(57)【要約】  本発明は、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象を治療するための方法であって、ｉ）クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよびｉｉ）熱ショックタンパク質９０（Ｈｓｐ９０）阻害剤を、各々もう一方と併用するときに哺乳動物対象を治療するのに有効な量で含む方法を提供する。本発明は、クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよびＨｓｐ９０阻害剤を、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象の治療に使用する量で含む医薬組成物も提供する。また、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象を治療する際に、Ｈｓｐ９０阻害剤と併用して使用するクラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチド、ならびに前立腺癌に罹患した哺乳動物対象を治療するための組成物であってｉ）クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよびｉｉ）Ｈｓｐ９０阻害剤を各々もう一方と併用するときに哺乳動物対象を治療するのに有効な量で含む組成物も提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
前立腺癌に罹患した哺乳動物対象を治療するための方法であって、ｉ）クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよびｉｉ）次の構造を有する熱ショックタンパク質９０（Ｈｓｐ９０）阻害剤：
【化１】
2014509608.tif 000015
または薬学的に許容されるその塩
［式中、
Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ14アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ハロアルキル、Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アシル、アリール、またはヘテロアリールであり、各アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリール基は、それぞれ独立にＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルアミノ、ニトロ、ハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、ハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシまたはカルボキサミドである１〜４個の基で任意に置換されていてもよく、
Ｒ1がＣ1〜Ｃ14アルキル基であるとき、前記アルキル基中の前記炭素原子の５個までは、それぞれ独立に、Ｒ4、カルボニル、エテニル、エチニルまたはＮ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ2もしくはＳＯから選択される部分で任意に置きかえられていてもよく、ただし、２個のＯ原子、２個のＳ原子、またはＯとＳ原子は互いに直接隣接せず、
Ｒ4は、
（ｉ）ヘテロアリール、
（ｉｉ）アリール、
（ｉｉｉ）飽和もしくは不飽和Ｃ3〜Ｃ10シクロアルキル、または
（ｉｖ）飽和もしくは不飽和Ｃ2〜Ｃ10ヘテロシクロアルキルであり、
各アリール、ヘテロアリール、飽和もしくは不飽和シクロアルキル、または飽和もしくは不飽和ヘテロシクロアルキルは、それぞれ独立に、少なくとも１個の基（それぞれ独立に、ヒドロキシ、ハロ、アミノ、シアノ、カルボキシ、カルボキサミド、ニトロ、オキソ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシ、またはモノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノである）で任意に置換されていてもよく；
Ｒ4は、Ｃ6〜Ｃ10アリール基、Ｃ5〜Ｃ8飽和環式基、またはＣ4〜Ｃ10ヘテロシクロアルキル基と任意に縮合されていてもよく；
Ｒ1は、任意の利用可能な位置で、Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ハロアルキル、Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、Ｃ2〜Ｃ10アルキニル、ヒドロキシ、カルボキシ、カルボキサミド、オキソ、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、−ＳＨ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ2〜Ｃ10アルケニルオキシ、Ｃ2〜Ｃ10アルキニルオキシ、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノ、−Ｃ1〜Ｃ10アルキル−Ｚ、−ＯＣ1〜Ｃ10アルキル−Ｚ、またはＲ5で任意に置換されていてもよく、
Ｚは、ＯＲoまたは−Ｎ（Ｒ6）2であり、
各Ｒ6は、それぞれ独立に、−ＨまたはＣ1〜Ｃ6アルキルであり、またはＮ（Ｒ6）2は、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、アゼパニル、１，３−もしくは１，４−ジアゼパニルまたはモルホリニルを表し、その各々は、ヒドロキシ、アミノ、アミノアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、またはハロゲンで任意に置換されていてもよく、
Ｒoは、−Ｈ、−Ｃ1〜Ｃ10アルキル、−Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、−Ｃ2〜Ｃ10アルキニル、アリール、ヘテロアリール、または−Ｃ1〜Ｃ6アシルであり；
Ｒ5は、
（１）ヘテロアリール、
（２）アリール、
（３）飽和もしくは不飽和Ｃ5〜Ｃ10シクロアルキル、または
（４）飽和もしくは不飽和Ｃ5〜Ｃ10ヘテロシクロアルキルであり、
前記Ｒ5基は、少なくとも１個の基（それぞれ独立に、ヒドロキシ、オキソ、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、−ＳＨ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシ、またはモノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノである）で任意に置換されていてもよく；
Ｒ2は、Ｈ、Ｃｌ、ハロゲン、ＣＦ3、ＣＨＦ2、ＣＨ3、Ｃ1〜Ｃ10アルキル、またはハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルであり；
Ｘは、ＮまたはＣＲ3であり、
Ｒ3は、Ｈ、ハロゲンまたはＣＨ3である］、
またはそのプロドラッグを、各々もう一方と併用するときに前記哺乳動物対象を治療するのに有効な量で前記哺乳動物対象に投与することを含む方法。
【請求項２】
前立腺癌に罹患した哺乳動物対象を治療するための方法であって、ｉ）クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよびｉｉ）Ｈｓｐ９０阻害剤（この阻害剤は、Ｈｓｐ９０ｉ−１以外である）を、各々もう一方と併用するときに前記哺乳動物対象を治療するのに有効な量で前記哺乳動物対象に投与することを含む方法。
【請求項３】
前立腺癌に罹患した哺乳動物対象を治療するための方法であって、ｉ）クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよびｉｉ）５０ｎｍｏｌ／Ｌ未満のＫaでＨｓｐ９０αおよびＨｓｐ９０βに結合するＨｓｐ９０阻害剤、またはそのプロドラッグを、各々もう一方と併用するときに前記哺乳動物対象を治療するのに有効な量で前記哺乳動物対象に投与することを含む方法。
【請求項４】
前記癌が、アンドロゲン非依存的前立腺癌である、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
合わせて投与したときの前記オリゴヌクレオチドの前記量と前記Ｈｓｐ９０阻害剤の前記量が、各薬剤を単独投与したときよりも、前記対象を治療するのに有効である、請求項１から４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記Ｈｓｐ９０阻害剤の前記量と併用する前記オリゴヌクレオチドの前記量が、単独投与時に臨床的に有効な量より少ない、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記オリゴヌクレオチドの前記量と併用する前記Ｈｓｐ９０阻害剤の前記量が、単独投与時に臨床的に有効な量より少ない、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
合わせて投与したときの前記オリゴヌクレオチドの前記量と前記Ｈｓｐ９０阻害剤の前記量が、前記対象における前立腺癌の臨床症状を軽減するのに有効である、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記哺乳動物対象がヒトである、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記オリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、クラステリンをコードするｍＲＮＡの翻訳開始部位または終結部位のいずれかにまたがっている、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列番号１１に記載の配列のヌクレオチドを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列番号３に記載の配列のヌクレオチドを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドを改変して、同じ配列の無改変のオリゴヌクレオチドと比較してｉｎ  ｖｉｖｏ安定性を強化する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記オリゴヌクレオチドが、クストリセンである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記クストリセンの前記量が、６４０ｍｇ未満である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記クストリセンの前記量が、４８０ｍｇ未満である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記クストリセンの前記量が、７日間に１回、静脈内投与される、請求項１５から１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記Ｈｓｐ９０阻害剤の量が、５０ｍｇ／ｋｇ未満である、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記Ｈｓｐ９０阻害剤の量が、２５ｍｇ／ｋｇ以下である、請求項１から１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記Ｈｓｐ９０阻害剤が、Ｈｓｐ９０ｉ−２である、請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記Ｈｓｐ９０阻害剤のプロドラッグが前記哺乳動物対象に投与され、前記プロドラッグがＨｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯである、請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記Ｈｓｐ９０阻害剤のプロドラッグが前記哺乳動物対象に投与され、前記プロドラッグがＨｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ２である、請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記オリゴヌクレオチドと前記Ｈｓｐ９０阻害剤の併用が、前立腺癌細胞の増殖を阻害するのに有効である、請求項１から２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
ある量のクラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよび次の構造を有するＨｓｐ９０阻害剤：
【化２】
2014509608.tif 000016
または薬学的に許容されるその塩
［式中、
Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ14アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ハロアルキル、Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アシル、アリール、またはヘテロアリールであり、各アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリール基は、それぞれ独立にＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルアミノ、ニトロ、ハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、ハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシまたはカルボキサミドである１〜４個の基で任意に置換されていてもよく、
Ｒ1がＣ1〜Ｃ14アルキル基であるとき、前記アルキル基中の前記炭素原子の５個までは、それぞれ独立に、Ｒ4、カルボニル、エテニル、エチニルまたはＮ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ2もしくはＳＯから選択される部分で任意に置きかえられていてもよく、ただし、２個のＯ原子、２個のＳ原子、またはＯとＳ原子は互いに直接隣接せず、
Ｒ4は、
（ｉ）ヘテロアリール、
（ｉｉ）アリール、
（ｉｉｉ）飽和もしくは不飽和Ｃ3〜Ｃ10シクロアルキル、または
（ｉｖ）飽和もしくは不飽和Ｃ2〜Ｃ10ヘテロシクロアルキルであり、
各アリール、ヘテロアリール、飽和もしくは不飽和シクロアルキル、または飽和もしくは不飽和ヘテロシクロアルキルは、それぞれ独立に、少なくとも１個の基（それぞれ独立に、ヒドロキシ、ハロ、アミノ、シアノ、カルボキシ、カルボキサミド、ニトロ、オキソ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシ、またはモノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノである）で任意に置換されていてもよく；
Ｒ4は、Ｃ6〜Ｃ10アリール基、Ｃ5〜Ｃ8飽和環式基、またはＣ4〜Ｃ10ヘテロシクロアルキル基と任意に縮合されていてもよく；
Ｒ1は、任意の利用可能な位置で、Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ハロアルキル、Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、Ｃ2〜Ｃ10アルキニル、ヒドロキシ、カルボキシ、カルボキサミド、オキソ、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、−ＳＨ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ2〜Ｃ10アルケニルオキシ、Ｃ2〜Ｃ10アルキニルオキシ、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノ、−Ｃ1〜Ｃ10アルキル−Ｚ、−ＯＣ1〜Ｃ10アルキル−Ｚ、またはＲ5で任意に置換されていてもよく、
Ｚは、ＯＲoまたは−Ｎ（Ｒ6）2であり、
各Ｒ6は、それぞれ独立に、−ＨまたはＣ1〜Ｃ6アルキルであり、またはＮ（Ｒ6）2は、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、アゼパニル、１，３−もしくは１，４−ジアゼパニルまたはモルホリニルを表し、その各々は、ヒドロキシ、アミノ、アミノアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、またはハロゲンで任意に置換されていてもよく、
Ｒoは、−Ｈ、−Ｃ1〜Ｃ10アルキル、−Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、−Ｃ2〜Ｃ10アルキニル、アリール、ヘテロアリール、または−Ｃ1〜Ｃ6アシルであり；
Ｒ5は、
（１）ヘテロアリール、
（２）アリール、
（３）飽和もしくは不飽和Ｃ5〜Ｃ10シクロアルキル、または
（４）飽和もしくは不飽和Ｃ5〜Ｃ10ヘテロシクロアルキルであり、
前記Ｒ5基は、少なくとも１個の基（それぞれ独立に、ヒドロキシ、オキソ、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、−ＳＨ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシ、またはモノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノである）で任意に置換されていてもよく；
Ｒ2は、Ｈ、Ｃｌ、ハロゲン、ＣＦ3、ＣＨＦ2、ＣＨ3、Ｃ1〜Ｃ10アルキル、またはハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルであり；
Ｘは、ＮまたはＣＲ3であり、
Ｒ3は、Ｈ、ハロゲンまたはＣＨ3である］、
またはそのプロドラッグを含む、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象の治療に使用する医薬組成物。
【請求項２６】
ある量のクラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよびＨｓｐ９０阻害剤（この阻害剤は、Ｈｓｐ９０ｉ−１以外である）を含む、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象の治療に使用する医薬組成物。
【請求項２７】
ある量のクラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチド、ならびに５０ｎｍｏｌ／Ｌ未満のＫaでＨｓｐ９０αおよびＨｓｐ９０βに結合するＨｓｐ９０阻害剤またはそのプロドラッグを含む、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象の治療に使用する医薬組成物。
【請求項２８】
前立腺癌に罹患した哺乳動物対象の治療において、次の構造を有するＨｓｐ９０阻害剤：
【化３】
2014509608.tif 000017
または薬学的に許容されるその塩、
［式中、
Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ14アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ハロアルキル、Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アシル、アリール、またはヘテロアリールであり、各アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリール基は、それぞれ独立にＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルアミノ、ニトロ、ハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、ハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシまたはカルボキサミドである１〜４個の基で任意に置換されていてもよく、
Ｒ1がＣ1〜Ｃ14アルキル基であるとき、前記アルキル基中の前記炭素原子の５個までは、それぞれ独立に、Ｒ4、カルボニル、エテニル、エチニルまたはＮ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ2もしくはＳＯから選択される部分で任意に置きかえられていてもよく、ただし、２個のＯ原子、２個のＳ原子、またはＯとＳ原子は互いに直接隣接せず、
Ｒ4は、
（ｉ）ヘテロアリール、
（ｉｉ）アリール、
（ｉｉｉ）飽和もしくは不飽和Ｃ3〜Ｃ10シクロアルキル、または
（ｉｖ）飽和もしくは不飽和Ｃ2〜Ｃ10ヘテロシクロアルキルであり、
各アリール、ヘテロアリール、飽和もしくは不飽和シクロアルキル、または飽和もしくは不飽和ヘテロシクロアルキルは、それぞれ独立に、少なくとも１個の基（それぞれ独立に、ヒドロキシ、ハロ、アミノ、シアノ、カルボキシ、カルボキサミド、ニトロ、オキソ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシ、またはモノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノである）で任意に置換されていてもよく；
Ｒ4は、Ｃ6〜Ｃ10アリール基、Ｃ5〜Ｃ8飽和環式基、またはＣ4〜Ｃ10ヘテロシクロアルキル基と任意に縮合されていてもよく；
Ｒ1は、任意の利用可能な位置で、Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ハロアルキル、Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、Ｃ2〜Ｃ10アルキニル、ヒドロキシ、カルボキシ、カルボキサミド、オキソ、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、−ＳＨ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ2〜Ｃ10アルケニルオキシ、Ｃ2〜Ｃ10アルキニルオキシ、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノ、−Ｃ1〜Ｃ10アルキル−Ｚ、−ＯＣ1〜Ｃ10アルキル−Ｚ、またはＲ5で任意に置換されていてもよく、
Ｚは、ＯＲoまたは−Ｎ（Ｒ6）2であり、
各Ｒ6は、それぞれ独立に、−ＨまたはＣ1〜Ｃ6アルキルであり、またはＮ（Ｒ6）2は、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、アゼパニル、１，３−もしくは１，４−ジアゼパニルまたはモルホリニルを表し、その各々は、ヒドロキシ、アミノ、アミノアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、またはハロゲンで任意に置換されていてもよく、
Ｒoは、−Ｈ、−Ｃ1〜Ｃ10アルキル、−Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、−Ｃ2〜Ｃ10アルキニル、アリール、ヘテロアリール、または−Ｃ1〜Ｃ6アシルであり；
Ｒ5は、
（１）ヘテロアリール、
（２）アリール、
（３）飽和もしくは不飽和Ｃ5〜Ｃ10シクロアルキル、または
（４）飽和もしくは不飽和Ｃ5〜Ｃ10ヘテロシクロアルキルであり、
前記Ｒ5基は、少なくとも１個の基（それぞれ独立に、ヒドロキシ、オキソ、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、−ＳＨ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシ、またはモノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノである）で任意に置換されていてもよく；
Ｒ2は、Ｈ、Ｃｌ、ハロゲン、ＣＦ3、ＣＨＦ2、ＣＨ3、Ｃ1〜Ｃ10アルキル、またはハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルであり；
Ｘは、ＮまたはＣＲ3であり、
Ｒ3は、Ｈ、ハロゲンまたはＣＨ3である］、
またはそのプロドラッグと併用して使用する、クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチド。
【請求項２９】
前立腺癌に罹患した哺乳動物対象の治療において、Ｈｓｐ９０阻害剤（この阻害剤は、Ｈｓｐ９０ｉ−１以外である）と併用して使用する、クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチド。
【請求項３０】
前立腺癌に罹患した哺乳動物対象の治療において、５０ｎｍｏｌ／Ｌ未満のＫaでＨｓｐ９０αおよびＨｓｐ９０βに結合するＨｓｐ９０阻害剤、またはそのプロドラッグと併用して使用する、クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチド。
【請求項３１】
前立腺癌に罹患した哺乳動物対象を治療するための組成物であって、ｉ）クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよびｉｉ）次の構造を有するＨｓｐ９０阻害剤：
【化４】
2014509608.tif 000018
または薬学的に許容されるその塩、
［式中、
Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ14アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ハロアルキル、Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アシル、アリール、またはヘテロアリールであり、各アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリール基は、それぞれ独立にＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルアミノ、ニトロ、ハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、ハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシまたはカルボキサミドである１〜４個の基で任意に置換されていてもよく、
Ｒ1がＣ1〜Ｃ14アルキル基であるとき、前記アルキル基中の前記炭素原子の５個までは、それぞれ独立に、Ｒ4、カルボニル、エテニル、エチニルまたはＮ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ2もしくはＳＯから選択される部分で任意に置きかえられていてもよく、ただし、２個のＯ原子、２個のＳ原子、またはＯとＳ原子は互いに直接隣接せず、
Ｒ4は、
（ｉ）ヘテロアリール、
（ｉｉ）アリール、
（ｉｉｉ）飽和もしくは不飽和Ｃ3〜Ｃ10シクロアルキル、または
（ｉｖ）飽和もしくは不飽和Ｃ2〜Ｃ10ヘテロシクロアルキルであり、
各アリール、ヘテロアリール、飽和もしくは不飽和シクロアルキル、または飽和もしくは不飽和ヘテロシクロアルキルは、それぞれ独立に、少なくとも１個の基（それぞれ独立に、ヒドロキシ、ハロ、アミノ、シアノ、カルボキシ、カルボキサミド、ニトロ、オキソ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシ、またはモノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノである）で任意に置換されていてもよく；
Ｒ4は、Ｃ6〜Ｃ10アリール基、Ｃ5〜Ｃ8飽和環式基、またはＣ4〜Ｃ10ヘテロシクロアルキル基と任意に縮合されていてもよく；
Ｒ1は、任意の利用可能な位置で、Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ハロアルキル、Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、Ｃ2〜Ｃ10アルキニル、ヒドロキシ、カルボキシ、カルボキサミド、オキソ、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、−ＳＨ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ2〜Ｃ10アルケニルオキシ、Ｃ2〜Ｃ10アルキニルオキシ、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノ、−Ｃ1〜Ｃ10アルキル−Ｚ、−ＯＣ1〜Ｃ10アルキル−Ｚ、またはＲ5で任意に置換されていてもよく、
Ｚは、ＯＲoまたは−Ｎ（Ｒ6）2であり、
各Ｒ6は、それぞれ独立に、−ＨまたはＣ1〜Ｃ6アルキルであり、またはＮ（Ｒ6）2は、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、アゼパニル、１，３−もしくは１，４−ジアゼパニルまたはモルホリニルを表し、その各々は、ヒドロキシ、アミノ、アミノアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、またはハロゲンで任意に置換されていてもよく、
Ｒoは、−Ｈ、−Ｃ1〜Ｃ10アルキル、−Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、−Ｃ2〜Ｃ10アルキニル、アリール、ヘテロアリール、または−Ｃ1〜Ｃ6アシルであり；
Ｒ5は、
（１）ヘテロアリール、
（２）アリール、
（３）飽和もしくは不飽和Ｃ5〜Ｃ10シクロアルキル、または
（４）飽和もしくは不飽和Ｃ5〜Ｃ10ヘテロシクロアルキルであり、
前記Ｒ5基は、少なくとも１個の基（それぞれ独立に、ヒドロキシ、オキソ、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、−ＳＨ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシ、またはモノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノである）で任意に置換されていてもよく；
Ｒ2は、Ｈ、Ｃｌ、ハロゲン、ＣＦ3、ＣＨＦ2、ＣＨ3、Ｃ1〜Ｃ10アルキル、またはハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルであり；
Ｘは、ＮまたはＣＲ3であり、
Ｒ3は、Ｈ、ハロゲンまたはＣＨ3である］、
またはそのプロドラッグを、各々もう一方と併用するときに前記哺乳動物対象を治療するのに有効な量で含む組成物。
【請求項３２】
前立腺癌に罹患した哺乳動物対象を治療するための組成物であって、ｉ）クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよびｉｉ）Ｈｓｐ９０阻害剤（この阻害剤は、Ｈｓｐ９０ｉ−１以外である）を、各々もう一方と併用するときに前記哺乳動物対象を治療するのに有効な量で含む組成物。
【請求項３３】
前立腺癌に罹患した哺乳動物対象を治療するための組成物であって、ｉ）クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドならびにｉｉ）５０ｎｍｏｌ／Ｌ未満のＫaでＨｓｐ９０αおよびＨｓｐ９０βに結合するＨｓｐ９０阻害剤、またはそのプロドラッグを、各々もう一方と併用するときに前記哺乳動物対象を治療するのに有効な量で含む組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
本出願は、２０１１年３月１５日に出願の米国特許仮出願第６１／４５３，１０２号の優先権を主張し、その内容を参照により本明細書に組み込む。
【０００２】
本出願の全体にわたり、括弧内に参照したものを含めて様々な刊行物が参照される。括弧内に参照した刊行物のすべての引用は、明細書の末尾、請求項の直前にアルファベット順に列挙されている。この発明に関連する技術水準についてより完全に記載するために、参照したすべての刊行物の開示をその全体として、参照により本出願中の本明細書に組み込む。
【発明の分野】
【０００３】
主たる発明は、前立腺癌を治療するための併用療法に関する。
【発明の背景】
【０００４】
前立腺癌（ＰＣａ）は、米国の男性において最も一般的な癌であり、癌関連の死亡率で３番目に一般的な要因である（Ｊｅｍａｌら、２００６）。アンドロゲン除去は、腫瘍細胞の増殖を阻害しアポトーシスを誘導するので、依然として進行性ＰＣａ患者に対する標準的で有効な療法である（Ｋｙｐｒｉａｎｏｕら、１９９０）。残念ながら、短期的な寛解の後、残存している腫瘍細胞が、去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）として再発し、ほとんどの男性が通常３年以内に死亡する（Ｇｌｅａｖｅら、１９９９）。ＣＲＰＣの進行は、アンドロゲン受容体軸（ａｎｄｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｘｉｓ）（Ｋｎｕｄｓｅｎら、２００９）、別の分裂促進性増殖因子（ｍｉｔｏｇｅｎｉｃ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）経路（Ｍｉｙａｋｅら、２０００；Ｃｕｌｉｇら、２００４）、ならびにストレス誘導性の生存促進性遺伝子（Ｇｌｅａｖｅら、１９９９；Ｍｉｙａｋｅら、１９９９）および細胞保護性シャペロンネットワーク（Ｒｏｃｃｈｉら、２００４；Ｍｉｙａｋｅら、２０００）の再活性化に起因する機序の結果として生じる。ＰＣａの男性の生存を大幅に向上させるには、この表現型の出現を阻害する新たな治療方針を開発しなければならない。アンドロゲン除去後に、前立腺腫瘍細胞により、多数のタンパク質が多量に発現されることが観察されてきた。これらのタンパク質の少なくともいくつかは、観察されているアポトーシス細胞死（アンドロゲン除去により観察される）に関連すると考えられる（Ｒａｆｆｏら、１９９５；Ｋｒａｊｅｗｓｋａら、１９９６；ＭｃＤｏｎｎｅｌｌら、１９９２）。しかし、多くのタンパク質の機能は、十分に理解されていない。クラステリン（別名硫酸化糖タンパク質−２（ＳＧＰ−２）またはＴＲＰＭ−２）は、この後者の範疇にある。
【０００５】
クラステリン
クラステリンは、細胞の生存を促進し、癌治療に対して広域スペクトル抵抗性を付与する細胞保護性シャペロンタンパク質である（Ｃｈｉら２００５）。Ｓｅｎｓｉｂａｒら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５５：２４３１〜２４３７頁、１９９５において、著者は、クラステリンをコードする遺伝子でトランスフェクトされたＬＮＣａＰ細胞を報告しており、このタンパク質の発現が、クラステリンに対して非常に感受性がある腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）の効果を変更するかどうか確かめるために観察した。トランスフェクトしたＬＮＣａＰ細胞をＴＮＦαで処理することにより、数時間にわたってクラステリンレベルの一過的な上昇がもたらされることが示されたが、このレベルは細胞死に先立つＤＮＡの断片化が観察される時間までに消失した。
【０００６】
米国特許第７，５３４，７７３号に記載のとおり（その内容を参照により組み込む）、去勢誘導性腫瘍の細胞死の増大および、アンドロゲン感受性癌細胞のアンドロゲン非依存性への進行の遅延は、細胞によるクラステリン発現を阻害することによって実現できる。
【０００７】
クストリセン
クストリセンは、クラステリン発現を阻害する第二世代のアンチセンスオリゴヌクレオチドである。クストリセンはクラステリンｍＲＮＡの一部に結合して、クラステリンタンパク質の産生を阻害するように特異的に設計されている。クストリセンの構造は、たとえば、米国特許第６，９００，１８７号（その内容を参照により本明細書に組み込む）にて入手可能である。広範な研究により、クストリセンは強力に、クラステリンの発現を調節し、アポトーシスを助長し、癌性ヒト前立腺、乳腺、卵巣、肺、腎臓、膀胱、および黒色腫細胞の化学療法に対する感受性を高めることが明らかにされた（Ｍｉｙａｋｅら、２００５）、米国特許出願公開第２００８／０１１９４２５号Ａ１も参照のこと。アンドロゲン依存的前立腺癌に対する臨床試験において、薬物であるフルタミドおよびブセレリンはクストリセンと併用すると、前立腺癌細胞のアポトーシスを増加させた（Ｃｈｉら、２００４；Ｃｈｉら、２００５）。
【０００８】
Ｈｓｐ９０
熱ショックタンパク質９０（Ｈｓｐ９０）は、多くの「クライアント」タンパク質（“ｃｌｉｅｎｔ”  ｐｒｏｔｅｉｎｓ）のタンパク質折りたたみ、成熟および立体構造安定化に必要な、ＡＴＰアーゼ依存的分子シャペロンである（Ｙｏｕｎｇら、２０００；Ｋａｍａｌら、２００３）。Ｈｓｐ９０は、増殖因子受容体、細胞サイクル調節因子、およびシグナル伝達キナーゼ（たとえばＡｋｔ、アンドロゲン受容体（ＡＲ）またはＲａｆ−１）を含めた、ＣＲＰＣに関連するいくつかのタンパク質と相互作用する（Ｗｈｉｔｅｓｅｌｌら、２００５；Ｔａｋａｙａｍａら、２００３）。腫瘍細胞は、良性の細胞と比較してより高レベルのＨｓｐ９０を発現しており（Ｋａｍａｌら、２００３；Ｃｈｉｏｓｉｓら、２００３）、Ｈｓｐ９０の阻害が、ＣＲＰＣおよび他の癌における興味深い標的として浮上した。天然化合物、たとえばゲルダナマイシンおよびその類似体、または合成化合物を含めた多くのＨｓｐ９０阻害剤が、ＡＴＰ結合ポケットを標的にして開発された。これらの薬剤が、Ｈｓｐ９０の機能を阻害し、アポトーシスを誘導することが、大腸、乳腺、前立腺癌および他の癌の前臨床試験において示された（Ｋａｍａｌら、２００３；Ｓｏｌｉｔら、２００３；Ｓｏｌｉｔら、２００２）。
【０００９】
併用療法
特定の状態、たとえば前立腺癌を治療するための２種の薬物の投与は、いくつか潜在的な問題を引き起こす。２種の薬物間のｉｎ  ｖｉｖｏ相互作用は複雑である。どの単剤の効果も、その吸収、分布および排出と関係している。２種の薬物が身体に導入された場合、各薬物はもう一方の薬物の吸収、分布および排出に影響を及ぼす可能性があり、したがって、もう一方の薬物の効果を変更する可能性がある。たとえば、一方の薬物が、もう一方の薬物の排出に関する代謝経路に関連する酵素の産生を阻害、活性化、または誘導する場合がある（Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ．Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｄｒｕｇ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ／ｄｒｕｇ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ−ｓｔｕｄｙ  ｄｅｓｉｇｎ、ｄａｔａ  ａｎａｌｙｓｉｓ、ａｎｄ  ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｄｏｓｉｎｇ  ａｎｄ  ｌａｂｅｌｉｎｇ）。したがって、同じ状態を治療するために２種の薬物が投与されたときに、各々が、ヒト対象においてもう一方の薬物の治療活性を補足するのか、影響が無いのか、または妨害するのかを予測できない。
【００１０】
２種の薬物間の相互作用は、各薬物の意図した治療活性に影響を及ぼす可能性があるだけでなく、その相互作用が、毒性代謝物のレベルを増加させる可能性もある（Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ．Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｄｒｕｇ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ／ｄｒｕｇ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ−ｓｔｕｄｙ  ｄｅｓｉｇｎ、ｄａｔａ  ａｎａｌｙｓｉｓ、ａｎｄ  ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｄｏｓｉｎｇ  ａｎｄ  ｌａｂｅｌｉｎｇ）。相互作用は、各薬物の副作用を強めるまたは弱める可能性もある。したがって、疾患を治療するために２種の薬物を投与することによって各薬物のプロファイルにどんな変化が起こるかは予測できない。
【００１１】
加えて、２種の薬物間の相互作用の影響がいつ現れるかを正確に予測することは困難である。たとえば、薬物間の代謝的相互作用は、第２の薬物の初回投与時、２種が定常状態の濃度に達した後、または薬物の一方を中断したときに明らかになる場合がある（Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ．Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｄｒｕｇ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ／ｄｒｕｇ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ−ｓｔｕｄｙ  ｄｅｓｉｇｎ、ｄａｔａ  ａｎａｌｙｓｉｓ、ａｎｄ  ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｄｏｓｉｎｇ  ａｎｄ  ｌａｂｅｌｉｎｇ）。
【００１２】
したがって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏモデル、動物モデル、またはヒトにおける１種の薬物もしくは各薬物単独での成功は、両方の薬物がヒトに投与される際の有効性とは相関しない場合がある。
【発明の概要】
【００１３】
本発明は、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象を治療するための方法であって、ｉ）クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよびｉｉ）次の構造を有する熱ショックタンパク質９０（Ｈｓｐ９０）阻害剤
【化１】
2014509608.tif 000002
【００１４】
または薬学的に許容されるその塩
［式中、
Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ14アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ハロアルキル、Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アシル、アリール、またはヘテロアリールであり、各アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリール基は、それぞれ独立にＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルアミノ、ニトロ、ハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、ハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシまたはカルボキサミドである１〜４個の基で任意に置換されていてもよく、
Ｒ1がＣ1〜Ｃ14アルキル基であるとき、アルキル基中の炭素原子の５個までは、それぞれ独立に、Ｒ4、カルボニル、エテニル、エチニルまたはＮ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ2もしくはＳＯから選択される部分で任意に置きかえられていてもよく、ただし、２個のＯ原子、２個のＳ原子、またはＯとＳ原子は互いに直接隣接せず、
Ｒ4は、
（ｉ）ヘテロアリール、
（ｉｉ）アリール、
（ｉｉｉ）飽和もしくは不飽和Ｃ3〜Ｃ10シクロアルキル、または
（ｉｖ）飽和もしくは不飽和Ｃ2〜Ｃ10ヘテロシクロアルキルであり、
各アリール、ヘテロアリール、飽和もしくは不飽和シクロアルキル、または飽和もしくは不飽和ヘテロシクロアルキルは、それぞれ独立に、少なくとも１個の基（それぞれ独立に、ヒドロキシ、ハロ、アミノ、シアノ、カルボキシ、カルボキサミド、ニトロ、オキソ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシ、またはモノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノである）で任意に置換されていてもよく；Ｒ4は、Ｃ6〜Ｃ10アリール基、Ｃ5〜Ｃ8飽和環式基、またはＣ4〜Ｃ10ヘテロシクロアルキル基と任意に縮合されていてもよく；
Ｒ1は、任意の利用可能な位置で、Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ハロアルキル、Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、Ｃ2〜Ｃ10アルキニル、ヒドロキシ、カルボキシ、カルボキサミド、オキソ、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、−ＳＨ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ2〜Ｃ10アルケニルオキシ、Ｃ2〜Ｃ10アルキニルオキシ、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノ、−Ｃ1〜Ｃ10アルキル−Ｚ、−ＯＣ1〜Ｃ10アルキル−Ｚ、またはＲ5で任意に置換されていてもよく、
Ｚは、ＯＲoまたは−Ｎ（Ｒ6）2であり、
各Ｒ6は、それぞれ独立に、−ＨまたはＣ1〜Ｃ6アルキルであり、またはＮ（Ｒ6）2は、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、アゼパニル、１，３−もしくは１，４−ジアゼパニルまたはモルホリニルを表し、その各々は、ヒドロキシ、アミノ、アミノアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、またはハロゲンで任意に置換されていてもよく、
Ｒoは、−Ｈ、−Ｃ1〜Ｃ10アルキル、−Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、−Ｃ2〜Ｃ10アルキニル、アリール、ヘテロアリール、または−Ｃ1〜Ｃ6アシルであり；
Ｒ5は、
（１）ヘテロアリール、
（２）アリール、
（３）飽和もしくは不飽和Ｃ5〜Ｃ10シクロアルキル、または
（４）飽和もしくは不飽和Ｃ5〜Ｃ10ヘテロシクロアルキルであり、
Ｒ5基は、少なくとも１個の基（それぞれ独立に、ヒドロキシ、オキソ、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、−ＳＨ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシ、またはモノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノである）で任意に置換されていてもよく；
Ｒ2は、Ｈ、Ｃｌ、ハロゲン、ＣＦ3、ＣＨＦ2、ＣＨ3、Ｃ1〜Ｃ10アルキル、またはハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルであり；
Ｘは、ＮまたはＣＲ3であり、
Ｒ3は、Ｈ、ハロゲンまたはＣＨ3である］、
またはそのプロドラッグを、各々もう一方と併用するときに哺乳動物対象を治療するのに有効な量で哺乳動物対象に投与することを含む方法を提供する。
【００１５】
上記の構造を有するＨｓｐ９０阻害剤は、米国特許第７，９２８，１３５号に記載されており、その全内容を参照により本明細書に組み込む。
【００１６】
本発明は、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象を治療するための方法であって、ｉ）クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよびｉｉ）Ｈｓｐ９０阻害剤（この阻害剤は、Ｈｓｐ９０ｉ−１以外である）を、各々もう一方と併用するときに哺乳動物対象を治療するのに有効な量で哺乳動物対象に投与することを含む方法を提供する。
【００１７】
本発明は、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象を治療するための方法であって、ｉ）クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよびｉｉ）５０ｎｍｏｌ／Ｌ未満のＫaでＨｓｐ９０αおよびＨｓｐ９０βに結合するＨｓｐ９０阻害剤、またはそのプロドラッグを、各々もう一方と併用するときに哺乳動物対象を治療するのに有効な量で哺乳動物対象に投与することを含む方法を提供する。
【００１８】
本発明は、クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチド、および次の構造を有するＨｓｐ９０阻害剤
【化２】
2014509608.tif 000003
【００１９】
または薬学的に許容されるその塩
［式中、
Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ14アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ハロアルキル、Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アシル、アリール、またはヘテロアリールであり、各アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリール基は、それぞれ独立にＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルアミノ、ニトロ、ハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、ハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシまたはカルボキサミドである１〜４個の基で任意に置換されていてもよく、
Ｒ1がＣ1〜Ｃ14アルキル基であるとき、アルキル基中の炭素原子の５個までは、それぞれ独立に、Ｒ4、カルボニル、エテニル、エチニルまたはＮ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ2もしくはＳＯから選択される部分で任意に置きかえられていてもよく、ただし、２個のＯ原子、２個のＳ原子、またはＯとＳ原子は互いに直接隣接せず、
Ｒ4は、
（ｉ）ヘテロアリール、
（ｉｉ）アリール、
（ｉｉｉ）飽和もしくは不飽和Ｃ3〜Ｃ10シクロアルキル、または
（ｉｖ）飽和もしくは不飽和Ｃ2〜Ｃ10ヘテロシクロアルキルであり、
各アリール、ヘテロアリール、飽和もしくは不飽和シクロアルキル、または飽和もしくは不飽和ヘテロシクロアルキルは、それぞれ独立に、少なくとも１個の基（それぞれ独立に、ヒドロキシ、ハロ、アミノ、シアノ、カルボキシ、カルボキサミド、ニトロ、オキソ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシ、またはモノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノである）で任意に置換されていてもよく；Ｒ4は、Ｃ6〜Ｃ10アリール基、Ｃ5〜Ｃ8飽和環式基、またはＣ4〜Ｃ10ヘテロシクロアルキル基と任意に縮合されていてもよく；
Ｒ1は、任意の利用可能な位置で、Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ハロアルキル、Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、Ｃ2〜Ｃ10アルキニル、ヒドロキシ、カルボキシ、カルボキサミド、オキソ、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、−ＳＨ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ2〜Ｃ10アルケニルオキシ、Ｃ2〜Ｃ10アルキニルオキシ、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノ、−Ｃ1〜Ｃ10アルキル−Ｚ、−ＯＣ1〜Ｃ10アルキル−Ｚ、またはＲ5で任意に置換されていてもよく、
Ｚは、ＯＲoまたは−Ｎ（Ｒ6）2であり、
各Ｒ6は、それぞれ独立に、−ＨまたはＣ1〜Ｃ6アルキルであり、またはＮ（Ｒ6）2は、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、アゼパニル、１，３−もしくは１，４−ジアゼパニルまたはモルホリニルを表し、その各々は、ヒドロキシ、アミノ、アミノアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、またはハロゲンで任意に置換されていてもよく、
Ｒoは、−Ｈ、−Ｃ1〜Ｃ10アルキル、−Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、−Ｃ2〜Ｃ10アルキニル、アリール、ヘテロアリール、または−Ｃ1〜Ｃ6アシルであり；
Ｒ5は、
（１）ヘテロアリール、
（２）アリール、
（３）飽和もしくは不飽和Ｃ5〜Ｃ10シクロアルキル、または
（４）飽和もしくは不飽和Ｃ5〜Ｃ10ヘテロシクロアルキルであり、
Ｒ5基は、少なくとも１個の基（それぞれ独立に、ヒドロキシ、オキソ、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、−ＳＨ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシ、またはモノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノである）で任意に置換されていてもよく；
Ｒ2は、Ｈ、Ｃｌ、ハロゲン、ＣＦ3、ＣＨＦ2、ＣＨ3、Ｃ1〜Ｃ10アルキル、またはハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルであり；
Ｘは、ＮまたはＣＲ3であり、
Ｒ3は、Ｈ、ハロゲンまたはＣＨ3である］、
またはそのプロドラッグを、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象の治療に使用する量で含む医薬組成物を提供する。
【００２０】
上記の構造を有するＨｓｐ９０阻害剤は、米国特許第７，９２８，１３５号に記載されており、その全内容を参照により本明細書に組み込む。
【００２１】
本発明は、クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチド、およびＨｓｐ９０阻害剤（この阻害剤は、Ｈｓｐ９０ｉ−１以外である）を、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象の治療に使用する量で含む医薬組成物を提供する。
【００２２】
本発明は、クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチド、ならびに５０ｎｍｏｌ／Ｌ未満のＫaでＨｓｐ９０αおよびＨｓｐ９０βに結合するＨｓｐ９０阻害剤、またはそのプロドラッグを、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象の治療に使用する量で含む医薬組成物を提供する。
【００２３】
本発明は、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象の治療において、クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチド、および次の構造を有するＨｓｐ９０阻害剤
【化３】
2014509608.tif 000004
【００２４】
または薬学的に許容されるその塩
［式中、
Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ14アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ハロアルキル、Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アシル、アリール、またはヘテロアリールであり、各アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリール基は、それぞれ独立にＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルアミノ、ニトロ、ハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、ハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシまたはカルボキサミドである１〜４個の基で任意に置換されていてもよく、
Ｒ1がＣ1〜Ｃ14アルキル基であるとき、アルキル基中の炭素原子の５個までは、それぞれ独立に、Ｒ4、カルボニル、エテニル、エチニルまたはＮ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ2もしくはＳＯから選択される部分で任意に置きかえられていてもよく、ただし、２個のＯ原子、２個のＳ原子、またはＯとＳ原子は互いに直接隣接せず、
Ｒ4は、
（ｉ）ヘテロアリール、
（ｉｉ）アリール、
（ｉｉｉ）飽和もしくは不飽和Ｃ3〜Ｃ10シクロアルキル、または
（ｉｖ）飽和もしくは不飽和Ｃ2〜Ｃ10ヘテロシクロアルキルであり、
各アリール、ヘテロアリール、飽和もしくは不飽和シクロアルキル、または飽和もしくは不飽和ヘテロシクロアルキルは、それぞれ独立に、少なくとも１個の基（それぞれ独立に、ヒドロキシ、ハロ、アミノ、シアノ、カルボキシ、カルボキサミド、ニトロ、オキソ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシ、またはモノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノである）で任意に置換されていてもよく；Ｒ4は、Ｃ6〜Ｃ10アリール基、Ｃ5〜Ｃ8飽和環式基、またはＣ4〜Ｃ10ヘテロシクロアルキル基と任意に縮合されていてもよく；
Ｒ1は、任意の利用可能な位置で、Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ハロアルキル、Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、Ｃ2〜Ｃ10アルキニル、ヒドロキシ、カルボキシ、カルボキサミド、オキソ、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、−ＳＨ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ2〜Ｃ10アルケニルオキシ、Ｃ2〜Ｃ10アルキニルオキシ、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノ、−Ｃ1〜Ｃ10アルキル−Ｚ、−ＯＣ1〜Ｃ10アルキル−Ｚ、またはＲ5で任意に置換されていてもよく、
Ｚは、ＯＲoまたは−Ｎ（Ｒ6）2であり、
各Ｒ6は、それぞれ独立に、−ＨまたはＣ1〜Ｃ6アルキルであり、またはＮ（Ｒ6）2は、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、アゼパニル、１，３−もしくは１，４−ジアゼパニルまたはモルホリニルを表し、その各々は、ヒドロキシ、アミノ、アミノアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、またはハロゲンで任意に置換されていてもよく、
Ｒoは、−Ｈ、−Ｃ1〜Ｃ10アルキル、−Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、−Ｃ2〜Ｃ10アルキニル、アリール、ヘテロアリール、または−Ｃ1〜Ｃ6アシルであり；
Ｒ5は、
（１）ヘテロアリール、
（２）アリール、
（３）飽和もしくは不飽和Ｃ5〜Ｃ10シクロアルキル、または
（４）飽和もしくは不飽和Ｃ5〜Ｃ10ヘテロシクロアルキルであり、
Ｒ5基は、少なくとも１個の基（それぞれ独立に、ヒドロキシ、オキソ、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、−ＳＨ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシ、またはモノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノである）で任意に置換されていてもよく；
Ｒ2は、Ｈ、Ｃｌ、ハロゲン、ＣＦ3、ＣＨＦ2、ＣＨ3、Ｃ1〜Ｃ10アルキル、またはハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルであり；
Ｘは、ＮまたはＣＲ3であり、
Ｒ3は、Ｈ、ハロゲンまたはＣＨ3である］、
またはそのプロドラッグと併用して使用する、クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドを提供する。
【００２５】
上記の構造を有するＨｓｐ９０阻害剤は、米国特許第７，９２８，１３５号に記載されており、その全内容を参照により本明細書に組み込む。
【００２６】
本発明は、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象の治療において、Ｈｓｐ９０阻害剤（この阻害剤は、Ｈｓｐ９０ｉ−１以外である）と併用して使用する、クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドを提供する。
【００２７】
本発明は、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象の治療において、５０ｎｍｏｌ／Ｌ未満のＫaでＨｓｐ９０αおよびＨｓｐ９０βに結合するＨｓｐ９０阻害剤、またはそのプロドラッグと併用して使用する、クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドを提供する。
【００２８】
本発明は、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象を治療するための組成物であって、ｉ）クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよびｉｉ）次の構造を有するＨｓｐ９０阻害剤
【化４】
2014509608.tif 000005
【００２９】
または薬学的に許容されるその塩
［式中、
Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ14アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ハロアルキル、Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アシル、アリール、またはヘテロアリールであり、各アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリール基は、それぞれ独立にＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルアミノ、ニトロ、ハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、ハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシまたはカルボキサミドである１〜４個の基で任意に置換されていてもよく、
Ｒ1がＣ1〜Ｃ14アルキル基であるとき、アルキル基中の炭素原子の５個までは、それぞれ独立に、Ｒ4、カルボニル、エテニル、エチニルまたはＮ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ2もしくはＳＯから選択される部分で任意に置きかえられていてもよく、ただし、２個のＯ原子、２個のＳ原子、またはＯとＳ原子は互いに直接隣接せず、
Ｒ4は、
（ｉ）ヘテロアリール、
（ｉｉ）アリール、
（ｉｉｉ）飽和もしくは不飽和Ｃ3〜Ｃ10シクロアルキル、または
（ｉｖ）飽和もしくは不飽和Ｃ2〜Ｃ10ヘテロシクロアルキルであり、
各アリール、ヘテロアリール、飽和もしくは不飽和シクロアルキル、または飽和もしくは不飽和ヘテロシクロアルキルは、それぞれ独立に、少なくとも１個の基（それぞれ独立に、ヒドロキシ、ハロ、アミノ、シアノ、カルボキシ、カルボキサミド、ニトロ、オキソ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシ、またはモノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノである）で任意に置換されていてもよく；Ｒ4は、Ｃ6〜Ｃ10アリール基、Ｃ5〜Ｃ8飽和環式基、またはＣ4〜Ｃ10ヘテロシクロアルキル基と任意に縮合されていてもよく；
Ｒ1は、任意の利用可能な位置で、Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ハロアルキル、Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、Ｃ2〜Ｃ10アルキニル、ヒドロキシ、カルボキシ、カルボキサミド、オキソ、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、−ＳＨ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ2〜Ｃ10アルケニルオキシ、Ｃ2〜Ｃ10アルキニルオキシ、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノ、−Ｃ1〜Ｃ10アルキル−Ｚ、−ＯＣ1〜Ｃ10アルキル−Ｚ、またはＲ5で任意に置換されていてもよく、
Ｚは、ＯＲoまたは−Ｎ（Ｒ6）2であり、
各Ｒ6は、それぞれ独立に、−ＨまたはＣ1〜Ｃ6アルキルであり、またはＮ（Ｒ6）2は、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、アゼパニル、１，３−もしくは１，４−ジアゼパニルまたはモルホリニルを表し、その各々は、ヒドロキシ、アミノ、アミノアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、またはハロゲンで任意に置換されていてもよく、
Ｒoは、−Ｈ、−Ｃ1〜Ｃ10アルキル、−Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、−Ｃ2〜Ｃ10アルキニル、アリール、ヘテロアリール、または−Ｃ1〜Ｃ6アシルであり；
Ｒ5は、
（１）ヘテロアリール、
（２）アリール、
（３）飽和もしくは不飽和Ｃ5〜Ｃ10シクロアルキル、または
（４）飽和もしくは不飽和Ｃ5〜Ｃ10ヘテロシクロアルキルであり、
Ｒ5基は、少なくとも１個の基（それぞれ独立に、ヒドロキシ、オキソ、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、−ＳＨ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシ、またはモノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノである）で任意に置換されていてもよく；
Ｒ2は、Ｈ、Ｃｌ、ハロゲン、ＣＦ3、ＣＨＦ2、ＣＨ3、Ｃ1〜Ｃ10アルキル、またはハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルであり；
Ｘは、ＮまたはＣＲ3であり、
Ｒ3は、Ｈ、ハロゲンまたはＣＨ3である］、
またはそのプロドラッグを、各々もう一方と併用するときに哺乳動物対象を治療するのに有効な量で含む組成物を提供する。
【００３０】
本発明は、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象を治療するための組成物であって、ｉ）クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよびｉｉ）Ｈｓｐ９０阻害剤（この阻害剤は、Ｈｓｐ９０ｉ−１以外である）を、各々もう一方と併用するときに哺乳動物対象を治療するのに有効な量で含む組成物を提供する。
【００３１】
本発明は、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象を治療するための組成物であって、ｉ）クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドならびにｉｉ）５０ｎｍｏｌ／Ｌ未満のＫaでＨｓｐ９０αおよびＨｓｐ９０βに結合するＨｓｐ９０阻害剤、またはそのプロドラッグを、各々もう一方と併用するときに哺乳動物対象を治療するのに有効な量で含む組成物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１−１】Ｈｓｐ９０ｉ−１およびＨｓｐ９０ｉ−２が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで前立腺癌（ＰＣａ）細胞におけるＨＳＰｓおよびクラステリン（ＣＬＵ）発現を誘導することを示す図。ＰＣ−３およびＬＮＣａＰ細胞を表示時点までの間、１μＭのＨｓｐ９０ｉ−２（Ａ）または１μＭのＨｓｐ９０ｉ−１（Ｃ）で処理した。並行して、表示用量のＨｓｐ９０ｉ−２でＰＣ−３およびＬＮＣａＰ細胞を４８時間処理した（Ｂ）。タンパク質抽出物をＣＬＵ、Ｈｓｐ７０、Ａｋｔおよびビンクリンについて分析した。腫瘍細胞を１μＭのＨｓｐ９０ｉ−２または１μＭのＨｓｐ９０ｉ−１で、２４時間処理した（Ｄ）。ｍＲＮＡ抽出物を実時間ＰＣＲによりＣＬＵ、Ｈｓｐ９０およびＨＳｐ７０について分析した。＊＊＊、ｐ＜０．００１。
【図１−２】（続葉）
【図１−３】（続葉）
【図１−４】（続葉）
【図２−１】Ｈｓｐ９０ｉ−２が、ＰＣａ異種移植片におけるＨＳＰおよびＣＬＵ発現を誘導することを示す図。マウスに５０ｍｇ／ｋｇのＨｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ（Ｈｓｐ９０ｉ−２のプロドラッグ）または媒体（対照）を、６週間投与した。Ａ、腫瘍を採取し、免疫組織化学的分析によりＣＬＵおよびＨｓｐ７０を評価した。Ｂ、総タンパク質を異種移植片腫瘍から抽出し、ＣＬＵ発現をウエスタンブロッティングにより分析した。相対レベルをＧＡＰＤＨを用いて標準化し、濃度測定単位で推定した。＊＊＊、ｐ＜０．００１。
【図２−２】（続葉）
【図３−１】Ｈｓｐ９０阻害剤処理後のＣＬＵ誘導が、ＨＳＦ−１活性の増加による細胞保護的なものであることを示す図。Ａ、ＬＮＣａＰ細胞を、表示濃度のＨｓｐ９０ｉ−１またはＨｓｐ９０ｉ−２で４８時間、処理した。Ｂ、ＬＮＣａＰ細胞に、表示濃度のＣＬＵプラスミドを４８時間にわたり一過性にトランスフェクトした。空のベクターを加えることにより、トランスフェクトされたプラスミドＤＮＡの総量をウエル当たり２μｇに標準化した。Ｃ（上）、４８時間にわたるＨｓｐ９０ｉ−１またはＨｓｐ９０ｉ−２処理（１μＭ）の後に、ＬＮＣａｐ細胞に２０ｎＭのＣＬＵ  ｓｉＲＮＡまたは対照ｓｉＳｃｒをトランスフェクトした。Ｃ（下）、ＬＮＣａＰ細胞を、３００ｎＭのクスチルセンまたは対照ＳｃｒＢ  ＡＳＯで、２回処理した。Ｄ、ＬＮＣａＰおよびＰＣ−３細胞を、３００ｎＭのクスチルセンまたは対照ＳｃｒＢ  ＡＳＯで２回、続いて、１μＭのＨｓｐ９０ｉ−１またはＨｓｐ９０ｉ−２で４８時間、処理した。細胞を採取し、ＨＳＥ−ルシフェラーゼ活性またはウエスタンブロッティング分析を実施した。３連で行った少なくとも３回の独立した実験の平均値。＊＊＊、ｐ＜０．００１；＊、ｐ＜０．０５；ｎｓ、有意でない。
【図３−２】（続葉）
【図３−３】（続葉）
【図４−１】ＰＣａ細胞におけるＣＬＵノックダウンおよびＨｓｐ９０阻害剤併用療法の有効性の増大を示す図。Ａ、ＬＮＣａＰ細胞を、３００ｎＭのクスチルセンまたは対照ＳｃｒＢ  ＡＳＯで２回、続いて、表示濃度のＨｓｐ９０ｉ−１またはＨｓｐ９０ｉ−２で４８時間、処理した。細胞成長は、クリスタルバイオレットにより測定し、対照と比較した。Ｂ、ＣａｌｃｕＳｙｎソフトウエアにより計算した用量依存的効果および併用指数（ＣＩ）値を、両薬物間の一定比率デザインで表示濃度でのクスチルセン単独、Ｈｓｐ９０ｉ−２単独または併用処理により４８時間処理したＬＮＣａＰ細胞において評価した。ＥＤ50およびＥＤ75のＣＩは、それぞれ０．４および０．７５であり、これらは、この併用処理の併用効果を示すものである。ＣおよびＤ、ＬＮＣａＰ細胞を、３００ｎＭのクスチルセンまたは対照ＳｃｒＢで２回、続いて、１μＭのＨｓｐ９０ｉ−１またはＨｓｐ９０ｉ−２で４８時間、処理した。細胞を採取し、ウエスタンブロッティング分析を実施した（Ｃ）。サブＧ１、Ｇ０〜Ｇ１、Ｓ、Ｇ２〜Ｍにある細胞の割合をヨウ化プロピジウム染色により測定し、細胞溶解物についてカスパーゼ３活性を測定し、結果を任意単位で表し、タンパク質含量について補正した（Ｄ）。すべての実験を少なくとも３回反復した。＄＄＄、ｐ＜０．００１；＊＊＊、ｐ＜０．００１；＊＊、ｐ＜０．０１、＊、ｐ＜０．０５。
【図４−２】（続葉）
【図４−３】（続葉）
【図４−４】（続葉）
【図５−１】ＰＣ−３異種移植片モデルにおけるクスチルセン＋Ｈｓｐ９０ｉ−１併用の有効性の増大を示す図。例６で述べるように、腫瘍が３００ｍｍに達したときに開始して、２５ｍｇ／ｋｇのＨｓｐ９０ｉ−１および１５ｍｇ／ｋｇのクスチルセンをマウスにＩＰ投与した。Ａ、クスチルセン＋Ｈｓｐ９０ｉ−１投与のマウスの平均腫瘍体積を対照ＳｃｒＢ  ＡＳＯ＋Ｈｓｐ９０ｉ−１と比較した±ＳＥＭ（ｎ＝７）。＊＊、ｐ＜０．０１。Ｂ、カプランマイヤー曲線において、癌特異的生存期間を７２日間の期間にわたりクスチルセン＋Ｈｓｐ９０ｉ−１投与マウスと対照ＳｃｒＢ  ＡＳＯ＋Ｈｓｐ９０ｉ−１との間で比較した。＊、ｐ＜０．０５。Ｃ、腫瘍を７２日後に採取し、免疫組織化学的分析によりＣＬＵ、Ｋｉ６７およびＴＵＮＥＬを評価した（最初の拡大倍率：ｘ２００）。
【図５−２】（続葉）
【図６−１】ＬＮＣａＰ異種移植片モデルにおける、クスチルセン＋Ｈｓｐｉ−２−ＰＲＯ併用の有効性の増大を示す図。血清ＰＳＡ値が去勢前のレベルに戻ったときに開始してマウスに２５ｍｇ／ｋｇのＨｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯおよび１５ｍｇ／ｋｇのクスチルセンを投与した。平均腫瘍体積（Ａ）および血清ＰＳＡレベル（Ｂ）を、４群間で比較した±ＳＥＭ（ｎ＝１０）。＊＊＊、ｐ＜０．００１。Ｃ、ＰＳＡ倍加時間および速度を、例６で述べるように計算した。＊、ｐ＜０．０５。Ｄ、カプランマイヤー曲線において、癌特異的生存期間を６２日間の期間にわたり、４群間で比較した。＊＊＊、ｐ＜０．００１。無増悪生存期間は、最初の腫瘍体積が２倍になる時間と定義した。
【図６−２】（続葉）
【図６−３】（続葉）
【図６−４】（続葉）
【図７】ＣＲＰＣ  ＬＮＣａＰ腫瘍における、クスチルセン＋Ｈｓｐｉ−２−ＰＲＯ併用療法アポトーシスレベルの有効性の増大を示す図。Ａ、５７日後に腫瘍を採取し、免疫組織化学的分析によりＣＬＵ、Ｋｉ６７、ＡＲ、ＡＫＴおよびＴＵＮＥＬを評価した（最初の拡大倍率：ｘ２００）。Ｂ、総タンパク質を異種移植片腫瘍から抽出し、ウエスタンブロッティングによりＣＬＵ、ＡＲ、ＡｋｔおよびＰＳＡを分析した。相対レベルをビンクリンを用いて標準化し、濃度測定単位で推定した±ＳＥＭ。
【図７Ｂ】（続葉）
【図８−１】クラステリンが、ＨＳＦ−１の調節によりＨｓｐ９０阻害剤から腫瘍細胞を保護することを示す図。Ａ、ＰＣ−３細胞を、ｗｔ−ＰＣ−３と比べてＣＬＵを過剰発現するようにトランスフェクトし、表示濃度のＨｓｐ９０ｉ−２で４８時間、処理した。細胞成長をクリスタルバイオレットにより測定し、対照と比較した。＊＊、ｐ≦０．０１。Ｂ、腫瘍細胞を２０ｎＭのＨＳＦ−１  ｓｉＲＮＡで対照Ｓｃｒ  ｓｉＲＮＡと対比して処理し、μＭのＨｓｐ９０ｉ−２で４８時間、処理した。総タンパク質を抽出し、ウエスタンブロッティングおよびカスパーゼ３／７活性分析を実施した。Ｃ、ＰＣ−３細胞を２０ｎＭのＣＬＵ  ｓｉＲＮＡで対照Ｓｃｒ  ｓｉＲＮＡと対比して処理し、１μＭのＨｓｐ９０ｉ−１で２４時間、処理した。ＨＳＦ−１の局在化を、免疫蛍光染色により評価した。
【図８−２】（続葉）
【図８−３】（続葉）
【図９】ＬＮＣａＰおよびＰＣ−３細胞を、３００ｎＭのクスチルセンまたは対照ＳｃｒＢ  ＡＳＯで２回、続いて１μＭのＨｓｐ９０ｉ−１またはＨｓｐ９０ｉ−２で４８時間、処理した。細胞を採取し、ＨＳＥ−ルシフェラーゼ活性またはウエスタンブロッティング分析を実施した。
【発明の詳細な説明】
【００３３】
本発明は、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象を治療するための方法であって、ｉ）クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよびｉｉ）次の構造を有する熱ショックタンパク質９０（Ｈｓｐ９０）阻害剤
【化５】
2014509608.tif 000006
【００３４】
または薬学的に許容されるその塩
［式中、
Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ14アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ハロアルキル、Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アシル、アリール、またはヘテロアリールであり、各アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリール基は、それぞれ独立にＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルアミノ、ニトロ、ハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、ハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシまたはカルボキサミドである１〜４個の基で任意に置換されていてもよく、
Ｒ1がＣ1〜Ｃ14アルキル基であるとき、アルキル基中の炭素原子の５個までが、それぞれ独立に、Ｒ4、カルボニル、エテニル、エチニルまたはＮ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ2もしくはＳＯから選択される部分に任意に置きかえられていてもよく、ただし、２個のＯ原子、２個のＳ原子、またはＯとＳ原子は互いに直接隣接せず、
Ｒ4は、
（ｉ）ヘテロアリール、
（ｉｉ）アリール、
（ｉｉｉ）飽和もしくは不飽和Ｃ3〜Ｃ10シクロアルキル、または
（ｉｖ）飽和もしくは不飽和Ｃ2〜Ｃ10ヘテロシクロアルキルであり、
各アリール、ヘテロアリール、飽和もしくは不飽和シクロアルキル、または飽和もしくは不飽和ヘテロシクロアルキルは、それぞれ独立に、少なくとも１個の基（それぞれ独立に、ヒドロキシ、ハロ、アミノ、シアノ、カルボキシ、カルボキサミド、ニトロ、オキソ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシ、またはモノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノである）で任意に置換されていてもよく；Ｒ4は、Ｃ6〜Ｃ10アリール基、Ｃ5〜Ｃ8飽和環式基、またはＣ4〜Ｃ10ヘテロシクロアルキル基と任意に縮合されていてもよく；
Ｒ1は、任意の利用可能な位置でＣ1〜Ｃ10アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ハロアルキル、Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、Ｃ2〜Ｃ10アルキニル、ヒドロキシ、カルボキシ、カルボキサミド、オキソ、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、−ＳＨ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ2〜Ｃ10アルケニルオキシ、Ｃ2〜Ｃ10アルキニルオキシ、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノ、−Ｃ1〜Ｃ10アルキル−Ｚ、−ＯＣ1〜Ｃ10アルキル−Ｚ、またはＲ5で任意に置換されていてもよく、
Ｚは、ＯＲoまたは−Ｎ（Ｒ6）2であり、
各Ｒ6は、それぞれ独立に、−ＨまたはＣ1〜Ｃ6アルキルであり、またはＮ（Ｒ6）2は、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、アゼパニル、１，３−もしくは１，４−ジアゼパニルまたはモルホリニルを表し、その各々は、ヒドロキシ、アミノ、アミノアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、またはハロゲンで任意に置換されていてもよく、
Ｒoは、−Ｈ、−Ｃ1〜Ｃ10アルキル、−Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、−Ｃ2〜Ｃ10アルキニル、アリール、ヘテロアリール、または−Ｃ1〜Ｃ6アシルであり；
Ｒ5は、
（１）ヘテロアリール、
（２）アリール、
（３）飽和もしくは不飽和Ｃ5〜Ｃ10シクロアルキル、または
（４）飽和もしくは不飽和Ｃ5〜Ｃ10ヘテロシクロアルキルであり、
Ｒ5基は、少なくとも１個の基（それぞれ独立に、ヒドロキシ、オキソ、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、−ＳＨ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシ、またはモノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノである）で任意に置換されていてもよく；
Ｒ2は、Ｈ、Ｃｌ、ハロゲン、ＣＦ3、ＣＨＦ2、ＣＨ3、Ｃ1〜Ｃ10アルキル、またはハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルであり；
Ｘは、ＮまたはＣＲ3であり、
Ｒ3は、Ｈ、ハロゲンまたはＣＨ3である］、
またはそのプロドラッグを、各々もう一方と併用するときに哺乳動物対象を治療するのに有効な量で哺乳動物対象に投与することを含む方法を提供する。
【００３５】
本発明は、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象を治療するための方法であって、ｉ）クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよびｉｉ）Ｈｓｐ９０阻害剤（この阻害剤は、Ｈｓｐ９０ｉ−１以外である）を、各々もう一方と併用するときに哺乳動物対象を治療するのに有効な量で哺乳動物対象に投与することを含む方法を提供する。
【００３６】
本発明は、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象を治療するための方法であって、ｉ）クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドならびにｉｉ）５０ｎｍｏｌ／Ｌ未満のＫaでＨｓｐ９０αおよびＨｓｐ９０βに結合するＨｓｐ９０阻害剤、またはそのプロドラッグを、各々もう一方と併用するときに哺乳動物対象を治療するのに有効な量で哺乳動物対象に投与することを含む方法を提供する。
【００３７】
いくつかの態様において、Ｈｓｐ９０阻害剤は、約７０、６０、５０、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、または５ｎｍｏｌ／Ｌ未満のＫaでＨｓｐ９０αおよび／またはＨｓｐ９０βに結合する。
【００３８】
いくつかの態様において、癌は、アンドロゲン非依存的前立腺癌である。
【００３９】
いくつかの態様において、合わせて投与したときのオリゴヌクレオチドの量とＨｓｐ９０阻害剤の量は、各薬剤を単独投与したときよりも対象を治療するのに有効である。
【００４０】
いくつかの態様において、Ｈｓｐ９０阻害剤の量と併用するオリゴヌクレオチドの量は、単独投与時に臨床的に有効な量より少ない。
【００４１】
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドの量と併用するＨｓｐ９０阻害剤の量は、単独投与時に臨床的に有効な量より少ない。
【００４２】
いくつかの態様において、合わせて投与したときのオリゴヌクレオチドの量とＨｓｐ９０阻害剤の量は、対象において前立腺癌の臨床症状を軽減させるのに有効である。
【００４３】
いくつかの態様において、哺乳動物対象は、ヒトである。
【００４４】
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドはアンチセンスオリゴヌクレオチドである。
【００４５】
いくつかの態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、クラステリンをコードするｍＲＮＡの翻訳開始部位または終結部位のいずれかにまたがっている。
【００４６】
いくつかの態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１１までに記載の配列のヌクレオチドを含む。
【００４７】
いくつかの態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号３に記載の配列のヌクレオチドを含む。
【００４８】
いくつかの態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドを改変して、同じ配列の無改変のオリゴヌクレオチドと比較してｉｎ  ｖｉｖｏ安定性を強化する。
【００４９】
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、クストリセンである。
【００５０】
いくつかの態様において、クストリセンの量は、６４０ｍｇ未満である。
【００５１】
いくつかの態様において、クストリセンの量は、４８０ｍｇ未満である。
【００５２】
いくつかの態様において、クストリセンの量は、７日間に１回、静脈内投与される。
【００５３】
いくつかの態様において、Ｈｓｐ９０阻害剤の量は、５０ｍｇ／ｋｇ未満である。
【００５４】
いくつかの態様において、Ｈｓｐ９０阻害剤の量は、２５ｍｇ／ｋｇ以下である。
【００５５】
いくつかの態様において、Ｈｓｐ９０阻害剤は、Ｈｓｐ９０ｉ−２である。
【００５６】
いくつかの態様において、Ｈｓｐ９０阻害剤のプロドラッグが哺乳動物対象に投与され、そのプロドラッグはＨｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯである。
【００５７】
いくつかの態様において、Ｈｓｐ９０阻害剤のプロドラッグが哺乳動物対象に投与され、そのプロドラッグはＨｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ２である。
【００５８】
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドとＨｓｐ９０阻害剤の併用は、前立腺癌細胞の増殖を阻害するのに有効である。
【００５９】
本発明は、クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチド、および次の構造を有するＨｓｐ９０阻害剤
【化６】
2014509608.tif 000007
【００６０】
または薬学的に許容されるその塩
［式中、
Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ14アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ハロアルキル、Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アシル、アリール、またはヘテロアリールであり、各アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリール基は、それぞれ独立にＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルアミノ、ニトロ、ハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、ハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシまたはカルボキサミドである１〜４個の基で任意に置換されていてもよく、
Ｒ1がＣ1〜Ｃ14アルキル基であるとき、アルキル基中の炭素原子の５個までが、それぞれ独立に、Ｒ4、カルボニル、エテニル、エチニルまたはＮ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ2もしくはＳＯから選択される部分で任意に置きかえられていてもよく、ただし、２個のＯ原子、２個のＳ原子、またはＯとＳ原子は互いに直接隣接せず、
Ｒ4は、
（ｉ）ヘテロアリール、
（ｉｉ）アリール、
（ｉｉｉ）飽和もしくは不飽和Ｃ3〜Ｃ10シクロアルキル、または
（ｉｖ）飽和もしくは不飽和Ｃ2〜Ｃ10ヘテロシクロアルキルであり、
各アリール、ヘテロアリール、飽和もしくは不飽和シクロアルキル、または飽和もしくは不飽和ヘテロシクロアルキルは、それぞれ独立に、少なくとも１個の基（それぞれ独立に、ヒドロキシ、ハロ、アミノ、シアノ、カルボキシ、カルボキサミド、ニトロ、オキソ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシ、またはモノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノである）で任意に置換されていてもよく；Ｒ4は、Ｃ6〜Ｃ10アリール基、Ｃ5〜Ｃ8飽和環式基、またはＣ4〜Ｃ10ヘテロシクロアルキル基と任意に縮合されていてもよく；
Ｒ1は、任意の利用可能な位置でＣ1〜Ｃ10アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ハロアルキル、Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、Ｃ2〜Ｃ10アルキニル、ヒドロキシ、カルボキシ、カルボキサミド、オキソ、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、−ＳＨ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ2〜Ｃ10アルケニルオキシ、Ｃ2〜Ｃ10アルキニルオキシ、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノ、−Ｃ1〜Ｃ10アルキル−Ｚ、−ＯＣ1〜Ｃ10アルキル−Ｚ、またはＲ5で任意に置換されていてもよく、
Ｚは、ＯＲoまたは−Ｎ（Ｒ6）2であり、
各Ｒ6は、それぞれ独立に、−ＨまたはＣ1〜Ｃ6アルキルであり、またはＮ（Ｒ6）2は、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、アゼパニル、１，３−もしくは１，４−ジアゼパニルまたはモルホリニルを表し、その各々は、ヒドロキシ、アミノ、アミノアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、またはハロゲンで任意に置換されていてもよく、
Ｒoは、−Ｈ、−Ｃ1〜Ｃ10アルキル、−Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、−Ｃ2〜Ｃ10アルキニル、アリール、ヘテロアリール、または−Ｃ1〜Ｃ6アシルであり；
Ｒ5は、
（１）ヘテロアリール、
（２）アリール、
（３）飽和もしくは不飽和Ｃ5〜Ｃ10シクロアルキル、または
（４）飽和もしくは不飽和Ｃ5〜Ｃ10ヘテロシクロアルキルであり、
Ｒ5基は、少なくとも１個の基（それぞれ独立に、ヒドロキシ、オキソ、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、−ＳＨ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシ、またはモノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノである）で任意に置換されていてもよく；
Ｒ2は、Ｈ、Ｃｌ、ハロゲン、ＣＦ3、ＣＨＦ2、ＣＨ3、Ｃ1〜Ｃ10アルキル、またはハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルであり；
Ｘは、ＮまたはＣＲ3であり、
Ｒ3は、Ｈ、ハロゲンまたはＣＨ3である］、
またはそのプロドラッグを、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象の治療に使用する量で含む医薬組成物を提供する。
【００６１】
本発明は、クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチド、およびＨｓｐ９０阻害剤（この阻害剤は、Ｈｓｐ９０ｉ−１以外である）を、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象の治療に使用する量で含む医薬組成物を提供する。
【００６２】
本発明は、クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチド、ならびに５０ｎｍｏｌ／Ｌ未満のＫaでＨｓｐ９０αおよびＨｓｐ９０βに結合するＨｓｐ９０阻害剤、またはそのプロドラッグを、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象の治療に使用する量で含む医薬組成物を提供する。
【００６３】
本発明は、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象の治療において、次の構造を有するＨｓｐ９０阻害剤：
【化７】
2014509608.tif 000008
【００６４】
または薬学的に許容されるその塩
［式中、
Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ14アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ハロアルキル、Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アシル、アリール、またはヘテロアリールであり、各アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリール基は、それぞれ独立にＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルアミノ、ニトロ、ハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、ハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシまたはカルボキサミドである１〜４個の基で任意に置換されていてもよく、
Ｒ1がＣ1〜Ｃ14アルキル基であるとき、アルキル基中の炭素原子の５個までが、それぞれ独立に、Ｒ4、カルボニル、エテニル、エチニルまたはＮ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ2もしくはＳＯから選択される部分で任意に置きかえられていてもよく、ただし、２個のＯ原子、２個のＳ原子、またはＯとＳ原子は互いに直接隣接せず、
Ｒ4は、
（ｉ）ヘテロアリール、
（ｉｉ）アリール、
（ｉｉｉ）飽和もしくは不飽和Ｃ3〜Ｃ10シクロアルキル、または
（ｉｖ）飽和もしくは不飽和Ｃ2〜Ｃ10ヘテロシクロアルキルであり、
各アリール、ヘテロアリール、飽和もしくは不飽和シクロアルキル、または飽和もしくは不飽和ヘテロシクロアルキルは、それぞれ独立に、少なくとも１個の基（それぞれ独立に、ヒドロキシ、ハロ、アミノ、シアノ、カルボキシ、カルボキサミド、ニトロ、オキソ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシ、またはモノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノである）で任意に置換されていてもよく；Ｒ4は、Ｃ6〜Ｃ10アリール基、Ｃ5〜Ｃ8飽和環式基、またはＣ4〜Ｃ10ヘテロシクロアルキル基と任意に縮合されていてもよく；
Ｒ1は、任意の利用可能な位置でＣ1〜Ｃ10アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ハロアルキル、Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、Ｃ2〜Ｃ10アルキニル、ヒドロキシ、カルボキシ、カルボキサミド、オキソ、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、−ＳＨ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ2〜Ｃ10アルケニルオキシ、Ｃ2〜Ｃ10アルキニルオキシ、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノ、−Ｃ1〜Ｃ10アルキル−Ｚ、−ＯＣ1〜Ｃ10アルキル−Ｚ、またはＲ5で任意に置換されていてもよく、
Ｚは、ＯＲoまたは−Ｎ（Ｒ6）2であり、
各Ｒ6は、それぞれ独立に、−ＨまたはＣ1〜Ｃ6アルキルであり、またはＮ（Ｒ6）2は、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、アゼパニル、１，３−もしくは１，４−ジアゼパニルまたはモルホリニルを表し、その各々は、ヒドロキシ、アミノ、アミノアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、またはハロゲンで任意に置換されていてもよく、
Ｒoは、−Ｈ、−Ｃ1〜Ｃ10アルキル、−Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、−Ｃ2〜Ｃ10アルキニル、アリール、ヘテロアリール、または−Ｃ1〜Ｃ6アシルであり；
Ｒ5は、
（１）ヘテロアリール、
（２）アリール、
（３）飽和もしくは不飽和Ｃ5〜Ｃ10シクロアルキル、または
（４）飽和もしくは不飽和Ｃ5〜Ｃ10ヘテロシクロアルキルであり、
Ｒ5基は、少なくとも１個の基（それぞれ独立に、ヒドロキシ、オキソ、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、−ＳＨ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシ、またはモノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノである）で任意に置換されていてもよく；
Ｒ2は、Ｈ、Ｃｌ、ハロゲン、ＣＦ3、ＣＨＦ2、ＣＨ3、Ｃ1〜Ｃ10アルキル、またはハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルであり；
Ｘは、ＮまたはＣＲ3であり、
Ｒ3は、Ｈ、ハロゲンまたはＣＨ3である］、
またはそのプロドラッグと併用して使用する、クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドを提供する。
【００６５】
本発明は、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象の治療において、Ｈｓｐ９０阻害剤（この阻害剤は、Ｈｓｐ９０ｉ−１以外である）と併用して使用する、クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドを提供する。
【００６６】
本発明は、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象の治療において、５０ｎｍｏｌ／Ｌ未満のＫaでＨｓｐ９０αおよびＨｓｐ９０βに結合するＨｓｐ９０阻害剤、またはそのプロドラッグと併用して使用する、クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドを提供する。
【００６７】
本発明は、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象を治療するための組成物であって、ｉ）クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよびｉｉ）次の構造を有するＨｓｐ９０阻害剤
【化８】
2014509608.tif 000009
【００６８】
または薬学的に許容されるその塩
［式中、
Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ14アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ハロアルキル、Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アシル、アリール、またはヘテロアリールであり、各アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリール基は、それぞれ独立にＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルアミノ、ニトロ、ハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、ハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシまたはカルボキサミドである１〜４個の基で任意に置換されていてもよく、
Ｒ1がＣ1〜Ｃ14アルキル基であるとき、アルキル基中の炭素原子の５個までが、それぞれ独立に、Ｒ4、カルボニル、エテニル、エチニルまたはＮ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ2もしくはＳＯから選択される部分で任意に置きかえられていてもよく、ただし、２個のＯ原子、２個のＳ原子、またはＯとＳ原子は互いに直接隣接せず、
Ｒ4は、
（ｉ）ヘテロアリール、
（ｉｉ）アリール、
（ｉｉｉ）飽和もしくは不飽和Ｃ3〜Ｃ10シクロアルキル、または
（ｉｖ）飽和もしくは不飽和Ｃ2〜Ｃ10ヘテロシクロアルキルであり、
各アリール、ヘテロアリール、飽和もしくは不飽和シクロアルキル、または飽和もしくは不飽和ヘテロシクロアルキルは、それぞれ独立に、少なくとも１個の基（それぞれ独立に、ヒドロキシ、ハロ、アミノ、シアノ、カルボキシ、カルボキサミド、ニトロ、オキソ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシ、またはモノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノである）で任意に置換されていてもよく；Ｒ4は、Ｃ6〜Ｃ10アリール基、Ｃ5〜Ｃ8飽和環式基、またはＣ4〜Ｃ10ヘテロシクロアルキル基と任意に縮合されていてもよく；
Ｒ1は、任意の利用可能な位置でＣ1〜Ｃ10アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ハロアルキル、Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、Ｃ2〜Ｃ10アルキニル、ヒドロキシ、カルボキシ、カルボキサミド、オキソ、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、−ＳＨ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ2〜Ｃ10アルケニルオキシ、Ｃ2〜Ｃ10アルキニルオキシ、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノ、−Ｃ1〜Ｃ10アルキル−Ｚ、−ＯＣ1〜Ｃ10アルキル−Ｚ、またはＲ5で任意に置換されていてもよく、
Ｚは、ＯＲoまたは−Ｎ（Ｒ6）2であり、
各Ｒ6は、それぞれ独立に、−ＨまたはＣ1〜Ｃ6アルキルであり、またはＮ（Ｒ6）2は、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、アゼパニル、１，３−もしくは１，４−ジアゼパニルまたはモルホリニルを表し、その各々は、ヒドロキシ、アミノ、アミノアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、モノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、またはハロゲンで任意に置換されていてもよく、
Ｒoは、−Ｈ、−Ｃ1〜Ｃ10アルキル、−Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、−Ｃ2〜Ｃ10アルキニル、アリール、ヘテロアリール、または−Ｃ1〜Ｃ6アシルであり；
Ｒ5は、
（１）ヘテロアリール、
（２）アリール、
（３）飽和もしくは不飽和Ｃ5〜Ｃ10シクロアルキル、または
（４）飽和もしくは不飽和Ｃ5〜Ｃ10ヘテロシクロアルキルであり、
Ｒ5基は、少なくとも１個の基（それぞれ独立に、ヒドロキシ、オキソ、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、−ＳＨ、−Ｓ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2−アリール、−ＳＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−アリール、（Ｃ1〜Ｃ6）アルコキシ、またはモノ−もしくはジ−（Ｃ1〜Ｃ10）アルキルアミノである）で任意に置換されていてもよく；
Ｒ2は、Ｈ、Ｃｌ、ハロゲン、ＣＦ3、ＣＨＦ2、ＣＨ3、Ｃ1〜Ｃ10アルキル、またはハロ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルであり；
Ｘは、ＮまたはＣＲ3であり、
Ｒ3は、Ｈ、ハロゲンまたはＣＨ3である］、
またはそのプロドラッグを、各々もう一方と併用するときに哺乳動物対象を治療するのに有効な量で含む組成物を提供する。
【００６９】
本発明は、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象を治療するための組成物であって、ｉ）クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよびｉｉ）Ｈｓｐ９０阻害剤（この阻害剤は、Ｈｓｐ９０ｉ−１以外である）を、各々もう一方と併用するときに哺乳動物対象を治療するのに有効な量で含む組成物を提供する。
【００７０】
本発明は、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象を治療するための組成物であって、ｉ）クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドならびにｉｉ）５０ｎｍｏｌ／Ｌ未満のＫaでＨｓｐ９０αおよびＨｓｐ９０βに結合するＨｓｐ９０阻害剤、またはそのプロドラッグを、各々もう一方と併用するときに哺乳動物対象を治療するのに有効な量で含む組成物を提供する。
【００７１】
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドとＨｓｐ９０阻害剤の併用は、前立腺癌細胞の増殖を阻害するのに有効である。
【００７２】
いくつかの態様において、Ｈｓｐ９０阻害剤媒介性のクラステリン発現誘導は、クストリセンによって減弱され、Ｈｓｐ９０阻害剤とクストリセンの併用は、ＣＲＰＣの進行を遅延させる。いくつかの態様において、Ｈｓｐ９０阻害剤とクストリセンの併用は、哺乳動物対象における腫瘍増殖を阻害する。いくつかの態様において、Ｈｓｐ９０阻害剤とクストリセンの併用は、哺乳動物対象の生存を引き延ばす。
【００７３】
本発明の一局面は、クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよびＨｓｐ９０阻害剤を、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象の治療に使用する量で含む医薬組成物を提供する。
【００７４】
本発明の一局面は、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象の治療において、Ｈｓｐ９０阻害剤と併用して使用する、クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドを提供する。
【００７５】
本発明の一局面は、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象を治療するための組成物であって、ｉ）クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよびｉｉ）Ｈｓｐ９０阻害剤を、各々もう一方と併用するときに哺乳動物対象を治療するのに有効な量で含む組成物を提供する。
【００７６】
本発明の局面は、オリゴヌクレオチドまたはＨｓｐ９０阻害剤の単独療法と比較した、クラステリン発現を標的にするオリゴヌクレオチドと、Ｈｓｐ９０阻害剤とを含む併用治療の効力の増加に関連する。本発明のいくつかの態様において、クラステリン発現を標的にするオリゴヌクレオチドと、ＨＳＰ９０阻害剤との併用は、オリゴヌクレオチドまたはＨｓｐ９０阻害剤の単独療法と比較して、前立腺癌細胞のアポトーシスを増加させおよび／または前立腺癌細胞の増殖を減少させる。いくつかの態様において、クラステリン発現を標的にするオリゴヌクレオチドと、Ｈｓｐ９０阻害剤との併用は、オリゴヌクレオチドまたはＨｓｐ９０阻害剤の単独療法と比較して、ＨＳＦ−１のタンパク質発現および／または機能を低下させる。
【００７７】
本発明の局面は、去勢抵抗性前立腺癌において患者の転帰を改善するために、Ｈｓｐ９０阻害剤と併用してクラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドを使用する標的戦略を提供する。
【００７８】
本発明は、前立腺癌に罹患した哺乳動物対象を治療するための方法であって、ｉ）クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよびｉｉ）熱ショックタンパク質９０（Ｈｓｐ９０）阻害剤を、各々もう一方と併用するときに哺乳動物対象を治療するのに有効な量で含む方法に関する。
【００７９】
いくつかの態様において、Ｈｓｐ９０阻害剤は、Ｈｓｐ９０ｉ−１である。
【００８０】
本明細書に開示された各態様は、他の開示された態様の各々に適用できるように意図されている。したがって、本明細書に記載の様々な要素の組合せのすべてが、本発明の範囲内にある。
【００８１】
パラメータ範囲が提供されている場合、その範囲内のすべての整数およびその１０分の１も本発明によって提供されることを理解されたい。たとえば、「０．２〜５ｍｇ／ｋｇ／日」は、０．２ｍｇ／ｋｇ／日、０．３ｍｇ／ｋｇ／日、０．４ｍｇ／ｋｇ／日、０．５ｍｇ／ｋｇ／日、０．６ｍｇ／ｋｇ／日など５．０ｍｇ／ｋｇ／日までを含む。
【００８２】
用語
本明細書では、特に明記しない限り、次の用語の各々は以下に述べる定義を有するものとする。
【００８３】
本明細書では、数値または範囲の文脈において「約」とは、詳述または請求される数値または範囲の±１０％を意味する。
【００８４】
本出願の明細書および特許請求の範囲では、用語「クラステリン」とは、ヒトを含めた哺乳動物に存在する糖タンパク質のことを指し、ヒトにおいてそのように命名された。数多くのクラステリン種の配列が知られている。たとえば、ヒトクラステリンの配列は、Ｗｏｎｇら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２１（３）９１７〜９２５頁（１９９４）、およびＮＣＢＩ配列受託番号ＮＭ＿００１８３１（配列番号４３）に記載されている。このヒト配列において、コード配列は、塩基４８〜１３９７にまたがっている。
【００８５】
本明細書では、「クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチド」とは、細胞においてクラステリン発現を低下させるのに有効な配列を持つオリゴヌクレオチドである。クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドは、たとえば、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはＲＮＡ干渉誘導分子であってよい。
【００８６】
本明細書では、「アンチセンスオリゴヌクレオチド」とは、クラステリン発現を低下させ、クラステリンｍＲＮＡに相補的な配列を有する非ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのことを指す。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）であってよい。本発明においてアンチセンス分子として使用し得る典型的な配列は、ＰＣＴ特許公開ＷＯ００／４９９３７、米国特許公開ＵＳ−２００２−０１２８２２０−Ａ１および米国特許第６，３８３，８０８号に開示されており、そのすべてを参照により本明細書に組み込む。具体的なアンチセンス配列は、配列番号１〜１８として本出願に記載されており、表１に見ることができる。
【表１】
2014509608.tif 000010
【００８７】
使用されるＯＤＮは、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＯＤＮの安定性を高めるために改変させてよい。たとえば、ＯＤＮは、ヌクレアーゼ消化に対する抵抗性を高めたホスホロチオエート誘導体（非架橋ホスホリル酸素原子を硫黄原子と置きかえた）として使用されてよい。ＭＯＥ（２’−Ｏ−（２−メトキシエチル））修飾（ＩＳＩＳ主鎖）も、有効である。そのような改変ＯＤＮの構築については、米国特許第６，９００，１８７号Ｂ２に詳述されており、その内容を参照により組み込む。いくつかの態様において、ＯＤＮは、クストリセンである。
【００８８】
本明細書では、「クストリセン」とは、配列ＣＡＧＣＡＧＣＡＧＡＧＴＣＴＴＣＡＴＣＡＴ（配列番号３）を有し、クラステリン発現を低下させるアンチセンスオリゴヌクレオチドのことを差し、この抗クラステリンオリゴヌクレオチドは、全体にわたってホスホロチオエート主鎖を有し、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾を持つヌクレオチド１〜４および１８〜２１の糖部分を有し、２’デオキシヌクレオチドであるヌクレオチド５〜１７を有し、またヌクレオチド１、４および１９に５−メチルシトシンを有する。クストリセンは、別名ＴＶ−１０１１、ＯＧＸ−０１１、ＩＳＩＳ  １１２９８９およびクストリセンナトリウムとしても知られている。
【００８９】
本明細書では、「ＲＮＡ誘導分子」とは、クラステリン発現のＲＮＡ干渉または「ＲＮＡｉ」を誘導可能な分子のことを差す。ＲＮＡｉはｍＲＮＡ分解に関係するが、この干渉の根底にある生化学的機序の多くは不明である。ＲＮＡｉの使用は、Ｆｉｒｅら、１９９８、Ｃａｒｔｈｅｗら、２００１、およびＥｌｂａｓｈｉｒら、２００１に記載されており、その内容を参照により本明細書に組み込む。
【００９０】
単離されたＲＮＡ分子は、ＲＮＡｉを媒介することができる。すなわち、本発明の単離されたＲＮＡ分子は、遺伝子の転写産物であるｍＲＮＡ（標的遺伝子とも呼ばれる）の分解を媒介し、または発現を抑止する。便宜上、本明細書において、そのようなｍＲＮＡを分解されるｍＲＮＡと称することもできる。用語ＲＮＡ、ＲＮＡ分子、ＲＮＡセグメントおよびＲＮＡ断片は、ＲＮＡ干渉を媒介するＲＮＡのことを指して互換的に使用できる。これらの用語は、二本鎖ＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ヘアピンＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、単離したＲＮＡ（部分精製したＲＮＡ、基本的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、組み換え的に作製したＲＮＡ）、ならびに１個以上のヌクレオチドの付加、削除、置換および／または変更により天然に存在するＲＮＡとは異なる改変されたＲＮＡを含む。そのような変更は、たとえばＲＮＡの末端または内部（そのＲＮＡの１か所以上のヌクレオチドで）への非ヌクレオチド材料の付加を含むことができる。本発明のＲＮＡ分子中のヌクレオチドは、天然に存在しないヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドを含めた標準的ではないヌクレオチドを含むこともできる。全体として、そのような変更されたＲＮＡｉ分子のすべては、類似体または天然に存在するＲＮＡの類似体のことを指す。本発明のＲＮＡは、ＲＮＡｉを媒介する能力を有する天然のＲＮＡに十分に類似してさえすれば十分である。
【００９１】
本明細書では、成句「ＲＮＡｉを媒介する」とは、どのｍＲＮＡ分子がＲＮＡｉ機構または工程による影響を受けることになるかを区別する能力のことを差し、また示している。ＲＮＡｉを媒介するＲＮＡは、機構を特定のｍＲＮＡの分解、さもなければ標的タンパク質の発現を低下に導くよう、ＲＮＡｉ機構と相互作用する。一態様において、本発明は、その配列に一致する特定のｍＲＮＡの切断を指示するＲＮＡ分子に関する。配列の完全一致が必要とは限らないが、その一致は、ＲＮＡが標的ｍＲＮＡの切断または発現の抑止によってＲＮＡｉ阻害を指示できるのに十分でなければならない。
【００９２】
上記したように、本発明のＲＮＡ分子は一般に、ＲＮＡ部分といくつかの付加的な部分、たとえばデオキシリボヌクレオチド部分を含む。ＲＮＡ分子中のヌクレオチドの総数は、最適には、ＲＮＡｉの有効な媒体であるための数より少ない。好ましいＲＮＡ分子において、ヌクレオチドの数は、１６〜２９個、より好ましくは１８〜２３個、および最も好ましくは２１〜２３個である。適切な配列は、配列番号１９〜４２として本出願に記載されている（表２）。
【表２】
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【００９３】
本発明のｓｉＲＮＡ分子を、ヒト患者を含めた癌または標的タンパク質の発現の阻害によって治療的有用性が得られる他の種類の疾患を有する患者を治療するための療法において使用する。本発明のｓｉＲＮＡ分子は、標的とされるｍＲＮＡおよびタンパク質の調節に適切な血漿および組織濃度に達するように、１回以上の連日注射（静脈内、皮下または髄腔内）によって、または１回以上の治療サイクルでの連続的な静脈内もしくは髄腔内投与によって患者に投与される。
【００９４】
本明細書では、「前立腺癌に罹患した哺乳動物対象」とは、前立腺癌を有すると肯定的に診断された哺乳動物対象を意味する。
【００９５】
本明細書では、「アンドロゲン非依存的前立腺癌」とは、アンドロゲン依存的でない（アンドロゲン感受性でない）細胞およびアンドロゲン依存的でない（アンドロゲン感受性でない）細胞を含有する腫瘍を包含し；そのような細胞はしばしば、アンドロゲン依存的からアンドロゲン非依存的に変化する。いくつかの態様において、アンドロゲン非依存的前立腺癌は、ホルモン除去療法および／またはホルモン遮断療法の投与後に変化した。いくつかの態様において、アンドロゲン非依存的でない前立腺癌と比較して、アンドロゲン非依存的前立腺癌においてＡＲ発現は増加している。
【００９６】
本明細書では、「去勢抵抗性前立腺癌」とは、ホルモン除去療法および／またはホルモン遮断療法に抵抗性がある任意のアンドロゲン非依存的前立腺癌を包含する。いくつかの態様において、去勢抵抗性前立腺癌は、ホルモン除去またはホルモン遮断療法の投与後に変化した。いくつかの態様において、去勢抵抗性でない前立腺癌と比較して、去勢抵抗性前立腺癌においてＡＲ発現は増加している。
【００９７】
本明細書では、「Ｈｓｐ９０阻害剤」とは、Ｈｓｐ９０−タンパク質相互作用、Ｈｓｐ９０シグナル伝達またはＨｓｐ９０タンパク質発現の阻害を含めた、Ｈｓｐ９０の機能を混乱または低下させる薬剤のことを指す。Ｈｓｐ９０阻害剤には、それだけには限らないが、Ｈｓｐ９０特異的モノクロナール抗体、Ｈｓｐ９０発現標的オリゴヌクレオチド（たとえば、Ｈｓｐ９０標的アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはＲＮＡ誘導分子）、Ｈｓｐ９０に特異的なペプチド薬剤、およびＨｓｐ９０に特異的な小分子阻害剤が含まれる。Ｈｓｐ９０阻害剤の非限定的な例は、Ｈｓｐ９０ｉ−１、Ｈｓｐ９０ｉ−２、Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯおよびＨｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ２である。
【００９８】
Ｈｓｐ９０ｉ−１は、Ｈｓｐ９０阻害剤である。Ｈｓｐ９０ｉ−１は、別名１７−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン（１７−ＡＡＧ）、テラチニブ、タネスピマイシン、ＮＳＣ−３３０５０７、ＣＮＦ−１０１、ＫＯＳ−９５３、ＧＬＤ−３６およびＣＰ１２７３７４である。Ｈｓｐ９０ｉ−１のＣＡＳ登録番号は、７５７４７−１４−７である。本明細書に記載の実験に使用されたＨｓｐ９０ｉ−１は、１７−ＡＡＧとも称され、アメリカ国立衛生研究所（Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍａｒｙｌａｎｄ、ＵＳＡ）から入手した。１７−ＡＡＧについては、Ｅｇｏｒｉｎら、１９９８およびＫｏｇａら、２００９に記述されており、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ）からの購入も可能である。
【００９９】
Ｈｓｐ９０ｉ−２は、Ｈｓｐ９０阻害剤である。Ｈｓｐ９０ｉ−２は、別名ＰＦ−０４９２８４７３、およびＳＮＸ−２１１２、および（４−（６，６−ジメチル−４−オキソ−３−トリフルオロメチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−インダゾール−１−イル）−２−（４−ヒドロキシ−シクロヘキシルアミノ）−ベンズアミド）である。Ｈｓｐ９０ｉ−２のＣＡＳ登録番号は、９０８１１２−４３−６である。Ｈｓｐ９０ｉ−２は、次の構造を有する。
【化９】
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【０１００】
Ｈｓｐ９０ｉ−２については、Ｌａｍｏｕｒｅｕｘら、２０１１に記述されており、その全内容を参照により本明細書に組み込む。
【０１０１】
Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯは、Ｈｓｐ９０阻害剤である。Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯは、Ｈｓｐ９０ｉ−２のプロドラッグである。Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯのＣＡＳ登録番号は、９０８１１５−２７−５である。Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯは、別名ＳＮＸ−５４２２およびＰＦ−０４９２９１１３である。Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯは、次の構造を有する
【化１０】
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【０１０２】
Ｈｓｐ９０ｉ−２−Ｐｒｏについては、Ｌａｍｏｕｒｅｕｘら、２０１１に記述されており、その全内容を参照により本明細書に組み込む。
【０１０３】
Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ２は、Ｈｓｐ９０ｉ−２の別のプロドラッグである。Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ２については、Ｃｈａｎｄａｒｌａｐａｔｙら、２００８に記述されており、その全内容を参照により本明細書に組み込む。Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ２は、別名ＳＮＸ−５５４２である。
【０１０４】
Ｈｓｐ９０ｉ−２、Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯおよびＨｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ２の合成方法は、Ｈｕａｎｇら、Ｊ．Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．２：４２８８〜４３０５頁（２００９）、および米国特許第７，９２８，１３５号に記載されており、その全内容を参照により本明細書に組み込む。合成の代わりに、Ｈｓｐ９０ｉ−２、Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯおよびＨｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ２は、Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＵＳＡ）およびＳｅｒｅｎｅｘ  Ｉｎｃ．（Ｄｕｒｈａｍ、Ｎｏｒｔｈ  Ｃａｒｏｌｉｎａ、ＵＳＡ）から入手できる。
【０１０５】
本出願の合成スキームに示された一般的な手順に対する変更を行って、構造的に多様な化合物を生成できることは、有機合成の当業者なら理解されよう。たとえば、アリール環が存在する場合、すべての位置異性体が予想され、標準的な芳香族置換化学を使用して合成することができる。置換基の数および種類は、アリール環の周りで異なっていてもよい。さらに、アルキル基が存在する場合、鎖長は当業者に周知の方法を使用して修正することができる。エステル形成が予想される場合、ラクトンが使用されてよく、ラクトン環は、求核基、たとえば上に記載したエーテル含有部分との反応によって開かれる。適切な有機形質転換は、Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎ、Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ、ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ；第６版、２００７）に記載されており、その内容を参照により本明細書に組み込む。
【０１０６】
主たる発明の化合物は、プロドラッグに転換されて、吸収および生体利用性を最適化することができる。プロドラッグの形成には、それだけには限らないが、エステルを形成するためのカルボン酸と遊離ヒドロキシル基との反応、リン酸を形成するためのオキシ塩化リンと遊離ヒドロキシル基との反応およびそれに続く加水分解、またはアミノ酸エステルを形成するためのアミノ酸と遊離ヒドロキシル基との反応が含まれ、その工程はＣｈａｎｄｒａｎによってＷＯ２００５／０４６５７５にすでに記載されている。置換基が選択され、得られた類似体は、医薬および製薬化学の当業者に周知の原理、たとえば、構造−活性関係の定量化、生物活性の最適化およびＡＤＭＥＴ（吸収、分布、代謝、排出、および毒性）特性にしたがって評価される。
【０１０７】
別段の指定がある場合を除き、本発明の化合物の構造が不斉炭素原子を含むとき、その化合物がラセミ化合物、ラセミ混合物および、単離された単一のエナンチオマーとして生じることを理解されたい。これらの化合物のそのような異性体の形態のすべてが、この発明に明白に含まれる。別段の指定がある場合を除き、各立体炭素は、ＲまたはＳ配置であってよい。したがって、特に明記しない限り、そのような不斉性から生じる異性体（たとえば、すべてのエナンチオマーおよびジアステレオマー）がこの発明の範囲に含まれることは、理解されよう。そのような異性体は、古典的な分離技術によっておよび立体化学的に制御された合成（たとえば「Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ、Ｒａｃｅｍａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ」Ｊ．Ｊａｃｑｕｅｓ、Ａ．Ｃｏｌｌｅｔ  ａｎｄ  Ｓ．Ｗｉｌｅｎ、Ｐｕｂ．Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、ＮＹ、１９８１に記載）によって実質的に純粋な形で得ることができる。たとえば、分離は、キラルカラムに対する分取クロマトグラフィーによって実施されてもよい。
【０１０８】
主たる発明は、本明細書に開示する化合物に存在する原子のすべての同位元素を含むことも意図する。同位元素は、同じ原子番号だが異なる質量数を有する原子を含む。一般例としてそれだけに限らないが、水素の同位元素としては、トリチウムおよびジュウテリウムがある。炭素の同位元素としては、Ｃ−１３およびＣ−１４がある。
【０１０９】
本出願の全体にわたって構造中の炭素のどんな注釈も、それ以上の注釈なしに使用される場合、炭素のすべての同位元素、たとえば12Ｃ、13Ｃまたは14Ｃを表すことを意図することに留意されたい。さらに、13Ｃまたは14Ｃを含有する任意の化合物は、具体的には、本明細書に開示される化合物の任意の構造を有することができる。
【０１１０】
本出願の全体にわたって構造中の水素のどんな注釈も、それ以上の注釈なしに使用される場合、水素のすべての同位元素、たとえば1Ｈ、2Ｈまたは3Ｈを表すことを意図することに留意されたい。さらに、2Ｈまたは3Ｈを含有する任意の化合物は、具体的には、本明細書に開示される化合物の任意の構造を有することができる。
【０１１１】
同位体標識化合物は一般に、非標識試薬を使用する代わりに適当な同位体標識試薬を使用する当業者に公知の従来の技術によって調製することができる。
【０１１２】
本明細書では、「アルキル」は、特定の数の炭素原子を有する分枝状と直鎖状両方の飽和脂肪族炭化水素基を含み、無置換でも置換されていてもよい。したがって、「Ｃ1〜Ｃnアルキル」のようなＣ1〜Ｃnは、１、２、…（ｎ−１）個またはｎ個の炭素を直鎖状または分枝状配置で有する基を含むと定義される。たとえば、「Ｃ1〜Ｃ6アルキル」のようなＣ1〜Ｃ6は、１、２、３、４、５、または６個の炭素を直鎖状または分枝状配置で有する基を含むと定義され、具体的にはメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシルおよびオクチルを含む。
【０１１３】
本明細書では、「アリール」とは、各環において多くとも１０原子までの任意の安定した単環、二環または多環炭素環を意味することを意図しており、少なくとも１方の環は、芳香族であり、無置換でも置換されていてもよい。そのようなアリール要素の例には、フェニル、ｐ−トルエニル（４−メチルフェニル）、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、フェナンスリル、アントリルまたはアセナフチルが含まれる。アリール置換基が二環式であり、１方の環が芳香族でない場合、付着は芳香族環を介することを理解されたい。
【０１１４】
用語「ヘテロアリール」とは、本明細書では、各環が多くとも１０個までの原子の安定した単環、二環または多環を表し、少なくとも１つの環は芳香族であり、Ｏ、ＮおよびＳからなる群から選択されるヘテロ原子を１〜４個含有する。二環式芳香族ヘテロアリール基には、それだけには限らないが、（ａ）１個の窒素原子を有する６員芳香族（不飽和）複素環に縮合されている；（ｂ）２個の窒素原子を有する５または６員芳香族（不飽和）複素環に縮合されている；（ｃ）１個の酸素または１個の硫黄原子のいずれかと共に１個の窒素原子を有する５員芳香族（不飽和）複素環に縮合されている；または（ｄ）Ｏ、ＮまたはＳから選択される１個のヘテロ原子を有する５員芳香族（不飽和）複素環に縮合されている、フェニル、ピリジン、ピリミジンまたはピリダジン環が含まれる。この定義の範囲にあるヘテロアリール基には、それだけに限らないが、ベンゾイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾフラザニル、ベンゾピラゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾチオフェニル、ベンズオキサゾリル、カルバゾリル、カルボリニル、シンノリニル、フラニル、インドリニル、インドリル、インドラジニル、インダゾリル、イソベンゾフラニル、イソインドリル、イソキノリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、ナフタピリジニル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、オキサゾリン、イソキサゾリン、オキセタニル、ピラニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリドピリジニル、ピリダジニル、ピリジル、ピリミジル、ピロールイル、キナゾリニル、キノリル、キノキサリニル、テトラゾリル、テトラゾロピリジル、チアジアゾリル、チアゾリル、チエニル、トリアゾリル、アゼチジニル、アジリジニル、１，４−ジオキサニル、ヘキサハイドロアゼピニル、ジヒドロベンゾイミダゾリル、ジヒドロベンゾフラニル、ジヒドロベンゾチオフェニル、ジヒドロベンズオキサゾリル、ジヒドロフラニル、ジヒドロイミダゾリル、ジヒドロインドリル、ジヒドロイソオキサゾリル、ジヒドロイソチアゾリル、ジヒドロオキサジアゾリル、ジヒドロオキサゾリル、ジヒドロピラジニル、ジヒドロピラゾリル、ジヒドロピリジニル、ジヒドロピリミジニル、ジヒドロピロールイル、ジヒドロキノリンイル、ジヒドロテトラゾリル、ジヒドロチアジアゾリル、ジヒドロチアゾリル、ジヒドロチエニル、ジヒドロトリアゾリル、ジヒドロアゼチジニル、メチレンジオキシベンゾイル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、アクリジニル、カルバゾリル、シンノリニル、キノキサリニル、ピラゾリル、インドリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンズオキサゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、フラニル、チエニル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、キノリンイル、イソキノリンイル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、インドリル、ピラジニル、ピリダジニル、ピリジニル、ピリミジニル、ピロールイル、テトラヒドロキノリンが含まれる。ヘテロアリール置換基が二環式であり、１方の環が芳香族でないまたはヘテロ原子を含有しない場合、付着はそれぞれ芳香族環を介する、またはヘテロ原子を含有する環を介することを理解されたい。ヘテロアリールが窒素原子を含有する場合、その対応するＮ−オキシドもこの定義に包含されることを理解されたい。
【０１１５】
アルキル、アリールおよびヘテロアリール置換基は、具体的に定義されない限り、置換されていても無置換でもよい。
【０１１６】
本発明の化合物は、塩形態であってもよい。本明細書では、「塩」とは、化合物の酸または塩基塩を作製することによって改変された本化合物の塩である。いくつかの態様において、塩は、薬学的に許容される。薬学的に許容される塩の例としては、それだけには限らないが、無機または塩基性残基の有機酸塩（たとえばアミン）；アルカリまたは酸性残基の有機塩（たとえばフェノール）がある。塩は、有機または無機酸を使用して作ることができる。そのような酸性塩には、塩化物、臭化物、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、スルホン酸塩、ギ酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、サリチル酸塩、アスコルビン酸塩などがある。フェノラート塩は、アルカリ土類金属塩、ナトリウム、カリウムまたはリチウムである。この点において用語「薬学的に許容される塩」とは、本発明の化合物の比較的無毒性である無機および有機酸または塩基付加塩のことを指す。これらの塩は、本発明の化合物の最終的な単離および精製の間に、または遊離塩基もしくは遊離酸の形態にある本発明の精製された化合物を、適切な有機または無機の酸もしくは塩基と別々に反応させ、このように形成された塩を単離することによってｉｎ  ｓｉｔｕ調製することができる。代表的な塩としては、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル酸塩、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩およびラウリルスルホン酸塩などがある。（たとえば、Ｂｅｒｇｅら（１９７７）「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」（Ｊ．Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．６６：１〜１９頁を参照のこと）。
【０１１７】
この発明の組成物は、本明細書に詳述される剤形を含めて様々な剤形で投与されてよい。その化合物を用いる治療は、併用療法または補助療法の構成要素であってよく、すなわち薬物を必要とする対象もしくは患者は、１種以上の本化合物と併せてその疾患用の別の薬物で治療されるもしくはそれを与えられる。この併用療法は、患者をまず１種の薬物で治療し、次いで他の薬物で治療する逐次治療でもよく、または２種以上の薬物を同時に投与してもよい。これらは、使用される剤形に応じて、同じ経路で、または２種以上の異なる投与経路でそれぞれ独立に投与されてもよい。
【０１１８】
本明細書では、「薬学的に許容される担体」とは、本化合物を動物またはヒトに送達するための、薬学的に許容される溶媒、懸濁化剤またはビヒクルである。担体は、液体でも固体でもよく、計画する投与方式を念頭に置いて選択する。リポソームも、薬学的に許容される担体である。
【０１１９】
治療において投与される化合物の用量は、因子、たとえば、個々の化学療法薬の薬力学的特性ならびにその投与の方法および経路、レシピエントの年齢、性別、代謝速度、吸収効率、健康状態および体重；症状の性質および程度；投与されている併用治療の種類；治療の頻度；および所望の治療効果に応じて変わってくる。
【０１２０】
化合物の単位用量は、単一の化合物または追加的な抗癌剤との混合物を含んでもよい。化合物は、錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤、顆粒剤、エリキシル剤、チンキ、懸濁剤、シロップ剤および乳剤として経口剤形で投与することができる。化合物は、静脈内（ボーラスまたは点滴）、腹膜内、皮下もしくは筋肉内の形で投与されても、またはたとえば注入、局所適用もしくは他の方法によって直接導入されてもよく、使用するすべての剤形は製薬の当業者に周知である。
【０１２１】
化合物は、意図する投与形態に関しておよび従来の医薬慣行と整合するように最適に選択された適切な医薬希釈剤、増量剤、賦形剤または担体（本明細書において一括して薬学的に許容される担体と称する）との混合物で投与することができる。単位は、経口、直腸、局所、静脈もしくは直接注入、または非経口投与に適した形態になる。化合物は、単独で投与されても薬学的に許容される担体と混合されてもよい。この担体は固体または液体であることができ、担体の種類は一般に、使用する投与の種類に基づいて選択される。活性薬剤は、錠剤もしくはカプセル剤の形態で、リポソーム、凝集粉としてまたは液状で同時投与することができる。適切な固形担体の例としては、ラクトース、スクロース、ゼラチンおよび寒天がある。カプセル剤または錠剤は、容易に処方でき、嚥下または咀嚼しやすくすることができる。他の固形剤としては、顆粒剤、およびバルク散剤がある。錠剤は、適当な結合剤、潤滑剤、希釈剤、崩壊剤、着色剤、賦香剤、流動化剤および融解剤を含有してよい。適当な液状剤形の例としては、水溶液もしくは水懸濁液、薬学的に許容される油脂、アルコールもしくはエステルを含めた他の有機溶媒、乳液、シロップまたはエリキシル剤、懸濁液、非発泡性顆粒から再溶解した液剤および／または懸濁剤、および発泡性顆粒から再溶解した発泡性処方が含まれる。そのような液状剤形は、たとえば、適切な溶媒、保存剤、乳化剤、懸濁化剤、希釈剤、甘味剤、増粘剤および融解剤を含有してよい。経口剤形は、任意に賦香剤および着色剤を含有する。非経口および静脈内の形は、注入の種類または選択した送達システムに適合させるために、ミネラルおよび他の材料を含んでもよい。
【０１２２】
本発明において有用な剤形を作製するための技術および組成物は、以下の参照に記載されている：７  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ、第９章および第１０章（ＢａｎｋｅｒおよびＲｈｏｄｅｓ、Ｅｄｉｔｏｒｓ、１９７９）；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ（Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら、１９８１）；Ａｎｓｅｌ、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ第２版（１９７６）；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１７版（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．、１９８５）；Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｄａｖｉｄ  Ｇａｎｄｅｒｔｏｎ、Ｔｒｅｖｏｒ  Ｊｏｎｅｓ編、１９９２）；Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  第７巻（Ｄａｖｉｄ  Ｇａｎｄｅｒｔｏｎ、Ｔｒｅｖｏｒ  Ｊｏｎｅｓ、Ｊａｍｅｓ  ＭｃＧｉｎｉｔｙ編、１９９５）；Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  Ｃｏａｔｉｎｇｓ  ｆｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ（Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓｅｒｉｅｓ  ３６（Ｊａｍｅｓ  ＭｃＧｉｎｉｔｙ編、１９８９）；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ：Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ：Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第６１巻（Ａｌａｉｎ  Ｒｏｌｌａｎｄ編、１９９３）；Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｔｒａｃｔ（Ｅｌｌｉｓ  Ｈｏｒｗｏｏｄ  Ｂｏｏｋｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．Ｓｅｒｉｅｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｊ．Ｇ．Ｈａｒｄｙ、Ｓ．Ｓ．Ｄａｖｉｓ、Ｃｌｉｖｅ  Ｇ．Ｗｉｌｓｏｎ編）；Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第４０巻（Ｇｉｌｂｅｒｔ  Ｓ．Ｂａｎｋｅｒ、Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ  Ｔ．Ｒｈｏｄｅｓ編）。上述した刊行物のすべてを参照により本明細書に組み込む。
【０１２３】
錠剤は、適当な結合剤、潤滑剤、崩壊剤、着色剤、賦香剤、流動化剤および融解剤を含有してよい。たとえば、錠剤またはカプセル剤を単位用量形で経口投与するには、活性薬物成分は、経口用の無毒性で薬学的に許容される不活性担体、たとえばラクトース、ゼラチン、寒天、デンプン、スクロース、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、リン酸ジカルシウム、硫酸カルシウム、マンニトール、ソルビトールなどと組み合わせることができる。適当な結合剤としては、デンプン、ゼラチン、天然糖、たとえばグルコースまたはβ−ラクトース、トウモロコシ甘味剤、天然および合成ゴム、たとえばアラビアゴム、トラガカントまたはアルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、蝋等が含まれる。これらの剤形において使用される潤滑剤としては、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが含まれる。崩壊剤としては、限定するものではないが、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンゴムなどが含まれる。
【０１２４】
化合物はまた、リポソーム送達系の形、たとえば小型単層小胞、大型単層小胞および多層小胞で投与することもできる。リポソームは、様々なリン脂質、たとえばコレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンから形成することができる。化合物は、組織標的乳液の成分として投与されてよい。
【０１２５】
化合物は、標的指向性の薬物担体としてのまたはプロドラッグとしての可溶性ポリマーと一緒に使用してもよい。そのようなポリマーには、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルトアミド−フェノール、またはパルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキシド−ポリリシンが含まれる。さらに、化合物は、薬物の制御放出を実現するのに有用なあるクラスの生分解性ポリマー、たとえば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸のコポリマー、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアシレート、および架橋したまたは両親媒性のブロックコポリマーのヒドロゲルと一緒に使用されてもよい。
【０１２６】
ゼラチンカプセル剤は、有効成分化合物および粉末状の担体、たとえばラクトース、デンプン、セルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸などを含有してもよい。類似の希釈剤を使用して、圧縮錠剤を作製することができる。錠剤とカプセル剤の両方が、即効性製品としてまたは数時間にわたって薬品の連続的放出をもたらす徐放性製品として製造できる。圧縮錠剤は、不快な味を覆い隠し錠剤を湿気から保護するために糖被覆またはフィルム被覆することができ、または胃腸管内における選択的崩壊のために腸溶被覆することができる。
【０１２７】
液体剤形で経口投与するには、経口用の薬物成分は、任意の経口用の無毒性で薬学的に許容される不活性担体、たとえばエタノール、グリセリン、水、などと組み合わせられる。適当な液状剤形の例には、水溶液もしくは水懸濁液、薬学的に許容される油脂、アルコールもしくはエステルを含めた他の有機溶媒、乳液、シロップまたはエリキシル剤、懸濁液、非発泡性顆粒から再溶解した液剤および／または懸濁剤、および発泡性顆粒から再溶解した発泡性処方が含まれる。そのような液状剤形は、たとえば、適切な溶媒、保存剤、乳化剤、懸濁化剤、希釈剤、甘味剤、増粘剤および融解剤を含有してよい。
【０１２８】
経口投与用の液状剤形は、患者の受け入れを高めるために、着色剤および賦香剤を含有することができる。一般に、水、適切な油、食塩水、水性デキストロース（グルコース）、および関連する糖液ならびにグリコール、たとえばプロピレングリコールまたはポリエチレングリコールは、非経口液剤用の適当な担体である。非経口投与用の液剤は、好ましくは、有効成分の水溶性塩、適当な安定剤、および必要ならば緩衝物質を含む。抗酸化剤、たとえば重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムまたはアスコルビン酸は、単独であるいは組み合わせて、適当な安定剤である。クエン酸とその塩ならびにＥＤＴＡナトリウムも使用される。さらに、非経口的溶液は、防腐剤、たとえばベンザルコニウムクロライド、メチル−またはプロピル−パラベンおよびクロロブタノールを含有することができる。適当な医薬用担体は、この分野の標準的参考書である「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙに記載されている。
【０１２９】
本発明の化合物は、適切な鼻腔内ビヒクルの使用によって鼻腔内形態で、または当業者に周知の経皮性皮膚パッチの形を使用する経皮経路によって、投与されてもよい。経皮送達システムの形で投与すると、用量投与は一般に、用量レジメンの全体を通して断続的ではなく連続的になる。
【０１３０】
非経口および静脈内の形態は、注入の種類または選択した送達システムに適合させるために、ミネラルおよび他の材料を含んでもよい。
【０１３１】
クラステリン発現の阻害は、一過性であってよく、Ｈｓｐ９０阻害剤との併用で起こってもよい。前立腺癌のヒトにおいて、このことは、発現の阻害が、Ｈｓｐ９０阻害もしくはＨｓｐ９０阻害剤を投与して１日または２日以内に有効になるべきであり、その後約３〜６ヵ月に及んで有効であるべきことを意味している。これを達成するには、複数回投与を必要とする場合がある。しかし、その時間帯はさらに引き延ばされてもよく、本発明の範囲から逸脱することなく、Ｈｓｐ９０阻害を開始し、その後に実質的な時間を延長してよいことは言うまでもない。
【０１３２】
本発明の局面は、アンドロゲン非依存的前立腺癌の治療に、または前立腺癌がアンドロゲン非依存的になることを防止するために適用できる。
【０１３３】
本発明の局面は、去勢抵抗性前立腺癌の治療に、または前立腺癌が去勢抵抗性になることを防止するために適用できる。
【０１３４】
「併用」とは、１回の治療計画の一環として、クラステリン発現を標的にしているオリゴヌクレオチドと同じ時点および頻度、またはより一般的には、異なる時間および頻度のいずれかであることを意味する。本発明の局面は、Ｈｓｐ９０阻害剤を投与する前、後、および／またはその間にオリゴヌクレオチドを投与することを含む。したがって、Ｈｓｐ９０阻害剤は、本発明によるオリゴヌクレオチドと併用して使用されてよいが、オリゴヌクレオチドとは異なる時間、異なる用量および異なる頻度で投与されてもよい。
【０１３５】
本明細書では、ミリグラムで測定されるオリゴヌクレオチドの「量」または「用量」とは、製剤の形に関係なく製剤中に存在するオリゴヌクレオチドのミリグラムのことを指す。
【０１３６】
本明細書では、クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチド、Ｈｓｐ９０阻害剤またはその任意の組合せの量のことを指す場合、「有効」とは、本発明の方法で使用した際に、合理的な利益／危険比に相応した過度の副作用（たとえば毒性、刺激またはアレルギー反応）無しに所望の治療的応答を得るのに十分なオリゴヌクレオチド、Ｈｓｐ９０阻害剤またはそれらの任意の組合せの分量のことを指す。
【０１３７】
本明細書では、「治療する」とは、たとえば、前立腺癌の進行の阻害、退縮または停止を包含する。治療するとは、任意の症状もしくは前立腺癌の症状の予防または改善も包含する。
【０１３８】
本明細書では、対象における疾患の進行または合併症の「阻害」とは、対象における疾患の進行および／または合併症を防ぐまたは減少させることを意味する。
【０１３９】
本明細書では、前立腺癌と関連した「症状」とは、前立腺癌と関連した任意の臨床的または臨床検査的徴候を含み、対象が感知するまたは気づくものに限られない。
【０１４０】
本明細書では、「薬学的に許容される担体」とは、合理的な利益／危険比に相応した過度の副作用（たとえば毒性、刺激およびアレルギー反応）が無い、ヒトおよび／または動物での使用に適切な担体もしくは賦形剤のことを指す。それは、本化合物および／または組合せを対象に送達するための、薬学的に許容される溶媒、懸濁化剤または賦形剤であってよい。
【０１４１】
次の略語が、本明細書において使用される
ＰＣａ  前立腺癌
ＣＲＰＣ  去勢抵抗性前立腺癌
ＨＳＰ  熱ショックタンパク質
ＣＬＵ  クラステリン
ＰＳＡ  前立腺特異的抗原
１７−ＡＡＧ  １７−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン
Ａｓｏ  アンチセンスオリゴヌクレオチド
単位用量
クラステリン発現を標的にするオリゴヌクレオチドの投与は、むき出しでの投与および薬学的に許容される脂質担体中での投与を含めた当技術分野において公知の様々な機序を使用して実施できる。たとえば、アンチセンス送達用の脂質担体は、米国特許第５，８５５，９１１号および第５，４１７，９７８号に開示されており、これを参照により本明細書に組み込む。一般に、オリゴヌクレオチドは、静脈内（ｉ．ｖ．）、腹腔内（ｉ．ｐ．）、皮下（ｓ．ｃ．）もしくは経口経路、または直接的な局所腫瘍注入によって投与される。好ましい態様において、クラステリン発現を標的にしているオリゴヌクレオチドは、静脈内（ｉ．ｖ．）注入によって投与される。いくつかの態様において、投与されるオリゴヌクレオチドの量は、６４０ｍｇである。
【０１４２】
アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与量は、前立腺細胞においてクラステリンの発現を阻害するのに有効な量である。この量が、使用されるアンチセンスオリゴヌクレオチドの有効性と、使用される任意の担体の性質の両方によって変化することは言うまでもない。
【０１４３】
クラステリン発現を標的にしているアンチセンスオリゴヌクレオチドの投与量は、４０〜６４０ｍｇまたは３００〜６４０ｍｇであってよい。アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与は、７日間に１回、１週間に３回、より具体的には、７日間のうちの１、３、５日目もしくは３、５、７日目であってよい。いくつかの態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与は、７日間に１回より低頻度である。用量は、患者の体重によって算出されてよく、したがって、約１〜２０ｍｇ／ｋｇ、もしくは約２〜１０ｍｇ／ｋｇ、または約３〜７ｍｇ／ｋｇ、もしくは約３〜４ｍｇ／ｋｇの用量範囲が使用され得る。この用量は、必要に応じて間隔をおいて繰り返される。１つの臨床的概念は、治療の第１週中に、１週間に１回、３回の初期用量で投与することである。投与されるアンチセンスオリゴヌクレオチドの量は、ヒト患者において癌細胞中のクラステリンの発現を阻害するのに有効であることが実証された量である。
【０１４４】
本発明のいくつかの態様において、前立腺癌の治療に必要とされるクラステリンの発現を標的にしているオリゴヌクレオチドの量は、オリゴヌクレオチド単独療法で必要となる量より、Ｈｓｐ９０阻害剤との併用において少なくなる。
【０１４５】
クストリセンは、ＩＶ投与用として等張のリン酸塩緩衝食塩水溶液として２０ｍｇ／ｍＬの濃度で処方されてよく、１本のバイアル中にクストリセンナトリウム１６０ｍｇを含有する８ｍＬの溶液として提供され得る。
【０１４６】
クストリセンは、０．９％塩化ナトリウム（生理食塩水）２５０ｍＬに加えることができる。投薬は、２時間以上の点滴として、末梢または中心留置カテーテルのいずれかを使用して静脈内に投与されてよい。追加的に、点滴ポンプを使用してよい。
【０１４７】
Ｈｓｐ９０阻害剤の投与は、経口、経鼻、肺、非経口、静脈内（ｉ．ｖ．）、腹腔内（ｉ．ｐ．）、関節内、経皮、皮内、皮下（ｓ．ｃ．）、局所、筋肉内、直腸、髄腔内、眼内および口腔内であってよい。経口投与では静脈内（ｉ．ｖ．）注入より高用量が必要になる可能性があることは、当業者は認識することになる。
【０１４８】
Ｈｓｐ９０阻害剤の用量は、６０ｍｇ／ｋｇ、５５ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇまたはそれ未満であってよい。
【０１４９】
クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよびＨｓｐ９０阻害剤の単位用量は、各々単独の用量またはそれらの混合物を含んでよい。クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドとＨｓｐ９０阻害剤との併用は、錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤、顆粒剤、エリキシル剤、チンキ、懸濁剤、シロップ剤および乳剤として経口剤形で投与することができる。クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよび／またはＨｓｐ９０阻害剤は、静脈内（ボーラスまたは点滴）、腹腔内、皮下もしくは筋肉内の形で投与されても、またはたとえば注入もしくは他の方法によって前立腺癌病変の中にもしくは上に直接導入されてもよく、使用するすべての剤形は製薬の当業者に周知である。
【０１５０】
クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよび／またはＨｓｐ９０阻害剤は、意図する投与形態に関しておよび従来の医薬慣行と整合するように最適に選択された適切な医薬希釈剤、増量剤、賦形剤または担体（本明細書において一括して薬学的に許容される担体と称する）との混合物で投与することができる。単位は、経口、直腸、局所、静脈もしくは直接注入、または非経口投与に適した形態になる。オリゴヌクレオチドおよび／またはＨｓｐ９０阻害剤は、単独で投与されても薬学的に許容される担体と混合されてもよい。この担体は固体または液体であってもよく、担体の種類は一般に、使用する投与の種類に基づいて選択される。カプセル剤または錠剤は、容易に処方でき、嚥下または咀嚼しやすくすることができる。他の固形剤としては、顆粒剤、およびバルク散剤がある。錠剤は、適当な結合剤、潤滑剤、希釈剤、崩壊剤、着色剤、賦香剤、流動化剤および融解剤を含有してよい。適当な液状剤形の例としては、水溶液もしくは水懸濁液、薬学的に許容される油脂、アルコールもしくはエステルを含めた他の有機溶媒、乳液、シロップまたはエリキシル剤、懸濁液、非発泡性顆粒から再溶解した液剤および／または懸濁剤、および発泡性顆粒から再溶解した発泡性処方が含まれる。そのような液状剤形は、たとえば、適切な溶媒、保存剤、乳化剤、懸濁化剤、希釈剤、甘味剤、増粘剤および融解剤を含有してよい。経口剤形は、任意に賦香剤および着色剤を含有する。非経口および静脈内の形は、注入の種類または選択した送達システムに適合させるために、ミネラルおよび他の材料を含んでもよい。
【０１５１】
クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドおよび／またはＨｓｐ９０阻害剤は、リポソーム送達システムの形態、たとえば小型単層小胞、大型単層小胞および多層小胞で投与することもできる。リポソームは、様々なリン脂質、たとえばコレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンから形成することができる。化合物は、組織標的乳液の成分として投与されてよい。
【０１５２】
液体剤形で経口投与するには、Ｈｓｐ９０阻害剤は、任意の経口用の無毒性で薬学的に許容される不活性担体、たとえばエタノール、グリセリン、水、などと組み合わせられてよい。適当な液状剤形の例には、水溶液もしくは水懸濁液、薬学的に許容される油脂、アルコールもしくはエステルを含めた他の有機溶媒、乳液、シロップまたはエリキシル、懸濁液、非発泡性顆粒から再溶解した液剤および／または懸濁剤、および発泡性顆粒から再溶解した発泡性処方が含まれる。そのような液状剤形は、たとえば、適切な溶媒、保存剤、乳化剤、懸濁化剤、希釈剤、甘味剤、増粘剤および融解剤を含有してよい。
【０１５３】
本発明のいくつかの態様において、前立腺癌の治療に必要とされるＨｓｐ９０阻害剤の量は、Ｈｓｐ９０単独療法で必要となる量より、クラステリンの発現を標的にしているオリゴヌクレオチドとの併用において少なくなる。
【０１５４】
単位用量は、単一化合物または化合物の混合物を含んでよい。単位用量は、経口または注入剤形として調製することができる。
【０１５５】
本発明の一局面によると、単位用量形に包装されたクラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドを含有する医薬組成物が提供され、各単位用量中のオリゴヌクレオチドの量は６４０ｍｇ以下である。前記医薬組成物はＨｓｐ９０阻害剤を含んでよく、注射可能な溶液または懸濁液であってよく、さらにナトリウムイオンを含有していてもよい。
【０１５６】
本発明の別の局面では、クラステリン発現を標的にしているオリゴヌクレオチドおよびＨｓｐ９０阻害剤の使用を提供し、癌治療用の薬剤の製造において、薬剤は６４０ｍｇ以下の用量のオリゴヌクレオチドが患者に送達されるように処方される。薬剤は、ナトリウムイオンを含有してよく、および／または注射可能な溶液の形態でもよい。
【０１５７】
本発明において有用な剤形を作製するための一般的な技術および組成物は、以下の参照に記載されている：７  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ、第９章および第１０章（ＢａｎｋｅｒおよびＲｈｏｄｅｓ、編者、１９７９）；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ（Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら、１９８１）；Ａｎｓｅｌ，Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ第２版（１９７６）；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１７版（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．、１９８５）；Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｄａｖｉｄ  Ｇａｎｄｅｒｔｏｎ、Ｔｒｅｖｏｒ  Ｊｏｎｅｓ編、１９９２）；Ａｄｖａｎｃｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  第７巻（Ｄａｖｉｄ  Ｇａｎｄｅｒｔｏｎ、Ｔｒｅｖｏｒ  Ｊｏｎｅｓ、Ｊａｍｅｓ  ＭｃＧｉｎｉｔｙ編、１９９５）；Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  Ｃｏａｔｉｎｇｓ  ｆｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ（Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓｅｒｉｅｓ３６（Ｊａｍｅｓ  ＭｃＧｉｎｉｔｙ編、１９８９）；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ：Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ：Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第６１巻（Ａｌａｉｎ  Ｒｏｌｌａｎｄ編、１９９３）；Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｔｒａｃｔ（Ｅｌｌｉｓ  Ｈｏｒｗｏｏｄ  Ｂｏｏｋｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．Ｓｅｒｉｅｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｊ．Ｇ．Ｈａｒｄｙ、Ｓ．Ｓ．Ｄａｖｉｓ、Ｃｌｉｖｅ  Ｇ．Ｗｉｌｓｏｎ編）；Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第４０巻（Ｇｉｌｂｅｒｔ  Ｓ．Ｂａｎｋｅｒ、Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ  Ｔ．Ｒｈｏｄｅｓ編）。これらの参照はその全体を、本出願に参照により本明細書に組み込む。
【０１５８】
この発明は、以下の実験の詳細を参照することによってよりよく理解されることになるが、その後に続く特許請求の範囲においてより完全に記載されるように、詳述した具体的な実験は本発明の単なる例示であるということを、当業者なら容易に理解されよう。
【０１５９】
実験の詳細
例１  Ｈｓｐ９０阻害剤は、前立腺癌（ＰＣａ）細胞におけるＨＳＰｓの発現をｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで誘導する。
【０１６０】
ＣＬＵ、Ｈｓｐ９０、Ｈｓｐ７０およびＡｋｔタンパク質の発現ならびにｍＲＮＡレベルに対するＨｓｐ９０ｉ−１またはＨｓｐ９０ｉ−２の用量および時間依存的効果を、ＬＮＣａＰおよびＰＣ−３細胞において評価した。Ｈｓｐ９０ｉ−１とＨｓｐ９０ｉ−２の両方は、Ｈｓｐ７０およびＣＬＵタンパク質レベルを、用量および時間依存的に最大３倍増加させた（図１Ａ、ＢおよびＣ）。Ｈｓｐ９０の阻害は、以前に報告されたように（Ｌａｍｏｕｒｅｕｘら、２０１１）、Ａｋｔ発現の用量および時間依存的低下をもたらした。ＣＬＵ、Ｈｓｐ７０およびＨｓｐ９０のｍＲＮＡレベルも、Ｈｓｐ９０阻害剤処理の後に増加した（図１Ｄ）。
【０１６１】
次にＣＬＵ発現に対するＨｓｐ９０ｉ−２での処理の効果を免疫組織化学およびウエスタンブロットを用いてＣＲＰＣ  ＬＮＣａＰ異種移植片においてｉｎ  ｖｉｖｏで評価した（図２）。ＣＬＵ発現は、媒体処理腫瘍と比較してＨｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯでの処理後に４倍増加した（＊＊＊、ｐ＜０．００１）（図２Ａ、Ｂ）。同様に、Ｈｓｐ９０阻害の薬力学的尺度とみなされる（Ｓｏｌｉｔら、２００３；Ｅｃｃｌｅｓら、２００８）Ｈｓｐ７０は、Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯでの処理後に２．３倍増加した（＊＊＊、ｐ＜０．００１）（図２Ａ）。
【０１６２】
例２  ＣＬＵおよびＨＳＦ−１活性に関連する治療誘導性フィードフォワードループ
ＨＳＦ−１は熱ショック応答の優勢な制御因子である（Ｂａｎｅｒｊｉら、２００８；Ｗｏｒｋｍａｎら、２００７）ので、ＨＳＦ−１活性およびＨＳＰｓの発現に対するＨｓｐ９０阻害の効果を評価した。Ｈｓｐ９０ｉ−１またはＨｓｐ９０ｉ−２は、ＣＬＵ（図１）ならびにＨＳＦ−１活性を、用量依存的に有意に誘導した（＊＊＊、ｐ≦０．０１；図３Ａ）。ＣＬＵの過剰発現により、ＰＣ−３腫瘍細胞がＨｓｐ９０ｉ−２誘発性アポトーシスから保護された（＊＊、ｐ≦０．０１；図８Ａ）。さらに、ｓｉＲＮＡを用いたＨＳＦ−１のノックダウンにより、ＣＬＵ発現が低下し、Ｈｓｐ９０ｉ−２により誘導されるアポトーシスに対して腫瘍細胞が感受性となり（図８Ｂ）、ＣＬＵの保護作用がＨＳＦ−１によって媒介されることが確認される。驚くべきことに、ＣＬＵの過剰発現によってもＨＳＦ−１活性が増大した（＊＊＊、ｐ≦０．００１、図３Ｂ）が、ｓｉＲＮＡまたはクスチルセンを用いたＣＬＵのノックダウンにより、ＨＳＦ−１活性が顕著に低下し（＊、ｐ≦０．０５；＊＊＊、ｐ≦０．００１；図３Ｃ）、ＣＬＵによるＨＳＦ−１の新規フィードフォワード調節が同定された。実際、ＣＬＵのサイレンシングにより、Ｈｓｐ９０ｉ−１またはＨｓｐ９０ｉ−２により誘導されるＨＳＦ−１転写活性（図３Ｃ）ならびにＨｓｐ２７およびＨｓｐ７０などのＨＳＦ−１調節遺伝子（図３Ｄ）が阻害された。この効果は、細胞質中のＨＳＦ−１を封鎖するＣＬＵノックダウンの能力によって説明することができる（図８Ｂ）。
【０１６３】
例３  単独療法と比較した、前立腺腫瘍細胞系のアポトーシスの増加におけるクスチルセンおよびＨｓｐ９０阻害剤を含む併用療法の有効性の増大
Ｈｓｐ９０阻害剤は、ＣＬＵおよび治療抵抗性におけるメディエーターとしての機能の上方制御を誘導する（Ｚｏｕｂｅｉｄｉら、２０１０；Ｇｌｅａｖｅら、２００５；Ｚｅｌｌｗｅｇｅｒら、２００３）ので、Ｈｓｐ９０阻害と併用したＣＬＵノックダウンが治療有効性を増大させるかどうかを、次に評価した。ＬＮＣａＰ細胞をクスチルセンで処理し、その後、表示濃度のＨｓｐ９０ｉ−１またはＨｓｐ９０ｉ−２で処理した。この併用により、Ｈｓｐ９０ｉ−１またはＨｓｐ９０ｉ−２の有効性が顕著に増大し、対照ＳｃｒＢ  ＡＳＯおよびＨｓｐ９０阻害剤で処理した細胞と比較して、１００ｎＭおよび１０００ｎＭにおいて細胞生存率が２０％低下した（＊、ｐ＜０．０５）（図４Ａ）。この効果が相加または併用効果であったかどうかを判断するために、一定比率デザインおよび併用指数（ＣＩ）値を用いた用量依存的効果の評価を実施し、ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙメディアンエフェクトプリンシパル（ｍｅｄｉａｎ  ｅｆｆｅｃｔ  ｐｒｉｎｃｉｐａｌ）（Ｃｈｏｕら、１９８４）に従って計算した。図４Ｂに用量反応曲線（併用療法、クスチルセンまたはＨｓｐ９０ｉ−２単独療法）および併用指数プロットを示すが、クスチルセンおよびＨｓｐ９０ｉ−２は、クスチルセンまたはＨｓｐ９０ｉ−２阻害剤単独療法と比較して、腫瘍細胞成長に対する高い併用有効性を有していたことがわかった。
【０１６４】
さらに、ＯＧＸ−０１１は、アポトーシスを誘導するＨｓｐ９０阻害剤の作用を増強する（図４ＣおよびＤ）。フローサイトメトリ分析により、クスチルセンをＨｓｐ９０ｉ−１（５３％）またはＨｓｐ９０ｉ−２（６５．４％）と併用したとき、対照ＳｃｒＢ  ＡＳＯ（４．２％）、クスチルセン単独（１７．４％）、対照ＳｃｒＢ  ＡＳＯ＋Ｈｓｐ９０ｉ−１（１８．３％）または対照ＳｃｒＢ  ＡＳＯ＋Ｈｓｐ９０ｉ−２（２４．４％；図４Ｃ）と比較してアポトーシス率（サブＧ１画分）が顕著に増加したこと（ｐ＜０．００１）が示されている。さらに、クスチルセンとＨｓｐ９０ｉ−１またはＨｓｐ９０ｉ−２との併用により、切断ＰＡＲＰおよびカスパーゼ３発現によって示されたように（図４Ｃ）、Ｈｓｐ９０阻害剤またはクスチルセン単独療法と比較して、多くのカスパーゼ依存的アポトーシスが誘導された。カスパーゼ３活性の顕著な増加は、クスチルセンが、アポトーシス率の増加を伴うＨｓｐ９０阻害に対して細胞を感受性とすることを確認するものである（図４Ｄ）。ＣＬＵとＨｓＰ９０の同時阻害による細胞の生存率の低下は、ＰＣ−３およびＬＮＣａＰ細胞の両方におけるｐ−ＡｋｔレベルならびにＬＮＣａＰ細胞におけるＡＲ（およびＰＳＡ）発現の低下に一部起因している（図４Ｃ）。
【０１６５】
例４  ＰＣ−３異種移植片におけるｉｎ  ｖｉｖｏでのクスチルセンおよびＨｓｐ９０ｉ−１の強力な併用療法
クスチルセンとＨｓｐ９０ｉ−１との併用の効果を、ＰＣ−３腫瘍においてｉｎ  ｖｉｖｏで評価した。ＰＣ−３異種移植片を有する雄ヌードマウスを治療（クスチルセン＋Ｈｓｐ９０ｉ−１対対照ＳｃｒＢ＋Ｈｓｐ９０ｉ−１；ｎ＝７）のために無作為に選択した。クスチルセン＋Ｈｓｐ９０ｉ−１は、ｉｎ  ｖｉｖｏでＳｃｒＢ＋Ｈｓｐ９０ｉ−１と比較して顕著に高い抗腫瘍効果を有し、対照ＳｃｒＢと比較して、６８日後に平均腫瘍体積を２９３５．３ｍｍ3から１１７６．９ｍｍ3に減少させた（＊＊、ｐ≦０．０１）（図５Ａ）。癌特異的生存期間は、併用クスチルセン＋Ｈｓｐ９０ｉ−１により対照と比較して有意に延長された（それぞれ７２日目に７１．４％対１４．３％；＊、ｐ≦０．０５；図５Ｂ）。免疫組織化学的分析により、他の群と比較してクスチルセン＋Ｈｓｐ９０ｉ−１の投与後のＣＬＵ、Ｋｉ６７およびＡｋｔ発現の低下が示されている（図５Ｃ）。さらに、クスチルセン＋Ｈｓｐ９０ｉ−１投与腫瘍は、他の群と比較して、ＴＵＮＥＬ染色の増加によって示されたように高いアポトーシスを示した（図５Ｃ）。
【０１６６】
例５  ＬＮＣａＰ  ＣＲＰＣ異種移植片におけるｉｎ  ｖｉｖｏでのクスチルセンおよびＨｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯの強力な併用療法
次にクスチルセンとＨｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯとの併用療法の効果を、去勢抵抗性ＬＮＣａＰ腫瘍において評価した。ＬＮＣａＰ腫瘍を有するマウスを、ＰＳＡ値が５０ｎｇ／ｍｌを超えたときに去勢した。ＰＳＡレベルが去勢前のレベルより高くまで戻った時点に、媒体対照、Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ単独、Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ＋対照ＳｃｒＢまたはＨｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ＋クスチルセンに無作為に割り付けた（各群においてｎ＝１０）。Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ＋クスチルセンを投与したマウスは、他のすべての群と比較して腫瘍成長の有意な遅延を示した（図６Ａ）（１０日目に、それぞれ２６５．３ｍｍ3、対照で８９２．７ｍｍ3、Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ単独で６４６．４ｍｍ3、Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ＋対照ＳｃｒＢで５５１．５６ｍｍ3）。治療後７週目までに、対照におけるすべてのマウスを安楽死させた。Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ＋クスチルセン群における腫瘍体積が５１７．４ｍｍ3であったのに対して、Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ単独で２４８３．６ｍｍ3であり、Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ＋対照ＳｃｒＢで２１７６．４ｍｍ3であった；＊＊＊、ｐ＜０．００１；図６Ａ）。
【０１６７】
血清ＰＳＡレベルも、他の群と比較して、クスチルセン＋Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯの投与を受けたマウスにおいて有意に低かった（〜４倍）（＊＊＊、ｐ＜０．００１；図６Ｂ）。併用クスチルセン＋Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ群は、４２日後に１２０ｎｇ／ｍｌの平均ＰＳＡレベルを有していたのに対して、媒体群において４１８．７ｎｇ／ｍｌ、Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ単独群において５２７ｎｇ／ｍｌ、またはＳｃｒＢ＋Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ群において４８０．３ｎｇ／ｍｌであった。併用クスチルセン＋Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ群は、他の群（ＰＳＡ倍加時間：〜２．４週間；速度：〜８５ｎｇ／ｍＬ／週；図６Ｃ）と比較して、有意に高いＰＳＡ倍加時間（３３．６週間；＊、ｐ＜０．０５）および低いＰＳＡ速度（１３．７８ｎｇ／ｍＬ／週；＊、ｐ＜０．０５）を示した。
【０１６８】
全生存期間も、併用クスチルセン＋Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯを投与したマウスにおいて、顕著に長かった（図６Ｄ）。すべてのマウスが６２日後に依然として生存していた（ｐ＜０．００１）併用クスチルセン＋Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ群と比較して、５７日目までに、対照、Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ単独または対照ＳｃｒＢ＋Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ群において、高い腫瘍負荷のためすべてのマウスが死亡したか、または安楽死させた。これらのデータは、Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯと併用してクスチルセンを用いてＣＬＵを標的とすることによって、単独療法より有意に、ヒトＣＲＰＣ異種移植片モデルにおける腫瘍成長が抑制され、生存期間が延長することを実証するものである。
【０１６９】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ所見と一致して、免疫組織化学的分析により、他の群と比較して併用クスチルセン＋Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯによる治療後のＣＬＵ、Ｋｉ６７、ＡｋｔおよびＡＲ発現の低下が明らかとなった（図７Ａ）。免疫染色の結果は、ウエスタンブロッティングにより確認した（図７Ｂ）。さらに、クスチルセン＋Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ併用により処理した腫瘍は、ＴＵＮＥＬ染色の増加により示された（図７Ａ）ように他の群と比較して高いアポトーシス率を有していた。これらのデータから、クスチルセン＋Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ治療腫瘍の腫瘍進行の低減が、増殖率の低下ならびにアポトーシス率の増加に起因することが示唆される。
【０１７０】
例６  例１〜５の材料および方法
腫瘍細胞系および試薬：
ヒトＰＣａ細胞系ＰＣ−３は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（２００８、アイソエンザイム分析によるＡＴＣＣ認証）から購入し、５％ウシ胎児血清および２ｍｍｏｌ／ＬのＬグルタミンを添加したＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）中で維持した。ＬＮＣａＰ細胞は、Ｄｒ．  Ｌｅｌａｎｄ  Ｗ．Ｋ．  Ｃｈｕｎｇ（１９９２、ＭＤＡＣＣ、Ｈｏｕｓｔｏｎ  Ｔｘ）の好意により提供されたものであり、２００９年７月にＩｌｌｕｍｉｎａ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｚｅｒ  ＩＩｘプラットフォームで、全ゲノムおよび全トランスクリプトーム配列決定によって試験され、認証された。ＬＮＣａｐ細胞は、５％ウシ胎児血清および２ｍｍｏｌ／ＬのＬ−グルタミンを添加したＲＰＭＩ１６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）中で維持した。すべての細胞系を加湿５％ＣＯ2／空気雰囲気中で３７℃で培養した。すべての細胞系を、復活後３ヵ月未満、継代培養した。ＬＮＣａｐ細胞を復活させるたびごとに、ＡＲおよびＰＳＡについてウエスタンブロッティングおよび／または実時間ＰＣＲを実施した。
【０１７１】
治療薬：
Ｈｓｐ９０阻害剤であるＨＳＰ９０ｉ−２（４−（６，６−ジメチル−４−オキソ−３−トリフルオロメチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−インダゾール−１−イル）−２−（４−ヒドロキシシクロヘキシルアミノ）−ベンズアミド）およびそのプロドラッグであるＨＳＰ９０ｉ−２−ＰＲＯをそれぞれｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ試験に用いた。これらの化合物は、ＨＳｐ９０のＮ末端アデノシン三リン酸結合部位に結合する新規な合成小分子量阻害剤であり、ＨＳＰ９０ｉ−２−ＰＲＯは、経口で生物学的に利用可能である。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験のために、ＨＳＰ９０ｉ−２をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に１０ｍＭ保存溶液向けに溶解し、−２０℃で保存した。ｉｎ  ｖｉｖｏ試験のために、ＨＳＰ９０ｉ−２−ＰＲＯをＰＢＳ中１％カルボキシメチルセルロースおよび０．５％Ｔｗｅｅｎ  ８０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）に１５ｍｇ／ｍｌで溶解し、４℃で保存した。
【０１７２】
ＨＳＰ９０ｉ−１（１７−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン（１７−ＡＡＧ）を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ試験に用いた。試験のために、１７−ＡＡＧをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に１０ｍＭ保存溶液向けに溶解し、−２０℃で保存した。
【０１７３】
クラステリンｓｉＲＮＡおよびアンチセンスオリゴヌクレオチド
以前に記載された（Ｓｏｗｅｒｙら、２００８）ように、エクソン２におけるヒトＣＬＵ開始部位およびスクランブル制御に対応するｓｉＲＮＡを用いるｓｉＲＮＡｓは、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｌａｆａｙｅｔｔｅ、ＣＯ）から購入した。第２世代アンチセンス（クスチルセン）および２’−Ｏ−（２−メトキシ）エチル修飾を有するスクランブル（ＳｃｒＢ）オリゴヌクレオチドは、ＯｎｃｏＧｅｎｅｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｃｏｌｕｍｂｉａ、Ｃａｎａｄａ）により供給された。クスチルセン配列（５’−ＣＡＧＣＡＧＣＡＧＡＧＴＣＴＴＣＡＴＣＡＴ−３’）、配列番号３は、ヒトＣＬＵのエクソンＩＩにおける開始部位に対応する。ＳｃｒＢ制御配列は、５’−ＣＡＧＣＧＣＴＧＡＣＡＡＣＡＧＴＴＴＣＡＴ−３’（配列番号４４）であった。前立腺細胞は、以前に記載されたプロトコール（Ｓｏｗｅｒｙら、２００８）を用いて、ｓｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドで処理した。
【０１７４】
細胞増殖およびアポトーシスアッセイ：
前立腺細胞系を５％ＦＢＳを含む適切な培地（ＤＭＥＭまたはＲＰＭＩ）中で平板培養し、表示濃度および時間でＨｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯまたはＨｓｐ９０ｉ−１で処理し、以前に記載されたように（Ｌｅｕｎｇら、２０００）クリスタルバイオレットアッセイを用いて細胞成長を測定した。アポトーシス細胞の検出および定量は、フローサイトメトリ（下で述べる）およびウエスタンブロッティング分析により行った。各アッセイを３連で反復した。
【０１７５】
併用指数（ＣＩ）は、ＣａｌｃｕＳｙｎ用量効果解析ソフトウエア（Ｂｉｏｓｏｆｔ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）を用いて評価した。Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙの多重薬物効果式（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｄｒｕｇ  ｅｆｆｅｃｔ  ｅｑｕａｔｉｏｎ）（Ｃｈｏｕら、１９８４）に基づくこの方法は、広範囲の成長阻害にわたる併用薬物活性を計算するのに適しており、ＣＩ＝１、相加性；ＣＩ＞１、拮抗作用；ＣＩ＜１、併用効果である。ＣＩは、ＥＤ50およびＥＤ75で計算した。
【０１７６】
カスパーゼ３活性は、ＣａｓｐＡＣＥ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ、Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃキット（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ、ＵＳＡ）を用いて治療の３日後に評価した。５０μｇの全細胞溶解物をカスパーゼ３基質ＡＣ−ＤＥＶＤ−ＡＭＣとともに、室温で４時間インキュベートし、３６０ｎｍ励起、４６０ｎｍ発光とした蛍光分析計でカスパーゼ３活性を定量化した。
【０１７７】
細胞周期分析：
前立腺癌細胞系を１μＭのＨｓｐ９０ｉ−２またはＨｓｐ９０ｉ−１の非存在下または存在下で７２時間インキュベートし、トリプシン処理し、２回洗浄し、０．１２％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、０．１２ｍＭのＥＤＴＡおよび１００μｇ／ｍｌのリボヌクレアーゼＡを含むＰＢＳ中でインキュベートし、次に５０μｇ／ｍｌのヨウ化プロピジウムを各試料に４℃で２０分間にわたって加えた。細胞周期分布は、２Ｎおよび４Ｎ  ＤＮＡ含量に基づいてフローサイトメトリー（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｅｐｉｃｓ  Ｅｌｉｔｅ、Ｂｅｃｋｍａｎ，Ｉｎｃ．、Ｍｉａｍｉ、ＦＬ）により分析した。各アッセイを３連で行った。
【０１７８】
ウエスタンブロッティング分析：
培養腫瘍前立腺細胞系の溶解物からの等量のタンパク質（抗体によって、５〜５０μｇ）を含む試料を、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル上電気泳動にかけ、ニトロセルロースフィルターに転移した。フィルターをＯｄｙｓｓｅｙ  Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ（ＬＩ−ＣＯＲ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で室温で１時間ブロックし、対象のタンパク質を検出するために、ブロットを一次抗体を用いて４℃で一夜探査した。インキュベーションの後、フィルターを洗浄緩衝液（０．１％Ｔｗｅｅｎを含むＰＢＳ）で５分間にわたり３回洗浄した。次いで、フィルターを１：５０００希釈Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ二次抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）とともに、室温で１時間インキュベートした。洗浄後にＯＤＹＳＳＥＹ  ＩＲイメージングシステム（ＬＩ−ＣＯＲ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、特異的タンパク質を検出した。
【０１７９】
定量的逆転写ＰＣＲ：
ＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を用いて、４８時間の処理後に、全ＲＮＡを培養細胞から抽出した。２μｇの全ＲＮＡをＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｒ  Ｆｉｒｓｔ  Ｓｔｒａｎｄ  ｃＤＮＡ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｋｉｔ（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて逆転写した。相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）のＰＣＲ増幅の実時間モニタリングは、ＳＹＢＲ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いたＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７９００  ＨＴ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で、ＤＮＡプライマー（追加の表  Ｓ１）を用いて実施した。標的遺伝子発現は、内部標準としての各試料中のＧＡＰＤＨレベルに対して標準化し、比較サイクル閾値（ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  ｃｙｃｌｅ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）（Ｃｔ）法を用いて、標的ｍＲＮＡの相対量を計算した。各アッセイを３連で行った。
【０１８０】
ルシフェラーゼアッセイ：
ＬＮＣａＰおよびＣ４−２細胞（２．５ｘ１０5）を６プレート上で平板培養し、リポフェクチン（ウエル当たり６μＬ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を用いてトランスフェクトした。用いた全量ＨＳＥプラスミドＤＮＡを、対照プラスミドの添加により、ウエル当たり１μｇに標準化した。１μＭのＨｓｐ９０ｉ−２またはＨｓｐ９０ｉ−１を、トランスフェクションの４時間後に、４８時間にわたって加えた。ＨＳＥ−ルシフェラーゼ活性を、Ｄｕａｌ−Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて、マイクロプレートルミノメーター（ＥＧ＆Ｇ  Ｂｅｒｔｈｏｌｄ）により測定した。すべての実験を３連ウエルで行い、プラスミドの異なる調製物を用いて３回反復した。
【０１８１】
免疫蛍光：
腫瘍細胞をカバーガラス上で成長させ、異なる濃度のＨｓｐ９０ｉ−２またはＨｓｐ９０ｉ−１で、４８時間処理した。処理後、細胞を氷冷メタノールで固定し、−２０℃で１０分間３％アセトンで完結した。細胞をＰＢＳで３回洗浄し、０．２％Ｔｒｉｔｏｎ／ＰＢＳとともに１０分間インキュベートし、その後洗浄し、ＨＳＦ−１（１：２５０）を検出するために、抗体を一夜加える前に３％無脂肪乳中で、３０分ブロッキングした。抗原は、ＦＩＴＣと結合させた抗マウス抗体（１：５００；３０分）を用いて視覚化した。光学顕微鏡写真をＺｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｐｌａｎ  ＩＩ蛍光顕微鏡を用いて２０倍で撮影した後、イメージングソフトウエア（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｅｃｌｉｐｓｅ、Ｅｍｐｉｘ  Ｉｍａｇｉｎｇ，Ｉｎｃ．）を用いて解析した。
【０１８２】
動物の治療：
雄無胸腺マウス（Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｃ．）に２ｘ１０6個のＬＮＣａＰ細胞（０．１ｍＬのＭａｔｒｉｇｅｌ中に懸濁；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を皮下（ｓ．ｃ．）注射した。腫瘍が３００〜５００ｍｍ3に達するか、またはＰＳＡレベルが５０ｎｇ／ｍＬを超えるまで増加した時点で、マウスを去勢した。腫瘍が去勢抵抗性に進行した時点で、マウスを媒体、Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ単独、Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ＋ＳｃｒＢ  ＡＳＯまたはＨｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ＋クスチルセンに無作為に割り付けた。Ｈｓｐ９０ｉ−２−ＰＲＯ（プロドラッグ、２５ｍｇ／ｋｇ；０．５％ＣＭＣ＋０．５％Ｔｗｅｅｎ−８０中製剤）は、週３回経口投与し、クスチルセンまたはＳｃｒＢ  ＡＳＯ（１５ｍｇ／ｋｇ）は、最初の週は１日１回、その後は週３回腹腔内注射した。各実験群は、１０匹のマウスからなっていた。腫瘍体積は、週２回測定した（長さｘ幅ｘ深さｘ０．５４３２）。血清ＰＳＡは、酵素免疫測定法（Ａｂｂｏｔｔ  ＩＭＸ、Ｍｏｎｔｒｅａｌ、Ｑｕｅｂｅｃ、Ｃａｎａｄａ）により週１回測定した。ＰＳＡ倍加時間（ＰＳＡｄｔ）および速度は、対数勾配法により計算した（ＰＳＡｔ＝ＰＳＡｉｎｉｔｉａｌ×ｅｍｔ）。データポイントは、平均腫瘍体積±ＳＥＭまたは平均ＰＳＡ濃度±ＳＥＭとして表した。
【０１８３】
ＰＣ−３腫瘍を定着させるために、２ｘ１０6個のＰＣ−３細胞を６〜８週齢の雄無胸腺マウス（Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｃ．）の側腹部にｓ．ｃ．接種した。通常、注射の３〜４週間後に、腫瘍が１００ｍｍ3に達したとき、Ｈｓｐ９０ｉ−１（２５ｍｇ／ｋｇ）＋対照ＳｃｒＢ  ＡＳＯ（１５ｍｇ／ｋｇ）またはＨｓｐ９０ｉ−１＋クスチルセン（１５ｍｇ／ｋｇ）による治療のために、マウスを無作為に選択した。Ｈｓｐ９０ｉ−１は、週３回腹腔内（ｉ．ｐ．）注射し、クスチルセンまたはＳｃｒＢは、最初の週は１日１回、その後は週３回腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。各実験群は、７匹のマウスからなっていた。腫瘍体積は、週２回測定した。データポイントは、平均腫瘍体積±ＳＥＭとして表した。
【０１８４】
腫瘍体積が体重の１０％以上に達したとき、ウエスタンブロッティング分析および免疫組織化学によるタンパク質発現の評価のためにマウスを屠殺し、腫瘍を採取した。すべての動物に対する処置は、カナダ動物管理協会（Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｃｏｕｎｃｉｌ  ｏｎ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ）のガイドラインおよび適切な施設認証に従って実施した。
【０１８５】
免疫組織化学：
免疫組織化学的染色は、適切な一次抗体ならびに酵素標識ビオチンストレプトアビジンシステムおよび溶媒抵抗性３，３’−ジアミノベニイジンＭａｐキットを用いた、Ｖｅｎｔａｎａ自動免疫染色装置Ｄｉｓｃｏｖｅｒ  ＸＴ（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍ）を用いて、腫瘍試料のホルマリン固定、パラフィン包埋４μｍ切片について実施した。染色強度のすべての比較は、２００倍の拡大倍率で行った。
【０１８６】
統計解析：
すべてのｉｎ  ｖｉｔｒｏデータは、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定およびＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定を用いて評価した。マウスの腫瘍体積は、クラスカル・ワォリス検定を用いて比較した。全生存期間は、カプラン・マイヤー曲線を用いて解析し、群間の統計的有意性は、対数順位検定（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ）を用いて評価した。統計的有意性の水準は、Ｐ＜０．０５に設定した。
【０１８７】
ウエスタンブロッティングに用いた抗体：
ＰＡＲＰ（１／１０００）、カスパーゼ３（１／１０００）、Ａｋｔ（１／１０００）、ｐ−Ａｋｔ（１／５００）は、細胞シグナル伝達に関わるものである。サイクリンＤ１（１／１０００）、ＨＳＰ９０（１／１０００）、ＨＳＰ７０（１／１０００）、クラステリン（１／１０００）、ＡＲ（１／１０００）、ＰＳＡ（１／１０００）、ＨＳＦ−１（１／１０００）は、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚから入手する。ＨＳＰ２７（１／５０００）は、Ａｓｓａｙｓ  Ｄｅｓｉｇｎｓから入手する。
【表３】
2014509608.tif 000014
【０１８８】
考察
前立腺癌は、最初は抗アンドロゲン療法に反応するが、去勢抵抗性疾患の進行がしばしば起こる。Ｈｓｐ９０の小分子阻害剤は、去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）および他の癌の治療において有望さを示すが、これらの阻害剤は、薬物の有効性を低減させる熱ショック応答を誘発する。前立腺癌において、治療抵抗性は、熱ショック因子１（ＨＳＦ−１）の活性化を伴う代償機構のため早期に発生する。Ｈｓｐ９０から放出されたならば、ＨＳＦ−１は、核に転位し、Ｈｓｐ遺伝子の熱ショックエレメント（ＨＳＥ）に結合し、Ｈｓｐ転写活性を増大させる（Ｗｈｉｔｅｓｅｌｌら、２００５）。したがって、Ｈｓｐ９０の阻害により、腫瘍細胞の生存と治療抵抗性を増大させる、Ｈｓｐ９０、Ｈｓｐ７０、Ｈｓｐ２７を含むいくつかのＨｓｐｓおよびクラステリン（ＣＬＵ）の発現の増加を伴う熱ショック応答が誘導される。これらの分子シャペロンの上方制御は、タンパク質の恒常性を回復し、耐熱性、細胞生存および治療抵抗性を促進することによる細胞のストレスからの回復において、一定の役割を果たしていると報告された（Ｔａｋａｙａｍａら、２００３；Ｚｏｕｂｅｉｄｉら、２０１０）。本明細書におけるデータは、この応答におけるＣＬＵの誘導を妨げることによって、Ｈｓｐ９０阻害剤誘発性ＣＲＰＣ細胞死がｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで促進されることを示している。本明細書で開示したように、ＣＲＰＣ細胞を、ＣＬＵを標的とするアンチセンス薬物であるクスチルセンの非存在下または存在下で、Ｈｓｐ９０阻害剤であるＨＳＰ９０ｉ−２−ＰＲＯまたはＨＳＰ９０ｉ−１で処理した。いずれかのＨｓｐ９０阻害剤単独の投与により、熱ショック因子ＨＳＦ−１の核転位および転写活性が増加し、これが、特にＣＬＵの発現を含む熱ショックタンパク質発現の用量および時間依存的増加を刺激した。クスチルセンといずれかのＨｓｐ９０阻害剤との併用が、クスチルセンまたはＨｓｐ９０阻害剤単独療法と比較して、ＣＲＰＣ細胞成長に対する阻害活性およびアポトーシスを増大させたように、処理によるＣＬＵの増加は、クスチルセンによって阻止された。これらの効果には、ＨＳＦ−１転写活性ならびにＨＳＰｓ、Ａｋｔ、ＰＳＡおよびアンドロゲン受容体の発現の低下が伴っていた。ヒトＣＲＰＣの異種移植片モデルにおけるＨｓｐ９０阻害剤とクスチルセンのｉｎ  ｖｉｖｏでの評価で、クスチルセンが抗腫瘍有効性を著しく増強し、Ｈｓｐ９０阻害剤単独療法と比較して、生存期間の延長を伴う腫瘍成長の８０％の抑制をもたらしたことが示された。総合すると、本明細書における所見から、Ｈｓｐ９０阻害剤により誘導される熱ショック応答およびＣＬＵの活性化がクスチルセンにより低減し、併用療法がＣＲＰＣの進行を遅らせるのに高い有効性を有することがわかる。
【０１８９】
治療抵抗性の発生は、ほとんどの悪性腫瘍の一般的特徴であり、ほとんどの癌死の基礎にある。治療抵抗性は、癌細胞のアポトーシスに対する抵抗（ｒｈｅｏｓｔａｔ）を集合的に増加させる治療の選択的圧力により一部発生する。治療ストレスの後に上方制御される生存タンパク質は、ｂｃｌ−２タンパク質ファミリーの抗アポトーシスメンバー、サバイビンならびにＣＬＵおよび他のＨＳＰｓのような分子シャペロンなどを含む（Ｚｅｌｌｗｅｇｅｒら、２００３）。
【０１９０】
分子シャペロンは、細胞がストレス誘発性タンパク質凝集に対処する助けとなり、細胞シグナル伝達および転写調節ネットワークにおいて顕著な役割を果たしている。シャペロンは、環境ストレスの時に様々な細胞および生物体の表現型を安定化する遺伝的バッファーとして働き、癌の進行時の細胞のダーウィン適応度および治療抵抗性を増大させる（Ｗｈｉｔｅｓｅｌｌら、２００５）。熱ショックシャペロンは、熱ショック応答の重要な構成要素であり、高度に保存されたストレス活性化保護機構も発癌性形質転換および熱耐性に関連する（Ｄａｉら、２００７）。シャペロンは、誤って折りたたまれたタンパク質および小胞体（ＥＲ）ストレス反応を調節するのに特に重要であり、これは、治療ストレスおよび抵抗性における対象の新たな分野である。このタンパク質恒常性（ｐｒｏｔｅｏｓｔａｓｉｓ）ネットワークの治療的調節に対する高まりつつある熱意は、合理的な標的としてのＨｓｐ’ｓおよびＣＬＵを強調するものである。その理由は、癌の進行および治療抵抗性に関連するシグナル伝達および転写ネットワークにおける、それらの多機能的役割があるためである。癌細胞は、より高いレベルの分子シャペロンを発現し、それらの形質転換を支持するためにＨＳＦ１の保護機能を奪う（Ｄａｉら、２００７）。実際、Ｈｓｐ９０、Ｈｓｐ７０、Ｈｓｐ２７またはＣＬＵの阻害剤はすべて、細胞死を誘発し、化学療法に感受性にすると報告された（Ｌａｍｏｕｒｅｕｘら、２０１１；Ｇｕｏら、２００５）。
【０１９１】
クラステリン（ＣＬＵ）の発現の増加は、化学療法抵抗性、放射線療法抵抗性およびホルモン療法抵抗性に関連づけられた（Ｚｅｌｌｗｅｇｅｒら、２００３；Ｊｕｌｙら、２００４）。ＣＬＵは、小ＨＳＰｓと同様な仕方でタンパク質凝集を抑制するストレス誘導性細胞保護シャペロンであり、そのプロモーターは、転写因子ＨＳＦ−１により認識される１４ｂｐエレメントを含む（Ｈｕｍｐｈｒｅｙｓら、１９９９）。ヒトＰＣａにおいて、ＣＬＵレベルは、グリーソン分類３無処置ホルモンナイーブ組織では低いが、より高いグリーソンスコアで（Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇら、１９９７）、またアンドロゲン除去後数週間以内に（Ｊｕｌｙら、２００２）増加する。ＣＬＵの発現は、Ｎｋｘ３．１ノックアウトマウスにおける、前立腺腫瘍形成の初期段階における腫瘍抑制遺伝子Ｎｋｘ３．１の喪失と相関する（Ｓｏｎｇら、２００９）。実験的および臨床研究で、ＣＬＵが治療抵抗性の発生と関連づけられ、ＣＬＵは、アンドロゲン除去、化学療法または放射線に反応して治療誘発性細胞死を抑制する（Ｍｉｙａｋｅら、２０００ａ；Ｊｕｌｙら、２００２：Ｍｉｙａｋｅら、２０００ｂ；Ｍｉｙａｋｅら、２０００ｃ）。ヒト前立腺ＬＮＣａＰ細胞におけるＣＬＵの過剰発現は、ホルモンまたは化学療法の後の進行を促進する（Ｍｉｙａｋｅら、２０００ａ；Ｍｉｙａｋｅら、２０００ｃ）ことから、ＣＬＵは、治療抵抗性を与える治療ストレスによって上方制御される抗アポトーシス遺伝子と同定される。クスチルセンは、ＣＬＵ発現を強力に抑制し、ＰＣａを含む様々なヒト癌における抗癌療法の有効性を増強する、現在後期臨床開発の段階にある第二世代のホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチドである（Ｚｏｕｂｅｉｄｉら、２０１０；Ｇｌｅａｖｅら、２００５）。ＣＬＵの標的化は、化学療法の細胞毒性効果を増強し、ＰＣａを含む様々なヒト癌における腫瘍成長を遅らせる（Ｍｉｙａｋｅら、２００５）が、Ｈｓｐ９０阻害剤療法および抵抗性との関連で、ＣＬＵの役割は明らかにされなかった。本明細書で示したように、Ｈｓｐ９０の阻害によって、ＨＳＦ−１活性およびＣＬＵ発現の増加を伴う熱ショック応答が誘導され、これが機能して、治療誘発性アポトーシスが抑制され、治療抵抗性の発生が促進される。クスチルセンを用いたＣＬＵのノックダウンにより、ＣＲＰＣにおけるＨｓｐ９０阻害剤の効果が増強される。
【０１９２】
本発明の態様は、クスチルセンのようなクラステリン発現を標的とするオリゴヌクレオチド、ならびにＨｓｐ９０阻害剤は、前立腺癌の治療のための強力な組合せであるという予期しない発見に関する。Ｈｓｐ９０と併用した抗クラステリン療法が非常に強力であるという発見は、特に驚くべきことである。その理由は、Ｈｓｐ９０が複数の細胞保護タンパク質の発現を増加させることが公知であるからである。
【０１９３】
ＨＳＰ９０ｉ−２を含むいくつかのＨｓｐ９０阻害剤は、様々な前臨床モデル（Ｌａｍｏｕｒｅｕｘら、２００１；Ｃｈａｎｄａｒｌａｐａｔｙら、２００８；Ｏｋａｗａら、２００９）において、また臨床試験（Ｌａｍｏｕｒｅｕｘら、２０１１；Ｓｙｄｏｒら、２００６）において強力な抗腫瘍活性を有する。以前の報告（Ｌａｍｏｕｒｅｕｘら、２０１１；Ｃｅｒｖａｎｔｅｓ−Ｇｏｍｅｚら、２００９）と一致して、本明細書におけるデータは、Ｈｓｐ９０阻害剤が、転写因子ＨＳＦ−１の活性化とその後のＨｓｐ９０自体、Ｈｓｐ７０およびＣＬＵのレベルの増加を伴う、ストレス応答を誘導することを示している。アクチノマイシンＤを用いた転写の阻害がＨＳＰ９０ｉ−１媒介性Ｈｓｐ７０およびＨｓｐ２７の発現を低下させ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＨＳＰ９０ｉ−１の効果を増強させる（Ｃｅｒｖａｎｔｅｓ−Ｇｏｍｅｚら、２００９）ので、この熱ショック応答は、治療抵抗性の発生を促進する可能性がある。さらに、ＨＳＦ−１のサイレンシングによるストレス応答の抑制によってもＨｓｐ９０阻害剤の活性が増加する（Ｂａｇａｔｅｌｌら、２０００）。ＣＬＵがＨｓｐ９０阻害剤の投与によって劇的に誘導され、ＣＬＵ阻害剤が後期臨床開発の段階にあることから、本明細書で開示した実験では、この熱ショック応答におけるＣＬＵの役割を評価した。
【０１９４】
ＣＬＵは、生殖、脂質輸送、補体調節およびアポトーシスを含む多くの様々な病態生理学的過程に関連する（Ｚｏｕｂｅｉｄｉら、２０１０；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら、１９９５）。ＣＬＵ発現は、ホルモン除去後の正常および悪性腫瘍前立腺および乳房組織を含むアポトーシスを受ける様々な組織において急速に上方制御される（Ｋｙｐｒｉａｎｏｕら、１９９０、Ｋｙｐｒｉａｎｏｕら、１９９１）。以前の研究においても、ＣＬＵ発現がＣＲＰＣを含む多くの癌の誘発および進行と関連づけられた（Ｚｏｕｂｅｉｄｉら、２０１０）。さらに、異種移植片腫瘍モデルにおけるアンドロゲン除去後のＣＬＵの上方制御が、去勢抵抗性への進行を促進し、タキサン化学療法を含む他のアポトーシス刺激に対して細胞を抵抗性にする（Ｍｉｙａｋｅら、２０００；Ｍｉｙａｋｅら、２００１）。これらの蓄積された知見（Ｍｉｙａｋｅら、２００１）と一致して、クスチルセンを用いるＣＬＵの阻害は、ＰＣａ前臨床モデルにおける従来型ならびに分子標的療法を相乗作用的に向上させる（Ｓｏｗｅｒｙら、２００８）。実際、第ＩＩ相試験でヒト前立腺癌組織におけるＣＬＵの９０％を超える阻害（Ｃｈｉら、２００５）、およびＣＲＰＣにおいてＯＧＸ−０１１をドセタキセルと併用した場合に生存期間の７ヵ月の延長（Ｃｈｉら、２００８；Ｃｈｉら、２０１０）が報告されたことから、クスチルセンは、現在第ＩＩＩ相試験にかけられている。
【０１９５】
本明細書におけるデータは、Ｈｓｐ９０阻害剤は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏとｉｎ  ｖｉｖｏの両方においてＣＬＵレベルを増加させるが、クラステリン阻害剤ＨＳＰ９０ｉ−２またはＨＳＰ９０ｉ−１は、ＣＬＵを誘導したことを示している。予想されたように（Ｃｅｒｖａｎｔｅｓ−Ｇｏｍｅｚら、２００９、Ｂａｇａｔｅｌｌら、２０００）、ＨＳＰ９０ｉ−２またはＨＳＰ９０ｉ−１は、ＨＳＰｓ発現の上方制御をもたらすＨＳＦ−１転写活性を誘導する。驚くべきことに、本明細書で述べた実験で、ＣＬＵサイレンシングは、Ｈｓｐ９０阻害剤誘導性ＨＳＦ−１転写活性を無効にするが、ＣＬＵ過剰発現は、それを増大させることが見いだされ、ＨＳＦ−１および熱ショック応答自体の調節におけるＣＬＵの役割が明らかにされた。ＣＬＵノックダウンにより、Ｈｓｐ９０阻害剤の処理後のＨＳＦ−１の核への転位が阻止される。ＨＳＦ−１活性に対するＣＬＵのこの効果は、生物学的に妥当である。その理由は、ＣＬＵ過剰発現が、Ｈｓｐ９０阻害剤の細胞毒性を防御するのに対して、ＣＬＵサイレンシングは、それを増大させるからである。これらのｉｎ  ｖｉｔｒｏでの結果と一致して、クスチルセンをＨｓｐ９０阻害剤と併用した場合に、ＰＣ−３およびＬＮＣａＰモデルにおいてｉｎ  ｖｉｖｏでも相乗効果が認められた。クスチルセン＋Ｈｓｐ９０阻害剤の併用により、ＣＲＰＣ腫瘍成長が有意に遅延し、ＰＣ−３およびＬＮＣａＰモデルにおける生存期間が延長した。Ｈｓｐ９０とＣＬＵとの複合阻害によるアポトーシス率の増加は、腫瘍の進行の遅延が治療により誘発されるアポトーシスの促進に起因していたことを示唆するものである。クラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチド＋Ｈｓｐ９０阻害剤の全身投与によって、それぞれＰＣ−３モデルおよびＬＮＣａＰ去勢抵抗性前立腺癌における腫瘍成長が対照ＳｃｒＢ  ＡＳＯ＋Ｈｓｐ９０阻害剤と比較して低下する。この腫瘍の進行の抑制は、両前立腺癌モデルにおける生存期間の延長を伴っている。免疫組織化学を用いたＴＵＮＥＬの検出によるクラステリンとＨｓｐ９０との複合阻害の後のアポトーシスの増加の検出は、併用療法の後の腫瘍の進行の遅延がＨｓｐ９０阻害剤誘発性アポトーシスの促進に起因することを示唆するものである。総括すると、これらの結果は、ＨＳＦ−１および熱ショック応答に対するＣＬＵの生物学的に妥当なフィードフォワード調節ループを初めて明らかにするものである。
【０１９６】
ＰＳＡレベルに対するＨｓｐ９０阻害剤と併用したクラステリン発現を低下させるオリゴヌクレオチドの効果を、上で開示したようにＬＮＣａＰ去勢抵抗性前立腺癌モデルにおいて検討した。本明細書で示したように、ｓｉＲＮＡまたはアンチセンス薬物を用いたＣＬＵの標的化により、前立腺癌における治療誘導性ＣＬＵの誘導が抑制され、Ｈｓｐ９０阻害剤誘発性細胞死が促進された。血清ＰＳＡレベルは、アンドロゲンの存在下でアンドロゲン受容体（ＡＲ）により調節される確立された有用なバイオマーカーであり（Ｍａｇｋｌａｒａら、２００２）、化学療法の有効性を評価するための患者のフォローアップにおける有益なツールである。熱ショック応答に対するＣＬＵ阻害の効果に加えて、去勢感受性のＡＲ陽性ＬＮＣａＰモデルにおける所見は、ＡＲ活性に関連するＣＬＵとＨｓｐ９０との複合抑制の他の可能な利益を強調するものである。Ｈｓｐ９０の阻害が、ＡＲを不安定化し、退化させ、それに伴ってＰＳＡの発現が低下することは、公知である（Ｓｏｌｉｔら、２００２；Ｇｅｏｒｇｅｔら、２００２）。ｉｎ  ｖｉｖｏで、血清ＰＳＡレベルならびにＰＳＡ倍加時間および速度は、ＰＦ−０４９２９１１３単独療法と比較して、併用ＯＧＸ−０１１療法により有意に低下した。血清ＰＳＡレベルは、確立された有用なＡＲ調節バイオマーカーであり（Ｋｉｍら、２００４）、化学療法の有効性を評価するうえでの有益なツールである。興味深いことに、このｉｎ  ｖｉｖｏ試験で用いたＨｓｐ９０阻害剤の低用量において、血清ＰＳＡレベルに対する効果は明らかでなかった。併用療法によるより低いＰＳＡレベルは、より低いＡＲレベルと相関していた。この、ＣＬＵ阻害とより低いＡＲレベルとの相関は、ＨＳＦ−１に対するＣＬＵの調節ループおよび他のＡＲシャペロン（たとえば、Ｈｓｐ２７、Ｈｓｐ７０、Ｈｓｐ９０、ＦＫＢＰ５．２）の発現の調節におけるＨＳＦ−１の役割に関連している可能性があり、我々は、継続中の実験において分子的基礎を積極的に探究している。ＣＬＵがＨＳＦ−１により転写レベルで活性化されることが公知である（Ｚｏｕｂｅｉｄｉら、２０１０）が、本明細書におけるデータもＣＬＵが、ひいてはＨＳＦ−１を活性化するフィードフォワードループを働かせることを示している。ＣＬＵのノックダウンは、ＨＳＦ−１転写活性を低下させ、その核転位を無効にし、これがその後、ＨＳＦ−１ノックダウンの後に認められるのと同様に、Ｈｓｐ２７、Ｈｓｐ７０およびＨｓｐ９０発現の低下をもたらす（Ｒｏｓｓｉら、２００６）。したがって、シャペロンレベルの低下のため、ＡＲの安定性が低下する。
【０１９７】
抗腫瘍活性の有効性の増大に加えて、併用療法は、毒性を低減するための用量の減量戦略も可能にし得る。たとえば、ＨＳＰ９０ｉ−１は、６０ｍｇ／ｋｇ／日での単独療法として肝毒性をもたらし（Ｇｌａｚｅら、２００５）、一方、ＨＳＰ９０ｉ−２−ＰＲＯは、５０ｍｇ／ｋｇ／日で体重減少を引き起こした。以前の試験で、単独療法としての５０ｍｇ／ｋｇのＨＳＰ９０ｉ−２−ＰＲＯは、ＬＮＣａＰ  ＣＲＰＣ腫瘍の進行を抑制した（Ｌａｍｏｕｒｅｕｘら、２０１１）。本試験に用いた２５ｍｇ／ｋｇ／日の治療に不十分な用量では、ＨＳＰ９０ｉ−２−ＰＲＯ単独療法は、腫瘍体積のわずかな、有意でない低下を示し、血清ＰＳＡレベルに対する効果を示さなかった。しかし、ＨＳＰ９０ｉ−２−ＰＲＯをクスチルセンと併用したとき、この低用量で腫瘍の進行の有意な遅延が認められ、毒性は認められなかった。
【０１９８】
本明細書で開示したデータは、Ｈｓｐ９０阻害剤によって誘導されたストレスがＨＳＦ−１活性の誘導によりどのようにＣＬＵを調節するか、ひいては、ＣＬＵがどのようにＨＳＦ−１活性、細胞の生存および治療抵抗性を調節するかを明らかにする助けとなる。本明細書で、ＣＬＵの阻害が、Ｈｓｐ９０阻害剤により誘導される熱ショック応答を無効にすることを初めて示した。これらの知見は、ＣＬＵ阻害剤が第ＩＩＩ相臨床試験にかけられているので、臨床的に妥当であり、薬剤耐性を克服するためのメカニズムに基づく介入に基づいて新たな薬物併用を確立するための枠組みを提供する。本発明は、ＣＲＰＣにおける患者の治療効果を改善するための、クスチルセンをＨｓｐ９０阻害剤と併用して用いる標的戦略の開発に関する。
【０１９９】
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【図１−１】
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【図１−２】
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【図１−３】
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【図１−４】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図４−３】
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【図４−４】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【図６−３】
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【図６−４】
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【図７】
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【図７Ｂ】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図８−３】
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【図９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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