(57)【要約】安定化した活性物質を含む植物細胞を含有する組成物、活性物質を安定化させる方法、および安定化した活性物質を含む植物細胞を製造する方法を提供すること。  本発明の組成物は、活性物質の安定化を高めることができ、機能性化粧料および皮膚外用剤の成分として用いられるときに安定性が高いため、活性成分の効果を極大化することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
安定化した活性物質を含む植物細胞を含有する化粧料組成物。
【請求項２】
前記活性物質は親水性物質および疎水性物質よりなる群から選ばれる少なくとも１つであることを特徴とする、請求項１に記載の化粧料組成物。
【請求項３】
記活性物質は、没食子酸（Ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄ）、アミノ酸、フィチン酸（Ｐｈｙｔｉｃ ａｃｉｄ）、ビタミンＣ、Ｌ−アスコルビン酸（Ｌ−Ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ）、アルブチン、フルクトース二リン酸、トリナトリウムフルクトース、１，６−ジホスフェートアデノシン、ナイアシンアミド、ゲニステイン（Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）、フラボノイド、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、レチノール、ヘスペリジン、オレアノール酸（Ｏｌｅａｎｏｌｉｃ Ａｃｉｄ）、ポリメチルメタクリレート、トリメトキシケイ皮酸チモール（Ｔｈｙｍｏｌ Ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｃｉｎｎａｍａｔｅ）、紅参サポニン、加水分解オタネニンジンサポニン、およびアスコルビルグルコシドよりなる群から選ばれる少なくとも１つであることを特徴とする、請求項１に記載の化粧料組成部物。
【請求項４】
前記植物細胞が細胞壁であることを特徴とする、請求項１に記載の化粧料組成部物。
【請求項５】
次の段階を含む、活性物質を安定化させた後、安定化した活性物質を含む植物細胞を製造する方法：
（ａ）１〜１００ＭＰａの条件で植物細胞内に活性物質を引き込む段階、
（ｂ）活性物質の引き込まれた植物細胞から逆浸透を用いて脱水反応を起こす段階、および
（ｃ）活性物質の引き込まれた植物細胞を得る段階。
【請求項６】
前記活性物質は親水性物質および疎水性物質よりなる群から選ばれる少なくとも１つであることを特徴とする、請求項５に記載の植物細胞を製造する方法。
【請求項７】
前記活性物質は、没食子酸（Ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄ）、アミノ酸、フィチン酸（Ｐｈｙｔｉｃ ａｃｉｄ）、ビタミンＣ、Ｌ−アスコルビン酸（Ｌ−Ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ）、アルブチン、フルクトース二リン酸、トリナトリウムフルクトース、１，６−ジホスフェートアデノシン、ナイアシンアミド、ゲニステイン（Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）、フラボノイド、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、レチノール、ヘスペリジン、オレアノール酸（Ｏｌｅａｎｏｌｉｃ Ａｃｉｄ）、ポリメチルメタクリレート、トリメトキシケイ皮酸チモール（Ｔｈｙｍｏｌ Ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｃｉｎｎａｍａｔｅ）、紅参サポニン、加水分解オタネニンジンサポニン、およびアスコルビルグルコシドよりなる群から選ばれる少なくとも１つであることを特徴とする、請求項５に記載の植物細胞を製造する方法。
【請求項８】
前記植物細胞が細胞壁であることを特徴とする、請求項５に記載の植物細胞を製造する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物細胞内において安定化した活性物質を含む化粧料組成物、活性物質を安定化させた後、安定化した活性物質を含む植物細胞を製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
天然に存在する動植物にはそれぞれ異なる数多くの活性物質が内在しており、その活性物質の種類もフラボノイド、フラボノール、フェノール、アミノ酸、リグナン、アルカロイド、ビタミン、カテキン化合物など無数である。これらの活性物質は、それぞれ互いに異なる薬理的作用を有し、多くの研究が行われている。このような人体内生理学的特性において有用な機能を有する活性成分の優れた効果にも拘らず、大部分の活性物質は安定性に乏しい。最近、これらの安定性および薬物送達を改善するために、活性物質に対して様々な試み、例えば、リン脂質または界面活性剤を用いるリポソーム、セラミドを用いる安定化セラソーム、液晶構造で安定化させた液晶ソーム、およびモノグリセリドを用いる立方晶キューボソームの適用などが行われている。ところが、これらの方法は、製造方法が複雑である、或いは化合物を用いて生体適合性に劣るという問題点がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明者は、より簡便で生体適合性の高い活性物質を安定化させる方法を開発するために努力した。その結果、植物細胞内、特に細胞壁内に活性物質を引き込む場合に活性物質の安定性が高くなることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００４】
そこで、本発明の目的は、植物細胞内において安定化した活性物質を含む化粧料組成物を提供することにある。
本発明の他の目的は、活性物質を安定化させた後、安定化した活性物質を含む植物細胞を製造する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記目的を達成するために、本発明の一実施形態は、安定化した活性物質を含む植物細胞を含有する化粧料組成物を提供する。
【０００６】
また、本発明の一実施形態において、前記化粧料組成物の活性物質は、親水性物質および疎水性物質よりなる群から選ばれた一つ以上であってもよい。
また、本発明の一実施形態において、前記化粧料組成物の活性物質は、没食子酸（Ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄ）、アミノ酸、フィチン酸（Ｐｈｙｔｉｃ ａｃｉｄ）、ビタミンＣ、Ｌ−アスコルビン酸（Ｌ−Ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ）、アルブチン、フルクトース二リン酸、トリナトリウムフルクトース、１，６−ジホスフェートアデノシン、ナイアシンアミド、ゲニステイン（Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）、フラボノイド、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、レチノール、ヘスペリジン、オレアノール酸（Ｏｌｅａｎｏｌｉｃ Ａｃｉｄ）、ポリメチルメタクリレート、トリメトキシケイ皮酸チモール（Ｔｈｙｍｏｌ Ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｃｉｎｎａｍａｔｅ）、紅参サポニン、加水分解オタネニンジンサポニン、およびアスコルビルグルコシドよりなる群から選ばれた一つ以上あってもよい。
【０００７】
また、本発明の一実施形態において、前記植物細胞は細胞壁を用いることが好ましい。
【０００８】
また、本発明の一実施形態には、次の段階を含む、活性物質を安定化させた後、安定化した活性物質を含む植物細胞を製造する方法を提供する。
（ａ）１〜１００ＭＰａの条件で植物細胞内に活性物質を引き込む段階、
（ｂ）活性物質の引き込まれた植物細胞から逆浸透化を用いて脱水反応を起こす段階、および
（ｃ）活性物質の引き込まれた植物細胞を得る段階。
【０００９】
また、本発明の一実施形態において、前記植物細胞を製造する方法の活性物質は、親水性物質および疎水性物質よりなる群から選ばれた一つ以上であってもよい。
【００１０】
また、本発明の一実施形態において、前記植物細胞を製造する方法の活性物質は、没食子酸（Ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄ）、アミノ酸、フィチン酸（Ｐｈｙｔｉｃ ａｃｉｄ）、ビタミンＣ、Ｌ−アスコルビン酸（Ｌ−Ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ）、アルブチン、フルクトース二リン酸、トリナトリウムフルクトース、１，６−ジホスフェートアデノシン、ナイアシンアミド、ゲニステイン（Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）、フラボノイド、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、レチノール、ヘスペリジン、オレアノール酸（Ｏｌｅａｎｏｌｉｃ Ａｃｉｄ）、ポリメチルメタクリレート、トリメトキシケイ皮酸チモール（Ｔｈｙｍｏｌ Ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｃｉｎｎａｍａｔｅ）、紅参サポニン、加水分解オタネニンジンサポニン、およびアスコルビルグルコシドよりなる群から選ばれる一つ以上であってもよい。
【００１１】
また、本発明の一実施形態において、前記植物細胞を製造する方法の植物細胞は細胞壁を用いることが好ましい。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の植物細胞内において安定化した活性物質を含む化粧料組成物は、従来の方法より簡便な方法を用いて活性物質の安定化を高めることができ、機能性化粧料および皮膚外用剤の成分として使用すると安定性が高いため、活性成分の効果を極大化することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】活性物質を植物細胞内に引き込んで安定化させる過程を示すフローチャートである。
【図２ａ】本発明に使用された親水性活性物質の試料１に対して高速液体クロマトグラフィーを用いて成分分析を行い、それぞれの標準試薬と比較した結果を示すグラフである。
【図２ｂ】本発明に使用された親水性活性物質の試料２に対して高速液体クロマトグラフィーを用いて成分分析を行い、それぞれの標準試薬と比較した結果を示すグラフである。
【図２ｃ】本発明に使用された親水性活性物質の試料３に対して高速液体クロマトグラフィーを用いて成分分析を行い、それぞれの標準試薬と比較した結果を示すグラフである。
【図２ｄ】本発明に使用された親水性活性物質の試料４に対して高速液体クロマトグラフィーを用いて成分分析を行い、それぞれの標準試薬と比較した結果を示すグラフである。
【図３ａ】本発明に使用された疎水性活性物質の試料５に対してＨＰＬＣクロマトグラムを用いて成分分析を行い、それぞれの標準試薬と比較した結果を示すグラフである。
【図３ｂ】本発明に使用された疎水性活性物質の試料６に対してＨＰＬＣクロマトグラムを用いて成分分析を行い、それぞれの標準試薬と比較した結果を示すグラフである。
【図３ｃ】本発明に使用された疎水性活性物質の試料７に対してＨＰＬＣクロマトグラムを用いて成分分析を行い、それぞれの標準試薬と比較した結果を示すグラフである。
【図４ａ】本発明の親水性活性物質を植物細胞内に引き込んだ後、剤形安定度の結果を示すグラフである。
【図４ｂ】本発明の親水性活性物質を植物細胞内に引き込んだ後、剤形安定度の結果を示すグラフである。
【図４ｃ】本発明の親水性活性物質を植物細胞内に引き込んだ後、剤形安定度の結果を示すグラフである。
【図４ｄ】本発明の親水性活性物質を植物細胞内に引き込んだ後、剤形安定度の結果を示すグラフである。
【図５ａ】本発明の疎水性活性物質を植物細胞内に引き込んだ後、剤形安定度の結果を示すグラフである。
【図５ｂ】本発明の疎水性活性物質を植物細胞内に引き込んだ後、剤形安定度の結果を示すグラフである。
【図５ｃ】本発明の疎水性活性物質を植物細胞内に引き込んだ後、剤形安定度の結果を示すグラフである。
【図６】植物細胞内において安定化した状態で引き込まれた没食子酸試料に対する顕微鏡写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明の一実施形態によれば、植物細胞内において安定化した活性物質を含む化粧料組成物を提供する。
【００１５】
本発明において、植物細胞は、当該技術分野において選択することが可能ないずれの種類の植物細胞も使用できる。
【００１６】
本発明において、植物細胞は、付いている多細胞を、酵素の組み合わせを用いる前処理によって単一細胞に作った後、それを使用することが好ましい。
【００１７】
本発明において、前記酵素は、当該技術分野において選択することが可能ないかなる種類の酵素も使用できる。
【００１８】
本発明において、用語「活性物質」とは、生体の機能を増進または抑制させる物質のことである。本発明の一実施形態によれば、活性物質は親水性物質および疎水性物質よりなる群から選ばれる一つ以上であってもよい。
【００１９】
本発明の一実施形態によれば、活性物質は親水性物質であってもよい。本発明の親水性活性物質は、没食子酸（Ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄ）、アミノ酸、フィチン酸（Ｐｈｙｔｉｃ ａｃｉｄ）、ビタミンＣ、Ｌ−アスコルビン酸（Ｌ−Ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ）、アルブチン、フルクトース二リン酸、トリナトリウムフルクトース、１，６−ジホスフェートアデノシン、およびナイアシンアミドよりなる群から選ばれる一つ以上であってもよく、好ましくは没食子酸、アミノ酸、フィチン酸、およびビタミンＣよりなる群から選ばれる一つ以上であってもよいが、これに限定されるものではない。
【００２０】
本発明の一実施形態によれば、活性物質は疎水性物質であってもよい。本発明の疎水性活性物質は、ゲニステイン（Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）、フラボノイド、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、レチノール、ヘスペリジン、オレアノール酸（Ｏｌｅａｎｏｌｉｃ Ａｃｉｄ）、ポリメチルメタクリレート、トリメトキシケイ皮酸チモール（Ｔｈｙｍｏｌ Ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｃｉｎｎａｍａｔｅ）、紅参サポニン、加水分解オタネニンジンサポニン、およびアスコルビルグルコシドよりなる群から選ばれる少なくとも１つであってもよいが、これに限定されるものではない。
【００２１】
本発明の一実施形態によれば、植物細胞は細胞壁を用いることが好ましい。
【００２２】
本発明の一実施形態によれば、次の段階を含む、活性物質を安定化させた後、安定化した活性物質を含む植物細胞を製造する方法を提供する。
（ａ）１〜１００ＭＰａの条件で植物細胞内に活性物質を引き込む段階、
（ｂ）活性物質の引き込まれた植物細胞から逆浸透化を用いて脱水反応を起こす段階、および
（ｃ）活性物質の引き込まれた植物細胞を得る段階。
【００２３】
本発明で使用される用語「可溶溶媒」は、活性物質を溶かすことが可能な全ての溶媒を指すもので、例えば、水、エタノール、酢酸エチル、ブチレングリコール、メタノール、プロパンジオールなどをいう。
【００２４】
本発明の活性物質を可溶溶媒に溶解させる段階において、前記可溶溶媒は、水、エタノール、メタノール、ブタノール、プロパノール、プロパンジオール、ブチレングリコール、プロピレングリコール、ペンチレングリコール、ヘキサンジオール、クロロホルム、酢酸エチル、ジクロロメタン、ヘキサン、石油エーテル（petroleum ether）、およびジエチルエーテルよりなる群から選ばれる１つの溶媒または２つ以上の混合溶媒であってもよく、好ましくは水、エタノール、メタノール、さらに好ましくは水、エタノールである。
【００２５】
本発明の活性物質溶液を植物細胞と共に混合する段階において、混合方法は、当該技術分野において２つ以上の物質を混合するために通常用いられる方法で行われてもよい。より具体的には、活性物質と植物細胞は同時にまたは順次容器に投入して混合することができる。
【００２６】
前記溶解工程を経て形成された活性物質可溶物は、植物細胞と共に水溶液上で混合され、 溶液状態で攪拌による自然浸透圧で平衡化されるが、本発明に係る植物細胞の含量は全重量に対して０．１〜３０重量％の比率であることが好ましい。０．１重量％以下の場合は植物細胞浸透圧率の低下問題があり、３０重量％以上の場合は植物細胞に引き込まれる活性物質の含量減少問題がある。活性物質の最適の含量は全重量に対して０．０１〜１０重量％であることが好ましい。活性物質によって、効能を示す最適の濃度がそれぞれ異なり、その臨界範囲で効果を発揮する。
【００２７】
前記活性物質溶液を植物細胞と共に混合する段階で活性物質が植物細胞内に一部引き込まれ、本発明の高圧の条件で植物細胞内に活性物質を引き込む段階において、高圧を加えることにより活性物質の引き込み率が高くなる。
【００２８】
本発明で使用される用語「高圧の条件」は、植物細胞内への活性物質の引き込みが起こることに適した条件を意味し、具体的には、０．０１ＭＰａ〜５００ＭＰａ、より好ましくは０．１ＭＰａ〜１００ＭＰａ、最も好ましくは０．５ＭＰａ〜２０ＭＰａである。０．５ＭＰａ以下の場合は活性物質の引き込みが効果的に起こらず、２０ＭＰａ以上の場合は細胞壁の破壊問題がありうる。本発明の好適な具現例によれば、活性物質を安定化させる方法において、活性物質の引き込み率をより高めるために、活性物質の引き込まれた植物細胞から脱水反応を起こす段階をさらに含むことができ、活性物質の引き込まれた植物細胞を得る段階をさらに含むことができる。
【００２９】
本発明で使用される用語「脱水反応」とは、有機化合物の分子内で水が分離される反応および有機化合物２分子から水が離脱して縮合する反応を意味する。脱水反応は、当該技術分野における通常の方法、例えば、親水性物質を用いることや、加熱することなどによって行われてもよいが、本発明の好適な具現例によれば、脱水反応は逆浸透化を用いることができる。
【００３０】
本発明で使用される用語「逆浸透化」とは、溶質の濃度が低い方に浸透圧よりさらに大きい圧を加えて、溶媒を溶質の濃度が低い方に送る過程を意味する（Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｏｓｍｏｓｉｓ（Ｒ／Ｏ）：Ｓｅｌｅｃｔｉｎｇ ａ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｏｓｍｏｓｉｓ Ｕｎｉｔ Ｂｙ Ａｒｔｈｕｒ Ｆｉｓｈｅｒ ｅｔ ａｌ．参照）。本発明の好適な具現例によれば、ナトリウムまたはカリウム元素を含む塩を添加して逆浸透させる方法を用いることができる。
【００３１】
逆浸透過程で、植物細胞内に活性物質を残したまま低濃度（植物細胞内の液漿）から高濃度（混合液）へ脱水が起こるが、本発明による最適の可溶性塩の添加は全重量に対して０．５〜４０重量％の比率で植物細胞外への脱水を誘導して細胞内への引き込み率を極大化する。
【００３２】
自然状態では、外部の水が細胞壁内に入ること（浸透圧）が正常であるが、人為的に細胞外に塩を添加して細胞内の水を脱水させることが逆浸透である。
【００３３】
活性物質の引き込まれた植物細胞を得る段階は、通常の細胞収得のための方法を含むが、フィルターまたは／および遠心分離による収得方法を用いることができる。フィルターを使用する場合には１．２〜５０μｍおよび４０〜２００ｍｅｓｈが好ましく、遠心分離を使用する場合には１００〜９，０００ｒｐｍ、０〜２５℃が好ましい。
【００３４】
本発明の好適な具現例によれば、前記回収工程によって得られた活性物質の引き込まれた植物細胞は、表面の不純物および引き込まれていない活性物質を除去する洗浄段階をさらに含むことができる。この場合、蒸留水に０．１〜２０重量％の塩が含まれた溶液を使用することが好ましいが、これに限定されるものではない。
【００３５】
本発明の化粧料組成物において、前記植物細胞内において安定化した活性物質の含量は、化粧料組成物の全重量に対して０．００１〜１０重量％であることが好ましく、０．００１％以下では活性を示さず、１０％以上では剤形の使用感および安定度に影響を及ぼす。
【００３６】
以下、実施例によって本発明をさらに詳細に説明する。これらの実施例は本発明をより具体的に説明するためのものに過ぎず、本発明の要旨によって、本発明の範囲がこれらの実施例に限定されないのは当該技術分野における通常の知識を有する者にとって自明であろう。
【実施例】
【００３７】
親水性活性物質の安定化
<実施例１>フェノール性化合物の没食子酸の安定化
没食子酸（＞９９％、Ｓｉｇｍａ、米国）を３次蒸留水に１０重量％加えて３０分間攪拌した。その後、没食子酸可溶物１０重量％と植物細胞（Ｂｌａｃｋ ｓｏｙｂｅａｎ ｕｎｉｃｅｌｌ、Ｈｅａｌｔｈｙ ｆｏｏｄ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、日本）１０重量％を蒸留水８０重量％に仕込み、プロペラミキサー（ＢＬ３０００、Ｈｅｉｄｏｎ、日本）を用いて８００ｒｐｍ、２０℃の条件で１時間攪拌した。攪拌の後、植物細胞混合液に高圧装置（ＴＦＳ−２Ｌ、株式会社東洋高圧、日本）を用いて２０ＭＰａ、２５℃、１時間の条件で高圧を加えた。この高圧処理を経た植物細胞混合液に塩化ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ Ｃｈｌｏｒｉｄｅ、ＮａＣｌ）を２重量％仕込み、プロペラミキサー（ＢＬ３０００、Ｈｅｉｄｏｎ、日本）を用いて８００ｒｐｍ、２０℃の条件で１時間逆浸透を誘導し、脱水反応させた。その後、遠心分離機（Ｓｕｐｒａ ２２Ｋ、Ｈａｎｉｌ、韓国）を用いて９，０００ｒｐｍ、１５℃の条件で２０分間高速遠心分離し、活性物質の引き込まれた植物細胞を得た。こうして得られた植物細胞に対して１００倍の生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ水溶液）を用いて表面を洗浄した後、さらに遠心分離機（Ｓｕｐｒａ ２２Ｋ、Ｈａｎｉｌ、韓国）を用いて９，０００ｒｐｍ、１５℃の条件で２０分間高速遠心分離して試料を得た。こうして得られたものを「試料１」とし、下記試験例で使用した。
【００３８】
<実施例２>アミノ酸の安定化
アミノ酸（ＡＡＳ、Ａｇｉｌｅｎｔ、米国）を３次蒸留水に２０重量％加えて３０分間攪拌した。その後、アミノ酸可溶物２０重量％と植物細胞（Ｂｌａｃｋ ｓｏｙｂｅａｎ ｕｎｉｃｅｌｌ、Ｈｅａｌｔｈｙ ｆｏｏｄ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、日本）１重量％を蒸留水７９重量％に仕込み、プロペラミキサー（ＢＬ３０００、Ｈｅｉｄｏｎ、日本）を用いて８００ｒｐｍ、２０℃の条件で１時間攪拌した。攪拌の後、植物細胞混合液に高圧装置（ＴＦＳ−２Ｌ、株式会社東洋高圧、日本）を用いて２０ＭＰａ、２５℃、１時間の条件で高圧を加えた。この高圧処理を経た植物細胞混合液に塩化ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ Ｃｈｌｏｒｉｄｅ、ＮａＣｌ）を２重量％仕込み、プロペラミキサー（ＢＬ３０００、Ｈｅｉｄｏｎ、日本）を用いて８００ｒｐｍ、２０℃の条件で１時間逆浸透を誘導し、脱水反応させた。その後、遠心分離機（Ｓｕｐｒａ ２２Ｋ、Ｈａｎｉｌ、韓国）を用いて９，０００ｒｐｍ、１５℃の条件で２０分間高速遠心分離し、活性物質の引き込まれた植物細胞を得た。こうして得られた植物細胞に対して１００倍の生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ水溶液）を用いて表面を洗浄した後、さらに遠心分離機（Ｓｕｐｒａ ２２Ｋ、Ｈａｎｉｌ、韓国）を用いて９，０００ｒｐｍ、１５℃の条件で２０分間高速遠心分離して試料を得た。こうして得られたものを「試料２」とし、下記試験例で使用した。
【００３９】
<実施例３>有機酸のフィチン酸の安定化
フィチン酸（５０％（ｗ／ｗ）、Ｓｉｇｍａ、米国）を３次蒸留水に１０重量％加えて３０分間攪拌した。その後、フィチン酸可溶物１０重量％と植物細胞（Ｂｌａｃｋ ｓｏｙｂｅａｎ ｕｎｉｃｅｌｌ、Ｈｅａｌｔｈｙ ｆｏｏｄ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、日本）１０重量％を蒸留水８０重量％に仕込み、プロペラミキサー（ＢＬ３０００、Ｈｅｉｄｏｎ、日本）を用いて８００ｒｐｍ、２０℃の条件で１時間攪拌した。攪拌の後、植物細胞混合液に高圧装置（ＴＦＳ−２Ｌ、株式会社東洋高圧、日本）を用いて２０ＭＰａ、２５℃の条件で１時間高圧を加えた。この高圧処理を経た植物細胞混合液に塩化ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ Ｃｈｌｏｒｉｄｅ、ＮａＣｌ）を２重量％仕込み、プロペラミキサー（ＢＬ３０００、Ｈｅｉｄｏｎ、日本）を用いて８００ｒｐｍ、２０℃の条件で１時間逆浸透を誘導し、脱水反応させた。その後、遠心分離機（Ｓｕｐｒａ ２２Ｋ、Ｈａｎｉｌ、韓国）を用いて９，０００ｒｐｍ、１５℃の条件で２０分間高速遠心分離し、活性物質の引き込まれた植物細胞を得た。こうして得られた植物細胞に対して１００倍の生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ水溶液）を用いて表面を洗浄した後、さらに遠心分離機（Ｓｕｐｒａ ２２Ｋ、Ｈａｎｉｌ、韓国）を用いて９，０００ｒｐｍ、１５℃の条件で２０分間高速遠心分離して試料を得た。こうして得られたものを「試料３」とし、下記試験例で使用した。
【００４０】
<実施例４>水溶性ビタミンのＬ−アスコルビン酸（Ｌ−Ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ）の安定化
Ｌ−アスコルビン酸（＞９９％、Ｓａｍｃｈｕｎ、韓国）を３次蒸留水に２０重量％加えて３０分間攪拌した。その後、アスコルビン酸可溶物１０重量％と植物細胞（Ｂｌａｃｋ ｓｏｙｂｅａｎ ｕｎｉｃｅｌｌ、Ｈｅａｌｔｈｙ ｆｏｏｄ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、日本）１０重量％を蒸留水８０重量％に仕込み、プロペラミキサー（ＢＬ３０００、Ｈｅｉｄｏｎ、日本）を用いて８００ｒｐｍ、２０℃の条件で１時間攪拌した。攪拌の後、植物細胞混合液に高圧装置（ＴＦＳ−２Ｌ、株式会社東洋高圧、日本）を用いて２０ＭＰａ、２５℃の条件で１時間高圧を加えた。この高圧処理を経た植物細胞混合液に塩化ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ Ｃｈｌｏｒｉｄｅ、ＮａＣｌ）を２重量％仕込み、プロペラミキサー（ＢＬ３０００、Ｈｅｉｄｏｎ、日本）を用いて８００ｒｐｍ、２０℃の条件で１時間逆浸透を誘導し、脱水反応させた。その後、遠心分離機（Ｓｕｐｒａ ２２Ｋ、Ｈａｎｉｌ、韓国）を用いて９，０００ｒｐｍ、１５℃の条件で２０分間高速遠心分離し、活性物質の引き込まれた植物細胞を得た。こうして得られた植物細胞に対して１００倍の生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ水溶液）を用いて表面を洗浄した後、さらに遠心分離機（Ｓｕｐｒａ ２２Ｋ、Ｈａｎｉｌ、韓国）を用いて９，０００ｒｐｍ、１５℃の条件で２０分間高速遠心分離して試料を得た。こうして得られたものを「試料４」とし、下記試験例で使用した。
【００４１】
疎水性活性物質の安定化
<実施例５>イソフラボンのゲニステイン（Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）の安定化
ゲニステイン（＞９９％、Ｓｉｇｍａ、米国）を９９．５％のエチルアルコール（Ｅｔｈｙｌ Ａｌｃｏｈｏｌ、Ｅｔｈａｎｏｌ）に５重量％加えて３０分間攪拌した。その後、ゲニステイン可溶物１０重量％と植物細胞（Ｂｌａｃｋ ｓｏｙｂｅａｎ ｕｎｉｃｅｌｌ、 Ｈｅａｌｔｈｙ ｆｏｏｄ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、日本）１０重量％を蒸留水８０重量％に仕込み、プロペラミキサー（ＢＬ３０００、Ｈｅｉｄｏｎ、日本）を用いて８００ｒｐｍ、２０℃の条件で１時間攪拌した。攪拌の後、植物細胞混合液に高圧装置（ＴＦＳ−２Ｌ、株式会社東洋高圧、日本）を用いて２０ＭＰａ、２５℃の条件で１時間高圧を加えた。この高圧処理を経た植物細胞混合液に塩化ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ Ｃｈｌｏｒｉｄｅ、ＮａＣｌ）を２重量％仕込み、プロペラミキサー（ＢＬ３０００、Ｈｅｉｄｏｎ、日本）を用いて８００ｒｐｍ、２０℃の条件で１時間逆浸透を誘導し、脱水反応させた。その後、遠心分離機（Ｓｕｐｒａ ２２Ｋ、Ｈａｎｉｌ、韓国）を用いて９，０００ｒｐｍ、１５℃の条件で２０分間高速遠心分離し、活性物質の引き込まれた植物細胞を得た。こうして得られた植物細胞に対して１００倍の生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ水溶液）を用いて表面を洗浄した後、さらに遠心分離機（Ｓｕｐｒａ ２２Ｋ、Ｈａｎｉｌ、韓国）を用いて９，０００ｒｐｍ、１５℃の条件で２０分間高速遠心分離して試料を得た。こうして得られたものを「試料５」とし、下記試験例で使用した。
【００４２】
<実施例６>フラボノイドの没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）の安定化
没食子酸エピガロカテキン（＞９９％、Ｓｉｇｍａ、米国）を７０％エチルアルコール（Ｅｔｈｙｌ Ａｌｃｏｈｏｌ、Ｅｔｈａｎｏｌ）水溶液に５重量％加えて３０分間攪拌した。その後、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）可溶物１０重量％と植物細胞（Ｂｌａｃｋ ｓｏｙｂｅａｎ ｕｎｉｃｅｌｌ、 Ｈｅａｌｔｈｙ ｆｏｏｄ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、日本）１０重量％を蒸留水８０重量％に仕込み、プロペラミキサー（ＢＬ３０００、Ｈｅｉｄｏｎ、日本）を用いて８００ｒｐｍ、２０℃の条件で１時間攪拌した。攪拌の後、植物細胞混合液に高圧装置（ＴＦＳ−２Ｌ、株式会社東洋高圧、日本）を用いて２０ＭＰａ、２５℃、１時間の条件で高圧を加えた。この高圧処理を経た植物細胞混合液に塩化ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ Ｃｈｌｏｒｉｄｅ、ＮａＣｌ）を２重量％仕込み、プロペラミキサー（ＢＬ３０００、Ｈｅｉｄｏｎ、日本）を用いて８００ｒｐｍ、２０℃の条件で１時間逆浸透を誘導し、脱水反応させた。その後、遠心分離機（Ｓｕｐｒａ ２２Ｋ、Ｈａｎｉｌ、韓国）を用いて９，０００ｒｐｍ、１５℃の条件で２０分間高速遠心分離し、活性物質の引き込まれた植物細胞を得た。こうして得られた植物細胞に対して１００倍の生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ水溶液）を用いて表面を洗浄した後、さらに遠心分離機（Ｓｕｐｒａ ２２Ｋ、Ｈａｎｉｌ、韓国）を用いて９，０００ｒｐｍ、１５℃の条件で２０分間高速遠心分離して試料を得た。こうして得られたものを「試料６」とし、下記試験例で使用した。
【００４３】
<実施例７>脂溶性ビタミンのレチノールの安定化
レチノール（＞９９％、Ｓｉｇｍａ、米国）を９９．５％エチルアルコール（Ｅｔｈｙｌ Ａｌｃｏｈｏｌ、Ｅｔｈａｎｏｌ）水溶液に５重量％加えて３０分間攪拌した。その後、レチノール可溶物１０重量％と植物細胞（Ｂｌａｃｋ ｓｏｙｂｅａｎ ｕｎｉｃｅｌｌ、 Ｈｅａｌｔｈｙ ｆｏｏｄ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、日本）１０重量％を蒸留水８０重量％に仕込み、プロペラミキサー（ＢＬ３０００、Ｈｅｉｄｏｎ、日本）を用いて８００ｒｐｍ、２０℃の条件で１時間攪拌した。攪拌の後、植物細胞混合液に高圧装置（ＴＦＳ−２Ｌ、株式会社東洋高圧、日本）を用いて２０ＭＰａ、２５℃の条件で１時間高圧を加えた。この高圧処理を経た植物細胞混合液に塩化ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ Ｃｈｌｏｒｉｄｅ、ＮａＣｌ）を２重量％仕込み、プロペラミキサー（ＢＬ３０００、Ｈｅｉｄｏｎ、日本）を用いて８００ｒｐｍ、２０℃の条件で１時間逆浸透を誘導し、脱水反応させた。その後、遠心分離機（Ｓｕｐｒａ ２２Ｋ、Ｈａｎｉｌ、韓国）を用いて９，０００ｒｐｍ、１５℃の条件で２０分間高速遠心分離し、活性物質の引き込まれた植物細胞を得た。こうして得られた植物細胞に対して１００倍の生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ水溶液）を用いて表面を洗浄した後、さらに遠心分離機（Ｓｕｐｒａ ２２Ｋ、Ｈａｎｉｌ、韓国）を用いて９，０００ｒｐｍ、１５℃の条件で２０分間高速遠心分離して試料を得た。こうして得られたものを「試料７」とし、下記試験例で使用した。
【００４４】
［試験例１］高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による成分分析
本発明の植物細胞内において安定化した活性物質の封入効率および成分分析のために、次のとおりに分析を行った。
【００４５】
［親水性活性物質］
（１）フェノール性化合物の没食子酸 
本発明の植物細胞内において安定化した没食子酸の封入効率および成分分析のために、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて分析を行った。試料は、各溶媒を用いて適正の濃度に製造して０．２μｍのディスクフィルターで濾過し、前処理した後、機器に注入した。機器は高速液体クロマトグラフィー（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｏｎｏｌｏｇｉｅｓ １２００ Ｓｅｒｉｅｓ ＨＰＬＣ、Ａｇｉｌｅｎｔ、米国）を用いてＵＶ２５４〜３４０ｎｍの領域で分析した。Ｃ１８カラム（Ｚｏｒｂａｘ ＸＤＢ−Ｃ１８ ４．６×２５０ｍｍ、Ａｇｉｌｅｎｔ、米国）を用いて、２％酢酸溶媒とアセトニトリル（ＡＣＮ）溶媒を使用した勾配溶離法で分析した。分析における溶媒はＨＰＬＣ級試薬を使用し、標準物質としては没食子酸（＞９９％、Ｓｉｇｍａ、米国）を使用して成分分析を行った。分析結果は図２ａ、表１のとおりである。
【００４６】
（２）アミノ酸
本発明の植物細胞内において安定化したアミノ酸の封入効率および成分分析のために、試料を各溶媒を用いて適正の濃度に製造し、０．２μｍのディスクフィルター（ｄｉｓｋ ｆｉｌｔｅｒ）で濾過し、前処理した後、ｏ−フタルアルデヒド（ｏ−ｐｈｔｈａｌａｌｄｅｈｙｄｅ、ＯＰＡ Ａｇｉｌｅｎｔ）、９−フルオレニルメチルクロロホルム（９−ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍａｔｅ、ＦＭＯＣ）誘導体を用いて、蛍光を帯びるイソインドール（ｉｓｏｉｎｄｏｌｅ）を形成させた後、高速液体クロマトグラフィー（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １２００ Ｓｅｒｉｅｓ ＨＰＬＣ、Ａｇｉｌｅｎｔ、米国）を用いる蛍光検出器（ＦＬＤ、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、米国）でアミノ酸を検出した。標準物質として２５０ｐＭ標準アミノ酸分析（Ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｔａｎｄａｒｄ；ＡＡＳ、Ａｇｉｌｅｎｔ、米国）を用いて検量線を作成し、成分分析を行った。分析結果は図２ｂ、表１に示した。
【００４７】
（３）有機酸のフィチン酸
本発明の植物細胞内において安定化したフィチン酸の封入効率および成分分析のために、試料を各溶媒を用いて適正の濃度に製造し、０．２μｍのディスクフィルターで濾過し、前処理した後、高速液体クロマトグラフィー（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １２００ Ｓｅｒｉｅｓ ＨＰＬＣ、Ａｇｉｌｅｎｔ、米国）を用いた蒸発光散乱検出器（Ｅｖａｐｏｒａｔｉｖｅ Ｌｉｇｈｔ Ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ；ＥＬＳＤ ３３００、Ａｌｌｔｅｃｈ、米国）でフィチン酸を検出した。溶出液は３次蒸留水、カラム温度は２５℃、流速は０．５ｍＬ／ｍｉｎ、ガス流速は１．４Ｌ／ｍｉｎ、ゲイン（Ｇａｉｎ）は１にそれぞれ固定し、標準物質としてフィチン酸（Ｓｉｇｍａ、米国）を用いて検量線を作成し、成分分析を行った。分析結果は図２ｃ、表１に示した。
【００４８】
（４）水溶性ビタミンのビタミンＣ
本発明の植物細胞内において安定化したビタミンＣの封入効率および成分分析のために、試料を各溶媒を用いて適正の濃度に製造し、０．２μｍのディスクフィルターで濾過し、前処理した後、高速液体クロマトグラフィー（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １２００ Ｓｅｒｉｅｓ ＨＰＬＣ、Ａｇｉｌｅｎｔ、米国）を用いてダイオード配列検出器（Ｄｉｏｄｅ Ａｒｒａｙ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ、ＤＡＤ；ＵＶ、２５４ｎｍ）で分析し、移動相を０．０５Ｍ ＫＨ２ＰＯ４：ＡＣＮ＝６０：４０（ｖ／ｖ）に固定し、１．０ｍＬ／ｍｉｎの流速で流した。標準物質としてＬ−アスコルビン酸（＞９９％、Ｓａｍｃｈｕｎ、韓国）を用いて検量線を作成し、成分分析を行った。分析結果は図２ｄ、表１に示した。高速液体クロマトグラフィー（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １２００ Ｓｅｒｉｅｓ ＨＰＬＣ、Ａｇｉｌｅｎｔ、米国）を用いて得られた各試料における、植物細胞内において安定化した親水性活性物質の含量は下記表１のとおりであり、その封入効率は下記数式１に基づいて計算して示した。
【００４９】
［数式１］
2014530800.tif 000002
【００５０】
【表１】
2014530800.tif 000003
【００５１】
［疎水性活性物質］
（５）イソフラボンのゲニステイン
本発明の植物細胞内において安定化したゲニステインの封入効率および成分分析のために、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて分析を行った。試料は、各溶媒を用いて適正の濃度に製造して０．２μｍのディスクフィルターで濾過し、前処理した後、機器に注入した。機器は高速液体クロマトグラフィー（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １２００ Ｓｅｒｉｅｓ ＨＰＬＣ、Ａｇｉｌｅｎｔ、米国）を用いてＵＶ２５４〜３４０ｎｍ領域で分析した。Ｃ１８カラム（Ｚｏｒｂａｘ ＸＤＢ−Ｃ１８ ４．６×２５０ｍｍ、Ａｇｉｌｅｎｔ、米国）を用いて、２％酢酸溶媒とアセトニトリル（ＡＣＮ）溶媒を使用した勾配溶離法で分析した。分析における溶媒は高速液体クロマトグラフィー級試薬を使用し、標準物質としてはゲニステイン（＞９９％、Ｓｉｇｍａ、米国）を用いて成分分析を行った。分析結果は図３ａ、表２のとおりである。
【００５２】
（６）フラボノイドの没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）
本発明の植物細胞内において安定化した没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）の封入効率および成分分析のために、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて分析を行った。試料は、各溶媒を用いて適正の濃度に製造して０．２μｍのディスクフィルターで濾過し、前処理した後、機器に注入した。機器は高速液体クロマトグラフィー（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １２００ Ｓｅｒｉｅｓ ＨＰＬＣ、Ａｇｉｌｅｎｔ、米国）を用いてＵＶ２５４〜３４０ｎｍ領域で分析した。Ｃ１８カラム（Ｚｏｒｂａｘ ＸＤＢ−Ｃ１８ ４．６×２５０ｍｍ、Ａｇｉｌｅｎｔ、米国）を用いて、２％酢酸溶媒とアセトニトリル（ＡＣＮ）溶媒を使用した勾配溶離法で分析した。分析における溶媒は高速液体クロマトグラフィー級試薬を使用し、標準物質としては没食子酸エピガロカテキン（＞９９％、Ｓｉｇｍａ、米国）を用いて成分分析を行った。分析結果は図３ｂ、表２のとおりである。
【００５３】
（７）脂溶性ビタミンのレチノール
本発明の植物細胞内において安定化したレチノールの封入効率および成分分析のために、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて分析を行った。試料は、各溶媒を用いて適正の濃度に製造して０．２μｍのディスクフィルターで濾過し、前処理した後、機器に注入した。機器は、高速液体クロマトグラフィー（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １２００ Ｓｅｒｉｅｓ ＨＰＬＣ、Ａｇｉｌｅｎｔ、米国）を用いてＵＶ３２５ｎｍ領域で分析したとともに、流速１ｍＬ／ｍｉｎ、カラム温度２５℃、Ｃ１８カラム（Ｚｏｒｂａｘ ＸＤＢ−Ｃ１８ ４．６×１５０ｍｍ、Ａｇｉｌｅｎｔ、米国）で９０％メタノール（ＭｅＯＨ）水溶液の溶媒を用いて分析した。分析における溶媒は高速液体クロマトグラフィー級試薬を使用し、標準物質としてはレチノール（＞９９％、Ｓｉｇｍａ、米国）を用いて成分分析を行った。分析結果は図３ｃ、表２のとおりである。高速液体クロマトグラフィー（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １２００ Ｓｅｒｉｅｓ ＨＰＬＣ、Ａｇｉｌｅｎｔ、米国）を用いて得られた各試料における、植物細胞内において安定化した疎水性活性物質の含量は下記表２のとおりであり、その封入効率は上記数式１に基づいて計算して示した。
【００５４】
【表２】
2014530800.tif 000004
【００５５】
［剤形実施例１および剤形比較例１］
実施例１に係る植物細胞内において安定化した没食子酸を含む栄養クリームの成分構成を下記表３のとおりに構成して製造した。
【００５６】
【表３】
2014530800.tif 000005
【００５７】
表３の組成からなる成分のうち、まず、原料１２〜１８の水性成分を８０℃で加温して完全溶解させた後、原料１〜１１を８０℃で加温して前記原料１２〜１８の溶液に投入し、ホモミキサー（Ｈｏｍｏ Ｍｉｘｅｒ Ｍａｒｋ II、Ｐｒｉｍｉｘ、日本）を用いて３０００ｒｐｍで１５分間乳化させた。その後、原料１９を投入して５分間攪拌した後、室温に冷却した。
【００５８】
［剤形実施例２および剤形比較例２］
実施例２に係る植物細胞内において安定化したアミノ酸を含む栄養クリームの成分構成を下記表４のとおりに構成して製造した。
【００５９】
【表４】
2014530800.tif 000006
【００６０】
表４の組成からなる成分のうち、まず、原料１２〜１８の水性成分を８０℃で加温して完全溶解させた後、原料１〜１１を８０℃で加温して前記原料１２〜１８の溶液に投入し、ホモミキサー（Ｈｏｍｏ Ｍｉｘｅｒ Ｍａｒｋ II、Ｐｒｉｍｉｘ、日本）を用いて３０００ｒｐｍで１５分間乳化させた。その後、原料１９を投入して５分間攪拌した後、室温に冷却した。
【００６１】
［剤形実施例３および剤形比較例３］
実施例３に係る植物細胞内において安定化したフィチン酸を含む栄養クリームの成分構成を下記表５のとおりに構成して製造した。
【００６２】
【表５】
2014530800.tif 000007
【００６３】
表５の組成からなる成分のうち、まず、原料１２〜１８の水性成分を８０℃で加温して完全溶解させた後、原料１〜１１を８０℃で加温して前記原料１２〜１８の溶液に投入し、ホモミキサー（Ｈｏｍｏ Ｍｉｘｅｒ Ｍａｒｋ II、Ｐｒｉｍｉｘ、日本）を用いて３０００ｒｐｍで１５分間乳化させた。その後、原料１９を投入して５分間攪拌した後、室温に冷却した。
【００６４】
［剤形実施例４および剤形比較例４］
実施例４に係る植物細胞内において安定化したビタミンＣを含む栄養クリームの成分構成を下記表６のとおりに構成して製造した。
【００６５】
【表６】
2014530800.tif 000008
【００６６】
表６の組成からなる成分のうち、まず、原料１２〜１８の水性成分を８０℃で加温して完全溶解させた後、原料１〜１１を８０℃で加温して前記原料１２〜１８の溶液に投入し、ホモミキサー（Ｈｏｍｏ Ｍｉｘｅｒ Ｍａｒｋ II、Ｐｒｉｍｉｘ、日本）を用いて３０００ｒｐｍで１５分間乳化させた。その後、原料１９を投入して５分間攪拌した後、室温に冷却した。
【００６７】
［剤形実施例５および剤形比較例５］
実施例５に係る植物細胞内において安定化したゲニステインを含む栄養クリームの成分構成を下記表７のとおりに構成して製造した。
【００６８】
【表７】
2014530800.tif 000009
【００６９】
表７の組成からなる成分のうち、まず、原料１２〜１６と原料１８の水性成分を８０℃で加温して完全溶解させた後、原料１〜１１と原料１７を８０℃で加温して前記原料１２〜１６と前記原料１８の溶液に投入し、ホモミキサー（Ｈｏｍｏ Ｍｉｘｅｒ Ｍａｒｋ II、Ｐｒｉｍｉｘ、日本）を用いて３０００ｒｐｍで１５分間乳化させた。その後、原料１９を投入して５分間攪拌した後、室温に冷却した。
【００７０】
［剤形実施例６および剤形比較例６］
実施例６に係る植物細胞内において安定化した没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）を含む栄養クリームの成分構成を下記表８のとおりに構成して製造した。
【００７１】
【表８】
2014530800.tif 000010
【００７２】
表８の組成からなる成分のうち、まず、原料１２〜１８の水性成分を８０℃で加温して完全溶解させた後、原料１〜１１を８０℃で加温して前記原料１２〜１８の溶液に投入し、ホモミキサー（Ｈｏｍｏ Ｍｉｘｅｒ Ｍａｒｋ II、Ｐｒｉｍｉｘ、日本）を用いて３０００ｒｐｍで１５分間乳化させた。その後、原料１９を投入して５分間攪拌した後、室温に冷却した。
【００７３】
［剤形実施例７および剤形比較例７］
実施例７に係る植物細胞内において安定化したレチノールを含む栄養クリームの成分構成を下記表９のとおりに構成して製造した。
【００７４】
【表９】
2014530800.tif 000011
【００７５】
表９の組成からなる成分のうち、まず、原料１２〜１６と原料１８の水性成分を８０℃で加温して完全溶解させた後、原料１〜１１と原料１７を８０℃で加温して前記原料１２〜１６と前記原料１８の溶液に投入し、ホモミキサー（Ｈｏｍｏ Ｍｉｘｅｒ Ｍａｒｋ II、Ｐｒｉｍｉｘ、日本）を用いて３０００ｒｐｍで１５分間乳化させた。その後、原料１９を投入して５分間攪拌した後、室温に冷却した。
【００７６】
［試験例２］剤形安定度実験
本発明の植物細胞内において安定化した活性物質の剤形安定度実験のために、上述のように製造された各剤形実施例および剤形比較例を９０℃の過酷条件の下で時間別にサンプリングして高速液体クロマトグラフィーで分析した後、時間流れによる活性成分の任意的単位（Ａｒｂｉｔａｒｙ ｕｎｉｔ．Ａ．Ｕ．）減少で安定度を示した（図４ａ〜図４ｄおよび図５ａ〜図５ｃを参照）。
【００７７】
［試験例３］染色法による顕微鏡細胞観察
本発明の植物細胞内において安定化した活性物質の細胞観察のために、次のとおりに顕微鏡観察を行った。顕微鏡観察は染色法を用いて行った。試料１を１００倍の３次蒸留水で希釈し、３０秒間実験用攪拌器を用いて混ぜた（Ｖｏｒｔｅｘｉｎｇ）後、メチレンブルー（Ｓｉｇｍａ、米国）を用いて染色を行った。染色の後、光学顕微鏡（Ｅｃｌｉｐｓｅ Ｅ６００、Ｎｉｋｏｎ、日本）を用いて最終倍率１００倍で観察した。映像をキャプチャーして図６に示した。
【００７８】
以下、本発明の剤形例として柔軟化粧水、収斂化粧水、栄養化粧水、マッサージクリーム、エッセンスおよびパックを例示するが、本発明の化粧料組成物の剤形はこれに限定されるものと解釈してはならず、本発明の範囲内における当業者による通常の変更が可能である。
【００７９】
表１０は柔軟化粧水の剤形例を示す［剤形例１］。
【００８０】
【表１０】
2014530800.tif 000012
【００８１】
表１１は収斂化粧水の剤形例を示す［剤形例２］。
【００８２】
【表１１】
2014530800.tif 000013
【００８３】
表１２は栄養化粧水の剤形例を示す［剤形例３］。
【００８４】
【表１２】
2014530800.tif 000014
【００８５】
表１３はエッセンスの剤形例を示す［剤形例４］。
【００８６】
【表１３】
2014530800.tif 000015
【００８７】
表１４はパックの剤形例を示す［剤形例５］。
【００８８】
【表１４】
2014530800.tif 000016
【図１】
2014530800.tif 000017
【図２ａ】
2014530800.tif 000018
【図２ｂ】
2014530800.tif 000019
【図２ｃ】
2014530800.tif 000020
【図２ｄ】
2014530800.tif 000021
【図３ａ】
2014530800.tif 000022
【図３ｂ】
2014530800.tif 000023
【図３ｃ】
2014530800.tif 000024
【図４ａ】
2014530800.tif 000025
【図４ｂ】
2014530800.tif 000026
【図４ｃ】
2014530800.tif 000027
【図４ｄ】
2014530800.tif 000028
【図５ａ】
2014530800.tif 000029
【図５ｂ】
2014530800.tif 000030
【図５ｃ】
2014530800.tif 000031
【図６】
2014530800.tif 000032
【国際調査報告】
2014530800.tif 000033
2014530800.tif 000034
2014530800.tif 000035
2014530800.tif 000036