(57)【要約】  本発明は、ＨＩＶ−１感染被験体の治療のための方法および組成物を提供する。本発明は特に、被験体の免疫応答の増強、および感染被験体のウイルス量の安定化または低減に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
投与後少なくとも４ヶ月間、ＨＩＶ−１感染被験体のウイルス量を維持するのに用いるための医薬組成物であって、
ａ．Ｎｅｆ、ＧａｇおよびＰｏｌからなる群から選択される２種以上のＨＩＶ−１抗原；
ｂ．Ｔｈ１免疫応答を誘導するアジュバント；および
ｃ．薬学的に許容可能な賦形剤
を含んでなる、医薬組成物。
【請求項２】
投与後少なくとも４ヶ月間、ＨＩＶ−１感染被験体のウイルス量を１００，０００コピー／ｍｌ以下に低減または維持するのに用いるための医薬組成物であって、
ａ．Ｎｅｆ、ＧａｇおよびＰｏｌからなる群から選択される２種以上のＨＩＶ−１抗原；
ｂ．Ｔｈ１免疫応答を誘導するアジュバント；および
ｃ．薬学的に許容可能な賦形剤
を含んでなる、医薬組成物。
【請求項３】
ＨＩＶ−１感染被験体のＴ細胞応答を増強するのに用いるための医薬組成物であって、
ａ．Ｎｅｆ、ＧａｇおよびＰｏｌからなる群から選択される２種以上のＨＩＶ−１抗原；
ｂ．Ｔｈ１免疫応答を誘導するアジュバント；および
ｃ．薬学的に許容可能な賦形剤
を含んでなる、医薬組成物。
【請求項４】
Ｔ細胞応答の増強が、
ａ．医薬組成物の投与前に比べて、医薬組成物の少なくとも１つのポリペプチドの特異的認識を示す被験体由来のＣＤ４＋Ｔ細胞もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞のいずれか；および／または
ｂ．医薬組成物の投与前に比べて、少なくとも１つ、２つもしくは３つの活性化マーカーを発現する被験体由来のＣＤ４＋Ｔ細胞
のパーセンテージが高いことである、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
ａ．被験体が抗レトロウイルス療法（ＡＲＴ）中でなく；かつ／または
ｂ．ＨＩＶ−１感染被験体がｉ）ＡＲＴ未経験であるか、ｉｉ）医薬組成物の投与前にＡＲＴを中断するか、またはｉｉｉ）並行してＡＲＴを受ける、
請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
ウイルス量が、
ａ．５０，０００コピー／ｍｌ以下、１０，０００コピー／ｍｌ未満、５０００コピー／ｍｌ未満、１０００コピー／ｍｌ未満、もしくは５００コピー／ｍｌ未満に維持され；かつ／または
ｂ．投与後に低減され；かつ／または
ｃ．少なくとも６ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１８ヶ月、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも４年、少なくとも５年、少なくとも６年、少なくとも７年、少なくとも８年、少なくとも９年、もしくは少なくとも１０年の間、維持もしくは低減される、
請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
ａ．医薬組成物がＮｅｆ、ＧａｇおよびＰｏｌを含んでなり；かつ／または
ｂ．Ｇａｇがｐ１７、ｐ２４もしくはその双方であり；かつ／または
ｃ．ＰｏｌがＲＴであり；かつ／または
ｄ．医薬組成物が配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４および／もしくは配列番号１６を含んでなり；かつ／または
ｅ．医薬組成物がＥｎｖをさらに含んでなる、
請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
アジュバントが、
ａ．免疫学的に活性なサポニン画分、リポ多糖、免疫賦活オリゴヌクレオチドおよびステロール（ここで、ステロールはコレステロールであってもよい）から選択される１種以上の成分であり；かつ／または
ｂ．免疫学的に活性なサポニン画分およびリポ多糖を含んでなり；かつ／または
ｃ．ＱＳ２１および／もしくは脂質Ａ誘導体（ここで、脂質Ａ誘導体は３Ｄ−ＭＰＬであってもよい）を含んでなり；かつ／または
ｄ．ＣｐＧを含んでなり；かつ／または
ｅ．リポソーム担体をさらに含んでなる、
請求項１〜７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
ａ．被験体に１回；および／または
ｂ．被験体に２回以上；および／または
ｃ．プライム−ブースト計画のプライム用量またはブースト用量のいずれかとして
投与される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
ＨＩＶ−１感染被験体のウイルス量の増加を安定化または阻害する方法であって、
１）ＨＩＶ−１感染被験体を選択すること；および
２）前記被験体に、
ａ．Ｎｅｆ、ＧａｇおよびＰｏｌからなる群から選択される２種以上のＨＩＶ−１抗原；
ｂ．Ｔｈ１免疫応答を誘導するアジュバント；および
ｃ．薬学的に許容可能な賦形剤
を含んでなる免疫原性組成物を投与すること
を含んでなり、
投与後に被験体のウイルス量が、投与前に比べて少なくとも４ヶ月間、安定を維持するかまたは低減する、方法。
【請求項１１】
ＨＩＶ−１感染被験体において臨床的ＨＩＶ疾患の発症を予防する方法であって、
１）ＨＩＶ−１感染被験体を選択すること；および
２）前記被験体に、
ａ．Ｎｅｆ、ＧａｇおよびＰｏｌからなる群から選択される２種以上のＨＩＶ−１抗原；
ｂ．Ｔｈ１免疫応答を誘導するアジュバント；および
ｃ．薬学的に許容可能な賦形剤
を含んでなる免疫原性組成物を投与すること
を含んでなり、
被験体のウイルス量が、投与後少なくとも４ヶ月間、１００，０００コピー／ｍｌ未満を維持する、方法。
【請求項１２】
ＨＩＶ−１感染被験体においてＨＩＶ疾患の進行を予防する方法であって、
１）ＨＩＶ−１感染被験体を選択すること；および
２）前記被験体に、
ａ．Ｎｅｆ、ＧａｇおよびＰｏｌからなる群から選択される２種以上のＨＩＶ−１抗原；
ｂ．Ｔｈ１免疫応答を誘導するアジュバント；および
ｃ．薬学的に許容可能な賦形剤
を含んでなる免疫原性組成物を投与すること
を含んでなり、
免疫原性組成物の投与後に、被験体のウイルス量が安定を維持する、方法。
【請求項１３】
ＨＩＶ−１感染被験体において免疫応答を誘導する方法であって、
１）ＨＩＶ−１感染被験体を選択すること；および
２）前記被験体に、
ａ．Ｎｅｆ、ＧａｇおよびＰｏｌからなる群から選択される２種以上のＨＩＶ−１抗原；
ｂ．Ｔｈ１免疫応答を誘導するアジュバント；および
ｃ．薬学的に許容可能な賦形剤
を含んでなる免疫原性組成物を投与すること
を含んでなり、
工程２）の投与後に、投与前に比べてより高いパーセンテージの被験体由来ＣＤ４＋Ｔ細胞が、ｉ）免疫原性組成物の少なくとも１つのポリペプチドの特異的認識を示すか、またはｉｉ）ＣＤ４０Ｌ、ＩＬ−２、ＴＮＦαおよびＩＦＮγからなる群から選択される少なくとも１つ、２つもしくは３つの活性化マーカーを発現する、方法。
【請求項１４】
ａ．被験体が抗レトロウイルス療法（ＡＲＴ）中でなく；かつ／または
ｂ．ＨＩＶ−１感染被験体がｉ）ＡＲＴ未経験であるか、ｉｉ）医薬組成物の投与前にＡＲＴを中断するか、またはｉｉｉ）並行してＡＲＴを受ける、
請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
ウイルス量が、
ａ．５０，０００コピー／ｍｌ以下、１０，０００コピー／ｍｌ未満、５０００コピー／ｍｌ未満、１０００コピー／ｍｌ未満、もしくは５００コピー／ｍｌ未満に維持され；かつ／または
ｂ．投与後に低減され；かつ／または
ｃ．少なくとも６ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１８ヶ月、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも４年、少なくとも５年、少なくとも６年、少なくとも７年、少なくとも８年、少なくとも９年、もしくは少なくとも１０年の間、維持もしくは低減される、
請求項１０〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
ａ．医薬組成物がＮｅｆ、ＧａｇおよびＰｏｌを含んでなり；かつ／または
ｂ．Ｇａｇがｐ１７、ｐ２４もしくはその双方であり；かつ／または
ｃ．ＰｏｌがＲＴであり；かつ／または
ｄ．医薬組成物が配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４および／もしくは配列番号１６を含んでなり；かつ／または
ｅ．医薬組成物がＥｎｖをさらに含んでなる、
請求項１０〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
アジュバントが、
ａ．免疫学的に活性なサポニン画分、リポ多糖、免疫賦活オリゴヌクレオチドおよびステロール（ここで、ステロールはコレステロールであってもよい）から選択される１種以上の成分であり；かつ／または
ｂ．免疫学的に活性なサポニン画分およびリポ多糖を含んでなり；かつ／または
ｃ．ＱＳ２１および／もしくは脂質Ａ誘導体（ここで、脂質Ａ誘導体は３Ｄ−ＭＰＬであってもよい）を含んでなり；かつ／または
ｄ．ＣｐＧを含んでなり；かつ／または
ｅ．リポソーム担体をさらに含んでなる、
請求項１０〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
ａ．被験体に１回；および／または
ｂ．被験体に２回以上；および／または
ｃ．プライム−ブースト計画のプライム用量またはブースト用量のいずれかとして
投与される、請求項１０〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＨＩＶ−１抗原を含んでなる免疫原性組成物およびＨＩＶ−１感染被験体の治療におけるその使用に関する。特に、本発明は、ＨＩＶ−１感染被験体の疾患を治療もしくは改善し、かつ／またはＨＩＶ−１感染被験体による抗レトロウイルス療法の必要性を遅延もしくは軽減するための、ＨＩＶ−１抗原を含んでなる免疫原性組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＨＩＶワクチンの開発を難しい課題とするＨＩＶ病原性の免疫学的特徴がいくつかある。抗体およびＴ細胞がそのウイルスの、宿主応答をすり抜け続ける連続的免疫変異体を選択する確率が高いこともそうである。自然感染後には特異的免疫性が存在する証拠があり、ウイルスは、免疫系がウイルスを最終的に抑えられなくなるまで、多くの場合何年も、宿主免疫応答によって封じられている。ＨＩＶ感染過程では、細胞性免疫応答（ヘルパー細胞および特異的細胞傷害性Ｔ細胞）ならびに結合抗体、ウイルスの中和、および抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）が検出できる[Letvin, 1993;  Weiss, 1993]。
【０００３】
治療を受けていない個体におけるＨＩＶ−１感染の典型的な経過は、一般に８〜１２年の期間にわたる３つの主要な相をたどる（図１）[Pantaleo, 1993]。個体間の変動は大きいが、感染のパターンと経過は次の通りである。
【０００４】
急性（初）感染：ＨＩＶ−１初感染は一時的な状態である。４０〜９０％の患者には症候性疾患であり、ｉ）血漿ウイルス血症の急激な初期上昇、ｉｉ）血中ＣＤ４＋Ｔリンパ球数の減少、およびｉｉｉ）血中ＣＤ８＋Ｔリンパ球数の大幅な増加を伴う。この血漿ウイルス血症の初期上昇の低下は、一般に、ウイルス特異的免疫応答、特にＨＩＶ−１特異的細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の出現と相関している[Kaufmann, 1999]。
【０００５】
慢性無症候期：この期間には、比較的安定なＣＤ４＋Ｔリンパ球数レベルと低ウイルス量を伴う、臨床的潜伏（生物学的潜伏ではない）が見られる（中央値１０年）。被験体は一般に健康な状態を維持しているので、この相は疾患管理の重要な標的である。長期非進行者（ＬＴＮＰ）は、何年も治療せずにこの相に留まる。ＡＲＴなどの現行の疾患管理戦略は、この相をできる限り長く引き延ばす。
【０００６】
慢性症候性ＨＩＶ感染（ＡＩＤＳ）：臨床的ＡＩＤＳは、最初のＣＤＣクラスＣ[CDC, 1993]またはＷＨＯステージＩＶ臨床イベント[WHO, 2005]の発症で始まる。ＡＩＤＳはＨＩＶ−１感染の末期の徴候であり、抗レトロウイルス療法を行わなければ２〜３年以内に死に至る。
【０００７】
ＨＩＶ−１感染被験体に投与される治療用ワクチンは、ＨＩＶ−１ウイルス量の安定化または低減、従って、付加的抗ウイルス治療の必要をなくしつつＨＩＶ疾患の進行を緩徐化するのに有用である。よって、感染被験体においてＨＩＶ疾患を管理するための治療用ワクチンの必要が依然としてある。
【発明の概要】
【０００８】
本発明の一つの目的は、ＨＩＶ−１感染被験体のＴ細胞応答を増強するための方法および組成物であって、
１）ＨＩＶ−１感染被験体を選択すること；および
２）前記被験体に、
ａ．Ｎｅｆ、ＧａｇおよびＰｏｌからなる群から選択される２種以上のＨＩＶ−１抗原；
ｂ．Ｔｈ１免疫応答を誘導するアジュバント；および
ｃ．薬学的に許容可能な賦形剤
を含んでなる免疫原性組成物を投与すること
を含んでなる、方法および組成物を提供することである。
【０００９】
本発明のさらなる目的は、ＨＩＶ−１感染被験体において免疫応答を誘導するための方法および組成物であって、組成物の投与後に、投与前に比べてより高いパーセンテージの被験体由来ＣＤ４＋Ｔ細胞が免疫原性組成物の少なくとも１つのポリペプチドの特異的認識を示す、方法および組成物を提供することである。
【００１０】
本発明のさらなる目的は、ＨＩＶ−１感染被験体において免疫応答を誘導するための方法および組成物であって、組成物の投与後に、投与前に比べてより高いパーセンテージの被験体由来ＣＤ４＋Ｔ細胞が、ＣＤ４０Ｌ、ＩＬ−２、ＴＮＦαおよびＩＦＮγからなる群から選択される少なくとも１つ、２つもしくは３つの活性化マーカーを発現する、方法および組成物を提供することである。
【００１１】
本発明のさらなる目的は、ＨＩＶ−１感染被験体においてＨＩＶ−１特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞機能の欠如を回復させるまたは阻害するための方法および組成物であって、本発明の組成物を投与することを含んでなる、方法および組成物を提供することである。
【００１２】
本発明のさらなる目的は、ＨＩＶ−１感染被験体においてウイルス量を低減するための方法および組成物であって、組成物の投与後に被験体のウイルス量が、投与前に比べて少なくとも４ヶ月間、安定を維持するかまたは低減する、方法および組成物を提供することである。
【００１３】
本発明のさらなる目的は、ＨＩＶ−１感染被験体において臨床的ＨＩＶ疾患の発症を予防するための方法および組成物であって、組成物の投与後に、被験体のウイルス量が投与後少なくとも４ヶ月間、１００，０００コピー／ｍｌ未満を維持する、方法および組成物を提供することである。
【００１４】
また、抗レトロウイルス療法（ＡＲＴ）の不在下で、投与後少なくとも４ヶ月間、ＨＩＶ−１感染被験体のウイルス量を１００，０００コピー／ｍｌ以下に低減または維持するのに用いるための医薬組成物であって、
ａ．Ｎｅｆ、ＧａｇおよびＰｏｌからなる群から選択される２種以上のＨＩＶ−１抗原；
ｂ．Ｔｈ１免疫応答を誘導するアジュバント；および
ｃ．薬学的に許容可能な賦形剤
を含んでなる医薬組成物も提供される。一つの実施態様では、被験体はＡＲＴ中でない。
【００１５】
一つの実施態様では、医薬組成物は、ＡＲＴの不在下で少なくとも４ヶ月間、ＨＩＶ−１感染被験体のウイルス量の安定性を維持するためのものである。
【００１６】
別の実施態様では、医薬組成物は、ＡＲＴ中でないＨＩＶ−１感染被験体のＴ細胞応答の増強に用いられる。さらなる実施態様では、Ｔ細胞応答の増強が、医薬組成物の投与前に比べて、医薬組成物の少なくとも１つのポリペプチドの特異的認識を示す被験体由来のＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞のいずれかのパーセンテージが高いことである。さらなる実施態様では、Ｔ細胞応答の増強が、医薬組成物の投与前に比べて、ＣＤ４０Ｌ、ＩＬ−２、ＴＮＦαおよびＩＦＮγなどの少なくとも１つ、２つまたは３つの活性化マーカーを発現する被験体由来のＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージが高いことである。さらなる実施態様では、Ｔ細胞応答の増強が、ＨＩＶ−１特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞機能の欠如の回復または阻害である。
【００１７】
さらなる実施態様では、被験体のウイルス量は、少なくとも６ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１８ヶ月、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも４年、少なくとも５年、少なくとも６年、少なくとも７年、少なくとも８年、少なくとも９年、または少なくとも１０年の間、１００，０００コピー／ｍｌ未満を維持する。別の実施態様では、被験体は、５０，０００コピー／ｍｌ未満、１０，０００コピー／ｍｌ未満、５０００コピー／ｍｌ未満、１０００コピー／ｍｌ未満、または５００コピー／ｍｌ未満のウイルス量を維持する。
【００１８】
一つの実施態様では、被験体は、並行して抗レトロウイルス療法（ＡＲＴ）で処置される。さらなる実施態様では、被験体は、前記免疫原性組成物の投与前または投与後に抗レトロウイルス療法（ＡＲＴ）を中断する。別の実施態様では、被験体はＡＲＴ未経験である。さらなる実施態様では、被験体は、免疫原性組成物の投与後、少なくとも６ヶ月、少なくとも１年、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも４年、または少なくとも５年間、ＡＲＴを断つ。
【００１９】
一つの実施態様では、前記組成物のポリペプチドは、Ｎｅｆ、ＧａｇおよびＰｏｌを含んでなる。さらなる実施態様では、Ｇａｇはｐ１７、ｐ２４またはその双方である。別の実施態様では、ＰｏｌはＲＴである。さらなる実施態様では、前記ポリペプチドは配列番号８を含んでなる。別の実施態様では、前記免疫原性組成物はＥｎｖをさらに含んでなる。
【００２０】
一つの実施態様では、前記組成物のアジュバントは、免疫学的に活性なサポニン画分、リポ多糖、免疫賦活オリゴヌクレオチド、およびステロールから選択される１以上の成分である。さらなる実施態様では、前記アジュバントは免疫学的に活性なサポニン画分およびリポ多糖を含んでなる。さらなる実施態様では、前記アジュバントはＱＳ２１および／または脂質Ａ誘導体を含んでなる。さらなる実施態様では、脂質Ａ誘導体は３Ｄ−ＭＰＬである。別の実施態様では、前記アジュバントはＣｐＧを含んでなる。別の実施態様では、ステロールはコレステロールである。さらなる実施態様では、前記アジュバントはリポソーム担体をさらに含んでなる。
【００２１】
一つの実施態様では、前記組成物は被験体に１回投与される。さらなる実施態様では、組成物は被験体に２回以上投与される。さらなる実施態様では、組成物はプライム−ブースト計画のプライム用量またはブースト用量のいずれかとして投与される。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】ＨＩＶ疾患の進行と２つの主要な臨床マーカーＣＤ４＋Ｔ細胞総数（細胞／ｍｍ３）とウイルス量（血漿ウイルス血症希釈力価）の相関を示すグラフである。
【図２】実施例に記載される患者コホートの概略図である。
【図３Ａ】ＡＲＴ経験コホート（パネルＡ）におけるベースラインからのＣＤ４総数変化を、初回用量投与後の日数の関数として示す。各パネルの各データ対では、Ｆ４／ＡＳ０１（黒）を左に、プラセボ（赤）を右に示す。
【図３Ｂ】ＡＲＴ未経験コホート（パネルＢ）におけるベースラインからのＣＤ４総数変化を、初回用量投与後の日数の関数として示す。各パネルの各データ対では、Ｆ４／ＡＳ０１（黒）を左に、プラセボ（赤）を右に示す。
【図４Ａ】試験中のＡＲＴ未経験コホートのウイルス量を示す。パネルＡは、ベースラインからのウイルス量変化を（ｌｏｇ１０で表す）、初回用量投与後の日数の関数として示す。プラセボは上の線（グレー）、Ｆ４／ＡＳ０１は下の線（オレンジ）である。
【図４Ｂ】試験中のＡＲＴ未経験コホートのウイルス量を示す。パネルＢは、ＡＲＴ未経験コホート（全ワクチン接種コホート）における４４日、４ヶ月、７ヶ月および１２ヶ月の時点でのｌｏｇ１０ウイルス量変化の逆累積分布曲線（ＲＣＣ）を示す。Ｙ軸は、Ｘ軸の対応する値またはそれを越えるウイルス量変化を有する被験体のパーセンテージに相当する。曲線の各下降は、その被験体のウイルス量に見られる変化に相当する（各点は１人の被験体に相当する。各グラフで、Ｆ４／ＡＳ０１は左の線（グレー）で、プラセボ（太いオレンジの線）は右に示す）。
【図５Ａ】少なくともＩＬ−２を発現するＦ４特異的ＣＤ４＋ＣＤ４０Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージを示す（免疫原性に関するプロトコールコホートに従う）；（Ａ）ＡＲＴ経験被験体およびＡＲＴ未経験被験体におけるＦ４に対する全応答。Ｐ値は、ベースラインを調整したＡＮＣＯＶＡモデル（調整が行われなかったワクチン接種前時点［ＡＮＯＶＡ］を除く）により導き出された、プラセボに対する幾何平均比Ｆ４／ＡＳ０１の９５％ＣＩに基づく。各グラフで、プラセボ群は左（グレー）に、Ｆ４／ＡＳ０１は右（オレンジ）に表す。
【図５Ｂ】少なくともＩＬ−２を発現するＦ４特異的ＣＤ４＋ＣＤ４０Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージを示す（免疫原性に関するプロトコールコホートに従う）；（Ｂ）ＡＲＴ経験被験体における特定の抗原に対する応答。Ｐ値は、ベースラインを調整したＡＮＣＯＶＡモデル（調整が行われなかったワクチン接種前時点［ＡＮＯＶＡ］を除く）により導き出された、プラセボに対する幾何平均比Ｆ４／ＡＳ０１の９５％ＣＩに基づく。各グラフで、プラセボ群は左（グレー）に、Ｆ４／ＡＳ０１は右（オレンジ）に表す。
【図５Ｃ】少なくともＩＬ−２を発現するＦ４特異的ＣＤ４＋ＣＤ４０Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージを示す（免疫原性に関するプロトコールコホートに従う）；（Ｃ）ＡＲＴ未経験被験体における特定の抗原に対する応答。Ｐ値は、ベースラインを調整したＡＮＣＯＶＡモデル（調整が行われなかったワクチン接種前時点［ＡＮＯＶＡ］を除く）により導き出された、プラセボに対する幾何平均比Ｆ４／ＡＳ０１の９５％ＣＩに基づく。各グラフで、プラセボ群は左（グレー）に、Ｆ４／ＡＳ０１は右（オレンジ）に表す。
【図６】Ｆ４／ＡＳ０１ワクチンに対するＣＤ４＋Ｔ細胞応答結果、すなわち応答者率の表である。Ｔ細胞応答は、Ｎｅｆ、ｐ１７、ｐ２４および逆転写酵素（ＲＴ）ペプチドプールで刺激した後に細胞内サイトカイン染色により評価した。結果は、少なくともＩＬ−２を発現する全ＣＤ４０Ｌ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージとして表した。ワクチン接種前にサイトカイン分泌が検出できなかった場合には、少なくともＩＬ−２を発現するＣＤ４０Ｌ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合がカットオフ値である０．０３％以上であった場合に被験体を応答者とみなした。ワクチン接種前にサイトカイン分泌が検出可能であった場合には、少なくともＩＬ−２を発現するＣＤ４０Ｌ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合がベースラインより少なくとも２倍高かった場合に被験体を応答者とみなした。
【図７Ａ】ワクチン接種ＡＲＴ経験患者におけるＦ４特異的ＣＤ４０Ｌ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞のサイトカイン同時発現プロフィールを、（Ａ）ワクチン接種前（各データ対の左に薄い黄色で表す）と用量２の２週間後（４４日目、各データ対の右に濃いオレンジで示す）で示す。結果は、１、２または３つのサイトカイン（ＩＬ−２、ＴＮＦ−αまたはＩＦＮ−γ）を発現するＦ４特異的ＣＤ４０Ｌ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージとして示す。
【図７Ｂ】ワクチン接種ＡＲＴ経験患者におけるＦ４特異的ＣＤ４０Ｌ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞のサイトカイン同時発現プロフィールを、（Ｂ）全時点に関する円グラフで示す。結果は、１、２または３つのサイトカイン（ＩＬ−２、ＴＮＦ−αまたはＩＦＮ−γ）を発現するＦ４特異的ＣＤ４０Ｌ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージとして示す。
【図８Ａ】Ｆ４ｃｏの投与後のＣＤ８＋Ｔ細胞応答を示す。パネルＡは、ＣＤ４０Ｌ、ＩＬ−２、ＴＮＦαおよび／またはＩＦＮγから選択される少なくとも１つのマーカーを発現するＡＲＴ経験コホートにおけるＦ４特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを示す。
【図８Ｂ】Ｆ４ｃｏの投与後のＣＤ８＋Ｔ細胞応答を示す。パネルＢは、ＣＤ４０Ｌ、ＩＬ−２、ＴＮＦαおよび／またはＩＦＮγから選択される少なくとも１つのマーカーを発現するＡＲＴ未経験コホートにおけるＦ４特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを示す。
【図８Ｃ】Ｆ４ｃｏの投与後のＣＤ８＋Ｔ細胞応答を示す。パネルＣは、ＣＤ４０Ｌ、ＩＬ−２、ＴＮＦαおよび／またはＩＦＮγから選択される各マーカーを発現するＡＲＴ経験コホートにおけるＦ４特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを示す。
【図８Ｄ】Ｆ４ｃｏの投与後のＣＤ８＋Ｔ細胞応答を示す。パネルＤは、ＣＤ４０Ｌ、ＩＬ−２、ＴＮＦαおよび／またはＩＦＮγから選択される各マーカーを発現するＡＲＴ未経験コホートにおけるＦ４特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを示す。
【図９】ＡＲＴ未経験コホート（全ワクチン接種コホート）の用量２の２週間後における、ウイルス量と少なくともＩＬ−２を発現するＦ４特異的ＣＤ４＋ＣＤ４０Ｌ＋Ｔ細胞の頻度の間の関係を示す。各点はある被験体からのデータを示す。
【図１０Ａ】ＡＲＴ経験コホートにおける抗原集合物（パネルＡ）投与後の１２ヶ月間のＦ４ｃｏに対する体液応答を示す。総てのグラフで、Ｆ４／ＡＳ０１は上の線（オレンジ）で、プラセボは下の線（グレー）で表す。
【図１０Ｂ】ＡＲＴ経験コホートにおける各抗原（パネルＢ）投与後の１２ヶ月間のＦ４ｃｏに対する体液応答を示す。総てのグラフで、Ｆ４／ＡＳ０１は上の線（オレンジ）で、プラセボは下の線（グレー）で表す。
【図１１Ａ】ＡＲＴ未経験コホートにおける抗原集合物（パネルＡ）投与後の１２ヶ月間のＦ４ｃｏに対する体液応答を示す。パネルＡのｐ２４では、上の線はＦ４／ＡＳ０１（オレンジ）を表し、下の線はプラセボ（グレー）を表す。ＲＴ、Ｎｅｆおよびｐ１７では、上の線はプラセボ（グレー）を表し、下の線はＦ４／ＡＳ０１（オレンジ）を表す。
【図１１Ｂ】ＡＲＴ未経験コホートにおける各抗原（パネルＢ）投与後の１２ヶ月間のＦ４ｃｏに対する体液応答を示す。パネルＢのｐ２４では、上の線はＦ４／ＡＳ０１（オレンジ）を表し、下の線はプラセボ（グレー）を表す。ＲＴ、Ｎｅｆおよびｐ１７では、上の線はプラセボ（グレー）を表し、下の線はＦ４／ＡＳ０１（オレンジ）を表す。
【発明の具体的説明】
【００２３】
自然史研究によれば、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答は、疾患の進展[Harrer, 1996]の初期ウイルス血症[Borfrow, 1994]の管理において重要な役割を果たすことが示唆される。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、ウイルス感染細胞の排除のための主要な免疫エフェクター機構である。ＳＩＶサルモデルでは、ＣＤ８＋Ｔ細胞の実験的枯渇が確立されたウイルス感染の制御の低下をもたらすことが実証されている[Jin, 1999]。従って、本発明の１つの目的は、ＨＩＶ−１感染被験体におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の枯渇を防ぐことである。
【００２４】
ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答の維持に役割を果たしていると思われる。ＣＤ４＋Ｔ細胞の助けは、エフェクターおよびメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞を誘導し、効率的に分化させるのに必要とされる[Janssen, 2003; Sun, 2004]。急性ＨＩＶ１感染後のＨＩＶ−１特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖の低下は、急性感染期に単離された自己ＣＤ４＋Ｔ細胞を添加することによってin vitroで、また、重要には、ワクチンにより誘導されるＨＩＶ−１特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞によってin vivoで回復させることができる[Lichterfield, 2004]。
【００２５】
最近の報告では、多機能性ＨＩＶ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞は、長期非進行者表現型（ＬＴＮＰ）、すなわち、ＡＲＴを受けずに慢性の無症候性期を維持する感染被験体に関連することを示す[Potter, 2007; Kannanganat, 2007]。ＬＴＮＰは、多くの場合、ウイルス制御者、すなわち、介入のない状態でウイルス量を低く維持している感染被験体であり、これらの低いウイルス量は通常、高いＣＤ４＋Ｔ細胞総数と相関している。例えば、ＬＴＮＰの研究は、少なくとも２つまたは３つのサイトカインを発現する高いレベルのＣＤ４＋Ｔ細胞を、疾患の無進行および低いウイルス量と相関させる[Kannanganat, 2007; Boaz, 2002; Harari, 2004 Iyasaere, 2003]。さらに、メモリーＣＤ４＋Ｔ細胞（ＩＬ−２＋）は、ＨＩＶ感染において保護能を有し[Younes, 2003]、これらの細胞の強い増殖応答は、低いウイルス量と相関している[Lichterfield, 2004]。従って、多機能性ＣＤ４＋Ｔ細胞応答の誘導は、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性およびウイルス量の管理に重要な役割を果たす。
【００２６】
驚くことに、本発明のワクチンの投与は、ＡＲＴ経験ＨＩＶ−１感染被験体とＡＲＴ未経験ＨＩＶ−１感染被験体の双方において高レベルの多機能性ＣＤ４＋Ｔ細胞を誘導することが判明した。さらに、本ワクチンの投与がプラセボを投与したＨＩＶ−１感染被験体に比べて低いウイルス量をもたらすことも判明した。この仮説に限定されるものではないが、本方法において誘導される多機能性ＣＤ４＋Ｔ細胞応答とＨＩＶ−１感染被験体におけるウイルス量の低減の間には相関があると考えられる。
【００２７】
従って、本発明の１つの目的は、ＨＩＶ−１感染被験体に投与した後に組成物の少なくとも１つのポリペプチドを特異的に認識するＣＤ４＋Ｔ細胞を誘導する方法および免疫原性組成物を提供することである。例えば、投与後に、被験体は、投与前に比べてＧａｇ、Ｐｏｌおよび／またはＮｅｆを認識するＣＤ４＋Ｔ細胞のレベルの増大を示す。好適には、応答の増強、または「より高い」応答は、新規なもの（投与前に既存の応答がない場合にはどんな増強であってもよい）または投与後の、既存の応答の有意な増強、例えば、２倍以上の増強もしくは満足のいく有意な増強のいずれかである。
【００２８】
これらの増強したＣＤ４＋応答レベルを有する被験体は「応答者」とみなされ、本発明の１つの目的は、免疫原性組成物がＨＩＶ−１感染被験体の少なくとも２０％にこのような応答を誘導することである。本発明免疫原性組成物の投与後に被験体の少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％が応答者であることが好適である。一つの実施態様では、被験体の少なくとも７５％が応答者である。
【００２９】
本発明のさらなる目的は、ＨＩＶ−１感染被験体に投与した後にＣＤ４＋Ｔ細胞において活性化マーカーの発現を誘導するための方法および免疫原性組成物を提供することである。例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、長期非進行者およびウイルス制御者のＣＤ４＋Ｔ細胞において発現されるものと一致する活性化マーカーを発現する。
【００３０】
一つの実施態様では、ＣＤ４＋Ｔ細胞活性化マーカーとしては、ＣＤ４０Ｌ、ＩＬ−２、ＴＮＦαおよびＩＦＮγを含む。好適には、１つ、２つ、３つまたは４つ総てのマーカーが発現される。
【００３１】
本明細書ではまた、ＨＩＶ−１感染被験体におけるＨＩＶ−１特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化などのＣＤ８＋Ｔ細胞機能の欠如を回復させるまたは阻害するための方法および免疫原性組成物が提供される。例えば、本免疫原性組成物の投与は、ＨＩＶ−１特異的抗原認識、増殖の増加、持続性の増大、および／または活性化マーカーの発現によって測定されるように、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を直接活性化する。
【００３２】
「抗原」とは、被験体に投与した際にその抗原に対する特異的免疫応答を惹起する物質を意味する。例えば、ＨＩＶ抗原は、ＨＩＶタンパク質、誘導体またはその断片に特異的な免疫応答を惹起するＨＩＶタンパク質、誘導体またはその断片である。一つの実施態様では、抗原は、タンパク質（例えば、ＨＩＶタンパク質、誘導体またはその断片）をコードするポリヌクレオチドである。
【００３３】
直接的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答の代わりに、またはそれに加えて、本発明の免疫原性組成物は、ＣＤ８＋Ｔ細胞機能の欠如を回復させるまたは阻害するＣＤ４＋Ｔ細胞応答を誘導することができる。このようなＣＤ４＋Ｔ細胞応答は上記されている。
【００３４】
本発明はまた、ＨＩＶ−１感染被験体のウイルス量の予想される増加を低減または阻害するための方法および組成物を提供する。特定の理論に限定されるものではないが、本発明の免疫原性組成物は、ＨＩＶ−１生活環の少なくとも１つの段階を阻害する、上記のようなＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞応答などの免疫応答を誘導し、その結果、ウイルス量が予想されたようには経時的に増加しないということが考えられる。ウイルス量は疾患の進行と密接に関連しているので[Mellors et al., 1996; Fraser et al, 2007]、ウイルス量の安定化または低減は、長期非進行者に見られるような感染被験体の健康の維持をもたらす。
【００３５】
従って、本発明の１つの目的は、本明細書に記載の免疫原性組成物を投与することによりＨＩＶ−１感染被験体のウイルス量を安定化または低減することである。一つの実施態様では、被験体のウイルス量は、感染被験体の同等集団に比べて予想されるよりも小さい増加を示す。別の実施態様では、被験体のウイルス量は安定化され、すなわち、投与時のウイルス量から有意に増加しない。別の実施態様では、ウイルス量は投与後に低減する。
【００３６】
「安定化される」とは、被験体のウイルス量が、特許請求される発明の組成物の投与直前のウイルス量の５％より大きな変動をしないことを意味する。「低減する」とは、被験体のウイルス量が、特許請求される発明の組成物の投与直前のウイルス量の５％を越える低下を示すことを意味する。例えば、低減は、特許請求される発明の組成物の投与直前の被験体のウイルス量よりも６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または９９．５％低いことを意味する。
【００３７】
本発明はまた、被験体のウイルス量が１００，０００コピー／ｍｌを越えて増加しないようにする免疫応答を誘導することにより、ＨＩＶ−１感染被験体におけるＨＩＶ疾患の進行を防ぐための方法および組成物を提供する。１００，０００コピー／ｍｌを越えるウイルス量はＨＩＶ疾患の進行に関連するが、１０，０００〜９９，９９９の間のウイルス量のリスクはより低くなり、３０，０００コピー／ｍｌ未満が好ましい。１０，０００コピー／ｍｌ、１０００コピー／ｍｌまたは５００コピー／ｍｌ未満のウイルス量が望ましい。aidsetc.org/aidsetc?page=cm-106_cd4_stageで閲覧可能な“Determining Risk of Disease Progression”(2007年)（最終アクセスは２０１０年９月２３日）参照。
【００３８】
上記のウイルス量の抑制は臨床上有意な期間、例えば、１ヶ月〜１０年またはそれ以上持続することが望ましい。一つの実施態様では、この抑制は、少なくとも４ヶ月間持続する。さらなる実施態様では、抑制は少なくとも６ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１８ヶ月、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも４年、少なくとも５年、少なくとも６年、少なくとも７年、少なくとも８年、少なくとも９年、または少なくとも１０年の間、持続する。
【００３９】
ウイルス量（保有（組み込まれた）ウイルス量を含む）は、多くの市販のアッセイを含む多くの異なるアッセイを用いて測定することができる。これらのアッセイとしては、定量的ＰＣＲアッセイ、分岐鎖ＤＮＡアッセイおよび血液スポットアッセイが含まれる。感染被験体中に存在するＨＩＶの量を定量する別のアッセイに置き換えることもできる。これらのアッセイとしては、ｐ２４抗原アッセイおよび逆転写酵素アッセイが含まれる。好適ないずれの試験方法を用いて感染被験体中のＨＩＶの量を定量してもよい。
【００４０】
本明細書に記載のいずれの方法またはアッセイにも、実施例に示されるアッセイを使用することができる。
【００４１】
本発明のさらなる目的は、抗レトロウイルス療法（ＡＲＴ）の不在下でＨＩＶ−１感染被験体のＨＩＶ疾患進行を防ぐための方法および免疫原性組成物を提供することである。ＡＲＴはＨＩＶ疾患の管理に比較的有効ではあるが、このような処置は、特に発展途上国では、薬剤耐性、重篤な副作用、コンプライアンスの難しさ、コストおよびアベラビリティをはじめとする大きな制限がある。従って、これらの制限を克服する長期管理がなお望まれる。
【００４２】
「抗レトロウイルス療法」（ＡＲＴ）とは、ＨＩＶ−１疾患の進行を管理するために使用される療法、例えば、ヌクレオシドおよび非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、融合阻害剤、エントリー阻害剤、成熟阻害剤、細胞阻害剤およびインテグラーゼ阻害剤のいずれかを意味する。このような薬剤としては、ラミブジンおよびジドブジン、エムトリシタビン（ＦＴＣ）、ジドブジン（ＺＤＶ）、アジドチミジン（ＡＺＴ）、ラミブジン（３ＴＣ）、ザルシタビン、ジデオキシシチジン（ｄｄＣ）、フマル酸テノホビルジソプロキシル（ＴＤＦ）、ジダノシン（ｄｄＩ）、スタブジン（ｄ４Ｔ）、硫酸アバカビル（ＡＢＣ）、エトラビリン、デラビルジン（ＤＬＶ）、エファビレンツ（ＥＦＶ）、ネビラピン（ＮＶＰ）、アンプレナビル（ＡＰＶ）、チプラナビル（ＴＰＶ）、インジナビル（ＩＤＶ）、サキナビル、メシル酸サキナビル（ＳＱＶ）、ロピナビル（ＬＰＶ）、リトナビル（ＲＴＶ）、ホスアンプレナビルカルシウム（ＦＯＳ−ＡＰＶ）、リトナビル、ＲＴＶ、ダルナビル、硫酸アタザナビル（ＡＴＶ）、メシル酸ネルフィナビル（ＮＦＶ）、エンフビルチド、Ｔ−２０、マラビロクおよびラルテグラビルが挙げられる。ＡＲＴ薬としてはまた、イバリズマブなどの抗体、標的化ＨＩＶタンパク質または疾患の進行に関連する細胞タンパク質が挙げられる。また、ＩＬ−２、ＩＬ−１２およびα−エピブロミドなどの免疫に基づく療法も含まれる。これらの各薬物は単独で投与することもできるし、または他の任意のＡＲＴと組み合わせて投与することもできる。ＡＲＴ薬とそれらの投与に関しては、米国薬局方（ＵＳＰ）またはwww.aidsmeds.com（２０１０年２３日アクセス）などのアクセスオンラインなどの多くの薬局方に見出せる。
【００４３】
一つの実施態様では、被験体のウイルス量は、本発明の免疫原性組成物の投与後、ＡＲＴの不在下で上記のように安定を維持するか、または低下する。別の実施態様では、免疫原性組成物の投与は、上記のようにＨＩＶに特異的なＣＤ４＋Ｔ細胞応答を誘導する。別の実施態様では、免疫原性組成物の投与は、上記のようにＣＤ４＋Ｔ細胞における活性化マーカーの発現を誘導する。別の実施態様では、免疫原性組成物の投与は、上記のようにＨＩＶに特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘導する。別の実施態様では、免疫原性組成物の投与は、上記のようにＣＤ８＋Ｔ細胞機能の欠如を回復させるまたは阻害する。好適には、上記の実施態様のいずれかまたは総てを組み合わせることができる。
【００４４】
一つの実施態様では、投与後、被験体のＨＩＶ−１疾患状態はＡＲＴの不在下で臨床的疾患へと進行しない。臨床的疾患は、被験体のウイルス量および／またはＣＤ４＋Ｔ細胞総数、ならびにＨＩＶ関連の増殖性障害および／または日和見感染症などの病態の発現を測定することによるなどの多様な方法でモニタリングすることができる。さらなる実施態様では、被験体のＨＩＶ−１疾患状態は、ＡＲＴの開始が推奨される閾値、例えば、１０，０００コピー／ｍｌを越えるウイルス量および／または５００細胞／ｍｍ３未満、３５０細胞／ｍｍ３未満または２００細胞／ｍｍ３未満のＣＤ４＋Ｔ細胞総数までに進行しない。
【００４５】
本発明の一つの実施態様では、被験体はＡＲＴ未経験者である。これらの被験体は、ＡＲＴ処置を以前にまたは並行して受けていない。別の実施態様では、被験体はＡＲＴ経験者である。これらの被験体は、以前にＡＲＴ処置を受けていてもよいが、本発明の免疫原性組成物の投与と並行して受けることができない（ＡＲＴの中断）。いくつかの実施態様では、被験体は、並行してＡＲＴ処置される。並行してとは、ＡＲＴ処置が特許請求される組成物の投与と同時に行われなければならないという必要を意味するのではなく、むしろ、被験体が厳しいコンプライアンスにもかかわらず、投与時にＡＲＴ処置計画に従うということを意味する。
【００４６】
本発明の１つの目的は、感染被験体の同等の集団に比べてＨＩＶ−１感染被験体によるＡＲＴの必要を遅延させることである。一つの実施態様では、ＡＲＴ処置は少なくとも４ヶ月間遅延される、さらなる実施態様では、ＡＲＴ処置は少なくとも６ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１８ヶ月、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも４年、少なくとも５年、少なくとも６年、少なくとも７年、少なくとも８年、少なくとも９年、または少なくとも１０年の間、遅延される。この遅延はＡＲＴ未経験被験体の最初のＡＲＴ処置に関するものであってもよいし、またはＡＲＴ経験被験体におけるＡＲＴ処置の再開に関するものであってもよい。一つの実施態様では、被験体にＡＲＴ処置と特許請求される方法および組成物による処置を交互に行い、これらの治療モダリティーを周期化することができる。
【００４７】
本発明のさらなる目的は、特定のＣＤ４＋Ｔ細胞総数またはプロフィール、特定のＣＤ８＋Ｔ細胞総数または量、特定のウイルス量、特定の処置状態、または好適な被験体の選択の助けとなる任意のパラメーターを有する被験体など、それを必要とするＨＩＶ−１感染被験体を治療するための組成物を提供することである。例えば、被験体は、ＡＲＴ未経験、ＡＲＴ経験、ＡＲＴ不応および／またはＡＲＴ不履行に基づいて選択することができる。
【００４８】
本発明の別の目的は、ウイルスのすり抜けおよび／またはＡＲＴ不履行のためのウイルス複製の減退を介したＡＲＴ耐性ＨＩＶ株の発生を軽減することである。ウイルス制御の異なるモダリティーを提供することで、このようなＡＲＴ耐性ＨＩＶの発生を回避することができる。
【００４９】
免疫原性組成物
以下、本方法に関して使用するのに好適な免疫原性組成物を開示する。
【００５０】
ＨＩＶ−１ゲノムはいくつかの異なるタンパク質をコードし、それぞれがその全体としてまたは断片として免疫原性であり得る。エンベロープタンパク質は、例えば、ｇｐ１２０、ｇｐ４１およびＥｎｖ前駆体ｇｐ１６０を含む。ＨＩＶ−１の非エンベロープタンパク質は、例えば、ｇａｇおよびｐｏｌ遺伝子の産物などの内部構造タンパク質、ならびにＲｅｖ、Ｎｅｆ、ＶｉｆおよびＴａｔなどの他の非構造タンパク質を含む。
【００５１】
ＣＤ４＋Ｔ細胞応答はＨＩＶ−１進行の免疫学的制御に重要であるので、ＨＩＶ−１抗原は少なくとも１つの、好ましくは、２つ以上のＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含有し得る。最高数の保存Ｔ細胞エピトープを含有するウイルス抗原は、Ｇａｇ、ＰｏｌおよびＮｅｆである。これらのＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープの代わりに、またはそれに加えて、抗原はＢ細胞エピトープ（例えば、Ｅｎｖポリペプチド中に存在）および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープを含むことができる。
【００５２】
本発明の免疫原性組成物は、これらの抗原の１以上を含んでなる。これらの抗原は、１以上の融合ポリペプチドといて組み合わせることもできるし、または別個にもしくはそれらの混合物として提供することもできる。
【００５３】
一つの実施態様では、本発明の免疫原性組成物は、Ｎｅｆを含んでなる１以上のポリペプチドを含んでなる。
【００５４】
ＨＩＶ−１  Ｎｅｆは初期タンパク質であり、すなわち、感染初期に、構造タンパク質の不在下で発現される。Ｎｅｆ遺伝子は初期アクセサリーＨＩＶ−１タンパク質をコードし、これらのタンパク質はいくつかの活性を有することが示されている。例えば、Ｎｅｆタンパク質はＣＤ４、ＨＩＶ−１受容体、およびＭＨＣクラスＩ分子の、細胞表面からのダウンレギュレーションを引き起こすことが知られているが、これらの機能の生物学的重要性には議論の余地がある。さらに、ＮｅｆはＴ細胞のシグナル経路と相互作用し、活性化状態を誘導し、これが次に、より効率的な遺伝子発現を促進することができる。いくつかのＨＩＶ−１単離株がこの領域に突然変異を有し、これによりそれらは機能的タンパク質をコードせず、in vivoでの複製および病原性が著しく抑えられている。
【００５５】
Ｎｅｆとは、全長Ｎｅｆ、ならびに全長Ｎｅｆの断片、変異体および誘導体を意味する。この用語はまた、Ｎｅｆを含んでなるポリペプチド（Ｎｅｆの断片、変異体および誘導体を含んでなるポリペプチドを含む）も含む。
【００５６】
一つの実施態様では、本発明の免疫原性組成物は、Ｐｏｌを含んでなる１以上のポリペプチドを含んでなる。
【００５７】
Ｐｏｌ遺伝子は、感染初期にウイルスに必要とされる２つの活性を含む２つのタンパク質、すなわち、ウイルスＤＮＡの細胞ＤＮＡへの組込みに必要とされるＲＴおよびインテグラーゼタンパク質をコードする。Ｐｏｌの一次産物はビリオンプロテアーゼによって切断されて、ＤＮＡ合成に必要な活性（ＲＮＡおよびＤＮＡ依存性ＤＮＡポリメラーゼ活性ならびにＲＮアーゼＨ機能）を含むアミノ末端ＲＴペプチドと、カルボキシ末端インテグラーゼタンパク質を生じる。従って、ＲＴはＰｏｌの断片の一例である。ＨＩＶ−１  ＲＴは全長ＲＴ（ｐ６６）のヘテロ二量体と、カルボキシ末端ＲＮアーゼＨドメインを欠く切断産物（ｐ５１）であり、このそれぞれもＰｏｌの断片の例である。
【００５８】
Ｐｏｌとは、全長Ｐｏｌ、ならびに全長Ｐｏｌの断片、変異体および誘導体を意味する。この用語はまた、Ｐｏｌを含んでなるポリペプチド（Ｐｏｌの断片、変異体および誘導体を含んでなるポリペプチドを含む）も含む。
【００５９】
一つの実施態様では、Ｐｏｌは、ＲＴ断片を含んでなる。このＲＴ断片は、Ｐｏｌの断片の一例である。ＲＴとは、全長ＲＴ、ならびに全長ＲＴの断片、変異体および誘導体を意味する。この用語はまた、ＲＴを含んでなるポリペプチド（ＲＴの断片、変異体および誘導体を含んでなるポリペプチドを含む）も含む。このように、ＲＴは、ｐ６６断片、ｐ５１断片、ならびに／またはｐ６６および／もしくはｐ５１の断片、変異体および誘導体を含んでなり得る。
【００６０】
一つの実施態様では、本発明の免疫原性組成物は、Ｇａｇを含んでなる１以上のポリペプチドを含んでなる。
【００６１】
Ｇａｇ遺伝子は前駆体ポリタンパク質として翻訳され、プロテアーゼにより切断されて、基質タンパク質（ｐ１７）、キャプシド（ｐ２４）、ヌクレオキャプシド（ｐ９）、ｐ６および２つのスペースペプチドｐ２とｐ１を含む産物を生じ、これらは総てＧａｇの断片の例である。
【００６２】
Ｇａｇ遺伝子は、ｐ５５と呼ばれる５５キロダルトン（ｋＤ）のＧａｇ前駆体タンパク質を生じ、これは非スプライシングウイルスｍＲＮＡから発現される。翻訳中に、ｐ５５のＮ末端はミリストイル化され、細胞膜の細胞質側の面との会合が誘発される。この膜結合型のＧａｇポリタンパク質は、他のウイルスタンパク質および細胞タンパク質とともに２コピーのウイルスゲノムＲＮＡを動員し、感染細胞の表面からのウイルス粒子の出芽を誘発する。出芽の後、ｐ５５は、ウイルス成熟の過程で、ウイルスによりコードされているプロテアーゼ（ｐｏｌ遺伝子の産物）により切断され、ＭＡ（マトリックス［ｐ１７］）、ＣＡ（キャプシド［ｐ２４］）、ＮＣ（ヌクレオキャプシド［ｐ９］）、およびｐ６と呼ばれる４つのより小さなタンパク質を生じるが、これらは総てＧａｇの断片の例である。
【００６３】
ｐ１７（ＭＡ）ポリペプチドは、ｐ５５のＮ末端ミリストイル化末端に由来する。ほとんどのＭＡ分子はビリオン脂質二重層の内面との結合を維持し、粒子を安定化させる。一部のＭＡがビリオンのより深い層に動員され、ウイルスＤＮＡを核へと導く複合体の一部となる。ＭＡ上の核親和性シグナルが細胞の核輸送機構により認識されることから、これらのＭＡ分子はウイルスゲノムの核輸送を助ける。この現象によってＨＩＶ−１は非分裂細胞に関連可能となり、レトロウイルスの特異な特性である。
【００６４】
ｐ２４（ＣＡ）タンパク質は、ウイルス粒子の円錐形のコアを形成する。シクロフィリンＡは、ｐ５５のｐ２４領域と相互作用してそのＨＩＶ−１粒子への組み込みをもたらすことが示されている。ＧａｇとシクロフィリンＡ間の相互作用は、この相互作用をシクロスポリンＡで妨害するとウイルス複製が阻害されることから、不可欠なものである。
【００６５】
ＧａｇのＮＣ領域は、ＨＩＶ−１のいわゆるパッケージングシグナルを特異的に認識する役割を担う。このパッケージングシグナルは、ウイルスＲＮＡの５’末端付近に位置する４つのステムループ構造からなり、異種ＲＮＡのＨＩＶ−１ビリオンヘの組み込みを媒介するのに十分なものである。ＮＣは、２つのジンクフィンガーモチーフにより媒介される相互作用を介してこのパッケージングシグナルに結合する。ＮＣはまた逆転写も補助する。
【００６６】
ｐ６ポリペプチド領域は、ｐ５５  Ｇａｇとアクセサリータンパク質Ｖｐｒの間の相互作用を媒介し、集合中のビリオンへのＶｐｒの組み込みをもたらす。ｐ６領域はまた、感染細胞からの出芽ビリオンの効率的放出に必要とされる、いわゆる後期ドメインも含む。
【００６７】
Ｇａｇとは、全長Ｇａｇ、ならびに全長Ｇａｇの断片、変異体および誘導体を意味する。この用語はまた、Ｇａｇを含んでなるポリペプチド（Ｇａｇの断片、変異体および誘導体を含んでなるポリペプチドを含む）も含む。
【００６８】
一つの実施態様では、Ｇａｇは、ｐ５５前駆体タンパク質を含んでなる。ｐ５５とはまた、全長ｐ５５、ならびに全長ｐ５５の断片、変異体および誘導体を意味する。この用語はまた、ｐ５５を含んでなるポリペプチド（ｐ５５の断片、変異体および誘導体を含んでなるポリペプチドを含む）も含む。このように、ｐ５５は、ｐ１７断片、ｐ２４断片、ｐ９断片、ｐ６断片、ならびに／またはｐ１７、ｐ２４、ｐ９および／もしくはｐ６の断片、変異体および誘導体、ならびに前記断片、変異体または誘導体を含んでなるポリペプチドを含んでなり得る。
【００６９】
一つの実施態様では、Ｇａｇはｐ１７である。一つの実施態様では、Ｇａｇはｐ２４である。一つの実施態様では、Ｇａｇは、ｐ１７とｐ２４の双方を、別個のタンパク質抗原成分または融合体のいずれかとして含んでなる。
【００７０】
好適には、ｐ１７およびｐ２４は融合され、異種アミノ酸配列によって離されている。
【００７１】
一つの実施態様では、免疫原性組成物はさらにＨＩＶエンベロープタンパク質（Ｅｎｖ）またはその断片もしくは誘導体を含んでなる。
【００７２】
本発明では、記載の抗原は全長抗原、例えば、全長Ｎｅｆ、全長Ｐｏｌ、全長Ｇａｇである。本発明はまた、その抗原の断片または変異体（全長に相当してもしなくてもよい）を含め、全長でない抗原も包含する。好適には、断片は免疫原性断片であり、変異体は免疫原性変異体である。
【００７３】
一般に、「断片」は、免疫原性であってもなくても、ＨＩＶ−１抗原を含んでなるポリペプチド（断片はこの一部である）に由来するアミノ酸の連続的配列を含む。好適には、断片は、断片がその一部であるポリペプチド由来の少なくとも５〜８個アミノ酸、少なくとも９〜１５個のアミノ酸、少なくとも２０個、少なくとも５０個、または少なくとも１００個の連続するアミノ酸を含む。
【００７４】
本明細書において「免疫原性断片」とは、その抗原の少なくとも１つのＴ細胞エピトープまたはＢ細胞エピトープを含んでなり、ＨＩＶ−１抗原性を示す。このような断片は、単離物として、または好適な構築物として提供される場合（例えば、他のＨＩＶ−１エピトープもしくは抗原と融合される場合、タンパク質性および／もしくは免疫原性であり得る融合相手と融合される場合、または担体上もしくは担体内に提供される場合など）のいずれかで、天然抗原に対して免疫応答を誘導することができる。
【００７５】
本明細書において「変異体」とは、それらの非変異体対応物に比べて、限定された様式で変更されているポリペプチドを含む。これには、例えば、発現系の発現を改善すること、または望ましくない酵素活性を含む、望ましくない活性を除去することによってポリペプチドの特性を変更することができる点突然変異が含まれる。しかしながら、ＨＩＶ−１抗原を含んでなるポリペプチド変異体は、免疫原性組成物またはワクチンにおいて望ましい抗原特性を保持し、従って、天然抗原に対する免疫応答を生じる能力を維持するように、天然ポリペプチドとの十分な類似性を維持していなければならない。特定の変異体がこのような免疫応答を生じるかどうかは、ＥＬＩＳＡなどの好適な免疫アッセイ（抗体応答の場合）または細胞マーカーおよびサイトカインに好適な染色を用いるフローサイトメトリー（細胞性応答の場合）によって評価することができる。
【００７６】
好適には、本発明による「変異体」は、１以上のアミノ酸の付加、欠失または置換を含んでなる。これらには、抗原のＣ末端および／またはＮ末端から１以上のアミノ酸が切断された末端切断型抗原が包含される。好適には、「変異体」には、抗原のＣ末端および／またはＮ末端から１〜５個のアミノ酸、６〜１０個のアミノ酸、１１〜１５個のアミノ酸、１６〜２０個のアミノ酸、２１〜２５個のアミノ酸または２５個を越えるアミノ酸が切断された末端切断型が含まれる。
【００７７】
本発明の変異体には、１以上の欠失、１以上のアミノ酸の付加または置換を組み込むことができる。従って、末端切断型の抗原は、これに加えて、そのペプチドの異なる部分に１以上のアミノ酸の欠失、付加または置換を含むことができる。
【００７８】
本発明の変異体はまた、Ｎｅｆ、Ｐｏｌおよび／またはＧａｇのポリペプチド配列と少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するポリペプチド配列も含んでなる。
【００７９】
本発明の一つの実施態様では、免疫原性組成物は、１以上の抗原を含んでなる２つのポリペプチド、１以上の抗原を含んでなる３つのポリペプチド、１以上の抗原を含んでなる４つのポリペプチド、または１以上の抗原を含んでなる５つもしくはそれを越えるポリペプチドを含んでなる。
【００８０】
Ｎｅｆ、Ｐｏｌおよび／またはＧａｇはそれぞれ、免疫原性組成物中に２回以上存在することができる。例えば、本発明の免疫原性組成物は、Ｎｅｆを含んでなる２以上のポリペプチド、Ｐｏｌを含んでなる２以上のポリペプチド、および／またはＧａｇを含んでなる２以上のポリペプチドを含んでなり得る。
【００８１】
さらなる実施態様では、１以上のポリペプチドはそれぞれ、Ｎｅｆ、Ｐｏｌおよび／またはＧａｇのうち１つ、Ｎｅｆ、Ｐｏｌおよび／またはＧａｇのうち２つ、Ｎｅｆ、Ｐｏｌおよび／またはＧａｇのうち３つ、Ｎｅｆ、Ｐｏｌおよび／またはＧａｇのうち４つなどを含んでなり得る。組成物中に２以上のポリペプチドが存在する場合には、各ポリペプチドは同じ数および／または同じ組成の抗原を含んでなることもでき、あるいは各ポリペプチドは異なる数および／または異なる組成の抗原を含んでなることもできる。組成物中に３以上のポリペプチドが存在する場合、２以上のポリペプチドが同じ数および／または同じ組成の抗原を含んでなり、残りのポリペプチドが異なる数および／または異なる組成の抗原を含んでなることができる。
【００８２】
これらの抗原のポリペプチド配列は、異なる株間で、例えば、ＨＩＶ−１の異なるクレードに由来する株間でよく保存されていることについては十分に記載されている。一つの実施態様では、組成物のポリペプチドは、クレードＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｊ、ＫのＨＩＶ−１株、または循環組換え型ＨＩＶ−１（ＣＲＦ）に由来する。一つの実施態様では、これらのポリペプチドは、クレードＢなどの同じクレードに由来する。別の実施態様では、これらのポリペプチドは２以上のクレードに由来する。さらなる実施態様では、これらのポリペプチドは、被験体に感染しているＨＩＶ−１株と同じクレードに由来する。別の実施態様では、少なくとも１つのポリペプチドが、被験体に感染しているＨＩＶ−１株とは異なるクレードに由来する。さらなる実施態様では、総てのポリペプチドが、被験体に感染しているＨＩＶ−１株とは異なるクレードに由来する。
【００８３】
各ＨＩＶ−１クレードおよび株の参照配列は、www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/でアクセス可能なＧｅｎｂａｎｋまたはwww.uniprot.org/でアクセス可能なＵｎｉＰｒｏｔデータベース（いずれも２０１１年９月２１日にアクセス）などの種々の周知の遺伝子データベースにおいて容易に入手することができる。例えば、各クレードおよび／または株に対する本発明の各抗原の配列はこれらのデータベースに見出すことができる。
【００８４】
本発明の免疫原性組成物中に存在し得る抗原の１以上を含んでなる融合タンパク質は、引用することにより本明細書の一部とされるＷＯ２００６／０１３１０６に開示されている。抗原Ｐｏｌ、Ｎｅｆ、Ｇａｇならびにその変異体および断片は、ＨＩＶの異なる株間で比較的よく保存されていると考えられ、従って、保存性の低い抗原よりも、ＨＩＶの異なる株に由来する抗原と交差反応する可能性が高いはずであるという理由で、免疫原性組成物に使用する融合タンパク質に含めるために予め選択されたものである。しかしながら、これらの抗原の融合タンパク質への組み込みは、そこに含まれる抗原が天然タンパク質に相当しないために、予測できない複雑性を持ち込むことがある。従って、融合タンパク質が容易に得られるとは限らず、天然タンパク質と同様に振る舞うと推測することはできない。
【００８５】
本発明の一つの実施態様では、免疫原性組成物において２つ、３つ、４つまたはそれを越える抗原が融合されて融合タンパク質を形成している。
【００８６】
好適には、ＧａｇがＰｏｌに融合されるか、またはＰｏｌがＧａｇに融合され、ＰｏｌがＮｅｆに融合されるか、またはＮｅｆがＰｏｌに融合され、かつ／またはＮｅｆがＧａｇに融合されるか、またはＧａｇがＮｅｆに融合される。
【００８７】
好適には、本発明の融合タンパク質では、Ｇａｇはｐ１７および／もしくはｐ２４であり、かつ／またはＰｏｌはＲＴである。
【００８８】
特に、免疫原性組成物中の抗原は融合されて、Ｎｅｆ、ＲＴ、ｐ１７およびｐ２４を任意の順序で含んでなる融合タンパク質を形成しているのが好都合である。好適には、これらの抗原は融合されて、ｐ２４−ＲＴ−Ｎｅｆ−ｐ１７を含んでなる融合タンパク質を形成している。このような融合タンパク質はＦ４として知られる。
【００８９】
融合タンパク質中の抗原は、互いに直接融合させることもできるし、あるいはリンカーによって融合させることもできる。このようなリンカーは、１以上のアミノ酸を含んでなる異種アミノ酸配列を含んでなることができる。
【００９０】
融合体中の抗原は、ＨＩＶの同じ株に由来していてもよいし、同じＨＩＶ−１クレードの異なる株に由来していてもよいし、あるいは異なるＨＩＶ−１クレードの異なる株に由来していてもよい。
【００９１】
好適には、融合タンパク質中の抗原は、２つ、３つまたは４つの異なるＨＩＶ−１クレードのＨＩＶ−１株に由来している。あるいは、融合タンパク質中の抗原の総てが、１つのＨＩＶ−１株または同じＨＩＶ−１クレードの複数の株に由来している。
【００９２】
本発明によるペプチドは、他の抗原と組み合わせることができる。特に、これはＨＩＶ−１  ｅｎｖタンパク質またはその断片もしくは変異体を含み得る。ｅｎｖの好ましい形態はｇｐ１２０、ｇｐ１４０、ｇｐ４１およびｇｐ１６０である。ｅｎｖは例えば、Ｒ２として知られるＨＩＶ−１クレードＢエンベロープクローンに由来する、ＷＯ００／０７６３１に記載されているエンベロープタンパク質、またはその断片もしくは変異体であり得る。ｅｎｖはまた、Ｗ６１．Ｄとして知られるｇｐ１２０クローン、またはその断片もしくは変異体であってもよい。
【００９３】
よって、本発明はさらに、ＨＩＶ−１  ｅｎｖタンパク質またはその断片もしくは変異体をさらに含んでなる本発明による免疫原性組成物を提供する。明瞭にするために、本明細書で用いる「断片」および「変異体」の用語の意味は上記で定義される通りである。
【００９４】
一つの実施態様では、融合タンパク質を含んでなる本発明の免疫原性組成物は、抗原を含んでなる１以上の非融合ポリペプチドをさらに含んでなる。
【００９５】
好適には、非融合ポリペプチド中の抗原は、融合タンパク質中の抗原の少なくとも１つと同じクレードのＨＩＶ−１株に由来する。
【００９６】
あるいは、非融合ポリペプチド中の抗原は、融合タンパク質中の１以上のクレードとは異なるＨＩＶ−１株に由来する。
【００９７】
好適には、非融合ポリペプチドはＥｎｖを含んでなる。例えば、非融合ポリペプチドは、ｇｐ１２０、ｇｐ１４０またはｇｐ１６０のうちの１以上を含んでなる。
【００９８】
ＨＩＶ−１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０は、宿主細胞との接着のために用いられるウイルスタンパク質である。ｇｐ１２０タンパク質は、中和抗体、ならびに抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）および抗体依存性細胞媒介ウイルス阻害（ＡＤＣＶＩ）の主要な標的である。しかしながら、抗体により最もよく認識されるタンパク質領域（Ｖ３ループ）はそのタンパク質の最も可変性の高い部分でもある。ｇｐ１２０タンパク質はまた、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）により認識されるエピトープを含む。これらのエフェクター細胞はウイルス感染細胞を排除することができ、従って、第２の主要な抗ウイルス免疫機構をなす。中和抗体のこの標的領域とは対照的に、いくつかのＣＴＬエピトープは異なるＨＩＶ−１株間で比較的保存されていると思われる。このため、ｇｐ４１、ｇｐ１２０およびｇｐ１６０は、細胞媒介性免疫応答の惹起を目的とするワクチンにおいて有用な抗原性成分（特にＣＴＬ）となり得る。
【００９９】
本発明の免疫原性組成物またはワクチンは、免疫防護的量または免疫治療的量のポリペプチドを含み、従来の技術によって調製することができる。
【０１００】
一つの実施態様では、免疫原性組成物の単位用量中の各抗原の総量は０．５〜２５μｇ、２〜２０μｇ、５〜１５μｇ、または約１０μｇである。
【０１０１】
好適には、免疫原性組成物の単位用量中の融合タンパク質の総量は１０μｇであり、かつ／または免疫原性組成物の単位用量中の非融合ポリペプチドの総量は２０μｇである。
【０１０２】
一つの実施態様では、免疫原性組成物の単位用量中の全抗原の総量０．１μｇ〜１００μｇ、０．５〜５０μｇ、２〜４０μｇ、５〜３０μｇ、７〜２０μｇ、例えば、全抗原の総量は約１００μｇ、約９０μｇ、約８０μｇ、約７０μｇ、約６０μｇ、約５０μｇ、約４０μｇ、３０μｇ、約２０μｇまたは約１０μｇであり得る。
【０１０３】
免疫原性組成物の一用量中のタンパク質の量は、典型的な受容者に著しい有害な副作用なく免疫応答を誘導する量として選択される。このような量はどの特異的免疫原を用いるか、そして選択する投与またはワクチン接種計画によって異なる。特定の免疫原性組成物の最適量は、被験体における関連の免疫応答の観察を含む標準的な試験によって確認することができる。
【０１０４】
アジュバント
アジュバントは、一般に、引用することにより本明細書の一部とされるVaccine Design-the Subunit and Adjuvant Approach, Powell and Newman編, Plenum Press, New York, 1995に記載されている。
【０１０５】
免疫賦活剤の一例であるアジュバントは、抗原に対する特異的免疫応答（抗体媒介性および／または細胞媒介性）を増強するまたは効力を高める免疫原性組成物中の成分を意味する。
【０１０６】
アジュバントは、Ｔｈ１型およびＴｈ−２型応答の免疫応答を誘導し得る。Ｔｈ１型サイトカイン（例えば、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２およびＩＬ−１２）は、所与の抗原に対する細胞媒介性免疫応答の誘導に好適である傾向にあり、Ｔｈ−２型サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０）は抗原に対する体液性免疫応答の誘導に好適である傾向にある。
【０１０７】
本発明では、アジュバントは、Ｔｈ１免疫応答の優先的インデューサーである。
【０１０８】
このＴｈ１型とＴｈ２型の免疫応答の区別は絶対的なものではない。実際には、ある個体は、主としてＴｈ１または主としてＴｈ２と記載される免疫応答を保持している。しかしながら、ネズミＣＤ４＋Ｔ細胞クローンにおいて、引用することにより本明細書の一部とされるMosmann and Coffman, 1989により記載されているような観点では、複数のサイトカインファミリーと捉えるのが好都合である場合が多い。従来、Ｔｈ１型応答はＴリンパ球によるＩＮＦ−γおよびＩＬ−２サイトカインの生産に関連付けられている。Ｔｈ１型免疫応答の誘導に直接関連づけられることの多い他のサイトカイン（ＩＬ−１２など）は、Ｔ細胞によっては生産されない。主としてＴｈ１応答を促進する好適なアジュバント系としては、モノホスホリル脂質Ａまたはその誘導体（または一般に解毒脂質Ａ、例えば、引用することによりその全内容が本明細書の一部とされる米国特許出願公開第２００８／１３８３５９号参照）、特に、３−デ−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａ（３Ｄ−ＭＰＬ）（その調製に関しては、引用することによりその全内容が本明細書の一部とされる米国特許第４，９１２，０９４号参照）；およびモノホスホリル脂質Ａ、好ましくは、３−デ−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａとアルミニウム塩（例えば、リン酸アルミニウムもしくは水酸化アルミニウム）または水中油型エマルションのいずれかとの組合せが挙げられる。このような組合せでは、抗原および３Ｄ−ＭＰＬは同じ粒子構造中に含ませれば、抗原シグナルおよび免疫賦活シグナルのより効率的な送達が可能となる。３Ｄ−ＭＰＬがミョウバン吸着抗原の免疫原性をさらに増強することができることを示した研究もある［Thoelen et al., 1998；米国特許第５，７７６，４６８号（それぞれ引用することにより本明細書の一部とされる）］。
【０１０９】
増強された系としては、モノホスホリル脂質Ａとサポニン誘導体の組合せ、特に、引用することにより本明細書の一部とされるＷＯ９４／００１５３に開示されているような、ＱＳ２１と３Ｄ−ＭＰＬの組合せ、または引用することにより本明細書の一部とされる米国特許第６，８４６，４８９号に開示されているような、ＱＳ２１がコレステロールでクエンチされた低反応源性組成物が含まれる。水中油型エマルション中にＱＳ２１、３Ｄ−ＭＰＬおよびトコフェロールを含む特に効力のあるアジュバント製剤が、引用することにより本明細書の一部とされる米国特許第６，１４６，６３２号に記載されている。一つの実施態様では、免疫原性組成物は、サポニン（ＱＳ２１であり得る）をさらに含んでなる。この処方物はまた水中油型エマルションおよびトコフェロールを含んでなることができる（米国特許第６，１４６，６３２号）。一つの実施態様では、この処方物は水中油型エマルション含有スクアレンであるＭＦ５９を含む。
【０１１０】
本発明の一つの実施態様では、アジュバントは、免疫学的に活性なサポニン画分および／またはリポ多糖および／または免疫賦活オリゴヌクレオチドから選択される１以上の成分を含んでなる。
【０１１１】
一つの実施態様では、アジュバントは、免疫学的に活性なサポニン画分およびリポ多糖を含んでなる。
【０１１２】
好適には、免疫学的に活性なサポニン画分はＱＳ２１であり、かつ／またはリポ多糖は脂質Ａ誘導体である。好適には、脂質Ａ誘導体は３Ｄ−ＭＰＬである。
【０１１３】
好適なアジュバントは、３Ｄ−ＭＰＬとＱＳ２１の組合せ（引用することにより本明細書の一部とされる米国特許第５，７５０，１１０号）、３Ｄ−ＭＰＬとＱＳ２１を含んでなる水中油型エマルション（米国特許第６，１４６，６３２号、ＷＯ９８／５６４１４）、または他の担体とともに処方された３Ｄ−ＭＰＬ（引用することにより本明細書の一部とされる米国特許第５，７７６，４６８号）である。
【０１１４】
３Ｄ−ＭＰＬは、GlaxoSmithKline Biologicals North Americaから入手可能であり、主としてＩＦＮ−γ（Ｔｈ１）表現型を伴うＣＤ４＋Ｔ細胞応答を促進する。これは米国特許第４，９１２，０９４号に開示されている方法に従って製造することができる。化学的には、これは３−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａと３、４、５または６アシル化鎖との混合物である。好ましくは、本発明の組成物では、小粒子３Ｄ−ＭＰＬが用いられる。小粒子３Ｄ−ＭＰＬは、０．２２μｍフィルターで濾過除菌可能な粒径を持つ。このような製剤は引用することにより本明細書の一部とされる米国特許第５，７７６，４６８号に記載されている。
【０１１５】
本発明で使用するのに好適な別のアジュバントは、Ｑｕｉｌ  Ａおよびその誘導体である。Ｑｕｉｌ  Ａは南米産の樹木キラヤ・サポナリア・モリナ(South American tree Quilaja Saponaria Molina)から単離されたサポニン調製物であり、Dalsgaard et al. 1974(引用することにより本明細書の一部とされる“Saponin adjuvants”, Archiv. fur die gesamte Virusforschung, Vol. 44, Springer Verlag, Berlin, p243-254)によりアジュバント活性を持つことが初めて記載された。Ｑｕｉｌ  Ａに関連する毒性が無く、アジュバント活性を保持するＱｕｉｌ  Ａの精製断片、例えば、ＱＳ７およびＱＳ２１（ＱＡ７およびＱＡ２１としても知られる）がＨＰＬＣにより単離されている（引用することにより本明細書の一部とされる米国特許第５，６０４，１０６号）。ＱＳ２１は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）、Ｔｈ１細胞および主要なＩｇＧ２ａ抗体応答を誘導する、キラヤ・サポナリア・モリナ由来の天然サポニンであり、本発明に関して好ましいサポニンである。
【０１１６】
特に好適なＱＳ２１の特定の処方物が記載れ、これらの処方物はステロールをさらに含んでなる（引用することにより本明細書の一部とされる米国特許第６，８４６，４８９号）。本発明の一部をなすサポニンはミセル、混合ミセル（排他的ではないが優先的に胆汁酸塩を伴う）の形態で分離することもできるし、あるいはＩＳＣＯＭマトリックス（引用することにより本明細書の一部とされる米国特許第４，５７８，２６９号）、リポソームまたは関連のコロイド構造、例えば、ウォーム様もしくはリング様多量体複合体、またはコレステロールおよび脂質を用いて処方される場合には脂質／積層構造およびラメラの形態、または水中油型エマルションの形態（例えば、引用することによりその全内容が本明細書の一部とされる米国特許第６，１４６，６３２号）であってもよい。サポニンは水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウムなどの金属塩と会合させることもできる（引用することにより本明細書の一部とされる米国特許第６，４６４，４８９号）。
【０１１７】
増強された系としては、モノホスホリル脂質Ａ（または解毒脂質Ａ）とサポニン誘導体の組合せ、特に、引用することにより本明細書の一部とされるＷＯ９４／００１５３に開示されているような、ＱＳ２１と３Ｄ−ＭＰＬの組合せ、または米国特許第６，８４６，４８９号に開示されているような、ＱＳ２１がコレステロールでクエンチされた低反応源性組成物が含まれる。水中油型エマルション中にＱＳ２１および／または３Ｄ−ＭＰＬとともに、または伴わずにトコフェロールを含む特に効力のあるアジュバント製剤が米国特許第６，１４６，６３２号に記載されている。
【０１１８】
一つの実施態様では、アジュバントはステロールを含んでなり、好適にはコレステロールであり得る。好適なステロール、例えば、コレステロールは、サポニンのアジュバント効果を維持しつつ、組成物の反応源性を低減する働きをする。
【０１１９】
本発明の一つの実施態様では、アジュバントはリポソーム担体を含んでなる。
【０１２０】
一つの実施態様では、アジュバントは、サポニンとステロールを、サポニン：ステロール比１：１〜１：１００（ｗ／ｗ）で含んでなる。好適には、サポニン：ステロール比は１：１〜１：１０（ｗ／ｗ）であり、またはサポニン：ステロール比は１：１〜１：５（ｗ／ｗ）である。
【０１２１】
一つの実施態様では、アジュバントは、サポニンとリポ多糖を、サポニン：リポ多糖比１：１で含んでなる。
【０１２２】
好適には、アジュバントはリポ多糖を含んでなり、このリポ多糖は一用量当たり１〜６０μｇの量で存在する。好適には、リポ多糖は一用量当たり５０μｇ、一用量当たり２５μｇ、一用量当たり１０μｇまたは一用量当たり５μｇの量で存在する。
【０１２３】
好適には、アジュバントはサポニンを含んでなり、このサポニンは一用量当たり１〜６０μｇの量で存在する。好適には、サポニンは一用量当たり５０μｇ、一用量当たり２５μｇ、一用量当たり１０μｇまたは一用量当たり５μｇの量で存在する。
【０１２４】
一つの実施態様では、アジュバントは（０．５ｍＬ用量当たり）０．０２５〜２．５、０．０５〜１．５、０．０７５〜０．７５、０．１〜０．３または０．１２５〜０．２５ｍｇ（例えば、０．２〜０．３、０．１〜０．１５、０．２５または０．１２５ｍｇ）のステロール（例えば、コレステロール）を含んでなる。
【０１２５】
一つの実施態様では、アジュバントは（０．５ｍＬ用量当たり）５〜６０、１０〜５０または２０〜３０μｇ（例えば、５〜１５、４０〜５０、１０、２０、３０、４０または５０μｇ）の脂質Ａ誘導体（例えば、３Ｄ−ＭＰＬ）を含んでなる。
【０１２６】
一つの実施態様では、アジュバントは（０．５ｍＬ用量当たり）５〜６０、１０〜５０または２０〜３０μｇ（例えば、５〜１５、４０〜５０、１０、２０、３０、４０または５０μｇ）のサポニン（例えば、ＱＳ２１）を含んでなる。
【０１２７】
一つの実施態様では、アジュバントは、リポソームに基づく処方物中に５０μｇの３Ｄ−ＭＰＬと５０μｇのＱＳ２１を含んでなる。さらなる実施態様では、アジュバントは、リポソームに基づく処方物中に２５μｇの３Ｄ−ＭＰＬと２５μｇのＱＳ２１を含んでなる。
【０１２８】
本発明の一つの実施態様では、アジュバントは水中油型エマルションを含んでなる。
【０１２９】
好適には、水中油型エマルションは、スクアレンおよび／またはαトコフェロールを含んでなる。好適には、水中油型エマルションは、代謝可能な水中油型エマルションである。特に、水中油型エマルションは好適には、Ｔｗｅｅｎ  ８０などの乳化剤を含んでなる。
【０１３０】
アジュバントは好適には、サポニンとリポ多糖を含んでなり得る。特に、アジュバントは、サポニンとリポ多糖を、１：１０〜１０：１（ｗ／ｗ）の範囲のサポニン：リポ多糖比で含んでなり得る。
【０１３１】
アジュバントは好適には、サポニンとステロールを含んでなり得る。特に、アジュバントは、サポニンとステロールを、１：１〜１：２０（ｗ／ｗ）の範囲のサポニン：ステロール比で含んでなり得る。
【０１３２】
アジュバントは好適には、サポニンと代謝可能な油を含んでなり得る。特に、アジュバントは、サポニンと代謝可能な油を、１：１〜２５０：１（ｗ／ｗ）の範囲の代謝可能な油：サポニン比で含んでなり得る。
【０１３３】
アジュバントは、好適にはαトコフェロールを含んでなり得る。
【０１３４】
一つの実施態様では、アジュバントは、（０．５ｍＬ用量当たり）０．５〜１５、１〜１３、２〜１１、４〜８または５〜６ｍｇ（例えば、２〜３、５〜６または１０〜１１ｍｇ）の代謝可能な油（例えば、スクアレン）を含んでなる。
【０１３５】
一つの実施態様では、アジュバントは、（０．５ｍＬ用量当たり）０．１〜１０、０．３〜８、０．６〜６、０．９〜５、１〜４または２〜３ｍｇ（例えば、０．９〜１．１、２〜３または４〜５ｍｇ）の乳化剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ  ８０）を含んでなる。
【０１３６】
一つの実施態様では、アジュバントは、（０．５ｍＬ用量当たり）０．５〜２０、１〜１５、２〜１２、４〜１０、５〜７ｍｇ（例えば、１１〜１３、５〜６または２〜３ｍｇ）のトコール（例えば、αトコフェロール）を含んでなる。
【０１３７】
一つの実施態様では、アジュバントは、（０．５ｍＬ用量当たり）５〜６０、１０〜５０または２０〜３０μｇ（例えば、５〜１５、４０〜５０、１０、２０、３０、４０または５０μｇ）の脂質Ａ誘導体（例えば、３Ｄ−ＭＰＬ）を含んでなる。
【０１３８】
一つの実施態様では、アジュバントは、（０．５ｍＬ用量当たり）０．０２５〜２．５、０．０５〜１．５、０．０７５〜０．７５、０．１〜０．３または０．１２５〜０．２５ｍｇ（例えば、０．２〜０．３、０．１〜０．１５、０．２５または０．１２５ｍｇ）のステロール（例えば、コレステロール）を含んでなる。
【０１３９】
一つの実施態様では、アジュバントは、（０．５ｍＬ用量当たり）５〜６０、１０〜５０または２０〜３０μｇ（例えば、５〜１５、４０〜５０、１０、２０、３０、４０または５０μｇ）のサポニン（例えば、ＱＳ２１）を含でなる。
【０１４０】
別の実施態様では、アジュバントは、金属塩と脂質Ａ誘導体を含んでなる。
【０１４１】
着目されるこのようなアジュバント系としては、リポ多糖３−デ−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａと組み合わせたアルミニウム塩に基づくものが含まれる。抗原と３−デ−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａは同じ金属塩粒子に同時に吸着させることもできるし、または異なる金属塩粒子に吸着させることもできる。
【０１４２】
好適には、アジュバントは、（０．５ｍＬ用量当たり）１００〜７５０、２００〜５００または３００〜４００μｇのＡｌ、例えば、リン酸アルミニウムを含んでなる。このような実施態様では、アジュバントは、（０．５ｍＬ用量当たり）５〜６０、１０〜５０または２０〜３０μｇ（例えば、５〜１５、４０〜５０、１０、２０、３０、４０または５０μｇ）の脂質Ａ誘導体（例えば、３Ｄ−ＭＰＬ）を含んでなる。
【０１４３】
本発明の一つの実施態様では、アジュバントは、ＣｐＧモチーフを含んでなる免疫賦活オリゴヌクレオチドを含んでなる。
【０１４４】
免疫賦活オリゴヌクレオチドは、本発明の免疫原性組成物において使用可能である。本発明のアジュバントまたは免疫原性組成物で使用するのに好ましいオリゴヌクレオチドは、ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドであり、好ましくは、少なくとも３つ、より好ましくは少なくとも６以上のヌクレオチドによって離された２以上のジヌクレオチドＣｐＧモチーフを含有する。ＣｐＧモチーフは、シトシンヌクレオチドとそれに続くグアニンヌクレオチドである。本発明のＣｐＧオリゴヌクレオチドは一般にデオキシヌクレオチドである。好ましい実施態様では、オリゴヌクレオチドのヌクレオチド間はホスホロジチオエート結合、より好ましくは、ホスホロチオエート結合であるが、ホスホジエステルおよびその他のヌクレオチド間結合も本発明の範囲内である。また、混合型ヌクレオチド間結合を有するオリゴヌクレオチドも本発明の範囲内である。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドまたはホスホロジチオエートを作製する方法は米国特許第５，６６６，１５３号、同第５，２７８，３０２号およびＷＯ９５／２６２０４（それぞれ引用することにより本明細書の一部とされる）に記載されている。
【０１４５】
好ましいオリゴヌクレオチドの例は下記の配列を有する。これらの配列は好ましくは、ホスホロチオエートで修飾されたヌクレオチド間結合を含む。
OLIGO 1 (配列番号1): TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT (CpG 1826)
OLIGO 2 (配列番号2): TCT CCC AGC GTG CGC CAT (CpG 1758)
OLIGO 3 (配列番号3): ACC GAT GAC GTC GCC GGT GAC GGC ACC ACG
OLIGO 4 (配列番号4): TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT (CpG 2006)
OLIGO 5 (配列番号5): TCC ATG ACG TTC CTG ATG CT (CpG 1668)
OLIGO 6 (配列番号6): TCG ACG TTT TCG GCG CGC GCC G (CpG 5456)
【０１４６】
別のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、それに対して影響力のない欠失または付加を有する好ましい配列を含んでなることができる。
【０１４７】
本発明で用いられるＣｐＧオリゴヌクレオチドは、当技術分野で公知の任意の方法によって合成することができる（例えば、引用することにより本明細書の一部とされるＥＰ４６８５２０参照）。好適には、このようなオリゴヌクレオチドは、自動合成装置を用いて合成することができる。
【０１４８】
投与
医薬組成物の投与は、１回または２回以上の各用量、例えば、同じポリペプチド含有組成物の反復投与、または異種「プライム−ブースト」ワクチン接種計画の形態を採ることができる。
【０１４９】
一つの実施態様では、本発明の免疫原性組成物は、まず、被験体に２または３回用量として投与されるが、これらの投与は１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、１０週間または１２週間の期間離される。好適には、これらの投与は４週間離される。
【０１５０】
好適には、本組成物は、被験体に６〜２４ヶ月ごと、または９〜１８ヶ月ごと、例えば、毎年投与される（例えば、追加免疫として）。例えば、本組成物は、被験体に６ヶ月または１年おきに投与される（例えば、追加免疫として）。
【０１５１】
これに関して好適には、被験体への組成物の追加投与は、同じ被験体への組成物の最初の投与の免疫応答を増強する。
【０１５２】
好適には、組成物はプライム用量である。あるいは、組成物はブースト用量である。
【０１５３】
好適には、２回以上のプライム用量および／またはブースト用量が投与される。
【０１５４】
異種プライム−ブースト計画では、プライムおよびブーストで異なる形態の免疫原性組成物またはワクチンの投与を用い、それぞれそれ自体２回以上の投与を含み得る。このプライム組成物とブースト組成物は少なくとも１つの抗原を共通に持つが、それは同じ形態の抗原である必要はなく、同じ抗原の異なる形態であってもよい。
【０１５５】
本発明によるプライム−ブースト免疫は、同種プライム−ブースト計画でも異種プライム−ブースト計画でもよい。同種プライム−ブースト計画では、プライムとブーストに同じ組成物、例えば、本発明の免疫原性組成物を用いる。
【０１５６】
異種プライム−ブースト計画は、タンパク質とＤＮＡに基づく処方物の組合せを用いて行うことができる。このような戦略は、広域の免疫応答を誘導するのに有効であると考えられる。アジュバントを伴うタンパク質ワクチンは主として抗体およびＣＤ４＋Ｔ細胞免疫応答を誘導するが、プラスミドまたは組換えベクターとしてのＤＮＡの送達は、強力なＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘導する。従って、タンパク質とＤＮＡワクチンの組合せは、多様な免疫応答を提供することができる。抗体（中和抗体ならびにＡＤＣＣおよびＡＤＣＶＩに関連する抗体）、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞はＨＩＶ−１に対する免疫防御に重要であると考えられるので、このことはＨＩＶに関して特に適切である。例えば、ＤＮＡはアデノウイルスベクターで送達することができる。
【０１５７】
本発明のさらなる側面において、本発明の免疫原性組成物はワクチン組成物である。
【０１５８】
ワクチンの調製は一般に、引用することにより本明細書の一部とされるNew Trends and Developments in Vaccines, Voller et al.編, University Park Press, Baltimore, Maryland, U.S.A. 1978に記載されている。
【０１５９】
本明細書において、本発明の「免疫原性組成物」に関する実施態様は、本発明の「ワクチン」に関する実施態様にも適用可能であり、この逆も可能である。
【０１６０】
本明細書において「含んでなる(comprising, compriseおよびcomprises)」という用語は、総ての場合において、「からなる(それぞれconsisting of, consist ofおよびconsists of)」という用語と場合により置き換え可能であることが本発明者により意図される。
【０１６１】
本特許明細書に引用された総ての刊行物または特許出願は、引用することにより本明細書の一部とされる。
【０１６２】
本発明をより良く理解できるように、以下の実施例を示す。これらの実施例は単に例示を目的とし、本発明の範囲を何ら限定するものではない。
【実施例】
【０１６３】
以下、例およびデータを挙げて本発明を説明するが、本発明はこれに限定されない。
【０１６４】
１．例示的Ｆ４候補ワクチンの調製
Ｆ４候補ワクチンは、従前に米国特許第７，６１２，１７３号および米国特許出願第６１／１８１，１３０号（それぞれ引用することによりその全内容が本明細書の一部とされる）に記載されている通りに調製した。このワクチンは１０μｇ／用量のコドン最適化Ｆ４組換えタンパク質（Ｆ４ｃｏ）を、特許アジュバントＡＳＯ１Ｂ（各５０μｇの３−Ｄ−ＭＰＬおよびＱＳ２１免疫賦活剤を含有するリポソームに基づくアジュバント）とともに含有する。あるいは、特許アジュバントＡＳＯ１Ｅを使用することもでき、その場合には、同じ免疫賦活剤をＡＳＯ１Ｂの半分の濃度（すなわち２５μｇの３−Ｄ−ＭＰＬと２５μｇのＱＳ２１）で含有する。これらの方法を以下に簡単にまとめる。
【０１６５】
２．Ｆ４ｃｏ融合抗原
Ｆ４ｃｏは、ｐ２４−ＲＴ−Ｎｅｆ−ｐ１７のように配置された４つのＨＩＶ−１クレードＢ由来抗原を含んでなる融合タンパク質である。これら４つの抗原は：
・ｇａｇ遺伝子によりコードされるウイルスキャプシドタンパク質ｐ２４
・ウイルスＲＮＡから二本鎖ＤＮＡへの転写を担うウイルス酵素ＲＴ（逆転写酵素）。この酵素は１つのアミノ酸の突然変異（トリプトファン２２９がリシンに置換）により、ＲＴポリメラーゼ活性が除去されている。このタンパク質はｐｏｌ遺伝子によりコードされている。
【０１６６】
・ｅｎｖ遺伝子をフランキングするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）によりコードされる調節タンパク質Ｎｅｆ
・ｇａｇ遺伝子によりコードされるウイルス基質タンパク質ｐ１７
である。
【０１６７】
以下のポリヌクレオチド配列は、発現される融合タンパク質のアミノ酸配列を変化させずに、そのコドン使用頻度が大腸菌(E.coli)で発現の高い遺伝子のコドン使用頻度を真似るようにコドンの最適化が行われている。
【０１６８】
２．１  Ｆ４ｃｏのヌクレオチド配列：
【化１】
2014501225.tif 000002
2014501225.tif 000003
ｐ２４配列は太字。
Ｎｅｆ配列は下線。
四角：遺伝子構築により導入されたヌクレオチド
【０１６９】
２．２  Ｆ４ｃｏのアミノ酸配列
【化２】
2014501225.tif 000004
Ｐ２４配列：アミノ酸１〜２３２（太字）
ＲＴ配列：アミノ酸２３５〜７９５
Ｎｅｆ配列：アミノ酸７９８〜１００２
Ｐ１７配列：アミノ酸１００５〜１１３６
四角：遺伝子構築により導入されたヌクレオチド
Ｋ（リシン）：トリプトファン（Ｗ）から変更。突然変異の導入により酵素活性が除去。
【０１７０】
２．３  別の配列
あるいは、Ｆ４ｃｏ配列の変異体を使用することもでき、例えば、ＲＴ領域を次のように突然変異させ、構築物の示されているＲＴ領域（配列番号８のアミノ酸２３５〜７９５）を置換することができる。アミノ酸４２８〜４４８間のＲＴ／ｐ６６領域は、大腸菌プロテアーゼに感受性がある。Ｐ５１構築物はＬｅｕ４２７で終わり、その結果、ＲＮアーゼＨドメインの排除が起こる。ＲＴ天然遺伝子配列中に同定されている推定大腸菌「フレームシフト」配列もまた排除した（ｐ５１遺伝子のコドンの最適化による）。
【０１７１】
合成Ｐ５１遺伝子の配列は、大腸菌のコドン使用頻度に従って設計した。従って、それは、コドン使用頻度が大腸菌で発現の高い遺伝子のコドン使用頻度を真似るように最適化されたコドンであった。この合成遺伝子を次のように構築した：３２のオリゴヌクレオチドを一工程ＰＣＲでアセンブルした。第２のＰＣＲで、末端プライマーを用い、この全長アセンブリを増幅し、得られたＰＣＲ産物をｐＧＥＭ−Ｔ中間プラスミドにクローニングした。遺伝子合成中に導入されたポイントエラーを補正した後、ｐ５１合成遺伝子をｐＥＴ２９ａ発現プラスミドにクローニングした。この組換えプラスミドをＢ８３４（ＤＥ３）細胞の形質転換に用いた。
【０１７２】
Ｐ５１  ＲＴヌクレオチド配列
【化３】
2014501225.tif 000005
四角：遺伝子構築により導入されたヌクレオチド
【０１７３】
アミノ酸配列：
【化４】
2014501225.tif 000006
四角：遺伝子構築により導入されたヌクレオチド
Ｋ（リシン）：トリプトファン（Ｗ）から変更。突然変異の導入により酵素活性が除去。
【０１７４】
あるいは、発現を増強するためにフレームシフト配列を除去する変更を行ったＦ４融合体を使用することもできる。このような融合体のヌクレオチド配列およびタンパク質配列は、それぞれ配列番号１１および１２で示される。発現されたタンパク質はＦ４ｃｏタンパク質の免疫原性を総て保持するが、フレームシフト欠失のためにより容易に発現される。
【０１７５】
上述のように、使用可能な他のＦ４融合には、異なるクレードのＨＩＶ配列に由来するものが含まれる。例えば、配列番号１３〜１６は、ＨＩＶクレードＣに基づくＦ４融合体のヌクレオチド配列およびタンパク質配列を示す。配列番号１３および１４は、精製が容易なようにカルボキシ末端に任意選択のヒスチジンタグ（６ｘＨｉｓ）を含むクレードＣ  Ｆ４配列の、それぞれヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。配列番号１５および１６は、ヒトでの発現のためにコドン使用頻度が最適化されたクレードＣ  Ｆ４配列の、それぞれヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。配列番号１４および１６のアミノ酸配列は、配列番号１４が任意選択の６ｘＨｉｓタグを含むこち以外は同一である。
【０１７６】
２．４  Ｆ４ｃｏ  ＧＭＰロットの調製
Ｆ４ｃｏ候補ワクチンは、従前に米国特許第７，６１２，１７３号および米国特許出願第６１／１８１，１３０号に記載されている通りに調製および精製した。簡単に述べると、配列番号７のヌクレオチド配列を含んでなる核酸を大腸菌ＢＬＲ（ＤＥ３）細胞で発現させるためのｐＥＴプラスミドベクターにクローニングしたが、これによりＩＰＴＧで誘導した際にＴ７プロモーターの制御下でＦ４ｃｏポリペプチドの発現が可能となる。適切な発現を確認した後に、ＧＭＰバッチの製造のために、培養をより大きなバッチにスケールアップした。３ロットを精製し、収量、純度および粘稠度を試験したところ、各特徴の標準に見合うか、またはそれより優れていた。
【０１７７】
３．ヒト被験体におけるＦ４の免疫原性
３．１  方法論
３．１．１  患者集団
Ｆ４ｃｏ／ＡＳ０１Ｂワクチン候補接種後、ＨＩＶ感染被験体の免疫応答に関するプラセボ対照第Ｉ相無作為化観察者盲検試験をドイツの６施設で行った（ＮＣＴ００８１４７６２）。この試験は地方独立倫理委員会と国家規制当局の承認を受けたものであり、ヘルシンキ宣言および医薬品の臨床試験の実施の基準(Good Clinical Practice)のガイドラインに準拠して行い、総ての被験体から書面によるインフォームド・コンセントを得た。第１の試験目的はワクチンの反応源性と安全性を評価することであった。第２の目的としては、ＨＩＶ−１特異的ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞応答、ＣＤ４＋Ｔ細胞総数ならびにＨＩＶウイルス量の評価を含んだ。４１名の被験体が登録され、１９名がＡＲＴ経験者、２２名がＡＲＴ未経験であった（図２）。
【０１７８】
ＡＲＴ経験コホートとＡＲＴ未経験コホートの双方で、Ｆ４ｃｏ／ＡＳ０１Ｂワクチンを受けた群の人工統計的プロフィールを、プラセボを受けた群と比較した。この２つのコホートの平均年齢はそれぞれ４３．８歳と３７．６歳であった。各コホートで１名を除き、全被験体が男性であった。これらのコホートは主としてコーカサス・ヨーロッパ白色人種であった（それぞれ被験体の９４．７％および９０．９％）。
【０１７９】
ＨＩＶ診断から最初のワクチン接種までの平均時間は、それぞれ１０．４７年および３．２３年であった。ＣＤ４細胞の最下点(nadir)はＡＲＴ経験群でおよそ２５０細胞／ｍｍ３、ＡＲＴ未経験群でおよそ５５０細胞／ｍｍ３であった。初回接種の時点でのＣＤ４細胞総数は、ＡＲＴ経験コホートで３４９〜１０５５細胞／ｍｍ３、ＡＲＴ未経験被験体では３７７〜１１８８細胞／ｍｍ３の範囲であり、後者のコホートでは、この時のウイルス量が２，２８０〜６９，４００コピー／ｍＬであった。被験体は総て、ＨＢｓＡｇおよびＨＣＶ  ＤＮＡに関して陰性であった。被験体のＨＩＶ状態に関してさらに詳しくは、表１に示されている。
【０１８０】
【表１】
2014501225.tif 000007
【０１８１】
３．１．２  処方
Ｆ４ｃｏワクチン候補は、有効成分として一用量当たり１０μｇのＦ４組換えタンパク質を含み、アジュバントＡＳ０１Ｂを伴った。ワクチン抗原は、リン酸バッファー中、スクロース、ＥＤＴＡ、アルギニン、ポリソルベート８０および亜硫酸ナトリウムにＦ４抗原を含有する凍結乾燥ペレットとして調製した。ＡＳ０１Ｂリポソームアジュバント系は、５０μｇの３−Ｄ−ＭＰＬと５０μｇのＱＳ２１を含有し、上記の実施例１に従って調製した。
【０１８２】
Ｆ４抗原を含有する凍結乾燥画分および単位用量３ｍｌのガラスバイアル中に調製されたＡＳ０１Ｂアジュバント系を含有する液体画分は、注射の少し前にワクチンを投与する人が再構成した。バイアルの内容物を溶かした後、この再構成ワクチン溶液０．５ｍｌを筋肉内投与用のシリンジに抜き取った。あるいは、同容量の生理食塩水をプラセボとして同様に投与した。
【０１８３】
３．１．３  投与
Ｆ４ワクチン候補を、投与間隔を４週間として２回投与し（図２）、安全性に関して被験体をモニタリングした。反応源性は許容されるものであり、反復投与しても増大しなかった。ＨＩＶ疾患のマーカー（ＣＤ４総数およびウイルス量）は、ワクチン接種による感染の悪化を示さなかった。ワクチン接種に関連する重篤有害事象の報告はなかった。
【０１８４】
３．１．４  安全性
局所的（注射部位の疼痛、発赤、腫脹）および全身的（発熱、疲労、頭痛、発汗、筋肉痛、消化管症状）特定(solocited)有害事象（ＡＥ）を各投与後７日間記録した。非特定ＡＥは、各ワクチン接種後３０日間記録した。ＡＥの重篤度は、米国立アレルギー感染症ＡＩＤＳ部（ＤＡＩＤＳ）ＡＥ分類体系（ＮＩＡＩＤ  ２００４）を用いて評価した。重篤有害事象（ＳＡＥ）および以下の所定のＨＩＶ関連ＡＥは試験期間を通じて評価した：ＣＤ４＋細胞総数おけるベースラインからの≧２５％減；ＡＲＴ経験被験体におけるワクチン接種後の検出可能なウイルス量（超高感度(utrasensitive)検出法を用いて測定されるＨＩＶ  ＲＮＡにおける５０コピー／ｍｌ以上の増加）／ＡＲＴ未経験被験体におけるワクチン接種後のウイルス量における０．５ｌｏｇ以上の増加；ＡＲＴの変更または開始；および異常な生化学的および／または血液学的パラメーター（ＤＡＩＤＳ尺度では１以上と定義）。安全性データは定期的に独立データ監視委員会により検証した。
【０１８５】
３．１．５  ウイルス量
ＨＩＶウイルス量は、ＡＲＴ経験コホートではＲｏｃｈｅ  ＣＯＢＡＳ  ＡＭＰＬＩＣＯＲ（商標）ＨＩＶ−１モニター試験ｖ１．５を用いて、また、ＡＲＴ未経験コホートではＲｏｃｈｅ  ＣＯＢＡＳ  ＡＭＰＬＩＰＲＥＰ（商標）／ＣＯＢＡＳ  ＴＡＱＭＡＮ（商標）ＨＩＶ−１試験ｖ１．０を用いて調べた。
【０１８６】
３．１．６  ＣＤ４総数
ＣＤ４の計数は、市販のＢＤ  Ｍｕｌｔｉｔｅｓｔ（商標）ＩＭＫキット（４色アッセイ）(Beckton Dickinson)を使用して行い、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒ装置で読み取った。試験過程で、この方法は、ＢＤＭｕｌｔｉｔｅｓｔ（商標）６色ＴＢＮＫ試薬と、詳細確認工程の後にＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩシステムを使用することで改良した。
【０１８７】
３．１．７  免疫応答
ＨＩＶ特異的ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞応答は、従前に記載されているように(Van Braeckel et al. 2011)静脈血から単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を用い、in vitroにおいてｐ１７、ｐ２４、ＲＴおよびＮｅｆペプチドプールで刺激した後に細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）を行って、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）およびＣＤ４０−リガンド（ＣＤ４０Ｌ）の発現を調べることにより評価した。結果は、少なくともＩＬ−２を発現するＣＤ４０Ｌ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の頻度、サイトカイン同時発現プロフィール、なたびに各個の抗原および少なくとも１つ、２つ、３つおよび４つ総ての抗原に対するin vitro刺激後の応答者のパーセンテージとして表した。ワクチン接種前にサイトカイン分泌が検出できない場合には、少なくともＩＬ−２を発現するＣＤ４０Ｌ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合がカットオフ値である０．０３％以上であれば、被験体を応答者とみなした。ワクチン接種前にサイトカイン分泌が検出可能であった場合には、少なくともＩＬ−２を発現するＣＤ４０Ｌ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合がベースラインの少なくとも２倍より大きければ、被験体を応答者とみなした。
【０１８８】
ＨＩＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答は、ＩＬ−２、ＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−γのうち少なくとも１つのサイトカインを発現するＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度として表した。ＡＲＴ経験コホートで、さらなる調査アッセイを行った。ＰＢＭＣをin vitroにおいて、Ｆ４抗原を包含するペプチドプールか、またはＨＬＡ  Ａ＊０２制限集団において選択された６つの免疫優性９マーペプチド（ＲＴ３３−４１、ＲＴ１２７−１３５、ＲＴ１７９−１８７、ＲＴ３０９−３１７、ｐ１７７７−８５、ｐ２４１９−２７）(Frahm et al. 2008)で刺激した。上記と同じ手順の後に、細胞を、抗ＣＤ８、ＣＤ３、４−１ＢＢ、ＭＩＰ−１β、ＩＬ−２、ＩＦＮγ抗体および６つのテトラマーのプール（６つの免疫優性ペプチドに特異的）からなる第１のパネルか、または抗ＣＤ３、ＣＤ８、４−１ＢＢ、ＩＦＮγ、パーフォリンおよびグランザイムＢ抗体ならびに６つのテトラマーのプールからなる第２のパネルで染色した。また、ＰＤ−１発現、ならびにＣＤ３８、ＨＬＡ  ＤＲ、ＣＣＲ５およびＫｉ−６７などの活性化マーカーを評価するために、総ＣＤ８＋Ｔ細胞またはテトラマー＋ＣＤ８＋Ｔ細胞に対してex vivo染色も行った。
【０１８９】
３．１．８  統計分析
安全性および反応源性の分析は、全ワクチン接種コホート（すなわち、少なくとも１回のワクチン用量を受容した全被験体）に対して行った。ＡＥを報告する被験体の数およびパーセンテージは、正確な９５％信頼区間（ＣＩ）で算出した。利用可能な各時点で各コホートの各処置集団において、ＣＤ４総数およびウイルス量のベースラインからの変化をまとめた。ウイルス量の変化については、逆累積分布曲線も導き出した。
【０１９０】
免疫原性の分析は、プロトコールコホート（すなわち、両ワクチン用量を受容し、総ての試験手順に従い、血液サンプルが入手可能であった被験体）に従って行った。連続変数に関しては記述統計およびカテゴリー変数に関してはパーセンテージ（９５％ＣＩ）を用いて、各時点での各群内の結果をまとめた。Ｆ４特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答は、各個の抗原に応答した特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞の合計から評価した。
【０１９１】
ウイルス量、ＣＤ４＋細胞総数および細胞媒介性免疫（ＣＭＩ）応答の群間の調査比較は、調整が行われなかったベースライン（ＡＮＯＶＡ）を除く総ての時点に関して共変量としてベースラインを用いる共変量分析（ＡＮＣＯＶＡ）モデルに基づいて行った。なお、ＣＤ４＋細胞総数に関しては算術スケールを用い、ウイルス量およびＣＭＩ規模に関しては対数スケールを用いた。多重性に関する調整は行わなかった。
【０１９２】
３．２  結果
３．２．１  ＣＤ４総数
ＣＤ４＋Ｔ細胞総数およびウイルス量レベルをモニタリングし、処置群間で比較した。ＣＤ４＋Ｔ細胞総数のベースライン（試験０日目）からの変化を図３にグラフで示す。パネルＡに示されるＡＲＴ経験コホートでは、ベースラインＣＤ４＋Ｔ細胞総数の値は同等であり（Ｆ４ｃｏ／ＡＳ０１Ｂ群およびプラセボ群に見られた平均値はそれぞれ５９５および６１６であった）、この２つの処置群間に差は見られなかった。２回目の用量の後にＣＤ４＋Ｔ細胞総数に約３０〜３５％の増加が見られたが、この増加の理由はまだ明らかでない。ＡＲＴ経験被験体では、ワクチン群とプラセボ群の間のこの差は４ヶ月まで有意な状態を維持し（ｐ＜０．０５）、１２ヶ月の時点でワクチン受容者にＦ４特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答がなお検出された。ＡＲＴ未経験コホート（図３Ｂ）では、ベースラインＣＤ４＋Ｔ細胞総数値は同等であり（Ｆ４ｃｏ／ＡＳ０１Ｂ群およびプラセボ群に見られた平均値はそれぞれ６６５および５８７であった）、試験期間にわたって、Ｆ４ｃｏ／ＡＳ０１Ｂ群とプラセボ群の間に一貫した差は見られなかった。防護的ＨＬＡ−Ｉ対立遺伝子（ＨＬＡ  Ｂ＊２７、Ｂ＊５８０１）または好ましくないＨＬＡ−Ｉ対立遺伝子（ＨＬＡ  Ｂ＊３５型）、ハプロタイプおよび無作為化（プラセボ対ワクチン）、ウイルス量の変化またはＣＤ４＋Ｔ細胞総数の変化（データは示されていない）の間に関連は見られなかった。本試験では、防護的ＨＬＡ−Ｉ対立遺伝子Ｂ＊５７およびＢ＊５８０２を有する患者はいなかった。
【０１９３】
３．２．２  ウイルス量
ワクチン群では２例、プラセボ群では１例の軽度の一時的上昇（blip）が見られた以外は、ウイルス量はＡＲＴ経験被験体の両群とも、１２ヶ月の追跡調査期間中、抑制されていた。
【０１９４】
ＡＲＴ未経験被験体では、用量２の２週間後に、ベースラインからのウイルス量の変化と少なくともＩＬ−２を発現するＣＤ４＋Ｔ細胞の頻度の間に負の相関が見られた（図４Ａ）。さらに、ベースラインからの平均ウイルス量の変化に関するアドホック比較を行ったところ、用量２の２週間後にワクチン群を支持する有意な差（ｐ＜０．０５）が示され、ウイルス量変化に関する逆累積分布曲線（ＲＣＣ）において群間シフトが生じた（図４Ｂ）。この差は追跡調査１２ヶ月の間持続されたが、統計学的に有意なのは用量２の２週間後だけであった。
【０１９５】
３．２．３  免疫源性
３．２．３．１  Ｔ細胞応答
少なくともＩＬ−２を発現するＦ４特異的ＣＤ４＋ＣＤ４０Ｌ＋Ｔ細胞の頻度は、両コホートにおいて用量２の２週間後、プラセボ群よりもワクチン群で有意に高かった（ｐ＜０．０５）（図５Ａ）。ほとんど総てのワクチンが、用量２の２週間後に４つの抗原のうち少なくとも１つに対するＣＤ４＋Ｔ細胞応答を生じ、ＲＴおよびｐ２４抗原に対する応答率が最も高かった。ＡＲＴ経験被験体では、ワクチン群とプラセボ群の間のこの差は４ヶ月まで有意な状態を維持し（ｐ＜０．０５）、１２ヶ月の時点でワクチン受容者にＦ４特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答がなお検出された（図５Ｂ）。ＡＲＴ未経験被験体では、その後のいずれの時点でも、ワクチン群とプラセボ群の間に有意な差は見られなかった（図５Ｃ）。
【０１９６】
ワクチン接種前のＡＲＴ経験被験体およびＡＲＴ未経験被験体の両群では、少なくともＩＬ−２を発現する既存のＦ４特異的ＣＤ４＋ＣＤ４０Ｌ＋Ｔ細胞が低頻度で検出された。ワクチンにより誘導されたＣＤ４＋Ｔ細胞は多機能性表現型を示した（図６）。ＡＲＴ経験被験体では、およそ７５％のＦ４特異的ＣＤ４０Ｌ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞が少なくとも２つのサイトカインを分泌し、およそ３５％が少なくとも３つのサイトカインを分泌し、このサイトカイン同時発現プロフィールは１２ヶ月まで維持された。ＡＲＴ未経験被験体では、およそ５０％のＦ４特異的ＣＤ４０Ｌ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞が少なくとも２つのサイトカインを分泌し、およそ１０％が少なくとも３つのサイトカインを分泌した（図７Ａ〜Ｂ）。
【０１９７】
図８に示されるように、ワクチン接種前に高頻度のＣＤ８＋Ｔ細胞が検出されたが、これらの細胞は主としてＩＦＮγを発現した。Ｆ４ｃｏ／ＡＳ０１Ｂワクチンの投与は、用いる供試マーカーまたは刺激ペプチドプールにかかわらず、その中央値頻度では効果を持つとは思われなかった。
【０１９８】
図９は、少なくともＩＬ−２を発現するＦ４ｃｏ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞とウイルス量の間の相関を示す。
【０１９９】
３．２．３．２  抗体応答
ＡＲＴ経験コホートとＡＲＴ未経験コホートはどちらも、ワクチン接種前に高レベルの循環抗体を持っていた。ＡＲＴ経験者では、Ｆ４ｃｏ／ＡＳ０１Ｂワクチンを投与した後に抗体レベルが一時的に上昇した（図１０Ａ〜Ｂ）。ＡＲＴ未経験被験体では、既存の抗体レベルはより高かったものの、増加は見られなかった（図１１Ａ〜Ｂ）。
【０２００】
３．２．３．３  免疫応答のまとめ
本試験では、ＡＲＴ経験被験体およびＡＲＴ未経験被験体の双方で、２用量のＦ４ｃｏ／ＡＳ０１Ｂワクチンで免疫原性が見られた。総てのワクチン抗原に対して応答が惹起され、高いＣＤ４＋Ｔ細胞頻度が見られた。４４日目まで、総免疫応答が、プラセボ群よりもＦ４ｃｏ／ＡＳ０１Ｂワクチン群で有意に高かった。ワクチンは、ＡＲＴ未経験コホートに比べてＡＲＴ経験コホートで免疫原性が高かった。大部分の抗原特異的ＣＤ４０Ｌ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞が、ＩＬ−２とＴＮＦ−αおよび／またはＩＦＮ−γの発現の組合せを特徴とする多機能性表現型を示した。ＡＲＴ未経験コホートでは、プラセボに比べて低いウイルス量を維持する傾向が見られ、ＡＲＴ経験コホートは低いウイルス量を持ち続けた。
【０２０１】
参照文献
【表２】
2014501225.tif 000008
2014501225.tif 000009
2014501225.tif 000010
【０２０２】
本発明の実施態様を以下の符番した段落にさらに記載する。
第１項  投与後少なくとも４ヶ月間、ＨＩＶ−１感染被験体のウイルス量の維持管理に使用するための、
ａ．Ｎｅｆ、ＧａｇおよびＰｏｌからなる群から選択される２種以上のＨＩＶ−１抗原；
ｂ．Ｔｈ１免疫応答を誘導するアジュバント；および
ｃ．薬学的に許容可能な賦形剤
を含んでなる、医薬組成物。
第２項  投与後少なくとも４ヶ月間、ＨＩＶ−１感染被験体のウイルス量を１００，０００コピー／ｍｌ以下に低減または維持するのに用いるための医薬組成物であって、
ａ．Ｎｅｆ、ＧａｇおよびＰｏｌからなる群から選択される２種以上のＨＩＶ−１抗原；
ｂ．Ｔｈ１免疫応答を誘導するアジュバント；および
ｃ．薬学的に許容可能な賦形剤
を含んでなる、医薬組成物。
第３項  ＨＩＶ−１感染被験体のＴ細胞応答を増強するのに用いるための医薬組成物であって、
ａ．Ｎｅｆ、ＧａｇおよびＰｏｌからなる群から選択される２種以上のＨＩＶ−１抗原；
ｂ．Ｔｈ１免疫応答を誘導するアジュバント；および
ｃ．薬学的に許容可能な賦形剤
を含んでなる、医薬組成物。
第４項  Ｔ細胞応答の増強が、医薬組成物の投与前に比べて、医薬組成物の少なくとも１つのポリペプチドの特異的認識を示す被験体由来のＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞のいずれかのパーセンテージが高いことである、第３項に記載の医薬組成物。
第５項  Ｔ細胞応答の増強が、医薬組成物の投与前に比べて、少なくとも１つ、２つまたは３つの活性化マーカーを発現する被験体由来のＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージが高いことである、第３項または第４項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
第６項  被験体が抗レトロウイルス療法（ＡＲＴ）中でない、第１〜５項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
第７項  ＨＩＶ−１感染被験体がＡＲＴ未経験である、第１〜６項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
第８項  ＨＩＶ−１感染被験体が医薬組成物の投与前にＡＲＴを中断する、第１〜６項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
第９項  ＨＩＶ−１感染被験体が並行してＡＲＴを受ける、第１〜６項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
第１０項  ウイルス量が５０，０００コピー／ｍｌ以下、１０，０００コピー／ｍｌ未満、５０００コピー／ｍｌ未満、１０００コピー／ｍｌ未満、または５００コピー／ｍｌ未満に維持される、第１〜９項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
第１１項  ウイルス量が投与後に低減される、第１〜１０項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
第１２項  ウイルス量が少なくとも６ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１８ヶ月、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも４年、少なくとも５年、少なくとも６年、少なくとも７年、少なくとも８年、少なくとも９年、もしくは少なくとも１０年の間、維持または低減される、第１〜１１項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
第１３項  医薬組成物がＮｅｆ、ＧａｇおよびＰｏｌを含んでなる、第１〜１２項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
第１４項  Ｇａｇがｐ１７、ｐ２４またはその双方である、第１〜１３項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
第１５項  ＰｏｌがＲＴである、第１〜１４項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
第１６項  配列番号８を含んでなる、第１〜１５項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
第１７項  配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４および／または配列番号１６を含んでなる、第１〜１６項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
第１８項  Ｅｎｖをさらに含んでなる、第１〜１７項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
第１９項  アジュバントが、免疫学的に活性なサポニン画分、リポ多糖、免疫賦活オリゴヌクレオチド、およびステロールから選択される１種以上の成分である、第１〜１８項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
第２０項  アジュバントが免疫学的に活性なサポニン画分およびリポ多糖を含んでなる、第１〜１９項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
第２１項  アジュバントがＱＳ２１および／または脂質Ａ誘導体を含んでなる、第１〜２０項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
第２２項  脂質Ａ誘導体が３Ｄ−ＭＰＬである、第２１項に記載の医薬組成物。
第２３項  アジュバントがＣｐＧを含んでなる、第１〜２２項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
第２４項  ステロールがコレステロールである、第１９〜２３項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
第２５項  アジュバントがリポソーム担体をさらに含んでなる、第１〜２４項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
第２６項  被験体に１回投与される、第１〜２５項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
第２７項  被験体２回以上投与される、第１〜２６項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
第２８項  免疫原性組成物がプライム−ブースト計画のプライム用量またはブースト用量のいずれかとして投与される、第１〜２７項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
第２９項  ＨＩＶ−１感染被験体のウイルス量の増加を安定化または阻害する方法であって、
１）ＨＩＶ−１感染被験体を選択すること；および
２）前記被験体に、
ａ．Ｎｅｆ、ＧａｇおよびＰｏｌからなる群から選択される２種以上のＨＩＶ−１抗原；
ｂ．Ｔｈ１免疫応答を誘導するアジュバント；および
ｃ．薬学的に許容可能な賦形剤
を含んでなる免疫原性組成物を投与すること
を含んでなり、
投与後に被験体のウイルス量が、投与前に比べて少なくとも４ヶ月間、安定を維持するかまたは低減する、方法。
第３０項  ＨＩＶ−１感染被験体において臨床的ＨＩＶ疾患の発症を予防する方法であって、
１）ＨＩＶ−１感染被験体を選択すること；および
２）前記被験体に、
ａ．Ｎｅｆ、ＧａｇおよびＰｏｌからなる群から選択される２種以上のＨＩＶ−１抗原；
ｂ．Ｔｈ１免疫応答を誘導するアジュバント；および
ｃ．薬学的に許容可能な賦形剤
を含んでなる免疫原性組成物を投与すること
を含んでなり、
被験体のウイルス量が、投与後少なくとも４ヶ月間、１００，０００コピー／ｍｌ未満を維持する、方法。
第３１項  ＨＩＶ−１感染被験体においてＨＩＶ疾患の進行を予防する方法であって、
１）ＨＩＶ−１感染被験体を選択すること；および
２）前記被験体に、
ａ．Ｎｅｆ、ＧａｇおよびＰｏｌからなる群から選択される２種以上のＨＩＶ−１抗原；
ｂ．Ｔｈ１免疫応答を誘導するアジュバント；および
ｃ．薬学的に許容可能な賦形剤
を含んでなる免疫原性組成物を投与すること
を含んでなり、
免疫原性組成物の投与後に、被験体のウイルス量が安定を維持する、方法。
第３２項  ＨＩＶ−１感染被験体において免疫応答を誘導する方法であって、
１）ＨＩＶ−１感染被験体を選択すること；および
２）前記被験体に、
ａ．Ｎｅｆ、ＧａｇおよびＰｏｌからなる群から選択される２種以上のＨＩＶ−１抗原；
ｂ．Ｔｈ１免疫応答を誘導するアジュバント；および
ｃ．薬学的に許容可能な賦形剤
を含んでなる免疫原性組成物を投与すること
を含んでなり、
工程２）の投与後に、投与前に比べてより高いパーセンテージの被験体由来ＣＤ４＋Ｔ細胞が免疫原性組成物の少なくとも１つのポリペプチドの特異的認識を示す、方法。
第３３項  ＨＩＶ−１感染被験体において免疫応答を誘導する方法であって、
１）ＨＩＶ−１感染被験体を選択すること；および
２）前記被験体に、
ａ．Ｎｅｆ、ＧａｇおよびＰｏｌからなる群から選択される２種以上のＨＩＶ−１抗原；
ｂ．Ｔｈ１免疫応答を誘導するアジュバント；および
ｃ．薬学的に許容可能な賦形剤
を含んでなる免疫原性組成物を投与すること
を含んでなり、
工程２）の投与後に、投与前に比べてより高いパーセンテージの被験体由来ＣＤ４＋Ｔ細胞が、ＣＤ４０Ｌ、ＩＬ−２、ＴＮＦαおよびＩＦＮγからなる群から選択される少なくとも１つ、２つもしくは３つの活性化マーカーを発現する、方法。
第３４項  被験体が抗レトロウイルス療法（ＡＲＴ）中でない、第２９〜３３項のいずれか一項に記載の方法。
第３５項  ＨＩＶ−１感染被験体がＡＲＴ未経験である、第２９〜３４項のいずれか一項に記載の方法。
第３６項  ＨＩＶ−１感染被験体が医薬組成物の投与前にＡＲＴを中断する、第２９〜３４項のいずれか一項に記載の方法。
第３７項  ＨＩＶ−１感染被験体が並行してＡＲＴを受ける、第２９〜３４項のいずれか一項に記載の方法。
第３８項  ウイルス量が５０，０００コピー／ｍｌ以下、１０，０００コピー／ｍｌ未満、５０００コピー／ｍｌ未満、１０００コピー／ｍｌ未満、または５００コピー／ｍｌ未満に維持される、第２９〜３７項のいずれか一項に記載の方法。
第３９項  ウイルス量が投与後に低減される、第２９〜３８項のいずれか一項に記載の方法。
第４０項  ウイルス量が少なくとも６ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１８ヶ月、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも４年、少なくとも５年、少なくとも６年、少なくとも７年、少なくとも８年、少なくとも９年、もしくは少なくとも１０年の間、維持または低減される、第２９〜３９項のいずれか一項に記載の方法。
第４１項  医薬組成物がＮｅｆ、ＧａｇおよびＰｏｌを含んでなる、第２９〜４０項のいずれか一項に記載の方法。
第４２項  Ｇａｇがｐ１７、ｐ２４またはその双方である、第２９〜４１項のいずれか一項に記載の方法。
第４３項  ＰｏｌがＲＴである、第２９〜４２項のいずれか一項に記載の方法。
第４４項  医薬組成物が配列番号８を含んでなる、第２９〜４３項のいずれか一項に記載の方法。
第４５項  医薬組成物が配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４および／または配列番号１６を含んでなる、第２９〜４４項のいずれか一項に記載の方法。
第４６項  医薬組成物がＥｎｖをさらに含んでなる、第２９〜４５項のいずれか一項に記載の方法。
第４７項  アジュバンが免疫学的に活性なサポニン画分、リポ多糖類、免疫賦活オリゴヌクレオチド、およびステロールから選択される１種以上の成分である、第２９〜４６項のいずれか一項に記載の方法。
第４８項  アジュバントが免疫学的に活性なサポニン画分およびリポ多糖を含んでなる、第２９〜４７項のいずれか一項に記載の方法。
第４９項  アジュバントがＱＳ２１および／または脂質Ａ誘導体を含んでなる、第２９〜４８項のいずれか一項に記載の方法。
第５０項  脂質Ａ誘導体が３Ｄ−ＭＰＬである、第４９項に記載の方法。
第５１項  アジュバントがＣｐＧを含んでなる、第２９〜５０項のいずれか一項に記載の方法。
第５２項  ステロールがコレステロールである、第４７〜５１項のいずれか一項に記載の方法。
第５３項  アジュバントがリポソーム担体をさらに含んでなる、第２９〜５２項のいずれか一項に記載の方法。
第５４項  医薬組成物が被験体に１回投与される、第２９〜５３項のいずれか一項に記載の方法。
第５５項  医薬組成物が被験体に２回以上投与される、第２９〜５４項のいずれか一項に記載の方法。
第５６項  免疫原性組成物がプライム−ブースト計画のプライム用量またはブースト用量のいずれかとして投与される、第２９〜５５項のいずれか一項に記載の方法。
【図１】
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【図２】
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【図６】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
2014501225.tif 000023
【図５Ｃ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
2014501225.tif 000026
【図８Ａ】
2014501225.tif 000027
【図８Ｂ】
2014501225.tif 000028
【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2014501225.tif 000033
2014501225.tif 000034
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