(57)【要約】治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストの投与によって心筋梗塞（ＭＩ）後患者の心臓の状態を改善し、心不全または不整脈に起因する心血管系の死亡数および入院数を減少させる方法を提供する。本発明の別の実施形態は、心筋梗塞（ＭＩ）に罹患した患者の左室駆出分画（ＬＶＥＦ）を増加させる方法であって、患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む、方法を提供する。本発明の別の実施形態は、心筋梗塞（ＭＩ）に罹患した患者の左室拡大を抑制する方法であって、患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む、方法を提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
心筋梗塞（ＭＩ）に罹患した患者の心不全および／または不整脈を処置する方法であって、該患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む、方法。
【請求項２】
前記心不全および／または不整脈の処置によって死亡数または入院数が減少する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
心筋梗塞（ＭＩ）に罹患した患者の心不全の進行を低減する方法であって、該患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む、方法。
【請求項４】
心筋梗塞（ＭＩ）に罹患した患者の不整脈を軽減する方法であって、該患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む、方法。
【請求項５】
心筋梗塞（ＭＩ）に罹患した患者の突然心臓死の発生数を減少させる方法であって、該患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む、方法。
【請求項６】
心筋梗塞（ＭＩ）に罹患した患者の左室駆出分画（ＬＶＥＦ）を増加させる方法であって、該患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む、方法。
【請求項７】
心筋梗塞（ＭＩ）に罹患した患者の左室拡大を抑制する方法であって、該患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む、方法。
【請求項８】
心筋梗塞（ＭＩ）に罹患した患者の左室収縮末期容積を減少させる方法であって、該患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む、方法。
【請求項９】
心筋梗塞（ＭＩ）に罹患した患者の左室拡張末期容積を減少させる方法であって、該患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む、方法。
【請求項１０】
心筋梗塞（ＭＩ）に罹患した患者の左室機能障害を回復させる方法であって、該患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む、方法。
【請求項１１】
心筋梗塞（ＭＩ）に罹患した患者の心筋収縮性を改善する方法であって、該患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む、方法。
【請求項１２】
心筋梗塞（ＭＩ）に罹患した患者における心臓細胞からのＩＬ−６、ＴＮＦａ、ＢＮＰ、またはＳＴ２（腫瘍形成抑制因子２）の放出を減少させる方法であって、該患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む、方法。
【請求項１３】
前記Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストが８−環式キサンチン誘導体である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストが、式Ｉまたは式ＩＩ
【化１１】
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（式中、
Ｒ１およびＲ２は、水素、任意選択的に置換されたアルキル、または−Ｄ−Ｅ基から独立して選択され、Ｄは共有結合またはアルキレンであり、Ｅは、任意選択的に置換されたアルコキシ、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたヘテロアリール、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたアルケニル、または任意選択的に置換されたアルキニルであり、
Ｒ３は水素、任意選択的に置換されたアルキル、または任意選択的に置換されたシクロアルキルであり、
Ｘは任意選択的に置換されたアリーレンまたは任意選択的に置換されたヘテロアリーレンであり、
Ｙは、共有結合またはアルキレンであり、このアルキレン中の１つの炭素原子は、−Ｏ−、−Ｓ−、または−ＮＨ−に任意選択的に置き換えられ得、そして、ヒドロキシ、アルコキシ、任意選択的に置換されたアミノ、または−ＣＯＲ（式中、Ｒはヒドロキシ、アルコキシ、またはアミノである）で任意選択的に置換され、
Ｚは任意選択的に置換された単環式アリールまたは任意選択的に置換された単環式ヘテロアリールであるか、
Ｘが任意選択的に置換されたヘテロアリーレンであり、Ｙが共有結合である場合にＺは水素である）
の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩、互変異性体、異性体、異性体の混合物、もしくはプロドラッグである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは、化学式
【化１２】
2014510150.tif 000018
を有し、名称３−エチル−１−プロピル−８−（１−（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−プリン−２，６（３Ｈ，７Ｈ）−ジオンまたは３−エチル−１−プロピル−８−（１−（（３−（トリフルオロメチル）フェニル）メチル）ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオンを有する化合物またはその薬学的に許容され得る塩、互変異性体、異性体、もしくは異性体の混合物である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストがＮ−［５−（１−シクロプロピル−２，６−ジオキソ−３−プロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−ピリジン−２−イル］−Ｎ−エチル−ニコチンアミドである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストが（２−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アセトアミドである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＭＩが急性ＭＩである、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＭＩがＳＴ上昇型ＭＩ（ＳＴＥＭＩ）または非ＳＴ上昇型ＭＩ（ＮＳＴＥＭＩ）である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記患者が血行動態学的に安定している、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストの投与をＭＩ中またはＭＩの直後に開始する、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストの投与をＭＩの後、少なくとも約２４時間後に開始する、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストの投与をＭＩの後、少なくとも約３日後に開始する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストの投与をＭＩの後、少なくとも約５日後に開始する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストの投与をＭＩの後、少なくとも約７日後に開始する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
前記患者にアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）インヒビターを投与する工程をさらに含む、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＡＣＥインヒビターが、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、およびラミプリルからなる群から選択される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項２８】
前記患者がヒトである、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】
前記投与が、全身投与、経口投与、静脈内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、または吸入による投与である、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願に対する相互参照）
本出願は、２０１１年４月７日に出願された米国仮特許出願第６１／４７３，１１０号、２０１１年６月７日に出願された米国仮特許出願第６１／４９４，２２２号、２０１１年１２月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／５７８，７２８号および２０１２年３月３０日に出願された米国仮特許出願第６１／６１８，５８１号の利益を米国特許法§１１９（ｅ）の下、主張する。これらの出願の各々の内容は、その全体が参考として本開示中に援用される。
【０００２】
（開示の分野）
本開示は、心筋梗塞（ＭＩ）後の患者の心機能の改善方法および心不全または不整脈に起因する心血管系の死亡数および入院数を減少させる方法に関する。本方法は、治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む。
【背景技術】
【０００３】
（背景）
急性心筋梗塞（ＡＭＩ）は、心筋層の虚血性壊死およびその後の強い炎症反応によって特徴づけられる。生存心筋層の最初の喪失度および炎症反応の強度は共に、心臓の拡大および機能障害によって特徴づけられる確実な心臓リモデリングの個別の予兆である。
【０００４】
心筋損傷によって心臓線維症が誘発され、それにより、不整脈および心不全がもたらされ得る。毎年約２００，０００人が急性ＳＴＥＭＩ（ＳＴ部分上昇型心筋梗塞）に罹患し、１年以内の死亡率は約２０％である。２０１１年の心筋梗塞後患者は約７６０万人であった。これにより、前記患者の１０〜７０％が５年以内に心不全に進行すると見積もられた。
【０００５】
しかし、心筋梗塞（ＭＩ）後の心臓線維症の全てが有害というわけではない。例えば、ＡＭＩの直後に、梗塞域内の組織は瘢痕形成を伴う壊死領域の代償的な線維性の修復を受ける。適切な線維性修復および瘢痕が無い場合、心臓は破裂するかもしれず、致命的であり得る。
【０００６】
対照的に、不適応な段階における病理学的ＬＶリモデリングによって心不全および不整脈に至り得る。したがって、正確なタイミングや位置を考慮しない心臓線維症の盲目的な抑制は、心機能の回復に有効でなく、ＭＩ後患者の死亡数を減少させられないであろう。むしろ、かかる処置によって重篤な有害事象を引き起こし得る。
【０００７】
間質性線維症は心筋細胞の正常な連結を妨害して不整脈基質を形成し、それにより、突然心臓死を引き起こし得る。
【０００８】
心臓線維症は、種々の心疾患を引き起こす心不全過程に関連しており、容積および圧力の過負荷の両方に関連する心臓線維症が含まれる（非特許文献１、非特許文献２、非特許文献３、および非特許文献４）。心不全の場合、線維症は、線維芽細胞数および基質沈着の両方の増加を含み（非特許文献５）、この状態の発症における線維芽細胞の重要性が示唆される。
【０００９】
アデノシン（Ａｄｏ）は、組織傷害に応答して放出され、４つの細胞表面膜受容体型のうちの１つとの相互作用によって充血を促進し、炎症を調整する偏在性の小分子である。いくつかの炎症モデルではＡ２ＢＡｄｏＲの遮断によって炎症反応の強度が制限されて治癒が改善されているのに対して、他のモデルではＡ２ＢＡｄｏＲシグナル伝達によって炎症の抑制が認められている。したがって、Ａ２ＢＡｄｏＲの役割を一般化できない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｗｅｂｅｒら，Ｃｉｒｃ．，８３：１８４９−１８６５（１９９１）
【非特許文献２】Ｓｃｈａｐｅｒら，Ｂａｓｉｃ  Ｒｅｓ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，８７：Ｓ１３０３−Ｓ１３０９（１９９２）
【非特許文献３】Ｂｏｌｕｙｔら，Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．，７５：２３−３２（１９９４）
【非特許文献４】Ｂｉｓｈｏｐら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ．，２２：１１５７−１１６５（１９９０）
【非特許文献５】Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．，３０：５３７−５４３（１９９５）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
概要
本開示は、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストが病理学的左室（ＬＶ）リモデリングを抑制してＬＶ駆出分画を増加させるという驚くべき予期せぬ発見に関する。心筋梗塞（ＭＩ）後患者では、ＬＶリモデリングの抑制によってＬＶ機能が改善されて不整脈の発生数を減少させることができ、それにより、心血管系（ＣＶ）の死亡数および入院数が減少し得る。
【００１２】
Ａ２Ｂアデノシン受容体（ＡｄｏＲ）がヒト心臓線維芽細胞（ＨＣＦ）中で発現するＡｄｏＲの主なサブタイプであり、この受容体の活性化によってＩＬ−６放出、コラーゲン産生、線維症マーカーの発現、および心血管疾患（ＣＶＤ）のバイオマーカーの放出が増加することも発見した。特に、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストがかかる活性化を完全に消失させ、それによって心疾患における線維化反応を軽減してＬＶ拡大の抑制およびＬＶ駆出分画の増加を生じ得ることを発見した。
【００１３】
上記およびその方法の１つの態様を考慮して、本開示は、心筋梗塞（ＭＩ）に罹患した患者の心不全の進行を低減し、そして／または不整脈および／または突然心臓死の発生数を減少させる方法であって、患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む、方法に関する。いくつかの実施形態では、心不全または不整脈の処置によって死亡数または入院数が減少する。
【００１４】
別の実施形態は、心筋梗塞（ＭＩ）に罹患した患者の心不全の進行を低減するか、心不全を軽減または処置する方法であって、患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む、方法を提供する。
【００１５】
別の実施形態は、心筋梗塞（ＭＩ）に罹患した患者の不整脈の発生数を減少させる方法であって、患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む、方法を提供する。
【００１６】
別の実施形態は、心筋梗塞（ＭＩ）に罹患した患者の突然心臓死の発生数を減少させる方法であって、患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む、方法を提供する。
【００１７】
別の実施形態は、心筋梗塞（ＭＩ）に罹患した患者の左室駆出分画（ＬＶＥＦ）を増加させる方法であって、患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む、方法を提供する。
【００１８】
別の実施形態は、心筋梗塞（ＭＩ）に罹患した患者の左室拡大を抑制する方法であって、患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む、方法を提供する。
【００１９】
別の実施形態は、心筋梗塞（ＭＩ）に罹患した患者の左室収縮末期容積を減少させる方法であって、患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む、方法を提供する。
【００２０】
別の実施形態は、心筋梗塞（ＭＩ）に罹患した患者の左室拡張末期容積を減少させる方法であって、患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む、方法を提供する。
【００２１】
別の実施形態は、心筋梗塞（ＭＩ）に罹患した患者の左室機能障害を回復させる方法であって、患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む、方法を提供する。
【００２２】
別の実施形態は、心筋梗塞（ＭＩ）に罹患した患者の心筋収縮性を改善する方法であって、患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む、方法を提供する。
【００２３】
別の実施形態は、心筋梗塞（ＭＩ）に罹患した患者における心臓細胞からＩＬ−６、ＴＮＦα、ＳＴ２（腫瘍形成抑制因子２）、またはＢＮＰの放出を減少させる方法であって、患者に治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与する工程を含む、方法を提供する。
【００２４】
１つの実施形態では、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは８−環式キサンチン誘導体である。別の実施形態では、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは、式Ｉまたは式ＩＩ
【００２５】
【化１】
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（式中、
Ｒ１およびＲ２は、水素、任意選択的に置換されたアルキル、または−Ｄ−Ｅ基から独立して選択され、Ｄは共有結合またはアルキレンであり、Ｅは、任意選択的に置換されたアルコキシ、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたヘテロアリール、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたアルケニル、または任意選択的に置換されたアルキニルであり、
Ｒ３は水素、任意選択的に置換されたアルキル、または任意選択的に置換されたシクロアルキルであり、
Ｘは任意選択的に置換されたアリーレンまたは任意選択的に置換されたヘテロアリーレンであり、
Ｙは、共有結合またはアルキレンであり、このアルキレン中の１つの炭素原子は、−Ｏ−、−Ｓ−、または−ＮＨ−に任意選択的に置き換えられ得、そして、ヒドロキシ、アルコキシ、任意選択的に置換されたアミノ、または−ＣＯＲ（式中、Ｒはヒドロキシ、アルコキシ、またはアミノである）で任意選択的に置換され、
Ｚは任意選択的に置換された単環式アリールまたは任意選択的に置換された単環式ヘテロアリールであるか、
Ｘが任意選択的に置換されたヘテロアリーレンであり、Ｙが共有結合である場合にＺは水素である）の化合物、
またはその薬学的に許容され得る塩、互変異性体、異性体、異性体の混合物、もしくはプロドラッグである。
【００２６】
１つの特定の態様では、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは、本明細書を通して化合物Ａと呼ばれる、以下の化学式
【００２７】
【化２】
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を有する、Ｎ−（６−アミノ−１−エチル−２，４−ジオキソ−３−プロピル−１，２，３，４−テトラヒドロ−ピリミジン−５−イル）−１−（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミドまたはその薬学的に許容され得る塩、互変異性体、異性体、もしくは異性体の混合物である。いくつかの態様では、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは、本明細書中にさらに記載されるように、化合物ＢまたはＣである。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】図１Ａ〜Ｄは、ＩＬ−６、コラーゲン、ＳＴ−２、およびＰＡＰＰＡの放出ならびにα−平滑筋アクチン（ＳＭＡα）およびα−１プロコラーゲン（Ｃｏｌ１Ａ１）の発現に及ぼすＮＥＣＡの影響が選択的Ａ２ＢＡｄｏＲアンタゴニスト（化合物Ａ（ＣｏｍｐＡ））によって完全に消失されたことを示す。
【図２】図２は、マウスにおいて急性心筋梗塞後のビヒクルと比較して化合物Ａ（ＣｏｍｐＡ）での処置によってカスパーゼ−１活性が有意に減少し（左パネル）、拡張末期径が減少し（左中パネル）、ＬＶ駆出分画が増加し（右中パネル）、心筋作用指数が減少した（右パネル）ことを示す。
【図３】図３は、実施例４における研究の時間軸である。
【図４】図４は、Ａ２ＢＡｄｏＲアンタゴニストである化合物Ａ（Ｃｏｍｐ  Ａ）の冠状動脈結紮直後の投与（４ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．で１日２回）によって術後７２時間で心臓組織におけるカスパーゼ−１活性化が防止され、心臓内の白血球（ＣＤ４５＋）動員が有意に抑制されたことを示す。＊Ｐ＜０．００１対偽手術；＃Ｐ＜０．０１対ビヒクル。Ｎ＝４〜６／群。
【図５】図５は、Ａ２ＢＡｄｏＲアンタゴニスト（化合物Ａ）での処置によってＡＭＩに関連する炎症マーカーの血漿レベルが有意に減少したことを示すチャートを含む。ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ｓＥ−セレクチン、ｓＩＣＡＭ、およびｓＶＣＡＭの血漿濃度を、術後２８日目にＬｕｍｉｎｅｘを使用して測定した。＋Ｐ＜０．０５対ビヒクル；＊Ｐ＜０．００１対ビヒクル。
【図６】図６は、急性心筋梗塞手術から２週間後にビヒクル（上のパネル）で処置したマウスおよびＡ２ＢＡｄｏＲアンタゴニスト（化合物Ａ）で処置したマウス（下のパネル）由来の例示的なＢモードおよびＭモードの心エコー画像を示す。
【図７−１】図７Ａ〜Ｆは、冠状動脈結紮術後のビヒクル処置したマウスが左心室および右心室の有意な拡大（左室拡張末期径（ＬＶＥＤＤ）（Ａ）、左室収縮末期径（ＬＶＥＳＤ）（Ｂ）、および右室拡張末期領域（ＲＶＥＤＡ）（Ｅ））ならびに左室および右室の機能の有意な減少（左室駆出分画（ＬＶＥＦ）（Ｃ）、心筋作用指数（ＭＰＩ）（Ｄ）、および三尖弁輪収縮期移動距離（ＴＡＰＳＥ））（Ｆ）を示したことを示す。Ａ２ＢＡｄｏＲアンタゴニスト（化合物Ａ）（４ｍｇ  ｉ．ｐ．で１日２回）での処置によって心臓の拡大および機能障害が有意に制限された。＊Ｐ＜０．００１対ベースライン（または偽手術）、＋Ｐ＜０．００１対ビヒクル。
【図７−２】図７Ａ〜Ｆは、冠状動脈結紮術後のビヒクル処置したマウスが左心室および右心室の有意な拡大（左室拡張末期径（ＬＶＥＤＤ）（Ａ）、左室収縮末期径（ＬＶＥＳＤ）（Ｂ）、および右室拡張末期領域（ＲＶＥＤＡ）（Ｅ））ならびに左室および右室の機能の有意な減少（左室駆出分画（ＬＶＥＦ）（Ｃ）、心筋作用指数（ＭＰＩ）（Ｄ）、および三尖弁輪収縮期移動距離（ＴＡＰＳＥ））（Ｆ）を示したことを示す。Ａ２ＢＡｄｏＲアンタゴニスト（化合物Ａ）（４ｍｇ  ｉ．ｐ．で１日２回）での処置によって心臓の拡大および機能障害が有意に制限された。＊Ｐ＜０．００１対ベースライン（または偽手術）、＋Ｐ＜０．００１対ビヒクル。
【図８】図８Ａ〜Ｄは、４つの炎症バイオマーカー（ＭＣＰ−１、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−２、およびＩＬ−６）の発現が化合物Ａでの処置によって減少し、そのうちの２つ（ＭＣＰ−１およびＩＬ−１ｂ）について、１０ｍｇ／ｋｇ／日群の減少が統計的に有意であったことを示す。
【図９】図９Ａ〜Ｄは、２８日目にＥＣＨＯ６を使用して測定したＬＶＥＤＤ（Ａ）、ＬＶＥＳＤ（Ｂ）、ＲＶＥＤＡ（Ｃ）、およびＭＰＩ（Ｄ）を示す。値を平均±ＳＥＭとして示す。ｎ＝４〜９。＊、偽コントロールと比較してｐ＜０．０５；＃、ＭＩと比較してｐ＜０．０５。統計量を、ＡＮＯＶＡおよびその後のボンフェローニ検定を使用して決定した。これらの図は、化合物Ａが有害なＭＩ後心筋リモデリングを抑制し、心筋機能を改善することを証明している。
【図１０】図１０Ａ〜Ｃは、ＳＴ２（Ａ）、ＩＬ−６（Ｂ）、およびＴＮＦ−α（Ｃ）の血漿レベルを示し、値を平均±ＳＥＭとして示す。ｎ＝４〜８。＊、偽コントロールと比較してｐ＜０．０５；＃、ＭＩと比較してｐ＜０．０５。統計量を、ＡＮＯＶＡおよびその後のボンフェローニ検定を使用して決定した。これらの図は、ＭＩ後心筋リモデリングのマウスモデルにおいて化合物Ａが血漿炎症性サイトカインバイオマーカーを減少させることを示している。
【図１１】図１１Ａ〜Ｃは、ｓＥ−セレクチン（Ａ）、ｓＩＣＡＭ（Ｂ）、およびｓＶＣＡＭ（Ｃ）の血漿レベルを示す。値を平均±ＳＥＭとして示す。ｎ＝４。＊、偽コントロールと比較してｐ＜０．０５；＃、ＭＩと比較してｐ＜０．０５。統計量を、ＡＮＯＶＡおよびその後のボンフェローニ検定を使用して決定した。これらの図は、ＭＩ後心筋リモデリングのマウスモデルにおいて化合物Ａが可溶性接着分子の血漿レベルを減少させることを示している。
【図１２】図１２Ａ〜Ｂは、化合物Ａが左室収縮末期容積（Ａ）を減少させ、左室駆出分画（Ｂ）を増加させることを示すためのチャートを含む。（Ａ）ＭＩ群およびＭＩ＋化合物Ａ群における左室収縮末期容積（ＬＶＥＳＶ）を、ベースライン、ＭＩ後１週間および５週間でＥＣＨＯを使用して測定した。値を平均±ＳＥＭとして示す。ｎ＝１３。＊、ＡＮＯＶＡおよびその後のボンフェローニ検定を使用してビヒクルコントロールと比較してｐ＜０．０５。（Ｂ）ビヒクルコントロール群（ＭＩ）および化合物Ａ群（ＭＩ＋化合物Ａ）におけるＬＶＥＦを、ベースライン、ＭＩ後１週間および５週間でＥＣＨＯを使用して測定した。ＬＶＥＦを、次式を使用して計算した：（ＬＶＥＤＶ−ＬＶＥＳＶ）／ＬＶＥＤＶ＊１００。値を平均±ＳＥＭとして示す。ｎ＝１３。＊、ＡＮＯＶＡおよびその後のボンフェローニ検定を使用してビヒクルコントロールと比較してｐ＜０．０５。
【図１３】図１３Ａ〜Ｂは、伝導速度を示すＬＶ前壁の伝導ベクトルマップである。化合物Ａサンプル（Ｂ）と比較してビヒクルコントロール（Ａ）において、示したＭＩ領域付近の小さな矢がより顕著であることを示す。
【図１４】図１４Ａ〜Ｃは、化合物Ａが梗塞領域および梗塞境界領域（ＩＢＺ）における伝導速度を増大させることを示す。種々のペーシングサイクル長でのプラセボコントロールおよび化合物Ａで処置したＭＩラットにおける正常（Ａ）、境界（Ｂ）、および梗塞（Ｃ）領域についてのＣＶ。＊、プラセボコントロールと比較してｐ＜０．０５。
【図１５】図１５Ａ〜Ｂは、ファーストグリーン対比染色（ライトグレイ）で染色した線維症について、シリウスレッド（ダークグレイとして示す）で染色したＩＢＺの高倍率顕微鏡（１００倍）画像である。ビヒクルコントロール（Ａ）については梗塞領域から境界領域へ指様分布で線維症が拡大していたが、化合物Ａサンプル（Ｂ）についてはその範囲はより狭い。これらの画像は、化合物ＡがＩＢＺ内の線維症を軽減することを示す。
【図１６】図１６Ａ〜Ｃは、ＭＩ後５週間でｌｕｍｉｎｅｘを使用して測定したＩＬ−６（Ａ）、ＰＡＩ−１（Ｂ）、およびＢＮＰ（Ｃ）の血漿レベルを示す。値を平均±ＳＥＭとして示す。ｎ＝４〜８。＊、正常コントロールと比較してｐ＜０．０５；＃、ＭＩと比較してｐ＜０．０５。統計量を、ＡＮＯＶＡおよびその後のボンフェローニ検定を使用して決定した。これらの図は、化合物ＡがラットのＭＩ後リモデリングモデルにおいて血漿バイオマーカーを減少させることを示している。
【図１７】図１７は、表示の用量で化合物Ａ、Ｂ、またはＣと共にＮＥＣＡで処置したヒト心筋細胞からのＩＬ−６放出を示すチャートである。
【図１８】図１８は、化合物Ａが病理学的ＭＩ後ＬＶリモデリングを抑制して心機能を改善する機構を図示によって提案している。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
詳細な説明
本開示をより詳細に説明する前に、以下の用語を最初に定義する。
【００３０】
本開示は記載の特定の実施形態に制限されず、したがって、勿論、変化し得ると理解すべきである。本開示の範囲が添付の特許請求の範囲のみによって制限されるので、本明細書中で使用される用語集は特定の実施形態を説明することのみを目的とし、制限されることを意図しないとも理解すべきである。
【００３１】
本明細書中および添付の特許請求の範囲中で使用する場合、文脈上そうでないと明確に示されない限り、単数形である「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は複数の指示対象を含むことに留意しなければならない。
１．定義
他で定義しない限り、本明細書中で使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示に属する当業者によって一般的に理解される意味を有する。本明細書中で使用する場合、以下の用語は、以下の意味を有する。
【００３２】
本明細書中で使用する場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」は、組成物および方法が引用した要素を含むが他の要素を排除しないことを意味することが意図される。「本質的に〜からなる」は、組成物および方法を定義するために使用する場合、記載の目的のための組み合わせの任意の本質的な意義から他の要素を排除することを意味するものとする。したがって、本明細書中に定義の要素から本質的になる組成物は、特許請求の範囲に記載の開示の基本的および新規の特徴に実質的に影響を及ぼさない他の材料または工程を排除しないであろう。「〜からなる」は、他の成分および実質的な方法の工程からのわずかな要素の排除を意味するものとする。これらの各移行語によって定義される実施形態は、本開示の範囲内に含まれる。
【００３３】
用語「約」は、数字表示（例えば、温度、時間、量、および濃度（範囲が含まれる）の前に使用する場合、（＋）または（−）１０％、５％、または１％で変化し得る近似値を示す。
【００３４】
用語「処置」は、患者の疾患の任意の処置を意味し、以下が含まれる：（ｉ）疾患の予防（すなわち、臨床症状が発症しないようにすること）；（ｉｉ）疾患の抑制（すなわち、臨床症状の発症の停止）；および／または（ｉｉｉ）疾患の軽減（すなわち、臨床症状の後退）。ほんの一例として、処置には、右室機能の改善および／または症状（労作性呼吸困難、疲労、胸痛、およびその組み合わせが含まれるが、これらに限定されない）の緩和が含まれ得る。
【００３５】
本明細書中で使用する場合、用語「回復する」は、病態の重症度に関して使用する場合、状態に関連する兆候または症状が軽減するか、被験体の状態が改善することを意味する。モニタリングすべき兆候または症状は特定の病態に特徴的であり、当業者に周知であろう。兆候および状態のモニタリング方法も周知であろう。
【００３６】
用語「患者」は、典型的に、哺乳動物（例えば、ヒトなど）をいう。
【００３７】
用語「治療有効量」は、上記定義の処置を必要とする患者に投与した場合に上記定義の処置を実施するのに十分な化合物（Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストなど）の量をいう。治療有効量は、使用される剤の特定の活性または送達経路、患者の病状の重症度および年齢、患者の健康状態、他の病状の存在、および栄養状態に応じて変化するであろう。さらに、患者が受けることができる他の薬物療法は、投与される治療剤の治療有効量の決定に影響を及ぼすであろう。
【００３８】
本明細書中で使用する場合、「薬学的に許容され得るキャリア」には、全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌薬および抗真菌薬、等張剤および吸収遅延剤などが含まれる。薬学的に活性な物質のためのかかる媒質および薬剤の使用は、当該分野で周知であろう。任意の従来の媒質または剤が有効成分と適合しない場合を除き、治療組成物におけるその使用が予想される。補足的な有効成分も組成物中に組み込むことができる。
２．方法
上記のように、本開示は、心筋梗塞（ＭＩ）に罹患した患者の心不全および／または不整脈を処置する方法に関する。１つの実施形態では、本明細書中に記載の方法により、心不全または不整脈の処置によって患者の死亡数または入院数を減少させることができる。さらに、かかる方法により、心筋梗塞（ＭＩ）後患者の心臓の状態が改善される。本方法は、治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを必要とする患者に投与する工程を必要とする。
【００３９】
Ａ２Ｂアデノシン受容体（ＡｄｏＲ）が、ヒト心臓線維芽細胞（ＨＣＦ）中で発現されるＡｄｏＲの主なサブタイプであり、この受容体の活性化によってＩＬ−６の放出およびコラーゲンの産生、線維症マーカーの放出、ならびに心血管疾患（ＣＶＤ）のバイオマーカーの放出が増加することが本明細書中で発見された。
【００４０】
さらに、Ｎ−エチルカルボキサミドアデノシン（ＮＥＣＡ）（アデノシンの安定なアナログ）は、濃度依存様式でＩＬ−６の放出を有意に増加させた。さらに、ＮＥＣＡは、α−平滑筋アクチンおよびα−１プロコラーゲンの発現を増加させ、ＨＣＦからのコラーゲンの産生を増加させ、ＣＶＤの２つの新規のバイオマーカー（可溶性ＳＴ−２およびＰＡＰＰＡ（妊娠関連血漿タンパク質Ａ））の放出を増加させた。しかし、ＨＣＦに及ぼすＮＥＣＡの影響は、Ａ２ＢＡｄｏＲアンタゴニストによって完全に無効にされた（実施例２）。
【００４１】
生理学的レベルでは、虚血心筋層でアデノシンレベルが上昇する。次いで、上昇したアデノシンレベルがマクロファージ、心筋細胞、および心臓線維芽細胞上のＡ２Ｂ受容体を活性化させ、それにより、左室機能障害に寄与する炎症および線維症のメディエーターを放出する。同様に、Ａ２ＢＡｄｏＲアンタゴニストがかかる活性化を抑制する能力により、かかる炎症および線維症のメディエーターの放出を抑制することができる。また、Ａ２ＢＡｄｏＲアンタゴニストは、損傷した心臓組織内でのマクロファージ活性化を抑制することができる。要するに、本開示のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは、心疾患における線維化反応を軽減し、それにより、左室機能を改善することができることを示す。
【００４２】
これらの機構的所見と一致して、ＬＶ収縮末期容量および拡張末期容量の拡大の減少、ならびにＬＶ駆出分画の増加で示されるように、ラットおよびマウスのＳＴ部分上昇型心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）モデルにおいて、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストが左室（ＬＶ）拡大を抑制することが本発明で認められた。ＬＶ拡大の抑制によってＬＶ機能が改善され、梗塞境界領域（ＩＢＺ）内の線維症の抑制によって不整脈が減少するので、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは心不全または不整脈に起因する心血管系の死亡数および入院数を減少させることができる。この点において、間質性線維症が不整脈基質を生成すると予想される。従って、間質性線維症の軽減により、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは、不整脈および突然心臓死の発生数を減少させることができる。
【００４３】
これらの所見の予想外の態様は、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストの活性が梗塞領域におけるＭＩ後代償性線維化反応を妨害しない点である。図１８に示すように、心筋梗塞の急性期中に（例えば、ＳＴＥＭＩ）、梗塞領域内の細胞が壊死する。急性期後（例えば、ＭＩの約１週間後）、壊死細胞由来の線維性瘢痕に起因する喪失を代償するために梗塞領域が菲薄化および拡大する。かかる代償機構（ＬＶ拡張としても公知）は、ＬＶ機能の維持に有益である。
【００４４】
しかし、不適応期中のＬＶのさらなる拡大により、心不全および不整脈が生じ得る。この点において、この段階でのＬＶ拡大は梗塞領域の外側の領域で起こり、それにより、球状の心室拡張が生じる。さらに、ＬＶの拡大によって駆出分画の減少を特徴とするＬＶ機能障害を生じる。
【００４５】
驚いたことに、本開示のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは、梗塞領域の外側の心臓組織内で、炎症または線維症のメディエーターの放出を特異的に抑制し、それにより、炎症および線維症により誘発された組織傷害を軽減し、駆出分画およびＬＶ機能を改善する。したがって、アデノシンの心臓の保護的役割に関する従来の認識と対照的に、本開示の実験データは、ＭＩ後の心臓の防御および回復におけるＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを使用したアデノシン活性阻害の治療効果を証明している。
【００４６】
したがって、ＭＩ後患者において使用する場合、代償性心臓線維症の終了前でさえ、かかる代償性反応を抑制するリスクを伴うことなくＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを患者に投与することができる。さらに、処置を受けた場合にＭＩ後患者が血行動態学的に安定であると予想される。さらに、ＭＩ中またはＭＩの直後の早期にアンタゴニストを投与することができると予想される。
【００４７】
Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストの治療効果の範囲にも驚く。例えば、ＬＶＥＦの減少を遅らせるだけの他の抗線維化薬（ピルフェニドンなど）と比較した場合、本開示のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは、かかる減少を停止させるかさらに逆転させることができた（実施例６および図１２Ｂ）。
【００４８】
さらに、かかるＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストの効果は、複数の化合物（化合物Ａ、Ｂ（以下に定義）、およびＣ（以下に定義）が含まれる）を使用して認められ、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストが一般にかかる治療能を有することを証明している。これを実施例７にさらに例示する。ｉｎ  ｖｉｖｏおよび臨床研究に加えて、本明細書中で使用したアッセイを更に使用して、その臨床用途の適合性についてのこれらまたは他のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストの選択性およびＰＫプロフィールを決定することができる。
【００４９】
したがって、本開示は、心筋梗塞（ＭＩ）後患者の心不全および／または不整脈の処置方法を提供する。心不全および／または不整脈（ａｒｒｈｔｈｙｍｉａ）の処置によって心血管系の死亡数および入院数が減少すると予想される。心不全のリスクまたは進行の低減、心不全の軽減、不整脈の軽減または回復、左室駆出分画（ＬＶＥＦ）の増大、左室拡大の抑制、左室収縮末期容積の減少、左室拡張末期容積の減少、左室機能障害の回復、心筋収縮性の改善、または心臓線維症の軽減のための方法も提供する。いくつかの態様では、提供された方法によってＭＩ後患者の心臓線維症が処置されるのに対して、処置によって梗塞領域を超える領域での線維症の標的化された軽減および線維症の軽減ならびに代償性線維化反応段階後の回復の改善が達成される。いくつかの実施形態では、本明細書中で使用する場合、軽減、低減、減少、増加、増大、改善、回復、または抑制は、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを投与されない同様の状況の患者と比較した場合である。
【００５０】
１つの実施形態では、本方法は、治療有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを患者に投与する工程を含む。
【００５１】
１つの態様では、ＭＩは急性ＭＩである。別の態様では、ＭＩはＳＴ上昇型ＭＩ（ＳＴＥＭＩ）である。さらに別の態様では、ＭＩは非ＳＴ上昇型ＭＩ（ＮＳＴＥＭＩ）である。
【００５２】
１つの態様では、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストの投与は、ＭＩ中またはＭＩ直後の早期に開始する。いくつかの実施形態では、患者がＭＩに罹患していると診断された場合に投与する。別の態様では、ＭＩの約１時間後、あるいは約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４時間後に投与を開始する。さらに別の態様では、ＭＩの約１日後、あるいは約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、または１４日後、またはＭＩの１、２、３、または４週間後に投与を開始する。１つの特定の態様では、ＭＩ患者が安定するとすぐに投与を開始する。１つの態様では、ＭＩ後１日以内に投与を開始する。別の態様では、ＭＩ後１日目と５日目との間に投与を開始する。即時投与が不可能な事象では、現在のデータでは、ＭＩの１週間後または２週間後の投与開始も依然として有効であることが示されている。
【００５３】
いくつかの態様では、ＭＩ後約３日未満、あるいは５日未満、７日未満、２週間未満、３週間未満、または４週間未満に投与を開始する。
【００５４】
いくつかの態様では、ＭＩ後患者は、血行動態学的に安定している。血行動態学的安定性の決定方法および基準は当該分野で公知である。用語「血行動態学的に安定な」は、本明細書中で使用する場合、１つ以上または全ての血行動態パラメータの測定値の正常範囲への回復をいう。かかる正常範囲の例を、以下の表に示す。
【表Ａ】
2014510150.tif 000005
【００５５】
以下により完全に記載する通り、アンタゴニストを、種々の方法（全身、経口、静脈内、筋肉内、腹腔内、および吸入が含まれる）で投与することができる。
【００５６】
別のその方法の態様では、本開示は、ヒト心臓線維芽細胞中のα−平滑筋アクチンおよび／またはα−１プロコラーゲンの過剰発現を抑制する方法に関し、本方法は、これらの細胞を有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストと接触させる工程を含む。
【００５７】
さらに別のその方法の態様では、本開示は、ＩＬ−６、コラーゲン、ＳＴ−２、ＰＡＰＰＡ（妊娠関連血漿タンパク質Ａ）、および／またはカスパーゼ−１の発現および／またはヒト心臓線維芽細胞からの放出を減少させる方法に関し、本方法は、これらの細胞を有効量のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストと接触させる工程を含む。
【００５８】
３．Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニスト
用語「Ａ２Ｂアデノシン受容体」または「Ａ２Ｂ受容体」は、アデノシン受容体のサブタイプをいう。他のサブタイプには、Ａ１、Ａ２Ａ、およびＡ３が含まれる。
【００５９】
用語「Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニスト」または「Ａ２Ｂ受容体アンタゴニスト」は、Ａ２Ｂアデノシン受容体の活性を阻害するかそうでなければ調整する任意の化合物、ペプチド、タンパク質（例えば、抗体）、ｓｉＲＮＡをいう。１つの実施形態では、アンタゴニストは、アデノシン受容体の他のサブタイプよりもＡ２Ｂ受容体を選択的に阻害する。別の実施形態では、アンタゴニストは、特にＡ２Ｂ受容体に選択性を示す。推定アンタゴニストである化合物を、実施例１中の手順を使用してスクリーニングすることができる。本開示の方法に適切な化合物を、実施例２〜７に例示の実験を使用してスクリーニングすることができる。例えば、ある化合物がＮＥＣＡ誘発ＩＬ−６放出を減少させる場合、この化合物を開示の目的に適切であると見なす。１つの態様では、減少は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、または５０％である。アンタゴニストの例には、以下の節で考察したものが含まれるが、これらに限定されない。
【００６０】
種々のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストが本発明で有用であることが予想される。化合物は、米国特許第６，８２５，３４９号、同第７，１０５，６６５号、および同第６，９９７，３００号（その全体が参考として援用される）に記載されている。１つの実施形態では、本発明は、式Ｉまたは式ＩＩ
【００６１】
【化３】
2014510150.tif 000006
（式中、
Ｒ１およびＲ２は、水素、任意選択的に置換されたアルキル、または−Ｄ−Ｅ基から独立して選択され、Ｄは共有結合またはアルキレンであり、Ｅは、任意選択的に置換されたアルコキシ、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたヘテロアリール、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたアルケニル、または任意選択的に置換されたアルキニルであり、
Ｒ３は水素、任意選択的に置換されたアルキル、または任意選択的に置換されたシクロアルキルであり、
Ｘは任意選択的に置換されたアリーレンまたは任意選択的に置換されたヘテロアリーレンであり、
Ｙは、共有結合またはアルキレンであり、このアルキレン中の１つの炭素原子は−Ｏ−、−Ｓ−、または−ＮＨ−に任意選択的に置き換えられ得、そしてヒドロキシ、アルコキシ、任意選択的に置換されたアミノ、または−ＣＯＲ（式中、Ｒはヒドロキシ、アルコキシ、またはアミノである）で任意選択的に置換され、
Ｚは任意選択的に置換された単環式アリールまたは任意選択的に置換された単環式ヘテロアリールであるか、
Ｘが任意選択的に置換されたヘテロアリーレンであり、Ｙが共有結合である場合にＺは水素である）の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩、互変異性体、異性体、異性体の混合物、もしくはプロドラッグの使用に関する。
【００６２】
式Ｉまたは式ＩＩあるいはその薬学的に許容され得る塩、互変異性体、異性体、異性体の混合物、もしくはプロドラッグについて、いくつかの実施形態では、
Ｒ１およびＲ２は、独立して、水素、任意選択的に置換されたアルキル、または−Ｄ−Ｅ基から選択され、Ｄは共有結合またはアルキレンであり、Ｅは任意選択的に置換されたアルコキシ、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたヘテロアリール、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたアルケニル、または任意選択的に置換されたアルキニルであるが、但し、Ｄが共有結合である場合にＥはアルコキシであり得ないことを条件とし、
Ｒ３は水素、任意選択的に置換されたアルキル、または任意選択的に置換されたシクロアルキルであり、
Ｘは任意選択的に置換されたアリーレンまたは任意選択的に置換されたヘテロアリーレンであり、
Ｙは、共有結合またはアルキレンであり、このアルキレン中の１つの炭素原子は、−Ｏ−、−Ｓ−、または−ＮＨ−に任意選択的に置き換えられ得、そして、ヒドロキシ、アルコキシ、任意選択的に置換されたアミノ、または−ＣＯＲ（式中、Ｒはヒドロキシ、アルコキシ、またはアミノである）で任意選択的に置換されるが、
但し、任意選択的置換がヒドロキシまたはアミノである場合に、それはヘテロ原子に隣接することができないことを条件とし、
Ｚは任意選択的に置換された単環式アリールまたは任意選択的に置換された単環式ヘテロアリールであるか、
Ｚは、Ｘが任意選択的に置換されたヘテロアリーレンであり、Ｙが共有結合である場合に水素であるが、
但し、Ｘが任意選択的に置換されたアリーレンである場合にＺは任意選択的に置換された単環式ヘテロアリールであることを条件とする。
【００６３】
１つの実施形態では、式ＩおよびＩＩの化合物は、Ｒ１およびＲ２は、独立して水素、任意選択的に置換された低級アルキル、または−Ｄ−Ｅ基であり、Ｄは共有結合またはアルキレンであり、Ｅは、任意選択的に置換されたフェニル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたアルケニル、または任意選択的に置換されたアルキニルである化合物であり、特にＲ３が水素である化合物である。
【００６４】
この群内で、１つの化合物クラスには、Ｒ１およびＲ２が独立してシクロアルキルで任意選択的に置換された低級アルキル（好ましくは、ｎ−プロピル）であり、Ｘが任意選択的に置換されたフェニレンである化合物が含まれる。このクラス内で、１つの化合物サブクラスは、Ｙがアルキレン（１つの炭素原子が酸素に置き換えられたアルキレン（好ましくは、−Ｏ−ＣＨ２−）、より具体的には、酸素がフェニレンとの結合点であるアルキレンが含まれる）である化合物である。このサブクラス内で、１つの実施形態では、Ｚは、任意選択的に置換されたオキサジアゾール、特に任意選択的に置換された［１，２，４］−オキサジアゾール−３−イル、特に任意選択的に置換されたフェニルまたは任意選択的に置換されたピリジルで置換された［１，２，４］−オキサジアゾール−３−イルである。
【００６５】
別の化合物クラスには、Ｘが任意選択的に置換された１，４−ピラゾレンである化合物が含まれる。このクラス内で、１つの化合物サブクラスは、Ｙが共有結合、アルキレン、低級アルキレンであり、Ｚが水素、任意選択的に置換されたフェニル、任意選択的に置換されたピリジル、または任意選択的に置換されたオキサジアゾールである化合物である。このサブクラス内で、１つの実施形態には、Ｒ１がシクロアルキルで任意選択的に置換された低級アルキルであり、Ｒ２が水素である化合物が含まれる。別の実施形態には、Ｙが−（ＣＨ２）−または−ＣＨ（ＣＨ３）−であり、Ｚが任意選択的に置換されたフェニルであるか、Ｙが−（ＣＨ２）−または−ＣＨ（ＣＨ３）−であり、Ｚが任意選択的に置換されたオキサジアゾール（特に３，５−［１，２，４］−オキサジアゾール）であるか、Ｙが−（ＣＨ２）−または−ＣＨ（ＣＨ３）−であり、Ｚが任意選択的に置換されたピリジルである化合物が含まれる。このサブクラス内で、Ｒ１およびＲ２が、独立して、シクロアルキルで任意選択的に置換された低級アルキル（特にｎ−プロピル）である化合物も含まれる。他の実施形態では、Ｙが共有結合、−（ＣＨ２）−、または−ＣＨ（ＣＨ３）−であり、Ｚが水素、任意選択的に置換されたフェニル、または任意選択的に置換されたピリジルである化合物、特にＹが共有結合であり、Ｚが水素である化合物である。
【００６６】
目下のところ、本発明で有用な化合物には、以下が含まれるが、これらに限定されない：
１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−プロピル−８−［１−ベンジルピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−ブチル−８−（１−｛［３−フルオロフェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−プロピル−８−［１−（フェニルエチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−（１−｛［５−（４−クロロフェニル）（１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１−プロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−（１−｛［５−（４−クロロフェニル）（１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１−ブチル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−ピラゾール−４−イル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−メチル−３−ｓｅｃ−ブチル−８−ピラゾール−４−イル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−シクロプロピルメチル−３−メチル−８−｛１−［（３−トリフルオロメチルフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジメチル−８−｛１−［（３−フルオロフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
３−メチル−１−プロピル−８−｛１−［（３−トリフルオロメチルフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
３−エチル−１−プロピル−８−｛１−［（３−トリフルオロメチルフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−｛１−［（３−フルオロフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−エチル−３−メチル−８−｛１−［（３−フルオロフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−｛１−［（２−メトキシフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）−フェニル］エチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−｛１−［（４−カルボキシフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
２−［４−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル（１，３，７−トリヒドロプリン−８−イル））ピラゾリル］−２−フェニル酢酸；
８−｛４−［５−（２−メトキシフェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ］フェニル｝−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−｛４−［５−（３−メトキシフェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ］フェニル｝−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−｛４−［５−（４−フルオロフェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ］フェニル｝−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン：
１−（シクロプロピルメチル）−８−［１−（２−ピリジルメチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−ｎ−ブチル−８−［１−（６−トリフルオロメチルピリジン−３−イルメチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−（１−｛［３−（４−クロロフェニル）（１，２，４−オキサジアゾール−５−イル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−［１−（｛５−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］イソオキサゾール−３−イル｝メチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−［１−（２−ピリジルメチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
３−｛［４−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−８−イル）ピラゾリル］メチル｝安息香酸；
１，３−ジプロピル−８−（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−｛１−［（３−（１Ｈ−１，２，３，４−テトラゾール（ｔｅｔｒａａｚｏｌ）−５−イル）フェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
６−｛［４−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−８−イル）ピラゾリル］メチル｝ピリジン−２−カルボン酸；
３−エチル−１−プロピル−８−［１−（２−ピリジルメチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−（１−｛［５−（４−クロロフェニル）イソオキサゾール−３−イル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−３−エチル−１−プロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−（１−｛［３−（４−クロロフェニル）（１，２，４−オキサジアゾール−５−イル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−３−エチル−１−プロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
３−エチル−１−プロピル−８−（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−（シクロプロピルメチル）−３−エチル−８−（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；および
３−エチル−１−（２−メチルプロピル）−８−（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン、
またはその薬学的に許容され得る塩、互変異性体、異性体、異性体の混合物、もしくはプロドラッグ。
【００６７】
上記のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストのプロドラッグも本発明の方法で有用であると予想される。例示的なプロドラッグは、米国特許第７，６２５，８８１号（その全体が本明細書中で参考として援用される）で教示されている。したがって、１つの実施形態では、本発明の方法で有用な化合物には、以下の式を有する式ＩＩＩ
【００６８】
【化４】
2014510150.tif 000007
（式中、
Ｒ１０およびＲ１２は独立して低級アルキルであり、
Ｒ１４は任意選択的に置換されたフェニルであり、
Ｘ１は水素またはメチルであり、
Ｙ１は−Ｃ（Ｏ）Ｒであり、Ｒは、独立して、任意選択的に置換された低級アルキル、任意選択的に置換されたアリール、または任意選択的に置換されたヘテロアリールであるか、
Ｙ１は−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ５）２であり、Ｒ１５は、水素であるか、またはフェニルもしくはヘテロアリールで任意選択的に置換された低級アルキルである）のプロドラッグおよびその薬学的に許容され得る塩が含まれる。
【００６９】
１つの式ＩＩＩの化合物群は、Ｒ１０およびＲ１２がエチルまたはｎ−プロピルである化合物、特にＲ１０がｎ−プロピルであり、Ｒ１２がエチルである化合物である。別の実施形態では、Ｒ１４は３−（トリフルオロメチル）フェニルであり、Ｘ１は水素である。
【００７０】
１つの亜群には、Ｙ１が−Ｃ（Ｏ）Ｒである式ＩＩＩの化合物、特にＲがメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、またはｎ−ペンチルである式ＩＩＩの化合物、より詳細にはＲがメチル、ｎ−プロピル、またはｔ−ブチルである式ＩＩＩの化合物が含まれる。別の亜群には、Ｙ１が−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ５）２である式ＩＩＩの化合物、特にＲ１５が水素である式ＩＩＩの化合物が含まれる。
【００７１】
式ＩＩＩの化合物またはプロドラッグには、以下の化合物が含まれるが、これらに限定されない：
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル］メチルアセタート；
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル］メチル２，２−ジメチルプロパノアート；
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル］メチルブタノアート；および
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−ピラゾール−４−イル）（１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル）］メチル二水素ホスファート、
またはその薬学的に許容され得る塩。
【００７２】
１つの実施形態では、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは、Ｎ−［５−（１−シクロプロピル−２，６−ジオキソ−３−プロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−ピリジン−２−イル］−Ｎ−エチル−ニコチンアミド（化合物Ｂ）であり、以下の化学式：
【００７３】
【化５】
2014510150.tif 000008
を有するＡＴＬ−８０１としても公知である。
この化合物に関するさらなる情報を、Ｋｏｌａｃｈａｌａら、Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１５５（１）：１２７−３７（２００８）および米国特許出願公開第２００７−００７２８４３号に見出すことができる。
【００７４】
別の実施形態では、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは、（２−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アセトアミド（化合物Ｃ）であり、以下の化学式：
【００７５】
【化６】
2014510150.tif 000009
を有するＡＳ−１６としても公知である。
この化合物およびこの化合物の調製方法に関するさらなる情報を、Ｂａｒａｌｄｉ，Ｐ．Ｇ．ら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４７：１４３４−４７（２００４）中に見出すことができる。
【００７６】
Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは、Ａ２Ｂ受容体活性を阻害するかそうでなければ調整する任意の化合物である。Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは、当該分野で公知である。例えば、いくつかの受容体の小分子インヒビターが同定されている。例示的な化合物には、以下が含まれる。
【００７７】
【化７】
2014510150.tif 000010
さらなるＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは、８−環式キサンチン誘導体（環状置換基がアリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、または複素環（その全ての環状基が上記定義のように任意選択的に置換される）であり得る）である。８−環式キサンチン誘導体の例を、文献（例えば、Ｂａｒａｌｄｉ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｄｅｓｉｇｎ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｅｗ  ８−Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｘａｎｔｈｉｎｅ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｓ  Ｈｉｇｈｌｙ  Ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｈｕｍａｎ  Ａ２Ｂ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ”，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，（２００３）を参照のこと）を通して見出すことができ、ＷＯ０２／４２２９８号、ＷＯ０３／０２５６６号、ＷＯ２００７／０３９２９７号、ＷＯ０２／４２２９８号、ＷＯ９９／４２０９３号、ＷＯ２００９／１１８７５９号、およびＷＯ２００６／０４４６１０号（その全体が本明細書中に全て援用される）中にも見出すことができる。
【００７８】
１つの実施形態では、Ａ２Ｂ受容体アンタゴニストは、以下の化学式
【００７９】
【化８】
2014510150.tif 000011
を有し、名称３−エチル−１−プロピル−８−（１−（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−プリン−２，６（３Ｈ，７Ｈ）−ジオンまたは３−エチル−１−プロピル−８−（１−（（３−（トリフルオロメチル）フェニル）メチル）ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオンを有する化合物である。この化合物を、時折、本明細書の全体にわたって、「化合物Ａ」または「ＣＶＴ−６８３３」という。本化合物は、米国特許第６，８２５，３４９号（その全体が本明細書中で参考として援用される）に記載されている。
【００８０】
用語「アルキル」は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個の炭素原子を有する、分枝鎖状または非分枝鎖状のモノラジカル飽和炭化水素鎖をいう。この用語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−デシル、およびテトラデシルなどの基によって例示される。
【００８１】
用語「置換アルキル」は以下をいう：
１）アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アジド（−Ｎ３）、シアノ（ＣＮ）、ハロゲン、ヒドロキシル（ＯＨ）、ケト（＝Ｏ）、チオカルボニル（−Ｃ（Ｓ））、カルボキシ（−Ｃ（Ｏ）ＯＨ）、カルボキシアルキル、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロシクリルチオ、チオール、アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、アミノスルホニル、アミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール，−、ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリール、および−ＳＯ２−ヘテロアリールからなる群から選択される１、２、３、４、または５個の置換基、好ましくは１〜３個の置換基を有する、上記定義のアルキル基。定義によって他で制限されない限り、全置換基を、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、および−Ｓ（Ｏ）ｎＲ’（式中、Ｒ’は、アルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは０、１、または２である）から選択される１、２、または３個の置換基で任意選択的にさらに置換することができる；または
２）酸素、硫黄、およびＮＲａ−（式中、Ｒａは、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、およびヘテロシクリルから選択される）から独立して選択される１〜１０個の原子が介在する上記定義のアルキル基。全置換基を、アルキル、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、または−Ｓ（Ｏ）ｎＲ’（式中、Ｒ’は、アルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは０、１、または２である）で任意選択的にさらに置換することができる；または
３）１、２、３、４、または５個の上記定義の置換基を有し、且つ１〜１０個の上記定義の原子が介在する上記定義のアルキル基。
【００８２】
用語「ヒドロキシアミノ」は、−ＮＨＯＨ基をいう。
【００８３】
用語「アルコキシアミノ」は、−ＮＨＯＲ基（式中、Ｒは任意選択的に置換されたアルキルである）をいう。
【００８４】
用語「低級アルキル」は、１、２、３、４、５、または６個の炭素原子を有する、分枝鎖状または非分枝鎖状のモノラジカル飽和炭化水素鎖をいう。この用語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｔ−ブチル、およびｎ−ヘキシルなどの基によって例示される。
【００８５】
用語「置換低級アルキル」は、置換アルキルについて定義された通りの１〜５個の置換基、好ましくは１、２、もしくは３個の置換基を有する上記定義の低級アルキル、または、置換アルキルについて定義された通りの、１、２、３、４、もしくは５個の原子が介在する上記定義の低級アルキル基、または上記定義の１、２、３、４、もしくは５個の置換基を有し、且つ上記定義の１、２、３、４、または５個の上記定義の原子が介在する低級アルキル基をいう。
【００８６】
用語「アルキレン」は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の炭素原子、好ましくは１〜１０個の炭素原子、より好ましくは１、２、３、４、５、または６個の炭素原子を有する、分枝鎖状または非分枝鎖状の飽和炭化水素鎖のジラジカルをいう。この用語は、メチレン（−ＣＨ２−）、エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）、およびプロピレン異性体（例えば、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−および−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−）などの基によって例示される。
【００８７】
用語「アルコキシ」は、Ｒ’−Ｏ−基（式中、Ｒ’は任意選択的に置換されたアルキルまたは任意選択的に置換されたシクロアルキルであるか、Ｒ’は−Ｙ’−Ｚ’基であり、Ｙ’は任意選択的に置換されたアルキレンであり、Ｚ’は任意選択的に置換されたアルケニル、任意選択的に置換されたアルキニル、または任意選択的に置換されたシクロアルケニルである（ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、およびシクロアルケニルは本明細書中に定義のとおりである））をいう。好ましいアルコキシ基は任意選択的に置換されたアルキル−Ｏ−であり、例として、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、ｎ−ヘキソキシ、１，２−ジメチルブトキシ、およびトリフルオロメトキシなどが含まれる。
【００８８】
用語「アルキルチオ」は、Ｒ’−Ｓ−基（式中、Ｒ’はアルキルについて定義のとおりである）をいう。
【００８９】
用語「アルケニル」は、好ましくは２〜２０個の炭素原子、より好ましくは２〜１０個の炭素原子、さらにより好ましくは２〜６個の炭素原子を有し、かつ１〜６個、好ましくは１個の二重結合（ビニル）を有する、分枝鎖状または非分枝鎖状不飽和炭化水素基のモノラジカルをいう。好ましいアルケニル基には、エテニルすなわちビニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、１−プロピレンすなわちアリル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、イソプロピレン（−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２）、およびビシクロ［２．２．１］ヘプテンなどが含まれる。
【００９０】
用語「置換アルケニル」は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ケト、チオカルボニル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロシクリルチオ、チオール、アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、アミノスルホニル、アミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール，−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリール、および−ＳＯ２−ヘテロアリールからなる群から選択される１、２、３、４、または５個の置換基、好ましくは１、２、または３個の置換基を有する、上記定義のアルケニル基をいう。定義によって他で制限されない限り、全置換基を、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、および−Ｓ（Ｏ）ｎＲ’（式中、Ｒ’はアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは０、１、または２である）から選択される１、２、または３個の置換基で任意選択的にさらに置換することができる。
【００９１】
用語「アルキニル」は、好ましくは２〜２０個の炭素原子、より好ましくは２〜１０個の炭素原子、さらにより好ましくは２〜６個の炭素原子を有し、かつ少なくとも１個、好ましくは１〜６個のアセチレン（三重結合）不飽和部位を有する、不飽和炭化水素のモノラジカルをいう。好ましいアルキニル基には、エチニル（−Ｃ≡ＣＨ）およびプロパルギル（またはプロパ−１−イン−３−イル、−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）などが含まれる。
【００９２】
用語「置換アルキニル」は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ケト、チオカルボニル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロシクリルチオ、チオール、アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、アミノスルホニル、アミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール，−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリール、および−ＳＯ２−ヘテロアリールからなる群から選択される１、２、３、４、または５個の置換基、好ましくは１、２、または３個の置換基を有する、上記定義のアルキニル基をいう。定義によって他で制限されない限り、全置換基を、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、および−Ｓ（Ｏ）ｎＲ’（式中、Ｒ’はアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは０、１、または２である）から選択される１、２、または３個の置換基で任意選択的にさらに置換することができる。
【００９３】
用語「アミノカルボニル」は、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’基（式中、各Ｒ’は、独立して、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルであるか、両方のＲ’基が連結して複素環式基（例えば、モルホリノ）を形成する）をいう。定義によって他で制限されない限り、全置換基を、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、および−Ｓ（Ｏ）ｎＲ’（式中、Ｒ’はアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは０、１、または２である）から選択される１〜３個の置換基で任意選択的にさらに置換することができる。
【００９４】
用語「アシルアミノ」は、−ＮＲ’Ｃ（Ｏ）Ｒ’基（式中、各Ｒ’は、独立して、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリルである）をいう。定義によって他で制限されない限り、全置換基を、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、および−Ｓ（Ｏ）ｎＲ’（式中、Ｒ’はアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは０、１、または２である）から選択される１〜３個の置換基で任意選択的にさらに置換することができる。
【００９５】
用語「アミノカルボニルアミノ」は、−ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ’Ｒ’基（式中、各Ｒ’は、独立して、Ｈであるか、置換アミノについて定義のとおりである）をいう。
【００９６】
用語「アシルオキシ」は、−Ｏ（Ｏ）Ｃ−アルキル基、−Ｏ（Ｏ）Ｃ−シクロアルキル基、−Ｏ（Ｏ）Ｃ−アリール基、−Ｏ（Ｏ）Ｃ−ヘテロアリール基、および−Ｏ（Ｏ）Ｃ−ヘテロシクリル基をいう。定義によって他で制限されない限り、全置換基を、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、または−Ｓ（Ｏ）ｎＲ’（式中、Ｒ’はアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは０、１、または２である）で任意選択的にさらに置換することができる。
【００９７】
用語「アルコキシカルボニルアミノ」は、アルキル−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ’基（式中、Ｒ’はアシルアミノについて定義のとおりである）をいう。
【００９８】
用語「アリール」は、単一の環（例えば、フェニル）もしくは複数の環（例えば、ビフェニル）または複数の縮合（ｃｏｎｄｅｎｓｅｄ）（縮合（ｆｕｓｅｄ））環（例えば、ナフチルまたはアントリル）を有する６〜２０個の炭素原子の芳香族炭素環基をいう。好ましいアリールには、フェニルおよびナフチルなどが含まれる。
【００９９】
用語「アリーレン」は、上記定義のアリール基のジラジカルをいう。この用語は、１，４−フェニレン、１，３−フェニレン、１，２−フェニレン、および１，４’−ビフェニレンなどの基によって例示される。
【０１００】
アリール置換基またはアリーレン置換基についての定義によって他で制限されない限り、かかるアリール基またはアリーレン基を、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ケト、チオカルボニル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロシクリルチオ、チオール、アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、アミノスルホニル、アミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール，−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリール、および−ＳＯ２−ヘテロアリールからなる群から選択される１〜５個の置換基、好ましくは１〜３個の置換基で任意選択的に置換することができる。定義によって他で制限されない限り、全置換基を、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、および−Ｓ（Ｏ）ｎＲ’（式中、Ｒ’はアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは０、１、または２である）から選択される１〜３個の置換基で任意選択的にさらに置換することができる。
【０１０１】
用語「アリールオキシ」は、アリール−Ｏ−基（式中、アリール基は上記定義のとおりである）をいい、任意選択的に置換されたアリール基（これも上記定義のとおりである）が含まれる。用語「アリールチオ」は、Ｒ’−Ｓ−基（式中、Ｒ’はアリールについて定義のとおりである）をいう。
【０１０２】
用語「アミノ」は−ＮＨ２基をいう。
【０１０３】
用語「置換アミノ」は、−ＮＲ’Ｒ’基（式中、各Ｒ’は、水素、アルキル、シクロアルキル、カルボキシアルキル（例えば、ベンジルオキシカルボニル）、アリール、ヘテロアリール、およびヘテロシクリル（但し、両Ｒ’基が水素であることはない）、または−Ｙ’−Ｚ’基（式中、Ｙ’は任意選択的に置換されたアルキレンであり、Ｚ’はアルケニル、シクロアルケニル、またはアルキニルである）からなる群から独立して選択される）をいう。定義によって他で制限されない限り、全置換基を、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、および−Ｓ（Ｏ）ｎＲ’（式中、Ｒ’はアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは０、１、または２である）から選択される１〜３個の置換基で任意選択的にさらに置換することができる。Ｒ’が−ＯＨである場合、これをヒドロキシアミノという。同様に、Ｒ’がアルコキシである場合、これは「アルコキシアミノ」である。
【０１０４】
用語「カルボキシアルキル」は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル基または−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルキル基（式中、アルキルおよびシクロアルキルは本明細書中に定義のとおりであり、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、または−Ｓ（Ｏ）ｎＲ’（式中、Ｒ’はアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは０、１、または２である）で任意選択的にさらに置換することができる）をいう。
【０１０５】
用語「シクロアルキル」は、単一環式環または複数縮合環を有する３〜２０個の炭素原子の炭素環基をいう。かかるシクロアルキル基には、例として、単一環構造（シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロオクチルなど）または多環構造（アダマンタニル、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、１，３，３−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタ−２−イル、（２，３，３−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタ−２−イル）、またはアリール基と縮合した炭素環基（例えば、インダンなど）など）が含まれる。
【０１０６】
用語「置換シクロアルキル」は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ケト、チオカルボニル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロシクリルチオ、チオール、アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、アミノスルホニル、アミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリール、および−ＳＯ２−ヘテロアリールからなる群から選択される１、２、３、４、または５個の置換基、好ましくは１、２、または３個の置換基を有するシクロアルキル基をいう。定義によって他で制限されない限り、全置換基を、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、および−Ｓ（Ｏ）ｎＲ’（式中、Ｒ’はアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは０、１、または２である）から選択される１、２、または３個の置換基で任意選択的にさらに置換することができる。
【０１０７】
用語「シクロアルケニル」は、少なくとも１個、または２〜６個の不飽和点（すなわち、二重結合）を有する上記定義のシクロアルキル基をいう。
【０１０８】
用語「ハロゲン」または「ハロ」は、フルオロ、ブロモ、クロロ、およびヨードをいう。
【０１０９】
用語「アシル」は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’基（式中、Ｒ’は、水素、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたアリール、および任意選択的に置換されたヘテロアリールである）を示す。
【０１１０】
用語「ヘテロアリール」は、少なくとも１つの環内に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個の炭素原子ならびに酸素、窒素、および硫黄から選択される１、２、３、または４個のヘテロ原子を有する芳香環基（すなわち、完全に不飽和）由来のラジカルをいう。かかるヘテロアリール基は、単一の環（例えば、ピリジルまたはフリル）または複数縮合環（例えば、インドリジニル、ベンゾチアゾリル、またはベンゾチエニル）を有することができる。ヘテロアリールの例には、［１，２，４］オキサジアゾール、［１，３，４］オキサジアゾール、［１，２，４］チアジアゾール、［１，３，４］チアジアゾール、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、インドール、インダゾール、プリン、キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチルピリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、フェナントロリン、イソチアゾール、フェナジン、イソオキサゾール、フェノキサジン、フェノチアジン、イミダゾリジン、およびイミダゾリンなどならびにヘテロアリール化合物を含むＮ−オキシドおよびＮ−アルコキシ−窒素誘導体（例えば、ピリジン−Ｎ−オキシド誘導体）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１１１】
用語「ヘテロアリーレン」は、上記定義のヘテロアリール基のジラジカルをいう。この用語は、２，５−イミダゾレン、３，５−［１，２，４］オキサジアゾレン、２，４−オキサゾレン、および１，４−ピラゾレンなどの基によって例示される。例えば、１，４−ピラゾレンは、以下の
【０１１２】
【化９】
2014510150.tif 000012
（式中、Ａは結合点を示す）である。
【０１１３】
ヘテロアリール置換基またはヘテロアリーレン置換基についての定義によって他で制限されない限り、かかるヘテロアリール基またはヘテロアリーレン基を、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ケト、チオカルボニル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロシクリルチオ、チオール、アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、アミノスルホニル、アミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール，−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリール、および−ＳＯ２−ヘテロアリールからなる群から選択される１〜５個の置換基、好ましくは１〜３個の置換基で任意選択的に置換することができる。定義によって他で制限されない限り、全置換基を、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、および−Ｓ（Ｏ）ｎＲ’（式中、Ｒ’はアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは０、１、または２である）から選択される１〜３個の置換基で任意選択的にさらに置換することができる。
【０１１４】
用語「ヘテロアリールオキシ」は、ヘテロアリール−Ｏ−基をいう。
【０１１５】
用語「ヘテロシクリル」は、単一環または複数縮合環を有する、飽和または部分不飽和のモノラジカルの基をいい、この基は、環内に１〜４０個の炭素原子と、窒素、硫黄、リン、および／または酸素から選択される１〜１０個のヘテロ原子、好ましくは１、２、３、または４個のヘテロ原子とを有する。複素環式基は、単一環または複数縮合環を有することができ、テトラヒドロフラニル、モルホリノ、ピペリジニル、ピペラジノ、およびジヒドロピリジノなどが含まれる。
【０１１６】
複素環式置換基についての定義によって他で制限されない限り、かかる複素環式基を、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ケト、チオカルボニル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロシクリルチオ、チオール、アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、アミノスルホニル、アミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール，−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリール、および−ＳＯ２−ヘテロアリールからなる群から選択される１、２、３、４、または５個、好ましくは１、２、または３個の置換基で任意選択的に置換することができる。定義によって他で制限されない限り、全置換基を、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、および−Ｓ（Ｏ）ｎＲ’（式中、Ｒ’はアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは０、１、または２である）から選択される１〜３個の置換基で任意選択的にさらに置換することができる。
【０１１７】
用語「ヘテロシクリルオキシ」は、−Ｏ−ヘテロシクリル（ｈｅｒｔｅｒｏｃｙｃｌｙｌ）をいう。
【０１１８】
用語「置換アルキルチオ」は、−Ｓ−置換アルキル基をいう。
【０１１９】
用語「ヘテロアリールチオ」は、−Ｓ−ヘテロアリール基（式中、ヘテロアリール基は上記定義のとおりであり、上でも定義されている任意選択的に置換されたヘテロアリール基が含まれる）をいう。
【０１２０】
用語「複素環チオ」は、複素環−Ｓ−基をいう。
【０１２１】
用語「スルホキシド」は、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’基（式中、Ｒ’は、アルキル、アリール、またはヘテロアリールである）をいう。「置換スルホキシド」は、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’基（式中、Ｒ’は、本明細書中に定義の置換アルキル、置換アリール、または置換ヘテロアリールである）をいう。
【０１２２】
用語「スルホン」は、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’基（式中、Ｒ’は、アルキル、アリール、またはヘテロアリールである）をいう。「置換スルホン」は、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’基（式中、Ｒ’は、本明細書中に定義の置換アルキル、置換アリール、または置換ヘテロアリールである）をいう。
【０１２３】
用語「アミノスルホニル」は、任意選択的にアミノに置換された−ＳＯ２−基をいう。
【０１２４】
用語「ケト」は、−Ｃ（Ｏ）−基をいう。用語「チオカルボニル」は、−Ｃ（Ｓ）−基をいう。用語「カルボキシ」は−Ｃ（Ｏ）−ＯＨ基をいう。
【０１２５】
「任意選択的な」または「任意選択的に」は、その後に記載される事象または環境が生じても生じなくてもよく、その記載には、前述の事象または環境が生じる例および生じない例が含まれることを意味する。
【０１２６】
用語「式Ｉ、式ＩＩ、または式ＩＩＩの化合物」は、開示の本発明の化合物、ならびにかかる化合物の薬学的に許容され得る塩、薬学的に許容され得るエステル、プロドラッグ、水和物、および多形を含むことを意図する。さらに、本発明の化合物は、１つ以上の不斉中心を含むことができ、ラセミ混合物または個別の鏡像異性体もしくはジアステレオ異性体として生成され得る。任意の所与の本発明の化合物中の立体異性体の存在数は、不斉中心の存在数に依存する（ｎが不斉中心の数である場合、可能な立体異性体数は２ｎである）。各立体異性体を、いくつかの適切な合成段階での中間体のラセミ混合物もしくは非ラセミ混合物の分割または従来の手段による本発明の化合物の分割によって得ることができる。各立体異性体（各鏡像異性体およびジアステレオ異性体が含まれる）ならびに立体異性体のラセミ混合物および非ラセミ混合物は本発明の範囲内に含まれ、その全てが、特に指示がない限り、本明細書の構造によって示されることが意図される。
【０１２７】
「異性体」は、同一の分子式を有する異なる化合物である。
【０１２８】
「立体異性体」は、原子の空間的配置のみが異なる異性体である。
【０１２９】
「鏡像異性体」は、相互に重ね合わせることができない鏡像である立体異性体対である。鏡像異性体対の１：１混合物は、「ラセミ」混合物である。用語「（±）」を、必要に応じてラセミ混合物を示すために使用する。
【０１３０】
「ジアステレオ異性体」は、少なくとも２つの不斉原子を有するが相互に鏡像ではない立体異性体である。
【０１３１】
絶対立体化学を、カーン−インゴルド−プレローグＲ−Ｓ則（Ｃａｈｎ−Ｉｎｇｏｌｄ−Ｐｒｅｌｏｇ  Ｒ−Ｓ  ｓｙｓｔｅｍ）にしたがって指定する。化合物が純粋な鏡像異性体である場合、各キラル炭素の立体化学を、ＲまたはＳのいずれかによって指定することができる。その絶対配置が未知の分割化合物を、ナトリウムＤ線の波長で偏光面を回転させる方向（右旋性または左旋性）に応じて（＋）または（−）と指定する。
【０１３２】
用語「互変異性体」は、プロトンの位置が異なる化合物の交互形態（エノール−ケトおよびイミン−エナミン互変異性体など）または環のＮＨ部分および環の＝Ｎ部分の両方に結合した環原子を含むヘテロアリール基の互変異性体形態（ピラゾール、イミダゾール、ベンゾイミダゾール、トリアゾール、およびテトラゾールなど）をいう。
【０１３３】
用語「プロドラッグ」は、本明細書中で使用する場合、ｉｎ  ｖｉｖｏで変換され得、そして／または分子の残部から分離されて活性な薬物、その薬学的に許容され得る塩もしくはその生物学的に活性な代謝産物を得ることができる化学基を含む本開示の化合物をいう。適切な基は当該分野で周知であり、特に以下が含まれる：カルボン酸部分について、例えば、エステル（アルキルアルコール、置換アルキルアルコール、ヒドロキシ置換アリール、およびヘテロアリールなどに由来するエステルが含まれるが、これらに限定されない）；アミド；ヒドロキシメチル、アルデヒド、およびその誘導体から選択されるプロドラッグ。かかるプロドラッグの構造は、以下に示す式ＩＩＩの構造であり得る。
【０１３４】
本明細書中に示した任意の式または構造は、化合物の非標識形態および同位体標識形態を示すことも意図する。同位体標識化合物は、１つ以上の原子が選択された原子質量または質量数を有する原子に置き換えられることを除いて本明細書中に示す式によって示す構造を有する。本開示の化合物に組み込むことができる同位体の例には、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素、および塩素の同位体（２Ｈ（ジュウテリウム、Ｄ）、３Ｈ（トリチウム）、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｆ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、および１２５Ｉなどであるが、これらに限定されない）が含まれる。本開示の種々の同位体標識化合物は、例えば、放射性同位体（３Ｈ、１３Ｃ、および１４Ｃなど）が組み込まれた同位体標識化合物である。かかる同位体標識化合物は、代謝研究、反応速度研究、検出技術または画像化技術（陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）または単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）（薬物または基質の組織分布アッセイが含まれる）など）、または患者の放射線処置で有用であり得る。
【０１３５】
本開示には、１個の炭素原子に結合した１〜「ｎ」個の水素がジュウテリウムに置き換えられ、ｎは分子中の水素の数である本明細書中に開示の任意の式の化合物も含まれた。かかる化合物は代謝耐性が増加するので、哺乳動物に投与した場合の任意の化合物の半減期の増加に有用である。例えば、Ｆｏｓｔｅｒ，“Ｄｅｕｔｅｒｉｕｍ  Ｉｓｏｔｏｐｅ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｉｎ  Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ”，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．５（１２）：５２４−５２７（１９８４）を参照のこと。かかる化合物を、当該分野で周知の手段（例えば、１つ以上の水素がジュウテリウムに置き換えられた出発物質の使用）によって合成する。
【０１３６】
本開示のジュウテリウムで標識されたか置換された治療化合物は、分布、代謝、および排泄（ＡＤＭＥ）に関する、改善されたＤＭＰＫの（薬物代謝および薬物動態学的な）性質を有し得る。より重い同位体（ジュウテリウムなど）での置換により、より高い代謝安定性に起因する特定の治療上の利点（例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期の増加または必要容量の減少）を得ることができる。１８Ｆ標識化合物は、ＰＥＴまたはＳＰＥＣＴ研究に有用であり得る。本開示の同位体標識化合物およびそのプロドラッグを、一般に、スキームに開示の手順、または非同位体標識試薬の代わりに容易に利用可能な同位体標識試薬を使用することによる下記の調製または実施例を実施することによって調製することができる。さらに、より重い同位体（特に、ジュウテリウム（すなわち、２ＨまたはＤ））での置換により、より高い代謝安定性に起因する特定の治療上の利点（例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期の増加または必要容量の減少または治療指数の改善）を得ることができる。この文脈におけるジュウテリウムが式Ｉまたは本明細書中に開示の任意の式の化合物中の置換基と見なされると理解される。
【０１３７】
かかるより重い同位体（特に、ジュウテリウム）の濃度を、同位体濃縮係数によって定義することができる。この開示の化合物では、特定の同位体として具体的に指定していない任意の原子は、その原子の任意の安定な同位体を示すことが意図される。別段に記述しない限り、ある位置を「Ｈ」または「水素」と具体的に指定する場合、その位置はその天然に存在する同位体組成で水素を有すると理解される。したがって、本開示の化合物では、ジュウテリウム（Ｄ）と具体的に指定した任意の原子は、ジュウテリウムを示すことが意図される。
【０１３８】
多くの場合、本発明の化合物は、アミノ基および／またはカルボキシル基またはこれらに類似する基の存在によって酸性塩および／または塩基性塩を形成することができる。用語「薬学的に許容され得る塩」は、式Ｉ、ＩＩ、またはＩＩＩの化合物の生物学的有効性および性質を保持し、且つ生物学的にも他の点でも不都合がない塩をいう。薬学的に許容され得る塩基付加塩を、無機塩基および有機塩基から調製することができる。無機塩基由来の塩には、ほんの一例として、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、およびマグネシウム塩が含まれる。有機塩基由来の塩には、第一級アミン、第二級アミン、および第三級アミン（アルキルアミン、ジアルキルアミン、トリアルキルアミン、置換アルキルアミン、ジ（置換アルキル）アミン、トリ（置換アルキル）アミン、アルケニルアミン、ジアルケニルアミン、トリアルケニルアミン、置換アルケニルアミン、ジ（置換アルケニル）アミン、トリ（置換アルケニル）アミン、シクロアルキルアミン、ジ（シクロアルキル）アミン、トリ（シクロアルキル）アミン、置換シクロアルキルアミン、二置換シクロアルキルアミン、三置換シクロアルキルアミン、シクロアルケニルアミン、ジ（シクロアルケニル）アミン、トリ（シクロアルケニル）アミン、置換シクロアルケニルアミン、二置換シクロアルケニルアミン、三置換シクロアルケニルアミン、アリールアミン、ジアリールアミン、トリアリールアミン、ヘテロアリールアミン、ジヘテロアリールアミン、トリヘテロアリールアミン、複素環アミン、二複素環アミン、三複素環アミン、アミン上の少なくとも２つの置換基が異なり、且つアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、および複素環などからなる群から選択される混合ジアミンおよびトリアミンなど）の塩が含まれるが、これらに限定されない。２個または３個の置換基がアミノ窒素と共に複素環式基またはヘテロアリール基を形成するアミンも含まれる。
【０１３９】
安定なアミンの具体例には、ほんの一例として、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリ（イソ−プロピル）アミン、トリ（ｎ−プロピル）アミン、エタノールアミン、２−ジメチルアミノエタノール、トロメタミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、Ｎ−アルキルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、モルホリン、およびＮ−エチルピペリジンなどが含まれる。
【０１４０】
薬学的に許容され得る酸付加塩を、無機酸および有機酸から調製することができる。無機酸由来の塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、およびリン酸などが含まれる。有機酸由来の塩には、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエン−スルホン酸、およびサリチル酸などが含まれる。
命名法
【０１４１】
【化１０】
2014510150.tif 000013
本発明の化合物の命名および番号付けを、Ｒ１はｎ−プロピルであり、Ｒ２はｎ−プロピルであり、Ｒ３は水素であり、Ｘはフェニレンであり、Ｙは−Ｏ−（ＣＨ２）であり、Ｚは５−（２−メトキシフェニル）−［１，２，４］−オキサジアゾール−３−イルである式Ｉの代表的化合物を使用して例示し、この化合物は、８−｛４−［５−（２−メトキシフェニル）−［１，２，４］−オキサジアゾール−３−イルメトキシ］−フェニル｝−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオンと命名される。
【０１４２】
４．併用療法
併用療法も提供する。１つの実施形態では、本方法は、患者にアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）インヒビターを投与する工程をさらに含む。ＡＣＥインヒビターの非限定的な例には、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、およびラミプリルなどが含まれる。
【０１４３】
別の実施形態では、本方法は、患者にアンギオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト（アンギオテンシン受容体遮断薬（ＡＲＢ）としても公知）を投与する工程をさらに含む。ＡＲＢの非限定的な例には、ロサルタン、ＥＸＰ３１７４、カンデサルタン、バルサルタン、イルベサルタン、テルミサルタン、エプロサルタン、オルメサルタン、およびアジルサルタンなどが含まれる。
【０１４４】
Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを、他の心臓線維症の治療または剤（レスベラトロール（３，５，４’−トリヒドロキシ−ｔｒａｎｓ−スチルベン）（Ｓｕｔｒａら，Ｊ  Ａｇｒｉｃ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ  ５６（２４）：１１６８３−１１６８７（２００８））が含まれるが、これに限定されない）と組み合わせて投与することができる。レスベラトロールは、スチルベノイド（１つの天然型フェノール型）およびフィトアレキシン（病原体（細菌または真菌など）による攻撃下でいくつかの植物によって天然に産生される）である。
【０１４５】
Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストと他の心臓線維症の治療との間に、そのそれぞれの異なる治療機構に起因する相乗作用が予想される。例えば、ＡＣＥインヒビターは、アンギオテンシンＩのアンギオテンシンＩＩへの変換を遮断する。したがって、ＡＣＥインヒビターは、細動脈耐性を低下させ、静脈容量を増加させ、心拍出量、心係数、一回心仕事量、および容積を増加させ、腎血管耐性を低下させ、ナトリウム利尿を増加させる（尿中ナトリウム排泄）。対照的に、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストは心臓の炎症および線維症を軽減する。したがって、組み合わせると、Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストおよびＡＣＥインヒビターは、心機能を増強し、各個別の剤の治療用量を減少させることができる。同様に、治療用量の減少は潜在的な有害事象の軽減または防止に役立つ。
【０１４６】
投与に関して、２種以上の剤を同時または連続的に投与することができると予想される。２種以上の剤を同時に投与する場合、これらの剤を単回用量または個別の用量として投与することができる。さらに、担当医がさらなる剤の必要投薬量、投与計画、および好ましい投与経路を容易に決定することができると予想される。かかる組成物を、薬学分野で周知の様式で調製する（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ  １７ｔｈ  Ｅｄ．（１９８５）および“Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ”，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．３ｒｄ  Ｅｄ．（Ｇ．Ｓ．Ｂａｎｋｅｒ  ＆  Ｃ．Ｔ．Ｒｈｏｄｅｓ，Ｅｄｓ．）を参照のこと）。
【０１４７】
５．投与
本発明の投与に適切な組成物を、経口、硝子体内、局所、舌下、頬側（ｂｕｃａｌｌｙ）、鼻経、非経口（例えば、筋肉内）、腹腔内、静脈内注射または皮下注射、槽内、膣内、腹腔内、舌下、頬側（ｂｕｃａｌｌｙ）、口腔噴霧剤として、または鼻内噴霧にて、それを必要とする個体に投与することができる。組成物を、各投与経路に適切な投薬形態で製剤することができる。
【０１４８】
薬学的組成物を、経口、鼻腔内、眼球、非経口、または吸入療法で投与することができ、錠剤、ロゼンジ、顆粒、カプセル、丸薬、アンプル、坐剤、またはエアロゾルの形態を取ることができる。薬学的組成物はまた、主成分を水性または非水性の希釈剤、シロップ、顆粒、または粉末中に含む懸濁液、溶液、および乳濁液の形態を取ることができる。本発明の剤に加えて、薬学的組成物はまた、他の薬学的に活性な化合物または複数の化合物を含むことができる。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物は本明細書中で有効成分とも呼ばれ、治療のために任意の適切な経路（経口、経鼻、局所（経皮、エアロゾル、口内、および舌下が含まれる）、非経口（皮下、筋肉内、静脈内、および皮内が含まれる）、および肺経路が含まれる）によって投与することができる。好ましい経路がレシピエントの状態および年齢ならびに処置される疾患に応じて変化することとも認識されるであろう。
【０１５０】
Ａ．注射
１つの投与様式は、非経口（特に、静脈内（ＩＶ）注射などの注射）による）である。本開示の組成物を注射による投与によって組み込むことができる形態には、水性もしくは油性の懸濁液、またはゴマ油、トウモロコシ油、綿実油、もしくはピーナッツ油を使用した乳濁液、ならびにエリキシル、マンニトール、デキストロース、もしくは滅菌水溶液、および類似の薬学的ビヒクルが含まれる。生理食塩水溶液も注射のために慣習的に使用されるが、本開示の文脈ではあまり好ましくない。エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど（およびその適切な混合物）、シクロデキストリン誘導体、および植物油も使用することができる。例えば、コーティング（レシチンなど）の使用、分散剤の場合の必要な粒径の維持、および界面活性剤の使用によって適切な流動性を維持することができる。種々の抗菌剤および抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、およびチロメサールなど）によって微生物作用を防止することができる。
【０１５１】
１つの態様では、本開示は、選択された濃度のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを含むＩＶ溶液を提供する。具体的には、ＩＶ溶液は、好ましくは、薬学的に許容され得る水溶液１ミリリットルあたり約１〜約５０００ｍｇのＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを含む。あるいは、ＩＶ溶液中のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニスト濃度は、約５〜約１０００ｍｇ、あるいは約１０〜約８００ｍｇ、あるいは約２０〜約８００ｍｇ、あるいは約５０〜約７００ｍｇ、あるいは約５０〜約５００ｍｇである。別の態様では、ＩＶ溶液中のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニスト濃度は、約１００〜約１０００ｍｇ、あるいは約１００〜約８００ｍｇ、あるいは約１００〜約５００ｍｇ、あるいは約２００〜約５００ｍｇ、あるいは約２００〜約４００ｍｇ、あるいは約２００〜約３００ｍｇである。さらに別の態様では、濃度は約２５０ｍｇである。Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを患者の静脈内に迅速に流すために、ＩＶ溶液は、好ましくは、粘性成分（例として、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール（例えば、ポリエチレングリコール４００）が含まれる）を含まない。粘性を実質的に変化させない微量の粘性成分を本開示の静脈内処方物中に含めることができると理解される。１つの特に好ましい実施形態では、ＩＶ溶液の粘度は、好ましくは２０℃で１０ｃＳｔ（センチストーク）未満、より好ましくは２０℃で５ｃＳｔ未満、さらにより好ましくは２０℃で２ｃＳｔ未満である。
【０１５２】
滅菌注射剤を、必要量の本開示の化合物を上に列挙した種々の他の成分と共に適切な溶媒中に組み込み、必要に応じてその後に濾過滅菌することによって調製する。一般に、基剤となる分散媒および上に列挙した成分由来の必要な他の成分を含む滅菌ビヒクルに種々の滅菌有効成分を組み込むことによって分散液を調製する。滅菌注射溶液調製用の滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、その事前に濾過滅菌した溶液から有効成分および任意のさらなる所望の成分の粉末が得られる真空乾燥および凍結乾燥である。
【０１５３】
Ｂ．経口投与
経口投与は、本開示の化合物の別の投与経路である。投与は、カプセルまたは腸溶性コーティング錠剤などを介した投与であり得る。少なくとも１つの本開示の化合物を含む薬学的組成物の作製において、有効成分を、通常、賦形剤によって希釈し、そして／またはカプセル、サシェ、紙、または他の容器の形態であり得るかかるキャリア内に封入する。賦形剤が希釈剤としての機能を果たす場合、賦形剤は、有効成分のビヒクル、キャリア、または媒質として作用する固体、半固体、または液体の材料（上記）であり得る。したがって、組成物は、錠剤、丸薬、粉末、ロゼンジ、サシェ、カシェ、エリキシル、懸濁液、乳濁液、溶液、シロップ、エアロゾル（固体または液体媒質として）、軟膏（例えば、１０重量％までの活性化合物を含む）、軟および硬ゼラチンカプセル、滅菌注射剤、および滅菌包装された粉末の形態であり得る。
【０１５４】
適切な賦形剤のいくつかの例には、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギナート、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、滅菌水、シロップ、およびメチルセルロースが含まれる。処方物は、さらに、以下を含むことができる：滑沢剤（タルク、ステアリン酸マグネシウム、および鉱物油など）；湿潤剤；乳化剤および懸濁剤；防腐剤（安息香酸メチルおよびヒドロキシ安息香酸プロピルなど）；甘味剤；および香味物質。
【０１５５】
本開示の組成物を、当該分野で公知の手順の使用による患者への投与後に有効成分が急速放出、徐放、または遅延放出されるように製剤することができる。経口投与のための放出制御薬物送達系には、ポリマーコーティングしたリザーバまたは薬物−ポリマーマトリックス処方物を含む浸透圧ポンプ系および溶解系が含まれる。制御放出系の例は、米国特許第３，８４５，７７０号；同第４，３２６，５２５号；同第４，９０２５１４号；および同第５，６１６，３４５号に記載されている。本開示の方法で用いる別の処方物は、経皮送達デバイス（「パッチ」）を使用する。かかる経皮パッチを使用して、制御された量の本開示の化合物の連続または不連続注入を提供することができる。医薬品送達のための経皮パッチの構築および使用は当該分野で周知である。例えば、米国特許第５，０２３，２５２号、同第４，９９２，４４５号、および同第５，００１，１３９号を参照のこと。かかるパッチを、医薬品の連続送達、拍動送達、またはオンデマンド型送達のために構築することができる。
【０１５６】
組成物を、好ましくは、単位投薬形態で製剤する。用語「単位投薬形態」は、ヒト被験体および他の哺乳動物に対して単位投薬量として適切な物理的に個別の単位（各単位は適切な薬学的賦形剤と関連させて所望の治療効果が得られるように計算された所定量の活性物質を含む）（例えば、錠剤、カプセル、アンプル）をいう。本開示の化合物は、広範な投薬量範囲にわたって有効であり、一般に、薬学的に有効な量で投与される。
【０１５７】
いくつかの態様では、経口投与について、各投薬単位は、１０ｍｇ〜２ｇ、あるいは、１０〜２００ｍｇ、または約１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、もしくは１６０ｍｇの本開示の化合物を含む。非経口投与について、投薬単位は、１０〜７００ｍｇまたは約５０〜２００ｍｇの本開示の化合物であり得る。しかし、開示の化合物の実際の投与量が、関連する状況（処置すべき状態、選択された投与経路、投与される実際の化合物およびその相対活性、各患者の年齢、体重、および応答、ならびに患者の症状の重症度などが含まれる）の観点から、医師によって決定されると理解されるであろう。
【０１５８】
固体組成物（錠剤など）の調製のために、主要な有効成分を、薬学的賦形剤と混合して、本開示の化合物の均一な混合物を含む固体予備処方組成物を形成する。これらの予備処方組成物を均一という場合、組成物が同様に有効な単位投薬形態（錠剤、丸薬、およびカプセルなど）に容易に細分され得るできるように、有効成分を組成物全体に均一に分散させることを意味する。
【０１５９】
本開示の錠剤または丸薬は、長期作用の利点を付与する投薬形態を提供するかまたは胃内の酸性条件から防御する目的で、コーティングされてもよく、そうでなければ配合されてもよい。例えば、錠剤または丸薬は内部投薬成分および外部投薬成分を含むことができ、後者は前者を覆う被覆物（ｅｎｖｅｌｏｐｅ）の形態である。２つの成分を、胃内での崩壊を阻止して、内部の成分を無変化で十二指腸へと通過させるかまたは放出を遅延させる機能を果たす腸溶性の層によって分離することができる。種々の材料をかかる腸溶性の層またはコーティングのために使用することができ、かかる材料には、多数のポリマー酸、ならびにポリマー酸とシェラック、セチルアルコール、および酢酸セルロースなどの材料との混合物が含まれる。
【０１６０】
Ｃ．吸入およびガス注入
吸入またはガス注入用の組成物には、薬学的に許容され得る水性溶媒もしくは有機溶媒またはそれらの混合物の溶液および懸濁液、ならびに粉末が含まれる。液体または固体の組成物は、上記の適切な薬学的に許容され得る賦形剤を含むことができる。好ましくは、組成物を、局所効果または全身効果を目的として、経口または経鼻の呼吸経路により投与する。好ましく薬学的に許容され得る溶媒中の組成物を、不活性ガスの使用によって噴霧することができる。噴霧溶液を噴霧デバイスから直接吸入することができるか、噴霧デバイスをフェイスマスクテントまたは間欠的陽圧呼吸器に取り付けることができる。溶液、懸濁液、または粉末の組成物を、好ましくは経口または経鼻で、適切な様式で処方物を送達させるデバイスから投与することができる。
【０１６１】
以下の実施例は、本開示の好ましい実施形態を証明するために含まれる。当業者は、以下の実施例に開示の技術が、本開示の実施において十分に機能することが本発明者らによって発見された技術を示し、したがって、その実施のための好ましい様式を構成すると見なすことができると認識すべきである。しかし、当業者は、本開示を考慮して、開示した特定の実施形態において多くの変更をすることができ、本開示の精神および範囲を逸脱することなく依然として同様または類似の結果を得ることができると認識すべきである。
【０１６２】
処方物例１
以下の成分を含む硬ゼラチンカプセルを調製する。
成分                      （ｍｇ／カプセル）
有効成分                      ３０．０
デンプン                    ３０５．０
ステアリン酸マグネシウム        ５．０
上記成分を混合し、硬ゼラチンカプセルに充填する。
【０１６３】
処方物例２
錠剤処方物を、以下の成分を使用して調製する。
成分                      （ｍｇ／錠剤）
有効成分                      ２５．０
セルロース、微結晶性        ２００．０
コロイド状二酸化ケイ素        １０．０
ステアリン酸                    ５．０
成分をブレンドし、圧縮して錠剤を形成する。
【０１６４】
処方物例３
以下の成分を含むドライパウダー吸入器処方物を調製する。
成分              重量％
有効成分            ５
ラクトース        ９５
有効成分をラクトースと混合し、混合物を乾燥粉末吸入器に添加する。
【０１６５】
処方物例４
それぞれ３０ｍｇの有効成分を含む錠剤を以下のように調製する。
成分                            （ｍｇ／錠剤）
有効成分                          ３０．０ｍｇ
デンプン                          ４５．０ｍｇ
微結晶性セルロース                ３５．０ｍｇ
ポリビニルピロリドン
（１０％滅菌水溶液として）          ４．０ｍｇ
カルボキシメチルデンプンナトリウム  ４．５ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム            ０．５ｍｇ
タルク                              １．０ｍｇ
合計                                １２０ｍｇ
有効成分、デンプン、およびセルロースをＮｏ．２０メッシュＵ．Ｓ．篩に通し、完全に混合する。ポリビニルピロリドン溶液を得られた粉末と混合し、次いで、１６メッシュＵ．Ｓ．篩に通す。このようにして生成された顆粒を５０℃〜６０℃で乾燥させ、１６メッシュＵ．Ｓ．篩に通す。次いで、Ｎｏ．３０メッシュＵ．Ｓ．篩に予め通したカルボキシメチルデンプンナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、およびタルクを顆粒に添加し、混合後、錠剤機にて圧縮してそれぞれ１２０ｍｇの錠剤を得る。
【０１６６】
処方物例５
それぞれ２５ｍｇの有効成分を含む坐剤を以下のように作製する。
成分                        量
有効成分                    ２５ｍｇ
飽和脂肪酸グリセリドで２，０００ｍｇにする。
【０１６７】
有効成分をＮｏ．６０メッシュＵ．Ｓ．篩に通し、必要最小限の熱を用いて予め融解した飽和脂肪酸グリセリド中に懸濁させる。次いで、混合物を、名目上の容量が２．０ｇの坐剤型に注ぎ、冷却する。
【０１６８】
処方物例６
それぞれ５．０ｍＬの用量あたり５０ｍｇの有効成分を含む懸濁液を以下のように作製する。
成分                                            量
有効成分                                        ５０．０ｍｇ
キサンタンガム                                    ４．０ｍｇ
カルボキシメチルセルロースナトリウム（１１％）
微結晶性セルロース（８９％）                    ５０．０ｍｇ
スクロース                                        １．７５ｇ
安息香酸ナトリウム                              １０．０ｍｇ
フレーバーおよび着色料                            任意量
精製水で５．０ｍＬにする。
【０１６９】
有効成分、スクロース、およびキサンタンガムをブレンドし、Ｎｏ．１０メッシュＵ．Ｓ．篩に通し、次いで、予め作製しておいた微結晶性セルロースおよびカルボキシメチルセルロースナトリウムの水溶液と混合する。安息香酸ナトリウム、フレーバー、および色素をいくらかの水で希釈し、撹拌しながら添加する。次いで、十分量の水を添加して必要な体積にする。
【０１７０】
処方物例７
皮下処方物を、以下のように調製することができる。
成分                    量
有効成分                ５．０ｍｇ
トウモロコシ油          １．０ｍＬ。
【０１７１】
処方物例８
以下の組成を有する注射調製物を調製する。
成分                          量
有効成分                      ２．０ｍｇ／ｍＬ
マンニトール、ＵＳＰ          ５０ｍｇ／ｍＬ
グルコン酸、ＵＳＰ            適量（ｐＨ５〜６）
水（蒸留、滅菌）              １．０ｍＬまで適量
窒素ガス、ＮＦ                適量。
【０１７２】
処方物例９
以下の組成を有する局所調製物を調製する。
成分                                    グラム
有効成分                                ０．２〜１０
Ｓｐａｎ  ６０                          ２．０
Ｔｗｅｅｎ  ６０                        ２．０
鉱物油                                  ５．０
ワセリン                                ０．１０
メチルパラベン                          ０．１５
プロピルパラベン                        ０．０５
ＢＨＡ（ブチル化ヒドロキシアニソール）  ０．０１
水                                      １００まで適量
水以外の上記の全成分を合わせ、撹拌しながら６０℃に加熱する。次いで、６０℃の十分量の水を強く撹拌しながら添加して成分を乳化し、次いで、水を１００ｇまで適量を添加する。
【実施例】
【０１７３】
本開示を、以下の実施例を参照してさらに定義する。筋道および方法の両方に対する多数の修正形態を本開示の範囲から逸脱することなく実施することができることが当業者に明らかであろう。
【０１７４】
略語
別段に記述しない限りは、全温度を摂氏（℃）で示す。また、これらの実施例およびその他の場所において、略語は以下の意味を有する。
【表Ｂ】
2014510150.tif 000014
【０１７５】
方法論および試薬
細胞および試薬
化合物Ａを、Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）によって米国特許第６，８２５，３４９号に示されるように合成した。他の化学物質を、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ）から入手した。
【０１７６】
リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ
リアルタイムＲＴ−ＰＣＲを、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ  ＰＣＲ装置（Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用して公開されているように行った。Ｚｈｏｎｇ  Ｈ．ら，“Ａ２Ｂ  Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎｃｒｅａｓｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｂｙ  ｂｒｏｎｃｈｉａｌ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌｓ，”  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３０（１）：１１８−１２５（２００４）。
【０１７７】
実施例１：アデノシン受容体アッセイ
Ａ２Ｂ受容体アンタゴニストをスクリーニングするために、以下の２種類のアッセイを典型的には使用する。１）所与の化合物が下記のＡ２Ｂ受容体に結合することができることを決定するための放射性リガンド結合アッセイ、および２）化合物がアゴニスト（受容体を活性化する）またはアンタゴニスト（受容体の活性化を阻害する）のいずれであるかを決定するための機能アッセイ（ｃＡＭＰアッセイなど）。
【０１７８】
Ａ２Ｂアデノシン受容体についての放射性リガンド結合アッセイを使用して、Ａ２Ｂアデノシン受容体に対する化合物の親和性を決定する。一方、他のアデノシン受容体についての放射性リガンド結合アッセイを、Ａ１、Ａ２Ａ、およびＡ３アデノシン受容体に対する化合物の親和性を決定するために行う。化合物は、Ａ２Ｂ受容体に対する親和性が他のアデノシン受容体より高いはずである（少なくとも３倍）。
【０１７９】
Ａ２Ｂ受容体についてのｃＡＭＰアッセイをしばしば使用して、化合物がアンタゴニストであり、ｃＡＭＰのＡ２Ｂ受容体媒介性の増加を遮断することを確認する。
【０１８０】
Ａ２Ｂアデノシン受容体の放射性リガンド結合
Ａ２Ｂ受容体の推定アンタゴニストである化合物を、以下のアッセイに基づいて不可欠な活性についてスクリーニングすることができる。ヒトＡ２Ｂアデノシン受容体ｃＤＮＡを、ＨＥＫ−２９３細胞内に安定にトランスフェクトする（ＨＥＫ−Ａ２Ｂ細胞という）。ＨＥＫ−Ａ２Ｂ細胞の単層をＰＢＳで１回洗浄し、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、およびプロテアーゼインヒビターを含む緩衝液中に回収する。これらの細胞をポリトロンにおいて設定４にて１分間ホモジナイズし、２９０００ｇにて４℃で１５分間遠心分離した。細胞ペレットを、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、およびプロテアーゼインヒビターを含む緩衝液で１回洗浄し、１０％スクロースを補足した同一の緩衝液に再懸濁させる。凍結させたアリコートを−８０℃で維持する。競合アッセイを、１０ｎＭ  ３Ｈ−ＺＭ２４１３８５（Ｔｏｃｒｉｓ  Ｃｏｏｋｓｏｎ）を、１単位／ｍＬのアデノシンデアミナーゼを補足したＴＥ緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓおよび１ｍＭ  ＥＤＴＡ）中の種々の濃度の試験化合物および５０μｇの膜タンパク質と混合することによって開始する。アッセイを９０分間インキュベートし、Ｐａｃｋａｒｄ  Ｈａｒｖｅｓｔｅｒを使用した濾過によって停止させ、氷冷ＴＭ緩衝液（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、ｐＨ７．４）で４回洗浄する。非特異的結合を、１０μＭ  ＺＭ２４１３８５の存在下で決定する。化合物の親和性（すなわち、Ｋｉ値）を、ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェアを使用して計算する。
【０１８１】
他のアデノシン受容体の放射性リガンド結合
ヒトＡ１、Ａ２Ａ、Ａ３アデノシン受容体ｃＤＮＡを、ＣＨＯ細胞またはＨＥＫ−２９３細胞のいずれかに安定にトランスフェクトする（ＣＨＯ−Ａ１、ＨＥＫ−Ａ２Ａ、ＣＨＯ−Ａ３という）。膜を、上記と同一のプロトコールを使用してこれらの細胞から調製する。競合アッセイを、０．５ｎＭ  ３Ｈ−ＣＰＸ（ＣＨＯ−Ａ１について）、２ｎＭ  ３Ｈ−ＺＭ２４１３８５（ＨＥＫ−Ａ２Ａ）、または０．１ｎＭ  １２５Ｉ−ＡＢ−ＭＥＣＡ（ＣＨＯ−Ａ３）を、１単位／ｍＬのアデノシンデアミナーゼを補足したＴＥ緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓおよび１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ＣＨＯ−Ａ１およびＨＥＫ−Ａ２Ａ用）またはＴＥＭ緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、および１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、ＣＨＯ−Ａ３用）中の種々の濃度の試験化合物およびパースペクティブメンブレンと混合することによって開始する。アッセイを９０分間インキュベートし、Ｐａｃｋａｒｄ  Ｈａｒｖｅｓｔｅｒを使用した濾過によって停止させ、氷冷ＴＭ緩衝液（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、ｐＨ７．４）で４回洗浄した。非特異的結合を、１μＭ  ＣＰＸ（ＣＨＯ−Ａ１）、１μＭ  ＺＭ２１４３８５（ＨＥＫ−Ａ２Ａ）、および１μＭ  ＩＢ−ＭＥＣＡ（ＣＨＯ−Ａ３）の存在下で決定する。化合物の親和性（すなわち、Ｋｉ値）を、ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェアを使用して計算する。
【０１８２】
ｃＡＭＰ測定
トランスフェクトした細胞の単層を、５ｍＭ  ＥＤＴＡ含有ＰＢＳ中に回収する。細胞をＤＭＥＭで１回洗浄し、１単位／ｍＬのアデノシンデアミナーゼを含むＤＭＥＭに、１００，０００〜５００，０００細胞／ｍＬの密度で再懸濁させる。１００μＬの細胞懸濁液を、種々のアゴニストおよび／またはアンタゴニストを含む２５μＬと混合し、反応物を、３７℃で１５分間維持した。１５分後、１２５μＬの０．２Ｎ  ＨＣｌを添加して、反応を停止させる。細胞を、１０００ｒｐｍで１０分間遠心分離する。１００μＬの上清を取り出し、アセチル化する。上清中のｃＡＭＰ濃度を、Ａｓｓａｙ  Ｄｅｓｉｇｎの直接ｃＡＭＰアッセイを使用して測定する。
【０１８３】
Ａ２ＡおよびＡ２Ｂアデノシン受容体はＧｓタンパク質とカップリングし、したがって、Ａ２Ａアデノシン受容体のアゴニスト（ＣＧＳ２１６８０など）またはＡ２Ｂアデノシン受容体のアゴニスト（ＮＥＣＡなど）がｃＡＭＰ蓄積を増大させるのに対して、これらの受容体のアンタゴニストがアゴニストによって誘発されたｃＡＭＰ蓄積の増加を防止する。Ａ１およびＡ３アデノシン受容体がＧｉタンパク質とカップリングし、したがって、Ａ１アデノシン受容体のアゴニスト（ＣＰＡなど）またはＡ３アデノシン受容体のアゴニスト（ＩＢ−ＭＥＣＡなど）がフォルスコリンによって誘発されたｃＡＭＰ蓄積の増加を抑制する。Ａ１受容体およびＡ３受容体のアンタゴニストは、ｃＡＭＰ蓄積の抑制を防止する。
【０１８４】
上記アッセイプロトコールに基づいて化合物がＡ２Ｂ受容体のアンタゴニストであるかどうかを決定することは、当業者の範囲内である。他のアデノシン受容体に対するＡ２Ｂ受容体の３倍選択性、特定の場合には１０倍選択性により、化合物を選択的Ａ２Ｂ受容体アンタゴニストと見なすことができる。
【０１８５】
実施例２：Ａ２Ｂアデノシン受容体が心臓線維症バイオマーカーを弱めた
本実施例は、Ａ２Ｂアデノシン受容体（ＡｄｏＲ）が初代ヒト心臓線維芽細胞（ＨＣＦ）において発現するＡｄｏＲの主なサブタイプであることを証明し、Ａ２ＢＡｄｏＲが心疾患における線維化反応を媒介することを示唆する。したがって、Ａ２ＢＡｄｏＲアンタゴニストを使用して、心臓線維症を処置することができる。
【０１８６】
ＡｄｏＲ、α−平滑筋アクチン、およびα−１プロコラーゲンの発現を、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲを使用して決定した。ＥＬＩＳＡを使用して細胞上清中のＩＬ−６、可溶性ＳＴ−２、およびＰＡＰＰＡ（妊娠関連血漿タンパク質Ａ）の濃度を測定し、可溶性コラーゲン濃度を、Ｓｉｒｃｏｌ（商標）コラーゲンアッセイを使用して決定した。
【０１８７】
４つのＡｄｏＲサブタイプのうち、Ａ２ＢＡｄｏＲが、ＨＣＦにおいて最高レベルで発現した。Ｎ−エチルカルボキサミドアデノシン（ＮＥＣＡ）（アデノシンの安定なアナログ）は、濃度依存様式でＩＬ−６の放出を有意に増加させ、最大増加は基礎レベルの２．４±０．１倍であった。さらに、ＮＥＣＡ（１０μＭ）は、ＨＣＦ由来のα−平滑筋アクチンおよびα−１プロコラーゲンの発現ならびにコラーゲン産生（１．８±０．１倍誘発、３．４±０．２〜６．０±０．４μｇ／ｍＬ、ｐ＜０．０５）を増加させた。さらに、ＮＥＣＡは、心血管疾患（ＣＶＤ）の２つの新規のバイオマーカーである可溶性ＳＴ−２（１．７±０．１倍誘発、１．５±０．１〜２．６±０．１ｎｇ／ｍＬ、ｐ＜０．０５）およびＰＡＰＰＡ（４．４±０．６倍誘発、１．４±０．５〜６．２±０．８ｎｇ／ｍＬ、ｐ＜０．０５）の放出を増加させた。ＩＬ−６、コラーゲン、ＳＴ−２、およびＰＡＰＰＡの放出ならびにα−平滑筋アクチンおよびα−１プロコラーゲンの発現に及ぼすＮＥＣＡの影響は、選択的Ａ２ＢＡｄｏＲアンタゴニストである化合物Ａによって完全に消失した（図１Ａ−Ｄ）。
【０１８８】
したがって、本実施例は、Ａ２ＢＡｄｏＲが初代ヒトＨＣＦにおいて発現したＡｄｏＲの主なサブタイプであり、この受容体の活性化がＩＬ−６放出およびコラーゲン産生、線維症マーカーの発現およびＣＶＤのバイオマーカーの放出を増加させることを示す。これらの所見は、Ａ２ＢＡｄｏＲが心疾患における線維化反応を媒介し得ることを示唆している。したがって、Ａ２ＢＡｄｏＲアンタゴニストを使用して、Ａ２ＢＡｄｏＲの活性化の抑制によって心臓線維症を処置することができる。
【０１８９】
実施例３：Ａ２Ｂアンタゴニストは心臓リモデリングを回復させる
本実施例は、アデノシンＡ２Ｂ受容体の選択的遮断がマウスにおける急性心筋梗塞後の心臓リモデリングを回復させることができることを証明する。アデノシンは、組織傷害に応答して放出され、充血および炎症を促進する。Ａ２Ｂ受容体を介したアデノシンの炎症誘発性の影響は、さらなる組織損傷を誘発する。本実施例は、急性心筋梗塞中のＡ２Ｂ受容体の選択的遮断がより好ましい心臓リモデリングを誘発するかどうかを試験する。
【０１９０】
雄ＩＣＲマウスに冠状動脈結紮または偽手術を行った（Ｎ＝８〜１０／群）。製剤した投与用懸濁液中の選択的Ａ２Ｂアンタゴニストである化合物Ａ（４ｍｇ／ｋｇ）を、手術直後から１２時間毎にｉ．ｐ．で投与し、１４日間持続した。経胸壁超音波心エコー検査を、手術前ならびに７、１４、および２８日後に行った。手術から７２時間後に亜群のマウスを屠殺し、心臓組織中のカスパーゼ−１（重要な炎症誘発性メディエーター）の活性を測定した。
【０１９１】
全偽手術マウスは４週間の時点で生存していたのに対して、４２％のビヒクル処置マウスおよび２５％の化合物Ａ処置マウスが術後４週の間に死亡した。化合物Ａでの処置は、ビヒクルと比較して、カスパーゼ−１活性、拡張末期径、および心筋作用指数を有意に減少させ、ＬＶ駆出分画を増加させた（図２）。
【０１９２】
したがって、本実施例は、選択的Ａ２Ｂアンタゴニストである化合物ＡでのアデノシンＡ２Ｂ受容体の選択的遮断が、心臓におけるカスパーゼ−１活性化を制限し、マウスにおいて急性心筋梗塞後により好ましく心臓リモデリングされることを証明している。
【０１９３】
実施例４：Ａ２Ｂアンタゴニストは、急性心筋梗塞後の心臓リモデリングを弱める。
【０１９４】
本実施例は、ｉｎ  ｖｉｖｏマウスモデルを使用して、アンタゴニストでのＡ２ＢＡｄｏＲの選択的遮断によって心臓におけるカスパーゼ−１活性が減少し、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）後により好ましく心臓リモデリングされることを証明する。
【０１９５】
方法
実験ＡＭＩモデル
成体非近交系雄ＣＤ１マウス（８〜１２週齢）は、Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）から供給された。本実験を、国立衛生研究所発行の生物医学的研究のための実験動物のガイドライン（Ｎｏ．８５−２３、１９９６年改定）の下で行った。研究プロトコールは、バージニアコモンウェルス大学動物実験委員会（ｔｈｅ  Ｖｉｒｇｉｎｉａ  Ｃｏｍｍｏｎｗｅａｌｔｈ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）によって承認された。およそ３０％の左心室を含む巨大な非再灌流梗塞を誘発するための持続的冠状動脈結紮によって実験ＡＭＩを誘発し、それによって虚血性拡張型心筋症が誘発された（Ｍｅｚｚａｒｏｍａら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ２０１１（印刷中）およびＡｂｂａｔｅら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００８；１１７：２６７０−８３）。簡潔に述べれば、麻酔下で（ペントバルビタール５０〜７０ｍｇ／ｋｇ）マウスの経口気管内に挿管し、右側面位に置き、次いで、左開胸、心膜切除、および近位左冠状動脈結紮に供した。胸部を縫合し、動物を回復させた。マウス生存手術を、異なる処置群に無作為に割り当てた（Ｎ＝６〜１５／群）。冠状動脈結紮を使用しない同一の外科的処置を動物に実施する偽手術を行った（Ｎ＝４〜８／群）。研究プロトコールのタイムラインを図３に示す。
【０１９６】
処置
Ａ２ＢＡｄｏＲアンタゴニストである化合物Ａを、Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）から入手した。冠状動脈結紮術直後から１２時間毎に１４日間にわたって化合物Ａ（４ｍｇ／ｋｇ）または一致させた用量のビヒクルを腹腔内投与する処置（最終体積０．１３ｍＬ）にマウスをランダムに割りつけた。用量−応答関係を調査するために、さらなるマウス群に、より低用量の化合物Ａ（２ｍｇ／ｋｇ）を投与した。処置遅延の臨床シナリオをシミュレートするために、さらなる２つのマウス群に術後１時間から化合物Ａ（４ｍｇ／ｋｇ）の投与を開始した。さらなるマウス群をさらなるコントロールとして０．１３ｍＬのＮａＣｌ（０．９％）で処置したが、ビヒクル処置のデータがＮａＣｌ処置のデータと有意に異ならなかったので、ビヒクル処置の結果のみを本実施例に含めている。ＡＭＩ後にいくらか遅れて薬物処置を行い得る臨床的に関連するシナリオをシミュレートするために、本実施例は、遅延無しの化合物Ａでの処置を、Ａ２ＢＡｄｏＲアンタゴニストを１時間遅れで投与した群と比較した。
【０１９７】
カスパーゼ−１活性化
マウスのさらなるサブセットを、術後７２時間で屠殺した（Ｎ＝４〜６／処置群）。上記のように心臓を取り出した。カスパーゼ−１の組織活性を、蛍光発生基質（ＣａｓｐＡＣＥ，Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）の切断によって決定した（Ａｂｂａｔｅら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００８；１１７：２６７０−８３）。プロテアーゼインヒビターのカクテル（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を含むＲＩＰＡ緩衝液（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用した均質化後に１６，０００ｒｐｍで２０分間遠心分離し、各サンプル由来の７５μｇのタンパク質を、供給者の説明書に従ってアッセイのために使用した。６０分後に蛍光を測定し、１分あたりの１マイクログラムのサンプルによって生成された任意の蛍光単位（蛍光／μｇ／分）として示し、偽手術マウスの心臓のホモジネート中のカスパーゼ−１活性と比較した変化倍率として計算した。
【０１９８】
炎症性浸潤
ＡＭＩ中の心臓における炎症性浸潤の定量化のために、本実施例は、ウェスタンブロットを使用して心臓内のＣＤ４５の発現（白血球のマーカー）を測定した。ＡＭＩの７２時間後に収集した心臓を、プロテアーゼインヒビターカクテル（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を補足したＲｉｐａ緩衝液（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）中でホモジナイズし、１６，２００×ｇで２０分間遠心分離した。３０マイクログラムの各サンプルを、Ｌａｅｍｍｌｉ緩衝液で希釈し、９６℃で１０分間変性させ、８％アクリルアミドゲルを使用したＳＤＳ／ＰＡＧＥを使用した分離によってタンパク質を分離した。タンパク質を、ニトロセルロース膜上に移した。５％ミルクを含むリン酸緩衝化生理食塩水での飽和後、膜を、ＣＤ４５に対して惹起したラット抗マウス抗体（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）とインキュベートした。タンパク質負荷を標準化するために、ｂ−アクチンに対するモノクローナル抗体（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用した。増強化学発光（ＥＣＬ）アッセイおよびオートラジオグラフィを使用して、ＣＤ４５およびｂ−アクチンに対応するバンドを検出した。バンド強度を、Ｓｃｉｏｎ  Ｉｍａｇｅソフトウェアを使用した濃度測定分析によって決定し、結果をコントロール偽サンプルと比較した強度の増加率として示した。
【０１９９】
サイトカインおよび可溶性接着分子の循環レベルの測定
ＩＬ−１βならびにインターロイキン−１（ＩＬ−６）、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、および可溶性接着分子（Ｅ−セレクチン、細胞間接着分子−１  ［ＩＣＡＭ−１］、および血管細胞接着分子  ［ＶＣＡＭ］）（ＩＬ−１βによって誘発される）の血漿濃度を、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）から入手したＬｕｍｉｎｅｘキットを製造者の説明書に従って使用して術後２８日目に決定した。血液サンプルを、動物の屠殺直前に直接的な心穿刺によって得た。
【０２００】
超音波心エコー検査
ベースライン（術前）および術後７、１４、および２８日目（屠殺前）に全マウスに経胸壁超音波心エコー検査を受けさせた。超音波心エコー検査を、３０ＭＨｚプローブを備えたＶｅｖｏ７７０画像化システム（ＶｉｓｕａｌＳｏｎｉｃｓ  Ｉｎｃ，Ｔｏｒｏｎｔｏ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）を使用して行った。心臓を、Ｂモードで傍胸骨短軸像および心尖部像から視覚化した。本実施例は、Ｂモードで左室（ＬＶ）拡張末期領域および収縮末期領域を測定し、ＭモードでＬＶ拡張末期径（ＬＶＥＤＤ）、ＬＶ収縮末期径（ＬＶＥＳＤ）、ＬＶ前壁の拡張期の厚さ（ＬＶＡＷＤＴ）、および左室後壁の拡張期の厚さ（ＬＶＰＷＤＴ）を、以前に記載のように（Ａｂｂａｔｅら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００８；１１７：２６７０−８３；Ｔｏｌｄｏら、ＰｌｏＳ  Ｏｎｅ  ２０１１；６：ｅ１８１０２）、かつ米国心エコー図学会の推奨（Ｇａｒｄｉｎら、Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｅｃｈｏｃａｒｄｉｏｇｒ  ２００２；１５：２７２−９０）にしたがって測定した。ＬＶ内径短縮率（ＦＳ）、ＬＶ駆出分画（ＥＦ）、ＬＶ体積、および偏心性（ＬＶＥＤＤ／ＬＶＰＷＤＴ比）を計算した（Ａｂｂａｔｅら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００８；１１７：２６７０−８３；Ｔｏｌｄｏら、ＰｌｏＳ  Ｏｎｅ  ２０１１；６：ｅ１８１０２；Ｇａｒｄｉｎら、Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｅｃｈｏｃａｒｄｉｏｇｒ  ２００２；１５：２７２−９０）。経僧帽弁および左室流出路のドップラースペクトルを心尖部四腔断面から記録し、心筋作用指数（ＭＰＩまたはＴｅｉ指数）を、等容性収縮および緩和時間を駆出時間で除した比として計算した（Ｔｅｉら、Ａｍ  Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｌ  １９９５；２６：３５７−３６６）。ＬＶ一回拍出量をＬＶ流出路流の速度時間積分値（ＶＴＩ）×ＬＶ流出路面積を使用して計算し、心拍出量をＬＶ一回拍出量×心拍数で計算した（Ａｂｂａｔｅら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００８；１１７：２６７０−８３；Ｔｏｌｄｏら、ＰｌｏＳ  Ｏｎｅ  ２０１１；６：ｅ１８１０２；Ｇａｒｄｉｎら、Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｅｃｈｏｃａｒｄｉｏｇｒ  ２００２；１５：２７２−９０）。右室（ＲＶ）拡大を傍胸骨短軸像心室中部断面のＲＶ拡張末期領域の測定によって評価し、ＲＶ収縮機能を、Ｍモードを使用し、三尖弁輪収縮期移動距離（ＴＡＰＳＥ）を測定して評価した（Ｔｏｌｄｏら、ＰｌｏＳ  Ｏｎｅ  ２０１１；６：ｅ１８１０２；Ｇａｒｄｉｎら、Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｅｃｈｏｃａｒｄｉｏｇｒ  ２００２；１５：２７２−９０）。心エコー図を実施して読み取る研究者に処置割り付けが分からないようにした。
【０２０１】
梗塞サイズの評価
２８日目の心エコー図の後、全マウスを、ペントバルビタールの過量投与および／または頸椎脱臼により屠殺した。心臓を外植し、１０％ホルマリン中にて少なくとも４８時間固定した。心臓の正中線の３分の１の横断面を切開し、パラフィン中に入れ、５μｍ切片に切断し、マッソン三色染料（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）で染色した（Ａｂｂａｔｅら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００８；１１７：２６７０−８３）。線維症領域および左心室全体を、Ｉｍａｇｅ  Ｐｒｏ  Ｐｌｕｓ  ６．０ソフトウェアを使用したコンピュータ形態計測を使用して決定した。
【０２０２】
血行動態的測定
マウス亜群（Ｎ＝４／群）において、ＬＶ心尖部を手術１時間後に穿刺し、圧トランスデューサーに取り付けたＭｉｌｌａｒカテーテルを挿入して、ＬＶ最大収縮期圧および心拍数を測定した（Ｔｏｌｄｏら、ＰｌｏＳ  Ｏｎｅ  ２０１１；６：ｅ１８１０２）。
【０２０３】
統計解析
群間の相違を、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）およびその後のボンフェローニ検定を使用して解析した。心エコー図データの反復測定の変化を反復測定のための変量効果のあるＡＮＯＶＡを使用して解析し、時間、群、および時間と群の交互作用の主な効果を決定した。生存解析を、カプランマイヤー生存曲線の作成およびロジスティック回帰分析の使用によって行った。ＳＰＳＳ  １５．０  ｐａｃｋａｇｅ  ｆｏｒ  Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）（ＳＰＳＳ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）を使用して計算を完了した。
【０２０４】
結果
Ａ２ＢＡｄｏＲ拮抗作用は急性心筋梗塞中に血行動態学的効果がなかった。
【０２０５】
Ａｄｏは血管拡張剤であるので、リモデリングの相違がＡ２ＢＡｄｏＲ拮抗作用に続く血行動態学的変化に起因していたことを排除するために、本実施例では、Ａ２ＢＡｄｏＲアンタゴニストである化合物Ａで処置したマウスおよびビヒクル処置したマウスにおける左心最大収縮期圧（ＬＶＰＳＰ）および心拍数（ＨＲ）を測定した。ＬＶＰＳＰは、冠状動脈結紮の１時間後に有意に減少したが、処置による影響を受けなかった（表１）。
【０２０６】
【表１】
2014510150.tif 000015
手術１時間後に血行動態データを記録した。
略語：Ａ２ＢＡｄｏＲ＝アデノシンＡ２Ｂ受容体；ＨＲ＝心拍数；ＬＶ＝左心室；ＬＶＳＰ＝最大ＬＶ収縮期圧；ＭＩ＝心筋梗塞
＊Ｐ＜０．００１対偽手術。
【０２０７】
Ａ２ＢＡｄｏＲ拮抗作用はカスパーゼ−１活性化および炎症を抑制する。
【０２０８】
カスパーゼ−１活性化は、虚血性傷害に応答する重要な炎症誘発機構の一部である。化合物Ａでの処置により、ＡＭＩ中の心臓でカスパーゼ−１活性化が防止された（図４）。ウェスタンブロットでのＣＤ４５発現として測定した白血球（ＣＤ４５＋）浸潤の強度はまた、ＡＭＩの７２時間後の化合物Ａでの処置によって有意に減少した（図４）。カスパーゼ−１活性化により、活性ＩＬ−１β（通常は非常に低い組織濃度で存在し、二次サイトカインおよび接着分子の発現の誘発によって炎症反応を急速に増幅させる）がプロセシングおよび放出される。ＩＬ−１βの血漿レベルは２匹のＡＭＩマウス以外は検出不可能であったのに対して、二次サイトカイン（すなわち、ＩＬ−６）の血漿レベルはＡＭＩ手術の２８日後に増加した（図５）。化合物Ａでの処置により、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、Ｅ−セレクチン、ＩＣＡＭ−１、およびＶＣＡＭの血漿レベルが有意に減少した（図５）。
【０２０９】
冠状動脈結紮術後の生存に及ぼすＡ２ＢＡｄｏＲ拮抗作用の影響
偽手術マウスは死亡しなかった。ビヒクル処置マウスの半分（５０％）は冠状動脈結紮術の２８日後に生存していたのに対して（Ｐ＜０．００１対偽手術）、７５％の化合物Ａ処置マウスは生存していた（Ｐ＝０．１４）。
【０２１０】
心臓リモデリングに及ぼすＡ２ＢＡｄｏＲ拮抗作用の影響
心臓リモデリングを、経胸壁超音波心エコー検査を使用して非侵襲的に測定した。ＢモードおよびＭモードでの記録例を図６に示す。手術時から開始した１２時間毎の化合物Ａの投与により、７日目に左室拡大および右室拡大および機能障害が有意に弱化され、この弱化が１４日目まで持続し、２８日目（最後の投薬の１４日後）でさえ持続した（図７）。２８日目に、ＡＭＩ後のＬＶ拡大は、化合物Ａによっておよそ４０％減少した。ＬＶ収縮機能はまた、化合物Ａ群で有意により高かった（平均ＬＶＥＦの絶対差５％）。心臓リモデリングの弱化は、心筋拡張／収縮機能（心筋作用指数）の維持と類似していた（図７Ａ〜Ｆ）。化合物Ａで処置したマウス心臓は、右室の拡大および機能障害の軽減も示した（図７Ａ〜Ｆ）。
【０２１１】
心筋虚血およびそれに伴う細胞傷害は、無菌性炎症応答を誘発する細胞内容物を放出させ、それにより、さらなる機能障害および心不全が促進されることが公知である。本研究は、Ａ２ＢＡｄｏＲに結合するＡｄｏの阻害によって炎症応答が制限され、より好ましい心臓リモデリングが得られることを最初に示す。
【０２１２】
Ａｄｏは組織の低酸素症中および虚血中に実際に迅速に放出され、偏在性特異的Ｇタンパク質共役受容体（ＡｄｏＲ）に迅速に結合する。ＡｄｏＲには４つのサブタイプが存在する。これらは以下である。Ａ１ＡｄｏＲはほとんどが心臓内で発現し、電気伝導を調節する。Ａ３ＡｄｏＲはげっ歯類肥満細胞内で発現し、マウスにおいて活性化および脱顆粒を調節する。それに対して、Ａ２ＡＡｄｏＲおよびＡ２ＢＡｄｏＲは血管緊張および炎症に関連している。Ａ２ＡＡｄｏＲは、種々の細胞型（内皮細胞、白血球、および心筋細胞が含まれる）の膜上に発現する高親和性ＡｄｏＲである。Ａ２ＢＡｄｏＲは、Ａ２ＡＡｄｏＲを発現する同一の細胞中で時折同時発現するが少数であり、したがって、少なくとも非ストレス条件にてこれらの細胞中でＡｄｏシグナル伝達に最小限度で関連していると考えられる低親和性受容体である。Ａ２ＡＡｄｏＲおよびＡ２ＢＡｄｏＲのＧタンパク質共役受容体の両方がアデニルシクラーゼを介してシグナル伝達することができる一方で、Ａ２ＢＡｄｏＲはまた、ホスホリパーゼＣおよび小ＧＴＰ結合タンパク質ｐ２１ｒａｓ（ｐ３８マイトジェン活性化ホスホキナーゼ（ＭＡＰＫ）および細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）に関与する炎症シグナル伝達に関与する）を介してシグナル伝達する。重要なことに、Ａ２ＢＡｄｏＲの発現は低酸素誘導転写因子−α（ＨＩＦ−α）の安定化に依存し、それ故に、低酸素症および炎症に対する感受性が高い。
【０２１３】
したがって、非ストレス条件でのＡ２ＢＡｄｏＲを介したＡｄｏシグナル伝達は有意である可能性が低い一方で、組織傷害の状況下で、Ａ２ＢＡｄｏＲは有意な役割を果たし得る。
【０２１４】
本実施例は、化合物Ａを使用するＡ２ＢＡｄｏＲの選択的遮断により、梗塞中の炎症応答を鈍らせることを示し、これは、ＡＭＩから２８日目のカスパーゼ−１活性のほぼ完全な減少、および一連のＡＭＩの初期の浸潤炎症細胞の有意な減少、および血漿サイトカインおよび接着分子の有意な減少によって示される通りである。カスパーゼ−１は、インフラマソーム（「危険」センサーとして機能する高分子構造）の酵素活性成分であり、成熟ＩＬ−１βのプロセシングおよび細胞死に関与する。心臓内でのインフラマソームの形成およびカスパーゼ−１の活性化によって心不全を引き起こす。Ａ２ＢＡｄｏＲの選択的遮断を使用した心臓内のカスパーゼ−１活性の有意な減少は、Ａ２ＢＡｄｏＲの炎症促進性シグナル伝達と一致する。しかし、心筋虚血におけるＡ２ＢＡｄｏＲの役割には議論の余地がある。虚血／再灌流に起因する急性心筋損傷モデルでは、Ａｄｏは、一貫して有利な虚血プレコンディショニング効果を再生する。Ａ２ＢＡｄｏＲを介したシグナル伝達が破壊された場合にＡｄｏのプレコンディショニング様効果が消失する。しかし、虚血プレコンディショニングの非存在下でのＡ２ＢＡｄｏＲの遮断は、かかるモデルにおいて心臓に影響を及ぼさなかった。これは、Ａ２ＢＡｄｏＲがプレコンディショニングのいくつかの態様を媒介することができる一方で、Ａ２ＢＡｄｏＲシグナル伝達が本来防御的でなく、プレコンディショニングの唯一のメディエーターである可能性が低いことを示唆している。
【０２１５】
巨大な非再灌流心筋梗塞のこのマウスモデルでは、Ａ２ＢＡｄｏＲ拮抗作用は、左室拡大ならびに収縮期および拡張期の機能障害を有意に制限した。Ａ２ＢＡｄｏＲの防御効果は、梗塞サイズに及ぼす影響と無関係であった。これは、ラットの非再灌流心筋梗塞において、アデノシンが梗塞サイズに影響を及ぼさなかったことを示す。
【０２１６】
この非再灌流心筋梗塞モデルでは、心臓リモデリングは大域的であり、梗塞領域および境界領域ならびに罹患していない遠位の左心室および右心室を含む。Ａ２ＢＡｄｏＲの遮断は梗塞サイズに影響を及ぼさないようであったのに対して、Ａ２ＢＡｄｏＲ遮断は境界領域および遠位心筋（左室および右室の寸法の改善によって証明される）ならびに重要にはＬＶ機能を防御するようであった。
【０２１７】
心臓内のカスパーゼ−１活性の減少およびより好ましい心臓リモデリングの所見により、心筋虚血に対する心筋応答におけるカスパーゼ−１の中心的役割が確認される。マウス心臓内でのカスパーゼ−１の過剰発現により、より広い領域の虚血性損傷、より重篤な心臓拡大、およびＡＭＩ後の生存率の低下をもたらすのに対して、カスパーゼ−１欠損マウスはＡＭＩ後に防御される。
【０２１８】
これらのデータは、心筋虚血後の梗塞治癒において、Ａ２ＢＡｄｏＲが炎症促進性の有害な役割を有することを示唆している。
【０２１９】
結論として、虚血発症後に投与した化合物ＡでのＡ２ＢＡｄｏＲの選択的遮断により、非再灌流心筋梗塞マウスモデルにおいて心臓内のカスパーゼ−１活性が減少し、ＡＭＩ後により好ましい心臓リモデリングがもたらされる。
【０２２０】
実施例５：心筋梗塞マウスモデルにおける化合物Ａの影響
Ａ２Ｂアンタゴニストである化合物Ａ（３ｍｇ／ｋｇ／日または１０ｍｇ／ｋｇ／日）を、６週齢のｏｂ／ｏｂモデルマウスに２８日間投与した。２８日間の投与後、多数の炎症バイオマーカー（ＭＣＰ−１、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−２、およびＩＬ−６）の発現を、これらのマウスにおいてコントロール（ビヒクル）と比較して測定した。
【０２２１】
図８Ａ〜Ｄに示すように、４つ全ての炎症バイオマーカーの発現が減少した。そのうちの２つ（ＭＣＰ−１およびＩＬ−１ｂ）について、１０ｍｇ／ｋｇ／日群の減少が統計的に有意であった。これらのデータは、Ａ２Ｂアンタゴニストである化合物Ａが処置動物において炎症を抑制することを証明している。
【０２２２】
心筋梗塞のマウスモデルにおける化合物Ａの影響も決定した。雄マウスを、持続的冠状動脈結紮または偽手術に供した。化合物Ａ（４ｍｇ／ｋｇ）を、手術の直後または１時間後から１日２回ｉ．ｐ．投与し、投与を１４日間継続した。ＬＶ拡張末期径／収縮末期径（ＬＶＥＤＤまたはＬＶＥＳＤ）、ＲＶ拡張末期領域（ＲＶＥＤＡ）、および心筋作用指数（ＭＰＩ）を測定するための経胸壁ＥＣＨＯを、手術前ならびに手術の７、１４、および２８日後に行った。組織の炎症および傷害のバイオマーカーの分析を、ＭＩの２８日後に行った。
【０２２３】
偽手術マウスの全てが４週間生存した。ビヒクル処置したＭＩマウスの４２％が４週間で死亡した。対照的に、化合物Ａで処置したＭＩマウスの死亡率はたった２５％であった。
【０２２４】
ＭＩマウスは、偽手術マウスと比較してＬＶＥＤＤおよびＬＶＥＳＤ、ＲＶＥＤＡおよびＭＰＩの有意な増加によって証明される有害な組織リモデリングおよび心筋機能障害を発症した（図９Ａ〜Ｄ）。手術の直後または１時間後の化合物Ａでの処置によって有意にＬＶ／ＲＶの寸法およびＭＰＩが減少し、ＭＩマウスにおいて化合物Ａが有害な心筋リモデリングを抑制し、心筋機能を改善したことが示唆される。化合物Ａは、偽手術マウスにおいて心筋リモデリング／機能に影響を及ぼさなかった。
【０２２５】
血漿中の炎症および心筋損傷のバイオマーカーを、ＭＩ後２８日目に分析した。ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、およびＳＴ２の血漿濃度は、偽手術マウスと比較してＭＩマウスで有意に増加した。手術直後の化合物Ａでの処置は、ＭＩマウスの全血漿バイオマーカー濃度を有意に減少させた（図１０Ａ〜Ｃ）。化合物Ａは、偽手術マウスにおいて血漿バイオマーカーに影響を及ぼさなかった。可溶性細胞接着分子（ＣＡＭ）（ｓＥ−セレクチン、ｓＩＣＡＭ、およびｓＶＣＡＭなど）は、心血管疾患における炎症過程の重要な循環バイオマーカーである。化合物Ａでの処置により、ＭＩマウスにおいて可溶性細胞接着分子の血漿レベルの増加が有意に抑制された（図１１Ａ〜Ｃ）。
【０２２６】
要約すれば、これらの結果は、化合物Ａでの処置が有意に心筋機能を改善し、炎症循環バイオマーカーを減少させ、したがって、ＭＩ後リモデリングのマウスモデルの死亡率を減少させることを示す。
【０２２７】
実施例６：化合物Ａの前臨床評価
本実施例は、心筋梗塞（ＭＩ）後動物のケアにおける化合物Ａの有効性を示す種々の前臨床実験を含む。
【０２２８】
心筋梗塞（ＭＩ）後リモデリングおよび心室性頻拍（ＶＴ）のラットモデル。
【０２２９】
ＭＩ後リモデリングおよびＶＴのラットモデルにおける化合物Ａの影響を決定した。ＭＩは、左冠状動脈前下降枝結紮での２５分間の閉塞およびその後の再灌流によって引き起こした。１週間後、ラットを、ビヒクルまたは化合物Ａ（１００ｍｇ／ｋｇ）のいずれかを経口経管栄養によって１日１回投与した。ＬＶ駆出分画（ＬＶＥＦ）、一回拍出量、およびＬＶ収縮末期容量（ＬＶＥＳＶ）を測定するための連続心エコー図（ＥＣＨＯ）を、ベースラインにて得、ＭＩの１週間後および５週間後に得た。電気生理学的研究、光学マッピング、組織学、およびバイオマーカー分析を、ＭＩの５週間後に行った。
【０２３０】
ベースラインにて得、ＭＩの１週間後および５週間後に得たＥＣＨＯは、ＭＩラットにおいて進行性のＬＶリモデリングの証拠（ＬＶ駆出分画および一回拍出量の有意な減少ならびにＬＶ収縮末期容量の有意な増加が含まれる）を示した。このモデルでは、ＬＶＥＦは、ＭＩの１週間後と５週間後との間でさらに減少することが一貫して認められた。これと一致して、本研究では、ＬＶＥＦは、ＭＩ１週間後の５６．０±２．１％からＭＩ５週間後の４０．７±２．２％に減少する。対照的に、化合物Ａで処置した動物では、ＬＶＥＦは、５３．１±３．２％から５５．６±２．６％に少し増加した（図１２Ｂ）。さらに、化合物Ａは、ＬＶＥＳＶ増加を有意に減少させた（図１２Ａ）。これら全ての結果は、化合物ＡがラットにおけるＭＩ後の心機能およびリモデリングを有意に改善することを示唆した。対照的に、ピルフェニドン（Ａ２Ｂアンタゴニストではないが、左室線維症を軽減することができることが示されている）は、ＬＶＥＳＶを増加させなかったが、そのさらなる減少をわずかに抑制しただけであった（図１２Ｂ）。
【０２３１】
心室性頻拍（ＶＴ）は、現在の冠動脈再建処置を使用した場合でさえ、ＭＩ後患者の一般的な死亡原因である。このＭＩ後リモデリングのラットモデルでは、ＶＴは、半分を超える動物において一貫して誘発された。したがって、ＶＴ誘発性における化合物Ａの影響を、ＭＩの５週間後に決定した。表３に示すように、ビヒクルコントロールにおけるＶＴの誘発率は５４％（１１匹中６匹）であったのに対して、化合物ＡはＶＴ誘発を９％に有意に低下させた（１１匹中１匹）。
【０２３２】
【表３】
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＊、カイ二乗検定を使用してビヒクルコントロールと比較してｐ＜０．０５。
【０２３３】
梗塞境界領域（ＩＢＺ）における異常な電気興奮伝導は、ＭＩ後不整脈の病理発生において重要である。伝導ベクトルマップ（図１３Ａ〜Ｂ）に示すように、ビヒクルコントロール群は、化合物Ａ処置動物より伝導速度がはるかに遅い。伝導性に及ぼす化合物Ａの影響を定量化するために、ＬＶ心筋の梗塞領域、境界領域、および正常領域の伝導速度（ＣＶ）を測定した。正常領域のＣＶが全ての領域のなかで最速であり、プラセボ群と化合物Ａ群との間で類似していた（図１４Ａ）。さらに、プラセボコントロール群の梗塞領域のＣＶは全領域のうちで最も遅く、化合物Ａによって有意に改善された（図１４Ｃ）。最後に、両群のＩＢＺにおけるＣＶは、非梗塞領域と梗塞領域との間であった。しかし、化合物Ａ群のＩＢＺのＣＶは、プラセボコントロールＩＢＺのＣＶより有意に速かった（図１４Ｂ）。
【０２３４】
ＩＢＺ中の異常な伝達は、組織リモデリングに起因する。ＩＢＺ中の過剰な線維症は、ＶＴ脆弱性の重要な基質である。図１５Ａ〜Ｂに示すように、ビヒクルコントロールＩＢＺの分析により、梗塞領域からＩＢＺへの線維症のより不均一な斑状の突起が明らかとなった。これらの線維性突起は化合物Ａ処置群のＩＢＺにおいてより少なく、このことは、化合物Ａが伝導速度の改善に関連するＩＢＺ中の線維症を抑制し、これによりＶＴ誘発性の顕著な低下を説明することができることを示唆する。
【０２３５】
炎症（ＩＬ−６）および組織傷害（ＢＮＰおよび（ＰＡＩ−１）の血漿バイオマーカーを、ＭＩの５週間後に分析した。ＩＬ−６およびＰＡＩ−１の血漿濃度は、正常ラットと比較してＭＩ後ラットで有意に増加した。化合物Ａの処置により、ＭＩ後ラットで全てのこれらの血漿バイオマーカーが有意に減少した。さらに、化合物ＡにはＭＩ後ラットにおいてＢＮＰの増加を阻害する傾向があった（Ｐ＝０．１６）（図１６Ａ〜Ｃ）。
【０２３６】
さらに、本実施例は、再灌流治療後に薬物を投与し、ＬＶ機能障害が既に確立されている臨床的に関連する処置計画を使用した。さらに、処置の影響を、臨床的に関連する終点（左室収縮末期容量およびＬＶＥＦなど）を使用して測定した。
【０２３７】
ＭＩ後リモデリングのラットモデルにおける研究結果は、化合物Ａの処置によって心筋機能が有意に改善され、ＶＴ脆弱性が軽減されることを示す。これは、虚血心筋の境界領域における炎症メディエーターの減少および線維症の抑制に起因する可能性が高い。
【０２３８】
実施例７：他のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニスト
本実施例は、ヒト心筋細胞を使用してＮＥＣＡ誘発性ＩＬ−６放出に及ぼす２つの他のＡ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストの影響について、上記Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを試験する。
【０２３９】
ヒト心筋細胞（ＨＣＭ）を、ＮＥＣＡのみで処置するか、化合物Ａ、化合物Ｂ（Ｎ−［５−（１−シクロプロピル−２，６−ジオキソ−３−プロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−ピリジン−２−イル］−Ｎ−エチル−ニコチンアミド、ＡＴＬ−８０１としても公知）、または化合物Ｃ（２−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アセトアミド）と組み合わせて処置した。図１７に示すように、ＮＥＣＡは、ヒト心筋細胞（ＨＣＭ）からのＩＬ−６放出を有意に増加させた。しかし、ＨＣＭに及ぼすＮＥＣＡの影響は、試験した各Ａ２ＢＡｄｏＲアンタゴニスト（化合物Ａ、Ｂ、およびＣ）によって完全に消失した。
【０２４０】
したがって、本実施例は、Ａ２ＢＡｄｏＲアンタゴニストが一般にヒト心筋細胞からのＮＥＣＡ誘発性ＩＬ−６放出を抑制する能力を有することを証明している。
【０２４１】
当業者は、本明細書中に明確に記載も表示もしていないが、本開示の原理を具体化し、且つその精神および範囲内に含まれる種々の組み合わせを考案することができると認識されるであろう。さらに、本明細書中に引用した全ての条件付きの用語は、読者が開示の原理および発明者らによる技術の拡大に寄与する概念を理解するのを補助することが主に意図されており、かかる具体的に引用した条件に制限されないと解釈されるべきである。さらに、本開示の原理、態様、および実施形態を本明細書中で引用した全ての記述は、その構造および機能の等価物の両方を含むことが意図される。さらに、かかる等価物が現在公知の等価物および将来的に開発される等価物（すなわち、構造と無関係に同一の機能を発揮する開発された任意の要素）の両方を含むことが意図される。したがって、本開示の範囲は、本明細書中に表示および記載した例示的な実施形態に制限されることは意図されていない。むしろ、本開示の範囲および精神は、添付の特許請求の範囲によって具体化される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【国際調査報告】
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