(57)【要約】本発明は、ドライアイを処置または予防するための、ムチンポリペプチドの眼科処方物を特徴とする。組換えムチンは、ドライアイを処置または予防するのに有効であるように処方物中に存在する。任意選択で、処方物は、薬学的に許容されるキャリアを含有する。薬学的に許容されるキャリアは、界面活性剤；等張化剤；緩衝液；保存剤；共溶媒；および粘度上昇剤からなる群より選択される１種または複数の成分を含有する。組換えムチンポリペプチドは、例えば、ＰＳＧＬ−１、ＣＤ３４、ＣＤ４３、ＣＤ４５、ＣＤ９６、ＧｌｙＣＡＭ−１、およびＭＡｄＣＡＭ−１またはそのフラグメントである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ドライアイを処置または予防するのに有効な量の組換えムチンポリペプチドを含む処方物であって、該処方物は、界面活性剤；等張化剤；緩衝液；保存剤；共溶媒；および粘度上昇剤からなる群より選択される１種または複数の成分を含む薬学的に許容されるキャリアを含み、該組換えムチンポリペプチドは、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）、ＣＤ３４、ＣＤ４３、ＣＤ４５、ＣＤ９６、ＧｌｙＣＡＭ−１、分泌型ムチン、膜結合型ムチン、ＭＡｄＣＡＭ−１、またはそのフラグメントである、処方物。
【請求項２】
前記ムチンポリペプチドが、前記ＰＳＧＬ−１の少なくとも一領域を含む、請求項１に記載の処方物。
【請求項３】
前記ムチンポリペプチドが、前記ＰＳＧＬ−１の細胞外部分を含む、請求項２に記載の処方物。
【請求項４】
前記分泌型ムチンが、ＭＵＣ２、ＭＵＣ５ＡＣ、ＭＵＣ５Ｂ、ＭＵＣ６、ＭＵＣ７、またはＭＵＣ９である、請求項１に記載の処方物。
【請求項５】
前記膜結合型ムチンが、ＭＵＣ１、ＭＵＣ３Ａ、ＭＵＣ３Ｂ、ＭＵＣ４、またはＭＵＣ１６である、請求項１に記載の処方物。
【請求項６】
前記組換えムチンが、１つまたは複数のグリコシルトランスフェラーゼによってグリコシル化されている、請求項１に記載の処方物。
【請求項７】
前記組換えムチンが、シアリル化されている、請求項１に記載の処方物。
【請求項８】
請求項１に記載の処方物であって、複数の組換えムチンを含み、該複数の組換えムチンが、分子量が１０００ｋＤａ超であるように、架橋されている、処方物。
【請求項９】
前記組換えムチンポリペプチドが、免疫グロブリンポリペプチドの少なくとも一領域に共有結合的に連結されている、請求項１に記載の処方物。
【請求項１０】
前記免疫グロブリンポリペプチドが、重鎖免疫グロブリンポリペプチドの領域を含む、請求項９に記載の処方物。
【請求項１１】
前記免疫グロブリンポリペプチドが、免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域を含む、請求項９に記載の処方物。
【請求項１２】
ドライアイを有する被験体の処置において使用するための請求項１に記載の処方物であって、該処置は、該被験体の目の表面に、該処方物を投与する工程を含む、処方物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１０年１２月２１日に出願された米国仮出願第６１／４２５，５２４号からの優先権を主張し、上記米国仮出願の内容は、その全容が参考として本明細書に援用される。
【０００２】
発明の分野
本発明は一般に、ドライアイの処置のための涙代用物として有用な組換えムチンを含有する組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
涙膜とは、水−気体の界面におけるマイボーム腺から生じる脂質層を伴った、電解質およびタンパク質（４つの主要なタンパク質は、リゾチーム、ラクトフェリン、リポカリンおよび分泌型ＩｇＡである）を含有する水性溶液である（１（非特許文献１））。涙液の非常に重要なタンパク質構成物質は、ムチンとして公知であるタンパク質の群である。これらは、分泌型（ＭＵＣ２、５ＡＣ、５Ｂ、６、７、９）または膜結合型（ＭＵＣ１、３Ａ、３Ｂ、４、１６）として公知である。前者のうち、ＭＵＣ５ＡＣは、涙液において同定されており（２（非特許文献２））、ＭＵＣ５ＡＣ、５Ｂ、６および７についての（ＭＵＣ２ではない）ｍＲＮＡは、涙腺組織において検出された（３（非特許文献３））。膜結合型ムチンであるＭＵＣ１、３Ａ、３Ｂ、４、１６は、角膜および結膜の上皮、涙器によって、および涙液中に発現していると報告された（２（非特許文献２））。ムチンは、角膜および結膜の細胞を乾燥および摩耗ストレスから保護する涙液の能力に寄付している。さらに、分泌型ムチンの１つであるＭＵＣ５ＡＣは、異物を捕捉し、鼻涙管を介した目からの異物のクリアランスに寄付することができる、大きなゲル形成ムチンである。膜結合型ムチンは、角膜および結膜の細胞のアクチン細胞骨格に固定されており、かつ細胞表面から概ね２００ｎｍに達する保護層である、グリコカリックスの重要な構成要素である。その保護的役割に加えて、グリコカリックスは涙膜の水相のムチンと相互作用し、固定すると考えられている。ムチン上の豊富なＯ−グリカン構造は、炭水化物特異的受容体（アドヘシン）を介して宿主細胞に付着するウイルスおよび細菌のために、デコイ受容体として作用すると考えられる。このように、細胞表面上の炭水化物構造および涙膜における可溶性ムチンのレパートリーにおける差異は、特定の病原体への目の感受性を決定する。
【０００４】
ドライアイは、涙膜の不十分な量、質または安定性によって説明される状態である（４（非特許文献４））。ドライアイ状態は、涙不足型または蒸発型に分類することができる（４（非特許文献４））。前者は、シェーグレン症候群関連（一次性および二次性）ならびに非シェーグレンの涙不足（涙腺疾患、涙腺閉塞、および瞬目反射の機能不全）状態にさらに分割される（４（非特許文献４））。蒸発型ドライアイ状態は、油不足型、まぶたが関連するもの、および眼の表面への変化によってもたらされるものにさらに分割される（４（非特許文献４））。最も一般に、水分不足型ドライアイは、涙の生成の低下と関連し、蒸発型ドライアイは、通常マイボーム腺の機能不全によってもたらされる（４（非特許文献４））。ドライアイ疾患を分類する従前の試みにおいて、状態は、５つの群：ムチンの不足、脂質の不足、水分の不足、まぶたの異常または不適当な瞬目機能、および眼の表面の異常（５（非特許文献５））に分割された。
【０００５】
涙膜はコンタクトレンズの潤滑および水和に寄付するため、正常な涙膜は、問題のないコンタクトレンズ着用のために必要とされる。さらに、コンタクトレンズ着用は、無症状のドライアイ状態を誘起し得る。したがって、涙液代用物は、レンズ着用の成功に必要であり得る。
【０００６】
人工涙は、化学組成または生物学的作用によって分類し得る。下記の構成物質は、人工涙において使用されてきた（様々な市販の涙代用物における構成物質の総合的一覧については、（６（非特許文献６））を参照されたい）。１）水、２）食塩水、３）グリセロール、単糖類および二糖類（例えば、グリセロール、スクロース、デキストロース、ソルビトール、マンニトール）、４）多糖類（例えば、粘液［ガム］、デキストランおよびムコ多糖［ヒアルロン酸ナトリウム、コンドロイチン硫酸ナトリウム］）、５）合成ポリマー（例えば、ビニル誘導体、エチレングリコール誘導体、他の合成ポリマー［ポリソルベート］）、６）ゼラチン、７）体液（例えば、血清、初乳、唾液、卵白、およびムチン）、ならびに８）脂質（６（非特許文献６））。体液は、商業化されていない（６（非特許文献６））。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｔｉｆｆａｎｙ  ＪＭ．  （Ｇｅｅｒｌｉｎｇ  Ｇ，  Ｂｒｅｗｉｔｔ  Ｈ，  ｅｄｓ．）Ｔｈｅ  ｎｏｒｍａｌ  ｔｅａｒ  ｆｉｌｍ．    Ｄｅｖ  Ｏｐｈｔａｌｍｏｌ，  ｖｏｌ  ４１．  Ｂａｓｅｌ：  Ｋａｒｇｅｒ，  ２００８：  １．
【非特許文献２】Ｒａｍａｍｏｏｒｔｈｙ  Ｐ，  Ｎｉｃｈｏｌｓ  ＪＪ．  Ｍｕｃｉｎｓ  ｉｎ  ｃｏｎｔａｃｔ  ｌｅｎｓ  ｗｅａｒ  ａｎｄ  ｄｒｙ  ｅｙｅ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．  Ｏｐｔｏｍ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ２００８；  ８５：  Ｅ６３１．
【非特許文献３】Ｐａｕｌｓｅｎ  Ｆ，  Ｌａｎｇｅｒ  Ｇ，  Ｈｏｆｆｍａｎ  Ｗ，  Ｂｅｒｒｙ  Ｍ．  Ｈｕｍａｎ  ｌａｃｒｉｍａｌ  ｇｌａｎｄ  ｍｕｃｉｎｓ．  Ｃｅｌｌ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｒｅｓ  ２００４；  ３１６：  １６７．
【非特許文献４】Ｆｏｕｌｋｓ  ＧＮ．  Ｗｈａｔ  ｉｓ  ｄｒｙ  ｅｙｅ  ａｎｄ  ｗｈａｔ  ｄｏｅｓ  ｉｔ  ｍｅａｎ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｃｏｎｔａｃｔ  ｌｅｎｓ  ｗｅａｒｅｒ？  Ｅｙｅ  ＆  Ｃｏｎｔａｃｔ  Ｌｅｎｓ  ２００３；  ２９（１Ｓ）：  Ｓ９６．
【非特許文献５】Ｈｏｌｌｙ  ＦＪ，  Ｌｅｍｐ  ＭＡ．  Ｔｅａｒ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｄｒｙ  ｅｙｅｓ．  Ｓｕｒｖ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ  １９７７；  ２２：  ６９．
【非特許文献６】Ｍｕｒｕｂｅ  Ｊ，  Ｐａｔｅｒｓｏｎ  Ａ，  Ｍｕｒｕｂｅ  Ｅ．  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ  ｔｅａｒｓ．  Ｉ：  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．  Ａｄｖ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  Ｂｉｏｌ  １９９８；  ４３８：  ６９３．
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、ある量の組換えムチンポリペプチドを含む眼科処方物を提供する。組換えムチンは、ドライアイを処置または予防するのに有効であるように処方物中に存在する。任意選択で、処方物は、薬学的に許容されるキャリアを含有する。
【０００９】
薬学的に許容されるキャリアは、界面活性剤；等張化剤；緩衝液；保存剤；共溶媒；および粘度上昇剤（ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ  ｂｕｉｌｄｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）からなる群より選択される１種または複数の成分を含有する。
【００１０】
組換えムチンポリペプチドは、例えば、ＰＳＧＬ−１、ＣＤ３４、ＣＤ４３、ＣＤ４５、ＣＤ９６、ＧｌｙＣＡＭ−１、およびＭＡｄＣＡＭ−１またはそのフラグメントである。例えば、ムチンポリペプチドは、ＰＳＧＬ−１の少なくとも１領域、例えば、細胞外部分を含む。代替的に、組換えムチンポリペプチドは、分泌型ムチンまたは膜結合型ムチンである。分泌型ムチンは、ＭＵＣ２、ＭＵＣ５ＡＣ、ＭＵＣ５Ｂ、ＭＵＣ６、ＭＵＣ７またはＭＵＣ９である。膜結合型ムチンは、ＭＵＣ１、ＭＵＣ３Ａ、ＭＵＣ３Ｂ、ＭＵＣ４、またはＭＵＣ１６である。
【００１１】
いくつかの態様において、組換えムチンは、１つまたは複数のグリコシルトランスフェラーゼでグリコシル化されている。例えば、組換えムチンは、シアリル化されている。いくつかの実施形態において、複数の組換えムチンは、分子量が１０００ｋＤａ超であるように、架橋されている。いくつかの態様において、組換えムチンポリペプチドは、免疫グロブリンポリペプチドの少なくとも１領域、例えば、重鎖免疫グロブリンポリペプチドの領域に共有結合的に連結している。好ましくは、免疫グロブリンポリペプチドは、免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域である。
【００１２】
本発明にさらに含まれているのは、被験体の目の表面に本発明の眼科処方物を投与することによって、ドライアイを有する被験体を処置する方法である。
【００１３】
別段の定義がない限り、本明細書において使用される全ての技術および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと同様または同等である方法および材料を本発明の実施または試験において使用することができるが、適切な方法および材料を下記に記載する。全ての刊行物、特許出願、特許、および本明細書において言及する他の参照文献は、その全体が参照により組み込まれている。矛盾する場合は、定義を含めて本明細書が優先する。さらに、材料、方法、および実施例は単に例示的なものであり、限定するものではない。
【００１４】
本発明の他の特徴および利点は、下記の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、涙膜補助剤として使用するための眼科調製物を対象とする。さらに具体的には、本出願は、目に滴下する水性処方物、または目に挿入する物体、例えば、コンタクトレンズ、軟膏剤、もしくは結膜嚢に挿入する固体デバイスをその中で事前に浸漬もしくは保存する水性処方物に関する。
【００１６】
特に、本発明は、有効成分として組換えムチンポリペプチドを含む、乾性角結膜炎またはドライアイ症候群における眼科的臨床症状および徴候を処置および／または予防するための眼科薬学的組成物に関する。
【００１７】
調製物は、乾性角結膜炎またはドライアイ症候群などの障害の処置に有用である。一般に、調製物はまた、目の刺激（例えば、乾燥した環境条件またはコンタクトレンズ着用によってもたらされるものなど）の症状の緩和に有効である。
【００１８】
定義
「急性」という用語は、本明細書において使用する場合、急速な発症を伴う状態、および重症ではあるが短期間である症状を表す。
【００１９】
「鎮痛剤」という用語は、本明細書において使用する場合、長期間の使用に適した、断続的および／または慢性の身体的な不快感の管理のための化合物／処方物を表す。
【００２０】
「麻酔剤」または「麻酔」という用語は、本明細書において使用する場合、短期間の一時的な使用に適した、急性の身体疼痛の管理のための化合物／処方物を表し、これは、化合物／処方物が投与される身体部位／器官における無感覚の生成または感受性の減少（例えば、目の角膜感受性の減少）を生じさせる作用を有する。
【００２１】
「水性」という用語は典型的には、水性組成物を表し、キャリアは、＞５０重量％、より好ましくは＞７５重量％、特に９０重量％の程度までの水である。「慢性」という用語は、本明細書に定義されているように、持続性な長引く状態、または頻繁する再発によって特徴付けられる状態、好ましくは３カ月超、より好ましくは６カ月超、より好ましくは１２カ月超、さらにより好ましくは２４カ月超持続／再発する状態を意味する。
【００２２】
「快適な」という用語は、本明細書において使用する場合、疼痛、ヒリヒリする感じ（ｂｕｒｎｉｎｇ）、刺すような痛み（ｓｔｉｎｇｉｎｇ）、かゆみ、刺激、または身体的な不快感と関連する他の症状の身体的な感覚とは対照的な、身体的に良好な状態または緩和の感覚を指す。
【００２３】
「快適な眼科処方物」という用語は、本明細書において使用する場合、目へと滴下したときに、ドライアイ疾患および／または眼の不快感と関連する症状からの身体的緩和を実現し、許容されるレベルの疼痛、ヒリヒリする感じ、刺すような痛み、かゆみ、刺激、または眼の不快感と関連する他の症状（市販の現在の濃度を投与することによって見られるものより少ない）のみをもたらす眼科処方物を指す。
【００２４】
「ドライアイ」という用語は、本明細書において使用する場合、不適当な涙の生成および／または異常な涙の組成を指す。本明細書に定義されているようなドライアイ疾患の原因には、これらに限定されないが、下記が含まれる。特発性先天性の無涙液症、眼球乾燥症、涙腺アブレーション（ｌａｃｒｉｍａｌ  ｇｌａｎｄ  ａｂｌａｔｉｏｎ）、および感覚脱失（ｓｅｎｓｏｒｙ  ｄｅｎｅｒｖａｔｉｏｎ）；膠原血管病（関節リウマチ、ウェゲナー肉芽腫症、および全身性エリテマトーデスを含めた）；シェーグレン症候群、およびシェーグレン症候群と関連する自己免疫疾患；眼瞼炎または酒さによってもたらされる脂質涙液層の異常；ビタミンＡの不足によってもたらされるムチン涙液層の異常；トラコーマ、ジフテリア性角膜結膜炎；粘膜皮膚障害；加齢；閉経；ならびに糖尿病。本明細書に定義されているようなドライアイの徴候および／または症状はまた、これらに限定されないが、下記を含めた他の状況によっても誘発され得る。長期の視作業；コンピュータでの仕事；乾燥した環境中にいること；眼の刺激；コンタクトレンズ、ＬＡＳＩＫおよび他の屈折手術；疲労；ならびに医薬品、例えば、イソトレチノイン、鎮静剤、利尿剤、三環系抗うつ剤、抗高血圧症薬、経口避妊薬、抗ヒスタミン剤、鼻腔うっ血除去薬、β遮断薬、フェノチアジン、アトロピン、および疼痛緩和オピエート、例えば、モルヒネ。
【００２５】
「有効量」という語句は当技術分野において認識されている用語であり、本発明の薬学的組成物に組み込まれたとき、任意の医学的処置に適用される妥当な便益／リスク比で、いくつかの所望の作用を生じさせる薬剤の量を指す。特定の実施形態において、この用語は、ドライアイおよび／または目の刺激の徴候および／または症状をクリアランス、減少または維持（例えば、広がりを防止）し、あるいはドライアイおよび／または目の刺激を予防または処置するのに必要とされるかまたは十分な量を指す。有効量は、処置される疾患もしくは状態、投与される特定の組成物、または疾患もしくは状態の重症度などの要因によって変化し得る。当業者は、過度な実験を必要とすることなしに、特定の薬剤の有効量を経験的に決定し得る。
【００２６】
対象の方法によって処置される「患者」、「被験体」、または「宿主」は、ヒトまたはヒトではない動物、例えば、霊長類、哺乳動物、および脊椎動物を指す。
【００２７】
「薬学的に許容される」という語句は当技術分野において認識されており、組成物、ポリマーおよび他の材料、ならびに／またはその塩および／もしくは投薬形態を指し、これは、正しい医学的判断の範囲内で、妥当な便益／リスク比と釣り合って、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わずに、ヒトおよび動物の組織と接触させる使用に適している。
【００２８】
「薬学的に許容されるキャリア」という語句は当技術分野において認識されており、例えば、１つの器官または体の部分から別の器官または体の部分に、任意の補助剤もしくは組成物またはその構成要素を輸送または運搬するか、あるいは目の表面への薬剤の送達に関与する、薬学的に許容される材料、組成物またはビヒクル、例えば、液体もしくは固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒またはカプセル化材料を指す。各キャリアは、組成物の他の成分と適合性であり、かつ患者にとって有害ではないという意味で、「許容」されなくてはならない。特定の実施形態において、薬学的に許容されるキャリアは、発熱性ではない。薬学的に許容されるキャリアとして役割を果たし得る材料のいくつかの例には、（１）糖、例えば、ラクトース、グルコースおよびスクロース；（２）デンプン、例えば、トウモロコシデンプンおよびポテトデンプン；（３）セルロース、およびその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロースおよび酢酸セルロース；（４）トラガカント粉末；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）賦形剤、例えば、カカオバターおよび坐剤ワックス；（９）油、例えば、落花生油、綿実油、ヒマワリ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびダイズ油；（１０）グリコール、例えば、プロピレングリコール；（１１）ポリオール、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール；（１２）エステル、例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル；（１３）寒天；（１４）緩衝剤、例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム；（１５）アルギン酸；（１６）発熱物質なしの水；（１７）等張食塩水；（１８）リンゲル液；（１９）エチルアルコール；（２０）リン酸緩衝溶液；（２１）ガム、例えば、ＨＰ−グアー；（２２）ポリマー；ならびに（２３）薬学的処方物において用いられる他の無毒性の適合性の物質が含まれる。
【００２９】
「薬学的に許容される塩」という用語は、当技術分野において認識されており、本発明の組成物またはその任意の構成要素（これらだけに限定されないが、治療剤、賦形剤、他の材料などを含めた）の相対的に無毒性の無機および有機の酸付加塩を指す。薬学的に許容される塩の例には、鉱酸（例えば、塩酸および硫酸）に由来するもの、ならびに有機酸（例えば、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸）に由来するものなどが含まれる。塩形成のための適切な無機塩基の例には、アンモニア、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム、亜鉛などの水酸化物、炭酸塩、および炭酸水素塩などが含まれる。塩はまた、無毒性で、このような塩を形成するのに十分に強力であるものを含めて、適切な有機塩基と共に形成し得る。例示のために、このような有機塩基のクラスは、モノ、ジ、およびトリアルキルアミン、例えば、メチルアミン、ジメチルアミン、およびトリエチルアミン；モノ、ジまたはトリヒドロキシアルキルアミン、例えば、モノ、ジ、およびトリエタノールアミン；アミノ酸、例えば、アルギニンおよびリシン；グアニジン；Ｎ−メチルグルコサミン；Ｎ−メチルグルカミン；Ｌ−グルタミン；Ｎ−メチルピペラジン；モルホリン；エチレンジアミン；Ｎ−ベンジルフェネチルアミン；（トリヒドロキシメチル）アミノエタン；トロメタミンなどを含み得る。例えば、Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．、６６巻：１〜１９頁（１９７７年）を参照されたい。
【００３０】
「予防する」という用語は、状態、例えば、ドライアイおよび／または目の刺激に関して使用されるとき、当技術分野において認識されており、組成物を投与されていない被験体に対して、被験体において医学的状態の徴候および／または症状の頻度を減少させ、あるいは発症を遅延させる組成物の投与を指す。
【００３１】
本明細書において使用する場合、「涙代用物」および「人工涙」という用語は、互換的に使用してもよく、それぞれは、これらだけに限定されないが、ポリマー（例えば、セルロースポリマー）、眼の表面保護剤、粘滑剤、または涙代用物についてのＦＤＡの研究書において見出される他の構成要素を含めた、眼への投与によって、潤滑させ、「湿潤させ」、内因性の涙の粘稠性に近づけ、天然の涙の増加を助け、またはそうでなければドライアイの徴候および／もしくは症状および状態の一時的な緩和を実現する、１つもしくは複数の分子または組成物を指す。「涙代用物構成要素」という用語は、１種もしくは複数のその構成要素を指す。
【００３２】
「処置する」という用語は、当技術分野において認識されている用語であり、任意の状態または疾患の少なくとも１つの徴候および／または症状を低下または回復させることを指す。
【００３３】
ムチンポリペプチド
様々な態様において、本発明は、ドライアイの処置に有用な組換えムチンポリペプチドを含有する組成物を提供する。
【００３４】
「ムチンポリペプチド」は、ムチンドメインを有するポリペプチドを指す。ムチンポリペプチドは、１、２、３、５、１０、２０またはそれを超えるムチンドメインを有する。ムチンポリペプチドは、Ｏ−グリカンで置換されているアミノ酸配列によって特徴付けられる任意の糖タンパク質である。例えば、ムチンポリペプチドは、セリンまたはトレオニンであるアミノ酸を１つおきまたは２つおきに有する。ムチンポリペプチドは、分泌タンパク質である。代替的に、ムチンポリペプチドは、細胞表面タンパク質である。
【００３５】
ムチンドメインは、アミノ酸であるトレオニン、セリンおよびプロリンに富んでおり、そこではオリゴ糖が、Ｎ−アセチルガラクトサミンを介してヒドロキシアミノ酸に連結している（Ｏ−グリカン）。ムチンドメインは、Ｏ−結合型グリコシル化部位を含むか、または代わりにＯ−結合型グリコシル化部位からなる。ムチンドメインは、１、２、３、５、１０、２０、５０、１００またはそれを超えるＯ−結合型グリコシル化部位を有する。代替的に、ムチンドメインは、Ｎ−結合型グリコシル化部位を含む。ムチンポリペプチドは、その質量の５０％、６０％、８０％、９０％、９５％または１００％がグリカンによる。ムチンポリペプチドは、ＭＵＣ遺伝子（すなわち、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５ａ、ＭＵＣ５ｂ、ＭＵＣ５ｃ、ＭＵＣ６、ＭＵＣ１１、ＭＵＣ１２など）によってコードされる任意のポリペプチドである。代替的に、ムチンポリペプチドは、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド１（ＰＳＧＬ−１）、ＣＤ３４、ＣＤ４３、ＣＤ４５、ＣＤ９６、ＧｌｙＣＡＭ−１、ＭＡｄＣＡＭ−１、赤血球グリコホリン、グリコカリシン、グリコホリン、シアロホリン、ロイコシアリン、ＬＤＬ−Ｒ、ＺＰ３、およびエピグリカニンである。好ましくは、ムチンは、ＰＳＧＬ−１である。ＰＳＧＬ−１は、１型の膜貫通トポロジーのジスルフィド結合した２つの１２０ｋＤａのサブユニット（それぞれが４０２のアミノ酸を含有する）を有するホモ二量体の糖タンパク質である。細胞外ドメインにおいて、Ｏ−結合オリゴ糖の付加のための３つまたは４つの潜在的部位を含有する、１０アミノ酸のコンセンサス配列の１５回の反復が存在する。一実施形態において、１０アミノ酸コンセンサス配列は、Ａ（Ｉ）ＱＴＴＱ（ＰＡＲ）Ｐ（ＬＴ）Ａ（ＴＥＶ）Ａ（ＰＧ）Ｔ（ＭＬ）Ｅ（配列番号１）である。別の実施形態において、１０アミノ酸コンセンサス配列は、ＡＱ（Ｍ）ＴＴＰ（Ｑ）Ｐ（ＬＴ）ＡＡ（ＰＧ）Ｔ（Ｍ）Ｅ（配列番号２）である。ＰＳＧＬ−１は、各モノマー中に、Ｏ−結合型グリコシル化のための５３超の部位、およびＮ−結合型グリコシル化のための３超の部位を有することが予想される。
【００３６】
ムチンポリペプチドは、ムチンタンパク質の全てまたは部分を含有する。代替的に、ムチンタンパク質は、ポリペプチドの細胞外部分を含む。例えば、ムチンポリペプチドは、ＰＳＧＬ−１の細胞外部分、またはその部分を含む（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ａ５７４６８に開示されているアミノ酸１９〜３１９）。ムチンポリペプチドはまた、ＰＳＧＬ−１のシグナル配列部分（例えば、アミノ酸１〜１８）、膜貫通ドメイン（例えば、アミノ酸３２０〜３４３）、および細胞質ドメイン（例えば、アミノ酸３４４〜４１２）を含む。
【００３７】
組換えムチンポリペプチドは、オリゴマー、例えば、二量体、三量体または五量体として存在し得る。好ましくは、融合ポリペプチドは、二量体である。
【００３８】
「非ムチンポリペプチド」は、その質量の少なくとも４０％未満がグリカンによる、ポリペプチドを指す。
【００３９】
ムチンポリペプチドは、ムチンタンパク質の全てまたは部分に相当する。例えば、組換えムチンポリペプチドは、ムチンタンパク質の少なくとも１部分を含む。「少なくとも１部分」とは、ムチンポリペプチドが、少なくとも１つのムチンドメイン（例えば、Ｏ−結合型グリコシル化部位）を含有することを意味する。ムチンタンパク質は、ポリペプチドの細胞外部分を含む。例えば、ムチンポリペプチドは、ＰＳＧＬ−１の細胞外部分を含む。
【００４０】
組換えムチンポリペプチドは、１つまたは複数のグリコシルトランスフェラーゼによってグリコシル化されている。第１のポリペプチドは、２、３、５またはそれを超えるグリコシルトランスフェラーゼによってグリコシル化されている。グリコシル化は、逐次的または連続的である。代替的に、グリコシル化は、同時発生的またはランダムであり、すなわち、特定の順序ではない。第１のポリペプチドは、タンパク質骨格へと、またはタンパク質骨格上に、Ｎ−結合型もしくはＯ−結合型グリカンを加えるかまたは産生することができる任意の酵素によってグリコシル化されている。例えば、第１のポリペプチドは、α２，３−および／またはα２，６−シアリルトランスフェラーゼによってグリコシル化されている。α２，３／６−シアリルトランスフェラーゼについての適切な供給源には、これらに限定されないが、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号
【００４１】
【化１】
2014501748.tif 000002
が含まれ、全内容が参照により本明細書中に組み込まれている。特定の実施形態において、第１のポリペプチドは、α２，３／６−シアリルトランスフェラーゼおよびコア２β１，６−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼの両方によってグリコシル化されている。コア２β１，６−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼについての適切な供給源には、これらに限定されないが、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号
【００４２】
【化２】
2014501748.tif 000003
が含まれる。第１のポリペプチドは、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または９５％超の炭水化物による質量を含有する。
【００４３】
いくつかの態様において、組換えムチンポリペプチドは、第２のポリペプチドに作動可能に連結している。本明細書において使用する場合、「融合タンパク質」または「キメラタンパク質」は、非ムチンポリペプチドに作動可能に連結しているムチンポリペプチドの少なくとも１部分を含む。
【００４４】
融合タンパク質において、「作動可能に連結している」という用語は、ムチンポリペプチドをＯ−結合型および／またはＮ−結合型グリコシル化することが可能となるような様式で、ムチンポリペプチドおよび第２のポリペプチドが、化学的に連結（最も典型的には、ペプチド結合などの共有結合を介して）していることを示すことを意図する。融合ポリペプチドをコードする核酸を指すために使用されるとき、作動可能に連結しているという用語は、ムチンポリペプチドおよび非ムチンポリペプチドをコードする核酸が、互いにインフレームで融合していることを意味する。非ムチンポリペプチドは、ムチンポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に融合することができる。
【００４５】
任意選択で、ムチン融合ポリペプチドは、１つまたは複数のさらなる部分に連結している。例えば、融合タンパク質は、ＧＳＴ融合タンパク質にさらに連結していてもよく、融合タンパク質配列は、ＧＳＴ（すなわち、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ）配列のＣ末端に融合している。このような融合タンパク質によって、融合タンパク質の精製を促進することができる。代替的に、融合タンパク質は、固体支持体にさらに連結し得る。様々な固体支持体が、当業者には公知である。例えば、融合タンパク質は、例えば、金属化合物、シリカ、ラテックス、ポリマー材料；マイクロタイタープレート；ニトロセルロース、もしくはナイロンまたはこれらの組合せでできた粒子に連結している。
【００４６】
融合タンパク質は、そのＮ末端において異種性シグナル配列（すなわち、ムチン核酸がコードするポリペプチドにおいて存在しないポリペプチド配列）を含む。例えば、天然のムチン糖タンパク質シグナル配列を除去し、別のタンパク質からのシグナル配列で置き換えることができる。特定の宿主細胞（例えば、哺乳動物宿主細胞）において、ポリペプチドの発現および／または分泌は、異種性シグナル配列を使用することによって増加させることができる。
【００４７】
本発明のキメラまたは融合タンパク質は、標準的な組換えＤＮＡ技術によって生成することができる。例えば、異なるポリペプチド配列をコードするＤＮＡフラグメントを、従来の技術によって、例えば、ライゲーションのための平滑末端または互い違いの末端（ｓｔａｇｇｅｒ−ｅｎｄｅｄ）の終端、適当な終端を実現するための制限酵素での消化、付着末端の適切な充填、望ましくない接合を回避するためのアルカリホスファターゼ処理、および酵素的ライゲーションを用いることによって、インフレームで一緒にライゲーションする。融合遺伝子は、ＤＮＡ自動合成機を含めた従来の技術によって合成する。代替的に、遺伝子フラグメントのＰＣＲ増幅は、２つの連続した遺伝子フラグメント間の相補的なオーバーハングを生じさせるアンカープライマーを使用して行い、これは、続いてアニールおよび再増幅されて、キメラ遺伝子配列を生じさせることができる（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、１９９２年を参照されたい）。さらに、融合部分（例えば、免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域）をコードする多くの発現ベクターが市販されている。ムチンをコードする核酸は、融合部分が免疫グロブリンタンパク質にインフレームで連結しするように、このような発現ベクター中にクローン化することができる。
【００４８】
融合ポリペプチドは、オリゴマー、例えば、二量体、三量体または五量体として存在し得る。好ましくは、融合ポリペプチドは、二量体である。
【００４９】
ムチンポリペプチド、および／またはムチンポリペプチドをコードする核酸は、当技術分野において公知の、ムチンをコードする配列を使用して構築する。ムチンポリペプチド、およびムチンポリペプチドをコードする核酸のための適切な供給源には、それぞれ、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ６６３６２５およびＮＭ１４５６５０、ＣＡＤ１０６２５およびＡＪ４１７８１５、ＸＰ１４０６９４およびＸＭ１４０６９４、ＸＰ００６８６７およびＸＭ００６８６７、ＮＰ００３３１７７７およびＮＭ００９１５１が含まれ、全内容が参照により本明細書中に組み込まれている。
【００５０】
ムチンポリペプチド部分は、天然に存在するムチン配列（野生型）において改変（これは、非変異配列に対して、炭水化物含量の増加をもたらす）を有するバリアントムチンポリペプチドとして提供される。本明細書において使用する場合、天然に存在する（野生型）ムチン配列における改変は、ヌクレオチドおよび／またはアミノ酸配列への１つまたは複数の置換、付加または欠失を含み、それによって、１つまたは複数のアミノ酸の置換、付加または欠失がコードされたタンパク質中に導入される。改変は、標準的な技術、例えば、部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介変異誘発によって、天然に存在するムチン配列中に導入することができる。
【００５１】
例えば、バリアントムチンポリペプチドは、野生型ムチンと比較して、さらなるＯ−結合型グリコシル化部位を含んだ。代替的に、バリアントムチンポリペプチドは、野生型ムチンポリペプチドと比較して、セリン、トレオニンまたはプロリン残基の数の増加をもたらすアミノ酸配列の改変を含む。この増加した炭水化物含量は、当業者に公知の方法によってムチンのタンパク質対炭水化物の比を決定することによって評価することができる。
【００５２】
代替的に、ムチンポリペプチド部分は、天然に存在するムチン配列（野生型）において改変を有するバリアントムチンポリペプチドとして提供され、これによって、さらなるＯ−グリコシル化部位を有するムチン配列、またはより高度のグリコシル化をもたらす、好ましくはペプチドＮ−アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼによって認識されるムチン配列がもたらされる。
【００５３】
いくつかの実施形態において、ムチンポリペプチド部分は、天然に存在するムチン配列（野生型）において改変を有するバリアントムチンポリペプチドとして提供され、これによって、（非変異配列に対して）タンパク質分解に対してより耐性のあるムチン配列がもたらされる。
【００５４】
ムチンポリペプチドは、完全長ＰＳＧＬ−１を含む。代替的に、第１のポリペプチドは、完全長未満のＰＳＧＬ−１ポリペプチド、例えば、ＰＳＧＬ−１ポリペプチドの機能的フラグメントを含む。例えば、第１のポリペプチドは、長さが４００未満の連続アミノ酸のＰＳＧＬ−１ポリペプチド、例えば、長さが３００、２５０、１５０、１００、または５０以下の連続アミノ酸のＰＳＧＬ−１ポリペプチド、および長さが少なくとも２５の連続アミノ酸のＰＳＧＬ−１ポリペプチドである。第１のポリペプチドは、例えば、ＰＳＧＬ−１の細胞外部分であり、またはその部分を含む。例示的なＰＳＧＬ−１ポリペプチドおよび核酸配列には、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＸＰ００６８６７；ＸＭ００６８６７；ＸＰ１４０６９４およびＸＭ１４０６９４が含まれる。
【００５５】
第２のポリペプチドは、好ましくは可溶性である。いくつかの実施形態において、第２のポリペプチドは、第２のムチンポリペプチドとの融合ポリペプチドの連関を促進する配列を含む。第２のポリペプチドは、免疫グロブリンポリペプチドの少なくとも１領域を含む。「少なくとも１領域」とは、免疫グロブリン分子の任意の部分、例えば、軽鎖、重鎖、Ｆｃ領域、Ｆａｂ領域、Ｆｖ領域またはその任意のフラグメントを含むことを意味する。免疫グロブリン融合ポリペプチドは当技術分野において公知であり、例えば、米国特許第５，５１６，９６４号；同第５，２２５，５３８号；同第５，４２８，１３０号；同第５，５１４，５８２号；同第５，７１４，１４７号；および同第５，４５５，１６５号に記載されている。
【００５６】
第２のポリペプチドは、完全長免疫グロブリンポリペプチドを含む。代替的に、第２のポリペプチドは、完全長未満の免疫グロブリンポリペプチド、例えば、重鎖、軽鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆｖ、またはＦｃを含む。好ましくは、第２のポリペプチドは、免疫グロブリンポリペプチドの重鎖を含む。より好ましくは、第２のポリペプチドは、免疫グロブリンポリペプチドのＦｃ領域を含む。
【００５７】
第２のポリペプチドは、野生型免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域のエフェクター機能より弱いエフェクター機能を有する。代替的に、第２のポリペプチドは、野生型免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域と同様またはより大きなエフェクター機能を有する。Ｆｃエフェクター機能は、例えば、Ｆｃ受容体結合、補体結合およびＴ細胞枯渇活性を含む（例えば、米国特許第６，１３６，３１０号を参照されたい）。Ｔ細胞枯渇活性、Ｆｃエフェクター機能、および抗体の安定性をアッセイする方法は、当技術分野において公知である。一実施形態において、第２のポリペプチドは、Ｆｃ受容体に対して低い親和性を有するか、または親和性を有さない。代替的に、第２のポリペプチドは、補体タンパク質Ｃ１ｑに対して低い親和性を有するか、または親和性を有さない。
【００５８】
本発明の別の態様は、ムチンポリペプチド、またはその誘導体、フラグメント、類似体もしくは相同体をコードする核酸を含有するベクター、好ましくは発現ベクターに関する。ベクターは、免疫グロブリンポリペプチド、またはその誘導体、フラグメント、類似体もしくは相同体をコードする核酸に作動可能に連結している、ムチンポリペプチドをコードする核酸を含有する。さらに、ベクターは、グリコシルトランスフェラーゼ、例えば、α２，３−および／またはα２，６−シアリルトランスフェラーゼをコードする核酸を含む。本明細書において使用する場合、「ベクター」という用語は、連結されている別の核酸を運ぶことができる核酸分子を指す。１つのタイプのベクターは、「プラスミド」であり、これは、さらなるＤＮＡ断片をライゲートすることができる環状二本鎖ＤＮＡループを指す。別のタイプのベクターは、ウイルスベクターであり、さらなるＤＮＡ断片は、ウイルスゲノム中にライゲートすることができる。特定のベクターは、導入される宿主細胞における自律複製が可能である（例えば、細菌の複製開始点を有する細菌ベクター、および哺乳動物のエピソームベクター）。他のベクター（例えば、哺乳動物の非エピソームベクター）は、宿主細胞への導入によって宿主細胞のゲノムに組み込まれ、それによって宿主ゲノムと共に複製される。さらに、特定のベクターは、作動可能に連結している遺伝子の発現を導くことができる。このようなベクターは、本明細書において「発現ベクター」と称される。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用性のある発現ベクターは、プラスミドの形態であることが多い。本明細書において、「プラスミド」および「ベクター」は、プラスミドがベクターの最も一般に使用される形態であるため、互換的に使用することができる。しかし、本発明は、他の形態の発現ベクター、例えば、同等の機能を果たすウイルスベクター（例えば、複製欠損のレトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）を含むことを意図する。
【００５９】
本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞における核酸の発現に適した形態の本発明の核酸を含むが、これは組換え発現ベクターが、発現のために使用する宿主細胞に基づいて選択され、発現される核酸配列に作動可能に連結している１つまたは複数の制御配列を含むことを意味する。組換え発現ベクターにおいて、「作動可能に連結している」とは、対象のヌクレオチド配列が、そのヌクレオチド配列の発現を可能とする様式で（例えば、インビトロの転写／翻訳系において、またはベクターを宿主細胞に導入するときに宿主細胞において）、制御配列（複数可）に連結していることを意味することを意図する。
【００６０】
「制御配列」という用語は、プロモーター、エンハンサーおよび他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことを意図する。このような制御配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ、ＧＥＮＥ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ、１８５巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．（１９９０年）に記載されている。制御配列は、多くのタイプの宿主細胞においてヌクレオチド配列の恒常的発現を導く配列、および特定の宿主細胞においてのみヌクレオチド配列の発現を導く配列（例えば、組織特異的制御配列）を含む。発現ベクターの設計は、形質転換される宿主細胞の選択、所望のタンパク質の発現レベルなどの要因によって決めることができることを当業者は認識するであろう。本発明の発現ベクターを、宿主細胞中に導入し、それによってタンパク質またはペプチド（本明細書に記載のような核酸がコードする融合タンパク質またはペプチドを含めた）を生成することができる。
【００６１】
本発明の組換え発現ベクターは、原核細胞または真核細胞において融合ポリペプチドを発現させるために設計することができる。例えば、融合ポリペプチドは、細菌細胞、例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、昆虫細胞（バキュロウイルス発現ベクターを使用した）、酵母細胞または哺乳動物細胞において発現させることができる。適切な宿主細胞は、Ｇｏｅｄｄｅｌ、ＧＥＮＥ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ、１８５巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．（１９９０年）においてさらに考察されている。代替的に、組換え発現ベクターは、例えば、Ｔ７プロモーター制御配列およびＴ７ポリメラーゼを使用して、インビトロで転写および翻訳することができる。
【００６２】
原核生物におけるタンパク質の発現は、殆どの場合、融合タンパク質または非融合タンパク質の発現を導く恒常的プロモーターまたは誘導性プロモーターを含有するベクターによって、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉにおいて行われる。融合ベクターは、その中のコードされたタンパク質に、通常は組換えタンパク質のアミノ末端に、いくつかのアミノ酸を加える。このような融合ベクターは典型的には、３つの目的を果たす。（ｉ）組換えタンパク質の発現を増加させること；（ｉｉ）組換えタンパク質の溶解性を増加させること；および（ｉｉｉ）アフィニティー精製においてリガンドとして作用することによって組換えタンパク質の精製を助けること。多くの場合、融合発現ベクターにおいて、タンパク質分解的切断部位を、融合部分および組換えタンパク質の接合部において導入し、融合タンパク質の精製の後に、融合部分からの組換えタンパク質の分離を可能とする。このような酵素、およびこれらの同族の認識配列は、第Ｘａ因子、トロンビンおよびエンテロキナーゼを含む。典型的な融合発現ベクターには、ｐＧＥＸ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｉｎｃ；Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｊｏｈｎｓｏｎ、１９８８年、Ｇｅｎｅ、６７巻：３１〜４０頁）、ｐＭＡＬ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｂｅｖｅｒｌｙ、Ｍａｓｓ．）およびｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）が含まれ、これらは、それぞれ、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトースＥ結合タンパク質、またはタンパク質Ａを、標的組換えタンパク質に融合する。
【００６３】
適切な誘導性の非融合Ｅ．ｃｏｌｉ発現ベクターの例には、ｐＴｒｃ（Ａｍｒａｎｎら、（１９８８年）、Ｇｅｎｅ、６９巻：３０１〜３１５頁）およびｐＥＴ１１ｄ（Ｓｔｕｄｉｅｒら、ＧＥＮＥ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ、１８５巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．（１９９０年）６０〜８９頁）が含まれる。
【００６４】
Ｅ．ｃｏｌｉにおいて組換えタンパク質の発現を最大化する１つの戦略は、組換えタンパク質をタンパク分解性に切断する能力が障害された宿主細菌において、タンパク質を発現させることである。例えば、Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ、ＧＥＮＥ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ、１８５巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．（１９９０年）１１９〜１２８頁を参照されたい。別の戦略は、各アミノ酸についての個々のコドンが、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて優先的に利用されるコドンであるように、発現ベクター中に挿入される核酸の核酸配列を変化させることである（例えば、Ｗａｄａら、１９９２年、Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２０巻：２１１１〜２１１８頁を参照されたい）。本発明の核酸配列のこのような改変は、標準的ＤＮＡ合成技術によって行うことができる。
【００６５】
融合ポリペプチド発現ベクターは、酵母発現ベクターである。酵母Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｉｖｉｓａｅにおける発現のためのベクターの例には、ｐＹｅｐＳｅｃ１（Ｂａｌｄａｒｉら、１９８７年、ＥＭＢＯ  Ｊ．、６巻：２２９〜２３４頁）、ｐＭＦａ（ＫｕｒｊａｎおよびＨｅｒｓｋｏｗｉｔｚ、１９８２年、Ｃｅｌｌ、３０巻：９３３〜９４３頁）、ｐＪＲＹ８８（Ｓｃｈｕｌｔｚら、１９８７年、Ｇｅｎｅ、５４巻：１１３〜１２３頁）、ｐＹＥＳ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）、およびｐｉｃＺ（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）が含まれる。
【００６６】
代替的に、融合ポリペプチドは、バキュロウイルス発現ベクターを使用して、昆虫細胞において発現させることができる。培養した昆虫細胞（例えば、Ｍａｍｅｓｔｒａ  ｂｒａｓｓｉｃａｅ細胞またはＳＦ９細胞）におけるタンパク質の発現のために利用可能なバキュロウイルスベクターは、ｐＡｃシリーズ（Ｓｍｉｔｈら、１９８３年、Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．、３巻：２１５６〜２１６５頁）およびｐＶＬシリーズ（ＬｕｃｋｌｏｗおよびＳｕｍｍｅｒｓ、１９８９年、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、１７０巻：３１〜３９頁）を含む。
【００６７】
本発明の核酸は、哺乳動物の発現ベクターを使用して、哺乳動物細胞において発現させる。哺乳動物の発現ベクターの例は、ｐＣＤＭ８（Ｓｅｅｄ、１９８７年、Ｎａｔｕｒｅ、３２９巻：８４０頁）およびｐＭＴ２ＰＣ（Ｋａｕｆｍａｎら、１９８７年、ＥＭＢＯ  Ｊ．、６巻：１８７〜１９５頁）を含む。哺乳動物細胞において使用するとき、発現ベクターの制御機能は、ウイルスの調節エレメントによって実現することが多い。例えば、一般に使用されるプロモーターは、ポリオーマ、アデノウイルス２型、サイトメガロウイルス、およびサルウイルス４０に由来する。原核細胞および真核細胞の両方についての他の適切な発現系については、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：  Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ、第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８９年の第１６章および第１７章を参照されたい。
【００６８】
本発明の別の態様は、本発明の組換え発現ベクターが導入された宿主細胞に関する。「宿主細胞」および「組換え宿主細胞」という用語は、本明細書において互換的に使用される。このような用語は、特定の対象細胞だけでなく、このような細胞の子孫または可能性のある子孫も指すことが理解される。特定の改変が、変異または環境の影響によって続く世代において起こり得るため、このような子孫は、実際は、親細胞と同一ではない場合もあるが、本明細書において使用する場合、この用語の範囲内に依然として含めてもよい。
【００６９】
宿主細胞は、任意の原核細胞または真核細胞でよい。例えば、融合ポリペプチドは、細菌細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、昆虫細胞、例えば、Ｍ．ｂｒａｓｓｉｃａｅ、酵母または哺乳動物細胞（例えば、ヒト、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）またはＣＯＳ細胞）において発現させることができる。他の適切な宿主細胞は、当業者には公知である。
【００７０】
ベクターＤＮＡは、従来の形質転換またはトランスフェクション技術によって、原核細胞または真核細胞中に導入することができる。本明細書において使用する場合、「形質転換」および「トランスフェクション」という用語は、リン酸カルシウムまたは塩化カルシウムの共沈殿、ＤＥＡＥ−デキストランが媒介するトランスフェクション、リポフェクション、または電気穿孔を含めた、外来核酸（例えば、ＤＮＡ）を宿主細胞中に導入するための種々の当技術分野において認識されている技術を指すことを意図する。宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトする適切な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、（ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ、第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８９年）、および他の実験室マニュアルにおいて見出すことができる。
【００７１】
哺乳動物細胞の安定的なトランスフェクションに関して、使用される発現ベクターおよびトランスフェクション技術によって、わずかな細胞のみが外来ＤＮＡを細胞のゲノム中に組み込み得ることが公知である。これらの組込み体を同定および選択するために、選択マーカー（例えば、抗生物質に対する耐性）をコードする遺伝子が、一般に、対象の遺伝子と共に宿主細胞中に導入される。様々な選択マーカーには、薬物（例えば、Ｇ４１８、ハイグロマイシンおよびメトトレキサート）に対して耐性を与える選択マーカーが含まれる。選択マーカーをコードする核酸を、融合ポリペプチドをコードするベクターと同じベクター上で宿主細胞に導入することができるか、または別々のベクター上で導入することができる。導入核酸を安定的にトランスフェクトされた細胞は、薬物の選択によって同定することができる（例えば、選択マーカー遺伝子を組み込んだ細胞が生存する一方、他の細胞は死滅する）。
【００７２】
本発明の宿主細胞、例えば、培養中の原核生物または真核生物の宿主細胞を使用して、融合ポリペプチドを産生（すなわち、発現）することができる。したがって、本発明は、本発明の宿主細胞を使用して融合ポリペプチドを産生する方法をさらに提供する。一実施形態において、この方法は、適切な培地中で、本発明の宿主細胞（その中に、融合ポリペプチドをコードする組換え発現ベクターが導入されている）を、融合ポリペプチドが産生されるように培養することを含む。別の実施形態において、この方法は、培地または宿主細胞からポリペプチドを単離することをさらに含む。
【００７３】
融合ポリペプチドは、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、電気泳動などの従来の条件によって単離および精製し得る。例えば、免疫グロブリン融合タンパク質は、融合タンパク質のＦｃ部分を選択的に結合する固定化されたタンパク質Ａまたはタンパク質Ｇを含有するカラムに溶液を通過させることによって精製し得る。例えば、Ｒｅｉｓ，  Ｋ．  Ｊ．ら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３２巻：３０９８〜３１０２頁（１９８４年）；ＰＣＴ出願公開第ＷＯ８７／００３２９号を参照されたい。次いで、融合ポリペプチドは、カオトロピック塩による処理によって、または酢酸水溶液（１Ｍ）による溶出によって、溶出し得る。
【００７４】
代替的に、本発明によるムチンポリペプチドおよび／または融合ポリペプチドは、当技術分野において公知の方法を使用して化学的に合成することができる。ポリペプチドの化学合成は、例えば、Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ、Ｂｏｄａｓｎｓｋｙ（編）、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、１９８８年；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３２巻：２４１〜２４７頁（１９８６年）；Ｂａｒａｎｙら、Ｉｎｔｌ．  Ｊ．  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．、３０巻：７０５〜７３９頁（１９８７年）；Ｋｅｎｔ、Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、５７巻：９５７〜９８９頁（１９８８年）、およびＫａｉｓｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４３巻：１８７〜１９８頁（１９８９年）に記載されている。ポリペプチドを、標準的ペプチド精製技術を使用して、化学的前駆体または他の化学物質を実質的に有さないように精製する。「化学的前駆体または他の化学物質を実質的に有さない」という言葉は、ペプチドの合成に関与する化学的前駆体または他の化学物質からペプチドが分離されている、ペプチドの調製物を含む。一実施形態において、「化学的前駆体または他の化学物質を実質的に有さない」という言葉は、約３０％（乾重量）未満の化学的前駆体または非ペプチド化学物質、より好ましくは、約２０％未満の化学的前駆体または非ペプチド化学物質、さらにより好ましくは、約１０％未満の化学的前駆体または非ペプチド化学物質、最も好ましくは、約５％未満の化学的前駆体または非ペプチド化学物質を有する、ペプチドの調製物を含む。
【００７５】
ポリペプチドの化学合成によって、修飾されたアミノ酸または非天然のアミノ酸（Ｄ−アミノ酸および他の小さな有機分子を含めた）の組込みが促進される。ペプチド中の１つまたは複数のＬ−アミノ酸の、相当するＤ−アミノ酸アイソフォームへの置き換えを使用して、酵素加水分解に対するペプチドの耐性を増加させ、生物活性のあるペプチドの１つまたは複数の特性、すなわち、受容体結合性、機能的効力または作用持続時間を増強することができる。例えば、Ｄｏｈｅｒｔｙら、１９９３年、Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．、３６巻：２５８５〜２５９４頁；Ｋｉｒｂｙら、１９９３年、Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．、３６巻：３８０２〜３８０８頁；Ｍｏｒｉｔａら、１９９４年、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．、３５３巻：８４〜８８頁；Ｗａｎｇら、１９９３年、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｅｐｔ．  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．、４２巻：３９２〜３９９頁；ＦａｕｃｈｅｒｅおよびＴｈｉｕｎｉｅａｕ、１９９２年、Ａｄｖ．  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓ．、２３巻：１２７〜１５９頁を参照されたい。
【００７６】
ペプチド配列への共有結合的架橋の導入は、ポリペプチド骨格をコンフォメーション的（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌｌｙ）およびトポグラフ的（ｔｏｐｏｇｒａｐｈｉｃａｌｌｙ）に束縛することができる。この戦略を使用して、増加した効力、選択性および安定性を有する融合ポリペプチドのペプチド類似体を開発することができる。環状ペプチドのコンフォメーションのエントロピーはその直鎖状の対応物よりも低いため、特定のコンフォメーションの採用は、非環状類似体に関するものより小さい、環状類似体に関するエントロピーの減少を伴って起こり得、結合のための自由エネルギーがより好都合となる。大環状化は、ペプチドのＮ末端とＣ末端との間、側鎖とＮ末端もしくはＣ末端との間［例えば、ｐＨ８．５でＫ３Ｆｅ（ＣＮ）６によって］（Ｓａｍｓｏｎら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、１３７巻：５１８２〜５１８５頁（１９９６年））、または２つのアミノ酸側鎖の間でのアミド結合の形成によって達成されることが多い。例えば、ＤｅＧｒａｄｏ、Ａｄｖ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｈｅｍ、３９巻：５１〜１２４頁（１９８８年）を参照されたい。ジスルフィド架橋をまた直鎖状配列に導入し、直鎖状配列の柔軟性を低下させる。例えば、Ｒｏｓｅら、Ａｄｖ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｈｅｍ、３７巻：１〜１０９頁（１９８５年）；Ｍｏｓｂｅｒｇら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ、１０６巻：５０５〜５１２頁（１９８２年）を参照されたい。さらに、システイン残基をペニシラミン（Ｐｅｎ、３−メルカプト−（Ｄ）バリン）に置き換えることを使用して、いくつかのオピオイド−受容体相互作用の選択性を増加させた。ＬｉｐｋｏｗｓｋｉおよびＣａｒｒ、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ，  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｇｕｔｔｅ（編）、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、２８７〜３２０頁（１９９５年）。
【００７７】
眼科処方物
本発明は、眼の表面への滴下において快適であり、繰り返される慢性使用に対して安全である、組換えムチンを含む新規な眼科処方物を特徴とする。したがって、本明細書に記載されている快適な眼科処方物は、ドライアイおよび／または眼の刺激の徴候および症状を処置し、ドライアイ疾患および／または眼の不快感と関連する徴候および症状の処置および／または予防のためのこのような処方物の使用における、長期間の患者の薬剤服用順守を増加させる。
【００７８】
本発明はまた、組換えムチンが単独で涙膜の安定性（涙膜破壊時間および眼保護インデックスの増加として評価）を改善し、全体的な眼の表面の健康（角膜着色および結膜発赤の減少、角膜感受性の増加、瞬目率の減少、ならびに視覚性能の改善として評価）を改善するのに有効であり得ることに部分的に基づいている。
【００７９】
したがって、処方物は、目への滴下において快適であり、急性または慢性のドライアイ疾患の緩和のために使用してもよく、断続的および長期間の使用の両方に特に適している。本発明の処方物が別の目の障害のための薬物を含有する場合、本発明の処方物をまた使用して、別の目の障害を処置することができる。
【００８０】
眼科処方物中のムチンの量は、製品タイプによって大きく変化することができる。例えば、コンタクトレンズ関連溶液中で、ムチン濃度は、約０．００１重量％〜５．０重量％で変化する。ドライアイ調製物中で、ムチンレベルは、約０．１重量％〜約１０．０重量％で変化することができる。固体の眼への挿入送達デバイスにおいて、ムチンレベルは、約９０．０重量％以上に亘ることができる。各タイプの調製物において、処置するドライアイ状態の重症度などの要因によって濃度を変化させて、ムチン溶液の特定の特性を増強し得る。これらの範囲は例示を目的としており、いかなる方法によっても特許請求の範囲を限定することを意味しない。
【００８１】
例示的な眼科組成物は、潤滑点眼薬、すなわち、人工涙溶液、涙液補助剤、局部的眼科薬物適用のための送達ビヒクルとして特定の有用性を見出す。これらの適用の大部分において、組成物は、緩衝化した無菌水性溶液において提供される。典型的には、これらの溶液は、約１〜１００ｃｐｓの粘度を有する。組成物は、溶液として、目の中へ点眼薬の形態で分注される。しかし、本明細書に記載されている組成物はまた、粘稠液体（すなわち、数百〜数千ｃｐｓの粘度）、ゲル剤または軟膏剤として処方し得ることを理解すべきである。これらの適用において、ムチン構成要素を、適当なビヒクル、例えば、Ｌｕｂｒａｇｅｌ、ＧＲＲ  Ｌｕｂｒｉｃａｔｉｎｇ  ＪｅｌｌｙまたはＫａｒａｊｅｌ（全て、Ｕｎｉｔｅｄ−Ｇｕａｒｄｉａｎ，Ｉｎｃ．、Ｈａｕｐｐａｕｇｅ、Ｎ．Ｙの商標の製品）に分散または溶解する。
【００８２】
例示的な組成物はまた、目の結膜嚢（ｃｕｌ−ｄｅ−ｓａｃ）中に置かれたときに時間の経過と共に溶解または侵食される固体の眼への挿入物として処方し得る。
【００８３】
膨潤制御放出デバイスは、ガラス状ポリマー、例えば、水溶性セルロース系材料に均質に分散しているムチンからなる。挿入物が目の中に置かれるとき、涙液がマトリックスに浸透し始め、続いてマトリックスが膨潤し、最後に溶解する。この過程が起こると、ムチンが目に放出され、長期間に亘るドライアイ症状の緩和を実現する。
【００８４】
侵食可能なデバイスはまた、ポリマーマトリックス中に均質に分散しているムチンからなる。この場合、ムチンは、通常デバイスの表面において、マトリックスポリマーの可溶化をもたらす化学反応（加水分解）によって放出される。一般に、マトリックス材料は、ポリ無水物またはポリ（オルトエステル）である。
【００８５】
別の実施形態において、ムチンは、化学修飾または架橋され、それ自体の「マトリックス」として作用してもよく、ここで、ムチンは、デバイスの全体、または殆ど全体を構成し、このようにして、目が利用できる最大量のムチンを実現する。
【００８６】
さらに、いくつかのコンタクトレンズが関連する実施形態において、本明細書において開示されている例示的な膜貫通または表面ムチンを、コンタクトレンズ浸漬溶液およびコンディショニング溶液、ならびにコンタクトレンズ着用者のための潤滑点眼薬に組み込み得る。
【００８７】
別の実施形態において、ムチンは、薬物送達において利用し得る。眼用薬物の送達のための最も一般的および便利な方法は、局部的点眼薬によるものである。一般に、用いられる溶液ビヒクルは涙液によってすばやく希釈され、ほんの数分間で目から排出される。この短い滞留時間は、目における薬物の吸収、したがってバイオアベイラビリティーを妨げる。多くの場合、薬物の濃度を大幅に増加させ、バイオアベイラビリティーを改善することによって、この短い滞留時間を克服する。このことは、現在処方されている眼用薬物の多くの、全身作用による有意な望ましくない副作用をもたらすことが多い。
【００８８】
眼の表面における薬物ビヒクルの滞留時間を改善し、また薬物とビヒクルとの相互作用もしくは連関を促進するために多くの研究が行われてきた。商業化された１つのアプローチは、架橋カルボキシ官能性ポリマー、例えば、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）（Ｂ．Ｆ．Ｇｏｏｄｒｉｃｈにより供給）を利用することである。このポリマーの生体付着性の性質は、米国特許第４，６１５，６９７号および米国特許第５、１８８，８２６号（これらの両方は、その全体が参照により組み込まれている）に記載されているように、制御放出眼科処方物のベースであった。
【００８９】
これらの架橋カルボキシ官能性ポリマーは水性溶液中で膨潤するが、ミクロンサイズの水和粒子として留まる。さらに、これらは、中性ｐＨで性質が実質的にアニオン性である。多くの眼科薬物、例えば、チモロールおよびピロカルピンは、正に帯電しているため、これらは、静電相互作用によって負に帯電しているポリマー粒子と連関する。また、水和粒子は微孔質であるため、薬物は、マトリックス中に吸収されることができる。このタイプの眼科溶液が目の中に入れられたとき、水和ポリマー粒子は粘膜表面に接着し、長期間に亘る滞留時間を実現する。この滞留の間に、薬物は水和ポリマー粒子から放出され、このように目へのより効率的な局所送達が実現される。
【００９０】
例示的な組成物において使用されるムチンは、定義上「生体付着性」であり、多重負電荷を含有する。この情報を考慮すれば、本発明のムチンが、眼科薬物送達ビヒクルとして、架橋カルボキシ官能性ポリマーと同様の様式で作用することが予想される。実際に、これらの膜貫通または表面のムチンは、上皮表面だけでなく、涙膜中の天然ムチンと相互作用するそれらの能力によって、優れた保持時間を実現する。
【００９１】
例示的な眼科処方物は、任意の数の本明細書に記載されている例示的な供給源からの組換えムチンを含む。さらに、他の溶液構成要素を、必要に応じて用いてもよい。
【００９２】
賦形剤
いくつかの実施形態において、本発明のムチン処方物は、１種または複数の薬学的に許容される賦形剤を含む。賦形剤という用語は、本明細書において使用する場合、処方物の活性剤と組み合わせて使用される生物学的に不活性な物質を広範に指す。賦形剤は、例えば、可溶化剤、安定化剤、界面活性剤、粘滑剤、増粘剤、希釈剤、不活性なキャリア、保存剤、結合剤、崩壊剤、コーティング剤、矯味矯臭薬、または着色剤として使用することができる。好ましくは、少なくとも１種の賦形剤を選択して、処方物に対して１つまたは複数の有益な物理的性質、例えば、活性剤（複数可）の安定性および／または溶解性の増加を実現する。「薬学的に許容される」賦形剤は、動物における使用のために、好ましくはヒトにおける使用のために、州もしくは連邦の規制当局によって承認されたものであり、または動物における使用、好ましくはヒトにおける使用のために、米国薬局方、ヨーロッパ薬局方もしくは別の一般に認識されている薬局方に一覧表示されている。
【００９３】
賦形剤のさらなる例には、特定の不活性なタンパク質、例えば、アルブミン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、アスパラギン酸（アスパルテートと代わりに称してもよい）、グルタミン酸（グルタメートと代わりに称してもよい）、リシン、アルギニン、グリシン、およびヒスチジン；脂肪酸およびリン脂質、例えば、スルホン酸アルキルおよびカプリレート；界面活性剤、例えば、ドデシル硫酸ナトリウムおよびポリソルベート；非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の名称２００、３００、４００、もしくは６００；カーボワックスの名称１０００、１５００、４０００、６０００、および１００００；炭水化物、例えば、グルコース、スクロース、マンノース、マルトース、トレハロース、およびデキストリン（シクロデキストリンを含めた）；ポリオール、例えば、マンニトールおよびソルビトール；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；ならびに塩形成対イオン、例えば、ナトリウムが含まれる。
【００９４】
本発明の処方物において使用し得るキャリアの例には、水、水および水混和性溶媒の混合物、例えば、Ｃ１〜Ｃ７−アルカノール、０．５〜５％の無毒性水溶性ポリマーを含む植物性油または鉱油、天然物（例えば、ゼラチン、アルギネート、ペクチン、トラガント、カラヤガム、キサンタンガム、カラゲニン、寒天およびアカシア）、デンプン誘導体（例えば、酢酸デンプンおよびヒドロキシプロピルデンプン）、さらに、他の合成生成物（例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメチルエーテル、ポリエチレンオキシド、好ましくは、架橋ポリアクリル酸、例えば中性Ｃａｒｂｏｐｏｌ、またはこれらのポリマーの混合物）が含まれる。キャリアの濃度は典型的には、活性成分の濃度の１〜１０００００倍である。
【００９５】
特定の実施形態において、キャリアは、ポリマー粘膜付着性ビヒクルである。本発明の方法または処方物において使用するのに適した粘膜付着性ビヒクルの例には、これらに限定されないが、１種または複数のポリマー懸濁化剤を含む水性ポリマー懸濁液が含まれる（これらだけに限定されないが、デキストラン、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、多糖類ゲル、Ｇｅｌｒｉｔｅ（登録商標）、セルロースポリマー、およびカルボキシ含有ポリマー系を含む）。特定の実施形態において、ポリマー懸濁化剤は、架橋カルボキシ含有ポリマー（例えば、ポリカルボフィル）を含む。他の特定の実施形態において、ポリマー懸濁化剤は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。本発明の安定的な眼科ムチン処方物における使用に適した架橋カルボキシ含有ポリマー系の例には、これらに限定されないが、Ｎｏｖｅｏｎ  ＡＡ−１、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）、および／またはＤｕｒａＳｉｔｅ（登録商標）（ＩｎＳｉｔｅ  Ｖｉｓｉｏｎ）が含まれる。
【００９６】
特定の実施形態では、本発明のムチン処方物は、下記から選択される１種または複数の賦形剤を含む。涙代用物、張度増強剤、保存剤、可溶化剤、粘度増強剤、粘滑剤、乳化剤、湿潤剤、金属イオン封鎖剤（ｓｅｑｕｅｓｔｅｒｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、および充填剤。加える賦形剤の量およびタイプは、処方物の特定の必要性により、一般に約０．０００１重量％〜９０重量％の範囲である。
【００９７】
涙代用物
「涙代用物」という用語は、眼への投与によって、潤滑させ、「湿潤させ」、内因性の涙の粘稠性に近づけ、天然の涙の増加を助け、またはそうでなければドライアイの徴候もしくは症状および状態の一時的な緩和を実現する、分子または組成物を指す。種々の涙代用物は当技術分野において公知であり、これらに限定されないが、モノマーポリオール、例えば、グリセロール、プロピレングリコール、およびエチレングリコール；ポリマーポリオール、例えば、ポリエチレングリコール；セルロースエステル、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよびヒドロキシプロピルセルロース；デキストラン、例えば、デキストラン７０；水溶性タンパク質、例えば、ゼラチン；ビニルポリマー、例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、およびポビドン；ならびにカルボマー、例えば、カルボマー９３４Ｐ、カルボマー９４１、カルボマー９４０およびカルボマー９７４Ｐが含まれる。多くのこのような涙代用物は市販されており、これらには、これらに限定されないが、セルロースエステル、例えば、Ｂｉｏｎ  Ｔｅａｒｓ（登録商標）、Ｃｅｌｌｕｖｉｓｃ（登録商標）、Ｇｅｎｔｅａｌ（登録商標）、ＯｃｃｕＣｏａｔ（登録商標）、Ｒｅｆｒｅｓｈ（登録商標）、Ｓｙｓｔａｎｅ（登録商標）、Ｔｅａｒｇｅｎ  ＩＩ（登録商標）、Ｔｅａｒｓ  Ｎａｔｕｒａｌｅ（登録商標）、Ｔｅａｒｓ  Ｎａｔｕｒａｌ  ＩＩ（登録商標）、Ｔｅａｒｓ  Ｎａｔｕｒａｌｅ  Ｆｒｅｅ（登録商標）、およびＴｈｅｒａＴｅａｒｓ（登録商標）；ならびにポリビニルアルコール、例えば、Ａｋｗａ  Ｔｅａｒｓ（登録商標）、ＨｙｐｏＴｅａｒｓ（登録商標）、Ｍｏｉｓｔｕｒｅ  Ｅｙｅｓ（登録商標）、Ｍｕｒｉｎｅ  Ｌｕｂｒｉｃａｔｉｎｇ（登録商標）、およびＶｉｓｉｎｅ  Ｔｅａｒｓ（登録商標）、Ｓｏｏｔｈｅ（登録商標）が含まれる。涙代用物はまた、パラフィン、例えば、市販のＬａｃｒｉ−Ｌｕｂｅ＠軟膏剤から構成し得る。涙代用物として使用される他の市販の軟膏剤には、Ｌｕｂｒｉｆｒｅｓｈ  ＰＭ（登録商標）、Ｍｏｉｓｔｕｒｅ  Ｅｙｅｓ  ＰＭ（登録商標）およびＲｅｆｒｅｓｈ  ＰＭ（登録商標）が含まれる。
【００９８】
本発明の好ましい一実施形態において、涙代用物は、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ヒプロメロースまたはＨＰＭＣ）を含む。いくつかの実施形態によれば、ＨＰＭＣの濃度は、約０．１％〜約２％ｗ／ｖの範囲、または前記範囲内の任意の特定の値である。いくつかの実施形態によれば、ＨＰＭＣの濃度は、約０．５％〜約１．５％ｗ／ｖの範囲、または前記範囲内の任意の特定の値である。いくつかの実施形態によれば、ＨＰＭＣの濃度は、約０．１％〜約１％ｗ／ｖの範囲、または前記範囲内の任意の特定の値である。いくつかの実施形態によれば、ＨＰＭＣの濃度は、約０．６％〜約１％ｗ／ｖの範囲、または前記範囲内の任意の特定の値である。好ましい実施形態において、ＨＰＭＣの濃度は、約０．１％〜約１．０％ｗ／ｖ、または前記範囲内の任意の特定の値（すなわち、０．１〜０．２％、０．２〜０．３％、０．３〜０．４％、０．４〜０．５％、０．５〜０．６％、０．６〜０．７％、０．７〜０．８％、０．８〜０．９％、０．９〜１．０％；約０．２％、約０．２１％、約０．２２％、約０．２３％、約０．２４％、約０．２５％、約０．２６％、約０．２７％、約０．２８％、約０．２９％、約０．３０％、約０．７０％、約０．７１％、約０．７２％、約０．７３％、約０．７４％、約０．７５％、約０．７６％、約０．７７％、約０．７８％、約０．７９％、約０．８０％、約０．８１％、約０．８２％、約０．８３％、約０．８４％、約０．８５％、約０．８６％、約０．８７％、約０．８８％、約０．８９％、もしくは約０．９０％）である。
【００９９】
例えば、これに限定されないが、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを含む涙代用物は、ＧｅｎＴｅａｌ（登録商標）潤滑点眼薬である。ＧｅｎＴｅａｌ（登録商標）（ＣｉｂａＶｉｓｉｏｎ−Ｎｏｖａｒｔｉｓ）は、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（３ｍｇ／ｇ）を含有し、過ホウ酸ナトリウムで保存された無菌の潤滑剤点眼薬である。ＨＰＭＣをベースとする涙の他の例を提供する。
【０１００】
別の好ましい実施形態において、涙代用物は、カルボキシメチルセルロースナトリウムを含む。例えば、これに限定されないが、カルボキシメチルセルロースナトリウムを含む涙代用物は、Ｒｅｆｒｅｓｈ（登録商標）Ｔｅａｒｓである。Ｒｅｆｒｅｓｈ（登録商標）Ｔｅａｒｓは、使用されるとき、天然の涙の構成要素に最終的に変化する、穏やかな非感作性の保存剤である安定化されたオキシクロロ複合体（Ｐｕｒｉｔｅ（登録商標））を含有する、正常な涙と同様の潤滑処方物である。
【０１０１】
好ましい実施形態において、涙代用物、または１種もしくは複数のその構成要素は、目がぼんやりすること、まぶたの硬化などを最小化する一方で、涙膜の補助の有効性を最適化する範囲の粘度を有する水性溶液である。好ましくは、涙代用物、または１種もしくは複数のその構成要素の粘度は、１〜１５０センチポイズ（ｃｐｉ）、例えば、５〜１５０ｃｐｉ、５〜１３０ｃｐｉ、３０〜１３０ｃｐｉ、５０〜１２０ｃｐｉ、６０〜１１５ｃｐｉの範囲（または前記範囲内の任意の特定の値）である。特定の実施形態において、涙代用物、または１種もしくは複数のその構成要素の粘度は、約７０〜９０ｃｐｉ、または前記範囲内の任意の特定の値（例えば、これに限定されないが、８５ｃｐｉ）である。
【０１０２】
粘度は、２０℃＋／−１℃の温度にて、Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄコーンおよびプレート粘度計モデルＶＤＶ−ＩＩＩ  Ｕｌｔｒａ＋（ＣＰ４０もしくは同等のスピンドルを有する）を使用して概ね２２．５０＋／−概ね１０（１／秒）の剪断速度で、またはＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ粘度計モデルＬＶＤＶ−Ｅ（ＳＣ４−１８もしくは同等のスピンドルを有する）を使用して概ね２６＋／−概ね１０（１／秒）の剪断速度で測定し得る。代替的に、粘度は、２５℃＋／−１℃にて、Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄコーンおよびプレート粘度計モデルＶＤＶ−ＩＩＩ  Ｕｌｔｒａ＋（ＣＰ４０もしくは同等のスピンドルを有する）を使用して概ね２２．５０＋／−概ね１０（１／秒）の剪断速度で、またはＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ粘度計モデルＬＶＤＶ−Ｅ（ＳＣ４−１８もしくは同等のスピンドルを有する）を使用して概ね２６＋／−概ね１０（１／秒）の剪断速度で測定し得る。
【０１０３】
いくつかの実施形態において、涙代用物、または１種もしくは複数のその構成要素を、適切な塩（例えば、リン酸塩）で、ｐＨ５．０〜９．０、好ましくはｐＨ５．５〜７．５、より好ましくはｐＨ６．０〜７．０（または前記範囲内の任意の特定の値）に緩衝化する。いくつかの実施形態において、涙代用物は、これらだけに限定されないが、グリセロール、プロピレングリセロール、グリシン、ホウ酸ナトリウム、塩化マグネシウム、および塩化亜鉛を含めた１種または複数の成分をさらに含む。
【０１０４】
塩、緩衝液、および保存剤
本発明の処方物はまた、薬学的に許容される塩、緩衝剤、または保存剤を含有し得る。このような塩の例には、下記の酸から調製したものが含まれる。塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、クエン酸、ホウ酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸など。このような塩はまた、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩またはカルシウム塩として調製することができる。緩衝剤の例には、リン酸、クエン酸、酢酸、および２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）が含まれる。
【０１０５】
好ましくは生理学的ｐＨへのｐＨの調節のために、緩衝液が特に有用であり得る。本溶液のｐＨは、４．０〜８．０、より好ましくは、約５．５〜７．５、より好ましくは、約６．０〜７．０の範囲内に維持するべきである。適切な緩衝液、例えば、ホウ酸、ホウ酸ナトリウム、クエン酸カリウム、クエン酸、炭酸水素ナトリウム、ＴＲＩＳ、ならびに様々な混合したリン酸緩衝液（Ｎａ２ＨＰＯ４、ＮａＨ２ＰＯ４およびＫＨ２ＰＯ４の組合せを含めた）ならびにこれらの混合物を加えてもよい。ホウ酸緩衝液が好ましい。一般に、緩衝液は、約０．０５〜２．５重量パーセント、好ましくは、０．１〜１．５重量パーセントの範囲の量で使用される。
【０１０６】
特定の実施形態において、処方物は、保存剤をさらに含む。保存剤は典型的には、第四級アンモニウム化合物、例えば、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゾキソニウムなどから選択し得る。塩化ベンザルコニウムは、Ｎ−ベンジル−Ｎ−（Ｃ８〜Ｃ１８アルキル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリドとしてさらに記載される。保存剤のさらなる例には、抗酸化剤、例えば、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、パルミチン酸レチニル、およびセレン；アミノ酸であるシステインおよびメチオニン；クエン酸およびクエン酸ナトリウム；ならびに合成保存剤、例えば、チメロサール、およびアルキルパラベン（例えば、メチルパラベンおよびプロピルパラベンを含めた）が含まれる。他の保存剤には、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、カテコール、レソルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、ｍ−クレゾール、硝酸フェニル水銀、酢酸フェニル水銀またはホウ酸フェニル水銀、過ホウ酸ナトリウム、亜塩素酸ナトリウム、アルコール（例えば、クロロブタノール、ブチルまたはベンジルアルコールまたはフェニルエタノール）、グアニジン誘導体（例えば、クロロヘキシジンまたはポリヘキサメチレンビグアニド）、過ホウ酸ナトリウム、Ｐｏｌｙｑｕａｄ（登録商標）、Ｇｅｒｍａｌ（登録商標）ＩＩ、ソルビン酸および安定化させたオキシクロロ複合体（例えば、Ｐｕｒｉｔｅ（登録商標））が含まれる。好ましい保存剤は、第四級アンモニウム化合物、特に、塩化ベンザルコニウムまたはその誘導体、例えば、Ｐｏｌｙｑｕａｄ（米国特許第４，４０７，７９１号を参照されたい）、アルキル−水銀塩、パラベンおよび安定化させたオキシクロロ複合体（例えば、Ｐｕｒｉｔｅ（登録商標））である。適切な場合には、十分な量の保存剤を眼科組成物に加えて、細菌および真菌によってもたらされる使用の間の二次汚染に対する保護を確実にする。
【０１０７】
特定の実施形態では、本発明のムチン処方物は、下記から選択される保存剤を含む。塩化ベンザルコニウム、０．００１％〜０．０５％；塩化ベンゼトニウム、０．０２％まで；ソルビン酸、０．０１％〜０．５％；ポリヘキサメチレンビグアニド、０．１ｐｐｍ〜３００ｐｐｍ；ポリクオタニウム−１（Ｏｍａｍｅｒ  Ｍ）、０．１ｐｐｍ〜２００ｐｐｍ；ハイポクロライト、ペルクロライトまたはクロライト化合物、５００ｐｐｍ以下、好ましくは１０〜２００ｐｐｍ；安定化させた過酸化水素溶液、適切な安定剤と共に０．０００１〜０．１％の重量％の過酸化水素をもたらす過酸化水素の供給源；ｐ−ヒドロキシ安息香酸のアルキルエステルおよびこれらの混合物、好ましくはメチルパラベンおよびプロピルパラベン、０．０１％〜０．５％；クロルヘキシジン、０．００５％〜０．０１％；クロロブタノール、０．５％まで；ならびに安定化させたオキシクロロ複合体（Ｐｕｒｉｔｅ（登録商標））０．００１％〜０．５％。
【０１０８】
別の実施形態において、本発明の局部的処方物は、保存剤を含まない。このような処方物は、コンタクトレンズを着用する患者、またはいくつかの局部的眼科点眼薬を使用するもの、および／または既に障害が起きている眼の表面（例えば、ドライアイ）を有するものにとって有用であり、ここでは、保存剤への限定された曝露がより望ましい場合がある。
【０１０９】
粘度増強剤および粘滑剤
特定の実施形態において、粘度増強剤を、本発明のムチン処方物に加えてもよい。このような薬剤の例には、多糖類、例えば、ヒアルロン酸およびその塩、コンドロイチン硫酸およびその塩、デキストラン、セルロースファミリーの様々なポリマー、ビニルポリマー、ならびにアクリル酸ポリマーが含まれる。
【０１１０】
特定の実施形態において、本発明のムチン処方物は、下記の１つまたは複数から選択される眼科粘滑剤および／または粘度増強ポリマーを含む。セルロース誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロース（０．０１〜５％）、ヒドロキシエチルセルロース（０．０１％〜５％）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはヒプロメロース（０．０１％〜５％）、およびメチルセルロース（０．０２％〜５％）；デキストラン４０／７０（０．０１％〜１％）；ゼラチン（０．０１％〜０．１％）；ポリオール、例えば、グリセリン（０．０１％〜５％）、ポリエチレングリコール３００（０．０２％〜５％）、ポリエチレングリコール４００（０．０２％〜５％）、ポリソルベート８０（０．０２％〜３％）、プロピレングリコール（０．０２％〜３％）、ポリビニルアルコール（０．０２％〜５％）、およびポビドン（０．０２％〜３％）；ヒアルロン酸（０．０１％〜２％）；ならびにコンドロイチン硫酸（０．０１％〜２％）。
【０１１１】
本発明の安定的な眼科ムチン処方物の粘度は、当技術分野において公知の標準的方法（例えば、粘度計またはレオメーターの使用）によって測定し得る。温度および剪断速度などの要因が、粘度測定に影響し得ることを当業者は認識するであろう。特定の実施形態において、粘度は、２０℃＋／−１℃にて、Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄコーンおよびプレート粘度計モデルＶＤＶ−ＩＩＩ  Ｕｌｔｒａ＋（ＣＰ４０もしくは同等のスピンドルを有する）を使用して概ね２２．５０＋／−概ね１０（１／秒）の剪断速度で、またはＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ粘度計モデルＬＶＤＶ−Ｅ（ＳＣ４−１８もしくは同等のスピンドルを有する）を使用して概ね２６＋／−概ね１０（１／秒）の剪断速度で測定する。別の実施形態において、本発明の眼科処方物の粘度は、２５℃＋／−１℃にて、Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄコーンおよびプレート粘度計モデルＶＤＶ−ＩＩＩ  Ｕｌｔｒａ＋（ＣＰ４０もしくは同等のスピンドルを有する）を使用して概ね２２．５０＋／−概ね１０（１／秒）の剪断速度で、またはＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ粘度計モデルＬＶＤＶ−Ｅ（ＳＣ４−１８もしくは同等のスピンドルを有する）を使用して概ね２６＋／−概ね１０（１／秒）の剪断速度で測定する。
【０１１２】
張度増強剤
必要に応じて、典型的には張度増強剤によって張性を調節する。このような薬剤は、例えば、イオン性および／または非イオン性タイプであり得る。イオン性張度増強剤の例は、ハロゲン化アルカリ金属またはハロゲン化土類金属、例えば、ＣａＣｌ２、ＫＢｒ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、Ｎａｌ、ＮａＢｒまたはＮａＣｌ、Ｎａ２ＳＯ４またはホウ酸である。非イオン性張度増強剤は、例えば、尿素、グリセロール、ソルビトール、マンニトール、プロピレングリコール、またはデキストロースである。本発明の水性溶液は典型的には、等張化剤で調節し、塩化ナトリウムの０．９％溶液またはグリセロールの２．５％溶液と同等である、正常な涙の液の浸透圧に近づける。約２２５〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇの重量オスモル濃度が好ましく、より好ましくは２８０〜３２０ｍＯｓｍである。
【０１１３】
可溶化剤
処方物は、特に、成分の１つまたは複数が懸濁液またはエマルジョンを形成する傾向がある場合、可溶化剤の存在をさらに必要とし得る。適切な可溶化剤には、例えば、チロキサポール、脂肪酸グリセロールポリエチレングリコールエステル、脂肪酸ポリエチレングリコールエステル、ポリエチレングリコール、グリセロールエーテル、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０またはこれらの化合物の混合物が含まれる。好ましい実施形態において、可溶化剤は、ヒマシ油および酸化エチレンの反応生成物、例えば、市販の製品であるＣｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（登録商標）またはＣｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＲＨ４０（登録商標）である。ヒマシ油および酸化エチレンの反応生成物は、目にとって極めて忍容性がある特に良好な可溶化剤であることが証明されてきた。別の実施形態において、可溶化剤は、チロキサポールまたはシクロデキストリンである。使用される濃度は、特に、活性成分の濃度によって決まる。加えられる量は典型的には、活性成分を可溶化するのに十分である。例えば、可溶化剤の濃度は、活性成分の濃度の０．１〜５０００倍である。好ましくは、可溶化剤は、シクロデキストリン化合物（例えば、α−、β−もしくはγ−シクロデキストリン、例えば、アルキル化、ヒドロキシアルキル化、カルボキシアルキル化もしくはアルキルオキシカルボニルアルキル化された誘導体、またはモノもしくはジグリコシル−α−、β−もしくはγ−シクロデキストリン、モノもしくはジマルトシル−α−、β−もしくはγ−シクロデキストリンまたはパノシル−シクロデキストリン）ではない。
【０１１４】
使用方法
本発明は、上記の新規なＮＳＡＩＤ単独の処方物または合わせた涙／ＮＳＡＩＤ処方物を使用することを含む、被験体においてドライアイおよび／または目の刺激に関連する徴候および症状を処置および／または予防する方法を特徴とする。例えば、ドライアイおよび／または目の刺激を処置および／または予防する方法は、それを必要としている被験体の目の表面に、組換えムチンを含む処方物を投与することを含み得る。
【０１１５】
さらに提供するのは、それを必要としている被験体の目の表面に、薬学的に許容されるキャリア中に組換えムチンを含む処方物を投与することを含む、被験体の涙膜の涙膜破壊時間（ＴＦＢＵＴ）を増加させる方法である。任意選択で、ＴＦＢＵＴを増加させるための眼科処方物は、涙代用物、または１種もしくは複数のその構成要素をさらに含み得る。
【０１１６】
また提供するのは、それを必要としている被験体の目の表面に、薬学的に許容されるキャリア中に組換えムチンを含む処方物を投与することを含む、被験体の目の眼保護インデックス（ＯＰＩ）を増加させる方法である。任意選択で、ＯＰＩを増加させるための眼科処方物は、涙代用物、または１種もしくは複数のその構成要素をさらに含み得る。
【０１１７】
さらに提供するのは、それを必要としている被験体の目の表面に、薬学的に許容されるキャリア中に組換えムチンを含む処方物を投与することを含む、被験体において眼の不快感を改善し、処置し、緩和し、抑制し、予防し、またはその他の方法で減少させる方法である。任意選択で、眼の不快感を改善し、処置し、緩和し、抑制し、予防し、またはその他の方法で減少させるための眼科処方物は、涙代用物、または１種もしくは複数のその構成要素をさらに含み得る。
【０１１８】
さらに提供するのは、それを必要としている被験体の目の表面に、薬学的に許容されるキャリア中に低用量の少なくとも１種の組換えムチンを含む処方物を投与することを含む、被験体の目の全体的な眼の表面の健康を改善させる方法である。任意選択で、ＯＰＩを増加させるための眼科処方物は、涙代用物、または１種もしくは複数のその構成要素をさらに含み得る。
【０１１９】
本発明の眼科処方物中の１種または複数の組換えムチンの有効量は、薬物の吸収、不活性化、および排出速度、ならびに処方物からの化合物の送達速度によって決まり、それぞれ、急性または慢性状態の処置のための短期間または長期間の使用に適している。投与量の値はまた、軽減される状態の重症度によって変化し得ることに留意すべきである。任意の特定の被験体について、特定の投与量レジメンは、個人の必要性、および組成物の投与を管理または監督している人の専門的な判断によって、時間の経過と共に調節すべきであることがさらに理解される。典型的には、用量は、当業者には公知の技術を使用して決定される。
【０１２０】
本発明の組換えムチンの投与量は、患者の症状、年齢および他の身体的特性、処置または予防する障害の性質および重症度、所望の快適性の程度、投与経路、ならびに補助剤の形態によって変化する。任意の対象処方物は、単回用量または分割用量で投与し得る。本発明の処方物についての投与量は、当業者に公知の技術によって、または本明細書において教示されているように容易に決定し得る。
【０１２１】
有効用量または量、および処方物の投与のタイミングに対する任意の可能性のある作用は、本発明の任意の特定の処方物について同定する必要があり得る。これは、通例の実験によって達成し得る。任意の処方物および処置または予防の方法の有効性は、処方物を投与し、投与の作用を評価することによって評価し得る（組成物の有効性および本明細書に記載のような患者にとっての快適性の程度と関連する１つまたは複数のインデックスを測定し、これらのインデックスの処置後の値を、処置前の同じインデックスの値と比較することによるか、あるいはこれらのインデックスの処置後の値を、異なる処方物を使用した同じインデックスの値と比較することによる）。
【０１２２】
所与の患者において最も有効な処置を生じさせる投与の正確な時間および任意の特定の処方物の量は、特定の化合物の活性、薬物動態、およびバイオアベイラビリティー、患者の生理学的状態（年齢、性別、疾患のタイプおよび段階、全身的な身体状態、所与の投与量および医薬品のタイプに対する反応性を含めた）、投与経路などによって決まる。本明細書において提示されるガイドラインを使用して、処置を最適化し、例えば、投与の最適な時間および／または量を決定してもよく、これは、被験体をモニターすること、投与量および／またはタイミングを調節することからなる通例の実験のみを必要とする。
【０１２３】
異なる構成要素の効果の開始および持続期間は相補的であり得るため、本発明の組成物へと処方されたいくつかの組換えムチンを合わせて使用することによって、任意の個々の構成要素についての必要とされる投与量を減少し得る。このような組み合わせ療法において、異なる組換えムチンは、一緒にまたは別々に、および１日の中で同時にまたは異なる時間に送達し得る。
【０１２４】
ドライアイ疾患および／または眼の刺激と関連する徴候および症状を処置および予防することにおける本発明の処方物および組成物の有効性は、涙膜破壊時間（ＴＦＢＵＴ）の変化、眼保護インデックス（ＯＰＩ）の変化、眼の快適性のレベルの改善、炎症の減少（着色および／または発赤によって測定するような）、角膜感受性の改善（例えば、Ｃｏｃｈｅｔ−Ｂｏｎｎｅｔ試験によって測定するような）、瞬目率の減少、視力の改善（例えば、瞬目間隔視力低下（Ｉｎｔｅｒ−ｂｌｉｎｋ  Ｉｎｔｅｒｖａｌ  Ｖｉｓｕａｌ  Ａｃｕｉｔｙ  Ｄｅｃａｙ）（ＩＶＡＤ）試験によって測定されるような）を測定することによって評価し得る。眼の表面への投与の前の、ＴＦＢＵＴ、ＯＰＩ；眼の不快感、炎症、角膜感受性、視力、角膜着色および／または瞬目率のレベルと比較した、本発明の処方物および組成物の眼の表面への投与の後の、被験体におけるＴＦＢＵＴおよび／もしくはＯＰＩの増加、ならびに／または眼の快適性、角膜感受性および／もしくは視力の改善されたレベル、ならびに／または炎症のレベルおよび／もしくは瞬目率の減少によって、ドライアイ疾患および／または眼の刺激と関連する徴候および症状を処置および予防することにおいて、処方物が有効であることを示す。
【０１２５】
本発明の眼科処方物は、涙膜の安定性を効果的に増強する。涙膜の安定性の１つの尺度は、目への眼科処方物の滴下の後に測定したときの、目への眼科処方物の滴下の前に測定したＴＦＢＵＴ（すなわち、ベースラインのＴＦＢＵＴ）と比較した、涙膜破壊時間（ＴＦＢＵＴ）の増加である。例えば、これに限定されないが、ＴＦＢＵＴは、滴下後に、ベースラインのＴＦＢＵＴと比較して、概ね０．５〜１０秒もしくはそれを超えて（または前記範囲内の任意の特定の値）増加する。より特定すると、ＴＦＢＵＴは、滴下の後に測定したときに、ベースラインのＴＦＢＵＴと比較して、約０．５秒、約１秒、約１．５秒、約２秒、約２．５秒、約３秒、約３．５秒、約４秒、約４．５秒、約５秒、約５．５秒、約６秒、約６．５秒、約７秒、約７．５秒、約８秒、約８．５秒、約９秒、約９．５秒、約１０秒、またはそれを超えて増加する。
【０１２６】
ＴＦＢＵＴの臨床的に意味ある増加を決定する１つの方法は、目への眼科処方物の滴下の後に測定したときの、目への眼科処方物の滴下の前に測定したＯＰＩ（すなわち、ベースラインのＯＰＩ）と比較した、眼保護インデックス（ＯＰＩ）の増加（すなわち、改善）である。眼保護インデックス（ＯＰＩ）として公知であるＴＦＢＵＴにおける臨床的に関連性のある変化を測定するこのアプローチは、ドライアイをもたらす要因の評価において、およびその治療剤を査定することにおいて有用であることが証明されてきた。
【０１２７】
ＴＦＢＵＴと瞬目間隔（ＩＢＩ＝完全な瞬目間の時間）との間の関係を研究するとき、これらの相互作用が眼の表面の完全性を制御することにおいて助けとなることを示唆し得る。ＴＦＢＵＴがＩＢＩより長いとき、表面は保護されている。対照的に、ＴＦＢＵＴがＩＢＩより短いとき、表面は保護されていない。１秒以内のＴＦＢＵＴにおいて、患者は眼の不快感を訴え、その後直ぐに表在性点状角膜炎が生じることを研究は示した。これらの症状および徴候を予防するために、ＴＦＢＵＴは、瞬目間期間に匹敵するかまたはそれを超え、眼の表面の完全な保護を実現しなくてはならない。涙膜の安定性に対する薬剤の作用を定量化するとき、二項分析を行い得る。インデックスによって、処置後の２つの可能性のある結果が考慮される。１）成功＝ＴＦＢＵＴが、瞬目間期間に匹敵するかまたはそれを超え、それゆえ、眼の表面は保護されている。２）失敗＝ＴＦＢＵＴが、瞬目間期間より短いままであり、それゆえ、眼の表面は保護されていない。ＯＰＩスコア≧１は、患者が涙で保護された眼の表面を有し、ドライアイと関連するより少ない徴候および症状を有するため、好ましいと考えられる。＜１のＯＰＩスコアは、患者が曝露された眼の表面を有し、ドライアイと関連するより多くの徴候および症状をもたらすため、好ましくないと考えられる。
【０１２８】
本発明の眼科処方物は、ＯＰＩを効果的に増加（すなわち、改善）する。例えば、これに限定されないが、ＯＰＩは、目への眼科処方物の滴下の後に測定したとき、ベースラインのＯＰＩと比較して、約０．１〜１０もしくはそれを超えて（または前記範囲内の任意の特定の値）改善する。より特定すると、ＯＰＩは改善し、それによってＯＰＩは、滴下の後に測定したとき、ベースラインのＯＰＩと比較して、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．２、１．４、１．６、１．８、２．０、２．２、２．４、２．６、２．８、３．０、３．２、３．４、３．６、３．８、４．０、４．２、４．４、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４、５．６、５．８、６．０、６．２、６．４、６．６、６．８、７．０、７．２、７．４、７．６、７．８、８．０、８．２、８．４、８．６、８．８、９．０、９．２、９．４、９．６、９．８、１０．０、またはそれを超えて増加する。眼の刺激／不快感は、効果的に減少し、それによって、眼の不快感に対する患者の評価は、目への眼科処方物の滴下の後に測定したとき、目への眼科処方物の滴下の前に測定した眼の不快感と比較して低い。
【０１２９】
ＴＦＢＵＴは、これらに限定されないが、目へのフルオレセインナトリウムの滴下の後の目への照射、またはそれと同等のものを含めた様々な方法を使用して測定し得る。ＯＰＩは、ＴＦＢＵＴを瞬目間の時間（秒）（瞬目間隔、または「ＩＢＩ」）で割ることによって得てもよい。
【０１３０】
本発明の処方物および組成物の投与の前の眼の快適性レベルと比較した、本発明の処方物および組成物の投与の後の被験体における眼の快適性の上昇または眼の不快感の低下は、主観的スケール（例えば、これらだけに限定されないが、眼の不快感を軽度、中等度、重度、もしくは０、１、２、３、４などとして決定する標準化された主観的スケール、または他の適当なスケール）、反射的反応（例えば、しり込み反射（ｆｌｉｎｃｈ−ｒｅｆｌｅｘ））、ならびに生理学的反応（これらに限定されないが、心拍数、血圧、および発汗レベルの変化を含めた）に限定される、ドライアイと関連する徴候および症状を処置および予防することにおいて処方物が有効であることを示す。
【０１３１】
全体的な眼の表面の健康を改善させることにおける本発明の処方物および組成物の有効性は、角膜着色、結膜発赤、角膜感受性、瞬目率、および視覚性能の変化を測定することによって評価し得る。これらのパラメーターを評価する方法には、それぞれ、リサミングリーンまたはフルオレセインナトリウム色素、標準化された評価スケール、Ｃｏｃｈｅｔ  Ｂｏｎｎｅｔ知覚測定法または非接触知覚測定法、ビデオ記録およびソフトウェア分析、ならびにアンケートまたは瞬目間隔視力低下（ＩＶＡＤ）試験が含まれる。
【０１３２】
パッケージング
本発明の処方物は、単回用量製品または複数用量製品としてパッケージし得る。単回用量製品は、パッケージの開放の前は無菌であり、パッケージ中の組成物の全てが、患者の目の１つまたは両方へ１回または数回適用することで消費されることを意図する。パッケージが開放された後の組成物の無菌性を維持するための抗菌保存剤の使用は一般に不必要である。処方物、例えば、軟膏剤処方物は、当業者には公知のように、軟膏剤のために必要に応じてパッケージし得る。
【０１３３】
複数用量製品はまた、パッケージの開放の前に無菌である。しかし、組成物の容器は、容器中の組成物の全てが消費される前に何度も開放し得るため、複数用量製品は、容器の繰り返される開放および取扱いの結果として、組成物が微生物に汚染されないことを確実にするために、十分な抗菌活性を有さなくてはならない。この目的のために必要とされる抗菌活性のレベルは当業者には周知であり、公式の刊行物、例えば、米国薬局方（「ＵＳＰ」）および米国食品医薬品局による他の刊行物、ならびに他の国における相当する刊行物において特定されている。微生物汚染に対する眼科医薬品の保存のための記述、および特定の処方物の保存剤の有効性を査定する手順の詳細な記載は、これらの刊行物において提供されている。米国において、保存剤の有効性の標準は、「ＵＳＰ  ＰＥＴ」要件と一般に称される（頭字語「ＰＥＴ」は、「保存剤の有効性試験（ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｔｅｓｔｉｎｇ）」の略語である）。
【０１３４】
単回用量パッケージング構成を使用することによって、組成物中の抗菌保存剤の必要性を排除するが、これは医学的な観点からかなりの利点である。なぜなら、眼科組成物を保存するために利用される従来の抗菌剤（例えば、塩化ベンザルコニウム）は、特にドライアイ状態もしくは既存の眼の刺激を患っている患者、または複数の保存製品を使用している患者において眼の刺激をもたらし得るためである。しかし、現在利用可能な単回用量パッケージング構成、例えば、「形成、充填および密封」として公知の工程によって調製される小容量のプラスチックバイアルは、メーカーおよび消費者にとっていくつかの不都合を有する。単回用量パッケージング系の主な不都合は、必要とされるパッケージング材料が非常に大量であり、これは無駄および高コストの両方であり、消費者にとって不便である。また、消費者が、指導されたように、目へ１滴または２滴を適用した後に、単回用量容器を廃棄せず、代わりに、後で使用するために開放された容器およびその中に残った任意の組成物をとって置くという危険性がある。単回用量製品のこの不適切な使用は、単回用量製品の微生物汚染の危険性、および汚染された組成物が目に適用された場合、眼が感染するという関連する危険性を生じる。
【０１３５】
本発明の処方物は好ましくは、「いつでも使用される状態となっている」水性溶液として処方される一方で、代替の処方物が、本発明の範囲内であることが意図される。このように、例えば、活性成分、界面活性剤、塩、キレート剤、もしくは眼科溶液の他の構成要素、またはこれらの混合物は、凍結乾燥することができ、または（例えば、脱イオン、もしくは蒸留）水にいつでも溶解される状態となっている乾燥散剤もしくは錠剤としてその他の方法で提供することができる。溶液の自己保存的の性質のために、滅菌水は必要ではない。
【０１３６】
キット
さらに別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載されている処方物のパッケージングおよび／または保存および／または使用のためのキット、ならびに本明細書に記載の方法の実施のためのキットを提供する。このように、例えばキットは、本発明の１種もしくは複数の眼科溶液、軟膏剤、ゲル剤、持続放出処方物もしくはデバイス、懸濁液もしくは処方物、錠剤、またはカプセル剤を含有する１つもしくは複数の容器を含み得る。キットは、輸送、使用、および保存の１つまたは複数の態様を促進するように設計することができる。
【０１３７】
キットは、その中に提供される処方物の使用の手段を明らかにする説明書（すなわち、プロトコル）を含有する指示用材料を任意選択で含み得る。指示用材料は典型的には、記載またはプリントされた材料を含む一方で、これらに限定されない。このような指示を保存し、これらを最終使用者に伝えることができる任意の媒体が、本発明によって意図されている。このような媒体には、これらに限定されないが、電子的記憶媒体（例えば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ）、光学媒体（例えば、ＣＤ  ＲＯＭ）などが含まれる。このような媒体は、このような指示用材料を提供するインターネットサイトのアドレスを含み得る。
【実施例】
【０１３８】
組成物およびこのような溶液を作製する方法を例示する本発明の眼科処方物の例を、下記に記載する。
【０１３９】
（実施例Ｉ）
本明細書に特に記載していない当技術分野において公知の標準的分子生物学プロトコルは、一般に、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇｓ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｎｅｗ−Ｙｏｒｋ（１９８９年、１９９２年）、およびＡｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，  Ｍｄ．（１９８８年）、およびＡｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，  Ｍｄ．（１９８９年）、およびＰｅｒｂａｌ，  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８８年）、およびＷａｔｓｏｎら、Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｂｏｏｋｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、およびＢｉｒｒｅｎら（編）、Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｓｅｒｉｅｓ、第１〜４巻、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９８年）、ならびに米国特許第４，６６６，８２８号；同第４，６８３，２０２号；同第４，８０１，５３１号；同第５，１９２，６５９号および同第５，２７２，０５７号（参照により本明細書中に組み込まれている）に記載の方法論に本質的に従う。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）は、標準的ＰＣＲプロトコル：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．（１９９０年）におけるように行った。フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）と組み合わせたインサイチュのＰＣＲは、特定のＤＮＡおよびｍＲＮＡ配列を含有する細胞の検出のために使用することができる（Ｔｅｓｔｏｎｉら、Ｂｌｏｏｄ、１９９６年、８７巻：３８２２頁）。ＲＴ−ＰＣＲを行う方法は、当技術分野で周知である。
【０１４０】
細胞培養
ＨｅＬａ細胞（アメリカ培養細胞系統保存機関）は、Ｃｚａｕｄｅｒｎａら（ＮＡＲ、２００３年、３１巻：６７０〜８２頁）に記載されているように培養する。ヒトケラチノサイトは、１０％ＦＣＳを含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）において３７℃にて培養する。マウス細胞系であるＢ１６Ｖ（アメリカ培養細胞系統保存機関）は、１０％ＦＣＳを含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）において３７℃にて培養する。培養条件は、（Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｆｉｎｄ  Ｅｘｐ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９９７年、１９巻（４号）：２３１〜９頁）に記載されている。
【０１４１】
（実施例ＩＩ）
ドライアイの発症を逆転させるウサギモデル
ウサギの涙腺排出管を外科的に閉じ、少なくとも４週間未処置のままとすることによって、ウサギにおいてドライアイを生じさせる。Ｇｉｌｂａｒｄ，  Ｊ．  Ｐ、１９９６年、「Ｄｒｙ  Ｅｙｅ：  ｐｈｒａｍｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ，  ｅｆｆｅｃｔｓ，  ａｎｄ  ｐｒｏｇｒｅｓｓ」、ＣＬＡＯ  Ｊ．、２２巻、１４１〜１４５頁を参照されたい。シルマー試験および眼の表面の着色によってドライアイを確認した後、本発明の処方物を、中性、等張性の緩衝化した水性溶液中で０．０１％、０．１％、１．０％、５％、または１０％の濃度で溶液として滴下する。処方物は、１日１〜５回まで、毎日２〜１０週間、眼の表面へ１滴（５０マイクロリットル）を投与する。ドライアイの症状を、週１回、２〜１０週間モニターするが、シルマースコアの増加および／または眼の表面の着色の量の減少は、ドライアイ疾患の処置における本発明の処方物の有効性を示す。
【０１４２】
（実施例ＩＩＩ）
ビヒクル処方物および例示的な点眼薬処方物
水性点眼薬処方物は、通常組み込まれる様々な添加物、例えば、緩衝剤（例えば、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、クエン酸緩衝液、酒石酸緩衝液、酢酸緩衝液、アミノ酸、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウムなど）、等張化物質（例えば、糖類、例えば、ソルビトール、グルコースおよびマンニトール、多価アルコール、例えば、グリセリン、濃グリセリン、ポリエチレングリコールおよびプロピレングリコール、塩、例えば、塩化ナトリウム）、保存剤または防腐剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ｐ−オキシベンゾエート、例えば、メチルｐ−オキシベンゾエートまたはエチルｐ−オキシベンゾエート、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、ソルビン酸またはその塩、チメロサール、クロロブタノールなど）、可溶化助剤または安定化剤（例えば、シクロデキストリンおよびこれらの誘導体、水溶性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン）、界面活性剤、例えば、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）、ｐＨ調節剤（例えば、塩酸、酢酸、リン酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウムなど）、キレート剤（例えば、エデト酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、濃縮リン酸ナトリウム）などを任意選択で含有する。
【０１４３】
水性懸濁液の形態の点眼薬処方物はまた、上記に一覧表示した添加物に加えて、懸濁化剤（例えば、ポリビニルピロリドン、グリセリンモノステアレート）、ならびに分散化剤（例えば、界面活性剤、例えば、チロキサポールおよびポリソルベート８０、イオン性ポリマー、例えば、アルギン酸ナトリウム）を含有してもよく、それによって点眼薬処方物が、さらに均一な微粒子および良好に分散した水性懸濁液であることを確実にする。
【０１４４】
眼科軟膏剤は、公知の軟膏基剤、例えば、精製ラノリン、ペトロラタム、プラスチベース、流動パラフィン、ポリエチレングリコールなどを含み得る。
【０１４５】
（実施例ＩＶ）
溶液を調製するための出発材料は、下記の通りである。塩化ナトリウム６．５５ｇ；クエン酸三ナトリウム一水和物７．３５ｇ；クエン酸０．０３５ｇ；ＥＤＴＡ  Ｎａ２０．０５０ｇ；マンニトール１．８００ｇ；プロピルメチルセルロース１．００ｇ；適当または必要とされる量のムチンポリペプチド。
【０１４６】
上記で特定した量の塩化ナトリウム、クエン酸三ナトリウム、クエン酸一水和物、ＥＤＴＡ  Ｎａ２、マンニトールおよびプロピルメチルセルロースを、１リットルの水に加えることによって、溶液を調製する。上記の構成物質を、１５ｌｂｓの圧力および１２０℃の温度で溶解およびオートクレーブし、４℃に冷却する。適当または必要とされる量のムチンポリペプチドを、約５０℃で穏やかに温め、手で振盪することによって５００ｍｇのＴｗｅｅｎ（商標）８０に溶解し、一定に磁気撹拌しながら定量的に１リットルの上記の混合物に移す。混合物を、低温室（４℃）において一晩撹拌した。透明な溶液が得られる。この溶液を、使用するまで冷蔵庫中で約４℃にて保存する。組換えムチンポリペプチドの最終濃度は、Ｃ−１８カラム上で高圧液体クロマトグラフィーによって、９５％メタノール、５％Ｈ２Ｏ混合物を溶出溶媒として使用して、流出液を適当なナノメートルで分光測定によりモニターすることによって決定する。ムチンポリペプチドの濃度は、少なくとも６週間安定的なままである。溶液は、４℃にて色の濃いボトル中で保存する。
【０１４７】
（実施例Ｖ）
溶液を調製するための出発材料は、下記の通りである。スクロース７６ｇ；クエン酸三ナトリウム一水和物７．３５ｇ；クエン酸０．０３５ｇ；ＥＤＴＡ  Ｎａ２０．０５０ｇ；マンニトール１．８ｇ；必要とされる量のムチンポリペプチド；ＴＷＥＥＮ（商標）８０、５００ｍｇ。
【０１４８】
上記で特定した量の塩化ナトリウム、クエン酸三ナトリウム、クエン酸一水和物、ＥＤＴＡ  Ｎａ２およびマンニトールを、１リットルの水に加えることによって、ムチンポリペプチド含有溶液を調製する。上記の構成物質を、１５ｌｂｓの圧力および１２０℃の温度で溶解およびオートクレーブし、４℃に冷却する。適当または必要とされる量のムチンポリペプチドを、約５０℃で穏やかに温め、手で振盪することによって５００ｍｇのＴｗｅｅｎ（商標）８０に溶解し、一定に磁気撹拌しながら１リットルの上記の混合物に定量的に移す。混合物を、低温室において一晩撹拌する。透明な溶液が得られる。この溶液を、使用するまで冷蔵庫中で約４℃にて保存する。
【０１４９】
（実施例ＶＩ）
０．５〜１．０液量オンスの点眼器ボトルを、１ｍｌ当たり、適当なまたは必要とされる量のムチンポリペプチド；ＴＷＥＥＮ（商標）８０；０．５ｍｇのＮａｃｌ；６．８５ｍｇのクエン酸Ｎａ３一水和物；７．３５ｍｇのクエン酸；０．０３１ｍｇのＥＤＴＡ  Ｎａ２；０．０５ｍｇのマンニトール；１ｍｌまで１．８ｍｇの適量の水を含有する１５ｍｌの無菌水性溶液で充填する。
【０１５０】
乾燥、刺激を有する目を患っている個人の目の１つに、２滴の溶液を、２〜１０週間の期間１日１〜５回添加する。比較の目的のために、同じスケジュールを使用して、非保存生理食塩水を、他の目に添加する。処置された目は、食塩水で処置された目と比較して、主観的な快適性および外観における著しい改善を示す。
【０１５１】
上記の記述における「溶液」という用語の使用は、純粋な技術上の定義による真溶液を意味すると解釈されない。これは肉眼には溶液であるように見える混合物を意味するとむしろ解釈され、したがって「溶液」という語は、可溶化したムチンポリペプチド、その誘導体および前駆体の透明なエマルジョンを包含すると解釈される。
【０１５２】
上記の詳細な記述は、本発明を説明および例示する目的のために示してきた。本発明は記載した詳細な情報に限定されず、様々な修正を行うことができることを理解すべきである。下記の特許請求の範囲は、現行技術を許容し、現行技術と一貫しているため、当業者が思いつくであろうこのような修正および変更を包含することを意図する。
【０１５３】
他の実施形態
本発明をその詳細な記載と合わせて記載してきたが、上記の記載は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を例示するもので、制限するものではないことを意図する。他の態様、利点、および修正は、下記の特許請求の範囲内である。
【０１５４】
【化３】
2014501748.tif 000004
（項目１）
ドライアイを処置または予防するのに有効な量の組換えムチンポリペプチドを含む眼科処方物。
（項目２）
薬学的に許容されるキャリアをさらに含む、項目１に記載の眼科処方物。
（項目３）
上記薬学的に許容されるキャリアが、界面活性剤；等張化剤；緩衝液；保存剤；共溶媒；および粘度上昇剤からなる群より選択される１種または複数の成分を含む、項目２に記載の眼科処方物。
（項目４）
上記組換えムチンポリペプチドが、ＰＳＧＬ−１、ＣＤ３４、ＣＤ４３、ＣＤ４５、ＣＤ９６、ＧｌｙＣＡＭ−１、ＭＡｄＣＡＭ−１、またはそのフラグメントである、項目１に記載の眼科処方物。
（項目５）
上記ムチンポリペプチドが、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）の少なくとも一領域を含む、項目４に記載の眼科処方物。
（項目６）
上記ムチンポリペプチドが、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１の細胞外部分を含む、項目５に記載の眼科処方物。
（項目７）
上記組換えムチンポリペプチドが、分泌型ムチンまたは膜結合型ムチンである、項目１に記載の眼科処方物。
（項目８）
上記分泌型ムチンが、ＭＵＣ２、ＭＵＣ５ＡＣ、ＭＵＣ５Ｂ、ＭＵＣ６、ＭＵＣ７、またはＭＵＣ９である、項目７に記載の眼科処方物。
（項目９）
上記膜結合型ムチンが、ＭＵＣ１、ＭＵＣ３Ａ、ＭＵＣ３Ｂ、ＭＵＣ４、またはＭＵＣ１６である、項目７に記載の眼科処方物。
（項目１０）
上記組換えムチンが、１つまたは複数のグリコシルトランスフェラーゼによってグリコシル化されている、項目１に記載の眼科処方物。
（項目１１）
上記組換えムチンが、シアリル化されている、項目１に記載の眼科処方物。
（項目１２）
複数の組換えムチンが、分子量が１０００ｋＤａ超であるように、架橋されている、項目１に記載の眼科処方物。
（項目１３）
上記組換えムチンポリペプチドが、免疫グロブリンポリペプチドの少なくとも一領域に共有結合的に連結されている、項目１に記載の眼科処方物。
（項目１４）
上記免疫グロブリンポリペプチドが、重鎖免疫グロブリンポリペプチドの領域を含む、項目１３に記載の眼科処方物。
（項目１５）
上記免疫グロブリンポリペプチドが、免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域を含む、項目１３に記載の眼科処方物。
（項目１６）
ドライアイを有する被験体の目の表面に、項目１に記載の眼科処方物を投与する工程を含む、該被験体を処置する方法であって、該処方物は、界面活性剤；等張化剤；緩衝液；保存剤；共溶媒；および粘度上昇剤からなる群より選択される１種または複数の成分を含む薬学的に許容されるキャリアをさらに含み、上記組換えムチンポリペプチドは、ＰＳＧＬ−１、ＣＤ３４、ＣＤ４３、ＣＤ４５、ＣＤ９６、ＧｌｙＣＡＭ−１、分泌型ムチン、膜結合型ムチン、ＭＡｄＣＡＭ−１、またはそのフラグメントである、方法。
【配列表】
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【国際調査報告】
2014501748.tif 000005
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