(57)【要約】本発明は、ＴＡＳ２Ｒ受容体ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０に関するアゴニストについての、本明細書中に開示される出願人等の発見に基づいている。これらの受容体に対するアゴニストの割り当てにより、苦味を調整する化合物を同定するための検定が可能になる。例えば、本発明は、これらのアゴニストに起因する苦味を抑制する化合物の同定方法を提供する。本発明は、これらのアゴニストに起因する苦味を選択的に抑制する化合物の同定方法も提供する。本発明はさらに、これらのアゴニストに起因する苦味を模倣する化合物の同定方法を提供する。本発明は、これらのアゴニストに起因する苦味を増強する化合物の同定方法も提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＫＣｌに起因する苦味を抑制する化合物の同定方法であって、以下の：
ａ）第一および第二細胞を提供することであって、
各細胞は、以下の、
ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から独立して選択される１つ以上の苦味受容体を発現し、各細胞は、同一の１つ以上の苦味受容体を発現することと、
ｂ）前記第一細胞を味物質と接触させることであって、
前記味物質は前記１つ以上の苦味受容体を活性化することと、    
ｃ）前記第二細胞を試験化合物および前記味物質と接触させることと、
ｄ）前記第一および第二細胞を苦味受容体活性化に関して検定することと、
ｅ）前記第一細胞の苦味受容体活性化を前記第二細胞の苦味受容体活性化と比較することであって、
前記第二細胞の苦味受容体活性が前記第一細胞の苦味受容体活性より低い場合、前記試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味の阻害剤であることと
を包含する方法。
【請求項２】
前記苦味受容体がＧタンパク質と複合体を形成される、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記Ｇタンパク質がＧｑタンパク質、アルファ・トランスデューシンまたはアルファ・ガストデューシンである、請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記Ｇｑタンパク質がＧα１５タンパク質である、請求項３記載の方法。
【請求項５】
苦味受容体活性が細胞内カルシウム濃度を測定することにより確定される、請求項１〜４のいずらかの記載の方法。
【請求項６】
前記細胞内カルシウム濃度が、カルシウム感受性蛍光染料を用いて確定される、請求項５記載の方法。
【請求項７】
前記カルシウム感受性蛍光染料が、Ｉｎｄｏ−１、Ｆｕｒａ−２、Ｆｌｕｏ−３、Ｆｌｕｏ−４、Ｒｈｏｄ−２、Ｒｈｏｄ−５Ｎ、カルセイン、カルセインブルー、サイトカルセインバイオレット、Ｑｕｉｎ−２、Ｑｕｅｓｔ  Ｆｌｕｏ−８Ｈ（商標）、Ｑｕｅｓｔ  Ｆｌｕｏ  ８Ｌ（商標）、Ｑｕｅｓｔ  Ｆｌｕｏ８（商標）、Ｑｕｅｓｔ  Ｒｈｏｄ−４（商標）、セレンテラジンおよびカルシウム−３からなる群から選択される、請求項６記載の方法。
【請求項８】
前記第一および第二細胞がｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株中に存在する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記第一および第二細胞がｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株のパネル中に存在する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
ＫＣｌに起因する苦味を抑制するよう受容体に選択的に作用する化合物を同定するための方法であって、以下の：
ａ）細胞株の第一および第二パネルを提供することであって、
各パネルは、以下の、
ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される苦味受容体を発現し、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現され、前記第一および第二パネルは同一細胞株を含むことと、
ｂ）前記第一パネル中の各細胞株を味物質と接触させることであって、
前記味物質は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群のうちの少なくとも２つを活性化することと、
ｃ）前記第二パネル中の各細胞株を試験化合物および前記味物質と接触させることと、
ｄ）各細胞株を苦味受容体活性化に関して検定することであって、
ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群のうちの少なくとも２つの苦味受容体活性が前記第一パネルと比較して前記第二パネルにおいて低い場合、前記試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味の選択的阻害剤であること
を包含する方法。
【請求項１１】
前記ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群のうちの少なくとも３つの苦味受容体活性が前記第一パネルと比較して前記第二パネルにおいて低い、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
前記ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群のうちの少なくとも４つの苦味受容体活性が前記第一パネルと比較して前記第二パネルにおいて低い、請求項１０記載の方法。
【請求項１３】
前記ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群のうちの少なくとも５つの苦味受容体活性が前記第一パネルと比較して前記第二パネルにおいて低い、請求項１０記載の方法。
【請求項１４】
前記ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群における各成員の苦味受容体活性が前記第一パネルと比較して前記第二パネルにおいて低い、請求項１０記載の方法。
【請求項１５】
前記第一および第二パネルが、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体を含む、請求項１０〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記苦味受容体がＧタンパク質と複合体を形成される、請求項１０〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記Ｇタンパク質がＧｑタンパク質、アルファ・トランスデューシンまたはアルファ・ガストデューシンである、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
前記Ｇｑタンパク質がＧα１５タンパク質である、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
苦味受容体活性が細胞内カルシウム濃度を測定することにより確定される、請求項１０〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記細胞内カルシウム濃度が、カルシウム感受性蛍光染料を用いて確定される、請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
前記カルシウム感受性蛍光染料が、Ｉｎｄｏ−１、Ｆｕｒａ−２、Ｆｌｕｏ−３、Ｆｌｕｏ−４、Ｒｈｏｄ−２、Ｒｈｏｄ−５Ｎ、カルセイン、カルセインブルー、サイトカルセインバイオレット、Ｑｕｉｎ−２、Ｑｕｅｓｔ  Ｆｌｕｏ−８Ｈ（商標）、Ｑｕｅｓｔ  Ｆｌｕｏ  ８Ｌ（商標）、Ｑｕｅｓｔ  Ｆｌｕｏ８（商標）、Ｑｕｅｓｔ  Ｒｈｏｄ−４（商標）、セレンテラジンおよびカルシウム−３からなる群から選択される請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
ＫＣｌに起因する苦味を増強する化合物の同定方法であって、以下の：
ａ）第一および第二細胞を提供することであって、
各細胞は、以下の、
ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から独立して選択される１つ以上の苦味受容体を発現し、各細胞は、同一の１つ以上の苦味受容体を発現することと、
ｂ）前記第一細胞を味物質と接触させることであって、
前記味物質はＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体のうちの１つ以上を活性化することと、
ｃ）前記第二細胞を試験化合物および前記味物質と接触させることと、
ｄ）前記第一および第二細胞を苦味受容体活性化に関して検定することと、
ｅ）前記第一細胞の苦味受容体活性化を前記第二細胞の苦味受容体活性化と比較することであって、
前記第二細胞の苦味受容体活性が前記第一細胞の苦味受容体活性より大きい場合、前記試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味の増強剤であることと
を包含する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、米国特許仮出願６１／５４９，６９３（２０１１年１０月２０日出願）（この記載内容は参照により本明細書中で援用される）に対する優先権を主張する。
【０００２】
本発明は、苦味調節因子を同定するための検定に関する。
【背景技術】
【０００３】
例えばヒトにおける味の感覚は、少なくとも５つの伝統的味：すなわち甘味、酸味、塩味、苦味および旨味（味の良さ）を検出し得る。多数の栄養物質、例えば野菜、食物、食物成分および栄養素は、苦味物質を含み、および／または苦味を有する。さらに、健康を維持するかまたは改善するために重要な多数の薬学的物質は、苦味物質を含み、および／または苦味を有する。ある食料製品および消費者製品、例えばコーヒー、ビールおよびダークチョコレートは望ましい苦味を有するが、多くの状況では、消費者はこのような苦味を嫌がる。例えば、多くの消費者は、ある種の苦味物質および／または苦味の知覚を嫌い、望ましくない苦味物質のレベル低減を示すか、または苦味を低減するか、または苦味を完全に欠く食物および薬学的製品を支持して、望ましくない苦味物質または苦味を有する食物または薬学的製品を回避する。望ましくない苦味物質を含有する、および／または望ましくない苦味を有する製品に対するこの反感は、口腔中および／または消化管中に存在する苦味受容体の活性化により媒介される苦味物質および／または苦味の知覚により引き起こされ得る。多くの場合、苦味物質を含むか、および／または苦味を有する所望レベルの栄養物または防腐剤が用いられ得ないので、消費者の苦味物質および／または苦味嫌いは、食物の栄養価および安全性の改良を妨げるかまたは阻止する。さらにまた、いくつかの医薬剤の苦味物質または苦味に対する嫌悪または反感は、それらの使用に関する処方レジメンの順守に負の影響を及ぼす。
【０００４】
例えば、食料製品の製造に用いられるいくつかの添加剤、防腐剤、乳化剤および食料品は、苦味物質を含み、および／または苦味を有する。これらの添加剤、防腐剤、乳化剤および食料品は食料製品の味に影響を及ぼし得るが、それらは食料製品の貯蔵寿命、栄養価または歯応えを改良するために重要でもある。例えば、高血圧症および心臓血管性疾患の漸増傾向は、一部は、西欧の食餌の高ナトリウム摂取に原因があった。したがって、塩化ナトリウムを別の塩味化合物に置き換えることが望ましい。もっとも一般的な塩化ナトリウム置換体は塩化カリウムであり、これは、その塩味に加えて、苦味を保有すると、集団の一部に感知される。塩化カリウムの苦味は、それに感受性である集団の一部に関して望ましくない苦味を生じることなく、食物中の塩化ナトリウムに取って代わるために用いられ得る程度を限定する。
【０００５】
別の一般的食品添加剤である乳酸ナトリウムは、広範な抗菌作用を有し、腐敗および病原性細菌の増殖を抑制するに際して有効であり、そして貯蔵寿命を延長し、食物安全性を増大するために食料製品中に一般に用いられる。しかしながらそのナトリウム含量のため、乳酸ナトリウムは防腐剤として望ましくないことがある。同様の抗菌特性を有する乳酸カリウムが、乳酸ナトリウムの代わりに用いられてきた。しかしながら、乳酸カリウムも苦味と関連があり、これが、望ましくない苦味を生じることなく食品中の乳酸ナトリウムに取って代わるために用いられ得る程度を限定する。
【０００６】
さらに、肥満症および糖尿病の漸増発生率は、一部は、多くの食餌の高糖摂取が原因であるとされてきた。したがって、糖を別の甘味化合物に置換することが望ましい。食物中の糖を低減するために用いられ得る人工および天然糖置換体は、しばしば、苦味と関連しており、これらもまた、有害な苦味を生じることなく食物中の糖に取って代わるために用いられ得る程度を制限する。例えば、一般的糖置換体はアセスルファムＫであって、これも、その甘味のほかに苦味を有する。
【０００７】
理論に縛られることなく考えると、苦味、甘味および旨味物質および化合物は、典型的には、Ｇタンパク質結合受容体を介して味応答を引き出すが、一方、塩味および酸味物質および化合物は、典型的には、イオンチャネルを介して味応答を引き出すという仮説が立てられている。苦味受容体は、苦味物質に応答して細胞内カルシウム濃度変化を誘導するＧタンパク質結合受容体のＴＡＳ２Ｒ（Ｔ２Ｒとしても言及される）ファミリーに属する。ＴＡＳ２Ｒ受容体は、味特異的Ｇタンパク質であるガストデューシンを介して作用する。ＴＡＳ２Ｒファミリーには少なくとも２５の異なる成員が存在するが、このことは、苦味の知覚が複雑で、いくつかの異なる味物質‐受容体相互作用を伴う、ということを示唆している。ＴＡＳ２Ｒ成員のいくつか、例えばＴＡＳ２Ｒ６０はオーファン受容体であって、これは同定されるリガンドを有さない。口腔および／または消化管内の苦味受容体の活性化を調整し得る、および／またはシグナル伝達し得る化合物は、増大レベルの苦味物質または苦味の知覚のために食料製品および医薬製品を嫌う消費者を生じることなくこのような製品中の苦味物質または苦味を感じる物質の所望の使用量レベルを可能にするために有効であり得る。いくつかの場合、苦味受容体および苦味の遮断剤または調節因子は、口腔および／または消化管中に存在する苦味受容体および／または味伝達シグナル伝達機構を介して苦味物質および／または苦味の知覚を低減し得る。
【０００８】
伝統的に、食品調製物および医薬品において、苦味は、甘味剤および他の味物質、例えば塩を用いて遮蔽された。しかしながら、いくつかの場合には、これは、食料製品中の他の味／風味／印象（例えば、非苦味または所望の苦味）を変更し、遮蔽し、または妨害し得るため、望ましくないかまたは十分でない。付加的に、このアプローチは、このような食料製品または医薬品中に存在する苦味を完全に遮蔽し得ることはめったになかった。そのため、遮蔽剤の代わりに、またはそれに加えて苦味を低減する化合物が選択される。
【０００９】
したがって、苦味物質または苦味の知覚を除去し、調整し、または低減するために、あるいは口腔および／または消化管中の苦味受容体の対応する活性化を低減するために、苦味物質を含むかまたは苦味を有する食料製品、消費者製品および医薬品に付加され得る化合物を同定するための検定を提供することが望ましい。同様に、他の苦味受容体を活性化しない化合物（すなわち、オフターゲット効果を有する化合物）を同定することが望ましい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、ＴＡＳ２Ｒ受容体ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０に関するアゴニストについての、本明細書中に開示される出願人等の発見に基づいている。これらの受容体に対するアゴニストの割り当てにより、苦味を調整する化合物を同定するための検定が可能になる。例えば、本発明は、これらのアゴニストに起因する苦味を抑制する化合物の同定方法を提供する。本発明は、これらのアゴニストに起因する苦味を選択的に抑制する化合物の同定方法も提供する。本発明はさらに、これらのアゴニストに起因する苦味を模倣する化合物の同定方法を提供する。本発明は、これらのアゴニストに起因する苦味を増強する化合物の同定方法も提供する。
苦味を抑制する化合物の同定方法
【００１１】
本発明の一態様は、ＫＣｌに起因する苦味を抑制する化合物の同定方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該方法は、第一および第二細胞を提供すること（ここで、第一および第二細胞は各々、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される１つ以上の苦味受容体を発現し、この場合、第一および第二細胞は、同一の１つ以上の苦味受容体を発現する）；第一細胞を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０のうちの１つ以上を活性化する味物質と接触させること；第二細胞を、試験化合物および味物質と接触させること；第一および第二細胞を苦味受容体活性化に関して検定すること；そして第一細胞の苦味受容体活性化を第二細胞の苦味受容体活性化と比較すること（ここで、第二細胞の苦味受容体活性が第一細胞の苦味受容体活性より低い場合、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味の阻害剤である）を包含する。
【００１２】
いくつかの実施形態では、当該方法は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される１つ以上の苦味受容体を発現する細胞を提供すること；細胞を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０のうちの１つ以上を活性化する味物質と接触させること；苦味受容体活性化に関する第一検定を実施すること；細胞を洗浄すること；細胞を試験化合物および味物質と接触させること；苦味受容体活性化に関する第二検定を実施すること；そして第一検定の苦味受容体活性化を第二検定の苦味受容体活性化と比較すること（ここで、第二検定の苦味受容体活性が第一検定の苦味受容体活性より低い場合、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味の阻害剤である）を包含する。
【００１３】
本発明の別の態様は、乳酸カリウムに起因する苦味を抑制する化合物の同定方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該方法は、第一および第二細胞を提供すること（ここで、第一および第二細胞は各々、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される１つ以上の苦味受容体を発現し、この場合、第一および第二細胞は、同一の１つ以上の苦味受容体を発現する）；第一細胞を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０のうちの１つ以上を活性化する味物質と接触させること；第二細胞を、試験化合物および味物質と接触させること；第一および第二細胞を苦味受容体活性化に関して検定すること；そして第一細胞の苦味受容体活性化を第二細胞の苦味受容体活性化と比較すること（ここで、第二細胞の苦味受容体活性が第一細胞の苦味受容体活性より低い場合、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味の阻害剤である）を包含する。
【００１４】
いくつかの実施形態では、当該方法は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される１つ以上の苦味受容体を発現する細胞を提供すること；細胞を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０のうちの１つ以上を活性化する味物質と接触させること；苦味受容体活性化に関する第一検定を実施すること；細胞を洗浄すること；細胞を試験化合物および味物質と接触させること；苦味受容体活性化に関する第二検定を実施すること；そして第一検定の苦味受容体活性化を第二検定の苦味受容体活性化と比較すること（ここで、第二検定の苦味受容体活性が第一検定の苦味受容体活性より低い場合、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味の阻害剤である）を包含する。
【００１５】
本発明の別の態様は、アセスルファムＫに起因する苦味を抑制する化合物の同定方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該方法は、第一および第二細胞を提供すること（ここで、第一および第二細胞は各々、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４からなる群から選択される１つ以上の苦味受容体を発現し、この場合、第一および第二細胞は、同一の１つ以上の苦味受容体を発現する）；第一細胞を、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４のうちの１つ以上を活性化する味物質と接触させること；第二細胞を、試験化合物および味物質と接触させること；第一および第二細胞を苦味受容体活性化に関して検定すること；そして第一細胞の苦味受容体活性化を第二細胞の苦味受容体活性化と比較すること（ここで、第二細胞の苦味受容体活性が第一細胞の苦味受容体活性より低い場合、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味の阻害剤である）を包含する。
【００１６】
いくつかの実施形態では、当該方法は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４からなる群から選択される１つ以上の苦味受容体を発現する細胞を提供すること；細胞を、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４のうちの１つ以上を活性化する味物質と接触させること；苦味受容体活性化に関する第一検定を実施すること；細胞を洗浄すること；細胞を試験化合物および味物質と接触させること；苦味受容体活性化に関する第二検定を実施すること；そして第一検定の苦味受容体活性化を第二検定の苦味受容体活性化と比較すること（ここで、第二検定の苦味受容体活性が第一検定の苦味受容体活性より低い場合、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味の阻害剤である）を包含する。
【００１７】
いくつかの実施形態では、苦味物質は、ＫＣｌ、乳酸カリウム、アセスルファムＫまたは普遍的苦味化合物である。いくつかの実施形態では、普遍的苦味化合物は、安息香酸デナトニウムまたはデナトニウムサッカリドである。
【００１８】
いくつかの実施形態では、苦味受容体はＧタンパク質と複合体を形成される。いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質はＧｑタンパク質、アルファ・トランスデューシンまたはアルファ・ガストデューシンである。いくつかの実施形態では、Ｇｑタンパク質はＧα１５タンパク質である。
【００１９】
いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、細胞内カルシウム濃度を測定することにより確定される。いくつかの実施形態では、細胞内カルシウム濃度は、カルシウム感受性蛍光染料、例えばＦｌｕｏ‐４またはカルシウム‐３染料を用いて確定される。
【００２０】
いくつかの実施形態では、当該方法の細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株中に存在する。いくつかの実施形態では、細胞はｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株のパネル中に存在する。
苦味を選択的に抑制する化合物の同定方法
【００２１】
本発明の一態様は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に抑制する化合物の同定方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株の第一および第二パネルを提供すること（ここで、各パネルは、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される１つ以上の苦味受容体を発現する細胞株を含み、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現され、そして各パネルは同一細胞株を含有する）；第一パネル中の各細胞株を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０のうちの少なくとも２つを活性化する味物質と接触させること；第二パネル中の各細胞株を試験化合物および味物質と接触させること；第一および第二パネル中の各細胞株を苦味受容体活性化に関して検定すること；そして第一パネル中の各細胞株の苦味受容体活性化を第二パネル中の対応する細胞株の苦味受容体活性化と比較すること（ここで、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群のうちの少なくとも２つの苦味受容体活性が第一パネルと比較して第二パネルにおいて低い場合、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味の選択的阻害剤である）を包含する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が第二パネルの細胞株のうちの少なくとも３つにおいて低い場合（ここで、細胞株は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される）には、試験化合物はＫＣｌに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が第二パネルの細胞株のうちの少なくとも４つにおいて低い場合（ここで、細胞株は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される）には、試験化合物はＫＣｌに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が第二パネルの細胞株のうちの少なくとも５つにおいて低い場合（ここで、細胞株は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される）には、試験化合物はＫＣｌに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０の各々に関して第二パネルにおいて低い場合には、試験化合物はＫＣｌに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、第一および第二パネル中の各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される苦味受容体を発現する（この場合、各受容体は、各パネルの少なくとも１つの細胞株中で発現される）。いくつかの実施形態では、試験化合物は、第一パネルと比較して、第二パネルにおいて、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０およびＴＡＳ２Ｒ５５苦味受容体活性を誘導しない。いくつかの実施形態では、第一パネルの各細胞株は、苦味受容体活性化に関する検定後に洗浄されて、細胞株の第二パネルを提供する。
【００２２】
本発明の別の態様は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に抑制する化合物の同定方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株の第一および第二パネルを提供すること（ここで、各パネルは、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される１つ以上の苦味受容体を発現する細胞株を含み、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現され、そして各パネルは同一細胞株を含有する）；第一パネル中の各細胞株を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０のうちの少なくとも２つを活性化する味物質と接触させること；第二パネル中の各細胞株を試験化合物および味物質と接触させること；第一および第二パネル中の各細胞株を苦味受容体活性化に関して検定すること；そして第一パネル中の各細胞株の苦味受容体活性化を第二パネル中の対応する細胞株の苦味受容体活性化と比較すること（ここで、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群のうちの少なくとも２つの苦味受容体活性が第一パネルと比較して第二パネルにおいて低い場合、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味の選択的阻害剤である）を包含する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が第二パネルの細胞株のうちの少なくとも３つにおいて低い場合（ここで、細胞株は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される）には、試験化合物は乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が第二パネルの細胞株のうちの少なくとも４つにおいて低い場合（ここで、細胞株は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される）には、試験化合物は乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が第二パネルの細胞株のうちの少なくとも５つにおいて低い場合（ここで、細胞株は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される）には、試験化合物は乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が第二パネルの細胞株のうちの少なくとも６つにおいて低い場合（ここで、細胞株は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される）には、試験化合物は乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０の各々に関して第二パネルにおいて低い場合には、試験化合物は乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、第一および第二パネル中の各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される苦味受容体を発現する（この場合、各受容体は、各パネルの少なくとも１つの細胞株中で発現される）。いくつかの実施形態では、試験化合物は、第一パネルと比較して、第二パネルにおいて、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０およびＴＡＳ２Ｒ５５苦味受容体活性を誘導しない。いくつかの実施形態では、第一パネルの各細胞株は、苦味受容体活性化に関する検定後に洗浄されて、細胞株の第二パネルを提供する。
【００２３】
本発明の別の態様は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に抑制する化合物の同定方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株の第一および第二パネルを提供すること（ここで、各パネルは、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４からなる群から選択される１つ以上の苦味受容体を発現する細胞株を含み、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現され、そして各パネルは同一細胞株を含有する）；第一パネル中の各細胞株を、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４のうちの少なくとも２つを活性化する味物質と接触させること；第二パネル中の各細胞株を試験化合物および味物質と接触させること；第一および第二パネル中の各細胞株を苦味受容体活性化に関して検定すること；そして第一パネル中の各細胞株の苦味受容体活性化を第二パネル中の対応する細胞株の苦味受容体活性化と比較すること（ここで、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される群のうちの少なくとも２つの苦味受容体活性が第一パネルと比較して第二パネルにおいて低い場合、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味の選択的阻害剤である）を包含する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が第二パネルの細胞株のうちの少なくとも３つにおいて低い場合（ここで、細胞株は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される）には、試験化合物はアセスルファムＫに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が第二パネルの細胞株のうちの少なくとも４つにおいて低い場合（ここで、細胞株は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される）には、試験化合物はアセスルファムＫに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が第二パネルの細胞株のうちの少なくとも５つにおいて低い場合（ここで、細胞株は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される）には、試験化合物はアセスルファムＫに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が第二パネルの細胞株のうちの少なくとも６つにおいて低い場合（ここで、細胞株は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される）には、試験化合物はアセスルファムＫに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４の各々に関して第二パネルにおいて低い場合には、試験化合物はアセスルファムＫに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、第一および第二パネル中の各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される苦味受容体を発現する（この場合、各受容体は、各パネルの少なくとも１つの細胞株中で発現される）。いくつかの実施形態では、試験化合物は、第一パネルと比較して、第二パネルにおいて、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体活性を誘導しない。いくつかの実施形態では、第一パネルの各細胞株は、苦味受容体活性化に関する検定後に洗浄されて、細胞株の第二パネルを提供する。
【００２４】
いくつかの実施形態では、苦味物質は、ＫＣｌ、乳酸カリウム、アセスルファムＫまたは普遍的苦味化合物である。いくつかの実施形態では、普遍的苦味化合物は、安息香酸デナトニウムまたはデナトニウムサッカリドである。
【００２５】
いくつかの実施形態では、苦味受容体はＧタンパク質と複合体を形成される。いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質はＧｑタンパク質、アルファ・トランスデューシンまたはアルファ・ガストデューシンである。いくつかの実施形態では、Ｇｑタンパク質はＧα１５タンパク質である。
【００２６】
いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、細胞内カルシウム濃度を測定することにより確定される。いくつかの実施形態では、細胞内カルシウム濃度は、カルシウム感受性蛍光染料、例えばＦｌｕｏ‐４またはカルシウム‐３染料を用いて確定される。
【００２７】
いくつかの実施形態では、当該方法の細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株中に存在する。いくつかの実施形態では、細胞はｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株のパネル中に存在する。
苦味を模倣する化合物の同定方法
【００２８】
本発明の一態様は、ＫＣｌに起因する苦味を模倣する化合物の同定方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株の第一および第二パネルを提供すること（ここで、各パネルは、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される１つ以上の苦味受容体を発現する細胞株を含み、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現され、そして各パネルは同一細胞株を含有する）；第一パネル中の各細胞株を、陰性対照と接触させること；第二パネル中の各細胞株を試験化合物と接触させること；第一および第二パネル中の各細胞株を苦味受容体活性化に関して検定すること；そして第一パネル中の各細胞株の苦味受容体活性化を第二パネル中の対応する細胞株の苦味受容体活性化と比較すること（ここで、試験化合物が、第一パネルと比較して第二パネルにおいてＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体活性を誘導する場合、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を模倣する）を包含する。いくつかの実施形態では、第一および第二パネル中の各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される苦味受容体を発現する（この場合、各受容体は、各パネルの少なくとも１つの細胞株中で発現される）。いくつかの実施形態では、試験化合物は、第一パネルと比較して、第二パネルにおいて、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０およびＴＡＳ２Ｒ５５苦味受容体活性を誘導しない。いくつかの実施形態では、第一パネルの各細胞株は、苦味受容体活性化に関する検定後に洗浄されて、細胞株の第二パネルを提供する。いくつかの実施形態では、陰性対象は、試験化合物の付加前の検定緩衝液である。
【００２９】
本発明の別の態様は、乳酸カリウムに起因する苦味を模倣する化合物の同定方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株の第一および第二パネルを提供すること（ここで、各パネルは、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される１つ以上の苦味受容体を発現する細胞株を含み、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現され、そして各パネルは同一細胞株を含有する）；第一パネル中の各細胞株を、陰性対照と接触させること；第二パネル中の各細胞株を試験化合物と接触させること；第一および第二パネル中の各細胞株を苦味受容体活性化に関して検定すること；そして第一パネル中の各細胞株の苦味受容体活性化を第二パネル中の対応する細胞株の苦味受容体活性化と比較すること（ここで、試験化合物が、第一パネルと比較して第二パネルにおいてＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体活性を誘導する場合、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を模倣する）を包含する。いくつかの実施形態では、第一および第二パネル中の各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される苦味受容体を発現する（この場合、各受容体は、各パネルの少なくとも１つの細胞株中で発現される）。いくつかの実施形態では、試験化合物は、第一パネルと比較して、第二パネルにおいて、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０およびＴＡＳ２Ｒ５５苦味受容体活性を誘導しない。いくつかの実施形態では、第一パネルの各細胞株は、苦味受容体活性化に関する検定後に洗浄されて、細胞株の第二パネルを提供する。いくつかの実施形態では、陰性対照は、試験化合物の付加前の検定緩衝液である。
【００３０】
本発明の別の態様は、アセスルファムＫに起因する苦味を模倣する化合物の同定方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株の第一および第二パネルを提供すること（ここで、各パネルは、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４からなる群から選択される１つ以上の苦味受容体を発現する細胞株を含み、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現され、そして各パネルは同一細胞株を含有する）；第一パネル中の各細胞株を、陰性対照と接触させること；第二パネル中の各細胞株を試験化合物と接触させること；第一および第二パネル中の各細胞株を苦味受容体活性化に関して検定すること；そして第一パネル中の各細胞株の苦味受容体活性化を第二パネル中の対応する細胞株の苦味受容体活性化と比較すること（ここで、試験化合物が、第一パネルと比較して第二パネルにおいてＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４苦味受容体活性を誘導する場合、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を模倣する）を包含する。いくつかの実施形態では、第一および第二パネル中の各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される苦味受容体を発現する（この場合、各受容体は、各パネルの少なくとも１つの細胞株中で発現される）。いくつかの実施形態では、試験化合物は、第一パネルと比較して、第二パネルにおいて、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体活性を誘導しない。いくつかの実施形態では、第一パネルの各細胞株は、苦味受容体活性化に関する検定後に洗浄されて、細胞株の第二パネルを提供する。いくつかの実施形態では、陰性対照は、試験化合物の付加前の検定緩衝液である。
【００３１】
いくつかの実施形態では、苦味受容体はＧタンパク質と複合体を形成される。いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質はＧｑタンパク質、アルファ・トランスデューシンまたはアルファ・ガストデューシンである。いくつかの実施形態では、Ｇｑタンパク質はＧα１５タンパク質である。
【００３２】
いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、細胞内カルシウム濃度を測定することにより確定される。いくつかの実施形態では、細胞内カルシウム濃度は、カルシウム感受性蛍光染料、例えばＦｌｕｏ‐４またはカルシウム‐３染料を用いて確定される。
【００３３】
いくつかの実施形態では、当該方法の細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株中に存在する。いくつかの実施形態では、細胞はｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株のパネル中に存在する。
苦味を増強する化合物の同定方法
【００３４】
本発明の一態様は、ＫＣｌに起因する苦味を増強する化合物の同定方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該方法は、第一細胞および第二細胞を提供すること（ここで、第一および第二細胞は各々、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される１つ以上の苦味受容体を発現する）；第一細胞を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０のうちの１つ以上を活性化する味物質と接触させること；第二細胞を、試験化合物および味物質と接触させること；第一および第二細胞を苦味受容体活性化に関して検定すること；そして第一細胞の苦味受容体活性化を第二細胞の苦味受容体活性化と比較すること（ここで、第二細胞の苦味受容体活性が第一細胞の苦味受容体活性より高い場合、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味の増強剤である）を包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される１つ以上の苦味受容体を発現する細胞を提供すること；細胞を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０のうちの１つ以上を活性化する味物質と接触させること；苦味受容体活性化に関する第一検定を実施すること；細胞を洗浄すること；細胞を試験化合物および味物質と接触させること；苦味受容体活性化に関する第二検定を実施すること；そして第一検定の苦味受容体活性化を第二検定の苦味受容体活性化と比較すること（ここで、第二検定の苦味受容体活性が第一検定の苦味受容体活性より高い場合、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味の増強剤である）を包含する。
【００３５】
本発明の別の態様は、乳酸カリウムに起因する苦味を増強する化合物の同定方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該方法は、第一細胞および第二細胞を提供すること（ここで、第一および第二細胞は各々、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される１つ以上の苦味受容体を発現する）；第一細胞を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０のうちの１つ以上を活性化する味物質と接触させること；第二細胞を、試験化合物および味物質と接触させること；第一および第二細胞を苦味受容体活性化に関して検定すること；そして第一細胞の苦味受容体活性化を第二細胞の苦味受容体活性化と比較すること（ここで、第二細胞の苦味受容体活性が第一細胞の苦味受容体活性より高い場合、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味の増強剤である）を包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される１つ以上の苦味受容体を発現する細胞を提供すること；細胞を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０のうちの１つ以上を活性化する味物質と接触させること；苦味受容体活性化に関する第一検定を実施すること；細胞を洗浄すること；細胞を試験化合物および味物質と接触させること；苦味受容体活性化に関する第二検定を実施すること；そして第一検定の苦味受容体活性化を第二検定の苦味受容体活性化と比較すること（ここで、第二検定の苦味受容体活性が第一検定の苦味受容体活性より高い場合、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味の増強剤である）を包含する。
【００３６】
本発明の別の態様は、アセスルファムＫに起因する苦味を増強する化合物の同定方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該方法は、第一細胞および第二細胞を提供すること（ここで、第一および第二細胞は各々、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４からなる群から選択される１つ以上の苦味受容体を発現する）；第一細胞を、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４のうちの１つ以上を活性化する味物質と接触させること；第二細胞を、試験化合物および味物質と接触させること；第一および第二細胞を苦味受容体活性化に関して検定すること；そして第一細胞の苦味受容体活性化を第二細胞の苦味受容体活性化と比較すること（ここで、第二細胞の苦味受容体活性が第一細胞の苦味受容体活性より高い場合、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味の増強剤である）を包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４からなる群から選択される１つ以上の苦味受容体を発現する細胞を提供すること；細胞を、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４のうちの１つ以上を活性化する味物質と接触させること；苦味受容体活性化に関する第一検定を実施すること；細胞を洗浄すること；細胞を試験化合物および味物質と接触させること；苦味受容体活性化に関する第二検定を実施すること；そして第一検定の苦味受容体活性化を第二検定の苦味受容体活性化と比較すること（ここで、第二検定の苦味受容体活性が第一検定の苦味受容体活性より高い場合、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味の増強剤である）を包含する。
【００３７】
いくつかの実施形態では、苦味物質は、ＫＣｌ、乳酸カリウム、アセスルファムＫまたは普遍的苦味化合物である。いくつかの実施形態では、普遍的苦味化合物は、安息香酸デナトニウムまたはデナトニウムサッカリドである。
【００３８】
いくつかの実施形態では、苦味受容体はＧタンパク質と複合体を形成される。いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質はＧｑタンパク質、アルファ・トランスデューシンまたはアルファ・ガストデューシンである。いくつかの実施形態では、Ｇｑタンパク質はＧα１５タンパク質である。
【００３９】
いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、細胞内カルシウム濃度を測定することにより確定される。いくつかの実施形態では、細胞内カルシウム濃度は、カルシウム感受性蛍光染料、例えばＦｌｕｏ‐４またはカルシウム‐３染料を用いて確定される。
【００４０】
いくつかの実施形態では、当該方法の細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株中に存在する。いくつかの実施形態では、細胞はｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株のパネル中に存在する。
苦味物質が組成物中に存在するか否かの同定方法
【００４１】
本発明の一態様は、ＫＣｌが組成物中に存在するか否かを確定するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株の第一および第二パネルを提供すること（ここで、各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される１つ以上の苦味受容体を発現し、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現され、そして各パネルは同一細胞株を含有する）；第一パネル中の各細胞株を、陰性対照と接触させること；第二パネル中の各細胞株を組成物と接触させること；第一および第二パネル中の各細胞株を苦味受容体活性化に関して検定すること；そして第一パネル中の各細胞株の苦味受容体活性化を第二パネル中の対応する細胞株の苦味受容体活性化と比較すること（ここで、組成物が、第一パネルと比較して第二パネルにおいて、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体活性を誘導し、第一パネルと比較して第二パネルにおいて、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０およびＴＡＳ２Ｒ５５苦味受容体活性を誘導しない場合、ＫＣｌは組成物中に存在する）を包含する。いくつかの実施形態では、第一パネルの各細胞株は、苦味受容体活性化に関する検定後に洗浄されて、細胞株の第二パネルを提供する。いくつかの実施形態では、陰性対照は、組成物の付加前の検定緩衝液である。
【００４２】
本発明の別の態様は、乳酸カリウムが組成物中に存在するか否かを確定するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株の第一および第二パネルを提供すること（ここで、各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される１つ以上の苦味受容体を発現し、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現され、そして各パネルは同一細胞株を含有する）；第一パネル中の各細胞株を、陰性対照と接触させること；第二パネル中の各細胞株を組成物と接触させること；第一および第二パネル中の各細胞株を苦味受容体活性化に関して検定すること；そして第一パネル中の各細胞株の苦味受容体活性化を第二パネル中の対応する細胞株の苦味受容体活性化と比較すること（ここで、組成物が、第一パネルと比較して第二パネルにおいて、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体活性を誘導し、第一パネルと比較して第二パネルにおいて、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０およびＴＡＳ２Ｒ５５苦味受容体活性を誘導しない場合、乳酸カリウムは組成物中に存在する）を包含する。いくつかの実施形態では、第一パネルの各細胞株は、苦味受容体活性化に関する検定後に洗浄されて、細胞株の第二パネルを提供する。いくつかの実施形態では、陰性対照は、組成物の付加前の検定緩衝液である。
【００４３】
本発明の別の態様は、アセスルファムＫが組成物中に存在するか否かを確定するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株の第一および第二パネルを提供すること（ここで、各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される１つ以上の苦味受容体を発現し、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現され、そして各パネルは同一細胞株を含有する）；第一パネル中の各細胞株を、陰性対照と接触させること；第二パネル中の各細胞株を組成物と接触させること；第一および第二パネル中の各細胞株を苦味受容体活性化に関して検定すること；そして第一パネル中の各細胞株の苦味受容体活性化を第二パネル中の対応する細胞株の苦味受容体活性化と比較すること（ここで、組成物が、第一パネルと比較して第二パネルにおいて、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４苦味受容体活性を誘導し、第一パネルと比較して第二パネルにおいて、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体活性を誘導しない場合、アセスルファムＫは組成物中に存在する）を包含する。いくつかの実施形態では、第一パネルの各細胞株は、苦味受容体活性化に関する検定後に洗浄されて、細胞株の第二パネルを提供する。いくつかの実施形態では、陰性対照は、組成物の付加前の検定緩衝液である。
【００４４】
いくつかの実施形態では、組成物は、食料製品から抽出される。いくつかの実施形態では、組成物は薬学的に活性な成分を含む。
【００４５】
いくつかの実施形態では、苦味受容体はＧタンパク質と複合体を形成される。いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質はＧｑタンパク質、アルファ・トランスデューシンまたはアルファ・ガストデューシンである。いくつかの実施形態では、Ｇｑタンパク質はＧα１５タンパク質である。
【００４６】
いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、細胞内カルシウム濃度を測定することにより確定される。いくつかの実施形態では、細胞内カルシウム濃度は、カルシウム感受性蛍光染料、例えばＦｌｕｏ‐４またはカルシウム‐３染料を用いて確定される。
【００４７】
いくつかの実施形態では、当該方法の細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株中に存在する。いくつかの実施形態では、細胞はｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株のパネル中に存在する。
【００４８】
本発明の特定の実施形態は、以下の番号を付した段落に記述されている：
１．  ＫＣｌに起因する苦味を抑制する化合物の同定方法であって、以下の：
ａ）第一および第二細胞を提供すること
（ここで、各細胞は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体からなる群から独立して選択される１つ以上の苦味受容体を発現し、この場合、各細胞は、同一の１つ以上の苦味受容体を発現する）；
ｂ）前記第一細胞を味物質と接触させること
（ここで、前記味物質はＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体のうちの１つ以上を活性化する）；
ｃ）前記第二細胞を試験化合物および味物質と接触させること；
ｄ）前記第一および第二細胞を苦味受容体活性化に関して検定すること；そして
ｅ）前記第一細胞の苦味受容体活性化を前記第二細胞の苦味受容体活性化と比較すること
（ここで、前記第二細胞の苦味受容体活性が前記第一細胞の苦味受容体活性より低い場合、前記試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味の阻害剤である）
を包含する方法。
２．  乳酸カリウムに起因する苦味を抑制する化合物の同定方法であって、以下の：
ａ）第一および第二細胞を提供すること
（ここで、各細胞は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体からなる群から独立して選択される１つ以上の苦味受容体を発現し、この場合、各細胞は、同一の１つ以上の苦味受容体を発現する）；
ｂ）前記第一細胞を味物質と接触させること
（ここで、前記味物質はＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体のうちの１つ以上を活性化する）；
ｃ）前記第二細胞を試験化合物および味物質と接触させること；
ｄ）前記第一および第二細胞を苦味受容体活性化に関して検定すること；そして
ｅ）前記第一細胞の苦味受容体活性化を前記第二細胞の苦味受容体活性化と比較すること
（ここで、前記第二細胞の苦味受容体活性が前記第一細胞の苦味受容体活性より低い場合、前記試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味の阻害剤である）
を包含する方法。
３．  前記味物質がＫＣｌ、乳酸カリウムまたは普遍的苦味化合物である段落１〜２のいずれか１つに記載の方法。
４．  前記苦味受容体がＧタンパク質と複合体を形成される段落１〜３のいずれか１つに記載の方法。
５．  前記Ｇタンパク質がＧｑタンパク質、アルファ・トランスデューシンまたはアルファ・ガストデューシンである段落４記載の方法。
６．  前記Ｇｑタンパク質がＧα１５タンパク質である段落５記載の方法。
７．  苦味受容体活性が細胞内カルシウム濃度を測定することにより確定される段落１〜６のいずれか１つに記載の方法。
８．  前記細胞内カルシウム濃度が、カルシウム感受性蛍光染料を用いて確定される段落７記載の方法。
９．  前記カルシウム感受性蛍光染料が、Ｆｌｕｏ−４またはカルシウム−３染料である段落８記載の方法。
１０．  前記第一および第二細胞がｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株中に存在する段落１〜９のいずれか１つに記載の方法。
１１．  前記第一および第二細胞がｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株のパネル中に存在する段落１〜９のいずれか１つに記載の方法。
１２．  前記普遍的苦味化合物が安息香酸デナトニウムまたはデナトニウムサッカリドである段落１〜１１のいずれか１つに記載の方法。
１３．  ＫＣｌに起因する苦味を選択的に抑制する化合物を同定するための方法であって、以下の：
ａ）細胞株の第一および第二パネルを提供すること
（ここで、各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される苦味受容体を発現する細胞を含み、この場合、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現され、この場合、第一および第二パネルは同一細胞株を含む）；
ｂ）前記第一パネル中の各細胞株を味物質と接触させること
（ここで、前記味物質は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群のうちの少なくとも２つを活性化する）；
ｃ）前記第二パネル中の細胞株を試験化合物および味物質と接触させること；
ｄ）各細胞株を苦味受容体活性化に関して検定すること
（ここで、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群のうちの少なくとも２つの苦味受容体活性が第一パネルと比較して第二パネルにおいて低い場合、前記試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味の選択的阻害剤である）
を包含する方法。
１４．  ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群のうちの少なくとも３つの苦味受容体活性が第一パネルと比較して第二パネルにおいて低い段落１３記載の方法。
１５．  ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群のうちの少なくとも４つの苦味受容体活性が第一パネルと比較して第二パネルにおいて低い段落１３記載の方法。
１６．  ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群のうちの少なくとも５つの苦味受容体活性が第一パネルと比較して第二パネルにおいて低い段落１３記載の方法。
１７．  ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０の苦味受容体活性が第一パネルと比較して第二パネルにおいて低い段落１３記載の方法。
１８．  各パネルが、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体からなる群から選択される苦味受容体を発現する細胞株を含み、各受容体が少なくとも１つの細胞株中で発現され、そして前記第一および第二パネルが同一細胞株を含む段落１３〜１７のいずれか１つに記載の方法。
１９．  前記試験化合物が、第一パネルと比較して第二パネルにおいてＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０およびＴＡＳ２Ｒ５５苦味受容体活性を誘導しない段落１８記載の方法。
２０．  乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に抑制する化合物を同定するための方法であって、以下の：
ａ）細胞株の第一および第二パネルを提供すること
（ここで、各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される苦味受容体を発現する細胞を含み、この場合、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現され、この場合、第一および第二パネルは同一細胞株を含む）；
ｂ）前記第一パネル中の各細胞株を味物質と接触させること
（ここで、前記味物質は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群のうちの少なくとも２つを活性化する）；
ｃ）前記第二パネル中の細胞株を試験化合物および味物質と接触させること；
ｄ）各細胞株を苦味受容体活性化に関して検定すること
（ここで、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群のうちの少なくとも２つの苦味受容体活性が第一パネルと比較して第二パネルにおいて低い場合、前記試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味の選択的阻害剤である）
を包含する方法。
２１．  ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群のうちの少なくとも３つの苦味受容体活性が第一パネルと比較して第二パネルにおいて低い段落２０記載の方法。
２２．  ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群のうちの少なくとも４つの苦味受容体活性が第一パネルと比較して第二パネルにおいて低い段落２０記載の方法。
２３．  ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群のうちの少なくとも５つの苦味受容体活性が第一パネルと比較して第二パネルにおいて低い段落２０記載の方法。
２４．  ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群のうちの少なくとも６つの苦味受容体活性が第一パネルと比較して第二パネルにおいて低い段落２０記載の方法。
２５．  ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０の苦味受容体活性が第一パネルと比較して第二パネルにおいて低い段落１３記載の方法。
２６．  各パネルが、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体からなる群から選択される苦味受容体を発現する細胞株を含み、各受容体が少なくとも１つの細胞株中で発現され、そして前記第一および第二パネルが同一細胞株を含む段落２０〜２５のいずれか１つに記載の方法。
２７．  前記試験化合物が、第一パネルと比較して第二パネルにおいてＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０およびＴＡＳ２Ｒ５５苦味受容体活性を誘導しない段落２６記載の方法。
２８．  前記味物質がＫＣｌ、乳酸カリウムまたは普遍的苦味化合物である段落１３〜２７のいずれか１つに記載の方法。
２９．  前記苦味受容体がＧタンパク質と複合体を形成される段落１３〜２８のいずれか１つに記載の方法。
３０．  前記Ｇタンパク質がＧｑタンパク質、アルファ・トランスデューシンまたはアルファ・ガストデューシンである段落２９記載の方法。
３１．  前記Ｇｑタンパク質がＧα１５タンパク質である段落３０記載の方法。
３２．  苦味受容体活性が細胞内カルシウム濃度を測定することにより確定される段落２８〜３１のいずれか１つに記載の方法。
３３．  前記細胞内カルシウム濃度が、カルシウム感受性蛍光染料を用いて確定される段落３２記載の方法。
３４．  前記カルシウム感受性蛍光染料が、Ｆｌｕｏ−４またはカルシウム−３染料である段落３３記載の方法。
３５．  前記普遍的苦味化合物が安息香酸デナトニウムまたはデナトニウムサッカリドである段落２８〜３４のいずれか１つに記載の方法。
３６．  前記第一パネルからの細胞株が苦味受容体活性化検定後に洗浄されて細胞株の第二パネルを提供する段落１３〜３４のいずれか１つに記載の方法。
３７．  ＫＣｌに起因する苦味を増強する化合物の同定方法であって、以下の：
ａ）第一および第二細胞を提供すること
（ここで、各細胞は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から独立して選択される１つ以上の苦味受容体を発現する）；
ｂ）前記第一細胞を味物質と接触させること
（ここで、前記味物質はＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体のうちの１つ以上を活性化する）；
ｃ）前記第二細胞を試験化合物および味物質と接触させること；
ｄ）前記第一および第二細胞を苦味受容体活性化に関して検定すること；そして
ｅ）前記第一細胞の苦味受容体活性化を前記第二細胞の苦味受容体活性化と比較すること
（ここで、前記第二細胞の苦味受容体活性が前記第一細胞の苦味受容体活性より大きい場合、前記試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を増強する）
を包含する方法。
３８．  乳酸カリウムに起因する苦味を増強する化合物の同定方法であって、以下の：
ａ）第一および第二細胞を提供すること
（ここで、各細胞は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から独立して選択される１つ以上の苦味受容体を発現する）；
ｂ）前記第一細胞を味物質と接触させること
（ここで、前記味物質はＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体のうちの１つ以上を活性化する）；
ｃ）前記第二細胞を試験化合物および味物質と接触させること；
ｄ）前記第一および第二細胞を苦味受容体活性化に関して検定すること；そして
ｅ）前記第一細胞の苦味受容体活性化を前記第二細胞の苦味受容体活性化と比較すること
（ここで、前記第二細胞の苦味受容体活性が前記第一細胞の苦味受容体活性より大きい場合、前記試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を増強する）
を包含する方法。
３９．  前記味物質がＫＣｌ、乳酸カリウムまたは普遍的苦味化合物である段落３７〜３８のいずれか１つに記載の方法。
４０．  前記苦味受容体がＧタンパク質と複合体を形成される段落３７〜３９のいずれか１つに記載の方法。
４１．  前記Ｇタンパク質がＧｑタンパク質、アルファ・トランスデューシンまたはアルファ・ガストデューシンである段落４０記載の方法。
４２．  前記Ｇｑタンパク質がＧα１５タンパク質である段落４１記載の方法。
４３．  苦味受容体活性が細胞内カルシウム濃度を測定することにより確定される段落３７〜４２のいずれか１つに記載の方法。
４４．  前記細胞内カルシウム濃度が、カルシウム感受性蛍光染料を用いて確定される段落４３記載の方法。
４５．  前記カルシウム感受性蛍光染料が、Ｆｌｕｏ−４またはカルシウム−３染料である段落４４記載の方法。
４６．  前記細胞がｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株中に存在する段落３７〜４５のいずれか１つに記載の方法。
４７．  前記細胞がｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株のパネル中に存在する段落３７〜４５のいずれか１つに記載の方法。
４８．  前記普遍的苦味化合物が安息香酸デナトニウムまたはデナトニウムサッカリドである段落３９〜４７のいずれか１つに記載の方法。
４９．  前記第一細胞が苦味受容体活性化検定後に洗浄されて細胞株の第二細胞を提供する段落３７〜４８のいずれか１つに記載の方法。
５０．  ＫＣｌに起因する苦味を抑制する化合物の同定方法であって、以下の：
ａ）細胞を提供すること
（ここで、前記細胞は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体からなる群から選択される１つ以上の苦味受容体を発現する）；
ｂ）前記第一細胞を味物質と接触させること
（ここで、前記味物質はＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体のうちの１つ以上を活性化する）；
ｃ）前記細胞を苦味受容体活性化に関して検定すること；
ｄ）前記細胞を洗浄すること；
ｅ）前記細胞を試験化合物および味物質と接触させること；
ｆ）前記細胞を苦味受容体活性化に関して検定すること；そして
ｇ）ステップ（ｃ）における前記細胞の苦味受容体活性化をステップ（ｆ）における前記細胞の苦味受容体活性化と比較すること
（ここで、ステップ（ｆ）における苦味受容体活性がステップ（ｃ）における苦味受容体活性より低い場合、前記試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味の阻害剤である）
を包含する方法。
５１．  乳酸カリウムに起因する苦味を抑制する化合物の同定方法であって、以下の：
ａ）細胞を提供すること
（ここで、前記細胞は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体からなる群から選択される１つ以上の苦味受容体を発現する）；
ｂ）前記第一細胞を味物質と接触させること
（ここで、前記味物質はＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体のうちの１つ以上を活性化する）；
ｃ）前記細胞を苦味受容体活性化に関して検定すること；
ｄ）前記細胞を洗浄すること；
ｅ）前記細胞を試験化合物および味物質と接触させること；
ｆ）前記細胞を苦味受容体活性化に関して検定すること；そして
ｇ）ステップ（ｃ）における前記細胞の苦味受容体活性化をステップ（ｆ）における前記細胞の苦味受容体活性化と比較すること
（ここで、ステップ（ｆ）における苦味受容体活性がステップ（ｃ）における苦味受容体活性より低い場合、前記試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味の阻害剤である）
を包含する方法。
５２．    前記味物質がＫＣｌ、乳酸カリウムまたは普遍的苦味化合物である段落５０〜５１のいずれか１つに記載の方法。
５３．  前記苦味受容体がＧタンパク質と複合体を形成される段落５０〜５２のいずれか１つに記載の方法。
５４．  前記Ｇタンパク質がＧｑタンパク質、アルファ・トランスデューシンまたはアルファ・ガストデューシンである段落５３記載の方法。
５５．  前記Ｇｑタンパク質がＧα１５タンパク質である段落５４記載の方法。
５６．  苦味受容体活性が細胞内カルシウム濃度を測定することにより確定される段落５０〜５５のいずれか１つに記載の方法。
５７．  前記細胞内カルシウム濃度が、カルシウム感受性蛍光染料を用いて確定される段落５６記載の方法。
５８．  前記カルシウム感受性蛍光染料が、Ｆｌｕｏ−４またはカルシウム−３染料である段落５７記載の方法。
５９．  前記細胞がｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株中に存在する段落５０〜５８のいずれか１つに記載の方法。
６０．  前記細胞がｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株のパネル中に存在する段落５０〜５８のいずれか１つに記載の方法。
６１．  前記普遍的苦味化合物が安息香酸デナトニウムまたはデナトニウムサッカリドである段落５２〜６０のいずれか１つに記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】内因性受容体アゴニスト・イソプロテレノールに対する２５の苦い細胞株すべての応答が全株を通して高度に均一である、ということを実証する。応答パーセント（Ｙ軸）を、イソプロテレノール濃度（Ｘ軸）の一関数としてプロットし、その結果を、曲線適合させて、ＥＣ５０値（半最大受容体活性化の濃度）を算定した。２５の細胞株すべてに関して、ＥＣ５０値は約４．９±０．４１ｎＭであった。
【図２】６つの受容体がＫＣｌ（２０ｍＭ）に対する強固な機能応答を示した、ということを実証するが、これは、これら６つの受容体が特異的に調整されてＫＣｌを検出することを示している。残り１９の受容体はどれも、閾値（４０％）を超える機能応答を提供しなかった。
【図３】（Ａ）ＫＣｌ特異的受容体を発現する細胞株におけるＫＣｌの付加に応答するＫＣｌシグナル伝達の用量‐応答曲線、ならびに（Ｂ）ＫＣｌ特異的受容体を発現する細胞株における緩衝液の付加に応答するＫＣｌシグナル伝達の用量‐応答曲線を提供する。Ｙ軸は、蛍光（ＲＦＵ）を表す。Ｘ軸は、（Ａ）では、ｌｏｇＫＣｌ濃度（Ｍ）を表す。付加されるＫＣｌを有さない（Ｂ）におけるＸ軸は、（Ａ）におけるｌｏｇＫＣｌ濃度（Ｍ）を反映する。
【図４】７つの受容体が乳酸カリウム（２０ｍＭ）に対する強固な機能応答を示したことを実証するが、これは、これら７つの受容体が特異的に調整されて、乳酸カリウムを検出する、ということを示している。残り１８の受容体はどれも、閾値（４０％）を超える機能応答を提供しなかった。
【図５】７つの受容体がアセスルファムＫ（２０ｍＭ）に対する強固な機能応答を示したことを実証するが、これは、これら７つの受容体が特異的に調整されて、アセスルファムＫを検出する、ということを示している。残り１８の受容体はどれも、閾値（４０％）を超える機能応答を提供しなかった。
【図６】ＫＣｌ、乳酸カリウムおよびアセスルファムＫに対する２５すべての苦い細胞株の機能反応性を実証する。
【発明を実施するための形態】
【００５０】
本発明の詳細な説明
【００５１】
本明細書中に記載される本発明が十分に理解され得るために、以下の詳細な説明が既述される。
【００５２】
別記しない限り、本明細書中で用いられる技術用語および科学用語はすべて、本発明が属する当該技術分野における当業者に一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書中に記載されるものと類似のまたは等価の方法および材料が本発明の実行または試験に際して用いられ得るが、しかし適切な方法および材料が以下に記載される。材料、方法および実例は例証的であるに過ぎず、本発明を限定するものではない。本明細書中で言及される出版物、特許およびその他の文書はすべて、全目的に関してその記載内容が参照により本明細書中で援用される。
【００５３】
本明細書全体を通して、「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語、あるいは変形の「〜を含む（三人称単数ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」または「〜からなる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、記述される整数または整数の群の含入を意味すると理解されるが、しかし任意の他の整数または整数群を排除しない。別記しない限り、単数用語は複数を包含するし、複数用語は単数を包含することになっている。「またはそれより多く」および「少なくとも」という用語は、本明細書中では互換的に用いられる。例えば、「２以上」および「少なくとも２」は、互換的に用いられ得る。同様に、「低い」または「より大きい」という用語は、本明細書中では互換的に用いられる。例えば、「ＡはＢより低い」および「ＢはＡより大きい」は、互換的に用いられ得る。
【００５４】
「アゴニスト」、「増強物質」または「活性剤」という用語は、苦味受容体活性を増大して、苦味受容体に関する細胞内分子の量または分布、あるいは細胞内シグナル伝達経路の一部である酵素の活性における変化を生じる化合物または物質を指す。細胞内分子の例としては、遊離カルシウム、環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）、イノシトールモノ‐
、ジ‐またはトリ‐リン酸が挙げられるが、これらに限定されない。酵素の例としては、アデニレートシクラーゼ、ホスホリパーゼ‐Ｃ、Ｇタンパク質結合受容体キナーゼが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５５】
「アンタゴニスト」、「阻害剤」または「遮断剤」という用語は、苦味受容体活性を減少させて、苦味受容体に関する細胞内分子の量または分布、あるいは細胞内シグナル伝達経路の一部である酵素の活性における変化を生じる化合物または物質を指す。細胞内分子の例としては、遊離カルシウム、環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）、イノシトールモノ‐
、ジ‐またはトリ‐リン酸が挙げられるが、これらに限定されない。酵素の例としては、アデニレートシクラーゼ、ホスホリパーゼ‐Ｃ、Ｇタンパク質結合受容体キナーゼが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書中で用いる場合、阻害剤、アンタゴニストまたは遮断剤は、苦味受容体のすべてに作用し得るし、あるいはその特定の一小群に作用し得る。阻害剤、アンタゴニストまたは遮断剤は、ＴＡＳ２Ｒ受容体の活性を、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％減少させ得る。
【００５６】
「人工甘味料」および「糖置換体」という用語は、甘味を付与するが、しかし糖より低い熱エネルギーを有する食物添加物を指す。いくつかの場合、「人工甘味料」または「糖置換体」の熱エネルギーはごくわずかである。
【００５７】
「苦い」または「苦味」という用語は、本明細書中で用いる場合、苦味物質の検出後に生じる知覚または味感覚を指す。以下の属性が苦味に寄与し得る：渋い、苦い‐渋い、金属性の、苦い‐金属性の、ならびに異味、後味、および望ましくない味、例えば冷凍焼けおよび段ボール味（これらに限定されない）、および／またはこれらの任意の組合せ。当該技術分野では、「異味」という用語はしばしば「苦味」と同義語である、ということが注目される。理論に制限されずに考えると、苦味の多様性は、多数の苦味受容体、ならびにこれらの受容体による苦味物質の示差的検出を反映し得る。苦味は、本明細書中で用いる場合、苦味物質による苦味受容体の活性化と、その後の下流シグナル伝達も包含する。苦味は、本明細書中で用いる場合、苦味受容体による苦味物質の検出後のシグナル伝達に起因する知覚をさらに包含する。苦味は、本明細書中で用いる場合、苦味受容体を苦味物質と接触させた後のシグナル伝達に起因する知覚をさらに包含する。苦味は、脳で知覚され得る。
【００５８】
「苦味受容体」という用語は、苦味物質が結合し得る受容体、典型的には細胞表面受容体を指す。苦味受容体は、口腔中に、および／または口腔外組織、例えば消化管、例えば胃、小腸および結腸全体を通して味様ホルモン産生細胞中に存在し得る。苦味受容体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでも、例えば検定、例えば細胞ベースの検定または結合検定においても存在し得る。
【００５９】
「苦味物質」、「苦味リガンド」または「苦味化合物」という用語は、苦味受容体を活性化するかまたは苦味受容体により検出され得る、および／または被験体における苦味の知覚を付与する化合物を指す。「苦味物質」は、苦味受容体を活性化するかまたは苦味受容体により検出されるために、および／または被験体における苦味の知覚を付与するために組合せる多数の化合物も指す。「苦味物質」はさらに、苦味受容体を活性化するかまたは苦味受容体により検出されるために、および／または被験体における苦味の知覚を付与するために、被験体による摂取時に酵素的に改質される化合物を指す。苦味の知覚は個体毎に変わり得るため、個体の中には、他の個体により同一化合物に関して知覚される苦味の種類と比較して、異なる種類の苦味を付与する化合物として「苦味物質」を説明し得る。苦味物質という用語は、さらにまた、苦味を付与する化合物を指す。
【００６０】
「細胞株」または「クローン細胞株」という用語は、単一の元の細胞のすべての子孫である細胞の集団を指す。本明細書中で用いる場合、細胞株は細胞培養中にｉｎ  ｖｉｔｒｏで保持され、クローン細胞のバンクを確立するためにアリコートで凍結され得る。
【００６１】
「消費者製品」という用語は、被験体による個人的使用および／または消費に起因する健康および美容製品を指す。消費者製品は、任意の形態で、例えば液体、固体、半固体、錠剤、カプセル、舐剤、細片、粉末、ゲル、ゴム、ペースト、スラリー、シロップ、エーロゾルおよび噴霧剤（これらに限定されない）の形態で存在し得る。消費者製品の非限定例としては、栄養医薬品、栄養補助食品、口紅、リップクリーム、石鹸、シャンプー、ガム、接着剤（例えば歯科用接着剤）、練り歯磨き、経口鎮痛剤、口臭防止剤、口腔洗浄剤、歯牙漂白剤およびその他の歯磨き剤が挙げられる。
【００６２】
「接触させること」という用語は、アンタゴニスト、アゴニスト、調節因子、味物質または試験化合物とポリペプチド（例えば、ＴＡＳ２Ｒ受容体）またはポリペプチドを発現する宿主細胞との間の任意の相互作用を指し、それにより、少なくとも２つの構成成分のうちのいずれかが、互いに独立して、液相中、例えば溶液中、または懸濁液中に存在し得るか、あるいは例えば本質的に平坦な表面の形態での、あるいは粒子、パール等の形態での固相と結合され得る。ポリペプチドは、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５またはＴＡＳ２Ｒ６０であり得る。同様に、宿主細胞は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５、ＴＡＳ２Ｒ６０またはその組合せを発現し得る。
【００６３】
「食餌」という用語は、集合的に、被験体により消費される食料製品および／または飲料を指す。被験体の「食餌」は、被験体が摂取する任意の消費者製品または薬学的組成物も包含する。
【００６４】
「食用組成物」という用語は、典型的には口腔を介した、消費に適した組成物を指す（しかし、消費は、非口腔手段、例えば吸入を介して起こり得る）。食用組成物は、任意の形態で、例えば液体、固体、半固体、錠剤、舐剤、細片、粉末、ゲル、ゴム、ペースト、スラリー、シロップ、エーロゾルおよび噴霧剤（これらに限定されない）の形態で存在し得る。本明細書中で用いる場合、食用組成物は、食料製品、薬学的組成物および消費者製品を包含する。食用組成物という用語は、例えば食餌補助剤および栄養補助剤も包含する。本明細書中で用いる場合、食用組成物は、口腔内に入れられるが、しかし嚥下されない組成物、例えば職業用歯科製品、例えば歯科処置剤、充填剤、詰め物材料、鋳型および光沢剤も包含する。「食用に適した」という用語は同様の組成物を指し、一般的に「食用になる」という用語と同義語として用いられる。
【００６５】
「有効量」という用語は、所望の特性または結果を生じるために十分な量を指す。例えば、本発明の検定に用いられる化合物の有効量は、苦味物質に関連した苦味の知覚を低減し得る量である。典型的には、本発明の検定に用いられる化合物の有効量は、苦味物質による苦味受容体の活性化を抑制し得る量である。代替的には、本発明の検定に用いられる化合物の有効量は、別の苦味物質の非存在下で苦味受容体を活性化し得る量である。
【００６６】
「風味改質剤」という用語は、食用組成物、例えば食料製品に付加されると、食用組成物中に存在する風味（例えば、甘味、塩味、旨味、酸味または苦味）を改質する（例えば、その知覚を遮蔽する、排除する、減少させる、低減する、または増強する）化合物または化合物の混合物を指す。
【００６７】
「機能的苦味受容体」という語句は、工学処理を伴わずに苦味受容体を普通に発現する細胞中の苦味受容体と実質的に同じ方法で、既知の活性剤または既知の阻害剤に応答する苦味受容体を指す。苦味受容体行動は、例えば、生理学的活性および薬理学的応答により確定され得る。生理学的活性としては、苦味の感覚が挙げられるが、これに限定されない。薬理学的応答としては、苦味受容体が調節因子と接触した場合の、苦味受容体に関する細胞内シグナル伝達経路の一部である細胞内分子の量または分布、あるいは酵素の活性における変化が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、薬理学的応答は、苦味受容体が活性化された場合の細胞内遊離カルシウムの増大、または苦味受容体が遮断された場合の細胞内遊離カルシウムの減少を包含し得る。
【００６８】
「調節因子」という用語は、肯定的にまたは否定的に、苦味受容体の構造、立体配置、生化学的または生物物理学的特性または機能性を変更する化合物または物質を指す。調節因子は、苦味受容体アゴニスト（増強剤または活性化剤）またはアンタゴニスト（阻害剤または遮断剤）、例えば部分的アゴニストまたはアンタゴニスト、選択的アゴニストまたはアンタゴニスト、および逆アゴニストであり得るし、アロステリック調節因子であり得る。その調節活性が、異なる条件または濃度下で、あるいは異なる形態の苦味受容体、例えば苦味受容体の天然型対突然変異型、ならびに異なる天然対立遺伝子変異体（例えば、多型性のための）に関して、変化する場合でも、物質または化合物は調節因子である。本明細書中で用いる場合、調節因子は、苦味受容体の活性、別の調節性化合物に対する苦味受容体の応答、または苦味受容体の選択性に影響を及ぼし得る。調節因子は、苦味受容体の機能に影響を及ぼす別の調節因子の能力も変え得る。調節因子は、苦味受容体のすべてにまたは特定小群に作用を及ぼし得る。調節因子としては、増強剤、活性化剤、阻害剤、アゴニスト、アンタゴニストおよび遮断剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６９】
本明細書中で用いる場合、「ネイティブ」タンパク質（例えば、苦味受容体）という用語は、それに追加されるかまたは挿入される非相同アミノ酸配列を有さないタンパク質を指す。例えば、本明細書中で用いられる「ネイティブ苦味受容体」は、ポリペプチドレベルで発現されるタグ配列を有さない苦味受容体を包含する。ネイティブとして苦味受容体に言及することにより、出願人等は、アミノ酸置換、突然変異または欠失を含む苦味受容体変異体、あるいは天然または従来既知の受容体タンパク質の断片またはスプライス化形態である変異体を排除するよう意図しない。
【００７０】
「オフターゲット効果」という用語は、非標的化味受容体の意図されない調節、活性化または抑制を指す。例えば、苦味受容体の特定の小群の活性を調整するよう意図される場合、苦味調節因子はオフターゲット効果を示し、それは、他の苦味受容体、あるいは他の味受容体、例えば甘味受容体および旨味受容体の活性も調整する。同様に、味調節因子が、苦味物質に起因する苦味を調整するよう意図される場合、味調節因子は、それが他の味物質に起因する味を調整するならば、あるいはそれがそれ自体に味を付与するならば、オフターゲット効果を示す。苦味調節因子のオフターゲット効果は、塩味、甘味、酸味、旨味および／またはその他の苦味の活性化または抑制を生じ得る。
【００７１】
「百万分率」および「ｐｐｍ」という用語は、低濃度の溶液に言及するために食品産業で用いられる。例えば、溶媒１０００ｍｌ中の溶質１ｇは、１０００ｐｐｍの濃度を有し、溶媒１０００ｍｌ中の１０００分の１グラム（０．００１ｇ）の溶質は１ｐｐｍの濃度を有する。したがって、１リットル当たり１ミリグラム（すなわち、１ｍｇ／Ｌ）の濃度は、１ｐｐｍである。
【００７２】
アミノ酸および核酸配列と関連した「同一パーセント」または「同一性パーセント」という語句は、少なくとも２つの異なる配列間の類似性を指す。このパーセント同一性は、標準アラインメント・アルゴリズム、例えばＡｌｔｓｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．  （（１９９０）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２１５：  ４０３  ４１０）により記載された基本局所アラインメント・ツール（ＢＬＡＳＴ）；Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （（１９７０）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ４８：  ４４４  ４５３）のアルゴリズム；またはＭｅｙｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．  （（１９８８）  Ｃｏｍｐｕｔ．  Ａｐｐｌ．  Ｂｉｏｓｃｉ．，  ４：  １１  １７）のアルゴリズムにより確定され得る。一組のパラメーターは、１２のギャップペナルティ、４つのギャップ伸長ペナルティおよび５つのフレームシフト・ギャップペナルティを有するＢｌｏｓｕｍ６２スコアリングマトリクスであり得る。２つのアミノ酸またはヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＰＡＭ１２０重量残基表、１２のギャップ長ペナルティおよび４つのギャップペナルティを用いて整列プログラム（バージョン２．０）中に組み入れられたＥ．  Ｍｅｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｗ．  Ｍｉｌｌｅｒ  （（１９８９）  ＣＡＢＩＯＳ，  ４：１１−１７）のアルゴリズムを用いても確定され得る。同一性パーセントは、通常は、類似長の配列を比較することにより算定される。タンパク質解析ソフトウェアは、種々の置換、欠失およびその他の修飾、例えば保存的アミノ酸置換に割り当てられる類似性の測定を用いて類似配列を整合させる。例えば、ＧＣＧウィスコンシンパッケージ(Ａｃｃｅｌｒｙｓ，  Ｉｎｃ．）は、異なる種の生物体からの相同ポリペプチドのような密接に関連するポリペプチド間の、あるいは野生型タンパク質およびその突然変異との間の配列同一性を確定するために、デフォルトパラメーターとともに用いられ得る「Ｇａｐ」および「Ｂｅｓｔｆｉｔ」のようなプログラムを含有する（例えば、ＧＣＧバージョン６．１参照）。ポリペプチド配列は、デフォルトまたは推奨パラメーターを用いるＦＡＳＴＡを用いても比較され得る。ＧＣＧバージョン６．１．  ＦＡＳＴＡ（例えばＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）におけるプログラムは、質問および検索配列間の最良重複の領域のアラインメントおよび配列同一性パーセントを提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  １８３：６３−９８  （１９９０）；  Ｐｅａｒｓｏｎ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １３２：１８５−２１９  （２０００））。同一性に関して比較されるポリペプチド配列の長さは、一般的に、少なくとも約１６アミノ酸残基、通常は少なくとも約２０残基、さらに通常では少なくとも約２４残基、典型的には少なくとも約２８残基であり、好ましくは約３５残基より多い。同一性に関して比較されるＤＮＡ配列の長さは、一般的には少なくとも約４８核酸残基、通常は少なくとも約６０核酸残基、さらに通常では少なくとも約７２核酸残基、典型的には少なくとも約８４核酸残基であり、好ましくは約１０５核酸残基より多い。
【００７３】
「苦味の知覚」、「塩味の知覚」、「風味の知覚」という用語、および類似の用語は、特定の味または風味についての被験体の感知を指す。
【００７４】
「選択的苦味調節因子」という用語は、任意の他の味物質を調節し、またはその独自の味を付与するということなく、特定の苦味物質に起因する苦味を調整する化合物を指す。例えば、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に抑制する化合物は、別の味物質、例えば他の苦味物質に起因する味を増大したり減少させたりせずに、ＫＣｌに起因する苦味を減少させる。いくつかの実施形態では、選択的苦味調節因子は、特定の苦味受容体または苦味受容体の特定の小群に関するアゴニストまたはアンタゴニストである。例えば、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に抑制する化合物は、任意の他の味受容体、例えば他の苦味受容体を活性化し、または抑制することなく、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０のうちの１つ以上の苦味受容体活性を拮抗する。
【００７５】
「安定な」または「安定的に発現すること」という用語は、「安定発現」および「一過性発現」という用語が当業者に理解される場合、本発明の細胞および細胞株を、一過性発現を有する細胞と区別するよう意図される。
【００７６】
「緊縮条件」または「緊縮ハイブリダイゼーション条件」は、１つ以上の核酸プローブを核酸試料とハイブリダイズして、試料中の標的核酸と特異的に結合されなかったプローブを洗い落とすための温度および塩条件を記述する。緊縮条件は当業者に既知であり、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｎ．Ｙ．  （１９８９），  ６．３．１−６．３．６に見い出され得る。水性および非水性方法は、その参考文献に記載されており、いずれかが用いられ得る。緊縮ハイブリダイゼーション条件の一例は、約４５℃で６×ＳＳＣ、その後、６０℃で０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で少なくとも１回洗浄でのハイブリダイゼーションである。緊縮ハイブリダイゼーション条件のさらなる例は、約４５℃で６×ＳＳＣ、その後、６５℃で０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で少なくとも１回洗浄でのハイブリダイゼーションである。緊縮条件は、約６５℃で０．５Ｍリン酸ナトリウム、７％ＳＤＳ、その後、６５℃で０．２×ＳＳＣ、１％ＳＤＳで少なくとも１回洗浄でのハイブリダイゼーションを包含する。
【００７７】
「被験体」という用語は、哺乳動物を指す。好ましい実施形態では、被験体はヒトである。いくつかの実施形態では、被験体は飼育動物または実験室動物、例えば家庭用愛玩動物、例えばイヌ、ネコ、ブタ、ウサギ、ラット、マウス、アレチネズミ、ハムスター、モルモットおよびフェレット（これらに限定されない）である。いくつかの実施形態では、被験体は家畜動物である。家畜動物の非限定例としては、以下のものが挙げられる：アルパカ、バイソン、ラクダ、畜牛、シカ、ブタ、ウマ、ラマ、ラバ、ロバ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、トナカイおよびヤク。
【００７８】
「甘味」という用語は、例えば糖により引き出される味を指す。甘味を引き出す組成物の非限定例としては、グルコス、スクロース、フルクトース、サッカリン、シクラマート、アスパルターム、アセスルファムカリウム、スクラロース、アリタームおよびネオタームが挙げられる。組成物の甘味または甘さの量は、例えば味試験により確定され得る。
【００７９】
「普遍的苦味化合物」という用語は、２５の苦味受容体すべてを活性化する化合物を指す。普遍的苦味化合物の非限定例としては、安息香酸デナトニウムおよびデナトニウムサッカリドが挙げられる。
【００８０】
本発明は、苦味を調整する化合物を同定するための検定を提供する。例えば本発明は、ＫＣｌ、乳酸カリウムまたはアセスルファムＫに起因する苦味を抑制する化合物の同定方法を提供する。本発明は、ＫＣｌ、乳酸カリウムまたはアセスルファムＫに起因する苦味を選択的に抑制する化合物の同定方法を提供する。本発明はさらに、ＫＣｌ、乳酸カリウムまたはアセスルファムＫに起因する苦味を模倣する化合物の同定方法を提供する。本発明は、ＫＣｌ、乳酸カリウムまたはアセスルファムＫに起因する苦味を増強する化合物の同定方法も提供する。本発明は、付加的に、ＫＣｌ、乳酸カリウムまたはアセスルファムＫが組成物中に存在するか否かを確定するための方法を提供する。
苦味受容体を発現する細胞および細胞株
【００８１】
本発明は、１つ以上の苦味受容体を発現するかまたは発現するよう工学処理された細胞および細胞株を利用するｉｎ  ｖｉｔｒｏ検定に関する。いくつかの実施形態では、本発明の細胞または細胞株は、１つ以上の機能的苦味受容体を発現する。
【００８２】
本発明の一実施形態によれば、細胞および細胞株は、苦味受容体をコードする核酸でトランスフェクトされる。他の実施形態では、細胞および細胞株は、苦味受容体を内因的に発現する。いくつかの実施形態では、細胞および細胞株は、苦味受容体の対立遺伝子変異体（すなわち、多型性）または突然変異体苦味受容体をコードする核酸でトランスフェクトされる。本発明の細胞株は、導入苦味受容体を安定的に発現し得る。別の実施形態では、細胞および細胞株は、遺伝子活性化により発現に関して活性化された苦味受容体を有する。いくつかの実施形態では、苦味受容体はネイティブ苦味受容体である。
【００８３】
特定の実施形態では、細胞および細胞株は、工学処理遺伝子活性化、すなわち内因性遺伝子の発現の活性化の結果として、内因性苦味受容体を発現するが、この場合、活性化は、適正な処理なしで細胞中で自然に起るわけではない。工学処理遺伝子活性化は、例えば内因性苦味受容体の発現に進み得るが、この場合、内因性苦味受容体は適正な処理なしで細胞株中で発現されるわけではない。代替的には、工学処理遺伝子活性化は、例えば内因性苦味受容体の発現レベル増大を生じ得るが、この場合、細胞株中の内因性遺伝子の発現レベルは、適正な処理なしの望ましくない低さであって、例えば細胞株中の苦味受容体の機能検定のために十分でない。代替的には、工学処理遺伝子活性化は、例えば細胞株から内因性苦味受容体を単離するために、内因性苦味受容体を過剰発現するために用いられ得る。工学処理遺伝子活性化は、当業者に既知の多数の手段により達成され得る。例えば、構成性または誘導性プロモーターの制御下で、転写因子またはトランス活性化因子を発現する核酸を細胞中に導入することにより、例えば、遺伝子の１つ以上の転写因子または転写のトランス活性化因子は、過剰発現されるかまたは発現するよう誘導され得る。内因性遺伝子が誘導性プロモーターの制御下にあることが既知である場合、発現は、細胞を遺伝子の既知の誘導因子に曝露することにより誘導され得る。さらに、内因性遺伝子それ自体をコードする核酸は、ゲノム中のコピー数増大のための遺伝子の発現レベル増大を獲得するために、細胞中に導入され得る。さらに、細胞により発現される内因性遺伝子の発現のある種の既知の阻害剤は、当該技術分野で周知の技法、例えばＲＮＡｉを用いることにより弱められ、失効されることさえあり、それにより内因性遺伝子の発現を増大し得る。
【００８４】
いくつかの実施形態では、細胞および細胞株は、１つ以上の苦味受容体を安定的に発現する。いくつかの実施形態では、発現苦味受容体は、アゴニストによる活性化時に細胞内遊離カルシウムを増大する。いくつかの実施形態では、増強剤、アゴニストまたは活性化剤は、小分子、化学物質部分、ポリペプチド、抗体または食品抽出物であり得る。他の実施形態では、発現苦味受容体は、アンタゴニストによる抑制時に細胞内遊離カルシウムを減少させる。いくつかの実施形態では、阻害剤、アンタゴニストまたは遮断剤は、小分子、化学物質部分、ポリペプチド、抗体または食品抽出物であり得る。増強剤、アゴニスト、活性化剤、阻害剤、アンタゴニストまたは遮断剤は、苦味受容体のすべてまたは特定小群に作用し得る。
【００８５】
本発明によれば、細胞または細胞株により発現される苦味受容体は、任意の哺乳動物、例えばラット、マウス、ウサギ、ヤギ、イヌ、ウシ、ブタまたは霊長類からであり得る。好ましい実施形態では、苦味受容体はヒト苦味受容体である。
【００８６】
いくつかの実施形態では、本発明の細胞または細胞株は、以下のものを含み得る：ヒトＴＡＳ２Ｒ１をコードするヌクレオチド配列（配列番号２）；ヒトＴＡＳ２Ｒ３をコードするヌクレオチド配列（配列番号３）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４をコードするヌクレオチド配列（配列番号４）；ヒトＴＡＳ２Ｒ５をコードするヌクレオチド配列（配列番号５）；ヒトＴＡＳ２Ｒ７をコードするヌクレオチド配列（配列番号６）；ヒトＴＡＳ２Ｒ８をコードするヌクレオチド配列（配列番号７）；ヒトＴＡＳ２Ｒ９をコードするヌクレオチド配列（配列番号８）；ヒトＴＡＳ２Ｒ１０をコードするヌクレオチド配列（配列番号９）；ヒトＴＡＳ２Ｒ１３をコードするヌクレオチド配列（配列番号１０）；ヒトＴＡＳ２Ｒ１４をコードするヌクレオチド配列（配列番号１１）；ヒトＴＡＳ２Ｒ１６をコードするヌクレオチド配列（配列番号１２）；ヒトＴＡＳ２Ｒ３８をコードするヌクレオチド配列（配列番号１３）；ヒトＴＡＳ２Ｒ３９をコードするヌクレオチド配列（配列番号１４）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４０をコードするヌクレオチド配列（配列番号１５）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４１をコードするヌクレオチド配列（配列番号１６）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４３をコードするヌクレオチド配列（配列番号１７）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４４をコードするヌクレオチド配列（配列番号１８）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４５をコードするヌクレオチド配列（配列番号１９）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４６をコードするヌクレオチド配列（配列番号２０）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４７をコードするヌクレオチド配列（配列番号２１）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４８をコードするヌクレオチド配列（配列番号２２）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４９をコードするヌクレオチド配列（配列番号２３）；ヒトＴＡＳ２Ｒ５０をコードするヌクレオチド配列（配列番号２４）；ヒトＴＡＳ２Ｒ５５をコードするヌクレオチド配列（配列番号２５）；ヒトＴＡＳ２Ｒ６０をコードするヌクレオチド配列（配列番号２６）；またはその任意の組合せ。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２〜２６のいずれか１つと８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２〜２６のいずれか１つと９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２〜２６のいずれか１つと８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、この場合、ヌクレオチド配列は、ＴＡＳ２Ｒ活性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２〜２６のいずれか１つと９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、この場合、ヌクレオチド配列は、ＴＡＳ２Ｒ活性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２〜２６のいずれか１つと、緊縮条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２〜２６のいずれか１つの成熟形態を含むヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２〜２６のいずれか１つの変異体であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２〜２６のいずれか１つの断片であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２〜２６のいずれか１つのヌクレオチド配列タンパク質分解性切断産物からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２〜２６のいずれか１つであるかまたはオルソログであるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。このようなオルソログは、当該技術分野で周知である。いくつかの実施形態では、ヌクレオチド配列は、配列番号２〜２６のいずれか１つと比較して、５以下、４以下、３以下、２以下または１以下の保存的置換を有する。
【００８７】
いくつかの実施形態では、本発明の細胞または細胞株は、ヒトＴＡＳ２Ｒ１（配列番号２８）；ヒトＴＡＳ２Ｒ３（配列番号２９）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４（配列番号３０）；ヒトＴＡＳ２Ｒ５（配列番号３１）；ヒトＴＡＳ２Ｒ７（配列番号３２）；ヒトＴＡＳ２Ｒ８（配列番号３３）；ヒトＴＡＳ２Ｒ９（配列番号３４）；ヒトＴＡＳ２Ｒ１０（配列番号３５）；ヒトＴＡＳ２Ｒ１３（配列番号３６）；ヒトＴＡＳ２Ｒ１４（配列番号３７）；ヒトＴＡＳ２Ｒ１６（配列番号：３８）；ヒトＴＡＳ２Ｒ３８（配列番号３９）；ヒトＴＡＳ２Ｒ３９（配列番号：４０）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４０（配列番号４１）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４１（配列番号４２）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４３（配列番号４３）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４４（配列番号４４）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４５（配列番号４５）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４６（配列番号４６）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４７（配列番号４７）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４８（配列番号４８）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４９（配列番号４９）；ヒトＴＡＳ２Ｒ５０（配列番号５０）；ヒトＴＡＳ２Ｒ５５（配列番号５１）；ヒトＴＡＳ２Ｒ６０（配列番号５２）；またはその任意の組合せをコードするポリヌクレオチド配列を含み得る。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２８〜５２のいずれか１つをコードするヌクレオチド配列と８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２８〜５２のいずれか１つをコードするヌクレオチド配列と９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２８〜５２のいずれか１つをコードするヌクレオチド配列と８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、この場合、ヌクレオチド配列は、ＴＡＳ２Ｒ活性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２８〜５２のいずれか１つをコードするヌクレオチド配列と９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、この場合、ヌクレオチド配列は、ＴＡＳ２Ｒ活性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２８〜５２のいずれか１つをコードするヌクレオチド配列と、緊縮条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２８〜５２のいずれか１つの成熟形態をコードするヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２８〜５２のいずれか１つをコードするヌクレオチド配列の変異体であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２８〜５２のいずれか１つをコードするヌクレオチド配列の断片であるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２８〜５２のいずれか１つをコードするヌクレオチド配列のヌクレオチド配列タンパク質分解性切断産物からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２８〜５２のいずれか１つをコードするヌクレオチド配列であるかまたはそのオルソログであるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。このようなオルソログは、当該技術分野で周知である。いくつかの実施形態では、ヌクレオチド配列は、配列番号２８〜５２のいずれか１つと比較して、５以下、４以下、３以下、２以下または１以下の保存的アミノ酸置換を有するＴＡＳ２Ｒ受容体をコードする。
【００８８】
いくつかの実施形態では、本発明の細胞または細胞株は、ヒトＴＡＳ２Ｒ１（配列番号２８）；ヒトＴＡＳ２Ｒ３（配列番号２９）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４（配列番号３０）；ヒトＴＡＳ２Ｒ５（配列番号３１）；ヒトＴＡＳ２Ｒ７（配列番号３２）；ヒトＴＡＳ２Ｒ８（配列番号３３）；ヒトＴＡＳ２Ｒ９（配列番号３４）；ヒトＴＡＳ２Ｒ１０（配列番号３５）；ヒトＴＡＳ２Ｒ１３（配列番号３６）；ヒトＴＡＳ２Ｒ１４（配列番号３７）；ヒトＴＡＳ２Ｒ１６（配列番号：３８）；ヒトＴＡＳ２Ｒ３８（配列番号３９）；ヒトＴＡＳ２Ｒ３９（配列番号：４０）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４０（配列番号４１）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４１（配列番号４２）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４３（配列番号４３）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４４（配列番号４４）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４５（配列番号４５）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４６（配列番号４６）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４７（配列番号４７）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４８（配列番号４８）；ヒトＴＡＳ２Ｒ４９（配列番号４９）；ヒトＴＡＳ２Ｒ５０（配列番号５０）；ヒトＴＡＳ２Ｒ５５（配列番号５１）；ヒトＴＡＳ２Ｒ６０（配列番号５２）；またはその任意の組合せを含み得る。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２８〜５２のいずれか１つと８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる群から選択されるＴＡＳ２Ｒ受容体を含む。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２８〜５２のいずれか１つと９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる群から選択されるＴＡＳ２Ｒ受容体を含む。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２８〜５２のいずれか１つと８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる群から選択されるＴＡＳ２Ｒ受容体を含み、この場合、ＴＡＳ２Ｒ受容体は、ＴＡＳ２Ｒ受容体活性を有する。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２８〜５２のいずれか１つと９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる群から選択されるＴＡＳ２Ｒ受容体を含み、この場合、ＴＡＳ２Ｒ受容体は、ＴＡＳ２Ｒ受容体活性を有する。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２８〜５２のいずれか１つの成熟形態からなる群から選択されるＴＡＳ２Ｒ受容体を含む。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２８〜５２のいずれか１つの変異体からなる群から選択されるＴＡＳ２Ｒ受容体を含む。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２８〜５２のいずれか１つの断片からなる群から選択されるＴＡＳ２Ｒ受容体を含む。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２８〜５２のいずれか１つのタンパク質分解性切断産物からなる群から選択されるＴＡＳ２Ｒ受容体を含む。いくつかの実施形態では、細胞または細胞株は、配列番号２８〜５２のいずれか１つのオルソログからなる群から選択されるＴＡＳ２Ｒ受容体を含む。このようなオルソログは、当該技術分野で周知である。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ受容体は、配列番号２８〜５２のいずれか１つと比較して、５以下、４以下、３以下、２以下または１以下の保存的アミノ酸置換を有する。
【００８９】
苦味受容体をコードする核酸は、ＤＮＡ、合成ＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、二本鎖ＤＮＡまたは一本鎖ＤＮＡであり得る。いくつかの実施形態では、核酸は、野生型苦味受容体をコードする核酸配列と比較した場合、アミノ酸置換を生じることも生じないこともある１つ以上の突然変異を含む。いくつかの他の実施形態では、核酸は、所定の集団中のある苦味受容体をコードする最高頻度出現性核酸配列と比較して、１つ以上の天然対立遺伝子変異体を含む。天然対立遺伝子変異体は、天然に存在する同一苦味受容体の異なるアミノ酸配列、例えば対立遺伝子変異または多型性のために所定の集団中で観察されるものを包含する。いくつかの実施形態では、苦味受容体をコードする核酸は、断片である。いくつかの実施形態では、断片は、ＴＡＳ２Ｒ活性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、断片は、配列番号２〜２６の少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも８０、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも６００、少なくとも７００、少なくとも８００、少なくとも８５０または少なくとも９００ヌクレオチドを含む。
【００９０】
多型性は、ヒトゲノムにおける一般的現象である。苦味受容体遺伝子内または付近に生じる多型は、例えば、それらの発現レベルを上方調節するかまたは下方調節することにより、あるいはそれらのアミノ酸配列を変えることにより、それらの発現に影響を及ぼし得るし、あるいはそれらの機能を変え得る。付表１は、ヒトＴＡＳ２Ｒ遺伝子に関連した単一ヌクレオチド多型（「ＳＮＰ」）、各参照配列におけるＳＮＰの位置、およびＳＮＰの説明を含めた独特の多型に関する参照番号を示す。参照番号は、国立生物工学情報センター（「ＮＣＢＩ」；Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  ＭＤ）の単一ヌクレオチド多型データベース（「ｄｂＳＮＰ」）で検索可能である。
【００９１】
コード配列多様性を生じるヒト苦味受容体遺伝子の対立遺伝子変異は、研究され、実証されている。例えば、Ｕｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｄｉｎｇ  ｓｉｎｇｌｅ−ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｔａｓｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ  ｂｉｔｔｅｒ  ｔａｓｔｉｎｇ”，  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ２８５：１４７−１５１，  ２００１；Ｗｏｏｄｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｎａｔｕｒａｌ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｉｎ  ＰＴＣ，  ａ  ｂｉｔｔｅｒ−ｔａｓｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇｅｎｅ，”  Ａｍ．  Ｊ．  Ｈｕｍ，  Ｇｅｎｅｔ．  ７４：６３７−６４６，  ２００４；およびＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ  ｈａｐｌｏｔｙｐｅ  ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ  ａｎｄ  ｃｏｄｉｎｇ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｖａｒｉａｔｉｏｎ  ａｔ  ｈｕｍａｎ  ｂｉｔｔｅｒ  ｔａｓｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｌｏｃｉ”，  Ｈｕｍａｎ  Ｍｕｔａｔｉｏｎ  ２６：１９９−２０４，  ２００５を参照されたい。付表２は、異なるヒト苦味受容体のコード配列における天然変異の一覧である。ヒト苦味受容体、それらのコード配列の配列番号、およびタンパク質配列は、最初の３列に列挙されている。配列番号により同定されるような各コード配列内のヌクレオチド変化およびそれらの位置は、それぞれ「ヌクレオチド変化」および「ヌクレオチド変化の位置」の列に示されている。それらの配列番号により同定されるような各苦味受容体内のアミノ酸変化は、一文字略語を用いて「説明」の列に示されている。各々の対応する配列番号に関するそれらの位置は、「アミノ酸変化の位置」の列に示されている。さらに、「説明」の列は、ＮＣＢＩのｄｂＳＮＰで検索可能であるその変異の識別子も含有する。「特徴識別子」は、欧州バイオインフォーマティクス研究所（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ）が主催するＵｎｉＰｒｏｔタンパク質知識ベースにより変異のいくつかに割り当てられた独特且つ安定な特徴識別子である。それらは、ＵｎｉＰｒｏｔ内で検索可能である。「ＮＡ」は、さらにＵｎｉＰｒｏｔにより割り当てられた無特徴識別子を意味する。
【００９２】
ヒトの味における変異は、周知の現象である。理論に縛られずに考えると、苦味の変異は、苦味受容体の多型に関連づけられ得る。例えば、フェニルチオカルバミド（ＰＴＣ）に関する受容体であるｈＴＡＳ２Ｒ３８における多型は、プロピルチオウラシル（ＰＲＯＰ）を検出する能力と結び付けられてきた（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｔｒａｉｔ  ｌｏｃｕｓ  ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ  ｔａｓｔｅ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｔｏ  ｐｈｅｎｙｌｔｈｉｏｃａｒｂａｍｉｄｅ”，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９９：１２２１−１２２５，  ２００３；  Ｗｏｏｄｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４）。ＴＡＳ２Ｒ３８遺伝子には３つの一般的多型が存在し‐Ａ４９Ｐ、Ｖ２６２ＡおよびＩ２９６Ｖ‐これらは、組み合わさって、２つの一般的ハロタイプおよびいくつかの他の非常にまれなハロタイプを形成する。２つの一般的ハロタイプは、ＡＶＩ（しばしば、「ノンテイスター」と呼ばれる）およびＰＡＶ（しばしば、「テイスター」と呼ばれる）である。これらのハロタイプの種々の組合せは、ホモ接合体ＰＡＶ／ＰＡＶおよびＡＶＩ／ＡＶＩおよびヘテロ接合体ＰＡＶ／ＡＶＩを生じる。これらの遺伝子型は、ＰＴＣ味覚識別能力における変異の８５％を占め得る：ＰＡＶ多型の２コピーを保有する人は、ＰＴＣがＴＡＳ２Ｒ３８ヘテロ接合体より苦いと報告し、ＡＶＩ／ＡＶＩ多型の２コピーを保有する人は、しばしば、ＰＴＣを本質的に無味であると報告する。これらの多型性は、Ｇタンパク質結合ドメインを変更することにより味に影響を及ぼすと仮定される。いくつかの実施形態では、本発明の細胞または細胞株は、ヒトＰＡＶ  ＴＡＳ２Ｒ３８をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号５４）を含み得る。いくつかの実施形態では、本発明の細胞または細胞株は、ヒトＰＡＶ  ＴＡＳ２Ｒ３８（配列番号５４）を含み得る。
【００９３】
付加的には、天然植物化合物であるアロインおよびアリストロキア酸の苦味に非常に感受性である集団の小群は、ｈＴＡＳ２Ｒ４３遺伝子におけるある多型性を遺伝している。この対立遺伝子を保有しないヒトは、低濃度でこれらの化合物を味感しない。さらにまた、ｈＴＡＳ２Ｒ４３感受性に深い関係ある、特定のｈＴＡＳ２Ｒ４４対立遺伝子は、サッカリンの苦味に対して人をより感受性にする。当該集団のいくつかの小群は、あるｈＴＡＳ２Ｒ遺伝子を保有せず、これが、個体間の味覚変異に寄与する。苦味遺伝子における多型は、疾患、例えば糖尿病（ＴＡＳ２Ｒ９）およびアルコール依存症（ＴＡＳ２Ｒ１６）の危険増大とも結び付けられてきた。異種天然苦味受容体を安定的に発現する細胞および細胞株、あるいは対立遺伝子変異体またはその多型、あるいは天然には存在しない１つ以上の突然変異（例えば、ランダム突然変異または部位特異的突然変異）を有するその突然変異型は、すべて、本発明の範囲内である。
【００９４】
苦味受容体を含む細胞および細胞株、その突然変異体型、またはその天然対立遺伝子変異体は、苦味受容体機能の調節因子、例えば特定の苦味受容体突然変異体型または天然対立遺伝子変異体に特異的である調節因子を同定するために用いられ得る。したがって、細胞および細胞株は、苦味受容体の個々のネイティブまたは突然変異体型または天然対立遺伝子変異体の特性、活性および役割についての情報を得るために、そして特定のネイティブまたは突然変異体型または天然対立遺伝子変異体に関する、あるいはネイティブまたは突然変異体型または天然対立遺伝子変異体の小群に関する活性を有する苦味受容体調節因子を同定するために、用いられ得る。これらの調節因子は、疾患状態または組織において示差的修飾化苦味受容体型を標的にする治療薬として有用である。例えばｉｎ ｖｉｖｏでの苦味受容体の多型は、望ましくない活性または疾患状態の一因となり得るため、本発明の細胞および細胞株を用いて、治療的使用のための調節因子に関してスクリーニングし得るが、この場合、突然変異体型または天然対立遺伝子変異体の応答の変更が所望され得る。細胞および細胞株は、苦味受容体のネイティブまたは突然変異体型または天然対立遺伝子変異体の小群のみに関する活性を有する調節因子を同定するためにも有用である。
【００９５】
細胞または細胞株を生じるために用いられる宿主細胞は、それらのネイティブ状態で、１つ以上の内因性苦味受容体を発現し得るし、または任意の苦味受容体の発現を欠くことがある。細胞または細胞株がそれ自体の苦味受容体（「内因性」苦味受容体としても言及される）のうちの１つ以上を発現する場合、異種苦味受容体は、細胞または細胞株の内因性苦味受容体（単数または複数）のうちの１つと同一であり得る。例えば、細胞または細胞株に対して内因性である苦味受容体をコードする核酸は、細胞または細胞株中に導入されて、導入核酸を伴わない場合よりも高レベルで細胞または細胞株中で苦味受容体が発現されるよう、細胞または細胞株中の苦味受容体をコードする遺伝子のコピー数を増大し得る。宿主細胞は、始原、胚または幹細胞、例えば胚性幹細胞であり得る。宿主細胞は、不死化細胞でもあり得る。始原または不死化宿主細胞は、真核生物体の中胚葉、外胚葉または内胚葉層に由来し得る。宿主細胞は、内皮、外皮、間葉、神経、腎臓、肝臓、造血または免疫細胞であり得る。例えば、宿主細胞は、小腸陰窩または絨毛細胞、クララ細胞、結腸細胞、小腸細胞、杯細胞、腸クロム親和性細胞、腸内分泌細胞であり得る。宿主細胞は、真核生物、原核生物、哺乳動物、ヒト、霊長類、ウシ、ブタ、ネコ、齧歯類、有袋類、ネズミ細胞またはその他の細胞であり得る。宿主細胞は、非哺乳動物、例えば酵母、昆虫、真菌、植物、下等真核生物および原核生物細胞でもあり得る。このような宿主細胞は、標的と相互作用し得る細胞により提供される発現産物の非存在に関してより大きな見込みを有する苦味受容体調節因子を試験するためにより発散性であるバックグラウンドを提供し得る。好ましい実施形態では、宿主細胞は哺乳動物細胞である。本発明の細胞または細胞株を生じるために用いられ得る宿主細胞の例としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：ヒト胚性腎臓２９３Ｔ細胞、樹立ニューロン細胞株、褐色細胞腫、神経芽細胞腫繊維芽細胞、横紋筋肉腫、背根神経節細胞、ＮＳ０細胞、ＣＶ−１（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）、ＣＯＳ−１（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５０）、ＣＯＳ−７（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）、ＣＨＯ−Ｋ１（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ６１）、３Ｔ３（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ９２）、ＮＩＨ／３Ｔ３（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５８）、ヒーラ（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２）、Ｃ１２７Ｉ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６１６）、ＢＳ−Ｃ−１（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２６）、ＭＲＣ−５（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １７１）、Ｌ−細胞、ＨＥＫ−２９３（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１５７３）およびＰＣ１２（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１７２１）、ＨＥＫ２９３Ｔ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１１２６８）、ＲＢＬ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１３７８）、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２２６６）、ＭＤＣＫ（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−３４）、ＳＪ−ＲＨ３０（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２０６１）、ＨｅｐＧ２（ＡＴＣＣ  ＨＢ−８０６５）、ＮＤ７／２３（ＥＣＡＣＣ  ９２０９０９０３）、ＣＨＯ（ＥＣＡＣＣ  ８５０５０３０２）、ベロ（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ８１）、Ｃａｃｏ−２（ＡＴＣＣ  ＨＴＢ  ３７）、Ｋ５６２（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２４３）、ジャーカット（ＡＴＣＣ  ＴＩＢ−１５２）、Ｐｅｒ．Ｃ６（Ｃｒｕｃｅｌｌ���  Ｌｅｉｄｅｎ，  Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）、Ｈｕｖｅｃ（ＡＴＣＣ  ヒト始原ＰＣＳ  １００−０１０、マウスＣＲＬ  ２５１４、ＣＲＬ  ２５１５、ＣＲＬ  ２５１６）、ＨｕＨ−７Ｄ１２（ＥＣＡＣＣ  ０１０４２７１２）、２９３（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １０８５２）、Ａ５４９（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １８５）、ＩＭＲ−９０（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １８６）、ＭＣＦ−７（ＡＴＣ  ＨＴＢ−２２）、Ｕ−２  ＯＳ（ＡＴＣＣ  ＨＴＢ−９６）、Ｔ８４（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２４８）または任意の樹立細胞株（分極または非分極）、あるいはアメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ、１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．  Ｍａｎａｓｓａｓ，  Ｖａ．  ２０１１０−２２０９  ＵＳＡ）または欧州細胞培養コレクション（ＥＣＡＣＣ、  Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ  Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ  ＳＰ４  ０ＪＧ  Ｅｎｇｌａｎｄ）のような貯蔵所から入手可能な任意の細胞株。
【００９６】
当業者が理解するであろうように、宿主細胞とともに用いるのに適した任意のベクターは、宿主細胞中にＴＡＳ２Ｒ受容体をコードする核酸を導入するために用いられ得る。種々のＴＡＳ２Ｒ受容体を含むベクターは、同一型であり得るし、あるいは異なる型のものであり得る。宿主細胞中にＴＡＳ２Ｒ受容体コード核酸を導入するために用いられ得るベクターの例としては、プラスミド、ウィルス、例えばレトロウィルスおよびレンチウィルス、コスミド、人工染色体（これらに限定されない）が挙げられ、そして、例えば以下のものを包含し得る：Ｐｃｍｖ−Ｓｃｒｉｐｔ、ｐｃＤＮＡ３．１  Ｈｙｇｒｏ、ｐｃＤＮＡ３．１ｎｅｏ、ｐｃＤＮＡ３．１ｐｕｒｏ、ｐＳＶ２ｎｅｏ、ｐＩＲＥＳ  ｐｕｒｏ、ｐＳＶ２  ｚｅｏ、ｐＦＮ１１Ａ（ＢＩＮＤ）  Ｆｌｅｘｉ（登録商標）、ｐＧＬ４．３１、ｐＦＣ１４Ａ（ＨａｌｏＴａｇ（登録商標）７）ＣＭＶ  Ｆｌｅｘｉ（登録商標）、ｐＦＣ１４Ｋ（ＨａｌｏＴａｇ（登録商標）７）ＣＭＶ  Ｆｌｅｘｉ（登録商標）、ｐＦＮ２４Ａ（ＨａｌｏＴａｇ（登録商標）７）ＣＭＶｄ３  Ｆｌｅｘｉ（登録商標）、ｐＦＮ２４Ｋ（ＨａｌｏＴａｇ（登録商標）７）ＣＭＶｄ３  Ｆｌｅｘｉ（登録商標）、ＨａｌｏＴａｇ（商標）
ｐＨＴ２、ｐＡＣＴ、ｐＡｄＶＡｎｔａｇｅ（商標）、ｐＡＬＴＥＲ（登録商標）−ＭＡＸ、ｐＢＩＮＤ、ｐＣＡＴ（登録商標）３−Ｂａｓｉｃ、ｐＣＡＴ（登録商標）３−Ｃｏｎｔｒｏｌ、ｐＣＡＴ（登録商標）３−エンハンサー、ｐＣＡＴ（登録商標）３−プロモーター、ｐＣＩ、ｐＣＭＶＴＮＴ（商標）、ｐＧ５ｌｕｃ、ｐＳＩ、ｐＴＡＲＧＥＴ（商標）、ｐＴＮＴ（商標）、ｐＦ１２Ａ  ＲＭ  Ｆｌｅｘｉ（登録商標）、ｐＦ１２Ｋ  ＲＭ  Ｆｌｅｘｉ（登録商標）、ｐＲｅｇ  ｎｅｏ、ｐＹＥＳ２／ＧＳ、ｐＡｄ／ＣＭＶ／Ｖ５−ＤＥＳＴ  Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ベクター、ｐＡｄ／ＰＬ−ＤＥＳＴ（商標）Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）、ｐＤＥＳＴ（商標）、２７ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）、ｐＥＦ−ＤＥＳＴ５１ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）、ｐｃＤＮＡ（商標）−ＤＥＳＴ４７ベクター、ｐＣＭＶ／Ｂｓｄベクター、ｐＥＦ６／Ｈｉｓ  Ａ、Ｂ、＆ｃ、ｐｃＤＮＡ（商標）６．２−ＤＥＳＴ、ｐＬｅｎｔｉ６／ＴＲ、ｐＬＰ−ＡｃＧＦＰ１−Ｃ、ｐＬＰＳ−ＡｃＧＦＰ１−Ｎ、ｐＬＰ−ＩＲＥＳｎｅｏ、ｐＬＰ−ＴＲＥ２、ｐＬＰ−ＲｅｖＴＲＥ、ｐＬＰ−ＬＮＣＸ、ｐＬＰ−ＣＭＶ−ＨＡ、ｐＬＰ−ＣＭＶ−Ｍｙｃ、ｐＬＰ−ＲｅｔｒｏＱ、ｐＬＰ−ＣＭＶｎｅｏ。いくつかの実施形態では、ベクターは、発現制御配列、例えば構成的または条件的プロモーターを含む。当業者は、適切な配列を選択できる。例えば、適切なプロモーターとしては、ＣＭＶ、ＴＫ、ＳＶ４０およびＥＦ‐１αが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、プロモーターは、誘導性、温度調節性、組織特異的、抑制性、熱ショック、発育、細胞株特異的、真核生物性、原核生物性または一過性プロモーター、あるいは上記のうちの任意の１つ以上の非修飾化または突然変異化、無作為化、シャッフル化配列の組合せまたは組換えである。他の実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ受容体は遺伝子活性化により発現され、この場合、その宿主細胞中でふつうは発現されないＴＡＳ２Ｒ受容体遺伝子の発現を駆動するための相同組換えにより、外因性プロモーターが宿主細胞のゲノム中に挿入される。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ受容体をコードする遺伝子はエピソーム遺伝子である。ＴＡＳ２Ｒ受容体をコードする核酸は、好ましくは構成的に発現される。
【００９７】
ＴＡＳ２受容体をコードする配列、またはＴＡＳ２Ｒシグナル伝達経路の構成成分の配列を含む核酸、および任意に選択可能マーカーをコードする核酸は、周知の方法により選択宿主細胞中に導入され得る。当該方法としては、トランスフェクション、ウィルス送達、タンパク質またはペプチド媒介性挿入、共沈降法、脂質ベースの送達試薬（リポフェクション）、サイトフェクション、リポポリアミン送達、デンドリマー送達試薬、電気穿孔または機械的送達が挙げられるが、これらに限定されない。トランスフェクション試薬の例は、ジーンポーター（ＧＥＮＥＰＯＲＴＥＲ）、ジーンポーター２、リポフェクタミン（ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ）、リポフェクタミン２０００、フュージーン（ＦＵＧＥＮＥ）６、フュージーンＨＤ、ＴＦＸ−１０、ＴＦＸ−２０、ＴＦＸ−５０、オリゴフェクタミン（ＯＬＩＧＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ）、トランスファスト（ＴＲＡＮＳＦＡＳＴ）、トランスフェクタム（ＴＲＡＮＳＦＥＣＴＡＭ）、ジーンシャトル（ＧＥＮＥＳＨＵＴＴＬＥ）、トロジェン（ＴＲＯＪＥＮＥ）、ジーンサイレンサー（ＧＥＮＥＳＩＬＥＮＣＥR）、Ｘ−トレメジーン（ＴＲＥＭＥＧＥＮＥ）、パーフェクチン（ＰＥＲＦＥＣＴＩＮ）、サイトフェクチン（ＣＹＴＯＦＥＣＴＩＮ）、シポルト（ＳＩＰＯＲＴ）、ユニフェクター（ＵＮＩＦＥＣＴＯＲ）、シフェクター（ＳＩＦＥＣＴＯＲ）、トランジット（ＴＲＡＮＳＩＴ）−ＬＴ１、トランジット−ＬＴ２、トランジット−エクスプレス（ＴＲＡＮＳＩＴ−ＥＸＰＲＥＳＳ）、アイフェクト（ＩＦＥＣＴ）、ＲＮＡＩシャトル、メタフェクテン（ＭＥＴＡＦＥＣＴＥＮＥ）、リオベック（ＬＹＯＶＥＣ）、リポタキシ（ＬＩＰＯＴＡＸＩ）、ジーンイレイザー（ＧＥＮＥＥＲＡＳＥＲ）、ジーンジュース（ＧＥＮＥＪＵＩＣＥ）、サイトピュア（ＣＹＴＯＰＵＲＥ）、ＪＥＴＳＩ、ＪＥＴＰＥＩ、メガフェクチン（ＭＥＧＡＦＥＣＴＩＮ）、ポリフェクト（ＰＯＬＹＦＥＣＴ）、トランスメッセンジャー（ＴＲＡＮＳＭＥＳＳＡＮＧＥＲ）、ＲＮＡｉＦＥＣＴ、スーパーフェクト（ＳＵＰＥＲＦＥＣＴ）、エフェクテン（ＥＦＦＥＣＴＥＮＥ）、ＴＦ−ＰＥＩ−ＫＩＴ、クロンフェクチン（ＣＬＯＮＦＥＣＴＩＮ）およびメタフェクチン（ＭＥＴＡＦＥＣＴＩＮＥ）である。
【００９８】
別の態様では、細胞および細胞株はＧタンパク質を発現する。Ｇタンパク質には２つのファミリー、すなわちヘテロ三量体Ｇタンパク質および単量体Ｇタンパク質が存在する。ヘテロ三量体Ｇタンパク質はＧタンパク質結合受容体（「ＧＰＣＲ」）により活性化され、３つのサブユニット：Ｇα、ＧβおよびＧγを含む。本明細書中で用いる場合、Ｇタンパク質という用語は、これら３つのサブユニットのうちのいずれか１つ、例えばＧaを、またはその組合せを、ならびに３つのサブユニットすべてを有するヘテロ三量体Ｇタンパク質を包含する。不活性状態では、Ｇα、ＧβおよびＧγは三量体を形成する。βおよびγサブユニットは互いに密接に結合され、イータ‐ガンマ複合体と呼ばれる。Ｇαは、ＧＰＣＲとのリガンド結合後、Ｇβγから分離する。Ｇβγ複合体は、そのＧＤＰ‐ＧＴＰ交換後、Ｇαサブユニットから放出される。Ｇβγ複合体は、他の二次メッセンジャーまたはゲートイオンチャネルを活性化し得る。Ｇアルファの４つのファミリーとしては、以下のものが挙げられる：Ｇｓ（刺激性）（これは、アデニレートシクラーゼを活性化することによりｃＡＭＰ合成を増大する）；Ｇｉ（抑制性）（アデニレートシクラーゼを抑制する）；Ｇ１２／１３ファミリー（種々の細胞運動過程、すなわち、細胞骨格、細胞接合を調節する）；ならびにＧｑ（これは、カルシウムシグナル伝達およびホスホリパーゼＣを刺激する）。単量体Ｇタンパク質は、ヘテロ三量体Ｇタンパク質のαサブユニットと相同である。本発明の細胞または細胞株中で、任意のＧタンパク質、例えばトランスデューシン（例えば、ＧＮＡＴ１、ＧＮＡＴ２およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｔ））、ガストデューシン（例えば、ＧＮＡＴ３グアニンヌクレオチド結合タンパク質およびαトランスデューシン３）、ヒトＧＮＡ１５（グアニンヌクレオチド結合タンパク質（Ｇタンパク質）α１５（Ｇｑクラス；同義語ＧＮＡ１６）およびマウスＧα１５、ならびにそれらのキメラタンパク質、例えばＧα１５−ＧＮＡ１５（Ｇα１５−Ｇα１６としても既知）（これらに限定されない）が発現され得る。好ましい実施形態では、Ｇタンパク質はマウスＧα１５（配列番号５３）である。別の好ましい実施形態では、Ｇタンパク質はヒトＧＮＡ１５（配列番号１）であるか、あるいは配列番号２７を含む核酸によりコードされるヒトＧタンパク質である。Ｇタンパク質は、任意の哺乳動物Ｇタンパク質、例えば添付の表３に列挙された任意の哺乳動物タンパク質（これらに限定されない）でもあり得る。細胞により安定的に発現されるＧタンパク質は、細胞に対して内因性であり得る。代替的には、Ｇタンパク質の安定発現は、細胞中へのＧタンパク質をコードする核酸のトランスフェクションの結果であり得る。非相同Ｇタンパク質を安定的に発現する細胞は当該技術分野で既知であり、例えばＨＥＫ２９３／Ｇα１５細胞である（Ｃｈａｎｄｒａｓｈｅｋａｒ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｔ２Ｒｓ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｓ  ｂｉｔｔｅｒ  ｔａｓｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ”，  Ｃｅｌｌ  １００：７０３−７１１，  ２０００；  Ｂｕｆｅ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ＴＡＳ２Ｒ１６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｂｉｔｔｅｒ  ｔａｓｔｅ  ｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  β−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅｓ”，  Ｎａ  Ｇｅｎｅｔ  ３２：３９７−４０１）。他の実施形態では、Ｇタンパク質をコードする核酸および苦味受容体をコードする核酸は、最初にトランスフェクトされるＧタンパク質をコードする核酸または最初にトランスフェクトされる苦味受容体をコードする核酸で、宿主細胞中に連続的にトランスフェクトされ得る。他の実施形態では、Ｇタンパク質をコードする核酸および苦味受容体をコードする核酸は、同一のまたは異なるベクター上で宿主細胞中に共トランスフェクトされ得る。したがって、Ｇタンパク質および苦味受容体をともに安定的に発現する細胞の選択は、同様に逐次的にまたは同時的に実行され得る。Ｇタンパク質を安定的に発現するために用いられ得る細胞または細胞株は、上記のように、苦味受容体を安定的に発現するために用いられ得るものと同一である。
【００９９】
本発明のいくつかの実施形態では、本発明の細胞または細胞株は、他のタンパク質を苦味受容体（単数または複数）とともに共発現する。好ましい実施形態では、他のタンパク質は、少なくとも１つの他の味受容体、例えば甘味（ＴＡＳ１Ｒ２／ＴＡＳ１Ｒ３）受容体または旨味（ＴＡＳ１Ｒ１／ＴＡＳ１Ｒ３）受容体である。いくつかの実施形態では、本発明の細胞株パネルは、苦味受容体を発現する細胞株、および他の味受容体、例えば甘味（ＴＡＳ１Ｒ２／ＴＡＳ１Ｒ３）受容体または旨味（ＴＡＳ１Ｒ１／ＴＡＳ１Ｒ３）受容体を発現する細胞株を包含する。苦味受容体と共発現されるタンパク質は、任意の機序により、例えば宿主細胞中で内因的に、あるいはベクターから非相同的に（これらに限定されない）発現され得る。さらにまた、本発明の他の実施形態では、１つより多い型の苦味受容体が細胞または細胞株中で安定的に発現され得る。
【０１００】
さらにまた本発明によれば、天然苦味受容体またはその天然対立遺伝子変異体の一型を発現する細胞および細胞株、ならびに苦味受容体の突然変異体型を発現する細胞および細胞株は、細胞内遊離カルシウムレベルに関して特性化され得る。いくつかの実施形態では、本発明の細胞および細胞株は、「生理学的に関連する」活性を伴う苦味受容体を発現する。本明細書中で用いる場合、生理学的関連性は、活性化されると同一型の天然苦味受容体と同様に、苦味受容体を発現し、それにより苦味受容体は細胞内遊離カルシウムの増大を引き起こし、そして同一型の天然苦味受容体が同一化合物により調節される場合に応答する同一の方法で調節因子に応答する細胞または細胞株の特性を指す。本発明の苦味受容体発現細胞および細胞株は、いくつかの突然変異体型の苦味受容体および苦味受容体のいくつかの天然対立遺伝子変異体は、好ましくは、適切な検定において、例えば細胞内遊離カルシウムを測定する検定において、ネイティブ苦味受容体を常態で発現する細胞と比較可能な機能を実証する。このような検定は、当業者に既知である（Ｎａｈｏｒｓｋｉ，  “Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙｓ，”  Ｂｒｉｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  １４７：Ｓ３８−Ｓ４５，  ２０００）。このような比較を用いて、細胞または細胞株の生理学的関連性を確定し得る。熟練味見試験員のパネルを用いる「シップ・アンド・スピット（舐めて吐き出す）」味試験も、本発明の細胞および細胞株における苦味受容体生理学的関連性をさらに実証するために用いられ得る。ネイティブまたは突然変異体型の苦味受容体またはその天然対立遺伝子変異体のスクリーニングにより同定される調節因子を用いるシップ・アンド・スピット味試験の結果を用いて、これらの異なる型の生理学的関連性を実証し得る。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、細胞および細胞株は、調節因子に応答し、苦味受容体に関して生理学的範囲のＥＣ５０またはＩＣ５０値で、細胞内遊離カルシウムを増大する。本明細書中で用いる場合、ＥＣ５０は、細胞または細胞株における半最大活性化応答を誘導するために必要とされる化合物または物質の濃度を指す。本明細書中で用いる場合、ＩＣ５０は、細胞または細胞株における半最大抑制応答を誘導するために必要とされる化合物または物質の濃度を指す。ＥＣ５０およびＩＣ５０値は、当該技術分野で周知である技法、例えば、化合物または物質の濃度を苦味受容体発現細胞株の応答と相関させる用量‐応答曲線を用いて、確定され得る。
【０１０２】
苦味受容体発現細胞および細胞株を作製するために、例えば米国特許第６，６９２，９６５号および国際特許公告ＷＯ／２００５／０７９４６２に記載された技法を用い得る。これらの文書はともに、これらの記載内容が参照により本明細書中で援用される。この技法は、任意の所望数のクローン（数百から数千までのクローン）が選択され得るよう、数百万の細胞の実時間査定を提供する。細胞選別技法、例えば流動細胞計測的細胞選別（例えばＦＡＣＳ機を用いる）または磁気細胞選別（例えばＭＡＣＳ機を用いる）を用いて、１個の細胞／ウェルが、培養容器（例えば、９６ウェル培養プレート）中に高統計学的信頼度で自動的に投入され得る。当該技法の速度および自動化は、多重遺伝子細胞株を容易に単離させる。苦味受容体発現細胞および細胞株を作製するために、例えば、国際特許公告ＷＯ  ２００９／１０２５６９およびＷＯ  ２０１０／０８８６３３に記載された技法も用い得る。これらの文書はともに、その記載内容が参照により本明細書中で援用される。この技法は、生理学的特性に適合される細胞および細胞株を生成する自動化方法を提供する。このような方法を用いて、潜在的苦味受容体調節因子の高処理量スクリーニングに適した細胞株のパネルを生成し得る。
【０１０３】
当該技法を用いて、各苦味受容体に関するＲＮＡ配列を、シグナル伝達プローブ（分子ビーコンまたは蛍光プローブとも呼ばれる）を用いて検出し得る。いくつかの実施形態では、分子ビーコンは、上記のような標的タグ配列を認識する。別の実施形態では、分子ビーコンは、苦味受容体コード配列それ自体の中の配列を認識する。シグナル伝達プローブは、それぞれタグのＲＮＡ配列または苦味受容体コード配列と相補的である部分を含むようプローブを設計することにより、ＲＮＡタグまたは苦味受容体コード配列に対して向けられ得る。これら同一技法は、用いられる場合、Ｇタンパク質に関するＲＮＡ配列を検出するために用いられ得る。
苦味を調整する化合物の同定方法
【０１０４】
一態様において、本発明は、苦味を調整する化合物の同定方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該方法は、例えば苦味受容体調節因子に関してスクリーニングし；物質の苦さを査定し；結晶学および結合試験のためのタンパク質を産生し；そして化合物選択性および用量投与、受容体／化合物結合力学および安定性、ならびに細胞生理学（例えば、電気生理学、タンパク質輸送、タンパク質フォールディング、およびタンパク質調節）に及ぼす受容体発現の作用を調べるための、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞ベース検定である。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞ベース検定は、上記の苦味受容体発現細胞および細胞株を利用する。苦味受容体の種々の組合せを発現する細胞および細胞株は、特定の苦味受容体に特異的なもの、または苦味受容体の突然変異体型または天然対立遺伝子変異体を含めて、苦味受容体を同定するために、そして個々の型の活性についての情報を獲得するために、別々にまたは一緒に用いられ得る。
【０１０６】
調節因子としては、苦味受容体あるいはその突然変異体型または天然対立遺伝子変異体の活性を変更する任意の物質または化合物が挙げられる。調節因子は、苦味受容体アゴニスト（増強剤または活性化剤）またはアンタゴニスト（阻害剤または遮断剤）、例えば部分的アゴニストまたはアンタゴニスト、選択的アゴニストまたはアンタゴニスト、および逆アゴニストであり得るし、アロステリック調節因子であり得る。その調節活性が、異なる条件または濃度下で、あるいは苦味受容体の異なる形態の苦味受容体（例えば突然変異体型および天然型対立遺伝子変異体）に関して、変化する場合でも、物質または化合物は調節因子である。他の態様において、調節因子は、苦味受容体の機能に影響を及ぼす別の調節因子の能力を変え得る。例えば、アンタゴニストにより抑制されない苦味受容体の一型の調節因子は、その型の苦味受容体をアンタゴニストによる抑制に対して感受性にさせ得る。
【０１０７】
細胞および細胞株は、種々の調節因子に対するそれらの応答に基づいて、ｉｎ  ｖｉｖｏ型の苦味受容体の同一性を既知の型の苦味受容体の同一性と相関させることにより、異なる苦味受容体病理学における異なる型の苦味受容体の役割を同定するために用い得る。これにより、このような苦味受容体関連病理学またはその他の生理学的状態の高度に標的化された処置のための疾患‐または組織‐特異的苦味受容体調節因子の選択が可能になる。例えば、多数の天然苦味化合物は有毒であるため、苦味受容体は毒性食用化合物の摂取に対する警告センサーとして役立ち得る。消化管粘膜において発現される苦味受容体は、ヒトにおける栄養素および有害物質の機能的検出に関与し、それらを吸収するよう腸管に準備させるか、または保護的応答を開始し得る。それらは、腸‐脳神経経路の活性化により食物摂取の制御にも関与し得る。したがって、本発明の細胞株および方法を用いて同定される苦味受容体調節因子を用いて、多数の状況において栄養分取り込みを調節し、例えば、肥満体の食欲を制御し、および／または腸管における栄養分取り込みを低減し、あるいは栄養不良の場合は空腹感を制御し、および／または食物からの栄養分および／またはエネルギーの取り込みを増大し得る。苦味受容体調節因子は、苦味化合物を同定するのに、さらに特定の化学的または構造的モチーフあるいはそれらの結合特性に影響を及ぼす苦味受容体の重要な残基を特性化し、リガンド結合に関して広範に、中等度にまたは選択的に調和される苦味受容体を同定し、それらの結合プロフィルに基づいて苦味受容体の群および亜群を限定し、苦味受容体に関する分子モデリングまたは薬剤設計に関するこのようなデータを用いてオーファン苦味受容体を脱オーファン化して、種々の苦味受容体が活性である組織を確定するのに有用であり得る。
【０１０８】
苦味受容体調節因子を同定するために、苦味受容体発現細胞または細胞株は、苦味受容体が機能的であり、適切な対照、例えば試験化合物に曝露されない細胞と比較して苦味受容体活性における統計学的に有意の変化（例えば、ｐ＜０．０５）を検出すると予測される条件下で、試験化合物に曝露され得る。既知のアゴニストまたはアンタゴニストを用いる陽性および／または陰性対照、および／または異なる苦味受容体を発現する細胞、あるいはその突然変異体型または天然対立遺伝子変異体も用いられ得る。いくつかの実施形態では、検出および／または測定されるべき苦味受容体活性は、細胞内遊離カルシウムレベルにおける変化である。種々の検定パラメーター、例えばシグナル対ノイズ比が最適化され得る、と当業者は理解する。
【０１０９】
さらなる態様において、本発明は、オーファン苦味受容体に関するリガンドの同定方法を提供する。すなわち、本発明は、苦味受容体を脱オーファン化する方法を提供する。既知の調節因子を伴わずに苦味受容体を発現する細胞または細胞株は、受容体に関する発現プロフィルを生成するための化合物または抽出物ライブラリーを用いてスクリーニングされ得る。任意に、類似のプロフィルを有する受容体（もしあるならば）は一緒に群別され、受容体（単数または複数）を結合するリガンド（単数または複数）に対する既知の苦味化合物でスクリーニングされる。一旦リガンドが同定されれば、結果は、味試験でさらに立証され得る。任意に、細胞および細胞株は、ネイティブ（すなわち、非タグ化）苦味受容体を安定的に発現し、したがって、この方法を用いて同定されるリガンドは的確で且つ関連性がある。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞または細胞株は、細胞株のコレクションも含めて、試験化合物に曝露される。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞または細胞株は、細胞株のコレクションも含めて、複数の試験化合物、例えば試験化合物のライブラリーに曝露される。試験化合物のライブラリーは、１つ以上の調節因子を同定するために、本発明の細胞株を用いてスクリーニングされ得る。試験化合物は、化学的部分、例えば小分子、ポリペプチド、ペプチド、ペプチド模倣物、抗体またはその抗原結合部分であり得る。抗体の場合、それらは非ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体または完全ヒト抗体であり得る。抗体は、重鎖および軽鎖の完全補体、または任意の抗体の抗原結合部分、例えば抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、ｄＡｂ等）、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体、重鎖または軽鎖可変領域の全部または抗原結合部分であり得る。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞または細胞株は、細胞株のコレクションも含めて、苦味物質の存在下で、１つの試験化合物または複数の試験化合物に曝露される。いくつかの実施形態では、苦味物質は、苦味受容体の小群を活性化する「特異的苦味物質」である。いくつかの実施形態では、苦味物質は、各苦味受容体を活性化する「普遍的苦味化合物」である。普遍的苦味化合物の非限定例としては、安息香酸デナトニウムまたはデナトニウムサッカリドが挙げられる。苦味物質により苦味受容体の誘導を減少させる試験化合物は、その苦味物質の阻害剤である。苦味物質により苦味受容体活性の誘導を増大する試験化合物は、その苦味物質の増強剤である。
【０１１２】
いくつかの苦味調節因子および試験化合物は、オフターゲット効果を示し得る。好ましくは、苦味調節因子または試験化合物は、選択的苦味調節因子であり、オフターゲット効果を示さない。
【０１１３】
本発明のｉｎ  ｖｉｔｒｏ検定は、細胞または細胞株のコレクションを用いて実施され得る。好ましい実施形態では、細胞または細胞株のコレクションは、２５の苦味受容体および／またはその変異体の各々を発現する細胞または細胞株を包含する。このようなパネルを用いて、化合物に関するオンターゲット対オフターゲット活性を、または純苦味対関連（すなわち、渋または金属）味における受容体の役割を確定し得る。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、大型化合物コレクションは、細胞ベースの機能性高処理量スクリーン（ＨＴＳ）で、例えば９６ウェル、３８４ウェル、１５３６ウェルまたはそれ以上のプレートフォーマットを用いて、苦味受容体調節活性に関して試験される。いくつかの実施形態では、一試験化合物または多重試験化合物（試験化合物のライブラリーを含む）は、１つより多い本発明の細胞または細胞株（細胞株のコレクションを含む）を用いてスクリーニングされ得る。多重細胞または細胞株（各々、異なる天然または突然変異体苦味受容体分子を発現する）が用いられる場合、多重苦味受容体、あるいはその突然変異体型または天然対立遺伝子変異体に有効である調節因子、代替的には、特定の苦味受容体あるいはその突然変異体型または天然対立遺伝子変異体に特異的である、そして他の苦味受容体または他の型の苦味受容体を調節しない調節因子を同定し得る。ヒト苦味受容体を発現する細胞または細胞株の場合、細胞は、試験化合物に曝露されて、望ましくない苦味受容体活性により特性化される疾患または症状の処置に用いるために、あるいは所望の苦味受容体活性の減少または非存在のために、苦味受容体活性を調整する（増大するかまたは減少させる）化合物を同定し得る。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、試験化合物への曝露の前に、本発明の細胞または細胞株は、例えば酵素、例えば哺乳動物または他の動物酵素、植物酵素、細菌酵素、溶解細胞からの酵素、タンパク質改質酵素、脂質改質酵素、および口腔、消化管、胃または唾液中の酵素を用いた前処置により、改質され得る。このような酵素としては、例えばキナーゼ、プロテアーゼ、ホスファターゼ、グリコシダーゼ、オキシドレダクターゼ、トランスフェラーゼ、ヒドロラーゼ、リアーゼ、イソメラーゼ、リガーゼ等が挙げられ得る。代替的には、細胞および細胞株は、先ず試験化合物に曝露された後、処置されて、処置による苦味受容体の改質を変更する化合物を同定し得る。
【０１１６】
ＧＰＣＲ活性化を同定し、測定するための検定は、当該技術分野で周知である。例えば、“Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  （Ｓｉｇｎａｌ  Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  Ｓｅｒｉｅｓ），”  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  １９９９；  １ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ；  Ｅｄｓ  Ｈａｇａ  ａｎｄ  Ｂｅｒｓｔｅｉｎを参照。ＧＰＣＲ活性化を検出するための任意の適切な検定は、潜在的苦味受容体調節因子による苦味受容体の活性化に及ぼす作用を評価するための本発明の方法で用いられ得る。このような検定の例としては、イオン感受性または膜電位蛍光インジケーターが挙げられる。静止状態下では、細胞への曝露によりそれらが濃度勾配に基づいて細胞に進入できるよう、これらの染料は膜透過性である。一旦内側に入ると、細胞酵素は染料を膜不透過型に変換して、染料を捕捉する。膜不透型の染料は、典型的には、例えば遊離細胞内カルシウムに対して高感受性でもあり、したがって、特定の強度または波長の光で刺激されると、カルシウム結合は染料を蛍光性にさせる。それ故、ＧＰＣＲ活性化に応答する細胞内カルシウム放出は、カルシウムと結合する膜透過性染料を用いて測定され得る。このような染料の例としては、Ｉｎｄｏ−１、Ｆｕｒａ−２、Ｆｌｕｏ−３、Ｆｌｕｏ−４、Ｒｈｏｄ−２、Ｒｈｏｄ−５Ｎ、カルセイン、カルセインブルー、サイトカルセインバイオレット、Ｑｕｉｎ−２、Ｑｕｅｓｔ  Ｆｌｕｏ−８Ｈ（商標）、Ｑｕｅｓｔ  Ｆｌｕｏ  ８Ｌ（商標）、Ｑｕｅｓｔ  Ｆｌｕｏ８（商標）、Ｑｕｅｓｔ  Ｒｈｏｄ−４（商標）、セレンテラジンおよびカルシウム−３が挙げられる。特定の実施形態では、ＧＰＣＲ活性化は、Ｆｌｕｏ−４またはカルシウム‐３蛍光を用いて測定される。いくつかの実施形態では、検定緩衝液（すなわち、負荷溶液）は、プロベネシドを含まない。細胞内カルシウムレベルは、例えば蛍光顕微鏡、フローサイトメトリー、蛍光分光計および蛍光マイクロプレート読取機を用いて、カルシウム結合に応答するこのような染料からの蛍光を測定することにより、測定され得る。ほとんどの蛍光インジケーターが、カルシウムに応答する光誘導性電子伝達系を組み入れるＢＡＰＴＡキレーターに由来する。例えば、ＦＬＩＰＲ（登録商標）およびＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ（商標）計器（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｃｏｒｐ．）ＦＤＳＳ（Ｈａｍａｍａｔｓｕ  Ｃｏｒｐ．）およびＮＯＶＯｓｔａｒ（商標）（ＢＭＧ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）は、細胞内カルシウムレベルにおける変化を継続的にモニタリングし、それにより時間依存的蛍光シグナルの形態で受容体の活性の動的読み出しを提供する。したがって、これらの計器は、ＧＰＣＲ調査のためのカルシウムの高処理量測定を可能にする。
【０１１７】
ＧＰＣＲ活性は、アデニレートシクラーゼ活性、ＩＰ３／Ｃａ２＋シグナル伝達、ホスホリパーゼＣ／細胞内Ｃａ２＋シグナル伝達、ＧＴＰアーゼ活性、ＧＴＰ結合、マイクロフィジオメーター／バイオセンサー検定(例えば、Ｈａｆｎｅｒ，  ２０００，  Ｂｉｏｓｅｎｓ．  Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎ．  １５：  １４９−１５８参照）、アラキドン酸レベル（例えば、Ｇｉｊｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，  ２７５：２０１４６−２０１５６参照）、ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰレベル(ラジオイムノアッセイによるかまたは結合タンパク質を用いる：例えば、Ｈｏｒｔｏｎ  ａｎｄ  Ｂａｘｅｎｄａｌｅ，  １９９５，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ４１：  ９１−１０５参照)、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）レベル、イノシトール三リン酸（ＩＰ３）レベル、プロテインキナーゼＣ活性および／またはＭＡＰキナーゼ活性を測定することによっても評価され得る。
ＫＣｌに起因する苦味を調整する化合物の同定方法
【０１１８】
別の態様によれば、本発明は、ＫＣｌに起因する苦味を調整する化合物の同定方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該方法は、ＫＣｌによる苦味受容体の活性化を調整し、抑制し、または増強する化合物を同定する。いくつかの実施形態では、当該方法は、ＫＣｌによる苦味受容体の活性化とその後の下流シグナル伝達を調整し、抑制し、または増強する化合物を同定する。いくつかの実施形態では、当該方法は、ＫＣｌによる刺激後のシグナル伝達経路の活性化を調整し、抑制し、または増強する化合物を同定する。いくつかの実施形態では、当該方法は、ＫＣｌに起因する苦味の知覚を調整し、抑制し、または増強する化合物を同定する。以下の実施例２に示すように、ＫＣｌは、苦味受容体ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０を活性化する。したがって、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体のうちの１つ以上のＫＣｌの活性化を調整する化合物は、ＫＣｌに起因する苦味の調節因子であるべきである。いくつかの実施形態では、化合物は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体のうちの１つ以上のＫＣｌの活性化を抑制する。このような実施形態では、化合物は、ＫＣｌに起因する苦味の阻害剤である。いくつかの実施形態では、化合物は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体のうちの１つ以上のＫＣｌの活性化を増強する。このような実施形態では、化合物は、ＫＣｌに起因する苦味の増強剤である。いくつかの実施形態では、化合物は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体のうちの１つ以上を活性化する。このような実施形態では、化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を模倣する。いくつかの実施形態では、上記の苦味を調整する化合物の同定方法のいずれかは、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体のうちの１つ以上を活性化する味物質を用いて実施される。いくつかの実施形態では、味物質は、ＫＣｌ、乳酸カリウム、アセスルファムＫおよび普遍的苦味化合物から選択される。いくつかの実施形態では、普遍的苦味化合物は、安息香酸デナトニウムまたはデナトニウムサッカリドである。いくつかの実施形態では、味物質の濃度は、５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭまたは５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、味物質の濃度は、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭまたは約５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、味物質の濃度は、少なくとも５ｍＭ、少なくとも１０ｍＭ、少なくとも１５ｍＭ、少なくとも２０ｍＭ、少なくとも２５ｍＭ、少なくとも３０ｍＭ、少なくとも３５ｍＭ、少なくとも４０ｍＭ、少なくとも４５ｍＭまたは少なくとも５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、味物質の濃度は、少なくとも約５ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約１５ｍＭ、少なくとも約２０ｍＭ、少なくとも約２５ｍＭ、少なくとも約３０ｍＭ、少なくとも約３５ｍＭ、少なくとも約４０ｍＭ、少なくとも約４５ｍＭまたは少なくとも約５０ｍＭである。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、試験化合物は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０のうちの２つ以上のＫＣｌ誘導性活性化を調整し、抑制し、または増強する。いくつかの実施形態では、試験化合物は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０のうちの３つ以上のＫＣｌ誘導性活性化を調整し、抑制し、または増強する。いくつかの実施形態では、試験化合物は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０のうちの４つ以上のＫＣｌ誘導性活性化を調整し、抑制し、または増強する。いくつかの実施形態では、試験化合物は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０のうちの５つ以上のＫＣｌ誘導性活性化を調整し、抑制し、または増強する。いくつかの実施形態では、試験化合物は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０の各々のＫＣｌ誘導性活性化を調整し、抑制し、または増強する。
【０１２０】
この節に記載されたＫＣｌに起因する苦味を調整する化合物の同定方法のいずれかにおいて、当該方法に用いられる苦味受容体は、上記のように、Ｇタンパク質と複合体を形成され得る。上記の任意のＧタンパク質が、用いられ得る。いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、Ｇｑタンパク質、アルファ・トランスデューシンまたはアルファ・ガストデューシンである。いくつかの実施形態では、Ｇｑタンパク質はＧα１５タンパク質である。
【０１２１】
この節に記載されたＫＣｌに起因する苦味を調整する化合物の同定方法のいずれかにおいて、上記の任意の検定を用いて、苦味受容体活性を測定し得る。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、細胞内カルシウム濃度を測定することにより確定される。いくつかの実施形態では、細胞内カルシウム濃度は、カルシウム感受性蛍光染料を用いて測定される。いくつかの実施形態では、カルシウム感受性蛍光染料は、Ｉｎｄｏ−１、Ｆｕｒａ−２、Ｆｌｕｏ−３、Ｆｌｕｏ−４、Ｒｈｏｄ−２、Ｒｈｏｄ−５Ｎ、カルセイン、カルセインブルー、サイトカルセインバイオレット、Ｑｕｉｎ−２、Ｑｕｅｓｔ  Ｆｌｕｏ−８Ｈ（商標）、Ｑｕｅｓｔ  Ｆｌｕｏ  ８Ｌ（商標）、Ｑｕｅｓｔ  Ｆｌｕｏ８（商標）、Ｑｕｅｓｔ  Ｒｈｏｄ−４（商標）、セレンテラジンおよびカルシウム−３から選択される。特定の実施形態では、カルシウム感受性蛍光染料はＦｌｕｏ−４またはカルシウム−３から選択される。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、当該方法は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される１つ以上の苦味受容体を提供すること；１つ以上の苦味受容体を、１つ以上の苦味受容体を活性化する味物質と接触させること；１つ以上の苦味受容体の活性を測定すること；１つ以上の苦味受容体を洗浄すること；１つ以上の苦味受容体を、味物質および試験化合物と接触させること；そして１つ以上の苦味受容体の活性を測定することを包含する。味物質に起因する１つ以上の苦味受容体の活性が、味物質および試験化合物に起因する１つ以上の苦味受容体の活性と異なる場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を調整する。味物質に起因する１つ以上の苦味受容体の活性が、味物質および試験化合物に起因する１つ以上の苦味受容体の活性より大きい場合には、試験化合物はＫＣｌに起因する苦味を抑制する。味物質に起因する１つ以上の苦味受容体の活性が、味物質および試験化合物に起因する１つ以上の苦味受容体の活性より低い場合には、試験化合物はＫＣｌに起因する苦味を増強する。このような実施形態では、試験順序は重要ではない、と熟練研究者は認識する。受容体は、洗浄の前または後に、試験化合物と接触され得る。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、１つ以上の苦味受容体は、１つ以上の苦味受容体が味物質と接触される前に、同時に、または後に、試験化合物と接触され得る。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、当該方法は、各々が、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される第一の１つ以上の苦味受容体および第二の１つ以上の苦味受容体を提供すること；第一の１つ以上の苦味受容体を、１つ以上の苦味受容体を活性化する味物質と接触させること；第一の１つ以上の苦味受容体の活性を測定すること；第二の１つ以上の苦味受容体を味物質および試験化合物と接触させること；そして第二の１つ以上の苦味受容体活性を測定することを包含する。第一の１つ以上の苦味受容体の活性が、第二の１つ以上の苦味受容体の活性と異なる場合には、試験化合物はＫＣｌに起因する苦味を調整する。第一の１つ以上の苦味受容体の活性が、第二の１つ以上の苦味受容体の活性より大きい場合には、試験化合物はＫＣｌに起因する苦味を抑制する。第一の１つ以上の苦味受容体の活性が、第二の１つ以上の苦味受容体の活性より低い場合には、試験化合物はＫＣｌに起因する苦味を増強する。いくつかの実施形態では、第一の１つ以上の苦味受容体は、活性の測定後に洗浄されて、第二の１つ以上の苦味受容体を提供する。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、第二の１つ以上の苦味受容体は、第二の１つ以上の苦味受容体が味物質と接触される前に、同時に、または後に、試験化合物と接触され得る。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、当該方法は、１つ以上の苦味受容体を発現する細胞を提供すること（ここで、１つ以上の苦味受容体は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される）；細胞を、１つ以上の苦味受容体を活性化する味物質と接触させること；１つ以上の苦味受容体の活性を測定すること；細胞を洗浄すること；細胞を味物質および試験化合物と接触させること；そして１つ以上の苦味受容体の活性を測定することを包含する。味物質に起因する１つ以上の苦味受容体の活性が、味物質および試験化合物に起因する１つ以上の苦味受容体の活性と異なる場合には、試験化合物はＫＣｌに起因する苦味を調整する。味物質に起因する１つ以上の苦味受容体の活性が、味物質および試験化合物に起因する１つ以上の苦味受容体の活性より大きい場合には、試験化合物はＫＣｌに起因する苦味を抑制する。味物質に起因する１つ以上の苦味受容体の活性が、味物質および試験化合物に起因する１つ以上の苦味受容体の活性より低い場合には、試験化合物はＫＣｌに起因する苦味を増強する。いくつかの実施形態では、細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株中に存在する。いくつかの実施形態では、細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株のパネル中に存在する。このような実施形態では、試験順序は重要ではない、と熟練研究者は認識する。細胞は、洗浄の前または後に、試験化合物と接触され得る。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、細胞は、細胞が味物質と接触される前に、同時に、または後に、試験化合物と接触され得る。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、当該方法は、１つ以上の苦味受容体を発現する第一細胞、および１つ以上の苦味受容体を発現する第二細胞を提供すること（ここで、１つ以上の苦味受容体は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される）；第一細胞を、１つ以上の苦味受容体を活性化する味物質と接触させること；第一細胞の苦味受容体活性を測定すること；第二細胞を、味物質および試験化合物と接触させること；そして第二細胞の苦味受容体活性を測定することを包含する。第一細胞の苦味受容体活性が、第二細胞の苦味受容体活性と異なる場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を調整する。第一細胞の苦味受容体活性が、第二細胞の苦味受容体活性より大きい場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を抑制する。第一細胞の苦味受容体活性が、第二細胞の苦味受容体活性より低い場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を増強する。いくつかの実施形態では、第一および第二細胞はｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株中に存在する。いくつかの実施形態では、第一および第二細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株の１つ以上のパネル中に存在する。いくつかの実施形態では、第一細胞は、苦味受容体活性を測定後に洗浄されて、第二細胞を提供する。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、第二細胞は、第二細胞が味物質と接触される前に、同時に、または後に、試験化合物と接触され得る。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、当該方法は、１つ以上の苦味受容体を発現する第三細胞、および１つ以上の苦味受容体を発現する第四細胞を提供することをさらに包含し、この場合、１つ以上の苦味受容体は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択され；第三および第四細胞における１つ以上の苦味受容体は同一であり；そして第三および第四細胞における１つ以上の苦味受容体は、第一および第二細胞における苦味受容体とは異なる。いくつかの実施形態では、当該方法は、１つ以上の苦味受容体を発現する第五細胞および１つ以上の苦味受容体を発現する第六細胞を提供することをさらに包含し、この場合、１つ以上の苦味受容体はＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択され；第五および第六細胞における１つ以上の苦味受容体は同一であり；そして第五および第六細胞における１つ以上の苦味受容体は、第一、第二、第三および第四細胞における苦味受容体とは異なる。いくつかの実施形態では、当該方法は、１つ以上の苦味受容体を発現する第七細胞および１つ以上の苦味受容体を発現する第八細胞を提供することをさらに包含し、この場合、１つ以上の苦味受容体はＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択され；第七および第八細胞における１つ以上の苦味受容体は同一であり；そして第七および第八細胞における１つ以上の苦味受容体は、第一、第二、第三、第四、第五および第六細胞における苦味受容体とは異なる。いくつかの実施形態では、当該方法は、１つ以上の苦味受容体を発現する第九細胞および１つ以上の苦味受容体を発現する第十細胞を提供することをさらに包含し、この場合、１つ以上の苦味受容体はＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択され；第九および第十細胞における１つ以上の苦味受容体は同一であり；そして第九および第十細胞における１つ以上の苦味受容体は、第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七および第八細胞における苦味受容体とは異なる。いくつかの実施形態では、当該方法は、１つ以上の苦味受容体を発現する第十一細胞および１つ以上の苦味受容体を発現する第十二細胞を提供することをさらに包含し、この場合１つ以上の苦味受容体はＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択され；第十一および第十二細胞における１つ以上の苦味受容体は同一であり；第十一および第十二細胞における１つ以上の苦味受容体は、第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九および第十細胞における苦味受容体とは異なる。このような実施形態では、当該方法は、第三、第五、第七、第九および第十一細胞を、１つ以上の苦味受容体を活性化する味物質と接触させること；第三、第五、第七、第九および／または第十一細胞の苦味受容体活性を測定すること；第四、第六、第八、第十および／または第十二細胞を、味物質および試験化合物と接触させること；そして第四、第六、第八、第十および／または第十二細胞の苦味受容体活性を測定することをさらに包含する。第三、第五、第七、第九および／または第十一細胞の苦味受容体活性が、それぞれ第四、第六、第八、第十および／または第十二細胞の苦味受容体活性と異なる場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を調整する。第四、第六、第八、第十および／または第十二細胞の苦味受容体活性が、それぞれ第三、第五、第七、第九および／または第十一細胞の苦味受容体活性より低い場合には、試験化合物はＫＣｌに起因する苦味を抑制する。第四、第六、第八、第十および／または第十二細胞の苦味受容体活性が、それぞれ第三、第五、第七、第九および／または第十一細胞の苦味受容体活性より大きい場合には、試験化合物はＫＣｌに起因する苦味を増強する。いくつかの実施形態では、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一および／または第十二細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株中に存在する。いくつかの実施形態では、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一および／または第十二細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株の１つ以上のパネル中に存在する。いくつかの実施形態では、第三、第五、第七、第九および／または第十一細胞は、苦味受容体活性の測定後に洗浄されて、それぞれ第四、第六、第八、第十および／または第十二細胞を提供する。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、第四、第六、第八、第十および／または第十二細胞は、第四、第六、第八、第十および／または第十二細胞が味物質と接触される前に、同時に、または後に、試験化合物と接触され得る。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株のパネルを提供すること（ここで、各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される苦味受容体を発現し、この場合、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現される）；各細胞株を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群のうちの４つ以上を活性化する味物質と接触させること；各細胞株の苦味受容体活性を測定すること；各細胞株を洗浄すること；各細胞株を味物質および試験化合物と接触させること；そして各細胞株の苦味受容体活性を測定することを包含する。ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの４つ以上の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して、異なる場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの５つ以上において異なる。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０細胞株において異なる。ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される４つ以上の細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して大きい場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの５つ以上においてより大きい。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０細胞株においてより大きい。ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される４つ以上の細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して低い場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの５つ以上においてより低い。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０細胞株においてより低い。いくつかの実施形態では、試験化合物が、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０およびＴＡＳ２Ｒ５５苦味受容体活性を誘導しない場合、当該化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に調整し、抑制し、または活性化する。いくつかの実施形態では、パネルは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株の適合パネルである。このような実施形態では、試験順序は重要ではない、と熟練研究者は認識する。細胞株は、洗浄の前または後に、試験化合物と接触され得る。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、各細胞株が味物質と接触される前に、同時に、または後に、各細胞株は試験化合物と接触され得る。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株のパネルを提供すること（この場合、各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される苦味受容体を発現し、各受容体は少なくとも１つの細胞株中で発現される）；各細胞株を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群のうちの４つ以上を活性化する味物質と接触させること；各細胞株の苦味受容体活性を測定すること；各細胞株を洗浄すること；各細胞株を味物質および試験化合物と接触させること；そして各細胞株の苦味受容体活性を測定することを包含する。ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの４つ以上の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して異なる場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの５つ以上において異なる。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０細胞株において異なる。ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される４つ以上の細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して大きい場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの５つ以上においてより大きい。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０細胞株においてより大きい。ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される４つ以上の細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して低い場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの５つ以上において低い。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０細胞株において低い。いくつかの実施形態では、試験化合物がＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０およびＴＡＳ２Ｒ５５苦味受容体活性を誘導しない場合、当該化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に調整し、抑制し、または活性化する。いくつかの実施形態では、パネルは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株の適合パネルである。このような実施形態では、試験順序は重要ではない、と熟練研究者は認識する。細胞株は、洗浄の前または後に、試験化合物と接触され得る。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、各細胞株は、各細胞株が味物質と接触される前に、同時に、または後に、試験化合物と接触され得る。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株の第一パネルおよび細胞株の第二パネルを提供すること（この場合、各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体からなる群から選択される苦味受容体を発現し、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現され、そして第一および第二パネルは同一細胞株を含む）；第一パネル中の各細胞株を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群のうちの４つ以上を活性化する味物質と接触させること；第一パネル中の各細胞株の苦味受容体活性を測定すること；第二パネル中の各細胞株を、味物質および試験化合物と接触させること；そして第二パネル中の各細胞株の苦味受容体活性を測定することを包含する。ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの４つ以上の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて異なる場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの５つ以上において異なる。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０細胞株において異なる。ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される４つ以上の細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいてより大きい場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの５つ以上においてより大きい。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０細胞株においてより大きい。ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される４つ以上の細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて低い場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの５つ以上において低い。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０細胞株において低い。いくつかの実施形態では、試験化合物が、第一パネルと比較して第二パネルにおいてＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０およびＴＡＳ２Ｒ５５苦味受容体活性を誘導しない場合、当該化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に調整し、抑制し、または活性化する。いくつかの実施形態では、第一および第二パネルは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株の適合パネルである。いくつかの実施形態では、細胞株の第一パネルは、苦味受容体活性に関して測定された後に洗浄されて、第二パネルの細胞株を提供する。言い換えれば、第一および第二パネルの細胞株は同一であり、第一測定ステップと第二接触ステップとの間に洗浄ステップを有する。このような実施形態では、試験順序は重要ではない、と熟練研究者は認識する。細胞株は、洗浄の前または後に、試験化合物と接触され得る。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、第二パネル中の各細胞株は、第二パネル中の各細胞株が味物質と接触される前に、同時に、または後に、試験化合物と接触され得る。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株の第一パネルおよび細胞株の第二パネルを提供すること（この場合、各パネルは、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体からなる群から選択される苦味受容体を発現する細胞株を含み、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現され、そして第一および第二パネルは同一細胞株を含む）；第一パネル中の各細胞株を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群の少なくとも２つを活性化する味物質と接触させること；第一パネル中の各細胞株の苦味受容体活性を測定すること；第二パネル中の各細胞株を、味物質および試験化合物と接触させること；そして、第二パネル中の各細胞株の苦味受容体活性を測定することを包含する。いくつかの実施形態では、第一および第二パネル中の各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される苦味受容体を発現し、この場合、各受容体は各パネルの少なくとも１つ細胞株中で発現される。ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの少なくとも２つの苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて異なる場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの少なくとも３つで異なる場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの少なくとも４つで異なる場合には、試験化合物は、ＫＣｌのためである苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの少なくとも５つで異なる場合には、試験物質は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０細胞株の各々において異なる場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に調整する。ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも２つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいてより大きい場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも３つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいてより大きい場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも４つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいてより大きい場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも５つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいてより大きい場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０細胞株の各々における苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいてより大きい場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に抑制する。ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも２つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて低い場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも３つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて低い場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも４つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて低い場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも５つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて低い場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０細胞株の各々における苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて低い場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、試験化合物が、第一パネルと比較して第二パネルにおいて、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０およびＴＡＳ２Ｒ５５苦味受容体活性を誘導しない場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を選択的に調整し、抑制し、または活性化する。いくつかの実施形態では、第一および第二パネルは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株の適合パネルである。いくつかの実施形態では、第一パネルの細胞株は、苦味受容体活性に関して測定された後に洗浄されて、第二パネルの細胞株を提供する。言い換えれば、第一および第二パネルの細胞株は同一であり、第一測定ステップと第二接触ステップの間に洗浄ステップを有する。このような実施形態では、試験順序は重要でない、と熟練研究者は認識する。細胞株は、洗浄の前または後に、試験化合物と接触され得る。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、第二パネル中の各細胞株は、第二パネル中の各細胞株を味物質と接触する前に、同時に、または後に、試験化合物と接触され得る。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、ＫＣｌに起因する苦味の調節因子を同定する上記の方法のいずれかで利用される味物質は、ＫＣｌ、乳酸カリウム、アセスルファムＫおよび普遍的苦味化合物から選択される。いくつかの実施形態では、普遍的苦味化合物は、安息香酸デナトニウムまたはデナトニウムサッカリドである。いくつかの実施形態では、味物質の濃度は、５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭまたは５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、味物質の濃度は、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭまたは約５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、味物質の濃度は、少なくとも５ｍＭ、少なくとも１０ｍＭ、少なくとも１５ｍＭ、少なくとも２０ｍＭ、少なくとも２５ｍＭ、少なくとも３０ｍＭ、少なくとも３５ｍＭ、少なくとも４０ｍＭ、少なくとも４５ｍＭまたは少なくとも５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、味物質の濃度は、少なくとも約５ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約１５ｍＭ、少なくとも約２０ｍＭ、少なくとも約２５ｍＭ、少なくとも約３０ｍＭ、少なくとも約３５ｍＭ、少なくとも約４０ｍＭ、少なくとも約４５ｍＭまたは少なくとも約５０ｍＭである。
【０１３２】
別の態様において、本発明は、ＫＣｌに起因する苦味を模倣する化合物を同定する方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株の第一パネルおよび細胞株の第二パネルを提供すること（この場合、各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体からなる群から選択される苦味受容体を発現し、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現され、そして第一および第二パネルは同一細胞株を含む）；第一パネル中の各細胞株を、陰性対照と接触させること；第一パネル中の各細胞株の苦味受容体活性を測定すること；第二パネル中の各細胞株を、試験化合物と接触させること；そして、第二パネル中の各細胞株の苦味受容体活性を測定することを包含する。試験化合物が、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０の苦味受容体活性を誘導する場合には、試験化合物は、ＫＣｌに起因する苦味を模倣する。いくつかの実施形態では、試験化合物は、第一パネルと比較して、第二パネルにおいてＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０およびＴＡＳ２Ｒ５５苦味受容体活性を誘導しない。いくつかの実施形態では、第一および第二パネルは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株の適合パネルである。いくつかの実施形態では、第一パネルの細胞株は、苦味受容体活性に関して測定された後に洗浄されて、第二パネルの細胞株を提供する。言い換えれば、第一および第二パネルの細胞株は同一であり、第一測定ステップと第二接触ステップの間に洗浄ステップを有する。このような実施形態では、試験順序は重要でない、と熟練研究者は認識する。細胞株は、洗浄の前または後に、試験化合物と接触され得る。いくつかの実施形態では、陰性対照は、試験化合物の付加前の検定緩衝液である。
【０１３３】
別の態様において、本発明は、ＫＣｌが組成物中に存在するか否かを確定するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株の第一パネルおよび細胞株の第二パネルを提供すること（この場合、各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体からなる群から選択される苦味受容体を発現し、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現され、そして第一および第二パネルは同一細胞株を含む）；第一パネル中の各細胞株を陰性対照と接触させること；第一パネル中の各細胞株の苦味受容体活性を測定すること；第二パネル中の各細胞株を組成物と接触させること；そして、第二パネル中の各細胞株の苦味受容体活性を測定することを包含する。組成物が、第一パネルと比較して、第二パネルにおいてＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体活性を誘導し、そして第一パネルと比較して、第二パネルにおいてＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０およびＴＡＳ２Ｒ５５苦味受容体活性を誘導しない場合、ＫＣｌは組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、組成物は、食物製品から抽出される。いくつかの実施形態では、組成物は、薬学的活性成分を含む。いくつかの実施形態では、第一および第二パネルは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株の適合パネルである。いくつかの実施形態では、第一パネルの細胞株は、苦味受容体活性に関して測定された後に洗浄されて、第二パネルの細胞株を提供する。言い換えれば、第一および第二パネルの細胞株は同一であり、第一測定ステップと第二接触ステップの間に洗浄ステップを有する。このような実施形態では、試験順序は重要でない、と熟練研究者は認識する。細胞株は、洗浄の前または後に、試験化合物と接触され得る。いくつかの実施形態では、陰性対照は、組成物の付加前の検定緩衝液である。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される２つ以上の異なる苦味受容体と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される異なる苦味受容体を各々発現する２つ以上の細胞と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される３つ以上の異なる味受容体と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される異なる苦味受容体を各々発現する３つ以上の細胞と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される４つ以上の異なる味受容体と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される異なる苦味受容体を各々発現する４つ以上の細胞と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される５つ以上の異なる味受容体と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される異なる苦味受容体を各々発現する５つ以上の細胞と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される６つ以上の異なる味受容体と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される異なる苦味受容体を各々発現する６つ以上の細胞と接触させることを包含する。
【０１３５】
ＫＣｌに起因する苦味を調整し、抑制し、増強し、または模倣する化合物の同定方法が、ＴＡＳ２Ｒ４４またはＴＡＳ２Ｒ４４を発現する細胞と、味物質または試験化合物とを接触させることを包含するいくつかの実施形態では、当該方法は、少なくとも１つの付加的苦味受容体または少なくとも１つの苦味受容体を発現する細胞（ここで、少なくとも１つの付加的苦味受容体は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される）を、味物質または試験化合物と接触させることも包含する。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、当該方法は、ＫＣｌに起因する苦味を調整し、抑制し、増強し、または模倣する試験化合物を、食料品、食料品の製造に用いられる任意の食品前駆体物質または任意の添加物と混合することをさらに包含する。いくつかの実施形態では、食料品は、ヒトが消費するためのものである。いくつかの実施形態では、食料品は、動物が消費するためのもの、例えばペットまたは家畜用である。いくつかの実施形態では、当該方法は、ＫＣｌに起因する苦味を調整し、抑制し、増強し、または模倣する試験化合物を、薬学的に許容可能な形態での活性作用物質と混合することをさらに包含する。
乳酸カリウムに起因する苦味を調整する化合物の同定方法
【０１３７】
別の態様によれば、本発明は、乳酸カリウムに起因する苦味を調整する化合物の同定方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該方法は、乳酸カリウムによる苦味受容体の活性化を調整し、抑制し、または増強する化合物を同定する。いくつかの実施形態では、当該方法は、乳酸カリウムによる苦味受容体の活性化とその後の下流シグナル伝達を調整し、抑制し、または増強する化合物を同定する。いくつかの実施形態では、当該方法は、乳酸カリウムによる刺激後のシグナル伝達経路の活性化を調整し、抑制し、または増強する化合物を同定する。いくつかの実施形態では、当該方法は、乳酸カリウムに起因する苦味の知覚を調整し、抑制し、または増強する化合物を同定する。以下の実施例３に示すように、乳酸カリウムは、苦味受容体ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０を活性化する。したがって、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体のうちの１つ以上の乳酸カリウムの活性化を調整する化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味の調節因子であるべきである。いくつかの実施形態では、化合物は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体のうちの１つ以上の乳酸カリウムの活性化を抑制する。このような実施形態では、化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味の阻害剤である。いくつかの実施形態では、化合物は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体のうちの１つ以上の乳酸カリウムの活性化を増強する。このような実施形態では、化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味の増強剤である。いくつかの実施形態では、化合物は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体のうちの１つ以上を活性化する。このような実施形態では、化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を模倣する。いくつかの実施形態では、上記の苦味を調整する化合物の同定方法のいずれかは、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体のうちの１つ以上を活性化する味物質を用いて実施される。いくつかの実施形態では、味物質は、ＫＣｌ、乳酸カリウム、アセスルファムＫおよび普遍的苦味化合物から選択される。いくつかの実施形態では、普遍的苦味化合物は、安息香酸デナトニウムまたはデナトニウムサッカリドである。いくつかの実施形態では、味物質の濃度は、５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭまたは５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、味物質の濃度は、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭまたは約５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、味物質の濃度は、少なくとも５ｍＭ、少なくとも１０ｍＭ、少なくとも１５ｍＭ、少なくとも２０ｍＭ、少なくとも２５ｍＭ、少なくとも３０ｍＭ、少なくとも３５ｍＭ、少なくとも４０ｍＭ、少なくとも４５ｍＭまたは少なくとも５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、味物質の濃度は、少なくとも約５ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約１５ｍＭ、少なくとも約２０ｍＭ、少なくとも約２５ｍＭ、少なくとも約３０ｍＭ、少なくとも約３５ｍＭ、少なくとも約４０ｍＭ、少なくとも約４５ｍＭまたは少なくとも約５０ｍＭである。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、試験化合物は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０のうちの２つ以上の乳酸カリウム誘導性活性化を調整し、抑制し、または増強する。いくつかの実施形態では、試験化合物は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０のうちの３つ以上の乳酸カリウム誘導性活性化を調整し、抑制し、または増強する。いくつかの実施形態では、試験化合物は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０のうちの４つ以上の乳酸カリウム誘導性活性化を調整し、抑制し、または増強する。いくつかの実施形態では、試験化合物は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０のうちの５つ以上の乳酸カリウム誘導性活性化を調整し、抑制し、または増強する。いくつかの実施形態では、試験化合物は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０の各々の乳酸カリウム誘導性活性化を調整し、抑制し、または増強する。
【０１３９】
この節に記載された乳酸カリウムに起因する苦味を調整する化合物の同定方法のいずれかにおいて、当該方法に用いられる苦味受容体は、上記のように、Ｇタンパク質と複合体を形成され得る。上記の任意のＧタンパク質が、用いられ得る。いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、Ｇｑタンパク質、アルファ・トランスデューシンまたはアルファ・ガストデューシンである。いくつかの実施形態では、Ｇｑタンパク質はＧα１５タンパク質である。
【０１４０】
この節に記載された乳酸カリウムに起因する苦味を調整する化合物の同定方法のいずれかにおいて、上記の任意の検定を用いて、苦味受容体活性を測定し得る。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、細胞内カルシウム濃度を測定することにより確定される。いくつかの実施形態では、細胞内カルシウム濃度は、カルシウム感受性蛍光染料を用いて測定される。いくつかの実施形態では、カルシウム感受性蛍光染料は、Ｉｎｄｏ−１、Ｆｕｒａ−２、Ｆｌｕｏ−３、Ｆｌｕｏ−４、Ｒｈｏｄ−２、Ｒｈｏｄ−５Ｎ、カルセイン、カルセインブルー、サイトカルセインバイオレット、Ｑｕｉｎ−２、Ｑｕｅｓｔ  Ｆｌｕｏ−８Ｈ（商標）、Ｑｕｅｓｔ  Ｆｌｕｏ  ８Ｌ（商標）、Ｑｕｅｓｔ  Ｆｌｕｏ８（商標）、Ｑｕｅｓｔ  Ｒｈｏｄ−４（商標）、セレンテラジンおよびカルシウム−３から選択される。特定の実施形態では、カルシウム感受性蛍光染料はＦｌｕｏ−４またはカルシウム−３から選択される。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、当該方法は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される１つ以上の苦味受容体を提供すること；１つ以上の苦味受容体を、１つ以上の苦味受容体を活性化する味物質と接触させること；１つ以上の苦味受容体の活性を測定すること；１つ以上の苦味受容体を洗浄すること；１つ以上の苦味受容体を、味物質および試験化合物と接触させること；そして１つ以上の苦味受容体の活性を測定することを包含する。味物質に起因する１つ以上の苦味受容体の活性が、味物質および試験化合物に起因する１つ以上の苦味受容体の活性と異なる場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を調整する。味物質に起因する１つ以上の苦味受容体の活性が、味物質および試験化合物に起因する１つ以上の苦味受容体の活性より大きい場合には、試験化合物は乳酸カリウムに起因する苦味を抑制する。味物質に起因する１つ以上の苦味受容体の活性が、味物質および試験化合物に起因する１つ以上の苦味受容体の活性より低い場合には、試験化合物は乳酸カリウムに起因する苦味を増強する。このような実施形態では、試験順序は重要ではない、と熟練研究者は認識する。受容体は、洗浄の前または後に、試験化合物と接触され得る。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、１つ以上の苦味受容体は、１つ以上の苦味受容体が味物質と接触される前に、同時に、または後に、試験化合物と接触され得る。
【０１４２】
いくつかの実施形態では、当該方法は、各々が、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される第一の１つ以上の苦味受容体および第二の１つ以上の苦味受容体を提供すること；第一の１つ以上の苦味受容体を、１つ以上の苦味受容体を活性化する味物質と接触させること；第一の１つ以上の苦味受容体の活性を測定すること；第二の１つ以上の苦味受容体を味物質および試験化合物と接触させること；そして第二の１つ以上の苦味受容体活性を測定することを包含する。第一の１つ以上の苦味受容体の活性が、第二の１つ以上の苦味受容体の活性と異なる場合には、試験化合物は乳酸カリウムに起因する苦味を調整する。第一の１つ以上の苦味受容体の活性が、第二の１つ以上の苦味受容体の活性より大きい場合には、試験化合物は乳酸カリウムに起因する苦味を抑制する。第一の１つ以上の苦味受容体の活性が、第二の１つ以上の苦味受容体の活性より低い場合には、試験化合物は乳酸カリウムに起因する苦味を増強する。いくつかの実施形態では、第一の１つ以上の苦味受容体は、活性の測定後に洗浄されて、第二の１つ以上の苦味受容体を提供する。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、第二の１つ以上の苦味受容体は、第二の１つ以上の苦味受容体が味物質と接触される前に、同時に、または後に、試験化合物と接触され得る。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、当該方法は、１つ以上の苦味受容体を発現する細胞を提供すること（ここで、１つ以上の苦味受容体は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される）；細胞を、１つ以上の苦味受容体を活性化する味物質と接触させること；１つ以上の苦味受容体の活性を測定すること；細胞を洗浄すること；細胞を味物質および試験化合物と接触させること；そして１つ以上の苦味受容体の活性を測定することを包含する。味物質に起因する１つ以上の苦味受容体の活性が、味物質および試験化合物に起因する１つ以上の苦味受容体の活性と異なる場合には、試験化合物は乳酸カリウムに起因する苦味を調整する。味物質に起因する１つ以上の苦味受容体の活性が、味物質および試験化合物に起因する１つ以上の苦味受容体の活性より大きい場合には、試験化合物は乳酸カリウムに起因する苦味を抑制する。味物質に起因する１つ以上の苦味受容体の活性が、味物質および試験化合物に起因する１つ以上の苦味受容体の活性より低い場合には、試験化合物は乳酸カリウムに起因する苦味を増強する。いくつかの実施形態では、細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株中に存在する。いくつかの実施形態では、細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株のパネル中に存在する。このような実施形態では、試験順序は重要ではない、と熟練研究者は認識する。細胞は、洗浄の前または後に、試験化合物と接触され得る。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、細胞は、細胞が味物質と接触される前に、同時に、または後に、試験化合物と接触され得る。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、当該方法は、１つ以上の苦味受容体を発現する第一細胞、および１つ以上の苦味受容体を発現する第二細胞を提供すること（ここで、１つ以上の苦味受容体は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される）；第一細胞を、１つ以上の苦味受容体を活性化する味物質と接触させること；第一細胞の苦味受容体活性を測定すること；第二細胞を、味物質および試験化合物と接触させること；そして第二細胞の苦味受容体活性を測定することを包含する。第一細胞の苦味受容体活性が、第二細胞の苦味受容体活性と異なる場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を調整する。第一細胞の苦味受容体活性が、第二細胞の苦味受容体活性より大きい場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を抑制する。第一細胞の苦味受容体活性が、第二細胞の苦味受容体活性より低い場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を増強する。いくつかの実施形態では、第一および第二細胞はｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株中に存在する。いくつかの実施形態では、第一および第二細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株の１つ以上のパネル中に存在する。いくつかの実施形態では、第一細胞は、苦味受容体活性を測定後に洗浄されて、第二細胞を提供する。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、第二細胞は、第二細胞が味物質と接触される前に、同時に、または後に、試験化合物と接触され得る。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、当該方法は、１つ以上の苦味受容体を発現する第三細胞、および１つ以上の苦味受容体を発現する第四細胞を提供することをさらに包含し、この場合、１つ以上の苦味受容体は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択され；第三および第四細胞における１つ以上の苦味受容体は同一であり；そして第三および第四細胞における１つ以上の苦味受容体は、第一および第二細胞における苦味受容体とは異なる。いくつかの実施形態では、当該方法は、１つ以上の苦味受容体を発現する第五細胞および１つ以上の苦味受容体を発現する第六細胞を提供することをさらに包含し、この場合、１つ以上の苦味受容体はＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択され；第五および第六細胞における１つ以上の苦味受容体は同一であり；そして第五および第六細胞における１つ以上の苦味受容体は、第一、第二、第三および第四細胞における苦味受容体とは異なる。いくつかの実施形態では、当該方法は、１つ以上の苦味受容体を発現する第七細胞および１つ以上の苦味受容体を発現する第八細胞を提供することをさらに包含し、この場合、１つ以上の苦味受容体はＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択され；第七および第八細胞における１つ以上の苦味受容体は同一であり；そして第七および第八細胞における１つ以上の苦味受容体は、第一、第二、第三、第四、第五および第六細胞における苦味受容体とは異なる。いくつかの実施形態では、当該方法は、１つ以上の苦味受容体を発現する第九細胞および１つ以上の苦味受容体を発現する第十細胞を提供することをさらに包含し、この場合、１つ以上の苦味受容体はＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択され；第九および第十細胞における１つ以上の苦味受容体は同一であり；そして第九および第十細胞における１つ以上の苦味受容体は、第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七および第八細胞における苦味受容体とは異なる。いくつかの実施形態では、当該方法は、１つ以上の苦味受容体を発現する第十一細胞および１つ以上の苦味受容体を発現する第十二細胞を提供することをさらに包含し、この場合１つ以上の苦味受容体はＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択され；第十一および第十二細胞における１つ以上の苦味受容体は同一であり；第十一および第十二細胞における１つ以上の苦味受容体は、第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九および第十細胞における苦味受容体とは異なる。いくつかの実施形態では、当該方法は、１つ以上の苦味受容体を発現する第十三細胞、および１つ以上の苦味受容体を発現する第十四細胞をさらに提供することを包含し、この場合、１つ以上の苦味受容体は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択され；第十三および第十四細胞中の１つ以上の苦味受容体は同一であり；そして第十三および第十四細胞中の１つ以上の苦味受容体は、第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一および第十二細胞における苦味受容体とは異なる。このような実施形態では、当該方法は、第三、第五、第七、第九および第十一および／または第十三細胞を、１つ以上の苦味受容体を活性化する味物質と接触させること；第三、第五、第七、第九、第十一および／または第十三細胞の苦味受容体活性を測定すること；第四、第六、第八、第十、第十二および／または第十四細胞を、味物質および試験化合物と接触させること；そして第四、第六、第八、第十、第十二および／または第十四細胞の苦味受容体活性を測定することをさらに包含する。第三、第五、第七、第九、第十一および／または第十三細胞の苦味受容体活性が、それぞれ第四、第六、第八、第十、第十二および／または第十四細胞の苦味受容体活性と異なる場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を調整する。第四、第六、第八、第十、第十二および／または第十四細胞の苦味受容体活性が、それぞれ第三、第五、第七、第九、第十一および／または第十三細胞の苦味受容体活性より低い場合には、試験化合物は乳酸カリウムに起因する苦味を抑制する。第四、第六、第八、第十、第十二および／または第十四細胞の苦味受容体活性が、それぞれ第三、第五、第七、第九、第十一および／または第十三細胞の苦味受容体活性より大きい場合には、試験化合物は乳酸カリウムに起因する苦味を増強する。いくつかの実施形態では、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三および／または第十四細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株中に存在する。いくつかの実施形態では、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三および／または第十四細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株の１つ以上のパネル中に存在する。いくつかの実施形態では、第三、第五、第七、第九、第十一および／または第十三細胞は、苦味受容体活性の測定後に洗浄されて、それぞれ第四、第六、第八、第十、第十二および／または第十四細胞を提供する。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、第四、第六、第八、第十、第十二および／または第十四細胞は、第四、第六、第八、第十、第十二および／または第十四細胞が味物質と接触される前に、同時に、または後に、試験化合物と接触され得る。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株のパネルを提供すること（ここで、各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される苦味受容体を発現し、この場合、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現される）；各細胞株を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群のうちの４つ以上を活性化する味物質と接触させること；各細胞株の苦味受容体活性を測定すること；各細胞株を洗浄すること；各細胞株を味物質および試験化合物と接触させること；そして各細胞株の苦味受容体活性を測定することを包含する。ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの４つ以上の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して、異なる場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの５つ以上において異なる。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの６つ以上において異なる。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０細胞株において異なる。ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される４つ以上の細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して大きい場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの５つ以上においてより大きい。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの６つ以上においてより大きい。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０細胞株においてより大きい。ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される４つ以上の細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して低い場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの５つ以上においてより低い。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０細胞株においてより低い。いくつかの実施形態では、試験化合物が、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０およびＴＡＳ２Ｒ５５苦味受容体活性を誘導しない場合、当該化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に調整し、抑制し、または活性化する。いくつかの実施形態では、パネルは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株の適合パネルである。このような実施形態では、試験順序は重要ではない、と熟練研究者は認識する。細胞株は、洗浄の前または後に、試験化合物と接触され得る。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、各細胞株が味物質と接触される前に、同時に、または後に、各細胞株は試験化合物と接触され得る。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株のパネルを提供すること（この場合、パネルは、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される苦味受容体を発現する細胞株を含み、各受容体は少なくとも１つの細胞株中で発現される）；各細胞株を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群のうちの少なくとも２つを活性化する味物質と接触させること；各細胞株の苦味受容体活性を測定すること；各細胞株を洗浄すること；各細胞株を味物質および試験化合物と接触させること；そして各細胞株の苦味受容体活性を測定することを包含する。いくつかの実施形態では、パネル中の各細胞株は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される苦味受容体を発現し、この場合、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現される。ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの少なくとも２つの苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して異なる場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの少なくとも３つにおいて異なる場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの少なくとも４つにおいて異なる場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの少なくとも５つにおいて異なる場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの少なくとも６つにおいて異なる場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０の各々において異なる場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に調整する。ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも２つの細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して大きい場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも３つの細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して大きい場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも４つの細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して大きい場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも５つの細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して大きい場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも６つの細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して大きい場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０の各々における苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して大きい場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に抑制する。ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも２つの細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して低い場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも３つの細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して低い場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも４つの細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して低い場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも５つの細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して低い場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも６つの細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して低い場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０の各々における苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して低い場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、試験化合物が、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０およびＴＡＳ２Ｒ５５苦味受容体活性を誘導しない場合、当該化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に調整し、抑制し、または活性化する。いくつかの実施形態では、パネルは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株の適合パネルである。このような実施形態では、試験順序は重要ではない、と熟練研究者は認識する。細胞株は、洗浄の前または後に、試験化合物と接触され得る。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、各細胞株は、各細胞株が味物質と接触される前に、同時に、または後に、試験化合物と接触され得る。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株の第一パネルおよび細胞株の第二パネルを提供すること（この場合、各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体からなる群から選択される苦味受容体を発現し、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現され、そして第一および第二パネルは同一細胞株を含む）；第一パネル中の各細胞株を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群のうちの４つ以上を活性化する味物質と接触させること；第一パネル中の各細胞株の苦味受容体活性を測定すること；第二パネル中の各細胞株を、味物質および試験化合物と接触させること；そして第二パネル中の各細胞株の苦味受容体活性を測定することを包含する。ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの４つ以上の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて異なる場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの５つ以上において異なる。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの６つ以上において異なる。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０細胞株において異なる。ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される４つ以上の細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいてより大きい場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの５つ以上においてより大きい。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの６つ以上においてより大きい。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０細胞株においてより大きい。ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される４つ以上の細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて低い場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの５つ以上において低い。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの６つ以上において低い。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０細胞株において低い。いくつかの実施形態では、試験化合物が、第一パネルと比較して第二パネルにおいてＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０およびＴＡＳ２Ｒ５５苦味受容体活性を誘導しない場合、当該化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に調整し、抑制し、または活性化する。いくつかの実施形態では、第一および第二パネルは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株の適合パネルである。いくつかの実施形態では、細胞株の第一パネルは、苦味受容体活性に関して測定された後に洗浄されて、第二パネルの細胞株を提供する。言い換えれば、第一および第二パネルの細胞株は同一であり、第一測定ステップと第二接触ステップとの間に洗浄ステップを有する。このような実施形態では、試験順序は重要ではない、と熟練研究者は認識する。細胞株は、洗浄の前または後に、試験化合物と接触され得る。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、第二パネル中の各細胞株は、第二パネル中の各細胞株が味物質と接触される前に、同時に、または後に、試験化合物と接触され得る。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株の第一パネルおよび細胞株の第二パネルを提供すること（この場合、各パネルは、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体からなる群から選択される苦味受容体を発現する細胞株を含み、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現され、そして第一および第二パネルは同一細胞株を含む）；第一パネル中の各細胞株を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される群の少なくとも２つを活性化する味物質と接触させること；第一パネル中の各細胞株の苦味受容体活性を測定すること；第二パネル中の各細胞株を、味物質および試験化合物と接触させること；そして、第二パネル中の各細胞株の苦味受容体活性を測定することを包含する。いくつかの実施形態では、第一および第二パネル中の各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される苦味受容体を発現し、この場合、各受容体は各パネルの少なくとも１つ細胞株中で発現される。ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの少なくとも２つの苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて異なる場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの少なくとも３つの苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて異なる場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの少なくとも４つの苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて異なる場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの少なくとも５つで異なる場合には、試験化合物は、乳酸カリウムのためである苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される細胞株のうちの少なくとも６つで異なる場合には、試験物質は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０細胞株の各々において異なる場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に調整する。ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも２つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいてより大きい場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも３つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいてより大きい場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも４つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいてより大きい場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも５つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいてより大きい場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも６つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいてより大きい場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０細胞株の各々における苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいてより大きい場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に抑制する。ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも２つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて低い場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも３つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて低い場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも４つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて低い場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも５つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて低い場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される少なくとも６つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて低い場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０細胞株の各々における苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて低い場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、試験化合物が、第一パネルと比較して第二パネルにおいて、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０およびＴＡＳ２Ｒ５５苦味受容体活性を誘導しない場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を選択的に調整し、抑制し、または活性化する。いくつかの実施形態では、第一および第二パネルは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株の適合パネルである。いくつかの実施形態では、第一パネルの細胞株は、苦味受容体活性に関して測定された後に洗浄されて、第二パネルの細胞株を提供する。言い換えれば、第一および第二パネルの細胞株は同一であり、第一測定ステップと第二接触ステップの間に洗浄ステップを有する。このような実施形態では、試験順序は重要でない、と熟練研究者は認識する。細胞株は、洗浄の前または後に、試験化合物と接触され得る。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、第二パネル中の各細胞株は、第二パネル中の各細胞株を味物質と接触する前に、同時に、または後に、試験化合物と接触され得る。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、乳酸カリウムに起因する苦味の調節因子を同定する上記の方法のいずれかで利用される味物質は、ＫＣｌ、乳酸カリウム、アセスルファムＫおよび普遍的苦味化合物から選択される。いくつかの実施形態では、普遍的苦味化合物は、安息香酸デナトニウムまたはデナトニウムサッカリドである。いくつかの実施形態では、味物質の濃度は、５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭまたは５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、味物質の濃度は、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭまたは約５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、味物質の濃度は、少なくとも５ｍＭ、少なくとも１０ｍＭ、少なくとも１５ｍＭ、少なくとも２０ｍＭ、少なくとも２５ｍＭ、少なくとも３０ｍＭ、少なくとも３５ｍＭ、少なくとも４０ｍＭ、少なくとも４５ｍＭまたは少なくとも５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、味物質の濃度は、少なくとも約５ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約１５ｍＭ、少なくとも約２０ｍＭ、少なくとも約２５ｍＭ、少なくとも約３０ｍＭ、少なくとも約３５ｍＭ、少なくとも約４０ｍＭ、少なくとも約４５ｍＭまたは少なくとも約５０ｍＭである。
【０１５１】
別の態様において、本発明は、乳酸カリウムに起因する苦味を模倣する化合物を同定する方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株の第一パネルおよび細胞株の第二パネルを提供すること（この場合、各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体からなる群から選択される苦味受容体を発現し、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現され、そして第一および第二パネルは同一細胞株を含む）；第一パネル中の各細胞株を、陰性対照と接触させること；第一パネル中の各細胞株の苦味受容体活性を測定すること；第二パネル中の各細胞株を、試験化合物と接触させること；そして、第二パネル中の各細胞株の苦味受容体活性を測定することを包含する。試験化合物が、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０の苦味受容体活性を誘導する場合には、試験化合物は、乳酸カリウムに起因する苦味を模倣する。いくつかの実施形態では、試験化合物は、第一パネルと比較して、第二パネルにおいてＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０およびＴＡＳ２Ｒ５５苦味受容体活性を誘導しない。いくつかの実施形態では、第一および第二パネルは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株の適合パネルである。いくつかの実施形態では、第一パネルの細胞株は、苦味受容体活性に関して測定された後に洗浄されて、第二パネルの細胞株を提供する。言い換えれば、第一および第二パネルの細胞株は同一であり、第一測定ステップと第二接触ステップの間に洗浄ステップを有する。このような実施形態では、試験順序は重要でない、と熟練研究者は認識する。細胞株は、洗浄の前または後に、試験化合物と接触され得る。いくつかの実施形態では、陰性対照は、試験化合物の付加前の検定緩衝液である。
【０１５２】
別の態様において、本発明は、乳酸カリウムが組成物中に存在するか否かを確定するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株の第一パネルおよび細胞株の第二パネルを提供すること（この場合、各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体からなる群から選択される苦味受容体を発現し、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現され、そして第一および第二パネルは同一細胞株を含む）；第一パネル中の各細胞株を陰性対照と接触させること；第一パネル中の各細胞株の苦味受容体活性を測定すること；第二パネル中の各細胞株を組成物と接触させること；そして、第二パネル中の各細胞株の苦味受容体活性を測定することを包含する。組成物が、第一パネルと比較して、第二パネルにおいてＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体活性を誘導し、そして第一パネルと比較して、第二パネルにおいてＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０およびＴＡＳ２Ｒ５５苦味受容体活性を誘導しない場合、乳酸カリウムは組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、組成物は、食物製品から抽出される。いくつかの実施形態では、組成物は、薬学的活性成分を含む。いくつかの実施形態では、第一および第二パネルは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株の適合パネルである。いくつかの実施形態では、第一パネルの細胞株は、苦味受容体活性に関して測定された後に洗浄されて、第二パネルの細胞株を提供する。言い換えれば、第一および第二パネルの細胞株は同一であり、第一測定ステップと第二接触ステップの間に洗浄ステップを有する。このような実施形態では、試験順序は重要でない、と熟練研究者は認識する。細胞株は、洗浄の前または後に、試験化合物と接触され得る。いくつかの実施形態では、陰性対照は、組成物の付加前の検定緩衝液である。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される２つ以上の異なる苦味受容体と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される異なる苦味受容体を各々発現する２つ以上の細胞と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される３つ以上の異なる味受容体と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される異なる苦味受容体を各々発現する３つ以上の細胞と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される４つ以上の異なる味受容体と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される異なる苦味受容体を各々発現する４つ以上の細胞と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される５つ以上の異なる味受容体と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される異なる苦味受容体を各々発現する５つ以上の細胞と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される６つ以上の異なる味受容体と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される異なる苦味受容体を各々発現する６つ以上の細胞と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される７つ以上の異なる味受容体と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される異なる苦味受容体を各々発現する７つ以上の細胞と接触させることを包含する。
【０１５４】
乳酸カリウムに起因する苦味を調整し、抑制し、増強し、または模倣する化合物の同定方法が、ＴＡＳ２Ｒ４４またはＴＡＳ２Ｒ４４を発現する細胞と、味物質または試験化合物とを接触させることを包含するいくつかの実施形態では、当該方法は、少なくとも１つの付加的苦味受容体または少なくとも１つの苦味受容体を発現する細胞（ここで、少なくとも１つの付加的苦味受容体は、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０から選択される）を、味物質または試験化合物と接触させることも包含する。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、当該方法は、乳酸カリウムに起因する苦味を調整し、抑制し、増強し、または模倣する試験化合物を、食料品、食料品の製造に用いられる任意の食品前駆体物質または任意の添加物と混合することをさらに包含する。いくつかの実施形態では、食料品は、ヒトが消費するためのものである。いくつかの実施形態では、食料品は、動物が消費するためのもの、例えばペットまたは家畜用である。いくつかの実施形態では、当該方法は、乳酸カリウムに起因する苦味を調整し、抑制し、増強し、または模倣する試験化合物を、薬学的に許容可能な形態での活性作用物質と混合することをさらに包含する。
アセスルファムＫに起因する苦味を調整する化合物の同定方法
【０１５６】
別の態様によれば、本発明は、アセスルファムＫに起因する苦味を調整する化合物の同定方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該方法は、アセスルファムＫによる苦味受容体の活性化を調整し、抑制し、または増強する化合物を同定する。いくつかの実施形態では、当該方法は、アセスルファムＫによる苦味受容体の活性化とその後の下流シグナル伝達を調整し、抑制し、または増強する化合物を同定する。いくつかの実施形態では、当該方法は、アセスルファムＫによる刺激後のシグナル伝達経路の活性化を調整し、抑制し、または増強する化合物を同定する。いくつかの実施形態では、当該方法は、アセスルファムＫに起因する苦味の知覚を調整し、抑制し、または増強する化合物を同定する。以下の実施例４に示すように、アセスルファムＫは、苦味受容体ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４を活性化する。したがって、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４苦味受容体のうちの１つ以上のアセスルファムＫの活性化を調整する化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味の調節因子であるべきである。いくつかの実施形態では、化合物は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４苦味受容体のうちの１つ以上のアセスルファムＫの活性化を抑制する。このような実施形態では、化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味の阻害剤である。いくつかの実施形態では、化合物は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４苦味受容体のうちの１つ以上のアセスルファムＫの活性化を増強する。このような実施形態では、化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味の増強剤である。いくつかの実施形態では、化合物は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４苦味受容体のうちの１つ以上を活性化する。このような実施形態では、化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を模倣する。いくつかの実施形態では、上記の苦味を調整する化合物の同定方法のいずれかは、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４苦味受容体のうちの１つ以上を活性化する味物質を用いて実施される。いくつかの実施形態では、味物質は、ＫＣｌ、乳酸カリウム、アセスルファムＫおよび普遍的苦味化合物から選択される。いくつかの実施形態では、普遍的苦味化合物は、安息香酸デナトニウムまたはデナトニウムサッカリドである。いくつかの実施形態では、味物質の濃度は、５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭまたは５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、味物質の濃度は、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭまたは約５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、味物質の濃度は、少なくとも５ｍＭ、少なくとも１０ｍＭ、少なくとも１５ｍＭ、少なくとも２０ｍＭ、少なくとも２５ｍＭ、少なくとも３０ｍＭ、少なくとも３５ｍＭ、少なくとも４０ｍＭ、少なくとも４５ｍＭまたは少なくとも５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、味物質の濃度は、少なくとも約５ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約１５ｍＭ、少なくとも約２０ｍＭ、少なくとも約２５ｍＭ、少なくとも約３０ｍＭ、少なくとも約３５ｍＭ、少なくとも約４０ｍＭ、少なくとも約４５ｍＭまたは少なくとも約５０ｍＭである。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、試験化合物は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４のうちの２つ以上のアセスルファムＫ誘導性活性化を調整し、抑制し、または増強する。いくつかの実施形態では、試験化合物は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４のうちの３つ以上のアセスルファムＫ誘導性活性化を調整し、抑制し、または増強する。いくつかの実施形態では、試験化合物は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４のうちの４つ以上のアセスルファムＫ誘導性活性化を調整し、抑制し、または増強する。いくつかの実施形態では、試験化合物は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４のうちの５つ以上のアセスルファムＫ誘導性活性化を調整し、抑制し、または増強する。いくつかの実施形態では、試験化合物は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４のうちの６つ以上のアセスルファムＫ誘導性活性化を調整し、抑制し、または増強する。いくつかの実施形態では、試験化合物は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４の各々のアセスルファムＫ誘導性活性化を調整し、抑制し、または増強する。
【０１５８】
この節に記載されたアセスルファムＫに起因する苦味を調整する化合物の同定方法のいずれかにおいて、当該方法に用いられる苦味受容体は、上記のように、Ｇタンパク質と複合体を形成され得る。上記の任意のＧタンパク質が、用いられ得る。いくつかの実施形態では、Ｇタンパク質は、Ｇｑタンパク質、アルファ・トランスデューシンまたはアルファ・ガストデューシンである。いくつかの実施形態では、Ｇｑタンパク質はＧα１５タンパク質である。
【０１５９】
この節に記載されたアセスルファムＫに起因する苦味を調整する化合物の同定方法のいずれかにおいて、上記の任意の検定を用いて、苦味受容体活性を測定し得る。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、細胞内カルシウム濃度を測定することにより確定される。いくつかの実施形態では、細胞内カルシウム濃度は、カルシウム感受性蛍光染料を用いて測定される。いくつかの実施形態では、カルシウム感受性蛍光染料は、Ｉｎｄｏ−１、Ｆｕｒａ−２、Ｆｌｕｏ−３、Ｆｌｕｏ−４、Ｒｈｏｄ−２、Ｒｈｏｄ−５Ｎ、カルセイン、カルセインブルー、サイトカルセインバイオレット、Ｑｕｉｎ−２、Ｑｕｅｓｔ  Ｆｌｕｏ−８Ｈ（商標）、Ｑｕｅｓｔ  Ｆｌｕｏ  ８Ｌ（商標）、Ｑｕｅｓｔ  Ｆｌｕｏ８（商標）、Ｑｕｅｓｔ  Ｒｈｏｄ−４（商標）、セレンテラジンおよびカルシウム−３から選択される。特定の実施形態では、カルシウム感受性蛍光染料はＦｌｕｏ−４またはカルシウム−３である。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、当該方法は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される１つ以上の苦味受容体を提供すること；１つ以上の苦味受容体を、１つ以上の苦味受容体を活性化する味物質と接触させること；１つ以上の苦味受容体の活性を測定すること；１つ以上の苦味受容体を洗浄すること；１つ以上の苦味受容体を、味物質および試験化合物と接触させること；そして１つ以上の苦味受容体の活性を測定することを包含する。味物質に起因する１つ以上の苦味受容体の活性が、味物質および試験化合物に起因する１つ以上の苦味受容体の活性と異なる場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を調整する。味物質に起因する１つ以上の苦味受容体の活性が、味物質および試験化合物に起因する１つ以上の苦味受容体の活性より大きい場合には、試験化合物はアセスルファムＫに起因する苦味を抑制する。味物質に起因する１つ以上の苦味受容体の活性が、味物質および試験化合物に起因する１つ以上の苦味受容体の活性より低い場合には、試験化合物はアセスルファムＫに起因する苦味を増強する。このような実施形態では、試験順序は重要ではない、と熟練研究者は認識する。受容体は、洗浄の前または後に、試験化合物と接触され得る。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、１つ以上の苦味受容体は、１つ以上の苦味受容体が味物質と接触される前に、同時に、または後に、試験化合物と接触され得る。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、当該方法は、各々が、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される第一の１つ以上の苦味受容体および第二の１つ以上の苦味受容体を提供すること；第一の１つ以上の苦味受容体を、１つ以上の苦味受容体を活性化する味物質と接触させること；第一の１つ以上の苦味受容体の活性を測定すること；第二の１つ以上の苦味受容体を味物質および試験化合物と接触させること；そして第二の１つ以上の苦味受容体活性を測定することを包含する。第一の１つ以上の苦味受容体の活性が、第二の１つ以上の苦味受容体の活性と異なる場合には、試験化合物はアセスルファムＫに起因する苦味を調整する。第一の１つ以上の苦味受容体の活性が、第二の１つ以上の苦味受容体の活性より大きい場合には、試験化合物はアセスルファムＫに起因する苦味を抑制する。第一の１つ以上の苦味受容体の活性が、第二の１つ以上の苦味受容体の活性より低い場合には、試験化合物はアセスルファムＫに起因する苦味を増強する。いくつかの実施形態では、第一の１つ以上の苦味受容体は、活性の測定後に洗浄されて、第二の１つ以上の苦味受容体を提供する。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、第二の１つ以上の苦味受容体は、第二の１つ以上の苦味受容体が味物質と接触される前に、同時に、または後に、試験化合物と接触され得る。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、当該方法は、１つ以上の苦味受容体を発現する細胞を提供すること（ここで、１つ以上の苦味受容体は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される）；細胞を、１つ以上の苦味受容体を活性化する味物質と接触させること；１つ以上の苦味受容体の活性を測定すること；細胞を洗浄すること；細胞を味物質および試験化合物と接触させること；そして１つ以上の苦味受容体の活性を測定することを包含する。味物質に起因する１つ以上の苦味受容体の活性が、味物質および試験化合物に起因する１つ以上の苦味受容体の活性と異なる場合には、試験化合物はアセスルファムＫに起因する苦味を調整する。味物質に起因する１つ以上の苦味受容体の活性が、味物質および試験化合物に起因する１つ以上の苦味受容体の活性より大きい場合には、試験化合物はアセスルファムＫに起因する苦味を抑制する。味物質に起因する１つ以上の苦味受容体の活性が、味物質および試験化合物に起因する１つ以上の苦味受容体の活性より低い場合には、試験化合物はアセスルファムＫに起因する苦味を増強する。いくつかの実施形態では、細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株中に存在する。いくつかの実施形態では、細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株のパネル中に存在する。このような実施形態では、試験順序は重要ではない、と熟練研究者は認識する。細胞は、洗浄の前または後に、試験化合物と接触され得る。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、細胞は、細胞が味物質と接触される前に、同時に、または後に、試験化合物と接触され得る。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、当該方法は、１つ以上の苦味受容体を発現する第一細胞、および１つ以上の苦味受容体を発現する第二細胞を提供すること（ここで、１つ以上の苦味受容体は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される）；第一細胞を、１つ以上の苦味受容体を活性化する味物質と接触させること；第一細胞の苦味受容体活性を測定すること；第二細胞を、味物質および試験化合物と接触させること；そして第二細胞の苦味受容体活性を測定することを包含する。第一細胞の苦味受容体活性が、第二細胞の苦味受容体活性と異なる場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を調整する。第一細胞の苦味受容体活性が、第二細胞の苦味受容体活性より大きい場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を抑制する。第一細胞の苦味受容体活性が、第二細胞の苦味受容体活性より低い場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を増強する。いくつかの実施形態では、第一および第二細胞はｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株中に存在する。いくつかの実施形態では、第一および第二細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株の１つ以上のパネル中に存在する。いくつかの実施形態では、第一細胞は、苦味受容体活性を測定後に洗浄されて、第二細胞を提供する。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、第二細胞は、第二細胞が味物質と接触される前に、同時に、または後に、試験化合物と接触され得る。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、当該方法は、１つ以上の苦味受容体を発現する第三細胞、および１つ以上の苦味受容体を発現する第四細胞を提供することをさらに包含し、この場合、１つ以上の苦味受容体は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択され；第三および第四細胞における１つ以上の苦味受容体は同一であり；そして第三および第四細胞における１つ以上の苦味受容体は、第一および第二細胞における苦味受容体とは異なる。いくつかの実施形態では、当該方法は、１つ以上の苦味受容体を発現する第五細胞および１つ以上の苦味受容体を発現する第六細胞を提供することをさらに包含し、この場合、１つ以上の苦味受容体はＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択され；第五および第六細胞における１つ以上の苦味受容体は同一であり；そして第五および第六細胞における１つ以上の苦味受容体は、第一、第二、第三および第四細胞における苦味受容体とは異なる。いくつかの実施形態では、当該方法は、１つ以上の苦味受容体を発現する第七細胞および１つ以上の苦味受容体を発現する第八細胞を提供することをさらに包含し、この場合、１つ以上の苦味受容体はＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択され；第七および第八細胞における１つ以上の苦味受容体は同一であり；そして第七および第八細胞における１つ以上の苦味受容体は、第一、第二、第三、第四、第五および第六細胞における苦味受容体とは異なる。いくつかの実施形態では、当該方法は、１つ以上の苦味受容体を発現する第九細胞および１つ以上の苦味受容体を発現する第十細胞を提供することをさらに包含し、この場合、１つ以上の苦味受容体はＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択され；第九および第十細胞における１つ以上の苦味受容体は同一であり；そして第九および第十細胞における１つ以上の苦味受容体は、第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七および第八細胞における苦味受容体とは異なる。いくつかの実施形態では、当該方法は、１つ以上の苦味受容体を発現する第十一細胞および１つ以上の苦味受容体を発現する第十二細胞を提供することをさらに包含し、この場合１つ以上の苦味受容体はＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択され；第十一および第十二細胞における１つ以上の苦味受容体は同一であり；第十一および第十二細胞における１つ以上の苦味受容体は、第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九および第十細胞における苦味受容体とは異なる。いくつかの実施形態では、当該方法は、１つ以上の苦味受容体を発現する第十三細胞および１つ以上の苦味受容体を発現する第十四細胞を提供することをさらに包含し、この場合１つ以上の苦味受容体はＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択され；第十三および第十四細胞における１つ以上の苦味受容体は同一であり；第十三および第十四細胞における１つ以上の苦味受容体は、第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一および第十二細胞における苦味受容体とは異なる。このような実施形態では、当該方法は、第三、第五、第七、第九、第十一および／または第十三細胞を、１つ以上の苦味受容体を活性化する味物質と接触させること；第三、第五、第七、第九、第十一および／または第十三細胞の苦味受容体活性を測定すること；第四、第六、第八、第十、第十二および／または第十四細胞を、味物質および試験化合物と接触させること；そして第四、第六、第八、第十、第十二および／または第十四細胞の苦味受容体活性を測定することをさらに包含する。第三、第五、第七、第九、第十一および／または第十三細胞の苦味受容体活性が、それぞれ第四、第六、第八、第十、第十二および／または第十四細胞の苦味受容体活性と異なる場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を調整する。第四、第六、第八、第十、第十二および／または第十四細胞の苦味受容体活性が、それぞれ第三、第五、第七、第九、第十一および／または第十三細胞の苦味受容体活性より低い場合には、試験化合物はアセスルファムＫに起因する苦味を抑制する。第四、第六、第八、第十、第十二および／または第十四細胞の苦味受容体活性が、それぞれ第三、第五、第七、第九、第十一および／または第十三細胞の苦味受容体活性より大きい場合には、試験化合物はアセスルファムＫに起因する苦味を増強する。いくつかの実施形態では、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三および／または第十四細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株中に存在する。いくつかの実施形態では、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三および／または第十四細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株の１つ以上のパネル中に存在する。いくつかの実施形態では、第三、第五、第七、第九、第十一および／または第十三細胞は、苦味受容体活性の測定後に洗浄されて、それぞれ第四、第六、第八、第十、第十二および／または第十四細胞を提供する。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、第四、第六、第八、第十、第十二および／または第十四細胞は、第四、第六、第八、第十、第十二および／または第十四細胞が味物質と接触される前に、同時に、または後に、試験化合物と接触され得る。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株のパネルを提供すること（ここで、各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される苦味受容体を発現し、この場合、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現される）；各細胞株を、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される群のうちの４つ以上を活性化する味物質と接触させること；各細胞株の苦味受容体活性を測定すること；各細胞株を洗浄すること；各細胞株を味物質および試験化合物と接触させること；そして各細胞株の苦味受容体活性を測定することを包含する。ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される細胞株のうちの４つ以上の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して、異なる場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される細胞株のうちの５つ以上において異なる。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される細胞株のうちの６つ以上において異なる。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４細胞株において異なる。ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される４つ以上の細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して大きい場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される細胞株のうちの５つ以上においてより大きい。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される細胞株のうちの６つ以上においてより大きい。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４細胞株においてより大きい。ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される４つ以上の細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して低い場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される細胞株のうちの５つ以上においてより低い。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４細胞株においてより低い。いくつかの実施形態では、試験化合物が、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体活性を誘導しない場合、当該化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に調整し、抑制し、または活性化する。いくつかの実施形態では、パネルは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株の適合パネルである。このような実施形態では、試験順序は重要ではない、と熟練研究者は認識する。細胞株は、洗浄の前または後に、試験化合物と接触され得る。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、各細胞株が味物質と接触される前に、同時に、または後に、各細胞株は試験化合物と接触され得る。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株のパネルを提供すること（この場合、パネルは、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４からなる群から選択される苦味受容体を発現する細胞株を含み、各受容体は少なくとも１つの細胞株中で発現される）；各細胞株を、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される群のうちの少なくとも２つを活性化する味物質と接触させること；各細胞株の苦味受容体活性を測定すること；各細胞株を洗浄すること；各細胞株を味物質および試験化合物と接触させること；そして各細胞株の苦味受容体活性を測定することを包含する。いくつかの実施形態では、パネル中の各細胞株は、以下の：各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される苦味受容体を発現し、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現される。ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される細胞株のうちの少なくとも２つの苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して異なる場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される細胞株のうちの少なくとも３つにおいて異なる場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される細胞株のうちの少なくとも４つにおいて異なる場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される細胞株のうちの少なくとも５つにおいて異なる場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される細胞株のうちの少なくとも６つにおいて異なる場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４細胞株の各々において異なる場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に調整する。ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される少なくとも２つの細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して大きい場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される少なくとも３つの細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して大きい場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される少なくとも４つの細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して大きい場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される少なくとも５つの細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して大きい場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に抑制する。ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される少なくとも６つの細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して大きい場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４細胞株の各々における苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して大きい場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に抑制する。ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される少なくとも２つの細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して低い場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される少なくとも３つの細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して低い場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される少なくとも４つの細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して低い場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される少なくとも５つの細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して低い場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に増強する。ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される少なくとも６つの細胞株の苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して低い場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４細胞株の各々における苦味受容体活性が、味物質と接触された場合、味物質および試験化合物と接触された場合と比較して低い場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、試験化合物がＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体活性を誘導しない場合、当該化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に調整し、抑制し、または活性化する。いくつかの実施形態では、パネルは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株の適合パネルである。このような実施形態では、試験順序は重要ではない、と熟練研究者は認識する。細胞株は、洗浄の前または後に、試験化合物と接触され得る。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、各細胞株は、各細胞株が味物質と接触される前に、同時に、または後に、試験化合物と接触され得る。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株の第一パネルおよび細胞株の第二パネルを提供すること（この場合、各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体からなる群から選択される苦味受容体を発現し、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現され、そして第一および第二パネルは同一細胞株を含む）；第一パネル中の各細胞株を、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される群のうちの４つ以上を活性化する味物質と接触させること；第一パネル中の各細胞株の苦味受容体活性を測定すること；第二パネル中の各細胞株を、味物質および試験化合物と接触させること；そして第二パネル中の各細胞株の苦味受容体活性を測定することを包含する。ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される細胞株のうちの４つ以上の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて異なる場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される細胞株のうちの５つ以上において異なる。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される細胞株のうちの６つ以上において異なる。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４細胞株において異なる。ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される４つ以上の細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいてより大きい場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される細胞株のうちの５つ以上においてより大きい。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される細胞株のうちの６つ以上においてより大きい。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４細胞株においてより大きい。ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される４つ以上の細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて低い場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される細胞株のうちの５つ以上において低い。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される細胞株のうちの６つ以上において低い。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４細胞株において低い。いくつかの実施形態では、試験化合物が、第一パネルと比較して第二パネルにおいてＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体活性を誘導しない場合、当該化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に調整し、抑制し、または活性化する。いくつかの実施形態では、第一および第二パネルは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株の適合パネルである。いくつかの実施形態では、細胞株の第一パネルは、苦味受容体活性に関して測定された後に洗浄されて、第二パネルの細胞株を提供する。言い換えれば、第一および第二パネルの細胞株は同一であり、第一測定ステップと第二接触ステップとの間に洗浄ステップを有する。このような実施形態では、試験順序は重要ではない、と熟練研究者は認識する。細胞株は、洗浄の前または後に、試験化合物と接触され得る。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、第二パネル中の各細胞株は、第二パネル中の各細胞株が味物質と接触される前に、同時に、または後に、試験化合物と接触され得る。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株の第一パネルおよび細胞株の第二パネルを提供すること（この場合、各パネルは、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４苦味受容体からなる群から選択される苦味受容体を発現する細胞株を含み、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現され、そして第一および第二パネルは同一細胞株を含む）；第一パネル中の各細胞株を、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される群の少なくとも２つを活性化する味物質と接触させること；第一パネル中の各細胞株の苦味受容体活性を測定すること；第二パネル中の各細胞株を、味物質および試験化合物と接触させること；そして、第二パネル中の各細胞株の苦味受容体活性を測定することを包含する。いくつかの実施形態では、第一および第二パネル中の各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される苦味受容体を発現し、この場合、各受容体は各パネルの少なくとも１つ細胞株中で発現される。ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される細胞株のうちの少なくとも２つの苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて異なる場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される細胞株のうちの少なくとも３つで異なる場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される細胞株のうちの少なくとも４つで異なる場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される細胞株のうちの少なくとも５つで異なる場合には、試験物質は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される細胞株のうちの少なくとも６つで異なる場合には、試験物質は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に調整する。いくつかの実施形態では、苦味受容体活性が、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４細胞株の各々において異なる場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に調整する。ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される少なくとも２つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいてより大きい場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される少なくとも３つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいてより大きい場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される少なくとも４つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいてより大きい場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される少なくとも５つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいてより大きい場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される少なくとも６つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいてより大きい場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に抑制する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４細胞株の各々における苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいてより大きい場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に抑制する。ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される少なくとも２つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて低い場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される少なくとも３つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて低い場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される少なくとも４つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて低い場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される少なくとも５つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて低い場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される少なくとも６つの細胞株の苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて低い場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４細胞株の各々における苦味受容体活性が、第二パネルと比較して第一パネルにおいて低い場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に増強する。いくつかの実施形態では、試験化合物が、第一パネルと比較して第二パネルにおいて、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体活性を誘導しない場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を選択的に調整し、抑制し、または活性化する。いくつかの実施形態では、第一および第二パネルは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株の適合パネルである。いくつかの実施形態では、第一パネルの細胞株は、苦味受容体活性に関して測定された後に洗浄されて、第二パネルの細胞株を提供する。言い換えれば、第一および第二パネルの細胞株は同一であり、第一測定ステップと第二接触ステップの間に洗浄ステップを有する。このような実施形態では、試験順序は重要でない、と熟練研究者は認識する。細胞株は、洗浄の前または後に、試験化合物と接触され得る。味物質および試験化合物は、逐次的にまたは同時的に付加され得る。すなわち、第二パネル中の各細胞株は、第二パネル中の各細胞株を味物質と接触する前に、同時に、または後に、試験化合物と接触され得る。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、アセスルファムＫに起因する苦味の調節因子を同定する上記の方法のいずれかで利用される味物質は、ＫＣｌ、乳酸カリウム、アセスルファムＫおよび普遍的苦味化合物から選択される。いくつかの実施形態では、普遍的苦味化合物は、安息香酸デナトニウムまたはデナトニウムサッカリドである。いくつかの実施形態では、味物質の濃度は、５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭまたは５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、味物質の濃度は、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭまたは約５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、味物質の濃度は、少なくとも５ｍＭ、少なくとも１０ｍＭ、少なくとも１５ｍＭ、少なくとも２０ｍＭ、少なくとも２５ｍＭ、少なくとも３０ｍＭ、少なくとも３５ｍＭ、少なくとも４０ｍＭ、少なくとも４５ｍＭまたは少なくとも５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、味物質の濃度は、少なくとも約５ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約１５ｍＭ、少なくとも約２０ｍＭ、少なくとも約２５ｍＭ、少なくとも約３０ｍＭ、少なくとも約３５ｍＭ、少なくとも約４０ｍＭ、少なくとも約４５ｍＭまたは少なくとも約５０ｍＭである。
【０１７０】
別の態様において、本発明は、アセスルファムＫに起因する苦味を模倣する化合物を同定する方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株の第一パネルおよび細胞株の第二パネルを提供すること（この場合、各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体からなる群から選択される苦味受容体を発現し、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現され、そして第一および第二パネルは同一細胞株を含む）；第一パネル中の各細胞株を、陰性対照と接触させること；第一パネル中の各細胞株の苦味受容体活性を測定すること；第二パネル中の各細胞株を、試験化合物と接触させること；そして、第二パネル中の各細胞株の苦味受容体活性を測定することを包含する。試験化合物が、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４の苦味受容体活性を誘導する場合には、試験化合物は、アセスルファムＫに起因する苦味を模倣する。いくつかの実施形態では、試験化合物は、第一パネルと比較して、第二パネルにおいてＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体活性を誘導しない。いくつかの実施形態では、第一および第二パネルは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株の適合パネルである。いくつかの実施形態では、第一パネルの細胞株は、苦味受容体活性に関して測定された後に洗浄されて、第二パネルの細胞株を提供する。言い換えれば、第一および第二パネルの細胞株は同一であり、第一測定ステップと第二接触ステップの間に洗浄ステップを有する。このような実施形態では、試験順序は重要でない、と熟練研究者は認識する。細胞株は、洗浄の前または後に、試験化合物と接触され得る。いくつかの実施形態では、陰性対照は、試験化合物の付加前の検定緩衝液である。
【０１７１】
別の態様において、本発明は、アセスルファムＫが組成物中に存在するか否かを確定するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、当該方法は、細胞株の第一パネルおよび細胞株の第二パネルを提供すること（この場合、各細胞株は、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体からなる群から選択される苦味受容体を発現し、各受容体は、少なくとも１つの細胞株中で発現され、そして第一および第二パネルは同一細胞株を含む）；第一パネル中の各細胞株を陰性対照と接触させること；第一パネル中の各細胞株の苦味受容体活性を測定すること；第二パネル中の各細胞株を組成物と接触させること；そして、第二パネル中の各細胞株の苦味受容体活性を測定することを包含する。組成物が、第一パネルと比較して、第二パネルにおいてＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４苦味受容体活性を誘導し、そして第一パネルと比較して、第二パネルにおいてＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体活性を誘導しない場合、アセスルファムＫは組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、組成物は、食物製品から抽出される。いくつかの実施形態では、組成物は、薬学的活性成分を含む。いくつかの実施形態では、第一および第二パネルは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞株の適合パネルである。いくつかの実施形態では、第一パネルの細胞株は、苦味受容体活性に関して測定された後に洗浄されて、第二パネルの細胞株を提供する。言い換えれば、第一および第二パネルの細胞株は同一であり、第一測定ステップと第二接触ステップの間に洗浄ステップを有する。このような実施形態では、試験順序は重要でない、と熟練研究者は認識する。細胞株は、洗浄の前または後に、試験化合物と接触され得る。いくつかの実施形態では、陰性対照は、組成物の付加前の検定緩衝液である。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される２つ以上の異なる苦味受容体と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される異なる苦味受容体を各々発現する２つ以上の細胞と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される３つ以上の異なる味受容体と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される異なる苦味受容体を各々発現する３つ以上の細胞と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される４つ以上の異なる味受容体と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される異なる苦味受容体を各々発現する４つ以上の細胞と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される５つ以上の異なる味受容体と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される異なる苦味受容体を各々発現する５つ以上の細胞と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される６つ以上の異なる味受容体と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、味物質および味物質＋試験化合物を、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される異なる苦味受容体を各々発現する６つ以上の細胞と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される７つ以上の異なる味受容体と接触させることを包含する。いくつかの実施形態では、当該方法は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される異なる苦味受容体を各々発現する７つ以上の細胞と接触させることを包含する。
【０１７３】
アセスルファムＫに起因する苦味を調整し、抑制し、増強し、または模倣する化合物の同定方法が、ＴＡＳ２Ｒ４４またはＴＡＳ２Ｒ４４を発現する細胞と、味物質または試験化合物とを接触させることを包含するいくつかの実施形態では、当該方法は、少なくとも１つの付加的苦味受容体または少なくとも１つの苦味受容体を発現する細胞（ここで、少なくとも１つの付加的苦味受容体は、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４から選択される）を、味物質または試験化合物と接触させることも包含する。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、当該方法は、アセスルファムＫに起因する苦味を調整し、抑制し、増強し、または模倣する試験化合物を、食料品、食料品の製造に用いられる任意の食品前駆体物質または任意の添加物と混合することをさらに包含する。いくつかの実施形態では、食料品は、ヒトが消費するためのものである。いくつかの実施形態では、食料品は、動物が消費するためのもの、例えばペットまたは家畜用である。いくつかの実施形態では、当該方法は、アセスルファムＫに起因する苦味を調整し、抑制し、増強し、または模倣する試験化合物を、薬学的に許容可能な形態での活性作用物質と混合することをさらに包含する。
苦味を調整するための化合物を同定するための細胞株のパネル
【０１７５】
別の態様によれば、本発明は、苦味を調整する化合物を同定するための細胞株のパネルを提供する。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、細胞株のパネルは、ＫＣｌに起因する苦味を調整する化合物を同定するためのものである。いくつかの実施形態では、パネルは、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される苦味受容体を発現する細胞株を含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０の各々は、パネル中の少なくとも１つの細胞株中で発現される。いくつかの実施形態では、パネルは、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される苦味受容体を発現する細胞株で本質的に構成される。いくつかの実施形態では、細胞株のパネルは、陰性対照細胞株をさらに含む。いくつかの実施形態では、陰性対照は、ＫＣｌに起因する苦味を調整する化合物を同定する方法に関する陰性対照である。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、細胞株のパネルは、乳酸カリウムに起因する苦味を調整する化合物を同定するためのものである。いくつかの実施形態では、パネルは、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される苦味受容体を発現する細胞株を含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０の各々は、パネル中の少なくとも１つの細胞株中で発現される。いくつかの実施形態では、パネルは、以下の：ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０からなる群から選択される苦味受容体を発現する細胞株で本質的に構成される。いくつかの実施形態では、細胞株のパネルは、陰性対照細胞株をさらに含む。いくつかの実施形態では、陰性対照は、乳酸カリウムに起因する苦味を調整する化合物を同定する方法に関する陰性対照である。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、細胞株のパネルは、アセスルファムＫに起因する苦味を調整する化合物を同定するためのものである。いくつかの実施形態では、パネルは、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４からなる群から選択される苦味受容体を発現する細胞株を含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４の各々は、パネル中の少なくとも１つの細胞株中で発現される。いくつかの実施形態では、パネルは、以下の：ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４からなる群から選択される苦味受容体を発現する細胞株で本質的に構成される。いくつかの実施形態では、細胞株のパネルは、陰性対照細胞株をさらに含む。いくつかの実施形態では、陰性対照は、アセスルファムＫに起因する苦味を調整する化合物を同定する方法に関する陰性対照である。
実施例
【０１７９】
本発明をより十分に理解するために、以下の実施例を記述する。これらの実施例は、端に例証のためであって、いかなる点でも本発明を限定するものではない。
【０１８０】
２５の苦味受容体の各々を発現する細胞株のパネルを、国際特許出願公告ＷＯ  ２０１０／０８８６３３に記載されたように生成した（例えば実施例２６参照）。したがって、パネルの各細胞株は、ヒト苦味受容体およびマウスＧα１５シグナル伝達タンパク質を発現した。
【０１８１】
以下の実施例の各々は、以下の機能検定を利用した：
１日目：安定細胞株を黒壁／透明底９６−ウェルプレート（例えば、Ｃｏｒｎｉｎｇ、３９０４）上に播種した。約４０Ｋ細胞／ウェルを付加し、３７°Ｃ、５％ＣＯ２で一晩、１０％ウシ胎仔血清（Ｓｉｇｍａ、５１７８）、２ｍＭグルタミン（Ｓｉｇｍａ、Ｇ７５１３）を補足した細胞増殖培地（ＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ、Ｄ５７９６）中でインキュベートした。
２日目：増殖培地を捨て、１３０ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＣａＣｌ２、５ｍＭ  ＫＣｌ、１．２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび１０ｍＭグルコース（ｐＨ７．０）を含有する緩衝液中に１×Ｃａ‐３染料（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｒ８０９０）、１％ＤＭＳＯを含有する負荷溶液  １００ｕｌ中で、３７°Ｃ、５％ＣＯ２で６０分間、細胞をインキュベートした。プロベネシドは、負荷溶液中には含まれなかった。
機能検定：染料負荷後、細胞プレートを蛍光プレート読取機（例えば、ＦＤＳＳ６０００（Ｈａｍａｍａｔｓｕ、日本））中に入れて、３×濃縮リガンド／アゴニストストック  ５０ｕｌを付加することにより、受容体刺激を測定した。アゴニスト付加前に１０秒間、アゴニストで刺激後１００〜２５０秒間、継続的に蛍光をモニタリングした。
【０１８２】
受容体活性化は、以下のように定義される：
活性化％＝［（（最大シグナル蛍光−最小シグナル蛍光）−（最大対照蛍光−最小対照蛍光））／（最大緩衝液蛍光−最小緩衝液蛍光）］＊１００
機能応答＝［（最大シグナル蛍光−最小シグナル蛍光）−（最大対照蛍光−最小対照蛍光）］
シグナル蛍光：リガンドの付加に伴って観察される蛍光における変化を指す
対照蛍光：緩衝液の付加に伴って観察される蛍光における変化を指す（陰性対照）
リガンドおよび対照からのカルシウムシグナルを、刺激前の細胞の基準蛍光に対して正規化した。
【０１８３】
次式を用いて、非線形回帰により、濃度分析を実施して、ＥＣ５０値を算定した：Ｙ＝ボトム＋（トップ−ボトム）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＥＣ５０−Ｘ）＊Ｈｉｌｌ  Ｓｌｏｐｅ））、Ｘ＝用量または濃度の対数、Ｙ＝応答（Ｘが増大すると増大）、トップ＝最大シグナル、ボトム＝最小シグナル。ＥＣ５０（半最大有効濃度）は、そのアゴニストから最大可能有効応答の５０％を生じるアゴニストのモル濃度を指す。
実施例１ 苦味受容体パネルにおける機能シグナル伝達の立証
【０１８４】
２５の苦味受容体細胞株の各々がＧタンパク質（Ｇα１５）を機能的且つ安定的に発現することを確証するために、ＨＥＫ２９３Ｔ宿主細胞株中で内因的に発現されるβ２‐アドレナリン作動性受容体のアゴニストであるイソプロテレノールの漸増濃度を用いて、上記のような全パネルを試験した。イソプロテレノールは、Ｇα１５シグナル伝達カスケードを介してシグナル伝達して、細胞内カルシウムレベルを増大することが知られている。
【０１８５】
図１に示したように、パネル中に存在する２５の苦味受容体細胞株はすべて、機能検定において均一に、イソプロテレノールに応答する。２５の細胞株の各々に関して、ＥＣ５０値は約４．９±０．４１ｎＭであったが、これは、公表文献値とほぼ一致する。ＥＣ５０値は、２５のクローン細胞株間で顕著な再現可能性を示し、苦味細胞株のパネルが機能検定のために有用であることを確証する。
実施例２ ＫＣｌに応答する苦味受容体の同定
【０１８６】
ＫＣｌに対して感受性で、ＫＣｌに起因する苦味を仲介すると思われる受容体組を同定するために、２５の苦味受容体発現細胞株の全パネルを、独立して且つ同時に、２０ｍＭ  ＫＣｌに曝露した。上記の蛍光レポーター系を用いて、細胞内カルシウムにおける変化により、苦味受容体活性化を測定した。図２に示したように、２５のうち６つの苦味受容体発現細胞株だけが、ＫＣｌ刺激に対して強力に且つ特異的に応答した。他の１９細胞株においては、ＫＣｌは、弱いまたはバックグラウンド応答を引き出した。ＫＣｌは、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体活性を誘導した（図２および６）。ＫＣｌは、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０またはＴＡＳ２Ｒ５５苦味受容体活性を誘導しなかった（図２および６）。これまで、目下オーファン化されているＴＡＳ２Ｒ６０に関して同定されたリガンドはなかった。
【０１８７】
ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４およびＴＡＳ２Ｒ６０によるＫＣｌ誘導シグナル伝達をさらに特性化するために、上記のように漸増濃度のＫＣｌでそれらを刺激し、ＥＣ５０値を算定することにより、受容体の各々のＫＣｌ活性化を測定することによって、機能プロフィルを作成した。図３に示したように、各細胞株に関するＥＣ５０値は、約５〜１５ｍＭであった。受容体およびリガンドの性質の差のために、ＴＡＳ２Ｒ活性検定における用量‐応答曲線は、図１における用量‐応答曲線と直接的に比較可能でない。
実施例３ 乳酸カリウムに応答する苦味受容体の同定
【０１８８】
乳酸カリウムに対して感受性で、乳酸カリウムに起因する苦味を仲介すると思われる受容体組を同定するために、２５の苦味受容体発現細胞株の全パネルを、独立して且つ同時に、２０ｍＭ  乳酸カリウムに曝露した。上記の蛍光レポーター系を用いて、細胞内カルシウムにおける変化により、苦味受容体活性化を測定した。図４に示したように、２５のうち７つの苦味受容体発現細胞株だけが、乳酸カリウム刺激に対して強力に且つ特異的に応答した。他の１８の細胞株においては、乳酸カリウムは、弱いまたはバックグラウンド応答を引き出した。乳酸カリウムは、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ４４、ＴＡＳ２Ｒ４６およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体活性を誘導した（図４および６）。乳酸カリウムは、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０およびＴＡＳ２Ｒ５５苦味受容体活性を誘導しなかった（図４および６）。これまで、目下オーファン化されているＴＡＳ２Ｒ６０に関して同定されたリガンドはなかった。
実施例４ アセスルファムＫに応答する苦味受容体の同定
【０１８９】
アセスルファムＫに対して感受性で、アセスルファムＫに起因する苦味を仲介すると思われる受容体組を同定するために、２５の苦味受容体発現細胞株の全パネルを、独立して且つ同時に、２０ｍＭアセスルファムＫに曝露した。上記の蛍光レポーター系を用いて、細胞内カルシウムにおける変化により、苦味受容体活性化を測定した。図５に示したように、２５のうち７つの苦味受容体発現細胞株だけが、アセスルファムＫ刺激に対して強力に且つ特異的に応答した。他の１８の細胞株においては、アセスルファムＫは、弱いまたはバックグラウンド応答を引き出した。アセスルファムＫは、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６およびＴＡＳ２Ｒ４４苦味受容体活性を誘導した（図５および６）。アセスルファムＫは、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ４７、ＴＡＳ２Ｒ４８、ＴＡＳ２Ｒ４９、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ５５およびＴＡＳ２Ｒ６０苦味受容体活性を誘導しなかった（図５および６）。
［配列表］
【０１９０】
ヒトＧＮＡ１５
ＭＡＲＳＬＴＷＲＣＣＰＷＣＬＴＥＤＥＫＡＡＡＲＶＤＱＥＩＮＲＩＬＬＥＱＫＫＱＤＲＧＥＬＫＬＬＬＬＧＰＧＥＳＧＫＳＴＦＩＫＱＭＲＩＩＨＧＡＧＹＳＥＥＥＲＫＧＦＲＰＬＶＹＱＮＩＦＶＳＭＲＡＭＩＥＡＭＥＲＬＱＩＰＦＳＲＰＥＳＫＨＨＡＳＬＶＭＳＱＤＰＹＫＶＴＴＦＥＫＲＹＡＡＡＭＱＷＬＷＲＤＡＧＩＲＡＣＹＥＲＲＲＥＦＨＬＬＤＳＡＶＹＹＬＳＨＬＥＲＩＴＥＥＧＹＶＰＴＡＱＤＶＬＲＳＲＭＰＴＴＧＩＮＥＹＣＦＳＶＱＫＴＮＬＲＩＶＤＶＧＧＱＫＳＥＲＫＫＷＩＨＣＦＥＮＶＩＡＬＩＹＬＡＳＬＳＥＹＤＱＣＬＥＥＮＮＱＥＮＲＭＫＥＳＬＡＬＦＧＴＩＬＥＬＰＷＦＫＳＴＳＶＩＬＦＬＮＫＴＤＩＬＥＥＫＩＰＴＳＨＬＡＴＹＦＰＳＦＱＧＰＫＱＤＡＥＡＡＫＲＦＩＬＤＭＹＴＲＭＹＴＧＣＶＤＧＰＥＧＳＫＫＧＡＲＳＲＲＬＦＳＨＹＴＣＡＴＤＴＱＮＩＲＫＶＦＫＤＶＲＤＳＶＬＡＲＹＬＤＥＩＮＬＬ              （配列番号１）
【０１９１】
ＴＡＳ２Ｒ１  ＣＤＳ
ＡＴＧＣＴＡＧＡＧＴＣＴＣＡＣＣＴＣＡＴＴＡＴＣＴＡＴＴＴＴＣＴＴＣＴＴＧＣＡＧＴＧＡＴＡＣＡＡＴＴＴＣＴＴＣＴＴＧＧＧＡＴＴＴＴＣＡＣＡＡＡＴＧＧＣＡＴＣＡＴＴＧＴＧＧＴＧＧＴＧＡＡＴＧＧＣＡＴＴＧＡＣＴＴＧＡＴＣＡＡＧＣＡＣＡＧＡＡＡＡＡＴＧＧＣＴＣＣＧＣＴＧＧＡＴＣＴＣＣＴＴＣＴＴＴＣＴＴＧＴＣＴＧＧＣＡＧＴＴＴＣＴＡＧＡＡＴＴＴＴＴＣＴＧＣＡＧＴＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣＴＡＣＧＴＴＡＡＴＧＴＧＡＴＴＧＴＴＡＴＣＴＴＣＴＴＣＡＴＡＧＡＡＴＴＣＡＴＣＡＴＧＴＧＴＴＣＴＧＣＧＡＡＴＴＧＴＧＣＡＡＴＴＣＴＣＴＴＡＴＴＴＡＴＡＡＡＴＧＡＡＴＴＧＧＡＡＣＴＴＴＧＧＣＴＴＧＣＣＡＣＡＴＧＧＣＴＣＧＧＣＧＴＴＴＴＣＴＡＴＴＧＴＧＣＣＡＡＧＧＴＴＧＣＣＡＧＣＧＴＣＣＧＴＣＡＣＣＣＡＣＴＣＴＴＣＡＴＣＴＧＧＴＴＧＡＡＧＡＴＧＡＧＧＡＴＡＴＣＣＡＡＧＣＴＧＧＴＣＣＣＡＴＧＧＡＴＧＡＴＣＣＴＧＧＧＧＴＣＴＣＴＧＣＴＡＴＡＴＧＴＡＴＣＴＡＴＧＡＴＴＴＧＴＧＴＴＴＴＣＣＡＴＡＧＣＡＡＡＴＡＴＧＣＡＧＧＧＴＴＴＡＴＧＧＴＣＣＣＡＴＡＣＴＴＣＣＴＡＡＧＧＡＡＡＴＴＴＴＴＣＴＣＣＣＡＡＡＡＴＧＣＣＡＣＡＡＴＴＣＡＡＡＡＡＧＡＡＧＡＴＡＣＡＣＴＧＧＣＴＡＴＡＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＣＴＴＴＴＧＴＴＧＣＴＧＡＧＴＴＣＴＣＡＧＴＧＣＣＡＴＴＧＣＴＴＡＴＣＴＴＣＣＴＴＴＴＴＧＣＴＧＴＴＴＴＧＣＴＣＴＴＧＡＴＴＴＴＣＴＣＴＣＴＧＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＣＣＣＧＧＣＡＡＡＴＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＧＴＧＧＣＣＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＴＴＣＣＴＧＧＣＡＧＧＧＧＴＧＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＣＧＣＧＴＴＧＣＴＧＴＣＴＡＴＣＣＴＧＴＣＣＴＴＣＣＴＧＡＴＣＣＴＣＴＡＣＴＴＣＴＣＣＣＡＣＴＧＣＡＴＧＡＴＡＡＡＡＧＴＴＴＴＴＣＴＣＴＣＴＴＣＴＣＴＡＡＡＧＴＴＴＣＡＣＡＴＣＡＧＡＡＧＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＴＧＴＴＣＴＴＣＡＴＣＣＴＴＧＴＧＡＴＴＧＧＴＧＴＡＴＡＣＣＣＴＴＣＴＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＴＣＡＴＣＴＴＡＡＴＴＴＴＡＧＧＡＡＡＴＣＣＴＡＡＡＴＴＧＡＡＡＣＡＡＡＡＴＧＣＡＡＡＡＡＡＧＴＴＣＣＴＣＣＴＣＣＡＣＡＧＴＡＡＧＴＧＣＴＧＴＣＡＧＴＧＡ              （配列番号２）
【０１９２】
ＴＡＳ２Ｒ３  ＣＤＳ
ＡＴＧＡＴＧＧＧＡＣＴＣＡＣＣＧＡＧＧＧＧＧＴＧＴＴＣＣＴＧＡＴＴＣＴＧＴＣＴＧＧＣＡＣＴＣＡＧＴＴＣＡＣＡＣＴＧＧＧＡＡＴＴＣＴＧＧＴＣＡＡＴＴＧＴＴＴＣＡＴＴＧＡＧＴＴＧＧＴＣＡＡＴＧＧＴＡＧＣＡＧＣＴＧＧＴＴＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＡＧＡＡＴＧＴＣＴＴＴＧＴＣＴＧＡＣＴＴＣＡＴＣＡＴＣＡＣＣＡＣＣＣＴＧＧＣＡＣＴＣＴＴＧＡＧＧＡＴＣＡＴＴＣＴＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＴＣＴＴＧＡＣＴＧＡＴＡＧＴＴＴＴＴＴＡＡＴＡＧＡＡＴＴＣＴＣＴＣＣＣＡＡＣＡＣＡＣＡＴＧＡＴＴＣＡＧＧＧＡＴＡＡＴＡＡＴＧＣＡＡＡＴＴＡＴＴＧＡＴＧＴＴＴＣＣＴＧＧＡＣＡＴＴＴＡＣＡＡＡＣＣＡＴＣＴＧＡＧＣＡＴＴＴＧＧＣＴＴＧＣＣＡＣＣＴＧＴＣＴＴＧＧＴＧＴＣＣＴＣＴＡＣＴＧＣＣＴＧＡＡＡＡＴＣＧＣＣＡＧＴＴＴＣＴＣＴＣＡＣＣＣＣＡＣＡＴＴＣＣＴＣＴＧＧＣＴＣＡＡＧＴＧＧＡＧＡＧＴＴＴＣＴＡＧＧＧＴＧＡＴＧＧＴＡＴＧＧＡＴＧＣＴＧＴＴＧＧＧＴＧＣＡＣＴＧＣＴＣＴＴＡＴＣＣＴＧＴＧＧＴＡＧＴＡＣＣＧＣＡＴＣＴＣＴＧＡＴＣＡＡＴＧＡＧＴＴＴＡＡＧＣＴＣＴＡＴＴＣＴＧＴＣＴＴＴＡＧＧＧＧＡＡＴＴＧＡＧＧＣＣＡＣＣＡＧＧＡＡＴＧＴＧＡＣＴＧＡＡＣＡＣＴＴＣＡＧＡＡＡＧＡＡＧＡＧＧＡＧＴＧＡＧＴＡＴＴＡＴＣＴＧＡＴＣＣＡＴＧＴＴＣＴＴＧＧＧＡＣＴＣＴＧＴＧＧＴＡＣＣＴＧＣＣＴＣＣＣＴＴＡＡＴＴＧＴＧＴＣＣＣＴＧＧＣＣＴＣＣＴＡＣＴＣＴＴＴＧＣＴＣＡＴＣＴＴＣＴＣＣＣＴＧＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＣＡＣＧＧＣＡＧＡＴＧＣＴＧＣＡＡＡＡＴＧＧＧＡＣＡＡＧＣＴＣＣＡＧＡＧＡＴＣＣＡＡＣＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＣＡＣＡＡＧＡＧＧＧＣＣＡＴＣＡＧＡＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＣＣＴＴＣＴＴＣＴＴＴＣＴＣＴＴＣＴＴＡＣＴＴＴＡＣＴＴＴＣＴＴＧＣＴＴＴＣＴＴＡＡＴＴＧＣＡＴＣＡＴＴＴＧＧＴＡＡＴＴＴＣＣＴＡＣＣＡＡＡＡＡＣＣＡＡＧＡＴＧＧＣＴＡＡＧＡＴＧＡＴＴＧＧＴＧＡＡＧＴＡＡＴＧＡＣＡＡＴＧＴＴＴＴＡＴＣＣＴＧＣＴＧＧＣＣＡＣＴＣＡＴＴＴＡＴＴＣＴＣＡＴＴＣＴＧＧＧＧＡＡＣＡＧＴＡＡＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＡＣＡＴＴＴＧＴＡＧＴＧＡＴＧＣＴＣＣＧＧＴＧＴＧＡＧＴＣＴＧＧＴＣＡＴＣＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＴＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＣＡＴＴＴＴＣＴＣＴＴＡＧ              （配列番号３）
【０１９３】
ＴＡＳ２Ｒ４  ＣＤＳ
ＡＴＧＣＴＴＣＧＧＴＴＡＴＴＣＴＡＴＴＴＣＴＣＴＧＣＴＡＴＴＡＴＴＧＣＣＴＣＡＧＴＴＡＴＴＴＴＡＡＡＴＴＴＴＧＴＡＧＧＡＡＴＣＡＴＴＡＴＧＡＡＴＣＴＧＴＴＴＡＴＴＡＣＡＧＴＧＧＴＣＡＡＴＴＧＣＡＡＡＡＣＴＴＧＧＧＴＣＡＡＡＡＧＣＣＡＴＡＧＡＡＴＣＴＣＣＴＣＴＴＣＴＧＡＴＡＧＧＡＴＴＣＴＧＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＧＣＡＴＣＡＣＣＡＧＧＴＴＴＣＴＴＡＴＧＣＴＧＧＧＡＣＴＡＴＴＴＣＴＧＧＴＧＡＡＣＡＣＣＡＴＣＴＡＣＴＴＣＧＴＣＴＣＴＴＣＡＡＡＴＡＣＧＧＡＡＡＧＧＴＣＡＧＴＣＴＡＣＣＴＧＴＣＴＧＣＴＴＴＴＴＴＴＧＴＧＴＴＧＴＧＴＴＴＣＡＴＧＴＴＴＴＴＧＧＡＣＴＣＧＡＧＣＡＧＴＧＴＣＴＧＧＴＴＴＧＴＧＡＣＣＴＴＧＣＴＣＡＡＴＡＴＣＴＴＧＴＡＣＴＧＴＧＴＧＡＡＧＡＴＴＡＣＴＡＡＣＴＴＣＣＡＡＣＡＣＴＣＡＧＴＧＴＴＴＣＴＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＧＧＡＡＴＡＴＣＴＣＣＣＣＡＡＡＧＡＴＣＣＣＣＡＧＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＧＴＧＴＧＣＴＧＡＴＴＴＣＴＧＣＴＴＴＣＡＣＣＡＣＴＴＧＣＣＴＧＴＡＣＡＴＣＡＣＧＣＴＴＡＧＣＣＡＧＧＣＡＴＣＡＣＣＴＴＴＴＣＣＴＧＡＡＣＴＴＧＴＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＴＡＡＣＡＣＡＴＣＡＴＴＴＡＡＴＡＴＣＡＧＴＧＡＧＧＧＣＡＴＣＴＴＧＴＣＴＴＴＡＧＴＧＧＴＴＴＣＴＴＴＧＧＴＣＴＴＧＡＧＣＴＣＡＴＣＴＣＴＣＣＡＧＴＴＣＡＴＣＡＴＴＡＡＴＧＴＧＡＣＴＴＣＴＧＣＴＴＣＣＴＴＧＣＴＡＡＴＡＣＡＣＴＣＣＴＴＧＡＧＧＡＧＡＣＡＴＡＴＡＣＡＧＡＡＧＡＴＧＣＡＧＡＡＡＡＡＴＧＣＣＡＣＴＧＧＴＴＴＣＴＧＧＡＡＴＣＣＣＣＡＧＡＣＧＧＡＡＧＣＴＣＡＴＧＴＡＧＧＴＧＣＴＡＴＧＡＡＧＣＴＧＡＴＧＧＴＣＴＡＴＴＴＣＣＴＣＡＴＣＣＴＣＴＡＣＡＴＴＣＣＡＴＡＴＴＣＡＧＴＴＧＣＴＡＣＣＣＴＧＧＴＣＣＡＧＴＡＴＣＴＣＣＣＣＴＴＴＴＡＴＧＣＡＧＧＧＡＴＧＧＡＴＡＴＧＧＧＧＡＣＣＡＡＡＴＣＣＡＴＴＴＧＴＣＴＧＡＴＴＴＴＴＧＣＣＡＣＣＣＴＴＴＡＣＴＣＴＣＣＡＧＧＡＣＡＴＴＣＴＧＴＴＣＴＣＡＴＴＡＴＴＡＴＣＡＣＡＣＡＴＣＣＴＡＡＡＣＴＧＡＡＡＡＣＡＡＣＡＧＣＡＡＡＧＡＡＧＡＴＴＣＴＴＴＧＴＴＴＣＡＡＡＡＡＡＴＡＧ              （配列番号４）
【０１９４】
ＴＡＳ２Ｒ５  ＣＤＳ
ＡＴＧＣＴＧＡＧＣＧＣＴＧＧＣＣＴＡＧＧＡＣＴＧＣＴＧＡＴＧＣＴＧＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＴＴＧＡＡＴＴＴＣＴＣＡＴＣＧＧＴＴＴＡＡＴＴＧＧＡＡＡＴＧＧＡＡＧＣＣＴＧＧＴＧＧＴＣＴＧＧＡＧＴＴＴＴＡＧＡＧＡＡＴＧＧＡＴＣＡＧＡＡＡＡＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＣＣＴＣＡＴＡＴＡＡＣＣＴＣＡＴＴＡＴＣＣＴＧＧＧＣＣＴＧＧＣＴＧＧＣＴＧＣＣＧＡＴＴＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＴＧＧＣＴＧＡＴＣＡＴＴＴＴＧＧＡＣＴＴＡＡＧＣＴＴＧＴＴＴＣＣＡＣＴＴＴＴＣＣＡＧＡＧＣＡＧＣＣＧＴＴＧＧＣＴＴＣＧＣＴＡＴＣＴＴＡＧＴＡＴＣＴＴＣＴＧＧＧＴＣＣＴＧＧＴＡＡＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＣＴＴＡＴＧＧＴＴＴＧＣＣＡＣＣＴＴＣＣＴＣＡＧＴＧＴＣＴＴＣＴＡＴＴＧＣＡＡＧＡＡＧＡＴＣＡＣＧＡＣＣＴＴＣＧＡＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＡＣＴＴＧＴＧＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＡＧＧＧＣＣＴＡＴＡＡＣＣＴＧＡＧＴＣＴＣＴＧＧＴＧＣＣＴＴＣＴＧＧＧＣＴＡＣＴＴＴＡＴＡＡＴＣＡＡＴＴＴＧＴＴＡＣＴＴＡＣＡＧＴＣＣＡＡＡＴＴＧＧＣＴＴＡＡＣＡＴＴＣＴＡＴＣＡＴＣＣＴＣＣＣＣＡＡＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＣＡＴＴＣＧＧＴＡＴＣＣＣＴＴＴＧＡＡＡＧＣＴＧＧＣＡＧＴＡＣＣＴＧＴＡＴＧＣＡＴＴＴＣＡＧＣＴＣＡＡＴＴＣＡＧＧＡＡＧＴＴＡＴＴＴＧＣＣＴＴＴＡＧＴＧＧＴＧＴＴＴＣＴＴＧＴＴＴＣＣＴＣＴＧＧＧＡＴＧＣＴＧＡＴＴＧＴＣＴＣＴＴＴＧＴＡＴＡＣＡＣＡＣＣＡＣＡＡＧＡＡＧＡＴＧＡＡＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＡＧＧＡＧＧＧＡＴＧＴＣＣＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＴＣＡＣＡＴＣＡＣＴＧＣＧＣＴＧＡＡＧＴＣＣＴＴＧＧＧＣＴＧＣＴＴＣＣＴＣＴＴＡＣＴＴＣＡＣＣＴＧＧＴＴＴＡＴＡＴＣＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＡＡＧＡＣＴＴＡＴＣＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＣＡＣＣＡＧＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＧＧＧＡＧＡＣＡＣＴＣＡＴＧＧＣＡＧＣＣＴＡＴＣＣＴＴＣＴＣＴＴＣＡＴＴＣＴＣＴＣＡＴＡＴＴＧＡＴＣＡＴＧＧＧＧＡＴＴＣＣＴＡＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＣＴＴＧＴＣＡＧＡＡＧＡＴＣＣＴＧＴＧＧＡＡＧＡＣＡＧＴＧＴＧＴＧＣＴＣＧＧＡＧＡＴＧＣＴＧＧＧＧＣＣＣＡＴＧＡ              （配列番号５）
【０１９５】
ＴＡＳ２Ｒ７  ＣＤＳ
ＡＴＧＧＣＡＧＡＴＡＡＡＧＴＧＣＡＧＡＣＴＡＣＴＴＴＡＴＴＧＴＴＣＴＴＡＧＣＡＧＴＴＧＧＡＧＡＧＴＴＴＴＣＡＧＴＧＧＧＧＡＴＣＴＴＡＧＧＧＡＡＴＧＣＡＴＴＣＡＴＴＧＧＡＴＴＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＡＴＧＧＡＴＴＧＧＧＴＣＡＡＧＡＡＧＡＧＧＡＡＡＡＴＴＧＣＣＴＣＣＡＴＴＧＡＴＴＴＡＡＴＣＣＴＣＡＣＡＡＧＴＣＴＧＧＣＣＡＴＡＴＣＣＡＧＡＡＴＴＴＧＴＣＴＡＴＴＧＴＧＣＧＴＡＡＴＡＣＴＡＴＴＡＧＡＴＴＧＴＴＴＴＡＴＡＴＴＧＧＴＧＣＴＡＴＡＴＣＣＡＧＡＴＧＴＣＴＡＴＧＣＣＡＣＴＧＧＴＡＡＡＧＡＡＡＴＧＡＧＡＡＴＣＡＴＴＧＡＣＴＴＣＴＴＣＴＧＧＡＣＡＣＴＡＡＣＣＡＡＴＣＡＴＴＴＡＡＧＴＡＴＣＴＧＧＴＴＴＧＣＡＡＣＣＴＧＣＣＴＣＡＧＣＡＴＴＴＡＣＴＡＴＴＴＣＴＴＣＡＡＧＡＴＡＧＧＴＡＡＴＴＴＣＴＴＴＣＡＣＣＣＡＣＴＴＴＴＣＣＴＣＴＧＧＡＴＧＡＡＧＴＧＧＡＧＡＡＴＴＧＡＣＡＧＧＧＴＧＡＴＴＴＣＣＴＧＧＡＴＴＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＧＣＧＴＧＧＴＴＣＴＣＴＣＴＧＴＧＴＴＴＡＴＴＡＧＣＣＴＴＣＣＡＧＣＣＡＣＴＧＡＧＡＡＴＴＴＧＡＡＣＧＣＴＧＡＴＴＴＣＡＧＧＴＴＴＴＧＴＧＴＧＡＡＧＧＣＡＡＡＧＡＧＧＡＡＡＡＣＡＡＡＣＴＴＡＡＣＴＴＧＧＡＧＴＴＧＣＡＧＡＧＴＡＡＡＴＡＡＡＡＣＴＣＡＡＣＡＴＧＣＴＴＣＴＡＣＣＡＡＧＴＴＡＴＴＴＣＴＣＡＡＣＣＴＧＧＣＡＡＣＧＣＴＧＣＴＣＣＣＣＴＴＴＴＧＴＧＴＧＴＧＣＣＴＡＡＴＧＴＣＣＴＴＴＴＴＣＣＴＣＴＴＧＡＴＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＣＧＧＡＧＡＣＡＴＡＴＣＡＧＧＣＧＡＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＴＧＣＣＡＣＡＧＧＧＴＧＣＡＧＡＧＡＣＣＣＣＡＧＣＡＣＡＧＡＡＧＣＣＣＡＴＧＴＧＡＧＡＧＣＣＣＴＧＡＡＡＧＣＴＧＴＣＡＴＴＴＣＣＴＴＣＣＴＴＣＴＣＣＴＣＴＴＴＡＴＴＧＣＣＴＡＣＴＡＴＴＴＧＴＣＣＴＴＴＣＴＣＡＴＴＧＣＣＡＣＣＴＣＣＡＧＣＴＡＣＴＴＴＡＴＧＣＣＡＧＡＧＡＣＧＧＡＡＴＴＡＧＣＴＧＴＧＡＴＴＴＴＴＧＧＴＧＡＧＴＣＣＡＴＡＧＣＴＣＴＡＡＴＣＴＡＣＣＣＣＴＣＡＡＧＴＣＡＴＴＣＡＴＴＴＡＴＣＣＴＡＡＴＡＣＴＧＧＧＧＡＡＣＡＡＴＡＡＡＴＴＡＡＧＡＣＡＴＧＣＡＴＣＴＣＴＡＡＡＧＧＴＧＡＴＴＴＧＧＡＡＡＧＴＡＡＴＧＴＣＴＡＴＴＣＴＡＡＡＡＧＧＡＡＧＡＡＡＡＴＴＣＣＡＡＣＡＡＣＡＴＡＡＡＣＡＡＡＴＣＴＧＡ              （配列番号６）
【０１９６】
ＴＡＳ２Ｒ８  ＣＤＳ
ＡＴＧＴＴＣＡＧＴＣＣＴＧＣＡＧＡＴＡＡＣＡＴＣＴＴＴＡＴＡＡＴＣＣＴＡＡＴＡＡＣＴＧＧＡＧＡＡＴＴＣＡＴＡＣＴＡＧＧＡＡＴＡＴＴＧＧＧＧＡＡＴＧＧＡＴＡＣＡＴＴＧＣＡＣＴＡＧＴＣＡＡＣＴＧＧＡＴＴＧＡＣＴＧＧＡＴＴＡＡＧＡＡＧＡＡＡＡＡＧＡＴＴＴＣＣＡＣＡＧＴＴＧＡＣＴＡＣＡＴＣＣＴＴＡＣＣＡＡＴＴＴＡＧＴＴＡＴＣＧＣＣＡＧＡＡＴＴＴＧＴＴＴＧＡＴＣＡＧＴＧＴＡＡＴＧＧＴＴＧＴＡＡＡＴＧＧＣＡＴＴＧＴＡＡＴＡＧＴＡＣＴＧＡＡＣＣＣＡＧＡＴＧＴＴＴＡＴＡＣＡＡＡＡＡＡＴＡＡＡＣＡＡＣＡＧＡＴＡＧＴＣＡＴＴＴＴＴＡＣＣＴＴＣＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＣＣＡＡＣＴＡＣＴＴＡＡＡＴＡＴＧＴＧＧＡＴＴＡＣＣＡＣＣＴＧＣＣＴＴＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＡＴＴＴＴＣＴＧＡＡＧＡＴＡＧＣＣＡＧＴＴＣＣＴＣＴＣＡＴＣＣＡＣＴＴＴＴＴＣＴＣＴＧＧＣＴＧＡＡＧＴＧＧＡＡＡＡＴＴＧＡＴＡＴＧＧＴＧＧＴＧＣＡＣＴＧＧＡＴＣＣＴＧＣＴＧＧＧＡＴＧＣＴＴＴＧＣＣＡＴＴＴＣＣＴＴＧＴＴＧＧＴＣＡＧＣＣＴＴＡＴＡＧＣＡＧＣＡＡＴＡＧＴＡＣＴＧＡＧＴＴＧＴＧＡＴＴＡＴＡＧＧＴＴＴＣＡＴＧＣＡＡＴＴＧＣＣＡＡＡＣＡＴＡＡＡＡＧＡＡＡＣＡＴＴＡＣＴＧＡＡＡＴＧＴＴＣＣＡＴＧＴＧＡＧＴＡＡＡＡＴＡＣＣＡＴＡＣＴＴＴＧＡＡＣＣＣＴＴＧＡＣＴＣＴＣＴＴＴＡＡＣＣＴＧＴＴＴＧＣＡＡＴＴＧＴＣＣＣＡＴＴＴＡＴＴＧＴＧＴＣＡＣＴＧＡＴＡＴＣＡＴＴＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＧＴＡＡＧＡＴＣＴＴＴＡＴＧＧＡＧＡＣＡＴＡＣＣＡＡＧＣＡＡＡＴＡＡＡＡＣＴＣＴＡＴＧＣＴＡＣＣＧＧＣＡＧＴＡＧＡＧＡＣＣＣＣＡＧＣＡＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＴＧＴＧＡＧＡＧＣＣＡＴＴＡＡＡＡＣＴＡＴＧＡＣＴＴＣＡＴＴＴＡＴＣＴＴＣＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＴＡＴＡＣＴＡＴＡＴＴＴＣＴＴＣＴＡＴＴＴＴＧＡＴＧＡＣＣＴＴＴＡＧＣＴＡＴＣＴＴＡＴＧＡＣＡＡＡＡＴＡＣＡＡＧＴＴＡＧＣＴＧＴＧＧＡＧＴＴＴＧＧＡＧＡＧＡＴＴＧＣＡＧＣＡＡＴＴＣＴＣＴＡＣＣＣＣＴＴＧＧＧＴＣＡＣＴＣＡＣＴＴＡＴＴＴＴＡＡＴＴＧＴＴＴＴＡＡＡＴＡＡＴＡＡＡＣＴＧＡＧＧＣＡＧＡＣＡＴＴＴＧＴＣＡＧＡＡＴＧＣＴＧＡＣＡＴＧＴＡＧＡＡＡＡＡＴＴＧＣＣＴＧＣＡＴＧＡＴＡＴＧＡ       （配列番号７）
【０１９７】
ＴＡＳ２Ｒ９  ＣＤＳ
ＡＴＧＣＣＡＡＧＴＧＣＡＡＴＡＧＡＧＧＣＡＡＴＡＴＡＴＡＴＴＡＴＴＴＴＡＡＴＴＧＣＴＧＧＴＧＡＡＴＴＧＡＣＣＡＴＡＧＧＧＡＴＴＴＧＧＧＧＡＡＡＴＧＧＡＴＴＣＡＴＴＧＴＡＣＴＡＧＴＴＡＡＣＴＧＣＡＴＴＧＡＣＴＧＧＣＴＣＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＡＴＡＴＴＴＣＣＴＴＧＡＴＴＧＡＣＡＴＣＡＴＣＣＴＧＡＴＣＡＧＣＴＴＧＧＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＡＴＣＴＧＴＣＴＧＣＴＧＴＧＴＧＴＡＡＴＡＴＣＡＴＴＡＧＡＴＧＧＣＴＴＣＴＴＴＡＴＧＣＴＧＣＴＣＴＴＴＣＣＡＧＧＴＡＣＡＴＡＴＧＧＣＡＡＴＡＧＣＧＴＧＣＴＡＧＴＡＡＧＣＡＴＴＧＴＧＡＡＴＧＴＴＧＴＣＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＣＣＡＡＴＡＡＴＴＣＡＡＧＴＣＴＣＴＧＧＴＴＴＡＣＴＴＣＴＴＧＣＣＴＣＡＧＴＡＴＣＴＴＣＴＡＴＴＴＡＣＴＣＡＡＧＡＴＡＧＣＣＡＡＴＡＴＡＴＣＧＣＡＣＣＣＡＴＴＴＴＴＣＴＴＣＴＧＧＣＴＧＡＡＧＣＴＡＡＡＧＡＴＣＡＡＣＡＡＧＧＴＣＡＴＧＣＴＴＧＣＧＡＴＴＣＴＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＴＴＴＣＴＴＡＴＣＴＣＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＡＧＴＧＴＴＣＣＡＡＡＧＡＡＴＧＡＴＧＡＴＡＴＧＴＧＧＴＡＴＣＡＣＣＴＴＴＴＣＡＡＡＧＴＣＡＧＴＣＡＴＧＡＡＧＡＡＡＡＣＡＴＴＡＣＴＴＧＧＡＡＡＴＴＣＡＡＡＧＴＧＡＧＴＡＡＡＡＴＴＣＣＡＧＧＴＡＣＴＴＴＣＡＡＡＣＡＧＴＴＡＡＣＣＣＴＧＡＡＣＣＴＧＧＧＧＧＴＧＡＴＧＧＴＴＣＣＣＴＴＴＡＴＣＣＴＴＴＧＣＣＴＧＡＴＣＴＣＡＴＴＴＴＴＣＴＴＧＴＴＡＣＴＴＴＴＣＴＣＣＣＴＡＧＴＴＡＧＡＣＡＣＡＣＣＡＡＧＣＡＧＡＴＴＣＧＡＣＴＧＣＡＴＧＣＴＡＣＡＧＧＧＴＴＣＡＧＡＧＡＣＣＣＣＡＧＴＡＣＡＧＡＧＧＣＣＣＡＣＡＴＧＡＧＧＧＣＣＡＴＡＡＡＧＧＣＡＧＴＧＡＴＣＡＴＣＴＴＴＣＴＧＣＴＣＣＴＣＣＴＣＡＴＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＣＣＡＧＴＣＴＴＴＣＴＴＧＴＴＡＴＧＡＣＣＴＣＴＡＧＣＧＣＴＣＴＧＡＴＴＣＣＴＣＡＧＧＧＡＡＡＡＴＴＡＧＴＧＴＴＧＡＴＧＡＴＴＧＧＴＧＡＣＡＴＡＧＴＡＡＣＴＧＴＣＡＴＴＴＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＣＣＡＴＴＣＡＴＴＣＡＴＴＣＴＡＡＴＴＡＴＧＧＧＡＡＡＴＡＧＣＡＡＧＴＴＧＡＧＧＧＡＡＧＣＴＴＴＴＣＴＧＡＡＧＡＴＧＴＴＡＡＧＡＴＴＴＧＴＧＡＡＧＴＧＴＴＴＣＣＴＴＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＡＧＣＣＴＴＴＴＧＴＴＣＣＡＴＡＧ    （配列番号８）
【０１９８】
ＴＡＳ２Ｒ１０  ＣＤＳ
ＡＴＧＣＴＡＣＧＴＧＴＡＧＴＧＧＡＡＧＧＣＡＴＣＴＴＣＡＴＴＴＴＴＧＴＴＧＴＡＧＴＴＡＧＴＧＡＧＴＣＡＧＴＧＴＴＴＧＧＧＧＴＴＴＴＧＧＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＴＡＴＴＧＧＡＣＴＴＧＴＡＡＡＣＴＧＣＡＴＴＧＡＣＴＧＴＧＣＣＡＡＧＡＡＴＡＡＧＴＴＡＴＣＴＡＣＧＡＴＴＧＧＣＴＴＴＡＴＴＣＴＣＡＣＣＧＧＣＴＴＡＧＣＴＡＴＴＴＣＡＡＧＡＡＴＴＴＴＴＣＴＧＡＴＡＴＧＧＡＴＡＡＴＡＡＴＴＡＣＡＧＡＴＧＧＡＴＴＴＡＴＡＣＡＧＡＴＡＴＴＣＴＣＴＣＣＡＡＡＴＡＴＡＴＡＴＧＣＣＴＣＣＧＧＴＡＡＣＣＴＡＡＴＴＧＡＡＴＡＴＡＴＴＡＧＴＴＡＣＴＴＴＴＧＧＧＴＡＡＴＴＧＧＴＡＡＴＣＡＡＴＣＡＡＧＴＡＴＧＴＧＧＴＴＴＧＣＣＡＣＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＴＣＴＴＣＴＡＴＴＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＡＧＣＡＡＡＴＴＴＴＴＣＣＡＡＣＴＡＣＡＴＡＴＴＴＣＴＣＴＧＧＴＴＧＡＡＧＡＧＣＡＧＡＡＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＴＣＴＴＣＣＣＴＴＣＡＴＧＡＴＡＧＴＡＴＴＣＴＴＡＣＴＴＡＴＴＴＣＡＴＣＧＴＴＡＣＴＴＡＡＴＴＴＴＧＣＡＴＡＣＡＴＴＧＣＧＡＡＧＡＴＴＣＴＴＡＡＴＧＡＴＴＡＴＡＡＡＡＴＧＡＡＧＡＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＴＧＧＧＡＴＣＴＣＡＡＣＡＴＧＴＡＴＡＡＡＡＧＴＧＡＡＴＡＣＴＴＴＡＴＴＡＡＡＣＡＧＡＴＴＴＴＧＣＴＡＡＡＴＣＴＧＧＧＡＧＴＣＡＴＴＴＴＣＴＴＣＴＴＴＡＣＡＣＴＡＴＣＣＣＴＡＡＴＴＡＣＡＴＧＴＡＴＴＴＴＴＴＴＡＡＴＣＡＴＴＴＣＣＣＴＴＴＧＧＡＧＡＣＡＣＡＡＣＡＧＧＣＡＧＡＴＧＣＡＡＴＣＡＡＡＴＧＴＧＡＣＡＧＧＡＴＴＧＡＧＡＧＡＣＴＣＣＡＡＣＡＣＡＧＡＡＧＣＴＣＡＴＧＴＧＡＡＧＧＣＡＡＴＧＡＡＡＧＴＴＴＴＧＡＴＡＴＣＴＴＴＣＡＴＣＡＴＣＣＴＣＴＴＴＡＴＣＴＴＧＴＡＴＴＴＴＡＴＡＧＧＣＡＴＧＧＣＣＡＴＡＧＡＡＡＴＡＴＣＡＴＧＴＴＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＡＡＡＣＡＡＡＣＴＧＣＴＧＣＴＴＡＴＧＴＴＴＧＧＡＡＴＧＡＣＡＡＣＣＡＣＡＧＣＣＡＴＣＴＡＴＣＣＣＴＧＧＧＧＴＣＡＣＴＣＡＴＴＴＡＴＣＴＴＡＡＴＴＣＴＡＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＡＡＡＧＣＡＡＧＣＣＴＣＴＴＴＧＡＧＧＧＴＡＣＴＧＣＡＧＣＡＡＴＴＧＡＡＧＴＧＣＴＧＴＧＡＧＡＡＡＡＧＧＡＡＡＡＡＴＣＴＣＡＧＡＧＴＣＡＣＡＴＡＧ              （配列番号９）
【０１９９】
ＴＡＳ２Ｒ１３  ＣＤＳ
ＡＴＧＧＡＡＡＧＴＧＣＣＣＴＧＣＣＧＡＧＴＡＴＣＴＴＣＡＣＴＣＴＴＧＴＡＡＴＡＡＴＴＧＣＡＧＡＡＴＴＣＡＴＡＡＴＴＧＧＧＡＡＴＴＴＧＡＧＣＡＡＴＧＧＡＴＴＴＡＴＡＧＴＡＣＴＧＡＴＣＡＡＣＴＧＣＡＴＴＧＡＣＴＧＧＧＴＣＡＧＴＡＡＡＡＧＡＧＡＧＣＴＧＴＣＣＴＣＡＧＴＣＧＡＴＡＡＡＣＴＣＣＴＣＡＴＴＡＴＣＴＴＧＧＣＡＡＴＣＴＣＣＡＧＡＡＴＴＧＧＧＣＴＧＡＴＣＴＧＧＧＡＡＡＴＡＴＴＡＧＴＡＡＧＴＴＧＧＴＴＴＴＴＡＧＣＴＣＴＧＣＡＴＴＡＴＣＴＡＧＣＣＡＴＡＴＴＴＧＴＧＴＣＴＧＧＡＡＣＡＧＧＡＴＴＡＡＧＡＡＴＴＡＴＧＡＴＴＴＴＴＡＧＣＴＧＧＡＴＡＧＴＴＴＣＴＡＡＴＣＡＣＴＴＣＡＡＴＣＴＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＣＡＡＴＣＴＴＣＡＧＣＡＴＣＴＴＴＴＡＴＴＴＧＣＴＣＡＡＡＡＴＡＧＣＧＡＧＴＴＴＣＴＣＴＡＧＣＣＣＴＧＣＴＴＴＴＣＴＣＴＡＴＴＴＧＡＡＧＴＧＧＡＧＡＧＴＡＡＡＣＡＡＡＧＴＧＡＴＴＣＴＧＡＴＧＡＴＡＣＴＧＣＴＡＧＧＡＡＣＣＴＴＧＧＴＣＴＴＣＴＴＡＴＴＴＴＴＡＡＡＴＣＴＧＡＴＡＣＡＡＡＴＡＡＡＣＡＴＧＣＡＴＡＴＡＡＡＡＧＡＣＴＧＧＣＴＧＧＡＣＣＧＡＴＡＴＧＡＡＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＣＴＴＧＧＡＡＴＴＴＣＡＧＴＡＴＧＡＧＴＧＡＣＴＴＴＧＡＡＡＣＡＴＴＴＴＣＡＧＴＧＴＣＧＧＴＣＡＡＡＴＴＣＡＣＴＡＴＧＡＣＴＡＴＧＴＴＣＡＧＴＣＴＡＡＣＡＣＣＡＴＴＴＡＣＴＧＴＧＧＣＣＴＴＣＡＴＣＴＣＴＴＴＴＣＴＣＣＴＧＴＴＡＡＴＴＴＴＣＴＣＣＣＴＧＣＡＧＡＡＡＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＡＡＡＴＧＣＡＡＣＴＣＡＡＴＴＡＣＡＡＡＧＧＡＣＡＣＡＧＡＧＡＣＣＣＣＡＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＣＣＡＴＡＣＡＡＡＴＧＣＣＴＴＧＡＡＡＡＴＴＧＴＧＡＴＣＴＣＡＴＴＣＣＴＴＴＴＡＴＴＣＴＡＴＧＣＴＡＧＴＴＴＣＴＴＴＣＴＡＴＧＴＧＴＴＣＴＣＡＴＡＴＣＡＴＧＧＡＴＴＴＣＴＧＡＧＣＴＧＴＡＴＣＡＧＡＡＣＡＣＡＧＴＧＡＴＣＴＡＣＡＴＧＣＴＴＴＧＴＧＡＧＡＣＧＡＴＴＧＧＡＧＴＣＴＴＣＴＣＴＣＣＴＴＣＡＡＧＣＣＡＣＴＣＣＴＴＴＣＴＴＣＴＧＡＴＴＣＴＡＧＧＡＡＡＣＧＣＴＡＡＧＴＴＡＡＧＡＣＡＧＧＣＣＴＴＴＣＴＴＴＴＧＧＴＧＧＣＡＧＣＴＡＡＧＧＴＡＴＧＧＧＣＴＡＡＡＣＧＡＴＧＡ              （配列番号１０）
【０２００】
ＴＡＳ２Ｒ１４  ＣＤＳ
ＡＴＧＧＧＴＧＧＴＧＴＣＡＴＡＡＡＧＡＧＣＡＴＡＴＴＴＡＣＡＴＴＣＧＴＴＴＴＡＡＴＴＧＴＧＧＡＡＴＴＴＡＴＡＡＴＴＧＧＡＡＡＴＴＴＡＧＧＡＡＡＴＡＧＴＴＴＣＡＴＡＧＣＡＣＴＧＧＴＧＡＡＣＴＧＴＡＴＴＧＡＣＴＧＧＧＴＣＡＡＧＧＧＡＡＧＡＡＡＧＡＴＣＴＣＴＴＣＧＧＴＴＧＡＴＣＧＧＡＴＣＣＴＣＡＣＴＧＣＴＴＴＧＧＣＡＡＴＣＴＣＴＣＧＡＡＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＴＴＧＧＴＴＡＡＴＡＴＴＣＧＧＡＡＧＣＴＧＧＴＧＴＧＴＧＴＣＴＧＴＧＴＴＴＴＴＣＣＣＡＧＣＴＴＴＡＴＴＴＧＣＣＡＣＴＧＡＡＡＡＡＡＴＧＴＴＣＡＧＡＡＴＧＣＴＴＡＣＴＡＡＴＡＴＣＴＧＧＡＣＡＧＴＧＡＴＣＡＡＴＣＡＴＴＴＴＡＧＴＧＴＣＴＧＧＴＴＡＧＣＴＡＣＡＧＧＣＣＴＣＧＧＴＡＣＴＴＴＴＴＡＴＴＴＴＣＴＣＡＡＧＡＴＡＧＣＣＡＡＴＴＴＴＴＣＴＡＡＣＴＣＴＡＴＴＴＴＴＣＴＣＴＡＣＣＴＡＡＡＧＴＧＧＡＧＧＧＴＴＡＡＡＡＡＧＧＴＧＧＴＴＴＴＧＧＴＧＣＴＧＣＴＴＣＴＴＧＴＧＡＣＴＴＣＧＧＴＣＴＴＣＴＴＧＴＴＴＴＴＡＡＡＴＡＴＴＧＣＡＣＴＧＡＴＡＡＡＣＡＴＣＣＡＴＡＴＡＡＡＴＧＣＣＡＧＴＡＴＣＡＡＴＧＧＡＴＡＣＡＧＡＡＧＡＡＡＣＡＡＧＡＣＴＴＧＣＡＧＴＴＣＴＧＡＴＴＣＡＡＧＴＡＡＣＴＴＴＡＣＡＣＧＡＴＴＴＴＣＣＡＧＴＣＴＴＡＴＴＧＴＡＴＴＡＡＣＣＡＧＣＡＣＴＧＴＧＴＴＣＡＴＴＴＴＣＡＴＡＣＣＣＴＴＴＡＣＴＴＴＧＴＣＣＣＴＧＧＣＡＡＴＧＴＴＴＣＴＴＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＴＣＴＣＣＡＴＧＴＧＧＡＡＡＣＡＴＣＧＣＡＡＧＡＡＧＡＴＧＣＡＧＣＡＣＡＣＴＧＴＣＡＡＡＡＴＡＴＣＣＧＧＡＧＡＣＧＣＣＡＧＣＡＣＣＡＡＡＧＣＣＣＡＣＡＧＡＧＧＡＧＴＴＡＡＡＡＧＴＧＴＧＡＴＣＡＣＴＴＴＣＴＴＣＣＴＡＣＴＣＴＡＴＧＣＣＡＴＴＴＴＣＴＣＴＣＴＧＴＣＴＴＴＴＴＴＣＡＴＡＴＣＡＧＴＴＴＧＧＡＣＣＴＣＴＧＡＡＡＧＧＴＴＧＧＡＧＧＡＡＡＡＴＣＴＡＡＴＴＡＴＴＣＴＴＴＣＣＣＡＧＧＴＧＡＴＧＧＧＡＡＴＧＧＣＴＴＡＴＣＣＴＴＣＡＴＧＴＣＡＣＴＣＡＴＧＴＧＴＴＣＴＧＡＴＴＣＴＴＧＧＡＡＡＣＡＡＧＡＡＧＣＴＧＡＧＡＣＡＧＧＣＣＴＣＴＣＴＧＴＣＡＧＴＧＣＴＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＡＧＧＴＡＣＡＴＧＴＴＣＡＡＡＧＡＴＧＧＧＧＡＧＣＣＣＴＣＡＧＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＡＴＴＴＡＧＡＧＡＡＴＣＡＴＣＴＴＧＡ           （配列番号１１）
【０２０１】
ＴＡＳ２Ｒ１６  ＣＤＳ
ＡＴＧＡＴＡＣＣＣＡＴＣＣＡＡＣＴＣＡＣＴＧＴＣＴＴＣＴＴＣＡＴＧＡＴＣＡＴＣＴＡＴＧＴＧＣＴＴＧＡＧＴＣＣＴＴＧＡＣＡＡＴＴＡＴＴＧＴＧＣＡＧＡＧＣＡＧＣＣＴＡＡＴＴＧＴＴＧＣＡＧＴＧＣＴＧＧＧＣＡＧＡＧＡＡＴＧＧＣＴＧＣＡＡＧＴＣＡＧＡＡＧＧＣＴＧＡＴＧＣＣＴＧＴＧＧＡＣＡＴＧＡＴＴＣＴＣＡＴＣＡＧＣＣＴＧＧＧＣＡＴＣＴＣＴＣＧＣＴＴＣＴＧＴＣＴＡＣＡＧＴＧＧＧＣＡＴＣＡＡＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＴＴＴＴＴＧＣＴＣＣＴＡＴＴＴＴＡＡＴＴＴＧＡＡＴＴＡＴＧＴＡＣＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＡＣＡＡＴＣＡＣＣＴＧＧＧＡＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＡＴＣＣＴＴＡＣＡＴＴＣＴＧＧＴＴＡＡＡＣＡＧＣＴＴＧＣＴＴＡＣＣＧＴＧＴＴＣＴＡＣＴＧＣＡＴＣＡＡＧＧＴＣＴＣＴＴＣＴＴＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＣＡＴＣＴＴＴＣＴＣＴＧＧＣＴＧＡＧＧＴＧＧＡＧＡＡＴＴＴＴＧＡＧＧＴＴＧＴＴＴＣＣＣＴＧＧＡＴＡＴＴＡＣＴＧＧＧＴＴＣＴＣＴＧＡＴＧＡＴＴＡＣＴＴＧＴＧＴＡＡＣＡＡＴＣＡＴＣＣＣＴＴＣＡＧＣＴＡＴＴＧＧＧＡＡＴＴＡＣＡＴＴＣＡＡＡＴＴＣＡＧＴＴＡＣＴＣＡＣＣＡＴＧＧＡＧＣＡＴＣＴＡＣＣＡＡＧＡＡＡＣＡＧＣＡＣＴＧＴＡＡＣＴＧＡＣＡＡＡＣＴＴＧＡＡＡＡＴＴＴＴＣＡＴＣＡＧＴＡＴＣＡＧＴＴＣＣＡＧＧＣＴＣＡＴＡＣＡＧＴＴＧＣＡＴＴＧＧＴＴＡＴＴＣＣＴＴＴＣＡＴＣＣＴＧＴＴＣＣＴＧＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＴＣＴＴＴＣＴＣＡＴＧＧＣＡＴＣＡＣＴＧＡＣＣＡＡＧＣＡＧＡＴＡＣＡＡＣＡＴＣＡＴＡＧＣＡＣＴＧＧＴＣＡＣＴＧＣＡＡＴＣＣＡＡＧＣＡＴＧＡＡＡＧＣＧＣＧＣＴＴＣＡＣＴＧＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＣＣＴＴＧＣＣＧＴＣＴＴＡＴＴＴＡＴＴＧＴＧＴＴＴＡＣＣＴＣＴＴＡＣＴＴＴＣＴＡＡＣＣＡＴＡＣＴＣＡＴＣＡＣＣＡＴＴＡＴＡＧＧＴＡＣＴＣＴＡＴＴＴＧＡＴＡＡＧＡＧＡＴＧＴＴＧＧＴＴＡＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＡＧＣＴＴＴＴＧＴＣＴＡＴＧＣＴＴＴＣＡＴＣＴＴＡＡＴＧＣＡＴＴＣＣＡＣＴＴＣＡＣＴＧＡＴＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＣＴＡＣＧＴＴＧＡＡＡＡＧＧＡＴＴＣＴＡＡＡＧＧＧＡＡＡＧＴＧＣＴＡＧ           （配列番号１２）
【０２０２】
ＴＡＳ２Ｒ３８  ＣＤＳ
ＡＴＧＴＴＧＡＣＴＣＴＡＡＣＴＣＧＣＡＴＣＣＧＣＡＣＴＧＴＧＴＣＣＴＡＴＧＡＡＧＴＣＡＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＴＣＴＧＴＴＣＡＴＴＴＣＡＧＴＣＣＴＧＧＡＧＴＴＴＧＣＡＧＴＧＧＧＧＴＴＴＣＴＧＡＣＣＡＡＴＧＣＣＴＴＣＧＴＴＴＴＣＴＴＧＧＴＧＡＡＴＴＴＴＴＧＧＧＡＴＧＴＡＧＴＧＡＡＧＡＧＧＣＡＧＧＣＡＣＴＧＡＧＣＡＡＣＡＧＴＧＡＴＴＧＴＧＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＴＣＴＣＡＧＣＡＴＣＡＧＣＣＧＧＣＴＴＴＴＣＣＴＧＣＡＴＧＧＡＣＴＧＣＴＧＴＴＣＣＴＧＡＧＴＧＣＴＡＴＣＣＡＧＣＴＴＡＣＣＣＡＣＴＴＣＣＡＧＡＡＧＴＴＧＡＧＴＧＡＡＣＣＡＣＴＧＡＡＣＣＡＣＡＧＣＴＡＣＣＡＡＧＣＣＡＴＣＡＴＣＡＴＧＣＴＡＴＧＧＡＴＧＡＴＴＧＣＡＡＡＣＣＡＡＧＣＣＡＡＣＣＴＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＧＣＣＴＧＣＣＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＴＴＡＣＴＧＣＴＣＣＡＡＧＣＴＣＡＴＣＣＧＴＴＴＣＴＣＴＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＴＧＡＴＣＴＧＣＴＴＧＧＣＡＡＧＣＴＧＧＧＴＣＴＣＣＡＧＧＡＡＧＡＴＣＴＣＣＣＡＧＡＴＧＣＴＣＣＴＧＧＧＴＡＴＴＡＴＴＣＴＴＴＧＣＴＣＣＴＧＣＡＴＣＴＧＣＡＣＴＧＴＣＣＴＣＴＧＴＧＴＴＴＧＧＴＧＣＴＴＴＴＴＴＡＧＣＡＧＡＣＣＴＣＡＣＴＴＣＡＣＡＧＴＣＡＣＡＡＣＴＧＴＧＣＴＡＴＴＣＡＴＧＡＡＴＡＡＣＡＡＴＡＣＡＡＧＧＣＴＣＡＡＣＴＧＧＣＡＧＡＴＴＡＡＡＧＡＴＣＴＣＡＡＴＴＴＡＴＴＴＴＡＴＴＣＣＴＴＴＣＴＣＴＴＣＴＧＣＴＡＴＣＴＧＴＧＧＴＣＴＧＴＧＣＣＴＣＣＴＴＴＣＣＴＡＴＴＧＴＴＴＣＴＧＧＴＴＴＣＴＴＣＴＧＧＧＡＴＧＣＴＧＡＣＴＧＴＣＴＣＣＣＴＧＧＧＡＡＧＧＣＡＣＡＴＧＡＧＧＡＣＡＡＴＧＡＡＧＧＴＣＴＡＴＡＣＣＡＧＡＡＡＣＴＣＴＣＧＴＧＡＣＣＣＣＡＧＣＣＴＧＧＡＧＧＣＣＣＡＣＡＴＴＡＡＡＧＣＣＣＴＣＡＡＧＴＣＴＣＴＴＧＴＣＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＧＣＴＴＣＴＴＴＧＴＧＡＴＡＴＣＡＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＣＣＴＴＣＡＴＣＴＣＴＧＴＧＣＣＣＣＴＡＣＴＧＡＴＴＣＴＧＴＧＧＣＧＣＧＡＣＡＡＡＡＴＡＧＧＧＧＴＧＡＴＧＧＴＴＴＧＴＧＴＴＧＧＧＡＴＡＡＴＧＧＣＡＧＣＴＴＧＴＣＣＣＴＣＴＧＧＧＣＡＴＧＣＡＧＣＣＡＴＣＣＴＧＡＴＣＴＣＡＧＧＣＡＡＴＧＣＣＡＡＧＴＴＧＡＧＧＡＧＡＧＣＴＧＴＧＡＴＧＡＣＣＡＴＴＣＴＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＣＡＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＧＴＡＡＧＡＧＣＣＧＡＣＣＡＣＡＡＧＧＣＡＧＡＴＴＣＣＣＧＧＡＣＡＣＴＧＴＧＣＴＧＡ              （配列番号１３）
【０２０３】
ＴＡＳ２Ｒ３９  ＣＤＳ
ＡＴＧＣＴＡＧＧＧＡＧＡＴＧＴＴＴＴＣＣＴＣＣＡＧＡＣＡＣＣＡＡＡＧＡＧＡＡＧＣＡＡＣＡＧＣＴＣＡＧＡＡＴＧＡＣＴＡＡＡＣＴＣＴＧＣＧＡＴＣＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＴＧＡＡＴＴＧＴＣＧＣＣＡＴＴＴＣＴＣＡＴＣＡＣＣＴＴＡＡＴＴＴＴＡＧＣＡＧＴＴＴＴＡＣＴＴＧＣＴＧＡＡＴＡＣＣＴＣＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＴＴＧＣＡＡＡＴＧＧＴＴＴＣＡＴＣＡＴＧＧＣＴＡＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＧＡＡＴＧＧＧＴＴＣＡＡＡＡＴＡＡＧＧＣＡＧＴＴＴＣＣＡＣＡＡＧＴＧＧＣＡＧＧＡＴＣＣＴＧＧＴＴＴＴＣＣＴＧＡＧＴＧＴＡＴＣＣＡＧＡＡＴＡＧＣＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＴＣＡＴＧＡＴＧＴＴＡＧＡＡＡＴＴＡＣＣＡＴＣＡＧＣＴＣＡＡＣＣＴＣＣＣＴＡＡＧＴＴＴＴＴＡＴＴＣＴＧＡＡＧＡＣＧＣＴＧＴＡＴＡＴＴＡＴＧＣＡＴＴＣＡＡＡＡＴＡＡＧＴＴＴＴＡＴＡＴＴＣＴＴＡＡＡＴＴＴＴＴＧＴＡＧＣＣＴＧＴＧＧＴＴＴＧＣＴＧＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧＴＴＴＣＴＴＣＴＡＣＴＴＴＧＴＧＡＡＧＡＴＴＧＣＣＡＡＴＴＴＣＴＣＣＴＡＣＣＣＣＣＴＴＴＴＣＣＴＣＡＡＡＣＴＧＡＧＧＴＧＧＡＧＡＡＴＴＡＣＴＧＧＡＴＴＧＡＴＡＣＣＣＴＧＧＣＴＴＣＴＧＴＧＧＣＴＧＴＣＣＧＴＧＴＴＴＡＴＴＴＣＣＴＴＣＡＧＴＣＡＣＡＧＣＡＴＧＴＴＣＴＧＣＡＴＣＡＡＣＡＴＣＴＧＣＡＣＴＧＴＧＴＡＴＴＧＴＡＡＣＡＡＴＴＣＴＴＴＣＣＣＴＡＴＣＣＡＣＴＣＣＴＣＣＡＡＣＴＣＣＡＣＴＡＡＧＡＡＡＡＣＡＴＡＣＴＴＧＴＣＴＧＡＧＡＴＣＡＡＴＧＴＧＧＴＣＧＧＴＣＴＧＧＣＴＴＴＴＴＴＣＴＴＴＡＡＣＣＴＧＧＧＧＡＴＴＧＴＧＡＣＴＣＣＴＣＴＧＡＴＣＡＴＧＴＴＣＡＴＣＣＴＧＡＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＣＴＧＡＴＣＣＴＣＴＣＴＣＴＣＡＡＧＡＧＡＣＡＣＡＣＣＣＴＡＣＡＣＡＴＧＧＧＡＡＧＣＡＡＴＧＣＣＡＣＡＧＧＧＴＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＡＧＣＡＴＧＧＡＧＧＣＴＣＡＣＡＴＧＧＧＧＧＣＣＡＴＣＡＡＡＧＣＴＡＴＣＡＧＣＴＡＣＴＴＴＣＴＣＡＴＴＣＴＣＴＡＣＡＴＴＴＴＣＡＡＴＧＣＡＧＴＴＧＣＴＣＴＧＴＴＴＡＴＣＴＡＣＣＴＧＴＣＣＡＡＣＡＴＧＴＴＴＧＡＣＡＴＣＡＡＣＡＧＴＣＴＧＴＧＧＡＡＴＡＡＴＴＴＧＴＧＣＣＡＧＡＴＣＡＴＣＡＴＧＧＣＴＧＣＣＴＡＣＣＣＴＧＣＣＡＧＣＣＡＣＴＣＡＡＴＴＣＴＡＣＴＧＡＴＴＣＡＡＧＡＴＡＡＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＧＧＡＧＣＧＧＣＴＴＣＡＧＣＴＴＣＧＡＣＴＴＣＡＴＣＴＴＴＡＣＣＣＡＡＡＡＧＡＧＴＧＧＡＣＴＣＴＧＡ              （配列番号１４）
【０２０４】
ＴＡＳ２Ｒ４０  ＣＤＳ
ＡＴＧＧＣＡＡＣＧＧＴＧＡＡＣＡＣＡＧＡＴＧＣＣＡＣＡＧＡＴＡＡＡＧＡＣＡＴＡＴＣＣＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＴＣＡＣＣＴＴＣＡＣＴＴＴＧＧＴＧＧＴＣＴＣＣＧＧＡＡＴＡＧＡＧＴＧＣＡＴＣＡＣＴＧＧＣＡＴＣＣＴＴＧＧＧＡＧＴＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＣＧＧＣＣＡＴＣＴＡＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＴＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＣＡＡＡＡＣＡＣＴＣＣＣＣＡＣＴＧＧＴＧＡＣＣＧＣＡＴＴＡＴＧＴＴＧＡＴＧＣＴＧＡＧＣＴＴＴＴＣＣＡＧＧＣＴＣＴＴＧＣＴＡＣＡＧＡＴＴＴＧＧＡＴＧＡＴＧＣＴＧＧＡＧＡＡＣＡＴＴＴＴＣＡＧＴＣＴＧＣＴＡＴＴＣＣＧＡＡＴＴＧＴＴＴＡＴＡＡＣＣＡＡＡＡＣＴＣＡＧＴＧＴＡＴＡＴＣＣＴＣＴＴＣＡＡＡＧＴＣＡＴＣＡＣＴＧＴＣＴＴＴＣＴＧＡＡＣＣＡＴＴＣＣＡＡＴＣＴＣＴＧＧＴＴＴＧＣＴＧＣＣＴＧＧＣＴＣＡＡＡＧＴＣＴＴＣＴＡＴＴＧＴＣＴＴＡＧＡＡＴＴＧＣＡＡＡＣＴＴＣＡＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＧＴＴＣＴＴＣＣＴＧＡＴＧＡＡＧＡＧＧＡＡＡＡＴＣＡＴＡＧＴＧＣＴＧＡＴＧＣＣＴＴＧＧＣＴＴＣＴＣＡＧＧＣＴＧＴＣＡＧＴＧＴＴＧＧＴＴＴＣＣＴＴＡＡＧＣＴＴＣＡＧＣＴＴＴＣＣＴＣＴＣＴＣＧＡＧＡＧＡＴＧＴＣＴＴＣＡＡＴＧＴＧＴＡＴＧＴＧＡＡＴＡＧＣＴＣＣＡＴＴＣＣＴＡＴＣＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＣＴＣＣＡＣＧＧＡＧＡＡＧＡＡＧＴＡＣＴＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＣＡＡＴＡＴＧＧＴＣＡＡＣＣＴＧＧＴＡＴＴＴＴＴＣＴＡＴＡＡＣＡＴＧＧＧＧＡＴＣＴＴＣＧＴＴＣＣＴＣＴＧＡＴＣＡＴＧＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＣＴＧＡＴＣＣＴＣＴＣＴＣＴＣＡＡＧＡＧＡＣＡＣＡＣＣＣＴＡＣＡＣＡＴＧＧＧＡＡＧＣＡＡＴＧＣＣＡＣＡＧＧＧＴＣＣＡＧＧＧＡＣＣＣＣＡＧＣＡＴＧＡＡＧＧＣＴＣＡＣＡＴＡＧＧＧＧＣＣＡＴＣＡＡＡＧＣＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＴＴＴＣＴＣＡＴＣＣＴＣＴＡＣＡＴＴＴＴＣＡＡＴＧＣＡＡＴＴＧＣＴＣＴＡＴＴＴＣＴＴＴＣＣＡＣＧＴＣＣＡＡＣＡＴＣＴＴＴＧＡＣＡＣＴＴＡＣＡＧＴＴＣＣＴＧＧＡＡＴＡＴＴＴＴＧＴＧＣＡＡＧＡＴＣＡＴＣＡＴＧＧＣＴＧＣＣＴＡＣＣＣＴＧＣＣＧＧＣＣＡＣＴＣＡＧＴＡＣＡＡＣＴＧＡＴＣＴＴＧＧＧＣＡＡＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＴＴＴＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＴＴＣＣＴＣＴＴＴＡＣＣＴＡＡＡＡＧＧＧＣＡＧＡＣＴＣＴＧＴＧＡ    （配列番号１５）
【０２０５】
ｔＡＳ２Ｒ４１  ＣＤＳ
ＡＴＧＣＡＡＧＣＡＧＣＡＣＴＧＡＣＧＧＣＣＴＴＣＴＴＣＧＴＧＴＴＧＣＴＣＴＴＴＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＧＴＣＴＴＣＴＧＧＧＧＡＴＴＧＣＡＧＣＧＡＡＴＧＧＣＴＴＣＡＴＴＧＴＧＣＴＧＧＴＧＣＴＧＧＧＣＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＣＧＡＴＡＴＧＧＣＡＧＧＴＴＧＣＴＧＣＣＣＴＴＧＧＡＴＡＴＧＡＴＣＣＴＣＡＴＴＡＧＣＴＴＧＧＧＴＧＣＣＴＣＣＣＧＣＴＴＣＴＧＣＣＴＧＣＡＧＴＴＧＧＴＴＧＧＧＡＣＧＧＴＧＣＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＴＡＣＴＣＴＧＣＣＣＡＧＡＡＧＧＴＣＧＡＧＴＡＣＴＣＴＧＧＧＧＧＴＣＴＣＧＧＣＣＧＡＣＡＧＴＴＣＴＴＣＣＡＴＣＴＡＣＡＣＴＧＧＣＡＣＴＴＣＣＴＧＡＡＣＴＣＡＧＣＣＡＣＣＴＴＣＴＧＧＴＴＴＴＧＣＡＧＣＴＧＧＣＴＣＡＧＴＧＴＣＣＴＧＴＴＣＴＧＴＧＴＧＡＡＧＡＴＴＧＣＴＡＡＣＡＴＣＡＣＡＣＡＣＴＣＣＡＣＣＴＴＣＣＴＧＴＧＧＣＴＧＡＡＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＣＣＡＧＧＧＴＧＧＧＴＧＣＣＣＴＧＧＣＴＣＣＴＧＴＴＧＧＧＣＴＣＴＧＴＣＣＴＧＡＴＣＴＣＣＴＴＣＡＴＣＡＴＡＡＣＣＣＴＧＣＴＧＴＴＴＴＴＴＴＧＧＧＴＧＡＡＣＴＡＣＣＣＴＧＴＡＴＡＴＣＡＡＧＡＡＴＴＴＴＴＡＡＴＴＡＧＡＡＡＡＴＴＴＴＣＴＧＧＧＡＡＣＡＴＧＡＣＣＴＡＣＡＡＧＴＧＧＡＡＴＡＣＡＡＧＧＡＴＡＧＡＡＡＣＡＴＡＣＴＡＴＴＴＣＣＣＡＴＣＣＣＴＧＡＡＡＣＴＧＧＴＣＡＴＣＴＧＧＴＣＡＡＴＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＧＴＴＴＴＴＣＴＧＧＴＣＴＣＡＡＴＴＡＴＧＣＴＧＣＴＧＡＴＴＡＡＴＴＣＴＣＴＧＡＧＧＡＧＧＣＡＴＡＣＴＣＡＧＡＧＡＡＴＧＣＡＧＣＡＣＡＡＣＧＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＧＡＣＣＣＣＡＧＣＡＣＣＣＡＧＧＣＴＣＡＣＡＣＣＡＧＡＧＣＴＣＴＧＡＡＧＴＣＣＣＴＣＡＴＣＴＣＣＴＴＣＣＴＣＡＴＴＣＴＴＴＡＴＧＣＴＣＴＧＴＣＣＴＴＴＣＴＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＡＴＴＧＡＴＧＣＣＧＣＡＡＡＡＴＴＴＡＴＣＴＣＣＡＴＧＣＡＧＡＡＣＧＡＣＴＴＴＴＡＣＴＧＧＣＣＡＴＧＧＣＡＡＡＴＴＧＣＡＧＴＣＴＡＣＣＴＧＴＧＣＡＴＡＴＣＴＧＴＣＣＡＴＣＣＣＴＴＣＡＴＣＣＴＣＡＴＣＴＴＣＡＧＣＡＡＣＣＴＣＡＡＧＣＴＴＣＧＡＡＧＣＧＴＧＴＴＣＴＣＡＣＡＧＣＴＣＣＴＧＴＴＧＴＴＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＴＴＣＴＧＧＧＴＧＧＣＣＴＧＡ              （配列番号１６）
【０２０６】
ＴＡＳ２Ｒ４３  ＣＤＳ
ＡＴＧＡＴＡＡＣＴＴＴＴＣＴＧＣＣＣＡＴＣＡＴＴＴＴＴＴＣＣＡＧＴＣＴＧＧＴＡＧＴＧＧＴＴＡＣＡＴＴＴＧＴＴＡＴＴＧＧＡＡＡＴＴＴＴＧＣＴＡＡＴＧＧＣＴＴＣＡＴＡＧＣＡＣＴＧＧＴＡＡＡＴＴＣＣＡＴＴＧＡＧＴＧＧＴＴＣＡＡＧＡＧＡＣＡＡＡＡＧＡＴＣＴＣＣＴＴＴＧＣＴＧＡＣＣＡＡＡＴＴＣＴＣＡＣＴＧＣＴＣＴＧＧＣＧＧＴＣＴＣＣＡＧＡＧＴＴＧＧＴＴＴＧＣＴＣＴＧＧＧＴＡＴＴＡＴＴＡＴＴＡＡＡＣＴＧＧＴＡＴＴＣＡＡＣＴＧＴＧＴＴＧＡＡＴＣＣＡＧＣＴＴＴＴＡＡＴＡＧＴＧＴＡＧＡＡＧＴＡＡＧＡＡＣＴＡＣＴＧＣＴＴＡＴＡＡＴＡＴＣＴＧＧＧＣＡＧＴＧＡＴＣＡＡＣＣＡＴＴＴＣＡＧＣＡＡＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＣＴＡＣＣＣＴＣＡＧＣＡＴＡＴＴＴＴＡＴＴＴＧＣＴＣＡＡＧＡＴＴＧＣＣＡＡＴＴＴＣＴＣＣＡＡＣＴＴＴＡＴＴＴＴＴＣＴＴＣＡＣＴＴＡＡＡＧＡＧＧＡＧＡＧＴＴＡＡＧＡＧＴＧＴＣＡＴＴＣＴＧＧＴＧＡＴＧＴＴＧＴＴＧＧＧＧＣＣＴＴＴＧＣＴＡＴＴＴＴＴＧＧＣＴＴＧＴＣＡＴＣＴＴＴＴＴＧＴＧＡＴＡＡＡＣＡＴＧＡＡＴＧＡＧＡＴＴＧＴＧＣＧＧＡＣＡＡＡＡＧＡＡＴＴＴＧＡＡＧＧＡＡＡＣＡＴＧＡＣＴＴＧＧＡＡＧＡＴＣＡＡＡＴＴＧＡＡＧＡＧＴＧＣＡＡＴＧＴＡＣＴＴＴＴＣＡＡＡＴＡＴＧＡＣＴＧＴＡＡＣＣＡＴＧＧＴＡＧＣＡＡＡＣＴＴＡＧＴＡＣＣＣＴＴＣＡＣＴＣＴＧＡＣＣＣＴＡＣＴＡＴＣＴＴＴＴＡＴＧＣＴＧＴＴＡＡＴＣＴＧＴＴＣＴＴＴＧＴＧＴＡＡＡＣＡＴＣＴＣＡＡＧＡＡＧＡＴＧＣＡＧＣＴＣＣＡＴＧＧＴＡＡＡＧＧＡＴＣＴＣＡＡＧＡＴＣＣＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＣＣＡＣＡＴＡＡＡＡＧＣＴＴＴＧＣＡＡＡＣＴＧＴＧＡＴＣＴＣＣＴＴＣＣＴＣＴＴＧＴＴＡＴＧＴＧＣＣＡＴＴＴＡＣＴＴＴＣＴＧＴＣＣＡＴＡＡＴＧＡＴＡＴＣＡＧＴＴＴＧＧＡＧＴＴＴＴＧＧＡＡＧＴＣＴＧＧＡＡＡＡＣＡＡＡＣＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＧＴＴＣＴＧＣＡＡＡＧＣＴＡＴＴＡＧＡＴＴＣＡＧＣＴＡＴＣＣＴＴＣＡＡＴＣＣＡＣＣＣＡＴＴＣＡＴＣＣＴＧＡＴＴＴＧＧＧＧＡＡＡＣＡＡＧＡＡＧＣＴＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＴＴＴＣＴＴＴＣＡＧＴＴＴＴＴＴＧＧＣＡＡＡＴＧＡＧＧＴＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＡＧＧＡＧＡＧＡＡＧＡＣＴＴＣＡＴＣＴＣＣＡＴＧＡ       （配列番号１７）
【０２０７】
ｔＡＳ２Ｒ４４  ＣＤＳ
ＡＴＧＡＣＡＡＣＴＴＴＴＡＴＡＣＣＣＡＴＣＡＴＴＴＴＴＴＣＣＡＧＴＧＴＧＧＴＡＧＴＧＧＴＴＣＴＡＴＴＴＧＴＴＡＴＴＧＧＡＡＡＴＴＴＴＧＣＴＡＡＴＧＧＣＴＴＣＡＴＡＧＣＡＴＴＧＧＴＡＡＡＴＴＣＣＡＴＴＧＡＧＣＧＧＧＴＣＡＡＧＡＧＡＣＡＡＡＡＧＡＴＣＴＣＴＴＴＴＧＣＴＧＡＣＣＡＧＡＴＴＣＴＣＡＣＴＧＣＴＣＴＧＧＣＧＧＴＣＴＣＣＡＧＡＧＴＴＧＧＴＴＴＧＣＴＣＴＧＧＧＴＡＴＴＡＴＴＡＴＴＡＡＡＴＴＧＧＴＡＴＴＣＡＡＣＴＧＴＧＴＴＴＡＡＴＣＣＡＧＣＴＴＴＴＴＡＴＡＧＴＧＴＡＧＡＡＧＴＡＡＧＡＡＣＴＡＣＴＧＣＴＴＡＴＡＡＴＧＴＣＴＧＧＧＣＡＧＴＡＡＣＣＧＧＣＣＡＴＴＴＣＡＧＣＡＡＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＣＴＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＴＡＴＴＴＴＡＴＴＴＧＣＴＣＡＡＧＡＴＴＧＣＣＡＡＴＴＴＣＴＣＣＡＡＣＣＴＴＡＴＴＴＴＴＣＴＴＣＡＣＴＴＡＡＡＧＡＧＧＡＧＡＧＴＴＡＡＧＡＧＴＧＴＣＡＴＴＣＴＧＧＴＧＡＴＧＣＴＧＴＴＧＧＧＧＣＣＴＴＴＡＣＴＡＴＴＴＴＴＧＧＣＴＴＧＴＣＡＡＣＴＴＴＴＴＧＴＧＡＴＡＡＡＣＡＴＧＡＡＡＧＡＧＡＴＴＧＴＡＣＧＧＡＣＡＡＡＡＧＡＡＴＡＴＧＡＡＧＧＡＡＡＣＴＴＧＡＣＴＴＧＧＡＡＧＡＴＣＡＡＡＴＴＧＡＧＧＡＧＴＧＣＡＧＴＧＴＡＣＣＴＴＴＣＡＧＡＴＧＣＧＡＣＴＧＴＡＡＣＣＡＣＧＣＴＡＧＧＡＡＡＣＴＴＡＧＴＧＣＣＣＴＴＣＡＣＴＣＴＧＡＣＣＣＴＧＣＴＡＴＧＴＴＴＴＴＴＧＣＴＧＴＴＡＡＴＣＴＧＴＴＣＴＣＴＧＴＧＴＡＡＡＣＡＴＣＴＣＡＡＧＡＡＧＡＴＧＣＡＧＣＴＣＣＡＴＧＧＴＡＡＡＧＧＡＴＣＴＣＡＡＧＡＴＣＣＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＣＣＡＣＡＴＡＡＡＡＧＣＴＴＴＧＣＡＡＡＣＴＧＴＧＡＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＣＴＴＧＴＴＡＴＧＴＧＣＣＧＴＴＴＡＣＴＴＴＣＴＧＴＣＣＡＴＡＡＴＧＡＴＡＴＣＡＧＴＴＴＧＧＡＧＴＴＴＴＧＧＧＡＧＴＣＴＧＧＡＡＡＡＣＡＡＡＣＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＧＴＴＣＴＧＣＡＡＡＧＣＴＡＴＴＡＧＡＴＴＣＡＧＣＴＡＴＣＣＴＴＣＡＡＴＣＣＡＣＣＣＡＴＴＣＡＴＣＣＴＧＡＴＴＴＧＧＧＧＡＡＡＣＡＡＧＡＡＧＣＴＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＴＴＴＣＴＴＴＣＡＧＴＴＴＴＧＣＧＧＣＡＡＧＴＧＡＧＧＴＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＡＧＧＡＧＡＧＡＡＧＣＣＴＴＣＡＴＣＴＣＣＡＴＧＡ       （配列番号１８）
【０２０８】
ｔＡＳ２Ｒ４５  ＣＤＳ
ＡＴＧＡＴＡＡＣＴＴＴＴＣＴＧＣＣＣＡＴＣＡＴＡＴＴＴＴＣＣＡＴＴＣＴＡＧＴＡＧＴＧＧＴＴＡＣＡＴＴＴＧＴＴＡＴＴＧＧＡＡＡＴＴＴＴＧＣＴＡＡＴＧＧＣＴＴＣＡＴＡＧＣＧＴＴＧＧＴＡＡＡＴＴＣＣＡＣＣＧＡＧＴＧＧＧＴＧＡＡＧＡＧＡＣＡＡＡＡＧＡＴＣＴＣＣＴＴＴＧＣＴＧＡＣＣＡＡＡＴＴＧＴＣＡＣＴＧＣＴＣＴＧＧＣＧＧＴＣＴＣＣＡＧＡＧＴＴＧＧＴＴＴＧＣＴＣＴＧＧＧＴＧＴＴＡＴＴＡＴＴＡＡＡＴＴＧＧＴＡＴＴＣＡＡＣＴＧＴＧＴＴＧＡＡＴＣＣＡＧＣＴＴＴＴＴＧＴＡＧＴＧＴＡＧＡＡＴＴＡＡＧＡＡＣＴＡＣＴＧＣＴＴＡＴＡＡＴＡＴＣＴＧＧＧＣＡＧＴＡＡＣＣＧＧＣＣＡＴＴＴＣＡＧＣＡＡＣＴＧＧＣＣＴＧＣＴＡＣＴＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＴＡＴＴＴＴＡＴＴＴＧＣＴＣＡＡＧＡＴＴＧＣＣＡＡＴＴＴＣＴＣＣＡＡＣＣＴＴＡＴＴＴＴＴＣＴＴＣＧＣＴＴＡＡＡＧＡＧＧＡＧＡＧＴＴＡＡＧＡＧＴＧＴＣＡＴＴＣＴＧＧＴＧＡＴＧＣＴＧＴＴＧＧＧＧＣＣＴＴＴＧＣＴＡＴＴＴＴＴＧＧＣＴＴＧＴＣＡＴＣＴＴＴＴＴＧＴＧＧＴＡＡＡＣＡＴＧＡＡＴＣＡＧＡＴＴＧＴＡＴＧＧＡＣＡＡＡＡＧＡＡＴＡＴＧＡＡＧＧＡＡＡＣＡＴＧＡＣＴＴＧＧＡＡＧＡＴＣＡＡＡＴＴＧＡＧＧＣＧＴＧＣＡＡＴＧＴＡＣＣＴＴＴＣＡＧＡＴＡＣＧＡＣＴＧＴＡＡＣＣＡＴＧＣＴＡＧＣＡＡＡＣＴＴＡＧＴＡＣＣＣＴＴＴＡＣＴＧＴＡＡＣＣＣＴＧＡＴＡＴＣＴＴＴＴＣＴＧＣＴＧＴＴＡＧＴＣＴＧＴＴＣＴＣＴＧＴＧＴＡＡＡＣＡＴＣＴＣＡＡＧＡＡＧＡＴＧＣＡＣＣＴＣＣＡＴＧＧＣＡＡＡＧＧＡＴＣＴＣＡＡＧＡＴＣＣＣＡＧＴＡＣＣＡＡＧＧＴＣＣＡＣＡＴＡＡＡＡＧＴＴＴＴＧＣＡＡＡＣＴＧＴＧＡＴＣＴＣＣＴＴＣＣＴＣＴＴＧＴＴＡＴＧＴＧＣＣＡＴＴＴＡＣＴＴＴＧＴＧＴＣＴＧＴＡＡＴＡＡＴＡＴＣＡＧＴＴＴＧＧＡＧＴＴＴＴＡＡＧＡＡＴＣＴＧＧＡＡＡＡＣＡＡＡＣＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＧＴＴＣＴＧＣＣＡＡＧＣＴＡＴＴＧＧＡＴＴＣＡＧＣＴＧＴＴＣＴＴＣＡＧＣＣＣＡＣＣＣＧＴＴＣＡＴＣＣＴＧＡＴＴＴＧＧＧＧＡＡＡＣＡＡＧＡＡＧＣＴＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＴＡＴＣＴＴＴＣＡＧＴＴＴＴＧＴＧＧＣＡＡＡＴＧＡＧＧＴＡＣＴＧＡ              （配列番号１９）
【０２０９】
ＴＡＳ２Ｒ４６  ＣＤＳ
ＡＴＧＡＴＡＡＣＴＴＴＴＣＴＧＣＣＣＡＴＣＡＴＴＴＴＴＴＣＣＡＴＴＣＴＡＡＴＡＧＴＧＧＴＴＡＣＡＴＴＴＧＴＧＡＴＴＧＧＡＡＡＴＴＴＴＧＣＴＡＡＴＧＧＣＴＴＣＡＴＡＧＣＡＴＴＧＧＴＡＡＡＴＴＣＣＡＴＴＧＡＧＴＧＧＴＴＴＡＡＧＡＧＡＣＡＡＡＡＧＡＴＣＴＣＴＴＴＴＧＣＴＧＡＣＣＡＡＡＴＴＣＴＣＡＣＴＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＡＧＴＴＧＧＴＴＴＡＣＴＣＴＧＧＧＴＡＴＴＡＧＴＡＴＴＡＡＡＴＴＧＧＴＡＴＧＣＡＡＣＴＧＡＧＴＴＧＡＡＴＣＣＡＧＣＴＴＴＴＡＡＣＡＧＴＡＴＡＧＡＡＧＴＡＡＧＡＡＴＴＡＣＴＧＣＴＴＡＣＡＡＴＧＴＣＴＧＧＧＣＡＧＴＡＡＴＣＡＡＣＣＡＴＴＴＣＡＧＣＡＡＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＣＴＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＴＡＴＴＴＴＡＴＴＴＧＣＴＣＡＡＧＡＴＴＧＣＣＡＡＴＴＴＣＴＣＣＡＡＣＣＴＴＡＴＴＴＴＴＣＴＴＣＡＣＴＴＡＡＡＧＡＧＧＡＧＡＧＴＴＡＡＧＡＧＴＧＴＴＧＴＴＣＴＧＧＴＧＡＴＡＣＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＴＴＴＧＣＴＡＴＴＴＴＴＧＧＴＴＴＧＴＣＡＴＣＴＴＴＴＴＧＴＧＡＴＡＡＡＣＡＴＧＡＡＴＣＡＧＡＴＴＡＴＡＴＧＧＡＣＡＡＡＡＧＡＡＴＡＴＧＡＡＧＧＡＡＡＣＡＴＧＡＣＴＴＧＧＡＡＧＡＴＣＡＡＡＣＴＧＡＧＧＡＧＴＧＣＡＡＴＧＴＡＣＣＴＴＴＣＡＡＡＴＡＣＡＡＣＧＧＴＡＡＣＣＡＴＣＣＴＡＧＣＡＡＡＣＴＴＡＧＴＴＣＣＣＴＴＣＡＣＴＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡＴＡＴＣＴＴＴＴＣＴＧＣＴＧＴＴＡＡＴＣＴＧＴＴＣＴＣＴＧＴＧＴＡＡＡＣＡＴＣＴＣＡＡＡＡＡＧＡＴＧＣＡＧＣＴＣＣＡＴＧＧＣＡＡＡＧＧＡＴＣＴＣＡＡＧＡＴＣＣＣＡＧＣＡＴＧＡＡＧＧＴＣＣＡＣＡＴＡＡＡＡＧＣＴＴＴＧＣＡＡＡＣＴＧＴＧＡＣＣＴＣＣＴＴＣＣＴＣＴＴＧＴＴＡＴＧＴＧＣＣＡＴＴＴＡＣＴＴＴＣＴＧＴＣＣＡＴＡＡＴＣＡＴＧＴＣＡＧＴＴＴＧＧＡＧＴＴＴＴＧＡＧＡＧＴＣＴＧＧＡＡＡＡＣＡＡＡＣＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＧＴＴＣＴＧＣＧＡＡＧＣＴＡＴＴＧＣＡＴＴＣＡＧＣＴＡＴＣＣＴＴＣＡＡＣＣＣＡＣＣＣＡＴＴＣＡＴＣＣＴＧＡＴＴＴＧＧＧＧＡＡＡＣＡＡＧＡＡＧＣＴＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＴＴＴＣＴＴＴＣＡＧＴＴＴＴＧＴＧＧＣＡＡＡＴＧＡＧＧＴＡＣＴＧＡ              （配列番号２０）
【０２１０】
ＴＡＳ２Ｒ４７  ＣＤＳ
ＡＴＧＡＴＡＡＣＴＴＴＴＣＴＧＣＣＣＡＴＣＡＴＴＴＴＴＴＣＣＡＴＴＣＴＡＡＴＡＧＴＧＧＴＴＡＴＡＴＴＴＧＴＴＡＴＴＧＧＡＡＡＴＴＴＴＧＣＴＡＡＴＧＧＣＴＴＣＡＴＡＧＣＡＴＴＧＧＴＡＡＡＴＴＣＣＡＴＴＧＡＧＴＧＧＧＴＣＡＡＧＡＧＡＣＡＡＡＡＧＡＴＣＴＣＣＴＴＴＧＴＴＧＡＣＣＡＡＡＴＴＣＴＣＡＣＴＧＣＴＣＴＧＧＣＧＧＴＣＴＣＣＡＧＡＧＴＴＧＧＴＴＴＧＣＴＣＴＧＧＧＴＧＴＴＡＴＴＡＣＴＡＣＡＴＴＧＧＴＡＴＧＣＡＡＣＴＣＡＧＴＴＧＡＡＴＣＣＡＧＣＴＴＴＴＴＡＴＡＧＴＧＴＡＧＡＡＧＴＡＡＧＡＡＴＴＡＣＴＧＣＴＴＡＴＡＡＴＧＴＣＴＧＧＧＣＡＧＴＡＡＣＣＡＡＣＣＡＴＴＴＣＡＧＣＡＧＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＣＴＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＴＧＴＴＴＴＡＴＴＴＧＣＴＣＡＧＧＡＴＴＧＣＣＡＡＴＴＴＣＴＣＣＡＡＣＣＴＴＡＴＴＴＴＴＣＴＴＣＧＣＡＴＡＡＡＧＡＧＧＡＧＡＧＴＴＡＡＧＡＧＴＧＴＴＧＴＴＣＴＧＧＴＧＡＴＡＣＴＧＴＴＧＧＧＧＣＣＴＴＴＧＣＴＡＴＴＴＴＴＧＧＴＴＴＧＴＣＡＴＣＴＴＴＴＴＧＴＧＡＴＡＡＡＣＡＴＧＧＡＴＧＡＧＡＣＴＧＴＡＴＧＧＡＣＡＡＡＡＧＡＡＴＡＴＧＡＡＧＧＡＡＡＣＧＴＧＡＣＴＴＧＧＡＡＧＡＴＣＡＡＡＴＴＧＡＧＧＡＧＴＧＣＡＡＴＧＴＡＣＣＡＴＴＣＡＡＡＴＡＴＧＡＣＴＣＴＡＡＣＣＡＴＧＣＴＡＧＣＡＡＡＣＴＴＴＧＴＡＣＣＣＣＴＣＡＣＴＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡＴＡＴＣＴＴＴＴＣＴＧＣＴＧＴＴＡＡＴＣＴＧＴＴＣＴＣＴＧＴＧＴＡＡＡＣＡＴＣＴＣＡＡＧＡＡＧＡＴＧＣＡＧＣＴＣＣＡＴＧＧＣＡＡＡＧＧＡＴＣＴＣＡＡＧＡＴＣＣＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＣＣＡＣＡＴＡＡＡＡＧＣＴＴＴＧＣＡＡＡＣＴＧＴＧＡＣＣＴＣＣＴＴＴＣＴＴＣＴＧＴＴＡＴＧＴＧＣＣＡＴＴＴＡＣＴＴＴＣＴＧＴＣＣＡＴＧＡＴＣＡＴＡＴＣＡＧＴＴＴＧＴＡＡＴＴＴＴＧＧＧＡＧＧＣＴＧＧＡＡＡＡＧＣＡＡＣＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＧＴＴＣＴＧＣＣＡＡＧＣＴＡＴＴＡＴＡＴＴＣＡＧＣＴＡＴＣＣＴＴＣＡＡＣＣＣＡＣＣＣＡＴＴＣＡＴＣＣＴＧＡＴＴＴＴＧＧＧＡＡＡＣＡＡＧＡＡＧＣＴＡＡＡＧＣＡＧＡＴＴＴＴＴＣＴＴＴＣＡＧＴＴＴＴＧＣＧＧＣＡＴＧＴＧＡＧＧＴＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＡＧＡＣＡＧＡＡＧＣＣＴＴＣＧＴＣＴＣＣＡＴＡＧＡＴＴＣＡＣＡＡＧＡＧＧＧＧＣＡＴＴＧＴＧＴＧＴＣＴＴＣＴＧＡ    （配列番号２１）
【０２１１】
ＴＡＳ２Ｒ４８  ＣＤＳ
ＡＴＧＡＴＧＴＧＴＴＴＴＣＴＧＣＴＣＡＴＣＡＴＴＴＣＡＴＣＡＡＴＴＣＴＧＧＴＡＧＴＧＴＴＴＧＣＡＴＴＴＧＴＴＣＴＴＧＧＡＡＡＴＧＴＴＧＣＣＡＡＴＧＧＣＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＴＡＧＴＡＡＡＴＧＴＣＡＴＴＧＡＣＴＧＧＧＴＴＡＡＣＡＣＡＣＧＡＡＡＧＡＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＴＴＣＴＣＡＣＴＧＣＴＣＴＧＧＴＧＧＴＣＴＣＣＡＧＡＡＴＴＧＧＴＴＴＡＣＴＣＴＧＧＧＴＣＡＴＧＴＴＡＴＴＣＣＴＴＴＧＧＴＡＴＧＣＡＡＣＴＧＴＧＴＴＴＡＡＴＴＣＴＧＣＴＴＴＡＴＡＴＧＧＴＴＴＡＧＡＡＧＴＡＡＧＡＡＴＴＧＴＴＧＣＴＴＣＴＡＡＴＧＣＣＴＧＧＧＣＴＧＴＡＡＣＧＡＡＣＣＡＴＴＴＣＡＧＣＡＴＧＴＧＧＣＴＴＧＣＴＧＣＴＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＴＡＴＴＴＴＧＴＴＴＧＣＴＣＡＡＧＡＴＴＧＣＣＡＡＴＴＴＣＴＣＣＡＡＣＣＴＴＡＴＴＴＣＴＣＴＣＣＡＣＣＴＡＡＡＧＡＡＧＡＧＡＡＴＴＡＡＧＡＧＴＧＴＴＧＴＴＣＴＧＧＴＧＡＴＡＣＴＧＴＴＧＧＧＧＣＣＣＴＴＧＧＴＡＴＴＴＣＴＧＡＴＴＴＧＴＡＡＴＣＴＴＧＣＴＧＴＧＡＴＡＡＣＣＡＴＧＧＡＴＧＡＧＡＧＡＧＴＧＴＧＧＡＣＡＡＡＡＧＡＡＴＡＴＧＡＡＧＧＡＡＡＴＧＴＧＡＣＴＴＧＧＡＡＧＡＴＣＡＡＡＴＴＧＡＧＧＡＡＴＧＣＡＡＴＡＣＡＣＣＴＴＴＣＡＡＧＣＴＴＧＡＣＴＧＴＡＡＣＴＡＣＴＣＴＡＧＣＡＡＡＣＣＴＣＡＴＡＣＣＣＴＴＴＡＣＴＣＴＧＡＧＣＣＴＡＡＴＡＴＧＴＴＴＴＣＴＧＣＴＧＴＴＡＡＴＣＴＧＴＴＣＴＣＴＴＴＧＴＡＡＡＣＡＴＣＴＣＡＡＧＡＡＧＡＴＧＣＧＧＣＴＣＣＡＴＡＧＣＡＡＡＧＧＡＴＣＴＣＡＡＧＡＴＣＣＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＣＣＡＴＡＴＡＡＡＡＧＣＴＴＴＧＣＡＡＡＣＴＧＴＧＡＣＣＴＣＣＴＴＣＣＴＣＡＴＧＴＴＡＴＴＴＧＣＣＡＴＴＴＡＣＴＴＴＣＴＧＴＧＴＡＴＡＡＴＣＡＣＡＴＣＡＡＣＴＴＧＧＡＡＴＣＴＴＡＧＧＡＣＡＣＡＧＣＡＧＡＧＣＡＡＡＣＴＴＧＴＡＣＴＣＣＴＧＣＴＴＴＧＣＣＡＡＡＣＴＧＴＴＧＣＡＡＴＣＡＴＧＴＡＴＣＣＴＴＣＡＴＴＣＣＡＣＴＣＡＴＴＣＡＴＣＣＴＧＡＴＴＡＴＧＧＧＡＡＧＴＡＧＧＡＡＧＣＴＡＡＡＡＣＡＧＡＣＣＴＴＴＣＴＴＴＣＡＧＴＴＴＴＧＴＧＧＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＧＣＴＧＡ              （配列番号２２）
【０２１２】
ＴＡＳ２Ｒ４９  ＣＤＳ
ＡＴＧＡＴＧＡＧＴＴＴＴＣＴＡＣＡＣＡＴＴＧＴＴＴＴＴＴＣＣＡＴＴＣＴＡＧＴＡＧＴＧＧＴＴＧＣＡＴＴＴＡＴＴＣＴＴＧＧＡＡＡＴＴＴＴＧＣＣＡＡＴＧＧＣＴＴＴＡＴＡＧＣＡＣＴＧＡＴＡＡＡＴＴＴＣＡＴＴＧＣＣＴＧＧＧＴＣＡＡＧＡＧＡＣＡＡＡＡＧＡＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＧＡＴＣＡＡＡＴＴＡＴＴＧＣＴＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＡＧＴＴＧＧＴＴＴＧＣＴＣＴＧＧＧＴＡＡＴＡＴＴＡＴＴＡＣＡＴＴＧＧＴＡＴＴＣＡＡＣＴＧＴＧＴＴＧＡＡＴＣＣＡＡＣＴＴＣＡＴＣＴＡＡＴＴＴＡＡＡＡＧＴＡＡＴＡＡＴＴＴＴＴＡＴＴＴＣＴＡＡＴＧＣＣＴＧＧＧＣＡＧＴＡＡＣＣＡＡＴＣＡＴＴＴＣＡＧＣＡＴＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＣＴＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＴＡＴＴＴＴＡＴＴＴＧＣＴＣＡＡＧＡＴＣＧＴＣＡＡＴＴＴＣＴＣＣＡＧＡＣＴＴＡＴＴＴＴＴＣＡＴＣＡＣＴＴＡＡＡＡＡＧＧＡＡＧＧＣＴＡＡＧＡＧＴＧＴＡＧＴＴＣＴＧＧＴＧＡＴＡＧＴＧＴＴＧＧＧＧＴＣＴＴＴＧＴＴＣＴＴＴＴＴＧＧＴＴＴＧＴＣＡＣＣＴＴＧＴＧＡＴＧＡＡＡＣＡＣＡＣＧＴＡＴＡＴＡＡＡＴＧＴＧＴＧＧＡＣＡＧＡＡＧＡＡＴＧＴＧＡＡＧＧＡＡＡＣＧＴＡＡＣＴＴＧＧＡＡＧＡＴＣＡＡＡＣＴＧＡＧＧＡＡＴＧＣＡＡＴＧＣＡＣＣＴＴＴＣＣＡＡＣＴＴＧＡＣＴＧＴＡＧＣＣＡＴＧＣＴＡＧＣＡＡＡＣＴＴＧＡＴＡＣＣＡＴＴＣＡＣＴＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡＴＡＴＣＴＴＴＴＣＴＧＣＴＧＴＴＡＡＴＣＴＡＣＴＣＴＣＴＧＴＧＴＡＡＡＣＡＴＣＴＧＡＡＧＡＡＧＡＴＧＣＡＧＣＴＣＣＡＴＧＧＣＡＡＡＧＧＡＴＣＴＣＡＡＧＡＴＣＣＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＡＴＣＣＡＣＡＴＡＡＡＡＧＣＴＣＴＧＣＡＡＡＣＴＧＴＧＡＣＣＴＣＣＴＴＣＣＴＣＡＴＡＴＴＡＣＴＴＧＣＣＡＴＴＴＡＣＴＴＴＣＴＧＴＧＴＣＴＡＡＴＣＡＴＡＴＣＧＴＴＴＴＧＧＡＡＴＴＴＴＡＡＧＡＴＧＣＧＡＣＣＡＡＡＡＧＡＡＡＴＴＧＴＣＴＴＡＡＴＧＣＴＴＴＧＣＣＡＡＧＣＴＴＴＴＧＧＡＡＴＣＡＴＡＴＡＴＣＣＡＴＣＡＴＴＣＣＡＣＴＣＡＴＴＣＡＴＴＣＴＧＡＴＴＴＧＧＧＧＧＡＡＣＡＡＧＡＣＧＣＴＡＡＡＧＣＡＧＡＣＣＴＴＴＣＴＴＴＣＡＧＴＴＴＴＧＴＧＧＣＡＧＧＴＧＡＣＴＴＧＣＴＧＧＧＣＡＡＡＡＧＧＡＣＡＧＡＡＣＣＡＧＴＣＡＡＣＴＣＣＡＴＡＧ       （配列番号２３）
【０２１３】
ＴＡＳ２Ｒ５０  ＣＤＳ
ＡＴＧＡＴＡＡＣＴＴＴＴＣＴＡＴＡＣＡＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡＡＴＴＣＴＡＡＴＡＡＴＧＧＴＴＴＴＡＴＴＴＧＴＴＣＴＣＧＧＡＡＡＣＴＴＴＧＣＣＡＡＴＧＧＣＴＴＣＡＴＡＧＣＡＣＴＧＧＴＡＡＡＴＴＴＣＡＴＴＧＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＡＧＡＡＡＡＡＡＧＡＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＧＡＣＣＡＡＡＴＴＣＴＣＡＣＴＧＣＴＣＴＧＧＣＧＧＴＣＴＣＣＡＧＡＡＴＴＧＧＴＴＴＧＣＴＣＴＧＧＧＣＡＴＴＡＴＴＡＴＴＡＡＡＴＴＧＧＴＡＴＴＴＡＡＣＴＧＴＧＴＴＧＡＡＴＣＣＡＧＣＴＴＴＴＴＡＴＡＧＴＧＴＡＧＡＡＴＴＡＡＧＡＡＴＴＡＣＴＴＣＴＴＡＴＡＡＴＧＣＣＴＧＧＧＴＴＧＴＡＡＣＣＡＡＣＣＡＴＴＴＣＡＧＣＡＴＧＴＧＧＣＴＴＧＣＴＧＣＴＡＡＣＣＴＣＡＧＣＡＴＡＴＴＴＴＡＴＴＴＧＣＴＣＡＡＧＡＴＴＧＣＣＡＡＴＴＴＣＴＣＣＡＡＣＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＴＴＣＡＴＴＴＡＡＡＧＡＧＧＡＧＡＧＴＴＡＧＧＡＧＴＧＴＣＡＴＴＣＴＧＧＴＧＡＴＡＣＴＧＴＴＧＧＧＧＡＣＴＴＴＧＡＴＡＴＴＴＴＴＧＧＴＴＴＧＴＣＡＴＣＴＴＣＴＴＧＴＧＧＣＡＡＡＣＡＴＧＧＡＴＧＡＧＡＧＴＡＴＧＴＧＧＧＣＡＧＡＡＧＡＡＴＡＴＧＡＡＧＧＡＡＡＣＡＴＧＡＣＴＧＧＧＡＡＧＡＴＧＡＡＡＴＴＧＡＧＧＡＡＴＡＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＴＴＣＡＴＡＴＴＴＧＡＣＴＧＴＡＡＣＴＡＣＣＣＴＡＴＧＧＡＧＣＴＴＣＡＴＡＣＣＣＴＴＴＡＣＴＣＴＧＴＣＣＣＴＧＡＴＡＴＣＴＴＴＴＣＴＧＡＴＧＣＴＡＡＴＣＴＧＴＴＣＴＣＴＧＴＧＴＡＡＡＣＡＴＣＴＣＡＡＧＡＡＧＡＴＧＣＡＧＣＴＣＣＡＴＧＧＡＧＡＡＧＧＡＴＣＧＣＡＡＧＡＴＣＴＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＣＣＡＣＡＴＡＡＡＡＧＣＴＴＴＧＣＡＡＡＣＴＣＴＧＡＴＣＴＣＣＴＴＣＣＴＣＴＴＧＴＴＡＴＧＴＧＣＣＡＴＴＴＴＣＴＴＴＣＴＡＴＴＣＣＴＡＡＴＣＧＴＴＴＣＧＧＴＴＴＧＧＡＧＴＣＣＴＡＧＧＡＧＧＣＴＧＣＧＧＡＡＴＧＡＣＣＣＧＧＴＴＧＴＣＡＴＧＧＴＴＡＧＣＡＡＧＧＣＴＧＴＴＧＧＡＡＡＣＡＴＡＴＡＴＣＴＴＧＣＡＴＴＣＧＡＣＴＣＡＴＴＣＡＴＣＣＴＡＡＴＴＴＧＧＡＧＡＡＣＣＡＡＧＡＡＧＣＴＡＡＡＡＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＴＴＴＴＧＡＴＴＴＴＧＴＧＴＣＡＧＡＴＴＡＧＧＴＧＣＴＧＡ              （配列番号２４）
【０２１４】
ＴＡＳ２Ｒ５５  ＣＤＳ
ＡＴＧＧＣＣＡＣＣＧＡＡＴＴＧＧＡＣＡＡＡＡＴＣＴＴＴＣＴＧＡＴＴＣＴＧＧＣＡＡＴＡＧＣＡＧＡＡＴＴＣＡＴＣＡＴＣＡＧＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＡＴＧＴＧＴＴＣＡＴＴＧＧＡＣＴＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＴＣＴＧＡＡＧＧＧＡＴＣＡＡＧＡＡＣＣＡＡＡＡＧＧＴＣＴＴＣＴＣＡＧＣＴＧＡＣＴＴＣＡＴＣＣＴＣＡＣＣＴＧＣＴＴＧＧＣＴＡＴＣＴＣＣＡＣＡＡＴＴＧＧＡＣＡＡＣＴＧＴＴＧＧＴＧＡＴＡＣＴＧＴＴＴＧＡＴＴＣＡＴＴＴＣＴＡＧＴＧＧＧＡＣＴＴＧＣＴＴＣＡＣＡＴＴＴＡＴＡＴＡＣＣＡＣＡＴＡＴＡＧＡＣＴＡＧＧＡＡＡＡＡＣＴＧＴＴＡＴＴＡＴＧＣＴＴＴＧＧＣＡＣＡＴＧＡＣＴＡＡＴＣＡＣＴＴＧＡＣＡＡＣＣＴＧＧＣＴＴＧＣＣＡＣＣＴＧＣＣＴＡＡＧＣＡＴＴＴＴＣＴＡＴＴＴＣＴＴＴＡＡＧＡＴＡＧＣＣＣＡＣＴＴＣＣＣＣＣＡＣＴＣＣＣＴＴＴＴＣＣＴＣＴＧＧＣＴＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＡＴＧＡＡＣＧＧＡＡＴＧＡＴＴＧＴＴＡＴＧＣＴＴＣＴＴＡＴＡＴＴＧＴＣＴＴＴＧＴＴＣＴＴＡＣＴＧＡＴＴＴＴＴＧＡＣＡＧＴＴＴＡＧＴＧＣＴＡＧＡＡＡＴＡＴＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＣＴＣＡＣＴＣＡＡＴＡＴＡＡＴＡＧＡＴＡＡＡＡＧＴＡＡＴＣＴＧＡＣＴＴＴＡＴＡＴＴＴＡＧＡＴＧＡＡＡＧＴＡＡＡＡＣＴＣＴＣＴＴＴＧＡＴＡＡＡＣＴＣＴＣＴＡＴＴＴＴＡＡＡＡＡＣＴＣＴＴＣＴＣＡＧＣＴＴＧＡＣＣＡＧＴＴＴＴＡＴＣＣＣＣＴＴＴＴＣＴＣＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＣＣＴＴＧＣＴＴＴＴＴＴＴＡＴＴＴＣＴＧＴＣＣＴＴＧＧＴＧＡＧＡＣＡＴＡＣＴＡＧＡＡＡＴＴＴＧＡＡＧＣＴＣＡＧＴＴＣＣＴＴＧＧＧＣＴＣＴＡＧＡＧＡＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＡＧＧＣＣＣＡＴＡＧＧＡＧＧＧＣＣＡＴＧＡＡＡＡＴＧＧＴＧＡＴＧＴＣＴＴＴＣＣＴＴＴＴＣＣＴＣＴＴＣＡＴＡＧＴＴＣＡＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＴＴＡＣＡＡＧＴＧＧＣＣＡＡＴＴＧＧＡＴＡＴＴＴＴＴＴＡＴＧＴＴＧＴＧＧＡＡＣＡＡＣＡＡＧＴＡＣＡＴＡＡＡＧＴＴＴＧＴＣＡＴＧＴＴＡＧＣＣＴＴＡＡＡＴＧＣＣＴＴＴＣＣＣＴＣＧＴＧＣＣＡＣＴＣＡＴＴＴＡＴＴＣＴＣＡＴＴＣＴＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＣＧＡＣＡＧＡＣＡＧＣＴＧＴＧＡＧＧＣＴＡＣＴＧＴＧＧＣＡＴＣＴＴＡＧＧＡＡＣＴＡＴＡＣＡＡＡＡＡＣＡＣＣＡＡＡＴＧＣＴＴＴＡＣＣＴＴＴＧＴＧＡ           （配列番号２５）
【０２１５】
ＴＡＳ２Ｒ６０  ＣＤＳ
ＡＴＧＡＡＴＧＧＡＧＡＣＣＡＣＡＴＧＧＴＴＣＴＡＧＧＡＴＣＴＴＣＧＧＴＧＡＣＴＧＡＣＡＡＧＡＡＧＧＣＣＡＴＣＡＴＣＴＴＧＧＴＴＡＣＣＡＴＴＴＴＡＣＴＣＣＴＴＴＴＡＣＧＣＣＴＧＧＴＡＧＣＡＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡＡＴＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＣＴＧＣＴＧＣＴＣＴＧＧＧＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＧＣＴＡＣＧＧＡＧＡＡＴＧＴＴＧＴＴＧＣＣＴＴＧＴＧＡＴＡＡＧＴＴＡＴＴＧＧＴＴＡＧＣＣＴＡＧＧＧＧＣＣＴＣＴＣＧＣＴＴＣＴＧＴＣＴＧＣＡＧＴＣＡＧＴＧＧＴＡＡＴＧＧＧＴＡＡＧＡＣＣＡＴＴＴＡＴＧＴＴＴＴＣＴＴＧＣＡＴＣＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＣＣＣＡＴＡＣＡＡＣＣＣＴＧＴＡＣＴＧＣＡＧＴＴＴＣＴＡＧＣＴＴＴＣＣＡＧＴＧＧＧＡＣＴＴＣＣＴＧＡＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＣＴＴＡＴＧＧＴＣＣＴＣＴＡＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧＴＧＴＣＴＴＣＴＡＴＴＧＴＧＴＧＡＡＡＡＴＴＧＣＴＡＣＣＴＴＣＡＣＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＡＡＧＣＡＣＡＡＧＴＴＧＴＣＴＧＧＧＴＧＧＣＴＡＣＣＡＴＧＧＡＴＧＣＴＣＴＴＣＡＧＣＴＣＴＧＴＡＧＧＧＣＴＣＴＣＣＡＧＣＴＴＣＡＣＣＡＣＣＡＴＴＣＴＡＴＴＴＴＴＣＡＴＡＧＧＣＡＡＣＣＡＣＡＧＡＡＴＧＴＡＴＣＡＧＡＡＣＴＡＴＴＴＡＡＧＧＡＡＣＣＡＴＣＴＡＣＡＡＣＣＴＴＧＧＡＡＴＧＴＣＡＣＴＧＧＣＧＡＴＡＧＣＡＴＡＣＧＧＡＧＣＴＡＣＴＧＴＧＡＧＡＡＡＴＴＣＴＡＴＣＴＣＴＴＣＣＣＴＣＴＡＡＡＡＡＴＧＡＴＴＡＣＴＴＧＧＡＣＡＡＴＧＣＣＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＴＴＴＴＴＣＡＴＴＴＧＣＡＴＧＡＴＴＴＴＧＣＴＣＡＴＣＡＣＡＴＣＴＣＴＧＧＧＡＡＧＡＣＡＣＡＧＧＡＡＧＡＡＧＧＣＴＣＴＣＣＴＴＡＣＡＡＣＣＴＣＡＧＧＡＴＴＣＣＧＡＧＡＧＣＣＣＡＧＴＧＴＧＣＡＧＧＣＡＣＡＣＡＴＡＡＡＧＧＣＴＣＴＧＣＴＧＧＣＴＣＴＣＣＴＣＴＣＴＴＴＴＧＣＣＡＴＧＣＴＣＴＴＣＡＴＣＴＣＡＴＡＴＴＴＣＣＴＧＴＣＡＣＴＧＧＴＧＴＴＣＡＧＴＧＣＴＧＣＡＧＧＴＡＴＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＣＴＧＧＡＣＴＴＴＡＡＡＴＴＣＴＧＧＧＴＧＴＧＧＧＡＧＴＣＡＧＴＧＡＴＴＴＡＴＣＴＧＴＧＴＧＣＡＧＣＡＧＴＴＣＡＣＣＣＣＡＴＣＡＴＴＣＴＧＣＴＣＴＴＣＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＧＧＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＴＧＣＴＧＡＡＧＡＧＴＣＧＴＣＧＴＴＣＣＴＣＡＡＧＧＴＧＴＧＧＧＡＣＡＣＣＴＴＧＡ              （配列番号２６）
【０２１６】
ＨＵＭＡＮ  ＧＮＡ１５  ＣＤＳ
ＡＴＧＧＣＣＣＧＧＴＣＣＣＴＧＡＣＴＴＧＧＧＧＣＴＧＣＴＧＴＣＣＣＴＧＧＴＧＣＣＴＧＡＣＡＧＡＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＡＣＴＧＣＣＧＣＣＡＧＡＡＴＣＧＡＣＣＡＧＧＡＧＡＴＣＡＡＣＡＧＧＡＴＴＴＴＧＴＴＧＧＡＡＣＡＧＡＡＡＡＡＡＣＡＡＧＡＧＣＧＣＧＡＧＧＡＡＴＴＧＡＡＡＣＴＣＣＴＧＣＴＧＴＴＧＧＧＧＣＣＴＧＧＴＧＡＧＡＧＣＧＧＧＡＡＧＡＧＴＡＣＧＴＴＣＡＴＣＡＡＧＣＡＧＡＴＧＣＧＣＡＴＣＡＴＴＣＡＣＧＧＴＧＴＧＧＧＣＴＡＣＴＣＧＧＡＧＧＡＧＧＡＣＣＧＣＡＧＡＧＣＣＴＴＣＣＧＧＣＴＧＣＴＣＡＴＣＴＡＣＣＡＧＡＡＣＡＴＣＴＴＣＧＴＣＴＣＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＡＴＧＡＴＡＧＡＴＧＣＧＡＴＧＧＡＣＣＧＧＣＴＧＣＡＧＡＴＣＣＣＣＴＴＣＡＧＣＡＧＧＣＣＴＧＡＣＡＧＣＡＡＧＣＡＧＣＡＣＧＣＣＡＧＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＧＡＣＣＣＣＴＡＴＡＡＡＧＴＧＡＧＣＡＣＡＴＴＣＧＡＧＡＡＧＣＣＡＴＡＴＧＣＡＧＴＧＧＣＣＡＴＧＣＡＧＴＡＣＣＴＧＴＧＧＣＧＧＧＡＣＧＣＧＧＧＣＡＴＣＣＧＴＧＣＡＴＧＣＴＡＣＧＡＧＣＧＡＡＧＧＣＧＴＧＡＡＴＴＣＣＡＣＣＴＴＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＣＧＧＴＧＴＡＴＴＡＣＣＴＧＴＣＡＣＡＣＣＴＧＧＡＧＣＧＣＡＴＡＴＣＡＧＡＧＧＡＣＡＧＣＴＡＣＡＴＣＣＣＣＡＣＴＧＣＧＣＡＡＧＡＣＧＴＧＣＴＧＣＧＣＡＧＴＣＧＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＡＣＡＧＧＣＡＴＣＡＡＴＧＡＧＴＡＣＴＧＣＴＴＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＡＡＡＡＣＣＡＡＡＣＴＧＣＧＣＡＴＣＧＴＧＧＡＴＧＴＴＧＧＴＧＧＣＣＡＧＡＧＧＴＣＡＧＡＧＣＧＴＡＧＧＡＡＡＴＧＧＡＴＴＣＡＣＴＧＴＴＴＣＧＡＧＡＡＣＧＴＧＡＴＴＧＣＣＣＴＣＡＴＣＴＡＣＣＴＧＧＣＣＴＣＣＣＴＧＡＧＣＧＡＧＴＡＴＧＡＣＣＡＧＴＧＣＣＴＡＧＡＧＧＡＧＡＡＣＧＡＴＣＡＧＧＡＧＡＡＣＣＧＣＡＴＧＧＡＧＧＡＧＡＧＴＣＴＣＧＣＴＣＴＧＴＴＣＡＧＣＡＣＧＡＴＣＣＴＡＧＡＧＣＴＧＣＣＣＴＧＧＴＴＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＧＧＴＣＡＴＣＣＴＣＴＴＣＣＴＣＡＡＣＡＡＧＡＣＧＧＡＣＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＴＣＡＣＡＣＣＴＣＣＣＡＣＣＴＧＧＣＣＡＣＡＴＡＣＴＴＣＣＣＣＡＧＣＴＴＣＣＡＧＧＧＡＣＣＣＣＧＧＣＧＡＧＡＣＧＣＡＧＡＧＧＣＣＧＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＴＣＴＴＧＧＡＣＡＴＧＴＡＴＧＣＧＣＧＣＧＴＧＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＧＣＧＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＧＡＣＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＡＡＧＧＣＴＣＣＣＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＣＴＴＣＴＴＣＧＣＡＣＡＣＴＴＣＡＣＣＴＧＴＧＣＣＡＣＧＧＡＣＡＣＧＣＡＡＡＧＣＧＴＣＣＧＣＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＡＧＧＡＣＧＴＧＣＧＧＧＡＣＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＣＣＣＧＧＴＡＣＣＴＧＧＡＣＧＡＧＡＴＣＡＡＣＣＴＧＣＴＧＴＧＡ           （配列番号２７）
【０２１７】
ＴＡＳ２Ｒ１
ＭＬＥＳＨＬＩＩＹＦＬＬＡＶＩＱＦＬＬＧＩＦＴＮＧＩＩＶＶＶＮＧＩＤＬＩＫＨＲＫＭＡＰＬＤＬＬＬＳＣＬＡＶＳＲＩＦＬＱＬＦＩＦＹＶＮＶＩＶＩＦＦＩＥＦＩＭＣＳＡＮＣＡＩＬＬＦＩＮＥＬＥＬＷＬＡＴＷＬＧＶＦＹＣＡＫＶＡＳＶＲＨＰＬＦＩＷＬＫＭＲＩＳＫＬＶＰＷＭＩＬＧＳＬＬＹＶＳＭＩＣＶＦＨＳＫＹＡＧＦＭＶＰＹＦＬＲＫＦＦＳＱＮＡＴＩＱＫＥＤＴＬＡＩＱＩＦＳＦＶＡＥＦＳＶＰＬＬＩＦＬＦＡＶＬＬＬＩＦＳＬＧＲＨＴＲＱＭＲＮＴＶＡＧＳＲＶＰＧＲＧＡＰＩＳＡＬＬＳＩＬＳＦＬＩＬＹＦＳＨＣＭＩＫＶＦＬＳＳＬＫＦＨＩＲＲＦＩＦＬＦＦＩＬＶＩＧＩＹＰＳＧＨＳＬＩＬＩＬＧＮＰＫＬＫＱＮＡＫＫＦＬＬＨＳＫＣＣＱ    （配列番号２８）
【０２１８】
ＴＡＳ２Ｒ３
ＭＭＧＬＴＥＧＶＦＬＩＬＳＧＴＱＦＴＬＧＩＬＶＮＣＦＩＥＬＶＮＧＳＳＷＦＫＴＫＲＭＳＬＳＤＦＩＩＴＴＬＡＬＬＲＩＩＬＬＣＩＩＬＴＤＳＦＬＩＥＦＳＰＮＴＨＤＳＧＩＩＭＱＩＩＤＶＳＷＴＦＴＮＨＬＳＩＷＬＡＴＣＬＧＶＬＹＣＬＫＩＡＳＦＳＨＰＴＦＬＷＬＫＷＲＶＳＲＶＭＶＷＭＬＬＧＡＬＬＬＳＣＧＳＴＡＳＬＩＮＥＦＫＬＹＳＶＦＲＧＩＥＡＴＲＮＶＴＥＨＦＲＫＫＲＳＥＹＹＬＩＨＶＬＧＴＬＷＹＬＰＰＬＩＶＳＬＡＳＹＳＬＬＩＦＳＬＧＲＨＴＲＱＭＬＱＮＧＴＳＳＲＤＰＴＴＥＡＨＫＲＡＩＲＩＩＬＳＦＦＦＬＦＬＬＹＦＬＡＦＬＩＡＳＦＧＮＦＬＰＫＴＫＭＡＫＭＩＧＥＶＭＴＭＦＹＰＡＧＨＳＦＩＬＩＬＧＮＳＫＬＫＱＴＦＶＶＭＬＲＣＥＳＧＨＬＫＰＧＳＫＧＰＩＦＳ              （配列番号２９）
【０２１９】
ＴＡＳ２Ｒ４
ＭＬＲＬＦＹＦＳＡＩＩＡＳＶＩＬＮＦＶＧＩＩＭＮＬＦＩＴＶＶＮＣＫＴＷＶＫＳＨＲＩＳＳＳＤＲＩＬＦＳＬＧＩＴＲＦＬＭＬＧＬＦＬＶＮＴＩＹＦＶＳＳＮＴＥＲＳＶＹＬＳＡＦＦＶＬＣＦＭＦＬＤＳＳＳＶＷＦＶＴＬＬＮＩＬＹＣＶＫＩＴＮＦＱＨＳＶＦＬＬＬＫＲＮＩＳＰＫＩＰＲＬＬＬＡＣＶＬＩＳＡＦＴＴＣＬＹＩＴＬＳＱＡＳＰＦＰＥＬＶＴＴＲＮＮＴＳＦＮＩＳＥＧＩＬＳＬＶＶＳＬＶＬＳＳＳＬＱＦＩＩＮＶＴＳＡＳＬＬＩＨＳＬＲＲＨＩＱＫＭＱＫＮＡＴＧＦＷＮＰＱＴＥＡＨＶＧＡＭＫＬＭＶＹＦＬＩＬＹＩＰＹＳＶＡＴＬＶＱＹＬＰＦＹＡＧＭＤＭＧＴＫＳＩＣＬＩＦＡＴＬＹＳＰＧＨＳＶＬＩＩＩＴＨＰＫＬＫＴＴＡＫＫＩＬＣＦＫＫ    （配列番号３０）
【０２２０】
ＴＡＳ２Ｒ５
ＭＬＳＡＧＬＧＬＬＭＬＶＡＶＶＥＦＬＩＧＬＩＧＮＧＳＬＶＶＷＳＦＲＥＷＩＲＫＦＮＷＳＳＹＮＬＩＩＬＧＬＡＧＣＲＦＬＬＱＷＬＩＩＬＤＬＳＬＦＰＬＦＱＳＳＲＷＬＲＹＬＳＩＦＷＶＬＶＳＱＡＳＬＷＦＡＴＦＬＳＶＦＹＣＫＫＩＴＴＦＤＲＰＡＹＬＷＬＫＱＲＡＹＮＬＳＬＷＣＬＬＧＹＦＩＩＮＬＬＬＴＶＱＩＧＬＴＦＹＨＰＰＱＧＮＳＳＩＲＹＰＦＥＳＷＱＹＬＹＡＦＱＬＮＳＧＳＹＬＰＬＶＶＦＬＶＳＳＧＭＬＩＶＳＬＹＴＨＨＫＫＭＫＶＨＳＡＧＲＲＤＶＲＡＫＡＨＩＴＡＬＫＳＬＧＣＦＬＬＬＨＬＶＹＩＭＡＳＰＦＳＩＴＳＫＴＹＰＰＤＬＴＳＶＦＩＷＥＴＬＭＡＡＹＰＳＬＨＳＬＩＬＩＭＧＩＰＲＶＫＱＴＣＱＫＩＬＷＫＴＶＣＡＲＲＣＷＧＰ    （配列番号３１）
【０２２１】
ＴＡＳ２Ｒ７
ＭＡＤＫＶＱＴＴＬＬＦＬＡＶＧＥＦＳＶＧＩＬＧＮＡＦＩＧＬＶＮＣＭＤＷＶＫＫＲＫＩＡＳＩＤＬＩＬＴＳＬＡＩＳＲＩＣＬＬＣＶＩＬＬＤＣＦＩＬＶＬＹＰＤＶＹＡＴＧＫＥＭＲＩＩＤＦＦＷＴＬＴＮＨＬＳＩＷＦＡＴＣＬＳＩＹＹＦＦＫＩＧＮＦＦＨＰＬＦＬＷＭＫＷＲＩＤＲＶＩＳＷＩＬＬＧＣＶＶＬＳＶＦＩＳＬＰＡＴＥＮＬＮＡＤＦＲＦＣＶＫＡＫＲＫＴＮＬＴＷＳＣＲＶＮＫＴＱＨＡＳＴＫＬＦＬＮＬＡＴＬＬＰＦＣＶＣＬＭＳＦＦＬＬＩＬＳＬＲＲＨＩＲＲＭＱＬＳＡＴＧＣＲＤＰＳＴＥＡＨＶＲＡＬＫＡＶＩＳＦＬＬＬＦＩＡＹＹＬＳＦＬＩＡＴＳＳＹＦＭＰＥＴＥＬＡＶＩＦＧＥＳＩＡＬＩＹＰＳＳＨＳＦＩＬＩＬＧＮＮＫＬＲＨＡＳＬＫＶＩＷＫＶＭＳＩＬＫＧＲＫＦＱＱＨＫＱＩ           （配列番号３２）
【０２２２】
ＴＡＳ２Ｒ８
ＭＦＳＰＡＤＮＩＦＩＩＬＩＴＧＥＦＩＬＧＩＬＧＮＧＹＩＡＬＶＮＷＩＤＷＩＫＫＫＫＩＳＴＶＤＹＩＬＴＮＬＶＩＡＲＩＣＬＩＳＶＭＶＶＮＧＩＶＩＶＬＮＰＤＶＹＴＫＮＫＱＱＩＶＩＦＴＦＷＴＦＡＮＹＬＮＭＷＩＴＴＣＬＮＶＦＹＦＬＫＩＡＳＳＳＨＰＬＦＬＷＬＫＷＫＩＤＭＶＶＨＷＩＬＬＧＣＦＡＩＳＬＬＶＳＬＩＡＡＩＶＬＳＣＤＹＲＦＨＡＩＡＫＨＫＲＮＩＴＥＭＦＨＶＳＫＩＰＹＦＥＰＬＴＬＦＮＬＦＡＩＶＰＦＩＶＳＬＩＳＦＦＬＬＶＲＳＬＷＲＨＴＫＱＩＫＬＹＡＴＧＳＲＤＰＳＴＥＶＨＶＲＡＩＫＴＭＴＳＦＩＦＦＦＦＬＹＹＩＳＳＩＬＭＴＦＳＹＬＭＴＫＹＫＬＡＶＥＦＧＥＩＡＡＩＬＹＰＬＧＨＳＬＩＬＩＶＬＮＮＫＬＲＱＴＦＶＲＭＬＴＣＲＫＩＡＣＭＩ           （配列番号３３）
【０２２３】
ＴＡＳ２Ｒ９
ＭＰＳＡＩＥＡＩＹＩＩＬＩＡＧＥＬＴＩＧＩＷＧＮＧＦＩＶＬＶＮＣＩＤＷＬＫＲＲＤＩＳＬＩＤＩＩＬＩＳＬＡＩＳＲＩＣＬＬＣＶＩＳＬＤＧＦＦＭＬＬＦＰＧＴＹＧＮＳＶＬＶＳＩＶＮＶＶＷＴＦＡＮＮＳＳＬＷＦＴＳＣＬＳＩＦＹＬＬＫＩＡＮＩＳＨＰＦＦＦＷＬＫＬＫＩＮＫＶＭＬＡＩＬＬＧＳＦＬＩＳＬＩＩＳＶＰＫＮＤＤＭＷＹＨＬＦＫＶＳＨＥＥＮＩＴＷＫＦＫＶＳＫＩＰＧＴＦＫＱＬＴＬＮＬＧＶＭＶＰＦＩＬＣＬＩＳＦＦＬＬＬＦＳＬＶＲＨＴＫＱＩＲＬＨＡＴＧＦＲＤＰＳＴＥＡＨＭＲＡＩＫＡＶＩＩＦＬＬＬＬＩＶＹＹＰＶＦＬＶＭＴＳＳＡＬＩＰＱＧＫＬＶＬＭＩＧＤＩＶＴＶＩＦＰＳＳＨＳＦＩＬＩＭＧＮＳＫＬＲＥＡＦＬＫＭＬＲＦＶＫＣＦＬＲＲＲＫＰＦＶＰ              （配列番号３４）
【０２２４】
ＴＡＳ２Ｒ１０
ＭＬＲＶＶＥＧＩＦＩＦＶＶＶＳＥＳＶＦＧＶＬＧＮＧＦＩＧＬＶＮＣＩＤＣＡＫＮＫＬＳＴＩＧＦＩＬＴＧＬＡＩＳＲＩＦＬＩＷＩＩＩＴＤＧＦＩＱＩＦＳＰＮＩＹＡＳＧＮＬＩＥＹＩＳＹＦＷＶＩＧＮＱＳＳＭＷＦＡＴＳＬＳＩＦＹＦＬＫＩＡＮＦＳＮＹＩＦＬＷＬＫＳＲＴＮＭＶＬＰＦＭＩＶＦＬＬＩＳＳＬＬＮＦＡＹＩＡＫＩＬＮＤＹＫＭＫＮＤＴＶＷＤＬＮＭＹＫＳＥＹＦＩＫＱＩＬＬＮＬＧＶＩＦＦＦＴＬＳＬＩＴＣＩＦＬＩＩＳＬＷＲＨＮＲＱＭＱＳＮＶＴＧＬＲＤＳＮＴＥＡＨＶＫＡＭＫＶＬＩＳＦＩＩＬＦＩＬＹＦＩＧＭＡＩＥＩＳＣＦＴＶＲＥＮＫＬＬＬＭＦＧＭＴＴＴＡＩＹＰＷＧＨＳＦＩＬＩＬＧＮＳＫＬＫＱＡＳＬＲＶＬＱＱＬＫＣＣＥＫ              （配列番号３５）
【０２２５】
ＴＡＳ２Ｒ１３
ＭＥＳＡＬＰＳＩＦＴＬＶＩＩＡＥＦＩＩＧＮＬＳＮＧＦＩＶＬＩＮＣＩＤＷＶＳＫＲＥＬＳＳＶＤＫＬＬＩＩＬＡＩＳＲＩＧＬＩＷＥＩＬＶＳＷＦＬＡＬＨＹＬＡＩＦＶＳＧＴＧＬＲＩＭＩＦＳＷＩＶＳＮＨＦＮＬＷＬＡＴＩＦＳＩＦＹＬＬＫＩＡＳＦＳＳＰＡＦＬＹＬＫＷＲＶＮＫＶＩＬＭＩＬＬＧＴＬＶＦＬＦＬＮＬＩＱＩＮＭＨＩＫＤＷＬＤＲＹＥＲＮＴＴＷＮＦＳＭＳＤＦＥＴＦＳＶＳＶＫＦＴＭＴＭＦＳＬＴＰＦＴＶＡＦＩＳＦＬＬＬＩＦＳＬＱＫＨＬＱＫＭＱＬＮＹＫＧＨＲＤＰＲＴＫＶＨＴＮＡＬＫＩＶＩＳＦＬＬＦＹＡＳＦＦＬＣＶＬＩＳＷＩＳＥＬＹＱＮＴＶＩＹＭＬＣＥＴＩＧＶＦＳＰＳＳＨＳＦＬＬＩＬＧＮＡＫＬＲＱＡＦＬＬＶＡＡＫＶＷ              （配列番号３６）
【０２２６】
ＴＡＳ２Ｒ１４
ＭＧＧＶＩＫＳＩＦＴＦＶＬＩＶＥＦＩＩＧＮＬＧＮＳＦＩＡＬＶＮＣＩＤＷＶＫＧＲＫＩＳＳＶＤＲＩＬＴＡＬＡＩＳＲＩＳＬＶＷＬＩＦＧＳＷＣＶＳＶＦＦＰＡＬＦＡＴＥＫＭＦＲＭＬＴＮＩＷＴＶＩＮＨＦＳＶＷＬＡＴＧＬＧＴＦＹＦＬＫＩＡＮＦＳＮＳＩＦＬＹＬＫＷＲＶＫＫＶＶＬＶＬＬＬＶＴＳＶＦＬＦＬＮＩＡＬＩＮＩＨＩＮＡＳＩＮＧＹＲＲＮＫＴＣＳＳＤＳＳＮＦＴＲＦＳＳＬＩＶＬＴＳＴＶＦＩＦＩＰＦＴＬＳＬＡＭＦＬＬＬＩＦＳＭＷＫＨＲＫＫＭＱＨＴＶＫＩＳＧＤＡＳＴＫＡＨＲＧＶＫＳＶＩＴＦＦＬＬＹＡＩＦＳＬＳＦＦＩＳＶＷＴＳＥＲＬＥＥＮＬＩＩＬＳＱＶＭＧＭＡＹＰＳＣＨＳＣＶＬＩＬＧＮＫＫＬＲＱＡＳＬＳＶＬＬＷＬＲＹＭＦＫＤＧＥＰＳＧＨＫＥＦＲＥＳＳ              （配列番号３７）
【０２２７】
ＴＡＳ２Ｒ１６
ＭＩＰＩＱＬＴＶＦＦＭＩＩＹＶＬＥＳＬＴＩＩＶＱＳＳＬＩＶＡＶＬＧＲＥＷＬＱＶＲＲＬＭＰＶＤＭＩＬＩＳＬＧＩＳＲＦＣＬＱＷＡＳＭＬＮＮＦＣＳＹＦＮＬＮＹＶＬＣＮＬＴＩＴＷＥＦＦＮＩＬＴＦＷＬＮＳＬＬＴＶＦＹＣＩＫＶＳＳＦＴＨＨＩＦＬＷＬＲＷＲＩＬＲＬＦＰＷＩＬＬＧＳＬＭＩＴＣＶＴＩＩＰＳＡＩＧＮＹＩＱＩＱＬＬＴＭＥＨＬＰＲＮＳＴＶＴＤＫＬＥＮＦＨＱＹＱＦＱＡＨＴＶＡＬＶＩＰＦＩＬＦＬＡＳＴＩＦＬＭＡＳＬＴＫＱＩＱＨＨＳＴＧＨＣＮＰＳＭＫＡＲＦＴＡＬＲＳＬＡＶＬＦＩＶＦＴＳＹＦＬＴＩＬＩＴＩＩＧＴＬＦＤＫＲＣＷＬＷＶＷＥＡＦＶＹＡＦＩＬＭＨＳＴＳＬＭＬＳＳＰＴＬＫＲＩＬＫＧＫＣ    （配列番号３８）
【０２２８】
ＴＡＳ２Ｒ３８
ＭＬＴＬＴＲＩＲＴＶＳＹＥＶＲＳＴＦＬＦＩＳＶＬＥＦＡＶＧＦＬＴＮＡＦＶＦＬＶＮＦＷＤＶＶＫＲＱＡＬＳＮＳＤＣＶＬＬＣＬＳＩＳＲＬＦＬＨＧＬＬＦＬＳＡＩＱＬＴＨＦＱＫＬＳＥＰＬＮＨＳＹＱＡＩＩＭＬＷＭＩＡＮＱＡＮＬＷＬＡＡＣＬＳＬＬＹＣＳＫＬＩＲＦＳＨＴＦＬＩＣＬＡＳＷＶＳＲＫＩＳＱＭＬＬＧＩＩＬＣＳＣＩＣＴＶＬＣＶＷＣＦＦＳＲＰＨＦＴＶＴＴＶＬＦＭＮＮＮＴＲＬＮＷＱＩＫＤＬＮＬＦＹＳＦＬＦＣＹＬＷＳＶＰＰＦＬＬＦＬＶＳＳＧＭＬＴＶＳＬＧＲＨＭＲＴＭＫＶＹＴＲＮＳＲＤＰＳＬＥＡＨＩＫＡＬＫＳＬＶＳＦＦＣＦＦＶＩＳＳＣＡＡＦＩＳＶＰＬＬＩＬＷＲＤＫＩＧＶＭＶＣＶＧＩＭＡＡＣＰＳＧＨＡＡＩＬＩＳＧＮＡＫＬＲＲＡＶＭＴＩＬＬＷＡＱＳＳＬＫＶＲＡＤＨＫＡＤＳＲＴＬＣ              （配列番号３９）
【０２２９】
ＴＡＳ２Ｒ３９
ＭＬＧＲＣＦＰＰＤＴＫＥＫＱＱＬＲＭＴＫＬＣＤＰＡＥＳＥＬＳＰＦＬＩＴＬＩＬＡＶＬＬＡＥＹＬＩＧＩＩＡＮＧＦＩＭＡＩＨＡＡＥＷＶＱＮＫＡＶＳＴＳＧＲＩＬＶＦＬＳＶＳＲＩＡＬＱＳＬＭＭＬＥＩＴＩＳＳＴＳＬＳＦＹＳＥＤＡＶＹＹＡＦＫＩＳＦＩＦＬＮＦＣＳＬＷＦＡＡＷＬＳＦＦＹＦＶＫＩＡＮＦＳＹＰＬＦＬＫＬＲＷＲＩＴＧＬＩＰＷＬＬＷＬＳＶＦＩＳＦＳＨＳＭＦＣＩＮＩＣＴＶＹＣＮＮＳＦＰＩＨＳＳＮＳＴＫＫＴＹＬＳＥＩＮＶＶＧＬＡＦＦＦＮＬＧＩＶＴＰＬＩＭＦＩＬＴＡＴＬＬＩＬＳＬＫＲＨＴＬＨＭＧＳＮＡＴＧＳＮＤＰＳＭＥＡＨＭＧＡＩＫＡＩＳＹＦＬＩＬＹＩＦＮＡＶＡＬＦＩＹＬＳＮＭＦＤＩＮＳＬＷＮＮＬＣＱＩＩＭＡＡＹＰＡＳＨＳＩＬＬＩＱＤＮＰＧＬＲＲＡＷＫＲＬＱＬＲＬＨＬＹＰＫＥＷＴＬ           （配列番号４０）
【０２３０】
ＴＡＳ２Ｒ４０
ＭＡＴＶＮＴＤＡＴＤＫＤＩＳＫＦＫＶＴＦＴＬＶＶＳＧＩＥＣＩＴＧＩＬＧＳＧＦＩＴＡＩＹＧＡＥＷＡＲＧＫＴＬＰＴＧＤＲＩＭＬＭＬＳＦＳＲＬＬＬＱＩＷＭＭＬＥＮＩＦＳＬＬＦＲＩＶＹＮＱＮＳＶＹＩＬＦＫＶＩＴＶＦＬＮＨＳＮＬＷＦＡＡＷＬＫＶＦＹＣＬＲＩＡＮＦＮＨＰＬＦＦＬＭＫＲＫＩＩＶＬＭＰＷＬＬＲＬＳＶＬＶＳＬＳＦＳＦＰＬＳＲＤＶＦＮＶＹＶＮＳＳＩＰＩＰＳＳＮＳＴＥＫＫＹＦＳＥＴＮＭＶＮＬＶＦＦＹＮＭＧＩＦＶＰＬＩＭＦＩＬＡＡＴＬＬＩＬＳＬＫＲＨＴＬＨＭＧＳＮＡＴＧＳＲＤＰＳＭＫＡＨＩＧＡＩＫＡＴＳＹＦＬＩＬＹＩＦＮＡＩＡＬＦＬＳＴＳＮＩＦＤＴＹＳＳＷＮＩＬＣＫＩＩＭＡＡＹＰＡＧＨＳＶＱＬＩＬＧＮＰＧＬＲＲＡＷＫＲＦＱＨＱＶＰＬＹＬＫＧＱＴＬ       （配列番号４１）
【０２３１】
ＴＡＳ２Ｒ４１
ＭＱＡＡＬＴＡＦＦＶＬＬＦＳＬＬＳＬＬＧＩＡＡＮＧＦＩＶＬＶＬＧＲＥＷＬＲＹＧＲＬＬＰＬＤＭＩＬＩＳＬＧＡＳＲＦＣＬＱＬＶＧＴＶＨＮＦＹＹＳＡＱＫＶＥＹＳＧＧＬＧＲＱＦＦＨＬＨＷＨＦＬＮＳＡＴＦＷＦＣＳＷＬＳＶＬＦＣＶＫＩＡＮＩＴＨＳＴＦＬＷＬＫＷＲＦＬＧＷＶＰＷＬＬＬＧＳＶＬＩＳＦＩＩＴＬＬＦＦＷＶＮＹＰＶＹＱＥＦＬＩＲＫＦＳＧＮＭＴＹＫＷＮＴＲＩＥＴＹＹＦＰＳＬＫＬＶＩＷＳＩＰＦＳＶＦＬＶＳＩＭＬＬＩＮＳＬＲＲＨＴＱＲＭＱＨＮＧＨＳＬＱＤＰＳＴＱＡＨＴＲＡＬＫＳＬＩＳＦＬＩＬＹＡＬＳＦＬＳＬＩＩＤＡＡＫＦＩＳＭＱＮＤＦＹＷＰＷＱＩＡＶＹＬＣＩＳＶＨＰＦＩＬＩＦＳＮＬＫＬＲＳＶＦＳＱＬＬＬＬＡＲＧＦＷＶＡ    （配列番号４２）
【０２３２】
ＴＡＳ２Ｒ４３
ＭＩＴＦＬＰＩＩＦＳＳＬＶＶＶＴＦＶＩＧＮＦＡＮＧＦＩＡＬＶＮＳＩＥＳＦＫＲＱＫＩＳＦＡＤＱＩＬＴＡＬＡＶＳＲＶＧＬＬＷＶＬＬＬＮＷＹＳＴＶＬＮＰＡＦＮＳＶＥＶＲＴＴＡＹＮＩＷＡＶＩＮＨＦＳＮＷＬＡＴＴＬＳＩＦＹＬＬＫＩＡＮＦＳＮＦＩＦＬＨＬＫＲＲＶＫＳＶＩＬＶＭＬＬＧＰＬＬＦＬＡＣＨＬＦＶＩＮＭＮＥＩＶＲＴＫＥＦＥＧＮＭＴＷＫＩＫＬＫＳＡＭＹＦＳＮＭＴＶＴＭＶＡＮＬＶＰＦＴＬＴＬＬＳＦＭＬＬＩＣＳＬＣＫＨＬＫＫＭＱＬＲＧＫＧＳＱＤＰＳＴＫＶＨＩＫＡＬＱＴＶＩＳＦＬＬＬＣＡＩＹＦＬＳＩＭＩＳＶＷＳＦＧＳＬＥＮＫＰＶＦＭＦＣＫＡＩＲＦＳＹＰＳＩＨＰＦＩＬＩＷＧＮＫＫＬＫＱＴＦＬＳＶＦＷＱＭＲＹＷＶＫＧＥＫＴＳＳＰ           （配列番号４３）
【０２３３】
ＴＡＳ２Ｒ４４
ＭＴＴＦＩＰＩＩＦＳＳＶＶＶＶＬＦＶＩＧＮＦＡＮＧＦＩＡＬＶＮＳＩＥＲＶＫＲＱＫＩＳＦＡＤＱＩＬＴＡＬＡＶＳＲＶＧＬＬＷＶＬＬＬＮＷＹＳＴＶＦＮＰＡＦＹＳＶＥＶＲＴＴＡＹＮＶＷＡＶＴＧＨＦＳＮＷＬＡＴＳＬＳＩＦＹＬＬＫＩＡＮＦＳＮＬＩＦＬＨＬＫＲＲＶＫＳＶＩＬＶＭＬＬＧＰＬＬＦＬＡＣＱＬＦＶＩＮＭＫＥＩＶＲＴＫＥＹＥＧＮＭＴＷＫＩＫＬＲＳＡＶＹＬＳＤＡＴＶＴＴＬＧＮＬＶＰＦＴＬＴＬＬＣＦＬＬＬＩＣＳＬＣＫＨＬＫＫＭＱＬＨＧＫＧＳＱＤＰＳＴＫＶＨＩＫＡＬＱＴＶＩＦＦＬＬＬＣＡＶＹＦＬＳＩＭＩＳＶＷＳＦＧＳＬＥＮＫＰＶＦＭＦＣＫＡＩＲＦＳＹＰＳＩＨＰＦＩＬＩＷＧＮＫＫＬＫＱＴＦＬＳＶＬＲＱＶＲＹＷ              （配列番号４４）
【０２３４】
ＴＡＳ２Ｒ４５
ＭＩＴＦＬＰＩＩＦＳＩＬＶＶＶＴＦＶＩＧＮＦＡＮＧＦＩＡＬＶＮＳＴＥＷＶＫＲＱＫＩＳＦＡＤＱＩＶＴＡＬＡＶＳＲＶＧＬＬＷＶＬＬＬＮＷＹＳＴＶＬＮＰＡＦＣＳＶＥＬＲＴＴＡＹＮＩＷＡＶＴＧＨＦＳＮＷＰＡＴＳＬＳＩＦＹＬＬＫＩＡＮＦＳＮＬＩＦＬＲＬＫＲＲＶＫＳＶＩＬＶＶＬＬＧＰＬＬＦＬＡＣＨＬＦＶＶＮＭＮＱＩＶＷＴＫＥＹＥＧＮＭＴＷＫＩＫＬＲＲＡＭＹＬＳＤＴＴＶＴＭＬＡＮＬＶＰＦＴＶＴＬＩＳＦＬＬＬＶＣＳＬＣＫＨＬＫＫＭＱＬＨＧＫＧＳＱＤＰＳＴＫＶＨＩＫＶＬＱＴＶＩＳＦＦＬＬＲＡＩＹＦＶＳＶＩＩＳＶＷＳＦＫＮＬＥＮＫＰＶＦＭＦＣＱＡＩＧＦＳＣＳＳＡＨＰＦＩＬＩＷＧＮＫＫＬＫＱＴＹＬＳＶＬＷＱＭＲＹ    （配列番号４５）
【０２３５】
ＴＡＳ２Ｒ４６
ＭＩＴＦＬＰＩＩＦＳＩＬＩＶＶＴＦＶＩＧＮＦＡＮＧＦＩＡＬＶＮＳＩＥＷＦＫＲＱＫＩＳＦＡＤＱＩＬＴＡＬＡＶＳＲＶＧＬＬＷＶＬＶＬＮＷＹＡＴＥＬＮＰＡＦＮＳＩＥＶＲＩＴＡＹＮＶＷＡＶＩＮＨＦＳＮＷＬＡＴＳＬＳＩＦＹＬＬＫＩＡＮＦＳＮＬＩＦＬＨＬＫＲＲＶＫＳＶＶＬＶＩＬＬＧＰＬＬＦＬＶＣＨＬＦＶＩＮＭＮＱＩＩＷＴＫＥＹＥＧＮＭＴＷＫＩＫＬＲＳＡＭＹＬＳＮＴＴＶＴＩＬＡＮＬＶＰＦＴＬＴＬＩＳＦＬＬＬＩＣＳＬＣＫＨＬＫＫＭＱＬＨＧＫＧＳＱＤＰＳＭＫＶＨＩＫＡＬＱＴＶＴＳＦＬＬＬＣＡＩＹＦＬＳＩＩＭＳＶＷＳＦＥＳＬＥＮＫＰＶＦＭＦＣＥＡＩＡＦＳＹＰＳＴＨＰＦＩＬＩＷＧＮＫＫＬＫＱＴＦＬＳＶＬＷＨＶＲＹＷＶＫＧＥＫＰＳＳＳ           （配列番号４６）
【０２３６】
ＴＡＳ２Ｒ４７
ＭＩＴＦＬＰＩＩＦＳＩＬＩＶＶＩＦＶＩＧＮＦＡＮＧＦＩＡＬＶＮＳＩＥＷＶＫＲＱＫＩＳＦＶＤＱＩＬＴＡＬＡＶＳＲＶＧＬＬＷＶＬＬＬＨＷＹＡＴＱＬＮＰＡＦＹＳＶＥＶＲＩＴＡＹＮＶＷＡＶＴＮＨＦＳＳＷＬＡＴＳＬＳＭＦＹＬＬＲＩＡＮＦＳＮＬＩＦＬＲＩＫＲＲＶＫＳＶＶＬＶＩＬＬＧＰＬＬＦＬＶＣＨＬＦＶＩＮＭＤＥＴＶＷＴＫＥＹＥＧＮＶＴＷＫＩＫＬＲＳＡＭＹＨＳＮＭＴＬＴＭＬＡＮＦＶＰＬＴＬＴＬＩＳＦＬＬＬＩＣＳＬＣＫＨＬＫＫＭＱＬＨＧＫＧＳＱＤＰＳＴＫＶＨＩＫＡＬＱＴＶＴＳＦＬＬＬＣＡＩＹＦＬＳＭＩＩＳＶＣＮＬＧＲＬＥＫＱＰＶＦＭＦＣＱＡＩＩＦＳＹＰＳＴＨＰＦＩＬＩＬＧＮＫＫＬＫＱＩＦＬＳＶＬＲＨＶＲＹＷＶＫＤＲＳＬＲＬＨＲＦＴＲＡＡＬＣＫＧ       （配列番号４７）
【０２３７】
ＴＡＳ２Ｒ４８
ＭＭＣＦＬＬＩＩＳＳＩＬＶＶＦＡＦＶＬＧＮＶＡＮＧＦＩＡＬＶＮＶＩＤＷＶＮＴＲＫＩＳＳＡＥＱＩＬＴＡＬＶＶＳＲＩＧＬＬＷＶＭＬＦＬＷＹＡＴＶＦＮＳＡＬＹＧＬＥＶＲＩＶＡＳＮＡＷＡＶＴＮＨＦＳＭＷＬＡＡＳＬＳＩＦＣＬＬＫＩＡＮＦＳＮＬＩＳＬＨＬＫＫＲＩＫＳＶＶＬＶＩＬＬＧＰＬＶＦＬＩＣＮＬＡＶＩＴＭＤＥＲＶＷＴＫＥＹＥＧＮＶＴＷＫＩＫＬＲＮＡＩＨＬＳＳＬＴＶＴＴＬＡＮＬＩＰＦＴＬＳＬＩＣＦＬＬＬＩＣＳＬＣＫＨＬＫＫＭＲＬＨＳＫＧＳＱＤＰＳＴＫＶＨＩＫＡＬＱＴＶＴＳＦＬＭＬＦＡＩＹＦＬＣＩＩＴＳＴＷＮＬＲＴＱＱＳＫＬＶＬＬＬＣＱＴＶＡＩＭＹＰＳＦＨＳＦＩＬＩＭＧＳＲＫＬＫＱＴＦＬＳＶＬＷＱＭＴＲ    （配列番号４８）
【０２３８】
ＴＡＳ２Ｒ４９
ＭＭＳＦＬＨＩＶＦＳＩＬＶＶＶＡＦＩＬＧＮＦＡＮＧＦＩＡＬＩＮＦＩＡＷＶＫＲＱＫＩＳＳＡＤＱＩＩＡＡＬＡＶＳＲＶＧＬＬＷＶＩＬＬＨＷＹＳＴＶＬＮＰＴＳＳＮＬＫＶＩＩＦＩＳＮＡＷＡＶＴＮＨＦＳＩＷＬＡＴＳＬＳＩＦＹＬＬＫＩＶＮＦＳＲＬＩＦＨＨＬＫＲＫＡＫＳＶＶＬＶＩＶＬＧＳＬＦＦＬＶＣＨＬＶＭＫＨＴＹＩＮＶＷＴＥＥＣＥＧＮＶＴＷＫＩＫＬＲＮＡＭＨＬＳＮＬＴＶＡＭＬＡＮＬＩＰＦＴＬＴＬＩＳＦＬＬＬＩＹＳＬＣＫＨＬＫＫＭＱＬＨＧＫＧＳＱＤＰＳＴＫＩＨＩＫＡＬＱＴＶＴＳＦＬＩＬＬＡＩＹＦＬＣＬＩＩＳＦＷＮＦＫＭＲＰＫＥＩＶＬＭＬＣＱＡＦＧＩＩＹＰＳＦＨＳＦＩＬＩＷＧＮＫＴＬＫＱＴＦＬＳＶＬＷＱＶＴＣＷＡＫＧＱＮＱＳＴＰ           （配列番号４９）
【０２３９】
ＴＡＳ２Ｒ５０
ＭＩＴＦＬＹＩＦＦＳＩＬＩＭＶＬＦＶＬＧＮＦＡＮＧＦＩＡＬＶＮＦＩＤＷＶＫＲＫＫＩＳＳＡＤＱＩＬＴＡＬＡＶＳＲＩＧＬＬＷＡＬＬＬＮＷＹＬＴＶＬＮＰＡＦＹＳＶＥＬＲＩＴＳＹＮＡＷＶＶＴＮＨＦＳＭＷＬＡＡＮＬＳＩＦＹＬＬＫＩＡＮＦＳＮＬＬＦＬＨＬＫＲＲＶＲＳＶＩＬＶＩＬＬＧＴＬＩＦＬＶＣＨＬＬＶＡＮＭＤＥＳＭＷＡＥＥＹＥＧＮＭＴＧＫＭＫＬＲＮＴＶＨＬＳＹＬＴＶＴＴＬＷＳＦＩＰＦＴＬＳＬＩＳＦＬＭＬＩＣＳＬＹＫＨＬＫＫＭＱＬＨＧＥＧＳＱＤＬＳＴＫＶＨＩＫＡＬＱＴＬＩＳＦＬＬＬＣＡＩＦＦＬＦＬＩＶＳＶＷＳＰＲＲＬＲＮＤＰＶＶＭＶＳＫＡＶＧＮＩＹＬＡＦＤＳＦＩＬＩＷＲＴＫＫＬＫＨＴＦＬＬＩＬＣＱＩＲＣ    （配列番号５０）
【０２４０】
ＴＡＳ２Ｒ５５
ＭＡＴＥＬＤＫＩＦＬＩＬＡＩＡＥＦＩＩＳＭＬＧＮＶＦＩＧＬＶＮＣＳＥＧＩＫＮＱＫＶＦＳＡＤＦＩＬＴＣＬＡＩＳＴＩＧＱＬＬＶＩＬＦＤＳＦＬＶＧＬＡＳＨＬＹＴＴＹＲＬＧＫＴＶＩＭＬＷＨＭＴＮＨＬＴＴＷＬＡＴＣＬＳＩＦＹＦＦＫＩＡＨＦＰＨＳＬＦＬＷＬＲＷＲＭＮＧＭＩＶＭＬＬＩＬＳＬＦＬＬＩＦＤＳＬＶＬＥＩＦＩＤＩＳＬＮＩＩＤＫＳＮＬＴＬＹＬＤＥＳＫＴＬＹＤＫＬＳＩＬＫＴＬＬＳＬＴＳＦＩＰＦＳＬＦＬＴＳＬＬＦＬＦＬＳＬＶＲＨＴＲＮＬＫＬＳＳＬＧＳＲＤＳＳＴＥＡＨＲＲＡＭＫＭＶＭＳＦＬＦＬＦＩＶＨＦＦＳＬＱＶＡＮＧＩＦＦＭＬＷＮＮＫＹＩＫＦＶＭＬＡＬＮＡＦＰＳＣＨＳＦＩＬＩＬＧＮＳＫＬＲＱＴＡＶＲＬＬＷＨＬＲＮＹＴＫＴＰＮＡＬＰＬ              （配列番号５１）
【０２４１】
ＴＡＳ２Ｒ６０
ＭＮＧＤＨＭＶＬＧＳＳＶＴＤＫＫＡＩＩＬＶＴＩＬＬＬＬＲＬＶＡＩＡＧＮＧＦＩＴＡＡＬＧＶＥＷＶＬＲＲＭＬＬＰＣＤＫＬＬＶＳＬＧＡＳＲＦＣＬＱＳＶＶＭＧＫＴＩＹＶＦＬＨＰＭＡＦＰＹＮＰＶＬＱＦＬＡＦＱＷＤＦＬＮＡＡＴＬＷＳＳＴＷＬＳＶＦＹＣＶＫＩＡＴＦＴＨＰＶＦＦＷＬＫＨＫＬＳＧＷＬＰＷＭＬＦＳＳＶＧＬＳＳＦＴＴＩＬＦＦＩＧＮＨＲＭＹＱＮＹＬＲＮＨＬＱＰＷＮＶＴＧＤＳＩＲＳＹＣＥＫＦＹＬＦＰＬＫＭＩＴＷＴＭＰＴＡＶＦＦＩＣＭＩＬＬＩＴＳＬＧＲＨＲＫＫＡＬＬＴＴＳＧＦＲＥＰＳＶＱＡＨＩＫＡＬＬＡＬＬＳＦＡＭＬＦＩＳＹＦＬＳＬＶＦＳＡＡＧＩＦＰＰＬＤＦＫＦＷＶＷＥＳＶＩＹＬＣＡＡＶＨＰＩＩＬＬＦＳＮＣＲＬＲＡＶＬＫＳＲＲＳＳＲＣＧＴＰ           （配列番号５２）
【０２４２】
Ｍｏｕｓｅ  Ｇｎａ１５（Ｇα１５）
ＭＡＲＳＴＷＧＣＣＷＣＴＫＴＡＡＲＤＮＲＫＫＲＫＧＧＳＧＫＳＴＫＭＲＨＧＶＧＹＳＤＲＲＡＲＹＮＶＳＭＡＭＤＡＭＤＲＳＲＤＳＫＨＡＳＶＭＴＤＹＫＶＳＴＫＹＡＶＡＭＹＷＲＤＡＧＲＡＣＹＲＲＲＨＤＳＡＶＹＹＳＨＲＳＤＳＹＴＡＤＶＲＳＲＭＴＴＧＮＹＣＳＶＫＫＴＫＲＶＤＶＧＧＲＳＲＲＫＷＨＣＮＶＡＹＡＳＳＹＤＣＮＤＮＲＭＳＡＳＴＷＫＳＴＳＶＮＫＴＤＤＫＨＴＳＨＡＴＹＳＧＲＲＤＡＡＡＫＳＤＭＹＡＲＶＹＡＳＣＡＤＧＧＲＫＧＳＲＡＲＲＡＨＴＣＡＴＤＴＳＶＲＳＶＫＤＶＲＤＳＶＡＲＹＤＮ           （配列番号５３）
【０２４３】
ＴＡＳ２Ｒ３８（ＰＡＶハロタイプ）
ＭＬＴＬＴＲＩＲＴＶＳＹＥＶＲＳＴＦＬＦＩＳＶＬＥＦＡＶＧＦＬＴＮＡＦＶＦＬＶＮＦＷＤＶＶＫＲＱＰＬＳＮＳＤＣＶＬＬＣＬＳＩＳＲＬＦＬＨＧＬＬＦＬＳＡＩＱＬＴＨＦＱＫＬＳＥＰＬＮＨＳＹＱＡＩＩＭＬＷＭＩＡＮＱＡＮＬＷＬＡＡＣＬＳＬＬＹＣＳＫＬＩＲＦＳＨＴＦＬＩＣＬＡＳＷＶＳＲＫＩＳＱＭＬＬＧＩＩＬＣＳＣＩＣＴＶＬＣＶＷＣＦＦＳＲＰＨＦＴＶＴＴＶＬＦＭＮＮＮＴＲＬＮＷＱＩＫＤＬＮＬＦＹＳＦＬＦＣＹＬＷＳＶＰＰＦＬＬＦＬＶＳＳＧＭＬＴＶＳＬＧＲＨＭＲＴＭＫＶＹＴＲＮＳＲＤＰＳＬＥＡＨＩＫＡＬＫＳＬＶＳＦＦＣＦＦＶＩＳＳＣＡＡＦＩＳＶＰＬＬＩＬＷＲＤＫＩＧＶＭＶＣＶＧＩＭＡＡＣＰＳＧＨＡＡＶＬＩＳＧＮＡＫＬＲＲＡＶＭＴＩＬＬＷＡＱＳＳＬＫＶＲＡＤＨＫＡＤＳＲＴＬＣ        （配列番号５４）
【表１】
2014530628.tif 000002
2014530628.tif 000003
2014530628.tif 000004
2014530628.tif 000005
2014530628.tif 000006
2014530628.tif 000007
2014530628.tif 000008
2014530628.tif 000009
2014530628.tif 000010
2014530628.tif 000011
2014530628.tif 000012
2014530628.tif 000013
2014530628.tif 000014
2014530628.tif 000015
【表２】
2014530628.tif 000016
2014530628.tif 000017
2014530628.tif 000018
2014530628.tif 000019
2014530628.tif 000020
2014530628.tif 000021
【表３】
2014530628.tif 000022
2014530628.tif 000023
2014530628.tif 000024
2014530628.tif 000025
2014530628.tif 000026
2014530628.tif 000027
【図１】
2014530628.tif 000028
【図２】
2014530628.tif 000029
【図３Ａ】
2014530628.tif 000030
【図３Ｂ】
2014530628.tif 000031
【図４】
2014530628.tif 000032
【図５】
2014530628.tif 000033
【図６】
2014530628.tif 000034
【配列表】
2014530628000001.xml
【手続補正書】
【提出日】平成26年6月17日(2014.6.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４３】
ＴＡＳ２Ｒ３８（ＰＡＶハロタイプ）
ＭＬＴＬＴＲＩＲＴＶＳＹＥＶＲＳＴＦＬＦＩＳＶＬＥＦＡＶＧＦＬＴＮＡＦＶＦＬＶＮＦＷＤＶＶＫＲＱＰＬＳＮＳＤＣＶＬＬＣＬＳＩＳＲＬＦＬＨＧＬＬＦＬＳＡＩＱＬＴＨＦＱＫＬＳＥＰＬＮＨＳＹＱＡＩＩＭＬＷＭＩＡＮＱＡＮＬＷＬＡＡＣＬＳＬＬＹＣＳＫＬＩＲＦＳＨＴＦＬＩＣＬＡＳＷＶＳＲＫＩＳＱＭＬＬＧＩＩＬＣＳＣＩＣＴＶＬＣＶＷＣＦＦＳＲＰＨＦＴＶＴＴＶＬＦＭＮＮＮＴＲＬＮＷＱＩＫＤＬＮＬＦＹＳＦＬＦＣＹＬＷＳＶＰＰＦＬＬＦＬＶＳＳＧＭＬＴＶＳＬＧＲＨＭＲＴＭＫＶＹＴＲＮＳＲＤＰＳＬＥＡＨＩＫＡＬＫＳＬＶＳＦＦＣＦＦＶＩＳＳＣＡＡＦＩＳＶＰＬＬＩＬＷＲＤＫＩＧＶＭＶＣＶＧＩＭＡＡＣＰＳＧＨＡＡＶＬＩＳＧＮＡＫＬＲＲＡＶＭＴＩＬＬＷＡＱＳＳＬＫＶＲＡＤＨＫＡＤＳＲＴＬＣ              （配列番号５４）
【表１】
2014530628.tif 000051
2014530628.tif 000052
2014530628.tif 000053
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2014530628.tif 000055
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2014530628.tif 000059
2014530628.tif 000060
2014530628.tif 000061
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2014530628.tif 000064
【表２】
2014530628.tif 000065
2014530628.tif 000066
2014530628.tif 000067
2014530628.tif 000068
【表３】
2014530628.tif 000069
2014530628.tif 000070
2014530628.tif 000071
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2014530628.tif 000073
2014530628.tif 000074
【手続補正書】
【提出日】平成26年6月18日(2014.6.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４３】
ＴＡＳ２Ｒ３８（ＰＡＶハロタイプ）
ＭＬＴＬＴＲＩＲＴＶＳＹＥＶＲＳＴＦＬＦＩＳＶＬＥＦＡＶＧＦＬＴＮＡＦＶＦＬＶＮＦＷＤＶＶＫＲＱＰＬＳＮＳＤＣＶＬＬＣＬＳＩＳＲＬＦＬＨＧＬＬＦＬＳＡＩＱＬＴＨＦＱＫＬＳＥＰＬＮＨＳＹＱＡＩＩＭＬＷＭＩＡＮＱＡＮＬＷＬＡＡＣＬＳＬＬＹＣＳＫＬＩＲＦＳＨＴＦＬＩＣＬＡＳＷＶＳＲＫＩＳＱＭＬＬＧＩＩＬＣＳＣＩＣＴＶＬＣＶＷＣＦＦＳＲＰＨＦＴＶＴＴＶＬＦＭＮＮＮＴＲＬＮＷＱＩＫＤＬＮＬＦＹＳＦＬＦＣＹＬＷＳＶＰＰＦＬＬＦＬＶＳＳＧＭＬＴＶＳＬＧＲＨＭＲＴＭＫＶＹＴＲＮＳＲＤＰＳＬＥＡＨＩＫＡＬＫＳＬＶＳＦＦＣＦＦＶＩＳＳＣＡＡＦＩＳＶＰＬＬＩＬＷＲＤＫＩＧＶＭＶＣＶＧＩＭＡＡＣＰＳＧＨＡＡＶＬＩＳＧＮＡＫＬＲＲＡＶＭＴＩＬＬＷＡＱＳＳＬＫＶＲＡＤＨＫＡＤＳＲＴＬＣ              （配列番号５４）
【表１】
2014530628.tif 000075
2014530628.tif 000076
2014530628.tif 000077
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【表２】
2014530628.tif 000089
2014530628.tif 000090
2014530628.tif 000091
2014530628.tif 000092
【表３】
2014530628.tif 000093
2014530628.tif 000094
2014530628.tif 000095
2014530628.tif 000096
2014530628.tif 000097
2014530628.tif 000098
【国際調査報告】
2014530628.tif 000099
2014530628.tif 000100
2014530628.tif 000101