(57)【要約】  ヒトのメラノトランスフェリンに由来するペプチド化合物及びその組成物が記載される。たとえば、血管形成及び／又は細胞移動を調節するための及び／又は血管形成に関連する疾病（たとえば、癌）を治療するためのこれらのペプチド化合物の使用も記載される。
2014530825.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウロキナーゼ型のプラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）によるプラスミノーゲンの活性化を高めるペプチド化合物であって、配列番号１のポリペプチドの残基２１０〜２２９又は５５６〜５７５に由来する配列を含むドメインを含むペプチド化合物。
【請求項２】
前記ドメインが式Ｉのドメインである：
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７−Ｘ１８−Ｘ１９−Ｘ２０−Ｘ２１−Ｘ２２−Ｘ２３（Ｉ）
式中、
“−“は結合であり；
Ｘ１は芳香族残基又は非存在であり；
Ｘ２は塩基性残基、Ｓｅｒ、Ｄ−Ｓｅｒ又は非存在であり；
Ｘ３はＧｌｙ又は非存在であり；
Ｘ４はＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ又は非存在であり；
Ｘ５は芳香族残基であり；
Ｘ６は塩基性アミノ酸であり；
Ｘ７はＣｙｓ、Ｄ−Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ｄ−Ｍｅｔ、Ｌｅｕ又はＤ−Ｌｅｕであり；
Ｘ８はＬｅｕ、又はＤ−Ｌｅｕであり；
Ｘ９はＶａｌ、Ｄ−Ｖａｌ、Ａｌａ又はＤ−Ａｌａであり；
Ｘ１０は酸性残基であり；
Ｘ１１はＡｓｎ、Ｄ−Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｄ−Ｇｌｎ又はＧｌｙであり；
Ｘ１２は塩基性残基、Ａｌａ又はＤ−Ａｌａであり；
Ｘ１３はＰｒｏ、Ｄ−Ｐｒｏ又はＧｌｙであり；
Ｘ１４は酸性残基であり；
Ｘ１５はＶａｌ又はＤ−Ｖａｌであり；
Ｘ１６はＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｄ−Ｐｒｏ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｌｙｓ又はＧｌｙであり；
Ｘ１７は芳香族残基であり；
Ｘ１８はＶａｌ又はＤ−Ｖａｌであり；
Ｘ１９は塩基性残基、Ｔｈｒ又はＤ−Ｔｈｒであり；
Ｘ２０は塩基性残基であり；
Ｘ２１は塩基性残基、酸性残基、Ｉｌｅ、Ｄ−Ｉｌｅ、又は非存在であり；
Ｘ２２は塩基性残基又は非存在であり；及び
Ｘ２３は塩基性残基、芳香族残基又は非存在であり、又はその塩である請求項１に記載のペプチド化合物。
【請求項３】
式Ｉ：Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７−Ｘ１８−Ｘ１９−Ｘ２０−Ｘ２１−Ｘ２２−Ｘ２３（Ｉ）
式中、
“−“は結合であり；
Ｘ１は芳香族残基又は非存在であり；
Ｘ２は塩基性残基、Ｓｅｒ、Ｄ−Ｓｅｒ又は非存在であり；
Ｘ３はＧｌｙ又は非存在であり；
Ｘ４はＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ又は非存在であり；
Ｘ５は芳香族残基であり；
Ｘ６は塩基性アミノ酸であり；
Ｘ７はＣｙｓ、Ｄ−Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ｄ−Ｍｅｔ、Ｌｅｕ又はＤ−Ｌｅｕであり；
Ｘ８はＬｅｕ、又はＤ−Ｌｅｕであり；
Ｘ９はＶａｌ、Ｄ−Ｖａｌ、Ａｌａ又はＤ−Ａｌａであり；
Ｘ１０は酸性残基であり；
Ｘ１１はＡｓｎ、Ｄ−Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｄ−Ｇｌｎ又はＧｌｙであり；
Ｘ１２は塩基性残基、Ａｌａ又はＤ−Ａｌａであり；
Ｘ１３はＰｒｏ、Ｄ−Ｐｒｏ又はＧｌｙであり；
Ｘ１４は酸性残基であり；
Ｘ１５はＶａｌ又はＤ−Ｖａｌであり；
Ｘ１６はＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｄ−Ｐｒｏ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｌｙｓ又はＧｌｙであり；
Ｘ１７は芳香族残基であり；
Ｘ１８はＶａｌ又はＤ−Ｖａｌであり；
Ｘ１９は塩基性残基、Ｔｈｒ又はＤ−Ｔｈｒであり；
Ｘ２０は塩基性残基であり；
Ｘ２１は塩基性残基、酸性残基、Ｉｌｅ、Ｄ−Ｉｌｅ、又は非存在であり；
Ｘ２２は塩基性残基又は非存在であり；及び
Ｘ２３は塩基性残基、芳香族残基又は非存在であり、又はその塩であるドメインを含むペプチド化合物。
【請求項４】
Ｘ１がＴｙｒ、Ｄ−Ｔｙｒ又は非存在である請求項２又は３に記載のペプチド化合物。
【請求項５】
Ｘ２がＡｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｄ−Ｓｅｒ又は非存在である請求項２〜４のいずれか１項に記載のペプチド化合物。
【請求項６】
Ｘ４がＡｌａ又は非存在である請求項２〜５のいずれか１項に記載のペプチド化合物。
【請求項７】
Ｘ５がＰｈｅ又はＤ−Ｐｈｅである請求項２〜６のいずれか１項に記載のペプチド化合物。
【請求項８】
Ｘ６がＡｒｇ又はＤ−Ａｒｇである請求項２〜７のいずれか１項に記載のペプチド化合物。
【請求項９】
Ｘ７がＣｙｓ、Ｄ−Ｃｙｓ、Ｍｅｔ又はＤ−Ｍｅｔである請求項２〜８のいずれか１項に記載のペプチド化合物。
【請求項１０】
Ｘ１０がＧｌｕ又はＤ−Ｇｌｕである請求項２〜９のいずれか１項に記載のペプチド化合物。
【請求項１１】
Ｘ１１がＡｓｎ又はＤ−Ａｓｎである請求項２〜１０のいずれか１項に記載のペプチド化合物。
【請求項１２】
Ｘ１２がＡｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ、Ａｌａ又はＤ−Ａｌａである請求項２〜１１のいずれか１項に記載のペプチド化合物。
【請求項１３】
Ｘ１３がＧｌｙである請求項２〜１２のいずれか１項に記載のペプチド化合物。
【請求項１４】
Ｘ１４がＡｓｐ又はＤ−Ａｓｐである請求項２〜１３のいずれか１項に記載のペプチド化合物。
【請求項１５】
Ｘ１７がＰｈｅ又はＤ−Ｐｈｅである請求項２〜１４のいずれか１項に記載のペプチド化合物。
【請求項１６】
Ｘ１９がＡｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｌｙｓ、Ｔｈｒ又はＤ−Ｔｈｒである請求項２〜１５のいずれか１項に記載のペプチド化合物。
【請求項１７】
Ｘ２０がＨｉｓ、Ｄ−Ｈｉｓ、Ａｒｇ又はＤ−Ａｒｇである請求項２〜１６のいずれか１項に記載のペプチド化合物。
【請求項１８】
Ｘ２１がＬｙｓ、Ｄ−Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、Ｄ−Ｇｌｕ、Ｉｌｅ、Ｄ−Ｉｌｅ又は非存在である請求項２〜１７のいずれか１項に記載のペプチド化合物。
【請求項１９】
Ｘ２２がＬｙｓ、Ｄ−Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ又は非存在である請求項２〜１８のいずれか１項に記載のペプチド化合物。
【請求項２０】
Ｘ２３がＬｙｓ、Ｄ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ、Ｄ−Ｐｈｅ又は非存在である請求項２〜１９のいずれか１項に記載のペプチド化合物。
【請求項２１】
Ｘ１〜Ｘ４が非存在である請求項２〜２０のいずれか１項に記載のペプチド化合物。
【請求項２２】
Ｘ２１〜Ｘ２３が非存在である請求項２〜２１のいずれか１項に記載のペプチド化合物。
【請求項２３】
前記ドメインが、
（ａ）Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ（配列番号：１６）；
（ｂ）Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ａ  Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ａ−Ｅ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｈ（配列番号：１７）；
（ｃ）Ｙ−Ｒ−Ｇ−Ａ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ（配列番号：１８）；
（ｄ）Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−Ｋ（配列番号：１９）；
（ｅ）Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｇ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ（配列番号：２０）；
（ｆ）Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ（配列番号：２１）；
（ｇ）Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｑ−Ａ−Ｐ−Ｄ−Ｖ−Ｋ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−Ｋ（配列番号：２２）；
（ｈ）Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ａ−Ｆ−Ｒ−Ｍ−Ｌ−Ａ−Ｅ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−Ｋ（配列番号：２３）；
（ｉ）
【化１】
2014530825.tif 000011
（配列番号：２４）；
（ｊ）ｆ−ｒ−ｃ−ｌ−ｖ−ｅ−ｎ−ａ−Ｇ−ｄ−ｖ−ａ−ｆ−ｖ−ｒ−ｈ−ｋ−ｋ−ｋ（配列番号：２５）；
（ｋ）       Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ（配列番号：２６）；
（ｌ）Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｒ−Ｅ−Ｒ−Ｆ（配列番号：２７）；
（ｍ）Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ａ  Ｆ−Ｒ−Ｌ−Ｌ−Ａ−Ｅ−Ｇ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｈ−Ｋ−Ｋ（配列番号：２８）；又は
（ｎ）Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｔ−Ｒ−Ｉ−Ｒ（配列番号：２９）であり；
式中、ｆ＝Ｄ−Ｐｈｅ、ｒ＝Ｄ−Ａｒｇ、ｃ＝Ｄ−Ｃｙｓ、ｌ＝Ｄ−Ｌｅｕ、ｖ＝Ｄ−Ｖａｌ、ｅ＝Ｄ−Ｇｌｕ、ｎ＝Ｄ−Ａｓｎ、ａ＝Ｄ−Ａｌａ、ｄ＝Ｄ−Ａｓｐ、ｈ＝Ｄ−Ｈｉｓ、及びｋ＝Ｄ−Ｌｙｓである請求項２又は３に記載のペプチド化合物。
【請求項２４】
前記結合がペプチド結合である請求項１〜２３のいずれか１項に記載のペプチド化合物。
【請求項２５】
さらに、（ｉ）アミノ末端修飾基、（ｉｉ）カルボキシ末端修飾基又は（ｉｉｉ）（ｉ）及び（ｉｉ）を含む請求項１〜２４のいずれか１項に記載のペプチド化合物。
【請求項２６】
前記アミノ末端修飾基が、直鎖又は分枝鎖の飽和Ｃ１〜Ｃ６アシル基又は不飽和Ｃ３〜Ｃ６アシル基である請求項２５に記載のペプチド化合物。
【請求項２７】
前記アミノ末端修飾基が、アシル基（Ａｃ）である請求項２６に記載のペプチド化合物。
【請求項２８】
前記カルボキシ末端修飾基がＮＨ２である請求項２５〜２７のいずれか１項に記載のペプチド化合物。
【請求項２９】
前記ペプチド化合物が、
（ａ）Ａｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−ＮＨ２（配列番号：２）；
（ｂ）Ａｃ−Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ａ  Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ａ−Ｅ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｈ−ＮＨ２（配列番号：３）；
（ｃ）Ａｃ−Ｙ−Ｒ−Ｇ−Ａ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−ＮＨ２（配列番号：４）；
（ｄ）Ａｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−Ｋ−ＮＨ２（配列番号：５）；
（ｅ）Ａｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｇ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−ＮＨ２（配列番号：６）；
（ｆ）Ａｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−ＮＨ２（配列番号：７）；
（ｇ）Ａｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｑ−Ａ−Ｐ−Ｄ−Ｖ−Ｋ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−Ｋ−ＮＨ２（配列番号：８）；
（ｈ）Ａｃ−Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ａ−Ｆ−Ｒ−Ｍ−Ｌ−Ａ−Ｅ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−Ｋ−ＮＨ２（配列番号：９）；
（ｉ）
【化２】
2014530825.tif 000012
；（配列番号：１０）
（ｊ）Ａｃ−ｆ−ｒ−ｃ−ｌ−ｖ−ｅ−ｎ−ａ−Ｇ−ｄ−ｖ−ａ−ｆ−ｖ−ｒ−ｈ−ｋ−ｋ−ｋ−ＮＨ２（配列番号：１１）；
（ｋ）Ａｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−ＮＨ２（配列番号：１２）；
（ｌ）Ａｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｒ−Ｅ−Ｒ−Ｆ−ＮＨ２（配列番号：１３）；
（ｍ）Ａｃ−Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ａ  Ｆ−Ｒ−Ｌ−Ｌ−Ａ−Ｅ−Ｇ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−ＮＨ２（配列番号：１４）；又は
（ｎ）Ａｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｔ−Ｒ−Ｉ−Ｒ−ＮＨ２（配列番号：１５）であり；
式中、Ａｃ＝アセチル、ｆ＝Ｄ−Ｐｈｅ、ｒ＝Ｄ−Ａｒｇ、ｃ＝Ｄ−Ｃｙｓ、ｌ＝Ｄ−Ｌｅｕ、ｖ＝Ｄ−Ｖａｌ、ｅ＝Ｄ−Ｇｌｕ、ｎ＝Ｄ−Ａｓｎ、ａ＝Ｄ−Ａｌａ、ｄ＝Ｄ−Ａｓｐ、ｈ＝Ｄ−Ｈｉｓ、及びｋ＝Ｄ−Ｌｙｓ、又はその塩である請求項２又は３に記載のペプチド化合物。
【請求項３０】
請求項１〜２９のいずれか１項に記載のペプチド化合物を含む医薬組成物。
【請求項３１】
さらに１以上の薬学上許容可能なキャリア、賦形剤及び／又は希釈剤を含む請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
それを必要とする対象に有効量の請求項１〜２９のいずれか１項に記載のペプチド化合物又は請求項３０若しくは３１に記載の医薬組成物を投与することを含む、対象にて血管形成及び／又は細胞移動を阻害する方法。
【請求項３３】
それを必要とする対象に有効量の請求項１〜２９のいずれか１項に記載のペプチド化合物又は請求項３０若しくは３１に記載の医薬組成物を投与することを含む、癌を治療する方法。
【請求項３４】
前記癌が、黒色腫、前立腺癌、白血病、ホルモン依存性の癌、乳癌、結腸癌、肺癌、皮膚癌、卵巣癌、膵臓癌、骨癌、肝癌、胆道癌、リンパ腫、肉腫、食道癌、胃癌、脳腫瘍、腎臓癌、又は表皮癌である請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
ペプチド化合物が、静脈内に、経口で、経皮で、皮下に、粘膜に、筋肉内に、鼻内に、肺内に、非経口で、直腸内に又は局所に投与される請求項３２〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
対象にて血管形成及び／又は細胞移動を阻害するための請求項１〜２９のいずれか１項に記載のペプチド化合物又は請求項３０若しくは３１に記載の医薬組成物の使用。
【請求項３７】
対象にて血管形成及び／又は細胞移動を阻害するために薬物を製造するための請求項１〜２９のいずれか１項に記載のペプチド化合物又は請求項３０若しくは３１に記載の医薬組成物の使用。
【請求項３８】
対象にて癌を治療するための請求項１〜２９のいずれか１項に記載のペプチド化合物又は請求項３０若しくは３１に記載の医薬組成物の使用。
【請求項３９】
対象にて癌を治療するために薬物を製造するための請求項１〜２９のいずれか１項に記載のペプチド化合物又は請求項３０若しくは３１に記載の医薬組成物の使用。
【請求項４０】
前記癌が黒色腫、前立腺癌、白血病、ホルモン依存性の癌、乳癌、結腸癌、肺癌、皮膚癌、卵巣癌、膵臓癌、骨癌、肝癌、胆道癌、リンパ腫、肉腫、食道癌、胃癌、脳腫瘍、腎臓癌、又は表皮癌である請求項３８又は３９に記載の使用。
【請求項４１】
前記ペプチド化合物又は医薬組成物が、静脈内、経口で、経皮、皮下、粘膜、筋肉内、鼻内、肺内、非経口で、直腸内又は局所の投与用である請求項３６〜４０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４２】
薬物として使用するための請求項１〜２９のいずれか１項に記載のペプチド化合物又は請求項３０若しくは３１に記載の医薬組成物。
【請求項４３】
前記薬物が対象にて血管形成及び／又は細胞移動を阻害するためである請求項４２に記載のペプチド化合物又は医薬組成物。
【請求項４４】
前記薬物が対象にて癌を治療するためである請求項４２又は４３に記載のペプチド化合物又は医薬組成物。
【請求項４５】
前記癌が、黒色腫、前立腺癌、白血病、ホルモン依存性の癌、乳癌、結腸癌、肺癌、皮膚癌、卵巣癌、膵臓癌、骨癌、肝癌、胆道癌、リンパ腫、肉腫、食道癌、胃癌、脳腫瘍、腎臓癌、又は表皮癌である請求項４４に記載のペプチド化合物又は医薬組成物。
【請求項４６】
前記薬物が、静脈内、経口で、経皮、皮下、粘膜、筋肉内、鼻内、肺内、非経口で、直腸内又は局所の投与用である請求項４２〜４５のいずれか１項に記載のペプチド化合物又は医薬組成物。
【請求項４７】
対象にて血管形成及び／又は細胞移動を阻害するための請求項１〜２９のいずれか１項に記載のペプチド化合物又は請求項３０若しくは３１に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
対象にて血管形成及び／又は細胞移動を阻害するために薬物を製造するための請求項１〜２９のいずれか１項に記載のペプチド化合物又は請求項３０若しくは３１に記載の医薬組成物。
【請求項４９】
対象にて癌を治療するための請求項１〜２９のいずれか１項に記載のペプチド化合物又は請求項３０若しくは３１に記載の医薬組成物。
【請求項５０】
対象にて癌を治療するために薬物を製造するための請求項１〜２９のいずれか１項に記載のペプチド化合物又は請求項３０若しくは３１に記載の医薬組成物。
【請求項５１】
前記癌が、黒色腫、前立腺癌、白血病、ホルモン依存性の癌、乳癌、結腸癌、肺癌、皮膚癌、卵巣癌、膵臓癌、骨癌、肝癌、胆道癌、リンパ腫、肉腫、食道癌、胃癌、脳腫瘍、腎臓癌、又は表皮癌である請求項４９又は５０に記載のペプチド化合物又は医薬組成物。
【請求項５２】
前記ペプチド化合物又は医薬組成物が、静脈内、経口で、経皮、皮下、粘膜、筋肉内、鼻内、肺内、非経口で、直腸内又は局所の投与用である請求項４６〜５１のいずれか１項に記載のペプチド化合物又は医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、その全体が参照によって本明細書に組み入れられる２０１１年１０月１９日に出願された米国仮特許出願、出願番号６１／５４８，９０５の利益を主張する。
【０００２】
本発明は一般にプラスミノーゲン活性化の調節の分野に関するものであり、さらに詳しくは血管形成及び細胞移動の調節の分野に関する。さらに具体的には、たとえば、プラスミノーゲン活性化の調節、血管形成及び／又は細胞移動の調節、及び／又は癌のような血管形成に関連する疾病の治療のためのペプチド化合物、その組成物、その調製方法、及びその使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
生体における既存の血管系からの新しい血管の増殖である血管形成は、たとえば、胎児発生、創傷治癒、生殖周期、糖尿病性網膜炎、慢性炎症、腫瘍の増殖及び転移のような生理的な及び病理的な過程に含まれる。この過程は内皮細胞（ＥＣ）の増殖、移動及び毛細血管様構造（細管形成）への形態的な分化に関与する。腫瘍の血管形成は、癌様増殖に浸透する、栄養及び酸素を供給する及び老廃物を取り除く血管のネットワークの増殖である。腫瘍の血管形成は実際、周りの正常な宿主組織にシグナルを送る分子（血管由来の増殖因子として知られる）を放出する腫瘍細胞に端を発する。このシグナル伝達は、宿主組織にて、新しい血管の増殖を促すタンパク質を次々に作る特定の遺伝子を活性化する。
【０００４】
転移は、癌が血流又はリンパ系を介して生体にて最初に原発腫瘍として生じた場所から離れた位置に広がる過程である。こうした腫瘍細胞の活発な移動は腫瘍細胞の侵襲及び転移の必須条件である。
【０００５】
従って、異常な血管形成及び細胞移動の阻害又は抑制は血管形成依存性の疾病の治療に対する治療上の戦略を提供する。
【０００６】
血管形成及び細胞移動を調節することができる、且つ癌のような血管形成に関連する疾病の治療のための新しい治療剤を提供する必要性がある。
【０００７】
本記載は、その内容が全体として参照によって本明細書に組み入れられる多数の文書を参照する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、たとえば、プラスミノーゲン活性化の調節、血管形成及び／又は細胞移動の調節、及び／又は癌のような血管形成に関連する疾病の治療のためのペプチド化合物、その組成物、その調製方法、及びその使用に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
第１の態様では、本発明は、ウロキナーゼ型のプラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）によるプラスミノーゲンの活性化を高めるペプチド化合物を提供し、前記ペプチド化合物は配列番号１のポリペプチドの残基２１０〜２２９又は５５６〜５７５に由来する配列を含むドメインを含む。
【００１０】
実施形態では、上述のドメインは式Ｉ：
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７−Ｘ１８−Ｘ１９−Ｘ２０−Ｘ２１−Ｘ２２−Ｘ２３（式中「−」は結合である）のドメインである。
【００１１】
Ｘ１は芳香族残基又は非存在であり；Ｘ２は塩基性残基、Ｓｅｒ、Ｄ−Ｓｅｒ又は非存在であり；Ｘ３はＧｌｙ又は非存在であり；Ｘ４はＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ又は非存在であり；Ｘ５は芳香族残基であり；Ｘ６は塩基性アミノ酸であり；Ｘ７はＣｙｓ又はＤ−Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ｄ−Ｍｅｔ、Ｌｅｕ又はＤ−Ｌｅｕ又はＧｌｙであり；Ｘ８はＬｅｕ又はＤ−Ｌｅｕであり；Ｘ９はＶａｌ、Ｄ−Ｖａｌ、Ａｌａ又はＤ−Ａｌａであり；Ｘ１０は酸性残基であり；Ｘ１１はＡｓｎ、Ｄ−Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｄ−Ｇｌｎ又はＧｌｙであり；Ｘ１２は塩基性残基、Ａｌａ又はＤ−Ａｌａであり；Ｘ１３はＰｒｏ、Ｄ−Ｐｒｏ又はＧｌｙであり；Ｘ１４は酸性４残基であり；Ｘ１５はＶａｌ又はＤ−Ｖａｌであり；Ｘ１６はＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｄ−Ｐｒｏ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｌｙｓ又はＧｌｙであり；Ｘ１７は芳香族残基であり；Ｘ１８はＶａｌ又はＤ−Ｖａｌであり；Ｘ１９は塩基性残基、Ｔｈｒ又はＤ−Ｔｈｒであり；Ｘ２０は塩基性残基であり；Ｘ２１は塩基性残基、酸性残基、Ｉｌｅ、Ｄ−Ｉｌｅ、又は非存在であり；Ｘ２２は塩基性残基、又は非存在であり；並びにＸ２３は塩基性残基、芳香族残基、又は非存在、又はその塩である。
【００１２】
さらなる態様では、本発明は式Ｉ：Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７−Ｘ１８−Ｘ１９−Ｘ２０−Ｘ２１−Ｘ２２−Ｘ２３（式中「−」は結合である）のドメイン含むペプチド化合物を提供する。
【００１３】
Ｘ１は芳香族残基又は非存在であり；Ｘ２は塩基性残基、Ｓｅｒ、Ｄ−Ｓｅｒ又は非存在であり；Ｘ３はＧｌｙ又は非存在であり；Ｘ４はＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ又は非存在であり；Ｘ５は芳香族残基であり；Ｘ６は塩基性アミノ酸であり；Ｘ７はＣｙｓ又はＤ−Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ｄ−Ｍｅｔ、Ｌｅｕ又はＤ−Ｌｅｕ又はＧｌｙであり；Ｘ８はＬｅｕ、又はＤ−Ｌｅｕであり；Ｘ９はＶａｌ、Ｄ−Ｖａｌ、Ａｌａ又はＤ−Ａｌａであり；Ｘ１０は酸性残基であり；Ｘ１１はＡｓｎ、Ｄ−Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｄ−Ｇｌｎ又はＧｌｙであり；Ｘ１２は塩基性残基、Ａｌａ又はＤ−Ａｌａであり；Ｘ１３はＰｒｏ、Ｄ−Ｐｒｏ又はＧｌｙであり；Ｘ１４は酸性残基であり；Ｘ１５はＶａｌ又はＤ−Ｖａｌであり；Ｘ１６はＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｄ−Ｐｒｏ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｌｙｓ又はＧｌｙであり；Ｘ１７は芳香族残基であり；Ｘ１８はＶａｌ又はＤ−Ｖａｌであり；Ｘ１９は塩基性残基、Ｔｈｒ又はＤ−Ｔｈｒであり；Ｘ２０は塩基性残基であり；Ｘ２１は塩基性残基、酸性残基、Ｉｌｅ、Ｄ−Ｉｌｅ、又は非存在であり；Ｘ２２は塩基性残基又は非存在であり；及びＸ２３は塩基性残基、芳香族残基又は非存在であり、又はその塩である。
【００１４】
実施形態では、Ｘ１はＴｙｒ、Ｄ−Ｔｙｒ又は非存在であり；Ｘ２はＡｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｄ−Ｓｅｒ又は非存在であり；Ｘ４はＡｌａ又は非存在であり；Ｘ５はＰｈｅ又はＤ−Ｐｈｅであり；Ｘ６はＡｒｇ又はＤ−Ａｒｇであり；Ｘ７はＣｙｓ、Ｄ−Ｃｙｓ、Ｍｅｔ又はＤ−Ｍｅｔであり；Ｘ１０はＧｌｕ又はＤ−Ｇｌｕであり；Ｘ１１はＡｓｎ、Ｄ−Ａｓｎ又はＧｌｙであり；Ｘ１２はＡｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ、Ａｌａ又はＤ−Ａｌａであり；Ｘ１３はＧｌｙであり；Ｘ１４はＡｓｐ又はＤ−Ａｓｐであり；Ｘ１７はＰｈｅ又はＤ−Ｐｈｅであり；Ｘ１９はＡｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｌｙｓ、Ｔｈｒ又はＤ−Ｔｈｒであり；Ｘ２０はＨｉｓ、Ｄ−Ｈｉｓ、Ａｒｇ又はＤ−Ａｒｇであり；Ｘ２１はＬｙｓ、Ｄ−Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、Ｄ−Ｇｌｕ、Ｉｌｅ、Ｄ−Ｉｌｅ、又は非存在であり；Ｘ２２はＬｙｓ、Ｄ−Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ、又は非存在であり；及び／又はＸ２３はＬｙｓ、Ｄ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ、Ｄ−Ｐｈｅ、又は非存在である。
【００１５】
実施形態では、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及び／又はＸ４は非存在であり；さらなる実施形態では、Ｘ１〜Ｘ４は非存在である。別の実施形態では、Ｘ２１、Ｘ２２及び／又はＸ２３は非存在であり；さらなる実施形態では、Ｘ２１〜Ｘ２３は非存在である。
【００１６】
実施形態では、上述のドメインは、
（ａ）Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ（配列番号：１６）；
（ｂ）Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ａ  Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ａ−Ｅ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｈ（配列番号：１７）；
（ｃ）Ｙ−Ｒ−Ｇ−Ａ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ（配列番号：１８）；
（ｄ）Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−Ｋ（配列番号：１９）；
（ｅ）Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｇ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ（配列番号：２０）；
（ｆ）Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ（配列番号：２１）；
（ｇ）Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｑ−Ａ−Ｐ−Ｄ−Ｖ−Ｋ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−Ｋ（配列番号：２２）；
（ｈ）Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ａ−Ｆ−Ｒ−Ｍ−Ｌ−Ａ−Ｅ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−Ｋ（配列番号：２３）；
（ｉ）
【化１】
2014530825.tif 000003
（配列番号：２４）；
（ｊ）ｆ−ｒ−ｃ−ｌ−ｖ−ｅ−ｎ−ａ−Ｇ−ｄ−ｖ−ａ−ｆ−ｖ−ｒ−ｈ−ｋ−ｋ−ｋ（配列番号：２５）；
（ｋ）       Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ（配列番号：２６）；
（ｌ）Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｒ−Ｅ−Ｒ−Ｆ（配列番号：２７）；
（ｍ）Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ａ  Ｆ−Ｒ−Ｌ−Ｌ−Ａ−Ｅ−Ｇ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｈ−Ｋ−Ｋ（配列番号：２８）；又は
（ｎ）Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｔ−Ｒ−Ｉ−Ｒ（配列番号：２９）であり；
式中、ｆ＝Ｄ−Ｐｈｅ、ｒ＝Ｄ−Ａｒｇ、ｃ＝Ｄ−Ｃｙｓ、ｌ＝Ｄ−Ｌｅｕ、ｖ＝Ｄ−Ｖａｌ、ｅ＝Ｄ−Ｇｌｕ、ｎ＝Ｄ−Ａｓｎ、ａ＝Ｄ−Ａｌａ、ｄ＝Ｄ−Ａｓｐ、ｈ＝Ｄ−Ｈｉｓ、及びｋ＝Ｄ−Ｌｙｓ、又はその塩である。
【００１７】
実施形態では、上述のペプチド化合物はさらに、（ｉ）アミノ末端修飾基；（ｉｉ）カルボキシ末端修飾基；又は（ｉｉｉ）（ｉ）及び（ｉｉ）の双方を含む。
【００１８】
さらなる実施形態では、上述のアミノ末端修飾基は直鎖又は分枝鎖の飽和Ｃ１〜Ｃ６アシル基又は不飽和Ｃ３〜Ｃ６アシル基である。さらなる実施形態では、上述のアミノ末端修飾基はアセチル基（Ａｃ）である。
【００１９】
別の実施形態では、上述のカルボキシ末端修飾基はＮＨ２である。
【００２０】
実施形態では、上述のペプチド化合物は、
（ａ）Ａｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−ＮＨ２（配列番号：２）；
（ｂ）Ａｃ−Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ａ  Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ａ−Ｅ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｈ−ＮＨ２（配列番号：３）；
（ｃ）Ａｃ−Ｙ−Ｒ−Ｇ−Ａ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−ＮＨ２（配列番号：４）；
（ｄ）Ａｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−Ｋ−ＮＨ２（配列番号：５）；
（ｅ）Ａｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｇ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−ＮＨ２（配列番号：６）；
（ｆ）Ａｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−ＮＨ２（配列番号：７）；
（ｇ）Ａｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｑ−Ａ−Ｐ−Ｄ−Ｖ−Ｋ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−Ｋ−ＮＨ２（配列番号：８）；
（ｈ）Ａｃ−Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ａ−Ｆ−Ｒ−Ｍ−Ｌ−Ａ−Ｅ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−Ｋ−ＮＨ２（配列番号：９）；
（ｉ）
【化２】
2014530825.tif 000004
；（配列番号：１０）
（ｊ）Ａｃ−ｆ−ｒ−ｃ−ｌ−ｖ−ｅ−ｎ−ａ−Ｇ−ｄ−ｖ−ａ−ｆ−ｖ−ｒ−ｈ−ｋ−ｋ−ｋ−ＮＨ２（配列番号：１１）；
（ｋ）Ａｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−ＮＨ２（配列番号：１２）；
（ｌ）Ａｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｒ−Ｅ−Ｒ−Ｆ−ＮＨ２（配列番号：１３）；
（ｍ）Ａｃ−Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ａ  Ｆ−Ｒ−Ｌ−Ｌ−Ａ−Ｅ−Ｇ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−ＮＨ２（配列番号：１４）；又は
（ｎ）Ａｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｔ−Ｒ−Ｉ−Ｒ−ＮＨ２（配列番号：１５）であり；
式中、Ａｃ＝アセチル、ｆ＝Ｄ−Ｐｈｅ、ｒ＝Ｄ−Ａｒｇ、ｃ＝Ｄ−Ｃｙｓ、ｌ＝Ｄ−Ｌｅｕ、ｖ＝Ｄ−Ｖａｌ、ｅ＝Ｄ−Ｇｌｕ、ｎ＝Ｄ−Ａｓｎ、ａ＝Ｄ−Ａｌａ、ｄ＝Ｄ−Ａｓｐ、ｈ＝Ｄ−Ｈｉｓ、及びｋ＝Ｄ−Ｌｙｓ、又はその塩である。
【００２１】
別の実施形態では、上述の結合はペプチド結合である。
【００２２】
別の態様では、本発明は上述のペプチド化合物を含む医薬組成物を提供する。実施形態では、上述の医薬組成物はさらに１以上の薬学上許容可能なキャリア、賦形剤及び／又は希釈剤を含む。
【００２３】
別の態様では、本発明は、それを必要とする対象に有効量の上述のペプチド化合物又は上述の医薬組成物を投与することを含む、対象にて血管形成及び／又は細胞移動を阻害する方法を提供する。
【００２４】
別の態様では、本発明は、それを必要とする対象に有効量の上述のペプチド化合物又は上述の医薬組成物を投与することを含む、癌を治療する方法を提供する。
【００２５】
別の態様では、本発明は、対象にて血管形成及び／又は細胞移動を阻害するための上述のペプチド化合物又は上述の医薬組成物の使用を提供する。
【００２６】
別の態様では、本発明は、対象にて血管形成及び／又は細胞移動を阻害するために薬物を製造するための上述のペプチド化合物又は上述の医薬組成物の使用を提供する。
【００２７】
別の態様では、本発明は、対象において癌を治療するための上述のペプチド化合物又は上述の医薬組成物の使用を提供する。
【００２８】
別の態様では、本発明は、対象において癌を治療するために薬物を製造するための上述のペプチド化合物又は上述の医薬組成物の使用を提供する。
【００２９】
別の態様では、本発明は、薬物として使用するために上述のペプチド化合物又は上述の医薬組成物を提供する。実施形態では、上述の薬物は対象における血管形成及び／又は細胞移動を阻害するためのものである。別の実施形態では、上述の薬物は対象における癌を治療するためのものである。
【００３０】
別の態様では、本発明は、対象にて血管形成及び／又は細胞移動を阻害するために上述のペプチド化合物又は上述の医薬組成物を提供する。
【００３１】
別の態様では、本発明は、対象にて癌を治療するために上述のペプチド化合物又は上述の医薬組成物を提供する。
【００３２】
別の態様では、本発明は、対象にて血管形成及び／又は細胞移動を阻害する方法において使用するために上述のペプチド化合物又は上述の医薬組成物を提供する。
【００３３】
別の態様では、本発明は、対象にて癌を治療する方法において使用するために上述のペプチド化合物又は上述の医薬組成物を提供する。
【００３４】
別の態様では、本発明は、対象にて血管形成及び／又は細胞移動を阻害するための薬物を製造するために上述のペプチド化合物又は上述の医薬組成物を提供する。
【００３５】
別の態様では、本発明は、対象にて癌を治療するための薬物を製造するために上述のペプチド化合物又は上述の医薬組成物を提供する。
【００３６】
実施形態では、上述の癌は、黒色腫、前立腺癌、白血病、ホルモン依存性の癌、乳癌、結腸癌、肺癌、皮膚癌、卵巣癌、膵臓癌、骨癌、肝癌、胆道癌、リンパ腫、肉腫、食道癌、胃癌、脳腫瘍、腎臓癌、又は表皮癌である。
【００３７】
実施形態では、上述のペプチド化合物は静脈内に、経口で、経皮で、皮下に、粘膜に、筋肉内に、鼻内に、肺内に、非経口で、直腸内に又は局所に投与される。
【００３８】
実施形態では、上述のペプチド化合物又は医薬組成物は、静脈内、経口で、経皮、皮下、粘膜、筋肉内、鼻内、肺内、非経口で、直腸内又は局所の投与用である。別の実施形態では、上述の医薬組成物は、静脈内、経口で、経皮、皮下、粘膜、筋肉内、鼻内、肺内、非経口で、直腸内又は局所の投与に適合させられる。
【００３９】
本発明の他の目的、利点及び特徴は、添付の図面を参照して例示目的のみで提供される特定の実施形態の以下の非拘束性の記載を読んでさらに明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
添付の図面では、
【図１】ウロキナーゼ型のプラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）によるプラスミノーゲンの活性化に対する可溶性のメラノトランスフェリン（ｓＭＴｆ）由来のペプチドの効果を示す図である。図１Ａ：ｕＰＡによるプラスミノーゲンの活性化を刺激するその能力についてのｓＭＴｆ由来のペプチドのスクリーニング。図１Ｂ：ｕＰＡによるプラスミノーゲンの活性化は、種々の濃度の配列番号２のペプチドの存在下又は非存在下で測定した。ｕＰＡ依存性のプラスミノーゲンの活性化は実施例１に記載される比色アッセイを用いて実施した。データは平均値±ＳＤを表し、結果はＶＬＫ−ｐＮＡの加水分解速度（ｍＡＵ／分）として表す。対照条件と比べて統計的に有意な差は*ｐ≦０．０５、**ｐ≦０．０１、***ｐ≦０．００１によって示す。
【図２−１】細胞移動に対するｓＭＴｆ由来のペプチドの効果を示す図である。細胞移動は実施例１に記載されるようにＢｏｙｄｅｎチャンバーを用いて評価した。ＨＭＥＣ−１内皮細胞（図２Ａ）及びＮＣＩ−Ｈ４６０肺癌細胞（図２Ｂ）の細胞移動を阻害するその能力についてのｓＭＴｆ由来のペプチドのスクリーニング。
【図２−２】１０μＭでのｓＭＴｆ由来のペプチドの存在下又は非存在下（ＣＴＲＬ）にて細胞移動を実施した。ＨＭＥＣ−１（図２Ｃ）及びＮＣＩ−Ｈ４６０（図２Ｄ）の細胞移動は、種々の濃度のｓＭＴｆ由来のペプチド（配列番号２［黒三角］、１３［黒四角］、又は１５［黒丸］）の存在下又は非存在下で測定した。データは平均値±ＳＥを表し、結果は未処理の細胞と比べた処理細胞の細胞移動の比率として表す。対照条件と比べて統計的に有意な差は*ｐ≦０．０５、**ｐ≦０．０１、***ｐ≦０．００１（ＡＮＯＶＡ、Ｎ＝４）によって示す。
【図３−１】腫瘍の増殖に対するｓＭＴｆ由来のペプチドの効果を示す図である。実施例１に記載されるようなヌードマウスを用いてヒトＮＣＩ−Ｈ４６０肺腫瘍の異種移植を行った。図３Ａ：ＮＣＩ−Ｈ４６０の増殖に対する配列番号１０のペプチドの効果。図３Ｂ：ＮＣＩ−Ｈ４６０の増殖に対する配列番号５及び７のペプチドの効果。
【図３−２】図３Ｃ：ＮＣＩ−Ｈ４６０の増殖に対する配列番号９、１３及１５のペプチドの効果。データは平均値±ＳＥを表し、結果は腫瘍の容積（ｍｍ３）として表す。対照＝溶媒のみ
【図４】腫瘍増殖（膠芽細胞腫）に対するｓＭＴｆ由来のペプチドの効果を示す図である。実施例１に記載されるようなヌードマウスを用いてヒトＵ８７膠芽細胞腫の異種移植を行った。図４Ａ：Ｕ８７の増殖に対する配列番号５及び７のペプチドの効果。図４Ｂ：Ｕ８７の増殖に対する配列番号１３及び１５のペプチドの効果。データは平均値±ＳＥを表し、結果は腫瘍の容積（ｍｍ３）として表す。対照＝溶媒のみ
【図５Ａ】ＮＣＩ−Ｈ４６０肺癌（図５Ａ）及びＵ８７膠芽細胞腫（図５Ｂ）の異種移植実験についてのデルタＣ／デルタＴ（ΔＣ／ΔＴ）値（％）と同様に最初と最後の腫瘍容積（ｍｍ３）を示す図である。
【図５Ｂ】同上。
【図６】配列番号２のｓＭＴｆ由来のペプチドの細胞毒性効果の評価を示す図である。細胞毒性は実施例１に記載されるように［メチル−３Ｈ］−チミジンの取り込みを用いて評価した。細胞毒性は、ＨＭＥＣ−１内皮細胞及びＮＣＩ−Ｈ４６０肺癌細胞において種々の濃度の配列番号２のｓＭＴｆ由来のペプチドの存在下又は非存在下で実施した。データは平均値±ＳＥを表し、結果は未処理の細胞と比べた処理細胞の細胞生存率の比率として表す。
【図７】生体内での血管形成に対するｓＭＴｆ由来のペプチドの効果を示す図である。材料及び方法の区分で記載されるようにヌードマウスを用いてマトリゲルプラグアッセイを実施した。マトリゲル埋め込みの血管新生に対する配列番号５、７、９、１３及び１５のペプチドの効果。データは平均値±ＳＥを表し、結果は乾燥試料のｍｇ当たりのヘモグロビンのμｇで表す。各対照条件と比べて統計的に有意な差は*ｐ≦０．０５、**ｐ≦０．０１、***ｐ≦０．００１（ＡＮＯＶＡ、Ｎ＝５）によって示す。
【図８】ヒトの可溶性メラノトランスフェリンのポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号１、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００５９２０．２）を示す。
【図９】ヒトの可溶性メラノトランスフェリンの２つのトランスフェリン領域（残基２３〜３５５及び３６７〜７０６）の配列配置比較を示す。残基２１０〜２２９及び５５６〜５７５に相当する部分に下線を引く。ＢＬＡＳＴＰ２．２．２５＋プログラム(Stephen F. Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25:3389-3402; Stephen F. Altschul et al., FEBS J. 272:5101-5109)を用いて配列配置比較を実施した。
【図１０Ａ】ヒトの可溶性メラノトランスフェリンのポリペプチドをコードする核酸の配列（配列番号３０、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００５９２９．５）を示す。コーディング配列：１１５〜２３３１；シグナルペプチド：１１５〜１７１；成熟ペプチド：１７２〜２３２８。
【図１０Ｂ】同上。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
本明細書で記載される研究では、本発明者らは、ヒトのメラノトランスフェリンに由来するペプチド、さらに詳しくは配列番号１のヒトのメラノトランスフェリンポリペプチドの残基２１０〜２２９及び５５６〜５７５に相当する部分がウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子によるプラスミノーゲンの活性化を刺激し、同様に血管形成及び細胞移動を調節することを示した。メラノトランスフェリン（ＭＴｆ）又は黒色腫関連の腫瘍抗原ｐ９７は非ヘムＦｅ結合タンパク質のトランスフェリン（Ｔｆ）ファミリーのホモログである膜結合型の糖タンパク質である（Brown et al., Nature 296: 171-173, 1982）。ＭＴｆは、シグナルペプチド（残基１〜１９）と、有意な配列同一性／類似性（４８％同一性、６５％類似性、図９）を示す２つのトランスフェリン領域（ほぼ残基２３〜３５５及び３６７〜７０６）を含む７３８アミノ酸のポリペプチド（図８、配列番号１）である。ＭＴｆは黒色腫に関連する最初の細胞表面マーカーの１つである（Brown et al., J Immunol 127: 539-546, 1981）。実際、それは以前、正常組織では少量しか発現されないが、新生物細胞（特に悪性黒色腫細胞）及び胎児組織で大量に発現される腫瘍胎児性抗原として記載されていた（Woodbury et al., Proc. Natl Acad. Sci USA 77: 2183-2187, 1980; Brown et al., Proc. Natl Acad. Sci USA 78: 539-543, 1981）。２種類のｐ９７が報告されており、一方はグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカーによって細胞膜に結合するが、他方は可溶性であり、盛んに分泌される。
【００４２】
従って、第１の態様では、本発明は、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）によるプラスミノーゲンの活性化を高めるペプチド化合物を提供し、前記ペプチド化合物は配列番号１のポリペプチドの残基２１０〜２２９又は５５６〜５７５に由来する配列を含むドメインを含む。本発明によって提供されるペプチド化合物は配列番号１の完全長のポリペプチドを含有しない。語句「化合物は配列番号１のポリペプチドの残基２１０〜２２９又は５５６〜５７５に由来する」は、配列番号１の２１０〜２２９及び／又は５５６〜５７５に相当する領域の範囲内でのアミノ酸に有意な配列同一性又は類似性を有する配列を指す。配列同一性は、２つの配列間の一致の程度、又は２つ並べた配列間で同一であるアミノ酸の分画を指す。配列類似性は、ＰＡＭマトリクス又はＢＬＯＳＵＭマトリクスのような好適な類似性マトリクスを用いて計算される、それらを比較する際、２つの配列間での類似性の程度を指す。実施形態では、配列は、配列番号１の２１０〜２２９及び／又は５５６〜５７５に相当する領域の１５以上の連続したアミノ酸の配列と少なくとも５０％の類似性又は同一性を有する。さらなる実施形態では、配列は、配列番号１の２１０〜２２９及び／又は５５６〜５７５に相当する領域の１５以上の連続したアミノ酸の配列と少なくとも５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５又は９０％の類似性又は同一性を有する。従って、配列番号１の残基２１０〜２２９及び／又は５５６〜５７５に由来する配列を含むドメインには、配列番号１の天然の残基２１０〜２２９及び／又は５５６〜５７５に比べて置換（好ましくは天然に存在する又は天然に存在しない機能的に同等のアミノ酸による）を含有する変化した配列を持ち、天然のヒトの可溶性メラノトランスフェリンの生物活性を保持し、特にウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）によるプラスミノーゲンの活性化を高める能力を保持するドメインが挙げられる。たとえば、配列内の１以上のアミノ酸を機能的同等物として作用する類似の物理化学的な特性（たとえば、類似の極性、電荷、嵩高さ、疎水性及び／又は親水性）を有する別のアミノ酸によって置換し、サイレント変化を生じることができる。配列内のアミノ酸についての置換はアミノ酸が属するクラスの他のメンバーから選択され得る。たとえば、正に荷電した（塩基性）アミノ酸には、アルギニン、リジン及びヒスチジン（同様にホモアルギニン及びオルニチン）が挙げられる。非極性（疎水性）アミノ酸には、ロイシン、イソロイシン、アラニン、フェニルアラニン、バリン、プロリン、トリプトファン及びメチオニンが挙げられる。荷電しない極性アミノ酸には、セリン、スレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン及びグルタミンが挙げられる。負に荷電した（酸性）アミノ酸には、グルタミン酸及びアスパラギン酸が挙げられる。アミノ酸グリシンは、非極性アミノ酸ファミリー又は荷電しない（中性）極性アミノ酸ファミリーのいずれかに含まれ得る。アミノ酸のファミリーの範囲内で為される置換は一般に保存的置換であると理解される。実施形態では、ドメインは、配列番号１のポリペプチドの残基２１０〜２２９又は５５６〜５７５に相当する天然の配列に少なくとも５０％、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９又は１００％類似性である配列を含む。実施形態では、ドメインは、配列番号１のポリペプチドの残基２１０〜２２９又は５５６〜５７５に相当する天然の配列に少なくとも５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９又は１００％同一又は類似性である配列を含む。パーセント類似性及び同一性は、たとえば、周知のアルゴリズム及びソフトウエアを用いて決定され得る。たとえば、Ｓｍｉｔｈ及びＷａｔｅｒｍａｎ，１９８１，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ２：４８２の局所相同性アルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈ，１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の相同性配列比較アルゴリズム、Ｐｅａｒｓｏｎ及びＬｉｐｍａｎ，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８５：２４４４の類似性法のための検索、及びこれらアルゴリズムのコンピュータによる実施（たとえば、ＧＡＰ，ＢＥＳＴＦＩＴ，ＦＡＳＴＡ及びＴＦＡＳＴＡ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）のような種々のアルゴリズムを用いて同一性／類似性の比較のための配列の最適な配列比較が実施され得る。配列同一性はまた、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０に記載されたＢＬＡＳＴアルゴリズムを用いても決定され得る（公開された初期設定を用いて）。ＢＬＡＳＴ解析を行うためのソフトウエアは全米バイオテクノロジー情報センターを介して入手可能であり得る。
【００４３】
実施形態では、ドメインは、配列番号１のポリペプチドの残基２１０〜２２９又は５５６〜５７５に相当する少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５のアミノ酸（連続する又はしない）を含む。
【００４４】
実施形態では、上述のドメインは式Ｉのドメインである：
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７−Ｘ１８−Ｘ１９Ｘ２０−Ｘ２１−Ｘ２２−Ｘ２３（Ｉ）
式中
“−“は結合であり；
Ｘ１は芳香族残基又は非存在であり；
Ｘ２は塩基性残基、Ｓｅｒ、Ｄ−Ｓｅｒ又は非存在であり；
Ｘ３はＧｌｙ又は非存在であり；
Ｘ４はＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ又は非存在であり；
Ｘ５は芳香族残基であり；
Ｘ６は塩基性アミノ酸であり；
Ｘ７はＣｙｓ、Ｄ−Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ｄ−Ｍｅｔ、Ｌｅｕ又はＤ−Ｌｅｕであり；
Ｘ８はＬｅｕ、又はＤ−Ｌｅｕであり；
Ｘ９はＶａｌ、Ｄ−Ｖａｌ、Ａｌａ又はＤ−Ａｌａであり；
Ｘ１０は酸性残基であり；
Ｘ１１はＡｓｎ、Ｄ−Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｄ−Ｇｌｎ又はＧｌｙであり；
Ｘ１２は塩基性残基、Ａｌａ又はＤ−Ａｌａであり；
Ｘ１３はＰｒｏ、Ｄ−Ｐｒｏ又はＧｌｙであり；
Ｘ１４は酸性残基であり；
Ｘ１５はＶａｌ又はＤ−Ｖａｌであり；
Ｘ１６はＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｄ−Ｐｒｏ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｌｙｓ又はＧｌｙであり；
Ｘ１７は芳香族残基であり；
Ｘ１８はＶａｌ又はＤ−Ｖａｌであり；
Ｘ１９は塩基性残基、Ｔｈｒ又はＤ−Ｔｈｒであり；
Ｘ２０は塩基性残基であり；
Ｘ２１は塩基性残基、酸性残基、Ｉｌｅ、Ｄ−Ｉｌｅ、又は非存在であり；
Ｘ２２は塩基性残基又は非存在であり；及び
Ｘ２３は塩基性残基、芳香族残基又は非存在である。
【００４５】
さらなる態様では、本明細書で定義されるような式Ｉのドメインを含むペプチド化合物が提供される。
【００４６】
用語「ペプチド化合物」は、アミノ酸残基を含み、当該技術で既知の方法を用いて測定し得る（以下の実施例１を参照）、たとえば、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）によるプラスミノーゲンの活性化を高める能力のような生物活性を示すペプチド、ペプチド類似体及びペプチド模倣体（又はペプチドの模倣体）を指す。ペプチド類似体は、「鋳型」ペプチドのそれに類似する特性を持つ非ペプチド薬剤として医薬技術では一般に使用される。ペプチド類似体／ペプチド模倣体は、生物学的に活性のあるペプチドの骨格構造及び物理化学的な特性を再現する。生物学的に活性のあるペプチドに構造的に関連するペプチド模倣体は、同等の又は向上した生物活性（たとえば、向上した治療効果及び／又は予防効果）を生成するのに使用され得る。一般に、ペプチド模倣体は、鋳型ペプチド、すなわち、生物活性又は薬学活性を有し、天然に存在するアミノ酸を含むが、当該技術で周知の方法（Spatola, Peptide Backbone Modifications, Vega Data, 1(3):267 (1983)); Spatola et al. (Life Sci. 38:1243-1249 (1986)); Hudson et al. (Int. J. Pept. Res. 14:177-185 (1979)); およびWeinstein. B., 1983, Chemistry and Biochemistry, of Amino Acids, Peptides and Proteins, Weinstein eds, Marcel Dekker, New- York）によって、たとえば、−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（シス及びトランス）、−ＣＨ２ＳＯ−、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−、−ＣＯＣＨ２−のような結合により任意で置き換えられた１以上のペプチド結合を有するペプチドに構造的に類似する。そのようなペプチド模倣体は、さらに経済的な製造、さらに大きな化学的安定性、高い薬学特性（たとえば、半減期、吸収、有効性、効率等）、低い抗原性等を含む特定の利点を有し得る。ペプチド模倣体化合物は、当該技術で既知の組み合わせライブラリ法における多数のアプローチのいずれかを用いて得ることができる。従って、実施形態では、結合（「−」）の１以上はペプチド結合／連結ではない。別の実施形態では、結合「−」すべてがペプチド結合／連結である。
【００４７】
用語「残基」又は「アミノ酸」には本明細書で使用されるとき、天然に存在するアミノ酸のＬ異性体及びＤ異性体の双方と同様にペプチドの合成類似体を調製するのにペプチド化学で使用される他のアミノ酸（たとえば、天然に存在するアミノ酸、天然に存在しないアミノ酸、核酸によってコードされないアミノ酸）が含まれる。天然に存在するアミノ酸の例は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン等である。他のアミノ酸には、たとえば、アミノ酸の遺伝的にコードされない形態、並びにＬアミノ酸ンの保存的な置換が挙げられる。天然に存在し、遺伝的にコードされないアミノ酸及び合成アミノ酸には、β−アラニン、３−アミノ−プロピオン酸、２,３−ジアミノプロピオン酸、α−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、４−アミノ−酪酸、Ｎ−メチルグリシン（サルコシン）、ヒドロキシプロリン、オルニチン（たとえば、Ｌ−オルニチン、シトルリン、ｔ−ブチルアラニン、ｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチルイソロイシン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、ノルロイシン、（Ｎｌｅ）、ノルバリン、２−ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、３−ベンゾチエニルアラニン、４−クロロフェニルアラニン、２−フルオロフェニルアラニン、３−フルオロフェニルアラニン、４−フルオロフェニルアラニン、ペニシルアラニン、１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリン−３−カルボン酸、β−２−チエニルアラニン、メチオニンスルホキシド、Ｌ−ホモアルギニン（Ｈａｒｇ）、Ｎ−アセチルリジン、２−アミノ酪酸、２−アミノ酪酸、２,４−ジアミノ酪酸（Ｄ−又はＬ−）、ｐ−アミノフェニルアラニン、Ｎ−メチルバリン、ホモシステイン、ホモセリン、システイン酸、ε−アミノヘキサン酸、δ−アミノ吉草酸、又は２,３−ジアミノ酪酸（Ｄ−又はＬ−）等が挙げられる。これらのアミノ酸は生化学／ペプチド化学の当該技術で周知である。
【００４８】
類似の側鎖官能性を提供する合成アミノ酸をペプチド／ドメインに導入することもできる。たとえば、芳香族アミノ酸は、Ｄ−又はＬ−ナフチルアラニン、Ｄ−又はＬ−フェニルグリシン、Ｄ−又はＬ−２−チエニルアラニン、Ｄ−又はＬ−１−、２−、３−又は４−ピレニルアラニン、Ｄ−又はＬ−３−チエニルアラニン、Ｄ−又はＬ−（２−ピリジニル）−アラニン、Ｄ−又はＬ−（３−ピリジニル）アラニン、Ｄ−又はＬ−（２−ピラジニル）アラニン、Ｄ−又はＬ−（４−イソプロピル）−フェニルグリシン、Ｄ−（トリフルオロメチル）−フェニルグリシン、Ｄ−（トリフルオロメチル）−フェニルアラニン、Ｄ−ｐ−フルオロフェニルアラニン、Ｄ−又はＬ−ｐ−ビフェニルアラニン、Ｄ−又はＬ−ｐ−メトキシビフェニルアラニン、アルキル基が置換又は非置換のメチル、エチル、プロピル、ヘキシル、ブチル、ペンチル、イソプロピル、イソブチル及びイソペンチルから成る群から選択されるＤ−又はＬ−２−インドール（アルキル）アラニン及びＤ−又はＬ−アルキルアラニンによって置き換えられ得る。
【００４９】
ホスホノ−又は硫酸化（たとえば、−ＳＯ３Ｈ）アミノ酸によって提供されるように、負の電荷を処理するのに非カルボン酸アミノ酸を作製することができ、それは非限定例であると見なされるべきである。
【００５０】
他の置換には、アルキル基を天然のアミノ酸と組み合わせることによって作製される非天然のアルキル化アミノ酸が挙げられる。たとえば、リジン及びアルギニンのような塩基性の天然のアミノ酸はアミン（ＮＨ２）官能性にてアルキル基によって置換され得る。さらに他の置換には、アスパラギン又はグルタミンのニトリル誘導体（たとえば、ＣＯＮＨ２官能性の代わりにＣＮ−部分を含有する）及びメチオニンのスルホキシド誘導体が挙げられる。加えて、ペプチド／ドメインにおける任意のアミド結合が、ケトメチレン、ヒドロキシエチル、エチル／還元されたアミド、チオアミド又は反転アミド部分（たとえば、(（−Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−のための−Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−、（ＣＨＯＨ）ＣＨ２、（ＣＨ２−ＣＨ２−）、（−Ｃ＝Ｓ）−ＮＨ-、又は−ＮＨ−（−Ｃ＝Ｏ））によって置き換えられ得る。
【００５１】
本発明のペプチド化合物の定義の範囲内で他の修飾も含められる。たとえば、１以上のアミノ酸を欠失させることによってペプチド／ドメインのサイズを減らすことができ、及び／又は非ペプチド結合を含有するアミノ酸模倣体又はジペプチド模倣体を使用し得る。これ目的で、たとえば、ベンゾジアゼピン、アゼピン、置換γラクタム環、ケトメチレン偽ペプチド、βターンジペプチドコア及びβ−アミノアルコールのような分子足場を使用する例は、ペプチド化学者に既知であり、たとえば、Ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｖｏｌ．２３）Ｗ．Ｍ．Ｋａｚｍｉｅｒｓｋｉ（ｅｄ．），Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  ａｎｄ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｍｉｍｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ，Ｖｏｌｓ．１＆２，Ａ．Ａｂｅｌｌ（Ｅｄ）に記載されている。
【００５２】
上述のドメイン又はペプチド化合物は、Ｌ−アミノ酸すべて、Ｄ−アミノ酸すべて又はＬ−アミノ酸とＤ−アミノ酸の混合物を含み得る。実施形態では、上述のドメイン又はペプチド化合物は、少なくともＤ−アミノ酸１つを含む。実施形態では、前記少なくとも１つのＤ−アミノ酸はドメイン又はペプチド化合物のＮ末端部分及び／又はＣ末端部分に位置する（たとえば、最後の２、３のＮ末端及び／又はＣ末端残基の範囲内）。１以上のＤ−アミノ酸の存在は通常、プロテアーゼ／ペプチダーゼの切断への感受性の低下のために高い安定性（たとえば、生体内で）を有するが、生物活性を保持するペプチドを生じる。
【００５３】
実施形態では、Ｘ１はＴｙｒ、Ｄ−Ｔｙｒ又は非存在であり；Ｘ２はＡｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｄ−Ｓｅｒ又は非存在であり；Ｘ４はＡｌａ又は非存在であり；Ｘ５はＰｈｅ又はＤ−Ｐｈｅであり；Ｘ６はＡｒｇ又はＤ−Ａｒｇであり；Ｘ７はＣｙｓ、Ｄ−Ｃｙｓ、Ｍｅｔ又はＤ−Ｍｅｔであり；Ｘ１０はＧｌｕ又はＤ−Ｇｌｕであり；Ｘ１１はＡｓｎ、Ｄ−Ａｓｎ又はＧｌｙであり；Ｘ１２はＡｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ、Ａｌａ又はＤ−Ａｌａであり；Ｘ１３はＧｌｙであり；Ｘ１４はＡｓｐ又はＤ−Ａｓｐであり；Ｘ１７はＰｈｅ又はＤ−Ｐｈｅであり；Ｘ１９はＡｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｌｙｓ、Ｔｈｒ又はＤ−Ｔｈｒであり；Ｘ２０はＨｉｓ、Ｄ−Ｈｉｓ、Ａｒｇ又はＤ−Ａｒｇであり；Ｘ２１はＬｙｓ、Ｄ−Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、Ｄ−Ｇｌｕ、Ｉｌｅ、Ｄ−Ｉｌｅ、又は非存在であり；Ｘ２２はＬｙｓ、Ｄ−Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ、又は非存在であり；及び／又はＸ２３はＬｙｓ、Ｄ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ、Ｄ−Ｐｈｅ、又は非存在である。
【００５４】
実施形態では、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及び／又はＸ４は存在せず；さらなる実施形態では、Ｘ１〜Ｘ４は存在しない。別の実施形態では、Ｘ２１、Ｘ２２及び／又はＸ２３は存在せず；さらなる実施形態では、Ｘ２１〜Ｘ２３は存在しない。
【００５５】
実施形態では、上述のドメインは、
（ａ）Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ（配列番号：１６）；
（ｂ）Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ａ  Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ａ−Ｅ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｈ（配列番号：１７）；
（ｃ）Ｙ−Ｒ−Ｇ−Ａ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ（配列番号：１８）；
（ｄ）Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−Ｋ（配列番号：１９）；
（ｅ）Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｇ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ（配列番号：２０）；
（ｆ）Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ（配列番号：２１）；
（ｇ）Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｑ−Ａ−Ｐ−Ｄ−Ｖ−Ｋ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−Ｋ（配列番号：２２）；
（ｈ）Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ａ−Ｆ−Ｒ−Ｍ−Ｌ−Ａ−Ｅ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−Ｋ（配列番号：２３）；
（ｉ）
【化３】
2014530825.tif 000005
（配列番号：２４）；
（ｊ）ｆ−ｒ−ｃ−ｌ−ｖ−ｅ−ｎ−ａ−Ｇ−ｄ−ｖ−ａ−ｆ−ｖ−ｒ−ｈ−ｋ−ｋ−ｋ（配列番号：２５）；
（ｋ）Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ（配列番号：２６）；
（ｌ）Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｒ−Ｅ−Ｒ−Ｆ（配列番号：２７）；
（ｍ）Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ａ  Ｆ−Ｒ−Ｌ−Ｌ−Ａ−Ｅ−Ｇ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｈ−Ｋ−Ｋ（配列番号：２８）；又は
（ｎ）Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｔ−Ｒ−Ｉ−Ｒ（配列番号：２９）であり；
式中、ｆ＝Ｄ−Ｐｈｅ、ｒ＝Ｄ−Ａｒｇ、ｃ＝Ｄ−Ｃｙｓ、ｌ＝Ｄ−Ｌｅｕ、ｖ＝Ｄ−Ｖａｌ、ｅ＝Ｄ−Ｇｌｕ、ｎ＝Ｄ−Ａｓｎ、ａ＝Ｄ−Ａｌａ、ｄ＝Ｄ−Ａｓｐ、ｈ＝Ｄ−Ｈｉｓ、及びｋ＝Ｄ−Ｌｙｓである。
【００５６】
実施形態では、上述のドメインは上記で定義されたドメイン（ａ）〜（ｎ）の任意の組み合わせである。実施形態では、上述のドメインはＦ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ（配列番号：１６）である。別の実施形態では、上述のドメインはＹ−Ｓ−Ｇ−Ａ  Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ａ−Ｅ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｈ（配列番号：１７）である。別の実施形態では、上述のドメインはＹ−Ｒ−Ｇ−Ａ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ（配列番号：１８）である。別の実施形態では、上述のドメインはＦ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−Ｋ（配列番号：１９）である。別の実施形態では、上述のドメインはＦ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｇ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ（配列番号：２０）である。別の実施形態では、上述のドメインはＦ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ（配列番号：２１）である。別の実施形態では、上述のドメインはＦ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｑ−Ａ−Ｐ−Ｄ−Ｖ−Ｋ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−Ｋ（配列番号：２２）である。別の実施形態では、上述のドメインはＹ−Ｓ−Ｇ−Ａ−Ｆ−Ｒ−Ｍ−Ｌ−Ａ−Ｅ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−Ｋ（配列番号：２３）である。別の実施形態では、上述のドメインは
【化４】
2014530825.tif 000006
（配列番号：２４）である。別の実施形態では、上述のドメインはｆ−ｒ−ｃ−ｌ−ｖ−ｅ−ｎ−ａ−Ｇ−ｄ−ｖ−ａ−ｆ−ｖ−ｒ−ｈ−ｋ−ｋ−ｋ（配列番号：２５）である。別の実施形態では、上述のドメインはＦ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ（配列番号：２６）である。別の実施形態では、上述のドメインはＦ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｒ−Ｅ−Ｒ−Ｆ（配列番号：２７）である。別の実施形態では、上述のドメインはＹ−Ｓ−Ｇ−Ａ  Ｆ−Ｒ−Ｌ−Ｌ−Ａ−Ｅ−Ｇ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｈ−Ｋ−Ｋ（配列番号：２８）である。別の実施形態では、上述のドメインはＦ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｔ−Ｒ−Ｉ−Ｒ（配列番号：２９）である。
【００５７】
実施形態では、上述のドメイン又はペプチド化合物は１００以下のアミノ酸残基を含有し、さらなる実施形態では、７５以下のアミノ酸残基を含有し、その上さらなる実施形態では、５０以下アミノ酸残基を含有する。実施形態では、上述のドメイン又はペプチド化合物は約８残基〜約１００残基の間を含有する。さらなる実施形態では、上述のドメイン又はペプチド化合物は約１０残基〜約５０残基の間を含有する。さらなる実施形態では、上述のドメイン又はペプチド化合物は約１０残基〜約４０残基の間を含有する。さらなる実施形態では、上述のドメイン又はペプチド化合物は約１１、１２、１４、１４又は１５残基〜約２５、２６、２７、２８、２９又は３０残基の間を含有する。さらなる実施形態では、上述のドメイン又はペプチド化合物は１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０の残基を含有する。
【００５８】
従って、実施形態では、上述のペプチド化合物は、上記で定義されたドメインに対してさらに、前記ドメインのアミノ末端及び／又はカルボキシ末端に共有結合する１以上のアミノ酸を含み得る。従って上述のペプチド化合物は、異なるタンパク質又はペプチドのアミノ酸配列にそのアミノ末端又はカルボキシ末端又は双方で連結される本明細書で記載されるようなドメインを含有するキメラペプチド又は融合ペプチドであり得る。実施形態では、上述のペプチド化合物は、特定の細胞、組織及び／又は臓器（たとえば、腫瘍）にペプチド化合物を向かわせるためのペプチド部分を含み得る。
【００５９】
他の実施形態では、ペプチド化合物は互いに直接又は間接的に（スペーサー又はリンカーを介して）共有結合する２以上のドメインを含み得る。
【００６０】
実施形態では、上述のペプチド化合物又はドメインのＮ末端及び／又はＣ末端のアミノ酸は、たとえば、アミド化、アセチル化、アシル化又は当該技術で既知の任意の他の修飾によって修飾され得る。
【００６１】
従って、別の態様では、本発明は式（ＩＩ）のペプチド化合物を提供する：
Ｚ１−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７−Ｘ１８−Ｘ１９−Ｘ２０−Ｘ２１−Ｘ２２−Ｘ２３−Ｚ２（Ｉ）
式中、Ｘ１〜Ｘ２３は上記で定義されたとおりであり
Ｚ１はアミノ末端の修飾又は非存在であり；及び
Ｚ２はカルボキシ末端の修飾又は非存在である。
【００６２】
実施形態では、ペプチド化合物のアミノ末端残基（すなわち、Ｎ末端における遊離のアミノ基）は、たとえば、部分／化学基（Ｚ１）の共有結合によって修飾される（たとえば、分解に対する保護のために）。実施形態では、アミノ末端の修飾（Ｚ１）は１〜２０の炭素（実施形態では１〜６、８、１２又は１６の炭素）の直鎖又は分枝鎖のアルキル基又はアシル基（Ｒ−ＣＯ−）であり、その際、Ｒは疎水性の部分（たとえば、アセチル、プロピオニル、ブタニル、イソプロピオニル、又はイソブタニル）又はアロイル基（Ａｒ−ＣＯ−）であり、Ａｒはアリール基である。実施形態では、アシル基はＣ１〜Ｃ１６又はＣ３〜Ｃ１６のアシル基であり（直鎖又は分枝鎖、飽和又は不飽和）であり、さらなる実施形態では、飽和Ｃ１〜Ｃ６アシル基（直鎖又は分枝鎖）又は不飽和Ｃ３〜Ｃ６アシル基（直鎖又は分枝鎖）であり、たとえば、アセチル基（ＣＨ３−ＣＯ−、Ａｃ）である。さらなる実施形態では、Ｚ１はＸ１に結合する１以上のアミノ酸の配列である。別の実施形態ではＺ１は標的化部分である。
【００６３】
実施形態では、ペプチド化合物のカルボキシ末端残基（すなわち、ペプチドのＣ末端の遊離のカルボキシ基）は修飾される（たとえば、カルボキシ末端修飾基がエステル結合を介して連結される）。Ｎ末端の修飾と同様に、ペプチドＣ末端での化学基の付加は、ペプチダーゼによる分解に対してペプチド化合物があまり影響を受けないようにし得るし、及び／又は血清での安定性を高め得る。実施形態では、Ｃ末端修飾基は、ヒドロキサム酸基、ニトリル基、アミド（１級、２級又は３級）基、１〜１０の炭素の脂肪族アミン、たとえば、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン又はシクロヘキシルアミン、芳香族若しくはアリールアルキルアミン、たとえば、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シナミルアミン若しくはフェニルエチルアミン、アルコール又はＣＨ２ＯＨである。さらなる実施形態では、Ｚ２はアミド、さらに詳しくはＮＨ２である。さらなる実施形態では、Ｚ２は１以上のアミノ酸の配列である。別の実施形態では、Ｚ２は標的化部分である。
【００６４】
本発明のペプチド化合物は、たとえば、プロテアーゼ耐性、血漿タンパク質の結合、長い血漿半減期、細胞内への浸透等のような追加の生物特性をペプチド化合物に付与する修飾をさらに含む。そのような修飾には、たとえば、ペプチド化合物への脂肪酸（たとえば、Ｃ６〜Ｃ１８）の共有結合、アルブミンのようなタンパク質への結合（たとえば、米国特許第７，２６８，１１３号を参照）；グリコシル化、ビオチン化、又はペグ化、アセチル化、アシル化、アセトミドメチル（Ａｃｍ）基の付加、ＡＤＰ−リボシル化、アルキル化、アミド化、カルバモイル化、カルボキシエチル化、エステル化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチド又はヌクレオチド誘導体の共有結合、薬剤の共有結合、マーカー（たとえば、蛍光マーカー又は放射性マーカー）の共有結合、脂質又は脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、脱メチル化、共有架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタミン酸塩の形成、ホルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカーの形成、ヒドロキシル化、ヨード化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク分解処理、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、及びユビキチン化が挙げられる。翻訳後修飾には、ペプチド化合物を安定化し、薬物力学又は薬物動態を改善するポリマーの付加も挙げられる。ペプチド化合物の修飾の上記の記載は、アプローチの範囲又は操作することができる考えられる修飾の範囲のいずれも限定するものではない。
【００６５】
実施形態では、上述のペプチド化合物は、
（ａ）Ａｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−ＮＨ２（配列番号：２）；
（ｂ）Ａｃ−Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ａ  Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ａ−Ｅ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｈ−ＮＨ２（配列番号：３）；
（ｃ）Ａｃ−Ｙ−Ｒ−Ｇ−Ａ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−ＮＨ２（配列番号：４）；
（ｄ）Ａｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−Ｋ−ＮＨ２（配列番号：５）；
（ｅ）Ａｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｇ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−ＮＨ２（配列番号：６）；
（ｆ）Ａｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−ＮＨ２（配列番号：７）；
（ｇ）Ａｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｑ−Ａ−Ｐ−Ｄ−Ｖ−Ｋ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−Ｋ−ＮＨ２（配列番号：８）；
（ｈ）Ａｃ−Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ａ−Ｆ−Ｒ−Ｍ−Ｌ−Ａ−Ｅ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−Ｋ−ＮＨ２（配列番号：９）；
（ｉ）
【化５】
2014530825.tif 000007
（配列番号：１０）；
（ｊ）Ａｃ−ｆ−ｒ−ｃ−ｌ−ｖ−ｅ−ｎ−ａ−Ｇ−ｄ−ｖ−ａ−ｆ−ｖ−ｒ−ｈ−ｋ−ｋ−ｋ−ＮＨ２（配列番号：１１）；
（ｋ）Ａｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−ＮＨ２（配列番号：１２）；
（ｌ）Ａｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｒ−Ｅ−Ｒ−Ｆ−ＮＨ２（配列番号：１３）；
（ｍ）Ａｃ−Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ａ  Ｆ−Ｒ−Ｌ−Ｌ−Ａ−Ｅ−Ｇ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−ＮＨ２（配列番号：１４）；又は
（ｎ）       Ａｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｔ−Ｒ−Ｉ−Ｒ−ＮＨ２（配列番号：１５）であり；
式中、Ａｃ＝アセチル、ｆ＝Ｄ−Ｐｈｅ、ｒ＝Ｄ−Ａｒｇ、ｃ＝Ｄ−Ｃｙｓ、ｌ＝Ｄ−Ｌｅｕ、ｖ＝Ｄ−Ｖａｌ、ｅ＝Ｄ−Ｇｌｕ、ｎ＝Ｄ−Ａｓｎ、ａ＝Ｄ−Ａｌａ、ｄ＝Ｄ−Ａｓｐ、ｈ＝Ｄ−Ｈｉｓ、及びｋ＝Ｄ−Ｌｙｓ、又はその塩である。
【００６６】
実施形態では、上述のペプチド化合物は上記で定義されたペプチド化合物（ａ）〜（ｎ）の任意の組み合わせである。実施形態では、上述のペプチド化合物は、Ａｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−ＮＨ２（配列番号：２）である。別の実施形態では、上述のペプチド化合物はＡｃ−Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ａ  Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ａ−Ｅ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｈ−ＮＨ２（配列番号：３）である。別の実施形態では、上述のペプチド化合物はＡｃ−Ｙ−Ｒ−Ｇ−Ａ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−ＮＨ２（配列番号：４）である。別の実施形態では、上述のペプチド化合物はＡｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−Ｋ−ＮＨ２（配列番号：５）である。別の実施形態では、上述のペプチド化合物はＡｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｇ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−ＮＨ２（配列番号：６）である。別の実施形態では、上述のペプチド化合物はＡｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−ＮＨ２（配列番号：７）である。別の実施形態では、上述のペプチド化合物はＡｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｑ−Ａ−Ｐ−Ｄ−Ｖ−Ｋ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−Ｋ−ＮＨ２（配列番号：８）である。別の実施形態では、上述のペプチド化合物はＡｃ−Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ａ−Ｆ−Ｒ−Ｍ−Ｌ−Ａ−Ｅ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−Ｋ−ＮＨ２（配列番号：９）である。別の実施形態では、上述のペプチド化合物は
【化６】
2014530825.tif 000008
（配列番号：１０）である。別の実施形態では、上述のペプチド化合物はＡc−ｆ−ｒ−ｃ−ｌ−ｖ−ｅ−ｎ−ａ−Ｇ−ｄ−ｖ−ａ−ｆ−ｖ−ｒ−ｈ−ｋ−ｋ−ｋ−ＮＨ２（配列番号：１１）である。別の実施形態では、上述のペプチド化合物はＡｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｒ−Ｈ−ＮＨ２（配列番号：１２）である。別の実施形態では、上述のペプチド化合物はＡｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｒ−Ｅ−Ｒ−Ｆ−ＮＨ２（配列番号：１３）である。別の実施形態では、上述のペプチド化合物はＡｃ−Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ａ  Ｆ−Ｒ−Ｌ−Ｌ−Ａ−Ｅ−Ｇ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｆ−Ｖ−Ｋ−Ｈ−Ｋ−Ｋ−ＮＨ２（配列番号：１４）である。別の実施形態では、上述のペプチド化合物はＡｃ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｌ−Ｖ−Ｅ−Ｎ−Ｒ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｐ−Ｆ−Ｖ−Ｔ−Ｒ−Ｉ−Ｒ−ＮＨ２（配列番号：１５）である。
【００６７】
実施形態では、上述のペプチド化合物は塩の形態、たとえば、薬学上許容可能な塩の形態である。本明細書で使用されるとき、用語「薬学上許容可能な塩」は、特許化合物の生物活性を保持し、生物学的に又は別の面で望ましくなくない化合物の塩を指す。そのような塩は、類似体の最終的な単離及び精製の間にその場で調製することができ、又は好適な酸と遊離の塩基官能基を反応させることによって別に調製することができる。本明細書で開示される多数のペプチド化合物はアミノ基及び／又はカルボキシ基又はそれに類似する基の存在に基づいて酸性及び／又は塩基性の塩を形成することが可能である。
【００６８】
薬学上許容可能な酸付加塩は無機酸及び有機酸から調製され得る。代表的な酸付加塩には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、カンファー酸塩、カンファースルホン酸塩、ジグルコン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩（イソチオン酸塩）、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、リン酸塩、グルタミン酸塩、重炭酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩及びウンデカン酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。無機酸に由来する塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等が挙げられる。有機酸に由来する塩には、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸等が挙げられる。薬学上許容可能な酸付加塩を形成するのに採用することができる酸の例には、たとえば、無機酸、たとえば、塩酸、臭化水素酸、硫酸及びリン酸、並びに有機酸、たとえば、シュウ酸、マレイン酸、コハク酸及びクエン酸が挙げられる。
【００６９】
塩基付加塩も、カルボン酸含有部分を薬学上許容可能な金属カチオンの水酸化物、炭酸塩若しくは重炭酸塩のような好適な塩基と又はアンモニア若しくは有機１級、２級若しくは３級アミンと反応させることによって調製することができる。薬学上許容可能な塩には、たとえば、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム及びアルミニウムの塩等のようなアルカリ金属若しくはアルカリ土類金属に基づくカチオン、並びにとりわけアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、トリエチルアンモニウム、ジエチルアンモニウム及びエチルアンモニウムを含む非毒性の四級アンモニア及びアミンのカチオンが挙げられるが、これらに限定されない。塩基付加塩の形成に有用な他の代表的な有機アミンには、たとえば、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペリジン、ピペラジン等が挙げられる。有機塩基に由来する塩には１級、２級及び３級アミンの塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７０】
本発明のペプチド化合物は、ペプチド化合物をコードする核酸を含む宿主細胞における発現によって（組換え発現）又は化学合成によって（たとえば、固相ペプチド合成）製造され得る。当該技術で周知の手動及び自動化された固相手段によってペプチドを容易に合成することができる。好適な合成は「ｔ−Ｂｏｃ」又は「Ｆｍｏｃ」法を利用して実施することができる。固相合成の技法及び手順は、たとえば、Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｂｙ  Ｅ．Ａｔｈｅｒｔｏｎ及びＲ．Ｃ．Ｓｈｅｐｐａｒｄ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ｂｙ  ＩＲＬ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９に記載されている。或いは、ペプチドは、たとえば、Ｌｉｕら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．３７：９３３−９３６，１９９６；Ｂａｃａら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１７：１８８１−１８８７，１９９５；Ｔａｍら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．４５：２０９−２１６，１９９５；Ｓｃｈｎｏｌｚｅｒ及びＫｅｎｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５６：２２１−２２５，１９９２；Ｌｉｕ及びＴａｍ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１６：４１４９−４１５３，１９９４；Ｌｉｕ及びＴａｍ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９１：６５８４−６５８８，１９９４；並びにＹａｍａｓｈｉｒｏ及びＬｉ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．３１：３２２−３３４，１９８８）に記載されたようなセグメント縮合によって調製され得る。ペプチドを合成するのに有用な他の方法はＮａｋａｇａｗａら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０７：７０８７−７０９２，１９８５に記載されている。
【００７１】
遺伝子コードによってコードされる天然に存在するアミノ酸を含むペプチド及びペプチド類似体も常法を用いた組換えＤＮＡ技術を用いて調製され得る。組換え技術によって作製されたペプチドは、当該技術で周知の方法を用いて修飾され得る（たとえば、Ｎ末端アシル化［たとえば、アセチル化］、Ｃ末端のアミド化等）。従って、実施形態では、本明細書で記載されるペプチド化合物が遺伝子コードによってコードされる天然に存在するアミノ酸を含有する場合、ペプチド化合物は組換え法を用いて作製されてもよく、実施形態では、たとえば、述べたばかりの修飾（たとえば、アシル化、アミド化）に供されてもよい。従って、別の態様では、本発明はさらに、上述のドメイン又はペプチド化合物をコードする核酸を提供する。本発明はまた上述の核酸を含むベクターも提供する。さらに別の態様では、本発明は上述の核酸及び／又はベクターを含む細胞（たとえば、宿主細胞）を提供する。本発明はさらに、たとえば、当該技術で周知の培養培地、作出法、単離法及び精製法を用いた、本発明のペプチド化合物の発現／作出のための、上述のもののような組換え発現系、ベクター及び宿主細胞を提供する。
【００７２】
本発明のペプチド化合物は、たとえば、逆相クロマトグラフィ、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）、イオン交換クロマトグラフィ、サイズ排除クロマトグラフィ、アフィニティクロマトグラフィ、ゲル電気泳動等のような当該技術で周知の多数の技法によって精製することができる。特定のペプチド又はペプチド類似体を精製するのに使用される実際の条件は、合成戦略及び、たとえば、正味の電荷、疎水性、親水性等のような因子に部分的に左右され、当業者には明らかであろう。アフィニティクロマトグラフィ精製については、たとえば、ペプチド又はペプチド類似体に特異的に結合する抗体が使用され得る。
【００７３】
実施形態では、上述のペプチド化合物は実質的に純粋である。天然でそれに伴う成分から分離されれば、化合物は「実質的に純粋」である。通常、試料中の総物質の重量で少なくとも６０％、さらに一般的には７５％、８０％又は８５％、好ましくは９０％を超え、さらに好ましくは９５％を超えれば、化合物は実質的に純粋である。従って、たとえば、化学的に合成される又は組換え技術で作出されるポリペプチドは一般に、その天然に会合する成分を実質的に含まない。核酸分子は、本発明のＤＮＡが由来する生物の天然に存在するゲノムにて普通連続するコーディング配列に直接隣接（すなわち、共有結合）しなければ、実質的に純粋である。実質的に純粋な化合物は、たとえば、天然の供給源からの抽出によって、ペプチド化合物をコードする組換え核酸分子の発現によって、又は化学合成によって得ることができる。純度は、たとえば、カラムクロマトグラフィ、ゲル電気泳動、ＨＰＬＣ等のような適当な方法を用いて測定することができる。
【００７４】
別の態様では、本発明は、上述のペプチド化合物を含む組成物（たとえば、医薬組成物）を提供する。実施形態では、組成物はさらに１以上の薬学上許容可能なキャリア、賦形剤及び／又は希釈剤を含む。
【００７５】
本明細書で使用されるとき、「薬学上許容可能な」（又は「生物学上許容可能な」）は、生体内で毒性の又は有害な生物学的効果がない（限定される）ことを特徴とする物質を指す。それは、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応又は他の問題若しくは合併症がなく、対象（たとえば、ヒト、動物）の体液及び／又は組織及び／又は臓器と接触して使用するのに好適であり、理に適った利益／リスクの比に釣り合う化合物、組成物、及び／又は剤形に言及する。
【００７６】
用語「薬学上許容可能なキャリア、賦形剤及び／又は希釈剤」は医薬組成物の調製で一般に使用される添加剤を指し、それには、たとえば、溶媒、分散媒、生理食塩水溶液、界面活性剤、可溶化剤、潤滑剤、乳化剤、コーティング、抗菌及び抗真菌剤、キレート剤、ｐＨ調節剤、緩和剤、還元剤、抗酸化剤、等張剤、吸収遅延剤等が挙げられる（たとえば、Rowe et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, Pharmaceutical Press; 6th edition, 2009を参照）。
【００７７】
本発明のペプチド化合物は、たとえば、静脈内、経口、経皮、腹腔内、皮下、粘膜、筋肉内、鼻内、肺内、非経口、又は局所の投与のような従来の経路を介した投与用に製剤化され得る。そのような製剤の調製は当該技術で周知である（たとえば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins; 21st edition, 2005を参照）。
【００７８】
本発明のペプチド化合物は、血管形成及び／又は細胞移動の阻害に、たとえば、異常な血管形成及び／又は細胞移動に関連する疾患／状態（たとえば、血管形成の阻害又は軽減が有益である疾患／状態）を防ぐ及び／又は治療するのに有用であり得る。本明細書で使用されるとき、「異常な血管形成」は新しい血管の異常な増殖を指す。異常な血管形成に関連する疾患／状態の例には、加齢性黄斑変性症、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、血管腫、乾癬、関節炎、慢性炎症、アテローム性硬化症、腫瘍の増殖及び／又は転移（たとえば、癌）が挙げられる。
【００７９】
従って、別の態様では、本発明は、それを必要とする対象に有効量の上述のペプチド化合物又は上述の医薬組成物を投与することを含む、対象にて血管形成及び／又は細胞移動を阻害する方法を提供する。
【００８０】
別の態様では、本発明は、それを必要とする対象に有効量の上述のペプチド化合物又は上述の医薬組成物を投与することを含む、癌を治療する方法を提供する。
【００８１】
別の態様では、本発明は、対象にて血管形成及び／又は細胞移動を阻害するための上述のペプチド化合物又は上述の医薬組成物の使用を提供する。
【００８２】
別の態様では、本発明は、対象にて血管形成及び／又は細胞移動を阻害するために薬物を製造するための上述のペプチド化合物又は上述の医薬組成物の使用を提供する。
【００８３】
別の態様では、本発明は、対象にて癌を治療するための上述のペプチド化合物又は上述の医薬組成物の使用を提供する。
【００８４】
別の態様では、本発明は、対象にて癌を治療するために薬物を製造するための上述のペプチド化合物又は上述の医薬組成物の使用を提供する。
【００８５】
別の態様では、本発明は、薬物として使用するための上述のペプチド化合物又は上述の医薬組成物を提供する。実施形態では、上述の薬物は対象にて血管形成及び／又は細胞移動を阻害するためのものである。別の実施形態では、上述の薬物は対象にて癌を治療するためのものである。
【００８６】
別の態様では、本発明は、対象にて血管形成及び／又は細胞移動を阻害するために上述のペプチド化合物又は上述の医薬組成物を提供する。
【００８７】
別の態様では、本発明は、対象にて血管形成及び／又は細胞移動を阻害するための薬物を製造するために上述のペプチド化合物又は上述の医薬組成物を提供する。
【００８８】
別の態様では、本発明は、対象にて癌を治療するための上述のペプチド化合物又は上述の医薬組成物を提供する。
【００８９】
別の態様では、本発明は、対象にて癌を治療するための薬物を製造するための上述のペプチド化合物又は上述の医薬組成物を提供する。
【００９０】
実施形態では、上述の癌は、黒色腫、前立腺癌、白血病、ホルモン依存性の癌、乳癌、結腸癌、肺癌、皮膚癌、卵巣癌、膵臓癌、骨癌、肝癌、胆道癌、リンパ腫、肉腫、食道癌、胃癌、脳腫瘍、腎臓癌、又は表皮癌である。
【００９１】
実施形態では、癌細胞又は腫瘍細胞はその表面にメラノトランスフェリン（ｐ９７）を発現する。
【００９２】
別の実施形態では、上述のペプチド化合物又は医薬組成物は転移を防ぐ、抑制する又は軽減する。
【００９３】
「有効量」は、所望の生物活性（たとえば、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子によるプラスミノーゲンの活性化を刺激する、血管形成及び／又は細胞移動を調節する）及び／又は予防／治療成績（たとえば、上記の疾患／状態の予防及び／又は治療）を達成するのに必要な投与及び期間での有効な量を指す。「治療上有効な量」は、治療の文脈で有効な量を指し、「予防上有効な量」は、予防の文脈で有効な量を指す。本発明の化合物の有効量は、たとえば、個体の疾患の状態、年齢、性別及び体重、並びに個体における所望の応答を引き出す化合物の能力のような因子に従って変化し得る。投与計画を調整して最適な予防／治療の応答を提供し得る。有効量はまた、予防上／治療上の有益な効果が化合物の毒性の又は有害な効果に勝るものでもある。特定の対象については、個体の必要性及び組成物を投与する又は投与を監督する人の専門的な判断に従って特定の投与計画が時間をかけて調整され得る。実施形態では、ペプチド組成物は、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの１日用量で投与され、さらなる実施形態では、約０．５ｍｇ〜約２０ｍｇで、さらなる実施形態では、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの１日用量で投与される。
【００９４】
用語「治療」、「治療すること」等は、所望の薬理学的及び／又は生理学的な効果、たとえば、腫瘍の増殖、転移を抑えることを得ることを意味するように意図される。効果は、疾患の又は疾患の症状を完全に又は部分的に予防する（転移を予防する）という点では予防上であり、疾患又は疾患に起因する有害効果についての部分的な又は完全な治癒と言う点では治療上である。「治療」は本明細書で使用されるとき、哺乳類、特にヒトにおける治療を指し、それには、疾患／状態を抑えること、疾患の進展／進行を停止する若しくは遅くすること；疾患を軽減すること（たとえば、疾患に関連する症状を軽減すること）が挙げられる。
【００９５】
実施形態では、本発明のペプチド化合物は、たとえば、ペプチド化合物をコードする核酸、又はペプチド化合物をコードする核酸を含むベクター、又は核酸若しくはベクターを含む細胞を対象に投与することによって間接的に対象に投与されるので、ペプチド化合物は、対象への投与に続いて生体内で産生される。すべて遺伝子治療ベクターの使用を含み得る、たとえば、ＤＮＡの直接注入、受容体が介在するＤＮＡの取り込み、ウイルスが介在する形質移入又は非ウイルス性の形質移入及び脂質に基づく形質移入のような当該技術で周知の方法を用いて核酸は生体内で細胞に送達され得る。
【００９６】
実施形態では、上述の予防及び／又は治療は、１以上の追加の活性剤／治療剤との併用で又は他の治療法との併用で上述のペプチド化合物又は薬学上許容可能なその塩又は医薬組成物の投与を含む。予防剤／治療剤及び／又は組成物の組み合わせは、従来の剤形にて投与されてもよく又は同時投与されてもよい（たとえば、連続して、同時に、異なる時に）。本発明の文脈での同時投与は、改善された臨床転帰を達成するための協調治療の経過にて１を超える治療剤の投与を指す。そのような同時投与は、同一の広がりを持ち、すなわち、重複した時間の間に生じ得る。たとえば、第２の剤を投与する前に、同時に、前後に、又は後に第１の剤を患者に投与し得る。実施形態では、剤は単一組成物にて組み合わせられ／製剤化されるので、同時に投与され得る。実施形態では、当該疾病を予防する又は治療するのに現在使用されている１以上の剤との併用で本発明の１以上の活性剤が使用され／投与される。従って、実施形態では、ペプチド組成物は、抗癌療法、たとえば、化学療法剤、血管形成阻害剤、ホルモン療法、放射線療法、光力学療法、手術、免疫療法、ワクチン又は移植との併用で投与され／使用される。
【００９７】
本明細書で使用されるとき、用語「対象」又は「患者」は、哺乳類のような温血動物、たとえば、ネコ、イヌ、マウス、モルモット、ウマ、ウシ、ヒツジ及びヒトを意味するように解釈される。実施形態では、対象は哺乳類である。さらなる実施形態では、上述の対象はヒトである。
【実施例】
【００９８】
以下の非限定の実施例によって本発明をさらに詳細に説明する。
【００９９】
略語
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＩＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＣＯＭＵ：（１−シアノ−２−エトキシ−２−オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ−モルフォリノ−カルベニウム  ヘキサフルオロホスフェート
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：マトリクス支援レーザー脱離／イオン化質量分光分析
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィ
ＢＨＡ：ベンズヒドリルアミン樹脂
Ｐｂｆ：２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル
Ｂｏｃ：ｔ−ブトキシカルボニル
ｔ−Ｂｕ：ｔ−ブチル
Ｔｒｔ：トリチル
Ａｃ：アセチル
ａ：Ｄ−アラニン
ｒ：Ｄ−アルギニン
ｆ：Ｄ−フェニルアラニン
ｃ：Ｄ−システイン
ｌ：Ｄ−ロイシン
ｖ：Ｄ−バリン
ｅ：Ｄ−グルタミン酸
ｎ：Ｄ−アスパラギン
ｄ：Ｄ−アスパラギン酸
ｈ：Ｄ−ヒスチジン
ｋ：Ｄ−リジン
【０１００】
本出願の全体を通して、天然に存在するアミノ酸は１文字コード又は３文字コードを相互交換可能に使用して指名される（それらの間の対応については以下の表Iを参照）。
【０１０１】
【表１】
2014530825.tif 000009
【０１０２】
実施例１.材料及び方法
ｓＭＴF断片及び誘導体の合成及び調製：固相合成
適当な側鎖の保護及び０．７５ミリモル／ｇの負荷でのベンズヒドリルアミン（ＢＨＡ）樹脂（ＢＡＣＨＥＭ  ＡＧ）と共にフルオロエチルメトキシカルボニル保護したα−アミノ酸を用いた手動の又は自動の固相ペプチド合成法を用いてｓＭＴｆペプチドを作製した。アミノ酸のカップリングの前に、６−アミノヘキサン酸とＲｉｎｋリンカーを樹脂に結合させ、次いで、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の［（１−シアノ−２−エトキシ−２−オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ−モルフォリノ−カルベニウム  ヘキサフルオロホスフェート］（ＣＯＭＵ）及びジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いてＦｍｏｃ−［９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニル］保護したアミノ酸を１時間結合させた。ＤＭＦ中２０％（ｖ／ｖ）のピペリジンを用いてＦｍｏｃの脱保護を１時間行った。無水酢酸とＤＩＥＡを用いて、アセチルによる本発明のペプチドをＮキャップする一般手順を実施した。合成の完了後、側鎖の脱保護と同時に、ペプチドを固相支持体から切断した。０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）中のアセトニトリルの勾配を用いた分取用ＲＰ−ＨＰＬＣ  ｏｎ  Ｖｙｄａｃ（商標）Ｃ１８−カラムによって粗精製の線状ペプチドをさらに精製した。ペプチドを真空乾燥してアセトニトリルを取り除き、０．１％ＴＦＡから凍結乾燥した。分析用高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）によって純度を評価し、Ｖｏｙａｇｅｒ（商標）機器（ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．）を用いたマトリクス支援レーザー脱離／イオン化質量分光分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ）によって質量を決定した。本明細書で記載される実験で使用されたペプチドの配列を表ＩＩに示す。
【０１０３】
【表２】
2014530825.tif 000010
Ａｃ＝アセチル、ｆ＝Ｄ−Ｐｈｅ、ｒ＝Ｄ−Ａｒｇ、ｃ＝Ｄ−Ｃｙｓ、ｌ＝Ｄ−Ｌｅｕ、ｖ＝Ｄ−Ｖａｌ、ｅ＝Ｄ−Ｇｌｕ、ｎ＝Ｄ−Ａｓｎ、ａ＝Ｄ−Ａｌａ、ｄ＝Ｄ−Ａｓｐ、ｈ＝Ｄ−Ｈｉｓ、及びｋ＝Ｄ−Ｌｙｓ
【０１０４】
ｕＰＡによる試験管内でのプラスミノーゲンの活性化
比色アッセイを用いてｕＰＡの試験管内での酵素活性を測定した。ｕＰＡによるプラスミノーゲンの活性化に対するｓＭＴｆ由来のペプチドの効果を検討するために、２００μＬの最終容積にてプラスミノーゲン活性化緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ／ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭのＮａＣｌ及び５０ｍＭのＣａＣｌ２）において反応を行った。このインキュベート媒体はまた３０ｎＭのプラスミノーゲンと１５μｇの発色性プラスミン基質Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ  ｐ−ニトロアニリド（ＶＬＫ−ｐＮＡ）も含有した。反応は１ｎｇのｕＰＡの添加によって開始した。このアッセイでは、ＶＬＫ−ｐＮＡの切断が４０５ｎｍで吸収するｐ−ニトロアニリン分子を生じる。マイクロプレートＴｈｅｒｍｏｍａｘ（商標）自動リーダーを用いて２分毎に３時間、３７℃にて反応生成物モニターした。ＶＬＫ−ｐＮＡ加水分解反応の速度を算出し、結果をｍＡＵ／分で表す。
【０１０５】
試験管内での細胞移動
３７℃にて０．１５％のゼラチンで２時間、事前に被覆したトランスウェルフィルター（８μｍの孔サイズ）を用いて４℃にて一晩、ＨＭＥＣ−１細胞及びＮＣＩ−Ｈ４６０細胞の移動を行った。トランスウェルフィルターをＰＢＳで１回洗浄し、２４穴プレートに取り付けた。細胞移動に対するｓＭＴｆ由来のペプチドの効果を検討するために、種々の濃度のペプチド（２×）を伴った又は伴わない３００μＬの無血清培地で下のチャンバーを満たした。次に、トリプシン処理によってＨＭＥＣ−１細胞及びＮＣＩ−Ｈ４６０細胞を回収し、遠心した。およそ５０，０００個（ＨＭＥＣ−１）及び１００，０００個（ＮＣＩ−Ｈ４６０）の細胞を１００μＬの無血清培地に再浮遊させ、各トランスウェルの上のチャンバーに加えた。次いで、種々の濃度のペプチド（２×）を伴った又は伴わない下のチャンバーに４００μＬの無血清培地を加えた。１時間インキュベートした後、２０％の血清を含有する細胞培養培地３００μＬを下のチャンバーに加えて細胞移動を刺激した（ペプチドの最終濃度は１×）。次いでプレートを３７℃にて５％ＣＯ２／９５％空気に４時間（ＨＭＥＣ−１）又は１８時間（ＮＣＩ−Ｈ４６０）に置いた。フィルターの下面に移動した細胞を１０％のホルマリンで３０分間固定し、０．１％のクリスタルバイオレット／２０％のＭｅＯＨで３０分間染色し、ＰＢＳで２回洗浄した。綿棒で拭うことによってフィルターの上側の細胞を機械的に取り除き、移動しなかった細胞をすべて取り除いた。顕微鏡とコンピュータが支援する画像解析（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｅｃｌｉｐｓｅ（商標）ソフトウエア）を用いて５０×の倍率でフィルター当たり４視野について細胞移動を定量した。結果は、未処理の細胞と比べた処理した細胞の細胞移動の比率として表す。
【０１０６】
マトリゲル（商標）プラグ血管形成アッセイ
血管形成は、皮下組織からのマトリゲル（商標）の固形片に向かう血管の増殖によって示されると考えられる。特定の病原体を持たないメスのＣｒｌ：ＣＤ−１（登録商標）−ｎｕＢＲヌードマウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｌａｓａｌｌｅ，ＱＣ）から入手した。使用したマウスはすべて５〜１０週齢だった。注射に先立って、ｂＦＧＦ（２５０ｎｇ／ｍＬ）及びＶＥＧＦ１６５（２００ｎｇ／ｍＬ）と共に又はそれを伴わずにヘパリンを５分間インキュベートし、次いで１ｍＬのＭＥＭを加え、１２．４μｇ／ｍＬのヘパリンの最終濃度について氷上でフェノールレッドを含まないマトリゲル（商標）の中に混合物を希釈した。次いで麻酔下で、特定の病原体を持たないメスのＣｒｌ：ＣＤ−１（登録商標）−ｎｕＢＲヌードマウスの右脇腹に、０．５ｍＬのマトリゲル（商標）のみ又はｂＦＧＦとＶＥＧＦを含有するマトリゲル（商標）を皮下注射した。７日後、マウスを屠殺し、マトリゲル（商標）の埋め込みを回収し、ＰＢＳで洗浄し、写真撮影した。残りの埋め込み物を直ちに凍結し、ヘモグロビン（Ｈｂ）濃度を評価するために一晩凍結乾燥した。抗血管形成の物質の試験は、マトリゲル（商標）の埋め込みの時点で開始した。次いで、試料を粉砕し、０．１％のＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ−１００に再懸濁した。試料を１時間、頻繁に混合し、１２，０００×ｇで１５分間遠心して粒子を取り除いた。次いで上清におけるヘモグロビン（Ｈｂ）濃度を４０５ｎｍでの吸収を測定することによって直接決定し、精製Ｈｂの検量線と比較した。ヘモグロビン含量は乾燥試料のｍｇ当たりのＨｂのμｇで表す。
【０１０７】
異種移植モデルの抗腫瘍アッセイ
ヌードマウスにおける腫瘍細胞の播種のために、トリプシン／ＥＤＴＡ溶液を用いたトリプシン処理によってＵ−８７ＭＧ細胞又はＮＣＩ−Ｈ４６０細胞を回収した。Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋を含まないリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ−ＣＭＦ）で細胞を２回洗浄し、遠心した。得られたペレットを１００μＬ当たり２．５×１０６個の細胞の濃度で無血清ＥＭＥＭ中の１％メチルセルロースに再浮遊させた。Ｏ２／イソフルランの吸入によって、特定の病原体を持たないメスのＣｒｌ：ＣＤ−１（登録商標）−ｎｕＢＲヌードマウスを麻酔し、右脇腹への１００μＬの細胞浮遊液の皮下注射によって腫瘍を定着させた。デジタルキャリパーを用いて週に２回、Ｏ２／イソフルラン麻酔したマウスにて腫瘍を測定し、腫瘍容積をπ／６×長さ×幅２として算出した。対照群のマウスの腫瘍が最初に１０００ｍｍ３に達すると、腫瘍を写真撮影し、各群のマウスを屠殺した。各群８匹の動物で実験を行った。対照のマウスと処理したマウスの体重をモニターすることによって組換えｓＭＴｆ処理の毒性を評価し、＞２０％の体重減が毒性効果を生じると見なした。
【０１０８】
細胞毒性
［メチル−３Ｈ］−チミジンの取り込みアッセイを用いてＨＭＥＣ−１及びＮＣＩ−Ｈ４６０におけるｓＭＴｆ由来のペプチドの細胞毒性を実行した。ｓＭＴｆ由来のペプチドの毒性効果を検討するために、ＨＭＥＣ−１細胞及びＮＣＩ−Ｈ４６０細胞をトリプシン処理によって回収し、遠心した。およそ５０００個の細胞（ＨＭＥＣ−１及びＮＣＩ−Ｈ４６０）を２００μＬの新鮮な培養培地に再浮遊させ、白色の９６穴プレートに播き、３７℃にて５％ＣＯ２９５％空気に置いた。２４時間後、培地を取り除き、２００μＬの無血清培養培地を加えて細胞を同期化させた。さらに２４時間後、培地を取り除き、種々の濃度のペプチドと共に又はペプチドを含まずに２００μＬの新鮮な完全培地を加えた。ペプチドとの２４時間のインキュベート後、培地を取り除き、２００μＬ（０．５μＣｉ）の［メチル−３Ｈ］−チミジンを加え、３７℃にて５％ＣＯ２９５％空気に４時間置いた。次いで３７℃にてＰＢＳでウェルを２回穏やかに洗浄し、２００μＬのＥｔＯＨ：酢酸（３：１）と共に１０分間インキュベートし、フードにて乾燥させた。ウェル当たり５０μＬのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ（商標）−Ｏを加え、プレートを密封し、３分間撹拌し、マイクロプレートシンチレーション及び発光カウンタ（ＴｏｐＣｏｕｎｔ  ＮＸＴ，Ｐａｃｋａｒｄ）にて読み取った。結果は、未処理の細胞と比べた処理した細胞の細胞生存率の比率として表す。
【０１０９】
実施例２：ｕＰＡによるプラスミノーゲン活性化に対するｓＭＴｆ由来のペプチドの効果
図１Ａ及び図１ＢはｕＰＡによるプラスミノーゲン活性化に対するｓＭＴｆ由来のペプチドの刺激効果を説明し、（ｉ）１μＭ及び１０μＭでｓＭＴｆ由来のペプチドを反応に加えるとｕＰＡによるＶＬＫ−ｐＮＡの加水分解が高まること（図１Ａ）及び（ｉｉ）配列番号２のｓＭＴｆ由来のペプチドは用量依存性にｕＰＡによるプラスミノーゲンの切断を刺激すること（図１Ｂ）を示す。
【０１１０】
実施例３：細胞移動に対するｓＭＴｆ由来のペプチドの効果
図２Ａ及び２Ｂは、ｓＭＴｆ由来のペプチドが１０μＭにてＨＭＥＣ−１細胞（図２Ａ）及びＮＣＩ−Ｈ４６０細胞（図２Ｂ）の移動を阻害すること；配列番号２、１３及び１５のｓＭＴｆ由来のペプチドが用量依存性にＨＭＥＣ−１細胞（図２Ｃ）及びＮＣＩ−Ｈ４６０細胞（図２Ｄ）の移動を阻害することを説明する。
【０１１１】
実施例４：腫瘍増殖に対するｓＭＴｆ由来のペプチドの効果
図３Ａ〜３Ｃは、配列番号１０（図３Ａ）、配列番号５（図３Ｂ）及び配列番号９（図３Ｃ）のｓＭＴｆ由来のペプチドが４０ｍｇ／ｋｇ／日にてＮＣＩ−Ｈ４６０腫瘍の増殖を阻害することを説明する。
【０１１２】
図４Ａ及び４Ｂは、配列番号５（図４Ａ）及び配列番号１５（図４Ｂ）のｓＭＴｆ由来のペプチドが４０ｍｇ／ｋｇ／日にてＵ８７腫瘍の増殖を阻害することを説明する。
【０１１３】
図５Ａは、配列番号１０、５、１５及び９のｓＭＴｆ由来のペプチドが４０ｍｇ／ｋｇ／日にてＮＣＩ−４６０腫瘍の増殖をそれぞれ６９％、４５％、３７％及び４２％阻害することを説明し；図５Ｂは、配列番号５及び１５が４０ｍｇ／ｋｇ／日にてＵ８７腫瘍の増殖をそれぞれ３９％及び７４％阻害することを説明する。
【０１１４】
実施例５：配列番号２のｓＭＴｆ由来のペプチドの細胞毒性の評価
図６は、配列番号２のｓＭＴｆ由来のペプチドがＨＭＥＣ−１細胞及びＮＣＩ−Ｈ４６０細胞に対して５０μＭまで細胞毒性を示さないことを説明する。
【０１１５】
実施例６：生体内の血管形成に対するｓＭＴｆ由来のペプチドの効果
図７は、配列番号１５、１３、９、５及び７のｓＭＴｆ由来のペプチドが、増殖因子ＦＧＦ−２及びＶＥＧＦによって誘導された生体内での血管新生を用量依存性に阻害することを説明する。
【０１１６】
本発明はその特定の実施形態のために上文に記載されてきたが、添付のクレームで定義されるような主題の発明の精神及び性質から逸脱することなく、それを改変することができる。クレームでは、単語「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」は制約のない形態として使用され、語句「含むが、これらに限定されない」と実質的に同等である。単数形態「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は文脈が明瞭に述べない限り、相当する複数の参照を含む。
【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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