(57)【要約】  本発明は、特にストレプトコッカス・アガラクチア（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）感染症及び他の病原菌感染症の治療のための、アルキルポリグリコシドをベースとする膣用組成物に関する。詳細には、本発明は、腟管の細菌感染症、特にストレプトコッカス・アガラクチア（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）感染症及び他の病原菌感染症の予防及び治療に使用するための、アルキルグルコシド又はアルキルポリグルコシドの種類に属する化合物に関する。また、腟管の細菌感染症の予防及び治療において静菌薬又は殺菌薬として使用するための、中鎖飽和脂肪酸又はそのグリセロールエステル誘導体及び関連混合物の分類内で選択されるさらなる有効成分と共のこのような化合物の使用が提供される。本発明の主題に使用できる中鎖飽和脂肪酸又はそのグリセロールエステル誘導体の例は、ラウリン酸、カプリン酸、カプリル酸及びカプロン酸並びにそれらのグリセロールエステル誘導体である。これらの物質は一般に市販されている。ラウリン酸及びモノラウレート（ラウリン酸のモノグリセロールエステル）並びにそれらの混合物を、好ましい処方において使用するものとする。本発明の製剤は好ましくは、膣用ゲル剤、軟膏剤、膣用ムース剤、膣錠、膣用硬カプセル剤及び軟カプセル剤、又は膣用洗浄剤である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ストレプトコッカス・アガラクチア（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）膣感染症の予防又は治療に使用するための、アルキルグルコシド又はアルキルポリグルコシドの種類に属する化合物。
【請求項２】
デシルグルコシド、カプリリル／カプリルグルコシド、ラウリルグルコシド、Ｃ８〜Ｃ１０アルキルポリグルコシド、Ｃ１２〜Ｃ１６アルキルポリグルコシド、ココグルコシド及びそれらの混合物から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記予防及び／又は治療が、妊娠第３２週目又は第３５週目からの前記化合物の投与を提供する、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
場合によりラウリン酸、ラウリン酸のモノグリセロールエステル及びそれらの混合物から選択される有効成分と共に含む、請求項１又は２に記載の少なくとも１種の化合物を含む殺菌性及び／又は静菌性膣用製剤であって、前記化合物アルキルグルコキシド又はアルキルポリグルコキシドと、ラウリン酸、ラウリン酸のモノグリセロールエステル及びそれらの混合物から選択される前記有効成分とが好ましくは１：１０〜１０：１の比で含まれる上記製剤。
【請求項５】
膣用ゲル剤、膣用洗浄剤、膣用クリーム剤、軟膏剤、膣用フォーム剤、膣錠、膣用硬カプセル剤及び軟カプセル剤である、請求項４に記載の製剤。
【請求項６】
膣管の細菌感染症の予防及び治療に使用するための、カプリリル／カプリルグルコシド、ラウリルグルコシド、Ｃ８〜Ｃ１０アルキルポリグルコシド、Ｃ１２〜Ｃ１６アルキルポリグルコシド及びそれらの混合物から選択される化合物。
【請求項７】
膣管の前記細菌感染症が、ガードネレラ・バギナリス（ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、カンジダ・アルビカンス（ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、淋菌（ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｅａｅ）、アトポビウム・バギナエ（ａｔｏｐｏｂｉｕｍ  ｖａｇｉｎａｅ）、クラミジア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｉｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、トリコモナス・バギナリス（ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、マイコプラズマ・ゲニタリウム／ウレアリチカム／ホミニス／パルバム（ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ／ｕｒｅａｌｉｔｉｃｕｍ／ｈｏｍｉｎｉｓ／ｐａｒｖｕｍ）、トレポネーマ・パリダム（ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ）及びストレプトコッカス・アガラクチア（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）感染症を含む、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
膣管の前記細菌感染症が、ストレプトコッカス・アガラクチア（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）感染症である、請求項６に記載の化合物。
【請求項９】
前記予防及び／又は治療が、妊娠第３２週目又は第３５週目からの前記化合物の投与を提供する、請求項６から８までのいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
場合によりラウリン酸、ラウリン酸のモノグリセロールエステル及びそれらの混合物から選択される有効成分と共に含む、請求項６に記載の少なくとも１種の化合物を含む殺菌性及び／又は静菌性膣用製剤。
【請求項１１】
カプリリル／カプリルグルコシド、ラウリルグルコシド、Ｃ８〜Ｃ１０アルキルポリグルコシド、Ｃ１２〜Ｃ１６アルキルポリグルコシド及びそれらの混合物から選択される前記化合物と、ラウリン酸、ラウリン酸のモノグリセロールエステル及びそれらの混合物から選択される前記有効成分とが好ましくは１：１０〜１０：１の比で含まれる、請求項１０に記載の製剤。
【請求項１２】
膣用ゲル剤、膣用洗浄剤、膣用クリーム剤、軟膏剤、膣用フォーム剤、膣錠、膣用硬カプセル剤及び軟カプセル剤である、請求項１０又は１１に記載の製剤。
【請求項１３】
腟管の細菌感染症の予防及び治療において個別投与、逐次投与又併用投与するために静菌薬又は殺菌薬として使用するための、中鎖飽和脂肪酸又はそのグリセロールエステル誘導体及び関連混合物から選択される有効成分と共に含む、アルキルグルコシド又はアルキルポリグルコシドの種類に属する化合物。
【請求項１４】
中鎖飽和脂肪酸又はそのグリセロールエステル誘導体及び関連混合物から選択される前記有効成分がラウリン酸、ラウリン酸のモノグリセロールエステル及びそれらの混合物から選択される、膣管の細菌感染症の予防及び治療において静菌薬又は殺菌薬として使用するための、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
アルキルグルコシド又はアルキルポリグルコシドの種類に属する前記化合物が、デシルグルコシド、カプリリル／カプリルグルコシド、ラウリルグルコシド、Ｃ８〜Ｃ１０アルキルポリグルコシド、Ｃ１２〜Ｃ１６アルキルポリグルコシド、ココグルコシド及びそれらの混合物から選択される、請求項１３又は１４に記載の化合物。
【請求項１６】
膣管の前記細菌感染症が、ガードネレラ・バギナリス（ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、カンジダ・アルビカンス（ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、淋菌（ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｅａｅ）、アトポビウム・バギナエ（ａｔｏｐｏｂｉｕｍ  ｖａｇｉｎａｅ）、クラミジア・トラコマチス（ｃｈｌａｍｉｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、トリコモナス・バギナリス（ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、マイコプラズマ・ゲニタリウム／ウレアリチカム／ホミニス／パルバム（ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ／ｕｒｅａｌｉｔｉｃｕｍ／ｈｏｍｉｎｉｓ／ｐａｒｖｕｍ）、トレポネーマ・パリダム（ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ）及びストレプトコッカス・アガラクチア（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）感染症を含む、請求項１３から１５までのいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１７】
膣管の前記細菌感染症が、ストレプトコッカス・アガラクチア（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）感染症である、請求項１３から１６までのいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１８】
前記予防及び／又は治療が、妊娠第３２週目又は第３５週目からの前記化合物の投与を提供する、請求項１３から１７までのいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１９】
中鎖飽和脂肪酸又はそのグリセロールエステル誘導体及び関連混合物から選択される有効成分と共に含む、アルキルグルコシド又はアルキルポリグルコシドの種類に属する少なくとも１種の化合物を含む殺菌性及び／又は静菌性膣用製剤。
【請求項２０】
アルキルグルコシド又はアルキルポリグルコシドの種類に属する前記化合物が請求項３に記載されたものであり、中鎖飽和脂肪酸又はそのグリセロールエステル誘導体及び関連混合物から選択される前記有効成分が請求項１４に記載されたものである、請求項１９に記載の製剤。
【請求項２１】
前記化合物アルキルグルコキシド又はアルキルポリグルコキシドと、中鎖飽和脂肪酸又はそのグリセロールエステル誘導体及び関連混合物から選択される前記有効成分が１：１０〜１０：１の比で含まれる、請求項１９又は２０に記載の製剤。
【請求項２２】
膣用ゲル剤、膣用洗浄剤、膣用クリーム剤、軟膏剤、膣用フォーム剤、膣錠、膣用硬カプセル剤及び軟カプセル剤である、請求項１９から２１までのいずれか一項に記載の製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特にストレプトコッカス・アガラクチア（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）感染症及び他の病原菌感染症の治療のための、アルキルグルコシド又はアルキルポリグルコシドをベースとする膣用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｂ群連鎖球菌又はストレプトコッカス・アガラクチア（ＧＢＳ）は、先進工業国における重度の新生児感染症の病原体であり、妊娠女性の１５〜３５％にみられる。Ｂｌｏｎｄら（１）によれば、８つの発表された研究の分析により、ＧＢＳは、妊娠中の母体の７．６〜２２．８％で認められることが明らかになった。このような百分率は、民族及び採取部位（膣単独又は膣及び直腸であり得る）によって異なる。腟における無症候性のＧＢＳの存在は、妊娠中に変化する。膣レベルでの存在は、腟炎、尿路感染症と関連する可能性があり、絨毛羊膜炎のリスクを増大させる。出産後、ＧＢＳ感染症は、絨毛羊膜炎及び分娩後子宮内膜炎から菌血症及び敗血症に至るまで様々な影響をもたらし得る。妊娠女性における感染症はまた、早産、早期破水（ｅａｒｌｙ  ｂｒｅａｋａｇｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｅｍｂｒａｎｅｓ）及び新生児の出生時低体重につながる恐れがある。汚染新生児における感染症はまた、ショックを伴う敗血症、肺炎、急性呼吸窮迫症候群及び神経系感染症、例えば、死ぬまで続く障害につながることもある髄膜炎、又はさらには死を引き起こす恐れがある。
【０００３】
妊娠中の無症候性感染症の抗生物質治療は、推奨されていない。ＧＢＳの無症候性キャリアである妊娠女性は、分娩中に認められる細菌のレベルが抗生物質治療によって低下しないならば、分娩前に治療すべきでない。さらに、抗生物質の投与に関連した典型的問題は耐性現象の発生にあり、これは出産中の治療の有効性を危うくする可能性がある。
【０００４】
したがって、標準的な治療法は、出産中の女性を抗生物質の静脈内投与によって治療することであるが、これは、胎児に対するリスクを完全に排除する保証はない。
【０００５】
感染新生児の数は、妊娠の３から１２％に及ぶ。
【０００６】
パブリックドメインのデータは、米国では毎年、１２０００人の新生児が感染し、約２０００人が死亡していることを示している。
【０００７】
細菌性膣炎（ＢＶ）もまた、妊娠女性を冒す膣感染症である。ＢＶは、ラクトバチルス属の消失、並びに多種多様な細菌叢、例えば、ガードネレラ・バギナリス（Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、アトポビウム・バギナエ（Ａｔｏｐｏｂｉｕｍ  ｖａｇｉｎａｅ）及び嫌気性微生物の異常な発生を伴う、正常な腟細菌叢の深刻な変化を特徴とする。
【０００８】
ＢＶは、自然流産及び未熟児出産を引き起こす恐れがあり、ＨＩＶの罹患リスクの増加を伴う。ＢＶの症例は全て、妊娠中に治療すべきである。
【０００９】
ＢＶの抗生物質治療は、この場合でも感染症を排除するのに十分でない。
【００１０】
ＢＶ及びＧＢＳは、新生児及び母体の両方に関して妊娠の結果に影響する高リスク源である。
【発明の概要】
【００１１】
したがって、本発明の一目的は、無症候性感染症及び症候性感染症の両方を妊娠初期においても治療するために提起されるような、安全で効率的な腟感染症の治療を提供することである。
【００１２】
本発明によれば、このような治療は、殺菌薬又は静菌薬を、単独で又は他の有効成分と組合せて用いて、実施される。本発明の殺菌薬又は静菌薬は、アルキルグルコシド又はアルキルポリグルコシドの種類に属する。
【００１３】
一実施形態において、本発明による治療は、ストレプトコッカス・アガラクチア感染症の予防及び治療を目的とする。
【００１４】
したがって、少なくとも１種がアルキルグルコシド又はアルキルポリグルコシドの種類から選択される、本発明による１種又は複数の有効成分を、医薬として許容される賦形剤及び担体と共に含有する殺菌性又は静菌性膣用製剤が、本発明の別の目的を構成する。
【００１５】
本発明の個々の目的は、添付した特許請求の範囲に記載されたものであり、その定義は本明細書の不可欠な部分である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、ストレプトコッカス・アガラクチア及び他の病原菌によって引き起こされる膣感染症の予防又は治療に使用するための、アルキルグルコシド又はアルキルポリグルコシドの種類に属する化合物を提供することを目的とする。
【００１７】
アルキルグルコシド又はアルキルポリグルコシドは、デンプンと脂肪族アルコールとの反応によって得られる非イオン界面活性剤である。本発明の主題に使用できるアルキルグルコシド又はアルキルポリグルコシドの例は、デシルグルコシド、カプリリル／カプリルグルコシド、ラウリルグルコシド、ココグルコシド、Ｃ８〜Ｃ１０アルキルポリグルコシド、Ｃ１２〜Ｃ１６アルキルポリグルコシドである。このような物質は一般に市販されている。
【００１８】
好ましい一実施形態において、カプリリル／カプリルグルコシド、ラウリルグルコシド、Ｃ８〜Ｃ１０アルキルポリグルコシド、Ｃ１２〜Ｃ１６アルキルポリグルコシド又はそれらの混合物を使用する。
【００１９】
本発明はまた、腟管の細菌感染症の予防及び治療において静菌薬又は殺菌薬として使用するための、中鎖飽和脂肪酸又はそのグリセロールエステル誘導体及び関連混合物から選択される有効成分と共の、アルキルグルコシド又はアルキルポリグルコシドの種類に属する化合物に関する。腟管のこのような細菌感染症は、特にストレプトコッカス・アガラクチア感染症である。
【００２０】
本発明の主題に使用できる中鎖飽和脂肪酸又はそのグリセロールエステル誘導体の例は、ラウリン酸、カプリン酸、カプリル酸及びカプロン酸並びにそれらのグリセロールエステル誘導体である。これらの物質は一般に市販されている。ラウリン酸及びモノラウレート（ラウリン酸のモノグリセロールエステル）並びにそれらの混合物を好ましくは処方において使用できる。ラウリン酸の一般的な天然供給源は、カカオ油又はパーム核油であり、これらを本発明の目的に使用できる。
【００２１】
本発明による、ラウリン酸又はモノラウレートと共の、アルキルグルコシド又はアルキルポリグルコシドの使用は、同一組成物中における両有効成分の存在、及び種々の有効成分の個別使用、同時使用又は異なる使用のいずれも含む。
【００２２】
本発明はまた、膣管の細菌感染症の予防及び治療に使用するための、カプリリル／カプリルグルコシド、ラウリルグルコシド、Ｃ８〜Ｃ１０アルキルポリグルコシド、Ｃ１２〜Ｃ１６アルキルポリグルコシド及びそれらの混合物から選択される化合物に関する。
【００２３】
用語「膣管の細菌感染症」は、ガードネレラ・バギナリス、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｅａｅ）、アトポビウム・バギナエ、クラミジア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｉｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、トリコモナス・バギナリス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、マイコプラズマ・ゲニタリウム／ウレアリチカム／ホミニス／パルバム（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ／ｕｒｅａｌｉｔｉｃｕｍ／ｈｏｍｉｎｉｓ／ｐａｒｖｕｍ）、トレポネーマ・パリダム（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ）及びストレプトコッカス・アガラクチアの感染症を含む。
【００２４】
本発明のさらなる目的は、場合によりラウリン酸、モノラウレート及びそれらの混合物から選択される有効成分と共に、前記で定義したアルキルグルコキシド又はアルキルポリグルコキシドの種類に属する少なくとも１種の化合物を含む殺菌性及び／又は静菌性膣用製剤を提供することである。
【００２５】
アルキルグルコシド、アルキルポリグルコシド、Ｃ８〜Ｃ１０アルキルポリグルコシド、Ｃ１２〜Ｃ１６アルキルポリグルコシド化合物と、ラウリン酸、モノラウレート及びそれらの混合物から選択されるさらなる有効成分とは、好ましくは１：１０〜１０：１の比で含まれる。
【００２６】
ストレプトコッカス・アガラクチア、ガードネレラ・バギナリス、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）及びカンジダ・アルビカンスに対する、本発明の化合物の阻止活性及び殺菌活性の評価
実験は、２種の異なるアルキルグルコシド、即ち、カプリリル／カプリルグルコシド／Ｃ８〜Ｃ１０アルキルポリグルコシドＣＡＳＲ−Ｎｏ．６８５１５−７３−１（Ａ１）及びラウリルグルコシド／Ｃ１２〜Ｃ１６アルキルポリグルコシドＣＡＳＲ−Ｎｏ．１１０６１５−４７−９（Ａ２）を用いて実施した。
【００２７】
２種の異なる有効成分、ラウリン酸（Ｆ）及びモノラウレート（Ｇ）もまた、単独で及びアルキルグルコシドと組合せて試験した。
【００２８】
比較として、健常女性において典型的な膣粘膜の生理的コロニー形成において優位を占める乳酸菌菌株も試験した。
【００２９】
健常女性における膣粘膜のコロニー形成で優位な３種の菌株は、ラクトバチルス・クリスパータス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｒｉｓｐａｔｕｓ）、ラクトバチルス・ジェンセニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｊｅｎｓｅｎｉｉ）及びラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇａｓｓｅｒｉ）であることが知られている。
【００３０】
したがって、このような探索的行動は、このような菌株について、病原微生物に対する本発明の化合物の選択性を、乳酸菌細菌叢と比較して評価することを目的として実施した。
【００３１】
細菌菌株
出生前健康診断中に膣−直腸緩衝液から分離した３種のストレプトコッカス・アガラクチア菌株をアッセイに用いた。これらの菌株を、「菌株２」、「菌株１０」及び「菌株１１」と命名した。分離は、血液寒天培地上で実施した。同定は、ＡＰＩ  ２０  Ｓｔｒｅｐ（Ｂｉｏ−Ｍｅｒｉｅｕｘ）システムの生化学的検査によって及びＬａｎｃｅｆｉｅｌｄ群の同定によって得た。
【００３２】
実験は、ストレプトコッカス・アガラクチアＡＴＣＣ１２３８６菌株についても実施した。
【００３３】
ガードネレラ・バギナリスＡＴＣＣ１４０１８菌株、淋菌ＡＴＣＣ４３０６９菌株及びカンジダ・アルビカンスＡＴＣＣ１０２３１菌株も、実験に用いた。
【００３４】
使用した膣乳酸菌菌株は、ラクトバチルス・クリスパータスのＮＣＩＭＢ４５０５菌株、ラクトバチルス・ジェンセニイのＮＣＩＭＢ１３２７９菌株及びラクトバチルス・ガセリのＮＣＩＭＢ７０２８２０菌株である。
【００３５】
菌株を、液体血液培地＋グリセロール懸濁液（２０％）中で−８０℃において再構成し、同温度に保持した。
【００３６】
培地及び培養液
「ブレインハートインフュージョンブロス（Ｂｒａｉｎ  Ｈｅａｒｔ  Ｉｎｆｕｓｉｏｎ  ｂｒｏｔｈ）」（ＢＨＩｂ、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）培地を、ストレプトコッカス・アガラクチアの培養に用い、２％「溶血（ｌａｋｅｄ）」ウマ血液を添加後の「ミューラー−ヒントンブロス（Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ  ｂｒｏｔｈ）」（Ｍ−Ｈｂ）培地及び５％脱線維ウマ血液を添加した「ミューラー−ヒントン寒天」（Ｍ−Ｈａ）培地（Ｏｘｏｉｄ）を、抗菌活性アッセイに用いた。
【００３７】
下記表は、他のアッセイ菌株に関してＭＩＣ及びＭＢＣを測定するための培地及び種菌の培養条件を示す。
【表１】
2014512408.tif 000002
【００３８】
細菌種菌の調製
ストレプトコッカス・アガラクチア菌株を、ＢＨＩｂブロス中で３７℃において２４時間培養した。アッセイ直前に、細菌懸濁液を、ＭｃＦａｒｌａｎｄ標準液０．５に相当する濁度が得られるまで希釈した。ブロス＋血液（２％）中でのさらなる１：１００希釈物５０μｌを、マイクロプレートのウェル中に分配した。この手順によって実施した種菌の推定力価は、約５ｘｌ０４ｕｆｃ（コロニー形成単位）／ウェルである。
【００３９】
細菌培養物もまた、連続１０倍希釈し（１０−７に相当する希釈値まで）、各希釈物の０．１ｍｌのアリコートをＭ−Ｈａ＋血液５％上に二重に画線して、使用する実際の力価を決定し、続いて、ＭＢＣ（最小殺菌濃度）を決定した。
【００４０】
他のアッセイ微生物菌株を、表Ａに明記した液体培地及びインキュベーション条件で、前記操作手順に従って培養した。
【００４１】
アッセイ産物の希釈物の調製
下記の希釈及び滅菌によって、分析に供する物質を、アッセイのために用意した。
【００４２】
「母」と称する物質の濃度は、完全可溶化を達成できた最高濃度に相当し、この濃度は、試験においてアッセイされる最高濃度の４倍である。
【表２】
2014512408.tif 000003
【００４３】
最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）の決定
ストレプトコッカス・アガラクチア
このアッセイは、９６ウェルマイクロタイタープレート中で実施した。標準濃度のＭ−Ｈｂ  ５０μＬを、５列のそれぞれの第１のウェルに入れた。各列の第１のウェルから始めて、５０μｌの容量を各ウェルから次のウェルへと１０回移し、したがって倍加希釈後に希釈系列が得られた。各列の１２番目のウェルは、細菌増殖の陽性対照として、物質を含まない状態にしておいた。
【００４４】
続いて、Ｍ−Ｈｂ＋２倍濃度血液（４％）の細菌種菌５０μｌを、各列の１１番目のウェルを除く、プレートの全てのウェルに入れた。各列について陰性対照を提供する目的で、Ｍ−Ｈｂ＋２倍濃度血液であるが細菌を含まないもののみを、１１番目のウェルに入れた。３種のストレプトコッカス・アガラクチア菌株それぞれをアッセイするために、記載したスキームを用いた。
【００４５】
３７℃において２４時間インキュベーション後、マイクロタイタープレートを調べて、各ウェル中の細菌増殖の有無を検証した。各物質に関して、最小発育阻止濃度を測定した。最小発育阻止濃度は、細菌増殖を阻止できる、即ち、液体がウェル内で混濁するのを防ぐことができる最低濃度と定義される濃度である。
【００４６】
ガードネレラ・バギナリス、淋菌、カンジダ・アルビカンス、ラクトバチルス・クリスパータス、ラクトバチルス・ジェンセニイ、ラクトバチルス・ガセリ
このアッセイは、９６ウェルマイクロタイタープレート中で実施した。「母」濃度の物質溶液５０μｌを２倍濃度の液体媒体５０μｌと一緒に、８列のそれぞれの第１のウェルに入れ、残りの１１ウェルに標準濃度の液体媒体５０μｌを入れた。各列の第１のウェルから始めて、５０μｌの容量を、各ウェルから次のウェルへと１０回移し、したがって倍加希釈後に１１回希釈系列が得られた。各列の１２番目のウェルは、細菌増殖の陽性対照として、物質を含まない状態にしておいた。
【００４７】
続いて、前に明記した希釈細菌種菌５０μｌを、各列の１１番目のウェルを除く、プレートの全てのウェルに入れた。各列について陰性対照を提供する目的で、単一濃度であるが細菌を含まない液体媒体のみを、１１番目のウェルに入れた。アッセイ微生物菌株それぞれに関してアッセイするために、記載したスキームを用いた。
【００４８】
各微生物に関して示した条件においてインキュベーション後、マイクロタイタープレートを調べて、各ウェル中の細菌増殖の有無を検証した。最小発育阻止濃度は、依然として細菌増殖を阻止できる、即ち、液体がウェル内で混濁するのを依然として防ぐことができる物質の最低濃度と定義される。
【００４９】
最小殺菌濃度（ＭＢＣ）の決定
各物質のＭＩＣの値を決定した直後に、各ウェルから５０μｌに相当する容量を採取し、固体媒体を含むプレートの表面に画線した。続いて、各微生物菌株に関して示した条件において、プレートをインキュベートした。３７℃において２４時間インキュベーション後、培地表面で増殖したコロニーの数をカウントし、こうして、ウェル中に存在する濃度の物質と２４時間接触した後に生存している細菌の数を決定した。ＭＢＣ値は、既定のアッセイ条件において細菌負荷を９９．９％低減できる各物質の最低濃度と定義され、これを、各ウェル中の生存細菌数と最初に入れた細菌種菌の数との比較によって決定した。
【００５０】
寒天媒体上における最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）の決定
このアッセイは、Ｍ−Ｈａ培地＋血液（５％）上で実施した。培地は、供給業者によって示される濃度に相当する、試験において使用する最終濃度に比較して３３％高い濃度で調製した。オートクレーブ中で滅菌後、培地を、４８℃の温度において平衡化させ、これにウマ血液を６．６％の濃度（アッセイの最終濃度より３３％高い）で加えた。Ｍ−Ｈａ培地＋血液の１５ｍｌアリコートを、４８℃に保持された５０ｍｌファルコン試験管に移し、アッセイする物質の希釈物５ｍｌをこれに加え、混合し、ペトリ皿に注入し、放置して、固化させた。それぞれ、概算容量が約５μｌで１０５ｕｆｃを含む２５の細菌種菌を、各プレートのＭ−Ｈａ培地＋血液の表面に堆積した。３７℃で１８時間インキュベーション後、種菌の堆積領域における、肉眼で認められる細菌増殖を阻止できる物質の最小濃度と定義する最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を、読み取った。
【００５１】
結果
ストレプトコッカス・アガラクチアでの試験では、物質を含有する溶液の濁度のために、液体媒体中でのアッセイにおける最小発育阻止濃度に関しては殺菌薬の最小濃度値しか示されず、最小発育阻止濃度は、十分な信頼性で決定することができなかった。「寒天培地上における最小発育阻止濃度の決定」を実施して、ＭＩＣ値を得た。
【００５２】
表Ｉは、種菌の調製に使用した培養物の細菌濃度値、及び種菌の懸濁液の濃度を示す。
【００５３】
表ＩＩ及びＩＩＩはそれぞれ、ストレプトコッカス・アガラクチアのアッセイ菌種に対する分析物質のＭＩＣ値及びＭＢＣ値を示す。
【００５４】
表ＩＶ、Ｖ、ＶＩはそれぞれ、ガードネレラ・バギナリス、淋菌及びカンジダ・アルビカンスに関するＭＩＣ値及びＭＢＣ値を示す。
【００５５】
アッセイ菌株に対する抗菌活性で知られている物質に関するＭＩＣ及びＭＢＣの比較データも示す。表ＶＩＩ、ＶＩＩＩ及びＩＸはそれぞれ、ラクトバチルス・クリスパータス、ラクトバチルス・ジェンセニイ及びラクトバチルス・ガセリに関するＭＩＣ値及びＭＢＣ値を示す。
【００５６】
結論
ＭＢＣを、調べた物質全てについて決定できた。Ｓ．アガラクチアに関するＭＢＣ値は、種々の細菌菌株と同様であるようであった。物質Ａ２及びＧについては菌株１０で最高値が観察された。これは、菌株１０が、参照抗生物質治療、アンピシリンに対してより耐性であるので、試験した抗菌薬に対してより大きい耐性を示したためである。実際に、抗菌作用を果たすのに必要なアンピシリンの濃度は、菌株２及び１１に対する濃度と比較して、菌株１０では少なくとも１５倍高かった（表ＩＩ）。ＭＢＣ試験に関して示したのと同様な注釈を、ＭＩＣ試験の結果（表ＩＩＩ）にも適用する。
【００５７】
結論として、これらの実験から、試験した分子は、ストレプトコッカス・アガラクチアＡＴＣＣ菌株及び親から分離された細菌菌株の両方に対して、さらに重要なことには、より高い罹患率及びより高い新生児死亡リスクと関連する、早発性疾患とも称される新生児の早期感染症の少なくとも６０％の原因である血清型ＩＩＩを示すＡＴＣＣ菌株に対して、静菌活性及び殺菌活性を示すことが明らかである。
【００５８】
アルキルポリグルコシドは、単独で使用した場合及びラウリン酸及びモノラウレートに関連して使用した場合のいずれにおいても、高い静菌活性及び抗菌活性を示した。
【００５９】
特に、表ＩＩは、アルキルポリグルコシドとラウリン酸又はモノラウレートとの関連が相乗効果をもたらすことを示す。
【表３】
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【表４】
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Ａ１＝カプリリル／カプリルグルコシド、Ｃ８〜Ｃ１０アルキルポリグルコシド（ＣＡＳＲ−ｎｏ．６８５１５−７３−１）
Ａ２＝ラウリルグルコシド、アルキルポリグルコシドＣ１２〜Ｃ１６（ＣＡＳＲ−ｎｏ．１１０６１５−４７−９）
Ｆ＝ラウリン酸
Ｇ＝モノラウレート（ラウリン酸のモノグリセロールエステル）
【００６０】
Ａ１＋Ｆ、Ａ１＋Ｇ、Ａ２＋Ｆ及びＡ２＋Ｇについて表ＩＩ中で示した２つのＭＢＣ値はそれぞれ、組合せて使用した第１の有効成分及び第２の有効成分に関係する。
【表５】
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【００６１】
他のアッセイ細菌菌株に関しても、本発明の対象であるアルキルポリグリコシドのかなりの殺菌活性及び静菌活性が明らかになった。
【００６２】
全ての場合において、アルキルポリグルコシドと、ラウリン酸及びモノラウレートの両方との著しい相乗効果が認められた。
キー：
Ａ２＝ラウリルグルコシド、Ｃ１２〜Ｃ１６アルキルポリグルコシド（ＣＡＳＲ−ｎｏ．１１０６１５−４７−９）
Ｆ＝ラウリン酸
Ｇ＝モノラウレート（ラウリン酸のモノグリセロールエステル）
【表６】
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【表７】
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【表８】
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【００６３】
試験した膣乳酸菌に関して、表ＶＩＩ、ＶＩＩＩ及びＩＸに示すような限界殺菌及び静菌活性が認められた。
【００６４】
以下の興味深い状況が明らかになった：
−  物質Ａ２、Ａ１＋Ｇ、Ａ２＋Ｇ及びＡ１に関しては、Ｓ．アガラクチア菌株において認められる値の２〜８倍の範囲のＭＢＣ値が認められ；
−  物質Ａ２、Ａ２＋Ｆ及びＡ２＋Ｇに関しては、Ｇ．バギナリスにおいて認められる値の約１５倍であり且つ淋菌において認められる値の６０〜１２０倍の範囲であるＭＢＣ値が認められた。
【００６５】
このことは全て、膣乳酸菌に対してニュートラルな作用を維持するにもかかわらず、試験した病原の菌株（乳酸菌を除く）に対する有効性に有利である。
【表９】
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【表１０】
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【表１１】
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【００６６】
本発明によれば、女性（体重約７０ｋｇ）への投与のために提起される化合物の投与量は、用量単位当たりの活性成分が０．０１ｍｇ〜１ｇ、好ましくは０．１ｍｇ〜１００ｍｇの範囲である。投与単位は、例えば、１日に１〜４回投与できる。治療される病態の重篤度に応じて持続投与の変形形態も必要となり得ることを考慮すべきである。正確な投与量は、医師の裁量による。
【００６７】
本発明による治療は、妊娠第３２週目又は第３５週目から始めて出産まで、又は必要ならば、さらに出産後まで、前記化合物を含有する製剤を局所投与するステップを含むことができる。実際に、本発明の化合物は、毒性が低く、耐性現象を引き起こさない。
【００６８】
本発明による殺菌性及び／又は静菌性膣用製剤は、例えば、膣用ゲル剤、膣用洗浄剤、膣用クリーム剤、軟膏剤、膣用フォーム剤、膣錠、膣用硬カプセル剤及び軟カプセル剤の形態であることができる。本明細書中に既に記載した医薬品形態は、必要に応じて即時放出されることもできるし、放出調節によって放出されることもできる。
【００６９】
膣腔への投与単位の導入は、好適な特別な技術（膣用アプリケーター、シリンジ、詰め物など）を用いて容易にすることができる。
【００７０】
本発明の対象である有効成分の取り込みを容易にするために、通常は溶媒を用意する。このような目的で種々の化合物が使用できるが、より大きい生体適合性のために水が好ましい溶媒である。非水系化合物、例えば、グリコール（例えば、プロピレングリコール、ブチレングリコール、エチレングリコール、ヘキシレングリコール、ポリエチレングリコール、など）、及びアルコール（例えば、エタノール、プロパノール、イソプロパノール）、並びにそれらの混合物もこの目的で使用できる。
【００７１】
典型的には、溶媒は最終処方の約７５％超の量で存在し、一部の製剤において最終処方の約９０％超であることができ、最終的に他の場合において最終処方の約９０％〜約９９．９９％を構成することができる。
【００７２】
（実施例１）
膣用ゲル剤
【表１２】
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【００７３】
（実施例２）
膣用ゲル剤
【表１３】
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【００７４】
（実施例３）
膣用洗浄剤
【表１４】
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【００７５】
（実施例４）
膣用洗浄剤
【表１５】
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【００７６】
（参考文献）
１．Ｂｌｏｎｄ  ＭＨ，  Ｐｏｕｌａｉｎ  Ｐ，  Ｇｏｌｄ  Ｆ，  Ｂｉｎｇｅｎ  Ｅ，  Ｗａｔｉｅｒ  Ｈ，Ｑｕｅｎｔｉｎ  Ｒ，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｂａｃｔｅｒｉｅｎｎｅ  ｍａｔｅｒｎｏ−ｆｏｅｔａｌｅ（母子細菌感染）.ＥＭＣ  ２００４  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｑｕｅ  ｖｏｌ．２，  ｐａｇｅ  １４．
【国際調査報告】
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