(57)【要約】  本発明は、｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸、および、そのエステルおよびアミドのプロドラッグを開示し、それは低酸素誘導因子−２α（ＨＩＦ−２α）を安定化することができ、それにより、がん治療のための方法を提供する。さらに、本発明は、｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸および／またはそのプロドラッグを含む組成物を開示し、それはがんを治療するために用いることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式：
【化１】
2014522410.tif 000029
を有する化合物であって、
ここで、Ｒは、以下：
ｉ）−ＯＲ１；
ｉｉ）−ＮＲ２Ｒ３；または
ｉｉｉ）−ＯＭ１；
から選択されて、
Ｒ１は：
ｉ）水素；または
ｉｉ）Ｃ１−Ｃ６直鎖、Ｃ３−Ｃ６分岐またはＣ３−Ｃ６環状アルキル；
であって、
Ｒ２およびＲ３は独立に：
ｉ）水素；
ｉｉ）Ｃ１−Ｃ６直鎖、Ｃ３−Ｃ６分岐またはＣ３−Ｃ６環状アルキル；または
ｉｉｉ）Ｒ２およびＲ３は、一緒になって、２〜７個の炭素原子、ならびに、Ｒ２とＲ３が結合された窒素原子を含む、窒素、酸素、および硫黄から選択される１〜３個のヘテロ原子を有する環を形成することができて；および
Ｍ１はカチオンであって；および
Ｒ４は：
ｉ）−ＯＨ；または
ｉｉ）−ＯＭ２；
であって、および
Ｍ２はカチオンである、
化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、
Ｒが−ＯＲ１であることを特徴とする、
化合物。
【請求項３】
請求項２に記載の化合物であって、
Ｒ１が水素であることを特徴とする、
化合物。
【請求項４】
請求項２に記載の化合物であって、
Ｒ１がメチルであることを特徴とする、
化合物。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物であって、
Ｒ４が−ＯＨであることを特徴とする、
化合物。
【請求項６】
請求項１に記載の化合物であって、
ＲがＭ１であることを特徴とする、
化合物。
【請求項７】
請求項１に記載の化合物であって、
以下の式：
【化２】
2014522410.tif 000030
または
【化３】
2014522410.tif 000031
を有することを特徴とする、
化合物。
【請求項８】
請求項７に記載の化合物であって、
Ｍ１は、ナトリウム、リチウム、カリウム、アンモニウム、および銀から選択されて、および、
Ｍ２は、水素、または、ナトリウム、リチウム、カリウム、アンモニウム、および銀から選択されるカチオンであることを特徴とする、
化合物。
【請求項９】
請求項１に記載の化合物であって、
以下の式：
【化４】
2014522410.tif 000032
を有し、
ここで、Ｍ１はナトリウムまたはアンモニウムであることを特徴とする、
化合物。
【請求項１０】
請求項１に記載の化合物であって、
Ｍ１は、以下の式：
【化５】
2014522410.tif 000033
を有するカチオンであり、
ここで、Ｒａ、ＲｂおよびＲｃはそれぞれ独立に：
ｉ）水素；
ｉｉ）置換または非置換のＣ１−Ｃ１２直鎖、Ｃ３−Ｃ１２分岐、またはＣ３−Ｃ１２環状アルキル；
ｉｉｉ）置換または非置換ベンジル；
であって、
ここで、Ｒａ、ＲｂおよびＲｃのうちの１つまたは複数は、以下から選択される１つまたは複数のユニットにより独立に置換することができ、：
ｉ）Ｃ１−Ｃ１２直鎖、Ｃ３−Ｃ１２分岐、またはＣ３−Ｃ１２環状アルコキシ；
ｉｉ）Ｃ１−Ｃ１２直鎖、Ｃ３−Ｃ１２分岐、またはＣ３−Ｃ１２環状ハロアルコキシ；
ｉｉｉ）ハロゲン；
ｉｖ）ヒドロキシル；
ｖ）チオ；または
ｖｉ）Ｒａ、ＲｂおよびＲｃのうちの１つまたは複数は、カチオン、アニオン、または双性イオンを形成することが可能な、１つまたは複数のユニットを含むことができる
ことを特徴とする、
化合物。
【請求項１１】
請求項１０に記載の化合物であって、
前記カチオンＭ１は、以下：
ｉ）２−ヒドロキシエチルアンモニウム［ＨＮ＋Ｈ２（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）］；
ｉｉ）メチル−２−ヒドロキシエチルアンモニウム［Ｈ２Ｎ＋（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）］；
ｉｉｉ）ジ−（２−ヒドロキシエチル）アンモニウム［Ｈ２Ｎ＋（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）２］；
ｉｖ）トリ−（２−ヒドロキシエチル）アンモニウム［ＨＮ＋（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）３］；および
ｖ）トリス−（ヒドロキシメチル）メチルアンモニウム［Ｈ３Ｎ＋Ｃ［（ＣＨ２ＯＨ）］３］
から選択されることを特徴とする、
化合物。
【請求項１２】
請求項１に記載の化合物であって、
前記化合物は、リジン、オルニチン、アルギニン、およびグルタミンから選択されるアミノ酸の塩であることを特徴とする、
化合物。
【請求項１３】
請求項１に記載の化合物であって、
以下の式：
【化６】
2014522410.tif 000034
または
【化７】
2014522410.tif 000035
を有することを特徴とする、
化合物。
【請求項１４】
請求項１に記載の化合物であって、
以下：
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸ナトリウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸二ナトリウム
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸カリウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸二カリウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸アンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸二アンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸ナトリウムカリウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸ナトリウムアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸カリウムアンモニウム；
ビス｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸カルシウム；
ビス｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸マグネシウム；
ビス｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸バリウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸メチルアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸カルシウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸マグネシウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸バリウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸ジメチルアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸ジエチルアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸トリエチルアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸ジメチルエチルアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸メチルジエチルアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸２−ヒドロキシエチルアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸メチル−２−ヒドロキシエチルアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸ジ−（２−ヒドロキシエチル）アンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸トリ−（２−ヒドロキシエチル）アンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸トリス−（ヒドロキシメチル）メチルアンモニウム；および
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸Ｎ−ベンジル−２−（ベンジルアミノ）エタンアミニウム
から選択されることを特徴とする、
化合物。
【請求項１５】
請求項１に記載の化合物であって、
Ｒが−ＮＲ２Ｒ３であることを特徴とする、
化合物。
【請求項１６】
請求項１に記載の化合物であって、
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立に、水素またはメチルであることを特徴とする、
化合物。
【請求項１７】
請求項１に記載の化合物であって、
Ｒが−ＮＨ２であることを特徴とする、
化合物。
【請求項１８】
化合物であって、以下：
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸メチル；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸エチル；
５−（３−フルオロフェニル）−Ｎ−（２−アミノ−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシピリジン−２−イルアミド；
５−（３−フルオロフェニル）−Ｎ−（２−メチルアミノ−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシピリジン−２−イルアミド；および
５−（３−フルオロフェニル）−Ｎ−（２−ジメチルアミノ−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシピリジン−２−イルアミド
から選択されることを特徴とする、
化合物。
【請求項１９】
組成物であって、
有効量の、請求項１に記載の１つまたは複数の化合物を含む、
組成物。
【請求項２０】
低酸素誘導因子−２α（ＨＩＦ−２α）を安定化するための組成物であって：
Ａ）以下の式：
【化８】
2014522410.tif 000036
を有する有効量の化合物、
ここで、Ｒは、以下：
ｉ）−ＯＲ１；
ｉｉ）−ＮＲ２Ｒ３；または
ｉｉｉ）−ＯＭ１；
から選択されて、
Ｒ１は：
ｉ）水素；または
ｉｉ）Ｃ１−Ｃ６直鎖、Ｃ３−Ｃ６分岐またはＣ３−Ｃ６環状アルキル；
であって、
Ｒ２およびＲ３は独立に：
ｉ）水素；
ｉｉ）Ｃ１−Ｃ６直鎖、Ｃ３−Ｃ６分岐またはＣ３−Ｃ６環状アルキル；または
ｉｉｉ）Ｒ２およびＲ３は、一緒になって、２〜７個の炭素原子、ならびに、Ｒ２とＲ３が結合された窒素原子を含む、窒素、酸素、および硫黄から選択される１〜３個のヘテロ原子を有する環を形成することができて；および
Ｍ１はカチオンであって；および
Ｒ４は：
ｉ）−ＯＨ；または
ｉｉ）−ＯＭ２；
であって、
Ｍ２はカチオンであって；および
Ｂ）１つまたは複数の薬学的に許容できる成分
を含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項２１】
請求項２０に記載の組成物であって、
Ｒが−ＯＲ１であることを特徴とする、
組成物。
【請求項２２】
請求項２０に記載の組成物であって、
Ｒ１が水素であることを特徴とする、
組成物。
【請求項２３】
請求項２０に記載の組成物であって、
Ｒ１がメチルであることを特徴とする、
組成物。
【請求項２４】
請求項２０に記載の組成物であって、
Ｒ４が−ＯＨであることを特徴とする、
組成物。
【請求項２５】
請求項２０に記載の組成物であって、
ＲがＭ１であることを特徴とする、
組成物。
【請求項２６】
請求項２０に記載の組成物であって、
以下の式：
【化９】
2014522410.tif 000037
または
【化１０】
2014522410.tif 000038
を有することを特徴とする、
組成物。
【請求項２７】
請求項２６に記載の組成物であって、
Ｍ１は、ナトリウム、リチウム、カリウム、アンモニウム、および銀から選択されて、および、
Ｍ２は、水素、または、ナトリウム、リチウム、カリウム、アンモニウム、および銀から選択されるカチオンであることを特徴とする、
組成物。
【請求項２８】
請求項２６に記載の組成物であって、
以下の式：
【化１１】
2014522410.tif 000039
を有し、
ここで、Ｍ１は、ナトリウムまたはアンモニウムであることを特徴とする、
組成物。
【請求項２９】
請求項２０に記載の組成物であって、
Ｍ１は、以下の式：
【化１２】
2014522410.tif 000040
を有するカチオンであって
ここで、Ｒａ、ＲｂおよびＲｃは、それぞれ独立に：
ｉ）水素；
ｉｉ）置換または非置換のＣ１−Ｃ１２直鎖、Ｃ３−Ｃ１２分岐、またはＣ３−Ｃ１２環状アルキル；
ｉｉｉ）置換または非置換ベンジル；
であって、
ここで、Ｒａ、ＲｂおよびＲｃのうちの１つまたは複数は、以下から選択される１つまたは複数のユニットにより独立に置換することができ、：
ｉ）Ｃ１−Ｃ１２直鎖、Ｃ３−Ｃ１２分岐、またはＣ３−Ｃ１２環状アルコキシ；
ｉｉ）Ｃ１−Ｃ１２直鎖、Ｃ３−Ｃ１２分岐、またはＣ３−Ｃ１２環状ハロアルコキシ；
ｉｉｉ）ハロゲン；
ｉｖ）ヒドロキシル；
ｖ）チオ；または
ｖｉ）Ｒａ、ＲｂおよびＲｃのうちの１つまたは複数は、カチオン、アニオン、または双性イオンを形成することが可能な、１つまたは複数のユニットを含むことができる
ことを特徴とする、
組成物。
【請求項３０】
請求項２９に記載の組成物であって、
前記カチオンＭ１は、以下：
ｉ）２−ヒドロキシエチルアンモニウム［ＨＮ＋Ｈ２（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）］；
ｉｉ）メチル−２−ヒドロキシエチルアンモニウム［Ｈ２Ｎ＋（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）］；
ｉｉｉ）ジ−（２−ヒドロキシエチル）アンモニウム［Ｈ２Ｎ＋（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）２］；
ｉｖ）トリ−（２−ヒドロキシエチル）アンモニウム［ＨＮ＋（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）３］；および
ｖ）トリス−（ヒドロキシメチル）メチルアンモニウム［Ｈ３Ｎ＋Ｃ［（ＣＨ２ＯＨ）］３］
から選択されることを特徴とする、
組成物。
【請求項３１】
請求項２０に記載の組成物であって、
前記組成物は、リジン、オルニチン、アルギニン、およびグルタミンから選択されるアミノ酸の塩であることを特徴とする、
組成物。
【請求項３２】
請求項２０に記載の組成物であって、
以下の式：
【化１３】
2014522410.tif 000041
または
【化１４】
2014522410.tif 000042
を有することを特徴とする、
組成物。
【請求項３３】
請求項２０に記載の組成物であって、
前記化合物は、以下：
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸ナトリウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸二ナトリウム
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸カリウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸二カリウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸アンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸二アンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸ナトリウムカリウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸ナトリウムアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸カリウムアンモニウム；
ビス｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸カルシウム；
ビス｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸マグネシウム；
ビス｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸バリウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸メチルアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸カルシウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸マグネシウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸バリウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸ジメチルアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸ジエチルアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸トリエチルアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸ジメチルエチルアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸メチルジエチルアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸２−ヒドロキシエチルアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸メチル−２−ヒドロキシエチルアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸ジ（２−ヒドロキシエチル）アンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸トリ（２−ヒドロキシエチル）アンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸トリス（ヒドロキシメチル）メチルアンモニウム；および
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸Ｎ−ベンジル−２−（ベンジルアミノ）エタンアミニウム
から選択されることを特徴とする、
組成物。
【請求項３４】
請求項２０に記載の組成物であって、
Ｒが、−ＮＲ２Ｒ３であることを特徴とする、
組成物。
【請求項３５】
請求項２０に記載の組成物であって、
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立に、水素またはメチルであることを特徴とする、
組成物。
【請求項３６】
請求項２０に記載の組成物であって、
Ｒが、−ＮＨ２であることを特徴とする、
組成物。
【請求項３７】
請求項２０に記載の組成物であって、
以下：
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸メチル；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸エチル；
５−（３−フルオロフェニル）−Ｎ−（２−アミノ−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシピリジン−２−イルアミド；
５−（３−フルオロフェニル）−Ｎ−（２−メチルアミノ−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシピリジン−２−イルアミド；および
５−（３−フルオロフェニル）−Ｎ−（２−ジメチルアミノ−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシピリジン−２−イルアミド
から選択される化合物を含むことを特徴とする、
組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［優先権］
本出願は、２０１１年６月６日に出願された仮出願第６１／４９３，５３４号の利益を主張し、その全体は、参照により本明細書中に援用される。
［分野］
本発明は、｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸、および、そのエステルおよびアミドのプロドラッグを開示し、それは低酸素誘導因子−２α（ＨＩＦ−２α）を安定化することができ、それにより、がん治療のための方法を提供する。さらに、本発明は、｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸および／またはそのプロドラッグを含む組成物を開示し、それは、がんを治療するために用いることができる。
【背景技術】
【０００２】
ノーベル賞受賞者であるＤｒ．Ｊｕｄａｈ  Ｆｏｌｋｍａｎは、全てのがん腫瘍が血管新生依存性であり、それ故に、血管新生の標的化はがん治療のための潜在的手段であることを、１９７１年に最初に提案した。血管新生は、元から存在する微小血管系からの、新しい毛管の成長である。アテローム性動脈硬化からがんまでの幅広い病状が、血管新生の過剰または欠損のいずれかと関連する。
【０００３】
数立法ミリメートルを超える腫瘍増殖は、新しい血管の供給の誘導がなければ発生し得ないことが、現在では広く受け入れられている。したがって、新しい血管系の阻害（血管新生阻害）は、腫瘍が増殖するのに必要な栄養供給を腫瘍に与えないことにより、非化学療法または非放射線療法の方法をがん治療に提供することができる。通常は静止しているが、内皮細胞は、様々な刺激に応答して、新しい血管系の形成に関与している。これらの刺激は、それらの起源を様々な形態で有することができる。
【発明の概要】
【０００４】
腫瘍内に新しい血管網を形成する内皮細胞は、腫瘍自身によって産生される血管新生刺激に応答する。これらの刺激のうち最も良く知られているのは、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）である。ヒト腫瘍において遍在性であることが分かっているので、ＶＥＧＦレベルの増加は、腫瘍増殖の増加速度と相関する。したがって、ＶＥＧＦの抑制は、腫瘍（原発性および転移性）の増殖速度を調節するための方法を示し、存在する腫瘍を縮小させることのできる手段を提供する。
【０００５】
したがって、腫瘍細胞によるＶＥＧＦ発現を抑制するための化合物、組成物、および方法に対する長年にわたる未解決のニーズがある。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１Ａ】様々な濃度のＨＩＦ−２α安定化剤｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸における、酸素正常状態下（２１％Ｏ２）の野生型ミューリン胚線維芽細胞と、低酸素状態下（１％Ｏ２）の細胞とを比較した、ＶＥＧＦのｍＲＮＡ発現の減少を示す。本開示のＨＩＦ−２α安定化剤は、コントロールに対して、１、１０および１００μＭの濃度で試験された。データはＶＥＧＦ  ｍＲＮＡの相対量を示し、左から右に順に、酸素正常状態コントロール（黒塗り）、ＨＩＦ２−α安定化剤酸素正常状態、低酸素コントロールおよびＨＩＦ２−α安定化剤低酸素である。ＶＥＧＦ  ｍＲＮＡの存在量は、低酸素状態下で、ＨＩＦ−２α安定化剤の全ての濃度において劇的に減少する（各濃度に関して一番右のデータ）。
【図１Ｂ】様々な濃度のＨＩＦ−２α安定化剤｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸における、酸素正常状態下（２１％Ｏ２）の、ＨＩＦ１−αが欠損のミューリン胚線維芽細胞すなわちＨＩＦ−１α−／−線維芽細胞と、低酸素状態下（１％Ｏ２）の細胞とを比較した、ＶＥＧＦ  ｍＲＮＡ発現の減少を示す。本開示のＨＩＦ−２α安定化剤は、コントロールに対して、１、１０および１００μＭの濃度で試験された。データは、ＶＥＧＦ  ｍＲＮＡの相対量を示し、左から右に順に、酸素正常状態コントロール（黒塗り）、ＨＩＦ２−α安定化剤酸素正常状態、低酸素コントロールおよびＨＩＦ２−α安定化剤低酸素である。ＶＥＧＦ  ｍＲＮＡの存在量は、ＨＩＦ１−α欠損のマウスでさえ、低酸素状態下で、ＨＩＦ−２α安定化剤の全ての濃度において劇的に減少する（各濃度に関して一番右のデータ）。
【図２Ａ】様々な濃度のＨＩＦ−２α安定化剤｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸における、酸素正常状態下（２１％Ｏ２）の野生型ミューリン胚線維芽細胞と、低酸素状態下（１％Ｏ２）の細胞とを比較した、ホスホグリセレートキナーゼ（ＰＧＫ）のｍＲＮＡ発現の減少を示す。本開示のＨＩＦ−２α安定化剤は、コントロールに対して、１、１０および１００μＭの濃度で試験した。データはＰＧＫの存在の相対量を示し、左から右に順に、酸素正常状態コントロール（黒塗り）、ＨＩＦ２−α安定化剤酸素正常状態、低酸素コントロールおよびＨＩＦ２−α安定化剤低酸素である。ホスホグリセレートキナーゼ（ＰＧＫ）ｍＲＮＡの存在量は、低酸素状態で、ＨＩＦ−２α安定化剤の全ての濃度において劇的に減少する。
【図２Ｂ】様々な濃度のＨＩＦ−２α安定化剤｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸における、酸素正常状態下（２１％Ｏ２）の、ＨＩＦ１−αが欠損のミューリン胚線維芽細胞すなわちＨＩＦ−１α−／−線維芽細胞と、低酸素状態下（１％Ｏ２）の細胞とを比較した、ホスホグリセレートキナーゼ（ＰＧＫ）のｍＲＮＡ発現の減少を示す。本開示のＨＩＦ−２α安定化剤は、コントロールに対して、１、１０および１００μＭの濃度で試験した。データはＰＧＫの存在の相対量を示し、左から右に順に、酸素正常状態コントロール（黒塗り）、ＨＩＦ２−α安定化剤酸素正常状態、低酸素コントロールおよびＨＩＦ２−α安定化剤低酸素である（バーＤ、最も淡い灰色）。ホスホグリセレートキナーゼ（ＰＧＫ）ｍＲＮＡの存在量は、ＨＩＦ１−α欠損のマウスでさえ、低酸素状態下で、ＨＩＦ−２α安定化剤の全ての濃度において劇的に減少する（各濃度に関して一番右のデータ）。
【図３】顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）での処置と比較した、Ｂ１６Ｆ１０メラノーマ腫瘍を有するＣ５７ＢＬ／６マウスでの腫瘍増殖の減少を示す。図３は、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤単独（△）が、ＧＭ−ＣＳＦ単独（■）と同程度に腫瘍増殖を減少させ、腫瘍増殖の阻害は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（コントロール）（◆）と比較して、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤をＧＭ−ＣＳＦ（Ｘ）と組み合わせて用いられる場合に相加的であることを示す。
【図４】腫瘍体積の減少に関する、送達方法の有効性の評価における、腫瘍内（Ｉ．Ｔ．）と腹腔内（Ｉ．Ｐ．）でのＧＭ−ＣＳＦ送達の比較を示す。本開示のＨＩＦ−２α安定化剤は、全てのケースにおいてＩ．Ｐ．で送達した。（△）で示されるデータは、ＧＭ−ＣＳＦと組み合わせた本開示のＨＩＦ−２α安定化剤（どちらもＩ．Ｐ．送達）を表し、（◆）で示されるデータは、ＧＭ−ＣＳＦ（＋）ビヒクル（どちらもＩ．Ｐ．送達）を表し、（■）で示されるデータは、Ｉ．Ｔ．送達のＧＭ−ＣＳＦ（＋）Ｉ．Ｐ．送達のビヒクルを表し、および、（ｘ）で示されるデータは、Ｉ．Ｔ．送達のＧＭ−ＣＳＦと組み合わせたＩ．Ｐ．送達の本開示のＨＩＦ−２α安定化剤を表す。
【図５】図３に示される注入方法に関するＰｍｅｌ１７  ｍＲＮＡ発現を用いて決定される肺転移の相対量を示し、ここで、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤はＩＰ投与されて、ＧＭ−ＣＳＦはＩＴ投与された。Ａ群は、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤およびＧＭ−ＣＳＦの両方に関するビヒクルコントロールである。Ｂ群は、ＧＭ−ＣＳＦ（＋）５％デキストラン中２０％ＰＥＧ（本開示のＨＩＦ−２α安定化剤の投与のためのビヒクル）を表す。Ｃ群は、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤（＋）ＰＢＳ（ＧＭ−ＣＳＦの投与のためのビヒクル）を表す。Ｄ群は、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤およびＧＭ−ＣＳＦを表す。本開示のＨＩＦ−２α安定化剤は、そのビヒクル（５％デキストラン中２０％ＰＥＧ）で送達してＩ．Ｐ．投与し、ＧＭ−ＣＳＦは、そのビヒクル（ＰＢＳ）で送達してＩ．Ｔ投与した。本開示のＨＩＦ−２α安定化剤を有する群のみが、Ｐｍｅｌ  １７  ｍＲＮＡ発現により測定される転移の減少を示したことに留意されたい。
【図６】ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴトランスジェニックマウス由来の細胞を同所性に１つの乳腺へ注入されたＣ５７ＢＬ／６マウスに関する腫瘍体積の減少を示す。動物は、１週間に３回、ビヒクルで（◆）、１２ｍｇ／ｋｇの本開示のＨＩＦ−２α安定化剤で（■）、または１７．５ｇ／ｋｇの本開示のＨＩＦ−２α安定化剤で（●）、処置される。
【図７】試験過程の動物の生存数を示し、ここで、マウスは、本明細書に記載のように、およそ１０７のＡ２７８０／ＣＰ腫瘍細胞で接種される。（◆）で示される線は、コントロール群を表し、（▲）で示される線は、１８ｍｇ／ｋｇの本開示のＨＩＦ−２α安定化剤の投与群を表し、および、（■）で示される線は、３６ｍｇ／ｋｇの本開示のＨＩＦ−２α安定化剤の投与群を表す。
【図８】本開示の試験にわたる、Ａ２７８０／ＣＰ処置マウスの腫瘍量の変化を示す。コントロール群を（◆）で表し、１８ｍｇ／ｋｇの本開示のＨＩＦ−２α安定化剤の投与群を（▲）で表し、および、３６ｍｇ／ｋｇの本開示のＨＩＦ−２α安定化剤の投与群を（■）で表す。
【図９】本開示の試験にわたる、Ａ２７８０／ＣＰ処置マウスの体重の変化（％）を示す。コントロール群を（◆）で表し、１８ｍｇ／ｋｇの本開示のＨＩＦ−２α安定化剤の投与群を（▲）で表し、および、３６ｍｇ／ｋｇの本開示のＨＩＦ−２α安定化剤の投与群を（■）で表す。
【図１０】コントロール（ビヒクル）と比べた、１０μＭのヒト末梢血単球でのｓ−ＶＥＧＦＲ−１の誘導を示す。
【図１１Ａ】本開示のＨＩＦ−２α安定化剤で処理された細胞中のＨＩＦ−２αタンパク質の増加（ｐ＝０．００１）、ＨＩＦ−１αでは対応する増加がない（ｐ＝０．１０５）。
【図１１Ｂ】ＧＭ−ＣＳＦで処理された単球によるｓＶＥＧＦＲ−１産生は、単球が本開示のＨＩＦ−２α安定化剤でさらに処置された場合に、タンパク質および転写レベルの両方で有意に増加した。（それぞれｐ＝０．００７およびｐ＝０．０３３）。
【図１１Ｃ】リアルタイムＰＣＲによるＶＥＧＦ転写レベルの評価は、ＧＭ−ＣＳＦはＶＥＧＦ産生を増加させた一方で、ＧＭ−ＣＳＦのみで刺激された単球、またはＧＭ−ＣＳＦおよび本開示のＨＩＦ−２α安定化剤で刺激された単球の間で、タンパク質または転写レベルのいずれかにおいて、ＶＥＧＦ産生に違いがなかったことを明示した（それぞれｐ＝０．１３３および０．５５６）。
【図１１Ｄ】ＧＭ−ＣＳＦのみで刺激された単球または本開示のＨＩＦ−２α安定化剤で共刺激された単球からのｓＶＥＧＦＲ−１産生には、タンパク質または転写レベルのいずれかにおいて、違いはなかった（それぞれｐ＝０．３０６およびｐ＝０．５６６）。
【図１１Ｅ】本開示のＨＩＦ−２α安定化剤は、単球の、ＶＥＧＦタンパク質およびｍＲＮＡの産生を増加させた（それぞれｐ＝０．０１１およびｐ＝０．００７）。
【図１１Ｆ】本開示のＨＩＦ−２α安定化剤は、コントロールマクロファージからのｓＶＥＧＦＲ−１転写を誘導したが（ｐ＝０．０３６）、ＨＩＦ−２α−欠損マクロファージからの転写は誘導しなかった（ｐ＝０．８８１）。
【図１２Ａ】ＧＭ−ＣＳＦと本開示のＨＩＦ−２α安定化剤との組み合わせ処置は、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤は、いずれかの単独処置と比べて、腫瘍増殖をさらに減少させた（ｐ<０．００１）。
【図１２Ｂ】本開示のＨＩＦ−２α安定化剤で処置されたマウスでの生存期間中央値（２０ｍｍ３の腫瘍直径になる時間として定義された）の３日の増加（ｐ＝０．０２３）。
【図１３Ａ】増加したレベルのｓＶＥＧＦＲ−１が、ＧＭ−ＣＳＦおよび本開示のＨＩＦ−２α安定化剤の両方で処置されたマウスの腫瘍内に検出された（ｐ＝０．０３１）。
【図１３Ｂ】ＧＭ−ＣＳＦは、単独で、または本開示のＨＩＦ−２α安定化剤と組み合わせて、腫瘍内ＶＥＧＦのレベルを、ビヒクルコントロールで処置されたマウスで観察されるレベルを超えて増加させなかった（ｐ＝０．４９０）。
【図１３Ｃ】ＧＭ−ＣＳＦと本開示のＨＩＦ−２α安定化剤との組み合わせ処置は、おそらくｓＶＥＧＦＲ−１の誘導を介して、メラノーマを有するマウスでの腫瘍血管分布を有意に減少させた（ｐ<０．００１）。
【図１４Ａ】本開示のＨＩＦ−２α安定化剤は、アイソタイプコントロール抗体で処置されたマウスでの腫瘍増殖を減少させたが（ｐ<０．００１）、抗−ｓＶＥＧＦＲ−１中和抗体でさらに処置されたマウスでの腫瘍増殖に対しては効果がなかった（ｐ＝０．２４５）。
【図１４Ｂ】本開示のＨＩＦ−２α安定化剤は、コントロール抗体で処置されたマウスでの腫瘍血管分布を減少させたが（ｐ＝０．０２２）、ｓＶＥＧＦＲ−１中和Ａｂで処置されたマウスでは減少させなかった。
【図１５】本開示のＨＩＦ−２α安定化剤は、ＬｙｓＭｃｒｅコントロールマウス（ＬｙｓＭ駆動的ｃｒｅリコンビナーゼを含むが、ｆｌｏｘｅｄ対立遺伝子は含まない）での腫瘍増殖を阻害した。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
本明細書に記載の材料、化合物、組成物、物品、および方法は、以下の開示内容の具体的な態様の詳細説明および本明細書に包含される実施例の参照により容易に理解され得る。
【０００８】
本発明の材料、化合物、組成物、物品、デバイス、および方法が、開示および説明される前に、以下に記載の態様は特定の合成方法または特定の試薬に限定されず、したがってもちろん、変更してよいことが理解されよう。本明細書で用いられる専門用語は特定の態様を説明する目的のみであり、限定することを意図しないこともまた、理解されよう。
【０００９】
また、明細書全体を通じて、様々な刊行物が参照される。開示内容が関連する技術水準をより完全に説明するために、これらの刊行物の開示はそれらの全体で、参照により、本出願へ援用される。開示される引用文献はまた、個々に、および具体的に、引用文献に含まれ、その依拠する引用文献の文中で説明される物質に関して、参照により本明細書中に援用される。
【００１０】
［一般定義］
本明細書において、および以下の請求項において、多くの用語に対して参照がされて、それは以下の意味を有することが定義される：
【００１１】
本明細書中の全ての％、比率および割合は、別段の定めのない限り、重量による。全ての温度は、別段の定めのない限り、セ氏温度（℃）である。
【００１２】
「薬学的に許容できる」は、生物学的に望ましくないものでない、またはその他の点でも望ましくないものではない物質を意味し、すなわち、その物質は、臨床上受け入れ難い生物学的作用を引き起こさずに、または、それを含む医薬組成物の他の構成要素のいずれかと有害な様式で相互作用せずに、関連のある活性化合物と一緒に個体に投与することができる。
【００１３】
構成要素の重量％は、明確に別段の記述がない限り、構成要素が包含される製剤または組成物の全重量に基づく。
【００１４】
本明細書において用いられる「有効量」は、「用量での、および所望のまたは治療の結果を達成するために必要な期間での、効果的な、１つまたは複数の本開示の化合物の量」を意味する。有効量は、治療されるヒトまたは動物の病状、年齢、性別、および体重のような、当技術分野で知られている因子により変更してよい。特定の投与計画が本明細書中の実施例に記載され得るが、当業者は、投与計画を変更して最適な治療の反応を与え得ることを理解するであろう。例えば、何回かの分割した投与量を毎日投与してよく、または、投与量は、治療状況の緊急性により示されるように比例的に減少してよい。加えて、本開示の組成物は、治療量を達成するために必要な頻度で投与することができる。
【００１５】
「混合（ａｄｍｉｘｔｕｒｅ）」または「融和（ｂｌｅｎｄ）」は、一般的に本明細書中で用いられ、２以上の異なる構成要素の物理的な結合を意味する。
【００１６】
本明細書中で用いられる「賦形剤」は、１つまたは複数の本開示の阻害剤に含まれてよい、または組み合わせてよい、任意の他の化合物を含み、治療的に、または生物学的に活性の化合物ではない。したがって、賦形剤は、薬学的に、または生物学的に許容できる、または関連があるべきである（例えば、賦形剤は通常、対象に対して非毒性であるべきである）。「賦形剤」は、一つのそのような化合物を含み、複数の賦形剤を含むこともまた意図される。
【００１７】
本明細書中で用いられる「賦形剤」は、１つまたは複数の本開示の阻害剤に含まれてよい、または組み合わせてよい、任意の他の化合物を含み、治療的に、または生物学的に活性の化合物ではない。したがって、賦形剤は、薬学的に、または生物学的に許容できる、または関連があるべきである（例えば、賦形剤は通常、対象に対して非毒性であるべきである）。「賦形剤」は、一つのそのような化合物を含み、複数の賦形剤を含むこともまた意図される。
【００１８】
本明細書において用いられる「対象」は、個体を意味する。このように、「対象」は、飼い慣らされた動物（例えば、ネコ、イヌなど）、家畜（例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギなど）、実験動物（例えば、マウス、ウサギ、ラット、モルモットなど）、および鳥類を含み得る。「対象」はまた、哺乳類、例えば霊長類またはヒトも含み得る。
【００１９】
「減少させる（ｒｅｄｕｃｅ）」またはその用語の他の形態、例えば「減少する（ｒｅｄｕｃｉｎｇ）」または「減少（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）」は、事象または特性（例えば血管漏出）を低くすることを意味する。これは典型的に、ある標準または期待値との関連であり、言い換えると、それは相対的であるが、常にその標準または相対値が参照される必要はないことが理解されよう。
【００２０】
用語「治療する（ｔｒｅａｔ）」またはその用語の他の形態、例えば「治療された（ｔｒｅａｔｅｄ）」または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、本発明の化合物の投与が、宿主での疾患または障害を和らげる、および／または、障害（例えば、血管漏出）と関連する特定の特性または事象を減少させる、阻害する、または除去することを意味するために本明細書中で用いられる。このように、用語「治療」は、特に、宿主が疾患にかかりやすいが、まだ疾患と診断されていない場合に、宿主で障害が生じるのを予防すること；障害を阻害すること；および／または、障害を和らげる、または覆すことを含む。本発明の方法が障害を予防することを目的とする限りにおいて、用語「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」は、病状が完全に阻止されることを要求しないことが理解されよう。むしろ、本明細書において用いられる用語「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」は、本発明の化合物の投与が疾患の発症の前に生じ得るように、熟練者が障害を起こしやすい集団を同定する能力を指す。その用語は、病状が完全に回避されることを意味しない。
【００２１】
本明細書の説明および請求項の全体にわたって、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」およびその用語の他の形態、例えば「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」は、制限されないが、包含すること（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）を意味し、例えば、他の添加剤、構成要素、整数、またはステップを排除する（ｅｘｃｌｕｄｅ）ことを意図しない。
【００２２】
説明および添付の請求項に用いられる単数形「ａ」「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに別段の指示をしない限り、複数形の指示対象を含む。したがって、例えば、「組成物（ａ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）」との言及は、２以上のそのような組成物の混合物を含み、「化学療法剤（ａ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｇｅｎｔ）」との言及は、２以上のそのような化学療法剤の混合物を含み、「化合物（ｔｈｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」との言及は、２以上のそのような化合物の混合物、例えばその塩などを含む。
【００２３】
「随意的」または「場合により」は、その後に記載される事象または状況が、生じ得る、または生じ得ないこと、および、その記載はその事象または状況が生じる事例および生じない事例を含むことを意味する。
【００２４】
範囲は、本明細書において、「約」ある特定の値から、および／または、「約」別の特定の値までとして表すことができる。そのような範囲が表される場合、別の態様は、そのある特定の値から、および／または、その別の特定の値までを含む。同様に、前に「約」を用いて値が近似値として表される場合は、その特定の値は別の態様を形成することが理解されよう。さらに、それぞれの範囲のエンドポイントは、他のエンドポイントとの関連でどちらも重要であり、他のエンドポイントとは独立であることが理解されよう。本明細書に開示される多くの値が存在し、それぞれの値もまた、その値自体に加えて、「約」その特定の値として本明細書中で開示されることもまた理解されよう。例えば、値「１０」が開示される場合は、「約１０」もまた開示される。値が開示される場合は、熟練者により適切に理解されるように、「それ未満、またはそれと等しい」値、「それより大きい、またはそれと等しい値」、および、値間の可能な範囲もまた開示されることもまた理解されよう。例えば、値「１０」が開示される場合は、「１０未満または１０と等しい」および「１０より大きいまたは１０と等しい」もまた開示される。本出願の全体にわたって、データは多くの異なる形式で与えられること、および、このデータは、エンドポイントとスタートポイントおよびそのデータポイントの任意の組み合わせに関する範囲を表すこともまた、理解されよう。例えば、特定のデータポイント「１０」と特定のデータポイント「１５」が開示される場合、１０および１５よりも大きい、以上、未満、以下、および、１０および１５と等しい、ならびに、１０および１５の間が開示されるとみなされることが理解されよう。２つの特定のユニットの間の各ユニットもまた開示されることもまた理解されよう。例えば、１０および１５が開示される場合、１１、１２、１３、および１４もまた開示される。
【００２５】
「ＶＥＧＦ−依存性がん（ＶＥＧＦ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃａｎｃｅｒ）」、「ＶＥＧＦ依存性がん（ＶＥＧＦ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃａｎｃｅｒｓ）」「ＶＥＧＦ−依存性腫瘍（ＶＥＧＦ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｔｕｍｏｒ）」または「ＶＥＧＦ依存性腫瘍（ＶＥＧＦ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｔｕｍｏｒｓ）」は、増殖がＶＥＧＦに依存するがんを指す。
【００２６】
本開示の目的に関して、用語「Ｃ１−Ｃ４直鎖、Ｃ３−Ｃ４分岐またはＣ３−Ｃ４環状アルキル」は、以下の、メチル（Ｃ１）、エチル（Ｃ２）、ｎ−プロピル（Ｃ３）、イソ−プロピル（Ｃ３）、シクロプロピル（Ｃ３）、ｎ−ブチル（Ｃ４）、ｓｅｃ−ブチル（Ｃ４）、イソ−ブチル（Ｃ４）、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｃ４）およびシクロブチル（Ｃ４）のユニットを含む。
【００２７】
本発明は、以下の式を有する化合物を開示する：
【化１】
2014522410.tif 000002
【００２８】
ここで、Ｒは、以下：
ｉ）−ＯＲ１；
ｉｉ）−ＮＲ２Ｒ３；または
ｉｉｉ）−ＯＭ１；
から選択されて、
Ｒ１は：
ｉ）水素；または
ｉｉ）Ｃ１−Ｃ６直鎖、Ｃ３−Ｃ６分岐またはＣ３−Ｃ６環状アルキル；
であって、
Ｒ２およびＲ３は独立に：
ｉ）水素；
ｉｉ）Ｃ１−Ｃ６直鎖、Ｃ３−Ｃ６分岐またはＣ３−Ｃ６環状アルキル；または
ｉｉｉ）Ｒ２およびＲ３は、一緒になって、２〜７個の炭素原子、ならびに、Ｒ２とＲ３が結合された窒素原子を含む、窒素、酸素、および硫黄から選択される１〜３個のヘテロ原子を有する環を形成することができる。
【００２９】
Ｍ１は、本明細書でさらに後述されるカチオンを表す。
【００３０】
Ｒ４は以下：
ｉ）−ＯＨ；または
ｉｉ）−ＯＭ２；
から選択され、
ここで、Ｍ２は、本明細書でさらに後述されるカチオンである。
【００３１】
以下の式：
【化２】
2014522410.tif 000003
を有する、本開示の化合物｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸は、低酸素誘導因子−２α（ＨＩＦ−２α）を安定化することが見いだされて、後述されるように、内因性血管内皮成長因子阻害剤ｓ−ＶＥＧＦ−１の産生を誘導することにより、抗血管新生作用を示す。
【００３２】
以下の式：
【化３】
2014522410.tif 000004
または
【化４】
2014522410.tif 000005
を有する、本開示の安定化剤の薬学的に許容できる塩もまた、開示される。
【００３３】
ここで、Ｍ１およびＭ２はそれぞれ独立に、１価、２価、または３価のカチオン、すなわち、Ｍ＋、Ｍ２＋、またはＭ３＋である。
【００３４】
本開示の塩の一態様は、以下の式：
【化５】
2014522410.tif 000006
を有する、１価の塩の形態での安定化剤に関する。
【００３５】
本態様の一実施態様は、本開示の安定化剤に関し、ここで、Ｍ１は無機カチオンである。無機カチオンに関する一つの反復（ｉｔｅｒａｔｉｏｎ）は、ナトリウム、リチウム、カリウム、アンモニウム、および銀から選択される。非限定的な例は、以下：
ｉ）｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸ナトリウム；
ｉｉ）｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸カリウム；および
ｉｉｉ）｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸アンモニウム
を含む。
【００３６】
本態様の別の実施態様は、本開示の安定化剤に関し、ここで、Ｍ１は有機カチオンである。有機カチオンに関する一実施態様はアミン類であり、例えば、以下の式：
【化６】
2014522410.tif 000007
を有する塩である。
【００３７】
Ｒａ、ＲｂおよびＲｃはそれぞれ独立に：
ｉ）水素；
ｉｉ）置換または非置換のＣ１−Ｃ１２直鎖、Ｃ３−Ｃ１２分岐、またはＣ３−Ｃ１２環状アルキル；
ｉｉｉ）置換または非置換ベンジル；であり、
ここで、Ｒａ、ＲｂおよびＲｃのうちの１つまたは複数は、以下から選択される１つまたは複数のユニットにより独立に置換することができる：
ｉ）Ｃ１−Ｃ１２直鎖、Ｃ３−Ｃ１２分岐、またはＣ３−Ｃ１２環状アルコキシ；
ｉｉ）Ｃ１−Ｃ１２直鎖、Ｃ３−Ｃ１２分岐、またはＣ３−Ｃ１２環状ハロアルコキシ；
ｉｉｉ）ハロゲン；
ｉｖ）ヒドロキシル；
ｖ）チオ；または
ｖｉ）Ｒａ、ＲｂおよびＲｃのうちの１つまたは複数は、カチオン、アニオン、または双性イオンを形成することができる１つまたは複数のユニットを含むことができる。
【００３８】
本実施態様の一つの反復はカチオンに関し、ここで、Ｒａ、ＲｂおよびＲｃのそれぞれは、水素またはＣ１−Ｃ１２直鎖アルキルである。非限定的な例は、メチルアンモニウム［ＨＮ＋Ｈ２（ＣＨ３）］、ジメチルアンモニウム［ＨＮ＋Ｈ（ＣＨ３）２］、トリメチルアンモニウム［ＨＮ＋（ＣＨ３）３］、エチルアンモニウム［ＨＮ＋Ｈ２（ＣＨ２ＣＨ３）］、ジエチルアンモニウム［ＨＮ＋Ｈ（ＣＨ２ＣＨ３）２］、トリエチルアンモニウム［ＨＮ＋（ＣＨ２ＣＨ３）３］、ジメチルエチルアンモニウム［ＨＮ＋（ＣＨ３）２（ＣＨ２ＣＨ３）］、およびメチルジエチルアンモニウム［ＨＮ＋（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）２］を含む。
【００３９】
本実施態様の別の反復はカチオンに関し、ここで、Ｒａ、ＲｂおよびＲｃのうちの１つまたは複数は、水素、非置換のＣ１−Ｃ１２直鎖、Ｃ３−Ｃ１２分岐、またはＣ３−Ｃ１２環状アルキル、または、置換のＣ１−Ｃ１２直鎖、Ｃ３−Ｃ１２分岐、またはＣ３−Ｃ１２環状アルキルから選択される。一実施態様は、１つまたは複数の、ヒドロキシで置換されたＣ１−Ｃ１２直鎖、Ｃ３−Ｃ１２分岐、またはＣ３−Ｃ１２環状アルキル鎖を有する有機物カチオンに関する。非限定的な例は、２−ヒドロキシエチルアンモニウム（モノエタノールアミンのカチオン、コリネート（ｃｈｏｌｉｎａｔｅ））［ＨＮ＋Ｈ２（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）］、メチル−２−ヒドロキシエチルアンモニウム［Ｈ２Ｎ＋（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）］、ジ−（２−ヒドロキシエチル）アンモニウム［Ｈ２Ｎ＋（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）２］、トリ−（２−ヒドロキシエチル）アンモニウム［ＨＮ＋（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）３］、およびトリス−（ヒドロキシメチル）メチルアンモニウム（トリス−（ヒドロキシメチル）アミノメタンのカチオン）［Ｈ３Ｎ＋Ｃ［（ＣＨ２ＯＨ）］３］を含む。アミノ糖類、例えば、式Ｈ２Ｎ＋（ＣＨ３）ＣＨ２［（ＣＨＯＨ）ｎＣＨ２ＯＨ］を有するアミノ糖類（ここで、ｎは１〜７である）から形成されるカチオンも含まれる。有機物カチオンを形成するのに適切なアミノ糖の非限定的な例は、メグルミン（１−デオキシ−１−メチルアミノ−ソルビトール）である。
【００４０】
本実施態様のさらなる反復は、アミノ酸から形成されるカチオンに関する。非限定的な例は、リジン、オルニチン、アルギニン、グルタミンなどを含む。
【００４１】
本開示の安定化剤の塩を形成するのに適切な有機アミン類の別の態様は、以下のアミン類を含む；Ｒａ、ＲｂおよびＲｃのうちの１つまたは複数は、一緒になって、３〜２０個の原子、および場合により、窒素、酸素および硫黄から選択される１つまたは複数のヘテロ原子を含むことができる複素環を形成する。非限定的な例は、ピペラジン、ピペリジン、モルホリン、チオモルホリンなどを含む。
【００４２】
カチオンを形成する化合物としての使用に適切な別の有機アミンは、ベンザチンを含む。ベンザチンは、モノ−またはジ−カチオン、例えば、以下の式：
【化７】
2014522410.tif 000008
または
【化８】
2014522410.tif 000009
を有するＮ−ベンジル−２−（ベンジルアミノ）エタンアミニウムの塩であり得る。
【００４３】
本開示の塩の別の態様は、以下の式：
【化９】
2014522410.tif 000010
を有する２価の塩の形態での安定化剤に関する。
【００４４】
本態様の一実施態様は、本開示の安定化剤に関し、ここで、Ｍ１は無機カチオンである。無機カチオンに関する一つの反復は、カルシウム、マグネシウム、バリウムなどから選択される。非限定的な例は、以下：
ｉ）ビス｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸カルシウム；
ｉｉ）ビス｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸マグネシウム；および
ｉｉｉ）ビス｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸バリウム
を含む。
【００４５】
薬学的に許容できる塩の別の態様は、以下の塩に関する；ＲはＯＭ１であり、Ｒ４はＯＭ２であり、例えば、以下の式：
【化１０】
2014522410.tif 000011
または
【化１１】
2014522410.tif 000012
を有する塩である。
【００４６】
第一の実施態様は、複数の１価の無機カチオンを含む塩に関する。例えば：
ｉ）｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸二ナトリウム；
ｉｉ）｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸二カリウム；
ｉｉｉ）｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸二アンモニウム；
ｉｖ）｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸ナトリウムカリウム；
ｖ）｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸ナトリウムアンモニウム；および
ｖｉ）｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸カリウムアンモニウムである。
【００４７】
別の実施態様では、ジ−カチオン種を形成することが可能な有機アミン類、例えば、本明細書に記載のベンザチンを用いて、適切な、薬学的に許容できる、本開示の安定化剤の塩を形成することができる。
【００４８】
加えて、本発明は、活性の化合物｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸にインビボで変換されるプロドラッグを開示する。本開示のプロドラッグは、以下の式：
【化１２】
2014522410.tif 000013
を有する。
【００４９】
ここで、Ｒは以下：
ｉ）−ＯＲ１；または
ｉｉ）−ＮＲ２Ｒ３；
から選択され、
Ｒ１はＣ１−Ｃ６直鎖、Ｃ３−Ｃ６分岐またはＣ３−Ｃ６環状アルキルであり；および
Ｒ２およびＲ３は、独立に：
ｉ）水素；
ｉｉ）Ｃ１−Ｃ６直鎖、Ｃ３−Ｃ６分岐またはＣ３−Ｃ６環状アルキル；または
ｉｉｉ）Ｒ１およびＲ２は、一緒になって、２〜７個の炭素原子、ならびに、窒素、酸素、および硫黄から選択される１〜３個のヘテロ原子（Ｒ１とＲ２が結合された窒素原子を含む）を有する環を形成することができる。
【００５０】
本開示のプロドラッグの一態様は、エステル類、すなわち、Ｒ１がＣ１−Ｃ６直鎖、Ｃ３−Ｃ６分岐またはＣ３−Ｃ６環状アルキルである化合物に関する。一実施態様では、Ｒ１はメチル（Ｃ１）であり、それによりプロドラッグ｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸メチルが提供される。別の実施態様では、Ｒ１はエチル（Ｃ２）であり、それによりプロドラッグ｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸エチルが提供される。
【００５１】
さらなる実施態様では、Ｒ１は、Ｃ３−Ｃ４直鎖、分岐または環状アルキル、例えば、ｎ−プロピル（Ｃ３）、イソ−プロピル（Ｃ３）、シクロプロピル（Ｃ３）、ｎ−ブチル（Ｃ４）、ｓｅｃ−ブチル（Ｃ４）、イソ−ブチル（Ｃ４）、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｃ４）およびシクロブチル（Ｃ４）から選択される。
【００５２】
本開示のプロドラッグの別の態様は、アミド類、すなわち、Ｒが−ＮＲ２Ｒ３である化合物に関する。本態様の一実施態様では、Ｒ２およびＲ３は、両方とも水素であり、ここで、Ｒは−ＮＨ２であり、それにより、プロドラッグ５−（３−フルオロフェニル）−Ｎ−（２−アミノ−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシピリジン−２−イルアミドが提供される。別の実施態様では、Ｒ１はメチル（Ｃ１）であり、Ｒ２は水素であり、それにより、プロドラッグ５−（３−フルオロフェニル）−Ｎ−（２−メチルアミノ−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシピリジン−２−イルアミドが提供される。さらに別の実施態様は、Ｒ１およびＲ２は、両方ともメチル（Ｃ１）であり、それにより、プロドラッグ５−（３−フルオロフェニル）−Ｎ−（２−ジメチルアミノ−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシピリジン−２−イルアミドが提供される。
【００５３】
本態様のさらなる実施態様では、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立に、水素、エチル、ｎ−プロピル（Ｃ３）、イソ−プロピル（Ｃ３）、シクロプロピル（Ｃ３）、ｎ−ブチル（Ｃ４）、ｓｅｃ−ブチル（Ｃ４）、イソ−ブチル（Ｃ４）、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｃ４）またはシクロブチル（Ｃ４）である。本態様によるプロドラッグの非限定的な例は、５−（３−フルオロフェニル）−Ｎ−（２−ジエチルアミノ−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシピリジン−２−イルアミド；５−（３−フルオロフェニル）−Ｎ−（２−プロピルアミノ−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシピリジン−２−イルアミド；５−（３−フルオロフェニル）−Ｎ−（Ｎ−エチル−Ｎ−イソプロピルアミノ−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシピリジン−２−イルアミド；５−（３−フルオロフェニル）−Ｎ−（２−ジイソプロピルアミノ−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシピリジン−２−イルアミド；５−（３−フルオロフェニル）−Ｎ−（２−シクロプロピルアミノ−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシピリジン−２−イルアミド；および５−（３−フルオロフェニル）−Ｎ−（２−ブチルアミノ−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシピリジン−２−イルアミドを含む。
【００５４】
さらに、本態様のさらなる実施態様では、Ｒ１およびＲ２は、一緒になって、２〜７個の炭素原子、ならびに、窒素、酸素、および硫黄から選択される１〜３個のヘテロ原子（Ｒ１とＲ２が結合された窒素原子を含む）を有する環を形成することができる。本実施態様の第一の反復では、Ｒ１およびＲ２は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、アジリジニル（Ｃ２）、アゼチジニル（Ｃ３）、ピロリジニル（Ｃ４）およびピペリジニル（Ｃ４）から選択される環を形成する。
【００５５】
本実施態様のさらなる反復では、Ｒ１およびＲ２は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、窒素、酸素および硫黄から選択される第二のヘテロ原子を含む環を形成する。これらの環の非限定的な例は、チアゾリル（Ｃ３）、イソチアゾリル（Ｃ３）、オキサゾリル（Ｃ３）、イソオキサゾリル（Ｃ３）、イミダゾリル（Ｃ３）、モルホリニル（Ｃ４）およびピペラジニル（Ｃ５）を含む。
【００５６】
本開示のＨＩＦ−２α安定化剤、６、および、エステルプロドラッグ、例えば、化合物５は、スキームＩに概説されて後述の実施例１にさらに記載される方法により、調製することができる。
【００５７】
スキームＩ
【化１３】
2014522410.tif 000014
試薬および条件：（ａ）Ｈ２：Ｐｄ／Ｃ，ＥｔＯＨ，ｒｔ，１６時間。
【化１４】
2014522410.tif 000015
試薬および条件：（ｂ）（ＣＦ３Ｏ２Ｓ）２Ｏ，Ｅｔ３Ｎ，ＣＨ２Ｃｌ２；ｒｔ，１６時間。
【化１５】
2014522410.tif 000016
試薬および条件：（ｃ）Ｅｔ３Ｎ，Ｎａ２ＣＯ３，ＥｔＯＨ，ｒｔ，１６時間。
【化１６】
2014522410.tif 000017
試薬および条件：（ｄ）Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２，Ｋ３ＰＯ４，Ｈ２Ｏ，ジオキサン；８５℃，１６時間。
【化１７】
2014522410.tif 000018
試薬および条件：（ｅ）（ｉ）ＮａＯＨ，ＴＨＦ；３０分．（ｉｉ）ＨＣｌ，ＴＨＦ，Ｈ２Ｏ；８５℃，１６時間。
【実施例】
【００５８】
（実施例１）
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸（６）
後述される反応では、特に記載のない限り、温度は、セ氏温度（℃）である；操作は室温または周囲温度、「室温」「ｒｔ」または「ＲＴ」（典型的に約１８℃〜約２５℃の範囲）で行われた；溶媒の蒸発は、減圧下（典型的に４．５〜３０ｍｍＨｇ）で、最高６０℃までの浴温でのロータリーエバポレーターを用いて行われた；反応の工程は、典型的に、その後に薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を行なった；産物は満足な１Ｈ  ＮＭＲ、ＨＰＬＣ、および／またはＬＣ−ＭＳ（ＧＣ−ＭＳ）データを示した；そして、以下の従来の略称もまた用いられる：Ｌ（リットル）、ｍＬ（ミリリットル）、ｍｍｏｌ（ミリモル）、ｇ（グラム）、およびｍｇ（ミリグラム）。別段の定めがない限り、全ての溶媒および試薬は、供給者から購入し、さらに精製することなく用いた。特に記載のない限り、反応は、窒素ブランケット下で行なった。化合物は、ＵＶランプ（２５４ｎｍ）の下で可視化した。３００ＭＨｚ  ＮＭＲで１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを記録した。
【００５９】
［（３，５−ジヒドロキシピリジン−２−カルボニル）−アミノ］−酢酸エチルエステル（２）の調製：
２０Ｌの丸底フラスコに、窒素およびパラジウム炭素（１０％  Ｐｄ／Ｃ）（１００ｇ、６０％ウェットペースト）およびエタノール（１２Ｌ）を満たし、続いて、［（３，５−ビス−ベンジルオキシピリジン−２−カルボニル）−アミノ］−酢酸エチルエステル、１、（１０００ｇ、２．３７８ｍｏｌ）を加えた。結果として生じた混合物を、真空−窒素パージサイクルに３回および真空−水素パージサイクルに３回供した。水素雰囲気を導入して、反応混合物を、ＴＬＣ分析による反応完了まで、１〜２５℃で撹拌した。反応は典型的に２〜３時間続き、そして、反応を完了させるために激しい撹拌を要した。それから、反応系を真空−窒素パージサイクルに供して、系から水素を除去した。反応混合物をフィルター処理して、フィルター−ケークをエタノール（２Ｌ）で洗浄した。複合濾液を、最高４５℃までの浴温でのロータリーエバポレーターで一定重量に濃縮して、５５８ｇの所望の産物を灰白色の固形物として得た（９７．７％収率）。ＭＰ：１３８−１４０℃；ＭＳ（ＥＳＩ＋）：ｍ／ｚ２４１（Ｍ＋１）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．２８（ｓ，１Ｈ），１０．７９（ｓ，１Ｈ），９．０９−９．０５（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ），７．７６−７．７１（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），６．６８−６．６７（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．１５−４．０８（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），４．０２−４．００（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），１．２２−１．１７（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ）。
【００６０】
Ｎ−フェニルビス（トリフルオロメタン−スルフィンイミド）（３）の調製：
１０Ｌの丸底フラスコに、アニリン（２３２．５ｇ、２．５ｍｏｌ）、トリエチルアミン（５０５ｇ、５ｍｏｌ）およびジクロロメタン（５Ｌ）を満たした。結果として生じた混合物を、氷浴で冷却した。ジクロロメタン（１Ｌ）中のトリフルオロメタンスルホン酸無水物（１４１０ｇ、５ｍｏｌ）を滴下した。反応混合物をＲＴに温めて、一晩撹拌した。それから、撹拌しながら反応物をクラッシュアイス（４ｋｇ）に加えた。結果として生じた二相性の混合物を分離した。有機相を塩水で洗浄して（２Ｌ×２）、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて、フィルター処理し、濃縮して粗製固体産物を形成した。粗製固体をエタノールで洗浄して、７６７ｇの所望の産物を白色固形物として生産した（８６％収率）。ＭＰ：９６−９８℃；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．６４−７．５１（ｍ，３Ｈ），７．４４−７．４２（ｍ，２Ｈ）。
【００６１】
［（３−ヒドロキシ−５−トリフルオロメタンスルホニルオキシピリジン−２−カルボニル）−アミノ］−酢酸エチルエステルナトリウム塩（４）の調製：
２０Ｌの丸底フラスコに、［（３，５−ジヒドロキシ−ピリジン−２−カルボニル）−アミノ］−酢酸エチルエステル、２、（８６０ｇ、３．５８ｍｏｌ）およびエタノール（１１Ｌ）を満たした。混合物を撹拌して、１０〜２０℃で溶液を形成した。トリエチルアミン（６０２ｍＬ、４．３ｍｏｌ）を加えた。結果として生じた混合物を０〜５℃に冷却して、Ｎ−フェニルビス（トリフルオロメタン−スルフィンイミド）、３、（１４０６ｇ、３．９４ｍｏｌ）を加えた。添加後、反応混合物を３５〜４０℃に加熱して、一晩撹拌した。ＴＬＣ分析は、反応が完了したことを示した。それから、反応混合物を、最高で４０℃までの浴温でロータリーエバポレーターにより濃縮した。残渣（油性固形物）をトルエン（４．５Ｌ）で処理して、およそ４．５Ｌに濃縮した。トルエン溶媒の交換を、残留エタノールレベルが１Ｈ  ＮＭＲ分析により０．５％未満になるまで繰り返した。トルエン溶液を、１０％ｗ／ｗＮａ２ＣＯ３水溶液（５．５Ｌ、１．３ｅｑ．）で処理した。結果として生じたスラリーをフィルター処理して、フィルターケークを水で洗浄し（２×２Ｌ）、それから、トルエン／ＴＢＭＥの混合物（１：２）で洗浄した（２×２Ｌ）。固形産物を乾燥して、１１５６ｇの所望の産物を白色固形物として得た（８２％収率）。ＭＳ（ＥＳＩ＋）：ｍ／ｚ３７３（Ｍ＋１）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．１３（１Ｈ，ｓ），７．４３−７．４２（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），６．７２−６．７１（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，２Ｈ），４．１２−４．０５（ｍ，４Ｈ），１．２１−１．１５（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３）。
【００６２】
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸エチルエステル（５）の調製：
５Ｌの丸底フラスコに、［（３−ヒドロキシ−５−トリフルオロメタンスルホニルオキシピリジン−２−カルボニル）−アミノ］−酢酸エチルエステルナトリウム塩、４、（３１０ｇ、０．７８ｍｏｌ）、１，４−ジオキサン（３Ｌ）および水（１５０ｍＬ）を満たした。溶液を真空−窒素パージサイクルに供して、続いて、カリウムホスフェート（５０ｇ、０．２３４ｍｏｌ）および３−フルオロフェニルボロン酸（１６３ｇ、１．１７ｍｏｌ）を添加した。添加後、真空−窒素パージサイクルを１回繰り返した。それから、１，１−ビス（ジフェニル−ホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）塩化物ＣＨ２Ｃｌ２複合体（７２ｇ、０．０８８ｍｏｌ、０．１１ｅｑ．）を加えた。もう一回の真空−窒素パージサイクルの後、反応混合物を７５〜８５℃に加熱した。反応の進行をＴＬＣによりモニターした。反応は１４〜１６時間後に完了した。反応物を１５〜２５℃に冷却して、溶媒回収が終わるまで、最高で４５℃の浴温でのロータリーエバポレーターにより濃縮した。残渣をＨＣｌ水溶液（１Ｍ、１．５Ｌ）および酢酸エチル（１．５Ｌ）で処理して、室温で３０分間撹拌した。それから、相を分離した。有機相を水（１．５Ｌ）、塩水（１．５Ｌ）で洗浄して、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、フィルター処理して濃縮した。粗製産物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル／酢酸：ｖｏｌ／ｖｏｌで３：１：０．０１）により精製して、２２６ｇの所望の産物を得た（９０％収率）。ＭＳ（ＥＳＩ＋）：ｍ／ｚ３１９（Ｍ＋１）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１１．８８（ｓ，１Ｈ），８．４４（ｓ，１Ｈ），８．３２−．３１（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５１−７．４４（ｍ，２Ｈ），７．４０−７．３７（ｍ，１Ｈ），７．３２−７．２７（ｍ，１Ｈ），７．１７−７．１３（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），４．３３−４．２５（ｍ，４Ｈ），１．３６−１．３１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。
【００６３】
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸（６）の調製：
室温で、ＴＨＦ（１Ｌ）中の｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸エチルエステル、５、（２２６ｇ、０．７１ｍｏｌ）のスラリーに、内部反応温度を２５℃より低く維持しながら水酸化ナトリウム水溶液（１Ｍ、２Ｌ）を加えた。反応の進行をＴＬＣによりモニターした。２０〜３０分後、反応は完了した。内部温度を２５℃より低く維持しながら、濃縮ＨＣｌを用いて反応溶液のｐＨを５〜５．５に調整した。反応混合物をフィルター処理して不溶物を除去し、全てのＴＨＦが除去されるまで、最高で４０℃までの浴温でのロータリーエバポレーターにより濾液を濃縮した。結果として生じた固形物を真空濾過により回収して、水（１Ｌ）で洗浄した。それから、固形物を、水（１．５Ｌ）およびＴＨＦ（１．５Ｌ）の混合物中に、室温で溶解させた。濃縮ＨＣｌで、ｐＨを、およそ５から、およそ２〜２．２５までに調整した。結果として生じた混合物を３０分間撹拌し、その後、ｐＨが２〜２．５の範囲であることを確認した。二相性の混合物を、最高で４０℃までの浴温でのロータリーエバポレーターにより、ＴＨＦの除去が終了するまで濃縮した。結果として生じた固形物をフィルター処理して、水で洗浄して（２×１Ｌ）、乾燥して、１１５ｇの所望の産物を白色固形物として得た（５５．８％収率）。ＭＰ：１８２−１８４℃；ＭＳ（ＥＳＩ−）：ｍ／ｚ２８９（Ｍ−１）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．９０（ｓ，１Ｈ），１２．３８（ｓ，１Ｈ），９．３９−９．３７（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），８．５５（ｓ，１Ｈ），７．８０−７．６７（ｍ，２Ｈ），７．５９−７．５２（ｍ，１Ｈ），７．３４−７．２７（ｍ，１Ｈ），４．０２−３．９９（ｍ，２Ｈ），３．５１（ｓ，１Ｈ）。
【００６４】
本開示のＨＩＦ−２α安定化剤のアミドプロドラッグは、スキームＩＩに概説されて後述の実施例２にさらに記載される方法により調製することができる。
【００６５】
スキームＩＩ
【化１８】
2014522410.tif 000019
試薬および条件：（ａ）ＣＨ３ＮＨ２ＨＣｌ，ＥＤＣＩ，ＨＯＢｔ，ＤＩＰＥＡ，ＤＭＦ；０℃〜ｒｔ，２日。
【００６６】
（実施例２）
５−（３−フルオロフェニル）−Ｎ−（２−メチルアミノ−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシピリジン−２−イルアミド（７）
５−（３−フルオロフェニル）−Ｎ−（２−メチルアミノ−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシピリジン−２−イルアミド（７）の調製：Ｎ２下で室温で、ＤＭＦ（５０ｍＬ）中の｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸、６、（２．９ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液に、１−（３−ジメチルアミノ−プロピル）−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣＩ）（２．３３ｇ、１４．４ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（１．３５ｇ、１０ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（１５．６５ｍＬ、３０ｍｍｏｌ）を加える。反応溶液を５分間撹拌し、それから、メチルアミンハイドロクロライド（０．９ｇ、１３０ｍｍｏｌ）を加える。２日間の撹拌後、減圧下で溶媒を除去し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２とＨ２Ｏとの間に分配する。有機相を分離し、飽和ＮａＣｌで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、フィルター処理して、減圧下で濃縮する。粗製産物をシリカ（ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２  １：９９）で精製して、所望の化合物を得る。
【００６７】
以下に、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤およびそのプロドラッグを調製するためのさらなる方法を説明する。エステルプロドラッグの例を調製するための方法がスキームＩＩＩに概説され、実施例３に説明される。
【００６８】
スキームＩＩＩ
【化１９】
2014522410.tif 000020
試薬および条件：（ａ）Ｋ２ＣＯ３，ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ），ＤＭＦ，Ｈ２Ｏ；４５℃，１８時間。
【化２０】
2014522410.tif 000021
試薬および条件：（ｂ）ＮａＯＣＨ３，ＣＨ３ＯＨ；還流，２０時間。
【化２１】
2014522410.tif 000022
試薬および条件：（ｃ）４８％ＨＢｒ；還流，２０時間。
【化２２】
2014522410.tif 000023
試薬および条件：（ｄ）ＣＤＩ，ＤＩＰＥＡ，ＤＭＳＯ；ｒｔ，２．５時間。
【００６９】
（実施例３）
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸メチル（１１）
５−（３−フルオロフェニル）−３−クロロ−２−シアノピリジン（８）の調製：磁気撹拌に適応され、かつ窒素注入口を備えた１００ｍＬの丸底フラスコに、（３−フルオロフェニル）ボロン酸（４．４８ｇ、３２ｍｍｏｌ）、３，５−ジクロロ−２−シアノピリジン（５．８ｇ、３４ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（５．５ｇ、４０ｍｍｏｌ）、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロ−パラジウム（ＩＩ）［ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）］（０．１ｇ、０．１３ｍｍｏｌ）、ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）および水（５ｍＬ）を満たす。反応溶液を撹拌し、４５℃に加熱して、その温度で１８時間保持し、その後、反応の完了は、移動相として酢酸エチル／メタノール（４：１）を用い、任意の残存する出発原料を可視化するためにＵＶ４３５ｎｍを用いたＴＬＣを介した出発原料３，５−ジクロロ−２−シアノピリジンの不存在によって判定することができる。それから、反応溶液を室温に冷却して、内容物を酢酸エチル（２５０ｍＬ）と飽和ＮａＣｌ水（１００ｍＬ）との間に分配する。有機相を分離して、飽和ＮａＣｌ水（１００ｍＬ）で二回目の洗浄をする。有機相をＭｇＳＯ４で４時間乾燥させて、ＭｇＳＯ４を濾過により除去し、溶媒を減圧下で除去する。それから、残存する残渣は、室温で２０時間、メタノール（５０ｍＬ）中で懸濁化する。結果として生じる固形物を濾過により回収して、冷却メタノール（５０ｍＬ）で洗浄してからヘキサン（６０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて所望の産物を得る。
【００７０】
５−（３−フルオロフェニル）−３−メトキシ−２−シアノピリジン（９）の調製：
磁気撹拌に適応され、かつ還流コンデンサーおよび窒素注入口が装着された５００ｍＬの丸底フラスコに、５−（３−フルオロフェニル）−３−クロロ−２−シアノピリジン、８、（９．２８ｇ、４０ｍｍｏｌ）、ナトリウムメトキシド（１３．８ｍＬ、６０ｍｍｏｌ）およびメタノール（２００ｍＬ）を満たす。撹拌しながら、反応溶液を加熱して２０時間還流する。移動相としてヘキサン／酢酸エチル（６：３）を用い、反応の構成要素を可視化するためのＵＶ４３５ｎｍを用いたＴＬＣ分析を介して測定される５−（３−フルオロフェニル）−３−クロロ−２−シアノピリジンの消失により、反応の完了を判定することができる。反応混合物を室温に冷却し、水（５００ｍＬ）と混合させる。混合物を０℃〜５℃に冷却し、３時間撹拌する。結果として生じる固形物を濾過により回収して水で洗浄し、それからヘキサンで洗浄する。それから、結果として生じるケークを４０℃での減圧中で乾燥させて、所望の産物を得る。
【００７１】
５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボン酸（１０）の調製：
磁気撹拌に適応され、かつ還流コンデンサーが装着された５０ｍＬの丸底フラスコに、５−（３−フルオロフェニル）−３−メトキシ−２−シアノピリジン、９、（０．９１２ｇ、４ｍｍｏｌ）および４８％のＨＢｒ水溶液（１０ｍＬ）を満たす。撹拌しながら、反応溶液を加熱して２０時間還流する。移動相としてヘキサン／酢酸エチル（６：３）を用い、反応の構成要素を可視化するためのＵＶ４３５ｎｍを用いたＴＬＣ分析を介して測定される５−（３−フルオロフェニル）−３−メトキシ−２−シアノピリジンの消失により、反応の完了を判定することができる。それから、反応溶液を撹拌しながら０℃〜５℃に冷却し、５０％のＮａＯＨ水をゆっくり加えてｐＨをおよそ２に調整する。それから、０℃〜５℃で３時間、撹拌を続ける。結果として生じる固形物を濾過により回収して水で洗浄し、それからヘキサンで洗浄する。結果として生じるケークを４０℃での減圧中で乾燥させて、所望の産物を得る。
【００７２】
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸メチル（１１）の調製：
磁気撹拌に適応され、かつ窒素注入チューブが装着された５０ｍＬの丸底フラスコに、５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボン酸、１０、（０．９３２ｇｍ、４ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）（０．９７ｇ、６ｍｍｏｌ）およびジメチルスルホキシド（５ｍＬ）を満たす。反応混合物を４５℃で約１時間撹拌し、それから室温に冷却する。グリシンメチルエステルハイドロクロライド（１．１５ｇ、１２ｍｍｏｌ）を加え、その後にジイソプロピルエチルアミン（３．２ｍＬ、１９ｍｍｏｌ）を滴下する。それからその混合物を、室温で２．５時間撹拌し、その後、水（７０ｍＬ）を加える。反応フラスコの内容物を０℃〜５℃に冷却して、溶液のｐＨがおよそ２になるまで１Ｎ  ＨＣｌを加える。その溶液をジクロロメタン（１００ｍＬ）で抽出し、有機相をＭｇＳＯ４で１６時間乾燥させる。シリカゲル（３ｇ）を加えて、溶液を２時間懸濁化して、その後、固形物を濾過により除去する。濾液を減圧下で乾燥するまで濃縮し、結果として生じる残渣をメタノール（１０ｍＬ）で２時間懸濁化する。結果として生じる固形物を濾過により回収して冷却メタノール（２０ｍＬ）で洗浄してからヘキサンで洗浄し、結果として生じるケークを乾燥させて所望の産物を得る。
【００７３】
エステルプロドラッグ｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−イル］アミノ｝酢酸メチル、１１は、スキームＩのステップ（ｅ）に概説され、かつ実施例１に記載される方法により、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤、｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸、６に変換することができる。
【００７４】
本開示のＨＩＦ−２α安定化剤のアミドプロドラッグに関する方法のさらなる非限定的な例を、以下のスキームＩＶで概説し、実施例４で説明する。
スキームＩＶ
【化２３】
2014522410.tif 000024
試薬および条件：（ａ）ＥＤＣＩ，ＨＯＢｔ，ＤＩＰＥＡ，ＤＭＦ；ｒｔ。
【００７５】
（実施例４）
５−（３−フルオロフェニル）−Ｎ−（２−アミノ−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシルピリジン−２−イルアミド（１２）
５−（３−フルオロフェニル）−Ｎ−（２−アミノ−２−オキソエチル）−３−ヒドロキシルピリジン−２−イルアミド（６）の調製：Ｎ２下で室温で、ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボン酸、１０、（６９９ｍｇ、３ｍｍｏｌ）の溶液に、１−（３−ジメチル−アミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣＩ）（０．９２５ｇ、５．９７ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシベンゾ−トリアゾール（ＨＯＢｔ）（０．８０６ｇ、５．９７ｍｍｏｌ）を加える。結果として生じる溶液を１５分間撹拌し、それから、２−アミノアセトアミドハイドロクロライド（０．６６ｇ、５．９７ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（１．５６ｍｌ、８．９６ｍｍｏｌ）を加える。反応をＴＬＣによりモニターし、反応が完了したら、反応混合物を減圧下で濃縮してＨ２Ｏを加える。所望の産物は、通常のワークアップにより分離することができる。
【００７６】
本開示はまた、本開示の安定化剤の薬学的に許容できる塩も含む。以下は、スキームＶに示されるように、薬学的に許容できる塩の調製の非限定的な例である。
【００７７】
スキームＶ
【化２４】
2014522410.tif 000025
【００７８】
実施例５
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸ナトリウム（１３）
ＮａＨＣＯ３（４１．０９ｍｇ）を含むバイアルに、アセトン中の｛［５−（３−フルオロ−フェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸（６）の溶液（５．１２ｍＬ中４００ｍｇサンプルの０．６４ｍＬ）を加える。その溶液を撹拌して所望の産物を、減圧中で濃縮により分離する。
【００７９】
［方法］
がんの増殖および転移は、がん細胞における転移促進遺伝子または抑制遺伝子の異常な制御によってのみ調節されているのではないことがよく知られている。がん細胞と間質細胞との間の相互作用は、がんの増殖および転移を促進することが示されている。腫瘍内にみられるマクロファージ（腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）と呼ばれる）は、間質細胞の極めて重要なメンバーである（Ｌｅｅｋ  ＲＤ，Ｈａｒｒｉｓ  ＡＬ，"Ｔｕｍｏｕｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ，"Ｊ  Ｍａｍｍ  Ｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌ  Ｎｅｏｐｌａｓｉａ  ７：１７７−１８９，２００２  ａｎｄ  Ｌｅｗｉｓ  ＣＥ，Ｍｕｒｄｏｃｈ  Ｃ．，"Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  ｈｙｐｏｘｉａ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｕｍｏｒ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ａｎｔｉ−ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ．"Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １６７：６２７−６３５，２００５を参照）。ＴＡＭは、腫瘍内に入り込む末梢血単球に由来する。がん細胞により活性化されると、ＴＡＭは、多様な因子、とりわけ、増殖因子、タンパク質分解酵素、サイトカイン、および炎症性メディエータを放出することができる。これらの因子の多くは、がん細胞の転移の促進における重要な作用物質である；実際に、広範囲のＴＡＭの浸潤は、様々なヒトのがんにおける、がん転移および予後不良と相関することが示されている。ＴＡＭは、腫瘍血管新生、腫瘍増殖、および腫瘍細胞の遊走と侵襲を含む様々なメカニズムを介してがん転移を促進する。したがって、ＴＡＭにより放出される、および／または刺激される様々な因子、すなわち、ＶＥＧＦの調節は、腫瘍増殖およびがん細胞転移を減少させ、阻止し、または予防するための重要な方法である。
【００８０】
低酸素の腫瘍微小環境に応答した腫瘍浸潤マクロファージによる血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）の分泌が、血管形成（血管新生）を誘導することがよく知られており、それは、腫瘍増殖および転移の増加をもたらす。また、低酸素状態で顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）により刺激された単核貪食細胞は、ＶＥＧＦの産生に加えて、ＶＥＧＦを中和して生物学的活性を阻害する高レベルの可溶性形態のＶＥＧＦ受容体（ｓＶＥＧＦＲ−１）も分泌することが以前より示されている（Ｅｕｂａｎｋ  ＴＤ，ｅｔ  ａｌ．，"ＧＭ−ＣＳＦ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ＶＥＧＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−１  ｆｒｏｍ  ｈｕｍａｎ  ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ，"Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２００４；２１（６）：８３３１−８４２）。加えて、低酸素誘導因子−１α（ＨＩＦ−１α）はマクロファージのＶＥＧＦ産生を調節し、一方で、低酸素誘導因子−２α（ＨＩＦ−２α）はマクロファージのｓＶＥＧＦＲ−１産生を調節することが見いだされ、それにより、血管新生の制御におけるＨＩＦに関する相反する役割が示された。さらに、ＨＩＦ−１αは、ＶＥＧＦに対するそれの効果を介して血管新生誘導の挙動を示し、ＨＩＦ−２αは、内因性ＶＥＧＦ阻害剤ｓＶＥＧＦＲ−１の産生を誘導することにより抗血管新生の挙動を示す（Ｅｕｂａｎｋ  ＴＤ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｏｐｐｏｓｉｎｇ  ｒｏｌｅｓ  ｆｏｒ  ＨＩＦ−１｛ａｌｐｈａ｝ａｎｄ  ＨＩＦ−２｛ａｌｐｈａ｝  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｂｙ  ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  ｐｈａｇｏｃｙｔｅｓ，"Ｂｌｏｏｄ，２０１１；１１７（１）：３２３−３３２）。したがって、血管新生および腫瘍増殖の制御において、ＨＩＦ−１αおよびＨＩＦ−２αに関して特異的で非依存的な役割が存在する。
【００８１】
低酸素誘導因子ＨＩＦ−１αとＨＩＦ−２αは、構成的に転写されるが、両方とも、ＨＩＦのキーとなるアミノ酸であるプロリンの水酸化により始まるプロセスにより、急速に分解される。プロリルヒドロキシラーゼドメイン（ＰＨＤ）タンパク質の３つのアイソフォーム（すなわち、４−プロリルヒドロキシラーゼ酵素群）が知られており、それぞれが、異なるＨＩＦの分解に作用する。例えば、ＰＨＤ２はＨＩＦ−１αを水酸化し、一方で、ＰＨＤ３はＨＩＦ−２αを水酸化する。ＨＩＦ−１αの安定化はＶＥＧＦを増加させるので、ＰＨＤ２の阻害は血管新生を増加させる。対照的に、ＨＩＦ−２αの安定化は、マクロファージのｓＶＥＧＦＲ−１産生を介してＶＥＧＦを減少させ、ＰＨＤ３の阻害は血管新生を抑制して、がん治療のための方法を提供する。（プロリル水酸化は、ｖｏｎ  Ｈｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕ（ＶＨＬ）腫瘍抑制タンパク質を含むユビキチンリガーゼ複合体の結合部位を生じさせ、ＨＩＦαの破壊をもたらす。加えて、ＨＩＦαの転写活性機能は、コアクチベーターｐ３００およびＣＢＰの動員に影響を及ぼすＦＩＨ（ＨＩＦ阻害因子）によるアスパラギン水酸化により、さらにモジュレートされる。したがって、ＰＨＤによるＨＩＦの水酸化は、細胞のＨＩＦレベルを激減させる不可逆のプロセスを始めさせる。）
【００８２】
本明細書は、ＨＩＦ−２αの安定化により、腫瘍増殖に影響を与える方法について開示する。理論に制限されることを望まずに、｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸は、ＰＨＤ３を阻害することによりＨＩＦ−２αを安定化し、それにより、より大量のＶＥＧＦサプレッサーｓＶＥＧＦＲ−１がマクロファージ（および場合により、がん細胞および他の間質細胞を含む、腫瘍中の他の細胞）から分泌されるようにする。
【００８３】
ｓＶＥＧＦＲ−１の公知の制御に加えて、ＨＩＦ−２α安定化剤、｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸は、予想外に、低酸素性胚線維芽細胞においてＶＥＧＦを下方制御した（図１参照）。この効果は、ＨＩＦ−１α欠損の胚線維芽細胞において保持された。
【００８４】
本明細書は、ＨＩＦ−２αの安定化により、腫瘍増殖に影響を与える方法について開示する。理論に制限されることを望まずに、｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸は、ＰＨＤ３を阻害することによりＨＩＦ−２αを安定化し、それにより、予想外に、腫瘍細胞（がん細胞および間質細胞を含む）でのＶＥＧＦ産生を抑制する。
【００８５】
近年では、Ｗａｒｂｕｒｇの仮説が、ミトコンドリアの機能障害および呼吸障害と、腫瘍細胞の増殖、分裂および膨張との関係に関する知見により、注目を再度集めている。身体は、ミトコンドリアを含む自己破壊のメカニズムであるアポトーシスにより、損傷細胞をしばしば殺すが、このメカニズムは、ミトコンドリアがシャットダウンしたがん細胞では欠けていることがある。がん細胞でのミトコンドリアの再活性化は、それらのアポトーシスプログラムを再稼働することができるであろう。また、単に呼吸障害に対する応答であるのに加えて、腫瘍細胞での解糖作用の強化は、細胞の複製に必要な炭素含有ビルディングブロックを提供することもできるであろう。
【００８６】
ＶＥＧＦの下方制御に加えて、ＨＩＦ−２α安定化剤｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸は、予想外に、低酸素性胚線維芽細胞において重要な解糖酵素であるＰＧＫを下方制御した（図２参照）。この効果は、ＨＩＦ−１α欠損の胚線維芽細胞において保持された。
【００８７】
本明細書は、ＨＩＦ−２αを安定化することにより、腫瘍増殖に影響を与える方法を開示する。理論に制限されることを望まずに、｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸は、ＰＨＤ３を阻害することによりＨＩＦ−２αを安定化し、それにより、予想外に、腫瘍細胞でのＰＧＫ産生を抑制する。
【００８８】
本開示のＨＩＦ−２α安定化剤およびそのプロドラッグは、ヒトおよび動物での、腫瘍増殖および／または腫瘍転移を、予防し、和らげ、最小限化し、調節し、および／または減少させるために用いることができる。本開示のＨＩＦ−２α安定化剤およびそのプロドラッグはまた、初期の腫瘍増殖速度を遅くするために用いることもできる。本開示のＨＩＦ−２α安定化剤およびそのプロドラッグは、治療が必要な対象に投与する場合、がん細胞の拡散を阻止するために用いることができる。したがって、本明細書に開示のＨＩＦ−２α安定化剤およびそのプロドラッグは、１つまたは複数の薬剤または他の医薬品との併用療法の一部として投与することができる。併用療法の一部として使用する場合、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤およびそのプロドラッグにより影響される転移の減少および原発腫瘍増殖の低減は、患者を治療するために用いられる任意の薬剤療法または薬物療法の、より効果的で効率的な使用を可能にする。加えて、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤およびそのプロドラッグによる転移調節は、対象が疾患を１カ所に限定する能力をより高める。
【００８９】
本開示の化合物、｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸、その塩、およびエステルおよびアミドプロドラッグは抗−腫瘍化特性を有し、その化合物は：
１．低酸素状態下で、細胞において、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）の存在量を非常に減少させて、それにより、腫瘍微小環境での血管新生を刺激する一因子を除去し、したがって、増殖のための栄養供給手段として血管新生を使用する腫瘍細胞の能力を低下させる。このことは図１Ａおよび図１Ｂから明らかである；
２．低酸素状態下で、細胞において、細胞内に存在するホスホグリセレートキナーゼ量を非常に減少させて、ここで、腫瘍細胞は、エネルギー源として酸化的リン酸化を用いないが、その代わりに解糖系を用いることが示されている。したがって、これは、増殖のためのエネルギーを生産する腫瘍細胞の能力を除去または低下させる。これは図２Ａおよび図２Ｂから明らかである；および
３．ＶＥＧＦに対する競合受容体であるｓ−ＶＥＧＦＲ１（可溶性ＶＥＧＦ）の刺激を生じさせ、したがって、血管新生を刺激することができるＶＥＧＦの量を減少させる。これは図１０から明らかである。
【００９０】
したがって、本開示の化合物は、腫瘍細胞に対して三つ又の攻撃を与え、すなわち、ＰＧＫを排して主要エネルギー源を除去し、ＶＥＧＦを減少させて腫瘍細胞が血管新生を介して栄養および血液供給を得る能力を低下させ、そして、ｓ−ＶＥＧＦを増加させることによって腫瘍が血管新生を誘導する能力をさらに低下させる。
【００９１】
本明細書は、悪性腫瘍または他のがん細胞の転移を予防するための方法、および、腫瘍の増殖速度を低下させるための方法を開示する。その方法は、悪性腫瘍またはがん細胞と診断された対象、または、腫瘍またはがん細胞を有する対象に、有効量の１つまたは複数の本開示の化合物を投与するステップを含む。例えば、悪性腫瘍またはがん細胞と診断された対象を治療するための方法は、有効量の｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸を対象に投与するステップを含む。別の例では、悪性腫瘍またはがん細胞を有する対象を治療するための方法は、有効量の｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸を対象に投与するステップを含む。
【００９２】
本明細書は、低酸素誘導因子−２α（ＨＩＦ−２α）を安定化するための方法を開示し、それは、有効量の本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグを対象に投与するステップを含む。例えば、低酸素誘導因子−２α（ＨＩＦ−２α）を安定化するための方法は、有効量の｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸を対象に投与するステップを含む。
【００９３】
さらに、本明細書は、がんを治療するための方法を開示し、それは、有効量の本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグを対象に投与するステップを含む。例えば、がんを治療するための方法は、有効量の｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸を対象に投与するステップを含む。
【００９４】
また、本明細書は、がんを有する対象での腫瘍血管新生を減少させるための方法も開示し、それは、有効量の本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグを対象に投与するステップを含む。例えば、がんを有する対象での腫瘍血管新生を減少させるための方法は、有効量の｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸を対象に投与するステップを含む。
【００９５】
またさらに、本明細書は、がんと診断された対象での腫瘍血管新生を減少させるための方法を開示し、それは、有効量の本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグを対象に投与するステップを含む。例えば、がんと診断された対象での腫瘍血管新生を減少させるための方法は、有効量の｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸を対象に投与するステップを含む。
【００９６】
またさらに、本発明は、ＶＥＧＦＲｓへのＶＥＧＦの結合を阻害することにより、インビトロ、インビボまたはエクスビボで、細胞内の血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）を減少させるための方法を開示し、それは、有効量の本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグを細胞に投与するステップを含む。一実施態様では、その細胞はがん細胞である。別の実施態様では、その細胞はヒト細胞である。また、さらなる実施態様では、その細胞はヒトがん細胞である。例えば、インビトロ、インビボまたはエクスビボで、細胞内の血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）を減少させるための方法は、有効量の｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸を細胞に投与するステップを含む。
【００９７】
また、本明細書は、インビトロ、インビボまたはエクスビボで、細胞からの可溶性血管内皮成長因子受容体−１（ｓＶＥＧＦ−１）の分泌を増加させるための方法をさらに開示し、それは、有効量の本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグを細胞に投与するステップを含む。一実施態様では、その細胞は、腫瘍関連細胞である。別の実施態様では、その細胞は、ヒト腫瘍関連細胞である。また、さらなる実施態様では、その細胞は、ヒトがん細胞である。例えば、インビトロ、インビボまたはエクスビボで、細胞からの可溶性血管内皮成長因子受容体−１（ｓＶＥＧＦ−１）の分泌を増加させるための方法は、有効量の｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸を細胞に投与するステップを含む。
【００９８】
また、本明細書は、対象での腫瘍増殖を調節するための方法をさらに開示し、それは、有効量の本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグを対象に投与するステップを含む。
【００９９】
本明細書は、がん治療用薬剤を製造するための、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグの使用を開示する。例えば、がん治療用薬剤を製造するための、｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸の使用である。
【０１００】
さらに、本明細書は、悪性腫瘍または他のがん細胞の転移を予防するための薬剤および腫瘍増殖を遅くするための薬剤の製造のための、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグの使用を開示する。例えば、悪性腫瘍または他のがん細胞の転移を予防するための薬剤および腫瘍増殖を遅くするための薬剤の製造のための、｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸の使用である。
【０１０１】
本明細書は、がんを治療するための、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグの使用を開示する。例えば、がんを治療するための、｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸の使用である。
【０１０２】
さらに本明細書は、悪性腫瘍または他のがん細胞の転移を予防するための、および腫瘍増殖を遅くするための、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグの使用を開示する。例えば、悪性腫瘍または他のがん細胞の転移を予防するための、および腫瘍増殖を遅くするための、｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸の使用である。
【０１０３】
またさらに、本明細書は、腫瘍血管新生を減少させるための、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグの使用を開示する。例えば、腫瘍血管新生を治療し減少させるための、｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸の使用である。
【０１０４】
またさらに、本明細書は、腫瘍血管新生を減少させるための薬剤を製造するための、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグの使用を開示する。例えば、腫瘍血管新生を治療し減少させるための薬剤を製造するための、｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸の使用である。
【０１０５】
またさらに、本明細書は、がんを治療するための方法を開示し、それは、有効量の本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグおよび有効量の１つまたは複数の化学療法剤を対象に投与するステップを含み、ここで、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグおよび１つまたは複数の化学療法剤は、任意の順序で投与される。例えば、がんを治療するための方法は、有効量の｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸および有効量の１つまたは複数の化学療法剤を対象に投与するステップを含む。化学療法剤の非限定的な例は、タキソール、ＩＬ−２、ゲムシタビン、エルロチニブ、ドキシル、イリノテカン、およびベバシズマブを含む。
【０１０６】
またさらに、本明細書は、がん細胞の転移を予防するための方法を開示し、それは、がんを有する対象に、有効量の本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグおよび有効量の１つまたは複数の化学療法剤を投与するステップを含み、ここで、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグおよび１つまたは複数の化学療法剤は、任意の順序で投与される。例えば、がん細胞の転移を予防するための方法は、がんを有する対象に、有効量の｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸および有効量の１つまたは複数の化学療法剤を投与するステップを含む。化学療法剤の非限定的な例は、タキソール、ＩＬ−２、ゲムシタビン、エルロチニブ、ドキシル、イリノテカン、およびベバシズマブを含む。
【０１０７】
またさらに、本明細書は、がんと診断された対象を治療するための方法を開示し、それは、がんと診断された患者に、有効量の本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグおよび有効量の１つまたは複数の化学療法剤を投与するステップを含み、ここで、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグおよび１つまたは複数の化学療法剤は、任意の順序で投与される。例えば、がんと診断された対象を治療するための方法は、がんと診断された対象に、有効量の｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸および有効量の１つまたは複数の化学療法剤を投与するステップを含む。化学療法剤の非限定的な例は、タキソール、ＩＬ−２、ゲムシタビン、エルロチニブ、ドキシル、イリノテカン、およびベバシズマブを含む。
【０１０８】
以下は、本開示の方法および組成物により治療することができるがんの非限定的な例である：急性リンパ芽球性白血病；急性骨髄性白血病；副腎皮質がん；小児副腎皮質がん；虫垂がん；基底細胞がん；肝外胆管がん；膀胱がん；骨がん；骨肉腫および悪性線維性組織球腫；小児脳幹グリオーマ；成人脳腫瘍；小児脳腫瘍、小児脳幹グリオーマ；小児脳腫瘍、小児中枢神経系非定型奇形腫様／横紋筋肉腫様腫瘍；中枢神経系胚芽腫；小脳星状細胞腫；大脳星状細胞腫／悪性グリオーマ；頭蓋咽頭腫；上衣芽腫；上衣腫；髄芽腫；髄上皮腫；中間型松果体実質腫瘍；原始神経外胚葉性腫瘍および松果体芽腫；視経路および視床下部グリオーマ；脳腫瘍および脊髄腫瘍；乳がん；気管支腫瘍；バーキットリンパ腫；カルチノイド腫瘍；胃腸カルチノイド腫瘍；中枢神経系非定型奇形腫様／横紋筋肉腫様腫瘍；中枢神経系胚芽腫；中枢神経系リンパ腫；小脳星状細胞腫；小児大脳星状細胞腫／悪性グリオーマ；子宮頸がん；小児脊索腫；慢性リンパ性白血病；慢性骨髄性白血病；慢性骨髄増殖性障害；大腸がん；結腸直腸がん；頭蓋咽頭腫；皮膚Ｔ細胞リンパ腫；食道がん；Ｅｗｉｎｇファミリーの腫瘍；性腺外胚細胞腫瘍；肝外胆管がん；眼のがん、眼球内メラノーマ；眼のがん、網膜芽細胞腫；胆嚢がん；胃（胃）がん；胃腸カルチノイド腫瘍；消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）；頭蓋外胚細胞腫瘍；性腺外胚細胞腫瘍；卵巣胚細胞腫瘍；妊娠性絨毛腫瘍；グリオーマ；小児脳幹グリオーマ；小児大脳星状細胞グリオーマ；小児視経路および視床下部のグリオーマ；有毛細胞白血病；頭頸部がん；肝細胞（肝臓）がん；ランゲルハンス細胞組織球症；ホジキンリンパ腫；下咽頭がん；視床下部および視経路グリオーマ；眼球内メラノーマ；膵島細胞腫瘍；腎臓（腎細胞）がん；ランゲルハンス細胞組織球症；喉頭がん；急性リンパ芽球性白血病；急性骨髄性白血病；慢性リンパ性白血病；慢性骨髄性白血病；有毛細胞白血病；口唇および口腔がん；肝臓がん；非小細胞肺がん；小細胞肺がん；エイズ関連リンパ腫；バーキットリンパ腫；皮膚性Ｔ細胞リンパ腫；ホジキンリンパ腫；非ホジキンリンパ腫；主要中枢神経系リンパ腫；ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症；骨の悪性線維性組織球腫および骨肉腫；髄芽腫；メラノーマ；眼球内（眼）メラノーマ；メルケル細胞がん；中皮腫；転移性潜在性原発扁平頸部がん；口腔がん；多発性内分泌腫瘍症候群（小児）；多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍；菌状息肉腫；骨髄異形成症候群；骨髄異形成／−骨髄増殖性疾患；慢性骨髄性白血病；成人急性骨髄性白血病；小児急性骨髄性白血病；多発性骨髄腫；慢性骨髄増殖性障害；鼻腔がんおよび副鼻腔がん；上咽頭がん；神経芽細胞腫；非小細胞肺がん；口のがん；口腔がん；中咽頭がん；骨肉腫および骨の悪性線維性組織球腫；卵巣がん；卵巣上皮がん；卵巣胚細胞腫瘍；卵巣の低悪性の潜在的腫瘍；膵がん；膵がん、膵島細胞腫瘍；乳頭腫症；副甲状腺がん；陰茎がん；咽頭がん；褐色細胞腫；中間型松果体実質腫瘍；松果体芽腫および原始神経外胚葉性腫瘍；下垂体腫瘍；形質細胞腫瘍／多発性骨髄腫；胸膜肺芽腫；主要中枢神経系リンパ腫；前立腺がん；直腸がん；腎細胞（腎臓）がん；腎盂および尿管の移行上皮がん；クロモソーム１５上のＮＵＴ遺伝子が関与する呼吸器がん；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；唾液腺がん；Ｅｗｉｎｇファミリーの腫瘍肉腫；カポシ肉腫；軟組織肉腫；子宮肉腫；セザリー症候群；皮膚がん（非黒色腫）；皮膚がん（メラノーマ）；メルケル細胞皮膚がん；小細胞肺がん；小腸がん；軟組織肉腫；扁平細胞がん、転移性潜在性原発扁平頸部がん；胃（胃）がん；原始神経外胚葉性腫瘍；皮膚性Ｔ細胞リンパ腫；精巣がん；咽頭がん；胸腺腫および胸腺がん；甲状腺がん；腎盂および尿管の移行上皮がん；妊娠性絨毛腫瘍；尿道がん；子宮内膜子宮がん；子宮肉腫；膣がん；外陰がん；ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症；およびウィルムス腫瘍。
【０１０９】
また、本明細書は、がんを治療するための方法を開示し、それは、以下の式：
【化２５】
2014522410.tif 000026
の化合物；または薬学的に許容できるその塩の有効量を、対象に投与するステップを含む。
【０１１０】
がんは、本明細書に記載の任意のがんであってよく、ＶＥＧＦ依存性がんを含む。酸素の拡散距離はおよそ１５０μｍであるので、２ｍｍ３を超えて増殖する固形腫瘍を含む細胞は、近くの血管系を利用して酸素と老廃物を交換しなければ、増殖することができない。この場合、低酸素は腫瘍細胞中のＨＩＦ−１αを安定化させ、血管を中に含む内皮細胞に関する増殖因子である血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）を産生する。ＶＥＧＦは血管新生の重要なレギュレーターであるので、可溶性形態のＶＥＧＦ受容体−１（ｓＶＥＧＦＲ−１）によるＶＥＧＦの隔離は、血管新生を調節する。本明細書に記載の１つまたは複数の化合物によるプロリルヒドロキシラーゼ３（ＰＨＤ３）の阻害は、ＨＩＦ−２αを安定化する。腫瘍細胞自体はｓＶＥＧＦＲ−１を産生しないが、本明細書に記載の化合物は、炎症性シグナルに応答して腫瘍に到達する単球およびマクロファージからのｓＶＥＧＦＲ−１の産生を増加することができる。このように、本明細書に記載の化合物は、それらの活性がｓＶＥＧＦＲ−１産生をある程度増加させることができるので、ＶＥＧＦに依存して増殖する任意の腫瘍は、本明細書に記載の化合物の標的となる可能性がある。
【０１１１】
［組成物］
本明細書は、対象でのがんを治療するため、がんと診断された対象でのがんを治療するため、対象での腫瘍増殖を予防するため、対象でのがん細胞の転移を予防するために用いることができる組成物を開示し、その組成物は、有効量の、本明細書に記載の１つまたは複数の化合物を含む。さらに、本明細書は、ヒトまたは他の哺乳類での腫瘍を治療するために用いることができる組成物を開示する。
【０１１２】
一態様は、以下：
ａ）有効量の１つまたは複数の本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグ；および
ｂ）１つまたは複数の薬学的に許容できる成分
を含む組成物に関する。
【０１１３】
別の態様は、以下：
ａ）有効量の１つまたは複数の本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグ；および
ｂ）有効量の１つまたは複数のさらなる化学療法剤；
を含む組成物に関し、ここで、本開示の化合物および１つまたは複数のさらなる化学療法剤は、一緒に、または任意の順序で投与することができる。
【０１１４】
一実施態様は、以下：
ａ）有効量の１つまたは複数の本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグ；および
ｂ）有効量のタキソール；
を含む組成物に関し、ここで、本開示の化合物およびタキソールは、一緒に、または任意の順序で投与することができる。
【０１１５】
別の実施態様は、以下：
ａ）有効量の１つまたは複数の本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグ；および
ｂ）有効量のゲムシタビン；
を含む組成物に関し、ここで、本開示の化合物およびゲムシタビンは、一緒に、または任意の順序で投与することができる。
【０１１６】
さらなる実施態様は、以下：
ａ）有効量の１つまたは複数の本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグ；および
ｂ）有効量のエルロチニブ；
を含む組成物に関し、ここで、本開示の化合物およびエルロチニブは、一緒に、または任意の順序で投与することができる。
【０１１７】
また、さらなる実施態様は、以下：
ａ）有効量の１つまたは複数の本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグ；および
ｂ）有効量のドキシル；
を含む組成物に関し、ここで、本開示の化合物およびドキシルは、一緒に、または任意の順序で投与することができる。
【０１１８】
また、さらなる実施態様は、以下：
ａ）有効量の１つまたは複数の本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグ；および
ｂ）有効量のイリノテカン；
を含む組成物に関し、ここで、本開示の化合物およびイリノテカンは、一緒に、または任意の順序で投与することができる。
【０１１９】
またさらに、さらなる実施態様は、以下：
ａ）有効量の１つまたは複数の本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグ；および
ｂ）有効量のベバシズマブ；
を含む組成物に関し、ここで、本開示の化合物およびベバシズマブは、一緒に、または任意の順序で投与することができる。
【０１２０】
「化学療法剤」または「化学療法化合物」は、がん治療に有用な化学的化合物である。本明細書に記載のものと組み合わせて用いることができるがん化学療法剤は、限定されないが、分裂阻害剤（ビンカアルカロイド）を含む。これらは、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシンおよびナベルビン（商標）（ビノレルビン−５’−ノルアンヒドロブラスチン）を含む。さらに別の実施態様では、がん化学療法剤は、カンプトテシン化合物などのトポイソメラーゼＩ阻害剤を含む。本明細書において用いられる「カンプトテシン化合物」は、Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（商標）（イリノテカン  ＨＣＬ）、ハイカムチン（商標）（トポテカン  ＨＣＬ）、および、カンプトテシンとその類似体に由来する他の化合物を含む。本開示の方法および組成物で用い得るがん化学療法剤の別カテゴリーは、エトポシド、テニポシドおよびミトポドジドのようなポドフィロトキシン誘導体である。本開示はさらに、腫瘍細胞中の遺伝物質をアルキル化するアルキル化剤として知られる他のがん化学療法剤を含む。これらは制限されずに、シスプラチン、シクロホスファミド、ナイトロジェンマスタード、トリメチレンチオホスホルアミド、カルムスチン、ブスルファン、クロラムブシル、ベルスチン、ウラシルマスタード、クロルナファジン、およびダカルバジンを含む。本開示は、化学療法剤として代謝拮抗剤を含む。これらのタイプの作用物質の例は、シトシンアラビノシド、フルオロウラシル、メトトレキサート、メルカプトプリン、アザチオプリン、およびプロカルバジンを含む。本開示の方法および組成物で使用し得るがん化学療法剤のさらなるカテゴリーは、抗生物質を含む。その例は、制限されずに、ドキソルビシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ミトラマイシン、マイトマイシン、マイトマイシンＣ、およびダウノマイシンを含む。これらの化合物に関して、非常に多くのリポソーム製剤が市販されている。本開示はさらに、抗−腫瘍抗体、ダカルバジン、アザシチジン、アムサクリン、メルファラン、イホスファミドおよびミトキサントロンを制限されずに含む他のがん化学療法剤を含む。
【０１２１】
本明細書に開示の化合物は、単独で、または細胞傷害性／抗腫瘍剤および抗血管新生剤を含む他の抗腫瘍剤と組み合わせて、投与することができる。細胞傷害性／抗腫瘍剤は、がん細胞を攻撃して殺す作用物質として定義される。いくつかの細胞傷害性／抗腫瘍剤は、腫瘍細胞中の遺伝物質をアルキル化するアルキル化剤、例えば、シスプラチン、シクロホスファミド、ナイトロジェンマスタード、トリメチレンチオホスホルアミド、カルムスチン、ブスルファン、クロラムブシル、ベルスチン、ウラシルマスタード、クロルナファジン、およびダカルバジンである。他の細胞傷害性／抗腫瘍剤は、腫瘍細胞に関する代謝拮抗剤、例えば、シトシンアラビノシド、フルオロウラシル、メトトレキサート、メルカプトプリン、アザチオプリン、およびプロカルバジンである。他の細胞傷害性／抗腫瘍剤は、抗生物質、例えば、ドキソルビシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ミトラマイシン、マイトマイシン、マイトマイシンＣ、およびダウノマイシンである。これらの化合物に関する非常に多くのリポソーム製剤が市販されている。さらに他の細胞傷害性／抗腫瘍剤は、分裂阻害剤（ビンカアルカロイド）である。これらは、ビンクリスチン、ビンブラスチンおよびエトポシドを含む。種々の細胞傷害性／抗腫瘍剤は、タキソールおよびその誘導体、Ｌ−アスパラギナーゼ、抗腫瘍抗体、ダカルバジン、アザシチジン、アムサクリン、メルファラン、ＶＭ−２６、イホスファミド、ミトキサントロン、およびビンデシンを含む。
【０１２２】
抗血管新生剤は当業者によく知られている。本開示の方法および組成物での使用のための適切な抗血管新生剤は、ヒト化およびキメラ抗体を含む抗−ＶＥＧＦ抗体、抗−ＶＥＧＦアプタマーおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。他の公知の血管新生阻害剤は、アンギオスタシン、エンドスタチン、インターフェロン類、インターロイキン１（αおよびβを含む）インターロイキン１２、レチノイン酸、およびメタロプロテイナーゼ−１およびメタロプロテイナーゼ−２の組織阻害剤（ＴＩＭＰ−１およびＴＩＭＰ−２）を含む。ラゾキサン（抗血管新生活性を有するトポイソメラーゼＩＩ阻害剤）のようなトポイソメラーゼを含む小分子もまた用いることができる。
【０１２３】
本開示の化合物と組み合わせて用いることができる他の抗がん剤は、限定されないが：アシビシン；アクラルビシン；アコダゾールハイドロクロライド；アクロニン；アドゼレシン；アルデスロイキン；アルトレタミン；アンボマイシン；アメタントロンアセテート；アミノグルテチミド；アムサクリン；アナストロゾール；アントラマイシン；アスパラギナーゼ；アスペルリン；アザシチジン；アゼテパ；アゾトマイシン；バチマスタット；ベンゾデパ；ビカルタミド；ビスアントレンハイドロクロライド；ビスナフィドジメシラート；ビゼレシン；ブレオマイシンサルフェート；ブレキナールナトリウム；ブロピリミン；ブスルファン；カクチノマイシン；カルステロン；カラセミド；カルベチマー；カルボプラチン；カルムスチン；カルビシンハイドロクロライド；カルゼルシン；セデフィンゴール；クロラムブシル；シロレマイシン；シスプラチン；クラドリビン；クリスナトールメシレート；シクロホスファミド；シタラビン；ダカルバジン；ダクチノマイシン；ダウノルビシンハイドロクロライド；デシタビン；デキソルマプラチン；デザグアニン；デザグアニンメシレート；ジアジクオン；ドセタキセル；ドキソルビシン；ドキソルビシンハイドロクロライド；ドロロキシフェン；ドロロキシフェンシトレート；ドロモスタノロンプロピオネート；ズアゾマイシン；エダトレキサート；エフロルニチンハイドロクロライド；エルサミトルシン；エンロプラチン；エンプロメート；エピプロピジン；エピルビシンハイドロクロライド；エルブロゾール；エソルビシンハイドロクロライド；エストラムスチン；エストラムスチンホスフェートナトリウム；エタニダゾール；エトポシド；エトポシドホスフェート；エトプリン；ファドロゾールハイドロクロライド；ファザラビン；フェンレチニド；フロクスウリジン；フルダラビンホスフェート；フルオロウラシル；フルロシタビン；ホスキドン；フォストリエシンナトリウム；ゲムシタビン；ゲムシタビンハイドロクロライド；ヒドロキシ尿素；イダルビシンハイドロクロライド；イホスファミド；イルモホシン；インターロイキンＩＩ（組み換えインターロイキンＩＩまたはｒＩＬ２を含む）、インターフェロンα−２ａ；インターフェロンα−２ｂ；インターフェロンα−ｎ１；インターフェロンα−ｎ３；インターフェロンβ−Ｉａ；インターフェロンγ−Ｉｂ；イプロプラチン；イリノテカンハイドロクロライド；ランレオチドアセテート；レトロゾール；リュープロリドアセテート；リアロゾールハイドロクロライド；ロメテレキソールナトリウム；ロムスチン；ロソキサントロンハイドロクロライド；マソプロコール；メイタンシン；メクロレタミンハイドロクロライド；メゲストロールアセテート；メレンゲストロールアセテート；メルファラン；メノガリル；メルカプトプリン；メトトレキサート；メトトレキサートナトリウム；メトプリン；メツレデパ；ミチンドミド；ミトカルシン；ミトクロミン；ミトギリン；ミトマルシン；マイトマイシン；ミトスペル（ｍｉｔｏｓｐｅｒ）；ミトタン；ミトキサントロンハイドロクロライド；ミコフェノール酸；ノコダゾール；ノガラマイシン；オルマプラチン；オキシスラン；パクリタキセル；ペグアスパラガーゼ；ペリオマイシン（ｐｅｌｉｏｍｙｃｉｎ）；ペンタムスチン；ペプロマイシンサルフェート；ペルホスファミド；ピポブロマン；ピポスルファン；ピロキサントロンハイドロクロライド；プリカマイシン；プロメスタン；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレドニムスチン；プロカルバジンハイドロクロライド；ピューロマイシン；ピューロマイシンハイドロクロライド；ピラゾフリン；リボプリン；ログレチミド；サフィンゴール；サフィンゴールハイドロクロライド；セムスチン；シムトラゼン；スパルホサートナトリウム；スパルソマイシン；スピロゲルマニウムハイドロクロライド；スピロムスチン；スピロプラチン；ストレプトニグリン；ストレプトゾシン；スロフェヌル（ｓｕｌｏｆｅｎｕｒ）；タリソマイシン；テコガラン（ｔｅｃｏｇａｌａｎ）ナトリウム；タガフール；テロキサントロンハイドロクロライド；テモポルフィン；テニポシド；テロキシロン；テストラクトン；チアミプリン；チオグアニン；チオテパ；チアゾフリン；チラパザミン；トレミフェンシトレート；トレストロンアセテート；トリシリビンホスフェート；トリメトレキサート；トリメトレキサートグルクロネート；トリプトレリン；ツブロゾールハイドロクロライド；ウラシルマスタード；ウレデパ；バプレオチド；ベルテポルフィン；ビンブラスチンサルフェート；ビンクリスチンサルフェート；ビンデシン；ビンデシンサルフェート；ビネピジンサルフェート；ビングリシネート（ｖｉｎｇｌｙｃｉｎａｔｅ）サルフェート；ビンロイロシン（ｖｉｎｌｅｕｒｏｓｉｎｅ）サルフェート；ビノレルビンタルトレート；ビンロシジン（ｖｉｎｒｏｓｉｄｉｎｅ）サルフェート；ビンゾリジン（ｖｉｎｚｏｌｉｄｉｎｅ）サルフェート；ボロゾール；ゼニプラチン；ジノスタチン；ゾルビシンハイドロクロライドを含む。他の抗がん薬は、限定されないが：２０−エピ−１，２５ジヒドロキシビタミンＤ３；５−エチニルウラシル；アビラテロン；アクラルビシン；アシルフルベン；アダシペノール（ａｄｅｃｙｐｅｎｏｌ）；アドゼレシン；アルデスロイキン；ＡＬＬ−ＴＫ拮抗薬；アルトレタミン；アンバムスチン；アミドックス（ａｍｉｄｏｘ）；アミホスチン；アミノレブリン酸；アムルビシン；アムサクリン；アナグレリド；アナストロゾール；アンドログラホリド；血管新生阻害剤；拮抗薬Ｄ；拮抗薬Ｇ；アンタレリックス；抗背側化形態形成性タンパク質−１（ａｎｔｉ−ｄｏｒｓａｌｉｚｉｎｇｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ−１）；前立腺がん抗アントロゲン薬；抗エストロゲン薬；アンチネオプラストン；アンチセンスオリゴヌクレオチド；アフィディコリングリシネート；アポトーシス遺伝子モジュレーター；アポトーシスレギュレーター；アプリン酸；ａｒａ−ＣＤＰ−ＤＬ−ＰＴＢＡ；アルギニンデアミナーゼ；アスラクリン；アタメスタン；アトリムスチン；アキシナスタチン１；アキシナスタチン２；アキシナスタチン３；アザセトロン；アザトキシン；アザチロシン；バッカチンＩＩＩ誘導体；バラノール；バチマスタット；ＢＣＲ／ＡＢＬ拮抗薬；ベンゾクロリン類；ベンゾイルスタウロスポリン；ベータラクタム誘導体；β−アレチン；ベタクラマイシンＢ；ベツリ���酸；ｂＦＧＦ阻害剤；ビカルタミド；ビスアントレン；ビサジリジニルスペルミン（ｂｉｓａｚｉｒｉｄｉｎｙｌｓｐｅｒｍｉｎｅ）；ビスナフィド；ビストラテンＡ；ビゼレシン；ブレフレート（ｂｒｅｆｌａｔｅ）；ブロピリミン；ブドチタン；ブチオニンスルホキシミン；カルシポトリオール；カルフォスチンＣ；カンプトテシン誘導体；カナリポックスＩＬ−２；カペシタビン；カルボキサミド−アミノ−トリアゾール；カルボキシアミドトリアゾール；ＣａＲｅｓｔ  Ｍ３；ＣＡＲＮ  ７００；軟骨由来の阻害剤；カルゼルシン；カゼインキナーゼ阻害剤（ＩＣＯＳ）；カスタノスペルミン；セクロピンＢ；セトロレリックス；クロリン類（ｃｈｌｏｒｌｎｓ）；クロロキノキサリンスルホンアミド；シカプロスト；シス−ポルフィリン；クラドリビン；クロミフェン類似体；クロトリマゾール；コリスマイシンＡ；コリスマイシンＢ；コンブレタスタチンＡ４；コンブレタスタチン類似体；コナゲニン；クラムベシジン（ｃｒａｍｂｅｓｃｉｄｉｎ）８１６；クリスナトール；クリプトフィシン８；クリプトフィシンＡ誘導体；クラシンＡ；シクロペンタンセラキノン類（ｃｙｃｌｏｐｅｎｔａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ）；シクロプラタム（ｃｙｃｌｏｐｌａｔａｍ）；シペマイシン（ｃｙｐｅｍｙｃｉｎ）；シタラビンオクホスファート；細胞溶解因子；サイトスタチン；ダクリキシマブ；デシタビン；デヒドロジデムニンＢ；デスロレリン；デキサメタゾン；デキシホスファミド；デクスラゾキサン；デクスベラパミル；ジアジクオン；ジデムニンＢ；ジドクス（ｄｉｄｏｘ）；ジエチルノルスペルミン；ジヒドロ−５−アザシチジン；９−ジヒドロタキソール；ジオキサマイシン；ジフェニルスピロムスチン；ドセタキセル；ドコサノール；ドラセトロン；ドキシフルリジン；ドロロキシフェン；ドロナビノール；デュオカルマイシンＳＡ；エブセレン；エコムスチン；エデルフォシン（ｅｄｅｌｆｏｓｉｎｅ）；エドレコロマブ；エフロルニチン；エレメン；エミテフール；エピルビシン；エプリステリド；エストラムスチン類似体；エストロゲン作動薬；エストロゲン拮抗薬；エタニダゾール；エトポシドホスフェート；エキセメスタン；ファドロゾール；ファザラビン；フェンレチニド；フィルグラスチム；フィナステリド；フラボピリドール；フレゼラスチン；フルアステロン（ｆｌｕａｓｔｅｒｏｎｅ）；フルダラビン；フルオロダウノルニシン（ｆｌｕｏｒｏｄａｕｎｏｒｕｎｉｃｉｎ）ハイドロクロライド；ホルフェニメックス；フォルメスタン；フォストリエシン；フォテムスチン；ガドリニウムテキサフィリン；硝酸ガリウム；ガロシタビン（ｇａｌｏｃｉｔａｂｉｎｅ）；ガニレリクス；ゼラチナーゼ阻害剤；ゲムシタビン；グルタチオン阻害剤；ヘプサルファム（ｈｅｐｓｕｌｆａｍ）；ヘレグリン；ヘキサメチレンビスアセトアミド；ヒペリシン；イバンドロン酸；イダルビシン；イドキシフェン；イドラマントン；イルモホシン；イロマスタット；イミダゾアクリドン類（ｉｍｉｄａｚｏａｃｒｉｄｏｎｅｓ）；イミキモド；免疫賦活薬ペプチド；インシュリン様増殖因子−１受容体阻害剤；インターフェロン作動薬；インターフェロン；インターロイキン；イオベングアン（ｉｏｂｅｎｇｕａｎｅ）；ヨードドキソルビシン；４−イポメアノール；イロプラクト（ｉｒｏｐｌａｃｔ）；イルソグラジン；イソベンガゾール（ｉｓｏｂｅｎｇａｚｏｌｅ）；イソホモハリコンドリン（ｉｓｏｈｏｍｏｈａｌｉｃｏｎｄｒｉｎ）Ｂ；イタセトロン；ジャスプラキノリド；カハラリドＦ；ラメラリン−Ｎトリアセテート；ランレオチド；レイナマイシン；レノグラスチム；レンチナンサルフェート；レプトルスタチン；レトロゾール；白血病阻害因子；白血球αインターフェロン；リュープロリド＋エストロゲン＋プロゲステロン；リュープロレリン；レバミゾール；リアロゾール；直鎖ポリアミン類似体；脂溶性ニ糖ペプチド；脂溶性白金化合物；リッソクリナミド７；ロバプラチン；ロンブリシン；ロメテレキソール；ロニダミン；ロソキサントロン；ロバスタチン；ロキソリビン；ラルトテカン；ルテチウムテキサフィリン；リソフィリン；溶解型ペプチド；マイタンシン；マンノスタチンＡ；マリマスタット；マソプロコール；マスピン；マトリライシン阻害剤；マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤；メノガリル；メルバロン；メテレリン；メチオニナーゼ；メトクロプラミド；ＭＩＦ阻害剤；ミフェプリストン；ミルテホシン；ミリモスチム；ミスマッチ二本鎖ＲＮＡ；ミトグアゾン；ミトラクトール；マイトマイシン類似体；ミトナフィド；ミトトキシン線維芽細胞増殖因子−サポリン；ミトキサントロン；モファロテン；モルグラモスチム；モノクローナル抗体、ヒト絨毛性腺刺激ホルモン；モノホスホリルリピドＡ＋マイコバクテリウム細胞壁ｓｋ；モピダモール；多剤耐性遺伝子阻害剤；多重腫瘍サプレッサー１（ｍｕｌｔｉｐｌｅｔｕｍｏｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ１）に基づく治療；マスタード抗がん作用物質；ミカペルオキシドＢ；マイコバクテリア細胞壁抽出物；ミリアポロン；Ｎ−アセチルジナリン；Ｎ−置換ベンズアミド類；ナファレリン；ナグレスチプ（ｎａｇｒｅｓｔｉｐ）；ナロキソン＋ペンタゾシン；ナパビン（ｎａｐａｖｉｎ）；ナフテルピン；ナルトグラスチム；ネダプラチン；ネモルビシン（ｎｅｍｏｒｕｂｉｃｉｎ）；ネリドロン酸；中性エンドペプチダーゼ；ニルタミド；ニサマイシン；一酸化窒素モジュレーター；抗酸化窒素酸化物；ニトルリン（ｎｉｔｒｕｌｌｙｎ）；Ｏ６−ベンジルグアニン；オクトレオチド；オキセノン；オリゴヌクレオチド；オナプリストン；オンダンセトロン；オンダ
ンセトロン；オラシン（ｏｒａｃｉｎ）；経口サイトカイン誘発剤；オルマプラチン；オサテロン；オキサリプラチン；オキサウノマイシン；パクリタキセル；パクリタキセル類似体；パクリタキセル誘導体；パラウアミン；パルミトイルリゾキシン；パミドロン酸；パナキシトリオール；パノミフェン；パラバクチン；パゼリプチン；ペグアスパラガーゼ；ペルデシン；ペントサンポリサルフェートナトリウム；ペントスタチン；ペントロゾール（ｐｅｎｔｒｏｚｏｌｅ）；パーフルブロン；ペルホスファミド；ペリリルアルコール；フェナジノマイシン；フェニルアセテート；ホスファターゼ阻害剤；ピシバニール；ピロカルピンハイドロクロライド；ピラルビシン；ピリトレキシム；プラセチン（ｐｌａｃｅｔｉｎ）Ａ；プラセチンＢ；プラスミノゲンアクチベーター阻害剤；白金複合体；白金化合物；白金−トリアミン複合体；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレドニゾン；プロピルビス−アクリドン；プロスタグランジンＪ２；プロテアソーム阻害剤；タンパク質Ａに基づく免疫モジュレーター；タンパク質キナーゼＣ阻害剤；微細藻類のタンパク質キナーゼＣ阻害剤；タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤；プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤；プルプリン類；ピラゾロアクリジン；ピリドキシレート（ｐｙｒｉｄｏｘｙｌａｔｅｄ）ヘモグロビンポリオキシエチレンコンジュゲート；ｒａｆ拮抗薬；ラルチトレキセド；ラモセトロン；ｒａｓファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；ｒａｓ阻害剤；ｒａｓ−ＧＡＰ阻害剤；脱メチル化レテリプチン；レニウムＲｅ１８６エチドロネート；リゾキシン；リボザイム；ＲＩＩレチンアミド；ログレチミド；ロヒツキン（ｒｏｈｉｔｕｋｉｎｅ）；ロムルチド；ロキニメックス；ルビジノン（ｒｕｂｉｇｉｎｏｎｅ）Ｂ１；ルボキシル；サフィンゴール；サイントピン；ＳａｒＣＮＵ；サルコフィトールＡ；サルグラモスチム；Ｓｄｉ１模倣物；セムスチン；老化由来阻害剤１；センスオリゴヌクレオチド；シグナル伝達阻害剤；シグナル伝達モジュレーター；単鎖抗原結合タンパク質；シゾフィラン；シブゾキサン；ナトリウムボロカプテート；ナトリウムフェニルアセテート；ソルベロール（ｓｏｌｖｅｒｏｌ）；ソマトメジン結合タンパク質；ソネルミン（ｓｏｎｅｒｍｉｎ）；スパルホス酸；スピカマイシンＤ；スピロムスチン；スプレノペンチン；スポンジスタチン１；スクアラミン；幹細胞阻害剤；幹細胞分裂阻害剤；スチピアミド；ストロメライシン阻害剤；スルフィノシン；過度活動性血管作動性腸管（ｓｕｐｅｒａｃｔｉｖｅ  ｖａｓｏａｃｔｉｖｅ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ）ペプチド拮抗薬；スラジスタ（ｓｕｒａｄｉｓｔａ）；スラミン；スワインソニン；合成グリコサミノグリカン類；タリムスチン；タモキシフェンメチオジド；タウロムスチン；タザロテン；テコガランナトリウム；タガフール；テルラピリリウム；テロメラーゼ阻害剤；テモポルフィン；テモゾロミド；テニポシド；テトラクロロデカオキシド；テトラゾミン；タリブラスチン（ｔｈａｌｉｂｌａｓｔｉｎｅ）；チオコラリン（ｔｈｉｏｃｏｒａｌｉｎｅ）；トロンボポエチン；トロンボポエチン模倣物；チマルファシン；サイモポイエ��ン受容体作動薬；チモトリナン；甲状腺刺激ホルモン；エチルエチオプルプリンすず；チラパザミン；二塩化チタノセン；トプセンチン；トレミフェン；全能性幹細胞因子；翻訳阻害剤；トレチノイン；トリアセチルウリジン；トリシリビン；トリメトレキサート；トリプトレリン；トロピセトロン；ツロステリド；チロシンキナーゼ阻害剤；チルホスチン類；ＵＢＣ阻害剤；ウベニメクス；尿生殖洞由来増殖阻害因子；ウロキナーゼ受容体拮抗薬；バプレオチド；バリオリン（ｖａｒｉｏｌｉｎ）Ｂ；ベクター系の赤血球遺伝子療法；ベラレソール；ベラミン（ｖｅｒａｍｉｎｅ）；ベルジン類（ｖｅｒｄｉｎｓ）；ベルテポルフィン；ビノレルビン；ビンキサルチン（ｖｉｎｘａｌｔｉｎｅ）；ビタキシン（ｖｉｔａｘｉｎ）；ボロゾール；ザノテロン（ｚａｎｏｔｅｒｏｎｅ）；ゼニプラチン；ジラスコルブ；およびジノスタチンスチマラマーを含む。一実施態様では、抗がん薬は、５−フルオロウラシル、タキソール、またはロイコボリンである。
【０１２４】
［方法］
Ｏｔｔｏ  Ｗａｒｂｕｒｇは、がん細胞のほとんどが、よりエネルギー効率の良い正常細胞の好気的条件よりむしろ、嫌気性解糖を用いてエネルギーを産生することを最初に見いだした（Ｗａｒｂｕｒｇ  Ｏ．"Ｏｎ  ｔｈｅ  ｏｒｉｇｉｎ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ"Ｓｃｉｅｎｃｅ  １２３（３１９１）：３０９−１４（１９５６））。Ｘｕは、低酸素が、がん細胞が新しい血管系の正常な発生に上回って増殖して腫瘤を形成することを可能にする「Ｗａｒｂｕｒｇの効果」に寄与する重要な因子であることを報告した（Ｘｕ  Ｒ−Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，"Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｇｌｙｃｏｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌｓ：Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｔｏ  Ｏｖｅｒｃｏｍｅ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｄｅｆｅｃｔ  ａｎｄ  Ｈｙｐｏｘｉａ．"Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６５：（２），６１３−６２１（２００５））。
【０１２５】
この速い腫瘍の膨張は、がん細胞を、血液供給が制限されて好気的条件を用いて成長する能力が制限された微小環境に置く。十分なエネルギー源を維持するために、腫瘍細胞は、それらの微小環境での低酸素状態を維持し、それ故に、エネルギー生産のための手段として、および、血管新生を刺激するための方法として、結果として生じた増加した解糖活性を使用する。Ｖａｎｄｅｒ  Ｈｅｉｄｅｎは、「ほとんどの正常細胞は、酸化的リン酸化によりグルコースを完全に異化する一方で、がん細胞を含む増殖性細胞は、主に、解糖によりグルコースを代謝する」ことを報告した（Ｖａｎ  Ｈｅｉｄｅｎ，Ｍ．Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．， "Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ａｎ  Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  Ｇｌｙｃｏｌｙｔｉｃ  Ｐａｔｈｗａｙ  ｉｎ  Ｒａｐｉｄｌｙ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇ  Ｃｅｌｌｓ，"Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ３２９，１４９２−１４９９（２０１０））。
【０１２６】
ホスホグリセレートキナーゼは、解糖の最終ステップのうちの一つにおいてリン酸基をＡＤＰに転移する働きをして、遍在する代謝エネルギー源であるＡＴＰを形成する、トランスフェラーゼである。理論に制限されることを望まずに、低酸素細胞における酵素ホスホグリセレートキナーゼの濃度減少は、エネルギー源として増殖性細胞（すなわちがん細胞）は利用できない嫌気性解糖経路を作る方法を提供する。さらに、理論に制限されることを望まずに、腫瘍細胞にみられる低酸素環境を阻害する、または減少させることにより、低酸素微小環境に応答して産生される血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）の量が減少し、それにより、がん細胞の増殖を助ける新しい血管系の形成を減少させる効果がある。
【０１２７】
理論に制限されることを望まずに、退形成はがん細胞の特徴である。がん細胞は、高エネルギー化代謝微小環境、すなわち、低酸素環境中に留まるので、がん細胞は、より静止期に入る能力がなく、したがって、その細胞は、例えば、正常細胞の様式で分化し始めるように成熟することができる。さらに、腫瘤微小環境でのＰＧＫ濃度の抑制は、がん細胞により誘導される低酸素環境に存在する状態を減少させる、または除去する方法として働くことができ、腫瘍増殖の遅延または阻止をもたらす。
【０１２８】
可溶性ＶＥＧＦ受容体−１（ｓＶＥＧＦＲ１）は、１８０−ｋＤａの膜貫通ＶＥＧＦＲ１の、トランケートされたおよそ１１０−ｋＤａのスプライス変異体である。Ｗｕにより報告されるように（Ｗｕ  Ｆ．Ｔ．Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，"Ａ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｏｎ  ｓＶＥＧＦＲ１：  ｉｔｓ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ  ｒｏｌｅ&ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｕｓｅ，"Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．２０１０  Ｍａｒｃｈ  １４（３）：５２８−５５２）、抗−血管新生効果は、あまり解明されていないが、以下：（１）ＶＥＧＦＲ１がするのと酷似の、ＶＥＧＦリガンドの隔離、および、血管新生誘導受容体のＶＥＧＦ仲介の活性化の効果的な減少；および（２）受容体二量体を不活性化する、全長ＶＥＧＦＲモノマーとのヘテロ二量体化（ｓＶＥＧＦＲ１は、その全長パートナーをリン酸転移するために必要な細胞内チロシンキナーゼドメインがないため）を含むと考えられている。ｓＶＥＧＦＲ１がＶＥＧＦ依存性シグナルに対して阻害効果を及ぼす明確な分子メカニズムは不明である。それにもかかわらず、２つのメカニズムが提案されている：（１）ＶＥＧＦファミリーメンバー（ＶＥＧＦ−ＡおよびＰｌＧＦを含む）の直接のリガンド捕捉、すなわち、受容体活性化に利用可能な効果的な濃度のフリーのＶＥＧＦを減少させる；および（２）表面ＶＥＧＦＲをヘテロ二量体化してドミナントネガティブ複合体を形成する、すなわち、リガンド活性化に利用可能な効果的な密度の未結合ＶＥＧＦＲを減少させる。
【０１２９】
理論に制限されることを望まずに、本開示の安定化剤によるＨＩＦ−２αの安定化は、増加した濃度の可溶性血管内皮成長因子（ｓＶＥＧＦＲ−１）をもたらし、それは、減少した濃度のＶＥＧＦをもたらす。図１Ａは、様々な濃度のＨＩＦ−２α安定化剤、｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸での、酸素正常状態下（２１％Ｏ２）の野生型ミューリン胚線維芽細胞［バーＡ、黒］における、および、低酸素状態下（１％Ｏ２）の野生型ミューリン胚線維芽細胞［バーＣ、薄い灰色］における、ＶＥＧＦのｍＲＮＡ発現の減少を示す。低酸素状態下では、低酸素コントロール［バーＣ］と比較して、１、１０および１００μＭの濃度でＶＥＧＦのｍＲＮＡが激減する［バーＤ、最も薄いグレー］。
【０１３０】
図１Ｂは、様々な濃度のＨＩＦ−２α安定化剤、｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸での、酸素正常状態下（２１％Ｏ２）の、ＨＩＦ１−αが欠損している線維芽細胞、すなわち、ＨＩＦ−１α−／−線維芽細胞［バーＡ、黒］における、および、低酸素状態下（１％Ｏ２）の、ＨＩＦ１−αが欠損している線維芽細胞、すなわち、ＨＩＦ−１α−／−線維芽細胞［バーＣ、薄い灰色］における、ＶＥＧＦのｍＲＮＡ発現の減少を示す。低酸素状態下では、低酸素コントロール［バーＣ］と比較して、１、１０および１００μＭの濃度でＶＥＧＦのｍＲＮＡが激減する［バーＤ、最も薄い灰色］。
【０１３１】
図２Ａは、様々な濃度のＨＩＦ−２α安定化剤、｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸での、酸素正常状態下（２１％Ｏ２）の野生型ミューリン胚線維芽細胞［バーＡ、黒］における、および、低酸素状態下（１％Ｏ２）の野生型ミューリン胚線維芽細胞［バーＣ、薄い灰色］における、ホスホグリセレートキナーゼ（ＰＧＫ）のｍＲＮＡ発現の減少を示す。低酸素状態下では、低酸素コントロール［バーＣ］と比較して、１、１０および１００μＭの濃度でＰＧＫのｍＲＮＡが激減する［バーＤ、最も薄い灰色］。
【０１３２】
図２Ｂは、様々な濃度のＨＩＦ−２α安定化剤、｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸での、酸素正常状態下（２１％Ｏ２）の、ＨＩＦ１−αが欠損している線維芽細胞、すなわち、ＨＩＦ−１α−／−線維芽細胞［バーＡ、黒］における、および、低酸素状態下（１％Ｏ２）の、ＨＩＦ１−αが欠損している線維芽細胞、すなわち、ＨＩＦ−１α−／−線維芽細胞［バーＣ、薄い灰色］における、ホスホグリセレートキナーゼ（ＰＧＫ）のｍＲＮＡ発現の減少を示す。低酸素状態下では、低酸素コントロール［バーＣ］と比較して、１、１０および１００μＭの濃度でＰＧＫのｍＲＮＡが激減する［バーＤ、最も薄い灰色］。
【０１３３】
メラノーマに対する治療としての、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤の有効性を試験した。
【０１３４】
［遺伝子発現の定量ＰＣＲ分析］
組織および細胞から、それぞれＴＲＩｚｏｌ（商標）試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）およびＲＮｅａｓｙ  ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて、全ＲＮＡを単離した。ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＩＩ  Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｒｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、１μｇのＲＮＡを逆転写に用いた。ＳＹＲグリーンまたはＴａｑＭａｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）でｃＤＮＡを増幅した。ＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７７００配列検出システムで定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）を行なった。ＰＣＲ条件は：９５℃１０分、９５℃１５秒を４０サイクルおよび６０℃１分である。β−アクチンに正規化後、ｍＲＮＡの相対量を計算した。
【０１３５】
［細胞培養、線維芽細胞の不死化］
１０％ウシ胎児血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１００Ｕ／ｍＬのペニシリンおよび１００ｍｇ／ｍＬのストレプトマイシンで補充されたＤＭＥＭ（＃１１９６５−０９２、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で細胞を培養した。グルコース欠乏にはグルコース無しのＤＭＥＭ（＃１１９６６−０２５、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いた。
【０１３６】
Ｅ１２．５胚からマウス胚線維芽細胞（ＭＥＦ）を単離して、ＳＶ４０ラージＴ抗原での安定的トランスフェクションにより不死化した。
【０１３７】
［ミューリンメラノーマ腫瘍モデル］
マウスに、１×１０５のＢ１６Ｆ１０ミューリンメラノーマ細胞ミューリンを、左脇腹に皮下で注入した。いったん腫瘍が触知可能になると（およそ５日）、マウスをランダムに分配して、５％のデキストラン中２０％のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（本開示のＨＩＦ−２α安定化剤のビヒクルコントロール）およびＰＢＳ（ＧＭ−ＣＳＦのビヒクルコントロール）、２０％ＰＥＧおよびＧＭ−ＣＳＦ（５０μＬボリュームでマウスあたり１００ｎｇ）、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤（１００μＬボリュームで１７．５ｍｇ／ｋｇ）およびＰＢＳ、または本開示のＨＩＦ−２α安定化剤およびＧＭ−ＣＳＦ（同じ投与量）のいずれかで処置した。ＰＢＳおよびＧＭ−ＣＳＦは腫瘍内投与し、一方で、２０％ＰＥＧおよび本開示のＨＩＦ−２α安定化剤は腹腔内投与した。マウスは、腫瘍が任意の寸法で２０ｍｍのサイズに達するまで（およそ２．５週）、１週間に３回処置し、その時点でマウスを施設の方針に従って安楽死させた。腫瘍の直径をカリパスで１週間に３回測定し、腫瘍体積は以下のように計算した：腫瘍体積＝０．５×［（大直径）×（小直径）２］。
【０１３８】
［肺転移の評価］
肺転移は、腫瘍を有するマウスの肺内にメラニン形成細胞に特異的なタンパク質に関するｍＲＮＡの検出により評価した。Ｂ１６Ｆ１０腫瘍を有するマウスを、図３に示すように、ＧＭ−ＣＳＦおよび／または本開示のＨＩＦ−２α安定化剤で処置した。屠殺のときに、肺を摘出して液体窒素中で急速冷凍した。冷凍された肺を液体窒素中でホモジナイズして、粉砕物をＴＲＩｚｏｌ（商標）試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に溶解させた。ＲＮＡをクロロホルム抽出して、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて精製した。Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  Ｆｉｒｓｔ  Ｓｔｒａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて１μｇのＲＮＡからｃＤＮＡを生産し、メーカーの説明書に従って、ＳＹＢＲグリーンＰＣＲ  ＭａｓｔｅｒＭｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いたリアルタイムＰＣＲに使用した。メラニン形成細胞に特異的なＰｍｅｌ１７を、Ｔｓｕｋａｍｏｔｏらにより示された方法を改良してｎｅｓｔｅｄ  ＰＣＲにより検出した。最初の反応のために、２μＬのｃＤＮＡを含む反応ボリューム２０μＬ中で、３０サイクルのＰＣＲ（９５℃１分、５８℃１分、７２℃１分）を行なった。ネストプライマーでの再増幅のために、最初の反応産物１μＬを、反応ボリューム２０μＬ中で、さらに３０サイクル増幅した。比較閾値方法によりデータを解析して、ＧＡＰＤＨ内部コントロール転写に対して正規化した。結果は半定量的であり、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはＧＭ−ＣＳＦで処置されたマウスでのレベルと比較した、ビヒクル処置のコントロールマウスにおける転写レベルでの違い（倍）を表す。
【０１３９】
［ミューリン乳がんモデル］
ポリオーマミドルＴ抗原がミューリン乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーターにより発現されるＰｙＭＴトランスジェニックマウスが、以前に説明されている（Ｌｉｎ  ＥＹ，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ，２００３、その全体で参照により本明細書中に援用される）。これらのマウスは、１０個の乳腺全てにおいて乳腺上皮がんが自然に発症する。Ｃ５７ＢＬ／６ＰｙＭＴトランスジェニックマウスからの末期腫瘍由来の不死化細胞株を使用した。５×１０５のＣ５７ＢＬ／６  ＰｙＭＴ腫瘍細胞を、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスの＃４乳腺脂肪体中に同所性に注入した。いったん腫瘍が触知可能になったら（およそ３週）、マウスは、ランダムにビヒクルコントロール（５％デキストラン中２０％ＰＥＧ）、または、１２ｍｇ／ｋｇまたは１７．５ｍｇ／ｋｇの本開示のＨＩＦ−２α安定化剤のいずれかで処置を受けた。マウスは１週間に３回処置して、腫瘍体積を上述のように計算した
【０１４０】
図３は、高い投与量（１７ｍｇ／ｋｇ）のＨＩＦ−２α安定化剤に関する本試験の結果を示す。これらのデータは、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤（△）が単独で腫瘍増殖を減少させ、それは動物がＧＭ−ＣＳＦ（■）単独で処置された場合にみられる腫瘍体積の減少と同程度であることを示す。加えて、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤をＧＭ−ＣＳＦと組み合わせて使用する場合（Ｘ）は、腫瘍増殖の減少が相加的である。これらの結果は、ビヒクルのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）の投与のみを受けるコントロール動物（◆）と比較される。
【０１４１】
投与プロトコル、すなわち、投与を腹腔内（Ｉ．Ｐ．）経由または腫瘍内（Ｉ．Ｔ．）経由の注入で行うかどうか比較して本試験を繰り返した。この繰り返しの試験にコントロール群は用いなかった。図４は、高投与量（１７ｍｇ／ｋｇ）のＨＩＦ−２α安定化剤に関する本試験の結果を示す。これらのデータは、Ｉ．Ｔ．注射が、Ｉ．Ｐ．注射よりも高い腫瘍体積減少をもたらすことを示す。例えば、Ｉ．Ｐ．投与（△）と比較して、ＧＭ−ＣＳＦがＩ．Ｔ．投与（◆）された場合に腫瘍体積の減少が高かった。これらの結果は、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤およびＧＭ−ＣＳＦを構成要素とする処置に関して、Ｉ．Ｐ．投与（■）とＩ．Ｔ．投与（ｘ）との比較時に確認された。
【０１４２】
図５は、図３に示された注入法に関してＰｍｅｌ１７のｍＲＮＡ発現を用いて決定された肺転移の相対量を示す。ここで、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤はＩＰ投与されて、ＧＭ−ＣＳＦはＩ．Ｔ．投与された。Ａ群は、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤およびＧＭ−ＣＳＦの両方に関するビヒクルコントロールである。Ｂ群は、ＧＭ−ＣＳＦ（＋）５％デキストラン中２０％ＰＥＧ（本開示のＨＩＦ−２α安定化剤投与のビヒクル）を表す。Ｃ群は、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤（＋）ＰＢＳ（ＧＭ−ＣＳＦ投与のビヒクル）を表す。Ｄ群は、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤およびＧＭ−ＣＳＦを表す。本開示のＨＩＦ−２α安定化剤は、そのビヒクル（５％デキストラン中２０％ＰＥＧ）で送達してＩ．Ｐ．投与し、ＧＭ−ＣＳＦは、そのビヒクル（ＰＢＳ）で送達してＩ．Ｔ．投与した。本開示のＨＩＦ−２α安定化剤の群のみが、Ｐｍｅｌ１７のｍＲＮＡ発現により測定される転移の減少を示したことに留意されたい。
【０１４３】
図６は、ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴトランスジェニックマウス由来の細胞を、１つの乳腺に同所性に注入されたＣ５７ＢＬ／６マウスに関する腫瘍体積の減少を示す。ビヒクル（◆）、１２ｍｇ／ｋｇの本開示のＨＩＦ−２α安定化剤（■）、または１７．５ｇ／ｋｇの本開示のＨＩＦ−２α安定化剤（●）で、１週間に３回、動物を処置する。
【０１４４】
ヒト卵巣異種移植片試験
［試薬および試験化合物］
試験化合物、｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸を、逆浸透脱イオン水中の０．２５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース／０．１％Ｔｗｅｅｎ（商標）８０溶液中に製剤化した。試験化合物は、各バイアルに、指示されるように１．８ｍｇ／ｍｌおよび３．６ｍｇ／ｍｌの濃度で再構成し、１０ｍｇ／ｋｇの投与ボリュームでそれぞれ１８ｍｇ／ｋｇおよび３６ｍｇ／ｋｇの投与量を送達した。試験化合物の溶液は毎週調製して、光から保護して４℃で保管した。全ての製剤は、冷蔵庫から取り出して投与前に３０分間撹拌して、投与中も継続的に撹拌した。
【０１４５】
ビヒクルコントロールは、逆浸透脱イオン水中０．２５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース／０．１％Ｔｗｅｅｎ（商標）８０溶液の溶液を作ることにより調製した。
【０１４６】
［細胞培養］
Ａ２７８０／ＣＰ卵巣腫瘍細胞株は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から取得した。培養は、１０％ウシ胎児血清で補充されたＲＰＭＩ  １６４０（Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ）中に保ち、５％ＣＯ２雰囲気中に収容した。十分な収量の細胞が獲得されるまで、１：３の継代比率で、組織培養フラスコ中で培養を続けた。
【０１４７】
［動物］
雌の無胸腺ムードマウスはＨａｒｌａｎ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）により供給された。マウスは、４〜５週齢、１２〜１５ｇの体重で提供され、取り扱う前の７日間、順応させた。マウスをマイクロアイソレーターケージ内に収容し、特有の病原体がフリーの条件下に維持した。マウスにＴｅｋｌａｎｄ  Ｇｌｏｂａｌ  Ｄｉｅｔ（商標）２９２０ｘ放射線照射の実験動物食（Ｈａｒｌａｎ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）を与え、オートクレーブされた水は自由に利用できるようにした。
【０１４８】
［Ａ２７８０／ＣＰ卵巣腫瘍異種移植片モデル］
６０匹の雌マウスに、Ａ２７８０／ＣＰ腫瘍細胞（およそ１．０×１０７細胞／マウス）の懸濁液を含む、０．１ｍｌの５０％ＲＰＭＩ／５０％Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）混合物を、右脇腹に皮下接種した。
【０１４９】
接種後３日に、腫瘍をカリパスで測定し、動物試験管理ソフトウェアを用いて腫瘍重量を計算した。８０．４〜１７０．６ｍｇの腫瘍サイズを有する３０匹のマウスを、ランダムな平衡化により、１０匹のマウスの３群（１〜３群）にランダム化した。マウスをランダム化したときに体重を記録し、その後１週間に２回、腫瘍の測定とともに記録した。
【０１５０】
試験のエンドポイントまで動物を処置した。Ｉ群はビヒクルのみを受けた（コントロール）。ＩＩ群には、１．８ｍｇ／ｍＬの投与量の｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸を与えて、一方で、ＩＩＩ群には３．６ｍｇ／ｍＬの投与量の｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸を与えた。全ての投与は経口投与（ＰＯ）により与えられた。各投与の投与量は、およそ１ｍＬ／１００ｇ動物体重であった。
【０１５１】
以下の式：
【数１】
2014522410.tif 000027
を用いて腫瘍量（ｍｇ）を決定した。
【０１５２】
ここで、「ａ」は最大直径であり、「ｂ」は最小直径である。測定はカリパスを用いて行なった。試験開始時の平均腫瘍サイズは１００〜１２５ｍｇであった。試験１日目に、動物を上述の３群にランダムに割り当てた。
【０１５３】
上記の方法によりそれぞれの腫瘍が腫瘍重量≧２０００ｍｇに到達したときに、主要試験の１〜３群から腫瘍を採取した。腫瘍サイズの測定および動物体重は、週に２回行なった。以下の表１および図７〜９は、本試験の結果を要約する。
【０１５４】
【表１】
2014522410.tif 000028
【０１５５】
図７は、試験の各評価ポイントでの生存動物の数を示す。（◆）で示される線はコントロール群を表し、（▲）で示される線は、１８ｍｇ／ｋｇの化合物が与えられた群を表し、（■）で示される線は、３６ｍｇ／ｋｇの化合物が与えられた群を表す。
【０１５６】
図８は、コントロール群（◆）、１８ｍｇ／ｋｇの化合物投与群（▲）、および、３６ｍｇ／ｋｇの化合物投与群（■）に関する試験にわたる腫瘍量の変化を示す。
【０１５７】
図９は、コントロール群（◆）、１８ｍｇ／ｋｇの化合物投与群（▲）、および、３６ｍｇ／ｋｇの化合物投与群（■）に関する体重変化（％）を示す。
【０１５８】
図７〜９および表１中の上記データから分かるように、腫瘍量の増殖速度は、コントロール群に比較して非常に低下し、１６日目までに、その全てが２，０００ｍｇを超える腫瘍量を有した（試験のエンドポイント）。
【０１５９】
［末梢血単球の精製および単球由来マクロファージの生産］
リンパ球分離培地（Ｃｅｌｌｇｒｏ）での密度勾配遠心分離により、新鮮な末梢血白血球ソースパック（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｒｅｄ  Ｃｒｏｓｓ，Ｃｏｌｕｍｂｕｓ  ＯＨ）から、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を単離した。ＦＢＳ上に積層することにより、全ＰＢＭＣから単球を精製した。１％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、０．１％ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、および１０μｇ／ｍＬのエンドトキシン阻害剤ポリミキシンＢで補充されたエンドトキシンフリーのＲＰＭＩ−１６４０中で、単球を培養した。一部の実験では、単離されたばかりの単球を、１０％のＦＢＳ、１％のＰＳＡ（ペニシリンＧナトリウム、ストレプトマイシンサルフェート、およびアンホテリシンＢ）、および２０ｎｇ／ｍＬのＭ−ＣＳＦを含む培地中で３日培養することにより、マクロファージに分化させた。マクロファージは、刺激前に２時間、血清飢餓させた。単球または単球由来マクロファージを、１０ｎｇ／ｍＬのＧＭ−ＣＳＦ、１０μＭの本開示のＨＩＦ−２α安定化剤、または同量のビヒクルコントロール（それぞれＰＢＳまたはＤＭＳＯ）で２４時間処理した。無細胞培養上清を採取して、ＥＬＩＳＡ（Ｒ&Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）により、ＶＥＧＦまたはｓＶＥＧＦＲ−１について分析した。
【０１６０】
［ＨＩＦ−２αｆｌｏｘ／ｆｌｏｘ／ＬｙｓＭｃｒｅマウスの作製および骨髄由来マクロファージの培養］
ＨＩＦ２αｆｌｏｘ／ｆｌｏｘマウス（ペンシルバニア大学のＤｒ．Ｃｅｌｅｓｔｅ  Ｓｉｍｏｎにより最初に開発された）およびＬｙｓＭｃｒｅリコンビナーゼマウス（デュッセルドルフ大学のＩｒｍｇａｒｄ  Ｆｏｅｒｓｔｅｒにより最初に開発された）（両方ともＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ＢａｒＨａｒｂｏｒ、ＭＥから購入した）を掛け合わせて、ＬｙｓＭｃｒｅおよび、ｆｌｏｘｅｄ  ＨＩＦ−２α対立遺伝子の、両方がホモ接合性のマウスを作製した。ｆｌｏｘｅｄ  対立遺伝子を発現しないＬｙｓＭｃｒｅリコンビナーゼマウスをコントロールとして用いた。ＨＩＦ−２αｆｌｏｘ／ｆｌｏｘ／ＬｙｓＭｃｒｅマクロファージにおいて、ＨＩＦ−２αの欠損がリアルタイムＰＣＲにより転写レベルで確認されたが、ＬｙｓＭｃｒｅコントロールマクロファージでは確認されなかった。
【０１６１】
骨髄由来マクロファージ（ＢＤＭ）を生産するために、大腿骨髄を単離して、前駆細胞を、１０％のＦＢＳ、１％のＰＳＡ、１０μｇ／ｍＬのポリミキシンＢ、および２０ｎｇ／ｍＬの組み換えミューリンＭ−ＣＳＦで補充された、ＲＰＭＩ−１６４０にプレーティングした。一日おきに新鮮なＭ−ＣＳＦを添加して、５日間細胞を培養した。分化ＢＤＭを２時間血清飢餓させて、それから、１％のＦＢＳおよび１０μｇ／ｍＬのポリミキシンＢを含むＲＰＭＩ−１６４０中、１００ｎｇ／ｍＬのミューリンＧＭ−ＣＳＦおよび／または２５μＭの本開示のＨＩＦ−２α安定化剤で処理した。培養上清を７２時間後に回収して、ＥＬＩＳＡ（Ｒ&Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）によりＶＥＧＦおよびｓＶＥＧＦＲ−１含有量をアッセイした。
【０１６２】
［リアルタイムＰＣＲ］
ヒト単球は、未処理のままにして、または、酸素正常条件下または０．５％Ｏ２条件下で、１００ｎｇ／ｍＬのＧＭ−ＣＳＦで刺激した。様々な時点で、Ｔｒｉｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に細胞を採取し、ＲＮＡをクロロホルム抽出し、それから、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて精製した。ミューリン試験では、安楽死のときに摘出した臓器を液体窒素中で急速冷凍し、液体窒素中で粉砕し、それからＴｒｉｚｏｌ中に溶解させた。Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  Ｆｉｒｓｔ  Ｓｔｒａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、１μｇのＲＮＡからｃＤＮＡを生産し、メーカーの説明書に従って、前述のプライマーおよびＳＹＢＲグリーンＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いたリアルタイムＰＣＲに使用した。比較閾値方法によりデータを解析し、β−アクチン内部コントロール転写に対して正規化した。結果は半定量的であり、同一ドナー由来の未処理の細胞でのレベルと比較した、特定のサンプルにおける転写レベルでの違い（倍）を表す。
【０１６３】
［ミューリンメラノーマ腫瘍モデル］
６〜８週齢Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、１×１０５のＢ１６Ｆ１０ミューリンメラノーマ細胞ミューリンを、左脇腹に皮下注入した。いったん腫瘍が触知可能になると（およそ５日）、マウスをランダムに分配して、５％スクロース中の２０％ＰＥＧ−４００（本開示のＨＩＦ−２α安定化剤のビヒクル）およびＰＢＳ（ＧＭ−ＣＳＦのビヒクル）、２０％ＰＥＧ−４００およびＧＭ−ＣＳＦ（５０μＬボリュームでマウスあたり１００ｎｇ）、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤（１００μＬボリュームで１７．５ｍｇ／ｋｇマウス重量）およびＰＢＳ、または本開示のＨＩＦ−２α安定化剤およびＧＭ−ＣＳＦ（同一濃度）のいずれかで処置した。本開示のＨＩＦ−２α安定化剤（またはそのビヒクルコントロール）は腹腔内投与し、一方でＧＭ−ＣＳＦ（またはそのビヒクルコントロール）は腫瘍内投与した。マウスは、腫瘍が任意の寸法で２０ｍｍのサイズに達するまで（およそ２．５週）、１週間に３回、腫瘍内処置し、その時点でマウスを施設の方針に従って安楽死させた。腫瘍の直径をカリパスで１週間に３回測定した。腫瘍体積は以下のように計算される：腫瘍体積＝０．５×［（大直径）×（小直径）２］。本開示のＨＩＦ−２α安定化剤処置と組み合わせたｓＶＥＧＦＲ−１の中和効果を分析する実験のために、マウスは、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤またはビヒクルコントロールのいずれかで１週間に３回、腹腔内処置し、５０μＬボリューム中４μｇの抗−ＶＥＧＦＲ−１中和抗体（Ｒ&Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）または４μｇのポリクローナルヤギＩｇＧアイソタイプコントロール（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）のいずれかで腫瘍内処置した。全ての方法は、Ｏｈｉｏ  Ｓｔａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅにより承認され、マウスは、動物保護の施設のガイドラインに従って処置した。
【０１６４】
［肺転移の評価］
肺転移は、腫瘍を有するマウスの肺内のメラニン形成細胞特異的なタンパク質に関するｍＲＮＡの検出により評価した。Ｂ１６Ｆ１０腫瘍を有するマウスを、上述のように、ＧＭ−ＣＳＦおよび／または本開示のＨＩＦ−２α安定化剤で腫瘍内処置した。屠殺のときに、肺を摘出して液体窒素中で急速冷凍した。冷凍された肺を液体窒素中でホモジナイズして、粉砕物をＴｒｉｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に溶解させた。ＲＮＡをクロロホルム抽出し、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて精製した。Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  Ｆｉｒｓｔ  Ｓｔｒａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて１μｇのＲＮＡからｃＤＮＡを生産し、メーカーの説明書に従って、ＳＹＢＲグリーンＰＣＲ  ＭａｓｔｅｒＭｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いたリアルタイムＰＣＲに使用した。メラニン形成細胞特異的なｍＲＮＡ、ＴＲＰ２およびＰｍｅｌ１７を、Ｔｓｕｋａｍｏｔｏらにより示された方法を改良してｎｅｓｔｅｄ  ＰＣＲにより検出した。最初の反応のために、２μｌのｃＤＮＡを含む２０μｌの反応ボリューム中で、３０サイクルのＰＣＲを行なった（９５℃１分、５８℃１分、７２℃１分）。ネストプライマーでの再増幅のために、１μＬの最初の反応産物を２０μｌの反応ボリューム中でさらに３０サイクル増幅した。比較閾値方法によりデータを解析し、β−アクチン内部コントロール転写に対して正規化した。結果は半定量的であり、ビヒクルコントロールマウスでのレベルと比較した、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはＧＭ−ＣＳＦ処置マウスにおける転写レベルでの違い（倍）を表す。
【０１６５】
［統計解析］
ＡＮＯＶＡ検定を用いて、複数の処置群間の非依存的な測定を比較した。データをｌｏｇ変換して、群間の分散を正規化した。Ｈｏｌｍの方法を用いてＰ値を調節して、多重比較に起因するタイプＩエラーを０．０５に保った。腫瘍増殖データに関し、腫瘍体積の経時変化を長期的に算定した。腫瘍量をｌｏｇ変換し、推定スロープ（腫瘍体積の経時変化）を９５％信頼区間で計算した。腫瘍体積の推定誤差を、長期的データのランダム効果回帰（ｒａｎｄｏｍ−ｅｆｆｅｃｔｓ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ）により計算した。全ての解析について、ｐ≦０．０５を統計的に有意とみなした。
【０１６６】
［本開示のＨＩＦ−２α安定化剤でのＰＨＤ３の阻害は、単球およびマクロファージのｓＶＥＧＦＲ−１産生を増強するが、ＶＥＧＦは増強しない。］
ＧＭ−ＣＳＦおよび低酸素に応答した単球のｓＶＥＧＦＲ−１産生は、ＨＩＦ−２αに依存する。一方で、ＨＩＦ−１αは同一条件下で単球のＶＥＧＦ産生を調節した。理論に束縛されるものではないが、本発明者らは、ＨＩＦ−２αの選択的安定化は、ＶＥＧＦ産生を影響することなく、ＧＭ−ＣＳＦにより刺激された単球からのｓＶＥＧＦＲ−１産生を高めると現在考えている。
【０１６７】
本開示のＨＩＦ−２α安定化剤によるＨＩＦ−２αの選択的上方制御を確認するために、ミューリン骨髄由来マクロファージを本開示のＨＩＦ−２α安定化剤で１８時間処理し、細胞を溶解させて、ＨＩＦ−１αおよびＨＩＦ−２αに関してイムノブロットした。本発明者らは、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤で処理した細胞においてＨＩＦ−２αタンパク質の増加を観察したが、ＨＩＦ−１αでは対応する増加は無かった（図１１Ａ）。
【０１６８】
ＨＩＦ−２αの安定化が、ｓＶＥＧＦＲ−１産生を増加させたかどうか調べるために、ヒト末梢血単球を、１０μＭの本開示のＨＩＦ−２α安定化剤の存在下または不存在下で、１００ｎｇ／ｍＬのＧＭ−ＣＳＦで刺激した。ＧＭ−ＣＳＦで処理された単球によるｓＶＥＧＦＲ−１産生は、単球を本開示のＨＩＦ−２α安定化剤でも処理した場合に、タンパク質および転写レベルの両方で有意に増加した（それぞれｐ＝０．００７およびｐ＝０．０３３）（図１１Ｂ）。
【０１６９】
同じ上清中のＶＥＧＦレベルを、フリーの（生物学的に利用可能な）ＶＥＧＦを検出するがｓＶＥＧＦＲ−１に結合したＶＥＧＦは検出しないＥＬＩＳＡを用いて測定した。本開示のＨＩＦ−２α安定化剤での細胞処理は、ＶＥＧＦ産生を有意に増加させなかった（ｐ＝０．１３３）。ｓＶＥＧＦＲ−１によるＶＥＧＦの中和のため、ＶＥＧＦタンパク質は、ＧＭ−ＣＳＦで刺激された単球の上清中に検出不可能であった（図１１Ｃ）。
【０１７０】
リアルタイムＰＣＲを用いたＶＥＧＦ転写レベルの評価により、ＧＭ−ＣＳＦはＶＥＧＦ産生を増加させるが、ＧＭ−ＣＳＦ単独で刺激された単球またはＧＭ−ＣＳＦと本開示のＨＩＦ−２α安定化剤とで刺激された単球の間で、ＶＥＧＦ産生に違いはないことが明らかにされた（ｐ＝０．５５６）（図１１Ｃ）。
【０１７１】
これらの結果は、ＨＩＦ−２αの選択的安定化は、単球のｓＶＥＧＦＲ−１産生を増加させるがＶＥＧＦ産生を増加させないことを示す。
【０１７２】
単球のＶＥＧＦ産生はＨＩＦ−１αに依存したので、本発明者らは、ＰＨＤ２阻害を介したＨＩＦ−１αの選択的安定化が、単球のＶＥＧＦ産生を増加させるがｓＶＥＧＦＲ−１産生を増加させないかどうか検討した。そのような検討をするために、ヒト末梢血単球を、ＨＩＦ−１αの安定化をもたらすＰＨＤ２の選択的な阻害剤存在下で、ＧＭ−ＣＳＦで刺激した。
【０１７３】
ＧＭ−ＣＳＦは、単球のｓＶＥＧＦＲ−１産生を誘導した。しかしながら、ＧＭ−ＣＳＦ単独で刺激された単球、またはＰＨＤ２の選択的な阻害剤で共刺激された単球からのｓＶＥＧＦＲ−１産生には、タンパク質または転写レベルのいずれでも違いはなかった（それぞれｐ＝０．３０６およびｐ＝０．５６６）（図１１Ｄ）。
【０１７４】
しかしながら、ＰＨＤ３の選択的な阻害剤は、単球の、ＶＥＧＦタンパク質およびｍＲＮＡの産生を増加させた（それぞれｐ＝０．０１１およびｐ＝０．００７）（図１１Ｅ）。
【０１７５】
ＨＩＦ−２αの安定化によりｓＶＥＧＦＲ−１産生が誘導されたことを確かめるために、マウスからの骨髄由来マクロファージを、骨髄に特異的なＨＩＦ−２α欠損（ＨＩＦ−２αｆｌｏｘ／ｆｌｏｘ／ＬｙｓＭｃｒｅ）とともに用いた。
【０１７６】
本開示のＨＩＦ−２α安定化剤は、コントロールのマクロファージからのｓＶＥＧＦＲ−１転写を誘導したが（ｐ＝０．０３６）、ＨＩＦ−２α欠損マクロファージからの転写は誘導しなかった（ｐ＝０．８８１）（図１１Ｆ）。
【０１７７】
これらの結果は、ｓＶＥＧＦＲ−１産生がＨＩＦ−２α依存的な効果であることを示す。さらにこれらの結果は、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤でのＰＨＤ３阻害は、ＨＩＦ−２αを安定化させ、ＧＭ−ＣＳＦで刺激された単球からｓＶＥＧＦＲ−１を選択的に誘導するがＶＥＧＦは誘導しないことを示す。
【０１７８】
［ＨＩＦ−２αの安定化は、ＧＭ−ＣＳＦの抗腫瘍効果を高め、ミューリンメラノーマモデルにおいて生存を高める］
ＧＭ−ＣＳＦの抗腫瘍効果は、ミューリンメラノーマモデルにおいて、腫瘍関連マクロファージからのＨＩＦ−２αを介したｓＶＥＧＦＲ−１産生に依存する（Ｒｏｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，"Ｈｙｐｏｘｉａ−Ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  Ｆａｃｔｏｒ−２α  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ＧＭ−ＣＳＦ？Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ａｎｄ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｔｕｍｏｒ  Ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ"，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ｏｎ  ｌｉｎｅ  ｂｅｆｏｒｅ  ｐｒｉｎｔ  Ｊｕｌｙ  １５，２０１１，ｄｏｉ：１０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．１１００８４１）。
【０１７９】
それ故に、ＨＩＦ−２αの化学的安定化が腫瘍関連マクロファージからのｓＶＥＧＦＲ−１産生を増加させて、それによりＧＭ−ＣＳＦの抗腫瘍効果を高めるかどうかを調べた。
【０１８０】
皮下Ｂ１６Ｆ１０メラノーマを有するマウスを、ＧＭ−ＣＳＦ（１００ｎｇ／マウス、腫瘍内）、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤（１７．５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）、またはその組み合わせ（または適切なビヒクルコントロール）で、１週間に３回処置した。ｌｏｇ変換値を用いた長期モデルに基づいて、ベースラインで４群間に腫瘍体積の有意差はみられなかった。しかしながら、処置１６日目には、ＧＭ−ＣＳＦまたは本開示のＨＩＦ−２α安定化剤のいずれかを受けたマウスに関する平均腫瘍体積は、ビヒクルコントロールで処置されたマウスよりも有意に小さかった（それぞれｐ<０．００１）。さらに、ＧＭ−ＣＳＦと本開示のＨＩＦ−２α安定化剤とを組み合わせた処置は、いずれかの処置のみと比較して、腫瘍増殖をさらに減少させた（図１２Ａ）（ｐ<０．００１）。これらのデータは、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤が、メラノーマモデルにおいてＧＭ−ＣＳＦの抗腫瘍効果を高めることができることを示す。また、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤は、単独でも、Ｂ１６Ｆ１０メラノーマを有するマウスの生存を高めた。図１２Ｂは、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤で処置されたマウスで、生存の中央値が３日増加する（腫瘍直径が２０ｍｍ３であるときと定義した）ことを示す（ｐ＝０．０２３）。
【０１８１】
［本開示のＨＩＦ−２α安定化剤は、ＧＭ−ＣＳＦに応答したｓＶＥＧＦＲ−１産生を高めて腫瘍血管新生を減少させる。］
再び、理論に束縛されるものではないが、本発明者らは、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤でのＨＩＦ−２αの化学的安定化が、ＧＭ−ＣＳＦに応答したｓＶＥＧＦＲ−１産生を増加させて、それにより、腫瘍増殖および血管新生を減少させることを現在考えている。リアルタイムＰＣＲを用いて、ＧＭ−ＣＳＦ、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤、またはその組み合わせで処置したマウス由来の腫瘍内の、ｓＶＥＧＦＲ−１およびＶＥＧＦのｍＲＮＡレベルを評価した。
【０１８２】
増加したレベルのｓＶＥＧＦＲ−１が、ＧＭ−ＣＳＦと本開示のＨＩＦ−２α安定化剤の両方で処置したマウスの腫瘍内で検出された（図１３Ａ）（ｐ＝０．０３１）。反対に、ＧＭ−ＣＳＦ（単独、または、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤と組み合わせて）は、ビヒクルコントロール処置マウスで観察されたレベルを超える腫瘍内ＶＥＧＦレベルの増加はなかった（図１３Ｂ）（ｐ＝０．４９０）。ｓＶＥＧＦＲ−１産生の増加が腫瘍血管新生の減少をもたらしたことを確認するために、それぞれのマウス由来の腫瘍を、内皮細胞マーカーＣＤ３１に関する免疫組織化学により染色した。図１３Ｃに示すように、ＧＭ−ＣＳＦと本開示のＨＩＦ−２α安定化剤との組み合わせ処置は、おそらくｓＶＥＧＦＲ−１の誘導を介して、メラノーマを有するマウスでの腫瘍血管分布を有意に減少させた（ｐ<０．００１）。
【０１８３】
血管新生の増加は転移リスクの増加と関連するので、本発明者らは、ＧＭ−ＣＳＦ、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤、またはその組み合わせで処置したマウスでの肺転移を調べた。ビヒクルコントロール処置マウスと比較して、有意に減少したレベルのメラノーマに特異的な遺伝子Ｐｍｅｌ１７が、ＧＭ−ＣＳＦおよび本開示のＨＩＦ−２α安定化剤で処置されたマウスの肺内で検出された（図１３Ｄ）。
【０１８４】
これらの結果は、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤が、腫瘍関連マクロファージからのｓＶＥＧＦＲ−１産生を増加させることにより、ＧＭ−ＣＳＦの抗血管新生効果を高めることを示す。
【０１８５】
［本開示のＨＩＦ−２α安定化剤の抗腫瘍効果は、ｓＶＥＧＦＲ−１産生に依存する。］
ＧＭ−ＣＳＦおよび本開示のＨＩＦ−２α安定化剤で処置されたマウスの腫瘍内のｓＶＥＧＦＲ−１のレベルの増加は、腫瘍増殖および血管新生の減少と相関した。腫瘍増殖および血管新生の調節が、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤に応答したｓＶＥＧＦＲ−１産生に起因したことを確認するために、マウスを、ｓＶＥＧＦＲ−１中和Ａｂの存在下または不存在下で、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤で処置した。
【０１８６】
本開示のＨＩＦ−２α安定化剤は、アイソタイプコントロール抗体で処置されたマウスでの腫瘍増殖を減少させたが（ｐ<０．００１）、抗−ｓＶＥＧＦＲ−１中和抗体でも処置されたマウスでの腫瘍増殖に対しては効果がなかった（ｐ＝０．２４５）（図１４Ａ）。
【０１８７】
腫瘍血管新生におけるｓＶＥＧＦＲ−１産生の役割を確認するために、本発明者らは、内皮細胞マーカーＣＤ３１に関する腫瘍を免疫染色した。図１４Ｂに示すように、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤は、コントロール抗体で処置されたマウスでの腫瘍血管分布を減少させたが（ｐ＝０．０２２）、ｓＶＥＧＦＲ−１中和Ａｂで処置されたマウスでは減少しなかった。
【０１８８】
これらの結果は、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤が、ｓＶＥＧＦＲ−１を誘導することにより、腫瘍血管新生を減少させることを示す。
【０１８９】
［本開示のＨＩＦ−２α安定化剤に応答したｓＶＥＧＦＲ−１産生は、マクロファージのＨＩＦ−２α産生に依存する。］
本開示のＨＩＦ−２α安定化剤は、特にマクロファージを標的とするのではなく、腫瘍関連マクロファージだけでなく全ての組織においてＨＩＦ−２αを安定化する。本開示のＨＩＦ−２α安定化剤に対する抗腫瘍応答におけるマクロファージの役割を調べるために、ＨＩＦ−２αの骨髄特異的欠損を有するマウス（ＨＩＦ−２αｆｌｏｘ／ｆｌｏｘ／ＬｙｓＭｃｒｅマウス）を使用した。
【０１９０】
本開示のＨＩＦ−２α安定化剤は、ＬｙｓＭｃｒｅコントロールマウス（ＬｙｓＭ駆動的ｃｒｅリコンビナーゼを含むが、ｆｌｏｘｅｄ対立遺伝子を含まない）での腫瘍増殖を阻害した。本開示のＨＩＦ−２α安定化剤は、ＨＩＦ−２α欠損マクロファージを有するマウスでの腫瘍増殖を減少させたが、抗腫瘍応答の程度はコントロールマウスよりもさらに低かった（図１５）。
【０１９１】
これらの結果は、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤が、少なくとも一部では、腫瘍関連マクロファージでのＨＩＦ−２αを安定化してｓＶＥＧＦＲ−１産生を誘導することにより、腫瘍増殖および血管新生を阻害することを示す。
【０１９２】
［ヒトメラノーマ細胞株（Ａ３７５）］
ヒトメラノーマ細胞株（Ａ３７５）を有し、発明者がＢ１６Ｆ１０ミューリンメラノーマモデルに関して行なったように、ＧＭ−ＣＳＦ、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤、またはその組み合わせで処置された、免疫不全マウス。ＧＭ−ＣＳＦと本開示のＨＩＦ−２α安定化剤との組み合わせは、このモデルでの腫瘍増殖を有意に減少させた（ｐ＝０．０５）。このデータは、さらなるミューリンモデルでのＧＭおよび本開示のＨＩＦ−２α安定化剤の有効性に関する本発明者らの知見を裏付け、また、マウスで増殖されたヒトがん細胞株が試験されるため、少なくとも一部で、ヒトのがんにも生物学的に高く関連がある。図１５参照。
【０１９３】
［ミューリンメラノーマ腫瘍モデル］
６〜８週齢Ｃ５７ＢＬ／６マウスまたはＳＣＩＤマウスに、１×１０５のＢ１６Ｆ１０ミューリンメラノーマ細胞または１×１０６のＡ３７５のヒトメラノーマ細胞を、それぞれ、皮下を左脇腹に注入した。いったん腫瘍が触知可能になると（およそ５日）、マウスをランダムに分配して、５％スクロース中の２０％ＰＥＧ−４００（本開示のＨＩＦ−２α安定化剤のビヒクル）およびＰＢＳ（ＧＭ−ＣＳＦのビヒクル）、２０％ＰＥＧ−４００およびＧＭ−ＣＳＦ（５０μＬボリュームでマウスあたり１００ｎｇ）、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤（１００μＬボリュームで１７．５ｍｇ／ｋｇマウス体重）およびＰＢＳ、または本開示のＨＩＦ−２α安定化剤およびＧＭ−ＣＳＦ（同一濃度）のいずれかで処置した。本開示のＨＩＦ−２α安定化剤（またはそのビヒクルコントロール）は腹腔内投与し、一方でＧＭ−ＣＳＦ（またはそのビヒクルコントロール）は腫瘍内投与した。マウスは、腫瘍が任意の寸法で２０ｍｍのサイズに達するまで（およそ２．５週）、１週間に３回、腫瘍内処置し、その時点でマウスを施設の方針に従って安楽死させた。腫瘍の直径をカリパスで１週間に３回測定した。腫瘍体積は以下のように計算される：腫瘍体積＝０．５×［（大直径）×（小直径）２］。
【０１９４】
本試験では、免疫不全ＳＣＩＤマウスに、Ａ３７５ヒトメラノーマ腫瘍を皮下接種した。腫瘍が触知可能なったとき（注射後７日）にスタートして、マウスを細胞傷害性化学療法のドセタキセルまたは本開示のＨＩＦ−２α安定化剤のいずれかで処置した。本開示のＨＩＦ−２α安定化剤は、１７ｍｇ／ｋｇの投与量で投与し、ドセタキセルは１ｍｇ／ｋｇで投与した。両方の薬剤は、ＩＰで１週間に３回投与した。ドセタキセルと本開示のＨＩＦ−２α安定化剤との組み合わせは、いずれかの薬剤単独と比較して、腫瘍増殖を有意に阻害した。屠殺のときに、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤のみ投与されたマウスでの腫瘍は、コントロール腫瘍のサイズのおよそ７８％であり、化学療法のみを受けたマウスの腫瘍は、コントロール腫瘍のサイズのおよそ５０％であり、両方の薬剤を投与されたマウスの腫瘍は、コントロール腫瘍のサイズのおよそ１６％であった。
【０１９５】
本開示の特定の実施態様が示され説明されているが、本開示の主旨および範囲を逸脱せずに様々な他の変更および改良をすることができることが、当業者に明白であろう。したがって、添付の特許請求の範囲内には、本開示の範囲内のそのような全ての変更および改良が含まれることが意図される。
【図１ａ】
2014522410.tif 000043
【図１ｂ】
2014522410.tif 000044
【図２ａ】
2014522410.tif 000045
【図２ｂ】
2014522410.tif 000046
【図３】
2014522410.tif 000047
【図４】
2014522410.tif 000048
【図５】
2014522410.tif 000049
【図６】
2014522410.tif 000050
【図７】
2014522410.tif 000051
【図８】
2014522410.tif 000052
【図９】
2014522410.tif 000053
【図１０】
2014522410.tif 000054
【図１１Ａ】
2014522410.tif 000055
【図１１Ｂ】
2014522410.tif 000056
【図１１Ｃ】
2014522410.tif 000057
【図１１Ｄ】
2014522410.tif 000058
【図１１Ｅ】
2014522410.tif 000059
【図１１Ｆ】
2014522410.tif 000060
【図１２Ａ】
2014522410.tif 000061
【図１２Ｂ】
2014522410.tif 000062
【図１３Ａ】
2014522410.tif 000063
【図１３Ｂ】
2014522410.tif 000064
【図１３Ｃ】
2014522410.tif 000065
【図１３Ｄ】
2014522410.tif 000066
【図１４Ａ】
2014522410.tif 000067
【図１４Ｂ】
2014522410.tif 000068
【図１５】
2014522410.tif 000069
【手続補正書】
【提出日】平成26年1月21日(2014.1.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式：
【化１】
2014522410.tif 000070
を有する化合物であって、
ここで、Ｍ１はカチオンであって；および
Ｒ４は：
ｉ）−ＯＨ；および
ｉｉ）−ＯＭ２；
からなる群から選択され、および
Ｍ２はカチオンである、
化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、
Ｒ４が−ＯＨであることを特徴とする、
化合物。
【請求項３】
請求項１または２に記載の化合物であって、
Ｍ１は、ナトリウム、リチウム、カリウム、アンモニウム、および銀から選択されて、および、
Ｍ２は、水素、または、ナトリウム、リチウム、カリウム、アンモニウム、および銀からなる群から選択されるカチオンであることを特徴とする、
化合物。
【請求項４】
請求項１に記載の化合物であって、
Ｍ１は、以下の式：
【化２】
2014522410.tif 000071
を有するカチオンであり、
ここで、Ｒａ、ＲｂおよびＲｃはそれぞれ独立に：
ｉ）水素；
ｉｉ）置換または非置換のＣ１−Ｃ１２直鎖、Ｃ３−Ｃ１２分岐、またはＣ３−Ｃ１２環状アルキル；および
ｉｉｉ）置換または非置換ベンジル；
からなる群から選択され、
ここで、Ｒａ、ＲｂおよびＲｃのうちの１つまたは複数は
ｉ）Ｃ１−Ｃ１２直鎖、Ｃ３−Ｃ１２分岐、またはＣ３−Ｃ１２環状アルコキシ；
ｉｉ）Ｃ１−Ｃ１２直鎖、Ｃ３−Ｃ１２分岐、またはＣ３−Ｃ１２環状ハロアルコキシ；
ｉｉｉ）ハロゲン；
ｉｖ）ヒドロキシル；および
ｖ）チオ
からなる群から選択される１つまたは複数のユニットにより独立に置換することができ、
ここで、Ｒａ、ＲｂおよびＲｃのうちの１つまたは複数は、カチオン、アニオン、または双性イオンを形成することが可能なユニットをさらに含むことができる
ことを特徴とする、
化合物。
【請求項５】
請求項４に記載の化合物であって、
前記カチオンＭ１は、以下：
ｉ）２−ヒドロキシエチルアンモニウム［ＨＮ＋Ｈ２（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）］；
ｉｉ）メチル−２−ヒドロキシエチルアンモニウム［Ｈ２Ｎ＋（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）］；
ｉｉｉ）ジ−（２−ヒドロキシエチル）アンモニウム［Ｈ２Ｎ＋（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）２］；
ｉｖ）トリ−（２−ヒドロキシエチル）アンモニウム［ＨＮ＋（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）３］；および
ｖ）トリス−（ヒドロキシメチル）メチルアンモニウム［Ｈ３Ｎ＋Ｃ［（ＣＨ２ＯＨ）］３］
から選択されることを特徴とする、
化合物。
【請求項６】
請求項１に記載の化合物であって、
以下：
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸ナトリウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸二ナトリウム
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸カリウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸二カリウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸アンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸二アンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸ナトリウムカリウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸ナトリウムアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸カリウムアンモニウム；
ビス｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸カルシウム；
ビス｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸マグネシウム；
ビス｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸バリウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸メチルアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸カルシウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸マグネシウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−オキシドピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸バリウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸ジメチルアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸ジエチルアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸トリエチルアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸ジメチルエチルアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸メチルジエチルアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸２−ヒドロキシエチルアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸メチル−２−ヒドロキシエチルアンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸ジ−（２−ヒドロキシエチル）アンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸トリ−（２−ヒドロキシエチル）アンモニウム；
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸トリス−（ヒドロキシメチル）メチルアンモニウム；および
｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］−アミノ｝酢酸Ｎ−ベンジル−２−（ベンジルアミノ）エタンアミニウム
から選択されることを特徴とする、
化合物。
【請求項７】
低酸素誘導因子−２α（ＨＩＦ−２α）を安定化するための医薬組成物であって：
Ａ）以下の式：
【化３】
2014522410.tif 000072
を有する化合物、
ここで、Ｒは、以下：
ｉ）−ＯＲ１；
ｉｉ）−ＮＲ２Ｒ３；および
ｉｉｉ）−ＯＭ１；
からなる群から選択されて、
Ｒ１は：
ｉ）水素；および
ｉｉ）Ｃ１−Ｃ６直鎖、Ｃ３−Ｃ６分岐またはＣ３−Ｃ６環状アルキル；
からなる群から選択されて、
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立に、以下：
ｉ）水素；および
ｉｉ）Ｃ１−Ｃ６直鎖、Ｃ３−Ｃ６分岐またはＣ３−Ｃ６環状アルキル；
からなる群から選択されて、
Ｒ２およびＲ３は、一緒になって、２〜７個の炭素原子、ならびに、Ｒ２とＲ３が結合された窒素原子を含む、窒素、酸素、および硫黄から選択される１〜３個のヘテロ原子、を有する環を形成することができて；および
Ｍ１はカチオンであって；および
Ｒ４は：
ｉ）−ＯＨ；および
ｉｉ）−ＯＭ２；
からなる群から選択されて
Ｍ２はカチオンであって；および
Ｂ）１つまたは複数の薬学的に許容できる成分
を含むことを特徴とする、
医薬組成物。
【請求項８】
対象におけるがんを治療するための医薬組成物であって：
Ａ）以下の式：
【化４】
2014522410.tif 000073
を有する化合物であって、
ここで、Ｒは、以下：
ｉ）−ＯＲ１；
ｉｉ）−ＮＲ２Ｒ３；および
ｉｉｉ）−ＯＭ１；
からなる群から選択されて、
Ｒ１は：
ｉ）水素；および
ｉｉ）Ｃ１−Ｃ６直鎖、Ｃ３−Ｃ６分岐またはＣ３−Ｃ６環状アルキル；
からなる群から選択されて、
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立に、以下：
ｉ）水素；および
ｉｉ）Ｃ１−Ｃ６直鎖、Ｃ３−Ｃ６分岐またはＣ３−Ｃ６環状アルキル
からなる群から選択されて、
Ｒ２およびＲ３は、一緒になって、２〜７個の炭素原子、ならびに、Ｒ２とＲ３が結合された窒素原子を含む、窒素、酸素、および硫黄から選択される１〜３個のヘテロ原子、を有する環を形成することができて；および
Ｍ１はカチオンであって；および
Ｒ４は：
ｉ）−ＯＨ；および
ｉｉ）−ＯＭ２；
からなる群から選択されて、
Ｍ２はカチオンであって；および
Ｂ）１つまたは複数の化学療法剤
を含むことを特徴とする、
医薬組成物。
【請求項９】
請求項８に記載の医薬組成物であって、
化学療法剤は、タキソール、ＩＬ−２、ゲムシタビン、エルロチニブ、ドキシル、イリノテカン、およびベバシズマブからなる群から選択されることを特徴とする、
医薬組成物。
【請求項１０】
請求項８または９に記載の医薬組成物であって、
がんは、急性リンパ芽球性白血病；急性骨髄性白血病；副腎皮質がん；小児副腎皮質がん；虫垂がん；基底細胞がん；肝外胆管がん；膀胱がん；骨がん；骨肉腫および悪性線維性組織球腫；小児脳幹グリオーマ；成人脳腫瘍；小児脳腫瘍、小児脳幹グリオーマ；小児脳腫瘍、小児中枢神経系非定型奇形腫様／横紋筋肉腫様腫瘍；中枢神経系胚芽腫；小脳星状細胞腫；大脳星状細胞腫／悪性グリオーマ；頭蓋咽頭腫；上衣芽腫；上衣腫；髄芽腫；髄上皮腫；中間型松果体実質腫瘍；原始神経外胚葉性腫瘍および松果体芽腫；視経路および視床下部グリオーマ；脳腫瘍および脊髄腫瘍；乳がん；気管支腫瘍；バーキットリンパ腫；カルチノイド腫瘍；胃腸カルチノイド腫瘍；中枢神経系非定型奇形腫様／横紋筋肉腫様腫瘍；中枢神経系胚芽腫；中枢神経系リンパ腫；小脳星状細胞腫；小児大脳星状細胞腫／悪性グリオーマ；子宮頸がん；小児脊索腫；慢性リンパ性白血病；慢性骨髄性白血病；慢性骨髄増殖性障害；大腸がん；結腸直腸がん；頭蓋咽頭腫；皮膚Ｔ細胞リンパ腫；食道がん；Ｅｗｉｎｇファミリーの腫瘍；性腺外胚細胞腫瘍；肝外胆管がん；眼のがん、眼球内メラノーマ；眼のがん、網膜芽細胞腫；胆嚢がん；胃（胃）がん；胃腸カルチノイド腫瘍；消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）；頭蓋外胚細胞腫瘍；性腺外胚細胞腫瘍；卵巣胚細胞腫瘍；妊娠性絨毛腫瘍；グリオーマ；小児脳幹グリオーマ；小児大脳星状細胞グリオーマ；小児視経路および視床下部のグリオーマ；有毛細胞白血病；頭頸部がん；肝細胞（肝臓）がん；ランゲルハンス細胞組織球症；ホジキンリンパ腫；下咽頭がん；視床下部および視経路グリオーマ；眼球内メラノーマ；膵島細胞腫瘍；腎臓（腎細胞）がん；ランゲルハンス細胞組織球症；喉頭がん；急性リンパ芽球性白血病；急性骨髄性白血病；慢性リンパ性白血病；慢性骨髄性白血病；有毛細胞白血病；口唇および口腔がん；肝臓がん；非小細胞肺がん；小細胞肺がん；エイズ関連リンパ腫；バーキットリンパ腫；皮膚性Ｔ細胞リンパ腫；ホジキンリンパ腫；非ホジキンリンパ腫；主要中枢神経系リンパ腫；ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症；骨の悪性線維性組織球腫および骨肉腫；髄芽腫；メラノーマ；眼球内（眼）メラノーマ；メルケル細胞がん；中皮腫；転移性潜在性原発扁平頸部がん；口腔がん；多発性内分泌腫瘍症候群（小児）；多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍；菌状息肉腫；骨髄異形成症候群；骨髄異形成／−骨髄増殖性疾患；慢性骨髄性白血病；成人急性骨髄性白血病；小児急性骨髄性白血病；多発性骨髄腫；慢性骨髄増殖性障害；鼻腔がんおよび副鼻腔がん；上咽頭がん；神経芽細胞腫；非小細胞肺がん；口のがん；口腔がん；中咽頭がん；骨肉腫および骨の悪性線維性組織球腫；卵巣がん；卵巣上皮がん；卵巣胚細胞腫瘍；卵巣の低悪性の潜在的腫瘍；膵がん；膵がん、膵島細胞腫瘍；乳頭腫症；副甲状腺がん；陰茎がん；咽頭がん；褐色細胞腫；中間型松果体実質腫瘍；松果体芽腫および原始神経外胚葉性腫瘍；下垂体腫瘍；形質細胞腫瘍／多発性骨髄腫；胸膜肺芽腫；主要中枢神経系リンパ腫；前立腺がん；直腸がん；腎細胞（腎臓）がん；腎盂および尿管の移行上皮がん；クロモソーム１５上のＮＵＴ遺伝子が関与する呼吸器がん；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；唾液腺がん；Ｅｗｉｎｇファミリーの腫瘍肉腫；カポシ肉腫；軟組織肉腫；子宮肉腫；セザリー症候群；皮膚がん（非黒色腫）；皮膚がん（メラノーマ）；メルケル細胞皮膚がん；小細胞肺がん；小腸がん；軟組織肉腫；扁平細胞がん、転移性潜在性原発扁平頸部がん；胃（胃）がん；原始神経外胚葉性腫瘍；皮膚性Ｔ細胞リンパ腫；精巣がん；咽頭がん；胸腺腫および胸腺がん；甲状腺がん；腎盂および尿管の移行上皮がん；妊娠性絨毛腫瘍；尿道がん；子宮内膜子宮がん；子宮肉腫；膣がん；外陰がん；ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症；およびウィルムス腫瘍よりなる群から選択されることを特徴とする、
医薬組成物。
【請求項１１】
請求項８〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、
がんは、メラノーマ、乳がんおよび卵巣がんからなる群から選択されることを特徴とする、
組成物。
【請求項１２】
請求項８〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、
前記化合物は、以下の式：
【化５】
2014522410.tif 000074
または薬学的に許容できるその塩を有する、
医薬組成物。
【請求項１３】
低酸素誘導因子−２α（ＨＩＦ−２α）を安定化するための医薬の製造のための化合物の使用であって、
前記化合物は、以下の式：
【化６】
2014522410.tif 000075
または薬学的に許容できるその塩を有する、
使用。
【請求項１４】
がんを治療するための医薬の製造のための化合物の使用であって、
前記化合物は、以下の式：
【化７】
2014522410.tif 000076
または薬学的に許容できるその塩を有する、
使用。
【請求項１５】
がんを治療するための医薬の製造のための化合物の使用であって、
前記化合物は、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）およびホスホグリセレートキナーゼ（ＰＧＫ）を下方制御するものであり、
前記化合物は、以下の式：
【化８】
2014522410.tif 000077
または薬学的に許容できるその塩を有する、
使用。
【請求項１６】
がんを治療するための医薬の製造のための化合物の使用であって、
前記化合物は、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）を下方制御し、かつ可溶性血管内皮成長因子受容体−１（ｓＶＥＧＦ−１）を増加するものであり、
前記化合物は、以下の式：
【化９】
2014522410.tif 000078
または薬学的に許容できるその塩を有する、
使用。
【請求項１７】
がんを治療するための医薬の製造のための化合物の使用であって、
前記化合物は、ホスホグリセレートキナーゼ（ＰＧＫ）を下方制御し、かつ可溶性血管内皮成長因子受容体−１（ｓＶＥＧＦ−１）を増加するものであり、
前記化合物は、以下の式：
【化１０】
2014522410.tif 000079
または薬学的に許容できるその塩を有する、
使用。
【請求項１８】
がんを治療するための医薬の製造のための化合物の使用であって、
前記化合物は、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）およびホスホグリセレートキナーゼ（ＰＧＫ）を下方制御し、かつ可溶性血管内皮成長因子受容体−１（ｓＶＥＧＦ−１）を増加するものであり、
前記化合物は、以下の式：
【化１１】
2014522410.tif 000080
または薬学的に許容できるその塩を有する、
使用。
【請求項１９】
医薬を製造するための化合物の使用であって、
前記医薬は、
Ａ）以下の式：
【化１２】
2014522410.tif 000081
を有する化合物、
ここで、Ｒは、以下：
ｉ）−ＯＲ１；
ｉｉ）−ＮＲ２Ｒ３；および
ｉｉｉ）−ＯＭ１；
からなる群から選択されて、
Ｒ１は：
ｉ）水素；および
ｉｉ）Ｃ１−Ｃ６直鎖、Ｃ３−Ｃ６分岐またはＣ３−Ｃ６環状アルキル；
からなる群から選択されて、
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立に、以下：
ｉ）水素；および
ｉｉ）Ｃ１−Ｃ６直鎖、Ｃ３−Ｃ６分岐またはＣ３−Ｃ６環状アルキル；
からなる群から選択され、
Ｒ２およびＲ３は、一緒になって、２〜７個の炭素原子、ならびに、Ｒ２とＲ３が結合された窒素原子を含む、窒素、酸素、および硫黄から選択される１〜３個のヘテロ原子、を有する環を形成することができて；および
Ｍ１はカチオンであって；および
Ｒ４は：
ｉ）−ＯＨ；および
ｉｉ）−ＯＭ２；
からなる群から選択され、
Ｍ２はカチオンであって；および
Ｂ）１つまたは複数の化学療法剤
を含むことを特徴とする、
使用。
【請求項２０】
請求項１９に記載の使用であって、
化学療法剤は、タキソール、ＩＬ−２、ゲムシタビン、エルロチニブ、ドキシル、イリノテカン、およびベバシズマブからなる群から選択されることを特徴とする、
使用。
【請求項２１】
請求項１９に記載の使用であって、
前記化合物は、以下の式：
【化１３】
2014522410.tif 000082
または薬学的に許容できるその塩を有する、
使用。
【請求項２２】
請求項１９〜２１のいずれか１項に記載の使用であって、
がんは、急性リンパ芽球性白血病；急性骨髄性白血病；副腎皮質がん；小児副腎皮質がん；虫垂がん；基底細胞がん；肝外胆管がん；膀胱がん；骨がん；骨肉腫および悪性線維性組織球腫；小児脳幹グリオーマ；成人脳腫瘍；小児脳腫瘍、小児脳幹グリオーマ；小児脳腫瘍、小児中枢神経系非定型奇形腫様／横紋筋肉腫様腫瘍；中枢神経系胚芽腫；小脳星状細胞腫；大脳星状細胞腫／悪性グリオーマ；頭蓋咽頭腫；上衣芽腫；上衣腫；髄芽腫；髄上皮腫；中間型松果体実質腫瘍；原始神経外胚葉性腫瘍および松果体芽腫；視経路および視床下部グリオーマ；脳腫瘍および脊髄腫瘍；乳がん；気管支腫瘍；バーキットリンパ腫；カルチノイド腫瘍；胃腸カルチノイド腫瘍；中枢神経系非定型奇形腫様／横紋筋肉腫様腫瘍；中枢神経系胚芽腫；中枢神経系リンパ腫；小脳星状細胞腫；小児大脳星状細胞腫／悪性グリオーマ；子宮頸がん；小児脊索腫；慢性リンパ性白血病；慢性骨髄性白血病；慢性骨髄増殖性障害；大腸がん；結腸直腸がん；頭蓋咽頭腫；皮膚Ｔ細胞リンパ腫；食道がん；Ｅｗｉｎｇファミリーの腫瘍；性腺外胚細胞腫瘍；肝外胆管がん；眼のがん、眼球内メラノーマ；眼のがん、網膜芽細胞腫；胆嚢がん；胃（胃）がん；胃腸カルチノイド腫瘍；消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）；頭蓋外胚細胞腫瘍；性腺外胚細胞腫瘍；卵巣胚細胞腫瘍；妊娠性絨毛腫瘍；グリオーマ；小児脳幹グリオーマ；小児大脳星状細胞グリオーマ；小児視経路および視床下部のグリオーマ；有毛細胞白血病；頭頸部がん；肝細胞（肝臓）がん；ランゲルハンス細胞組織球症；ホジキンリンパ腫；下咽頭がん；視床下部および視経路グリオーマ；眼球内メラノーマ；膵島細胞腫瘍；腎臓（腎細胞）がん；ランゲルハンス細胞組織球症；喉頭がん；急性リンパ芽球性白血病；急性骨髄性白血病；慢性リンパ性白血病；慢性骨髄性白血病；有毛細胞白血病；口唇および口腔がん；肝臓がん；非小細胞肺がん；小細胞肺がん；エイズ関連リンパ腫；バーキットリンパ腫；皮膚性Ｔ細胞リンパ腫；ホジキンリンパ腫；非ホジキンリンパ腫；主要中枢神経系リンパ腫；ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症；骨の悪性線維性組織球腫および骨肉腫；髄芽腫；メラノーマ；眼球内（眼）メラノーマ；メルケル細胞がん；中皮腫；転移性潜在性原発扁平頸部がん；口腔がん；多発性内分泌腫瘍症候群（小児）；多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍；菌状息肉腫；骨髄異形成症候群；骨髄異形成／−骨髄増殖性疾患；慢性骨髄性白血病；成人急性骨髄性白血病；小児急性骨髄性白血病；多発性骨髄腫；慢性骨髄増殖性障害；鼻腔がんおよび副鼻腔がん；上咽頭がん；神経芽細胞腫；非小細胞肺がん；口のがん；口腔がん；中咽頭がん；骨肉腫および骨の悪性線維性組織球腫；卵巣がん；卵巣上皮がん；卵巣胚細胞腫瘍；卵巣の低悪性の潜在的腫瘍；膵がん；膵がん、膵島細胞腫瘍；乳頭腫症；副甲状腺がん；陰茎がん；咽頭がん；褐色細胞腫；中間型松果体実質腫瘍；松果体芽腫および原始神経外胚葉性腫瘍；下垂体腫瘍；形質細胞腫瘍／多発性骨髄腫；胸膜肺芽腫；主要中枢神経系リンパ腫；前立腺がん；直腸がん；腎細胞（腎臓）がん；腎盂および尿管の移行上皮がん；クロモソーム１５上のＮＵＴ遺伝子が関与する呼吸器がん；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；唾液腺がん；Ｅｗｉｎｇファミリーの腫瘍肉腫；カポシ肉腫；軟組織肉腫；子宮肉腫；セザリー症候群；皮膚がん（非黒色腫）；皮膚がん（メラノーマ）；メルケル細胞皮膚がん；小細胞肺がん；小腸がん；軟組織肉腫；扁平細胞がん、転移性潜在性原発扁平頸部がん；胃（胃）がん；原始神経外胚葉性腫瘍；皮膚性Ｔ細胞リンパ腫；精巣がん；咽頭がん；胸腺腫および胸腺がん；甲状腺がん；腎盂および尿管の移行上皮がん；妊娠性絨毛腫瘍；尿道がん；子宮内膜子宮がん；子宮肉腫；膣がん；外陰がん；ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症；およびウィルムス腫瘍よりなる群から選択されることを特徴とする、
使用。
【請求項２３】
請求項１４〜２２のいずれか１項に記載の使用であって、
がんは、メラノーマ、乳がんおよび卵巣がんからなる群から選択されることを特徴とする、
使用。
【請求項２４】
請求項１４〜２２のいずれか１項に記載の使用であって、
がんは、ＶＥＧＦ依存性がんであることを特徴とする、
使用。
【請求項２５】
インビボまたはエクスビボで細胞における可溶性血管内皮成長因子受容体−１（ｓＶＥＧＦ−１）を増加させるための方法であって、
以下の式：
【化１４】
2014522410.tif 000083
または薬学的に許容できるその塩を有する化合物を、細胞に投与することを含む
方法。
【請求項２６】
インビボまたはエクスビボで細胞におけるホスホグリセレートキナーゼ（ＰＧＫ）を下方制御するための方法であって、
以下の式：
【化１５】
2014522410.tif 000084
または薬学的に許容できるその塩を有する化合物を、細胞に投与することを含む
方法。
【請求項２７】
請求項２５または２６のいずれかに記載の方法であって、
前記細胞はがん細胞である、
使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
本開示の安定化剤の塩を形成するのに適切な有機アミン類の別の態様は、以下のアミン類を含む；Ｒａ、ＲｂおよびＲｃのうちの１つまたは複数は、一緒になって、３〜２０個の炭素原子、および、窒素、酸素および硫黄から選択される１つまたは複数のヘテロ原子を含むことができる複素環を形成する。非限定的な例は、ピペラジン、ピペリジン、モルホリン、チオモルホリンなどを含む。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０３】
またさらに、本明細書は、腫瘍血管新生を減少させるための、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグの使用を開示する。例えば、腫瘍血管新生を減少させるための、｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸の使用である。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０４】
またさらに、本明細書は、腫瘍血管新生を減少させるための薬剤を製造するための、本開示のＨＩＦ−２α安定化剤および／またはそのプロドラッグの使用を開示する。例えば、腫瘍血管新生を減少させるための薬剤を製造するための、｛［５−（３−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシピリジン−２−カルボニル］アミノ｝酢酸の使用である。
【国際調査報告】
2014522410.tif 000085