(57)【要約】  本発明は、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オールの酸付加塩、その調製及びその応用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
‐無機酸、
‐８個以下の炭素原子を含む非環式脂肪族カルボン酸又はスルホン酸、及び
‐４個以下のアリール基を含む芳香族カルボン酸又はスルホン酸、
から成る群から選択された酸で形成される、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オールの酸付加塩。
【請求項２】
塩酸及び硫酸から成る群から選択された無機酸で形成される、請求項１に記載の5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オールの酸付加塩。
【請求項３】
２個から６個の炭素原子、好ましくは３個から４個の炭素原子を含む非環式脂肪族カルボン酸で形成される、請求項１に記載の5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オールの酸付加塩。
【請求項４】
２個から６個の炭素原子、好ましくは３個から４個の炭素原子を含む前記非環式脂肪族カルボン酸が、モノカルボン酸又はジカルボン酸である、請求項３に記載の5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オールの酸付加塩。
【請求項５】
コハク酸、グルタル酸、マロン酸、フマル酸、又は酢酸で形成される、請求項３又は４に記載の5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オールの酸付加塩。
【請求項６】
２個から６個の炭素原子、好ましくは３個から４個の炭素原子を含む前記非環式脂肪族カルボン酸が、少なくとも１つの-OHで置換される、請求項３又は４に記載の5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オールの酸付加塩。
【請求項７】
L-酒石酸、D-酒石酸、L-リンゴ酸、クエン酸、又は2(S)-ヒドロキシプロパン酸で形成される、請求項６に記載の5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オールの酸付加塩。
【請求項８】
メシル酸から選択された非環式脂肪族スルホン酸で形成される、請求項１に記載の5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オールの酸付加塩。
【請求項９】
４個以下のアリール基を有する芳香族カルボン酸で形成され、前記アリール基の少なくとも１つが少なくとも１つの-OHで置換される、請求項１に記載の5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オールの酸付加塩。
【請求項１０】
4,4’メチレンビス[3-ヒドロキシ-2-ナフトエ酸]で形成される、請求項９に記載の5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オールの酸付加塩。
【請求項１１】
３個以下のアリール基、好ましくはわずか１個のアリール基を含む芳香族カルボン酸又はスルホン酸で形成される、請求項１に記載の5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オールの酸付加塩。
【請求項１２】
ベンゼンスルホン酸、安息香酸、又は4-メチルベンゼンスルホン酸で形成される、請求項１１に記載の5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オールの酸付加塩。
【請求項１３】
薬学的に受容可能なキャリア及び請求項１から１２のいずれか一項に記載の酸付加塩を含む医薬組成物。
【請求項１４】
神経変性疾患、がんの治療に用いるため、又は、患者の免疫系を活性化するための請求項１から１２のいずれか一項に記載の酸付加塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オールの酸付加塩、その調製及びその応用に関する。
【背景技術】
【０００２】
薬学的に活性な化合物5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オールは、デンドロゲニンAという名称で知られている。その構造式は以下の通りである：
【０００３】
【化１】
2014530245.tif 000002
【０００４】
デンドロゲニンAは、特許文献１及び非特許文献１に遊離塩基として開示されている。当該遊離塩基の水に対する溶解度は0.47mg/mlである。
しかしながら、デンドロゲニンAの酸付加塩はこれまで開示されたことがなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第０３／８９４４９号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】de Medina等 (J.Med.Chem.,2009)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、デンドロゲニンAの酸付加塩に関するものであり、当該酸付加塩は、水中で顕著な溶解度を有する（当該遊離塩基の最大130倍まで高い）。
その顕著な溶解度により、本発明の塩は、注入された際に遊離塩基よりも生物学的に利用可能であることが予測され、それによって高投与量の投与が可能となる。
本発明の塩は、
‐無機酸、
‐８個以下の炭素原子を含む非環式脂肪族カルボン酸又はスルホン酸、及び
‐４個以下のアリール基を含む芳香族カルボン酸又はスルホン酸、
から成る群から選択される酸で形成される、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オールの酸付加塩である。
本発明の塩は、1mg/mlから70mg/mlの間、特に1.4mg/mlから65mg/mlの間、さらに厳密には、
‐例えばL-乳酸、マロン酸、L-リンゴ酸若しくは酒石酸（D若しくはL）で形成される塩では、35mg/mlから65mg/mlの間；
‐例えばベンゼンスルホン酸、安息香酸、コハク酸、4-メチルベンゼンスルホン酸、若しくは塩酸で形成される塩では、20mg/mlから35mg/mlの間；
‐例えば硫酸、フマル酸、グルタル酸、若しくはメシル酸で形成される塩では、10mg/mlから20mg/mlの間；又は
‐例えばクエン酸、酢酸、若しくはパモン酸で形成される塩では、1.4mg/mlから10mg/mlの間
の水中での溶解度を有することが可能である。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の塩は、遊離塩基としてのデンドロゲニンAと前記リスト中の酸の一つとの反応によって調製できる。当該反応に用いられる溶媒は、例えばエタノール、水、又はトルエンであって良い。当該溶媒を反応の間加熱しても良い。結果として生じる塩を、当業者に周知の方法にしたがって回収して良い。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明に係るデンドロゲニンAの酸付加塩を無機酸から形成しても良い。
一実施態様において、当該無機酸は塩酸を含まない。
好ましい無機酸は、塩酸及び硫酸から成る群から選択される。
無機酸で形成されるデンドロゲニンAの酸付加塩は、15mg/mlから25mg/mlの間の水中での溶解度を有し得る。
【００１０】
本発明に係るデンドロゲニンAの酸付加塩を、８個以下の炭素原子を有する非環式脂肪族カルボン酸から形成しても良い。
当該非環式脂肪族カルボン酸は、好ましくは、２個から６個の炭素原子を、より好ましくは３個から４個の炭素原子を含む。
当該非環式脂肪族カルボン酸は、モノカルボン酸又はジカルボン酸を含む。
モノカルボン酸を、少なくとも１つのヒドロキシル基で置換して良い。
好ましいモノカルボン酸は、酢酸又はL-乳酸（2(S)-ヒドロキシプロパン酸）を含む。
ジカルボン酸を、少なくとも１つのヒドロキシル基で置換しても良い。
好ましいジカルボン酸は、酒石酸、L-リンゴ酸、コハク酸、マロン酸、フマル酸及びグルタル酸を含む。
少なくとも１つのヒドロキシル基で置換されたモノカルボン酸又はジカルボン酸は、好ましくはL-酒石酸、D-酒石酸、L-リンゴ酸、クエン酸、又は2(S)-ヒドロキシプロパン酸を含む。
非環式脂肪族カルボン酸は、クエン酸等のトリカルボン酸又はマロン酸等の１つの不飽和（unsaturation）を含む酸を含んでも良い。
非環式脂肪族カルボン酸で形成されるデンドロゲニンAの酸付加塩は、4mg/mlから60mg/mlの間の水中での溶解度を有し得る。
好ましい非環式脂肪族カルボン酸は、L-乳酸、マロン酸、L-リンゴ酸及び酒石酸（D又はL）から成る群から選択される。
そのような酸で形成されるデンドロゲニンAの酸付加塩は、35mg/mlから65mg/mlの間の水中での溶解度を有し得る。
【００１１】
本発明に係るデンドロゲニンAの酸付加塩を、メシル酸等の８個以下の炭素原子を有する非環式脂肪族スルホン酸から生成しても良い。
本発明に係るデンドロゲニンAの酸付加塩を、４個以下のアリール基を有する芳香族カルボン酸又はスルホン酸から生成しても良い。
４個以下のアリール基を有する芳香族カルボン酸又はスルホン酸は、好ましくはわずか１個のアリール基を含んでいる。例えば、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、又は4-メチルベンゼンスルホン酸である。
このような酸で生成されたデンドロゲニンAの酸付加塩は、水に対して20mg/mlから35mg/mlの間の溶解度を有し得る。
４個までのアリール基を有する好ましい芳香族カルボン酸は、パモン酸（4,4’メチレンビス(3-ヒドロキシ-2-ナフトエ酸)）を含んでいる。
【００１２】
本発明は、薬学的に受容可能なキャリア及びデンドロゲニンAの前記酸付加塩の１つを含む医薬組成物にも関する。
【００１３】
本発明は、神経変性疾患、がんの治療に用いるため、又は、患者の免疫系を活性化するためのデンドロゲニンAの前記酸付加塩の１つにも関する。
【００１４】
以下の例は、本発明に基づくデンドロゲニンAの酸付加塩の調製を説明している。
【実施例１】
【００１５】
例１：5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、塩酸塩：
塩酸水（0.9g, 37％）を、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール（5.14g, 10mmol）のエタノール（10ml）溶液に加える。当該溶液を減圧下で蒸発乾固させ、生じた残留物をメタノールから再結晶させる。当該生成物をろ過し、エタノールから再結晶させ、ろ過及び乾燥を行った後に、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、塩酸塩が、淡黄色の結晶性固体として得られる。当該塩酸塩は、以下の分析特性を有している：分析により求められた：C, 77.11；H, 10.40；N, 7.79；Cl, 6.58％; H2O, 1.75％。C36H56ClN3O2-0.52H2Oに関して計算した：C, 77.09；H, 10.37；N, 7.78；Cl, 6.57％; H2O, 1.73％。
【実施例２】
【００１６】
例２：5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、L-酒石酸塩：
5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール（5.4g, 10mmol）を、(2R,3R)2,3-ジヒドロキシブタン二酸（L-(+)-酒石酸；Fluka；1.5g, 10mmol）のエタノール（40ml）溶液に加える。当該溶液を減圧下で蒸発乾固させ、生じた残留物をメタノールから再結晶させる。当該生成物をろ過し、再結晶させ、ろ過及び乾燥を行った後に、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、酒石酸塩が、淡黄色の結晶性固体として得られる。当該酒石酸塩は、以下の分析特性を有している：分析により求められた：C, 66.61；H, 9.42；N, 6.48％; H2O, 2.23％。C36H61N3O8-0.8H2Oに関して計算した：C, 66.60；H, 9.46；N, 6.48％; H2O, 2.22％。
【実施例３】
【００１７】
例３：5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、L-リンゴ酸塩：
5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール（5.4g, 10mmol）を、(2S)-(-)-ヒドロキシブタン酸（L-(-)-リンゴ酸；Fluka；1.34g, 10mmol）の水／エタノール(1:1)（40ml）溶液に加える。当該溶液を減圧下で蒸発乾固させ、生じた残留物をメタノールから再結晶させる。当該生成物をろ過し、再結晶させ、ろ過及び乾燥を行った後に、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、リンゴ酸塩が、淡黄色の結晶性固体として得られる。当該リンゴ酸塩は、以下の分析特性を有している：分析により求められた：C, 67.22；H, 9.53；N, 6.51％； H2O, 0.65％。C36H61N3O7-0.23H2Oに関して計算した：C, 67.20；H, 9.49；N, 6.53％； H2O, 0.64％。
【実施例４】
【００１８】
例４：5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、コハク酸塩：
5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール（5.4g, 10mmol）を、ブタン二酸（コハク酸；Fluka；1.18g, 10mmol）のエタノール（40ml）溶液に加える。当該溶液を90℃に加熱し、水（18g）で処理し、ろ過する。冷却によって当該生成物は結晶化し、ろ過及び乾燥が行われ、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、コハク酸塩が、淡黄色の結晶性固体として得られる。当該コハク酸塩は、以下の分析特性を有している：分析により求められた：C, 68.99；H, 9.81；N, 6.72％； H2O, 0.78％。C36H61N3O6-0.25H2Oに関して計算した：C, 68.95；H, 9.74；N, 6.70％； H2O, 0.72％。
【実施例５】
【００１９】
例５：5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、安息香酸塩：
5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール（5.4g, 10mmol）を、安息香酸（Fluka；1.22g, 10mmol）のトルエン（40ml）溶液に加える。当該溶液を加熱し、ろ過する。冷却によって当該生成物は結晶化し、ろ過及び乾燥が行われ、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、安息香酸塩が、薄茶色の結晶性固体として得られる。当該安息香酸塩は、以下の分析特性を有している：分析により求められた：C, 73.73；H, 9.66；N, 6.63％。C39H61N3O4に関して計算した：C, 73.70；H, 9.61；N, 6.61％。
【実施例６】
【００２０】
例６：5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、ベンゼンスルホン酸塩：
5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール（5.4g, 10mmol）を、ベンゼンスルホン酸（Fluka；1.61g, 10mmol）のホットトルエン（40ml）溶液に加える。当該溶液を減圧下で蒸発乾固させ、生じた残留物をエタノール‐酢酸エチルから再結晶させる。当該生成物をろ過及び乾燥させた後に、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、ベンゼンスルホン酸塩が、淡黄色の結晶性固体として得られる。当該ベンゼンスルホン酸塩は、以下の分析特性を有している：分析により求められた：C, 72.80；H, 9.89；N, 5.77％； H2O, 1.11％。C38H61N3O5S-0.38H2Oに関して計算した：C, 72.78；H, 9.85；N, 5.75％； H2O, 1.09％。
【実施例７】
【００２１】
例７：5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、パモ酸塩：
5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール（5.4g, 10mmol）と4,4’メチレンビス(3-ヒドロキシ-2-ナフトエ酸)（Fluka；3.88g, 10mmol）との混合物を、エタノール（40ml）中で加熱する。水（25ml）を加える。冷却によって当該生成物は結晶化し、ろ過及び乾燥が行われ、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、パモ酸塩が、淡黄色の結晶性固体として得られる。当該パモ酸塩は、以下の分析特性を有している：分析により求められた：C, 74.96；H, 8.15；N, 4.78％； H2O, 2.37％。C55H71N3O8-1.15H2Oに関して計算した：C, 74.93；H, 8.08；N, 4.77％； H2O, 2.35％。
【実施例８】
【００２２】
例８：5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、グルタル酸塩：
1,5-ペンタン二酸（グルタル酸、Fluka, 660mg, 5mmol）溶液を、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール（2.57g, 5mmol）のホットエタノール（100ml）溶液に加える。当該溶液を減圧下で蒸発乾固させ、生じた残留物をエタノールから再結晶させる。当該生成物をろ過し、再結晶させ、ろ過及び乾燥を行った後に、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、グルタル酸塩が、淡黄色の結晶性固体として得られる。当該グルタル酸塩は、以下の分析特性を有している：分析により求められた：C, 71.09；H, 10.74；N, 6.76％； H2O, 3.38％。C37H63N3O6-1.15H2Oに関して計算した：C, 71.07；H, 10.68；N, 6.72％； H2O, 3.31％。
【実施例９】
【００２３】
例９：5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、マロン酸塩：
1,3-プロパン二酸（マロン酸、Fluka, 520mg, 5mmol）溶液を、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール（2.57g, 5mmol）のホットエタノール（100ml）溶液に加える。当該溶液を減圧下で蒸発乾固させ、生じた残留物をエタノールから再結晶させる。当該生成物をろ過し、再結晶させ、ろ過及び乾燥を行った後に、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、マロン酸塩が、淡黄色の結晶性固体として得られる。当該マロン酸塩は、以下の分析特性を有している：分析により求められた：C, 69.09；H, 9.77；N, 5.95％； H2O, 1.53％。C35H59N3O6-0.51H2Oに関して計算した：C, 69.05；H, 9.70；N, 5.92％； H2O, 1.51％。
【実施例１０】
【００２４】
例１０：5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、フマル酸塩：
(トランス)-ブタン二酸（フマル酸、Fluka, 1.16g, 10mmol）を、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール（5.14g, 10mmol）のエタノール（20ml）溶液に加える。当該溶液を90℃に加熱し、水（18g）で処理し、ろ過する。冷却によって当該生成物は結晶化し、ろ過及び乾燥が行われ、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、フマル酸塩が、淡黄色の結晶性固体として得られる。当該フマル酸塩は、以下の分析特性を有している：分析により求められた：C, 68.01；H, 9.58；N, 6.63％； H2O, 1.05％。C36H59N3O6-0.36H2Oに関して計算した：C, 67.98；H, 6.58；N, 6.61％； H2O, 1.02％。
【実施例１１】
【００２５】
例１１：5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、硫酸塩：
硫酸（Fluka, 5ml, 1M）のエタノール溶液を、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール（2.57g, 5mmol）のホットエタノール（100ml）溶液に加える。当該溶液を減圧下で蒸発乾固させ、生じた残留物をエタノールから再結晶させる。当該生成物をろ過し、エタノールから再結晶させ、ろ過及び乾燥を行った後に、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、硫酸塩が、淡黄色の結晶性固体として得られる。当該硫酸塩は、以下の分析特性を有している：分析により求められた：C, 62.84；H, 9.39；N, 6.94％； H2O, 5.72％。C32H57N3O6S-1.92H2Oに関して計算した：C, 62.81；H, 9.32；N, 6.87％； H2O, 5.65％。
【実施例１２】
【００２６】
例１２：5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、トシル酸塩：
5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール（5.4g, 10mmol）を、4メチルベンゼンスルホン酸（トシル酸塩、Fluka；g, 10mmol）のホットトルエン（40ml）溶液に加える。当該溶液を減圧下で蒸発乾固させ、生じた残留物をエタノール‐酢酸エチルから再結晶させる。当該生成物をろ過及び乾燥させた後に、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、トシル酸塩が、淡黄色の結晶性固体として得られる。当該トシル酸塩は、以下の分析特性を有している：分析により求められた：C, 69.52；H, 9.39；N, 6.28％； H2O, 1.77％。C39H63N3O5S-0.64H2Oに関して計算した：C, 69.49；H, 9.35；N, 6.24％； H2O, 1.71％。
【実施例１３】
【００２７】
例１３：5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、メシル酸塩：
メチルスルホン酸（メシル酸、Fluka, 5ml, 1M）のエタノール溶液を、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール（2.57g, 5mmol）のホットエタノール（100ml）溶液に加える。当該溶液を減圧下で蒸発乾固させ、生じた残留物をエタノールから再結晶させる。当該生成物をろ過し、エタノールから再結晶させ、ろ過及び乾燥を行った後に、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、メシル酸塩が、淡黄色の結晶性固体として得られる。当該メシル酸塩は、以下の分析特性を有している：分析により求められた：C, 66.10；H, 9.89；N, 7.05％； H2O, 1.63％。C34H59N3O5S-0.53H2Oに関して計算した：C, 66.06；H, 9.84；N, 7.01％； H2O, 1.59％。
【実施例１４】
【００２８】
例１４：5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、酢酸塩：
酢酸（sigma, 0.6g, 10mmol）を、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール（5.14g, 10mmol）のエタノール（40ml）溶液に加える。当該溶液を減圧下で蒸発乾固させ、生じた残留物をメタノールから再結晶させる。当該生成物をろ過し、エタノールから再結晶させ、ろ過及び乾燥を行った後に、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、酢酸塩が、淡黄色の結晶性固体として得られる。当該酢酸塩は、以下の分析特性を有している：分析により求められた：C, 71.52；H, 10.38；N, 7.41％； H2O, 0.44％。C34H59N3O4-0.13H2Oに関して計算した：C, 71.50；H, 10.34；N, 7.36％； H2O, 0.41％。
【実施例１５】
【００２９】
例１５：5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、クエン酸塩：
5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール（5.4g, 10mmol）と2-ヒドロキシプロパン-1,2,3-トリカルボン酸（Fluka；1.92g, 10mmol）との混合物を、エタノール（40ml）中で加熱する。水（25ml）を加える。冷却によって当該生成物は結晶化し、ろ過及び乾燥が行われ、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、クエン酸塩が、淡黄色の結晶性固体として得られる。当該クエン酸塩は、以下の分析特性を有している：分析により求められた：C, 66.06；H, 9.19；N, 6.12％； H2O, 2.11％。C38H63N3O9-0.78H2Oに関して計算した：C, 66.01；H, 9.12；N, 6.08％； H2O, 2.03％。
【実施例１６】
【００３０】
例１６：5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、L-乳酸塩：
5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール（5.4g, 10mmol）と2(S)-ヒドロキシプロパン酸（L-乳酸塩、Fluka；3.88g, 10mmol）との混合物を、エタノール（40ml）中で加熱する。当該溶液を減圧下で蒸発乾固させ、生じた残留物をアセトン‐エタノールから再結晶させる。当該生成物をろ過し、酢酸エチルから再結晶させ、ろ過及び乾燥を行った後に、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、乳酸塩が、淡黄色の結晶性固体として得られる。当該乳酸塩は、以下の分析特性を有している：分析により求められた：C, 70.53；H, 10.01；N, 6.88％； H2O, 0.43％。C36H61N3O5-0.14H2Oに関して計算した：C, 70.50；H, 9.96；N, 6.85％； H2O, 0.41％。
【実施例１７】
【００３１】
例１７：5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、(D)(-)酒石酸塩：
5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール（5.4g, 10mmol）を、(2S,3S)2,3-ジヒドロキシブタン二酸（D-(-)-酒石酸；Fluka；1.5g, 10mmol）のエタノール（40ml）溶液に加える。当該溶液を減圧下で蒸発乾固させ、生じた残留物をエタノールから再結晶させる。当該生成物をろ過し、再結晶させ、ろ過及び乾燥を行った後に、5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オール、-(D)-酒石酸塩が、淡黄色の結晶性固体として得られる。当該-(D)-酒石酸塩は、以下の分析特性を有している：分析により求められた：C, 67.98；H, 9.48；N, 6.63％； H2O, 4.29％。C36H61N3O8-1.51H2Oに関して計算した：C, 67.94；H, 9.59；N, 6.61％； H2O, 4.27％。
【実施例１８】
【００３２】
例１８‐水への溶解度
例１から例１７の5α-ヒドロキシ-6β-[2-(1H-イミダゾール-4-イル)エチルアミノ]コレスタン-3β-オールの酸付加塩の室温での水に対する溶解度を、以下の方法にしたがって測定した：
各サンプルを十分な量で採取した。水（50%v/v）を各サンプルに加え、混合物を室温で５時間にわたり振とうした。上澄みをフィルタを通してろ過し、サンプル溶液を供給するのに必要な量の0.1%TFA/アセトニトリルの混合水溶液で希釈した。サンプル溶液の濃度（mg/ml）を、検量線法による高速液体クロマトグラフィー（HPLC）で測定し、室温での水に対する溶解度とした。
HPLC分析条件：
HPLCの精製及び分析を、Perkin Elmer装置のLC200シリーズと、Bischoff ChromatographyのUltrasep C18 RP100カラムを用いたダイオードアレイUV検出器とを用いて実行した。
HPLC分析を、アセトニトリル勾配（Bの40％を8分間、その後20分でBを100％まで；Aは95:5水/アセトニトリル、0.1％TFA；Bは95:5アセトニトリル/水、0.1％TFA）を用いて、18.5分の保持時間で行った。流量は1ml/minであった。
結果を表１に示す。比較のために、遊離塩基の溶解度は0.47mg/mlである。
【００３３】
【表１】
2014530245.tif 000003
【国際調査報告】
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