(57)【要約】  蓋（１０１）を有するコンタクトレンズ保管ケース（１０４）を消毒する方法（３００）は、ケースのキャビティ（１１３）を蓋で閉塞するステップ（３１３）と、ケースを約３時間、約６０℃で加熱することによりケースを能動的に乾燥するステップ（３１５）とを含む。
2014519617.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
蓋を有するコンタクトレンズ保管ケースを消毒する方法であって、
前記ケースのキャビティを前記蓋で閉塞するステップと、
前記ケースを約３時間、約６０℃で加熱することにより前記ケースを能動的に乾燥するステップとを含む、方法。
【請求項２】
前記ケースのキャビティを閉塞するステップは、
前記ケースのキャビティを隠すように前記蓋を前記ケース上に載せるステップと、
前記蓋と前記ケースとを部分的に係合するステップと、
前記蓋と前記ケースとを完全に係合するステップとのうちの１つを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記蓋と前記ケースとを部分的に係合するステップは、前記蓋および前記ケースのそれぞれのねじ山を部分的に係合するステップを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記蓋と前記ケースとを部分的に係合するステップは、前記蓋および前記ケースのそれぞれの圧入表面を部分的に係合するステップを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記蓋と前記ケースとを完全に係合するステップは、前記蓋および前記ケースのそれぞれのねじ山を完全に係合するステップを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記蓋と前記ケースとを完全に係合するステップは、前記蓋および前記ケースのそれぞれの圧入表面を完全に係合するステップを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
前記閉塞するステップと前記能動的に乾燥するステップとの前に、
コンタクトレンズとある量の消毒液とを前記ケースのキャビティの中に配置するステップと、
前記蓋と前記ケースとを完全に係合するステップと、
前記消毒液について特定される時間／温度方式に前記ケースを晒すステップと、
前記コンタクトレンズを取り除くステップと、
前記消毒液を手動で揺動するステップとをさらに含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記能動的に乾燥するステップは、前記キャビティが前記蓋によって閉塞された前記ケースを１時間と４時間との間、６０℃で加熱することにより、前記ケースを能動的に乾燥するステップを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記能動的に乾燥するステップは、前記キャビティが前記蓋によって閉塞された前記ケースを１時間と４時間との間、５５℃と６５℃との間で加熱することにより、前記ケースを能動的に乾燥するステップを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記能動的に乾燥するステップは、前記キャビティが前記蓋によって閉塞された前記ケースを１時間と４時間との間、５０℃と７０℃との間で加熱することにより、前記ケースを能動的に乾燥するステップを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記能動的に乾燥するステップは、前記キャビティが前記蓋によって閉塞された前記ケースを１時間と４時間との間、４５℃と７５℃との間で加熱することにより、前記ケースを能動的に乾燥するステップを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の技術分野
本発明は一般に、コンタクトレンズ、それらの関連する保管ケースおよび衛生処理方式に関し、特にコンタクトレンズ保管ケース（以下、「コンタクトレンズ保管ケース」、「保管ケース」、または「ケース」と称する）において微生物の成長を低減するためのプロセスに関する。
【背景技術】
【０００２】
背景
眼用のコンタクトレンズ（以下、単に「レンズ」と称する）がますます広く普及している。これには、細菌性角膜炎および他の眼感染症の発生の対応する増加が伴っている。
【０００３】
上記の眼感染症を起こすリスクの増加に関連付けられる１つの要因として、ケースの不適切な衛生が特定されており、ケースの衛生を向上するために現在いくつかのアプローチが用いられている。
【０００４】
１つのこのようなアプローチは、消毒液を用いてコンタクトレンズに付着する微生物および他の異質粒子のレベルを低減することである。別の構成では、コンタクトケースに銀イオンを注入してケース表面上の汚染を低減している。別の方式では（ＷＯ２０１０／１１１７４４Ａ１参照）、ケース、ケースに隣接するクリップに位置決めされる蓋を能動的に乾燥して、乾燥プロセスの間およびケースの使用とケースの使用との間のその後の保管期間の間に大気粉塵、微生物、およびかびの胞子がケースに進入するのを防止することを伴う。これにより、ケースにおいて動植物の成長が低減される。「能動的に乾燥する」という用語は、ケースを環境温度および環境湿度で受動的に乾燥する場合と比較して、ケースおよび関連する蓋の乾燥時間を著しく低減する温度までケースを加熱することによりコンタクトレンズ保管ケースを乾燥することを意味する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、上記の構成の利用可能性と、ケースの手入れの仕方について医療専門家およびアイウェアの専門家によってレンズの着用者に対して日常的になされている助言とにもかかわらず、研究では、ケースのうち７６％〜９２％の間のものが眼感染症を起こし得る程度まで汚染されていることが示されている。
【０００６】
概要
本発明の目的は、既存の構成の１つ以上の欠点を実質的に克服または少なくとも改善することである。
【０００７】
ケースを能動的に乾燥しながらコンタクトレンズケースのキャビティをケース蓋で閉塞することにより上記の問題に対処しようとする閉塞ケース乾燥（occluded case drying（すなわちＯＣＤ））構成と称される構成が開示される。
【０００８】
本願明細書における「閉塞する」という用語は、ケースのキャビティを塞ぐまたは隠すよう蓋をケースの上に載せること、部分的に蓋およびケースを係合すること、および完全に蓋およびケースを係合することをその範囲内に含む。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の第１の局面によると、蓋を有するコンタクトレンズ保管ケースを消毒する方法が提供される。この方法は、ケースのキャビティを蓋で閉塞するステップと、次いでケースを約３時間、約６０℃で加熱することによりケースを能動的に乾燥するステップとを含む。
【００１０】
本発明の他の局面も開示される。
ここで、図面および添付書類を参照して本発明の少なくとも１つの実施例を記載する。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１Ａ】レンズケースを能動的に乾燥するための先行技術の装置を示す図である。
【図１Ｂ】レンズケースを能動的に乾燥するための先行技術の装置を示す図である。
【図１Ｃ】レンズケースを能動的に乾燥するための先行技術の装置を示す図である。
【図２】開示されるＯＣＤ法に従った、コンタクトレンズ保管ケースを消毒するための装置を示す図である。
【図３】本開示に従った、蓋を有するコンタクトレンズ保管ケースを消毒するための方法のフロー図である。
【図４】図２に示されるＯＣＤ構成の想像図である。
【００１２】
添付書類Ａは、保管ケース内の微生物汚染レベルをさまざまな条件下でテストするために出願人が行った臨床研究から生まれた報告書である。
【００１３】
添付書類Ｂは、臨床研究プロトコルのフロー図を詳述する。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
最良の形態を含む詳細な説明
添付の図面のいずれか１つ以上において、同じ参照番号を有するステップおよび／または機構に参照が行われる場合、それらのステップおよび／または機構は、反対の意図が現れる場合を除き、この記載の目的について同じ機能または作用を有する。
【００１５】
図１Ａ〜図１Ｃは、レンズケースを能動的に乾燥するための先行技術の装置を示す。
図１Ａは、コンタクトレンズ保管ケース１０４と、関連する蓋１０１とを示す。コンタクトレンズ（図示せず）は、当該レンズを保管すべきときに、ケース１０４における窪み（「キャビティ」とも称する）１１３の中に配置され得る。蓋１０１は、ケース１０４を閉じるために蓋１０１がケース１０４に取り付けられるとケース１０４上のねじ山１０３と係合するねじ山１０２を有する。
【００１６】
図１Ｂは、表面がケース１０４の外面と共形的であるキャビティ１０８を有する装置１１０を示す。したがって、ケース１０４を能動的に乾燥するためにケース１０４がキャビティ１０８に挿入された後、装置１１０において電源／制御システム１１１によって加熱要素１０９が活性化されると、所望の量の加熱エネルギーが正確かつ繰り返しケース１０４に適用され得る。装置１１０の側には鉛直部材１０７，１１４が取り付けられる。鉛直部材１０７，１１４はそれぞれ水平部材１０６および１０５を有する。水平部材１０６および１０５は、図１Ｃおよび図４に関連してより詳細に記載されるように、ケース１０４の蓋１０１を支持するための環状のシェルフとして作用する。
【００１７】
図１Ｃは、装置１１０のキャビティ１０８の中にケース１０４が挿入された装置１１０を示す。蓋１０１の縁部は、水平部材１０６によって形成される環状のシェルフ上に支持されており、他の鉛直部材１１４および関連する水平部材１０５は明確さのため図１Ｃから省略されている。この構成は、蓋が対流により乾燥するとともに大気粉塵、微生物およびかびの胞子の侵入からケース１０４を保護することを可能にするよう、ケース１０４においてキャビティ１１３の上に簡便に蓋１０１を支持する。
【００１８】
図４は、図１Ｃに示される構成の想像図を示す。
なお、「背景」のセクションおよび先行技術の構成に関連する上記の段落に含まれる議論は、それぞれの公開および／または使用を通じて公共の知見を形成し得る文献または装置の議論に関する。このような議論は、任意の態様のこのような文献または装置が当該技術における通常の一般知識の一部を形成するという本発明者（ら）または特許出願人による説明ではない。
【００１９】
能動的に乾燥された保管ケース内の微生物汚染レベルをテストするよう、出願人は臨床研究を行った。上記の研究は以下の実験を含んだ。
１．保管ケースを加熱して微生物活性を著しく低減するのにもっとも有効な作業温度を決定する実験。
２．（１１０のような）能動乾燥装置の性能を、同じ作業温度で動作する温置オーブン（図示せず）と比較する実験。
３．蓋が容器から離れている場合と、蓋がそれぞれのねじ山の上部上に載っているか、部分的に係合しているか、または完全に係合している場合とで、保管ケースを能動的に乾燥することの殺菌性の有効性を比較する実験。
４．保管ケースを能動的に乾燥することの殺菌性の有効性を、商業的に入手可能な多目的コンタクトレンズ消毒液（multipurpose contact lens disinfection solution（ＭＰＤＳ））を用いるコントロールに対して比較する実験。
５．多目的消毒液の製造者が推奨する処理方式に従った後、保管ケースを能動的に乾燥することの殺菌性の有効性を決定する実験。
【００２０】
添付書類Ｂは、臨床研究プロトコルのフロー図を詳述する。
臨床研究（完全な報告書は添付書類Ａに組み込まれている）からの結果は以下のことを決定した。
１．予想に従って、３つのテストされた温度（１４℃、４５℃および６０℃）のうち、３時間の間保管ケースを６０℃まで加熱したものが、著しく微生物活性を低減するもっとも有効な温度であった。
２．予想に従って、能動乾燥装置を用いて乾燥したケースは、微生物活性を低減することにおいて温置オーブンと同じ非常に高いレベルの効力を達成しなかったが、当該ケースは著しく微生物活性を低減した。
３．予想外なことに、蓋を外した状態で保管ケースを乾燥することは、蓋がそれぞれのねじ山の上部上に載った状態、ねじ山と部分的に係合した状態、またはねじ山と完全に係合した状態で、保管ケースを乾燥した場合ほど有効ではなかった。
４．予想したように、保管ケース能動乾燥装置は、商業的に入手可能な多目的コンタクトレンズ消毒液よりも、微生物活性を低減することについて有効であった。
５．予想外なことに、製造者が推奨する商業的に入手可能なＭＰＤＳ処理方式と、能動乾燥プロセスとの両方を組み合せると、微生物活性を低減することにおける有効性が著しく向上した。その低減のレベルは予想されないものであった。
【００２１】
結果１、２および４は予想と大いに合致した。結果３および５は、驚くべきことであって、完全に予想されないことであった。
【００２２】
より特定的には、蓋を付けた状態で保管ケースを乾燥することは、保管ケースと関連する蓋とを別個に乾燥するよりも著しく有効であった。さらに、ＭＰＤＳ方式の使用とその後の能動的な乾燥の組合せにより、性能がかなり向上し、微生物活性が測定可能なしきい値を下回るまで低減した。
【００２３】
図２は、ＯＣＤ法に従ってコンタクトレンズ保管ケースを消毒するための装置２０８を示す。装置２０８は、図１に示される装置に類似しているが、以下に説明するように、ＯＣＤ法が実行されることを可能にする有意な違いが存在する。装置２０８は、ケース２０５の外面と共形的である表面のキャビティ２０７を有する。したがって、ケース２０５を消毒するためにケース２０５がキャビティ２０７に挿入された後、装置２０８において電源／制御システム２０６によって加熱要素２０４が活性化されると、所望の量の加熱エネルギーが正確かつ繰り返しケース２０５に適用され得る。図１Ｂにおける装置１１０とは対照的に、ケース２０５の蓋２０１を保持するための環状のシェルフとして動作する水平部材を有する鉛直部材が存在しない。その代わり、蓋２０１は、（ａ）蓋２０１をケース２０５の上部上に載せるか、（ｂ）部分的に蓋２０１のねじ山２０３をケース２０５の対応するねじ山２０２と係合するか、または（ｃ）完全に蓋２０１のねじ山２０３をケース２０５の対応するねじ山２０２と係合するかのいずれかによって、ケース２０５のキャビティ２０９を「閉塞」するために位置決めされる。
【００２４】
予想外なことに、蓋２０１が上述したようにケースのキャビティ２０９を閉塞した状態でケース２０５を消毒することにより、ＭＰＤＳの効力が大きく向上し、測定可能なしきい値を下回るまで微生物活性を低減するということが分かった。さらに、ＭＰＤＳ処理方式を用いた後でＯＣＤ法に従ってケースを消毒することにより、ケース上でＭＰＤＳの抗菌効果が著しく向上する。より特定的には、蓋２０１がケース２０５のキャビティを閉塞した状態で、約６０℃の温度で約３時間の期間の間、ケース２０５を加熱することによりケースを消毒することは非常に有効である。当該ＯＣＤ法のために、他の時間期間および温度設定も用いられ得る。
【００２５】
図３は、上記の開示されたＯＣＤ法に従った、蓋２０１を有するコンタクトレンズ保管ケース２０５を消毒するための方法３００のフロー図である。方法３００は、開始ステップ３０１から始まり、次いで矢印３０２に従ってステップ３０３に進む。ステップ３０３では、ユーザがコンタクトレンズをケース２０５のキャビティ２０９の中に配置する。ステップ３０３において、推奨される手順に従って、所定の体積のＭＰＤＳがケースのキャビティに配置される。プロセス３００は次いで、矢印３０４に従ってステップ３０５に進む。ステップ３０５では、ユーザは、蓋２０１をケース２０５に強く固定する。次いで、プロセス３００は、矢印３０６に従ってステップ３０７に進む。ステップ３０７では、ケース、ケース中のコンタクトレンズ、消毒液、および蓋が、消毒液の製造者が特定するような時間／温度プロファイルに晒される。次いで、プロセス３００は矢印３０８に従ってステップ３０９に進む。ステップ３０９では、ユーザは、コンタクトレンズをケースから除去する。次いで、プロセス３００は矢印３１０に従ってステップ３１１に進む。ステップ３１１では、ユーザは消毒液を揺動する。ユーザは、ケースをゆすがない。またはケースを手動で乾燥しない。次いで、プロセス３００は矢印３１２に従ってステップ３１３に進む。ステップ３１３では、ユーザは、それぞれのねじ山がケース上にある状態で、ケースの上部上に蓋を載せるか、または部分的もしくは完全に蓋のねじ山と係合するかのいずれかによって、ケースのキャビティを閉塞する。次いで、プロセス３００は矢印３１４に従ってステップ３１５に進む。ステップ３１５では、ケースは、約３時間の期間、約６０℃で滅菌される。次いで、プロセス３００は矢印３１６に従ってステップ３１７に進む。ステップ３１７では、ケースは再使用の準備ができた状態となる。
【００２６】
添付書類Ａは、保管ケース内の微生物汚染レベルをさまざまな条件下でテストするために出願人が行った臨床研究から生まれた報告書である。
【００２７】
添付書類Ｂは、臨床研究プロトコルのフロー図を詳述する。
産業上の利用可能性
上記の構成は、コンタクトレンズ産業に適用可能である。
【００２８】
上の記載は、本発明のいくつかの実施例のみを説明するものであって、本発明の範囲および精神から逸脱することがなければ修正および／または変更がなされ得る。実施例は例示的であって、限定的ではない。
【００２９】
したがってＯＣＤプロセス、特に、状況を最適化するために他の温度範囲および他の時間間隔が特定され得る。これらの状況は、他の考慮のうち、ＭＰＤＳについて特定された処理方式、および用いられる能動乾燥装置などに依存してもよい。さらに、ケースのキャビティを閉塞するために、ケースと蓋との係合が、上記のようにねじ山を用いて達成され得るか、または相補的な圧入表面のような他の係合方法を用いて達成され得る。
【００３０】
添付書類Ａ
臨床研究報告書
【００３１】
【表１】
2014519617.tif 000003
【００３２】
目次
目次．．．２
要旨．．．３
イントロダクション．．．４
材料および方法．．．５
菌株の成長．．．５
実験１：レンズケースにおいて堅固なバイオフィルムを発生させるのに最適な温置時間の決定．．．５
実験２：堅固なバイオフィルムを引き起こすのに最適な培地の決定．．．５
実験３：１４℃、４５℃または６０℃でのバイオフィルム形成後の温置の影響．．．５
実験４：乾燥の間においてレンズケースにキャップを付ける影響．．．５
実験５：Warm Contact社の装置と比較した、定温器における６０℃での温置の影響．．．６
実験６：多目的消毒液（Alcon Optifree RepleniSH（登録商標））に関連したWarm Contact社の装置の影響．．．６
バイオフィルムからの細菌細胞の回収．．．６
統計分析．．．６
結果．．．７
レンズケースにおいて堅固なバイオフィルムを発生させるのに最適な温置時間の決定．．．７
図１．２４時間または４８時間の温置の間の黄色ブドウ球菌３１によるバイオフィルムの形成．．．７
堅固なバイオフィルムを引き起こすのに最適な培地の決定．．．７
図２．黄色ブドウ球菌が作り出したバイオフィルムの量に対する培地（ＴＳＢの希釈）の影響．．．８
５０℃または６０℃でのバイオフィルム形成後の温置の影響．．．８
図３．黄色ブドウ球菌３１の回収可能な生菌細胞の数に対する乾燥温度の影響．．．８
乾燥の間においてレンズケースにキャップを付ける影響．．．９
Warm Contact社の装置と比較した、定温器において６０℃での温置の影響．．．９
図４．６０℃の定温器と比較した場合のWarm Contact社の装置の有効性の比較．．．９
多目的消毒液に関連したWarm Contact社の装置の影響．．．１０
図５．多目的消毒液に関連したWarm Contact社の装置の有効性．．．１０
結論．．．１１
参考文献．．．１２
添付書類−生データ．．．１４
要旨
この研究では、適切な設定条件をセットアップし、３時間の間６０℃を提供するよう設定された場合のWarm Contact社の装置が、多目的消毒液（Optifree RepleniSH（登録商標））の性能を著しく向上することができ、コンタクトレンズケースにおいて緑膿菌および黄色ブドウ球菌の両方のバイオフィルムの完全な死滅を提供するということが示された。その一方、コンタクトレンズの衛生についての通常の手順、すなわち液の除去および低い温度（１４℃）での乾燥では、レンズケース窪みにおいて両方の細菌タイプについて１，０００のコロニー形成単位が残った。この研究では、以前の研究において堅固なバイオフィルムを作り出すことが示された緑膿菌および黄色ブドウ球菌の両方の臨床分離株を用いた。さらに、Warm Contact社の装置は試験手順を通じて確実に動作した。
【００３３】
イントロダクション：
コンタクトレンズの微生物汚染、特に細菌汚染によって、コンタクトレンズ着用者は、レンズの着用時に有害事象を発生させるリスクに晒される。これらの有害事象は、重症であるが一般的でない細菌性角膜炎（角膜の感染症）（レンズを毎日着用する場合、着用者のうち約４／１０，０００の割合で発生する1-5）から、あまり重症ではないがより一般的な、着用者のうち１２／１００までの割合で起こるコンタクトレンズ誘導性急性充血眼（contact lens induced acute red eye（ＣＬＡＲＥ））および１２／１００の割合で起こるコンタクトレンズ誘導性周辺潰瘍（contact lens induced peripheral ulceration（ＣＬＰＵ））5-9までの範囲を取り得る。これらの事象を引き起こす微生物は、もっとも一般的には細菌である。細菌性角膜炎のケースからは、緑膿菌が一般的に分離され、グラム陰性菌であり、ＣＬＰＵからは黄色ブドウ球菌が分離され7,8,10、グラム陽性菌であった。
【００３４】
疫学的調査では、コンタクトレンズを毎日着用する際の細菌性角膜炎の場合、この疾患に関連付けられるリスク要因は、レンズ消毒を頻繁に行わないこと10-12と、衛生方式に従っていないこと13と、ケース洗浄の短縮14とを含むことが示されている。保管ケースの衛生が乏しいことは、細菌性角膜炎を引き起こすリスクが３．７０倍に増加することに関連付けられる15。さらに、コンタクトレンズ保管ケースの微生物汚染も、角膜における滅菌浸潤（sterile infiltrate）16に関連付けられる。
【００３５】
レンズケースの手入れの仕方についてコンタクトレンズ着用者に与えられる助言において不具合があり17、これがケースの衛生の欠如に寄与しているかもしれない。確かに研究では、臨床研究またはコミュニティにおいてレンズ着用者から回収したケースのうち５３％〜９２％のケースが汚染されていたことが示されている17-22。これらのレベルのレンズケースの汚染は、臨床試験のしっかりと制御された条件下で新しいデュアル消毒システムを使用しても、多目的消毒液（たとえば米国のテキサス州（ＴＸ）フォートワース（Fort Worth）のAlcon Laboratories社のOptifree RepleniSH（登録商標））において発生する23。コンタクトレンズケースから分離される細菌の数は、レンズケースあたり数百から６０，０００を超えるコロニー形成単位の範囲となり得る23。
【００３６】
したがって、通常の使用時のレンズケースの汚染を低減するとともに、微生物により発生する有害事象の割合を低減し得る、消毒液の性能および／または衛生システムの性能の向上を提供する必要性が存在する。Warm Contact社（オーストラリアのキャンベラ（Canberra））は、コンタクトレンズケースを加熱するのに用いられ得る特許付与された加熱装置を開発した。この装置は、ケースがコンタクトレンズを消毒するのに用いられていない期間（すなわちレンズが着用されている間）に当該レンズケースを加熱するよう用いられ得る。ここで我々は、この温める処置によって細菌の死滅のレベルが増加するという仮説を調査した。
【００３７】
材料および方法：
菌株の成長
（細菌性角膜炎から分離された際に選ばれるとともに良好なバイオフィルム産生物である）緑膿菌０７１24と、（コンタクトレンズ誘導性周辺潰瘍から分離した際に選ばれるとともに良好なバイオフィルム産生物である）黄色ブドウ球菌３１25とを、凍結保存からチョコレート血液寒天培地（Chocolate Blood Agar（ＣＢＡ）；サウスオーストラリア（ＳＡ）のアデレード（Adelaide）のOxoid Australia社）プレート上に再成長させ、一晩３７℃で温置した。その後、細菌は滅菌ループを用いてプレートから掻き落とされ、滅菌リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ；ＮａＣｌが８ｇ／Ｌ、ＫＣｌが０．２ｇ／Ｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４が１．１５ｇＬ、ＫＨ２ＰＯ４が０．２ｇ／Ｌ；ｐＨ７．２）中に再懸濁され、遠心分離により洗浄された。次いでペレットが、Trypticase（商標）ソイ培養液（Trypticase（商標） Soya Broth（ＴＳＢ））（Oxoid Australia社）の濃縮物とＰＢＳとの混合液中に再懸濁された。次いで、細菌細胞の数が、（１．０×１０8コロニー形成単位（ＣＦＵ）／ｍｌに等しい）０．１００の光学密度（ＯＤ）に調節された。次いで、これがＴＳＢ／ＰＢＳ中において連続的に希釈され、これにより各菌株について１．０×１０6ＣＦＵ／ｍｌの最終接種強度が得られた。
【００３８】
実験１：レンズケースにおいて堅固なバイオフィルムを発生させるのに最適な温置時間の決定
細菌の株によってコンタクトレンズケースの表面上にバイオフィルムの形成を引き起こすために、細菌細胞（１×１０6ＣＦＵ／ｍｌで２ｍｌ、上記を参照）を新しいレンズケース（Alcon Laboratories社）の窪みに加え、レンズケースに緩くキャップを付け、３７℃で穏やかな揺動状態で２４時間または４８時間温置した。最初のテストは、黄色ブドウ球菌３１のみについて、１：１０のＴＳＢ：ＰＢＳを用いた。バイオフィルムの形成後、培地が取り除かれ、レンズケースは、ＰＢＳでゆすがれるか、または５０℃で３時間乾燥された。この実験は、１：１００のＴＳＢ／ＰＢＳにおいて緑膿菌７１を用いても行われ、２４時間のみバイオフィルムの形成を行った。各細菌タイプについて処理の各々ごとに４つのコンタクトレンズケースを検査した。
【００３９】
実験２：堅固なバイオフィルムを引き起こすのに最適な培地の決定
細菌細胞は、１×１０6ＣＦＵ／ｍｌの密度にて、黄色ブドウ球菌３１の場合、１：１０、１：２０、１：５０、または１：１００のＴＳＢ：ＰＢＳにおいて懸濁され、緑膿菌７１の場合、１：１００または１：１０００のＴＳＢ：ＰＢＳで懸濁された。次いで、細胞は新しいレンズケース（Alcon Laboratories社）の窪みに加えられ、レンズケースには緩くキャップが付けられ、３７℃で穏やかな揺動状態で２４時間温置された。バイオフィルムの形成後、培地が取り除かれ、レンズケースは、ＰＢＳでゆすがれるか、または５０℃で３時間乾燥された。各細菌タイプについて培地のタイプの各々ごとに４つのコンタクトレンズケースを検査した。
【００４０】
実験３：１４℃、４５℃または６０℃でのバイオフィルム形成後の温置の影響
細菌細胞は、１×１０6ＣＦＵ／ｍｌの密度にて、黄色ブドウ球菌３１の場合、１：１０のＴＳＢ：ＰＢＳにおいて懸濁され、緑膿菌７１の場合、１：１００のＴＳＢ：ＰＢＳで懸濁された。次いで、細胞は新しいレンズケース（日本のMenicon社）の窪みに加えられ、レンズケースには緩くキャップが付けられ、３７℃で穏やかな揺動状態で２４時間温置された。バイオフィルムの形成後、培地が取り除かれ、レンズケースは、ＰＢＳでゆすがれるか、または１４℃、４５℃または６０℃で３時間乾燥された。各細菌タイプについて温度の各々ごとに４つのコンタクトレンズケースを検査した。
【００４１】
実験４：乾燥の間においてレンズケースにキャップを付ける影響
細菌細胞は、１×１０6ＣＦＵ／ｍｌの密度にて、黄色ブドウ球菌３１の場合、１：１００のＴＳＢ：ＰＢＳにおいて懸濁され、緑膿菌７１の場合、１：１０００のＴＳＢ：ＰＢＳで懸濁された。次いで、細胞は新しいレンズケース（Alcon Laboratories社）の窪みに加えられ、レンズケースには緩くキャップが付けられ、３７℃で穏やかな揺動状態で２４時間温置された。バイオフィルムの形成後、培地が取り除かれ、レンズケースは、ケースにキャップが付けられた状態またはキャップが外された状態のいずれかで、ＰＢＳでゆすがれるか、または６０℃で３時間乾燥された。各細菌タイプについて処理の各々ごとに４つのコンタクトレンズケースを検査した。
【００４２】
実験５：Warm Contact社の装置と比較した、定温器における６０℃での温置の影響
細菌細胞は、１×１０6ＣＦＵ／ｍｌの密度にて、黄色ブドウ球菌３１の場合、１：１００のＴＳＢ：ＰＢＳにおいて懸濁され、緑膿菌７１の場合、１：１０００のＴＳＢ：ＰＢＳで懸濁された。次いで、細胞は新しいレンズケース（Alcon Laboratories社）の窪みに加えられ、レンズケースには緩くキャップが付けられ、３７℃で穏やかな揺動状態で２４時間温置された。バイオフィルムの形成後、レンズケースは、ＰＢＳでゆすがれるか、または緩くキャップが付けられて６０℃で３時間、定温器もしくはWarm Contact社の装置において乾燥された。コントロールとして、バイオフィルムが１４℃で３時間、温置された。各細菌タイプについて処理の各々ごとに４つのコンタクトレンズケースを検査した。Warm Contact社の装置を用いた１４℃および６０℃で行われた実験について、実験をさらに４回繰り返した（すなわち合計で１６個のレンズケースが、各株について各温度ごとに用いられた）。
【００４３】
実験６：多目的消毒液（Alcon Optifree RepleniSH（登録商標））に関連したWarm Contact社の装置の影響
細菌細胞は、１×１０6ＣＦＵ／ｍｌの密度にて、黄色ブドウ球菌３１の場合、１：１００のＴＳＢ：ＰＢＳにおいて懸濁され、緑膿菌７１の場合、１：１０００のＴＳＢ：ＰＢＳで懸濁された。次いで、細胞は新しいレンズケース（Alcon Laboratories社）の窪みに加えられ、レンズケースには緩くキャップが付けられ、３７℃で穏やかな揺動状態で２４時間温置された。バイオフィルムの形成後、レンズケースはＰＢＳでゆすがれるか、またはOptifree RepleniSH（登録商標）とともに６時間（製造者が推奨する消毒時間）温置され、次いで６０℃で３時間乾燥された。各細菌タイプについて処理の各々ごとに４つのコンタクトレンズケースを検査した。これらの実験をさらに、３回または４回、別の日に繰り返した。
【００４４】
バイオフィルムからの細菌細胞の回収：
各実験（１〜７）の終わりでは、２ｍｌのＰＢＳを小さな磁気撹拌子とともに加えることによりレンズケースから細菌細胞が取り除かれた。細胞は、渦流混合で最大速度にて１分混合することでレンズケースから取り除かれた。この後、結果得られる懸濁液は、Ｄ／Ｅ培養液（Oxoid Australia社）において連続して希釈され（１：１０）、栄養寒天プレート（Oxoid Australia社）上に配置された。次いで、栄養寒天プレートは３７℃で１８時間、温置され、結果得られるコロニー形成単位が数えられ、バイオフィルムにおける元々の細菌細胞の数が希釈情報から計算された。
【００４５】
統計分析：
テスト条件とコントロール条件との間の差を決定するよう、スチューデントｔ検定を用いた。
【００４６】
結果：
レンズケースにおいて堅固なバイオフィルムを発生させるのに最適な温置時間の決定
黄色ブドウ球菌３１の３７℃での２４時間の温置により、３，２６７±２，４９８ＣＦＵ／ｍｌから構成されるバイオフィルムが生成される一方、４８時間温置した場合、２４０±１９３ＣＦＵ／ｍｌから構成されるバイオフィルムが生成される（Ｐ＝０．０５２；図１）。５０℃で３時間の温置の後、生菌はいずれのバイオフィルムからも回収され得なかった（Ｐ＝０．０８）。緑膿菌７１の場合、バイオフィルムは２０，５６６，６６７±２，３９８，４５６ＣＦＵ／ｍｌからなった。５０℃で３時間の温置により、バイオフィルムにおける緑膿菌７１の数が９，９３０±９，６８２まで低減した（Ｐ＝０．０００４）。
【００４７】
【表２】
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【００４８】
これらの結果は、両方の細菌タイプについて、２４時間の温置の後でバイオフィルムが形成されたことを示した。黄色ブドウ球菌３１の場合、この時間を４８時間まで増加させることには何の利点もなかった。緑膿菌７１が形成したバイオフィルムは、黄色ブドウ球菌３１が形成したバイオフィルムと比較して、より堅固であった（すなわち高温の影響に対してより高い抵抗を有した）。すべてのその後の実験は、２４時間の温置の後形成されたバイオフィルムを用いた。
【００４９】
堅固なバイオフィルムを引き起こすのに最適な培地の決定：
黄色ブドウ球菌３１の場合、ＰＢＳ中のＴＳＢの希釈を増加させることにより、１：１０のＴＳＢ：ＰＢＳの場合の３，２６７±２，４９８ＣＦＵ／ｍｌから１：１００のＴＳＢ：ＰＢＳの場合の３，０９０，０００±３６８，４４０ＣＦＵ／ｍｌまで、より多くのバイオフィルムの細菌数が与えられる（Ｐ＝０．０００５；図２）。緑膿菌７１の場合、１：１００のＴＳＢ／ＰＢＳ（２０，５６６，６６７±２，３９８，４５６ＣＦＵ／ｍｌ）または１：１０００のＴＳＢ：ＰＢＳ（１６，３００，０００±２，１２６，０２９ＣＦＵ／ｍｌ；Ｐ＝０．０４）においてに温置した後、バイオフィルムから培養した細菌細胞の数の差は小さい。
【００５０】
【表３】
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【００５１】
この実験から、黄色ブドウ球菌３１について１：１００のＴＳＢ：ＰＢＳを用い、緑膿菌７１について１：１０００のＴＳＢ：ＰＢＳを用いて実験５〜７を継続することを決定した。
【００５２】
５０℃または６０℃でのバイオフィルム形成後の温置の影響：
バイオフィルムにおける細菌は４５℃または６０℃の熱に晒された。黄色ブドウ球菌３１の場合、１４℃での乾燥により１，９９０，０００±４３８，６３４ＣＦＵ／ｍｌとなり、４５℃での乾燥により６２５，０００±１４５，３０８ＣＦＵ／ｍｌとなり、６０℃での乾燥により１９５，０００±８４，４００ＣＦＵ／ｍｌとなった（Ｐ＝０．００００３）。緑膿菌７１の場合、１４℃での乾燥により９９６，６６７±３８０，０００ＣＦＵ／ｍｌとなり、４５℃での乾燥により４，８３３±４，３７４ＣＦＵ／ｍｌとなり、６０℃での乾燥により２７０±１７３ＣＦＵ／ｍｌとなった（Ｐ＝０．０２）。したがって我々は、各細菌タイプについて生きた細菌細胞の数を低減する最適温度として６０℃を選んだ。
【００５３】
【表４】
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【００５４】
乾燥の間においてレンズケースにキャップを付ける影響：
両方の細菌タイプが形成されたバイオフィルムは、キャップが閉じた状態またはキャップのない状態（すなわち雰囲気に対して開放状態）のいずれかで３時間の間６０℃で乾燥に晒された。「乾燥」段階の間、キャップが閉じられ続けている場合の方が、両方の細菌のバイオフィルムがより低減された。黄色ブドウ球菌３１の場合、キャップが開いた状態での乾燥により、２１５，３３３±１３７，５５３ＣＦＵ／ｍｌとなったが、キャップが閉じた状態では、レンズケースから細菌は回収されなかった（０ＣＦＵ／ｍｌ）（Ｐ＝０．０２）。同様に、緑膿菌７１の場合、キャップが開いた状態での乾燥では、３４３±２６３ＣＦＵ／ｍｌとなったが、キャップが閉じた状態では、レンズケースから細菌は回収されなかった（０ＣＦＵ／ｍｌ）（Ｐ＝０．０４）。
【００５５】
Warm Contact社の装置と比較した、定温器において６０℃での温置の影響：
両方の細菌タイプの場合、Warm Contact社のレンズ装置は、１４℃で３時間のコントロールと比較して、著しく細菌バイオフィルムの量を低減した。しかしながら、Warm Contact社の装置は、相当温度（６０℃）の定温器においてレンズケースを温置した場合ほどは有効ではなかった（図４ａおよび図４ｂ；黄色ブドウ球菌３１の場合にはＰ＝０．０００４および緑膿菌７１の場合にはＰ＝０．０３）。
【００５６】
【表５】
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【００５７】
多目的消毒液に関連したWarm Contact社の装置の影響：
多目的消毒液であるOptifree RepleniSH（登録商標）の存在下で細菌バイオフィルムを６０℃でWarm Contact社の装置において温置することにより、バイオフィルムの完全な死滅につながる。これは、単にOptifree RepleniSH（登録商標）において１４℃で温置する（黄色ブドウ球菌３１の場合にはＰ＝０．０１１および緑膿菌７１の場合にはＰ＝０．００００８）か、またはＰＢＳにおいて６０℃で温置する（黄色ブドウ球菌３１の場合にはＰ＝０．０００５および緑膿菌７１の場合にはＰ＝０．０２８；図５ａおよび図５ｂ）よりも著しく良好である。
【００５８】
【表６】
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【００５９】
結論：
この一連の研究では、３時間の間６０℃を提供するよう設定された場合のWarm Contact社の装置が、多目的消毒液（Optifree RepleniSH（登録商標））の性能を著しく向上することができ、緑膿菌および黄色ブドウ球菌の両方のバイオフィルムの完全な死滅を提供するということが示された。その一方、コンタクトレンズの衛生についての通常の手順、すなわち液の除去および低い温度（１４℃）での乾燥では、レンズケース窪みにおいて両方の細菌タイプについて１，０００のコロニー形成単位が残った。
【００６０】
適切な条件をセットアップ、すなわち、バイオフィルムを形成するのに適切な時間、形成すべき堅固なバイオフィルムのための適切な培地、およびバイオフィルムに加えられるべき適切な温度をセットアップして、製造者が推奨する消毒時間だけ消毒をした後で乾燥する温度を増加すると、性能がかなり向上したことをこれらの研究は実証した。
【００６１】
これは有意なことである。なぜならば、保管ケースの衛生が乏しいことが、細菌性角膜炎または滅菌角膜浸潤を発生させるリスクの増加に関連付けられるということが疫学的調査において示されているからである15,16。
【００６２】
【表７−１】
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【００６３】
【表７−２】
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【００６４】
添付書類Ｂ
【００６５】
【表８】
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【００６６】
【表９】
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【００６７】
【表１０】
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２】
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【図４】
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【図３】
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【国際調査報告】
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