(57)【要約】本発明は、脂質二重層とポリマー共役脂質とを含み、前記ポリマー共役脂質が前記脂質二重層に組み込まれているリポソームを提供する。本発明は、前記リポソームを生成する方法、ならびに核酸を被験体に送達する方法であって混合リポソームに封入された前記核酸を投与するステップを含む方法、被験体において画像診断を実施する方法であって混合リポソームに封入された診断薬を投与するステップを含む方法、および被験体において病理学的状態を処置、阻害または抑制する方法であって前記被験体に混合リポソームを投与することを含む方法も提供する。【選択図】図６
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
脂質二重層とポリマー共役脂質とを含み、前記ポリマー共役脂質が前記脂質二重層に組み込まれている、リポソーム。
【請求項２】
前記リポソームがナノリポソームである、請求項１に記載のリポソーム。
【請求項３】
前記ポリマー共役脂質が前記脂質二重層の内葉と外葉との両方に組み込まれている、請求項１に記載のリポソーム。
【請求項４】
前記ポリマー共役脂質が前記脂質二重層の外層に組み込まれている、請求項１に記載のリポソーム。
【請求項５】
前記リポソームが、その中に組み込まれた２種類以上のポリマー共役脂質を含む、請求項１に記載のリポソーム。
【請求項６】
前記ポリマー共役脂質が、単一のポリマーに共役された２種類以上の脂質を含む、請求項１に記載のリポソーム。
【請求項７】
前記ポリマー共役脂質中の脂質とポリマー単位との比が２：４〜２：２０００である、請求項６に記載のリポソーム。
【請求項８】
前記ポリマーがヘマセルである、請求項１に記載のリポソーム。
【請求項９】
前記ヘマセルがグルタリルリンカーを介して前記脂質に共役されている、請求項８に記載のリポソーム。
【請求項１０】
前記ポリマーが多糖である、請求項１に記載のリポソーム。
【請求項１１】
前記多糖が、グリコサミノグリカンである、請求項１０に記載のリポソーム。
【請求項１２】
前記グリコサミノグリカンが、ヒアルロン酸である、請求項１１に記載のリポソーム。
【請求項１３】
前記ヒアルロン酸が、約１０〜５０ｋＤの平均分子量を有する、請求項１２に記載のリポソーム。
【請求項１４】
前記グリコサミノグリカンがコンドロイチン硫酸である、請求項１１に記載のリポソーム。
【請求項１５】
前記グリコサミノグリカンがデルマタン硫酸である、請求項１１に記載のリポソーム。
【請求項１６】
前記グリコサミノグリカンがヘパリンである、請求項１に記載のリポソーム。
【請求項１７】
前記多糖がキトサンである、請求項１０に記載のリポソーム。
【請求項１８】
前記キトサンが、グルタリルリンカーを介して前記脂質に共役されている、請求項１７に記載のリポソーム。
【請求項１９】
前記多糖がアルギン酸である、請求項１０に記載のリポソーム。
【請求項２０】
前記多糖がヘタスターチである、請求項１０に記載のリポソーム。
【請求項２１】
前記多糖がデキストランである、請求項１０に記載のリポソーム。
【請求項２２】
前記デキストランがグルタリルリンカーを介して前記脂質に共役されている、請求項２１に記載のリポソーム。
【請求項２３】
前記脂質がリン脂質である、請求項１に記載のリポソーム。
【請求項２４】
前記リン脂質がホスファチジルエタノールアミンである、請求項２３に記載のリポソーム。
【請求項２５】
前記リポソームが、第２のポリマー共役脂質をさらに含む、請求項１に記載のリポソーム。
【請求項２６】
前記第２のポリマー共役脂質がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）共役脂質である、請求項２５に記載のリポソーム。
【請求項２７】
脂質二重層とグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）共役脂質とを含み、前記ポリマー共役脂質が前記脂質二重層に組み込まれている、リポソーム。
【請求項２８】
前記リポソームがナノリポソームである、請求項２７に記載のリポソーム。
【請求項２９】
前記ＧＡＧ共役脂質が前記脂質二重層の内葉と外葉との両方に組み込まれている、請求項２７に記載のリポソーム。
【請求項３０】
前記ＧＡＧ共役脂質が前記脂質二重層の外層に組み込まれている、請求項２７に記載のリポソーム。
【請求項３１】
前記リポソームが、その中に組み込まれた２種類以上のＧＡＧ共役脂質を含む、請求項２７に記載のリポソーム。
【請求項３２】
前記ＧＡＧ共役脂質が、単一のＧＡＧに共役された２種類以上の脂質を含む、請求項２７に記載のリポソーム。
【請求項３３】
前記ＧＡＧ中の脂質と二糖単位との比が２：４〜２：２０００である、請求項２７に記載のリポソーム。
【請求項３４】
前記ＧＡＧがヒアルロン酸である、請求項２７に記載のリポソーム。
【請求項３５】
前記ヒアルロン酸が約１０〜５０ｋＤの平均分子量を有する、請求項３４に記載のリポソーム。
【請求項３６】
前記ＧＡＧがコンドロイチン硫酸である、請求項２７に記載のリポソーム。
【請求項３７】
前記ＧＡＧがデルマタン硫酸である、請求項２７に記載のリポソーム。
【請求項３８】
前記ＧＡＧがヘパリンである、請求項２７に記載のリポソーム。
【請求項３９】
前記脂質がリン脂質である、請求項２７に記載のリポソーム。
【請求項４０】
前記リン脂質がホスファチジルエタノールアミンである、請求項３９に記載のリポソーム。
【請求項４１】
前記リポソームが第２のポリマー共役脂質をさらに含む、請求項２７に記載のリポソーム。
【請求項４２】
前記第２のポリマー共役脂質がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）共役脂質である、請求項４１に記載のリポソーム。
【請求項４３】
脂質二重層とポリマー共役脂質とを含み、前記ポリマー共役脂質は前記脂質二重層に組み込まれており、前記ポリマーがグリコサミノグリカンでない、リポソーム。
【請求項４４】
前記リポソームがナノリポソームである、請求項４３に記載のリポソーム。
【請求項４５】
前記ポリマー共役脂質が前記脂質二重層の内葉と外葉との両方に組み込まれている、請求項４３に記載のリポソーム。
【請求項４６】
前記ポリマー共役脂質が前記脂質二重層の外葉に組み込まれている、請求項４３に記載のリポソーム。
【請求項４７】
前記リポソームが、その中に組み込まれた２種類以上のポリマー共役脂質を含む、請求項４３に記載のリポソーム。
【請求項４８】
前記ポリマー共役脂質が、単一のポリマーに共役された２種類以上の脂質を含む、請求項４３に記載のリポソーム。
【請求項４９】
前記ポリマー共役脂質中の脂質とポリマー単位との比が２：４〜２：２０００である、請求項４８に記載のリポソーム。
【請求項５０】
前記ポリマーがヘマセルである、請求項４３に記載のリポソーム。
【請求項５１】
前記ヘマセルがグルタリルリンカーを介して前記脂質に共役されている、請求項４３に記載のリポソーム。
【請求項５２】
前記ポリマーが多糖である、請求項４３に記載のリポソーム。
【請求項５３】
前記多糖がキトサンである、請求項５２に記載のリポソーム。
【請求項５４】
前記キトサンがグルタリルリンカーを介して前記脂質に共役されている、請求項５３に記載のリポソーム。
【請求項５５】
前記多糖がアルギン酸である、請求項５２に記載のリポソーム。
【請求項５６】
前記多糖がヘタスターチである、請求項５２に記載のリポソーム。
【請求項５７】
前記多糖がデキストランである、請求項５２に記載のリポソーム。
【請求項５８】
前記デキストランがグルタリルリンカーを介して前記脂質に共役されている、請求項５７に記載のリポソーム。
【請求項５９】
前記脂質がリン脂質である、請求項４３に記載のリポソーム。
【請求項６０】
前記リン脂質がホスファチジルエタノールアミンである、請求項５９に記載のリポソーム。
【請求項６１】
前記ポリマー共役脂質の脂質が前記リポソームの前記脂質二重層の脂質とは異なる、請求項４３に記載のリポソーム。
【請求項６２】
前記リポソームが第２のポリマー共役脂質をさらに含む、請求項４３に記載のリポソーム。
【請求項６３】
前記第２のポリマー共役脂質がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）共役脂質である、請求項６２に記載のリポソーム。
【請求項６４】
混合リポソームを生成する方法であって、
脂質をポリマーと共役させてポリマー共役脂質を形成するステップと、
前記ポリマー共役脂質をリポソームと接触させて混合リポソームを生成するステップとを含む、方法。
【請求項６５】
前記ポリマー共役脂質をリポソームと接触させる前記ステップの前に、前記ポリマー共役脂質を単離するステップをさらに含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記リポソームが２種類以上のポリマー共役脂質を含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６７】
前記ポリマー共役脂質が、単一のポリマーに共役された２種類以上の脂質を含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６８】
前記リポソームがナノリポソームである、請求項６４に記載の方法。
【請求項６９】
前記リポソームが脂質二重層を含み、前記ポリマー共役脂質が前記脂質二重層の内葉と外葉との両方に組み込まれている、請求項６４に記載の方法。
【請求項７０】
前記リポソームが脂質二重層を含み、前記ポリマー共役脂質が前記脂質二重層の外葉に組み込まれている、請求項６４に記載の方法。
【請求項７１】
前記リポソームが、その中に組み込まれた２種類以上のポリマー共役脂質を含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項７２】
前記ポリマー共役脂質が、単一のポリマーに共役された２種類以上の脂質を含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項７３】
前記ポリマー共役脂質中の脂質とポリマー単位との比が２：４〜２：２０００である、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記ポリマーがヘマセルである、請求項６４に記載の方法。
【請求項７５】
前記ヘマセルがグルタリルリンカーを介して前記脂質に共役されている、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記ポリマーが多糖である、請求項６４に記載の方法。
【請求項７７】
前記多糖がグリコサミノグリカンである、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記グリコサミノグリカンがヒアルロン酸である、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記ヒアルロン酸が、約１０〜５０ｋＤの平均分子量を有する、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記グリコサミノグリカンがコンドロイチン硫酸である、請求項７７に記載の方法。
【請求項８１】
前記グリコサミノグリカンがデルマタン硫酸である、請求項７７に記載の方法。
【請求項８２】
前記グリコサミノグリカンがヘパリンである、請求項７７に記載の方法。
【請求項８３】
前記多糖がキトサンである、請求項７６に記載の方法。
【請求項８４】
前記キトサンがグルタリルリンカーを介して前記脂質に共役されている、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記多糖がアルギン酸である、請求項７６に記載の方法。
【請求項８６】
前記多糖がヘタスターチである、請求項７６に記載の方法。
【請求項８７】
前記多糖がデキストランである、請求項７６に記載の方法。
【請求項８８】
前記デキストランがグルタリルリンカーを介して前記脂質に共役されている、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記脂質がリン脂質である、請求項６４に記載の方法。
【請求項９０】
前記リン脂質がホスファチジルエタノールアミンである、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記リポソームが脂質二重層を含み、前記ポリマー共役脂質の脂質が前記脂質二重層の脂質とは異なる、請求項６４に記載の方法。
【請求項９２】
第２の脂質を第２のポリマーと共役して第２のポリマー共役脂質を形成し、前記第２のポリマー共役脂質を前記混合リポソームと接触させるステップをさらに含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項９３】
前記第２のポリマー共役脂質がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）共役脂質である、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
請求項６４に記載の方法によって生成される混合リポソーム。
【請求項９５】
請求項１に記載のリポソームを含む組成物。
【請求項９６】
請求項２７に記載のリポソームを含む組成物。
【請求項９７】
請求項４３に記載のリポソームを含む組成物。
【請求項９８】
請求項１に記載のリポソームを含む薬物送達システム。
【請求項９９】
被験体に核酸を送達する方法であって、請求項１に記載のリポソームに封入された前記核酸を前記被験体に投与するステップを含む、方法。
【請求項１００】
前記核酸が治療目的で前記被験体に送達される、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
被験体において画像診断を実施する方法であって、前記被験体に請求項１に記載のリポソームに封入された診断薬を投与し、前記患者を撮像するステップを含む、方法。
【請求項１０２】
被験体において病理学的状態を処置、阻害または抑制する方法であって、前記被験体に請求項１のリポソームを投与することを含む、方法。
【請求項１０３】
前記病理学的状態が、癌である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記癌が転移癌である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
前記病理学的状態が新生物である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０６】
前記病理学的状態が感染症である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０７】
前記感染症が敗血症である、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
前記病理学的状態が閉塞性呼吸器疾患である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０９】
前記病理学的状態が皮膚科病理学的状態である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１１０】
前記病理学的状態が嚢胞性線維症である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１１１】
前記病理学的状態が結膜炎である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１１２】
前記病理学的状態が炎症性腸疾患である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１１３】
前記病理学的状態が神経系障害である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１１４】
前記神経系障害が多発性硬化症である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１１５】
前記リポソームが、前記病理学的状態を処置するための生体活性剤をさらに含む、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１１６】
前記病理学的状態が癌であり、前記生体活性剤が抗癌薬である、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１７】
前記病理学的状態が細菌感染症、真菌感染症、ウイルス感染症、または寄生虫感染症であり、前記生体活性剤が抗菌薬、抗真菌薬、抗ウイルス薬または抗寄生虫薬である、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１８】
前記病理学的状態がプリオン感染症であり、前記生体活性剤がプリオン感染症を処置するために好適な生体活性剤である、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１９】
前記薬物が、経口、静脈内、鼻腔内、眼内、筋肉内、皮下または局所投与される、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１２０】
前記リポソームが、炎症組織を標的とするポリマー−リポソーム共役の担体として機能する、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１２１】
前記ポリマー−リポソーム共役が抗炎症活性を有する、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１２２】
前記ポリマー−リポソーム共役が前記リポソームの安定性を高める、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１２３】
前記ポリマー−リポソーム共役が前記リポソームの半減期を延長する、請求項１０２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脂質二重層とポリマー共役脂質とを含み、ポリマー共役脂質が脂質二重層内に組み込まれているリポソームを提供する。本発明は更に、このリポソームを生成する方法、混合リポソーム内に封入された核酸を投与するステップを含む、被験体に核酸を送達する方法、混合リポソーム内に封入された診断用薬剤を投与するステップを含む、被験体において画像診断を実施するための方法、ならびに被験体に混合リポソームを投与することを含む、被験体における病理学的状態を処置、阻害または抑制する方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
全身分布および非標的器官の曝露を低減するための、薬剤の遅延放出と、所望の冒された器官／系への薬剤の特異的標的化との双方を提供する薬剤送達システムが長い間探求されてきた。１つの有望な候補物質は、リン脂質（ＰＬ）リポソームおよびそれらの誘導体であった。リポソームは、リン脂質から構成された小さな球状のビシクルであり、水性の内部を包囲する１つ以上の脂質二重層からなる。リポソームは、親水性薬剤（水性の内部に）および親油性薬剤（脂質二重層内に）の双方を封入することができ、したがって、薬剤送達に非常に好適である。
【０００３】
リン脂質リポソームは、徐放性または制御放出性薬物デポーとして機能することができ、したがって、薬効における改善に寄与し、投与の頻度における減少を可能にする。封入された薬剤および生物学的環境の双方の保護をもたらすことによって、リポソームは薬剤不活性化および薬剤分解のリスクを低減する。粒子からの遊離薬剤放出の薬物動態は、直接投与される遊離薬剤とは異なるために、これら担体は、毒性および望ましくない副作用を低減するよう使用され得る。
【０００４】
リン脂質リポソームは、広範囲のサイズ（５０〜５００ｎｍ）で調製され得る。炎症性組織においては、細胞間間隙は５０ｎｍ〜１００ｎｍの通常の距離から広げられるために、１００ｎｍよりも小さな薬剤を搭載するリポソームは、標的系への薬剤の選択的送達に好適である。
【０００５】
提示された利点にもかかわらず、薬剤封入リポソームを使用することに関連する困難がいくつか存在する。例えば、リポソームは、低い標的化能力、循環における低い保持性および安定性、長期投与時の潜在毒性、ならびに溢出不能性を有する。
【０００６】
既知のナノリポソームの欠点を解決するために、本発明者らは、混合脂質／Ｐｏ−Ｌナノリポソームの形成のために、ポリマー共役脂質（Ｐｏ−Ｌｓ）を使用した。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
一実施形態では、本発明は、脂質二重層とポリマー共役脂質とを含み、該ポリマー共役脂質は、該脂質二重層内に組み込まれているリポソームを提供する。
【０００８】
別の実施形態では、本発明は、脂質二重層およびグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）共役脂質を含み、該ポリマー共役脂質は該脂質二重層内に組み込まれているリポソームを提供する。
【０００９】
別の実施形態では、本発明は、脂質二重層とポリマー共役脂質とを含み、該ポリマー共役脂質は該脂質二重層内に組み込まれ、該ポリマーはグリコサミノグリカンではないリポソームを提供する。
【００１０】
別の実施形態では、本発明は、混合リポソームを生成する方法を提供し、この方法は、脂質をポリマーと共役させてポリマー共役脂質を形成し、該ポリマー共役脂質とリポソームを接触させて、混合リポソームを生成するステップを含む。
【００１１】
別の実施形態では、混合リポソームを提供し、この混合リポソームは、脂質をポリマーと共役させてポリマー共役脂質を形成し、該ポリマー共役脂質とリポソームを接触させて、混合リポソームを生成するステップを含む方法によって生成される。
【００１２】
別の実施形態では、本発明は、脂質二重層とポリマー共役脂質とを含み、該ポリマー共役脂質は、該脂質二重層内に組み込まれているリポソームを含む組成物を提供する。
【００１３】
脂質二重層とグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）共役脂質とを含み、該ポリマー共役脂質は、該脂質二重層内に組み込まれているリポソームを含む組成物を提供する。
【００１４】
別の実施形態では、本発明は、脂質二重層とポリマー共役脂質とを含み、該ポリマー共役脂質は、該脂質二重層内に組み込まれ、該ポリマーはグリコサミノグリカンではないリポソームを含む組成物を提供する。
【００１５】
別の実施形態では、本発明は、脂質二重層とポリマー共役脂質とを含み、該ポリマー共役脂質は、該脂質二重層内に組み込まれているリポソームを含む薬剤送達システムを提供する。
【００１６】
別の実施形態では、本発明は、被験体に核酸を送達させる方法を提供し、この方法は、脂質二重層とポリマー共役脂質とを含み、該ポリマー共役脂質は、該脂質二重層に組み込まれているリポソーム内に封入された核酸を被験者に投与するステップを含む。
【００１７】
別の実施形態では、本発明は、被験体において画像診断を実施するための方法を提供し、この方法は、脂質二重層とポリマー共役脂質とを含み、該ポリマー共役脂質は、該脂質二重層に組み込まれているリポソーム内に封入された診断用薬剤を被験体に投与し、該被験体を撮像するステップを含む。
【００１８】
別の実施形態では、本発明は、被験体における病理学的状態を処置、阻害、または抑制する方法を提供し、この方法は、脂質二重層とポリマー共役脂質とを含み、該ポリマー共役脂質は、該脂質二重層に組み込まれているリポソーム内に封入された診断用薬剤を被験体に投与することを含む。
【００１９】
発明とされる主題は、本明細書の結論部分において具体的に指摘されかつ別個に主張される。しかしながら、本発明は、添付の図面と共に読めば、以下の詳細な説明を参照することによってより深く理解されることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】ポリマー共役脂質（Ｐｏ−Ｌ）／リポソーム比およびポリマーサイズにおける変動が、Ｐｏ−Ｌ／リポソームの構造および機能にどのように影響を及ぼすかを表すモデルである：（ａ）マッシュルーム；より低いＰｏ−Ｌ／リポソーム比で得られ、（ｂ）ブラシ；より高いＰｏ−Ｌ／リポソーム比で得られ、（ｃ）表面コーティング；高いＭＷ  ＨＡ（または他のＧＡＧｓ）で得られた。
【図２】リポソームの添加剤充填パラメーター（ＰＰ）によって表されたＥｇｇＰＣ：Ｃｈｏｌ：ＨｙＰＥから構成されるリポソームの安定性に及ぼすＨｙＰＥの効果である。図は、ＰＰをリポソーム中のＨｙＰＥ共役ＰＥのモルパーセントの関数として示す。ＰＰが１．０に近づく（しかし、１以下である）場合、最適な安定性が得られる。縦軸は、リポソーム安定性を増加させるＨｙＰＥ濃度を示す。ＥｇｇＰＣは卵ホスファチジル−コリンであり、Ｃｈｏｌはコレステロールであり、ＨｙＰＥはヒアルロン酸（ＨＡ）共役ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）である。
【図３】異なるポリマー共役脂質（Ｐｏ−Ｌｓ）を有するリポソームのサイズ安定性である。示されたＰｏ−Ｌの有無でリポソームを５５℃で１７日間インキュベートし、それらのサイズの変化を、動的光散乱によって監視した。図は、1日目と１７日目でのサイズ（ｎｍ）を示す。ＤＭＰＣは、ジミリストイルホスファチジル−コリンであり、ＨｙＰＥはヒアルロン酸（ＨＡ）共役ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）であり、Ｄｅｘ（５）−ＰＥはデキストラン（ＭＷ  ５Ｋ）共役ＰＥであり、Ｄｅｘ（４０）はデキストラン（ＭＷ  ４０Ｋ）共役ＰＥであり、Ｈｅｔａ−ＰＥはヘタスターチ（ヒドロキシエチルスターチ）共役ＰＥであり、Ｈｅｍ−ＰＥはヘマクセル（ポリゲリン）共役ＰＥである。
【図４】Ｐｏ−Ｌが、外部ＰＬＡ２によるリポソーム分解を阻害することを示す。ジ−オレオイル−ホスファチジル−コリン（ＤＯＰＣ）および２位の炭素でＣ６−ＮＢＤ（蛍光脂肪酸）で標識化されたＰＣから構成されるリポソーム（ＨｙＰＥの有無で）を外部ホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）と相互作用させた。リポソームリン脂質の加水分解を、ＰＬＡ２作用によるＣ６−ＮＢＤ−脂肪酸ＰＣ放出の蛍光強度の放出によって決定した。図は、リポソームＣ６−ＮＢＤ−ＰＣ（総リポソームリン脂質を表す）の５％を加水分解するのに必要な時間を示す。
【図５】封入薬剤（イヌリンフルオレセイン＝ＩｎＦｌ）の保持性によって検討されたリポソームの安定性を示す。ジミリストイルホスファチジル−コリン（ＤＭＰＣ）から構成されるＩｎＦｌ含有リポソーム（Ｐｏｌ−ＰＬＩ（ＨｙＰＥ）の有無で）を、血漿中３７℃でインキュベートし、リポソーム外媒体に放出されたＩｎ−Ｆｌを６日間監視した。
【図６】ラットにおける（インビボでの）リポソームの安定性に及ぼすＰｏｌ−ＰＬＩの効果を示す。ＩｎＦＬ含有リポソームを、ラットの尾部静脈に注射し、循環内の薬剤の保持性を、注射後５分と２８時間で採取された血液サンプル中の薬剤レベルの測定によって、２８時間監視し、最初に注射したＩｎＦｌ量のパーセントとして表した。図は、リポソームへのＨｅｍ−ＰＥの添加が、リポソームからの薬剤放出を著しく低速化させたことを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
ナノリポソーム、またはサブミクロン二重層脂質ビシクルは、生物活性剤の封入および送達のための技術である。ナノリポソームに組み込まれ得る生物活性材料を挙げるとは、医薬品から化粧品および栄養補給品までにわたり、その数は莫大に存在する。そのナノサイズによる、生体適合性および生分解性のために、ナノリポソームは、ナノセラピー（例えば診断、癌療法、遺伝子送達）、化粧品、食品技術および農業を含む非常に広範囲の分野で潜在的な利用可能性を有する。ナノリポソームは、生物活性剤の溶解度および生物学的利用能、インビボおよびインビトロ安定性を改善することによって、ならびにこれらの他の分子との不必要な相互作用を防止することによって、生物活性剤の性能を増強させることが可能である。ナノリポソームの別の利点は、細胞特異的標的化であり、これは、健康な細胞および組織に及ぼす有害な作用を最小限に留めると同時に、標的部位における最適な治療効力に必要とされる薬剤濃度を達成するために欠くことのできないものである。
【００２２】
ポリマー共役脂質（Ｐｏｌ−Ｌ）リポソーム
【００２３】
一実施形態では、本発明は、脂質二重層とポリマー共役脂質とを含み、該ポリマー共役脂質は、前記脂質二重層に組み込まれているリポソームを提供する。
【００２４】
一実施形態では、このリポソームは、第１の脂質から形成され、一方ポリマー共役脂質（複数可）の脂質は、該第１の脂質とは異なる第２の脂質から形成される。例えば、一実施形態では、このリポソームは、コレステロールの有無で、ホスファチジルコリンを使用して形成され、一方、共役は、ホスファチジルエタノールアミンを使用して形成されてもよい。一実施形態では、このポリマーは、多糖である。一実施形態では、この多糖はグリコサミノゴリカンである。
【００２５】
一実施形態では、該ポリマーは、共有結合を介して該脂質に共役される。一実施形態では、該ポリマーは該脂質に架橋結合される。
【００２６】
一実施形態では、本発明は、２種類以上のポリマー共役脂質を含むリポソームを提供し、該ポリマー共役脂質は、単一のポリマーに共役された２種類以上の脂質を含む。
【００２７】
一実施形態では、このポリマー共役脂質は、ホスホリパーゼＡ２の阻害剤であるか、または別の実施形態では、このポリマー共役脂質は、ホスホリパーゼＡ２の活性、機能、または発現を阻害する。
【００２８】
一実施形態では、このポリマーは、アルギニン酸である。一実施形態では、このアルギニン酸は、低分子量アルギニン酸である。別の実施形態では、このアルギン酸は、切断型である。
【００２９】
別の実施形態では、本発明は、脂質二重層とグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）共役脂質とを含むリポソームを提供し、該ポリマー共役脂質は、該脂質二重層に組み込まれている。
【００３０】
別の実施形態では、本発明は、２種類以上のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）共役脂質を含むリポソームを提供し、該ＧＡＧ共役脂質は、単一のＧＡＧに共役された２種類以上の脂質を含む。
【００３１】
別の実施形態では、本発明は、２種類以上のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）共役リン脂質を含むリポソームを提供し、該ＧＡＧ共役リン脂質は、単一のＧＡＧに共役された２種類以上のリン脂質を含む。
【００３２】
一実施形態では、このＧＡＧは、ヒアルロン酸である。一実施形態では、このヒアルロン酸は、低分子量ヒアルロン酸である。別の実施形態では、このヒアルロン酸は、切断型である。
【００３３】
別の実施形態では、本発明は、２種類以上の低分子量ヒアルロン酸共役ホスファチジルエタノールアミンを含むリポソームを提供し、該低分子量ヒアルロン酸共役ホスファチジルエタノールアミンは、単一のヒアルロン酸に共役された２種類以上のヒアルロン酸共役ホスファチジルエタノールアミンを含む。
【００３４】
別の実施形態では、本発明は、脂質二重層とポリマー共役脂質とを含むリポソームを提供し、該ポリマー共役脂質は、該脂質二重層に組み込まれ、該ポリマーはグリコサミノグリカンではない。
【００３５】
別の実施形態では、本発明は、ポリマー共役脂質を含むリポソームを提供し、該ポリマーはグリコサミノグリカンではない。別の実施形態では、本発明は、ポリマー共役脂質を含むリポソームを提供し、該ポリマーは、ヒアルロン酸ではない。
【００３６】
一実施形態では、ポリマーは多糖である。一実施形態では、脂質はリン脂質である。一実施形態では、リポソームは脂質二重層を含む。一実施形態では、ポリマー共役脂質は、リポソームの脂質二重層に組み込まれる。一実施形態では、リポソームは、修飾リポソームである。
【００３７】
一実施形態では、リポソームはナノリポソームである。一実施形態では、リポソームは、直径で１００ｎｍ未満である。別の実施形態では、リポソームは、直径で１５０ｎｍ未満である。別の実施形態では、リポソームは、直径で７５ｎｍ未満である。別の実施形態では、リポソームは、直径が５０ｎｍ未満である。別の実施形態では、リポソームは、直径が１〜１００ｎｍ未満である。別の実施形態では、リポソームは、直径が２０〜１００ｎｍ未満である。別の実施形態では、リポソームは、直径が５０〜１００ｎｍ未満である。別の実施形態では、リポソームは、直径が２０〜１５０ｎｍ未満である。別の実施形態では、リポソームは、直径が１０〜５０ｎｍ未満である。
【００３８】
一実施形態では、リポソームは、脂質二重層を含み、該ポリマー共役脂質は、該脂質二重層の内葉と外葉との両方に組み込まれる。別の実施形態では、リポソームは脂質二重層を含み、該ポリマー共役脂質は、該脂質二重層の外葉にのみ組み込まれる。別の実施形態では、リポソームは脂質二重層を含み、該ポリマー共役脂質は、該脂質二重層の内葉にのみ組み込まれる。
【００３９】
別の実施形態では、本発明のＰｏ−Ｌリポソームは、並外れて安定であるリポソームを提供する。一実施形態では、本発明のＰｏ−Ｌリポソームは、リポソームの内葉と外葉との両方に対称的に装入され、すなわち、両リポソーム表面でポリマーを有し、一実施形態では、このことが、小さなポリマーがリポソームの外部表面（外葉）に装入される場合のリポソームの安定性に比べて、リポソームの安定性を増大させる。一実施形態では、大きなポリマーの外部リポソーム表面のみへの装入は、リポソームにおける過度の非対称性を引き起こし、これがリポソームの安定性を損なう。
【００４０】
別の実施形態では、本発明は、脂質二重層を含む修飾リポソームを提供し、該リポソームは、該脂質二重層に組み込まれた２種類以上の多糖共役リン脂質（ＰｏＳ−ＰＬｓ）を含む。
【００４１】
一実施形態では、本発明のリポソームは、その中でリポソームが本明細書に記載されるようなポリマー共役脂質をその脂質二重層に組み込む修飾リポソームであり、一実施形態では、これは、ポリマー共役脂質の脂質とは異なる脂質から構成される。一実施形態では、本発明の修飾リポソームは、混合リポソームと呼ばれる。
【００４２】
別の実施形態では、本発明は、脂質二重層を含む修飾リポソームを提供し、該リポソームは、該脂質二重層に組み込まれた多糖共役リン脂質（ＰｏＳ−ＰＬｓ）を含み、該多糖は、グリコサミノグリカンである。
【００４３】
別の実施形態では、本発明は、脂質二重層を含む修飾リポソームを提供し、該リポソームは、該脂質二重層に組み込まれた多糖共役リン脂質（ＰｏＳ−ＰＬｓ）を含み、該多糖は、低分子量グリコサミノグリカンである。
【００４４】
別の実施形態では、本発明は、脂質二重層を含む修飾リポソームを提供し、該リポソームは、該脂質二重層に組み込まれた多糖共役リン脂質（ＰｏＳ−ＰＬｓ）を含み、該多糖は、グリコサミノグリカンではない。
【００４５】
一実施形態では、本発明はポリマー共役脂質を含むリポソームを提供する。別の実施形態では、本発明は、ポリマー共役脂質を含むミセルを提供する。別の実施形態では、本発明は、ポリマー共役脂質を含むナノリポソームを提供する。別の実施形態では、本発明は、ポリマー共役脂質を含むアルカエオソームを提供する。別の実施形態では、本発明は、ポリマー共役脂質を含む免疫リポソームを提供する。別の実施形態では、本発明は、ポリマー共役脂質を含むビロソームを提供する。別の実施形態では、本発明は、ポリマー共役脂質を含む超変形可能なビシクルを提供する。別の実施形態では、本発明は、ポリマー共役脂質を含むステレスリポソームを提供する。一実施形態では、このポリマーは多糖である。
【００４６】
一実施形態では、ポリマー共役脂質は、単一のポリマーに共役された２種類以上の脂質を含む。
【００４７】
一実施形態では、該ポリマー共役脂質内の反復ポリマー単位に対する脂質の比は、１：２〜１：１０００である。別の実施形態では、該ポリマー共役脂質内の反復ポリマー単位に対する脂質の比は、２：４〜２：２０００である。別の実施形態では、該ポリマー共役脂質内の反復ポリマー単位に対する脂質の比は、１：２８〜１：６２である。別の実施形態では、該ポリマー共役脂質内の反復ポリマー単位に対する脂質の比は、１：１００〜１：５００である。別の実施形態では、該ポリマー共役脂質内の反復ポリマー単位に対する脂質の比は、１：２５〜１：３５である。別の実施形態では、該ポリマー共役脂質内の反復ポリマー単位に対する脂質の比は、１：５５〜１：６５である。別の実施形態では、該ポリマー共役脂質内の反復ポリマー単位に対する脂質の比は、１：２０〜１：７０である。別の実施形態では、該ポリマー共役脂質内の反復ポリマー単位に対する脂質の比は、１：１０〜１：１００である。別の実施形態では、該ポリマー共役脂質内の反復ポリマー単位に対する脂質の比は、１：５０〜１：５００である。別の実施形態では、該ポリマー共役脂質内の反復ポリマー単位に対する脂質の比は、１：１００未満である。
【００４８】
一実施形態では、該ポリマー共役脂質内の脂質に対する反復ポリマー単位の比は、２０〜７０である。別の実施形態では、該ポリマー共役脂質内の脂質に対する反復ポリマー単位の比は、２８〜６２である。別の実施形態では、該ポリマー共役脂質内の脂質に対する反復ポリマー単位の比は、１０〜８０である。別の実施形態では、該ポリマー共役脂質内の脂質に対する反復ポリマー単位の比は、約３０である。別の実施形態では、該ポリマー共役脂質内の脂質に対する反復ポリマー単位の比は、約２８である。別の実施形態では、該ポリマー共役脂質内の脂質に対する反復ポリマー単位の比は、２５〜３０である。別の実施形態では、該ポリマー共役脂質内の脂質に対する反復ポリマー単位の比は、２０〜３５である。別の実施形態では、該ポリマー共役脂質内の脂質に対する反復ポリマー単位の比は、１５〜４０である。別の実施形態では、該ポリマー共役脂質内の脂質に対する反復ポリマー単位の比は、約６０である。別の実施形態では、該ポリマー共役脂質内の脂質に対する反復ポリマー単位の比は、６２である。別の実施形態では、該ポリマー共役脂質内の脂質に対する反復ポリマー単位の比は、６０〜６５である。別の実施形態では、該ポリマー共役脂質内の脂質に対する反復ポリマー単位の比は、５５〜７０である。別の実施形態では、該ポリマー共役脂質内の脂質に対する反復ポリマー単位の比は、５０〜７５である。一実施形態では、数字または範囲は、ほぼ先に記載された数字または範囲である。一実施形態では、脂質に対する反復ポリマー単位の比は、モル比である。
【００４９】
一実施形態では、このポリマーは多糖であり、一実施形態では、これは低分子量多糖である。一実施形態では、反復ポリマー単位は、反復二糖単位である。別の実施形態では、このポリマーは多糖ではなく、一実施形態では、これはヘマクセルである。
【００５０】
一実施形態では、該多糖の分子量は５ｋＤ〜２０ｋＤである。一実施形態では、ＰｏＳ−ＰＬは、多糖をリン脂質に、それぞれ約１：５０〜約１：１の質量ＰＬ：質量ＧＡＧ比で反応させることによって調製される。別の実施形態では、該質量ＰＬ：質量ＧＡＧ比は、約１：５０〜約１：１０である。別の実施形態では、該質量ＰＬ：質量ＧＡＧ比は、約１：４０〜約１：１である。別の実施形態では、該質量ＰＬ：質量ＧＡＧ比は、約１：１０〜約１：４０である。
【００５１】
別の実施形態では、該質量ＰＬ：質量ＧＡＧ比は、約１：２５である。別の実施形態では、該質量ＰＬ：質量ＧＡＧ比は、約０．５：１５である。別の実施形態では、該質量ＰＬ：質量ＧＡＧ比は、約１：１５である。別の実施形態では、該質量ＰＬ：質量ＧＡＧ比は、約２：１５である。別の実施形態では、該質量ＰＬ：質量ＧＡＧ比は、約５：１５である。
【００５２】
別の実施形態では、該ＧＡＧの多分散性は、約１：５０から５０：５０までである。別の実施形態では、該ＧＡＧの多分散性は、約１〜１．７５である。別の実施形態では、該ＧＡＧの多分散性は、約１．２５〜１．５である。
【００５３】
一実施形態では、本発明の脂質−ポリマー共役は、低分子量多糖を含み、該多糖の平均分子量は、５ｋＤ〜９０ｋＤである。別の実施形態では、該多糖の平均分子量は、５ｋＤ〜６０ｋＤである。別の実施形態では、該多糖の平均分子量は、５ｋＤ〜４０ｋＤである。別の実施形態では、該多糖の平均分子量は、５ｋＤ〜１５ｋＤである。別の実施形態では、該多糖の平均分子量は、５ｋＤ〜２０ｋＤである。
【００５４】
別の実施形態では、該多糖の平均分子量は、１０ｋＤ〜３０ｋＤである。別の実施形態では、該多糖の平均分子量は、１０ｋＤ〜５０ｋＤである。別の実施形態では、該多糖の平均分子量は、１０ｋＤを超える。
【００５５】
一実施形態では、多糖はグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）である。一実施形態では、ポリマー共役脂質は、グリコサミノグリカン共役リン脂質である。一実施形態では、グリコサミノグリカンはムコ多糖体である。一実施形態では、グリコサミノグリカンは、反復二糖単位（アミノ糖−酸性糖反復単位）から構成される長鎖である。一実施形態では、このアミノ糖は、グルコサミンまたはガラクトサミンである。一実施形態では、このアミノ糖は、硫酸化されている。一実施形態では、酸性糖はＤ−グルクロン酸またはＬ−イズロン酸である。
【００５６】
一実施形態では、グリコサミノグリカンは、グリコサミノグリカンの塩および遊離酸、ならびに化学的に変化されるが、なおそれらの機能を保持するグリコサミノグリカンを包含する。これら修飾としては、エステル化、硫酸化、ポリ硫酸化、およびメチル化を含む。例えば、ヒアルロン酸塩は、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸カリウム、ヒアルロン酸マグネシウム、およびヒアルロン酸カルシウムを含む。
【００５７】
一実施形態では、グリコサミノグリカンは、それらの初期抽出形よりも多くのイオウ基を含有するよう化学的に修飾されてもよい。別の実施形態では、グリコサミノグリカンは、部分的にまたは完全に合成されてもよく、若しくは植物または動物由来のいずれであってもよい。
【００５８】
一実施形態では、グリコサミノグリカンは、天然供給源から取得される。一実施形態では、グリコサミノグリカンの天然供給源としては、植物および動物供給源の双方が挙げられ、すなわち、ブナの木、ならびにサメ軟骨、ウシ気管、クジラ隔膜、ブタ鼻孔を含む動物軟骨の形態、ならびに貝＝ペルナ・カナリクルス（Perna canaliculus）およびナマコなどの軟体動物が挙げられる。別の実施形態では、本発明での使用のためのグリコサミノグリカンは、組換えグリコサミノグリカンである。
【００５９】
一実施形態では、グリコサミノグリカンは、本発明の組成物および方法における使用に、約１０〜３０ｋＤに次いで切断される。
【００６０】
本発明の一実施形態では、グリコサミノグリカンは、特に、ヒアルロン酸、ヘパリン、硫酸ヘパリン、硫酸コンドロイチン、ケラチン、硫酸ケラチン、硫酸デルマタン、またはこれらの誘導体であることができる。
【００６１】
一実施形態では、ＧＡＧはヒアルロン酸である。一実施形態では、このヒアルロン酸は、低分子量ヒアルロン酸、切断ヒアルロン酸、またはこれらの組み合わせである。一実施形態では、この低分子量ヒアルロン酸は、約１０〜５０ｋＤの平均分子量を有する。
【００６２】
一実施形態では、本発明のポリマーは、本発明の脂質に共有結合する。一実施形態では、１００ｋＤを超える分子量を有するヒアルロン酸などの高分子量ＧＡＧｓは、これらがリポソームに非共有的に接着することが確認されたために、本発明のリポソームの調製では使用されない。
【００６３】
一実施形態では、ヒアルロン酸ナトリウムなどの低分子量ＧＡＧは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１０／１３２４０２号の実施例９に記載されるような、ヒアルロン酸ナトリウムの酸加水分解によって調製される。
【００６４】
一実施形態では、ヒアルロン酸およびその誘導体の分子量は、国際公開第２０１０／１３２４０２号に記載されるように、サイズ排除クロマトグラフィーおよび多角光散乱（ＳＥＣ−ＭＡＬＳ）によって決定される。
【００６５】
一実施形態では、この多糖はグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）ではない。一実施形態では、この多糖は、キトサン、アルギン酸、ヘタスターチ、デキストラン、またはこれらの組み合わせである。
【００６６】
一実施形態では、脂質またはリン脂質が、本発明の組成物および方法に使用され得る。一実施形態では「脂質」とは、特にリン脂質、グリセロ脂質、スフィンゴ脂質、ステロール脂質、プレノール脂質、糖脂質等を含む任意のタイプの脂質を指す。
【００６７】
一実施形態では、ポリマー共役脂質は、ポリマー共役リン脂質である。別の実施形態では、このリン脂質は、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、またはホスファチジルグリセロールである。別の実施形態では、該リン脂質は、パルミチン酸、ミリスチン酸、ミリストオレイン酸、パルミトオレイン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、エルシン酸またはドコサヘキサエン酸の残基を含む。
【００６８】
一実施形態では、本発明の組成物および方法のためのリン脂質は、異なる鎖の長さを有してもよい。一実施形態では、該リン脂質は、ジミリストイルリン脂質である。別の実施形態では、該リン脂質はジパルミトイルリン脂質である。別の実施形態では、該リン脂質は、ジラウリル−リン脂質である。別の実施形態では、該リン脂質は、ジステアロイル−リン脂質である。別の実施形態では、該リン脂質は、ジオレオイル−リン脂質である。
【００６９】
一実施形態では、本発明は、一般式（Ａ）の構造によって表される脂質−ポリマー共役を含むリポソームを提供する。
【００７０】
【化１】
2014519493.tif 000003
【００７１】
式中、
Ｌは、脂質またはリン脂質であり、
Ｚは、不在、エタノールアミン、セリン、イノシトール、コリン、リン酸塩、またはグリセロールのいずれかであり、
Ｙは、不在かまたは２〜３０個の原子の長さでの範囲のスペーサ基のいずれかであり、
ｎは１〜７０の数字であり、
式中、Ｌ、Ｚ、ＹおよびＸの間のいずれの結合も、アミドおよびエステル結合のいずれかであり、
式中、該グリコサミノグリカンの分子量は、５ｋＤ〜２０ｋＤである。
【００７２】
一実施形態では、Ｌは脂質である。別の実施形態では、Ｌはリン脂質である。別の実施形態では、Ｌは、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、またはホスファチジルグリセロールである。別の実施形態では、Ｌは、パルミチン酸、ミリスチン酸、ミリストオレイン酸パルミトオレイン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、エルシン酸またはドコサヘキサエン酸の残基を含む。別の実施形態では、Ｌは、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミンである。別の実施形態では、該Ｌは、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミンである。
【００７３】
別の実施形態では、Ｘは、ヒアルロン酸、ヘパリン、硫酸ヘパリン、コンドロイチン、硫酸コンドロイチン、硫酸デルマタンまたは硫酸ケラチンである。別の実施形態では、Ｘはヒアルロン酸である。別の実施形態では、Ｘはヘパリンである。別の実施形態では、Ｘはコンドロイチンである。別の実施形態では、Ｘは硫酸コンドロイチンである。別の実施形態では、Ｘは硫酸デルマタンであり、別の実施形態では、Ｘは硫酸ケラチンである。別の実施形態では、Ｘは、ヘマクセル、アルギネート、アルギン酸、キトサン、またはこれらの組み合わせである。
【００７４】
別の実施形態では、該硫酸コンドロイチンは、コンドロイチン−６−硫酸、コンドロイチン−４−硫酸またはこれらの誘導体である。別の実施形態では、該硫酸デルマタンは、デルマタン−６−硫酸、デルマタン−４−硫酸またはこれらの誘導体である。
【００７５】
一実施形態では、Ｘは多糖ではないポリマーであり、一実施形態では、これはヘマクセルである。一実施形態では、ＸはＰＥＧではない。
【００７６】
別の実施形態では、本発明は、一般式（Ｉ）の構造によって表される脂質−ポリマー共役を提供する。
【００７７】
【化２】
2014519493.tif 000004
【００７８】
式中、
Ｒ１は、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖であり、
Ｒ２は、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖であり、
Ｙは、不在かまたは２〜３０個の原子の長さの範囲のスペーサ基のいずれかであり、
Ｘは、生理学的に許容可能なモノマー、ダイマー、オリゴマーまたは生理学的に許容可能なポリマーのいずれかであり、
ｎは、１〜１０００の数字である。
式中、Ｙが不在の場合、このホスファチジルエタノールアミンは、アミド結合を介して、Ｘに直接結合し、Ｙがスペーサである場合、このスペーサは、アミドまたはエステル結合を介してＸに直接結合し、アミド結合を介してホスファチジルエタノールアミンに直接結合する。
【００７９】
一実施形態では、本発明のリポソームでの使用のための化合物は、共役部分Ｘとして以下のうちの１つを含む：酢酸塩、ブチレート、グルタレート、スクシネート、ドデカノエート、ジドデカノエート、マルトース、ラクトビオン酸、デキストラン、アルギネート、アスピリン、コレート、コレステリルヘミスクシネート、カルボキシメチル−セルロース、ヘパリン、ヒアルロン酸、硫酸コンドロイチン、ポリゲリン（ヘマクセル）、ポリエチレングリコール、ポリカルボキシル化ポリエチレングリコール、グリコサミノグリカン、多糖、ヘテロ−多糖、ホモ−多糖、またはポリピラノース。ＰＥ−共役を調製するために出発物質として使用されるポリマーは、１〜２，０００ｋＤａの分子量で異なってもよい。一実施形態では、ヘパリンは、超低分子量ヘパリンであり、一実施形態では、これは、５〜６個の二糖単位を含む。
【００８０】
ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）部分の例は、その中で、リン脂質のグリセロール主鎖に結合された２つの脂肪酸基の鎖長さが、２〜３０個の炭素原子の長さで異なり、ならびにその中でこれら脂肪酸鎖が、飽和および／または不飽和炭素原子を含有するリン脂質の類縁体である。脂肪酸鎖の代わりに、リン脂質のグリセロール主鎖に直接結合されるか、またはエーテル結合を介して結合されたアルキル鎖は、ＰＥの類縁体として含める。一実施形態では、ＰＥ部分は、ジパルミトイル−ホスファチジル−エタノールアミンである。別の実施形態では、ＰＥ部分は、ジミリストイル−ホスファチジル−エタノールアミンである。
【００８１】
ホスファチジル−エタノールアミンおよびその類縁体は、天然、合成、および半合成誘導体ならびにこれらの異性体を含む様々な供給源からのものであってもよい。
【００８２】
ＰＥ部分の代わりに使用され得るリン脂質は、共有結合によって、Ｎ−メチル−ＰＥのアミノ基を通して結合されたＮ−メチル−ＰＥ誘導体およびこれらの類縁体；共有結合によって、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ＰＥのアミノ基を通して結合されたＮ，Ｎ−ジメチル−ＰＥ誘導体およびこれらの類縁体；パルミトイル−ステアロイル−ＰＳ、様々な供給源から天然ＰＳ、半合成ＰＳｓ、合成、天然および人工ＰＳｓ並びのこれらの異性体などのホスファチジルセリン（ＰＳ）およびその類縁体である。本発明における共役部分として有用な他のリン脂質は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジン酸およびホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ならびにリン脂質、リソリン脂質、ホスファチジン酸、スフィンゴミエリン、リソスフィングミエリン、セラミド、およびスフィンゴシンのいずれかを含むこれらの誘導体である。
【００８３】
ＰＥ−共役およびＰＳ−共役については、リン脂質は、直接的にまたはスペーサ基を介してのいずれかで、リン脂質極性ヘッド基の窒素原子を通して、共役されたモノマーまたはポリマー部分に結合される。ＰＣ、ＰＩ、およびＰＧ共役については、リン脂質は、直接的にまたはスペーサ基を介してのいずれかで、極性ヘッド基の窒素原子または酸素原子の１つを通して、共役されたモノマーまたはポリマー部分に結合される。
【００８４】
別の実施形態では、本発明は、一般式（ＩＩ）の構造によって表される脂質−ポリマー共役を含むリポソームを提供する。
【００８５】
【化３】
2014519493.tif 000005
【００８６】
式中、
Ｒ１は、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖であり、
Ｒ２は、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖であり、
Ｙは、不在かまたは２〜３０個の原子の長さの範囲のスペーサ基のいずれかであり、
Ｘは、生理学的に許容可能なモノマー、ダイマー、オリゴマーまたはポリマーであり、ここでＸはグリコサミノグリカンであり、
ｎは、１〜１０００の数字である。
式中、Ｙが不在の場合、このホスファチジルセリンは、アミド結合を介して、Ｘに直接結合し、Ｙがスペーサである場合、このスペーサは、アミドまたはエステル結合を介してＸに直接結合し、アミド結合を介してホスファチジルセリンに直接結合する。
【００８７】
一実施形態では、このホスファチジルセリンは、ホスファチジルセリンのＣＯＯ−部分を介して、Ｙに結合し、またはＹが不在の場合Ｘに結合する。
【００８８】
別の実施形態では、本発明は、一般式（ＩＩＩ）の構造によって表される脂質−ポリマー共役を含むリポソームを提供する。
【００８９】
【化４】
2014519493.tif 000006
【００９０】
式中、
Ｒ１は、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖であり、
Ｒ２は、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖であり、
Ｚは、不在、イノシトール、コリン、またはグリセロールのいずれかであり、
Ｙは、不在かまたは２〜３０個の原子の長さの範囲のスペーサ基のいずれかであり、
Ｘは、生理学的に許容可能なモノマー、ダイマー、オリゴマーまたはポリマーであり、ここでＸはグリコサミノグリカンであり、
ｎは、１〜１０００の数字である。
式中、リン脂質、Ｚ、ＹおよびＸの間のいずれの結合も、アミドまたはエステル結合のいずれかである。
【００９１】
別の実施形態では、本発明は、一般式（ＩＶ）の構造によって表される脂質−ポリマー共役を含むリポソームを提供する。
【００９２】
【化５】
2014519493.tif 000007
【００９３】
式中、
Ｒ１は、水素若しくは、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖のいずれかであり、
Ｒ２は、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖であり、
Ｚは、不在、イノシトール、コリン、またはグリセロールのいずれかであり、
Ｙは、不在かまたは２〜３０個の原子の長さの範囲のスペーサ基のいずれかであり、
Ｘは、生理学的に許容可能なモノマー、ダイマー、オリゴマーまたはポリマーであり、ここでＸはグリコサミノグリカンであり、
ｎは、１〜１０００の数字である。
式中、リン脂質、Ｚ、ＹおよびＸの間のいずれの結合も、アミドまたはエステル結合のいずれかである。
【００９４】
別の実施形態では、本発明は、一般式（Ｖ）の構造によって表される脂質−ポリマー共役を含むリポソームを提供する。
【００９５】
【化６】
2014519493.tif 000008
【００９６】
式中、
Ｒ１は、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖であり、
Ｒ２は、水素若しくは２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖のいずれかであり、
Ｚは、不在、イノシトール、コリン、またはグリセロールのいずれかであり、
Ｙは、不在かまたは２〜３０個の原子の長さの範囲のスペーサ基のいずれかであり、
Ｘは、生理学的に許容可能なモノマー、ダイマー、オリゴマーまたはポリマーであり、ここでＸはグリコサミノグリカンであり、
ｎは、１〜１０００の数字である。
式中、リン脂質、Ｚ、ＹおよびＸの間のいずれの結合も、アミドまたはエステル結合のいずれかである。
【００９７】
別の実施形態では、本発明は、一般式（ＶＩ）の構造によって表される脂質−ポリマー共役を含むリポソームを提供する。
【００９８】
【化７】
2014519493.tif 000009
【００９９】
式中、
Ｒ１は、水素若しくは、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖のいずれかであり、
Ｒ２は、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖であり、
Ｚは、不在、イノシトール、コリン、またはグリセロールのいずれかであり、
Ｙは、不在かまたは２〜３０個の原子の長さの範囲のスペーサ基のいずれかであり、
Ｘは、生理学的に許容可能なモノマー、ダイマー、オリゴマーまたはポリマーであり、ここでＸはグリコサミノグリカンであり、
ｎは、１〜１０００の数字である。
式中、リン脂質、Ｚ、ＹおよびＸの間のいずれの結合も、アミドまたはエステル結合のいずれかである。
【０１００】
別の実施形態では、本発明は、一般式（ＶＩＩ）の構造によって表される脂質−ポリマー共役を含むリポソームを提供する。
【０１０１】
【化８】
2014519493.tif 000010
【０１０２】
式中、
Ｒ１は、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖であり、
Ｒ２は、水素若しくは２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖のいずれかであり、
Ｚは、不在、イノシトール、コリン、またはグリセロールのいずれかであり、
Ｙは、不在かまたは２〜３０個の原子の長さの範囲のスペーサ基のいずれかであり、
Ｘは、生理学的に許容可能なモノマー、ダイマー、オリゴマーまたはポリマーであり、ここでＸはグリコサミノグリカンであり、
ｎは、１〜１０００の数字である。
式中、リン脂質、Ｚ、ＹおよびＸの間のいずれの結合も、アミドまたはエステル結合のいずれかである。
【０１０３】
本発明の一実施形態では、Ｚが不在の場合、ホスファチジルコリン（ＰＣ）共役ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）共役、ホスファチジン酸（ＰＡ）共役、およびホスファチジルグリセロール（ＰＧ）共役は、本明細書では一般式（ＩＩＩ）の化合物として定義される。
【０１０４】
別の実施形態では、本発明は、一般式（ＶＩＩＩ）の構造によって表される脂質−ポリマー共役を含むリポソームを提供する。
【０１０５】
【化９】
2014519493.tif 000011
【０１０６】
式中、
Ｒ１は、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖であり、
Ｒ２は、水素若しくは２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖のいずれかであり、
Ｚは、不在、エタノールアミン、セリン、イノシトール、コリン、またはグリセロールのいずれかであり、
Ｙは、不在かまたは２〜３０個の原子の長さの範囲のスペーサ基のいずれかであり、
Ｘは、生理学的に許容可能なモノマー、ダイマー、オリゴマーまたはポリマーであり、ここでＸはグリコサミノグリカンであり、
ｎは、１〜１０００の数字である。
式中、リン脂質、Ｚ、ＹおよびＸの間のいずれの結合も、アミドまたはエステル結合のいずれかである。
【０１０７】
別の実施形態では、本発明は、一般式（ＩＸ）の構造によって表される脂質−ポリマー共役を含むリポソームを提供する。
【０１０８】
【化１０】
2014519493.tif 000012
【０１０９】
式中、
Ｒ１は、水素、若しくは２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖のいずれかであり、
Ｒ２は、水素、若しくは２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖のいずれかであり、
Ｚは、不在、エタノールアミン、セリン、イノシトール、コリン、またはグリセロールのいずれかであり、
Ｙは、不在かまたは２〜３０個の原子の長さの範囲のスペーサ基のいずれかであり、
Ｘは、生理学的に許容可能なモノマー、ダイマー、オリゴマーまたはポリマーであり、ここでＸはグリコサミノグリカンであり、
ｎは、１〜１０００の数字である。
式中、リン脂質、Ｚ、ＹおよびＸの間のいずれの結合も、アミドまたはエステル結合のいずれかである。
【０１１０】
別の実施形態では、本発明は、一般式（ＩＸａ）の構造によって表される脂質−ポリマー共役を含むリポソームを提供する。
【０１１１】
【化１１】
2014519493.tif 000013
【０１１２】
式中、
Ｒ１は、水素若しくは、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖のいずれかであり、
Ｒ２は、水素若しくは２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖のいずれかであり、
Ｚは、不在、エタノールアミン、セリン、イノシトール、コリン、またはグリセロールのいずれかであり、
Ｙは、不在かまたは２〜３０個の原子の長さの範囲のスペーサ基のいずれかであり、
Ｘは、生理学的に許容可能なモノマー、ダイマー、オリゴマーまたはポリマーであり、ここでＸはグリコサミノグリカンであり、
ｎは、１〜１０００の数字である。
式中、リン脂質、Ｚ、ＹおよびＸの間のいずれの結合も、アミドまたはエステル結合のいずれかである。
【０１１３】
別の実施形態では、本発明は、一般式（ＩＸｂ）の構造によって表される脂質−ポリマー共役を含むリポソームを提供する。
【０１１４】
【化１２】
2014519493.tif 000014
【０１１５】
式中、
Ｒ１は、水素若しくは、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖のいずれかであり、
Ｒ２は、水素若しくは２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖のいずれかであり、
Ｚは、不在、エタノールアミン、セリン、イノシトール、コリン、またはグリセロールのいずれかであり、
Ｙは、不在かまたは２〜３０個の原子の長さの範囲のスペーサ基のいずれかであり、
Ｘは、生理学的に許容可能なモノマー、ダイマー、オリゴマーまたはポリマーであり、ここでＸはグリコサミノグリカンであり、
ｎは、１〜１０００の数字である。
式中、リン脂質、Ｚ、ＹおよびＸの間のいずれの結合も、アミドまたはエステル結合のいずれかである。
【０１１６】
別の実施形態では、本発明は、一般式（Ｘ）の構造によって表される脂質−ポリマー共役を含むリポソームを提供する。
【０１１７】
【化１３】
2014519493.tif 000015
【０１１８】
式中、
Ｒ１は、水素若しくは、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖のいずれかであり、
Ｒ２は、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖であり、
Ｚは、不在、エタノールアミン、セリン、イノシトール、コリン、またはグリセロールのいずれかであり、
Ｙは、不在かまたは２〜３０個の原子の長さの範囲のスペーサ基のいずれかであり、
Ｘは、生理学的に許容可能なモノマー、ダイマー、オリゴマーまたはポリマーであり、ここでＸはグリコサミノグリカンであり、
ｎは、１〜１０００の数字である。
式中、セラミド、ホスフォリル、Ｚ、ＹおよびＸの間のいずれの結合も、アミドまたはエステル結合のいずれかである。
【０１１９】
別の実施形態では、本発明は、一般式（ＸＩ）の構造によって表される脂質−ポリマー共役を含むリポソームを提供する。
【０１２０】
【化１４】
2014519493.tif 000016
【０１２１】
式中、
Ｒ１は、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖であり、
Ｙは、不在かまたは２〜３０個の原子の長さの範囲のスペーサ基のいずれかであり、
Ｘは、生理学的に許容可能なモノマー、ダイマー、オリゴマーまたはポリマーであり、ここでＸはグリコサミノグリカンであり、
ｎは、１〜１０００の数字である。
式中、Ｙが不在の場合、スフィンゴシルは、アミド結合を介してＸに直接結合し、Ｙがスペーサである場合、このスペーサはＸおよびスフィンゴシルにはアミド結合を介して直接結合し、Ｘにアミドまたはエステル結合を介して結合する。
【０１２２】
別の実施形態では、本発明は、一般式（ＸＩＩ）の構造によって表される脂質−ポリマー共役を含むリポソームを提供する。
【０１２３】
【化１５】
2014519493.tif 000017
【０１２４】
式中、
Ｒ１は、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖であり、
Ｒ２は、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖であり、
Ｚは、不在、エタノールアミン、セリン、イノシトール、コリン、またはグリセロールのいずれかであり、
Ｙは、不在かまたは２〜３０個の原子の長さでの範囲のスペーサ基のいずれかであり、
Ｘは、生理学的に許容可能なモノマー、ダイマー、オリゴマーまたはポリマーであり、ここでＸはグリコサミノグリカンであり、
ｎは、１〜１０００の数字である。
式中、セラミド、Ｚ、ＹおよびＸの間のいずれの結合も、アミドまたはエステル結合のいずれかである。
【０１２５】
別の実施形態では、本発明は、一般式（ＸＩＩＩ）の構造によって表される脂質−ポリマー共役を含むリポソームを提供する。
【０１２６】
【化１６】
2014519493.tif 000018
【０１２７】
式中、
Ｒ１は、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖であり、
Ｒ２は、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖であり、
Ｚは、不在、コリン、リン酸塩、イノシトール、またはグリセロールのいずれかであり、
Ｙは、不在かまたは２〜３０個の原子の長さの範囲のスペーサ基のいずれかであり、
Ｘは、生理学的に許容可能なモノマー、ダイマー、オリゴマーまたはポリマーであり、ここでＸはグリコサミノグリカンであり、
ｎは、１〜１０００の数字である。
式中、ジグリセリル、Ｚ、ＹおよびＸの間のいずれの結合も、アミドまたはエステル結合のいずれかである。
【０１２８】
別の実施形態では、本発明は、一般式（ＸＩＶ）の構造によって表される脂質−ポリマー共役を含むリポソームを提供する。
【０１２９】
【化１７】
2014519493.tif 000019
【０１３０】
式中、
Ｒ１は、水素若しくは２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖のいずれかであり、
Ｒ２は、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖であり、
Ｚは、不在、コリン、リン酸塩、イノシトール、またはグリセロールのいずれかであり、
Ｙは、不在かまたは２〜３０個の原子の長さの範囲のスペーサ基のいずれかであり、
Ｘは、生理学的に許容可能なモノマー、ダイマー、オリゴマーまたはポリマーであり、ここでＸはグリコサミノグリカンであり、
ｎは、１〜１０００の数字である。
式中、グリセロ脂質、Ｚ、ＹおよびＸの間のいずれの結合も、アミドまたはエステル結合のいずれかである。
【０１３１】
別の実施形態では、本発明は、一般式（ＸＶ）の構造によって表される脂質−ポリマー共役を含むリポソームを提供する。
【０１３２】
【化１８】
2014519493.tif 000020
【０１３３】
式中、
Ｒ１は、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖であり、
Ｒ２は、水素若しくは２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖のいずれかであり、
Ｚは、不在、コリン、リン酸塩、イノシトール、またはグリセロールのいずれかであり、
Ｙは、不在かまたは２〜３０個の原子の長さの範囲のスペーサ基のいずれかであり、
Ｘは、生理学的に許容可能なモノマー、ダイマー、オリゴマーまたはポリマーであり、ここでＸはグリコサミノグリカンであり、
ｎは、１〜１０００の数字である。
式中、グリセロ脂質、Ｚ、ＹおよびＸの間のいずれの結合も、アミドまたはエステル結合のいずれかである。
【０１３４】
別の実施形態では、本発明は、一般式（ＸＶＩ）の構造によって表される脂質−ポリマー共役を含むリポソームを提供する。
【０１３５】
【化１９】
2014519493.tif 000021
【０１３６】
式中、
Ｒ１は、水素若しくは２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖のいずれかであり、
Ｒ２は、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖であり、
Ｚは、不在、コリン、リン酸塩、イノシトール、またはグリセロールのいずれかであり、
Ｙは、不在かまたは２〜３０個の原子の長さの範囲のスペーサ基のいずれかであり、
Ｘは、生理学的に許容可能なモノマー、ダイマー、オリゴマーまたはポリマーであり、ここでＸはグリコサミノグリカンであり、
ｎは、１〜１０００の数字である。
式中、脂質、Ｚ、ＹおよびＸの間のいずれの結合も、アミドまたはエステル結合のいずれかである。
【０１３７】
別の実施形態では、本発明は、一般式（ＸＶＩＩ）の構造によって表される脂質−ポリマー共役を含むリポソームを提供する。
【０１３８】
【化２０】
2014519493.tif 000022
【０１３９】
式中、
Ｒ１は、水素若しくは２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖のいずれかであり、
Ｒ２は、２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖であり、
Ｚは、不在、コリン、リン酸塩、イノシトール、またはグリセロールのいずれかであり、
Ｙは、不在かまたは２〜３０個の原子の長さの範囲のスペーサ基のいずれかであり、
Ｘは、生理学的に許容可能なモノマー、ダイマー、オリゴマーまたはポリマーであり、ここでＸはグリコサミノグリカンであり、
ｎは、１〜１０００の数字である。
式中、脂質、Ｚ、ＹおよびＸの間のいずれの結合も、アミドまたはエステル結合のいずれかである。
【０１４０】
別の実施形態では、本発明は、一般式（ＸＶＩＩＩ）の構造によって表される脂質−ポリマー共役を含むリポソームを提供する。
【０１４１】
【化２１】
2014519493.tif 000023
【０１４２】
式中、
Ｒ１は、水素若しくは２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖のいずれかであり、
Ｒ２は、水素若しくは２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖のいずれかであり、
Ｚは、不在、コリン、リン酸塩、イノシトール、またはグリセロールのいずれかであり、
Ｙは、不在かまたは２〜３０個の原子の長さの範囲のスペーサ基のいずれかであり、
Ｘは、生理学的に許容可能なモノマー、ダイマー、オリゴマーまたはポリマーであり、ここでＸはグリコサミノグリカンであり、
ｎは、１〜１０００の数字である。
式中、脂質、Ｚ、ＹおよびＸの間のいずれの結合も、アミドまたはエステル結合のいずれかである。
【０１４３】
別の実施形態では、本発明は、一般式（ＸＩＸ）の構造によって表される脂質−ポリマー共役を含むリポソームを提供する。
【０１４４】
【化２２】
2014519493.tif 000024
【０１４５】
式中、
Ｒ１は、水素若しくは２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖のいずれかであり、
Ｒ２は、水素若しくは２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖のいずれかであり、
Ｚは、不在、コリン、リン酸塩、イノシトール、またはグリセロールのいずれかであり、
Ｙは、不在かまたは２〜３０個の原子の長さの範囲のスペーサ基のいずれかであり、
Ｘは、生理学的に許容可能なモノマー、ダイマー、オリゴマーまたはポリマーであり、ここでＸはグリコサミノグリカンであり、
ｎは、１〜１０００の数字である。
式中、脂質、Ｚ、ＹおよびＸの間のいずれの結合も、アミドまたはエステル結合のいずれかである。
【０１４６】
別の実施形態では、本発明は、一般式（ＸＸ）の構造によって表される脂質−ポリマー共役を含むリポソームを提供する。
【０１４７】
【化２３】
2014519493.tif 000025
【０１４８】
式中、
Ｒ１は、水素若しくは２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖のいずれかであり、
Ｒ２は、水素若しくは２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖のいずれかであり、
Ｚは、不在、コリン、リン酸塩、イノシトール、またはグリセロールのいずれかであり、
Ｙは、不在かまたは２〜３０個の原子の長さの範囲のスペーサ基のいずれかであり、
Ｘは、生理学的に許容可能なモノマー、ダイマー、オリゴマーまたはポリマーであり、ここでＸはグリコサミノグリカンであり、
ｎは、１〜１０００の数字である。
式中、脂質、Ｚ、ＹおよびＸの間のいずれの結合も、アミドまたはエステル結合のいずれかである。
【０１４９】
別の実施形態では、本発明は、一般式（ＸＸＩ）の構造によって表される脂質−ポリマー共役を含むリポソームを提供する。
【０１５０】
【化２４】
2014519493.tif 000026
【０１５１】
式中、
Ｒ１は、水素若しくは２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖のいずれかであり、
Ｒ２は、水素若しくは２〜３０個の炭素原子の長さの範囲の線状、飽和、モノ不飽和、またはポリ不飽和のアルキル鎖のいずれかであり、
Ｚは、不在、コリン、リン酸塩、イノシトール、またはグリセロールのいずれかであり、
Ｙは、不在かまたは２〜３０個の原子の長さの範囲のスペーサ基のいずれかであり、
Ｘは、生理学的に許容可能なモノマー、ダイマー、オリゴマーまたはポリマーであり、ここでＸはグリコサミノグリカンであり、
ｎは、１〜１０００の数字である。
式中、脂質、Ｚ、ＹおよびＸの間のいずれの結合も、アミドまたはエステル結合のいずれかである。
【０１５２】
上述の一般式（Ａ）、（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（ＩＸｂ）、（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）、（ＸＩＩＩ）、（ＸＩＶ）、（ＸＶ）、（ＸＶＩ）、（ＸＶＩＩ）、（ＸＶＩＩＩ）、（ＸＩＸ）、（ＸＸ）、（ＸＸＩ）、および（ＸＸＩＩ）の構造によって表された化合物のいずれかまたは全てについて、一実施形態では、Ｘはグリコサミノグリカンである。本態様により、かつ一実施形態では、このグリコサミノグリカンは、特に、ヒアルロン酸、ヘパリン、硫酸ヘパリン、硫酸コンドロイチン、ケラチン、硫酸ケラチン、硫酸デルマタンまたはこれらの誘導体である。別の実施形態では、Ｘは、グリコサミノグリカンではない。別の実施形態では、Ｘは多糖であり、一実施形態では、これはヘテロ−多糖であり、別の実施形態では、これは、ホモ−多糖である。別の実施形態では、Ｘはポリピラノースである。
【０１５３】
別の実施形態では、グリコサミノグリカンは、二糖単位のポリマーである。別の実施形態では、ポリマー中の二糖単位の数はｍである。別の実施形態では、ｍは２〜１０，０００の数である。別の実施形態では、ｍは２〜５００の数である。別の実施形態では、ｍは２〜１０００の数である。別の実施形態では、ｍは２〜２０００の数である。別の実施形態では、ｍは１０００〜２０００の数である。別の実施形態では、ｍは２０００〜５０００の数である。別の実施形態では、ｍは３０００〜７０００の数である。別の実施形態では、ｍは５０００〜１０，０００の数である。別の実施形態では、グリコサミノグリカンの二糖単位は、１つの脂質またはリン脂質部分に結合されてもよい。別の実施形態では、グリコサミノグリカンの各二糖単位は、０または１つの脂質またはリン脂質部分に結合されてもよい。別の実施形態では、脂質またはリン脂質部分は、二糖単位の−ＣＯＯＨ基に結合されている。別の実施形態では、脂質またはリン脂質部分と二糖単位との間の結合は、アミド結合である。
【０１５４】
別の実施形態では、グリコサミノグリカンは、グリコサミノグリカンの二糖単位モノマーまたは三糖単位モノマーを含む。
【０１５５】
別の実施形態では、硫酸コンドロイチンは、特に、コンドロイチン−６−硫酸、コンドロイチン−４−硫酸またはこの誘導体であることができる。
【０１５６】
本発明の一実施形態では、Ｙは不在である。任意の架橋基（これは、一実施形態では、スペーサと呼ばれる）Ｙを形成する好適な二価基の非限定的例は、直鎖または分岐鎖アルキレン（例えば、２個以上の、好ましくは４〜３０個の炭素原子のアルキレン）、−ＣＯ−アルキレン−ＣＯ、−ＮＨ−アルキレン−ＮＨ−、−ＣＯ−アルキレン−ＮＨ−、−ＮＨ−アルキレン−ＮＨ、ＣＯ−アルキレン−ＮＨ−、アミノ酸、シクロアルキレンであり、各例におけるアルキレンは、直鎖または分岐鎖であり、鎖−（−Ｏ−ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２−）ｘ中に２個以上、好ましくは２〜３０個の炭素原子を含有し、式中ｘは１以上の整数である。
【０１５７】
本発明の実施形態によると、従来のリン脂質構造に加えて、本発明での使用のための関連する誘導体は、エステル結合の代わりにアルキル結合を含有するように、Ｃ１またはＣ２で修飾されたリン脂質である。本発明の一実施形態では、アルキルリン脂質誘導体およびエーテルリン脂質誘導体が本明細書で例示される。
【０１５８】
本発明の一実施形態では、リン脂質結合グリコサミノグリカンの糖環は完全体である。別の実施形態では、完全体とは、閉じられていることを指す。別の実施形態では、完全体とは中性を指す。別の実施形態では、完全体とは破壊されていないことを指す。
【０１５９】
本発明の一実施形態では、本発明によるいずれかの化合物における脂質またはリン脂質は完全体である。別の実施形態では、本発明によるいずれかの化合物における脂質またはリン脂質の中性構造は維持される。
【０１６０】
一実施形態では、本発明での使用のための化合物は、生体分解性である。
【０１６１】
一部の実施形態では、使用のための化合物が、以下の表１に列挙されるようなものである。
【０１６２】
【表１Ａ】
2014519493.tif 000027
【０１６３】
【表２Ｂ】
2014519493.tif 000028
【０１６４】
【表３Ｃ】
2014519493.tif 000029
【０１６５】
一実施形態では、本発明の組成物および方法での使用のためのＧＡＧおよびＰＬは、スペーサを含み、一実施形態では、これはアミノ酸であり、アミノ酸のアミノ基は、ＧＡＧのカルボキシ基に結合し、アミノ酸のカルボキシ基は、リン脂質のアミノ基に結合する。
【０１６６】
本発明の一実施形態では、本発明での使用のための化合物は、化合物Ｉ〜ＬＸＸＸＶＩＩＩの１つ以上のいずれかである。別の実施形態では、本発明での使用のための化合物は、生理学的に教養可能な担体または溶媒と組み合わせた、化合物ＸＸＩＩ、化合物ＸＩＩＩ，化合物ＸＸＩＶ、化合物ＸＸＶ、化合物ＸＸＶＩ、化合物ＸＸＶＩＩ、化合物ＸＸＶＩＩＩ、化合物ＸＸＩＸ、化合物ＸＸＸ、またはその薬学的に許容可能な塩である。本発明の実施形態によると、これらポリマーは、共役部分として選択される場合、２００〜２，０００，０００ダルトンの分子量で異なってもよい。本発明の一実施形態では、本明細書で参照されるポリマーの分子量は、２００〜１０００ダルトンである。別の実施形態では、本明細書で参照されるポリマーの分子量は、２００〜１０００ダルトンである。別の実施形態では、本明細書で参照されるポリマーの分子量は、１０００〜５０００ダルトンである。別の実施形態では、本明細書で参照されるポリマーの分子量は、５０００〜１０，０００ダルトンである。別の実施形態では、本明細書で言及されるポリマーの分子量は、１０，０００〜２０，０００ダルトンである。別の実施形態では、本明細書で参照されるポリマーの分子量は、１０，０００〜５０，０００ダルトンである。別の実施形態では、本明細書で参照されるポリマーの分子量は、２０，０００〜７０，０００ダルトンである。別の実施形態では、本明細書で参照されるポリマーの分子量は、５０，０００〜１００，０００ダルトンである。別の実施形態では、本明細書で参照されるポリマーの分子量は、１００，０００〜２００，０００ダルトンである。別の実施形態では、本明細書で参照されるポリマーの分子量は、２００，０００〜５００，０００ダルトンである。別の実施形態では、本明細書で参照されるポリマーの分子量は、２００，０００〜１，０００，０００ダルトンである。別の実施形態では、本明細書で参照されるポリマーの分子量は、５００，０００〜１，０００，０００ダルトンである。別の実施形態では、本明細書で参照されるポリマーの分子量は、１，０００，０００〜２，０００，０００ダルトンである。種々の分子量種が、所望の生物学的効力を有することが示された。
【０１６７】
本発明の一実施形態では、低分子量の脂質共役は、式（Ｉ）から（ＸＸＩ）の化合物として上述の部分で定義され、ここでＸは、単糖類または多糖、カルボキシル化二糖、モノカルボン酸またはジカルボン酸、サリシレート、サリチル酸、アスピリン、ラクトビオン酸、マルトース、アミノ酸、グリシン、酢酸、酪酸、ジカルボン酸、グルタル酸、コハク酸、脂肪酸、ドデカン酸、ジドデカン酸、胆汁酸、コリン酸、コレステリルヘミスクシネート、ジペプチドまたはトリペプチド、オリゴペプチド、三糖若しくはヘパリンの二糖または三糖モノマー単位、硫酸ヘパリン、ケラチン、硫酸ケラチン、コンドロイチン、コンドロイチン−６−硫酸、コンドロイチン−４−硫酸、デルマチン、硫酸デルマタン、デキストラン、ヒアルロン酸、グリコサミノグリカン、またはポリピラノースである。
【０１６８】
任意の架橋基Ｙを形成する好適な二価基の例は、直鎖または分岐鎖アルキレン（例えば、２個以上の、好ましくは４〜１８個の炭素原子の）、−ＣＯ−アルキレン−ＣＯ、−ＮＨ−アルキレン−ＮＨ−、−ＣＯ−アルキレン−ＮＨ−、シクロアルキレンであり、各例におけるアルキレンは、直鎖または分岐鎖であり、鎖−（−Ｏ−ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２−）ｘ中に２個以上、好ましくは２〜１８個の炭素原子を含有し、式中ｘは１以上の整数である。
【０１６９】
別の実施形態では、従来のリン脂質に加えて、本発明での使用のための関連する誘導体は、エステル結合の代わりにエーテルまたはアルキル結合を含有するようＣ１またはＣ２位で改変されたリン脂質である。これら誘導体は、一般式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）によって上記で例示される。
【０１７０】
本発明の一実施形態では、Ｘは、脂質と共有結合で共役される。別の実施形態では、Ｘはアミド結合を介して、脂質と共有結合で共役される。別の実施形態では、Ｘはエステル結合を介して、脂質と共有結合で共役される。別の実施形態では、脂質はホスファチジルエタノールアミンである。
【０１７１】
一実施形態では、本発明は、ポリマー共役脂質を含むリポソームを提供し、このポリマー共役脂質は、一実施形態では、多糖共役リン脂質（ＰｏＳ−ＰＬ）である。一実施形態では、該ＰｏＳ−ＰＬは、ヒアルロン酸−ホスファチジル−エタノールアミン（ＨｙＰＥ；化合物Ａ）であり、これは、一実施形態では、交互に並ぶβ−１，３−グルクロニド結合およびβ−１，４−グルコサミニド結合によって結合された交互に並ぶＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンおよびＤ−グルクロン酸を含む。
【０１７２】
【化２５】
2014519493.tif 000030
【０１７３】
一実施形態では、塩化、部分的または全体的エステル化、内部エステル化、脱アセチル化、Ｏ−硫酸化、過カルボキシル化およびアミド化による化学修飾から得られたものなどのヒアルロン酸の誘導体は、本発明の組成物または方法において使用され得る。一実施形態では、「ｎ」は、全ＨｙＰＥ共役ＰＥ分子内に存在するＰＥｓの数を表し、一方「ｍ」は、分子内に存在する二糖の数を表し、二糖単位の一部は、共役ＨｙＰＥを含み、他の二糖単位は共役ＨｙＰＥを含まない。
【０１７４】
別の実施形態では、該ＰｏＳ−ＰＬは、硫酸コンドロイチン−ホスファチジル−エタノールアミン（ＣＳＡＰＥ；化合物Ｂ）である。
【０１７５】
【化２６】
2014519493.tif 000031
【０１７６】
別の実施形態では、該ＰｏＳ−ＰＬは、硫酸デルマタン−ホスファチジル−エタノールアミン（ＤｅｒＰＥ；化合物Ｃ）である。
【０１７７】
【化２７】
2014519493.tif 000032
【０１７８】
別の実施形態では、該ＰｏＳ−ＰＬは、ヘパリン−ホスファチジル−エタノールアミン（ＨｅｐＰＥ；化合物Ｄ）である。
【０１７９】
【化２８】
2014519493.tif 000033
【０１８０】
別の実施形態では、該ＰｏＳ−ＰＬは、非グリコサミノグリカン共役リン脂質である。
【０１８１】
別の実施形態では、該ＰｏＳ−ＰＬは、キトサン−グルタリル−ホスファチジル−エタノールアミン（ＣｈｉＰＥ；化合物Ｅ）である。
【０１８２】
【化２９】
2014519493.tif 000034
【０１８３】
別の実施形態では、該ＰｏＳ−ＰＬは、アルギン酸−ホスファチジル−エタノールアミン（ＡｌｇＰＥ；化合物Ｆ）である。
【０１８４】
【化３０】
2014519493.tif 000035
【０１８５】
別の実施形態では、該ＰｏＳ−ＰＬは、ヘタスターチ−ホスファチジル−エタノールアミン（ＨｅｔＰＥ；化合物Ｇ）である。
【０１８６】
【化３１】
2014519493.tif 000036
【０１８７】
別の実施形態では、該ＰｏＳ−ＰＬは、デキストラン−グルタリル−ホスファチジル−エタノールアミン（ＤｅｘＰＥ；化合物Ｈ）である。
【０１８８】
【化３２】
2014519493.tif 000037
【０１８９】
別の実施形態では、前記Ｐｏ−Ｌは、ヘマセル−グルタリル−ホスファチジル−エタノールアミン（ＨｅｍＰＥまたはポリゲリン；化合物Ｉ）である。
【０１９０】
【化３３】
2014519493.tif 000038
【０１９１】
一実施形態では、前記ＰｏＳ−ＰＬは、ケラタン硫酸−ホスファチジル−エタノールアミン（ＫＳＰＥ；化合物Ｊ）である。
【０１９２】
【化３４】
2014519493.tif 000039
【０１９３】
別の実施形態では、前記ＰｏＳ−ＰＬは、参照により本明細書に組み入れられる米国特許出願公開第２０１０／００２２４７３号に記載されているような脂質またはリン脂質共役である。
【０１９４】
一実施形態では、多糖は、リン脂質のアミン残基を介してリン脂質に連結される。一実施形態では、多糖は、多糖のカルボン酸残基を介してリン脂質に連結される。別の実施形態では、多糖は、架橋試薬の不在下で酸化されてアルデヒドとなり得るヒドロキシル単位（例えば、−ＣＨ２−ＯＨ）を介してリン脂質に連結される。
【０１９５】
一実施形態では、リポソームは、親水性核を取り囲む１以上の二重脂質層により形成される、５０ｎｍ〜１０００ｎｍの範囲の様々なサイズの中空のミクロスフェアである。この構造は疎水性尾部と親水性頭部を有するリン脂質の特殊な性質のために達成でき、水性媒体中では、疎水性尾部は互いに引き寄せ合うが、親水性頭部は水に面する傾向がある。その結果、閉じて小さな小胞を形成する二重脂質層となり、その内部に種々の親水性環境が存在する。リポソームは１９６５年に初めて記載され(Standish M M et al., J Mol Biol, 1965, 13:238-252)、薬物および／または有効成分の担体として研究されてきた（例えば、Liposomes as drug carriers, Gregoriadis G. editor, New York: John Wiley & Sons, 1985: 3-18; Banerjee R., J Biomater Appl, 2001, 16:3-21）。リポソームは通常、それらのサイズおよび二重脂質層の数に基づいて分類される。概して言えば、例えば、Callow R A et al.(参照により本明細書に組み入れられる、Cryobiology, 1985:251-267）が記載しているように、ａ）多重ラメラ小胞：それらはタマネギ様構造を有し、複数の二重脂質層は親水性層を散在させている；ｂ）単ラメラ小胞、大型（直径が１μｍを超える）および小型（直径が１μｍ未満）：それらは１つの単一二重脂質層により形成され、強親水性の核を取り囲む；ｃ）著しく疎水性の環境を取り囲むいくつかの二重脂質層から構成されるオリゴラメラ小胞が挙げられる。
【０１９６】
一実施形態では、リポソームは、一実施形態では、多重ラメラ小胞（ＭＬＶ）、微細乳化リポソーム（ＭＥＬ）または大単ラメラ小胞（ＬＵＶＥＴ）であり、当技術分野で公知の方法を用いて調製される。一実施形態では、前記リポソームは、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）を含まない。別の実施形態では、前記リポソームは、ホスファチジルエタノールアミンを含む。
【０１９７】
一実施形態では、単ラメラリポソームの生産のための従来の脂質膜技術を用いてリポソームを調製する：二重層からなるであろう選択された脂質を有機溶媒と混合した後、溶媒を蒸発させ乾燥脂質膜を形成されるように設定した環境条件（例えば、圧力および温度の設定パラメーター）に曝す。次に、前記脂質膜を水性媒体および／またはリポソームと会合させるポリマーを含有する溶液で水和させる。この混合物の一部を凍結させ、凍結乾燥させ、次いで好適な媒体を加えることによってその最初の容量に再構成する。この凍結、凍結乾燥および再構成ステップは、ヒアルロン酸および／またはその誘導体が単ラメラリポソーム微小構造に対する凍結保護剤として働き得ることを実証する実験所見に基づいて考案された（参照により本明細書に組み入れられるPeer at al., Biochim Biophys Acta, 2003, 1612:76-82）。一般に、単純な構造化リン脂質懸濁液が凍結され、その後再構成されると、それらのリポソームは元の特徴を失い、組織化されてはるかに大きな多重ラメラ小胞となるが、それらの構造およびそれらが担持している物質の制御放出が効果的でないことから本発明の目的では好適でない。凍結乾燥される混合物中に有意な量の多糖が存在すれば、安定な水素結合の形成によりリポソームの元の構造特性が保持され、再構成後でも制御放出系としてのそれらの有効性を維持する。
【０１９８】
別の実施形態では、本発明のリポソームは、当業者に公知のいずれの方法によって得てもよい。一実施形態では、適当なサイズのリポソームは、音波処理／超音波、押出し、またはそれらの組み合わせを用いて調製される。
【０１９９】
別の実施形態では、リポソーム製剤は、逆相蒸発（ＲＥＶ）法（参照により本明細書に組み入れられる米国特許第４，２３５，８７１号参照）、注入法、または洗剤希釈によって生産することができる。リポソームを生成するためのこれら、およびその他の方法の総説は、教本である、参照により本明細書に組み入れられるLiposomes, Marc Ostro, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1983, Chapter 1に見出せる。また、参照により本明細書に組み入れられるSzoka Jr. et al., (1980, Ann. Rev. Biophys. Bioeng., 9:467)も参照。ＵＬＶを形成するための方法は、参照により本明細書に組み入れられる"Extrusion Technique for Producing Unilamellar Vesicles"と題されたCullis et al., PCT Publication No. 87/00238, Jan. 16, 1986に記載されている。多重ラメラリポソーム（ＭＬＶ）は、脂質膜法によって調製してもよく、この方法では脂質をクロロホルム−メタノール溶液（３：１ｖｏｌ／ｖｏｌ）に溶かし、減圧下で蒸発乾固させ、膨潤溶液で水和させる。その後、この溶液に十分な振盪および例えば２時間、例えば３７℃でのインキュベーションを行う。インキュベーション後、押出しにより単ラメラリポソーム（ＵＬＶ）が得られる。この押出し工程は、リポソームのサイズを好ましい平均直径まで縮小することによりリポソームを改造する。あるいは、濾過またはその他のサイズ選択技術などの技術を用いて所望のサイズのリポソームを選択してもよい。
【０２００】
本発明のサイズ選択リポソームは約３００ｎｍ未満の平均直径を有すべきであるが、約２００ｎｍ未満の平均直径を有するように選択されることが好ましく、約１００ｎｍ未満の平均直径が特に好ましい。本発明のリポソームが単ラメラリポソームである場合、それは好ましくは、約２００ｎｍ未満の平均直径を有するように選択される。本発明の最も好ましい単ラメラリポソームは、約１００ｎｍ未満の平均直径を有する。しかしながら、より小さな単ラメラリポソームの由来する本発明の多小胞リポソームは一般に、より大きく、約１０００ｎｍ未満の平均直径を有し得ると理解される。本発明の好ましい多小胞リポソームは約８００ｎｍ未満、および約５００ｎｍ未満の平均直径を有するが、本発明の最も好ましい多小胞リポソームは約３００ｎｍ未満の平均直径を有する。
【０２０１】
一実施形態では、これらのリポソームは、天然または合成由来の単一または複数の飽和または不飽和型の直鎖または分岐鎖を有し得る親水性部分と親油性部分から構成される脂質によって形成される。体液中でリポソームを安定化させるコレステロールまたは所望の効果を有することが当業者に公知の他の任意の要素など、他の要素を添加してもよい。
【０２０２】
一実施形態では、本発明のリポソームは、２つ以上の親油性側鎖を含む。一実施形態では、本発明のリポソームは、例えば１０〜３０個の間の炭素原子を有する２個の飽和およびまたは不飽和脂肪酸、脂肪酸と第四級アミン、アシル基が８〜３０個の炭素原子を含む場合には第四級ジメチルジアシルアミンとの塩を含有する親油性陽イオン性鎖を含む。さらなる例は文献に詳細に記載されている（参照によりそれらの全内容が本明細書に組み入れられるFasbender et al., Am J Physiol, 1995, 269:L45-L51; Solodin et al, Biochemistry, 1995, 34:13537-13544; Feigner et al., J Biol Chem, 1994, 269:2550-2561; Stamatatos et al., Biochemistry, 1988, 27:3917-3925を含む）。
【０２０３】
一実施形態では、本発明のリポソームは非イオン鎖を含み、この非イオン鎖は一実施形態では、例えば１０〜３０個の間の炭素原子を有するグリセリンジエステルであり、別の実施形態では、アルコキシル化アミンである。一実施形態では、陰イオン性側鎖の例としては、ホスファチジン酸、およびジパルミトイルホスファチジルグリセロールなどの負電荷リン脂質が含まれる。一実施形態では、単一の非イオン鎖を有する物質の例は、カプリン酸グリセリル、カプリル酸グリセリル、ヒドロキシステアリン酸グリセリル、リソステアリン酸（lysostearate）グリセリル、ラノリン酸グリセリル、ラウリン酸グリセリル、リノール酸グリセリルなど、鎖に１０〜３０個の間の炭素原子を有するモノグリセリンエステルである。
【０２０４】
別の実施形態では、リポソームは、親油性鎖がエーテル結合および／またはエステル結合によって結合されているポリオキシエチレン誘導体から構成される。例示のため、本発明者らはセチルおよびステアリン酸エーテル（これらは全て３〜１０の間のオキシエチレン単位を有する）、ならびにそれらの誘導体を挙げることができる。
【０２０５】
単一の陰イオン性鎖を有する物質としては、限定されるものではないが、オレイン酸などの脂肪酸、ならびにホスファチジルセリンおよびホスファチジルグリセロールなどの、一本鎖を有する負電荷リン脂質が挙げられる。
【０２０６】
一実施形態では、リポソームは、天然または合成由来のいずれかのリン脂質から構成することができる。天然リン脂質には、卵ホスファチジルコリンそれ自体または水素化物、およびダイズまたはその他の植物源からのリン脂質が含まれる。
【０２０７】
本発明のリポソームは、当技術分野でリポソームを生成するために周知であり慣例的に使用されている脂質材料の組み合わせから生産することができる。脂質には、スフィンゴミエリンなどの比較的硬質の品種、または不飽和アシル鎖を有するリン脂質などの流動タイプが含まれ得る。「リン脂質」は、リポソームを形成することができるいずれか１種類のリン脂質またはリン脂質の組み合わせを意味する。卵、ダイズもしくはその他の植物源から得られるもの、または部分合成もしくは完全合成されたもの、または様々な脂質鎖長および不飽和度のものを含むホスファチジルコリン（ＰＣ）は、本発明において使用するために好適である。限定されるものではないが、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、水素化ダイズホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、ダイズホスファチジルコリン（ｓｏｙ  ＰＣ）、卵ホスファチジルコリン（ｅｇｇ  ＰＣ）、水素化卵ホスファチジルコリン（ＨＥＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジミリストイルグリセロホスホコリン（ＤＭＰＣ）、ジラウロイルグリセロホスホコリン（ＤＬＰＣ）、パルミトイルオレオイルグリセロホスホコリン（ＰＯＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）、およびホスファチジルセリンを含む合成、半合成および天然ホスファチジルコリンは、本発明において使用するために好適なホスファチジルコリンである。これらのリン脂質は全て市販されている。さらに、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）およびリン酸（ＰＡ）も本発明において使用するために好適なリン脂質であり、限定されるものではないが、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジラウリルホスファチジルグリセロール（ＤＬＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジミリストイルホスファチジン酸（ＤＭＰＡ）、ジステアロイルホスファチジン酸（ＤＳＰＡ）、ジラウリルホスファチジン酸（ＤＬＰＡ）、およびジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）が挙げられる。別の実施形態では、リポソームは、ジ−オレオイル−ホスファチジル−コリン（ＤＯＰＣ）、２位の炭素においてＣ６−ＮＢＤ（蛍光脂肪酸）で標識されたＰＣ、またはそれらの組み合わせから構成される。別の実施形態では、リポソームは、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）から構成される。他の好適なリン脂質は、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリン、ならびにラウリン酸、ミリスチン酸ステアロイル、およびパルミチン酸鎖を含有するホスファチジン酸を含む。脂質膜を安定化させる目的で、コレステロールなどの付加的脂質成分を添加することが好ましい。一実施形態では、本発明のリポソームを生成するための脂質は、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）およびホスファチジルコリン（ＰＣ）を、さらにコレステロール（ＣＨ）と組み合わせて含む。本発明の一実施形態によれば、本発明のリポソームを生成するため��脂質とコレステロールの組み合わせは、ＰＥ：ＰＣ：Ｃｈｏｌモル比３：１：１を含む。
【０２０８】
一実施形態では、細胞内皮系へのリポソームの取り込みを防ぎ、目的組織へのリポソームの取り込みを高めるために、リポソームの外面を長時間循環剤で改質してもよい。長時間循環剤としての親水性ポリマーによるリポソームの改質は、血中でリポソームの半減期を延長できることが知られている。親水性ポリマーの例としては、ポリエチレングリコール、ポリメチルエチレングリコール、ポリヒドロキシプロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリメチルプロピレングリコールおよびポリヒドロキシプロピレンオキシドが挙げられる。よって、一実施形態において、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）含有リン脂質を組み込むことも本発明により企図される。
【０２０９】
明らかに、目的に好適なリポソームを得るために作り出すことができる、可能性のある組み合わせは多数あり、それらはすでに文献に詳細に報告されているので、当業者ならば最も好適なものを選択することができる。
【０２１０】
一実施形態では、本発明の化合物は生分解性である。
【０２１１】
ポリマー共役脂質リポソームの生成方法
【０２１２】
別の実施形態では、本発明は、混合リポソームを生成する方法であって、脂質をポリマーと共役してポリマー共役脂質を形成するステップと、前記ポリマー共役脂質をリポソームと接触させて混合リポソームを生成するステップとを含む方法を提供する。
【０２１３】
別の実施形態では、本発明は、改質リポソームを生成する方法であって、脂質をポリマーと共役してポリマー共役脂質を形成し、前記ポリマー共役脂質をリポソームと接触させて改質リポソームを生成するステップを含む方法を提供する。一実施形態では、前記方法は、ＰｏＳ−ＰＬをリポソームと接触させるステップの前に、前記ポリマー共役脂質を単離することをさらに含む。一実施形態では、リポソームは２種類以上のポリマー共役脂質を含む。
【０２１４】
別の実施形態では、本発明は、脂質をポリマーと共役してポリマー共役脂質を形成するステップと、前記ポリマー共役脂質をリポソームと接触させて混合リポソームを生成するステップとを含む方法によって生産された混合リポソームを提供する。
【０２１５】
リポソームの生成方法
【０２１６】
一実施形態では、リポソームは、水性環境中にリン脂質を提供し、前記リン脂質にリポソームを形成させることによって調製される。一実施形態では、リポソームの生成を加速化するためにエネルギーが供給される。よって、一実施形態では、音波処理、押出し、およびＭｏｚａｆａｒｉ法を用いてリポソームを生成することができる。一実施形態では、リポソームは、ホスホリポン９０Ｈ、ホスホリポン１００Ｈ、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ステアリルアミン（ＳＡ）、ジセチルホスフェート（ＤＣＰ）、コレステロール、またはそれらの組み合わせを用いて製造することができる。
【０２１７】
ナノリポソームの生成方法
【０２１８】
一実施形態では、リポソームを分離するために、次のようにそれぞれ４℃で４０分間、１．３×１０５のｇ力で実施する連続的遠心分離によって粒子が分画される。すなわち、３回実施後のペレットは微粒子富化画分であり、さらに３回実施した微粒子富化画分の上清はナノ粒子富化画分である。
【０２１９】
一実施形態では、リポソームは凍結乾燥することができる。
【０２２０】
ポリマー共役脂質の生成方法
【０２２１】
一実施形態では、架橋試薬を用いてポリマーと脂質とを連結させる。一実施形態では、架橋試薬としては、グルタルアルデヒド（ＧＡＤ）、水可溶性カルボジイミド（一実施形態では、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）である）、ゲニピン、トランスグルタミナーゼ、ホルムアルデヒドまたはそれらの組み合わせが含まれる。
【０２２２】
一実施形態では、ポリマーは、直接またはリンカーを介して脂質に共役されている。一実施形態では、リンカーはグルタリルリンカーであり、これは一実施形態では、式−ＯＣ（ＣＨ２）３ＣＯ−で表される。別の実施形態では、−ＣＯ−アルキレン−ＣＯ、−ＮＨ−アルキレン−ＮＨ−、−ＣＯ−アルキレン−ＮＨ−、−ＮＨ−アルキレン−ＮＨＣＯ−アルキレン−ＮＨ−、アミノ酸、シクロアルキレンであり、各場合において、アルキレンは直鎖または分岐鎖であり、鎖−（−Ｏ−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−）ｘ−（ｘは１以上の整数である）内に２個以上、好ましくは２〜３０個の原子を含む。
【０２２３】
一実施形態では、ポリマー（一実施形態では、多糖）と脂質（一実施形態では、リン脂質）の間の結合はアミド結合である。別の実施形態では、多糖とリン脂質の間の結合はエステル結合である。
【０２２４】
一実施形態では、ポリマー共役脂質を、溶液中のリポソームと合わせるが、この場合、ポリマー共役脂質の脂質成分がリポソームの脂質二重層に組み込まれる。一実施形態では、共有結合脂質によりリポソームの表面に固定されたポリマーは、マッシュルームのようにリポソーム表面から放射状に（すなわち、リポソーム表面に対して垂直）広がっている（図１ａ）。一実施形態では、このマッシュルーム状の構造は比較的低いＰｏ−Ｌ／リポソーム比から得られるものであり、これらのＰｏ−Ｌはあまり密に詰まっていない。一実施形態では、共有結合脂質を介してリポソームの表面に固定されたポリマーは、ブラシのようにリポソーム表面から放射状に（すなわち、リポソーム表面に対して垂直）広がっている（図１ｂ）。一実施形態では、このブラシ状の構造は、比較的高いＰｏ−Ｌ／リポソーム比から得られるものであり、これらのＰｏ−Ｌはぎっしり詰まっている。一実施形態では、Ｐｏ−Ｌ／リポソーム比は、中間構造、すなわちマッシュルーム−ブラシ構造が存在するように調節し、これは一実施形態において約３〜１０ｎｍの保護を与える。一実施形態では、脂質共役ポリマーは約３〜１０ｎｍの保護層を形成し（図１ａ〜１ｂ）、これは一実施形態において、本明細書で実証したように（図４）、リポソームを分解酵素または他の傷害／溶解剤、例えば、ホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）から保護する。別の実施形態では、脂質共役ポリマーは、リポソーム上に１ｎｍを超える層を形成する。別の実施形態では、脂質共役ポリマーは、約３．５ｎｍの層を形成する。別の実施形態では、脂質共役ポリマーは、約４．５ｎｍの層を形成する。別の実施形態では、脂質共役ポリマーは、約３．５〜４．５ｎｍの層を形成する。別の実施形態では、脂質共役ポリマーは、約３〜５ｎｍの層を形成する。別の実施形態では、脂質共役ポリマーは、約２〜７ｎｍの層を形成する。脂質共役ポリマーは、ＰＬＡ２阻害剤として機能することが当技術分野で知られており、本明細書に示されているデータは、脂質共役ポリマーがリポソームを分解から保護し得ることも実証する。
【０２２５】
リポソームの外面を被覆する、天然の非末端切断型ヒアルロン酸などの大きな多糖とは対照的に、これは約１ｎｍの層を形成し（図１ｃ）、リポソームを多くの酵素から保護するためには十分でない。さらに、ポリマーを脂質と混合することから形成されるリポソームは、架橋剤の存在下であっても、ポリマー−リポソーム共役のリポソームへの組み込みではなく、前記リポソームの表面へのポリマーの接着を提供し得ることが当技術分野で公知である。
【０２２６】
ポリマー共役脂質リポソームの使用
【０２２７】
一実施形態では、本発明は、ポリマー共役脂質を含むリポソームを含む薬物送達システムを提供する。
【０２２８】
別の実施形態では、本発明は、脂質二重層とポリマー共役脂質とを含み、前記ポリマー共役脂質が前記脂質二重層に組み込まれているリポソームを含む薬物送達システムを提供する。
【０２２９】
別の実施形態では、本発明は、２種類以上のポリマー共役脂質を含み、前記ポリマー共役脂質が、単一のポリマーに共役された２種類以上の脂質を含むリポソームを含む薬物送達システムを提供する。
【０２３０】
別の実施形態では、本発明は、２種類以上の低分子量グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）共役脂質を含み、前記低分子量ＧＡＧ共役脂質が、単一のＧＡＧに共役された２種類以上の脂質を含むリポソームを含む薬物送達システムを提供する。
【０２３１】
別の実施形態では、本発明は、ポリマー共役脂質を含み、前記ポリマーがグリコサミノグリカンであるリポソームを含む薬物送達システムを提供する。
【０２３２】
一実施形態では、ポリマー共役脂質は、一実施形態では生体活性薬を含むリポソームの安定性を高める。別の実施形態では、ポリマー共役脂質は、リポソームの分解を軽減する。別の実施形態では、ポリマー共役脂質は、リポソームの半減期を延長する。別の実施形態では、リポソームは、生体活性ポリマー共役脂質を炎症組織に標的化し、それにより、ポリマー共役脂質の有効性を高める。一実施形態では、生体活性ポリマー共役脂質を含むリポソームは、付加的な生体活性薬をさらに含む。一実施形態では、リポソームは、炎症組織には侵入できるが非炎症組織には侵入できないそのサイズのために炎症組織を標的とする。
【０２３３】
一実施形態では、本発明の、また、本発明の方法において使用するためのリポソームはいずれも、本発明の１種類以上のポリマー共役脂質を含む。よって、一実施形態では、本発明のリポソームは、ＨｙＰＥとＫＳＰＥを含む。別の実施形態では、本発明のリポソームは、ＣＳＡＰＥとＰＥＧ−ＰＥを含む。別の実施形態では、本発明のリポソームは、ＨｙＰＥとＰＥＧ−ＰＥを含む。本発明のリポソームは、前記リポソームの脂質二重層に組み込まれた本発明の２種類、３種類、４種類またはそれを超える異なるポリマー共役脂質を含み得ると理解されるべきである。
【０２３４】
一実施形態では、本発明のリポソームは、脂質層に疎水性薬剤を含む。
【０２３５】
別の実施形態では、本発明のリポソームは、リポソーム内に封入された親水性薬剤を含む。
【０２３６】
一実施形態では、前記薬剤は、プラスミドＤＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ、低分子一過性ＲＮＡ（ｓｔＲＮＡ）、ミクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ＲＮＡミメティクス、または硫酸プロタミンおよびポリリジンなどの陽イオンペプチド、またはポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、ポリアミンスペルミジンおよびスペルミンなどの陽イオンポリマーによって凝集されたヘテロクロマチンｓｉＲＮＡなどの核酸である。
【０２３７】
一実施形態では、本発明の組成物は、顕微鏡的薬物送達システム（ＭＤＤＳ）として使用可能である。別の実施形態では、本発明の組成物は、治療薬または診断薬の持続放出または制御放出を提供する。別の実施形態では、本発明の組成物は、薬物の分解または不活性化を軽減する。別の実施形態では、本発明の組成物は薬物の有効性を高め、薬物の投与頻度の低減を可能とする。別の実施形態では、本発明の組成物は、薬物の毒性および望ましくない副作用を軽減する。別の実施形態では、本発明の組成物は、治療および診断において使用するために後に送達するための薬物を封入する。別の実施形態では、本発明の組成物は、薬物、ワクチン、化粧品、減量薬または栄養補助食品の有効性を改善し、副作用を軽減する。別の実施形態では、本発明の組成物は、種々のタイプの生体活性を組み込み、かつ保護することができるとともに、それらをヒトまたは動物の体内の標的部位に送達することができる。
【０２３８】
一実施形態では、抗生物質および化学療法薬などの小分子、ならびにタンパク質などの大分子は本明細書に記載の改質リポソーム中に封入することができる。別の実施形態では、改質リポソームはＤＮＡを封入するために使用することができ、大きな改質リポソームであれば、細胞全体および細胞系統を封入できさえする。よって、改質リポソームは、組織工学用のスキャフォールドとしても使用可能である。
【０２３９】
本発明の別の実施形態では、まず、他の分子を多糖に結合させることができ、その後、これを脂質と反応させる。これらの粒子は、粒子の外側に前記他の分子を露出させておく。これらの他の分子は、例えば、抗体、葉酸塩、ポルフィリン、またはレクチンであってよく、標的化に用いてもよい。別の実施形態では、標的化薬剤は、多糖と結合させてもよく、一実施形態では、これは特異的モノクローナル抗体、ｓｃＦｖ、Ｆａｂフラグメント、受容体リガンド、またはそれらの組み合わせである。
【０２４０】
一実施形態では、本発明の多糖は、乳房、肺の腫瘍、および前立腺癌を標的とするために、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、またはＭＵＣ３に対する抗体と共役させてもよい。あるいは、本発明の多糖は、黒色腫を標的とするために、ガングリオシドＧＭ３に対する抗体と共役させてもよい。
【０２４１】
一実施形態では、本発明は、１種類以上の薬剤をリポソームに封入するための方法を提供する。この方法は、（１）ポリマーに共役された脂質を有する凍結乾燥リポソームを提供するステップ（前記ポリマーは前記脂質に共有結合されている）と、（２）親水性薬剤を水溶液として提供するステップと、（３）前記凍結乾燥リポソームを、親水性薬剤を含む水溶液で再水和するステップとを含む。一実施形態では、前記ポリマー共役脂質は、前記ポリマー共役脂質に共有結合された標的化部分をさらに含んでよい。
【０２４２】
本発明はまた、ポリマー共役脂質を含むリポソームを作製するためのキット、ならびにリポソームとポリマー共役脂質を含む薬物および／または薬剤封入のためのキットを提供する。
【０２４３】
別の実施形態では、本発明は、病理学的状態に罹患している被験体を処置する方法であって、前記被験体にポリマー共役脂質を含むリポソームに封入された生体活性剤を投与することを含む方法を提供する。
【０２４４】
別の実施形態では、本発明は、被験体において病理学的状態を処置、阻害、または抑制する方法であって、前記被験体にポリマー共役脂質を含むリポソームに封入された生体活性剤を投与することを含む方法を提供する。
【０２４５】
別の実施形態では、本発明は、被験体において病理学的状態を処置、阻害、または抑制する方法であって、前記被験体に脂質二重層とポリマー共役脂質とを含むリポソームを投与することを含み、前記ポリマー共役脂質が前記脂質二重層に組み込まれている方法を提供する。一実施形態では、前記リポソームは、前記病理学的状態の処置、阻害、または抑制に有効な薬剤を含む。
【０２４６】
別の実施形態では、本発明は、被験体において病理学的状態を処置、阻害、または抑制する方法であって、前記被験体に、２種類以上のポリマー共役脂質を含み、前記ポリマー共役脂質が、単一のポリマーに共役された２種類以上の脂質を含むリポソームに封入された生体活性剤を投与することを含む方法を提供する。
【０２４７】
別の実施形態では、本発明は、被験体において病理学的状態を処置、阻害、または抑制する方法であって、前記被験体に、２種類以上の低分子量グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）共役脂質を含み、前記低分子量ＧＡＧ共役脂質が、単一のＧＡＧに共役された２種類以上の脂質を含むリポソームに封入された生体活性剤を投与することを含む方法を提供する。
【０２４８】
別の実施形態では、本発明は、被験体において病理学的状態を処置、阻害、または抑制する方法であって、前記被験体に、ポリマー共役脂質（前記ポリマーはグリコサミノグリカンでない）を含むリポソームに封入された生体活性剤を投与することを含む方法を提供する。
【０２４９】
一実施形態では、このリポソームの治療効果または予防効果は、ナノリポソームの炎症組織への本来の標的化によるものである。この態様によれば、一実施形態において、ナノリポソームはポリマー共役脂質を炎症組織に標的化し、この場合、前記ポリマー共役脂質は抗炎症効果を示し、それにより被験体における治療効果または予防効果を誘導する。別の実施形態では、前記リポソームは生体活性剤を含み、本発明の組成物および方法の改良された効果は、リポソーム上のポリマー共役脂質により付与される分解からの保護によるものであり、それにより被験体におけるリポソームの半減期が延長され、それにより前記被験体に対するその効果が高まる。別の実施形態では、本発明の組成物および方法の改良効果は、リポソームの脂質二重層に組み込まれたポリマー共役脂質の存在による、リポソームからの生体活性剤のより緩慢な放出によるものである。
【０２５０】
一実施形態では、前記病理学的状態は敗血症である。
【０２５１】
別の実施形態では、前記病理学的状態は腸管疾患であり、一実施形態では、クローン病、潰瘍性大腸炎、免疫炎症性腸障害、薬剤性腸症、虚血誘発性腸障害、炎症性腸疾患、またはそれらの組み合わせである。
【０２５２】
別の実施形態では、前記病理学的状態は、炎症性応答に関連する中枢神経系または末梢神経系の疾患または障害であり、一実施形態では、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、髄膜炎、脳および末梢神経系の脱髄疾患、またはそれらの組み合わせであり、前記脳および末梢神経系の脱髄疾患は、多発性硬化症、特発性脱髄性多発神経障害またはギラン−バレー症候群、アルツハイマー病、疼痛、ハンチントン病（ＨＤ）、重症筋無力症（ＭＧ）、ＨＩＶ関連痴呆、前頭側頭型痴呆（ＦＴＤ）、脳卒中、外傷性脳損傷、加齢性網膜変性、脳脊髄炎、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、脳虚血誘発性損傷、またはそれらの組み合わせである。
【０２５３】
別の実施形態では、前記病理学的状態は閉塞性呼吸器疾患であり、一実施形態では、喘息、慢性閉塞性肺疾患、またはそれらの組み合わせである。
【０２５４】
別の実施形態では、前記病理学的状態は皮膚科病理学的状態であり、一実施形態では、乾癬、脂漏性皮膚炎、接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、またはそれらの組み合わせである。
【０２５５】
別の実施形態では、前記病理学的状態は感染症である。一実施形態では、前記感染症はウイルス感染症である。一実施形態では、前記ウイルス感染症はインフルエンザ感染症、ＨＩＶ感染症、またはポックスウイルス感染症である。別の実施形態では、前記感染症は細菌感染症である。一実施形態では、前記細菌感染症はクラミジア感染症である。
【０２５６】
別の実施形態では、前記病理学的状態は新生物である。別の実施形態では、前記病理学的状態は肉腫、腺癌、結腸癌、黒色腫、乳癌、白血病、リンパ腫、胃癌、膠芽腫、星状細胞腫、膀胱癌、胸膜中皮腫、燕麦細胞癌、気管支原生癌、またはそれらの組み合わせである。
【０２５７】
別の実施形態では、本発明は、被験体の疾患、病理学的状態または障害を処置、阻害、または抑制する方法であって、前記被験体に、本発明のリポソームに封入された生体活性剤を投与することを含む方法を提供する。一実施形態では、前記病理学的状態は結膜炎であり、一実施形態ではウイルス性、別の実施形態では細菌性のものである。別の実施形態では、前記結膜炎はアレルゲンまたは刺激物によるものである。
【０２５８】
別の実施形態では、前記病理学的状態は嚢胞性線維症である。
【０２５９】
一実施形態では、前記病理学的状態は癌であり、前記生体活性剤は抗癌薬である。一実施形態では、前記癌は転移癌である。別の実施形態では、前記病理学的状態は感染症であり、一実施形態では、細菌感染症、真菌感染症、ウイルス感染症、または寄生虫感染症である。一実施形態では、前記生体活性剤は抗菌薬、抗真菌薬、抗ウイルス薬または抗寄生虫薬である。別の実施形態では、前記病理学的状態はプリオン感染症である。
【０２６０】
一実施形態では、前記薬物は経口、静脈内、鼻腔内、眼内、筋肉内、皮下または局所投与される。
【０２６１】
一実施形態では、「処置する」とは、治療的処置または予防もしくは回避処置のいずれかを意味し、この目的は上記のような病的状態または障害を回避または軽減することである。よって、一実施形態では、処置には、疾患、障害もしくは病理学的状態に関連する症状の、直接的影響もしくは治癒、抑制、阻害、回避、重篤度の軽減、発症の遅延、軽減、またはそれらの組み合わせを含み得る。よって、一実施形態では、「処置する」とは、とりわけ、進行の遅延、緩解の促進、緩解の誘発、緩解の増進、回復の加速化、有効性の増強、または別の治療薬に対する耐性の低減、またはそれらの組み合わせを意味する。一実施形態では、「回避する」とは、とりわけ、症状の発症の遅延、疾患再発の回避、再発エピソードの回数または頻度の低減、症候性エピソード間の潜伏期間の延長、またはそれらの組み合わせを意味する。一実施形態では、「抑制する」または「阻害する」とは、とりわけ、症状の重篤度の軽減、急性エピソードの重篤度の軽減、症状数の低減、疾患関連症状の罹患率の低減、症状の潜伏期間の短縮、症状の改善、続発性症状の軽減、続発性感染症の軽減、患者の生存期間の延長、またはそれらの組み合わせを意味する。
【０２６２】
一実施形態では、症状は原発性であり、別の実施形態では、症状は続発性である。一実施形態において、「原発性」とは、対象ウイルス感染症の直接的結果である症状を意味し、一実施形態において、「続発性」とは、主因からまたは主因の結果として誘導される症状を意味する。一実施形態では、本発明において使用するための組成物および方法は、その病理学的状態に関連する原発性もしくは続発性症状、または続発性合併症を処置する。
【０２６３】
一部の実施形態では、本発明の、および本発明の方法において使用するためのリポソームはいずれも、本明細書に記載のいずれかの形態または実施形態において、１種類以上の本発明のポリマー共役脂質を含む。一部の実施形態では、本発明のリポソームはいずれも、本明細書に記載のいずれかの形態または実施形態において、１種類以上の本発明のポリマー共役脂質からなる。一部の実施形態では、本発明のリポソームは、本明細書に記載のいずれかの形態または実施形態において、本発明の１種類以上のポリマー共役脂質から本質的になる。
【０２６４】
一部の実施形態では、用語「含む」は、ＨｙＰＥなどのポリマー共役脂質の包含、ならびに当技術分野で公知であり得る他の脂質または脂質共役の包含を意味する。一部の実施形態では、用語「から本質的になる」は、標準的リポソームからのその唯一の変更点がポリマー共役脂質の示された包含であるリポソームを意味するが、リポソームの薬物放出プロフィールの改良に直接関与しない他の脂質または脂質共役が含まれてもよい。一部の実施形態では、用語「からなる」は、リポソームに組み込まれた、特定のポリマー共役脂質のみを、あるいはまた、列挙されたポリマー共役脂質のみを含有するリポソームを意味する。
【０２６５】
一実施形態では、用語「標的化薬剤」または「標的化部分」は、特定の組織、細胞種、受容体、感染因子または他の対象とする領域を目指す、または好ましくは前記と会合するもしくは結合する薬剤を意味する。標的化薬剤としては、限定されるものではないが、オリゴヌクレオチド、抗原、抗体もしくはその機能的フラグメント、リガンド、受容体、特異的結合対の一方のメンバー、生体受容体に親和性を有するペプチドを含むポリアミド、オリゴ糖、多糖、ステロイドもしくはステロイド誘導体、ホルモン、例えば、エストラジオールもしくはヒスタミン、ホルモンミミック、例えば、モルヒネ、または標的に結合特異性を有するその他の化合物が挙げられる。本発明の方法において、標的化薬剤は、目的とする標的への本発明の脂質粒子の輸送または優先的局在を促進する。
【０２６６】
本明細書において、「抗体」または抗体の「機能的フラグメント」は、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体製剤、ならびにヒト化抗体などのハイブリッドまたはキメラ抗体、改変抗体、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆ（ａｂ）フラグメント、Ｆｖフラグメント、単一ドメイン抗体、二量体および三量体抗体フラグメント構築物、ミニボディー、および親抗体分子の免疫結合特性を示し、かつ／または細胞表面抗原に結合するそれらの機能的フラグメントを含む製剤を包含する。
【０２６７】
標的化薬剤は、標的細胞で差次的に発現される受容体のいずれのリガンドであってもよい。限定されない例としては、トランスフェリン、葉酸塩、他のビタミン、ＥＧＦ、インスリン、ヘレグリン、ＲＧＤペプチドまたはインテグリン受容体に反応性のある他のポリペプチド、抗体またはそれらのフラグメントが挙げられる。糖分子または糖タンパク質、脂質分子またはリポタンパク質も標的化薬剤であり得る。
【０２６８】
一実施形態では、病的状態において特異的に発現される細胞表面マーカーに対する抗体は標的化薬剤として使用可能である。腫瘍細胞に特異的に出現する抗原の例としては、黒色腫上のガングリオシドＧＭ３、乳癌、肺癌および前立腺癌の表面のＭＵＣ１、ＭＵＣ２、およびＭＵＣ３、ならびに消化管癌の表面のＬｅｗｉｓ  Ｘが挙げられる。一実施形態において、抗体は、抗体の抗原結合領域を含有する機能的フラグメントである。好ましい抗体フラグメントは、抗体の一本鎖Ｆｖフラグメントである。抗体または抗体フラグメントは、標的細胞の表面の受容体、好ましくは標的細胞上で差次的に発現される受容体と結合するものである。一実施形態では、多種の標的化薬剤が脂質粒子に共有結合され得る。
【０２６９】
別の実施形態では、本発明は、被験体において画像診断を実施するための方法であって、ポリマー共役脂質を含むリポソームに封入された診断薬を投与するステップを含む方法を提供する。
【０２７０】
別の実施形態では、本発明は、被験体において画像診断を実施するための方法であって、脂質二重層とポリマー共役脂質とを含み、前記ポリマー共役脂質が前記脂質二重層に組み込まれているリポソームに封入された診断薬を前記被験体に投与し、前記被験体を撮像するステップを含む方法を提供する。
【０２７１】
別の実施形態では、本発明は、被験体において画像診断を実施するための方法であって、２種類以上のポリマー共役脂質を含み、前記ポリマー共役脂質が、単一のポリマーに共役された２種類以上の脂質を含むリポソームに封入された診断薬を投与するステップを含む方法を提供する。
【０２７２】
別の実施形態では、本発明は、被験体において画像診断を実施するための方法であって、２種類以上の低分子量グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）共役脂質を含み、前記低分子量ＧＡＧ共役脂質が、単一のＧＡＧに共役された２種類以上の脂質を含むリポソームに封入された診断薬を投与するステップを含む方法を提供する。
【０２７３】
別の実施形態では、本発明は、被験体において画像診断を実施するための方法であって、ポリマー共役脂質を含み、前記ポリマーがグリコサミノグリカンでないリポソームに封入された診断薬を投与するステップを含む方法を提供する。
【０２７４】
別の実施形態では、本発明は、被験体においてＰＬＡ２を阻害するための方法であって、前記被験体にポリマー共役脂質を含むリポソームを投与するステップを含む方法を提供する。
【０２７５】
別の実施形態では、本発明は、被験体においてＰＬＡ２を阻害するための方法であって、前記被験体に、２種類以上のポリマー共役脂質を含み、前記ポリマー共役脂質が、単一のポリマーに共役された２種類以上の脂質を含むリポソームを投与するステップを含む方法を提供する。
【０２７６】
別の実施形態では、本発明は、被験体においてＰＬＡ２を阻害するための方法であって、前記被験体に、２種類以上の低分子量グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）共役脂質を含み、前記低分子量ＧＡＧ共役脂質が、単一のＧＡＧに共役された２種類以上の脂質を含むリポソームを投与するステップを含む方法を提供する。
【０２７７】
別の実施形態では、本発明は、被験体においてＰＬＡ２を阻害するための方法であって、前記被験体に、ポリマー共役脂質を含み、前記ポリマーがグリコサミノグリカンでないリポソームを投与するステップを含む方法を提供する。
【０２７８】
本明細書で使用する場合、一実施形態では、用語「封入」および「封入された」とは、脂質粒子中への薬剤の組み込みを意味する。前記薬剤は、脂質粒子の水性内部に存在する。一実施形態では、封入された薬剤の一部は、リポソームの内部に沈殿した塩の形態をとる。前記薬剤はまた、リポソームの内部で自己沈殿してもよい。
【０２７９】
一実施形態では、「薬剤」は、身体に治療上影響を及ぼし得るか、または診断のためにｉｎ  ｖｉｖｏで使用できる任意の薬剤または化合物を意味する。治療薬の例としては、癌治療のための化学療法薬、感染症を治療するための抗生物質、真菌感染症を治療するための抗真菌薬、核酸類似体、例えば、ｓｉＲＮＡを含む治療核酸が挙げられる。一実施形態では、対象とする薬剤は、遺伝子、プラスミドＤＮＡなどのポリヌクレオチド、ＤＮＡフラグメント、オリゴヌクレオチド、オリゴデオキシヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、キメラＲＮＡ／ＤＮＡオリゴヌクレオチド、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、リボザイム、またはウイルス粒子である。一実施形態では、前記薬剤は、増殖因子、サイトカイン、免疫調節薬、または発現した際に免疫系を刺激または抑制する抗原を提示するタンパク質を含むその他のタンパク質である。一実施形態では、前記薬剤は、投与後にｉｎ  ｖｉｖｏで検出可能な診断薬である。例示的診断薬としては、電子稠密物質、磁気共鳴イメージング剤、放射性医薬品および蛍光分子が挙げられる。撮像に有用な放射性ヌクレオチドとしては、同位元素６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、１１１Ｉｎ、９９ｍＴｃ、６７Ｇａまたは６８Ｇａを含む、銅、ガリウム、インジウム、レニウム、およびテクネチウムの放射性同位元素が挙げられる。参照により本明細書に組み入れられる、Ｌｏｗらが米国特許第５，６８８，４８８号で開示しているイメージング剤が本明細書に記載のリポソーム複合体において有用である。
【０２８０】
一実施形態では、対象とする薬剤は核酸、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、プラスミドＤＮＡ、低分子ヘアピンＲＮＡ、低分子一過性ＲＮＡ（ｓｔＲＮＡ）、ミクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ＲＮＡミメティクス、またはヘテロクロマチンｓｉＲＮＡである。対象とする核酸薬剤は、脂質粒子への効率的封入を妨げる荷電骨格を有する。よって、対象とする核酸薬剤は、脂質粒子に封入する前に陽イオンポリマー、例えば、ＰＥＩ、ポリアミンスペルミジン、およびスペルミン、または陽イオンペプチド、例えば、プロタミンおよびポリリジンと縮合させてもよい。一実施形態では、前記薬剤は、陽イオンポリマーと縮合されない。
【０２８１】
一実施形態では、対象とする薬剤は、下記の方法で脂質粒子に封入される。凍結保護剤および標的化薬剤を含む脂質粒子が凍結乾燥して提供される。対象とする薬剤は水溶液である。水溶液としての対象とする薬剤は、凍結乾燥脂質粒子を再水和させるために利用される。従って、対象とする薬剤は、再水和された脂質粒子に封入される。
【０２８２】
一実施形態では、対象とする２種類の薬剤を本脂質粒子によって送達することができる。一方の薬剤は疎水性であり、他方は親水性である。疎水性薬剤は、脂質粒子の形成の際に脂質粒子に添加することができる。疎水性薬剤は、その脂質粒子の脂質部分と会合する。親水性薬剤は、凍結乾燥脂質粒子を再水和する水溶液として添加する。
【０２８３】
好適な脂質：薬剤の効果的ないずれの比も本発明により意図される。一実施形態では、脂質：薬剤のモル比としては、約２：１〜約３０：１、約５：１〜約１００：１、約１０：１〜約４０：１、約１５：１〜約２５：１が含まれる。
【０２８４】
一実施形態では、薬剤の負荷効率は、封入薬剤パーセントとして約５０％、約６０％、約７０％またはそれを超える。一実施形態では、親水性薬剤の負荷効率は５０〜１００％の範囲である。脂質粒子の脂質部分と会合される薬剤、例えば、水溶液中で可溶性の不十分な薬剤の好ましい負荷効率は、負荷薬剤パーセントとして約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％である。一実施形態では、脂質層における疎水性薬剤の負荷効率は８０〜１００％の範囲である。
【０２８５】
本方法の一態様では、リポソーム製剤は、放射性標識、蛍光標識、非蛍光標識、色素、または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）を増強する化合物を含む群から選択される標識で検出可能に標識される。一実施形態では、リポソーム製剤は音響反射率によって検出される。標識はリポソームの外側に結合されてもよいし、あるいはリポソームに封入されてもよい。
【０２８６】
別の実施形態では、本発明は、被験体に核酸を送達する方法であって、脂質二重層とポリマー共役脂質とを含み、前記ポリマー共役脂質が前記脂質二重層に組み込まれているリポソームに封入された前記核酸を前記被験体に投与するステップを含む方法を提供する。
【０２８７】
別の実施形態では、本発明は、被験体に核酸を送達する方法であって、脂質二重層を含む改質リポソームに封入された前記核酸を前記被験体に投与するステップを含み、前記リポソームが、前記脂質二重層に組み込まれた２種類以上の多糖共役リン脂質（ＰｏＳ−ＰＬｓ）を含む方法を提供する。
【０２８８】
本発明のさらに別の目的は、脂質粒子を遺伝子送達物質として用いる遺伝子送達を提供することである。例えば、変異型Ｒａｆ遺伝子は、抗血管新生目的で腫瘍細胞に標的化または送達することができ；細胞毒性の高いサイトカイン（highly ctoxic cytokine）ＴＮＦ−αの遺伝子は、細胞を促進するために癌に送達することができ；サイトカインＩＬ−１２およびＩＦＮ−γの遺伝子は、アレルギー誘発性過敏性（ＡＨＲ）のために肺に送達することができ；また、グリア細胞系由来神経成長因子（glail cell ine derived neurogrowth factor）（ＧＤＮＦ）のｃＤＮＡは、パーキンソン病患者の黒質のドーパミン細胞に標的化することができる。
【０２８９】
一実施形態では、本発明のリポソームは、抗癌薬を送達するために用いられる。一実施形態では、ＨＹＰＥを含み、パクリタキセルなどの有糸分裂阻害剤を含有するリポソームが本発明の組成物および関連の方法に包含される。一実施形態では、卵巣癌、乳癌、非小細胞肺癌、結腸直腸癌、頭頸部癌、および他の悪性腫瘍を含む多数のヒト腫瘍種が、ＣＤ４４ファミリーの細胞表面プロテオグリカンの有意な発現を有する。例えば、ＣＤ４４プロテオグリカンファミリーは、原発性ヒト卵巣腫瘍または腹膜インプラントからの新鮮なサンプルの約９０％といった多くで発現される。さらに、頭頸部の扁平上皮癌を用いた研究では、７５％を超えるものがＣＤ４４の発現を有することが示された。一般に、上皮癌幹細胞もまたＣＤ４４を発現する。
【０２９０】
ＣＤ４４プロテオグリカンファミリーには、ヒアルロン酸の主要な受容体である、親型と１０を超えるアイソフォームが含まれる。ヒアルロン酸は、細胞挙動に対する直接的受容体媒介作用を含め、細胞外マトリックス内で種々の機能を果たす。これらの作用は細胞内シグナル伝達経路を介して生じ、この場合、ヒアルロン酸がＣＤ４４細胞表面受容体に結合し、前記受容体によってインターナライズされる。
【０２９１】
本明細書において、用語「抗癌薬」は、被験体、例えば、１以上の癌細胞を死滅させること、１以上の癌細胞にアポトーシスを誘導すること、１以上の癌細胞の成長速度を低下させること、罹患率もしくは転移数を軽減すること、腫瘍サイズを縮小すること、腫瘍成長を阻害すること、腫瘍もしくは１以上の癌細胞への血液供給を低減すること、１以上の癌細胞もしくは腫瘍に対する免疫応答を増進すること、癌の進行を回避もしくは阻害する、または癌を有する被験体の寿命を延長することにより、癌に悪影響を与えることができる化合物を意味する。
【０２９２】
一部の実施形態では、本開示の改質リポソームにおいて使用するために好適な抗癌薬はタキサンを含む。一般に、タキサンは典型的には、微小管機能の阻害などの抗腫瘍特性を有するジテルペン類である。好適なタキサンの例としては、限定されるものではないが、パクリタキセル、ドセタキセル、およびそれらの誘導体が挙げられる。一実施形態では、好適な抗癌薬は、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（「ＮＨＳエステル」）などの活性エステルとして提供されてよい。例えば、一実施形態では、好適な抗癌薬は、「パクリタキセル−ＮＨＳエステル」または「タキソール−ＮＨＳエステル」とも呼ばれるパクリタキセル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルであり得る。別の実施形態では、本発明のリポソームを用いて送達される抗癌薬は、ドキソルビシン、トポテカン、またはそれらの組み合わせである。
【０２９３】
他の抗癌薬もまた、開示される改質リポソームにおいて使用するために好適であり得る。抗癌薬としては、例えば、化学療法薬（化学療法）、放射線療法薬（放射線療法）、免疫療法薬（免疫療法）、遺伝子療法薬（遺伝子療法）、ホルモン療法、他の生物学的薬剤（生物療法）および／または別の療法が挙げられる。本明細書に開示される改質リポソームにおいて抗癌薬として使用するために好適であり得る抗癌薬の非網羅的一覧は、参照により本明細書に組み入れられる米国特許第７，３４４，８２９号の第１２段落４３行目〜第１３段落４行目に記載されている。
【０２９４】
一実施形態では、本発明は、本発明のリポソームを含む組成物を提供する。
【０２９５】
「治療上有効な」という句は、疾患または障害の治療に使用される有効成分の量を制限することを意図する。この量は、前記疾患または障害を軽減または除去する目標を達成する。
【０２９６】
本発明の医薬組成物は、それを必要とする被験体において適応症、すなわち、病理学的状態を処置するために使用することができる。本明細書で用いる場合、用語「被験体」は、ヒトおよびその他、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、イヌ、ネコ、ラット、マウスなどの哺乳類、ならびに両生類、鳥類、爬虫類および魚類を含む動物を含むものと考えられる。
【０２９７】
本発明の医薬組成物は好ましくは経口投与されるが、非経口、例えば、皮下、静脈内、局所的、筋肉内、腹腔内、経皮、直腸、膣、鼻腔内または眼内を含む別の好適な経路によって投与してもよい。別にまたは並行して、投与は経口経路によってもよい。経口投与経路は、頬側および舌下投与経路を含むと理解される。
【０２９８】
非経口投与はボーラス注射または経時的漸進灌流によってもよい。非経口投与は一般に、注射、最も一般には皮下、筋肉内または静脈内を特徴とする。
【０２９９】
本発明の医薬組成物の有効成分、浸透促進剤、および他の生物学的に活性な薬物または医薬から構成された局所製剤は、多くの方法で適用可能である。液体製剤は、好適な送達装置から皮膚または罹患した皮膚もしくは粘膜の適当な領域へ滴下し、手で擦り込むか、または単に風乾させることができる。前記液体製剤に、好適なゲル化剤を添加することができ、その調製物を適当な領域に適用し、擦り込むことができる。創傷または火傷への投与の場合には、有効成分をオイルおよびエマルションなどの剤形に組み込んでよい。このような調製物は、ローション、クリーム、ペーストおよび軟膏などの形態で罹患領域に直接適用することができる。
【０３００】
あるいは、前記局所用液体製剤を噴霧装置に入れ、スプレーとして送達することもできる。このタイプの薬物送達装置は、皮膚病に侵された大面積の皮膚に、極めて敏感な皮膚に、または鼻腔もしくは口腔に適用するために特によく適用している。所望により、本医薬組成物は軟膏または経皮パッチの形態で投与してもよい。
【０３０１】
本発明の医薬組成物はまた、粘膜、例えば、膣（特に膣病理学的状態を処置する場合）、直腸および鼻腔内投与経路による取り込みを最適化する他の経路によって投与してもよい。さらに、本医薬組成は、粘膜組織または上皮を介した送達にも適合させることができる。鼻腔内投与される場合、本医薬組成物は一般にエアゾール形態または滴剤形態で投与される。これは肺病理学的状態を処置するために特に有用であり得る。
【０３０２】
好適な製剤は、A. Gennaro (2000) "Remington: The Science and Practice of Pharmacy", 20th edition, Lippincott, Williams, & Wilkins; Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (1999) H. C. Ansel et al., eds 7th ed., Lippincott, Williams, & Wilkins;およびHandbook of Pharmaceutical Excipients (2000) A. H. Kibbe et al., eds. ,3rd ed. Amer. Pharmaceutical Assoc.（それぞれ引用することにより本明細書に組み入れられる）に見出すことができる。
【０３０３】
意図される投与様式に応じて、使用する組成物は、例えば、錠剤、坐剤、丸剤、カプセル剤、散剤、液体または懸濁液などの、固体、半固体または液体剤形の形、好ましくは、正確な用量の単回投与に好適な単位剤形であり得る。本発明の医薬組成物および薬学上許容される希釈剤、担体、賦形剤、アジュバント、または補助薬剤。薬学上許容される担体は、活性のある治療タンパク質に対しては化学的に不活性なものであり、使用条件下で有害な副作用または毒性を持たないものであることが好ましい。担体の選択は１つには特定の有効成分によって、ならびにその組成物を投与するために使用される方法によって決定される。よって、本発明の医薬組成物の好適な製剤には多様なものがある。
【０３０４】
好適な賦形剤は、特に、糖類（例えば、ラクトースまたはスクロース、マンニトール、ソルビトールなど）、セルロース調製物および／またはリン酸カルシウム（例えば、リン酸三カルシウム、リン酸水素カルシウムなど）などの増量剤、ならびに例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピロリジンを用いたデンプンペーストなどの結合剤である。
【０３０５】
非経口投与用の注射製剤は、液体懸濁液、注射前に液体中で溶液もしくは懸濁液とするのに好適な固体形態、またはエマルションとして調製することができる。好適な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロールまたはエタノールなどである。さらに、所望により、投与される医薬組成物はまた、湿潤剤または乳化剤、およびｐＨ緩衝剤などの微量の無毒な補助薬剤、例えば、酢酸ナトリウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミンなども含有してよい。
【０３０６】
水性注射懸濁液はまた、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、および／またはデキストランを含め、懸濁液の粘度を高める物質も含有してよい。所望により、この懸濁液は安定剤も含有してよい。
【０３０７】
非経口製剤は、アンプルおよびバイアルなどの単位用量または多用量密閉容器で提供することができ、使用直前に注射用の無菌液体担体、例えば水を加えるだけのフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存することができる。即時調合注射懸濁液は、従前に記載されている種類の無菌散剤、顆粒剤、および錠剤から調製することができる。
【０３０８】
経口投与では、薬学上許容される無毒の組成物は、例えば、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルク、セルロース、クロスカルメロースナトリウム、グルコース、ゼラチン、スクロース、および炭酸マグネシウムなどの、通常使用される賦形剤のいずれかを組み込むことによって形成される。このような組成物には、懸濁液、錠剤、分散錠、丸剤、カプセル剤、散剤、および徐放性製剤などが含まれる。経口投与に好適な製剤は、水、生理食塩水、またはオレンジジュースなどの希釈剤に懸濁させた有効量の薬物封入ガゴマー（gagomer）粒子などの液体懸濁液；それぞれ所定量の有効成分を固体または顆粒として含有する、サシェ剤、ロゼンジ剤、およびトローチ剤；散剤、適当な液体中の懸濁液；および好適なエマルションからなり得る。液体製剤は、水およびアルコール、例えば、エタノール、ベンジルアルコール、およびポリエチレンアルコールなどの希釈剤を、薬学上許容される界面活性剤、沈殿防止剤、または乳化剤の添加を伴ってまたは伴わずに含んでよい。
【０３０９】
組成物が丸剤または錠剤である場合、それは有効成分とともに、ラクトース、スクロース、またはリン酸二カルシウムなどの希釈剤；ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤；ならびにデンプン、アラビアガム、ゼラチン、ポリビニルピロリジン、セルロースおよびその誘導体などの結合剤を含有する。
【０３１０】
錠剤形態は、ラクトース、スクロース、マンニトール、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸、微晶質セルロース、アラビアガム、ゼラチン、グアーガム、コロイド状二酸化ケイ素、クロスカルメロースナトリウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、保存剤、香味剤、薬学上許容される崩壊剤、湿潤剤、および薬理学的に適合する担体のうち１種類以上を含むことができる。
【０３１１】
カプセル剤形態は、例えば、界面活性剤、滑沢剤、および不活性増量剤（ラクトース、スクロース、リン酸カルシウム、およびトウモロコシデンプンなど）を含有する、通常のゼラチン硬カプセル種または軟カプセル種であり得る。
【０３１２】
ロゼンジ剤形態は、担体、通常にはスクロースおよびアラビアガムまたはトラガカントガム中の薬物封入ガゴマー粒子、ならびにゼラチンもしくはグリセリン、またはスクロースとアラビアガムなどの不活性基剤中に有効成分を含む香錠を含有することができる。
【０３１３】
任意の所与の患者に投与される本発明の医薬組成物中の有効成分の量は経験的に決定されなければならず、患者の病理学的状態によって異なる。最初に比較的少量の医薬組成物を投与し、有害な作用が示されなければ用量を着実に増やすことができる。当然のことながら、慣例の動物毒性試験において決定される最大安全毒性用量は決して超えてはならない。
【０３１４】
本発明の範囲内の医薬組成物には、有効成分がその意図される目的を達成するために有効な量で含まれる、あらゆる組成物が含まれる。個々の必要は異なるが、各化合物の有効量の最適範囲の決定は当業者の範囲内である。投与する用量は、その個々のレシピエントの年齢、健康、および体重、ならびに任意の併用処置の性質および望まれる効果によって決まる。典型的な用量は０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重を含む。好ましい用量は約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。最も好ましい用量は約１〜５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。
【０３１５】
実施例１
【０３１６】
ポリマー共役脂質（Ｐｏ−Ｌｓ）の調製
【０３１７】
ヒアルロン酸共役ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＨｙＰＥ）
【０３１８】
２０．０ｇのヒアルロン酸を、撹拌および３５℃で加熱しながら、７７０ｍｌの０．１Ｍ  ＭＥＳバッファー（５Ｎ  ＮａＯＨでｐＨ＝６．４に調整）に溶かした（溶液１）。２．００ｇのジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）を、ＤＰＰＥの完全な溶解が達成されるまで撹拌および５０℃で加熱しながら、７５０ｍｌのｔｅｒｔ−ブタノール（９３％ｔ−ＢｕＯＨ、７％水）と６５ｍｌの水の混合物に溶かした（溶液２）。
【０３１９】
撹拌下で溶液１に溶液２を加え、２．００ｇのＨＯＢＴを加え、この混合物を３０±５℃まで放冷した。２０ｇのＥＤＡＣを加え、溶解したところで（１〜２分）、この反応混合物を２リットルのＲＢフラスコに移した。
【０３２０】
反応混合物を超音波槽で３時間音波処理した。この音波処理ステップが完了した際に、反応混合物を撹拌しながら室温で一晩維持した。
【０３２１】
ヘマセル共役ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＨｅｍＰＥ）
【０３２２】
Ｈｅｍ  ＮＨの調製
【０３２３】
４ｇのヘキサンジアミンを４００ｍｌのＨ２Ｏに溶かした後、ｐＨ＝６．０となるようにＨＣｌで滴定した。５００ｍｌの３．５％ヘマセルおよび２ｇのＥＤＡＣを加えた。ｐＨを滴定により３〜４時間６．０に維持し、反応を一晩放置した。翌朝、ｐＨを６．０に調整し、０．５ｇのＥＤＡＣを加え、反応を４時間続けた。この溶液をｐＨ３．０〜４．０まで酸性化し、１０ｋＤ  Ｆｉｌｔｒｏｎで濾過した。
【０３２４】
Ｈｅｍ−ＮＨのグルタリル−ＰＥ（Ｇｌｕ−ＰＥ）への結合
【０３２５】
２００ｍｇのＧｌｕ−ＰＥをＣ／Ｍ：１／１に溶かし、この溶液を８００ｍｇのＤＣＣで１．５時間活性化した。溶媒をローターバキュームで蒸発させた。１ｍｌのＤｉＤＡＢと０．５ｍｌのトリエチルアミンを含有する４０ｍｌのＨ２Ｏに溶かした１ｇのＨｅｍ−Ｎｈの溶液をすぐに加えた。反応を４８時間進行させた。得られた溶液をＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＥｔＯＨで洗浄して遊離のＧｌｕ−ＰＥを除去した。水相を水に対して透析し、凍結乾燥させた。Ｈ２Ｏ／ＭｅＯＨ：１／１に溶かし、イオン交換カラム（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＩＲ  １２０）に通した。水に対して透析し、凍結乾燥させた。
【０３２６】
リポソームの調製
【０３２７】
公開されている手順（MacDonald et al., 1991）に従い、ｔｅｒｔ−ブタノールに溶かした、３３モル％コレステロールを含む／含まない、ＤＭＰＣまたは卵−ＰＣなどの脂質から、単ラメラリポソームを調製し、凍結乾燥させ、ｔｒｉｓ−バッファーｐＨ＝７．４に懸濁させ、ポリカーボネートフィルターから押出し処理して、平均直径が５０〜１００ｎｍの間にサイズ分画されるナノリポソームを得た。Ｐｏ−Ｌ／脂質リポソームを得るために、押出しの前にこれらの脂質懸濁液をＰｏ−Ｌ溶液（例えば、バッファー中のＨｙＰＥまたはＨｅｍ−ＰＥ）と所望の比率で混合した。この混合ナノリポソームのサイズを動的光散乱により測定した。
【０３２８】
結果
【０３２９】
Ｐｏ−Ｌ／脂質は、充填パラメーターが０．８（安定範囲＝０．７４〜１．０）で、健康組織への浸透を避けつつ、炎症組織の細胞間隙の選択的浸透に好適な１００〜１３０ｎｍのナノリポソームを形成する。図２は、ＰＥ−ＨｙＰＥリポソームに関して最適な安定性を得るために必要とされる、リポソーム中の、ＨｙＰＥに共役されたＰＥのモルパーセントを示し、これは充填パラメーター（ＰＰ）が１．０に近い（ただし、１より大きくはない）場合に得られる。
【０３３０】
Ｐｏ−Ｌ／脂質ナノリポソームのサイズは６０℃で少なくとも２７日間安定であった（データは示されていない）が、露出した脂質ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）ナノリポソーム（対照）のサイズは１７日目までに増大し（図３）、２０日目に縮小し始めた（データは示されていない）。１．６％ＨｙＰＥ−２、０．６％ＨｙＰＥ−５、Ｄｅｘ（５）−ＰＥ、Ｄｅｘ（４０）−ＰＥ、Ｈｅｔａ−ＰＥ、およびＨｅｍ−ＰＥを含むナノリポソームは全て、対照ナノリポソームよりも安定なナノリポソームサイズを持っていた（図３）。ＨｙＰＥ−２およびＨｙＰＥ−５は、それらの共役中のヒアルロン酸とＰＥのモル比を表しているが、これはまたＰＥ当たりのヒアルロン酸二糖単位の数として表すこともできる（表２）。
【０３３１】
【表２】
2014519493.tif 000040
【０３３２】
＊−ＨＡ平均ＭＷ＝５０ＫＤ；＊＊ＤＳＵ＝ＨｙＰＥ中のＨＡ二糖単位（ＭＷ＝３７９）
【０３３３】
Ｐｏ−Ｌ／脂質ＮＬは、外部ホスホリパーゼＡ２（主要なＰＬ加水分解酵素）による溶解に、対照（図４）またはＰＥＧ化（データは示されていない）ナノリポソームよりも著しく高い耐性を示した。さらに、Ｐｏ−Ｌ／脂質ナノリポソームからの封入薬物の放出（３７℃、血漿中で２日）は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験（図５）およびｉｎ  ｖｉｖｏ実験（図６）の両方で、対照ナノリポソームからのものより有意に遅かった。
【０３３４】
これらの結果は、Ｐｏ−Ｌ／脂質ＮＬが薬物の緩徐放出および標的化送達に好適であり、組成物の併用に優る利点を持ち得ることを示唆した。いくつかのＰｏＳＰＬは抗炎症薬として開発されたものであり、従って、それらの使用は付加的な治療利益を提供し、多くの従前の研究で示されているように、天然、生分解性、非免疫原性かつ無毒なものから構成される。さらに、Ｐｏ−Ｌは、異なる治療および器官標的化に使用されるように改質できる組成物のプラットフォームを提供する。
【０３３５】
本発明の特定の特徴を本明細書に例示し記載してきたが、当業者ならば、今や多くの改変、置換、変更および等価物が想到できるであろう。よって、添付の特許請求の範囲は、このような改変および変更を全て、本発明の真の趣旨の範囲内にあるとして包含することが意図されると理解すべきである。
【図１】
2014519493.tif 000041
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
2014519493.tif 000045
【図６】
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【手続補正書】
【提出日】平成26年1月15日(2014.1.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脂質二重層とポリマー共役リン脂質とを含み、前記ポリマー共役リン脂質が前記脂質二重層に組み込まれている、リポソーム。
【請求項２】
前記リポソームがナノリポソームである、請求項１に記載のリポソーム。
【請求項３】
前記ポリマー共役リン脂質が、単一のポリマーに共役された２種類以上の脂質を含む、請求項１に記載のリポソーム。
【請求項４】
前記ポリマー共役リン脂質中のリン脂質とポリマー単位との比が２：４〜２：２０００である、請求項１に記載のリポソーム。
【請求項５】
前記ポリマーがヘマセルである、請求項１に記載のリポソーム。
【請求項６】
前記ポリマーが多糖である、請求項１に記載のリポソーム。
【請求項７】
前記多糖が、グリコサミノグリカン、キトサン、アルギン酸、ヘタスターチおよびデキストランからなる群から選択される、請求項６に記載のリポソーム。
【請求項８】
前記グリコサミノグリカンが、ヒアルロン酸、コンドロイチン、ケラタン、デルマタンおよびヘパリンからなる群から選択される、請求項７に記載のリポソーム。
【請求項９】
前記グリコサミノグリカンが、５〜９０ｋＤの平均分子量を有する、請求項７に記載のリポソーム。
【請求項１０】
前記ポリマーが、グルタリルリンカーを介して前記リン脂質に共役されている、請求項１に記載のリポソーム。
【請求項１１】
前記リン脂質がホスファチジルエタノールアミンである、請求項１に記載のリポソーム。
【請求項１２】
前記リポソームが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）共役脂質をさらに含む、請求項１に記載のリポソーム。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の混合リポソームを生成する方法であって、
リン脂質をポリマーと共役させてポリマー共役リン脂質を形成するステップと、
前記ポリマー共役リン脂質をリポソームと接触させて混合リポソームを生成するステップとを含む、方法。
【請求項１４】
前記ポリマー共役脂質をリポソームと接触させる前記ステップの前に、前記ポリマー共役脂質を単離するステップをさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
被験体に核酸を送達するための組成物の調製における、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のリポソームの使用。
【請求項１６】
被験体において画像診断を実施するための組成物の調製における、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のリポソームの使用。
【請求項１７】
被験体において病理学的状態を処置、阻害または抑制するための組成物の調製における、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のリポソームの使用。
【請求項１８】
前記病理学的状態が、癌、感染症、閉塞性呼吸器疾患、皮膚科病理学的状態、嚢胞性線維症、眼障害、炎症性腸疾患、および神経系障害からなる群から選択される、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
前記リポソームが、前記病理学的状態を処置するための生体活性剤をさらに含む、請求項１７に記載の使用。
【請求項２０】
前記薬物が、経口、静脈内、鼻腔内、眼内、筋肉内、皮下または局所投与される、請求項１７に記載の使用。
【国際調査報告】
2014519493.tif 000047
2014519493.tif 000048
2014519493.tif 000049
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