(57)【要約】  本発明は、ＩＤＨ１および突然変異ＩＤＨ１遺伝子発現および／または活性のモジュレーションに応答する形質、疾患および状態の研究、診断および治療のための、および／またはＩＤＨ１または突然変異ＩＤＨ１遺伝子発現経路をモジュレーションするための化合物、組成物および方法に関する。特に、本発明は、ＩＤＨ１または突然変異ＩＤＨ１遺伝子発現に対するＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を引き起こしうる又は引き起こす短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）、短干渉性ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）および短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）分子のような小さな核酸分子を含む二本鎖核酸分子に関する。【選択図】図１２
2014522242.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＤＨ１または突然変異ＩＤＨ１の発現を抑制する単離された二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子であって、
（ａ）該ｓｉＮＡがセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
（ｂ）各鎖が、独立して、１５〜３０ヌクレオチド長であり、
（ｃ）少なくとも１つの鎖が、配列番号１〜５０６からなる群から選択される少なくとも１５ヌクレオチド配列を含む、単離された二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子。
【請求項２】
ＩＤＨ１または突然変異ＩＤＨ１の発現を抑制する二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子であって、
（ａ）該ｓｉＮＡがセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
（ｂ）各鎖が、独立して、１５〜３０ヌクレオチド長であり、
（ｃ）該アンチセンス鎖が、
５’−ＣＵＡＵＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡ−３’（配列番号７）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号１１）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号１２）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号１３）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号３８）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号３９）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号４０）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号４１）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号５９）；または
５’−ＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵＧＧＧＧ−３’（配列番号６３）
のいずれかに相補的な配列を有する少なくとも１５ヌクレオチドを含む、二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子。
【請求項３】
ＩＤＨ１または突然変異ＩＤＨ１の発現を抑制する二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子であって、
（ａ）該ｓｉＮＡがセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
（ｂ）各鎖が、独立して、１５〜３０ヌクレオチド長であり、
（ｃ）該アンチセンス鎖が、
５’−ＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧＡＵＡＧ−３’（配列番号４４６）；
５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４５０）；
５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４５１）；
５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４５２）；
５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４７７）；
５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４７８）；
５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４７９）；
５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧ−３’（配列番号４８０）；
５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣＵＡＵＧ−３’（配列番号４９８）；または
５’−ＣＣＣＣＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣ−３’（配列番号５０２）
の少なくとも１５ヌクレオチド配列を含み、ここで、該ヌクレオチドの１以上は化学修飾されていてもよい、二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子。
【請求項４】
該センス鎖が、
５’−ＣＵＡＵＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡ−３’（配列番号７）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号１１）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号１２）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号１３）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号３８）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号３９）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号４０）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号４１）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号５９）；または
５’−ＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵＧＧＧＧ−３’（配列番号６３）
の少なくとも１５ヌクレオチド配列を含み、ここで、該ヌクレオチドの１以上は化学修飾されていてもよい、請求項３記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項５】
該ｓｉＮＡが、
５’−ＣＵＡＵＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡ−３’（配列番号７）および
５’−ＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧＡＵＡＧ−３’（配列番号４４６）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号１１）および
５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４５０）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号１２）および
５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４５１）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号１３）および
５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４５２）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号３８）および
５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４７７）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号３９）および
５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４７８）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号４０）および
５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４７９）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号４１）および
５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧ−３’（配列番号４８０）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号５９）および
５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣＵＡＵＧ−（配列番号４９８）；または
５’−ＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵＧＧＧＧ−３’（配列番号６３）および
５’−ＣＣＣＣＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣ−３’（配列番号５０２）
のいずれかを含む、請求項４記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項６】
少なくとも１つのヌクレオチドが化学修飾ヌクレオチドである、前記請求項のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項７】
少なくとも１つの非ヌクレオチドを含む、前記請求項のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項８】
少なくとも１つのヌクレオチドが汎用塩基を含む、前記請求項のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項９】
少なくとも１つのホスホロチオアートヌクレオチド間結合を含む、前記請求項のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項１０】
少なくとも１つの鎖の３’末端、５’末端、または３’および５’末端の両方にキャップを含む、前記請求項のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項１１】
一方または両方の鎖上に１以上の３’突出ヌクレオチドを含む、前記請求項のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項１２】
該アンチセンス鎖の５’末端がリン酸化されている、前記請求項のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項１３】
少なくとも１つの鎖上の３’突出ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルヌクレオチドである、請求項１１記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項１４】
該２’−Ｏ−メチルヌクレオチドがホスホロチオアートヌクレオチド間結合で連結されている、請求項１３記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項１５】
少なくとも１つの化学修飾ヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである、請求項６記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項１６】
少なくとも１つの化学修飾ヌクレオチドが２’−デオキシヌクレオチドである、請求項６記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項１７】
少なくとも１つの化学修飾ヌクレオチドが２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである、請求項６記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項１８】
一方または両方の鎖における５以上のピリミジンヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドである、請求項１〜５のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項１９】
一方または両方の鎖における５以上のピリミジンヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルピリミジンヌクレオチドである、請求項１〜５のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項２０】
一方または両方の鎖における５以上のプリンヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フルオロプリンヌクレオチドである、請求項１〜５のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項２１】
一方または両方の鎖における５以上のプリンヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルプリンヌクレオチドである、請求項１〜５のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項２２】
一方または両方の鎖における５以上のプリンヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルプリンヌクレオチドである、請求項１８記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項２３】
一方または両方の鎖における５以上のプリンヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである、請求項１９記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項２４】
センス鎖およびアンチセンス鎖を有する式（Ａ）：
【化１】
2014522242.tif 000041
（式中、上側の鎖は該二本鎖核酸分子のセンス鎖であり、下側の鎖はアンチセンス鎖であり、該アンチセンス鎖は配列番号４４６、配列番号４５０、配列番号４５１、配列番号４５２、配列番号４７７、配列番号４７８、配列番号４７９、配列番号４８０、配列番号４９８または配列番号５０２の少なくとも１５ヌクレオチド配列を含み、該センス鎖は、該アンチセンス鎖に対する相補性を有する配列を含む；
各Ｎは、独立して、修飾されていない若しくは化学修飾されているヌクレオチドである、または非ヌクレオチドである；
各Ｂは、存在する又は存在しない末端キャップである；
（Ｎ）は突出ヌクレオチドを表し、それらのそれぞれは、独立して、修飾されていない又は化学修飾されている；
Ｘ１およびＸ２は、独立して、０〜４の整数である；
Ｘ３は１５〜３０の整数である；
Ｘ４は１２〜２７の整数である；
［Ｎ１］−［Ｎ２］−［Ｎ３］は修飾ヌクレオチドまたはリボヌクレオチドであり、ここで、［Ｎ１］−［Ｎ２］−［Ｎ３］は、以下のものからなる群から選択される：
（ａ）［Ｎ１］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ２］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである；
（ｂ）［Ｎ１］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ２］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−デオキシヌクレオチドである；
（ｃ）［Ｎ１］は２’−デオキシヌクレオチドであり、［Ｎ２］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−Ｏ−メチルヌクレオチドである；
（ｄ）［Ｎ１］は２’−デオキシヌクレオチドであり、［Ｎ２］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−デオキシヌクレオチドである；および
（ｅ）［Ｎ１］はリボヌクレオチドであり、［Ｎ２］はリボヌクレオチドであり、［Ｎ３］はリボヌクレオチドである）を含む二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子。
【請求項２５】
（ａ）ＮＸ４位における１以上のピリミジンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである；
（ｂ）ＮＸ４位における１以上のプリンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである；
（ｃ）ＮＸ３位における１以上のピリミジンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである；および
（ｄ）ＮＸ３位における１以上のプリンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである、請求項２４記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項２６】
Ｘ１が２であり、Ｘ２が２である、請求項２４または請求項２５記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項２７】
１以上のヌクレオチドが汎用塩基を有する、請求項２４〜２６のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項２８】
該アンチセンス鎖の５’末端からの１４位のヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルヌクレオチドではない、請求項２４〜２７のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項２９】
該アンチセンス鎖の５’末端からの１４位のヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである、請求項２４〜２８のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項３０】
１以上の突出ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルヌクレオチドである、請求項２４〜２９のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項３１】
少なくとも１つのホスホロチオアートヌクレオチド間結合を含む、請求項２４〜３０のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項３２】
各Ｘ１およびＸ２＝１または２；Ｘ３＝１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４；およびＸ４＝１５、１６、１７、１８、１９、２０または２１である、請求項２４記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項３３】
各Ｘ１およびＸ２＝２；Ｘ３＝１９；およびＸ４＝１６である、請求項２４記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項３４】
（ａ）ＮＸ４位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである；
（ｂ）ＮＸ４位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである；
（ｃ）ＮＸ３位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである；および
（ｄ）ＮＸ３位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが２’−デオキシヌクレオチドである、請求項２５記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項３５】
（ａ）ＮＸ４位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドが２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである；
（ｂ）ＮＸ４位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドがリボヌクレオチドである；
（ｃ）ＮＸ３位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドが２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである；および
（ｄ）ＮＸ３位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドがリボヌクレオチドである、請求項２５記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項３６】
（ａ）ＮＸ４位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである；
（ｂ）ＮＸ４位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである；
（ｃ）ＮＸ３位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドが２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである；および
（ｄ）ＮＸ３位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである、請求項２５記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項３７】
１以上のホスホロチオアートヌクレオチド間結合を含む、請求項３４、３５または３６のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項３８】
医薬上許容される担体または希釈剤中に前記請求項のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子を含む組成物。
【請求項３９】
ＩＤＨ１または突然変異ＩＤＨ１の作用により又は作用の喪失により引き起こされる状態に罹患したヒト対象の治療方法を含み、該方法が、
（ａ）請求項１〜３７のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子、
（ｂ）請求項３８記載の組成物
の有効量を該対象に投与することを含む、治療方法。
【請求項４０】
該状態が癌である、請求項３９記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対する相互参照
本出願は、２０１１年６月６日付け出願の米国仮出願第６１／４９３，５７０号（これを参照により本明細書に組み入れることとする）の利益を請求するものである。
【０００２】
配列表
３７  ＣＦＲ  §  １．５２（ｅ）（５）に基づいてＥＦＳを介して提出された配列表を参照により本明細書に組み入れることとする。ＥＦＳを介して提出された配列表テキストファイルは、２３４，９００バイトのサイズの２０１２年５月７日付けで作成されたファイル「ＳＩＲＯＮＣ００００４−ＰＣＴ−ＳＥＱＬＩＳＴ−０７ＭＡＹ２０１２」を含有する。
【背景技術】
【０００３】
サイトゾルイソクエン酸デヒドロゲナーゼはイソクエン酸デヒドロゲナーゼ１（ＩＤＨ１）としても公知であり、ＣＯ２およびα−ケトグルタラート（αＫＧ）を産生するイソクエン酸の酸化的カルボキシル化を触媒する酵素である。ＩＤＨ１における体細胞突然変異は、結腸直腸癌、神経膠腫（例えば、等級ＩＩ〜ＩＩＩ神経膠星状細胞、乏突起神経膠腫および神経膠芽細胞腫）、急性骨髄球様白血病（ＡＭＬ）、前立腺、Ｂ急性リンパ芽球性白血病およびより低頻度の種々の他の悪性疾患を有する患者において特定されている（Ｓｊｏｂｌｏｍら，２００６，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１４：２６８−２７４；Ｐａｒｓｏｎｓら，２００８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２１：１８０７−１８１２；Ｂｌｅｅｋｅｒら，２００９，Ｈｕｍ．Ｍｕｔａｔ．３０：７−１１；Ｙａｎら，２００９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６０：７６５−７７３；Ｙａｎら，２００９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６０：７６５−７７３；Ｍａｒｄｉｓら，２００９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６１：１０５８−１０６６）。重要なことに、神経膠腫およびＡＭＬは、最悪の予後を示す最も悪性の腫瘍型のうちの２つである。
【０００４】
これらの悪性疾患において見出されるＩＤＨ１突然変異は、イソシトラートへの結合に関与するアルギニン三つ組触媒基の部分を（Ａｒｇ１００およびＡｒｇ１０９と共に）形成するアミノ酸であるＡｒｇ１３２に影響を及ぼすヘテロ接合突然変異である。該突然変異の位置ゆえに、該突然変異タンパク質は酵素活性を欠くと最初は仮定されたが、該突然変異形態は、触媒的に不活性ではなく、αＫＧから２−ヒドロキシグルタラート（２ＨＧ）に還元する新規酵素活性を有することが後に見出された（Ｄａｎｇら，２００９  Ｎａｔｕｒｅ  ４６２：７３９−７４４）。ＩＤＨ１のアミノ酸位置１３２位のアルギニンは、ヒスチジン（Ｒ１３２Ｈ）、システイン（Ｒ１３２Ｃ）、グリシン（Ｒ１３２Ｇ）、セリン（Ｒ１３２Ｓ）、ロイシン（Ｒ１３２Ｌ）およびバリン（Ｒ１３２Ｖ）に突然変異していることが判明している（Ｙｅｎら，２０１０，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２９：６４０９−６４１７）。
【０００５】
ＷＯ２０１０／１０５２４３（Ｄａｎｇら）として公開されているＰＣＴ国際特許出願は、２ＨＧの新活性を示す突然変異ＩＤＨ１タンパク質をコードするｍＲＮＡを標的化する、核酸に基づくインヒビター（例えば、ｓｉＲＮＡ）を投与することによる、突然変異イソクエン酸デヒドロゲナーゼの存在により特徴づけられる細胞増殖関連障害を有する患者の治療方法を記載している。特異的なセンスおよびアンチセンス配列を有するｓｉＲＮＡが該出願に記載されているが、該開示は、ＩＤＨ１遺伝子発現のダウンレギュレーションおよび／またはＩＤＨタンパク質レベルの低下もしくはいずれの機能アッセイにおけるそのようなダウンレギュレーションの結果をも示していない。
【０００６】
ＩＤＨ１およびその突然変異形態を抑制する分子が依然として必要とされている。遺伝子発現、特にＩＤＨ１および突然変異ＩＤＨ１の遺伝子発現の、ＲＮＡ干渉（以下「ＲＮＡｉ」）による改変は、この要求を満たすための１つのアプローチである。ＲＮＡｉは短い一本鎖ＲＮＡ（「ｓｓＲＮＡ」）または二本鎖ＲＮＡ（「ｄｓＲＮＡ」）分子により誘発される。「短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）」または「短干渉性ＲＮＡ」または「ｓｉＲＮＡ」または「ＲＮＡｉインヒビター」と称される短いｄｓＲＮＡ分子はは、ｓｉＮＡに対する配列相同性を共有するメッセンジャーＲＮＡ（「ｍＲＮＡ」）の発現をサイレンシングする。これは、ＲＮＡ誘発性サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と一般に称される、ｓｉＮＡを含有するエンドヌクレアーゼ複合体により引き起こされるｍＲＮＡの切断により生じうる。標的ＲＮＡの切断は、典型的に、ｓｉＮＡ二本鎖のガイド配列に相補的な領域の中央部で生じる（Ｅｌｂａｓｈｉｒら，２００１，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．，１５：１８８）。また、ＲＮＡ干渉は、おそらく、翻訳を抑制する又はクロマチン構造を調節することにより標的遺伝子配列の転写を妨げる細胞メカニズムによる小型ＲＮＡ（例えば、マイクロＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ）媒介性遺伝子サイレンシングをも含みうる（例えば、Ａｌｌｓｈｉｒｅ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７：１８１８−１８１９；Ｖｏｌｐｅら，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７：１８３３−１８３７；Ｊｅｎｕｗｅｉｎ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７：２２１５−２２１８；およびＨａｌｌら，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７：２２３２−２２３７を参照されたい）。ＲＮＡｉの分野における相当な進歩にもかかわらず、ＩＤＨ１および突然変異ＩＤＨ１遺伝子発現を抑制しうる並びに突然変異ＩＤＨ１発現に関連した疾患（例えば、癌）を治療しうる物質が尚も必要とされている。
【発明の概要】
【０００７】
発明の概括
本発明は、新規短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子を使用して、ＩＤＨ１またはその誘導体および／もしくは突然変異体の遺伝子発現のモジュレーションに応答する疾患を治療するという課題の解決手段を提供する。本発明の一部として記載されている新規ｓｉＮＡ分子は、野生型ＩＤＨ１遺伝子発現をモジュレーションするために、ならびに／またはＩＤＨ１の１以上の誘導体および／もしくは突然変異形態の遺伝子発現をモジュレーションするために使用されうる。例えば、該新規ｓｉＮＡ分子は、あるタイプの癌（例えば、中枢神経系およびＡＭＬの癌）において発現されるＩＤＨ１タンパク質の突然変異形態、例えばＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｈ、ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｃ、ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｇ、ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｓ、ＩＤＨ１−Ｒ１３２ＬおよびＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｖの遺伝子発現をモジュレーションするために使用されうる。野生型ＩＤＨ１およびＩＤＨ１の突然変異形態は、併せて、本明細書においては「ＩＤＨ１関連」タンパク質および遺伝子と称される。
【０００８】
本発明は、小型核酸分子を使用するＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）により、ＩＤＨ１関連遺伝子、特に、細胞増殖関連障害（例えば、中枢神経系およびＡＭＬの癌）に関連したＩＤＨ１関連遺伝子の発現をモジュレーションするのに、およびそのような障害に関連した状態を治療するのに有用な化合物、組成物および方法を提供する。
【０００９】
特に、本発明は、小型核酸分子、すなわち、短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子、例えば短干渉性ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）および環状ＲＮＡ分子（これらに限定されるものではない）、ならびにＩＤＨ１関連遺伝子および／またはＩＤＨ１関連遺伝子発現および／もしくは活性の経路に関与する他の遺伝子発現をモジュレーションするために用いられる方法に関する。
【００１０】
１つの態様においては、本発明は、細胞または哺乳動物におけるＩＤＨ１関連遺伝子の発現を抑制する二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子を提供し、ここで、該二本鎖ｓｉＮＡはセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む。該アンチセンス鎖は、ＩＤＨ１関連遺伝子の発現に関連したＲＮＡの少なくとも一部に相補的な配列を含む。該センス鎖は、該アンチセンス鎖に相補的な配列を含む。種々の実施形態においては、ｓｉＮＡ分子の鎖の少なくとも１つは、配列番号１〜５０６の配列の群から選択される少なくとも１５ヌクレオチド配列を含む。
【００１１】
ある実施形態においては、表１ａに記載されている標的配列に相補的な配列を有する少なくとも１５ヌクレオチドをアンチセンス鎖が含む、二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子を提供する。１つの実施形態においては、「少なくとも１５ヌクレオチド」は１５個の連続的ヌクレオチドである。該ｓｉＮＡのセンス鎖は、該アンチセンス鎖に相補的な領域を含む。特定の実施形態においては、本発明のｓｉＮＡのアンチセンス鎖は、表１ｂ（配列番号４４０〜５０６）から選択されるアンチセンス配列の少なくとも１５ヌクレオチドを含む。他の実施形態においては、該センス鎖は、表１ｂ（配列番号１〜６７）に記載されているセンス鎖配列の少なくとも１５ヌクレオチドを含む。他の実施形態においては、本発明の二本鎖ｓｉＮＡ分子は、表１ｂ（配列番号１〜６７）から選択されるセンス鎖の少なくとも１５ヌクレオチドと、表１ｂ（配列番号４４０〜５０６）から選択されるアンチセンス鎖の少なくとも１５ヌクレオチドとを含む。前記実施形態のそれぞれにおいては、「少なくとも１５ヌクレオチド」は１５個の連続的ヌクレオチドである。
【００１２】
本発明のこの態様の或る実施形態においては、アンチセンスおよび／またはセンス鎖が、表１ｃに記載されている配列番号６８〜４３９から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含む、二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子を提供する。他の実施形態においては、該アンチセンス鎖は、本発明の標的配列に相補的な配列を有する、表１ｃに記載されている修飾配列を含む。他の実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、表１ｃに記載されている配列番号６８〜４３９から選択される少なくとも２つの配列を含み、ここで、前記の少なくとも２つの配列の１つは前記の少なくとも２つの配列のもう１つに相補的であり、前記の少なくとも２つの配列の１つは、ＩＤＨ１関連遺伝子の発現において生じるｍＲＮＡの配列に相補的である。
【００１３】
ある実施形態においては、本発明は、ＩＤＨ１関連遺伝子の発現をモジュレーションする二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子を提供し、ここで、該ｓｉＮＡ分子はセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、各鎖は、独立して、１５〜３０ヌクレオチド長であり、該アンチセンス鎖は、
５’−ＣＵＡＵＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡ−３’（配列番号７）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号１１）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号１２）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号１３）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号３８）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号３９）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号４０）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号４１）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号５９）；または
５’−ＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵＧＧＧＧ−３’（配列番号６３）のいずれかに相補的な配列を有する少なくとも１５ヌクレオチドを含む。１つの実施形態においては、「少なくとも１５ヌクレオチド」は１５個の連続的ヌクレオチドである。
【００１４】
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子のアンチセンス鎖は、
５’−ＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧＡＵＡＧ−３’（配列番号４４６）；
５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４５０）；
５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４５１）；
５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４５２）；
５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４７７）；
５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４７８）；
５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４７９）；
５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧ−３’（配列番号４８０）；
５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣＵＡＵＧ−３’（配列番号４９８）；または
５’−ＣＣＣＣＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣ−３’（配列番号５０２）のいずれかに対する同一性を有する少なくとも１５ヌクレオチドを含む。１つの実施形態においては、「少なくとも１５ヌクレオチド」は１５個の連続的ヌクレオチドである。したがって、該ｓｉＮＡ分子のアンチセンス鎖は、配列番号４４６、４５０、４５１、４５２、４７７、４７８、４７９、４８０、４９８または５０２のいずれかの少なくとも１５ヌクレオチド配列を含む。
【００１５】
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子のセンス鎖は、
５’−ＣＵＡＵＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡ−３’（配列番号７）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号１１）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号１２）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号１３）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号３８）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号３９）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号４０）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号４１）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号５９）；または
５’−ＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵＧＧＧＧ−３’（配列番号６３）のいずれかに対する同一性を有する少なくとも１５ヌクレオチドを含む。１つの実施形態においては、「少なくとも１５ヌクレオチド」は１５個の連続的ヌクレオチドである。したがって、該ｓｉＮＡ分子のセンス鎖は、配列番号７、１１、１２、１３、３８、３９、４０、４１、５９または６３のいずれかの少なくとも１５ヌクレオチドの配列を含む。
【００１６】
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、
５’−ＣＵＡＵＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡ−３’（配列番号７）および
５’−ＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧＡＵＡＧ−３’（配列番号４４６）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号１１）および
５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４５０）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号１２）および
５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４５１）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号１３）および
５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４５２）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号３８）および
５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４７７）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号３９）および
５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４７８）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号４０）および
５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４７９）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号４１）および
５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧ−３’（配列番号４８０）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号５９）および
５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣＵＡＵＧ−（配列番号４９８）；または
５’−ＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵＧＧＧＧ−３’（配列番号６３）および
５’−ＣＣＣＣＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣ−３’（配列番号５０２）のいずれかを含む。もう１つの実施形態においては、該ｓｉＮＡ分子は、配列番号７および４４６の両方、または配列番号１１および４５０の両方、または配列番号１２および４５１の両方、または配列番号１３および４５２の両方、または配列番号３８および４７７の両方、または配列番号３９および４７８の両方、配列番号４０および４７９の両方、または配列番号４１および４８０の両方、または配列番号５９および４９８の両方、または配列番号６３および５０２の両方の少なくとも１５ヌクレオチド配列を含む
本発明の幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡのヌクレオチドの全ては修飾されていない。他の実施形態においては、ｓｉＮＡ分子の一方または両方の鎖において、独立して、該ヌクレオチド位置の１以上（１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０個）が修飾されている。修飾には、核酸糖修飾、塩基修飾、バックボーン（ヌクレオチド間結合）修飾、非ヌクレオチド修飾および／またはそれらのいずれかの組合せが含まれる。ある場合には、プリンおよびピリミジンヌクレオチドが異なって修飾されている。例えば、プリンおよびピリミジンヌクレオチドは、２’−糖位置において、異なって修飾されうる（すなわち、少なくとも１つのプリンは、２’−糖位置において、同じ又は異なる鎖において、少なくとも１つのピリミジンとは異なる修飾を有する）。ある場合においては、プリンは一方または両方の鎖において修飾されていないが、ピリミジンは一方または両方の鎖において修飾されている。ある他の場合においては、ピリミジンは一方または両方の鎖において修飾されていないが、プリンは一方または両方の鎖において修飾されている。幾つかの場合には、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドは２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチドまたは２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである。幾つかの場合には、一方または両方の鎖におけるピリミジンヌクレオチドの少なくとも５以上は全２’−デオキシ−２’−フルオロまたは全２’−Ｏ−メチルピリミジンヌクレオチドである。幾つかの場合には、一方または両方の鎖におけるプリンヌクレオチドの少なくとも５以上は全２’−デオキシ−２’−フルオロまたは全２’−Ｏ−メチルピリミジンヌクレオチドである。該ｓｉＮＡ分子が本明細書に記載の１以上の修飾を含む或る場合においては、ガイド（アンチセンス）鎖の５’末端の１、２および３位のヌクレオチドは修飾されていない。
【００１７】
ある実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は該鎖の一方または両方において１、２、３または４ヌクレオチドの３’突出を有する。他の実施形態においては、該ｓｉＮＡ分子は突出を欠く（すなわち、平滑末端を有する）。好ましくは、該ｓｉＮＡ分子はセンスおよびアンチセンス鎖の両方に２ヌクレオチドの３’突出を有する。該突出は修飾されている又は修飾されていないことが可能である。該突出における修飾ヌクレオチドの例には、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、ロック化（ｌｏｃｋｅｄ）核酸（ＬＮＡ）ヌクレオチドまたは２’−デオキシヌクレオチドが含まれるが、これらに限定されるものではない。該アンチセンス鎖における突出ヌクレオチドは、ＩＤＨ１関連標的配列におけるヌクレオチドに相補的なヌクレオチドを含みうる。同様に、該センス鎖における突出は、ＩＤＨ１関連標的配列内に存在するヌクレオチドを含みうる。ある場合には、本発明のｓｉＮＡ分子は、２’−Ｏ−アルキル（例えば、２’−Ｏ−メチル）ヌクレオチドであるアンチセンス鎖上の２つの３’突出ヌクレオチド、および２’−デオキシヌクレオチドであるセンス鎖上の２つの３’突出ヌクレオチドを有する。他の場合には、本発明のｓｉＮＡ分子は、アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方において２’−Ｏ−アルキル（例えば、２’−Ｏ−メチル）ヌクレオチドである２つの３’突出ヌクレオチドを有する。ある実施形態においては、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドは２’−Ｏ−メチルウリジンヌクレオチドである。ある場合には、該３’突出はまた、該突出のヌクレオチド間に１以上のホスホロチオアート結合を含む。
【００１８】
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子はキャップ（本明細書においては「末端キャップ」とも称される）を有する。該キャップは５’末端に存在し（５’−キャップ）、または３’末端に存在し（３’−キャップ）、または両末端（例えば、該ｓｉＮＡのセンス鎖の５’および３’末端）に存在する。
【００１９】
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は該アンチセンス鎖の５’末端においてリン酸化されている。該リン酸基はホスファート、ジホスファートまたはトリホスファートでありうる。
【００２０】
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡのアンチセンス鎖は、配列番号９１、１０７、１１１、１１５、１９９、２１３、２２７、２３１、３０３または４１１のいずれかに対する配列同一性を有する少なくとも１５ヌクレオチドを含む。他の実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子のセンス鎖、配列番号９０、１０６、１１０、１１４、１９８、２１２、２２６、２３０、３０２または４１０のいずれかに対する配列同一性を有する少なくとも１５ヌクレオチドを含む。もう１つの実施形態においては、「少なくとも１５ヌクレオチド」は１５個の連続的ヌクレオチドである。
【００２１】
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、配列番号９０および９１、配列番号１０６および１０７、配列番号１１０および１１１、配列番号１１４および１１５、配列番号１９８および１９９、配列番号２１２および２１３、配列番号２２６および２２７、配列番号２３０および２３１、配列番号３０２および３０３、または配列番号４１０および４１１のいずれかを含む。
【００２２】
本発明の二本鎖ｓｉＮＡ分子は対称または非対称でありうる。これらの二本鎖ｓｉＮＡの各鎖は、独立して、ヌクレオチド長において３〜３０ヌクレオチドの範囲でありうる。一般に、本発明のｓｉＮＡ分子の各鎖は約１５〜３０（すなわち、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０）ヌクレオチド長である。
【００２３】
二本鎖である又は二重らせん構造を有する本発明のｓｉＮＡ分子は、独立して、約３〜約３０（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０）塩基対を含む。一般に、本発明のｓｉＮＡの二重らせん構造は１５〜３０塩基対、より一般には１８〜２５塩基対、更に一般には１９〜２４塩基対、最も一般には１９〜２１塩基対長である。
【００２４】
ある実施形態においては、二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子を提供し、ここで、該分子はセンス鎖およびアンチセンス鎖を有し、式（Ａ）：
【００２５】
【化１】
2014522242.tif 000003
（式中、上側の鎖は該二本鎖核酸分子のセンス鎖であり、下側の鎖はアンチセンス鎖であり、該アンチセンス鎖は配列番号４４６、配列番号４５０、配列番号４５１、配列番号４５２、配列番号４７７、配列番号４７８、配列番号４７９、配列番号４８０、配列番号４９８または配列番号５０２の少なくとも１５ヌクレオチド配列を含み、該センス鎖は、該アンチセンス鎖に対する相補性を有する配列を含む；
各Ｎは、独立して、修飾されていない若しくは化学修飾されているヌクレオチドである、または非ヌクレオチドである；
各Ｂは、存在する又は存在しない末端キャップである；
（Ｎ）は突出ヌクレオチドを表し、それらのそれぞれは、独立して、修飾されていない又は化学修飾されている；
Ｘ１およびＸ２は、独立して、０〜４の整数である；
Ｘ３は１５〜３０の整数である；
Ｘ４は１２〜２７の整数である；
［Ｎ１］−［Ｎ２］−［Ｎ３］は修飾ヌクレオチドまたはリボヌクレオチドであり、ここで、［Ｎ１］−［Ｎ２］−［Ｎ３］は、以下のものからなる群から選択される：
（ａ）［Ｎ１］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ２］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである；
（ｂ）［Ｎ１］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ２］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−デオキシヌクレオチドである；
（ｃ）［Ｎ１］は２’−デオキシヌクレオチドであり、［Ｎ２］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−Ｏ−メチルヌクレオチドである；
（ｄ）［Ｎ１］は２’−デオキシヌクレオチドであり、［Ｎ２］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−デオキシヌクレオチドである；および
（ｅ）［Ｎ１］はリボヌクレオチドであり、［Ｎ２］はリボヌクレオチドであり、［Ｎ３］はリボヌクレオチドである）を含む。
【００２６】
１つの実施形態においては、本発明は、
（ａ）ＮＸ４位における１以上のピリミジンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである；
（ｂ）ＮＸ４位における１以上のプリンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである；
（ｃ）ＮＸ３位における１以上のピリミジンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである；および
（ｄ）ＮＸ３位における１以上のプリンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである、式（Ａ）の二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子に関する。
【００２７】
本発明は更に、所望により医薬上許容される担体または希釈剤と組合された、本明細書に記載されている二本鎖核酸分子を含む組成物を提供する。
【００２８】
該組成物の投与は公知方法により行われることが可能であり、該核酸はインビトロまたはインビボで所望の標的細胞内に導入される。
【００２９】
細胞、組織および生物内への本発明の核酸分子の導入に一般に用いられる技術は種々の担体系、試薬およびベクターの使用を含む。本発明における使用に適したそのような担体系の非限定的な例には、コンジュゲート、核酸−脂質粒子、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）、リポソーム、リポプレックス（ｌｉｐｏｐｌｅｘ）、ミセル、ウイロソーム、核酸複合体およびそれらの混合物が含まれる。
【００３０】
本発明の組成物はエアゾール、分散液、溶液（例えば、注射可能溶液）、クリーム、軟膏、錠剤、散剤（粉末）、懸濁液などの形態でありうる。これらの組成物は、いずれかの適当な経路で、例えば、経口的、舌下、頬側、非経口的、鼻腔内または局所的に投与されうる。幾つかの実施形態においては、該組成物はエアゾール化され、吸入により運搬される。
【００３１】
本発明の分子および組成物は広範な治療用途わたる有用性を有する。したがって、本発明のもう１つの態様は、対象の治療における本発明の分子および組成物の使用に関する。したがって、本発明は、ＩＤＨ１関連遺伝子またはタンパク質の作用により又は作用の喪失により引き起こされる状態に罹患している対象、例えばヒトの治療方法を提供し、該方法は、本発明の二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子の有効量を該対象に投与することを含む。ある実施形態においては、該状態は癌（例えば、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、ＡＭＬ）である。
【００３２】
本発明のこれらの及び他の態様は、以下の詳細な説明および添付図面を参照することにより明らかとなろう。更に、本明細書に記載されているいずれの方法または組成物も、本明細書に記載されているいずれかの他の方法または組成物に関して実施されうること、および種々の実施形態が組合されうることが想定される。
【００３３】
また、本発明の種々の態様を説明し及びより詳細に記載するために、本明細書の全体にわたって特許、特許出願および他の文書が引用されている。本明細書に引用されているこれらの参考文献のそれぞれの全体を、図面を含め、参照により本明細書に組み入れることとする。
【００３４】
発明の詳細な説明
Ａ．用語および定義
本出願においては以下の用語および定義が適用される。
【００３５】
本明細書および添付の特許請求の範囲において用いる単数形表現は、文脈に明らかに矛盾しない限り、複数対象物を含む。したがって、例えば、「細胞」に対する言及は２以上の細胞などの組合せを含む。
【００３６】
特に示されていない限り、いずれの濃度範囲、百分率範囲、比範囲または整数範囲も、挙げられている範囲内の任意の整数および適当な場合にはその分数（例えば、整数の１０分の１および１００分の１）の値を含むと理解されるべきである。
【００３７】
数字に関して本明細書中で用いる「約」または「およそ」は、特に示されていない限り、またはそうでないことが文脈から明らかでない限り（そのような数字が、可能な値の１００％を超える場合は除かれる）、一般に、該数字のいずれかの方向（より大きい又はより小さい）の５％の範囲内に含まれる数字を含むと理解される。特に示されていない限り、またはそうでないことが文脈から明らかでない限り、範囲が示されている場合には、該範囲内にエンドポイントが含まれる。
【００３８】
本明細書中で用いる「非塩基」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているとおりのその意味を示す。この語は、一般に、ヌクレオチド塩基を欠く又は糖部分の１’位に核酸塩基の代わりに水素原子（Ｈ）もしくは他の非核酸塩基化学基を有する糖部分に関するものである。例えば、Ａｄａｍｉｃら，米国特許第５，９９８，２０３号を参照されたい。１つの実施形態においては、本発明の非塩基部分はリボース、デオキシリボースまたはジデオキシリボース糖である。
【００３９】
本明細書中で用いる「非環状ヌクレオチド」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。この語は、一般に、非環状リボース糖を有するいずれかのヌクレオチドを意味し、この場合、例えば、該リボース炭素／炭素または炭素／酸素結合のいずれかが、独立して又は一緒になって、該ヌクレオチドに存在しない。
【００４０】
本明細書中で用いる「アルキル」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。この語は、一般に、直鎖状、分枝鎖状、アルケニル、アルキニル基および環式基を含むが芳香族基を含まない飽和または不飽和炭化水素を意味する。それでも、前記アルキルは非芳香族複素環基をも意味する。好ましくは、アルキル基は１〜１２個の炭素を有する。より好ましくは、それは１〜７個の炭素、より好ましくは１〜４個の炭素の低級アルキルである。アルキル基は置換されている又は置換されていないことが可能である。置換されている場合、置換基は、好ましくは、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、＝Ｏ、＝Ｓ、ＮＯ２、ＳＨ、ＮＨ２またはＮＲ１Ｒ２であり、ここで、Ｒ１およびＲ２は、独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ４アルキルである。
【００４１】
本明細書中で用いる「アンチセンス領域」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。本発明の典型的な核酸分子に関しては、この語は、標的核酸配列に対する相補性を有するｓｉＮＡ分子のヌクレオチド配列を意味する。また、ｓｉＮＡ分子のアンチセンス領域は、所望により、ｓｉＮＡ分子のセンス領域に対する相補性を有する核酸配列を含みうる。１つの実施形態においては、該ｓｉＮＡ分子のアンチセンス領域はアンチセンス鎖またはガイド鎖と称される。
【００４２】
「非対称ヘアピン」なる語は、アンチセンス領域、ヌクレオチドまたは非ヌクレオチドを含みうるループ部分、および該アンチセンス領域より少数のヌクレオチドを含むセンス領域（該センス領域は、該アンチセンス領域と塩基対形成しループと二重らせんを形成するのに十分な相補性を有する）を含む直鎖状ｓｉＮＡ分子を意味する。例えば、本発明の非対称ヘアピンｓｉＮＡ分子は、細胞またはインビトロ系においてＲＮＡｉをもたらすのに十分な長さ（例えば、約１５〜約３０、または約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０ヌクレオチド）を有するアンチセンス領域、および約４〜約１２（例えば、約４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２）ヌクレオチドを含むループ領域、および該アンチセンス領域に相補的な約３〜約２５（例えば、約３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５）ヌクレオチドを有するセンス領域を含みうる。該非対称ヘアピンｓｉＮＡ分子は、化学修飾されていることが可能な５’末端ホスファート基をも含みうる。該非対称ヘアピンｓｉＮＡ分子のループ部分は、本明細書に記載されているとおりのヌクレオチド、非ヌクレオチド、リンカー分子またはコンジュゲート分子を含みうる。
【００４３】
本明細書中で用いる「生分解性」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。この語は、一般に、生物学的系における分解、例えば、酵素的分解または化学的分解に関するものである。
【００４４】
本明細書中で用いる「生分解性リンカー」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。本発明の典型的な核酸分子に関しては、この語は、１つの分子をもう１つの分子に連結するために設計された、生物学的系における分解に感受性であるリンカー分子を意味する。該リンカーは核酸または非核酸系リンカーでありうる。例えば、生分解性リンカーは、リガンドまたは生物学的に活性な分子を本発明のｓｉＮＡに結合させるために使用されうる。あるいは、生分解性リンカーは、本発明のｓｉＮＡ分子のセンス鎖とアンチセンス鎖とを結合させるために使用されうる。生分解性リンカーは、その安定性が特定の目的（例えば、特定の組織または細胞型への運搬）のために調節されうるように設計される。核酸系生分解性リンカーの安定性は、種々の化学的手段、例えば、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチドおよび化学修飾ヌクレオチド、例えば２’−Ｏ−メチル、２’−フルオロ、２’−アミノ、２’−Ｏ−アミノ、２’−Ｃ−アリル、２’−Ｏ−アリルおよび他の２’−修飾および塩基修飾ヌクレオチドの組合せを用いることにより調節されうる。該生分解性核酸リンカー分子は二量体、三量体、四量体またはそれより長い核酸分子、例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドであることが可能であり、あるいはリン系結合、例えばホスホルアミダートまたはホスホジエステル結合を有する単一ヌクレオチドを含みうる。該生分解性核酸リンカー分子は核酸バックボーン、核酸糖または核酸塩基修飾をも含みうる。
【００４５】
本明細書中で用いる「生物学的に活性な分子」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。本発明の典型的な核酸分子に関しては、この語は、系において生物学的応答を惹起もしくは修飾しうる、ならびに／または他の生物学的に活性な分子の薬物動態および／もしくは薬力学をモジュレーションしうる化合物または分子を意味する。生物学的に活性な分子の例には、ｓｉＮＡ分子の単独体、または治療的に活性な分子、例えば抗体、コレステロール、ホルモン、抗ウイルス物質、ペプチド、タンパク質、化学療法剤、小分子、ビタミン、補因子、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、酵素核酸、アンチセンス核酸、三重らせん形成性オリゴヌクレオチド、ポリアミン、ポリアミド、ポリエチレングリコール、他のポリエーテル、２−５Ａキメラ、ｓｉＮＡ、ｄｓＲＮＡ、アロザイム、アプタマー、デコイおよびそれらの類似体（これらに限定されるものではない）を含む他の分子とｓｉＮＡ分子との組合せが含まれる。
【００４６】
本明細書中で用いる「生物学的系」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。この語は、一般に、ヒトまたは動物（これらに限定されるものではない）を含む生物学的起源からの精製または未精製形態の物質を意味し、ここで、該系は、ＲＮＡｉ活性に要求される成分を含む。したがって、この語は、例えば、細胞、組織、対象もしくは生物またはそれらの抽出物を含む。この語は生物学的起源からの再構成物質をも含む。
【００４７】
本明細書中で用いる「平滑末端」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。本発明の典型的な核酸分子に関しては、この語は、突出ヌクレオチドを有さない二本鎖ｓｉＮＡ分子の末端を意味する。例えば、平滑末端を有する二本鎖ｓｉＮＡ分子の２本の鎖は、末端の突出ヌクレオチドを伴わずに、マッチした塩基対により、互いに整列する。本発明のｓｉＮＡ二重らせん分子は該二重らせんの一方または両方の末端に平滑末端（例えば、アンチセンス鎖の５’末端に位置する末端、センス鎖の５’末端または二重らせんの両末端）を含みうる。
【００４８】
本明細書中で用いる「キャップ」（本明細書においては「末端キャップ」とも称される）なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。本発明の典型的な核酸分子に関しては、この語は、本発明の１以上の核酸分子の１以上の末端に組込まれうる化学修飾ヌクレオチドまたは非ヌクレオチドでありうる部分を意味する。これらの末端修飾は該核酸分子をエキソヌクレアーゼ消化から保護し、細胞内の運搬および／または局在化を補助しうる。該キャップは本発明の任意の核酸分子の５’末端（５’−キャップ）または３’末端（３’−キャップ）に存在することが可能であり、あるいは両末端に存在することが可能である。キャップは本発明の核酸分子のセンス鎖の５’末端、３’末端ならびに／または５’および３’末端に存在しうる。また、キャップは、所望により、本発明の核酸分子のアンチセンス鎖の３’末端に存在しうる。非限定的な例においては、５’−キャップは、ＬＮＡ、グリセリル、逆方向デオキシ非塩基残基（部分）、４’５’−メチレンヌクレオチド、１−（ベータ−Ｄ−エリスロフラノシル）ヌクレオチド、４’−チオヌクレオチド、炭素環式ヌクレオチド、１，５−アンヒドロヘキシトールヌクレオチド、Ｌ−ヌクレオチド、アルファ−ヌクレオチド、修飾塩基ヌクレオチド、ホスホロジチオアート結合、トレオ−ペントフラノシルヌクレオチド、非環状３’，４’−ｓｅｃｏヌクレオチド、非環状３，４−ジヒドロキシブチルヌクレオチド、非環状３，５−ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、３’−３’−逆方向ヌクレオチド部分、３’−３’−逆方向非塩基部分、３’−２’−逆方向ヌクレオチド部分、３’−２’−逆方向非塩基部分、１，４−ブタンジオールホスファート、３’−ホスホルアミダート、ヘキシルホスファート、アミノヘキシルホスファート、３’−ホスファート、３’−ホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、または架橋もしくは非架橋メチルホスホナート部分を含むが、これらに限定されるものではない。３’−キャップの非限定的な例は、ＬＮＡ、グリセリル、逆方向デオキシ非塩基残基（部分）、４’５’−メチレンヌクレオチド、１−（ベータ−Ｄ−エリスロフラノシル）ヌクレオチド、４’−チオヌクレオチド、炭素環式ヌクレオチド、５’−アミノ−アルキルホスファート、１，３−ジアミノ−２−プロピルホスファート、３−アミノプロピルホスファート、６−アミノヘキシルホスファート、１，２−アミノドデシルホスファート、ヒドロキシプロピルホスファート、１，５−アンヒドロヘキシトールヌクレオチド、Ｌ−ヌクレオチド、アルファ−ヌクレオチド、修飾塩基ヌクレオチド、ホスホロジチオアート、トレオ−ペントフラノシルヌクレオチド、非環状３’，４’−ｓｅｃｏヌクレオチド、３，４−ジヒドロキシブチルヌクレオチド、３，５−ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、５’−５’−逆方向ヌクレオチド部分、５’−５’−逆方向非塩基部分、５’−ホスホルアミダート、５’−ホスホロチオアート、１，４−ブタンジオールホスファート、５’−アミノ、架橋および／または非架橋５’−ホスホルアミダート、ホスホロチオアートおよび／またはホスホロジチオアート、架橋または非架橋メチルホスホナート、ならびに５’−メルカプト部分（より詳細には、参照により本明細書に組み入れるＢｅａｕｃａｇｅおよびＩｙｅｒ，１９９３，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ４９，１９２５を参照されたい）を含むが、これらに限定されるものではない。図５は種々のキャップの非限定的な例の幾つかを示す。
【００４９】
本明細書中で用いる「細胞」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。本発明の典型的な核酸分子に関しては、この語はその通常の生物学的な意味で用いられ、全多細胞生物を意味せず、例えば、特に、ヒトを意味しない。細胞は生物、例えば鳥類、植物および哺乳動物、例えばヒト、ウシ、ヒツジ、霊長類、サル、ブタ、イヌおよびネコに存在しうる。細胞は原核細胞（例えば、細菌細胞）または真核細胞（例えば、哺乳類または植物細胞）でありうる。細胞は体細胞または生殖系列由来、全能性または多能性、分裂性または非分裂性でありうる。また、細胞は配偶子もしくは胚、幹細胞または完全分化細胞から誘導されることが可能であり、あるいはそれらを含みうる。
【００５０】
本明細書中で用いる「化学修飾」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。本発明の典型的な核酸分子に関しては、この語は、天然ｓｉＲＮＡまたはＲＮＡ全般のヌクレオチドとは異なるヌクレオチドの化学構造の任意の修飾を意味する。「化学修飾」なる語は、本明細書に記載されている又は当技術分野で公知の、糖、塩基またはヌクレオチド間結合における天然ｓｉＲＮＡまたはＲＮＡの付加、置換または修飾を含む。ある実施形態においては、「化学修飾」なる語は、ある生物学的系における天然に存在するＲＮＡの或る形態に関するもの、例えば２’−Ｏ−メチル修飾またはイノシン修飾でありうる。
【００５１】
本明細書中で用いる「相補性」または「相補的」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。本発明の典型的な核酸分子に関しては、この語は、一般に、伝統的なワトソン−クリックまたは本明細書に記載されている他の非伝統的な結合型による１つの核酸配列ともう１つの核酸配列との間の水素結合の形成または存在に関するものである。本発明の核酸分子の場合、核酸分子に関するその相補的配列に対する結合自由エネルギーは、該核酸の関連機能（例えば、ＲＮＡｉ活性）の進行を可能にするのに十分なものである。核酸分子に関する結合自由エネルギーは当技術分野でよく知られている（例えば、Ｔｕｒｎｅｒら，１９８７，ＣＳＨＳｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．ＬＩＩ  ｐｐ．１２３−１３３；Ｆｒｉｅｒら，１９８６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：９３７３−９３７７；Ｔｕｒｎｅｒら，１９８７，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０９：３７８３−３７８５を参照されたい）。完全な相補性は、核酸配列の連続残基の全てがもう１つの核酸配列内の同じ数の連続残基と水素結合することを意味する。部分的相補性は核酸分子内に種々のミスマッチまたは塩基対不形成ヌクレオチド（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれ以上のミスマッチ、非ヌクレオチドリンカーまたは塩基対不形成ヌクレオチド）を含むことがあり、これらは、該核酸分子のアンチセンス鎖もしくはアンチセンス領域とセンス鎖もしくはセンス領域との間または該核酸分子のアンチセンス鎖もしくはアンチセンス領域と対応標的核酸分子との間で生じるバルジ、ループまたは突出を形成しうる。そのような部分的相補性は、関与するヌクレオチドの総数に基づいて塩基対不形成ヌクレオチドの数により決定される相補性比率（％相補性）、すなわち、約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％などにより表されうる。そのような部分的相補性は、該核酸分子（例えば、ｓｉＮＡ）がその機能（例えば、配列特異的ＲＮＡｉを引き起こす能力）を維持する限りにおいて許容される。
【００５２】
本明細書中で用いる「組成物」または「製剤」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているそれらの意味を示す。これらの語は、一般に、例えば医薬上許容される担体または希釈剤中の、細胞または対象（例えば、ヒトを含む）内への投与（例えば、全身または局所投与）に適した形態の組成物または製剤を意味する。適当な形態は、１つには、使用または進入経路（例えば、経口、経皮、吸入または注射）に左右される。そのような形態は、該組成物または製剤が標的細胞（すなわち、負荷電核酸が運搬に望ましい細胞）に到達するのを妨げるものであるべきではない。例えば、血流内に注射される組成物は可溶性であるべきである。他の要因は当技術分野で公知であり、毒性、該組成物または製剤がその効果を発揮するのを妨げる形態のような考慮事項を含む。本明細書中で用いる医薬製剤には、ヒトおよび獣医用の製剤が含まれる。本発明の核酸分子との製剤化に適した物質の非限定的な例には、脂質ナノ粒子（例えば、Ｓｅｍｐｌｅら，２０１０，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，Ｆｅｂ；２８（２）：１７２−６．を参照されたい）、Ｐ−糖タンパク質インヒビター（例えば、プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｐ８５）、生分解性重合体、例えば、徐放運搬用のポリ（ＤＬ−ラクチド−コグリコリド）ミクロスフェア（Ｅｍｅｒｉｃｈ，ＤＦら，１９９９，Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，８，４７−５８）、および充填ナノ粒子、例えば、ポリブチルシアノアクリラートから構成されるものが含まれる。本発明の核酸分子の運搬手段の他の非限定的な例には、Ｂｏａｄｏら，１９９８，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ，８７，１３０８−１３１５；Ｔｙｌｅｒら，１９９９，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，４２１，２８０−２８４；Ｐａｒｄｒｉｄｇｅら，１９９５，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．，９２，５５９２−５５９６；Ｂｏａｄｏ，１９９５，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．，１５，７３−１０７；Ａｌｄｒｉａｎ−Ｈｅｒｒａｄａら，１９９８，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２６，４９１０−４９１６；およびＴｙｌｅｒら，１９９９，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．，９６，７０５３−７０５８に記載されている物質が含まれる。「医薬上許容される組成物」または「医薬上許容される製剤」は、本発明の核酸分子の、それらの所望の活性に最も適した身体位置への有効な分布を可能にする組成物または製剤を意味しうる。
【００５３】
「細胞毒性／静細胞物質」なる語は、細胞の機能を直接的に阻害することにより細胞死を引き起こす若しくは細胞増殖を抑制する又は細胞有糸分裂を抑制もしくは阻害する化合物、例えばアルキル化物質、腫瘍壊死因子、インターカレーター、低酸素活性化性化合物、微小管インヒビター／微小管安定化物質、有糸分裂キネシンのインヒビター、ヒストンデアセチラーゼのインヒビター、有糸分裂進行に関与するキナーゼのインヒビター、代謝拮抗物質；生体応答調節物質；ホルモン／抗ホルモン治療用物質、造血成長因子、モノクローナル抗体標的化治療用物質、トポイソメラーゼインヒビター、プロテアソームインヒビターおよびユビキチンリガーゼインヒビターを意味する。
【００５４】
本明細書中で用いる「遺伝子」または「標的遺伝子」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているそれらの意味を示す。これらの語は、一般に、ポリペプチドの産生に必要な部分長または全長のコード配列を含む核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）配列を意味する。標的遺伝子は該核酸配列のＵＴＲまたは非コード領域をも含みうる。遺伝子または標的遺伝子は、機能性ＲＮＡ（ｆＲＮＡ）または非コードＲＮＡ（ｎｃＲＮＡ）、例えば小一過性ＲＮＡ（ｓｔＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、小核ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）、短干渉性ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、核小体ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）およびそれらの前駆体ＲＮＡをコードしうる。そのような非コードＲＮＡは、機能性または調節性細胞過程に関与するｆＲＮＡまたはｎｃＲＮＡの活性をモジュレーションする際にｓｉＮＡ媒介性ＲＮＡ干渉のための標的核酸分子として働きうる。したがって、疾患につながる異常ｆＲＮＡまたはｎｃＲＮＡ活性は本発明のｓｉＮＡ分子によりモジュレーションされうる。ｆＲＮＡおよびｎｃＲＮＡを標的化するｓｉＮＡ分子は、遺伝的刷込み、転写、翻訳または核酸プロセシング（例えば、トランスアミノ化、メチル化など）のような細胞過程に介入することにより対象、生物または細胞の遺伝子型または表現型を操作または改変するためにも使用されうる。標的遺伝子は、細胞由来の遺伝子、内因性遺伝子、トランスジーンまたは外因性遺伝子、例えば、感染後に細胞内に存在する病原体、例えばウイルスの遺伝子でありうる。標的遺伝子を含有する細胞は任意の生物、例えば植物、動物、原虫、ウイルス、細菌または真菌から誘導され、またはそれらに含有されうる。植物の非限定的な例には、単子葉植物、双子葉植物または裸子植物が含まれる。動物の非限定的な例には、脊椎動物または無脊椎動物が含まれる。真菌の非限定的な例には、カビまたは酵母が含まれる。総説としては、例えば、ＳｎｙｄｅｒおよびＧｅｒｓｔｅｉｎ，２００３，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３００，２５８−２６０を参照されたい。
【００５５】
本明細書中で用いる「相同配列」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているそれらの意味を示す。これらの語は、一般に、遺伝子、遺伝子転写産物および／または非コードポリヌクレオチドのような１以上のポリヌクレオチド配列により共有されているヌクレオチド配列を意味する。例えば、相同配列は、関連しているが異なるタンパク質、例えば異なる遺伝子ファミリーメンバー、異なるタンパク質エピトープ、異なるタンパク質アイソフォームまたは完全分岐遺伝子をコードする２以上の遺伝子により共有されているヌクレオチド配列でありうる。相同配列は、２以上の非コードポリヌクレオチド、例えば非コードＤＮＡまたはＲＮＡ、調節配列、イントロン、および転写制御または調節の部位により共有されているヌクレオチド配列でありうる。相同配列は、２以上のポリヌクレオチド配列により共有されている配列領域をも含みうる。相同性は、完全同一（１００％）であることを必要とせず、部分相同配列も本発明の範囲に含まれる（例えば、少なくとも９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％など）。相同性（％）は、２つの配列間のマッチヌクレオチドの数を、比較されている全長により割り算し、１００を掛けた数である。
【００５６】
「ＩＤＨ１」なる語は、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ１（サイトゾルイソクエン酸デヒドロゲナーゼとしても公知）を意味する。表５は、野生型ヒトＩＤＨ１タンパク質をコードするヌクレオチド配列を開示しているＮＣＢＩ  Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号を一覧している。「ＩＤＨ１関連」なる語は、ＩＤＨ１遺伝子またはタンパク質、例えば、野生型ＩＤＨ１遺伝子およびコード化タンパク質の両方、ならびにそれらの誘導体、例えば、野生型ＩＤＨ１遺伝子およびコード化タンパク質および／またはペプチドの突然変異形態および／またはスプライス変異体を含む。例えば、ヒトＩＤＨ１の種々の突然変異形態、すなわち、１３２位のアルギニンがヒスチジンに突然変異しているもの（ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｈ）、システインに突然変異しているもの（ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｃ）、グリシンに突然変異しているもの（ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｇ）、セリンに突然変異しているもの（ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｓ）、ロイシンに突然変異しているもの（ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｌ）およびバリンに突然変異しているもの（ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｖ）が特定されている。これらの突然変異形態、およびそれらをコードするポリヌクレオチドはそれぞれ、「ＩＤＨ１関連」なる語に含まれる。
【００５７】
「ＲＮＡｉ活性の改善」なる語は、インビトロおよび／またはインビボで測定されたＲＮＡｉ活性の増加を意味し、この場合、ＲＮＡｉ活性は、ＲＮＡｉをもたらすｓｉＮＡの能力および本発明のｓｉＮＡの安定性の両方を反映するものである。本発明においては、これらの活性の産生は、複数のリボヌクレオチドを含有する全ＲＮＡ  ｓｉＮＡまたはｓｉＮＡと比較してインビトロおよび／またはインビボで上昇しうる。幾つかの場合には、ｓｉＮＡ分子の活性または安定性は低下（すなわち、１０倍未満）しうるが、ｓｉＮＡ分子の全活性はインビトロおよび／またはインビボで増強しうる。
【００５８】
「含む」（およびそのいずれかの形態、例えば「含み」および「含まれる」）、「含んでなる」（およびそのいずれかの形態、例えば「有する」または「有し」）または「含有する」（およびそのいずれかの形態、例えば「含有し」または「含有している」）なる語は包括性であり、非限定性（オープン・エンド）であり、列挙されていない追加的な要素または方法工程を除外しない。
【００５９】
「抑制」、「ダウンレギュレーション」または「減少（低下）」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているそれらの意味を示す。本発明の典型的な核酸分子に関しては、この語は、一般に、遺伝子の発現における、または１以上のタンパク質もしくはタンパク質サブユニットをコードするＲＮＡ分子または等価ＲＮＡ分子のレベルにおける、あるいは１以上のタンパク質またはタンパク質サブユニットの活性における、本発明の核酸分子（例えば、ｓｉＮＡ）の非存在下で観察されるものより低いレベルへの低下を意味する。ダウンレギュレーションは、翻訳後サイレンシング、例えばＲＮＡｉ媒介性切断、またはＤＮＡメチル化パターンもしくはＤＮＡクロマチン構造の改変にも関連づけられうる。
【００６０】
本明細書中で用いる「間欠的」または「間欠的に」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているそれらの意味を示す。これらの語は、一般に、規則的または不規則的な間隔での周期的停止および開始を意味する。
【００６１】
「ヌクレオシド間結合」または「ヌクレオシド間リンカー」または「ヌクレオチド間結合」または「ヌクレオチド間リンカー」なる語は本明細書中で互換的に用いられ、当技術分野で公知のとおり、２つのヌクレオシド単位間のいずれかのリンカーまたは結合、例えばホスファート、ホスファートの類似体、ホスホナート、グアニジウム、ヒドロキシルアミン、ヒドロキシルヒドラジニル、アミド、カルバマート、アルキルおよび置換アルキル結合（これらに限定されるものではない）を意味する。ヌクレオシド間結合は核酸分子のバックボーンを構成する。
【００６２】
本明細書中で用いる「哺乳類」または「哺乳動物」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているそれらの意味を示す。これらの語は、一般に、任意の温血脊椎動物種、例えばヒト、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ハムスター、モルモット、ウサギ、家畜などを意味する。
【００６３】
「加圧式定量噴霧式吸入器」または「ＭＤＩ」なる語は、容器、該容器を覆う固定キャップ、および該容器内に配置された製剤定量弁を含む単位を意味する。ＭＤＩ系は適当なチャネリング装置を含む。適当なチャネリング装置は、例えば、弁アクチュエータ、および充填キャニスターから該定量弁を介して患者の鼻または口（例えば、マウスピースアクチュエータ）へと医薬が運搬されうる円筒形および円錐状導管を含む。
【００６４】
本明細書中で用いる「マイクロＲＮＡ」または「ｍｉＲＮＡ」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。この語は、一般に、ｍＲＮＡ切断、翻訳抑制／阻害またはヘテロクロマチンサイレンシングのいずれかにより標的メッセンジャーＲＮＡの発現を調節する小さな二本鎖ＲＮＡを意味する（例えば、Ａｍｂｒｏｓ，２００４，Ｎａｔｕｒｅ，４３１，３５０−３５５；Ｂａｒｔｅｌ，２００４，Ｃｅｌｌ，１１６，２８１−２９７；Ｃｕｌｌｅｎ，２００４，Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．，１０２，３−９；Ｈｅら，２００４，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．，５，５２２−５３１；Ｙｉｎｇら，２００４，Ｇｅｎｅ，３４２，２５−２８；およびＳｅｔｈｕｐａｔｈｙら，２００６，ＲＮＡ，１２：１９２−１９７を参照されたい）。
【００６５】
本明細書中で用いる「モジュレート（モジュレーション）」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。本発明の典型的な核酸分子に関しては、この語は、遺伝子の発現または１以上のＲＮＡ分子（コード化または非コード化）のレベルまたは１以上のＲＮＡ分子もしくはタンパク質もしくはタンパク質サブユニットの活性がアップレギュレーションまたはダウンレギュレーションされて、発現、レベルまたは活性が、モジュレーションを引き起こす分子の非存在下で観察されるものより高くなる又は低くなる場合を意味する。例えば、幾つかの実施形態における「モジュレート（モジュレーション）」なる語は、例えば遺伝子発現の、抑制を意味することがあり、他の実施形態においては、例えば遺伝子発現の、増強またはアップレギュレーションを意味することがある。
【００６６】
本明細書中で用いる「修飾（された）ヌクレオチド」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。この語は、一般に、当技術分野で一般に公知の未修飾（または天然）ヌクレオチドの塩基、糖および／またはホスファートの化学構造における修飾を含有するヌクレオチドを意味する。修飾ヌクレオチドの非限定的な例は本明細書および米国特許出願第１２／０６４，０１４号（ＵＳ  ２００９０１７６７２５として公開されている）に記載されている。
【００６７】
「塩基対不形成」なる語は、二本鎖ｓｉＮＡ分子のセンス鎖またはセンス領域とアンチセンス鎖またはアンチセンス領域との間で塩基対形成していないヌクレオチドに関するものである。塩基対不形成ヌクレオチドは、例えば、ミスマッチ、突出および一本鎖ループを含みうるが、これらに限定されるものではない。
【００６８】
「非ヌクレオチド」なる語は、１以上のヌクレオチド単位の代わりにポリヌクレオチド鎖内に取り込まれうる任意の基または化合物、例えば非塩基部分またはアルキル鎖（これらに限定されるものではない）を意味する。該基または化合物は、それが、一般に認識されているヌクレオチド塩基、例えばアデノシン、グアニン、シトシン、ウラシルまたはチミンを含有しておらず、１’位に核酸塩基を欠く点において、「非塩基」である。
【００６９】
「ヌクレオチド」なる語は、当技術分野で一般に認識されているとおりに用いられる。ヌクレオチドは、一般に、核酸塩基、糖およびヌクレオシド間結合、例えばホスファートを含む。該塩基は、当技術分野でよく知られているとおり、天然塩基（標準）、修飾塩基または塩基類似体でありうる。そのような塩基は、一般に、ヌクレオチド糖部分の１’位に位置する。また、該ヌクレオチドは、該糖、ヌクレオシド間結合および／または塩基部分において修飾されていない又は修飾されていることが可能である（互換的に、ヌクレオチド類似体、修飾ヌクレオチド、非天然ヌクレオチド、非標準ヌクレオチドなどとも称される；例えば、米国特許出願第１２／０６４，０１４号（ＵＳ  ２００９０１７６７２５として公開）を参照されたい）。
【００７０】
本明細書中で用いる「突出」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。典型的な二本鎖核酸分子に関しては、この語は、一般に、二本鎖核酸分子の２本の鎖間で塩基対形成していないヌクレオチド配列の末端部分を意味する（例えば、図４を参照されたい）。突出は、存在する場合、典型的には、ｓｉＮＡ二重らせんの一方または両方の鎖の３’末端に位置する。
【００７１】
本明細書中で用いる「非経口」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。この語は、一般に、消化管を経由する以外の方法で分子、薬物、物質または化合物を投与する方法または技術を意味し、表皮、皮下、血管内（例えば、静脈内）、筋肉内または鞘内注射または注入技術などを含む。
【００７２】
「経路標的」なる語は、遺伝子発現または活性の経路に関与する任意の標的を意味する。例えば、いずれかの与えられた標的は、生物学的経路における上流、下流または変更遺伝子を含みうる関連経路標的を有しうる。これらの経路標的遺伝子は、本明細書に記載の疾患、状態および形質の治療において相加または相乗効果をもたらしうる。
【００７３】
「ホスホロチオアート」なる語は、酸素原子の代わりに１以上の硫黄原子を含むヌクレオチド間ホスファート結合を意味する。したがって、ホスホロチオアートなる語はホスホロチオアートおよびホスホロジチオアートヌクレオチド間結合の両方を意味する。
【００７４】
「１位」なる語は、鎖、例えばアンチセンス鎖の末端の第１ヌクレオチドの位置を意味する。本明細書において言及されている全ての位置は、鎖の末端から数えたヌクレオチドの位置であり、例えば、アンチセンス鎖の５’末端からの１〜３位は、アンチセンス鎖の５’末端から数えた１、２および３位の３ヌクレオチドを意味する。
【００７５】
本明細書中で用いる「リボヌクレオチド」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。この語は、一般に、β−Ｄ−リボフラノース部分の２’位にヒドロキシル基を有するヌクレオチドを意味する。
【００７６】
本明細書中で用いる「ＲＮＡ」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。一般に、ＲＮＡなる語は、少なくとも１つのリボフラノシド部分を含む分子を意味する。この語は、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、単離ＲＮＡ、例えば部分精製ＲＮＡ、実質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、組換え製造ＲＮＡ、ならびに１以上のヌクレオチドの付加、欠失、置換および／または改変の点で天然ＲＮＡとは異なる改変ＲＮＡを含みうる。そのような改変は、例えば、ｓｉＮＡの末端または内部への、例えばＲＮＡの１以上のヌクレオチドにおける、非ヌクレオチド物質の付加を含みうる。本発明のＲＮＡ分子におけるヌクレオチドは、非標準ヌクレオチド、例えば、天然に存在しないヌクレオチドまたは化学合成ヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドをも含みうる。これらの改変ＲＮＡは、天然に存在するＲＮＡの類似体と称されうる。
【００７７】
「ＲＮＡ干渉」なる語または「ＲＮＡｉ」なる語は、当技術分野で一般に公知のとおり、短干渉性核酸分子により引き起こされる、細胞における遺伝子発現を抑制またはダウンレギュレーションする生物学的過程を意味する。例えば、以下のものを参照されたい：ＺａｍｏｒｅおよびＨａｌｅｙ，２００５，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０９，１５１９−１５２４；ＶａｕｇｈｎおよびＭａｒｔｉｅｎｓｓｅｎ，２００５，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０９，１５２５−１５２６；Ｚａｍｏｒｅら，２０００，Ｃｅｌｌ，１０１，２５−３３；Ｂａｓｓ，２００１，Ｎａｔｕｒｅ，４１１，４２８−４２９；Ｅｌｂａｓｈｉｒら，２００１，Ｎａｔｕｒｅ，４１１，４９４−４９８；ならびにＫｒｅｕｔｚｅｒら，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ００／４４８９５；Ｚｅｒｎｉｃｋａ−Ｇｏｅｔｚら，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ０１／３６６４６；Ｆｉｒｅ，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９９／３２６１９；Ｐｌａｅｔｉｎｃｋら，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ００／０１８４６；ＭｅｌｌｏおよびＦｉｒｅ，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ０１／２９０５８；Ｄｅｓｃｈａｍｐｓ−Ｄｅｐａｉｌｌｅｔｔｅ，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９９／０７４０９；ならびにＬｉら，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ００／４４９１４；Ａｌｌｓｈｉｒｅ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，１８１８−１８１９；Ｖｏｌｐｅら，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，１８３３−１８３７；Ｊｅｎｕｗｅｉｎ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，２２１５−２２１８；ならびにＨａｌｌら，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，２２３２−２２３７；ＨｕｔｖａｇｎｅｒおよびＺａｍｏｒｅ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，２０５６−６０；ＭｃＭａｎｕｓら，２００２，ＲＮＡ，８，８４２−８５０；Ｒｅｉｎｈａｒｔら，２００２，Ｇｅｎｅ  ＆  Ｄｅｖ．，１６，１６１６−１６２６；ならびにＲｅｉｎｈａｒｔ  ＆  Ｂａｒｔｅｌ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，１８３１。また、ＲＮＡｉなる語は、例えば翻訳後遺伝子サイレンシング、翻訳抑制、転写抑制またはエピジェネティクス（後成学）のような配列特異的ＲＮＡ干渉を示すために用いられる他の語と同意義であると意図される。例えば、本発明のｓｉＮＡ分子は、転写後レベルまたは転写前レベルのいずれかにおいて遺伝子を後成学的にサイレンシングするために使用されうる。非限定的な例においては、本発明のｓｉＮＡ分子による遺伝子発現のエピジェネティック（後成的）モジュレーションは、遺伝子発現を改変するためのクロマチン構造またはメチル化パターンのｓｉＮＡ媒介性修飾により生じうる（例えば、Ｖｅｒｄｅｌら，２００４，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０３，６７２−６７６；Ｐａｌ−Ｂｈａｄｒａら，２００４，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０３，６６９−６７２；Ａｌｌｓｈｉｒｅ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，１８１８−１８１９；Ｖｏｌｐｅら，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，１８３３−１８３７；Ｊｅｎｕｗｅｉｎ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，２２１５−２２１８；およびＨａｌｌら，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，２２３２−２２３７を参照されたい）。もう１つの非限定的な例においては、本発明のｓｉＮＡ分子による遺伝子発現のモジュレー��ョンは、当技術分野で公知のとおり、ＲＩＳＣまたは翻訳抑制によるＲＮＡ（コードまたは非コードＲＮＡ）のｓｉＮＡ媒介性切断により生じることがあり、あるいはモジュレーションは転写抑制により生じうる（例えば、Ｊａｎｏｗｓｋｉら，２００５，Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１，２１６−２２２を参照されたい）。
【００７８】
「ＲＮＡｉインヒビター」なる語は、細胞または生物におけるＲＮＡ干渉機能または活性をダウンレギュレーション、低減または抑制しうる任意の分子を意味する。ＲＮＡｉインヒビターは、タンパク質成分、例えばＲＩＳＣ、または核酸成分、例えばｍｉＲＮＡもしくはｓｉＲＮＡを含むＲＮＡｉ経路のいずれかの成分の機能と相互作用し又は干渉することにより、ＲＮＡｉをダウンレギュレーション、低減または抑制（例えば、標的ポリヌクレオチドのＲＮＡｉ媒介性切断、翻訳抑制または転写サイレンシング）しうる。ＲＮＡｉインヒビターは、ＲＩＳＣ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡまたは細胞または生物におけるＲＮＡｉ経路のいずれかの他の成分の機能と相互作用し又は干渉しうるｓｉＮＡ分子、アンチセンス分子、アプタマーまたは小分子でありうる。ＲＮＡｉ（例えば、標的ポリヌクレオチドのＲＮＡｉ媒介性切断、翻訳抑制または転写サイレンシング）により、本発明のＲＮＡｉインヒビターは、標的遺伝子の発現をモジュレーション（例えば、アップレギュレーションまたはダウンレギュレーション）するために使用されうる。
【００７９】
本明細書中で用いる「センス領域」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。本発明の典型的な核酸分子に関しては、この語は、ｓｉＮＡ分子のアンチセンス領域に対する相補性を有するｓｉＮＡ分子のヌクレオチド配列を意味する。また、ｓｉＮＡ分子のセンス領域は、標的核酸配列に対する相同性または配列同一性を有する核酸配列を含みうる。１つの実施形態においては、該ｓｉＮＡ分子のセンス領域はセンス鎖またはパッセンジャー鎖とも称される。
【００８０】
「短干渉性核酸」、「ｓｉＮＡ」、「短干渉性ＲＮＡ」、「ｓｉＲＮＡ」、「短干渉性核酸分子」、「短干渉性オリゴヌクレオチド分子」または「化学修飾短干渉性核酸分子」なる語は、配列特異的にＲＮＡ干渉（「ＲＮＡｉ」）または遺伝子サイレンシングを引き起こすことにより遺伝子発現またはウイルス複製を抑制またはダウンレギュレーションしうる任意の核酸分子を意味する。これらの語は、個々の核酸分子、複数のそのような核酸分子またはそのような核酸分子のプールの双方を意味しうる。該ｓｉＮＡは、自己相補的なセンスおよびアンチセンス鎖を含む二本鎖核酸分子であることが可能であり、ここで、該アンチセンス鎖は、標的核酸分子またはその一部におけるヌクレオチド配列に相補的であるヌクレオチド配列を含み、該センス鎖は、標的核酸配列またはその一部に対応するヌレオチド配列を含む。該ｓｉＮＡは、二重らせん、非対称二重らせん、ヘアピンまたは非対称ヘアピン二次構造（自己相補的なセンスおよびアンチセンス領域を有するもの）を有するポリヌクレオチドであることが可能であり、ここで、該アンチセンス領域は、別の標的核酸分子またはその一部におけるヌクレオチド配列に相補的であるヌクレオチド配列を含み、該センス領域は、標的核酸配列またはその一部に対応するヌクレオチド配列を含む。該ｓｉＮＡは、自己相補的なセンスおよびアンチセンス領域を含む２以上のループ構造およびステムを有する環状一本鎖ポリヌクレオチドであることが可能であり、ここで、該アンチセンス領域は、標的核酸分子またはその一部におけるヌクレオチド配列に相補的であるヌクレオチド配列を含み、該センス領域は、標的核酸配列またはその一部に対応するヌクレオチド配列を含み、該環状ポリヌクレオチドは、ＲＮＡｉを引き起こしうる活性ｓｉＮＡ分子を産生するようにインビボまたはインビトロのいずれかでプロセシング（加工）されうる。該ｓｉＮＡは、標的核酸分子またはその一部におけるヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を有する一本鎖ポリヌクレオチドを含むことが可能であり（例えば、この場合、そのようなｓｉＮＡ分子は、標的核酸配列またはその一部に対応するヌクレオチド配列のｓｉＮＡ分子内の存在を要しない）、ここで、該一本鎖ポリヌクレオチドは更に、末端ホスファート基、例えば５’−ホスファート（例えば、Ｍａｒｔｉｎｅｚら，２００２，Ｃｅｌｌ，１１０，５６３−５７４およびＳｃｈｗａｒｚら，２００２，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ，１０，５３７−５６８を参照されたい）または５’，３’−ジホスファートを含みうる。
【００８１】
本明細書中で用いる「対象」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。この語は、一般に、本発明の核酸分子が投与されうる生物を意味する。対象は、ヒトまたはヒト細胞を含む哺乳類または哺乳類細胞でありうる。この語はまた、外植細胞のドナーもしくはレシピエントである生物または該細胞自体を意味する。
【００８２】
本明細書中で用いる「全身投与」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。この語は、一般に、血流中の薬物のインビボ全身吸収または蓄積およびそれに続く全身への分布を意味する。
【００８３】
「ＩＤＨ１」または「ＩＤＨ１関連」なる語と共に用いられた場合の「標的」なる語は、任意のＩＤＨ１関連標的タンパク質、ペプチドもしくはポリペプチド、またはコード化ポリヌクレオチド／核酸配列（例えば、標的ＤＮＡまたは標的ＲＮＡ）（限定的なものではないが、表２および表５に一覧されているものを含む）を意味する。したがって、ＩＤＨ１関連標的は、野生型ＩＤＨ１タンパク質およびそのコード遺伝子の両方、ならびにそれらの誘導体、例えば、野生型ＩＤＨ１遺伝子およびコード化タンパク質および／またはペプチドの突然変異形態および／またはスプライス変異体でありうる。例えば、ヒトＩＤＨ１の種々の突然変異形態、すなわち、１３２位のアルギニンがヒスチジンに突然変異しているもの（ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｈ）、システインに突然変異しているもの（ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｃ）、グリシンに突然変異しているもの（ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｇ）、セリンに突然変異しているもの（ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｓ）、ロイシンに突然変異しているもの（ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｌ）およびバリンに突然変異しているもの（ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｖ）が特定されている。
【００８４】
本明細書中で用いる「標的部位」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。この語は、一般に、例えば、標的配列に相補的な配列をアンチセンス領域内に含有するｓｉＮＡ構築物によりもたらされる切断のために「標的化」される標的核酸分子（例えば、ＲＮＡ）内の配列を意味する。
【００８５】
本明細書中で用いる「治療的有効量」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。この語は、一般に、研究者、獣医、医師または他の臨床家により求められている細胞、組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を惹起する化合物または組成物の量を意味する。例えば、疾患または障害に関連した測定可能なパラメータにおける少なくとも２５％の減少が認められる場合に、与えられた臨床的治療が有効だとみなされるならば、その疾患または障害の治療のための薬物の治療的有効量は、そのパラメータにおいて少なくとも２５％の減少を引き起こすのに必要な量である。
【００８６】
本明細書中で用いる「汎用塩基」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。汎用塩基なる語は、一般に、天然ＤＮＡ／ＲＮＡ塩基のそれぞれと塩基対を形成するヌクレオチド塩基類似体であって、それらの間で相違をほとんど又は全く伴わないものを意味する。汎用塩基の非限定的な例には、当技術分野で公知のとおり（例えば、Ｌｏａｋｅｓ，２００１，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２９，２４３７−２４４７を参照されたい）、Ｃ−フェニル、Ｃ−ナフチルおよび他の芳香族誘導体、イノシン、アゾールカルボキサミドおよびニトロアゾール誘導体、例えば３−ニトロピロール、４−ニトロインドール、５−ニトロインドールおよび６−ニトロインドールが含まれる。
【００８７】
本明細書中で用いる「アップレギュレーション」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。本発明の典型的な核酸分子に関しては、この語は、遺伝子の発現、または１以上のタンパク質もしくはタンパク質サブユニットをコードするＲＮＡ分子もしくは等価ＲＮＡ分子のレベル、または１以上のＲＮＡ、タンパク質もしくはタンパク質サブユニットの活性の、本発明の核酸分子（例えば、ｓｉＮＡ）の非存在下で観察されるものを超えるレベルまでの増加を意味する。ある場合には、ｓｉＮＡ分子での遺伝子発現のアップレギュレーションまたは促進は、不活性または弱化分子の存在下で観察されるレベルを超えるものである。他の場合には、ｓｉＮＡ分子での遺伝子発現のアップレギュレーションまたは促進は、例えば、スクランブル配列またはミスマッチを有するｓｉＮＡ分子の存在下で観察されるレベルを超えるものである。更に他の場合には、本発明の核酸分子での遺伝子発現のアップレギュレーションまたは促進は、該核酸分子の存在下のほうが、その非存在下より大きい。幾つかの場合には、遺伝子発現のアップレギュレーションまたは促進は、ＲＮＡ媒介性遺伝子サイレンシング、例えば、アップレギュレーションされるべき対象遺伝子の発現をダウンレギュレーションし、抑制し又はサイレンシングするコードまたは非コードＲＮＡ標的のＲＮＡｉ媒介性切断またはサイレンシングの抑制に関連づけられる。遺伝子発現のダウンレギュレーションは、例えば、コードＲＮＡまたはそのコード化タンパク質により、例えば負のフィードバックまたは拮抗作用により誘導されうる。遺伝子発現のダウンレギュレーションは、例えば、関心のある遺伝子に対する調節制御を有する非コードＲＮＡにより、例えば、翻訳抑制、クロマチン構造、メチル化、ＲＩＳＣ媒介性ＲＮＡ切断または翻訳抑制により該遺伝子の発現をサイレンシングすることにより誘導されうる。したがって、関心のある遺伝子をダウンレギュレーション、抑制またはサイレンシングする標的の抑制またはダウンレギュレーションは、治療用の対象遺伝子の発現をアップレギュレーションするために用いられうる。
【００８８】
本明細書中で用いる「ベクター」なる語は、当技術分野で一般に受け入れられているその意味を示す。ベクターなる語は、一般に、１以上の核酸分子を運搬するために用いられるいずれかの核酸および／またはウイルスに基づく発現系または技術を意味する。
【００８９】
Ｂ．本発明のｓｉＮＡ分子
本発明は、疾患および／または生理的状態、例えば、ＩＤＨ１関連遺伝子またはタンパク質の発現に関連した細胞増殖関連障害、例えば、中枢神経系の癌（神経膠腫）およびＡＭＬ（これらに限定されるものではない）を治療するために使用されうるＩＤＨ１関連ポリヌクレオチド配列を標的化するｓｉＮＡを含む組成物および方法を提供する。本発明の特定の態様および実施形態においては、本発明の核酸分子は、表１ａおよび表１ｂに示されている配列の少なくとも１５ヌクレオチド配列を含む。該ｓｉＮＡは幾つかの形態で提供されうる。例えば、本発明のｓｉＮＡは１以上のｓｉＮＡ化合物として単離されることが可能であり、あるいはそれは核酸プラスミド内の転写カセットの形態をとることが可能である。該ｓｉＮＡは化学合成されることも可能である。該ｓｉＮＡは、例えば表１ｃおよび表６に示されているような修飾および／または修飾パターンを含みうる。したがって、種々の実施形態においては、本発明の核酸の鎖または領域の少なくとも１つは、配列番号１〜５０６からなる配列の群から選択される少なくとも１５ヌクレオチド配列を含む。該ｓｉＮＡは単独で投与されることが可能であり、あるいは他のｓｉＮＡ分子またはＩＤＨ１関連疾患もしくは状態を治療する通常の物質と共投与されることが可能である。
【００９０】
本発明のｓｉＮＡ分子は、ＲＮＡ転写産物との相互作用により或いは個々の遺伝子配列との相互作用により、特にＩＤＨ１関連遺伝子の遺伝子サイレンシングを引き起こすために使用されうる。そのような相互作用は、例えば、ＲＮＡｉにより、または標的のクロマチン構造もしくはメチル化パターンをモジュレーションし標的のヌクレオチド配列で標的遺伝子の転写を妨げることによりサイレンシングを引き起こす細胞過程により、転写レベルまたは転写後レベルで遺伝子サイレンシングのモジュレーションを引き起こす。よく詳細には、該標的はＩＤＨ１関連ＲＮＡ、ＤＮＡまたはｍＲＮＡのいずれかである。
【００９１】
１つの態様においては、本発明は、細胞または哺乳動物におけるＩＤＨ１関連遺伝子の発現を抑制するための短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子を提供する。該ｓｉＮＡは一本鎖または二本鎖でありうる。二本鎖の場合、該ｓｉＮＡはセンスおよびアンチセンス鎖を含む。アンチセンス鎖は、ＩＤＨ１関連遺伝子の発現において形成されるｍＲＮＡの少なくとも一部に相補的である。センス鎖はアンチセンス鎖に相補的な領域を含む。特定の実施形態においては、アンチセンス鎖は、表１ｂ（配列番号４４０〜５０６）から選択されるアンチセンス配列の少なくとも１５ヌクレオチドを含む。一般に、二本鎖ｓｉＮＡは、表１ｂ（配列番号１〜６７）から選択されるセンス鎖の少なくとも１５ヌクレオチドと、表１ｂ（配列番号４４０〜５０６）から選択されるアンチセンス鎖の少なくとも１５ヌクレオチドとを含む。もう１つの実施形態においては、「少なくとも１５ヌクレオチド」は１５個の連続的ヌクレオチドである。
【００９２】
本発明のｓｉＮＡのヌクレオチドの１以上は、所望により、修飾されていてもよい。化学修飾ｓｉＮＡの他の実施形態においては、本発明の幾つかのｓｉＮＡは、表１ｃに記載されている配列番号６８〜４３９から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含む。他の実施形態においては、該ｓｉＮＡは、表１ｃに記載されている配列番号６８〜４３９から選択される少なくとも２つの配列を含み、ここで、前記の少なくとも２つの配列の１つは、前記の少なくとも２つの配列のもう１つに相補的であり、前記の少なくとも２つの配列の１つは、ＩＤＨ１関連遺伝子の発現において生じるｍＲＮＡの配列に相補的である。本発明の或る修飾ｓｉＮＡの例を表１ｃに示す。
【００９３】
本発明の二本鎖ＲＮＡ分子は、相補的であり対称または非対称でありうる２つの異なる別々の鎖、すなわち、２つの一本鎖ＲＮＡ分子を含むことが可能であり、あるいは、２つの相補的部分（例えば、センス領域およびアンチセンス領域）が塩基対形成し、１以上の一本鎖「ヘアピン」領域（すなわち、ループ）により共有結合されていて例えば一本鎖短ヘアピンポリヌクレオチドまたは環状一本鎖ポリヌクレオチドが生じている１つの一本鎖分子を含むことが可能である。
【００９４】
該リンカーはポリヌクレオチドリンカーまたは非ヌクレオチドリンカーでありうる。幾つかの実施形態においては、該リンカーは非ヌクレオチドリンカーである。幾つかの実施形態においては、本発明のヘアピンまたは環状ｓｉＮＡ分子は１以上のループモチーフを含有し、ここで、該ｓｉＮＡ分子のループ部分の少なくとも１つは生分解性である。例えば、インビボでの該ｓｉＮＡ分子のループ部分の分解が、１、２、３または４ヌクレオチドを含む３’末端ヌクレオチド突出のような３’末端突出を有する二本鎖ｓｉＮＡ分子を与えうるように、本発明の一本鎖ヘアピンｓｉＮＡ分子は設計される。あるいは、インビボでのｓｉＮＡ分子のループ部分の分解が、約２ヌクレオチドを含む３’末端ヌクレオチド突出のような３’末端突出を有する二本鎖ｓｉＮＡ分子を与えうるように、本発明の環状ｓｉＮＡ分子は設計される。
【００９５】
本発明の対称ｓｉＮＡ分子においては、それぞれの鎖、センス（パッセンジャー）鎖およびアンチセンス（ガイド）鎖は、独立して、約１５〜約３０（例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０）ヌクレオチド長である。一般に、本発明の対称ｓｉＮＡ分子の各鎖は約１９〜２４（例えば、約１９、２０、２１、２２、２３または２４）ヌクレオチド長である。
【００９６】
非対称ｓｉＮＡ分子においては、該分子のアンチセンス領域または鎖は約１５〜約３０（例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０）ヌクレオチド長であり、ここで、センス領域は約３〜約２５（例えば、約３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５）ヌクレオチド長である。一般に、本発明の非対称ｓｉＮＡ分子の各鎖は約１９〜２４（例えば、約１９、２０、２１、２２、２３または２４）ヌクレオチド長である。
【００９７】
更に他の実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は一本鎖ヘアピンｓｉＮＡ分子を含み、ここで、該ｓｉＮＡ分子は約２５〜約７０（例えば、約２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、４０、４５、５０、５５、６０、６５または７０）ヌクレオチド長である。
【００９８】
更に他の実施形態においては、本発明はｓｉＮＡ分子は一本鎖環状ｓｉＮＡ分子を含み、ここで、該ｓｉＮＡ分子は約３８〜約７０（例えば、約３８、４０、４５、５０、５５、６０、６５または７０）ヌクレオチド長である。
【００９９】
更に他の実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は一本鎖非環状ｓｉＮＡ分子を含み、ここで、該ｓｉＮＡ分子は、独立して、約１５〜約３０（例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０）ヌクレオチド長である。
【０１００】
種々の対称実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ二重らせんは、独立して、約１５〜約３０（例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０）塩基対を含む。一般に、該ｓｉＮＡの二重らせん構造は１５〜３０、より一般には１８〜２５、更に一般には１９〜２４、最も一般には１９〜２１塩基対を含有する。
【０１０１】
本発明の二重らせんｓｉＮＡ分子が非対称である更に他の実施形態においては、該ｓｉＮＡ分子は約３〜２５（例えば、約３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５）塩基対を含む。一般に、該ｓｉＮＡの二重らせん構造は１５〜２５、より一般には１８〜２５、更に一般には１９〜２４、最も一般には１９〜２１塩基対を含有する。
【０１０２】
本発明のｓｉＮＡ分子がヘアピンまたは環状構造である更に他の実施形態においては、該ｓｉＮＡ分子は約１５〜約３０（例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０）塩基対を含む。
【０１０３】
本発明のｓｉＮＡ分子のセンス鎖およびアンチセンス鎖またはセンス領域およびアンチセンス領域は相補的でありうる。また、該アンチセンス鎖またはアンチセンス領域は、例えば表５においてＮＣＢＩ  Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号により表されている配列または表２に開示されている配列（これらに限定されるものではない）のようなＩＤＨ１関連標的ＲＮＡのヌクレオチド配列またはその一部に相補的でありうる。該ｓｉＮＡのセンス鎖またはセンス領域はＩＤＨ１関連遺伝子またはその一部のヌクレオチド配列を含みうる。ある実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子のセンス領域またはセンス鎖は、例えば表５においてＮＣＢＩ  Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号により表されている配列または表２に開示されている配列（これらに限定されるものではない）のようなＩＤＨ１関連標的ポリヌクレオチド配列に相補的である、該ｓｉＮＡ分子のアンチセンス領域またはアンチセンス鎖の部分に相補的である。
【０１０４】
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は該ｓｉＮＡ分子のセンス鎖またはセンス領域とアンチセンス鎖またはアンチセンス領域との間に完全な相補性を有する。他の又は同じ実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子のアンチセンス鎖は対応ＩＤＨ１関連標的核酸分子に完全に相補的である。
【０１０５】
更に他の実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、該ｓｉＮＡ分子のセンス鎖またはセンス領域とアンチセンス鎖またはアンチセンス領域との間、あるいは該ｓｉＮＡ分子のアンチセンス鎖またはアンチセンス領域と対応ＩＤＨ１関連標的核酸分子との間に部分的な相補性（すなわち、１００％未満の相補性）を有する。したがって、幾つかの実施形態においては、本発明の二本鎖核酸分子は、他方の鎖のヌクレオチドに相補的である約１５〜約３０（例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０）ヌクレオチドを一方の鎖内に有する。他の実施形態においては、該分子は、該二本鎖核酸分子のアンチセンス領域のヌクレオチドに相補的である約１５〜約３０（例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０）ヌクレオチドをセンス領域内に有する。ある実施形態においては、本発明の二本鎖核酸分子は、対応ＩＤＨ１関連標的核酸分子のヌクレオチド配列に相補的である約１５〜約３０（例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０）ヌクレオチドをアンチセンス鎖内に有する。
【０１０６】
他の実施形態においては、該ｓｉＮＡ分子は、該ｓｉＮＡ分子がその活性、例えばＲＮＡｉを引き起こす活性を維持する限り、１以上のヌクレオチドの欠失、置換、ミスマッチおよび／または付加を含有しうる。非限定的な例においては、該欠失、置換、ミスマッチおよび／または付加はループまたはバルジ、あるいはゆらぎ又は他の代替的（非ワトソン−クリック）塩基対を形成しうる。したがって、幾つかの実施形態においては、例えば、本発明の二本鎖核酸分子は、他方の鎖または領域に対するミスマッチまたは塩基対不形成を有する１以上（例えば、１、２、３、４、５または６）のヌクレオチドを一方の鎖または領域内に有する。他の実施形態においては、本発明の二本鎖核酸分子は、他方の鎖または領域に対するミスマッチまたは塩基対不形成を有する１以上（例えば、１、２、３、４、５または６）のヌクレオチドを各鎖または領域内に有する。好ましい実施形態においては、本発明のｓｉＮＡは３個以下のミスマッチを含有する。該ｓｉＮＡのアンチセンス鎖が標的配列に対するミスマッチを含有する場合、ミスマッチの領域は相補性の領域の中心部に位置しないことが好ましい。
【０１０７】
他の実施形態においては、該ｓｉＮＡ分子は、該ｓｉＮＡ分子がその活性、例えばＲＮＡｉを引き起こす活性を維持する限り、１以上のヌクレオチドの欠失、置換、ミスマッチおよび／または付加を配列に有する配列番号１〜６７および配列番号４４０〜５０６（表１ｂに示されている）から選択される少なくとも１つの配列を含有しうる。非限定的な例においては、該欠失、置換、ミスマッチおよび／または付加はループまたはバルジ、あるいはゆらぎ又は他の代替的（非ワトソン−クリック）塩基対を形成しうる。
【０１０８】
本発明はまた、第１鎖および第２鎖が互いに相補的であり、少なくとも１つの鎖が、配列番号１〜６７および配列番号４４０〜５０６（表１ｂに示されている）から選択されるポリヌクレオチド配列に高いストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズ可能であり、該ヌクレオチドのいずれかが修飾されていない又は化学修飾されている、二本鎖核酸（ｓｉＮＡ）分子を含む。ハイブリダイゼーション技術は当業者によく知られている（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  Ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）を参照されたい）。好ましいストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、５０％  ホルムアミド、５×ＳＳＣ（１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１５ｍＭ  クエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭ  リン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハルト液、１０％  硫酸デキストランおよび２０μｇ／ｍｌ  変性せん断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中、４２℃での一晩のインキュベーション、ならびにそれに続く、約６５℃での０．１×ＳＳＣ中のフィルターの洗浄を含む。１つの特定の実施形態においては、第１鎖は、他方の鎖のヌクレオチドに相補的である約１５、１６、１７、１８、１９、２０または２１ヌクレオチドを有し、少なくとも１つの鎖は、配列番号１〜６７および配列番号４４０〜５０６（表１ｂに示されている）から選択されるポリヌクレオチド配列にハイブリダイズ可能である。より好ましい実施形態においては、第１鎖は、他方の鎖のヌクレオチドに相補的である約１５、１６、１７、１８、１９、２０または２１ヌクレオチドを有し、少なくとも１つの鎖は、配列番号７、配列番号４４６、配列番号１１、配列番号４５０、配列番号１２、配列番号４５１、配列番号１３、配列番号４５２、配列番号３８、配列番号４７７、配列番号３９、配列番号４７８、配列番号４０、配列番号４７９、配列番号４１、配列番号４８０、配列番号５９、配列番号４９８、配列番号６３または配列番号５０２に高いストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズ可能であり、該ヌクレオチドのいずれかは修飾されておらず又は化学修飾されている。
【０１０９】
ある実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は約１〜約４（例えば、約１、２、３または４）ヌクレオチドの突出を含む。該突出におけるヌクレオチドは同じ又は異なるヌクレオチドでありうる。幾つかの実施形態においては、該突出は該二本鎖核酸分子の一方または両方の鎖の３’末端に存在する。例えば、本発明の二本鎖核酸分子は、該二本鎖核酸分子のアンチセンス鎖／領域の３’末端、センス鎖／領域の３’末端、またはアンチセンス鎖／領域およびセンス鎖／領域の両方にヌクレオチドまたは非ヌクレオチド突出を含みうる。
【０１１０】
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子の突出部分を含むヌクレオチドは、ＩＤＨ１関連標的ポリヌクレオチド配列に基づく配列を含み、ここで、本発明のｓｉＮＡ分子のアンチセンス鎖／領域の突出部分を含むヌクレオチドは該ＩＤＨ１関連標的ポリヌクレオチド配列内のヌクレオチドに相補的であり、および／または本発明のｓｉＮＡ分子のセンス鎖／領域の突出部分を含むヌクレオチドは該ＩＤＨ１関連標的ポリヌクレオチド配列内のヌクレオチドを含みうる。したがって、幾つかの実施形態においては、該突出は、該ＩＤＨ１関連標的ポリヌクレオチド配列の部分に相補的である２ヌクレオチドの突出を含む。しかし、他の実施形態においては、該突出は、該ＩＤＨ１関連標的ポリヌクレオチド配列の部分に相補的でない２ヌクレオチドの突出を含む。ある実施形態においては、該突出は、ＩＤＨ１関連標的ポリヌクレオチド配列の部分に相補的でない３’−ＵＵ突出を含む。他の実施形態においては、該突出はアンチセンス鎖の３’末端におけるＵＵ突出およびセンス鎖の３’末端におけるＴＴ突出を含む。他の実施形態においては、該突出は、本明細書における実施例、表および図に記載されているヌクレオチドを含む。
【０１１１】
３’末端ヌクレオチド突出を有する本明細書に記載されているｓｉＮＡ分子の実施形態のいずれかにおいては、該突出は、所望により、１以上の核酸糖、塩基またはバックボーン位置において化学修飾されている。本発明の二本鎖核酸（ｓｉＮＡ）分子の突出部分における修飾ヌクレオチドの代表的で非限定的な例には、２’−Ｏ−アルキル（例えば、２’−Ｏ−メチル）、２’−デオキシ、２’−デオキシ−２’−フルオロ、２’−デオキシ−２’−フルオロアラビノ（ＦＡＮＡ）、４’−チオ、２’−Ｏ−トリフルオロメチル、２’−Ｏ−エチル−トリフルオロメトキシ、２’−Ｏ−ジフルオロメトキシ−エトキシ、汎用塩基、非環状または５’−Ｃ−メチルヌクレオチドが含まれる。より好ましい実施形態においては、該突出ヌクレオチドは、それぞれ独立して、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−Ｏ−メチルヌクレオチド、２’−デオキシ−２−フルオロヌクレオチドまたは２’−デオキシリボヌクレオチドである。幾つかの場合には、該突出ヌクレオチドは１以上のホスホロチオアート結合により連結されている。
【０１１２】
更に他の実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、平滑末端を有する（すなわち、ヌクレオチド突出を伴わない）二重らせん核酸分子を含み、ここで、両末端が平滑であり、あるいは該末端の１つが平滑である。幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は１つの平滑末端を含み、例えば、この場合、アンチセンス鎖の５’末端およびセンス鎖の３’末端はいずれの突出ヌクレオチドをも有さず、あるいはアンチセンス鎖の３’末端およびセンス鎖の５’末端はいずれの突出ヌクレオチドをも有さない。他の実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は２つの平滑末端を含み、例えば、この場合、アンチセンス鎖の３’末端およびセンス鎖の５’末端ならびにアンチセンス鎖の５’末端およびセンス鎖の３’末端はいずれの突出ヌクレオチドをも有さない。
【０１１３】
本発明のｓｉＮＡ分子の実施形態または態様のいずれかにおいては、センス鎖および／またはアンチセンス鎖は更に、該センス鎖および／またはアンチセンス鎖の３’末端、５’末端または３’および５’末端の両方にキャップ（例えば、本明細書に記載されているもの、または当技術分野で公知のもの）を有する。ヘアピンｓｉＮＡ分子の場合、該キャップは該ポリヌクレオチドの末端ヌクレオチドの一方または両方に存在しうる。幾つかの実施形態においては、該キャップは二本鎖ｓｉＮＡ分子のセンス鎖の一方または両方の末端に存在する。他の実施形態においては、該キャップはアンチセンス（ガイド）鎖の３’末端に存在する。好ましい実施形態においては、キャップはセンス鎖の３’末端およびセンス鎖の５’末端に存在する。
【０１１４】
そのような末端キャップの代表的で非限定的な例には、逆方向非塩基ヌクレオチド、逆方向デオキシ非塩基ヌクレオチド、逆方向ヌクレオチド部分、図５に示されている基、グリセリル修飾、アルキルもしくはシクロアルキル基、複素環、または当技術分野で一般に公知のいずれかの他のキャップが含まれる。
【０１１５】
本発明のｓｉＮＡ分子の実施形態のいずれかは５’ホスファート末端を有しうる。幾つかの実施形態においては、該ｓｉＮＡは末端ホスファートを欠く。
【０１１６】
本発明のいずれかのｓｉＮＡ分子または構築物は１以上の化学修飾を含みうる。修飾は、例えば安定性、活性、毒性、免疫応答（例えば、インターフェロン応答、炎症性もしくは炎症促進性サイトカイン応答またはＴｏｌｌ様受容体応答の刺激の阻害）および／またはバイオアベイラビリティのようなインビトロまたはインビボ特性を改善するために用いられうる。
【０１１７】
出願人は、対応未修飾ｓｉＮＡ分子と比較して改善されたＲＮＡｉ活性および／または安定性を有する化学修飾ｓｉＮＡ分子を本明細書に記載している。本明細書に開示されている種々の化学修飾ｓｉＮＡモチーフは、未修飾または最低限度に修飾された活性ｓｉＲＮＡに実質的に類似したＲＮＡｉ活性を維持する能力を付与し（例えば、Ｅｌｂａｓｈｉｒ，２００１，ＥＭＢＯ  Ｊ．，２０：６８７７−６８８８を参照されたい）、同時に、治療用途における使用に適切なヌクレアーゼ抵抗性および薬物動態特性を付与する。
【０１１８】
種々の実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、センスおよび／またはアンチセンス鎖に存在するいずれかの（例えば、１以上または全ての）ヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである（例えば、１つのヌクレオチドが修飾されている、または幾つかのヌクレオチド（すなわち、複数または２以上）が修飾されている、または全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである）、修飾を含む。幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は化学修飾で部分的に修飾されている（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５または５９ヌクレオチドが修飾されている）。幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、修飾ヌクレオチドである少なくとも約８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８または６０ヌクレオチドを含む。他の実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は化学修飾で完全に修飾（１００％修飾）されている。すなわち、該ｓｉＮＡ分子はいずれのリボヌクレオチドをも含有しない。幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子のセンス鎖におけるヌクレオチドの１以上が修飾されている。同じ又は他の実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子のアンチセンス鎖におけるヌクレオチドの１以上が修飾されている。
【０１１９】
単一ｓｉＮＡ分子内の化学修飾は同じ又は異なりうる。幾つかの実施形態においては、少なくとも１つの鎖は少なくとも１つの化学修飾を有する。他の実施形態においては、各鎖は、同じ又は異なりうる少なくとも１つの化学修飾、例えば糖、塩基またはバックボーン（すなわち、ヌクレオチド間結合）修飾を有する。他の実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は少なくとも２、３、４、５またはそれ以上の異なる化学修飾を含有する。
【０１２０】
本発明における使用に適した化学修飾の非限定的な例は米国特許出願第１０／４４４，８５３号、第１０／９８１，９６６号および第１２／０６４，０１４号（ＵＳ  ２００４０１９２６２６、ＵＳ  ２００５０２６６４２２およびＵＳ  ２００９０１７６７２５として公開されている）ならびにそれらにおいて引用されている参考文献に開示されており、糖、塩基およびホスファート修飾、非ヌクレオチド修飾、ならびに／またはそれらのいずれかの組合せを含む。これらの米国特許出願（第１０／４４４，８５３号、第１０／９８１，９６６号および第１２／０６４，０１４号）を、本発明のｓｉＮＡとの使用に適した化学修飾を記載する目的のために、参照により本明細書に組み入れることとする。
【０１２１】
本発明の或る特定の実施形態においては、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドは、当技術分野で一般に認識されているとおり、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキル（例えば、２’−Ｏ−メチル）ヌクレオチドまたはロック化（ｌｏｃｋｅｄ）核酸（ＬＮＡ）ヌクレオチドが含まれる。
【０１２２】
本発明の更に他の実施形態においては、少なくとも１つのヌクレオチドはリボ様ノーザン（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ）またはＡ形態ヘリックス立体配置を有する（例えば、Ｓａｅｎｇｅｒ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ  ｅｄ．，１９８４を参照されたい）。ノーザン立体配置を有するヌクレオチドの非限定的な例には、ロック化核酸（ＬＮＡ）ヌクレオチド（例えば、２’−Ｏ，４’−Ｃ−メチレン−（Ｄ−リボフラノシル）ヌクレオチド）、２’−メトキシエトキシ（ＭＯＥ）ヌクレオチド、２’−メチル−チオ−エチルヌクレオチド、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−デオキシ−２’−クロロヌクレオチド、２’−アジドヌクレオチド、２’−Ｏ−トリフルオロメチルヌクレオチド、２’−Ｏ−エチル−トリフルオロメトキシヌクレオチド、２’−Ｏ−ジフルオロメトキシ−エトキシヌクレオチド、４’−チオヌクレオチドおよび２’−Ｏ−メチルヌクレオチドが含まれる。
【０１２３】
種々の実施形態においては、該二本鎖ｓｉＮＡ分子に存在するピリミジンヌクレオチドの大部分（例えば、５０％を超える）は糖修飾を含む。同じおよび／または他の実施形態の幾つかにおいては、該二本鎖ｓｉＮＡ分子に存在するプリンヌクレオチドの大部分（例えば、５０％を超える）は糖修飾を含む。
【０１２４】
幾つかの実施形態においては、該アンチセンス鎖におけるピリミジンヌクレオチドは２’−Ｏ−メチルまたは２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドであり、該アンチセンス鎖におけるプリンヌクレオチドは２’−Ｏ−メチルヌクレオチドまたは２’−デオキシヌクレオチドである。他の実施形態においては、該センス鎖におけるピリミジンヌクレオチドは２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドであり、該センス鎖に存在するプリンヌクレオチドは２’−Ｏ−メチルまたは２’−デオキシプリンヌクレオチドである。
【０１２５】
本発明の或る実施形態においては、該センス鎖上の相補的領域におけるピリミジンヌクレオチドの全ては２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドである。ある実施形態においては、該アンチセンス鎖の相補的領域におけるピリミジンヌクレオチドの全ては２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドである。ある実施形態においては、該センス鎖上の相補的領域におけるプリンヌクレオチドの全ては２’−デオキシプリンヌクレオチドである。ある実施形態においては、該アンチセンス鎖上の相補的領域におけるプリンの全ては２’−Ｏ−メチルプリンヌクレオチドである。ある実施形態においては、該センス鎖上の相補的領域におけるピリミジンヌクレオチドの全ては２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドであり、該アンチセンス鎖の相補的領域におけるピリミジンヌクレオチドの全ては２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドであり、該センス鎖上の相補的領域におけるプリンヌクレオチドの全ては２’−デオキシプリンヌクレオチドであり、該アンチセンス鎖上の相補的領域におけるプリンの全ては２’−Ｏ−メチルプリンヌクレオチドである。
【０１２６】
幾つかの実施形態においては、一方または両方の鎖におけるピリミジンヌクレオチドの少なくとも５以上は２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドである。幾つかの実施形態においては、一方または両方の鎖におけるピリミジンヌクレオチドの少なくとも５以上は２’−Ｏ−メチルピリミジンヌクレオチドである。幾つかの実施形態においては、一方または両方の鎖におけるプリンヌクレオチドの少なくとも５以上は２’−デオキシ−２’−フルオロプリンヌクレオチドである。幾つかの実施形態においては、一方または両方の鎖におけるプリンヌクレオチドの少なくとも５以上は２’−Ｏ−メチルプリンヌクレオチドである。
【０１２７】
ある実施形態においては、該プリンおよびピリミジンは２’−糖位置において異なって修飾される（すなわち、少なくとも１つのプリンは、同じ又は異なる鎖において、２’−糖位置において、少なくとも１つのピリミジンとは異なる修飾を有する）。例えば、幾つかの実施形態においては、一方または両方の鎖におけるピリミジンヌクレオチドの少なくとも５以上は２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドであり、一方または両方の鎖における少なくとも５以上のプリンヌクレオチドは２’−Ｏ−メチルプリンヌクレオチドである。他の場合には、一方または両方の鎖におけるピリミジンヌクレオチドの少なくとも５以上は２’−Ｏ−メチルピリミジンヌクレオチドであり、一方または両方の鎖における少なくとも５以上のプリンヌクレオチドは２’−デオキシ−２’−フルオロプリンヌクレオチドである。
【０１２８】
種々の修飾および修飾パターンを有するそのようｓｉＮＡ分子のセンスおよびアンチセンス鎖の他の非限定的な例を図２および３に示す。
【０１２９】
前記修飾またはそれらの組合せ（引用参考文献におけるものを含む）はいずれも、本発明のｓｉＮＡ分子のいずれかに適用されうる。
【０１３０】
本発明の修飾ｓｉＮＡ分子は該ｓｉＮＡ分子内の種々の位置に修飾を含みうる。幾つかの実施形態においては、本発明の二本鎖ｓｉＮＡ分子は該ｓｉＮＡ二重らせん内の内部塩基対形成位置に修飾ヌクレオチドを含む。他の実施形態においては、本発明の二本鎖ｓｉＮＡ分子は該ｓｉＮＡ分子の塩基対不形成または突出領域に修飾ヌクレオチドを含む。更に他の実施形態においては、本発明の二本鎖ｓｉＮＡ分子は該ｓｉＮＡ分子の末端位置に修飾ヌクレオチドを含む。例えば、そのような末端領域には、該ｓｉＮＡ分子の領域のセンスおよび／アンチセンス鎖の３’位および／または５’位が含まれる。また、本発明の修飾ｓｉＮＡ分子のいずれかは、該ｓｉＮＡ二重らせんの一方または両方のオリゴヌクレオチド鎖において、例えば、センス鎖、アンチセンス鎖または両方の鎖において、修飾を有しうる。更に、本発明のｓｉＮＡ分子の化学修飾に関しては、本発明の二本鎖ｓｉＮＡ分子の各鎖は、各鎖が、異なる化学修飾パターンを含むように、１以上の化学修飾を有しうる。
【０１３１】
前記修飾またはそれらの組合せ（引用参考文献におけるものを含む）はいずれも、本発明の実施形態のいずれかに適用されうる。
【０１３２】
ある実施形態においては、本発明の二本鎖ｓｉＮＡ分子の各鎖は、異なる化学修飾パターン、例えば、本明細書に記載されている（表６を参照されたい）いずれかの安定化化学（「Ｓｔａｂ」）修飾化学法またはそれらのいずれかの組合せ、すなわち、一定のＳｔａｂ化学センスおよびアンチセンス鎖の種々の組合せを含む。更に、種々の修飾パターンをもたらしうる修飾法の非限定的な例を表６に示す。「Ｓｔａｂ」として表６に記載されている安定化化学法は、センス／アンチセンス化学法のいずれかの組合せ、例えば、Ｓｔａｂ  ７／８、Ｓｔａｂ  ７／１１、Ｓｔａｂ  ８／８、Ｓｔａｂ  １８／８、Ｓｔａｂ  １８／１１、Ｓｔａｂ  １２／１３、Ｓｔａｂ  ７／１３、Ｓｔａｂ  １８／１３、Ｓｔａｂ  ７／１９、Ｓｔａｂ  ８／１９、Ｓｔａｂ  １８／１９、Ｓｔａｂ  ７／２０、Ｓｔａｂ  ８／２０、Ｓｔａｂ  １８／２０、Ｓｔａｂ  ７／３２、Ｓｔａｂ  ８／３２もしくはＳｔａｂ  １８／３２または安定化化学法のいずれかの他の組合せで組合されうる。
【０１３３】
本発明のｓｉＮＡのいずれかにおいては、該ｓｉＮＡ分子のガイド鎖またはガイド領域（アンチセンス鎖またはアンチセンス領域としても公知である）の５’末端における１以上（例えば、１、２、３、４または５）のヌクレオチドはリボヌクレオチドである。
【０１３４】
ある実施形態においては、本発明は、ＩＤＨ１またはその誘導体もしくは突然変異体の発現をモジュレーションする二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子を提供し、ここで、該ｓｉＮＡ分子は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、各鎖は、独立して、１５〜３０ヌクレオチド長であり、該アンチセンス鎖は、
５’−ＣＵＡＵＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡ−３’（配列番号７）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号１１）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号１２）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号１３）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号３８）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号３９）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号４０）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号４１）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号５９）；または
５’−ＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵＧＧＧＧ−３’（配列番号６３）のいずれかに相補的な配列を有する少なくとも１５ヌクレオチドを含む。１つの実施形態においては、「少なくとも１５ヌクレオチド」は１５個の連続的ヌクレオチドである。
【０１３５】
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子のアンチセンス鎖は、
５’−ＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧＡＵＡＧ−３’（配列番号４４６）；
５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４５０）；
５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４５１）；
５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４５２）；
５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４７７）；
５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４７８）；
５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４７９）；
５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧ−３’（配列番号４８０）；
５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣＵＡＵＧ−３’（配列番号４９８）；または
５’−ＣＣＣＣＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣ−３’（配列番号５０２）のいずれかに対する同一性を有する少なくとも１５ヌクレオチドを含む。１つの実施形態においては、「少なくとも１５ヌクレオチド」は１５個の連続的ヌクレオチドである。したがって、該ｓｉＮＡ分子のアンチセンス鎖は配列番号４４６、４５０、４５１、４５２、４７７、４７８、４７９、４８０、４９８または５０２のいずれかの少なくとも１５ヌクレオチド配列を含む。
【０１３６】
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子のセンス鎖は、
５’−ＣＵＡＵＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡ−３’（配列番号７）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号１１）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号１２）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号１３）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号３８）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号３９）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号４０）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号４１）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号５９）；または
５’−ＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵＧＧＧＧ−３’（配列番号６３）のいずれかに対する同一性を有する少なくとも１５ヌクレオチドを含む。１つの実施形態においては、「少なくとも１５ヌクレオチド」は１５個の連続的ヌクレオチドである。したがって、該ｓｉＮＡ分子のセンス鎖は配列番号７、１１、１２、１３、３８、３９、４０、４１、５９または６３のいずれかの少なくとも１５ヌクレオチド配列を含む。
【０１３７】
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、
５’−ＣＵＡＵＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡ−３’（配列番号７）および
５’−ＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧＡＵＡＧ−３’（配列番号４４６）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号１１）および
５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４５０）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号１２）および
５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４５１）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号１３）および
５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４５２）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号３８）および
５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４７７）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号３９）および
５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４７８）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号４０）および
５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４７９）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号４１）および
５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧ−３’（配列番号４８０）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号５９）および
５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣＵＡＵＧ−（配列番号４９８）；または
５’−ＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵＧＧＧＧ−３’（配列番号６３）および
５’−ＣＣＣＣＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣ−３’（配列番号５０２）のいずれかを含む。もう１つの実施形態においては、該ｓｉＮＡ分子は、配列番号７および４４６の両方、または配列番号１１および４５０の両方、または配列番号１２および４５１の両方、または配列番号１３および４５２の両方、または配列番号３８および４７７の両方、または配列番号３９および４７８の両方、または配列番号４０および４７９の両方、または配列番号４１および４８０の両方、または配列番号５９および４９８の両方、または配列番号６３および５０２の両方の少なくとも１５ヌクレオチド配列を含む
幾つかの実施形態においては、該ｓｉＮＡ分子は、該ｓｉＮＡ分子がその活性、例えばＲＮＡｉを引き起こす活性を維持する限り、配列番号７、配列番号４４６、配列番号１１、配列番号４５０、配列番号１２、配列番号４５１、配列番号１３、配列番号４５２、配列番号３８、配列番号４７７、配列番号３９、配列番号４７８、配列番号４０、配列番号４７９、配列番号４１、配列番号４８０、配列番号５９、配列番号４９８、配列番号６３または配列番号５０２の少なくとも１５ヌクレオチド配列内に１以上のヌクレオチドの欠失、置換、ミスマッチおよび／または付加を含有しうる。非限定的な例においては、該欠失、置換、ミスマッチおよび／または付加はループまたはバルジ、あるいはゆらぎ又は他の代替的（非ワトソン−クリック）塩基対を形成しうる。
【０１３８】
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子のアンチセンス鎖は、配列番号９１、１０７、１１１、１１５、１９９、２１３、２２７、２３１、３０３または４１１のいずれかに対する配列同一性を有する少なくとも１５ヌクレオチドを含む。他の実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子のセンス鎖は、配列番号９０、１０６、１１０、１１４、１９８、２１２、２２６、２３０、３０２または４１０のいずれかに対する配列同一性を有する少なくとも１５ヌクレオチドを含む。もう１つの実施形態においては、「少なくとも１５ヌクレオチド」は１５個の連続的ヌクレオチドである。
【０１３９】
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は配列番号９０および９１、配列番号１０６および１０７、配列番号１１０および１１１、配列番号１１４および１１５、配列番号１９８および１９９、配列番号２１２および２１３、配列番号２２６および２２７、配列番号２３０および２３１、配列番号３０２および３０３、または配列番号４１０および４１１のいずれかを含む。
【０１４０】
ある実施形態においては、二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子を提供し、ここで、該分子はセンス鎖およびアンチセンス鎖を有し、式（Ａ）：
【０１４１】
【化２】
2014522242.tif 000004
（式中、上側の鎖は該二本鎖核酸分子のセンス鎖であり、下側の鎖はアンチセンス鎖であり、該アンチセンス鎖は配列番号４４６、配列番号４５０、配列番号４５１、配列番号４５２、配列番号４７７、配列番号４７８、配列番号４７９、配列番号４８０、配列番号４９８または配列番号５０２の少なくとも１５ヌクレオチド配列を含み、該センス鎖は、該アンチセンス鎖に対する相補性を有する配列を含む；
各Ｎは、独立して、修飾されていない若しくは化学修飾されているヌクレオチドである、または非ヌクレオチドである；
各Ｂは、存在する又は存在しない末端キャップである；
（Ｎ）は突出ヌクレオチドを表し、それらのそれぞれは、独立して、修飾されていない又は化学修飾されている；
Ｘ１およびＸ２は、独立して、０〜４の整数である；
Ｘ３は１５〜３０の整数である；
Ｘ４は１２〜２７の整数である；
［Ｎ１］−［Ｎ２］−［Ｎ３］は修飾ヌクレオチドまたはリボヌクレオチドであり、ここで、［Ｎ１］−［Ｎ２］−［Ｎ３］は、以下のものからなる群から選択される：
（ａ）［Ｎ１］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ２］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである；
（ｂ）［Ｎ１］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ２］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−デオキシヌクレオチドである；
（ｃ）［Ｎ１］は２’−デオキシヌクレオチドであり、［Ｎ２］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−Ｏ−メチルヌクレオチドである；
（ｄ）［Ｎ１］は２’−デオキシヌクレオチドであり、［Ｎ２］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−デオキシヌクレオチドである；および
（ｅ）［Ｎ１］はリボヌクレオチドであり、［Ｎ２］はリボヌクレオチドであり、［Ｎ３］はリボヌクレオチドである）を含む。
【０１４２】
幾つかの実施形態においては、式ＡのｓｉＮＡ分子は、該ｓｉＮＡ分子がその活性、例えばＲＮＡｉを引き起こす活性を維持する限り、配列番号４４６、配列番号４５０、配列番号４５１、配列番号４５２、配列番号４７７、配列番号４７８、配列番号４７９、配列番号４８０、配列番号４９８または配列番号５０２の少なくとも１５ヌクレオチド配列に対する１以上のヌクレオチドの欠失、置換、ミスマッチおよび／または付加を含有しうる。非限定的な例においては、該欠失、置換、ミスマッチおよび／または付加はループまたはバルジ、あるいはゆらぎ又は他の代替的（非ワトソン−クリック）塩基対を形成しうる。
【０１４３】
１つの実施形態においては、本発明は、
（ａ）ＮＸ４位における１以上のピリミジンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである；
（ｂ）ＮＸ４位における１以上のプリンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである；
（ｃ）ＮＸ３位における１以上のピリミジンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである；および
（ｄ）ＮＸ３位における１以上のプリンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである、式（Ａ）の二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子に関する。
【０１４４】
ある実施形態においては、本発明は、
（ａ）ＮＸ４位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである；
（ｂ）ＮＸ４位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである；
（ｃ）ＮＸ３位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである；および
（ｄ）ＮＸ３位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが２’−デオキシヌクレオチドである、式（Ａ）の二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子に関する。
【０１４５】
ある実施形態においては、本発明は、
（ａ）ＮＸ４位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドが２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである；
（ｂ）ＮＸ４位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドがリボヌクレオチドである；
（ｃ）ＮＸ３位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドが２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである；および
（ｄ）ＮＸ３位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドがリボヌクレオチドである、式（Ａ）の二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子に関する。
【０１４６】
ある実施形態においては、本発明は、
（ａ）ＮＸ４位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである；
（ｂ）ＮＸ４位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである；
（ｃ）ＮＸ３位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドが２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである；および
（ｄ）ＮＸ３位における１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである、式（Ａ）の二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子に関する。
【０１４７】
ある実施形態においては、本発明は、１以上のホスホロチオアートヌクレオチド間結合を更に含む、式（Ａ）の二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子に関する。
【０１４８】
幾つかの実施形態においては、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は該核酸分子のアンチセンス鎖またはアンチセンス領域の５’末端に末端ホスファート基を含む。
【０１４９】
種々の実施形態においては、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は、各Ｘ１およびＸ２＝１または２；Ｘ３＝１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４；およびＸ４＝１５、１６、１７、１８、１９、２０または２１を含む。
【０１５０】
ある実施形態においては、式Ａを有するｓｉＮＡ分子はＸ１＝２およびＸ２＝２を含む。
【０１５１】
１つの特定の実施形態においては、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は各Ｘ１およびＸ２＝２；Ｘ３＝１９；およびＸ４＝１６を含む。
【０１５２】
ある実施形態においては、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は該センス鎖またはセンス領域の３’および５’末端にキャップ（Ｂ）を含む。
【０１５３】
ある実施形態においては、式Ａを有するｓｉＮＡ分子はアンチセンス鎖またはアンチセンス領域の３’末端にキャップ（Ｂ）を含む
種々の実施形態においては、式ＡのｓｉＮＡ分子はセンス鎖またはセンス領域の３’および５’末端のキャップ（Ｂ）ならびにアンチセンス鎖またはアンチセンス領域の３’末端のキャップ（Ｂ）を含む。
【０１５４】
更に他の実施形態においては、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は該二本鎖核酸分子のセンス（上側）鎖の５’末端のみにキャップ（Ｂ）を有する。
【０１５５】
幾つかの実施形態においては、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は更に、ヌクレオチド間に１以上のホスホロチオアートヌクレオチド間結合を含む。ある実施形態においては、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は、該核酸分子のセンス鎖、アンチセンス鎖またはセンス鎖とアンチセンス鎖との両方の３’末端の第１末端（Ｎ）と隣接ヌクレオチドとの間に１以上のホスホロチオアートヌクレオチド間結合を含む。例えば、二本鎖核酸分子は、ホスホロチオアートヌクレオチド間結合（ＮｓＮ；ここで、「ｓ」はホスホロチオアートを示す）を伴う突出ヌクレオチド位置を有するＸ１および／またはＸ２＝２を含みうる。
【０１５６】
幾つかの実施形態においては、式Ａを有するｓｉＮＡ分子のヌクレオチドの１以上は汎用塩基を有する。
【０１５７】
ある実施形態においては、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は、アンチセンス鎖の５’から１４位に、その１４位のヌクレオチドがプリンである場合、リボヌクレオチドを有する。他の実施形態においては、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は、アンチセンス鎖の５’位から１４位に、その１４位のヌクレオチドがピリミジンヌクレオチドである場合、リボヌクレオチド、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドまたは２’−Ｏ−メチルヌクレオチドを有する。特に好ましい実施形態においては、アンチセンス鎖の５’末端から１４位は、そのヌクレオチドがプリンまたはピリミジンであるかどうかにかかわらず、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである。
【０１５８】
幾つかの実施形態においては、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は、ＩＤＨ１関連標的ポリヌクレオチド配列におけるヌクレオチドに相補的であるアンチセンス鎖（下側の鎖）における（Ｎ）ヌクレオチドを含み、それはまた、アンチセンス（下側）鎖のＮおよび［Ｎ］ヌクレオチドに対する相補性を有する。
【０１５９】
本発明のｓｉＮＡに適用可能であるものとして前記で考察されている前記修飾またはそれらの組合せ（引用参考文献におけるものを含む）は、式Ａを有するｓｉＮＡ分子の実施形態のいずれかにも適用されうる。
【０１６０】
Ｃ．ｓｉＮＡ分子の作製／合成
本発明のｓｉＮＡは、当業者に公知の幾つかの技術を用いて得られうる。例えば、該ｓｉＮＡは化学合成されることが可能であり、あるいはプラスミドによりコードされうる（例えば、ヘアピンループを有する二重らせんに自動的に折り畳まれる配列として転写されうる）。ｓｉＮＡは、より長いｄｓＲＮＡ（例えば、約２５ヌクレオチド長より長いｄｓＲＮＡ）の、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＲＮアーゼＩＩまたはＤｉｃｅｒによる切断によっても製造されうる。これらの酵素は生物学的に活性なｓｉＮＡへとｄｓＲＮＡをプロセシングする（Ｙａｎｇら，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９９：９９４２−９９４７（２００２）；Ｃａｌｅｇａｒｉら，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９９：１４２３６（２００２）；Ｂｙｒｏｎら，Ａｍｂｉｏｎ  Ｔｅｃｈ  Ｎｏｔｅｓ  １０（１）：４−６（２００９）；Ｋａｗａｓｋｉら，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，３１：９８１−９８７（２００３）；ＫｎｉｇｈｔおよびＢａｓｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９３：２２６９−２２７１（２００１）；ならびにＲｏｂｅｒｓｔｏｎら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ  ２４３：８２（１９６９））。
【０１６１】
１．化学合成
好ましくは、本発明のｓｉＮＡは化学合成される。オリゴヌクレオチド（例えば、ある修飾オリゴヌクレオチド、またはリボヌクレオチドを欠くオリゴヌクレオチドの一部）は、当技術分野で公知の方法を用いて合成される（例えば、Ｃａｒｕｔｈｅｒｓら，１９９２，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２１１，３−１９；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９９／５４４５９；Ｗｉｎｃｏｔｔら，１９９５，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２３，２６７７−２６８４；Ｗｉｎｃｏｔｔら，１９９７，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．，７４，５９；Ｂｒｅｎｎａｎら，１９９８，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ．，６１，３３−４５；およびＢｒｅｎｎａｎ，米国特許第６，００１，３１１号に記載されているとおり）。オリゴヌクレオチドの合成は、一般的な核酸保護およびカップリング基、例えば、５’末端におけるジメトキシトリチルおよび３’末端におけるホスホラミダイトを利用する。
【０１６２】
修飾を伴わないｓｉＮＡ分子は、Ｕｓｍａｎら，１９８７，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１０９，７８４５およびＳｃａｒｉｎｇｅら，１９９０，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１８，５４３３に記載されている方法を用いて合成される。これらの合成は、本発明の或るｓｉＮＡ分子に使用されうる５’末端におけるジメトキシトリチルおよび３’末端におけるホスホラミダイトのような一般的な核酸保護およびカップリング基を利用する。
【０１６３】
ある実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、米国特許第６，９９５，２５９号、第６，６８６，４６３号、第６，６７３，９１８号、第６，６４９，７５１号、第６，９８９，４４２号および第７，２０５，３９９号に記載の方法により合成され、脱保護され、分析される。
【０１６４】
非限定的な合成例においては、小規模合成は、２’−Ｏ−メチル化ヌクレオチドに関する２．５分間のカップリング工程および２’−デオキシヌクレオチドまたは２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドに関する４５秒間のカップリング工程を伴う０．２μｍｏｌの規模の方法を用いて、３９４  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．合成装置において行われる。表７は、該合成サイクルにおいて使用される試薬の量および接触時間を示す。
【０１６５】
あるいは、本発明のｓｉＮＡ分子は別々に合成され、合成後に、例えば連結により（例えば、Ｍｏｏｒｅら，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６，９９２３；Ｄｒａｐｅｒら，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９３／２３５６９；Ｓｈａｂａｒｏｖａら，１９９１，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９，４２４７；Ｂｅｌｌｏｎら，１９９７，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１６，９５１；およびＢｅｌｌｏｎら，１９９７，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．８，２０４）、または合成および／もしくは脱保護後のハイブリダイゼーションにより合体されうる。
【０１６６】
Ｓｃａｒｉｎｇｅら，米国特許第５，８８９，１３６号、第６，００８，４００号および第６，１１１，０８６号の教示を用いることによっても、本発明の種々のｓｉＮＡ分子が合成されうる。
【０１６７】
２．ベクター発現
あるいは、標的ＩＤＨ１関連分子をコードする遺伝子と相互作用し、それをダウンレギュレーションする本発明のｓｉＮＡ分子は、ＤＮＡまたはＲＮＡベクター内に挿入された転写単位（例えば、Ｃｏｕｔｕｒｅら，１９９６，ＴＩＧ．，１２，５１０を参照されたい）から発現され、運搬されうる。該組換えベクターはＤＮＡプラスミドまたはウイルスベクターでありうる。ｓｉＮＡを発現するウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、アデノウイルスまたはアルファウイルス（これらに限定されるものではない）に基づいて構築されうる。
【０１６８】
幾つかの実施形態においては、本発明の核酸分子を発現させるために、ｐｏｌ  ＩＩＩに基づく構築物が使用される。ｓｉＮＡ分子の配列の転写は、真核生物ＲＮＡポリメラーゼＩ（ｐｏｌ  Ｉ）、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ（ｐｏｌ  ＩＩ）またはＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ（ｐｏｌ  ＩＩＩ）のためのプロモーターから駆動されうる（例えば、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，米国特許第５，９０２，８８０号および第６，１４６，８８６号を参照されたい）（また、ＩｚａｎｔおよびＷｅｉｎｔｒａｕｂ，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９，３４５；ＭｃＧａｒｒｙおよびＬｉｎｄｑｕｉｓｔ，１９８６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ  ８３，３９９；Ｓｃａｎｌｏｎら，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８，１０５９１−５；Ｋａｓｈａｎｉ−Ｓａｂｅｔら，１９９２，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．，２，３−１５；Ｄｒｏｐｕｌｉｃら，１９９２，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６６，１４３２−４１；Ｗｅｅｒａｓｉｎｇｈｅら，１９９１，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６５，５５３１−４；Ｏｊｗａｎｇら，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９，１０８０２−６；Ｃｈｅｎら，１９９２，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２０，４５８１−９；Ｓａｒｖｅｒら，１９９０  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４７，１２２２−１２２５；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら，１９９５，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２３，２２５９；Ｇｏｏｄら，１９９７，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，４，４５も参照されたい）。ｐｏｌ  ＩＩまたはｐｏｌ  ＩＩＩプロモーターからの転写産物は細胞内で高レベルで発現され、与えられた細胞型における与えられたｐｏｌ  ＩＩプロモーターのレベルは、近傍に存在する遺伝子調節配列（エンハンサー、サイレンサーなど）の性質に左右される。原核生物ＲＮＡポリメラーゼ酵素が適当な細胞内で発現されるならば、原核生物ＲＮＡポリメラーゼプロモーターも使用される（Ｅｌｒｏｙ−ＳｔｅｉｎおよびＭｏｓｓ，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７，６７４３−７；ＧａｏおよびＨｕａｎｇ  １９９３，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２１，２８６７−７２；Ｌｉｅｂｅｒら，１９９３，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ，２１７，４７−６６；Ｚｈｏｕら，１９９０，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１０，４５２９−３７を参照されたい）。幾人かの研究者は、そのようなプロモーターから発現される核酸分子が哺乳類細胞において機能しうることを示している（例えば、Ｋａｓｈａｎｉ−Ｓａｂｅｔら，１９９２，前掲；Ｏｊｗａｎｇら，１９９２，前掲；Ｃｈｅｎら，１９９２，前掲；Ｙｕら，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０，６３４０−４；Ｌ’Ｈｕｉｌｌｉｅｒら，１９９２，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１１，４４１１−８；Ｌｉｓｚｉｅｗｉｃｚら，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ，９０，８０００−４；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら，１９９５，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２３，２２５９；およびＳｕｌｌｅｎｇｅｒ  ＆  Ｃｅｃｈ，１９９３，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６２，１５６６）。より詳しくは、Ｕ６小核（ｓｎＲＮＡ）、転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）およびアデノウイルスＶＡ  ＲＮＡをコードする遺伝子に由来するもののような転写単位は、細胞において高濃度の所望のＲＮＡ分子（例えば、ｓｉＮＡ）を得るのに有用である（Ｔｈｏｍｐｓｏｎら，１９９５，前掲；ＣｏｕｔｕｒｅおよびＳｔｉｎｃｈｃｏｍｂ，１９９６，前掲；Ｎｏｏｎｂｅｒｇら，１９９４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．，２２，２８３０；Ｎｏｏｎｂｅｒｇら，米国特許第５，６２４，８０３号；Ｇｏｏｄら，１９９７，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．，４，４５；ならびにＢｅｉｇｅｌｍａｎら，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９６／１８７３６）。前記のｓｉＮＡ転写単位は、プラスミドＤＮＡベクター、ウイルスＤＮＡベクター（例えば、アデノウイルスまたはアデノ随伴ウイルスベクター）またはウイルスＲＮＡベクター（例えば、レトロウイルスまたはアルファウイルスベクター）（これらに限定されるものではない）を含む、哺乳類細胞内への導入のための種々のベクター内に組込まれうる（総説としては、Ｃｏｕｔｕｒｅら，１９９６，ＴＩＧ，１２，５１０を参照されたい）。
【０１６９】
本発明のｓｉＮＡ分子を発現させるために使用されるベクターは、ｓｉＮＡ二重らせんの一方もしくは両方の鎖、またはｓｉＮＡ二重らせんへと自己ハイブリダイズする単一自己相補性鎖をコードしうる。本発明のｓｉＮＡ分子をコードする核酸配列は、該ｓｉＮＡ分子の発現を可能にする様態で機能的に連結されうる（例えば、Ｐａｕｌら，２００２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９，５０５；ＭｉｙａｇｉｓｈｉおよびＴａｉｒａ，２００２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９，４９７；ならびにＬｅｅら，２００２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９，５００を参照されたい）。
【０１７０】
Ｄ．担体／運搬系
本発明のｓｉＮＡは直接的に加えられ、あるいはカチオン性脂質と複合体化され、リポソーム内に封入され、あるいはｓｉＮＡ分子を発現する組換えプラスミドまたはウイルスベクターとして複合体化され、あるいは標的細胞または組織に運搬されうる。核酸分子の運搬のための方法は、例えば、Ａｋｈｔａｒら，１９９２，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏ．，２，１３９；Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ａｋｈｔａｒ編，１９９５；Ｍａｕｒｅｒら，１９９９，Ｍｏｌ．Ｍｅｍｂｒ．Ｂｉｏｌ．，１６，１２９−１４０；ＨｏｆｌａｎｄおよびＨｕａｎｇ，１９９９，Ｈａｎｄｂ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，１３７，１６５−１９２；ならびにＬｅｅら，２０００，ＡＣＳ  Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．，７５２，１８４−１９２に記載されている。Ｂｅｉｇｅｌｍａｎら，米国特許第６，３９５，７１３号およびＳｕｌｌｉｖａｎら，ＰＣＴ国際出願公開番号ＷＯ  ９４／０２５９５は更に、核酸分子の運搬のための一般的方法を記載している。これらの方法は実質的に全ての核酸分子の運搬に利用されうる。核酸分子は、リボソーム内への封入、イオントホレシスまたは他の小胞、例えば生分解性重合体、ヒドロゲル、シクロデキストリン（例えば、Ｇｏｎｚａｌｅｚら，１９９９，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，１０，１０６８−１０７４；Ｗａｎｇら，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ０３／４７５１８およびＷＯ  ０３／４６１８５を参照されたい）、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）およびＰＬＣＡミクロスフェア（例えば、米国特許第６，４４７，７９６号および米国特許出願公開第ＵＳ  ２００２１３０４３０号を参照されたい）、生分解性ナノカプセルおよび生物接着性ミクロスフェア内への封入またはタンパク質性ベクター（Ｏ’ＨａｒｅおよびＮｏｒｍａｎｄ，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ００／５３７２２）（これらに限定されるものではない）を含む、当業者に公知の種々の方法により細胞に投与されうる。
【０１７１】
１つの態様においては、本発明は、本明細書に記載されているｓｉＮＡ分子を含有する担体系を提供する。幾つかの実施形態においては、該担体系は、脂質に基づく担体系、カチオン性脂質、またはリポソーム核酸複合体、リポソーム、ミセル、ウイロソーム、脂質ナノ粒子またはそれらの混合物である。他の実施形態においては、該担体系は、重合体に基づく担体系、例えばカチオン性重合体−核酸複合体である。追加的な実施形態においては、該担体系は、シクロデキストリンに基づく担体系、例えば、シクロデキストリン重合体−核酸複合体である。他の実施形態においては、該担体系は、タンパク質に基づく担体系、例えばカチオン性ペプチド−核酸複合体である。もう１つの実施形態においては、該担体系は脂質ナノ粒子（「ＬＮＰ」）製剤である。
【０１７２】
ある実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、例えば米国特許出願第１１／３５３，６３０号、第１１／５８６，１０２号、第６１／１８９，２９５号、第６１／２０４，８７８号、第６１／２３５，４７６号、第６１／２４９，８０７号および第６１／２９８，０２２号に記載されているとおり、脂質ナノ粒子組成物で製剤化される。ある実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、４０／４８／２／１０の比のカチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−Ｃ−ＤＭＡ／ＤＳＰＣ、４０／４８／２／１０の比のカチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧ／ＤＳＰＣ、または６０／３８／２の比のカチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧを含む脂質ナノ粒子組成物で製剤化される。ある実施形態においては、該カチオン性脂質はオクチルＣＬｉｎＤＭＡ、ＤＬｉｎＤＭＡ、Ｌ−２７８、ＤＬｉｎＫＣ２ＤＭＡまたはＭＣ３（表９を参照されたい）である。
【０１７３】
種々の実施形態においては、表８に記載されている脂質ナノ粒子製剤は本発明における任意のｓｉＮＡ分子またはｓｉＮＡ分子の組合せに適用される。
【０１７４】
ある他の実施形態においては、本発明は、ＰＣＴ国際出願公開番号ＷＯ  ２０１０／０２１８６５、ＷＯ  ２０１０／０８０７２４、ＷＯ  ２０１０／０４２８７７、ＷＯ  ２０１０／１０５２０９およびＷＯ  ２０１１／０２２４６０ならびに米国特許出願第６１／２４９，８０７号、第６１／２９８，０２２号、第６１／３２２，０５４号、第６１／３４７，６４０号、第６１／３５１，３７３号、第６１／３８２，０６７号、第６１／３８４，４８６号および第６１／３８８，２０１号に記載されているカチオン性脂質製剤のいずれかで製剤化された本発明のｓｉＮＡ分子を含む組成物に関する。
【０１７５】
他の実施形態においては、本発明は本発明のｓｉＮＡ分子のコンジュゲートおよび／または複合体に関する。そのようなコンジュゲートおよび／または複合体は、生物学的系（例えば、細胞）内へのｓｉＮＡ分子の運搬を促進させるために使用されうる。本発明により提供されるコンジュゲートおよび複合体は、治療用化合物を細胞膜越えに移入し、薬物動態を改変し、および／または本発明の核酸分子の局在化をモジュレーションすることにより、治療活性を付与しうる。そのようなコンジュゲートの非限定的な例は、米国特許公開番号ＵＳ  ２００８／０１５２６６１およびＵＳ  ２００４／０１６２２６０（例えば、ＣＤＭ−ＬＢＡ、ＣＤＭ−Ｐｉｐ−ＬＢＡ、ＣＤＭ−ＰＥＧ、ＣＤＭ−ＮＡＧなど）ならびに米国特許出願第１０／２０１，３９４号ならびに米国特許第７，８３３，９９２号、第６，５２８，６３１号、第６，３３５，４３４号、第６，２３５，８８６号、第６，１５３，７３７号、第５，２１４，１３６号および第５，１３８，０４５号に記載されている。
【０１７６】
種々の実施形態においては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は本発明のｓｉＮＡ化合物に共有結合されうる。該結合ＰＥＧは任意の分子量のもの、好ましくは、約１００〜約５０，０００ダルトン（Ｄａ）のものでありうる。
【０１７７】
更に他の実施形態においては、本発明は、例えば国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９６／１０３９１；Ａｎｓｅｌｌら，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９６／１０３９０；Ｈｏｌｌａｎｄら，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９６／１０３９２に開示されているような、本発明のｓｉＮＡ分子およびポリ（エチレングリコール）脂質（ＰＥＧ修飾または長循環性リポソームまたはステルスリポソーム）を含有する表面修飾リポソームを含む組成物または製剤に関する。
【０１７８】
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子はまた、ポリエチレンイミンおよびその誘導体、例えばポリエチレンイミン−ポリエチレングリコール−Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＰＥＩ−ＰＥＧ−ＧＡＬ）またはポリエチレンイミン−ポリエチレングリコール−トリ−Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＰＥＩ−ＰＥＧ−トリＧＡＬ）誘導体で製剤化または複合体化されうる。１つの実施形態においては、本発明の核酸分子は、米国特許出願公開第２００３／０７７８２９号に記載されているとおりに製剤化される。
【０１７９】
他の実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、膜破壊剤、例えば米国特許出願公開第２００１／０００７６６６号に記載されているものと複合体化される。更に他の実施形態においては、該膜破壊剤および該ｓｉＮＡ分子はまた、カチオン性脂質またはヘルパー脂質分子、例えば米国特許第６，２３５，３１０号に記載されている脂質と複合体化される。
【０１８０】
ある実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、米国特許出願公開第２００３／０７７８２９号、第２００５／０２８７５５１号、第２００５／０１６４２２０号、第２００５／０１９１６２７号、第２００５／０１１８５９４号、第２００５／０１５３９１９号、第２００５／００８５４８６号および第２００３／０１５８１３３号ならびに国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ００／０３６８３およびＷＯ  ０２／０８７５４１に記載されている運搬系と複合体化される。
【０１８１】
幾つかの実施形態においては、本発明のリポソーム製剤は、米国特許第６，８５８，２２４号、第６，５３４，４８４号、第６，２８７，５９１号、６，８３５，３９５号、第６，５８６，４１０号、第６，８５８，２２５号、第６，８１５，４３２号、第６，５８６，００１号、第６，１２０，７９８号、第６，９７７，２２３号、第６，９９８，１１５号、第５，９８１，５０１号、第５，９７６，５６７号、第５，７０５，３８５号ならびに米国特許出願公開番号２００６／００１９９１２、２００６／００１９２５８、２００６／０００８９０９、２００５／０２５５１５３、２００５／００７９２１２、２００５／０００８６８９、２００３／００７７８２９、２００５／００６４５９５、２００５／０１７５６８２、２００５／０１１８２５３、２００４／００７１６５４、２００５／０２４４５０４、２００５／０２６５９６１および２００３／００７７８２９に記載されている化合物および組成物で製剤化または複合体化された本発明のｓｉＮＡ分子（例えば、ｓｉＮＡ）を含む。
【０１８２】
あるいは、本発明のｓｉＮＡを発現する前記の組換えプラスミドおよびウイルスベクターが、本発明の分子を運搬するために使用されうる。ｓｉＮＡ分子を発現するベクターの運搬は全身性であることが可能であり、例えば静脈内または筋肉内投与、対象者から外植された標的細胞への投与およびそれに続く、該対象者への再導入、あるいは所望の標的細胞内への導入を可能にするいずれかの他の手段によるものでありうる（総説としては、Ｃｏｕｔｕｒｅら，１９９６，ＴＩＧ．，１２，５１０を参照されたい）。そのような組換えプラスミドは直接的に投与されることが可能であり、あるいは例えばＭｉｒｕｓ  Ｔｒａｎｓｉｔ  ＬＴ１親油性試薬；リポフェクチン；リポフェクタミン；セルフェクチン；ポリカチオン（例えば、ポリリシン）またはリポソーム  脂質に基づく担体系、カチオン性脂質またはリポソーム核酸複合体、ミセル、ウイロソーム、脂質ナノ粒子を含む適当な運搬試薬と共に投与されうる。
【０１８３】
Ｅ．キット
本発明はまた、キット形態の核酸を提供する。該キットは容器を含みうる。該キットは、典型的には、本発明の核酸を、その投与のための説明と共に含有する。ある場合には、該核酸に標的化部分が結合していることが可能である。標的化部分（例えば、抗体、タンパク質）を結合させる方法は当業者に公知である。ある場合には、該核酸は化学修飾されている。他の実施形態においては、該キットは本発明のｓｉＮＡ分子の２以上を含有する。該キットは、医薬上許容される担体または希釈剤と共に本発明のｓｉＮＡ分子を含みうる。該キットは更に、賦形剤を含みうる。
【０１８４】
Ｆ．治療用途／医薬組成物
ＩＤＨ１の研究における現在の一連の知見は、ＩＤＨ１活性をアッセイするための方法の必要性、ならびに研究、診断および治療用の、野生型および／または突然変異ＩＤＨ１の発現を調節する化合物の必要性を示している。後記のとおり、本発明の核酸分子は、ＩＤＨ１および／または突然変異ＩＤＨ１レベルに関連した１以上の病態を診断するためのアッセイにおいて使用されうる。また、該核酸分子および医薬組成物は、ＩＤＨ１関連ＲＮＡレベルに関連した１以上の病態を治療するために使用されうる。
【０１８５】
１．ＩＤＨ１および／または突然変異ＩＤＨ１に関連した病態
ＩＤＨ１関連遺伝子および／またはタンパク質の発現に関連づけられうる個々の病態には、細胞増殖関連障害、例えば、中枢神経系の癌（例えば、神経膠腫（例えば、神経膠芽細胞腫、星状細胞腫、乏突起神経膠腫、テント上）および原始神経外胚葉性腫瘍（例えば、髄芽腫））、および骨髄系細胞の増殖により特徴づけられる造血障害（例えば、ＡＭＬ、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性新生物（ＭＰＮ））が含まれる。
【０１８６】
本発明のｓｉＮＡ分子は標的ＩＤＨ１関連ｍＲＮＡを分解する（そしてそれにより、ＩＤＨ１関連遺伝子またはタンパク質の発現に関連した疾患を抑制する）と理解される。疾患の抑制は、対象における疾患の進行を直接的に測定することにより評価されうる。それは、該疾患に関連した状態の変化または逆転を観察することによっても推論されうる。また、本発明のｓｉＮＡ分子は予防手段として使用されうる。したがって、本発明の核酸分子および医薬組成物の使用は、ＩＤＨ１関連遺伝子発現の調節に関連したこれらの疾患および他の疾患の改善、治療、予防および／または治癒のために用いられうる。
【０１８７】
２．医薬組成物
本発明のｓｉＮＡ分子は、種々の治療、予防、獣医、診断、標的妥当性評価、ゲノム発見、遺伝的操作および薬物ゲノム（ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃ）の用途に有用な試薬および方法を提供する。
【０１８８】
ａ．製剤
本発明は、記載されているｓｉＮＡ分子の医薬組成物、すなわち、医薬上許容される担体または希釈剤中の組成物を提供する。これらの製剤または組成物は、当技術分野で一般に公知の医薬上許容される担体または希釈剤を含みうる。
【０１８９】
１つの実施形態においては、本発明は、配列番号７、配列番号４４６、配列番号１１、配列番号４５０、配列番号１２、配列番号４５１、配列番号１３、配列番号４５２、配列番号３８、配列番号４７７、配列番号３９、配列番号４７８、配列番号４０、配列番号４７９、配列番号４１、配列番号４８０、配列番号５９、配列番号４９８、配列番号６３または配列番号５０２の少なくとも１５ヌクレオチドを含むｓｉＮＡ分子を含む医薬組成物に関する。もう１つの実施形態においては、「少なくとも１５ヌクレオチド」は１５個の連続的ヌクレオチドである。更にもう１つの実施形態においては、本発明は、式（Ａ）を含むｓｉＮＡ分子を含む医薬組成物に関する。
【０１９０】
本発明のｓｉＮＡ分子は、好ましくは、当技術分野で公知の技術に従い、対象に投与する前に医薬組成物として製剤化される。本発明の医薬組成物は、少なくとも無菌であり発熱物質を含有しないことにより特徴づけされる。本発明の医薬組成物の製造方法は、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，１７  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９８５）に記載されている当技術分野の技量の範囲内である。
【０１９１】
幾つかの実施形態においては、本発明の医薬組成物（例えば、ｓｉＮＡおよび／またはそのＬＮＰ製剤）は更に、通常の医薬賦形剤および／または添加剤を含む。適当な医薬賦形剤には、保存剤、香味剤、安定剤、抗酸化剤、浸透圧調節剤、緩衝剤（バッファー）およびｐＨ調節剤が含まれる。適当な添加剤には、生理的に生体適合性であるバッファー（例えば、塩酸トリメチルアミン）、キレート剤（例えば、ＤＴＰＡまたはＤＴＰＡ−ビスアミド）、またはカルシウムキレート錯体（例えば、カルシウムＤＴＰＡ、ＣａＮａＤＴＰＡ−ビスアミド）の添加、または所望により、カルシウムもしくはナトリウム塩（例えば、塩化カルシウム、アスコルビン酸カルシウム、グルコン酸カルシウムまたは乳酸カルシウム）の添加が含まれる。また、抗酸化剤および懸濁化剤が使用されうる。
【０１９２】
局所投与用の種々のタイプの製剤の非限定的な例には、軟膏剤、ローション剤、クリーム剤、ゲル剤、フォーム（泡剤）、経皮パッチによる運搬用の製剤、散剤、噴霧剤、エアゾール剤、カプセル剤またはカートリッジ（吸入器またはインサフレーターにおける使用のためのもの）または滴剤（例えば、点眼剤または点鼻剤）、噴霧療法のための水剤（溶液）／懸濁剤、坐剤、ペッサリー、貯留型浣腸剤、および咀嚼可能もしくは吸い込み可能な錠剤もしくはペレット剤（例えば、アフタ性潰瘍の治療のためのもの）、またはリポソームもしくはマイクロカプセル製剤が含まれる。
【０１９３】
軟膏剤、クリーム剤およびゲル剤は、例えば、適当な増粘剤および／またはゲル化剤および／または溶媒の添加により、水性または油性基剤で製剤化されうる。そのような基剤の非限定的な例には、例えば、水および／または油、例えば流動パラフィン、または植物油、例えばラッカセイ油もしくはヒマシ油、または溶媒、例えばポリエチレングリコールが含まれうる。該基剤の性質に応じて、種々の増粘剤およびゲル化剤が使用されうる。そのような物質の非限定的な例には、白色軟パラフィン、ステアリン酸アルミニウム、セトステアリルアルコール、ポリエチレングリコール、羊毛脂、ミツロウ、カルボキシポリメチレンおよびセルロース誘導体および／またはグリセリルモノステアラートおよび／またはノニオン乳化剤が含まれる。
【０１９４】
１つの実施形態においては、ローション剤が水性または油性基剤で製剤化されることが可能であり、一般に、１以上の乳化剤、安定剤、分散剤、懸濁化剤または増粘剤をも含有するであろう。
【０１９５】
１つの実施形態においては、いずれかの適当な散剤基剤、例えばタルク、ラクトースまたはデンプンの補助により、外部適用のための散剤が形成されうる。滴剤は、１以上の分散剤、可溶化剤、懸濁化剤または保存剤をも含む水性または非水性基剤で製剤化されうる。
【０１９６】
経口使用を意図した組成物は医薬組成物の製造のための当技術分野で公知の任意の方法により製造されることが可能であり、そのような組成物は、医薬上優美かつ美味な製剤を得るために、１以上のそのような甘味剤、香味剤、着色剤および保存剤を含有しうる。錠剤は、錠剤の製造に適した無毒性の医薬上許容される賦形剤と混合された有効成分を含有する。これらの賦形剤は、例えば不活性な希釈剤、例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム；顆粒化および崩壊剤、例えばコーンスターチまたはアルギン酸；結合剤、例えばデンプン、ゼラチンまたはアカシア；ならびに滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクでありうる。該錠剤はコーティングされていないものであることが可能であり、あるいはそれは公知技術によりコーティングされうる。幾つかの場合には、そのようなコーティングは、胃腸管における崩壊および吸収を遅延させて長期にわたる持続的作用をもたらすための公知技術により調製されうる。例えば、時間遅延性物質、例えばグリセリルモノステアラートまたはグリセリルジステアラートが使用されうる。
【０１９７】
経口用製剤は、硬ゼラチンカプセル剤（この場合、有効成分は不活性固体希釈剤、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンと混合さている）または軟ゼラチンカプセル剤（この場合、有効成分は水または油媒体、例えばラッカセイ油、液体パラフィンまたはオリーブ油と混合されている）としても提供されうる。
【０１９８】
水性懸濁剤は、水性懸濁剤の製造に適した賦形剤と混合された活性物質を含有する。そのような賦形剤は、懸濁化剤、例えばカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピル−メチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガムおよびアカシアガムであり、分散または湿潤剤は、天然に存在するホスファチド、例えばレシチン、アルキレンオキシドと脂肪酸との縮合産物、例えばポリオキシエチレンステアラート、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合産物、例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール、または脂肪酸およびヘキシトールに由来する部分エステルとエチレンオキシドとの縮合産物、例えばポリオキシエチレンソルビトールモノオレアート、または脂肪酸およびヘキシトール無水物に由来する部分エステルとエチレンオキシドとの縮合産物、例えばポリエチレンソルビタンモノオレアートでありうる。該水性懸濁剤は、１以上の保存剤、例えばエチルまたはｎ−プロピル、ｐ−ヒドロキシベンゾアート、１以上の着色剤、１以上の香味剤、および１以上の甘味剤、例えばスクロースまたはサッカリンをも含有しうる。
【０１９９】
油性懸濁剤は、有効成分を、植物油、例えばラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油またはヤシ油、あるいは鉱油、例えば流動パラフィンに懸濁させることにより製剤化されうる。該油性懸濁剤は、増粘剤、例えばミツロウ、固型パラフィンまたはセチルアルコールを含有しうる。美味な経口製剤を得るために、甘味剤（例えば、前記のもの）および香味剤が添加されうる。これらの組成物は、例えばアスコルビン酸のような抗酸化剤の添加により保存されうる。
【０２００】
また、本発明の医薬組成物は水中油エマルションの形態でありうる。油相は植物油、例えばオリーブ油またはラッカセイ油、あるいは鉱油、例えば流動パラフィンまたはこれらの混合物でありうる。適当な乳化剤は、天然に存在するガム、例えばアカシアガムまたはトラガカントガム、天然に存在するホスファチド、例えばダイズ、レシチン、および脂肪酸とヘキシトール無水物とに由来するエステルまたは部分エステル、例えばソルビタンモノオレアート、およびエチレンオキシドとの該部分エステルの縮合産物、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレアートでありうる。該エマルションは甘味剤および香味剤をも含有しうる。
【０２０１】
シロップ剤およびエリキシル剤は、甘味剤、例えばグリセロール、プロピレングリコール、ソルビトールまたはスクロースを使用して製剤化されうる。そのような製剤は粘滑剤、保存剤ならびに香味および着色剤をも含有しうる。該医薬組成物は無菌の注射可能な水性または油性懸濁剤の形態でありうる。この懸濁剤は、前記で挙げられている適当な分散または湿潤剤および懸濁化剤を使用して公知の技術により製剤化されうる。該無菌注射剤はまた、無毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液としての、無菌の注射可能な溶液または懸濁液でありうる。使用されうる許容されるビヒクルおよび溶媒としては、水、リンゲル液および等張性塩化ナトリウム溶液が挙げられる。また、無菌の不揮発性油が溶媒または懸濁媒体として簡便に使用される。この目的には、合成モノ−またはジグリセリドを含む、刺激の少ないいずれかの不揮発性油が使用されうる。また、注射剤の製造においては、脂肪酸、例えばオレイン酸が有用である。
【０２０２】
本発明の核酸分子はまた、例えば該薬物の直腸投与のための坐剤の形態で投与されうる。これらの組成物は、常温では固体であるが直腸温度では液体であり従って直腸内で溶解して該薬物を放出する適当な非刺激性賦形剤と該薬物とを混合することにより製造されうる。そのような物質には、カカオ脂およびポリエチレングリコールが含まれる。
【０２０３】
本発明の核酸は無菌媒体中で非経口的に投与されうる。該分子は、用いられるビヒクルおよび濃度に応じて、該ビヒクルに懸濁または溶解されうる。有利には、局所麻酔薬、保存剤および緩衝剤のような佐剤がビヒクルに溶解されうる。
【０２０４】
他の実施形態においては、肺運搬における使用のための、本発明で提供されるｓｉＮＡおよびＬＮＰ組成物および製剤は更に、１以上の界面活性剤を含む。本発明の組成物の取り込みを増強するための適当な界面活性剤（サーファクタント）または界面活性剤成分には、サーファクタントタンパク質Ａ、サーファクタントタンパク質Ｂ、サーファクタントタンパク質Ｃ、サーファクタントタンパク質Ｄおよびサーファクタントタンパク質Ｅ、ジ飽和ホスファチジルコリン（ジパルミトイル以外）、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン；ホスファチジン酸、ユビキノン、リゾホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルコリン、パルミトイル−リゾホスファチジルコリン、デヒドロエピアンドロステロン、ドリコール、スルファチジン酸、グリセロール−３−ホスファート、ジヒドロキシアセトンホスファート、グリセロール、グリセロール−３−ホスホコリン、ジヒドロキシアセトン、パルミタート、シチジンジホスファート（ＣＤＰ）ジアシルグリセロール、ＣＤＰコリン、コリン、コリンホスファートの合成および天然ならびに完全およびトランケート化形態；ならびに、とりわけ、オメガ−３脂肪酸、ポリエン酸、ポリエノン酸、レシチン、パルミチン酸、エチレンまたはプロピレンオキシドの非イオン性ブロック共重合体、ポリオキシプロピレン、単量体および重合体ポリオキシエチレン、デキストランおよび／またはアルカノイル側鎖を有する単量体および重合体ポリ（ビニルアミン）、Ｂｒｉｊ  ３５、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００および合成界面活性剤ＡＬＥＣ、Ｅｘｏｓｕｒｆ、ＳｕｒｖａｎおよびＡｔｏｖａｑｕｏｎｅ、界面活性剤の成分のための天然担体ビヒクルである天然および人工層状体が含まれる。これらの界面活性剤は製剤中で単一界面活性剤または多成分界面活性剤の一部として、あるいは本発明における医薬組成物の核酸成分の５’および／または３’末端への共有結合付加体として使用されうる。
【０２０５】
ｂ．組合せ
本発明のｓｉＮＡおよび医薬製剤は単独で対象に投与されることが可能であり、あるいは１以上の他の治療用物質、例えば抗癌物質と組合せて使用されうる。したがって、ここで開示されている化合物と他の抗癌または化学療法物質との組合せは本発明の範囲内である。そのような物質の例は、Ｃａｎｃｅｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｖ．Ｔ．ＤｅｖｉｔａおよびＳ．Ｈｅｌｌｍａｎ（編），６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ（２００１年２月１５日），Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓに見出されうる。当業者は、関わっている癌および薬物の個々の特性に基づいて、どの物質の組合せが有用であるかを認識しうるであろう。本発明のｓｉＮＡは、癌において使用されるいずれかの治療用物質と組合された場合にも有用である。本化合物は、放射線療法と共に投与される場合に特に有用である。
【０２０６】
したがって、もう１つの実施形態においては、本発明は、１以上の抗癌または化学療法物質と、本発明のｓｉＮＡ分子、例えば、配列番号７、配列番号４４６、配列番号１１、配列番号４５０、配列番号１２、配列番号４５１、配列番号１３、配列番号４５２、配列番号３８、配列番号４７７、配列番号３９、配列番号４７８、配列番号４０、配列番号４７９、配列番号４１、配列番号４８０、配列番号５９、配列番号４９８、配列番号６３もしくは配列番号５０２または式（Ａ）の少なくとも１５ヌクレオチドを含むｓｉＮＡ分子（これらに限定されるものではない）との組合せを提供する。もう１つの実施形態においては、該組合せのｓｉＮＡ成分の「少なくとも１５ヌクレオチド」は１５個の連続的ヌクレオチドである。
【０２０７】
ある実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、以下のものを含む公知抗癌物質と組合された場合に有用である：エストロゲン受容体モジュレーター、アンドロゲン受容体モジュレーター、レチノイド受容体モジュレーター、細胞毒性物質、抗増殖物質、プレニル−タンパク質トランスフェラーゼインヒビター、血管新生インヒビター、細胞増殖および生存シグナリングのインヒビター、アポトーシス誘導物質、ならびに細胞周期チェックポイントを阻害する物質。
【０２０８】
本発明の分子と組合せて使用されうるエストロゲン受容体モジュレーターの例には、タモキシフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、ラロキシフェン（ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）、ヨードキシフェン（ｉｄｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ３５３３８１、ＬＹ１１７０８１、トレミフェン（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ）、フルベストラント（ｆｕｌｖｅｓｔｒａｎｔ）、４−［７−（２，２−ジメチル−１−オキソプロポキシ−４−メチル−２−［４−［２−（１−ピペリジニル）エトキシ］フェニル］−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル］−フェニル−２，２−ジメチルプロパノアート、４，４’−ジヒドロキシベンゾフェノン−２，４−ジニトロフェニル−ヒドラゾンおよびＳＨ６４６が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２０９】
本発明の分子と組合せて使用されうるアンドロゲン受容体モジュレーターの例には、フィナステリド（ｆｉｎａｓｔｅｒｉｄｅ）および他の５α−レダクターゼインヒビター、ニルタミド（ｎｉｌｕｔａｍｉｄｅ）、フルタミド（ｆｌｕｔａｍｉｄｅ）、ビカルタミド（ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）、リアロゾール（ｌｉａｒｏｚｏｌｅ）および酢酸アビラテロン（ａｂｉｒａｔｅｒｏｎｅ）が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２１０】
本発明の分子と組合せて使用されうるそのようなレチノイド受容体モジュレーターの例には、ベキサロテン（ｂｅｘａｒｏｔｅｎｅ）、トレチノイン（ｔｒｅｔｉｎｏｉｎ）、１３−シス−レチノイン酸、９−シス−レチノイン酸、α−ジフルオロメチルオルニチン、ＩＬＸ２３−７５５３、トランス−Ｎ−（４’−ヒドロキシフェニル）レチナミドおよびＮ−４−カルボキシフェニルレチナミドが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２１１】
本発明の分子と組合せて使用されうる細胞毒性物質の例には、以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：セルテネフ（ｓｅｒｔｅｎｅｆ）、カケクチン（ｃａｃｈｅｃｔｉｎ）、イホスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、タソネルミン（ｔａｓｏｎｅｒｍｉｎ）、ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｍｉｎｅ）、カルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）、アルトレタミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、ジブロモズルシトール（ｄｉｂｒｏｍｏｄｕｌｃｉｔｏｌ）、ラニムスチン（ｒａｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、ホテムスチン（ｆｏｔｅｍｕｓｔｉｎｅ）、ネダプラチン（ｎｅｄａｐｌａｔｉｎ）、オキサリプラチン（ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ）、テモゾロミド（ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）、ヘプタプラチン（ｈｅｐｔａｐｌａｔｉｎ）、エストラムスチン（ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ）、トシル酸イムプロスルファン（ｉｍｐｒｏｓｕｌｆａｎ）、トロホスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ニムスチン（ｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、塩化ジブロスピジウム（ｄｉｂｒｏｓｐｉｄｉｕｍ）、プミテパ（ｐｕｍｉｔｅｐａ）、ロバプラチン（ｌｏｂａｐｌａｔｉｎ）、サトラプラチン（ｓａｔｒａｐｌａｔｉｎ）、プロフィロマイシン（ｐｒｏｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、イロフルベン（ｉｒｏｆｕｌｖｅｎ）、デキシホスファミド（ｄｅｘｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、シス−アミンジクロロ（２−メチル−ピリジン）白金、ベンジルグアニン、グルホスファミド（ｇｌｕｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ＧＰＸ１００、（トランス，トランス，トランス）−ビス−ミュー−（ヘキサン−１，６−ジアミン）−ミュー−［ジアミン−白金（ＩＩ）］ビス［ジアミン（クロロ）白金（ＩＩ）］テトラクロリド、ジアリジジニルスペルミン（ｄｉａｒｉｚｉｄｉｎｙｌｓｐｅｒｍｉｎｅ）、三酸化ヒ素、１−（１１−ドデシルアミノ−１０−ヒドロキシウンデシル）−３，７−ジメチルキサンチン、ゾルビシン（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）、ミトザントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、ピラルビシン（ｐｉｒａｒｕｂｉｃｉｎ）、ピナフィド（ｐｉｎａｆｉｄｅ）、バルルビシン（ｖａｌｒｕｂｉｃｉｎ）、アムルビシン（ａｍｒｕｂｉｃｉｎ）、アンチネオプラストン（ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｏｎ）、３’−デアミノ−３’−モルホリノ−１３−デオキソ−１０−ヒドロキシカルミノマイシン、アンナマイシン（ａｎｎａｍｙｃｉｎ）、ガラルビシン（ｇａｌａｒｕｂｉｃｉｎ）、エリナフィド（ｅｌｉｎａｆｉｄｅ）、ＭＥＮ１０７５５および４−デメトキシ−３−デアミノ−３−アジリジニル−４−メチルスルホニル−ダウノルビシン（ＷＯ  ００／５００３２を参照されたい）。
【０２１２】
本発明の分子と組合せて使用されうる低酸素活性化性化合物の一例としては、チラパザミン（ｔｉｒａｐａｚａｍｉｎｅ）が挙げられる。
【０２１３】
本発明の分子と組合せて使用されうるプロテアソームインヒビターの例には、ラクタシスチン（ｌａｃｔａｃｙｓｔｉｎ）およびボルテゾミブ（ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ）が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２１４】
本発明の分子と組合せて使用されうる微小管インヒビター／微小管安定化物質の例には、パクリタクセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、硫酸ビンデシン（ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）、３’，４’−ジデヒドロ−４’−デオキシ−８’−ノルビンカロイコブラスチン（ｎｏｒｖｉｎｃａｌｅｕｋｏｂｌａｓｔｉｎｅ）、ドセタキソール（ｄｏｃｅｔａｘｏｌ）、リゾキシン（ｒｈｉｚｏｘｉｎ）、ドラスタチン（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ）、ミボブリン（ｍｉｖｏｂｕｌｉｎ）イセチオナート、オーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）、セマドチン（ｃｅｍａｄｏｔｉｎ）、ＲＰＲ１０９８８１、ＢＭＳ１８４４７６、ビンフルニン（ｖｉｎｆｌｕｎｉｎｅ）、クリプトフィシン（ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ）、２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−Ｎ−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）ベンゼンスルホンアミド、アンヒドロビンブラスチン（ａｎｈｙｄｒｏｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バリル−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリル−Ｌ−プロリン−ｔ−ブチルアミド、ＴＤＸ２５８、エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅｓ）（例えば、米国特許第６，２８４，７８１号および第６，２８８，２３７号を参照されたい）およびＢＭＳ１８８７９７が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２１５】
本発明の分子と組合せて使用されうるトポイソメラーゼインヒビターの幾つかの例には、以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、ヒカプタミン（ｈｙｃａｐｔａｍｉｎｅ）、イリノテカン（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）、ルビテカン（ｒｕｂｉｔｅｃａｎ）、６−エトキシプロピオニル−３’，４’−Ｏ−エキソ−ベンジリデン−シャールトルーシン（ｃｈａｒｔｒｅｕｓｉｎ）、９−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−５−ニトロピラゾロ［３，４，５−ｋｌ］アクリジン−２−（６Ｈ）プロパンアミン、１−アミノ−９−エチル−５−フルオロ−２，３−ジヒドロ−９−ヒドロキシ−４−メチル−１Ｈ，１２Ｈ−ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：ｂ，７］−インドリジノール［１，２ｂ］キノリン−１０，１３（９Ｈ，１５Ｈ）ジオン，ルルトテカン（ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ）、７−［２−（Ｎ−イソプロピルアミノ）エチル］−（２０Ｓ）カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、ＢＮＰ１３５０、ＢＮＰＩ１１００、ＢＮ８０９１５、ＢＮ８０９４２、リン酸エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）、ソブゾキサン（ｓｏｂｕｚｏｘａｎｅ）、２’−ジメチルアミノ−２’−デオキシ−エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、ＧＬ３３１、Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−９−ヒドロキシ−５，６−ジメチル−６Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］カルバゾール−１−カルボキサミド、アスラクリン（ａｓｕｌａｃｒｉｎｅ）、（５ａ，５ａＢ，８ａａ，９ｂ）−９−［２−［Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−Ｎ−メチルアミノ］エチル］−５−［４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシフェニル］−５，５ａ，６，８，８ａ，９−ヘキソヒドロフロ（３’，４’：６，７）ナフト（２，３−ｄ）−１，３−ジオキソール−６−オン、２，３−（メチレンジオキシ）−５−メチル−７−ヒドロキシ−８−メトキシベンゾ［ｃ］−フェナントリジニウム、６，９−ビス［（２−アミノエチル）アミノ］ベンゾ［ｇ］イソグイノリン−５，１０−ジオン、５−（３−アミノプロピルアミノ）−７，１０−ジヒドロキシ−２−（２−ヒドロキシエチルアミノメチル）−６Ｈ−ピラゾロ［４，５，１−ｄｅ］アクリジン−６−オン、Ｎ−［１−［２（ジエチルアミノ）エチルアミノ］−７−メトキシ−９−オキソ−９Ｈ−チオキサンテン−４−イルメチル］ホルムアミド、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）アクリジン−４−カルボキサミド、６−［［２−（ジメチルアミノ）エチル］アミノ］−３−ヒドロキシ−７Ｈ−インデノ［２，１−ｃ］キノリン−７−オンおよびジメスナ（ｄｉｍｅｓｎａ）。
【０２１６】
本発明の分子と組合せて使用されうる、有糸分裂キネシン、特にヒト有糸分裂キネシンＫＳＰのインヒビターの例には、ＰＣＴ公開ＷＯ０１／３０７６８、ＷＯ０１／９８２７８、ＷＯ０３／０５０，０６４、ＷＯ０３／０５０，１２２、ＷＯ０３／０４９，５２７、ＷＯ０３／０４９，６７９、ＷＯ０３／０４９，６７８、ＷＯ０４／０３９７７４、ＷＯ０３／０７９９７３、ＷＯ０３／０９９２１１、ＷＯ０３／１０５８５５、ＷＯ０３／１０６４１７、ＷＯ０４／０３７１７１、ＷＯ０４／０５８１４８、ＷＯ０４／０５８７００、ＷＯ０４／１２６６９９、ＷＯ０５／０１８６３８、ＷＯ０５／０１９２０６、ＷＯ０５／０１９２０５、ＷＯ０５／０１８５４７およびＷＯ０５／０１７１９０、ならびに米国特許出願公開番号ＵＳ２００５／０１７６７７６に記載されているインヒビターが含まれるが、これらに限定されるものではない。１つの実施形態においては、有糸分裂キネシンのインヒビターには、ＫＳＰのインヒビター、ＭＫＬＰ１のインヒビター、ＣＥＮＰ−Ｅのインヒビター、ＭＣＡＫのインヒビター、Ｋｉｆｌ４のインヒビター、Ｍｐｈｏｓｐｈ１のインヒビターおよびＲａｂ６−ＫＩＦＬのインヒビターが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２１７】
本発明の化合物と組合せて使用されうるヒストンデアセチラーゼインヒビターの例には、ＴＳＡ、オキサムフラチン（ｏｘａｍｆｌａｔｉｎ）、ＰＸＤ１０１、ＭＧ９８、バルプロ酸およびスクリプタイド（ｓｃｒｉｐｔａｉｄ）が含まれるが、これらに限定されるものではない。他のヒストンデアセチラーゼインヒビターに対する更なる言及はＭｉｌｌｅｒ，Ｔ．Ａ．ら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４６（２４）：５０９７−５１１６（２００３）に見出されうる。
【０２１８】
本発明の分子と組合せて使用されうる、有糸分裂の進行に関与するキナーゼのインヒビターには、オーロラキナーゼのインヒビター、Ｐｏｌｏ様キナーゼ（ＰＬＫ）のインヒビター（特にＰＬＫ−１のインヒビター）、ｂｕｂ−１のインヒビターおよびｂｕｂ−Ｒ１のインヒビターが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２１９】
本発明の分子と組合せて使用されうる抗増殖性物質には、以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：アンチセンスＲＮＡおよびＤＮＡオリゴヌクレオチド、例えばＧ３１３９、ＯＤＮ６９８、ＲＶＡＳＫＲＡＳ、ＧＥＭ２３１およびＩＮＸ３００１、ならびに抗代謝拮抗物質、例えばエノシタビン（ｅｎｏｃｉｔａｂｉｎｅ）、カルモフル（ｃａｒｍｏｆｕｒ）、テガフル（ｔｅｇａｆｕｒ）、ペントスタチン（ｐｅｎｔｏｓｔａｔｉｎ）、ドキシフルリジン（ｄｏｘｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ）、トリメトレキセート（ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）、フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、ガロシタビン（ｇａｌｏｃｉｔａｂｉｎｅ）、シタラビンオクホスファート（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ  ｏｃｆｏｓｆａｔｅ）、ホステアビン（ｆｏｓｔｅａｂｉｎｅ）ナトリウム水和物、ラルチトレキセド（ｒａｌｔｉｔｒｅｘｅｄ）、パルチトレキシド（ｐａｌｔｉｔｒｅｘｉｄ）、エミテフル（ｅｍｉｔｅｆｕｒ）、チアゾフリン（ｔｉａｚｏｆｕｒｉｎ）、デシタビン（ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、ノラトレキセド（ｎｏｌａｔｒｅｘｅｄ）、ペメトレキセド（ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）、ネルザラビン（ｎｅｌｚａｒａｂｉｎｅ）、２’−デオキシ−２’−メチリデンシチジン、２’−フルオロメチレン−２’−デオキシシチジン、Ｎ−［５−（２，３−ジヒドロ−ベンゾフリル）スルホニル］−Ｎ’−（３，４−ジクロロフェニル）尿素、Ｎ６−［４−デオキシ−４−［Ｎ２−［２（Ｅ），４（Ｅ）−テトラデカジエノイル］グリシルアミノ］−Ｌ−グリセロ−Ｂ−Ｌ−マンノ−ヘプトピラノシル］アデニン、アプリジン（ａｐｌｉｄｉｎｅ）、エクテイナスシジン（ｅｃｔｅｉｎａｓｃｉｄｉｎ）、トロキサシタビン（ｔｒｏｘａｃｉｔａｂｉｎｅ）、４−［２−アミノ−４−オキソ−４，６，７，８−テトラヒドロ−３Ｈ−ピリミジノ［５，４−ｂ］［１，４］チアジン−６−イル−（Ｓ）−エチル］−２，５−チエノイル−Ｌ−グルタミン酸、アミノプテリン（ａｍｉｎｏｐｔｅｒｉｎ）、５−フルオロウラシル、アラノシン（ａｌａｎｏｓｉｎｅ）、１１−アセチル−８−（カルバモイルオキシメチル）−４−ホルミル−６−メトキシ−１４−オキサ−１，１−ジアザテトラシクロ（７．４．１．０．０）−テトラデカ−２，４，６−トリエン−９−イル酢酸エステル、スワインソニン（ｓｗａｉｎｓｏｎｉｎｅ）、ロメトレキソール（ｌｏｍｅｔｒｅｘｏｌ）、デクスラゾキサン（ｄｅｘｒａｚｏｘａｎｅ）、メチオニナーゼ（ｍｅｔｈｉｏｎｉｎａｓｅ）、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−Ｂ−Ｄ−アラビノフラノシルシトシンおよび３−アミノピリジン−２−カルボキサルデヒドチオセミカルバゾン。
【０２２０】
本発明の分子と組合せて使用されうるモノクローナル抗体標的化治療用物質の例には、癌細胞特異的または標的細胞特異的モノクローナル抗体に細胞毒性物質または放射性同位体が結合している治療用物質、例えばＢｅｘｘａｒが含まれる。
【０２２１】
本発明の分子と組合せて使用されうるプレニル−タンパク質トランスフェラーゼインヒビターの例には、以下の刊行物および特許において見出されうるものが含まれるが、それらに限定されるものではない：ＷＯ９６／３０３４３、ＷＯ９７／１８８１３、ＷＯ９７／２１７０１、ＷＯ９７／２３４７８、ＷＯ９７／３８６６５、ＷＯ９８／２８９８０、ＷＯ９８／２９１１９、ＷＯ９５／３２９８７、ＷＯ９４／１９３５７、ＷＯ９５／０８５４２、ＷＯ９５／１１９１７、ＷＯ９５／１２６１２、ＷＯ９５／１２５７２、ＷＯ９５／１０５１４、ＷＯ９５／１０５１５、ＷＯ９５／１０５１６、ＷＯ９５／２４６１２、ＷＯ９５／３４５３５、ＷＯ９５／２５０８６、ＷＯ９６／０５５２９、ＷＯ９６／０６１３８、ＷＯ９６／０６１９３、ＷＯ９６／１６４４３、ＷＯ９６／２１７０１、ＷＯ９６／２１４５６、ＷＯ９６／２２２７８、ＷＯ９６／２４６１１、ＷＯ９６／２４６１２、ＷＯ９６／０５１６８、ＷＯ９６／０５１６９、ＷＯ９６／００７３６、ＷＯ９６／１７８６１、ＷＯ９６／３３１５９、ＷＯ９６／３４８５０、ＷＯ９６／３４８５１、ＷＯ９６／３００１７、ＷＯ９６／３００１８、ＷＯ９６／３０３６２、ＷＯ９６／３０３６３、ＷＯ９６／３１１１１、ＷＯ９６／３１４７７、ＷＯ９６／３１４７８、ＷＯ９６／３１５０１、ＷＯ９７／００２５２、ＷＯ９７／０３０４７、ＷＯ９７／０３０５０、ＷＯ９７／０４７８５、ＷＯ９７／０２９２０、ＷＯ９７／１７０７０、ＷＯ９７／２６２４６、ＷＯ９７／３００５３、ＷＯ９７／４４３５０およびＷＯ９８／０２４３６；米国特許第５，４２０，２４５号、第５，５２３，４３０号、第５，５３２，３５９号、第５，５１０，５１０号、第５，５８９，４８５号、第５，６０２，０９８号、第５，６６１，１５２号、第５，５７１，７９２号；ならびに欧州特許出願公開番号０  ６１８  ２２１、０  ６７５  １１２、０  ６０４  １８１、０  ６９６  ５９３。血管新生に対するプレニル−タンパク質トランスフェラーゼインヒビターの役割の一例に関しては、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ．ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．９，ｐｐ．１３９４−１４０１（１９９９）を参照されたい。
【０２２２】
本発明の分子と組合せて使用されうる血管新生インヒビターの例には、以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：チロシンキナーゼインヒビター、例えば、チロシンキナーゼ受容体Ｆｌｔ−１（ＶＥＧＦＲ１）およびＦｌｋ−１／ＫＤＲ（ＶＥＧＦＲ２）のインヒビター、上皮由来、繊維芽細胞由来または血小板由来増殖因子のインヒビター、ＭＭＰ（マトリックスメタロプロテアーゼ）インヒビター、インテグリンブロッカー、インターフェロンα、インターロイキン−１２、ペントサンポリスルファート、シクロオキシゲナーゼインヒビター、例えば非ステロイド抗炎症物質（ＮＳＡＩＤ）、例えばアスピリンおよびイブプロフェン、ならびに選択的シクロオキシゲナーゼ２インヒビター、例えばセレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）およびロフェコキシブ（ｒｏｆｅｃｏｘｉｂ）（ＰＮＡＳ，Ｖｏｌ．８９，ｐ．７３８４（１９９２）；ＪＮＣＩ，Ｖｏｌ．６９，ｐ．４７５（１９８２）；Ａｒｃｈ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ，Ｖｏｌ．１０８，ｐ．５７３（１９９０）；Ａｎａｔ．Ｒｅｃ，Ｖｏｌ．２３８，ｐ．６８（１９９４）；ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．３７２，ｐ．８３（１９９５）；Ｃｌｉｎ，Ｏｒｔｈｏｐ．Ｖｏｌ．３１３，ｐ．７６（１９９５）；Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，Ｖｏｌ．１６，ｐ．１０７（１９９６）；Ｊｐｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，Ｖｏｌ．７５，ｐ．１０５（１９９７）；Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．５７，ｐ．１６２５（１９９７）；Ｃｅｌｌ，Ｖｏｌ．９３，ｐ．７０５（１９９８）；Ｉｎｔｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．２，ｐ．７１５（１９９８）；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２７４，ｐ．９１１６（１９９９））、ステロイド抗炎症物質（例えば、コルチコステロイド、ミネラルコルチコステロイド、デキサメタゾン（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、プレドニゾン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）、プレドニゾロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、メチルプレド（ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄ）、ベタメタゾン（ｂｅｔａｍｅｔｈａｓｏｎｅ））、カルボキシアミドトリアゾール、コムブレタスタチン（ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ）Ａ−４、スクアラミン（ｓｑｕａｌａｍｉｎｅ）、６−Ｏ−クロロアセチル−カルボニル）−フマギロール（ｆｕｍａｇｉｌｌｏｌ）、サリドマイド（ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ）、アンジオスタチン（ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）、トロポニン−１、アンジオテンシンＩＩアンタゴニスト（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚら，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１０５：１４１−１４５（１９８５）を参照されたい）、およびＶＥＧＦに対する抗体（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１７，ｐｐ．９６３−９６８（Ｏｃｔｏｂｅｒ  １９９９）；Ｋｉｍら，Ｎａｔｕｒｅ，３６２，８４１−８４４（１９９３）；ＷＯ００／４４７７７；およびＷＯ００／６１１８６）、エンドスタチン（ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）、ウクライン（ｕｋｒａｉｎ）、ランピルナーゼ（ｒａｎｐｉｒｎａｓｅ）、ＩＭ８６２、５−メトキシ−４−［２−メチル−３−（３−メチル−２−ブテニル）オキシラニル］−１−オキサスピロ［２，５］オクタ−６−イル（クロロアセチル）カルバマート、アセチル��ナナリン（ａｃｅｔｙｌｄｉｎａｎａｌｉｎｅ）、５−アミノ−１−［［３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）−フェニル］メチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド、ＣＭ１０１、スクアラミン（ｓｑｕａｌａｍｉｎｅ）、コムブレタスタチン（ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ）、ＲＰＩ４６１０、ＮＸ３１８３８、硫酸化マンノペントースホスファート、７，７−（カルボニル−ビス［イミノ−Ｎ−メチル−４，２−ピロロカルボニルイミノ［Ｎ−メチル−４，２−ピロール］−カルボニルイミノ］−ビス−（１，３−ナフタレンジスルホナート）、および３−［（２，４−ジメチルピロール−５−イル）メチレン］−２−インドリノン（ＳＵ５４１６）。
【０２２３】
血管新生をモジュレーションまたは抑制する他の治療用物質も本発明の分子と組合せて使用されることが可能であり、凝固および線維素溶解系をモジュレーションまたは抑制する物質を包含する（Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｌａ．Ｍｅｄ．３８：６７９−６９２（２０００）における総説を参照されたい）。本発明の化合物と組合せて使用されうる、凝固および線維素溶解経路をモジュレーションまたは抑制するそのような物質の例には、ヘパリン（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．８０：１０−２３（１９９８）を参照されたい）、低分子量ヘパリンおよびカルボキシペプチダーゼＵインヒビター（活性トロンビン活性化性線維素溶解インヒビター（ＴＡＦＩａ）のインヒビターとしても公知である）が含まれるが、これらに限定されるものではない。ＴＡＦＩａインヒビターはＰＣＴ公開ＷＯ０３／０１３，５２６および米国特許出願（Ｕ．Ｓ．Ｓｅｒ．）第６０／３４９，９２５号（２００２年１月１８日付け出願）に記載されている。
【０２２４】
本発明の分子と組合せて使用されうる、細胞周期チェックポイントを妨げる物質は、限定的なものではないがＡＴＲ、ＡＴＭ、Ｃｈｋ１およびＣｈｋ２キナーゼのインヒビターならびにｃｄｋおよびｃｄｃキナーゼインヒビターを包含し、特に、７−ヒドロキシスタウロスポリン、フラボピリドール（ｆｌａｖｏｐｉｒｉｄｏｌ）、ＣＹＣ２０２（Ｃｙｃｌａｃｅｌ）およびＢＭＳ−３８７０３２により例示される。
【０２２５】
本発明の分子と組合せて使用されうる、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）を妨げる物質には、ｃ−Ｋｉｔ、Ｅｐｈ、ＰＤＧＦ、Ｆｌｔ３およびＭＡＰＫ１のインヒビターが含まれるが、これらに限定されるものではない。他の物質には、Ｂｕｍｅ−ＪｅｎｓｅｎおよびＨｕｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ，４１１：３５５−３６５，２００１に記載されているＲＴＫのインヒビターが含まれる。
【０２２６】
本発明の分子と組合せてと使用されうる、細胞周期および生存シグナリング経路のインヒビターには、以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：ＥＧＦＲのインヒビター（例えば、ゲフィチニブ（ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）およびエルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ））、ＥＲＢ−２のインヒビター（例えば、トラスツズマブ（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ））、ＩＧＦＲのインヒビター、サイトカイン受容体のインヒビター、ＭＡＰＫ１のインヒビター、ＰＩ３Ｋのインヒビター（例えば、ＬＹ２９４００２）、セリン／トレオニンキナーゼのインヒビター（限定的なものではないが、例えばＷＯ０２／０８３０６４、ＷＯ０２／０８３１３９、ＷＯ０２／０８３１４０、ＵＳ２００４−０１１６４３２、ＷＯ０２／０８３１３８、ＵＳ２００４−０１０２３６０、ＷＯ０３／０８６４０４、ＷＯ０３／０８６２７９、ＷＯ０３／０８６３９４、ＷＯ０３／０８４４７３、ＷＯ０３／０８６４０３、ＷＯ２００４／０４１１６２、ＷＯ２００４／０９６１３１、ＷＯ２００４／０９６１２９、ＷＯ２００４／０９６１３５、ＷＯ２００４／０９６１３０、ＷＯ２００５／１００３５６、ＷＯ２００５／１００３４４に記載されているもののようなＡｋｔのインヒビターを含む、）、Ｒａｆキナーゼのインヒビター（例えば、ＢＡＹ−４３−９００６）、ＭＥＫのインヒビター（例えば、ＣＩ−１０４０およびＰＤ−０９８０５９）およびｍＴＯＲのインヒビター（例えば、Ｗｙｅｔｈ  ＣＣＩ−７７９）。そのような物質には、小分子インヒビター化合物および抗体アンタゴニストが含まれる。
【０２２７】
本発明の分子と組合せて使用されうるアポトーシス誘導物質には、ＴＮＦ受容体ファミリーメンバー（ＴＲＡＩＬ受容体を含む）のアクチベーターが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２２８】
本発明の分子と組合せて使用されうる、選択的ＣＯＸ−２インヒビターであるＮＳＡＩＤには、米国特許第５，４７４，９９５号、米国特許第５，８６１，４１９号、米国特許第６，００１，８４３号、米国特許第６，０２０，３４３号、米国特許第５，４０９，９４４号、米国特許第５，４３６，２６５号、米国特許第５，５３６，７５２号、米国特許第５，５５０，１４２号、米国特許第５，６０４，２６０号、Ｕ．Ｓ．５，６９８，５８４号、米国特許第５，７１０，１４０号、ＷＯ９４／１５９３２、米国特許第５，３４４，９９１号、米国特許第５，１３４，１４２号、米国特許第５，３８０，７３８号、米国特許第５，３９３，７９０号、米国特許第５，４６６，８２３号、米国特許第５，６３３，２７２および米国特許第５，９３２，５９８号（それらの全てを参照により本明細書に組み入れることとする）に開示されているＮＳＡＩＤが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２２９】
本発明の分子と組合せた場合に特に有用であるＣＯＸ−２のインヒビターには、３−フェニル−４−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−２−（５Ｈ）−フラノンおよび５−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）−フェニル−２−（２−メチル−５−ピリジニル）ピリジンまたはそれらの医薬上許容される塩が含まれる。
【０２３０】
ＣＯＸ−２の特異的インヒビターとして記載されており、したがって本発明において有用である分子には、パレコキシブ（ｐａｒｅｃｏｘｉｂ）、ＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標）およびＢＥＸＴＲＡ（登録商標）またはそれらの医薬上許容される塩が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２３１】
本発明の分子と組合せて使用されうるチロシンキナーゼインヒビターには、以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：Ｎ−（トリフルオロメチルフェニル）−５−メチルイソオキサゾール−４−カルボキサミド、３−［（２，４−ジメチルピロール−５−イル）メチリデニル）インドリン−２−オン、１７−（アリルアミノ）−１７−デメトキシゲルダナマイシン（ｄｅｍｅｔｈｏｘｙｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ）、４−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−７−メトキシ−６−［３−（４−モルホリニル）プロポキシル］キナゾリン、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−４−キナゾリンアミン、ＢＩＢＸ１３８２，２，３，９，１０，１１，１２−ヘキサヒドロ−１０−（ヒドロキシメチル）−１０−ヒドロキシ−９−メチル−９，１２−エポキシ−１Ｈ−ジインドロ［１，２，３−ｆｇ：３’，２’，１’−ｋｌ］ピロロ［３，４−ｉ］［１，６］ベンゾジアゾシン−１−オン、ＳＨ２６８、ゲニステイン（ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）、イマチニブ（ｉｍａｔｉｎｉｂ）（ＳＴＩ５７１）、ＣＥＰ２５６３、４−（３−クロロフェニルアミノ）−５，６−ジメチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンメタンスルホナート、４−（３−ブロモ−４−ヒドロキシフェニル）アミノ−６，７−ジメトキシキナゾリン、４−（４’−ヒドロキシフェニル）アミノ−６，７−ジメトキシキナゾリン、ＳＵ６６６８、ＳＴＩ５７１Ａ、Ｎ−４−クロロフェニル−４−（４−ピリジルメチル）−１−フタラジンアミンおよびＥＭＤ１２１９７４。
【０２３２】
伝統的な抗癌化合物以外のもの、例えば、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビター、ＰＰＡＲ−γ（すなわち、ＰＰＡＲ−ガンマ）アゴニストおよびＰＰＡＲ−δ（すなわち、ＰＰＡＲ−デルタ）アゴニストとの組合せも本組成物および方法に含まれる。
【０２３３】
本発明の分子と組合せて使用されうるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの例には、以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：ロバスタチン（ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ）（ＭＥＶＡＣＯＲ（登録商標）；米国特許第４，２３１，９３８号、第４，２９４，９２６号および第４，３１９，０３９号を参照されたい）、シンバスタチン（ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ）（ＺＯＣＯＲ（登録商標）；米国特許第４，４４４，７８４号、第４，８２０，８５０号および第４，９１６，２３９号）、プラバスタチン（ｐｒａｖａｓｔａｔｉｎ）（ＰＲＡＶＡＣＨＯＬ（登録商標）；米国特許第４，３４６，２２７号、第４，５３７，８５９号、第４，４１０，６２９号、第５，０３０，４４７号および第５，１８０，５８９号を参照されたい）、フルバスタチン（ｆｌｕｖａｓｔａｔｉｎ）（ＬＥＳＣＯＬ（登録商標）；米国特許第５，３５４，７７２号、第４，９１１，１６５号、第４，９２９，４３７号、第５，１８９，１６４号、第５，１１８，８５３号、第５，２９０，９４６号および第５，３５６，８９６号）およびアトルバスタチン（ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ）（ＬＩＰＩＴＯＲ（登録商標）；米国特許第５，２７３，９９５号、第４，６８１，８９３号、第５，４８９，６９１号および第５，３４２，９５２号を参照されたい）。本発明において使用されうるこれらの及び追加的なＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの構造式はＭ．Ｙａｌｐａｎｉ，“Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  Ｌｏｗｅｒｉｎｇ  Ｄｒｕｇｓ”，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，ｐｐ．８５−８９（１９９６年２月５日）の８７ページならびに米国特許第４，７８２，０８４号および第４，８８５，３１４号に記載されている。
【０２３４】
ＰＰＡＲ−γ（すなわち、ＰＰＡＲ−ガンマ）アゴニストおよびＰＰＡＲ−δ（すなわち、ＰＰＡＲ−デルタ）アゴニストは或る悪性疾患の治療に有用である。ＰＰＡＲ−γおよびＰＰＡＲ−δは核ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γおよびδである。内皮細胞上のＰＰＡＲ−γの発現および血管新生におけるその関与が文献において報告されている（Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３１：９０９−９１３（１９９８）；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：９１１６−９１２１（１９９９）；Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．４１：２３０９−２３１７（２０００）を参照されたい）。より最近になって、ＰＰＡＲ−γアゴニストはインビトロにおけるＶＥＧＦに対する血管新生応答を抑制することが示されており、トログリタゾン（ｔｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）およびマレイン酸ロシグリタゾン（ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）の両方がマウスにおける網膜血管新生の発生を抑制する（Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｍｏｌ．１１９：７０９−７１７（２００１））。本発明の化合物と組合せて使用されうるＰＰＡＲ−γアゴニストおよびＰＰＡＲ−γ／αアゴニストの例には、以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：チアゾリジンジオン（例えば、ＤＲＦ２７２５、ＣＳ−０１１、トログリタゾン（ｔｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、ロシグリタゾン（ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）およびピオグリタゾン（ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ））、フェノフィブレート（ｆｅｎｏｆｉｂｒａｔｅ）、ジェムフィブロジル（ｇｅｍｆｉｂｒｏｚｉｌ）、クロフィブレート（ｃｌｏｆｉｂｒａｔｅ）、ＧＷ２５７０、ＳＢ２１９９９４、ＡＲ−Ｈ０３９２４２、ＪＴＴ−５０１、ＭＣＣ−５５５、ＧＷ２３３１、ＧＷ４０９５４４、ＮＮ２３４４、ＫＲＰ２９７、ＮＰ０１１０、ＤＲＦ４１５８、ＮＮ６２２、ＧＩ２６２５７０、ＰＮＵ１８２７１６、ＤＲＦ５５２９２６、２−［（５，７−ジプロピル−３−トリフルオロメチル−１，２−ベンゾイソオキサゾール−６−イル）オキシ］−２−メチルプロピオン酸（ＵＳＳＮ  ０９／７８２，８５６に開示されている）および２（Ｒ）−７−（３−（２−クロロ−４−（４−フルオロフェノキシ）フェノキシ）プロポキシ）−２−エチルクロマン−２−カルボン酸（ＷＯ２００２／０２６７２９に開示されている）。
【０２３５】
本発明のもう１つの実施形態は、癌の治療のための遺伝子治療と組合されたここに開示されている分子の使用である。癌の治療のための遺伝的方法の概説については、Ｈａｌｌら（Ａｍ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ  ６１：７８５−７８９（１９９７））およびＫｕｆｅら（Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，５ｔｈ  Ｅｄ，ｐｐ  ８７６−８８９，ＢＣ  Ｄｅｃｋｅｒ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，２０００）を参照されたい。遺伝子治療は、いずれかの腫瘍抑制遺伝子を運搬するために用いられうる。そのような遺伝子の例には、組換えウイルス媒介性遺伝子導入により運搬されうるｐ５３（例えば、米国特許第６，０６９，１３４号を参照されたい）、ｕＰＡ／ｕＰＡＲアンタゴニスト（“Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ａ  ｕＰＡ／ｕＰＡＲ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｔｕｍｏｒ  Ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｍｉｃｅ”Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｕｇｕｓｔ５（８）：１１０５−１３（１９９８））およびインターフェロンガンマ（Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４：２１７−２２２（２０００））が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２３６】
また、本発明の分子は、固有の多剤耐性（ＭＤＲ）、特に、輸送体タンパク質の高レベルの発現に関連したＭＤＲのインヒビターと組合せて投与されうる。そのようなＭＤＲインヒビターには、ｐ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）のインヒビター、例えばＬＹ３３５９７９、ＸＲ９５７６、ＯＣ１４４−０９３、Ｒ１０１９２２、ＶＸ８５３およびＰＳＣ８３３（バルスポダル（ｖａｌｓｐｏｄａｒ））が含まれる。
【０２３７】
本発明の分子は、本発明の分子の単独での使用または放射線療法との併用から生じうる、急性、遅延性、後期および予期性嘔吐を含む悪心または嘔吐を治療するための制吐物質と共に使用されうる。嘔吐の予防または治療のために、本発明の分子は、他の制吐物質、特に以下のものと共に使用されうる：ニューロキニン−１受容体アンタゴニスト、５ＨＴ３受容体アンタゴニスト、例えばオンダンセトロン（ｏｎｄａｎｓｅｔｒｏｎ）、グラニセトロン（ｇｒａｎｉｓｅｔｒｏｎ）、トロピセトロン（ｔｒｏｐｉｓｅｔｒｏｎ）およびザチセトロン（ｚａｔｉｓｅｔｒｏｎ）、ＧＡＢＡＢ受容体アゴニスト、例えばバクロフェン（ｂａｃｌｏｆｅｎ）、コルチコステロイド、例えばデカドロン（Ｄｅｃａｄｒｏｎ）（デキサメタゾン）、ケナログ（Ｋｅｎａｌｏｇ）、アリストコルト（Ａｒｉｓｔｏｃｏｒｔ）、ナサリド（Ｎａｓａｌｉｄｅ）、プレフェリド（Ｐｒｅｆｅｒｉｄ）、ベネコルテン（Ｂｅｎｅｃｏｒｔｅｎ）など、例えば米国特許第２，７８９，１１８号、第２，９９０，４０１号、第３，０４８，５８１号、第３，１２６，３７５号、第３，９２９，７６８号、第３，９９６，３５９号、第３，９２８，３２６号および第３，７４９，７１２号に開示されているもの、抗ドーパミン物質、例えばフェノチアジン（ｐｈｅｎｏｔｈｉａｚｉｎｅ）（例えば、プロクロペラジン（ｐｒｏｃｈｌｏｒｐｅｒａｚｉｎｅ）、フルフェナジン（ｆｌｕｐｈｅｎａｚｉｎｅ）、チオリダジン（ｔｈｉｏｒｉｄａｚｉｎｅ）およびメソリダジン（ｍｅｓｏｒｉｄａｚｉｎｅ））、メトクロプラミド（ｍｅｔｏｃｌｏｐｒａｍｉｄｅ）またはドロナビノール（ｄｒｏｎａｂｉｎｏｌ）。１つの実施形態においては、ニューロキニン−１受容体アンタゴニスト、５ＨＴ３受容体アンタゴニストおよびコルチコステロイドから選択される制吐物質が、本化合物の投与に際して生じうる嘔吐の治療または予防のための佐剤として投与される。
【０２３８】
本発明の分子と共に使用されるニューロキニン−１受容体アンタゴニストは、例えば、以下のものに十分に記載されている：米国特許第５，１６２，３３９号、第５，２３２，９２９号、第５，２４２，９３０号、第５，３７３，００３号、第５，３８７，５９５号、第５，４５９，２７０号、第５，４９４，９２６号、第５，４９６，８３３号、第５，６３７，６９９号、第５，７１９，１４７号；欧州特許公開番号ＥＰ  ０  ３６０  ３９０、０  ３９４  ９８９、０  ４２８  ４３４、０  ４２９  ３６６、０  ４３０  ７７１、０  ４３６  ３３４、０  ４４３  １３２、０  ４８２  ５３９、０  ４９８  ０６９、０  ４９９  ３１３、０  ５１２  ９０１、０  ５１２  ９０２、０  ５１４  ２７３、０  ５１４  ２７４、０  ５１４  ２７５、０  ５１４  ２７６、０  ５１５  ６８１、０  ５１７  ５８９、０  ５２０  ５５５、０  ５２２  ８０８、０  ５２８  ４９５、０  ５３２  ４５６、０  ５３３  ２８０、０  ５３６  ８１７、０  ５４５  ４７８、０  ５５８  １５６、０  ５７７  ３９４、０  ５８５  ９１３，０  ５９０  １５２、０  ５９９  ５３８、０  ６１０  ７９３、０  ６３４  ４０２、０  ６８６  ６２９、０  ６９３  ４８９、０  ６９４  ５３５、０  ６９９  ６５５、０  ６９９  ６７４、０  ７０７  ００６、０  ７０８  １０１、０  ７０９  ３７５、０  ７０９  ３７６、０  ７１４  ８９１、０  ７２３  ９５９、０  ７３３  ６３２および０  ７７６  ８９３；ＰＣＴ国際特許公開番号ＷＯ９０／０５５２５、９０／０５７２９、９１／０９８４４、９１／１８８９９、９２／０１６８８、９２／０６０７９、９２／１２１５１、９２／１５５８５、９２／１７４４９、９２／２０６６１、９２／２０６７６、９２／２１６７７、９２／２２５６９、９３／００３３０、９３／００３３１、９３／０１１５９、９３／０１１６５、９３／０１１６９、９３／０１１７０、９３／０６０９９、９３／０９１１６、９３／１００７３、９３／１４０８４、９３／１４１１３、９３／１８０２３、９３／１９０６４、９３／２１１５５、９３／２１１８１、９３／２３３８０、９３／２４４６５、９４／００４４０、９４／０１４０２、９４／０２４６１、９４／０２５９５、９４／０３４２９、９４／０３４４５、９４／０４４９４、９４／０４４９６、９４／０５６２５、９４／０７８４３、９４／０８９９７、９４／１０１６５、９４／１０１６７、９４／１０１６８、９４／１０１７０、９４／１１３６８、９４／１３６３９、９４／１３６６３、９４／１４７６７、９４／１５９０３、９４／１９３２０、９４／１９３２３、９４／２０５００、９４／２６７３５、９４／２６７４０、９４／２９３０９、９５／０２５９５、９５／０４０４０、９５／０４０４２、９５／０６６４５、９５／０７８８６、９５／０７９０８、９５／０８５４９、９５／１１８８０、９５／１４０１７、９５／１５３１１、９５／１６６７９、９５／１７３８２、９５／１８１２４、９５／１８１２９、９５／１９３４４、９５／２０５７５、９５／２１８１９、９５／２２５２５、９５／２３７９８、９５／２６３３８、９５／２８４１８、９５／３０６７４、９５／３０６８７、９５／３３７４４、９６／０５１８１、９６／０５１９３、９���／０５２０３、９６／０６０９４、９６／０７６４９、９６／１０５６２、９６／１６９３９、９６／１８６４３、９６／２０１９７、９６／２１６６１、９６／２９３０４、９６／２９３１７、９６／２９３２６、９６／２９３２８、９６／３１２１４、９６／３２３８５、９６／３７４８９、９７／０１５５３、９７／０１５５４、９７／０３０６６、９７／０８１４４、９７／１４６７１、９７／１７３６２、９７／１８２０６、９７／１９０８４、９７／１９９４２および９７／２１７０２；ならびに英国特許公開番号２  ２６６  ５２９、２  ２６８  ９３１  、２  ２６９  １７０、２  ２６９  ５９０、２  ２７１  ７７４、２  ２９２  １４４、２  ２９３  １６８、２  ２９３  １６９および２  ３０２  ６８９。そのような化合物の製造は前記特許および刊行物（それらを参照により本明細書に組み入れることとする）に十分に記載されている。
【０２３９】
１つの実施形態においては、本発明の分子と共に使用されるニューロキニン−１受容体アンタゴニストは、２−（Ｒ）−（１−（Ｒ）−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）−フェニル）エトキシ）−３−（Ｓ）−（４−フルオロフェニル）−４−（３−（５−オキソ−１Ｈ，４Ｈ−１，２，４−トリアゾロ）メチル）モルホリン、またはその医薬上許容される塩（これは米国特許第５，７１９，１４７号に記載されている）から選択される。
【０２４０】
本発明の分子はまた、貧血の治療において有用な物質と共に投与されうる。そのような貧血治療用物質としては、例えば、連続的赤血球形成受容体アクチベーター（例えば、エポエチンアルファ）が挙げられる。
【０２４１】
本発明の分子はまた、好中球減少症の治療において有用な物質と共に投与されうる。そのような好中球減少症治療用物質としては、例えば、好中球の産生および機能を調節する造血成長因子、例えばヒト顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）が挙げられる。Ｇ−ＣＳＦの例には、フィルグラスチム（ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）およびＰＥＧ−フィルグラスチムが含まれる。
【０２４２】
本発明の分子はまた、免疫増強薬、例えばレバミゾール（ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ）、イソプリノシン（ｉｓｏｐｒｉｎｏｓｉｎｅ）およびザダキシン（Ｚａｄａｘｉｎ）と共に投与されうる。
【０２４３】
本発明の分子はまた、他のｓｉＮＡ療法と組合された癌の治療または予防に有用でありうる。
【０２４４】
本発明の分子はまた、γ−セクレターゼインヒビターおよび／またはＮＯＴＣＨシグナリングのインヒビターと組合せて投与されうる。そのようなインヒビターには、ＷＯ０１／９００８４、ＷＯ０２／３０９１２、ＷＯ０１／７０６７７、ＷＯ０３／０１３５０６、ＷＯ０２／３６５５５、ＷＯ０３／０９３２５２、ＷＯ０３／０９３２６４、ＷＯ０３／０９３２５１、ＷＯ０３／０９３２５３、ＷＯ２００４／０３９８００、ＷＯ２００４／０３９３７０、ＷＯ２００５／０３０７３１、ＷＯ２００５／０１４５５３、ＵＳＳＮ  １０／９５７，２５１、ＷＯ２００４／０８９９１１、ＷＯ０２／０８１４３５、ＷＯ０２／０８１４３３、ＷＯ０３／０１８５４３、ＷＯ２００４／０３１１３７、ＷＯ２００４／０３１１３９、ＷＯ２００４／０３１１３８、ＷＯ２００４／１０１５３８、ＷＯ２００４／１０１５３９およびＷＯ０２／４７６７１に記載されている化合物（ＬＹ−４５０１３９を含む）が含まれる。
【０２４５】
本発明の分子はまた、ＰＡＲＰインヒビターと組合された癌の治療または予防に有用でありうる。
【０２４６】
本発明の分子はまた、以下の治療用物質と組合された癌の治療に有用でありうる：アバレリックス（ａｂａｒｅｌｉｘ）（Ｐｌｅｎａｘｉｓ  ｄｅｐｏｔ（登録商標））；アルデスロイキン（ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）（Ｐｒｏｋｉｎｅ（登録商標））；アルデスロイキン（Ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））；アレムツズマブ（Ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂｂ）（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標））；アリトレチノイン（ａｌｉｔｒｅｔｉｎｏｉｎ）（Ｐａｎｒｅｔｉｎ（登録商標））；アロプリノール（ａｌｌｏｐｕｒｉｎｏｌ）（Ｚｙｌｏｐｒｉｍ（登録商標））；アルトレタミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）（Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））；アミホスチン（ａｍｉｆｏｓｔｉｎｅ）（Ｅｔｈｙｏｌ（登録商標））；アナストロゾール（ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））；三酸化ヒ素（Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標））；アスパラギナーゼ（ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ）（Ｅｌｓｐａｒ（登録商標））；アザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）（Ｖｉｄａｚａ（登録商標））；塩酸ベンダムスチン（ｂｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅ）（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））；ベバクジマブ（ｂｅｖａｃｕｚｉｍａｂ）（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））；ベキサロテン（ｂｅｘａｒｏｔｅｎｅ）カプセル（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標））；ベキサロテン（ｂｅｘａｒｏｔｅｎｅ）ゲル（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標））；ブレオマイシン（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ）（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））；ボルテゾミブ（ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ）（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））；ブレフェルジン（ｂｒｅｆｅｌｄｉｎ）Ａ；静脈内ブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標））；経口ブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）（Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））；カルステロン（ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）（Ｍｅｔｈｏｓａｒｂ（登録商標））；カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））；カルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））；カルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）（ＢＣＮＵ（登録商標），ＢｉＣＮＵ（登録商標））；カルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）（Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標））；ポリフェプロサン（Ｐｏｌｉｆｅｐｒｏｓａｎ）２０インプラントと併用されるカルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）（Ｇｌｉａｄｅｌ  Ｗａｆｅｒ（登録商標））；セレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）（Ｃｅｌｅｂｒｅｘ（登録商標））；セツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））；クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））；シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））；クラドリビン（ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ）（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標）、２−ＣｄＡ（登録商標））；クロファラビン（ｃｌｏｆａｒａｂｉｎｅ）（Ｃｌｏｌａｒ（登録商標））；シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標））；シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）（Ｃｙｔｏｘａｎ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（登録商標））；シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）（Ｃｙｔｏｘａｎ  Ｔａｂｌｅｔ（登録商標））；シタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標））；シタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）リポソーム（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））；ダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））；ダクチノマイシン（ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、アクチノマイシン（ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）Ｄ（Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標））；ダルテパリン（ｄａｌｔｅｐａｒｉｎ）ナトリウム注射用（Ｆｒａｇｍｉｎ（登録商標））；ダルベポエチンアルファ（Ｄａｒｂｅｐｏｅｔｉｎ  ａｌｆａ）（Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標））；ダサチニブ（ｄａｓａｔｉｎｉｂ）（Ｓｐｒｙｃｅｌ（登録商標））；ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）リポソーム（ＤａｎｕｏＸｏｍｅ（登録商標））；ダウノルビシン，ダウノマイシン（ｄａｕｎｏｍｙｃｉｎ）（Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ（登録商標））；ダウノルビシン，ダウノマイシン（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））；デガレリックス（ｄｅｇａｒｅｌｉｘ）（Ｆｉｒｍａｇｏｎ（登録商標））；デニロイキン・ジフチトックス（Ｄｅｎｉｌｅｕｋｉｎ  ｄｉｆｔｉｔｏｘ）（Ｏｎｔａｋ（登録商標））；デクスラゾキサン（ｄｅｘｒａｚｏｘａｎｅ）（Ｚｉｎｅｃａｒｄ（登録商標））；塩酸デクスラゾキサン（Ｔｏｔｅｃｔ（登録商標））；ジデムニン（ｄｉｄｅｍｎｉｎ）Ｂ；１７−ＤＭＡＧ；ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））；ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ  ＰＦＳ（登録商標））；ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標），Ｒｕｂｅｘ（登録商標））；ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ  ＰＦＳ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（登録商標））；ドキソルビシンリポソーム（Ｄｏｘｉｌ（登録商標））；プロピオン酸ドロモスタノロン（ｄｒｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｅ）（Ｄｒｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｅ（登録商標））；プロピオン酸ドロモスタノロン（Ｍａｓｔｅｒｏｎｅ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（登録商標））；エクリズマブ注射用（ｅｃｕｌｉｚｕｍａｂ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標））；エリオットＢ（Ｅｌｌｉｏｔｔ’ｓ  Ｂ）溶液（Ｅｌｌｉｏｔｔ’ｓ  Ｂ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（登録商標））；エルトロンボパッグ（ｅｌｔｒｏｍｂｏｐａｇ）（Ｐｒｏｍａｃｔａ（登録商標））；エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））；エポエチン（Ｅｐｏｅｔｉｎ）アルファ（ｅｐｏｇｅｎ（登録商標））；エルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））；エストラムスチン（ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ）（Ｅｍｃｙｔ（登録商標））；エチニルエストラジオール；リン酸エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）（Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ（登録商標））；エトポシド，ＶＰ−１６（Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））；エベロリムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）錠剤（Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標））；エキセメスタン（ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ）（Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標））；フェルモキシトール（ｆｅｒｕｍｏｘｙｔｏｌ）（Ｆ��ｒａｈｅｍｅ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（登録商標））；フィルグラスチム（Ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）（Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標））；フロクスウリジン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）（動脈内）（ＦＵＤＲ（登録商標））；フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））；フルオロウラシル（ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ），５−ＦＵ（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標））；フルベストラント（ｆｕｌｖｅｓｔｒａｎｔ）（Ｆａｓｌｏｄｅｘ（登録商標））；ゲフィニチブ（ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）（Ｉｒｅｓｓａ（登録商標））；ゲルダナマイシン（ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ）；ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）（Ｇｅｍｚａｒ（登録商標））；ゲムツズマブ・オゾガマイシン（ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ  ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）（Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標））；酢酸ゴセレリン（ｇｏｓｅｒｅｌｉｎ）（Ｚｏｌａｄｅｘ  Ｉｍｐｌａｎｔ（登録商標））；（Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標））；酢酸ヒストレリン（ｈｉｓｔｒｅｌｉｎ）（Ｈｉｓｔｒｅｌｉｎ  ｉｍｐｌａｎｔ（登録商標））；ヒドロキシ尿素（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））；イブリツモマブ・チウキセタン（Ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ  Ｔｉｕｘｅｔａｎ）（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））；イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標））；イホスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）（ＩＦＥＸ（登録商標））；メシル酸イマチニブ（ｉｍａｔｉｎｉｂ）（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））；インターフェロンアルファ２ａ（Ｒｏｆｅｒｏｎ  Ａ（登録商標））；インターフェロンアルファ２ｂ（Ｉｎｔｒｏｎ  Ａ（登録商標））；イオベングアン（ｉｏｂｅｎｇｕａｎｅ）Ｉ  １２３注射用（ＡｄｒｅＶｉｅｗ（登録商標））；イリノテカン（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））；イキサベピロン（ｉｘａｂｅｐｉｌｏｎｅ）（Ｉｘｅｍｐｒａ（登録商標））；イアパチニブ（Ｉａｐａｔｉｎｉｂ）錠剤（Ｔｙｋｅｒｂ（登録商標））；レナリドミド（ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ）（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標））；レトロゾール（ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）（Ｆｅｍａｒａ（登録商標））；ロイコボリン（ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ）（Ｗｅｌｌｃｏｖｏｒｉｎ（登録商標），Ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ（登録商標））；酢酸ロイプロイド（Ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ）（Ｅｌｉｇａｒｄ（登録商標））；レバミソール（ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ）（Ｅｒｇａｍｉｓｏｌ（登録商標））；ロムスチン（ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ），ＣＣＮＵ（ＣｅｅＢＵ（登録商標））；メクロレタミン（ｍｅｃｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ），ナイトロジェンマスタード（Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））；酢酸メゲストロール（ｍｅｇｅｓｔｒｏｌ）（Ｍｅｇａｃｅ（登録商標））；メルファラン（ｍｅｌｐｈａｌａｎ），Ｌ−ＰＡＭ（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））；メルカプトプリン，６−ＭＰ（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標））；メスナ（ｍｅｓｎａ）（Ｍｅｓｎｅｘ（登録商標））；メスナ（Ｍｅｓｎｅｘ  ｔａｂｓ（登録商標））；メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）（Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ（登録商標））；メトクスサレン（ｍｅｔｈｏｘｓａｌｅｎ）（Ｕｖａｄｅｘ（登録商標））��８−メトキシソラレン；マイトマイシン（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ）Ｃ（Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ（登録商標））；ミトタン（ｍｉｔｏｔａｎｅ）（Ｌｙｓｏｄｒｅｎ（登録商標））；ミトザントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））；ミトラマイシン（ｍｉｔｒａｍｙｃｉｎ）；フェンプロピオン酸ナンドロロン（ｎａｎｄｒｏｌｏｎｅ）（Ｄｕｒａｂｏｌｉｎ−５０（登録商標））；ネララビン（ｎｅｌａｒａｂｉｎｅ）（Ａｒｒａｎｏｎ（登録商標））；ニロチニブ（ｎｉｌｏｔｉｎｉｂ）（Ｔａｓｉｇｎａ（登録商標））；ノフェツモマブ（Ｎｏｆｅｔｕｍｏｍａｂ）（Ｖｅｒｌｕｍａ（登録商標））；オファツムマブ（ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）（Ａｒｚｅｒｒａ（登録商標））；オプレルベキン（Ｏｐｒｅｌｖｅｋｉｎ）（Ｎｅｕｍｅｇａ（登録商標））；オキサリプラチン（ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ）（Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標））；パクリタクセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）（Ｐａｘｅｎｅ（登録商標））；パクリタクセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））；パクリタクセルタンパク質結合粒子（Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標））；パリフェルミン（ｐａｌｉｆｅｒｍｉｎ）（Ｋｅｐｉｖａｎｃｅ（登録商標））；パミドロナート（ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ）（Ａｒｅｄｉａ（登録商標））；パニツムマブ（ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標））；パゾパニブ（ｐａｚｏｐａｎｉｂ）錠剤（Ｖｏｔｒｉｅｎｔｔｍ（登録商標））；ペガデマーゼ（ｐｅｇａｄｅｍａｓｅ）（Ａｄａｇｅｎ（Ｐｅｇａｄｅｍａｓｅ  Ｂｏｖｉｎｅ）（登録商標））；ペガスパルガーゼ（ｐｅｇａｓｐａｒｇａｓｅ）（Ｏｎｃａｓｐａｒ（登録商標））；ペグフィルグラスチム（Ｐｅｇｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）（Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標））；ペメトレキセド（ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）二ナトリウム（Ａｌｉｍｔａ（登録商標））；ペントスタチン（ｐｅｎｔｏｓｔａｔｉｎ）（Ｎｉｐｅｎｔ（登録商標））；ピポブロマン（ｐｉｐｏｂｒｏｍａｎ）（Ｖｅｒｃｙｔｅ（登録商標））；プレリキサホル（ｐｌｅｒｉｘａｆｏｒ）（Ｍｏｚｏｂｉｌ（登録商標））；プリカマイシン（ｐｌｉｃａｍｙｃｉｎ），ミトラマイシン（ｍｉｔｈｒａｍｙｃｉｎ）（Ｍｉｔｈｒａｃｉｎ（登録商標））；ポルフィメル（ｐｏｒｆｉｍｅｒ）ナトリウム（Ｐｈｏｔｏｆｒｉｎ（登録商標））；プララトレキサート（ｐｒａｌ
ａｔｒｅｘａｔｅ）注射用（Ｆｏｌｏｔｙｎ（登録商標））；プロカルバジン（ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ）（Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標））；キナクリン（ｑｕｉｎａｃｒｉｎｅ）（Ａｔａｂｒｉｎｅ（登録商標））；ラパマイシン（ｒａｐａｍｙｃｉｎ）；ラスブリカーゼ（Ｒａｓｂｕｒｉｃａｓｅ）（Ｅｌｉｔｅｋ（登録商標））；塩酸ラロキシフェン（ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）（Ｅｖｉｓｔａ（登録商標））；リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））；ロミデプシン（ｒｏｍｉｄｅｐｓｉｎ）（Ｉｓｔｏｄａｘ（登録商標））；ロミプロスチム（ｒｏｍｉｐｌｏｓｔｉｍ）（Ｎｐｌａｔｅ（登録商標））；サルグラモスチム（ｓａｒｇｒａｍｏｓｔｉｍ）（Ｌｅｕｋｉｎｅ（登録商標））；サルグラモスチム（Ｓａｒｇｒａｍｏｓｔｉｍ）（Ｐｒｏｋｉｎｅ（登録商標））；ソラフェニブ（ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））；ストレプトゾシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ）（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））；マレイン酸スニチニブ（ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ）（Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標））；タルク（Ｓｃｌｅｒｏｓｏｌ（登録商標））；タモキシフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標））；テモゾロミド（ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）（Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標））；テムシロリムス（ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）（Ｔｏｒｉｓｅｌ（登録商標））；テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ），ＶＭ−２６（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））；テストラクトン（ｔｅｓｔｏｌａｃｔｏｎｅ）（Ｔｅｓｌａｃ（登録商標））；チオグアニン，６−ＴＧ（Ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ（登録商標））；チオプリン；チオテパ（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））；トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）（Ｈｙｃａｍｔｉｎ（登録商標））；トレミフェン（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ）（Ｆａｒｅｓｔｏｎ（登録商標））；トシツモマブ（Ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ）（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））；トシツモマブ／Ｉ−１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））；トランス−レチノイン酸；トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））；トレチノイン（ｔｒｅｔｉｎｏｉｎ），ＡＴＲＡ（Ｖｅｓａｎｏｉｄ（登録商標））；トリエチレンメラミン（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｍｅｌａｍｉｎｅ）；ウラシルマスタード（Ｕｒａｃｉｌ  Ｍｕｓｔａｒｄ）（Ｕｒａｃｉｌ  Ｍｕｓｔａｒｄ  Ｃａｐｓｕｌｅｓ（登録商標））；バルルビシン（ｖａｌｒｕｂｉｃｉｎ）（Ｖａｌｓｔａｒ（登録商標））；ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））；ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））；ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））；ボリノスタット（ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ）（Ｚｏｌｉｎｚａ（登録商標））；ウォルトマンニン（ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ）；およびゾレドロナート（ｚｏｌｅｄｒｏｎａｔｅ）（Ｚｏｍｅｔａ（登録商標））。
【０２４７】
前記の組合せは医薬製剤の形態での使用のために簡便に提供されることが可能であり、したがって、前記の組合せと医薬上許容される希釈剤または担体とを含む医薬組成物は本発明のもう１つの態様である。
【０２４８】
そのような組合せの個々の成分は、別々の又は組合された医薬製剤中で、連続的または同時に投与されうる。
【０２４９】
したがって、記載されている分子は、例えば他のＭＡＰＫ１インヒビターのような当技術分野で公知のとおりの、対象または生物における本明細書に記載されている疾患、障害、状態および形質を予防または治療するための１以上の公知の化合物、治療または処置と組合せて使用されうるであろう。
【０２５０】
３．治療用途
ＩＤＨ１関連遺伝子発現およびタンパク質活性に関する研究における現在の一連の知見は、治療用途のためのそれらの発現および／または活性を調節しうる方法の必要性を示している。
【０２５１】
したがって、本発明の１つの態様は、ＩＤＨ１関連発現の作用により又は作用の喪失により引き起こされる状態に罹患したヒト（これに限定されるものではない）を含む対象の治療方法を含み、該方法は、本発明の二本鎖ｓｉＮＡ分子の有効量を該対象に投与することを含む。この態様の１つの実施形態においては、該ｓｉＮＡ分子は、配列番号７、配列番号４４６、配列番号１１、配列番号４５０、配列番号１２、配列番号４５１、配列番号１３、配列番号４５２、配列番号３８、配列番号４７７、配列番号３９、配列番号４７８、配列番号４０、配列番号４７９、配列番号４１、配列番号４８０、配列番号５９、配列番号４９８、配列番号６３もしくは配列番号５０２または式（Ａ）の少なくとも１５ヌクレオチドを含む。もう１つの実施形態においては、「少なくとも１５ヌクレオチド」は１５個の連続的ヌクレオチドである。
【０２５２】
この態様のもう１つの実施形態においては、該状態は癌である又は癌により引き起こされる。したがって、ある実施形態においては、本発明の分子および組成物は、癌細胞および癌の転移の予防またはモジュレーションを含む癌の治療方法において有用である。本発明のこの態様により治療可能な癌には、以下のものが含まれうる：膀胱癌、膀胱移行上皮癌、尿路上皮癌、脳癌、神経膠腫、星状細胞腫、乳癌、乳癌腫、子宮頸癌、結腸直腸癌、直腸癌、結腸直腸癌腫、結腸癌、遺伝非ポリープ症結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、食道扁平上皮癌、眼黒色腫、ブドウ膜黒色腫、眼内黒色腫、原発性眼内リンパ腫、腎細胞癌、明細胞腎細胞癌、乳頭腎細胞癌、白血病、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性脊髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性脊髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、肝癌、ヘパトーマ、肝細胞癌、胆管癌、肺癌、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫/白血病、多発性骨髄腫、卵巣癌、膵癌、膵管腺癌、前立腺癌、前立腺腺癌、横紋筋肉腫、胎児性横紋筋肉腫、皮膚癌、黒色腫、悪性黒色腫、皮膚黒色腫、粘膜黒色腫、小腸癌、胃癌、胃癌腫、精巣癌、精巣精上皮腫、精巣非精上皮腫、甲状腺癌、乳頭状甲状腺癌および乳頭状腺癌。
【０２５３】
本発明のｓｉＮＡ分子はエクスビボ用途における試薬としても使用される。例えば、ｓｉＮＡ試薬は、治療効果を得るために対象内に移植される組織または細胞内に導入される。該細胞および／または組織は、外植片を後に受ける生物または対象に由来することが可能であり、あるいは移植前の別の生物または対象に由来することが可能である。細胞または組織が、インビボで移植された場合に、所望の表現型を得る又は機能を果たしうるように、該ｓｉＮＡ分子は、該細胞または組織における１以上の遺伝子の発現をモジュレーションするために使用されうる。１つの実施形態においては、患者からの或るＩＤＨ１関連標的細胞を外植する。これらの摘出細胞を、該細胞内の特定のヌクレオチド配列を標的化するＩＤＨ１関連ｓｉＮＡと、これらの細胞による該ｓｉＮＡの取り込みに適した条件下で接触させる（例えば、カチオン性脂質、リポソームなどのような運搬試薬を使用する、または細胞内へのｓｉＮＡの運搬を促進するエレクトロポレーションのような技術を用いる）。ついで該細胞を同じ患者または他の患者に再導入する。
【０２５４】
Ｇ．投与
組成物または製剤は種々の方法で投与されうる。ある実施形態においては、該ｓｉＮＡ分子の投与は、単独療法としての単独の、または本明細書に記載されている若しくは当技術分野で公知の追加的な療法と組合された局所投与または全身投与である。
【０２５５】
本発明は、肺運搬のような、肺細胞および組織のような関連組織または細胞への局所投与により、対象または生物を本発明のｓｉＮＡ分子と接触させることに関する。局所投与は、例えば、吸入、噴霧療法、カテーテル法、移植、直接注射、皮膚／経皮適用、パッチ、ステント化、点耳／点眼、または関連組織への門脈投与、または当技術分野で一般に公知であるいずれかの他の局所投与技術、方法もしくは処置を含みうる。
【０２５６】
更に他の実施形態においては、本発明は、対象または生物における癌組織または細胞のような関連組織または細胞への全身投与により（例えば、ｓｉＮＡの静脈内または皮下投与により）、対象または生物を本発明のｓｉＮＡ分子と接触させることに関する。全身投与は、例えば、当技術分野で一般に公知である肺投与（吸入、噴霧療法など）、静脈内投与、皮下投与、筋肉内投与、カテーテル法、鼻咽頭投与、経皮投与または経口／胃腸投与を含みうる。
【０２５７】
１つの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子およびその製剤または組成物は、当技術分野で一般に公知のとおり、肝臓に投与される（Ｗｅｎら，２００４，Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，１０，２４４−９；Ｍｕｒａｏら，２００２，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．，１９，１８０８−１４；Ｌｉｕら，２００３，ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．，１０，１８０−７；Ｈｏｎｇら，２００３，Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，５４，５１−８；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，２００４，Ａｒｃｈ  Ｖｉｒｏｌ．，１４９，１６１１−７；およびＭａｔｓｕｎｏら，２００３，ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．，１０，１５５９−６６）。
【０２５８】
１つの実施形態においては、本発明は、単球およびリンパ球を含む造血細胞へ本発明のｓｉＮＡ分子を運搬するための方法の使用に関する。これらの方法はＨａｒｔｍａｎｎら，１９９８，Ｊ．Ｐｈａｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２８５（２），９２０−９２８；Ｋｒｏｎｅｎｗｅｔｔら，１９９８，Ｂｌｏｏｄ，９１（３），８５２−８６２；ＦｉｌｉｏｎおよびＰｈｉｌｌｉｐｓ，１９９７，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．，１３２９（２），３４５−３５６；ＭａおよびＷｅｉ，１９９６，Ｌｅｕｋ．Ｒｅｓ．，２０（１１／１２），９２５−９３０；ならびにＢｏｎｇａｒｔｚら，１９９４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２２（２２），４６８１−８に詳細に記載されている。
【０２５９】
１つの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子およびその製剤または組成物は、当技術分野で一般に公知のとおり、皮膚または小胞に直接的または局所的（例えば、局部的）に投与される（例えば、Ｂｒａｎｄ，２００１，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，３，２４４−８；Ｒｅｇｎｉｅｒら，１９９８，Ｊ．Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔ，５，２７５−８９；Ｋａｎｉｋｋａｎｎａｎ，２００２，ＢｉｏＤｒｕｇｓ，１６，３３９−４７；Ｗｒａｉｇｈｔら，２００１，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．，９０，８９−１０４；ならびにＰｒｅａｔおよびＤｕｊａｒｄｉｎ，２００１，ＳＴＰ  ＰｈａｒｍａＳｃｉｅｎｃｅｓ，１１，５７−６８を参照されたい）。１つの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子およびその製剤または組成物は、所望により追加的な物質（例えば、イソプロピルミリスタートおよびカルボマー９８０）を含む、アルコール（例えば、エタノールまたはイソプロパノール）、水を含むヒドロアルコール性ゲル製剤を使用して直接的または局所的に投与される。他の実施形態においては、該ｓｉＮＡは、鼻腔に局所投与されるように製剤化される。局所製剤は罹患領域への１日当たり１以上の適用により投与されることが可能であり、皮膚領域を覆う密封包帯が有利に使用されうる。連続的または持続的運搬は接着性貯留系により達成されうる。
【０２６０】
１つの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子は、例えば特定の器官または区画（例えば、眼、眼の背部、心臓、肝臓、腎臓、膀胱、前立腺、腫瘍、ＣＮＳなど）へ、イオントホレシスにより投与される。イオントホレシス運搬の非限定的な例は、例えば、ＷＯ０３／０４３６８９およびＷＯ０３／０３０９８９（それらの全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されている。
【０２６１】
１つの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子およびその製剤または組成物は、本明細書に記載されているとおり及び当技術分野で一般に公知のとおり、肺に投与される。もう１つの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子およびその製剤または組成物は、米国特許公開第２００６／００６２７５８号、第２００６／００１４２８９号および第２００４／００７７５４０号に記載されているとおり、肺組織および細胞に投与される。
【０２６２】
本発明の投与方法の非限定的な例には、経口、頬側、舌下、非経口（すなわち、関節内、静脈内、腹腔内、皮下または筋肉内）、局所直腸投与または他の局所投与が含まれる。１つの実施形態においては、本発明の組成物は通気および吸入により投与されうる。
【０２６３】
幾つかの実施形態においては、該医薬組成物はボーラス注射により静脈内または腹腔内に投与される（例えば、米国特許第５，２８６，６３４号を参照されたい）。脂質核酸粒子は、疾患部位に直接注射により、または疾患部位から遠位の部位に注射により投与されうる（例えば、Ｃｕｌｖｅｒ，ＨＵＭＡＮ  ＧＥＮＥ  ＴＨＥＲＡＰＹ，Ｍａｒｙ  Ａｎｎ  Ｌｉｅｂｅｒｔ，Ｉｎｃ．，Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ．ｐｐ．７０−７１（１９９４）を参照されたい）。
【０２６４】
治療用途の場合、本発明のｓｉＮＡ分子または医薬組成物の医薬上有効な用量が対象に投与される。医薬上有効な用量は、疾患発生を予防、抑制する又は病態を治療する（症状を或る程度、好ましくは、症状の全てを改善する）のに必要な用量である。当業者は、対象のサイズおよび体重、疾患の進行または侵入の程度、対象の年齢、健康状態および性別、投与経路ならびに投与が局所性であるか全身性であるかというような要因を考慮することにより、与えられた対象に投与されるべき本発明のｓｉＮＡの治療的に有効な用量を容易に決定することが可能である。一般に、有効成分０．１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の量が、負荷電重合体の効力に応じて投与される。最適な投与スケジュールは患者の体内の薬物蓄積の測定から算出されうる。本発明のｓｉＮＡ分子は単一用量または複数用量で投与されうる。
【０２６５】
本発明のｓｉＮＡ分子は、月１回、週１回、１日１回（ＱＤ）投与されることが可能であり、あるいは毎月、毎週または毎日の複数の用量（限定的なものではないが、例えば、毎日２回（ＢＩＤ）、毎日３回（ＴＩＤ）、２週間に１回）に分割されることが可能である。したがって、投与は単一または分割用量で達成されうる。当業者は、測定された滞留時間および体液または組織内の薬物濃度に基づいて、投与のための反復率を容易に推定することが可能である。
【０２６６】
また、該投与は連続的（すなわち、毎日）または間欠的でありうる。例えば、本発明の化合物の間欠的投与は１週間当たり１〜６日間の投与でありることが可能であり、あるいはそれは周期的な投与（例えば、連続した２〜８週間の毎日の投与、ついで１週間までの、投与無しの中止期間）を意味することが可能であり、あるいはそれは隔日の投与を意味しうる。
【０２６７】
本発明の組成物は、単独で又は他の適当な成分と組合されて、吸入（例えば、鼻腔内または気管内）により投与されるエアゾール製剤（すなわち、それは「噴霧化」されうる）に製造されうる（Ｂｒｉｇｈａｍら，Ａｍ．Ｊ．Ｓｃｉ．，２９８：２７８（１９８９）を参照されたい）。エアゾール製剤は、許容されうる加圧プロペラント、例えばジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などの中に配置されうる。
【０２６８】
１つの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子およびその製剤は、肺運搬により投与され、例えば、関連肺組織内への核酸分子の急速な局所取り込みをもたらす、吸入装置またはネブライザーにより投与されるエアゾールまたは噴霧乾燥製剤の吸入により投与される。微粒化核酸組成物の呼吸可能な乾燥粒子を含有する固体粒状組成物は、乾燥または凍結乾燥核酸組成物を粉砕し、ついで該微粒化組成物を例えば４００メッシュスクリーンに通過させて大きな凝集物を破壊または分離除去することにより製造されうる。本発明のｓｉＮＡ組成物を含む固体粒状組成物は、所望により、エアゾールの形成を促進するように働く分散剤、および他の治療用化合物を含有しうる。適当な分散剤はラクトースであり、これは、いずれかの適当な比（例えば、１対１の重量比）で、核酸化合物と混合されうる。
【０２６９】
本発明のｓｉＮＡ分子または組成物を含む噴霧組成物は、例えば、適当な液化プロペラントを使用して加圧式定量噴霧式吸入器のような加圧パックから運搬されるエアゾール剤として、あるいは水性の溶液または懸濁液として製剤化されうる。１つの実施形態においては、吸入に適した本発明のエアゾール組成物は懸濁液または溶液であることが可能であり、一般に、本発明のｓｉＮＡ分子と、適当なプロペラント、例えばフルオロカーボンもしくは水素含有クロロフルオロカーボンまたはそれらの混合物、特にヒドロフルオロアルカン、特に１，１，１，２−テトラフルオロエタン、１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロ−ｎ−プロパンまたはその混合物とを含有する。該エアゾール組成物は、所望により、当技術分野でよく知られている追加的な製剤化賦形剤、例えば界面活性剤を含有しうる。非限定的な例には、オレイン酸、レシチンまたはオリゴ乳酸または誘導体、例えばＷＯ９４／２１２２９およびＷＯ９８／３４５９６に記載されているもの、および共存溶媒、例えばエタノールが含まれる。１つの実施形態においては、本発明の医薬エアゾール製剤は、所望により界面活性剤および／または共存溶媒と組合されていてもよい、本発明の化合物とフルオロカーボンもしくは水素含有クロロフルオロカーボンまたはそれらの混合物をプロペラントとして含む。
【０２７０】
本発明のエアゾール製剤は適当な緩衝剤の添加により緩衝化されうる。
【０２７１】
エアゾール製剤は、所望により使用されうる追加的な添加剤、例えば保存剤（該製剤が無菌に製造されていない場合）を含みうる。非限定的な例には、メチルヒドロキシベンゾアート、抗酸化剤、香味剤、揮発性油、緩衝剤および乳化剤ならびに他の製剤界面活性剤が含まれる。１つの実施形態においては、分解を軽減し、より安全な本発明の生体適合性非液体粒子懸濁組成物（例えば、ｓｉＮＡおよび／またはそのＬＮＰ製剤）を得るために、フルオロカーボンまたはペルフルオロカーボン担体が使用される。もう１つの実施形態においては、ネブライザーを含む装置は、静菌性であることにより適合装置における微生物増殖の可能性を低減するフルオロ化合物を含む本発明の組成物（例えば、ｓｉＮＡおよび／またはそのＬＮＰ製剤）を運搬する。
【０２７２】
吸入器またはインサフレーターにおいて使用される、例えばゼラチンの本発明の組成物を含むカプセルおよびカートリッジは、本発明の化合物と適当な散剤基剤、例えばラクトースまたはデンプンとの吸入用粉末混合物を含有するように製剤化されうる。１つの実施形態においては、各カプセルまたはカートリッジは本発明のｓｉＮＡ分子と１以上の賦形剤とを含有する。もう１つの実施形態においては、本発明の化合物は、例えばラクトースのような賦形剤を伴わないで提供されうる。
【０２７３】
本発明のエアゾール組成物は、呼吸可能なサイズの粒子、例えば、吸入に際して鼻、口および喉頭を通過するのに並びに気管支および肺胞を通過するのに十分に小さいサイズの粒子を含む製剤として、呼吸系内に投与されうる。一般に、呼吸可能な粒子は約０．５〜１０ミクロンの範囲のサイズである。１つの実施形態においては、該粒子範囲は１〜５ミクロンでありうる。もう１つの実施形態においては、該粒子範囲は２〜３ミクロンでありうる。該エアゾール剤中に含まれる呼吸可能でないサイズの粒子は喉において析出し嚥下される傾向にあり、したがって、該エアゾール剤中の呼吸可能でない粒子の量は最小化される。鼻腔内投与の場合、鼻腔内の保持を保証するためには、１０〜５００μｍの範囲の粒子サイズが好ましい。
【０２７４】
幾つかの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ組成物は、加圧エアゾール製剤、加圧ポンプもしくは噴霧化により鼻に投与される水性製剤により、例えば鼻炎の治療のために、鼻に局所的に投与される。適当な製剤は、この目的のための希釈剤または担体として水を含有する。ある実施形態においては、肺または鼻への本発明の組成物の投与のための水性製剤には、通常の賦形剤、例えば緩衝剤、等張性改変剤などが配合されうる。
【０２７５】
本発明のｓｉＮＡ分子は、前記のとおり、粒子および／またはエアゾール剤として製剤化され、運搬され、当業者に公知の種々のエアゾール化装置から投薬されうる。
【０２７６】
本発明のｓｉＮＡ分子または製剤を含む液体または非液体粒子のエアゾール剤は、いずれかの適当な手段により、例えばネブライザー（例えば、米国特許第４，５０１，７２９号を参照されたい）、例えば超音波またはエアジェットネブライザーを含む装置を使用して製造されうる。
【０２７７】
本発明のｓｉＮＡ分子または製剤と界面活性剤とを含む固体粒子エアゾール剤は、いずれかの固体粒子エアゾール製造装置を使用して製造されうる。本発明のｓｉＮＡ分子と共に使用される１つのタイプの固体粒子エアゾール製造装置はインサフレーターである。第２のタイプの例示的エアゾール製造装置は加圧式定量噴霧式吸入器（「ＭＤＩ」）を含む。本明細書に教示されているｓｉＮＡ分子または製剤を含有するＭＤＩは当技術分野の方法により製造されうる（例えば、前記ＢｙｒｏｎおよびＷＯ９６／３２０９９を参照されたい）。
【０２７８】
該ｓｉＮＡ分子は、ＷＯ０５／０４４３５４に記載され例示されているもののような流体ディスペンサーからの運搬のための流体製剤としても製剤化されうる。
【０２７９】
本発明の或る実施形態においては、ネブライザー装置は、意識のある自発呼吸患者に対する、または全年齢の調節呼吸患者に対する適用において使用される。該ネブライザー装置は肺への標的化局所的および全身的薬物運搬に使用されうる。１つの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子または製剤を局所的に肺または肺組織に運搬するために、ネブライザーを含む装置が使用される。もう１つの実施形態においては、本発明のｓｉＮＡ分子または製剤を全身的に運搬するために、ネブライザーを含む装置が使用される。
【０２８０】
Ｈ．本発明のｓｉＮＡ分子の他の適用／用途
本発明のｓｉＮＡ分子は診断用途、研究用途および／または医薬の製造にも使用されうる。
【０２８１】
１つの態様においては、本発明は、対象における疾患、形質または状態の診断に適した条件下で本発明の組成物を対象に投与することを含む、対象における疾患、形質または状態を診断するための方法に関する。
【０２８２】
もう１つの実施形態においては、本発明は、医薬の製造における使用のための、本発明の二本鎖核酸の使用を含む。１つの実施形態においては、該医薬は、ＩＤＨ１関連遺伝子またはタンパク質の作用または作用の喪失により引き起こされる状態の治療における使用のためのものである。１つの実施形態においては、該医薬は、中枢神経系の癌およびＡＭＬ（これらに限定されるものではない）を含む細胞増殖関連障害の治療用の使用のためのものである。
【図面の簡単な説明】
【０２８３】
【図１】図１は、ＲＮＡｉに関与する標的ＲＮＡ分解の非限定的な提示メカニズムの表示を示す。外来性一本鎖ＲＮＡ、例えばウイルス、トランスポゾンまたは他の外因性ＲＮＡからＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲＰ）により産生された二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）はＤＩＣＥＲ酵素を活性化し、そしてこれはｓｉＮＡ二本鎖を産生する。あるいは、合成ｓｉＮＡまたは発現されたｓｉＮＡが適当な手段により直接的に細胞内に導入されうる。活性ｓｉＮＡ複合体は標的ＲＮＡを認識して、ＲＩＳＣエンドヌクレアーゼ複合体による標的ＲＮＡの分解またはＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲＰ）による追加的なＲＮＡの合成を引き起こし、これはＤＩＣＥＲを活性化し、追加的なｓｉＮＡ分子を産生し、それによりＲＮＡｉ応答を増幅しうる。
【図２】図２は、代表的ｓｉＮＡ二本鎖の一般化構造を用いて、本発明の化学修飾ｓｉＮＡ構築物の非限定的な例を示す。この図に示されている具体的な修飾は、単独で、または本発明のいずれかのｓｉＮＡ分子に関してここに記載されている他の修飾および特徴に加えて該図の他の修飾と組合せて用いられうる。この図において、Ｎはいずれかのヌクレオチド、または所望により、本明細書に記載されている非ヌクレオチドを表す。Ｂ−ＮＸ３−（Ｎ）Ｘ２−Ｂ−３’を有する上側の鎖はｓｉＮＡのセンス（またはパッセンジャー）鎖であり、Ｂ（Ｎ）Ｘ１−ＮＸ４−［Ｎ３］−［Ｎ２］−［Ｎ１］−５’を有する下側の鎖はｓｉＮＡのアンチセンス（またはガイド）鎖である。センス鎖の内部のヌクレオチド（または場合によっては非ヌクレオチド）はＮＸ３と称され、アンチセンス鎖の内部のヌクレオチド（または場合によっては非ヌクレオチド）はＮＸ４と称される。該内部のヌクレオチド（または場合によっては非ヌクレオチド）は一般に２つの鎖の間で塩基対形成しているが、幾つかの実施形態においては、塩基対形成を欠く（例えば、ミスマッチまたはギャップを有する）こともある。突出領域のヌクレオチド（または場合によっては非ヌクレオチド）は括弧（Ｎ）により示されている。アンチセンス鎖の５’末端部分のヌクレオチドは［Ｎ］（［Ｎ１］、［Ｎ２］、［Ｎ３］）として示されている。末端ギャップは同じ鎖の５’および／または３’末端に存在してもよく、更に、アンチセンス鎖の３’末端に存在してもよい。一般に、各鎖は、独立して、約１５〜約３０ヌクレオチド長の範囲でありうるが、いずれかの突出ヌクレオチドの存在によって変動しうる。ある実施形態においては、Ｘ１およびＸ２は、独立して、０〜４の整数であり、Ｘ３は１５〜３０の整数であり、Ｘ４は１２〜２７の整数である。ｓｉＮＡ構築物のセンスおよびアンチセンス鎖のヌクレオチドに関して、種々の修飾が示される。［Ｎ３］、［Ｎ２］および［Ｎ１］ヌクレオチドは２’−デオキシ、２’−デオキシ−２’−フルオロまたは２’−メトキシ修飾で化学修飾され、リボースヌクレオチドを含みうる。（Ｎ）突出ヌクレオチドの位置は、本明細書に記載されているとおりに化学修飾されることが可能であり（例えば、２’−Ｏ−メチル、２’−デオキシ−２’−フルオロ、２’−デオキシ、ＬＮＡ、汎用塩基など）、対応標的核酸配列から誘導されること又は誘導されないことが可能である。この図に示されている構築物は、本明細書に記載されているホスホロチオアート結合をも含みうる。例えば、ホスホロチオアート結合はいずれかのＮおよび／または（Ｎ）位置の間に存在しうる。そのようなホスホロチオアートの組込みは、プリン「Ｒ」およびピリミジン「Ｙ」位置の間で、または一般にピリミジン結合の安定化のために用いられうる。更に、この図には示されていないが、この図に示されている構築物は、所望により、センス鎖の５’末端から９番目の位置に、またはガイド鎖の５’末端から１１個のヌクレオチド位置を数えることによりガイド鎖の５’末端に基づく１１番目の位置にリボヌクレオチドを含みうる。同様に、該アンチセンス鎖は、５’末端から１４番目の位置にリボヌクレオチドまたは２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドを含むことが可能であり、あるいは、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド（例えば、２’−Ｏ−メチルプリン）がこの位置に存在しないように、選択または設計されうる。更に、この図に示されていないが、アンチセンス鎖の５’末端位置は、本明細書に記載されているとおり、末端ホスファート基を含みうる。
【図３】図３は、図２に示されている代表的ｓｉＮＡ二本鎖に適用される修飾の或る組合せの非限定的な例を示す。代表的構造の下に示されている表は、（Ｎ）Ｘ１、（Ｎ）Ｘ２、ＮＸ３、ＮＸ４および［Ｎ３］−［Ｎ２］−［Ｎ１］ヌクレオチド（および場合によっては非ヌクレオチド）の位置の特定の組合せを示す。例えば、５個以上（例えば、５、６、７、８、９または１０個以上）のＮＸ３および５個以上（５、６、７、８、９または１０個以上）のＮＸ４ピリミジン「Ｙ」およびプリン「Ｒ」ヌクレオチドの組合せが特定されており、それらのそれぞれは、独立して、随意的ホスホロチオアート置換に加えて、該図に示されている特定の（Ｎ）Ｘ１および／または（Ｎ）Ｘ２の置換を有しうる。５’末端アンチセンス鎖［Ｎ３］−［Ｎ２］−［Ｎ１］ヌクレオチドは２’−デオキシ、２’−デオキシ−２’−フルオロまたは２’−メトキシ修飾で修飾され、あるいは、示されているとおりのリボヌクレオチドである。
【図４Ａ】図４Ａ〜Ｃは本発明の種々のｓｉＮＡ構築物の非限定的な例を示す。図２および３に示されている代表的構造の基準は、図４Ａ〜Ｃに示されている構造のいずれにも適用されうる。  図４Ａに示されている例示物（構築物１、２および３）は１９個の代表的塩基対を有するが、本発明の種々の実施形態は、本明細書に記載されている任意の数の塩基対を含む。直線で挟まれた領域は、例えば、約１、２、３または４ヌクレオチド長、好ましくは約２ヌクレオチドを含むヌクレオチド突出を表す。構築物１および２は、独立して、ＲＮＡｉ活性のために使用されうる。構築物２はポリヌクレオチドまたは非ヌクレオチドリンカー（これは、所望により、生分解性リンカーとして設計されうる）を含みうる。１つの実施形態においては、構築物２に示されているループ構造は、インビボおよび／またはインビトロで構築物１の形成をもたらす生分解性リンカーを含みうる。もう１つの実施形態においては、構築物３は、同じ原理で構築物２を得るために使用されることが可能であり、この場合、インビボおよび／またはインビトロで活性ｓｉＮＡ構築物２を得るためにリンカーが使用され、所望により、インビボおよび／またはインビトロで活性ｓｉＮＡ構築物１を得るために別の生分解性リンカーが使用されうる。そのようなものとして、インビボまたはインビトロおよび／またはインビトロでの使用のためのｓｉＮＡ構築物の設計に基づいて、ｓｉＮＡ構築物の安定性および／または活性がモジュレーションされうる。
【図４Ｂ】図４Ａ〜Ｃは本発明の種々のｓｉＮＡ構築物の非限定的な例を示す。図２および３に示されている代表的構造の基準は、図４Ａ〜Ｃに示されている構造のいずれにも適用されうる。  図４Ｂに示されている例は、部分的相補性により生じる突出、バルジ、ループおよびステムループを含みうる例えばマイクロＲＮＡまたはｓｉＲＮＡのような本発明の二本鎖核酸分子の種々の変異体を表す。バルジ、ループおよびステムループは、本発明の二本鎖核酸分子の一方または両方の鎖における約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれ以上のヌクレオチドのミスマッチまたはバルジのようないずれかの度合の部分的相補性により生じうる。
【図４Ｃ】図４Ａ〜Ｃは本発明の種々のｓｉＮＡ構築物の非限定的な例を示す。図２および３に示されている代表的構造の基準は、図４Ａ〜Ｃに示されている構造のいずれにも適用されうる。  図４Ｃにおける例は、ジヌクレオチド３’突出を有する２つの２１ヌクレオチド配列の１９塩基対の二重らせんを含む本発明のモデル二本鎖核酸分子を表す。最上部の鎖（１）はセンス鎖（パッセンジャー鎖）を表し、中央の鎖（２）はアンチセンス（ガイド鎖）を表し、下側の鎖（３）は標的ポリヌクレオチド配列を表す。ジヌクレオチド突出（ＮＮ）は、標的ポリヌクレオチドに由来する配列を含みうる。例えば、ガイド鎖内の３’−（ＮＮ）配列は標的ポリヌクレオチドの５’−［ＮＮ］配列に相補的でありうる。また、パッセンジャー鎖の５’−（ＮＮ）配列は、標的ポリヌクレオチド配列の５’−［ＮＮ］配列と同じ配列を含みうる。他の実施形態においては、例えば、ガイド鎖内の３’−（ＮＮ）配列が標的ポリヌクレオチドの５’−［ＮＮ］配列に相補的でなく、パッセンジャー鎖の５’−（ＮＮ）配列が、標的ポリヌクレオチド配列の５’−［ＮＮ］配列と異なる配列を含みうる場合、突出（ＮＮ）は標的ポリヌクレオチド配列に由来しない。追加的な実施形態においては、いずれかの（ＮＮ）ヌクレオチドが、例えば２’−Ｏ−メチル、２’−デオキシ−２−フルオロおよび／または本明細書における他の修飾として化学修飾されている。更に、該パッセンジャー鎖は該パッセンジャー鎖のリボヌクレオチド位置Ｎ（斜字）を含みうる。示されている代表的な１９塩基対の２１マー二重らせんの場合、位置Ｎ（斜字）はパッセンジャー鎖の５’末端から９ヌクレオチドでありうる。しかし、異なる長さの二重らせんにおいては、位置Ｎ（斜字）は、ガイド鎖の５’末端から１１のヌクレオチド位置を数え、パッセンジャー鎖における対応塩基対形成ヌクレオチドを選ぶことにより、ガイド鎖の５’末端に基づいて決定される。Ａｇｏ２による切断は、矢印により示されているとおり、１０位と１１位との間で生じる。追加的実施形態においては、ガイド鎖の５’末端から１０および１１のヌクレオチド位置を数え、パッセンジャー鎖における対応塩基対形成ヌクレオチドを選ぶことにより、ガイド鎖の５’末端に基づいて１０位および１１位の２つのリボヌクレオチドが存在する。アンチセンス鎖ヌクレオチドＮはリボヌクレオチドまたは修飾ヌクレオチドであることも可能であり、ガイド鎖の５’末端から１４位に位置する。該修飾は例えば２’−デオキシ−２’−フルオロ修飾でありうるが、好ましくは、２’−Ｏ−アルキル修飾ではない。該アンチセンス鎖のＮ３、Ｎ２およびＮ１位は修飾ヌクレオチドを含む。
【図５】図５は、例えば、（１）［３−３’］−逆方向デオキシリボース、（２）デオキシリボヌクレオチド、（３）［５’−３’］−３’−デオキシリボヌクレオチド、（４）［５’−３’］−リボヌクレオチド、（５）［５’−３’］−３’−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、（６）３’−グリセリル、（７）［３’−５’］−３’−デオキシリボヌクレオチド、（８）［３’−３’］−デオキシリボヌクレオチド、（９）［５’−２’］−デオキシリボヌクレオチド、および（１０）［５’−３’］−ジデオキシリボヌクレオチド（Ｘ＝Ｏの場合）を含む、本発明のｓｉＮＡ配列の５’および／または３’末端を安定化するために用いられうる種々の安定化化学法（１〜１０）の非限定的な例を示す。この図に示されている修飾および未修飾バックボーン化学法に加えて、これらの化学法は、本明細書に記載されている種々の糖および塩基ヌクレオチド修飾と組合されうる。
【図６】図６は、直鎖状および二重らせん構築物ならびにそれらの非対称（不斉）誘導体を含む、本発明のリン酸化ｓｉＮＡ分子の非限定的な例を示す。
【図７】図７は本発明の化学修飾末端ホスファート基の非限定的な例を示す。
【図８】図８は、本発明のコレステロール結合ｓｉＮＡ分子を合成するために使用されうるコレステロール結合ホスホラミダイトの非限定的な例を示す。ｓｉＮＡ分子のセンス鎖の５’末端に連結されたコレステロール部分を有する一例が示されている。
【図９】図９は、核酸鎖に連結された５’および３’逆方向非塩基キャップの実施形態を示す。
【図１０】図１０はＭＯＧ−Ｇ−ＵＶＭヒト神経膠腫細胞における優先的なＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈ特異的ＲＮＡｉノックダウンを示す。２０ｎＭ  ｓｉＮＡでのトランスフェクションの７２時間後にサンプルを調製した。トランスフェクトされた個々のｓｉＮＡはｓｉＮＡ二重らせんＩＤ番号（例えば、Ｒ−００８３６４６００−０００Ｒ；表１ｃを参照されたい）により特定されている。
【図１１Ａ】図１１Ａおよび１１Ｂは、ＩＤＨ１  Ｒ１３２のＲＮＡｉノックダウンによる、２−ヒドロキシグルタラート（２−ＨＧ）産生および細胞培養培地内への分泌の減少を示す（各柱状グラフはｎ＝４）。図ＡおよびＢは各実験の開始時の細胞プレーティング密度においてのみ異なる。ｓｉＮＡでのトランスフェクションの９６時間後にサンプルを調製した。トランスフェクトされた個々のｓｉＮＡはｓｉＮＡ二重らせんＩＤ番号（例えば、Ｒ−００８３６４６００−０００Ｒ；表１ｃを参照されたい）により特定されている。
【図１１Ｂ】図１１Ａおよび１１Ｂは、ＩＤＨ１  Ｒ１３２のＲＮＡｉノックダウンによる、２−ヒドロキシグルタラート（２−ＨＧ）産生および細胞培養培地内への分泌の減少を示す（各柱状グラフはｎ＝４）。図ＡおよびＢは各実験の開始時の細胞プレーティング密度においてのみ異なる。ｓｉＮＡでのトランスフェクションの９６時間後にサンプルを調製した。トランスフェクトされた個々のｓｉＮＡはｓｉＮＡ二重らせんＩＤ番号（例えば、Ｒ−００８３６４６００−０００Ｒ；表１ｃを参照されたい）により特定されている。
【図１２】図１２はＩＤＨ１  ｓｉＮＡノックダウンとヒドロキシグルタラート（２−ＨＧ）分泌の減少との間の相関性を示す。  実施例  つぎに、以下の非限定的な実施例を用いて本発明を例示する。当業者は、実質的に同じ結果が得られるように変更または修飾されうる種々の非臨界的パラメーターを容易に認識するであろう。
【０２８４】
実施例１：ＩＤＨ１  ｓｉＮＡの設計および合成
ＩＤＨ１  ｓｉＮＡの合成  −  一連のｓｉＮＡ分子を設計し、合成し、ＩＤＨ１遺伝子発現に対する有効性に関して評価した。ＰＣＴ国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０３６４６３（ＷＯ２０１０／１３８７５５として公開されている）（これを、ｓｉＮＡを設計し選択する目的のために、参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されている方法により、あるＩＤＨ１配列を設計し、選択した。著作権のあるアルゴリズムを使用して、他の配列を設計し、選択した。ヒトＩＤＨ１突然変異体を標的化するｓｉＮＡ配列を、それぞれの突然変異体部位を含むように選択した。野生型ヒトＩＤＨ１遺伝子内の標的配列を、主に、著作権のあるアルゴリズムにより決定された高い有効性のスコアを与えるものから選択した。選択されたＩＤＨ１関連ｓｉＮＡの標的配列を表１ａ（標的配列）に記載する。表１ａにおける標的配列に対応するｓｉＮＡ配列のセンスおよびアンチセンス鎖を表１ｂに記載する。表１ａにおける標的配列の一部に対応する種々の化学修飾ｓｉＮＡを表１ｃに記載する。
【０２８５】
【表１】
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【０２８６】
【表２】
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標的配列の各オリゴヌクレオチドに関しては、該ｓｉＮＡの、２つの個々の相補的鎖を、固相合成を用いて、別々に合成し、ついで逆相固相抽出（ＳＰＥ）により別々に精製した。該相補鎖を、二本鎖（二重らせん）を形成させるためにアニールさせ、所望の濃度および選択されたバッファー中で運搬した。
【０２８７】
簡潔に説明すると、当技術分野で一般に公知の方法を用いて（例えば、ＵＳ  ２００９０１７６７２５として公開された米国特許出願第１２／０６４，０１４号を参照されたい）、自動固相合成装置においてホスホラミダイト化学を用いて、一本鎖オリゴヌクレオチドを合成した。合成カラムに第１ヌクレオシド残基（天然または化学修飾体）で誘導体化された固体支持体を充填した。５’−ヒドロキシルを遊離させる、酸不安定性５’−Ｏ−ジメトキシトリチル基の脱トリチル化により、合成を開始させた。適当に保護されたホスホラミダイトおよび適当な活性化因子（アセトニトリル中）を該合成カラムに同時に運搬して、該５’−ヒドロキシルへの該アミダイトのカップリングを生じさせた。ついで該カラムを溶媒、例えばアセトニトリルで洗浄した。酸化溶液、例えばヨウ素溶液を該カラムを通して送り出して、亜リン酸トリエステル結合Ｐ（ＩＩＩ）をそのホスホトリエステルＰ（Ｖ）類似体へと酸化させた。２，６−ルチジンおよびＮ−メチルイミダゾールの存在下、例えば無水酢酸のような試薬を使用して、未反応の５’−ヒドロキシル基をキャップ化した。次のホスホラミダイトの取り込みのために、脱トリチル化工程により、伸長サイクルを再開させた。所望の配列が合成されるまで、このプロセスを繰返した。該合成は最終的な５’末端保護基（トリチルまたは５’−Ｏ−ジメトキシトリチル）で終結した。
【０２８８】
該合成の完了直後に、該固相および付随オリゴヌクレオチドをアルゴン圧または真空下で乾燥させた。水性塩基を加え、該混合物を加熱して、スクシニル結合の切断、シアノエチルホスファート保護基の除去および環外アミン保護の脱保護を生じさせた。
【０２８９】
リボヌクレオチドを含有しない一本鎖上で、以下のプロセスを行った。該固体支持体を該水性塩基で処理した後、該混合物を濾過して、該脱保護粗製合成物から該固体支持体を分離した。ついで該固体支持体を水で洗浄し、これを濾液と合わせた。得られた塩基性溶液は５’末端位置上の５’−Ｏ−ジメトキシトリチル基の保持（トリチル−オン）を可能にする。
【０２９０】
リボヌクレオチドを含有する一本鎖の場合には、以下のプロセスを行った。該固体支持体を水性塩基で処理した後、該混合物を濾過して、該脱保護粗製合成物から該固体支持体を分離した。ついで該固体支持体をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で洗浄し、これを濾液と合わせた。フッ化物試薬、例えばトリエチルアミントリヒドロフルオリドを該混合物に加え、該溶液を加熱した。該反応を適当なバッファーでクエンチして、最終的な５’末端位置に５’−Ｏ−ジメトキシトリチル基を含有する粗製一本鎖の溶液を得た。
【０２９１】
クロマトグラフィー精製、例えばＳＰＥ  ＲＰＣ精製を用いて、各粗製一本鎖のトリチル−オン溶液を精製した。該トリチル基の疎水性は、非トリチル化トランケート化不完全配列より強力な、所望の完全長オリゴの保持を可能にする。該不完全配列を適当な溶媒、例えば低比率のアセトニトリルで、該樹脂から選択的に洗浄した。ついで、保持されたオリゴヌクレオチドをトリフルオロ酢酸でカラム上で脱トリチル化して、該酸不安定性トリチル基を除去した。残留酸を該カラムから洗浄し、塩交換を行い、該物質の最終的な脱塩を開始させた。該完全長オリゴを水性−有機溶媒で精製形態で回収した。ついで該最終産物を純度（ＨＰＬＣ）、同一性（Ｍａｌｄｉ−ＴＯＦ  ＭＳ）および収率（ＵＶ  Ａ２６０）に関して分析した。該オリゴを凍結乾燥または真空凝縮により乾燥させた。
【０２９２】
該産物の分析に基づいて、アニールさせるために、該乾燥オリゴを適当なバッファーに溶解させ、ついで該センスおよびアンチセンスオリゴヌクレオチド鎖の等モル量（理論吸光係数を用いて計算した）を混合した。ついで該溶液を所望の最終濃度およびクロマトグラフィー法による二重らせんの純度に関して分析した。該分析が過剰のいずれかの鎖を示した場合には、二重らせん化が完了するまで、追加的な非過剰な鎖を滴下した。該標的産物の純度が得られたことを分析が示した場合には、該物質をそのまま使用した。
【０２９３】
表１ｃは、このプロトコールを用いて合成された、またはこのプロトコールもしくは当技術分野で公知の他の方法を用いて合成されうる種々の化学修飾ｓｉＮＡを示す。表１ｃにおける各「ｓｉＮＡ二重らせんＩＤ」番号は、センスおよびアンチセンス鎖を有する単一のｓｉＮＡ二重らせんを表し、ここで、該センスおよびアンチセンス鎖は、示されているヌクレオチドおよびそれらのヌクレオチドの化学修飾形態から構成される。例えば、ｓｉＮＡ二重らせんＩＤ番号Ｒ−００８３６４８０７−０００Ｗは、配列５’−ＡＵＵＧＧＡＵＣＵＡＣＡＵＡＧＣＵＡＵ−３’（配列番号１）（この二重らせんＩＤ番号に関しては表１ｃの第４列に示されている）を有するヒトＩＤＨ１の標的部位３４２に対する二本鎖ｓｉＮＡ二重らせんである。二重らせんＲ−００８３６４８０７−０００Ｗに関しては、２つのエントリーが存在し（該表の第２行および第３行を参照されたい）、表１ｃにおいて挙げられているｓｉＮＡ二重らせんＩＤ番号のそれぞれに関しても同様である。これらのエントリーは該表の「修飾配列」の列（第５列）において異なる。この表に挙げられている二重らせんのそれぞれに関して、該二重らせんの第１エントリーの「修飾配列」の列において示されている配列はセンス鎖（例えば、二重らせんＲ−００８３６４８０７−０００Ｗに関しては配列番号６８）を表し、該二重らせんの第２エントリーの「修飾配列」の列において示されている配列はアンチセンス鎖（例えば、二重らせんＲ−００８３６４８０７−０００Ｗに関しては配列番号６９）を表す。アンチセンス配列は、示されている標的配列（センス配列）に相補的であるものとして容易に特定される。
【０２９４】
【表３】
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ここで、
Ａ、Ｃ、ＧおよびＵ＝リボースＡ、Ｃ、ＧまたはＵ。
ａ、ｇ、ｃおよびｕ＝２’−デオキシ−２’−フルオロＡ、Ｇ、ＣまたはＵ。
Ａ、Ｕ、ＣおよびＧ＝２’−Ｏ−メチル（２’−ＯＭｅ）Ａ、Ｕ、ＣまたはＧ。
斜字体のＡ、Ｕ、ＣおよびＧ＝デオキシＡ、Ｕ、ＣまたはＧ。
Ｂ＝逆方向非塩基。
斜字体のＴ＝チミジン。
ｓ＝ホスホロチオアート結合。
【０２９５】
工業的製造のための更なる合成工程  −  アニーリング工程後に標的産物純度が得られたことを分析が示したら、濃縮および脱塩のために、該物質を接線流動濾過（ＴＦＦ）系に移す。それは、該アニーリング工程前にこれを行うのとは対照的なものである。
【０２９６】
限外濾過：適当な分子量カットオフ膜を含有するＴＦＦ系を使用して、該アリール化産物溶液を濃縮する。濃縮後、濾液の伝導度が水のものとなるまで、該産物溶液を、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水を使用するダイアフィルトレーションにより脱塩する。
【０２９７】
凍結乾燥：該濃縮溶液をボトルに移し、急速冷凍し、凍結乾燥装置に接続する。ついで該産物を粉末へと凍結乾燥する。該ボトルを該凍結乾燥装置から取り出し、そのまま使用する。
【０２９８】
実施例２：ＩＤＨ１遺伝子発現に対して活性なｓｉＮＡを特定するための初期スクリーニング
ルシフェラーゼレポータープラスミドの設計  −  ｐｓｉＣＨＥＣＫ（商標）−２ベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃａｔ＃Ｃ８０２１）の修飾形態を使用して、野生型Ｒ１３２ＨおよびＲ１３２Ｃ突然変異ＩＤＨ１対立遺伝子に特異的なレポーター構築物を作製した。該単点突然変異部位の周囲の２００塩基対の領域をＸｈｏＩおよびＮｏｔＩ制限部位間にクローニングして、レニラ（Ｒｅｎｉｌｌａ）ルシフェラーゼおよびＩＤＨ１インサート（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）間の転写融合産物を得た。各融合転写産物において、該レニラ（Ｒｅｎｉｌｌａ）ルシフェラーゼオープンリーディングフレームはＩＤＨ１インサートの上流に位置する。該融合転写産物のＩＤＨ１関連インサートを標的化するｓｉＮＡはレニラ（Ｒｅｎｉｌｌａ）ルシフェラーゼ発現のノックダウンを引き起こしうる。レニラ（Ｒｅｎｉｌｌａ）ルシフェラーゼ発現のレベルは、レニラ（Ｒｅｎｉｌｌａ）ルシフェラーゼ活性の量を直接的に測定することにより決定されうる。該プラスミドは、ＩＤＨ１  ｓｉＮＡにより影響されないホタルルシフェラーゼ遺伝子を発現し、該プラスミドは、細胞内にトランスフェクトされたプラスミドの量のばらつきを考慮するためにデータを正規化するために使用されうる。
【０２９９】
３つのレポーターのＩＤＨ１インサート配列は以下のとおりである。
【０３００】
野生型ＩＤＨ１−
ＣＧＧＴＣＴＴＣＡＧＡＧＡＡＧＣＣＡＴＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＡＡＴＡＴＣＣＣＣＣＧＧＣＴＴＧＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＣＴＡＴＣＡＴＣＡＴＡＧＧＴＣＧＴＣＡＴＧＣＴＴＡＴＧＧＧＧＡＴＣＡＡＴＡＣＡＧＡＧＣＡＡＣＴＧＡＴＴＴＴＧＴＴＧＴＴＣＣＴＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＡＡＧＴＡＧＡＧＡＴＡＡＣＣＴＡＣＡＣＡＣＣＡＡＧＴＧＡＣＧＧＡＡＣＣＣＡＡＡＡＧＧＴＧＡＣＡＴＡＣＣＴＧＧＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＴ（配列番号５０７）；
ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｈ突然変異体−
ＣＧＧＴＣＴＴＣＡＧＡＧＡＡＧＣＣＡＴＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＡＡＴＡＴＣＣＣＣＣＧＧＣＴＴＧＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＣＴＡＴＣＡＴＣＡＴＡＧＧＴＣＡＴＣＡＴＧＣＴＴＡＴＧＧＧＧＡＴＣＡＡＴＡＣＡＧＡＧＣＡＡＣＴＧＡＴＴＴＴＧＴＴＧＴＴＣＣＴＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＡＡＧＴＡＧＡＧＡＴＡＡＣＣＴＡＣＡＣＡＣＣＡＡＧＴＧＡＣＧＧＡＡＣＣＣＡＡＡＡＧＧＴＧＡＣＡＴＡＣＣＴＧＧＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＴ（配列番号５０８）；
およびＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｃ突然変異体−
ＣＧＧＴＣＴＴＣＡＧＡＧＡＡＧＣＣＡＴＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＡＡＴＡＴＣＣＣＣＣＧＧＣＴＴＧＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＣＴＡＴＣＡＴＣＡＴＡＧＧＴＴＧＴＣＡＴＧＣＴＴＡＴＧＧＧＧＡＴＣＡＡＴＡＣＡＧＡＧＣＡＡＣＴＧＡＴＴＴＴＧＴＴＧＴＴＣＣＴＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＡＡＧＴＡＧＡＧＡＴＡＡＣＣＴＡＣＡＣＡＣＣＡＡＧＴＧＡＣＧＧＡＡＣＣＣＡＡＡＡＧＧＴＧＡＣＡＴＡＣＣＴＧＧＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＴ（配列番号５０９）。
【０３０１】
野生型ＩＤＨ１−Ｒ１３２ＨおよびＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｃの完全長ＤＮＡおよびタンパク質配列を表２に記載する。
【０３０２】
【表４】
2014522242.tif 000019
細胞培養調製  −  ヒトヘパトーマ細胞系ＨｅｐＧ２を変法イーグル培地内で増殖させた。マウスヘパトーマ細胞系Ｈｅｐａ１−６をダルベッコ変法イーグル培地内で増殖させた。全ての培地を１０％  ウシ胎児血清、１００μｇ／ｍＬ  ストレプトマイシン、１００Ｕ／ｍＬ  ペニシリンおよび１％  炭酸水素ナトリウムで補足した。
【０３０３】
トランスフェクションおよびスクリーニング  −  細胞を９６ウェル組織培養プレート内で１０，０００細胞／ウェルの密度でプレーティングし、３７℃で一晩インキュベートした。翌日、レポータープラスミドおよびｓｉＮＡをリポフェクタミン（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標））２００試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でコトランスフェクトした。初期スクリーニングでは、ｓｉＮＡおよびプラスミドの最終濃度は、それぞれ、１０ｎＭおよび６００ｎｇ／ｍｌであった。
【０３０４】
１２点の用量反応曲線実験のために、一連のｓｉＮＡを４０ｎＭから４倍希釈し、一方、プラスミド濃度は６００ｎｇ／ｍｌのままに一定に維持した。全てのトランスフェクションは、複数の生物学的重複実験として設計した。トランスフェクションの１日後、該培地を新鮮な培地と交換し、該細胞を３７℃で更に１日間インキュベートした。トランスフェクションの２日後、該レポータープラスミドからのレニラ（Ｒｅｎｉｌｌａ）ルシフェラーゼおよびホタルルシフェラーゼ活性を、Ｄｕａｌ−Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイ系（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃａｔ  ＃  Ｅ２９４０）を該製造業者の説明に従い使用して測定した。
【０３０５】
データ分析  −  異なるウェルにおける異なるトランスフェクション効率に関して正規化するために、各ウェルのレニラ（Ｒｅｎｉｌｌａ）ルシフェラーゼ活性を、同じ細胞からのホタルルシフェラーゼ活性で割り算した。野生型および突然変異ＩＤＨ１  ｓｉＮＡにより得られた正規化ルシフェラーゼ活性を更に、非標的化対照ｓｉＮＡにより得られた該正規化ルシフェラーゼ活性により割り算して、レポーター発現のノックダウン率（％ＫＤ）を求めた。Ｌｏｇ２（変化倍率）（「ｌｏｇ２ＦＣ」）を以下の式に従い計算した：ｌｏｇ２ＦＣ＝ｌｏｇ２［１００／（１００−％ＫＤ）］。
【０３０６】
効力５０およびＩＣ５０の全計算は、Ｒ．２．９．２ソフトウェアを使用して行った。単一リガンド結合に関するＳ字形用量反応（一定勾配）式を用いて、該データを分析した。効力５０は、５０％標的ｍＲＮＡノックダウンを与える計算されたｓｉＮＡトランスフェクション濃度である。低い最大ノックダウン（ｌｏｇ２（変化倍率）＜１）を有するｓｉＮＡの場合、効力５０は計算できない。
【０３０７】
結果  −  既に記載されているとおりに、ＩＤＨ１関連ｓｉＮＡを設計し、合成した。レニラ（Ｒｅｎｉｌｌａ）ルシフェラーゼおよびＩＤＨ１関連インサート（野生型、Ｒ１３２Ｈ突然変異体またはＲ１３２Ｃ突然変異体のいずれか）間の転写融合産物を与える修飾ｐｓｉＣＨＥＣＫ（商標）−２ベクターに基づくレポータープラスミドでトランスフェクトされたＨｅｐａ１−６細胞において、種々のｓｉＮＡをスクリーニングした。該マウス細胞における種々の修飾ＩＤＨ１関連ｓｉＮＡでの処理の際のＩＤＨ１関連ｍＲＮＡ発現レベル（野生型、Ｒ１３２Ｈ突然変異体またはＲ１３２Ｃ突然変異体のいずれか）におけるＬｏｇ２ＦＣを表３ａ、表３ｂ、表３ｃおよび表３ｄに示す。各実験において、ｎ＝２〜４である。表３ｃに示されているスクリーニングデータは、主に、Ｓｔａｂ  ０４／０５化学（表６を参照されたい）を有する化学修飾ｓｉＮＡからのデータを含むが、３’突出以外は未修飾であるｓｉＮＡからの幾つかのデータをも含む。表３ｄに示されているスクリーニングデータは、３’突出を除いた未修飾ｓｉＮＡからのデータのみを含む。各スクリーニングは、該ルシフェラーゼアッセイ法を用いて、４８時間の時点で行った。
【０３０８】
【表５】
2014522242.tif 000020
【０３０９】
【表６】
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【０３１０】
【表７】
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2014522242.tif 000024
【０３１１】
【表８】
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2014522242.tif 000026
表３ａ〜ｄからの選択された高順位ｓｉＮＡを更に、用量反応曲線を用いて、ヒトＨｅｐＧ２およびマウスＨｅｐａ１−６細胞における有効性および効力に関して分析した。これらのｓｉＮＡに関する結果を表４ａ、表４ｂ、表４ｃおよび表４ｄに示す。効力５０（表４ａ〜ｄにおける「Ｐ５０」）を４８時間の曝露時間の後で決定した。
【０３１２】
【表９】
2014522242.tif 000027
【０３１３】
【表１０】
2014522242.tif 000028
【０３１４】
【表１１】
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【０３１５】
【表１２】
2014522242.tif 000030
実施例３：インビトロＩＤＨ１タンパク質ノックダウン
インビトロ細胞培養系  −  ヒト神経膠腫細胞系ＭＯＧ−Ｇ−ＵＶＷを、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ（ＵＫ））により推奨されているとおりに増殖させた。ｐＬＥＮＴＩ６．２  Ｃ末端Ｖ５レンチウイルス発現系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、ＭＯＧ−Ｇ−ＵＶＷ細胞を、ヒトＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｈを発現するように操作した。レンチウイルス感染後、ＧＬＵＴＡＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１％  炭酸水素ナトリウム、ピルビン酸ナトリウム、５マイクログラム／ｍｌのブラスチシジン（ｂｌａｓｔｉｃｉｄｉｎ）および１０％  ウシ胎児血清で補足されたＤＭＥＭ−Ｆ１２内で、ＭＯＧ−Ｇ−ＵＶＷ  ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈ細胞を増殖させた。該２−ＨＧ測定のために、ダルベッコ改変イーグル培地ＧＬＵＴＡＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、Ｄ−グルコース、ピルビン酸ナトリウムおよび１０％  ウシ胎児血清内で肉腫細胞系を増殖させた。
【０３１６】
ＩＤＨ１タンパク質ノックダウンを評価するための実験  −  ｓｉＲＮＡタンパク質ノックダウン実験のために、細胞を６ウェル組織培養プレート内にプレーティングし、３７℃で一晩インキュベートした。翌日、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）ＲＮＡｉＭＡＸ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、ｓｉＮＡまたはｓｉＧＬＯトランスフェクション対照（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ）を２０ｎＭの最終濃度でトランスフェクトした。翌朝、細胞培地を交換した。トランスフェクションの７２時間後、細胞をＰＢＳで１回洗浄し、ｍ−ＰＥＲ細胞溶解バッファー（Ｐｉｅｒｃｅ）で細胞溶解させ、ウエスタンブロットを行った。特に示されていない限り１：１０００の希釈度の以下の抗体を使用して、タンパク質発現を評価した：Ｖ５タグ付きＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｈ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１：４００の希釈度の内因性抗ヒトＩＤＨ１（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈ  Ｇｒｏｕｐ）、抗ヒトＧＡＰＤＨ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および抗ヒトチューブリン（Ｔｕｂｕｌｉｎ）（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）。
【０３１７】
２−ヒドロキシグルタラートの評価のための質量分析  −  突然変異ＩＤＨ１のｓｉＮＡノックダウンの際の２−ヒドロキシグルタラート（２−ＨＧ）を測定するために、細胞を６ウェル組織培養プレート内にプレーティングし、３７℃で一晩インキュベートした。翌日、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）ＲＮＡｉＭＡＸ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、ｓｉＮＡを２０ｎＭの最終濃度でトランスフェクトした。全てのトランスフェクションを複数の生物学的重複実験として設計した。翌朝、細胞培地を交換した。ＭＯＧ−Ｇ−ＵＶＷ  ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｈに関してはトランスフェクションの７２時間後、およびＨＴ−１０８０細胞に関してはトランスフェクションの９６時間後、培地上清を集め、９６ウェルプレートに移し、アセトニトリルで希釈した。プレートを室温で３２００ＲＰＭで１０分間遠心して、沈殿タンパク質を清澄化し、２−ＨＧをＡＰＩ−４００質量分析計における質量分析により分析した。
【０３１８】
結果  −
１）ＭＯＧ−Ｇ−ＵＶＭヒト神経膠腫細胞における優先的ＩＦＨ１−Ｒ１３２Ｈ特異的ＲＮＡｉノックダウン  −  図１０におけるウエスタンブロットデータは、ヒトＩＤＨ１に基づく幾つかのｓｉＮＡ配列が、ヒト神経膠腫ＭＯＧ−Ｇ−ＵＶＷ細胞系におけるＩＤＨ１発現を抑制しうることを示している。Ｃ末端Ｖ５タグを野生型または突然変異ＩＤＨタンパク質内に導入し、Ｖ５特異的抗体でのブロッティングにより発現を測定した。図１０は、野生型ＩＤＨ１発現を完全状態に維持しながら突然変異ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｈの発現を有効に阻止する、ｓｉＮＡ二重らせんＩＤ番号Ｒ−００８３６４６００−０００Ｒの活性を示す。ｓｉＮＡ二重らせんＩＤ番号Ｒ−００８３６４７１４−０００Ｃはまた、突然変異体特異的ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｈ  ＲＮＡｉ活性を有するが、それは、ＳｓｉＮＡ  Ｒ−００８３６４６００−０００Ｒより低い度合のものである。これとは対照的に、ｓｉＮＡ配列Ｒ−００８３６４７９８−０００ＢおよびＲ−００８３６４８３６−０００Ｐは野生型または突然変異ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｈ対立遺伝子の発現を無差別に妨げた。
【０３１９】
２）ＲＮＡｉによるＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｃの抑制は培地内の２−ＨＧを減少させる  −  図１１Ａおよび１１Ｂは、ヒトＩＤＨ１に基づく幾つかのｓｉＮＡ配列が代謝産物２−ヒドロキシグルタラート（２−ＨＧ）の産生および細胞培養培地内への分泌を妨げうることを示している。図１１Ａおよび図１１Ｂは各実験の開始時の細胞プレーティング密度のみにおいて異なる。示されているとおり、Ｒ１３２Ｃ特異的配列Ｒ−００８３７２８１１−０００Ｌ、Ｒ−００８３７２８８６−０００Ｂ、Ｒ−００８３７２８５５−０００Ｒまたは無差別ＩＤＨ１  ｓｉＮＡ  Ｒ−００８３６４７９８−０００Ｂ（前記）はそれぞれ、トランスフェクションの９６時間後に、培地内の分泌２−ＨＧのレベルを減少させうる。模擬トランスフェクト化細胞または非標的化対照ｓｉＮＡ配列は高レベルの２−ＨＧを維持した。
【０３２０】
３）ＩＤＨ１  ｓｉＲＮＡノックダウンは２−ＨＧの減少と相関する  −  図１２は、ＩＤＨ１のｓｉＮＡノックダウンが、選択された２−ヒドロキシグルタラート（２−ＨＧ）の減少と相関することを証明している。９６時間のインキュベーション時間の後、ｓｉＮＡ二重らせんＩＤ番号Ｒ−００８３６４８３６−０００ＢまたはＲ−００８３６４７９８−０００Ｂのいずれかでトランスフェクトされた細胞においては、ＩＤＨ１タンパク質および２−ＨＧが有意に減少した。定量的には、Ｒ−００８３６４８３６−０００ＢおよびＲ−００８３６４７９８−０００Ｂは共に、このアッセイにおいて類似レベルのノックダウン活性を有するため、８５％のＩＤＨ１タンパク質の減少は２−ＨＧの７８％の減少を引き起こした。対照サンプルは、模擬トランスフェクション（ＲＮＡｉＭａｘ）、非標的化対照または蛍光トランスフェクション対照ｓｉＧＬＯからなり、これらはいずれもＩＤＨ１タンパク質発現または２−ＨＧ産生を有意には損なわなかった。
【０３２１】
実施例４：ｓｉＮＡのインビトロ血清安定性の決定
ｓｉＮＡをＨ２Ｏで５０μＭ〜１００μＭ  ストック溶液として再構成させ、予め３７℃に加温されたヒト血清に２０μｇ／ｍＬの最終濃度まで加える。ついで該混合物を３７℃で０、１および２時間インキュベートする。各時点の終了時に、等容量のフェノメネクス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）細胞溶解−ローディングバッファーと混合することにより該反応を停止させる。オリゴヌクレオチドをフェノメネクス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）固相抽出により９６ウェル形態において精製し、Ｌａｂｃｏｎｃｏ  Ｔｒｉａｄ  Ｌｙｏ−００４１７で乾燥状態まで凍結乾燥させる。凍結乾燥サンプルを、ＲＮアーゼ非含有Ｈ２Ｏで調製された１５０μＬの１ｍＭ  ＥＤＴＡ中で再構成させる。ついで、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｏｒｂｉｔｒａｐでの液体クロマトグラフィー／質量分析（ＬＣ／ＭＳ）分析のために、該サンプル溶液を１ｍＭ  ＥＤＴＡで５倍希釈する。該ｓｉＮＡの血清代謝産物を測定分子量に基づいて決定した。
【０３２２】
実施例５：サイトカイン誘導の試験
脂質ナノ粒子（４０／４８／２／１０の比のＤＬｉｎＤＭＡ／コレステロール／Ｓ−ＰＥＧ−Ｃ−ＤＭＡ／ＤＳＰＣ）中にローディングされた本発明の種々のｓｉＮＡの免疫刺激効果を評価するために、単一の３ｍｐｋ容量のＬＮＰ製剤化ｓｉＮＡを尾静脈注射により３Ｃ５７Ｂｌ／６マウスに投与する。投与後の３および２４時間の時点で、血清または血漿サンプルを集める。これらのサンプルにおけるサイトカインおよびケモカインレベルを、Ａｕｓｈｏｎ  ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓのＳｅａｒｃｈｌｉｇｈｔ  ＩＲ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ａｒｒａｙを該製造業者の説明に従い使用して測定する。測定されるサイトカインおよびケモカインはＩＬ−１ａ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＫＣ、ＩＬ−１０、ＩＦＮγ、ＴＮＦ、ＧＭＣＳＦ、ＭＩＰ−１β、ＭＣＰ−１／ＪＥおよびＲＡＮＴＥＳである。
【０３２３】
実施例６：非ヒト霊長類における薬力学的研究
脂質ナノ粒子（例えば、４０／４８／２／１０の比のＤＬｉｎＤＭＡ／コレステロール／Ｓ−ＰＥＧ−Ｃ−ＤＭＡ／ＤＳＰＣ）内にローディングされたｓｉＮＡの単一の２．５ｍｐｋ用量を静脈内注入によりリサース・マカク（Ｒｈｅｓｕｓ  ｍａｃａｑｕｅ）サルに投与する。標的ｍＲＮＡノックダウンをモニターするために、１６Ｔゲージ・メングヒニ（Ｍｅｎｇｈｉｎｉ）針を使用して、動物１匹当たり約２０ｍｇの組織に関して、投与前および後の種々の時点で肝臓生検を行う。該治療に関連した潜在的毒性をモニターするために、投与前および後の種々の時点で全血および血清／血漿も集める。全ての方法は、ＵＳＤ  Ａ  Ａｎｉｍａｌ  Ｗｅｌｆａｒｅ  Ａｃｔ（９  ＣＦＲ，Ｐａｒｔｓ１、２および３）に概説されている規制およびＧｕｉｄｅ  ｆｏｒ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓ（ＩＬＡＲ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，１９９６，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  Ｐｒｅｓｓ）において特定されている条件に従う。標的遺伝子発現におけるＬｏｇ２（変化倍率）は投与後の種々の時点で決定される。該サルの投与前標的遺伝子発現レベルは、最初の投与の７日前に測定する。
【０３２４】
実施例７：ｓｉＮＡ脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）製剤
ＤＬｉｎＤＭＡ製剤に関する一般的ＬＮＰ法の説明  −  脂質ナノ粒子を衝撃ジェット法により製造する。アルコールに溶解した脂質を、クエン酸バッファーに溶解したｓｉＮＡと混合することにより、該粒子を形成させる。脂質とｓｉＮＡとの混合比は約４５〜５５％  脂質および３５〜４５％  ｓｉＮＡが目標（標的）とされる。該脂質溶液はカチオン性脂質、ヘルパー脂質（コレステロール）、ＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ−Ｃ−ＤＭＡ、ＰＥＧ−ＤＭＧ）脂質およびＤＳＰＣ（アルコール（例えば、エタノール）中で５〜１５ｍｇ／ｍＬの濃度、目標は９〜１２ｍｇ／ｍＬ）を含有する。該脂質の比は、カチオン脂質に関しは２５〜９８（目標は３５〜６５）のモルパーセント範囲を有し、該ヘルパー脂質は０〜７５（目標は３０〜５０）のモルパーセント範囲を有し、ＰＥＧ脂質は１〜１５（目標は１〜６）のモルパーセント範囲を有し、ＤＳＰＣは０〜１５（目標は０〜１２）のモルパーセント範囲を有する。該ｓｉＮＡ溶液は、３．５〜５の範囲のｐＨを有するクエン酸ナトリウム緩衝塩溶液中で０．３〜１．０ｍｇ／ｍＬ（目標は０．３〜０．９ｍｇ／ｍＬ）の濃度範囲で１以上のｓｉＮＡ配列を含有する。それらの２つの液体を１５〜４０℃（目標は３０〜４０℃）の範囲の温度に加熱し、ついで衝撃ジェットミキサーにおいて混合して、瞬時にＬＮＰを形成させる。管ＩＤは０．２５〜１．０ｍｍの範囲、および１０〜６００ｍＬ／分の合計流量を有する。流量と管ＩＤとの組合せは３０〜２００ｎｍのＬＮＰの粒径を制御する効果を示す。ついで該溶液を、より高いｐＨを有する緩衝溶液と、１：１〜１：３  ｖｏｌ：ｖｏｌ（目標は１：２  ｖｏｌ：ｖｏｌ）の範囲の混合比で混合する。この緩衝溶液は１５〜４０℃（目標は３０〜４０℃）の範囲の温度である。該混合ＬＮＰをアニオン交換濾過工程前に３０分〜２時間維持する。インキュベート中の温度は１５〜４０℃（目標は３０〜４０℃）の範囲である。インキュベート後、該溶液を、アニオン交換分離工程を構成する０．８μｍフィルターで濾過する。このプロセスは、１ｍｍ  ＩＤ〜５ｍｍ  ＩＤの範囲の管ＩＤ、および１０〜２０００ｍＬ／分の流量を用いる。該ＬＮＰを濃縮し、限外濾過法によりダイアフィルトレーションする。この場合、該アルコールを除去し、該クエン酸バッファーを最終バッファー溶液、例えばリン酸緩衝食塩水と交換する。該限外濾過法は接線流動濾過形態（ＴＦＦ）を用いる。この方法は３０〜５００ＫＤの膜名目分子量カットオフ範囲を用いる。該膜形態は中空糸または平坦なシートカセットである。適切な分子量カットオフを用いる該ＴＦＦ法は保持物質中に該ＬＮＰを保持し、濾液または浸透物は該アルコール、クエン酸バッファーおよび最終的なバッファー廃棄物を含有する。該ＴＦＦ法は、初期濃度から１〜３ｍｇ／ｍＬのｓｉＮＡ濃度を伴う多工程法である。濃縮後、該ＬＮＰ溶液を１０〜２０容量にわたって最終バッファーに対するダイアフィルトレーションに付して、該アルコールを除去し、バッファー交換を行う。ついで該物質を更に１〜３倍濃縮する。該ＬＮＰ法の最終工程は、該濃縮ＬＮＰを滅菌濾過し、該産物をバイアルに入れるためのものである。
【０３２５】
分析方法：
１）ｓｉＮＡ濃度  −  ｓｉＮＡ二重らせん濃度は、２９９６  ＰＤＡ検出器と共にＷａｔｅｒｓ  ２６９５  Ａｌｌｉａｎｃｅ系（Ｗａｔｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ  ＭＡ）を使用する強アニオン交換高速液体クロマトグラフィー（ＳＡＸ−ＨＰＬＣ）により決定される。該ＬＮＰ（ＲＮＡｉ運搬ビヒクル（ＲＤＶ）とも称される）を、全ｓｉＮＡを遊離させるために０．５％  ＴｒｉｔｏｎＸ−１００で処理し、２５４ｎｍでのＵＶ検出を伴うＤｉｏｎｅｘ  ＢｉｏＬＣ  ＤＮＡＰａｃ  ＰＡ  ２００（４×２５０ｍｍ）カラムを使用するＳＡＸ分離により分析する。移動相は、０〜１５分の直線勾配および１ｍｌ／分の流量を伴う、Ａ：２５ｍＭ  ＮａＣｌＯ４、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、２０％  ＥｔＯＨ（ｐＨ７．０）およびＢ：２５０ｍＭ  ＮａＣ１Ｏ４、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、２０％  ＥｔＯＨ（ｐＨ７．０）から構成される。ｓｉＮＡ量を、ｓｉＮＡ標準曲線を比較することにより決定する。
【０３２６】
２）封入率  −  ＲＤＶの封入率をモニターするためのＲＮＡ定量のために、蛍光試薬ＳＹＢＲ  Ｇｏｌｄを使用する。遊離ｓｉＮＡおよび全ｓｉＮＡ量を決定するために、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００の存在下または非存在下でＲＤＶを使用する。該アッセイは、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）のＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ５ｅマイクロプレート分光光度計を使用して行う。サンプルを４８５ｎｍで励起させ、蛍光発光を５３０ｎｍで測定する。ｓｉＮＡ標準曲線を比較することにより、ｓｉＮＡの量を決定する：封入率＝（１−遊離ｓｉＮＡ／全ｓｉＮＡ）×１００％。
【０３２７】
３）粒径および多分散性  −  １μｇのｓｉＮＡを含有するＲＤＶを１×ＰＢＳで３ｍｌの最終容量に希釈する。ＺｅｔａＰＡＬＳ装置（Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｈｏｌｔｓｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用する動的光散乱法により、該サンプルの粒径および多分散性を測定する。９０℃の散乱角で、２５℃で、Ｈｅ−Ｎｅレーザーを使用して、散乱強度を測定する。
【０３２８】
４）ゼータ（ζ）電位分析  −  １μｇのｓｉＮＡを含有するＲＤＶを１ｍＭ  Ｔｒｉｓバッファー（ｐＨ７．４）で２ｍｌの最終容量に希釈する。光源としてのＨｅ−Ｎｅレーザーおよび電極と共にＺｅｔａＰＡＬＳ装置（Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｈｏｌｔｓｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して、サンプルの電気泳動移動度を決定する。ζ電位の計算において、スモルチョウスキー（Ｓｍｏｌｕｃｈｏｗｓｋｉ）限界を推定する。
【０３２９】
５）脂質分析  −  コロナ帯電エアゾール検出器（ＣＡＤ）（ＥＳＡ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃｈｅｌｍｓｆｏｒｄ，ＭＡ）と共にＷａｔｅｒｓ  ２６９５  Ａｌｌｉａｎｃｅ系（Ｗａｔｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ  ＭＡ）を使用する逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）により、個々の脂質濃度を決定する。Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ１８（５０×４．６ｍｍ，粒径１．８μｍ）カラムを６０℃でＣＡＤと共に使用して、ＲＤＶにおける個々の脂質を分析する。移動相は、Ａ：Ｈ２Ｏ中の０．１  ＴＦＡおよびＢ：ＩＰＡ中の０．１％  ＴＦＡから構成される。勾配は、時間０からの６０％移動相Ａおよび４０％移動相Ｂから１．００分における４０％移動相Ａおよび６０％移動相Ｂへ；時間１．００から５．００分までの４０％移動相Ａおよび６０％移動相Ｂ；５．００分からの４０％移動相Ａおよび６０％移動相Ｂから１０．００分における２５％移動相Ａおよび７５％移動相Ｂへ；１０．００分からの２５％移動相Ａおよび７５％移動相Ｂから１５．００分における５％移動相Ａおよび９５％移動相Ｂへ；ならびに１５．００からの５％移動相Ａおよび９５％移動相Ｂから２０．００分における６０％移動相Ａおよび４０％移動相Ｂへ、１ｍｌ／分の流量で変化する。二次曲線の当てはめでＲＤＶにおける全ての脂質成分に関する標準曲線と比較することにより、個々の脂質濃度を決定する。各脂質のモル比率を、その分子量に基づいて計算する。
【０３３０】
表８における種々の製剤のための一般的ＬＮＰ製造  −  ｓｉＮＡおよび／または担体分子を２５ｍＭ  クエン酸バッファー（ｐＨ４．０）に０．９ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解することにより、表８におけるｓｉＮＡナノ粒子溶液を製造する。カチオン性脂質（例えば、ＣＬｉｎＤＭＡまたはＤＯＢＭＡ；表８における製剤に関する構造および比を参照されたい）、ＤＳＰＣ、コレステロールおよびＰＥＧ−ＤＭＧの混合物（表８に比が示されている）を約１５ｍｇ／ｍＬの濃度で無水エタノールに溶解することにより脂質溶液を製造する。窒素とホスファートとの比は約３：１である。
【０３３１】
等容量のｓｉＮＡ／担体および脂質溶液を、２個のＦＰＬＣポンプを使用して、同じ流量で、混合Ｔコネクタへ運搬する。所望の粒径に調節するために、背圧弁を使用する。生じた乳状混合物を無菌ガラスボトル内に集める。ついでこの混合物を等容量のクエン酸バッファーでゆっくり希釈し、イオン交換膜で濾過して、該混合物中の遊離ｓｉＮＡ／担体を除去する。クエン酸バッファー（ｐＨ４．０）に対する限外濾過を用いてエタノールを除去し（ＡＬＣＯスクリーンからの試験スティック）、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）に対する限外濾過を用いてバッファーを交換する。最終ＬＮＰを、所望の容量に濃縮することにより得、０．２μｍフィルターで濾過滅菌する。得られたＬＮＰを粒径、ζ電位、アルコール含量、全脂質含量、封入核酸および全核酸濃度の点で特徴づける。
【０３３２】
ＬＮＰ製造方法  −  非限定的な例において、以下のとおりにバルクにおいてＬＮＰ−０８６  ｓｉＮＡ／担体製剤を製造する。該方法は、（１）脂質溶液を調製すること、（２）ｓｉＮＡ／担体溶液を調製すること、（３）混合／粒子形成、（４）インキュベーション、（５）希釈、ならびに（６）限外濾過および濃縮からなる。
【０３３３】
１）脂質溶液の調製  −  三頚２Ｌ丸底フラスコ、冷却器、測定用シリンダー、および２個の１０Ｌ円錐ガラス容器を発熱物質除去処理に付す。該脂質を室温に加温する。該三頚丸底フラスコ内にピペットで５０．４４ｇのＣＬｉｎＤＭＡ、および４３．３２ｇのＤＳＰＣ、５．３２ｇのコレステロール、６．９６ｇのＰＥＧ−ＤＭＧ、および２．６４ｇのリノレイルアルコールを移す。該混合物に１Ｌのエタノールを加える。該丸底フラスコを、Ｊ−ＣＨＥＭプロセスコントローラに接続された加熱マントル内に配置する。上部に冷却器を取り付けて、該脂質懸濁液をアルゴン下で撹拌棒で撹拌する。熱電対プローブを、密閉アダプターが取り付けられた該丸底フラスコの一方の頚から該懸濁液内に入れる。該懸濁液を、それが透明になるまで、３０℃で加熱する。該溶液を室温に冷却し、円錐ガラス容器に移し、キャップで密閉する。
【０３３４】
２）ｓｉＮＡ／担体溶液の調製  −  無菌容器（例えば、Ｃｏｒｎｉｎｇ貯蔵ボトル）内に、３．６ｇに水補正係数（約１．２）を掛け算した重量の第１  ｓｉＮＡ粉末（「ｓｉＮＡ−１」）を秤量して入れる。該ｓｉＮＡを発熱物質除去済み５Ｌガラス容器に移す。該秤量容器をクエン酸バッファー（２５ｍＭ，ｐＨ４．０および１００ｍＭ  ＮａＣｌ）で３回洗浄し、該洗浄液を５Ｌ容器内に入れ、クエン酸バッファーで４Ｌに適宜調節する。以下の方法を用いて、該ｓｉＮＡ溶液の濃度をＵＶ分光計で決定する。２０μＬを該溶液から取り出し、１０００μＬに５０倍希釈し、クエン酸バッファーでのブランキングの後、Ａ２６０ｎｍにおけるＵＶ読取値を記録する。これを繰返す。それらの２つのサンプルの読取値が合致する場合には、平均を取り、該ｓｉＮＡの吸光係数に基づいて濃度を計算する。該最終濃度が０．９０±０．０１ｍｇ／ｍＬの範囲から外れている場合には、更にｓｉＮＡ／担体粉末を加え、または更にクエン酸バッファーを加えることにより、該濃度を調節する。第２  ｓｉＮＡ（「ｓｉＮＡ−２」）に関して、このプロセスを繰返す。発熱物質除去済み１０Ｌガラス容器内に、４Ｌのそれぞれ０．９ｍｇ／ｍＬのｓｉＮＡ溶液を移す。
【０３３５】
あるいは、該ｓｉＮＡ／担体溶液が、２以上のｓｉＮＡ二重らせんおよび／または担体の混合物ではなく、単一のｓｉＮＡ二重らせんおよび／または担体を含む場合には、該ｓｉＮＡ／担体を２５ｍＭ  クエン酸バッファー（ｐＨ４．０，１００ｍＭのＮａＣｌ）に溶解して、０．９ｍｇ／ｍＬの最終濃度を得る。
【０３３６】
ついで該脂質／エタノール溶液を、Ｍａｓｔｅｒ  Ｆｌｅｘ  Ｐｒｉｓｔａｌｔｉｃ  Ｐｕｍｐ  Ｍｏｄｅｌ  ７５２０−４０を使用して、Ｐａｌｌ  Ａｃｒｏｐａｋ  ２０  ０．８／０．２μｍ滅菌フィルターＰＮ  １２２０３に通過させて、発熱物質除去済みガラス容器内に滅菌濾過して、該封入プロセス用の無菌出発物質を得る。該濾過プロセスは、２０ｃｍ２の膜面積を用いて、８０ｍＬの規模で行う。流量は２８０ｍＬ／分である。このプロセスは、管直径および濾過面積を増加させることにより、規模改変されうる。
【０３３７】
３）粒子形成−混合工程  −  ＡＫＴＡ  Ｐ９００ポンプのスイッチを入れ、１０００ｍＬの１Ｎ  ＮａＯＨを１Ｌガラス容器内に配置し、１０００ｍＬの７０％  エタノールを１Ｌガラス容器内に配置し、圧力蓋が付いた該ポンプを各容器に接続することにより、衛生処理を行う。２０００ｍＬガラス容器を該ポンプ出口の下に配置し、アルゴンが１０ｐｓｉで該系を流れるようにし、流量を４０分の時間設定で４０ｍＬ／分に設定する。該衛生処理が完了したら、該ガスのスイッチを切り、使用の準備が整うまで該ポンプを該溶液中で保存する。使用前に、２００ｍＬのエタノールおよび２００ｍＬの無菌クエン酸バッファーを使用することにより、該ポンプ流動を確認する。
【０３３８】
該ＡＫＴＡポンプに、該無菌脂質／エタノール溶液、該無菌ｓｉＮＡ／担体またはｓｉＮＡ／担体混合物／クエン酸バッファー溶液、および蓋付きの発熱物質除去済み受容容器（２×バッチサイズ）を接続する。該ガスのスイッチを入れ、混合中、圧力を５〜１０ｐｓｉに維持する。
【０３３９】
４）インキュベーション  −  該溶液を、２２±２時間のインキュベーション時間にわたって、混合した後に維持する。該インキュベーションは室温（２０〜２５℃）で行い、処理中の溶液を光から防護する。
【０３４０】
５）希釈  −  等しい長さの管およびＴｅｅ接続および３６０ｍＬ／分の流量で設定された複ヘッド蠕動ポンプ，Ｍａｓｔｅｒ  Ｆｌｅｘ  Ｐｅｒｉｓｔａｌｔｉｃ  Ｐｕｍｐ，Ｍｏｄｅｌ  ７５２０−４０を使用して、該脂質ｓｉＮＡ溶液を等容量のクエン酸バッファーで希釈する。
【０３４１】
６）限外濾過および濃縮  −  該限外濾過プロセスは、時間の決まったプロセスであり、流量は注意深くモニターされる必要がある。これは２工程プロセスであり、第１工程は、該希釈物を３２Ｌから３６００ｍＬに及び約２ｍｇ／ｍＬの濃度にする濃縮工程である。
【０３４２】
該第１工程においては、限外濾過膜ＧＥ  ＰＮ  ＵＦＰ−１００−Ｃ−３５Ａを備えたフレックススタンド（Ｆｌｅｘｓｔａｎｄ）をクアトロフロー（ｑｕａｔｒｏｆｌｏｗ）ポンプに取り付ける。２００ｍＬのＷＦＩを貯留容器に加え、ついで３Ｌの０．５Ｎ  水酸化ナトリウム（これはついで、濃縮水を通過して流れて廃棄される）を加える。このプロセスを３回繰返す。ついで３ＬのＷＦＩを該系に２回流し、ついで３Ｌのクエン酸バッファーを流す。ついで該ポンプを排液に付す。
【０３４３】
該希釈ＬＮＰ溶液を貯蔵容器内に４Ｌの目印まで入れる。該ポンプのスイッチを入れ、透過流量が３００ｍＬ／分となり、液体レベルが貯蔵容器内で４Ｌで一定となるように該ポンプの速度を調節する。全ての該希釈ＬＮＰ溶液が該貯蔵容器に移ったら、該ポンプを停止させる。該ポンプ速度を、必要に応じて調節することにより、該希釈ＬＮＰ溶液を２４０分で３６００ｍＬに濃縮する。
【０３４４】
第２工程は、エタノールクエン酸バッファーをリン酸緩衝食塩水と交換するダイアフィルトレーション工程である。該ダイアフィルトレーション工程は３時間を要し、この場合も、流量を注意深くモニターする必要がある。この工程中、該エタノール濃度をヘッドスペースＧＣによりモニターする。３時間後（２０ダイアフィルトレーション容量）、該溶液を約６ｍｇ／ｋｇまたは１．２Ｌの容量まで濃縮するために第２濃縮を行う。この物質を発熱物質除去済みガラス容器内に集める。該系を高流量で４００ｍＬのＰＢＳで洗浄し、透過ラインを閉じる。この物質を集め、第１収集物に加える。この時点での予想濃度は４．５ｍｇ／ｍＬである。該濃度および容量を決定する。
【０３４５】
該蠕動ポンプの供給管を、７２ＬのＰＢＳ（０．０５μｍ濾過物）を含有する容器内に配置し、流量を、まず、貯蔵容器において３６００ｍＬの一定容量を維持するように調節し、ついで４００ｍＬ／分まで増加させる。該ＬＮＰ溶液をＰＢＳ（２０容量）での１８０分間のダイアフィルトレーションに付す。
【０３４６】
該ＬＮＰ溶液を１．２Ｌの目印まで濃縮し、発熱物質除去済み２Ｌメスシリンダー内に集める。４００ｍＬのＰＢＳを該貯蔵容器に加え、該ポンプを２分間にわたって再循環させる。この洗浄液を集め、該メスシリンダー内に集められたＬＮＰ溶液に加える。
【０３４７】
得られたＬＮＰを粒径、ζ電位、アルコール含量、全脂質含量、封入核酸および全核酸濃度に関して特徴づけする。
【０３４８】
本発明は、記載されている目的を遂行し、記載されている目標および利点ならびにそれらにおいて固有のものを達成するために十分に適合化される、と当業者は容易に認識するであろう。好ましい実施形態の現在の代表例として本明細書に記載されている方法および組成物は典型例であり、本発明の範囲を限定するものではない。本発明の精神に包含され特許請求の範囲により定められるそれらにおける変更および他の用途が当業者において見出されるであろう。
【０３４９】
表５：ＩＤＨ１関連ＮＣＢＩ  Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号
ＮＭ  ０５８９６  −  配列番号５１６；
ホモサピエンス（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）ＩＤＨ１；
ＧＩ：２８１７８８２４。
【０３５０】
【表１３】
2014522242.tif 000031
2014522242.tif 000032
ＣＡＰ＝任意の末端キャップ；例えば、図５を参照されたい。
【０３５１】
全てのＳｔａｂ化学は、本発明の二重らせんのために互いに組合せて（例えば、センスおよびアンチセンス鎖化学の組合せとして）用いられることが可能であり、あるいは、例えば本発明の一本鎖核酸分子の単離において用いられることが可能である。全てのＳｔａｂ化学は、２’−Ｏ−アルキル、２’−デオキシ−２’−フルオロ、２’−デオキシ、ＬＮＡもしくは他の修飾ヌクレオチドを有する３’突出ヌクレオチドまたは非ヌクレオチドを含みうる。全てのＳｔａｂ化学は、典型的には、約１９〜２１ヌクレオチドを含むが、本明細書に記載されているとおりに変動しうる。全てのＳｔａｂ化学はまた、アンチセンスまたはガイド鎖の５’末端から決定された場合の二本鎖核酸二重らせんの１１番目の塩基対位置に、センスまたはパッセンジャー鎖における単一リボヌクレオチドを含みうる（図４Ｃを参照されたい）。全てのＳｔａｂはまた、前記Ｓｔａｂの代わりに、アンチセンス鎖の５’末端からの１４位に２’−デオキシ−２’−フルオロ修飾を、それがその位置においてプリンであるかピリミジンであるかには無関係に、有しうる（図４Ｃを参照されたい）。前記のアンチセンス鎖の全てのＳｔａｂ化学は、該アンチセンス鎖の５’末端からの１、２および／または３位に、２’−デオキシウリジンの代わりに、チミジンを有しうる（図４Ｃを参照されたい）。Ｓ＝センス鎖。ＡＳ＝アンチセンス鎖。＊Ｓｔａｂ２３は、３’−ＣＡＰに隣接した単一リボヌクレオチドを有する。＊Ｓｔａｂ２４およびＳｔａｂ２８は５’末端に単一リボヌクレオチドを有する。＊Ｓｔａｂ２５、Ｓｔａｂ２６、Ｓｔａｂ２７、Ｓｔａｂ３５、Ｓｔａｂ３５Ｇ＊、Ｓｔａｂ３５Ｎ＊、Ｓｔａｂ３５ｒｅｖ＊、Ｓｔａｂ３６、Ｓｔａｂ５０＊、Ｓｔａｂ５３＊、Ｓｔａｂ５３Ｎ＊およびＳｔａｂ５４は５’末端に３個のリボヌクレオチドを有する。＊Ｓｔａｂ２９、Ｓｔａｂ３０、Ｓｔａｂ３１、Ｓｔａｂ３３およびＳｔａｂ３４の、５’末端からの最初の３個のヌクレオチド位置のいずれかのプリンは、リボヌクレオチドである。ｐ＝ホスホロチオアート結合。†Ｓｔａｂ３５は、３’突出に２’−Ｏ−メチルＵを、そして５’末端に３個のリボヌクレオチドを有する。†Ｓｔａｂ３６は、標的配列に相補的である２’−Ｏ−メチル突出（天然に存在する突出）、および５’末端の３個のリボヌクレオチドを有する。‡−Ｓｔａｂ０４Ｈ、Ｓｔａｂ０６Ｃ、Ｓｔａｂｌ０７Ｈ、Ｓｔａｂ０７ｍＵ、Ｓｔａｂ０９Ｈ、Ｓｔａｂ１６Ｃ、Ｓｔａｂ１６Ｈ、Ｓｔａｂ１８Ｃ、Ｓｔａｂ１８Ｈ、Ｓｔａｂ５２Ｈ、Ｓｔａｂ０５Ｃ、Ｓｔａｂ０５Ｎ、Ｓｔａｂ１０Ｃ、Ｓｔａｂ１０Ｎ、Ｓｔａｂ３５Ｇ＊、Ｓｔａｂ３５Ｎ＊、Ｓｔａｂ３５Ｎ＊、Ｓｔａｂ３５ｒｅｖ＊、Ｓｔａｂ５０＊、Ｓｔａｂ５３＊、Ｓｔａｂ５３Ｎ＊、Ｓｔａｂ５４は２個の２’−Ｏ−メチルＵ３’突出を有する。Ｓｔａｂ３５Ｇ＊、Ｓｔａｂ３５Ｎ＊、Ｓｔａｂ３５ｒｅｖ＊、Ｓｔａｂ５０＊、Ｓｔａｂ５３＊およびＳｔａｂ５３Ｎ＊は、５’末端から決定された場合のガイド鎖の１４位の２’−Ｏ−メチル修飾を許容しない。
【０３５２】
【表１４】
2014522242.tif 000033
【０３５３】
【表１５】
2014522242.tif 000034
2014522242.tif 000035
【０３５４】
【表１６】
2014522242.tif 000036
2014522242.tif 000037
2014522242.tif 000038
2014522242.tif 000039
2014522242.tif 000040
【図１】
2014522242.tif 000042
【図２】
2014522242.tif 000043
【図３】
2014522242.tif 000044
【図４Ａ】
2014522242.tif 000045
【図４Ｂ】
2014522242.tif 000046
【図４Ｃ】
2014522242.tif 000047
【図５】
2014522242.tif 000048
【図６】
2014522242.tif 000049
【図７】
2014522242.tif 000050
【図８】
2014522242.tif 000051
【図９】
2014522242.tif 000052
【図１０】
2014522242.tif 000053
【図１１Ａ】
2014522242.tif 000054
【図１１Ｂ】
2014522242.tif 000055
【図１２】
2014522242.tif 000056
【配列表】
2014522242000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成26年2月6日(2014.2.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＤＨ１または突然変異ＩＤＨ１の発現を抑制する単離された二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子であって、
（ａ）該ｓｉＮＡがセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
（ｂ）各鎖が、独立して、１５〜３０ヌクレオチド長であり、
（ｃ）少なくとも１つの鎖が、配列番号１〜５０６からなる群から選択される少なくとも１５ヌクレオチド配列を含む、単離された二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子。
【請求項２】
ＩＤＨ１または突然変異ＩＤＨ１の発現を抑制する二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子であって、
（ａ）該ｓｉＮＡがセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
（ｂ）各鎖が、独立して、１５〜３０ヌクレオチド長であり、
（ｃ）該アンチセンス鎖が、
５’−ＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧＡＵＡＧ−３’（配列番号４４６）；
５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４５０）；
５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４５１）；
５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４５２）；
５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４７７）；
５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４７８）；
５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４７９）；
５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧ−３’（配列番号４８０）；
５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣＵＡＵＧ−３’（配列番号４９８）；または
５’−ＣＣＣＣＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣ−３’（配列番号５０２）
の少なくとも１５ヌクレオチド配列を含み、ここで、該ヌクレオチドの１以上は化学修飾されていてもよい、二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子。
【請求項３】
該センス鎖が、
５’−ＣＵＡＵＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡ−３’（配列番号７）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号１１）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号１２）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号１３）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号３８）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号３９）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号４０）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号４１）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号５９）；または
５’−ＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵＧＧＧＧ−３’（配列番号６３）
の少なくとも１５ヌクレオチド配列を含み、ここで、該ヌクレオチドの１以上は化学修飾されていてもよい、請求項２記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項４】
該ｓｉＮＡが、
５’−ＣＵＡＵＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡ−３’（配列番号７）および
５’−ＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧＡＵＡＧ−３’（配列番号４４６）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号１１）および
５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４５０）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号１２）および
５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４５１）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号１３）および
５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＧＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４５２）；
５’−ＣＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵ−３’（配列番号３８）および
５’−ＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵＧ−３’（配列番号４７７）；
５’−ＡＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵ−３’（配列番号３９）および
５’−ＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡＵ−３’（配列番号４７８）；
５’−ＵＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡ−３’（配列番号４０）および
５’−ＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧＡ−３’（配列番号４７９）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＵＧＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号４１）および
５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＣＡＡＣＣＵＡＵＧ−３’（配列番号４８０）；
５’−ＣＡＵＡＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵ−３’（配列番号５９）および
５’−ＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣＵＡＵＧ−（配列番号４９８）；または
５’−ＧＧＵＣＡＵＣＡＵＧＣＵＵＡＵＧＧＧＧ−３’（配列番号６３）および
５’−ＣＣＣＣＡＵＡＡＧＣＡＵＧＡＵＧＡＣＣ−３’（配列番号５０２）
のいずれかを含む、請求項３記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項５】
少なくとも１つのヌクレオチドが化学修飾ヌクレオチドである、請求項1〜４のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項６】
少なくとも１つの化学修飾ヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである、請求項５記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項７】
少なくとも１つの化学修飾ヌクレオチドが２’−デオキシヌクレオチドである、請求項５記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項８】
少なくとも１つの化学修飾ヌクレオチドが２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである、請求項５記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項９】
少なくとも１つの非ヌクレオチドを含む、請求項１〜８のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項１０】
少なくとも１つのホスホロチオアートヌクレオチド間結合を含む、請求項1〜９のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項１１】
少なくとも１つの鎖の３’末端、５’末端、または３’および５’末端の両方にキャップを含む、請求項１〜１０のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項１２】
一方または両方の鎖上に１以上の３’突出ヌクレオチドを含む、請求項１〜１１のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項１３】
センス鎖およびアンチセンス鎖を有する式（Ａ）：
【化１】
2014522242.tif 000057
（式中、上側の鎖は該二本鎖核酸分子のセンス鎖であり、下側の鎖はアンチセンス鎖であり、該アンチセンス鎖は配列番号４４６、配列番号４５０、配列番号４５１、配列番号４５２、配列番号４７７、配列番号４７８、配列番号４７９、配列番号４８０、配列番号４９８または配列番号５０２の少なくとも１５ヌクレオチド配列を含み、該センス鎖は、該アンチセンス鎖に対する相補性を有する配列を含む；
各Ｎは、独立して、修飾されていない若しくは化学修飾されているヌクレオチドである、または非ヌクレオチドである；
各Ｂは、存在する又は存在しない末端キャップである；
（Ｎ）は突出ヌクレオチドを表し、それらのそれぞれは、独立して、修飾されていない又は化学修飾されている；
Ｘ１およびＸ２は、独立して、０〜４の整数である；
Ｘ３は１５〜３０の整数である；
Ｘ４は１２〜２７の整数である；
［Ｎ１］−［Ｎ２］−［Ｎ３］は修飾ヌクレオチドまたはリボヌクレオチドであり、ここで、［Ｎ１］−［Ｎ２］−［Ｎ３］は、以下のものからなる群から選択される：
（ａ）［Ｎ１］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ２］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである；
（ｂ）［Ｎ１］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ２］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−デオキシヌクレオチドである；
（ｃ）［Ｎ１］は２’−デオキシヌクレオチドであり、［Ｎ２］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−Ｏ−メチルヌクレオチドである；
（ｄ）［Ｎ１］は２’−デオキシヌクレオチドであり、［Ｎ２］は２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドであり、［Ｎ３］は２’−デオキシヌクレオチドである；および
（ｅ）［Ｎ１］はリボヌクレオチドであり、［Ｎ２］はリボヌクレオチドであり、［Ｎ３］はリボヌクレオチドである）を含む二本鎖短干渉性核酸（ｓｉＮＡ）分子。
【請求項１４】
（ａ）ＮＸ４位における１以上のピリミジンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである；
（ｂ）ＮＸ４位における１以上のプリンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである；
（ｃ）ＮＸ３位における１以上のピリミジンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである；および
（ｄ）ＮＸ３位における１以上のプリンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはそれらのいずれかの組合せである、請求項１３記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項１５】
各Ｘ１およびＸ２＝１または２；Ｘ３＝１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４；およびＸ４＝１５、１６、１７、１８、１９、２０または２１である、請求項１３記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項１６】
１以上のホスホロチオアートヌクレオチド間結合を含む、請求項１３記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子。
【請求項１７】
医薬上許容される担体または希釈剤中に請求項1〜１６のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子を含む組成物。
【請求項１８】
ＩＤＨ１または突然変異ＩＤＨ１の作用により又は作用の喪失により引き起こされる状態に罹患したヒト対象の治療方法のための医薬の製造における請求項１〜１６のいずれか1項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子又は請求項１７に記載の組成物の使用であって、該治療方法が、
（ａ）請求項１〜１６のいずれか１項記載の二本鎖ｓｉＮＡ分子、または
（ｂ）請求項１７記載の組成物
の有効量を該対象に投与することを含む、前記使用。
【請求項１９】
該状態が癌である、請求項１８記載の使用。
【国際調査報告】
2014522242.tif 000058
2014522242.tif 000059
2014522242.tif 000060