(57)【要約】  本発明は、幹細胞がリンパ組織に存在する胚中心に結合することを妨げることを含む、幹細胞が器官および組織に結合することを阻害する方法および組成に関する。リンパ組織の胚中心を再生するための組成および方法を開示する。組成に含まれるものはアジュバント、ＣＤ４０、ＣＤ２８およびＩＬ−２１受容体へのアゴニスト、ならびにＣＤ２０へのアンタゴニストである。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
幹細胞がリンパ組織に結合することを阻害する方法であって、前記リンパ組織への前記幹細胞の結合を阻害する治療剤とともに当該幹細胞を投与することを含む方法。
【請求項２】
前記リンパ組織が脾臓、パイエル板およびリンパ節を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記治療剤は、前記幹細胞の、前記リンパ組織内の胚中心への結合を阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記胚中心は、脾臓、パイエル版およびリンパ節組織からなる群から選択されるリンパ組織に存在する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記胚中心は活性化している、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記治療剤は、プリン類の合成を妨げる剤、抗代謝産物、脾臓への放射線照射、化学療法剤、免疫抑制剤、グルココルチコイド、抗ベータアミロイド剤、抗Ｒｈ因子、抗ＴＮＦ剤、抗エオタキシン、抗Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）剤、抗インターフェロン剤、抗インターフェロンアルファ剤、抗インターフェロンベータ剤、抗インターフェロンガンマ剤、抗ＴＧＦ剤、抗ＴＧＦアルファ剤、抗ＴＧＦベータ剤、抗インテグリン剤、抗アルファ４剤、抗インターロイキン剤、抗インターロイキン１剤、抗インターロイキン２剤、抗インターロイキン４剤、抗インターロイキン５剤、抗インターロイキン６剤、抗インターロイキン１２剤、抗インターロイキン１３剤、抗インターロイキン２３剤、抗ＩｇＥ剤、抗血管接着タンパク質（ＶＡＰ）剤、抗Ｂ７剤、抗血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）剤、抗ＢＡＦＦ（ＢＬｙＳ）剤、抗ＣＴＬＡ４剤、抗補体剤、抗ＣＤ２剤、抗ＣＤ３剤、抗ＣＤ４剤、抗ＣＤ５剤、抗ＣＤ２０剤、抗ＣＤ２３剤、抗ＣＤ２５ａ剤、抗ＣＤ４０剤、抗ＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌ）剤、抗ＣＤ６２Ｌ剤、抗ＣＤ８０剤、抗ＣＤ１４７剤、抗ＬＦＡ１剤、抗（ＣＤ１１ａ）剤、抗ＣＤ１８剤、プリン類合成阻害剤、ピリミジン合成阻害剤、抗増殖剤、抗代謝剤、抗葉酸在、および抗ｍＴＯＲ剤、
からなる群から選択される、請求項１の方法。
【請求項７】
前記治療剤は、アザチオプリン、ミコフェノール酸、レフルノミド、テリフルノミド、メトトレキサート、タクロリムス、シクロスポリン、ピメクロリムス、アベチムス、グスペリムス、サリドマイド、レナリドマイド、アナキンラ、シロリムス、デフォロリウムス、エベロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、ビオリムス  Ａ９、エクリズマブ、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴール、アフェリモマブ、ゴリムマブ、メポリズマブ、オマリズマブ、ネレリモマブ、ファラリモマブ、エルシリモマブ、レブリキズマブ、ウステキヌマブ、ムロモマブ−ＣＤ３、オテリキシズマブ、テプリズマブ、ビジリズマブ、クレノリキシマブ、ケリキシマブ、ザノリムマブ、エファリズマブ、エルリズマブ、アフツズマブ、オクレリズマブ、パスコリズマブ、ルミリキシマブ、テネリキシマブ、トラリズマブ、アセリズマブ、ガリキシマブ、ガビリモマブ、ルプリズマブ、ベリムマブ、イピリムマブ、トレメリムマブ、ベルチリムマブ、レルデリムマブ、メテリムマブ、ナタリズマブ、トシリズマブ、オヅリモマブ、バシリキシマブ、ダクリズマブ、イノリモマブ、ゾリモマブアリトックス、アトロリムマブ、セデリズマブ、ドルリキシズマブ、フォントリズマブ、ガンテネルマブ、ゴミリキシマブ、マスリモマブ、モロリムマブ、ペキセリズマブ、レスリズマブ、ロベリズマブ、シプリズマブ、タリズマブ、テリモマブアリトックス、バパリキシマブ、ベパリモマブ、アバタセプト、ベラタセプト、エタネルセプト、ペグスネルセプト、アフリベルセプト、アレファセプト、リロナセプト、リンフォトキシンアルファおよびベータ阻害剤、デセツズマブＳＧＮ−４０、ＨＣＤ−１２、
からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記幹細胞の前記リンパ組織への結合が、ＣＤ４５抗原を下方制御または妨げる治療剤を投与することにより阻害される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記治療剤は、放射線である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記幹細胞は、外因性または内因性の幹細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記治療剤は、化学療法剤である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記幹細胞は、悪性血液疾患、白血病、リンパ腫、癌、大理石骨病、再生不良性貧血および血球減少症、鎌状赤血球病およびサラセミア、角膜輪部幹細胞欠損、乳癌、急性心筋梗塞、冠状動脈疾患、末梢血管疾患、心不全、１型糖尿病、２型糖尿病、脳卒中、脊髄損傷、神経芽細胞腫、多発性硬化症、全身性硬化症、エリテマトーデス、慢性創傷治癒、火傷、骨折治癒、軟骨修復、ＣＮＳ腫瘍、変形性関節症、腎不全、パーキンソン病、骨髄腫、糖尿病足、肝硬変および胆汁性肝硬変、拡張型心筋症、貧血、網膜色素変性症、クローン病、糖尿病性神経障害、肥満細胞症、卵巣癌、てんかん、重症筋無力症、自己免疫性疾患、肉芽腫性疾患、骨壊死、肝不全、ＰＭＤ疾患、脂肪異栄養症、脱髄疾患、軟骨疾患、網膜疾患、ループス腎炎、アルツハイマー病、外傷性脳損傷、肉腫、筋炎、高血糖症、黄斑変性症、潰瘍性大腸炎および筋肉変性、
からなる群から選択される疾患を治療するために投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
個人における幹細胞のリンパ組織への結合を阻害するための方法であって、リンパ組織に存在する胚中心の形成を阻害すること、またはリンパ組織の胚中心を破壊もしくは除去することを含む方法。
【請求項１４】
胚細胞の形成を阻害する、または胚細胞の破壊もしくは除去を促進する治療剤が個人に投与され、前記治療剤は、プリン類の合成を妨げる剤、抗代謝産物、放射線、免疫抑制剤、グルココルチコイド、抗ベータアミロイド剤、抗Ｒｈ因子、抗ＴＮＦ剤、抗エオタキシン、抗Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）剤、抗インターフェロン剤、抗インターフェロンアルファ剤、抗インターフェロンベータ剤、抗インターフェロンガンマ剤、抗ＴＧＦ剤、抗ＴＧＦアルファ剤、抗ＴＧＦベータ剤、抗インテグリン剤、抗アルファ４剤、抗インターロイキン剤、抗インターロイキン１剤、抗インターロイキン２剤、抗インターロイキン４剤、抗インターロイキン５剤、抗インターロイキン６剤、抗インターロイキン１２剤、抗インターロイキン１３剤、抗インターロイキン２３剤、抗ＩｇＥ剤、抗血管接着タンパク質（ＶＡＰ）剤、抗Ｂ７剤、抗血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）剤、抗ＢＡＦＦ（ＢＬｙＳ）剤、抗ＣＴＬＡ４剤、抗補体剤、抗ＣＤ２剤、抗ＣＤ３剤、抗ＣＤ４剤、抗ＣＤ５剤、抗ＣＤ２０剤、抗ＣＤ２３剤、抗ＣＤ２５ａ剤、抗ＣＤ４０剤、抗ＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌ）剤、抗ＣＤ６２Ｌ剤、抗ＣＤ８０剤、抗ＣＤ１４７剤、抗ＬＦＡ１剤、抗（ＣＤ１１ａ）剤、抗ＣＤ１８剤、プリン類合成阻害剤、ピリミジン合成阻害剤、抗増殖剤、抗代謝剤、抗葉酸在、および抗ｍＴＯＲ剤、からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記治療剤は、化学療法剤である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
リンパ組織の胚中心を再生するための方法であって、前記胚中心は化学剤、生物剤により、または放射線により損傷されたものであって、胚中心の再生を刺激する１つ以上の剤を投与することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願への相互参照】
【０００１】
本出願は、２０１０年８月１８日出願の米国仮特許出願第６１／３７４，９４３号、２０１１年２月１０日出願の米国仮特許出願第６１／４４１，４８５号および２０１１年３月４日出願の米国仮特許出願第６１／４４９，３７２号への優先権を主張するものである。前述の出願のすべては、その全体において参照することにより本明細書に組み込まれる。
【技術分野】
【０００２】
本開示の対象は、器官および組織に幹細胞が結合することを調節する方法および組成、ならびにリンパ組織の胚中心を再生させるための方法および組成に関する。
【背景技術】
【０００３】
再生医療は、損傷、または先天的欠陥により喪失した組織もしくは器官の機能を修復または置換するために、生きている機能的な組織を創出するプロセスである。この分野は、以前は修復不可能であった器官を、それら自身で治癒するように刺激することにより、身体の損傷した組織または器官を再生する可能性を秘めている。
【０００４】
組織や器官の機能を再生するために用いられている一つの方法は、幹細胞を、その影響を受けた器官や組織に送達することである。しかしながら、幹細胞は、たとえ幹細胞が直接傷ついた器官の組織へと注入されたときでも、組織再生の標的となった器官にあまり保持されない。ヒトおよび動物における画像解析により、送達された幹細胞のほとんどが、幹細胞の注入後一時間以内に脾臓内で見出されることが明らかにされている。また動物研究により、心筋梗塞を誘導した後、幹細胞治療の前に脾臓を外科的除去することにより、損傷を受けた心臓の機能的回復が改善することが、明らかにされている(Ｂｌｏｏｄ，Ｖｏｌ  ８４，Ｎｏ５：１４８２−１４９１，１９９４；ＮＡＴＵＲＥ  ４１０：７０１−７０５，２００１)。脾臓摘出手術はまた、ヒトの患者において、骨髄移植後の生着を改善することが明らかになっている（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  Ｄｅｖ  １３（１）：５１−６２，２００４；Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ．２８（２）：７３６−７，１９９６；Ａｍ  Ｊ  Ｈｅｍａｔｏｌ．２２（３）：２７５−８３,１９８６）。しかしながら、脾臓摘出手術は外科手術の死亡率、敗血症および生涯続く血栓性合併症ともまた関連付けられている（Ｂｌｏｏｄ  Ｒｅｖ．１４（３）：１２１−１２９，２０００；Ｌｅｕｋｅｍｉａ．１５（３）：４６５−４６７，２００１；Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  １３（２）：１７１−１７６，２００９）。
【０００５】
それゆえ、脾臓を除去することなく、脾臓および他のリンパ組織における幹細胞の局在を防ぐために用いられる方法および組成の開発する必要性がある。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、幹細胞がリンパ組織、特にリンパ節の胚中心および脾臓の胚中心へ結合することを阻害する治療剤（単数または複数）とともに、幹細胞を個人に投与することを含む、幹細胞がリンパ組織に結合することを阻害するための方法および組成を提供することにより、この必要性を満たす。「ともに」という用語は、幹細胞治療とともに、その前または後に、を意味する。「幹細胞治療」は、幹細胞を個人に投与すること、個人の内因性幹細胞貯蔵内から幹細胞を動員すること、または個人の内因性幹細胞貯蔵から幹細胞を自発的に放出することに依存することを意味する。
【０００７】
例えば、器官再生を導く幹細胞で治療された患者は、幹細胞治療後の死亡率の低下および機能の改善をはっきりと示しているが、幹細胞治療はほとんどの場合に器官損傷の前の機能の状態へ患者を回復させることはない。脾臓および他のリンパへの幹細胞の結合の減少により、損傷器官へ引き付けられ得る循環幹細胞の数は増加し、それによってその患者の幹細胞治療により誘導される機能回復の程度が増加する。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
幹細胞がリンパ組織へ結合することを阻害する治療剤の投与において、好ましくは治療の１〜１４日前に、より好ましくは３〜７日、最も好ましくは幹細胞治療または幹細胞動員の３〜４日前に、治療剤を投与する。当該個人の内因性幹細胞貯蔵からの幹細胞の自発的放出とともに幹細胞がリンパ組織へ結合することを阻害する治療剤の投与において、治療剤は、好ましくは１〜６０日、より好ましくは１〜３０日、最も好ましくは１〜１４日の期間にわたって、治療剤を投与する。
【０００９】
幹細胞がリンパ組織、特にリンパ組織の胚中心へ結合することを阻害する剤は、放射線、化学療法剤、免疫抑制剤およびＣＤ４５へのアンタゴニストおよびＣＤ２６へのアンタゴニストを含む。全血または骨髄からの単核分画内で見いだされる幹細胞、または全血もしくは骨髄から精製された幹細胞は、脾臓の白脾髄領域、さらに具体的には脾臓を含むリンパ組織の白脾髄における胚中心、さらにもっと具体的には脾臓の白脾髄における活性胚中心へ結合する。ＣＤ４５、特に３０−Ｆ１１ラットＩｇＧ２ｂ抗マウス抗ＣＤ４５モノクローナル抗体により識別されるエピトープに対する抗体は、脾臓の特定された場所への幹細胞の結合を減少させ、標的損傷器官への生体内分布のために幹細胞をより利用できるようにし、組織の再生の機能回復を増進する。
【００１０】
本発明の他の実施態様では、リンパ組織の活性胚中心を減少、破壊または除去し、それに従いリンパ組織への幹細胞の結合減少をもたらす治療剤を投与する。本発明の他の実施態様は、幹細胞の脾臓への結合を減少するために、脾臓の活性胚中心の数を減少させ、それによって修復の必要な損傷器官へ送達またはホーミングするために利用可能な循環幹細胞の数を増加させる方法を表す。免疫応答を抑制する薬剤は、脾臓および他のリンパ組織内の活性胚中心の数を減少させ得る。免疫調整剤の一般的な区分は、プリン類の合成を妨げる剤、抗代謝産物、放射線、脾臓への放射線照射、免疫抑制剤、グルココルチコイド、抗ベータアミロイド剤、抗Ｒｈ因子、抗ＴＮＦ剤、抗エオタキシン、抗Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）剤、抗インターフェロン剤、抗インターフェロンアルファ剤、抗インターフェロンベータ剤、抗インターフェロンガンマ剤、抗ＴＧＦ剤、抗ＴＧＦアルファ剤、抗ＴＧＦベータ剤、抗インテグリン剤、抗アルファ４剤、抗インターロイキン剤、抗インターロイキン１剤、抗インターロイキン２剤、抗インターロイキン４剤、抗インターロイキン５剤、抗インターロイキン６剤、抗インターロイキン１２剤、抗インターロイキン１３剤、抗インターロイキン２３剤、抗ＩｇＥ剤、抗血管接着タンパク質（ＶＡＰ）剤、抗Ｂ７剤、抗血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）剤、抗ＢＡＦＦ（ＢＬｙＳ）剤、抗ＣＴＬＡ４剤、抗補体剤、抗ＣＤ２剤、抗ＣＤ３剤、抗ＣＤ４剤、抗ＣＤ５剤、抗ＣＤ２０剤、抗ＣＤ２３剤、抗ＣＤ２５ａ剤、抗ＣＤ４０剤、抗ＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌ）剤、抗ＣＤ６２Ｌ剤、抗ＣＤ８０剤、抗ＣＤ１４７剤、抗ＬＦＡ１剤、抗（ＣＤ１１ａ）剤、抗ＣＤ１８剤、プリン類合成阻害剤、ピリミジン合成阻害剤、抗増殖剤、抗代謝剤、抗葉酸在、および抗ｍＴＯＲ剤を含む。
【００１１】
アデノシンデアミナーゼ欠損も活性胚中心の欠損をもたらす、デオキシＡＴＰの蓄積をもたらす剤も同様である（Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７１：５５６２−５５７０，  ２００３）。同様に、活性化ＣＣＲ７の発現を増強する剤は、活性胚中心形成の縮小をもたらす。
【００１２】
化学療法剤も、リンパ組織の胚中心の形成を阻害、または胚中心を破壊もしくは除去するために用いられ得る。代表的な例は、アルキル化剤、抗代謝剤、植物アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、抗新生物剤、三酸化ヒ素を含む。
【００１３】
アルキル化剤の例として、シスプラチンおよびカルボプラチンを含み、オギザリプラチンもまたアルキル化剤である。それらは、生物学的に重要な分子におけるアミノ、カルボキシル、スルフヒドリルおよびリン酸基と共有結合を形成することにより、細胞機能を損なう。
【００１４】
抗代謝剤の例、ＤＮＡの構成要素となるアザチオプリン、メルカプトプリン、カペシタビンフルオロウラシル。それらは、これら物質が（細胞周期の）「Ｓ」期の間にＤＮＡへ取り込まれるのを妨害し、正常な発達と分割を中断する。それらはまたＲＮＡ合成にも影響する。それらの効果により、これら薬物はもっとも広く用いられる細胞増殖抑制剤となっている。
【００１５】
アルカロイドはビンカ・アルカロイドおよびタキサンを含む。ビンカ・アルカロイドはビンクリスチン、ビンブラスチン、酒石酸ビノレルビン、ビンデシンを含む。タキサンはタキソール、パクリタキセル、ドセタキセルを含む。
【００１６】
トポイソメラーゼは、ＤＮＡのトポロジーを維持する必須の酵素である。Ｉ型またはＩＩ型トポイソメラーゼの阻害は、ＤＮＡ固有の超らせんを混乱させることにより、ＤＮＡの転写および複製を妨げる。いくつかのＩ型トポイソメラーゼ阻害剤は、イリノテカンおよびトポテカンであるカンプトテシン類を含む。ＩＩ型トポイソメラーゼ阻害剤の例は、アムサクリン、エトポシド、エトポシドリン酸塩およびテニポシドを含む。
【００１７】
抗新生物剤は、ダクチノミシン、ドキソルビシン、エピルビシンおよびブレオマイシンを含む。
【００１８】
定義
本発明の実施態様を表すために用いられる定義。
【００１９】
本明細書で用いられるアゴニストという用語は、特定の受容体または当該受容体の効果（単数または複数）を調整するために必須な下流シグナル経路を活性化するすべての実体を意味する。アゴニストは、抗生物質、抗体断片、可溶性リガンド、小分子、環状ペプチド、架橋剤を含みうるがこれらに限定されない。
【００２０】
本明細書で用いられるアンタゴニストという用語は、受容体の対の構造物（単数または複数）の結合または特定の受容体の活性化または受容体の効果（単数または複数）を調整するために必須の下流シグナル経路を妨げるすべての実体を意味する。アンタゴニストは、抗体、抗体断片、可溶性リガンド、Ｆｃ融合受容体、キメラ受容体、小分子、環状ペプチド、ペプチドを含みうるがこれらに限定されない。
【００２１】
本明細書で用いられる阻害剤という用語は、特定のリガンドまたはその受容体の標的効果を減少させるすべての実体を意味する。阻害剤は小分子、アンチセンス剤、ｓｉＲＮＡおよびｍｉｃｒｏＲＮＡを含む核酸でありうる。
【００２２】
リンパ組織、リンパ節、脾臓および胚中心
リンパ組織は、リンパ系における、多数のリンパ球を含有する特殊化された形態の網様結合組織である。この組織型は、脾臓、胸腺、扁桃腺、ならびに、すべてが消化管の粘膜と関連する内臓リンパ節、パイエル板および乳糜管を構成する。
【００２３】
リンパ節は、免疫系の小さなボール状の器官であり、腋下および胃／消化管を含む全身に広く分布し、リンパ管で繋がっている。リンパ節は、Ｂ細胞、Ｔ細胞および他の免疫細胞の駐屯部位である。リンパ節は全身にあり、外来粒子に対するフィルターやトラップとしての機能を果たす。リンパ節は線維性被膜に囲まれており、リンパ節の内部では線維性被膜が広がり小柱を形成する。リンパ節の実体は外皮質と内部髄質に分けられ、髄質が直接表面と接触する門における場所を除き、内部髄質はすべて外皮質により囲まれる。外皮質は主に小胞として配置されるＢ細胞から成り、抗原にチャレンジされた際に胚中心を発達させることができ、深層皮質は主にＴ細胞から成る。Ｔ細胞（または主に赤血球）が主に樹状細胞と接触し、網様ネットワークが濃い、皮質下区分として知られる区分がある。
【００２４】
脾臓は、腹部の左側、胃と横隔膜の間に位置する腹腔内の器官である。この器官は免疫系の主要な調節部である。血管に富む器官であり、多くの動脈血の供給を受けている。脾臓に入ると、血液の流れは拡張した血管の網、またはリンパ球の大きな集団の間に位置する「洞」に入る。洞の壁は貪食細胞を含み、貪食細胞は血液中で死細胞および外来粒子を飲み込み、全身循環からそれらを除去する能力がある。リンパ節と同じように、脾臓は抗体の重要な源であるが、しかしながらリンパ節よりも大いに、脾臓は、異常または正常に磨滅した（死んでいる）赤血球を、それらを破壊することにより、循環から除去することに関連づけられている。
【００２５】
脾臓は、白脾髄と赤脾髄の両方を含む。脾臓の赤脾髄はマクロファージを保持し、マクロファージは通常、老化または不完全な赤血球（ＲＢＣ）および抗体で覆われた細菌または赤血球を循環からろ過し除去する。脾臓の白脾髄はリンパ領域を含み、免疫の監視および応答にとって極めて重要である。それは侵入病原体に対する抗体を合成し、出血や感染に応答して血小板および好中球を放出する。成長の間、脾臓は、（妊娠６週目で）最初の造血部位であることを含む多様な役割を持つと考えられている。脾臓は、成長の早期段階の間で、骨髄造血が取って代わると、その造血機能を失うと長い間考えられていたが、最近の研究により大人の脾臓が、幹細胞の発生、幹細胞の異なる系への分化および幹細胞の貯蔵の部位であることが明らかになった（Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  １１（６）：２７１−２７６，２００５；）。しかしながら、外因性の幹細胞が蓄積する脾臓内の部位および外因性の幹細胞が脾臓に結合する分子メカニズムは分かっていない。
【００２６】
脾臓の白脾髄の動脈周囲リンパ鞘（ＰＡＬＳ）は主にＴ細胞が居るが、リンパ部分は主にＢ細胞が居る。胚中心（ＧＣ）は、リンパ節または末梢リンパ組織中のリンパ節内の部位であり、脾臓の白脾髄内では、他では中心細胞として知られる、集中した成熟Ｂリンパ球が急速に増殖、分化し、抗体反応の間に体細胞超変異およびクラススイッチを経て成熟する部位である。胚中心はＢ細胞液性免疫反応の重要な部位である。それらはＴ依存抗原によるＢ細胞の活性化の後に動的に発達する。組織学的には、ＧＣはリンパ組織内で微視的に識別可能な部位として描写される。活性化Ｂ細胞は原発巣から一次濾胞小胞システムへと移動し、濾胞樹状細胞（ＦＤＣ）の環境内でモノクローナルな増殖を開始する。
【００２７】
増殖の数日後、Ｂ細胞は抗体をコードするＤＮＡを変異し、それに従い胚中心でクローンの多様性を発生させる。これは体細胞超変異に起因するランダムな置換、欠損および挿入を含む。ＦＤＣからのいくらかの未確認の刺激で、成熟中のＢ細胞（胚中心細胞）は、暗調域から明調域へと移動し、それらの抗体を表面へと曝し始め、この段階で中心細胞と呼ばれる。中心細胞はアポトーシスを活性化された状態にあり、抗原を提示するＦＤＣからの生存シグナルを得るために争う。この救済プロセスは、抗原への抗体の親和性に依存すると信じられている。機能性Ｂ細胞はその後、最終分化シグナルを得るためにヘルパーＴ細胞と相互作用する。このことはまた、たとえばＩｇＭからＩｇＧへのアイソタイプ転換を含む。Ｔ細胞との相互作用は、自己反応性抗体の産生を防ぐと信じられている。Ｂ細胞は、抗体を発散するプラズマ細胞、または次に同じ抗原と接触した場合に活性化されるメモリーＢ細胞のいずれかになる。リサイクル仮説によると、それらはまた、増殖、変異および選別の全プロセスを再開しうる。
【００２８】
脾臓の白脾髄領域に含まれるＢ細胞は、特異的な分子マーカーで染色されることで識別される特有の領域へとさらに分離されることができる。脾臓の境界域は、白脾髄に隣接し白脾髄と赤脾髄の間の分離を作り出す非循環成熟Ｂ細胞を含み、ＣＤ２１およびＩｇＭおよびＣＤ２４およびＣＤ７９ａを高いレベルで、そしてＣＤ９とＣＤ２２を測定可能なレベルで発現する。マントル域は正常な胚中心濾胞を囲み、ＣＤ２１、ＣＤ２３およびＣＤ３８を発現する。濾胞域は胚中心の中に含まれ、ＩｇＤおよびＣＤ２３を高レベルで、ＣＤ２１およびＣＤ２４を中間レベルで発現し、ＰＮＡ染色により識別されうる。胚中心はＰＮＡ結合によりもっとも良く識別され、濾胞域よりＣＤ５４を高レベルで発現する。胚中心は、すべての胚中心において均一に分布するように見えるヘルパーＴ細胞の特別な集団を有する。胚中心は、ヘルパーＴ細胞を要する免疫応答に伝統的に関連づけられるが、これは絶対的ではない。胚中心は、超可変遺伝子変異が発生し、高い親和性のＩｇＧを産生するＢ細胞が産生される場所である。活性胚中心は明らかなマクロファージおよびＣＤ２１を発現する樹状細胞を有する。濾胞中心はまたＣＤ４５Ｒ（Ｂ２２０）の発現により識別される（Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，３５：３６６−３７５，２００７）。ＣＤ４５Ｒ濾胞中心はＢｃｌ６およびＢｃｌ２を発現する胚中心を囲んで見出される（ＢｉｏＥｓｓａｙｓ  ２９：１６６−１７７，  ２００７；Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐａｔｈｏｌ  ３４（５）：６４８−６５５，（２００６））。
【００２９】
ＣＤ４５は、普遍的な白血球抗原であり、ＰＴＰＲＣ（タンパク質チロシンフォスファターゼ、受容体タイプＣ）としてもまた知られ、赤血球およびプラズマ細胞を除くすべての分化造血細胞上に見いだされる。それはまたリンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病、ヘアリー細胞白血病および急性非リンパ球性白血病において発現される。それはＢおよびＴ細胞抗原受容体シグナル伝達において必須であることが示されている。ＣＤ４５ファミリーは、複数のメンバーからなり、それらはすべて単一の複合遺伝子の産物である。この遺伝子は３４のエクソンを含み、一次転写物の３つのエクソンはまたスプライスを受けて８つの異なる成熟ｍＲＮＡと翻訳後には８つの異なるタンパク質産物を生み出す。これらの３つのエクソンは、ＲＡ、ＲＢおよびＲＣアイソフォームを産生する。
【００３０】
ＣＤ４５抗原の様々なアイソフォームが存在する。ＣＤ４５抗原のアイソフォームは、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＣ、ＣＤ４５ＲＡＢ、ＣＤ４５ＲＡＣ、ＣＤ４５ＲＢＣ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４５Ｒ（ＡＢＣ）を含む。ＣＤ４５ＲＡは、ナイーブＴ細胞上に位置し、ＣＤ４５ＲＯは、メモリーＴ細胞上に位置する。ＣＤ４５はまた、高度にグリコシル化されている。ＣＤ４５Ｒは最も長いタンパク質であり、Ｔ細胞から分離されるときには２００キロダルトンに移行する。Ｂ細胞もまた、２２０キロダルトンの分子量を持ち、ゆえに名前がＢ２２０（２２０キロダルトンのＢ細胞アイソフォーム）である、より重度にグリコシル化されたＣＤ４５Ｒを発現する。Ｂ２２０の発現は、Ｂ細胞に限定されず、活性化Ｔ細胞、樹状細胞のサブセットおよび他の抗原提示細胞上にもまた発現される。ナイーブＴリンパ球は、大きなＣＤ４５アイソフォームを発現し、通常はＣＤ４５ＲＡ陽性である。活性化およびメモリーＴリンパ球は、ＲＡ，ＲＢおよびＲＣエクソンが欠落した最も短いＣＤ４５アイソフォームであるＣＤ４５ＲＯを発現する。この最も短いアイソフォームはＴ細胞活性化を促進する。ＣＤ４５の細胞質ドメインは、最も大きい既知のものの一つであり、Ｌｃｋ（Ｔ細胞において）またはＬｙｎ／Ｆｙｎ／Ｌｃｋ（Ｂ細胞において）と呼ばれるチロシンキナーゼ上の抑制性リン酸基を除去し、それを活性化する内因性のフォスファターゼ活性を有する。ＣＤ４５は単量体および二量体の両方の形で存在することができ、二量体化はＣＤ４５のフォスファターゼ活性を低下させうる（Ｂｌｏｏｄ  ｖ１０３（９）：３４４０−３４４７，２００４）。
【００３１】
ＣＤ４５はすべての造血細胞上で発現されており、すべての造血抗原の中で最も広く発現されているものであるため、移植および他の幹細胞再構築において造血幹細胞をもまた含む集団の分離に用いられているが、しかしながら、間葉系幹細胞は、ＣＤ４５＋早期前駆細胞の集団から誘導されるが、ほとんどの場合、ＣＤ４５陰性で見いだされる（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  ２８：１４０−１５１，２０１０）。すべてのＣＤ４５アイソフォームの完全な欠落は、幹細胞の保持、運動性および骨髄へのホーミングに影響することや、脾臓での早期幹細胞からの機能性Ｂ細胞の産生において役割を果たすことが、マウスで証明されている（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０５：２３８１−２３９５，２００８）。興味深いことに、すべてのＣＤ４５アイソフォームを欠落しているＣＤ４５ノックアウトマウスは、骨髄におけるｃＫｉｔ＋Ｌｉｎ−の造血前駆細胞の数が減少していたが、脾臓内での数は増加していた。
【００３２】
３０−Ｆ１１は、マウス由来の胸腺および脾臓に対して生成されるラットモノクローナルＩｇＧ２ｂである。クローン３０−Ｆ１１は自己抗原（ＣＤ４５．１およびＣＤ４５．２）およびすべてのＣＤ４５アイソフォームの両方と反応する。３０−Ｆ１１およびクローン３０−Ｆ４はそれぞれ、他方がＣＤ４５に結合するのを阻害し、それらがＣＤ４５上の同じ、または重複するエピトープに結合することを示唆している（Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １２７（３）：９８２−９８６，１９８１）。同様に、これらのクローンの両方は、Ｄｅｎｎｅｒｔらにより記述される抗体と交差阻害するが、しかしながら抗ＣＤ４５抗体５５−６．１は３０−Ｆ１１または３０−Ｆ４のいずれとも交差阻害しない（Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ５３：３５０−３６４，１９８０）。
【００３３】
放射性標識３０−Ｆ１１抗体は、マウス脾臓で最も高い蓄積（６０％）、髄質でわずか２０％の蓄積を示し（Ｂｌｏｏｄ  ９３（２）：７３７−７４５，１９９９）、マウスで標的造血照射をもたらすために用いられる。ＣＤ４５はすべての造血細胞上で発現されているために、３０−Ｆ１１抗体は、マウスの筋肉からの幹細胞分画の識別のために、Ｓｃａ１抗原とともに用いられている（ＰＮＡＳ  ９９  １３４１−１３４６，２００２）。放射性標識された３０−Ｆ１１および３０−Ｆ１１のｆ（ａｂ）‘２断片が放射線療法を送達する方法として評価されている。３０−Ｆ１１の取り込みは、マウスの脾臓で最も劇的であり、次いで腋窩リンパ節が続く。(Cancer Res 52(5):1228-34, 1992)
ＣＤ４５ポリペプチドは、公表されている手段により製造することができる。抗ＣＤ４５ポリクローナルおよびモノクローナル抗体の作製方法は、本技術分野でよく知られている（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９）；およびＨｕｒｒｅｌｌ，Ｊ．Ｇ．Ｒ．，Ｅｄ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．，１９８２）を参照のこと）。当業者には明白なように、ポリクローナル抗体は、馬、牛、山羊、羊、犬、鶏、ウサギ、ネズミおよびラットなどのような様々な温血動物から産生することができる。ヒト化抗体の作製が良く知られている。例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  Ｌ，Ｃｌａｒｋ  Ｍ，Ｗａｌｄｍａｎｎ  Ｈ，Ｗｉｎｔｅｒ  Ｇ（１９８８）“Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅｒａｐｙ”Ｎａｔｕｒｅ  ３３２（６１６２）：３３２：３２３．、Ｑｕｅｅｎ  Ｃ，Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ  ＷＰ，Ｓｅｌｉｃｋ  ＨＥ，Ｐａｙｎｅ  ＰＷ，Ｌａｎｄｏｌｆｉ  ＮＦ，Ｄｕｎｃａｎ  ＪＦ，Ａｖｄａｌｏｖｉｃ  ＮＭ，Ｌｅｖｉｔｔ  Ｍ，Ｊｕｎｇｈａｎｓ  ＲＰ，Ｗａｌｄｍａｎｎ  ＴＡ（Ｄｅｃ  １９８９）“Ａ  ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈａｔ  ｂｉｎｄｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ２  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．”Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．８６（２４）：１００２９−３３、Ｎｏｒｄｅｒｈａｕｇ  Ｌ，Ｏｌａｆｓｅｎ  Ｔ，Ｍｉｃｈａｅｌｓｅｎ  ＴＥ，Ｓａｎｄｌｉｅ  Ｉ．（Ｍａｙ  １９９７）“Ｖｅｒｓａｔｉｌｅ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｔｒａｎｓｉｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｔａｂｌｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ．”Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０４（１）：７７−８７を参照のこと。
【００３４】
幹細胞がリンパ組織に結合することを阻害する方法および剤
他の特定の実施態様は、脾臓を分化４５（ＣＤ４５）抗原の群に対するアンタゴニストの溶液へ脾臓を暴露することにより、幹細胞が脾臓に結合することを調整する方法を提供する。ＣＤ４５抗原に対するアンタゴニストの溶液は、３０−Ｆ１１エピトープに結合するように構成または処方されうる。ＣＤ４５抗原に対するアンタゴニストの溶液は、損傷組織または器官への幹細胞の輸送を強化することにより再生治療を促進するように処方されうる。ＣＤ４５抗原に対する抗体を含む溶液は、３０−Ｆ１１エピトープおよび３０Ｆ−１１のヒト相当物に結合するように処方されうる。
【００３５】
本発明は、リンパ節および脾臓などのようなリンパ組織へ幹細胞が結合することを減少させるための方法を記述し、ヒト患者を治療するためにこれらの方法を使用する。本発明は、脾臓において循環幹細胞が結合する脾臓の場所の中の特定の部位と、この部位に幹細胞が結合することを増加または減少させるための方法を記述する。新鮮で厚い脾臓の切片の免疫蛍光および組織学的分析により、血管系を循環する幹細胞は、実施例１、２、３および４において示されるように、インビボまたはエクスビボのいずれかで投与された際、脾臓の活性胚中心に結合することが明らかになった。脾臓に結合する幹細胞の量を減らすための一つの方法は、投与された幹細胞が脾臓の活性胚中心上の分子標的に結合することを妨げる剤を供給することである。本発明のプロセスによると、３０−Ｆ１１抗体はマウスＣＤ４５抗原に結合し、幹細胞がマウス脾臓の胚中心に結合することを妨げる。３０−Ｆ１１ラットＩｇＧ２ｂ抗マウスＣＤ４５の相当物かもしれない抗ヒト抗ＣＤ４５抗体は、ヒトのエピトープＰを認識するＹＡＭＬ５６８（Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  ４７：１３３５−１３４１，２００６；Ｉｎ：  Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  ＩＩＩ：Ｗｈｉｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ  ｐｐ８１１−８１４，１９８７；Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ４０：５３８−５４４，１９８５）、抗ＣＤ４５クローンＨＩ３０またはＹＴＨ−２４およびＹＴＨ−５４抗ヒト抗ＣＤ４５抗体を含む。
【００３６】
他の本発明の実施態様は、幹細胞が胚中心へ結合することを阻害するＣＤ２６に対する抗体などのような、ＣＤ２６に対するアンタゴニストの使用である。ＣＤ２６が幹細胞により発現されるとき、リンパ組織、特にリンパ組織の胚中心に接着する幹細胞上に提示される抗原である。幹細胞上のＣＤ２６を妨げることにより、幹細胞はリンパ組織に結合できなくなる。
【００３７】
胚中心形成を阻害、下方制御または胚中心を破壊または除去する剤
他の本発明の実施態様は、胚中心の増殖を阻害もしくは下方制御または胚中心を破壊もしくは除去することにより、幹細胞がリンパ組織に結合することを阻害することである。胚中心（ＧＣ）は、Ｔ依存性抗原によるＢ細胞の活性化の後、動的に発達する。Ｂ細胞を活性化し、それによって胚中心の増殖を誘導するＴ細胞抗原は、Ｂ細胞上に存在するＣＤ４０受容体に結合するＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４としても知られる）である。ＣＤ４０受容体へのＣＤ４０のこの結合は、Ｂ細胞を活性化するだけでなく、胚中心の増殖もまた誘導する。それゆえに、本発明のその他の実施態様は、ＣＤ４０へのＣＤ４０Ｌの結合を阻害する剤を個々人へ投与することが含まれる。そのような剤の例として、ＣＤ４０またはＣＤ４０Ｌへのアンタゴニスト的な抗体がある。
【００３８】
胚中心の発達にとって重要な他のタンパク質は、「シグナル伝達リンパ球活性化分子関連タンパク質」（ＳＡＰ）である（Ｈａｉ  Ｑｕｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４５５：７６４−７６９（２００８）。ゆえに、ＳＡＰに対する抗体は、胚中心の形成を阻害し、故にリンパ組織への幹細胞の結合を阻害するであろう。
【００３９】
ＩＬ−２１は、胚中心のＢ細胞分化にとって重要なもうひとつのポリペプチドであり、Ｂ細胞に備わるメカニズムを通して急増する。ＩＬ−２１シグナル伝達の欠落は、タンパク質抗原に対するＢ細胞応答に多大な影響を与え、脾臓および骨髄のプラズマ細胞の形成、ならびにＧＣの持続性および機能が減少し、それらの増殖、メモリーＢ細胞への遷移およびアフィニティー成熟に影響を与える（Ｚｏｔｏｓ，Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．ＪＥＭ  ２０７：３６５−３７８（２０１０））。ゆえに、ＩＬ−２１に対する抗体などのようなアンタゴニストをある人に投与することによって、胚中心は下方制御され、それらの形成が阻害される。このことは、リンパ組織における胚中心の欠落により、幹細胞がリンパ組織および脾臓へ結合することを阻害する。
【００４０】
化学療法剤は、幹細胞が、リンパ節、パイエル板および脾臓の白脾髄を含むリンパ組織の胚中心へ結合することを阻害することができる。また、免疫応答を抑制する剤は、脾臓の活性胚中心の数を減少させうる。そのような剤として、以下のものが含まれる。
【００４１】
好ましくは幹細胞投与の３〜４日前に、毎日、３〜５ｍｇ／ｋｇで投与される、アザチオプリン（ＩＭＵＲＡＮ（登録商標）、Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）。アザチオプリンは、ＤＮＡ合成に必要なプリン類（アデニンおよびグアニン）の合成を阻害する。Ｔ細胞およびＢ細胞を含む、急速に増殖する細胞はとりわけプリン類合成阻害による影響を受ける。
【００４２】
デキサメタゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾンリン酸ナトリウムおよびベータメタゾンなどのようなコルチコステロイド。デキサメタゾン錠剤（Ｍｅｒｃｋ）およびデキサメタゾンリン酸ナトリウム注入は、幹細胞治療の１〜１４日前に、より好ましくは３〜７日前に、最も好ましくは３〜４日前に施される。投与されるデキサメタゾンの総量は、幹細胞がリンパ組織に結合できないようにリンパ組織の胚中心を下方制御するのに十分な量である。その期間中のデキサメタゾンの総量は、２ｍｇから３ｇの範囲であり、好ましくは合計で２７ｍｇである。デキサメタゾンの日々の量は、一日当たり０．７５ｍｇから７００ｍｇの範囲であり、好ましくは一日当たり７ｍｇである。他のグルココルチコイドステロイドのように、デキサメタゾンはリンパ組織の胚中心の形成および増殖を阻害する。
【００４３】
ミコフェノール酸（Ｍｙｆｏｒｔｉｃ（登録商標）遅延放出カプセル、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  Ｅａｓｔ  Ｈａｎｏｖｅｒ、Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｒｙ、１日２回７２０ｍｇ（一日量の総量１４４０ｍｇ）を食物摂取の１時間前または２時間後、空腹時に投与）好ましくは幹細胞投与の３〜４日前に投与。（ＣｅｌｌＣｅｐｔ（登録商標）Ｒｏｃｈｅ  Ｌａｂｓ、Ｎｕｔｌｅｙ、ＮＪ、ミコフェノール酸モフェチル）錠剤およびカプセル、経口懸濁液、ミコフェノール酸モフェチル塩酸塩）静脈内注射のために、ミコフェノール酸の２−モルホリノエチルエステル（ＭＰＡ）、好ましくは幹細胞投与の３〜４日前に、静脈内注射で１ｇを一日２回投与、経口で１．５ｇを１日２回投与する。それは、ＢおよびＴリンパ細胞の増殖において用いられるプリン類合成の新たな経路でグアニン一リン酸塩の合成比率を制御する酵素である、イノシン一リン酸塩デヒドロゲナーゼを阻害する。ミコフェノール酸は効力が高く、より古い抗増殖アザチオプリンに代わり使用されることができる。それは通常、カルシニューリン阻害剤（シクロスポリンまたはタクロリムス）およびプレドニゾロンもまた含む、３化合物の免疫抑制剤処方計画の一部として用いられる。
【００４４】
レフルノミド、Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ  Ｕ．Ｓ．ＬＬＣ、Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ、ＮＪ  幹細胞投与の３〜４日前に、一日当たり１００ｍｇで３日間。レフルノミドは、化学的および薬理学的に非常に不均一である、ＤＭＡＲＤ（疾患修飾性抗リウマチ剤）薬物群に属するピリミジン合成阻害剤である。レフルノミドは、ジヒドロオロット酸デヒドロゲナーゼ（新たなピリミジン合成にかかわる酵素）（略語はＤＨＯＤＨ）を阻害する免疫調節剤である。
【００４５】
テリフルノミドは、レフルノミドの活性代謝物であり、Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ  Ｕ．Ｓ．ＬＬＣ、Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ、ＮＪ  好ましくは幹細胞投与の３〜４日前に、一日当たり１００ｍｇで３日間。
【００４６】
メトトレキサートは、代謝抵抗物質および抗葉酸薬である。それは葉酸の代謝を阻害することにより作用する。一日当たり１５〜３０ｍｇの量で５日間まで、好ましくは幹細胞投与の３〜４日前に、経口または筋肉内注射で投与される。Ｍｙｌａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｍｏｒｇａｎｔｏｗｎ、Ｗｅｓｔ  Ｖｉｒｇｉｎｉａ。
【００４７】
免疫抑制剤マクロライドは、以下である。
【００４８】
タクロリムスは、Ｔ細胞によるインターロイキン−２（ＩＬ−２）の産生を減少する。好ましくは幹細胞投与の３〜４日前に、カプセルまたは注入の形態で、０．１０〜０．１５ｍｇ／ｋｇ／日（Ａｓｔｅｌｌａｓ  Ｐｈａｒｍａ  ＵＳ、Ｉｎｃ．Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ、ＩＬ）。
【００４９】
シクロスポリン。シクロスポリンは、免疫応答性リンパ球、特にＴリンパ細胞の細胞基質タンパク質シクロフィリン（イムノフィリン）に結合すると考えられている。カプセル、経口溶液または注入の形態で、Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標）として市販され、好ましくは幹細胞投与の３〜４日前に１４〜１８ｍｇ／ｋｇ／日で投与される（Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｅａｓｔ  Ｈａｎｏｖｅｒ、Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）。
【００５０】
ピメクロリムス（エリデル）は、アスコマイシンマクロラクタムの誘導体である。ピメクロリムスはマクロフィリン−１２に結合し、カルシニューリンを阻害することが、インビトロで示されている。ゆえに、ピメクロリムスはＴ細胞からのサイトカインの合成および放出を阻害することにより、Ｔ細胞の活性化を阻害する。ピメクロリムスはまた、肥満細胞からの炎症性サイトカインおよびメディエータ―の放出を妨げる。ピメクロリムスは、好ましくは幹細胞治療の前に、６週間まで、１％クリームの局所剤として使用される。
【００５１】
グスペリムスは、抗腫瘍抗生剤スペルグアリンの誘導体であり、インターロイキン２刺激性のＳおよびＧ２／Ｍ期へのＴ細胞成熟化、およびＴ細胞のＩＦＮ−ガンマ分泌Ｔｈ１エフェクターＴ細胞への分裂を阻害し、活性化ナイーブＣＤ４Ｔ細胞の増殖阻害をもたらす。０．５ｍｇ／ｋｇ／日、皮下注射にて連続で２１日間、好ましくは幹細胞投与の３〜４日前に完了させて、投与される。日本化薬株式会社。
【００５２】
エベロリムス（ＲＡＤ−００１）は、好ましくは幹細胞投与の３〜４日前に、１０ｍｇ／日の量で経口的に投与される。Ｎｏｖａｒｔｉｓ、Ｅａｓｔ  Ｈａｎｏｖｅｒ、ＮＪ、ｔｒａｄｅｎａｍｅｓ  Zｏｒｔｒｅｓｓ（ＵＳＡ）の下。
【００５３】
サリドマイド。サリドマイドはＴＮＦαのレベルを下げうる（ＴＨＡＬＯＭＩＤ（登録商標）、Ｃｅｌｇｅｎｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓｕｍｍｉｔ、ＮＪ）。好ましくは幹細胞投与の３〜４日前に、夕食後１時間、好ましくは就寝時、許容される投薬は１００〜３００ｍｇ／日である。
【００５４】
レナリドマイドは、腫瘍壊死因子−アルファの阻害においてサリドマイドの５０，０００倍強力なサリドマイドの誘導体で、薬物副作用がより少ない。Ｃｅｌｇｅｎｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓｕｍｍｉｔ、ＮＪ）好ましくは幹細胞投与の３〜４日前に、１〜２１日目において、１日１回経口で２５ｍｇ。
【００５５】
アナキンラは、ヒトＩＬ−１ＲＡ（受容体アンタゴニストに対するＲＡ）Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標）  Ｂｉｏｖｉｔｒｕｍ、Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ、Ｓｗｅｄｅｎの、非グリコシル化型組換体であり、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、それぞれ単回投与で、１００ｍｇを含有する注射濃度として供給される。
【００５６】
インフリキシマブ（商品名はＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））は、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）に対するモノクローナル抗体である。Ｃｅｎｔｏｃｏｒ  Ｏｒｔｈｏ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｈｏｒｓｈａｍ、ＰＡ  幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、３ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇまでの投与量で、静脈注入により投与される。
【００５７】
ゴリムマブ（ＣＮＴＯ  １４８）はヒトモノクローナル抗体であり、商標名はＳｉｍｐｏｎｉとして市販されている。ゴリムマブはＴＮＦ−アルファを標的とする。Ｃｅｎｔｏｃｏｒ  Ｏｒｔｈｏ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、  Ｈｏｒｓｈａｍ、  ＰＡ、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、０．５ｍｌ中、５０ｍｇで皮下注射として投与される。
【００５８】
アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ｎｏｒｔｈ  Ｃｈｉｃａｇｏ，  ＩＬ）はＴＮＦ阻害剤であり、アダリムマブはＴＮＦαに結合し、ＴＮＦ受容体の活性化を阻害する。アダリムマブは完全ヒトモノクローナル抗体から作成され、０．８ｍｌシリンジに前もって充填、またはペンデバイスに前もって充填の両方で、それぞれアダリムマブ４０ｍｇを含み、市販される。幹細胞投与の前に胚中心を下方制御するために、幹細胞投与の前の７〜１４日以内に、好ましくは３〜７日、少なくともアダリムマブ４０ｍｇが投与されなければならない。幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜７日以内に、好ましくは２回、アダリムマブ４０ｍｇ量が投与されなければならない。
【００５９】
セルトリズマブペゴールは、腫瘍壊死因子アルファに対するモノクローナル抗体である。より正確には、それはヒト化ＴＮＦ阻害モノクローナル抗体のＰＥＧ修飾Ｆａｂ’断片である。それは、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、２回の２００ｍｇの皮下注射、注射として投与される（ＵＣＢ  Ｉｎｃ．、Ａｔｌａｎｔａ、Ｇｅｏｒｇｉａ）。
【００６０】
テムシロリムス（Ｐｆｉｚｅｒ  Ｃｏｒｐ．）は、ｍＴＯＲ（ラパミシンの哺乳類標的）の特異的阻害剤であり、腫瘍細胞の増殖、成長および生存を調節するタンパク質合成に干渉する。テムシロリムスの推奨投与量は、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、３０〜６０分以上での２５ｍｇの静脈内注入である。
【００６１】
ゾタロリムスは、ラパミシンの半合成誘導体である。、Ａｂｂｏｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｎｏｒｔｈ  Ｃｈｉｃａｇｏ  ＩＬ）。
【００６２】
ビオリムス  Ａ９  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ。
【００６３】
エクリズマブ（商標名は、Ｓｏｌｉｒｉｓ）は、補体タンパク質Ｃ５に対するモノクローナル抗体である。この抗体はＣ５の開裂を妨げ、補体介在細胞の破壊プロセスを停止させる。Ｓｏｌｉｒｉｓは、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に６００ｍｇ投与量または９００ｍｇ投与量で投与される静脈内注射として投与される（Ａｌｅｘｉｏｎ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓＣｈｅｓｈｉｒｅ, ＣＴ）。
【００６４】
メポリズマブ（提案されている商標名はＢｏｓａｔｒｉａ）は、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に７５０ｍｇの注射として投与される、インターロイキン５（ＩＬ−５）を認識するヒト化モノクローナル抗体である。ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ, Ｋｉｎｇ ｏｆ Ｐｒｕｓｓｉａ, ＰＡ.
オマリズマブ（商標名はＸｏｌａｉｒ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）は、ヒト化抗体である。オマリズマブは、ヒトイムノグロブリンＥ（ＩｇＥ）に選択的に結合する、組換えＤＮＡ誘導ヒト化ＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体である。Ｘｏｌａｉｒ（オマリズマブ）の１５０〜３７５ｍｇが、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、皮下注射で投与される。
【００６５】
ネレリモマブ（ＢＡＹＸ）は、マウス抗ＴＮＦ抗体であり、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇで投与されることができる。
【００６６】
ファラリモマブは、マウス抗ＴＮＦ抗体であり、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇで投与されることができる。
【００６７】
エルシリモマブ（Ｂ−Ｅ８としてもまた知られる）は、マウスモノクローナル抗体であり、免疫抑制剤である。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与されることができる。
【００６８】
レブリキズマブは、ＩＬ−１３に特異的に結合するように設計されたヒト化モノクローナル抗体であり、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇで投与されることができる。Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ, Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ, Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，
ウステキヌマブ（実験用の名称はＣＮＴＯ１２７５、所有者の商用名称はＳｔｅｌａｒａ、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）は、ヒトモノクローナル抗体である。ウステキヌマブは、免疫システムおよび免疫介在炎症疾患を制御する自然発生タンパク質である、インターロイキン１２およびインターロイキン２３に、向けられる。幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、一か月離して、それぞれ９０もしくは４５ミリグラムの２回注射、または４５ｍｇの単回注射を完了させる。
【００６９】
ムロモマブ−ＣＤ３（商標名はＯｒｔｈｏｃｌｏｎｅ  ＯＫＴ３、Ｊａｎｓｓｅｎ−Ｃｉｌａｇより市販）は、Ｔ細胞の表面上の膜タンパク質である、ＣＤ３受容体を標的としたモノクローナル抗体である。それは１０〜１４日の間、単回ボーラス静脈内注射で５ｍｇ／日で投与される。幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、投与は完了されなければならない。３０ポンド（１３．６ｋｇ）未満の体重の児童は、２．５ｍｇ／日を受けるべきである（Ｏｒｔｈｏ    Ｂｉｏｔｅｃｈ , Ｒａｒｉｔａｎ, ＮＪ）。
【００７０】
オテリキシズマブは、ＣＤ３のエプシロン鎖を標的とするモノクローナル抗体である。それは１０〜１４日の間、単回ボーラス静脈内注射で５ｍｇ／日で投与される。幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、投与は完了されなければならない。３０ポンド未満の体重の児童は、２．５ｍｇ／日を受けるべきである。当該抗体はＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅと共同でＴｏｌｅｒｘ，Ｉｎｃ．により開発され、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓにより製造される。
【００７１】
テプリズマブは、ＭＧＡ０３１およびｈＯＫＴ３γ１（Ａｌａ−Ａｌａ）としてもまた知られる、ヒト化Ｆｃ改変モノクローナル抗体である。それは抗ＣＤ３抗体である。本発明によると、１０〜１４日の間、単回ボーラス静脈内注射で５ｍｇ／日の投与量で、それは投与されうる。幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、投与は完了されなければならない。３０ポンド未満の体重の児童は、２．５ｍｇ／日を受けるべきである（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ。
【００７２】
ビジリズマブ（仮の商標名はＮｕｖｉｏｎ、ＰＤＬ  ＢｉｏＰｈａｒｍａ  Ｉｎｃ．）は、活性化Ｔ細胞上のＣＤ３を標的とするヒト化モノクローナル抗体である。本発明によると、１０〜１４日の間、単回ボーラス静脈内注射で５ｍｇ／日の投与量で、それは投与されうる。幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、投与は完了されなければならない。３０ポンド未満の体重の児童は、２．５ｍｇ／日を受けるべきである。
【００７３】
クレノリキシマブは、ＣＤ４に対するモノクローナル抗体である。本発明によると、１０〜１４日の間、単回ボーラス静脈内注射で５ｍｇ／日の投与量で、それは投与されうる。幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、投与は完了されなければならない。
【００７４】
ケリキシマブは、ＣＤ４タンパク質を介して白血球に結合するモノクローナル抗体である。幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、３ｍｇ／ｋｇ注入の投与量で投与される。
【００７５】
ザノリムマブ（予想される商標名はＨｕＭａｘ−ＣＤ４）は、ＣＤ４を標的とするヒトモノクローナル抗体であり、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、２０ｍｇ／ｋｇ／日の投与量で投与される（Ｇｅｎｍａｂ, Ａ／Ｓ ＣＯＰＥＮＨＡＧＥＮ／ＴｅｎＸ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ, Ｉｎｃ., Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ, ＰＡ）。
【００７６】
エファリズマブ（商標名はＲａｐtｉｖa、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｍｅｒｃｋ  Ｓｅｒｏｎｏ）は、組換えヒト化モノクローナル抗体である。エファリズマブはリンパ球機能関連抗原１のＣＤ１１ａサブユニットに結合する。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、２０ｍｇ／ｋｇの投与量で皮下注射により週に一度、投与されることができる。
【００７７】
ｒｈｕＭＡｂとしてもまた知られる、エルリズマブは、Ｒｏｃｈｅの協力のもと、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈにより開発された組換えヒト化モノクローナル抗体である。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、２０ｍｇ／ｋｇの投与量で皮下注射により週に一度、投与されることができる。当該薬剤は、血管において成長因子を阻害することにより機能する。とりわけ、エルリズマブはＣＤ１８およびＬＦＡ−１インテグリンを標的とする。
【００７８】
アフツズマブは、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体である。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、２０ｍｇ／ｋｇの投与量で皮下注射により週に一度、投与されることができる（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ  Ｉｎｃ．）。
【００７９】
オクレリズマブはヒト化抗ＣＤ２０モノクローナル抗体である。それは成熟リンパ球を標的とする。それはＨｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅの子会社ＧｅｎｅｎｔｅｃｈとＢｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃにより開発中である。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、２００ｍｇおよび６００ｍｇで投薬される。
【００８０】
パスコリズマブは、抗ＩＬ−４ヒト化モノクローナル抗体である。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、２０ｍｇ／ｋｇの投与量で皮下注射により週に一度、投与されることができる。
【００８１】
ルミリキシマブはＣＤ２３を標的とするモノクローナル抗体である。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、５０ｍｇ／ｍ２で、４５０ｍｇ／ｍ２まで、５００ｍｇ／ｍ２まで投薬されることができる。当該薬剤は、Ｍａｃａｃａ ｉｒｕｓ および Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓからのキメラ抗体である。 （Ｂｉｏｇｅｎ ＩＤＥＣ）
テネリキシマブは、免疫刺激性タンパク質ＣＤ４０に結合するキメラモノクローナル抗体である。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、２０ｍｇ／ｋｇの投与量で皮下注射により週に一度、投与されることができる。
【００８２】
トラリズマブ（ＩＤＥＣ  １３１）は、ヒト化モノクローナル抗体である。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、２０ｍｇ／ｋｇの投与量で皮下注射により週に一度、投与されることができる。（ＩＤＥＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）
アセリズマブは、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、０．５ｍｇ／ｋｇから１．０ｍｇ／ｋｇおよび２．０ｍｇ／ｋｇの範囲の投与量で静脈内注射により投与される、抗ＣＤ６２Ｌである。
【００８３】
ガリキシマブは、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、５００ｍｇ／ｍ２静脈内の投与量で投与される、抗ＣＤ８０（Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ）モノクローナル抗体である。それは、Ｍａｃａｃａ ｉｒｕｓ および Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓからのキメラ抗体である。
【００８４】
ガビリモマブは、マウスモノクローナル抗体である（ＡＢＸ−ＣＢＬとしてもまた知られ、Ａｂｇｅｎｉｘにより開発された）。それはＣＤ１４７抗原に結合する。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、２０ｍｇ／ｋｇの投与量で静脈内注射により投与されることができる。
【００８５】
幹細胞投与の前の７〜１４日および３〜４日以内に、２０ｍｇ／ｋｇで投与されるヒト化抗ＣＤ４０Ｌ、ＢＧ９５８８。ＣＤ４０リガンドやＣＤ４０Ｌともまた呼ばれ、活性化Ｔ細胞上で最初に発現されるタンパク質であり、ＴＮＦスーパーファミリーの分子の一員であるＣＤ１５４への抗体の投与。それは抗原提示細胞（ＡＰＣ）上のＣＤ４０に結合し、標的細胞の種類に依存して様々な効果をもたらす。一般的に、ＣＤ４０Ｌは、共刺激分子の役割を果たし、ＡＰＣ上のＭＨＣ分子によるＴ細胞受容体刺激に関連してＡＰＣでの活性化を誘導する。ＣＤ４０Ｌ全体で、ＣＤ４０、α５β１インテグリンおよびαＩＩｂβ３の３つの結合パートナーを有する。
【００８６】
幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、２０ｍｇ／ｋｇで投与される、ＣＤ１５４（ＣＤ４０リガンド）に結合し、ゆえにＣＤ４０とＣＤ１５４の間の相互作用を妨げる、モノクローナル抗体（Ｈｕ５ｃ８）５ｃ８。
【００８７】
ベリムマブ（以前にはＬｙｍｐｈｏｓｔａｔ−Ｂとして知られた、登録名称はＢｅｎｌｙｓｔａ）は、ＴＮＦファミリー（ＢＡＦＦ）のＢ細胞活性因子としてもまた知られる、Ｂリンパ球刺激物質（ＢＬｙＳ）を特異的に認識し、生物学的活性を阻害する、完全ヒトモノクローナル抗体である。Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与されることができる。
【００８８】
イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０またはＭＤＸ−１０１としてもまた知られる）は、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂにより開発される抗ＣＴＬＡ−４（細胞傷害性Ｔ細胞リンパ球関連）ヒトモノクローナル抗体である。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇの活性薬剤が投与される。
【００８９】
トレメリムマブ（以前はチシリムマブ、ＣＰ−６７５，２０６）は、Ｐｆｉｚｅｒにより産生される完全ヒトＩｇＧ２モノクローナル抗体である。それは、活性化Ｔリンパ球の表面上に発現されるＣＴＬＡ−４タンパク質に結合する。トレメリムマブは抗原提示細胞リガンドＢ７．１およびＢ７．２のＣＴＬＡ−４への結合を妨げ、Ｔ細胞活性化のＢ７−ＣＴＬＡ−４介在性の下方制御の阻害をもたらす。続いて、Ｂ７．１またはＢ７．２は他のＴ細胞表面受容体タンパク質、ＣＤ２８と相互作用し、Ｂ７−ＣＴＬＡ−４介在性阻害とは反対のＢ７−ＣＤ２８介在性Ｔ細胞活性化をもたらす。トレメリムマブは、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇで静脈内注射により投与される。
【００９０】
ベルチリムマブはエオタキシン−１に結合するヒトモノクローナル抗体である。（ｉＣｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ.Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ, Ｂ.Ｃ.）本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与される。
【００９１】
レルデリムマブ（ＣＡＴ−１５２）は、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙにより開発された、抗ＴＧＦβ−２である。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与されることができる。
【００９２】
メテリムマブ（ＣＡＴ−１９２）は、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙにより開発された、ＴＧＦベータ１を中和するヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。本発明によると、幹細胞投与の前の好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与されることができる。ナタリズマブは、細胞接着分子α４−インテグリンに対するヒト化モノクローナル抗体である。それはＴｙｓａｂｒｉとしてＢｉｏｇｅｎ  ＩｄｅｃおよびＥｌａｎから共同販売され、以前にはＡｎｔｅｇｒｅｎと名付けられていた。ナタリズマブは、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、およそ１時間以上をかけ静脈内点滴により、３００ｍｇの投与量で、投与される。
【００９３】
トシリズマブまたはアトリズマブは、商標名ＡｃｔｅｍｒａおよびＲｏＡｃｔｅｍｒａでＨｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅおよび中外製薬により開発されたインターロイキン６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対するヒト化モノクローナル抗体である。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、８ｍｇ／ｋｇで静脈内注射により投与されることができる。
【００９４】
オヅリモマブは、免疫反応に関わるリンパ球機能関連抗原１タンパク質のアルファ鎖に対するマウスモノクローナル抗体である。それは幹細胞投与の前の７〜１４日、および３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇの活性薬剤が投与される。
【００９５】
バシリキシマブ（商標名はＳｉｍｕｌｅｃｔ）は、Ｔ細胞のＩＬ−２受容体のα鎖（ＣＤ２５）へのキメラマウス-ヒトモノクローナル抗体である。投与量は、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、２０ｍｇを２回である。
【００９６】
ダクリズマブ（商標名はＺｅｎａｐａｘ）は、Ｔ細胞のＩＬ−２受容体のアルファサブユニットへの治療用ヒト化モノクローナル抗体である。Ｒｏｃｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ  Ｉｎｃ、３４０  Ｋｉｎｇｓｌａｎｄ  Ｓｔｒｅｅｔ、Ｎｕｔｌｅｙ、Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ。それは、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇの活性薬剤を投与される。
【００９７】
イノリモマブは、インターロイキン−２受容体のアルファ鎖を標的とするマウスモノクローナル抗体である。ＯＰｉ（以前にはＯｒｐｈａｎ  Ｐｈａｒｍａ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）。それは、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇの活性薬剤を投与される。
【００９８】
ゾリモマブアリトックスは、マウスモノクローナル抗体であり、リシンタンパク質のＡ鎖へ連結されている抗ＣＤ５抗体である（薬物名においてａｒｉｔｏｘにより反映されている）。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与されることができる。
【００９９】
アトロリムマブはＲｈ因子に対するマウスモノクローナル抗体である。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与されることができる。
【０１００】
セデリズマブは抗ＣＤモノクローナル抗体である。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与されることができる。
【０１０１】
ドルリキシズマブは、キメラ／ヒト化モノクローナル抗体であり、免疫抑制剤である。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇの活性薬剤の投与量で投与される。
【０１０２】
フォントリズマブ（商標名はＨｕＺＡＦ）は、抗インターフェロンガンマヒト化モノクローナル抗体である。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、４．０ｍｇ／ｋｇまたは１０．０ｍｇ／ｋｇとして与えられるフォントリズマブの投与量で、静脈内で投与されることができる。（ＰＤＬ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）
【０１０３】
ガンテネルマブは、抗ベータアミロイドモノクローナル抗体である（Ｒｏｃｈｅ）。それは、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇの活性薬剤の投与量で投与される。
【０１０４】
ゴミリキシマブは、低親和性ＩｇＥ受容体（ＦｃεＲＩＩまたはＣＤ２３）を標的とするモノクローナル抗体である。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与されることができる。
【０１０５】
マスリモマブは、Ｔ細胞受容体を標的とするマウスモノクローナル抗体である。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与されることができる。
【０１０６】
モロリムマブは、ヒトＲｈ因子に対するヒトモノクローナル抗体である。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与されることができる。
【０１０７】
ペキセリズマブは、補体系の成分５を標的とするモノクローナル抗体の１本鎖可変断片である。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与されることができる。
【０１０８】
レスリズマブは抗ＩＬ−５ヒト化モノクローナル抗体である。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、好ましくはレスリズマブ３．０ｍｇ／ｋｇの投与量で、点滴として投与されることができる。（Ｃｅｐｔｉｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｉｎｃ）。
【０１０９】
ＬｅｕｋＡｒｒｅｓｔとＨｕ２３Ｆ２Ｇとしてもまた知られるロベリズマブは、白血球を抑制する抗ＣＤ１１／ＣＤ１８ヒト化モノクローナル抗体である。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与されることができる。
【０１１０】
シプリズマブ（ＭＥＤＩ−５０７）は、ＣＤ２へと向かうヒトＩｇＧ１カッパを伴う抗ＣＤ２モノクローナル抗体である。当該剤は免疫調整効果が高いことが示されており、ＴおよびＮＫ細胞の機能を選択的に抑制する。シプリズマブはＴ細胞およびＮＫ細胞にある特異的な受容体であるＣＤ２に結合し、それによりＣＤ２＋細胞の溶解をもたらす宿主免疫反応、免疫システムの選択的な抑制および活性化Ｔ細胞増殖の調節をもたらす。本発明によると、シプリズマブは、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、０．０４ｍｇ／ｋｇで静脈内注射、および５または７ｍｇ／ｋｇの投与量で皮下注射で投与されることができる。（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）
【０１１１】
タリズマブ（ＴＮＸ−９０１）は、Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴｅｘａｓのＴａｎｏｘにより開発されたヒト化モノクローナル抗体である。それはマスト細胞や好塩基球上のＩｇＥ受容体にすでに結合しているＩｇＥに結合することなく、イムノグロブリンＥ（またはＩｇＥ）およびＩｇＥ発現Ｂリンパ球を特異的に標的とするように設計された。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与されることができる。
【０１１２】
オマリズマブは、Ｔａｎｏｘ、ＮｏｖａｒｔｉｓおよびＧｅｎｅｎｔｅｃｈにより開発された抗ＩｇＥモノクローナル抗体である。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与されることができる。
【０１１３】
テリモマブアリトックスは、マウスモノクローナル抗体である。当該抗体はリシンタンパク質のＡ鎖に連結されている（薬物名においてａｒｉｔｏｘにより反映されている）。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与されることができる。
【０１１４】
バパリキシマブは、抗ＶＡＰ−１キメラモノクローナル抗体である。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与されることができる。
【０１１５】
ベパリモマブは、抗ＶＡＰＩマウスモノクローナル抗体である。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与されることができる。
【０１１６】
アバタセプト（Ｏｒｅｎｃｉａとして市販）は、Ｂ７に結合することができる分子であるＣＴＬＡ−４の細胞外ドメインに融合されたイムノグロブリンからなる融合タンパク質であり、ゆえにＴ細胞の活性化を完全に妨げる。アバタセプトは体重に基づいた特別な投与計画に従い、３０分の静脈内点滴として投与されるべきである。投与は、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、好ましくは６０ｋｇ未満に対しては５００ｍｇ、６０ｋｇ〜１００ｋｇに対しては７５０ｍｇおよび１００ｋｇ超に対しては１グラムであるべきである。
【０１１７】
ベラタセプト（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ−Ｓｑｕｉｂｂ）は、Ｔ細胞共刺激に必須な分子であるＣＴＬＡ−４の細胞外ドメインに連結されるヒトＩｇＧ１イムノグロブリンのＦｃ断片からなる融合タンパク質であり、Ｔ細胞活性化プロセスを選択的に妨げる。それは開発された。それは、アダタセプト（Ｏｒｅｎｃｉａ）とは、２アミノ酸のみ異なる。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、好ましくは６０ｋｇ未満に対しては５００ｍｇ、６０ｋｇ〜１００ｋｇに対しては７５０ｍｇおよび１００ｋｇ超に対しては１グラムの投与量で、体重に基づいた特別な投与計画に従い、３０分の静脈内点滴として投与されることができる。
【０１１８】
エタネルセプト（商標名はＥｎｂｒｅｌ、Ａｍｇｅｎ、Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ、ＣＡ）は、ＴＮＦ阻害剤として作用することにより腫瘍壊死因子（ＴＮＦ、免疫システムの一部）を干渉することにより、自己免疫性疾患を治療する薬剤である。エタネルセプトは、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、２５ｍｇまたは５０ｍｇの投与量で、皮下（ｓ．ｃ．）投与されることができる。
【０１１９】
ペグスネルセプトはペグ化可溶性腫瘍壊死因子受容体である。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、好ましくは９ｍｇ／ｋｇの皮下注射投与量で、投与されることができる。
【０１２０】
アフリベルセプトは、抗ヒトＩｇＧ１の定常領域（Ｆｃ）に融合され、血管新生抑制活性の可能性がある、ヒト血管内皮成長因子受容体１（ＶＥＧＦＲ１）および２（ＶＥＧＦＲ２）の細胞外ドメインの断片からなるタンパク質であり、Ｓａｎｏｆｉ−ＡｖｅｎｔｉｓおよびＲｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓにより共同開発されている。アフリベルセプト（ＶＥＦＧ  Ｔｒａｐ）は、抗血管新生剤であり、血管内皮成長因子Ａ（ＶＥＧＦ−Ａと呼ばれる）のすべての形態に結合するように特別に設計された融合癌泊質である。加えて、アフリベルセプトは、腫瘍血管新生にもまたかかわる胎盤成長因子（ＰＬＧＦ）に結合する。アフリベルセプトは、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、好ましくはキログラム当たり２ミリグラム（ｍｇ／ｋｇ）または４ｍｇ／ｋｇの投与量で静脈内注射または点滴により投与されることができる。
【０１２１】
アレファセプトは、融合タンパク質である。それは、ある種のＴ細胞の増殖を妨げるタンパク質と抗体の一部を組み合わせる。ＡＭＥＶＩＶＥ（登録商標）（アレファセプト）は、ヒトＩｇＧ１のＦｃ（ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３ドメイン）部分に連結されているヒト白血球機能抗原−３（ＬＦＡ−３）の細胞外ＣＤ２結合部分からなる、免疫抑制効果のある２量体融合タンパク質である。このましい用量は、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、好ましくは７．５ｍｇの静脈内注射または１５ｍｇの筋肉内注射のいずれかである。Ａｓｔｅｌｌａｓ  Ｐｈａｒｍａ  ＵＳ，Ｉｎｃ．Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ  ６００１５．
【０１２２】
ＩＬ−１Ｔｒａｐ（商標名Ａｒｃａｌｙｓｔで市販）としてもまた知られるリロナセプトは、ＩＬ−１ｈに結合して中和する、ヒトインターロイキン−１受容体の細胞外ドメインおよびヒトＩｇＧ１のＦＣドメインからなる２量体融合タンパク質である。治療は、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、２回として送達される３２０ｍｇの負荷用量、つまり２つの異なる場所にそれぞれ同日に与えられる１６０ｍｇの皮下注射で開始されるべきである。１２歳から１７歳の小児患者の場合には、治療は、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、２ｍＬの最大単回注射量で１回または２回の皮下注射として送達される、３２０ｍｇの最大量まで、４．４ｍｇ／ｋｇの負荷用量で開始されるべきである。Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎにより作製される。
【０１２３】
ダセツズマブ（ＳＧＮ−４０またはｈｕＳ２Ｃ６としてもまた知られる）は、抗ＣＤ４０ヒト化モノクローナル抗体である。ＣＤ４０抗原は、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫および慢性リンパ球性白血病を含む殆どのＢ系列血液腫瘍で高度に発現される。ＣＤ４０は、膀胱癌、腎癌および卵巣がんを含む固形がんの多くの種類、および免疫性疾患で役割を果たす細胞上で見いだされる。それは、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、好ましくは１０ｍｇ／ｋｇの活性薬剤の投与量で投与される。Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．
【０１２４】
ＨＣＤ１２２は、完全ヒトアンタゴニスト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体である。ＣＤ４０は、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）によるその活性化を経て、免疫反応、ならびに細胞増殖および生存シグナル伝達において主要な役割を果たす細胞表面受容体である。それは通常、Ｂ細胞悪性腫瘍において過剰発現および活性化されている。本発明によると、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、１０ｍｇ／ｋｇの活性薬剤の投与量で投与されることができる。これはＸＯＭＡ／ＮＯＶＡＲＴＩＳ  ＯＮＣＯＬＯＧＹにより開発されている。
【０１２５】
商標名ＲｉｔｕｘａｎおよびＭａｂＴｈｅｒａでＧｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡより販売されているリツキシマブは、Ｂ細胞の表面上で主に見出されるＣＤ２０タンパク質に対するキメラモノクローナル抗体である。それゆえに、それはＢ細胞を破壊することができる。ＣＤ２０は、早期前駆Ｂ細胞から分化の後期まで、Ｂ細胞上で広く発現されるが、最終的に分化したプラズマ細胞の上では欠損している。Ｒｉｔｕｘａｎは、それぞれ１００ｍｇ（１０ｍＬ）または５００ｍｇ（５０ｍＬ）の単回使用バイアルにおいて、１０ｍｇ／ｍＬの濃度で供給される。Ｒｉｔｕｘａｎは、５０ｍｇ／時間の点滴速度で投与することができる。点滴毒性が無ければ、幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、点滴速度は、３０分毎に５０ｍｇ／時間の増加で、好ましくは最大４００ｍｇ／時間まで増加する。幹細胞投与の前の３〜４日に好ましくは投与される、静脈内注射としての好ましい推奨投与量は３７５ｍｇ／ｍ２である。
【０１２６】
リツキシマブはまた、インジウム−１１１−（Ｉｎ−１１１−）Ｚｅｖａｌｉｎの投与の前の４時間以内、およびイットリウム−９０−（Ｙ−９０−）Ｚｅｖａｌｉｎの投与の前の４時間以内に、好ましくは２５０ｍｇ／ｍ２の投与量でリツキシマブを点滴することにより、Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標）の成分として投与されることができ、これは幹細胞投与の前の７〜１４日、好ましくは３〜４日以内に、行わなければならない。Ｒｉｔｕｘａｎはまた、幹細胞投与の前の好ましくは３〜４日、メトトレキサートの組み合わせで投与されることができる。Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ  Ｉｎｃ．およびＧｅｎｅｎｔｅｃｈ  ＵＳＡ，Ｉｎｃ．
【０１２７】
商標名Ｚｅｖａｌｉｎで販売されるイブリツモマブチウキセタンは、Ｂ細胞を標的とする放射免疫治療モノクローナル抗体である。当該薬剤はモノクローナルマウスＩｇＧ１抗体イブリツモマブを、放射性同位体（イットリウム−９０またはインジウム−１１１のいずれか）を加えたキレート剤チウキセタンとともに使用する。チウキセタンは炭素骨格がイソチオシアナトベンジルおよびメチル基を含む改変ＤＴＰＡ型である。
【０１２８】
アデノシンデアミナーゼ欠損はまた、活性胚中心形成の減少をもたらすであろうし、デオキシＡＴＰの蓄積を引き起こす剤も同様である（Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７１： ５５６２−５５７０, ２００３）。同様に、ＣＣＲ７の発現増強または活性化剤は活性胚中心形成の減少をもたらすであろう。
【０１２９】
幹細胞：定義、単離、送達、および治療用途
本発明の範囲内の幹細胞という用語には、所望の組織に分化可能な細胞が含まれる。かかる細胞には、多能性幹細胞、胚性幹細胞、多能性成体幹細胞、および始原細胞と前駆細胞が含まれる。「幹細胞」は、一定の条件下で、長期間、または、成体幹細胞の場合、生物体の生活の全体にわたって、それ自体の再生能を有する、胚、胎児、もしくは成体の細胞である。また、身体の組織および器官を構成する、特殊化した細胞を生じさせることもできる。
【０１３０】
「多能性幹細胞」には、身体のすべての細胞が発生する３つの胚葉（中胚葉、内胚葉、および外胚葉）から発達する細胞の種を生じさせる能力がある。ヒト多能性幹細胞の公知の天然供給源は、性腺の一部になるはずであった胎児組織のヒト初期胚から単離され、培養されたものである。
【０１３１】
「胚性幹細胞」は、胚盤胞と呼ばれる初期の（４日から５日）胚の一部である、内部細胞塊と呼ばれる細胞の群に由来する。胚盤胞から一旦除去されると、内部細胞塊の細胞は、胚性幹細胞に培養することができる。
【０１３２】
「成体幹細胞」は、分化した（特殊化した）組織で生じ、それ自体再生し、かつ特殊化されるようになって、適切な組織に移されると、配置されるすべての特殊化した細胞型の組織をもたらす、未分化の（特殊化していない）細胞である。成体幹細胞は、生物体の生涯において、これら自身の同一の複製体を作製することができる。この特性は、「自己再生」と呼ばれる。成体幹細胞は、通常、分裂して、始原細胞または前駆細胞を発生させ、その後、特有の形状および特殊化した機能（例えば、筋細胞拘縮、または神経細胞シグナリング）を有する「成熟した」細胞型に分化するか、または発達する。成体幹細胞の供給源には、骨髄、血液、眼の角膜と網膜、脳、骨格筋、歯髄、肝臓、皮膚、胃腸管の内膜、および膵臓が含まれるが、これらに限定されない。
【０１３３】
個体への幹細胞の送達または投与には、外因性幹細胞の送達または投与と共に、内因性幹細胞の動員が含まれ、ならびに、自発的に放出される内因性幹細胞のバイオアベイラビリティの増強も含まれる。
【０１３４】
骨髄の幹細胞は、最も研究されている成体幹細胞の種である。現在、これらは、移植によって、骨髄に種々の血液および免疫成分を回復させるのに臨床的に使用されている。現在骨髄でみられる２つの主な幹細胞の特定された種が存在する：すなわち、血液および免疫細胞を形成すると一般に考えられる、造血幹細胞（ＨＳＣ、またはＣＤ３４＋細胞）と、骨、軟骨、筋肉、および脂肪を形成すると一般に考えられる、間質（間葉系）幹細胞（ＭＳＣ）である。しかしながら、近年、両種の骨髄由来幹細胞は、同じ組織を組織するこれらの能力において、広範囲な可塑性および多分化能が示されている。骨格の骨髄腔にある骨髄は、成人ヒトにおける造血の主な部位である。骨髄は、１日毎、体重１キログラム当たり、約６０億の細胞を生ずる。造血活性を有する（赤色）骨髄(hematopoietically active (red) marrow)は、思春期後期まで出生後に退行し、その後、下部頭蓋椎骨(lower skull vertebrae)、肩、腰帯、肋骨、および胸骨に集中する。脂肪細胞が、手、足、脚部、および腕（黄色骨髄）の骨格において、造血性細胞に取って代わる。脂肪は、成人において赤色骨髄の空間の約５０パーセントを占めるようになり、さらに、脂肪変性は、加齢に伴ってゆっくりと継続する。非常に高齢の個体において、粘液様物質への脂肪のゼラチンの変換が生じ得る（脂肪骨髄）。長期の要求が溶血性貧血等に存在する場合、黄色骨髄は、造血活性を有する骨髄に戻ることができる。したがって、造血は、赤色骨髄の量を増加させて、始原細胞から成熟細胞への発達（変化）時間を減少させることによって、拡大することができる。
【０１３５】
骨髄間質は、主に鼻腔のネットワークからなり、該鼻腔は、皮質毛細管の骨内膜で生じ、全身静脈循環をする血管の集中において終端となる。３層構造の鼻腔壁は、内皮細胞からなる。すなわち、発達不十分で薄い基底膜と、脂肪細胞に変換可能な線維芽細胞である外膜細網細胞である。内皮細胞および細網細胞は、造血サイトカインの供給源である。造血は、鼻腔内空間で発生し、種々の複雑な刺激性サイトカインと阻害性サイトカイン、細胞間の接触、および隣接する細胞に対する細胞外マトリックス構成要素の影響によって制御される。この特有の環境において、リンパ球造血系幹細胞(lymphohematopoietic stem cell)は、すべての血球型に分化する。成熟細胞が生じ、放出されて、定常状態血球レベルが維持される。系は、失血、溶血、炎症、免疫性血球減少症、および他の原因の結果、付加的な細胞の需要の増加を満たし得る。
【０１３６】
「始原または前駆」細胞は、部分的に特殊化されている。それは自己再生し、また、分化細胞も生じさせる。研究者は、前駆／始原細胞と成体幹細胞を、幹細胞が分裂する場合、２つの新しい細胞のうちの１つが、多くの場合、再びそれ自体複製可能な幹細胞であるという点で、区別することが多い。対照的に、始原／前駆細胞が分裂する場合、より多くの始原／前駆細胞を形成することができるか、または、２つの特殊化した細胞を形成することができる。始原／前駆細胞は、損傷を受けたか、または死んでいる細胞に取って代わり、このため、肝臓または脳等の組織の完全性および機能を維持することができる。
【０１３７】
本発明に有用な幹細胞を単離および培養するための手段は周知である。臍帯血は、造血幹細胞の豊富な供給源である。臍帯血から得られる幹細胞、および骨髄または末梢血から得られる幹細胞は、移植の利用において、非常に類似していると考えられる。胎盤は、間葉系幹細胞の優れた容易に用いることのできる供給源である。さらに、間葉系幹細胞は、脂肪組織および骨髄間質細胞から得ることができることが示され、また、他の組織に存在することが推測されている。羊水および組織は、幹細胞の他の優れた供給源である。成体幹細胞を得ることができる器官に劇的な質における、および量における相違があるが、細胞間の初期の相違は、比較的表面的であり、これらが示す可塑性の同様の範囲によって平衡が保たれ得る。例えば、造血および間葉系の成体幹細胞は、適切な条件下で、心筋細胞になり得る。成体幹細胞の潜在能についての全範囲の概要説明は、まだ始まったばかりである。幹細胞は、公知の方法を用いて、単離および分化することができる。例えば、マウスでは、骨髄細胞は、マウスを屠殺し、１対のはさみで脚部骨格を切断して、幹細胞を水洗することによって単離される。また、幹細胞は、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋（Ｔ細胞）、ＣＤ４５＋（ｐａｎＢ細胞）、ＧＲ−１（顆粒細胞）等の不要な細胞を結合する抗体によって骨髄細胞をパニングすることにより、骨髄細胞から単離することもできる。このプロトコールの例について、Inabaらの文献：J. Exp. Med. 176:1693-1702(1992)を参照のこと。
【０１３８】
図１は、全血の勾配遠心分離から得られた層の代表図を示す。符号１は血小板を示し、符号２は、ＭＮＣおよび幹細胞を含む軟膜を示し、符号３はフィコールを示し、また、符号４は、ＲＢＣペレットおよび幹細胞を示す。
【０１３９】
ヒトでは、ＣＤ３４＋造血幹細胞は、臍帯血、骨髄、および動員された末梢血を含む種々の供給源から得ることができる。ＣＤ３４＋細胞の精製は、抗体親和性手法によって行うことができる。ＣＤ３４＋細胞を単離するための親和性カラム単離手法は、Hoらの文献：Stem Cells 13 (suppl. 3): 100-105(1995)に記載されている。また、Brennerの文献：Journal of Hematotherapy 2: 7-17 (1993)も参照のこと。間葉系幹細胞を単離、精製、および培養により発達させる方法が公知である。また、ＭＳＣの特異性抗原も公知である（米国特許第５，４８６，３５９号および同第５，８３７，５３９号を参照）。
【０１４０】
幹細胞は、有系分裂細胞分裂による再生能と、多様な範囲の特殊化した細胞型への分化能が特徴である。幹細胞は、種々の効力で存在する。全能性幹細胞は、完全な生物体の発達に必要な組織をすべて発生させることができる受精卵等の細胞である。多能性幹細胞は、３つの胚葉すべての幹細胞を生じさせることができ、胚性幹細胞、精原幹細胞（Cell. 119(7):1001-1012, 2009; NATURE 440:1199-1203, 2006）、または、四倍体胚に注入する場合、全生物体（Stem Cell Rev. 2010）を生じさせることができるが、胎盤等の必要とされる胚外組織ではない、人工多能性幹細胞等の細胞が含まれ得る、細胞である。非常に小さい胚様幹細胞は、骨髄、血液、心臓、および、３つの胚葉系統すべての細胞の細胞を生じさせることができる成体の他の組織内にみられる細胞であるが、これらは、四倍体相補性分析で全生物体を発生させることが未だ示されていない。このため、これらが、体細胞インプリンティングが四倍体相補性におけるこれらの活性を防ぐ、真の多能性幹細胞であるか、または、これらが、多く制限されるが、非常に可塑性の多能性幹細胞であるか否かは、不明確である（DEVELOPMENTAL DYNAMICS 236:3309-3320, 2007）。多能性幹細胞は、造血幹細胞（ＨＳＣ）（J Exp Med. 207(6):1127-1130, 2010）、脂肪幹細胞（ＡＳＣ）（Stem Cells Dev. 2010［印刷前の電子公表］）（６）、または、制限された系統内の種々の機能細胞を生じさせることができる、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）（ステムブック(StemBook), ケンブリッジ（マサチューセッツ州）：ハーバード大学幹細胞研究所；２００８年から２００９年）等である。
【０１４１】
幹細胞は、分化することができる程度によってさらに特徴づけることができ、それらの性能によって識別される。性能は、幹細胞の分化潜在能（種々の細胞型に分化する潜在能）を示す。
【０１４２】
全能性（ｔｏｔｉｐｏｔｅｎｔ）（全能性（ｏｍｎｉｐｏｔｅｎｔ）としても知られている）幹細胞は、胚および胚体外細胞型に分化することができる。かかる細胞は、完全で、生存可能な生物体を構築することができる。これらの細胞は、卵および精子細胞の融合から生じる。また、受精卵の初期の少ない分裂によって生じた細胞も、全能性である。
【０１４３】
多能性（ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ）幹細胞は、全能細胞の子孫であり、ほぼすべての細胞（すなわち、３つの胚葉のいずれに由来の細胞）に分化することができる。
【０１４４】
多能性（ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ）幹細胞は、多くの細胞であるが、細胞の密接に関連するファミリーのみに分化することができる。
【０１４５】
少能性幹細胞は、リンパ系幹細胞または骨髄幹細胞等の若干の細胞のみに分化することができる。
【０１４６】
単能性細胞は、１つの細胞型のみを生ずることができるが、これらと非幹細胞（例えば、筋肉幹細胞）の区別を示す自己再生特性を有し得る。
【０１４７】
２つの広い種の哺乳類幹細胞は、次に示すとおりである：胚盤胞の内部細胞塊から単離される胚性幹細胞、および成体組織でみられる成体幹細胞。
【０１４８】
成体幹細胞は、未分化細胞であり、胚発育後の身体全体にみられ、細胞分裂をして、死んだ細胞を補充し、かつ損傷を受けた組織を再生することによって増殖する。体性幹細胞としても知られている、成体幹細胞は、成獣およびヒト成人と同様に、幼体で見出すことができる。成体幹細胞の種には、造血幹細胞、乳房幹細胞、間葉系幹細胞、内皮幹細胞、神経幹細胞、嗅神経成体幹細胞、脂肪由来幹細胞、神経冠幹細胞、および睾丸幹細胞が含まれる。
【０１４９】
始原細胞は、特定の種の細胞に分化する傾向がある。しかしながら、幹細胞とは対照的に、始原細胞は、既に非常に特異的である。これらは、「標的」細胞に分化するために推進される。幹細胞と始原細胞の間の最も重要な相違は、幹細胞が無期限に複製することができることに対して、始原細胞は、限られた倍数しか分裂することができないということである。正確な定義に関する論争は依然としてあり、概念は依然として発展している。
【０１５０】
「始原細胞」および「幹細胞」という用語は、時に同等である場合がある。
【０１５１】
幹細胞は、全血、骨髄、脂肪組織、臍帯血、および他の組織の単核画分内でみられ、ならびに、これらの単核画分から単離された幹細胞は、ヒト患者に利益を提供することが示されている。末梢血単核球（ＰＢＭＣ）は、円形の核を有する血球である。例えば、リンパ球、単球、またはマクロファージである。これらの血球は、免疫系において感染に抵抗し、侵入者に適合するのに非常に重要な構成要素である。リンパ球集団は、Ｔ細胞（ＣＤ４およびＣＤ８陽性の約７５％）と、Ｂ細胞およびＮＫ細胞（合わせて約２５％）とからなる。ＰＢＭＣは、血漿の層の下に軟膜を形成する単球およびリンパ球と共に、フィコール、血液の層を分離する、親水性多糖を使用して、全血から抽出されることが多い。この軟膜はＰＢＭＣを含む。さらに、ＰＢＭＣは、選択的に赤血球を溶解する低張溶解を用いて、全血から抽出することができる。この方法によって、好中球および他の多形核白血球（ＰＭＮ）細胞が得られ、これらは、得られる固有の免疫防御において重要である。骨髄穿刺液のＰＢＭＣ画分は、心筋梗塞を起こした後の患者を治療するのに使用され、その後の死亡率を低減させ、これらの患者の心臓機能をわずかに改善することが示されている（Eur Heart J 27:2775-2783, 2006）。死亡率がこれらの種の治療によって顕著に低減されるが、心臓機能はわずかに改善されるにすぎない。これらの患者に関する核画像研究は、冠動脈内に注入した単核画分幹細胞の大多数（最大９７％）が、心臓に残存せず、注入後６０分から９０分以内に、脾臓および肝臓で主に見出すことができることを示している（Circulation 111:2198-2202, 2005）。同様に、他の画像研究は、全血、骨髄、脂肪組織、臍帯血、胎盤、羊水、および他の組織の単核画分内に見られる幹細胞、ならびにこれらの単核画分から単離された幹細胞が、種々の種において脾臓に蓄積することを示している（STEM CELLS 24:2279-2283, 2006; J Nucl Med 45:512-518, 2004; J Nucl Med 47:1212-1219, 2006; J Nucl Med 47:1295-1301, 2006）。
【０１５２】
動物試験は、より多数の骨髄単核球の投与によって、心臓の修復および機能回復の改善をもたらすことを示している（Circulation 114:2163-2169, 2006）。しかしながら、臨床患者において、これは、全身麻酔下で、最大２００ｍｌの多量の骨髄の吸引を必要とし、また、これは、心臓機能が依然として低下している梗塞直後の患者に非常に不適切であると考えられる。また、研究者は、良好な器官の標的および保持を得るために、注入する幹細胞を濃縮することも試みている。注入されたＣＤ３４＋細胞の数の増強によって、冠動脈内注射後に、心臓中のＣＤ３４＋細胞のより高い蓄積をもたらしたが、幹細胞送達を増強するこの方法は、単核球画分内に含まれる、どの特定の幹細胞が、組織再生に必要であるかが現時点では知られていないので、最適以下であると考えられる（Circulation 111:2198-2202, 2005）。さらに、精製されたヒト間葉系幹細胞（ＭＳＣ）は、ヒト臍帯血ＣＤ３４＋幹細胞の移植を増大することが示されている（Hematology VOL 14 NO 3:125-132, 2009）。
【０１５３】
幹細胞は、自家であるか、または非血縁ドナーからのものであり得る。幹細胞は、骨髄、全血、臍帯血、脂肪組織、もしくは他の供給源からの単核球画分内に含まれ得るか、または、ＣＤ３４、ＣＤ１３３、ＣＤ１０５、ＣＤ１１７、ＳＳＥＡ１−４、色素排除、もしくは他の特定の幹細胞抗原の選択によって精製することができる。幹細胞は、全血、骨髄、臍帯血、脂肪組織、嗅粘膜からの組織剥離物、および、臍帯組織等の単個細胞浮遊液に解離することができる他の幹細胞源から、フィコール−ヒパクまたは他の市販の勾配を使用して、密度勾配遠心分離によって、単離することができる。幹細胞は、かかる手法から得られた単核球画分から回収することができる。または、幹細胞は、密度勾配遠心分離後に、他の画分内で見出すことができる（Stem Cells and Development 2011 Bhartiyaら）。例えば、臍帯血は、ＰＢＳ中で１：１に希釈し、ヒストパク１０７７（シグマ(Sigma)社製）上に慎重に覆われ、室温で３０分間、１５００ｒｐｍで遠心分離することができる。図１に示す得られた層は、幹細胞単離のためにさらに処理することができる。層１は血小板層であり、層２は、単核球を含む軟膜であり、層３はフィコール層であり、また、層４は赤血球ペレット層である。層１、２および３を収集し、ＦＢＳによってか、またはＦＢＳなしで、ＤＭＥＭ Ｆ１２等の適切な媒体で希釈し、再度遠心分離して、細胞ペレットを得ることができる。層４を、ＤＭＥＭ Ｆ１２等の適切な媒体で希釈し、標準ベンチトップ遠心分離機において、室温で１５分間、８００ｒｐｍで遠心分離することができる。幹細胞は、層２（軟膜）および層４（ＲＢＣペレット）から主に回収することができる。
【０１５４】
さらに、幹細胞は、ＢＤからのＡＲＩＡ等のセルソーター、ミルテニー(Miltenyi)社から入手可能なもの等の磁性カラム、磁性ビーズおよびＤＹＮＡＬ磁石、ならびに当業者に公知の他の抗体／抗原に基づく分離方法を用いて、これらの表面に発現させた特異性抗原によって、特性評価および単離することができる。また、幹細胞は、本開示に説明する他の細胞への結合能によって、特定および単離することもできる。
【０１５５】
多能性幹細胞は、段階特異性胎児抗原（ＳＳＥＡ）、転写因子Ｏｃｔ４、ならびにＮａｎｏｇおよび他のマーカーの発現が特徴であり得る。造血幹細胞は、ＣＤ３４、ＣＤ１３３、ｃｋｉｔ、Ｓｃａ１等のマーカーの発現が特徴であり、さらに、ＣＤ４５陽性である。ＣＤという略語は、抗原ファミリーを指し、「分化の集合」を指す。
【０１５６】
造血幹細胞（ＨＳＣ）は、骨髄系統（単球およびマクロファージ、好中球、好塩基球、好酸球、赤血球、巨大核細胞／血小板、樹状細胞）、ならびにリンパ系統（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞）を含む、すべての血球型を生じさせる多能性幹細胞である。造血組織は、長期および短期の再生能、ならびに付された多能性、少能性および単能性始原細胞を有する細胞を含む。ＨＳＣは、骨髄組織において１：１０．０００の細胞を構成する。ＨＳＣは、次に示す抗原を発現させる：ＣＤ３４、ＣＤ９０（Ｔｈｙ１）、ＣＤ４５、ＣＤ４１、ＣＤ１０５、ＣＤ１１７（ｃ−ｋｉｔ）、ＳＣＦ（ｋｉｔリガンド）、Ｌｙ６Ａ／Ｅ（ｓｃａ−１）、ＣＤ１２７、ＣＤ４４、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ１４、ＣＤ１０６、ＣＤ８４、ＣＤ９０、Ｆｌｋ−１、ＣＤ１６４、Ｎｏｔｃｈ１、ＣＤ３３８（ＡＢＣＧ２）、ＣＤ２０２ｂ、ＣＤ１８４、ＡＣ１３３（＝ＣＤ１３３）、およびＣＸＣＲ４。
【０１５７】
間葉系幹細胞またはＭＳＣは、次に示すものを含む種々の細胞型に分化することができる、多能性幹細胞である：骨芽細胞（骨細胞）、軟骨細胞(chondrocyte)（軟骨細胞(cartilage cell)）、および脂肪細胞(adipocyte)（脂肪細胞(fat cell)）。間葉系幹細胞は、ＣＤ４５、ＣＤ９０、ＣＤ１０５、ＣＤ３４、ＣＤ３１、ＣＤ２９、ＣＤ１０６、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ１６６、Ｌｙ６Ａ／Ｅ（ｓｃａ−１）、ＣＤ１１７、ＣＤ７１、ＣＤ１０、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ４９ｅ、ＴＮＡＰ、ＰＴＰ ＬＡＲ、Ｗ５Ｃ５抗原、Ｗ３Ｄ５抗原、Ｗ４Ａ５抗原、およびＣＸＣＲ４の発現が特徴である。
【０１５８】
内皮幹細胞（または、内皮始原細胞または前駆細胞）は、多能性幹細胞である。これらは、骨髄でみられる３種の幹細胞のうちの１つであり、次に示す抗原を発現させる：ＣＤ４５、ＣＤ３１、ＣＤ３４、ＣＤ１０５、ＣＤ１４６、ＣＤ１０６、ＣＤ５４、ＣＤ１１７、ＣＤ１０２、ＣＤ１２０ａ、ＣＤ１２０ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ２９、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ６２Ｌ、およびＣＸＣＲ４。
【０１５９】
神経幹細胞（ＮＳＣ）は、神経系の主な表現型を発生させる、自己再生型の多能性細胞である。神経始原細胞および神経幹細胞は、成体マウス脳組織の神経性領域のうちの１つである脳室下帯を含む、線条体組織と、脊髄等の非神経性領域を含む、ヒト成人脳の種々の領域と、ヒトを含む種々の種から単離されている。ＮＳＣは、次に示す抗原を発現させる：ＣＤ２９、ＣＤ１４６、Ｎｏｔｃｈ１、Ｋｉ６７、ＣＤ２４、ＣＤ４９ｆ、ビメンチン、ＣＤ８１、およびＣＸＣＲ４。神経始原細胞は、次に示す抗原を発現させる：５７Ｄ２抗原、Ｗ４Ａ５抗原、およびＣＸＣＲ４。
【０１６０】
ｉＰＳ、ＳＣＮＴ、ＡＮＴ−ＯＡＲ等からの胚幹細胞、精原幹細胞、睾丸幹細胞、および多能性幹細胞は、次に示す抗原を発現させる：ＣＤ２４、ＣＤ９、Ｎａｎｏｇ、Ｓｍａｄ、Ｒｕｎｘ２、ｃ ｍｙｃ、ＣＤ３０、ＧＳＣ、Ｏｃｔ３／４、Ｓｏｘ２、ＳＳＥＡ１（ＣＤ１５）、ＳＳＥＡ４、ＣＤ３２４、ＣＤ２９、Ｔｒａ−１−６０、Ｔｒａ−１−８１、ＣＤ３３８（ＡＢＣＧ２）、ＣＤ４９ｆ、ＦｏｘＤ３、Ｓｔａｔ３、Ｈｏｘ１１、およびＣＸＣＲ４。
【０１６１】
ＶＳＥＬは、ＳＳＥＡ１、Ｏｃｔ４、Ｎａｎｏｇ、Ｒｅｘ１、および他の多能性幹細胞マーカー、ならびにＣＤ１３３、ＣＤ３４、ＡＰ、ｃＭｅｔ、ＬＩＦ−Ｒ、およびＣＸＣＲ４に陽性である（J Am Coll Cardiol 53(1):10-20, 2009; Stem Cell Rev 4:89-99, 2008）。さらに、成体脾臓でみられるＨｏｘ１１＋幹細胞等の別のマーカーが特徴である、新しい幹細胞が、日常的に特定されている（Horm Metab Res 40: 137-146, 2008）。成体脾臓に残存する胎児幹細胞が確認されており、膵島細胞を再生することができるが、この細胞は、脾臓のＣＤ４５陰性画分に存在する（Mol Cell Proteomics 4(10):1459-1470, 2005）。ＣＤ４５に陰性であるＨｏｘ１１＋脾細胞は、ＯＣＴ３／４、ＳＯＸ２、ＫＬＦ４、ｃ−ＭＹＣ、およびＮＡＮＯＧを発現させ、これらを胚性幹細胞および人工多能性幹細胞（ｉＰＳ）と潜在的に同等にさせる（Int J Biochem Cell Biol. 2009 Dec 18）。
【０１６２】
幹細胞の治療用途
幹細胞治療は、多くの疾患の治療について調査され、改善されている。幹細胞治療から利益を得ることができ得る症状には、次に示すものが含まれる：眼疾患、神経疾患、ＧＩ疾患、筋骨格疾患、代謝性疾患、内分泌疾患、血管疾患、肺疾患、心臓疾患、心血管疾患、免疫媒介疾患、自己免疫媒介疾患、心血管疾患、および再生治療が有用なすべての疾患。ＮＩＨのウェブサイト（ｗｗｗ.ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ.ｇｏｖ）上に含まれる臨床試験情報は、３０００を越えるの幹細胞試験を列挙する。評価段階にある疾患には、次に示すものが含まれる：脈管炎、内皮始原細胞を使用するリウマチ障害、結合組織疾患患者における自家単核球の移植による新血管新生の治療、進行性核上麻痺患者における血液幹細胞動員のための顆粒球コロニー刺激因子の連続投与、大脳皮質基底核変性症、および多系統萎縮症；血液悪性腫瘍、白血病、リンパ腫、癌、大理石病、再生不良性貧血および血球減少症、鎌状赤血球病およびサラセミア、角膜上皮幹細胞疲弊症、乳癌、急性心筋梗塞（米国特許第７，８６２，８１０号：ｃ−ｋｉｔ陽性心臓幹細胞の単離および培養を参照）、冠動脈疾患（米国特許第７，４７０，５３８号：臍帯血から単離されたＣＤ１３３＋／ＣＤ３４＋／ＣＸＣＲ４−細胞を増強させる、冠動脈への注入による単離および投与を参照）末梢血管疾患、心不全、Ｉ型糖尿病（米国特許出願公開第２０１１０００８３０号：糖尿病の治療のための間葉系幹細胞を作製するヒト脂肪由来インスリンを参照）、２型糖尿病、脳卒中、脊髄損傷、神経芽腫、多発性硬化症（米国特許出願公開第２０１００１６６７１２号：ＭＳを治療するための自家間葉系幹細胞由来神経前駆細胞の投与を参照）、全身性硬化症、紅斑性狼瘡、慢性創傷治癒、熱傷、骨折治癒、軟骨修復、ＣＮＳ腫瘍、変形性関節炎、腎不全、パーキンソン病（米国特許出願公開第２０１０００１００８７号：幹細胞移動の誘導およびＥＣ−１８による特殊化のための方法を参照）、骨髄腫、糖尿病性足疾患、肝硬変および胆汁性肝硬変、拡張型心筋症、貧血、色素性網膜炎、クローン病、糖尿病性ニューロパシー、肥満細胞症、卵巣癌、てんかん、重症筋無力症、自己免疫疾患、肉芽腫性疾患、骨壊死、肝不全、ＰＭＤ疾患、脂質異栄養症(lypodystrophy)、脱髄疾患、軟骨欠陥、網膜疾患、ループス腎炎、アルツハイマー病、外傷性脳損傷、肉腫、筋炎、高血糖、黄斑変性、潰瘍性大腸炎、筋変性、ならびにその他。これらの幹細胞治療に対する制限には、特定の損傷した器官、または骨髄および脾臓の造血中心のいずれかに対して、最適に幹細胞を送達し移植する能力がないことが含まれる。
【０１６３】
外因性幹細胞の送達
幹細胞は、多くの経路によって患者に送達することができる。例えば、幹細胞は、幹細胞生存率を最適化し、細胞集塊を除去する適切な賦形剤に含めて、静脈内に、動脈内に、筋肉内に、皮内に、皮下に、腹腔内に、心膜内に、眼内に、血管に、経心内膜に、経心的に、経中隔に、心外膜に、冠動脈内に、経皮的経心筋血行再建術によって、鞘内に、器官内に、鼻腔内に、心室内に、または、針、カテーテルもしくは他の最小侵襲性の方法によって硬膜外に、投与することができる。また、幹細胞は、注入部位で幹細胞の維持を支援するように設計された、「マトリックス」混合物または懸濁混合物（例えば、コラーゲン、フィブリノーゲン、フィブロネクチン、ラミニン、アルギン酸塩、アガロース、メチルセルロース、リポソーム、ナノ粒子、ミセル、アルブミン泡、脂肪酸、または他の半固体懸濁製剤）で、これらの経路によって投与することもできる。
【０１６４】
幹細胞を送達するために使用することができる、カテーテルに基づく送達システムには、標準のバルーン血管形成注入カテーテル、経皮的冠動脈送達カテーテル、オーバーザワイヤーバルーンカテーテルのストップ・フロー・インフレーション(stop flow inflation)、スワンガンズ(Swan Ganz)型カテーテル、ヒックマン(Hickman)型カテーテル、フォーリー(Foley)型カテーテル、中心静脈カテーテル、ピグテール型カテーテル、スマートポート(SmartPort)（商標）システム、ステレオタキシス(Stereotaxis)社もしくはミトラリン(Mitralign)社によって開発されたジェントルタッチ磁石ナビゲーションシステム(Gentle Touch Magnetic Navigation System)等の金属チップ型磁石誘導型カテーテル、アキュシンチ(Accucinch)システム、およびヘリックス(HELIX)（商標）、ミオカテ(MyoCath)（商標）、ＮＯＧＡ Ｒ誘導型ミオスター(Myostar)（商標）、スティレット(Stiletto)（商標）等の器官に直接注入するカテーテル、または血管内超音波（ＩＶＵＳ）誘導型トランスアクセス(TransAccess)送達システム（商標）、または、オープンセイル(OpenSail)（商標）、コンサート(Concerto)（商標）、メルカトル(Mercator)社からのマイクロシリンジ注入カテーテル、およびマベリック(Maverick)（商標）等の動脈経路経由、もしくは左心室補助循環装置（ＬＶＡＤ）、両心室補助装置（ＢｉＶＡＤ）等の移植可能なデバイス治療によって、送達する、カテーテル、オプティマイザー(Optimizer)（商標）、米国特許出願公開第２００９／０２９９２６９号に記載のものなどの細胞送達カテーテルが含まれる。
【０１６５】
また、幹細胞を、侵襲性外科手段を用いて、患者に投与し、次いで、器官に直接注入するか、または器官に適用することもできる。器官への幹細胞組成物を適用する使用法には、特に、コラーゲンマトリックス、細胞外マトリックス組成物、フィブリンまたは他の細胞外マトリックス材料からなる生体高分子マイクロスレッド、細胞外マトリックスおよび生物分解性材料を含むパッチ、フィブリンパッチ、アルギン酸塩またはアガロースベースのパッチ、デキストラン等の成分を含み得る、細胞外マトリックス材料および生物分解性生理学的不活性材料からなる、足場、器官特異性抗原または結合分子でコーティングされた幹細胞、エクスビボで消化された器官ドナーまたは死体器官からの足場または脱細胞器官としても知られている、残存細胞外マトリックス、ならびにコンタクトレンズが含まれる。
【０１６６】
内因性幹細胞の動員
幹細胞によって患者を治療する他の方法は、自分の身体の幹細胞を動員させて、骨髄等の器官を出て、循環させることを含む。例えば、ニューポジェン(Neupogen)またはニューラスタ(Neulasta)等の長期活性型として販売される、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ；フィルグラスチム(Filgrastim)）、リューカイン(Leukine)として販売される、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＦＳ；サルグラモスチム(Sargramostim)）、ジェンザイム(Genzyme)社によってモゾビル(Mozobil)／プレリキサフォル(Plerixafor)として販売される、ＡＭＤ３１００等の治療法は、循環内の幹細胞数を増加させる。ニューポジェンは、３００マイクログラムまたは４８０マイクログラムのいずれか一方のフィルグラスチムを含む、単回使用バイアルまたは単回使用シリンジで存在する。賦形剤は、酢酸塩、ソルビトール、ポリソルベート８０、ナトリウム、および注射用蒸留水からなる。ニューポジェンは、１日２回静脈内に、１日１回皮下に、または慢性的皮下治療として、臨床的に使用される。ニューポジェンは、骨髄抑制化学療法を受ける癌患者、誘導または統合化学療法を受ける急性骨髄白血病患者、骨髄移植を受ける癌患者、重症慢性好中球減少症患者、および末梢血始原細胞の収集および治療を受ける患者の好中球数の回復を促進するために、承認されている。ニューポジェンは、一般に、体重１キログラム当たり３マイクログラムから６９マイクログラム、毎日投与され、２日から２０日間継続する治療による化学療法４日後に開始する。ニューポジェンの添付文書によれば、Ｇ−ＣＳＦは、骨髄内の好中球の生産を調節し、好中球始原細胞の増殖、分化、および選択された終末細胞の機能活性化（食細胞の能力の増強、呼吸バーストに関連する細胞の代謝の準備刺激、抗体依存性致死、および、細胞表面抗原に関連する一部の機能のうちの発現の増加を含む）に影響を与える。また、Ｇ−ＣＳＦは、次に示すものによって、循環に幹細胞を動員することも示されている：ＣＸＣＲ４のＮ末端のクリッピングをもたらすことによる（１）、骨髄においてＶＣＡＭ発現を低減することによる（２）、骨髄間質におけるＣＸＣＬ１２発現を低減し、ＣＸＣＲ４発現を低減するその作用。Ｇ−ＣＳＦは、ＣＸＣＲ２の同系統のリガンドである、ＣＸＣＬ２を増加させることが示されている。臨床的治療のための承認であるので、Ｇ−ＣＳＦは、循環において非常に小さい胚様幹細胞の数を増加させることも示されている。
【０１６７】
添付文書によれば、リューカインは、白血球分離による収集のための末梢血への造血始原細胞の動員に適応する。動員のない収集と比較して、動員は、数の増加した移植可能な始原細胞の収集を可能にする。骨髄機能廃絶化学療法後、増加した数の始原細胞の移植は、より迅速な移植をもたらすことができ、これは、支持療法の必要性の減少を生じ得る。骨髄再構築は、末梢血始原細胞移植後のリューカインの投与によって、さらに促進される。リューカインの推奨用量は、身体表面積１平方メートル当たり１日２５０マイクログラムであり、２４時間静脈注射として、または１日１回皮下に投与される。リューカインによる最適な治療時間は、循環への幹細胞動員において５日のようである。また、リューカインは、Ｇ−ＣＳＦ単独に反応して不十分な動員剤であった患者において、Ｇ−ＣＳＦと併用して有効であることも示されている。
【０１６８】
モボジル(Mobozil)は、１，１’−[１，４−フェニレンビス（メチレン）]−ビス−１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカンという化学名を有する。モボジルは、分子式Ｃ２８Ｈ５４Ｎ８を有する。モボジルは、ケモカイン受容体ＣＸＣＲ４の阻害剤であり、およびその同系統のリガンドＳＤＦ−１（ＣＸＣＬ１２）の結合をブロックである。モボジルは、骨髄の間質および他の細胞によって発現させたＳＤＦ−１（ＣＸＣＬ１２）への、ＣＸＣＲ４を発現させた幹細胞の結合を妨害することによって、循環幹細胞数を増加させる。モボジル治療後の最適な動員は、補体の活性化に依存する。モボジルの皮下注射は、ニューポジェンと併用して、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）および多発性骨髄腫（ＭＭ）患者における収集およびその後の自家移植のために、末梢血に造血幹細胞を動員することについて、承認されている。モボジルは、２０ ｍｇ／ｍＬ溶液を１．２ｍＬ含む単回使用バイアルとして販売される。患者は、添付文書に詳述される、次に示す推奨スケジュールに従って、モボジルにより治療される：患者に４日間、１日１回Ｇ−ＣＳＦを供した後、モボジル治療を開始する；最大４日連続のモボジルの投与を繰り返す；０．２４ｍｇ／実際の体重ｋｇに基づいて、用量を選択する；アフェレーシス開始およそ１１時間前に、皮下注射によって投与する。Ｇ−ＣＳＦとモボジルの併用は、Ｇ−ＣＳＦ単独による使用よりも、循環へ初期幹細胞を動員することが示されている。
【０１６９】
循環(cirulcation)へ幹細胞（造血幹細胞を含む）を動員することが知られている、他の薬剤には、肝細胞増殖因子(hepatocytre growth factor)（ＨＧＦ）エリスロポイエチン、副甲状腺ホルモン、Ｆｌｔ３リガンド、幹細胞刺激因子（ＳＣＦ）が含まれる。公知の他の薬剤、または、循環への幹細胞および始原細胞の動員の増加を生じると期待されるものには、次に示すものが含まれる；特に、コロニー刺激因子等の幹細胞増殖を増加させる薬剤、舞茸ベータグルカン等の内因性Ｇ−ＣＳＦ生産を増加させる薬剤、アゴニストをダウンレギュレートするＣＸＣＲ４を含む、ＳＤＦ−１もしくはＣＸＣＲ４の発現を低減する薬剤、ＳＤＦ−１もしくはＣＸＣＲ４の結合親和力を低減する薬剤、ＣＸＣＲ４のシグナリングを弱化する薬剤、循環から幹細胞の生体内蓄積をブロックする薬剤、補体の活性化等の循環への幹細胞の放出、もしくは血漿スフィンゴシン−１−ホスフェートの増加を促進する薬剤、骨髄もしくはその同系統のリガンドＣＸＣＬ２におけるＣＸＣＲ２の発現をアップレギュレートする薬剤、化学療法剤シクロフォスファミド等の骨髄におけるＶＣＡＭ発現を低減する薬剤、レチノイン酸受容体アゴニスト、ＢＩＯ５１９２等のＶＬＡ−４の小分子阻害剤、もしくはＶＬＡ４の他のブロッカー、ＣＸＣＬ１２を発現させる骨髄を分解する、メタロプロテイナーゼもしくはカルボキシペプチダーゼ活性化剤、または選択された化学療法レジメ、またはＧ−ＣＳＦ治療にシクロフォスファミドもしくはトポイソメラーゼ阻害剤エトポシドを加えるレジメ、ケモカインＣＸＣＬ２によるフコイダンの摂取、およびコロミン酸。
【０１７０】
自発的に放出される内因性幹細胞
幹細胞によって患者を治療する他の方法は、自発的に放出された内因性幹細胞が、リンパ組織で隔離するのを防ぐことを含む。幹細胞および始原細胞は、毎日、血液循環に自発的に放出される。並体結合マウスを使用する試験は、脾臓が、幹細胞および始原細胞を容易に循環に交換することが示されている。さらに、病状（例えば、特に、高コレステロール血症、心臓発作、ＳＴＥＭＩまたはＣＡＤ、動脈結紮または一過性虚血、中程度の滞留、原発性副甲状腺機能亢進症、および、網膜色素上皮損傷）は、幹細胞および始原細胞の循環のレベルを増加させることが示されている。自発的に放出された幹細胞または疾患を誘導した幹細胞が、リンパ組織で隔離するのを防ぐことによって、より多くの幹細胞が、損傷を受けた組織または器官を再生することを可能にする。
【０１７１】
リンパ組織の胚中心を再生するための組成物および方法
本発明は、放射または化学療法の後に、リンパ組織の胚中心を再生し、再若幼化し、リンパ組織の胚中心の数を増加させる方法および組成物を提供することによって、この必要性を満たす。本発明によるリンパ組織の胚中心を再若幼化するか、または再生する、治療法は、免疫活性化剤、共刺激分子、免疫補助剤、およびこれらの組合せを含む。
【０１７２】
本発明の一実施態様において、リンパ組織の胚中心が、補助剤の投与によって再生される。かかる補助剤の一例には、病原体関連分子パターン、リポソーム、リポ多糖、抗原の分子ケージ、細菌細胞壁成分、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）、および非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド含有ＤＮＡ等のエンドサイトーシスした核酸、水酸化アルミニウム（ミョウバン）、リン酸アルミニウム、リン酸カルシウム、水酸化アルミニウム、アルミニウムカリウムホスフェート(aluminum potassium phosphate)、リン酸水素アルミニウムナトリウム(aluminum sodium hydrogen phosphate)、およびアルミニウムヒドロキシホスフェートスルファート(aluminum hydroxyphosphate sulfate)等の無機塩が含まれる。他の補助剤には、スクワレン、モンタニドＩＳＡ７２０（スクワレン）、またはＩＳＡ５１（ドラケオール）、ＭＦ５９（ノバルティス(Novartis)社製）、およびＳＢＡＳ２等の水中油型エマルションが含まれる。本発明によって使用することができる、他の分類の補助剤は、ビロソーム、サポニン、および、微生物誘導体（モノホスホリルリピドＡ ＣｐＧモチーフ、ＢＣＧ−ＣＷＳと呼ばれるＢＣＧ準備刺激免疫（マイコバクテリウム・ボビス(Mycobacterium bovis)）等）を含む脂質等の微粒子補助剤である。
【０１７３】
リポ多糖、およびコンカナバリンＡ等の分裂促進剤、細菌細胞壁成分、アルカソーム(archaeosome)（古細菌メタノブレビバクター・スミシー(Methanobrevibacter smithii)のグリセロ脂質エーテル）、ＴＬＲ４アゴニストＧＬＡグルコピラノシル脂質補助剤、ＬＰＳおよびＢＣＧ（イミューンデザイン(Immune Design)社製）、ＴＬＲ２アゴニストＢＣＧ、ペプチドグリカン、およびグラム陽性菌、ＴＬＲ５アゴニストフラジェリン、住血吸虫卵抗原（ＳＥＡ）、リステリア・モノサイトゲネス(listeria monocytogenes)（ＬＭ）。他の補助剤には、トール様受容体アゴニスト、および最大１００塩基の長さ（最も好ましくは、２０塩基の長さ）のＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む活性化剤、Ｐａｍ３Ｃｙｓ等のＴＬＲ１アゴニスト、Ｐａｍ３Ｃｙｓ等のＴＬＲ２アゴニスト；ｄｓＲＮＡおよびポリＩ：Ｃ等のＴＬＲ３アゴニスト、イミダゾールキノレン(imidazolequinolene)（例えば、イミキモド（Ｒ−８３９）、レシキモド（Ｒ−８４８））等のＴＬＲ７アゴニスト、レシキモド（Ｒ−８４８）等のＴＬＲ８アゴニスト；ならびに、ポリＩ：ＣおよびＣｐＧ等のＴＬＲ９アゴニストが含まれる。また、植物誘導体補助剤、ベータグルカン、サポニンベースのＱＳ２１、およびコンカナバリンＡの使用も、本発明に含まれる。
【０１７４】
本発明の別の実施態様は、脾臓において活性を有する胚中心の数を増大させて、化学療法、放射線、および組合せ治療を含む、癌治療、非骨髄破壊的治療または骨髄破壊的治療を受ける患者における幹細胞移植および血液学的回復を増強する方法からなる。活性を有する胚中心の数の増加によって、脾臓の幹細胞の結合および移植が増強し、次いで、化学療法調整レジメおよび癌治療後の造血回復の速度が促進する。癌および白血病の治療に加えて、非骨髄破壊的治療は、Ｉ型糖尿病(JAMA. 297(14):1568-1576, 2007)、狼瘡、および多発性硬化症（ｗｗｗ．ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ．）を含む、自己免疫疾患の治療に用いられる(Pediatr Clin North Am. 57(1):239-71, 2010)。本発明は、脾臓の胚中心の数を増加させ、これによって、移植された幹細胞の結合、移植および増殖を増大させることによる、骨髄破壊的または非骨髄破壊的調整を受ける癌または自己免疫患者における造血回復を増強する方法を提供する。例えば、骨髄破壊的または非骨髄破壊的調整レジメ後の幹細胞治療を受ける患者は、投与された幹細胞の移植および造血再生に必要な期間に、感染および死の危険性がある。脾臓に結合する幹細胞に利用可能な胚中心の数を増加させることによる幹細胞移植の促進および増加は、造血回復に必要な時間を低減し、これによって、これらの患者の感染および死の危険性を低減することができる。
【０１７５】
幹細胞は、自家であるか、または非血縁ドナーからのものであり得る。幹細胞は、骨髄、全血、臍帯血、脂肪組織、もしくは他の供給源からの単核球画分内に含まれているか、または、ＣＤ３４、ＣＤ１３３、ＣＤ１０５、ＣＤ１１７、ＳＳＥＡ１−４、色素排除、もしくは他の特定の幹細胞抗原の選択によって精製することができる。
【０１７６】
脾臓の胚中心は、ＣＤ４０受容体を活性化する処理によって特に増加させることができる(Blood.104:4088-4096, 2004; J. Clin. Invest. 112:1506-1520 2003)（５０）（５１）。機能的受容体は、ＴＮＦＲ１またはＴＮＦＲ２の構成要素を有するＣＤ４０三量体または多量体である。ＣＤ４０受容体を活性化する処置の一例には、次に示すものが含まれる：ＣＤ４０受容体を活性化するＣＤ４０に対するアゴニスト抗体、ＣＤ４０受容体を活性化することができるｓｏｌＣＤ４０Ｌの適切な形態、および、ＡＴホック転写因子ＡＫＮＡ等による転写速度の改良、活性およびシグナリングを増加させることもできる、ｍＲＮＡ安定性またはタンパク質安定性によって、ＣＤ４０受容体の発現を増加させる薬剤。または、ＴＲＡＦおよびＴＴＲＡＰファミリーのメンバーは、ＣＤ４０受容体と相互作用し、そのシグナリングを媒介し、活性を有する胚中心の数を増加させる。胚中心Ｂ細胞シクロオキシゲナーゼ２、またはＥＰ２受容体複製ＣＤ４０受容体の係合を活性化し、活性を有する胚中心の形成を増強させることができる薬剤。胚中心の形成および持続性を活性化する他の手段には、ＣＣＲ７の阻害または欠損が含まれる(J. Leukoc. Biol. 85: 409-417, 2009)。胚中心の形成および持続性を活性化する他の手段には、ＣＣＲ７の阻害または欠損が含まれる(J. Leukoc. Biol. 85: 409-417, 2009)。
【０１７７】
本発明の別の実施態様は、免疫刺激分子を投与して、リンパ組織の胚中心の再生を促進することからなる。免疫刺激分子は、抗体、融合タンパク質、可溶性リガンド、小分子、転写レギュレーター、ｍＲＮＡまたはタンパク質安定剤、および他の免疫刺激部分である得る。例えば、共刺激ＣＤ２８経路は、可溶性Ｂ７タンパク質、およびＴｅＧｅｎｅｒｏ１４１２化合物等を有する抗体によって活性化することができる。
【０１７８】
ＴＧＮ１４１２は、Ｔリンパ球におけるＣＤ２８受容体のアゴニストとして設計された、ヒト化モノクローナル抗体であり、これは、Ｔリンパ球の生産および活性化を刺激する。ＴＧＮ１４１２は、ベーリンガーインゲルハイム(Boerhinger Ingelheim)社から製造される。
【０１７９】
付加的な共刺激分子および経路には、ＯＸ４０／ＯＸ４０リガンド、４−１ＢＢ／４−１ＢＢリガンド、Ｂ７／ＣＤ２８ファミリー；Ｂ７−１／ＣＤ８０、ＣＤ２８、Ｂ７−２／ＣＤ８６、ＣＴＬＡ−４、Ｂ７−Ｈ１／ＰＤ−Ｌ１、ＩＣＯＳ、Ｂ７−Ｈ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、ＰＤ−Ｌ２／Ｂ７−ＤＣ、Ｂ７−Ｈ４、ＰＤＣＤ６、ＢＴＬＡ、共刺激ＴＮＦスーパーファミリー分子；４−１ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９／ＣＤ１３７、４−１ＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＡＦＦ Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２７リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３０リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＧＩＴＲリガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、およびＳＬＡＭファミリー；２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＣＤ２、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ５８／ＬＦＡ−３、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＮＴＢ−Ａ／ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭ／ＣＤ１５０、および他の共刺激分子；ＣＤ２、ＣＤ５３、ＣＤ８２／Ｋａｉ−１、ＣＤ９０／Ｔｈｙ１、ＣＤ９６、ＣＤ１６０、Ｉｋａｒｏｓ、インテグリンアルファ４／ＣＤ４９ｄ、インテグリンアルファ４ベータ１、インテグリンアルファ４ベータ７／ＬＰＡＭ−１、ＬＡＧ−３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＲＴＡＭ、ＤＡＰ１２、デクチン−１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、ＥｐｈＢ６、ＴＣＬ１Ａ、ＴＩＭ−１／ＫＩＭ−１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ−４、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰ Ｒ、ＨＬＡ−ＤＲ、およびエフリンが含まれる。
【０１８０】
胚中心の再生を増強し得る他の薬剤は、抗ＣＤ２０（リツキシマブ）等のサイトカインバーストをもたらすことが知られている、薬剤である。
【０１８１】
他の免疫活性化剤には、アゴニスト抗体と共に、ＩＬ２１受容体に対するアゴニストが含まれ得る。
【０１８２】
臨床前にかまたは臨床的に使用される他の補助剤には、次に示すものが含まれる。
【０１８３】
二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）、および非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド含有ＤＮＡ等のエンドサイトーシスした核酸。
【０１８４】
アデノウイルス５型（Ａｄ５）等のアデノウイルスおよびアデノウイルスの構成要素。
【０１８５】
レチノイン酸誘導遺伝子（ＲＩＧ）−１様受容体（ＲＬＲ）のアゴニストおよび活性化剤。
【０１８６】
Ｐ２Ｘ１、Ｐ２Ｘ４、もしくはＰ２Ｘ７活性化剤またはアゴニスト。
【０１８７】
ヌクレオチド結合オリゴマー化ドメイン様受容体（ＮＬＲ）のアゴニストおよび活性化剤。
【０１８８】
アドバックス（Ａｄｖａｘ）、リポソーム、キトサンマイクロスフィア、およびジメチル−ジオクチルデシルアンモニウムブロミド（ＤＤＡ）。
【０１８９】
開発においてほとんど新規のヒト補助剤は、ＩＳＣＯＭＳ、ＱＳ２１、ＡＳ０２、およびＡＳ０４である。
【０１９０】
ＡＳＯ４は、アルミニウムを添加した脱アシル化モノホスホリルリピドＡ ＭＰＬである。
【０１９１】
ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、最大１００塩基の長さ（最も好ましくは、２０塩基の長さ）であり得る。
【０１９２】
また、抗ＣＤ３ ＯＫＴ３を静脈内に(i.v.)投与して、リンパ組織内の胚芽細胞の再生を誘導することもできる。
【０１９３】
また、本発明は、２以上の治療剤を投与して、リンパ組織内の胚中心を発生させることからもなる。本発明の別の実施態様において、幹細胞は、胚中心を再生する治療剤と共に投与される。
【０１９４】
補助剤の投与
アルミニウムカリウムホスフェートは、約０．１７ｍｇの用量で投与することができる。
【０１９５】
リン酸アルミニウムは、約１．５ｍｇの用量で投与することができる。
【０１９６】
水酸化アルミニウムは、約０．１５ｍｇから約０．３ｍｇの用量で投与することができる。アルミニウム塩は、一般に、最大０．８５ｍｇの用量で投与することができる。
【０１９７】
アルミニウムヒドロキシホスフェート(aluminum hydroxyphosphate)は、約０．２２５ｍｇの用量で投与することができる。
【０１９８】
水酸化アルミニウムとリン酸アルミニウムの組合せは、約０．４５ｍｇの組合せ用量で投与することができる。
【０１９９】
油エマルションの投与
ＳＢＡＳ−２は、ＭＰＬとＱＳ２１の水中油型エマルションである。
【０２００】
モンタニドＩＳＡ７２０（スクワレン）、またはＩＳＡ５１（ドラケオール）等の水中油型エマルション。
【０２０１】
スクワレンは、ノバルティス(Novartis)社によって用いられるＭＦ５９補助剤中に含まれ、補助剤活性用注射液０．５ｍｌから１ｍｌにおいて１．９５％もしくは１００部あたり２部、または１００ｍｌ当たり４グラムで、投与される。
【０２０２】
ＭＦ５９補助剤は、リポバント(Lipovant)；４％ ｗ／ｖから５％ ｗ／ｖスクワレン、０．５％ ｗ／ｖトゥイーン８０、０．５％スパン８５、および、場合により、ＮＯＤ−ＬＲＲとして知られている非ＴＬＲ感受性受容体を活性化する、可変量のムラミルトリペプチドホスファチジル−エタノールアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）を含む。
【０２０３】
微生物誘導体の投与
ＢＣＧ−ＣＷＳと呼ばれるＢＣＧ準備刺激免疫（マイコバクテリウム・ボビス）は、成体ではバイアル当たり１から８×１０８コロニー形成単位（ＣＦＵ）、子供ではその用量の半分である。
【０２０４】
アルカソーム（古細菌メタノブレビバクター・スミシーのグリセロ脂質エーテル）は、体重グラム当たり０．１マイクログラムから５００マイクログラム（最も好ましくは、体重ｍｇ当たり３８マイクログラム）で投与される。
【０２０５】
トール様受容体アゴニストおよび活性化剤の投与
最大１００塩基の長さ（最も好ましくは、２０塩基の長さ）のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、体重２０グラムから２５グラム当たり１、１０、１００、５００マイクログラムで投与される。好ましい用量は、体重２０ｍｇから２５ｍｇ当たり１０μｇである。
【０２０６】
共刺激ＣＤ２８経路は、可溶性Ｂ７タンパク質、およびＴｅＧｅｎｅｒｏ１４１２化合物等を有する抗体によって活性化することができる。ＴＧＮ１４１２は、Ｔリンパ球におけるＣＤ２８受容体のアゴニストとして設計された、ヒト化モノクローナル抗体であり、これは、Ｔリンパ球の生産および活性化を刺激する。ベーリンガーインゲルハイム社がＴＧＮ１４１２を製造した。リンパ液の胚中心を再生する免疫活性化の目的のために、ＴＧＮ１４１２の好ましい用量は、３分から６分間にわたる投与で、０．１ｍｇ／体重ｋｇ未満であろう。胚中心の再生におけるＴＧＮ１４１２の有効用量は、０．００１ ｍｇ／ｋｇから０．１ ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．０１ ｍｇ／ｋｇであろう。
【０２０７】
胚中心の再生を増強することができる他の薬剤は、５０ ｍｇ／ｍｍ２または１５０ ｍｇ／ｍｍ２から３７５ ｍｇ／ｍｍ２未満で投与される抗ＣＤ２０（リツキシマブ）等の、サイトカインバーストを生ずることが知られている薬剤；１０日から１４日間、５ｍｇ／日未満の好ましい用量で、静脈内に(i.v.)投与される抗ＣＤ３ ＯＫＴ３；最大１２週間、１週当たり３回の、２時間の注入において３０ｍｇ投与される抗ＣＤ５２（キャンパス）抗体である。
【０２０８】
さらなる免疫活性化剤には、０．００１ ｍｇ／ｋｇから５０ ｍｇ／ｋｇ（好ましくは、０．０１ ｍｇ／ｋｇから０．１ ｍｇ／ｋｇ）で投与されるアンタゴニスト抗体と共に、ＩＬ２１受容体に対するアゴニストが含まれ得る。タンパク質リガンドアゴニストは、骨髄破壊的または非骨髄破壊的治療後、最大２８日、０．０００１ ｍｇ／ｋｇから５０ ｍｇ／ｋｇで毎日投与することができる。タンパク質リガンドアゴニストは、一般に、アゴニストの分子量および生物分散に治療的に依存して、抗体の１／１０回量の投与で有用である。
【０２０９】
小分子の免疫活性化剤は、１回の経口投与で、または２時間ごと、４時間から６時間ごと、もしくはこれより長い間隔を含み得る特定の間隔で、毎日１ｍｇから１０００ｍｇ、経口的に送達することができる。
【０２１０】
ＡＳＯ４は、アルミニウムを添加した脱アシル化モノホスホリルリピドＡ ＭＰＬであり、０．５ｍｇリン酸アルミニウムと共に、フェンドリックス(Fendrix)（ＧＳＫ社製）０．５ｍｌ中５０マイクログラムの用量で投与される。
【０２１１】
最大１００塩基の長さ（最も好ましくは、２０塩基の長さ）のＣｐＧオリゴヌクレオチドが、ミョウバンと共に、体重２０グラムから２５グラム当たり１、１０、１００、５００マイクログラムで、投与される。好ましい用量は、体重２０ｍｇから２５ｍｇ当たり１０μｇである。
【０２１２】
投与
リンパ組織内の胚中心の再生を誘導する治療剤の投与は、静脈内、動脈内、経口、筋肉内、エアロゾル、吸入、皮内、皮下、腹腔内、心膜内、眼内、血管、経心内膜、経心的、経中隔、心外膜、冠動脈内、経皮的経心筋血行再建術、鞘内、器官内、鼻腔内、心室内、または、針、カテーテルもしくは他の最小侵襲性の方法による硬膜外を含む方法によって行うことができる。
【実施例】
【０２１３】
下記の実施例は、幹細胞結合に関与することができる結合部位の数を調節するか、または緩和するための方法および組成物の実験結果を示す。
【０２１４】
実施例１
幹細胞を多く含む骨髄および全血単核画分は、同種異型マウスに投与される場合、白脾髄の端部でＢ細胞領域に結合する
雄１２９Ｓ１／ＳｖｌｍＪマウスの骨髄および全血単核球画分を、ヒストパクを使用して単離し、混合した。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２で、４日間インキュベートして、分化した体細胞を致死させ、これによって、単核球中の幹細胞画分を濃縮した。次いで、得られた細胞を、メーカーの説明書に従って、セルトラッカーオレンジ(cell tracker orange)（ＣＴＯ、インビトロゲン(Invitrogen)社製）によって標識した。およそ１０００万の標識細胞を、レシピエント同腹子に眼窩後方注射によって投与し、９０分後、マウスを放血し、血液を収集し、血管から残存する赤血球を洗い流し、および脾臓を採取した。脾臓を、１％ＰＦＡに一晩固定し、次いで、これを低溶融低ゲル化温度アガロースに埋め込み、断片当たり２００ミクロンの厚さに薄片とした。脾臓に結合したＭＮＣ幹細胞を、免疫蛍光法を用いて視覚化した。標識ＭＮＣ含有幹細胞画分は、白脾髄の端部でＢ細胞領域に結合した。失血中に収集した全血のＭＮＣ画分の免疫蛍光試験は、注射した標識細胞１０００万のうちのおよそ４０，０００が、注射９０分後に循環で継続してみられることを示した。
【０２１５】
結果および結論：ＣＴＯ標識幹細胞を多く含むＭＮＣ細胞は、白脾髄領域の周囲に結合した。細胞の結合は、Ｂ細胞領域において組織学的に明らかである。これは、幹細胞を多く含む骨髄および全血単核画分が、同種異型マウスに投与される場合、白脾髄の端部でＢ細胞領域に結合することを示す。
【０２１６】
実施例２
ＣＤ３４＋、ＣＤ１０５＋およびＣＤ１１７＋に精製された幹細胞は、標識ＭＮＣ幹細胞含有画分と同じ脾臓領域に結合する。
【０２１７】
雄マウスの骨髄および全血の単核球画分を、ヒストパクを使用して単離し、混合した。次いで、セルトラッカーグリーン（ＣＴＧ、インビトロゲン社製）によって標識したＭＮＣ細胞を、ＣＤ３４、ｃｋｉｔ、およびＣＤ１０５に対するビオチン標識抗体と共にインキュベートし、メーカーの推奨に従って、ミルテニー磁力分離カラムを使用して、精製した。単離されたＭＮＣの一部を、ＣＴＯによって別個に標識した。１００万のＣＴＯ標識ＭＮＣを、１００ミクロンから２００ミクロンの厚さの新鮮な脾臓切片上で、２０５，０００ＣＴＧ標識精製幹細胞と共に、４℃で１２時間から１８時間、インキュベートした。脾臓切片を十分に洗浄して、未結合の細胞を除去し、１時間、１％ＰＦＡに固定し、次いで、蛍光イメージングのために湿式マウントした。メタモルフ(MetaMorph)ソフトウェアを使用して、生じた赤色（ＭＮＣ）と緑色（幹細胞）の結合を捕捉し、重ね合わせた。
【０２１８】
結果および結論：精製された幹細胞集団は、ＭＮＣ画分と同じ脾臓領域に結合した。これはＣＤ３４＋、ＣＤ１０５＋およびＣＤ１１７＋に精製された幹細胞が、標識ＭＮＣ幹細胞含有画分と同じ脾臓領域に結合することを示す。
【０２１９】
実施例３
骨髄および全血単核画分の幹細胞は、脾臓の胚中心のＰＮＡ陽性領域に結合する。
【０２２０】
骨髄および全血単核球（ＭＮＣ）を、ヒストパクを使用して、成体マウスから単離する。得られた単核球を、メーカーの推奨に従って、セルトラッカーオレンジ、グリーンまたはブルー、ＤｉＩまたはカルセインオレンジまたはブルー等の細胞追跡用色素によって染色する。ＦＩＴＣ標識ＰＮＡ（１０μｇ）、ＩｇＤ（１０μｇ）、または抗ＣＤ２１（１０μｇ）を使用して、白脾髄の特定のＢ細胞領域を識別する。ＰＮＡは胚中心を標識し、ＩｇＤは濾胞帯を標識し、また、抗ＣＤ２１は、辺縁帯および暗殻帯を標識する。ＦＩＴＣ標識抗ＣＤ３（２００ｎｇから１μｇ）を使用して、白脾髄のＴ細胞領域を特定する。十分な洗浄後、結合細胞および抗体を、１％ＰＦＡを使用して、４℃で１時間、脾臓切片に固定する。湿式マウント断片を、蛍光について観察し、メタモルフソフトウェアを使用して撮影する。
【０２２１】
結果および結論：ＣＴＯ標識ＭＮＣは、１５時間、４℃の培養後に、活性を有するＰＮＡ＋胚中心に結合した。ＣＴＯ標識ＭＮＣ結合は、ＩｇＤまたは抗ＣＤ２１と共存してみられなかった。これは、骨髄および全血単核画分の幹細胞が、脾臓の胚中心のＰＮＡ陽性ＩｇＤ陰性ＣＤ２１陰性領域に結合することを示す。
【０２２２】
実施例４
全血および骨髄単核球画分から単離されたＣＤ３４＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ１１７＋幹細胞は、白脾髄のＰＮＡ＋胚中心に結合する。
【０２２３】
マウス全血および骨髄からの単核球画分を組み合わせ、ＣＴＯによって標識し、次いで、ビオチン化抗ＣＤ３４、抗ＣＤ１１７、および抗ＣＤ１０５と共にインキュベートし、その後、抗体に結合した細胞を、メーカーの説明書に従って、ミルテニー磁力細胞分離カラムを使用して、単離した。回収されたＣＤ３４＋ＣＤ１０５＋ＣＤ１１７＋幹細胞の数は、開始ＭＮＣ画分の０．３％から３％であった。
【０２２４】
得られたＣＤ３４＋ＣＤ１０５＋ＣＤ１１７＋細胞を、新鮮なマウス脾臓切片上で、１０μｇのＰＮＡと共に、１５時間、インキュベートした。積極的に選択された細胞を、脾臓切片当たり１００，０００の細胞（Ａ）、５０，０００の細胞（Ｂ）、２５，０００の細胞（Ｃ）、または１０，０００の細胞（Ｄ）で加えた。ＭＮＣのインキュベーションと同様に、精製された幹細胞は、白脾髄のＰＮＡ陽性胚中心に結合した。幹細胞は、濃度依存的に結合した。細胞は、胚中心の個別のニッチに結合し、およそ１００，０００よりも多い加えた細胞の量は、付加的なニッチへの拡大よりも強力な結合シグナルを生ずる（実施例２を参照）。
【０２２５】
結果および結論(Conclustion)：これらの結果は、全血および骨髄単核球画分から単離されたＣＤ３４＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ１１７＋幹細胞が、白脾髄のＰＮＡ＋胚中心に結合することを示す。
【０２２６】
実施例５
ＭＮＣ画分の幹細胞の結合は、抗ＣＤ４５抗体によってブロックされる。
【０２２７】
脾臓切片へのＭＮＣおよび幹細胞の結合は、ラットモノクローナルＩｇＧ２ｂ抗マウス抗ＣＤ４５（８００ナノグラムから４マイクログラム）によってブロックされるが、抗ＣＤ４５Ｒ（１０マイクログラム）、または抗ＣＤ３抗体（１マイクログラム）によってはブロックされない。３０−Ｆ１１ラット抗マウス抗ＣＤ４５抗体（サンタクルーズバイオテクノロジー(Santa Cruz Biotechnology)社製）、または１７Ａ２抗ＣＤ３抗体（サンタクルーズバイオテクノロジー社製）を、１：５０または１：１０に希釈し、１時間、２５０，０００のＣＴＯ標識ＭＮＣと共にインキュベートした。ＭＮＣ結合を、結合するニッチの数、およびニッチのサイズとして視覚的に計測した。ＣＴＯ−ＭＮＣ対照の新鮮な脾臓切片は、切片ごとに、大きいサイズの培地で３から６のＭＮＣ結合ニッチを有していた。抗ＣＤ３抗体は、ＭＮＣ結合ニッチの数またはサイズのいずれにも影響を与えなかった。１：５０希釈における抗ＣＤ４５ ３０−Ｆ１１抗体は、ＭＮＣ結合ニッチの数およびサイズを共に半分減少させた。１：１０希釈における抗ＣＤ４５ ３０−Ｆ１１抗体は、新鮮な脾臓切片に結合するＣＴＯ−ＭＮＣを完全に消失させた。
【０２２８】
別の試験において、標識ＭＮＣを、３０−Ｆ１１抗ＣＤ４５（４マイクログラム）、またはＰＣ３／１８８Ａ抗ＣＤ３（１マイクログラム）（サンタクルーズバイオテクノロジー社製）の存在下で、１時間、脾臓切片上でインキュベートした。
【０２２９】
別の試験において、セルトラッカーオレンジ（ＣＴＯ）標識ＭＮＣを、ＣＤ４５Ｒまたは３０−Ｆ１１抗ＣＤ４５に対する抗体と共に、４℃で１５時間、インキュベートした。１：１０（５μｇ）に希釈したＣＤ４５Ｒ（ミルテニーバイオテック(Miltenyi Biotec)社製）に対する抗体は、新鮮なマウス脾臓切片へのＣＴＯ−ＭＮＣの結合をブロックしなかった。対照的に、１：１０（４μｇ）の３０−Ｆ１１抗ＣＤ４５抗体（サンタクルーズ社製）は、新鮮な脾臓切片へのＣＴＯ標識ＭＮＣの結合を低減させた。ＣＤ４５Ｒは、活性を有する胚中心ではなく、濾胞帯Ｂ細胞を結合する。
【０２３０】
３０Ｆ−１１抗ＣＤ４５との１：１０共培養物は、およそ７５％、新鮮な脾臓切片へのＣＴＯ標識ＭＮＣの結合を低減させた。
【０２３１】
結果および結論：これらのデータは、脾臓に対する、ＭＮＣ画分中の幹細胞の結合が、抗ＣＤ４５抗体によってブロックされることを示す。
【０２３２】
実施例６
３０−Ｆ１１ラットＩｇＧ２ｂ抗マウス抗ＣＤ４５抗体によって結合したＣＤ４５エピトープ。
【０２３３】
３０−Ｆ１１は、マウスＣＤ４５のすべてのアイソフォームに結合する。
【０２３４】
３０−Ｆ１１エピトープの正確な結合は、マッピングされていない。３０−Ｆ１１を、マウス脾臓および胸腺細胞との免疫化によって生成した。マウスＣＤ４５アイソフォーム１の細胞外ドメインは、アミノ酸２４〜５６４からなる。アイソフォーム２は、アミノ酸３１〜７３を欠いているが、アイソフォーム３は、アミノ酸３１〜１６９を欠いている。３０−Ｆ１１は、マウスＣＤ４５のすべてのアイソフォームに結合すると報告されているので、結合するエピトープは、アイソフォーム１のアミノ酸１７０〜５６４に存在するはずである。タンパク質の抗原領域は、疎水性(Kyte Doolittle)、およびＳｗｉｓＰｒｏｔウェブサイトでみられる接近性アルゴリズムを用いて予測することができる。抗原領域は、低い疎水性と高い接近性の領域でみられる可能性が最も高いと考えられる。ヒト配列の５０１〜５２１付近のアミノ酸残基には、潜在的抗原部位としてタンパク質のこの領域を示す、低い疎水性予測がある。また、この領域は、マウスからヒトまで十分に保存される。（Okumura M.らの文献：１９９６年８月１５日；157(4):1569-75を参照。）
実施例７
免疫補助剤は、胚中心の形成を増強し、単核幹細胞画分の脾臓への結合を増加させる
活性を有する胚中心を、不完全フロイントアジュバントまたはＲｉｂｉを使用して、意図的な免疫化によって正常なマウスに誘発させた。第０日目に、マウスに、ＰＢＳまたは０．５ｍｌのＲＩＢＩ補助剤と１：１で混合した０．５ｍｌの不完全フロイントアジュバント（ＦＩＡ）を腹腔内に(ＩＰ)注射した。免疫化７日または１４日後に、マウスを、アベルチン麻酔前に３０分間、１００Ｕの腹腔内ヘパリンによってヘパリン処置した。マウスを、眼窩後部出血によって放血し、全１．５ｍｌから１．８ｍｌの全血を得て、これを１５ｍｌ円錐管中で２００μｌの５Ｕ／ｍｌヘパリンに加えた。その後、腹大動脈および大静脈を切断し、残存する血液を、胸部大静脈を上げ、１０ｍｌの５Ｕ／ｍＬヘパリンの遅い押出し注入によって、完全に血管から外に洗い流した。脾臓を除去し、増殖培地に入れ、その後、軟寒天に埋め込み、また、これを切断して、２００ミクロンの厚さの一定の切片を得た。胸骨および大腿骨骨髄を、ハンク緩衝食塩水によって骨から洗い流し、全血および骨髄の単核幹細胞画分を、ヒストパクを使用して単離し、混合した。ＦＩＴＣ標識抗ＰＮＡ（１０μｇ）を使用して、４℃で一晩、インキュベーションすることによって、脾臓切片上で、胚中心を特定した。ＰＮＡとの一晩の培養後、洗浄せずに、ＣＴＯ標識単核幹細胞画分を、４℃で１時間、切片に加えた。十分な洗浄後、結合細胞および標識ＰＮＡを、１％ＰＦＡを使用して、４℃で１時間、脾臓切片に固定する。湿式マウント断片を、蛍光について観察しメタモルフソフトウェアを使用して撮影する。
【０２３５】
免疫化７日後のＰＮＡの結合は、ＦＩＡおよびＲＩＢＩ処置マウスにおいて類似しており、共に、対照の結合のほぼ２倍であった。しかしながら、ＦＩＡ処置マウスは、ＲＩＢＩ処置マウスよりも健康であり、このため、その後の試験をすべてＦＩＡによって行った。ＦＩＡ処置７日および１４日後と比較して、ＰＮＡ輝度は、７日後でより高かったが、１４日後の活性を有する胚中心は、しっかりと組織され、コンパクトであるようであった。対照と比較して、ＦＩＡの免疫化は、マウス脾臓の活性を有する胚中心の数を２倍にする。脾臓への、対照マウスから単離されたＣＴＯ標識単核幹細胞画分の添加は、ＦＩＡ処置マウスでみられた活性を有する胚中心の形成の増強によって、脾臓にも同様に顕著に多い単核幹細胞が結合することを示した。７日後の単核幹細胞の結合は、対照脾臓に結合するもののおよそ３倍から５倍に増加し、単核幹細胞画分の結合は、対照脾臓に結合するものの最大１０倍、および一部の事例において、１０倍を超えて増加した。
【０２３６】
結果および結論：これらのデータは、免疫補助剤が、胚中心の形成を増強し、脾臓に結合する単核幹細胞画分を増加させることを示す。
【０２３７】
実施例８
活性を有する胚中心の形成の阻害は、エクスビボにおける脾臓への幹細胞の結合を減少させる。
【０２３８】
マウスを、脾臓切片に結合する幹細胞のエクスビボ分析のための脾臓および幹細胞の採取７日前に、腹腔内注射により、エタノール（１部）およびＰＢＳ（９部）中に溶解した１ｍｇデクサメタゾーンによって処置した。対照マウスを、全容積１ｍｌのエタノール（１部）およびＰＢＳ（９部）のみによって処置した。第７日目に、実施例７に詳述するように、マウスを採取し処置した。対照マウスの単核幹細胞画分を、対照およびデクサメタゾーン処置脾臓切片に関する結合試験に使用した。第７日目に結合する単核幹細胞は、試験７日前に供したデクサメタゾーンによる１回１ｍｇの処置後、３０％から４０％減少した。
【０２３９】
採取７日前の単回の１ｍｇのデクサメタゾーン処置は、脾臓重量を平均２２％減少させ、循環ＭＮＣの平均数を３４％減少させ、ＰＮＡ標識胚中心を最大２４％減少させたが、全血または骨髄のＭＮＣ画分内の幹細胞の割合は、減少せず、実際、対照と比較して、平均３２％増加した。
【０２４０】
結果および結論：これらのデータは、免疫抑制剤が、処置マウスの脾臓の細胞に結合する単核球画分の数を減少させることを示す。
【０２４１】
実施例９
活性を有する胚中心の形成の阻害は、インビボにおける脾臓への幹細胞の結合を減少させる。
【０２４２】
未処置の対照マウスを、アベルチン麻酔前に３０分間、１００Ｕの腹腔内ヘパリンによってヘパリン処理した。マウスを、眼窩後部出血によって放血し、全１．５ｍｌから１．８ｍｌの全血を得て、これを１５ｍｌ円錐管中で２００μｌの５Ｕ／ｍｌヘパリンに加えた。その後、腹大動脈および大静脈を切断し、残存する血液を、胸部大静脈を上げ、１０ｍｌの５Ｕ／ｍＬヘパリンの遅い押出し注入によって、完全に血管から外に洗い流した。胸骨および大腿骨骨髄を、ハンク緩衝食塩水によって骨から洗い流し、全血および骨髄の単核幹細胞画分を、ヒストパクを使用して単離し、混合した。単核幹細胞画分を増殖培地（１０％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ）中で再懸濁し、３７℃、５％ＣＯ２で、一晩インキュベートした。翌朝、単核幹細胞を、メーカーの説明書に従って、セルトラッカーグリーン（ＣＴＧ）によって標識した。
【０２４３】
ＣＴＧによる、未処置の対照単核幹細胞（ＭＮＣ）の染色直後に、レシピエントマウスにそれぞれ、第７日目において、眼窩後部の鼻腔に、およそ６ＭのＣＴＧ ＭＮＣ（１００μｌ）を注射した。５匹の対照マウスに、第０日および第４日目において、１００μｌエタノールおよび９００μｌ ＰＢＳを腹腔内注射した。３匹のマウスに、第０日および第４日目において、１ｍｇデクサメタゾーンを腹腔内に処置した。そして、２匹のマウスに、第０日、第２日および第５日目において、１ｍｇデクサメタゾーンを腹腔内に処置した。１時間後に、マウスを、眼窩後部の出血によって放血した。その後、腹大動脈および大静脈を切断し、残存する血液を、胸部大静脈を上げ、１０ｍｌの５Ｕ／ｍＬヘパリンの遅い押出し注入によって、完全に血管から外に洗い流した。脾臓を採取し、１％ＢＳＡを添加したフェノールレッドのないＲＰＭＩの氷上に保持した。胸骨および大腿骨骨髄を、ハンク緩衝食塩水によって骨から洗い流し、全血および骨髄の単核幹細胞画分を、ヒストパクを使用して単離した。
【０２４４】
脾臓を単個細胞浮遊液に解離し、脾臓中の注射されたＭＮＣ ＣＴＧ隔離の程度を、フローサイトメトリーを使用して決定した。デクサメタゾーン（全２ｍｇ）は、脾臓中のＭＮＣ ＣＴＧの全細胞数蓄積を３３％から４３％減少させ、３ｍｇの全デクサメタゾーン用量は、脾臓中のＭＮＣ ＣＴＧの全細胞数蓄積をおよそ７０％減少させた。
【０２４５】
結果および結論：これらのデータは、７日の免疫抑制剤の処置が、脾臓中に隔離する外部から注入されたＭＮＣ幹細胞の数を減少させることを示す。
【０２４６】
実施例１０
活性を有する胚中心の形成の阻害は、幹細胞の脾臓への結合を減少させる。
【０２４７】
（理論実験例(prophetic)）
ヒトボランティアを、薬剤の悪影響をすべて制限するか、または完全に回避すると選択された用量を用いて、確立された臨床試験計画書に従って、プレドニゾン等の市販の一般的な免疫反応抑制剤によって、予防的に処置する。別のヒトボランティア群を、５ ｍｇ／ｋｇから１００ ｍｇ／ｋｇの用量で、ＨＣＤ−１２２抗ＣＤ４０ ｍＡｂ等のＣＤ４０に対する抗体によって処置する。
【０２４８】
予防免疫抑制の最終日の前かまたは該最終日に、自家幹細胞を、５０ｍｌの腸骨稜の骨髄からか、または全血アフェレーシス(apharesis)生成物から、単核球画分で単離する。得られた幹細胞を含有するＭＮＣ画分を、その後の３Ｄ ＰＥＴイメージングのために、２−［１８Ｆ］−フルオロ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース（１８Ｆ−ＦＤＧ）か、その後のＳＰＥＣＴイメージングのために、適切な核イメージング標識によって標識する。２から１０００万の幹細胞を含む、標識ＭＮＣ幹細胞含有画分を、静脈内注射し、投与後６０分から９０分、および最大４８時間、ＰＥＴまたはＳＰＥＣＴイメージングによって、これらの生物分散を決定する。ＭＮＣ中の幹細胞は、注射後９０分以内に、正常なボランティアの脾臓に主に蓄積する。対照的に、免疫が抑制され、ＨＣＤ−１２２によって処置したボランティアは、ＭＮＣ幹細胞画分の脾臓の蓄積が低減される。
【０２４９】
実施例１１
活性を有する胚中心の形成の阻害または低減は、マウスにおける心臓への幹細胞の送達を増強し、機能回復を促進する。
【０２５０】
（理論実験例）
３ヶ月および１２ヶ月齢のＰＮおよび１２９Ｓ１／ＳｖｌｍＪマウスに、抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡｂ（ファルマミンゲン(PharMingen)社製）を静脈内注射（i.v.；第０日、２日および４日目の注射当たり２５０ｍｇ）するか、または対照ハムスターにＩｇ（ピアス(Pierce)社製、ロックフォード、イリノイ州）を注射する。全血および骨髄単核画分幹細胞を、未処置の同腹子マウスから収集し、ＣＴＯ等の細胞追跡用色素によって標識し、次いで、幹細胞を、ビオチン化抗ＣＤ３４、抗ＣＤ１０５、抗ＳＳＥＡ１、および抗ＣＤ１１７抗体を使用して、ミルテニー磁力分離カラムによって精製する。第５日目に、１００，０００から１Ｍの精製幹細胞を、試験マウスの眼窩後部または静脈内に注射する。１５時間から２４時間後に、マウスを放血し、血液を収集し、血管に残存する赤血球を洗浄し、また、脾臓を、幹細胞蓄積の蛍光イメージングのために収集する。幹細胞蓄積は、対照のＩＧ処置ＰＮマウスの活性を有するＰＮＡ＋胚中心において明らかであり、１２９Ｓ１マウスよりも有意に多い活性を有する胚中心の数、その結果としての、結合する幹細胞の増加を示す。抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡｂ処置１２９Ｓ１マウスは、明らかに活性を有する胚中心が、あったとしても少数であり、幹細胞結合はわずかであるか全くない。抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡｂ処置ＰＮマウスは、Ｉｇ処置対照マウスと比較して、活性を有する胚中心の数の減少を示し、このため、これに並行して、幹細胞結合の減少を示す。
【０２５１】
これらのマウスの心臓の再生を検討するために、３ヶ月および１２ヶ月齢のＰＮおよび１２９Ｓ１／ＳｖｌｍＪマウスに、抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡｂ（ファルマミンゲン社製）を静脈内注射（i.v.；第０日、２日および４日目の注射当たり２５０ｍｇ）するか、または対照ハムスターＩｇ（ピアス社製、ロックフォード、イリノイ州）を注射する。第４日目に、マウスに麻酔をかけ、心エコー検査を、ベースライン心臓機能および容積について行い、次いで、ＬＡＤ冠動脈を、左心室自由壁のおよそ７０％の梗塞への開胸術によって恒久的に結紮する。
【０２５２】
全血および骨髄単核画分幹細胞を、未処置の同腹子マウスから収集し、幹細胞を、ビオチン化抗ＣＤ３４、抗ＣＤ１０５、抗ＳＳＥＡ１、および抗ＣＤ１１７抗体を使用して、ミルテニー磁力分離カラムによって精製する。ＬＡＤの恒久的な結紮３日後の第７日目に、１００，０００から１Ｍの精製幹細胞を、試験マウスの眼窩後部または静脈内に注射する。マウスの連続心エコー検査を、第１４日、２１日および２８日目に行う。
【０２５３】
幹細胞注射をしないＩｇ対照処置マウスは、有意な心臓機能の低下、拡張末期容積と収縮末期容量の増加、および非梗塞壁厚の増加を示し、第２８日目前に５０％から１００％のマウスが心不全を発症する。幹細胞注射をしたＩｇ対照処置１２９Ｓ１マウスは、心不全死の減少、幹細胞注射をしないものと比較して、心臓機能のわずかな改善を示す。幹細胞注射をしたＩｇ対照処置ＰＮマウスは、１２９Ｓ１マウスと比較して、生存または機能の改善を示さない。対照的に、抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡｂ処置幹細胞注射１２９Ｓ１マウスは、他のすべての群と比較して、生存および心臓機能の有意な改善を示し、抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡｂ処置幹細胞注射ＰＮマウスは、対照Ｉｇ処置幹細胞注射ＰＮマウスと比較して、生存および心臓機能を改善する。
【０２５４】
実施例１２
活性を有する胚中心の形成の阻害または低減は、ヒトにおける心臓への幹細胞の送達を増強し、機能回復を促進する。
【０２５５】
（理論実験例）
梗塞急性期におけるステント移植による経皮的冠動脈インターベンションによって良好に治療された、急性ＳＴ部上昇型ＭＩ患者が、試験に適格である。患者を、１日、３０分のＩＶ注入によって、５、１０、２０または１００ ｍｇ／ｋｇで、抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡｂレプリツマブ(Replizumab)により処置する。
【０２５６】
ＭＩ後３日から１５日に、単核球を、フィコール−ヒパク（ファルマシア(Pharmacia)社製、ウプサラ、スウェーデン）によって、５０ｍＬ骨髄穿刺液から回収する。骨髄吸引から完成品までの全過程を、医薬品の製造管理と品質管理に関する基準に従って行う。
【０２５７】
ＭＲＩによって心臓機能を追跡し、また、付加的な予後には、死亡、再発性ＭＩ、およびその後の血管再生、または入院（無病生存）が含まれる。偽薬患者と比較して、幹細胞によって治療された患者には、歴史的に、１年に５５％から６０％に対して８０％の無病生存率の減少がある。抗ＣＤ４０Ｌおよび幹細胞によって治療された患者は、幹細胞のみで治療された患者と比較して、無病生存率が改善された。さらに、抗ＣＤ４０Ｌ幹細胞によって治療された患者は、幹細胞のみで治療された患者と比較した、左心室容積の更なる減少と、心駆出パラメーターの改善を示す。
【０２５８】
実施例１３
マウス脾臓における単核画分幹細胞結合パートナーの特定および単離
雄１２９Ｓ１／ＳｖｌｍＪマウスの骨髄および全血単核球画分を、ヒストパクを使用して単離し、混合し、メーカーの説明書に従って、ＣＴＯによって標識した。脾臓を、単個細胞浮遊液に解離し、ＣＴＢによって標識した。幹細胞を、ＭＮＣを７日間、増殖培地で培養し、その後、７日間、ＦＢＳを含まない増殖培地（１２０ ｎｇ／ｍｌ幹細胞因子および２５％ウマ血清を添加）で培養し、非接着性細胞を採取することによって得た。典型的には、非接着性細胞の最大４０％が、ＣＤ３４、ＣＤ１０５、ＳＳＥＡ１、および／またはＣＤ１１７を発現する。幹細胞をＣＴＯによって標識した。
【０２５９】
ＣＴＢ標識脾細胞を、ＣＴＯ標識ＭＮＣと共に、１：１の比（１０００万のＣＴＢ標識脾細胞と５００μｌＰＢＳ中１０Ｍ ＭＮＣ）または１００：１の比（１０００万のＣＴＢ標識脾細胞と５００μｌＰＢＳ中１００，０００のＣＴＯ標識幹細胞）で、３７℃、５％ＣＯ２で、ロッカーにおいてインキュベートした。アリコートを、ＦＬ２およびＦＬ９蛍光を捕捉するベックマン・クルター・ガリオ・フローサイトメーター(Beckman Coulter Gallios flow cytometer)の実施において採用した。細胞間結合は、分散ダイヤグラムの右上部（ＵＲ）の四分円において、ＣＴＢ＋ＣＴＯ＋共陽性シグナルの時間依存性増加により明らかであった。バックグラウンドＵＲは０．１５％であった。脾細胞と幹細胞の最大結合は、５０分で２．６％ ＵＲであり、脾細胞とＭＮＣの最大結合は、３０分で５％ ＵＲであった。
【０２６０】
結果および結論：これらのデータは、フローサイトメトリーを使用して、脾臓に結合する幹細胞に関与する脾臓細胞を特定および単離できることを示す。
【０２６１】
上述するように、本発明の好適な実施態様が示され、説明されたが、上で述べた通り、多くの変更を、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなしに、行うことができる。したがって、本発明の範囲は、好適な実施態様の開示によって限定されない。代わりに、本発明は、次に示す特許請求の範囲への言及によって専ら決定されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【０２６２】
【図１】図１は、全血の勾配遠心分離から得られた層の代表図を示す。
【図１】
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【国際調査報告】
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