(57)【要約】  微生物感染を治療するかまたは防止するための方法および組成物を開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
照射された微生物種を含む医薬組成物であって、前記微生物種に、あらかじめ定義された代謝状態の細胞が含まれる、前記医薬組成物。
【請求項２】
前記のあらかじめ定義された代謝状態が、栄養枯渇、極端な温度、鉄の入手可能性、好気性増殖、嫌気性増殖、微好気性、酸化ストレス、一酸化炭素に対する曝露、ｐＨ改変、栄養素の入手可能性、操作細胞集団密度、抗生物質の存在、あるいは２以上のこれらの状態の組み合わせによって誘発される、請求項１の医薬組成物。
【請求項３】
前記マイコバクテリウム属（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種が、ガンマ線照射などの照射で不活性化される、請求項１の医薬組成物。
【請求項４】
組成物が照射された細菌またはその細胞溶解物を含み、投与がワクチン接種または治療措置の一部として非経口投与、静脈内投与、皮下投与、皮内投与または筋内投与である、請求項１の医薬組成物。
【請求項５】
マイコバクテリウム細胞の９０％より多くがあらかじめ決定された状態である、請求項１の医薬組成物。
【請求項６】
哺乳動物宿主への鼻内送達、粘膜送達または肺内送達のため、エアロゾル化され、そして配合され、それによって深部肺浸透のための粒子サイズが７ミクロン未満である、請求項１の医薬組成物。
【請求項７】
アジュバント、ｔｏｌｌ様受容体またはパターン認識受容体アゴニスト、アルミニウム塩、あるいはサポニンをさらに含む、請求項１の医薬組成物。
【請求項８】
療法的有効量のカルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）をさらに含む、請求項１の医薬組成物。
【請求項９】
被験体において免疫反応を増進する方法であって、請求項１の組成物の薬学的有効量を投与する工程を含む、前記方法。
【請求項１０】
微生物種が、１０２〜１０１２マイコバクテリウム属種の用量で投与されるマイコバクテリウム属である、請求項９の方法。
【請求項１１】
不活性化マイコバクテリウム属種にマイコバクテリウム細胞または細胞溶解物が含まれる、請求項９の方法。
【請求項１２】
照射されたブルセラ属（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）微生物種を含む医薬組成物であって、
前記組成物は、浸透圧送達系または組成マトリックスを用いて、哺乳動物宿主に膣送達、直腸送達、または胃腸粘膜送達するために配合されており、そして
前記組成物は、前記宿主に送達された際、免疫学的に刺激する用量を含む、
前記組成物。
【請求項１３】
胃腸送達のための薬学的に許容されうるキャリアーを含む、請求項１２の医薬組成物。
【請求項１４】
前記の不活性化された種の細胞が、フィード措置の一部として提供されるか、あるいは特殊化された植物に基づくワクチンまたは作物種子、例えばイネ（ｒｉｃｅ）、トウモロコシ（ｍａｉｚｅ）、もしくはダイズ（ｓｏｙｂｅａｎｓ）と組み合わされて送達される、請求項１２の医薬組成物。
【請求項１５】
前記の不活性化された種の細胞が、胃放出を増進するｐＨ感受性ポリマー、胃保持および放出のための粘膜付着性ポリマー、または胃保持系を使用した、胃送達に適した形で提供される、請求項１２の医薬組成物。
【請求項１６】
前記の不活性化された種の細胞が、胃溶解に抵抗するｐＨ感受性ポリマー、徐放のための膨張性/ゲル化ＨＧを用いて、あるいは浸透圧駆動錠剤またはデバイスとして、腸内送達に適した形で提供される、請求項１２の医薬組成物。
【請求項１７】
前記の不活性化された種の細胞が、結腸送達に適した形で提供される、請求項１２の医薬組成物。
【請求項１８】
結腸細菌によって分解可能な組成物をさらに含む、請求項１２の医薬組成物。
【請求項１９】
結腸細菌が、１以上の活性アゾレダクターゼ、エステラーゼ、アミダーゼ、グルコシダーゼ、またはグルクロニダーゼを含む、請求項１２の医薬組成物。
【請求項２０】
前記の不活性化された種の細胞が、胃および腸内通過時間をはるかに超えた時点で放出する浸透圧系または膨張系を備えた結腸送達に適した形で提供される、請求項１２の医薬組成物。
【請求項２１】
前記の不活性化された種の細胞が、結腸で優先的に分解される適切なポリマーでコーティングされている、請求項１２の医薬組成物。
【請求項２２】
前記組成物がｐＨ感受性ポリマーでコーティングされている、請求項１２の医薬組成物。
【請求項２３】
前記ｐＨ感受性ポリマーが、ユードラジットＬ  １００、ユードラジットＳ  １００、ユードラジットＬ  ３０Ｄ、ユードラジットＦＳ  ３０Ｄ、ユードラジットＬ  １００−５５、酢酸フタル酸ポリビニル、フタル酸ヒドロキシプロピルエチルセルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルエチルセルロース５０、フタル酸ヒドロキシプロピルエチルセルロース５５、酢酸トリメリット酸セルロースまたは酢酸フタル酸セルロースである、請求項２２の医薬組成物。
【請求項２４】
前記浸透圧送達が、ローズ・ネルソン・ポンプ、ヒグチ・リーパー・ポンプ、ヒグチ・テウエス（Ｔｈｅｅｕｗｅｓ）・ポンプ、基本浸透圧ポンプ、マルチチャンバー浸透圧ポンプ、ＯＲＯＳ−ＣＴ、多粒子遅延放出系、液体経口浸透圧系、サンドイッチ浸透圧錠剤、一体化（Ｍｏｎｏ  ｌｉｔｈｉｃ）浸透圧系、浸透圧破裂性浸透圧ポンプ、または遅延放出のためのテレスコピックカプセル（ｔｅｌｅｓｃｏｐｉｃ  ｃａｐｓｕｌｅ）を用いている、請求項１２の医薬組成物。
【請求項２５】
療法的有効量のカルメット・ゲラン桿菌をさらに含む、請求項１２の医薬組成物。
【請求項２６】
クローン病を治療するかまたは防止する際の有効性に関して、前記組成物を試験する工程をさらに含む、請求項９の方法。
【請求項２７】
ブルセラ症を治療するかまたは防止する際の有効性に関して、前記組成物を試験する工程をさらに含む、請求項９の方法。
【請求項２８】
ヨーネ病の治療または防止に関して、前記組成物を試験する工程をさらに含む、請求項９の方法。
【請求項２９】
哺乳動物宿主への鼻内送達、粘膜送達または肺内送達のために配合された照射されたＳ．ピオゲネス（Ｓ．  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）の免疫学的有効用量を含む、医薬組成物。
【請求項３０】
Ｓ．ピオゲネスの１以上の血清型を含む、請求項２９の医薬組成物。
【請求項３１】
ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）感染を治療するかまたは防止する方法であって、有効用量の請求項３３の組成物を、必要とする被験体に投与する工程を含む、前記方法。
【請求項３２】
前記組成物を、不活性化されたマイコバクテリウム属種または別のアジュバントとともに投与する、請求項２９の方法。
【請求項３３】
ビタミンＤ、レチノイン酸、またはエピガロカテキン−３−ガレートとともに、マイコバクテリウム、非感染性微生物、不活性化マイコバクテリウム（例えば照射による）、または微生物粒子を含む、医薬組成物であって、
前記組成物は、哺乳動物宿主に鼻内送達、膣送達、直腸送達、粘膜送達または肺内送達するために配合されており、そして
前記組成物は、前記宿主に送達された際、免疫学的に刺激する用量を含む、前記組成物。
【請求項３４】
カルシジオールおよび酵素２５−ヒドロキシビタミンＤ３  １−アルファ−ヒドロキシラーゼ、レチノイン酸および／またはエピガロカテキン−３−ガレートを含む、請求項３３の医薬組成物であって、
前記組成物は、哺乳動物宿主に鼻内送達、膣送達、直腸送達、粘膜送達または肺内送達するために配合されており、そして
前記組成物は、前記宿主に送達された際、免疫学的に刺激する用量を含む、前記組成物。
【請求項３５】
前記ビタミンＤ、レチノイン酸および／またはエピガロカテキン−３−ガレートが、グルコース、ソルビトールまたはラクトースとともに投与される、請求項３３の医薬組成物。
【請求項３６】
ビタミンＤ、レチノイン酸および／またはエピガロカテキン−３−ガレートの合成型をさらに含む、請求項３３の医薬組成物であって、
前記組成物は、哺乳動物宿主に鼻内送達、膣送達、直腸送達、粘膜送達または肺内送達するために配合されており、そして
前記組成物は、前記宿主に送達された際、免疫学的に刺激する用量を含む、前記組成物。
【請求項３７】
薬学的に許容されうるキャリアーをさらに含み、そして粘膜送達のために配合されている、請求項１の医薬組成物。
【請求項３８】
凍結乾燥されている、請求項１の医薬組成物。
【請求項３９】
鼻送達または肺送達のために設定されている請求項１の医薬組成物を含む、エアロゾルまたはスプレーパッケージ。
【請求項４０】
グルコース、ソルビトールまたはラクトースをさらに含む、請求項２９の医薬組成物。
【請求項４１】
前記組成物が、動物モデルに対して予防的にまたは療法的に投与される、請求項９の方法。
【請求項４２】
前記動物モデルが、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、非ヒト霊長類またはヒトである、請求項３７の方法。
【請求項４３】
アジュバントまたは免疫刺激剤として請求項１の組成物を用いる方法であって、明らかなマイコバクテリウム感染がない哺乳動物被験体に、前記被験体において抗原に対する免疫反応を増進させるのに十分な用量のエアロゾル化マイコバクテリウム属種を投与する工程を含む、前記方法。
【請求項４５】
動物被験体において喘息を治療するかまたは防止する方法であって、請求項１の組成物を、必要とする被験体に投与する工程を含む、前記方法。
【請求項４６】
被験体において癌を治療するかまたは防止する方法であって、請求項１の組成物の有効量を、必要とする被験体に投与する工程を含む、前記方法。
【請求項４７】
微生物種がエアロゾル化されている、請求項１の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１１年４月２０日出願のＵＳＳＮ６１／４７７，３５３；２０１１年４月２０日出願のＵＳＳＮ  ６１６１／４７７，３６９；２０１１年４月２０日出願のＵＳＳＮ  ６１／４７７，３６９；２０１１年４月２０日出願のＵＳＳＮ  ６１／４７７，３８５；２０１１年４月２０日出願のＵＳＳＮ  ６１／４７７，２８４；２０１１年４月２０日出願のＵＳＳＮ  ６１／４７７，３０６；および２０１１年５月２０日出願のＵＳＳＮ  ６１／４８８，５３０に優先権を請求する。これらの出願の内容はその全体が本明細書に援用される。
【０００２】
発明の分野
本発明は、免疫反応を増進するための方法に、そしてより詳細には、不活性化マイコバクテリウム属（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種を用いたワクチンに関する。
【背景技術】
【０００３】
結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）（Ｍ．ｔｂ）は、世界のヒト集団の１/３を感染させている［１］。カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）ワクチンとして知られる一般的な結核症（ＴＢ）ワクチンが、発展途上国において、新生児に投与される。このワクチンは、小児における髄膜および播種性ＴＢに対して保護するが、不顕性ＴＢの確立または成人における肺疾患の再活性化を適切に保護できない［２］。さらに、ＢＣＧ有効性は、１０〜１５年の期間に渡って減少すると報告されている［３］。最も一般的なタイプの結核症疾患は肺性であり、そして伝染は咳の間に生じるエアロゾル液滴を通じて起こる。したがって、ＢＣＧワクチン接種は非常に普及しているものの、疾患負荷は減少してきていない。現在、Ｍ．ｔｂマイコバクテリウム（ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉａｌ）系譜が、Ｍ．ｔｂおよびＢＣＧ両方に共通の抗原における突然変異に適応してきた可能性がある証拠がある［４、５］。さらに、最近の研究によって、非経口的に送達されたＢＣＧが、肺疾患に対する保護に必須でありうる、肺粘膜におけるＴ細胞免疫反応を誘導することができない可能性が示唆されている［６、７］。少なくともこれらの理由のため、世界中のＴＢの蔓延を減少させるには、新規ワクチンが必須である。
【発明の概要】
【０００４】
本発明は、望ましい免疫反応を増加させる組成物を調製する新規方法の発見に基づく。
１つの側面において、本発明は、あらかじめ決定された生物学的状態にある細胞を高率で含む、照射Ｍ．ｔｂ集団を用いたワクチンを提供する。Ｍ．ｔｂの状態は、例えば、栄養枯渇、極端な温度、鉄枯渇、好気性増殖、嫌気性増殖、酸化ストレス、あるいは２以上のこれらの状態の組み合わせから生じる代謝状態にある細胞を意味しうる。いくつかの態様において、Ｍ．ｔｂ細胞の９０％、９５％、９８％、９９％または９９．９％より多くが、あらかじめ決定された状態にある。
【０００５】
該ワクチンを、結核感染を防止するかまたは除去し、そして／または再活性化を防止する多くの他のワクチン接種戦略とともに用いてもよい。すでにＢＣＧまたは別のサブユニットＴＢ免疫刺激剤を投与されている患者において、ＢＣＧを置換するために、そして／またはＢＣＧのブースターとして、該ワクチンを用いてもよい。該ワクチンを予防的または療法的戦略のいずれにおいて用いてもよい。
【０００６】
特定の代謝状態を誘導するために適した刺激には、限定されるわけではないが、酸素濃度変化、一酸化炭素、栄養素入手可能性、一酸化窒素の存在、抗生物質の存在、鉄の入手可能性、ｐＨ変化、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニスト、集団密度、および／または振盪などの物理的刺激が含まれる。
【０００７】
照射前に、桿菌にｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで適切な刺激を提供してもよい。
いくつかの態様において、マイコバクテリウム属種細胞の１００％が不活性化される。被験体がヒトである場合、好ましくはマイコバクテリウム属種細胞の１００％が不活性化される。
【０００８】
いくつかの態様において、マイコバクテリウム属種は、照射で不活性化される。好ましくは、照射はガンマ線照射であるが、ｘ線およびマイクロ波を含む、他のタイプの照射が使用可能である。
【０００９】
いくつかの態様において、マイコバクテリウム属種は、塩を通じた浸透圧または乾燥プロセスで不活性化される。
医薬組成物には、場合によって、宿主における免疫反応を増進させるアジュバントが含まれてもよい。
【００１０】
医薬組成物には、場合によって、薬学的に許容されうるキャリアーが含まれてもよく、または凍結乾燥されて提供されてもよい。
いくつかの態様において、医薬組成物は宿主への鼻内送達のために配合されている。
【００１１】
さらに、医薬組成物は、エアロゾルまたはスプレーパッケージとして提供される。
１つの態様において、本発明は、哺乳動物宿主への鼻内送達または肺内送達のために配合され、そして宿主、例えばヒトに送達された際、免疫学的に防御する用量を与える、ガンマ線照射マイコバクテリウム属種を含む、医薬組成物を提供する。
【００１２】
別の側面において、本発明は、ＴＢに対して哺乳動物にワクチン接種する方法を提供する。該方法には、哺乳動物に、不活性化マイコバクテリウム属種を含む組成物を投与する工程が含まれる。好ましいワクチン接種は鼻内または肺内である。好ましくは、組成物には、宿主に送達した際、免疫学的に防御する用量が含まれる。
【００１３】
別の側面において、本発明は、別の抗原の送達を促進する、免疫刺激剤を提供する。
１つの側面において、本発明は、不活性化マイコバクテリウム属種を含む医薬組成物であって、哺乳動物宿主への鼻内送達、粘膜送達または肺内送達のために配合され、そして宿主に送達された際、免疫学的に防御する用量を含む、前記組成物を提供する。
【００１４】
該方法で使用するのに適したマイコバクテリウム属種には、例えば結核菌（Ｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、Ｍ．マリナム（Ｍ．  ｍａｒｉｎｕｍ）、Ｍ．ボビス（Ｍ  ｂｏｖｉｓ）、Ｍ．アフリカヌム（Ｍ．  ａｆｒｉｃａｎｕｍ）、またはＭ．ミクロッティ（Ｍ．  ｍｉｃｒｏｔｔｉ）が含まれる。いくつかの態様において、不活性化マイコバクテリウム属種細胞は、死細胞または細胞溶解物である。被験体がヒトである場合、好ましくはマイコバクテリウム属種細胞の１００％が不活性化される。
【００１５】
該方法で使用するための医薬組成物には、場合によって、宿主における防御免疫反応を増進するアジュバントが含まれてもよい。
該方法で使用するための医薬組成物には、場合によって、薬学的に許容されうるキャリアーが含まれてもよく、または凍結乾燥されて提供されてもよい。
【００１６】
いくつかの態様において、該方法で使用するための医薬組成物は宿主への鼻内送達のために配合されている。
さらに、該方法で使用するための医薬組成物は、エアロゾルまたはスプレーパッケージとして提供される。
【００１７】
いくつかの態様において、医薬組成物は、鼻送達または肺送達のために設定されたデバイスを通じて送達される。
さらにさらなる側面において、本発明は、マイコバクテリウム属での感染を防止するか、またはマイコバクテリウム属感染を治療するためのワクチンを調製するための方法であって、哺乳動物宿主への鼻内送達または肺送達のための不活性化マイコバクテリウム属種の免疫学的に防御する用量を配合する工程を含む、前記方法を提供する。
【００１８】
いくつかの態様において、該方法には、結核症の非ヒト動物モデルにおいてワクチンを試験する工程が含まれる。動物モデルは、例えば、マウス、モルモット、ウサギ、ウシ、または非ヒト霊長類であってもよい。
【００１９】
本発明の利点は、とりわけ、本明細書に開示するワクチンが、宿主内で天然に見られる桿菌の生活環を通じた不均一な状態を模倣し、そして不活性化桿菌の多数の状態を用いて免疫系を提供することである。
【００２０】
別に定義しない限り、本明細書に用いるすべての技術的および科学的用語は、本発明が属する技術分野の一般的な当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載するものと類似であるかまたは同等の方法および材料を、本発明の実施または試験に用いてもよいが、適切な方法および材料を以下に記載する。本明細書に言及するすべての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、その全体が本明細書に援用される。矛盾が生じる場合、定義を含めて本明細書が統制するであろう。さらに、材料、方法、および実施例は例示のみであり、そして限定を意図されない。
【００２１】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および請求項から明らかであろう。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本明細書に提供するのは、とりわけ、予防的ワクチンまたは療法的ワクチンとして有用な多様な組成物である。
単数または複数の定義される状態にあるマイコバクテリウムに基づくワクチン
１以上の定義された代謝状態にある、１以上の不活性化マイコバクテリウム属種を用いて、本発明記載のワクチンを調製する。次いで、マイコバクテリウム属種を被験体への送達のために配合してもよい。理論によって束縛されることは望ましくないが、定義される状態で調製されるマイコバクテリウム属種は、不均一な全細胞調製よりも利点を提供すると考えられる。対照的に、本発明記載の不活性化マイコバクテリウムの不均一な群は、マイコバクテリウム抗原の実質的なポートフォリオを提供して、免疫系が頑強な記憶免疫反応を誘発するのを補助する。不活性化された不均一なマイコバクテリウムは、被験体の肺実質または気道／鼻粘膜に送達された際、先に記載されたＴＢワクチンで観察されているよりもはるかにより強い免疫反応を誘発すると推定される。
【００２３】
定義されるマイコバクテリウム状態
一般的に、環境トリガー、抗生物質、マイコバクテリウム濃度、栄養素の入手可能性または酸素の存在によって、マイコバクテリウムの特定の代謝状態が誘導可能である。種または株の状態はまた、一酸化窒素、一酸化炭素およびｐＨに対する漸進的な変化によっても誘導されうる。マイコバクテリウムの特定の代謝状態は、外部刺激の結果としての検知および特定の遺伝子の転写と定義されうる。異なる外部刺激に対する結果として、遺伝子転写が生じる、十分な証拠がある。過去十年間に渡って増加してきたゲノムデータを踏まえて、多くの研究者が、Ｍ．ｔｂの適応機構を性質決定してきた。静止期および休眠期遺伝子発現は、ドミナント静止期タンパク質の性質決定を伴って、すでに１９９６年に性質決定されてきている［８］。１６ｋＤａアルファ−クリスタリン様低分子熱ショックタンパク質の遺伝子は、緩慢に増殖中のＭ．ｔｂ集団において、主に発現されることが示された。あるいは、Ｍ．ｔｂの栄養飢餓を調べる研究によって、Ｒｖ２５５７およびＲｖ２５５８などの遺伝子が誘導されることが示された［９］。より最近の研究はまた、Ｍ．ｔｂがマクロファージ感染中に一酸化炭素（ＣＯ）を検知する能力を裏付け、そして細菌が適応するためにＣＯに依存しうると認識している［１０］。
【００２４】
Ｍ．ｔｂは、持続感染を可能にし、そして宿主免疫系の複雑な動力学に拮抗する、生存機構を発展させてきている。Ｍ．ｔｂの病原体としての回復力は、大部分、環境要因に順応し、そして外部刺激を検知する能力による。例えば、Ｍ．ｔｂは、あるとしても最小限の複製を伴って、何年もヒト組織中に常在し、そして次いで、適切な条件下で、増殖状態に復帰することも可能である。研究によって、該細菌の異なる状態は、感受性であり、そして外部刺激、環境変化、化学薬品、および抗生物質によって誘発されるという考え方が裏付けられている［１１］［１２］［１３］。
【００２５】
Ｍ．ｔｂの多様な代謝状態は、遺伝子発現を改変して、細胞内および細胞外状態変化をもたらす、バイオセンサー機構によって誘発されると考えられる。特定の状態のマイコバクテリウム属種は、不活性化に感受性であり、そして未知の状態または不均一な状態にある細胞集団に比較して、免疫反応を誘発する際により有効であると推定される。本発明は、特定の代謝状態のマイコバクテリウムを提供する。
【００２６】
宿主内のＭ．ｔｂの発病が成功するためには、かなりの困難に順応し、そして適応する能力が要求される。宿主への感染に際して、桿菌は、肺内のマクロファージおよび樹状細胞内で生存し、そして次いで増殖することが可能である。マクロファージは、桿菌を貪食し、そしてリソソーム構成要素（例えば誘導性一酸化窒素シンターゼおよびＮＯＸ２）を放出する。続いて、マクロファージは、ファゴソーム内に酸素および窒素中間体を分泌して、該構成要素を殺し、そして消化する［１４］［１５］。Ｍ．ｔｂは、ファゴソーム内のｐＨの実質的な低下を防止する。こうして、桿菌は、複製不能となるであろう不適な低ｐＨ環境を回避する［１６］。実際、ファゴリソソーム内のＭ．ｔｂは、マクロファージがｐＨを５未満に低下させようとする試みを中和することによって、およそ６．４のより高いｐＨを維持するのを補助すると考えられる。
【００２７】
第二に、Ｍ．ｔｂは、播種を制御し、そして防止するため、宿主が桿菌を肉芽腫内に被包しようとする試みにもかかわらず、持続可能でなければならない。肉芽腫は、感染組織を取り巻く免疫細胞層である。肉芽腫の中央は、しばしば、死につつある組織およびともに融合しているマクロファージで構成される。肉芽腫の外層には、活性化マクロファージ、ＣＤ４およびＣＤ８細胞が含まれる。肉芽腫内に見られる桿菌は、しばしば、高い二酸化炭素レベルを伴う低酸素、加水分解酵素、および抗微生物化合物の環境にある。したがって、桿菌の状態は、肉芽腫内で生存し、そして数ヶ月またはさらに数年後であっても、細菌が再活性化される機会を提供する。
【００２８】
第三に、Ｍ．ｔｂはまた、状態および栄養が劣っている可能性もある、感染個体の他の臓器および組織においても見られうる。この桿菌集団の役割は、完全には理解されていないが、これらの桿菌が、持続および数年後の桿菌再活性化への寄与を補助する可能性もあると考えられる。
【００２９】
Ｍ．ｔｂのセンサーおよび生体力学は、現在、増加する注目を集めており、そして現在、さらなる研究によって、桿菌の洗練された機構が強調されている。実際、Ｍ．ｔｂのゲノムは、約１９０の転写制御因子をコードし、このうちいくつかが窮迫、例えば栄養枯渇、極端な温度、鉄枯渇、および酸化ストレスの状態に反応することが見出されてきている［１８］。哺乳動物宿主において、長期間生存するため、Ｍ．ｔｂは、その環境にしたがって、多様な環境条件に適応し、発現しまたは転写を阻害してきた［１９］。
【００３０】
特に、Ｍ．ｔｂが嫌気性および好気性状態に堪える能力に取り組む、多くの観察がなされてきている。結核症桿菌は、複製のため、酸素を必要とするが、桿菌は、極端に低濃度の酸素でも数年間持続可能である。好気性状態から嫌気性状態への迅速な変化によって、細菌の死が導かれるであろう；が、Ｏ２の漸進性減少は、細菌が次第にＯ２を含まない環境に適応することを可能にする。
【００３１】
Ｍ．ｔｂはまた、低濃度の鉄のｉｎ  ｖｉｖｏ状態に対して適応可能である［１２］。２２のＭ．ｔｂ遺伝子の研究によって、Ｍ．ｔｂ感染の初期にｗｈｉＢ３遺伝子が誘導されることが示された。該遺伝子は、おそらく、低い細菌密度と組み合わせて酸化および／または還元ストレスによって誘発される［２０］。研究によって、レドックス反応性４Ｆｅ−４Ｓクラスタータンパク質が、特異的にＯ２と反応し、そしてＮＯがＭ．ｔｂ  ＷｈｉＢ３遺伝子の発現を誘導することが裏付けられている［２１］。該複合体は、持続性および不顕性に関与すると考えられる生理学的に関連する宿主シグナルに反応する［２１］。さらに、ｗｈｉＢ３の誘導は、細胞内レドックス環境における変動に相関し、そして好気性呼吸および炭素利用に依存すると推測される。
【００３２】
ｗｈｉＢ３遺伝子の制御は複雑であるようであるが、ｉｎ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏのｗｈｉＢ３抑制パターンは、集団密度による制御と最もよく一致する［２０］［２１］。さらに、ｗｈｉＢ３の発現は、マウス肺および培養において、細菌密度と逆に相関することが見出された［２０］。マイコバクテリウムは、細菌の細胞−細胞コミュニケーションを通じて、マイコバクテリウム集団密度を検知する能力を有するとも考えられる。最終的に、この能力は、細菌が集団として適応するかまたは集団情報を獲得することを可能にする。したがって、多様な集団のｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏ状態のいずれかを提供することによって、マイコバクテリウムの異なる状態を誘導するのを補助することが可能である。
【００３３】
マイコバクテリウムの別の改変された状態は、細菌が２つの非複製状態に進入することを可能にする酸素枯渇中に起こる［２２］。非複製持続（ＮＲＰ１）の第一の段階は、酸素濃度が通常の飽和の１％に到達した際に生じる。この期は、微好気性期としてもまた知られ、培養内での光学密度増加によっても特徴付けられる。細胞肥大は、おそらく、通常、低酸素条件でのみ観察される、細胞壁の肥厚の結果であろう［１１］。この期はさらに、ＲＮＡ合成減少、細胞分裂停止、およびＤＮＡ合成の停止によっても特徴付けられ、マイコバクテリウムの酵素活性に対する多くの変化が伴う。酵素には、限定されるわけではないが、イソクエン酸リアーゼ、４グリシンデヒドロゲナーゼ４および硝酸レダクターゼが含まれる［１３］。この期はまた、静止期とも称されることも可能であり、そして通常、酸素限定、栄養素限定、二次代謝産物産生およびｐＨ変化によって引き起こされる、バッチ培養法における細胞密度関連増殖抑止を指す［２３］。概して、この期は、持続感染の多様な段階中に、Ｍ．ｔｂによって示される生理学的状態を模倣すると考えられる。
【００３４】
第二の、より酸素枯渇した状態は、非複製持続２（ＮＲＰ２）と称され、細胞の代謝状態が最低限であり、そして必要な機能のみが活性である際に生じる。この第二の非複製期または状態は、酸素レベルが通常飽和の０．０６％に達した際に起こる（嫌気性）。この状態は、光学密度のさらなる増加がなく、そして細胞肥大が停止することによって特徴付けられる。興味深いことに、細胞は、イソニアジドなどの抗生物質に耐性になり、そしてメトロニダゾールなどの嫌気性菌を治療する抗生物質に感受性になる。さらに、この状態の細菌は、長期間持続可能である。適切な条件に移されれば、細菌は、同調した様式で増殖を再開し、ＲＮＡ合成がまず起こり、その後、細胞分裂し、そして次いで、最終的にＤＮＡ複製が再開する。
【００３５】
ＮＲＰ２を誘導する１つの方法は、攪拌閉鎖培養チューブなどの閉鎖系内で酸素の緩慢な枯渇を引き起こすことである。最初に、培養は好気性であるが、利用可能な酸素が消費されるにつれて、環境は微好気性期にシフトし、そして次いで嫌気性期にシフトする。この緩慢な進行によって、桿菌が適応し、そして嫌気的に増殖することが不可能であっても、嫌気性条件を生き抜くことが可能になる。
【００３６】
Ｒｏｓｅｎｋｒａｎｄｓらは、多くのタンパク質が、例えばＲｖ０５６９が、５％酸素でレベル増加を示すが、１％酸素では増加を示さないことを示した［２４］。ペプチド分析を用いて調べたユニークなタンパク質の相対存在量は、ＮＲＰモデルを用いて予測されるよりもはるかに多い可能性もある。さらに、ペプチド分析を用いて調べたユニークなタンパク質の相対存在量は、ＮＲＰモデルにおいて予測されるよりもはるかに多い可能性もある。したがって、タンパク質濃度に基づいて、適切な定常状態を見出すと、照射マイコバクテリウム属種の適切な混合物を提供するのを補助することが明らかである。
【００３７】
本発明記載のＴＢワクチンは、好ましくは、粘膜および呼吸粘膜系における防御免疫反応を誘起し、そして好ましくは、多様な状態のマイコバクテリウムの多様な種で、呼吸上皮における抗原提示細胞を直接刺激する。
【００３８】
Ｍ．ｔｂの不活性化
一般的に、処理によって、細菌集団が宿主での増殖性感染を生じることが不可能なままとなる一方、同時に、対応する疾患誘発マイコバクテリウムに対する生産性反応を誘発するのに必要な抗原性構造を保持する限り、任意のタイプの不活性化法を用いてもよい。マイコバクテリウム調製物は、典型的には無能力化される。本発明にしたがって産生された、無能力化された細菌細胞の文脈において、「無能力化」によって、細菌細胞が、不可逆的な静菌状態にあることを意味する。細菌は、構造を保持し、そしてしたがって、例えば野生型細菌に関連する免疫原性、抗原性、および／または受容体−リガンド相互作用を保持する一方、複製不能である。いくつかの態様において、細菌は、細菌細胞内に感染性ファージが存在するため、複製不能である。
【００３９】
不活性化の好ましいタイプはガンマ線照射である。当該技術分野に知られる不活性化の他のタイプには、例えば、他のタイプの照射（紫外線照射を含む）、ホルマリン処理、および熱処理が含まれる。ヒト使用のための態様において、１００％の細胞が殺される。
【００４０】
理論によって束縛されることは望ましくないが、ガンマ線照射マイコバクテリウム属は、本発明の組成物および方法における使用に特に適していると推定される。ガンマ線照射された細菌は、安全であると見なされ、そして複製しないため、実験室において一般的に用いられる。にもかかわらず、多くの試験において、これらは、桿菌壁上の抗原によって誘発される反応を含めて、免疫防御反応を誘発することが示されてきている［２５］、［２６］、［２７］。さらに、ガンマ線照射マイコバクテリウムは、アポトーシスを経て、そして樹状細胞によって貪食される。樹状細胞は、マイコバクテリウム抗原をＴ細胞に提示し、Ｔ細胞はＣＤ４  Ｔｈ１およびＣＤ８細胞傷害性細胞を活性化する。ガンマ線照射Ｍ  ｔｂはまた、一酸化窒素放出を誘導可能であり［２５］、そして生存Ｍ  ｔｂに対するものと同様のＴｈ２反応を誘発可能である［２６］。１９６３年、Ｎｉｓｈｉｈａｒａらは、ガンマ線照射Ｍ  ｔｂをマウスに皮内注射し、そしてこれが、Ｍ  ｔｂのエアロゾル曝露に対して、皮内注射されたＢＣＧと同等に防御性であることを見出した［２８］。
【００４１】
生存Ｍ．ｔｂ感染に対する適応免疫反応は、他の感染に比較して遅れており、そしてこれによって、肺における桿菌集団は、感染の免疫前の期間中に顕著に増加することが可能になる［２９］。エアロゾル化または粘膜ワクチン配合物において、死んだ桿菌を用いることによって、増殖するマイコバクテリウムが存在せず、そして免疫反応は、細菌の細胞壁上の抗原に反応するために適切な時間を有するであろう。さらに、何千年にも渡る適応の試みを通じて、Ｍ  ｔｂは、初期抗原提示中、自然免疫反応を回避する多くの方法を見出してきた［３０］、［３１］、［３２、３３］。死んだマイコバクテリウムは、ヒト免疫系を逃れ、そして抗原提示成功を回避する方法を誘発する酵素を産生する可能性を持たない。
【００４２】
肺組織に対するワクチンのエアロゾル化送達または粘膜送達
好ましくは、望ましい状態のマイコバクテリウムが、肺における局所免疫反応を誘発するために用いられるであろう。肺は、ＴＢ感染の最初の部位であるため、ワクチンを肺系に局在化させることに集中するのは合理的であろう。呼吸免疫系においては、ある度合いの区画化が存在する。最近の証拠によって、肺リンパ球が、初期免疫反応を開始する際、局在化されたままであり、そして限定された数のＢ細胞およびＴ細胞のみが全身に遊走することが示唆されている［３４、３５］。ヒト肺リンパ解剖は、局所肺リンパ節から胸管に進入した細胞が、他の組織に到達する前に、肺動脈血中で、肺に戻ってくる点でユニークである。ある程度のリンパ球は、全身循環へと通過していく可能性もあるが、活性化Ｔ細胞は、血管内皮に付着し、そして肺に戻り、したがって、Ｔ細胞が感染病巣近くに維持される傾向がある［３６］。モルモットＴＢモデルにおいて、肺リンパ系が、肺および局所肺リンパ節に加えて、初期感染部位であることが観察された［３７］［３８、３９］。したがって、気道管腔および粘膜免疫細胞をターゲティングすることは、有効なワクチン接種戦略を開発するために重要な意味を持つ。さらに、気道管腔／粘膜送達ワクチンは、針の必要性を排除し、そして大流行に直面した際に、迅速なワクチン接種反応を可能にするなどの大きな利点を有するであろう。
【００４３】
ＢＣＧのエアロゾル送達または気管内送達を用いたいくつかの研究では、有効性は多様であり、霊長類［４０］、ウシ［４１］、モルモット［４２］、およびマウス［４３］［４４、４５、４６］における非経口接種に勝る防御があったものから、皮下経路に勝る利点がまったく見られないものまであった［４７］。他の研究によって、免疫反応が最初のＢＣＧ用量に依存することが示された［４８、４９］。組換えアデノウイルスに基づくワクチンを鼻内送達すると、Ｍ．ｔｂでの曝露に対して防御が提供された［３９、５０、５１、５２］。Ａｇ８５Ａを発現するアデノウイルスに基づくワクチン［５３、５４］、Ａｇ８５Ｂ−ＥＳＡＴ−６を発現する組換えストレプトコッカス・ゴルドニ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｇｏｒｄｏｎｉｉ）［５５］、または微粒子被包ＥＳＡＴ−６［５６］でマウスを鼻内免疫すると、ＩＦＮ−γ産生可能な抗原特異的ＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔ細胞が多数誘発された。ごく最近、ヘパリン結合性赤血球凝集素の鼻内送達が、ＢＣＧワクチン接種した新生マウスの防御を増進した［５７］。
【００４４】
組成物
免疫反応増進が望ましい、任意のマイコバクテリウム属種または株が、本発明の組成物および方法において使用可能である。あらかじめ定義された状態のマイコバクテリウム属を含む組成物が、例えば記載される方法を用いて、調製可能である。適切な種には、例えば、マイコバクテリウム・ボビス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓ）、マイコバクテリウム・アフリカヌム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｆｒｉｃａｎｕｍ）、マイコバクテリウム・ミクロッティ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍｉｃｒｏｔｔｉ）、および結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）を含むＭ  ｔｂコンプレックスのメンバーであるマイコバクテリウム属が含まれる。遺伝的に類似のマイコバクテリウムには、マイコバクテリウム・カネッティ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｃａｎｅｔｔｉｉ）およびマイコバクテリウム・マリヌム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍａｒｉｎｕｍ）が含まれる。対応する宿主種および治療しようとするマイコバクテリウム属関連疾患のタイプに合わせて、特定の種または種の組み合わせを選択する。ヒトにおいて疾患を引き起こす他のマイコバクテリウム属には、例えば、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、らい菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）、マイコバクテリウム・レプラムリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅｍｕｒｉｕｍ）、パラ結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ  ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、マイコバクテリウム・ウルセランス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｕｌｃｅｒａｎｓ）、マイコバクテリウム・スメグマチス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）、マイコバクテリウム・ゼノピ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｘｅｎｏｐｉ）、マイコバクテリウム・ケロネー（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｃｈｅｌｏｎｅｉ）、マイコバクテリウム・フォーチュイタム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ）、マイコバクテリウム・ファーシノゲネス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｆａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓ）、マイコバクテリウム・フラブム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｆｌａｖｕｍ）、マイコバクテリウム・ヘモフィツム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｈａｅｍｏｐｈｉｔｕｍ）、マイコバクテリウム・カンサシ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋａｎｓａｓｉｉ）、マイコバクテリウム・フレイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｈｌｅｉ）、マイコバクテリウム・スクロフラセウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｃｒｏｆｕｌａｃｅｕｍ）、マイコバクテリウム・セネガレンス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｅｎｅｇａｌｅｎｓｅ）、マイコバクテリウム・シミエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｉｍｉａｅ）、マイコバクテリウム・サーモレジスチブル（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｈｅｒｍｏｒｅｓｉｓｔｉｂｌｅ）、およびマイコバクテリウム・ゼノピ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｘｅｎｏｐｉ）が含まれる。
【００４５】
医薬組成物中で用いられるべきマイコバクテリウムには、全細胞または細胞の一部、例えば細胞溶解物が含まれてもよい。例えば、適切な構成要素には、ガンマ線照射全細胞溶解物、ガンマ線照射培養ろ過タンパク質、ガンマ線照射細胞壁分画、ガンマ線照射細胞膜分画、ガンマ線照射細胞質ゾル分画、ガンマ線照射可溶性細胞壁タンパク質、およびガンマ線照射可溶性タンパク質プールが含まれる。
【００４６】
医薬組成物中で用いられるべきマイコバクテリウムには、１以上の状態のマイコバクテリウムが含まれてもよく、全細胞または細胞の一部、例えば細胞溶解物であってもよい。
医薬組成物の調製
単数または複数の望ましい状態の不活性化細胞、あるいは細胞溶解物を、薬学的に許容されうるキャリアーと合わせて、医薬組成物を形成することによって、宿主に投与するための死細胞を調製する。キャリアーは、例えば、生理学的生理食塩水、ミネラルオイル、植物油、水性カルボキシメチルセルロースナトリウム、または水性ポリビニルピロリドンであってもよい。いくつかの態様において、キャリアーは、ヒト被験体に療法的に投与するために十分に純粋である。当業者は、例えば等張性ビヒクル、例えば塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、または乳酸リンゲル注射液を用いた適切な溶液を調製することが十分に可能である。保存剤、安定化剤、緩衝剤、酸化防止剤および／または他の添加剤を、必要に応じて含めてもよい。
【００４７】
例えばＭ．ボビスＢＣＧの投与に関連するプロトコル、配合物、投薬および臨床実施に慣れている当業者は、さらに、本発明の医薬組成物を使用するために、これらのプロトコルを容易に適応させることも可能である。ワクチンを、投薬配合物に適合した方式で、そして療法的に有効でありそして免疫原性であろう量で、投与する。投与すべき量は、治療しようとする被験体に応じ、例えば個体免疫系が免疫反応を開始する能力、および望ましい防御の度合いに応じる。適切な投薬量範囲は、ワクチン接種あたり活性成分数百マイクログラムの桁であり、好ましい範囲は、約０．１μｇ〜１０００ｍｇである。最初の投与およびブースター投与のための適切な措置もまた多様であるが、典型的には、最初の投与の後、接種または他の投与が続く。したがって、ワクチンを単回用量で、または複数の用量で投与してもよい。１つの態様において、ワクチンを約１〜１２ヶ月空けて２回の用量で投与してもよい。被験体に任意の時点でワクチン接種してもよいが、好ましくは、予期されるストレス期間、例えば輸送または他の処理の直前（最適には約１０日間から２週間）に投与する。
【００４８】
治療しようとする状態に応じて、組成物を単独で、あるいは他の治療または標準的ＢＣＧワクチンと組み合わせて、同時にまたは連続してのいずれかで投与してもよい。ＢＣＧでのワクチン接種後に組成物を投与して、そしてしたがって、該組成物がブースト結核症ワクチンとして作用してもよい。さらに、死桿菌全体の最初の皮下接種後、エアロゾル化、鼻内または粘膜ブーストで投与してもよい。
【００４９】
死細胞を微粒子またはマイクロカプセル内に取り込んで、被験体動物への抗原材料の曝露を延長し、そしてしたがって、長期間、感染に対して動物を防御することも可能である。当該技術分野において慣用的な技術を用いて、微粒子およびカプセルを多様な周知の不活性生体適合性材料から形成してもよい。適切なマトリックス材料には、例えば天然または合成ポリマー、例えばアルギネート、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸／グリコール酸）、ポリ（カプロラクトン）、ポリカーボネート、ポリアミド、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリシアノアクリレート、ポリウレタン、エチレン−酢酸ビニルコポリマー、ポリスチレン、塩化ポリビニル、フッ化ポリビニル、ポリ（ビニルイミダゾール）、クロロスルホン化ポリオレフィン、酸化ポリエチレン、ならびに特に寒天およびポリアクリレートが含まれる。本明細書において使用可能な、微粒子内に材料を取り込むかまたは被包するための技術の例は、Ｓｐａｒｋｓ［５８］、Ｋｙｄｏｎｉｕｓ［５９］およびＥｌ−Ｎｏｋａｌｙ［６０］に記載され、これらの内容は各々、本明細書に援用される。
【００５０】
不活性化マイコバクテリウムは、水または生理食塩水内に懸濁される小粒子中に含有されてもよい。ワクチン配合物はまた、場合によるアジュバント、抗細菌剤、または当該技術分野に慣用的であるような他の薬学的活性剤も含有してもよい。アジュバントには、限定されるわけではないが、塩、エマルジョン（油／水組成物を含む）、サポニン、リポソーム配合物、ウイルス粒子、ポリペプチド、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰＳ）、核酸に基づく化合物または特定の抗原を利用する他の配合物が含まれる。適切なアジュバントには、例えば、植物油、ミョウバン、フロイントの不完全アジュバント、またはフロイントの不完全アジュバントが含まれ、油およびフロイントの不完全アジュバントが特に好ましい。他のアジュバントには、水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウム（ミョウバン）、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）、糖の合成ポリマー（ＣＡＲＢＯＰＯＬ（登録商標））、熱処理によるワクチン中のタンパク質の凝集物、アルブミンに対するペプシン処理（Ｆａｂ）抗体で再活性化されたことによる凝集物、Ｃ．パルブム（Ｃ．ｐａｒｖｕｍ）などの細菌細胞またはグラム陰性細菌の内毒素もしくはリポ多糖構成要素を含む混合物、生理学的に許容されうる油ビヒクル中のエマルジョン、例えばモノオレイン酸マンニド（Ａｒａｃｅｌ  Ａ）、またはブロック置換物として用いられるパーフルオロカーボン２０パーセント溶液を含むエマルジョン（Ｆｌｕｏｓｏｌ−ＤＡ）が含まれ、これらもまた使用可能である。
【００５１】
不活性化マイコバクテリウムは、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）不安定毒素（ＬＴ）およびコレラ毒素（ＣＴ）などの粘膜細菌毒素アジュバント中に、またはＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）中に含有されてもよい［６１］。ＬＰＳの誘導体でありそしてより毒性でない型である、別のありうる粘膜アジュバント、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）をリポソームと組み合わせると、粘膜免疫防御反応が誘導されることが見出された［６２］。鼻ワクチン接種のために設計された１つの新規アジュバント、ユーロシン（Ｅｕｒｏｃｉｎｅ）Ｌ３ＴＭは、実験動物モデルにおいて、鼻内投与後、ＴＢに対する長期持続免疫を誘導することが示されてきている［６３、６４、６５］。アジュバント技術は、内因性脂質および薬学的に許容される脂質の組み合わせに基づく非毒性薬学的配合物からなる。ワクチンには、場合によって、サイトカインまたは合成ＩＦＮ−γ誘導剤、例えばポリＩ：Ｃのみまたは上述のアジュバントとの組み合わせなどの、さらなる免疫調節物質が含まれてもよい。
【００５２】
さらなる他のアジュバントには、生体適合性マトリックス材料の微粒子またはビーズが含まれる。微粒子は、当該技術分野で慣用的であるような任意の生体適合性マトリックス材料で構成されてもよく、これには限定されるわけではないが、寒天およびポリアクリレートが含まれる。当業者は、他のキャリアーまたはアジュバントもまた使用可能であることを認識するであろう。例えば、使用可能なキトサンまたは任意の生体付着性送達系がＷｅｂｂおよびＷｉｎｋｅｌｓｔｅｉｎ［６６］に記載され、その内容は本明細書に援用される。
【００５３】
組成物には、場合によって、エアロゾル化用量の一部として、ビタミンＤおよび／またはその代謝産物、類似体またはその誘導体が含まれる。当業者は、ビタミンＤがｔｏｌｌ様受容体の誘発を補助しうることを認識するであろう。
【００５４】
不活性化マイコバクテリウムを含有する医薬組成物は、好ましくは、当該技術分野に知られる方法を用いた、鼻内送達または肺内送達のために配合される。アジュバントと組み合わされた照射マイコバクテリウムの配合物は、好ましくは、ワクチン接種と関連する炎症などの副作用を最小限にするように選択されるか、または配合物の安定性を改善することも可能である。アジュバントはまた、免疫刺激剤としてまたはデポとしての役割も有する可能性もある。深い肺浸透のため、粒子サイズは、好ましくは１〜４ミクロンの間である。
【００５５】
いくつかの態様において、不活性化マイコバクテリウムは、ネブライザーの改良によって、またはコンパクト・ポータブル・デバイス、用量計測吸入装置（ＭＤＩ）および乾燥粉末吸入装置（ＤＰＩ）の３つのタイプを通じて送達される。鼻内送達を、鼻スプレー、点滴器または鼻計測薬剤送達デバイスを通じて行ってもよい。計測用量吸入装置を通じて、不活性マイコバクテリウムを送達してもよい。典型的には、放出した用量の１０〜２０％のみが肺に沈着する。スプレーが高速および巨大粒子サイズのものであれば、およそ５０〜８０％の薬剤エアロゾルが中咽頭領域に衝突する。
【００５６】
マイコバクテリウムは、限定されるわけではないが、糖キャリアー系などの乾燥粉末配合物中に含有されてもよい。糖キャリアー系には、ラクトース、マンニトール、および／またはグルコースが含まれてもよい。ラクトース、マンニトール、およびグルコースはすべて、キャリアーとしてＦＤＡに認可される。また、典型的には直径５０〜１００マイクロメートルであるラクトース一水和物などのより大きな糖粒子もあり、こうした粒子は鼻−中咽頭に留まるが、呼吸樹を通じて、不活性化桿菌が肺胞内に移動するのを可能にする［６７］。
【００５７】
望ましい場合、マイコバクテリウムは、リポソーム配合物中に含有されてもよい。リポソームは、肺胞に到達する他の吸入粒子と同様、マクロファージによって一掃される。リポソームリン脂質のプロセシング、取り込みおよびリサイクリングは、肺胞ＩＩ型細胞を通じて、内因性界面活性剤と同じ機構を通じて起こる。
【００５８】
専門用語
結核症を防止するかまたは治療するため、上述の照射マイコバクテリウムを含有する医薬組成物を、適切な個体に投与する。本明細書において、「結核症」への言及には、肺桿菌および肺外桿菌への言及が含まれる。用語「個体」、「被験体」、「宿主」、および「患者」は、本明細書において、交換可能に用いられ、そして本発明の療法ワクチンを用いた治療を受け入れられる細菌感染を有し、そして治療または療法が望ましい、任意の被験体が含まれる。マイコバクテリウムによる感染に感受性である任意の哺乳動物宿主のために、医薬組成物を調製してもよい。適切な哺乳動物宿主には、例えば農場動物、例えばブタおよびウシが含まれる。
【００５９】
用語「治療」、「治療すること」、「治療する」等は、本明細書において、一般的に、望ましい薬理学的効果および／または生理学的効果を得ることを指す。効果は、疾患またはその症状を完全にまたは部分的に防止する観点から、予防的であってもよく、そして／または疾患および／または疾患に起因する不都合な影響に対する部分的または完全な安定化または治癒の観点から、療法的であってもよい。「治療」は、本明細書において、被験体、特に哺乳動物被験体、より詳細にはヒトにおける疾患のいかなる治療も含み、そしてこれには：（ａ）疾患または症状に対する素因を有しうるが、疾患または症状を有するとはいまだ診断されていない被験体において、疾患または症状が生じることを防止するか；（ｂ）疾患症状を阻害する、すなわち疾患の発展を抑止するか；または疾患症状を軽減する、すなわち疾患または症状の退行を引き起こすか、（ｃ）不顕性ＴＢにおいて疾患の再活性化を防止する、すなわち桿菌が休眠期から増殖期に推移するのを防止することが含まれる。したがって、投与は好ましくは、「予防的有効量」または「療法的有効量」（場合によって、予防は療法と見なされうるが）であり、これは個体に利益を示すのに十分である。投与の実際の量、ならびに投与速度および時間経過は、治療中の疾患の性質および重症度に応じるであろう。治療の処方、例えば投薬量等に関する決定は、一般開業医および他の医師または獣医師の責任の範囲内である。
【００６０】
ワクチンで治療された被験体は、典型的には、感染細菌に対する防御免疫を有するかまたは発展させるであろう。用語「防御免疫」は、哺乳動物に投与されるワクチン、免疫原性組成物または免疫スケジュールが、病原性細菌によって引き起こされる疾患を防止するか、その発展を遅延させるか、またはその重症度を減少させるか、あるいは疾患の症状を減少させるかまたはまったく除去する免疫反応を誘導することを意味する。「感染細菌」によって、宿主において感染を確立し、そしてその結果、疾患または望ましくない症状と関連しうる、細菌を意味する。一般的に、感染細菌は、病原性細菌である。
【００６１】
句「免疫反応を誘発するのに十分な量」は、特定のワクチン調製物または免疫原性組成物の投与前および投与後に測定された免疫反応指標の間に、検出可能な相違があることを意味する。ワクチン試験を投与された動物を、皮内ＢＣＧを投与された動物に対して試験する。最後のワクチン接種の数週後、動物をエアロゾル病原性Ｍ  ｔｂに曝露する。病原性Ｍ．ｔｂ曝露の数週後、臨床的および分子的免疫反応を評価する。
【００６２】
用語「状態」、「代謝状態」、「改変された状態」、または「異なる状態」は、交換可能に使用可能であり、そしてタンパク質組成または遺伝子発現において検出可能な相違がある、マイコバクテリウムの異なる代謝状態を指す。状態は、細菌が外部刺激に反応し、そしてその結果、細菌が異なる抗原を提示するか、または特定の遺伝子を発現するかまたはその転写を開始しうるものと定義される。
【００６３】
結核症ワクチンのスクリーニングおよび開発
マイコバクテリウム細胞集団、またはその分画（上述のようなもの）を多様な不活性化措置に供し、処理細胞または細胞分画を含有する候補の医薬組成物を調製し、そして上述の方法を用いて、処理組成物が免疫反応を誘発し、そして／または宿主においてマイコバクテリウム感染に対する有効な曝露を開始する能力を試験することによって、試験ワクチンをスクリーニングするかまたは最適化することも可能である。
【００６４】
用語「免疫原性細菌組成物」、「免疫原性組成物」および「ワクチン」は、本明細書において、交換可能に用いられ、調製物中に存在するエピトープに対する免疫反応を誘発するのに十分な量で投与された際、被験体において細胞性および／または体液性免疫反応を誘発可能な調製物を意味する。
【００６５】
用語「状態」または「期」は、本明細書において交換可能に用いられ、そして外部刺激または環境に反応したマイコバクテリウムの代謝状態を指す。
組換え抗原を発現する細菌での免疫後、試験動物の免疫反応を監視することによって、マイコバクテリウム細胞または抽出調製物によって発現される抗原性分子の免疫強度を決定してもよい。試験動物には、マウス、モルモット、ウサギ、ウシ、非ヒト霊長類、および最終的にヒト被験体が含まれてもよい。
【００６６】
多様なアプローチ、例えば：（ａ）Ｔ細胞関連サイトカイン発現、（ｂ）血漿サイトカイン産生、（ｃ）Ｔ細胞増殖、細胞傷害性、サイトカインプロファイル、（ｄ）Ｔ細胞抗原レパートリー、（ｅ）Ｔ細胞制御プロファイル、（ｆ）ｍＲＮＡプロファイル、（ｇ）自然免疫プロファイル、（ｈ）抗体プロファイル、（ｉ）遺伝学および（ｊ）免疫動物における疾患からの防御および／または感染性症状の緩和によって、試験被験体の免疫反応をさらに分析してもよい。
【００６７】
細菌組成物および該組成物の使用法
別の側面において、本発明は、結核症に対するワクチン、そしてより詳細には、被験体への経口送達、直腸送達または膣送達のために配合された不活性化マイコバクテリウム属種を用いたワクチンに関する。
【００６８】
粘膜ワクチン接種および療法は、免疫学の次のフロンティアを代表する。腸関連リンパ組織およびその免疫系は、マイコバクテリウム属種およびまたはブルセラ属種などの他の細菌に対する治療またはワクチン接種に関して、かなりの課題を示す。マイコバクテリウム属種およびブルセラ属種は、ヒトと共進化してきており、そしてヒトおよび家畜に影響を及ぼし続けている、弾力的な細胞内細菌である。同様に、ウシにおいて、ブルセラ症およびヨーネ病は、家畜健康に重大な問題を示し、そして農業に重大な財政的負荷を与える。これらの２つの疾患に対する現在のワクチンは、その効果が疑わしく、そして安全上の懸念を生じている。さらに、クローン病には、ワクチン代替物がないままである。腸関連リンパ組織内で免疫反応を誘導し、そしてこれらの細胞内病原体によって引き起こされる疾患蔓延を減少させるための新規アプローチが必要である。
【００６９】
本発明は、細菌性疾患、例えば不活性化マイコバクテリウム種および不活性化細菌によって引き起こされる疾患を防止し、そして／または治療するための組成物を提供する。
組成物をいくつかのワクチン接種戦略で用いてもよく：予防的に、細菌感染を防止するために感染前に投与してもよいし、そして曝露後に投与される場合には、療法的に投与して、排除するかまたは不顕性に封じ込め、そして再活性化を防止してもよい。組成物はまた、細菌、ウイルスまたは真菌感染、あるいは自己免疫疾患のための治療として用いてもよい。本発明の組成物を用いたワクチンを用いて、現在のワクチンを置換してもよいし、そして／または被験体において、他のワクチンのブースターとして用いてもよい。
【００７０】
組成物を経口送達、直腸送達または膣送達のために配合してもよい。やはり本発明に含まれるのは、粘膜組織、例えば腸粘膜リンパ組織への曝露を最大限にするため、抗原性物質の送達速度を調節するための浸透圧送達系および他の配合物送達系である。
【００７１】
配合物を、ひとまとまりとして、または部分的構成要素としてのいずれで、細菌またはウイルス構成要素を含有する組成物の一部として用いてもよい。腸または生殖器系の粘膜表面への照射マイコバクテリウムの局所送達は、アジュバントおよび／または療法剤として作用してもよい。
【００７２】
１つの側面において、本発明は、１以上のマイコバクテリウム種を含む医薬組成物であって、哺乳動物宿主への膣送達、直腸送達、または経口送達のために配合され、そして宿主に送達された際に免疫学的に防御する用量を含む、前記医薬組成物を提供する。
【００７３】
１つの側面において、本発明は、哺乳動物に対する、ヨーネ病、炎症性腸疾患またはクローン病などのウシにおける自己免疫疾患のためのワクチン接種または療法剤を提供する。
【００７４】
組成物には、照射および／または不活性化マイコバクテリウム種が含まれてもよい。
適切なマイコバクテリウム属種には、例えばマイコバクテリウム・アビウム下位種パラツベルキュロシス（ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、結核菌、Ｍ．マリヌム、Ｍ．ボビス、Ｍ．アフリカヌム、またはＭ．ミクロッティが含まれる。いくつかの態様において、不活性化マイコバクテリウム属種細胞は、死細胞または細胞溶解物である。
【００７５】
一般的に、結核菌コンプレックスのメンバーである任意のマイコバクテリウム属種または株が、本発明の組成物および方法において使用可能である。対応する宿主種および治療しようとするマイコバクテリウム属関連疾患のタイプに合わせて、特定の種または種の組み合わせを選択する。したがって、ヒトにおいて疾患を引き起こすマイコバクテリウム属には、例えば、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラレ、らい菌、マイコバクテリウム・レプラムリウム、パラ結核菌、マイコバクテリウム・ウルセランス、マイコバクテリウム・スメグマチス、マイコバクテリウム・ゼノピ、マイコバクテリウム・ケロネー、マイコバクテリウム・フォーチュイタム、マイコバクテリウム・ファーシノゲネス、マイコバクテリウム・フラブム、マイコバクテリウム・ヘモフィツム、マイコバクテリウム・カンサシ、マイコバクテリウム・フレイ、マイコバクテリウム・スクロフラセウム、マイコバクテリウム・セネガレンス、マイコバクテリウム・シミエ、マイコバクテリウム・サーモレジスチブル、およびマイコバクテリウム・ゼノピが含まれる。マイコバクテリウム属、マイコバクテリウム・アビウム、マイコバクテリウム・ボビス、マイコバクテリウム・ジフテリア（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ）、マイコバクテリウム・イントラセルラレ、らい菌、マイコバクテリウム・レプラムリウム、マイコバクテリウム・フレイ、マイコバクテリウム・スメグマチス、結核菌。Ｍ  ｔｂコンプレックスのメンバーである適切なマイコバクテリウム属種には：マイコバクテリウム・ボビス、マイコバクテリウム・アフリカヌム、マイコバクテリウム・ミクロッティ、および結核菌が含まれる。遺伝的に類似のマイコバクテリウムには、マイコバクテリウム・カネッティおよびマイコバクテリウム・マリヌムが含まれる。
【００７６】
さらなる適切な細菌には、例えば、アセトバクター・アウランチウス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ａｕｒａｎｔｉｕｓ）、アシネトバクター・バウマンニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、アクチノミセス・イスラエリ（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｉｓｒａｅｌｉｉ）、アグロバクテリウム・ラジオバクター（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｒａｄｉｏｂａｃｔｅｒ）、アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）、アゾリゾビウム・カウリノダンス（Ａｚｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｃａｕｌｉｎｏｄａｎｓ）、アゾトバクター・ビネランディ（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ  ｖｉｎｅｌａｎｄｉｉ）、アナプラズマ属（Ａｎａｐｌａｓｍａ）、アナプラズマ・ファゴサイトフィルム（Ａｎａｐｌａｓｍａ  ｐｈａｇｏｃｙｔｏｐｈｉｌｕｍ）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、バチルス・ブレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）、バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ）、バチルス・フシフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、バチルス・ミコイデス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｙｃｏｉｄｅｓ）、バチルス・ステアロテルモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、バクテロイデス・フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ）、バクテロイデス・ジンジバリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）、バクテロイデス・メラニノゲニクス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ）、バルトネラ属（Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ）、バルトネラ・ヘンセレ（Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ  ｈｅｎｓｅｌａｅ）、バルトネラ・クィンタナ（Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ  ｑｕｉｎｔａｎａ）、ボルデテラ属（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）、ボルデテラ・ブロンキセプティカ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、ボレリア・ブルグドフェリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、ブルセラ属（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）、ウシ流産菌（Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ）、ブルセラ・メリテンシス（Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ）、ブルセラ・スイス（Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｓｕｉｓ）、バークホルデリア属（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）、バークホルデリア・マレイ（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍａｌｌｅｉ）、バークホルデリア・シュードマレイ（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ）、バークホルデリア・セパシア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ）、カリマトバクテリウム・グラヌロマティス（Ｃａｌｙｍｍａｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｉｓ）、カンピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、カンピロバクター・コリ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｃｏｌｉ）、カンピロバクター・フィータス（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｆｅｔｕｓ）、カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）、カンピロバクター・ピロリ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）、クラミジア属（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）、トラコーマクラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、クラミドフィラ属（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ）、肺炎クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、オウム病クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｓｉｔｔａｃｉ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）、コリネバクテリウム属（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ）、コリネバクテリウム・フシフォルメ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｅ）、Ｑ熱コクシエラ（Ｃｏｘｉｅｌｌａ  ｂｕｒｎｅｔｉｉ）、エーリキア・シャフェンシス（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｃｈａｆｆｅｅｎｓｉｓ）、エンテロバクター・クロアカ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａｅ）、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、エンテロコッカス・アビウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ａｖｉｕｍ）、エンテロコッカス・デュランス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｕｒａｎｓ）、フェカリス菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、フェシウム菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ）、エンテロコッカス・ガリナルム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｇａｌｌｌｉｎａｒｕｍ）、エンテロコッカス・マロラツス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｍａｌｏｒａｔｕｓ）、大腸菌、野兎病菌（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）、フゾバクテリウム・ヌクレアツム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）、ガルドネレラ・バジナリス（Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、ヘモフィルス属（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ヘモフィルス・デュクレイ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ）、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、パラインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、ヘモフィルス・ペルツシス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、ヘモフィルス・バジナリス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）、クレブシエラ・ニューモニア（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、アシドフィルス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、カゼイ菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）、レジオネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌ��ｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、メタノバクテリウム・エクストロクエンス（Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｘｔｒｏｑｕｅｎｓ）、ミクロバクテリウム・マルチフォルメ（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｅ）、ミクロコッカス・ルテウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｕｔｅｕｓ）、モラクセラ・カタリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）、マイコプラズマ・フェルメンタンス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ）、マイコプラズマ・ジェニタリウム（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ）、マイコプラズマ・ホミニス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｏｍｉｎｉｓ）、マイコプラズマ・ペネトランス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｅｎｅｔｒａｎｓ）、肺炎マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、ラクトバチルス・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ナイセリア属（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）、パスツレラ属（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、野兎病菌（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）、ペプトストレプトコッカス属（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、リゾビウム・ラジオバクター（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｒａｄｉｏｂａｃｔｅｒ）、リケッチア属（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ）、発疹チフスリケッチア（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｐｒｏｗａｚｅｋｉｉ）、リケッチア・ピシタッシ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｐｓｉｔｔａｃｉ）、リケッチア・クィンタナ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｑｕｉｎｔａｎａ）、リケッチア・リケッチィ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ）、リケッチア・トラコーマ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｅ）、ロシャリメア属（Ｒｏｃｈａｌｉｍａｅａ）、ロシャリメア・ヘンセラ（Ｒｏｃｈａｌｉｍａｅａ  ｈｅｎｓｅｌａｅ）、ロシャリメア・クィンタナ（Ｒｏｃｈａｌｉｍａｅａ  ｑｕｉｎｔａｎａ）、ロティア・デントカリオサ（Ｒｏｔｈｉａ  ｄｅｎｔｏｃａｒｉｏｓａ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、サルモネラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）、チフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、セラチア・マルセセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、志賀赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、ステノトロフォモナス・マルトフィリア（Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ）、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス・アガラクチエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）、ストレプトコッカス・アビウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｖｉｕｍ）、ストレプトコッカス・ボビス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｂｏｖｉｓ）、ストレプトコッカス・クリセツス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｒｉｃｅｔｕｓ）、ファシウム菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｃｅｉｕｍ）、フェカリス菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、ストレプトコッカス・フェルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｆｅｒｕｓ）、ストレプトコッカス・ガリナルム（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｇａｌｌｉｎａｒｕｍ）、ストレプトコッカス・ラクティス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）、ストレプトコッカス・ミチオール（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｉｔｉｏｒ）、ストレプトコッカス・ミチス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｉｔｉｓ）、ストレプトコッカス・ムタンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｕｔａｎｓ）、ストレプトコッカス・オラリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｏｒａｌｉｓ）、肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトコッカス・ラツス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｒａｔｔｕｓ）、ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、ストレプトコッカス・サンギス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｎｇｕｉｓ）、ストレプトコッカス・ソブリヌス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｏｂｒｉｎｕｓ）、トレポネーマ属（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ）、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ）、トレポネーマ・デンティコラ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｄｅｎｔｉｃｏｌａ）、ビブリオ属（Ｖｉｂｒｉｏ）、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａ）、ビブリオ・コーマ（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｏｍｍａ）、腸炎ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ  ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）、ビブリオ・バルニフィクス（Ｖｉｂｒｉｏ  ｖｕｌｎｉｆｉｃｕｓ）、ウォルバシア属（Ｗｏｌｂａｃｈｉａ）、エルシニア属（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、エルシニア・エンテロコリティカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）、エルシニア・ペスチス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）、エルシニア・シュード
ツベルキュロシス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）が含まれる。
【００７７】
いくつかの態様において、細菌は、死細胞または細胞溶解物である。
いくつかの態様において、細菌のある程度は不活性化されるかまたは弱毒化される。
いくつかの態様において、細菌は照射で不活性化される。好ましくは、照射はガンマ線照射であるが、ｘ線およびマイクロ波を含む他のタイプの照射を用いてもよい。
【００７８】
いくつかの態様において、細菌は塩を通じた浸透圧または乾燥プロセスで不活性化される。
医薬組成物には、場合によって、宿主における免疫反応を増進させるアジュバントが含まれてもよい。
【００７９】
医薬組成物には、場合によって、薬学的に許容されうるキャリアーが含まれてもよいし、または医薬組成物は凍結乾燥されて提供されてもよい。
医薬組成物には、場合によって、薬学的に許容されうるキャリアー、例えばグルコース、ラクトースまたはソルビトールが含まれてもよい。
【００８０】
いくつかの態様において、医薬組成物を宿主への経口送達、直腸送達または膣送達のために配合してもよい。
さらに、医薬組成物を座薬パッケージとして、または経口配合物中で提供してもよい。
【００８１】
１つの態様において、本発明は、ガンマ線照射マイコバクテリウム属種を含む医薬組成物であって、哺乳動物宿主に経口、直腸または膣、または肺内送達するために配合されており、そして宿主、例えばヒトに送達された際、免疫学的に防御する用量を含む、前記組成物を提供する。
【００８２】
別の側面において、本発明は、ＴＢに対して哺乳動物にワクチン接種する方法を提供する。該方法には、不活性化マイコバクテリウム属種を含む組成物を哺乳動物に投与する工程が含まれ、ここで哺乳動物のワクチン接種は経口、直腸または膣であり、そして組成物は、宿主に送達された際、免疫学的に防御する用量を含む。
【００８３】
別の側面において、本発明は、別の抗原の送達を促進する免疫刺激剤を提供する。
１つの側面において、本発明は、浸透圧送達デバイスまたはマトリックス組成物などのキャリアー、およびガンマ線照射マイコバクテリウム属種を含む医薬組成物であって、哺乳動物宿主への胃腸送達のために配合され、そして宿主に送達された際、免疫学的に防御する用量を含む、前記組成物を提供する。
【００８４】
いくつかの態様において、不活性化マイコバクテリウム属種は、死細胞または細胞溶解物である。被験体がヒトである場合、好ましくは、マイコバクテリウム属種細胞の１００％が不活性化される。いくつかの態様において、該方法で使用するためのマイコバクテリウム属種は、照射で不活性化される。好ましくは、照射はガンマ線照射である。他の態様において、マイコバクテリウム属種は、ホルマリンまたは熱で不活性化される。
【００８５】
１つの側面において、本発明は、浸透圧送達デバイスまたはマトリックス組成物などのキャリアー、および不活性化ウシ流産菌を含む医薬組成物であって、哺乳動物宿主への胃腸送達のために配合され、そして宿主に送達された際、免疫学的に防御する用量を含む、前記組成物を提供する。
【００８６】
いくつかの態様において、ウシ流産菌細胞は、死細胞または細胞溶解物である。被験体がヒトである場合、好ましくは、ブルセラ属種細胞の１００％が不活性化される。いくつかの態様において、該方法で使用するためのブルセラ属種は、照射で不活性化される。好ましくは、照射はガンマ線照射である。他の態様において、ブルセラ属種は、ホルマリンまたは熱で不活性化される。
【００８７】
該方法で使用するための医薬組成物には、場合によって、宿主において防御免疫反応を増進させるアジュバントが含まれてもよい。
該方法で使用するための医薬組成物には、場合によって、薬学的に許容されうるキャリアーが含まれてもよく、または凍結乾燥されて提供されてもよい。
【００８８】
いくつかの態様において、該方法で使用するための医薬組成物は、腸関連リンパ組織への送達のために配合される。
いくつかの態様において、医薬組成物は、胃腸系への送達のために設定されたデバイスを通じて送達される。
【００８９】
さらにさらなる側面において、本発明は、マイコバクテリウム属種感染を治療するためのワクチンを調製するための方法であって、哺乳動物宿主への胃腸送達のために、不活性化マイコバクテリウム属種の免疫学的に防御する用量を配合することを含む、前記方法を提供する。
【００９０】
さらにさらなる側面において、本発明は、ウシ流産菌感染を治療するためのワクチンを調製するための方法であって、哺乳動物宿主への胃腸送達のために、不活性化ウシ流産菌の免疫学的に防御する用量を配合することを含む、前記方法を提供する。
【００９１】
いくつかの態様において、該方法には、ヨーネ病、クローン病またはブルセラ症のウシ動物モデルにおいて、ワクチンを試験する工程が含まれる。動物モデルはまた、例えばマウス、モルモット、ウサギ、ブタ、ヤギ、またはシカなどの他の哺乳動物であってもよい。
【００９２】
哺乳動物胃腸系の免疫系は、しばしば、腸関連リンパ組織（ＧＡＬＴ）と称される。この重要な系には、ヒト体内のリンパ組織の最大量を含有する腸が含まれる。ＧＡＬＴは、免疫細胞を貯蔵する多くのタイプのリンパ組織を通じて、細菌およびウイルスなどの外来物質から哺乳動物を防御することを補助する。免疫細胞、例えばＴリンパ球およびＢリンパ球は、外来侵入者から体を防御するのに関与する。胃腸系全体の組織ネットワークには：扁桃腺（ワルダイヤー輪）、アデノイド（咽頭扁桃）、パイエル板、虫垂および大腸および胃におけるリンパ凝集物、食道における小リンパ凝集物、ならびに腸の粘膜固有層中のリンパ細胞および血漿細胞が含まれる。
【００９３】
胃腸管の管腔は、体には外界に相当する。免疫系は、粘膜裏打ちを通じて、そしてリンパ球、マクロファージおよび他の細胞などの多くの細胞を用いて、外来物質を単離することが可能である。ＧＡＬＴ内のリンパ球集団は、脾臓のものと類似であり、そして大部分、粘膜固有層リンパ球、上皮内（ｉｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ）リンパ球、およびパイエル板と記載される。小腸の粘膜および粘膜下層に位置するパイエル板は、腸管全体に見られうるリンパ節と類似である。最後に、Ｍまたはミクロフォールド（ｍｉｃｒｏｆｏｌｄ）細胞は、リンパ濾胞上の腸上皮中に位置し、そしてタンパク質およびペプチド抗原をエンドサイトーシスする。Ｍ細胞は、外来物質を下層の組織内に輸送し、これは局所樹状細胞およびマクロファージへと渡される。樹状細胞およびマクロファージは、次いで、ＧＡＬＴにおいてＴ細胞を提示する。さらに、上皮下の樹状細胞はまた、上皮細胞間に位置する偽足で、管腔中の抗原を検出可能である。パイエル板における抗原に曝露された後、Ｔ細胞は粘膜固有層および上皮に遊走し、ここで成熟を経る。
【００９４】
腸関連リンパ組織に抗原をターゲティングする送達系を用いた経口ワクチンの新規生成は、胃腸疾患、免疫療法、および療法剤の治療を根本的に変えるであろう。本組成物および方法は、ミクロフォールド（Ｍ）細胞内への病原体の進入を模倣することによって、Ｍ細胞の潜在能力を使用する。提唱される組成物によるＭ細胞の刺激は、抗原の進入を増進し、免疫反応を開始し、そしてその結果、粘膜病原体に対する防御を導くことが可能である。
【００９５】
本発明は、免疫反応を誘発するために、不活性化マイコバクテリウムまたは別の細菌を腸関連リンパ組織に送達する。組成物および方法は、環境、免疫学的ターゲット、ならびに胃内（＜３時間）、小腸内（３〜５時間）、および大腸内（２０時間）での推移時間を考慮する（ａｃｃｏｕｎｔ  ｆｏｒ）。
【００９６】
理想的な送達を提供するため、環境要因、例えばｐＨ、モル浸透圧濃度、および生化学的環境を考慮する。例えば、ｐＨは胃腸管で、以下のダイナミックレンジ内である：胃（食事前）１〜２、胃（消化中）４、小腸６〜７、十二指腸６．６、回腸７．５、および盲腸６．４。ｐＨのこうした変化は不活性化マイコバクテリウムを含むいかなる組成物に対しても実質的な分解を構成しうる。本発明は、浸透圧送達ビヒクルまたはマトリックス組成物を用いて、マイコバクテリウムを胃より先の部位に送達し、こうした部位ではｐＨは、マイコバクテリウム抗原安定性および提示をより受け入れやすい。さらに、下部胃腸管に対する薬剤の送達は、炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎）、過敏性腸症候群、および結腸癌などの結腸疾患の局所療法に好適である。
【００９７】
理論によって束縛されることは望ましくないが、抗原の局所送達は、ワクチン接種または免疫療法の有効性を増進すると考えられる。肺などの他の臓器への類似の洞察は、局所送達の重要性および重要なホーミング機構の誘導を立証する。例えば、ネズミＴＢモデルにおいて、肺における抗原特異的記憶Ｔ細胞は、優先的にワクチン接種の部位に戻るようホーミングし、そして感染時の気道におけるＴ細胞の位置は重要であることが見出されてきている。さらに、インフルエンザ・ネズミモデルにおける研究によって、肺免疫細胞は、局在化されたままであり、そしてわずかなＢ細胞およびＴ細胞のみが全身に遊走することが示唆されている。これらの前述の洞察に加えて、私有データに基づいて、本発明者らは、免疫系のホーミング機構から得られる利点があると仮定している。次いで、これらの知見を本発明に適用し、マイコバクテリウムワクチンが、腸関連リンパ組織において、防御免疫反応を誘発するのに成功するためには、好ましくは、こうしたワクチンは、ＧＡＬＴ内の抗原提示細胞を直接刺激する。本発明は、示す適用および送達系を使用して、照射マイコバクテリウムまたは他の細菌を、大腸および小腸に直接送達することによって、これを達成する。
【００９８】
本発明の組成物および方法は、例えば、クローン病を含む疾患および状態、ならびに家畜疾患、例えばヨーネ病およびウシ流産菌に有用である。
ヒト・クローン病
また、ＭＡＰは、ウシにおいて非常に類似の疾患であるヨーネ病を引き起こすため、ヒトにおける炎症性腸疾患であるクローン病にも関連づけられてきている。多くの病原性細菌がクローン病の原因病原体であると推測されている一方、大部分の研究は、粘膜層が弱り、そして腸壁から細菌を一掃することが不可能であることが、細菌をより安全に宿することを可能にすることを裏付けている。さらに、クローン病、潰瘍性大腸炎および過敏性大腸症候群は、根底に同じ原因を有する可能性もある。実際、近年、クローン病が同時に発生すると、マイコバクテリウム属、他の細菌、および遺伝子マーカーが観察されてきており、そして現在、多くの個体がマイコバクテリウム・アビウム下位種パラツベルキュロシス感染に対する素因を持つ遺伝的要因を有する可能性があることが知られている。ヒトにおける感染に際して、細菌は、マンニン（ｍａｎｎｉｎｓ）を産生し、これがそれ自体および多様な細菌の両方が貪食されるのを防ぎ、それによって多様な二次感染を引き起こす。およそ１４０万人のアメリカ人が、炎症性腸疾患、またはクローン病および潰瘍性大腸炎を含むＩＢＤを患う。
【００９９】
ヨーネ病における使用
ヨーネ病は、ウシ、ヒツジ、およびヤギなどの家畜に最も一般的に影響を及ぼし、そして反芻動物の捕獲種および野生種の他の種において報告されてきている。細菌、マイコバクテリウム・アビウム下位種パラツベルキュロシスによって引き起こされるヨーネ病は、しばしば、頭字語ＭＡＰによっても示される。ＭＡＰを含むマイコバクテリウム属は、動物免疫系の細胞内部で増殖し、そして複製することが可能な細胞内細菌である。ＭＡＰは、感染動物によって、糞便、ミルクおよび唾液中に排出された際、水、土および植物を汚染させる。外部環境におけるほど頑強ではないが、ＭＡＰは、広い範囲の温度、ならびにｐＨ変化および水入手可能性に慣れる能力を有するため、最長１年生存可能である。糞便、唾液または他の汚染供給源に曝露された未感染動物は、疾患の高いリスクを持つ。
【０１００】
感染動物は、最初の感染後、何年も無症候性でありうる。しかし、症候性動物は、長期の下痢および体重喪失を経験するであろう。該疾患は、４つの病期を示す：病期１は、排出物を通じたＭＡＰの脱落を伴う無症候性と記載される。病期ＩＩは、他の周囲の動物に実質的に増加したリスクを提示する、より顕著な脱落を伴う、無症候性動物によって記載される。診断は、典型的には、糞便においてのみ検出可能である。病期ＩＩＩは、顕著な症状の始まりであり、そして大部分の診断アッセイは、マイコバクテリウムの存在を検出可能である。病期ＩＶは、臨床的に明らかであり、動物が１日あたり数十億の細菌脱落を有する可能性もあり、そして２年またはそれより長く経たないと生じない可能性もある。伝染性の性質を考えると、ヨーネ病は、最初はわずかな動物にしか存在しない可能性があり、そして最初に診断されるまでに、５〜１５倍もの数の動物が感染しうると考えられる。
【０１０１】
感染の別の手段は、感染したメス由来のミルクからである。研究によって、病期ＩＩＩおよびＩＶのヨーネ病に感染した雌牛の３６％が、初乳に細菌を有することが示されている。授乳中の子ウシは、初乳、ミルクまたは乳首の外の汚染領域への曝露を通じて感染する可能性が高い。母親が病期ＩＩＩまたはＩＶである場合、出生前感染のリスクは、８〜４０％であるが、病期ＩおよびＩＩの感染の母親ではリスクははるかにより低い。
【０１０２】
米国動物健康監視機構（ＮＡＨＭＳ）による酪農研究によると、陽性知見が、雌牛の１０％がＭＡＰに関して陽性と診断されることを必要とする場合、ヨーネ病は、米国酪農の２２％に存在する。米国酪農産業に対するコストは、ミルク産生減少、食肉価値減少および未成熟な選抜除去を通じて、年間２億ドルより多いと概算される。ＭＡＰに対するワクチン接種は、感染に対して防御せず、そしてミルク産生減少を防止しないとしても、脱落および臨床的症状を減少させるにはわずかに有効であると見なされる。パラツベルキュロシスに対するワクチン接種は、非常に有益であり、ワクチン接種後は、雌牛あたり１４２ドルの経済的利益があると報告されてきている。有効性を欠くため、ワクチン接種はＭＡＰ感染を減少させるために最低限にしか一般的に利用されていない。ワクチン接種より多く使用される２つの他の戦略は、試験および選抜除去ならびに疑わしい子ウシまたは家畜を減少させる検疫である。
【０１０３】
ウシ流産菌における使用
ブルセラ症は、ウシ流産菌によって引き起こされ、そして家畜およびヒトにおいて、重度の疾病および死を導きうる。家畜におけるブルセラ症は、感染家畜の流産を生じうる。陽性診断は、反応動物の屠殺を生じうるため、試験および屠殺は、米国家畜産業に経済的脅威を課しうる。米国および西欧諸国はこの疾患から経済的な負担を受けているが、ブルセラ症は、アフリカ、中東、南アメリカ、および世界の他の発展途上地域においては重大な健康上の脅威であり続けている。該疾患は慢性および無症候性であるが、妊娠したウシ（ｈｅｆｆｅｒｓ）は、胎盤感染を患う可能性があり、これが流産および受胎能力減少を導く可能性もある。野生生物におけるウシ流産菌は、家畜に対して連続した脅威であり、そしてモンタナ、アイダホおよびワイオミングなどの州では、すべて、近年の曝露の報告がある。
【０１０４】
ウシ流産菌は、貪食後の好中球による殺傷に抵抗し、マクロファージ内部で複製し、そしてマクロファージからのエスケープ機構を提供する機構を発展させてきている。したがって、ワクチン技術の開発は、好敵手に打ち勝つのが困難であり続けている。ウシ流産菌ＲＢ５１およびＢ．メリテンシスＲＥＶ．１が多くの国で家畜を免疫するのに用いられている；しかし、これらの株は、なお流産および持続性感染を誘導する。さらに、ＲＥＶ．１ワクチンは、病原性であり、そして不安定であり、Ｂ．メリテンシスに対する改善されたワクチンの必要性が生じる。最高でも、現在のワクチンは、再ワクチン接種後であってさえ６０％未満の有効性しかなく、そして野生生物における有効性はさらに低い。したがって、有効性および安全性に疑いがあり、現在のワクチンを超える研究が必要である。
【０１０５】
医薬組成物の調製
１以上の不活性化マイコバクテリウム属種または他の細菌を用いて、本発明記載のワクチンを調製し、これを次いで、被験体に直腸送達、経口送達または膣送達するために配合する。不活性化マイコバクテリウムまたは細菌は、被験体の小腸粘膜および大腸粘膜に送達された際、強い免疫反応を誘発すると仮定される。
【０１０６】
組成物をフィード措置の一部として送達するか、あるいは特殊化された植物に基づくワクチンまたは作物種子、例えばイネ（ｒｉｃｅ）、トウモロコシ（ｍａｉｚｅ）、もしくはダイズ（ｓｏｙｂｅａｎｓ）と組み合わせて送達してもよい。
【０１０７】
別の態様において、組成物を、薬学的に許容されうるキャリアーと組み合わせて、医薬組成物を形成することによって、宿主への投与のために調製する。
あるいは、胃放出を増進するｐＨ感受性ポリマー、胃保持および放出のための粘膜付着性ポリマー、または胃保持系を使用した、胃送達のために、組成物を調製する。
【０１０８】
１つの態様において、組成物を、胃溶解に抵抗するｐＨ感受性ポリマー、徐放のための膨張性/ゲル化ＨＧ、あるいは徐放のための浸透圧駆動錠剤またはデバイスを用いて、腸内送達のために調製する。
【０１０９】
いくつかの態様において、アゾレダクターゼ、エステラーゼ、アミダーゼ、グルコシダーゼ、グルクロニダーゼなどの結腸細菌によって分解可能な組成物を使用して、結腸送達のために、組成物を調製する。
【０１１０】
望ましい場合、胃および／または腸内通過時間をはるかに超えた時点で放出する浸透圧または膨張系を利用した組成物を使用して、結腸送達のために、組成物を調製する。
望ましい場合、結腸または腸でのみ分解される適切なポリマーで組成物をコーティングしてもよい。
【０１１１】
本発明者らは、不活性化マイコバクテリウムまたはウシ流産菌と同時に送達されるカルシトリオールの使用が、有益な特性を有すると仮定している。ビタミンＤの１つの型（カルシトリオール）と組み合わせた不活性化マイコバクテリウムの経口送達、直腸送達または膣送達は、細菌の貪食およびプロセシングを補助し、マクロファージ抗原提示を可能にし、そして増進された免疫反応を植え付けることが可能であると想定される。カルシトリオールは、マクロファージ液胞内のカテリシデン（ｃａｔｈｅｌｉｃｉｄｅｎ）を刺激して、細菌を殺し、そして細菌の抗原性構成要素を分解する。ビタミンＤは、Ｔｏｌｌ様受容体シグナル伝達と関連づけられてきており、そしてビタミンＤ−１−ヒドロキシラーゼとともにマクロファージを提示すると、抗微生物ペプチド、カテリシジン（ｃａｔｈｅｌｉｃｉｄｉｎ）の発現が誘導されて、マイコバクテリウムの十分な殺傷を促進可能である。
【０１１２】
さらなる増進は、ビタミンＤ組成物に添加される異なる代謝状態のマイコバクテリウムを用いることである。これは、細胞性免疫反応に向かうマイコバクテリウム抗原提示を改善する潜在能力を有する。
【０１１３】
組成物は、場合によって、胃から遠位回腸へのｐＨの進行性の増加を利用して、ｐＨ感受性ポリマーでコーティングされる。ｐＨ感受性ポリマーで錠剤、カプセルまたはペレットをコーティングすると、酸性胃液からの防御が提供され、そしてこうしたポリマーには、限定されるわけではないが、ユードラジットＬ１００、ユードラジットＳ１００、ユードラジットＬ  ３０Ｄ、ユードラジットＦＳ  ３０Ｄ、ユードラジットＬ  １００−５５、酢酸フタル酸ポリビニル、フタル酸ヒドロキシプロピルエチルセルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルエチルセルロース５０、フタル酸ヒドロキシプロピルエチルセルロース５５、酢酸トリメリット酸セルロース、および酢酸フタル酸セルロースが含まれる。
【０１１４】
適切な浸透圧送達デバイスには、例えば、ローズ・ネルソン・ポンプ、ヒグチ・リーパー・ポンプ、ヒグチ・テウエス（Ｔｈｅｅｕｗｅｓ）・ポンプ、基本浸透圧ポンプ、マルチチャンバー浸透圧ポンプ、ＯＲＯＳ−ＣＴが含まれる。他のデバイスには、例えば多粒子遅延放出系、液体経口浸透圧系、サンドイッチ浸透圧錠剤、一体化（Ｍｏｎｏ  ｌｉｔｈｉｃ）浸透圧系、浸透圧破裂性浸透圧ポンプ、または遅延放出のためのテレスコピックカプセル（ｔｅｌｅｓｃｏｐｉｃ  ｃａｐｓｕｌｅ）が含まれる。他の系には、例えば、一連の停止によるパルス状送達、拡張可能開口部に基づくパルス状送達、液体浸透圧ポンプまたはプッシュプルポンプが含まれる。
【０１１５】
医薬組成物中に使用される細菌には、全細胞または細胞の一部、例えば細胞溶解物が含まれてもよい。例えば、適切な構成要素には、ガンマ線照射全細胞溶解物、ガンマ線照射培養ろ過タンパク質、ガンマ線照射細胞壁分画、ガンマ線照射細胞膜分画、ガンマ線照射細胞質ゾル分画、ガンマ線照射可溶性細胞壁タンパク質、およびガンマ線照射可溶性タンパク質プールが含まれる。
【０１１６】
必要に応じて、保存剤、安定化剤、緩衝剤、酸化防止剤および／または他の添加物が含まれてもよい。
例えば、不活性化マイコバクテリウムまたは細菌の投与に関連するプロトコル、配合物、投薬および臨床実施に慣れている当業者は、さらに、本発明の医薬組成物を使用するために、これらのプロトコルを容易に適応させることも可能である。ワクチンを、投薬配合物に適合した方式で、そして療法的に有効でありそして免疫原性であろう量で、投与する。投与すべき量は、治療しようとする被験体に応じ、例えば個体免疫系が免疫反応を開始する能力、および望ましい防御の度合いに応じる。適切な投薬量範囲は、ワクチン接種あたり活性成分数百マイクログラムの桁であり、好ましい範囲は、約０．１μｇ〜１０００ｍｇである。最初の投与およびブースター投与のための適切な措置もまた多様であるが、典型的には、最初の投与の後、接種または他の投与が続く。したがって、ワクチンを単回用量で、または複数の用量で投与してもよい。１つの態様において、ワクチンを約１〜１２ヶ月空けて２回の用量で投与してもよい。被験体に任意の時点でワクチン接種してもよいが、好ましくは、予期されるストレス期間、例えば輸送または他の処理の直前（最適には約１０日間から２週間）に投与する。
【０１１７】
治療しようとする状態に応じて、組成物を単独で、あるいは他の治療または標準的ワクチンと組み合わせて、同時にまたは連続してのいずれかで投与してもよい。ワクチン接種後に組成物を投与して、そしてしたがって、該組成物がワクチンのアジュバントとして作用してもよい。
【０１１８】
別の態様において、本発明の組成物は、胃腸管における示差ｐＨまたは吸収を補償するであろう。例えば、組成物は、小腸および大腸において、活性物質の異なる速度の放出を提供するため、マトリックスの異なる領域中に放出修飾因子または活性成分の特定の濃度を有しうる。当業者は、適切な組成を決定することが可能であり、そして適切な試験を決定するため、ルーチンの試験を使用しうる。
【０１１９】
組成物は、小腸および大腸をターゲティングする、二重の段階の放出を利用してもよい。この態様において、組成物は、それぞれ、小腸および大腸のｐＨで可溶性である放出修飾因子を含有するであろう。小腸および大腸は、典型的には、それぞれ７．１〜７．２および６．９のｐＨを有するため、７．０または７．１より高いｐＨで可溶性であり、そして７．０未満で不溶性である放出修飾剤を選択してもよい。
【０１２０】
組成物は、水または生理食塩水中に懸濁された小粒子中に含有されてもよい。組成物はまた、さらなるアジュバント、抗細菌剤、または当該技術分野に慣用的であるような他の薬学的活性剤も含有してもよい。アジュバントには、限定されるわけではないが、塩、エマルジョン（油／水組成物を含む）、サポニン、リポソーム配合物、ウイルス粒子、ポリペプチド、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰＳ）、核酸に基づく化合物または特定の抗原を利用する他の配合物が含まれる。適切なアジュバントには、例えば、植物油、ミョウバン、フロイントの不完全アジュバント、またはフロイントの不完全アジュバントが含まれ、油およびフロイントの不完全アジュバントが特に好ましい。他のアジュバントには、水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウム（ミョウバン）、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）、糖の合成ポリマー（ＣＡＲＢＯＰＯＬ（登録商標））、熱処理によるワクチン中のタンパク質の凝集物、アルブミンに対するペプシン処理（Ｆａｂ）抗体で再活性化されたことによる凝集物、Ｃ．パルブムなどの細菌細胞またはグラム陰性細菌の内毒素もしくはリポ多糖構成要素を含む混合物、生理学的に許容されうる油ビヒクル中のエマルジョン、例えばモノオレイン酸マンニド（Ａｒａｃｅｌ  Ａ）、またはブロック置換物として用いられるパーフルオロカーボン２０パーセント溶液を含むエマルジョン（Ｆｌｕｏｓｏｌ−ＤＡ）もまた使用可能である。
【０１２１】
組成物は、場合によって、大腸菌不安定毒素（ＬＴ）およびコレラ毒素（ＣＴ）などの粘膜細菌毒素アジュバント中に、またはＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）中に含有されてもよい。ＬＰＳの誘導体でありそしてより毒性でない型である、別のありうる粘膜アジュバント、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）をリポソームと組み合わせると、粘膜免疫防御反応が誘導されることが見出された。アジュバント技術は、内因性脂質および薬学的に許容される脂質の組み合わせに基づく非毒性薬学的配合物からなる。ワクチンには、場合によって、サイトカインまたは合成ＩＦＮ−γ誘導剤、例えばポリＩ：Ｃのみまたは上述のアジュバントとの組み合わせなどの、さらなる免疫調節物質が含まれてもよい。
【０１２２】
さらなる他のアジュバントには、生体適合性マトリックス材料の微粒子またはビーズが含まれる。微粒子は、当該技術分野で慣用的であるような任意の生体適合性マトリックス材料で構成されてもよく、これには限定されるわけではないが、寒天およびポリアクリレートが含まれる。当業者は、他のキャリアーまたはアジュバントもまた使用可能であることを認識するであろう。例えば、使用可能なキトサンまたは任意の生体付着性送達系がＷｅｂｂおよびＷｉｎｋｅｌｓｔｅｉｎに記載され、その内容は本明細書に援用される。
【０１２３】
医薬組成物は、好ましくは、当該技術分野に知られる方法を用いて、膣送達、直腸送達、または経口送達のために配合される。アジュバントと組み合わされた照射組成物の配合物は、好ましくは、ワクチン接種と関連する炎症などの副作用を最小限にするように選択されるか、または配合物の安定性を改善することも可能である。アジュバントはまた、免疫刺激剤としてまたはデポとしての役割も有する可能性もある。
【０１２４】
望ましい場合、組成物はリポソーム配合物中に含有されうる。リポソームは、肺胞に到達する他の粒子と同様、マクロファージによって一掃される。リポソームリン脂質のプロセシング、取り込みおよびリサイクリングは、肺胞ＩＩ型細胞を通じて、内因性界面活性剤と同じ機構を通じて起こる。
【０１２５】
結核症を防止するかまたは治療するため、上述の照射マイコバクテリウムを含有する医薬組成物を、適切な個体に投与する。Ｌｉｇｈｔｅｒら、ＵＳ２０１００１１２００７に開示される方法を用いて組成物を作製してもよい。本明細書において、「結核症」への言及には、肺結核菌（ｔｕｂｅｒｃｕｌｉ）および肺外結核菌への言及が含まれる。用語「個体」、「被験体」、「宿主」、および「患者」は、本明細書において、交換可能に用いられ、そして本発明の療法ワクチンを用いた治療を受け入れられる細菌感染を有し、そして治療または療法が望ましい、任意の被験体を指す。マイコバクテリウムによる感染に感受性である任意の哺乳動物宿主のために、医薬組成物を調製してもよい。適切な哺乳動物宿主には、例えば農場動物、例えばブタおよびウシが含まれる。
【０１２６】
用語「治療」、「治療すること」、「治療する」等は、本明細書において、一般的に、望ましい薬理学的効果および／または生理学的効果を得ることを指す。効果は、疾患またはその症状を完全にまたは部分的に防止する観点から、予防的であってもよく、そして／または疾患および／または疾患に起因する不都合な影響に対する部分的または完全な安定化または治癒の観点から、療法的であってもよい。「治療」は、本明細書において、被験体、特に哺乳動物被験体、より詳細にはヒトにおける疾患のいかなる治療も含み、そしてこれには：（ａ）疾患または症状に対する素因を有しうるが、疾患または症状を有するとはいまだ診断されていない被験体において、疾患または症状が生じることを防止するか；（ｂ）疾患症状を阻害する、すなわち疾患の発展を抑止するか；または疾患症状を軽減する、すなわち疾患または症状の退行を引き起こすか、（ｃ）疾患の再活性化を防止する、すなわち桿菌が休眠期から増殖期に推移するのを防止することが含まれる。したがって、投与は好ましくは、「予防的有効量」または「療法的有効量」（場合によって、予防は療法と見なされうるが）であり、これは個体に利益を示すのに十分である。投与の実際の量、ならびに投与速度および時間経過は、治療中の疾患の性質および重症度に応じるであろう。治療の処方、例えば投薬量等に関する決定は、一般開業医および他の医師または獣医師の責任の範囲内である。
【０１２７】
ワクチンで治療された被験体は、典型的には、感染細菌に対する防御免疫を有するかまたは発展させるであろう。用語「防御免疫」は、哺乳動物に投与されるワクチン、免疫原性組成物または免疫スケジュールが、病原性細菌によって引き起こされる疾患を防止するか、その発展を遅延させるか、またはその重症度を減少させるか、あるいは疾患の症状を減少させるかまたはまったく除去する免疫反応を誘導することを意味する。「感染細菌」によって、宿主において感染を確立し、そしてその結果、疾患または望ましくない症状と関連しうる、細菌を意味する。一般的に、感染細菌は、病原性細菌である。
【０１２８】
用語「免疫原性細菌組成物」、「免疫原性組成物」および「ワクチン」は、本明細書において、交換可能に用いられ、調製物中に存在するエピトープに対する免疫反応を誘発するのに十分な量で投与された際、被験体において細胞性および／または体液性免疫反応を誘発可能な調製物を意味する。
【０１２９】
マイコバクテリウムまたはブルセラを防止するかまたは治療するため、上述の照射マイコバクテリウムまたはブルセラを含有する医薬組成物を、適切な個体に投与する。本明細書において、「結核症」への言及には、肺桿菌および肺外桿菌への言及が含まれる。用語「個体」、「被験体」、「宿主」、および「患者」は、本明細書において、交換可能に用いられ、そして本発明の療法ワクチンを用いた治療を受け入れられる細菌感染を有し、そして治療または療法が望ましい、任意の被験体が含まれる。マイコバクテリウムまたはブルセラによる感染に感受性である任意の哺乳動物宿主のために、医薬組成物を調製してもよい。適切な哺乳動物宿主には、例えば農場動物、例えばブタおよびウシが含まれる。
【０１３０】
用語「治療」、「治療すること」、「治療する」等は、本明細書において、一般的に、望ましい薬理学的効果および／または生理学的効果を得ることを指す。効果は、疾患またはその症状を完全にまたは部分的に防止する観点から、予防的であってもよく、そして／または疾患および／または疾患に起因する不都合な影響に対する部分的または完全な安定化または治癒の観点から、療法的であってもよい。「治療」は、本明細書において、被験体、特に哺乳動物被験体、より詳細にはヒトにおける疾患のいかなる治療も含み、そしてこれには：（ａ）疾患または症状に対する素因を有しうるが、疾患または症状を有するとはいまだ診断されていない被験体において、疾患または症状が生じることを防止するか；（ｂ）疾患症状を阻害する、すなわち疾患の発展を抑止するか；または疾患症状を軽減する、すなわち疾患または症状の退行を引き起こすか、（ｃ）疾患の再活性化を防止する、すなわち桿菌が休眠期から増殖期に推移するのを防止することが含まれる。したがって、投与は好ましくは、「予防的有効量」または「療法的有効量」（場合によって、予防は療法と見なされうるが）であり、これは個体に利益を示すのに十分である。投与の実際の量、ならびに投与速度および時間経過は、治療中の疾患の性質および重症度に応じるであろう。治療の処方、例えば投薬量等に関する決定は、一般開業医および他の医師または獣医師の責任の範囲内である。
【０１３１】
ワクチンで治療された被験体は、典型的には、感染細菌に対する防御免疫を有するかまたは発展させるであろう。用語「防御免疫」は、哺乳動物に投与されるワクチン、免疫原性組成物または免疫スケジュールが、病原性細菌によって引き起こされる疾患を防止するか、その発展を遅延させるか、またはその重症度を減少させるか、あるいは疾患の症状を減少させるかまたはまったく除去する免疫反応を誘導することを意味する。「感染細菌」によって、宿主において感染を確立し、そしてその結果、疾患または望ましくない症状と関連しうる、細菌を意味する。一般的に、感染細菌は、病原性細菌である。
【０１３２】
句「免疫反応を誘発するのに十分な量」は、特定のワクチン調製物または免疫原性組成物の投与前および投与後に測定された免疫反応指標の間に、検出可能な相違があることを意味する。最後のワクチン接種の数週後、動物を生細胞感染に曝露する。病原性細菌曝露の数週後、臨床的および分子的免疫反応を評価する。
【０１３３】
用語「状態」、「代謝状態」、「改変された状態」、または「異なる状態」は、交換可能に使用可能であり、そしてタンパク質組成または遺伝子発現において検出可能な相違がある、マイコバクテリウムの異なる代謝状態を指す。状態は、細菌が外部刺激に反応し、そしてその結果、細菌が異なる抗原を提示するか、または特定の遺伝子を発現するかまたはその転写を開始しうるものと定義される。
【０１３４】
用語「浸透圧送達系」または「送達系」は、意図される免疫ターゲットへの不活性化細菌の送達を可能にするデバイスまたは組成マトリックスを指す。この送達系の例は、不活性化ウシ流産菌がウシの小腸および大腸内に送達されるのを可能にし、低いｐＨである胃の分解性を回避する。
【０１３５】
ワクチンのスクリーニングおよび開発
マイコバクテリウムまたは細菌細胞集団、あるいはその分画（上述のようなもの）を多様な不活性化措置に供し、処理細胞または細胞分画を含有する候補の医薬組成物を調製し、そして上述の方法を用いて処理組成物が免疫反応を誘発し、そして／または宿主においてマイコバクテリウム感染に対する有効な曝露を開始する能力を試験することによって、試験ワクチンをスクリーニングするかまたは最適化することも可能である。
【０１３６】
用語「免疫原性細菌組成物」、「免疫原性組成物」および「ワクチン」は、本明細書において、交換可能に用いられ、調製物中に存在するエピトープに対する免疫反応を誘発するのに十分な量で投与された際、被験体において細胞性および／または体液性免疫反応を誘発可能な調製物を意味する。
【０１３７】
用語「状態」または「期」は、本明細書において交換可能に用いられ、そして外部刺激または環境に反応したマイコバクテリウムの代謝状態を指す。
組換え抗原を発現する細菌での免疫後、試験動物の免疫反応を監視することによって、マイコバクテリウム細胞または抽出調製物によって発現される抗原性分子の免疫強度を決定してもよい。試験動物には、マウス、モルモット、ウサギ、ウシ、非ヒト霊長類、および最終的にヒト被験体が含まれてもよい。
【０１３８】
多様なアプローチ、例えば：（ａ）Ｔ細胞関連サイトカイン産生、（ｂ）血漿サイトカイン産生、（ｃ）Ｔ細胞増殖、細胞傷害性、サイトカインプロファイル、（ｄ）Ｔ細胞抗原レパートリー、（ｅ）Ｔ細胞制御プロファイル、（ｆ）ｍＲＮＡプロファイル、（ｇ）自然免疫プロファイル、（ｈ）抗体プロファイル、（ｉ）遺伝学および（ｊ）免疫動物における疾患からの防御および／または感染性症状の緩和によって、試験被験体の免疫反応をさらに分析してもよい。
【０１３９】
喘息を防止し、そして治療するための組成物
さらなる側面において、本発明は、呼吸器系に直接送達される照射マイコバクテリウム属種を用いて、喘息を防止し、そして治療するための組成物を提供する。
【０１４０】
主な病原体ならびに環境アレルゲンは、粘膜表面を通じて、ヒトに進入する。粘膜免疫系および肺免疫系は、部位特異的な方式で発展して、コロニー形成および外来抗原による進入を防止する。したがって、これらの防御の刺激は、感染およびアレルギー性疾患を防止するために重要である。
【０１４１】
喘息およびマイコバクテリウム感染の間の間接的な関連によって、アレルゲンに誘導されるＴｈ２反応の発展を阻害し、そしてＴｈ１免疫反応を支持するために、マイコバクテリウムを利用するありうる戦略が示唆される。肺内送達または粘膜送達アプローチは、直接の局在効果を提供し、そして肺内へのＴｈ２細胞の補充およびまたは肺内でのＴｈ２細胞の拡大を阻害するであろう。ガンマ線照射Ｍ．ｔｂは、非常に免疫原性であり、そして安全であり、そして強力なＴｈ１反応を誘発するため、しばしば、生存Ｍ．ｔｂの代用物として、実験室において用いられる。
【０１４２】
１つの側面において、本発明は、不活性化マイコバクテリウムを含む組成物を用いて、喘息を防止するかまたは治療するための方法を提供する。
別の側面において、本発明は、Ｔｈ２型アレルギー疾患において免疫寛容を誘導するために使用される肺／粘膜Ｔｈ１刺激剤を生成するための方法を提供する。
【０１４３】
適切なマイコバクテリウム属種には、例えば、結核菌、Ｍ．マリヌム、Ｍ．ボビス、Ｍ．アフリカヌム、Ｍ．カネッティ、またはＭ．ミクロッティが含まれる。いくつかの態様において、不活性化マイコバクテリウム属種細胞は、死細胞または細胞溶解物である。
【０１４４】
いくつかの態様において、マイコバクテリウム属種は、照射によって不活性化される。好ましくは照射はガンマ線照射である。他の態様において、紫外照射および／またはｘ線で不活性化を行う。他の態様において、マイコバクテリウム属種は、ホルマリンまたは熱で不活性化される。
【０１４５】
さらにさらなる側面において、照射マイコバクテリウム属を医薬組成物として提供する。医薬組成物には、場合によって、免疫学的反応が望ましい別の抗原、および／または宿主における免疫反応を増進させるアジュバントが含まれてもよい。医薬組成物にはさらに薬学的に許容されうるキャリアーが含まれてもよいし、または凍結乾燥して提供されてもよい。いくつかの態様において、医薬組成物は、宿主への鼻内送達のために配合される。
【０１４６】
いくつかの態様において、アジュバントをｔｏｌｌ様受容体アゴニストまたはパターン認識受容体アゴニストと組み合わせてもよい。適切なｔｏｌｌ様受容体アゴニストには、限定されるわけではないが、例えばＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７／８およびＴＬＲ９アゴニストが含まれる。
【０１４７】
いくつかの態様において、不活性化マイコバクテリウム属種を不活性微粒子またはリポソームなどのキャリアーと組み合わせる。
いくつかの態様において、照射マイコバクテリウム属種をアルミニウム塩と組み合わせる。
【０１４８】
いくつかの態様において、不活性化種を油中水または水中油エマルジョンと組み合わせる。
さらに、医薬組成物をエアロゾル、スプレーパッケージとして提供するか、または加圧カートリッジによって送達する。
【０１４９】
１つの態様において、本発明は、哺乳動物宿主への鼻内送達または肺内送達のために配合されたガンマ線照射マイコバクテリウム属種を含み、そして宿主、例えばヒトに送達した際に免疫刺激用量を与える医薬組成物を提供する。
【０１５０】
別の側面において、本発明は、アレルギー誘導性喘息に対して免疫刺激剤または免疫調節剤として作用する方法を提供する。該方法には、哺乳動物に、不活性化マイコバクテリウム属種を含む組成物を投与する工程が含まれ、ここで哺乳動物のワクチン接種は鼻内または肺内であり、そして組成物は、宿主に送達された際、免疫学的に刺激する用量を含む。
【０１５１】
別の側面において、本発明は免疫刺激剤として作用することも可能であり、そしてこれを、例えば、タンパク質、薬学的調製物、抗原、療法剤、ウイルス様粒子、および他の細菌構成要素などの他の剤と組み合わせることも可能である。
【０１５２】
いくつかの態様において、該方法で使用するためのマイコバクテリウム属種は、照射で不活性化される。好ましくは、照射はガンマ線照射である。他の態様において、マイコバクテリウム属種は、ホルマリン、熱、または浸透圧で不活性化される。
【０１５３】
該方法で使用するための医薬組成物には、場合によって、宿主における免疫反応をさらに増進させるためのさらなるアジュバントが含まれてもよい。
該方法で使用するための医薬組成物には、場合によって、薬学的に許容されうるキャリアーが含まれてもよく、または凍結乾燥されて提供されてもよい。
【０１５４】
いくつかの態様において、該方法で使用するための医薬組成物は、宿主への鼻内送達のために配合される。
さらに、該方法で使用するための医薬組成物は、エアロゾルまたはスプレーパッケージとして提供される。
【０１５５】
いくつかの態様において、医薬組成物は、粘膜送達、鼻送達または肺送達のために設定されたデバイスを通じて送達される。
さらにさらなる側面において、本発明は、マイコバクテリウム属感染を治療するためのワクチンを調製するための方法であって、哺乳動物宿主への鼻内送達または肺送達のための不活性化マイコバクテリウム属種の免疫学的に刺激する用量を配合する工程を含む、前記方法を提供する。
【０１５６】
いくつかの態様において、結核症の非ヒト動物モデルにおいて、アジュバントまたは防御喘息用量を試験するための方法が含まれる。動物モデルは、例えばマウス、モルモット、ウサギ、ウシ、または非ヒト霊長類であってもよい。
【０１５７】
いくつかの態様において、不活性化マイコバクテリウムを、無機塩、オリゴヌクレオチド、油エマルジョンおよびサポニンに基づく混合物を含む他のアジュバントと組み合わせてもよい。
【０１５８】
いくつかの態様において、不活性化マイコバクテリウムを、コレラ毒素（ＣＴ）、大腸菌熱不安定性毒素（ＬＴ）、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、ＤＮＡ、あるいは微粒子、例えばビロソーム、リポソーム、コクリエート（ｃｏｃｈｌｅａｔｅｓ）、ポリマー性微小球体、粘膜付着性ポリマー、または免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）と組み合わせてもよい。
【０１５９】
いくつかの態様において、不活性化マイコバクテリウムを、脂質に基づくアジュバントまたは送達系と組み合わせてもよい。これらには、限定されるわけではないが、リポソーム（エステル脂質から作製される陰イオン性および陽イオン性閉鎖ビヒクル）、プロテオリポソーム、コクリエート（水性空間を伴わずに、ロールアップした二層シートに変換されたリポソーム）、およびプロテオリポソーム・コクリエート、イスコマトリックス、ビロソーム、ユーロシン、およびモノホスホリル脂質Ａが含まれる。
【０１６０】
いくつかの態様において、照射マイコバクテリウム属を細菌病原体またはその構成要素と組み合わせる。細菌には、限定されるわけではないが、肺炎球菌、髄膜炎菌、Ａ群連鎖球菌、Ｂ群連鎖球菌、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、フェカリス菌、緑膿菌、大腸菌、クレブシエラ・ニューモニア、トラコーマクラミジア、およびヘリコバクター・ピロリが含まれる。
【０１６１】
いくつかの態様において、照射マイコバクテリウム属を弱毒化または不活性化ウイルス構成要素または全ウイルスと合わせる。呼吸器感染の一般的な原因であるウイルスまたはウイルスの組み合わせ。ヒト・ウイルスには、ライノウイルス、コロナウイルス、インフルエンザウイルス、ヒト・パラインフルエンザウイルス、ヒト呼吸器合胞体ウイルス、アデノウイルス、エンテロウイルス、パラミクソウイルス類およびメタニューモウイルスが含まれる。組成物には、コクサッキーウイルス、エコーウイルス、単純ヘルペスウイルス、コロナウイルス、エプスタインバーウイルスおよび／またはサイトメガロウイルスが含まれてもよい。
【０１６２】
いくつかの態様において、照射マイコバクテリウム属を、例えば、ウイルス：ＰＩ３、ＩＢＲ、ＢＶＤ、ＢＲＳＶ、アデノウイルス、ライノウイルス、ヘルペスウイルスＩＶ、エンテロウイルス、ＭＣＦおよびレオウイルスなどの、家畜において疾患を引き起こしうるウイルスと組み合わせて用いてもよい。
【０１６３】
いくつかの態様において、提唱される照射マイコバクテリウム属を、ウシ・カルシウイルス、ウシ・パルボウイルス、ＢＨＶ４、ウシ・レオウイルス、ウシ・エンテロウイルス、ウシ・ライノウイルス、および悪性カタル熱ウイルスを引き起こすと推測される病原体と組み合わせてもよい。
【０１６４】
他の態様において、提唱されるアジュバントを、ウシ鼻気管炎ウイルス、１型ウシ・ヘルペスウイルス、３型パラインフルエンザウイルス、ウシ呼吸器合胞体ウイルス、ウシ・ウイルス性下痢ウイルス、ウシ・アデノウイルスおよびウシ・コロナウイルスと組み合わせて使用してもよい。
【０１６５】
いくつかの態様において、当業者には適切だと考えられるように、これらのウイルスまたはその構成要素を、ベクター、例えばＤＮＡベクターを通じて送達してもよい。他の態様において、提唱される療法剤を用いて、死細菌、例えばヘモフィルス属、ウレアプラズマ・ディバースム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｄｉｖｅｒｓｕｍ）、マイコプラズマ・ディスパー（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｄｉｓｐａｒ）、マイコプラズマ・ボビス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｂｏｖｉｓ）、およびマイコプラズマ・ボビリニス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｂｏｖｉｒｈｉｎｉｓ）、マンヘミア・ヘモリチカ（Ｍａｎｎｈｅｉｍｉａ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）、パスツレラ・マルトシダ、ヘモフィルス・ソムヌス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｓｏｍｎｕｓ）を含むパスツレラ科（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｃｅａｅ）と組み合わせてもよい。
【０１６６】
１以上の不活性化マイコバクテリウム属種を用いて、本発明にしたがって喘息を治療するための組成物を調製し、次いで、被験体への肺送達および粘膜送達のために配合する。不活性化マイコバクテリウム属種を調製するための方法は、ＷＯ２００８／１２８０６５およびＵＳ２０１００１１２００７に記載される。ガンマ線照射を用いて、マイコバクテリウムを不活性化可能であり、そして１０２０確度まで結核菌を殺すのに必要な線量は、２．４メガラドであることが広く知られる。例えば、１３７Ｃｓ（セシウム）を用いて、１５４３ラド／分で２７時間、２．５メガラドの総投薬量で細胞に照射してもよい。
【０１６７】
不活性化マイコバクテリウム属は、被験体に肺送達、経口送達または粘膜送達した際、アレルギー誘導性喘息に対する予防のための免疫調節剤として、そして細胞性免疫反応を刺激する免疫刺激剤またはアジュバントとして作用すると仮定される。
【０１６８】
理論によって束縛されることは望ましくないが、本発明者らは、呼吸器粘膜に送達された際、エアロゾル化不活性化マイコバクテリウム属種から誘発される免疫反応は、呼吸器上皮における抗原提示細胞の直接刺激によって、肺系および呼吸器系における免疫反応を誘発するユニークな能力を提供しうると推測している。感染性疾患ならびに環境アレルゲンの９０％より多くが、粘膜表面を通じて宿主に侵入し、そして粘膜免疫の刺激は、こうした感染およびアレルゲンを制御する最適なアプローチでありうる［６８、６９］。喘息ワクチンのための理想的な経路は、アレルゲン侵入の部位、呼吸器系に基づいて、選択されるべきであり、呼吸器系には、いくつかの区画化が存在する。
【０１６９】
最近の証拠によって、肺リンパ球が、初期免疫反応を開始する際、局在化されたままであり、そして限定された数のＢ細胞およびＴ細胞のみが全身に遊走することが示唆されている［３４、３５］。ヒト肺リンパ解剖は、局所肺リンパ節から胸管に進入した細胞が、他の組織に到達する前に、肺動脈血中で、肺に戻ってくる点でユニークである。ある程度のリンパ球は、全身循環へと通過していく可能性もあるが、活性化Ｔ細胞は、血管内皮に付着し、そして肺に戻り、したがって、Ｔ細胞が感染病巣近くに維持される傾向がある［３６］。したがって、気道管腔および粘膜免疫細胞をターゲティングすることは、有効なワクチン接種戦略を開発するために重要な暗示を保持する。
【０１７０】
いくつかの研究が、ＴＳＴ反応および喘息または／およびアトピーの間の逆相関を見出している［７０、７１、７２、７３］。７０万人を超す小児における環境研究である、小児期の喘息およびアレルギーの国際研究によって、ＴＢ通知率およびＷＨＯ  ＴＢ発症率が高い地域において、６〜７歳の小児が喘鳴を有する可能性は有意に（ｐ＜０．０００１）より低かった［７４、７５］。マイコバクテリウム感染および喘息の間のこれらの間接的な関連を考慮すると、何人かの研究者らは、マウスにおける生存および熱殺ＢＣＧでの予防処置が、どちらも肺において極性化Ｔｈ１免疫反応を導き、そしてアレルゲン誘導性Ｔｈ２反応の発展を阻害することを見出した［７６、７７、７８、７９、８０］。具体的には、生存または死亡マイコバクテリウムは、肺内へのＴｈ２細胞の補充および／またはそのホーミングの拡大を阻害し、ＩＦＮ−γレベルを増加させ、そしてオボアルブミン気道曝露後の好酸球増加症を減少させた［７６、７７、７８、７９、８０］。
【０１７１】
こうした観察を踏まえて、最近のパイロット研究は、喘息の成人に対する鼻内脱脂酸処理Ｍ．バカエ（Ｍ．  ｖａｃｃａｅ）の効果を調べ、そして処置群およびプラセボの間に有意な相違がないことが見出された［８１］。微生物またはアレルゲンの同時曝露は関連があるようであるため、これらの結果は驚くべきことではない可能性もある。アレルギー性気道疾患のネズミモデルにおいて例示されるように、アレルゲン特異的Ｔ細胞のトランスファーは、慢性曝露モデルにおいて、気道リモデリング変化を逆転はさせなかったが防止し［８２、８３］、これはおそらく、発展しつつある免疫系が、喘息炎症を軽減させるより大きな潜在的可能性を保持する可能性もあることを例示する。
【０１７２】
Ｓｈｉｒｔｃｌｉｆｆｅら［８４］は、成人喘息における熱不活性化マイコバクテリウム・ボビス・カルメット・ゲラン桿菌の反復皮内注射の効果を調べた。多くの患者において、ＢＣＧに対する過剰な局所反応のため、試験への登用は早期に停止され、そして注射の数が減らされた。熱不活性化ＢＣＧの反復注射が副作用を伴い、有効性が欠如していたため、熱殺ＢＣＧの療法的潜在能力には限りがある。しかし、熱殺マイコバクテリウムのプロセスは、不都合な反応および有効性欠如の両方に寄与しうるタンパク質および酵素を変性させることが示されてきている。さらに、ワクチン接種を提供する全身アプローチは、皮内熱殺ＢＣＧの潜在的有効性をさらに減少させうる。ガンマ線照射は、桿菌を完全に不活性化する一方、タンパク質構造保持を補助することが示されてきている。したがって、エアロゾル化ガンマ線照射マイコバクテリウムを送達する前述の提唱は、局所化送達および抗原提示の両方において、ユニークな利点を与えうる。
【０１７３】
エアロゾル化送達または粘膜送達照射マイコバクテリウム属を用いて、断続性および持続性両方の、そしてすべての重症度の気管支、アレルギー性、内因性、外因性、運動誘導性、薬剤誘導性（アスピリンおよびＮＳＡＩＤ誘導性を含む）、および粉塵誘導性喘息を含む、喘息関連状態の多様なタイプ、ならびに他の気道過敏反応性の他の原因；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；感染性および好酸球性気管支炎を含む気管支炎；肺気腫；気管支拡張症；嚢胞性線維症；サルコイドーシス；農夫肺および関連疾患；過敏性肺炎；原因不明の線維化性肺胞炎、特発性間質性肺炎、線維症合併抗新生物療法、ならびに結核症およびアスペルギルス症および他の真菌感染を含む慢性感染を含む、肺線維症；肺移植の合併症；肺血管系の血管炎および血栓障害、ならびに肺高血圧；気道の炎症性状態および分泌性状態と関連する慢性の咳、ならびに医原性の咳の治療を含む鎮咳活性；薬物性鼻炎を含む急性および慢性鼻炎、ならびに血管運動性鼻炎；神経性鼻炎（枯草熱）を含む通年性および季節性アレルギー性鼻炎；鼻ポリープ症；風邪、ならびに呼吸器合胞体ウイルス、インフルエンザウイルス、コロナウイルス（ＳＡＲＳを含む）およびアデノウイルスを含む、急性ウイルス感染治療することも可能である。
【０１７４】
粘膜／肺免疫刺激剤として照射Ｍ．ｔｂなどの死んだマイコバクテリウム全体を用いるアイディアは、コッホ現象として知られる、Ｍ．ｔｂに先に感染した個体における過剰炎症の恐れから、見過ごされてきた。しかし、過去数十年に渡る、療法剤としてのマイコバクテリウムの臨床的使用は、その安全性に関して説得力がある証拠を提供する。数十万の個体が、高い小胞内用量（１０８）ｘ６用量の生存ＢＣＧを投与されてきており、そしていかなるコッホ様反応も医学的論文に報告はない。さらに、数百の小児および大学生に対する１９６８年に行われた１つのパイオニア研究によって、ガス産生生存ＢＣＧがやはり高用量で送達され、そして研究者らはこの参加者のいずれにも、呼吸器機能不全または発熱を認めなかった［４８］。最後に、ＴＢワクチンおよび喘息療法剤としての評価のため、死んだＭ．バカエでの皮内ワクチン接種が数年前に試験を開始した。各研究の有効性は最小限であることが立証されたが、Ｍ．バカエを投与された数千の個体において、コッホ様反応は報告されなかった。［８１、８５、８６、８７、８８、８９］。
【０１７５】
本発明は、喘息に対する免疫反応を誘発するための方法であって、哺乳動物被験体、例えばヒトまたはウシにおいて反応を誘導するのに有効な量の本発明の免疫原性組成物またはワクチン組成物の任意の１つを投与することを含んでもよい、前記方法を提供する。本発明はまた、免疫学的反応または防御反応を誘導するための方法であって、所望の哺乳動物被験体において、反応を誘導するのに有効な量の本発明の免疫原性組成物またはワクチン組成物の任意の１つを投与することを含んでもよい、前記方法を提供する。
【０１７６】
本発明はまた、防御免疫の獲得を刺激する方法であって、有効量のワクチンを用いたワクチン接種の前に、有効量の不活性化マイコバクテリウム属種を投与することを含んでもよい、前記方法もまた含む。本発明はまた、本明細書記載の組成物および／または方法を含むキットも提供する。
【０１７７】
不活性化マイコバクテリウム属種を用いて、抗原に対するアレルギー性Ｔｈ２反応を減少させてもよい。「抗原」は、本明細書において、動物またはヒトに導入された際、アレルギー症状を生じる化合物と定義される。
【０１７８】
「ワクチン」は、本明細書において、体内に投与されて能動免疫を生じる、抗原性部分の組成物と定義され、通常、修飾生存（弱毒化）または不活性化感染性病原体、あるいは感染性病原体の何らかの部分からなる。
【０１７９】
当該技術分野に知られる動物喘息モデルを用いて、照射Ｍ．Ｔｂに対する反応を性質決定してもよい。１つのモデルは、米国特許第７，５５３，４８７号に記載される、アレルギー性喘息のよく性質決定されたネズミモデルであり、このモデルにおいては、アレルゲン曝露が気道過剰反応（「ＡＨＲ」）、肺好酸球症、抗原特異的血清ＩｇＥレベルの上昇、および気道上皮粘膜含量の増加を導く。さらに、既知のアレルギー性エフェクターカスケードを用いて、喘息反応を分析してもよい。好酸球は、喘息および喘息性ＡＨＲにおける主なエフェクター細胞として示されてきている。ネズミモデルにおいて、アレルギー性喘息は、気道上皮の粘液含量の顕著な増加と関連づけられている。粘液過剰分泌は、急性喘息発作で死亡した患者由来の検死標本において、特に顕著である。
【０１８０】
本明細書記載の照射マイコバクテリウムをさらに用いて、免疫反応の陽性対照および陰性対照を生じることが可能である一方、配合物は、他の病原体の免疫反応を比較する基準として有用である。
【０１８１】
免疫反応を増進するための組成物および方法
さらなる側面において、本発明は、細胞性免疫反応を刺激するアジュバントとして、照射マイコバクテリウム属種を提供する。
【０１８２】
ウイルス、細菌および寄生虫などの病原体、ならびに環境性アレルゲンの大部分は、粘膜表面を通じて、ヒトに侵入する。粘膜免疫系および肺免疫系は、有害な病原体によるコロニー形成および侵入を防止する、部位特異的方法を発展させてきた。したがって、これらの防御の刺激は、感染を防止し、そして疾患を調節するために重要である。アジュバントは、強い防御免疫反応の生成における初期生得的免疫反応を誘発可能であり、そしてこれはワクチン有効性に非常に重要である。したがって、免疫刺激剤の役割は、ワクチン学においてより重要になってきている。
【０１８３】
ガンマ線照射Ｍ．ｔｂ（照射Ｍ．ｔｂ）は、非常に免疫原性であり、そして安全であるため、しばしば、生存Ｍ．ｔｂの代用物として実験室において用いられている。Ｔヘルパー１免疫刺激剤としての使用に関する照射Ｍ．ｔｂ研究は見過ごされてきた。エアロゾル化アプローチまたは粘膜アプローチは、局所免疫反応を提供するであろう。このアプローチは、抗原侵入を模倣し、そして呼吸器系内のある程度の区画化がありうるため、利点を提供しうる。現在、ＦＤＡが認可する粘膜アジュバントまたはエアロゾル化免疫刺激剤は存在しないため、粘膜および吸入のワクチンおよび療法剤を設計し、そして開発するための、新規戦略が必要である。
【０１８４】
１つの側面において、本発明は、結核症の見かけの症状または他の徴候を伴わないが、免疫反応の増進が望ましい被験体に送達するため、照射マイコバクテリウム属を用いたアジュバントまたは免疫刺激剤を生成するための方法を提供する。
【０１８５】
別の側面において、本発明は、ワクチンまたは療法剤のアジュバントとして使用するため、肺／粘膜Ｔｈ１刺激を生成するための方法を提供する。
適切なマイコバクテリウム属種には、例えば、結核菌、Ｍ．マリヌム、Ｍ．ボビス、Ｍ．アフリカヌム、Ｍ．カネッティ、またはＭ．ミクロッティが含まれる。いくつかの態様において、不活性化マイコバクテリウム属種細胞は、死細胞または細胞溶解物である。
【０１８６】
いくつかの態様において、マイコバクテリウム属種は、照射によって不活性化される。好ましくは照射はガンマ線照射である。他の態様において、紫外照射および／またはｘ線で不活性化を行う。他の態様において、マイコバクテリウム属種は、ホルマリンまたは熱で不活性化される。
【０１８７】
さらにさらなる側面において、照射マイコバクテリウム属を医薬組成物として提供する。医薬組成物には、場合によって、免疫学的反応が望ましい別の抗原、および／または宿主における免疫反応を増進させるアジュバントが含まれてもよい。医薬組成物にはさらに薬学的に許容されうるキャリアーが含まれてもよいし、または凍結乾燥して提供されてもよい。いくつかの態様において、医薬組成物は、宿主への鼻内送達のために配合される。
【０１８８】
いくつかの態様において、アジュバントをｔｏｌｌ様受容体アゴニストまたはパターン認識受容体アゴニストと組み合わせてもよい。適切なｔｏｌｌ様受容体アゴニストには、限定されるわけではないが、例えばＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７／８およびＴＬＲ９アゴニストが含まれる。
【０１８９】
いくつかの態様において、照射マイコバクテリウム属種を不活性微粒子またはリポソームなどのキャリアーと組み合わせる。
いくつかの態様において、照射マイコバクテリウム属種をアルミニウム塩と組み合わせる。
【０１９０】
いくつかの態様において、照射マイコバクテリウム属を油中水または水中油エマルジョンと組み合わせる。
さらに、医薬組成物をエアロゾル、スプレーパッケージとして提供するか、または加圧カートリッジによって送達する。
【０１９１】
１つの態様において、本発明は、哺乳動物宿主への鼻内送達または肺内送達のために配合されたガンマ線照射マイコバクテリウム属種を含み、そして宿主、例えばヒトに送達した際に免疫刺激用量を与える医薬組成物を提供する。
【０１９２】
別の側面において、本発明は免疫刺激剤として作用することも可能であり、そしてこれを、例えば、タンパク質、薬学的調製物、抗原、療法剤、ウイルス様粒子、および他の細菌構成要素などの他の剤と組み合わせることも可能である。
【０１９３】
いくつかの態様において、該方法で使用するためのマイコバクテリウム属は、照射で不活性化される。好ましくは、照射はガンマ線照射である。他の態様において、マイコバクテリウム属種は、ホルマリン、熱、または浸透圧で不活性化される。
【０１９４】
該方法で使用するための医薬組成物には、場合によって、宿主における免疫反応をさらに増進させるためのさらなるアジュバントが含まれてもよい。
該方法で使用するための医薬組成物には、場合によって、薬学的に許容されうるキャリアーが含まれてもよく、または凍結乾燥されて提供されてもよい。
【０１９５】
いくつかの態様において、該方法で使用するための医薬組成物は、宿主への鼻内送達のために配合される。
さらに、該方法で使用するための医薬組成物は、エアロゾルまたはスプレーパッケージとして提供される。
【０１９６】
いくつかの態様において、医薬組成物は、粘膜送達、鼻送達または肺送達のために設定されたデバイスを通じて送達される。
さらにさらなる側面において、本発明は、マイコバクテリウム属感染を治療するためのワクチンを調製するための方法であって、哺乳動物宿主への鼻内送達または肺送達のための不活性化マイコバクテリウム属種の免疫学的に刺激する用量を配合する工程を含む、前記方法を提供する。
【０１９７】
いくつかの態様において、結核症の非ヒト動物モデルにおいて、該方法には、アジュバント用量を試験することが含まれる。動物モデルは、例えばマウス、モルモット、ウサギ、ウシ、または非ヒト霊長類であってもよい。
【０１９８】
いくつかの態様において、不活性化マイコバクテリウムを、無機塩、オリゴヌクレオチド、油エマルジョンおよびサポニンに基づく混合物を含む他のアジュバントと組み合わせてもよい。
【０１９９】
いくつかの態様において、不活性化マイコバクテリウムを、コレラ毒素（ＣＴ）、大腸菌熱不安定性毒素（ＬＴ）、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、ＤＮＡ、あるいは微粒子、例えばビロソーム、リポソーム、コクリエート、ポリマー性微小球体、粘膜付着性ポリマー、または免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）と組み合わせてもよい。
【０２００】
いくつかの態様において、不活性化マイコバクテリウムを、脂質に基づくアジュバントまたは送達系と組み合わせてもよい。これらには、限定されるわけではないが、リポソーム（エステル脂質から作製される陰イオン性および陽イオン性閉鎖ビヒクル）、プロテオリポソーム、コクリエート（水性空間を伴わずに、ロールアップした二層シートに変換されたリポソーム）、およびプロテオリポソーム・コクリエート、イスコマトリックス、ビロソーム、ユーロシン、およびモノホスホリル脂質Ａが含まれる。
【０２０１】
いくつかの態様において、上述のアジュバントを細菌病原体またはその構成要素と組み合わせる。細菌には、限定されるわけではないが、肺炎球菌、髄膜炎菌、Ａ群連鎖球菌、Ｂ群連鎖球菌、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、フェカリス菌、緑膿菌、大腸菌、クレブシエラ・ニューモニア、結核菌、トラコーマクラミジア、およびヘリコバクター・ピロリが含まれる。
【０２０２】
いくつかの態様において、前述のアジュバントを弱毒化または不活性化ウイルス構成要素または全ウイルスと合わせる。ヒト・ウイルスには、ライノウイルス、コロナウイルス、インフルエンザウイルス、アデノウイルス、ヒト・パラインフルエンザウイルス、ヒト呼吸器合胞体ウイルス、アデノウイルス、エンテロウイルス、パラミクソウイルスおよびメタニューモウイルスが含まれる。組成物には、コクサッキーウイルス属、エコーウイルス、エプスタインバーウイルスおよびサイトメガロウイルスが含まれてもよい。
【０２０３】
いくつかの態様において、提唱されるアジュバントを例えば、ウイルス：ＰＩ３、ＩＢＲ、ＢＶＤ、ＢＲＳＶ、アデノウイルス、ライノウイルス、ヘルペスウイルスＩＶ、エンテロウイルス、ＭＣＦおよびレオウイルスなどの家畜において疾患を引き起こしうるウイルスと組み合わせて用いてもよい。
【０２０４】
いくつかの態様において、提唱されるアジュバントを、ウシ・カルシウイルス、ウシ・パルボウイルス、ＢＨＶ４、ウシ・レオウイルス、ウシ・エンテロウイルス、ウシ・ライノウイルス、および悪性カタル熱ウイルスを引き起こすと推測される病原体と組み合わせてもよい。
【０２０５】
他の態様において、提唱されるアジュバントを、ウシ鼻気管炎ウイルス、１型ウシ・ヘルペスウイルス、３型パラインフルエンザウイルス、ウシ呼吸器合胞体ウイルス、ウシ・ウイルス性下痢ウイルス、ウシ・アデノウイルスおよびウシ・コロナウイルスと組み合わせて使用してもよい。
【０２０６】
いくつかの態様において、当業者には適切だと考えられるように、これらのウイルスまたはその構成要素を、ベクター、例えばＤＮＡベクターを通じて送達してもよい。他の態様において、提唱されるアジュバントを、細菌、例えばヘモフィルス属、ウレアプラズマ・ディバースム、マイコプラズマ・ディスパー、マイコプラズマ・ボビス、およびマイコプラズマ・ボビリニス、マンヘミア・ヘモリチカ、パスツレラ・マルトシダ、ヘモフィルス・ソムヌスを含むパスツレラ科と組み合わせて用いてもよい。
【０２０７】
１以上の不活性化マイコバクテリウム属種を用いて、本発明記載の組成物を調製し、次いで、被験体への肺送達および粘膜送達のために配合する。不活性化マイコバクテリウム属種を調製するための方法は、ＷＯ２００８／１２８０６５およびＵＳ２０１００１１２００７に記載される。ガンマ線照射を用いて、マイコバクテリウムを不活性化可能であり、そして１０２０確度まで結核菌を殺すのに必要な線量は、２．４メガラドである。例えば、１３７Ｃｓ（セシウム）を用いて、１５４３ラド／分で２７時間、２．５メガラドの総投薬量で細胞に照射してもよい。
【０２０８】
不活性化マイコバクテリウム属は、被験体に肺送達、経口送達、または粘膜送達された際、細胞性免疫反応を刺激する免疫調節剤またはアジュバントとして作用すると仮定される。不活性化マイコバクテリウムを粘膜または肺内系に送達して、ワクチンアジュバントとして作用させるか、またはＴ細胞サブセット（Ｔｈ１、Ｔｈ１７、制御性Ｔ細胞）を活性化させるワクチンアジュバントとして作用させることも可能である。照射マイコバクテリウム属は、免疫刺激剤として興味深い化合物とする特異的な特徴を有する。照射Ｍ．ｔｂの細胞壁上の抗原は、生存Ｍ．ｔｂと類似の自然免疫反応を誘発する［２５、２６、２８、９０］。ガンマ線照射マイコバクテリウムは、アポトーシスを経て、そして樹状細胞（ＤＣ）によって呑み込まれうる。ＤＣは、Ｔ細胞に対してマイコバクテリウム抗原を提示し、Ｔ細胞はＣＤ４  Ｔｈ１およびＣＤ８細胞傷害性細胞を活性化する［２６］。ガンマ線照射Ｍ  ｔｂはまた、一酸化窒素放出を誘導可能であり［２５］、そして生存Ｍ  ｔｂに対するものと類似のＴヘルパー（Ｔｈ）反応を誘発可能である［２６］。
【０２０９】
理論によって束縛されることは望ましくないが、本発明者らは、呼吸器粘膜に送達された際、エアロゾル化不活性化マイコバクテリウム属種から誘発される免疫反応が、呼吸器上皮における抗原提示細胞の直接刺激によって、肺系および呼吸器系における免疫反応を誘発するユニークな能力を提供しうると推測する。感染性疾患ならびに環境アレルゲンの９０％より多くが、粘膜表面を通じて宿主に侵入し、そして粘膜免疫の刺激は、こうした感染およびアレルゲンを制御する最適なアプローチでありうる［６８］。現在のワクチンの大部分は全身性に送達され、そしてこれらは、呼吸器免疫または粘膜免疫を誘発するのに失敗している［６８］。理想的な免疫経路は、病原体侵入の部位に基づき、そして呼吸器系において、選択されるべきであり、呼吸器系には、いくつかの区画化が存在する。
【０２１０】
最近の証拠によって、肺リンパ球が、初期免疫反応を開始する際、局在化されたままであり、そして限定された数のＢ細胞およびＴ細胞のみが全身に遊走することが示唆されている［３４、３５］。他の粘膜組織に比較して、肺血管系および間質は、より多くの循環Ｔ細胞を捕捉する［９１］。ヒト肺リンパ解剖は、局所肺リンパ節から胸管に進入した細胞が、他の組織に到達する前に、肺動脈血中で、肺に戻ってくる点でユニークである。ある程度のリンパ球は、全身循環へと通過していく可能性もあるが、活性化Ｔ細胞は、血管内皮に付着し、そして肺に戻り、したがって、Ｔ細胞が感染病巣近くに維持される傾向がある［３６］。したがって、気道管腔および粘膜免疫細胞をターゲティングすることは、有効なワクチン接種戦略を開発するために重要な暗示を保持する。さらに、気道管腔／粘膜送達ワクチンは、針の必要性を排除し、そして大流行に直面した際に、迅速なワクチン接種反応を可能にするなどの大きな利点を有するであろう。こうしたものとして、気道／管腔ワクチン接種には多大な商業的潜在性がある。
【０２１１】
マイコバクテリウムは、固有のアジュバント特性を所持する。これらの特性には、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）を通じて、樹状細胞（ＤＣ）を活性化し［９２］［９３、９４、９５］、炎症促進性サイトカインを誘導し、そして細胞内ＭＨＣプロセシング区画をターゲティングする能力が含まれる。呼吸器粘膜アジュバントを評価する実験研究は、大部分、鼻内送達または経口粘膜送達の方法に費やされてきているが、これは、免疫反応の解剖学的誘導の観点からは、ワクチンのエアロゾル送達とは異なる可能性もある。吸入によるエアロゾルワクチン接種は、小気道を有効にターゲティング可能である。これに関して、吸入器からモルモットに送達された乾燥ＢＣＧはバチルス負荷を有意に減少させることが示された［９６］。エアロゾル化による粘膜および気道管腔ワクチン接種の効果はなお評価すべきままである。
【０２１２】
粘膜／肺免疫刺激剤として照射マイコバクテリウム属種などの死んだマイコバクテリウム全体を用いるアイディアは、コッホ現象として知られる、Ｍ．ｔｂに先に感染した個体における過剰炎症の恐れから、見過ごされてきた。しかし、過去数十年に渡る、療法剤としてのマイコバクテリウムの臨床的使用は、その安全性に関して説得力がある証拠を提供する。数十万の個体が、高い小胞内用量（１０８）ｘ６用量の生存ＢＣＧを投与されてきており、そしていかなるコッホ様反応も医学的論文に報告はない。さらに、数百の小児および大学生に対する１９６８年に行われた１つのパイオニア研究によって、ガス産生生存ＢＣＧがやはり高用量で送達され、そして研究者らはこの参加者のいずれにも、呼吸器機能不全または発熱を認めなかった［４８］。最後に、ＴＢワクチンおよび喘息療法剤としての評価のため、死んだＭ．バカエを含む皮内ワクチン接種が数年前に試験を開始した。各研究の有効性は最小限であることが立証されたが、Ｍ．バカエを投与された数千の個体において、コッホ様反応は報告されなかった。［８１、８５、８６、８７、８８、８９］。
【０２１３】
本発明は、免疫反応を誘発するための方法であって、哺乳動物被験体、例えばヒトまたはウシにおいて反応を誘導するのに有効な量の本発明の免疫原性組成物またはワクチン組成物の任意の１つを投与することを含んでもよい、前記方法を提供する。本発明はまた、免疫学的反応または防御反応を誘導するための方法であって、所望の哺乳動物被験体において、反応を誘導するのに有効な量の本発明の免疫原性組成物またはワクチン組成物の任意の１つを投与することを含んでもよい、前記方法を提供する。
【０２１４】
本発明はまた、防御免疫の獲得を刺激する方法であって、有効量のワクチンを用いたワクチン接種の前に、有効量の不活性化マイコバクテリウム属種を投与することを含んでもよい、前記方法もまた含む。本発明はまた、本明細書記載の組成物および／または方法を含むキットも提供する。
【０２１５】
不活性化マイコバクテリウム属種を用いて、抗原またはワクチンに対する反応を増加させてもよい。「抗原」は、本明細書において、動物またはヒトに導入された際、抗体形成および細胞仲介性免疫を生じるであろう化合物と定義される。
【０２１６】
「アジュバント」は、本明細書において、配合物において特異的ワクチン抗原と組み合わせて用いた際、生じる免疫反応を増大させるかあるいは別の方式で改変するかまたは修飾する単数または複数の化合物と定義される。
【０２１７】
「ワクチン」は、本明細書において、ほとんどの場合、アジュバントとともに、体内に投与されて能動免疫を生じる、抗原性部分の組成物と定義され、通常、修飾生存（弱毒化）または不活性化感染性病原体、あるいは感染性病原体の何らかの部分からなる。
【０２１８】
本発明で使用するための抗原は、上に示す定義内に属する任意の望ましい抗原であってもよい。抗原は、商業的に入手可能であるか、または当業者はこうした抗原を産生可能である。ワクチンを構成する抗原性部分は、修飾生存または死菌微生物のいずれか、あるいは微生物または限定されるわけではないが腫瘍細胞を含む他の細胞から精製された天然産物、合成産物、遺伝子操作タンパク質、ペプチド、多糖もしくは類似の産物、またはアレルゲンであってもよい。抗原性部分はまた、タンパク質、ペプチド、または多糖のサブユニットであってもよい。抗原はまた、遺伝子抗原、すなわち免疫反応を生じるＤＮＡまたはＲＮＡであってもよい。本発明にしたがって使用可能な抗原の代表には、限定されるわけではないが、予防または療法ワクチンおよびアレルゲンにおいて使用可能な、自己免疫疾患、ホルモン、または腫瘍抗原に加えて、ウイルス、細菌、真菌、寄生虫および他の感染性病原体から得られる天然、組換えまたは合成産物が含まれる。ウイルスまたは細菌産物は、生物が酵素切断によって産生した構成要素であってもよいし、または一般の当業者に周知の組換えＤＮＡ技術によって産生された生物の構成要素であってもよい。本発明の性質および送達様式のため、本発明はまた、薬剤、例えばホルモン、抗生物質および抗ウイルス剤のための送達系としても機能するであろうことが想像される。
【０２１９】
さらに、本明細書記載の照射Ｍｔｂを用いて、免疫反応のための、例えば基準として有用な配合物において、陽性対照または陰性対照を生じて、他の病原体の免疫反応を比較することも可能である。
【０２２０】
粘膜送達のためのストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）組成物および該組成物を用いる方法
本発明はさらに、免疫反応を増進するための組成物、そしてより詳細には、粘膜送達のために配合されるストレプトコッカス・ピオゲネスの組成物を提供する。好ましくは、不活性化Ｓ．ピオゲネスを用いて、免疫反応をもたらし、そして将来のＳ．ピオゲネス曝露に対する防御を提供して、侵襲性および非侵襲性感染を減少させる。
【０２２１】
ストレプトコッカス・ピオゲネスはまた、Ａ群連鎖球菌としても知られ、β群溶血性連鎖球菌のメンバーである。Ｓ．ピオゲネスは、小児および青年を感染させる最も一般的な病原性細菌と見なされ、そしてしたがって、考慮すべき健康上の問題である。Ｓ．ピオゲネスの大部分の株は、一過性であり、そして比較的無害である感染を引き起こすが、いくつかの株は、かなりの罹患率を引き起こしうる。Ｓ．ピオゲネスは、非侵襲性疾患、例えば咽頭炎、中耳炎、ならびにそれに続く急性リウマチ熱および急性糸球体腎炎を生じさせる。Ａ群連鎖球菌属によって引き起こされる侵襲性感染には、壊死性筋膜炎（ＮＦ）、菌血症性肺炎、敗血症、および連鎖球菌毒性ショック症候群が含まれる。Ｓ．ピオゲネスは、一般的に、５〜１５歳において、咽頭炎を示し、そして小児咽頭炎の最大３０％に関与すると考えられる［９７］。さらに、Ａ群連鎖球菌は、年間５０万の死亡の原因であり、そして財務コストは、米国内だけで年間約５億ドルと概算される［９８］。侵襲性Ｓ．ピオゲネス症例のおよそ９１％は入院するため、これはいまだ取り組まれていない、医療制度に対する大きな負担である［９９］。
【０２２２】
本発明は、好ましくは被験体に粘膜送達するために配合された、１以上のタイプのＳ．ピオゲネスを含む医薬組成物を提供する。Ｓ．ピオゲネスを不活性化する好ましい方法は、ガンマ線照射を介したものである。医薬組成物をアジュバントとともに用いてもよいし、あるいは弱毒化、非感染性、または不活性化細菌またはその細胞溶解物と組み合わせて用いてもよい。
【０２２３】
１つの側面において、組成物をストレプトコッカス・ピオゲネスに対するワクチンとして用いる。
１つの側面において、組成物は、非侵襲性および侵襲性疾患に対する療法剤を提供する。
【０２２４】
不活性化細菌の提唱される組成物をいくつかのワクチン接種戦略とともに利用してもよく：予防的に、細菌感染を防止するために感染前に投与してもよいし、曝露後に投与して、排除するかまたは不顕性に封じ込め、そして再活性化を防止してもよい。本発明の組成物を用いて、現在のワクチンを置換してもよいし、そして／またはすでに適切にワクチン接種された被験体において、他のワクチンのブースターとして用いてもよい。
【０２２５】
１つの側面において、本発明は、ガンマ線照射されたＳ．ピオゲネスを含む医薬組成物であって、哺乳動物宿主への鼻内送達、粘膜送達または肺内送達のために配合され、そして宿主に送達された際、免疫学的に防御する用量を含む、前記組成物を提供する。
【０２２６】
１つの側面において、組成物には、定義された状態の連鎖球菌属集団が含まれる。連鎖球菌属の状態は、例えば、栄養枯渇、極端な温度、鉄枯渇、好気性増殖、嫌気性増殖、酸化ストレス、あるいは２以上のこれらの状態の組み合わせから生じる状態にある細胞を意味しうる。いくつかの態様において、細胞の９０％、９５％、９８％、９９％または９９．９％より多くが、あらかじめ決定された状態にある。
【０２２７】
いくつかの態様において、不活性化Ｓ．ピオゲネス細胞は、死細胞または細胞溶解物である。
一般的に、多くの細菌種または株を本発明の組成物および方法において使用可能である。１つの側面において、本発明は、１以上の異なる状態の細菌種の医薬組成物を提供し、ここで、状態は、不活性化される前に多様な刺激に対して細菌が曝露された結果でありうる。
【０２２８】
別の側面において、細菌は、異なる抗原性発現を可能にするため、異なる刺激または環境に曝露される。
いくつかの態様において、細菌のある程度は不活性化されるかまたは弱毒化される。
【０２２９】
いくつかの態様において、細菌は照射で不活性化される。好ましくは、照射はガンマ線照射であるが、ｘ線およびマイクロ波を含む他のタイプの照射を用いてもよい。
いくつかの態様において、細菌は塩を通じた浸透圧または乾燥プロセスで不活性化される。
【０２３０】
医薬組成物には、場合によって、宿主における免疫反応を増進させるアジュバントが含まれてもよい。
いくつかの態様において、Ｓ．ピオゲネスは、不活性化マイコバクテリウム属種と組み合わされ、後者がアジュバントとして作用してもよい。
【０２３１】
医薬組成物には、場合によって、薬学的に許容されうるキャリアーが含まれてもよいし、または医薬組成物は凍結乾燥されて提供されてもよい。
医薬組成物には、場合によって、薬学的に許容されうるキャリアー、例えばグルコース、ラクトースまたはソルビトールが含まれてもよい。
【０２３２】
いくつかの態様において、医薬組成物を宿主への鼻内送達のために調製してもよい。
さらに、医薬組成物をエアロゾルまたはスプレーパッケージとして提供してもよい。
１つの態様において、本発明は、哺乳動物宿主に鼻内送達または肺内送達するために配合されており、そして宿主、例えばヒトに送達された際、免疫学的に防御する用量を与える、ガンマ線照射されたＳ．ピオゲネス種を含む、医薬組成物を提供する。
【０２３３】
別の側面において、本発明は、Ｓ．ピオゲネスによって引き起こされる感染に対して哺乳動物にワクチン接種する方法を提供する。該方法には、不活性化Ｓ．ピオゲネス種を含む組成物を哺乳動物に投与する工程が含まれ、ここで哺乳動物のワクチン接種は鼻内または肺内であり、そして組成物は、宿主に送達された際、免疫学的に防御する用量を含む。
【０２３４】
別の側面において、本発明は、別の抗原の送達を促進する免疫刺激剤を提供する。
１つの側面において、本発明は、不活性化Ｓ．ピオゲネス種を含む医薬組成物であって、哺乳動物宿主への鼻内送達、粘膜送達または肺内送達のために配合され、そして宿主に送達された際、免疫学的に防御する用量を含む、前記組成物を提供する。
【０２３５】
いくつかの態様において、不活性化細胞は、死細胞または細胞溶解物である。被験体がヒトである場合、好ましくは、Ｓ．ピオゲネス種細胞の１００％が照射で不活性化される。
【０２３６】
いくつかの態様において、不活性化細胞は、細菌の弱毒化株と混合されている。
好ましくは、照射はガンマ線照射である。
該方法で使用するための医薬組成物には、場合によって、宿主における防御免疫反応を増進するアジュバントが含まれてもよい。
【０２３７】
該方法で使用するための医薬組成物には、場合によって、薬学的に許容されうるキャリアーが含まれてもよく、または凍結乾燥されて提供されてもよい。
いくつかの態様において、該方法で使用するための医薬組成物は宿主への鼻内送達のために配合されている。
【０２３８】
さらに、該方法で使用するための医薬組成物は、エアロゾルまたはスプレーパッケージとして提供される。
いくつかの態様において、医薬組成物は、鼻送達または肺送達のために設定されたデバイスを通じて送達される。
【０２３９】
いくつかの態様において、医薬組成物は、咀嚼カプセル、ロゼンジ、溶解可能フィルムまたはガムを通じて送達される。
さらにさらなる側面において、本発明は、Ｓ．ピオゲネス感染を治療するためのワクチンを調製するための方法であって、哺乳動物宿主への鼻内送達または肺送達のための照射されたＳ．ピオゲネスの免疫学的に防御する用量を配合する工程を含む、前記方法を提供する。
【０２４０】
いくつかの態様において、該方法には、非ヒト動物モデルにおいてワクチンを試験する工程が含まれる。動物モデルは、例えば、マウス、モルモット、ウサギ、ウシ、または非ヒト霊長類であってもよい。
【０２４１】
１つの態様において、本発明には、ガンマ線照射されたＳ．ピオゲネスのための組成物の一部として、細かいキャリアーおよび粗いキャリアーとしての異なる糖の使用が含まれる。粘膜送達Ｓ．ピオゲネスを、全体でまたは部分的構成要素としてのいずれかで、細菌またはウイルス構成要素を含有する組成物の一部として用いてもよい。粘膜表面へのＳ．ピオゲネスの局在送達は、咽頭炎、皮膚および軟組織感染、例えば壊死性筋膜炎または菌血症肺炎および連鎖球菌後の疾患、例えば糸球体腎炎またはリウマチ熱などの両方の疾患に対して適切なワクチンを提供しうる。
【０２４２】
ストレプトコッカス・ピオゲネスはまた、Ａ群連鎖球菌としても知られ、β群溶血性連鎖球菌のメンバーである。Ｓ．ピオゲネスは、小児および青年を感染させる最も一般的な病原性細菌と見なされ、そしてしたがって、考慮すべき健康上の問題である。Ｓ．ピオゲネスの大部分の株は、一過性であり、そして比較的無害である感染を引き起こすが、いくつかの株は、致死性でありうる。Ｓ．ピオゲネスは、非侵襲性疾患、例えば咽頭炎、中耳炎、ならびに感染性疾患、例えば急性リウマチ熱および急性糸球体腎炎を生じさせる。Ａ群連鎖球菌によって引き起こされる侵襲性感染には、壊死性筋膜炎、菌血症性肺炎、敗血症、および連鎖球菌毒性ショック症候群が含まれる。典型的には資源の乏しい地域は、急性リウマチ熱、侵襲性疾患、リウマチ性心臓疾患、急性連鎖球菌感染後の糸球体腎炎、および風土病性連鎖球菌膿加疹によって影響を受ける。資源が豊富な国は、大きな公衆衛生優先事項として咽頭炎および侵襲性疾患に直面する［１００］。
【０２４３】
Ｓ．ピオゲネスは、一般的に、５〜１５歳において、咽頭炎を示し、そして小児咽頭炎の最大３０％に関与すると考えられる［９７］。さらに、Ａ群連鎖球菌は、年間５０万の死亡の原因であり、そして米国内だけで年間およそ５億ドルのコストが掛かると概算される［９８］。侵襲性Ｓ．ピオゲネス症例のおよそ９１％は入院するため、いまだ取り組まれていない、医療制度に対する大きな負担がある［９９］。
【０２４４】
ストレプトコッカス・ピオゲネスのｅｍｍ遺伝子は、Ｓ．ピオゲネスの少なくとも１００の既知のＭ血清特異性の細胞表面Ｍ病原性タンパク質をコードする［１０１］。ｅｍｍまたはＭタイピングに基づくＡ群連鎖球菌の疫学を記載する１９９０〜２００９年の研究総説によると、総数２０５のｅｍｍ型が同定されてきている［１００］。地域的および臨床的所見は異なる可能性があるが、最も一般的なＳ．ピオゲネスｅｍｍ型は、典型的には、ｅｍｍ１、ｅｍｍ１２、ｅｍｍ２８、ｅｍｍ３、およびｅｍｍ４である。米国疾病対策予防センターの活動性細菌コアサーベイランスの２００４年のデータによれば、３０の最も一般的なｅｍｍ型が、単離体の９５％を占め、一方、ｅｍｍ１型（２２％）、３型（９％）、２８型（９％）、１２型（９％）、および８９型（６％）が最も一般的であり、そして累積的に単離体の５５％を占めた。さらに、２６の最も一般的なｅｍｍ型が単離体の９３％を占めた。ｅｍｍ型によって占められる疾患の比率は、１０年間のサーベイランスに渡ってほとんど変化せず、そして小児および年長者の間で類似であった［９９］。
【０２４５】
不活性化Ｓ．ピオゲネスの粘膜送達は、免疫反応をもたらすのを補助し、そして将来のＳ．ピオゲネス曝露に対する防御を提供して、侵襲性および非侵襲性感染を減少させると想定される。１つの態様において、不活性化ｅｍｍ型のポートフォリオを用いて、最大防御を提供する。別の態様において、本発明は、Ｓ．ピオゲネスの１以上のｅｍｍ型を用いて調製され、次いで、被験体に対する粘膜送達のために配合される。組成物は、被験体の粘膜／鼻粘膜に送達されると、局在化免疫反応を誘発すると想定される。
【０２４６】
本発明者らが考える、不活性化粘膜送達Ｓ．ピオゲネスの使用および配合が、見過ごされてきた１つの理由は、提唱される発明が、照射結核菌に関する本発明者のユニークでそして独自の見識によるためである。したがって、必要性は明らかでなく、または容易に仮定されなかった。本発明者らは、先の発明で、免疫を促進する手段として照射結核菌をエアロゾル化することを提唱し、そしてその使用を支持する未公表のデータを有する。不活性化Ｓ．ピオゲネスに対する曝露は、マクロファージのさらなる抗原提示を促進しうるため、本発明者らは、潜在的なワクチンが、長期免疫反応を育成すると仮定する。さらに、投与経路は、粘膜に送達されたＳ．ピオゲネスが免疫調節剤、療法剤、またはアジュバントとしてさらなる役割を提供しうるものとなる。
【０２４７】
医薬組成物で用いられる細菌には、全細胞または細胞の一部、例えば細胞溶解物が含まれてもよい。例えば、適切な構成要素には、ガンマ線照射全細胞溶解物、ガンマ線照射培養ろ過タンパク質、ガンマ線照射細胞壁分画、ガンマ線照射細胞膜分画、ガンマ線照射細胞質ゾル分画、ガンマ線照射可溶性細胞壁タンパク質、およびガンマ線照射可溶性タンパク質プールが含まれる。
【０２４８】
医薬組成物中で用いられるべき細菌には、不活性化Ｓ．ピオゲネスとともに、弱毒化株も含まれてもよい。
医薬組成物の調製
薬学的に許容されうるキャリアーと合わせて、医薬組成物を形成することによって、宿主に投与するための不活性化Ｓ．ピオゲネスを調製する。キャリアーは、グルコース、スクロース、ラクトース、ソルビトール、例えば、生理学的生理食塩水、ミネラルオイル、植物油、水性カルボキシメチルセルロースナトリウム、または水性ポリビニルピロリドンであってもよい。方法は、例えば、ＷＯ／２００８／１２８０６５、またはそのＵＳ国内移行対応出願２０１００１１２００７に記載されるように実行されてもよく、その内容はその全体が本明細書に援用される。不活性化細胞または細胞溶解物を薬学的に許容されうるキャリアーと合わせて、医薬組成物を形成することによって、宿主に投与するための不活性化Ｓ．ピオゲネスを調製する。キャリアーは、グルコース、スクロース、ラクトース、ソルビトール、例えば、生理学的生理食塩水、ミネラルオイル、植物油、水性カルボキシメチルセルロースナトリウム、または水性ポリビニルピロリドンであってもよい。いくつかの態様において、キャリアーは、ヒト被験体に療法的に投与するために十分に純粋である。当業者は、例えば等張性ビヒクル、例えば塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、または乳酸リンゲル注射液を用いた適切な溶液を調製することが十分に可能である。保存剤、安定化剤、緩衝剤、酸化防止剤および／または他の添加剤を、必要に応じて含めてもよい。例えばＳ．ピオゲネスの投与に関連するプロトコル、配合物、投薬および臨床実施に慣れている当業者は、さらに、本発明の医薬組成物を使用するために、これらのプロトコルを容易に適応させることも可能である。Ｓ．ピオゲネスの免疫調節型を、投薬配合物に適合した方式で、そして療法的に有効でありそして免疫原性であろう量で、投与する。投与すべき量は、治療しようとする被験体に応じ、例えば個体免疫系が免疫反応を開始する能力、および望ましい防御の度合いに応じる。適切な投薬量範囲は、病因、使用、用量、および宿主の状態に応じる。最初の投与およびブースター投与のための適切な措置もまた多様であるが、典型的には、最初の投与の後、接種または他の投与が続く。したがって、組成物を単回用量で、または複数の用量で投与してもよい。１つの態様において、組成物を約１ヶ月空けて多数回の用量で投与してもよい。
【０２４９】
治療しようとする状態に応じて、組成物を単独で、あるいは他の治療または標準的ワクチンと組み合わせて、同時にまたは連続してのいずれかで投与してもよい。ワクチン接種後に組成物を投与して、そしてしたがって該組成物がワクチンのアジュバントとして作用してもよい。組成物は、咀嚼用のカプセル中に含有されてもよいし、または経口投与のためガム中に含有されてもよい。組成物をスワブで投与してもよいし、あるいは鼻スプレーまたは経口スプレーで投与してもよい。組成物は、水または生理食塩水中に懸濁された粒子中に含有されてもよい。組成物はまた、さらなるアジュバント、抗細菌剤、または当該技術分野に慣用的であるような他の薬学的活性剤も含有してもよい。アジュバントには、限定されるわけではないが、塩、エマルジョン（油／水組成物を含む）、サポニン、リポソーム配合物、ウイルス粒子、ポリペプチド、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰＳ）、核酸に基づく化合物または特定の抗原を利用する他の配合物が含まれる。適切なアジュバントには、例えば、植物油、ミョウバン、フロイントの不完全アジュバント、またはフロイントの不完全アジュバントが含まれ、油およびフロイントの不完全アジュバントが特に好ましい。他のアジュバントには、水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウム（ミョウバン）、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）、糖の合成ポリマー（ＣＡＲＢＯＰＯＬ（登録商標））、熱処理によるワクチン中のタンパク質の凝集物、アルブミンに対するペプシン処理（Ｆａｂ）抗体で再活性化されたことによる凝集物、Ｃ．パルブムなどの細菌細胞またはグラム陰性細菌の内毒素もしくはリポ多糖構成要素を含む混合物、生理学的に許容されうる油ビヒクル中のエマルジョン、例えばモノオレイン酸マンニド（Ａｒａｃｅｌ  Ａ）、またはブロック置換物として用いられるパーフルオロカーボン２０パーセント溶液を含むエマルジョン（Ｆｌｕｏｓｏｌ−ＤＡ）もまた使用可能である。組成物は、大腸菌不安定毒素（ＬＴ）およびコレラ毒素（ＣＴ）などの粘膜細菌毒素アジュバント中に、またはＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）中に含有されてもよい［６１］。他のありうる粘膜アジュバントには、Ｌ３ＴＭおよびモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）が含まれる。ワクチンには、場合によって、サイトカインまたは合成ＩＦＮ−γ誘導剤、例えばポリＩ：Ｃのみまたは上述のアジュバントとの組み合わせなどの、さらなる免疫調節物質が含まれてもよい。さらに他のアジュバントには、微粒子または生体適合性マトリックス材料のビーズが含まれる。微粒子は、当該技術分野で慣用的であるような任意の生体適合性マトリックス材料で構成されてもよく、これには限定されるわけではないが、寒天およびポリアクリレートが含まれる。
【０２５０】
当業者は、他のキャリアーまたはアジュバントもまた使用可能であることを認識するであろう。例えば、ＷｅｂｂおよびＷｉｎｋｅｌｓｔｅｉｎ［６６］に記載されるものなどのキトサンまたは任意の生体付着性送達系が使用可能である。
【０２５１】
Ｓ．ピオゲネスを含有する医薬組成物は、好ましくは、当該技術分野に知られる方法を用いた、鼻内送達または肺内送達のために配合される。アジュバントと組み合わされたＳ．ピオゲネスの配合物は、好ましくは、ワクチン接種と関連する炎症などの副作用を最小限にするように選択されるか、または配合物の安定性を改善することも可能である。アジュバントはまた、免疫刺激剤としてまたはデポとしての役割も有する可能性もある。いくつかの態様において、Ｓ．ピオゲネス組成物は、ネブライザーの改良によって、またはコンパクト・ポータブル・デバイス、用量計測吸入装置（ＭＤＩ）および乾燥粉末吸入装置（ＤＰＩ）の３つのタイプを通じて送達される。鼻内送達を、鼻スプレー、点滴器または鼻計測薬剤送達デバイスを通じて行ってもよい。計測用量吸入装置を通じて、不活性マイコバクテリウムを送達してもよい。典型的には、放出した用量の１０〜２０％のみが肺に沈着する。スプレーが高速および巨大粒子サイズのものであれば、およそ５０〜８０％の薬剤エアロゾルが中咽頭領域に衝突する。組成物は、限定されるわけではないが、糖キャリアー系などの乾燥粉末配合物中に含有されてもよい。糖キャリアー系には、ラクトース、スクロース、および／またはグルコースが含まれてもよい。ラクトースおよびグルコースは、キャリアーとしてＦＤＡに認可されている。また、典型的には直径５０〜１００マイクロメートルであるラクトース一水和物などのより大きな糖粒子もあり、こうした粒子は鼻−中咽頭に留まるが、呼吸樹を通じて、不活性化桿菌が肺胞内に移動するのを可能にする［１０２］。望ましい場合、組成物は、リポソーム配合物中に含有されてもよい。リポソームは、肺胞に到達する他の吸入粒子と同様、マクロファージによって一掃される。リポソームリン脂質のプロセシング、取り込みおよびリサイクリングは、肺胞ＩＩ型細胞を通じて、内因性界面活性剤と同じ機構を通じて起こる。
【０２５２】
結核症を防止するかまたは治療するため、上述の照射マイコバクテリウムを含有する医薬組成物を、適切な個体に投与する。用語「個体」、「被験体」、「宿主」、および「患者」は、本明細書において、交換可能に用いられ、そして本発明の療法ワクチンを用いた治療を受け入れられる細菌感染を有し、そして治療または療法が望ましい、任意の被験体を指す。Ｓ．ピオゲネスによる感染に感受性である任意の哺乳動物宿主のために、医薬組成物を調製してもよい。用語「治療」、「治療すること」、「治療する」等は、本明細書において、一般的に、望ましい薬理学的効果および／または生理学的効果を得ることを指す。効果は、疾患またはその症状を完全にまたは部分的に防止する観点から、予防的であってもよく、そして／または疾患および／または疾患に起因する不都合な影響に対する部分的または完全な安定化または治癒の観点から、療法的であってもよい。「治療」は、本明細書において、被験体、特に哺乳動物被験体、より詳細にはヒトにおける疾患のいかなる治療も含み、そしてこれには：（ａ）疾患または症状に対する素因を有しうるが、疾患または症状を有するとはいまだ診断されていない被験体において、疾患または症状が生じることを防止するか；（ｂ）疾患症状を阻害する、すなわち疾患の発展を抑止するか；または疾患症状を軽減する、すなわち疾患または症状の退行を引き起こすか、（ｃ）細菌の再感染を防止することが含まれる。したがって、投与は好ましくは、「予防的有効量」または「療法的有効量」（場合によって、予防は療法と見なされうるが）であり、これは個体に利益を示すのに十分である。投与の実際の量、ならびに投与速度および時間経過は、治療中の疾患の性質および重症度に応じるであろう。治療の処方、例えば投薬量等に関する決定は、一般開業医および他の医師または獣医師の責任の範囲内である。
【０２５３】
ワクチンで治療された被験体は、典型的には、感染細菌に対する防御免疫を有するかまたは発展させるであろう。用語「防御免疫」は、哺乳動物に投与されるワクチン、免疫原性組成物または免疫スケジュールが、病原性細菌によって引き起こされる疾患を防止するか、その発展を遅延させるか、またはその重症度を減少させるか、あるいは疾患の症状を減少させるかまたはまったく除去する免疫反応を誘導することを意味する。「感染細菌」によって、宿主において感染を確立し、そしてその結果、疾患または望ましくない症状と関連しうる、細菌を意味する。一般的に、感染細菌は、病原性細菌である。
【０２５４】
用語「免疫原性細菌組成物」、「免疫原性組成物」および「ワクチン」は、本明細書において、交換可能に用いられ、調製物中に存在するエピトープに対する免疫反応を誘発するのに十分な量で投与された際、被験体において細胞性および／または体液性免疫反応を誘発可能な調製物を意味する。
【０２５５】
ビタミンＤ代謝産物を含む組成物および該組成物を用いる方法
さらなる側面において、本発明は、肺送達および粘膜送達のために配合された、ビタミンＤの１つの型の組成物に、そしてより詳細には、ビタミンＤの代謝産物、合成実体、および前駆体を用いた用量に関する。
【０２５６】
ビタミンＤは、多くの型で存在し、そして典型的には肝臓によってカルシジオールに転換される。続いて、カルシジオールは、腎臓によって、または免疫系の単球／マクロファージによってのいずれかで、ビタミンＤの生物学的活性型である、カルシトリオールを作製するのに用いられる。後者の状況において、単球またはマクロファージがカルシトリオールを産生し、カルシトリオールは、局所で、病原体に対してサイトカインとして作用する。肺の粘膜および肺内表面へのカルシトリオールの局在化送達は、アジュバントまたは療法剤としての適用を提供しうる。カルシトリオールは、ビタミンＤ受容体の強力なリガンドであることが示されてきており、そしてｉｎ  ｖｉｔｒｏの研究によって、免疫学分野におけるその使用の証拠が提供されてきている。
【０２５７】
本発明は、細菌性疾患を防止し、そして／または治療するためのワクチンのためのアジュバントを提供する。不活性化または弱毒化細菌およびカルシトリオールを含有する組成物を、いくつかのワクチン接種戦略とともに利用可能であり：予防的に、感染前に投与して、細菌感染を防止してもよいし、そして曝露後に投与した際、予防的に、排除するかまたは不顕性に封じ込め、そして再活性化を防止してもよい。該組成物はまた、細菌、ウイルス、または真菌感染、タバコを含む毒素からの肺損傷、間質性肺疾患を引き起こす任意のプロセスまたは自己免疫プロセスのための治療としても使用可能である。最後に、該組成物を用いて、現在のワクチンを置換してもよいし、そして／またはすでに適切にワクチン接種された患者において、他のワクチンのブースターとして用いてもよい。
【０２５８】
１つの側面において、本発明は、カルシトリオールを含む医薬組成物であって、哺乳動物宿主への鼻内送達、粘膜送達または肺内送達のために配合され、そして宿主に送達された際、免疫学的に防御する用量を含む、前記組成物を提供する。
【０２５９】
１つの側面において、本発明は、カルシトリオールおよび１以上の細菌を含む医薬組成物であって、哺乳動物宿主への鼻内送達、粘膜送達または肺内送達のために配合され、そして宿主に送達された際、免疫学的に防御する用量を含む、前記組成物を提供する。
【０２６０】
１つの側面において、本発明は、自己免疫疾患、例えば関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、Ｉ型糖尿病、脳脊髄炎、または炎症性腸疾患のための療法を提供する。
カルシトリオールは、照射または不活性化マイコバクテリウム種とともに組成物として使用可能である。適切なマイコバクテリウム属種には、例えば、結核菌、Ｍ．マリヌム、Ｍ．ボビス、Ｍ．アフリカヌム、またはＭ．ミクロッティが含まれる。いくつかの態様において、不活性化マイコバクテリウム属種細胞は、死細胞または細胞溶解物である。
【０２６１】
一般的に、結核菌コンプレックスのメンバーである任意のマイコバクテリウム属種または株が、本発明の組成物および方法において使用可能である。Ｍ  ｔｂコンプレックスのメンバーである適切なマイコバクテリウム属種には、例えば、マイコバクテリウム・ボビス、マイコバクテリウム・アフリカヌム、マイコバクテリウム・ミクロッティ、および結核菌が含まれる。遺伝的に類似のマイコバクテリウムには、マイコバクテリウム・カネッティおよびマイコバクテリウム・マリヌムが含まれる。対応する宿主種および治療しようとするマイコバクテリウム属関連疾患のタイプに合わせて、特定の種または種の組み合わせを選択する。ヒトにおいて疾患を引き起こす他のマイコバクテリウムには、例えば、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラレ、らい菌、マイコバクテリウム・レプラムリウム、パラ結核菌、マイコバクテリウム・ウルセランス、マイコバクテリウム・スメグマチス、マイコバクテリウム・ゼノピ、マイコバクテリウム・ケロネー、マイコバクテリウム・フォーチュイタム、マイコバクテリウム・ファーシノゲネス、マイコバクテリウム・フラブム、マイコバクテリウム・ヘモフィツム、マイコバクテリウム・カンサシ、マイコバクテリウム・フレイ、マイコバクテリウム・スクロフラセウム、マイコバクテリウム・セネガレンス、マイコバクテリウム・シミエ、マイコバクテリウム・サーモレジスチブル、およびマイコバクテリウム・ゼノピが含まれる。
【０２６２】
さらなる適切な細菌には、例えば、アセトバクター・アウランチウス、アシネトバクター・バウマンニ、アクチノミセス・イスラエリ、アグロバクテリウム・ラジオバクター、アグロバクテリウム・ツメファシエンス、アゾリゾビウム・カウリノダンス、アゾトバクター・ビネランディ、アナプラズマ属、アナプラズマ・ファゴサイトフィルム、バチルス属、炭疽菌、バチルス・ブレビス、バチルス・セレウス、バチルス・フシフォルミス、バチルス・リケニフォルミス、バチルス・メガテリウム、バチルス・ミコイデス、バチルス・ステアロテルモフィルス、枯草菌、バクテロイデス属、バクテロイデス・フラジリス、バクテロイデス・ジンジバリス、バクテロイデス・メラニノゲニクス、バルトネラ属、バルトネラ・ヘンセレ、バルトネラ・クィンタナ、ボルデテラ属、ボルデテラ・ブロンキセプティカ、百日咳菌、ボレリア・ブルグドフェリ、ブルセラ属、ウシ流産菌、ブルセラ・メリテンシス、ブルセラ・スイス、バークホルデリア属、バークホルデリア・マレイ、バークホルデリア・シュードマレイ、バークホルデリア・セパシア、カリマトバクテリウム・グラヌロマティス、カンピロバクター属、カンピロバクター・コリ、カンピロバクター・フィータス、カンピロバクター・ジェジュニ、カンピロバクター・ピロリ、クラミジア属、トラコーマクラミジア、クラミドフィラ属、肺炎クラミジア、オウム病クラミジア、クロストリジウム属、ボツリヌス菌、クロストリジウム・ディフィシレ、ウェルシュ菌、破傷風菌、コリネバクテリウム属、ジフテリア菌、コリネバクテリウム・フシフォルメ、Ｑ熱コクシエラ、エーリキア・シャフェンシス、エンテロバクター・クロアカ、エンテロコッカス属、エンテロコッカス・アビウム、エンテロコッカス・デュランス、フェカリス菌、フェシウム菌、エンテロコッカス・ガリナルム、エンテロコッカス・マロラツス、大腸菌、野兎病菌、フゾバクテリウム・ヌクレアツム、ガルドネレラ・バジナリス、ヘモフィルス属、ヘモフィルス・デュクレイ、インフルエンザ菌、パラインフルエンザ菌、ヘモフィルス・ペルツシス、ヘモフィルス・バジナリス、ヘリコバクター・ピロリ、クレブシエラ・ニューモニア、ラクトバチルス属、アシドフィルス菌、カゼイ菌、ラクトバチルス・ラクチス、レジオネラ・ニューモフィラ、リステリア・モノサイトゲネス、メタノバクテリウム・エクストロクエンス、ミクロバクテリウム・マルチフォルメ、ミクロコッカス・ルテウス、モラクセラ・カタリス、マイコバクテリウム属、マイコバクテリウム・アビウム、マイコバクテリウム・ボビス、マイコバクテリウム・ジフテリア、マイコバクテリウム・イントラセルラレ、らい菌、マイコバクテリウム・レプラムリウム、マイコバクテリウム・フレイ、マイコバクテリウム・スメグマチス、結核菌、マイコプラズマ属、マイコプラズマ・フェルメンタンス、マイコプラズマ・ジェニタリウム、マイコプラズマ・ホミニス、マイコプラズマ・ペネトランス、肺炎マイコプラズマ、ラクトバチルス・ブルガリクス、ナイセリア属、淋菌、髄膜炎菌、パスツレラ属、パスツレラ・マルトシダ、野兎病菌、ペプトストレプトコッカス属、ポルフィロモナス・ジンジバリス、緑膿菌、リゾビウム・ラジオバクター、リケッチア属、発疹チフスリケッチア、リケッチア・ピシタッシ、リケッチア・クィンタナ、リケッチア・リケッチィ、リケッチア・トラコーマ、ロシャリメア属、ロシャリメア・ヘンセラ、ロシャリメア・クィンタナ、ロティア・デントカリオサ、サルモネラ属、サルモネラ菌、チフス菌、ネズミチフス菌、セラチア・マルセセンス、志賀赤痢菌、スタフィロコッカス属、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、ステノトロフォモナス・マルトフィリア、ストレプトコッカス属、ストレプトコッカス・アガラクチエ、ストレプトコッカス・アビウム、ストレプトコッカス・ボビス、ストレプトコッカス・クリセツス、ファシウム菌、フェカリス菌、ストレプトコッカス・フェルス、ストレプトコッカス・ガリナルム、ストレプトコッカス・ラクティス、ストレプトコッカス・ミチオール、ストレプトコッカス・ミチス、ストレプトコッカス・ムタンス、ストレプトコッカス・オラリス、肺炎球菌、化膿性連鎖球菌、ストレプトコッカス・ラツス、ストレプトコッカス・サリバリウス、ストレプトコッカス・サンギス、ストレプトコッカス・ソブリヌス、トレポネーマ属、梅毒トレポネーマ、トレポネーマ・デンティコラ、ビブリオ属、コレラ菌、ビブリオ・コーマ、腸炎ビブリオ、ビブリオ・バルニフィクス、ウォルバシア属、エルシニア属、エルシニア・エンテロコリティカ、エルシニア・ペスチス、エルシニア・シュードツベルキュロシスが含まれる。
【０２６３】
いくつかの態様において、細菌は、死細胞または細胞溶解物である。
いくつかの態様において、細菌のある程度は不活性化されるかまたは弱毒化される。
いくつかの態様において、細菌は照射で不活性化される。好ましくは、照射はガンマ線照射であるが、ｘ線およびマイクロ波を含む他のタイプの照射を用いてもよい。
【０２６４】
他の態様において、細菌はホルマリンまたは熱で不活性化される。
いくつかの態様において、細菌は塩を通じた浸透圧または乾燥プロセスで不活性化される。
【０２６５】
医薬組成物には、場合によって、宿主における免疫反応を増進させるアジュバントが含まれてもよい。
医薬組成物には、場合によって、薬学的に許容されうるキャリアーが含まれてもよいし、または医薬組成物は凍結乾燥されて提供されてもよい。
【０２６６】
医薬組成物には、場合によって、薬学的に許容されうるキャリアー、例えばグルコース、ラクトースまたはソルビトールが含まれてもよい。
いくつかの態様において、医薬組成物は宿主への鼻内送達のために配合されている。
【０２６７】
さらに、医薬組成物は、エアロゾルまたはスプレーパッケージとして提供される。
１つの態様において、本発明は、哺乳動物宿主への鼻内送達または肺内送達のために配合され、そして宿主、例えばヒトに送達された際、免疫学的に防御する用量を与える、ガンマ線照射マイコバクテリウム属種を含む、医薬組成物を提供する。
【０２６８】
別の側面において、本発明は、ＴＢに対して哺乳動物にワクチン接種する方法を提供する。該方法には、哺乳動物に、不活性化マイコバクテリウム属種を含む組成物を投与する工程が含まれ、ここで哺乳動物のワクチン接種は鼻内または肺内で行われ、そして組成物は、宿主に送達された際、免疫学的に防御する用量を含む。
【０２６９】
別の側面において、本発明は、別の抗原の送達を促進する、免疫刺激剤を提供する。
１つの側面において、本発明は、カルシトリオールおよびガンマ線照射マイコバクテリウム属種を含む医薬組成物であって、哺乳動物宿主への鼻内送達、粘膜送達または肺内送達のために配合され、そして宿主に送達された際、免疫学的に防御する用量を含む、前記組成物を提供する。いくつかの態様において、不活性化マイコバクテリウム属種細胞は、死細胞または細胞溶解物である。被験体がヒトである場合、好ましくは、マイコバクテリウム属種細胞の１００％が不活性化される。いくつかの態様において、該方法で使用するためのマイコバクテリウム属種は、照射で不活性化される。好ましくは、照射はガンマ線照射である。他の態様において、マイコバクテリウム属種は、ホルマリンまたは熱で不活性化される。
【０２７０】
該方法で使用するための医薬組成物には、場合によって、宿主における防御免疫反応を増進するアジュバントが含まれてもよい。
該方法で使用するための医薬組成物には、場合によって、薬学的に許容されうるキャリアーが含まれてもよく、または凍結乾燥されて提供されてもよい。
【０２７１】
いくつかの態様において、該方法で使用するための医薬組成物は宿主への鼻内送達のために配合されている。
さらに、該方法で使用するための医薬組成物は、エアロゾルまたはスプレーパッケージとして提供される。
【０２７２】
いくつかの態様において、医薬組成物は、鼻送達または肺送達のために設定されたデバイスを通じて送達される。
さらにさらなる側面において、本発明は、マイコバクテリウム属感染を治療するためのワクチンを調製するための方法であって、哺乳動物宿主への鼻内送達または肺送達のための不活性化マイコバクテリウム属種の免疫学的に防御する用量を配合する工程を含む、前記方法を提供する。
【０２７３】
いくつかの態様において、該方法には、結核症の非ヒト動物モデルにおいてワクチンを試験する工程が含まれる。動物モデルは、例えば、マウス、モルモット、ウサギ、ウシ、または非ヒト霊長類であってもよい。
【０２７４】
本発明記載の組成物を、１以上の型のビタミンＤを用いて調製し、これを次いで、被験体への送達、好ましくは肺送達および粘膜送達のために配合する。ビタミンＤ組成物は、被験体の肺または粘膜／鼻粘膜に送達されると、抗微生物免疫反応を誘発すると推定され、そしてこれはヒト血液中の単球を用いて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで観察されてきている。
【０２７５】
ビタミンＤの歴史は、タラの肝油が結核症の治療として用いられていた、はるか１８００年代まで遡って、医学コミュニティの興味を引いてきた［１０３］。現在、サナトリウムで得られた治癒性の利益は、日光曝露および体の生得的なビタミンＤ産生に次ぐと考えられている。ビタミンＤは、紫外光からのみ得られるのではなく、油っぽい魚、卵にも見られ、そしていくつかの食品において強化されている。
【０２７６】
ビタミンＤ自体は生物学的に不活性であるが、生物学的活性型に代謝されうる。ビタミンＤは食餌内で消費されるかまたは表皮によって産生された後、循環し、そして最終的に肝臓に輸送される。次いで、肝臓は、ビタミンＤを加水分解して、循環中で見られる主な型である２５−ヒドロキシビタミンＤ（カルシジオールまたは２５（ＯＨ）Ｄ３または２５Ｄ３）を形成する。腎臓は、酵素Ｄ３−１−ヒドロキシラーゼ酵素を用いて、２５−ヒドロキシビタミンＤの第二の加水分解を行って、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ（カルシトリオール、１アルファ、２５−ジヒドロキシビタミンＤまたは１，２５（ＯＨ）２Ｄ３または１，２５Ｄ３）を生成する。カルシトリオールは、コレカルシフェロール由来の最も強力なステロイドホルモンと見なされており、そして体内の大部分の影響の原因であると考えられる。
【０２７７】
カルシトリオールは、細胞核に進入し、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤは、ビタミンＤ受容体（ＶＤＲ）と会合して、そしてレチノイン酸Ｘ受容体（ＲＸＲ）との会合を促進する［１０４］。１，２５−ジヒドロキシビタミンＤの存在下で、ＶＤＲ／ＲＸＲ複合体は、骨および腸、乳腺、結腸、前立腺、造血細胞、および皮膚を含む、体全体の組織において、５０を超える遺伝子の転写を調節する、分子相互作用カスケードを開始する［１０５］。
【０２７８】
ビタミンＤ不全は、マクロファージが発展し、そしてマクロファージ特異的表面抗原を提示する能力を減少させる。さらに、不全は、リソソーム酵素酸ホスファターゼの産生を減少させ、そしてマクロファージの抗微生物機能に不可欠な機能であるＨ２Ｏ２の使用を減少させる［１０６］［１０７］。さらに、ビタミンＤまたはその欠乏は、冬期のインフルエンザの季節的増加に部分的に関与しうる［１０８］。
【０２７９】
ビタミンＤがより低い集団では、結核症の発生率が増加していることが観察されている。Ｓｔｒａｃｈａｎは、インド亜大陸出身のロンドン在住のベジタリアンのヒンズー教徒アジア系移民では、肉および魚を毎日食べるムスリムに比較して、結核症のリスクが８．５倍増加していることを観察した［１０９］。さらに、結核症に対する感受性が増加していることが知られるアフリカ系アメリカ人では２５−ヒドロキシビタミンＤが低下しており、そしてカテリシジン・メッセンジャーＲＮＡ誘導補助が不十分であることが示されてきている［１１０］［１１１］［１１２］。総合すると、これらの見識によって、ヒトにおけるｔｏｌｌ様受容体およびカルシトリオール仲介性自然免疫の間の関連が裏付けられる。
【０２８０】
ビタミンＤがマクロファージ内のＭ．ｔｂの増殖を抑制し［１１３］［１１４、１１５］、そしてビタミンＤは、Ｍ．ｔｂに対する自然免疫を提供しうるｔｏｌｌ様受容体を刺激する［１１６］ことを示す証拠がある。Ｃｒｏｗｌｅらは、１，２５Ｄが、極端に低濃度であっても、マクロファージが桿菌複製を遅延させ、そして停止することを可能にすることを確認した。実際、桿菌増殖に対する防御は、１，２５Ｄが通常の循環レベルより１，０００倍低い濃度であった際に達成され、そして感染３日後に１，２５Ｄが添加された場合であっても誘導された。ここで、Ｃｒｏｗｌｅは、通常循環レベルより高いが、肉芽腫内で提供される濃度である４μｇ／ｍｌの濃度で用いた。したがって、この研究は、１，２５Ｄが免疫調節剤として働き、そしてヒト・マクロファージが免疫を発揮するのを活性化するよう補助しうる証拠を提供する［１１５］。
【０２８１】
２００１年初頭、Ｄｅｎｉｓらは、最大１０９Ｍの用量のカルシトリオール（１，２５（ＯＨ２）、ビタミンＤ３）が、単独で、結核症発達を制限する大きな能力をヒト単球にｉｎ  ｖｉｔｒｏで与えることを示した［１１７］。Ｌｉｕ［１１６］によるｉｎ  ｖｉｔｒｏ作用機構のさらなる分析によって、マイコバクテリウム・ペプチドによるヒト・マクロファージの活性化が、ＶＤＲならびにＣｙｐ２７Ｂ１、ビタミンＤ−１−ヒドロキシラーゼの発現を誘導し、これが不活性プロビタミンＤ［２５（ＯＨ）Ｄ３］を活性１，２５（ＯＨ）２Ｄ３に変換することが示された。さらに、マクロファージを１，２５（ＯＨ）２Ｄ３に曝露すると、抗微生物ペプチド・カテリシジンの発現が誘導され、そしてファゴリソソーム内のＭ．ｔｂの殺傷を促進することが示された。さらに、Ｍ．ボビス・カルメット・ゲラン桿菌に感染した単球において、カテリシジンおよび１，２５（ＯＨ）２Ｄ３がファゴリソソーム内で観察された。ＴＬＲ  ２／１の誘導は、ヒト単球およびマクロファージにおいては細胞内結核菌の生存可能性を減少させたが、単球由来樹状細胞においては減少させなかった［１１６］。カテリシジン経路は、進化の結果のようであり、そしてマウスには見られないが、初代ヒト単球におけるＶＤＲの活性化は、病原性Ｍ．ｔｂに感染した初代ヒト・マクロファージに１，２５（ＯＨ）２Ｄ３を添加した後、コロニー形成単位が減少することから明らかであるように、抗微生物特性を持つ少なくとも１つの既知の抗微生物ペプチドの誘導を誘発する。
【０２８２】
弱毒化された細菌または不活性化された細菌と組み合わせて、カルシトリオールを粘膜送達すると、細菌を貪食し、そしてプロセシングして、マクロファージ抗原提示を可能にし、そして免疫反応増進を植え付ける（ｉｍｂｕｅ）ことが補助される。カルシトリオールは、マクロファージ液胞内のカテリシデンを刺激して、細菌を殺し、そしてその抗原性構成要素を分解する。ビタミンＤは、Ｔｏｌｌ様受容体シグナル伝達と結びつけられてきており、そしてマクロファージにビタミンＤ−１−ヒドロキシラーゼを提示すると、抗微生物ペプチド・カテリシジンの発現が誘導されて、Ｍ．ｔｂの十分な殺傷が促進されうる［１１８］。ビタミンＤ組成に加えて、マイコバクテリウムの異なる代謝状態を用いると、さらなる増進がありうる。これは、細胞性免疫反応へのＭ．ｔｂ抗原提示を改善する潜在能力を有しうる。
【０２８３】
カルシトリオールの使用および配合が見過ごされてきたと本発明者らが考える１つの理由は、提唱される発明が、本発明者の照射結核菌に関するユニークでそして独自の見識によることである。したがって、必要性は明らかでなく、または容易に仮定されなかった。本発明者らは、先の発明で、免疫を促進する手段として照射結核菌をエアロゾル化することを提唱し、そしてその使用を支持する未公表のデータを有する。カルシトリオールは、マクロファージのさらなる抗原提示を促進しうるため、本発明者らは、カルシトリオールが照射マイコバクテリウムとともに投与された際、免疫反応ブーストを育成すると仮定する。さらに、投与経路は、粘膜に送達されたカルシトリオールが、免疫調節剤、療法剤、およびアジュバントとしてさらなる役割を提供しうることになる。
【０２８４】
医薬組成物で用いられる細菌には、全細胞または細胞の一部、例えば細胞溶解物が含まれてもよい。例えば、適切な構成要素には、ガンマ線照射全細胞溶解物、ガンマ線照射培養ろ過タンパク質、ガンマ線照射細胞壁分画、ガンマ線照射細胞膜分画、ガンマ線照射細胞質ゾル分画、ガンマ線照射可溶性細胞壁タンパク質、およびガンマ線照射可溶性タンパク質プールが含まれる。
【０２８５】
１，２５  Ｄ３は、自己免疫疾患の治療および防止に役割を果たしうる。ＤｅＬｕｃａらの研究は、モデルにおいて、通常のまたは高カルシウムの食餌の存在下で、自己免疫脳脊髄炎、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、Ｉ型糖尿病、および炎症性腸疾患が防止されるかまたは顕著に抑制されうるというアイディアを裏付ける［１１９］。ＤｅＬｕｃｏは、ビタミンＤがトランスフォーミング増殖因子ＴＧＦｂ−１およびインターロイキン４（ＩＬ−４）産生を刺激し、これが次に、炎症性Ｔ細胞活性を抑制しうると推論している。さらに、ビタミンＤ受容体の多型が、乳癌のリスク増加に関与することが示されてきている［１２０］。低レベルのビタミンＤが乳癌疾患進行と関連づけられてきており、そして転移結腸癌と関連する組織は、カルシトリオールに反応するのに失敗する［１２１］。したがって、本発明者らは、癌モデルにおいて、療法剤または予防剤として、エアロゾル化ビタミンｄを試験する保証された証拠があると考えている。
【０２８６】
本発明にはさらに、呼吸組織および粘膜組織へのカルシトリオール送達のための組成物の一部として、細かいキャリアーおよび粗いキャリアーとしての異なる糖の使用が含まれる。エアロゾル化カルシトリオールを、全体でまたは部分的構成要素としてのいずれかで、細菌またはウイルス構成要素を含有する組成物の一部として用いてもよい。粘膜表面および肺内表面へのカルシトリオールの局在送達は、アジュバントまたは療法剤としての適用を提供しうる。
【０２８７】
医薬組成物の調製
薬学的に許容されうるキャリアーと合わせて、医薬組成物を形成することによって、宿主に投与するためのカルシトリオールまたはカルシジオールを調製する。カルシトリオールおよびカルシドール（ｃａｌｃｉｄｏｌ）は、当該技術分野に周知である。
【０２８８】
キャリアーは、グルコース、スクロース、ラクトース、ソルビトール、例えば、生理学的生理食塩水、ミネラルオイル、植物油、水性カルボキシメチルセルロースナトリウム、または水性ポリビニルピロリドンであってもよい。
【０２８９】
また、療法時に、カルシジオールを変換酵素、例えばビタミンＤ−１−ヒドロキシラーゼで処理して、カルシトリオールに変換し、カルシトリオールの半減期を延長し、そして貯蔵の問題を回避してもよい。例えば、変換は、投与前にデバイス中で行われてもよい。
【０２９０】
カルシトリオールを薬学的に許容されうるキャリアーとともに不活性化細胞または細胞溶解物と合わせて、医薬組成物を形成することによって、宿主への投与のために調製する。キャリアーは、グルコース、スクロース、ラクトース、ソルビトール、例えば、生理学的生理食塩水、ミネラルオイル、植物油、水性カルボキシメチルセルロースナトリウム、または水性ポリビニルピロリドンであってもよい。いくつかの態様において、キャリアーは、ヒト被験体に療法的に投与するために十分に純粋である。当業者は、例えば等張性ビヒクル、例えば塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、または乳酸リンゲル注射液を用いた適切な溶液を調製することが容易に可能である。保存剤、安定化剤、緩衝剤、酸化防止剤および／または他の添加剤を、必要に応じて含めてもよい。
【０２９１】
例えばカルシトリオールまたはカルシジオールの投与に関連するプロトコル、配合物、投薬および臨床実施に慣れている当業者は、さらに、本発明の医薬組成物を使用するために、これらのプロトコルを容易に適応させることも可能である。ビタミンＤの免疫調節型を、投薬配合物に適合した方式で、そして療法的に有効でありそして免疫原性であろう量で、投与する。投与すべき量は、治療しようとする被験体に応じ、例えば個体免疫系が免疫反応を開始する能力、および望ましい防御の度合いに応じる。
【０２９２】
適切な投薬量範囲は、病因、使用、用量、および宿主の状態に応じる。最初の投与およびブースター投与のための適切な措置もまた多様であるが、典型的には、最初の投与の後、接種または他の投与が続く。したがって、組成物を単回用量で、または複数の用量で投与してもよい。１つの態様において、組成物を約０〜１２ヶ月空けて２回の用量で投与してもよい。
【０２９３】
組成物はまた、代用物としてまたは追加してのいずれかで、カルシトリオールの合成誘導体を用いてもよい。合成誘導体には、限定されるわけではないが、カルシポトリオール、カルシポトリエン、タカルシトール、ジヒドロタキステロール、およびエルゴカルシフェロールが含まれる。
【０２９４】
合成誘導体には、通常は、Ｃ，Ｄ環および側鎖領域の構造変化の結果であるデルタノイドが含まれる。
他の合成誘導体には：ｌ，２５−ジヒドロキシ−２６，２７−ヘキサフルオロコレカルシフェロール、１，２５−ジヒドロキシ−２２Ｅ−エン−２６，２７−ヘキサフルオロコレカルシフェロール、１，２５−ジヒドロキシ−２３−イン−コレカルシフェロール、１，２５−ジヒドロキシ−ｌ６−エン−２３−イン−コレカルシフェロール、ｌ，２５Ｓ−ジヒドロキシ−２６−トリフルオロ−２２Ｅ−エン−コレカルシフェロール、ｌ，２５−ジヒドロキシ−ｌ６，２３Ｅ−ジエン−コレカルシフェロール、１，２５−ジヒドロキシ−ｌ６−エン−コレカルシフェロール、１，２５−ジヒドロキシ−ｌ６−エン−２３−イン−２６，２７−ヘキサフルオロコレカルシフェロール、ｌ，２５−ジヒドロキシ−ｌ６，２３Ｚ−ジエン−２６，２７−ヘキサフルオロコレカルシフェロール、１，２５−ジヒドロキシ−ｌ６，２３Ｅ−ジエン−２６，２７−ヘキサフルオロコレカルシフェロール、１，２５−ジヒドロキシ−１６，２３Ｅ−ジエン−２６，２７−ヘキサフルオロ−１９ノル−コレカルシフェロール、１，２５−ジヒドロキシ−１６−エン−イン−２６，２７−ヘキサフルオロ−１４−ノル−コレカルシフェロール、ｌ，２５−ジヒドロキシ−１６，２３Ｚ−ジエン−２６，２７−ヘキサフルオロ−１９−ノル−コレカルシフェロールが含まれる。
【０２９５】
治療しようとする状態に応じて、組成物を単独で、あるいは他の治療または標準的ワクチンと組み合わせて、同時にまたは連続してのいずれかで投与してもよい。ワクチン接種後に組成物を投与して、そしてしたがって、該組成物がアジュバントとして作用してもよい。
【０２９６】
組成物は、水または生理食塩水中に懸濁される小粒子中に含有されてもよい。組成物はまた、さらなるアジュバント、抗細菌剤、または当該技術分野に慣用的であるような他の薬学的活性剤も含有してもよい。アジュバントには、限定されるわけではないが、塩、エマルジョン（油／水組成物を含む）、サポニン、リポソーム配合物、ウイルス粒子、ポリペプチド、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰＳ）、核酸に基づく化合物または特定の抗原を利用する他の配合物が含まれてもよい。適切なアジュバントには、例えば、植物油、ミョウバン、フロイントの不完全アジュバント、またはフロイントの不完全アジュバントが含まれ、油およびフロイントの不完全アジュバントが特に好ましい。他のアジュバントには、水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウム（ミョウバン）、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）、糖の合成ポリマー（ＣＡＲＢＯＰＯＬ（登録商標））、熱処理によるワクチン中のタンパク質の凝集物、アルブミンに対するペプシン処理（Ｆａｂ）抗体で再活性化されたことによる凝集物、Ｃ．パルブムなどの細菌細胞またはグラム陰性細菌の内毒素もしくはリポ多糖構成要素を含む混合物、生理学的に許容されうる油ビヒクル中のエマルジョン、例えばモノオレイン酸マンニド（Ａｒａｃｅｌ  Ａ）、またはブロック置換物として用いられるパーフルオロカーボン２０パーセント溶液を含むエマルジョン（Ｆｌｕｏｓｏｌ−ＤＡ）が含まれる。
【０２９７】
組成物は、場合によって、大腸菌不安定毒素（ＬＴ）およびコレラ毒素（ＣＴ）などの粘膜細菌毒素アジュバント中に、またはＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）中に含有されてもよい［６１］。ＬＰＳの誘導体でありそしてより毒性でない型である、別のありうる粘膜アジュバント、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）をリポソームと組み合わせると、粘膜免疫防御反応が誘導されることが見出された［６２］。鼻ワクチン接種のために設計された１つの新規アジュバント、ユーロシンＬ３ＴＭは、実験動物モデルにおいて、鼻内投与後、ＴＢに対する長期持続免疫を誘導することが示されてきている［６３、６４、６５］。アジュバント技術は、内因性脂質および薬学的に許容される脂質の組み合わせに基づく非毒性薬学的配合物からなる。ワクチンには、場合によって、サイトカインまたは合成ＩＦＮ−γ誘導剤、例えばポリＩ：Ｃのみまたは上述のアジュバントとの組み合わせなどの、さらなる免疫調節物質が含まれてもよい。
【０２９８】
さらなる他のアジュバントには、生体適合性マトリックス材料の微粒子またはビーズが含まれる。微粒子は、当該技術分野で慣用的であるような任意の生体適合性マトリックス材料で構成されてもよく、これには限定されるわけではないが、寒天およびポリアクリレートが含まれる。当業者は、他のキャリアーまたはアジュバントもまた使用可能であることを認識するであろう。例えば、使用可能なキトサンまたは任意の生体付着性送達系がＷｅｂｂおよびＷｉｎｋｅｌｓｔｅｉｎに記載され、その内容は本明細書に援用される［６６］。
【０２９９】
カルシトリオールを含有する医薬組成物は、好ましくは、当該技術分野に知られる方法を用いた、鼻内送達または肺内送達のために配合される。アジュバントと組み合わされたカルシトリオールの配合物は、好ましくは、ワクチン接種と関連する炎症などの副作用を最小限にするように選択されるか、または配合物の安定性を改善することも可能である。アジュバントはまた、免疫刺激剤としてまたはデポとしての役割も有する可能性もある。
【０３００】
いくつかの態様において、カルシトリオール組成物は、ネブライザーの改良によって、またはコンパクト・ポータブル・デバイス、用量計測吸入装置（ＭＤＩ）および乾燥粉末吸入装置（ＤＰＩ）の３つのタイプを通じて送達される。鼻内送達を、鼻スプレー、点滴器または鼻計測薬剤送達デバイスを通じて行ってもよい。計測用量吸入装置を通じて、不活性マイコバクテリウムを送達してもよい。典型的には、放出した用量の１０〜２０％のみが肺に沈着する。スプレーが高速および巨大粒子サイズのものであれば、およそ５０〜８０％の薬剤エアロゾルが中咽頭領域に衝突する。
【０３０１】
組成物は、限定されるわけではないが、糖キャリアー系などの乾燥粉末配合物中に含有されてもよい。糖キャリアー系には、例えばラクトース、スクロース、および／またはグルコースが含まれてもよい。ラクトースおよびグルコースは、キャリアーとしてＦＤＡに認可される。また、典型的には直径５０〜１００マイクロメートルであるラクトース一水和物などのより大きな糖粒子もあり、こうした粒子は鼻−中咽頭に留まるが、呼吸樹を通じて、不活性化桿菌が肺胞内に移動するのを可能にする［６７］。
【０３０２】
望ましい場合、組成物は、リポソーム配合物中に含有されてもよい。リポソームは、肺胞に到達する他の吸入粒子と同様、マクロファージによって一掃される。リポソームリン脂質のプロセシング、取り込みおよびリサイクリングは、肺胞ＩＩ型細胞を通じて、内因性界面活性剤と同じ機構を通じて起こる。
【０３０３】
結核症を防止するかまたは治療するため、上述のような照射マイコバクテリウムを含有する医薬組成物を適切な個体に投与する。Ｌｉｇｈｔｅｒら、ＵＳ２０１００１１２００７に開示される方法を用いて組成物を作製してもよい。本明細書において、「結核症」への言及には、肺および肺外結核菌への言及が含まれる。用語「個体」、「被験体」、「宿主」、および「患者」は、本明細書において、交換可能に用いられ、そして本発明の療法ワクチンを用いた治療を受け入れられる細菌感染を有し、そして治療または療法が望ましい、任意の被験体を指す。マイコバクテリウムによる感染に感受性である任意の哺乳動物宿主のために、医薬組成物を調製してもよい。適切な哺乳動物宿主には、例えば農場動物、例えばブタおよびウシが含まれる。
【０３０４】
用語「治療」、「治療すること」、「治療する」等は、本明細書において、一般的に、望ましい薬理学的効果および／または生理学的効果を得ることを指す。効果は、疾患またはその症状を完全にまたは部分的に防止する観点から、予防的であってもよく、そして／または疾患および／または疾患に起因する不都合な影響に対する部分的または完全な安定化または治癒の観点から、療法的であってもよい。「治療」は、本明細書において、被験体、特に哺乳動物被験体、より詳細にはヒトにおける疾患のいかなる治療も含み、そしてこれには：（ａ）疾患または症状に対する素因を有しうるが、疾患または症状を有するとはいまだ診断されていない被験体において、疾患または症状が生じることを防止するか；（ｂ）疾患症状を阻害する、すなわち疾患の発展を抑止するか；または疾患症状を軽減する、すなわち疾患または症状の退行を引き起こすか、（ｃ）ＴＢにおいて疾患の再活性化を防止する、すなわち桿菌が休眠期から増殖期に推移するのを防止することが含まれる。したがって、投与は好ましくは、「予防的有効量」または「療法的有効量」（場合によって、予防は療法と見なされうるが）であり、これは個体に利益を示すのに十分である。投与の実際の量、ならびに投与速度および時間経過は、治療中の疾患の性質および重症度に応じるであろう。治療の処方、例えば投薬量等に関する決定は、一般開業医および他の医師または獣医師の責任の範囲内である。
【０３０５】
ワクチンで治療された被験体は、典型的には、感染細菌に対する防御免疫を有するかまたは発展させるであろう。用語「防御免疫」は、哺乳動物に投与されるワクチン、免疫原性組成物または免疫スケジュールが、病原性細菌によって引き起こされる疾患を防止するか、その発展を遅延させるか、またはその重症度を減少させるか、あるいは疾患の症状を減少させるかまたはまったく除去する免疫反応を誘導することを意味する。「感染細菌」によって、宿主において感染を確立し、そしてその結果、疾患または望ましくない症状と関連しうる、細菌を意味する。一般的に、感染細菌は、病原性細菌である。
【０３０６】
用語「免疫原性細菌組成物」、「免疫原性組成物」および「ワクチン」は、本明細書において、交換可能に用いられ、調製物中に存在するエピトープに対する免疫反応を誘発するのに十分な量で投与された際、被験体において細胞性および／または体液性免疫反応を誘発可能な調製物を意味する。
【０３０７】
ビタミンＤを含有する組成物および該組成物を用いる方法
さらなる側面において、本発明は、肺送達および粘膜送達のために配合された、エピガロカテキン−３−ガレート、レチノイン酸および／またはビタミンＤならびにそれぞれの代謝産物、合成実体、および前駆体を含む照射された細菌種の１つの型の組成物に関する。
【０３０８】
細胞内細菌が、宿主免疫反応を逃れる能力は、細菌がトリプトファン−アスパラギン酸含有コートタンパク質（ＴＡＣＯ）の上方制御を通じて、ファゴソーム成熟を抑止する能力による。ファゴソーム成熟の干渉は、細胞内病原体が複製し、そして将来の病原性を可能にする機会を提供する。ビタミンＤおよびレチノイン酸、ならびにエピガロカテキン−３−ガレートの組み合わせは、ＴＡＣＯ発現を下方制御し、ファゴソーム成熟を促進し、そして続いて、細胞内病原体の病原性を減少させることが示されてきている。したがって、照射された細菌に対するビタミンＤおよびレチノイン酸またはエピガロカテキン−３−ガレートのいずれかの粘膜調製物または皮下調製物は、新規療法およびワクチン接種配合物を提供しうる。
【０３０９】
１つの側面において、本発明は、細菌性疾患を防止し、そして／または治療するためのワクチンのためのアジュバントを提供する。不活性化または弱毒化細菌、レチノイン酸およびカルシトリオールを含有する組成物を、いくつかのワクチン接種戦略とともに利用可能であり：予防的に、感染前に投与して、細菌感染を防止してもよいし、そして曝露後に投与した際、予防的に、排除するかまたは不顕性に封じ込め、そして再活性化を防止してもよい。該組成物はまた、細菌、ウイルス、または真菌感染、あるいは自己免疫プロセスのための治療としても使用可能である。最後に、該組成物を用いて、現在のワクチンを置換してもよいし、そして／またはすでに適切にワクチン接種された患者において、他のワクチンのブースターとして用いてもよい。
【０３１０】
さらなる側面において、本発明は、ビタミンＤ、レチノイン酸および／またはエピガロカテキン−３−ガレートを含む医薬組成物であって、哺乳動物宿主への鼻内送達、粘膜送達または肺内送達のために配合され、そして宿主に送達された際、免疫学的に防御する用量を含む、前記組成物を提供する。
【０３１１】
１つの側面において、本発明は、ビタミンＤ、レチノイン酸および／またはエピガロカテキン−３−ガレートと１以上の細菌を含む医薬組成物であって、哺乳動物宿主への鼻内送達、粘膜送達または肺内送達のために配合され、そして宿主に送達された際、免疫学的に防御する用量を含む、前記組成物を提供する。
【０３１２】
ビタミンＤ、レチノイン酸および／またはエピガロカテキン−３−ガレートは、照射または不活性化マイコバクテリウム種とともに組成物として使用可能である。適切なマイコバクテリウム属種には、例えば、結核菌、Ｍ．マリヌム、Ｍ．ボビス、Ｍ．アフリカヌム、またはＭ．ミクロッティが含まれる。いくつかの態様において、不活性化マイコバクテリウム属種細胞は、死細胞または細胞溶解物である。
【０３１３】
一般的に、結核菌コンプレックスのメンバーである任意のマイコバクテリウム属種または株が、本発明の組成物および方法において使用可能である。Ｍ  ｔｂコンプレックスのメンバーである適切なマイコバクテリウム属種には、例えば、マイコバクテリウム・ボビス、マイコバクテリウム・アフリカヌム、マイコバクテリウム・ミクロッティ、および結核菌が含まれる。遺伝的に類似のマイコバクテリウムには、マイコバクテリウム・カネッティおよびマイコバクテリウム・マリヌムが含まれる。対応する宿主種および治療しようとするマイコバクテリウム属関連疾患のタイプに合わせて、特定の種または種の組み合わせを選択する。ヒトにおいて疾患を引き起こす他のマイコバクテリウム属には、例えば、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラレ、らい菌、マイコバクテリウム・レプラムリウム、パラ結核菌、マイコバクテリウム・ウルセランス、マイコバクテリウム・スメグマチス、マイコバクテリウム・ゼノピ、マイコバクテリウム・ケロネー、マイコバクテリウム・フォーチュイタム、マイコバクテリウム・ファーシノゲネス、マイコバクテリウム・フラブム、マイコバクテリウム・ヘモフィツム、マイコバクテリウム・カンサシ、マイコバクテリウム・フレイ、マイコバクテリウム・スクロフラセウム、マイコバクテリウム・セネガレンス、マイコバクテリウム・シミエ、マイコバクテリウム・サーモレジスチブル、およびマイコバクテリウム・ゼノピが含まれる。
【０３１４】
さらなる適切な細菌には、例えば、アセトバクター・アウランチウス、アシネトバクター・バウマンニ、アクチノミセス・イスラエリ、アグロバクテリウム・ラジオバクター、アグロバクテリウム・ツメファシエンス、アゾリゾビウム・カウリノダンス、アゾトバクター・ビネランディ、アナプラズマ属、アナプラズマ・ファゴサイトフィルム、バチルス属、炭疽菌、バチルス・ブレビス、バチルス・セレウス、バチルス・フシフォルミス、バチルス・リケニフォルミス、バチルス・メガテリウム、バチルス・ミコイデス、バチルス・ステアロテルモフィルス、枯草菌、バクテロイデス属、バクテロイデス・フラジリス、バクテロイデス・ジンジバリス、バクテロイデス・メラニノゲニクス、バルトネラ属、バルトネラ・ヘンセレ、バルトネラ・クィンタナ、ボルデテラ属、ボルデテラ・ブロンキセプティカ、百日咳菌、ボレリア・ブルグドフェリ、ブルセラ属、ウシ流産菌、ブルセラ・メリテンシス、ブルセラ・スイス、バークホルデリア属、バークホルデリア・マレイ、バークホルデリア・シュードマレイ、バークホルデリア・セパシア、カリマトバクテリウム・グラヌロマティス、カンピロバクター属、カンピロバクター・コリ、カンピロバクター・フィータス、カンピロバクター・ジェジュニ、カンピロバクター・ピロリ、クラミジア属、トラコーマクラミジア、クラミドフィラ属、肺炎クラミジア、オウム病クラミジア、クロストリジウム属、ボツリヌス菌、クロストリジウム・ディフィシレ、ウェルシュ菌、破傷風菌、コリネバクテリウム属、ジフテリア菌、コリネバクテリウム・フシフォルメ、Ｑ熱コクシエラ、エーリキア・シャフェンシス、エンテロバクター・クロアカ、エンテロコッカス属、エンテロコッカス・アビウム、エンテロコッカス・デュランス、フェカリス菌、フェシウム菌、エンテロコッカス・ガリナルム、エンテロコッカス・マロラツス、大腸菌、野兎病菌、フゾバクテリウム・ヌクレアツム、ガルドネレラ・バジナリス、ヘモフィルス属、ヘモフィルス・デュクレイ、インフルエンザ菌、パラインフルエンザ菌、ヘモフィルス・ペルツシス、ヘモフィルス・バジナリス、ヘリコバクター・ピロリ、クレブシエラ・ニューモニア、ラクトバチルス属、アシドフィルス菌、カゼイ菌、ラクトバチルス・ラクチス、レジオネラ・ニューモフィラ、リステリア・モノサイトゲネス、メタノバクテリウム・エクストロクエンス、ミクロバクテリウム・マルチフォルメ、ミクロコッカス・ルテウス、モラクセラ・カタリス、マイコバクテリウム属、マイコバクテリウム・アビウム、マイコバクテリウム・ボビス、マイコバクテリウム・ジフテリア、マイコバクテリウム・イントラセルラレ、らい菌、マイコバクテリウム・レプラムリウム、マイコバクテリウム・フレイ、マイコバクテリウム・スメグマチス、結核菌、マイコプラズマ属、マイコプラズマ・フェルメンタンス、マイコプラズマ・ジェニタリウム、マイコプラズマ・ホミニス、マイコプラズマ・ペネトランス、肺炎マイコプラズマ、ラクトバチルス・ブルガリクス、ナイセリア属、淋菌、髄膜炎菌、パスツレラ属、パスツレラ・マルトシダ、野兎病菌、ペプトストレプトコッカス属、ポルフィロモナス・ジンジバリス、緑膿菌、リゾビウム・ラジオバクター、リケッチア属、発疹チフスリケッチア、リケッチア・ピシタッシ、リケッチア・クィンタナ、リケッチア・リケッチィ、リケッチア・トラコーマ、ロシャリメア属、ロシャリメア・ヘンセラ、ロシャリメア・クィンタナ、ロティア・デントカリオサ、サルモネラ属、サルモネラ菌、チフス菌、ネズミチフス菌、セラチア・マルセセンス、志賀赤痢菌、スタフィロコッカス属、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、ステノトロフォモナス・マルトフィリア、ストレプトコッカス属、ストレプトコッカス・アガラクチエ、ストレプトコッカス・アビウム、ストレプトコッカス・ボビス、ストレプトコッカス・クリセツス、ファシウム菌、フェカリス菌、ストレプトコッカス・フェルス、ストレプトコッカス・ガリナルム、ストレプトコッカス・ラクティス、ストレプトコッカス・ミチオール、ストレプトコッカス・ミチス、ストレプトコッカス・ムタンス、ストレプトコッカス・オラリス、肺炎球菌、化膿性連鎖球菌、ストレプトコッカス・ラツス、ストレプトコッカス・サリバリウス、ストレプトコッカス・サンギス、ストレプトコッカス・ソブリヌス、トレポネーマ属、梅毒トレポネーマ、トレポネーマ・デンティコラ、ビブリオ属、コレラ菌、ビブリオ・コーマ、腸炎ビブリオ、ビブリオ・バルニフィクス、ウォルバシア属、エルシニア属、エルシニア・エンテロコリティカ、エルシニア・ペスチス、エルシニア・シュードツベルキュロシスが含まれる。
【０３１５】
いくつかの態様において、細菌は、死細胞または細胞溶解物である。
いくつかの態様において、細菌のある程度は不活性化されるかまたは弱毒化される。
いくつかの態様において、細菌は照射で不活性化される。好ましくは、照射はガンマ線照射であるが、ｘ線およびマイクロ波を含む他のタイプの照射を用いてもよい。
【０３１６】
他の態様において、細菌はホルマリンまたは熱で不活性化される。
いくつかの態様において、細菌は塩を通じた浸透圧または乾燥プロセスで不活性化される。
【０３１７】
医薬組成物には、場合によって、宿主における免疫反応を増進させるアジュバントが含まれてもよい。
医薬組成物には、場合によって、薬学的に許容されうるキャリアーが含まれてもよいし、または医薬組成物は凍結乾燥されて提供されてもよい。
【０３１８】
医薬組成物には、場合によって、薬学的に許容されうるキャリアー、例えばグルコース、ラクトースまたはソルビトールが含まれてもよい。
いくつかの態様において、医薬組成物は宿主への鼻内送達のために配合されている。
【０３１９】
さらに、医薬組成物は、エアロゾルまたはスプレーパッケージとして提供される。
１つの態様において、本発明は、哺乳動物宿主への鼻内送達または肺内送達のために配合され、そして宿主、例えばヒトに送達された際、免疫学的に防御する用量を与える、ガンマ線照射マイコバクテリウム属種を含む、医薬組成物を提供する。
【０３２０】
別の側面において、本発明は、ＴＢに対して哺乳動物にワクチン接種する方法を提供する。該方法には、哺乳動物に、不活性化マイコバクテリウム属種を含む組成物を投与する工程が含まれ、ここで哺乳動物のワクチン接種は鼻内または肺内であり、そして組成物は、宿主に送達された際、免疫学的に防御する用量を含む。
【０３２１】
別の側面において、本発明は、別の抗原の送達を促進する、免疫刺激剤を提供する。
１つの側面において、本発明は、レチノイン酸およびカルシトリオールおよびガンマ線照射マイコバクテリウム属種を含む医薬組成物であって、哺乳動物宿主への鼻内送達、粘膜送達または肺内送達のために配合され、そして宿主に送達された際、免疫学的に防御する用量を含む、前記組成物を提供する。いくつかの態様において、不活性化マイコバクテリウム属種細胞は、死細胞または細胞溶解物である。被験体がヒトである場合、好ましくは、マイコバクテリウム属種細胞の１００％が不活性化される。いくつかの態様において、方法で使用するためのマイコバクテリウム属種は、照射で不活性化される。好ましくは、照射はガンマ線照射である。他の態様において、マイコバクテリウム属種は、ホルマリンまたは熱で不活性化される。
【０３２２】
該方法で使用するための医薬組成物には、場合によって、宿主における防御免疫反応を増進するアジュバントが含まれてもよい。
該方法で使用するための医薬組成物には、場合によって、薬学的に許容されうるキャリアーが含まれてもよく、または凍結乾燥されて提供されてもよい。
【０３２３】
いくつかの態様において、該方法で使用するための医薬組成物は宿主への鼻内送達のために配合されている。
さらに、該方法で使用するための医薬組成物は、エアロゾルまたはスプレーパッケージとして提供される。
【０３２４】
いくつかの態様において、医薬組成物は、鼻送達または肺送達のために設定されたデバイスを通じて送達される。
さらにさらなる側面において、本発明は、マイコバクテリウム属感染を治療するためのワクチンを調製するための方法であって、哺乳動物宿主への鼻内送達または肺送達のための不活性化マイコバクテリウム属種の免疫学的に防御する用量を配合する工程を含む、前記方法を提供する。
【０３２５】
いくつかの態様において、該方法には、結核症の非ヒト動物モデルにおいてワクチンを試験する工程が含まれる。動物モデルは、例えば、マウス、モルモット、ウサギ、ウシ、または非ヒト霊長類であってもよい。
【０３２６】
エピガロカテキン−３−ガレートと照射された細菌
結核菌は、ヒトとともに共進化しており、そして宿主免疫反応をよそに生存機構および複製機構を発展させてきた。回避およびそれに続くマイコバクテリウム持続は、結核菌が、部分的にＴＡＣＯの上方制御によって、ファゴソーム−リソソーム融合を阻害する能力による。
【０３２７】
緑茶ポリフェノールの主な構成要素、エピガロカテキン−３−ガレートは、Ｓｐ１転写因子を阻害する能力を通じて、ヒト・マクロファージ内のＴＡＣＯ遺伝子転写を下方制御する生得的な能力を有する。ＥＧＣＧは、この活性をブロックし、したがって、結合能を抑制することによって、Ｓｐ１依存性遺伝子の下方制御因子として作用することが示されてきている［１２２］［１２３］。ＥＧＣＧは、用量依存方式でＴＡＣＯ遺伝子転写を下方制御し、そしてｉｎ  ｖｉｔｒｏデータは、フローサイトメトリーおよびコロニー数を通じて評価した際、マクロファージ内のマイコバクテリウム生存を実質的に減少させることを示す。さらに、ＥＧＣＧは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＭ．ｔｂ曝露前に用いた際、マクロファージ内の結核菌生存を完全に阻害する［１２４］。単独で用いると、ＥＧＣＧは、ｉｎ  ｖｉｖｏで実質的な利益を提供しない可能性もある。しかし、本発明者らは、照射エアロゾル化マイコバクテリウムの私有組成物とともに用いると、この組み合わせが抗原提示を上方制御し、そして先の特許出願に改善を提供するであろうと理論化している。エアロゾル化照射Ｍ．ｔｂの有望な生存データは公表されておらず、そして予期されないため、この組み合わせは、有望で、そして驚くべき結果を生じうる。
【０３２８】
レチノイン酸と照射された細菌
レチノイン酸は、ビタミンＡ（レチノール）レチノイン酸（ＲＡ）の代謝産物であり、マクロファージを刺激する。結核症桿菌は、肺胞マクロファージを捕食するため、レチノイン酸を用いて、結核症の治療または防止を補助する潜在能力がありうる。結核菌株Ｈ３７Ｒｖに感染させた後、週３回の経口用量を３週間および５週間投与する、ラットにおける研究では、対照およびＲＡ処置ラットの間で、結核症組織病理の重症度に有意な相違が示された。ＲＡの経口投与は、Ｈ３７Ｒｖ感染の３週後および５週後、肺および脾臓の両方において、コロニー形成単位（ＣＦＵ）の数を減少させた。さらに、ＣＤ４陽性およびＣＤ８陽性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、ならびにＣＤ１６３陽性マクロファージの提示が、経口処置ラットの感染肺組織において増加した。経口投与ＲＡは、結核菌のｉｎ  ｖｉｖｏ増殖および結核症の発展を有意に阻害するため、エアロゾル化照射Ｍ．ｔｂと組み合わせた粘膜組成物、皮下組成物、または経口組成物の使用には、潜在能力がありうる［１２５］。
【０３２９】
ビタミンＤと照射された細菌
弱毒化されたまたは不活性化された細菌と組み合わせて、カルシトリオールを粘膜送達すると、細菌を貪食し、そしてプロセシングして、マクロファージ抗原提示を可能にし、そして免疫反応増進を植え付けることが補助されるであろう。カルシトリオールは、マクロファージ液胞内のカテリシデンを刺激して、細菌を殺し、そしてその抗原性構成要素を分解する。ビタミンＤは、Ｔｏｌｌ様受容体シグナル伝達と結びつけられてきており、そしてマクロファージにビタミンＤ−１−ヒドロキシラーゼを提示すると、抗微生物ペプチド・カテリシジンの発現が誘導されて、Ｍ．ｔｂの十分な殺傷が促進されうる［１１８］。ビタミンＤ組成に加えて、マイコバクテリウムの異なる代謝状態を用いると、さらなる増進がありうる。これは、細胞性免疫反応へのＭ．ｔｂ抗原提示を改善する潜在能力を有しうる。
【０３３０】
本発明者らは、先の発明で、免疫を促進する手段として照射結核菌をエアロゾル化することを提唱し、そしてその使用を支持する未公表のデータを有する。カルシトリオールは、マクロファージのさらなる抗原提示を促進しうるため、本発明者らは、カルシトリオールが照射マイコバクテリウムとともに投与された際、免疫反応ブーストを育成すると仮定する。さらに、投与経路は、粘膜に送達されたカルシトリオールが、免疫調節剤、療法剤、およびアジュバントとしてさらなる役割を提供しうるようになる。
【０３３１】
医薬組成物で用いられる細菌には、全細胞または細胞の一部、例えば細胞溶解物が含まれてもよい。例えば、適切な構成要素には、ガンマ線照射全細胞溶解物、ガンマ線照射培養ろ過タンパク質、ガンマ線照射細胞壁分画、ガンマ線照射細胞膜分画、ガンマ線照射細胞質ゾル分画、ガンマ線照射可溶性細胞壁タンパク質、およびガンマ線照射可溶性タンパク質プールが含まれる。
【０３３２】
ビタミンＤおよびレチノイン酸と照射された細菌
ビタミンＤおよびレチノイン酸は、ＴＡＣＯ機構を通じて病原性ミコバクテリウムによるマクロファージ侵入を相乗的に制御するようである［１２６］。ビタミンＤおよびレチノイン酸の組み合わせは、単離処置群と比較した際、マイコバクテリウム・ファゴソームの成熟をより多数の細胞が経験することを可能にする。したがって、ビタミンＤおよびレチノイン酸の粘膜または皮下配合物は、エアロゾル化照射マイコバクテリウムの組成物でのさらなる改善を提供しうる。
【０３３３】
ビタミンＤ、レチノイン酸およびエピガロカテキン−３−ガレートと照射された細菌
本発明にはさらに、呼吸組織および粘膜組織へのビタミンＤ、レチノイン酸および／またはエピガロカテキン−３−ガレート送達のための組成物の一部として、細かいキャリアーおよび粗いキャリアーとしての異なる糖の使用が含まれる。エアロゾル化組成物を、全体でまたは部分的構成要素としてのいずれかで、細菌またはウイルス構成要素を含有する組成物の一部として用いてもよい。粘膜表面または肺内表面へのカルシトリオール、レチノイン酸またはＥＧＣＧの局在送達は、アジュバントまたは療法剤としての適用を提供しうる。
【０３３４】
薬学的に許容されうるキャリアーと合わせて、医薬組成物を形成することによって、宿主に投与するためのビタミンＤ、レチノイン酸および／またはエピガロカテキン−３−ガレートを調製する。ビタミンＤ、レチノイン酸および／またはエピガロカテキン−３−ガレートは、当該技術分野に周知である。
【０３３５】
キャリアーは、グルコース、スクロース、ラクトース、ソルビトール、例えば、生理学的生理食塩水、ミネラルオイル、植物油、水性カルボキシメチルセルロースナトリウム、または水性ポリビニルピロリドンであってもよい。
【０３３６】
また、療法時に、カルシジオールを変換酵素、例えばビタミンＤ−１−ヒドロキシラーゼで処理して、カルシトリオールに変換し、カルシトリオールの半減期を延長し、そして貯蔵の問題を回避してもよい。例えば、変換は、投与前にデバイス中で行われてもよい。
【０３３７】
ビタミンＤ、レチノイン酸および／またはエピガロカテキン−３−ガレートを、薬学的に許容されうるキャリアーとともに不活性化細胞または細胞溶解物と合わせて、医薬組成物を形成することによって、宿主への投与のために調製する。キャリアーは、グルコース、スクロース、ラクトース、ソルビトール、例えば、生理学的生理食塩水、ミネラルオイル、植物油、水性カルボキシメチルセルロースナトリウム、または水性ポリビニルピロリドンであってもよい。いくつかの態様において、キャリアーは、ヒト被験体に療法的に投与するために十分に純粋である。当業者は、例えば等張性ビヒクル、例えば塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、または乳酸リンゲル注射液を用いた適切な溶液を調製することが容易に可能である。保存剤、安定化剤、緩衝剤、酸化防止剤および／または他の添加剤を、必要に応じて含めてもよい。
【０３３８】
例えばビタミンＤ、レチノイン酸および／またはエピガロカテキン−３−ガレートの投与に関連するプロトコル、配合物、投薬および臨床実施に慣れている当業者は、さらに、本発明の医薬組成物を使用するために、これらのプロトコルを容易に適応させることも可能である。ビタミンＤの免疫調節型を、投薬配合物に適合した方式で、そして療法的に有効でありそして免疫原性であろう量で、投与する。投与すべき量は、治療しようとする被験体に応じ、例えば個体免疫系が免疫反応を開始する能力、および望ましい防御の度合いに応じる。
【０３３９】
適切な投薬量範囲は、病因、使用、用量、および宿主の状態に応じる。最初の投与およびブースター投与のための適切な措置もまた多様であるが、典型的には、最初の投与の後、接種または他の投与が続く。したがって、組成物を単回用量で、または複数の用量で投与してもよい。１つの態様において、組成物を約０〜１２ヶ月空けて２回の用量で投与してもよい。
【０３４０】
組成物はまた、代用物としてまたは追加してのいずれかで、ビタミンＤ、レチノイン酸および／またはエピガロカテキン−３−ガレートの合成誘導体を用いてもよい。合成誘導体には、限定されるわけではないが、カルシポトリオール、カルシポトリエン、タカルシトール、ジヒドロタキステロール、およびエルゴカルシフェロールが含まれる。
【０３４１】
合成誘導体には、通常は、Ｃ，Ｄ環および側鎖領域の構造変化の結果であるデルタノイドが含まれる。
他の合成誘導体には：ｌ，２５−ジヒドロキシ−２６，２７−ヘキサフルオロコレカルシフェロール、１，２５−ジヒドロキシ−２２Ｅ−エン−２６，２７−ヘキサフルオロコレカルシフェロール、１，２５−ジヒドロキシ−２３−イン−コレカルシフェロール、１，２５−ジヒドロキシ−ｌ６−エン−２３−イン−コレカルシフェロール、ｌ，２５Ｓ−ジヒドロキシ−２６−トリフルオロ−２２Ｅ−エン−コレカルシフェロール、ｌ，２５−ジヒドロキシ−ｌ６，２３Ｅ−ジエン−コレカルシフェロール、１，２５−ジヒドロキシ−ｌ６−エン−コレカルシフェロール、１，２５−ジヒドロキシ−ｌ６−エン−２３−イン−２６，２７−ヘキサフルオロコレカルシフェロール、ｌ，２５−ジヒドロキシ−ｌ６，２３Ｚ−ジエン−２６，２７−ヘキサフルオロコレカルシフェロール、１，２５−ジヒドロキシ−ｌ６，２３Ｅ−ジエン−２６，２７−ヘキサフルオロコレカルシフェロール、１，２５−ジヒドロキシ−１６，２３Ｅ−ジエン−２６，２７−ヘキサフルオロ−１９ノル−コレカルシフェロール、１，２５−ジヒドロキシ−１６−エン−イン−２６，２７−ヘキサフルオロ−１４−ノル−コレカルシフェロール、ｌ，２５−ジヒドロキシ−１６，２３Ｚ−ジエン−２６，２７−ヘキサフルオロ−１９−ノル−コレカルシフェロールが含まれる。
【０３４２】
治療しようとする状態に応じて、組成物を単独で、あるいは他の治療または標準的ワクチンと組み合わせて、同時にまたは連続してのいずれかで投与してもよい。ワクチン接種後に組成物を投与して、そしてしたがって、該組成物がアジュバントとして作用してもよい。
【０３４３】
組成物は、水または生理食塩水中に懸濁される小粒子中に含有されてもよい。組成物はまた、さらなるアジュバント、抗細菌剤、または当該技術分野に慣用的であるような他の薬学的活性剤も含有してもよい。アジュバントには、限定されるわけではないが、塩、エマルジョン（油／水組成物を含む）、サポニン、リポソーム配合物、ウイルス粒子、ポリペプチド、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰＳ）、核酸に基づく化合物または特定の抗原を利用する他の配合物が含まれてもよい。適切なアジュバントには、例えば、植物油、ミョウバン、フロイントの不完全アジュバント、またはフロイントの不完全アジュバントが含まれ、油およびフロイントの不完全アジュバントが特に好ましい。他のアジュバントには、水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウム（ミョウバン）、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）、糖の合成ポリマー（ＣＡＲＢＯＰＯＬ（登録商標））、熱処理によるワクチン中のタンパク質の凝集物、アルブミンに対するペプシン処理（Ｆａｂ）抗体で再活性化されたことによる凝集物、Ｃ．パルブムなどの細菌細胞またはグラム陰性細菌の内毒素もしくはリポ多糖構成要素を含む混合物、生理学的に許容されうる油ビヒクル中のエマルジョン、例えばモノオレイン酸マンニド（Ａｒａｃｅｌ  Ａ）、またはブロック置換物として用いられるパーフルオロカーボン２０パーセント溶液を含むエマルジョン（Ｆｌｕｏｓｏｌ−ＤＡ）もまた使用可能である。
【０３４４】
組成物は、場合によって、大腸菌不安定毒素（ＬＴ）およびコレラ毒素（ＣＴ）などの粘膜細菌毒素アジュバント中に、またはＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）中に含有されてもよい［６１］。ＬＰＳの誘導体でありそしてより毒性でない型である、別のありうる粘膜アジュバント、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）をリポソームと組み合わせると、粘膜免疫防御反応が誘導されることが見出された［６２］。鼻ワクチン接種のために設計された１つの新規アジュバント、ユーロシンＬ３ＴＭは、実験動物モデルにおいて、鼻内投与後、ＴＢに対する長期持続免疫を誘導することが示されてきている［６３、６４、６５］。アジュバント技術は、内因性脂質および薬学的に許容される脂質の組み合わせに基づく非毒性薬学的配合物からなる。ワクチンには、場合によって、サイトカインまたは合成ＩＦＮ−γ誘導剤、例えばポリＩ：Ｃのみまたは上述のアジュバントとの組み合わせなどの、さらなる免疫調節物質が含まれてもよい。
【０３４５】
さらなる他のアジュバントには、生体適合性マトリックス材料の微粒子またはビーズが含まれる。微粒子は、当該技術分野で慣用的であるような任意の生体適合性マトリックス材料で構成されてもよく、これには限定されるわけではないが、寒天およびポリアクリレートが含まれる。当業者は、他のキャリアーまたはアジュバントもまた使用可能であることを認識するであろう。例えば、使用可能なキトサンまたは任意の生体付着性送達系がＷｅｂｂおよびＷｉｎｋｅｌｓｔｅｉｎに記載され、その内容は本明細書に援用される［６６］。
【０３４６】
エピガロカテキン−３−ガレート、レチノイン酸および／またはビタミンＤを含有する医薬組成物は、好ましくは、当該技術分野に知られる方法を用いた、鼻内送達または肺内送達のために配合される。アジュバントと組み合わされたカルシトリオールの配合物は、好ましくは、ワクチン接種と関連する炎症などの副作用を最小限にするように選択されるか、または配合物の安定性を改善することも可能である。アジュバントはまた、免疫刺激剤としてまたはデポとしての役割も有する可能性もある。
【０３４７】
いくつかの態様において、ビタミンＤ、レチノイン酸および／またはエピガロカテキン−３−ガレート組成物は、ネブライザーの改良によって、またはコンパクト・ポータブル・デバイス、用量計測吸入装置（ＭＤＩ）および乾燥粉末吸入装置（ＤＰＩ）の３つのタイプを通じて送達される。鼻内送達を、鼻スプレー、点滴器または鼻計測薬剤送達デバイスを通じて行ってもよい。計測用量吸入装置を通じて、不活性マイコバクテリウムを送達してもよい。典型的には、放出した用量の１０〜２０％のみが肺に沈着する。スプレーが高速および巨大粒子サイズのものであれば、およそ５０〜８０％の薬剤エアロゾルが中咽頭領域に衝突する。
【０３４８】
組成物は、限定されるわけではないが、糖キャリアー系などの乾燥粉末配合物中に含有されてもよい。糖キャリアー系には、例えばラクトース、スクロース、および／またはグルコースが含まれてもよい。ラクトースおよびグルコースは、キャリアーとしてＦＤＡに認可される。また、典型的には直径５０〜１００マイクロメートルであるラクトース一水和物などのより大きな糖粒子もあり、こうした粒子は鼻−中咽頭に留まるが、呼吸樹を通じて、不活性化桿菌が肺胞内に移動するのを可能にする［６７］。
【０３４９】
望ましい場合、組成物は、リポソーム配合物中に含有されてもよい。リポソームは、肺胞に到達する他の吸入粒子と同様、マクロファージによって一掃される。リポソームリン脂質のプロセシング、取り込みおよびリサイクリングは、肺胞ＩＩ型細胞を通じて、内因性界面活性剤と同じ機構を通じて起こる。
【０３５０】
結核症を防止するかまたは治療するため、上述の照射マイコバクテリウムを含有する医薬組成物を適切な個体に投与する。Ｌｉｇｈｔｅｒら、ＵＳ２０１００１１２００７に開示される方法を用いて組成物を作製してもよい。本明細書において、「結核症」への言及には、肺結核菌および肺外結核菌への言及が含まれる。用語「個体」、「被験体」、「宿主」、および「患者」は、本明細書において、交換可能に用いられ、そして本発明の療法ワクチンを用いた治療を受け入れられる細菌感染を有し、そして治療または療法が望ましい、任意の被験体を指す。マイコバクテリウムによる感染に感受性である任意の哺乳動物宿主のために、医薬組成物を調製してもよい。適切な哺乳動物宿主には、例えば農場動物、例えばブタおよびウシが含まれる。
【０３５１】
用語「治療」、「治療すること」、「治療する」等は、本明細書において、一般的に、望ましい薬理学的効果および／または生理学的効果を得ることを指す。効果は、疾患またはその症状を完全にまたは部分的に防止する観点から、予防的であってもよく、そして／または疾患および／または疾患に起因する不都合な影響に対する部分的または完全な安定化または治癒の観点から、療法的であってもよい。「治療」は、本明細書において、被験体、特に哺乳動物被験体、より詳細にはヒトにおける疾患のいかなる治療も含み、そしてこれには：（ａ）疾患または症状に対する素因を有しうるが、疾患または症状を有するとはいまだ診断されていない被験体において、疾患または症状が生じることを防止するか；（ｂ）疾患症状を阻害する、すなわち疾患の発展を抑止するか；または疾患症状を軽減する、すなわち疾患または症状の退行を引き起こすか、（ｃ）不顕性ＴＢにおいて疾患の再活性化を防止する、すなわち桿菌が休眠期から増殖期に推移するのを防止することが含まれる。したがって、投与は好ましくは、「予防的有効量」または「療法的有効量」（場合によって、予防は療法と見なされうるが）であり、これは個体に利益を示すのに十分である。投与の実際の量、ならびに投与速度および時間経過は、治療中の疾患の性質および重症度に応じるであろう。治療の処方、例えば投薬量等に関する決定は、一般開業医および他の医師または獣医師の責任の範囲内である。
【０３５２】
ワクチンで治療された被験体は、典型的には、感染細菌に対する防御免疫を有するかまたは発展させるであろう。用語「防御免疫」は、哺乳動物に投与されるワクチン、免疫原性組成物または免疫スケジュールが、病原性細菌によって引き起こされる疾患を防止するか、その発展を遅延させるか、またはその重症度を減少させるか、あるいは疾患の症状を減少させるかまたはまったく除去する免疫反応を誘導することを意味する。「感染細菌」によって、宿主において感染を確立し、そしてその結果、疾患または望ましくない症状と関連しうる、細菌を意味する。一般的に、感染細菌は、病原性細菌である。
【０３５３】
用語「免疫原性細菌組成物」、「免疫原性組成物」および「ワクチン」は、本明細書において、交換可能に用いられ、調製物中に存在するエピトープに対する免疫反応を誘発するのに十分な量で投与された際、被験体において細胞性および／または体液性免疫反応を誘発可能な調製物を意味する。
【０３５４】
別に定義しない限り、本明細書で用いるすべての技術的および科学的用語は本発明が属する技術分野の一般の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書記載のものと類似のまたは同等の方法および材料を本発明の実施または試験に使用可能であるが、適切な方法および材料を以下に記載する。本明細書に言及するすべての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、その全体が本明細書に援用される。矛盾がある場合、定義を含めて、本明細書が統制するであろう。さらに、材料、方法、および実施例は、例示のみであり、そして限定を意図されない。
【国際調査報告】
2014512388.tif 000002
2014512388.tif 000003
2014512388.tif 000004
2014512388.tif 000005