(57)【要約】本発明は、皮膚しわ改善に効果的な組成物及びそのような組成物を用いる皮膚しわ改善方法に関し、ホスホジエステラーゼ５（ＰＤＥ５）抑制剤を含み、望ましくは化学式１で表される化合物、さらに望ましくはミロデナフィルを有効成分として含む組成物を開示する。
2014526461.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ホスホジエステラーゼ５抑制剤を有効成分として含むことを特徴とする皮膚しわ改善用組成物。
【請求項２】
前記ＰＤＥ５抑制剤が、下記化学式１で表されるＰＤＥ５抑制剤、またはその薬学的に許容可能な塩、溶媒化物または水和物であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【化１】
2014526461.tif 000005
化学式１において、
Ｒ１は、水素；１つまたはそれ以上のフルオロで選択的に置換されたＣ１〜Ｃ３アルキル；またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり；
Ｒ２は、水素；ハロゲン；ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、または１つまたはそれ以上のフルオロで選択的に置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル；Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル；Ｃ２〜Ｃ６アルケニル；またはＣ２〜Ｃ６アルキニルであり；
Ｒ３は、水素；ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、または１つまたはそれ以上のフルオロで選択的に置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル；Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル；Ｃ２〜Ｃ６アルケニル；またはＣ２〜Ｃ６アルキニルであり；
Ｒ４は、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、または１つまたはそれ以上のフルオロで選択的に置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル；Ｃ２〜Ｃ６アルケニル；Ｃ２〜Ｃ６アルキニル；またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり；
Ｒ５は、ＳＯ２ＮＲ６Ｒ７；ＮＨＳＯ２ＮＲ６Ｒ７；ＮＨＣＯＣＯＮＲ６Ｒ７；ＮＨＳＯ２Ｒ８；ＮＨＣＯＲ８；または１つまたはそれ以上のフルオロまたはＣ１〜Ｃ３アルキルで選択的に置換されたフェニル基またはヘテロシクリル基であり；
Ｒ６及びＲ７は、互いに独立して水素；ヒドロキシ、ＣＯ２Ｈ、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、または１つまたはそれ以上のフルオロで選択的に置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル；若しくは窒素原子とともに互いに結合してイミダゾール、アジリジン（アジリデン）、アゼリジン（アゼチジン）、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、ピペラジン及びホモピペラジンのような単環を形成するか、または２，５‐ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン及び３，７‐ジアザビシクロ［３．３．０］オクタンのような二重環を形成でき、このような基はＲ９で選択的に置換でき；
Ｒ８は、１つまたはそれ以上のフルオロで選択的に置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル；またはＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり；
Ｒ９は、１つまたはそれ以上のハロゲン、ヒドロキシ、１つまたはそれ以上のフルオロで選択的に置換されたＣ１〜Ｃ３アルコキシ、ＣＯ２Ｒ１０、ＮＲ１１Ｒ１２、Ｃ＝ＮＲ１３（ＮＲ１４Ｒ１５）、またはＣ１〜Ｃ３アルキルで選択的に置換されたテトラゾールで選択的に置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル；または１つまたはそれ以上の窒素原子が含まれているヘテロアリール基であって、このとき、ヘテロアリールは１つまたはそれ以上のフルオロで選択的に置換でき；
Ｒ１０は、水素；ヒドロキシ、ＮＲ１１Ｒ１２、１つまたはそれ以上のフルオロ、または窒素原子含有複素環で選択的に置換されたＣ１〜Ｃ４アルキルであって、このとき、複素環はピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、ピロール及びイミダゾールのうち選択されたものであり、窒素原子がＣ１〜Ｃ４アルキルに直接結合され；
Ｒ１１及びＲ１２は、互いに独立して水素；またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１３は、水素；１つまたはそれ以上のフルオロで選択的に置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル；またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり；
Ｒ１４及びＲ１５は、互いに独立して水素；１つまたはそれ以上のフルオロで選択的に置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル；Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル；または窒素とともに互いに結合してピロリジニル、ピペリジノ、モルフォリノ、ピペラジニルまたはホモピペラジニルを形成でき、このような基はＣ１〜Ｃ３アルキルで選択的に置換されることができる。
【請求項３】
前記ＰＤＥ５抑制剤が、
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐メチルピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（４‐メチルピペラジン‐１‐イルスルホニル）‐２‐ｎ‐プロポキシフェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐ｎ‐プロピルピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐イソプロピルピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（２‐フルオロエチル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（４‐（２‐フルオロエチル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）‐２‐ｎ‐プロポキシフェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（３‐フルオロプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（３‐フルオロプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐７‐エチル‐５‐メチル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（３‐フルオロプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐７‐（３‐フルオロプロピル）‐５‐メチル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
７‐シクロプロピルメチル‐２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（３‐フルオロプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐メチル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（３‐フルオロプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐エチル‐７‐エチル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（３‐フルオロプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐エチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐イソプロピルピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐エチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（３‐フルオロプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐エチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（２‐ヒドロキシエチル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐エチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐エチルピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐エチル‐７‐（３‐フルオロプロピル）‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（４‐エチルピペラジン‐１‐イルスルホニル）‐２‐ｎ‐プロポキシフェニル）‐５‐エチル‐７‐（３‐フルオロプロピル）‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐イソプロピルピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐エチル‐７‐（３‐フルオロプロピル）‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（３‐フルオロプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐エチル‐７‐（３‐フルオロプロピル）‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（４‐（３‐フルオロプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）‐２‐ｎ‐プロポキシフェニル）‐５‐エチル‐７‐（３‐フルオロプロピル）‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（２‐ヒドロキシエチル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐エチル‐７‐（３‐フルオロプロピル）‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（４‐（２‐ヒドロキシエチル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）‐２‐ｎ‐プロポキシフェニル）‐５‐エチル‐７‐（３‐フルオロプロピル）‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（４‐（３‐ヒドロキシプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）‐２‐ｎ‐プロポキシフェニル）‐５‐エチル‐７‐（３‐フルオロプロピル）‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（４‐（２‐ヒドロキシエチル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）‐２‐ｎ‐プロポキシフェニル）‐５‐エチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（４‐（３‐フルオロプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）‐２‐ｎ‐プロポキシフェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（２‐ヒドロキシエチル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（４‐（２‐ヒドロキシエチル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）‐２‐ｎ‐プロポキシフェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（２‐エトキシ‐４‐（３‐ヒドロキシプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（４‐（３‐ヒドロキシプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）‐２‐ｎ‐プロポキシフェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（ヒドロキシカルボニルメチル）ピペリジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（４‐（ヒドロキシカルボニルメチル）ピペリジン‐１‐イルスルホニル）‐２‐ｎ‐プロポキシフェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（２‐ヒドロキシカルボニルエチル）ピペリジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（４‐（２‐ヒドロキシカルボニルエチル）ピペリジン‐１‐イルスルホニル）‐２‐ｎ‐プロポキシフェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（１Ｈ‐テトラゾール‐５‐イルメチル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
５‐メチル‐２‐（２‐ｎ‐プロポキシ‐５‐（４‐（２‐（１Ｈ‐テトラゾール‐５‐イル）エチル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（１Ｈ‐テトラゾール‐５‐イルメチル）ピペリジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
５‐メチル‐２‐（２‐ｎ‐プロポキシ‐５‐（４‐（１Ｈ‐テトラゾール‐５‐イルメチル）ピペリジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
及び、これらの薬学的に許容可能な塩、溶媒化物または水和物からなる群より選択される少なくとも１つであることを特徴とする請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ＰＤＥ５抑制剤が、ミロデナフィル、またはその薬学的に許容可能な塩、溶媒化物または水和物であることを特徴とする請求項３に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚しわ改善に有用な組成物及びそのような組成物を用いる皮膚しわの改善方法に関する。
【０００２】
本出願は、２０１１年９月９日出願の韓国特許出願第１０‐２０１１‐００９１９４０号に基づく優先権を主張し、該当出願の明細書及び図面に開示された内容は、すべて本出願に援用される。
【背景技術】
【０００３】
皮膚は多様な外部刺激に接することが多いため、他の器官に比べてしわができやすい。そのなかでも、顔の皮膚は太陽光、乾燥した外気、公害物質などに直接晒され、他の皮膚より早期にしわができる。
皮膚組織の老化による最も特徴的な変化は、皮膚基質（ｍａｔｒｉｘ）の変化であり、真皮層にある線維芽細胞（ｓｋｉｎ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ）が老化し、線維質と基質の生成能力が衰えるようになる。基質の量が全般的に減少して皮膚が薄くなり、皮膚の弾力を低下させてしわができる。すなわち、老化が進行するにつれて、皮膚は弾力性の低下、血液循環の障害、皮膚障壁の弱化などがひどくなる。
【０００４】
皮膚が紫外線に露出すると、皮膚細胞損傷の主な原因である自由ラジカル（ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ）、活性酸素種（ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ、ＲＯＳ）、活性カルボニル化合物来由のラジカル種などが生成される。これらはＤＮＡの損傷を誘発し、細胞膜構造を攻撃して老化斑を作り、潤ってしなやかに皮膚の弾力を保持させる膠原質と線維質を攻撃してしわ生成を加速化することもある。したがって、自由ラジカルを除去する役割をする抗酸化剤を投与することが、皮膚しわ改善に役に立ち得る。しかし、すべての抗酸化剤が皮膚しわ改善に効果を奏するのではなく、皮膚しわ改善効果を評価するためには皮膚しわ改善効果を直接確認することが望ましい。このような外部環境または内部機作によって発生する皮膚しわを減らすために多くの薬物及び化粧品が研究されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、上記問題点に鑑みてなされたものであり、皮膚しわ改善に有用な組成物を提供することを目的とする。
【０００６】
また、本発明は、皮膚しわ改善に効果的な方法を提供することを他の目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記の課題を達成するため、本発明は、ホスホジエステラーゼ５（以下、「ＰＤＥ５」とする）抑制剤またはその薬学的に許容可能な塩、溶媒化物または水和物を有効成分として含むことを特徴とする皮膚しわ改善用組成物を提供する。
ホスホジエステラーゼは、生体内のホスホジエステル結合を切断する酵素の通称であり、アミノ酸配列、基質特異性、生体反応調節性質、薬理学的性質、及び組織分布によってホスホジエステラーゼ１ないし１１のファミリに分類される。そのうち、ホスホジエステラーゼ５抑制剤は、勃起不全、女性の性機能不全症、狭心症、高血圧、心不全、及びアテローム性動脈硬化症に望ましい影響を及ぼすことが証明され、特に、勃起不全治療剤として広く使用されている。しかし、今までこのようなＰＤＥ５抑制剤、特に特定構造を有するＰＤＥ５抑制剤がしわ改善に有用であるという事実は明らかになっていなかった。すなわち、本発明は、ＰＤＥ５抑制剤の新たな用途である医薬または化粧学的皮膚しわ改善用途を提供する。
本発明によるＰＤＥ５抑制剤としては、下記化学式１で表されるＰＤＥ５抑制剤またはその薬学的に許容可能な塩、溶媒化物または水和物を使用することができる。
【０００８】
【化１】
2014526461.tif 000003
【０００９】
化学式１において、
Ｒ１は、水素；１つまたはそれ以上のフルオロで選択的に置換されたＣ１〜Ｃ３アルキル；またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり；
Ｒ２は、水素；ハロゲン；ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、または１つまたはそれ以上のフルオロで選択的に置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル；Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル；Ｃ２〜Ｃ６アルケニル；またはＣ２〜Ｃ６アルキニルであり；
Ｒ３は、水素；ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、または１つまたはそれ以上のフルオロで選択的に置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル；Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル；Ｃ２〜Ｃ６アルケニル；またはＣ２〜Ｃ６アルキニルであり；
Ｒ４は、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、または１つまたはそれ以上のフルオロで選択的に置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル；Ｃ２〜Ｃ６アルケニル；Ｃ２〜Ｃ６アルキニル；またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり；
Ｒ５は、ＳＯ２ＮＲ６Ｒ７；ＮＨＳＯ２ＮＲ６Ｒ７；ＮＨＣＯＣＯＮＲ６Ｒ７；ＮＨＳＯ２Ｒ８；ＮＨＣＯＲ８；または１つまたはそれ以上のフルオロまたはＣ１〜Ｃ３アルキルで選択的に置換されたフェニル基またはヘテロシクリル基であり；
Ｒ６及びＲ７は、互いに独立して水素；ヒドロキシ、ＣＯ２Ｈ、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、または１つまたはそれ以上のフルオロで選択的に置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル；若しくは窒素原子とともに互いに結合してイミダゾール、アジリジン（アジリデン）、アゼリジン（アゼチジン）、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、ピペラジン及びホモピペラジンのような単環を形成するか、または２，５‐ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン及び３，７‐ジアザビシクロ［３．３．０］オクタンのような二重環を形成でき、このような基はＲ９で選択的に置換でき；
Ｒ８は、１つまたはそれ以上のフルオロで選択的に置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル；またはＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり；
Ｒ９は、１つまたはそれ以上のハロゲン、ヒドロキシ、１つまたはそれ以上のフルオロで選択的に置換されたＣ１〜Ｃ３アルコキシ、ＣＯ２Ｒ１０、ＮＲ１１Ｒ１２、Ｃ＝ＮＲ１３（ＮＲ１４Ｒ１５）、またはＣ１〜Ｃ３アルキルで選択的に置換されたテトラゾールで選択的に置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル；または１つまたはそれ以上の窒素原子が含まれているヘテロアリール基であって、このとき、ヘテロアリールは１つまたはそれ以上のフルオロで選択的に置換でき；
Ｒ１０は、水素；ヒドロキシ、ＮＲ１１Ｒ１２、１つまたはそれ以上のフルオロ、または窒素原子含有複素環で選択的に置換されたＣ１〜Ｃ４アルキルであって、このとき、複素環はピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、ピロール及びイミダゾールのうち選択されたものであり、窒素原子がＣ１〜Ｃ４アルキルに直接結合され；
Ｒ１１及びＲ１２は、互いに独立して水素；またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１３は、水素；１つまたはそれ以上のフルオロで選択的に置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル；またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり；
Ｒ１４及びＲ１５は、互いに独立して水素；１つまたはそれ以上のフルオロで選択的に置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル；Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル；または窒素とともに互いに結合してピロリジニル、ピペリジノ、モルフォリノ、ピペラジニルまたはホモピペラジニルを形成でき、このような基はＣ１〜Ｃ３アルキルで選択的に置換されることができる。
【００１０】
望ましくは、化学式１において、
Ｒ１は、水素；メチル；またはエチルであり；
Ｒ２は、水素；メチル；またはハロゲンであり；
Ｒ３は、１つまたはそれ以上のフルオロで選択的に置換されたＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ４は、エチル；ｎ‐プロピル；またはアリルであり；
Ｒ５は、ＳＯ２ＮＲ６Ｒ７；またはＮＨＳＯ２Ｒ８であり；
Ｒ６及びＲ７は、窒素原子とともに互いに結合してピペリジノ、ピペラジニル、ホモピペラジニルを形成でき、このような基はＲ９で選択的に置換でき；
Ｒ８は、メチルであり；
Ｒ９は、１つまたはそれ以上のハロゲン、ヒドロキシ、ＣＯ２Ｒ１０、またはＣ１〜Ｃ３アルキルで選択的に置換されたテトラゾールで選択的に置換されたＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１０は、水素である。
【００１１】
より望ましくは、本発明による組成物に含まれるＰＤＥ５抑制剤は、例えば、
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐メチルピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（４‐メチルピペラジン‐１‐イルスルホニル）‐２‐ｎ‐プロポキシフェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐ｎ‐プロピルピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐イソプロピルピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（２‐フルオロエチル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（４‐（２‐フルオロエチル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）‐２‐ｎ‐プロポキシフェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（３‐フルオロプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（３‐フルオロプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐７‐エチル‐５‐メチル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（３‐フルオロプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐７‐（３‐フルオロプロピル）‐５‐メチル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
７‐シクロプロピルメチル‐２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（３‐フルオロプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐メチル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（３‐フルオロプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐エチル‐７‐エチル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（３‐フルオロプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐エチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐イソプロピルピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐エチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（３‐フルオロプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐エチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（２‐ヒドロキシエチル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐エチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐エチルピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐エチル‐７‐（３‐フルオロプロピル）‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（４‐エチルピペラジン‐１‐イルスルホニル）‐２‐ｎ‐プロポキシフェニル）‐５‐エチル‐７‐（３‐フルオロプロピル）‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐イソプロピルピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐エチル‐７‐（３‐フルオロプロピル）‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（３‐フルオロプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐エチル‐７‐（３‐フルオロプロピル）‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（４‐（３‐フルオロプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）‐２‐ｎ‐プロポキシフェニル）‐５‐エチル‐７‐（３‐フルオロプロピル）‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（２‐ヒドロキシエチル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐エチル‐７‐（３‐フルオロプロピル）‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（４‐（２‐ヒドロキシエチル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）‐２‐ｎ‐プロポキシフェニル）‐５‐エチル‐７‐（３‐フルオロプロピル）‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（４‐（３‐ヒドロキシプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）‐２‐ｎ‐プロポキシフェニル）‐５‐エチル‐７‐（３‐フルオロプロピル）‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（４‐（２‐ヒドロキシエチル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）‐２‐ｎ‐プロポキシフェニル）‐５‐エチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（４‐（３‐フルオロプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）‐２‐ｎ‐プロポキシフェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（２‐ヒドロキシエチル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（４‐（２‐ヒドロキシエチル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）‐２‐ｎ‐プロポキシフェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（２‐エトキシ‐４‐（３‐ヒドロキシプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（４‐（３‐ヒドロキシプロピル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）‐２‐ｎ‐プロポキシフェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（ヒドロキシカルボニルメチル）ピペリジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（４‐（ヒドロキシカルボニルメチル）ピペリジン‐１‐イルスルホニル）‐２‐ｎ‐プロポキシフェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（２‐ヒドロキシカルボニルエチル）ピペリジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（５‐（４‐（２‐ヒドロキシカルボニルエチル）ピペリジン‐１‐イルスルホニル）‐２‐ｎ‐プロポキシフェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（１Ｈ‐テトラゾール‐５‐イルメチル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
５‐メチル‐２‐（２‐ｎ‐プロポキシ‐５‐（４‐（２‐（１Ｈ‐テトラゾール‐５‐イル）エチル）ピペラジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
２‐（２‐エトキシ‐５‐（４‐（１Ｈ‐テトラゾール‐５‐イルメチル）ピペリジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐５‐メチル‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
５‐メチル‐２‐（２‐ｎ‐プロポキシ‐５‐（４‐（１Ｈ‐テトラゾール‐５‐イルメチル）ピペリジン‐１‐イルスルホニル）フェニル）‐７‐ｎ‐プロピル‐３，５‐ジヒドロ‐４Ｈ‐ピロロ［３，２‐ｄ］ピリミジン‐４‐オン；
及び、これらの薬学的に許容可能な塩、溶媒化物または水和物を使用することができる。
【００１２】
本発明によるしわ改善用組成物に有効成分として使用される最も望ましいＰＤＥ５抑制剤は、ミロデナフィル（ｍｉｒｏｄｅｎａｆｉｌ）またはこれらの薬学的に許容可能な塩、溶媒化物または水和物である。
【００１３】
本発明によるＰＤＥ５抑制剤は、例えば、米国特許第６，９６２，９１１号に開示された製造方法によって製造することができ、該文献は引用によってその全体が本明細書に含まれる。
【００１４】
本発明によるＰＤＥ５抑制剤は、皮膚に存在するＰＤＥ５に作用して筋肉を弛緩すると推測され、筋肉の弛緩時筋肉の収縮を抑制して皮膚しわ改善用途で使用されるボトックス（ＢＯＴＯＸ）の機作と同様にしわの改善効果を奏すると考えられるが、本発明はこのような理論に限定されない。
【００１５】
本発明によるＰＤＥ５抑制剤（以下、単に「化合物」とする）において、幾つかの化合物は薬学的に許容可能な塩の形態で投与することができる。「薬学的に許容可能な塩」とは、毒性がないか少ない酸または塩基で製造された塩を言う。本発明の化合物が相対的に酸性である場合、塩基（ｂａｓｅ）付加塩は、適当な非活性（ｉｎｅｒｔ）溶媒の中で、十分な量の所望の塩基とその化合物の中性形態を接触させて得ることができる。薬学的に許容可能な塩基付加塩は、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、マグネシウム、または有機アミノからなる塩を含むが、これらに限定されることはない。本発明の化合物が相対的に塩基性である場合、酸（ａｃｉｄ）付加塩は、適当な非活性溶媒の中で、十分な量の所望の酸とその化合物の中性形態を接触させて得ることができる。薬学的に許容可能な酸付加塩は、プロピオン酸、イソ酪酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸（ｓｕｂｅｒｉｃ ａｃｉｄ）、フマル酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ‐トルエンスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸、塩酸、臭素酸、窒酸、炭酸、一水素炭酸（ｍｏｎｏｈｙｄｒｏｇｅｎｃａｒｂｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、リン酸、一水素リン酸、二水素リン酸、硫酸、一水素硫酸、よう化水素酸、亜リン酸（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｕｓ ａｃｉｄ）などで形成された塩を含むが、これらに限定されることはない。また、アルジネート（ａｒｇｉｎａｔｅ）のようなアミノ酸の塩及びグルクロン酸（ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）またはガラクツロン酸（ｇａｌａｃｔｕｎｏｒｉｃ ａｃｉｄ）のような有機酸の類似体を含むが、これらに限定されることはない。
【００１６】
本発明の化合物は、化合物によって水和物形態を含み、溶媒化された形態（例えば、水和物）だけでなく、非溶媒化された（ｕｎｓｏｌｖａｔｅｄ）形態で存在することもできる。本発明の化合物は、結晶形または無定形形態で存在でき、このような全ての物理的形態は本発明の範囲に含まれる。
【００１７】
本発明の化合物は、キラル中心である非対称炭素原子または二重結合を有し得、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体などで存在することができる。また、本発明の化合物は、互変異性体（ｔａｕｔｏｍｅｒｉｓｍ）形態としても存在でき、これらも本発明の範囲に含まれる。
【００１８】
本発明の皮膚しわ改善用組成物は、医薬品、機能性食品、及び化粧品の形態で製造することができる。このような医薬品、機能性食品、及び化粧品は、薬剤学的に許容される賦形剤または添加剤を含むことができる。本発明の皮膚しわ改善用組成物は、単独で、又は、便利な担体、賦形剤などとともに混合して投与でき、このような投与剤形は単回投与または多回投与剤形であり得る。
【００１９】
本発明の皮膚しわ改善用組成物を含む医薬品、機能性食品、及び化粧品は、固形製剤、液状製剤または半固型製剤であり得る。固形製剤は散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、坐剤などがあるが、これらに限定されることはない。固形製剤には、賦形剤、着香剤、結合剤、防腐剤、崩壊剤、滑沢剤、充填剤などを含むことができるが、これらに限定されることはない。液状製剤としては、水溶液、プロピレングリコール溶液のような溶液剤、懸濁液剤、乳剤などがあるが、これらに限定されることはなく、適切な着色剤、着香剤、安定化剤、粘性化剤などを添加して製造することができる。半固型製剤としては、クリーム剤、ローション剤、乳化剤、塗布剤などがあるが、これらに限定されることはなく、適切な着色剤、着香剤、安定化剤、粘性化剤、界面活性剤などを添加して製造することができる。ただし、本発明の組成物は、皮膚しわを改善しようとする目的上、皮膚に直接、局所的に適用することが生体内の他の部位の副作用をもたらす可能性が少ないという面で望ましく、したがって本発明による組成物の剤形は半固型製剤であることがより望ましい。
【００２０】
例えば、散剤は、本発明の化合物と乳糖、澱粉、微結晶セルロースなど薬剤学的に許容される適切な賦形剤を単純混合することで製造することができる。顆粒剤は、本発明の化合物；薬剤学的に許容される適切な賦形剤；及びポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロースなどの薬剤学的に許容される適切な結合剤を混合した後、水、エタノール、イソプロパノールなどの溶媒を用いた湿式顆粒法または圧縮力を用いた乾式顆粒法で製造することができる。また、錠剤は、前記顆粒剤をマグネシウムステアレートなどの薬剤学的に許容される適切な滑沢剤と混合した後、打錠機で打錠することで製造することができる。
【００２１】
上述したように、本発明の組成物は皮膚に局所的に適用されることが望ましいため、通常の皮膚適用化粧品剤形に製造することが望ましい。すなわち、本発明による皮膚しわ改善用組成物は、基礎化粧用またはメイクアップ用製品である化粧水、エッセンス、化粧オイル、クリーム、パウダー、パック、ファウンデーション、メイクアップベース、化粧スティック（ｓｔｉｃｋ）などの剤形に製造して使用することができる。液状、クリーム状、ペースト状、固体状など多様な性状で適用でき、本発明が属した分野で周知の化粧料製造方法で製造することができる。
【００２２】
例えば、化粧水剤形は、精製水にカルボマーを撹拌分散させた後、ブチレングリコール、グリセリン、ＰＥＧ−１５００などを加え、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、トリエタノール、防腐剤、本発明による化合物などをエタノールなど適切な溶媒に溶解させて混合する方式で製造することができる。また、例えば、ローション剤形は、セテアリルアルコール、グリセリルステアレート／ＰＥＧ−１００ステアレイト、ポリソルベート６０、セスキオレイン酸ソルビタン、オクタン酸セチル、スクアレンなどを約７０℃の温度で加熱溶解させた後、ブチレングリコール、マグネシウムアルミニウムシリケート、キサンタンガム、防腐剤などを精製水に溶解分散させて７０℃に加熱したものに乳化した後、乳化物を冷却して、適切な溶媒または成分に溶解された本発明の化合物を添加して撹拌した後、室温に冷却して製造することができる。
【００２３】
本発明の皮膚しわ改善用組成物は、治療する疾患及び個体の状態に合わせて経口剤、注射剤（例えば、筋肉注射、腹腔注射、静脈注射、注入（ｉｎｆｕｓｉｏｎ）、皮下注射、インプラント）、吸入剤、鼻腔投与剤、膣剤、直腸投与剤、舌下剤、経皮剤、局所剤などで投与することができるが、これらに限定されることはない。投与経路によって通常使用されて非毒性である、薬剤学的に許容される担体、添加剤、ビヒクルを含む適切な投与ユニット剤形に製剤化することができる。一定時間薬物を持続的に放出できるデポ（ｄｅｐｏｔ）剤形も本発明の範囲に含まれる。ただし、皮膚しわ改善という本発明の目的から、皮膚に直接適用する局所製剤が最も望ましい。
【００２４】
皮膚しわ改善という本発明の目的を達成するため、前記ＰＤＥ５抑制剤は毎日約０．１ｍｇ／ｋｇないし約２００ｍｇ／ｋｇを投与でき、１日約０．５ｍｇ／ｋｇないし約１００ｍｇ／ｋｇの投与容量が望ましい。しかし、前記投与量は患者の状態（年齢、性別、体重など）、治療している状態の深刻性などによって多様に適用することができる。投与の便宜上、必要に応じて、１日の総投与量を分け、一日数回に分けて投与することができる。また、本発明による化合物が皮膚に直接、局所的に適用される場合、その投与量は毎日約０．０５ｍｇ／皮膚面積ｃｍ２ないし５０ｍｇ／皮膚面積ｃｍ２であることが望ましいが、本発明がこのような投与容量に限定されることはない。
【００２５】
また、本発明は、化学式１で表される化合物から選択される化合物、望ましくはミロデナフィル、またはこれらの薬学的に許容可能な塩、溶媒化物及び水和物のうちいずれか１つ以上の治療学的または化粧学的に有効な量を皮膚しわ改善が必要な個体に投与または適用することを含む皮膚しわ改善方法を提供する。
【発明の効果】
【００２６】
本発明は、皮膚しわ改善に効果的な組成物、及びこのような組成物を用いる皮膚しわ改善方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
以下、図面を参照した本発明の実施例の説明により、本発明の他の目的及び態様が明らかになるであろう。
【図１】ＵＶを照射せず、しわを誘発していない正常群（ｎ＝４）の写真結果である。
【図２】ＵＶを照射してしわを誘発したが、有効成分を投与せずに媒質（２０％ＥｔＯＨ、３０％ＤＷ、５０％ＰＥＧ）のみを塗布した陰性対照群（ｎ＝６）の写真結果である。
【図３】しわを誘発した後、ミロデナフィル遊離塩基１０ｍＭ（約５％）を塗布した群（ｎ＝７）の写真結果である。
【図４】しわを誘発した後、ミロデナフィル二塩酸塩（２ＨＣｌ）１０ｍＭ（約５％）を塗布した群（ｎ＝６）の写真結果である。
【図５】レチノイン酸（ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ）０．０５％を塗布した陽性対照群（ｎ＝６）の写真結果である。
【図６】ヒト皮膚線維芽細胞のプロコラーゲンタイプＩの生成に及ぼすミロデナフィル塩酸塩の影響を分析したグラフである。
【図７】ヒト皮膚線維芽細胞のＭＭＰ−１発現抑制に及ぼすミロデナフィル塩酸塩の影響を分析したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
以下、図面を参照して本発明の望ましい実施例を詳細に説明する。しかし、本発明による実施例は多くの他の形態に変形でき、本発明の範囲が下記実施例に限定されると解釈されてはならない。本発明の実施例は当業界で平均的な知識を持つ者に本発明をより完全に説明するために提供されるものである。
【００２９】
＜実施例１＞皮膚内ＰＤＥ５の発現確認
ＰＤＥ５抑制剤の顔皮膚のしわに対する改善可能性を調査するため、皮膚組織でＰＤＥ５の発現有無を調査した。
【００３０】
７週齢Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）雄ラットからＰＤＥ５が発現すると知られた腎臓及び前立腺と、皮膚を摘出し、各組織におけるＰＤＥ５発現を確認した。まず、摘出された組織を約１００ｍｇ程度にカットした。その後、組織を均質化（ｈｏｍｏｇｅｎｉｚａｔｉｏｎ）し、ＲＮＡを抽出した。抽出したＲＮＡを定量した後、１マイクログラムに合わせてそれを持ってｃＤＮＡを製作した。製作したｃＤＮＡを持ってリアルタイムＰＣＲで各組織内でＰＤＥ５の発現を確認した。対照群としてはβ‐アクチンを使用した。使用したプライマーは、ＰＤＥ５の場合は５’‐ＴＴＧＡＣＧＧＡＴＣＴＧＧＡＧＡＣＧＣＴ‐３’（ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ）と５’‐ＣＡＣＣＡＣＧＡＴＧＧＴＣＣＡＡＡＴＣＡ‐３’（ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ）であって、β‐アクチンの場合は５’‐ＡＣＣＴＴＣＡＡＣＡＣＣＣＣＡＧＣＣＡ‐３’（ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ）と５’‐ＣＡＧＴＧＧＴＡＣＧＡＣＣＡＧＡＧＧＣＡ‐３’（ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ）であった（ＢＪＵ ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ ２００６（９８）１２５９〜１２６３を参照）。各組織で発現するＰＤＥ５の相対的な量を下記の表１に示した。表１のデータは平均±標準偏差で示されている。
【００３１】
【表１】
2014526461.tif 000004
【００３２】
表１に示されたように、相当量のＰＤＥ５が発現すると知られた腎臓及び前立腺組織ほど、皮膚でもＰＤＥ５が発現することが確認できた。このような結果は、皮膚に存在するＰＤＥ５を本発明による化合物で抑制することで皮膚に所定の影響を及ぼすことができることを見せている。
【００３３】
＜実施例２＞皮膚しわ改善効果の評価
実質的にＰＤＥ５抑制剤が、動物モデルでもしわ改善効果が奏するか否かを調べた。７週齢の無毛マウスにＵＶＢ（２９０〜３２０ｎｍ、３１２ｎｍ）照射でしわを誘発し、本発明による化合物または対照群を塗布して本発明による化合物が誘発されたしわに及ぼす影響を評価した。
【００３４】
より具体的に、１〜２週目には１ＭＥＤ（Ｍｉｎｉｍａｌ Ｅｄｅｍａｌ Ｄｏｓｅ）で６０ｍＪ／ｃｍ２を一週間に３日照射し、３週目には２ＭＥＤ（１２０ｍＪ／ｃｍ２）を一週間に３日照射し、４週目には３ＭＥＤ（１８０ｍＪ／ｃｍ２）を一週間に３日照射し、５〜８週目には４ＭＥＤ（２４０ｍＪ／ｃｍ２）を一週間に３日照射し、９〜１５週目には４ＭＥＤ（２４０ｍＪ／ｃｍ２）を一週間に５日照射し、１６〜１７週目にはスクアレン‐ＯＯＨ（ＵＶを照射して酸化したスクアレン）を１回約０．５ｍｌずつ筆で塗布し、さらに強いしわを誘発した。その後、１４日間、本発明による化合物または対照群を一日二回塗布し、その後、皮膚観察写真を撮影して図１ないし図５に示した。
【００３５】
図１は、ＵＶを照射せず、しわを誘発していない正常群（ｎ＝４）の写真結果である。週齢の増加とともに、ＵＶを照射していない群でも自然なしわが少しできるが、深くなく、非常に薄いしわであった。
【００３６】
図２は、ＵＶを照射してしわを誘発したが、有効成分を投与せずに媒質（２０％ＥｔＯＨ、３０％ＤＷ、５０％ＰＥＧ）のみを塗布した陰性対照群（ｎ＝６）の写真結果である。ＵＶを照射してしわを誘発した後、媒質のみを２週間塗布した群では、しわが深く、しわの数も多いことが観察できた。
【００３７】
図３は、しわを誘発した後、望ましいＰＤＥ５抑制剤であるミロデナフィル遊離塩基１０ｍＭ（約５％）を塗布した群（ｎ＝７）の写真結果である。ミロデナフィル遊離塩基投与群では、しわ改善効果が観察され、皮膚がきれいに見えることが観察できた。
【００３８】
図４は、しわを誘発した後、望ましいＰＤＥ５抑制剤であるミロデナフィル二塩酸塩（２ＨＣｌ）を１０ｍＭ（約５％）塗布した群（ｎ＝６）の写真結果である。ミロデナフィル２ＨＣｌ塗布群では、しわ改善効果が観察され、皮膚がきれいに見えることが観察できた。
【００３９】
図５は、レチノイン酸０．０５％を塗布した陽性対照群（ｎ＝６）の写真結果である。レチノイン酸を塗布した結果、皮膚に角質ができ、次々と剥がれた。それで、一日二回から一日一回の塗布に変更したが、相変わらず皮膚に角質ができ、多少剥がれる傾向が観察された。若干のしわ改善も観察されたが、しわ改善よりは角質化の速度が速かった。
【００４０】
＜実施例３＞コラーゲン生成促進効果の評価
正常ヒト真皮線維芽細胞（Ｎｏｒｍａｌ ｈｕｍａｎ ｄｅｒｍａｌ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ）を用いて試験物質であるミロデナフィル塩酸塩（ｍｉｒｏｄｅｎａｆｉｌ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）のコラーゲンタイプＩ生成促進効果を評価した。
【００４１】
細胞株としては正常ヒト真皮線維芽細胞である７Ｆ３８０２（以下、「ＮＨＤＦ」とする）を使用し、凍結保管中のＮＨＤＦを解凍させて継代培養した後、５〜７継代のとき評価に使用した。
【００４２】
陽性対照物質としては、Ｌ‐アスコルビン酸（Ｓｉｇｍａ−ＡｌｄｒｉｃｈＣｏ．、米国）を用いた。Ｌ‐アスコルビン酸は線維芽細胞を用いたコラーゲン生成促進に効果があると報告されており、比較できる基礎資料が豊富であるため、本評価の信頼度向上のために選択した。賦形剤としてはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を使用した。
【００４３】
１０ｍＭのミロデナフィル塩酸塩貯蔵液から０．０１ｍＬを採取した後、賦形剤であるＤＭＳＯを９．９９ｍＬ添加して１０，０００ｎＭのサンプルを調剤した。サンプルをさらに希釈して１０００ｎＭの濃度に調剤した。試験物質の処理直前に、無血清培地（ｓｅｒｕｍ‐ｆｒｅｅ ｍｅｄｉｕｍ）でそれぞれの濃度を１００倍希釈して１０及び１００ｎＭにそれぞれ調剤した。
【００４４】
陽性対照物質は、Ｌ‐アスコルビン酸の最終濃度が２０，０００μＭ（３．５２２ｍｇ／ｍＬ）になるように無血清培地を加えて溶解させた後、２００μＭに希釈して調剤した。
【００４５】
細胞培養液としては、２種の培養液を用いた。細胞継代で試験物質処理の前段階まで使用される培養液である完全培地（ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｍｅｄｉｕｍ）としてはウシ胎児血清（ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ）、ペニシリン‐ストレプトマイシン（ペニシリン１０，０００Ｕ／ｍＬ及びストレプトマイシン１０，０００μｇ）及びＤＭＥＭ／Ｆ１２（ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｅａｇｌｅ’ｓ ｍｅｄｉｕｍ／Ｆ１２）からなる培養液を使用し、試験物質処理段階の後に使用される培養液である無血清培地としてはペニシリン‐ストレプトマイシン及びＤＭＥＭを混合して使用した。
【００４６】
前処理（細胞培養及び試験物質の処理）は次のように行った。完全培地で培養されたＮＨＤＦを４８ウェルプレートの各ウェルに４００ｕｌずつ分注（１×１０５ｃｅｌｌｓ／４００ｕｌ／ｗｅｌｌ）し、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター（ＭＣＯ−２０ ＡＩＣ、三洋、日本）で２４時間培養した。培養が完了した後、各ウェルの培養液を除去した。Ｄ‐ＰＢＳ（Ｄ‐ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ）を各ウェルに５００ｕｌずつ入れて洗浄した。その後、各ウェルに試験物質及び陽性対照物質の各調剤物をそれぞれのウェルに８００μＬずつ入れた。陰性対照物質のウェルにはＤＭＳＯが含まれた無血清培地を８００μＬずつ入れた。３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで４８時間培養した。培養が完了した後、各ウェルの培養液は回収して遠心分離機で遠心分離（２５℃、３０００ｒｐｍ、１０分）した後、上層液を取ってプロコラーゲンタイプＩ定量に使用した。培養液が除去されたプレートの各ウェルに１ｍＬのＤ‐ＰＢＳを入れて洗浄した後、細胞溶解バッファー（ｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）（Ｌｏｔ Ｎｏ．：４１、Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、米国）を各ウェルに３００μｌずつ入れた。プレートをディープフリーザー（ｄｅｅｐ ｆｒｅｅｚｅｒ）（−７０℃、ＤＦＵ−６５７ＣＬ、Ｏｐｅｒｏｎ、韓国）に２時間保管して凍結させた後、室温で解凍させる過程を２回実施して細胞を溶解させた。細胞溶解物（Ｃｅｌｌ ｌｙｓａｔｅ）を回収して遠心分離機で遠心分離（Ｍｉｃｒｏ １７ＴＲ、ＨＡＮＩＬ ＳＣＩＥＮＣＥ ＩＮＤＵＳＴＲＡＬ、韓国）（４℃、１３０００ｒｐｍ、３０分）を実施した後、上層液を取って総タンパク（ｔｏｔａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ）定量に使用した。
【００４７】
総タンパク定量は、ＢＣＡプロテインアッセイキット（ｐｒｏｔｅｉｎ ａｓｓａｙ ｋｉｔ）（Ｌｏｔ Ｎｏ．：ＫＫ１４０６３７、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．、米国）を用いて分析し、プロコラーゲンタイプＩ定量は、プロコラーゲンタイプＩ Ｃ‐ペプチドＥＩＡキット（Ｌｏｔ Ｎｏ．：ＡＢ０１５２０Ｃ、Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏ Ｉｎｃ．、日本）を用いて定量した。
【００４８】
陰性対照物質、試験物質及び陽性対照物質を添加したウェルのプロコラーゲンタイプＩの量を総タンパク量で分けて補正されたプロコラーゲンタイプＩの量を計算した。補正されたプロコラーゲンタイプＩの量を次の算式に代入して生成率（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｒａｔｅ ｏｆ ｐｒｏｃｏｌｌａｇｅｎ ｔｙｐｅ Ｉ）を計算した。本試験は３回繰り返して実施し、結果に反映した。
【００４９】
プロコラーゲンタイプＩの生成率（％）＝（Ｂ−Ａ）／Ｂ×１００
Ａ：試験物質または陽性対照物質のプロコラーゲンタイプＩの量
Ｂ：陰性対照物質のプロコラーゲンタイプＩの量
その結果を図６に示した。図６に示されたように、１０及び１００ｎＭ濃度のミロデナフィル塩酸塩のプロコラーゲンタイプＩ生成率は、陰性対照群（１００．０±０．０％）と比べて統計学的に有意義に増加（ｐ＜０．０１：１０ｎＭ；１４９．７±１２．４％、１００ｎＭ；１８９．８±６．４％）した。３５．２μｇ／ｍＬ（２００μＭ）濃度の陽性対照群のプロコラーゲンタイプＩ生成率は、陰性対照群と比べて統計学的に有意義に増加（ｐ＜０．０１：３５．２μｇ／ｍＬ；１７５．７±１１．５％）した。
【００５０】
＜実施例４＞ＭＭＰ−１の発現抑制効果の評価
正常ヒト真皮線維芽細胞を用いて試験物質であるミロデナフィル塩酸塩のマトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）発現抑制効果を評価した。
陽性対照物質としては、（−）没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．、米国）を選択した。ＥＧＣＧは線維芽細胞を用いたＭＭＰ−１発現抑制に効果があると報告されており、比較できる基礎資料が豊富であるため、本試験の信頼度向上のために選択した。賦形剤としてはＤＭＳＯを使用した。
【００５１】
１０ｍＭのミロデナフィル塩酸塩貯蔵液から０．０１ｍＬを採取した後、賦形剤であるＤＭＳＯを９．９９ｍＬを添加して１０，０００ｎＭのサンプルを調剤した。サンプルをさらに希釈して１０００ｎＭの濃度に調剤した。試験物質の処理直前に、無血清培地でそれぞれの濃度を１００倍希釈して１０及び１００ｎＭにそれぞれ調剤した。
【００５２】
陽性対照物質は、ＥＧＣＧの最終濃度が１０，０００μＭ（４．５８４ｍｇ／ｍＬ）になるように無血清培地を加えて溶解させた後、１０μＭ（０．００４６ｍｇ／ｍＬ）に希釈して調剤した。
【００５３】
総タンパク定量は、ＢＣＡプロテインアッセイキット（Ｌｏｔ Ｎｏ．：ＫＫ１４０６３７、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．、米国）を用いて分析し、ＭＭＰ−１定量は、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）、ｈｕｍａｎ、ｂｉｏｔｒａｋ ＥＬＩＳＡ ｓｙｓｔｅｍ ｋｉｔ（Ｌｏｔ Ｎｏ．：３９８０６１、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、英国）を用えて定量した。
【００５４】
試験物質、陽性対照物質及び陰性対照物質を添加したウェルのＭＭＰ−１の量を総タンパク量で分けて補正されたＭＭＰ−１の量を計算した。補正されたＭＭＰ−１の量を次の算式に代入して発現抑制率（Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ＭＭＰ−１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）を計算した。
【００５５】
ＭＭＰ−１の発現抑制率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
Ａ：試験物質または陽性対照物質のＭＭＰ−１の量
Ｂ：陰性対照物質のＭＭＰ−１の量
その他の条件は、実施例３と同一または類似の方法を用いた。
【００５６】
その結果を図７に示した。１０及び１００ｎＭ濃度のミロデナフィル塩酸塩のＭＭＰ−１発現抑制率は、それぞれ１１５．８±９．１％及び９７．９±８．５％であって、陰性対照群（１８９．７±１０．９％）と比べて統計学的に有意義に減少（ｐ＜０．０１）した。また、０．００４６ｍｇ／ｍＬ（１０μＭ）濃度の陽性対照群のＭＭＰ−１発現抑制率は１０２．３±１８．７％であって、陰性対照群（１８９．７±１０．９％）と比べて統計学的に有意義に減少（ｐ＜０．０１）した。
【００５７】
以上、本発明を詳細に説明した。しかし、本発明の思想及び範囲内で多様な変更及び修正が可能であるため、詳細な説明及び具体例は、本発明の望ましい一実施例に過ぎないものと理解されなければならない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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