(57)【要約】  インスリン化合物または2種以上のインスリン化合物の混合物、ニコチン酸系化合物およびアミノ酸を含むインスリン製剤。【特許請求の範囲】
【請求項１】
・  インスリン化合物、
・  ニコチン酸系化合物および
・  アルギニン
を含むインスリン製剤。
【請求項２】
インスリン化合物が、ヒトインスリンまたはインスリンアナログである、請求項1に記載のインスリン製剤。
【請求項３】
インスリン化合物が、B28Aspヒトインスリン、B3LysB29Gluヒトインスリン、およびB28LysB29Proからなる群から選択される、請求項1または2に記載のインスリン製剤。
【請求項４】
インスリン化合物が、B28Aspヒトインスリンである、請求項1から3のいずれか一項に記載のインスリン製剤。
【請求項５】
インスリン化合物が、約0.2mMから約2.0mMまでの量で存在する、請求項1から4のいずれか一項に記載のインスリン製剤。
【請求項６】
インスリン化合物が、約0.6mMから約1.2mMまでの量で存在する、請求項1から5のいずれかに記載のインスリン製剤。
【請求項７】
ニコチン酸系化合物が、ニコチンアミド、ニコチン酸、ナイアシン、ナイアシンアミドおよびビタミンB3および/もしくはその塩ならびに/またはその組合せからなる群から選択される、請求項1から6のいずれか一項に記載のインスリン製剤。
【請求項８】
ニコチン酸系化合物が、ニコチンアミドである、請求項1から7のいずれか一項に記載のインスリン製剤。
【請求項９】
約1mMから約250mMまでのニコチン酸系化合物を含む、請求項1から8のいずれか一項に記載のインスリン製剤。
【請求項１０】
約1mMから約250mMまでのニコチン酸系化合物を含む、請求項1から9のいずれか一項に記載のインスリン製剤。
【請求項１１】
約80mMから約230mMまでのニコチン酸系化合物を含む、請求項1から10のいずれか一項に記載のインスリン製剤。
【請求項１２】
約10mMから約60mMまでのアルギニンを含む、請求項1から11のいずれか一項に記載のインスリン製剤。
【請求項１３】
約10mMから約30mMまでのアルギニンを含む、請求項1から12のいずれか一項に記載のインスリン製剤。
【請求項１４】
約20mMのアルギニンを含む、請求項1から13のいずれか一項に記載のインスリン製剤。
【請求項１５】
1つ以上の緩衝剤をさらに含む、請求項1から14のいずれか一項に記載のインスリン製剤。
【請求項１６】
緩衝剤が、リン酸緩衝液である、請求項15に記載のインスリン製剤。
【請求項１７】
緩衝剤が、トリスである、請求項15に記載のインスリン製剤。
【請求項１８】
保存剤、等張化剤、および/または安定化剤をさらに含む、請求項1から17のいずれか一項に記載のインスリン製剤。
【請求項１９】
金属イオンをさらに含む、請求項1から18のいずれか一項に記載のインスリン製剤。
【請求項２０】
金属イオンが亜鉛である、請求項19に記載のインスリン製剤。
【請求項２１】
亜鉛:インスリンのモル比が、約0:6から約3.5:6までである、請求項20に記載のインスリン製剤。
【請求項２２】
亜鉛:インスリンのモル比が、約2:6から約3:6までである、請求項20に記載のインスリン製剤。
【請求項２３】
7.4未満のpHを有する、請求項1から22のいずれか一項に記載のインスリン製剤。
【請求項２４】
約7.4のpHを有する、請求項1から23のいずれか一項に記載のインスリン製剤。
【請求項２５】
約7.1のpHを有する、請求項1から24のいずれか一項に記載のインスリン製剤。
【請求項２６】
B28Aspヒトインスリン、ニコチンアミド、亜鉛、アルギニン、およびリン酸緩衝液を含む、インスリン製剤。
【請求項２７】
B28Aspヒトインスリンが約0.6mMから約1.2mMまでの範囲の濃度で存在し、ニコチンアミドが約80mMから約260mMまでの範囲の濃度で存在し、アルギニンが約10mMから約40mMまでの範囲の濃度で存在し、6個のB28Aspヒトインスリン分子当たり約4個未満の亜鉛イオンが存在し、約7.4以下のpHを有する、請求項26に記載のインスリン製剤。
【請求項２８】
a.  約0.6mMから約1.2mMまでの範囲の濃度で存在するB28Aspヒトインスリン;
b.  約80mMから約260mMまでの範囲の濃度で存在するニコチンアミド;
c.  6個のB28Aspヒトインスリン分子当たり約4個未満の亜鉛イオンで存在する亜鉛;
d.  約10mMから約30mMまでの範囲の濃度で存在するアルギニン;および
e.  リン酸緩衝液
から必須になり、約7.1のpHを有するインスリン製剤。
【請求項２９】
治療を必要とする哺乳動物に、請求項1から28のいずれか一項に記載の治療活性用量のインスリン製剤を投与することによる、哺乳動物における血中グルコースレベルを低減する方法。
【請求項３０】
請求項1から28のいずれか一項に記載のインスリン製剤を対象に投与することを含む、対象の真性糖尿病の治療方法。
【請求項３１】
ストレス誘発性高血糖、2型糖尿病、耐糖能の低下、1型糖尿病を含む高血糖、ならびに火傷、手術による傷および同化作用が治療に必要とされる他の疾患または負傷、心筋梗塞、脳卒中、冠動脈性心疾患および他の心血管疾患の治療または予防、ならびに重症の糖尿病患者および非糖尿病患者の治療に使用するための、請求項1から28のいずれか一項に記載のインスリン製剤。
【請求項３２】
高血糖  2型糖尿病および1型糖尿病の治療に使用するための、請求項31に記載のインスリン製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インスリン化合物、ニコチン酸系化合物およびアミノ酸を含む医薬製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
真性糖尿病は、グルコースを利用する能力が部分的にまたは完全に失われている代謝障害である。全人口の約5%が糖尿病に罹患しており、その障害は流行病と言えるほどまでになっている。
【０００３】
1920年代におけるインスリンの導入以来、糖尿病の治療において継続的な進歩がなされてきた。高血糖レベルを避ける一助とするために、多くの場合、糖尿病患者は頻回注射療法を実施し、それによって、インスリンを食事のたびに投与する。糖尿病患者は、数十年の間インスリンを用いて治療されるため、安全で、生活の質を向上させるインスリン製剤を主に必要としている。市販のインスリン製剤の中で、即効型(rapid-acting)、中間作用型および持続性作用型の製剤が挙げられる。
【０００４】
真性糖尿病の治療において、レギュラーインスリン(Actrapid(登録商標)など)、イソフェンインスリン(NPHと称される)、インスリン亜鉛懸濁液(Semilente(登録商標)、Lente(登録商標)およびUltralente(登録商標)など)ならびに二相性イソフェンインスリン(NovoMix(登録商標)など)などの、インスリンの多くの種類の医薬製剤が提案され、使用されている。作用の特定のプロファイル、すなわち速効型または持続性作用型に設計された、ヒトインスリンアナログおよび誘導体も開発されている。このような即効型インスリンアナログを含む市販のインスリン製剤の中には、NovoRapid(登録商標)(B28Aspヒトインスリンの製剤)、Humalog(登録商標)(B28LysB29Proヒトインスリンの製剤)およびApidra(登録商標)(B3LysB29Gluヒトインスリンの製剤)が含まれる。
【０００５】
国際出願WO 91/09617および同WO/9610417(Novo Nordisk A/S)は、ニコチンアミドまたはニコチン酸もしくはその塩を含有するインスリン製剤を開示している。欧州特許出願第1283051号は、緩衝剤として使用されるアルギニンを含有するインスリン製剤を開示しているとされている。欧州特許出願第1283051号は、インスリン製剤の物理的安定性の改良を開示しているとされている。
【０００６】
ほとんどの場合、インスリンの医薬製剤は、皮下注射によって投与される。患者にとって重要なのは、インスリンの作用プロファイルであり、これは、注射からの時間の関数としての、インスリンがグルコース代謝に及ぼす作用を意味する。このプロファイルでは、とりわけ、作用の開始時間、作用の極大値および作用の全持続時間が重要である。ボーラスインスリンの場合には、異なる作用プロファイルを有する種々のインスリン製剤が望ましく、患者によって要望される。患者は誰でも、非常に異なる作用プロファイルを有するインスリン製剤を、同日に使用し得る。望ましい作用プロファイルは、例えば、その日の時刻ならびに患者によって摂取される食事の量および組成によって決まる。
【０００７】
患者にとって同じように重要なのは、インスリン製剤の化学的安定性であり、これは例えば、Penfill(登録商標)カートリッジが入るデバイスなどのペン型注射デバイスを何度も使用するからであり、インスリン製剤はこのデバイスの中でカートリッジ全体が空になるまで保存され、それは1.5〜3.0mlカートリッジを含有するデバイスについて、少なくとも1〜2週であり得る。保存中、インスリン構造に共有結合性の化学的変化が起こる。このことは、脱アミド生成物およびより高分子量のトランスフォーメーション生成物(ダイマー、ポリマー)などの、より活性が低くおよび/または潜在的に免疫原性を有し得る分子の形成につながる可能性がある。さらに、同様に重要なのは、インスリン製剤の物理的安定性である。何故ならば、長期保存は、結局のところ、生物学的に不活性で潜在的に免疫原性である不溶性繊維の形成につながる可能性があるからである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際出願WO 91/09617
【特許文献２】国際出願WO/9610417
【特許文献３】欧州特許出願第1283051号
【特許文献４】欧州特許第214826号
【特許文献５】WO 2005/012347
【特許文献６】WO2008034881
【特許文献７】米国特許第5,962,267号
【特許文献８】WO 95/16708
【特許文献９】欧州特許第0055945号
【特許文献１０】欧州特許第0163529号
【特許文献１１】欧州特許第0347845号
【特許文献１２】欧州特許第0741188号
【特許文献１３】米国特許第6500645号
【特許文献１４】米国特許第5,395,922号
【特許文献１５】欧州特許第765,395号
【特許文献１６】WO 08037735
【特許文献１７】PCT WO 2007/074133
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, 1995
【非特許文献２】Stability of Protein Pharmaceuticals, Ahern. T.J. & Manning M.C., Plenum Press, New York 1992
【非特許文献３】Greene and Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, 1999
【非特許文献４】Frank他(1981) in Peptides: Proceedings of the 7th American Peptide Chemistry Symposium (Rich & Gross編), Pierce Chemical Co., Rockford, III. 729〜739頁
【非特許文献５】Chan他(1981) PNAS 78:5401〜5404頁
【非特許文献６】Thim他(1986) PNAS 83:6766〜6770頁
【非特許文献７】Naiki他(1989) Anal. Biochem. 177, 244〜249頁
【非特許文献８】LeVine (1999) Methods. Enzymol. 309, 274〜284頁
【非特許文献９】Nielsen他(2001) Biochemistry 40, 6036〜6046頁
【非特許文献１０】Pharmaceutical Research, 21(2004)1498〜1504頁
【非特許文献１１】Pharmaceutical Research, 23(2006)49〜55頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、好ましい吸収速度ならびに好ましい化学的および物理的な安定性を有するインスリン製剤に関する。本発明は、ヒトインスリンおよび/またはそのアナログ、ニコチンアミドもしくはニコチン酸および/またはその塩ならびにアルギニンを含むインスリン製剤に関する。
【００１１】
一実施形態では、本発明は、
・  インスリン化合物
・  ニコチン酸系化合物および
・  アルギニン
を含むインスリン製剤に関する。
【００１２】
別の実施形態では、本発明はまた、対象または哺乳動物に、本発明によるインスリン製剤を投与することを含む、対象の真性糖尿病の治療方法または対象の血中グルコースレベルを低減するための方法を企図する。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】本発明による製剤を37℃で2週間保存中の分解生成物の発生を、総インスリン含量に対する百分率で示す図である。実施例1のTable 1(表1)に記載されているように、文字Aは、参照であるNovoRapid(登録商標)を指し、残りの文字は、インスリンアスパルト製剤に相当する。NovoRapid(登録商標)製剤(製剤A)と比較して、ニコチンアミドを加えると(製剤BおよびD)、分解生成物の形成が増加するのに対して、ニコチンアミド、グルタミン酸およびアルギニンを組み合わせて加えると(製剤CおよびE)、HMWPの形成がより低下した、ほとんど同様の分解パターンになる。
【図２】本発明による製剤を37℃で2週間保存中の分解生成物の発生を、総インスリン含量に対する百分率で示す図である。実施例1のTable 1(表1)に記載されているように、文字Aは、参照であるNovoRapid(登録商標)を指し、残りの文字は、インスリンアスパルト製剤に相当する。ニコチンアミド、グルタミン酸およびアルギニンを組み合わせて加えたもの、製剤F、G、HおよびI、は、緩衝系が異なっており、リン酸緩衝液またはトリス緩衝液であり、インスリンおよびZnの濃度が、0.6mMおよび0.3mMまたは1.2mMおよび0.6mMであるが、これらは、製剤AであるNovoRapid(登録商標)製剤と同様の分解パターンを有する。
【図３】ブタに本発明による製剤の1nmol/kg用量を0分時に皮下注射した後の、血漿中グルコース濃度(平均+/- SEM、N=8)を示す図である。実施例1のTable 1(表1)に記載されているように、文字Aは、参照であるNovoRapid(登録商標)を指し、残りの文字は、インスリンアスパルト製剤に相当する。NovoRapid(登録商標)製剤(製剤A)と比較して、血漿グルコース低下の初期速度は、ニコチンアミドを加えた製剤(製剤N)についてはより速く、ニコチンアミドおよびアルギニンの組合せ(製剤M)についてはさらに速い。
【図４】ブタに本発明による製剤の1nmol/kg用量を0分時に皮下注射した後の、血漿中グルコース濃度(平均+/- SEM、N=7)を示す図である。実施例1のTable 1(表1)に記載されているように、文字Aは、参照であるNovoRapid(登録商標)を指し、残りの文字は、インスリンアスパルト製剤に相当する。NovoRapid(登録商標)製剤(製剤A)と比較して、血漿グルコース低下の初期速度は、ニコチンアミド、アルギニンおよびグルタミン酸の組合せを含む製剤(製剤L)ならびにニコチンアミドおよびアルギニンの組合せを含む製剤(製剤K)についてはより速い。
【図５】ブタに本発明による製剤の1nmol/kg用量を0分時に皮下注射した後の、血漿中インスリンアスパルト濃度(平均+/- SEM、N=7)を示す図である。実施例1のTable 1(表1)に記載されているように、文字Aは、参照であるNovoRapid(登録商標)を指し、残りの文字は、インスリンアスパルト製剤に相当する。NovoRapid(登録商標)製剤(製剤A)と比較して、ニコチンアミド(製剤J)、ニコチンアミドおよびアルギニンの組合せ(製剤K)ならびにニコチンアミド、アルギニンおよびグルタミン酸の組合せ(製剤L)を含む製剤のインスリン成分の初期吸収速度は著しく速い。
【図６】ブタに本発明による製剤の1nmol/kg用量を0分時に皮下注射した後の、血漿中グルコース濃度(平均+/- SEM、N=8、各ブタに2回投与)を示す図である。文字Aは、参照であるNovoRapid(登録商標)を指し、実施例1のTable 3(表3)に記載されているように、11番はインスリンアスパルト製剤に相当する。NovoRapid(登録商標)製剤(製剤A)と比較して、血漿グルコース低下の初期速度は、ニコチンアミドおよびアルギニンの組合せを含む製剤(製剤11)についてはより速い。
【図７】ブタに本発明による製剤の1nmol/kg用量を0分時に皮下注射した後の、血漿中インスリンアスパルト濃度(平均+/- SEM、N=8、各ブタに2回投与)を示す図である。文字Aは、参照であるNovoRapid(登録商標)を指し、実施例1のTable 3(表3)に記載されているように、11番はインスリンアスパルト製剤に相当する。NovoRapid(登録商標)製剤(製剤A)と比較して、ニコチンアミドおよびアルギニンを含む製剤(製剤11)のインスリン成分の初期吸収速度は著しく速い。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明のインスリン製剤中のインスリン化合物の皮下注射後の吸収は、驚いたことに、参照のインスリン製剤のものに比べて速いことが見出された。この性質は、特に、インスリンが毎食前に与えられる頻回注射レジメンに関連して、即効型インスリンには有用である。作用の開始がより速いため、本インスリンは、従来の即効型インスリン液剤のものに比べて、食事により近い時間に都合良く摂取することができる。さらに、インスリンのより速い消失は、恐らく食事後の低血糖のリスクを減らす。
【００１５】
本発明のインスリン製剤は、インスリンアスパルトなどのインスリン化合物を含む即効型インスリン製剤、ニコチンアミドなどのニコチン酸系化合物およびアミノ酸であるアルギニンである。場合によって、本発明のインスリン製剤はまた、他のアミノ酸を含み得る。これらのインスリン製剤は、既存療法に比べて、正常な生理機能をより精密に模倣する、急速な吸収プロファイルを有する。さらに、本発明のインスリン製剤は、市販の医薬製剤に適した化学的および物理的な安定性を有する。
【００１６】
本発明のインスリン製剤は、物理的に安定であるのみならず、驚いたことに、化学的にも安定である速効型インスリン製剤を提供する。本発明のインスリン製剤は、既存のインスリン療法と比較して、作用がさらにより速く開始される。このような超速効型インスリン製剤は、第1フェーズであるインスリン放出の回復、注射の利便性および肝臓によるグルコース産生の停止という利点を有する。本発明のインスリン製剤は、皮下組織から血漿中への好ましい吸収速度を有し、ブタにおける数種のPK/PD実験によって示唆されているように、NovoRapid(登録商標)などの従来の製剤と比較した場合、初期の吸収速度の増加は、1.5から5倍までの範囲である。このより速い吸収速度は、血糖コントロールおよび利便性を改善し得、食前から食後の投与への切り替えが可能となり得る。本発明はある部分、ニコチンアミドの追加によって、吸収速度の増加が可能になるが、それはまた、HMWP量を著しく増加させることによって、化学的安定性に負の影響をもたらすという驚くべき発見に基づいている。本発明のインスリン製剤は、アルギニンの追加によって改良された化学的安定性を有し、このことは、例えば、保存後のダイマーインスリンおよびポリマーインスリンならびに脱アミドインスリンの形成を減少させることに反映されている。本発明のインスリン製剤はさらに、ポンプでの使用に有用であり得る、改良された物理的安定性も有し得る。
【００１７】
本発明は、約0.1mMから約10.0mMまでの濃度で存在する本発明によるインスリン化合物を含み、3から8.5までのpHを有するインスリン製剤を提供する。製剤は、ニコチン酸系化合物およびアルギニンも含む。製剤は、プロテアーゼ阻害剤、金属イオン、緩衝系、保存剤、等張化剤、キレート剤、安定化剤および界面活性剤をさらに含む。
【００１８】
一実施形態では、金属イオンは、酢酸亜鉛または塩化亜鉛として加えられる亜鉛である。
【００１９】
一実施形態では、インスリン製剤は、ヒトインスリン、そのアナログまたはその組合せ、ニコチンアミドおよび/またはニコチン酸および/またはその塩ならびにアルギニンおよび/またはその塩を含む。
【００２０】
一実施形態では、本発明によるインスリン製剤は、B28Aspヒトインスリン、ニコチンアミドおよびアルギニンの水性溶液を含む。
【００２１】
本発明の液剤中のB28Aspヒトインスリンの含量は、15〜500国際単位(IU)/mlの範囲内であり得、好ましくは、注射用製剤中に50〜333IU/mlの範囲内であり得る。しかし、非経口投与の他の目的に関して、インスリン化合物の含量はより高い可能性がある。
【００２２】
本状況において、単位「IU」は、6nmolに相当する。
【００２３】
「インスリンアスパルト」という用語は、ヒトインスリンアナログB28Aspヒトインスリンを指す。
【００２４】
「開始」という用語は、注射からPK曲線が増加に移るまでの時間を指す。
【００２５】
「吸収速度」という用語は、PK曲線の傾きを指す。
【００２６】
本発明による「インスリン化合物」は、本明細書において、ヒトインスリン、インスリンアナログおよび/またはその組合せであると理解されるべきである。
【００２７】
本明細書において使用される「ヒトインスリン」という用語は、構造および性質がよく知られているヒトホルモンを意味する。ヒトインスリンは、システイン残基、すなわちA鎖とB鎖との間のジスルフィド架橋によって結合されている2つのポリペプチド鎖を有する。A鎖は、アミノ酸21個のペプチドであり、B鎖は、アミノ酸30個のペプチドであり、2つの鎖は3つのジスルフィド架橋によって結合されている:1つ目は、A鎖の6位のシステインと11位のシステインとの間、2つ目は、A鎖の7位のシステインとB鎖の7位のシステインとの間、3つ目は、A鎖の20位のシステインとB鎖の19位のシステインとの間にある。
【００２８】
ホルモンは、アミノ酸24個のプレペプチドからなる単鎖前駆体プロインスリン(プレプロインスリン)として合成され、その後、以下の配置:プレペプチド-B-Arg Arg-C-Lys Arg-A[式中、Cは31個のアミノ酸が結合したペプチドである]において86個のアミノ酸を含有するプロインスリンになる。Arg-ArgおよびLys-Argは、結合ペプチドをAおよびB鎖から開裂するための開裂部位である。
【００２９】
本明細書において使用される「インスリンアナログ」とは、天然に存在するインスリンの一次構造、例えばヒトインスリンの一次構造から、変異によって誘導されるポリペプチドを意味する。1種または複数種の変異体は、天然に存在するインスリン中に存在する少なくとも1つのアミノ酸残基を欠失および/または置換することによっておよび/または少なくとも1つのアミノ酸残基を付加することによって作製される。付加および/または置換されたアミノ酸残基は、コード可能なアミノ酸残基または他の天然に存在するアミノ酸残基であり得る。
【００３０】
一実施形態では、インスリンアナログは、親インスリンと比較して8つ未満の改変(置換、欠失、付加およびその組合せ)を含み、あるいは、アナログは、親インスリンと比較して7つ未満の改変を含み、あるいは、アナログは、親インスリンと比較して6つ未満の改変を含み、あるいは、アナログは、親インスリンと比較して5つ未満の改変を含み、あるいは、アナログは、親インスリンと比較して4つ未満の改変を含み、あるいは、アナログは、親インスリンと比較して3つ未満の改変を含み、あるいは、アナログは、親インスリンと比較して2つ未満の改変を含む。
【００３１】
インスリン分子における変異は、天然のアミノ酸を置換するアミノ酸について、鎖(AまたはB)、位置および3文字コードを記述して表示される。「desB30」または「B(1〜29)」とは、B30アミノ酸残基を欠く天然のインスリンB鎖またはそのアナログを意味し、B28Aspヒトインスリンとは、B鎖の28位のアミノ酸残基が、Aspで置換されているヒトインスリンを意味する。
【００３２】
インスリンアナログの例は、B鎖の28位のProが、Asp、Lys、Leu、ValまたはAlaで変異しているおよび/またはB29位のLysが、Pro、GluまたはAspで変異しているような例である。さらに、B3位のAsnは、Thr、Lys、Gln、GluまたはAspで変異し得る。A21位のアミノ酸残基は、Glyで変異し得る。B1位のアミノ酸は、Gluで変異し得る。B16位のアミノ酸は、GluまたはHisで変異し得る。インスリンアナログのさらなる例は、例えば、ヒトインスリン中のB30アミノ酸が欠失されているアナログ(des(B30)ヒトインスリン)、ヒトインスリン中のB1アミノ酸が欠失されているインスリンアナログ(des(B1)ヒトインスリン)、des(B28〜B30)ヒトインスリンおよびdes(B27)ヒトインスリンなどの欠失アナログである。A鎖および/またはB鎖が、N-末端伸長部分を有するインスリンアナログならびにA鎖および/またはB鎖が、B鎖のC-末端に付加された2つのアルギニン残基を有するようなC-末端伸長部分を有するインスリンアナログも、インスリンアナログの例である。さらなる例は、言及されている変異の組合せを含むインスリンアナログである。A14位のアミノ酸が、Asn、Gln、Glu、Arg、Asp、GlyまたはHisであり、B25位のアミノ酸がHisであり、場合によって、1つまたは複数の追加の変異をさらに含むものが、インスリンアナログのさらなる例である。A21位のアミノ酸残基がGlyであり、インスリンアナログが、2つのアルギニン残基を有するC-末端においてさらに伸長されるものも、インスリンアナログの例である。
【００３３】
インスリンアナログのさらなる例には、DesB30ヒトインスリン; AspB28ヒトインスリン; AspB28、desB30ヒトインスリン; LysB3、GluB29ヒトインスリン; LysB28、ProB29ヒトインスリン; GlyA21、ArgB31、ArgB32ヒトインスリン; GluA14、HisB25ヒトインスリン; HisA14、HisB25ヒトインスリン; GluA14、HisB25、desB30ヒトインスリン; HisA14、HisB25、desB30ヒトインスリン; GluA14、HisB25、desB27、desB28、desB29、desB30ヒトインスリン; GluA14、HisB25、GluB27、desB30ヒトインスリン; GluA14、HisB16、HisB25、desB30ヒトインスリン; HisA14、HisB16、HisB25、desB30ヒトインスリン; HisA8、GluA14、HisB25、GluB27、desB30ヒトインスリン; HisA8、GluA14、GluB1、GluB16、HisB25、GluB27、desB30  ヒトインスリン;およびHisA8、GluA14、GluB16、HisB25、desB30ヒトインスリンが含まれるが、これらに限定されない。
【００３４】
「ニコチン酸系化合物」という用語は、ニコチンアミド、ニコチン酸、ナイアシン、ナイアシンアミドおよびビタミンB3および/もしくはその塩ならびに/またはその任意の組合せを含む。
【００３５】
本発明によると、ニコチン酸系化合物および/またはその塩の濃度は、約1mMから約300mMまでまたは約5mMから約200mMまでの範囲である。
【００３６】
「アルギニン」または「Arg」という用語は、アミノ酸であるアルギニンおよび/またはその塩、例えば、アルギニン塩酸塩またはアルギニングルタミン酸塩を含む。
【００３７】
一実施形態では、インスリン製剤は、1から100mMのアルギニンを含む。
【００３８】
一実施形態では、インスリン製剤は、1から20mMのアルギニンを含む。
【００３９】
一実施形態では、インスリン製剤は、20から90mMのアルギニンを含む。
【００４０】
一実施形態では、インスリン製剤は、30から85mMのアルギニンを含む。
【００４１】
「グルタミン酸」または「Glu」という用語は、アミノ酸であるグルタミン酸および/またはその塩を含む。
【００４２】
本明細書において使用される「医薬製剤」または「インスリン製剤」という用語は、インスリン化合物、すなわちヒトインスリン、そのアナログおよび/またはその組合せ、ならびにニコチン酸系化合物およびアミノ酸を含み、場合によって、保存剤、キレート剤、張性調節剤、充填剤、安定化剤、酸化防止剤、ポリマーおよび界面活性剤、金属イオン、油脂性媒体ならびにタンパク質(例えば、ヒト血清アルブミン、ゼラチンまたはタンパク質)などの他の添加剤(excipient)と一緒に含む製品を意味し、前記インスリン製剤は、前記インスリン製剤の人への投与によって、疾患または障害を治療、予防またはその重症度を軽減するのに有用である。したがって、インスリン製剤は、医薬製剤または医薬組成物として、当技術分野においても知られている。
【００４３】
緩衝剤は、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸塩、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸ナトリウムおよびトリス(ヒドロキシメチル)-アミノメタン(トリス)、ビシン、トリシン、リンゴ酸、コハク酸塩、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、アスパラギン酸、エチレンジアミンまたはその混合物からなる群から選択され得るが、これらに限定されない。これらの具体的な緩衝剤のそれぞれは、本発明の代替の実施形態を構成する。
【００４４】
本発明のインスリン製剤は、インスリン製剤に共通の他の成分、例えば、クエン酸塩などの亜鉛錯化剤およびリン酸緩衝液をさらに含み得る。
【００４５】
グリセロールおよび/またはマンニトールおよび/または塩化ナトリウムは、0から250mM、0から200mMまたは0から100mMの濃度に相当する量で存在し得る。
【００４６】
安定化剤、界面活性剤および保存剤も、本発明のインスリン製剤中に存在し得る。
【００４７】
本発明のインスリン製剤は、薬学的に許容される保存剤をさらに含み得る。保存剤は、保存効果を得るのに十分な量で存在し得る。インスリン製剤中の保存剤の量は、例えば、当技術分野の文献および/または例えば市販の製品中の保存剤について知られている量から決定され得る。これらの具体的な保存剤のそれぞれは、本発明の代替の実施形態を構成する。医薬製剤における保存剤の使用は、例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, 1995に記載されている。
【００４８】
本発明のインスリン製剤中に存在する保存剤は、これまでの従来のインスリン製剤におけるように、例えば、フェノール、m-クレゾールおよびメチルパラベンであってよい。
【００４９】
本発明のインスリン製剤は、キレート剤をさらに含み得る。医薬製剤におけるキレート剤の使用は、当業者にはよく知られている。便宜上、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, 1995を参照のこと。
【００５０】
本発明のインスリン製剤は、安定化剤をさらに含み得る。本明細書において使用される「安定化剤」という用語は、ペプチドを安定化させるために、すなわち、そのような製剤の保存寿命および/または使用時間を延ばすために、医薬製剤を含有するポリペプチドに加えられる化学物質を指す。便宜上、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, 1995を参照のこと。
【００５１】
本発明のインスリン製剤は、界面活性剤をさらに含み得る。本明細書において使用される「界面活性剤」という用語は、水溶性(親水性)部分、頭部および脂溶性(親油性)セグメントを含む任意の分子またはイオンを指す。界面活性剤は、好ましくは、界面に集積し、親水性部分が水の方向へ向けられ(親水相)、親油性部分が油の方向または疎水相(すなわち、ガラス、空気、油など)へ向けられる。界面活性剤がミセルを形成し始める濃度は、臨界ミセル濃度またはCMCとして知られている。さらに、界面活性剤は、液体の表面張力を下げる。界面活性剤は、両親媒性化合物としても知られている。「洗剤」という用語は、一般に、界面活性剤について使用される同義語である。医薬製剤における界面活性剤の使用は、当業者にはよく知られている。便宜上、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, 1995を参照のこと。
【００５２】
さらなる実施形態では、本発明は、本発明のインスリン化合物の水性溶液および緩衝剤を含むインスリン製剤であって、前記インスリン化合物が、0.1mMからまたはそれを超える濃度で存在し、前記製剤が、室温(約25℃)で約3.0から約8.5までのpHを有するインスリン製剤に関する。
【００５３】
本発明はまた、本発明のインスリン製剤を製造するための方法に関する。
【００５４】
一実施形態では、本発明のインスリン製剤を作製するための方法は、
a)  インスリン化合物またはインスリン化合物の混合物を水中または緩衝剤中に溶解させることによって、溶液を調製すること;
b)  二価の金属イオンを水中または緩衝剤中に溶解させることによって、溶液を調製すること;
c)  保存剤を水中もしくは緩衝剤中に溶解させることによって、溶液を調製すること
d)  等張化剤を水中または緩衝剤中に溶解させることによって、溶液を調製すること;
e)  界面活性剤および/または安定化剤を水中または緩衝剤中に溶解させることによって、溶液を調製すること;
f)  溶液a)と、溶液b)、c)、d)およびe)のうちの1種または複数種とを混合すること;
最後に、f)における混合物のpHを所望のpHに調整した後、滅菌ろ過を行うこと
を含む。
【００５５】
一実施形態では、本発明のインスリン製剤を作製するための方法は、
a)  保存剤、等張化剤、金属イオン塩、アルギニンまたはアルギニン塩およびニコチン酸系化合物の別個のストック溶液を調製すること;
b)  保存剤のストック溶液または保存剤の混合物を水もしくは緩衝剤に加えることによって、溶液を調製すること;
c)  等張化剤のストック溶液を、溶液b)に加えること;
d)  インスリン化合物またはインスリン化合物の混合物を、水中または緩衝剤中に溶解させ;HClを加えてこの溶液を酸性にすることによって、溶液を調製すること;
e)  金属イオン塩のストック溶液を、d)に加えること;
f)  e)をc)に加え、撹拌すること;
g)  アルギニンまたはアルギニン塩のストック溶液をf)に加え、撹拌すること;
h)  ニコチン酸系化合物のストック溶液をg)に加え、NaOH/HClを使用して、所望のpHに調整すること
を含む。
【００５６】
一実施形態では、本発明のインスリン製剤を作製するための方法は、
a)  保存剤、等張化剤、金属イオン塩の別個のストック溶液ならびにアルギニンまたはアルギニン塩およびニコチン酸系化合物の混合ストック溶液を調製すること;
b)  保存剤のストック溶液または保存剤の混合物を水もしくは緩衝剤に加えることによって、溶液を調製すること;
c)  等張化剤のストック溶液を、溶液b)に加えること;
d)  インスリン化合物またはインスリン化合物の混合物を、水中または緩衝剤中に溶解させ;HClを加えてこの溶液を酸性にすることによって、溶液を調製すること;
e)  金属イオン塩のストック溶液を、d)に加えること;
f)  e)をc)に加え、撹拌すること;
g)  アルギニンまたはアルギニン塩およびニコチン酸系化合物の混合ストック溶液をf)に加え、撹拌すること;
h) g)のpHを、NaOH/HClを使用して、所望のpHに調整すること
を含む。
【００５７】
本発明のインスリン製剤は、非経口投与による糖尿病の治療において使用することができる。本発明のインスリン製剤の、患者に投与されるべき投与量は、主治医によって選択されることが推奨される。
【００５８】
非経口投与は、シリンジを用い、場合によってペン様のシリンジを用いた皮下、筋肉内、腹腔内または静脈内注射によって行われ得る。あるいは、非経口投与は、注入ポンプを用いて行うことができる。さらなる選択肢として、本発明のインスリン化合物を含有するインスリン製剤は、例えば、無針注射によるもしくは貼付剤からの、場合によってイオン導入パッチからの経皮投与またはバッカル剤などの経粘膜投与に適合し得る。
【００５９】
本発明によるインスリン製剤は、そのような治療を必要とする患者に、いくつかの部位に、例えば、局所部位、例えば、皮膚および粘膜部位に、バイパス吸収を行う部位、例えば、動脈中、静脈中、心臓内への投与を行う部位にならびに吸収を伴う部位、例えば、皮内、皮下、筋肉内または腹腔内への投与を行う部位に投与され得る。
【００６０】
本発明の一実施形態では、インスリン製剤は、水性製剤、すなわち、水を含む製剤である。そのような製剤は、典型的には、溶液または懸濁液である。本発明のさらなる実施形態では、インスリン製剤は、水性溶液である。
【００６１】
「水性製剤」という用語は、少なくとも50%w/wの水を含む製剤と定義される。同様に、「水性溶液」という用語は、少なくとも50%w/wの水を含む溶液と定義され、「水性懸濁液」という用語は、少なくとも50%w/wの水を含む懸濁液と定義される。
【００６２】
水性懸濁液は、活性化合物を、水性懸濁液の製造に適した添加剤と混合して含有し得る。
【００６３】
一実施形態では、本発明のインスリン製剤は、注射によるインスリン療法に使用されるペン様デバイスにおける適用に十分適している。
【００６４】
一実施形態では、本発明のインスリン製剤は、インスリン投与用のポンプで使用することができる。
【００６５】
本明細書において使用されるインスリン製剤の「物理的安定性」という用語は、タンパク質を熱-機械的応力に曝した結果としておよび/または疎水性表面および界面などの不安定な界面および表面との相互作用の結果として、生物学的に不活性なおよび/または不溶性のタンパク質の凝集体を形成する、タンパク質の傾向を指す。水性タンパク質製剤の物理的安定性は、適した容器(例えば、カートリッジまたはバイアル)に満たされた製剤を、異なる温度で、種々の期間、機械的/物理的応力(例えば、撹拌)に曝した後に、目視検査および/または濁度測定を用いて評価される。製剤の目視検査は、暗い背景で、集束させた鋭い光の中で行われる。製剤の濁度は、例として、0から3までの尺度で、濁度の程度をランク付けする視覚的尺度によって特性決定される(濁度を示さない製剤は、視覚的尺度0に相当し、日光の下で視覚的濁度を示す製剤は、視覚的尺度3に相当する)。製剤は、日光の下で視覚的濁度を示す場合、タンパク質凝集に関して物理的に不安定であると分類される。あるいは、製剤の濁度は、当業者によく知られている簡単な濁度測定によって評価することができる。水性タンパク質製剤の物理的安定性は、分光学的薬剤またはタンパク質の配座状態のプローブを使用することによって評価することもできる。プローブは、好ましくは、タンパク質の非天然配座異性体に選択的に結合する小分子である。タンパク質構造の小分子分光学的プローブの一例は、チオフラビンTである。チオフラビンTは、アミロイド繊維の検出のために広く使用されている蛍光色素である。繊維の存在下で、恐らく他のタンパク質の配置も同様に、チオフラビンTは、繊維タンパク質形態に結合すると、約450nmで最大となる新たな励起および約482nmの増強された発光を生じる。未結合チオフラビンTは、それらの波長で本質的に非蛍光性である。
【００６６】
本明細書において使用されるタンパク質製剤の「化学的安定性」という用語は、天然のタンパク質構造と比較して、より低い生物学的効力を潜在的に有するおよび/またはより増大した免疫原性を潜在的に有する化学的分解生成物の形成をもたらす、タンパク質の共有結合構造の変化を指す。種々の化学的分解生成物は、天然のタンパク質のタイプおよび性質ならびにタンパク質が曝される環境に応じて形成され得る。化学的分解生成物の量の増加は、タンパク質製剤の保存中および使用中に見られることが多い。ほとんどのタンパク質は、脱アミド化する傾向があり、その過程で、グルタミニルまたはアスパラギニル残基中の側鎖アミド基が加水分解されて遊離カルボン酸を形成しまたはアスパラギニル残基はIsoAsp誘導体を形成する。他の分解経路は、高分子量生成物の形成に関与し、ここでは2つ以上のタンパク質分子が、アミド基転移および/またはジスルフィド相互作用を通じて互いに共有結合し、共有結合したダイマー、オリゴマーおよびポリマー分解生成物の形成をもたらす(Stability of Protein Pharmaceuticals, Ahern. T.J. & Manning M.C., Plenum Press, New York 1992)。酸化(例として、メチオニン残基の)は、化学的分解の別の変種として言及することができる。タンパク質製剤の化学的安定性は、異なる環境条件(分解生成物の形成は、例として、温度上昇によってしばしば加速され得る)に曝された後に、種々の時点で化学的分解生成物の量を測定することによって評価することができる。個々の分解生成物のそれぞれの量は、多くの場合、種々のクロマトグラフィー技術(例えば、SEC-HPLCおよび/またはRP-HPLC)を使用して、分子サイズおよび/または電荷に応じて分解生成物を分離することによって測定される。HMWP生成物は、潜在的に免疫原性であり、生物学的に活性ではないため、低レベルのHMWPが有利である。
【００６７】
「安定化された製剤」という用語は、増加した物理的安定性、増加した化学的安定性または増加した物理的および化学的な安定性を有する製剤を指す。一般に、製剤は、使用期限に達するまでは、(推奨される使用条件および貯蔵条件に従って)使用中および保存中に安定でなければならない。
【００６８】
「糖尿病」または「真性糖尿病」という用語は、1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病(妊娠中の)および高血糖を引き起こす他の状態を含む。この用語は、膵臓が不十分な量のインスリンを産生するまたは体細胞がインスリンに対して適切に応答できず、細胞がグルコースを吸収できない代謝障害に使用される。結果として、グルコースは、血中に蓄積する。
【００６９】
1型糖尿病は、インスリン依存性真性糖尿病(IDDM)および若年型糖尿病とも呼ばれており、B-細胞の破壊によって引き起こされ、通常は絶対的なインスリン欠乏に至る。
【００７０】
2型糖尿病は、非インスリン依存性真性糖尿病(NIDDM)および成人型糖尿病としても知られており、主にインスリン抵抗性であり、ひいては相対的なインスリン不足を伴うおよび/またはインスリン抵抗性を有し、主にインスリンの分泌低下を伴う。
【００７１】
本明細書において使用される「薬学的に許容される」という用語は、標準的な薬学的適用に適している、すなわち、患者においていかなる重篤な有害事象も生じさせないことを意味する。
【００７２】
本明細書において使用される「疾患の治療」という用語は、疾患、状態または障害を発症している患者の管理およびケアを意味し、疾患の治療、予防または緩和を含む。治療の目的は、疾患、状態または障害と闘うことである。治療は、疾患、状態または障害を取り除くまたは抑制するためのおよび疾患、状態または障害に関連する症状または合併症を緩和するための活性化合物の投与ならびに疾患、状態または障害の予防を含む。
【００７３】
その最も広い意味では、「重症患者(critically ill patient)」という用語は、本明細書において使用される場合、疾患または負傷によって、命を脅かすような単臓器もしくは多臓器系不全を起こしているまたはそれを急性的に起こす危険性がある患者、手術を受けている途中で、合併症が併発する場合の患者ならびに7日間以内に生命の維持に必要不可欠な臓器において手術を受けているまたは7日間以内に大手術を受けている患者を指す。より制限された意味では、「重症患者」という用語は、本明細書において使用される場合、疾患または負傷によって、命を脅かすような単臓器もしくは多臓器系不全を起こしているまたはそれを急性的に起こす危険性がある患者あるいは手術を受けている途中で、合併症が併発する場合の患者を指す。さらに制限された意味では、「重症患者」という用語は、本明細書において使用される場合、疾患または負傷によって、命を脅かすような単臓器もしくは多臓器系不全を起こしているまたはそれを急性的に起こす危険性がある患者を指す。同様に、これらの定義は、「重症患者(critical illness in a patient)」および「重症患者(patient is critically ill)」などの類似の表現に適用する。重症患者の例は、心臓手術、脳手術、胸部手術、腹部手術、血管手術もしくは移植手術を必要とする患者あるいは神経系疾患、脳外傷、呼吸不全、腹膜炎、多発外傷もしくは重症の火傷または重症の多発性神経障害に罹患している患者である。
【００７４】
本明細書において使用される「同化」という用語は、より小さい単位から分子を構成する一連の代謝経路を意味する。これらの反応は、エネルギーを必要とする。代謝過程を分類する1つのやり方は、細胞、器官または有機体のレベルで、「同化」として分類するかまたは正反対の「異化」として分類するかである。同化は、巨大分子をより小さい部分に分解して呼吸に使い尽くす異化によって、エネルギーが供給される。多くの同化過程は、アデノシン三リン酸(ATP)によってエネルギーが供給される。同化過程は、器官および組織を「築き上げる」方向に働く。これらの過程によって、細胞が成長および分化し、体のサイズが大きくなり、ある過程は、複雑な分子の合成に関与している。同化過程の例には、骨の成長および石化ならびに筋肉量の増加が含まれる。内分泌学者は伝統的に、ホルモンが代謝のどの部分を刺激するかによって、ホルモンを同化または異化として分類してきた。同化と異化との間のバランスはまた、概日リズムによって調節され、グルコース代謝などの過程は、終日にわたって、動物の標準的な活動期間に合うように変動する。これらのホルモンの「同化作用」のいくつかの例は、アミノ酸からタンパク質の合成の増加、食欲増加、骨リモデリングおよび成長の増加ならびに赤血球の産生を増加させる骨髄の刺激である。多くの機構を通じて、同化ホルモンは、筋肉細胞の形成を刺激し、よって骨格筋のサイズの増加をもたらし、その結果、強さが増すことになる。
【００７５】
別の実施形態では、本発明によるインスリンアナログは、2型糖尿病における疾患の悪化を遅延または予防するための医薬品として使用される。
【００７６】
本発明の一実施形態では、ストレス誘発性高血糖、2型糖尿病、耐糖能の低下、1型糖尿病を含む高血糖、ならびに火傷、手術による傷および同化作用が治療に必要とされる他の疾患または負傷、心筋梗塞、脳卒中、冠動脈性心疾患および他の心血管疾患の治療または予防のための医薬品として使用するための、本発明によるインスリン製剤が提供される。
【００７７】
本発明のさらなる実施形態では、ストレス誘発性高血糖、2型糖尿病、耐糖能の低下、1型糖尿病を含む高血糖、ならびに火傷、手術による傷および同化作用が治療に必要とされる他の疾患または負傷、心筋梗塞、冠動脈性心疾患および他の心血管疾患、脳卒中の治療または予防のための方法であって、そのような治療を必要とする患者に、そのような治療のための有効量の本発明によるインスリン製剤を投与することを含む方法が提供される。
【００７８】
本発明によるインスリン製剤での治療はまた、第2のまたはそれ以上の薬理学的に活性な物質、例えば、抗糖尿病剤、抗肥満剤、食欲調節剤、抗高血圧剤、糖尿病に起因するまたは関連する合併症の治療および/または予防のための薬剤ならびに肥満に起因するまたは関連する合併症および障害の治療および/または予防のための薬剤から選択される物質と組み合わされ得る。
【００７９】
本発明によるインスリン製剤での治療はまた、胃バンディング術または胃バイパス術などの、グルコースレベルおよび/または脂質恒常性に影響を及ぼす手術である肥満手術と組み合わされ得る。
【００８０】
ポリペプチド、例えば、インスリンの製造は、当技術分野においてよく知られている。本発明によるインスリンアナログは、例として、古典的なペプチド合成、例えば、t-BocもしくはFmocの化学または他のよく確立された技術を使用する固相ペプチド合成によって製造され得、例えば、Greene and Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, 1999を参照のこと。インスリン化合物は、アナログをコードするDNA配列を含有し、適した栄養培地中で、インスリンアナログの発現が許容される条件下で、インスリンアナログを発現することが可能な宿主細胞を培養することを含む方法によっても製造され得る。非天然のアミノ酸残基を含むインスリンアナログについては、例として、tRNA変異体の使用によって、非天然のアミノ酸がアナログに組み込まれるように、組換え細胞を改変するべきである。よって、手短に言えば、本発明によるインスリンアナログは、知られているインスリンアナログの調製と同じように調製される。
【００８１】
ヒトインスリンおよびヒトインスリンアナログの製造には、いくつかの方法が使用され得る。例えば、微生物中でのインスリンの製造に使用される3つの主な方法が、WO2008034881に開示されている。これらのうちの2つは、大腸菌(Escherichia coli)が関与しており、細胞質中での巨大融合タンパク質の発現(Frank他(1981) in Peptides: Proceedings of the 7th American Peptide Chemistry Symposium (Rich & Gross編)、Pierce Chemical Co.、Rockford、III. 729〜739頁)またはペリプラズム空間の中への分泌を可能にするためのシグナルペプチドの使用(Chan他(1981) PNAS 78:5401〜5404頁)である。3つ目の方法は、培地中にインスリン前駆体を分泌させるために、サッカロミセスセレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)を利用している(Thim他(1986) PNAS 83:6766〜6770頁)。先行技術は、大腸菌またはサッカロミセスセレビシエにおいて発現される多くのインスリン前駆体を開示している。米国特許第5,962,267号、WO 95/16708、欧州特許第0055945号、欧州特許第0163529号、欧州特許第0347845号および欧州特許第0741188号を参照のこと。
【００８２】
インスリンアナログは、例えば米国特許第6500645号に開示されているようなよく知られている技術によって、問題となっているインスリンアナログをコードするDNA配列を、適した宿主細胞中で発現することによって製造される。インスリンアナログは、直接発現されるかまたはB鎖上にN-末端伸長部分もしくはB鎖上にC-末端伸長部分を有する前駆体分子として発現される。N-末端伸長部分は、直接発現される生成物の収率を高める機能を有し、15個までのアミノ酸残基の長さであり得る。N-末端伸長部分は、培養ブロスから単離した後、インビトロで開裂されることになり、それ故に、B1に隣接して開裂部位を有する。本発明において、適したタイプのN-末端伸長部分は、米国特許第5,395,922号および欧州特許第765,395号に開示されている。C-末端伸長部分は、宿主細胞のエキソプロテアーゼによる、細胞内のタンパク質分解プロセシングに対して、成熟インスリンまたはインスリンアナログ分子を保護する機能を有し得る。C-末端伸長部分は、培養ブロス中で、分泌された活性なカルボキシペプチダーゼによって、細胞外に開裂されるかまたは培養ブロスから単離した後、インビトロで開裂されることになる。B鎖上にカルボキシペプチダーゼ(carboxypetidase)によって除去されるC-末端伸長部分を有する、成熟インスリンおよびインスリンアナログを製造する方法は、WO 08037735に開示されている。このプロセスの標的インスリン生成物は、B鎖の短いC-末端伸長部分を有していても有していなくてもよい、2本鎖ヒトインスリンまたは2本鎖ヒトインスリンアナログであり得る。標的インスリン生成物が、B鎖のC-末端伸長部分を有していない場合には、前記C-末端伸長部分は、その後、さらなる精製ステップ前に、B鎖から開裂されることが可能であるべきである。
【００８３】
本発明はまた、本明細書における他の箇所でさらに記載されている、以下の実施形態の非限定的なリストを企図する。
1. 
・  インスリン化合物、
・  ニコチン酸系化合物および
・  アルギニン
を含むインスリン製剤。
2. インスリン化合物が、ヒトインスリンまたはインスリンアナログである、実施形態1に記載のインスリン製剤。
3. インスリン化合物が、B28Aspヒトインスリン、B3LysB29GluヒトインスリンまたはB28LysB29Proヒトインスリンである、実施形態1または2に記載のインスリン製剤。
4. インスリン化合物が、B28Aspヒトインスリンである、実施形態1から3のいずれかに記載のインスリン製剤。
5. インスリン化合物が、B3LysB29Gluヒトインスリン、またはB28LysB29Proヒトインスリンである、実施形態1から4のいずれかに記載のインスリン製剤。
6. インスリン化合物が、B28LysB29Proヒトインスリンである、実施形態1から5のいずれかに記載のインスリン製剤。
7. インスリン化合物が、B3LysB29Gluヒトインスリンである、請求項1から6のいずれかに記載のインスリン製剤。
8. インスリン化合物が、以下の:0.1〜10.0mM;0.1〜3.0mM;0.1〜2.5mM;0.1〜2.0mM;0.1〜1.5mM;0.2〜2.5mM;0.2〜2.0mM;0.2〜1.5mM;0.3〜3.0mM;0.3〜2.5mM;0.3〜2.0mM;0.3〜1.5mM;0.5〜1.3mMおよび0.6〜1.2mMから選択される範囲で存在する、実施形態1から7のいずれかに記載のインスリン製剤。
9. インスリン化合物が、約0.1mMから約10.0mMまでの量で存在する、実施形態1から8のいずれかに記載のインスリン製剤。
10. インスリン化合物が、約0.1mMから約3.0mMまでの量で存在する、実施形態1から9のいずれかに記載のインスリン製剤。
11. インスリン化合物が、約0.1mMから約2.5mMまでの量で存在する、実施形態1から10のいずれかに記載のインスリン製剤。
12. インスリン化合物が、約0.1mMから約2.0mMまでの量で存在する、実施形態1から11のいずれかに記載のインスリン製剤。
13. インスリン化合物が、約0.1mMから約1.5mMまでの量で存在する、実施形態1から12のいずれかに記載のインスリン製剤。
14. インスリン化合物が、約0.2mMから約2.5mMまでの量で存在する、実施形態1から13のいずれかに記載のインスリン製剤。
15. インスリン化合物が、約0.2mMから約2.0mMまでの量で存在する、実施形態1から14のいずれかに記載のインスリン製剤。
16. インスリン化合物が、約0.2mMから約1.5mMまでの量で存在する、実施形態1から15のいずれかに記載のインスリン製剤。
17. インスリン化合物が、約0.3mMから約3.0mMまでの量で存在する、実施形態1から16のいずれかに記載のインスリン製剤。
18. インスリン化合物が、約0.3mMから約2.5mMまでの量で存在する、実施形態1から17のいずれかに記載のインスリン製剤。
19. インスリン化合物が、約0.3mMから約2.0mMまでの量で存在する、実施形態1から18のいずれかに記載のインスリン製剤。
20. インスリン化合物が、約0.3mMから約1.5mMまでの量で存在する、実施形態1から19のいずれかに記載のインスリン製剤。
21. インスリン化合物が、約0.5mMから約1.3mMまでの量で存在する、実施形態1から20のいずれかに記載のインスリン製剤。
22. インスリン化合物が、約0.3mMから約1.2mMまでの量で存在する、実施形態1から21のいずれかに記載のインスリン製剤。
23. インスリン化合物が、約0.6mMから約1.2mMまでの量で存在する、実施形態1から22のいずれかに記載のインスリン製剤。
24. インスリン化合物が、約0.6mM、または約1.2mMの量で存在する、実施形態1から23のいずれかに記載のインスリン製剤。
25. インスリン化合物が、約0.3mMの量で存在する、実施形態1から24のいずれかに記載のインスリン製剤。
26. インスリン化合物が、約0.6mMの量で存在する、実施形態1から25のいずれかに記載のインスリン製剤。
27. インスリン化合物が、約0.9mMの量で存在する、実施形態1から26のいずれかに記載のインスリン製剤。
28. インスリン化合物が、約1.2mMの量で存在する、実施形態1から27のいずれかに記載のインスリン製剤。
29. ニコチン酸系化合物が、ニコチンアミド、ニコチン酸、ナイアシン、ナイアシンアミドおよびビタミンB3および/もしくはその塩ならびに/またはその任意の組合せからなる群から選択される、実施形態1から28のいずれかに記載のインスリン製剤。
30. ニコチン酸系化合物が、ニコチンアミドおよびニコチン酸および/もしくはその塩ならびに/またはその任意の組合せから選択される、実施形態1から29のいずれかに記載のインスリン製剤。
31. ニコチン酸系化合物が、ニコチンアミドおよび/またはその塩である、実施形態1から30のいずれかに記載のインスリン製剤。
32. ニコチン酸系化合物が、以下の:1〜300mM;5〜200mM;40〜120mM,70〜140mMまたは80〜130mMから選択される範囲で存在する、実施形態1から31のいずれかに記載のインスリン製剤。
33. 約1mMから約300mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から32のいずれかに記載のインスリン製剤。
34. 約8mMから約260mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から33のいずれかに記載のインスリン製剤。
35. 約50mMから約250mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から34のいずれかに記載のインスリン製剤。
36. 約80mMから約250mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から35のいずれかに記載のインスリン製剤。
37. 約80mMから約180mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から36のいずれかに記載のインスリン製剤。
38. 約5mMから約200mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から37のいずれかに記載のインスリン製剤。
39. 約1mMから約150mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から38のいずれかに記載のインスリン製剤。
40. 約5mMから約20mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から39のいずれかに記載のインスリン製剤。
41. 約20mMから約120mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から40のいずれかに記載のインスリン製剤。
42. 約40mMから約120mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から41のいずれかに記載のインスリン製剤。
43. 約20mMから約40mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から42のいずれかに記載のインスリン製剤。
44. 約60mMから約80mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から43のいずれかに記載のインスリン製剤。
45. 約70mMから約140mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から44のいずれかに記載のインスリン製剤。
46. 約80mMから約130mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から45のいずれかに記載のインスリン製剤。
47. 約8mM、30mM、100mM、または130mMのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から46のいずれかに記載のインスリン製剤。
48. 約8mMのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から47のいずれかに記載のインスリン製剤。
49. 約30mM、100mMまたは130mMのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から48のいずれかに記載のインスリン製剤。
50. 約30mMのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から49のいずれかに記載のインスリン製剤。
51. 約80mMのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から50のいずれかに記載のインスリン製剤。
52. 約100mMのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から51のいずれかに記載のインスリン製剤。
53. 約120mMのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から52のいずれかに記載のインスリン製剤。
54. 約130mMのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から53のいずれかに記載のインスリン製剤。
55. 約150mMのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から54のいずれかに記載のインスリン製剤。
56. 約155mMのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から55のいずれかに記載のインスリン製剤。
57. 約180mMのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から56のいずれかに記載のインスリン製剤。
58. 約230mMのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から57のいずれかに記載のインスリン製剤。
59. 以下の範囲:1〜100mM、5〜120mM、8〜85mM、20〜90mM、30〜90mM、30〜85mM、30〜60mMまたは10〜40mMのアルギニン化合物を含む、実施形態1から58のいずれかに記載のインスリン製剤。
60. 以下の範囲:1〜120mM、8〜85mMまたは1〜40mMのアルギニン化合物を含む、実施形態1から59のいずれかに記載のインスリン製剤。
61. 約1mMから約120mMまでのアルギニンを含む、実施形態1から60のいずれかに記載のインスリン製剤。
62. 約1mMから約100mMまでのアルギニンを含む、実施形態1から61のいずれかに記載のインスリン製剤。
63. 約5mMから約120mMまでのアルギニンを含む、実施形態1から62のいずれかに記載のインスリン製剤。
64. 約20mMから約90mMまでのアルギニンを含む、実施形態1から63のいずれかに記載のインスリン製剤。
65. 約30mMから約85mMまでのアルギニンを含む、実施形態1から64のいずれかに記載のインスリン製剤。
66. 約8mMから約85mMまでのアルギニンを含む、実施形態1から65のいずれかに記載のインスリン製剤。
67. 約30mMから約60mMまでのアルギニンを含む、実施形態1から66のいずれかに記載のインスリン製剤。
68. 約10mMから約40mMまでのアルギニンを含む、実施形態1から67のいずれかに記載のインスリン製剤。
69. 約10mMから約30mMまでのアルギニンを含む、実施形態1から68のいずれかに記載のインスリン製剤。
70. 約10mMから約60mMまでのアルギニンを含む、実施形態1から69のいずれかに記載のインスリン製剤。
71. 約1mMから約40mMまでのアルギニンを含む、実施形態1から70のいずれかに記載のインスリン製剤。
72. アルギニンが、以下の:1mM、2mM、3mM、4mM、5mM、6mM、7mM、8mM、9mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mMまたは40mM、45mM、50mM、55mMまたは60mMから選択される範囲で存在する、実施形態1から71のいずれかに記載のインスリン製剤。
73. 約1mMのアルギニンを含む、実施形態1から72のいずれかに記載のインスリン製剤。
74. 約2mMのアルギニンを含む、実施形態1から73のいずれかに記載のインスリン製剤。
75. 約3mMのアルギニンを含む、実施形態1から74のいずれかに記載のインスリン製剤。
76. 約4mMのアルギニンを含む、実施形態1から75のいずれかに記載のインスリン製剤。
77. 約5mMのアルギニンを含む、実施形態1から76のいずれかに記載のインスリン製剤。
78. 約6mMのアルギニンを含む、実施形態1から77のいずれかに記載のインスリン製剤。
79. 約7mMのアルギニンを含む、実施形態1から78のいずれかに記載のインスリン製剤。
80. 約8mMのアルギニンを含む、実施形態1から79のいずれかに記載のインスリン製剤。
81. 約9mMのアルギニンを含む、実施形態1から80のいずれかに記載のインスリン製剤。
82. 約10mMのアルギニンを含む、実施形態1から81のいずれかに記載のインスリン製剤。
83. 約11mMのアルギニンを含む、実施形態1から82のいずれかに記載のインスリン製剤。
84. 約12mMのアルギニンを含む、実施形態1から83のいずれかに記載のインスリン製剤。
85. 約13mMのアルギニンを含む、実施形態1から84のいずれかに記載のインスリン製剤。
86. 約14mMのアルギニンを含む、実施形態1から85のいずれかに記載のインスリン製剤。
87. 約15mMのアルギニンを含む、実施形態1から86のいずれかに記載のインスリン製剤。
88. 約17mMのアルギニンを含む、実施形態1から87のいずれかに記載のインスリン製剤。
89. 約20mMのアルギニンを含む、実施形態1から88のいずれかに記載のインスリン製剤。
90. 約22mMのアルギニンを含む、実施形態1から89のいずれかに記載のインスリン製剤。
91. 約25mMのアルギニンを含む、実施形態1から90のいずれかに記載のインスリン製剤。
92. 約30mMのアルギニンを含む、実施形態1から91のいずれかに記載のインスリン製剤。
93. 約35mMのアルギニンを含む、実施形態1から92のいずれかに記載のインスリン製剤。
94. 約40mMのアルギニンを含む、実施形態1から93のいずれかに記載のインスリン製剤。
95. 約45mMのアルギニンを含む、実施形態1から94のいずれかに記載のインスリン製剤。
96. 約50mMのアルギニンを含む、実施形態1から95のいずれかに記載のインスリン製剤。
97. 約55mMのアルギニンを含む、実施形態1から96のいずれかに記載のインスリン製剤。
98. 約60mMのアルギニンを含む、実施形態1から97のいずれかに記載のインスリン製剤。
99. 緩衝剤をさらに含む、実施形態1から98のいずれかに記載のインスリン製剤。
100. 前記緩衝剤がリン酸緩衝液である、実施形態99に記載のインスリン製剤。
101. 約1mg/mLから約20mg/mLまでのリン酸緩衝液を含む、実施形態100に記載のインスリン製剤。
102. 約1mg/mLから約15mg/mLまでのリン酸緩衝液を含む、実施形態100に記載のインスリン製剤。
103. 約1mg/mLから約10mg/mLまでのリン酸緩衝液を含む、実施形態100に記載のインスリン製剤。
104. 約3mg/mLのリン酸緩衝液を含む、実施形態100に記載のインスリン製剤。
105. 前記緩衝剤がトリスである、実施形態99に記載のインスリン製剤。
106. 約2mMから約50mMまでのトリスを含む、実施形態105に記載のインスリン製剤。
107. 約10mMから約40mMまでのトリスを含む、実施形態105に記載のインスリン製剤。
108. 約20mMから約30mMまでのトリスを含む、実施形態105に記載のインスリン製剤。
109. 約10mM、20mM、30mMまたは40mMのトリスを含む、実施形態105に記載のインスリン製剤。
110. 約7mMのトリスを含む、実施形態105に記載のインスリン製剤。
111. 約10mMのトリスを含む、実施形態105に記載のインスリン製剤。
112. 約20mMのトリスを含む、実施形態105に記載のインスリン製剤。
113. 約30mMのトリスを含む、実施形態105に記載のインスリン製剤。
114. 約40mMのトリスを含む、実施形態105に記載のインスリン製剤。
115. 金属イオンをさらに含む、実施形態1から114のいずれかに記載のインスリン製剤。
116. 金属イオンが亜鉛である、実施形態115に記載のインスリン製剤。
117. 亜鉛:インスリンのモル比が、約0:6から約6:6までである、実施形態116に記載のインスリン製剤。
118. 亜鉛:インスリンのモル比が、約0:6から約5:6までである、実施形態116に記載のインスリン製剤。
119. 亜鉛:インスリンのモル比が、約1:6から約6:6までである、実施形態116に記載のインスリン製剤。
120. 亜鉛:インスリンのモル比が、約2:6から約6:6までである、実施形態116に記載のインスリン製剤。
121. 亜鉛:インスリンのモル比が、約2:6から約5:6までである、実施形態116に記載のインスリン製剤。
122. 亜鉛:インスリンのモル比が、約2.5:6から約4.5:6までである、実施形態116に記載のインスリン製剤。
123. 亜鉛:インスリンのモル比が、約3:6から約4:6までである、実施形態116に記載のインスリン製剤。
124. 亜鉛:インスリンのモル比が、約2:6である、実施形態116に記載のインスリン製剤。
125. 亜鉛:インスリンのモル比が、約2.5:6である、実施形態116に記載のインスリン製剤。
126. 亜鉛:インスリンのモル比が、約3:6である、実施形態116に記載のインスリン製剤。
127. 亜鉛:インスリンのモル比が、約3.1:6である、実施形態116に記載のインスリン製剤。
128. 亜鉛:インスリンのモル比が、約3.2:6である、実施形態116に記載のインスリン製剤。
129. 亜鉛:インスリンのモル比が、約3.3:6である、実施形態116に記載のインスリン製剤。
130. 亜鉛:インスリンのモル比が、約3.4:6である、実施形態116に記載のインスリン製剤。
131. 亜鉛:インスリンのモル比が、約3.5:6である、実施形態116に記載のインスリン製剤。
132. 亜鉛:インスリンのモル比が、約3.6:6である、実施形態116に記載のインスリン製剤。
133. 亜鉛:インスリンのモル比が、約3.7:6である、実施形態116に記載のインスリン製剤。
134. 亜鉛:インスリンのモル比が、約3.8:6である、実施形態116に記載のインスリン製剤。
135. 亜鉛:インスリンのモル比が、約3.9:6である、実施形態116に記載のインスリン製剤。
136. 亜鉛:インスリンのモル比が、約4:6である、実施形態116に記載のインスリン製剤。
137. 亜鉛:インスリンのモル比が、約4.5:6である、実施形態116に記載のインスリン製剤。
138. 亜鉛:インスリンのモル比が、約5:6である、実施形態116に記載のインスリン製剤。
139. 安定化剤をさらに含む、実施形態1から138のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
140. 安定化剤が非イオン性洗剤である、実施形態139に記載のインスリン製剤。
141. 洗剤が、ポリソルベート20(Tween20)またはポリソルベート80(Tween80)である、実施形態140に記載のインスリン製剤。
142. 洗剤が、ポリソルベート20(Tween20)である、実施形態140に記載のインスリン製剤。
143. 洗剤が、ポリソルベート80(Tween80)である、実施形態140に記載のインスリン製剤。
144. 約5から100ppmまで、約10から約50ppmまでまたは約10から約20ppmまでのポリソルベートを含む、実施形態140に記載のインスリン製剤。
145. 1種または複数種の保存剤をさらに含む、実施形態1から144のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
146. 前記保存剤がフェノール化合物である、実施形態145に記載のインスリン製剤。
147. 前記フェノール化合物が、約0から約6mg/mlまでまたは約0から約4mg/mlまでの量で存在する、実施形態146に記載のインスリン製剤。
148. 前記フェノール化合物が、約5から約100mMまでの量で存在する、実施形態146に記載のインスリン製剤。
149. 前記フェノール化合物が、約5から約50mMまでの量で存在する、実施形態146に記載のインスリン製剤。
150. 前記フェノール化合物が、約5から約30mMまでの量で存在する、実施形態146に記載のインスリン製剤。
151. 前記フェノール化合物が、約16mMの量で存在する、実施形態146に記載のインスリン製剤。
152. 前記フェノール化合物が、約14.4mMの量で存在する、実施形態146に記載のインスリン製剤。
153. 前記保存剤がm-クレゾールである、実施形態145に記載のインスリン製剤。
154. m-クレゾールが、約0.5から約4.0mg/ml、または約0.6から約4.0mg/mlまでの量で存在する、実施形態153に記載のインスリン製剤。
155. m-クレゾールが、約5から約100mMまでの量で存在する、実施形態153に記載のインスリン製剤。
156. m-クレゾールが、約5から約50mMまでの量で存在する、実施形態153に記載のインスリン製剤。
157. m-クレゾールが、約5から約30mMまでの量で存在する、実施形態153に記載のインスリン製剤。
158. m-クレゾールが、約16mMの量で存在する、実施形態153に記載のインスリン製剤。
159. m-クレゾールが、約14.4mMの量で存在する、実施形態153に記載のインスリン製剤。
160. グリセロールを、約0.5から約2.5%までの量でさらに含む、実施形態1から159のいずれかに記載のインスリン製剤。
161. グリセロールを、約0.7から約2.0%までの量でさらに含む、実施形態1から160のいずれかに記載のインスリン製剤。
162. グリセロールを、約1.0から約1.5%までの量でさらに含む、実施形態1から161のいずれかに記載のインスリン製剤。
163. グリセロールを、約1.25%の量でさらに含む、実施形態1から162のいずれかに記載のインスリン製剤。
164. pHが、中性から弱塩基性である、実施形態1から163のいずれかに記載のインスリン製剤。
165. pHが、約6.8から約8.0までである、実施形態1から164のいずれかに記載のインスリン製剤。
166. pHが、約6.8である、実施形態1から165のいずれかに記載のインスリン製剤。
167. pHが、約6.9である、実施形態1から166のいずれかに記載のインスリン製剤。
168. pHが、約7.0である、実施形態1から167のいずれかに記載のインスリン製剤。
169. pHが、約7.1である、実施形態1から168のいずれかに記載のインスリン製剤。
170. pHが、約7.2である、実施形態1から169のいずれかに記載のインスリン製剤。
171. pHが、約7.3である、実施形態1から170のいずれかに記載のインスリン製剤。
172. pHが、約7.4である、実施形態1から171のいずれかに記載のインスリン製剤。
173. pHが、約7.5である、実施形態1から172のいずれかに記載のインスリン製剤。
174. pHが、約7.6である、実施形態1から173のいずれかに記載のインスリン製剤。
175. pHが、約7.7である、実施形態1から174のいずれかに記載のインスリン製剤。
176. pHが、約7. 8である、実施形態1から175のいずれかに記載のインスリン製剤。
177. pHが、約7.9である、実施形態1から176のいずれかに記載のインスリン製剤。
178. pHが、約8.0である、実施形態1から177のいずれかに記載のインスリン製剤。
179. 治療を必要とする患者に、実施形態1から178のいずれかに記載の治療活性用量のインスリン製剤を投与することによる、哺乳動物における血中グルコースレベルを低減する方法。
180. 実施形態1から178のいずれかに記載のインスリン製剤を対象に投与することを含む、対象の真性糖尿病の治療方法。
181. 非経口投与のための、実施形態179から180のいずれかに記載の方法。
182. ストレス誘発性高血糖、2型糖尿病、耐糖能の低下、1型糖尿病を含む高血糖、ならびに火傷、手術による傷および同化作用が治療に必要とされる他の疾患または負傷、心筋梗塞、脳卒中、冠動脈性心疾患および他の心血管疾患の治療または予防ならびに重症の糖尿病患者および非糖尿病患者の治療に使用するための、実施形態1から178のいずれかに記載のインスリン製剤。
183. ストレス誘発性高血糖、2型糖尿病、耐糖能の低下、1型糖尿病を含む高血糖、ならびに火傷、手術による傷、心筋梗塞、脳卒中、冠動脈性心疾患および他の心血管疾患の治療または予防に使用するための、実施形態182に記載のインスリン製剤。
184. 高血糖  2型糖尿病および1型糖尿病の治療に使用するための、実施形態182または183に記載のインスリン製剤。
185.
・  インスリン化合物、
・  ニコチン酸系化合物
・  アルギニンおよび
・  緩衝剤
を含むインスリン製剤。
186. インスリン化合物が、ヒトインスリンまたはインスリンアナログである、実施形態185に記載のインスリン製剤。
187. インスリン化合物が、B28Aspヒトインスリン、B3LysB29GluヒトインスリンおよびB28LysB29Proからなる群から選択される、実施形態185または186に記載のインスリン製剤。
188. インスリン化合物がB28Aspヒトインスリンである、実施形態186に記載のインスリン製剤。
189. インスリン化合物が、約0.2mMから約2.0mMまでの量で存在する、実施形態185から188のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
190. インスリン化合物が、約0.6mMから約1.2mMまでの量で存在する、実施形態185から189のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
191. ニコチン酸系化合物が、ニコチンアミド、ニコチン酸、ナイアシン、ナイアシンアミドおよびビタミンB3および/もしくはその塩ならびに/またはその任意の組合せからなる群から選択される、実施形態185から190のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
192. ニコチン酸系化合物がニコチンアミドである、実施形態185から191のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
193. 約1mMから約250mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態192に記載のインスリン製剤。
194. 約1mMから約250mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態192に記載のインスリン製剤。
195. 約80mMから約230mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態192に記載のインスリン製剤。
196. 約10mMから約60mMまでのアルギニンを含む、実施形態185から195のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
197. 約10mMから約30mMまでのアルギニンを含む、実施形態185から196のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
198. 約20mMのアルギニンを含む、実施形態185から197のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
199. 緩衝剤がリン酸緩衝液である、実施形態185から198のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
200. 緩衝剤が、トリスである、実施形態185から199のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
201. 保存剤、等張化剤および/または安定化剤をさらに含み得る、実施形態185から200のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
202. 金属イオンをさらに含む、実施形態185から201のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
203. 金属イオンが亜鉛である、実施形態202に記載のインスリン製剤。
204. 亜鉛:インスリンのモル比が、約0:6から約3.5:6までである、実施形態203に記載のインスリン製剤。
205. 亜鉛:インスリンのモル比が、約2:6から約3:6までである、実施形態203に記載のインスリン製剤。
206. 約7.4未満のpHを有する、実施形態185から205のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
207. 約7.4のpHを有する、実施形態185から205のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
208. 約7.1のpHを有する、実施形態185から205のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
209. B28Aspヒトインスリン;ニコチンアミド;亜鉛;アルギニン;およびリン酸緩衝液を含むインスリン製剤。
210. B28Aspヒトインスリンが約0.6mMから約1.2mMまでの範囲の濃度で存在し、ニコチンアミドが約80mMから約260mMまでの範囲の濃度で存在し、アルギニンが約10mMから約40mMまでの範囲の濃度で存在し、6個のB28Aspヒトインスリン分子当たり約4個未満の亜鉛イオンが存在し、約7.4以下のpHを有する、実施形態209に記載のインスリン製剤。
211. 
a.  約0.6mMから約1.2mMまでの範囲の濃度で存在するB28Aspヒトインスリン;
b.  約80mMから約260mMまでの範囲の濃度で存在するニコチンアミド;
c.  6個のB28Aspヒトインスリン分子当たり約4個未満の亜鉛イオンで存在する亜鉛;
d.  約10mMから約30mMまでの範囲の濃度で存在するアルギニン;および
e.  リン酸緩衝液
から必須になり、約7.1のpHを有するインスリン製剤。
212. 治療を必要とする哺乳動物に、実施形態1から211のいずれか1つに記載の治療活性用量のインスリン製剤を投与することによる、哺乳動物における血中グルコースレベルを低減するための方法。
213. 対象に、実施形態1から211のいずれか1つに記載のインスリン製剤を投与することを含む、対象における真性糖尿病の治療のための方法。
214. ストレス誘発性高血糖、2型糖尿病、耐糖能の低下、1型糖尿病を含む高血糖、ならびに火傷、手術による傷および同化作用が治療に必要とされる他の疾患または負傷、心筋梗塞、脳卒中、冠動脈性心疾患および他の心血管障害の治療または予防ならびに重症の糖尿病患者および非糖尿病患者の治療に使用するための、実施形態1から211のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
215. 高血糖  2型糖尿病および1型糖尿病の治療に使用するための、実施形態1から211のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
【００８４】
本発明のさらなる実施形態は、以下に関する。
216. 
・  インスリン化合物、
・  ニコチン酸系化合物および
・  アルギニン
を含むインスリン製剤。
217. インスリン化合物が、ヒトインスリン、またはインスリンアナログである、実施形態216に記載のインスリン製剤。
218. インスリン化合物が、B28Aspヒトインスリンである、実施形態216または217に記載のインスリン製剤。
219. インスリン化合物がB28LysB29Proヒトインスリンである、実施形態216から218のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
220. インスリン化合物がB3LysB29Gluヒトインスリンである、実施形態216から219のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
221. インスリン化合物が、約0.2mMから約2.0mMまでの量で存在する、実施形態216から220のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
222. インスリン化合物が、約0.3mMから約1.2mMまでの量で存在する、実施形態216から221のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
223. ニコチン酸系化合物が、ニコチンアミド、ニコチン酸、ナイアシン、ナイアシンアミドおよびビタミンB3および/もしくはその塩ならびに/またはその任意の組合せからなる群から選択される、実施形態216から222のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
224. 約1mMから約150mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態216から223のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
225. 約85mMのアルギニンを含む、実施形態216から224のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
226. 金属イオン、保存剤、等張化剤および安定化剤、および緩衝剤をさらに含む、実施形態216から225のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
227. 治療を必要とする患者に、実施形態216から226のいずれか1つに記載の治療活性用量のインスリン製剤を投与することによる、哺乳動物における血中グルコースレベルを低減するための方法。
228. 実施形態216から226のいずれか1つに記載のインスリン製剤を対象に投与することを含む、対象の真性糖尿病の治療方法。
229. ストレス誘発性高血糖、2型糖尿病、耐糖能の低下、1型糖尿病を含む高血糖、ならびに火傷、手術による傷および同化作用が治療に必要とされる他の疾患または負傷、心筋梗塞、脳卒中、冠動脈性心疾患および他の心血管疾患の治療または予防ならびに重症の糖尿病患者および非糖尿病患者の治療に使用するための、実施形態216から226のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
【００８５】
本発明は、以下の実施例によってさらに説明されるが、この実施例は、限定するものとして解釈されるべきではない。
【００８６】
本明細書に引用されている、出版物、特許出願および特許を含むすべての参考文献は、それぞれの参考文献が参照によって組み込まれていることを個々におよび具体的に指示された場合と同程度に、ならびに本明細書において完全に説明された場合と同程度に(法律で認められている最大限の程度に)、それらの内容全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【００８７】
すべての見出しおよび小見出しは、本明細書において便宜上使用されているに過ぎず、決して本発明を限定するものとして解釈されるべきではない。
【００８８】
本明細書において提供されている、任意のおよびすべての実施例または例示的な言葉(例えば、「などの」)の使用は、本発明をより良く明らかにすることを意図するものに過ぎず、他に特に請求しない限り、本発明の範囲を限定するものではない。本明細書中のいかなる言葉も、請求されていない任意の要素を、本発明の実施に必要不可欠なものとして示すものと解釈されるべきではない
【００８９】
本明細書における特許文書の引用および組み込みは、便宜上なされているものに過ぎず、そのような特許文書の妥当性、特許性および/または権利行使可能性についてのいずれの見解も反映するものではない。
【００９０】
本発明は、準拠法で許されているように、本明細書に添付されている特許請求の範囲に記載された主題のすべての改変物および均等物を含む。
【００９１】
(実施例)
(実施例1)
医薬製剤の調製
本発明の医薬製剤は、水性溶液として調製され得る。水性媒体は、例えば、塩化ナトリウムまたはグリセロールで等張化される。さらに、水性媒体は、亜鉛イオン(例えば、酢酸亜鉛または塩化亜鉛として加える)、緩衝剤および保存剤を含有してよい。アルギニンは、Arg、HClとして加えられ得る。製剤のpH値は、所望の値に調整され、約3から約8.5の間、約3から約5または約6.5および約7.5の間であり得、これは問題となっているインスリンの等電点、pIによって決まる。
【００９２】
【表１】
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【００９３】
【表２】
2014501239.tif 000003
【００９４】
【表３】
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【００９５】
【表４】
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【００９６】
(実施例2)
インスリンの化学的安定性の分析
サイズ排除クロマトグラフィー
高分子量タンパク質(HMWP)およびモノマーインスリンアスパルトの定量は、ウォーターズInsulin(300×7.8mm、部品番号wat201549)上で、2.5M酢酸、4mMのL-アルギニンおよび20%(V/V)のアセトニトリルを含有する溶離液を用い、流速1ml/分で40℃にて行った。検出は、波長可変吸光度検出器(Waters486)を用い、276nmで行った。注入量は40μlであり、600μMのヒトインスリン標準であった。HMWPおよび製剤の濃度は、それぞれのサンプリング点で測定した。
【００９７】
逆相クロマトグラフィー(UPLC)
インスリンアスパルトに関連した不純物の決定は、BEH RP C8、2.1×100mmカラム、粒子径1.7μm、Waters part no 186002878を使用し、流速0.5ml/分、40℃にて、220nmでの検出を使用するUPLCシステム上で行った。溶出は以下からなる移動相を用いて行った:
A. 10%(w/w)アセトニトリル、2.8%(w/w)硫酸ナトリウム、0.3%(w/w)o-リン酸、pH3.5。
B. 70%(w/w)アセトニトリル。勾配:0〜11分は、A/Bが73%/27%の定組成、11〜12分は、A/Bが52%/48%への線形変化、13〜15分は、A/Bが73%/27%への線形変化およびA/Bが73%/27%の定組成勾配。
【００９８】
B28イソ-アスパラギン酸、脱アミド体および他の関連した不純物の量は、総吸光度面積に対する百分率で測定される吸光度面積として決定し、総吸光度面積は、保存剤の溶出後に決定した。RP-UPLC法は、Novo Nordiskが販売しているインスリンアスパルト配合薬の品質管理に使用されている分析方法と同等である。
【００９９】
アルギニンを追加すると、形成される分解生成物、特にHMWPおよび脱アミド体の量が減少する。アルギニンの濃度を10から50mMの範囲で増加させると、さらに分解が減少することになる。ThTアッセイにおけるラグタイムとして測定される物理的安定性は、アルギニンを加えると減少し、アルギニンの濃度を増加させると、ますます減少する。以下のTable 4(表4)に示すように、分解生成物の形成の減少に関して、50mMアルギニンの全体的な能力は、50mMグリシン、50mMグルタミン酸または50mMヒスチジンよりも優れている。
【０１００】
本発明のインスリン製剤は、物理的に安定であるのみならず、驚いたことに、化学的にも安定である速効型インスリン製剤を提供する。
【０１０１】
【表５】
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【０１０２】
【表６】
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【０１０３】
【表７】
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【０１０４】
(実施例3)
LYDブタモデルを対象とした薬物動態学的(PK)/薬力学(PD)研究および血漿分析アッセイ
LYDブタを対象としたPK/PD研究
PK/PD研究は、体重55から110kgの間のLYD交雑種である国産雌ブタについて、行った。このブタを、研究開始の少なくとも2日前に、耳静脈を経て頸静脈内にカテーテルを挿入した。研究開始前の最後の食餌は、試験製剤の注射の約18時間前に動物に与え、動物は、絶食期間および試験期間中のすべての時間に、水を自由に摂取した。
【０１０５】
0時間に、試験製剤を首の側面に皮下投与した。投与前に血液試料を採取し、投与後に一定の時間間隔で、カテーテルから試料を採取し、ヘパリンでプレコーティングされた1.5mlガラス管に入れた。血液試料は、遠心によって血漿を分離するまで、氷水中に入れておいた。遠心は、最初の30分以内に、4℃で10分間、3000rpmで行った。血漿試料は、4℃で短時間(2〜3時間)保存または-18℃で長期保存し、グルコースについてはYSIまたはKonelab 30iでおよびインスリンアスパルト濃度についてはLOCIによって分析した。
【０１０６】
インスリンアスパルトの定量化のためのLuminescent Oxygen Channeling Immunoassay(LOCI)法
インスリンアスパルトLOCIは、モノクロナール抗体に基づいたサンドイッチイムノアッセイであり、ユーロピウムでコーティングされたアクセプタービーズとストレプトアビジンでコーティングされたドナービーズである2つのビーズの近接を応用している。アクセプタービーズはヒトインスリンに対する特異的抗体でコーティングされており、血漿試料中のインスリンアスパルトを認識する。第2のビチオン化抗体はインスリンアスパルトに特異的に結合し、それらはストレプトアビジンでコーティングされたビーズと一緒にサンドイッチを作り上げる。ビーズ-会合体-免疫複合体のイルミネーションは、アクセプタービーズにチャネルするドナービーズから一重項酸素を放出し、化学発光を引き起こす。化学発光が測定され、発生した光の量がインスリンアスパルトの濃度に比例する。
【０１０７】
販売されている製品であるNovoRapid(登録商標)と比較して、血漿グルコース低下の初期速度は、本発明の製剤についてはより速い(図3および図4)。同様に、NovoRapid(登録商標)と比較すると、本発明の製剤のインスリン成分の初期吸収速度は著しく速い(図5)。
【０１０８】
(実施例4)
タンパク質配合物の物理的安定性の評価のためのThT繊維化アッセイの一般的概論
ペプチドの低い物理的安定性は、アミロイド繊維形成を引き起こし得、それは、試料中に秩序立った糸状高分子構造として観察され、最終的にゲルの形成をもたらす。このことは、伝統的に、試料の目視検査によって測定されている。しかし、そのような測定は、非常に主観的であり、観察者に依存している。それ故に、小分子指標プローブの適用が、はるかに有利である。チオフラビンT(ThT)はそのようなプローブであり、繊維に結合すると、はっきりと識別できる蛍光サインを示す[Naiki他(1989) Anal. Biochem. 177, 244〜249頁; LeVine (1999) Methods. Enzymol. 309, 274〜284頁]。繊維形成の経時変化は、以下の式を有するS字曲線によって記載することができる[Nielsen他(2001) Biochemistry 40, 6036〜6046頁]。
【０１０９】
【数１】
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【０１１０】
ここで、Fは、時刻tにおけるThT蛍光である。定数t0は、最大蛍光の50%に達するために必要な時間である。繊維形成を説明する2つの重要なパラメーターは、t0-2τによって計算されるラグタイムおよび見かけの速度定数κapp=1/τである。
【０１１１】
【化１】
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【０１１２】
部分的に折りたたまれたペプチドの中間体の形成は、繊維化の一般的な開始機構として提案されている。それらの中間体が核となって鋳型を形成し、その上にさらなる中間体が集まり得、繊維化が進行することはほとんどない。ラグタイムは、臨界量の核が蓄積される間隔に相当し、見かけの速度定数は繊維それ自体が形成される速度である。
【０１１３】
試料調製
試料は、それぞれのアッセイ前に新しく調製した。それぞれの試料の組成は、それぞれの実施例中に記載されている。試料のpHは、濃縮されたNaOHおよびHClO4またはHClの適量を使用して、所望の値に調整した。チオフラビンTを、H2O中のストック溶液から試料に加えて最終濃度を1μMとした。
【０１１４】
200μlの試料アリコートを、96ウェルマイクロタイタープレート(Packard OptiPlate(商標)-96、白色ポリスチレン)に置いた。通常、それぞれの試料について4つまたは8つの複製(1回の試験条件に対応する)が、ウェルの一列に置かれた。プレートは、Scotch Pad(Qiagen)で密封した。
【０１１５】
インキュベーションおよび蛍光測定
所定の温度でのインキュベーション、振盪およびThT蛍光発光の測定は、Fluoroskan Ascent FL蛍光プレートリーダーまたはVarioskanプレートリーダー(Thermo Labsystems)において行った。温度は37℃に調整した。軌道振盪は、すべての提示データにおいて、1mmの振幅で960rpmに合わせた。蛍光測定は444nmフィルターを通した励起および485nmフィルターを通した発光測定を使用して行った。
【０１１６】
それぞれの実行は、プレートをアッセイ温度で10分間インキュベートすることによって開始した。プレートを20分毎に所望の期間測定した。それぞれの測定の間、記載されている通りにプレートを振盪し加熱した。
【０１１７】
データの取り扱い
測定点を、さらなる処理のために、マイクロソフトエクセル形式に保存し、GraphPad Prismを使用して曲線描画およびフィッティングを行った。繊維の非存在下でのThT由来のバックグラウンド発光は無視できるものであった。データ点は、典型的には、4つまたは8つの試料の平均であり、標準偏差のエラーバーとともに示される。同一実験で得られたデータのみ(すなわち同一プレート上の試料)が、同一グラフに提示され、実験の間における繊維化の相対的な測定を保証している。
【０１１８】
データセットは方程式(1)に適合させ得る。しかし、完全なS字曲線が、常に測定時間中に得られるとは限らず、本明細書では、ThT蛍光がバックグラウンドレベルとは異なる時点として、ラグタイムをThT蛍光曲線から目視で決定した。
【０１１９】
初期濃度および最終濃度の測定
試験された製剤のそれぞれにおけるペプチド濃度は、ThT繊維化アッセイへの適用前(「初期」)およびThT繊維化完了後(「ThTアッセイ後」)の両方で測定した。濃度は、プラムリンチド標準を参照として使用し、逆HPLC法によって決定した。完了後の測定前に、複製のそれぞれから150μlを採取し、エッペンドルフ型チューブへ移した。これらを30000Gで40分間遠心した。上清を0.22μmフィルターを通してろ過した後、HPLCシステムに適用した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
2014501239000001.app
【国際調査報告】
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2014501239.tif 000019
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