(57)【要約】ＮＫ細胞阻害性受容体を中和する化合物を含む組成物及び悪性血液疾患の治療におけるそのような組成物の使用方法が提供される。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
前悪性血液疾患又は悪性血液疾患を有する又は以前有していた個体を治療する方法であって、治療上活性のある量の、ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物を個体に投与することを含み、前記化合物は、個体が微小な又は検出できない病変を有するときに個体に投与される方法。
【請求項２】
個体が前悪性血液疾患を有する請求項１に記載の方法。
【請求項３】
個体が、ＳＭＭ（くすぶり型骨髄腫）、ＭＧＵＳ（意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症）又はＭＤＳ（骨髄異形成症候群）を有する請求項２に記載の方法。
【請求項４】
個体が、悪性血液疾患を有する若しくは以前有していた、又は悪性血液疾患の発症の高いリスクに相関する遺伝的変異を有する請求項１に記載の方法。
【請求項５】
個体が、白血病、リンパ腫、骨髄腫、又はリンパ系悪性腫瘍を有する又は以前有していた請求項４に記載の方法。
【請求項６】
個体が、ＡＭＬ（急性骨髄性白血病）、ＭＭ（多発性骨髄腫）、ＳＭＭ（くすぶり型骨髄腫）、ＣＭＬ（慢性骨髄性白血病又は慢性顆粒球白血病（ＣＧＬ））、又はＣＬＬ（慢性リンパ性白血病）を有する又は以前有していた請求項５に記載の方法。
【請求項７】
個体が、化合物を投与する前に悪性血液疾患又は前悪性血液疾患について第１の治療で治療されている請求項２〜６に記載の方法。
【請求項８】
第１の治療が、化学療法剤、免疫調節剤、放射線療法、手術、抗ホルモン剤、又は抗血管新生剤、又は前述のいずれかの併用による治療から選択される請求項７に記載の方法。
【請求項９】
個体が、部分的寛解又は完全寛解を経験した、寛解状態にある、無症候状態である、少数の異常細胞を有する、及び／又は検出できない病変を有する請求項１〜８に記載の方法。
【請求項１０】
個体が、およそ１０９個未満の細胞の全身白血病組織量を有し、及び／又は骨髄にて５％未満の芽球を有し、及び／又は白血病の兆候若しくは症状を有さない請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
個体が血清Ｍタンパク質レベルの２５％を超える低下を有する請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
個体が血清Ｍタンパク質レベルの５０％を超える低下を有する請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
個体が、骨髄にて１０％以上の形質細胞を有するが、多発性骨髄腫（ＭＭ）の基準を満たさない請求項９に記載の方法。
【請求項１４】
個体が３ｇ／ｄＬ以上の血清Ｍタンパク質レベルを有する請求項９に記載の方法。
【請求項１５】
個体が、骨髄にて１０％以上の形質細胞を有するが、終末器官障害の証拠はない請求項９に記載の方法。
【請求項１６】
個体が３ｇ／ｄＬ以上の血清Ｍタンパク質レベルを有し、骨髄にて１０％以上の形質細胞を有する請求項９に記載の方法。
【請求項１７】
個体が終末器官障害の証拠を有さない請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
個体が骨髄にて１０％未満の形質細胞を有する請求項９に記載の方法。
【請求項１９】
ＮＫＣＩＲを阻害する化合物が単剤治療剤として使用される請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
ＮＫＣＩＲを阻害する化合物が、少なくとも１つの他の治療剤との併用で投与される請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
ＮＫＣＩＲを阻害する化合物が、ＮＫＣＩＲが介在するＮＫ阻害を阻止する又は中和し、それによって、さもなければ遮断される標的細胞に対するＮＫ細胞活性を強化する能力を有する抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片である請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
抗体又は抗体断片が、キラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）に対する抗体又はその断片である請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
抗体又は抗体断片が、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体又は抗体断片である請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
抗体又は抗体断片が、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＥ又はＩｇＭを含む請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
抗体又は抗体断片が、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４を含む請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
抗体又は抗体断片が、エフェクター機能、タンパク質分解、ＦｃＲ結合、グリコシル化又は半減期の１以上に影響を及ぼす少なくとも１つの変異を含むＦｃドメインを含む請求項２１に記載の方法。
【請求項２７】
抗体が、ＫＩＲ２ＤＬ１及びＫＩＲ２ＤＬ２／３と結合する抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片である請求項２２に記載の方法。
【請求項２８】
抗体又は抗体断片が、ＣＤ９４、ＮＫＧ２及びＬＩＲポリペプチド又はその断片から成る群から選択されるＮＫＣＩＲに対する抗体である請求項２１に記載の方法。
【請求項２９】
抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片が１−７Ｆ９と競合する請求項２２に記載の方法。
【請求項３０】
抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片が１−７Ｆ９又はその断片である請求項２２に記載の方法。
【請求項３１】
抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片が１−７Ｆ９のものと少なくとも９０％同一であるＶＬ及びＶＨドメインを含む請求項２２に記載の方法。
【請求項３２】
抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片が１−７Ｆ９のＶＬ及びＶＨドメインを含む請求項２２に記載の方法。
【請求項３３】
抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片のＶＬが１−７Ｆ９のＶＬのＣＤＲを含む請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片のＶＨが１−７Ｆ９のＶＨのＣＤＲを含む請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が、治療上有効な量の抗ＮＫＣＩＲ抗体を含む薬学上許容可能な組成物として投与される請求項２１に記載の方法。
【請求項３６】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が、少なくとも約１週間の期間、ＮＫ細胞上のＮＫＣＩＲの実質的に完全な飽和を生じる量で投与される請求項２１に記載の方法。
【請求項３７】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が、少なくとも約２週間の期間、ＮＫ細胞上のＮＫＣＩＲの実質的に完全な飽和を生じる量で投与される請求項２１に記載の方法。
【請求項３８】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が、少なくとも約1ヵ月の期間、ＮＫ細胞上のＮＫＣＩＲの実質的に完全な飽和を生じる量で投与される請求項２１に記載の方法。
【請求項３９】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が、約２週間ごとに１回の投与頻度で数回投与される請求項２１〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が、約１ヵ月ごとに１回の投与頻度で数回投与される請求項３６〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が、約２ヵ月以上ごとに１回の投与頻度で数回投与される請求項３６〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片のその後の投与が約２週間隔てられる請求項３９又は４０に記載の方法。
【請求項４３】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片のその後の投与が約１ヵ月隔てられる請求項３９又は４０に記載の方法。
【請求項４４】
治療期間の間、ＮＫ細胞上のＮＫＣＩＲの有意な不飽和化がない請求項３６〜４３に記載の方法。
【請求項４５】
治療期間の間、ＮＫ細胞上のＮＫＣＩＲの有意な不飽和化がある請求項３６〜４３に記載の方法。
【請求項４６】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇの投与量範囲で投与される請求項２１に記載の方法。
【請求項４７】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇの投与量範囲で投与される請求項２１に記載の方法。
【請求項４８】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１．０ｍｇ／ｋｇの投与量範囲で投与される請求項２１に記載の方法。
【請求項４９】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇの投与量範囲で投与される請求項２１に記載の方法。
【請求項５０】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が大体２ヵ月ごとに１回投与される請求項４６〜４９に記載の方法。
【請求項５１】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が約０．２ｍｇ／ｋｇの投与量範囲で投与される請求項２１に記載の方法。
【請求項５２】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が約０．３ｍｇ／ｋｇの投与量範囲で投与される請求項２１に記載の方法。
【請求項５３】
ヒトの治療法に使用するための医薬組成物であって、ヒト患者に約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約０．３ｍｇ／ｋｇの投与量を提供する量で抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片と、薬学上許容可能なキャリアを含む医薬組成物。
【請求項５４】
抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片が、そのアミノ酸配列が１−７Ｆ９の可変軽鎖又は重鎖のポリペプチドと少なくとも８０％の配列同一性を有する可変軽鎖及び／又は重鎖のポリペプチドを含む請求項２２に記載の方法。
【請求項５５】
抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片が、そのアミノ酸配列が１−７Ｆ９の可変軽鎖又は重鎖のポリペプチドと少なくとも９０％の配列同一性を有する可変軽鎖及び／又は重鎖のポリペプチドを含む請求項２２に記載の方法。
【請求項５６】
抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片が、そのアミノ酸配列が１−７Ｆ９の可変軽鎖又は重鎖のポリペプチドと少なくとも９５％の配列同一性を有する可変軽鎖及び／又は重鎖のポリペプチドを含む請求項２２に記載の方法。
【請求項５７】
抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片が、そのアミノ酸配列が１−７Ｆ９に対する少なくとも９８％の配列同一性を有する可変軽鎖及び／又は重鎖のポリペプチドを含む請求項２２に記載の方法。
【請求項５８】
抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片が、無傷のＫＩＲ２ＤＬ１及びＫＩＲ２ＤＬ２／３にて１−７Ｆ９と同じ線形又は立体構造のエピトープに特異的に結合し、及び／又は無傷のＫＩＲ２ＤＬ１及びＫＩＲ２ＤＬ２／３にて線形又は立体構造のエピトープに結合する１−７Ｆ９と競合する請求項２２に記載の方法。
【請求項５９】
抗ＫＩＲ抗体断片が、１−７Ｆ９と同じ結合特性を有する１−７Ｆ９の断片である請求項２２に記載の方法。
【請求項６０】
悪性血液疾患を有する又は以前有していた個体を治療する方法であって、
悪性血液疾患を有する又は以前有していた個体が微小な又は検出できない病変を有するかどうかを判定することと、
個体が微小な又は検出できない病変を有するのであれば、治療上活性のある量のＮＫＣＩＲを阻害する化合物で個体を治療することを含む方法。
【請求項６１】
個体を治療する方法であって、
個体が、くすぶり多発性型骨髄腫（ＳＭＭ）、無症候性の意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）又は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を有するかどうかを判定することと、
個体がＳＭＭ、ＭＧＵＳ又はＭＤＳを有するのであれば、ＮＫＣＩＲを阻害する治療上活性のある量の化合物で個体を治療することを含む方法。
【請求項６２】
悪性血液疾患を有する個体を治療する方法であって、
個体が微小な又は検出できない病変を有するように、第１の治療で個体を治療することと、、
ＮＫＣＩＲを阻害する治療上活性のある量の化合物で微小な又は検出できない病変を治療することを含む方法。
【請求項６３】
第１の治療が、化学療法剤又は免疫調節剤による治療である請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
第１の治療が免疫調節剤による治療である請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
悪性血液疾患を有する又は有していた個体が微小な又は検出できない病変を有するかどうか及び／又は個体がＳＭＭ、ＭＧＵＳ又はＭＤＳを有するかどうかを判定することが標準の医学指針に従って行われる請求項６０〜６２に記載の方法。
【請求項６６】
微小な又は検出できない病変及び／又はＳＭＭ、ＭＧＵＳ若しくはＭＤＳの判定が異常な細胞の集団又は異常な細胞数を特定することを含む請求項６２に記載の方法。
【請求項６７】
異常な細胞の集団又は異常な細胞数がフローサイトメトリーによって特定される請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
異常な細胞を選別する、又は単離することをさらに含む請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
微小な又は検出できない病変及び／又はＳＭＭ、ＭＧＵＳ若しくはＭＤＳの判定が細胞遺伝学的な異常を検出することを含む請求項６６に記載の方法。
【請求項７０】
細胞遺伝学的な異常を検出することが、
異常な細胞の集団を単離することと、
単離した異常な細胞から核酸を単離することと、
悪性血液疾患の発症の高い可能性と相関する遺伝子再構成を標的とする１以上の核酸に単離された核酸を接触させることを含み、
接触が細胞遺伝学的な異常の存在を検出する請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
遺伝的マーカーが、ＡＭＬを有する個体で生存の予後不良に相関するＦＬＴ３又はＮｐＭ１における変異である請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
遺伝的マーカーが、免疫グロブリン（Ｉｇ）及び／又はＴ細胞受容体の遺伝子における遺伝子再構成である請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
微小な又は検出できない病変及び／又はＳＭＭ、ＭＧＵＳ若しくはＭＤＳの判定が、個体における血清の単クローン性タンパク質（Ｍタンパク質）のレベルを評価することを含む請求項６５に記載の方法。
【請求項７４】
個体がＳＭＭ又はＭＧＵＳを有するかどうかを判定することが、個体における血清の単クローン性タンパク質（Ｍタンパク質）のレベルを評価することを含む請求項６１に記載の方法。
【請求項７５】
Ｍタンパク質のレベルが少なくとも３ｇ／Ｌであれば、個体がＳＭＭを有すると判定される請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
個体がＳＭＭ又はＭＧＵＳを有するかどうかを判定することが、個体における骨髄形質細胞を評価することを含む請求項６１に記載の方法。
【請求項７７】
個体が少なくとも１０％の骨髄形質細胞を有するのであれば、個体はＳＭＭを有すると判定される請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物の使用であって、個体が微小な又は検出できない病変を有するときに個体に投与するために、前悪性血液疾患又は悪性血液疾患を有する又は以前有していた個体の治療用の医薬組成物を調製するための使用であり、前記組成物が治療上活性のある量の、ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物を含む使用。
【請求項７９】
組成物が前悪性血液疾患を有する個体における使用を目的とする請求項７８に記載の使用。
【請求項８０】
組成物が、ＳＭＭ（くすぶり型骨髄腫）、ＭＧＵＳ（意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症）又はＭＤＳ（骨髄異形成症候群）を有する個体における使用を目的とする請求項７９に記載の使用。
【請求項８１】
組成物が、悪性血液疾患を有する若しくは以前有していた、又は悪性血液疾患の発症の高いリスクと相関する遺伝的変異を有する個体を治療することを目的とする請求項７８に記載の使用。
【請求項８２】
組成物が、白血病、リンパ腫、骨髄腫、又はリンパ系の悪性疾患を有する又は以前有していた個体を治療することを目的とする請求項８１に記載の使用。
【請求項８３】
組成物が、ＡＭＬ（急性骨髄性白血病）、ＭＭ（多発性骨髄腫）、ＳＭＭ（くすぶり型骨髄腫）、ＣＭＬ（慢性骨髄性白血病又は慢性顆粒球白血病（ＣＧＬ））、又はＣＬＬ（慢性リンパ性白血病）を有する又は以前有していた個体を治療することを目的とする請求項８２に記載の使用。
【請求項８４】
組成物が、化合物を投与する前に悪性血液疾患又は前悪性血液疾患について第１の治療で治療されている個体を治療することを目的とする請求項７９〜８２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項８５】
組成物が、化学療法剤、免疫調節剤、放射線療法、手術、抗ホルモン剤、又は抗血管新生剤、又は前述のいずれかの併用による治療から選択される第１の治療が行われていた個体を治療することを目的とする請求項８４に記載の使用。
【請求項８６】
組成物が、部分的寛解又は完全寛解を経験した、寛解状態にある、無症候状態である、少数の異常細胞を有する、及び／又は検出できない病変を有する個体を治療することを目的とする請求項７８〜８５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項８７】
組成物が、およそ１０９個未満の細胞の全身白血病組織量を有し、及び／又は骨髄にて５％未満の芽球を有し、及び／又は白血病の兆候若しくは症状を有さない個体を治療することを目的とする請求項８６に記載の使用。
【請求項８８】
組成物が、血清Ｍタンパク質レベルで２５％を超える低下を示す個体を治療することを目的とする請求項８６に記載の使用。
【請求項８９】
組成物が、血清Ｍタンパク質レベルで５０％を超える低下を示す個体を治療することを目的とする請求項８６に記載の使用。
【請求項９０】
組成物が、骨髄にて１０％以上の形質細胞を有するが、多発性骨髄腫（ＭＭ）の基準を満たさない個体を治療することを目的とする請求項８６に記載の使用。
【請求項９１】
組成物が、３ｇ／ｄＬ以上の血清Ｍタンパク質レベルを有する個体を治療することを目的とする請求項８６に記載の使用。
【請求項９２】
組成物が、骨髄にて１０％以上の形質細胞を有するが、終末器官障害の証拠はない個体を治療することを目的とする請求項８６に記載の使用。
【請求項９３】
組成物が、３ｇ／ｄＬ以上の血清Ｍタンパク質レベルを有し、骨髄にて１０％以上の形質細胞を有する個体を治療することを目的とする請求項８６に記載の使用。
【請求項９４】
組成物が、終末器官障害の証拠はない個体を治療することを目的とする請求項９３に記載の使用。
【請求項９５】
組成物が、骨髄にて１０％未満の形質細胞を有する個体を治療することを目的とする請求項８６に記載の使用。
【請求項９６】
ＮＫＣＩＲを阻害する化合物が単剤治療剤として使用される請求項７８に記載の使用。
【請求項９７】
ＮＫＣＩＲを阻害する化合物が、少なくとも１つの他の治療剤との併用で投与される請求項７８に記載の使用。
【請求項９８】
ＮＫＣＩＲを阻害する化合物が、ＮＫＣＩＲが介在するＮＫ阻害を阻止する又は中和し、それによって、さもなければ遮断される標的細胞に対するＮＫ細胞活性を強化する能力を有する抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片である請求項７８に記載の使用。
【請求項９９】
抗体又は抗体断片が、キラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）に対する抗体又はその断片である請求項９８に記載の使用。
【請求項１００】
抗体又は抗体断片が、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体又は抗体断片である請求項９８に記載の使用。
【請求項１０１】
抗体又は抗体断片が、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＥ又はＩｇＭを含む請求項９８に記載の使用。
【請求項１０２】
抗体又は抗体断片が、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４を含む請求項９８に記載の使用。
【請求項１０３】
抗体又は抗体断片が、エフェクター機能、タンパク質分解、ＦｃＲ結合、グリコシル化又は半減期の１以上に影響を及ぼす少なくとも１つの変異を含むＦｃドメインを含む請求項９８に記載の使用。
【請求項１０４】
抗体が、ＫＩＲ２ＤＬ１及びＫＩＲ２ＤＬ２／３と結合する抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片である請求項９９に記載の使用。
【請求項１０５】
抗体又は抗体断片が、ＣＤ９４、ＮＫＧ２及びＬＩＲポリペプチド又はその断片から成る群から選択されるＮＫＣＩＲに対する抗体である請求項９８に記載の使用。
【請求項１０６】
抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片が１−７Ｆ９と競合する請求項９９に記載の使用。
【請求項１０７】
抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片が１−７Ｆ９又はその断片である請求項９９に記載の使用。
【請求項１０８】
抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片が１−７Ｆ９のものと少なくとも９０％同一であるＶＬ及びＶＨのドメインを含む請求項９９に記載の使用。
【請求項１０９】
抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片が１−７Ｆ９のＶＬ及びＶＨのドメインを含む請求項９９に記載の使用。
【請求項１１０】
抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片のＶＬが１−７Ｆ９のＶＬのＣＤＲを含む請求項１０８に記載の使用。
【請求項１１１】
抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片のＶＨが１−７Ｆ９のＶＨのＣＤＲを含む請求項１０８に記載の使用。
【請求項１１２】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が、治療上有効な量の抗ＮＫＣＩＲ抗体を含む薬学上許容可能な組成物として投与される請求項９８に記載の使用。
【請求項１１３】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が、少なくとも約１週間の期間、ＮＫ細胞上のＮＫＣＩＲの実質的に完全な飽和を生じる量で投与される請求項９８に記載の使用。
【請求項１１４】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が、少なくとも約２週間の期間、ＮＫ細胞上のＮＫＣＩＲの実質的に完全な飽和を生じる量で投与される請求項９８に記載の使用。
【請求項１１５】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が、少なくとも約1ヵ月の期間、ＮＫ細胞上のＮＫＣＩＲの実質的に完全な飽和を生じる量で投与される請求項９８に記載の使用。
【請求項１１６】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が、約２週間ごとに１回の投与頻度で数回投与される請求項９８〜１１５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１７】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が、約１ヵ月ごとに１回の投与頻度で数回投与される請求項１１３〜１１５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１８】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が、約２ヵ月以上ごとに１回の投与頻度で数回投与される請求項１１３〜１１５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１９】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片のその後の投与が約２週間隔てられる請求項１１６又は１１７に記載の使用。
【請求項１２０】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片のその後の投与が約１ヵ月隔てられる請求項１１６又は１１７に記載の使用。
【請求項１２１】
治療期間の間、ＮＫ細胞上のＮＫＣＩＲの有意な不飽和化がない請求項１１３〜１２０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２２】
治療期間の間、ＮＫ細胞上のＮＫＣＩＲの有意な不飽和化がある請求項１１３〜１２０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２３】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇの投与量範囲で投与される請求項９８に記載の使用。
【請求項１２４】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇの投与量範囲で投与される請求項９８に記載の使用。
【請求項１２５】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１．０ｍｇ／ｋｇの投与量範囲で投与される請求項９８に記載の使用。
【請求項１２６】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇの投与量範囲で投与される請求項９８に記載の使用。
【請求項１２７】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が大体２ヵ月ごとに１回投与される請求項１２３〜１２６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２８】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が約０．２ｍｇ／ｋｇの投与量範囲で投与される請求項９８に記載の使用。
【請求項１２９】
抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片が約０．３ｍｇ／ｋｇの投与量範囲で投与される請求項９８に記載の使用。
【請求項１３０】
ヒトの治療のために医薬組成物を調製するための、ヒト患者にて約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約０．３ｍｇ／ｋｇの投与量を提供する量での抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片及び薬学上許容可能なキャリアの使用。
【請求項１３１】
抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片は、そのアミノ酸配列が１−７Ｆ９と少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む請求項９９に記載の使用。
【請求項１３２】
抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片は、そのアミノ酸配列が１−７Ｆ９に対する少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む請求項９９に記載の使用。
【請求項１３３】
抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片は、そのアミノ酸配列が１−７Ｆ９に対する少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む請求項９９に記載の使用。
【請求項１３４】
抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片は、そのアミノ酸配列が１−７Ｆ９に対する少なくとも９８％の配列同一性を有するポリペプチドを含む請求項９９に記載の使用。
【請求項１３５】
抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片が、無傷のＫＩＲ２ＤＬ１及びＫＩＲ２ＤＬ２／３にて１−７Ｆ９と同じ線形又は立体構造のエピトープに特異的に結合し、及び／又は無傷のＫＩＲ２ＤＬ１及びＫＩＲ２ＤＬ２／３にて線形又は立体構造のエピトープに結合する１−７Ｆ９と競合する請求項９９に記載の使用。
【請求項１３６】
抗ＫＩＲ抗体断片が、１−７Ｆ９と同じ結合特性を有する１−７Ｆ９の断片である請求項９９に記載の使用。
【請求項１３７】
悪性血液疾患を有する又は以前有していた個体が微小な又は検出できない病変を有するかどうかを検出する部分を含有し、個体が微小な又は検出できない病変を有するのであれば、治療上活性のある量のＮＫＣＩＲを阻害する化合物で個体を治療する組成物を調製することにおける化合物の使用。
【請求項１３８】
個体がくすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）、無症候性の意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）又は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を有するかどうかを検出する部分を含有し、個体がＳＭＭ、ＭＧＵＳ又はＭＤＳを有するのであれば、ＮＫＣＩＲを阻害する、治療上活性のある量の化合物で個体を治療する組成物を調製することにおける化合物の使用。
【請求項１３９】
悪性血液疾患を有する個体を治療するため、微小な又は検出できない病変を有する個体を第１の治療で治療するため、及び微小な又は検出できない病変を有する個体を治療上活性のある量のＮＫＣＩＲを阻害する化合物で治療するための組成物の調製における化合物の使用。
【請求項１４０】
第１の治療が、化学療法剤又は免疫調節剤による治療である請求項１３９に記載の使用。
【請求項１４１】
第１の治療が、免疫調節剤による治療である請求項１４０に記載の使用。
【請求項１４２】
悪性血液疾患を有する又は以前有していた個体が微小な又は検出できない病変を有するかどうか、及び／又は個体がＳＭＭ、ＭＧＵＳ若しくはＭＤＳを有するかどうかを判定することが標準の医学指針によって為される請求項１３７〜１３９に記載の使用。
【請求項１４３】
微小な又は検出できない病変及び／又はＳＭＭ、ＭＧＵＳ若しくはＭＤＳの判定が異常な細胞の集団又は異常な細胞数を特定することを含む請求項１３９に記載の使用。
【請求項１４４】
異常な細胞の集団又は異常な細胞数がフローサイトメトリーによって特定される請求項１４３に記載の方法。
【請求項１４５】
異常な細胞を選別する、又は単離することをさらに含む請求項１４３に記載の使用。
【請求項１４６】
微小な又は検出できない病変及び／又はＳＭＭ、ＭＧＵＳ若しくはＭＤＳの判定が細胞遺伝学的な異常を検出することを含む請求項１４３に記載の使用。
【請求項１４７】
細胞遺伝学的な異常の検出がさらに、
異常な細胞の集団を単離することと、
単離した異常な細胞から核酸を単離することと、
悪性血液疾患の発症の高いリスクと相関する遺伝子再構成を標的とする１以上の核酸に単離された核酸を接触させることを含み、
接触が細胞遺伝学的な異常の存在を検出する請求項１４６に記載の使用。
【請求項１４８】
遺伝的マーカーが、ＡＭＬを有する個体で生存の予後不良に相関するＦＬＴ３又はＮｐＭ１における変異である請求項１４７に記載の使用。
【請求項１４９】
遺伝的マーカーが、免疫グロブリン（Ｉｇ）及び／又はＴ細胞受容体の遺伝子における遺伝子再構成である請求項１４７に記載の使用。
【請求項１５０】
微小な又は検出できない病変及び／又はＳＭＭ、ＭＧＵＳ若しくはＭＤＳの判定が、個体における血清の単クローン性タンパク質（Ｍタンパク質）のレベルを評価することを含む請求項１４２に記載の使用。
【請求項１５１】
個体がＳＭＭ又はＭＧＵＳを有するかどうかを判定することが、個体における血清の単クローン性タンパク質（Ｍタンパク質）のレベルを評価することを含む請求項１３８に記載の使用。
【請求項１５２】
Ｍタンパク質のレベルが少なくとも３ｇ／Ｌであれば、個体がＳＭＭを有すると判定される請求項１５１に記載の使用。
【請求項１５３】
個体がＳＭＭ又はＭＧＵＳを有するかどうかを判定することが、個体における骨髄形質細胞を評価することを含む請求項１３８に記載の使用。
【請求項１５４】
個体が少なくとも１０％の骨髄形質細胞を有するのであれば、個体はＳＭＭを有すると判定される請求項１５３に記載の使用。
【請求項１５５】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２及びＫＩＲ２ＤＬ３の少なくとも１つへの結合において配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗体と競合する抗体又はその結合断片であり、本請求項における配列番号は、特許請求の範囲の直前にある本願のページに含まれるＷＯ２００６／００３１７９の配列表を参照する、上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１５６】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２及びＫＩＲ２ＤＬ３の少なくとも１つへの結合において配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗体又は結合断片と競合する抗体又はその結合断片であり、本請求項における配列番号は、特許請求の範囲の直前にある本願のページに含まれるＷＯ２００６／００３１７９の配列表を参照する、上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１５７】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域含む抗体又は結合断片であり、本請求項における配列番号は、特許請求の範囲の直前にある本願のページに含まれるＷＯ２００６／００３１７９の配列表を参照する、上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１５８】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、
（ａ）配列番号１７の残基３１〜３５に相当する重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列と、
（ｂ）配列番号１７の残基５０〜６５に相当する重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列と、
（ｃ）配列番号１７の残基９９〜１１２に相当する重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む抗体又は結合断片であり、本請求項における配列番号は、特許請求の範囲の直前にある本願のページに含まれるＷＯ２００６／００３１７９の配列表を参照する、上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１５９】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗体又は結合断片であり、本請求項における配列番号は、特許請求の範囲の直前にある本願のページに含まれるＷＯ２００６／００３１７９の配列表を参照する、上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１６０】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、約０．４５ｎＭ以下のＫＩＲ２ＤＬ１に対する解離定数（Ｋｄ）を有する抗体又はその結合断片である上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１６１】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、約０．０２５ｎＭ以下のＫＩＲ２ＤＬ３に対するＫｄを有する抗体又はその結合断片である上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１６２】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、アミノ酸残基Ｌ３８、Ｒ４１、Ｍ４４、Ｆ４５、Ｎ４６、Ｄ４７、Ｔ４８、Ｌ４９、Ｒ５０、１５２、Ｆ６４、Ｄ７２、Ｙ８０、Ｐ８７、及びＹ８８を実質的に含むＫＩＲ２ＤＬ１のエピトープに結合する抗体又はその結合断片である上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１６３】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、ＫＩＲ２ＤＬ１（配列番号２３）の細胞外部分の残基Ｍ４４、Ｆ４５及びＤ７２へのＨＬＡ−Ｃｗ４分子の結合を阻止する抗体又はその結合断片であり、本請求項における配列番号は、特許請求の範囲の直前にある本願のページに含まれるＷＯ２００６／００３１７９の配列表を参照する、上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１６４】
抗体がモノクローナル抗体又はその断片である請求項１５５〜１６３のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項１６５】
抗体が、ヒトの又はヒト化したモノクローナル抗体又はその断片である請求項１５５〜１６４のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項１６６】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物は、抗体がＩｇＧ１、lｇＧ２、lｇＧ３又はlｇＧ４抗体である抗体又はその結合断片である上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１６７】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物は、抗体がＩｇＧ４抗体である抗体又はその結合断片である上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１６８】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、抗体が配列番号１５のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む抗体又はその結合断片であり、本請求項における配列番号は、特許請求の範囲の直前にある本願のページに含まれるＷＯ２００６／００３１７９の配列表を参照する、上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１６９】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、抗体が配列番号１５のアミノ酸配列に対する少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む抗体又はその結合断片であり、本請求項における配列番号は、特許請求の範囲の直前にある本願のページに含まれるＷＯ２００６／００３１７９の配列表を参照する、上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１７０】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、抗体が配列番号１５のアミノ酸配列に対する少なくとも９８％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む抗体又はその結合断片であり、本請求項における配列番号は、特許請求の範囲の直前にある本願のページに含まれるＷＯ２００６／００３１７９の配列表を参照する、上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１７１】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、抗体が配列番号１７のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む抗体又はその結合断片であり、本請求項における配列番号は、特許請求の範囲の直前にある本願のページに含まれるＷＯ２００６／００３１７９の配列表を参照する、上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１７２】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、抗体が配列番号１７のアミノ酸配列に対する少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む抗体又はその結合断片であり、本請求項における配列番号は、特許請求の範囲の直前にある本願のページに含まれるＷＯ２００６／００３１７９の配列表を参照する、上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１７３】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、抗体が配列番号１７のアミノ酸配列に対する少なくとも９８％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む抗体又はその結合断片であり、本請求項における配列番号は、特許請求の範囲の直前にある本願のページに含まれるＷＯ２００６／００３１７９の配列表を参照する、上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１７４】
抗体又は断片が、ＩｇＧ１、lｇＧ２、lｇＧ３又はＩｇＧ４抗体である請求項１６８〜１７３のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項１７５】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、lｇＧ４抗体である抗体又はその結合断片である請求項１６８〜１７３のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項１７６】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２及びＫＩＲ２ＤＬ３の少なくとも１つへの結合において配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗体と競合する抗体又はその結合断片である上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１７７】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２及びＫＩＲ２ＤＬ３の少なくとも１つへの結合において配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗体又はその結合断片と競合する抗体又はその結合断片である上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１７８】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体又はその結合断片である上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１７９】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、配列番号５７に含有される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む抗体又はその結合断片である上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１８０】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、配列番号５５に含有される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む抗体又はその結合断片である上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１８１】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、
（ａ）配列番号４９の重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列と
（ｂ）配列番号５０の重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列と
（ｃ）配列番号５１の重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む抗体又はその結合断片である上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１８２】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、
（ａ）配列番号４３の軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列と
（ｂ）配列番号４５の軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列と
（ｃ）配列番号４７の軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む抗体又はその結合断片である上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１８３】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、配列番号５７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗体又はその結合断片である上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１８４】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、約０．４５ｎＭ以下のＫＩＲ２ＤＬ１に対する解離定数（Ｋｄ）を有する抗体又はその結合断片である請求項１７９〜１８３のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項１８５】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、約０．０２５ｎＭ以下のＫＩＲ２ＤＬ３に対するＫｄを有する抗体又はその結合断片である請求項１７９〜１８３のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項１８６】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、アミノ酸残基Ｌ３８、Ｒ４１、Ｍ４４、Ｆ４５、Ｎ４６、Ｄ４７、Ｔ４８、Ｌ４９、Ｒ５０、１５２、Ｆ６４、Ｄ７２、Ｙ８０、Ｐ８７、及びＹ８８を実質的に含むＫＩＲ２ＤＬ１のエピトープに結合する抗体又はその結合断片である請求項１７９〜１８５のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項１８７】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、ＫＩＲ２ＤＬ１（配列番号２３）の細胞外部分の残基Ｍ４４、Ｆ４５及びＤ７２へのＨＬＡ−Ｃｗ４分子の結合を阻止する抗体又はその結合断片である請求項１７９〜１８６のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項１８８】
抗体がモノクローナル抗体又はその断片である請求項１７６〜１８７のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項１８９】
抗体が、ヒトの又はヒト化したモノクローナル抗体又はその断片である請求項１７６〜１８８のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項１９０】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物は、抗体がＩｇＧ１、lｇＧ２、lｇＧ３又はlｇＧ４抗体である抗体又はその結合断片である請求項１７９〜１８９のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項１９１】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物は、抗体がlｇＧ４抗体である抗体又はその結合断片である請求項１７９〜１９０のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項１９２】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物は、抗体が配列番号５５のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む抗体又はその結合断片である請求項１７９〜１９１のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項１９３】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物は、抗体が配列番号５５のアミノ酸配列に対する少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む抗体又はその結合断片である請求項１７９〜１９２のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項１９４】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物は、抗体が配列番号５５のアミノ酸配列に対する少なくとも９８％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む抗体又はその結合断片である請求項１７９〜１９３のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項１９５】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物は、抗体が配列番号５７のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む抗体又はその結合断片である請求項１７９〜１９４のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項１９６】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物は、抗体が配列番号５７のアミノ酸配列に対する少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む抗体又はその結合断片である請求項１７９〜１９５のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項１９７】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物は、抗体が配列番号５７のアミノ酸配列に対する少なくとも９８％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む抗体又はその結合断片である請求項１７９〜１９６のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項１９８】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、配列番号５８に含有される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む抗体又はその結合断片である上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項１９９】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、配列番号５６に含有される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む抗体又はその結合断片である上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項２００】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物は、抗体が配列番号５６のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む抗体又はその結合断片である請求項１７９〜１９９のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項２０１】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物は、抗体が配列番号５６のアミノ酸配列に対する少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む抗体又はその結合断片である請求項１７９〜２００のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項２０２】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物は、抗体が配列番号５６のアミノ酸配列に対する少なくとも９８％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む抗体又はその結合断片である請求項１７９〜２０１のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項２０３】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物は、抗体が配列番号５８のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む抗体又はその結合断片である請求項１７９〜２０２のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項２０４】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物は、抗体が配列番号５８のアミノ酸配列に対する少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む抗体又はその結合断片である請求項１７９〜２０３のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項２０５】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物は、抗体が配列番号５８のアミノ酸配列に対する少なくとも９８％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む抗体又はその結合断片である請求項１７９〜２０４のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項２０６】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗体又はその結合断片である上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項２０７】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、配列番号５６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗体又はその結合断片である上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項２０８】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、配列番号５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗体又はその結合断片である上記請求項のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項２０９】
抗体又は断片が、ＩｇＧ１、lｇＧ２、lｇＧ３又はlｇＧ４抗体である請求項１７６〜２０８のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項２１０】
ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物が、lｇＧ４抗体である抗体又はその結合断片である請求項１７６〜２０９のいずれかに記載の方法又は使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
関連出願との相互参照
本出願は、配列情報すべてを含むその開示が参照によって本明細書に組み入れられる２０１０年１１月２２日に出願された米国仮特許出願、出願番号６１／４１５，９７３に対する優先権を主張する。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、悪性血液疾患を治療するためのＮＫ細胞活性の調節に関する。
【背景技術】
【０００３】
ナチュラルキラーＮＫ細胞は、細胞傷害性免疫細胞として作用する大型顆粒リンパ球のサブセットである。標的細胞（たとえば、癌細胞、ウイルス感染細胞）に対してＮＫ細胞が自然に介在する細胞傷害性活性は、活性化する及び阻害性の細胞表面受容体によってそれぞれ伝達される正及び負のシグナルのバランスの結果として一般に発現される。
【０００４】
ＮＫ細胞は、種間で異なる多数の既知の細胞表面マーカーによって特定することができる（ヒトでは、ＣＤ５６、ＣＤ１６、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６及びＮＫｐ３０が使用されることが多く、マウスではＮＫ１．１」、Ｌｙ４９Ａ−Ｗ、ＣＤ４９ｂが使用されることが多い）。活性のある状態では、ＮＫ細胞は、特定の自己、同種、及びさらに異種の腫瘍細胞、ウイルス感染細胞、特定の細菌（たとえば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ）及びその他の標的細胞を殺傷することが可能である。ＮＫ細胞は、その表面上に主要組織適合性クラスＩ（「ＭＨＣＩ」又は「ＭＨＣ-Ｉ」）分子をほとんど発現しない又は発現しない標的細胞を優先的に殺傷すると思われる。ＮＫ細胞はまた、抗体分子を結合させた標的細胞も殺傷し、抗体依存性の細胞傷害性（ＡＤＣＣ）として知られるメカニズムである。標的細胞に対する作用では、ＮＫ細胞は、グランザイムと呼ばれるタンパク質分解性酵素であるパーフォリンと呼ばれる孔形成性タンパク質、及び標的細胞のアポトーシス若しくは溶解を直接もたらす、又は他の免疫応答を調節するサイトカイン／ケモカイン（たとえば、ＴＮＦα、ＩＦＮγ等）を放出することができる。活性化の際、ＮＫ細胞は、これらの細胞がＦａｓを発現する細胞でアポトーシスを誘導するのを可能にするＦａｓリガンド（ＦａｓＬ）も発現し得る。
【０００５】
適切なＮＫ細胞介在性の免疫応答を開始するには、十分なＮＫ細胞活性及びＮＫ細胞数が通常必要とされる。ＮＫ細胞は個体において正常な数で存在し得るが、活性化されなければ、これらの細胞は、たとえば、異常な細胞を排除することのような生体の免疫系の機能を実行することにおいて有効ではない。ＮＫ細胞活性の低下は、多数の疾患の発症及び進行に連鎖している。たとえば、研究によって、ＮＫ細胞の活性は、たとえば、慢性疲労性症候群（ＣＦＳ）、ウイルス感染、及び癌の発症のような疾患に対する大きな感受性をもたらすことが明らかにされている。
【０００６】
ＮＫ細胞活性は、ＮＫ細胞活性調節受容体（「ＮＫＣＡＭＲ」又は簡単に「ＡＭＲ」）によって調節されるが、それは、標的細胞上で発現される、たとえば、ＭＨＣ−Ｉ分子、ＭＨＣ−Ｉホモログ、又は他の生体分子のような種々のリガンドに特異的であり得る。個体におけるＮＫ細胞は通常、多数の活性化受容体及び阻害性受容体を提示している。ＮＫ細胞の活性は、これらの活性化受容体及び阻害性受容体を介して伝達されるシグナルのバランスによって調節される。各型のＮＫＣＡＭＲを以下で順に手短に議論する。ほとんどのＮＫＣＡＭＲは、２つの部類のタンパク質：免疫グロブリン（Ｉｇ）様の受容体スーパーファミリー（ＩｇＳＦ）又はＣ型レクチン様の受容体（ＣＴＬＲ）スーパーファミリー（Radaev and Sun, Annu. Rev. Biomol. Struct. 2003 32:93-114）のうちの１つの属すると思われる。しかしながら、他の形態のＮＫＣＡＭＲが知られている。
【０００７】
たとえば、キラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）のようなＮＫＣＡＭＲに対する抗体が以前から記載されており、従来技術では、抗ＫＩＲ抗体のような抗ＮＫ受容体抗体を抗癌剤と併用する少なくとも幾つかの提案がある。たとえば、ＷＯ２００４／０５６３９２は、抗ＮＫｐ３０及び／又は抗ＮＫｐ４６抗体をインターロイキン−２（ＩＬ−２）との混合物で使用したことを記載している。ＷＯ２００５／００９４６５は、ヒト対象にて治療用抗体による治療の効率を高めるために、ＮＫ細胞の阻害性受容体を遮断する又は活性化受容体を刺激する化合物（たとえば、ｍＡｂＤＦ２００又は抗ＮＫｐ３０ｍＡｂのような抗ＫＩＲｍＡｂ）と組み合わせた治療用抗体（たとえば、リツキサン）の併用を記載している（ＵＳ２００５００３７００２も参照のこと）。ＷＯ２００８／０８４１０６は、抗ＫＩＲの処方、投与量及び投与計画を記載している。ＷＯ２００５／０７９７６６はまた、癌療法に使用するための抗ＫＩＲ抗体を含む抗体（たとえば、抗組織因子抗体）の併用を記載している。ＷＯ２００５／００３１６８及びＷＯ２００５／００３１７２は、ＩＬ−２及びＩＬ−２１を含む種々の剤との多数の抗ＫＩＲ抗体の併用を記載している。ＷＯ２００５／０３７３０６は同様に、抗ＫＩＲ抗体と組み合わせたＩＬ−２１、ＩＬ−２１誘導体及びＩＬ−２１類似体の併用を記載している。
【０００８】
ＮＫ細胞は、腫瘍抗原を結合する抗体が介在する抗腫瘍応答への寄与の可能性のために科学論文にて多大な注目を浴びている一方で、ＮＫ細胞受容体を調節することによって直接、生体内の有効性又はＮＫ細胞の細胞傷害性を高めることを調べようとした研究は少ない。今までのＮＫ細胞を調節する化合物による治療は、標的細胞を殺傷するＮＫ細胞の能力を潜在的に回復すると一般にみなされている。そのような治療は、多分、重大な疾患（たとえば、腫瘍増殖）ではＮＫ細胞の免疫監視は損傷されるという証拠を考慮して、進行した疾患ではない患者では使用されていなかった。たとえば、骨髄腫では、悪性の多発性骨髄腫（ＭＭ）はＮＫ細胞の量的低下及び機能的消耗と並行する。進行したＭＭ患者では、ＮＫ細胞数も減り、ＮＫ細胞は刺激に対して低応答性になる。
【０００９】
その結果、患者に改善された利益を提供するＮＫ細胞の調節を用いる方法に対するニーズが当該技術に存在する。ＮＫ細胞活性を調節する化合物、たとえば、抗＋ＮＫＣＩＲ抗体及びその断片は、癌の治療で特に有用であり得る。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、悪性血液疾患又は前悪性血液疾患を有する又は以前有していた個体を治療する方法を提供する。方法は、治療上活性のある量の、ＮＫ細胞阻害性受容体（ＮＫＣＩＲ）を阻害する化合物を個体に投与することを含む。化合物は好ましくは、個体が微小な又は検出できない病変を有するときに個体に投与される。さらに、本発明は、悪性血液疾患又は前悪性血液疾患を有する又は以前有していた個体を治療するための医薬組成物を調製するために、個体が微小な又は検出できない病変を有するときに個体に投与するために、ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物の使用を企図するが、前記組成物は、治療上活性のある量の、ＮＫＣＩＲ（ナチュラルキラー細胞阻害性受容体）を阻害する化合物を含む。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明の一実施形態では、個体は前悪性血液疾患を有する。特定の実施形態では、個体は、ＳＭＭ（くすぶり型骨髄腫）、ＭＧＵＳ（意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症）又はＭＤＳ（骨髄異形成症候群）を有する。
【００１２】
本発明の別の実施形態では、個体は、悪性血液疾患又は悪性血液疾患の発症の高いリスクに相関する遺伝的変異を有する又は以前有していた。特定の実施形態では、個体は、白血病、リンパ腫、骨髄腫、又はリンパ系の悪性腫瘍を有する又は以前有していた。好まれる実施形態では、個体は、ＡＭＬ（急性骨髄性白血病）、ＭＭ（多発性骨髄腫）、ＳＭＭ（くすぶり型骨髄腫）、ＣＭＬ（慢性骨髄性白血病）、又はＣＬＬ（慢性リンパ性白血病）有する又は以前有していた。
【００１３】
一実施形態では、個体は、化合物を投与する前に、悪性血液疾患又は前悪性血液疾患のための第１の治療で治療を受けていた。第１の治療は、化学療法剤、免疫調節剤、放射線療法、外科手術、抗ホルモン剤、又は抗血管新生剤、又は前述のいずれかの組み合わせによる治療から選択され得る。好ましくは、個体は、第１の治療による治療に対する部分寛解又は完全寛解を経験した。第１の治療の結果、個体は、寛解にあってもよく、検出できない病変を有し、無症候性であり、少数の異常細胞を有する。
【００１４】
一実施形態では、悪性血液疾患は白血病、すなわち、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。好ましくは、個体は、任意で第１の治療に続いて、寛解にあり、検出できない病変を有し、及び／又は少数の異常細胞を有する。特定の実施形態では、個体は、約１０９個未満の細胞の全身白血病細胞量及び／又は骨髄における５％未満の芽球を有し、及び／又は白血病の兆候又は症状を有さない。
【００１５】
一実施形態では、悪性血液疾患は骨髄腫、すなわち、多発性骨髄腫（ＭＭ）である。好ましくは、個体は、任意で第１の治療に続いて、部分寛解又は完全寛解を経験しており、寛解にあり、無症候性であり、検出できない病変を有し、及び／又は少数の異常細胞を有する。特定の実施形態では、個体は、血清タンパク質Ｍのレベルで２５％を超える低下を経験している。好ましくは、個体は、血清蛋白質Ｍのレベルで５０％を超える低下を経験している。
【００１６】
一実施形態では、悪性血液疾患はくすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）である。好ましくは、個体は、任意で第１の治療に続いて、部分寛解又は完全寛解を経験しており、寛解にあり、無症候性であり、検出できない病変を有し、及び／又は少数の異常細胞を有する。本発明の特定の態様では、個体は、骨髄にて１０％以上の形質細胞を有するが、多発性骨髄腫（ＭＭ）の基準を満たさない。本発明の別の態様では、個体は≧３ｇ／ｄＬの血清Ｍタンパク質を有する。本発明のさらに別の態様では、個体は、骨髄にて１０％以上の形質細胞を有するが、終末器官障害（ＣＲＡＢ）の証拠はない。さらなる実施形態では、個体は≧３ｇ／ｄＬの血清Ｍタンパク質を有し、骨髄にて１０％以上の形質細胞を有するが、任意でさらに終末器官障害の証拠はない。
【００１７】
一実施形態では、悪性血液疾患は、無症候性の意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）である。そのような実施形態では、個体は好ましくは骨髄にて１０％未満の形質細胞を有する。
【００１８】
本発明はまた、
（ａ）悪性血液疾患を有する又は有していた個体が微小な又は検出できない病変を有するかどうかを判定することと、
（ｂ）個体が微小な又は検出できない病変を有するのであれば、ＮＫＣＩＲを阻害する、治療上活性のある量の化合物で個体を治療すること
を含む方法も企図する。
【００１９】
さらに本発明は、
（ａ）個体が、くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）、無症候性の意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）又は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を有するかどうかを判定することと、
（ｂ）個体がＳＭＭ、ＭＧＵＳ又はＭＤＳを有するのであれば、ＮＫＣＩＲを阻害する、治療上活性のある量の化合物で個体を治療すること
を含む方法を包含する。
【００２０】
さらに、本発明は、
（ａ）第１の治療（たとえば、1以上の導入療法及び任意で１以上の地固め療法）によって悪性血液疾患を有する個体を治療することを含み、その際、第１の治療は化学療法剤、又はＩｍｉｄのような免疫調節剤であるので、個体が微小な又は検出できない病変を有し（たとえば、疾患が寛解にある及び／又は個体が第１の治療への応答を経験している）；
（ｂ）ＮＫＣＩＲを阻害する、治療上活性のある量の化合物によって、微小な又は検出できない病変を有する対象を治療することを含む方法を包含する。任意で、ステップ（ａ）はさらに悪性血液疾患を有する又は有していた個体が微小な又は検出できない病変を有するかどうかを判定することを包含する。
【００２１】
さらに、本発明は、悪性血液疾患を有する又は有していた個体が微小な又は検出できない病変を有するかどうかを検出する部分を含有し、個体が微小な又は検出できない病変を有するのであれば、ＮＫＣＩＲを阻害する、治療上活性のある量の化合物によって個体を治療する組成物を調製することにおける化合物の使用を企図する。
【００２２】
本発明はまた、個体がくすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）、無症候性の意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）又は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を有するかどうかを検出する部分を含有し、個体がＳＭＭ、ＭＧＵＳ又はＭＤＳを有するのであれば、ＮＫＣＩＲを阻害する、治療上活性のある量の化合物で個体を治療する組成物を調製することにおける化合物の使用を企図する。
【００２３】
さらに、本発明は、個体が微小な又は検出できない病変を有するように、悪性血液疾患を有する個体を治療し、第１の治療で個体を治療し、及び個体が微小な又は検出できない病変を有する個体を、ＮＫＣＩＲを阻害する、治療上活性のある量の化合物で個体を治療するための組成物を調製することにおける化合物の使用を含む。
【００２４】
一実施形態では、悪性血液疾患を有する又は有していた個体が、微小な又は検出できない病変を有する、寛解にある、部分寛解又は完全寛解を有する及び／又は特定の病態（たとえば、ＳＭＭ、ＭＧＵＳ、ＡＭＬ、ＣＭＬ、ＭＤＳ、ＭＭ等）を有するかどうかを判定することは、標準の医学指針に従って為される。
【００２５】
一実施形態では、悪性血液疾患を有する又は有していた個体が、微小な又は検出できない病変を有する、寛解にある、又は部分寛解若しくは完全寛解を有するかどうかを判定することは、異常な細胞の集団又は細胞の異常な数（たとえば、骨髄における形質細胞の比率）を特定することを含む。任意で、前記特定はフローサイトメトリーによる。任意で、方法はさらに、異常な細胞の集団を選別すること又は単離することを含む。
【００２６】
一実施形態では、悪性血液疾患を有する又は有していた個体が、微小な又は検出できない病変を有する、寛解にある、又は部分寛解若しくは完全寛解を有するかどうかを判定することは、細胞遺伝学的異常を検出すること（たとえば、核型を評価すること）を含む。
【００２７】
一実施形態では、微小な疾患の検出は、異常細胞の集団を選別することと；悪性血液疾患の発症の高いリスクと相関する遺伝的再構成を標的とする１以上の核酸に、選別した細胞から単離した核酸を接触させることを含み、その際、接触させることは、細胞遺伝学的異常の存在を判定し、それによって微小な疾患の存在を検出する。一実施形態では、遺伝的マーカーは、ＡＭＬを有する個体の生存の予後不良に相関するＦＬＴ３又はＮｐＭ１における変異である。別の実施形態では、遺伝的マーカーは免疫グロブリン（Ｉｇ）及び／又はＴ細胞受容体の遺伝子における再構成である。
【００２８】
一実施形態では、悪性血液疾患を有する又は有していた個体が、微小な又は検出できない病変を有する、寛解にある、及び／又は部分寛解若しくは完全寛解を有するか（たとえば、ＭＭにて）どうかを判定することは、個体における血清単クローン性タンパク質（Ｍタンパク質）のレベルを評価することを含む。
【００２９】
一実施形態では、個体がＳＭＭ又はＭＧＵＳを有するかどうかを判定することは、個体における血清単クローン性タンパク質（Ｍタンパク質）のレベルを評価することを含み、任意で、Ｍタンパク質のレベルが少なくとも３ｇ／ｄＬであれば、患者はＳＭＭを有すると判定される。一実施形態では、個体がＳＭＭ又はＭＧＵＳを有するかどうかを判定することは、個体における骨髄形質細胞を評価することを含み、任意で、個体が少なくとも１０％の骨髄形質細胞を有するのであれば、患者はＳＭＭを有すると判定される。
【００３０】
上記で議論したように、患者は、1以上の予測因子に基づいて予後不良であり、たとえば、進行の高いリスクにある。一実施形態では、表２の分類によれば、患者はＳＭＭを有し、第１群の範囲内である。一実施形態では、患者は遺伝子変異に基づいて予後不良であり、たとえば、患者は、ＡＭＬを有し、予後不良に関連するＦＬＴ３又はＮｐＭ１における変異を有する。
【００３１】
一実施形態では、ＮＫＣＩＲを阻害する化合物は単剤として使用される。別の実施形態では、ＮＫＣＩＲを阻害する化合物は少なくとも１つの他の治療剤と併用して投与される。
【００３２】
ＮＫＣＩＲを阻害する化合物は、前記ＮＫＣＩＲを阻害する結果、ＮＫ細胞の細胞傷害性を調節し得る。好ましくは、ＮＫＣＩＲを阻害する化合物は、ＮＫＣＩＲが介在するＮＫ阻害を阻止する又は中和する能力を有し、それによって、さもなければ遮断される標的細胞に対するＮＫ細胞活性を増強する抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片である。一実施形態では、抗体又は抗体断片は、キラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）又はその断片に対する抗体である。別の実施形態では、抗体又は抗体断片は、キメラの、ヒトの又はヒト化した抗体又は抗体断片である。さらに別の実施形態では、抗体又は抗体断片は、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＥ又はＩｇＭを含む。好ましくは、抗体又は抗体断片はiｇＧ１又はＩｇＧ４を含む。一実施形態では、抗体又は抗体断片は、エフェクター機能、半減期、タンパク質分解、ＦｃＲ結合又はグリコシル化の1以上に影響を及ぼす少なくとも１つの変異を含むＦｃドメインを含む。
【００３３】
特定の実施形態では、抗体又は抗体断片は、ＫＩＲ２ＤＬ１及びＫＩＲ２ＤＬ２／３と結合する抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片である。好ましくは、抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片は１−７Ｆ９と競合する。さらに好ましくは、抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片は１−７Ｆ９又は抗体断片である。抗ＫＩＲ抗体断片は１−７Ｆ９と同一の結合特性を有する１−７Ｆ９の断片であることが熟考される。態様の1つでは、抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片は、１−７Ｆ９のそれらと少なくとも９０％同一であるＶＬ及びＶＨのドメインを含む。別の態様では、抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片は、１−７Ｆ９のＶＬ及びＶＨのドメインを含む。さらに別の態様では、抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片のＶＬは１−７Ｆ９のＶＬのＣＤＲを含む。さらなる態様では、抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片のＶＨは１−７Ｆ９のＶＨのＣＤＲを含む。
【００３４】
一実施形態では、抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片は、そのアミノ酸配列が１−７Ｆ９に対する少なくとも８０％の配列同一性、１−７Ｆ９に対する少なくとも９０％の配列同一性、１−７Ｆ９に対する少なくとも９５％の配列同一性、又は１−７Ｆ９に対する少なくとも９８％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。別の実施形態では、抗ＫＩＲ抗体又は抗体断片は、１−７Ｆ９と同様に無傷のＫＩＲ２ＤＬ１又はＫＩＲ２ＤＬ２／３の同じ線形エピトープ又は立体構造エピトープに特異的に結合し、及び／又は無傷のＫＩＲ２ＤＬ１又はＫＩＲ２ＤＬ２／３の同じ線形エピトープ又は立体構造エピトープに結合するのに１−７Ｆ９と競合する。
【００３５】
別の実施形態では、抗体又は抗体断片は、ＣＤ９４、ＮＫＧ２（たとえば、ＮＫＧ２Ａ及びＮＫＧ２Ｅ）及びＬＩＲ（たとえば、Ｂ５に対するＬＩＬＲＢ１）又はそれらの断片から成る群から選択されるＮＫＣＩＲに対する抗体である。
【００３６】
本発明の一実施形態では、抗ＮＫＣＩＲ抗体は、治療上有効な量の抗ＮＫＣＩＲ抗体を含む薬学上許容可能な組成物として投与される。態様の１つでは、ＮＫＣＩＲ抗体は、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、又は少なくとも約1ヵ月の期間についてＮＫ細胞上のＮＫＣＩＲの実質的に完全な飽和を生じる量で投与される。
【００３７】
態様の１つでは、治療期間の間、重大な不飽和化を起こさずに、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、又は少なくとも約1ヵ月の期間についてＮＫ細胞上のＮＫＣＩＲの実質的に完全な飽和を生じる量及び頻度で抗体が投与される。一実施形態では、1以上のＮＫＣＩＲ抗体の治療上活性のある量は、抗体の投与の後、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、又は少なくとも約1ヵ月の期間についてＮＫ細胞上のＮＫＣＩＲの実質的に完全な飽和を生じるような抗体の量であり、抗体は、約２週間ごとに1回、約１ヵ月ごとに１回、又は約２ヵ月以上ごとに１回の投与頻度で数回投与され、その後の投与は約２週間又は約１ヵ月隔てられる。
【００３８】
態様の１つでは、抗体は、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、又は少なくとも約1ヵ月の期間についてＮＫ細胞上のＮＫＣＩＲの実質的に完全な飽和を生じ、治療期間の間、重大な不飽和化を可能にする量及び頻度で投与される。一実施形態では、1以上のＮＫＣＩＲ抗体の治療上活性のある量は、抗体の投与の後、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、又は少なくとも約1ヵ月の期間についてＮＫ細胞上のＮＫＣＩＲの実質的に完全な飽和を生じるような抗体の量であり、抗体は、約２週間ごとに1回、約１ヵ月ごとに１回、又は約２ヵ月ごとに１回の投与頻度で数回投与され、その後の投与は約２週間又は約１ヵ月隔てられる。
【００３９】
別の実施形態では、抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１．０ｍｇ／ｋｇ、又は約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇの投与量範囲で投与される。好ましくは、抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片は大体２ヵ月ごとに１回投与される。
【００４０】
別の態様では、上述の種々の方法のいずれか１つは、１以上の追加の抗癌剤、たとえば、化学療法剤による追加の化学療法の適用によってさらに任意で改変され得る。
【００４１】
別の実施形態では、本発明に係る抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片及び薬学上許容可能なキャリア又は賦形剤を含有するヒト治療法用の医薬組成物が提供され、それは、平均的なヒト対象（体重約４５〜９０ｋｇ）に投与する際、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１．０ｍｇ／ｋｇ、又は約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇの投与量範囲を生じる。特定の実施形態では、平均的なヒト対象への投与の際、組成物は約０．１〜０．３ｍｇ／ｋｇ、さらに具体的には０．２ｍｇ／ｋｇ又は約０．３ｍｇ／ｋｇの投与範囲を生じる。
【００４２】
本発明はまた、疾患を有する個体を治療し、及び／又はそれを必要とする個体でＮＫ細胞活性を強化するための方法も企図する。方法は、ヒト患者にて約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約０．３ｍｇ／ｋｇの投与量を提供する量で抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片、及び薬学上許容可能なキャリアを個体に投与することを含み、その際、抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片は１ヵ月当たり、１回以下で投与される。さらに、本発明は、ヒト治療法用の医薬組成物の調製のための、ヒト患者にて約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約０．３ｍｇ／ｋｇの投与量を提供する量での抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片、及び薬学上許容可能なキャリアの使用を企図する。一実施形態では、抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片は２ヵ月ごとに１回以下で投与される。別の実施形態では、抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片は、１ヵ月当たり１回〜２か月ごとに１回の間で投与される。さらに別の実施形態では、抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体は、ヒト患者にて約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約０．２ｍｇ／ｋｇの投与量にて提供される。
【００４３】
本明細書で提供される本発明の記載にてこれらの態様はさらに完全に記載され、本発明の追加の態様、特徴及び利点はその記載から明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】ほとんどのＡＭＬ患者についての治療戦略を示す図であり、それは、２つの一般的なフェーズ：導入療法及び寛解後療法に分けられる。
【図２】（ＷＯ２００６／００３１７９の図１２）抗体ＤＦ２００及びＰａｎ２Ｄ（ＮＫＶＳＦ１）の軽鎖可変領域、及び軽鎖ＣＤＲのアミノ酸配列の比較配置を提供する図である。（Ａ）ＤＦ２００（配列番号１）及びＰａｎ-２Ｄ（配列番号２）の抗ＫＩＲ可変軽鎖（ＶＬ）領域。アミノ酸配列上の数は未成熟（非分泌）免疫グロブリンにおけるＭｅｔ（＋１）の翻訳の開始に対する位置を示す。（Ｂ）ＣＤＲ−Ｌ１配列の配置。正常ではＣｙｓ：の前の残基。Ｔｒｐ：の後の残基。通常、Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ。長さ１０〜１７ａａ。（Ｃ）ＣＤＲ−Ｌ２配列の配置。一般にＩｌｅ−Ｔｙｒ：の前の残基。長さ：７ａａ。始まり：ＣＤＲ−Ｌ１の終了後およそ１６ａａ。始まり：分泌タンパク質の開始からおよそ２４ａａ。（Ｄ）ＣＤＲ−Ｌ３配列の配置。Ｃｙｓ：の前の残基。Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＸＸＸ−Ｇｌｙ：の後の残基。長さ：７〜１１ａａ。始まり：ＣＤＲ−Ｌ２の終了後およそ３３ａａ。
【図３】（ＷＯ２００６／００３１７９の図１３）抗体ＤＦ２００の重鎖可変領域、重鎖ＣＤＲを提供する図である。（Ａ）ＤＦ-２００のＶＨ領域、未成熟タンパク質。分泌された成熟ＶＨは２０位：残基Ｑで開始する。ＶＨ領域は残基Ｓで終了し、その後、定常領域（示さず）が続く。（Ｂ）ＣＤＲ−Ｈ１.Ｃｙｓ−ＸＸＸ−ＸＸＸ−ＸＸＸの前の残基。Ｔｒｐ、一般にＴｒｐ−Ｖａｌ又はＴｒｐ−Ｉｌｅの後の残基。長さ：１０〜１４ａａ。始まり：分泌タンパク質の開始からおよそ２２〜２６ａａ。（Ｃ）ＣＤＲ−Ｈ２.Ｌｅｕ−ＧIｕ−Ｔｒｐ-Ｈｅ−ＧIｙの前の残基、しかし、他の変異も可能である。Ｌｙｓ又はＡｒｇ／Ｌｅｕ又はＨｅ又はＶａＩ又はＰｈｅ又はＴｈｒ又はＡｌａ／Ｔｈｒ又はＳｅｒ又はｌｉｅ又はＡｌａ。長さ：１６〜２０ａａ。始まり：ＣＤＲ-Ｈ１の終了後およそ１５ａａ。（Ｄ）ＣＤＲ−Ｈ３。Ｃｙｓ−ＸＸＸ−ＸＸＸ（通常Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ａｒｇ）の前の残基。Ｔｒｐ−ＧＩｙ−ＸＸＸｖＧＩｙの後の残基。長さ：３〜２５ａａ。始まり：ＣＤＲ-Ｈ２の終了後およそ３３ａａ。
【図４】（ＷＯ２００６／００３１７９の図１４）ヒト抗体１−７Ｆ９のＶＨ及びＶＬの配列のヌクレオチド配列及びアミノ酸配列を表す図である。（Ａ）ＨｕＫＩＲ  １−７Ｆ９の成熟可変軽鎖の翻訳。（Ｂ）ＨｕＫＩＲ  １−７Ｆ９の成熟可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列。（Ｃ）ＨｕＫＩＲ  １−７Ｆ９の成熟可変重鎖の翻訳。（Ｄ）ＨｕＫＩＲ  １−７Ｆ９の成熟重鎖をコードするヌクレオチド配列。
【図５】（ＷＯ２００６／００３１７９の図１５）モノクローナル抗体１−７Ｆ９、ＤＦ２００（ＶＨ配列：配列番号１９、ＶＬ配列：配列番号２１）及びＰａｎ２Ｄ（ＮＫＶＳＦ１；ＶＨ配列：配列番号２０、ＶＬ配列：配列番号２２）のＶＨ及びＶＬの配列のアミノ酸配列を示す図である。ＣＤＲは四角で囲む。
【図６】（ＷＯ２００６／００３１７９の図２０）ＫＩＲ２ＤＬ１配列の中で示されるＫＩＲ２ＤＬ１における１−７Ｆ９の結合エピトープを示す図である。１−７Ｆ９から４．０Ａ距離の範囲内のアミノ酸を灰色と黒の背景で強調する。黒の背景で強調したアミノ酸は１−７Ｆ９への水素結合に関与する。図２〜６で列記した配列番号は、本出願のクレームの直前のページに含有されるＷＯ２００６／００３１７９で記載された配列表における配列番号に相当する。
【発明を実施するための形態】
【００４５】
本発明は、悪性血液疾患又は前悪性血液疾患を有する又は以前有していた個体を治療する方法を提供する。方法は、治療上活性のある量の、ＮＫ細胞阻害性受容体（ＮＫＣＩＲ）を阻害する化合物を個体に投与することを含む。化合物は、個体が微小な又は検出できない病変を有するときに個体に投与される。
【００４６】
本明細書に記載されるヒト臨床試験は、ＮＫ細胞の細胞傷害性に関与するＮＫ細胞阻害性受容体を遮断する化合物、たとえば、抗ＮＫＣＩＲ抗体による治療は、化合物によって治療された際、悪性血液疾患に罹っていたが、寛解にあった及び／又は微小な若しくは検出できない病変を有した患者にて無病生存期間を大きく延長することを示した。
【００４７】
抗体
特に言及されない限り、又は文脈によって明瞭に反論されない限り、本発明の文脈における用語、抗体は、（ａ）典型的な生理的条件下で有意な時間、少なくとも１つの標的抗原に特異的に結合し、及び／又は（ｂ）その標的ＮＫＣＩＲに関連する生理的応答を調節する、たとえば、ＫＩＲ調節のＮＫ細胞活性を調節する能力を有する免疫グロブリン（Ｉｇ）分子、Ｉｇ分子の断片、又はそのいずれかの誘導体を指す。この点での有意な時間は、たとえば、酵素結合免疫吸収アッセイ（ＥＬＩＳＡ）のような標準的な免疫アッセイにて抗体／抗原の複合体を検出するのに好適な任意の時間を意味する。通常、有意な時間は、少なくとも約３０分、少なくとも約４５分、少なくとも約１時間、少なくとも約２時間、少なくとも約４時間、少なくとも約８時間、少なくとも約１２時間、約２４時間以上、約４８時間以上等の時間である。
【００４８】
免疫グロブリンは、重鎖（たとえば、α、δ、ε、γ及びμ鎖）及び軽鎖（たとえば、κ及びλ鎖）を含む構造的に関連するタンパク質のクラスである。ヒトでは、免疫グロブリンは、それに従って重鎖がＩｇ分子に含有される５つの主なクラス（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭ）に分けられ得る。
【００４９】
免疫グロブリンの構造はその特徴が明確にされている。たとえば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌ，Ｗ．，編、第２版、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照のこと。免疫グロブリンの最も一般的な型であるＩｇＧ分子は、２対のポリペプチド鎖を含み、低分子量鎖である軽鎖（Ｌ）の一対と重鎖（Ｈ）の一対であり、４つはすべてジスルフィド結合によって互いに結合する。手短には、重鎖のそれぞれは通常、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲ又はＶＨと略記する）及び重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は通常、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３から構成される。各軽鎖は通常、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲ又はＶＬと略記する）及び軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は通常１つのドメイン、ＣＬで構成される。ＶＨ及びＶＬの領域はさらに超可変性の領域（又は超可変領域、それは、構造的に定義されるループの配列及び形態が超可変であり得る）に分けることができ、それは、相補性決定領域（ＣＤＲ）とも呼ばれ、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるさらに保存されている領域が組み入れられている。完全長の天然に産生される抗体では、ＶＨ及びＶＬはそれぞれ通常、以下の順：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端に配置される３つのＣＤＲと４つのＦＲで構成される（超可変ループ領域の場合、それらは、軽鎖可変ドメインでは、ＦＲＬ１、ＣＤＲＬ１等、又はＬ１、Ｌ２、Ｌ３、及び重鎖ドメインではＨ１、Ｈ２、Ｈ３とも呼ばれ得る（たとえば、Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)を参照））。通常、この領域のアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１）に記載された方法によって実施される（「Ｋａｂａｔにおけるような可変ドメイン残基の番号付け」及び「Ｋａｂａｔに従って」のような語句は本明細書では、重鎖可変ドメイン又は軽鎖可変ドメインについてのこの番号付け方式を指す）。この番号付け方式を用いて、ペプチドの線形アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲ又はＣＤＲの短縮又はそれへの挿入に相当するわずかな又は追加のアミノ酸を含有し得る。たとえば、重鎖可変ドメインは、ＣＤＲＨ２の残基５２の後に単一アミノ酸の挿入（Ｋａｂａｔに従って残基５２ａ）及び重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入残基（Ｋａｂａｔに従って残基８２ａ、８２ｂ及び８２ｃ）を含み得る。残基のＫａｂａｔ番号付けは、「標準の」Ｋａｂａｔ番号付けした配列を持つ抗体の配列の相同の領域での配置によって所与の抗体について決定され得る。
【００５０】
上記で示したように、抗ＮＫＣＩＲ抗体は、ＮＫＣＩＲに特異的に結合する能力を保持する抗体「断片」の形態であり得る（又はそれを含み得る）。そのような抗体断片は、本明細書のどこかで議論される完全長の抗体に関連する前述の特徴の１つ又は組み合わせを適当な程度持つことを特徴とし得る（たとえば、多数の抗体断片はＦｃドメインを欠くので、抗体関連の補体機能を誘導しない又は促進しない）。抗体の抗原結合機能は、どの数の好適なその断片によっても実行することができる。抗体断片の例には、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨＩのドメインから本質的に成る一価の断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ）２及びＦ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域にてジスルフィド結合で結合する２つのＦａｂ断片を含む二価の断片；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ1ドメインから本質的に成るＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨのドメインから本質的に成るＦｖ断片；（ｖ）ＶＨドメインから本質的に成るｄＡｂ断片（(Ward et al., (1989) Nature 341 :544-546）及び（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬ及びＶＨは別々の遺伝子によってコードされるが、組換え法を用いて、ＶＬ及びＶＨの領域が対になって一価の分子を形成する単一タンパク質として作られるのを可能にする合成リンカーによって、それらを連結することができる（単鎖抗体又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；たとえば、Bird et al. (1988) Science 242:423-426: and Huston et al. ( 1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883を参照）。そのような単鎖抗体も、言及されない限り、又は文脈によって明瞭に示されない限り、たとえば、抗体断片及び抗体様ペプチド／分子のような用語の範囲内に包含される。たとえば、二重特異性抗体のような単鎖抗体の他の形態もこれらの用語に包含されることが意図される。二重特異性抗体は、二価の二重特異性の抗体であり、ＶＨ及びＶＬのドメインが単鎖ポリペプチドで発現されるが、同一鎖上の２つのドメイン間で対を形成するには通常短すぎるリンカーを用いて、それによって、互いに相補的なドメインとの対を作らせ、２つの抗原結合部位を創りだす（たとえば、Holliger, P., et al. ( 1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448; Poljak, R. J., et al. (1994) Structure 2: 1 121 -1 123; and Cao et al. (1998), Bioconjugate Chem. 9, 635-644を参照）。完全長の抗体と類似する結合特性を有するが、そのような抗体断片は、まとめて且つそれぞれ独立して、本発明の独特の特徴であり、抗体とは異なる生物学的な及び／又は物理化学的な特性及び有用性を示す。本発明によって提供されるこれらの及び他の有用な抗体断片及び抗体様分子を本明細書でさらに議論する。言及されない限り、又は文脈によって明瞭に反論されない限り、好適な抗体断片は、本明細書で記載される本発明の組成物及び方法にて抗体の代理として使用することができ、逆もまた同様であることが一般に理解されるべきである。
【００５１】
一般的に、用語、抗体にはポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体（ｍＡｂ）が含まれる。用語「モノクローナル抗体」は、均一の構造及び特異性を有する均質な抗体集団を含む組成物を指す。ポリクローナル抗体は通常、免疫的に感作した動物の血清に由来するが、組換え法によって導出することもできる。抗ＫＩＲ抗体は、それが産生される方法にかかわらず、モノクローナル抗体とみなすことができる。
【００５２】
生成されたとき抗体はアイソタイプを持つことができ、その後、当該技術で周知である従来の方法を用いて抗体のアイソタイプを転換することができる。そのような技法には、直接組換え法（たとえば、米国特許第４，８１６，３９７号を参照）、細胞／細胞融合法（たとえば、米国特許第５，９１６，７７１号を参照）及び当該技術で既知の他の好適な技法が挙げられる。従って、たとえば、種々の治療用途のために、たとえば、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＥ又はＩｇＭの抗体にアイソタイプ転換することによって、一方又は双方の親抗体のアイソタイプに関して、本発明により提供される多重特異性の多価抗体のエフェクター機能を「変化させ」得る。
【００５３】
ＮＫ細胞活性調節受容体（ＮＫＣＡＭＲ）
ＮＫ細胞活性は、ＮＫ細胞活性調節受容体（「ＮＫＣＡＭＲ」又は単に「ＡＭＲ」）によって調節されるが、それは、たとえば、ＭＨＣ−I分子、ＭＨＣ−Iホモログ、又は標的細胞上に発現される他の生体分子のような種々のリガンドに特異的であり得る。個体におけるＮＫ細胞は通常、多数の活性化受容体及び阻害性受容体を提示している。ＮＫ細胞の活性は、これらの活性化受容体及び阻害性受容体を介して伝達されるシグナルのバランスによって調節される。ＮＫＣＡＭＲの各型を以下で順に手短に議論する。
【００５４】
体細胞が、たとえば、癌の進行又は感染のようなストレス下にある場合、たとえば、ＭＩＣＡ及びＭＩＣＢのような種々の分子が通常、ストレスのある細胞の表面上に表示され、正常で表示されるＭＨＣ−I分子は細胞表面から「失われる」（数の減少及び／又は免疫系によって「異物」として「見られ」ないようにグリコシル化される）。ＮＫＣＡＭＲは、細胞のストレス、疾患及び障害に関連するＮＫの標的である可能性がある細胞におけるこれらの及びその他の変化に敏感である。
【００５５】
ほとんどのＮＫＣＡＭＲは、２つのクラスのタンパク質：免疫グロブリン（Ｉｇ）様の受容体スーパーファミリー（ＩｇＳＦ）又はＣ型レクチン様の受容体（ＣＴＬＲ）スーパーファミリー（Radaev and Sun, Annu. Rev. Biomol. Struct. 2003 32:93-114）のうちの１つの属すると思われる。しかしながら、他の形態のＮＫＣＡＭＲが知られている。多数のＮＫＣＡＭＲの構造は解明されている（同上）。本発明をよりよく説明するには、よく理解されているＮＫＣＡＭＲの型をその特定の例を参照してここで記載する。しかしながら、本明細書で明白に記載されるそれら受容体に加えて、幾つかの追加のＮＫＣＡＭＲが知られており（たとえば、Farag et al., Expert Opin. Biol. Ther. 3(2):237-250を参照）、本明細書で記載される本発明の組成物及び方法は通常、これら及びその他のＮＫＣＡＭＲに適用できるであろう。
【００５６】
ＮＫ細胞活性化受容体（ＮＫＣＡＲ）
多数のＮＫ細胞活性化受容体（ＮＫＣＡＲ）はＩｇスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）に属する（そのような受容体は本明細書ではＩｇ様受容体又は「ＩＬＲ」とも呼ばれ得る）。活性化ＩＬＲＮＫ受容体（ＡＩＬＲ）には、たとえば、ＣＤ２、ＣＤ１６、ＣＤ６９、ＤＮＡＸアクセサリー分子−１（ＤＮＡＭ−１）、２Ｂ４、ＮＫ１．１；キラー免疫グロブリン（Ｉｇ）−様活性化受容体（ＫＡＲ）；ＩＬＴ／  ＬＩＲ；並びにＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６及びＮＫｐ３０のようなナチュラル細胞傷害性受容体（ＮＣＲ）が挙げられる。幾つかのその他のＮＫＣＡＲはＣＬＴＲスーパーファミリーに属する（たとえば、ＮＫＲＰ−１、ＣＤ６９；ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｃ及びＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｅヘテロ二量体、ＮＫＧ２Ｄホモ二量体、及びマウスでは、Ｌｙ４９の活性化アイソフォーム（たとえば、Ｌｙ４９Ａ−Ｄ）。さらに他のＮＫＣＡＲ（たとえば、ＬＦＡ−１及びＶＬＡ−４）はインテグリンタンパク質スーパーファミリーの属し、他の活性化受容体はさらに他の区別可能な構造を有し得る。多数のＮＫＣＡＲはＭＨＣ−I分子に結合する細胞外ドメイン及び相対的に短く、阻害性ＮＫ受容体に特徴的な阻害性（ＩＴＩＭ）シグナル伝達モチーフを欠く細胞質ドメインを持つ。これら受容体の膜貫通ドメインは通常、たとえば、ＣＤ３ζ、ＦｃεＲＩγＤＡＰ１２及びＤＡＰ１０（２Ｂ４、たとえば、この一般規則の例外と思われる）のようなシグナル伝達関連分子との会合を円滑にする荷電したアミノ酸残基を含むが、それらは、ＮＫ細胞活性化シグナルを伝搬する「免疫受容体チロシン系活性化モチーフ」（ＩＴＡＭｓ）と呼ばれる短いアミノ酸配列を含有する。受容体２Ｂ４は、細胞質尾部に４つのいわゆる免疫受容体チロシン系スイッチモチーフ（ＩＴＳＭ）を含有し；ＩＴＳＭモチーフはまた、ＮＫＣＡＲ  ＣＳ  １／ＣＲＡＣＣ及びＮＴＢ−Ａに見つけることもできる。２Ｂ４及びＳＬＡＭの細胞質ドメインは、活性化受容体及び阻害性受容体に存在するモチーフに似る、ＳＨ２ドメインを含有するタンパク質ＳＨＰ−２及びＳＡＰ（ＳＬＡＭ関連タンパク質）を動員することができる１以上の独特のチロシン系モチーフを含有する。
【００５７】
ストレスが誘導する分子、たとえば、ヒトにおけるＭＩＣ−Ａ、ＭＩＣ−Ｂ及びＵＬＢＰ並びにマウスにおけるＲａｅ−１及びＨ−６０は、たとえば、ＮＫＧ２Ｄホモ二量体のようなＮＫＣＡＲについてのリガンドとして役立つことができる。細胞性の炭水化物、病原性抗原及び抗体もＮＫＣＡＲのリガンドであり得る。たとえば、ＮＫＲ−Ｐ１は、炭水化物リガンドに結合し、特に異常なグリコシル化パターンを示す腫瘍細胞に対して、ＮＫ細胞活性化を始動させ得る。ウイルス性の血球凝集素も、たとえば、ＩＬＲ  ＮＫＣＡＲ  ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６及びＮＫｐ８０のようなナチュラル細胞傷害性受容体（ＮＣＲ）のリガンドとして役立ち得る。
【００５８】
ＮＫＣＡＲは、活性化シグナルを直接伝達することができ、又はアダプター分子若しくは他の受容体と併せて作用することができる（単独で有効であることもある受容体間の協調した応答の文脈で、又はコレセプター／受容体のペアリングの文脈で）。たとえば、ＮＫＣＡＲ  ＮＣＲは通常、ＩＴＡＭを欠くので、その膜貫通ドメインで荷電した残基を介してアダプター分子に結合し（たとえば、ＮＫｐ３０はＣＤ３ζ鎖と会合し；ＮＫｐ４４はＤＡＰ１２及び／又はＫＡＲＡＰと会合し；ＮＫｐ４６はＣＤ３ζ鎖及びＦｃＲＩγに結合する）、それは、同様に、ＮＫ細胞活性化シグナルを伝搬するためにタンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）を動員することができる。ＮＫ細胞が介在するＡＤＣＣおよびサイトカイン産生に重要なＮＫＣＡＲであるＣＤ１６は、ＣＤ３ζ鎖及び／又はγ鎖で形成されるホモ二量体又はヘテロ二量体に会合する。ＮＫＧ２Ｄは、ＮＫ細胞の活性化においてＮＣＲ及びＮＫＣＡＲと相補的及び／又は相乗的な役割を担うと思われる。特定の標的に対するＮＫ細胞の活性化は、複数のＮＫＣＡＲ若しくはＮＣＲの協調した活性化、又は単一受容体の作用のみを必要とし得る。２Ｂ４及びＮＫｐ８０を含む他のターゲティング表面分子はＮＫ細胞活性化のコレセプターとして機能すると思われる。
【００５９】
ヒトＫＩＲ（たとえば、ＫＩＲ２ＤＳ及びＫＩＲ３ＤＳ）及びマウスＬｙ−４９タンパク質（たとえば、Ｌｙ−４９Ｄ及びＬy−４９Ｈ）の活性化アイソフォームは一部のＮＫ細胞で発現される。これらの分子は阻害性モチーフ（ＩＴＩＭ）を欠くことによって、相対的に短い細胞質ドメインとシグナル伝達ポリペプチド、たとえば、ＤＡＰ１２のジスルフィド結合二量体と会合する荷電した膜貫通領域を持つ点でそれらの阻害性の相方と異なる（以下で議論される）。
【００６０】
ＮＫＣＩＲ  ＮＫ細胞阻害性受容体
ＩＬＲ（ＩｇＳＦ）ＮＫ細胞阻害性受容体（ＮＫＣＩＲ）（Ｉ）はＨＬＡ−Ａ、−Ｂ、又は−Ｃのアロタイプに特異的な多数の異なるヒトＫＩＲを含む。ＫＩＲは、特定のアロタイプ内で複数の対立遺伝子を認識し得る、たとえば、ＫＩＲ２ＤＬ１はＨＬＡ−Ｃｗ２、４及び６のアロタイプを認識する。ＣＴＬＲスーパーファミリーの阻害性受容体はＣＤ９４／ＮＫＧ２タンパク質ファミリーのメンバーを含むが、それは、たとえば、ＮＫＧ２ＡのようなＮＫＧ２ファミリーの種々のメンバーとともにレクチン様ＣＤ９４によって形成される受容体を含み、それぞれヒト及びマウスにおける非古典的クラスＩ分子、ＨＬＡ−Ｅ及びＱａ−１を認識し、マウスにて古典的なクラスＩＭＨＣ分子を認識するマウスのＬｙ４９分子を認識する。さらに対照的に、ＮＫＲＰ１Ａ、Ｎｋｒｐｌｆ及びＮｋｒｐｌｄは、そのリガンドがＭＨＣ関連ではなく、たとえば、樹状細胞、マクロファージ及びリンパ球のような種々の細胞型で発現されるＣＴＬＲファミリーメンバーである阻害性受容体である。
【００６１】
ＭＨＣクラスＩ特異的なＮＫＣＩＲには、ＣＴＬＲ  Ｌｙ−４９受容体（マウス）；ＩｇＳＦ受容体白血球免疫グロブリン様受容体（ＬＩＲ）（ヒト）、ＫＩＲ（たとえば、ｐ５８及びｐ７０キラー細胞免疫グロブリン様受容体、ヒト）及びＣＴＬＲ  ＣＤ９４／ＮＫＧ２受容体（マウス及びヒト）が挙げられる。ＭＨＣ−I特異的なＮＫＣＩＲはすべて、ＭＨＣ−I結合の経過中のその細胞質ドメインにおけるＩＴＩＭのリン酸化及びリン酸化されたＩＴＩＭへのチロシンホスファターゼ（たとえば、ＳＨＰ−１及びＳＨＰ−２）の動員が関与し、ＮＫＣＡＲを介したＮＫの活性化に関与する近傍のタンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）の阻害を生じる共通する阻害メカニズムを使用すると思われる。
【００６２】
ＣＴＬＲ糖タンパク質から形成される阻害性のＣＤ９４／ＮＫＧ２ヘテロ二量体は、ＩＴＩＭを運ぶＮＫＧ２分子（たとえば、ＮＫＧ２Ａ）を含み、非古典的なＭＨＣ−I分子（たとえば、ヒトにおけるＨＬＡ−Ｅ及びマウスにおけるＱａ−１）に結合する。
【００６３】
白血球免疫グロブリン様受容体には、２又は４のＩｇドメインを含有し、ＫＩＲポリペプチドに構造的に関連する幾つかのメンバーが含まれる。たとえば、Ｆａｎｇｅｒら、１９９９、Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌ．６６：２３１−２３６を参照のこと。ＬＩＲにはサブファミリーＡ及びＢが含まれ、たとえば、ＬＩＲ−１〜ＬＩＲ−８（それらの幾つかは、ＩＬＴ−１、IＬＴ−２、IＬＴ−３、ＩＬＴ−４、ＩＬＴ−５及びＩＬＴ−６を含むＩＬＴポリペプチドとも呼ばれる）が含まれる。ポリペプチドＬＩＲ−１、ＬＩＲ−２、ＬＩＲ−３、ＬＩＲ−５及びＬＩＲ−８はすべて２以上のＩＴＩＭ阻害性シグナル伝達ドメインを含有する。
【００６４】
阻害性Ｌｙ−４９受容体は、マウスのＩＩ型膜ジスルフィド結合ホモ二量体ＣＴＬＲ糖タンパク質であり、種々のＭＨＣ−Ｉ分子に結合し、通常、優勢な阻害性（負の）シグナルをＮＫ細胞に送達する。Ｌｙ−４９Ａは、たとえば、ＭＨＣ−Ｉ分子Ｈ−２Ｄｄのα／α２ドメインに結合するが、Ｌｙ−４９ＣはＨ−２Ｋｂに結合する。ヒトＮＫ細胞はマウスＬｙ−４９受容体のホモログを欠くと思われる。代わりに、ヒトＮＫ細胞はＫＩＲを発現するが、それはマウスＮＫ細胞には見つかっていない。ヒトＫＩＲ及びマウスＬｙ−４９受容体は構造的相同性を欠くが、それらは、機能的に相同分子種性であり：受容体の双方の型は標的細胞上のＨＬＡクラスＩに結合してＮＫ介在性の細胞障害性の阻害を生じる。
【００６５】
キラー細胞免疫グロブリン様受容体ＫＩＲ
ＮＫＣＩＲの重要なタイプはＫＩＲである。一般に、ＫＩＲは、ほとんどのヒトＮＫ細胞と同様にＴ細胞の一部で発現される、１〜３の細胞外免疫グロブリン様ドメインを含む細胞表面の糖タンパク質である。多数のＫＩＲが十分に性状分析されている（たとえば、http://www.ncbi.nlm.nih.gov books/bookres.fcgi/mono_003/chldl .pdfの全米バイオテクノロジー情報センターのウェブサイトから入手可能なCarrington and Norman, The KIR Gene Cluster, May 28, 2003を参照）。ヒトＫＩＲにはＫＩＲ２ＤＬ及びＫＩＲ３ＤＬが挙げられる。ＫＩＲはまた、たとえば、ＣＤ１５８ｅｌ、ＣＤ１５８ｋ、ＣＤ１５８ｚ、ｐ５８ＫＩＲ  ＣＤ１５８ｅｌ（ｐ７０）、ＣＤ２４４等のような種々の他の名称でも呼ばれ得る（たとえば、そのそれぞれはその全体が本出願に組み入れられる米国特許出願２００４００３８８９４、Radaev et al., Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct., 32:93- 1 14 (2003), Cerweknka et al., Nat. Rev. Immunol. 1 :41 -49 (2001 ); Farag et al., Expert Opin. Biol. Ther., 3(2):237-250 (2003); Biassoni et al., J. Cell. Mol. Med., 7(4):376-387 (2003); and Warren et al., British J. Haematology, 121 :793-804 (2003)を参照）。多数のＫＩＲの構造が解明されており、これらのタンパク質間で顕著な構造的類似性を示している。たとえば、Ｒａｄａｅｖら、上記を参照のこと。
【００６６】
ＫＩＲは構造的にも機能的にも分類することができる。たとえば、ほとんどのＫＩＲは２つのＩｇドメイン（５８ｋＤａ  ＫＩＲ２Ｄ  ＫＩＲ）を有するが、他は３つのＩｇドメイン（７０ｋＤａ  ＫＩＲ３Ｄ  ＫＩＲ）を有し、それぞれｐ５８分子及びｐ７０分子と呼ばれることがある。ＫＩＲは細胞質尾部の長さでも異なる。通常、相対的に長い細胞質尾部（Ｌ）を持つＫＩＲは阻害性シグナルを送達するのに対して、短い細胞質尾部（Ｓ）を持つＫＩＲはＮＫ細胞又はＴ細胞の応答を活性化することができる。従って、ＫＩＲの命名法は、細胞外ドメインの数（ＫＩＲ２Ｄ又はＫＩＲ３Ｄ）及び細胞質尾部が長い（ＫＩＲ２ＤＬ又はＫＩＲ３ＤＬ）か、短い（ＫＩＲ２ＤＳ又はＫＩＲ３ＤＳ）かに基づくことができる。ＫＩＲについての追加の命名法情報は、本発明の以下の詳細な説明で提供される。「ＫＩＲファミリー」の一部のメンバーは、ＮＫＣＡＲであり、さらに詳しくは「ＫＡＲ」（たとえば、ＫＩＲ２ＤＳ２及びＫＩＲ２ＤＳ４）であり；それらは通常、免疫調節モチーフ（ＩＴAＭ）を有するアダプター分子（たとえば、ＤＡＰ１２）と会合する1以上の膜貫通残基（たとえば、Ｌｙｓ）を含む。阻害性ＫＩＲの細胞質内部分は通常、ホスファターゼを動員する１以上のＩＴAＭを含む。阻害性ＫＩＲはＨＬＡ分子のα1／α２ドメインに結合する。阻害性ＫＩＲは通常、活性にアダプター分子の会合を必要としないと思われる。言及されない限り、「ＫＩＲ」、「ＫＩＲｓ」等のような用語は、「ＫＩＲファミリー」のＮＫＣＩＲメンバーを指し、「ＫＡＲ」、「ＫＡＲｓ」等のような用語は、「ＫＩＲファミリー」のＮＫＣＡＲのメンバーを指す。
【００６７】
ＫＩＲはＭＨＣ−Ｉ分子（たとえば、特定のＨＬＡクラスＩアロタイプ）に結合することができ、通常、反対に作用する負のシグナルの伝達を生じ、ＮＫ細胞への刺激性の活性化シグナルを無効にし得るが、それによって関連する標的の可能性がある細胞をＮＫ細胞が殺傷するのを妨げ得る（明らかに、ＩＴＩＭのリン酸化及びチロシンホスファターゼ（たとえば、ＳＨＰ−１及びＳＨＰ−２のようなタンパク質チロシンホスファターゼを含有するＳＨ２ドメイン）の動員を介して、ＰＴＫ（たとえば、Ｓｙｋ、ＴｃＲ及び／又はＺＡＰ７０）の脱リン酸化及び／又はＬＡＴ／ＰＬＣ複合体形成の阻害及びＩＴＡＭカスケードの関連する崩壊を導く）。ウイルスはそれが感染した細胞にてクラスＩのＭＨＣの発現を抑制することが多いので、そのようなウイルス感染細胞は、ＮＫ細胞による殺傷に感受性になる。癌細胞もクラスＩのＭＨＣの発現を減らす又は失くすことが多いので、これらの細胞もＮＫ細胞による殺傷に感受性になり得る。感染細胞は、グリコシル化という点でＭＨＣに結合されたタンパク質を変化させることもできる。これが起きると、細胞が発現するＭＨＣ−Ｉ／タンパク質の複合体が変化する。ＮＫ関連のＫＩＲがこれらの「外来」複合体に結合することができなければ、阻害性シグナルを生成することができず、溶解が開始する。
【００６８】
確認された阻害性ＫＩＲはすべて、ＫＩＲの亜型に応じてＨＬＡ／ＭＨＣ抗原の様々なサブセットと相互作用すると思われる。ヒトでは、２つのＩｇドメインを有するＫＩＲ（ＫＩＲ２Ｄ）はＨＬＡ−Ｃアロタイプを認識し：ＫＩＲ2ＤＬ２（以前、ｐ５８．２と称された）及び密接に関連する遺伝子産物ＫＩＲ２ＤＬ３は、グループ１のＨＬＡ−Ｃアロタイプ（Ｃｗ1、３、７及び８）が共有するエピトープを認識するのに対して、ＫＩＲ２ＤＬ１（ｐ５８．１）はグループ２のＨＬＡ−Ｃアロタイプ（Ｃｗ２、４、５及び６）が共有するエピトープを認識する。ＫＩＲ２ＤＬ１の特異性は、グループ２のＨＬＡ−Ｃ対立遺伝子の８０位におけるＬｙｓ残基の存在によって決定付けられると思われる。ＫＩＲ2ＤＬ２及びＫＩＲ2ＤＬ３の認識は、８０位におけるＡｓｎ残基の存在によって決定付けられると思われる。ＨＬＡ−Ｃ対立遺伝子の実質的大半は８０位にてＡｓｎ残基又はＬｙｓ残基のいずれかを有する。３つのＩｇドメインを持つＫＩＲの１つ、ＫＩＲ３ＤＬ１（ｐ７０）は、ＨＬＡ−Ｂｗ４対立遺伝子が共有するエピトープを認識する。最後に、３つのＩｇドメインを持つ分子のホモ二量体、ＫＩＲ3ＤＬ２（ｐ１４０）はＨＬＡ−Ａ３及び−Ａ１１を認識する。
【００６９】
いずれかのタイプ（活性化又は阻害性）の個々のＭＨＣ−Ｉ特異的なＮＫ細胞受容体は通常すべてのＭＨＣクラスＩ分子と相互作用するわけではないが、特定のアロタイプ（単一遺伝座の様々な変異体によってコードされるタンパク質）に特異的に結合する。また、個々のＮＫ細胞は、互いに独立して機能する幾つかの異なった阻害性及び／又は活性化の受容体を発現し得る。たとえば、ヒトでは、所与のＫＩＲの存在又は非存在は、単一個体内でＮＫ細胞から他のＮＫ細胞で変異する。ヒトでは相対的に高いレベルのＫＩＲの多型現象もあり、特定のＫＩＲ分子が一部で存在するが、全個体には存在しない。ＫＩＲ及び他のＭＨＣ認識する阻害性受容体は、ＮＫ細胞によって同時発現され得るが、所与の個体のＮＫレパトアでは、通常、単一のＫＩＲを発現する細胞があり；従って、この後者のタイプの相当するＮＫ細胞活性は、特定のＭＨＣ−Ｉ対立遺伝子群を発現する細胞だけで阻害される。実際、集団の中におけるＫＩＲ遺伝子型の多様性の程度の最近の概算は、非血縁個体の＜０．２４％が同一の遺伝子型を有することを予想され得ることを示唆している。最も一般的な白人のハプロタイプ「Ａ」ハプロタイプ（約４７〜５９％の頻度）は、たった１つの活性化ＫＩＲ遺伝子（ＫＩＲ２ＤＳ４）と６つの阻害性ＫＩＲ遺伝子座（ＫＩＲ３ＤＬ３、−２ＤＬ３、−２ＤＬ１、−２ＤＬ４、−３ＤＬ１及び−３ＤＬ２）を含有する。残りの「Ｂ」ハプロタイプは非常に多様で、２〜５の活性化ＫＩＲ遺伝子座（ＫＩＲ２ＤＳ  １、−２ＤＳ２、−２ＤＳ３及び−２ＤＳ５を含む）を含有する。
【００７０】
ＫＩＲは、Ｈｕｇｏ遺伝子命名委員会のウェブサイト（http://www.gene.ucl.ac.uk/nomenclature/genefamily/kir.html）及びＡｎｄｒｅら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２（８）：６６１（２００１）から得られる情報を含めて表１でここに反映されるように幾つかの別名によって知られることが言及されるべきである。
【００７１】
【表１−１】
2014501729.tif 000003
【表１−２】
2014501729.tif 000004
【表１−３】
2014501729.tif 000005
【００７２】
ＮＫＣＩＲ関連のＮＫ細胞阻害の中和
また、又は代わりに、ＮＫ阻害を阻止し、又は中和し、それによって、さもなければ遮断された標的細胞に対するＮＫ細胞活性を強化するその能力に基づいて抗ＮＫＣＩＲ抗体を性状分析することができる。上記で示したように、少なくとも１つのＮＫＣＩＲに十分な時間結合してＮＫ細胞におけるＮＫＣＩＲが介在するＮＫ細胞障害性の阻害を中和する抗ＮＫＣＩＲ抗体を本発明の文脈で使用することができる。そのような抗ＮＫＣＩＲ抗体は、天然の形態（たとえば、細胞傷害剤と結合することなく）で治療剤としてそのまま使用され得る。本発明のさらに特に有利な特徴は、２以上のＮＫＣＩＲと交差反応し、そのような関連したＮＫＣＩＲの一部又はすべて（通常好ましくはすべて）に関連する阻害活性を中和する抗ＮＫＣＩＲ抗体である。
【００７３】
中和する抗ＮＫＣＩＲ抗体はＮＫＣＩＲが介在するＮＫ細胞障害性の阻害を部分的に又は完全に中和し得る。中和は、さもなければ存在する阻害シグナルの実質的な遮断を指す。中和は好適な方法によって測定することができる。態様の１つでは、阻害の中和は、抗ＮＫＣＩＲ抗体の非存在下で実質的に同一の設定にて通常生じる特異的溶解の量に比べて、ＮＫ細胞及びＮＫ標的細胞の特定の混合物におけるＮＫ細胞が介在する特異的な溶解にて、中和抗ＫＩＲ抗体が、少なくとも約２０％、好ましくは少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７５％以上（たとえば、２５〜１００％）の上昇を生じるという点で反映される。この態様での比率の上昇は、ＮＫ標的細胞及びその関連するＮＫＣＩＲを遮断しないＮＫ細胞の混合物（１００％）と、ＮＫ細胞及びＮＫ標的細胞がＮＫＣＩＲに対するリガンドを提示するＮＫ標的細胞の混合物から得られるクロム放出毒性アッセイの結果の比較によって抗ＮＫＣＩＲ又は他の抗体を検討する際に、決定され得る。抗ＫＩＲ抗体の場合、比較は、ＮＫ標的細胞及びその関連するＫＩＲを遮断しないＮＫ細胞の混合物（１００％）と、ＮＫ細胞及びＮＫ細胞上の阻害性ＫＩＲに対する同族のＭＨＣクラスＩ分子を提示するＮＫ標的細胞の混合物（０％）から得られるクロム放出毒性アッセイの結果により得る。有利な態様では、本発明は、そのような抗ＮＫＣＩＲ抗体の非存在下では効果的に溶解されない細胞の溶解を誘導する抗ＮＫＣＩＲ抗体を提供する。或いは、ＮＫＣＩＲ阻害活性の中和は、たとえば、１又は幾つかの阻害性ＮＫＣＩＲ（たとえば、ＫＩＲ、ＮＫＧ２、ＮＫＧ２Ａ及びＬＩＲ（たとえば、ＬＩＬＲＢ  １、ＬＩＬＲＢ５）を発現するＮＫ細胞クローン又は形質転換体と、ＮＫ細胞上のＮＫＣＩＲの１つによって認識されるたった１つのリガンド（たとえば、ＨＬＡポリペプチド又は対立遺伝子、たとえば、ＨＬＡ-Ｅ等）を発現する標的細胞とを用いたクロムアッセイの結果によって示すことができ、その際、抗体によって得られる細胞傷害性のレベルは、ＮＫＣＩＲのリガンドに対する既知の阻止抗体で認められる細胞傷害性の少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％以上（たとえば、２５〜１００％）のような少なくとも約２０％である。たとえば、抗ＫＩＲ抗体を調べる場合、たとえば、米国ニュージャージー州、フランダースのＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓから現在入手可能であり、Ｓｈｉｅｌｄｓら、Ｔｉｓｓｕｅ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ．１９９８  Ｍａｙ；５１（５）：５６７−７０に記載されているＷ６／３２抗ＭＨＣクラスＩ抗体のような抗ＭＨＣクラスＩ抗体が実質的に同一の設定で投与される。
【００７４】
クロム放出アッセイ及びＮＫ細胞傷害性活性を評価する他の方法は当該技術で既知である。そのようなアッセイに好適な条件も周知である。典型的なクロム放出アッセイは、たとえば、標的細胞（たとえば、Ｃｗ３及び／又はＣｗ４陽性の細胞株、マイクロタイタープレートのウェル当たり、たとえば、約５０００個）をＮａ２５１ＣｒＯ４（５１Ｃｒが取り込まれ、生きている標的細胞で保持されるように）で標識し、過剰な放射性活性を洗い流し、その後、好適なエフェクター：標的の比（たとえば、約４：１）にて抗ＮＫＣＩＲ抗体の存在下又は非存在下で約４時間の間、ＮＫ細胞に暴露し、標的細胞の死及び溶解を反映するその後の５１Ｃｒの放出を測定することによって実施される。そのようなアッセイの例は、Ｍｏｒｅｔｔａら、１９９３，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７８，５９７−６０４に記載されている。類似のアッセイでは、増殖している標的細胞を３Ｈチミジンで標識することができ、それを複製するＤＮＡに組み入れる。ＮＫ細胞による細胞溶解作用の際、標的細胞のＤＮＡは迅速に断片化され、濾液に保持される一方で、断片化されないＤＮＡはフィルター上に回収されので、これらの断片の放出又は細胞性ＤＮＡにおける３Ｈチミジンの保持のいずれかを測定することができる。そのようなアッセイに関連する他の例及び関連議論は、たとえば、ＰＣＴ出願ＷＯ２００６／０７２６２５に見つけることができる。
【００７５】
別の態様では、本発明は、同族のＮＫＣＩＲに結合するために交差反応性の及び／又は中和性の抗ＮＫＣＩＲ抗体と競合し、そのような既知の抗体と同一の抗原決定基／エピトープと結合する能力を特徴とする抗ＮＫＣＩＲ抗体を提供する。特定のモノクローナル抗体（たとえば、１−７Ｆ９）に言及する場合、語句「と競合する」は、組換えＮＫＣＩＲ分子又は表面で発現されるＮＫＣＩＲ分子を用いた結合アッセイにて、抗ＮＫＣＩＲ抗体が参照抗体又は他の分子と競合することを意味する。たとえば、結合アッセイにて通常１−７Ｆ９が結合するＫＩＲ分子に対する１−７Ｆ９の結合を抗ＫＩＲ抗体が検出可能に低下させると、抗ＫＩＲ抗体は１−７Ｆ９「と競合する」と言うことができる。１−７Ｆ９と競合する抗ＫＩＲ抗体は、ＫＩＲ２ＤＬ１ヒト受容体、ＫＩＲ２ＤＬ２／３ヒト受容体、又はＫＩＲ２ＤＬ１とＫＩＲ２ＤＬ２／３ヒト受容体の双方に対する結合について１−７Ｆ９と競合し得る。
【００７６】
関連することが多いが、参照タンパク質と同一の又は実質的に類似するエピトープに結合するタンパク質の能力に対する参照タンパク質との競合という点でタンパク質を記載することは場合によっては、十分に異なる生物学的な及び物理化学的な特性を暗示する。タンパク質間の競合は、試験抗ＮＫＣＩＲ抗体が、抗ＮＫＣＩＲ抗体によって結合されるエピトープと少なくとも部分的に重複するエピトープ、又はそのような抗ＫＩＲ抗体が立体障害のために既知の抗ＮＫＣＩＲ抗体と競合するようにそのようなエピトープに十分近く位置するエピトープに結合することを暗示する。抗ＮＫＣＩＲ抗体は、抗体の大きなサイズのために同一又は類似のエピトープに結合することなく、参照の抗ＮＫＣＩＲ抗体と競合し得る。そのような競合する抗ＮＫＣＩＲ抗体は、異なる抗原決定基に結合するとしても、参照抗ＮＫＣＩＲ抗体と同一の抗原決定領域に関連する相互作用を遮断することにおいて有用であり得る。
【００７７】
別の例となる態様では、本発明は、たとえば、１−７Ｆ９、ＤＦ２００及び／又はＮＫＶＳＦ１（ＫＩＲについて）、又は抗体Ｚ１９９（ＮＫＧ２Ａについて、カリフォルニア州のＢｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒから入手可能な）のような抗ＮＫＣＩＲ抗体と実質的に同一の抗原決定領域に結合する抗ＮＫＣＩＲ抗体を提供する。
【００７８】
競合は、特定の結合相手を結合する別の分子の存在下でその結合相手を結合する特定の分子の性向における有意な低下を指す。通常、競合は、競合する分子、たとえば、抗ＫＩＲ抗体の存在下にて、たとえば、抗ＫＩＲ抗体と少なくとも１つのＫＩＲの間での結合における少なくとも約２０％（たとえば、約２５％以上、約３０％以上、約１５〜３５％等を含む）の低下のような結合における少なくとも約１５％の低下を意味する。競合する抗体に属するエピトープが抗原の近傍に位置する場合のような特定の状況では、競合は、受容体（たとえば、ＫＩＲ）結合の約４０％を超える相対的阻害、少なくとも約５０％の阻害、少なくとも約５５％の阻害、少なくとも約６０％の阻害、少なくとも約７５％の阻害、又は、たとえば、約４５〜９５％の阻害のレベルのようなさらに高いレベルの阻害によって際立ち得る。
【００７９】
競合を評価することには通常、第１の量の第１の分子（たとえば、抗ＫＩＲ抗体）；第２の量の第２の分子（たとえば、既知の抗ＫＩＲ抗体；及び第３の量の第３の分子（たとえば、ＫＩＲ）を用いた相対的阻害性結合の評価が関与し、その際、第１、第２及び第３の量はすべて、他の存在する分子に関して未解決の分子の選択性及び／又は特異性について情報を付与する比較を行うのに十分である。普通、ＥＬＩＳＡ競合アッセイについては、約５〜５０μｇ（たとえば、約１０〜５０μｇ、約２０〜５０μｇ、約５〜２０μｇ、約１０〜２０μｇ等）の抗ＫＩＲ抗体、既知の抗ＫＩＲ抗体及び少なくとも１つのＫＩＲを用いて競合が存在するかを評価する。その推定上／既知の標的に競合する分子を結合するのに条件も好適であるべきである。生理的又は生理的に近い条件（たとえば、約２０〜４０℃の温度、約７〜８のｐＨ等）が通常、抗ＫＩＲ抗体：ＫＩＲに好適であり得る。
【００８０】
２以上の分子間での競合（又は結合の相対的な阻害）の判定は、対照のＮＫＣＩＲ結合分子（たとえば、１−７Ｆ９）と抗ＮＫＣＩＲ抗体を混ぜ合わせ（又は事前に吸収させ）、関連するＫＩＲ、たとえば、そのそれぞれがＤＦ２００によって結合されることが分っているＫＩＲ２ＤＬ１及びＫＩＲ2ＤＬ２／３を含有する試料に適用する免疫アッセイの使用によって為され得る。ＥＬＩＳＡ、放射線免疫アッセイ、ウエスタンブロット等に基づくプロトコールはそのような競合試験における使用に好適である。競合ＥＬＩＳＡは通常、分子の結合に好適な条件下（たとえば、特に、立体的な／非線形のエピトープを結合する抗体の場合、生理的な条件）で実施される。競合はまた、たとえば、Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ、Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８８），Ｃｏｌｌｉｇａｎら編、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，（１９９２，１９９３），Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，（第５版），Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（２００２）及びＭｕｌｌｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．９２：５８９−６０１（１９８３）に見られるフローサイトメトリー試験、ＳＰＲ解析及びその他の技法によっても評価することができる。
【００８１】
多数の既知の技法によって抗原決定領域又はエピトープを特定することができる。たとえば、標的ＮＫＣＩＲタンパク質における露出したアミン／カルボキシルの化学修飾を介した「フットプリンティング」アッセイによって抗原決定領域を迅速に特定することができる。そのようなフットプリンティング法の具体的な一例は、質量分光分析（ＨＸＭＳ）によって検出される水素／重水素交換の使用であり、その際、受容体及びリガンドのタンパク質アミドのプロトン、結合及び逆交換の水素／重水素交換が生じ、タンパク質結合に関与する主鎖のアミド基は逆交換から保護されるので、重水素化されたままである。ペプチドタンパク分解、迅速マイクロボア高速液体クロマトグラフィ分離、及び／又はエレクトロスプレーイオン化質量分光分析によってこの点で関連領域を特定することができる。たとえば、Ｅｈｒｉｎｇ、Ｈ，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．２６７（２）ｐｐ．２５２−２５９（１９９９）及び／又はＥｎｇｅｎ，Ｊ．Ｒ．及びＳｍｉｔｈ，Ｄ．Ｌ．（２００１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３，２５６Ａ−２６５Ａを参照のこと。
【００８２】
好適なエピトープ特定法の別の例は核磁気共鳴（ＮＭＲ）エピトープマッピングであり、その際通常、遊離の抗原の二次元ＮＭＲスペクトルにおけるシグナルの位置と、たとえば、抗体のような抗原結合ペプチドと複合体化した抗原が比較される。抗原は通常、ＮＭＲスペクトルにて抗原に相当するシグナルのみが見え、抗原結合ペプチドからのシグナルは見えないように選択的に１５Ｎによって放射線標識される。抗原結合ペプチドとの相互作用に関与するアミノ酸に由来する抗原シグナルは通常、遊離の抗原のスペクトルに比べて、複合体のスペクトルで位置を移動させ、結合に関与するアミノ酸はそのように特定することができる。たとえば、Ｅｒｎｓｔ  Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｒｅｓ  Ｆｏｕｎｄ  Ｗｏｒｋｓｈｏｐ．２００４；（４４）：１４９−６７；Ｈｕａｎｇら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２８１（１）ｐｐ．６１−６７（１９９８）；並びにＳａｉｔｏ及びＰａｔｔｅｒｓｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９９６、Ｊｕｎ；９（３）：５１６−２４を参照のこと。
【００８３】
質量分光分析法を用いてもエピトープのマッピング／性状分析を行うことができる。たとえば、Ｄｏｗｎｗａｒｄ，ＪＭａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．２０００、Ａｐｒ；３５（４）：４９３−５０３並びにＫｉｓｅｌａｒ及びＤｏｗｎａｒｄ，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．１９９９、Ｍａｙ、１；７１（９）：１７９２−８０１を参照のこと。
【００８４】
エピトープのマッピング及び特定の文脈では、プロテアーゼ消化法も有用であり得る。たとえば、３７℃にてｐＨ７〜８での一晩の消化にＮＫＣＩＲに対して約１：５０の比率でトリプシンを用い、その後、ペプチド特定のために質量分光法（ＭＳ）解析を行うことによって、抗原決定関連領域／配列を決定することができる。続いて、抗ＮＫＣＩＲ結合子によってトリプシン切断から保護されたペプチドは、トリプシン消化に供した試料と抗体とインキュベートし、その後、たとえば、トリプシンによる消化に供した試料を比較することによって特定することができる（それによって結合子のためのフットプリントを示す）。キモトリプシン、ペプシン等のような他の酵素もまた、又は代わりに類似のエピトープ性状分析法で使用することができる。さらに、酵素消化は、考えられる抗原決定配列が、表面に露出していないので、抗原性という点では関係しない可能性が高い抗ＮＫＣＩＲポリペプチドの文脈でＮＫＣＩＲの領域内にあるかどうかを解析する迅速法を提供することができる。類似の技法の議論については、たとえば、Ｍａｎｃａ，Ａｎｎ  １ｓｔ  Ｓｕｐｅｒ  Ｓａｎｉｔａ．１９９１；２７（１）：１５−９を参照のこと。
【００８５】
種々のファージディスプレイ法もエピトープを特定するのに使用することができる。たとえば、Ｗａｎｇ及びＹｕ，Ｃｕｒｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ．２００４、Ｊａｎ；５（ｌ）：ｌ−１５；Ｂｕｒｔｏｎ，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．１９９５、Ａｕｇ；ｌ（２）：８７−９４；Ｃｏｒｔｅｓｅら、Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．１９９５、Ａｕｇ；ｌ（２）：８７−９４；及びＩｒｖｉｎｇら、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ．２００１、Ｊｕｎ；５（３）：３１４−２４を参照のこと。コンセンサスエピトープも改変したファージディスプレイ関連法を介して特定することができる（Mumey et al., J. Comput. Biol. 10:555-567 and Mumey, Proceedings of the Sixth Annual International Conference on Computational Molecular Biology (RECOMB-02), pp. 233-240 (ACM Press, New York)) for discussion (see also Bailey et al., Protein Science (2003), 12:2453-2475; Dromey et al., J Immunol. 2004 Apr l ; 172(7):4084-90; Parker et al., Mol Biotechnol. 2002 Jan;20( l ):49-62; and Czompoly et al., Biochem Biophys Res Commun. 2003 Aug 8;307(4):791 -6を参照）。
【００８６】
一方がビオチン化される又はさもなければ似たように標識される２つのＫＩＲ結合分子（たとえば、既知の抗ＫＩＲ抗体）によるＫＩＲへの競合結合によるエピトープのマッピングは関連する抗原決定領域を特定する別の方法である。
【００８７】
エピトープをマッピングするのに役立つ可能性のある他の方法には、結晶学法、Ｘ線回析法（たとえば、１９７０年代から１９８０年代にＰｏｌｊａｋらによって開発されたＸ線回析／配列試験）、及びマルチピンペプチド合成法が挙げられる。
【００８８】
たとえば、配列解析及び三次元構造の解析とドッキングのようなコンピュータに基づく方法を用いて抗原決定基を特定することもできる。たとえば、個々のｍＡｂのＦａｂ断片の構造のドッキングによるＮＫＣＩＲ又はその一部の構造を用いた分子モデリングによってエピトープを決定することもできる。必要に応じて、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ（カナダ、ケベック州、モントリオール−ｗｗｗ．ｃｈｅｍｃｏｍｐ．ｃｏｍ）から入手可能であるＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ（ＭＯＥ）のようなプログラムを用いた構造を特徴付けたＮＫＣＩＲによる相同性モデリングによってＮＫＣＩＲのモデルを作製することができる。これらの及び他のマッピング法はＥｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｗｅｓｔｗｏｏｄ  ａｎｄ  Ｈａｙ  Ｅｄｓ．）２００１、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ（Ｃａｓｏｎ，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９９４、Ｓｅｐ；４９（２）：２０９−１９も参照）にて議論されている。
【００８９】
抗ＫＩＲ抗体の特徴
有利な抗ＫＩＲ抗体は、機能的特徴、特に、たとえば、１を超える阻害性ＫＩＲのような１を超えるＫＩＲと交差反応する又は交差結合するその能力、及び／又はＮＫ阻害性シグナルを効果的に中和する能力に基づいて分類され得る。本発明は、抗ＫＩＲ又は抗ＫＩＲ抗体の併用を用いた治療を企図する。例となる抗ＫＩＲ抗体には、抗ＫＩＲ２ＤＬ１抗体及び抗ＫＩＲ２ＤＬ２抗体、又は抗ＫＩＲ２ＤＬ１抗体及び抗ＫＩＲ２ＤＬ３抗体、又は抗ＫＩＲ２ＤＬ１抗体及び抗ＫＩＲ２ＤＬ２抗体及び抗ＫＩＲ２ＤＬ３抗体、又は少なくとも２つの異なるヒト阻害性ＫＩＲ受容体遺伝子産物に結合し、２つの異なるヒト阻害性ＫＩＲ受容体の１つを発現するＮＫ細胞にてＮＫ細胞傷害性のＫＩＲが介在する阻害を中和することが可能である抗ＫＩＲ抗体、又は抗ＫＩＲ2Ｄ抗体及び抗ＫＩＲ3Ｄ抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９０】
１種類を超えるＫＩＲに効果的に結合する抗ＫＩＲ抗体は本発明の特に有利な特徴である。特定の例となる態様では、本発明は、ＮＫ細胞の表面にて少なくとも２つの阻害性ＫＩＲ受容体に結合する抗ＫＩＲ抗体を提供する。その上さらに特定の説明に役立つ態様では、本発明は、ヒトＫＩＲ２ＤＬ受容体の共通する抗原決定領域を結合する抗ＫＩＲ抗体を提供する。その上さらなる態様では、本発明はＫＩＲ２ＤＬ1、ＫＩＲ２ＤＬ２及びＫＩＲ２ＤＬ３受容体に結合する抗ＫＩＲ抗体を提供する。
【００９１】
用語「ＫＩＲ２ＤＬ２／３」は、ＫＩＲ２ＤＬ２及びＫＩＲ２ＤＬ３の受容体のいずれか又は双方を指すのに使用することができる。これら２つの受容体は、非常に高い相同性を有し、同一遺伝子の対立遺伝子の形態であり、多数の点で相互交換可能であると当該技術によってみなされる。従って、ＫＩＲ２ＤＬ２／３は特定の点では、単一の阻害性ＫＩＲ分子であるとみなすことができる。ＫＩＲ２ＤＬ２／３と交差反応する抗ＫＩＲ抗体が本発明の範囲内である一方で、ＫＩＲ２ＤＬ２及びＫＩＲ２ＤＬ３のみに含まれるＫＩＲ結合特性を有する抗ＫＩＲ抗体は「交差反応性」であるとはみなされない。
【００９２】
ＫＩＲ２ＤＬ1又はＫＩＲ２ＤＬ２／３の少なくとも一方がヒト集団の少なくとも約９０％に存在するので、ＫＩＲ２ＤＬ1／ＫＩＲ２ＤＬ２／３交差反応性の抗ＫＩＲ抗体は、ＨＬＡ−Ｃアロタイプに関連する細胞のほとんど、それぞれグループ２のＨＬＡ−Ｃアロタイプ及びグループ１のＨＬＡ−Ｃアロタイプに対するＮＫ活性を促進する又は増強することができる。そのような交差反応性を有する単一のＫＩＲ抗体を含む組成物は、ほとんどのヒト対象の治療及び／又は診断に使用されてもよく、それによって、患者の遺伝子プロファイルの必要性を除外し、有効な成績を確保するために患者に投与する必要がある様々な抗体の量を減らし得る。
【００９３】
交差反応する抗ＫＩＲ抗体は、好適な組成を有することができ、多数の好適な技法によって得ることができる。たとえば、交差反応性の抗ＫＩＲ抗体は、抱合、重合、又は（ペプチドリガンドの場合）融合タンパク質に含まれることによって会合し得る、多数のＫＩＲリガンド配列及び様々なＫＩＲに結合する抗ＫＩＲ抗体配列を含むことができる。別の態様では、交差反応する抗ＫＩＲ抗体からの抗ＫＩＲ抗体配列を含む抗ＫＩＲ抗体が提供される。
【００９４】
それからＫＩＲ結合配列を得ることができる交差反応する抗ＫＩＲ抗体が知られている。そのような抗体の例は、たとえば、Ｗａｔｚｌら、Ｔｉｓｓｕｅ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ，５６，ｐ．２４０（２０００）に記載されている。別の例は、ＮＫＶＳＦ１（ｐａｎ２ＤｍＡｂとも呼ばれる；ＣＤ１５８ａ（ＫＩＲ２ＤＬ１），ＣＤ１５８ｂ（ＫＩＲ２ＤＬ２の共通エピトープを認識する）及びＰＣＴ特許出願ＷＯ２００６／００３１７９（Ｉｎｎａｔｅ  Ｐｈａｒｍａ；Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ；Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｇｅｎｏａ）の図１５に示される可変領域とＣＤＲの配列を有するp５０．３（ＫＩＲ２ＤＳ４）である。ＫＩＲ２ＤＬ1及びＫＩＲ２ＤＬ２／３を含むＫＩＲファミリーの種々のメンバーと反応するモノクローナル抗体ＤＦ２００はそのような交差反応する抗体の別の例である。ＤＦ２００を産生するハイブリドーマは、フランスの２５，Ｒｕｅ  ｄｕ  Ｄｏｃｔｅｕｒ  Ｒｏｕｘ，Ｆ−７５７２４  Ｐａｒｉｓ  Ｃｅｄｅｘ  １５のパスツール研究所のＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｎａｔｉｏｎａｌｅ  ｄｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ  ｄｅ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｓにて２００４年６月１０日に特定番号「ＤＦ２００」、登録番号ＣＮＣＭＩ−３２２４として登録され、ＣＮＣＭカルチャーコレクションで寄託されている。幾つかの追加のモノクローナル抗体を生成することができ、交差反応性抗ＫＩＲ抗体であることを示すことができる。さらなる他の例は、ＷＯ２００６／００３１７９に記載されている抗体１−７Ｆ９及び１−４Ｆ１である。
【００９５】
交差反応性抗ＫＩＲ抗体は、それが結合する２以上のＫＩＲに対して好適な親和性及び／又は結合活性を有することができる。親和性は、エピトープ又は抗原決定基への抗ＫＩＲ抗体又は他の抗原結合タンパク質の結合の強さを指す。通常、親和性は、［Ａｂ］×［Ａｇ］／［Ａｂ−Ａｇ］として定義される解離定数ＫＤという点で測定され、その際、［Ａｂ−Ａｇ］は抗体／抗原複合体のモル濃度であり、［Ａｂ］は未結合の抗体のモル濃度であり、［Ａｇ］は未結合の抗原のモル濃度である。親和性定数Ｋａは１／ＫＤによって定義される。競合阻害、平衡透析等によって結合ペプチドの特異性及び親和性を決定する好適な方法は、たとえば、Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８８）；Ｃｏｌｌｉｇａｎら編、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，（１９９２，１９９３），及びＭｕｌｌｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．９２：５８９−６０１（１９８３）に見つけることができる。
【００９６】
通常、本発明によって提供される抗ＫＩＲ抗体は、約１０４〜約１０１０Ｍ−１（たとえば、約１０７〜約１０９Ｍ−１）の範囲で少なくとも１つのＫＩＲに対する親和性を有する。用語、免疫反応性は本明細書では通常、約１０−４Ｍ未満の解離定数ＫＤでのＫＩＲへの抗ＫＩＲ抗体の結合を指す。たとえば、特定の態様では、本発明は、たとえば、表面プラスモン共鳴（ＳＰＲ）スクリーニング（たとえば、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）ＳＰＲ解析装置による）によって測定されるとき、ＫＩＲ２ＤＬ1及びＫＩＲ２ＤＬ２／３に関して約７×１０−９Ｍ以上の平均解離定数（ＫＤ）を有する抗ＫＩＲ抗体を提供する。さらに特定の例となる態様では、本発明は、ＫＩＲ２ＤＬ２／３に対して約２×１０−９Ｍ（たとえば、約０．１〜４×１０−９Ｍ）以上のＫＤを有し、ＫＩＲ２ＤＬ1に対して約１１×１０−９Ｍ（たとえば、約７〜１５×１０−９Ｍ）以上のＫＤを有する抗ＫＩＲ抗体を提供する。
【００９７】
親和性は、本明細書のどこかで記載される方法又は当該技術で既知の同等の方法のいずれかによって測定することができる。親和性を測定するのに使用することができる一方法の例は、Ｍｕｎｓｏｎ及びＰｏｌｌａｒｄ，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０７：２２０（１９８０）のスキャチャード解析で提供される。結合親和性も平衡法（たとえば、ＥＬＩＳＡ又は放射性免疫アッセイ（ＲＩＡ）又は動態解析（たとえば、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）解析））によって測定され得る。
【００９８】
抗ＫＩＲ抗体はまた、又は代わりに、約１００ｎＭ未満の、約５０ｎＭ未満の、約１０ｎＭ未満の、約５ｎＭ以下の、約１ｎＭ以下の、約０．５ｎＭ以下の、約０．１ｎＭ以下の、約０．０１ｎＭ以下の、又はさらに０．００１ｎＭ以下の解離定数によるＫＩＲ結合を示すことを特徴とする。
【００９９】
結合活性は、結合タンパク質と抗原の間の全相互作用の全体的な強さ（たとえば、抗ＫＩＲ抗体とＫＩＲの間の相互作用の全体の強さ）を指す。親和性は、抗体又は他の結合タンパク質の単一の抗原結合部位と単一のエピトープ又は抗原決定基の間の全体的な非共有結合相互作用の強さである。結合活性は通常、３つの主な因子：それが結合するエピトープ又は抗原決定基に対する結合タンパク質の固有の親和性、抗体又は結合タンパク質及び抗原の価数（たとえば、３、４、以上の価数を持つ抗ＫＩＲ抗体は通常、二価の抗体よりも抗原に対する高い結合活性を示し、二価の抗体は、特に抗原に反復するエピトープがある場合、一価の抗体よりも抗原に対する高い結合活性を有することができる）、及び／又は相互作用する成分の幾何配置に支配される。結合活性は通常、親和性を評価するのに使用されるものと同じタイプの技法によって測定される。
【０１００】
別の態様では、本発明は２以上の種に由来するＫＩＲと交差反応する抗ＫＩＲ抗体を提供する。たとえば、態様の１つでは、本発明は、ヒト及びカニクイザルのＫＩＲと交差反応する抗ＫＩＲ抗体を提供する。特定の態様では、本発明は少なくとも２つのヒトＫＩＲと交差反応し、カニクイザルのＮＫ細胞にも結合する抗ＫＩＲ抗体を提供する。そのような抗ＫＩＲ抗体は、そのような交差反応プロファイルを示す抗体ＮＫＶＳＦ１からの又はそれに由来する配列を含むことができる。そのような抗ＫＩＲ抗体を必要に応じてカニクイザルにおける毒性試験及び他の有用な試験に供することができる。
【０１０１】
種々のＫＩＲと交差反応する抗体を本発明の併用組成物及び方法にて使用することができる。そのような抗体の例となる交差反応プロファイルには、ＫＩＲの２ＤＬ１プラス２ＤＬ２／３、３ＤＬ１プラス３ＤＬ２、２ＤＬ１（及び２ＤＬ２／３）プラス２ＤＳ４及び２ＤＬ１（及び２ＤＬ２／３）と交差反応するが、２ＤＳ４とは反応しない抗体が挙げられる。
【０１０２】
従って、たとえば、本発明の方法又は組成物は、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２及びＫＩＲ２ＤＬ３を結合し、たとえば、ＷＯ２００５００３１６８に記載されたようなＮＫ細胞の細胞傷害性のＫＩＲが介在する阻害を低下させる又は阻止する抗ＫＩＲ抗体を含むことができる。
【０１０３】
本発明の併用の方法及び組成物で有用な例となる抗ＫＩＲ抗体には、抗ＫＩＲ抗体、ＤＦ２００のそれに相当するＶＬ領域を含む、又はそのようなＶＬ領域（実質的に類似し、類似の結合プロファイル及び親和性を保持することによって）、若しくはＤＦ２００のＶＬ配列に非常に類似する（たとえば、少なくとも約９０％同一又は９５％同一）ＶＬ配列／ドメインから本質的に成る抗ＫＩＲ抗体が挙げられる。ＤＦ２００のＶＬ配列はＷＯ２００６／３１７９に示されている。そのような抗ＫＩＲ抗体は代わりに、ＤＦ２００（ＷＯ２００６／３１７９でも示される）の軽鎖可変ＣＤＲのセットを含むことによっても定義され得る。そのような抗体は通常、ＤＦ２００のＶＨドメイン又は非常に類似する配列（たとえば、ＤＦ２００のＶＨドメインに高い同一性を有する又はさもなければ、そのような配列で本質的に成る配列）、又はＤＦ２００（ＷＯ２００６／３１７９でも示される）の重鎖可変ＣＤＲのいずれかを含む。
【０１０４】
本明細書で使用されるとき、用語「配列同一性比率」又は「配列同一性」は、２つの配列間の同一性比率を指し、それは、配列が共有する同一の位置の数の関数であり、すなわち、％相同性＝同一位置の数／位置の数×１００であり、２つの配列の最適な配置のために導入する必要があるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮に入れる。２つの配列間での配列の比較及び同一性比率の決定は以下の非限定例で記載するような数学的なアルゴリズムを用いて達成することができる。
【０１０５】
２つのアミノ酸配列の間の同一性比率は、Ｍｙｅｒｓ及びＷ．Ｍｉｌｌｅｒ (Comput. Appl. Biosci., 4: 1 1-17 (1998)）のアルゴリズムを用いて決定することができ、それは、ＰＡＭ１２０重量残基表と、１２のギャップ長さペナルティと、４のギャップペナルティを用いてＡＬＩＧＮ（バージョン２．０）に組み入れられている。加えて、２つのアミノ酸配列の間の同一性比率は、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２マトリクス又はＰＡＭ２５０マトリクス及び１６、１４、１２、１０、８、６又は４のギャップウエイト及び１、２、３、４、５又は６の長さウエイトを用いてＧＣＧソフトウエアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで利用可能）におけるＧＡＰプログラム取り込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈ（J. Mol. Biol. 48:444-453 (1970)）のアルゴリズムを用いて決定することができる。
【０１０６】
特定の例では、本開示のタンパク質の配列をさらにクエリー配列として使用して公的なデータベースに対する検索を行う、たとえば、関連配列を特定することができる。そのような検索はＡｌｔｓｃｈｏｌら、（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０のＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を用いて実施することができる。ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０ワードレングス＝３でＢＬＡＳＴタンパク質検索を実施して本発明の抗体に相同なアミノ酸配列を得ることができる。比較目的でギャップのある配置を得るには、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、（１９９７）、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９−３４０２に記載されたように、ギャップのあるＢＬＡＳＴを利用することができる。ＢＬＡＳＴ及びギャップのあるＢＬＡＳＴを使用する場合、各プログラム（たとえば、ＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴ）の初期設定パラメータを使用することができる。ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ．を参照のこと。
【０１０７】
別の例となる態様では、本発明の併用の組成物及び方法は、抗体１−７Ｆ９（ＷＯ２００６／３１７９で示された）のＶＨ及びＶＬに相当する若しくはそれに高度に類似する（たとえば、本質的に成る）ＶＨ及びＶＬの配列を含む、又は１−７Ｆ９のＶＬ及びＶＨのＣＤＲを少なくとも含む抗ＫＩＲ抗体を含む。
【０１０８】
交差反応性及び／又は中和性の抗ＫＩＲ抗体との競合
別の態様では、本発明の方法又は組成物は、これらの抗体の１つ又は本明細書に組み込まれた参考文献に記載された他の抗ＫＩＲ抗体（たとえば、１−７Ｆ９）の１つと競合する抗ＫＩＲ抗体を含むことを特徴とする。
【０１０９】
たとえば、ＤＦ２００、１−７Ｆ９及び／又はＮＫＶＳＦ１のような例となる抗ＫＩＲ抗体と競合する抗体は、既知のスクリーニングアッセイを用いて特定することができる。多数のそのようなアッセイが日常的に実施され、当該技術で既知である（たとえば、参照によって本明細書に具体的に組み入れられる米国特許第５，６６０，８２７号を参照）。ＥＬＩＳＡ、放射性免疫アッセイ、ウエスタンブロットに基づくプロトコール及びＢＩＡＣＯＲＥ解析の使用はそのような競合試験での使用に好適である。
【０１１０】
ＫＩＲ抗原試料を適用する前に、ある時間、対照抗体（たとえば、ＤＦ２００、ＮＫＶＳＦ１、又は１−７Ｆ９）を種々の量の試験抗体と（約１：１、１：２、１：１０、又は約１：１００の比で）事前混合することができる。或いは、対照抗体及び種々の量の試験抗体を別々に単に加えてＫＩＲ抗原試料に暴露する間に混合することができる。遊離の抗体（たとえば、分離法又は洗浄法を用いて未結合の抗体を排除することによって）及び対照抗体を試験抗体（たとえば、種特異性又はアイソタイプ特異的な二次抗体を用いる、又は検出可能な標識で対照抗体を特異的に標識することによって）から区別することができる限り、様々なＫＩＲ２ＤＬ抗原への対照抗体の結合を試験抗体が低下させるかどうかを判定することができるということは、試験抗体が対照と実質的に同じエピトープを認識することを示している。完全に無関係な抗体（ＫＩＲに結合しない）の存在下での（標識された）対照抗体の結合は対照の高い値として役立つ。同一の、しかし標識されていない対照抗体と標識した対照抗体をインキュベートすることによって対照の低い値を得ることができ、その際、競合が生じ、標識抗体の結合を低下させる。試験アッセイでは、試験抗体の存在下での標識抗体の反応性の有意な低下は、実質的に同一のエピトープを認識する抗体、すなわち、標識された対照抗体と競合するものを示す。たとえば、約１：１又は１：１０及び約１：１００の間での対照：試験抗体の任意の比率で、ＫＩＲ２ＤＬ１及びＫＩＲ２ＤＬ３抗原の一方又は双方への対照抗体の結合を少なくとも約５０％、たとえば、少なくとも約６０％以上、好ましくは約７０％（たとえば、約６５〜１００％）低下させる試験抗体は対照と競合する抗体であるとみなされる。
【０１１１】
競合はまたフローサイトメトリーによっても評価することができる。そのような試験では、所与のＫＩＲを持つ細胞を先ず対照抗体とインキュベートし、次いで蛍光色素又はビオチンで標識した試験抗体とインキュベートすることができる。飽和量の対照抗体との予備インキュベートの際得られた結合が、対照抗体との予備インキュベートなしでの試験抗体によって得られた結合（蛍光の平均値で測定される）の約８０％、好ましくは約５０％、約４０％以下（たとえば、約３０％）であれば、抗体は対照抗体と競合すると言われる。或いは、飽和量の試験抗体とともに予備インキュベートした細胞上で標識対照抗体（蛍光色素又はビオチンによる）により得られた結合が、試験抗体との予備インキュベートなしで得られた結合の約８０％、好ましくは約５０％、約４０％以下（たとえば、約３０％）であれば、抗体は対照抗体と競合すると言われる。
【０１１２】
試験抗体を予備吸収し、ＫＩＲ２ＤＬ１又はＫＩＲ２ＤＬ２／３のいずれか又は双方が不動化されている表面に飽和濃度で適用する単純な競合アッセイも有利に採用され得る。単純な競合アッセイにおける表面は好ましくはＢＩＡＣＯＲＥチップ（又は表面プラスモン共鳴解析に好適な他の媒体）である。ＫＩＲを被覆した表面への対照抗体の結合が測定される。対照抗体のＫＩＲ含有表面へのこの結合を試験抗体の存在下で対照抗体の結合と比較する。試験抗体の存在下での対照抗体によるＫＩＲ２ＤＬ１及びＫＩＲ２ＤＬ２／３を含有する表面への結合における有意な低下は、試験抗体が対照抗体と「競合する」ように、試験抗体が対照抗体と実質的に同一のエピトープを認識することを示す。ＫＩＲ２ＤＬ１及びＫＩＲ２ＤＬ２／３抗原の双方に対する対照抗体の結合を少なくとも約２０％以上、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約７０％以上低下させる試験抗体は対照抗体と競合する抗体であるとみなすことができる。好ましくは、そのような試験抗体は、少なくともＫＩＲ２ＤＬ１、２及び３抗原のそれぞれに対する対照抗体の結合を少なくとも約５０％（たとえば、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％以上）低下させるであろう。対照抗体と試験抗体の順を反転することができ、すなわち、対照抗体が先ず表面に結合することができ、次いで、その後の競合アッセイにて試験抗体が表面に接触することが十分に理解されるであろう。好ましくは、第２の抗体（抗体が競合すると想定して）で見られる結合の低下が大きな程度になると予想されるので、ＫＩＲ２ＤＬ１及びＫＩＲ２ＤＬ２／３抗原に高い親和性を有する抗体を先ず、ＫＩＲ２ＤＬ１及びＫＩＲ２ＤＬ２／３を含有する表面に結合させる。そのようなアッセイのさらなる例は、本明細書の実施例及び、たとえば、その開示が参照によって本明細書に組み入れられるＳａｕｎａｌ及びＲｅｇｅｎｍｏｒｔｅｌ，（１９９５）、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１８３：３３−４１にて提供されている。
【０１１３】
別の態様では、本発明の方法又は組成物は、１を超えるＫＩＲと交差反応性ではない抗体のみの包含を特徴とする。たとえば、ＫＩＲ２ＤＬ１にのみ特異的なモノクローナル抗体は、ＫＩＲ２ＤＬ１とＨＬＡ−Ｃｗ４アロタイプ及びＣｗ４と同じ群の属する類似のＨＬＡ−Ｃアロタイプとの間の相互作用を阻止することが示されている（その開示が参照によって本明細書に組み入れられるMoretta et al., J Exp Med. 1993; 178(2):597-604）。別の例では、ＫＩＲ２ＤＬ２／３に対するモノクローナル抗体は、ＨＬＡＣｗ３（等）アロタイプとのＫＩＲ２ＤＬ２／３の相互作用を阻止することが記載されている（Moretta et al., 1993、上記）。任意で、抗体は、ＧＬ１８３（ＫＩＲ２ＤＬ２／３／Ｓ２−特異的、フランスのＩｍｍｕｎｏｔｅｃｈ及び米国のＢｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎから入手可能）；ＥＢ６（ＫＩＲ２ＤＬｌ／ｓｌ−特異的、フランスのＩｍｍｕｎｏｔｅｃｈ及び米国のＢｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎから入手可能）；ＡＺ１３８（ＫＩＲ３ＤＬ１−特異的、Ｍｏｒｅｔｔａら、イタリアのＵｎｉｖ．Ｇｅｎｏｖａから入手可能）；Ｑ６６（ＫＩＲ３ＤＬ２−特異的、フランスのＩｍｍｕｎｏｔｅｃｈから入手可能）；及びＤＸ９，Ｚ２７（ＫＩＲ３ＤＬ１−特異的、フランスのＩｍｍｕｎｏｔｅｃｈ及び米国のＢｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎから入手可能）から成る群から選択することができる。
【０１１４】
エピトープ
追加の態様では、本発明は、種々のＫＩＲ上で提示される特定の抗原領域及び／又はエピトープに向けられる抗ＫＩＲ抗体を提供する。例となる一態様では、本発明は、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１２７、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１８１及び１９２から選択される１以上のアミノ酸残基によって定義される領域の範囲内でＫＩＲ２ＤＬ１を特異的に結合する抗ＫＩＲ抗体を提供する。別の実施形態では、本発明は、アミノ酸残基、その１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１２７、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１８１、及び１９２の1以上によって定義される領域にてＫＩＲ２ＤＬ１及びＫＩＲ２ＤＬ２／３に特異的に結合する抗ＫＩＲ抗体を提供する。
【０１１５】
さらなる態様では、本発明は、ＫＩＲ２ＤＬ１に結合するが、Ｒ１３１がＡｌａであるＫＩＲ２ＤＬ１の変異体には、それに比べて有意に低下した結合親和性（ＫＩＲ２ＤＬ１に対して示される親和性の約２０％以下、約３０％以下、約４０％以下、約５０％以下、約６０％以下、又は約７０％以下等）で結合する抗ＫＩＲ抗体を提供する。別の態様では、本発明は、ＫＩＲ２ＤＬ１に結合するが、Ｒ１５７がＡｌａであるＫＩＲ２ＤＬ１の変異体には、相対的に低下した結合親和性（ＫＩＲ２ＤＬ１に対して示される親和性の約２０％以下、約３０％以下、約４０％以下、約５０％以下、約６０％以下、又は約７０％以下等）で結合する抗ＫＩＲ抗体を提供する。別の態様では、本発明は、ＫＩＲ２ＤＬ１に結合するが、Ｒ１５８がＡｌａであるＫＩＲ２ＤＬ１の変異体には、相対的に低下した結合親和性（ＫＩＲ２ＤＬ１に対して示される親和性の約２０％以下、約３０％以下、約４０％以下、約５０％以下、約６０％以下、又は約７０％以下等）で結合する抗ＫＩＲ抗体を提供する。
【０１１６】
さらなる態様では、本発明は、ＫＩＲ２ＤＬ１の残基１３１、１５７及び１５８に結合する抗ＫＩＲ抗体を提供する。
【０１１７】
追加の態様では、本発明は、ＫＩＲ２ＤＳ３（Ｒ１３１Ｗ）に結合するが、ＫＩＲ２ＤＳ３には結合しない抗ＫＩＲ抗体を提供する。さらに別の態様では、本発明は、ＫＩＲ２ＤＳ４と同様にＫＩＲ２ＤＬ1及びＫＩＲ２ＤＬ２／３に結合する抗ＫＩＲ抗体を提供する。さらに別の態様では、本発明は、ＫＩＲ２ＤＬ1及びＫＩＲ２ＤＬ２／３の双方に結合するが、ＫＩＲ２ＤＳ４には結合しない抗ＫＩＲ抗体を提供する。
【０１１８】
抗ＫＩＲ抗体の組成物及び構築物における抗ＫＩＲ抗体の配列の使用を説明するために、例となる抗ＫＩＲ抗体の配列及び抗体配列の変異をここで記載する。例となるＫＩＲ抗体、ＤＦ２００及び１−７Ｆ９の可変領域及びＣＤＲＳのアミノ酸と核酸の配列はＰＣＴ出願ＷＯ２００６／００３１７９にも開示されており、その開示は参照によって本明細書に組み入れられる。
【０１１９】
例となる一態様では、本発明は、配列ＬｙｓＡｌａＳｅｒＧｌｎＡｓｎＶａｌＶａｌＴｈｒＴｙｒＶａｌＳｅｒ（配列番号４３）から成る又は本質的に成るＣＤＲ−Ｌ１配列を含む抗ＫＩＲ抗体を提供する。別の態様では、本発明は、配列ＴｈｒＡｌａＳｅｒＳｅｒＳｅｒＶａｌＳｅｒＳｅｒＳｅｒＴｙｒＬｅｕＴｙｒ（配列番号４４）から成る又は本質的に成るＣＤＲ−Ｌ１配列を含む抗ＫＩＲ抗体を提供する。
【０１２０】
別の説明に役立つ態様では、本発明は、配列ＧｌｙＡｌａＳｅｒＡｓｎＡｒｇＴｙｒＴｈｒ（配列番号４５）から成る又は本質的に成るＣＤＲ−Ｌ２配列も含む、又は代わりに含む抗ＫＩＲ抗体を提供する。さらなる態様では、本発明は、配列ＳｅｒＴｈｒＳｅｒＡｓｎＬｅｕＡｌａＳｅｒ（配列番号４６）から成る又は本質的に成るＣＤＲ−Ｌ２配列も含む、又は代わりに含む抗ＫＩＲ抗体を提供する。
【０１２１】
別の例証的な様相では、本発明は、配列ＧｌｙＧｌｎＧｌｙＴｙｒＳｅｒＴｙｒＰｈｅＴｙｒＴｈｒ（配列番号４７）から成る又は本質的に成るＣＤＲ−Ｌ３も含む、又は代わりに含む抗ＫＩＲ抗体を提供する。さらに別の態様では、本発明は、配列ＨｉｓＧｌｎＴｙｒＨｉｓＡｒｇＳｅｒＰｒｏＰｒｏＴｈｒ（配列番号４８）から成る又は本質的に成るＣＤＲ−Ｌ３も含む、又は代わりに含む抗ＫＩＲ抗体を提供する。
【０１２２】
さらなる例となる特徴として、本発明は、配列ＧｌｙＰｈｅＳｅｒＰｈｅＴｈｒＰｈｅＴｙｒＧｌｙＶａｌＨｉｓ（配列番号４９）から成る又は本質的に成るＣＤＲ−Ｈ１を含む抗ＫＩＲ抗体を提供する。
【０１２３】
さらに別の例となる態様では、本発明は、配列ＶａｌＩｌｅＴｒｐＳｅｒＧｌｙＧｌｙＡｓｎＴｈｒＡｓｐＴｙｒＡｓｎＡｌａＡｌａＰｈｅＩｌｅＳｅｒ（配列番号５０）から成る又は本質的に成るＣＤＲ−Ｈ２を含む抗ＫＩＲ抗体を提供する。
【０１２４】
さらに別の例となる態様では、本発明は、配列ＡｓｎＰｒｏＡｒｇＰｒｏＧｌｙＡｓｎＴｙｒＰｒｏＴｙｒＧｌｙＭｅｔＡｓｐＴｙｒ（配列番号５１）から成る又は本質的に成るＣＤＲ−Ｈ３を含む抗ＫＩＲ抗体を提供する。
【０１２５】
異なる態様では、本発明は、配列ＧｌｙＴｙｒＴｈｒＰｈｅＴｈｒＳｅｒＴｙｒＴｒｐＭｅｔＨｉｓ（配列番号５２）から成る又は本質的に成るＣＤＲ−Ｈ１を含む抗ＫＩＲ抗体を提供する。
【０１２６】
追加の態様では、本発明は、配列ＴｈｒＩｌｅＴｙｒＰｒｏＧｌｙＡｓｎＳｅｒＡｓｐＴｈｒＡｓｎＴｙｒＡｓｎＧｌｎＬｙｓＰｈｅＬｙｓＧｌｙ（配列番号５３）から成る又は本質的に成るＣＤＲ−Ｈ２を含む抗ＫＩＲ抗体を提供する。
【０１２７】
本発明の別の態様は、配列ＰｒｏＴｈｒＴｈｒＡｌａＴｈｒＡｒｇＳｅｒＳｅｒＡｌａＭｅｔＡｓｐＴｙｒ（配列番号５４）から成る又は本質的に成るＣＤＲ−Ｈ３を含む抗ＫＩＲ抗体によって具現化される。
【０１２８】
これらのＣＤＲ配列の基本的な及び新規の特性は、他の必要なＣＤＲ及びＦＲ配列との組み合わせで、１以上のＫＩＲ上に提示されるエピトープに結合する能力である。上記で示したように、そのような配列における特定の残基がＫＩＲエピトープの結合にほとんど寄与しない又は全く寄与しないこともあり得る。さらに、そのようなＣＤＲ残基がエピトープの結合特性に実質的に影響を及ぼすことなく、１又はわずかな挿入を認容し得ることもまた、又は代わりにあり得る（特異性及び／又は親和性）。しかしながら、本発明の他の態様では、そのような配列で有意な変更を行って有用な変異体を生じることができる。そのような変更を以下で議論する。
【０１２９】
これらの例となるＣＤＲ配列は、以下で記載する変異体ＣＤＲ配列、又は他の抗ＫＩＲのＣＤＲ（通常、ＫＩＲ結合の抗ＫＩＲ抗体から）と互いに組み合わせることができる。例となる一態様では、本発明は配列番号４３、４５、４７、４９、５０及び５１から選択されるＣＤＲ配列のほとんど又はすべてを含む抗ＫＩＲ抗体を提供する。
【０１３０】
別の説明に役立つ態様では、本発明は、配列ＭｅｔＧｌｕＳｅｒＧｉｎＴｈｒＬｅｕＶａｌＰｈｅＩｌｅＳｅｒＩｌｅＬｅｕＬｅｕＴｒｐＬｅｕＴｙｒＧｌｙＡｌａＡｓｐＧｌｙＡｓｎＩｌｅＶａｌＭｅｔＴｈｒＧｉｎＳｅｒＰｒｏＬｙｓＳｅｒＭｅｔＳｅｒＭｅｔＳｅｒＶａｌＧｌｙＧｌｕＡｒｇＶａｌＴｈｒＬｅｕＴｈｒＣｙｓＬｙｓＡｓｎＳｅｒＧｌｕＡｓｎＶａｌＶａｌＴｈｒＴｙｒＶａｌＳｅｒＴｒｐＴｙｒＧｉｎＧｉｎＬｙｓＰｒｏＧｌｕＧｌｎＳｅｒＰｒｏＬｙｓＬｅｕＬｅｕＩｌｅＴｙｒＧｌｙＡｌａＳｅｒＡｓｎＡｒｇＴｙｒＴｈｒＧｌｙＶａｌＰｒｏＡｓｐＡｒｇＰｈｅＴｈｒＧｌｙＳｅｒＧｌｙＳｅｒＡｌａＴｈｒＡｓｐＰｈｅＴｈｒＬｅｕＴｈｒＩｌｅＳｅｒＳｅｒＶａｌＧｌｎＡｌａＧｌｕＡｓｐＬｅｕＡｌａＡｓｐＴｙｒＨｉｓＣｙｓＧｌｙＧｌｎＧｌｙＴｙｒＳｅｒＴｙｒＰｒｏＴｙｒＴｈｒＰｈｅＧｌｙＧｌｙＴｈｒＬｙｓＬｅｕＡｓｐＩｌｅＬｙｓＡｒｇ（配列番号５５）から本質的に成る軽鎖可変（ＶＬ）配列を含む抗体を提供する。そのような配列の基本的な及び新規の特性はＫＩＲ結合へのその寄与である。そのような特性に実質的な影響を及ぼすことなく、この配列にて幾つかのアミノ酸を欠失、付加、又は置換させ得ることが可能であり得る。
【０１３１】
追加の例となる態様では、本発明は、配列ＭｅｔＡｓｐＰｈｅＧｌｎＶａｌＧｌｎＩｌｅＰｈｅＳｅｒＰｈｅＬｅｕＬｅｕＩｌｅＳｅｒＡｌａＳｅｒＶａｌＩｌｅＭｅｔＳｅｒＡｒｇＧｌｙＧｌｎＩｌｅＶａｌＬｅｕＴｈｒＧｌｎＳｅｒＰｒｏＡｌａＳｅｒＭｅｔＳｅｒＡｌａＳｅｒＬｅｕＧｌｙＧｌｕＡｒｇＶａｌＴｈｒＭｅｔＴｈｒＣｙｓＴｈｒＡｌａＳｅｒＳｅｒＳｅｒＶａｌＳｅｒＳｅｒＳｅｒＴｙｒＬｅｕＴｙｒＴｒｐＴｙｒＧｌｎＧｌｎＬｙｓＰｒｏＧｌｙＳｅｒＳｅｒＰｒｏＬｙｓＬｅｕＴｒｐＩｌｅＴｙｒＳｅｒＴｈｒＳｅｒＡｓｎＬｅｕＡｌａＳｅｒＧｌｙＶａｌＰｒｏＡｌａＡｒｇＰｈｅＳｅｒＧｌｙＳｅｒＧｌｙＳｅｒＧｌｙＴｈｒＳｅｒＴｙｒＳｅｒＬｅｕＴｈｒＩｌｅＳｅｒＳｅｒＭｅｔＧｌｎＡｌａＧｌｕＡｓｐＡｌａＡｌａＴｈｒＴｙｒＴｙｒＣｙｓＨｉｓＧｌｎＴｙｒＨｉｓＡｒｇＳｅｒＰｒｏＰｒｏＴｈｒＰｈｅＧｌｙＧｌｙＧｌｙＴｈｒＬｙｓＬｅｕＧｌｕＩｌｅＬｙｓＡｒｇ(配列番号５６）から本質的に成るＶＬ配列を含む抗体を提供する。
【０１３２】
配列が適当な文脈（たとえば、それが未解決のペプチドの全内容である又はペプチドの露出したＮ末端部分を表すＶＬ配列のシグナル配列として配列番号５５の最初の約２３のアミノ酸が切断され得る）で提示されるのであれば、配列番号５５及び配列番号５６双方のＮ末端部分は好適な宿主細胞にて切断され得る。従って、本発明はまた、配列番号５５及び配列番号５６のＮ末端が切り詰められた型（たとえば、そのＮ末端部分の約２０アミノ酸が取り除かれている）から本質的に成るＶＬ配列を含む抗ＫＩＲ抗体を提供する。
【０１３３】
別の態様では、本発明は、配列ＭｅｔＡｌａＶａｌＬｅｕＧｌｙＬｅｕＬｅｕＰｈｅＣｙｓＬｅｕＶａｌＴｈｒＰｈｅＰｒｏＳｅｒＣｙｓＶａｌＬｅｕＳｅｒＧｌｎＶａｌＧｌｎＬｅｕＧｌｕＧｌｎＳｅｒＧｌｙＰｒｏＧｌｙＬｅｕＶａｌＧｌｎＰｒｏＳｅｒＧｌｎＳｅｒＬｅｕＳｅｒＩｌｅＴｈｒＣｙｓＴｈｒＶａｌＳｅｒＧｌｙＰｈｅＳｅｒＰｈｅＴｈｒＰｒｏＴｙｒＧｌｙＶａｌＨｉｓＴｒｐＶａｌＡｒｇＧｌｎＳｅｒＰｒｏＧｌｙＬｙｓＧｌｙＬｅｕＧｌｕＴｒｐＬｅｕＧｌｙＶａｌＩｌｅＴｒｐＳｅｒＧｌｙＧｌｙＡｓｎＴｈｒＡｓｐＴｙｒＡｓｎＡｌａＡｌａＰｈｅＩｌｅＳｅｒＡｒｇＬｅｕＳｅｒＩｌｅＡｓｎＬｙｓＡｓｐＡｓｎＳｅｒＬｙｓＳｅｒＧｌｎＶａｌＰｈｅＰｈｅＬｙｓＭｅｔＡｓｎＳｅｒＬｅｕＧｌｎＶａｌＡｓｎＡｓｐＴｈｒＡｌａｌｉｅＴｙｒＴｙｒＣｙｓＡｌａＡｒｇＡｓｎＰｒｏＡｒｇＰｒｏＧｌｙＡｓｎＴｙｒＰｒｏＴｙｒＧｌｙＭｅｔＡｓｐＴｙｒＴｒｐＧｌｙＧｌｎＧｌｙＴｈｒＳｅｒＶａｌＴｈｒＶａｌＳｅｒＳｅｒ（配列番号５７）から本質的に成る重鎖可変（ＶＨ）配列も含む又は代わりに含む抗ＫＩＲ抗体を提供する。この配列の最初の２０アミノ酸残基は、この配列又は適当な文脈で配置されるこの配列を含むタンパク質鎖から成る又は本質的に成るペプチドのシグナル配列として作用することができる。従って、本発明はまた、その最初の約１〜２０残基を欠く配列番号５７の断片から本質的に成るＶＨ配列を含む抗ＫＩＲ抗体を提供する。
【０１３４】
さらなる態様では、本発明は、配列ＭｅｔＧｌｕＣｙｓＡｓｎＴｒｐＩｌｅＬｅｕＰｒｏＰｈｅＩｌｅＬｅｕＳｅｒＶａｌＴｈｒＳｅｒＧｌｙＶａｌＴｙｒＳｅｒＧｌｕＶａｌＧｌｎＬｅｕＧｌｎＧｌｎＳｅｒＧｌｙＴｈｒＶａｌＬｅｕＡｌａＡｒｇＰｒｏＧｌｙＡｌａＳｅｒＶａｌＬｙｓＭｅｔＳｅｒＣｙｓＬｙｓＡｌａＳｅｒＧｌｙＴｙｒＴｈｒＰｈｅＴｈｒＳｅｒＴｙｒＴｒｐＭｅｔＨｉｓＴｒｐＭｅｔＬｙｓＧｌｎＡｒｇＰｒｏＧｌｙＧｌｎＧｌｙＬｅｕＧｌｕＴｒｐＩｌｅＧｌｙＴｈｒＩｌｅＴｙｒＰｒｏＧｌｙＡｓｎＳｅｒＡｓｐＴｈｒＡｓｎＴｙｒＡｓｎＧｌｎＬｙｓＰｈｅＬｙｓＧｌｙＬｙｓＡｌａＬｙｓＬｅｕＴｈｒＡｌａＶａｌＴｈｒＳｅｒＴｈｒＡｓｎＴｈｒＡｌａＴｙｒＭｅｔＧｌｕＬｅｕＳｅｒＳｅｒＬｅｕＴｈｒＡｓｎＧｌｕＡｓｐＳｅｒＡｌａＶａｌＴｙｒＴｙｒＣｙｓＳｅｒＡｒｇＰｒｏＴｈｒＴｈｒＡｌａＴｈｒＡｒｇＳｅｒＳｅｒＡｌａＭｅｔＡｓｐＴｙｒＴｒｐＧｌｙＧｌｎＧｌｙＴｈｒＳｅｒＶａｌＴｈｒＶａｌＳｅｒＳｅｒ（配列番号５８）から本質的に成る重鎖可変（ＶＨ）配列も含む又は代わりに含む抗ＫＩＲ抗体を提供する。この配列の最初の２０アミノ酸残基は、この配列又は適当な文脈で配置されるこの配列を含むタンパク質鎖から成る又は本質的に成るペプチドのシグナル配列として作用することができる。従って、本発明はまた、その最初の約１〜２０残基を欠く配列番号５８の断片から本質的に成るＶＨ配列を含む抗ＫＩＲ抗体を提供する。
【０１３５】
態様の１つでは、本発明は、配列番号５５又はそのＮ末端が切り詰められた部分から本質的に成るＶＬ配列及び配列番号５７又はそのＮ末端が切り詰められた部分から本質的に成るＶＨ配列を含む抗ＫＩＲ抗体を提供する。
【０１３６】
すでに言及したように、たとえば、抗ＫＩＲ抗体配列のような抗原結合抗体配列の好適な配列変異体を本発明の抗体に組み入れることができる。抗体配列のほとんどのタイプの変異が好適であり得る。従って、たとえば、抗ＫＩＲ抗体は変異体定常配列及び／又は変異体フレームワーク配列を含むことができる。
【０１３７】
態様の１つでは、本発明は、１以上の変異体ＣＤＲ配列（たとえば、野生型関連の配列に関して配列の生物学的及び／又は物理化学的な特性に影響を及ぼす１以上のアミノ酸の挿入、欠失、付加及び／又は置換によって類似する野生型ＣＤＲとは異なるＣＤＲ配列）を含む抗ＫＩＲ抗体を提供する。ＰＣＴ出願番号ＷＯ２００６／０７２６２５で開示された技法を参照のこと。ＣＤＲ、ＶＨ及びＶＬ配列の変異体は、それぞれその「親」ＣＤＲ、ＶＨ及びＶＬ配列、たとえば、抗ＫＩＲｍＡｂＤＦ２００及び／又は抗ＫＩＲｍＡｂＮＫＶＳＦ１のＣＤＲ、ＶＨ及びＶＬ配列に好適なレベルの同一性を示すことができる。通常、親と本質的に同一の抗原決定領域に結合する変異体配列は、親配列に対する少なくとも約４０％のアミノ酸配列同一性、たとえば、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上、又は少なくとも約９５％（たとえば、約４５〜９９％、約５５〜９９％、又は約６５〜９９％）の親配列に対する同一性を保持するであろう。しかしながら、場合によっては、本質的に同一のエピトープを標的とするＣＤＲ配列に特に関して、さらに低いレベルの同一性を持つ変異体が好適であり得る。
【０１３８】
異なる抗原決定領域又は異なるセット（又は「プロファイル」）の抗原決定領域に結合するＣＤＲ、ＶＨ及びＶＬの変異体も、本明細書のどこかで記載される技法のいずれか（合理的な設計、変異誘発、指向進化等）によって生成することができる。そのような場合、親配列に対する有意に低いレベルのアミノ酸配列同一性を予想することができる。たとえば、親ＣＤＲ配列と約２０〜３０％ほどの小さなアミノ酸同一性である、親配列とは異なるエピトープ結合特性を有するＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２又はＣＤＲ−Ｈ３の変異体はＫＩＲのようなＮＫＣＡＭＲの結合に寄与する変異体にて示され得る。
【０１３９】
ＰＣＴ出願番号ＷＯ２００６／０７２６２５はさらに、ＣＤＲ及び可変領域の配列に特定の式を含む抗ＫＩＲ抗体の変異体を提供しているが、その開示は参照によって本明細書に組み入れられる。
【０１４０】
通常、変異体は、ほとんど保存的置換を介して「親」配列とは異なり、たとえば、変異体における置換の少なくとも約３５％、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上、約９５％以上（たとえば、６５〜９９％）が保存的なアミノ酸残基の置換である。本発明の文脈では、保存的置換は、ＰＣＴ出願番号ＷＯ２００６／０７２６２５（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ  ＡＳ及びＩｎｎａｔｅ  Ｐｈａｒｍａ  ＳＡ）の表４、５及び６の１以上で反映されたアミノ酸のクラスの範囲内の置換によって定義することができる。参照によって本明細書に組み入れられるＰＣＴ出願番号ＷＯ２００６／０７２６２５はまた、追加の保存的置換のグループ分け：保存的ではない置換を選択することによる機能における実質的な変更を作り出すこと；ペプチド変異体の設計及び選択に有用な原理；疎水性／親水性の特性という点での保存；保存的置換、疎水性特性、重量保存、ＢＬＡＳＴプログラムの使用によって判定されるような二次構造の組成又は類似性スコアという点で特性の類似性を評価する方法を含む、親ペプチドの構造に実質的に似る変異体ペプチドの構造を維持すること；許容可能な変異体と親の間の変異／多様性の他の点；ＣＤＲにおける有利な配列変更；変化したグリコシル化を生じる配列変異；超可変領域の挿入、及び変異抗体、さらに一般的にはＣＤＲ変異体を生成することを記載している。
【０１４１】
本発明のアミノ酸配列の文脈における同一性は、任意の好適な技法によって、通常、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈ配置解析（Needleman and Wunsch, J. Mol. Biol. (1970) 48:443-453を参照）によって、たとえば、１２の当初ギャップペナルティと−２の拡張ペナルティとともにＢＬＯＳＵＭ５０スコア化マトリクスを用いたＡＬＩＧＮ２．０（ＡＬＩＧＮプログラムに組み入れられたグローバルアライメント法の議論についてはMyers and Miller, CABIOS (1989)４：１１−１７を参照）による解析を介して提供されるように決定することができる。ＡＬＩＧＮ２．０プログラムのコピーは、たとえば、サンディエゴのSｕｐｅｒｃｏｍｐｕｔｅｒ（ＳＤＳＣ）Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈを介して入手可能である。Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈ配置は、２つの配列間の全体的な又は広範囲の同一性測定を提供するので、さらに大きなペプチド配列の一部又は部分配列であり得る標的配列は、完全配列と類似する方法で使用されてもよく、又は代わりに局所配置の値を用いて、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ配置（J. Mol. Biol (1981 ) 147: 195- 197）によって決定されるように、配列間の関係を評価することができることが認識されるべきであり、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ配置は利用可能なプログラムを介して入手することができる（同一性を解析するのに好適であり得る他の局所配置法には、たとえば、ＦａｓｔＡ及びＢＬＡＳＴプログラムのような発見的局所配置アルゴリズムを適用するプログラムが挙げられる）。同一性を評価するためのさらなる関連方法は、たとえば、国際特許出願番号ＷＯ０３／０４８１８５に記載されている。Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズムを改善しようとするＧｏｔｏｈアルゴリズムを代わりに広範囲配列配置に使用することができる。たとえば、Ｇｏｔｏｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１６２：７０５−７０８（１９８２）を参照のこと。
【０１４２】
抗体の産生
モノクローナル抗体は特に、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ法、又は他の周知のその後開発された方法（たとえば、Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp.59-103 (Academic Press, 1986)を参照）を用いて作製され得る。ハイブリドーマ及び他の融合細胞は、化学融合、電気的融合、又は好適なタイプの骨髄腫、ヘテロ骨髄腫、リンパ芽球細胞、形質細胞種又は類似の不死化された細胞及び好適なタイプの抗体発現細胞による他の好適な技法によって形成され得る。
【０１４３】
形質転換した不死化Ｂ細胞を使用して効率的に抗体を産生することもできる。形質転換したＢ細胞は、エプステインバーウイルス又は形質転換遺伝子による形質転換のような常法によって産生することができる（たとえば、"Continuously Proliferating Human Cell Lines Synthesizing Antibody of Predetermined Specificity," Zurawaki, V. R. et al, in Monoclonal Antibodies, ed. by Kennett R. H. et al, Plenum Press, N.Y. 1980, pp 19-33.を参照）。従って、安定し、連続した及び／又は不死化した抗ＮＫＣＩＲ抗体発現細胞及び細胞株は本発明の別の特徴である。抗ＮＫＣＩＲ抗体を産生する方法の工程には、たとえば、適当な相手と融合させて抗ＮＫＣＩＲ抗体を産生する、又は配列決定してそのような配列を用いて組換え抗ＮＫＣＩＲ抗体を作出する抗ＡＭＲ抗体及び／又は抗ＳＴＭ抗体を産生する不死化Ｂ細胞を作出する工程が含まれ得る。
【０１４４】
組換えタンパク質の発現用の宿主として利用可能な細胞株は、当該技術で周知であり、それには、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から入手可能な多数の不死化された細胞株が挙げられる。これらには、とりわけ、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ、ＳＰ２細胞、ＨｅＬａ細胞、幼若ハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（たとえば、ＨｅｐＧ２）、Ａ５４９細胞、及び多数の他の細胞株が挙げられる。使用され得る他の細胞株は、たとえば、Ｓｆ９細胞のような昆虫細胞株である。抗体遺伝子をコードする核酸（又は核酸を含有するベクター）を哺乳類宿主細胞に導入すると、宿主細胞で抗体の発現を可能にする、さらに好ましくは、宿主細胞が増殖している培養培地への抗体の分泌を可能にする期間、宿主細胞を培養することによって抗体を産生することができる。標準的なタンパク質精製法を用いて培養培地から抗体を回収することができる。分泌シグナルがなく、直接発現される場合、抗体は宿主細胞の溶解物からも回収され得る。
【０１４５】
細胞培養、細胞溶解物、及び形質転換動物又はそれから得られる生体材料（たとえば、抗体を産生する形質転換動物の腹水から）からの抗体の精製は、たとえば、免疫親和性カラム精製、硫酸沈殿、クロマト分画；分取用ＳＤＳ−ＰＡＧＥ等を含む当該技術で既知の好適な技法の任意の数の適用によって達成することができる。
【０１４６】
抗ＮＫＣＩＲ抗体は細菌細胞及び、たとえば、酵母のような真核単細胞生物にて産生することもできる。細菌細胞が産生した抗体は正常なグリコシル化を欠くので、ＡＤＣＣ機能及び、哺乳類細胞及び／又は動物で産生される本質的に同一の抗体に関連し得る免疫応答の他の態様という点で欠陥があり得る。
【０１４７】
ＷＯ２００６／０７２６２５に記載されたものを含む抗体の精製、スクリーニング及び選抜のための好適な方法を使用することができる。抗ＮＫＣＩＲ抗体のスクリーニング及び選抜は、好適な技法又は技法の組み合わせによって達成することができる。たとえば、多様な免疫アッセイ方式を使用して特定のタンパク質、変異体又は断片に選択的に結合する抗体を選抜することができる。たとえば、固相ＥＬＩＳＡ免疫アッセイを日常的に用いて、タンパク質、タンパク質変異体又はその断片と選択的に免疫反応性である抗体を選抜する。Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ、上記を参照のこと。モノクローナル抗体の結合親和性は、たとえば、Ｍｕｎｓｏｎら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０（１９８０）のスキャチャード解析によって決定することができる。
【０１４８】
抗ＮＫＣＩＲ抗体は通常、たとえば、ＮＫＣＩＲが介在するシグナルを阻害し、ＮＫＣＡＲが介在するシグナルを介したＮＫ活性の活性化を促進することによってＮＫ細胞の活性を調節する能力についてスクリーニングされる。たとえば、フローサイトメトリースクリーニング法を含むそのような文脈で有用であり得る多数のＮＫ細胞アッセイが開発されている。たとえば、 ＭｃＧｉｎｎｅｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，８０、１９８４、７０−８５を参照のこと。ＮＫ細胞を培養すること、ＮＫ細胞を評価すること等に関する方法は当該技術で既知である。たとえば、Ｃａｍｐｂｅｌｌ及びＣｏｌｏｎｎａ，Ｎａｔｕｒａｌ  Ｋｉｌｌｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ (Methods in Molecular Biology Series vol. 121) (2000)を参照のこと。
【０１４９】
抗ＮＫＣＩＲ抗体の文脈では、ＮＫ細胞中和活性は、ＮＫＣＩＲ陽性ＮＫ細胞による標的細胞の溶解を再構成する抗ＮＫＣＩＲ抗体の能力によって実証することができる。抗ＮＫＣＩＲ抗体が関連するＮＫ細胞の調節（たとえば、ＫＩＲ阻害）は細胞に基づいた種々の細胞傷害性アッセイによって評価することができる。再指向殺傷は、細胞傷害性を誘導するＮＫ細胞受容体の能力を決定するための実験系の１つである。抗体が結合するＦｃ受容体を発現する標的細胞を殺傷する能力について、候補受容体に特異的な抗体で被覆したＮＫ細胞を評価する。別の変異体では、抗ＫＩＲ抗体に関連するＮＫ細胞活性の調節をサイトカイン放出アッセイにて評価する。種々の抗ＮＫＣＩＲ抗体に関連する他の生物活性を用いて、抗ＮＫＣＩＲ抗体を評価することもできる。たとえば、ＡＤＣＣに介在するＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ３及びＡＤＣＣに介在する一部のＩgＧ１サブクラス抗体によって誘導される抗体依存性細胞障害性（ＡＤＣＣ）を誘導する、促進する及び／又は高めるその能力について、抗ＮＫＣＩＲ抗体を評価することができる。クロム放出アッセイを用いて、ＡＤＣＣを誘導する能力を評価することができる。
【０１５０】
抗ＮＫＣＩＲ抗体は通常、少なくとも実質的に純粋な形態で使用され、提供される。実質的に純粋な分子は、それが属する分子のクラスに関して見い出される組成にて優勢な種である分子である（たとえば、実質的に純粋な抗体は、それが見い出される組成にて優勢なタンパク質種である）。実質的に純粋な種は、組成物における分子のタイプの少なくとも約５０％を構成し、通常、重量で組成物における種の少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％以上の比率を構成するであろう。一般に、抗ＮＫＣＩＲ抗体を含む組成物は、組成物における存在するすべてのペプチド種の文脈で、又は提案された用途の文脈で実質的に活性のあるペプチド種に関して抗ＮＫＣＩＲ抗体について少なくとも約９８％、９８％又は99％の相同性を示すであろう。たとえば、アルブミンのようなペプチド安定化剤／緩衝剤は、抗ＮＫＣＩＲ抗体の活性を妨げることなく、最終医薬製剤に意図的に含まれるので、そのような純度の計算から除外され得る。基本的な活性を妨害しない不純物の存在は実質的に純粋な組成物の文脈で許容可能であり得る。純度は、所与の化合物に適する方法（たとえば、クロマトグラフィ法、アガロース及び／又はポリアクリルアミドのゲル電気泳動、ＨＰＬＣ解析等）によって測定することができる。
【０１５１】
単離された分子は、有意なレベルの（たとえば、約１％を超える、約２％を超える、約３％を超える、又は約５％を超える）外来の及び望ましくない生体分子、たとえば、細胞、細胞培養物、化学媒体、又は抗ＮＫＣＩＲ抗体が産生された動物の中に含有される抗ＮＫＣＩＲ抗体ではない生体分子に無関係である分子を指す。単離された分子はまた、十分な量の時間（たとえば、少なくとも約１０分間、少なくとも約２０分間）、ヒトの介在（自動又は手動、又は双方）によるそのような精製の段階を通過した分子も指す。本発明によって提供される種々の組成物の多くでは、たとえば、１以上の薬学上許容可能なキャリアを含む組成物では、抗ＮＫＣＩＲ抗体は、組成物における全分子種の数という点では相対的に少量で存在することができる（たとえば、大量の薬学上許容可能なキャリア、安定剤、及び／又は保存剤を含む組成物の場合）。場合によっては、ＢＳＡのような追加のペプチドが前に精製された抗ＮＫＣＩＲ抗体とともにそのような組成物に含まれ得る。しかしながら、組成物のそのような追加の構成物が抗ＮＫＣＩＲ抗体の意図される応用に許容可能であるという条件で、そのような組成物は単離された抗ＮＫＣＩＲ抗体を含むとして依然として記載することができる。言い換えれば、用語「単離された」は、薬学上許容可能な調製物の一部を形成し得るような他の化合物又は物質との人工的な又は合成の混合物を排除することを意味しない。
【０１５２】
薬学上許容可能なキャリア
抗ＮＫＣＩＲ抗体を、１以上の意図される投与経路のために適する１以上のキャリア（希釈剤、賦形剤等）及び／又は補助剤と組み合わせて薬学上許容可能である組成物を提供することができる。
【０１５３】
抗ＮＫＣＩＲ抗体は、たとえば、ラクトース、スクロース、紛体（たとえば、デンプン紛体）、アルカン酸のセルロースエステル、ステアリン酸、タルク、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸及び硫酸のナトリウム塩及びカルシウム塩、アカシア、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、及び／又はポリビニルアルコール、及び任意で従来の投与用に錠剤化したもの及びカプセル化したものと混合され得る。或いは、抗ＮＫＣＩＲ抗体は、生理食塩水、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、カルボキシメチルセルロースコロイド状溶液、エタノール、コーン油、ピーナッツ油、綿実油、ゴマ油、トラガカントゴム、及び／又は種々の緩衝液に溶解され得る。他のキャリア、補助剤及び投与方式は医薬技術で周知である。キャリア又は希釈剤には、遅延性物質、たとえば、グリセリル一ステアリン酸又はグリセリル二ステアリン酸を単独で又はワックスと共に、又は他の機能的に類似の物質が含まれ得る。
【０１５４】
薬学上許容可能なキャリアには一般に、抗ＮＫＣＩＲ抗体と生理的に相溶性である好適な溶媒、分散性媒体、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤等のいずれか又はすべてが含まれる。薬学上許容可能なキャリアの例には、水、生理食塩水、リン酸緩衝化生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール等、並びにそれらの組み合わせが挙げられる。多くの場合、そのような組成物に等張剤、たとえば、糖類、マンニトールやソルビトールのような多価アルコール、又は塩化ナトリウムを含むことが望ましくあり得る。たとえば、湿潤剤又は些末な量の、たとえば、湿潤剤又は乳化剤、保存剤又は緩衝剤のような補助物質、それらは、抗ＫＩＲ抗体、関連組成物又は組み合わせの貯蔵寿命又は有効性を高めることができる。医薬組成物のキャリア及び他の成分の好適性は抗体の所望の生物学的特性への有意な否定的な影響を欠くことに基づいて決定される。
【０１５５】
本発明に係る抗ＮＫＣＩＲ抗体組成物、関連組成物及び組み合わせは、種々の好適な形態であり得る。そのような形態には、たとえば、液体、半固体、及び固体の剤形、たとえば、液状溶液（たとえば、注射用及び輸液用の溶液）、分散液又は懸濁液、エマルジョン、ミクロエマルジョン、錠剤、丸薬、粉剤、リポソーム、デンドリマー、及び他のナノ粒子（たとえば、Baek et al., Methods Enzymol. 2003;362:240-9; Nigavekar et al., Pharm Res. 2004 Mar;21(3):476-83）、微粒子及び座薬が挙げられる。製剤及び塩はさらにＰＣＴ出願番号ＷＯ２００６／０７２６２５に記載されている。
【０１５６】
通常、注射用及び輸液用の溶液という点での組成物、たとえば、他の抗体による受動免疫に使用されるものに類似する組成物は、本発明の抗ＮＫＣＩＲ抗体の送達に使用される。抗ＮＫＣＩＲ抗体組成物の典型的な送達方式は、非経口投与（たとえば、静脈内、皮下、腹腔内、及び／又は筋肉内での投与）によるものである。態様の１つでは、抗ＮＫＣＩＲ抗体は、静脈内の注射又は点滴によってヒト患者に投与される。
【０１５７】
医薬用途のための組成物は、種々の希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、界面活性剤（たとえば、非イオン性の界面活性剤、たとえば、ツイーン−８０）、安定剤（たとえば、糖類又はタンパク質を含まないアミノ酸）、保存剤、組織固定剤、可溶化剤、及び／又は医薬用途のための組成物への包含に好適である他の物質も含むことができる。好適な成分の例は、Ｂｅｒｇｅら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，６６６１），１−１９（１９７７）；Ｗａｎｇ及びＨａｎｓｏｎ，Ｊ．Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈ：４２，Ｓ４−Ｓ６（１９８８）；米国特許第６，１６５，７７９号及び同第６，２２５，２８９号、並びに本明細書で引用される他の文書にも記載されている。そのような医薬組成物はまた保存剤、抗酸化剤又は当業者に既知の他の添加剤を含むこともできる。追加の薬学上許容可能なキャリアは当該技術で既知である（たとえば、ＷＯ２００６／０７２６２５における参照を参照のこと）。
【０１５８】
悪性血液疾患の治療
本発明は、悪性血液疾患又は前悪性血液疾患を有する又は以前有していた個体を治療する治療方法を提供する。治療には、抗ＮＫＣＩＲ抗体、抗ＮＫＣＩＲ抗体組成物及び／又は関連組成物が関与し、それらは微小な疾患又は検出できない病変を有する個体に投与される。本発明はまた、白血病（たとえば、ＡＭＬ、ＣＭＬ、ＭＤＳ）及び骨髄腫（たとえば、ＭＭ、ＳＭＭ）及びＭＤＳ、ＳＭＭ及びＭＧＵＳのような前悪性血液疾患を含む悪性血液疾患のそのような治療のために抗ＮＫＣＩＲ抗体を投与する好まれる治療計画も提供する。
【０１５９】
用語「治療」は本明細書では、症状又は病気状態が発症するのを防ぐ目的での、又はすでに発症したそのような症状又は病気状態の進行を防ぎ若しくは遅らせる、症状又は病気状態を緩和する、改善する又は撲滅する目的での有効量のそのような製剤の送達を指す。用語「治療」は、従って、（ｉ）第１の治療の後、有効又は著効を経験した、（ｉｉ）寛解にある、（ｉｉｉ）検出できる疾患（たとえば、ＡＭＬ、ＭＭ、ＭＤＳ）に罹った、又は（ｉｖ）前悪性疾患を有する個体における微小な疾患又は検出できない病変の治療を含むことを意味する。従って、企図される治療は、ＳＭＭ又はＭＧＵＳを有するが、未だＭＭを有さない個体の治療を含む。さらに、治療は、ＭＤＳを有するが、ＡＭＬを有さない個体の治療を含む。用語「治療」は、導入療法及び地固め療法を含む。
【０１６０】
用語「検出できない病変」は本明細書で使用されるとき、疾患の生物学的な及び／又は医学的なマーカーが細胞学的検出可能レベルを下回っている個体における病気状態を指す。たとえば、白血病患者は、患者が細胞学的検出可能レベルを下回る全身白血病組織量、すなわち、およそ１０９個を下回る細胞を有する場合、「検出できない病変」を有すると言われる。さらなる例を目的として、骨髄腫患者は、多発性骨髄腫の骨髄又は血液の知見がない及び／又は血清若しくは尿のＭタンパク質成分の証拠がない場合、「検出できない病変」を有すると言われる。疾患の生物学的な及び／又は医学的なマーカーは標準の手順を用いて評価され得る。たとえば、血清又は尿のＭタンパク質レベルは電気泳動法及び／又は免疫固定法を用いて評価され得る。
【０１６１】
本明細書で使用されるとき、用語「寛解」は慢性又は悪性の疾患の臨床的な及び主観的な特徴の部分的な又は完全な消失を指す。
【０１６２】
用語「前悪性血液疾患（単数）」及び／又は「前悪性血液疾患（複数）」は本明細書で使用されるとき、前癌性の細胞を指す。これら前癌性の細胞は未だ悪性ではないが、悪性になる。前癌性の細胞は正常細胞とは異なって見え得るが、未だ周辺組織に侵襲していない。例となる前悪性疾患には、ＭＤＳ、ＳＭＭ及びＭＧＵＳが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６３】
用語「悪性血液疾患」には本明細書では、リンパ腫、白血病、骨髄腫、又はリンパ性悪性疾患、並びに脾臓及びリンパ節の癌が挙げられる。例となるリンパ腫にはＢ細胞リンパ腫及びＴ細胞リンパ腫の双方が挙げられる。Ｂ細胞リンパ腫の非限定例には、低悪性度／ＮＨＬの濾胞性細胞リンパ腫（ＦＣＣ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、びまん性大細胞リンパ腫（ＤＬＣＬ）、小リンパ性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽球ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球ＮＨＬ、高悪性度小非切断細胞ＮＨＬ、巨大疾患ＮＨＬ、ヴァンデルストレームマクログロブリン血症、リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、びまん性大細胞リンパ腫（ＤＬＣＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、単球性Ｂ細胞リンパ腫、血管免疫芽球性リンパ節症、小リンパ球性濾胞性びまん性大細胞、びまん性小切断細胞、大細胞免疫芽球性リンパ芽球腫、小非切断バーキット及び非バーキット濾胞性優勢大細胞；濾胞性優勢小切断細胞；及び濾胞性混合小切断及び大細胞リンパ腫が挙げられる。Ｔ細胞リンパ腫の非限定例には、節外性Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、未分化大細胞ンパ腫、及び血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫が挙げられる。悪性血液疾患にはまた、たとえば、二次白血病、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、Ｂ細胞前リンパ性白血病（Ｂ-ＰＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、及び骨髄異形成（ＭＤＳ）のような白血病も挙げられるが、これらに限定されない。悪性血液疾患にはさらに、たとえば、多発性骨髄腫（ＭＭ）及びくすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）のような骨髄腫も挙げられるが、これらに限定されない。他の血液性及び／又はＢ細胞又はＴ細胞に関連する癌は、用語、悪性血液疾患によって包含される。たとえば、悪性血液疾患にはまた、樹状細胞、血小板、赤血球、ナチュラルキラー細胞及び多形核白血球、たとえば、好塩基球、好酸球、好中球及び単球を含む追加の造血系細胞の癌も含まれる。
【０１６４】
これらの前悪性疾患及び悪性疾患は分類の系の変化によって異なる名称を有することが多く、異なる名称のもとで分類されたリンパ腫患者も本発明の併用療法計画から恩恵を受け得ることが当業者に明らかであるべきである。
【０１６５】
例となる一態様では、本発明は、宿主にて悪性血液疾患の進行を検出可能に減らすのに十分な量で抗ＮＫＣＩＲ抗体、抗ＮＫＣＩＲ抗体組成物又は関連組成物（たとえば、抗ＮＫＣＩＲ抗体をコードする核酸）を投与することを含む、検出可能なレベルの癌細胞を有する哺乳類宿主、たとえば、ヒト患者における悪性血液疾患の進行を減らす方法を提供する。
【０１６６】
疾患又は癌の進行は、特定のタイプの疾患の標準的な基準によって定義することができる。進行は、当初細胞の選択的なクローン性増殖を評価することによって任意で決定される。癌及び癌の進行を検出する方法は、好適な技法によって達成することができ、そのうち幾つかの例は当該技術で既知である。好適な技法の例には、ＰＣＲ及びＲＴ−ＰＣＲ（たとえば、癌細胞関連の遺伝子又は「マーカー」の）、生検、画像化法、核型決定法及び他の染色体分析、免疫アッセイ／免疫細胞化学的検出法、組織学的な及び／又は組織病理的なアッセイ、細胞動態試験及び細胞周期分析、フローサイトメトリー、並びに身体検査法（たとえば、身体的な症状）が挙げられる。癌及び癌の進行を検出する例となる方法には、異常細胞の集団を単離し、異常細胞から核酸を単離し、遺伝子再構成を標的とするオリゴヌクレオチドに単離された核酸を接触させることによって、細胞学的異常、たとえば、腫瘍性の遺伝的マーカーを検出することが挙げられる。接触によって、たとえば、免疫グロブリン（Ｉｇ）及び／又はＴ細胞受容体の遺伝子の再構成のような細胞学的な異常の存在が検出される。
【０１６７】
対象に抗ＮＫＣＩＲ抗体を送達すること（直接投与、又は抗ＮＫＣＩＲ抗体をコードする核酸配列を含むポックスウイルス遺伝子移送ベクターからのような、その中の核酸からの発現のいずれかによる）及び本発明の他の方法を実践することを用いて、癌の進行の好適な態様を抑制する、治療する、予防する、又はさもなければ、改善することができる。本発明の方法は、腫瘍増殖（たとえば、骨髄における形質細胞の比率、循環における腫瘍細胞の数）、及びそれに関連するパラメータ又は症状（たとえば、Ｍタンパク質のレベル）の抑制及び／又は改善に特に有用であることができる。癌の進行のそのような態様を抑制する、予防する又はさもなければ改善する方法は、独立して及びまとめて本発明の有利な特徴である。
【０１６８】
癌の進行の抑制には、たとえば、（１）腫瘍細胞に形質転換する正常細胞の比率（又はその態様）、（２）前腫瘍細胞（たとえば、ＳＭＭ又はＭＧＵＳ）又は腫瘍細胞の増殖の比率、（３）前腫瘍性及び／又は腫瘍性の表現型を示す細胞の数、（４）前腫瘍細胞及び／又は腫瘍細胞を含む細胞媒体（たとえば、細胞培養物、組織又は臓器（たとえば哺乳類宿主の臓器））の物理的面積、（５）正常細胞及び／又は前腫瘍細胞が腫瘍細胞に形質転換する確率、（６）癌細胞が癌進行の次の態様に進行する（たとえば、転移の可能性の低下）の確率、又は（７）それらの組み合わせにおける検出可能な低下が含まれ得る。そのような変化は、上述の技法又は当該技術で既知のその好適な相方を用いて検出することができ、それは通常、その有効性を評価できるように治療計画の投与に先立って好適な時間に適用される。
【０１６９】
別の態様では、本発明は、癌の進行のリスクを減らす方法、治験開始を受けている細胞集団におけるさらなる癌の進行のリスクを減らす方法、及び／又はヒト患者における癌の進行を低下させるための治療計画を提供する方法を提供するが、それは、部分寛解又は完全寛解を達成するのに十分な量及び計画で１以上の第１の治療（たとえば、化学療法剤のような導入療法）を患者に投与すること、及びある量の抗ＮＫＣＩＲ抗体又は関連組成物（又は併用投与方法を適用すること）を患者に投与することを含む。患者の第１の治療に対する応答が進行中である間に、たとえば、患者が寛解にある又は微小病変を有する場合に、抗ＮＫＣＩＲ抗体が投与される。
【０１７０】
抗ＮＫＣＩＲ化合物は、単剤療法剤として、又は他の治療剤との併用で投与され得る。用語「単剤療法剤」は本明細書で使用されるとき、他の医薬活性剤を含まない、及び／又は特定の疾患状態について個体を治療するのに追加の医薬活性剤を使用しないとき、抗ＮＫＣＩＲ化合物を含む薬物を指す。或いは、本発明の一部の実施形態では、抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片の投与は他の治療剤と併用され得る。たとえば、癌の治療には多数の治療剤が利用可能である。本発明の抗体組成物及び方法は、特定の疾患、特に腫瘍、癌、又は患者が呈する他の疾患若しくは障害の治療に一般に採用される他の方法と併用され得る。特定の治療法が、それ自体で患者の状態に有害であることが知られず、本発明の医薬組成物における抗体の活性に有意に対抗しない限り、本発明とのその併用は企図される。
【０１７１】
癌の治療と関連して、本発明の医薬組成物は、たとえば、外科手術、放射線療法、化学療法等のような従来の治療法との併用で使用され得る。従って、本発明は、本発明の医薬組成物が、手術と同時に、その前に若しくはその後に使用される；又は従来の化学療法、放射線療法、若しくは抗血管新生剤、若しくは標的とされる免疫毒素若しくは凝固リガンドとともに、その前に又はその後に投与される、併用療法を提供する。本発明の抗ＫＩＲ抗体組成物の投与の前に、それと同時に、又はそれに続いて他の抗癌剤が与えられ得る。状況によっては、治療期間を有意に延ばすことが望ましいことさえあり得るが、その際、抗癌剤及び抗癌治療の各投与と本発明の抗体組成物の投与との間で、数日（たとえば、２、３、４、５、６又は７）、数週間（たとえば、２、３、４、５、６、７又は８）、又はさらに数か月（たとえば、１、２、３、４、５、６、７、又は８）が経過する。このことは、手術や化学療法のように抗癌治療が腫瘍を実質的に破壊することを意図した状況、及び本発明の抗体組成物の投与が微小転移又は腫瘍の再増殖を防ぐことを意図した状況では有利であり得る。本発明の抗ＫＩＲ抗体基づく組成物又は抗癌剤のいずれかの１回を超える投与が利用されることも想定される。これらの剤は、相互交換可能に、隔日又は隔週に、又は本発明の抗ＫＩＲ抗体組成物による治療のサイクルに続く抗癌剤療法のサイクルで投与され得る。いずれにしても、併用療法を用いて腫瘍の退行を達成するには、必要とされるものすべてが、投与時間にかかわらず、抗腫瘍効果を発揮するのに十分な併用量で双方の剤を送達すべきである。
【０１７２】
併用抗癌療法を実践するには、患者の中で有利な併用抗癌作用を生じるのに有効な方法で他の抗癌剤と併用して本発明の抗体組成物を単に患者に投与する。治療計画にて、本発明の抗体含有組成物との併用で１以上の剤が使用される場合、各治療が別々に実施される場合に認められる効果の追加であるという併用成績についての要件はない。少なくとも追加の効果が一般に望ましいが、単一療法の１つを上回る高い抗癌効果が有益である。また、これは可能であり、有利であるが、相乗効果を示すための併用治療についての特定の要件もない。
【０１７３】
併用投与には、別々の製剤又は単一の医薬製剤の同時投与、及び抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片と第１の治療のいずれかの順での連続投与が含まれる。好ましくは、投与された活性剤すべてが同時にその生物活性を発揮する。
【０１７４】
患者及び癌のステージに応じて、第１の治療には以下の剤及び／又は療法：手術、放射線療法、免疫調節剤、化学療法剤、ホルモン療法、及び抗血管新生剤の１以上が関与し得る。抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片の投与を、別の抗体、たとえば、特定の癌に関連する別の腫瘍抗原に向けられた抗体の投与と併用することも望ましくてもよい。たとえば、抗ＮＫＣＩＲ抗体又は抗体断片は、リツキサンとの併用で投与され得る。
【０１７５】
手術という点では、外科的介入は本発明との併用で実践され得る。
【０１７６】
放射線療法と関連して、たとえば、γ線照射、Ｘ線、ＵＶ照射、マイクロ波及びさらに電子放出等のような癌細胞内で局所的にＤＮＡの損傷を誘導するメカニズムが熟考される。放射線同位元素の癌細胞への有向送達も熟考され、これは、ターゲティング抗体又は他のターゲティング手段との併用で使用され得る。
【０１７７】
他の態様では、本発明の抗体組成物と共に又はその一部として免疫調節剤又は免疫調節計画が併用で投与され得る。免疫調節剤の好まれる例には、サイトカインが挙げられる。そのような併用法に種々のサイトカインが採用され得る。本発明によって熟考される併用にて有用なサイトカインの例には、IＬ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＴＧＦ−β、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＬＡＦ、ＴＣＧＦ、ＢＣＧＦ、ＴＲＦ、ＢＡＦ、ＢＤＧ、ＭＰ、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＴＭＦ、ＰＤＧＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γが挙げられる。本発明の併用治療又は組成物で使用されるサイトカインは、たとえば、患者の状態とサイトカインの相対的な毒性のような臨床的適応と矛盾しない標準の計画に従って投与される。本発明の抗体組成物と共に又はその一部として併用で投与され得る他の免疫調節化合物には、たとえば、抗ＣＴＬＡ４抗体又は抗ＣＤ９４ＪＮＫＧ２Ａ抗体（たとえば、米国公開特許出願２００３００９５９６５を参照）のような抗体を含むが、それらに限定されないリンパ球上の他の阻害性受容体に特異的に結合する抗体が挙げられる。当該技術で既知であるこれらの分子の変異体及び誘導体も、又は代わりに、そのような方法で使用することができ、適宜、本発明の組成物に組み入れることができる。
【０１７８】
特定の実施形態では、本発明の抗ＫＩＲ抗体を含む治療用組成物は、化学療法剤又はホルモン療法剤との併用で投与されてもよく、又はそれをさらに含んでもよい。種々のホルモン療法剤及び化学療法剤が、本明細書で開示される併用治療法で使用され得る。
【０１７９】
例となる化学療法剤には、アセトゲニン（たとえば、ブラタシン及びブラタシノン）、アドリアマイシン、アルキル化剤、アルキルスルホン酸、アジリジン（たとえば、ベンゾドパ、カルボクオン、メツレドパ及びウレドパ）、ビスホスホネート（たとえば、クロドロネート、エチドロネート、ＮＥ−５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート、アレンドロネート、パミドロネート、チルドロネート及びリセドロネート）；ダクチノマイシン、デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール）、エチルエニミン及びメチルアメラミン（たとえば、アルトレアミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホロアミド、トリエチレンチオホスホロアミド、及びトリメチロールメラミン）、β−ラパコン、ラパコール；コロチシン；ベツリン酸；カンプトテシン（たとえば、トポテカン、イリノテカン、アセチルカンプトテシン、スコポレチン及び９−アミノカンプトテシン）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（たとえば、アドゼレシン、カルゼレシン及びビゼレシン合成類似体）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（たとえば、クリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカマイシン（たとえば、ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１）；エレウテロビン；パンクラチサチン；サクロジクチン；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード（たとえば、クロラムブシル、クロマファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン、酸化メクロレタミン塩酸塩、メルファラン、ノベムビシン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、及びウラシルマスタード）；ニトロソウレア（たとえば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン及びラニムスチン）；エネジン抗体のような抗体（たとえば、カリケアミシン）；ジネミシン；エスペラミシン；ネオカルジノスタチンクロモフォア及びクロモプロテインエネジン抗体（たとえば、アクラシノミシン、アクチノマイシン、オートラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルレウシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マクレロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、プロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン及びゾルビシン）；代謝拮抗剤（たとえば、メソトレキセート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ））；葉酸類似体（たとえば、デノプテリン、メソトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセート）；プリン類似体（たとえば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジン類似体、たとえば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン及びフルオキシウリジン）；���ンドロゲン（たとえば、カルステロン、ドロモスタノロン、プロピオネート、エピチオスタノール、メピチオスタン、及びテストラクトン）；抗副腎薬（たとえば、アミノグルテチミド、ミトタン及びトリロスタン）；葉酸補充薬（たとえば、フォリン酸）；アセグラトン；アルドホスホアミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジクオン；エルフォミチン；酢酸エリピチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダニン；マイタシノイド（たとえば、マイタシン及びアンサミトシン）；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダノモール；ニトラエリン；ペントサチン；フェナメット；ピラルビン；ロソキサントロン；２−エチルヒドラジン；プロカルバジン；多糖Ｋ；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２,２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリクロロテセン（たとえば、Ｔ−２トキシン、ベラウリンＡ、ロリジンＡ及びアングイジン）；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；チオテパ；タキソイド（たとえば、タキソール、タキソテレ、パクリタキセル及びドセタキセル）；クロラムブシル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メソトレキセート；白金類似体（たとえば、シスプラチン及びカルボプラチン）；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イフォスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；オキサリプラチン；レウコボビン；ビノレルビン；ノバントロン；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンロネート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチロミチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド（たとえば、レチノイン酸）；カペシタビン及び上記いずれかの薬学上許容可能な塩、酸又は誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８０】
当業者によって理解されるように、ＮＫＣＩＲ抗体、たとえば、抗ＫＩＲ抗体との併用で使用される化学療法剤の適切な用量は、化学療法剤単独又は他の化学療法剤との併用での投与を含む臨床療法ですでに採用されているものに近似するであろう。投与量における変動は、治療される状態に応じて生じる可能性がある。治療を行う内科医は個々の対象にとって適切な用量を決定することができるであろう。
【０１８１】
抗ホルモン剤は、癌の増殖を促進することができるホルモンの影響を調節する、軽減する、阻止する又は阻害するように作用する。上記で言及したように、本発明のＮＫＣＩＲ阻害剤、たとえば、抗ＫＩＲ抗体は、抗ホルモン剤との併用で使用され得る。例となる抗ホルモン剤には、ＬＨＥＨ作動薬（たとえば、レウプロレリン、ゴセレリン、トリプトレリン及びブセレリン）；抗エストロゲン及び選択性エストロゲン調節剤（ＳＥＲＭ）（たとえば、タモキシフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン及びトレミフェン）；エストロゲン受容体下方調節剤（ＥＲＤ）；抗アンドロゲン（たとえば、フルタミド、ニルタミド、シプロテロン、及びビカルタミド）；アロマターゼ阻害剤（たとえば、アナストロゾール、エグセメスタン、レトロゾール、４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロール、フォルメスタニン、ボロゾール及びファドロゾール）、及びプロゲスタゲン（たとえば、メドロキシ、クロロマジノン、及びメゲストロール）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８２】
本発明の本ＮＫＣＩＲ阻害剤、たとえば、抗ＫＩＲ抗体は、１以上の抗血管新生療法との併用で使用されてもよく、さらに抗血管新生剤を含み得る。抗血管新生剤の非限定例には、中和抗体、アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ＲＮＡｉ、ＲＮＡアプタマー及びリボザイム、特に、たとえば、ＰＫＣ−α、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、ＥＧＦ−Ｒ、ＶＥＧＦ又はＶＥＧＦ−Ｒのような、異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するものが挙げられる。
【０１８３】
治療上有効であるこれら前述の化学療法剤の投与計画及び投与量は、治療される癌、疾患の程度及び当該技術で技量のある内科医に精通する他の因子に左右され、内科医によって決定され得る。
【０１８４】
さらなる態様では、本発明は、宿主における癌の寛解を促進できるように、たとえば、抗ＫＩＲ抗体のような抗ＮＫＣＩＲ抗体を含む組成物を宿主に投与することを含む、哺乳類宿主、たとえば、ヒト患者における癌の寛解を促進する方法を提供する。
【０１８５】
その上さらなる態様では、本発明は、所望の生理的効果を達成できるように、予防上有効な量の本発明の抗ＮＫＣＩＲ抗体又は関連組成物を宿主に投与することを含む、癌性状態を発症するリスクを低減する、癌性状態の発症までの時間を減らす、早期段階で診断される癌の重症度を軽減する及び／又は哺乳類宿主におけるその発症の際の癌の冒された面積を減らすための方法を提供する。好ましくは、宿主は、ＭＤＳ、ＳＭＭ又はＭＧＵＳを有し、癌性状態はＭＭであり、その際、抗ＮＫＣＩＲ抗体は、ＭＭを発症するリスクを減らし、及び／又はＭＭの発症までの時間を減らす。
【０１８６】
ＳＭＭ患者では、ＮＫ細胞数及び活性化マーカーが顕著に増加する。通常、ＳＭＭを有する個体は、化合物、たとえば、ＮＫＣＩＲを結合する抗体による治療に先立って第１の治療で治療されていないが、本発明はまた、非ＮＫＣＩＲ剤で以前治療されているＳＭＭ患者を予想する。
【０１８７】
理論に束縛されないで、本発明の方法は、その方法が、疾患の兆候及び症状を持つ個体におけるＮＫ細胞の機能を回復させるのに特に好適であるわけではないので、高い腫瘍組織量を有する患者に比べて微小な病変を有する個体で使用されるとき、最も有効であると考えられる。その結果、ＳＭＭやＭＧＵＳのような前悪性状態以外の病態が関与する一部の実施形態では、患者は第１の治療で優先的に治療されるので、個体は微小の、検出できない病変を有する。たとえば、導入療法及び任意で地固め療法による治療は、疾患の寛解又は著効を生じ得るので、本発明の方法の有効性を高める。
【０１８８】
さらなる態様では、本発明は、癌と診断されたヒト患者における関連期間にわたる生存の可能性を高める方法を提供する。別の態様では、本発明は、その生活の質を改善するのに有効な量で本発明の組成物を患者に投与することを含む、癌患者の生活の質を改善する方法を提供する。さらなる態様では、本明細書に記載される本発明の方法を適用して、脊椎動物宿主における癌細胞の数を有意に減らすので、たとえば、腫瘍細胞の総数が減る。関連する態様では、本発明は、脊椎動物、たとえば、ヒト癌患者にて前腫瘍性細胞及び／又は腫瘍性細胞を殺傷する方法を提供する。任意で、癌は、ＡＭＬ、ＣＭＬ、ＭＭ、ＳＭＭ及びＭＧＵＳから成る群から選択される悪性血液疾患である。
【０１８９】
別の態様では、本発明は、前悪性血液疾患又は悪性血液疾患を有する又は以前有していた個体を治療するために医薬組成物を調製するためのＮＫＣＩＲを阻害する化合物の使用を提供する。本使用の一実施形態では、個体は微小の又は検出できない病変を有する。別の実施形態では、個体は前悪性血液疾患を有する。さらなる実施形態では、個体は、ＳＭＭ（くすぶり型骨髄腫）、ＭＧＵＳ（意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症）、又はＭＤＳ（骨髄異形成症候群）を有する。
【０１９０】
本発明はまた、前悪性血液疾患又は悪性血液疾患を有する又は以前有していた個体を治療するのに使用するためのＮＫＣＩＲを阻害する化合物を提供する。
【０１９１】
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、米国及び欧州における成人で最も一般的なタイプの白血病の１つである。２００６年、米国では、約１１，９３０のＡＭＬの新しい症例が診断されると推定され、すべての癌の１％未満及び白血病すべての３４％の割合を占める。ＡＭＬの発生は４０再未満では低いが、４０歳での１００，０００人当たり１人から７５歳以上での１００，０００人当たり１５人を超える。ＡＭＬの症状の患者の年齢中央値は６５〜７０歳である。上手く行く治療は若い患者に比べて高齢のＡＭＬ患者ではずっと稀である。高齢、５５〜６５歳以上の患者については、治療（導入化学療法）から死亡までの平均期間は５〜１０ヵ月である。完全寛解率は約５０％であるが、寛解は普通、一時的であり、稀に１２ヵ月を超えて続く。導入化学療法後３年間寛解で生存する確率は１０％未満である。
【０１９２】
転帰における年齢に関連した差異は、関連する合併症及び予後因子に関連する。高齢患者の多くは、細胞傷害剤による標準治療及びその合併症を認容することができない。年齢に関連した慢性の心臓疾患、肺疾患、肝臓疾患又は腎臓疾患を持つ患者では、化学療法による急性毒性のリスクがさらに大きくなる。
【０１９３】
異常な核型特性はＡＭＬでは共通する。急性白血病における病態生理、自然な経過及び治療法に対する応答を規定することにおける核型の重要性は鍵となる概念である。ＡＭＬの若い患者における治療の失敗に関連することが最も多い細胞学的な異常（たとえば、第５又は第７染色体の異常又は複雑な核型）は高齢者ではさらにかなり一般的であり、患者の３２〜５７％で生じる。それに対して、「好都合な」細胞学的な異常、たとえば、ｔ（８；２１）、ｔ（１５；１７）又はｉｎｖ（１６）は、若年患者でさらに一般的であり、かれらのさらに良好な無病生存に部分的に関与する。ＡＭＬで一般的に使用される疾患の進行の特定の生体マーカーには、ＦＬＴ３における変異及び／又はＮＰＭ１変異が挙げられ、それらは核型正常ＡＭＬについての２つの最も重要な予後生体マーカーである。ＦＬＴ３は一般に、ＡＭＬにおける単一の最も重要な予後因子である。ＡＭＬ患者のおよそ２５〜３５％がＦＬＴ３の変異を有する。ＦＬＴ３の変異を持つ患者は転帰が悪く、標準の化学療法に対する応答が悪い。
【０１９４】
ＡＭＬの現在の治療
ＡＭＬ患者のほとんどに対する治療戦略は、図１に示すように、２つの一般的なフェーズ：導入療法と寛解後療法に分けられている。
【０１９５】
導入療法
ＡＭＬにおける治療法の最初の目標は完全寛解（ＣＲ）を誘導することである。寛解にある成人のＡＭＬは、正常な末梢血血球数及び骨髄における５％未満の芽球を伴った正常な細胞性の骨髄及び疾患の兆候又は症状がないこととして定義される。加えて、中枢神経系白血病の兆候又は症状がなく、他の髄外浸潤がない。
【０１９６】
導入療法は、全身白血病組織量を約１０９個の細胞の細胞学的に検出可能なレベル未満に減らすことを目的とする。完全寛解達成の必要条件は、導入化学療法後、通常１又は２週間続く骨髄無形成の獲得である。しかしながら、完全寛解の時点で、患者は未だ、有意であるが、わずかに検出できる残りの白血病組織量（微小残存病変）を有し、何らかの形態での寛解後療法を必要とする。
【０１９７】
２０年間を超えて、標準の導入化学療法には、アントラサイクリン及びシタラビンが含まれてきた。最も一般的な計画は、７日間のシタラビンの連続点滴に３日間のダウノルビシンを組み合わせる（３＋７投薬計画）。この計画を用いたほとんどの前向き試験では、６０歳未満の患者の６５％〜７５％及び６０歳を超えるものの約５０％でＣＲが達成される。老年患者の間でＣＲを得る確率の低下は、耐性疾患の高いリスクの結果である共に、汎血球減少症の合併症による死亡の高いリスクの結果である。導入療法後のＣＲの低い比率に関連する他の因子には、有害な細胞遺伝学の存在、先行する血液疾患、及び診断時の一般状態不良が挙げられる。
【０１９８】
高齢患者における標準の治療法に対する相対的に低い応答率を考えて、用量強化導入療法計画が試みられている。しかしながら、今日まで、寛解又は死亡率に関して３＋７投薬計画より優れた導入療法は判明していない。
【０１９９】
寛解後療法
寛解後療法は、最初のＣＲにて１０８〜１０９細胞と高い残りの白血病細胞の数をさらに減らすことを目的とする。十分な骨髄抑制を生じる細胞傷害性の化学療法、又は同種移植を介した患者の幹細胞の置き換えのいずれかによって、これが達成され得る。
【０２００】
ＡＭＬ集団で最大比率を提示する高齢患者では、治癒目的での化学療法は好都合なリスク／利益特性を伴った治療選択肢を構成しないが、地固め療法が普通、高齢患者に提供される。高齢ＡＭＬ患者に対する強化された地固め及び維持の化学療法計画が臨床試験で調べられているが、有益であることは判明していない。これは主として、年齢に関連した患者の関連合併症と合わせた化学療法に関連した毒性のためである。従って、一般状態で有意な低下に苦しむ又は導入化学療法に関連した有意な臓器毒性に苦しむ患者は、強化された寛解後療法の候補ではないであろう。
【０２０１】
抗ＮＫＣＩＲ化合物によるＡＭＬの治療
寛解後療法として抗ＮＫＣＩＲ抗体を有利に投与することができる。たとえば、治療法に先立ってＣＲを達成した、たとえば、導入療法及び任意で地固め療法に続く患者を、本明細書で開示される用量及び投与計画に従って抗ＮＫＣＩＲ抗体で治療することができる。実施形態では、患者は予後不良であり（たとえば、進行の高いリスクを有する群にいる）、たとえば、予後不良に関連するＦＬＴ３又はＮpＭ１の変異を有する。抗ＮＫＣＩＲ治療は、単剤療法剤としてであってもよく、又は疾患の治療で使用される他の剤との併用であってもよい。しかしながら、好ましくは、抗ＮＫＣＩＲ抗体は、ＮＫ細胞活性に負の効果を有する化学療法剤を同時に使用することなく投与されるであろう。
【０２０２】
くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）
くすぶり型多発性骨髄腫は、国際的にコンセンサスを得た基準（国際骨髄腫ワーキンググループ。単クローン性高ガンマグロブリン血症、多発性骨髄腫及び関連疾患の分類に関する基準：国際骨髄腫ワーキンググループからの報告。Br J Haematol 2003; 121 : 749-57）
３ｇ／ｄＬ以上の血清単クローン性タンパク質
及び／又は骨髄における１０％以上の形質細胞、
しかし、関連する症状と同様に関連する臓器又は組織の損傷（骨病変を含む終末器官障害）の証拠はない：
を用いて２００３年以来定義されている。
【０２０３】
Ｍａｙｏクリニックのグループがこれらの基準を精査して、血清の遊離鎖のみを持つ患者は除外すべきであり、形質細胞はクローン性であることが必要であることを明らかにした（Kyle RA, Rajkumar SV. Criteria for diagnosis, staging, risk stratification and response assessment of multiple myeloma. Leukemia 2009; 23: 3-9）。
【０２０４】
ＳＭＭの現在の治療
現在のところ、ＳＭＭの治療法はない。この医学状態の現在の管理は、治療に値する活動性ＭＭへの早期の進行を診断するのを可能にする密接な経過観察に限定される。進行のパターンを確立するために最初の１年間３ヵ月ごとに患者は経過観察を受けるべきである。Ｋｙｌｅの予後基準（Blade J et al. J Clin Oncol 2010 28: 690-97）に従って、Ｍタンパク質が安定し、進行のリスクが低い進行していない患者では、さらに少ない頻度の経過観察が考慮され得る。
【０２０５】
ＳＭＭの罹患率は年齢と共に増加し、診断時の平均年齢は６５〜７０歳に及ぶ。ＳＭＭは新しく診断されたＭＭの全症例のおよそ１５％の割合を占める。米国におけるＭＭの推定発生率を考えると、１年当たり２０，０００の新しい症例の間で、３，０００を超えるＳＭＭの新しい症例が毎年米国で診断されていることになる。しかしながら、現在、ほとんどのＳＭＭは診断されておらず、実際、以下で議論するように、ＳＭＭはＭＭすべてに先行する可能性がある。
【０２０６】
活性化ＮＫ細胞がＭＭに由来する悪性細胞に対して細胞傷害性であることを示した生体外データを含む収斂性の証拠は、ＮＫ細胞がＭＭの免疫監視に関与することを示唆している。疾患の早期段階では、骨髄腫細胞は上述の活性化ＮＫリガンド（ＭＩＣＡ及びＢ、ＵＬＢＰ）を広く発現し、阻害性のＨＬＡクラス−１リガンドを下方調節する（Carbone E et al. Blood 2005; 105: 251-58）。また、低腫瘍組織量の悪性ＭＭへの進行は、ＮＫ細胞の量的低下及び機能的消耗に並行する。ＮＫ細胞の数及び活性化マーカーは、くすぶり型又は早期のＭＭと同様にＭＧＵＳの患者で顕著に増加する。対照的に、進行したＭＭ患者ではＮＫ細胞の数は低下し、ＮＫ細胞は刺激に対して低応答性になる（Carbone et al 2005; Sawanobori M et al. Acta Haematol 1997; 98: 150-54）。
【０２０７】
２つの最近の研究は、＜３ｇ／ｄlの血清Ｍタンパク質と＜１０％の骨髄形質細胞を特徴とする無症候性の意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）がＭＭすべてに先行することを示唆している。しかしながら、ＭＧＵＳ患者の半分が進行するにすぎず、この場合、Ｍタンパク質の上昇は緩慢であり、明らかなＭＭの前にＳＭＭに向かいそうである。これらの形質細胞の増殖並びにＭＧＵＳからＳＭＭ及びＳＭＭから症状のあるＭＭへの進行に関与するメカニズムの病態生理は完全に理解されるべきである。しかしながら、幾つかの病原性過程の２つの主なステップが上手く性状分析されている：
後天的な遺伝事象の結果生じるクローン性形質細胞の当初の限定的な形質転換。ＭＧＵＳ、ＳＭＭの形質細胞は、それの正常な相方とは明瞭に区別する初期骨髄腫細胞に類似する遺伝的な及び表現型の特性を有する。
腫瘍性形質細胞における遺伝的事象の発生だけでなく、骨髄微細環境における変化の蓄積にも連鎖すると思われるＭＧＵＳからＳＭＭ及びＳＭＭからＭＭへの緩やかな進行。
【０２０８】
２７６人のＳＭＭ患者のコホートにて自然の経過が上手く記載され、Ｋｙｌｅらのグループが続いて以下のように結論付けた：
症候性で治療不能の悪性腫瘍への進行の累積確率は５年で７３％だった。ほとんどの患者がＭＭを発症したが、たった２％は原発性アミロイドーシス（ＡＬ）に進行した。
ＳＭＭにおける進行の全体的なリスクは、診断からの時間に大きく影響された。それは最初の５年間、年当たりおよそ１０％だったが、次の５年間、年当たりたった３％であり、その後、年当たり１％に減った。進行までの平均時間（ＴＴＰ）は２〜３年の間だった。
進行のリスクは、単クローン性タンパク質のレベル、骨髄形質細胞の比率、又はその双方によって有意に影響を受けた。以下に示すように、これら２つの変数を用いて創った３つの予後群間で進行の平均時間に実質的な差異があった。高リスク群では、１５年で８７％が明白な悪性腫瘍に進行し、進行の平均時間は２年と短かった。対照的に、低リスク群では、平均時間１９年で３９％のヒトが進行した。
【０２０９】
【表２】
2014501729.tif 000006
【０２１０】
表２は、活動型多発性骨髄腫の進行の確率を示す（Kyle RA et al. N Engl J Med 2007; 356: 2582-90から）。
【０２１１】
進行の他の因子は追加の研究で特定されており、以下の表で言及する。最近のデータは、２つの免疫的な予測因子の重要性を強調しており、それらはＳＭＭの前兆を改善し得る。
０．１２６より低い又は８より高い区切り点での異常な遊離の軽鎖の比（ＦＬＣ）は独立したリスク因子であると思われる。同じＭａｙｏのコホートに関する仕事によって示されるように、ＦＬＣを取り入れることは、血清Ｍタンパク質のレベルと骨髄形質細胞の比率を考慮することだけでの当初の分類に比べて、患者のさらに均衡のとれた分布となる分類の改善を生じた。
骨髄形質細胞ＢＭＰＣの異常な表現型、及び古い試験でも示されたような、いわゆる免疫麻痺は、関与しないＩｇアイソタイプの１又は２の低下として定義した。これら２つのパラメータに基づいて、因子がない、１つある又は２つある場合それぞれ、４％、４６％及び７２％のＳＭＭからＭＭへの蓄積進行があるスコア化方式が提案された。しかしながら、フローサイトメトリーによるＢＭＰＣの表現型の分析は扱いにくいままであり、チームによっては再現しにくい可能性がある。
【０２１２】
最終的に、いわゆる進展型ＳＭＭの患者、すなわち、血清Ｍタンパク質値が進行性で上昇する患者は、Ｍタンパク質が安定した患者よりも症候性ＭＭへの進行の時間が短い（平均１．３対３．９年）。
【０２１３】
表３は、進行の主な因子を示す。抗ＮＫＣＩＲ抗体による治療は以下のようであり得る。
【０２１４】
【表３】
2014501729.tif 000007
【０２１５】
抗ＮＫＣＩＲ化合物によるＳＭＭの治療
たとえば、標準的な国際骨髄腫ワーキンググループの定義によって定義されたようなＳＭＭ又はＭＧＵＳの患者に抗ＮＫＣＩＲ化合物を有利に投与することができる。実施形態では、患者は予後不良であり（たとえば、進行の高リスクを有する群にいる）、たとえば、患者は予後不良に関連する変異を有し、又は表２における群分けで第１群に入る。任意で、ＭＭへの進行について定義された１以上のリスク因子を有する患者を治療することができ、たとえば、活性型多発性骨髄腫への進行の確率（たとえば、criteria of Kyle RA et al. N Engl J Med 2007; 356: 2582-90を参照）に基づいて第１、２及び３群に入る患者を特定し、選択することができ、抗ＮＫＣＩＲ化合物で治療することができる。本明細書で開示される用量及び投与方式に従って、抗ＮＫＣＩＲ抗体によって患者を治療することができる。抗ＮＫＣＩＲ治療は、単剤治療としてであってもよいし、又は疾患の治療に使用される他の剤との併用であってもよい。しかしながら、好ましくは、抗ＮＫＣＩＲ抗体は、ＮＫ細胞活性に負の効果を有する化学療法剤を同時に使用することなく投与されるであろう。
【０２１６】
多発性骨髄腫（ＭＭ）
多発性骨髄腫は２番目に頻度の高い血液癌（２００７年の米国における１９，９００の新しい症例及び西欧では匹敵する数）である。ＭＭは、すべてではないがほとんどの症例でクローン性の免疫グロブリン、いわゆるＭタンパク質を産生する形質細胞の悪性増殖の結果生じる。ＭＭは骨破壊、低カルシウム血症、骨髄不全及び腎不全を特徴とする。正確な、合意に基づいた基準を国際的に用いてＭＭを定義する、Ｋｙｌｅ及びＲａｊｋｕｍａｒ，２００９。
【０２１７】
ＭＭの現在の治療
歴史的な治療は、細胞減少療法、高用量のコルチコステロイドと、アルキル化剤又はアドリアマイシン及びビンクリスチンのあまり強力ではない（が、骨髄毒性が低い）併用を含む従来の抗有糸分裂化学療法剤による、いわゆる「導入」から成る。
【０２１８】
導入の後、普通、高用量のメルファランアルキル化剤（２００ｍｇ／ｍ２）の投与による「強化」段階（高用量化学療法とも呼ばれる）の最も強力な治療が続いた。それらの骨髄毒性は、自己の造血系細胞の移植による血液学的な救済を必要とし、それは無形成フェーズを短縮する。導入フェーズの終了時に投与されるＧＣＳＦ及び／又はサイクロホスファミドによって造血系細胞は普通骨髄から末梢血に移動する。しかしながら、強化は、安全性の理由から、主要な関連合併症のない６５歳未満の患者でのみ許容され得る。
【０２１９】
そのような強化された治療によって、歴史的な導入治療で患者の１０〜２０％内でＶＧＰＲ及びＰＲを達成するのが可能になった。従って、強化なしでは、６５歳を超える患者では、完全寛解（ＣＲ）及び非常によい部分寛解（ＶＧＰＲ）は稀にしか達成できなかった。５回の大型の無作為試験によって、応答、進行、無病生存という点で、及び全体の生存の３症例にて化学療法に比べた強化に基づく治療計画の優位性を実証することが可能になった（Attal et al., 2007にて概説された）。
【０２２０】
２つの新しいクラスの免疫調節剤、「Ｉｍｉｄｓ」、たとえば、サリドマイド及びレナリドミド、並びにプロテアソーム阻害剤、たとえば、ボルテゾミブが最近出現し、コルチコステロイド又は細胞傷害性化学療法剤との併用療法の一部として主に使用されている。両者のクラスの薬剤は、少なくとも２つの効果：細胞減少及び形質細胞の微細環境の調節を組み合わせる。ステロイド及び、高用量化学療法を含む従来の化学療法とのこれら新しい薬剤の併用によって、応答率、特にＶＧＰＲ又はＣＲの比率を劇的に改善することが可能になった。しかしながら、検出不能な微小残存病変を伴った分子寛解が現れ、記録され得る場合、非常に稀ではあるが、これらの条件にて患者の１０％未満で成立し、ＣＲを達成する患者は数年後、避けようもなく再発する。
【０２２１】
最初の再発は症例の少なくとも５０％で治療に応答するが、２回目以降の再発は、どんな利用できる治療にも最終的には不応性になる。従って、同種の造血系細胞が上手く移植されるわずかな若年患者を除いて、疾患は治癒不能のままである。しかしながら、処置の毒性がその適応を大幅に限定する。
【０２２２】
現在の治療は症候性の患者に限定されたままである。無症候性の患者の進行及び生存における治療の利益は未だ実証されていない。治療の適応は合意の上で定義される。
【０２２３】
６５歳を超える又は主要な関連合併症を持つ患者では、歴史的な治療は、二重導入療法：メルファラン＋プレドニゾロン（ＭＰ）から成る。幾つかの研究によって、３つの新しい剤（サリドマイド、ボルテゾミブ又はレナリドミド）のいずれかとのＭＰの併用は、標準のＭＰよりも優れることが示された。さらに良好な成績をさらにもたらし得る、レナリドミド＋デキサメタゾン（Ｄｅｘ）及びレナリドミド＋ボルテゾミブ＋Ｄｅｘを含む他の併用は現在試験中である。６５歳未満で、主要な関連合併症のない患者では、治療は、前のように導入によって開始し、腫瘍組織量を減らすのを可能にした後、幹細胞を回収し、自己造血系細胞の戻しを伴った強化を行う。自己ＨＣＴ後のＩｍｉｄｓとプロテアーゼ阻害剤を併用する細胞減少化学療法の反復による地固めは調べられ始めたばかりである。
【０２２４】
疾患の応答の評価
その分野のリーダーの委員会によって２００６年、Ｌｅｕｋｅｍｉａにて出版されたようなＩＭＷＧ（国際ＭＭワーキンググループ）の国際的な均一の応答基準を今や試験すべてで使用すべきである。
【０２２５】
通常、対立遺伝子特異的なオリゴヌクレオチドによる骨髄試料からのリアルタイムＰＣＲを用いてＣＲにおける患者の微小残存病変を検出し、定量することが関与する分子寛解（たとえば、１０，０００個のＢＭ細胞中に悪性細胞１つ未満として定義される）を含む種々の方法によって応答を評価することができる。多重パラメータのフローサイトメトリーも使用する。他の方法には、血清で定量することができる遊離の軽鎖の定量、及び骨髄の免疫的な評価が挙げられる。
【０２２６】
導入療法、地固め（強化を含む）療法に対する完全寛解及び部分寛解は、標準の指針（たとえば、ＩＭＷＧ指針）に従って評価することができる。ＣＲ、ＰＲ又はＶＧＰＲの患者を本発明の抗ＮＫＣＩＲ抗体で治療し得る。
【０２２７】
抗ＮＫＣＩＲ化合物によるＭＭの治療
そのような導入及び／又は任意で地固め療法に対して部分寛解又は完全寛解を経験しているので、微小病変を有する患者にて、化学療法剤を用いた治療及び／又は免疫調節剤（たとえば、Ｉｍｉｄ又はプロテオソーム阻害剤）による治療に続く導入（及び／又は地固め及び／又は強化）療法後の療法として抗ＮＫＣＩＲ化合物を有利に投与することができる。治療法に続いて、たとえば、導入療法及び任意で地固め療法に続いて応答又は寛解を達成している患者は、本明細書で開示される用量及び投与方式に従って、抗ＮＫＣＩＲ抗体によって治療することができる。抗ＮＫＣＩＲ治療は、単剤治療としてであってもよいし、又は疾患の治療に使用される他の剤との併用であってもよい。しかしながら、好ましくは、抗ＮＫＣＩＲ抗体は、ＮＫ細胞活性に負の効果を有する化学療法剤を同時に使用することなく投与されるであろう。
【０２２８】
抗ＮＫＣＩＲ抗体の投与及び投薬計画
態様の１つでは、本発明が提供する治療の方法は、治療上有効な量で抗ＮＫＣＩＲ抗体を含む組成物を個体に投与することを含む。治療上有効な量は、たとえば、約０．０００３ｍｇ（抗体）／ｋｇ（患者の体重）〜約３ｍｇ／ｋｇ（たとえば、約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、たとえば、約０．０１５〜約３ｍｇ／ｋｇ、たとえば、約０．０７５ｍｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、及び約１ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇｋｇのいずれか、又は約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０１５ｍｇ／ｋｇ、約０．０７５ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、及び約３ｍｇ／ｋｇのいずれか）の投与量であり得る。抗ＫＩＲ抗体の用量及び製剤は、ＰＣＴ出願番号ＷＯ２００８／０８４１０６に記載されており、その開示は参照によって本明細書に組み入れられる。一実施形態では、方法は、たとえば、１日３回から２ヵ月に１回の範囲内での投与頻度で投与を少なくとも１回繰り返すことを含む。用量は、たとえば、少なくとも３回、少なくとも６回、又は少なくとも１０回投与され得る。一実施形態では、抗体は静脈内に投与される。別の実施形態では、ＮＫ細胞の表面上の阻害性ＫＩＲへの抗体の結合は、ＮＫ細胞の細胞傷害性活性を強化する。さらに別の実施形態では、抗体は交差反応性の抗ＫＩＲ抗体である。たとえば、抗体は、ＰＣＴ出願番号ＷＯ２００８／０８４１０６に記載されたような形式での抗体１−７Ｆ９であり得る。
【０２２９】
好まれる一実施形態では、ヒト患者で実質的に完全な飽和を提供するように用量が選択される。本明細書で使用されるとき、用語「実質的に完全な飽和」は、標的となるＮＫＣＩＲの少なくとも９０％の占有率、好ましくは少なくとも９５％の受容体占有率を指す。方法は任意で、ＮＫ細胞の強化及び／又は抗腫瘍活性について患者を評価することを含む（好適な技法の使用によって実施されてもよく、そのうちの幾つかは当該技術で既知であり、たとえば、本明細書で記載されるようなＮＫＣＩＲの占有率レベル、ＣＤ１０７ａマーカー等を含む）。製剤は通常、たとえば、約１時間のような好適な時間をかけてｉ．ｖ．投与によって投与される。
【０２３０】
たとえば、抗ＮＫＣＩＲ抗体は、少なくとも約１、２、３又は６ヵ月間、血漿中のＮＫ細胞上で少なくとも約９０％、好ましくは少なくとも約９５％のＮＫＣＩＲ占有率を達成する用量及び投与頻度で投与することができ、それによって長い時間、飽和を持続することができる（たとえば、少なくとも３ヵ月、６ヵ月）。別個の実施形態では、用量は、約０．１〜約３ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約３ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約１ｍｇ／ｋｇ及び約１〜約３ｍｇ／ｋｇの範囲であり、さらに好ましくは、その際、抗体は抗ＫＩＲ抗体であり、さらに好ましくは、その際、抗体は１−７Ｆ９である。投与頻度は、１日に1回〜２ヵ月に１回、大体１週間に１回〜大体２ヵ月に１回、又は大体１ヵ月に１回の範囲であり得る。或いは、投与頻度は、１日に約３回、約２回及び約１回；１週間に約５回、約４回、約３回及び約２回；並びに大体２、４及び６週ごとに１回から選択することができる。
【０２３１】
好まれる一実施形態では、実質的に完全な受容体の飽和（たとえば、少なくとも９０％又は９５％の受容体の占有率）を生じる抗ＮＫＣＩＲ抗体の用量が、１週間に約２回〜大体１ヵ月に１回、又は大体１ヵ月に１回〜大体２ヵ月に１回投与される。用量は、たとえば、少なくとも３回、少なくとも６回以上投与することができる。たとえば、方法は、少なくとも約２週間、１ヵ月、６ヵ月、９か月又は１２ヵ月間ＮＫ細胞上の少なくとも約９０％又は９５％のＮＫＣＩＲの占有率を達成する用量及び投与頻度で抗ＮＫＣＩＲ抗体を投与することを含み得る。
【０２３２】
好まれる一実施形態では、計画は持続する実質的に完全な受容体の飽和を生じる。少なくとも約１週間、２週間又は１ヵ月間、実質的に完全な受容体の飽和を生じる用量の抗ＮＫＣＩＲ抗体が投与される。少なくとも１週間、用量が実質的に完全な受容体の飽和（たとえば、少なくとも９０％又は９５％の受容体の占有率）を生じる場合、用量は、たとえば、１週間に１回〜２週間ごとに１回の間で投与されてもよく；約２週間、用量が実質的に完全な受容体の飽和を生じる場合、用量は、たとえば、２週間ごとに１回〜1カ月に1回の間で投与され得る。約２週間〜約１ヵ月の間、用量が実質的に完全な受容体の飽和を生じる場合、用量は、たとえば、大体1ヵ月に１回投与され得る。各計画では、用量は、たとえば、少なくとも３回、少なくとも６回以上投与することができる。たとえば、方法は、少なくとも約６ヵ月、９か月又は１２ヵ月間ＮＫ細胞上の少なくとも約９５％のＫＩＲの占有率を達成する用量及び投与頻度で抗ＮＫＣＩＲ抗体を投与することを含み得る。
【０２３３】
別の好まれる実施形態では、計画は間欠的な実質的に完全な受容体の飽和を生じる。少なくとも約１週間、２週間又は１ヵ月間、実質的に完全な受容体の飽和（たとえば、少なくとも約９０％又は９５％の受容体の占有率）を生じる用量の抗ＮＫＣＩＲ抗体が投与される。用量が、約１〜２週間、実質的に完全な受容体の飽和を生じる場合、用量は、たとえば、大体１ヵ月に１回又は少なくとも２ヵ月の期間に１回（たとえば、２ヵ月ごとに１回）投与され得る。用量が、約２週間〜約１ヵ月、実質的に完全な受容体の飽和を生じる場合、用量は、たとえば、少なくとも大体２ヵ月の期間に１回（たとえば、２ヵ月ごとに１回）投与され得る。別個の実施形態では、用量は、大体１ヵ月に１回投与される約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇの範囲内であり；一実施形態では、用量は、大体２ヵ月ごとに１回投与される約０．１〜約３ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１〜約ｍｇ／ｋｇの範囲内であり（又は大体２ヵ月を超える期間当たり１回、すなわち、２ヵ月間当たり１回未満）、さらに好ましくは、その際、抗体は抗ＫＩＲ抗体であり、さらに好ましくは、抗体は１−７Ｆ９である。治療計画が少なくとも６ヵ月、９か月又は１２ヵ月間、間欠的な実質的に完全な受容体の飽和を生じるように、治療を繰り返すことができる。
【０２３４】
抗体は通常静脈内に投与されるが、他の好適な投与方式は既知であり、たとえば、ＷＯ２００８／０８４１０６にも記載されている。
【０２３５】
抗ＫＩＲ抗体、１−７Ｆ９又はそのＳ２４１Ｐ変異体がＮＫ細胞活性を調節し、及び／又は疾患を治療するのに好ましい抗体である一方で、他の抗ＮＫＣＩＲ抗体及び抗ＫＩＲ抗体も本発明に係る方法で使用され得る。しかしながら、そのような抗体は抗ＫＩＲ抗体、１−７Ｆ９に類似するＫＤ値、患者における類似するクリアランス及び類似する分布容量を有するべきであり、その際、「類似する」は、相当する抗ＫＩＲ抗体、１−７Ｆ９の約５０％以内、好ましくは約３０％以内を意味する。抗ＫＩＲ抗体、１−７Ｆ９は、０．０１５ｍｇ／ｋｇまでの用量について約４ｎｇ／ｍｌの高い親和性ＫＤと約２０ｎｇ／ｍｌの低い親和性ＫＤ、約０．５ｍｌ／時間／ｋｇのクリアランス、及び約１１５ｍｌ／ｋｇの分布容量を有する（ＷＯ２００８／０８４１０６を参照）。本発明の１以上の方法で有用な例となる抗ＮＫＣＩＲ抗体は、以下の特性：（ａ）ＮＫ細胞上の阻害性ＮＫＣＩＲのシグナル伝達を抑制する又は遮断する、（ｂ）約２〜約６ｎｇ／ｍｌの高い親和性ＫＤ、（ｃ）約１０〜約３０ｎｇ／ｍｌの低い親和性ＫＤ、（ｄ）約０．２５〜約０．７５ｍｌ／時間／ｋｇのクリアランス、（ｅ）約５０ｍｌ／ｋｇ〜約１７５ｍｌ／ｋｇの分布容量を有し得る。抗ＮＫＣＩＲ抗体の受容体占有率は、抗体が結合した特定のＮＫＣＩＲに適合させた、本発明で記載されるようなアッセイ（たとえば、実施例２を参照）を用いて決定することができる。抗ＮＫＣＩＲ抗体の薬物動態特性は、特定の抗ＮＫＣＩＲ抗体適合させた、本発明で記載されるようなアッセイ（たとえば、実施例１を参照）を用いて決定することができる。
【実施例】
【０２３６】
実施例１：患者における薬物動態
抗ＫＩＲ抗体、１−７Ｆ９の血漿濃度を以下で手短に記載するようにＥＬＩＳＡによって測定する。
【０２３７】
ＫＩＲ２ＤＬ３コーティング溶液（１００μｌ／ウェル）によってプレートを被覆し、約＋４℃にて一晩インキュベートする。次いで自動プレート洗浄機を用いて洗浄緩衝液によってプレートを３回洗浄する（４００μｌ／ウェル）。ブロッキング緩衝液を加え（ウェル当たり２００μｌ）、室温にてプレート振盪器上で約２時間インキュベートする。この後、プレートをもう一度洗浄緩衝液によって３回洗浄する（４００μｌ／ウェル）。
【０２３８】
標準、質的対照及び試料をプレートに加え（１００μｌ／ウェル）、その後、室温にてプレート振盪器上で約２時間インキュベートする。プレートをさらに３回（上記のように）洗浄した後、マウス抗ヒトＩｇＧ４：ペルオキシダーゼ希釈溶液（１００μｌ／ウェル）を加える。次いで再び、室温にてプレート振盪器上で約２時間プレートをインキュベートし、その後もう一度洗浄する。
【０２３９】
ＴＭＢをプレートに加え（１００μｌ／ウェル）、次いで室温にてプレート振盪器上で約３０分間インキュベートする。停止溶液（５０μｌ／ウェル）の添加によって酵素反応を止める。４５０ｎｍ（参照フィルター６５０ｎｍ）にて吸収を読み取る。この試験の定量の下限は５．０００ｎｇ/ｍLであり、この試験の定量の上限は１１０．０ｎｇ/ｍLである。
【０２４０】
実施例２：ＫＩＲ占有アッセイ
４色蛍光アッセイによってヒト全血試料にて受容体の占有率を評価する。手短には、ＥＤＴＡ抗凝固剤添加末梢血にてＴリンパ球及びＮＫリンパ球上で遊離の及び結合したＫＩＲ２Ｄ受容体のレベルを評価する。ＫＩＲ２Ｄ分子に結合するＰＥ結合の１−７Ｆ９で染色することによって遊離の部位アッセイは未結合のＫＩＲ２Ｄを評価する。結合部位アッセイは、ＫＩＲ２Ｄ受容体に結合した１−７Ｆ９を認識するＰＥ結合のマウス抗ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体で染色することによって１−７Ｆ９により占有されたＫＩＲ２Ｄ受容体を評価する。遊離のアッセイ及び結合のアッセイによって、１−７Ｆ９−ＰＥ又は抗ｈＩｇＧ４−ＰＥについての蛍光強度［ＭＥＳＦ］と同様に陽性染色の比率双方の評価が可能になる。以下の２つのアッセイにて結合抗体の以下の組み合わせを使用する。
遊離の部位アッセイ：ＣＤ３／１−７Ｆ９／ＣＤ４５／ＣＤ５６
結合アッセイ：ＣＤ３／ｈＩｇＧ４／ＣＤ４５／ＣＤ５６
【０２４１】
Ｂｅｃｔｏｎ  ＤｉｃｋｉｎｓｏｎのＣｅｌｌｑｕｅｓｔソフトウエアを用いてＢｅｃｔｏｎ  ＤｉｃｋｉｎｓｏｎのＦＡＣＳｃａｌｉｂｕｒにて試料を解析する。Ｔ細胞はＣＤ４５＋ＣＤ３＋リンパ球として定義し、ＮＫ細胞はＣＤ４５＋ＣＤ３-ＣＤ５６＋細胞として定義する。
【０２４２】
実施例３：ＡＭＬ臨床試験
導入化学療法及び地固め化学療法に続いて最初の完全寛解に入っている、骨髄移植に適さない高齢のＡＭＬ患者（６０歳を超えた）にて単一用量漸増試験を実施した。標準の３＋３設計を適用し、合計７用量レベルを調べた：用量は、０．０００３ｍｇ／ｋｇから３ｍｇ／ｋｇに及ぶ。投与に続いて、安全性、ＰＫ及びＫＩＲ占有が検出できなくなるまでＫＩＲ占有率について患者をモニターした。
【０２４３】
拡大試験も実施した。用量漸増試験を完了し、依然として完全寛解にあるＡＭＬ患者が拡大試験に参加することができ、患者は月単位で６回まで投与を受けた。患者は前の試験と同じ用量で投与を受ける。
【０２４４】
患者、材料及び方法
双方の試験にて、最初の完全寛解（ＣＲ）にあり、移植に適さない高齢ＡＭＬ患者（６０歳を超えた）がその試験に適した。ＡＭＬはＷＨＯの基準（Brunning RD, Matutes E, Harris NL et al.: Acute myeloid leukaemia: Introduction. In Jaffe ES, Harris NL, Stein H, et al. Eds. :Pathology and Genetics of Tumors of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. Lyon, France: IARC Press, 2001. World Health Organization Classification of Tumors, 3, pp 77-80）に従った。寛解は、ＮＣＩ基準（Cheson et al. J CO, Vol 21 , no. 24, pp 4642-4649 (2003)）に従って定義された形態学的な完全寛解（ＣＲ）又は１〜２サイクルの導入化学療法及び少なくとも１サイクル、最高６サイクルの地固め化学療法の後、不完全な血小板数の回復を伴ったＣＲｉだった。
【０２４５】
用量漸増試験におけるスクリーニングでは、化学療法の最後の投与からの時間が少なくとも３０日であり、１２０日を超えなかった。他の適格性の基準には、ＮＫ細胞上のＫＩＲ２ＤＬ１及び２／３の発現、ＥＣＯＧ(Oken, M.M., et al. Toxicity And Response Criteria Of The Eastern Cooperative Oncology Group. Am J Clin Oncol 5:649-655, 1982)、状況０〜２及び以前の治療の毒性からの回復が挙げられた。
【０２４６】
拡大試験については、許容できる安全性特性で用量漸増試験を完了したことが追加の適格性基準だった。
【０２４７】
追加の基準には、１×１０９個／Ｌを超える好中球の絶対数、＞８０×１０９個／Ｌの血小板、骨髄における５％未満の芽球、アウエル小体がないこと、疾患の症状がないこと、以前の抗白血病療法の急性毒性からの回復、患者のＮＫ細胞上のＫＩＲの発現（抗ＫＩＲ抗体、１−７Ｆ９を結合する能力）、治験医師によって判断されるような主要な関連する臓器不全がないこと、並びに以下のような臨床検査値：（ａ）≦２ｍｇ／ｄLの血清クレアチニン、（ｂ）正常の上限×≦１．５の総ビリルビン及び（ｃ）正常の上限×≦３のＡＳＴが挙げられた。
【０２４８】
試験設計
用量漸増試験は、多施設非盲検単回用量漸増の安全性及び認容性の試験である。７用量レベル：０．０００３ｍｇ／ｋｇ、０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．０１５ｍｇ／ｋｇ、０．０７５ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、及び３ｍｇ／ｋｇを調べるように計画する。一般の（３＋３）設計をこの試験に選択する。各患者を単回用量に割り振り、患者のＮＫ細胞上に検出可能なＫＩＲ占有がなくなるまで、安全性、薬物動態及び薬物力学についてモニターする。安全性、ＰＫ及びＫＩＲの占有率は継続的に解析し、各投与群からの投与後最初の４週間に得られたデータが用量漸増判定の基礎を形成する。
【０２４９】
拡大試験は、反復投与多施設非盲検の安全性及び認容性の試験として設計される。個々の患者に与える用量は、単回用量試験で患者が受け取ったものと同じである。患者は４週間間隔で６回の投与を受ける、すなわち、最大６ヵ月の期間に６回の投与サイクルを受け取る。各投与サイクルは投与外来と安全性監視外来から成る。最後の投与に続いて、患者は患者のＮＫ細胞上に検出可能なＫＩＲ占有がなくなるまで、安全性についてモニターされる。この安全性経過観察の持続期間は、受け取った用量に左右される可能性が高く、最後の投与後、最大２４週間であると予想される。
【０２５０】
抗ＫＩＲ抗体、１−７Ｆ９投与に対する安全性（すなわち、観察される毒性）は、米国国立癌研究所、有害事象共通用語基準（ＣＴＣＡＥ）、バージョン３．０を用いて評価される。薬物動態の端点、ＫＩＲ占有率、ＮＫ細胞及びＴ細胞の活性化のマーカー、ＷＴ−１腫瘍マーカー、進行／無病生存及び全体的な生存も評価される。
【０２５１】
ＡＭＬ試験の成績
０．０００３ｍｇ／ｋｇ、０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．０１５ｍｇ／ｋｇ、０．０７５ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、及び３ｍｇ／ｋｇの各投与レベルを受け取っている患者の間で用量漸増試験にて受容体飽和を評価した。要約すると、用量０．０００３ｍｇ／ｋｇは約２時間の間、部分的なＫＩＲの飽和（５０％占有率）を生じ；用量０．００３ｍｇ／ｋｇは２４時間未満の間で完全なＫＩＲの飽和（９０％占有率）を生じ；用量０．０１５ｍｇ／ｋｇは７日未満の間で完全なＫＩＲの飽和を生じ；用量０．０７５ｍｇ／ｋｇはほぼ７日の間で完全なＫＩＲの飽和を生じ；用量０．３ｍｇ／ｋｇは７日を超えて１４日未満の間で完全なＫＩＲの飽和を生じ；用量１ｍｇ／ｋｇは３週間未満（約２週間〜３週間の間）の間で完全なＫＩＲの飽和を生じ；用量３ｍｇ／ｋｇは４週間を超える間で完全なＫＩＲの飽和を生じた。
【０２５２】
０．０００３ｍｇ／ｋｇ、０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．０１５ｍｇ／ｋｇ、０．０７５ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、及び３ｍｇ／ｋｇの投与レベルで治療された患者を、治療の開始時からの無病生存（ＤＦＳ）について評価した。結果を表４に示す。１ｍｇ／ｋｇ及び３ｍｇ／ｋｇの投与レベルを受け取った患者は、それより低い投与レベルの患者よりも有意に長いＤＦＳを経験した。さらに、高用量での平均４３週間（３６〜７１週間の範囲）に対して低用量での平均１１週間（３〜１１２週間の範囲）という再発までの時間をＩＰＨ２１療法の開始から算出した場合、長期にわたる継続した飽和を含む受容体の飽和は、ＮＫ細胞の教育における有意な低応答性又は欠損を生じないと思われ、受容体の飽和を生じない用量による反復した刺激よりもさらに効果的であると思われるさらに強い示唆があった。さらに、１ｍｇ／ｋｇ及び３ｍｇ／ｋｇを投与された患者（患者の無病が７３週間及び進行中）のＤＦＳは、治療を受けていない患者で予想されるよりもはるかに高いと思われる。その結果、抗ＫＩＲ抗体によるＮＫ活性の調節は、寛解にある患者に投与した場合、有意な有益な効果を有する。効果は、抗体が少なくとも２週間の完全な受容体飽和を達成するために、特に投与の反復サイクルの経過の間（ここでは、１ヵ月に１回投与して約１ヵ月の飽和を生じる１ｍｇ／ｋｇ及び３ｍｇ／ｋｇの投与レベルで６回投与）継続する完全な受容体飽和を伴って投与される場合、特に高い。
【０２５３】
【表４】
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【０２５４】
実施例４：くすぶり型多発性骨髄腫における臨床試験
継続した又は間欠的な飽和を生じる抗ＫＩＲ抗体、１−７Ｆ９の２つの異なる用量を用いた２群試験をＳＭＭ患者にて実施する。最初のＡ群は、０．２ｍｇ／ｋｇで治療し、各注射後少なくとも約７日間にわたって完全（＞９０％）であるが、一時的な飽和をもたらし、Ｂ群は２ｍｇ／ｋｇを投与し、２回の連続した注射間で完全で持続した飽和をもたらす。患者は月単位で６回まで投与を増やし、安全性、及びＭＭに向かう疾患の進行を示す基準を含む有効性の基準について調べられる。
【０２５５】
患者、材料及び方法
試験に適する患者は、国際骨髄腫ワーキンググループの定義（Br J Haematol 2003; 121 : 749）：血清Ｍタンパク質≧３ｇ／ｄｌ、および／または骨髄形質細胞≧１０％で、終末器官障害の証拠がない（ＣＲＡＢ）：
−（Ｃ）高カルシウム血症がない：Ｃａ＜１０．５ｍｇ／ｄｌ
−（Ｒ）腎不全がない：クレアチニン＜２ｍｇ／ｄｌ（１７７マイクロモル／ｌ）又は算出されたクレアチニンクリアランス（ＭＤＲＤに従って）＞５０ｍｌ／分
−（Ａ）貧血がない：Ｈｂ＞１１ｇ／ｄｌ
−（Ｂ）標準の骨調査で溶解性骨病変がない（臨床的に指摘されればＭＲＩを使用することができた）
に由来する定義に従って任意のリスクレベルのＳＭＭを有する。
【０２５６】
患者はまた、血清Ｍタンパク質≧１ｇ／ｄｌによる疾患として定義される測定可能な病変を有しなければならず、疲労、再発感染又はＭＭのいかなる臨床的疑いの証拠も有してはならない。
【０２５７】
試験設計
無作為化にて割り振った患者で２つの用量を評価する：
−Ａ群では、０．２ｍｇ／ｋｇ、各注射後少なくとも約７日間にわたって完全（＞９０％）であるが、一時的な飽和をもたらし、
−Ｂ群では、２ｍｇ／ｋｇ、２回の連続した注射間で完全で持続した飽和をもたらす
【０２５８】
双方の群では、抗ＫＩＲ抗体、１−７Ｆ９が、１時間にわたる静脈内経路によって４週間ごとに６回投与される。患者すべてにおいて、試験全体の間、同一用量を使用する。抗ＫＩＲ抗体、１−７Ｆ９を４週ごとに６サイクル投与する。その疾患が６サイクルの試験治療に少なくともやや有効を達成する患者は、６サイクルの追加の治療期間によって治療される。患者は試験にて、１２又は１８ヵ月、すなわち、治療の完了後６ヵ月（又はＫＩＲの飽和が治療の完了後６ヵ月でまだ＞３０％であれば、さらに長く）経過観察される。
【０２５９】
評価基準
応答は、ＥＢＭＴ基準（Blade et al; Br J Haematol 1998; 102: 1 15）に由来するやや有効を含めるために改変されたＩＭＷＧ均一応答基準（Durie BGM et al; Leukemia 2006; 20: 1467）に従って分類され、（ａ）血清タンパク質のレベルで２５〜４９％の低下及び（ｂ）２００ｍｇ／２４時間を超える２４時間尿中Ｍタンパク質排泄の５０〜８９％の低下の双方を必要とした。
【０２６０】
血清及び尿の電気泳動が陰性である患者すべてにおいて免疫固定及び骨髄の検査を行い、その疾患がＣＲ基準を達成する患者すべてにて血清の遊離軽鎖を測定し、その疾患がＣＲ基準を達成する患者すべてにて骨髄の免疫表現型決定を行う。血清及び尿のタンパク質の電気泳動にて線量測定を用いてＭタンパク質を定量する。尿試料がない場合、応答は血清レベルのみで評価する。
【０２６１】
さらに、ＤＯＲ（応答持続時間）、ＰＦＳ（無増悪生存）及び進行までの時間（ＴＰＰ）を試験期間中記録する。
【０２６２】
実施例５：第１選択治療への応答に続く多発性骨髄腫における臨床試験
Ｇｅｈａｎの一段階フェーズＩＩ設計による非盲検無作為二独立群多施設試験を行って、ヒトモノクローナル抗体抗ＫＩＲ抗体、１−７Ｆ９の２つの異なる投与計画に対する血清Ｍタンパク質レベルにおける応答を評価する。患者は、４週間間隔で１時間にわたる点滴で投与される０．２ｍｇ／ｋｇ又は２ｍｇ／ｋｇ（その無作為化による）のいずれかの用量で１−７Ｆ９の点滴を４回受ける。
【０２６３】
患者、材料及び方法
試験に適するのは、最初に全身療法を必要とし、第１選択の治療、従来用量の化学療法又は高用量の化学療法及び造血系細胞の自家移植を受け、その後地固め療法を受けた又は受けなかったＭＭ患者である。
【０２６４】
患者は、残存病変又は以前の治療への応答を有し得る。残存病変は、（ａ）≧１０ｇ／ｌでＭタンパク質が定量可能とみなされるβ−グロブリン領域のスパイクを除いて、≧３ｇ／ｌの定量可能な血清Ｍタンパク質；又は（ｂ）血清Ｍタンパク質が＜３ｇ／ｌであり、≧１００ｍｇ／ｌの測定可能な関与する遊離軽鎖及び異常な遊離軽鎖の比（＜０．２６又は＞１．６５）を有する病変である。
【０２６５】
部分的（ＰＲ及びＶＧＰＲ）であり、頭打ちにある応答の患者については、部分寛解は、ＩＭＷＧ均一応答基準：第１選択の化学療法前の血清Ｍタンパク質の値からの≧５０％の低下、及び≧９０％又は＜２００ｍｇ／２４時間までの２４時間尿Ｍタンパク質の低下を満たすべきである。非常に良い部分寛解は、血清Ｍタンパク質の９０％以上の低下に加えて＜１００ｍｇ／２４時間の尿中Ｍタンパク質レベルというＩＭＷＧ均一応答基準に従って定義される。≧３ｇ／ｌの血清Ｍタンパク質；少なくとも２ヵ月間の血清Ｍタンパク質の安定したレベルの患者についての、及び＜３ｇ／ｌの血清Ｍタンパク質；血清における遊離軽鎖の安定したレベルの患者についての頭打ちフェーズ。
【０２６６】
患者はさらに０、１又は２のＥＣＯＧ（米国東海岸癌臨床試験グループ）の一般状態を有する。
【０２６７】
試験設計
１時間かけた静脈内経路で４サイクルについて、無作為化グループに従って０．２ｍｇ／ｋｇ又は２ｍｇ／ｋｇのいずれかの用量で４週間ごとに抗体１−７Ｆ９の点滴１回を投与する。４カ月で応答する（血清Ｍタンパク質の低下）患者は、４回の月ごとの投与のさらなる投与期間を受け取ることが許される。１群の全患者で試験全体にわたって同一用量が使用される。
【０２６８】
第１の用量、０．２ｍｇ／ｋｇは約１週間を超えて完全な受容体飽和をもたらすと予想される。
【０２６９】
第２の用量、２ｍｇ／ｋｇは少なくとも１ヵ月の期間で受容体を飽和する用量をやや上回る。
【０２７０】
評価基準
有効性は、血清及び２４時間の尿の電気泳動で線量測定を用いて定量されるＭタンパク質のレベル及び結合部位フリーライトアッセイによる比濁法を用いて定量される遊離軽鎖のレベルに基づいて評価される。ＴＴＰ（進行までの時間）、ＰＦＳ（無増悪生存）、ＤＯＲ（応答持続時間）及びＯＳ（全体の生存）を含む幾つかの評価項目が評価される。
【０２７１】
成績
０．２ｍｇ／ｋｇ又は２ｍｇ／ｋｇで４回治療した各群における最初の７人の患者のうちで、２ｍｇ／ｋｇ治療群（持続した受容体飽和）にてＭタンパク質の低下によって評価すると（２回の連続した外来で確認された２５％から低下したＭタンパク質）、治療に対する応答が１つ認められた。
【０２７２】
本明細書で引用された出版物、特許出願及び特許を含む参考文献はすべて、本明細書のどこかで為された特定に文書の別々に提供された組み入れにかかわりなく、その全体が、及び各参考文献が参照によって組み入れられるように個々に及び特に指示され、本明細書で全体的に言及されたかのような同じ程度に（法律によって許される最大の程度に）、参照によって本明細書に組み入れられる。
【０２７３】
用語「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」及び本発明を記載する文脈における類似の指示対象は、本明細書で指示されない限り、又は文脈によって明瞭に相反されない限り、単数及び複数の双方を網羅するように解釈されるべきである。
【０２７４】
言及されない限り、本明細書で提供された正確な値はすべて、相当する近似値の代表である（たとえば、特定の因子又は測定に関して提供された正確な例となる値はすべて、適宜、「約」によって修飾される相当する近似の測定も提供するとみなすことができる）。
【０２７５】
要素（単数）又は要素（複数）に関して、たとえば、「含むこと」、「有すること」、「包含すること」又は「含有すること」のような用語を使用する本発明の態様又は実施形態の本明細書における記載は、本明細書で指示されない限り、又は文脈によって明瞭に相反されない限り、特定の要素（単数）又は要素（複数）から「成る」、「本質的に成る」又はそれを「実質的に含む」本発明の類似の態様又は実施形態に対するサポートを提供することを意図する（たとえば、特定の要素を含むような本明細書で記載される組成物は、言及されない限り、又は文脈によって明瞭に相反されない限り、その要素から成る組成物も記載すると理解されるべきである）。
【０２７６】
本明細書で提供される例又は例となる言語（たとえば、「たとえば」）のいずれか及びすべては、本発明をさらに明らかにすることを単に意図するのであって、主張されない限り、本発明の範囲で限定を提起するものではない。本発明の実践に必須であるとして任意の非請求の要素を示すと解釈されるべき言語は本明細書にはない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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