(57)【要約】血液悪性腫瘍であると判っているか疑われる被験者から得た細胞、例えばＣＤ１３８発現細胞の試料中のＧａｄｄ４５β発現レベルを測定するステップを有するＧａｄｄ４５β発現の測定方法である。発現レベルは、例えば多発性骨髄腫の診断、例えば多発性骨髄腫である患者の予後の予測、又は適切な治療薬の選択をガイドに用いられる。特に治療薬にはＧａｄｄ４５β及び／又はＭＫＫ７阻害剤が含まれる。さらに、データセットは多数の被験者から測定された発現レベルを含む。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液悪性腫瘍であると判っているか又は疑われる被験者から得た細胞の試料中のＧａｄｄ４５β発現レベルを測定するステップを有する
Ｇａｄｄ４５β発現を測定する方法。
【請求項２】
前記被験者が多発性骨髄腫であると疑われる者である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記被験者がびまん性大細胞型B細胞リンパ腫であると疑われる者である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記細胞の試料が、物質番号ＣＤ１３８陽性細胞であるか又は誘導されたものである、請求項１又は２の方法。
【請求項５】
前記細胞の試料が、被験者から得た後にＣＤ１３８陽性細胞を増加させられたものである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記細胞が健常者の細胞に比べて高いＧａｄｄ４５β発現レベルを示した場合に、前記被験者を特定の血液悪性腫瘍と診断するステップをさらに含む請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記被験者が特定の血液悪性腫瘍であると判っており、測定された前記Ｇａｄｄ４５β発現レベルが、少なくとも一人の対照被験者の群から得た細胞において予め測定された対応するＧａｄｄ４５β発現レベルを有するデータセットと比較される、請求項１、２、４又は５に記載の方法。
【請求項８】
前記対照被験者が健常者である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記対照被験者が特定の血液悪性腫瘍であると判っている被験者である、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記被験者から得た細胞において測定されたＧａｄｄ４５β発現レベルを、相対的に高い又は相対的に低いとして分類するステップを含む、請求項８又は９に記載の方法。
【請求項１１】
ｉ）前記被験者が特定の血液悪性腫瘍であると判っており、
ｉｉ）測定された前記Ｇａｄｄ４５β発現レベルが、適切な特定の血液悪性腫瘍及び適切な細胞型におけるＧａｄｄ４５β発現の基準値と比較することにより、相対的に高い又は相対的に低いとして分類される、請求項１、２、４又は５に記載の方法。
【請求項１２】
前記被験者から得た細胞において測定された前記Ｇａｄｄ４５β発現レベルにおける相対的に高い又は相対的に低いとの分類が、前記被験者の予後を予測するために用いられる、請求項１０又は１１に記載の方法。
【請求項１３】
相対的に高いＧａｄｄ４５β発現レベルは相対的に不良の予後を予測し、かつ、相対的に低いＧａｄｄ４５β発現レベルは相対的に良好な予後を予測するために用いられる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記被験者から得た細胞において測定された前記Ｇａｄｄ４５β発現レベルにおける相対的に高い又は相対的に低いとの分類が、前記被験者の適切な治療を選択するために用いられる、請求項１０又は１１に記載の方法。
【請求項１５】
相対的に高いＧａｄｄ４５β発現レベルがＧａｄｄ４５βの阻害剤、Ｇａｄｄ４５βシグナル伝達の阻害剤又はＮＦ−κＢシグナル伝達の阻害剤を（必要に応じて別の治療と組み合わせて）用いた特定の前記血液悪性腫瘍の治療を示すとともに、必要に応じて、相対的に低いＧａｄｄ４５β発現レベルが前記血液悪性腫瘍の別の治療を示す、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
示された前記治療を行うステップをさらに有する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
特定の前記血液悪性腫瘍が多発性骨髄腫であり、かつ、前記細胞の試料が物質番号ＣＤ１３８陽性細胞又はＣＤ１３８陽性細胞から誘導された物質を含む、請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記細胞の試料が、血液試料から得られるか、又は、骨髄吸引、リンパ節、腎臓、脾臓若しくは骨から得られる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
特定の血液悪性腫瘍と疑われるか又は判っている多数の被験者の群から得た細胞において測定されたＧａｄｄ４５β発現レベルのデータセット。
【請求項２０】
前記細胞がＣＤ１３８陽性細胞であり、かつ、特定の前記血液悪性腫瘍が多発性骨髄腫である、請求項１９に記載のデータセット。
【請求項２１】
前記Ｇａｄｄ４５β発現レベルが、ＲＴ−ＰＣＲにより、他の核酸増幅技術により、定量的若しくは半定量的ハイブリダイゼーション技術により、又は別のｍＲＮＡ測定技術により測定されたｍＲＮＡレベルである、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法又は請求項１９若しくは２０に記載のデータセット。
【請求項２２】
前記Ｇａｄｄ４５β発現レベルが、フローサイトメトリー、ウェスタンブロット、タンパク質アレイ、ＲＩＡ、ＥＬＩＳＡ若しくは他のイムノアッセイにより、又は他のタンパク質測定技術により測定されたタンパク質レベルである、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法又は請求項１９若しくは２０に記載のデータセット。
【請求項２３】
前記Ｇａｄｄ４５β発現レベルが、機能アッセイにより測定されたＧａｄｄ４５β活性レベルである、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法又は請求項１９若しくは２０に記載のデータセット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌及び他の炎症性疾患の診断に関し、並びに、それらの疾患における予後情報及びセラノスティック（治療的調節）情報の提供に関する。
【背景技術】
【０００２】
［Ｇａｄｄ４５β及び癌］
ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ−末端キナーゼ、すなわちＪＮＫ経路を含め、発癌や癌の進行に関与する多数の細胞経路が存在する。ＪＮＫ経路は、サイトカイン並びに紫外線照射、熱衝撃及び浸透圧衝撃などのストレス刺激に応答する。また、サイトカインや細胞ストレスに応答して活性化するものとして、ＮＦ−κＢ経路がある。ＮＦ−κＢ経路は、Ｇａｄｄ４５β及びＪＮＫキナーゼ、すなわちマイトジェン活性化プロテイン−キナーゼ７（ＭＫＫ７／ＪＮＫＫ２）の仲介によるクロストークによってＪＮＫ経路を阻害することができる。ＭＫＫ７の活性は、誘導因子であるＧａｄｄ４５βファミリーのメンバーでありＮＦ−κＢの直接転写標的であるＧａｄｄ４５βにより阻害される。これは、Ｇａｄｄ４５βが、ＭＫＫ７に結合しその活性を阻害することによりＪＮＫシグナル伝達のＮＦ−κＢによる抑制を仲介することを意味する（非特許文献１）。
【０００３】
ＮＦ−κＢ阻害剤の使用は、癌及び炎症性疾患の治療における使用を提案されてきた。しかしながら、ＮＦ−κＢは、計画的細胞死（ＰＣＤ）、免疫、炎症及び組織成長における役割を含む多くの活性を有しているので、ＮＦ−κＢ自体よりもむしろＮＦ−κＢの特定の機能を阻害することが好ましい。従って、多数のＧａｄｄ４５β阻害剤が提案されてきた（特許文献１参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際特許出願公開ＷＯ２０１１／０４８３９０号公報
【特許文献２】米国特許出願公開第２００５／０１１２６３０号公報
【特許文献３】米国特許出願公開第２００９／０２６４３０６号公報
【特許文献４】米国特許出願公開第２０１０／０１４４６７３号公報
【特許文献５】国際特許出願公開ＷＯ０３／０６８９３５号公報
【特許文献６】国際特許出願公開ＷＯ２０１０／０４０１２４号公報
【特許文献７】国際特許出願公開ＷＯ２００４／０１６７４４号公報
【特許文献８】米国特許第６４１０７０７号明細書
【特許文献９】米国特許第５９３６０９２号明細書
【特許文献１０】米国特許第６０９３６９２号明細書
【特許文献１１】米国特許第６２２５４４５号明細書
【特許文献１２】米国特許第４１７９３３７号明細書
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Papa,et al.2004,Nature Cell Biology 6(2):1462153
【非特許文献２】Brit.J.Haematol.(2003)121:749-757
【非特許文献３】Zenmyo et al.Diagnostic Pathol. (2010:5:69)
【非特許文献４】Qiu et al.Am.J.Pathol.(2003:162,1961)
【非特許文献５】Ho A,Schwarze SR,Mermelstein SJ, Waksman G,Dowdy SF 2001 Synthetic protein transduction domains:enhanced transduction potential in vitro and in vivo.Cancer Res 61 :474-477
【非特許文献６】Wagstaff et al.(2006).Curr.Med.Chem.13:171-1387
【非特許文献７】Chithrani DB,Mol Membr Biol.2010 Oct 7,(Epub ahead of print)
【非特許文献８】Schrand AM,Lin JB,Hens SC,Hussain SM.,Nanoscale.2010 Sep 27,Epub ahead of print
【非特許文献９】Palumbo A, Bringhen S, Rossi D, Cavalli M, Larocca A, Ria R, Offidani M, Patriarca F, Nozzoli C, Guglielmelli T, Benevolo G, Callea V, Baldini L, Morabito F, Grasso M, Leonardi G, Rizzo M, Falcone AP, Gottardi D, Montefusco V, Musto P, Petrucci MT, Ciccone G, Boccadoro M.Bortezomib-melphalan-prednisone-thalidomide followed by maintenance with bortezomib-thalidomide compared with bortezomib-melphalan-prednisone for initial treatment of multiple myeloma: a randomized controlled trial.J Clin Oncol.2010 Dec 1;28(34):5101-9
【非特許文献１０】Durie BG, Kyle RA, Belch A, Bensinger W, Blade J, Boccadoro M, Child JA, Comenzo R, Djulbegovic B, Fantl D, Gahrton G, Harousseau JL, Hungria V, Joshua D, Ludwig H, Mehta J, Morales AR, Morgan G, Nouel A, Oken M, Powles R, Roodman D, San Miguel J, Shimizu K, Singhal S, Sirohi B, Sonneveld P, Tricot G, Van Ness B; Scientific Advisors of the International Myeloma Foundation. Myeloma management guidelines: a consensus report from the Scientific Advisors of the International Myeloma Foundation.Hematol J.2003;4(6):379-98
【非特許文献１１】Fields G.B. and Noble R.L. 1990 Int J Pept Protein Res; 35: 161-214
【非特許文献１２】Bodansky, M. and Bodansky A. 1995. The practice of peptide synthesis, 2nd edn., Springer Verlag, Berlin
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、Ｇａｄｄ４５βの細胞レベルの測定に関し、かつ、Ｇａｄｄ４５βレベルの指標が所定の癌に関する診断並びに予後情報及びセラノスティック情報の提供の双方に有用であるとの発見に基づいている。
【０００７】
多発性骨髄腫（ＭＭ）は、形質細胞性骨髄腫及びカーレル病としても知られているが、形質細胞の癌である。多発性骨髄腫は、ステロイド、化学療法、サリドマイド及び肝細胞移植によって一時的な寛解へと誘導することができるが、現在のところ治療不能である。米国癌協会によると、米国では約４５，０００人が多発性骨髄腫と共に生活し、毎年約１５，０００人が新たな症例と診断されている。診断後の平均生存期間は約３年である。多発性骨髄腫は、非ホジキンリンパ腫に次ぐ最も一般的な血液癌であり、全ての癌の約１％を、そして全ての癌による死亡の約２％を占める。多発性骨髄腫の発生率は増加しているように見え、病気の発症年齢が低下しているという証拠もある。多発性骨髄腫の診断の際に支援するために、患者や医者に対し予後情報を提供する際に支援するために、そして特定の治療に効果を示す可能性の最も高い患者の選択において有用な情報を提供する際に支援するために、多発性骨髄腫に関する診断、予後情報及びセラノスティック情報の提供を改善することが明らかに必要とされている。
【０００８】
多くの方法が、多発性骨髄腫に関する診断及び／又は予後情報の提供において使用するために提案されている。例えば、特許文献２は、正常な形質細胞分化に関与すると考えられる遺伝子群の発現差に応じて多発性骨髄腫患者を異なる臨床的サブグループに分けることを開示している。特許文献３は、多数の血液悪性腫瘍に関する診断及び予後情報を提供するためにＤＮＡメチル化プロフィールの使用を開示している。特許文献４は、ＣＫＳ１Ｂ遺伝子の発現レベルに基づいて多発性骨髄腫の予後に関する有用な情報の提供を開示している。特許文献５は、腫瘍細胞表面上に存在し、多発性骨髄腫を含む多数の悪性細胞の治療、診断及び予後に使用するために提案された新規ＲＮＡ及びタンパク質抗原を開示している。特許文献６は、多発性骨髄腫を含む癌の治療、予後及び監視のためにＧＯＬＰＨ３遺伝子の使用を提案している。
【０００９】
特許文献７は、Ｇａｄｄ４５β発現の低下が疾患又は疾患のリスク増大と相関性がある場合に、肝疾患へ罹りやすさの診断又は予測においてＧａｄｄ４５β発現を使用することを開示している。
【００１０】
多発性骨髄腫は、通常、血清及び／又は尿中のＭタンパク質（単クローン性免疫グロブリン又はパラプロテイン）の検出並びに組織病理学による骨髄中のクローン形質細胞の検出の後に診断される。多発性骨髄腫及び他の単クローン性免疫グロブリン血症の分類の報告については非特許文献２を参照されたい。癌細胞は、通常、ＣＤ１３８陽性細胞であり、それらの細胞は血漿、骨髄又はそれらが浸潤している他の組織（例えば、リンパ節、腎臓、脾臓及び骨）で検出することができる。多発性骨髄腫の既存の診断方法は、多くの目的において適切であるが、それらは一般に信頼性の高い予後情報を提供するものではない。
【００１１】
Ｇａｄｄ４５β発現が、軟骨肉腫（非特許文献３）でもヒト肝細胞肉腫（非特許文献４）でも癌の進行と共に低下することが報告されている。
【００１２】
本発明は、血液及びリンパ系の癌に関してＧａｄｄ４５β発現が、癌の指標であり、かつ、予後不良及びＧａｄｄ４５β阻害剤を用いた治療の適切さの指標でもあるという発見に基づいている。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明の第１の態様によれば、Ｇａｄｄ４５β発現を測定する方法が提供され、その方法は、血液悪性腫瘍であることが判っているか又は疑われる被験者から予め得られた細胞の試料中のＧａｄｄ４５β発現レベルを測定するステップを含む。
【００１４】
本発明の第２の態様によれば、特定の血液悪性腫瘍であることが疑われるか又は判っている一群の複数被験者から得た細胞において測定されたＧａｄｄ４５β発現レベルを有するデータセットが提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、ＭＧＵＳ、多発性骨髄腫（ＭＭ）又は慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）のいずれかと診断された患者から得た細胞中のＧａｄｄ４５β  ｍＲＮＡ発現を、健常者の細胞から得た値と比較したものを示す。Ｇａｄｄ４５β  ｍＲＮＡの値は、健常者の末梢血由来の精製されたＣＤ１９＋リンパ球の４試料、毎年１％の発生率で多発性骨髄腫に進行する可能性のある前癌状態である、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）の患者の骨髄吸引から得た精製されたＣＤ１３８＋形質細胞の１２試料、新たに多発性骨髄腫と診断された患者の骨髄吸引から得た精製されたＣＤ１３８＋形質細胞の５８試料、及び、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）の患者の末梢血から精製されたＣＤ１９＋リンパ球の５試料についての定量的リアルタイムＰＣＲ測定から計算された。ＭＧＵＳ患者の精製された形質細胞中のｍＲＮＡレベルは、ＭＭ患者と比べて有意に（ｐ＜０．０００１）異なっていた。比較は、ｔ−スチューデント検定を用いて行い、０．０５未満のｐ値は有意とみなした。
【図１ａ】図１ａは、ＭＧＵＳ、多発性骨髄腫（ＭＭ）又は慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）のいずれかと診断された患者におけるＧａｄｄ４５β  ｍＲＮＡ発現を示す。発現は、図中に示すように精製されたＣＤ１３８＋又はＣＤ１９＋細胞中で測定された。単クローン性（すなわち癌）ＣＤ１３８＋形質細胞は、多発性骨髄腫（ＭＭ）（ｎ＝１０１）又は意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）（ｎ＝１４）を患っている患者からのものであった。多クローン性（すなわち非癌）ＣＤ１３８＋形質細胞は、ＭＭ以外の癌（非ＭＭ）（ｎ＝１０）を患っている癌患者からのものであった。ＣＤ１９＋Ｂリンパ球は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）（ｎ＝５）の患者又は健常者（ｎ＝４）からのものであった。Ｇａｄｄ４５β  ｍＲＮＡレベルは、定量的リアルタイムＰＣＲ測定により診断時に決定され、それらの値はβ−アクチンに対して正規化された。ＭＭ患者対ＭＵＧＳ患者から得たＣＤ１３８＋細胞中のＧａｄｄ４５β発現の統計的有意性は、ｔ−スチューデント検定により非常に高い（ｐ＝０．０００１８）と決定された。
【図２】図２は、多発性骨髄腫を患っておりＶＭＰ（ベルケイド−メルファラン−プレドニゾン）の標準治療プロトコルで治療されている患者の群における無増悪生存曲線を示す。患者は、定量的リアルタイムＰＣＲ測定による彼らのＣＤ１３８＋細胞中のＧａｄｄ４５β発現が低又は中／高のいずれであるかにより区分されている。  ５８人の多発性骨髄腫の患者が、診断時に得られたＧａｄｄ４５βのｍＲＮＡ値によって３つのグループに分けられた。カットオフ値は、３３％と６６％を用いて識別された。よって、全患者を、Ｇａｄｄ４５β  ｍＲＮＡの低レベル、中レベル及び高レベルをもつ均等な患者数からなる３つのサブグループに分けた。カプラン・マイヤー法を用いて無増悪生存期間（ＰＦＳ）を推定し、曲線同士の差をログランク検定により解析した。  結果として、低発現のグループと、中／高発現を合わせたグループとの間にＰＦＳにおける差が現れ、低Ｇａｄｄ４５β  ｍＲＮＡレベルの患者は、他のグループに比べて良好な結果であった。
【図３】図３は、Ｇａｄｄ４５β阻害剤による死滅に対する感受性とＧａｄｄ４５β発現レベルの間の腫瘍細胞株における相関を示している。（Ａ）の上枠は、２９個の癌細胞株の枠におけるＧａｄｄ４５βの発現（定量的リアルタイムＰＣＲにより測定）を示しているのに対し、下枠は、特定のＧａｄｄ４５β阻害剤である”Ｚ−ＤＴＰ２”（Ｄ配置のアミノ酸を伴うＴｙｒ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅシーケンスを有しかつＣ末端にてＮＨ２基に結合しＮ末端にてベンジルオキシカルボニル基に結合したテトラペプチド）１０μＭによる１４４時間の処理後の同じ細胞株における細胞死の割合（［３Ｈ］チミジン取り込みにより測定）を示している。（Ｂ）は、Ｇａｄｄ４５β発現と細胞死の相関を示す。２つのパラメータ間の相関係数の有意性はｐ＜０．０１（ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェアにより計算されたピアソン相関）である。
【図４】図４は、Ｇａｄｄ４５β発現と、初代培養造血細胞中のｍＤＴＰ３上のＧａｄｄ４５β／ＭＫ７阻害剤の細胞障害活性との相関を示す。（Ａ）の上枠は、健常者から得た末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及び多発性骨髄腫（ＭＭ）の患者（ｎ＝９）又はワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症（ＷＭ）の患者（ｎ＝２）から得たＣＤ１３８＋造血細胞の中のＧａｄｄ４５β発現を示す。下枠は、初代培養細胞中の５０％（ＩＣ５０）細胞死を誘発する化合物ｍＤＴＰ３の平均濃度を示す。形質細胞（すなわちＣＤ１３８＋）は、抗ＣＤ１３８磁性マイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＧｍｂＨ、ドイツ）を用いて精製し、細胞の純度は、フローサイトメトリーにより確認した。細胞死アッセイにおいて、ＣＤ１３８＋形質細胞は、ｍＤＴＰ３の濃度を増加させて（すなわち０．０００１、０．００１、０．００３、０．０１、０．０３、０．１、０．３、１．３、１０μΜ）４８時間処理した。ＰＢＭＣは、１００μΜのｍＤＴＰ３で１４４時間処理した。ＩＣ５０値は、細胞生存率アッセイにより決定した。Ｇａｄｄ４５β発現値は、エンドゲン対照（すなわち１８ＳリボソームＲＮＡ）に対して正規化した。値は、平均±標準偏差を示す。（Ｂ）は、Ｇａｄｄ４５β発現対ｍＤＴＰ３  ＩＣ５０値の相関プロットを示す。図示の通り、非癌細胞中のｍＤＴＰ３細胞障害の欠如は、これらの細胞中の低Ｇａｄｄ４５β発現の統計的有意性と相関する。２つのパラメータのドメイン間の相関係数の有意性は高く（ｐ＝０．０１７）、初代培養ＭＭ細胞中のｍＤＴＰ３の高い標的特異性を確認するものである。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明の第１の態様によれば、血液悪性腫瘍又はその疑いのある被験者から得た細胞試料中のＧａｄｄ４５β発現レベルを測定するステップを含むＧａｄｄ４５β発現の測定方法が提供される。
【００１７】
［血液悪性腫瘍］
本発明に関連する血液悪性腫瘍としては、リンパ腫や白血病があり得る。所与の実施形態によれば、本発明は血液悪性腫瘍に関連し、当該腫瘍は、次の群中の１又は複数のものである。
１．リンパ腫
２．白血病
３．成熟Ｂ細胞悪性腫瘍
４．成熟Ｔ細胞悪性腫瘍
５．成熟ナチュラルキラー細胞悪性腫瘍
６．ホジキンリンパ腫
７．慢性リンパ性白血病
８．急性リンパ性白血病
９．慢性骨髄性白血病
１０．急性骨髄性白血病
【００１８】
所与の好適な実施形態によれば、本発明は次の郡中の１つに該当する血液悪性腫瘍に関連することがあり得る。
１．バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＣＢＣＬ）Ｔ細胞白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＣＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、マントル細胞リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、白血病、成人Ｔ細胞白血病、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、骨髄異形成症候群及びプロモノリティック白血病
２．プロモノリティック白血病、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、Ｔ細胞白血病、Ｂ細胞白血病、多発性骨髄腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）
３．バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫
４．びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫
【００１９】
所与の好適な実施形態によれば、本発明はＧａｄｄ４５β ｍＲＮＡの細胞発現の増加に関係する血液悪性腫瘍に関連する。
【００２０】
所与の好適な実施形態によれば、本発明は多発性骨髄腫に関連する。
【００２１】
［細胞の試料］
細胞の試料は、血液、リンパ液、リンパ節生検若しくは骨髄から、又は、癌細胞に浸潤されている末梢組織（例えば癌細胞に浸潤されていると判っている腎臓、脾臓若しくは骨又は他の組織）から得ることができる。所与の実施形態によれば、細胞の試料は、骨髄から得られる。”細胞の試料”の用語は、生きている細胞と死んだ細胞の両方を含み、独立した細胞及び組織内に存在している細胞の両方を含み、さらに細胞由来物質（例えば細胞物質を含む均質化細胞又は液）も含む。試料は、好適には、腫瘍細胞又は腫瘍の疑いのある細胞の物質量を含んでいるが、他の細胞も含んでいてもよい。つまり、必ずしも完全に精製することは必要ないということである。
【００２２】
所与の実施形態によれば、本発明の第１の態様の方法は、細胞の試料を得るステップを含む。本発明の第１の態様の他の実施形態によれば、この方法は、被験者から細胞の試料を得るステップを含まない。すなわち、この方法は被験者から予め得た試料に対して実施されるということである。
【００２３】
［被験者］
被験者は、好適には、人間被験者である。従って、本明細書は、人間被験者を診断し、予後を見通し、そして治療するという文脈で読まれることが好適である。
【００２４】
血液悪性腫瘍が疑われる被験者は、病気の兆候や診断症状を理由として悪性腫瘍を有するのではないかと疑われる。例えば、多発性骨髄腫を疑われる被験者は、高い血漿カルシウム、腎臓の問題や腎不全、貧血、骨病変及び／又は骨痛を有することがある。多発性骨髄腫と判っている被験者は、クローン性形質細胞又はＭタンパク質の検出によって診断されている場合がある。
【００２５】
［試料処理］
被験者から得た細胞の試料は、Ｇａｄｄ４５β発現レベルを測定する前に調製することができる。例えば、細胞を、殺菌し、精製し、固定し、又は保存することがある。細胞の試料が組織試料である場合、その組織を粉砕する、例えば、その中の細胞をばらばらにすることがある。当初得られた試料を特定の細胞サブセットについて濃縮することができる。その細胞サブセットは、通常、癌又は癌の疑いの有る細胞のサブセットである。細胞サブセットを選択するために適切な細胞マーカーを用いてもよい。多発性骨髄腫に関する本発明の態様の場合、ＣＤ１３８が適切な細胞マーカーとなり得る。濃縮プロセスにおける細胞サブセットの選択には、任意の適切な方法を用いてよい。例えば、ＣＤ１３８＋細胞は、蛍光活性化細胞選別又は磁気細胞選別などの細胞選別法により選択することができる。このような方法は、他の細胞型特異的表面マーカーを用いた細胞サブセットの選択にも適用可能である。別の方法として、高速乗算細胞として細胞試料を濃縮することにより細胞を調製してもよい。高速乗算細胞は、一定期間、増殖培地で試料を培養することにより濃縮することができる。
【００２６】
所与の実施形態においては、Ｇａｄｄ４５β発現レベルを測定できるように細胞を壊したり溶解したりすることが必要となる。例えば、細胞は、核酸またはタンパク質の抽出及び調製方法に供されてもよい。
【００２７】
［診断における本発明の使用］
所与の実施形態においては、本発明の第１の態様である方法は、診断に有用な情報の提供を含む。場合によっては、この方法は、診断を行うステップを含むことができる。他の場合、診断を行うステップは、特許請求の方法から除外される。
【００２８】
好適には、（核酸、タンパク質又は活性レベルにおいて）高いＧａｄｄ４５β発現の測定は、血液悪性腫瘍をもつ被験者を示す。血液悪性腫瘍は、［血液悪性腫瘍］の見出しにおいて上記した通り定義することができる。
【００２９】
所与の実施形態においては、血液悪性腫瘍は多発性骨髄腫である。
【００３０】
所与の実施形態においては、本発明の方法は、その他の疾患（例えばＭＧＵＳ）に対する多発性骨髄腫の判別診断に有用な情報の提供を含む。
【００３１】
［Ｇａｄｄ４５βレベルの評価］
細胞の試料中のＧａｄｄ４５β発現レベルは、ｍＲＮＡ発現レベル、タンパク質発現レベル、又は発現したＧａｄｄ４５βタンパク質活性のレベルでもよい。
【００３２】
ｍＲＮＡ発現レベルの決定のために任意の方法を使用することができる。例えば、核酸増幅技術（例えば、利用可能な定量的及び半定量的リアルタイムＰＣＲの多様なバージョン）又は定量的又は半定量的ハイブリダイゼーション技術である。
【００３３】
タンパク質発現レベルの決定のために任意の方法を使用することができる。例えば、フローサイトメトリー、ウェスタンブロット、タンパク質アレイ、ＲＩＡ及びＥＬＩＳＡ等のイムノアッセイを用いてもよい。
【００３４】
発現したＧａｄｄ４５βタンパク質活性を決定するために任意の方法を使用することができる。適切な方法は、酵素アッセイ（例えば、リン酸化アッセイ）及び結合アッセイが挙げられる。Ｇａｄｄ４５β活性は、直接的（例えば、その結合活性を測定することにより）又は間接的（例えば、Ｇａｄｄ４５βにより活性化した細胞シグナル伝達タンパク質であるマイトジェン活性化プロテインキナーゼ７（ＭＫＫ７）のリン酸化又は活性を測定することにより）測定することができる。
【００３５】
Ｇａｄｄ４５β発現レベルは、相対的又は絶対的に測定することができる。絶対発現レベルが使用される場合、測定値は、それらが上昇しているかどうかを判断するためにしきい値と比較することができる。あるいは、それらを同時に測定することができるか、または予め測定された対照試料中のレベルと比較して測定することができる。
【００３６】
種々の対照試料を使用することができる。限定しないが、対照試料には細胞株を含む（例えば多発性骨髄腫又はそれが疑われる被験者から得た試料中のレベルを、多発性骨髄腫細胞株（例えばＵ２６６）中のレベルと比べて測定でき、かつ／又は、非多発性骨髄腫細胞株中のレベルと比べて測定できる）。
【００３７】
別の方法として、対照試料を健常者から得てもよい。
【００３８】
別の方法として、Ｇａｄｄ４５β発現レベルは、血液悪性腫瘍を有していると疑われると診断された他の被験者又は他の被験者の群と比べて測定してもよい。
【００３９】
所与の実施形態において、この方法は、特定の血液悪性腫瘍（例えば多発性骨髄腫）を診断するためのものである。それは、測定されたＧａｄｄ４５β発現レベルが、健常な１又は複数の別の被験者の群から得た細胞において予め測定されたＧａｄｄ４５β発現レベルに対応するＧａｄｄ４５β発現レベルを含むデータセットと比較されたときに、細胞の試料が高いＧａｄｄ４５β発現レベルを示す場合である。別の方法として、１又は複数の別の被験者は、特定の血液悪性腫瘍（例えば多発性骨髄腫）を有すると判っている別の被験者でもよい。
【００４０】
通常、細胞の試料が健常者から得た試料に比べて高いＧａｄｄ４５β発現レベルを示したとき、又は、細胞の試料が血液悪性腫瘍と判っている被験者から得た試料に見られるものと同程度のＧａｄｄ４５β発現レベルを示したとき、血液悪性腫瘍と診断される。
【００４１】
本発明の診断の態様は、実施例１及び図１により示される。それらは、多発性骨髄腫である患者から得たＣＤ１３８陽性細胞が、ＭＧＵＳ、ＣＬＬの患者及び健常者から得たＢ細胞又は形質細胞（例えばＣＤ１３８＋又はＣＤ１９細胞）の試料におけるよりも高いＧａｄｄ４５β発現を示す可能性が高いことを示している。
【００４２】
［予後の決定における本発明の方法の使用］
特定の血液悪性腫瘍（例えば多発性骨髄腫）を診断する際に使用することに加えて、本発明の方法は、既に血液悪性腫瘍と診断された（この診断は本発明の方法の使用によるものでも、別の方法、例えば骨髄組織病理又は形質細胞や尿中のＭタンパク質の検出により多発性骨髄腫と診断されたものでもよい）被験者の予想される予後の指標を提供するために用いることもできる。
【００４３】
通常、このようなアプローチは、それ以前に同じ特定の血液悪性腫瘍と診断された他の被験者と比べて相対的に高い又は相対的に低いというように、被験者から得られた細胞で測定されたＧａｄｄ４５β発現レベルを（例えば、２又はそれ以上の領域にその発現を割り当てることにより）分類することを含む。
【００４４】
例えば、測定されたＧａｄｄ４５β発現レベルを、それ以前に多数（例えば１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、５００、７５０又は１０００）の別の被験者から得た対応する細胞で測定された対応するＧａｄｄ４５β発現レベルを含むデータセットと比較してもよい。その場合、それらの別の被験者は、特定の血液悪性腫瘍であると判っておりかつＧａｄｄ４５β発現レベルが相対的に高いか相対的に低いと分類されている。
【００４５】
別の方法として、適用可能な特定の悪性腫瘍及び適切な細胞型についてのＧａｄｄ４５β発現の基準レベルと比較することにより、特定の悪性腫瘍について相対的に高い又は相対的に低いというように、Ｇａｄｄ４５β発現レベルを分類してもよい。
【００４６】
相対的に高い又は相対的に低いというＧａｄｄ４５β発現レベルの分類は、被験者の予後を予測するために（例えば、生存率若しくは無増悪生存率の予測又は今後のタイムスケール上の特定の症状若しくは症状の重症度の可能性の指標を提供するために）用いることができる。通常、相対的に高い発現レベルは、比較的不良の予後を予測し、相対的に低い発現レベルは比較的良好な予後を予測する。
【００４７】
本発明の予後予測の態様は、実施例２及び図２を参照して説明される。それによれば、診断上多発性骨髄腫とされる相対的に高いＧａｄｄ４５β発現を有する患者は、診断上相対的に低いＧａｄｄ４５β発現を有する患者よりも、その後のフォローアップ期間中に疾患の悪化を呈する可能性が高いことが示されている。
【００４８】
［テラノスティックへの適用における本発明の方法の使用］
予測される予後の指標は、当該患者における適切な治療を選択するために用いることができる。一般に、より悲観的な予後はより積極的な治療を示唆するものであるが、さほど効果の無い治療と組み合わされた予後不良が、ほとんど又は全く何もしない治療の副作用の回避のためだけに、死亡リスク低減法による緩和ケアを提供する決定へと誘導してしまうという状況がある。
【００４９】
所与の実施形態によれば、本発明の方法は、適切な治療を選択するために予後情報を用いるステップを含む。
【００５０】
所与の実施形態によれば、相対的に高いＧａｄｄ４５β発現レベルの指標は、Ｇａｄｄ４５β阻害剤（例えばＧａｄｄ４５β発現、活性又はシグナル伝達の阻害剤）及び／又はＮＦ−ｋＢの阻害剤を用いた特定の血液悪性腫瘍（例えば多発性骨髄腫）の治療を示すために用いることができる。必要に応じて、相対的に低いＧａｄｄ４５β発現の指標は、別の（非Ｇａｄｄ４５β阻害剤による）治療を示してもよい。
【００５１】
もちろん、どのような治療が示されたとしても、Ｇａｄｄ４５β阻害剤であれ別の治療であれ、それらの治療は、治療プロトコル及び／又は臨床的判断により示されるような他の治療（例えば外科手術、化学療法、免疫療法又は放射性療法）と組み合わせて提供することができる。
【００５２】
好適には、相対的に高いＧａｄｄ４５β発現レベルは、Ｇａｄｄ４５βに特異なＧａｄｄ４５β阻害剤による治療を示す。
【００５３】
［Ｇａｄｄ４５β阻害剤］
多数の特定のＧａｄｄ４５β阻害剤が、特許文献１で論じられており、単に例示としてそれらを以下に開示する。出願人は、以下において特に開示されたＧａｄｄ４５β阻害剤を利用することを、本発明のテラノスティック態様の実施形態と考えている。本発明のテラノスティック態様に関係する以下に特に開示された阻害剤は、特許請求の範囲で権利要求することについても、又は、権利否定することについても、それらの権利が保持されている。
【００５４】
Ｇａｄｄ４５β阻害剤は、式Ｉの化合物とすることができる。
式Ｉ：  Ｘ１−Ａ−Ｘ２
上記式Ｉにおいて、
Ａは、Ａ””であるか、又は、Ａ”−［Ｍ−Ａ’−］ｎＭ−Ａ”’である。
Ａ””は、Ａ”、Ａ’”又はＺ１−Ｙ２−Ｙ３−Ｚ４である。ここで、Ｙ２−Ｙ３はオリゴペプチド部分又はＹ２−Ｙ３残基を有するオリゴペプトイド部分であり、Ｚ１はＹ２−Ｙ３のＮ末端窒素に結合し、Ｚ４はＹ２−Ｙ３のＣ末端炭素に結合している。
Ａ”は、Ａ’であるか、又は、Ｙ１−Ｙ２−Ｙ３−Ｚ４である。ここで、Ｙ１−Ｙ２−Ｙ３はオリゴペプトイド部分又はＹ１−Ｙ２−Ｙ３残基を含むオリゴペプトイド部分であり、Ｚ４はＹ１−Ｙ２−Ｙ３のＣ末端炭素に結合している。
Ａ’”は、Ａ’であるか、又は、Ｚ１−Ｙ２−Ｙ３−Ｙ４である。ここでＹ２−Ｙ３−Ｙ４は，オリゴペプトイド部分又はＹ２−Ｙ３−Ｙ４の残基を含むオリゴペプトイド部分であり、Ｚ１はＹ２−Ｙ３−Ｙ４のＮ末端窒素に結合している。
それぞれのＡ’は、個々に独立して、オリゴペプチド部分、又はＹ１−Ｙ２−Ｙ３−Ｙ４残基を含むオリゴペプトイド部分である。
ｎは０から１８の整数である。
【００５５】
Ｙ１及びＹ４は、個々に独立して、芳香族側鎖を有するアミノ酸残基又はアミノ酸誘導体残基である。所与の実施形態においては、各側鎖が、１個から３個までの炭素のアルキレン基を有する。この１個から３個までの炭素のアルキレン基は、５員から１０員までの炭素環式又は複素環式芳香族基により１回又は２回置換されており、かつ必要に応じてさらに１個から４個までの炭素のアルキルにより置換されている。ここでの芳香族は、必要に応じて、ヒドロキシル基、ハロゲン又はＣ１からＣ４までのアルキル基若しくはＣ１からＣ４までのアルコキシ基から選択された少なくとも１つの置換基により置換されている。
【００５６】
Ｙ２は無いか又はアミノ酸残基若しくはアミノ酸誘導体である。Ｌ配置又Ｄ配置の２０個の天然アミノ酸のいずれかが好適であり、及び／又は、ｐＨ７水溶液中で好適には負電荷をもつ側鎖を有するアミノ酸残基又はアミノ酸誘導体残基が好適である。
【００５７】
Ｙ３はアミノ酸残基又はアミノ酸誘導体である。Ｌ配置又Ｄ配置の２０個の天然アミノ酸のいずれかが好ましく、及び／又は、ｐＨ７水溶液中で好適には負電荷をもつ側鎖を有するアミノ酸残基又はアミノ酸誘導体残基が好ましい。
【００５８】
所与の実施形態においてＹ２及びＹ３の双方とも存在する場合、Ｙ２及びＹ３は、好適にはその側鎖の正と負の各電荷間に塩橋が形成できることが好ましく、かつ／又は、Ｙ１とＹ４、Ｘ１とＸ４、Ｘ１とＹ４若しくはＹ１とＸ４の芳香族中心間の距離が１０又は２０オングストロームより大きくなくかつ３オングストロームより小さくないことが好ましい。Ｙ２及びＹ３の側鎖は３０原子を超えないことが好ましい。Ｙ２及びＹ３は天然に生じたアミノ酸でもよく、又は、Ｌ配置又はＤ配置のＮ−メチル−アミノ酸でもよい。
【００５９】
Ｚ１は、式ＩＩの基である。
【００６０】
【化１】
2014519315.tif 000003
【００６１】
式ＩＩの基は、Ｙ２のＮ末端窒素に結合している。
【００６２】
Ｗは無いか又は酸素、窒素若しくは１個から３個までの炭素のアルキレン基である。ここで１個から３個までのアルキレン基は、必要に応じて、少なくとも１個の置換基により置換されている。この置換基は１個から４個までの炭素のアルキル基又は５員から１０員までの炭素環式若しくは複素環式芳香族基である。
【００６３】
Ｊは、５員から１０員までの炭素環式又は複素環式芳香族基である。ここで芳香族基は、必要に応じて、少なくとも１つの置換基で置換されている。この置換基はヒドロキシル、ハロゲン、１個から４個までの炭素のアルキル基又は１個から４個までの炭素のアルコキシ基から選択される。
【００６４】
Ｚ４は、式ＩＩＩの基を表す。
【００６５】
【化２】
2014519315.tif 000004
【００６６】
この基は、Ｙ３のＣ末端炭素に結合している。
【００６７】
Ｒは、水素又は１個から４個までの炭素のアルキル基である。
【００６８】
Ｗ’は無いか又は１個から３個までの炭素のアルキレン基である。ここで１個から３個までのアルキレン基は、必要に応じて、１個から４個までの炭素のアルキル基又は５員から１０員までの炭素環式若しくは複素環式芳香族基から選択された少なくとも１つの置換基により置換されている。
【００６９】
Ｊ’は３員から１０員までの脂肪族炭素環式基又は５員から１０員までの炭素環式若しくは複素環式芳香族基である。ここで脂肪族基又は芳香族基は、必要に応じて、ヒドロキシル基、ハロゲン、１個から４個までの炭素のアルキル基又は２個から４個までの炭素のアルコキシ基から選択された少なくとも１つの置換基により置換されている。
【００７０】
Ｍは、先のオリゴペプチド部分又はオリゴペプトイド部分（Ａ’、Ａ”、Ａ’”）と、次のオリゴペプチド部分又はオリゴペプトイド部分（Ａ’、Ａ”、Ａ’”）との間のペプチド結合である。あるいはＭは、先のオリゴペプチド部分又はオリゴペプトイド部分（Ａ’、Ａ”、Ａ’”）の末端炭素基にアミド結合、エステル結合、エーテル結合又はチオエーテル結合を介して結合しかつ次のオリゴペプトイド結合（Ａ’、Ａ”、Ａ’”）の末端アミノ基にアミド結合、エステル結合、エーテル結合又はチオエーテル結合を介して結合したリンカー部分である。
【００７１】
Ｘ１は無いか又は遊離アミノ基をブロッキングするためにＡのアミノ末端に付加された部分である。
【００７２】
Ｘ２は無いか又は遊離カルボキシル基をブロッキングするためにＡの炭素末端に付加された部分である。
【００７３】
所与の実施形態においては、Ｗは無いか又は１個から３個までの炭素のアルキレン基である。
【００７４】
好適にはＸ１及びＸ２は、ＡがＺ１を有する場合にＸ１が無くかつＡがＺ４を有する場合にＸ２が無い（すなわち、分子の末端に遊離アミノ基又は遊離カルボキシル基が無い場合はＸ１とＸ２が必要無い）という条件下において、原子が３０個を超えない（又は、より好適には２０個を超えない、又は１０個を超えない）部分である。
【００７５】
またはＸ１及びＸ２は、上記部分の誘導体であり、それらの誘導体は、次の群から選択される。
ａ）式Ｉの化合物の分子のオリゴマー又はマルチマー（多量体）であって、２個又はそれ以上の式Ｉの化合物の分子を有し、その各々が、式Ｉの化合物の分子に存在するアミノ酸基又はカルボン酸基と、少なくとも２個のアミド結合中に関与する骨格部分上の対向するアミノ酸基又はカルボン酸基との間のアミド結合を介して共通骨格部分に結合されているオリゴマー又はマルチマー。
ｂ）式Ｉの化合物の分子又は上記ａ）で定義されたそれらのオリゴマー若しくはマルチマーを有する誘導体であって、アミド結合、エステル結合、エーテル結合又はチオエーテル結合を介して次のものと結合した誘導体。
ＰＥＧ、ＰＥＧ系化合物、細胞透過性ペプチド、蛍光染料、ビオチン若しくは他のタグ部分、脂肪酸、離散的サイズのナノ粒子、又は、金属イオン若しくは放射性イオンとのキレート配位子錯体
ｃ）式Ｉの化合物の分子又は上記ａ）で定義されたそれらのオリゴマー若しくはマルチマーを有する誘導体であって、アミド化、グリコシル化、カルバミル化、アシル化、硫酸化、リン酸化、環化、脂質化、ペグ化、又は、融合ペプチド若しくは融合ペプトイドを形成するためのペプチド若しくはペプトイドの融合パートナーに対するリンケージにより修飾されている誘導体。
ｄ）式Ｉの化合物又は上記ａ）若しくはｂ）で定義されたそれらの誘導体の分子の、塩及び溶媒和物。
【００７６】
所与の実施形態においてＹ１は、
Ｄ−トリプトファン、
Ｌ−トリプトファン、
Ｄ−チロシン、
Ｌ−チロシン、
Ｄ−３，３−ジフェニルアラニン、
Ｌ−３，３−ジフェニルアラニン、
Ｄ−Ｈ−３−（４−ピリジル）アラニン、
Ｌ−Ｈ−３−（４−ピリジル）アラニン、
Ｄ−Ｈ−３−（３−ピリジル）アラニン、
Ｌ−Ｈ−３−（３−ピリジル）アラニン、
Ｄ−Ｈ−３−（２−ピリジル）アラニン、
Ｌ−Ｈ−３−（２−ピリジル）アラニン、
Ｄ−２−アミノ−４−フェニル酪酸、
Ｌ−２−アミノ−４−フェニル酪酸、
Ｄ−Ｈ−４−ヒドロキシフェニルグリシン、
Ｌ−Ｈ−４−ヒドロキシフェニルグリシン、
Ｄ−３−（２−フリル）アラニン、
Ｌ−３−（２−フリル）アラニン、
Ｌ−ホモフェニルアラニン、
Ｄ−ホモフェニルアラニン、
Ｄ−３−（４−キノリル）アラニン、
Ｌ−３−（４−キノリル）アラニン、
Ｄ−ナフチルアラニン、
Ｌ−ナフチルアラニン、
ｐ−ヒドロキシ安息香酸、
ｐ−ヒドロキシフェニル酢酸、
３−（ｐ−ヒドロキシフェニル）−プロピオン酸、
又は上記いずれかのＬ配置又はＤ配置のＮ−メチル誘導体である。
【００７７】
あるいはＹ１は，
Ｄ−フェニルアラニン、
Ｌ−フェニルアラニン、
Ｄ−トリプトファン、
Ｌ−トリプトファン、
Ｄ−チロシン、
Ｌ−チロシン、
Ｄ−３，３−ジフェニルアラニン、
Ｌ−３，３−ジフェニルアラニン、
Ｄ−Ｈ−３−（４−ピリジル）アラニン、
Ｌ−Ｈ−３−（４−ピリジル）アラニン、
Ｄ−Ｈ−３−（３−ピリジル）アラニン、
Ｌ−Ｈ−３−（３−ピリジル）アラニン、
Ｄ−Ｈ−３−（２−ピリジル）アラニン、
Ｌ−Ｈ−３−（２−ピリジル）アラニン、
Ｄ−２−アミノ−４−フェニル酪酸、
Ｌ−２−アミノ−４−フェニル酪酸、
Ｄ−フェニルグリシン、
Ｌ−フェニルグリシン、
Ｄ−Ｈ−４−ヒドロキシフェニルグリシン、
Ｌ−Ｈ−４−ヒドロキシフェニルグリシン、
Ｄ−３−（２−フリル）アラニン、
Ｌ−３−（２−フリル）アラニン、
Ｌ−シクロヘキシルアラニン、
Ｄ−シクロヘキシルアラニン、
Ｌ−ホモフェニルアラニン、
Ｄ−ホモフェニルアラニン、
Ｄ−３−（４−キノリル）アラニン、
Ｌ−３−（４−キノリル）アラニン、
Ｄ−ナフチルアラニン
又はＬ−ナフチルアラニンでもよい。
【００７８】
所与の実施形態においては、Y２が無いか又は、
Ｄ−グルタミン酸、
Ｌ−グルタミン酸、
Ｄ−アスパラギン酸、
Ｌ−アスパラギン酸、
Ｌ−ロイシン、
Ｄ−ロイシン、
Ｌ−グルタミン、
Ｄ−グルタミン、
Ｌ−メチオニン、
Ｄ−メチオニン、
Ｄ−２−アミノヘプタン二酸、
Ｌ−２−アミノヘプタン二酸、
これらのいずれかのメチルエステル又はエチルエステル、
Ｌ−ホモセリン、
Ｄ−ホモセリン、
又は上記いずれかのＬ配置又はＤ配置のＮ−メチル誘導体である。
【００７９】
別の例としてＹ２は、
Ｄ−グルタミン酸、
Ｌ−グルタミン酸、
Ｄ−アスパラギン酸、
Ｌ−アスパラギン酸、
Ｄ−２−アミノヘプタン二酸、
Ｌ−２−アミノヘプタン二酸、
これらのいずれかのメチルエステル又はエチルエステル、
Ｌ−ホモセリン、
又はＤ−ホモセリンであってもよい。
【００８０】
所与の実施形態においてはＹ３は、
Ｄ−アルギニン、
Ｌ−アルギニン、
Ｌ−プロリン、
Ｄ−プロリン、
Ｄ−ヒスチジン、
Ｌ−ヒスチジン、
Ｄ−リジン、
Ｄ−α，β−ジアミノプロピオン酸（Ｄ−Ｄａｐ）、
Ｌ−α，β−ジアミノプロピオン酸（Ｌ−Ｄａｐ）、
Ｌ−α，δ−ジアミノ酪酸（Ｌ−Ｄａｂ）、
Ｄ−α，δ−ジアミノ酪酸（Ｄ−Ｄａｂ）、
Ｌ−オルニチン、
Ｄ−オルニチン、
Ｌ−リジン、
又は上記いずれかのＬ配置又はＤ配置のＮ−メチル誘導体である。
【００８１】
別の例としてＹ３は、
Ｄ−アルギニン、
Ｌ−アルギニン、
Ｄ−ヒスチジン、
Ｌ−ヒスチジン、
Ｄ−リジン、
Ｄ−α，β−ジアミノプロピオン酸（Ｄ−Ｄａｐ）、
Ｌ−α，β−ジアミノプロピオン酸（Ｌ−Ｄａｐ）、
Ｄ−α，δ−ジアミノ酪酸（Ｄ−Ｄａｂ）、
Ｌ−α，δ−ジアミノ酪酸（Ｌ−Ｄａｂ）、
Ｌ−オルニチン、
Ｄ−オルニチン、
又はＬ−リジンであってもよい。
【００８２】
所与の実施形態においてＹ４は、
Ｄ−フェニルアラニン、
Ｌ−フェニルアラニン、
Ｄ−トリプトファン、
Ｌ−トリプトファン、
Ｄ−チロシン、
Ｌ−チロシン、
Ｄ−３，３−ジフェニルアラニン、
Ｌ−３，３−ジフェニルアラニン、
Ｄ−Ｈ−３−（４−ピリジル）アラニン、
Ｌ−Ｈ−３−（４−ピリジル）アラニン、
Ｄ−Ｈ−３−（３−ピリジル）アラニン、
Ｌ−Ｈ−３−（３−ピリジル）アラニン、
Ｄ−Ｈ−３−（２−ピリジル）アラニン、
Ｌ−Ｈ−３−（２−ピリジル）アラニン、
Ｄ−２−アミノ−４−フェニル酪酸、
Ｌ−２−アミノ−４−フェニル酪酸、
Ｄ−フェニルグリシン、
Ｌ−フェニルグリシン、
Ｄ−Ｈ−４−ヒドロキシフェニルグリシン、
Ｌ−Ｈ−４−ヒドロキシフェニルグリシン、
Ｄ−３−（２−フリル）アラニン、
Ｌ−３−（２−フリル）アラニン、
Ｌ−ホモフェニルアラニン、
Ｄ−ホモフェニルアラニン、
Ｄ−３−（４−キノリル）アラニン、
Ｌ−３−（４−キノリル）アラニン、
Ｄ−ナフチル−アラニン、
Ｌ−ナフチル−アラニン、
これらのＬ配置又はＤ配置のＮ−メチル誘導体、
アニリン、
ベンジルアミン、
又は２−フェニルエチルアミンである。
【００８３】
別の例としてＹ４は、
Ｄ−フェニルアラニン、
Ｌ−フェニルアラニン、
Ｄ−トリプトファン、
Ｌ−トリプトファン、
Ｄ−チロシン、
Ｌ−チロシン、
Ｄ−３，３−ジフェニル−アラニン、
Ｌ−３，３−ジフェニル−アラニン、
Ｄ−Ｈ−３−（４−ピリジル）アラニン、
Ｌ−Ｈ−３−（４−ピリジル）アラニン、
Ｄ−Ｈ−３−（３−ピリジル）アラニン、
Ｌ−Ｈ−３−（３−ピリジル）アラニン、
Ｄ−Ｈ−３−（２−ピリジル）アラニン、
Ｌ−Ｈ−３−（２−ピリジル）アラニン、
Ｄ−２−アミノ−４−フェニル酪酸、
Ｌ−２−アミノ−４−フェニル酪酸、
Ｄ−フェニルグリシン、
Ｌ−フェニルグリシン、
Ｄ−Ｈ−４−ヒドロキシフェニルグリシン、
Ｌ−Ｈ−４−ヒドロキシフェニルグリシン、
Ｄ−３−（２−フリル）アラニン、
Ｌ−３−（２−フリル）アラニン、
Ｌ−シクロヘキシルアラニン、
Ｄ−シクロヘキシルアラニン、
Ｌ−ホモフェニルアラニン、
Ｄ−ホモフェニルアラニン、
Ｄ−３−（４−キノリル）−アラニン、
Ｌ−３−（４−キノリル）−アラニン、
Ｄ−ナフチル−アラニン
又はＬ−ナフチル−アラニンであってもよい。
【００８４】
所与の好適な実施形態においては、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３及びＹ４は全て上述した通りである。
所与の実施形態においては、Ｙ２及びＹ３が以下であるという条件でＹ１、Ｙ２、Ｙ３及びＹ４が全て上述した通りである。その条件においてＹ２は、
Ｄ−グルタミン酸、
Ｌ−グルタミン酸、
Ｄ−アスパラギン酸、
Ｌ−アスパラギン酸、
Ｄ−２−アミノヘプタン二酸、
Ｌ−２−アミノヘプタン二酸、
これらのいずれかのメチルエステル又はエチルエステル；
Ｌ−ホモセリン、
Ｌ−ロイシン
Ｄ−ロイシン
Ｌ−グルタミン
Ｄ−グルタミン
Ｌ−メチオニン
Ｄ−メチオニン
Ｄ−ホモセリン、
又は上記いずれかのＬ配置又Ｄ配置のＮ−メチル誘導体であり、かつ、Ｙ３は、
Ｄ−アルギニン、
Ｌ−アルギニン、
Ｄ−ヒスチジン、
Ｌ−ヒスチジン、
Ｄ−リジン、
Ｌ−リジン、
Ｌ−プロリン、
Ｄ−プロリン、
Ｄ−α，β−ジアミノプロピオン酸（Ｄ−Ｄａｐ）、
Ｌ−α，β−ジアミノプロピオン酸（Ｌ−Ｄａｐ）、
Ｄ−α，δ−ジアミノ酪酸（Ｄ−Ｄａｂ）、
Ｌ−α，δ−ジアミノ酪酸（Ｌ−Ｄａｂ）、
Ｄ−オルニチン
Ｌ−オルニチン
又は上記のいずれかのＬ配置又はＤ配置のＮ−メチル誘導体である。
【００８５】
所与の実施形態においては、Ｙ１及びＹ２は双方とも上述した通りであるが、Ｙ２及びＹ３の双方又は一方が無い。所与の実施形態においてはＭがペプチド結合である。
【００８６】
所与の実施形態においては、Ｘ１は水素であるか、又は、Ｘ１は、アミノ結合を形成するためにオリゴペプチド配列のアミノ末端に付加された、次の群の１つである。当該群は、
アセチル基、
ベンジルオキシカルボニル基、
２−クロロベンジルオキシカルボニル基、
３−メトキシ−３，４−ヒドロキシベンゾイル基、
３−ヒドロキシ−３，４−メトキシ−ベンゾイル基、
ベンゾイル基、
又はフルオレニルメトキシカルボニル基からなる。
【００８７】
Ｘ２はヒドロキシル基であるか、又は、Ｘ２は、アミノ結合を形成するためにオリゴペプチド配列のカルボニル酸末端に付加された、次の群の１つである。当該群は、
アミン、
Ｄ−フェニルアラニン、
Ｌ−フェニルアラニン、
Ｄ−トリプトファン、
Ｌ−トリプトファン、
Ｄ−チロシン、
Ｌ−チロシン、
Ｄ−３，３−ジフェニルアラニン、
Ｌ−３，３−ジフェニルアラニン、
Ｄ−Ｈ−３−（４−ピリジル）アラニン、
Ｌ−Ｈ−３−（４−ピリジル）アラニン、
Ｄ−Ｈ−３−（３−ピリジル）アラニン、
Ｌ−Ｈ−３−（３−ピリジル）アラニン、
Ｄ−Ｈ−３−（２−ピリジル）アラニン、
Ｌ−Ｈ−３−（２−ピリジル）アラニン、
Ｄ−２−アミノ−４−フェニル酪酸、
Ｌ−２−アミノ−４−フェニル酪酸、
Ｄ−フェニルグリシン、
Ｌ−フェニルグリシン、
Ｄ−Ｈ−４−ヒドロキシフェニルグリシン、
Ｌ−Ｈ−４−ヒドロキシフェニルグリシン、
Ｄ−３−（２−フリル）アラニン、
Ｌ−３−（２−フリル）アラニン、
Ｌ−シクロヘキシルアラニン、
Ｄ−シクロヘキシルアラニン、
Ｌ−ホモフェニルアラニン、
Ｄ−ホモフェニルアラニン、
Ｄ−３−（４−キノリル）アラニン、
Ｌ−３−（４−キノリル）アラニン、
Ｄ−ナフチルアラニン
Ｌ−ナフチルアラニン
又は上記いずれかのＬ配置又はＤ配置のＮ−メチル誘導体からなる。
【００８８】
所与の実施形態においては、Ｚ１、Ｙ２、Ｙ３及びＺ４は次の通りである。
Ｚ１は、
４−ヒドロキシベンゾイル基、
（４−ヒドロキシ−フェニル）アセチル基、
３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロピオニル基、
ベンゾイル基、
ベンジルオキシカルボニル基、
２−フェニル−アセチル基、
３−フェニル−プロピオニル基、
３、３−ジフェニル−プロピオニル基、
３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロピオニル基、
（１Ｈ−インドール−３−イル）アセチル基、
フラン−２−イル−アセチル基、
フラン−３−イル−アセチル基、
３−ピリジン−４−イル−プロピオニル基、
３−ピリジン−３−イル−プロピオニル基、
３−ピリジン−２−イル−プロピオニル基、
３−ピリミジン−４−イル−プロピオニル基、
３−ピリダジン−４−イル−プロピオニル基、
３−［１，３，５］トリアジン−２−イル−プロピオニル基、
２−ピリジン−４−イル−アセチル基、
２−ピリジン−３−イル−アセチル基、
２−ピリジン−２−イル−アセチル基、
２−ピリミジン−４−イル−アセチル基、
２−ピリダジン−４−イル−アセチル基、
２−［１，３，５］トリアジン−２−イル−アセチル基、
ナフタレン−１−イル−アセチル基、
ナフタレン−２−イル−アセチル基、
２−ナフタレン−１−イル−プロピオニル基、
又は２−ナフタレン−２−イル−プロピオニルである。
【００８９】
Ｙ２は、
Ｄ−グルタミン酸、
Ｌ−グルタミン酸、
Ｄ−アスパラギン酸、
Ｌ−アスパラギン酸、
Ｌ−ロイシン、
Ｄ−ロイシン、
Ｌ−グルタミン、
Ｄ−グルタミン、
Ｌ−メチオニン、
Ｄ−メチオニン、
Ｄ−２−アミノヘプタン二酸、
Ｌ−２−アミノヘプタン二酸、
これらのいずれかのメチルエステル又はエチルエステル、
Ｌ−ホモセリン、
Ｄ−ホモセリン、
又は上記のいずれかのＬ又はＤ配置のＮ−メチル誘導体である。
【００９０】
Ｙ３は、
Ｄ−アルギニン、
Ｌ−アルギニン、
Ｄ−ヒスチジン、
Ｌ−ヒスチジン、
Ｌ−プロリン、
Ｄ−プロリン、
Ｄ−リジン、
Ｌ−リジン、
Ｄ−α，β−ジアミノプロピオン酸（Ｄ−Ｄａｐ）、
Ｌ−α，β−ジアミノプロピオン酸（Ｌ−Ｄａｐ）、
Ｄ−α，δ−ジアミノ酪酸（Ｄ−Ｄａｂ）、
Ｌ−α，δ−ジアミノ酪酸（Ｌ−Ｄａｂ）、
Ｄ−オルニチン、
Ｌ−オルチニン、
又は上記のいずれかのＬ配置又はＤ配置のＮ−メチル誘導体である。
【００９１】
Ｚ４は、
フェニルアミン、
ベンジルアミン、
フェネチルアミン、
シクロヘキシルアミン、
２−シクロヘキシルエチルアミン、
３−シクロヘキシルプロピルアミン、
４−（２−アミノエチル）フェノール、
４−アミノ−フェノール、
４−アミノメチル−フェノール、
１Ｈ−インドール−３−イル−アミン、
２−（１Ｈ−インドール−３−イル）エチルアミン、
Ｃ−（１Ｈ−インドール−３−イル）メチルアミン、
２，２−ジフェニル−エチルアミン、
２，２−ジピリジン−４−イル−エチルアミン、
２−ピリジン−４−イル−エチルアミン、
２−ピリジン−３−イル−エチルアミン、
２−ピリジン−２−イル−エチルアミン、
２−ピリミジン−４−イル−エチルアミン、
２−［１、３、５］トリアジン−２−イル−エチルアミン、
Ｃ−フラン−２−イル−メチルアミン、
Ｃ−フラン−３−イル−メチルアミン、
又はＣ−ナフタレン−２−イル−メチルアミンである。
【００９２】
慣例の通り、全てのペプチド及びペプトイドとそれらの領域は、Ｎ末端からＣ末端へと記載している。
ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７又は１８でもよい。所与の好適例において、ｎ＝０である。
【００９３】
所与の好適例においてＡはＡ’である。このような例において、化合物は本質的に、１又はそれ以上の末端で必要に応じてブロッキング基Ｘ１とＸ２を有するテトラペプチド、トリペプチド又はジペプチド（又は対応するペプトイド）である。
【００９４】
＜オリゴペプチド＞
オリゴペプチドは、αアミノ酸（本明細書では単に“アミノ酸”と称する）の縮合により形成された短いポリマーである。１つのアミノ酸残基と次のそれとの結合は、ペプチド結合又はアミド結合として知られている。
【００９５】
＜アミノ酸＞
本明細書中で使用される用語“アミノ酸”は、Ｄ配置とＬ配置の光学立体配置の両方における２０個の標準的なアミノ酸（イソロイシン、アラニン、ロイシン、アスパラギン、リジン、アスパラギン酸、メチオニン、システイン、フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニン、グルタミン、トリプトファン、グリシン、バリン、プロリン、セリン、チロシン、アルギニン、及びヒスチジン）を含む。また、Ｄ配置とＬ配置の両方における合成αアミノ酸も含む。所与の実施形態においてはＤ配置が好ましい。
【００９６】
＜アミノ酸誘導体＞
本明細書中で使用されるこの用語は、Ｎ−置換グリシンを含み、これは、側鎖が（アミノ酸におけるような）α炭素ではなく、分子の主鎖に沿った窒素原子に結合するという点でαアミノ酸とは異なる。またこの用語は、αアミノ酸のメチルエステル及びエチルエステル、β−アミノ酸及びＮ−メチル化αアミノ酸も含む。
【００９７】
＜オリゴペプトイド＞
厳密に言えば、用語“オリゴペプチド”はαアミノ酸のオリゴマーにのみ関連する。アミノ酸誘導体（例えば、Ｎ置換グリシン）を、（全ての又はいくつかの残基位置で）組み込んだ類似オリゴマーは、オリゴペプトイドとして知られている。
【００９８】
＜誘導体＞
好適には、ここで例示されたＧａｄｄ４５β阻害剤の誘導体は、機能的誘導体である。用語“機能的誘導体”は、（例えば、式Ｉによる対応する未修飾の化合物の生理学的機能と同じであるか、又は、それに替えて機能アッセイにおけるインビトロ生理学的機能が同じであるような）同じ生理学的機能をもつ式Ｉの化合物の化学的誘導体を示すために用いられる。機能アッセイは例えば、本明細書中の実施形態の１つに記載されたアッセイの１つにおけるものである。
【００９９】
化合物の誘導体は、アミド化、グリコシル化、カルバミル化、アシル化（例えばアセチル化）、硫酸化、リン酸化、環化、脂質化、ペグ化を含む周知のプロセスにより修飾された式Ｉの構造を有してもよい。式Ｉの構造は、分子内のランダムの位置で修飾されてもよく、又は、分子内の予め決められた位置で修飾されてもよい。そして、１個、２個、３個又はそれ以上の化学部分を付加されてもよい。誘導体には、その内部でＮ末端ＮＨ２基が別の基、例えばメトキシ基で置換された化合物も含まれる。
【０１００】
Ｇａｄｄ４５β阻害剤は融合タンパク質でもよく、その場合、式Ｉの構造は、公知技術の方法を用いて別のタンパク質又はポリペプチド（融合パートナー）に融合させられる。いかなる適切なポリペプチド又はタンパク質（例えば血清アルブミン、炭酸脱水酵素、グルタチオンＳトランスフェラーゼ、又はチオレドキシン等）も、融合パートナーとして用いることができる。好適な融合パートナーは、生体内で有害な生物活性を有していないであろう。このような融合タンパク質は、融合パートナーのカルボキシ末端を式Ｉの構造のアミノ末端に結合することにより、又はその逆に結合することにより形成することができる。必要に応じて、式Ｉの構造を融合パートナーに結合するために、切断可能なリンカーを用いてもよい。得られた切断可能な融合タンパク質は、阻害剤の活性型が放出されるように生体内で切断することができる。このような切断可能なリンカーは例えば、リンカーＤ−Ｄ−Ｄ−Ｄ−Ｙ［配列番号：２２７］、Ｇ−Ｐ−Ｒ、Ａ−Ｇ−Ｇ及びＨ−Ｐ−Ｆ−Ｈ−Ｌ［配列番号：２２８］を含むが、これらに限定されない。これらはそれぞれ，エンテロキナーゼ、トロンビン、ユビキチン切断酵素及びレニンによって切断することができる例えば特許文献８を参照されたい。
【０１０１】
Ｇａｄｄ４５β化合物は、式Ｉの構造をもつ生理学的な機能的誘導体であってもよい。用語”生理学的な機能的誘導体”は、本明細書では、対応する式１の非修飾化合物と同じ生理学的機能を有する式Ｉの化合物の化学的誘導体を意味するために用いる。例えば、生理学的な機能的誘導体は、体内で式Ｉの化合物に転換可能であってもよい。生理学的な機能的誘導体の例は、エステル、アミド及びカルバメートが挙げられる。
【０１０２】
その化合物の薬学的に許容されるエステル及びアミドとしては、例えば酸基の位置などの適切な部位に結合したＣ１−２０アルキル−、Ｃ２−２０アルケニル−、Ｃ５−１０アリル−、Ｃ５−１０若しくはＣ１−２０アルキル−、又は、アミノ酸−エステル若しくは−アミド、を有するものが挙げられる。適切な部分の例としては、４個から２６個までの炭素原子、好ましくは５個から１９個までの炭素原子をもつ疎水性置換基である。適切な脂質基としては、限定しないが、次のものが含まれる。すなわちラウロイル（Ｃ１２Ｈ２３）、パルミチル（Ｃ１５Ｈ３１）、オレイル（Ｃ１５Ｈ２９）、ステアリル（Ｃ１７Ｈ３５）、コール酸及びデオキシコール酸である。
【０１０３】
脂肪酸誘導体をもつスルフィドリル含有化合物の脂質化のための方法は、特許文献９、特許文献１０及び特許文献１１に開示されている。ジスルフィド結合を介して脂肪酸に結合された阻害剤を有する、阻害剤の脂肪酸誘導体は、神経細胞及び神経組織への阻害剤の送達のために用いることができる。脂質化は、対応する非脂質化化合物の吸収率に対する当該化合物の吸収率を格段に増大させるとともに、当該化合物の血液及び組織における滞留を格段に延長させる。さらに、脂質化誘導体におけるジスルフィド結合は、細胞内で比較的不安定であるため、脂肪酸部分からの分子の細胞内放出を容易とする。適切な脂質含有部分は、４個から２６個までの炭素原子、好適には５個から１９個までの炭素原子をもつ疎水性置換基である。適切な脂質基としては、限定しないが、次のものが含まれる。すなわちパルミチル（Ｃ１５Ｈ３１）、オレイル（Ｃ１５Ｈ２９）、ステアリル（Ｃ１７Ｈ３５）、コール酸及びデオキシコール酸塩である。
【０１０４】
環化方法は、環化樹脂を用いたジスルフィド架橋及びヘッドトゥテイル環化の形成による環化を含む。環化ペプチドは、その立体配座の制約として安定性が増し、酵素分解に対する耐性が強化されている。環化は、非環化ペプチドがＮ末端システイン基を含む場合に特に好都合となり得る。適切な環化ペプチドは、モノマー又はダイマーのヘッドトゥテイル環化構造を含む。環化ペプチドは、特にジスルフィド結合の形成のために組み込まれる付加的なシステイン、又は、樹脂ベース環化のために組み込まれる側鎖のような１又は複数の付加的残基を含んでもよい。
【０１０５】
化合物は、式Ｉのペグ化構造であってもよい。ペグ化阻害剤化合物は、可溶性、安定性及びポリペプチドの循環時間の向上、又は抗原性の低減という追加の利点を提供できる（特許文献１２参照）。
【０１０６】
化合物の誘導体における化学的部分は、ポリエチレングリコール、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコールなどの水溶性ポリマーから選択されてもよい。阻害剤の誘導体化のためのポリマー部分は、任意の分子量でよく、分岐又は非分岐のいずれでもよい。例えば徐放の持続が所望されるなどの所望する治療プロファイルに応じて、生物学的活性に対する効果が有る場合のその効果に応じて、取り扱いの容易さに応じて、治療タンパク質若しくは類似のものに対するポリエチレングリコールの抗原性及び他の既知の効果の程度若しくは欠如に応じて、他の分子量のポリマーを用いてもよい。例えば、ポリエチレングリコールは、平均分子量が約２００、５００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００、５５００、６０００、６５００、７０００、７５００、８０００、８５００、９０００、９５００、１０，０００、１０，５００、１１，０００、１１，５００、１２，０００、１２，５００、１３，０００、１３，５００、１４，０００、１４，５００、１５，０００、１５，５００、１６，０００、１６，５００、１７，０００、１７，５００、１８，０００、１８，５００、１９，０００、１９，５００、２０，０００、２５，０００、３０，０００、３５，０００、４０，０００、５０，０００、５５，０００、６０，０００、６５，０００、７０，０００、７５，０００、８０，０００、８５，０００、９０，０００、９５，０００、又は１００，０００ｋＤａである。
【０１０７】
医薬における使用に適している化合物の塩及び溶媒和物は、対イオン又は関係する溶媒が薬学的に許容されるものである。しかしながら、薬学的に許容できない対イオン又は関係する溶媒を有する塩及び溶媒和物を使用してもよい。例えば、式Ｉの化合物及びそれらの薬学的に許容される塩又は溶媒和物の調製における中間体としての使用のためである。
【０１０８】
適切な塩としては、有機酸、無機酸、有機塩基又は無機塩基と形成されるものを含む。薬学的に許容可能な酸付加塩としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、クエン酸、酒石酸、酢酸、リン酸、乳酸、ピルビン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、コハク酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、オキサロ酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ベンゼンスルホン酸、及びイセチオン酸と形成されるものが挙げられる。シュウ酸のような他の酸は、それ自体は薬学的に許容されないが、阻害剤化合物及びそれらの薬学的に許容される塩を得る際の中間体としては有用であり得る。塩基をもつ薬学的に許容可能な塩は、アンモニウム塩、例えばカリウム塩およびナトリウム塩のようなアルカリ金属塩、例えばカルシウム塩およびマグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩、並びに、例えばジシクロヘキシルアミン及びＮ−メチル−Ｄ−グルコミンのような有機塩基との塩である。
【０１０９】
有機化学分野の当業者は、多くの有機化合物が、それらがその中で反応させられたりその中から沈殿若しくは結晶化させられたりする溶媒との錯体を形成可能であることは理解できよう。このような錯体は、”溶媒和物”として知られている。例えば、水との錯体は”水和物”として知られている。
【０１１０】
所与の好適な実施形態においては、化合物の、人間の循環系における半減期は少なくとも０．１、０．２、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、??９、１０、１１時間であるか又は最も好ましくは少なくとも１２時間である。
【０１１１】
好ましくは、化合物は、インビトロ結合アッセイにおいて評価されるＧａｄｄ４５β及び／又はＭＫＫ７（及び／又は両方に関係）に対し結合する能力の少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０％を保持することが好ましく、又は最も好ましくは９９％を保持する。あるいは、化合物は、通常のヒト血清中で２４時間３７℃にて培養した後のインビトロ競合結合アッセイにおいて評価されるＧａｄｄ４５βのＭＫＫ７との相互作用を阻害する能力の少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０％を保持することが好ましく、又は最も好ましくは９９％を保持する。
【０１１２】
これに替えて又は追加して、化合物は、次の活性のうち少なくとも１つを有する。
ａ）実施例に記載したアッセイ条件下にてＭＫＫ７のＧａｄｄ４５βとの相互作用を少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０％阻害し、又は最も好ましくは９９％阻害する能力。
ｂ）Ｕ２６６、ＫＭＳ−１１、ＮＣＩ−Ｈ９２９、ＡＲＨ−７７、ＪＪＮ−３、ＫＭＳ−１２、ＫＭＳ−１８、及びＫＭＳ−２７からなる群から選択されたヒト骨髄腫細胞株の培地中の細胞のうち、又は、ＤＬＢＣＬ細胞株ＬＹ−３の培地中の細胞のうち、又は、プロ単球細胞株Ｕ９３７の培地中の細胞のうち、又は、バ−キットリンパ腫細胞細胞株ＢＪＡＢの培地中の細胞のうち、又は、原発腫瘍細胞（例えば一次多発性骨髄腫腫瘍細胞）の培地中の細胞のうち、Ｔ細胞株ＪＵＲＫＡＴの少なくとも９０％が死滅しない条件下にて少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０％の細胞を死滅させ、又は最も好ましくは９９％の細胞を死滅させるインビトロでの能力。
【０１１３】
所与の好適な実施形態においては、式ＩにおいてＡで識別される、化合物のオリゴペプチドのコア部分は、次の群から選択されたアミノ酸配列を有する。
【０１１４】
（Ｌ−Ｔｙｒ）−（Ｌ−Ａｓｐ）−（Ｌ−Ｈｉｓ）−（Ｌ−Ｐｈｅ）［配列番号：２］
（Ｌ−Ｔｙｒ）−（Ｌ−Ｇｌｕ）−（Ｌ−Ａｒｇ）−（Ｌ−Ｐｈｅ）［配列番号：３］
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（Ｄ−Ｔｒｐ）−（Ｄ−Ｇｌｕ）−（Ｄ−Ｌｙｓ）−（Ｄ−Ｔｒｐ）［配列番号：２２２］
（Ｄ−Ｔｒｐ）−（Ｄ−Ｇｌｕ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−（Ｄ−Ｔｒｐ）［配列番号：２２３］
（Ｄ−Ｔｒｐ）−（Ｄ−Ａｓｐ）−（Ｄ−Ｌｙｓ）−（Ｄ−Ｔｒｐ）［配列番号：２２４］
（Ｄ−Ｔｒｐ）−（Ｄ−Ｇｌｎ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−（Ｄ−Ｔｒｐ）［配列番号：２２５］
（Ｄ−Ｔｒｐ）−（Ｄ−Ａｓｎ）−（Ｄ−Ｌｙｓ）−（Ｄ−Ｔｒｐ）［配列番号：２２６］
（Ｌ−Ｔｙｒ）−（Ｌ−Ａｓｐ）−（Ｌ−Ｐｈｅ）、
（Ｄ−Ｔｙｒ）−（Ｄ−Ａｓｐ）−（Ｄ−Ｐｈｅ）、
（Ｌ−Ｔｙｒ）−（Ｌ−Ｇｌｕ）−（Ｌ−Ｐｈｅ）、
（Ｌ−Ｔｙｒ）−（Ｌ−Ａｒｇ）−（Ｌ−Ｐｈｅ）、
（Ｄ−Ｔｙｒ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−（Ｄ−Ｐｈｅ）、
（Ｄ−Ｔｙｒ）−（Ｄ−Ｇｌｕ）−（Ｄ−Ｐｈｅ）、
（Ｄ−Ｔｙｒ）−（Ｄ−Ｐｒｏ）−（Ｄ−Ｐｈｅ）、
（Ｄ−Ｔｙｒ）−（Ｄ−Ｌｅｕ）−（Ｄ−Ｐｈｅ）、
（Ｄ−Ｔｙｒ）−（Ｄ−Ａｓｐ）−（Ｄ−Ｔｙｒ）、
（Ｄ−Ｔｙｒ）−（Ｄ−Ｇｌｕ）−（Ｄ−Ｔｙｒ）、
（Ｄ−Ｔｙｒ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−（Ｄ−Ｔｙｒ）、
（Ｄ−Ｔｙｒ）−（Ｄ−Ｐｒｏ）−（Ｄ−Ｔｙｒ）、
（Ｄ−Ｔｙｒ）−（Ｄ−Ｌｅｕ）−（Ｄ−Ｔｙｒ）、
（Ｄ−Ｐｈｅ）−（Ｄ−Ｐｒｏ）−（Ｄ−Ｐｈｅ）、
（Ｄ−Ｐｈｅ）−（Ｄ−Ｌｅｕ）−（Ｄ−Ｐｈｅ）、
（Ｄ−Ｐｈｅ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−（Ｄ−Ｔｙｒ）、
（Ｄ−Ｐｈｅ）−（Ｄ−Ｇｌｕ）−（Ｄ−Ｔｙｒ）、
（Ｄ−Ｐｈｅ）−（Ｄ−Ａｓｐ）−（Ｄ−Ｔｙｒ）、
（Ｄ−Ｐｈｅ）−（Ｄ−Ｐｒｏ）−（Ｄ−Ｔｙｒ）、
（Ｄ−Ｐｈｅ）−（Ｄ−Ｌｅｕ）−（Ｄ−Ｔｙｒ）、
（Ｄ−Ｔｙｒ）−（Ｄ−Ｐｒｏ）−（Ｄ−Ｔｒｐ）、
（Ｄ−Ｔｙｒ）−（Ｄ−Ｌｅｕ）−（Ｄ−Ｔｒｐ）、
（Ｄ−Ｔｙｒ）−（Ｄ−Ａｓｐ）−（Ｄ−Ｔｒｐ）、
（Ｄ−Ｔｙｒ）−（Ｄ−Ｇｌｕ）−（Ｄ−Ｔｒｐ）、
（Ｄ−Ｔｙｒ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−（Ｄ−Ｔｒｐ）、
（Ｄ−Ｔｙｒ）−（Ｄ−Ｐｒｏ）−（Ｄ−Ｔｒｐ）、
（Ｄ−Ｔｙｒ）−（Ｄ−Ｌｅｕ）−（Ｄ−Ｔｒｐ）、
（Ｄ−Ｐｈｅ）−（Ｄ−Ｐｒｏ）−（Ｄ−Ｔｒｐ）
（Ｄ−Ｐｈｅ）−（Ｄ−Ｌｅｕ）−（Ｄ−Ｔｒｐ）、
（Ｄ−Ｐｈｅ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−（Ｄ−Ｔｒｐ）、
（Ｄ−Ｐｈｅ）−（Ｄ−Ｇｌｕ）−（Ｄ−Ｔｒｐ）、
（Ｄ−Ｐｈｅ）−（Ｄ−Ａｓｐ）−（Ｄ−Ｔｒｐ）、
（Ｄ−Ｐｈｅ）−（Ｄ−Ｐｒｏ）−（Ｄ−Ｔｒｐ）及び
（Ｄ−Ｐｈｅ）−（Ｄ−Ｌｅｕ）−（Ｄ−Ｔｒｐ）
【０１１５】
他の実施形態において、Ａ部分は、次の群から選択される。
ｐ−ヒドロキシ安息香酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−（Ｌ−Ａｒｇ）−アニリン、
ｐ−ヒドロキシ安息香酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−（Ｌ−Ａｒｇ）−アニリン、
ｐ−ヒドロキシ安息香酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−アニリン、
ｐ−ヒドロキシ安息香酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−アニリン、
ｐ−ヒドロキシ安息香酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−（Ｌ−Ａｒｇ）−ベンジルアミン、
ｐ−ヒドロキシ安息香酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−（Ｌ−Ａｒｇ）−ベンジルアミン、
ｐ−ヒドロキシ安息香酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−ベンジルアミン、
ｐ−ヒドロキシ安息香酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−ベンジルアミン、
ｐ−ヒドロキシ安息香酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−（Ｌ−Ａｒｇ）−２−フェニルエチルアミン、
ｐ−ヒドロキシ安息香酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−（Ｌ−Ａｒｇ）−２−フェニルエチルアミン、
ｐ−ヒドロキシ安息香酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−２−フェニルエチルアミン、
ｐ−ヒドロキシ安息香酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−２−フェニルエチルアミン、
２−（４−ヒドロキシ−フェニル）酢酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−（Ｌ−Ａｒｇ）−アニリン、
２−（４−ヒドロキシ−フェニル）酢酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−（Ｌ−Ａｒｇ）−アニリン、
２−（４−ヒドロキシ−フェニル）酢酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−アニリン、
２−（４−ヒドロキシ−フェニル）酢酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−アニリン、
２−（４−ヒドロキシ−フェニル）酢酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−（Ｌ−Ａｒｇ）−ベンジルアミン、
２−（４−ヒドロキシ−フェニル）酢酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−（Ｌ−Ａｒｇ）−ベンジルアミン、
２−（４−ヒドロキシ−フェニル）酢酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−ベンジルアミン、
２−（４−ヒドロキシ−フェニル、酢酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−ベンジルアミン、
２−（４−ヒドロキシ−フェニル）酢酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−（Ｌ−Ａｒｇ）−２−フェニルエチルアミン、
２−（４−ヒドロキシ−フェニル）酢酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−（Ｌ−Ａｒｇ）−２−フェニルエチルアミン、
２−（４−ヒドロキシ−フェニル）酢酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−２−フェニルエチルアミン、
２−（４−ヒドロキシ−フェニル）酢酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−２−フェニルエチルアミン、
３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロオピオン酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−（Ｌ−Ａｒｇ）−アニリン、
３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロオピオン酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−（Ｌ−Ａｒｇ）−アニリン、
３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロオピオン酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−アニリン、
３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロオピオン酸−（Ｄ−ＧＩｕ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−アニリン、
３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロオピオン酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−（Ｌ−Ａｒｇ）−ベンジルアミン、
３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロオピオン酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−（Ｌ−Ａｒｇ）−ベンジルアミン、
３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロオピオン酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−ベンジルアミン、
３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロオピオン酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−ベンジルアミン、
３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロオピオン酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−（Ｌ−Ａｒｇ）−２−フェニルエチルアミン、
３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロオピオン酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−（Ｌ−Ａｒｇ）−２−フェニルエチルアミン、
３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロオピオン酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−２−フェニルエチルアミン、
３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロオピオン酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−２−フェニルエチルアミン、
ｐ−ヒドロキシ安息香酸−（Ｌ−Ａｒｇ）−アニリン、
ｐ−ヒドロキシ安息香酸−（Ｄ−Ａｒｇ）−アニリン、
ｐ−ヒドロキシ安息香酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−アニリン、
ｐ−ヒドロキシ安息香酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−アニリン、
ｐ−ヒドロキシ安息香酸−（Ｌ−Ａｒｇ）−ベンジルアミン、
ｐ−ヒドロキシ安息香酸−（Ｄ−Ａｒｇ）−ベンジルアミン、
ｐ−ヒドロキシ安息香酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−ベンジルアミン、
ｐ−ヒドロキシ安息香酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−ベンジルアミン、
ｐ−ヒドロキシ安息香酸−（Ｌ−Ａｒｇ）−２−フェニルエチルアミン、
ｐ−ヒドロキシ安息香酸−（Ｄ−Ａｒｇ）−２−フェニルエチルアミン、
ｐ−ヒドロキシ安息香酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−２−フェニルエチルアミン、
ｐ−ヒドロキシ安息香酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−２−フェニルエチルアミン、
２−（４−ヒドロキシ−フェニル）酢酸−（Ｌ−Ａｒｇ）−アニリン、
２−（４−ヒドロキシ−フェニル）酢酸−（Ｄ−Ａｒｇ）−アニリン、
２−（４−ヒドロキシ−フェニル）酢酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−アニリン、
２−（４−ヒドロキシ−フェニル）酢酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−アニリン、
２−（４−ヒドロキシ−フェニル）酢酸−（Ｄ−Ａｒｇ）−ベンジルアミン、
２−（４−ヒドロキシ−フェニル）酢酸−（Ｌ−Ａｒｇ）−ベンジルアミン、
２−（４−ヒドロキシ−フェニル）酢酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−ベンジルアミン、
２−（４−ヒドロキシ−フェニル）酢酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−ベンジルアミン、
２−（４−ヒドロキシ−フェニル）酢酸−（Ｌ−Ａｒｇ）−２−フェニルエチルアミン、
２−（４−ヒドロキシ−フェニル）酢酸−（Ｄ−Ａｒｇ）−２−フェニルエチルアミン、
２−（４−ヒドロキシ−フェニル）酢酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−２−フェニルエチルアミン、
２−（４−ヒドロキシ−フェニル）酢酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−２−フェニルエチルアミン、
３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロオピオン酸−（Ｌ−Ａｒｇ）−アニリン、
３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロオピオン酸−（Ｄ−Ａｒｇ）−アニリン、
３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロオピオン酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−アニリン、
３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロオピオン酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−アニリン、
３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロオピオン酸−（Ｌ−Ａｒｇ）−ベンジルアミン、
３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロオピオン酸−（Ｄ−Ａｒｇ）−ベンジルアミン、
３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロオピオン酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−ベンジルアミン、
３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロオピオン酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−ベンジルアミン、
３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロオピオン酸−（Ｌ−Ａｒｇ）−２−フェニルエチルアミン、
３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロオピオン酸−（Ｄ−Ａｒｇ）−２−フェニルエチルアミン、
３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロオピオン酸−（Ｌ−Ｇｌｕ）−２−フェニルエチルアミン、
３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロオピオン酸−（Ｄ−Ｇｌｕ）−２−フェニルエチルアミン
【０１１６】
他の実施形態においては、Ａ部分は、本明細書とともに提出した配列リスト中に開示された配列のうちの１つから選択される。
【０１１７】
別の例として、式ＩにおいてＡ’でラベル付けされた部分は、すぐ上で挙げた群から選択されたアミノ酸配列を有するオリゴペプチドでもよい。
【０１１８】
所与の実施形態においては、Ａ’部分は、残基Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４を有するペプチド部分又はペプトイド部分である。
ここで、Ｘａａ１は、Ｌ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｎ−メチル−Ｌ−Ｔｙｒ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ｔｙｒ、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、２−（４−ヒドロキシフェニル）酢酸、３−（４−ヒドロキシフェニル）プロピオン酸、又はアセチルであり、
Ｘａａ２は、Ｌ−Ｇｌｕ、Ｄ−Ｇｌｕ、Ｌ−Ａｓｐ、Ｄ−Ａｓｐ、Ｎ−メチル−Ｌ−Ｇｌｕ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ｇｌｕ、Ｎ−メチル−Ｌ−Ａｓｐ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｓｐ、Ｌ−Ｐｒｏ、Ｄ−Ｐｒｏ、Ｎ−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ｐｒｏ、Ｌ−Ｌｅｕ、Ｄ−Ｌｅｕ、Ｎ−メチル−Ｌ−Ｌｅｕ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ｌｅｕ、又は存在せず、
Ｘａａ３は、Ｌ−Ａｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ、Ｌ−Ｈｉｓ、Ｄ−Ｈｉｓ、Ｌ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｌｙｓ、Ｎ−メチル−Ｌ−Ａｒｇ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｒｇ、Ｎ−メチル−Ｌ−Ｈｉｓ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ｈｉｓ、Ｎ−メチル−Ｌ−Ｌｙｓ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ｌｙｓ、又は存在せず、
Ｘａａ４は、アニリン、ベンジルアミン、２−フェニルエチルアミン、Ｌ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｐｈｅ、Ｎ−メチル−Ｌ−Ｐｈｅ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ｐｈｅ、Ｌ−Ｔｒｐ、Ｄ−Ｔｒｐ、Ｎ−メチル−Ｌ−Ｔｒｐ、又はＮ−メチル−Ｄ−Ｔｒｐである。
【０１１９】
所与の実施形態においては、Ｘａａ２又はＸａａ３のいずれかが無いが、Ｘａａ２及びＸａａ３の両方が無いということはない。他の実施形態においては、Ｘａａ２及びＸａａ３の両方が無い。
【０１２０】
Ｍは、隣のペプチド部分又はペプトイド部分との間の単なるアミノ結合でもよい。別の例として、スペーサとして導入され、アミド結合により隣のペプチド部分又はペプトイド部分に結合された分子の部分であってもよい。
【０１２１】
Ｍは、付加的なアミノ酸でもよい。好適には、嵩高でない側鎖をもつ付加的なアミノ酸であり、例えばグリシン、アラニン若しくはセリン又はこれらのいずれかの誘導体である。別の例として、Ｍは、非アミノ酸部分でもよく、例えば、ε−アミノカプロン酸、３−アミノプロピオン酸、４−アミノ酪酸である。他の部分は、メチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、ブチルアミン、メチレン、ジメチレン、トリメチレン、又はテトラメチレンとすることができる。全ての場合において、Ｍは、その存在がＡ’部分と、Ｇａｄｄ４５β及び／又はＭＫＫ７との間の結合を物理的に妨げないようにすべきである。潜在的な干渉の程度は、インビトロ結合アッセイを用いて評価することができる。
【０１２２】
＜オリゴマー及びマルチマー＞
Ｇａｄｄ４５β阻害剤は、式Ｉの化合物の分子のオリゴマー又はマルチマーを包含してもよい。当該オリゴマー及びマルチマーは、式Ｉの化合物の分子を２個又はそれ以上有し、その各々が、式Ｉの化合物の分子中に存在するアミン又はカルボキシル酸基と、骨格部分上における対向するアミノ又はカルボキシル酸基との間のアミド結合を介して共通骨格部分に結合している。当該共通骨格部分は少なくとも２個のアミド結合により関与している。
【０１２３】
所与の実施形態においては、共通骨格部分は、アミノ酸リジンとしてもよい。リジンは、それをアミノ酸として規定する官能基に加えて、その側鎖上にアミノ基を有する三官能性アミノ酸である。この三官能性により、リジンは、ペプチド、ペプトイド又は類似の分子と３つのアミド結合を形成することが可能である。共通骨格部分として使用可能な他の三官能性アミノ酸は、Ｄ−α−β−ジアミノプロピオン酸（Ｄ−Ｄａｐ）、Ｌ−α，β−ジアミノプロピオン酸（Ｌ−Ｄａｐ）、Ｌ−α，δ−ジアミノ酪酸（Ｌ−Ｄａｂ）、Ｄ−α，δ−ジアミノ酪酸（Ｌ−Ｄａｂ）、及びＬ−オルニチン、Ｄ−オルニチンを含む。他の三官能性の非標準アミノ酸を用いてもよい。共通骨格部分は、分岐したペプチド、ペプトイド又は類似の分子を有していてもよく、それらは三官能性アミノ酸をその配列中に組み込んでおり、少なくともアミド結合を形成することができる三官能性の活性末端基を有している。
【０１２４】
＜細胞透過性ペプチド＞
所与の実施形態においては、式Ｉの化合物は、細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）に結合させられる。
【０１２５】
このようなペプチドは、１又は複数の共有結合を介して、又は、非共有結合により式Ｉの化合物に結合されてもよい。
【０１２６】
ＣＰＰは、例えばＣＰＰがＴａｔすなわちアンテナペディア配列由来のペプチドである誘導体、又はＰＴＤ−４ペプチドであるポリアルギニンタグ、又は機能的に等価な細胞透過性ペプチド（非特許文献５）である場合のように、直接的に形質膜を透過してもよい。
【０１２７】
あるいはＣＰＰは、エンドサイトーシス又は一時的な膜貫通構造の形成により細胞に入ってもよい。細胞透過性ペプチドの議論については、非特許文献６及びそれらの参考文献を参照されたい。
【０１２８】
所与の実施形態においては、化合物は、細胞取り込みを促進するためにナノ粒子（例えばナノ金）と結合してもよい。
【０１２９】
＜蛍光色素、タグ部分及び脂質化誘導体＞
式Ｉの化合物は、その標的の組織又は細胞への透過をモニタリングするために蛍光色素と結合させてもよい。蛍光色素は、アミノ基（例えばコハク酸イミド、イソチオシアネート、ヒドラジン）、カルボキシル基（例えばカルボジイミド）、チオール基（例えばマレイミド及びアセチルブロミド）及びアジド基を有して得られ、これらの基は式Ｉの化合物のペプチド部分と選択的に反応するために用いられる。蛍光色素の例は、フルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体が挙げられる。
【０１３０】
式Ｉの化合物は、非特許文献７に記載の離散的サイズのナノ粒子と結合させてもよい。非特許文献７では１００ｎｍまでの離散的サイズのものが記載されている。それによりペプチド又はその誘導体をジスルフィド架橋に結合できることによって、細胞質ゾルの還元性環境内で特定の放出を可能とする。さらに、アミド、エーテル、エステル、チオエーテル結合を介して結合されたペプチド−ナノ粒子も、これらの化合物が低毒性である場合に同じ目的で用いることができる。ナノ粒子は、細胞を取り込み易いと同時に蛍光技術による細胞取り込みの可視化及び定量化のための手段を提供する（非特許文献８）。
【０１３１】
タグ部分は同様の手段により結合され、同様に、組織及び細胞を標的とすることの成果をモニタリングできる。
【０１３２】
ジスルフィド架橋を介して脂肪酸に結合された、式Ｉの化合物を有する化合物の脂肪酸誘導体は、細胞及び組織への阻害剤化合物の送達のために用いることができる。脂質化は、対応する非脂質化化合物の吸収率に対して化合物の吸収率を格段に向上させると共に、化合物の血液及び組織における滞留を延長させる。さらに、脂質化誘導体のジスルフィド結合は細胞内では比較的不安定であるため、脂肪酸部分からの分子の細胞内放出を容易とする。適切な脂質含有部分は、４個から２６個までの炭素原子、好ましくは５個から１９個までの炭素原子を有する疎水性置換基である。適切な脂質基は、限定しないが、パルミチル（Ｃ１５Ｈ３１）、オレイル（Ｃ１５Ｈ２９）、ステアリル（Ｃ１７Ｈ３５）、コール酸、リノール酸及びデオキシコール酸が含まれる。
【０１３３】
＜イオン結合体＞
式Ｉの化合物は、機能的に、金属イオン又は放射性イオンに結合させることができる。この結合は、典型的には、イオンとキレート化されるイオンキレート剤（例えばＥＤＴＡ）の共役結合によって達成される。このような手段によって放射性イオン（例えば９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、８９Ｓｒ、９０Ｙ、１１７ｍＳｎ、１５３Ｓｍ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、又は１７７Ｌｕ）を、放射線治療として標的細胞に送達することができる。非放射性金属イオン（例えばガドリニウムイオン）は、ＮＭＲ検出可能なマーカーとして用いることができる。
【０１３４】
＜塩及び溶媒和物＞
医薬としての使用に適切な化合物の塩及び溶媒和物は、対イオン又は関係溶媒が薬学的に許容できるものである。しかしながら、薬学的に許容できない対イオン又は関係溶媒を有する塩及び溶媒和物も使用可能である。例えば、式Ｉの化合物及びそれらの薬学的に許容できる塩又は溶媒和物の調製における中間体として使用する場合である。
【０１３５】
適切な塩は、有機酸、無機酸、有機塩基又は無機塩基により形成されるものである。薬学的に許容できる酸付加塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、クエン酸、酒石酸、酢酸、リン酸、乳酸、ピルビン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、コハク酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、オキサロ酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ベンゼンスルホン酸、及びイセチオ酸で形成されるものを含む。シュウ酸などのその他の酸はそれ自体は薬学的に許容されないが、阻害剤化合物及びそれらの薬学的に許容される塩を得る際の中間体として有用である場合がある。薬学的に許容される塩基性の塩は、アンモニウム塩、カリウム塩やナトリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩やマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、及びジシクロヘキシルアミンやＮ−メチル−Ｄ−グルコサミンなどの有機塩基性塩を含む。
【０１３６】
有機化学分野の当業者は、多くの有機化合物が、その中で反応している溶媒、又はその中から沈殿若しくは結晶化している溶媒と錯体を形成できることを理解しているであろう。このような錯体は“溶媒和物”として知られている。例えば，水との錯体は“水和物”として知られている。
【０１３７】
式Ｉの好適な分子の例を以下に挙げる。アミノ酸残基のＬ配置及びＤ配置は特定しないが、両方の配置が包括される。
【０１３８】
アセチル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：３７］
パラヒドロキシ安息香酸−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−アニリン
パラヒドロキシ安息香酸−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−ベンジルアミン
パラヒドロキシ安息香酸−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−２−フェニルエチルアミン
２−（４−ヒドロキシフェニル）酢酸−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−アニリン
２−（４−ヒドロキシフェニル）酢酸−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−ベンジルアミン
２−（４−ヒドロキシフェニル）酢酸−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−２−フェニルエチルアミン
３−（４−ヒドロキシフェニル）酢酸−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−３−アニリン
３−（４−ヒドロキシフェニル）酢酸−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−ベンジルアミン、
３−（４−ヒドロキシフェニル）酢酸−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−２−フェニルエチルアミン
アセチル−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：３８］
パラヒドロキシ安息香酸−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−アニリン
パラヒドロキシ安息香酸−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−ベンジルアミン
パラヒドロキシ安息香酸−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−３−Ｐｈｅ−プロピルアミン２−（４−ヒドロキシフェニル）酢酸−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−アニリン
２−（４−ヒドロキシフェニル）酢酸−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−ベンジルアミン
２−（４−ヒドロキシフェニル）酢酸−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−２−フェニルエチルアミン
３−（４−ヒドロキシフェニル）プロピオン酸−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−アニリン
３−（４−ヒドロキシフェニル）プロピオン酸−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−ベンジルアミン
３−（４−ヒドロキシフェニル）プロピオン酸−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−２−フェニルエチルアミン
アセチル−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：３９］
アセチル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：４０］
アセチル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：４１］
アセチル−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：４２］
アセチル−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：４３］
アセチル−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：４４］
アセチル−Ｔｒｐ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：４５］
アセチル−Ｔｒｐ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：４６］
アセチル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ２［配列番号：４７］
アセチル−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−ＮＨ２［配列番号：４８］
アセチル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−ＮＨ２［配列番号：４９］
アセチル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−ＮＨ２［配列番号：５０］
アセチル−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ２［配列番号：５１］
アセチル−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−ＮＨ２［配列番号：５２］
アセチル−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−ＮＨ２［配列番号：５３］
アセチル−Ｔｒｐ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−ＮＨ２［配列番号：５４］
アセチル−Ｔｒｐ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−ＮＨ２［配列番号：５５］
アセチル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：５６］のインターナルラクタム
アセチル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：５７］
アセチル−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：５８］
アセチル−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：５９］
アセチル−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
アセチル−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ２、
アセチル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
アセチル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−ＮＨ２、
アセチル−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
アセチル−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−ＮＨ２、
アセチル−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
アセチル−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
アセチル−Ｔｙｒ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
Ｈ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
Ｈ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ２、
Ｈ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
Ｈ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−ＮＨ２、
Ｈ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
Ｈ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−ＮＨ２、
Ｈ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
Ｈ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
Ｈ−Ｔｙｒ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
ベンジルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
ベンジルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ２、
ベンジルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
ベンジルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−ＮＨ２、
ベンジルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
ベンジルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−ＮＨ２、
ベンジルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
ベンジルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
ベンジルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
ベンジルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：６０］
ベンジルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：６１］
ベンジルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：６２］
ベンジルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
ベンジルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
ベンジルオキシカルボニル−（Ｎ−メチル）Ｔｙｒ−（Ｎ−メチル）Ａｒｇ−（Ｎ−メチル）Ｐｈｅ−ＮＨ２、
ベンジルオキシカルボニル−（Ｎ−メチル）Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−（Ｎ−メチル）Ｐｈｅ−ＮＨ２、
ベンジルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−（Ｎ−メチル）Ａｒｇ−（Ｎ−メチル）Ｐｈｅ−ＮＨ２、
ベンジルオキシカルボニル−（Ｎ−メチル）Ｔｙｒ−（Ｎ−メチル）Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
ベンジルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−（Ｎ−メチル）Ｐｈｅ−ＮＨ２、
ベンジルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−（Ｎ−メチル）Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
ベンジルオキシカルボニル−（Ｎ−メチル）Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
アセチル−（Ｎ−メチル）Ｔｙｒ−（Ｎ−メチル）Ａｒｇ−（Ｎ−メチル）Ｐｈｅ−ＮＨ２、
アセチル−（Ｎ−メチル）Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−（Ｎ−メチル）Ｐｈｅ−ＮＨ２、
アセチル−Ｔｙｒ−（Ｎ−メチル）Ａｒｇ−（Ｎ−メチル）Ｐｈｅ−ＮＨ２、
アセチル−（Ｎ−メチル）Ｔｙｒ−（Ｎ−メチル）Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
アセチル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−（Ｎ−メチル）Ｐｈｅ−ＮＨ２、
アセチル−Ｔｙｒ−（Ｎ−メチル）Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
アセチル−（Ｎ−メチル）Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
Ｈ−（Ｎ−メチル）Ｔｙｒ−（Ｎ−メチル）Ａｒｇ−（Ｎ−メチル）Ｐｈｅ−ＮＨ２、
Ｈ−（Ｎ−メチル）Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−（Ｎ−メチル）Ｐｈｅ−ＮＨ２、
Ｈ−Ｔｙｒ−（Ｎ−メチル）Ａｒｇ−（Ｎ−メチル）Ｐｈｅ−ＮＨ２、
Ｈ−（Ｎ−メチル）Ｔｙｒ−（Ｎ−メチル）Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
Ｈ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−（Ｎ−メチル）Ｐｈｅ−ＮＨ２、
Ｈ−Ｔｙｒ−（Ｎ−メチル）Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
Ｈ−（Ｎ−メチル）Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
アセチル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−（β−ホモ）Ｐｈｅ−ＮＨ２、
アセチル−Ｔｙｒ−（β−ホモ）Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
アセチル−（β−ホモ）Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
アセチル−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
アセチル−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−ＮＨ２、
ベンジルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
ベンジルオキシカルボニル−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−ＮＨ２、
Ｈ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
Ｈ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−ＮＨ２、
（３−メトキシ，４−ヒドロキシベンゾイル）−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：６３］
（３−メトキシ，４−ヒドロキシベンゾイル）−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：６４］
（３−メトキシ，４−ヒドロキシベンゾイル）−Ｔｙｒ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号６５］
（３−メトキシ，４−ヒドロキシベンゾイル）−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
（３−メトキシ，４−ヒドロキシベンゾイル）−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
フルオレニルメチルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：６６］
フルオレニルメチルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：６７］
フルオレニルメチルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：６８］
フルオレニルメチルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：６９］
フルオレニルメチルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
フルオレニルメチルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
ミリスチル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：７０］
ミリスチル−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：７１］
ミリスチル−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
ミリスチル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
ミリスチル−Ｔｙｒ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：７２］
アセチル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：７３］
アセチル−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：７４］
アセチル−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：７５］
アセチル−Ｔｙｒ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：７６］
ベンジルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：７７］
ベンジルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：７８］
ベンジルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：７９］
ベンジルオキシカルボニル−Ｔｙｒ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２［配列番号：８０］
【０１３９】
Ｇａｄｄ４５β阻害剤のさらに別の例として以下を含む。
【０１４０】
【化３】
2014519315.tif 000005
【０１４１】
化合物Ａ１
Ａｃ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
【０１４２】
【化４】
2014519315.tif 000006
【０１４３】
化合物Ａ３
Ａｃ−Ｔｙｒ−ｂＡｌａ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
【０１４４】
【化５】
2014519315.tif 000007
【０１４５】
化合物Ａ６
Ａｃ−Ｔｙｒ−（６−アミノ−カプロン酸）−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
化合物Ａ７
Ａｃ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ２、
化合物Ａ８
Ａｃ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−ＮＨ２、
化合物Ａ９
Ａｃ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
【０１４６】
【化６】
2014519315.tif 000008
【０１４７】
化合物Ｂ２
Ａｃ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
【０１４８】
【化７】
2014519315.tif 000009
【０１４９】
化合物Ｂ１３
Ａｃ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
【０１５０】
【化８】
2014519315.tif 000010
【０１５１】
化合物Ｂ１６
Ａｃ−Ｔｙｒ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
化合物Ｈ１
Ｌ−３，３−ジフェニル−アラニン、
化合物Ｈ２
Ｌ−Ｈ−３（４−ピリジル）アラニン、
化合物Ｈ３
Ｌ−Ｈ−４−ヒドロキシフェニルグリシン、
化合物Ｈ４
Ｌ−２−アミノ−４−フェニル酪酸、
化合物Ｈ５
Ｌ−フェニルグリシン、
化合物Ｈ６
Ｌ−Ｈ−４−ヒドロキシフェニルグリシン、
化合物Ｈ７
Ｌ−ホモフェニルアラニン、
化合物Ｈ８
Ｌ−３−（２−フリル）−アラニン、
化合物Ｈ９
Ｌ−３−（４−キノリル）−アラニン、
化合物Ｈ１０
Ｌ−ナフチル−アラニン、
【０１５２】
【化９】
2014519315.tif 000011
【０１５３】
化合物Ｉ１
Ａｃ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−（Ｎ−Ｍｅ）Ｐｈｅ−ＮＨ２、
【０１５４】
【化１０】
2014519315.tif 000012
【０１５５】
化合物Ｉ２
Ａｃ−Ｔｙｒ−（Ｎ−Ｍｅ）Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
【０１５６】
【化１１】
2014519315.tif 000013
【０１５７】
化合物Ｉ３
Ａｃ−（Ｎ−Ｍｅ）Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
【０１５８】
【化１２】
2014519315.tif 000014
【０１５９】
化合物Ｉ４
Ａｃ−（Ｎ−Ｍｅ）Ｔｙｒ−（Ｎ−Ｍｅ）Ａｒｇ−（Ｎ−Ｍｅ）Ｐｈｅ−ＮＨ２、
【０１６０】
【化１３】
2014519315.tif 000015
【０１６１】
化合物Ｉ５
Ａｃ−（Ｎ−Ｍｅ）Ｔｙｒ−Ａｒｇ−（Ｎ−Ｍｅ）Ｐｈｅ−ＮＨ２、
【０１６２】
【化１４】
2014519315.tif 000016
【０１６３】
化合物Ｏ１
Ａｃ−Ｐｈｅ−ＡｒｇＴｙｒ−ＮＨ２、
【０１６４】
【化１５】
2014519315.tif 000017
【０１６５】
化合物Ｏ２
Ａｃ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
【０１６６】
【化１６】
2014519315.tif 000018
【０１６７】
化合物Ｏ３
Ａｃ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ２、
【０１６８】
【化１７】
2014519315.tif 000019
【０１６９】
化合物Ｏ５
Ｈ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−ＮＨ２、
【０１７０】
【化１８】
2014519315.tif 000020
【０１７１】
化合物Ｏ７
Ｈ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
化合物Ｏ８
Ｈ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ２、
化合物Ｏ９
Ｈ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２、
化合物Ｏ１０
Ｈ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ２、
化合物Ｐ１
４−（ヒドロキシル）−フェニル−酢酸−Ａｒｇ−３−フェニル−エチルアミン、
化合物Ｐ２
４−（ヒドロキシル）−フェニル−酢酸−Ｈｉｓ−３−フェニル−エチルアミン、
化合物Ｐ３
４−（ヒドロキシル）−フェニル−酢酸−Ｇｌｕ−３−フェニル−エチルアミン、
【０１７２】
【化１９】
2014519315.tif 000021
【０１７３】
化合物Ｇ１
シクロ（Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ）、
化合物Ｇ２
シクロ（Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ）、
【０１７４】
【化２０】
2014519315.tif 000022
【０１７５】
化合物Ｇ３
シクロ（Ｔｙｒ−Ｐｈｅ）、
化合物Ｎ１
ナノ金−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２
【０１７６】
Ｇａｄｄ４５β阻害剤のさらに別の例としては、本明細書と共に提出された配列表に開示されたペプチドがある。
【０１７７】
所与の実施形態においては、本明細書に具体的に開示された化合物は、実施例中のものも含めて好適な化合物であり、又は、式ＩのＡ’部分の好適な形態である。マルチマーのバージョン又は本明細書に明示的に開示された特定の化合物を用いることもできる。例えば、本明細書に開示された特定の化合物の３個又は４個の残基のペプチド部分又はペプトイド部分が、式Ｉの化合物のＡ、Ａ’、Ａ”、Ａ’”又はＡ””部分に対応してもよい。
【０１７８】
本発明のテラノスティック態様は、基本的に図３（Ａ）、図３（Ｂ）及び図４に示された結果により説明される。ｑＲＴ−ＰＣＲアッセイによる評価として、２９個の異なる原発組織の癌細胞株の枠に示されたここでの結果は、Ｚ−ＤＴＰ誘導死滅に感受性を有する癌細胞が、内因性Ｇａｄｄ４５β発現レベルと相関することを、非常に高度な統計的有意性をもって証明している。実際に、Ｚ−ＤＴＰ２による治療後の細胞生存／増殖割合対Ｇａｄｄ４５β発現の相関プロットは、２つのパラメータのドメイン間の相関係数の有意性が非常に高い（ｐ＜０．０１）（ピアソン相関）ことを示している。これらのデータは、単純で費用対効果の高いｑＲＴ−ＰＣＲ解析によりＧａｄｄ４５β阻害剤に対する患者レスポンダー集団を予測することが可能であることを示している。例えば、多発性骨髄腫患者からの初代培養細胞がＧａｄｄ４５β発現のレベルについて分析され、この発現が高レベルの患者はＧａｄｄ４５β阻害剤による最も大きな治療効果を得るであろうと見なすことができる。故に、本発明の重要な態様はテラノスティック態様である。すなわち、Ｇａｄｄ４５β阻害剤治療に対する患者の反応を予測するための臨床的に有用なアッセイの適用である。
【０１７９】
[データセット]
本発明の第２の態様においては、特定の血液悪性腫瘍と判っている又はその疑いのある多数の被験者群から得た細胞について測定されたＧａｄｄ４５β発現レベルを有するデータセットが提供される。
【０１８０】
データセットは、書面若しくは電子形態にて又は他の任意の形態にて保管されてもよい。好適には、特定の血液悪性腫瘍を有する被験者から得た細胞のＧａｄｄ４５β発現レベルを、同じ特定の血液悪性腫瘍を有する別の多数の被験者から得た比較可能な細胞におけるＧａｄｄ４５β発現レベルと比較できるコンピュータデータベースである。
【実施例】
【０１８１】
［材料及び方法］
＜定量的リアルタイムＰＣＲ反応＞
ＲＮＡは、ＤＮＡ／ＲＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｎｏｒｇｅｎ、ソロルド、カナダ）を使用して凍結ペレットから抽出した。ＲＮＡ量と純度は、ＢｉｏＰｈｏｔｏｍｅｔｅｒ  ＰＬＵＳ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、ハンブルク、ドイツ）を用いて同定され、２６０／２８０の吸光度比１．７〜２．０内の試料のみを使用した。相補的ＤＮＡは、Ｈｉｇｈ  ｃａｐａｃｉｔｙ  ｃＤＮＡ  ＲＴ  Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、フォスターシティ、カリフォルニア、ＵＳＡ）を使用して製造した。定量的逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＲＴ−ＰＣＲ）を、ΔΔＣｔアプローチに基づく相対的定量によりＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ  ７９００  ＨＴ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて行った。ＪＵＭ２細胞株を数学的キャリブレータとして、そしてＧＵＳをハウスキーピング遺伝子として用いた。全てのｍＲＮＡの測定は、二重に実施した。分析の再現性を評価するために、プレート間の１０個のランダム試料の両方の遺伝子の発現を検査した。０．９９８９％のプレート内中央値変動が得られ、０．９５８６  ％のプレート間変動は全ての反応に匹敵する有効性を示した。
【０１８２】
＜患者及び健常被験者＞
実施例で使用した試料は、次の被験者のグループに由来するものである。健常者、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）の患者、未治療の多発性骨髄腫患者（ＭＭ）、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症（ＷＭ）の患者、慢性リンパ性白血病のＣＬＬの患者、ＭＭに関係しない癌（例えば乳癌）（非ＭＭ）をもつ腫瘍患者の各グループである。ＭＭ患者は、ＶＭＰ−ＶＭＰＴフェーズＩＩＩ臨床試験で登録されたもので、この臨床試験は、メンテナンス有り又は無しの高齢の骨髄腫患者におけるベルケイドメルファランプレドニゾンサリドマイドの９サイクルに対するベルケイドメルファランプレドニゾンの９サイクルを比較するものである（非特許文献９）。この試験では、メンテナンス無しで標準的投薬量のベルケイドメルファランプレドニゾンの６週間９サイクルにより治療された患者の代表的グループに由来する試料のみを分析した。
【０１８３】
ＭＭの診断は、国際規格基準（非特許文献１０）に従って行った。血液細胞数、血清バイオマーカーを用いた臓器機能評価、ベータ−２−ミクログロブリン及びアルブミンのレベル、血清及び尿中の単クローン成分、Ｘ線を用いた骨病変が、各患者において検査された。さらに、診断において腫瘍の骨髄浸潤性の評価のために骨髄吸引が行われた。形質細胞の分離のために、抗ＣＤ１３８−被覆磁性マイクロビーズ及びＡｕｔｏＭＡＣＳ  Ｐｒｏ  Ｓｅｐａｒａｔｏｒ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＧｍｂＨ、ドイツ）を用いた。ＣＤ１９＋とＢ細胞は、抗ＣＤ１９磁性ビーズを用いて同様に分離された。
【０１８４】
［実施例１］
診断におけるＣＤ１３８＋細胞中のＧａｄｄ４５β  ｍＲＮＡ発現：ＭＧＵＳ対ＭＭ
Ｇａｄｄ４５β  ｍＲＮＡの発現が、ＭＧＵＳ（１２例）又はＭＭ（５８例）の患者から診断時に得た精製形質細胞（すなわちＣＤ１３８＋細胞）において定量的リアルタイムＰＣＲにより測定された。データは、健常者（４例）又は慢性リンパ性白血病の患者（５例）から精製されたＣＤ１９＋細胞（ＣＤ１９は正常Ｂ細胞のマーカーである）において観察されたＧａｄｄ４５βの発現と比較された。結果は図１に示されており、ＭＭの患者においてＭＧＵＳの患者に比べて有意に高いＧａｄｄ４５βの発現が見られたことを示している。
【０１８５】
［実施例１Ａ］
ＭＧＵＳ、ＭＭ、ＣＬＬ及び非ＭＭ悪性腫瘍の診断におけるＣＤ１３８＋細胞中のＧａｄｄ４５β  ｍＲＮＡ発現
Ｇａｄｄ４５β  ｍＲＮＡの発現が、ＭＭ（１０１例）又はＭＧＵＳ（１４例）の患者から診断時に得た精製形質細胞（すなわちＣＤ１３８＋細胞）において定量的リアルタイムＰＣＲにより測定された。発現は、ＭＭ以外の癌の腫瘍患者（非ＭＭ、１０例）から得た多クローン性（すなわち非癌）ＣＤ１３８＋形質細胞においても測定された。発現は、ＣＬＬの患者（５例）及び４例の健常者から得たＣＤ１９＋Ｂ細胞においても測定された。Ｇａｄｄ４５β  ｍＲＮＡレベルはｑＲＴ−ＰＣＲにより同定され、値はハウスキーピング遺伝子β−アクチンに対して正規化された。結果は図１Ａに示されたおり、ＭＭ患者から得た細胞は、ＭＧＵＳ、ＣＬＬ、非ＭＭ腫瘍患者及び健常者から得た細胞と比べて有意に高いＧａｄｄ４５βの発現を示すことが判る。ｔ−スチューデント検定にて決定されたように、ＭＭ患者からの細胞とＭＧＵＳ患者からの細胞におけるＧａｄｄ４５β発現の差は、ｐ＝０．０００１８と高い統計的有意性である。
【０１８６】
［実施例２］
ＶＭＰスケジュールにより治療された患者から分離されたＣＤ１３８＋細胞におけるＧａｄｄ４５β  ｍＲＮＡ発現：ＰＦＳ（無増悪生存期間）
Ｇａｄｄ４５β  ｍＲＮＡの発現の値が、ＭＭの患者から診断時に得た精製形質細胞において定量的リアルタイムＰＣＲにより測定された。患者は、Ｇａｄｄ４５β  ｍＲＮＡ発現の値に基づいて２つのグループに分けられた。３３パーセンタイル値未満の発現をもつ患者は、低Ｇａｄｄ４５β発現であるとして分類された。３３パーセンタイル値と６６パーセンタイル値の間の発現をもつ患者は、中Ｇａｄｄ４５β発現であるとして分類された。６６パーセンタイル値を超える発現をもつ患者は、高Ｇａｄｄ４５β発現であるとして分類された。３グループの患者の臨床転帰を追跡した。図２から判るように、低発現グループに属する患者と、中発現又は高発現グループに属する患者との間には、無増悪生存率において統計的に有意な差がある。
【０１８７】
［実施例３］
Ｚ−ＤＴＰ誘導死滅に対する異なる感受性をもつ腫瘍細胞株についての基準を決定するために、我々は、定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ｑＲＴ−ＰＣＴ）を用いて２９個の腫瘍細胞株すなわち異なる原発組織のパネルにおけるＧａｄｄ４５β発現のレベルを測定すると共に、これらのレベルと、Ｚ−ＤＴＰの細胞障害活性に対するこれらの細胞株の感受性の程度とを相関付けた。図３に示されるように、これらの分析においては、乳癌及びＨＥＫ−２９３Ｔ細胞株は、完全ＤＭＥＭ培地にある７５ｃｍ２フラスコ（５×ｌ０６細胞／フラスコ）中で培養したのに対し、他の全ての細胞株は、上述した完全ＲＰＭＩ−１６４０培地中で５×ｌ０５細胞／ウェルにて６−ウェルプレートのウェル中で培養した。全ＲＮＡは、Ｔｒｉｚｏｌにより抽出され、ＰｕｒｅＬｉｋｅ  ＲＮＡミニキット（Ｉｎｂｉｔｏｒｏｇｅｎ）を用いて精製した。ＧｅｎｅＡｍｐ  ＲＮＡ  ＰＣＲ  Ｋｉｔ（アプライドバイオシステムズ）を用いて行われる逆転写（ＲＴ）反応のためにテンプレートとしてＲＮＡ１μｇを添加した。ｑＲＴ−ＰＣＲは、ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）、Ｇａｄｄ４５β特異的プライマー及びＡＢＩ７９００リアルタイムＰＣＲ装置を用いて３通りに得られたｃＤＮＡにより行った。実験Ｃｔ値はβ−アクチンに対して正規化し、相対的ｍＲＮＡ発現を、参照資料（すなわちＨＥＫ−２９３Ｔ細胞からのｍＲＮＡ）に対して計算した。Ｚ−ＤＴＰ誘導死滅に対する腫瘍細胞株の感受性は、１０μＭのＺ−ＤＴＰ２により１４４時間処理後に［３Ｈ］チミジン取り込みアッセイを行うことにより上述した通り分析された。さらに図３から、Ｚ−ＤＴＰ２による治療後の細胞生存率に対するＧａｄｄ４５β  ｍＲＮＡ発現の相関プロットが示される。２つのパラメータのドメイン間の相関係数の有意性は、ピアソン相関により計算された。これは、ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェアを用いて２つの変数間の関係を定量化するものである。
【０１８８】
［実施例４  Ｇａｄｄ４５β阻害剤の例としてのＺ−ＤＴＰ２の合成］
例として、Ｚ−ＤＴＰ２の合成を報告する。Ｚ−ＤＴＰ２は、Ｄ−チロシン、Ｄ−グルタミン、Ｄ−アルギニン、Ｄ−フェニルアラニンからなり、アミノ結合によりＮ末端に結合されたベンジルオキシカルボニル（すなわちＺ基）とアミノ結合によりＣ末端に結合されたアミノ基とをもつテトラペプチドのコアを有する。
【０１８９】
＜材料及び方法＞
Ｚ−ＤＴＰ２は、Ｆｍｏｃ／ｔＢｕ固相法（非特許文献１１、１２）に従って手作業で調製した。５００μＭ（１０００ｍｇ）のＲｉｎｋアミドポリスチレン樹脂（Ｆｍｏｃ−ＲＩＮＫ−ＡＭ−ｒｅｓｉｎ，ＧＬ Ｂｉｏｃｈｅｍ社，上海，中国，カタログ番号４９００１）から開始し、０．５０ｍＭｅｓ／ｇを置換した。樹脂を２０μｍポリテトラフルオロエチレン隔膜、ポリプロピレン上部キャップと下部ルアーロックポリプロピレンキャップを設けた３０ｍＬのポリプロピレン容器に入れた。樹脂は、１０．０ｍＬの５０：５０のジクロロメタン（ＤＣＭ）：ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）混合物（共にＬａｂＳｃａｎ，スティローガン，アイルランド；ＤＣＭはカタログ番号Ｈ６５０８Ｌ；ＤＭＦはカタログ番号Ｈ３３Ｈ１１Ｘ）で２０分間膨潤させた。その後、減圧下で溶媒を除去した後、５．０ｍＬの８：２のＤＭＦ：ピペリジン混合物（Ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ、Ｐｉｐ、カタログ番号８０６４１；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ミラン、イタリア）を用いて室温（ＲＴ）で２０分間処理することによりＦｍｏｃ基を解裂した。反応物を減圧下で取り出し、樹脂を５．０ｍＬのＤＭＦで３回洗浄した。
次に、２．５ｍＭのＦｍｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＯＨ（ＧＬ Ｂｉｏｃｈｅｍ、上海、カタログ番号３５７０２）０．９７ｇを、５．０ｍＬのＤＭＦに溶解した（最終濃度０．５Ｍ）。そしてＤＣＭ中で、０．５Ｍのベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート溶液（ＰｙＢＯＰ、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ、カタログ番号０１−６２−００１６）５．０ｍＬと、ジ−イソ−プロピル−エチルアミン（５．０ｍＭ；ＤＩＥＡ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｄ−３８８７）０．９０ｍＬとを用いて活性化させた。
活性化したアミノ酸の溶液を樹脂上に注ぎ、激しく撹拌しつつ３０分間放置した。減圧下で溶液をドレンし、樹脂を５．０ｍＬのＤＭＦで３回洗浄した。α−ＮＨ２のＦｍｏｃ基を、上述した８：２のＤＭＦ：ピペリジン混合物（５．０ｍＬ）で２０分間処理して除去し、さらに５．０ｍＬのＤＭＦで（３回）十分に洗浄した。
Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ溶液（５．０ｍＬのＤＭＦ中で２．５ｍＭ、１．６グラム；ＧＬ Ｂｉｏｃｈｅｍ、上海、カタログ番号３６４０４）を、上述した２．５ｍＭのＰｙＢＯＰ及び５．０ｍＭの純粋なＤＩＥＡを用いて活性化させた。溶液を樹脂上に移し、３０分間撹拌放置した。
Ｆｍｏｃ基を５．０ｍＬの８：２ＤＭＦ−Ｐｉｐ溶液で解裂し、ＤＭＦで洗浄（３回，５．０ｍＬ）した後、上述したＰｙＢＯＰとＤＩＥＡで予め活性化させたＤＭＦ中の０．５ＭのＦｍｏｃ−（Ｄ）−Ｇｌｕ（ｔＢＵ）−ＯＨ溶液（５．０ｍＬのＤＭＦ中で２．５ｍＭ、１．１グラム；ＧＬ Ｂｉｏｃｈｅｍ、上海、カタログ番号３６６０５）を樹脂に加え、室温で３０分間反応させた。
アミノ酸溶液のドレンに続いて、Ｆｍｏｃ基を上述した通り（８：２のＤＭＦ：Ｐｉｐ５．０ｍＬによる２０分間の処理）除去し、樹脂を５．０ｍＬのＤＭＦで３回洗浄した。５．０ｍＬのＤＭＦに溶解した２．５ｍｏｌのＦｍｏｃ−（Ｄ）−Ｔｙｒ（ｔＢＵ）−ＯＨ（１．２ｇ、ＧＬ Ｂｉｏｃｈｅｍ、上海、カタログ番号３６９０６）を上述したＰｙＢＯＰとＤＩＥＡで予め活性化させてから、樹脂上に移し、４５分間撹拌放置した。
減圧ドレンによりアミノ酸溶液を除去した後、樹脂を５．０ｍＬのＤＭＦで５回洗浄した。５ｍＭのＺ−ＯＳｕ（ベンジルオキシカルボニル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、ＧＬ Ｂｉｏｃｈｅｍ、上海、カタログ番号１０５０２）を１０ｍＬのＤＭＦに溶解し、樹脂に加えた。２．４ｍＬのＤＩＥＡを加え、攪拌しつつ一晩反応させた。
溶液をドレンした後、樹脂をＤＭＦ、ＤＣＭ、メチルアルコール（ＭｅＯＨ、ＬａｂＳｃａｎ、カタログ番号Ｃ２５１７）、及びエチルエーテル（ＥＴ２Ｏ、ＬａｂＳｃａｎ、カタログ番号Ａ３５０９Ｅ）で十分に洗浄し、減圧下で乾燥させ、加重した。重量は１．１ｇとした。ペプチドを解裂するために、体積比９０：５：５のＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＴＩＳからなる１０．０ｍＬの混合物（ＴＦＡ、トリフルオロ酢酸、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、イタリア、カタログ番号９１７００；ＴＩＳ、トリイソプロピルシラン、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号２３，３７８−１）により樹脂を室温で３時間処理した。
樹脂を濾過により除去し、２０ｍＬの冷ＥＴ２Ｏをトリフルオロ酢酸溶液に加えることにより、白色沈殿物を形成させた。遠心分離により溶媒を除去した後、沈降物を１０．０ｍＬの冷ＥＴ２Ｏで洗浄し、１０．０ｍＬの体積比５０：５０のＨ２Ｏ：ＣＨ３ＣＮに溶解し、凍結乾燥した。
ペプチドは、内径５０×２ｍｍの狭口径ＯＮＹＸ Ｃ１８カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、トーランス、カリフォルニア、ＵＳＡ）を用いて、６００μＬ／分の５％ＣＨ３ＣＮ、０．０５％ＴＦＡで平衡化し、ＬＣ−ＭＳにより特性評価を行った。この分析は、ＣＨ３ＣＮ、０．０５％ＴＦＡに３分で５％から７０％の濃度勾配を適用して行った。ペプチドは、１０×１ｃｍのＣ１８ ＯＮＹＸカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、トーランス、カリフォルニア、ＵＳＡ）を用いたセミ分取ＲＰ−ＨＰＬＣにより精製し、毎分２０ｍＬで平衡化し、各実施ごとに２０ｍｇを注入した。ペプチドを溶出するために８分で５％から６５％の濃度勾配を適用した。
純粋な画分をプールし、ＬＣ−ＭＳで特性評価を行った。ペプチドＡの決定されたＭＷは、７４６．８ａｍｕ（理論値７４６．８３ａｍｕ）であり、生成物は９５％以上の純度であった（ＨＰＬＣ）。全ての粗生成物の精製後に約６０％の収率が得られた。
【０１９０】
［実施例５］
Ｇａｄｄ４５β／ＭＫＫ７阻害剤に反応する初代培養細胞におけるＧａｄｄ４５β発現と細胞障害活性の相関関係
Ｇａｄｄ４５β  ｍＲＮＡの発現が、健常者から得たＰＢＭＣと、多発性骨髄腫（ＭＭ）である９例の各被験者及びワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症（ＷＭ）である２例の各被験者から得たＣＤ１３８＋細胞において上述の他の実施例において上述した通り測定された。ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症（ＷＭ）は、単クローン性免疫グロブリン血症の存在などＭＭといくつかの特徴を共有しているＢ細胞悪性腫瘍であるリンパ形質細胞性リンパ腫としても知られている。
【０１９１】
図４（Ａ）は、Ｇａｄｄ４５β  ｍＲＮＡは、全てのＭＭの被験者において高いが、健常者又はＷＭの被験者においては非常に低いレベルであることを示している。さらに各被験者から得た細胞を、ｍＤＴＰ３の細胞殺傷能力を評価するために、Ｇａｄｄ４５β活性の強力な阻害剤である化合物ｍＤＴＰ３（Ａｃ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２）に暴露した。図４Ｂは、初代培養細胞中、５０％（ＩＣ５０）の細胞死滅を誘導するｍＤＴＰ３の平均濃度を示している。形質細胞（すなわちＣＤ１３８＋）は抗ＣＤ１３８＋磁性マイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＧｍｂＨ、ドイツ）を用いて精製し、フローサイトメトリーにより細胞純度を確認した。死滅アッセイにおいて、ＣＤ１３８＋形質細胞は、ｍＤＴＰ３の濃度を増加させて（すなわち０．０００１、０．００１、０．００３、０．０１、０．０３、０．１、０．３、１、３及び１０μＭ）４８時間処理した。ＰＮＭＣは、１００μＭのｍＤＴＰ３により１４４時間処理した。ＩＣ５０値は、細胞生存率アッセイにより決定した。Ｇａｄｄ４５β発現値は、エンドゲン対照（すなわち１８ｓリボソームＲＮＡ）に対して正規化した。値は、平均±標準偏差を示す。
【０１９２】
図４（Ｂ）は、ｍＤＴＰ３によるＩＣ５０値に対するＧａｄｄ４５β発現の相関プロットを示す。図示のように、非癌細胞におけるｍＤＴＰ３細胞障害の欠如は、これらの細胞中の低いＧａｄｄ４５β発現と統計的に有意の相関性がある。２つのパラメータのドメイン間の相関係数の有意性は高く（ｐ＝０．０１７）、初代ＭＭ細胞におけるｍＤＴＰ３の高い標的特異性を確認した。同様の結果は、Ｚ−ＤＴＰ２（カルボキシベンジル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ２）及びＺ−ＤＴＰ１（カルボキシベンジル−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２）を含む更なるＧａｄｄ４５β阻害剤を用いて得られた。
【図１】
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【図１ａ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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