノクローナル抗体ＭＡＫ１９９のＶＨおよびＶＬ鎖のＣＤＲ配列（前記表５を参照されたい）を種々のヒト重鎖および軽鎖アクセプター配列内にグラフティングする。
【０１８２】
モノクローナル抗体ＭＡＫ１９９のＶＨおよびＶＬ配列に対する配列ＶＨおよびＶＬのアライメントに基づいて、以下の公知ヒト配列を選択する：
ａ）ＶＨ１−１８（ＩＧＨＶ１−１８）およびＶＨ７−４．１（ＩＧＨＶ７−４−１）、ならびに重鎖アクセプター配列を構築するための連結配列ｈＪＨ６；
ｂ）１−３９／１２および６−Ｄ１／Ａ１４、ならびに軽鎖アクセプター配列を構築するためのｈＪＫ２。
【０１８３】
ＭＡＫ１９９の対応ＶＨおよびＶＬ  ＣＤＲを該アクセプター配列内にグラフティングすることにより、ＣＤＲグラフティングヒト化および修飾ＶＨおよびＶＬ配列を調製した（前記表６も参照されたい）。
【０１８４】
［実施例２．３］：ＣＤＲグラフティング抗体におけるフレームワーク復帰突然変異の構築
ヒト化抗体フレームワーク復帰突然変異を作製するために、可変ドメインのデノボ（ｄｅ  ｎｏｖｏ）合成により、ならびに／または突然変異誘発性プライマーおよびＰＣＲ、および当技術分野でよく知られた方法を用いて、実施例２．２により調製されたＣＤＲグラフティング抗体配列内に突然変異を導入する。種々の組合せの復帰突然変異および他の突然変異を、以下のとおり、ＣＤＲグラフトのそれぞれに関して構築する。これらの突然変異に関する残基番号はＫａｂａｔ番号付け系に基づいている。
【０１８５】
重鎖ｈＭＡＫ１９９ＶＨ．２ｚに関しては、以下のバーニアおよびＶＨ／ＶＬ界面残基の１以上を以下のとおりに復帰突然変異させる：Ｖ２→Ｉ、Ｙ９１→Ｆ。
【０１８６】
追加的な突然変異には以下のものが含まれる：Ｑ１→Ｅ。
【０１８７】
重鎖ｈＭＡＫ１９９ＶＨ．２ｚに関しては、以下のバーニアおよびＶＨ／ＶＬ界面残基の１以上を以下のとおりに復帰突然変異させる：Ｖ２→Ｉ、Ｖ６７→Ｆ、Ｍ６９→Ｆ、Ｔ７１→Ｌ、Ｙ９１→Ｆ。
【０１８８】
追加的な突然変異には以下のものが含まれる：Ｑ１→Ｅ、Ｒ８２→Ｓ、Ｄ８５→Ｅ。
【０１８９】
軽鎖ｈＭＡＫ１９９Ｖｋ．１に関しては、以下のバーニアおよびＶＨ／ＶＬ界面残基の１以上を以下のとおりに復帰突然変異させる：Ａ４３→Ｔ、Ｐ４４→Ｖ、Ｆ７１→Ｙ、およびＹ８７→Ｆ。
【０１９０】
軽鎖ｈＭＡＫ１９９Ｖｋ．２に関しては、以下のバーニアおよびＶＨ／ＶＬ界面残基の１以上を以下のとおりに復帰突然変異させる：Ｖ２→Ｉ、Ａ４３→Ｔ、Ｐ４４→Ｖ、Ｋ４９→Ｙ、Ｆ７１→Ｙ、およびＹ８７→Ｆ。
【０１９１】
［実施例２．４］：ＣＤＲグラフティング抗体におけるフレームワーク復帰突然変異を含有するヒト化抗ＨＴＮＦα抗体の作製
該配列を使用して、標準的なＤＮＡ合成または増幅技術により核酸を合成し、標準的な組換えＤＮＡ技術を用いて所望の抗体フラグメントを発現ベクターへと合体させ、細胞内での発現を行うことが可能である。例えば、アミノ酸配列から核酸コドンが決定され、Ｂｌｕｅ  Ｈｅｒｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（ｗｗｗ．ｂｌｕｅｈｅｒｏｎｂｉｏ．ｃｏｍ）Ｂｏｔｈｅｌｌ，ＷＡ  ＵＳＡによりオリゴヌクレオチドＤＮＡが合成される。該オリゴヌクレオチドを３００〜２，０００塩基対の二本鎖ＤＮＡへと合体させ、プラスミドベクター内にクローニングし、配列を確認する。酵素法を用いて、クローン化断片を合体させて、完全な遺伝子を得、発現ベクター内にサブクローニングする（７，３０６，９１４；７，２９７，５４１；７，２７９，１５９；７，１５０，９６９；２００８０１１５２４３；２００８０１０２４７５；２００８００８１３７９；２００８００７５６９０；２００８００６３７８０；２００８００５０５０６；２００８００３８７７７；２００８００２２４２２；２００７０２８９０３３；２００７０２８７１７０；２００７０２５４３３８；２００７０２４３１９４；２００７０２２５２２７；２００７０２０７１７１；２００７０１５０９７６；２００７０１３５６２０；２００７０１２８１９０；２００７０１０４７２２；２００７００９２４８４；２００７００３７１９６；２００７００２８３２１；２００６０１７２４０４；２００６０１６２０２６；２００６０１５３７９１；２００３０２１５４５８；および２００３０１５７６４３を参照されたい）。
【０１９２】
例えば、前記のインシリコで構築されたヒト化抗体をｐＨｙｂＥベクター（米国特許公開第ＵＳ  ２００９／０２３９２５９号）内のマルチクローニング部位内に挿入することが可能である。細菌コロニーを単離し、プラスミドＤＮＡを抽出し、ｃＤＮＡインサートの全体を配列決定する。各抗体に対応する正しいヒト化重鎖および軽鎖をＨＥＫ２９３−６Ｅ細胞内にトランスフェクトして、完全長ヒト化抗ヒトＴＮＦ−α抗体を一過性に産生させる。該重鎖グラフティングｃＤＮＡおよび該軽鎖グラフティングｃＤＮＡを含有するｐＨｙｂＥベクターをＨＥＫ２９３−６Ｅ細胞内にコトランスフェクトした。組換えキメラ抗体を含有する細胞上清をプロテインＡセファロースクロマトグラフィーにより精製し、結合抗体を酸バッファーの添加により溶出する。抗体を中和し、ＰＢＳ中に透析する。ヒト化抗体を表７に示す。
【０１９３】
【表７】
2014503202.tif 000008
【０１９４】
［実施例２．５］：ヒト化抗ｈＴＮＦα  ｈＭＡＫ１９９抗体ＶＨ／ＶＬペア形成
【０１９５】
【表８】
2014503202.tif 000009
【０１９６】
［実施例２．６］：ＢＩＡＣＯＲＥ技術を用いるアフィニティの決定
【０１９７】
【表９】
2014503202.tif 000010
【０１９８】
ＢＩＡＣＯＲＥ法：
ＢＩＡＣＯＲＥアッセイ（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｉｎｃ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）は、オン速度およびオフ速度定数の速度論的測定により、抗体のアフィニティを決定する。標的抗原（例えば、精製組換え標的抗原）への抗体の結合は、２５℃で、ランニングＨＢＳ−ＥＰ（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ［ｐＨ７．４］，１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，３ｍＭ  ＥＤＴＡおよび０．００５％  界面活性剤Ｐ２０）を使用するＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）１０００または３０００装置（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）での、表面プラズモン共鳴に基づく測定により決定される。全ての化学物質はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ（Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）から得られ、そうでなければ、記載されている異なる入手元から得られる。例えば、１０ｍＭ  酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）中に希釈された約５０００ＲＵのヤギ抗マウスＩｇＧ，（Ｆｃγ），フラグメント特異的ポリクローナル抗体（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を、２５μｇ／ｍｌで、標準的なアミンカップリングキットを製造業者の説明および手順に従い使用して、ＣＭ５研究等級バイオセンサーチップに直接固定化する。バイオセンサー表面上の未反応部分をエタノールアミンでブロッキングする。フローセル２および４における修飾カルボキシメチルデキストラン表面を反応表面として使用する。フローセル１および３におけるヤギ抗マウスＩｇＧを含有しない未修飾カルボキシメチルデキストランを参照表面として使用する。速度論的分析のために、１：１ラングミュア結合モデルから導き出された速度式を、Ｂｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ４．０．１ソフトウェアを使用して、（グローバル・フィット解析を用いて）８つ全ての注入の会合および解離段階に同時にフィットさせる。ヤギ抗マウスＩｇＧ特異的反応表面上の捕捉のために、精製抗体をＨＥＰＥＳ緩衝食塩水中で希釈する。リガンドとして捕捉されるべき抗体（２５μｇ／ｍｌ）を５μｌ／分の流速で反応マトリックスに注入する。会合および解離速度定数ｋｏｎ（Ｍ−１ｓ−１）およびｋｏｆｆ（ｓ−１）を２５μｌ／分の連続的流速下で決定する。速度定数は、１０〜２００ｎＭの範囲の種々の抗原濃度において速度論的結合測定を行うことにより導き出される。ついで抗体と標的抗原との反応の平衡解離定数（Ｍ）を、以下の式：ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎにより、該速度論的速度定数から計算する。時間の関数として結合を記録し、速度論的速度定数を計算する。このアッセイにおいては、１０６Ｍ−１ｓ−１という速いオン速度および１０−６１ｓ−１という遅いオフ速度が測定されうる。
【０１９９】
【表１０】
2014503202.tif 000011
【０２００】
Ｂｉａｃｏｒｅ技術により特徴づけられる全てのヒト化構築物の結合が維持され、それはマウス親抗体のものに匹敵した。
【０２０１】
［実施例２．７］：ヒトＴＮＦαの中和
Ｌ９２９細胞を半コンフルエント密度まで増殖させ、０．２５％  トリプシン（Ｇｉｂｃｏ＃２５３００）を使用して回収した。該細胞をＰＢＳで洗浄し、計数し、４μｇ／ｍＬ  アクチノマイシンＤを含有するアッセイ培地内に１Ｅ６細胞／ｍＬで再懸濁させた。該細胞を９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ＃３５９９）内に１００μＬの容量および５Ｅ４細胞／ウェルで播いた。該抗体および対照ＩｇＧをアッセイ培地中で４倍濃度まで希釈し、系列１：４希釈を行った。ｈｕＴＮＦαをアッセイ培地内で４００ｐｇ／ｍＬまで希釈した。抗体サンプル（２００μＬ）をｈｕＴＮＦα（２００μＬ）に１：２の希釈系で加え、室温で０．５時間インキュベートした。
【０２０２】
該抗体／ヒトＴＮＦα溶液を１００μＬでプレート化細胞に加えて、１００ｐｇ／ｍＬ  ｈｕＴＮＦαおよび１５０ｎＭ〜０．０００１ｎＭ  抗体の最終濃度にした。該プレートを３７℃、５％  ＣＯ２で２０時間インキュベートした。生存性を定量するために、１００μＬを該ウェルから取り出し、１０μＬのＷＳＴ−１試薬（Ｒｏｃｈｅ  ｃａｔ＃  １１６４４８０７００１）を加えた。プレートをアッセイ条件下で３．５時間インキュベートした。該プレートをＳｐｅｃｔｒｏｍａｘ  １９０  ＥＬＩＳＡプレートリーダーでＯＤ４２０〜６００ｎｍで読取った。幾つかのアッセイからの平均ＥＣ５０が表１０に含まれている。
【０２０３】
【表１１】
2014503202.tif 000012
【０２０４】
全ての抗ｈＴＮＦα抗体が該ＴＮＦα中和アッセイにおいて中和を示した。
【０２０５】
［実施例２．８］：ヒト化モノクローナル抗体の物理化学的およびインビトロ安定性分析
サイズ排除クロマトグラフィー
抗体を水で２．５ｍｇ／ｍＬに希釈し、ＴＳＫゲルＧ３０００  ＳＷＸＬカラム（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，ｃａｔ＃  ｋ５５３９−０５ｋ）を使用して、２０ｍＬをＳｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣ系で分析した。サンプルを２１１ｍＭ  硫酸ナトリウム、９２ｍＭ  リン酸ナトリウム（ｐＨ７．０）で０．３ｍＬ／分の流速で該カラムから溶出した。ＨＰＬＣ系運転条件は以下のとおりであった。
移動相：２１１ｍＭ  Ｎａ２ＳＯ４、９２ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４＊７Ｈ２Ｏ、ｐＨ７．０
勾配：無勾配
流速：０．３ｍＬ／分
検出器波長：２８０ｎｍ
オートサンプラー冷却温度：４℃
カラムオーブン温度：外界
実施時間：５０分
【０２０６】
表１１は、前記方法により決定された、％単量体（単量体百分率）（予想分子量の非凝集タンパク質）として表された抗体構築物の複数のデータを含む。
【０２０７】
【表１２】
2014503202.tif 000013
【０２０８】
抗ｈＴＮＦα抗体は優れたＳＥＣプロファイルを示し、最良体は＞９５％単量体を示した。
【０２０９】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
還元および非還元の両方の条件下、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により抗体を分析する。アダリムマブのロットＡＦＰ０４Ｃを対照として使用する。還元条件の場合、該サンプルを、１００ｍＭ  ＤＴＴを含有する２×トリスグリシンＳＤＳ−ＰＡＧＥサンプルバッファー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ｃａｔ＃ＬＣ２６７６，ｌｏｔ＃１３２３２０８）と１：１で混合し、６０℃で３０分間加熱する。非還元条件の場合、該サンプルをサンプルバッファーと１：１で混合し、１００℃で５分間加熱する。該還元サンプル（１０ｍｇ／レーン）を１２％  プレキャスト  トリス−グリシンゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ｃａｔ＃ＥＣ６００５ｂｏｘ，ｌｏｔ＃６１１１０２１）上にローディングし、該非還元サンプル（１０ｍｇ／レーン）を８％〜１６％  プレキャスト  トリス−グリシンゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ｃａｔ＃ＥＣ６０４５ｂｏｘ，ｌｏｔ＃６１１１０２１）上にローディングする。ＳｅｅＢｌｕｅ  Ｐｌｕｓ  ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ｃａｔ＃ＬＣ５９２５，ｌｏｔ＃１３５１５４２）を分子量マーカーとして使用する。該ゲルをＸＣｅｌｌ  ＳｕｒｅＬｏｃｋミニセルゲルボックス（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ｃａｔ＃ＥＩ０００１）においてランニングさせ、まず、該ゲル内で該サンプルを積層させることにより７５ボルトの電圧を適用し、ついで、色素先端が該ゲルの底に達するまで１２５ボルトの一定電圧を適用することにより、該タンパク質を分離する。使用したランニングバッファーは、１０×トリスグリシンＳＤＳバッファー（ＡＢＣ，ＭＰＳ−７９−０８０１０６）から調製された１×トリスグリシンＳＤＳバッファーである。該ゲルをコロイド性青色染料（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ｃａｔ＃４６−７０１５，４６−７０１６）で一晩染色し、バックグラウンドが透明になるまでＭｉｌｌｉ−Ｑ水で脱染する。ついで該染色ゲルを、Ｅｐｓｏｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎスキャナー（モデル１６８０，Ｓ／Ｎ  ＤＡＳＸ００３６４１）を使用してスキャンする。
【０２１０】
沈降速度分析
抗体を３個の標準的な２セクターカーボンエポンセンターピース（ｔｗｏ−ｓｅｃｔｏｒ  ｃａｒｂｏｎ  ｅｐｏｎ  ｃｅｎｔｅｒｐｉｅｃｅ）のそれぞれのサンプルチャンバ内にローディングする。これらのセンターピースは１．２ｃｍの光路長を有し、サファイア・ウィンドウ（ｓａｐｐｈｉｒｅ  ｗｉｎｄｏｗ）を備えている。参照バッファーにはＰＢＳを使用、各チャンバの容積は１４０μＬであった。Ｂｅｃｋｍａｎ  ＰｒｏｔｅｏｍｅＬａｂ  ＸＬ−Ｉ分析用超遠心機（シリアル＃ＰＬ１０６Ｃ０１）において４穴（ＡＮ−６０Ｔｉ）ローターを使用して、全てのサンプルを同時に検査する。
【０２１１】
実施条件をプログラムし、ＰｒｏｔｅｏｍｅＬａｂ（ｖ５．６）を使用して遠心機の制御を行う。該サンプルおよびローターを１時間にわたって熱的に平衡させた後、分析を行う（２０．０±０．１℃）。適切な細胞ローディングの確認を３０００ｒｐｍで行い、単一のスキャンを各セルに関して記録する。沈降速度条件は以下のとおりである：
サンプルセル容積：４２０ｍＬ
参照セル容積：４２０ｍＬ
温度：２０℃
ローター（回転）速度：３５，０００ｒｐｍ
時間：８：００時間
ＵＶ波長：２８０ｎｍ
ラジアルステップサイズ：０．００３ｃｍ
データ収集：シグナル平均化を伴わずに、ステップ当たり、１データ点
スキャン総数：１００。
【０２１２】
完全抗体のＬＣ−ＭＳ分子量測定
完全抗体の分子量をＬＣ−ＭＳにより分析する。各抗体を約１ｍｇ／ｍＬまで水で希釈する。タンパク質マイクロトラップ（Ｍｉｃｈｒｏｍ  Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｉｎｃ，ｃａｔ＃００４／２５１０９／０３）を有する１１００  ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ）系を使用して、５ｍｇの該サンプルを脱塩し、ＡＰＩ  Ｑｓｔａｒパルサーｉ質量分析計（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）内に導入する。短い勾配を用いて、該サンプルを溶出する。該勾配は、移動相Ａ（０．０８％  ＦＡ，０．０２％  ＴＦＡ（ＨＰＬＣ水中））および移動相Ｂ（０．０８％  ＦＡおよび０．０２％  ＴＦＡ（アセトニトリル中））で５０ｍＬ／分の流速で行う。該質量分析計は、２０００〜３５００の質量対電荷比のスキャン範囲で、４．５ｋボルトのスプレー電圧で操作する。
【０２１３】
抗体軽鎖および重鎖のＬＣ−ＭＳ分子量測定
抗体軽鎖（ＬＣ）、重鎖（ＨＣ）および脱グリコシル化ＨＣの分子量測定をＬＣ−ＭＳにより分析する。抗体を１ｍｇ／ｍＬまで水で希釈し、該サンプルを最終濃度１０ｍＭのＤＴＴで３７℃で３０分間、ＬＣおよびＨＣに還元する。該抗体を脱グリコシル化するために、１００ｍｇの該抗体を、１００ｍＬの合計体積中、２ｍＬのＰＮＧアーゼＦ、５ｍＬの１０％  Ｎ−オクチルグルコシドと共に３７℃で一晩インキュベートする。脱グリコシル化後、該サンプルを最終濃度１０ｍＭのＤＴＴで３７℃で３０分間還元する。Ｃ４カラム（Ｖｙｄａｃ，ｃａｔ＃２１４ＴＰ５１１５，Ｓ／Ｎ  ０６０２０６５３７２０４０６９）を有するＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣ系を使用して、該サンプル（５ｍｇ）を脱塩し、ＡＰＩ  Ｑｓｔａｒパルサーｉ質量分析計（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）内に導入する。短い勾配を用いて、該サンプルを溶出する。該勾配は、移動相Ａ（０．０８％  ＦＡ，０．０２％  ＴＦＡ（ＨＰＬＣ水中））および移動相Ｂ（０．０８％  ＦＡおよび０．０２％  ＴＦＡ（アセトニトリル中））で５０ｍＬ／分の流速で行う。該質量分析計は、８００〜３５００の質量対電荷比のスキャン範囲で、４．５ｋボルトのスプレー電圧で操作する。
【０２１４】
ペプチドマッピング
抗体を７５ｍＭ  炭酸水素アンモニウム中の最終濃度６Ｍの塩酸グアニジンで室温で１５分間変性させる。該変性サンプルを最終濃度１０ｍＭのＤＴＴで３７℃で６０分間還元し、ついで暗所にて３７℃で３０分間、５０ｍＭ  ヨード酢酸（ＩＡＡ）でのアルキル化を行う。アルキル化後、該サンプルを４リットルの１０ｍＭ  炭酸水素アンモニウムに対して４℃で一晩透析する。該透析サンプルを１ｍｇ／ｍＬの１０ｍＭ  炭酸水素アンモニウム（ｐＨ７．８）で希釈し、１００ｍｇの抗体をトリプシン（Ｐｒｏｍｅｇａ，ｃａｔ＃Ｖ５１１１）またはＬｙｓ−Ｃ（Ｒｏｃｈｅ，ｃａｔ＃  １１  ０４７  ８２５  ００１）で１：２０（ｗ／ｗ）のトリプシン／Ｌｙｓ−Ｃ：抗体比にて３７℃で４時間消化する。消化物を１ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌでクエンチする。質量分析計での検出を用いるペプチドマッピングのために、４０ｍＬの該消化物を、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣ系を用いるＣ１８カラム（Ｖｙｄａｃ，ｃａｔ＃  ２１８ＴＰ５１，Ｓ／Ｎ  ＮＥ９６０６  １０．３．５）上での逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰＨＰＬＣ）により分離する。該ペプチド分離は、移動相Ａ（０．０２％  ＴＦＡおよび０．０８％  ＦＡ（ＨＰＬＣ等級水中））および移動相Ｂ（０．０２％  ＴＦＡおよび０．０８％  ＦＡ（アセトニトリル中））を用いる勾配で５０ｍＬ／分の流速で行う。該ＡＰＩ  ＱＳＴＡＲ  Ｐｕｌｓａｒ  ｉ質量分析計は、４．５ｋボルトのスプレー電圧および８００〜２５００の質量対電荷比のスキャン範囲で正モードで操作する。
【０２１５】
ジスルフィド結合マッピング
該抗体を変性させるために、１００ｍＭの該抗体を１００ｍＭ  炭酸水素アンモニウム中の３００ｍＬの８Ｍ  グアニジンＨＣｌと混合する。ｐＨが７〜８となるようにｐＨを調べ、該サンプルを、最終濃度６ＭのグアニジンＨＣｌ中、室温で１５分間変性させる。該変性サンプルの一部（１００ｍＬ）を６００ｍＬのＭｉｌｌｉ−Ｑ水で希釈して、１Ｍの最終グアニジン−ＨＣｌ濃度を得る。該サンプル（２２０ｍｇ）をトリプシン（Ｐｒｏｍｅｇａ，ｃａｔ＃Ｖ５１１１，ロット＃  ２２２６５９０１）またはＬｙｓ−Ｃ（Ｒｏｃｈｅ，ｃａｔ＃  １１０４７８２５００１，ロット＃  １２８０８０００）で１：５０のトリプシンまたはＬｙｓ−Ｃ：抗体（ｗ／ｗ）比（４．４ｍｇ  酵素：２２０ｍｇ  サンプル）にて３７℃で約１６時間消化する。更に５ｍｇのトリプシンまたはＬｙｓ−Ｃを該サンプルに加え、消化を３７℃で更に２時間進行させる。１ｍＬのＴＦＡを各サンプルに加えることにより、消化を停止させる。Ａｇｉｌｅｎｔ  ＨＰＬＣ系でＣ１８カラム（Ｖｙｄａｃ，ｃａｔ＃  ２１８ＴＰ５１  Ｓ／Ｎ  ＮＥ０２０６３０−４−１Ａ）を使用するＲＰＨＰＬＣにより、消化されたサンプルを分離する。該分離は、５０ｍＬ／分の流速で移動相Ａ（０．０２％  ＴＦＡおよび０．０８％  ＦＡ（ＨＰＬＣ等級水中））および移動相Ｂ（０．０２％  ＴＦＡおよび０．０８％  ＦＡ（アセトニトリル中））を用いて、ペプチドマッピングに用いたのと同じ勾配で行う。該ＨＰＬＣ操作条件は、ペプチドマッピングに用いたものと同じである。該ＡＰＩ  ＱＳＴＡＲ  Ｐｕｌｓａｒ  ｉ質量分析計は、４．５ｋボルトのスプレー電圧および８００〜２５００の質量対電荷比のスキャン範囲で正モードで操作する。該ペプチドの観察されたＭＷを、ジスルフィド結合により連結されたトリプシンまたはＬｙｓ−Ｃ処理ペプチドの予想ＭＷと合致させることにより、ジスルフィド結合を帰属する。
【０２１６】
遊離スルフヒドリル決定
抗体における遊離システインを定量するために用いた方法は、特徴的な発色産物５−チオ−（２−ニトロ安息香酸）（ＴＮＢ）を与える、スルフヒドリル基（ＳＨ）とのエルマン試薬５，５¢−ジチオ−ビス（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）の反応に基づくものである。該反応は、式：
ＤＴＮＢ  ＋  ＲＳＨ  →  ＲＳ−ＴＮＢ  ＋  ＴＮＢ−  ＋  Ｈ＋
で示される。
【０２１７】
Ｃａｒｙ５０分光光度計を使用して、該ＴＮＢ−の吸光度を４１２ｎｍで測定する。２−メルカプトエタノール（ｂ−ＭＥ）の希釈液を遊離ＳＨ標準物として使用して、吸収曲線をプロットし、該タンパク質中の遊離スルヒドリル基の濃度を該サンプルの４１２ｎｍにおける吸光度から決定する。
【０２１８】
該ｂ−ＭＥ標準ストックは、０．１４２ｍＭの最終濃度までのＨＰＬＣ等級水での１４．２Ｍのｂ−ＭＥの系列希釈により調製する。ついで各濃度に関する３通りの標準物を調製する。アミコンウルトラ（ａｍｉｃｏｎ  ｕｌｔｒａ）１０，０００  ＭＷＣＯ遠心フィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，ｃａｔ＃  ＵＦＣ８０１０９６，ロット＃  Ｌ３ＫＮ５２５１）を使用して抗体を１０ｍｇ／ｍＬに濃縮し、該バッファーを、アダリムマブに使用される製剤化バッファー（５．５７ｍＭ  第一リン酸ナトリウム、８．６９ｍＭ  第二リン酸ナトリウム、１０６．６９ｍＭ  ＮａＣｌ、１．０７ｍＭ  クエン酸ナトリウム、６．４５ｍＭ  クエン酸、６６．６８ｍＭ  マンニトール、ｐＨ５．２、０．１％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ）に変更する。該サンプルを振とう機上で室温で２０分間混合する。ついで１８０ｍＬの１００ｍＭ  トリスバッファー（ｐＨ８．１）を各サンプルおよび標準物に加え、ついで１０ｍＭ  リン酸バッファー（ｐＨ８．１）中の３００ｍＬの２ｍＭ  ＤＴＮＢを加える。十分に混合した後、該サンプルおよび標準物をＣａｒｙ  ５０  分光光度計で４１２ｎｍの吸光度に関して測定する。ｂ−ＭＥ標準物のＯＤ４１２および遊離ＳＨの量をプロットすることにより、標準曲線を得る。ブランクの差し引きの後、この曲線に基づいてサンプルの遊離ＳＨ含量を計算する。
【０２１９】
弱陽イオン交換クロマトグラフィー
抗体を１０ｍＭ  リン酸ナトリウム（ｐＨ６．０）で１ｍｇ／ｍＬに希釈する。ＷＣＸ−１０  ＰｒｏＰａｃ分析用カラム（Ｄｉｏｎｅｘ，ｃａｔ＃  ０５４９９３，Ｓ／Ｎ  ０２７２２）と共にＳｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣ系を使用して、電荷不均一性を分析する。該サンプルを、８０％  移動相Ａ（１０ｍＭ  リン酸ナトリウム、ｐＨ６．０）および２０％  移動相Ｂ（１０ｍＭ  リン酸ナトリウム、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ６．０）中の該カラム上にローディングし、１．０ｍＬ／分の流速で溶出する。
【０２２０】
オリゴ糖のプロファイリング
抗体のＰＮＧアーゼＦ処理の後に遊離したオリゴ糖を２−アミノベンズアミド（２−ＡＢ）標識試薬で誘導体化する。順相高速液体クロマトグラフィー（ＮＰＨＰＬＣ）により該蛍光標識オリゴ糖を分離し、既知標準物との保持時間の比較に基づいて種々の形態のオリゴ糖を特徴づけする。
【０２２１】
まず、Ｎ結合オリゴ糖を重鎖のＦｃ部分から切断するために、該抗体をＰＮＧアーゼＦで消化する。該抗体（２００ｍｇ）を２ｍＬのＰＮＧアーゼＦおよび３ｍＬの１０％  Ｎ−オクチルグルコシドと共に５００ｍＬ  エッペンドルフチューブ内に配置する。リン酸緩衝食塩水を加えて最終体積を６０ｍＬにする。該サンプルを、７００ＲＰＭに設定されたエッペンドルフ・サーモミキサー内で３７℃で一晩インキュベートする。アダリムマブのロットＡＦＰ０４Ｃも対照としてＰＮＧアーゼＦで消化する。
【０２２２】
ＰＮＧアーゼＦ処理後、該サンプルを、７５０ＲＰＭに設定されたエッペンドルフ・サーモミキサー内で９５℃で５分間インキュベートして、該タンパク質を析出させ、ついで該サンプルをエッペンドルフ遠心機内に１０，０００ＲＰＭで２分間配置して、該沈殿タンパク質を遠心沈殿させる。該オリゴ糖を含有する上清を５００ｍＬ  エッペンドルフチューブに移し、スピード・バック（ｓｐｅｅｄ−ｖａｃ）内で６５℃で乾燥させる。
【０２２３】
Ｐｒｏｚｙｍｅから購入した２ＡＢ標識キット（ｃａｔ＃  ＧＫＫ−４０４，ロット＃  １３２０２６）を使用して、該オリゴ糖を２ＡＢで標識する。該標識試薬を該製造業者の説明に従い調製する。酢酸（１５０ｍＬ，キットにおいて提供されているもの）をＤＭＳＯバイアル（キットにおいて提供されているもの）に加え、該溶液を上下に数回ピペッティングすることにより混合する。該酢酸／ＤＭＳＯ混合物（１００ｍＬ）を２−ＡＢ染料のバイアルに移し（使用の直前）、該染料が完全に溶解するまで混合する。ついで該染料溶液を還元剤のバイアル（キットにおいて提供されているもの）に加え、十分に混合する（標識試薬）。該標識試薬（５ｍＬ）を各乾燥オリゴ糖サンプルバイアルに加え、十分に混合する。該反応バイアルを、６５℃および７００〜８００ＲＰＭに設定されたエッペンドルフ・サーモミキサー内に２時間の反応時間にわたって配置する。
【０２２４】
該標識反応後、ＰｒｏｚｙｍｅからのＧｌｙｃｏＣｌｅａｎ  Ｓ  Ｃａｒｔｒｉｄｇｅｓ（ｃａｔ＃  ＧＫＩ−４７２６）を使用して過剰の蛍光染料を除去する。該サンプルを加える前に、該カートリッジを１ｍＬのｍｉｌｌｉ−Ｑ水で洗浄し、ついで５イッシュ（ｉｓｈ）の１ｍＬの３０％  酢酸溶液で洗浄する。該サンプルを加える直前に、１ｍＬのアセトニトリル（Ｂｕｒｄｉｃｋおよび  Ｊａｃｋｓｏｎ，ｃａｔ＃  ＡＨ０１５−４）を該カートリッジに加える。
【０２２５】
該アセトニトリルの全てが該カートリッジを通過した後、該サンプルを、新たに洗浄されたディスクの中心にスポットし、該ディスク上に１０分間吸着させる。該ディスクを１ｍＬのアセトニトリルで洗浄し、ついで５イッシュの１ｍＬの９６％  アセトニトリルで洗浄する。該カートリッジを１．５ｍＬ  エッペンドルフチューブ上に配置し、該２−ＡＢ標識オリゴ糖を３イッシュ（各イッシュにつき４００ｍＬ）のｍｉｌｌｉ  Ｑ水で溶出する。
【０２２６】
Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣ系に接続されたＧｌｙｃｏｓｅｐ  Ｎ  ＨＰＬＣ（ｃａｔ＃  ＧＫＩ−４７２８）カラムを使用して、該オリゴ糖を分離する。該Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣ系は、系コントローラ、脱気装置、バイナリーポンプ、サンプル冷却器を伴うオートサンプラー、および蛍光検出器からなる。
【０２２７】
高温での安定性
該抗体の最終濃度を適当なバッファー、界面活性剤、安定剤および／または糖で２ｍｇ／ｍＬに調節する。ついで該抗体溶液を濾過滅菌し、０．２５ｍＬのアリコートを無菌条件下で調製する。該アリコートを−８０℃、５℃、２５℃または４０℃で１、２または３週間放置する。該インキュベーション期間の終了時に、該サンプルをサイズ排除クロマトグラフィーおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析する。
【０２２８】
該安定性サンプルを還元性および非還元性の両方の条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析する。用いる方法は、本明細書に記載されているものと同じである。該ゲルをコロイド性青色染料（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ｃａｔ＃  ４６−７０１５，４６−７０１６）で一晩染色し、バックグラウンドが透明になるまでＭｉｌｌｉ−Ｑ水で脱染する。ついで、Ｅｐｓｏｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎスキャナー（モデル１６８０，Ｓ／Ｎ  ＤＡＳＸ００３６４１）を使用して、該染色ゲルをスキャンする。より高い感度を得るために、銀染色キット（Ｏｗｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、同じゲルを銀染色し、該製造業者により提供される推奨方法を用いる。
【０２２９】
［実施例２．９］：ＨＥＫ  ２９３−６Ｅ細胞におけるトランスフェクションおよび発現
該抗ｈＴＮＦα抗体ベクター構築物をタンパク質産生のために２９３細胞内にトランスフェクトした。用いた２９３一過性トランスフェクション法は、Ｄｕｒｏｃｈｅｒら（２００２）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３０（２）：Ｅ９およびＰｈａｍら（２００５）Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ９０（３）：３３２−４４に公開されている方法の変法である。該トランスフェクションにおいて使用した試薬には以下のものが含まれていた。
・１３０ｒｐｍ、３７℃および５％  ＣＯ２に設定された加湿インキュベーターにおいて使い捨てエーレンマイヤーフラスコ内で培養されたＨＥＫ  ２９３−６Ｅ細胞（ＥＢＮＡ１を安定に発現するヒト胎児腎細胞系；Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｕｎｃｉｌ  Ｃａｎａｄａから入手）。
・培地：ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ２９３発現培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  １２３３８−０１８）＋２５μｇ／Ｌ  ゲネチシン（Ｇ４１８）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  １０１３１−０２７）および０．１％  プルロニックＦ−６８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ２４０４０−０３２）。
・トランスフェクション培地：ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ２９３発現培地＋１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  １５６３０−０８０）。
・ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）ストック：直鎖状２５ｋＤａ  ＰＥＩ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して調製され−１５℃未満で貯蔵された１ｍｇ／ｍＬ  無菌ストック溶液（ｐＨ７．０）。
・トリプトン供給培地：ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ２９３発現培地内のトリプトンＮ１（Ｏｒｇａｎｏｔｅｃｈｎｉｅ，１９５５４）の５％  ｗ／ｖ  無菌ストック。
【０２３０】
トランスフェクションのための細胞調製：トランスフェクションの約２〜４時間前に、ＨＥＫ  ２９３−６Ｅ細胞を遠心分離により集め、生細胞約１００万個／ｍＬの細胞密度で培地に再懸濁させた。各トランスフェクションのために、４０ｍＬの該細胞懸濁液を使い捨ての２５０ｍＬ  エーレンマイヤーフラスコ内に移し、２〜４時間インキュベートした。
【０２３１】
トランスフェクション：トランスフェクション培地およびＰＥＩストックを室温（ＲＴ）に予め加温した。各トランスフェクションに関して、２５μｇのプラスミドＤＮＡおよび５０μｇのポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を５ｍＬのトランスフェクション培地内で一緒にし、室温で１５〜２０分間インキュベートして、ＤＮＡ：ＰＥＩ複合体を形成させた。ＢＲ３−Ｉｇトランスフェクションのために、２５μｇのＢＲ３−Ｉｇプラスミドをトランスフェクションごとに使用した。それぞれの５ｍＬのＤＮＡ：ＰＥＩ複合体混合物を、予め調製された４０ｍＬの培養に加え、１３０ｒｐｍ、３７℃および５％  ＣＯ２に設定された加湿インキュベータに戻した。２０〜２８時間後、５ｍＬのトリプトン供給培地を各トランスフェクションに加え、該培養を６日間継続した。
【０２３２】
表１２は、ＨＥＫ  ２９３−６Ｅ細胞における、ミリグラム／リットルとして表された親抗体に関する収量データを含む。
【０２３３】
【表１３】
2014503202.tif 000014
【０２３４】
全ての抗体がＨＥＫ  ２９３−６Ｅ細胞において良好に発現された。ほとんどの場合、＞５０ｍｇ／Ｌの精製抗体がＨＥＫ  ２９３−６Ｅ細胞の上清から容易に入手可能であった。
【０２３５】
本開示は、分子生物学の分野でよく知られた技術の全体を、出典明示により援用するものである。これらの技術には、限定的なものではないが以下の刊行物に記載されている技術が含まれる。
Ａｕｓｕｂｅｌら編，Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（４ｔｈ  Ｅｄ．１９９９）Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ（ＩＳＢＮ  ０−４７１−３２９３８−Ｘ）．
ＬｕおよびＷｅｉｎｅｒ編，Ｃｌｏｎｉｎｇおよび  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（２００１）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  Ｐｒｅｓｓ，Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ，２９８  ｐｐ．（ＩＳＢＮ  １−８８１２９９−２１−Ｘ）．
ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ編，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（２００１）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，ＮＹ，７９０  ｐｐ．（ＩＳＢＮ  ３−５４０−４１３５４−５）．
ＯｌｄおよびＰｒｉｍｒｏｓｅ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ：Ａｎ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｏ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（３ｄ  Ｅｄ．１９８５）Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ．Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ；Ｖ．２：４０９  ｐｐ．（ＩＳＢＮ  ０−６３２−０１３１８−４）．
Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｄ  ｅｄ．（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ），Ｖｏｌｓ．１−３（ＩＳＢＮ  ０−８７９６９−３０９−６）．
Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  Ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ：Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｏ  Ｇｅｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９８７）ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，ＮＹ（翻訳：Ｈｏｒｓｔ  Ｉｂｅｌｇａｕｆｔｓ），６３４  ｐｐ．（ＩＳＢＮ  ０−８９５７３−６１４−４）．
【０２３６】
出典明示による援用
本出願の全体にわたって引用されうる全ての引用参考文献（文献参照物、特許、特許出願およびウェブサイトを含む）の内容の全体を、それらにおいて引用されている参考文献も同様に、あらゆる目的で、参照により本明細書に明示的に組込むこととする。本実施形態の実施は、特に示されていない限り、当技術分野でよく知られている免疫学、分子生物学および細胞生物学の通常の技術を用いる。
【０２３７】
均等物
該実施形態は、その精神または必須特徴から逸脱することなく、他の特定の形態においても実施されうる。したがって、前記実施形態は、全ての点において、限定的なものではなく例示的なものであるとみなされるべきである。したがって、前記の説明ではなく添付の特許請求の範囲によって範囲が示されており、したがって、特許請求の範囲の均等論の意義および範囲内に含まれる全ての変更が本発明に含まれると意図される。
【配列表】
2014503202000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成25年8月7日(2013.8.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５または配列番号４６を含む抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２】
配列番号３１（ＣＤＲ−Ｈ１）の残基３１−３５、配列番号３１（ＣＤＲ−Ｈ２）の残基５０−６６、配列番号３１（ＣＤＲ−Ｈ３）の残基９９−１１３、配列番号３２（ＣＤＲ−Ｌ１）の残基２４−３４、配列番号３２（ＣＤＲ−Ｌ２）の残基５０−５６または配列番号３２（ＣＤＲ−Ｌ３）の残基８９−９７を含む少なくとも１つのＣＤＲを含む、ＴＮＦαに結合しうる抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項３】
結合性タンパク質が少なくとも３つのＣＤＲを含む、請求項２に記載の結合性タンパク質。
【請求項４】
少なくとも３つのＣＤＲが、
（ａ）配列番号３１（ＣＤＲ−Ｈ１）の残基３１−３５、配列番号３１（ＣＤＲ−Ｈ２）の残基５０−６６および配列番号３１（ＣＤＲ−Ｈ３）の残基９９−１１３、または
（ｂ）配列番号３２（ＣＤＲ−Ｌ１）の残基２４−３４、配列番号３２（ＣＤＲ−Ｌ２）の残基５０−５６および配列番号３２（ＣＤＲ−Ｌ３）の残基８９−９７
の可変ドメインＣＤＲセットを含む、請求項３に記載の結合性タンパク質。
【請求項５】
少なくとも２つの可変ドメインＣＤＲセットを含む、請求項４に記載の結合性タンパク質。
【請求項６】
結合性タンパク質が、
（ａ）配列番号３１（ＣＤＲ−Ｈ１）の残基３１−３５、配列番号３１（ＣＤＲ−Ｈ２）の残基５０−６６および配列番号３１（ＣＤＲ−Ｈ３）の残基９９−１１３、ならびに
（ｂ）配列番号３２（ＣＤＲ−Ｌ１）の残基２４−３４、配列番号３２（ＣＤＲ−Ｌ２）の残基５０−５６および配列番号３２（ＣＤＲ−Ｌ３）の残基８９−９７
の両方を含む、請求項５に記載の結合性タンパク質。
【請求項７】
ヒトアクセプターフレームワークを更に含む、請求項６に記載の結合性タンパク質。
【請求項８】
ヒトアクセプターフレームワークが配列番号１０〜１９または配列番号２０〜３０のいずれか１つを含む、請求項７に記載の結合性タンパク質。
【請求項９】
ヒトアクセプターフレームワークが少なくとも１つのフレームワーク領域アミノ酸置換を含み、フレームワークのアミノ酸配列がヒトアクセプターフレームワークの配列に対して少なくとも６５％同一であり、ヒトアクセプターフレームワークと同一である少なくとも７０個のアミノ酸残基を含む、請求項７または８に記載の結合性タンパク質。
【請求項１０】
ヒトアクセプターフレームワークが、ＣＤＲに隣接した残基、グリコシル化部位残基、稀有残基、ヒトＴＮＦ−αと相互作用しうる残基、ＣＤＲと相互作用しうる残基、カノニカル（ｃａｎｏｎｉｃａｌ）残基、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との接触残基、バーニア（Ｖｅｒｎｉｅｒ）領域内の残基、およびチョチア（Ｃｈｏｔｈｉａ）により定義された可変領域鎖ＣＤＲ１とカバト（Ｋａｂａｔ）により定義された第１重鎖フレームワークとの間で重複する領域内の残基に、少なくとも１つのフレームワーク領域アミノ酸置換を含む、請求項８に記載の結合性タンパク質。
【請求項１１】
残基が１Ｈ、２Ｈ、６７Ｈ、６９Ｈ、７１Ｈ、８２Ｈ、８５Ｈ、９１Ｈおよび２Ｌ、４３Ｌ、４４Ｌ、４９Ｌ、７１Ｌまたは８７Ｌである、請求項１０に記載の結合性タンパク質。
【請求項１２】
結合性タンパク質がコンセンサスヒトアクセプターを含む、請求項１１に記載の結合性タンパク質。
【請求項１３】
（ａ）配列番号３３、配列番号３４、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１および配列番号４２を含む可変重鎖ポリペプチド、ならびに
（ｂ）配列番号３５、配列番号３６、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５および配列番号４６を含む可変軽鎖ポリペプチド
を含む、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項１４】
結合性タンパク質が、以下のそれぞれのアミノ酸配列：
配列番号３１および配列番号３２；
配列番号３３および配列番号３５；
配列番号３３および配列番号４３；
配列番号３３および配列番号４４；
配列番号３３および配列番号３６；
配列番号３３および配列番号４５；
配列番号３３および配列番号４６；
配列番号３４および配列番号３５；
配列番号３４および配列番号４３；
配列番号３４および配列番号４４；
配列番号３４および配列番号３６；
配列番号３４および配列番号４５；
配列番号３４および配列番号４６；
配列番号３７および配列番号３５；
配列番号３７および配列番号４３；
配列番号３７および配列番号４４；
配列番号３７および配列番号３６；
配列番号３７および配列番号４５；
配列番号３７および配列番号４６；
配列番号３８および配列番号３５；
配列番号３８および配列番号４３；
配列番号３８および配列番号４４；
配列番号３８および配列番号３６；
配列番号３８および配列番号４５；
配列番号３８および配列番号４６；
配列番号３９および配列番号３５；
配列番号３９および配列番号４３；
配列番号３９および配列番号４４；
配列番号３９および配列番号３６；
配列番号３９および配列番号４５；
配列番号３９および配列番号４６；
配列番号４０および配列番号３５，
配列番号４０および配列番号４３；
配列番号４０および配列番号４４；
配列番号４０および配列番号３６；
配列番号４０および配列番号４５；
配列番号４０および配列番号４６；
配列番号４１および配列番号３５；
配列番号４１および配列番号４３；
配列番号４１および配列番号４４；
配列番号４１および配列番号３６；
配列番号４１および配列番号４５；
配列番号４１および配列番号４６；
配列番号４２および配列番号３５；
配列番号４２および配列番号４３；
配列番号４２および配列番号４４；
配列番号４２および配列番号３６；
配列番号４２および配列番号４５；または
配列番号４２および配列番号４６
を含む可変重鎖ポリペプチドおよび可変軽鎖ポリペプチドを含む、請求項１３に記載の結合性タンパク質。
【請求項１５】
結合性タンパク質が免疫グロブリン分子、ジスルフィド結合Ｆｖ、モノクローナル抗体、ｓｃＦｖ、キメラ抗体、単一ドメイン抗体、ＣＤＲグラフティング抗体、ジアボディ、ヒト化抗体、多重特異性抗体、Ｆａｂ、二重特異性抗体、ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質、Ｆａｂ’、二重特異性抗体、Ｆ（ａｂ’）２またはＦｖである、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項１６】
結合性タンパク質が、ヒトＩｇＭ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、ヒトＩｇＥ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、ヒトＩｇＧ３定常ドメインまたはヒトＩｇＡ定常ドメインを含む、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項１７】
配列番号２または配列番号３のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域を更に含む、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項１８】
配列番号４または配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域を更に含む、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項１９】
結合性タンパク質がヒトＴＮＦ−αを中和しうる、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項２０】
結合性タンパク質が、表面プラズモン共鳴による測定で少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１または少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１の、標的に対するオン（ｏｎ）速度定数（Ｋｏｎ）を有する、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項２１】
結合性タンパク質が、表面プラズモン共鳴による測定で多くとも約１０−３ｓ−１、多くとも約１０−４ｓ−１、多くとも約１０−５ｓ−１または多くとも約１０−６ｓ−１の、標的に対するオフ（ｏｆｆ）速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項２２】
結合性タンパク質が、多くとも約１０−７Ｍ、多くとも約１０−８Ｍ、多くとも約１０−９Ｍ、多くとも約１０−１０Ｍ、多くとも約１０−１１Ｍ、多くとも約１０−１２Ｍまたは多くとも１０−１３Ｍの、標的に対する解離定数（ＫＤ）を有する、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項２３】
結合性タンパク質が、多くとも約１０−７Ｍ、多くとも約１０−８Ｍ、多くとも約１０−９Ｍ、多くとも約１０−１０Ｍ、多くとも約１０−１１Ｍ、多くとも約１０−１２Ｍまたは多くとも１０−１３Ｍの、ＴＮＦ−αに対する解離定数（ＫＤ）を有する、請求項２２に記載の結合性タンパク質。
【請求項２４】
結合性タンパク質が、免疫接着分子、イメージング剤、治療用物質または細胞毒性物質を更に含む、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項２５】
イメージング剤が放射能標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識またはビオチンである、請求項２４に記載の結合性タンパク質。
【請求項２６】
放射能標識が３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍである、請求項２５に記載の結合性タンパク質。
【請求項２７】
治療用または細胞毒性物質が代謝拮抗物質、アルキル化物質、抗生物質、増殖因子、サイトカイン、抗血管新生物質、抗有糸分裂物質、アントラサイクリン、毒素およびアポトーシス性物質である、請求項２４に記載の結合性タンパク質。
【請求項２８】
結合性タンパク質がヒトグリコシル化パターンを有する、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項２９】
結合性タンパク質が結晶化結合性タンパク質である、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項３０】
請求項１に記載の結合性タンパク質アミノ酸配列をコードする単離された核酸。
【請求項３１】
請求項１に記載の結合性タンパク質アミノ酸配列をコードする単離された核酸を含むベクター。
【請求項３２】
ベクターがｐｃＤＮＡ、ｐＴＴ、ｐＴＴ３、ｐＥＦＢＯＳ、ｐＢＶ、ｐＪＶ、ｐＨｙｂＥまたはｐＢＪである、請求項３１に記載のベクター。
【請求項３３】
請求項３１に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項３４】
宿主細胞が原核細胞である、請求項３３に記載の宿主細胞。
【請求項３５】
宿主細胞が真核細胞である、請求項３３に記載の宿主細胞。
【請求項３６】
真核細胞が原生生物細胞、動物細胞、植物細胞、真菌細胞、哺乳類細胞、鳥類細胞または昆虫細胞である、請求項３５に記載の宿主細胞。
【請求項３７】
真核細胞がエス・セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞またはＳＦ９細胞である、請求項３６に記載の宿主細胞。
【請求項３８】
ＴＮＦ−αに結合しうる結合性タンパク質を産生するのに十分な条件下、請求項３３に記載の宿主細胞を培地内で培養する工程を含む、ＴＮＦ−αに結合しうるタンパク質の製造方法。
【請求項３９】
請求項３８に記載の製造方法により製造されるタンパク質。
【請求項４０】
請求項１または請求項３９に記載の結合性タンパク質と医薬上許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項４１】
ＴＮＦ−α活性が有害である障害を治療するための少なくとも１つの追加的物質を更に含む、請求項４０に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
追加的物質が、治療用物質、イメージング物質、細胞毒性物質、血管新生インヒビター、キナーゼインヒビター、共刺激分子ブロッカー、接着分子ブロッカー、抗サイトカイン抗体またはその機能性フラグメント、メトトレキセート、シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６、検出可能な標識またはレポーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋肉弛緩薬、麻酔薬、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗微生物薬、抗乾癬薬、コルチコステロイド、タンパク質同化ステロイド、エリスロポエチン、免疫化、免疫グロブリン、免疫抑制物質、成長ホルモン、ホルモン補充療法薬、放射性医薬品、抗うつ薬、抗精神病薬、興奮薬、喘息治療薬、ベータアゴニスト、吸入ステロイド、経口ステロイド、エピネフリンまたはその類似体、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストである、請求項４１に記載の医薬組成物。
【請求項４３】
請求項４０に記載の組成物の有効量を哺乳動物に投与する工程を含む、哺乳動物の治療方法。
【請求項４４】
ヒトＴＮＦ−α活性が低減するように、ヒトＴＮＦ−αを請求項１に記載の結合性タンパク質と接触させることを含む、ヒトＴＮＦ−α活性を低減するための方法。
【請求項４５】
ＴＮＦ−α活性が有害である障害に罹患しているヒト対象においてヒトＴＮＦ−α活性を低減するための方法であって、ヒト対象におけるヒトＴＮＦ−α活性が低減するように、請求項１に記載の結合性タンパク質をヒト対象に投与することを含む方法。
【請求項４６】
ＴＮＦ−α活性が有害である疾患または障害に対する対象の治療方法であって、治療が達成されるように、請求項１に記載の結合性タンパク質を対象に投与することによる治療方法。
【請求項４７】
障害が自己免疫および／または炎症障害である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
障害がクローン病、尋常性乾癬、関節リウマチ、乾癬性関節炎、骨関節炎、若年性特発性関節炎、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、強直性脊椎炎、インスリン依存性糖尿病、自己免疫性糖尿病、アレルギーおよび自己免疫ブドウ膜炎である、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
障害が、呼吸障害；喘息；アレルギー性および非アレルギー性喘息；感染による喘息；呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染による喘息；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；気道炎症を伴う状態；好酸球増加症；線維症および過剰粘液産生；嚢胞性線維症；肺線維症；アトピー性障害；アトピー性皮膚炎；蕁麻疹；湿疹；アレルギー性鼻炎；アレルギー性胃腸炎；皮膚の炎症性および／または自己免疫状態；胃腸器官の炎症および／または自己免疫状態；炎症性腸疾患（ＩＢＤ）；潰瘍性大腸炎；クローン病；肝臓の炎症および／または自己免疫状態；肝硬変；肝線維症；Ｂ型および／またはＣ型肝炎ウイルスによって引き起こされる肝線維症；強皮症；腫瘍または癌；肝細胞癌；神経膠芽腫；リンパ腫；ホジキンリンパ腫；ウイルス感染；細菌感染；寄生虫感染症；ＨＴＬＶ−１感染；防御１型免疫応答の発現の抑制、およびワクチン接種中の防御１型免疫応答の発現の抑制である、請求項４６に記載の方法。
【請求項５０】
請求項１に記載の結合性タンパク質を、第２物質の投与の前、それと同時またはその後で投与することを含む、ＴＮＦ−αが有害である障害に罹患した患者の治療方法であって、第２物質が、以下のものに結合しうる抗体またはそのフラグメント：ヒトＩＬ−１２；ＰＧＥ２；ＬＰＡ；ＮＧＦ；ＣＧＲＰ；ＳｕｂＰ；ＲＡＧＥ；ヒスタミン；ヒスタミン受容体ブロッカー；ブラジキニン；ＩＬ−１アルファ；ＩＬ−１ベータ；ＶＥＧＦ；ＰＬＧＦ；メトトレキセート；コルチコステロイド；グルココルチコイド受容体モジュレーター；シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６または非ステロイド性抗炎症物質である、治療方法。
【請求項５１】
請求項１に記載の結合性タンパク質を、第２物質の投与の前、それと同時またはその後で投与することを含む、ＴＮＦ−αが有害である障害に罹患した患者の治療方法であって、第２物質が、ＴＮＦアンタゴニスト；ＴＮＦ受容体の可溶性断片；ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト；ＴＮＦ変換酵素（ＴＡＣＥ）インヒビター；ムスカリン性受容体アンタゴニスト；ＴＧＦ−ベータアンタゴニスト；インターフェロンガンマ；ピルフェニドン（ｐｅｒｆｅｎｉｄｏｎｅ）；化学療法剤、メトトレキセート、レフルノミド；シロリムス（ラパマイシン）またはその類似体、ＣＣＩ−７７９；ＣＯＸ２またはｃＰＬＡ２インヒビター；ＮＳＡＩＤ；免疫調節物質；ｐ３８インヒビター；ＴＰＬ−２、ＭＫ−２およびＮＦｋＢインヒビター；ブデノシド；上皮増殖因子；コルチコステロイド；シクロスポリン；スルファサラジン；アミノサリチル酸；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼインヒビター；メサラミン；オラサラジン；バルサラジド；抗酸化物質；トロンボキサンインヒビター；ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；抗ＩＬ−１ｂ抗体；抗ＩＬ−６抗体；増殖因子；エラスターゼインヒビター；ピリジニル−イミダゾール化合物；ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８、ＩＬ−２９、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２、ＩＬ−３３、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦまたはＰＤＧＦの抗体またはアゴニスト；ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０またはそれらのリガンドの抗体；ＦＫ５０６；ラパマイシン；ミコフェノール酸モフェチル；イブプロフェン；プレドニゾロン；ホスホジエステラーゼインヒビター；アデノシンアゴニスト；抗血栓剤；補体インヒビター；アドレナリン作動性物質；ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼインヒビター；ＩＬ−１β変換酵素インヒビター；ＴＮＦａ変換酵素インヒビター；Ｔ細胞シグナリングインヒビター；メタロプロテイナーゼインヒビター；６−メルカプトプリン；アンジオテンシン変換酵素インヒビター；可溶性サイトカイン受容体；可溶性ｐ５５  ＴＮＦ受容体；可溶性ｐ７５  ＴＮＦ受容体；ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ；抗炎症性サイトカイン；ならびにＴＧＦｂから選択される、治療方法。
【請求項５２】
対象への投与が、少なくとも非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、腔内、腹腔内、小脳内、脳室内、結腸内、子宮頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、髄腔内、滑液嚢内、胸内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬、舌下、鼻腔内または経皮によるものである、請求項４３〜５１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５３】
（ｉ）請求項１に記載のＴＮＦ−α結合性タンパク質またはそのＴＮＦ−α結合性部分とサンプルを接触させ、
（ｉｉ）サンプル中のＴＮＦ−αとＴＮＦ−α結合性タンパク質またはその結合性部分との複合体の形成を検出する（サンプル中の対照サンプルまたは関連ＴＮＦ−αのものと比較した場合の、サンプル中の複合体の形成の統計的に有意な変化）ことを含む、サンプル中のヒトＴＮＦ−αを検出する方法。
【請求項５４】
サンプルが全血、血漿、血清、尿、唾液または組織生検である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
ヒト対象におけるヒトＴＮＦ−αを検出する方法であって、
（ｉ）請求項１に記載のＴＮＦ−α結合性タンパク質またはそのＴＮＦ−α結合性部分を、ヒトＴＮＦ−αへのＴＮＦ−α結合性タンパク質またはそのＴＮＦ−α結合性部分の結合を可能にする条件下、試験対象または対照対象に投与し、
（ｉｉ）結合性タンパク質またはその結合性部分とＴＮＦ−αとの複合体の形成を検出することを含み、ここで、対照対象と比較した場合またはより早い時点での試験対象における複合体の形成と比較した場合の、試験対象における複合体の形成の統計的に有意な変化が、ＴＮＦ−αの存在を示す、方法。