(57)【要約】  本発明は、一成分として、室温で液体であり、かつ、生理的塩濃度及び／又は生理的温度でゲルであるスラリーマトリックスと、第２の成分として、１種以上の抗原とを含有する、組成物を含む。また、このような組成物の投与により、被検者において免疫応答を誘導する方法、並びに被検者にワクチン接種する方法も含まれる。
2014512385.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一成分として、室温で液体であり、かつ、生理的塩濃度及び／又は生理的温度でゲルであるスラリーマトリックスと、別の成分として、１種以上の抗原とを含有する、組成物。
【請求項２】
前記スラリーマトリックスが、ペプチドヒドロゲル、又はその誘導体を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記スラリーマトリックスが、ペプチドスカフォールドＲＡＤＡＲＡＤＡＲＡＤＡＲＡＤＡ、又はその誘導体のペプチドヒドロゲルを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記ペプチドヒドロゲルが、ＰＵＲＡＭＡＴＲＩＸ、又はその誘導体を含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記スラリーマトリックスが、ＭＡＴＲＩＧＥＬ、又はその誘導体である、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
より多くのアジュバントの１種をさらに含有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
トール様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト及び／又はサイトカインをさらに含有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記ＴＬＲアゴニストが、ＴＬＲ４及び／又はＴＬＲ９アゴニストを含む、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記ＴＬＲ９アゴニストが、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）を含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記抗原が、肝炎抗原、インフルエンザ抗原、住血吸虫症抗原、及び／若しくはバークホルデリア抗原、又はこれらの抗原断片を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
被検者において免疫応答を起こす方法であって、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物を前記被検者に投与するステップを含む、方法。
【請求項１２】
被検者を免疫する方法であって、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物を前記被検者に投与するステップを含む、方法。
【請求項１３】
被検者に１種以上の免疫原性抗原を送達する方法であって、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物を前記被検者に投与するステップを含む、方法。
【請求項１４】
被検者に１種以上の治療用抗原を送達する方法であって、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物を前記被検者に投与するステップを含む、方法。
【請求項１５】
前記被検者が、家畜又はペットである、請求項１１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記被検者が、家禽である、請求項１１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記被検者が、ヒトである、請求項１１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記組成物の投与が、皮下（ｓｃ）注射及び／又は筋内（ｉｍ）注射を含む、請求項１１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記組成物の投与が、初回及び／又は追加ワクチン接種を含む、請求項１１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記組成物の投与が、追加ワクチン接種を含む、請求項１１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記組成物の投与が、ポリペプチドワクチン又はプラスミドＤＮＡワクチンによる初回ワクチン接種後の追加ワクチン接種を含む、請求項１１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
ウシ属の動物において抗住血吸虫免疫応答を起こす方法であって、一成分として、室温で液体であり、かつ、生理的条件でゲルであるスラリーマトリックスと、別の成分として、１種以上の住血吸虫抗原とを含有する組成物を前記ウシ属の動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項２３】
ウシ属の動物において抗住血吸虫免疫を起こす方法であって、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物を前記ウシ属の動物に投与するステップを含み、ここで、１種以上の抗原が、住血吸虫抗原を含む、方法。
【請求項２４】
ウシ属の動物への住血吸虫症ワクチン接種の方法であって、一成分として、室温で液体であり、かつ、生理的条件でゲルであるスラリーマトリックスと、別の成分として、１種以上の住血吸虫抗原とを含有する組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項２５】
ウシ属の動物への抗住血吸虫症ワクチン接種の方法であって、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物を前記ウシ属の動物に投与するステップを含み、ここで、前記１種以上の抗原が、住血吸虫抗原を含む、方法。
【請求項２６】
前記組成物が、１種以上のアジュバントをさらに含有する、請求項２２〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記組成物が、トール様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト及び／又はサイトカインをさらに含有する、請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＴＬＲアゴニストが、ＴＬＲ４及び／又はＴＬＲ９アゴニストを含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＴＬＲ９アゴニストが、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＣｐＧ  ＯＤＮが、ウシＣｐＧを含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記アジュバントが、ＩＬ−１２を含む、請求項２６〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記住血吸虫抗原が、日本住血吸虫抗原、又はその抗原断片を含む、請求項２２〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記住血吸虫抗原が、ＳｊＣＴＰＩポリペプチド、ＳｊＣＴＰＩ−Ｈｓｐ７０ポリペプチド、ＳｊＣ２３ポリペプチド、及び／若しくはＳｊＣ２３−Ｈｓｐ７０ポリペプチド、又はこれらの抗原断片を含む、請求項２２〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記組成物の投与が、初回及び／又は追加ワクチン接種を含む、請求項２２〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
前記組成物の投与が、ＳｊＣＴＰＩ−Ｈｓｐ７０プラスミドＤＮＡワクチンによる初回ワクチン接種後に投与される追加ワクチン接種を含む、請求項２２〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
１種以上の抗住血吸虫化学療法薬の投与をさらに含む、請求項２２〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
住血吸虫による感染の予防に少なくとも４５％の効力を示す、請求項２２〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物を製造する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
継続出願のデータ
本出願は、２０１１年４月１８日に出願された米国仮特許出願第６１／４７６，４３１号明細書の利益を請求する。上記文献は、参照により本明細書に組み込むものとする。
【０００２】
政府出資
本発明は、国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ）により付与された助成金第ＡＩ０７１８３３号及び第ＡＩ０３６６５７号による政府支援を受けて行われた。政府は、本発明に所定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
ワクチンは、依然として感染症に対抗するための唯一最大の公衆衛生上の財産（ｐｕｂｌｉｃ  ｈｅａｌｔｈ  ａｓｓｅｔ）である。ワクチン送達の目的は、抗原提示細胞の活性化、抗原の取込み及びプロセシングを増強するように、ワクチン抗原を賦与することである。別の目的は、特に、単一の有効用量のワクチンが利用可能である場合、有効なワクチン特異的応答を誘導するのに必要なワクチン接種の回数を減らすことである。現行の、従来のワクチン送達方法は、ミョウバンを用いる。ミョウバンなどのアルミニウム塩は、１９２０年代にヒトワクチンのアジュバントとしての使用のために初めて許諾された。送達方法の改善及びワクチン製剤化に使用するための安全なアジュバントが求められている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、一成分として、室温で液体であり、かつ、生理的塩濃度及び／又は生理的温度でゲルであるスラリーマトリックスと、別の成分として、１種以上の抗原とを含有する組成物を含む。本組成物のいくつかの態様では、スラリーマトリックスは、ペプチドヒドロゲルである。いくつかの態様では、ペプチドヒドロゲルは、ＰＵＲＡＭＡＴＲＩＸ、又はその誘導体を含む。いくつかの態様では、ペプチドヒドロゲルは、ペプチドスカフォールドＲＡＤＡＲＡＤＡＲＡＤＡＲＡＤＡ、又はその誘導体を含む。本組成物のいくつかの態様では、スラリーマトリックスは、ＭＡＴＲＩＧＥＬ、又はその誘導体を含む。
【０００５】
本組成物のいくつかの態様では、組成物はさらに、より多くのアジュバントの１種を含有する。いくつかの態様では、アジュバントは、トール様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト及び／又はサイトカインを含む。いくつかの態様では、ＴＬＲアゴニストは、ＴＬＲ４アゴニストを含む。いくつかの態様では、ＴＬＲアゴニストは、ＴＬＲ９アゴニストを含む。いくつかの態様では、ＴＬＲ９アゴニストは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）を含む。
【０００６】
本組成物のいくつかの態様では、組成物はさらに、トール様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト及び／又はサイトカインを含有する。いくつかの態様では、ＴＬＲアゴニストは、ＴＬＲ４アゴニストを含む。いくつかの態様では、ＴＬＲアゴニストは、ＴＬＲ９アゴニストを含む。いくつかの態様では、ＴＬＲ９アゴニストは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）を含む。
【０００７】
本組成物のいくつかの態様では、抗原は、肝炎抗原、インフルエンザ抗原、住血吸虫症抗原、及び／若しくはバークホルデリア（ｂｕｒｋｏｌｄｅｒｉａ）抗原、又はこれらの抗原断片を含む。
【０００８】
本発明は、被検者において免疫応答を起こす方法を包含し、この方法は、本明細書に記載の組成物を被検者に投与するステップを含む。
【０００９】
本発明は、被検者を免疫する方法を包含し、この方法は、本明細書に記載の組成物を被検者に投与するステップを含む。
【００１０】
本発明は、被検者に１種以上の免疫原性抗原を送達する方法を包含し、この方法は、本明細書に記載の組成物を被検者に投与するステップを含む。
【００１１】
本発明は、被検者に１種以上の治療用抗原を送達する方法を包含し、この方法は、本明細書に記載の組成物を被検者に投与するステップを含む。
【００１２】
本発明の方法のいくつかの態様では、被検者は、家畜又はペットである。本発明の方法のいくつかの態様では、被検者は家禽である。本発明の方法のいくつかの態様では、被検者はヒトである。
【００１３】
本発明の方法のいくつかの態様では、本組成物の投与は、皮下（ｓｃ）注射又は筋内（ｉｍ）注射を含む。
【００１４】
本発明の方法のいくつかの態様では、本組成物の投与は、初回及び／又は追加ワクチン接種としての投与を含む。
【００１５】
本発明の方法のいくつかの態様では、本組成物の投与は、ポリペプチドワクチン又はプラスミドＤＮＡワクチンによる、初回ワクチン接種後の追加ワクチン接種としての投与を含む。
【００１６】
本発明は、ウシ属の動物（ｂｏｖｏｉｄ）において抗住血吸虫免疫応答を起こす方法を包含し、この方法は、一成分として、室温で液体であり、かつ、生理的条件でゲルであるスラリーマトリックスと、別の成分として、１種以上の住血吸虫抗原とを含有する組成物をウシ属の動物（ｂｏｖｏｉｄ）に投与するステップを含む。
【００１７】
本発明は、ウシ属の動物（ｂｏｖｏｉｄ）において抗住血吸虫免疫を起こす方法を包含し、この方法は、本明細書に記載の組成物をウシ属の動物（ｂｏｖｏｉｄ）に投与するステップを含み、ここで、１種以上の抗原は、住血吸虫抗原を含む。
【００１８】
本発明は、ウシ属の動物（ｂｏｖｏｉｄ）における住血吸虫症ワクチン接種の方法を包含し、この方法は、一成分として、室温で液体であり、かつ、生理的条件でゲルであるスラリーマトリックスと、別の成分として、１種以上の住血吸虫抗原とを含有する組成物を投与するステップを含む。
【００１９】
本発明は、ウシ属の動物（ｂｏｖｏｉｄ）における抗住血吸虫症ワクチン接種の方法を包含し、この方法は、本明細書に記載の組成物をウシ属の動物（ｂｏｖｏｉｄ）に投与するステップを含み、ここで、１種以上の抗原は、住血吸虫抗原を含む。
【００２０】
本方法のいくつかの態様では、組成物はさらに、１種以上のアジュバントを含有する。いくつかの態様では、アジュバントは、トール様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト及び／又はサイトカインを含む。いくつかの態様では、ＴＬＲアゴニストは、ＴＬＲ４及び／又はＴＬＲ９アゴニストを含む。いくつかの態様では、ＴＬＲ９アゴニストは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）を含む。いくつかの態様では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、ウシＣｐＧを含む。いくつかの態様では、アジュバントは、サイトカインＩＬ−１２である。
【００２１】
本組成物のいくつかの態様では、組成物はさらに、トール様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト及び／又はサイトカインを含有する。いくつかの態様では、ＴＬＲアゴニストは、ＴＬＲ４及び／又はＴＬＲ９アゴニストを含む。いくつかの態様では、ＴＬＲ９アゴニストは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）を含む。本方法のいくつかの態様では、ＣｐＧ  ＯＤＮは、ウシＣｐＧを含む。
【００２２】
本方法のいくつかの態様では、住血吸虫抗原は、日本住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）抗原、又はその抗原断片を含む。
【００２３】
本方法のいくつかの態様では、住血吸虫抗原は、ＳｊＣＴＰＩポリペプチド、ＳｊＣＴＰＩ−Ｈｓｐ７０ポリペプチド、ＳｊＣ２３ポリペプチド、及び／若しくはＳｊＣ２３−Ｈｓｐ７０ポリペプチド、又はこれらの抗原断片を含む。
【００２４】
本方法のいくつかの態様では、組成物の投与は、初回及び／又は追加ワクチン接種としての投与を含む。
【００２５】
本方法のいくつかの態様では、組成物の投与は、ＳｊＣＴＰＩ−Ｈｓｐ７０プラスミドＤＮＡワクチンによる、初回ワクチン接種後の追加ワクチン接種としての投与を含む。
【００２６】
本方法のいくつかの態様では、本方法は、１種以上の抗住血吸虫化学療法薬の投与をさらに含む。
【００２７】
本方法のいくつかの態様では、本方法は、住血吸虫による感染の予防に少なくとも４５％の効力を示す。
【００２８】
本発明は、本明細書に記載する組成物を製造する方法を包含する。
【００２９】
「及び／又は」という用語は、列挙した要素の１つ若しくは全て、又は列挙した要素のいずれか２つ以上の組合せを意味する。
【００３０】
「好ましい」及び「好ましくは」という語は、特定の状況下で、特定の利益を与えうる本発明の実施形態を指す。しかし、同じ若しくは他の状況下で、他の実施形態もまた好ましい場合もある。さらに、１つ以上の好ましい実施形態を挙げる場合、他の実施形態が有用ではないことを意味するわけではなく、本発明の範囲から他の実施形態を排除することを意図するものではない。
【００３１】
用語「含む」及びその変形は、これらの用語が、説明及び特許請求の範囲に記載される場合、限定的意味を有するわけではない。
【００３２】
別途記載のない限り、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、「その（ｔｈｅ）」及び「少なくとも１つの」は、置換え可能に用いられ、１つ以上を意味する。
【００３３】
また、本明細書では、終点による数値範囲の記載は、その範囲内に組み込まれる全ての数（例えば、１〜５は、１、１．５、２、２．７５、３、３．８０、４、５、など）を含む。
【００３４】
値の範囲が与えられる場合、別途明示されていない限り、その範囲の上限と下限の間に介在する、下限の単位の１０分の１までの値の各々、並びに表示される範囲内のその他のいずれの表示値、又は介在する値も本発明に包含されることは理解されたい。表示範囲に除外される範囲が明示されている場合には、より小さい範囲の上限及び下限は、独立して、これら小さい範囲に含まれ、また、本発明にも含まれうる。表示範囲が、両側限界の一方又は両方を含む場合、その含まれる両側限界のいずれか一方又は両方を除いた範囲も本発明に含まれる。
【００３５】
個別のステップを含む、本明細書に開示される全ての方法について、ステップは、いずれの実現可能な順で実施してもよい。また、必要に応じて、２つ以上のステップの任意の組合せを同時に行ってもよい。
【００３６】
以上述べた本発明の概要は、本発明の各々開示される実施形態又はすべての実施を説明することを意図するものではない。以下に示す説明によって、例としての実施形態をさらに具体的に例示する。本願全体を通じて数か所で、例を列挙するリストから指標が提供されるが、これらの例は様々な組合せで用いることができる。各ケースにおいて、記載するリストは、代表群として用いられるに過ぎず、限定的リストとして解釈すべきではない。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】ＩｇＡ抗ＨＢｓＡｇ抗体力価の動態を示す。示すデータは、総ｎ＝１０の２つの独立した実験からプールしたものである。
【図２】ＩｇＭ抗ＨＢｓＡｇ抗体力価の動態を示す。示すデータは、総ｎ＝１０の２つの独立した実験からプールしたものである。
【図３】ＩｇＧ抗ＨＢｓＡｇ抗体力価の動態を示す。示すデータは、総ｎ＝１０の２つの独立した実験からプールしたものである。
【図４】ＩｇＧ1抗ＨＢｓＡｇ抗体力価の動態を示す。示すデータは、総ｎ＝１０の２つの独立した実験からプールしたものである。
【図５】ＩｇＧ2a抗ＨＢｓＡｇ抗体力価の動態を示す。示すデータは、総ｎ＝１０の２つの独立した実験からプールしたものである。
【図６】単回ワクチン接種後（２１日）のより高い抗ＨＢｓＡｇ抗体力価を示す。示すデータは、総ｎ＝１０の２つの独立した実験からプールしたものであり；ボンフェローニ（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）事後検定を含む２元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用い、抗原単独と比較して、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊ｐ＜０．０００１である。
【図７】単回ワクチン接種後（３５日）のより高い抗ＨＢｓＡｇ抗体力価を示す。示すデータは、総ｎ＝１０の２つの独立した実験からプールしたものであり；ボンフェローニ（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）事後検定を含む２元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用い、抗原単独と比較して、＊ｐ＜０．０５である。
【図８】脾細胞のＨＢｓＡｇ再刺激から２４時間後のサイトカインプロフィールを示す。示すデータは、１つの実験、総ｎ＝５の代表的なものであり；ボンフェローニ（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）事後検定を含む２元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用い、抗原単独と比較して、＊ｐ＜０．０５、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１である。
【図９】脾細胞のＨＢｓＡｇ再刺激から４８時間後のサイトカインプロフィールを示す。示すデータは、総ｎ＝１０（アジュバントのみの場合、ｎ＝５）の２つの独立した実験からプールしたものであり；ボンフェローニ（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）事後検定を含む２元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用い、抗原単独と比較して、統計的有意差はみとめられなかった（ｐ＜０．０５）。
【図１０】脾細胞のＨＢｓＡｇ再刺激から７２時間後のサイトカインプロフィールを示す。示すデータは、総ｎ＝１０（アジュバントのみの場合、ｎ＝５）の２つの独立した実験からプールしたものであり；ボンフェローニ（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）事後検定を含む２元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用い、抗原単独と比較して、＊＊ｐ＜０．０１である。
【図１１】ＨｂｓＡｇ特異的Ｔ細胞性応答において、ＥＬＩＳｐｏｔによるＨＢｓＡｇ特異的細胞性免疫の増大を示す。示すデータは、総ｎ＝１０の２つの独立した実験からプールしたものであり；ボンフェローニ（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）事後検定を含む２元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用い、抗原単独と比較して、＊ｐ＜０．０５である。
【図１２】フローサイトメトリーによるＨＢｓＡｇ特異的Ｔ細胞性免疫の増大を示す。示すデータは、総ｎ＝１０の２つの独立した実験からプールしたものであり；ボンフェローニ（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）事後検定を含む２元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用い、抗原単独と比較して、＊＊ｐ＜０．０１である。
【図１３】初回接種から２４時間後の免疫マウス（ｎ＝１０／グループ）からの様々な細胞サブセットにおけるｅｘ  ｖｉｖｏサイトカインバランスの優勢を示すレーダグラフである。軸の値をつないで、中央の多角形面積を形成することができ、これは、全体的サイトカインバランスを表している。レーダチャート軸の分析から、サイトカインバランス全体に対する白血球の寄与が明らかである。
【図１４Ａ−Ｂ】初回接種から４８時間後の免疫マウス（ｎ＝１０／グループ）からの様々な細胞サブセットにおけるｅｘ  ｖｉｖｏサイトカインバランスの優勢を示すレーダグラフである。図１４Ａは、ＴＮＦ及びＩＦＮγを表す。図１４Ｂは、ＩＬ−５及びＩｌＬ−４を表す。各軸は、各サイトカインバランスカテゴリーの割合を示す。各軸の値をつないで、中央の多角形面積を形成することができ、これは、全体的サイトカインバランスを表している。中央の多角形面積の増加又は減少が、各グループにおける炎症性又は調節サイトカインバランスの高い又は低い寄与を表している。
【図１５】初回接種から７２時間後の免疫マウス（ｎ＝１０／グループ）からの様々な細胞サブセットにおけるｅｘ  ｖｉｖｏサイトカインバランスの優勢を示すレーダグラフである。軸の値をつないで、中央の多角形面積を形成することができ、これは、全体的サイトカインバランスを表している。レーダチャート軸の分析から、サイトカインバランス全体に対する白血球の寄与が明らかである。
【図１６Ａ−Ｄ】初回接種から１４〜３５日後の免疫マウス（ｎ＝１０／グループ）において誘導したｒＨｅｐＢａｇ特異的抗体の比較を示す。初回免疫から２８日後に追加免疫を実施し、ｒＨｅｐＢａｇ特異的抗体レベルをＥＬＩＳＡアッセイにより決定した。図１６Ａは、１４日からのデータ、図１６Ｂは、２１日からのデータ、図１６Ｃは、２８日からのデータ、図１６Ｄは、３５日からのデータをそれぞれ示す。ｐ≦０．０５の統計的有意性は、ｒＨｅｐＢａｇ、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）中のｒＨｅｐＢａｇ及びフロイント中のｒＨｅｐＢａｇとの比較について、添え字「ａ」、「ｂ」及び「ｃ」でそれぞれ表す。
【図１７Ａ−Ｄ】ｒＨｅｐＢａｇ＋アジュバントによるマウス（ｎ＝１０／グループ）の免疫から１４〜３５日後のＩｇＧ１：ＩｇＧ２ａ比を示す。初回免疫から２８日後に追加免疫を実施し、ｒＨｅｐＢａｇ特異的抗体レベルをＥＬＩＳＡアッセイにより決定した。図１７Ａは、１４日からのデータ、図１７Ｂは、２１日からのデータ、図１７Ｃは、２８日からのデータ、図１７Ｄは、３５日からのデータをそれぞれ示す。
【図１８Ａ−Ｂ】ｒＮＰをワクチン接種した２つの系列のマウスにおける抗ＮＰ  ＩｇＧ力価の増加を示す。図１８Ａは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの力価を示す。図１８Ｂは、Ｂａｌｂ／ｃマウスの力価を示す。血清は、最後のワクチン接種から４週間後に採取した（４ｗｐｌｖ）。
【図１９Ａ−Ｂ】ＰＲ８ＷＩＶをワクチン接種したＣ５７Ｂｌ／６マウスにおける抗インフルエンザＩｇＧ力価の増加を示す。図１９Ａ及び図１９Ｂは、２つの独立した実験からの結果を示す。血清は、最後のワクチン接種から４週間後に採取した（４ｗｐｌｖ）。
【図２０Ａ−Ｂ】ＰＲ８ＷＩＶをワクチン接種したＣ５７Ｂｌ／６マウスにおける致死的攻撃からの防御の増加を示す。図２０Ａは、３０ＬＤ50での致死的攻撃による独立した実験からの結果を示す。図２０Ｂは、１０００ＬＤ50での致死的攻撃による独立した実験からの結果を示す。
【図２１Ａ−Ｃ】３つの異なるアジュバント（ミョウバン、ＣＦＡ、又はＰＵＲＡＭＴＲＩＸゲル）を含む３つの組換えバークホルディアタンパク質抗原のカクテルで免疫したマウスにおける抗バークホルディアＩｇＧ力価の増加を示す。図２１Ａは、免疫マウスにおける抗バークホルディアタンパク質４−９ＩｇＧ力価を示す。図２１Ｂは、免疫マウスにおける抗バークホルディアタンパク質２２−１１ＩｇＧ力価を示す。図２１Ｃは、免疫マウスにおける抗バークホルディアタンパク質４２ＩｇＧ力価を示す。
【図２２Ａ−２２Ｂ】完全フロイントアジュバント中のＣＣＡ（図２２Ａ）及びＭＡＴＲＩＧＥＬ＋ＣｐＧ中のＣＣＡ（図２２Ｂ）で免疫したマウスにおけるＩｇＧ抗住血吸虫ＣＣＡタンパク質抗体力価を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
本発明は、ワクチン投与の部位での抗原の改善された局所的かつ持続的送達をもたらし；抗原提示細胞活性化、並びに抗原の取込み及びプロセシングを増強する、改善されたワクチン送達を達成する組成物及び方法を提供する。本発明では、１種以上の免疫原性物質を、室温及び／又は低塩濃度で液体であり、かつ、生理的塩濃度及び／又は生理的温度でゲルであるスラリーマトリックス成分を含む組成物中で投与する。ゲル化は、哺乳動物又は鳥類などの脊椎動物の生理的体温によって誘導することができる。このような温度は、例えば、少なくとも約２５℃、少なくとも約３０℃、少なくとも約３２℃、少なくとも約３５℃、少なくとも約３７℃、少なくとも約３９℃、又は少なくとも約４０℃であってよい。ゲル化は、生理的塩濃度により誘導されうる。いくつかの実施形態では、ゲル化は、塩のミリモル濃度の存在下で、例えば、約０．０５モル（Ｍ）より高い塩濃度によって、ありうる。
【００３９】
従って、ワクチン組成物は、被検者への投与後、ゲル化又は重合して、単一部位にワクチン抗原を局在化させ、ここに自然抗原提示細胞が向かい、ワクチン抗原の取込みを開始することができる。理想的には、スラリーマトリックスは、生体適合性材料であり、体液又は組織との接触により身体に不要な反応、例えば、組織の死滅、腫瘍形成、アレルギー反応、異物反応（拒絶）、炎症性反応、抗体応答、又は血液凝固を誘導することはない。スラリーマトリックスは、本明細書では、「医用ポリマーヒドロゲル」、「医用ヒドロゲル」、「医用ポリマー」、「ポリマーヒドロゲル」、「生体適合性ポリマーヒドロゲル」、「生体適合性ヒドロゲル」、「生体適合性ポリマー」、又は「ヒドロゲル」と呼ばれる場合もある。本明細書で用いる場合、「ヒドロゲル」は、架橋した親水性高分子の３次元網目状構造であり、膨潤することができ、約２０重量％〜約９５重量％の水を含有することができる。ヒドロゲルは、その液体成分が水のゲルである。本明細書で用いる場合、ゲルは、固体のゼリー様物質であり、軟質及び脆弱から硬質及び強靭まで幅広い特性を有するものあってよい。ゲルは、実質的に希薄な架橋系であり、定常状態では、流動性を全く呈示しない。重量では、ゲルはほぼ液体であるが、液体内の３次元網目状構造のために、固体のように挙動する。ゲルにその構造（硬さ）を付与するのは、流体内の架橋である。このようにして、ゲルは、固体内での液体の分子の分散系であり、ここで、固体は連続相であり、液体は不連続相である。ヒドロゲルは、親水性のポリマー鎖の網目構造であり、水を分散媒とするコロイドゲルとして存在する場合もある。ヒドロゲルは、高度に吸収性（９９．９％超の水を含有しうる）の天然又は合成ポリマーである。ヒドロゲルは、また、その有意な水分のために、天然の組織と非常によく似た柔軟度を有する。
【００４０】
医療技術での用途に利用可能な、多様な医用ポリマーヒドロゲルのいずれを本明細書に記載の方法及び組成物に用いてもよい。
【００４１】
いくつかの実施形態では、スラリーマトリックスは、天然に存在するものであり、例えば、フィブリン、コラーゲン、エラスチン、アガロース、メチルセルロース、ヒアルロナン、及びその他の天然に由来するポリマーがある。いくつかの実施形態では、スラリーマトリックスは、ＭＡＴＲＩＧＥＬ、又はその誘導体である。ＭＡＴＲＩＧＥＬは、マウス細胞由来の基底細胞膜抽出物であり、ラミニン、コラーゲンＩＶ、エンタクチン、ニドゲン、及びプロテオグリカンを含有する。ＭＡＴＲＩＧＥＬへの腫瘍細胞の侵入が、腫瘍進行及び侵入における、細胞外マトリックス受容体及びマトリックス分解酵素の関与を研究するのに用いられており、また、ＭＡＴＲＩＧＥＬは、血管新生及び抗血管新生サイトカイン並びにその他の物質の活性を研究するための、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏ血管新生モデル（ＭＡＴＲＩＧＥＬプラグアッセイ）としても用いられている。ＭＡＴＲＩＧＥＬは、ＢＤ  Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）Ｍａｔｒｉｘとして市販されている。ワールドワイドウェブサイト：ｂｄｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ．ｃｏｍ／ｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅ／ｅｃｍ／ｅｃｍｔｙｐｅｓ／ｉｎｄｅｘ．ｊｓｐを参照されたい。
【００４２】
いくつかの実施形態では、スラリーマトリックスは合成であり、例えば、合成ペプチドヒドロゲル又は自己集合ペプチド（ｓａペプチド）スカフォールドなどがある。ｓａペプチドスカフォールドは、生理学的条件下でイオン性自己相補性βシートオリゴペプチドの自発的集合によって形成され、ヒドロゲル物質を生成する。これらの短いペプチド（約８、約１２、約１６、約２４、又は約３２アミノ酸残基で、典型的には、内部に反復配列を含む）は、塩類水溶液中で３次元マトリックスに自己集合する。これらのペプチドは、両親媒性として特徴付けられ、相補性及び構造的に適合性の疎水性及び親水性アミノ酸残基；１２アミノ酸超、好ましくは少なくとも１６アミノ酸を交互に有する。相補性とは、イオン化した対及び／又はそれらの親水性側鎖同士の間に形成される水素結合を介して、相互作用するペプチドの能力を指し、また、構造的に適合性とは、相補的ペプチド同士が、そのペプチド骨格同士の間に定距離を維持する能力を指す。これらの特性を有するペプチドは、分子間相互作用に参加し、これによって、二次構造レベルで、βシートの、また、三次構造レベルで、織り合わされたフィラメントの形成及び安定化がもたらされる。例として、限定するものではないが、ペプチドファミリーメンバー、ＲＡＤ１６−Ｉ（（ＲＡＤＡ）（４））、ＲＡＤ１６−ＩＩ（（ＲＡＲＡＤＡＤＡ）（２））、ＫＦＥ−８（（ＦＫＦＥ）（２））、又はＫＬＤ−１２（（ＫＬＤＬ）（３））が挙げられる。例えば、以下の文献を参照されたい：米国特許第５，６７０，４８３号明細書；Ｈｏｌｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ；９７（１２）：６７２８−３３；Ｙｏｋｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ；１０２（２４）：８４１４−９；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｎａｎｏｓｃａｌｅ；４（８）：２７２０−７、及びＢＤ  ＰｕｒａＭａｔｒｉｘ（商標）Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｈｙｄｒｏｇｅｌ，Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  Ｕｓｅ，Ｃａｔａｌｏｇ  Ｎｕｍｂｅｒ ３５４２５０（ＳＰＣ−３５４２５０−Ｇ  ｒｅｖ  ２．０；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）。いくつかの実施形態では、ペプチドヒドロゲルは、アルギニン−アラニン−アスパラギン酸−アラニン（ＲＡＤＡ）のペプチドスカフォールド自己集合ビルディングブロックを含む。いくつかの実施形態では、ペプチドヒドロゲルは、ＲＡＤＡＲＡＤＡＲＡＤＡＲＡＤＡ、又はその誘導体を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドヒドロゲルは、ＰＵＲＡＭＡＴＲＩＸ、又はその誘導体を含む。例えば、以下の文献を参照されたい：米国特許第５，６７０，４８３号明細書；Ｈｏｌｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ；９７（１２）：６７２８−３３；Ｙｏｋｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ；１０２（２４）：８４１４−９；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｎａｎｏｓｃａｌｅ；４（８）：２７２０−７、及びＢＤ  ＰｕｒａＭａｔｒｉｘ（商標）Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｈｙｄｒｏｇｅｌ，Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  Ｕｓｅ，Ｃａｔａｌｏｇ  Ｎｕｍｂｅｒ ３５���２５０（ＳＰＣ−３５４２５０−Ｇ  ｒｅｖ  ２．０；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）。これらの文献の各々は、その全文を本明細書に参照として組み込むものとする。
【００４３】
いくつかの実施形態では、医用ポリマーヒドロゲルは、ｉｎ  ｖｉｖｏで自然に重合するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ヒドロゲルであってもよい。
【００４４】
いくつかの実施形態では、スラリーマトリックスは、脊椎動物若しくは哺乳動物の体温及び／又は生理的塩濃度でのゲル化に加えて、時間経過と共に、分解及び溶解する生体再吸収性合成ポリマーである。こうした化合物は、加水分解によって体内で自然に分解され、水溶性モノマーとして吸収される。例として、以下のものが挙げられる：ポリ乳酸、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（Ｌ−乳酸）、ポリ−Ｄ−ラクチド、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリグリコリド並びに乳酸とのそのコポリマー（ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）、乳酸及びグリコール酸のホモ−及びコポリマー、ポリ（ＤＬ−乳酸／グリシン）コポリマー、ポリ（ＤＬ−乳酸−コ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリ（ＤＬ−乳酸−コ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、多孔性ポリ（ＤＬ−乳酸−コ−グリコール酸）フォーム、ポリ（アミノ酸）ポリ［オクス（１−オキソ−１，２−エタンジル）］（（Ｃ2Ｈ2Ｏ2）n；Ｂｉｏｖｅｋ）、ポリ（グリコリド−コ−カプロラクトン）、ポリ（グリコリド−コ−トリメチレンカルボネート）、ポリジオキサノン（ＰＤＯ、ＰＤＳ）、ポリ−ｐ−ジオキサノン、カプロラクトン（２−オキセパノンとも呼ばれる）、エプシロン−カプロラクトン、６−ヘキサノラクトン、ヘキサノ−６−ラクトン、１−オキサ−２−オキソシクロヘプタンポリグラクチン９１０、ポリ無水物、並びにポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸−コ−グリコール酸、８８：１２）（ＰＬＧＡ）から、又はＰＬＧＡとポリ（Ｌ−乳酸）（ＰＬＬＡ）の５０／５０（ｗ／ｗ）ブレンドから形成されるポリオルトエステルフィルム。例えば、Ｓｃｈａｋｅｎｒａａｄ及びＤｉｊｋｓｔｒａ，１９９１，Ｃｌｉｎ  Ｍａｔｅｒ；７（３）：２５３−６９；Ｍｏｏｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｍａｔｅｒ  Ｒｅｓ；３７（３）：４１３−２０；及びＬｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ；２１（１８）：１８３７−４５を参照されたい。
【００４５】
本発明の組成物は、１種以上の抗原物質（本明細書では、免疫原とも呼ぶ）を含む。抗原物質は、被検者に免疫応答を誘発するために、被検者に投与される多種多様な物質のいずれであってもよい。抗原物質は、病原体由来の免疫原であってもよい。抗原物質は、例えば、ペプチド又はタンパク質抗原、ウイルス抗原若しくはポリペプチド、不活性化ウイルス、組換えウイルス、細菌若しくは寄生体抗原、不活性化細菌若しくは寄生体、全細胞、遺伝子改変細胞、腫瘍関連抗原若しくは腫瘍細胞、又は炭水化物抗原であってよい。いくつかの用途では、抗原は、生存細胞ではない。いくつかの実施形態では、抗原物質は、可溶性抗原である。
【００４６】
本明細書に記載する組成物は、抗原物質として、ワクチン成分として利用可能な多種多様な免疫原性物質のいずれを含んでもよい。このようなワクチンとして、限定するものではないが、様々な感染性、ウイルス性、及び寄生体性疾患に向けられる抗原ワクチン成分、並びに抗腫瘍ワクチン成分が挙げられる。抗腫瘍ワクチンとしては、限定するものではないが、ペプチドワクチン、全細胞ワクチン、遺伝子改変全細胞ワクチン、組換えタンパク質ワクチン、又は組換えウイルスベクターによる腫瘍関連抗原の発現に基づくワクチンがある。いくつかの実施形態では、抗原物質は、可溶性抗原である。
【００４７】
抗原物質は、例えば、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｏｌｉｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、Ａ型又はＢ型インフルエンザウイルス、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）抗原（例えば、ＰＡなど）に由来する細菌抗原を含む。
【００４８】
抗原物質は、例えば、マラリア原虫又は住血吸虫に由来する寄生体抗原を含む。マラリア抗原としては、限定するものではないが、以下：プラスモジウム（ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）種：三日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘ）、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、及びサルマラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｋｎｏｗｌｅｓｉ）、卵形マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｏｖａｌｅａｎｄ）、並びに四日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｍａｌａｒｉａｅ）由来の抗原が挙げられる。住血吸虫としては、限定するものではないが、日本住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）、マンソン住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍｏｎｓｏｎｉ）、及びビルハルツ住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ）が挙げられる。住血吸虫抗原は、住血吸虫トリオースリン酸イソメラーゼ（ＣＴＰＩ）タンパク質、又はその抗原断片若しくは誘導体であってよく、限定するものではないが、日本住血吸虫（Ｓ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）、マンソン住血吸虫（Ｓ．ｍｏｎｓｏｎｉ）、及びビルハルツ住血吸虫（Ｓ．ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ）ＣＴＰＩタンパク質、又はその抗原断片若しくは誘導体がある。住血吸虫抗原は、住血吸虫テトラスピン２３ｋＤａ内在性膜タンパク質（Ｃ２３）、又はその抗原断片若しくは誘導体であってもよく、限定するものではないが、日本住血吸虫（Ｓ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）、マンソン住血吸虫（Ｓ．ｍａｎｓｏｎｉ）、若しくはビルハルツ住血吸虫（Ｓ．ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ）Ｃ２３タンパク質、又はその抗原断片若しくは誘導体がある。こうした住血吸虫抗原は、１つ以上の別の抗原決定基と融合したキメラポリペプチド、例えば、熱ショックタンパク質、又はその抗原断片若しくは誘導体であってもよく、限定するものではないが、ウシ熱ショックタンパク質７０（Ｈｓｐ７０）がある。住血吸虫抗原として、例えば、ＳｊＣＴＰＩ、ＳｊＣＴＰＩ−Ｈｓｐ７０、ＳｊＣ２３、及びＳｊＣ２３−Ｈｓｐ７０ポリペプチドが挙げられる。抗原は、限定するものではないが、キネトプラスチド原生動物、例えば、ブラストクリティディア（Ｂｌａｓｔｏｃｒｉｔｈｉｄｉａ）、クリティディア（Ｃｒｉｔｈｉｄｉａ）、エンドトリパヌム（Ｅｎｄｏｔｒｙｐａｎｕｍ）、ヘルペトモナス（Ｈｅｒｐｅｔｏｍｏｎａｓ）、リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）、レプトモナス（Ｌｅｐｔｏｍｏｎａｓ）、フィトモナス（Ｐｈｙｔｏｍｏｎａｓ）、トリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ）、及びワラセイナ（Ｗａｌｌａｃｅｉｎａ）属の原生動物などの、他の様々な寄生体のいずれであってもよい。好ましい実施形態では、原生動物は、限定するものではないが、クルーズトリパノソーマ（Ｔ．ｃｒｕｚｉ）、ブルーストリパノソーマ（Ｔ．ｂｒｕｃｅｉ）、ガンビアトリパノソーマ（Ｔ．ｂ．ｇａｍｂｉｅｎｓｅ）、及びローデシアトリパノソーマ（Ｔ．ｂ．ｒｈｏｄｅｓｉｅｎｓｅ）などのトリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ）属のものである。いくつかの実施形態では、原生動物は、限定するものではないが、例えば、大型リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｍａｊｏｒ）などの��ーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）属のものである。トリパノソーマに関連する重要な疾患としては、トリパノソーマ症（トリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ）の種に起因するアフリカ睡眠病及びシャーガス病）及びリーシュマニア症（リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）の種に起因する）がある。
【００４９】
抗原物質は、例えば、Ｃ型肝炎、Ｂ型肝炎、若しくはＡ型肝炎のような肝炎、インフルエンザ、例えば、Ｍ２、赤血球凝集素、及び／又はＡ型インフルエンザ（限定するものではないが、Ｈ５Ｎ１及びＨ１Ｎ１サブタイプなど）、Ｂ型インフルエンザ、及びＣ型インフルエンザなどのインフルエンザウイルスのノイラミニダーゼタンパク質、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、狂犬病、パピローマウイルス、麻疹、風疹、水痘、ロタウイルス、ポリオ、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、並びにマイナス鎖ＲＮＡウイルス、例えば、パラミクソウイルス（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）科のウイルスに由来するウイルス抗原を含む。パラミクソウイルス（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）科のウイルスの例として、限定するものではないが、ヒトパラインフルエンザウイルス１型、ヒトパラインフルエンザウイルス２型、ヒトパラインフルエンザウイルス３型、ヒトパラインフルエンザウイルス４型、パラインフルエンザウイルス５型、流行性耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、ヒトメタニューモウイルス、ヒト呼吸器合胞体ウイルス、ウシ呼吸器合胞体ウイルス、ギュウエキウイルス  イヌジステンパーウイルス、アザラシジステンパーウイルス、ニューカッスル病ウイルス、トリニューモウイルス、小反芻獣疫ウイルス（ＰＰＲＶ）、センダイウイルス、メナングルウイルス、ツパイアパラミクソウイルス、ティオマンウイルス、ツホコウイルス（Ｔｕｈｏｋｏｖｉｒｕｓ）１、ツホコウイルス（Ｔｕｈｏｋｏｖｉｒｕｓ）２、ツホコウイルス（Ｔｕｈｏｋｏｖｉｒｕｓ）３、ヘンドラウイルス、ニパウイルス、フェルドランスウイルス、ナリバウイルス、サレム（Ｓａｌｅｍ）ウイルス、Ｊウイルス（Ｊ  ｖｉｒｕｓ）、モスマン（Ｍｏｓｓｍａｎ）ウイルス、及びベイロング（Ｂｅｉｌｏｎｇ）ウイルスが挙げられる。
【００５０】
抗原物質は、家禽に伝染性の病原体に由来する１種以上の免疫原を含んでもよい。このような免疫原は、例えば、伝染性気管支炎ウイルス（ＩＢＶ）、ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）、マレック病（ＭＤＶ）、伝染性ファブリキウス嚢病ウイルス（ＩＢＤ）、伝染性喉頭気管炎（ＩＬＴ）、トリレオウイルス、コレラ、鶏痘、マイコプラズマ症、シチメンチョウ及びニワトリコリーザ、トリインフルエンザ、トリ脳脊髄炎（ＡＥ）、トリ鼻気管炎（ＡＲＴ）、アヒル肝炎ウイルス、出血性腸炎、ガチョウパルボウイルス、パラミクソウイルス３、ニワトリ貧血ウイルス（ＣＡＶ）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、丹毒（Ｅｒｙｓｉｐｅｌａｓ）、リエメレラ（Ｒｅｉｍｅｒｅｌｌａ）、マイコプラズマ・ガリセプティクム（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｇａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍ）、パスツレラ・ムルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、サルモネラ・エンテリティディス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、コクシジウム病、産卵低下症候群（ＥＤＳ）ウイルス、シチメンチョウ鼻気管炎ウイルス（ＴＲＴＶ）、並びにポックスウイルスに由来するものでもよい。
【００５１】
抗原物質は、ウシ属の動物（ｂｏｖｏｉｄｓ）、例えば、限定するものではないが、畜牛、スイギュウ、アフリカスイギュウ、アメリカバイソン、及びヤクに感染性の病原体に由来する１種以上の免疫原を含んでもよい。このような免疫原は、例えば、限定するものではないが、ＢＶＤＶＩ型及びＩＩ型などのウシ呼吸器疾患（ＢＲＤ）ワクチン、限定するものではないが、潜伏ウイルスを発生しないサブユニットワクチンなどのウシヘルペスウイルス（ＢＨＶ−１）ワクチン、ウシヘモフィルス・ソムナス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｓｏｍｎｕｓ）ワクチン、マンヘミア・ヘモリチカ（Ｍａｎｎｈｅｉｍｉａ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）ワクチン、ウシマイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｂｏｖｉｓ）ワクチン、ウシロタウイルスワクチン、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）Ｋ９９ワクチン、ウシコロナウイルス（ＢＣＶ)ワクチン、クロストリジウム・シャボイ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｃｈａｕｖｏｅｉ）（黒脚症）ワクチン、クロストリジウム・セプチカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｅｐｔｉｃｕｍ）ワクチン、クロストリジウム・ソルデリ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｏｒｄｅｌｌｉ）（悪性浮腫）ワクチン、クロストリジウム・ノビイ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｎｏｖｙｉ）（黒色病）ワクチン、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）（腸内毒素中毒）ワクチン、限定するものではないが、ウシモラクセラ菌（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｂｏｖｉｓ）、クラミジア、マイコプラズマ、アコレプラズマなどの伝染性ウシ角結膜炎（流行性結膜炎）ワクチン、又は伝染性ウシ鼻気管炎（ＩＢＲ）ウイルスワクチン、限定するものではないが、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）Ｊ５ワクチンなどの乳腺炎ワクチンに由来するものでよい。
【００５２】
抗原物質は、ブタに伝染性の病原体、例えば、限定するものではないが、ブタサーコウイルス２型（ＰＣＶ２）、ブタ繁殖・呼吸障害症候群（ＰＲＲＳＶ）、呼吸器病マイコプラズマ、ブタ連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｕｉｓ）、ブタコロナウイルス、ロタウイルス、腸管毒素原性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）（Ｋ８８）、アクチノバチルス・プルロニューモニア（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａ）（ＡＰＰ）、及びブタインフルエンザに由来する１種以上の免疫原を含んでよい。
【００５３】
抗原物質は、ほぼ遍在性のグラム陰性、運動性、無条件的好気性桿菌群である、バークホルディア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）属に由来する１種以上の免疫原を含んでもよく、これらには、動物／ヒト及び植物両方の病原体、並びにいくつかの環境的に重要な種が含まれる。バークホルディア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）は、その病原性メンバーについてよく知られている。鼻疽菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｍａｌｌｅｉ）は、馬鼻疽（主に、ウマ及び近縁動物に起こる疾患）の原因となる。類鼻疽菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ）は、類鼻疽（ホイットモア病とも呼ばれる）（特に東南アジア及びオーストラリア北部における、主として熱帯気候の伝染病であり、ヒト又は動物に感染しうる）の原因因子である。セパシア菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ）は、嚢胞性線維症を伴う、人における肺感染症の重要な病原体である。その抗体耐性、及びそれらの関連疾患の高い致死率のために、鼻疽菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｍａｌｌｅｉ）及び類鼻疽菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ）は、家畜及びヒトを標的とする潜在的生物兵器であるとみなされている。バークホルディア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）抗原としては、例えば、３つのバークホルディア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）組換えタンパク質（バークホルディア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）４−９タンパク質、バークホルディア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）２２−１１タンパク質、及びバークホルディア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）４２タンパク質）のいずれかを含む。このようなバークホルディア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）抗原は、個別に投与してもよいし、又は、２つ若しくは３つの抗原のカクテルとして投与してもよい。
【００５４】
抗原物質は、現在、麻疹−流行性耳下腺炎−風疹（ＭＭＲ）及び麻疹−流行性耳下腺炎−風疹−水痘（ＭＭＲＶ）の混合ワクチンに用いられている抗原物質の１種以上であってもよい。
【００５５】
いくつかの実施形態では、抗原物質は、ポリヌクレオチドワクチンである。すなわち、抗原物質は、プラスミドなどのベクター構築物として送達され、被検者に送達されると、ポリペプチド抗原の発現を引き起こす。本明細書で用いる場合、「ポリヌクレオチド」は、リボヌクレオチド又はデオキシヌクレオチドのいずれかの、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態であり、二本鎖及び一本鎖ＲＮＡ及びＤＮＡの両方を含む。ポリヌクレオチドは、天然の供給源から直接得ることができ、あるいは、組換え、酵素、又は化学的技法を用いて作製することもできる。ポリヌクレオチドは、線状又は環状のいずれの形状とすることもできる。ポリヌクレオチドは、例えば、発現若しくはクローン化ベクターなどのベクターの一部、又は断片であってもよい。ポリヌクレオチドは、例えば、コード領域、及び調節領域のような非コード領域などの様々な機能を有するヌクレオチド配列を含んでもよい。任意の好適なベクター又は送達ベクターを用いることができる。様々なベクターが一般に入手可能である。ベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス粒子、又はファージの形態であってよい。ベクターは、発現ベクターであってもよい。様々な方法で、適切な核酸配列をベクターに挿入してもよい。一般に、当業者には公知の技術を用いて、適切な制限エンドヌクレアーゼ部位にＤＮＡを挿入する。ベクター成分としては、一般に、限定するものではないが、１つ以上のシグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、及び転写終結配列がある。これらの成分の１つ以上を含む好適なベクターの構築には、当業者には公知の標準的連結技術を用いる。
【００５６】
本明細書に記載する組成物は、ワクチンとして有用となりうる。ワクチンは、予防ワクチンとすることも防御ワクチンとすることもできる。
【００５７】
本明細書に記載する組成物は、アジュバント活性を有する１種以上の化合物を含んでもよい。このようなアジュバントは、それ自体では明確な抗原作用を有することなく、免疫系を刺激し、ワクチン抗原に対する応答を高める。アジュバントは、特定のワクチン抗原と組み合わせて用いられると、抗原特異的免疫応答を加速、延長、若しくは増強するのに役立つ。この目的に好適な化合物又は組成物としては、限定するものではないが、例えば、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム（ミョウバンとも呼ばれる）、アルミニウムヒドロキシル−リン酸塩、及びアルミニウムヒドロキシル−リン酸塩−硫酸塩などのアルミニウムベースのアジュバント、並びに、以下のような非アルミニウムアジュバント、例えば、ＱＳ２１、ＭＦ５９、リピドＡ、中性リップソーム（ｌｉｐｓｏｍｅ）、ミクロ粒子、例えば、ＩＬ−１２などのサイトカイン、植物性油、動物性油、例えば、鉱油を基材とする水中油形若しくは油中水形エマルション（Ｂａｙｏｌ  Ｆ（商標）若しくはＭａｒｃｏｌ  ５２（商標））、完全フロイントアジュバント、不完全フロイントアジュバント、植物油、例えば、ビタミンＥ酢酸塩、サポニン、スクアレン、脂質付加アミノ酸（ＬＡＡ）、及び／又はＴＬＲアゴニストが挙げられる。
【００５８】
いくつかの実施形態では、アジュバント成分は、トール様受容体（ＴＬＲ）リガンドである。哺乳動物におけるＴＬＲは、１９９７年に初めて同定された。これらは、多数の病原体に対する第１の防御線を構成して、自然免疫系の機能に重要な役割を果たす。トール様受容体には多数の公知のサブクラスがあり、例えば、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２、ＴＬＲ１３、ＴＬＲ１４、ＴＬＲ１５、及びＴＬＲ１６が挙げられ、それらのリガンドは、有意な構造上の変異を呈示する。ＴＬＲアゴニストは、様々なトール様受容体（ＴＬＲ）のうち１つの分子リガンドである。公知のＴＬＲとしては、以下のものが挙げられる：ＴＬＲ１（ＴＬＲ１リガンドは、トリアシルリポタンパク質を含む）；ＴＬＲ２（ＴＬＲ２リガンドは、リポタンパク質、グラム陽性ペプチドグリカン、リポテイコ酸、真菌、及びウイルス糖タンパク質を含む）；ＴＬＲ３（ＴＬＲ３リガンドは、特定のウイルスに存在するような二本鎖ＲＮＡ、及びポリＩ：Ｃを含む）；ＴＬＲ４（ＴＬＲ４リガンドは、リポ多糖及びウイルス糖タンパク質を含む）；ＴＬＲ５（ＴＬＲ５リガンドは、フラジェリンを含む）；ＴＬＲ６（ＴＬＲ６リガンドは、ジアシルリポタンパク質を含む）；ＴＬＲ７（ＴＬＲ７リガンドは、合成低分子免疫修飾物質（ｓｍａｌｌ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｉｍｍｕｎｅ  ｍｏｄｉｆｉｅｒ）（例えば、イミキモド、Ｒ−８４８、ロキソリビン、及びブロピリミン）及び一本鎖ＲＮＡを含む）；ＴＬＲ８（ＴＬＲ８リガンドは、合成低分子化合物（ｓｍａｌｌ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）及び一本鎖ＲＮＡを含む）；並びにＴＬＲ９（ＴＬＲ９リガンドは、非メチル化ＣｐＧ  ＤＮＡモチーフを含む）。いくつかのＴＬＲリガンドを本明細書に記載するが、そのような記載が本発明を何ら限定するものではないことを理解すべきである。ＴＬＲリガンドは、市販のものが広く入手可能である。
【００５９】
好ましいＴＬＲアゴニストとしては、ＴＬＲ２アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、ＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ８アゴニスト、及びＴＬＲ９アゴニストが挙げられる。ＬＲ２は、グラム陽性及びグラム陰性菌、並びにマイコプラズマ及び酵母由来の多様な微生物分子の認識に関与する。ＴＬＲ２リガンドとしては、リポグリカン、リポ多糖、リポテイコ酸及びペプチドグリカンがある。
【００６０】
ＴＬＲ４は、グラム陰性リポ多糖（ＬＰＳ）及びリピドＡ、その毒性部分を認識する。ＴＬＲ４アゴニストとしては、限定するものではないが、リポ多糖（ＬＰＳ）、ウイルス糖タンパク質、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）（Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｃｏｌｌｏｉｄｓ  Ｓｕｒｆ  Ｂ  Ｂｉｏｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ；７５（１）：１２３−３２）、グルコピラノシル脂質アジュバント安定エマルション（ＧＬＡ−ＳＥ）（Ｃｏｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ；５（１０）：ｅ１３６７７）、及びグルコピラノシル脂質アジュバント（ＧＬＡ）と呼ばれる合成ヘキサアシル化リピドＡ誘導体（Ｃｏｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ；６（１）：ｅ１６３３３）が含まれる。
【００６１】
ＴＬＲ９は、細菌ＤＮＡ又は合成オリゴヌクレオチド（ＯＤＮ）に存在するものなどの非メチル化ＣｐＧ含有配列によって活性化される。このような非メチル化ＣｐＧ含有配列は、細菌ＤＮＡ中に高い頻度で存在するが、哺乳動物ＤＮＡには稀有である。従って、非メチル化ＣｐＧ配列によって、哺乳動物ＤＮＡから微生物ＤＮＡを識別する。ＴＬＲ９アゴニストは、限定するものではないが、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＤＮＡ、エンドトキシンフリー大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＤＮＡ、又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｋ１２由来のエンドトキシンフリー細菌ＤＮＡなどの微生物ＤＮＡの調製物であってよい。ＴＬＲ９アゴニストは、非メチル化ＣｐＧモチーフを含む合成オリゴヌクレオチドであってもよく、これは、本明細書において「ＣｐＧ−オリゴデオキシヌクレオチド」、「ＣｐＧＯＤＮ」、「ＯＤＮ」、若しくは「ＣｐＧ」とも称する。ＣｐＧ  ＯＤＮは、短く、一本鎖の、ＤＮＡ分子であり、これは、シトシン（「Ｃ」ヌクレオチド）に続いてグアニン（「Ｇ」ヌクレオチド）を含む。「ｐ」は、典型的に、ＤＮＡのホスホジエステル骨格を指す。本発明のＴＬＲ９アゴニストは、既述した少なくとも３つのタイプの刺激ＯＤＮ、すなわちＡ型、Ｂ型、及びＣ型のいずれを含んでもよい。ＣｐＧ−オリゴデオキシヌクレオチドは、ポリヌクレオチドの化学合成のための標準的方法によって作製してもよいし、又は市販のものを購入してもよい。例えば、ＣＰＧ  ＯＤＮは、ＩｎｖｉｔｒｏＧｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から購入することができる。
【００６２】
本明細書に記載の組成物は、１種以上のサイトカインを含んでもよい。サイトカインとしては、限定するものではないが、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ−β）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、及び／又はＦｌｔ−３リガンドが挙げられる。いくつかの用途では、１つ以上のサイトカインをアジュバントとして用いることもできる。
【００６３】
本発明はまた、本明細書に記載の組成物を被検者に投与することにより、被検者において免疫応答を誘導する方法も包含する。免疫応答は、防御免疫を付与しても、しなくてもよい。免疫応答は、例えば、体液性免疫応答及び／又は細胞性免疫応答を含んでよい。体液性免疫応答としては、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２（ＩｇＧ２ａ及び／若しくはＩｇＧ２ｂなど）、ＩｇＧ３、及び／又はＩｇＧ４など）、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、及び／又はＩｇＹ応答が挙げられる。細胞性免疫応答としては、Ｔ細胞活性化及び／又はサイトカイン産生が挙げられる。体液性又は細胞性免疫応答の決定は、免疫学分野で公知の様々な方法のいずれか、例えば、限定するものではないが、本明細書に記載する方法のいずれによって行ってもよい。免疫応答の誘導は、感染因子による将来の攻撃に対する初回免疫及び／又は免疫系の刺激を含んでよく、これによって将来の感染に対する免疫を賦与する。このような免疫応答の誘導は、防御応答として作用して、一般に、症状の軽減をもたらしうる。免疫応答は、自然及び／又は獲得免疫応答を増強しうる。免疫応答は、単一の初回免疫で、より高い濃度の抗体を呈示しうる。免疫応答は、スラリーマトリックスを含まない免疫と比較して、免疫グロブリン比並びに／又は炎症性サイトカイン、Ｉ型インターフェロン、及び／若しくはケモカイン誘導に変化を示す可能性がある。このような変化は、増加又は減少のいずれでもありうる。例えば、別の免疫グロブリンイソタイプと比較して免疫グロブリンの１イソタイプ（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、若しくはＩｇＥのいずれか１つと比較してＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、若しくはＩｇＥのいずれか１つ）の高い比、又は別のＩｇＧサブクラスと比較して１ＩｇＧサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、若しくはＩｇＧ４のいずれか１つと比較してＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、若しくはＩｇＧ４のいずれか１つ）の高い比を得ることができる。
【００６４】
本発明はまた、本明細書に記載の組成物を被検者に投与することにより、被検者にワクチン接種する方法も包含する。このようなワクチン接種により、将来の感染症の症状を軽減又は改善すると共に、将来の感染を予防することができる。本明細書に記載する組成物は、新たな感染に対する耐性が増大する、及び／又は疾患の臨床的重症度が軽減するように、感染を予防及び／又は改善する上での免疫原性組成物として、治療及び／又は予防用途を有しうる。このような防御は、ＲＳＳに関連する症状（限定するものではないが、本明細書に記載する症状のいずれかなど）の軽減又は欠如のいずれかによって証明されうる。利用可能な様々なアッセイのいずれか、例えば、限定するものではないが、本明細書に記載するもののいずれかを用いて、本発明のワクチン接種方法の有効性を決定することができる。
【００６５】
いくつかの用途では、通常の感染の過程で実質的軽減をもたらすような量で、少なくとも１種の免疫原の免疫学的に有効な量を使用する。免疫原性及び有効性は、公知の様々な実験装置のいずれか、例えば、限定するものではないが、本明細書に記載するもののいずれかを用いてアッセイすることができる。
【００６６】
本明細書に記載する組成物及び方法は、ウイルス性疾患、感染性疾患、例えば、限定するものではないが、細菌、真菌及び寄生体感染、癌、並びに１種以上の免疫原の投与が治療のために望ましい他の疾患の治療及び／又は予防のために、被検者に投与することができる。本明細書に開示する方法では、当分野において公知の様々なパラメータのいずれか、例えば、限定するものではないが、本明細書に記載するもののいずれかにより、１種以上の物質の投与の効果を評価することができる。これには、ＥＬＩＳＰＯＴ、ＦＡＣＳ分析、サイトカイン放出、又はＴ細胞増殖アッセイなど、多数の方法による、例えば、腫瘍抗原に対する遅延型過敏反応の増大の決定、治療後悪性腫瘍再発までの時間的遅延の決定、無再発生存期間増加の決定、治療後生存率の増加の決定、腫瘍サイズの決定、ワクチン接種抗原への暴露時に活性化される反応性Ｔ細胞の数の決定などが含まれる。
【００６７】
例えば、本明細書に記載する組成物及び方法を癌の治療のために患者に投与してよい。抗腫瘍ワクチンとしては、限定するものではないが、ペプチドワクチン、全細胞ワクチン、遺伝子改変全細胞ワクチン、組換えタンパク質ワクチン、又は組換えウイルスベクターによる腫瘍関連抗原の発現に基づくワクチンなどが挙げられる。治療しようとする癌としては、限定するものではないが、黒色腫、基底細胞癌、結腸直腸癌、膵臓癌、乳癌、前立腺癌、肺癌（小細胞肺癌及び非小細胞肺癌など）、白血病、リンパ腫、肉腫、卵巣癌、カポジ肉腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、横紋筋肉腫、原発性血小板血症、原発性マクログロブリン血症、小細胞肺腫瘍、原発性脳腫瘍、胃癌、悪性膵島細胞腫、悪性カルチノイド、膀胱癌、前悪性皮膚病変、精巣癌、リンパ腫、甲状腺癌、神経芽細胞腫、食道癌、尿生殖器管癌、悪性高カルシウム血、子宮頚癌、子宮内膜癌、膠芽腫、及び副腎皮質癌が挙げられる。いくつかの態様では、癌は、原発性癌である。いくつかの態様では、癌は転移性である。本明細書で用いる場合、「腫瘍」は、哺乳動物にみいだされる任意のタイプの癌、新生物、又は悪性腫瘍を指す。
【００６８】
癌の治療の効果は、当分野では公知の様々なパラメータのいずれかにより、評価することができる。これは、限定するものではないが、以下を含む：腫瘍サイズの縮小の決定、腫瘍の増殖、拡散、侵入力、脈管形成、血管新生、及び／又は転移の阻害の決定、任意の転移性病変の成長、拡散、侵入力及び／若しくは脈管形成の阻害の決定、免疫系細胞による腫瘍浸潤の決定、並びに／又は腫瘍抗原に対する遅延型過敏反応増大の決定。治療の効果はまた、被検者における再発の遅延若しくは腫瘍進行の遅延の決定、又は被検者の生存率、例えば、治療から１若しくは５年後の生存率の増加の決定によっても評価することができる。本明細書で用いる場合、再発は、腫瘍又は新生物の、明らかな停止後の再発である。
【００６９】
本明細書で用いる場合、別途明示されていない限り、「治療」、並びに「治療される」、「治療すること」などの類似の語は、好ましくは臨床結果などの有益又は所望の結果を得るためのアプローチである。治療は、治療及び／又は予防的治療を含みうる。治療の望ましい効果は、疾患の発生又は再発の予防、症状の改善、疾患の１つ以上の直接若しくは間接的病理学的帰結の軽減、疾患進行速度の低下、病状の改善若しくは緩和、寛解若しくは予後の改善を含む。いくつかの用途では、記載する組成物は、１つ以上の所望の結果に、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％の改善を示しうる。
【００７０】
本明細書で用いる場合、物質の「有効量」又は「治療に有効な量」は、臨床結果を含む有益な結果などの所望の生物学的効果をもたらすのに十分な量である。治療に有効な濃度及び量は、本明細書での各用途について、本明細書に記載のもののいずれかを含む、既知のｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏ装置で組成物を試験することによって、実験により決定することができる。次いで、そこから、ヒト又は他の動物についての投与量を補外することができる。本発明の方法の場合、当分野では公知の様々なパラメータのいずれかによって、１回以上の介入の投与の効果を評価することができる。
【００７１】
いくつかの実施形態では、「有効な量」は、少なくとも１つの病理パラメータの低減をもたらす量である。従って、例えば、治療を受けていない個体のパラメータに予測される低減と比較して、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、又は少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％の低減を達成するのに有効な量。
【００７２】
本発明はまた、本明細書に記載するワクチン組成物を製造する方法及び使用する方法も包含する。本発明の組成物は、選択される投与経路に合わせて設計される様々な形態の薬剤として製剤化してよい。多様な投与方法のいずれを用いてもよい。例えば、投与は、静脈内、局所、経口、鼻内、皮下、腹腔内、筋内、又は腫瘍内であってよい。
【００７３】
本明細書に記載するワクチン組成物は、インプラントの形態をしていてもよい。このようなインプラントは、腫瘍内に移植することができる。送達は、例えば、注射、輸液、点滴注入、局所適用、針による送達、及び／又はカテーテルによる送達など、利用可能な多様な技術のいずれによって達成してもよい。送達は、針若しくはカテーテルなどの送達装置又は手段の使用によって達成することもできる。このような送達装置は、本発明に含まれる。
【００７４】
本発明の組成物は、１つ以上の別の治療介入と一緒に投与してもよい。別の治療的処置として、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：外科的切除、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、抗腫瘍ワクチン、抗体療法、全身照射、骨髄移植、末梢血幹細胞移植、サイトカイン、抗生物質、抗菌薬、抗ウイルス薬（例えば、ＡＺＴ、ｄｄＩ若しくはｄｄＣなど）の投与、化学療法薬（例えば、シクロホスファミド、メトトレキセート、５−フルオロウラシル、ドキソルビシン、ビンクリスチン、イホスファミド、シスプラチン、ゲムシタビン、ブスルファン、ａｒａ−Ｃ、アドリアマイシン、ミトマイシン、シトキサン、メトトレキセートなど）、並びにこれらの組合せ。このような投与は、既述したワクチン組成物の投与前、投与中、及び／又は投与後に実施してよい。
【００７５】
本明細書で用いる場合、「被検者」という用語は、限定するものではないが、ヒト及びヒト以外の脊椎動物を含む。いくつかの実施形態では、被検者は、哺乳動物、特にヒトである。被検者は、「個体」、「患者」又は「宿主」であってもよい。被検者としては、例えば、ヒト、高等霊長類、ヒト以外の霊長類、家畜及びペット（例えば、イヌ、ネコ、畜牛、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラバ、ロバ、ミンク、及び家禽類など）、実験動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、及びウサギなど）、並びに野生生物が挙げられる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載するワクチン組成物は、ウシ属の動物、限定するものではないが、畜牛、スイギュウ、アフリカスイギュウ、アメリカバイソン、及びヤクなどに投与する。
【００７６】
本明細書に記載するワクチン組成物は、家禽類、例えば、ニワトリ、シチメンチョウ、ホロホロチョウ、ヤマウズラ及び水鳥（例えば、アヒル及びカモ）などに投与してもよい。ニワトリとしては、限定するものではないが、雌鶏、雄鶏、ブロイラー、ひな鳥、種鶏、種鶏の子孫、及び産卵鶏が挙げられる。本発明のワクチンは、孵化前又は孵化後のいずれに家禽に投与してもよい。家禽は、様々な齢でワクチンを受けてもよい。例えば、ブロイラーは、卵内で、産卵後１日の卵内で、又は生後２〜３週で投与してもよい。産卵用家禽又は繁殖用家禽に、例えば、生後約６〜１２週でワクチンを接種し、生後約１６〜２０週で追加免疫してもよい。このような産卵用家禽又は繁殖用家禽には、生後約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、又は約１２週でワクチン接種してもよい。このような産卵用家禽又は繁殖用家禽には、生後約１６、約１７、約１８、約１９、又は約２０週で追加接種してもよい。このような産卵用家禽又は繁殖用家禽の子孫は、投与した免疫原に対する抗体力価を示しうるが、これによって、子孫における感染症の症状を予防又は軽減することができる。
【００７７】
本発明の組成物は、当分野では公知で、かつ使用されている方法に従って、製剤化することができる。本発明のワクチン組成物は、組成物を改善若しくは安定化するように設計される塩、バッファー、防腐剤、又はその他の物質を含んでもよい。ワクチン組成物は、薬学的に許容される賦形剤又は担体を含んでもよい。本明細書で用いる場合、「薬学的に許容される担体」という用語は、ヒト又はその他の脊椎動物への投与に好適な物質を指す。投与のために、本明細書に記載する組成物は、必要であれば、適切にバッファー処理し、また、十分な塩水又はグルコースで組成物を等張性にしてもよい。これに関して、使用することができる滅菌水性媒質は、当業者には周知であろう。さらに、ヒトへの投与の場合、無菌性、発熱原性、及びＦＤＡによって要求される一般的安全性及び純度基準を満たす必要がある。このような製剤は、発熱物質除去であってよく、滅菌、及び／又はエンドトキシンフリーであってよい。
【００７８】
本発明の組成物は、さらに１種以上の安定剤を含んでもよい。いずれの好適な安定剤を用いてもよく、このようなものとして、ソルビトール、マンニトール、デンプン、スクロース、デキストリン、若しくはグルコースなどの炭水化物；アルブミン若しくはカゼインなどのタンパク質；並びにアルカリ金属リン酸塩などのバッファーなどがある。安定剤は、乾燥ワクチン製剤を凍結乾燥により製造する場合、特に有利である。このような組成物は、薬学的に許容される担体又は希釈剤を含んでもよい。担体としては、例えば、安定剤、防腐剤及びバッファーが挙げられる。好適な安定剤として、例えば、ＳＰＧＡ、炭水化物（例：ソルビトール、マンニトール、デンプン、スクロース、デキストリン、グルタミン酸塩若しくはグルコースなど）、タンパク質（例：乾燥乳清、アルブミン若しくはカゼインなど）又はそれらの分解産物が挙げられる。好適なバッファーとしては、例えば、アルカリ金属リン酸塩がある。好適な防腐剤としては、例えば、チメロサール、メルチオレート及びゲンタマイシンがある。希釈剤としては、限定するものではないが、水、水性バッファー（例えば、緩衝食塩水）、アルコール、及びポリオール（例えば、グリセロール）が挙げられる。
【００７９】
本明細書に記載する方法及び組成物に、様々な調節物質のいずれを含有させてもよい。本明細書で用いる場合、「調節物質」は、生存組織に治療効果を有する物質である。調節物質としては、例えば、疾患を予防及び／若しくは解消する、並びに／又は回復を促進するのに有効な治療薬がある。
【００８０】
本発明のワクチンは、多くの異なる経路のいずれによって被検者に投与してもよい。例えば、ワクチンは、静脈内、腹腔内、皮下、鼻内、経口、経皮、及び／又は筋内経路で投与することができる。好適な投与計画は、例えば、被検者の年齢、体重、性別、及び健康状態；投与経路；所望の効果；並びに使用する特定のコンジュゲート及び製剤など、当分野では公知の要因を考慮に入れて決定することができる。ワクチンは、単回又は複数回のいずれでも投与してもよい。複数回用ワクチン接種フォーマットで投与される場合、投与の時期は、当分野では公知のスケジュールに従ってよい。例えば、初回投与の後、抗体力価及び／又は免疫記憶を維持するために、１以上の追加用量を投与してもよい。
【００８１】
本発明の方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、又はｉｎ  ｖｉｖｏ方法を含んでもよい。本明細書で用いる場合、「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」は、細胞培養物中であり、「ｉｎ  ｖｉｖｏ」は、被検者の身体内である。本発明では、単離された免疫原又は物質を送達してもよい。本明細書で用いる場合、「単離された」とは、その天然の環境から取り出されたか、組換え技術を用いて作製されたか、又は化学的若しくは酵素により合成された物質であって、従って、その天然の状態から「人為的に」改変された物質を意味する。
【００８２】
本発明は、本発明に記載の組成物の１つ以上を使用するキットを含む。このようなキットは、免疫応答を誘発するために、被検者への免疫原の投与を可能にすることができる。本発明のキットは、本発明を実施するために必要なバッファー及び溶液などの他の試薬を含んでもよい。任意選択で、このような容器に、注意事項又は印刷された説明書を付属させてもよい。本明細書で用いる場合、「パッケージ材料」というフレーズは、キットの中身を収納するのに用いられる１つ以上の物理的構造を指す。パッケージ材料は、好ましくは、滅菌状態の無汚染物環境を提供するように、公知の方法によって作製する。本明細書で用いる場合、「パッケージ」という用語は、設定した範囲内にポリペプチドを保持することができる、固体マトリックス、又はガラス、プラスチック、紙、ホイルなどの材料を指す。本発明のキットはまた、使用説明書を含んでもよい。使用説明書は、典型的に、試薬濃度、又は少なくとも１つのアッセイ方法パラメータ、例えば、混合しようとする試薬及びサンプルの相対量、試薬／サンプル混合物の維持時間、温度、バッファー条件などを記載する具体的表示を含む。
【００８３】
別途記載のない限り、本明細書及び特許請求の範囲で用いられる成分の量、分子量などを表す数は全て、いずれのケースでも、用語「約」によって変更されるものとして理解すべきである。従って、反対のことが記載されていない限り、本明細書及び特許請求の範囲に記載される数値パラメータは、近似値であり、これらは、本発明によって達成しようとする所望の特性に応じて変動しうる。少なくとも、また、特許請求の範囲の均等物の原則を限定しようとするものではないが、各数値パラメータは、少なくとも、記載される有効桁数を考慮して、通常の丸め技法を適用することにより、解釈すべきである。
【００８４】
本発明の広い範囲を示す数値範囲及びパラメータは近似値ではあるが、具体例に記載する数値は、可能な限り正確に表示されている。しかし、全ての数値は、それぞれの試験の測定に存在する標準偏差から必然的に生じる範囲を本質的に含む。
【００８５】
本明細書の記載は、説明のための実施形態を例示する。本願全体を通して複数の箇所で、例を列挙したリストから指標が提供されるが、これらの例は、多様な組合せで用いることができる。各例において、記載したリストは、代表群として用いられるに過ぎず、限定的リストとして解釈すべきではない。
【００８６】
本発明を以下の実施例により説明する。具体な例、材料、量、及び手順は、本明細書に記載するように、本発明の範囲及び精神に従って広義に解釈すべきであることを理解されたい。見出しは全て読者の便宜を図って設けたものであり、そのような記載のない限り、見出しに続く本文の意味を限定するために用いるべきではない。
【実施例】
【００８７】
実施例１
新規のワクチン接種送達計画は、増強されたワクチン特異的免疫応答を起こす
従来の送達方法を用いる場合にみとめられるものに対してワクチン送達を促進するために、室温では液体であるが、３５℃での注射後の生理的条件下では、ゲルデポー（ｇｅｌ−ｄｅｐｏｔ）を形成する成分と一緒に、ＣｐＧアジュバントを含む、又は含まない抗原を提供することに主眼を置いた。これによって、抗原及びアジュバントを濃縮形態で送達することが可能になり、これにより、抗原呈示細胞活性を増強すると共に、炎症誘発性のワクチン特異的応答を引き起こすことができる。組換えＢ型肝炎抗原（ｒＨｅｐＢａｇ）をワクチン接種の抗原として用いて、Ｂ型肝炎特異的抗体及びサイトカインを誘導する能力について、７つの異なるワクチン送達計画と共に評価された送達方法。マウスを、２つの異なるタイプのゲルスラリー（ＰＵＲＡＭＡＴＲＩＸ（「Ｐ１」とも称する）及びＭＡＴＲＩＧＥＬ（「Ｐ２」とも称する）中のｒＨｅｐＢａｇ、又はＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ（アルミニウム塩）中のｒＨｅｐＢａｇ、又は完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）と混合したｒＨｅｐＢａｇで、ワクチン接種した。ゲルスラリー及びＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬは、マウスＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６と一緒に又は含まずに（＋／−）混合した。
【００８８】
結果は、ＯＤＮを含むいずれのゲルスラリーでワクチン接種したマウスも、初回接種から２４〜４８時間後に、有意に高いＴＮＦ産生を示したが、Ｐ１は、２４時間後にＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬより有意に優れていた。アジュバントＰ２は、４８時間後に有望なＴｈ２阻害を示したが、血清中の抗原特異的ＩｇＧ２ａ産生の増加と同時に、ＩＬ−４、ＩＬ−５及びＩＬ−１０レベルが低下した。
【００８９】
ワクチン特異的抗体の分析から、Ｐ１が、ＯＤＮの使用の有無にかかわらず、初回免疫から１４日後に、高いワクチン特異的ＩｇＡ、ＩｇＭ及びＩｇＧ力価をもたらし、高いＩｇＡ及びＩｇＧ力価が３５日間維持されたことがわかった。この実験で試験したゲルスラリー系の両方が、従来のアジュバントより優れていたことから、この新規のゲルスラリーワクチン送達系は、現在わずかにしか機能的でない多数の既存のワクチンに対する応答を増強する上で広範な有用性を有しうる。この新規ワクチン送達系の使用を、寄生体からウイルス感染症まで、様々な感染症のいずれかについてのワクチンの開発においてさらに調べることにする。
【００９０】
材料及び方法
ワクチン及び投与経路。この研究で用いる実験用ワクチンを、組換えＢ型肝炎抗原、すなわち、ｒＨｅｐＢａｇから作製した（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＳＡ）。９０匹の生後６週〜８週の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスを均等に９つのグループに分けて、それぞれ、５μｇのｒＨｅｐＢａｇを含む０．１ｍｌ溶液、５μｇのｒＨｅｐＢａｇを含む５０μｇＯＤＮ１８２６（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ，Ｉｎｃ．  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）の０．１ｍｌ、ＯＤＮ１８２６を含む、又は含まないＰＵＲＡＭＡＴＲＩＸ（Ｐ１）及び５μｇのｒＨｅｐＢａｇの０．４ｍｌ溶液、ＯＤＮ１８２６を含む、又は含まないＭＡＴＲＩＧＥＬ（Ｐ２）及び５μｇのｒＨｅｐＢａｇの０．４ｍｌ、ＯＤＮ１８２６を含む、又は含まない２５０μｇミョウバン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，ＵＳＡ）及び５μｇのｒＨｅｐＢａｇの０．１ｍｌ溶液、並びに５μｇのｒＨｅｐＢａｇを含む（１：２）０．１ｍｌの完全フロイントアジュバント（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ．Ｍｉｓｓｏｕｒｉ，ＵＳＡ）を、背中に初回皮下注射（ｓｃ）、次いで、４週間後に追加免疫として投与した。１用量のスラリーを調製するために、５０ｕｇＣｐＧの事前混合を含む、又は含まない５ｕｇのｒＨＢｓＡｇ抗原を、ＭＡＴＲＩＧＥＬ又はＰＵＲＡＭＡＴＲＩＸと一緒に４００μｌの最終用量にして、入念に混合した後、皮下注射した。必要な用量の数に応じて増量した。ＭＡＴＲＩＧＥＬ及びＰＵＲＡＭＡＴＲＩＸは、ＢＤ（Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）から購入した。
【００９１】
サイトカイン及び抗体の評価。追加免疫から１週間後、サイトカイン評価のために脾細胞を単離した。単細胞懸濁液（１．５×１０6／ｍｌ)を調製して、ペニシリン−ストレプトマイシン（それぞれ、最終濃度：１００Ｕ／ｍｌ及び１００μｇ／ｍｌ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ．Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）と一緒に、１６４０培地（ＲＰＭＩ １６４０ Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｈｙｃｌｏｎｅ，Ｕｔａｈ，ＵＳＡ）中に懸濁させた。０．５ｍｌの培地、１μｇ／ｍｌのコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）の０．５ｍｌ、又は５μｇ／ｍｌのｒＨｅｐＢａｇの０．５ｍｌと一緒に、０．５ｍｌの単細胞懸濁液を４８ウェルプレート（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ．Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）に添加して、５％ＣＯ2を用い、３７℃で培養した。ＴＮＦのレベルを２４及び４８時間培養後に、ＩＬ−４及びＩＬ−５を４８時間後に、ＩＬ−４及びＩＬ−１０を７２時間後に定量したが、各々３回繰り返した。サイトカイン陽性マウスのパーセンテージは、２ステッププラットフォームを用いてさらに変換したが、これは、（１）各グループについて得られた値の全範囲を考慮した、各サイトカインの大域中央値を計算すること；及び（２）「低」及び「高」サイトカイン産生体（“ｌｏｗ”  ａｎｄ  “ｈｉｇｈ”−ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｐｒｏｄｕｃｅｒｓ）と称する２つのカテゴリーに個体を区分するために、カットオフエッジとしてサイトカイン陽性細胞の大域中央値パーセンテージ（ｇｌｏｂａｌ  ｍｅｄｉａｎ  ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ）を用いて、「低」及び「高」サイトカイン産生体のコンセプトを各グループについて確認することから成るものであった。同じ重みを全てのサイトカインに付与して、細胞集団を形成することにより、各グループについての総サイトカインプロフィールを作成したことに注目すべきである。
【００９２】
製造者（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ，ＵＳＡ））により記載されているように、２４時間の培養後、３×１０5及び１．５×１０5個の脾細胞で、ＩＦＮγＥＬＩＳｐｏｔも実施した。その際、１μｇ／ｍｌのＣｏｎＡを正の対照として用いた。スポット形成単位（ＳＦＵ）値は、３回繰り返した培養物の平均からその個別のバックグランドの平均値を差し引いた値として表した。
【００９３】
マウスから血液サンプルを１〜６週（初回免疫の前日を含む）まで毎週採取した。これらの血液から得た血清を抗体の検出及び定量のためにＵＬＩＳＡアッセイに用いた。
【００９４】
フローサイトメトリーのためのＴ細胞分析用の合成ペプチド。合成ペプチドは、Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｉｎｃ．，によって合成され、関連文献に基づいて選択されたものである。Ｓ ２２８−３９ペプチド（ＩＰＱＳＬＤＳＷＷＴＳＬ）は、Ｈ２−Ｌd拘束性（Ｈ２−Ｌd−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ）であり、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおける優性エピトープである。フローサイトメトリーのために、グループ毎に５匹のマウスからの脾細胞を５μＭペプチド及び４０Ｕ／ｍｌ  ＩＬ−２で個別に刺激した。
【００９５】
統計分析。抗体評価のために、コルモゴロフ−スミノルフ（Ｋｏｌｍｏｇｏｒｏｖ−Ｓｍｉｒｎｏｖ）正規性検定の後、ＧｒａｐｈＰａｄ ＰＲＩＳＭソフトウエア、バージョン４．０（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）を用いて、マン・ホィットニー又はスチューデントのｔ検定によって、比較を分析した。Ｐ値が≦０．０５のとき、差が統計的に有意であるとみなした。グループ同士の「低」及び「高」サイトカイン産生体頻度の比較のために、カイ２乗検定を用い、Ｐ≦０．０５で有意とみなした。レーダグラフ軸及び多角形面積の比較は、大きさが２倍小さい比率の場合、有意とみなした。レーダチャート形式で表示する結果のデータ分析は、グループ内及びグループ間で、サイトカイン産生体カテゴリー同士の中央多角形面積を比較することにより実施した。大きさが２倍小さい又は大きい軸及び多角形面積を示す比率の場合、有意な差とみなした。
【００９６】
結果
初期の結果から、ＣｐＧを含むいずれかのゲルスラリーをワクチン接種したマウスは、ミョウバン又はＣＦＡをワクチン接種したマウスと比較して、初回免疫から１４日後に有意に高いワクチン特異的ＩｇＧ２ａを、また、接種から２８日後にＩｇＡ、ＩｇＭを有することがわかった。１回のゲルスラリー送達は、他の送達方法で追加免疫後に得られたものより、初回免疫から１４日後に有意に高いワクチン特異的ＩｇＧ力価をもたらしたが、これは、追加免疫が必要ないことを示している。アッセイが、ゲルスラリー＋ＣｐＧワクチン接種マウスからの細胞と比較して、ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ又はＣＦＡをワクチン接種したマウスの脾細胞由来の上方制御されたＩＬ−１０及びＩＬ−４を示したことを思い出されたい。ＣｐＧを使用した場合、ＣＦＡでのレベル増加と比較して、全グループで、ＩＬ−５のレベルがバックグランドまで低下した。ＩＦＮ又はＴＮＦのレベルに差はなかった。
【００９７】
図１は、ＩｇＡ抗ＨＢｓＡｇ抗体力価の動態を示す。示すデータは、総ｎ＝１０の２つの独立した実験からプールしたものである。
【００９８】
図２は、ＩｇＭ抗ＨＢｓＡｇ抗体力価の動態を示す。示すデータは、総ｎ＝１０の２つの独立した実験からプールしたものである。
【００９９】
図３は、ＩｇＧ抗ＨＢｓＡｇ抗体力価の動態を示す。示すデータは、総ｎ＝１０の２つの独立した実験からプールしたものである。
【０１００】
図４は、ＩｇＧ1抗ＨＢｓＡｇ抗体力価の動態を示す。示すデータは、総ｎ＝１０の２つの独立した実験からプールしたものである。
【０１０１】
図５は、ＩｇＧ2a抗ＨＢｓＡｇ抗体力価の動態を示す。示すデータは、総ｎ＝１０の２つの独立した実験からプールしたものである。
【０１０２】
図６は、単回ワクチン接種後（２１日）のより高い抗ＨＢｓＡｇ抗体力価を示す。示すデータは、総ｎ＝１０の２つの独立した実験からプールしたものであり；ボンフェローニ（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）事後検定を含む２元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用い、抗原単独と比較して、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１である。
【０１０３】
図７は、単回ワクチン接種後（３５日）のより高い抗ＨＢｓＡｇ抗体力価を示す。示すデータは、総ｎ＝１０の２つの独立した実験からプールしたものであり；ボンフェローニ（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）事後検定を含む２元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用い、抗原単独と比較して、＊ｐ＜０．０５である。
【０１０４】
図８は、脾細胞のＨＢｓＡｇ再刺激から２４時間後のサイトカインプロフィールを示す。示すデータは、１つ実験（総ｎ＝５）の代表的データであり；ボンフェローニ（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）事後検定を含む２元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用い、抗原単独と比較して、＊ｐ＜０．０５、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１である。
【０１０５】
図９は、脾細胞のＨＢｓＡｇ再刺激から４８時間後のサイトカインプロフィールを示す。示すデータは、総ｎ＝１０（アジュバントのみの場合、ｎ＝５）の２つの独立した実験からプールしたものであり；ボンフェローニ（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）事後検定を含む２元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用い、抗原単独と比較して、統計的有意差はみとめられなかった（ｐ＜０．０５）。
【０１０６】
図１０は、脾細胞のＨＢｓＡｇ再刺激から７２時間後のサイトカインプロフィールを示す。示すデータは、総ｎ＝１０（アジュバントのみの場合、ｎ＝５）の２つの独立した実験からプールしたものであり；ボンフェローニ（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）事後検定を含む２元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用い、抗原単独と比較して、＊＊ｐ＜０．０１である。
【０１０７】
図１１は、ＨｂｓＡｇ特異的Ｔ細胞応答において、ＥＬＩＳｐｏｔによるＨＢｓＡｇ特異的細胞性免疫の増大を示す。示すデータは、総ｎ＝１０の２つの独立した実験からプールしたものであり；ボンフェローニ（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）事後検定を含む２元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用い、抗原単独と比較して、＊ｐ＜０．０５である。
【０１０８】
図１２は、フローサイトメトリーによるＨＢｓＡｇ特異的Ｔ細胞性免疫の増大を示す。示すデータは、総ｎ＝１０の２つの独立した実験からプールしたものであり；ボンフェローニ（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）事後検定を含む２元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用い、抗原単独と比較して、＊＊ｐ＜０．０１である。
【０１０９】
ｒＨｅｐＢａｇの刺激を含む脾細胞によるサイトカイン分泌の増加。ワクチンによって誘導された細胞免疫応答を測定するため、追加免疫から１週間後にマウスを死なせ、脾細胞を最終濃度５μｇ／ｍｌのｒＨｅｐＢａｇと一緒に、又はこれを含まずに培養した。サイトカインレベルをＥＬＩＳＡによって測定した。より多種のサイトカインを調べ、循環白血球のｅｘ  ｖｉｖｏサイトカインプロフィールを評価するために、低及び高産生体のコンセプトを適用した。このために、他所で記載したように、各グループについて得られた任意の値を用いて、各サイトカイン陽性細胞サブセットについて大域中央値を計算した（Ｖｉｔｅｌｌｉ−Ａｖｅｌａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ；６８（５）：５１６−２５）。各サイトカイン陽性細胞集団の大域中央値パーセンテージをカットオフエッジとして用いて、表１に示すように、「低」及び「高」サイトカイン産生体と称する２つのカテゴリーに個体を区分した。
【０１１０】
データから、ＯＤＮ１８２６を接種したマウスのいずれも２４時間内のＴＮＦ産生を示さなかったが、ＯＤＮ１８２６がアジュバントＰ１又はＰ２と結合した場合には、図１３に示すように、有意な割合のマウスが、カットオフエッジを超えるＴＮＦの値を示した（ｐ＜０．０１１）ことがわかった。ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬは、ＯＤＮ１８２６と結合していても、又はしていなくても、有意な量の「高」ＴＮＦ産生体を誘導したが、ＣｐＧを含まないアジュバントＰ１を接種したマウスの全てが、カットオフを超える値を呈示し、この値は、全てのアルヒドロゲル（Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ）グループより有意に高かった（ｐ＜０．００１）。この同じ結果は、４８時間後には観測されず、このとき、アジュバントＰ１、Ｐ２、ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ及びフロイントは、同等数の「高」ＴＮＦ産生体を示した（図１４Ａ及び１４Ｂ）（ｐ＜０．００１）。
【０１１１】
さらに、４８時間後、ＩＬ−４及びＩＬ−５産生に興味深いデータがみとめられ、このとき、アジュバントＰ２で免疫したマウスのほとんどが、「低」ＩＬ−４及びＩＬ−５産生体の領域に入った（ｐ＜０．０５）。これとは違い、アジュバントＰ１を接種したマウスのほとんどが、両サイトカインの高い産生を呈示した（ｐ＜０．００２）。図１５に示すように、アジュバントＰ１は、ＯＤＮ１８２６との結合の有無に関わらず、７２時間後、「高」ＩＬ−４産生体を呈示し続けたが、同じ結果が、ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ又はフロイント免疫後にみとめられた（ｐ＜０．００１）。また、データから、アジュバントＰ２又はアジュバントＰ２＋ＯＤＮ１８２６で事前に免疫したマウスのほとんどが、カットオフエッジを下回るＩＬ−１０の値を示し、ＯＤＮ１８２６と結合した、又は結合していないｒＨｅｐＢａｇで免疫したマウスより有意に低いことがわかった（ｐ＜０．０５）。
【０１１２】
【表１】
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【０１１３】
ｒＨｅｐＢａｇとアジュバントＰ１及びＰ２でワクチン接種したマウスにおける持続的体液性応答。ＥＬＩＳＡにより特定のイソタイプ抗体を試験するために、免疫前及び免疫後に血清を毎週採取した。アジュバントＰ１及びＰ２の両方でワクチン接種したマウスは、初回接種から２週間内に抗ｒＨｅｐＢａｇ  ＩｇＧ抗体を産生した（ｐ＜０．００２）。最も高い抗ｒＨｅｐＢａｇ抗体力価は、ＯＤＮと結合した、又は結合していないＰ１をワクチン接種したマウスにおいて達成され、これらの応答は、ＯＤＮ、ミョウバン又はフロイントアジュバントによる免疫より有意に高かった（ｐ＜０．００１）。ｉｎ  ｖｉｖｏで誘発されたＩｇＧ１：ＩｇＧ２ａ比は、両アジュバントで異なるパターンを示す。アジュバントＰ１は、初回接種から１４〜３５日内に高レベルのＩｇＧ１を伴うＴｈ２応答を起こす。これに対し、Ｐ２＋ＯＤＮによって誘発される応答は、純粋なＴｈ１又はＴｈ２応答というよりむしろ混合系であり、ＩｇＧ１及びＩｇＧ２ａレベルは、全タイムラインにわたって上方制御された。図１７Ａ〜１７Ｄを参照されたい。
【０１１４】
初回接種から１４日を過ぎると間もなく、アジュバントＰ１＋／−ＯＤＮの組合せは、ＩｇＡ及びＩｇＭ力価の上方制御を誘導し、この体液性応答は、それぞれ３５日及び２１日後まで維持された（ｐ＜０．０４）。このアジュバントは、ＩｇＡ、ＩｇＭ及びＩｇＧの産生について、１４及び３５日にわたってフロイントより優れ、最初の３週間にわたってＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬより優れていた（ｐ＜０．０２）。さらに、アジュバントＰ１及びＰ２のいずれも、追加免疫後、全Ｉｇの産生についてフロイントアジュバントより優れていることも明らかにされた（ｐ＜０．０２）。図１６Ａ〜１６Ｄ参照。
【０１１５】
論考
この実施例により、Ｐ１又はＰ２ゲルスラリーのいずれかとＯＤＮでワクチン接種したマウスは、初回接種から２４〜４８時間後に有意に高いＴＮＦ産生を有したが、Ｐ１は、２４時間後、有意にＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬより優れていることがわかった。アジュバントＰ２は、４８時間後に有望なＴｈ２阻害を示したが、血清中の抗原特異的ＩｇＧ２ａ産生増加と同時にＩＬ−４、ＩＬ−５及びＩＬ−１０レベルの低下を示した。
【０１１６】
ワクチン特異的抗体の分析によって、Ｐ１が、ＯＤＮの使用の有無にかかわらず、初回免疫から１４日後に高いワクチン特異的ＩｇＡ、ＩｇＭ及びＩｇＧ力価をもたらし、高いＩｇＡ及びＩｇＧ力価が３５日にわたって維持された。この実験で試験したゲルスラリー系はいずれも、従来のアジュバントより優れていたため、この新規ゲルスラリーワクチン送達系は、現在わずかにしか機能的でない多数の既存のワクチンに対する応答を増強する上で広範な有用性を有すると考えられる。この新規ワクチン送達系の使用について、寄生体からウイルス感染症まで、任意の種類の感染症のためのワクチンの開発においてさらに詳しく調べることにする。
【０１１７】
実施例２
インフルエンザワクチン接種
既述の実施例において詳細に記載した方法に従い、ミョウバン、ＣｐＧ、又はＰＵＲＡＭＡＴＲＩＸ及びＣｐＧのスラリーと一緒に投与した、組換え核タンパク質（ｒＮＰ）インフルエンザウイルス抗原で、Ｃ５７／ＢＬ及びＢａｌｂ／ｃマウスを免疫した。１用量のスラリーを調製するために、５０ｕｇＣｐＧと予め混合して、又は混合せずに、１０ｕｇｒＮＰ抗原を、ＰＵＲＡＭＡＴＲＩＸと一緒に最終用量２００ｕｌにして、入念に混合した後、皮下注射した。必要な用量の数に応じて増量した。図１８Ｂに示すように、抗インフルエンザＩｇＧ力価は、ミョウバン又はＣｐＧのアジュバントと一緒に投与したｒＮＰをワクチン接種したマウスと比較して、ＰＵＲＡＭＡＴＲＩＸ及びＣｐＧと一緒にスラリーとして投与したｒＮＰをワクチン接種した増加したＢａｌｂ／ｃマウスであった。図１８Ａは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける抗インフルエンザＩｇＧ力価を示す。抗インフルエンザＩｇＧ力価は、最後のワクチン接種から４週間後に決定した（ｗｐｌｖ）。
【０１１８】
やはり、既述の実施例により詳細に記載した方法に従い、ＰＵＲＡＭＡＴＲＩＸスラリーとして、又はＰＵＲＡＭＡＴＲＩＸ及びＣｐＧのスラリーとして、ミョウバンと一緒に投与した、全不活性化Ａ型インフルエンザウイルス（Ｈ１Ｎ１）株ＰＲ８で、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスを免疫した。対照として、別のマウスをＰＲ８全不活性化ウイルス（ＷＩＶ）のみで免疫した。１用量のスラリーを調製するために、５０ｕｇＣｐＧと予め混合して、又は混合せずに、１５ｕｇのＰＲ８抗原を、ＰＵＲＡＭＡＴＲＩＸと一緒に最終用量２００ｕｌにして、入念に混合した後、皮下注射した。必要な用量の数に応じて増量した。ＰＲ８（ＷＩＶ）は、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒからのホルマリン−不活性化インフルエンザＡ／ＰＲ／８／３４（Ｈ１Ｎ１）であり、ｒＮＰは、Ｉｍｇｅｎｅｘからの組換えヒトＡ型インフルエンザ（Ａ／ＰＲ／８／３４／Ｍｏｕｎｔ  Ｓｉｎａｉ（Ｈ１Ｎ１）セグメント５）核タンパク質ＮＰである。
【０１１９】
図１９に示すように、ＣｐＧなしで、ミョウバンのアジュバントと一緒に、又はＰＵＲＡＭＡＴＲＩＸのみを含むスラリーとして、投与したＰＲ８ＷＩＶをワクチン接種したマウスと比較して、ＰＵＲＡＭＡＴＲＩＸ及びＣｐＧと一緒にスラリーとして投与したＰＲ８ＷＩＶをワクチン接種したＣ５７Ｂｌ／６マウスにおいて、血清抗インフルエンザＩｇＧ力価は増加した。抗インフルエンザＩｇＧ力価は、最後のワクチン接種から４週間後に決定した（ｗｐｌｖ）。図１９は、２つの独立した実験からの結果を示す。
【０１２０】
図２０に示すように、致死的攻撃からの防御の増大が、ＰＲ８ＷＩＶをワクチン接種したＣ５７Ｂｌ／６マウスにおいてみとめられた。図２０Ａは、３０ＬＤ50での致死的攻撃による独立した実験からの結果を示し、図２０Ｂは、１０００ＬＤ50での致死的攻撃による独立した実験からの結果を示す。
【０１２１】
実施例３
バークホルデリア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）ワクチン接種
既述の実施例により詳細に記載した方法に従い、３つの異なるアジュバント：ミョウバン、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）、又はＰＵＲＡＭＡＴＲＩＸ及びＣｐＧのスラリーのうちの１つと一緒に投与した、３つの異なるバークホルデリア組換えタンパク質（バークホルデリア４−９タンパク質、バークホルデリア２２−１１タンパク質、及びバークホルデリア４２タンパク質）のカクテルで、マウスを免疫した。１用量のＰＵＲＡＭＡＴＲＩＸ＋ＣｐＧスラリーを調製するために、５０ｕｇＣｐＧと予め混合して、又は混合せずに、７５ｕｇのバークホルデリア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）タンパク質抗原を、ＰＵＲＡＭＡＴＲＩＸと一緒に最終用量２００ｕｌにして、入念に混合した後、皮下注射した。必要な用量の数に応じて増量した。対照として、抗原なしで、ミョウバンのみ、ＣＦＡのみ、又はＰＵＲＡＭＡＴＲＩＸ＋ＣｐＧのスラリーで、別のマウスを免疫した。
【０１２２】
バークホルデリア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）（以前は、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）の一部）属の名称は、ほぼ遍在性のグラム陰性、運動性、無条件的好気性桿菌群を指し、これらには、動物／ヒト及び植物病原体の両方、並びにいくつかの環境的に重要な種を含む。バークホルディアは、その病原性メンバーについて最もよく知られている。鼻疽菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｍａｌｌｅｉ）は、馬鼻疽（主に、ウマ及び近縁動物に起こる疾患）の原因となる。類鼻疽菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ）は、類鼻疽（ホイットモア病とも呼ばれる）（特に東南アジア及びオーストラリア北部における、主として熱帯気候の伝染病であり、ヒト又は動物に感染しうる）の原因因子である。セパシア菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ）は、嚢胞性線維症を伴う、人における肺感染症の重要な病原体である。その抗体耐性、及びそれらの関連疾患の高い致死率のために、鼻疽菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｍａｌｌｅｉ）及び類鼻疽菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ）は、家畜及びヒトを標的とする潜在的生物兵器であるとみなされている。
【０１２３】
図２１は、３つのバークホルデリア組換えタンパク質（バークホルデリア４−９タンパク質、バークホルデリア２２−１１タンパク質、及びバークホルデリア４２タンパク質）のカクテルで免疫したマウスにおける抗バークホルデリアＩｇＧ力価を示す。図２１Ｂは、免疫マウスにおける抗バークホルデリアタンパク質４−９ＩｇＧ力価を示す。図２１Ａは、免疫マウスにおける抗バークホルデリアタンパク質２２−１１ＩｇＧ力価を示す。図２１Ｃは、免疫マウスにおける抗バークホルデリアタンパク質４２ＩｇＧ力価を示す。ミョウバンのみ、ミョウバン＋タンパク質カクテル、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）のみ、ＣＦＡ＋タンパク質カクテル、ＰＵＲＡＭＡＴＲＩＸ＋ＣｐＧスラリーのみ、並びにＰＵＲＡＭＡＴＲＩＸゲル＋タンパク質カクテルによる免疫後の抗体力価を示す。ミョウバン又はＣＦＡのワクチン接種と比較して、ｐｕｒａｍａｔｒｉｘを含むゲルワクチン組成物として投与した３つのタンパク質のうち２つに対して、特定の血清抗体レベルによって測定される免疫応答の増加が観測された。具体的には、ミョウバン又はＣＦＡのワクチン接種と比較して、ＰＵＲＡＭＡＴＲＩＸをゲルワクチンとして投与したとき、バークホルデリア４−９タンパク質（図２１Ｂ）及びバークホルデリア２２−１１タンパク質（図２１ＡＢ）に対して、抗バークホルデリアＩｇＧ力価の増加が観測された。攻撃データは分析中である。
【０１２４】
実施例４
動物用ワクチン
既述の実施例により詳細に記載した方法に従い、本発明を様々な動物用ワクチンのいずれかと一緒に用いることができる。本発明のワクチン組成物、送達方法、及び送達系は、家畜産業に多くの利点及び優れた価値をもたらしうるが、このようなものとして、効果の改善、生産周期への早期送達、及び生産周期全体を通じて防御を賦与するために単回用量だけの投与による効能などが挙げられるが、これに限定されない。
【０１２５】
本発明の組成物、送達方法、及び送達系は、ブタの免疫に用いることができる。本発明の組成物、送達方法、及び送達系を用いてブタに投与することができるワクチンとしては、限定するものではないが、ブタサーコウイルス２型（ＰＣＶ２）ワクチン、ブタ繁殖・呼吸障害症候群（ＰＲＲＳＶ）ワクチン、呼吸器病マイコプラズマワクチン、ブタ連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｕｉｓ）ワクチン、ブタコロナウイルスワクチン、ロタウイルスワクチン、腸管毒素原性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）（Ｋ８８）ワクチン、アクチノバチルス・プルロニューモニア（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａ）（ＡＰＰ）ワクチン、及びブタインフルエンザワクチンが挙げられる。入手可能なワクチン及びこのようなワクチンのブタへの投与に関するさらに詳しい情報については、例えば、以下を参照されたい：ワールドワイドウェブサイト：ｍｅｒｃｋ−ａｎｉｍａｌ−ｈｅａｌｔｈ．ｃｏｍ／ｓｐｅｃｉｅｓ／ｐｉｇｓ／ｖａｃｃｉｎｅｓ．ａｓｐｘ、“Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｓｗｉｎｅ Ｈｅｒｄ，”Ａｌａｂａｍａ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ＡＮＲ−９０２，Ａｌａｂａｍａ  Ａ＆Ｍ  ａｎｄ  Ａｕｂｕｒｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓ（ワールドワイドウェブサイト：ａｃｅｓ．ｅｄｕ／ｐｕｂｓ／ｄｏｃｓ／Ａ／ＡＮＲ−０９０２／ＡＮＲ−０９０２．ｐｄｆで閲覧可能）、及び“Ｐｉｇ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ｐｒｏｇｒａｍｓ，”ＰＲＩＭＥ ＦＡＣＴ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９４４，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２００９（ワールドワイドウェブサイト：ｄｐｉ．ｎｓｗ．ｇｏｖ．ａｕ／＿ｄａｔａ／ａｓｓｅｔｓ／ｐｄｆ＿ｆｉｌｅ／０００９／３０１５００／Ｐｉｇ−ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ−ｐｒｏｇｒａｍｓ．ｐｄｆで閲覧可能）。
【０１２６】
本発明の組成物、送達方法、及び送達系は、ウシ属の動物（ｂｏｖｉｎｅ）、例えば、限定するものではないが、畜牛、スイギュウ、アフリカスイギュウ、アメリカバイソン、及びヤクなどの免疫に用いてもよい。本発明の組成物、方法及び送達系を用いて、ウシ属の動物に投与することができるワクチンとしては、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：限定されないが、ＢＶＤＶＩ型及びＩＩ型などのウシ呼吸器疾患（ＢＲＤ）ワクチン、限定されないが、潜伏ウイルスを発生しないサブユニットワクチンなどのウシヘルペスウイルス１型（ＢＨＶ−１）ワクチン、ウシヘモフィルス・ソムナス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｓｏｍｎｕｓ）ワクチン、マンヘミア・ヘモリチカ（Ｍａｎｎｈｅｉｍｉａ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）ワクチン、ウシマイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｂｏｖｉｓ）ワクチン、ウシロタウイルスワクチン、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）Ｋ９９ワクチン、ウシコロナウイルス（ＢＣＶ)ワクチン、クロストリジウム・シャボイ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｃｈａｕｖｏｅｉ）（黒脚症）ワクチン、クロストリジウム・セプチカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｅｐｔｉｃｕｍ）ワクチン、クロストリジウム・ソルデリ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｏｒｄｅｌｌｉ）（悪性浮腫）ワクチン、クロストリジウム・ノビイ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｎｏｖｙｉ）（黒色病）ワクチン、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）（腸内毒素中毒）ワクチン、限定するものではないが、ウシモラクセラ菌（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｂｏｖｉｓ）、クラミジア、マイコプラズマ、アコレプラズマなどの伝染性ウシ角結膜炎（流行性結膜炎）ワクチン、又は感染性ウシ鼻気管炎（ＩＢＲ）ウイルスワクチン、限定するものではないが、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）Ｊ５ワクチンなどの乳腺炎ワクチン。
【０１２７】
いくつかの用途では、本発明の組成物、送達方法、及び送達系は、ウシ属の動物（ｂｏｖｏｉｄ）への１種以上の住血吸虫症抗原の投与に用いてもよい。このような住血吸虫抗原は、例えば、日本住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）、マンソン住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍｏｎｓｏｎｉ）、又はビルハルツ住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ）に由来するものでよい。住血吸虫抗原は、住血吸虫トリオースリン酸イソメラーゼ（ＣＴＰＩ）タンパク質、又はその抗原断片若しくは誘導体であってもよく、限定するものではないが、日本住血吸虫（Ｓ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）、マンソン住血吸虫（Ｓ．ｍｏｎｓｏｎｉ）、若しくはビルハルツ住血吸虫（Ｓ．ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ）ＣＴＰＩタンパク質、又はそれらの抗原断片若しくは誘導体を含む。住血吸虫抗原は、住血吸虫テトラスピン２３ｋＤａ内在性膜タンパク質（Ｃ２３）、又はその抗原断片若しくは誘導体であってもよく、限定するものではないが、日本住血吸虫（Ｓ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）、マンソン住血吸虫（Ｓ．ｍｏｎｓｏｎｉ）、若しくはビルハルツ住血吸虫（Ｓ．ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ）Ｃ２３タンパク質、又はその抗原断片若しくは誘導体を含む。こうした住血吸虫抗原は、１つ以上の別の抗原決定基と融合したキメラポリペプチド、例えば、熱ショックタンパク質、又はその抗原断片若しくは誘導体であってもよく、限定するものではないが、ウシ熱ショックタンパク質７０（Ｈｓｐ７０）を含む。
【０１２８】
例えば、入手可能なワクチン及びこのようなワクチンの畜牛への投与に関するさらに詳しい情報については、例えば、以下を参照されたい：“Ｂｅｅｆ Ｃａｔｔｌｅ Ｈｅｒｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ Ｓｃｈｅｄｕｌｅ”Ｐｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ａｒｋａｎｓａｓ，Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＦＳＡ３００９（ワールドワイドウェブサイト：ｕａｅｘ．ｅｄｕ／Ｏｔｈｅｒ＿Ａｒｅａｓ／ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ／ＰＤＦ／ＦＳＡ−３００９．ｐｄｆで閲覧可能）、“Ｈｏｗ ｔｏ Ｖａｃｃｉｎａｔｅ，”Ｏｋｌａｈｏｍａ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ａｎｄ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．３５０（ワールドワイドウェブサイト：ａｎｓｃｉ．ｃｏｌｏｓｔａｔｅ．ｅｄｕ／ｐｄｆ＿ｆｉｌｅｓ／ＹＬＥ／Ｄａｉｒｙ７＿ｖａｃｃｉｎａｔｅ．ｐｄｆで閲覧可能）、及び“Ｃａｔｔｌｅ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ，”Ｂｅｅｆ  Ｃａｔｔｌｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＢＣＨ−３０１５（ワールドワイドウェブサイト：ｉｏｗａｂｅｅｆｃｅｎｔｅｒ．ｏｒｇ／Ｂｅｅｆ％２０Ｃａｔｔｌｅ％２０Ｈａｎｄｂｏｏｋ／Ｖａｃｃｉｎｅｓ＿Ｃａｔｔｌｅ．ｐｄｆで閲覧可能）。
【０１２９】
本発明のワクチン組成物、送達方法、及び送達系はまた、限定するものではないが、ネコ及びイヌなどのペットのワクチン接種に、例えば、母子免疫の伝達のためのパルボウイルスワクチンによるイヌの免疫を目的として、用いてもよい。
【０１３０】
投与経路としては、限定するものではないが、皮下（ｓｃ）又は筋内（ｉｍ）注射がある。本発明の組成物、送達方法、及び送達系を用いたワクチン接種によって、単回用量の投与後、迅速で、より長期に持続する防御が得られることになる。
【０１３１】
実施例５
家禽用ワクチン
既述の実施例により詳細に記載した方法に従い、本発明を様々な家禽用ワクチンのいずれかの送達系として用いることができ、このようなワクチンとして、限定するものではないが、以下：伝染性気管支炎（ＩＢ）、ニューカッスル病（ＮＤ）、マレック病、伝染性ファブリキウス嚢病（ＩＢＤ）ウイルス、伝染性喉頭気管炎（ＩＬＴ）、トリレオウイルス、コレラ、鶏痘、マイコプラズマ症、シチメンチョウ及びニワトリコリーザ、トリインフルエンザ、トリ脳脊髄炎（ＡＥ）、トリ鼻気管炎（ＡＲＴ）、アヒル肝炎ウイルス、出血性腸炎、ガチョウパルボウイルス、パラミクソウイルス３、ニワトリ貧血ウイルス（ＣＡＶ）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、丹毒（Ｅｒｙｓｉｐｅｌａｓ）、リエメレラ（Ｒｅｉｍｅｒｅｌｌａ）、マイコプラズマ・ガリセプティクム（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｇａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍ）、パスツレラ・ムルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、サルモネラ・エンテリティディス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、コクシジウム病のワクチンが挙げられる。
【０１３２】
投与経路としては、限定するものではないが、皮下（ｓｃ）又は筋内（ｉｍ）注射がある。皮下注射の場合、ワクチンを皮膚と下層組織の間の隙間に注射する。典型的に、頸の後ろの弛緩性皮膚における家禽に用いられる適用部位。筋内注射の場合には、ワクチン製剤を筋肉塊内に貯留させる。典型的には、このために、胸部筋肉又は腿筋肉のいずれかを用いる。ワクチン接種は、日齢の雛、若い雌鶏、産卵鶏、種鶏、ブロイラー、及び／又は観賞用鳥のワクチン接種が挙げられる。典型的には、産卵鶏及び種鶏は、産卵期間の前にワクチンを接種し、次いで、産卵期間中、６〜８週間毎に不活性化ワクチンを接種する。これによって、これら家禽を疾患から防御するだけでなく、移行抗体を子孫に移行させる。ワクチン接種することができる家禽として、ニワトリ、シチメンチョウ、並びに、例えば、アヒル及びカモのような水鳥が挙げられるが、これに限定されない。
【０１３３】
実施例６
住血吸虫症免疫
完全フロイントアジュバント又はＭＡＴＲＩＧＥＬ＋ＣｐＧのいずれかにおける住血吸虫タンパク質抗原ＣＣＡでマウスを免疫した。抗ＣＣＡＩｇＧ抗体力価をＥｌＩＳＡで決定した。データを図２２Ａ（完全フロイントアジュバント中のＣＣＡ）及び図２２Ｂ（ＭＡＴＲＩＧＥＬ＋ＣｐＧ中のＣＣＡ）に示す。２匹のマウスを各抗原製剤で免疫した。完全フロイントアジュバント中のＣＣＡで免疫したマウスについては、免疫から０、８、１６、及び１９日後、ＭＡＴＲＩＧＥＬ＋ＣｐＧ中のＣＣＡで免疫したマウスについては、免疫から０、８、１６、２４、３２、及び４０日後、血清サンプルを採取した。ＥＬＩＳＡデータは、ＭＡＴＲＩＧＥＬ＋ＣｐＧで免疫したマウスにおいて、ＣＣＡ特異的抗体のより高い力価をはっきりと示している。
【０１３４】
実施例７
スイギュウの住血吸虫症ワクチン接種
住血吸虫症は、世界中で２億人を超える人々が罹患している寄生虫病である。住血吸虫感染症の世界的有病率に関する近年の情報と合わせて、住血吸虫症に関連する障害を再評価すると、住血吸虫症の真の負荷は、以前評価したものより実質的に大きいことが示されている。アジア、特に中国において、原因因子は、日本住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）である。アフリカの種とは異なり、マンソン住血吸虫（Ｓ．ｍａｎｓｏｎｉ）及びビルハルツ住血吸虫（Ｓ．ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ）、日本住血吸虫（Ｓ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）は、ウシ属、特にスイギュウに感染する人獣共通寄生体であり、中国におけるヒトへの住血吸虫伝染の約７５％の原因となっている。スイギュウにおける住血吸虫感染を低減する介入はその健康を増進すると同時に、ヒトへの疾患伝染も低減することになる。中国の多くの地域での現在の防疫プログラムは、ヒト及びスイギュウの同時プラジカンテル（ＰＺＱ）処置であり；これは、全体的流行の低減を示してはいるが、大量の継続的処置を必要とし、時間及びコストの両方がかかる。より持続可能な選択肢は、ウシ化学療法に代わって、ウシからの日本住血吸虫（Ｓ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）の伝染を低減するワクチンの開発であろう。実際に、数学的モデル化（Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ａｃｔａ  Ｔｒｏｐ；８２（２）：２５３−２６２）によって、４５％の効力の予防ワクチンを単独で、又はＰＺＱと組み合わせて、用いて、ウシ属病原体保有動物における日本住血吸虫（Ｓ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）感染を低減すれば、時間経過と共に、均衡有病率が低下するはずであり、住血吸虫症の長期にわたる持続的防疫を達成しうることが証明された。この２方面からの介入（ｔｗｏ−ｐｒｏｎｇｅｄ  ｂａｓｅ  ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ）によって、住血吸虫症の伝染が長期にわたって有意に低減し、ウシの健康及び成長を増進すると共に、共同体人口における罹患率全体を低下させるであろう。Ｄａ’Ｄａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｖａｃｃｉｎｅ；２６（２９−３０）：３６１７−３６２５を参照されたい。この文献は、その全文を参照として本明細書に組み込むものとする。
【０１３５】
日本住血吸虫（Ｓ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）抗原で家畜を免疫するために、本明細書に記載の抗原−ＰＵＲＡＭＡＴＲＩＸ組成物を用いる。これら試験については、全ての動物に、ＳｊＣＴＰＩ−Ｈｓｐ７０プラスミドＤＮＡワクチン（Ｄａ’Ｄａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｖａｃｃｉｎｅ；２６（２９−３０）：３６１７−３６２５にさらに詳細に記載されているように）による初回ワクチン接種を投与する。スイギュウは、組換えＳｊＣＴＰＩタンパク質、ＰＵＲＡＭＡＴＲＩＸおよびウシ科動物ＣｐＧの組成物で追加免疫する。特に、１００ｕｇの組換えＳｊＣＴＰＩ＋ウシＣｐＧをＰＵＲＡＭＡＴＲＩＸと混合して、総注射量を約０．５０ｍｌ／動物とする。これをスイギュウ／及び畜牛の肩に注射する。単回の追加ワクチンのみを動物に投与する。
【０１３６】
抗ＳｊＣＴＰＩ  ＩｇＧ抗体応答を含む体液性及び細胞性免疫応答の誘発を決定する。追加免疫後、攻撃しようとする動物をセルカリアで攻撃し、糞ｇ当たりの卵の数の減少、肝組織中の卵の減少、ミラシジウム孵化の減少、及び感染虫体数の減少を測定することにより、ワクチン効力を測定する。これらの測定方法については、Ｄａ’Ｄａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｖａｃｃｉｎｅ；２６（２９−３０）：３６１７−３６２５にさらに詳細に記載されている。
【０１３７】
フィリピンにおける第１回試験は、フィリピンにおいてすでに２年目となり、前述したように、４００頭のスイギュウ又は畜牛に追加免疫した。フィリピンのサマル島での第２回試験は、１５００頭のスイギュウ又は畜牛を含む予定である。中国での第３回試験は、６００頭のスイギュウ又は畜牛を含む予定である。
【０１３８】
例えば、ＣｐＧ若しくはＩＬ−１２などのアジュバントを含む、又は含まないｐｕｒａｍａｔｒｉｘ組成物中の、住血吸虫ポリペプチド（例えば、ＳｊＣＴＰＩ、ＳｊＣＴＰＩ−Ｈｓｐ７０、ＳｊＣ２３、若しくはＳｊＣ２３−Ｈｓｐ７０ポリペプチド）の組成物を用いたスイギュウ及び畜牛の免疫は、アジアにおける住血吸虫症の新たな防疫プログラムの基礎として役立ちうる。プラジカンテル（ＰＺＱ）による処置に加え、このようなプログラムは、家畜における産卵寄生虫の数を減少させ、日本住血吸虫（Ｓ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）の有病率、強度及び伝染の測定可能な低減をもたらす手段として、ＳｊＣ２３−Ｈｓｐ７０及びＳｊＣＴＰＩ−Ｈｓｐ７０のような部分的防御ワクチンによるスイギュウのワクチン接種を含む。
【０１３９】
本明細書に引用した任意の特許、特許出願、及び刊行物、並びに電子的に閲覧可能な資料（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ及びＲｅｆＳｅｑにおけるヌクレオチド配列、例えば、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ、ＰＩＲ、ＰＲＦ、ＰＤＢにおけるアミノ酸配列提出物、並びにＧｅｎＢａｎｋ及びＲｅｆＳｅｑにおける註釈付きコード領域からの翻訳物など）の完全な開示内容は、参照として本明細書に組み込むものとする。本願の開示内容と、本明細書に参照として組み込まれるいずれかの文献の開示内容の間に不一致が存在する場合には、本願の開示内容が優先されるものとする。以上の詳細な説明及び実施例は、明瞭な理解のために提供したに過ぎない。そこからの不要な限定が一切ないことは理解すべきである。当業者には明らかな変更形態は、特許請求の範囲によって定められる本発明に含まれるため、本発明は、図示及び記載した厳密な詳細事項に限定されない。見出しは全て読者の便宜のために設けたものであり、そのような記載のない限り、見出しに続く本文の意味を限定するために用いるべきではない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４Ａ−Ｂ】
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【図１５】
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【図１６Ａ−Ｄ】
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【図１７Ａ−Ｄ】
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【図１８Ａ−Ｂ】
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【図１９Ａ−Ｂ】
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【図２０Ａ−Ｂ】
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【図２１Ａ−Ｃ】
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【図２２Ａ−２２Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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