(57)【要約】  本発明は、デアニン誘導体を有効成分として含有する皮膚外用剤組成物に関し、より具体的には、デアニン誘導体を有効成分として含有し、抗老化、皮膚しわ改善、皮膚障壁強化、皮膚免疫強化、皮膚保湿及びアトピー改善効果を有する皮膚外用剤組成物に関する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式１または化学式２の構造を有するデアニン誘導体（ｔｈｅａｎｉｎｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ）を有効成分として含有する皮膚外用剤組成物。
【化１】
2014533723.tif 000010
【化２】
2014533723.tif 000011
【請求項２】
上記デアニン誘導体は、組成物全体重量に対して０．０００１〜２０重量％で含有されることを特徴とする請求項１に記載の皮膚外用剤組成物。
【請求項３】
上記組成物は、ケラチン１（Ｋｅｒａｔｉｎ  １）遺伝子発現を促進させることを特徴とする請求項１又は２に記載の皮膚外用剤組成物。
【請求項４】
上記組成物は、トランスグルタミナーゼ１（Ｔｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ  １）遺伝子発現を促進させることを特徴とする請求項１又は２に記載の皮膚外用剤組成物。
【請求項５】
上記組成物は、フィラグリン（ｆｉｌａｇｇｒｉｎ）遺伝子発現を促進させることを特徴とする請求項１又は２に記載の皮膚外用剤組成物。
【請求項６】
上記組成物は、細胞内のカルシウム移動を調節させることを特徴とする請求項１又は２に記載の皮膚外用剤組成物。
【請求項７】
上記組成物は、抗老化用であることを特徴とする請求項１又は２に記載の皮膚外用剤組成物。
【請求項８】
上記組成物は、皮膚しわ改善用であることを特徴とする請求項１又は２に記載の皮膚外用剤組成物。
【請求項９】
上記組成物は、表皮恒常性維持改善用であることを特徴とする請求項１又は２に記載の皮膚外用剤組成物。
【請求項１０】
上記組成物は、皮膚障壁強化用であることを特徴とする請求項１又は２に記載の皮膚外用剤組成物。
【請求項１１】
上記組成物は、皮膚免疫強化用であることを特徴とする請求項１又は２に記載の皮膚外用剤組成物。
【請求項１２】
上記組成物は、皮膚保湿用であることを特徴とする請求項１又は２に記載の皮膚外用剤組成物。
【請求項１３】
上記組成物は、アトピー改善用であることを特徴とする請求項１又は２に記載の皮膚外用剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、デアニン誘導体を有効成分として含有する皮膚外用剤組成物に関し、より具体的には、デアニン誘導体を有効成分として含有し、抗老化、皮膚しわ改善、皮膚障壁強化、皮膚免疫強化、皮膚保湿及びアトピー改善効果を有する皮膚外用剤組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
デアニン（ｔｈｅａｎｉｎｅ）は、緑茶（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｓｉｓ）に含有されたアミノ酸であって、グルタミン（Ｌ−ｇｌｕｔａｍｉｎｅ）とエチルアミン（ｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ）の酵素反応によって生成され、一般的に緑茶葉乾燥重量の約１〜２％を占め、主に遊離アミノ酸形態で存在する特徴を有する。デアニンは、カフェインによる興奮作用を抑制し（Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｌｅｔｔ．２００１  １２３（２−３）、１５９−１６７、Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２０００  Ｆｅｂ；６４（２）：２８７−９３）、脳でアルファ波（ａｌｐｈａ−ｗａｖｅｓ）を増加して緊張を緩和させ（Ｎｉｐｐｏｎ  Ｎｏｇｅｉｋａｇａｋｕ  Ｋａｉｓｈｉ  １９９８；７２：１５３−１５７）、ストレスによる心臓搏動数の増加抑制及びストレス反応因子減少のような抗ストレス作用（Ｂｉｏｌ  Ｐｓｙｃｈｏｌ．２００７  ７４（１）：３９−４５）があると報告されている。また、癌細胞内部のグルタチオン数値を減少させて抗癌作用をし（Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．２００４  ２１２（２）、１７７−１８４）、血圧降下（Ｂｉｏｓｃｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １９９５  ５９（４）６１５−６１８）、低密度脂質蛋白コレステロール（ＬＤＬ−ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ）の酸化を抑制させる（Ｅｘｐ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐａｔｈｏｌ  １９９７；４９：３２９−３３５）抗酸化効能を一部有していて、最近には、抗肥満（Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  ２００４、１８（１）５５−６２）及びアルコール分解酵素増加（Ｂｉｏｌ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ  ２００５  ２８（９）１７０２、１７０６）のような生理活性についても研究されている。
【０００３】
デアニンが多様な生理活性を有するという可能性検証及び具体的な研究が行われているが、皮膚領域に対しては、デアニンと緑茶成分カテキンの単独あるいは混合処理時の脂肪分解効果（韓国特許公開２００４−００９２５３８号公報）と皮膚老化改善（韓国特許公開２００７−００２８９０１号公報）、プロリンリサイクリング促進効果（韓国特許公開２００９−００６４７４３号公報）を除いて、現在までデアニンの皮膚効能について知られた研究事例及び作用機作に対しては報告されたことがなく、米国特許出願ＵＳ２００６／０１３４０９５  Ａ１は、デアニンの保湿効果を記載しており、デアニン誘導体を細胞活性剤として記載しているが、デアニン自体ではないデアニン誘導体の優れた皮膚効能についても現在まで知られていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
これより、本発明者らは、デアニン誘導体の生理活性に起因してデアニン母核の効果を模倣することを超えて、さらに優秀で且つ差別される生理効能として、抗老化、皮膚しわ改善、皮膚障壁強化、皮膚免疫強化、皮膚保湿及びアトピー改善効果を有することを知見し、本発明を完成した。
【０００５】
したがって、本発明の目的は、デアニン誘導体を有効成分として含有し、抗老化、皮膚しわ改善、皮膚障壁強化、皮膚免疫強化、皮膚保湿及びアトピー改善効果に優れた皮膚外用剤組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、デアニン誘導体を有効成分として含有する抗老化、皮膚しわ改善、皮膚障壁強化、皮膚免疫強化、皮膚保湿及びアトピー改善用皮膚外用剤組成物に関する。
【発明の効果】
【０００７】
本発明のデアニン誘導体を含有する皮膚外用剤組成物は、デアニン誘導体の生理活性に起因してデアニン母核の効果を模倣することを超えて、さらに優秀で且つ差別される生理効能として、抗老化、皮膚しわ改善、皮膚障壁強化、皮膚免疫強化、皮膚保湿及びアトピー改善効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１は、デアニンと本発明のデアニン誘導体によるケラチン１（ｋｅｒａｔｉｎ  １）遺伝子発現率を示すグラフである。
【図２】図２は、デアニンと本発明のデアニン誘導体によるトランスグルタミナーゼ１（ｔｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ  １）遺伝子発現率を示すグラフである。
【図３】図３は、デアニンと本発明のデアニン誘導体によるフィラグリン遺伝子発現率を示すグラフである。
【図４】図４は、デアニンと本発明のデアニン誘導体を処理した場合の細胞内カルシウム移動様相を示す結果である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
以下、本発明をさらに具体的に説明する。
本発明で使用されるデアニン誘導体は、下記化学式１または化学式２の構造を有する。
【化１】
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【００１０】
【化２】
2014533723.tif 000004
【００１１】
本発明のデアニン誘導体は、組成物全体重量に対して０．０００１〜２０重量％で含有することが好ましい。０．０００１重量％未満の場合、所望の効果を期待することができず、２０重量％を超過する場合、化粧品剤形の粘度調節が容易ではないからである。
【００１２】
表皮層は、増殖と分化の過程を通じて完全な角質層を作って、適切な時期に脱落される恒常性を有する。この過程に基底層で分裂された角質形成細胞は、多様なタンパク質と脂質を合成しながら角質細胞に変化し、角質層を形成するようになる。表皮の基底細胞で分化するほど核と細胞内器官が消失しながら平たくなり、ケラチン中間微細線維が増加される。このような分化において細胞内カルシウム濃度が重要であり、カルシウム濃度が低濃度である表皮下部では、角質形成細胞の増殖が促進され、カルシウム高濃度である上部表皮では、増殖が抑制され、分化が起きる。ケラチン中間微細線維を構成するケラチンタンパク質は、基底層ではｋｅｒａｔｉｎ  ５、ｋｅｒａｔｉｎ  １４が発現され、顆粒層ではｋｅｒａｔｉｎ  １、ｋｅｒａｔｉｎ  １０が発現される。したがって、ｋｅｒａｔｉｎ  １は、表皮分化に対する指標として活用される。
【００１３】
皮膚の老化は、光老化と自然老化とに分けられ、この際、いずれも若い皮膚の表皮とは異なる態様を示すようになる。光老化では、表皮の厚さが非正常的に肥厚し、自然老化では、表皮の厚さが減少し、形成された角質細胞がよく脱離しない状態になる。これは、いずれも表皮の正常なターンオーバー（ｔｕｒｎ−ｏｖｅｒ）過程が行われないからであり、分化調節が適切ではないからである。また、このような表皮の変化は、無毛マウスに慢性的な低線量の紫外線を照射し、しわが形成される機作を研究した論文（ＪＤＳ、２００１、Ｋａｍｂａｙｔａｓｈｉ）によれば、光老化のしわ生成にも関与することが分かる。この研究によれば、紫外線を照射された皮膚は、しわが生成され、この際、ケラチン  １（ｋｅｒａｉｎ１）とフィラグリン（ｆｉｌａｇｇｒｉｎ）の量が顕著に減少することが分かる。
【００１４】
本発明のデアニン誘導体は、ケラチン１の発現を増加させる効果を有し、このような効果は、表皮の増殖と分化の恒常性を改善する結果をもたらすことができ、このような恒常性改善を通じて自然老化皮膚を改善するだけでなく、紫外線によるしわ生成を防止するか、または緩和させることができる。
【００１５】
皮膚が行う最も重要な機能のうち１つは、皮膚内外の各種物質の自由な移動を防止する障壁としての機能である。皮膚障壁は、顆粒層から角質層に急激に移行しつつケラチン中間微細線維がからみ合って線維束を形成し、角質遊離顆粒にあったタンパク質成分及び他の細胞質内タンパク質と交差結合しながら細胞膜の内側を取り囲む角質蛋白膜を形成しながら細胞膜が代替される。角質蛋白膜と角質脂質膜を結合し、角質細胞の境界を成す角質肥厚膜（ｃｏｒｎｉｆｉｅｄ  ｅｎｖｅｌｏｐｅ）を形成するようになり、完全な皮膚障壁構造を完成する。フィラグリン（ｆｉｌａｇｇｒｉｎ）は、角質層と顆粒層でケラチン微細線維間の結合を促進させて障壁を強化する機能を行い、トランスグルタミナーゼ１（Ｔｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ１）は、角質肥厚膜の形成に必要な多様なタンパク質をクロスリンク（ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｉｎｇ）させ、長鎖（ｌｏｎｇ    ｃｈａｉｎ）のヒドロキシセラミド（ｈｙｄｒｏｘｙｃｅｒａｍｉｄｅ）をタンパク質と連携して角質脂質膜の形成に寄与する。
【００１６】
本発明のデアニン誘導体は、フィラグリン（Ｆｉｌａｇｇｒｉｎ）、トランスグルタミナーゼ１（Ｔｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ  １）の発現を増加させる効果に優れている。したがって、本発明のデアニン誘導体は、角質肥厚膜の形成を補助し、皮膚の主機能である障壁機能を強化する効果があり、これにより、皮膚の物理的崩御膜を堅固にして、皮膚の先天免疫（ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ）を強化することができる。
【００１７】
天然保湿因子（Ｎａｔｕｒａｌ  ｍｏｉｓｔｕｒｉｚｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ、ＮＭＦ）は、皮膚保湿に重要な要素のうち１つであって、アミノ酸とその誘導体よりなり、水分を含有し、皮膚保湿を維持させる。また、皮膚障壁の強化効能は、皮膚保湿効能に寄与する因子である。フィラグリン（Ｆｉｌａｇｇｒｉｎ）は、角質層と顆粒層でケラチン微細線維間の結合を促進させて障壁を強化する機能を行うだけでなく、アミノ酸に分解し、天然保湿因子を形成する。また、フィラグリン（Ｆｉｌａｇｇｒｉｎ）遺伝子異常がアトピー皮膚炎の前哨症状と連関があるという周期的な研究報告がある。したがって、フィラグリンは、表皮障壁機能強化だけでなく、天然保湿因子として作用すると共に、アトピー皮膚炎においても関連が深い。
【００１８】
本発明のデアニン誘導体は、前述したように、フィラグリンの発現を増加させ、このような効果によって表皮障壁機能強化とともに天然保湿因子増加による皮膚保湿効能を示すことができ、フィラグリンの減少によるアトピー皮膚炎の症状を緩和させる効果を有する。
【００１９】
上記化粧料組成物は、剤形が特に限定されず、目的によって適宜選択することができる。例えば、スキンローション、スキンソフナー、スキントナー、アストリンゼント、ローション、ミルクローション、モイスチャーローション、栄養ローション、マッサージクリーム、栄養クリーム、モイスチャークリーム、ハンドクリーム、ファンデーション、エッセンス、栄養エッセンス、パック、せっけん、クレンジングフォーム、クレンジングローション、クレンジングクリーム、ボディーローション及びボディークレンザーよりなる群から選択されたいずれか１つ以上の剤形で製造されることができるが、これに制限されるものではない。
【００２０】
本発明の剤形がペースト、クリームまたはゲルの場合には、担体成分として動物線維、植物線維、ワックス、パラフィン、澱粉、トラカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、シリカ、タルクまたは酸化亜鉛などが利用されることができる。
【００２１】
本発明の剤形がパウダーまたはスプレーの場合には、担体成分としてラクトース、タルク、シリカ、アルミニウムヒドロキシド、カルシウムシリケートまたはポリアミドパウダーが利用されることができ、特に、スプレーの場合には、追加的にクロロフルオロヒドロカーボン、プロパン／ブタンまたはジメチルエーテルのような推進体を含むことができる。
【００２２】
本発明の剤形が溶液または乳濁液の場合には、担体成分として溶媒、溶媒化剤または乳濁化剤が利用され、例えば、水、エタノール、イソプロパノール、エチルカーボネート、エチルアセテート、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエート、プロピレングリコール、１,３−ブチルグリコールオイル、グリセロール脂肪族エステル、ポリエチレングリコールまたはソルビタンの脂肪酸エステルがある。
【００２３】
本発明の剤形が懸濁液の場合には、担体成分として水、エタノールまたはプロピレングリコールのような液状希釈剤、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールエステル及びポリオキシエチレンソルビタンエステルのような懸濁剤、微小結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、アガーまたはトラカントなどが利用されることができる。
【００２４】
本発明の剤形が界面−活性剤含有クレンジングの場合には、担体成分として脂肪族アルコールサルフェート、脂肪族アルコールエーテルサルフェート、スルホコハク酸モノエステル、イセチオネート、イミダゾリニウム誘導体、メチルタウレート、サルコシネート、脂肪酸アミドエーテルサルフェート、アルキルアミドベタイン、脂肪族アルコール、脂肪酸グリセリド、脂肪酸ジエタノールアミド、植物性油、リノリン誘導体またはエトキシル化グリセロール脂肪酸エステルなどが利用されることができる。
【００２５】
上記化粧料組成物には、上記添加されたデアニン誘導体以外に、機能性添加物及び一般的な化粧料組成物に含まれる成分がさらに含まれることができる。例えば、上記機能性添加物としては、水溶性ビタミン、油溶性ビタミン、高分子ペプチド、高分子多糖、スフィンゴ脂質及び海草エキスよりなる群から選択された成分を含むことができる。
【００２６】
本発明の化粧料組成物には、また、上記機能性添加物とともに、必要に応じて一般的な化粧料組成物に含まれる成分を配合してもよい。その他含まれる配合成分としては、油脂成分、保湿剤、エモリエント剤、界面活性剤、有機及び無機顔料、有機粉体、紫外線吸収剤、防腐剤、殺菌剤、酸化防止剤、植物抽出物、ｐＨ調整剤、アルコール、色素、香料、血行促進剤、冷感剤、制汗剤、精製水などを挙げることができる。
【実施例】
【００２７】
以下、実施例及び実験例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の権利範囲がこれらに限定するものではない。
【００２８】
［試験例１］ヒト胎児上皮角質形成細胞（ＨＥＫ）でのＫｅｒａｔｉｎ１遺伝子発現確認
ヒト胎児上皮角質形成細胞（ＨＥＫ；Ｌｏｎｚａ社、ＮＨＥＫ−Ｎｅｏ−ＮｅｏｎａｔａｌＮｏｒｍａｌ  Ｈｕｍａｎ  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ、Ｐｏｏｌｅｄ）を６−ｗｅｌｌに培地（ＫＢＭ−ｇｏｌｄ、Ｌｏｎｚａ社）に１×１０5ずつ分注し、３７℃で２４時間培養し、培地を捨てて、デアニン誘導体をそれぞれ１００μＭ、５００μＭ含む培地（ＫＢＭ−ｇｏｌｄ、Ｌｏｎｚａ社）で処理し、５日間３７℃で培養した。
【００２９】
５日間培養した角質形成細胞でＲＮｅａｓｙ  ｍｉｎｉ  ｋｉｔ（ｑｉａｇｅｎ社）を利用してＲＮＡを抽出し、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  III  ｋｉｔ（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）でＲＴ−ＰＣＲを行い、ｃＤＮＡを合成した。Ｋｅｒａｔｉｎ１の発現量を確認するために、プローブ（ＴａｑＭａｎＴＭ  ｆｌｕｏｒｏｇｅｎｉｃ  ｐｒｏｂｅ、Ｈｓ００１９６１５８_ｍ１）を利用してｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＰＣＲを行い、Ｋｅｒａｔｉｎ１の発現様相を観察し、結果を図１に示す。対照群としては、非処理群、デアニン誘導体の代わりに、それぞれ１００μＭ、５００μＭデアニン（Ｓｉｇｍａ、Ｔ６５７６）を処理したものを使用した。
【００３０】
図１の結果から、非処理群に比べてデアニン誘導体は、Ｋｅｒａｔｉｎ  １の発現を増加させることを確認することができ、デアニン誘導体は、デアニン母核自体を処理した場合に比べて同一濃度処理時に非常に優れた効果を示すことが分かる。
【００３１】
［試験例２］ヒト胎児上皮角質形成細胞（ＨＥＫ）でのトランスグルタミナーゼ１遺伝子発現確認
ヒト胎児上皮角質形成細胞（ＨＥＫ；Ｌｏｎｚａ社、ＮＨＥＫ−Ｎｅｏ−ＮｅｏｎａｔａｌＮｏｒｍａｌ  Ｈｕｍａｎ  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ、Ｐｏｏｌｅｄ）を６−ｗｅｌｌに培地（ＫＢＭ−ｇｏｌｄ、Ｌｏｎｚａ社）に１×１０5ずつ分注し、３７℃で２４時間培養し、培地を捨てて、デアニン誘導体をそれぞれ１００μＭ、５００μＭ含む培地（ＫＢＭ−ｇｏｌｄ、Ｌｏｎｚａ社）で処理し、５日間３７℃で培養した。
【００３２】
５日間培養した角質形成細胞からＲＮｅａｓｙ  ｍｉｎｉ  ｋｉｔ（ｑｉａｇｅｎ社）を利用してＲＮＡを抽出し、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  III  ｋｉｔ（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）でＲＴ−ＰＣＲを行い、ｃＤＮＡを合成した。トランスグルタミナーゼ１（ｔｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ  １）の発現量を確認するためにプローブ（ＴａｑＭａｎ  ＴＭ  ｆｌｕｏｒｏｇｅｎｉｃ  ｐｒｏｂｅ、Ｈｓ００１６５９２９_ｍ１）を利用してｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＰＣＲを行い、トランスグルタミナーゼの発現様相を観察し、結果を図２に示す。対照群としては、非処理群とデアニン誘導体の代わりに、それぞれ１００μＭ、５００μＭデアニン（Ｓｉｇｍａ、Ｔ６５７６）を処理したものを使用した。
【００３３】
図２の結果から、非処理群に比べてデアニン誘導体は、トランスグルタミナーゼ１の発現を増加させることを確認することができ、デアニン誘導体は、デアニン母核自体を処理した場合に比べて、同一濃度処理時に非常に優れた効果を示すことが分かる。
【００３４】
［試験例３］ヒト胎児上皮角質形成細胞（ＨＥＫ）でのフィラグリン（ｆｉｌａｇｇｒｉｎ）遺伝子発現確認
ヒト胎児上皮角質形成細胞（ＨＥＫ；Ｌｏｎｚａ社、ＮＨＥＫ−Ｎｅｏ−ＮｅｏｎａｔａｌＮｏｒｍａｌ  Ｈｕｍａｎ  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ、Ｐｏｏｌｅｄ）を６−ｗｅｌｌに培地（ＫＢＭ−ｇｏｌｄ、Ｌｏｎｚａ社）に１×１０5ずつ分注し、３７℃で２４時間培養し、培地を捨てて、デアニン誘導体をそれぞれ１００μＭ、５００μＭ含む培地（ＫＢＭ−ｇｏｌｄ、Ｌｏｎｚａ社）で処理し、５日間３７℃で培養した。
【００３５】
５日間培養した角質形成細胞からＲＮｅａｓｙ  ｍｉｎｉ  ｋｉｔ（ｑｉａｇｅｎ社）を利用してＲＮＡを抽出し、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  III  ｋｉｔ（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）でＲＴ−ＰＣＲを行い、ｃＤＮＡを合成した。フィラグリン（ｆｉｌａｇｇｒｉｎ）の発現量を確認するために、プローブ（ＴａｑＭａｎＴＭ  ｆｌｕｏｒｏｇｅｎｉｃ  ｐｒｏｂｅ、Ｈｓ００８５６９２７_ｇ１）を利用してｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＰＣＲを行い、フィラグリンの発現様相を観察し、結果を図３に示す。対照群としては、非処理群とデアニン誘導体の代わりに、それぞれ１００μＭ、５００μＭデアニン（Ｓｉｇｍａ、Ｔ６５７６）を処理したものを使用した。
【００３６】
図３の結果から、非処理群に比べてデアニン誘導体は、フィラグリンの発現を増加させることを確認することができ、デアニン誘導体は、デアニン母核自体を処理した場合に比べて同一濃度処理時に非常に優れた効果を示すことが分かる。
【００３７】
［試験例４］ヒト胎児上皮角質形成細胞（ＨＥＫ）でカルシウムｉｎｆｌｕｘ評価
安定化したヒト胎児上皮角質形成細胞（ＨＥＫ；Ｌｏｎｚａ社、ＮＨＥＫ−Ｎｅｏ−Ｎｅｏｎａｔａｌ  Ｎｏｒｍａｌ  Ｈｕｍａｎ  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ、Ｐｏｏｌｅｄ）をコンフォーカルディッシュ（ｃｏｎｆｏｃａｌ  ｄｉｓｈｅｓ）に２×１０4ずつ載置し、デアニン２．５ｍＭとデアニン誘導体０．５ｍＭとを５分間処理した後、１μｍ  ｆｌｕｏ  ３−ＡＭを１５分間処理し、細胞内で分解し、カルシウムと結合したｆｌｕｏ  ３をｃｏｎｆｏｃａｌ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ（Ｎｉｋｏｎ、Ｊａｐａｎ）で観察し、蛍光の差異を測定し、細胞内のカルシウム移動を評価し、結果を図４に示す。
【００３８】
図４の結果から、デアニンとデアニン誘導体は、細胞内のカルシウム移動において明確に異なる結果を示すことが分かる。このような差異によって本発明のデアニン誘導体は、単純にデアニン母核の効果を模倣するものではなく、デアニン母核の効能と異なる新しい生理活性効能を有することが分かる。
【００３９】
［実施例１及び比較例１］
下記表１の組成によって実施例１及び比較例１を製造した。
【００４０】
【表１】
2014533723.tif 000005
【００４１】
［試験例５］皮膚障壁機能回復効果測定
デアニン誘導体が皮膚損傷によって損傷された皮膚障壁機能の回復に及ぶ効果を測定するために、下記のような実験を行った。成人男女１０名の上膊をテープストリッピング（ＴａｐｅＳｔｒｉｐｐｉｎｇ）方法を利用して皮膚障壁に損傷を与え、上記比較例１及び実施例１を毎日２ｍｇ／ｃｍ2ずつ３ｃｍＸ３ｃｍ面積に１回塗布しながら７日間一日に１回ずつ経皮水分喪失量（ＴＷＥＬ）の回復程度をＶａｐｏｍｅｔｅｒ（Ｄｅｌｆｉｎ、フィンランド）で測定比較した。テープストリッピング前の経皮水分量を１００％として経皮水分喪失量を計算した結果を下記表２に示す。
【００４２】
【表２】
2014533723.tif 000006
【００４３】
上記表２の結果から、デアニン誘導体を含有する実施例１を処理する場合、速い速度で経皮水分喪失量が正常に戻って、障壁損傷が回復することを確認することができる。
【００４４】
［実施例２及び比較例２］
下記表３の組成比によって実施例２及び比較例２の栄養クリームの剤形を製造した。
【００４５】
【表３】
2014533723.tif 000007
【００４６】
［試験例６］皮膚保湿力増加効果測定
デアニン誘導体が皮膚保湿力増加に及ぶ効果を測定するために、下記実験を行った。
乾燥皮膚に分類された４０〜５０代の成人男女６０名を３０名ずつ２つの群に分けて、それぞれ実施例２及び比較例２による２つの群の栄養クリームを毎日２回ずつ４週間顔面に塗布するようにした。塗布開始前と、塗布後１週、２週、４週経過した時点、そして塗布中止後２週経過（総６週経過）時点とにおいて、恒温、恒湿条件（２４℃、相対湿度４０％）で皮膚水分量測定器（Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ  ＣＭ８２５、Ｃ＋ＫＥｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  Ｃｏ．，ドイツ）で皮膚水分量を測定した。塗布開始前の皮膚水分量を基準として各時点の皮膚水分量の増加率を百分率で計算し、結果を下記表４に示す。
【００４７】
【表４】
2014533723.tif 000008
【００４８】
上記表４の結果から、比較例２を塗布した場合には、塗布後４週までは約３０％程度の水分増加率を示すが、塗布を中止した後には、皮膚水分量が減少する一方、デアニン誘導体を含有する実施例２を塗布した場合には、塗布を中止した後にも３０％以上の皮膚水分増加率を示すことを確認することができる。これにより、デアニン誘導体を含有する本発明による組成物の皮膚保湿効果が非常に優れていることが分かる。
【００４９】
［試験例７］皮膚しわ改善効能確認
本発明による組成物の皮膚しわ改善効果を確認するために下記の実験を行った。
４０代の元気な女性８０名を４０名ずつ２つの群に分けて、それぞれ実施例２及び比較例２の２つの群による栄養クリームを毎日１回ずつ１２週間顔面に塗布するようにした後、シリコンを利用してレプリカを取って、しわの状態を皮膚測定器（ｖｉｓｉｏｍｅｔｅｒ、ＳＶ６００、Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ  ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で測定し、画像分析した。その結果を、下記表５に示す。下記表５の値は、塗布１２週後のそれぞれの変数（ｐａｒａｍｅｔｅｒ）値から塗布前の変数値を抜いたものの平均を示すものである。
【００５０】
【表５】
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【００５１】
上記表５の結果から、実施例２の外用剤組成物は、皮膚しわ改善効果が非常に優れていることが分かった。したがって、本発明のデアニン誘導体を含有する化粧料組成物は、皮膚しわ改善に非常に効果的であることを確認することができる。
【産業上の利用可能性】
【００５２】
本発明のデアニン誘導体を有効成分として含有し、デアニン誘導体の生理活性によってデアニン母核の効果を模倣することを超えて、さらに優秀で且つ差別される生理効能として、抗老化、皮膚しわ改善、皮膚障壁強化、皮膚免疫強化、皮膚保湿及びアトピー改善効果を有する皮膚外用剤組成物を提供することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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