(57)【要約】本明細書に記載の技術は、細胞死を誘導する方法に関する。本明細書に記載の技術はさらに、二本鎖切断修復の阻害物質を投与することを含む、癌および自己免疫疾患を含む状態の処置に関する。また本明細書において、二本鎖切断修復の阻害物質、およびそのような阻害物質についてスクリーニングする方法も記載する。2014527036.tif 000064
2014527036.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（d）対象由来の生体試料を得る段階；
（e）DNA編集酵素のレベルを測定する段階；および
（f）DNA二本鎖切断修復の阻害物質の治療的有効量を、検出可能なレベルのDNA編集酵素を有している対象に投与する段階
を含む、処置の方法。
【請求項２】
DNA二本鎖切断修復の阻害物質の治療的有効量を、検出可能なレベルのDNA編集酵素を有していると判定された対象に投与する段階
を含む、処置の方法。
【請求項３】
（c）増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞を有している対象を選択する段階；および
（d）DNA二本鎖切断修復の阻害物質の治療的有効量を該対象に投与する段階
を含む、処置の方法であって、該DNA編集酵素の増大したレベルが、健常個体由来の同じ型の細胞におけるDNA編集酵素のレベルよりも高いDNA編集酵素のレベルである、方法。
【請求項４】
前記生体試料が血液細胞を含む、請求項1記載の方法。
【請求項５】
前記生体試料がB細胞を含む、請求項1記載の方法。
【請求項６】
検出可能なレベルまたは増大したレベルのDNA編集酵素を発現する前記細胞におけるDNA編集酵素のレベルが、健常対象由来の正常細胞におけるよりも統計学的に有意に高い、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法。
【請求項７】
前記DNA編集酵素が、
組換え活性化遺伝子1（RAG1）、組換え活性化遺伝子2（RAG2）、胞子形成特異的タンパク質11（SPO11）、アポリポタンパク質B mRNA編集酵素触媒ポリペプチド様（APOBEC）ファミリーメンバー、および活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）
からなる群より選択される、請求項1〜6のいずれか一項記載の方法。
【請求項８】
前記DNA編集酵素が活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）である、請求項7記載の方法。
【請求項９】
増大したレベルのAIDを発現するB細胞における活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）のレベルが、健常対象由来の非活性化B細胞において発現されるAIDのレベルよりも有意に高い、請求項8記載の方法。
【請求項１０】
前記対象がヒト対象である、請求項1〜9のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１】
前記生体試料または前記検出可能なレベルのDNA編集酵素を発現する細胞もしくは前記増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞が癌細胞である、請求項1〜10のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２】
前記対象が癌を有している、請求項1〜11のいずれか一項記載の方法。
【請求項１３】
前記生体試料または前記検出可能なレベルのDNA編集酵素を発現する細胞もしくは前記増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞が自己免疫細胞である、請求項1〜11のいずれか一項記載の方法。
【請求項１４】
前記対象が、
リンパ腫、白血病、および形質細胞腫瘍
からなる群より選択される状態を有している、請求項1〜13のいずれか一項記載の方法。
【請求項１５】
前記リンパ腫が、
非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、MALTリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、およびT細胞リンパ腫
からなる群より選択される、請求項14記載の方法。
【請求項１６】
前記白血病が、
急性リンパ芽球性白血病（ALL）、バーキット白血病、B細胞白血病、B細胞急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病（CLL）、急性骨髄性白血病（AML）、慢性骨髄性白血病（CML）、およびT細胞急性リンパ芽球性白血病（T-ALL）
からなる群より選択される、請求項14記載の方法。
【請求項１７】
前記形質細胞腫瘍が、
多発性骨髄腫、形質細胞性骨髄腫、形質細胞白血病、および形質細胞腫
からなる群より選択される、請求項14記載の方法。
【請求項１８】
前記対象が、
上皮細胞癌、結腸癌、肝癌、胃癌、腸癌、食道癌、乳癌、肺癌、および甲状腺癌
からなる群より選択される癌を有している、請求項12記載の方法。
【請求項１９】
前記対象が自己免疫疾患を有している、請求項1〜10および13のいずれか一項記載の方法。
【請求項２０】
前記自己免疫疾患が、
紅斑性狼蒼、ウィスコット-アルドリッチ症候群、自己免疫性リンパ球増殖症候群、重症筋無力症、関節リウマチ（RA）、紅斑性狼蒼性腎炎、多発性硬化症、全身性紅斑性狼蒼、円板状狼蒼、亜急性皮膚紅斑性狼蒼、凍傷状紅斑性狼蒼を含む皮膚紅斑性狼蒼、慢性関節炎、シェーグレン症候群、炎症性慢性鼻副鼻腔炎、大腸炎、セリアック病、炎症性腸疾患、バレット食道、炎症性胃炎自己免疫性腎炎、自己免疫性血管炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性心炎、自己免疫性脳炎、および自己免疫媒介性血液疾患
からなる群より選択される、請求項19記載の方法。
【請求項２１】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
Rad51、Rad51AP1、Rad51B、Rad51C、Rad51D、XRCC2、XRCC3、RAD54、RAD52、BRCA1、BRCA2、ATM、ATR、MRE11、RAD50、NBS1、WRN、BLM、RECQ4、LIG4、XRCC4、PRKDC、DCLRE1C、XRCC6、XRCC5、およびXLF
からなる群より選択される1つまたは複数の遺伝子の発現または活性を減少させる、請求項1〜20のいずれか一項記載の方法。
【請求項２２】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
小分子、タンパク質、ペプチド、抗体、抗体断片、タンパク質結合タンパク質、リボ核酸、デオキシリボ核酸、アプタマー、ペプチド核酸（PNA）、およびロックド核酸（LNA）
からなる群より選択される、請求項1〜21のいずれか一項記載の方法。
【請求項２３】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、スチルベン、スチルベノイド、またはその誘導体である、請求項1〜20のいずれか一項記載の方法。
【請求項２４】
前記スチルベンまたは前記スチルベン誘導体が、式Vの化合物、またはその立体異性体、鏡像異性体、プロドラッグ、もしくは薬学的に許容される塩である、請求項23記載の方法：
2014527036.tif 000051
式中、R1は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R2は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R3は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R4は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R5は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R6は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R7は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R8は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R9は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R10は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
Xは、C(R21)2、-C(O)N(R22)-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-SO2- -CH(R11)CH(R12)-、-C(R11)=C(R12)-、および
2014527036.tif 000052
からなる群より選択され得；
R11は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2NC(O)R21、NC(O)OR21、NC(S)R21、NC(S)N(R22)2、NSO2R21、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R12は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2NC(O)R21、NC(O)OR21、NC(S)R21、NC(S)N(R22)2、NSO2R21、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
各R21は、水素、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群より独立して選択され得；
各R22は、水素、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群より独立して選択され得る。
【請求項２５】
前記スチルベン誘導体が4,4'ジイソチオシアノスチルベン-2,2'-ジスルホン酸（DIDS）である、請求項21記載の方法。
【請求項２６】
前記スチルベンまたは前記スチルベン誘導体が、
(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ジアセトアミド；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(2-メチルプロパンアミド)；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(2-メトキシアセトアミド)；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ジメタンスルホンアミド；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ジシクロプロパンスルホンアミド；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(プロパン-2-スルホンアミド)；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(プロパン-2-スルホンアミド)；(E)-N-(4-(4-アミノスチリル)フェニル)プロパン-2-スルホンアミド；(E)-1,1'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(3-メチルチオ尿素)；(E)-1,1'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(3-イソプロピルチオ尿素)；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)アセトアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)イソブチルアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-2-メトキシアセトアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)メタンスルホンアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)シクロプロパンスルホンアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)プロパン-2-スルホンアミド；N'-(4-{(E)-2-[4-(ジメチルアミノ)フェニル]-1-エテニル}フェニル)-N,N-ジメチルスルファミド；(E)-1-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-3-メチルチオ尿素；(E)-1-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-3-イソプロピルチオ尿素；(E)-1-シクロプロピル-3-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)チオ尿素；(E)-1-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-3-メチル尿素；(E)-1-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-3-イソプロピル尿素；(E)-1-シクロプロピル-3-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)尿素；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-アセトアミドベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-イソブチルアミドベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(2-メトキシアセトアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(シクロプロパンスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(1-メチルエチルスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-アセトアミドベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-イソブチルアミドベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(2-メトキシアセトアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(メチルスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(シクロプロパンスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(1-メチルエチルスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-シクロプロピルチオウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-エチルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)��ス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-イソブチルアミド-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-イソブチルアミド-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-イソブチルアミド-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(2-メトキシアセトアミド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(2-メトキシアセトアミド)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナ���スチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(メチルスルホンアミド)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-エチルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-イソブチルアミド-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルウレイド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-エチルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(2-メトキシアセトアミド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-メチルチオウレイド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルウレイド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-メチルチオウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルチオウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-エチルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-4,4'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(N-メチルベンズアミド)；(E)-4,4'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(N-イソプロピルベンズアミド)；(E)-4,4'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(N,N-ジメチルベンズアミド)；(E)-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(モルホリノメタノン)；(E)-5-(4-ヒドロキシスチリル)ベンゼン-1,3-ジオール(3,5,4'-トリヒドロキシ-トランス-スチルベン)；およびレスベラトロール
からなる群より選択される、請求項21記載の方法。
【請求項２７】
前記スチルベンまたは前記スチルベン誘導体が、
(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(プロパン-2-スルホンアミド)；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)シクロプロパンスルホンアミド；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(ジメチルアミノ-スルホンアミド)；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)プロパン-2-スルホンアミド；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-4,4'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(N-メチルベンズアミド)；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホネート)；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；および(E)-5-アセトアミド-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート
からなる群より選択される、請求項21記載の方法。
【請求項２８】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
4-メチルキナゾリン-2-カルボキサミド；ベンズ[h]イソキノリン-6-アミン；5,6-ジメチル-2-メルカプトメチルベンズイミダゾール；(E)-1-(2-ヒドロキシフェニル)-3-(ピリジン-3-イル)プロパ-2-エン-1-オン；N4-ブチル-6-クロロピリミジン-2,4-ジアミン；1-テルモプシン；6-アミノ-5-ニトロソ-2-フェニルピリミジン-4(1H)-オン；および4-(2-アミノ-4-ニトロフェニルアミノ)フェニル
からなる群より選択される、請求項20記載の方法。
【請求項２９】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
7-アザインドール-3-カルボキシアルデヒド；2-アミノ-4-フェニルフェノール；3-(1-メチル-3-ピロリジニル)インドール；1-メチル-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]キノロン；2-アミノ-5-ニトロ-1H-ベンズイミダゾール；2-(5-ニトロ-2-フルフリリデン)アミノエタノール-N-オキシド；ニフラトロン；α-メルカプト-N,2-ナフチルアセトアミド；1-テルモプシン；N4-ブチル-6-クロロ-2,4-ピリミジンジアミン；2-(2-ヒドロキシ-6-プロパン-2-イルオキシ-シクロヘキシル)酢酸；6-アミノ-5-ニトロソ-2-フェニル-1H-ピリミジン-4-オン；4-アミノ-2-ヒドロキシフェニル)アルソン酸；スピロ[1,2-ジヒドロインデン-3,5'-イミダゾリジン]-2',4'-ジオン；N〜4〜-(4-メトキシフェニル)-6-メチルピリミジン-2,4-ジアミン；2-アミノ-9-ペンチル-3H-プリン-6-チオン；2-(4-メトキシフェニル)-3-(ピリジン-3-イル)プロパ-2-エンニトリル；2-クロロピリミジン-4,6-ジカルボキサミド；2-アミノ-3H-フェノキサジン-3-オン；2-メチル-N-ベンジル-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-アミン；4-(ベンジルアミノ)-2-メチル-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン；2-アミノ-1-ナフタレンスルホン酸；N-sec-ブチル-3-メチルベンズアミド；ベンズ[h]イソキノリン-6-アミン；および2-(2-メチルシクロヘキシリデン)ヒドラジンカルボキサミド
からなる群より選択される、請求項20記載の方法。
【請求項３０】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が抗体またはポリペプチドであり、該抗体または該ポリペプチドが、抗体の抗原結合断片またはタンパク質結合タンパク質を含む、請求項1〜20のいずれか一項記載の方法。
【請求項３１】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
miRNA、shRNA、siRNA、amiRNA、dsRNA、アンチセンスRNA、またはリボザイム
からなる群より選択されるRNAi物質である、請求項1〜20のいずれか一項記載の方法。
【請求項３２】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項1〜31のいずれか一項記載の方法。
【請求項３３】
治療的物質を投与することをさらに含む、請求項1〜32のいずれか一項記載の方法。
【請求項３４】
検出可能なレベルまたは増大したレベルを有していることが疑われる前記対象から得られた生体試料中のDNA編集酵素ポリペプチド、mRNA、または活性のレベルを測定することにより、検出可能なレベルまたは増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞を有している該対象を特定する、請求項1〜33のいずれか一項記載の方法。
【請求項３５】
増大したレベルを有していることが疑われる前記対象から得られた生体試料中のDNA編集酵素ポリペプチド、mRNA、または活性のレベルを測定すること、および、そのレベルを、健常対象から得られた生体試料中で見られるDNA編集酵素ポリペプチド、mRNA、または活性のレベルと比べることにより、検出可能なレベルまたは増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞を有している該対象を特定し、試験試料中のDNA編集酵素ポリペプチド、mRNA、または活性の量の増加により、DNA二本鎖切断修復の阻害物質での処置を必要とする対象が示される、請求項1〜34のいずれか一項記載の方法。
【請求項３６】
前記DNA編集酵素ポリペプチドのレベルを測定することが、
ウェスタンブロット、免疫沈降、酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）、放射性免疫測定法（RIA）、サンドイッチアッセイ法、タンパク質インサイチューアレイ、免疫組織学的染色、ラジオイムノメトリックアッセイ法、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ法、インサイチュー免疫測定法、沈降反応、免疫蛍光測定法、定量的インサイチュータンパク質分析（AQUA）、質量分析、および免疫電気泳動アッセイ法
からなる群より選択される1つまたは複数のアッセイ法を用いることを含む、請求項34または35記載の方法。
【請求項３７】
前記DNA編集酵素ポリペプチドのレベルを測定することがアッセイ法を用いることを含み、該アッセイ法が、抗体、抗体断片、タンパク質結合タンパク質、または、該DNA編集酵素ポリペプチドに結合するペプチドを用いる、請求項34〜36のいずれか一項記載の方法。
【請求項３８】
前記抗体または前記抗体断片がモノクローナル抗体である、請求項34〜37のいずれか一項記載の方法。
【請求項３９】
前記抗体、前記抗体断片、前記タンパク質結合タンパク質、または、前記DNA編集酵素ポリペプチドに結合するペプチドを、検出可能な標識で標識する、請求項34〜38のいずれか一項記載の方法。
【請求項４０】
前記DNA編集酵素mRNAのレベルを測定することが、
RT-PCR、定量的RT-PCR、ハイブリダイゼーションアッセイ法、ノーザンブロット、マイクロアレイに基づく発現解析、転写増幅、自家持続配列複製、ハイスループット配列決定法、およびRNA-Seq
からなる群より選択される1つまたは複数のアッセイ法を用いることを含む、請求項34または35記載の方法。
【請求項４１】
前記DNA編集酵素活性の活性を測定することが、
ハイブリダイゼーション、ハイスループット配列決定法、エクソーム配列決定法、蛍光インサイチューハイブリダイゼーション（FISH）、PCR、およびゲノム配列決定法
からなる群より選択される1つまたは複数のアッセイ法を用いて、ゲノムまたはその一部の全突然変異状態を判定することを含み、正常な突然変異状態よりも2％またはそれ以上大きい突然変異状態がDNA編集酵素の活性を示す、請求項1〜40のいずれか一項記載の方法。
【請求項４２】
前記活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）の活性を測定することが、
ハイブリダイゼーション、ハイスループット配列決定法、エクソーム配列決定法、蛍光インサイチューハイブリダイゼーション（FISH）、PCR、およびゲノム配列決定法
からなる群より選択される1つまたは複数のアッセイ法を用いて、標的遺伝子であるIGH、BCL6、MYC、BCL11A、CD93、PIM1、および/またはPAX5における高頻度突然変異の状態を判定することを含む、請求項35、36、または41のいずれか一項記載の方法。
【請求項４３】
前記活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）の活性を測定することが、ホスホ-H2AXアッセイ法、53BP1アッセイ法、またはRAD51アッセイ法を用いることを含む、請求項35または36記載の方法。
【請求項４４】
細胞死を引き起こす方法であって、
（e）細胞にDNA編集酵素の有効量を投与する段階；および
（f）その後、段階（a）の細胞をDNA二本鎖切断修復の阻害物質と接触させる段階
を含み、それにより細胞死を引き起こす、方法。
【請求項４５】
細胞を細胞死に対して感受性にさせる方法であって、
（g）DNA二本鎖切断修復の阻害物質を用いて細胞を細胞死に対して感受性にさせるために、対象にDNA編集酵素の治療的有効量を投与する段階；および
（h）その後、該対象にDNA二本鎖切断修復の阻害物質を投与する段階
を含む、方法。
【請求項４６】
ポリペプチド、DNA編集酵素をコードする核酸、および、DNA編集酵素をコードする核酸を含むベクター
からなる群より選択される形態で前記DNA編集酵素を投与する、請求項44記載の方法。
【請求項４７】
前記DNA編集酵素が、
組換え活性化遺伝子1（RAG1）、組換え活性化遺伝子1（RAG2）、胞子形成特異的タンパク質11（SPO11）、アポリポタンパク質B mRNA編集酵素触媒ポリペプチド様（APOBEC）ファミリーメンバー、および活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）
からなる群より選択される、請求項44〜46のいずれか一項記載の方法。
【請求項４８】
前記DNA編集酵素が活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）である、請求項44〜47のいずれか一項記載の方法。
【請求項４９】
試験作用物質がDNA二本鎖切断修復の阻害物質であるかどうかを判定する方法であって、
（a）DNA編集酵素を発現する細胞を試験作用物質と接触させる段階；および
（b）段階（a）の細胞の細胞生存度を決定する段階
を含み、細胞生存度の減少により、該試験作用物質がDNA二本鎖切断修復の阻害物質であることが示される、方法。
【請求項５０】
（c）DNA編集酵素を発現しない細胞を前記試験作用物質と接触させる段階；
（d）段階（c）の細胞の細胞生存度を決定する段階；および
（e）段階（b）の生存細胞の比率を段階（d）の生存細胞の比率で割ることにより比を求める段階
をさらに含み、
0.8未満の比により、該試験作用物質がDNA二本鎖切断修復の阻害物質であることが示される、請求項49記載の方法。
【請求項５１】
前記DNA編集酵素を発現する細胞が、AIDを発現する細胞である、請求項49または50記載の方法。
【請求項５２】
前記AIDを発現する細胞が、刺激されたB細胞である、請求項51記載の方法。
【請求項５３】
前記細胞が癌細胞である、請求項49〜52のいずれか一項記載の方法。
【請求項５４】
前記細胞が、DNA編集酵素をコードする核酸ベクターでトランスフェクトされている、請求項49〜53のいずれか一項記載の方法。
【請求項５５】
前記細胞が、CH12-F3、3T3、CH12F3、Caco-2、CCRF-CEM、CHO、CH12-F3、COS-7、HCT 116、HEK 293、HL-60、HepG2、Jurkat、KG-1、K-562、MCF-7、MDCK、MG-63、Mo-B、MOLT-4、Ramos（RA 1）、およびU2-OSからなる群より選択される細胞株である、請求項49〜54のいずれか一項記載の方法。
【請求項５６】
前記細胞が自己免疫細胞である、請求項49〜55のいずれか一項記載の方法。
【請求項５７】
Xがナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛である、式XXIVの化合物、その立体異性体またはプロドラッグ：
2014527036.tif 000053
。
【請求項５８】
Xがナトリウムである、請求項57記載の化合物。
【請求項５９】
式VIIIの化合物、その立体異性体、プロドラッグ、または薬学的に許容される塩：
2014527036.tif 000054
。
【請求項６０】
式Xの化合物、その立体異性体、プロドラッグ、または薬学的に許容される塩：
2014527036.tif 000055
。
【請求項６１】
Xがナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛である、式XXVの化合物、その立体異性体、またはプロドラッグ：
2014527036.tif 000056
。
【請求項６２】
Xがナトリウムである、請求項61記載の化合物。
【請求項６３】
Xがナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛である、式XXXIの化合物、その立体異性体、またはプロドラッグ：
2014527036.tif 000057
。
【請求項６４】
Xがナトリウムである、請求項63記載の化合物。
【請求項６５】
Xがナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛である、式XXXIIの化合物、その立体異性体、またはプロドラッグ：
2014527036.tif 000058
。
【請求項６６】
Xがナトリウムである、請求項65記載の化合物。
【請求項６７】
Xがナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛である、式XXXIIIの化合物、その立体異性体、またはプロドラッグ：
2014527036.tif 000059
。
【請求項６８】
Xがナトリウムである、請求項67記載の化合物。
【請求項６９】
Xがナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛である、式XXXIVの化合物、その立体異性体、またはプロドラッグ：
2014527036.tif 000060
。
【請求項７０】
Xがナトリウムである、請求項69記載の化合物。
【請求項７１】
Xがナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛である、式XXXVの化合物、その立体異性体、またはプロドラッグ：
2014527036.tif 000061
。
【請求項７２】
Xがナトリウムである、請求項71記載の化合物。
【請求項７３】
検出可能なレベルのDNA編集酵素を有していると判定された対象を処置するための、DNA二本鎖切断修復の阻害物質の使用。
【請求項７４】
前記対象が、
（c）対象由来の生体試料を得ること；および
（d）DNA編集酵素のレベルを測定すること
によって、検出可能なレベルのDNA編集酵素を有していると判定される、請求項73記載の使用。
【請求項７５】
対象を処置するための、DNA二本鎖切断修復の阻害物質の使用であって、
方法が、
（c）増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞を有している対象を選択する段階；および
（d）DNA二本鎖切断修復の阻害物質の治療的有効量を該対象に投与する段階
を含み、該DNA編集酵素の増大したレベルが、健常個体由来の同じ型の細胞におけるDNA編集酵素のレベルよりも高いDNA編集酵素のレベルである、使用。
【請求項７６】
前記生体試料が血液細胞を含む、請求項73記載の使用。
【請求項７７】
前記生体試料がB細胞を含む、請求項73記載の使用。
【請求項７８】
検出可能なレベルまたは増大したレベルのDNA編集酵素を発現する前記細胞におけるDNA編集酵素のレベルが、健常対象由来の正常細胞におけるよりも統計学的に有意に高い、請求項73〜77のいずれか一項記載の使用。
【請求項７９】
前記DNA編集酵素が、
組換え活性化遺伝子1（RAG1）、組換え活性化遺伝子2（RAG2）、胞子形成特異的タンパク質11（SPO11）、アポリポタンパク質B mRNA編集酵素触媒ポリペプチド様（APOBEC）ファミリーメンバー、および活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）
からなる群より選択される、請求項73〜78のいずれか一項記載の使用。
【請求項８０】
前記DNA編集酵素が活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）である、請求項79記載の使用。
【請求項８１】
増大したレベルの活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）を発現するB細胞におけるAIDのレベルが、健常対象健常対象由来の非活性化B細胞において発現されるAIDのレベルよりも有意に高い、請求項80記載の使用。
【請求項８２】
前記対象がヒト対象である、請求項73〜81のいずれか一項記載の使用。
【請求項８３】
前記生体試料または前記検出可能なレベルのDNA編集酵素を発現する細胞もしくは前記増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞が癌細胞である、請求項73〜82のいずれか一項記載の使用。
【請求項８４】
前記対象が癌を有している、請求項73〜83のいずれか一項記載の使用。
【請求項８５】
前記生体試料または前記検出可能なレベルのDNA編集酵素を発現する細胞もしくは前記増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞が自己免疫細胞である、請求項73〜84のいずれか一項記載の使用。
【請求項８６】
前記対象が、
リンパ腫、白血病、および形質細胞腫瘍
からなる群より選択される状態を有している、請求項73〜85のいずれか一項記載の使用。
【請求項８７】
前記リンパ腫が、
非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、MALTリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、およびT細胞リンパ腫
からなる群より選択される、請求項86記載の使用。
【請求項８８】
前記白血病が、
急性リンパ芽球性白血病（ALL）、バーキット白血病、B細胞白血病、B細胞急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病（CLL）、急性骨髄性白血病（AML）、慢性骨髄性白血病（CML）、およびT細胞急性リンパ芽球性白血病（T-ALL）
からなる群より選択される、請求項86記載の使用。
【請求項８９】
前記形質細胞腫瘍が、
多発性骨髄腫、形質細胞性骨髄腫、形質細胞白血病、および形質細胞腫
からなる群より選択される、請求項86記載の使用。
【請求項９０】
前記対象が、
上皮細胞癌、結腸癌、肝癌、胃癌、腸癌、食道癌、乳癌、肺癌、および甲状腺癌
からなる群より選択される癌を有している、請求項86記載の使用。
【請求項９１】
前記対象が自己免疫疾患を有している、請求項73〜82および85のいずれか一項記載の使用。
【請求項９２】
前記自己免疫疾患が、
紅斑性狼蒼、ウィスコット-アルドリッチ症候群、自己免疫性リンパ球増殖症候群、重症筋無力症、関節リウマチ（RA）、紅斑性狼蒼性腎炎、多発性硬化症、全身性紅斑性狼蒼、円板状狼蒼、亜急性皮膚紅斑性狼蒼、凍傷状紅斑性狼蒼を含む皮膚紅斑性狼蒼、慢性関節炎、シェーグレン症候群、炎症性慢性鼻副鼻腔炎、大腸炎、セリアック病、炎症性腸疾患、バレット食道、炎症性胃炎自己免疫性腎炎、自己免疫性血管炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性心炎、自己免疫性脳炎、および自己免疫媒介性血液疾患
からなる群より選択される、請求項91記載の使用。
【請求項９３】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
Rad51、Rad51AP1、Rad51B、Rad51C、Rad51D、XRCC2、XRCC3、RAD54、RAD52、BRCA1、BRCA2、ATM、ATR、MRE11、RAD50、NBS1、WRN、BLM、RECQ4、LIG4、XRCC4、PRKDC、DCLRE1C、XRCC6、XRCC5、およびXLF
からなる群より選択される1つまたは複数の遺伝子の発現または活性を減少させる、請求項73〜92のいずれか一項記載の使用。
【請求項９４】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
小分子、タンパク質、ペプチド、抗体、抗体断片、タンパク質結合タンパク質、リボ核酸、デオキシリボ核酸、アプタマー、ペプチド核酸（PNA）、およびロックド核酸（LNA）
からなる群より選択される、請求項73〜93のいずれか一項記載の使用。
【請求項９５】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、スチルベン、スチルベノイド、またはその誘導体である、請求項73〜93のいずれか一項記載の使用。
【請求項９６】
前記スチルベンまたは前記スチルベン誘導体が、式Vの化合物、またはその立体異性体、鏡像異性体、プロドラッグ、もしくは薬学的に許容される塩である、請求項95記載の使用：
2014527036.tif 000062
式中、R1は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R2は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R3は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R4は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R5は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R6は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R7は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R8は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R9は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R10は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
Xは、C(R21)2、-C(O)N(R22)-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-SO2- -CH(R11)CH(R12)-、-C(R11)=C(R12)-、および
2014527036.tif 000063
からなる群より選択され得；
R11は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2NC(O)R21、NC(O)OR21、NC(S)R21、NC(S)N(R22)2、NSO2R21、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R12は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2NC(O)R21、NC(O)OR21、NC(S)R21、NC(S)N(R22)2、NSO2R21、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
各R21は、水素、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群より独立して選択され得；
各R22は、水素、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群より独立して選択され得る。
【請求項９７】
前記スチルベン誘導体が4,4'ジイソチオシアノスチルベン-2,2'-ジスルホン酸（DIDS）である、請求項95記載の使用。
【請求項９８】
前記スチルベンまたは前記スチルベン誘導体が、
(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ジアセトアミド；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(2-メチルプロパンアミド)；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(2-メトキシアセトアミド)；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ジメタンスルホンアミド；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ジシクロプロパンスルホンアミド；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(プロパン-2-スルホンアミド)；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(プロパン-2-スルホンアミド)；(E)-N-(4-(4-アミノスチリル)フェニル)プロパン-2-スルホンアミド；(E)-1,1'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(3-メチルチオ尿素)；(E)-1,1'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(3-イソプロピルチオ尿素)；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)アセトアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)イソブチルアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-2-メトキシアセトアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)メタンスルホンアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)シクロプロパンスルホンアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)プロパン-2-スルホンアミド；N'-(4-{(E)-2-[4-(ジメチルアミノ)フェニル]-1-エテニル}フェニル)-N,N-ジメチルスルファミド；(E)-1-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-3-メチルチオ尿素；(E)-1-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-3-イソプロピルチオ尿素；(E)-1-シクロプロピル-3-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)チオ尿素；(E)-1-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-3-メチル尿素；(E)-1-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-3-イソプロピル尿素；(E)-1-シクロプロピル-3-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)尿素；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-アセトアミドベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-イソブチルアミドベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(2-メトキシアセトアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(シクロプロパンスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(1-メチルエチルスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-アセトアミドベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-イソブチルアミドベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(2-メトキシアセトアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(メチルスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(シクロプロパンスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(1-メチルエチルスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-シクロプロピルチオウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-エチルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)��ス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-イソブチルアミド-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-イソブチルアミド-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-イソブチルアミド-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(2-メトキシアセトアミド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(2-メトキシアセトアミド)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナ���スチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(メチルスルホンアミド)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-エチルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-イソブチルアミド-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルウレイド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-エチルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(2-メトキシアセトアミド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-メチルチオウレイド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルウレイド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-メチルチオウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルチオウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-エチルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-4,4'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(N-メチルベンズアミド)；(E)-4,4'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(N-イソプロピルベンズアミド)；(E)-4,4'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(N,N-ジメチルベンズアミド)；(E)-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(モルホリノメタノン)；(E)-5-(4-ヒドロキシスチリル)ベンゼン-1,3-ジオール(3,5,4'-トリヒドロキシ-トランス-スチルベン)；およびレスベラトロール
からなる群より選択される、請求項95記載の使用。
【請求項９９】
前記スチルベンまたは前記スチルベン誘導体が、
(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(プロパン-2-スルホンアミド)；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)シクロプロパンスルホンアミド；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(ジメチルアミノ-スルホンアミド)；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)プロパン-2-スルホンアミド；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-4,4'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(N-メチルベンズアミド)；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホネート)；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；および(E)-5-アセトアミド-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート
からなる群より選択される、請求項95記載の使用。
【請求項１００】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
4-メチルキナゾリン-2-カルボキサミド；ベンズ[h]イソキノリン-6-アミン；5,6-ジメチル-2-メルカプトメチルベンズイミダゾール；(E)-1-(2-ヒドロキシフェニル)-3-(ピリジン-3-イル)プロパ-2-エン-1-オン；N4-ブチル-6-クロロピリミジン-2,4-ジアミン；1-テルモプシン；6-アミノ-5-ニトロソ-2-フェニルピリミジン-4(1H)-オン；および4-(2-アミノ-4-ニトロフェニルアミノ)フェニル
からなる群より選択される、請求項94記載の使用。
【請求項１０１】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
7-アザインドール-3-カルボキシアルデヒド；2-アミノ-4-フェニルフェノール；3-(1-メチル-3-ピロリジニル)インドール；1-メチル-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]キノロン；2-アミノ-5-ニトロ-1H-ベンズイミダゾール；2-(5-ニトロ-2-フルフリリデン)アミノエタノール-N-オキシド；ニフラトロン；α-メルカプト-N,2-ナフチルアセトアミド；1-テルモプシン；N4-ブチル-6-クロロ-2,4-ピリミジンジアミン；2-(2-ヒドロキシ-6-プロパン-2-イルオキシ-シクロヘキシル)酢酸；6-アミノ-5-ニトロソ-2-フェニル-1H-ピリミジン-4-オン；4-アミノ-2-ヒドロキシフェニル)アルソン酸；スピロ[1,2-ジヒドロインデン-3,5'-イミダゾリジン]-2',4'-ジオン；N〜4〜-(4-メトキシフェニル)-6-メチルピリミジン-2,4-ジアミン；2-アミノ-9-ペンチル-3H-プリン-6-チオン；2-(4-メトキシフェニル)-3-(ピリジン-3-イル)プロパ-2-エンニトリル；2-クロロピリミジン-4,6-ジカルボキサミド；2-アミノ-3H-フェノキサジン-3-オン；2-メチル-N-ベンジル-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-アミン；4-(ベンジルアミノ)-2-メチル-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン；2-アミノ-1-ナフタレンスルホン酸；N-sec-ブチル-3-メチルベンズアミド；ベンズ[h]イソキノリン-6-アミン；および2-(2-メチルシクロヘキシリデン)ヒドラジンカルボキサミド
からなる群より選択される、請求項94記載の使用。
【請求項１０２】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が抗体またはポリペプチドであり、該抗体または該ポリペプチドが、抗体の抗原結合断片、またはタンパク質結合タンパク質を含む、請求項73〜94のいずれか一項記載の使用。
【請求項１０３】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
miRNA、shRNA、siRNA、amiRNA、dsRNA、アンチセンスRNA、またはリボザイム
からなる群より選択されるRNAi物質である、請求項73〜94のいずれか一項記載の使用。
【請求項１０４】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項73〜103のいずれか一項記載の使用。
【請求項１０５】
治療的物質を投与することをさらに含む、請求項73〜104のいずれか一項記載の使用。
【請求項１０６】
検出可能なレベルまたは増大したレベルを有していることが疑われる前記対象から得られた生体試料中のDNA編集酵素ポリペプチド、mRNA、または活性のレベルを測定することによって、検出可能なレベルまたは増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞を有している該対象を特定する、請求項73〜105のいずれか一項記載の使用。
【請求項１０７】
増大したレベルを有していることが疑われる前記対象から得られた生体試料中のDNA編集酵素ポリペプチド、mRNA、または活性のレベルを測定すること、および、そのレベルを、健常対象から得られた生体試料中で見られるDNA編集酵素ポリペプチド、mRNA、または活性のレベルと比べることにより、検出可能なレベルまたは増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞を有している該対象を特定し、試験試料中のDNA編集酵素ポリペプチド、mRNA、または活性の量の増加により、DNA二本鎖切断修復の阻害物質での処置を必要とする対象が示される、請求項73〜106のいずれか一項記載の使用。
【請求項１０８】
前記DNA編集酵素ポリペプチドのレベルを測定することが、
ウェスタンブロット、免疫沈降、酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）、放射性免疫測定法（RIA）、サンドイッチアッセイ法、タンパク質インサイチューアレイ、免疫組織学的染色、ラジオイムノメトリックアッセイ法、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ法、インサイチュー免疫測定法、沈降反応、免疫蛍光測定法、定量的インサイチュータンパク質分析（AQUA）、質量分析、および免疫電気泳動アッセイ法
からなる群より選択される1つまたは複数のアッセイ法を用いることを含む、請求項106または107記載の使用。
【請求項１０９】
前記DNA編集酵素ポリペプチドのレベルを測定することがアッセイ法を用いることを含み、該アッセイ法が、抗体、抗体断片、タンパク質結合タンパク質、または、DNA編集酵素ポリペプチドに結合するペプチドを用いる、請求項106または107記載の使用。
【請求項１１０】
前記抗体または前記抗体断片がモノクローナル抗体である、請求項106〜109のいずれか一項記載の使用。
【請求項１１１】
前記抗体、前記抗体断片、前記タンパク質結合タンパク質、または、前記DNA編集酵素ポリペプチドに結合するペプチドを、検出可能な標識で標識する、請求項106〜110のいずれか一項記載の使用。
【請求項１１２】
前記DNA編集酵素mRNAのレベルを測定することが、
RT-PCR、定量的RT-PCR、ハイブリダイゼーションアッセイ法、ノーザンブロット、マイクロアレイに基づく発現解析、転写増幅、自家持続配列複製、ハイスループット配列決定法、およびRNA-Seq
からなる群より選択される1つまたは複数のアッセイ法を用いることを含む、請求項106または107記載の使用。
【請求項１１３】
前記DNA編集酵素活性の活性を測定することが、
ハイブリダイゼーション、ハイスループット配列決定法、エクソーム配列決定法、蛍光インサイチューハイブリダイゼーション（FISH）、PCR、およびゲノム配列決定法
からなる群より選択される1つまたは複数のアッセイ法を用いて、ゲノムまたはその一部の全突然変異状態を判定することを含み、正常な突然変異状態よりも2％またはそれ以上大きい突然変異状態がDNA編集酵素の活性を示す、請求項106または107記載の使用。
【請求項１１４】
前記活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）の活性を測定することが、
ハイブリダイゼーション、ハイスループット配列決定法、エクソーム配列決定法、蛍光インサイチューハイブリダイゼーション（FISH）、PCR、およびゲノム配列決定法
からなる群より選択される1つまたは複数のアッセイ法を用いて、標的遺伝子であるIGH、BCL6、MYC、BCL11A、CD93、PIM1、および/またはPAX5における高頻度突然変異の状態を判定することを含む、請求項106、107、および113のいずれか一項記載の使用。
【請求項１１５】
前記活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）の活性を測定することが、ホスホ-H2AXアッセイ法、53BP1アッセイ法、またはRAD51アッセイ法を用いることを含む、請求項106または107記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、2011年6月27日提出の米国特許仮出願第61/501,522号の35 U.S.C. §119(e)の下での恩典を主張し、その内容は全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０００２】
配列表
本出願は、EFS-Webを介し、ASCIIフォーマットで提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。2012年6月7日に作成されたこのASCIIコピーは、060636PC.txtと命名され、サイズは547,092バイトである。
【０００３】
技術分野
本明細書に記載の技術は、活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）を発現する癌および自己免疫疾患を、DNA二本鎖切断修復メカニズムを阻害することにより処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
背景
2010年に、白血病、リンパ腫および多発性骨髄腫の新しい症例は推定137,000例あり、米国だけでこれらの癌による死亡は54,000例を超える。白血病/リンパ腫処置における医療の現在の標準は、集中的な長期化学療法に関わることが多く、これは患者にとって身体への負担が重くなり得る。通常の化学療法の一般的副作用には、免疫系の崩壊、骨髄抑制、骨髄破壊、悪心、疲労、肝毒性、体重減少、脱毛、長期認知障害、および治療関連の続発性腫瘍が含まれる。標準的化学療法の主な問題は、癌患者におけるそれ以外は健常である細胞および組織に与える損傷である。現行の処置は長期緩解を得られないことが多く、生存患者は、ずっと真に健康でいることの妨げとなる、長期持続する化学療法関連の健康上の懸念を日常的に経験する。
【０００５】
癌細胞を特異的に標的とする選択的な治療法は、これらの荒廃的な副作用のほとんどを改善し得る。残念なことに、わずかな例外はあるものの、選択的な標的化は技術的に困難または不可能である。したがって、癌細胞を選択的に標的とする一方、非特異的副作用を最小にするための、さらなる、または代替のアプローチが切に必要とされている。
【発明の概要】
【０００６】
概要
本明細書に記載の技術は、活性DNA編集酵素を有している細胞をDNA修復の阻害物質で処置することを目的とする。本明細書において用いられる「DNA編集酵素」とは、通常はDNAセグメントの突然変異、交換または切除を触媒する酵素、特に点突然変異、DNA一本鎖切断、DNA二本鎖切断またはタンパク質-DNA付加物を生成すること、またはその生成を促進することができる酵素を意味する。本明細書において言及される、DNA編集酵素は、その作用において必ずしも部位特異的ではない。同様に、必ずしも細胞特異的ではない。いくつかの態様において、細胞はそのような酵素の検出可能な量を発現するB細胞である。DNA編集酵素の非限定例には、組換え活性化遺伝子1（RAG1；NCBI遺伝子ID: 5896、例えば、SEQ ID NO: 0157；NCBI Ref: NM_000448（mRNA）およびSEQ ID NO 0158；NCBI Ref: NP_000439（ポリペプチド））、組換え活性化遺伝子1（RAG2；NCBI遺伝子ID: 5897、例えば、SEQ ID NO: 0159；NCBI Ref: NM_001243785（mRNA）およびSEQ ID NO: 160；NCBI Ref: NP_001230714（ポリペプチド））、胞子形成特異的タンパク質11（SPO11；NCBI遺伝子ID: 23626、例えば、SEQ ID NO: 0161；NCBI Ref: NM_012444（mRNA）およびSEQ ID NO 0162；NCBI Ref: NP_036576（ポリペプチド））、APOBECファミリーメンバーおよび/またはAIDが含まれるが、それらに限定されるわけではない。いくつかの態様において、DNA編集酵素はAIDであり得る。
【０００７】
いくつかの態様において、DNA編集酵素はAPOBEC（アポリポタンパク質B mRNA編集酵素触媒ポリペプチド様）ファミリーのメンバーであり得る。本明細書において用いられる「APOBECファミリー」とは、N末端亜鉛依存性シチジンデアミナーゼ触媒ドメインを有し、かつC末端擬触媒ドメインを含む、シチジンデアミナーゼ酵素のファミリーを意味する。APOBECファミリーメンバーの非限定例には、AID、APOBEC1、APOBEC2、APOBEC3A、APOBEC3C、APOBEC3E、APOBEC3F、APOBEC3G、APOBEC3H、およびAPOBEC4が含まれる。
【０００８】
本明細書に記載の技術の態様は、活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID、またはAICDA）、B細胞リコンビナーゼなどのDNA編集酵素を用い、これは細胞内で発現されると、広範なゲノム切断を引き起こす。さらに、本発明者らは、DNA相同組換え能力（二本鎖切断修復）が減少および/または阻害されると、AIDなどのDNA編集酵素のこの活性は細胞死を引き起こすことを発見した。具体的には、本明細書に示すとおり、AIDを発現する細胞におけるDNA二本鎖切断（DSB）修復の阻害は、AIDによって生成される未修正のオフターゲット二本鎖切断により、細胞毒性をもたらす。
【０００９】
1つの局面において、本明細書において提供するのは、AIDを発現する細胞、例えば、癌性B細胞もしくは自己免疫疾患のB細胞、または腸癌細胞、結腸癌細胞、肺癌細胞、肝癌細胞、上皮癌細胞、乳癌細胞、食道癌細胞、甲状腺癌細胞、前立腺癌細胞、腎癌、黒色腫などの他の癌細胞の自己破壊を選択的に誘導する、癌処置パラダイムである。いくつかの態様において、方法は、DNA組換えシステムを用いて腫瘍細胞自己破壊を誘導することにより、例えば、癌細胞を選択的に処置する（正常細胞には関与しない）。このアプローチは、AIDがDNA相同組換え能力の減少した細胞において広範なゲノム切断および細胞死を誘導するとの知見を用いている。本明細書に記載するとおり、本発明者らは、AID発現の上昇を特徴とする細胞集団を二本鎖切断修復（DSB）の阻害物質で処置すると、細胞死が起こることを明らかにした。したがって、AID発現の上昇を有している癌または自己免疫疾患の患者を二本鎖切断修復の阻害物質で処置するための方法を提供する。
【００１０】
DSB修復の阻害物質は、DSB修復に必要な任意の遺伝子またはタンパク質の発現または活性を低下させる阻害物質であり得る。本明細書において提供する特定の態様において、DSB修復の阻害物質は、Rad51；Rad51AP1；Rad51B；Rad51C；Rad51D；XRCC2；XRCC3；RAD54；RAD52；BRCA1；BRCA2；ATM；ATR；MRE11；RAD50；NBS1；WRN；BLM；RECQ4；LIG4（DNAリガーゼ4）；XRCC4；PRKDC（DNA-PKcs7 XRCC7）；DCLRE1C；XRCC6（Ku70）；XRCC5（Ku80）および/またはXLF（NHEJ1；XRCC4様因子）の発現または活性を低下させるかまたは阻害する阻害物質である。本明細書において提供する特定の態様において、DSB修復の阻害物質は、Rad51；Rad51AP1；Rad51B；Rad51C；Rad51D；XRCC3；RAD54；RAD52；BRCA1；BRCA2；ATM；ATR；MRE11；RAD50；NBS1；WRN；BLM；RECQ4；LIG4（DNAリガーゼ4）；XRCC4；PRKDC（DNA-PKcs7 XRCC7）；DCLRE1C；XRCC6（Ku70）；XRCC5（Ku80）および/またはXLF（NHEJ1；XRCC4様因子）の発現または活性を低下させる阻害物質である。いくつかの態様において、二本鎖切断修復の阻害物質は、Rad51ファミリーメンバー（例えば、Rad51；Rad51AP1；Rad51B；Rad51C；Rad51D；XRCC2；XRCC3）を阻害し得る。いくつかの態様において、二本鎖切断修復の阻害物質は、非相同末端結合（NHEJ）タンパク質メンバー（例えば、LIG4；XRCC4；PRKDC；DCLRE1C；XRCC6；XRCC5;XLF）を阻害し得る。
【００１１】
本明細書において提供する特定の態様において、DSB修復阻害物質は、RAD51-媒介性鎖交換修復阻害物質であり、スチルベン誘導体である。スチルベン誘導体には、スチルベン（(E)-1,2-ジフェニルエテン）、トランス-スチルベン、（(E)-スチルベン、トランス-1,2-ジフェニルエチレン）誘導体、シス-スチルベン誘導体、コンブレタスタチン（5-[(2R)-2-ヒドロキシ-2-(3,4,5-トリメトキシフェニル)エチル]-2-メトキシフェノール）、レスベラトロール（トランス-3,5,4'-トリヒドロキシスチルベン；(E)-5-(4-ヒドロキシスチリル)ベンゼン-1,3-ジオール）、ジエチルスチルベストロール（4,4'-(3E)-ヘキサ-3-エン-3,4-ジイルジフェノール）、コルヒチン、および（(S)N-(5,6,7,9-テトラヒドロ-1,2,3,IO-テトラメトキシ-9-オキソベンゾ[α]ヘプタイエン-7-イル)アセトアミド）が含まれ得るが、それらに限定されるわけではない。1つの態様において、RAD51媒介性鎖交換修復の阻害物質は4,4'ジイソチオシアノスチルベン-2,2'-ジスルホン酸（DIDS）である。DIDSはRad51複合体を破壊し、ヘテロ二重鎖形成を阻害すると報告されている（Ishida, T., et al., Nucleic Acids Res, 2009, 37(10): p. 3367-76）。
【００１２】
本明細書において提供するいくつかの態様において、DSB修復阻害物質は、サラジン酸またはその誘導体である。本明細書において提供する特定の態様において、DSB修復阻害物質は、スチクチン酸またはその誘導体である。本明細書において提供するいくつかの態様において、DSB修復阻害物質はSTK856883またはその誘導体である。本明細書において提供するいくつかの態様において、DSB修復阻害物質は4'-ブロモ-3'ニトロプロピオフェノン（NS-123）またはその誘導体である（Lally et al, Cancer Res 2007, 67; 8791）。
【００１３】
DNA編集酵素のレベルが増大した任意の癌を、本明細書に記載の方法および組成物により処置することができる。例えば、癌は、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、脳癌、皮膚癌、結腸直腸癌（結腸；大腸）、肝癌、リンパ腫、肺癌、口腔癌、頭頸部癌、脾癌、リンパ節癌、小腸癌、血球癌、胃癌、腎癌、膵癌、子宮内膜癌、精巣癌、皮膚癌、食道癌、骨髄癌、血液癌、子宮頸癌、膀胱癌、ユーイング肉腫、甲状腺癌、神経膠腫、および/または胃腸癌であり得る。本発明は、前癌を含む、本明細書において論じる他の癌にも適用可能である。特定の態様において、処置する癌はB細胞の癌、例えば、慢性リンパ性白血病（CLL）である。
【００１４】
AIDを発現する任意の癌を処置することができる。特定の態様において、処置する癌は、リンパ腫または白血病である。特定の態様において、治療するリンパ腫は、例えば、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病（CLL）、B細胞急性リンパ性白血病（B-ALL）、急性リンパ芽球性白血病、ヘアリーセル白血病、脾性周辺帯リンパ腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫（DLBCL、DLBL、DLCL）、および/または形質細胞腫を含むが、それらに限定されるわけではない、非ホジキンリンパ腫である。特定の態様において、治療する癌は、例えば、ホジキン病、急性骨髄性白血病（AML）、慢性骨髄性白血病（CML）、MALTリンパ腫および/またはT細胞白血病およびリンパ腫を含むが、それらに限定されるわけではない、白血病である。特定の態様において、治療する癌は、肉腫、癌腫、結腸癌、肝癌、胃癌、腸癌、肺癌、乳癌、前立腺癌、腎癌、黒色腫、甲状腺癌、食道癌、および/または胆管癌である。
【００１５】
DNA編集酵素のレベルが増大した任意の自己免疫疾患を処置することができる。特定の態様において、DNA編集酵素はAIDである。特定の態様において、治療する自己免疫疾患は、紅斑性狼蒼、ウィスコット-アルドリッチ症候群、自己免疫性リンパ球増殖症候群、重症筋無力症；関節リウマチ（RA）、紅斑性狼蒼性腎炎、多発性硬化症、全身性紅斑性狼蒼、亜急性皮膚紅斑性狼蒼、凍傷状紅斑性狼蒼を含む皮膚紅斑性狼蒼、慢性関節炎、シェーグレン症候群、自己免疫性腎炎、自己免疫性血管炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性心炎、自己免疫性脳炎、自己免疫媒介性血液疾患、炎症性慢性鼻副鼻腔炎、大腸炎、セリアック病、炎症性腸疾患、バレット食道、および/または炎症性胃炎である。
【００１６】
特定の態様において、DSB修復阻害物質は、阻害物質および薬学的に許容される担体を含む組成物中に含まれる。さらなる態様において、DSB修復阻害物質は、薬学的に許容される担体および別の化学療法化合物を含む組成物中に含まれ得る。特定の態様において、DSB修復阻害物質を含む組成物を、癌に対する別の処置も受けている患者に投与することができる。特定の態様において、DSB修復阻害物質を含む組成物を、自己免疫疾患に対する別の処置も受けている患者に投与することができる。
【００１７】
特定の態様において、高いAID発現を伴う癌を有している患者をDSB修復阻害物質で処置することにより、癌の指標、マーカー、症状、重症度、転移率、再発、および/または腫瘍サイズは、DSB修復阻害物質による処置前の指標、マーカー、症状、重症度、転移、再発、および/もしくは腫瘍サイズと比べて、またはDSB修復阻害物質による処置を受けていない患者と比べて、少なくとも10％、例えば、少なくとも20％、少なくとも30％、少なくとも50％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも90％、またはそれ以上減少する。
【００１８】
特定の態様において、高いAID発現を伴う自己免疫疾患を有している患者をDSB修復阻害物質で処置することにより、自己免疫疾患の指標、マーカー、症状、および/または重症度は、DSB修復阻害物質による処置前の指標、マーカー、症状、重症度、転移、再発および/もしくは腫瘍サイズと比べて、またはDSB修復阻害物質による処置を受けていない患者と比べて、少なくとも10％、例えば、少なくとも20％、少なくとも30％、少なくとも50％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも90％、またはそれ以上減少する。
【００１９】
本明細書においてまた提供するのは、患者の癌または自己免疫疾患がDSB修復阻害物質による処置に反応性であるかどうかを、その患者の細胞中のAIDのタンパク質またはmRNAレベルを判定することにより判定する方法である。いくつかの態様において、対象から得られた癌細胞中のAID mRNAおよび/またはタンパク質のレベルを判定する。いくつかの態様において、AID mRNAおよび/またはタンパク質のレベルを対象からられ得た自己反応性細胞中で判定する。AID発現産物、すなわちmRNAまたはタンパク質の高いレベルは、疾患がDSB修復阻害物質によって処置可能であることを示す。例えば、増大したレベルを有していることが疑われる対象から得られた細胞の試験試料中のAIDタンパク質またはmRNAレベルを測定すること、および、そのレベルを、健常対象から得られた同じ型の細胞の試料中で見られるAIDのレベルと比べることにより、増大したレベルのAIDを発現する細胞を有している対象を特定してもよく、試験試料中のAIDの量の増加により、二本鎖切断修復の阻害物質での処置を必要とする対象が示される。
【００２０】
特定の態様において、AIDタンパク質のレベルの判定は、以下のアッセイ法の1つまたは複数の使用を含む：ウェスタンブロット、免疫沈降、酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）、放射性免疫測定法（RIA）、サンドイッチアッセイ法、蛍光インサイチューハイブリダイゼーション（FISH）、免疫組織学的染色、ラジオイムノメトリックアッセイ法、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ法、インサイチュー免疫測定法、沈降反応、凝集アッセイ法、補体結合アッセイ法、免疫蛍光測定法、プロテインAアッセイ法、質量分析、および/または免疫電気泳動アッセイ法。特定の態様において、AIDタンパク質のレベルの判定は、抗体、抗体断片、抗体のエピトープ結合断片を含むポリペプチド、モノクローナル抗体、モノクローナル抗体断片、タンパク質結合タンパク質、および/またはAID結合ペプチドの使用を含む。
【００２１】
特定の態様において、AID mRNAのレベルの判定は、以下のアッセイ法の1つまたは複数の使用を含む：RT-PCR、定量的RT-PCR、RNA-seq、ノーザンブロット、マイクロアレイに基づく発現解析、転写増幅、および/または自家持続配列複製。特定の態様において、AID mRNAのレベルの判定は、抗体、抗体断片、モノクローナル抗体、および/またはモノクローナル抗体断片、および/またはタンパク質結合タンパク質の使用を含む。特定の態様において、RT-PCRのためのAIDプライマーには、SEQ ID NO:101およびSEQ ID NO:102が含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００２２】
特定の態様において、AIDのレベルをその活性によって判定し、その標的遺伝子および/または標的遺伝子によってコードされる転写物の配列分析、PCRまたはFISH分析によって判定することができる。AID標的遺伝子には、IGH（NCBI遺伝子ID 3492）、BCL6（NCBI遺伝子ID 604；SEQ ID NO:001）、MYC（NCBI遺伝子ID 4609；SEQ ID NO:002）、BCL11A（NCBI遺伝子ID 53335；SEQ ID NO:003）、CD93（NCBI遺伝子ID 22918；SEQ ID NO:004）、PIM1（NCBI遺伝子ID 5292；SEQ ID NO:005）および/またはPAX5（NCBI遺伝子ID 5079；SEQ ID NO:006）が含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００２３】
遺伝子座における高頻度突然変異の検出は、AID活性を示している。特定の態様において、AIDの活性を全ゲノム配列決定法または完全ゲノム配列決定法を用いて判定し、全ゲノムまたはIGH、BCL6、MYC、BCL11a、CD93、PIM1および/またはPAX5を含む特定の標的遺伝子における高頻度突然変異のレベルを判定する。
【００２４】
特定の態様において、AIDの活性を、二本鎖切断を検出するためのFISH分析、例えば、DNA切断検出fish（DBD-FISH）（Volpi and Bridger, BioTechniques, Vol. 45, No. 4, 385-409）を用いて判定する。
【００２５】
特定の態様において、AIDの活性をホスホ-H2AXアッセイ法（Rakiman et al., Advance Biotech 2008, 39-42）を用いて判定する。
【００２６】
特定の態様において、AID mRNAまたはタンパク質のレベルを判定するために用いる、抗体、抗体断片、モノクローナル抗体、モノクローナル抗体断片、タンパク質結合タンパク質、および/またはAID結合ペプチドを、検出可能な標識で標識する。
【００２７】
特定の態様において、DSB修復阻害物質の有効用量を患者に1回投与することができる。特定の態様において、DSB修復阻害物質の有効用量を患者に繰り返し投与することができる。
【００２８】
1つの局面において、本明細書に記載の技術は、細胞死を引き起こす方法であって、（a）細胞にDNA編集酵素の有効量を投与する段階；および（b）その後、段階（a）の細胞を二本鎖切断修復の阻害物質と接触させる段階を含み、それにより細胞死を引き起こす、方法に関する。1つの局面において、本明細書に記載の技術は、細胞を細胞死に対して感受性にさせる方法であって、（a）二本鎖切断修復の阻害物質を用いて細胞を細胞死に対して感受性にさせるために、対象にDNA編集酵素の治療的有効量を投与する段階；および（b）その後、対象に二本鎖切断修復の阻害物質を投与する段階を含む、方法に関する。いくつかの態様において、ポリペプチド、DNA編集酵素をコードする核酸、および、DNA編集酵素をコードする核酸を含むベクターからなる群より選択される形態でDNA編集酵素を投与する。いくつかの態様において、DNA編集酵素はAPOBECファミリーのメンバーであり得る。いくつかの態様において、DNA編集酵素は活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）であり得る。
【００２９】
様々な態様の詳細を以下の説明において示す。本明細書に記載の技術の他の特徴、目的、および利点は、その説明および図面から、ならびに特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】XRCC2ノックダウンが活性化誘導細胞毒性につながることを示す、フローサイトメトリーデータのグラフを示す。Xrcc2-特異的shRNA（XKD）または対照shRNA（対照）を発現する構築物を用いて形質導入した、野生型およびTrp53-/-マウス脾細胞からのeGFP+細胞のフローサイトメトリー分析を、刺激の3日後に実施した。対照を用いて形質導入した野生型（WT）細胞（白いバー）、XKDを用いて形質導入した野生型細胞（黒いバー）およびXKDを用いて形質導入したTrp53-/-細胞（灰色のバー）を示す。データは三つ組で2回行った実験を表す（平均値およびs.e.m）。
【図２】Xrcc2-特異的（XKD）または対照shRNA（対照）を用いて形質導入した、活性化（ACT）および非活性化（NON）野生型（Aicda+/+、白抜きのバー）またはAicda-/-マウス脾細胞（塗りつぶしたバー）のフローサイトメトリーデータのグラフを示す。eGFP+細胞のフローサイトメトリー分析を、刺激の3日後に実施した。データは四つ組で2回行った実験を表す（平均値およびs.e.m）。
【図３】Xrcc2-特異的shRNAを用いて形質導入し、抗CD40に加えてIL-4で0、2または3日間刺激した、B細胞からのフローサイトメトリーデータのグラフを示し；抗CD40およびIL-4で活性化した総細胞数を、抗CD40だけで刺激した細胞数に対して規準化する。第0日のデータを白いバーで示し、第2日のデータを灰色のバーで示し、第3日のデータを黒いバーで示す。データは四つ組で2回行った実験を表す（平均値およびs.e.m）。x軸は細胞の遺伝子型を示す。
【図４】非活性化（Non）または活性化（Act）条件で増殖させたAicda+/+およびAicda-/- XKDおよび対照（対照）脾B細胞中のγ-H2AXのフォーカスを、γ-H2AX+細胞（1つまたは複数のフォーカス；塗りつぶしたバー）のγ-H2AX-細胞（フォーカスなし；白抜きのバー）に対する比で示す。
【図５】Aicda+/+およびAicda-/- XKDおよび対照（対照）脾B細胞中のDSB修復フォーカスの数のグラフを示す。y軸はγ-H2AXフォーカスの数を表し；白抜きのバーは、XKDまたは対照（対照）で処理したAicda+/+およびAicda-/- shRNA脾B細胞における非活性化条件を示し、塗りつぶしたバーは活性化条件を示す。*P＜0.05および**P＜0.01（二標本t検定）。データは4つの実験を表す（誤差バー、s.e.m）。
【図６】活性化XKDまたは対照（対照）マウスCH12-F3細胞におけるガンマ-H2AXフォーカスのフォーカス分布を示す。
【図７】DIDS処理が刺激された脾細胞の生存を減少することを示す細胞数のグラフを示す。野生型（AID+/+；塗りつぶした印）またはAICDAノックアウト（AID-/-、白い印）マウスの脾臓から単離した細胞を抗CD40抗体およびIL-4で第0日および第2日に刺激した。DIDSを第0日および第2日に0μM、50μM、100μMおよび150μMの濃度で添加した。総生細胞数を第1、2、3、4および6日にトリパンブルー染色を用いて判定した。
【図８】癌細胞が高レベルのAICDA発現を示すことを明らかにするグラフを示す。x軸上の各カラム/目盛は異なる細胞または組織型を表す一方、y軸はデータセット平均レベルを上回る変化倍率でAICDA発現のレベルを表す。図8Aは、59の癌由来ヒト細胞株群からの発現データを示す。図8Bは、初代ヒト組織および癌からの発現データを示す。
【図９】Guava EasyCyteフローサイトメーターアッセイ法を用いた脾細胞生存度のグラフを示す。野生型（WT）またはAICDAノックアウト（-/-）マウスの脾臓から単離した細胞を抗CD40抗体およびIL-4で第0日および第2日に刺激した。DIDSを第0日および第2日に0または150μMの濃度で添加した。抗CD40抗体に加えてIL-4で刺激し、DIDSで処理したWT細胞を塗りつぶした四角で示し、抗CD40抗体に加えてIL-4で刺激し、DIDSで処理したAICDA-/-細胞を丸で示し；抗CD40抗体に加えてIL-4で刺激したWT細胞を白い菱形で示し；かつ抗CD40に加えてIL-4抗体で刺激したAICDA-/-細胞を白い三角で示す。生細胞の総数を1日おきに判定した。日数をx軸上に示し、生細胞の比率をy軸上に示す。
【図１０】MultiTox-Fluor Multiplex Cytotoxicity Assayを用いてのDIDS誘導体のスクリーニング結果を示す。化合物同一性をx軸上に示し、生細胞の比率をy軸上に示す。
【図１１】DIDSで処理した、14名の原発性慢性リンパ性白血病（CLL）患者からの初代ヒトCLL細胞を示す。CLL細胞を0uM（n＝5、対照）、150uM（n＝4）、または600uM（n＝2）で処理した。生細胞数を伴うDIDSを、培養第2、4、6、および8日に血球計数器で手動計数することにより判定した。誤差バーは平均値の標準誤差を示す。
【図１２】第0日にB細胞を活性化するためのaCD40＋IL-4を補足したRPMI培地中1×106細胞/mlの濃度で培養中に播種した初代AIDノックアウトマウス脾細胞のグラフを示す。個々の培養物に0（丸）、0.5（三角）、5（菱形）、50（四角）、または500uM（丸）NS-123を補足し、生細胞を第1、2、3、および4日にトリパンブルー染色後に計数した。
【図１３】第0日にB細胞を活性化するためのaCD40＋IL-4を補足したRPMI培地中1×106細胞/mlの濃度で培養中に播種した初代AIDノックアウトマウス脾細胞の生存度に対するNS-123の用量反応についてのグラフを示す。0、5、10、20、30および50uMのNS-123濃度を試験した。
【図１４】初代マウスB細胞およびそれらのDIDSに対する反応のグラフを示す。次いで、細胞を0（塗りつぶした丸）または2.5Gy（＝250rad；白い丸）のいずれかに供した。誤差バーは3つの独立した実験からの平均値の標準誤差（S.E.M.）を表す。
【図１５】図15Aは、様々なDIDS濃度で処理した非活性化CH12-F3細胞の総細胞数を示す。図15Bは、様々なDIDS濃度で処理した活性化CH12-F3細胞の総細胞数を示す。0μM DIDSの結果を塗りつぶした四角で示し、50μM DIDSを塗りつぶした丸で示し、100μM DIDSを白い四角で示し、かつ150μM DIDSを白い丸で示す。
【図１６】図16Aは、150μM DIDSで活性化および処理した、AIDノックアウトマウスおよびB6野生型マウスから単離したAIDヌル（AID-/-）およびAID陽性（AID+/+）脾細胞中で検出されたフォーカスの数を示す。図16Bは、AID+/+とAID-/-培養物について比較定量した、ホスホ-H2AX陽性細胞（塗りつぶしたバー）対ホスホ-H2AX陰性細胞（白抜きのバー）の比率を示す。図16Cは、DIDS処理AID+/+（塗りつぶしたバー）対AID-/-（白抜きのバー）細胞について定量した、細胞1個あたりのフォーカスの数を示す。
【図１７】未処理または30μM DIDSで処理した、AID発現（AID+）またはAID陰性（AID-）初代ヒトCLL細胞の細胞生存度を示す。
【図１８】図18Aは、初代ヒトCLL細胞のAIDのRT-PCR発現を示す。図18Bは、DIDSに反応しての初代ヒトCLL細胞の細胞生存度を示す。
【図１９】図19Aは、25mg/kg DIDSで処置したBXSB.Yaa Cd8/IL15-/-マウスの体重を示す。図19Bは、25mg/kg DIDSで処置したBXSB.Yaa Cd8/IL15-/-マウスのIgG2b血清含有量を示す。
【図２０】図20Aおよび20Bは、処置開始後の日数で示した、BXSB.Yaa Cd8/Il15-/-マウスの25mg/kg DIDS（20A）または50mg/kg DIDS（20B）いずれかによる処置後の、ログランクMantel Cox生存プロットを示す。
【図２１】図21Aおよび21Bは、ゲーハン-ブレスロー-ウィルコクソン検定を適用して、マウスの日齢でプロットした、25mg/kg DIDS（21A）または50mg/kg DIDS（21B）いずれかで処置したBXSB.Yaa Cd8/IL15-/-マウスの生存を示す。
【図２２】DIDSがDNA損傷後のRAD51フォーカス形成を崩壊することを示す。DIDSに曝露していない（0mM）照射細胞は効率的なフォーカス形成を示す。DIDS曝露（150mM）は、放射線誘導RAD51フォーカス形成を完全に阻害し、Rad51フォーカス+細胞の基準線レベル（非照射、0Gy試料のものと等価）に対する比率を低下させる。誤差バーは3つの独立した実験からの平均値の標準誤差（S.E.M.）を示す。
【図２３】図23Aおよび23Bは、DIDS処置に応じた、AID陽性（AID+）およびAID陰性（AID-）ヒト細胞におけるホスホル-H2AXフォーカスの数を示す。フォーカスの数をx軸上に示す。図23Aは、0μM DIDS対照による処置の結果を示し、図23Bは、30μM DIDSによる処置の結果を示す。誤差バーは4つの独立したAID-/-試料の培養物（白抜きのバー）および5つの独立したAID+試料の培養物（塗りつぶしたバー）の平均値の標準誤差（S.E.M.）を表す。
【図２４】DIDS処置およびAID発現に応じた、活性化カスパーゼ3（AC3）陽性細胞を示す。誤差バーは4つの独立したAID-試料-/-の培養物（白抜きのバー）および5つの独立したAID+試料の培養物（塗りつぶしたバー）の平均値の標準誤差（S.E.M.）を表す。
【図２５】図25Aは、マウスモデルにおける全身DIDS処置の効果を試験するための実験デザインを示す。図25Bは、対照マウスの体重の変化比率を示す。図25Cは、DIDSで処置したマウスの体重の変化比率を示す。
【図２６】DNP-KLHで免疫化し、0、10、または50mg/kg DIDSで処置した、AID-/-およびAID+/+マウスからの骨髄、脾臓、および末梢血の終点フローサイトメトリードットプロット分析を示す。プロットはB220（y軸）およびCD19（x軸）の発現について染色したリンパ球ゲートにおける細胞の集団を表す。各プロットの右上角の数字は各分析のB220+/CD19+細胞のパーセンテージを示す。初期/前胚中心から後胚中心へのB細胞成熟の進行を下に示す。
【図２７】エプスタイン-バーウイルスにより形質転換した末梢ヒトBリンパ球におけるAIDおよびGAPDH（対照）についてのRT-PCR発現分析を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
詳細な説明
定義
便宜上、本明細書、実施例、および添付の特許請求の範囲において用いられる特定の用語および語句の意味を以下に示す。当技術分野における用語の用法と本明細書に示すその定義との間に明らかな不一致がある場合、本明細書内に示す定義がまさる。
【００３２】
細胞生物学および分子生物学における一般用語の定義は、''The Merck Manual of Diagnosis and Therapy'', 18th Edition, published by Merck Research Laboratories, 2006 (ISBN 0-911910-18-2)；Robert S. Porter et al. (eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, published by Blackwell Science Ltd., 1994 (ISBN 0-632-02182-9)；およびRobert A. Meyers (ed.), Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, published by VCH Publishers, Inc., 1995 (ISBN 1-56081-569-8)；The ELISA guidebook (Methods in molecular biology 149) by Crowther J. R. (2000)；Fundamentals of RIA and Other Ligand Assays by Jeffrey Travis, 1979, Scientific Newsletters；Immunology by Werner Luttmann, published by Elsevier, 2006において見いだすことができる。分子生物学における一般用語の定義は、Benjamin Lewin, Genes IX, published by Jones & Bartlett Publishing, 2007 (ISBN-13: 9780763740634)；Kendrew et al. (eds.), Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, published by VCH Publishers, Inc., 1995 (ISBN 1-56081-569-8)およびCurrent Protocols in Protein Sciences 2009, Wiley Intersciences, Coligan et al., eds.においても見いだされる。
【００３３】
特に記載がないかぎり、本明細書に記載の技術は、例えば、Methods in Enzymology, Volume 289: Solid-Phase Peptide Synthesis, J. N. Abelson, M. I. Simon, G. B. Fields (Editors), Academic Press; 1st edition (1997) (ISBN-13: 978-0121821906)；米国特許第4,965,343号、および同第5,849,954号；Maniatis et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., USA (1982)；Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3 ed.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., USA (2000)；Davis et al., Basic Methods in Molecular Biology, Elsevier Science Publishing, Inc., New York, USA (1995)；またはMethods in Enzymology: Guide to Molecular Cloning Techniques Vol.152, S. L. Berger and A. R. Kimmel Eds., Academic Press Inc., San Diego, USA (1987)；Current Protocols in Protein Science (CPPS) (John E. Coligan, et. al., ed., John Wiley and Sons, Inc.)、Current Protocols in Cell Biology (CPCB) (Juan S. Bonifacino et. al. ed., John Wiley and Sons, Inc.)、およびCulture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique by R. Ian Freshney, Publisher: Wiley-Liss; 5th edition (2005)、Animal Cell Culture Methods (Methods in Cell Biology, Vol. 57, Jennie P. Mather and David Barnes editors, Academic Press, 1st edition, 1998)に記載の、標準の手順を用いて実施し、これらはすべてその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【００３４】
単数の用語「1つの(a)」、「1つの(an)」、および「その(the)」は、文脈から明らかに特に他に示されないかぎり、複数の指示物を含む。同様に、「または」なる単語は、文脈から明らかに特に他に示されないかぎり、「および」を含むことが意図される。本明細書に記載のものと類似または等価の方法および材料を本開示の実施または試験において用い得るが、適切な方法および材料を以下に記載する。略語「e.g.」はラテン語のexempli gratiaに由来し、本明細書において非限定例を示すために用いる。したがって、略語「e.g.」は「例えば」なる用語と同義である。
【００３５】
操作実施例中以外または特に他に示される場合以外は、本明細書において用いられる成分の量または反応条件を表すすべての数字は、すべての場合に「約」なる用語で修飾されると理解されるべきである。パーセンテージに関して用いられる場合、「約」なる用語は±1％を意味する。
【００３６】
本明細書において用いられる「投与する」なる用語は、所望の効果が生じるような、組成物の所望の部位への少なくとも部分的な局在をもたらす方法または経路による、組成物の対象への配置を意味する。本明細書に記載の化合物または組成物を、経口経路、経腸経路、または、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、経皮投与、気道（エアロゾル）投与、肺投与、経鼻投与、鼻内投与、直腸投与、および局所（口腔および舌下を含む）投与を含む非経口経路を含むが、それらに限定されるわけではない、当技術分野において公知の任意の適切な経路によって投与することができる。
【００３７】
例示的な投与様式には、注射、注入、滴下注入、吸入、または経口摂取が含まれるが、それらに限定されるわけではない。「注射」には、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、脳室内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、脳脊髄内、および胸骨内注射および注入が含まれるが、それらに限定されるわけではない。好ましい態様において、組成物を静脈内注入または注射によって投与する。
【００３８】
本明細書において用いられる「自己免疫疾患」または「自己免疫障害」なる用語は、対象自身の抗体が宿主組織と反応する場合などの、自己組織への攻撃による免疫媒介性であるが、微生物への免疫反応も含み得る状態を意味する。そのような状態には、紅斑性狼蒼、ウィスコット-アルドリッチ症候群、自己免疫性リンパ球増殖症候群、重症筋無力症、関節リウマチ（RA）、紅斑性狼蒼性腎炎、多発性硬化症、全身性紅斑性狼蒼、円板状狼蒼、亜急性皮膚紅斑性狼蒼、凍傷状紅斑性狼蒼を含む皮膚紅斑性狼蒼、慢性関節炎、シェーグレン症候群、炎症性慢性鼻副鼻腔炎、大腸炎、セリアック病、炎症性腸疾患、バレット食道、炎症性胃炎、自己免疫性腎炎、自己免疫性血管炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性心炎、自己免疫性脳炎、および自己免疫媒介性血液疾患が含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００３９】
「減少する」、「低下させる」、「低下」、「阻害する」または「阻害」なる用語はすべて、一般には統計学的に有意な量の減少を意味するために本明細書において用いられる。しかし、不確かさを避けるために、「減少する」、「低下した」、「低下」、「阻害する」または「阻害」は、基準レベルに比べて少なくとも5％、例えば、基準レベルに比べて少なくとも約10％、または少なくとも約20％、または少なくとも約30％、または少なくとも約40％、または少なくとも約50％、または少なくとも約60％、または少なくとも約70％、または少なくとも約80％、または少なくとも約90％または少なくとも約95％、または少なくとも約98％ または少なくとも約99％、またはそれ以上の減少を意味する。
【００４０】
「増加した」、「増加する」、または「増大させる」、または「活性化する」、または「上昇した」なる用語はすべて、一般には統計学的に有意な量の増加を意味するために本明細書において用いられ；不確かさを避けるために、「増加した」、「増加する」、または「増大させる」、または「活性化する」、または「上昇した」なる用語は、基準レベルに比べて少なくとも5％の増加、例えば、基準レベルに比べて少なくとも約10％、少なくとも約20％、もしくは少なくとも約30％、もしくは少なくとも約40％、もしくは少なくとも約50％、もしくは少なくとも約60％、もしくは少なくとも約70％、もしくは少なくとも約80％、もしくは少なくとも約90％、もしくは最大100％までの増加、または5〜100％の間の任意の増加、あるいは基準レベルに比べて少なくとも約2倍、もしくは少なくとも約3倍、もしくは少なくとも約4倍、もしくは少なくとも約5倍、もしくは少なくとも約10倍の増加、または2倍から10倍の間もしくはそれ以上の任意の増加などの、統計学的に有意な増加を意味する。
【００４１】
「統計学的に有意な」または「有意」なる用語は、統計学的有意性を意味し、一般には正常よりも低いかもしくは高い2標準偏差（2SD）、またはより低いかもしくはより高いマーカーの濃度を意味する。この用語は、差があるという統計学的証拠を意味する。帰無仮説が実際に真実である場合、帰無仮説を却下する決定を行う確立と定義される。決定はp値を用いて行うことが多い。
【００４２】
本明細書において用いられる「化合物」または「作用物質」なる用語は、交換可能に用いられ、DSB修復を阻害する分子および/または組成物を意味する。化合物/作用物質には、化学的化合物および化学化合物の混合物、例えば、有機または無機小分子；糖類；オリゴ糖；多糖；生物学的高分子、例えば、ペプチド、タンパク質、および、ペプチド類似体および誘導体；ペプチド様物質；核酸；核酸類似体および誘導体；細菌、植物、真菌、または哺乳動物細胞もしくは組織などの生物学的材料から得られた抽出物；天然または合成組成物；ペプチド；アプタマー；ならびに、抗体、またはその断片が含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００４３】
本明細書において用いられる「試験化合物」または「試験作用物質」なる用語は、本明細書において特定される、DSB修復に関与する遺伝子またはタンパク質の発現および/または活性を阻害するそれらの能力についてスクリーニングする、化合物もしくは作用物質および/またはその組成物を意味する。
【００４４】
本明細書において用いられる「DSB修復阻害物質」なる用語は、二本鎖DNA切断の修復を阻害する、任意の化合物または作用物質である。特定の態様において、そのような阻害物質は、相同組換えおよび非相同末端結合（NHEJ）を阻害することを含み得る。特定の態様において、そのような阻害物質は、RAD51媒介性鎖交換の阻害物質を含み得る。いくつかの態様において、そのような阻害物質は、例えば、Rad51；Rad51AP1；Rad51B；Rad51C；Rad51D；XRCC2；XRCC3；RAD54；RAD52；BRCA1；BRCA2；ATM；ATR；MRE11；RAD50；NBS1；WRN；BLM；RECQ4；LIG4；XRCC4；PRKDC；DCLRE1C；XRCC6；XRCC5；およびXLFの阻害物質を含み得る。
【００４５】
本明細書において用いられる「抗体」なる用語は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、1つまたは複数のエピトープを含む抗原に特異的に結合する抗原結合部位を含む分子を意味する。この用語は、2つの免疫グロブリン重鎖および2つの免疫グロブリン軽鎖からなる抗体、ならびに、例えば、Fv、Fab、およびF(ab)'2、ならびに二官能性ハイブリッド抗体（例えば、Lanzavecchia et al., Eur. J. Immunol. 17, 105 (1987)）、および一本鎖（例えば、Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 85, 5879-5883 (1988)およびBird et al., Science 242, 423-426 (1988)、これらは参照により本明細書に組み入れられる）、および、例えば、ナノボディ、ラクダ科（VHH断片）および免疫グロブリン新抗原受容体（IgNAR）を含む、単一ドメイン抗体（sdAb）（Harmsen et al. 2007, Appl. Microbiol. Biotechnol. 77 (1): 13-22；Holt et al. 2003, Trends in Biotechnology 21 (11): 484-490；これらはその全体が参照により本明細書に組み入れられる）を含む、抗体以外の様々な形態も意味する。（一般には、Hood et al., Immunology, Benjamin, N.Y., 2ND ed. (1984)、Harlow and Lane, Antibodies. A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory (1988)およびHunkapiller and Hood, Nature, 323, 15-16 (1986)を参照されたく、これらは参照により本明細書に組み入れられる）。この用語は、細胞内抗体、すなわち、細胞内ではたらき、細胞内タンパク質に結合する抗体も含む。細胞内抗体には、全抗体またはその抗体結合断片、例えば、単一のFv、FabおよびF(ab)'2などが含まれ得る。本明細書において用いられる「エピトープ」なる用語は、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトにおいて、抗原または免疫原活性を有するポリペプチドまたはタンパク質または非タンパク質分子の断片を意味する。免疫原活性を有するエピトープは、動物において抗体反応を誘発するポリペプチドまたはタンパク質の断片である。抗体が免疫特異的に結合するエピトープは、当業者には周知の任意の方法により、例えば、免疫アッセイ法により決定することができる。抗原のエピトープは必ずしも免疫原性である必要はない。
【００４６】
「タンパク質結合タンパク質」なる用語は、非免疫グロブリン結合タンパク質を意味し、抗体構造（例えば、Fc断片）、ミニボディ、アドネクチン、アンチカリン、アフィボディ、アフィリン、アンキリン反復タンパク質、DARPin、ノッティン、グルボディ、C型レクチン様ドメインタンパク質、テトラネクチン、クリングルドメイン（KD）、クニッツドメインタンパク質、チオレドキシン、チトクロムb562、ジンクフィンガー骨格、ブドウ球菌ヌクレアーゼ骨格、フィブロネクチンまたはフィブロネクチン二量体、テネイシン、N-カドヘリン、E-カドヘリン、ICAM、タイチン、GCSF受容体、サイトカイン受容体、グリコシダーゼ阻害物質、抗生物質色素タンパク質、ミエリン膜接着分子P0、CD8、CD4、CD2、クラスI MHC、T細胞抗原受容体、CD1、C2およびVCAM-1のI-setドメイン、ミオシン結合タンパク質Cの1-set免疫グロブリンドメイン、ミオシン結合タンパク質Hの1-set免疫グロブリンドメイン、テロキンのI-set免疫グロブリンドメイン、NCAM、トウィッチン、ニューログリアン、成長ホルモン受容体、エリスロポエチン受容体、プロラクチン受容体、インターフェロン-ガンマ受容体、β-ガラクトシダーゼ／グルクロニダーゼ、β-グルクロニダーゼ、トランスグルタミナーゼ、T-細胞抗原受容体、スーパーオキシドジスムターゼ、組織因子ドメイン、チトクロムF、緑色蛍光タンパク質、GroEL、ならびにソーマチンからなる群より選択される。そのような非免疫グロブリン結合タンパク質の調製法は当技術分野において周知である（Binz et al. 2005, Nat Biotechnol 1257-6；Lee et al. 2010, Proc Natl Acad Sci USA 107(21):9567-71；Gebauer and Skerra 2009, Curr Opin Chem Biol. 13(3):245-255）。
【００４７】
「発現」なる用語は、適切な場合には、例えば、転写、翻訳、折りたたみ、修飾およびプロセシングを含むが、それらに限定されるわけではない、RNAおよびタンパク質の産生、ならびに適宜タンパク質の分泌に関与する細胞プロセスを意味する。「発現産物」なる用語は、遺伝子から転写されたRNA、および遺伝子から転写されたmRNAの翻訳により得られたポリペプチドを含む。いくつかの態様において、発現産物は、マイクロRNAまたはRNAiなどの、ポリペプチドをコードしない配列から転写される。
【００４８】
本明細書において用いられる「相補性」または「相補的塩基対」なる用語は、DNAにおけるA：TおよびG：CならびにRNAにおけるA：Uを意味する。ほとんどのDNAは4つの窒素性塩基：塩基または塩基アデニン（A）、チミン（T）、グアニン（G）、およびシトシン（C）のみのヌクレオチド配列からなる。これらの塩基は一緒になって遺伝的アルファベットを形成し、それらの長い規則正しい配列は、コードされた形で、遺伝子に存在する情報の多くを含む。ほとんどのRNAも4つの塩基のみの配列からなる。しかし、RNAでは、チミンがウリジン（U）で置き換えられている。
【００４９】
本明細書において用いられる「核酸」または「核酸配列」なる用語は、リボ核酸、デオキシリボ核酸またはその類似体、デオキシリボ核酸（DNA）および適切な場合には、リボ核酸（RNA）などのポリヌクレオチド、一本鎖または二本鎖の形態のそのポリマーの単位を組み込んでいる、任意の分子、好ましくはポリマー分子を意味する。一本鎖核酸は、変性した二本鎖DNAの1つの鎖の核酸であり得る。または、いかなる二本鎖DNA由来でもない一本鎖核酸であり得る。1つの局面において、鋳型核酸はDNAである。別の局面において、鋳型はRNAである。適切な核酸分子は、ゲノムDNA、リボソームDNAおよびcDNAを含むDNAである。他の適切な核酸分子は、mRNA、rRNAおよびtRNAを含むRNAである。核酸分子は、ゲノムDNAなどの場合、天然であり得るか、または、それは、合成でもよい、すなわち、ヒト活動に基づき調製してもよいか、もしくは両者の組み合わせであってもよい。特に限定されないかぎり、この用語は、基準の核酸と類似の結合特性を有し、天然ヌクレオチドと類似の様式で代謝される、天然ヌクレオチドの公知の類似体を含む核酸を含む。特に記載がないかぎり、特定の核酸配列はその保存的に修飾された変異体（例えば、変性コドン置換）および相補的配列、ならびに明確に示された配列も暗黙的に含む。具体的には、変性コドン置換は、1つまたは複数の選択した（またはすべての）コドンの3位が混合塩基および/またはデオキシイノシン残基で置換されている配列を生成することにより達成し得る（Batzer, et al., Nucleic Acid Res. 19:5081 (1991)；Ohtsuka, et al., J. Biol. Chem. 260:2605-2608 (1985)、およびRossolini, et al., Mol. Cell. Probes 8:91-98 (1994)）。核酸分子は、米国特許出願第20070213292号に記載の2'-デオキシ、2'-デオキシ-2'-フルオロ、2'-O-メチル、2'-O-メトキシエチル（2'-O-MOE）、2'-O-アミノプロピル（2'-O-AP）、2'-O-ジメチルアミノエチル（2'-O-DMAOE）、2'-O-ジメチルアミノプロピル（2'-O-DMAP）、2'-O-ジメチルアミノエチルオキシエチル（2'-O-DMAEOE）、または2'-O--N-メチルアセトアミド（2'-O-NMA）、コレステロール付加、およびホスホロチオエート主鎖などの特定の改変；ならびに米国特許第6,268,490号に記載の2'-酸素と4'-炭素原子との間でメチレン単位により連結されている特定のリボヌクレオシドを有していてもよく、特許および特許出願はいずれもその全体が参照により本明細書に組み入れられる。「核酸」なる用語は、等価物として、ヌクレオチド類似体から作製されたRNAまたはDNAいずれかの誘導体、変異体および類似体、ならびに一本鎖（センスまたはアンチセンス）および二本鎖ポリヌクレオチドを含むと理解されるべきでもある。
【００５０】
「遺伝子」なる用語は、適切な調節配列に機能的に連結された場合に、インビトロまたはインビボでRNAに転写される核酸配列（DNA）を意味する。遺伝子は、コード領域の前および後の領域、例えば、5'非翻訳（5'UTR）または「リーダー」配列および3'UTRまたは「トレーラー」配列、ならびに個々のコードセグメント（エキソン）の間の介在配列（イントロン）を含んでいてもまたは含んでいなくてもよい。
【００５１】
本明細書において用いられる「タンパク質」および「ポリペプチドおよび「ペプチド」なる用語は、本明細書において交換可能に用いられて、隣接残基のα-アミノ基とカルボキシ基との間のペプチド結合により、他の残基に連結されている一連のアミノ酸残基を意味する。「タンパク質」、および「ポリペプチドおよび「ペプチド」なる用語は、本明細書において交換可能に用いられ、そのサイズまたは機能に関係なく、修飾アミノ酸（例えば、リン酸化、糖化、グリコシル化アミノ酸など）およびアミノ酸類似体を含む、アミノ酸のポリマーを意味する。「タンパク質」は比較的大きいポリペプチドに関して用いられることが多く、「ペプチド」は小さいポリペプチドに関して用いられることが多いが、当技術分野におけるこれらの用語の用法は重なっており、変動する。本明細書において用いられる「ペプチド」なる用語は、特に記載がないかぎり、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質およびタンパク質の断片を意味する。「タンパク質」および「ポリペプチド」および「ペプチド」なる用語は、遺伝子産物およびその断片を指す場合、本明細書において交換可能に用いられる。したがって、例示的ペプチドまたはタンパク質には、遺伝子産物、天然タンパク質、相同体、オルソログ、パラログ、断片ならびに前記の他の等価物、変異体、断片、および類似体が含まれる。
【００５２】
本明細書において用いられる「ベクター」なる用語は、宿主細胞への送達のためまたは異なる宿主細胞間の移動のために設計された核酸構築物を意味する。本明細書において用いられるベクターは、ウイルスベクターまたは非ウイルスベクターであり得る。ベクターには、クローニングベクター、発現ベクター、プラスミド、ファージ、トランスポゾン、コスミド、細菌人工染色体（BAC）、酵母人工染色体（YAC）、ウイルス、ビリオン、レトロウイルスなどが含まれるが、それらに限定されるわけではない。いくつかの態様において、ベクターはエピソームベクターである。適切なエピソームベクターの使用は、対象中における関心対象のヌクレオチドを高コピー数の染色体外DNAに維持し、それにより染色体組込みの潜在的影響を排除する手段を提供する。
【００５３】
本明細書において用いられる「発現ベクター」なる用語は、細胞において異種核酸断片を組込み、発現する能力を有するベクターを意味する。発現ベクターは、追加の要素を含んでいてもよく、例えば、発現ベクターは2つの複製システムを有していてもよく、したがって2つの生物中、例えば、発現のためにヒト細胞中ならびにクローニングおよび増幅のために原核生物宿主中で維持することが可能になる。発現ベクターは、ベクター上の転写調節配列に連結された配列からのRNAまたはポリペプチドの発現を指向してもよい。発現された配列は、細胞に対して異種であることが多いが、必須ではない。発現ベクターは、追加の要素を含んでいてもよく、例えば、発現ベクターは2つの複製システムを有していてもよく、したがって2つの生物中、例えば、発現のためにヒト細胞中ならびにクローニングおよび増幅のために原核生物宿主中で維持することが可能になる。
【００５４】
本明細書において用いられる「ウイルスベクター」なる用語は、少なくとも1つのウイルス起源の要素を含み、ウイルスベクター粒子中にパッケージングされる能力を有する、核酸ベクター構築物を意味する。ウイルスベクターは、非必須ウイルス遺伝子の代わりに標的遺伝子を含むことができる。ベクターおよび/または粒子を、インビトロまたはインビボのいずれかで任意の核酸を細胞中に移動するために用いてもよい。サイトメガロウイルス、アデノウイルス、レンチウイルス、ポックスウイルス、ヘルペスウイルス、レトロウイルス（例えば、MMLV、HIV-1またはALV）を含むが、それらに限定されるわけではない、多くの形のウイルスベクターが当技術分野において公知である。ウイルスを核酸修飾化合物の細胞中への担体として用いることができる。例えば、細胞への感染または形質導入のために、修飾化合物を含む構築物を、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（AAV）、もしくは単純ヘルペスウイルス（HSV）などの非複製、欠陥ウイルスゲノム、またはレトロウイルスおよびレンチウイルスを含む他のウイルスゲノム中に組込み、パッケージングしてもよい。または、構築物を、エピソームの複製が可能なベクター、例えば、EPVおよびEBVベクター中に組み込んでもよい。発現制御配列がそのポリペプチド配列の転写および翻訳を制御および調節する場合、ベクター中に組み込まれた核酸を発現制御配列に動作可能に連結することができる。
【００５５】
本明細書において用いられる「動作可能に連結された」または「機能的に連結された（operably linked）」なる用語は、第二の核酸と機能的関係にある核酸を意味する。「機能的に連結された」なる用語は、転写されるオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドなどの2つまたはそれ以上の核酸分子と、転写されるオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの転写を可能にするプロモーターまたはエンハンサー要素などの調節要素との機能的接続を含む。いくつかの例において、核酸修飾化合物の転写は、細胞型中での発現が意図される該細胞型中の核酸の発現を制御する、プロモーター配列（または他の転写調節配列）の制御下にある。修飾核酸は、天然型のタンパク質の転写を制御する配列と同じかまたは異なる、転写調節配列の制御下にあり得ることも理解されると考えられる。いくつかの場合には、特定の遺伝子の転写を開始するために必要なプロモーター配列は、細胞の合成機構、または導入された合成機構によって認識される。プロモーター配列は「組織特異的プロモーター」であってもよく、これはプロモーターとして役立つ核酸配列、すなわち、プロモーターに機能的に連結された、選択された核酸配列の発現を調節する核酸配列を意味し、かつこれは特定の細胞、例えば、リンパ球または上皮細胞における選択された核酸配列の発現に影響をおよぼす。この用語は、主に1つの組織における選択された核酸の発現を調節するが、他の組織における発現も引き起こす、いわゆる「漏出」プロモーターも含む。
【００５６】
本明細書において用いられる「異種核酸断片」なる用語は、その細胞において自然には存在しない核酸配列を意味する。例えば、DNA編集酵素（例えば、AID）などの異種遺伝子を細菌またはウイルスのゲノムに挿入した場合、細菌およびウイルスゲノムはDNA編集酵素遺伝子を自然に有していないため、その遺伝子はその受容体細菌またはウイルスに対して異種である。
【００５７】
本明細書において用いられる「複製不全」なる用語は、ウイルスベクターがさらに複製して、そのゲノムをパッケージングすることができないことを意味する。例えば、対象の細胞が複製不全組換えアデノ随伴ウイルス（rAAV）ビリオンに感染すると、異種（導入遺伝子としても公知）遺伝子が患者の細胞内で発現されるが、rAAVは複製を欠損しており（例えば、ウイルスをパッケージングすることから必須のタンパク質をコードする補助遺伝子を欠き）、ウイルス粒子は患者の細胞内で形成されない。
【００５８】
本明細書において用いられる「単離された」または「部分的に精製された」なる用語は、核酸またはポリペプチドの場合、その天然原料において見られるような核酸もしくはポリペプチドと共に存在する、および/または細胞によって発現されたか、もしくは分泌ポリペプチドの場合には分泌された場合に核酸もしくはポリペプチドと共に存在する、少なくとも1つの他の成分（例えば、核酸またはポリペプチド）から分離された核酸またはポリペプチドを意味する。化学合成した核酸もしくはポリペプチド、またはインビトロ転写/翻訳を用いて合成したものは「単離された」と考えられる。
【００５９】
本明細書において疾患の文脈で用いられる「処置する」、「処置」、「処置すること」などの用語は、本明細書に記載の癌の指標、症状、マーカー、物理的パラメーター、腫瘍サイズまたは再発の重症度の低下を意味する。本明細書において列挙する任意の状態に関する範囲で、本明細書に記載の技術の文脈において、「処置する」、「処置」、「処置すること」などの用語は、そのような癌もしくは自己免疫障害に関連する少なくとも1つの症状もしくは合併症の進行、増悪、悪化、進行、予測される進行もしくは重症度を軽減する、緩和するか、改善するか、阻害するか、緩徐化するか、遅延させるか、逆転させるか、もしくは停止すること、または疾患もしくは障害の発症を遅延させることを意味する。1つの態様において、癌または自己免疫障害の症状が、少なくとも5％、少なくとも10％、少なくとも20％、少なくとも30％、少なくとも40％、または少なくとも50％緩和される。
【００６０】
疾患または障害のマーカーまたは症状の文脈において、「より低い」とは、そのようなレベルにおける統計学的に有意な減少を意味する。減少は、例えば、少なくとも10％、少なくとも20％、少なくとも30％、少なくとも40％、またはそれ以上であり得、好ましくはそのような疾患または障害がない個体にとっての正常範囲内として許容されるレベルまでの低下である。
【００６１】
疾患または障害のマーカーまたは症状の文脈において、「より高い」とは、そのようなレベルにおける統計学的に有意な増加を意味する。減少は、例えば、少なくとも10％、少なくとも20％、少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、またはそれ以上であり得、好ましくはそのような疾患または障害がない個体にとっての正常範囲内として許容されるレベルからの上昇である。
【００６２】
本明細書において用いられる「治療的有効量」、「有効量」または「有効用量」なる語句は、本明細書に記載の状態（例えば、癌または自己免疫疾患）の処置、予防、または管理において治療上の利点を提供する量、例えば、そのような状態の少なくとも1つの症状において統計学的に有意な軽減を提供する量を意味する。治療的有効量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。一般に、治療的有効量は、対象の病歴、年齢、状態、性別、ならびに対象の医学的状態の重症度および種類、ならびに、他の薬学的に活性な作用物質の投与によって変動し得る。
【００６３】
本明細書において用いられる「薬学的組成物」なる用語は、薬学的産業において一般に用いられる薬学的に許容される担体と組み合わせての活性作用物質を意味する。
【００６４】
本明細書において用いられる「薬学的に許容される」なる用語は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症なしにヒトおよび動物の組織と接触して用いるのに適し、妥当な損益比に見合った、化合物、材料、組成物、および/または剤形を意味する。
【００６５】
本明細書において用いられる「薬学的に許容される担体」なる用語は、当業者には公知であるとおり、液体もしくは固体充填剤、希釈剤、賦形剤（例えば、色素、香料、結合剤、皮膚軟化剤、充填剤、滑沢剤、保存剤、コーンスターチ、ラクトース、タルク、ステアリン酸マグネシウム、スクロース、ゼラチン、ステアリン酸カルシウム、二酸化ケイ素、シェラックおよびグレーズ）、溶媒もしくはカプセル化材料、コーティング、界面活性剤、吸収遅延剤、製造支援物質（例えば、滑沢剤、タルクマグネシウム、ステアリン酸カルシウムもしくは亜鉛、またはステアリン酸）、または溶媒カプセル化材料、塩、保存剤、安定化剤、ゲル、崩壊剤、甘味剤、そのような同様の材料、およびそれらの組み合わせなどの、任意の薬学的に許容される材料、組成物、媒質、または媒体を意味する（例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289-1329参照）。任意の通常の担体が活性成分と不適合である場合を除き、治療的または薬学的組成物におけるその使用が企図される。各担体は、製剤の他の成分と適合性であり、患者に対して有害でないという意味で「許容され」なければならない。例えば、担体は処置における作用物質の効果を減少しない。言い換えると、担体は薬学的に不活性である。薬学的に許容される担体となり得る材料のいくつかの例には：（1）ラクトース、グルコースおよびスクロースなどの糖類；（2）コーンスターチおよびジャガイモデンプンなどのデンプン；（3）セルロース、ならびにカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、エチルセルロース、微結晶セルロース、および酢酸セルロースなどのその誘導体；（4）粉末トラガカント；（5）麦芽；（6）ゼラチン；（7）ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、およびタルクなどの滑沢剤；(8）カカオ脂および坐剤ワックスなどの賦形剤；（9）落花生油、綿実油、紅花油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、およびダイズ油などの油；（10）プロピレングリコールなどのグリコール；（11）グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコール（PEG）などのポリオール；（12）オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル；（13）寒天；（14）水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；（15）アルギン酸；（16）発熱物質を含まない水；（17）等張食塩水；（18）リンゲル液；（19）エチルアルコール；（20）pH緩衝化溶液；（21）ポリエステル、ポリカーボネート、および/またはポリ無水物；（22）ポリペプチドおよびアミノ酸などの嵩増し剤（23）血清アルブミン、HDL、およびLDLなどの血清成分；（22）エタノールなどのC2〜C12アルコール；ならびに（23）薬学的製剤中で用いられる他の非毒性適合性物質が含まれるが、それらに限定されるわけではない。湿潤剤、結合剤、充填剤、滑沢剤、着色剤、崩壊剤、放出剤、コーティング剤、甘味剤、着香剤、香料、保存剤、水、塩溶液、アルコール、抗酸化剤、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘稠パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなども、製剤中に存在し得る。「賦形剤」、「担体」、「薬学的に許容される担体」などの用語は、本明細書において交換可能に用いられる。
【００６６】
本明細書において用いられる「小分子」なる用語は、ペプチド、ペプチド様物質、アミノ酸、アミノ酸類似体、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド類似体、アプタマー、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、分子量が約10,000グラム/モル未満の有機または無機化合物（すなわち、ヘテロ有機および有機金属化合物を含む）、分子量が約5,000グラム/モル未満の有機または無機化合物、1モルあたり約1,000グラム/モル未満の分子量の有機または無機化合物、1モルあたり約500グラム未満の分子量の有機または無機化合物、ならびにそのような化合物の塩、エステル、および他の薬学的に許容される形を含み得るが、それらに限定されるわけではない、化学作用物質を意味する。
【００６７】
本明細書において用いられる「対象」は、ヒトまたは動物を意味する。1つの態様において、動物は、霊長類、齧歯類、家畜、鳥類、魚類、または狩猟動物などの脊椎動物である。「患者」、「個体」、および「対象」なる用語は本明細書において交換可能に用いられる。
【００６８】
好ましくは、対象は哺乳動物である。哺乳動物はヒト、非ヒト霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、またはウシであり得るが、これらの例に限定されない。ヒト以外の哺乳動物を、癌、自己免疫疾患、または炎症疾患の動物モデルとなる対象として都合よく用いることができる。加えて、本明細書に記載の方法を用いて、家畜および/またはペットを処置することもできる。対象は雄性または雌性であり得る。対象は、以前に癌もしくは自己免疫疾患と診断された者、または癌もしくは自己免疫疾患に関連する1つもしくは複数の合併症を有していると特定された対象であり得、任意に癌もしくは自己免疫疾患または癌もしくは自己免疫疾患に関連する1つもしくは複数の合併症に対する処置を受けているが、必ずしもその必要はない。対象は、癌または自己免疫疾患を患っていない者でもあり得る。例えば、対象は、癌もしくは自己免疫疾患または癌もしくは自己免疫疾患に関連する1つもしくは複数の合併症に対する1つまたは複数の危険因子を示す者であり得る。対象は、癌もしくは自己免疫疾患または癌もしくは自己免疫疾患に関連する1つもしくは複数の合併症について無症候性であり得る。1つの態様において、対象は、癌または自己免疫疾患を有していることについてまたはそれを有している危険度が高いことについて選択される。対象は癌もしくは自己免疫疾患に関連する1つもしくは複数の合併症と診断された、またはそれらを有していると特定された者でもあり得るか、あるいは対象は以前に癌もしくは自己免疫疾患に関連する1つもしくは複数の合併症と診断されたことがないかまたはそれらを有していると特定されたことがない者でもあり得る。
【００６９】
本明細書において用いられる「アルキル」なる用語は、飽和直鎖、分枝鎖、またはシクリル炭化水素ラジカルを意味する。「アルキル」なる用語は、シクロアルキルまたは環式アルキルを含む。加えて、アルキルの主鎖は、O、N、またはSなどの、1つまたは複数のヘテロ原子を含み得る。アルキルラジカルの例には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、n-ブチル、tert-ブチル、ネオペンチル、n-ヘキシル、およびn-オクチルラジカルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００７０】
本明細書において用いられる「アルケニル」なる用語は、少なくとも1つの炭素-炭素二重結合を有する、不飽和直鎖、分枝鎖、またはシクリル炭化水素ラジカルを意味する。「アルケニル」なる用語は、シクロアルキルまたは環式アルケニルを含む。加えて、アルケニルの主鎖は、O、N、またはSなどの、1つまたは複数のヘテロ原子を含み得る。アルケニルラジカルの例には、アリル、ブテニル、およびヘキセニルラジカルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００７１】
本明細書において用いられる「アルキニル」なる用語は、少なくとも1つの炭素-炭素三重結合を有する、不飽和炭化水素ラジカルを意味する。加えて、アルキニルの主鎖は、O、N、またはSなどの、1つまたは複数のヘテロ原子を含み得る。代表的なアルキニル基には、エチニル、1-プロピニル、1-ブチニル、イソペンチニル、1,3-ヘキサジイニル、n-ヘキシニル、3-ペンチニル、1-ヘキセン-3-イニルなどが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００７２】
本明細書において用いられる「ハロゲン」なる用語は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素から選択される原子を意味する。「ハロゲン放射性同位元素」なる用語は、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素から選択される原子の放射性核種を意味する。
【００７３】
本明細書において用いられる「シクリル」なる用語は、3〜12個の炭素、好ましくは3〜8個の炭素、より好ましくは3〜6個の炭素を有する、飽和および部分的不飽和環式炭化水素基を意味し、ここでシクリル基は置換されていてもよい。シクリル基の例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプチル、およびシクロオクチルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００７４】
本明細書において用いられる「ヘテロシクリル」なる用語は、単環式の場合は1〜3個のヘテロ原子、二環式の場合は1〜6個のヘテロ原子、または三環式の場合は1〜9個のヘテロ原子を有する、非芳香族5〜8員単環式、8〜12員二環式、または11〜14員三環式環系を意味し、sAICDヘテロ原子はO、N、またはSから選択され（例えば、単環式、二環式、または三環式の場合、それぞれ炭素原子および1〜3個、1〜6個、または1〜9個のN、O、またはSのヘテロ原子）、ここで各環の0、1、2または3個の原子は置換基によって置換され得る。ヘテロシクリル基の例には、ピペラジニル、ピロリジニル、ジオキサニル、モルホリニル、テトラヒドロフラニルなどが含まれる。
【００７５】
本明細書において用いられる「アリール」なる用語は、6-炭素単環式、10-炭素二環式、14-炭素三環式芳香環系を意味し、ここで各環は1〜4つの置換基を有し得る。アリール基の例には、フェニル、メチルフェニル、ナフチル、およびアントラセニルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００７６】
本明細書において用いられる「ヘテロアリール」なる用語は、単環式の場合は1〜3個のヘテロ原子、二環式の場合は1〜6個のヘテロ原子、または三環式の場合は1〜9個のヘテロ原子を有する、芳香族5〜8員単環式、8〜12員二環式、または11〜14員三環式環系を意味し、sAICDヘテロ原子はO、N、またはSから選択され（例えば、単環式、二環式、または三環式の場合、それぞれ炭素原子および1〜3個、1〜6個、または1〜9個のN、O、またはSのヘテロ原子）、ここで各環は1〜5つの置換基を有していてもよい。ヘテロアリール基の例には、ピリジル、フリルまたはフラニル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、ピリミジニル、ピロリル、ピラジニル、チオフェニルまたはチエニル、キノリニル、インドリル、チアゾリルなどが含まれる。
【００７７】
本明細書において用いられる「置換された」なる用語は、置換された部分上の1つまたは複数の水素原子の、アルキル、アルケニル、ヘテロシクロアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、ヒドロキシ、アミノ、アミド、アルキルアミノ、アリールアミノ、シアノ、ハロ、メルカプト、ニトロ、カルボニル、アシル、アリール、およびヘテロアリール基から独立して選択されるが、それらに限定されるわけではない、置換基による独立の置き換えを意味する。
【００７８】
本明細書において用いられる「異性体」なる用語は、同じ分子式を有するが、構造が異なる化合物を意味する。立体配置および/または立体配座のみが異なる異性体は「立体異性体」と呼ぶ。「異性体」なる用語は、鏡像異性体を指す場合にも用いられる。
【００７９】
「鏡像異性体」なる用語は、互いの鏡像であり、重ね合わせ不可能な、分子異性体の対の1つを記載するために用いる。鏡像異性体を示すかまたは指すために用いる他の用語には、「立体異性体」（キラル中心の周りの異なる配置または立体化学のため；すべての鏡像異性体は立体異性体であるが、すべての立体異性体が鏡像異性体というわけではない）または「光学異性体」（異なる純粋な鏡像異性体の平面偏光を異なる方向に回転させる能力である、純粋な鏡像異性体の光学活性のため）が含まれる。鏡像異性体は一般に、融点および沸点などの同じ物理的性質を有し、かつ同じ分光学的性質も有する。鏡像異性体は、平面偏光とのそれらの相互作用に関して、および生物活性に関して、互いに異なり得る。
【００８０】
「ラセミ混合物」、「ラセミ化合物」、または「ラセミ体」なる用語は、1つの化合物の2つの鏡像異性体の混合物を意味する。理想的なラセミ混合物は、(+)鏡像異性体の旋光度が(-)鏡像異性体の旋光度を相殺するような、化合物の両鏡像異性体の50：50混合物が存在するものである。
【００８１】
「分割する」または「分割」なる用語は、ラセミ混合物に関して用いる場合、ラセミ体のその2つの鏡像異性体（すなわち、(+)および(-)；または(R)および(S)体）への分離を意味する。この用語は、ラセミ体の1つの異性体の生成物への鏡像選択的変換も意味し得る。
【００８２】
「鏡像体過剰率」または「ee」なる用語は、1つの鏡像異性体が他よりも多く生成する反応生成物を意味し、(+)-および(-)-鏡像異性体の混合物について、モルまたは重量または体積比F(+)およびF(-)で組成を示して規定する（F(+)およびF(-)の合計＝1）。鏡像体過剰率は*F(+) -F(-)*と規定され、鏡像体過剰率（％）は100×*F(+) -F(-)*により規定される。鏡像異性体の「純度」は、そのeeまたはパーセントee値（ee％）で記載する。
【００８３】
「精製した鏡像異性体」、または「純粋な鏡像異性体」、または「分割した鏡像異性体」、または「鏡像体過剰の化合物」のいずれで表されていようと、これらの用語は1つの鏡像異性体の量が他の量を超えていることを示すことになる。したがって、鏡像異性体調製物について言及する場合、主要鏡像異性体のパーセント（例えば、モルまたは重量または体積による）および（または）主要鏡像異性体のパーセント鏡像体過剰率の両方（またはいずれか）を用いて、調製物が精製した鏡像異性体調製物であるかどうかを決定してもよい。
【００８４】
異性体の「鏡像異性純度」または「鏡像異性体純度」なる用語は、精製した鏡像異性体の質的または量的尺度を意味し；典型的には、測定値はeeまたは鏡像体過剰率に基づいて表す。
【００８５】
「実質的に精製した鏡像異性体」、「実質的に分割した鏡像異性体」、「実質的に精製した鏡像異性体調製物」なる用語は、1つの鏡像異性体が他よりも多く含まれる、より好ましくは、他の鏡像異性体が20％未満である、より好ましくは10％未満、より好ましくは5％未満、さらにより好ましくは鏡像異性体または鏡像異性体調製物の2％未満である、調製物（例えば、非光学活性の出発原料、基質、または中間体から誘導された）を示すことになる。
【００８６】
「精製した鏡像異性体」、「分割した鏡像異性体」、および「精製した鏡像異性体調製物」なる用語は、1つの鏡像異性体（例えば、R-鏡像異性体）が他よりも多く含まれる、より好ましくは、他の鏡像異性体（例えば、S-鏡像異性体）が30％未満である、好ましくは20％未満、より好ましくは10％未満（例えば、この特定の場合、R-鏡像異性体はS-鏡像異性体を実質的に含まない）、より好ましくは5％未満、さらにより好ましくは調製物の2％未満である、調製物（例えば、非光学活性の出発原料、基質、または中間体から誘導された）を示すことになる。精製した鏡像異性体は他の鏡像異性体を実質的に含まずに合成してもよいか、または精製した鏡像異性体は立体優先的（stereopreferred）手順、その後の分離段階で合成してもよいか、または精製した鏡像異性体はラセミ混合物から誘導してもよい。
【００８７】
「エナンチオ選択性」なる用語は、記号「E」で示す鏡像異性比とも呼び、ラセミ基質から生成物ラセミ混合物中に1つの鏡像異性体を他の鏡像異性体に対して生成する酵素の選択的能力を意味し；言い換えると、これは鏡像異性体を識別する酵素の能力の尺度である。非選択的反応はE＝1を有し、一方、Eが20を超える分割は一般に合成または分割のために有用と考えられる。エナンチオ選択性は、問題の鏡像異性体間の変換速度の差にある。鏡像異性体の一方を多く含む反応生成物を得；反対に、残っている基質は他の鏡像異性体を多く含む。実用的な目的のために、鏡像異性体の一方を大過剰で得ることが一般に望ましい。これは、変換工程を変換の一定の度合で停止することにより達成される。
【００８８】
本発明の化合物はプロドラッグの形態で存在してもよい。本明細書において用いられる「プロドラッグ」は、そのようなプロドラッグを対象に投与すると、活性親化合物もしくはインビボで活性薬物に代謝される化合物またはインビボで本発明の方法において用いる他の化合物を放出する任意の担体を含むことが意図される。プロドラッグは、薬剤の多くの望ましい品質（例えば、溶解性、バイオアベイラビリティ、製造など）を向上させることが公知であるため、本発明のいくつかの方法において用いる化合物は、望まれる場合には、プロドラッグの形態で送達してもよい。したがって、本発明は、本発明の化合物のプロドラッグならびにプロドラッグを送達する方法を企図する。本発明において用いる化合物のプロドラッグは、化合物にある官能基を、修飾が日常的操作またはインビボのいずれかで親化合物に切断されるような様式で修飾することにより調製してもよい。したがって、プロドラッグには、例えば、ヒドロキシ、アミノ、またはカルボキシ基が、プロドラッグを対象に投与すると切断されて、それぞれ遊離ヒドロキシル、遊離アミノまたはカルボン酸を生成する任意の基に結合している、本明細書に記載の化合物が含まれる。他の例には、アルコールおよびアミン官能基の酢酸、ギ酸、および安息香酸誘導体；ならびにメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tertブチル、シクロプロピル、フェニル、ベンジル、およびフェネチルエステルなどの、アルキル、炭環式、アリール、およびアルキルアリールエステルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００８９】
本明細書において用いられる「薬学的に許容される塩」なる用語は、例えば、非毒性有機または無機酸からの、治療的物質もしくは治療的化合物またはプロドラッグの無機および有機塩、通常の非毒性塩または四級アンモニウム塩を意味する。これらの塩は、投与媒体中、インサイチューで、または剤形製造工程で、または遊離塩基もしくは酸型の治療的物質を適切な有機もしくは無機酸もしくは塩基と別々に反応させ、続く精製でそのように生成した塩を単離することにより調製することができる。通常の非毒性塩には、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などの無機酸由来のもの；および酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パルミチン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリサイクリック酸、スルファニル酸、2-アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イソチオン酸、アジピン酸、アスパラギン酸、炭酸、グルコン酸、グルクロン酸、マロン酸、オレイン酸、パモ酸などの有機酸から調製される塩が含まれる。例えば、Berge et al., ''Pharmaceutical Salts'', J. Pharm. Sci. 66:1-19 (1977)またはP. H. Stahl and C. G. Wermuth, editors, Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, Weinheim/Zurich:Wiley-VCH/VHCA, 2002を参照されたく、その内容は全体が参照により本明細書に組み入れられる。「塩」なる用語は「薬学的に許容される塩」と交換可能に用いられる。
【００９０】
本明細書に記載の局面のいくつかの態様において、代表的な塩には、臭化水素塩、塩酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、コハク酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、トルエンスルホン酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナプチレート、メタンスルホン酸塩、リン酸1水素塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオ酸塩、ラウリルスルホン酸塩、ピロリン酸塩、ピロ硫酸塩、およびナトリウム塩などが含まれる。
【００９１】
特定されるすべての特許および他の出版物は、例えば、本明細書に記載の技術と関連して用い得る、そのような出版物に記載の方法論を記載および開示する目的のために、特にその全体が参照により本明細書に組み入れられる。これらの出版物は、本出願の提出日よりも前にそれらが開示されたことのみのために提供する。これに関して、本発明者らが先行発明により、または任意の他の理由により、そのような開示に先行する権利がないとの自認であると解釈されるべきではない。日付に関するすべての言明およびこれらの文書の内容に関する表示は、出願人らが使用可能な情報に基づいており、これらの文書の日付および内容の正確さに関するいかなる自認をなすものではない。
【００９２】
DNA編集酵素および二本鎖DNA切断修復
本明細書に記載の技術の態様は、活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID、またはAICDA；ARP2、CDA2、またはHIGM2としても公知）、すなわちアポリポタンパク質B mRNA編集酵素触媒ポリペプチド様（APOBEC）のメンバーであるDNA編集酵素が、相同組換え能力が減弱した細胞（例えば、DNA二本鎖切断修復能力が減弱した細胞）において広範なゲノム切断および細胞死を引き起こすと考えられるというの発見に基づいている。したがって、本明細書において提供するのは、細胞死を引き起こす方法であって、細胞においてDNA編集酵素（例えば、AID）の発現増加を検出する段階、および、その後、細胞を二本鎖切断修復の阻害物質と接触させる段階を含み、それにより細胞死をもたらす、方法である。したがって、本明細書において提供するのは、細胞死を引き起こす方法であって、細胞においてDNA編集酵素（例えば、AID）の発現を増加させる段階、および、その後、細胞を二本鎖切断修復の阻害物質と接触させる段階を含み、それにより細胞死をもたらす、方法である。したがって、本明細書において提供するのは、細胞死を引き起こす方法であって、細胞にDNA編集酵素（例えば、AID）の治療的有効量を投与する段階、および、その後、細胞を二本鎖切断修復の阻害物質と接触させる段階を含み、それにより細胞死をもたらす、方法である。
【００９３】
AICDA遺伝子（NCBI遺伝子ID: 57379）によってコードされるAIDは、適切なB細胞機能のために必要とされ、中心芽細胞B細胞で最も顕著に発現される。このタンパク質は、体細胞高頻度突然変異、遺伝子変換、および免疫グロブリン遺伝子のクラススイッチ組換えに関与している。AIDは、通常はほとんど抗原活性化胚中心B細胞でのみ発現され、免疫グロブリンアイソタイプクラススイッチングを開始する（Manis et al. 2002, Trends Immunol, 23, 31-39；Chaudhuri and Alt, Nat Rev Immunol, 2004, 4, 541-552；Longerich et al., Curr Opin Immunol, 2006, 18, 164-174；Chaudhuri et al., Adv Immunol 2007, 94, 157-214）。AIDは、活性化B細胞における体細胞高頻度突然変異および免疫グロブリンクラススイッチングに必要とされる。AID発現は、CD40リガンド、B細胞受容体、IL4R、またはToll様受容体刺激によって調節される（Crouch et al., J Exp Med 2007 204:1145-1156；Muramatsu et al., J Biol Chem 1999 274:18470-6）。活性化後、AIDは、一時的に上方制御され、免疫グロブリン遺伝子内において配列非特異的様式で点突然変異またはDNA二本鎖切断を誘導し、次いで下方制御される（Longerich et al., Curr Opin Immunol, 2006, 18, 164-176；Chaudhuri et al., Adv Immunol 2007, 94, 157-214）。全体として、AIDは任意の所与の時点で正常細胞の小さい集団（抗原活性化B細胞）でのみ活性である。AIDによって制御されるゲノム再配列および突然変異は、機能的適応免疫にとって必要な、抗原認識多様性、受容体編集およびリンパ球エフェクター機能の発生につながる（Mills, et al. Immunol Rev 2003 194:77-95）。最近、AIDがオフターゲット点突然変異活性を有すると報告された（Liu, M. et al., Nature 2008, 451, 841-845；Liu and Schatz, Trends Immunol. 2009, 30, 173-181；Perez-Duran et al., Carcinogenesis. 2007, 28(12):2427-33）。Robbianiらは、B細胞におけるAIDのオフターゲット活性、特にc-myc/IgH転座を報告している（Robbiani et al., Mol Cell 2009, 36(4):631-41）。AID発現はBcl6形質転換マウスにおける腫瘍発生の速度を加速する（Pasqualucci et al., 2008, Nat. Genet. 40, 108-112）。しかし、調節解除されたAIDは、B細胞においてそれ自体に悪性病変または転座関連の癌を必ずしも引き起こさない（Muto et al., 2006, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103, 2752-2757；Okazaki et al., 2003, J. Exp. Med. 197, 1173-1181；Shen et al., 2008, Mol. Immunol. 45, 1883-1892）。加えて、c-myc/IgH転座におけるその絶対的役割にもかかわらず、AIDはIL-6形質転換マウスまたはプリスタン処置マウスにおいてそれぞれ形質細胞増加症または形質細胞腫の発生に必要とされない（Kovalchuk et al., 2007, J. Exp. Med. 204, 2989-3001；Ramiro et al., 2004, J. Exp. Med. 200, 1103-1110）。しかし、ほとんどのヒトB細胞リンパ腫関連の転座はc-mycに関与せず、多くはIg遺伝子に関与しない（Kuppers, 2005, Oncogene 20, 5580-5594）。
【００９４】
AIDの過剰発現が慢性リンパ性白血病（CLL）で報告されている（Hancer et al. Leuk Lymphoma. 2011 Jan;52(1):79-84；Heintel et al., Leukemia. 2004 Apr;18(4):756-62）。さらに、AID発現は、芽球性急性B系統白血病および骨髄性白血病の治療抵抗性に相関し、慢性Bリンパ性白血病では一般に予後不良に関連することが明らかにされている（Mao et al., Br J Dermatol 2001, 145:117-122；Chaudhuri et al., Nature 2004, 430:992-8）。さらに、肺癌、乳癌、胃癌、結腸癌、腸癌、肝癌、および胆管癌を含むが、それらに限定されるわけではない、様々な癌からの腫瘍細胞におけるAIDの発現が報告されている（Greeve et al., Blood 2003, 1010, 3574-3580；Feldhahn et al., J Exp Med 2007, 204, 1157-1166；Kotani et al., PNAS USA 2007, 104, 1616-1620；Engels et al., 2008, Appl Immunohistochem Mol Morphol 16, 521-529；Klemm et al., 2009, Cancer Cell 6, 232-245；Palacios et al., 2010, Blood 115(22), 4488-4496；Leuenberger et al., 2009, Mod Pathol 32, 177-186；Gruber et al., 2010, Cancer Res 70, 7411-7420；炎症性癌（Marusawa 2008, Int J Biochem Cell Biol.40, 399-402）；濾胞性リンパ腫（Hardianti et al., 2004, Leukemia 18, 826-831；Shikata et al., 2012, Cancer Sci. 103(3):415-21）；甲状腺癌（Qiu et al. 2012, Mod Pathol 25(1),36-45）；乳癌（Borchert et al. 2011, BMC Cancer 11:347）；Marusawa, et al., 2011, Adv Immunol 111:109-41；Zhang et al. 2012, Hum Pathol 43(3):423-34；Komori et al., 2008, Hepatology 47(3):888-896；Hockley 2010, Leukemia 24(5):1084-6；成人T細胞白血病（Nakamura et al., 2011, Br J Dermatol. 165(2):437-9）。前記パラグラフの参照文献はすべてその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【００９５】
AIDのレベル上昇が関節炎（Xu et al. Scand. J. Immunol. 2009, 296, 2033-6）およびMRL/Fas(lpr/lpr)マウス狼蒼モデル（White et al. 2011, Autoimmunity 44(8), 585-98）で報告されている。前記パラグラフの参照文献はすべてその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【００９６】
DSB修復が阻害されると、AIDにより生じるDSBの程度は以前に考えられていたよりもはるかに高く、ゲノム損傷の程度は非常に重度で細胞死をもたらすことを、本明細書において示している。したがって、本明細書に記載の技術の1つの態様において、（a）増大したレベルの活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）を発現する細胞を有している対象を選択する段階；および（b）二本鎖切断修復の阻害物質の治療的有効量を対象に投与する段階を含む、処置の方法であって、AIDの増大したレベルが、健常個体由来の同じ型の細胞におけるAIDのレベルよりも高いAIDのレベルである、方法を提供する。いくつかの態様において、増大したレベルのAIDを発現する細胞はB細胞である。いくつかの態様において、増大したレベルのAIDを発現するB細胞は癌性B細胞または自己免疫疾患に関連するB細胞である。いくつかの態様において、対象はヒト対象であり得る。
【００９７】
本明細書において提供する方法は、DNA二本鎖切断修復を阻害することによって癌および/または自己免疫疾患を処置する。この阻害はAIDを発現する細胞に対して致命的であることが判明しており、なぜならAIDは広範なゲノム切断を生じ、二本鎖切断修復阻害物質による処置は、細胞自体によって生成されているこれらの損傷の修復を妨害するからである。これは、AIDを発現する細胞、例えば、癌性B細胞および/または自己免疫細胞に特異的な、対象における細胞死をまねく。したがって、本明細書に記載のとおり、1つの態様において、特定の疾患細胞の自己破壊を選択的に誘導する一方、健常組織における意図しない副作用を軽減する、処置パラダイムを提供する。
【００９８】
RAD51媒介性鎖交換修復は、相同組換えの成分であり、放射線照射、架橋薬物により、またはAIDなどの酵素の活性の結果として生じたDNA二本鎖切断（DSB）を修復するために用いられる（Klein2008, DNA Repair, 7:686-93）。
【００９９】
RAD51（NCBI遺伝子ID: 5888）は、ATP依存性DNA結合活性を有する真核生物リコンビナーゼであり、哺乳動物の減数分裂性組換えおよびDNA修復において役割を果たす。RAD51はDSBの3'末端一本鎖に結合し、相同配列との対形成を促進する。さらなる段階は、ストランド侵入および修復に関与する（San Filippo et al., Annual Review of Biochemistry 2008, 77:229-257参照）。さらにRAD51は、抗体成熟中のクラススイッチ組換えにおいて機能を有することが明らかにされている（Li et al., PNAS 1996, 93:10222-7）。特定の態様において、DSB修復阻害物質はRAD51の発現または活性を阻害する。
【０１００】
特定の態様において、DSB修復阻害物質は、Rad51AP1（NCBI遺伝子ID:10635；例えば、SEQ ID NO:007（mRNA）およびSEQ ID NO:114（タンパク質））；Rad51B（NCBI遺伝子ID: 5890；例えば、SEQ ID NO:008（mRNA）およびSEQ ID NO:115（タンパク質））；Rad51C（NCBI遺伝子ID: 5889 例えば、SEQ ID NO: 0163（mRNA；NM_058216）およびSEQ ID NO: 0164（タンパク質；NP_478123）またはSEQ ID NO:0165（mRNA；NM_002876）およびSEQ ID NO:0166（タンパク質；NP_002867）；Rad51D（NCBI遺伝子ID: 5892；例えば、SEQ ID NO:009（mRNA）およびSEQ ID NO:116（タンパク質））；XRCC2（NCBI遺伝子ID: 7516；例えば、SEQ ID NO:010（mRNA）およびSEQ ID NO:117（タンパク質））；XRCC3（NCBI遺伝子ID: 7517；例えば、SEQ ID NO:011（mRNA）およびSEQ ID NO:118（タンパク質））；RAD54（NCBI遺伝子ID: 546；例えば、SEQ ID NO:012（mRNA）およびSEQ ID NO:119（タンパク質））；RAD52（NCBI遺伝子ID: 5893；例えば、SEQ ID NO:013（mRNA）およびSEQ ID NO:120（タンパク質））；BRCA1（NCBI遺伝子ID: 672；例えば、SEQ ID NO:014（mRNA）およびSEQ ID NO:121（タンパク質））；BRCA2（NCBI遺伝子ID: 675；例えば、SEQ ID NO:015（mRNA）およびSEQ ID NO:122（タンパク質））；ATM（NCBI遺伝子ID: 472；例えば、SEQ ID NO:016（mRNA）およびSEQ ID NO:123（タンパク質））；ATR（NCBI遺伝子ID: 545；例えば、SEQ ID NO:017（mRNA）およびSEQ ID NO:124（タンパク質））；MRE11（NCBI遺伝子ID: 4361；例えば、SEQ ID NO:018（mRNA）およびSEQ ID NO:125（タンパク質））；RAD50（NCBI遺伝子ID:10111: 例えば、SEQ ID NO:019（mRNA）およびSEQ ID NO:126（タンパク質））；NBS1（NCBI遺伝子ID: 4683；例えば、SEQ ID NO:020（mRNA）およびSEQ ID NO:127（タンパク質））；WRN（NCBI遺伝子ID: 7486；例えば、SEQ ID NO:021（mRNA）およびSEQ ID NO:128（タンパク質））；BLM（NCBI遺伝子ID: 641；例えば、SEQ ID NO:022（mRNA）およびSEQ ID NO:129））；RECQ4（NCBI遺伝子ID: 9401；例えば、SEQ ID NO:023（mRNA）およびSEQ ID NO:130（タンパク質））；LIG4（DNAリガーゼ4；NCBI遺伝子ID: 3981；例えば、SEQ ID NO:024（mRNA）およびSEQ ID NO:131（タンパク質））；XRCC4（NCBI遺伝子ID: 7518；例えば、SEQ ID NO:025（mRNA）およびSEQ ID NO:132（タンパク質））；PRKDC（DNA-PKcs7；XRCC7；NCBI遺伝子ID: 5591；例えば、SEQ ID NO:026（mRNA）およびSEQ ID NO:133（タンパク質））；DCLRE1C（NCBI遺伝子ID: 64421；例えば、SEQ ID NO:027（mRNA）およびSEQ ID NO:134（タンパク質））；XRCC6（Ku70；NCBI遺伝子ID: 2547；例えば、SEQ ID NO:028（mRNA）およびSEQ ID NO:135（タンパク質））；XRCC5（Ku80；NCBI遺伝子ID: 7520；例えば、SEQ ID NO:029（mRNA）およびSEQ ID NO:136（タンパク質））および/またはXLF（NHEJ1；XRCC4様因子；NCBI遺伝子ID: 79840；例えば、SEQ ID NO:030（mRNA）およびSEQ ID NO:137（タンパク質））を含むが、それらに限定されるわけではない、タンパク質および/または転写物の1つまたは複数の発現または活性を阻害する。
【０１０１】
特定の態様において、DSB修復阻害物質は、Rad51AP1；Rad51B；Rad51C；Rad51D；XRCC3；RAD54；RAD52；BRCA1；BRCA2；ATM；ATR；MRE11；RAD50；NBS1；WRN；BLM；RECQ4；LIG4；XRCC4；PRKDC；DCLRE1C；XRCC6；XRCC5；およびXLFからなる群より選択される遺伝子によってコードされる1つまたは複数のタンパク質および/または転写物の発現または活性を阻害する。
【０１０２】
特定の態様において、DSB修復阻害物質は、Rad51AP1；Rad51B；Rad51C；Rad51D；RAD54；RAD52；BRCA1；BRCA2；ATM；ATR；MRE11；RAD50；NBS1；WRN；BLM；RECQ4；LIG4；およびPRKDCからなる群より選択される遺伝子によってコードされる1つまたは複数のタンパク質および/または転写物の発現または活性を阻害する。
【０１０３】
特定の態様において、DSB修復阻害物質は、Rad51AP1；Rad51B；Rad51C；および/またはRad51Dを含むが、それらに限定されるわけではない、タンパク質および/または転写物の1つまたは複数に結合する。
【０１０４】
いくつかの態様において、二本鎖切断修復の阻害物質は、Rad51ファミリーメンバー（例えば、Rad51；Rad51AP1；Rad51B；Rad51C；Rad51D；XRCC2；XRCC3）の発現または活性を阻害し得る。いくつかの態様において、二本鎖切断修復の阻害物質は、非相同末端結合（NHEJ）タンパク質メンバー（例えば、LIG4；XRCC4；PRKDC；DCLRE1C；XRCC6；XRCC5；XLF）を阻害し得る。
【０１０５】
酵母において、Rad52はRad51のssDNAへの結合を媒介することが明らかにされている。BRCA2も組換えメディエータとして機能し；RAD51のssDNAへの結合を促進し、おそらくはRAD51の核への転座を媒介すると考えられる。RAD51B、Rad51C、RAD51D、XRCC2およびXRCC3はRAD51のパラログであり、すべてDSBR経路のHRにおいて機能している（Yokoyama et al. J Biol Chem. 2003, 278(4):2767-72；Thacker, Trends Genet. 1999, 15:166-168；Schild D, et al., J. Biol. Chem. 2000, 275:16443-16449）。Rad51AP1は、分枝DNA分子への結合を促進するRAD51関連タンパク質である（Modesti et al., Mol Cell 2007, 28:468-481；Dunlop et al., 2012, J Biol Chem 6, 287, 12343-7）。RAD54は、dsDNA依存性ATPアーゼ活性を有するタンパク質であり、この活性はRAD51の存在によって増大する。酵母において、Rad54は、DNA相同性の検索、クロマチンのリモデリング、侵入複合体の形成、および最終的なRad51のdsDNAからの除去を促進する。ヒトにおいて、これはDNA修復および組換えにおける主要な中間体であるホリデイジャンクションの分岐点移動において機能することが明らかにされている（San Filippo et al., Annual Review of Biochemistry 2008, 77:229-257；Mazina et al., 2012, J Biol Chem 6, 287(15):11820-32）。BRCA1はDSBのRAD51媒介性修復を促進し、交叉型修復を抑制する（Cousineau et al., Cancer Res 2005 65:11384-91）。ATMおよびATRはタンパク質キナーゼである。ATMは、DSBが検出されると標的をリン酸化し、細胞周期を停止する。MRE11、RAD50およびNBS1は、ATMをDSBに動員するMRN複合体を形成する。これとは反対に、ATRはssDNAによって活性化される。WRN、BLM、およびRECQ4はRECQヘリカーゼファミリーのメンバーである。WRNは、HR中に生成されたホリデイジャンクションを巻き戻し、したがって不適切な組換えを減少させると考えられる、ヘリカーゼおよびエキソヌクレアーゼである（Yang et al., J Biol Chem 2002, 277, 31980-7）。BLMおよびRECQ4はいずれも、RAD51との相互作用によって活性化されるヘリカーゼである（Brosh et al., 2000, J Biol Chem, 275:23500-8；Rossi et al., 2010, DNA Repair 9:796-804）。
【０１０６】
XRCC2は、哺乳動物相同組換え因子のRAD51ファミリーの主要なメンバーであり（Thacker, Biochimie 1999, 81: 77-85；Braybrooke et al., J Biol Chem 2000, 275:29110-6；Deans et al., EMBO J 2000, 19:6675-6685）、そのDSB修復機能で知られている（Johnson et al., Nature 1999, 401:397-9）。ヒトゲノムにおいて、XRCC2は、様々な癌において再配列されることが多い領域である、第7染色体のサイトバンドq36（7q36）上に位置する（Dohner et al., Blood 1998, 92:4031-5；Simmons et al., Leukemia 2002, 16:2408-2416；Mao et al., Br J Dermatol 2001, 145:117-122）。XRCC2欠損細胞は、増殖異常、電離放射線および他のDNA損傷物質に対する過敏性、ならびに自発的染色体不安定性を示す（Deans et al., EMBO J 2000, 19:6675-6685；Liu et al., J Biomed Biotechnol 2002, 2:106-113；Deans et al., Cancer Res 2003, 63:8181-7）。XRCC2は、初期発生中のB細胞において正常な増殖およびゲノムの完全性に必要とされる（Caddle, et al., 2008, Mol. Cell. Biol. 28, 2295-2303）。Xrcc2の同型接合性欠失を有するマウスは、広範な細胞アポトーシスに関連して、妊娠中期に死亡する（Deans et al., EMBO J 2000, 19:6675-6685；Orii et al., PNAS 2006 ,103:10017-10022；Adam et al., DNA Repair (Amst.) 2007, 6:224-234）。本明細書およびHashamら（Nature Immunology, 2010, 11 (9), 820-826）に記載のとおり、本発明者らは、XRCC2欠損成熟B細胞中のAID発現が、広範で細胞毒性の高いDSBにつながることを見いだした。
【０１０７】
XRCC3は、相同組換えに関与して染色体安定性を維持し、かつDNA損傷を修復する、RecA/Rad51関連タンパク質ファミリーのメンバーである。XRCC4は、DNA二本鎖切断修復遺伝子であり、ゲノム安定性のために重要である。これはDNAリガーゼIVと相互作用することが公知である。
【０１０８】
DSB修復の阻害物質
特定の態様において、DSB修復阻害物質は、例えば、RAD51媒介性鎖交換修復の阻害物質であり、スチルベン誘導体であり得る。スチルベン誘導体には、スチルベン、トランス-スチルベン誘導体、シス-スチルベン誘導体、シス-スチルベンオキシド、トランス-スチルベンオキシド、4,4'-ビス(2-ベンゾキサゾリル)スチルベン、4-ニトロ-4'-(オクタデシルアミノ)スチルベン、α,β-ビス(フェニルアゾ)スチルベン、メソ-1,2-ジブロモ-1,2-ジフェニルエタン、(Z)-1,2-ジフェニル-1,2-エチレンジボロン酸ビス(ピナコール)エステル、2,4-ジニトロ-3',4'-(メチレンジオキシ)-スチルベン、ポリメトキシスチルベン、ジヒドロスチルベン、コンブレタスタチン、コンブレタスタチンA-4,3,5,4'-トリメトキシ-トランス-スチルベン、3,4,5,4'-テトラメトキシスチルベン、レスベラトロール、ジエチルスチルベストロール、2,4,6-トリヒドロフェナントレン-2-O-グルコシド、レスベラトロール-2-C-グルコシド、シス-ε-ビニフェリンジグルコシド、トランス-ε-ビニフェリンジグルコシド、パリドールグルコシド、パリドールジグルコシド、シス-3,4',5-トリメチオキシ-3'-アミノスチルベン、シス-3,4',5-トリメトキシ-3'-ヒドロキシスチルベン、コルヒチン、コンブレタスタチンA4-リン酸、デスオキシラポンチゲニン、ジメチルアミノニトロスチルベン、ラポンチゲニン、ピセアタンノール、4-ヒドロキシスチルベン、4,4'-ジヒドロキシスチルベン、3,5-ジヒドロキシスチルベン、トリメチルレスベラトロール、シルバミジン（silbamidine）、ジエチルスチルベストロール、パルテノシッシン、パリドール、クアドラングラリンA、クアドラングラリンB、クアドラングラリンC、ZD6126が含まれ得るが、それらに限定されるわけではない。スチルベン誘導体の非限定例には下記に開示される構造が含まれる：米国特許第4,723,034号、同第4,326,055号、同第4,723,028号、同第4,892,949号、同第6,562,834号、同第5,589,506号、同第7,655,696号、同第4,996,237号、同第5,561,122号、同第5,525,632号、同第5,430,062号、同第5,731,353号、同第7,781,580号、米国特許公報US2004/0147788、同US2008/071364、日本特許公開公報JP-A-7-225558、同JP-A-8-301831、および同JP-A-10-81673、Roberti et al., J. Med. Chem 2003 46:3546-54；Baderschneider and Winterhalter J of Agricultural and Food Chem 2000 48:2681-6；Hillis and Ishikura, Journal of Chromatography A 1968 32:323-336；Kim et al., J Med Chem 2002 45:160-4；Young et al., J Am Chem Soc 1972 94:3976-81；Iliya et al., Phytochemistry 2003 62:601-6；Aguamah et al., Phytochemistry 1981 20:1381-3；およびKim et al., J Biol Chem2002 277:16340-4；これらはその全体が参照により本明細書に組み入れられる。公知の化合物、ならびに将来発見されると考えられるスチルベン化合物は、そのような新しく発見される化合物がスチルベン誘導体と分類される場合には、本明細書に記載の技術におけるスチルベン誘導体に含まれる。本明細書に記載の技術のスチルベン誘導体には、生体前駆体（bioprecursor）または対象の体内でスチルベン誘導体に変換され得る化合物も含まれる。薬学的に許容される塩、エステル、水和物、および溶媒和物の形態であり得る、スチルベン誘導体の製造、ならびにスチルベン誘導体、その不活性な薬学的に許容される担体および/または希釈剤を含む薬学的組成物の製造は、米国特許第5,525,632号および上に挙げた出版物に開示されている。特定のスチルベン誘導体は市販もされており���例えば：シス-スチルベン（#S2259 Sigma-Aldrich、St. Louis MO）、トランス-スチルベン（#S6382 Sigma-Aldrich、St. Louis MO）、レスベラトロール（#R5010 Sigma-Aldrich、St. Louis MO）、または4,4'ジイソチオシアノスチルベン-2,2'-2スルホン酸（#D3514 Sigma-Aldrich、St. Louis MO）がある。
【０１０９】
特定の態様において、DSB修復の阻害物質は、RAD51媒介性鎖交換修復阻害物質4,4'ジイソチオシアノスチルベン-2,2'-2スルホン酸（DIDS；式XXVI）であり得る。
2014527036.tif 000003
【０１１０】
いくつかの態様において、本明細書において記載するのは式（V）のスチルベンまたはその誘導体である。
2014527036.tif 000004
【０１１１】
R1は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得る。好ましくは、R1は水素、OR21、NO2、N(R22)2、OP(O)(OH)2、またはSO3R21であり、ここでR21およびR22は独立してHまたはC1〜C4アルキルである。いくつかの態様において、R1は水素、OH、OCH3、NO2、NH2、OP(O)(OH)2、SO3H、またはSO3Naである。
【０１１２】
R2は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得る。好ましくは、R2は水素、OR21、NO2、N(R22)2、OP(O)(OH)2、またはSO3R21であり、ここでR21およびR22は独立してHまたはC1〜C4アルキルである。いくつかの態様において、R2は水素、OH、OCH3、NO2、NH2、OP(O)(OH)2、SO3H、またはSO3Naである。
【０１１３】
R3は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得る。好ましくは、R3は水素、ヘテルシクリル、OR21、NO2、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHSO2R21、N(R22)2、NHC(O)N(R22)2、NHC(S)N(R22)2、またはNHSO2N(R22)2であり、ここでR21およびR22は独立してHまたはC1〜C4アルキルである。いくつかの態様において、R3は水素、OH、OCH3、N=C=S、NH2、NHCH3、NO2、NH-オクタデカン、NHC(O)CH3、NHC(O)CH(CH3)2、NHC(O)CH2OCH3、NHSO2CH3、NHSO2-シクロプロパン、NHSO2CH(CH3)2、NHSO2N(CH3)2、NHC(S)NHCH3、NHC(S)NHCH(CH3)2、NHC(S)NH-シクロプロパン、NHC(O)NHCH3、NHC(O)NHCH(CH3)2、ベンゾキサゾリル、またはNHC(O)NH-シクロプロパンである。
【０１１４】
R4は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得る。好ましくは、R4は水素、OR21、NO2、N(R22)2、OP(O)(OH)2、またはSO3R21であり、ここでR21およびR22は独立してHまたはC1〜C4アルキルである。いくつかの態様において、R4は水素、OH、OCH3、NO2、NH2、OP(O)(OH)2、SO3H、またはSO3Naである。
【０１１５】
R5は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得る。好ましくは、R5は水素、OR21、NO2、N(R22)2、OP(O)(OH)2、またはSO3R21であり、ここでR21およびR22は独立してHまたはC1〜C4アルキルである。いくつかの態様において、R5は水素、OH、OCH3、NO2、NH2、OP(O)(OH)2、SO3H、またはSO3Naである。
【０１１６】
R6は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得る。好ましくは、R6は水素、OR21、NO2、N(R22)2、OP(O)(OH)2、またはSO3R21であり、ここでR21およびR22は独立してHまたはC1〜C4アルキルである。いくつかの態様において、R6は水素、OH、OCH3、NO2、NH2、OP(O)(OH)2、SO3H、またはSO3Naである。
【０１１７】
R7は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得る。好ましくは、R7は水素、OR21、NO2、N(R22)2、OP(O)(OH)2、またはSO3R21であり、ここでR21およびR22は独立してHまたはC1〜C4アルキルである。いくつかの態様において、R7は水素、OH、OCH3、NO2、NH2、OP(O)(OH)2、SO3H、またはSO3Naである。
【０１１８】
R8は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得る。好ましくは、R8は水素、ヘテルシクリル、OR21、NO2、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHSO2R21、N(R22)2、NHC(O)N(R22)2、NHC(S)N(R22)2、またはNHSO2N(R22)2であり、ここでR21およびR22は独立してHまたはC1〜C4アルキルである。いくつかの態様において、R8は水素、OH、OCH3、N=C=S、NH2、NHCH3、NO2、NH-オクタデカン、NHC(O)CH3、NHC(O)CH(CH3)2、NHC(O)CH2OCH3、NHSO2CH3、NHSO2-シクロプロパン、NHSO2CH(CH3)2、NHSO2N(CH3)2、NHC(S)NHCH3、NHC(S)NHCH(CH3)2、NHC(S)NH-シクロプロパン、NHC(O)NHCH3、NHC(O)NHCH(CH3)2、ベンゾキサゾリル、またはNHC(O)NH-シクロプロパンである。
【０１１９】
R9は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得る。好ましくは、R9は水素、OR21、NO2、N(R22)2、OP(O)(OH)2、またはSO3R21であり、ここでR21およびR22は独立してHまたはC1〜C4アルキルである。いくつかの態様において、R9は水素、OH、OCH3、NO2、NH2、OP(O)(OH)2、SO3H、またはSO3Naである。
【０１２０】
R10は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得る。好ましくは、R10は水素、OR21、NO2、N(R22)2、OP(O)(OH)2、またはSO3R21であり、ここでR21およびR22は独立してHまたはC1〜C4アルキルである。いくつかの態様において、R10は水素、OH、OCH3、NO2、NH2、OP(O)(OH)2、SO3H、またはSO3Naである。
【０１２１】
Xは、C(R21)2、-C(O)N(R22)-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-SO2- -CH(R11)CH(R12)-、-C(R11)=C(R12)-、および
2014527036.tif 000005
からなる群より選択され得る。好ましくは、Xは-C(R11)=C(R12)-または
2014527036.tif 000006
である。Xが-C(R11)=C(R12)-または
2014527036.tif 000007
である場合、置換基R11およびR12はシスまたはトランス配座のいずれかで存在し得ることが理解されるべきである。さらに、Xが
2014527036.tif 000008
である場合、R11およびR12が結合している炭素は独立してRまたはS配置を有し得る。したがって、Xは
2014527036.tif 000009
であり得る。
【０１２２】
R11は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2NC(O)R21、NC(O)OR21、NC(S)R21、NC(S)N(R22)2、NSO2R21、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得る。好ましくは、R11は水素、C1〜C10アルキル、ハロゲン、OR21、シクリル、またはヘテロシクリルである。いくつかの態様において、R11は水素、メチル、エチル、OH、OCH3、Br、N2-フェニル、
2014527036.tif 000010
である。
【０１２３】
R12は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2NC(O)R21、NC(O)OR21、NC(S)R21、NC(S)N(R22)2、NSO2R21、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得る。いくつかの態様において、R12は水素である。
【０１２４】
さらに、R11およびR12は両方同じであり得るかまたは両方異なり得る。いくつかの態様において、R11およびR12は両方水素である。いくつかの態様において、Xは-CH2CH2-、-CH=CH-、
2014527036.tif 000011
である。
【０１２５】
各R21は、水素、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群より独立して選択され得る。好ましくは、R21は水素または直鎖もしくは分枝C1〜C10アルキレンである。いくつかの態様において、R21はメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ペンチル、t-ブチル、シクロプロピル、またはCH2OCH3であり得る。
【０１２６】
各R22は、水素、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群より独立して選択され得る。好ましくは、R22は水素または直鎖もしくは分枝C1〜C10アルキレンである。いくつかの態様において、R22は水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ペンチル、t-ブチル、またはシクロプロピルであり得る。
【０１２７】
R3およびR8は同じであり得るかまたは異なり得る。したがって、いくつかの態様において、R3およびR8は、水素、ヘテルシクリル、OR21、NO2、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHSO2R21、N(R22)2、NHC(O)N(R22)2、NHC(S)N(R22)2、およびNHSO2N(R22)2からなる群より独立して選択され、ここでR21はHまたはC1〜C4アルキルであり得、かつR22はHまたはC1〜C10アルキルであり得る。例えば、R3およびR8は水素、OH、OCH3、N=C=S、NH2、NHCH3、NO2、NH-オクタデカン、NHC(O)CH3、NHC(O)CH(CH3)2、NHC(O)CH2OCH3、NHSO2CH3、NHSO2-シクロプロパン、NHSO2CH(CH3)2、NHSO2N(CH3)2、NHC(S)NHCH3、NHC(S)NHCH(CH3)2、NHC(S)NH-シクロプロパン、NHC(O)NHCH3、NHC(O)NHCH(CH3)2、ベンゾキサゾリル、またはNHC(O)NH-シクロプロパンからなる群より独立して選択され得る。
【０１２８】
いくつかの態様において、R3およびR8の少なくとも1つは水素ではない。いくつかの態様において、R3およびR8は両方とも水素ではない。
【０１２９】
いくつかの態様において、R3およびR8は異なり、水素、OH、OCH3、N=C=S、NH2、NHCH3、NO2、NH-オクタデカン、NHC(O)CH3、NHC(O)CH(CH3)2、NHC(O)CH2OCH3、NHSO2CH3、NHSO2-シクロプロパン、NHSO2CH(CH3)2、NHSO2N(CH3)2、NHC(S)NHCH3、NHC(S)NHCH(CH3)2、NHC(S)NH-シクロプロパン、NHC(O)NHCH3、NHC(O)NHCH(CH3)2、ベンゾキサゾリル、またはNHC(O)NH-シクロプロパンからなる群より独立して選択される。例えば、R3およびR8の一方はHであり得、かつ他方はNH2であり得、R3およびR8の一方はHであり得、かつ他方はNHCH3であり得、R3およびR8の一方はHであり得、かつ他方はN(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はHであり得、かつ他方はNHC(O)CH3であり得、R3およびR8の一方はHであり得、かつ他方はNHC(O)CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はHであり得、かつ他方はNHC(O)CH2OCH3であり得、R3およびR8の一方はHであり得、かつ他方はNHSO2-CH3であり得、R3およびR8の一方はHであり得、かつ他方はNHSO2-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はHであり得、かつ他方はNHSO2-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はHであり得、かつ他方はNHSO2-NHCH3であり得、R3およびR8の一方はHであり得、かつ他方はNHSO2-N(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はHであり得、かつ他方はNHSO2-NHCH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はHであり得、かつ他方はNHSO2-NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はHであり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はHであり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はHであり得、かつ他方はNHC(S)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はHであり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はHであり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はHであり得、かつ他方はNHC(O)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNH2であり得、かつ他方はNHCH3であり得、R3およびR8の一方はNH2であり得、かつ他方はN(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNH2であり得、かつ他方はNHC(O)CH3であり得、R3およびR8の一方はNH2であり得、かつ他方はNHC(O)CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNH2であり得、かつ他方はNHC(O)CH2OCH3であり得、R3およびR8の一方はNH2であり得、かつ他方はNHSO2-CH3であり得、R3およびR8の一方はNH2であり得、かつ他方はNHSO2-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNH2であり得、かつ他方はNHSO2-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNH2であり得、かつ他方はNHSO2-NHCH3であり得、R3およびR8の一方はNH2であり得、かつ他方はNHSO2-N(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNH2であり得、かつ他方はNHSO2-NHCH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNH2であり得、かつ他方はNHSO2-NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNH2であり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNH2であり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNH2であり得、かつ他方はNHC(S)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNH2であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNH2であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNH2であり得、かつ他方はNHC(O)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHCH3であり得、かつ他方はN(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHCH3であり得、かつ他方はNHC(O)CH3であり得、R3およびR8の一方はNHCH3であり得、かつ他方はNHC(O)CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHCH3であり得、かつ他方はNHC(O)CH2OCH3であり得、R3およびR8の一方はNHCH3��あり得、かつ他方はNHSO2-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHCH3であり得、かつ他方はNHSO2-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHCH3であり得、かつ他方はNHSO2-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHCH3であり得、かつ他方はNHSO2-NHCH3であり得、R3およびR8の一方はNHCH3であり得、かつ他方はNHSO2-N(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHCH3であり得、かつ他方はNHSO2-NHCH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHCH3であり得、かつ他方はNHSO2-NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHCH3であり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHCH3であり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHCH3であり得、かつ他方はNHC(S)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHCH3であり得、かつ他方はNHCO)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHCH3であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHCH3であり得、かつ他方はNHC(O)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はN(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(O)CH3であり得、R3およびR8の一方はN(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(O)CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はN(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(O)CH2OCH3であり得、R3およびR8の一方はN(CH3)2であり得、かつ他方はNHSO2-CH3であり得、R3およびR8の一方はN(CH3)2であり得、かつ他方はNHSO2-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はN(CH3)2であり得、かつ他方はNHSO2-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はN(CH3)2であり得、かつ他方はNHSO2-NHCH3であり得、R3およびR8の一方はN(CH3)2であり得、かつ他方はNHSO2-N(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はN(CH3)2であり得、かつ他方はNHSO2-NHCH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はN(CH3)2であり得、かつ他方はNHSO2-NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はN(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はN(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はN(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(S)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はN(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はN(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はN(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(O)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH3であり得、かつ他方はNHC(O)CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH3であり得、かつ他方はNHC(O)CH2OCH3であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH3であり得、かつ他方はNHSO2-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH3であり得、かつ他方はNHSO2-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH3であり得、かつ他方はNHSO2-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH3であり得、かつ他方はNHSO2-NHCH3であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH3であり得、かつ他方はNHSO2-N(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH3であり得、かつ他方はNHSO2-NHCH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH3であり得、かつ他方はNHSO2-NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH3であり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH3であり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH(CH3)2であり得、R3
およびR8の一方はNHC(O)CH3であり得、かつ他方はNHC(S)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH3であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH3であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH3であり得、かつ他方はNHC(O)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(O)CH2OCH3であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHSO2-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHSO2-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHSO2-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHSO2-NHCH3であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHSO2-N(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHSO2-NHCH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHSO2-NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(S)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(O)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH2OCH3であり得、かつ他方はNHSO2-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH2OCH3であり得、かつ他方はNHSO2-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH2OCH3であり得、かつ他方はNHSO2-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH2OCH3であり得、かつ他方はNHSO2-NHCH3であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH2OCH3であり得、かつ他方はNHSO2-N(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH2OCH3であり得、かつ他方はNHSO2-NHCH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH2OCH3であり得、かつ他方はNHSO2-NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH2OCH3であり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH2OCH3であり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH2OCH3であり得、かつ他方はNHC(S)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH2OCH3であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH2OCH3であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)CH2OCH3であり得、かつ他方はNHC(O)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHSO2-CH3であり得、かつ他方はNHSO2-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-CH3であり得、かつ他方はNHSO2-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHSO2-CH3であり得、かつ他方はNHSO2-NHCH3であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-CH3であり得、かつ他方はNHSO2-N(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-CH3であり得、かつ他方はNHSO2-NHCH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-CH3であり得、かつ他方はNHSO2-NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHSO2-CH3であり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-CH3であり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-CH3であり得、かつ他方はNHC(S)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHSO2-CH3であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-CH3であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-CH3であり得、かつ他方はNHC(O)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHSO2-CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHSO2-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHSO2-CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHSO2-NHCH3であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHSO2-N(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHSO2-NHCH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHSO2-NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHSO2-CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(S)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHSO2-CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(O)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHSO2-シクロプロパンであり得、かつ他方はNHSO2-NHCH3であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-シクロプロパンであり得、かつ他方はNHSO2-N(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-シクロプロパンであり得、かつ他方はNHSO2-NHCH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-シクロプロパンであり得、かつ他方はNHSO2-NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHSO2-シクロプロパンであり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-シクロプロパンであり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-シクロプロパンであり得、かつ他方はNHC(S)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHSO2-シクロプロパンであり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-シクロプロパンであり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-シクロプロパンであり得、かつ他方はNHC(O)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHSO2-NHCH3であり得、かつ他方はNHSO2-N(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-NHCH3であり得、かつ他方はNHSO2-NHCH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-NHCH3であり得、かつ他方はNHSO2-NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHSO2-NHCH3であり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-NHCH3であり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-NHCH3であり得、かつ他方はNHC(S)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHSO2-NHCH3であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-NHCH3であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-NHCH3であり得、かつ他方は
NHC(O)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHSO2-N(CH3)2であり得、かつ他方はNHSO2-NHCH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-N(CH3)2であり得、かつ他方はNHSO2-NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHSO2-N(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-N(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-N(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(S)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHSO2-N(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-N(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-N(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(O)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHSO2-NHCH(CH3)2であり得、かつ他方はNHSO2-NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHSO2-NHCH(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-NHCH(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-NHCH(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(S)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHSO2-NHCH(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-NHCH(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-NHCH(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(O)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHSO2-NH-シクロプロパンであり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-NH-シクロプロパンであり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-NH-シクロプロパンであり得、かつ他方はNHC(S)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHSO2-NH-シクロプロパンであり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-NH-シクロプロパンであり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHSO2-NH-シクロプロパンであり得、かつ他方はNHC(O)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHC(S)NHCH3であり得、かつ他方はNHC(S)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHC(S)NHCH3であり得、かつ他方はNHC(S)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHC(S)NHCH3であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHC(S)NHCH3であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHC(S)NHCH3であり得、かつ他方はNHC(O)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHC(S)NH-CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(S)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHC(S)NH-CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH3であり得、R3およびR8の一方はNHC(S)NH-CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHC(S)NH-CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(O)NH-シクロプロパンであり得、R3およびR8の一方はNHC(O)NH-CH3であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH(CH3)2であり得、R3およびR8の一方はNHC(O)NH-CH3であり得、かつ他方はNHC(O)NH-シクロプロパンであり得、またはR3およびR8の一方はNHC(O)NH-CH(CH3)2であり得、かつ他方はNHC(O)NH-CH(CH3)2であり得る。
【０１３０】
いくつかの態様において、R3およびR8は両方N=C=S、NH2、NHC(O)CH3、NHC(O)CH(CH3)2、NHC(O)CH2OCH3、NHSO2CH3、NHSO2-シクロプロパン、NHSO2CH(CH3)2、NHSO2N(CH3)2、NHC(S)NHCH3、NHC(S)NHCH(CH3)2、NHC(S)NH-シクロプロパン、NHC(O)NHCH3、NHC(O)NHCH(CH3)2、またはNHC(O)NH-シクロプロパンである。
【０１３１】
いくつかの態様において、R1およびR6の少なくとも1つ（例えば、1つまたは両方）はSO3R21である。例えば、R1およびR6の少なくとも1つ（例えば、1つまたは両方）はSO3Hまたはその塩である。
【０１３２】
いくつかの態様において、R1およびR6の少なくとも1つ（例えば、1つまたは両方）はSO3R21であり得、かつR3およびR8は、水素、ヘテルシクリル、OR21、NO2、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHSO2R21、N(R22)2、NHC(O)N(R22)2、NHC(S)N(R22)2、およびNHSO2N(R22)2からなる群より独立して選択され得、ここでR21およびR22は独立してHまたはC1〜C4アルキルである。例えば、R1およびR6の少なくとも1つ（例えば、1つまたは両方）はSO3Hであり得、かつR3およびR8は水素、OH、OCH3、N=C=S、NH2、NHCH3、NO2、NH-オクタデカン、NHC(O)CH3、NHC(O)CH(CH3)2、NHC(O)CH2OCH3、NHSO2CH3、NHSO2-シクロプロパン、NHSO2CH(CH3)2、NHSO2N(CH3)2、NHC(S)NHCH3、NHC(S)NHCH(CH3)2、NHC(S)NH-シクロプロパン、NHC(O)NHCH3、NHC(O)NHCH(CH3)2、ベンゾキサゾリル、またはNHC(O)NH-シクロプロパンからなる群より独立して選択され得る。
【０１３３】
いくつかの態様において、R1およびR6の少なくとも1つ（例えば、1つまたは両方）はSO3R21であり得、かつR3およびR8は両方同じであり、水素、N=C=S、NHC(O)R21、NHSO2R21、N(R22)2、NHC(O)N(R22)2、NHC(S)N(R22)2、およびNHSO2N(R22)2からなる群より選択される。例えば、R1およびR6の少なくとも1つ（例えば、1つまたは両方）はSO3Hであり得、かつR3およびR8は同じで、水素、N=C=S、NH2、NHC(O)CH3、NHC(O)CH(CH3)2、NHC(O)CH2OCH3、NHSO2CH3、NHSO2-シクロプロパン、NHSO2CH(CH3)2、NHSO2N(CH3)2、NHC(S)NHCH3、NHC(S)NHCH(CH3)2、NHC(S)NH-シクロプロパン、NHC(O)NHCH3、NHC(O)NHCH(CH3)2、およびNHC(O)NH-シクロプロパンからなる群より選択され得る。
【０１３４】
いくつかの態様において、R1〜R10の1、2、3、4、5、または6つはOHまたはOCH3である。
【０１３５】
式（V）の化合物にはその薬学的に許容される塩、立体異性体混合物、および鏡像異性体が含まれる。本明細書に記載の技術の化合物には、式（V）の化合物の生理的に許容される塩も含まれ得る。式（V）の化合物は、ラセミ混合物または実質的に純粋な立体異性体もしくは鏡像異性体として存在し得る。
【０１３６】
スチルベンを作製する方法は当技術分野において周知で、例えば、米国特許第7,321,050号；同第6,022,998号；同第6,177,220号；同第5,068,300号；同第3,387,050号；同第5,563,298号；同第7,820,848号；同第8,101,804号；第6,218,108号；および同第7,714,161号；米国特許出願公開第2007/0276172号および同第2004/0143023号；Likhtenstein, Gertz I. ''Stilbens Synthesis and Applications'' Kirk-Othmer Encyclopedia of Chemical Technology. 2000, John Wiley & Sons, Inc.；Likhtenshtein, G. ''Stilbens Preparation and Analysis'' ''Applications in Chemistry, Life Sciences and Materials Science'' 2010, Wiley-VCHに記載されており、これらはその全体が参照により本明細書に組み入れられる。スチルベンおよびスチルベン誘導体の合成も商業的サービスとして利用可能である（例えば、Mercachem、Nijmegen、Netherlands；Proteros、Martinsried、Germany；AMRI、Albany、NY；WuXi Apptec、Shanghai、China；およびRichman Chemical Inc.、Gwynedd、PA）。いくつかの態様において、スチルベンはアミドおよびスルホンアミド誘導体へとさらに官能基化してもよい。
【０１３７】
式（V）のいくつかの例示的化合物は、(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ジアセトアミド；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(2-メチルプロパンアミド)；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(2-メトキシアセトアミド)；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ジメタンスルホンアミド；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ジシクロプロパンスルホンアミド；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(プロパン-2-スルホンアミド)；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(ジメチルアミノ-スルホンアミド)；(E)-N-(4-(4-アミノスチリル)フェニル)プロパン-2-スルホンアミド；(E)-1,1'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(3-メチルチオ尿素)；(E)-1,1'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(3-イソプロピルチオ尿素)；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)アセトアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)イソブチルアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-2-メトキシアセトアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)メタンスルホンアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)シクロプロパンスルホンアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)プロパン-2-スルホンアミド；N'-(4-{(E)-2-[4-(ジメチルアミノ)フェニル]-1-エテニル}フェニル)-N,N-ジメチルスルファミド；(E)-1-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-3-メチルチオ尿素；(E)-1-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-3-イソプロピルチオ尿素；(E)-1-シクロプロピル-3-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)チオ尿素；(E)-1-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-3-メチル尿素；(E)-1-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-3-イソプロピル尿素；(E)-1-シクロプロピル-3-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)尿素；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-アセトアミドベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-イソブチルアミドベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(2-メトキシアセトアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(シクロプロパンスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(1-メチルエチルスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-アセトアミドベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-イソブチルアミドベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(2-メトキシアセトアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(メチルスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(シクロプロパンスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(1-メチルエチルスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-シクロプロピルチオウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-エチルウレイド)ベンゼンスル���ン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-イソブチルアミド-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-イソブチルアミド-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-イソブチルアミド-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(2-メトキシアセトアミド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(2-メトキシアセトアミド)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルチオウレイ���)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(メチルスルホンアミド)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-エチルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-イソブチルアミド-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルウレイド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-エチルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナ���リウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(2-メトキシアセトアミド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-メチルチオウレイド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルウレイド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-メチルチオウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルチオウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-エチルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-4,4'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(N-メチルベンズアミド)；(E)-4,4'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(N-イソプロピルベンズアミド)；(E)-4,4'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(N,N-ジメチルベンズアミド)；(E)-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(モルホリノメタノン)；および(E)-5-(4-ヒドロキシスチリル)ベンゼン-1,3ジオール(3,5,4'-トリヒドロキシ-トランス-スチルベン)である。
【０１３８】
いくつかの態様において、スチルベン誘導体は、(E)-5-アセトアミド-2-(4-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム（式VI、本明細書においてBB5-4とも呼ぶ）；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)シクロプロパンスルホンアミド（式VII、本明細書においてBB2-5とも呼ぶ）；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(プロパン-2-スルホンアミド)（式VIII、本明細書においてBB1-6とも呼ぶ）；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(ジメチルアミノ-スルホンアミド)（式IX、本明細書においてBB1-7とも呼ぶ）；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)プロパン-2-スルホンアミド（式X、本明細書においてBB2-6とも呼ぶ）；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム（式XI、本明細書においてBB5-39とも呼ぶ）；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホネート)；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホン酸ナトリウム)（式XII、本明細書においてBB4B-2とも呼ぶ）；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム（式XIII、本明細書においてBB5-47とも呼ぶ）；(E)-4,4'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(N-メチルベンズアミド)（式XIV、本明細書においてBB8-1とも呼ぶ）；(E)-5-アセトアミド-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホンネート；(E)-5-アセトアミド-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム（式XXIII、本明細書においてBB5-6とも呼ぶ）；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム（式XXVII）；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム（式XXVIII）；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム（式XXIX）；および(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム（式XXX）からなる群より選択され得る。
2014527036.tif 000012
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【０１３９】
特定の態様において、スチルベン誘導体は、(E)-5-アセトアミド-2-(4-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム（式VI）；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム（式XXVII）；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム（式XXIX）；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム（式XXVIII）；および6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホン酸ナトリウム（式XII、本明細書においてBB4B-2とも呼ぶ）からなる群より選択され得る。
【０１４０】
いくつかの態様において、スチルベン誘導体は、(E)-5-アセトアミド-2-(4-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネートであり得る。いくつかの態様において、スチルベン誘導体は式XXIVの構造を有し得る。
2014527036.tif 000015
式中、Xは任意の薬学的に許容される塩カチオンであり得る。非限定例として、Xは、ナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛であり得る。
【０１４１】
いくつかの態様において、スチルベン誘導体は、(E)-5-アセトアミド-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネートであり得る。いくつかの態様において、スチルベン誘導体は式XXVの構造を有し得る。
2014527036.tif 000016
式中、Xは任意の薬学的に許容される塩カチオンであり得る。非限定例として、Xは、ナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛であり得る。
【０１４２】
いくつかの態様において、スチルベン誘導体は、(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネートであり得る。いくつかの態様において、スチルベン誘導体は式XXXIの構造を有し得る。
2014527036.tif 000017
式中、Xは任意の薬学的に許容される塩カチオンであり得る。非限定例として、Xはナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛であり得る。
【０１４３】
いくつかの態様において、スチルベン誘導体は、(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネートであり得る。いくつかの態様において、スチルベン誘導体は式XXXIIの構造を有し得る。
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式中、Xは任意の薬学的に許容される塩カチオンであり得る。非限定例として、Xはナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛であり得る。
【０１４４】
いくつかの態様において、スチルベン誘導体は、(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネートであり得る。いくつかの態様において、スチルベン誘導体は式XXXIIIの構造を有し得る。
2014527036.tif 000019
式中、Xは任意の薬学的に許容される塩カチオンであり得る。非限定例として、Xはナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛であり得る。
【０１４５】
いくつかの態様において、スチルベン誘導体は、6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホネート)であり得る。いくつかの態様において、スチルベン誘導体は式XXXIVの構造を有し得る。
2014527036.tif 000020
式中、Xは任意の薬学的に許容される塩カチオンであり得る。非限定例として、Xは、ナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛であり得る。
【０１４６】
いくつかの態様において、スチルベン誘導体は、(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネートであり得る。いくつかの態様において、スチルベン誘導体は式XXXVの構造を有し得る。
2014527036.tif 000021
式中、Xは任意の薬学的に許容される塩カチオンであり得る。非限定例として、Xは、ナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛であり得る。
【０１４７】
いくつかの態様において、本明細書において前述したスチルベンおよびスチルベン誘導体は、二本鎖切断修復の阻害物質であり得る。いくつかの態様において、前述のスチルベンおよびスチルベン誘導体は、本明細書に記載の方法において用いることができる。
【０１４８】
いくつかの態様において、二本鎖切断修復の阻害物質はスチルベノイドであり得る。本明細書において用いられる「スチルベノイド」とは、ヒドロキシル化スチルベン誘導体である。スチルベノイドの非限定例には、レスベラトロール；アグリコン；ピセタノール（picetannol）；ピノシルビン；プテロスチルベン；α-ビニフェリン；アンペロプシンA；アンペロプシンE；ジプトインドネシンC；ジプトインドネシンF；イプシロン-ビニフェリン；フレキスオソールA；グネチンH；ヘムスレヤノールD；ホペアフェノール；トランス-ジプトインドネシンB；バチカノールB；アストリンギン；ピセイド；ジプトインドネシンAが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【０１４９】
本明細書において提供する特定の態様において、阻害物質はサラジン酸（式I）（Pubchem Substance ID: 24840333；化合物A03）であり得る。サラジン酸は1,4,10-トリヒドロキシ-5-(ヒドロキシメチル)-8-メチル-3,7-ジオキソ-1,3-ジヒドロ-7H-2,6,12-トリオキサベンゾ[5,6]シクロヘプタ[1,2-e]インデン-11-カルバルデヒドと呼ぶこともできる。
2014527036.tif 000022
【０１５０】
本明細書において提供する特定の態様において、阻害物質はスチクト酸（式II）（Pubchem Substance ID: 24840609；化合物A10）であり得る。この化合物は、NSC-87511、スコプラル酸（scopularic acid）、ステロカウロン酸（sterocaulonic acid）；および1,3-ジヒドロ-1,4-ジヒドロキシ-10-メトキシ-5,8-ジメチル-3,7-ジオキソ-7H-イソベンゾフロ[4,5-b][1,4]ベンゾジオキセピン-11-カルバルデヒドとしても公知である。
2014527036.tif 000023
【０１５１】
本明細書において提供する特定の態様において、阻害物質はSTK856883（式III）（Pubchem Substance ID: 24787209；化合物B02）であり得る。この化合物は3-ベンジル-2-[(E)-2-ピリジン-3-イルエテニル]キナゾリン-4-オンと呼ぶこともできる。STK856883はRAD51阻害物質として特定されている（Huang et al. ACS Chem Biol. 2011 Mar 23）。
2014527036.tif 000024
【０１５２】
本明細書において提供する特定の態様において、阻害物質は4'-ブロモ-3'ニトロプロピオフェノン（式IV）（Calbiochem Cat: No. 323115）であり得る。4'-ブロモ-3'-ニトロプロピオフェノンは、NS-123または1-(4-ブロモ-3-ニトロフェニル)プロパン-1-オンとしても公知であり、電離放射線の腫瘍成長阻害効果を優先的に増大させ（U251、HT-29、およびA549腫瘍細胞では約5μM、U251異種移植マウスモデルでは50mg/kg、i.p.）、正常なヒト膠細胞、ゼブラフィッシュ胚およびヌードマウスに対しては明らかな効果を示さない、国際公開公報第2009036297号に記載の細胞透過性ニトロ-ロピオフェノン（nitro-ropiophenone）化合物である。これは未修復の二本鎖DNA切断の蓄積を増加させ、損傷依存性のシグナリングを延長することが明らかにされている。
2014527036.tif 000025
【０１５３】
いくつかの態様において、阻害物質は、4-メチルキナゾリン-2-カルボキサミド（式XV）；ベンズ[h]イソキノリン-6-アミン（式XVI）；5,6-ジメチル-2-メルカプトメチルベンズイミダゾール（式XVII）；(E)-1-(2-ヒドロキシフェニル)-3-(ピリジン-3-イル)プロパ-2-エン-1-オン（式XVIII）；N4-ブチル-6-クロロピリミジン-2,4-ジアミン（式XIX）；1-テルモプシン（式XX）；6-アミノ-5-ニトロソ-2-フェニルピリミジン-4(1H)-オン（式XXI）；および4-(2-アミノ-4-ニトロフェニルアミノ)フェニル（式XXII）からなる群より選択され得る。
2014527036.tif 000026
【０１５４】
いくつかの態様において、阻害物質は、7-Aアザインドール-3-カルボキシアルデヒド（CAS4649-09-6）；2-アミノ-4-フェニルフェノール（CAS1134-36-7）；3-(1-メチル-3-ピロリジニル)インドール（CAS3671-00-9）；1-メチル-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]キノロン（CAS35359-22-9）；2-アミノ-5-ニトロ-1H-ベンズイミダゾール（CAS6232-92-4）；2-(5-ニトロ-2-フルフリリデン)アミノエタノール-N-オキシド（CAS19561-70-7；ニフラトロン）；α-メルカプト-N,2-ナフチルアセトアミド（CAS93-42-5；チオナリド）；（CAS486-90-8；1-テルモスピン（thermospine））；N4-ブチル-6-クロロ-2,4-ピリミジンジアミン（CAS5457-91-0）；2-(2-ヒドロキシ-6-プロパン-2-イルオキシ-シクロヘキシル)酢酸（CAS7248-04-6）；6-アミノ-5-ニトロソ-2-フェニル-1H-ピリミジン-4-オン（CAS5466-66-0）；4-アミノ-2-ヒドロキシフェニル)アルソン酸（CAS6318-57-6）；スピロ[1,2-ジヒドロインデン-3,5'-イミダゾリジン]-2',4'-ジオン（CAS6252-98-8）；N〜4〜-(4-メトキシフェニル)-6-メチルピリミジン-2,4-ジアミン（CAS93001-35-5）；2-アミノ-9-ペンチル-3H-プリン-6-チオン（CAS24397-98-6）；2-(4-メトキシフェニル)-3-(ピリジン-3-イル)プロパ-2-エンニトリル（CAS92437-25-7）；2-クロロピリミジン-4,6-ジカルボキサミド（CAS7150-30-3）；2-アミノ-3H-フェノキサジン-3-オン（CAS1916-59-2）；2-メチル-N-ベンジル-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-アミン；4-(ベンジルアミノ)-2-メチル-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン；NSC-106570（CAS1866-43-9；ロロジン）；2-アミノ-1-ナフタレンスルホン酸（CAS81-16-3）；N-sec-ブチル-3-メチルベンズアミド (NSC 34983）；ベンズ[h]イソキノリン-6-アミン；および2-(2-メチルシクロヘキシリデン)ヒドラジンカルボキサミドからなる群より選択され得る。
【０１５５】
特定の態様において、DSB修復阻害物質はATM阻害物質であり得る。いくつかの態様において、阻害物質は、2-モルホリン-4-イル-6-チアントレン-1-イル-ピラン-4-オン（KU-55933、S1092 Selleck Chemicals LLC: Houston、TX；国際公開公報第/03070726号）、または2-((2R,6S)-2,6-ジメチル-モルホリン-4-イル)-N-[5-(6-モルホリン-4-イル-4-オキソ-4H-ピラン-2-イル)-9H-チオキサンテン-2-イル]-アセトアミド（KU-60019またはKU60019；国際公開公報第2007/026157号；S1570 Selleck Chemicals LLC；Houston TX；Mol Cancer Ther 2009, 8(10): 2894-2902）である。また非限定例として、DSB修復阻害物質は、欧州特許EP1946757ならびに国際公開公報第03/070726号および国際公開公報第2005/016919号に開示されているものなどの化合物であり得る。
2014527036.tif 000027
【０１５６】
本明細書において提供する特定の態様において、DSB修復阻害物質は、DSB修復を促進する任意の遺伝子またはタンパク質の発現または活性を低下させる阻害物質である。これらの遺伝子またはタンパク質は、RAD51媒介性鎖交換における、DSB修復に関与する酵素、またはDSB修復に関与する酵素の活性を制御する調節もしくは足場遺伝子もしくはタンパク質であり得る。遺伝子またはタンパク質は、その遺伝子またはタンパク質の発現または活性の減少がDSB修復の減少をもたらす場合、DSB修復を促進する遺伝子またはタンパク質であると考えられる。DSB修復の低下は、試験中の遺伝子またはタンパク質の正常な発現または活性を有する対照と比べて、約5％、約10％、約20％、約30％、約40％、約50％、約60％、約70％、約80％、約90％、約100％、約125％、約150％、またはそれ以上であり得る。DSB修復は当業者には周知の方法によって測定することができる。非限定例として、DSB修復はH2AX-S139PO4（γ-H2AX、リン酸化ヒストン2A）フォーカスの比色または免疫蛍光検出によって測定することができる（Rogakou et al., J Biol Chem 1998, 273:5858-5868；Rothkamm and Loebrich, Proc Natl Acad Sci USA, 2003, 100(9): 5057-5062；Redon et al., Aging 2011, 3(2):168-74；Rakiman et al. 2008, Advanced Biotech 39）。非限定例として、DSB修復はガンマ-H2AXリン酸化の検出によって測定することができる。非限定例として、DSB修復はCOMETアッセイ法によって測定することができる（Orlow et al.2008, J. Clin. Oncol. 26, 3560-3566；Muller et al 1994, International Journal of Radiation Biology 65, 315-319；Fairbairn et al. 1995, Mutation Research/Reviews in Genetic Toxicology 339, 37-59）。非限定例として、DSB修復は、DSB修復の成分である、RAD51媒介性鎖交換を測定することにより評価することができる。RAD51媒介性鎖交換は、Ishida et al., Nucleic Acids Res 2009 37:3367-3376に記載のインビトロ鎖交換アッセイ法によって測定することができる。前記パラグラフの参照文献はすべてその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０１５７】
本明細書において提供する特定の態様において、DSB修復阻害物質は、以下を含むが、それらに限定されるわけではない、以下のタンパク質の1つまたは複数の発現または活性を低下させる阻害物質である：Rad51AP1（NCBI遺伝子ID:10635；SEQ ID NO:007）；Rad51B（NCBI遺伝子ID: 5890；SEQ ID NO:008）；Rad51D（NCBI遺伝子ID: 5892；SEQ ID NO；009）；Rad51C（NCBI遺伝子ID: 5889、例えば、SEQ ID NO:0163（mRNA；NM_058216）およびSEQ ID NO:0164（タンパク質；NP_478123）またはSEQ ID NO:0165（mRNA；NM_002876）およびSEQ ID NO:0166（タンパク質；NP_002867）；XRCC2（NCBI遺伝子ID: 7516；SEQ ID NO:010）；XRCC3（NCBI遺伝子ID: 7517；SEQ ID NO:011）；RAD54（NCBI遺伝子ID: 546；SEQ ID NO:012）；RAD52（NCBI遺伝子ID: 5893；SEQ ID NO:013）；BRCA1（NCBI遺伝子ID: 672；SEQ ID NO:014）；BRCA2（NCBI遺伝子ID: 675；SEQ ID NO:015）；ATM（NCBI遺伝子ID: 472；SEQ ID NO:016）；ATR（NCBI遺伝子ID: 545；SEQ ID NO:017）；MRE11（NCBI遺伝子ID: 4361；SEQ ID NO:018）；RAD50（NCBI遺伝子ID:10111: SEQ ID NO:019）；NBS1（NCBI遺伝子ID: 4683；SEQ ID NO:020）；WRN（NCBI遺伝子ID: 7486；SEQ ID NO:021）；BLM（NCBI遺伝子ID: 641；SEQ ID NO:022）；RECQ4（NCBI遺伝子ID: 9401；SEQ ID NO:023）；LIG4（DNAリガーゼ4；NCBI遺伝子ID: 3981;SEQ ID NO:024；XRCC4（NCBI遺伝子ID: 7518；SEQ ID NO:025）；PRKDC（DNA-PKcs7；XRCC7；NCBI遺伝子ID: 5591；SEQ ID NO:026）；DCLRE1C（NCBI遺伝子ID: 64421；SEQ ID NO:027）；XRCC6（Ku70；NCBI遺伝子ID: 2547；SEQ ID NO:028）；XRCC5（Ku80；NCBI遺伝子ID: 7520；SEQ ID NO:029）および/またはXLF（NHEJ1；XRCC4様因子；NCBI遺伝子ID: 79840；SEQ ID NO:030）。
【０１５８】
DSB修復の阻害物質は、核酸（DNAまたはRNA）、小分子、アプタマー、タンパク質、ペプチド、抗体、抗体のエピトープ結合断片を含むポリペプチド、抗体断片、ペプチド-核酸（PNA）、ロックド核酸（LNA）、またはリボザイムであり得る。いくつかの態様において、DSB修復の阻害物質は、小分子、アプタマー、タンパク質、ペプチド、抗体、抗体のエピトープ結合断片を含むポリペプチド、抗体断片、およびペプチド-核酸（PNA）からなる群より選択され得る。
【０１５９】
LNA塩基は、リボース環の2'酸素と4'炭素との間のメチレン連結を含むリボヌクレオチド類似体である（Koshkin A.A., 1998, Tetrahedron, 54:3607-3630；Obika S., 1998, Tetrahedron Lett., 39:5401-5404）。糖部分上の拘束は、ハイブリダイゼーションのために塩基をあらかじめ構築するロックド3'末端配座をもたらし、融点（Tm）を1塩基あたり10℃も高める（Wengel J., 1999, Acc. Chem. Res., 32:301-310；Braasch D.A. and Corey, D.R., 2001, Chem. Biol., 8:1-7）。LNA塩基は、DNA合成のための標準のプロトコールを用いてオリゴヌクレオチドに組み込むことができる。LNA塩基の導入は、オリゴマーの5'および3'末端に組み込まれると、ヌクレアーゼに対する抵抗性も与える（Crinelli R., et. al., 2002, Nucleic Acids Res., 30:2435-2443）。いくつかの態様において、遺伝子サイレンシング物質はLNA-DNAキメラである。LNA含有オリゴマーの合成は当技術分野において公知であり、例えば、米国特許第6316198号、同第6670461号、同第6794499号、同第6977295号、同第6998484号、同第7053195号、および米国特許公報番号US 2004/0014959に記載のものがあり、これらはすべてその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０１６０】
いくつかの態様において、DSB阻害物質は、SEQ ID NO:050、SEQ ID NO:051、SEQ ID NO:052、SEQ ID NO:053、SEQ ID NO:054、SEQ ID NO:055、SEQ ID NO:056、SEQ ID NO:057、SEQ ID NO:058、SEQ ID NO:059、SEQ ID NO:060、SEQ ID NO:061、SEQ ID NO:062、SEQ ID NO:063、SEQ ID NO:064、SEQ ID NO:065、SEQ ID NO:066、SEQ ID NO:067、SEQ ID NO:068、SEQ ID NO:069、SEQ ID NO:070、SEQ ID NO:071、SEQ ID NO:072、SEQ ID NO:073、SEQ ID NO:074、SEQ ID NO:075、SEQ ID NO:076、SEQ ID NO:077、SEQ ID NO:078、SEQ ID NO:079、SEQ ID NO:080、SEQ ID NO:081、SEQ ID NO:082、SEQ ID NO:083、SEQ ID NO:084、SEQ ID NO:085、SEQ ID NO:086、SEQ ID NO:087、SEQ ID NO:088、SEQ ID NO:089、SEQ ID NO:090、SEQ ID NO:091、SEQ ID NO:092、SEQ ID NO:093、SEQ ID NO:094、SEQ ID NO:095、SEQ ID NO:096、SEQ ID NO:097、およびSEQ ID NO:098からなる群より選択されるRNA干渉配列を含む。
【０１６１】
DSB修復の阻害物質は、当業者には周知の方法を用いて組換えにより生成することができる（Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2 ed.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., USA (1989)参照）。または、DSB修復は、商業的に、例えば、DIDS（#38440 Sigma-Aldrich；St. Louis、MO）；4'-ブロモ-3'ニトロプロピオフェノン（Calbiochem Cat: No. 323115）を入手することができるか、または、化学合成することもできる。
【０１６２】
試験化合物および作用物質を、それらのDSB修復を阻害する能力についてスクリーニングすることができる。DSB修復の阻害は、インビボまたはインビトロでモニターすることができる。1つの態様において、DSB修復の崩壊を、試験化合物存在下および非存在下で、DNA編集酵素、例えば、AIDを発現する細胞中に存在する二本鎖切断（DSB）のレベルを、本明細書に記載のとおり核型分析することにより評価してモニターする。1つの態様において、DSBをγ-H2AXフォーカス形成によって測定する。1つの態様において、DSB修復を53BP1またはRad50フォーカス形成によって測定する。1つの態様において、例えば、腫瘍の成長、症状、または、癌細胞がAIDを発現する癌のマーカーを防止または低下させる能力を判定することによって、DSB修復を崩壊させる試験化合物の能力をインビボでモニターする。DSB修復は、Ishida et al., Nucleic Acids Res 2009 37:3367-3376に記載の鎖交換アッセイ法により、インビトロで測定することもできる。
【０１６３】
1つの態様において、連結した核酸分子の生成をモニターする、インビトロ鎖交換アッセイ法を実施する。例えば、ΦX174環状ssDNA（20μM）を、45mM NaCl、0.03mM EDTA、0.6mM 2-メルカプトエタノール、3％グリセロール、1mM MgCl2、1mM DTT、1mM ATP、0.1mg/mlウシ血清アルブミン、2mM CaCl2、20mMクレアチンリン酸、および75μg/mlクレアチンキナーゼを含む26mM HEPES緩衝液（pH7.5）10μl中、RAD51（6μM）と共に試験化合物存在下、37℃で10分間インキュベートする。このインキュベーションの後、2μM RPAを反応混合物に添加し、混合物を37℃でさらに10分間インキュベートする。次いで、20μM ΦX174直鎖dsDNAの添加により反応を開始し、60分間続ける。0.1％SDSおよび1.97mg/mlプロテイナーゼK（Roche Applied Science、Basel、Switzerland）の添加により反応を停止し、さらに37℃で20分間インキュベートする。6倍のローディング色素を添加した後、除タンパクした反応生成物を、1×TAE緩衝液中、1％アガロースゲル電気泳動により3.3V/cmで4時間分離する。生成物をSYBR Gold（Invitrogen、Carlsbad、CA、USA）染色により可視化する。
【０１６４】
アッセイ法の別の態様において、反応を32P-標識dsDNAで実施することができる。可視化は、ゲルを乾燥し、それらを撮像プレートに曝露し、FLA-7000画像分析器（Fujifilm、東京、日本）を用いてプレートを可視化することにより実施する。
【０１６５】
反応を可視化すると、過剰に供給されたssDNAおよびdsDNA分子が可視となる。DSB修復が起これば、より大きい、連結分子が検出される。DSB修復の阻害物質は、可視連結分子の量の低下を引き起こすことになる。
【０１６６】
試験作用物質は典型的には、インビトロで遺伝子発現またはタンパク質活性を阻害するその能力についてまずスクリーニングし、遺伝子発現またはタンパク質活性に対する阻害効果を有する試験作用物質を特定する。次いで、陽性阻害性物質を、インビトロまたはインビボアッセイ法により、DSB修復の阻害に関する有効性について試験する。
【０１６７】
一般に、化合物は、適切な期間、対照に比べて発現またはタンパク質活性を調節し得る任意の濃度で試験することができる。いくつかの態様において、化合物を約0.1nM〜約1000mMの範囲の濃度で試験する。1つの態様において、化合物を、約0.1μM〜約20μM、約0.1μM〜約10μM、または約0.1μM〜約5μMの範囲で試験する。1つの態様において、化合物を1μMで試験する。
【０１６８】
実施中の特定の態様に依存して、試験化合物は溶液中、遊離状態で供給することができるか、または、担体もしくは固体支持体、例えば、ビーズに結合してもよい。試験化合物の固定のために、いくつかの適切な固体支持体を用いてもよい。適切な固体支持体の例には、アガロース、セルロース、デキストラン（すなわち、Sephadex、Sepharoseとして市販されている）、カルボキシメチルセルロース、ポリスチレン、ポリエチレングリコール（PEG）、ろ紙、ニトロセルロース、イオン交換樹脂、プラスチックフィルム、ポリアミンメチルビニルエーテルマレイン酸コポリマー、ガラスビーズ、アミノ酸コポリマー、エチレン-マレイン酸コポリマー、ナイロン、シルクなどが含まれる。加えて、本明細書に記載の方法のために、試験化合物を個々に、またはグループでスクリーニングしてもよい。グループスクリーニングは、所与のグループについて複数の陽性結果が予想されないような、有効試験化合物のヒット率が低いと予想される場合に、特に有用である。
【０１６９】
試験作用物質をスクリーニングするために、インビトロアッセイシステムおよび/または細胞アッセイシステムを用いることができる。例えば、試験作用物質を、遺伝子もしくは遺伝子によってコードされるタンパク質への結合についてスクリーニングする、遺伝子の発現レベルの変更についてスクリーニングすること、または遺伝子によってコードされるタンパク質の活性/機能の調節についてスクリーニングすることができる。
【０１７０】
1つの態様において、タンパク質/ペプチド試験作用物質（抗体、またはその断片を含む）を、インビトロでコードされるタンパク質に結合するその能力について評価することができる。直接結合アッセイ法の例には、標識したインビトロタンパク質-タンパク質結合アッセイ法、電気泳動移動度シフトアッセイ法、タンパク質結合についての免疫アッセイ法、ELISAアッセイ法、免疫共沈降アッセイ法、競合アッセイ法（例えば、公知の結合物質との）などが含まれるが、それらに限定されるわけではない。例えば、米国特許第4,366,241号；同第4,376,110号；同第4,517,288号；および同第4,837,168号；ならびにBevan et al., Trends in Biotechnology 13:115-122, 1995；Ecker and Crooke, 1995, Biotechnology (NY) 13:351-360；およびHodgson, Biotechnology (NY) 10:973-980, 1992を参照されたい。試験作用物質は、該作用物質が関心対象のタンパク質に結合することを示すシグナル、例えば、蛍光消光またはFRETを検出することにより特定することもできる。試験作用物質ポリペプチドを、インビトロで核酸に結合するその能力についてモニターすることもでき、例えば、ELISAフォーマットアッセイ法は、核酸へのタンパク質結合の分析のための、ゲル移動度シフトアッセイ法（EMSA）に代わる簡便なアッセイ法であり得る。試験作用物質のコードされたタンパク質への結合は、該作用物質がタンパク質活性の阻害物質であり得ることを示している。
【０１７１】
1つの態様において、遺伝子によってコードされるタンパク質の生物活性または機能を下方制御する能力について、試験作用物質をアッセイする。用いるアッセイ法は、タンパク質の機能に依存し、当業者であれば容易に決定することができ、例えば、インビトロでRAD51媒介性修復をモニターする。
【０１７２】
1つの態様において、試験作用物質を、遺伝子の転写を阻害する能力についてアッセイする。転写アッセイ法は当業者には周知である（例えば、米国特許第7,319,933号および同第6,913,880号参照）。例えば、遺伝子の発現の調節は、レポーター発現ベクターの培養細胞株への一過性または安定なトランスフェクションにより、細胞に基づいたシステムで調べることができる。試験化合物を、遺伝子の転写調節因子（例えば、プロモーター配列）の制御下で、レポーター遺伝子（例えば、ルシフェラーゼ遺伝子）の発現を阻害するかまたは増加させる能力についてアッセイすることができる。レポーター遺伝子に機能的に連結された転写調節因子を有するアッセイ用ベクターを、プロモーター活性のアッセイ法のために、任意の哺乳動物細胞株にトランスフェクトすることができる。レポーター遺伝子は、典型的には、宿主細胞に自然には存在しない、容易にアッセイされる酵素活性を有するポリペプチドをコードする。真核生物のプロモーターのための典型的なレポーターポリペプチドには、例えば、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（CAT）、ホタルまたはウミシイタケルシフェラーゼ、β-ガラクトシダーゼ、β-グルクロニダーゼ、アルカリ性ホスファターゼ、Dendra2、mCherry、mRaspberry、mPlum、tdTomato、緑色蛍光タンパク質（GFP）、黄色蛍光タンパク質（YFP）、高感度緑色蛍光タンパク質（eGFP）、赤色蛍光タンパク質（RFP）、シアン蛍光タンパク質（CFP）などが含まれる。遺伝子の転写調節因子制御下でレポーター遺伝子を発現するベクターは、分子生物学の日常的に行われる技術および方法を用いて調製することができる（例えば、例えば、Sambrook et al.、上記；Brent et al.、上記参照）。
【０１７３】
レポーター遺伝子に加えて、ベクターは、宿主細胞中での増殖または維持に必須の因子、ならびにポリアデニル化配列および転写ターミネーターなどの因子も含み得る。例示的アッセイ用ベクターには、ベクターのpGL3シリーズ（Promega、Madison、WI；米国特許第5,670,356号）が含まれ、これらはルシフェラーゼ遺伝子の5'のポリリンカー配列を含む。細胞培養、トランスフェクション、およびレポーター遺伝子アッセイ法の一般的方法は当技術分野において、例えば、Sambrook et al.、上記；およびTransfection Guide、Promega Corporation、Madison、WI (1998)に記載されている。任意の容易にトランスフェクト可能な哺乳動物細胞株、例えば、3T3、Caco-2、CCRF-CEM、CHO、COS-7、HCT 116、HEK 293、CH12-F3、MCF-7、HepG2、Jurkat、Mo-B、KG-1、K-562、MOLT-4およびHL-60細胞を用いて、ベクターからのレポーター遺伝子の発現をアッセイしてもよい。
【０１７４】
または、mRNAレベルの測定は、例えば、ノーザンブロッティングまたは他のハイブリダイゼーションアッセイ法、ヌクレアーゼ保護アッセイ法、逆転写（定量的RT-PCR）技術、RNA-Seq、ハイスループット配列決定法などの生化学的および分子生物学的技術を用いて測定することができる。そのようなアッセイ法は当業者には周知である。1つの態様において、核「ランオン」（または「ランオフ」）転写アッセイ法を用いる（例えば、Methods in Molecular Biology, Volume: 49, Sep-27-1995, Page Range: 229-238参照）。アレイも用いることができ；アレイ、およびそのようなアレイを用いてmRNAを解析する方法は、以前に、例えば、EP0834575、EP0834576、国際公開公報第96/31622号、米国特許第5,837,832号または国際公開公報第98/30883号に記載されている。国際公開公報第97/10365号は、高密度オリゴヌクレオチドアレイを用いて、多数の遺伝子の発現レベルをモニターする方法を提供する。
【０１７５】
1つの態様において、試験する対象から1つまたは複数の細胞を採取し、RNAを細胞から単離する。細胞を採取する場合、所望の型の細胞を主に含む試料、例えば、細胞の少なくとも約50％、好ましくは少なくとも約60％、さらにより好ましくは少なくとも約70％、80％、およびさらにより好ましくは少なくとも約90％が所望の型のものである、細胞の試料を得ることが好ましい。組織試料を当技術分野において公知の方法に従って得ることもできる。
【０１７６】
対象から細胞試料を採取し、次いでそれを所望の細胞型で濃縮することも可能である。例えば、所望の細胞型の細胞表面上のエピトープに結合する抗体による単離などの、様々な技術を用いて、細胞を他の細胞から単離することができる。所望の細胞が固形組織中にある場合、特定の細胞を、例えば、顕微解剖、またはレーザー捕獲顕微解剖（LCM）により切り出すことができる。
【０１７７】
個体から組織試料または細胞からRNAを単離する場合、組織または細胞が対象から除去された後の遺伝子発現における任意のさらなる変化を防止することが重要であり得る。発現レベルの変化は、動揺、例えば、熱ショックまたはリポ多糖（LPS）もしくは他の試薬による活性化後に急速に変化することが知られている。加えて、組織および細胞中のRNAは急速に分解され得る。したがって、好ましい態様において、対象から得られた組織または細胞は急速凍結するか、または後にできるだけ早くRNAで処理する。
【０１７８】
RNAを組織試料から、様々な方法、例えば、チオシアン酸グアニジウム溶解、続いてCsCl遠心沈降により抽出することができる（Chirgwin et al., 1979, Biochemistry 18:5294-5299）。単一細胞からのRNAを、Dulac, C. (1998) Curr. Top. Dev. Biol. 36, 245およびJena et al. (1996) J. Immunol. Methods 190: 199に記載のものなどの、単一細胞からcDNAライブラリを調製する方法に記載のとおりに得ることができる。RNA分解を避けるために、例えば、RNAsinの包含により、注意しなければならない。
【０１７９】
次いで、RNA試料を特定の種で濃縮することができる。1つの態様において、ポリ(A)＋RNAをRNA試料から単離する。一般に、そのような精製はmRNA上のポリ-A末端を用いる。特に、前述のとおり、ポリ-Tオリゴヌクレオチドを固体支持体上に固定して、mRNAの親和性リガンドとして役立ててもよい。この目的のためのキットは市販されており、例えば、QuickExtract(登録商標)キット（Epicentre Biotechnologies、Madison、WI；Oligotex Direct mRNA kit、Qiagen、Valencia、CA）がある。
【０１８０】
本明細書に記載の方法において用い得るプローブの型には、cDNA、リボプローブ、合成オリゴヌクレオチドおよびゲノムプローブが含まれる。用いるプローブの型は一般には、例えば、インサイチューハイブリダイゼーションのためリボプローブ、およびノーザンブロッティングのためのcDNAなどの、特定の状況によって決定されることになる。1つの態様において、プローブは、RNAに特有のヌクレオチド領域に指向される。プローブは、調節可能なタンパク質のmRNA転写物を区別して認識するのに必要な程度に短くてよく、例えば、15塩基の短さであってよいが；少なくとも17、18、19または20個以上の塩基のプローブを用いることができる。1つの態様において、プライマーおよびプローブはストリンジェントな条件下で、アッセイされるタンパク質をコードする遺伝子に対応するヌクレオチド配列を有するDNA断片に特異的にハイブリダイズする。本明細書において用いられる「ストリンジェントな条件」なる用語は、ヌクレオチド配列において少なくとも95％の同一性がある場合にのみハイブリダイゼーションが起こることを意味する。別の態様において、「ストリンジェントな条件」下でのハイブリダイゼーションは、配列間に少なくとも97％の同一性がある場合に起こる。
【０１８１】
1つの態様において、遺伝子の翻訳を阻害する能力について、試験作用物質をアッセイする。遺伝子翻訳を、遺伝子から発現されるタンパク質の定量により、例えば、ウェスタンブロッティングにより、タンパク質の免疫学的検出、ELISA（酵素結合免疫吸着測定法）、放射性免疫測定法（RIA）、または他の免疫測定法、および蛍光細胞分析（FACS）、質量分析、またはタンパク質を検出するためのタンパク質配列決定法により、測定することができる。
【０１８２】
小分子、ポリマー、およびゲノムに基づくライブラリを作製するための方法は、例えば、Ding, et al., J Am. Chem. Soc. 124: 1594-1596 (2002)、およびLynn, et al., J. Am. Chem. Soc. 123: 8155-8156 (2001)に記載されている。市販の化合物ライブラリは、例えば、ArQule、Pharmacopia、graffinity、Panvera、Vitas-M Lab、Biomol International、Selleck ChemicalsおよびOxford Chemicals Limitedから入手することができる。これらのライブラリを、本明細書に記載の方法を用い、DSB修復を阻害する能力についてスクリーニングすることができる。
【０１８３】
特定の態様において、DSB修復阻害物質は、DSB修復を促進するタンパク質をコードする遺伝子の発現を阻害し得る核酸である。非限定例として、DSB修復阻害物質はDSB修復のアンチセンス阻害物質、例えば、米国特許出願公開第2002/0137698号に開示されているRAD51のアンチセンス阻害物質であり得る。遺伝子サイレンシングまたはRNAiを用いることができる。特定の態様において、細胞をDSB修復の阻害物質と接触させることで、標的遺伝子に対する細胞中のmRNAレベルが、miRNAまたはRNA干渉分子非存在下の細胞中で見られるmRNAレベルの少なくとも約5％、約10％、約20％、約30％、約40％、約50％、約60％、約70％、約80％、約90％、約95％、約99％、約100％減少することになる。1つの態様において、mRNAレベルは少なくとも約70％、約80％、約90％、約95％、約99％、約100％減少する。特定の態様において、DSB修復の阻害物質は、RNAi分子を含む発現ベクターまたはウイルスベクターを含む。
【０１８４】
本明細書において用いられる「RNAi」なる用語は、RNAi、siRNA、shRNA、内因性マイクロRNA、および人工マイクロRNAを含むが、それらに限定されるわけではない、任意の型の干渉RNAを意味する。例えば、これは、RNAの下流プロセシングのメカニズムには関係なく、以前にsiRNAと特定された配列を含む（すなわち、siRNAはmRNAの切断をもたらすインビボプロセシングの特定の方法を有すると考えられるが、そのような配列を本明細書に記載の隣接配列の文脈でベクターに組み込むことができる）。本明細書に記載の技術の作用物質に関する「RNAi」および「RNA干渉」なる用語は、本明細書において交換可能に用いられる。
【０１８５】
本明細書において用いられる「siRNA」とは、二本鎖RNAを生成する核酸を意味し、この二本鎖RNAは、siRNAが標的遺伝子と同じ細胞中に存在するかまたは発現される場合に、遺伝子または標的遺伝子の発現を低下させるかまたは阻害する能力を有する。二本鎖RNA siRNAは相補鎖によって生成され得る。1つの態様において、siRNAとは、二本鎖siRNAを生成し得る核酸を意味する。siRNAの配列は全長標的遺伝子、またはその部分配列に対応し得る。典型的には、siRNAは少なくとも約15〜50個のヌクレオチドの長さである（例えば、二本鎖siRNAの各相補配列は約15〜50ヌクレオチドの長さであり、二本鎖siRNAは約15〜50塩基対の長さ、好ましくは約19〜30塩基のヌクレオチド、好ましくは約20〜25個のヌクレオチドの長さ、例えば、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、または30個のヌクレオチドの長さである）。
【０１８６】
本明細書において用いられる「shRNA」または「小ヘアピンRNA」（ステムループとも呼ぶ）は、siRNAの一種である。1つの態様において、これらのshRNAは短い、例えば、約19〜約25個のヌクレオチドのアンチセンス鎖と、続く約5〜約9個のヌクレオチドのヌクレオチドループ、および類似のセンス鎖からなる。または、センス鎖がヌクレオチドループ構造の前にあり、アンチセンス鎖が後ろであってもよい。
【０１８７】
RNAiは、例えば、Schiffelers and Storm, Expert Opin Drug Deliv. 2006 May;3(3):445-54に記載のナノ粒子またはリポソーム（例えば、Hughes et al., Methods Mol Biol. 2010;605:445-59）を用いて送達してもよい。
【０１８８】
特定の態様において、核酸であるDSB修復阻害物質はアンチセンスRNAであり得る。
【０１８９】
特定の態様において、核酸であるDSB修復阻害物質はリボザイムであり得る。細胞性mRNA転写物を触媒的に切断するよう設計されたリボザイム分子を用いて、細胞性mRNAの翻訳および細胞性ポリペプチドの発現またはそれら両方を防止することもできる（例えば、PCT国際公開WO90111364；Sarver et al. 1990, Science 247, 1222-1225および米国特許第5,093,246号参照）。mRNAを部位特異的認識配列で切断するリボザイムを用いて細胞性mRNAを破壊することができるが、ハンマーヘッド型リボザイムの使用が好ましい。ハンマーヘッド型リボザイムはmRNAを、標的mRNAと相補的塩基対を形成する隣接領域によって規定される部位で切断する。唯一の条件は、標的mRNAが2塩基の配列：5'-UG-3'を有することである。ハンマーヘッド型リボザイムの構築および生成は当技術分野において周知であり、Haseloff and Gerlach 1988, Nature 334:585-591により詳細に記載されている。リボザイムは、切断認識部位が細胞性mRNAの5'末端付近にあるように；すなわち、効率を高め、非機能性mRNA転写物の細胞内蓄積を最小限にするように、操作してもよい。
【０１９０】
本明細書において提示する方法および組成物のリボザイムは、テトラヒメナ好熱生物において天然に見られるもの（IVS、またはL-19 IVS RNAとしても公知）およびCechら（Zaug, et al. 1984, Science 224:574-578；Zaug, et al. 1986, Science 231:470-475；Zaug, et al. 1986 Nature 324:429-433；公開された国際特許公報番号W088/04300；Been, et al. 1986, Cell 47:207-216）によって広く記載されているものなどの、RNAエンドリボヌクレアーゼ（以下「Cech型リボザイム」）も含む。Cech型リボザイムは、標的RNA配列にハイブリダイズする8塩基対活性部位を有し、その後標的RNAの切断が起こる。本発明の方法および組成物は、細胞性遺伝子に存在する8塩基対活性部位配列を標的とするCech型リボザイムを含む。
【０１９１】
アンチセンスアプローチなどの場合、リボザイムは、修飾オリゴヌクレオチド（例えば、安定性の改善、標的化などのため）で構成され得、インビボでDNA編集酵素遺伝子を発現する細胞に送達されるべきである。好ましい送達方法は、トランスフェクトされた細胞が内因性細胞メッセージを破壊し、翻訳を阻害するのに十分な量のリボザイムを産生するように、強力な構成性pol HIまたはpol IIプロモーターの制御下でのリボザイムをコードするDNA構築物の使用を含む。アンチセンス分子とは異なり、リボザイムは、触媒性であるため、効率のためには低い細胞濃度しか必要でない。
【０１９２】
「マイクロRNA」または「miRNA」なる用語は、本明細書において交換可能に用いられ、内因性RNAであり、そのいくつかは翻訳後レベルでタンパク質コード遺伝子の発現を調節することが知られている。内因性マイクロRNAは、mRNAの生産利用率を調節することができる、ゲノム中に天然に存在する小RNAである。人工マイクロRNAなる用語は、mRNAの生産利用率を調節することができる、内因性マイクロRNA以外の任意の型のRNA配列を含む。マイクロRNA配列は、Lim, et al., Genes & Development, 17, p. 991-1008 (2003)；Lim et al., Science 299, 1540 (2003)；Lee and Ambros, Science, 294, 862 (2001)；Lau et al., Science 294, 858-861 (2001)；Lagos-Quintana et al., Current Biology, 12, 735-739 (2002)；Lagos Quintana et al., Science 294, 853-857 (2001)；およびLagos-Quintana et al., RNA, 9, 175-179 (2003)などの出版物に記載されており、これらは参照により本明細書に組み入れられる。複数のマイクロRNAを前駆体分子に組み込むこともできる。さらに、miRNAおよび/またはRNAi経路を通じて内因性遺伝子の発現を調節するために、人工miRNAおよび短鎖干渉RNA（siRNA）を送達する媒体としてmiRNA様ステムループを細胞中で発現させることもできる。
【０１９３】
本明細書において用いられる「二本鎖RNA」または「dsRNA」とは、2つの鎖からなるRNA分子を意味する。二本鎖分子には、それ自体で折り返して二本鎖構造を形成する単一RNA分子からなるものが含まれる。例えば、プレmiRNAと呼ばれる、一本鎖miRNAの由来元である、前駆体分子のステムループ構造（Bartel et al., 2004, Cell 116:281-297）は、dsRNA分子を含む。
【０１９４】
標的遺伝子発現の阻害物質または活性化物質として働き得るヌクレオチド配列（例えば、RNAi、siRNA、shRNA）を選択するための手段は、周知であり、当業者によって実施されている。特定の核酸配列に対するRNAi物質を設計するために、多くのコンピュータープログラムが使用可能である。RNAi（例えば、siRNAなど）の標的となる領域を、開始コドンの約25〜50ヌクレオチド、約50〜75ヌクレオチド、または約75〜100ヌクレオチド下流から始めて、所与の標的遺伝子配列、例えば、RAD51）から選択することができる。ヌクレオチド配列は5'または3'UTRおよび開始コドン付近の領域を含むことができる。本明細書に記載の技術のsiRNA分子を設計する1つの方法は、23ヌクレオチド配列モチーフAA(N19)TT（Nは任意のヌクレオチドであり得る）（SEQ ID NO: 156）を特定する段階、および少なくとも25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％または75％のG/C含有率を有するものを選択する段階を含む。配列の「TT」部分は任意である。または、そのような配列が認められない場合、モチーフNA(N21)を用いて検索を拡大することができ、Nは任意のヌクレオチドであり得る。この場合、センスsiRNAの3'末端をTTに変換して、センスおよびアンチセンス3'オーバーハングの配列組成に関して、対称二本鎖の生成を可能にすることができる。次いで、アンチセンスRNAi分子を、23ヌクレオチド配列モチーフのヌクレオチド第1〜21位に対する相補体として合成することができる。例えば、小分子干渉リボ核タンパク質粒子（siRNP）が、ほぼ同じ割合のセンスおよびアンチセンス標的RNA切断siRNPで確実に生成されるために、対称3'TTオーバーハングの使用が有利であり得る（Elbashir et al. 2001上記）。
【０１９５】
いくつかの態様において、RNAi物質は、特定した標的遺伝子配列における少なくとも5個の近接ヌクレオチドを標的とする。1つの態様において、RNAi物質は、特定した標的配列における少なくとも6、7、8、9または10個の近接ヌクレオチドを標的とする。いくつかの態様において、RNAi物質は、特定した標的配列における少なくとも11、12、13、14、15、16、17、18または19個の近接ヌクレオチドを標的とする。
【０１９６】
いくつかの態様において、本明細書において開示するRNAi物質においてヌクレアーゼ抵抗性を高めるために、例えば、メチルホスホネート、ホスホロチオエートもしくはホスホロジチオエート連結またはその混合物などの、非ホスホジエステル主鎖連結を、RNAi物質の1つまたは複数の非RNASE H活性化領域に組み込むことができる。そのような非活性化領域は2'-置換基をさらに含んでもよく、結合親和性および二本鎖安定性を高めるために、鏡像異性的に選択した主鎖連結を含むこともできる。細胞膜を通してのオリゴヌクレオシド配列の取り込みを増大させるため、標的核酸とのハイブリッドの安定性を増大させるため、もしくは生成を増大させるため、または標的との架橋を促進するため（ソラレン光架橋置換基と同様）などの、様々な所望の特性を注入するために、他の官能基をオリゴヌクレオシド配列に連結してもよい。例えば、PCT公開WO92/02532を参照されたく、これは参照により本明細書に組み入れられる。
【０１９７】
特定の態様において、DSB修復の阻害物質は、抗体、モノクローナル抗体、または抗体断片である（一般には、Hood et al., Immunology, Benjamin, N.Y., 2ND ed. (1984)、Harlow and Lane, Antibodies. A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory (1988)およびHunkapiller and Hood, Nature, 323, 15-16 (1986)を参照されたく、これらは参照により本明細書に組み入れられる）。抗体は当業者には周知の方法を用いて調製する。典型的には、所望の抗原で免疫化した動物からの脾細胞を、一般には骨髄腫細胞との融合により不死化する（Kohler and Milstein (1976) Eur, J. Immunol. 6:511-519を参照されたく、参照により本明細書に組み入れられる）。不死化の代替法には、エプスタイン-バーウイルス、癌遺伝子、もしくはレトロウイルスによる形質転換、または当技術分野において公知の他の方法が含まれる。単一の不死化細胞から生じたコロニーを、抗原に対する所望の特異性および親和性の抗体の産生についてスクリーニングし、そのような細胞によって産生されたモノクローナル抗体の収率を、脊椎動物宿主の腹腔内への注射を含む様々な技術によって増大させてもよい。または、例えば、Huse, et al. (1989), Science 246:1275-1281によって概要が示された一般的プロトコールに従ってヒトB細胞からのDNAライブラリをスクリーニングすることにより、またはファージディスプレイライブラリ（例えば、国際公開公報第91/17271号および国際公開公報第92/01047号参照）をスクリーニングすることにより、モノクローナル抗体またはその抗体断片もしくは結合断片をコードするDNA配列を単離してもよい。特定の態様において、RAD51媒介性鎖交換修復の阻害物質は細胞内抗体である。細胞内抗体の産生法は、例えば、国際公開公報第2002/086096号に記載のとおり、当業者には周知である。抗体は通常は少なくとも約1mM、例えば、1mMもしくはそれ以下、300μMもしくはそれ以下、30μMもしくはそれ以下、10μMもしくはそれ以下、3μMもしくはそれ以下、1μMもしくはそれ以下、100nMもしくはそれ以下、または10nMもしくはそれ以下のKDで結合することになる。
【０１９８】
特定の態様において、DSB修復の阻害物質はタンパク質またはペプチドである。ペプチド作用物質は、天然のタンパク質の断片、またはRAD51媒介性交換修復のタンパク質の模擬物もしくはペプチド様物質であり得る。本明細書に記載のDSB修復に関与する遺伝子またはタンパク質を調節するよう、すなわち、遺伝子発現またはコードされたタンパク質活性を調節するよう、タンパク質および/もしくはペプチドまたはその断片の形の作用物質を設計することができる。そのような作用物質は、通常は存在しないタンパク質ならびに通常は細胞内で内因的に発現される、例えば、低いレベルで発現されるタンパク質を含むことが意図される。有用なタンパク質の例は、突然変異したタンパク質、遺伝子操作されたタンパク質、ペプチド、合成ペプチド、組換えタンパク質、キメラタンパク質、ヒト化タンパク質、修飾タンパク質およびその断片である。遺伝子発現またはタンパク質活性の調節は直接的または間接的であり得る。1つの態様において、タンパク質/ペプチド作用物質は、本明細書において特定する遺伝子によってコードされるタンパク質に直接結合するか、または本明細書において特定する遺伝子の核酸に直接結合する。
【０１９９】
阻害活性についてペプチドをスクリーニングすることができる。ペプチドライブラリ、例えば、ペプチドまたは他の化合物のコンビナトリアルライブラリは、任意の位置での配列優先性または定常性なしで、完全に無作為化することができる。または、ライブラリにバイアスをかけることができ、すなわち、配列内のいくつかの位置を一定に保つか、または限られた数の可能性から選択する。例えば、いくつかの場合には、ヌクレオチドまたはアミノ酸残基を、規定のクラス内で、例えば、疎水性アミノ酸、親水性残基、架橋のためのシステイン、SH-3ドメインのためのプロリン、リン酸化部位のためのセリン、トレオニン、チロシンもしくはヒスチジン、またはプリンへと立体的にバイアスがかかった（小さいか、または大きい）残基のクラス内で無作為化する。
【０２００】
試験作用物質は、天然のタンパク質またはそれらの断片であり得る。そのような試験作用物質は、天然材料、例えば、細胞または組織溶解物から得ることができる。ポリペプチド作用物質のライブラリは、例えば、市販のcDNAライブラリから調製するか、または日常的な方法で作製することもできる。試験作用物質は、ペプチド、例えば、約5〜約30アミノ酸のペプチドであり得、約5〜約20アミノ酸のペプチドが好ましく、約7〜約15アミノ酸のペプチドが特に好ましい。ペプチドは、天然のタンパク質の消化物、ランダムペプチド、または「バイアスがかかった」ランダムペプチドであり得る。いくつかの方法では、試験作用物質は、ポリペプチド、ペプチドまたはタンパク質である。試験作用物質は、核酸でもあり得る。核酸試験作用物質は、天然の核酸、ランダムな核酸、または「バイアスがかかった」ランダムな核酸であり得る。例えば、原核生物または真核生物ゲノムの消化物を、タンパク質について前述のとおりに同様に使用することができる。
【０２０１】
スクリーニングする試験作用物質のライブラリは、本明細書において特定する遺伝子によってコードされる、タンパク質またはそれらの断片の構造試験に基づいて作製することもできる。そのような構造試験により、タンパク質により結合しやすい試験作用物質の特定が可能となり、それらの活性を調節することが可能となる。タンパク質の3次元構造を、いくつかの方法、例えば、結晶構造および分子モデリングにおいて試験することができる。X線結晶学を用いてタンパク質構造を試験する方法は、文献で周知である。Physical Bio-chemistry, Van Holde, K. E. (Prentice-Hall, New Jersey 1971), pp. 221-239、およびPhysical Chemistry with Applications to the Life Sciences, D. Eisenberg & D. C. Crothers (Benjamin Cummings, Menlo Park 1979)を参照されたい。構造のコンピューターモデリングは、モジュレーターをスクリーニングするための試験作用物質を設計するための別の手段を提供する。分子モデリングの方法は、文献に、例えば、「System and method for molecular modeling utilizing a sensitivity factor」なる標題の米国特許第5,612,894号、および「Molecular modeling method and system」なる標題の米国特許第5,583,973号に記載されている。加えて、タンパク質構造は、中性子回折および核磁気共鳴（NMR）により決定することもできる。例えば、Physical Chemistry, 4th Ed. Moore, W. J. (Prentice-Hall, New Jersey 1972)、およびNMR of Proteins and Nucleic Acids, K. Wuthrich (Wiley-Interscience, New York 1986)を参照されたい。
【０２０２】
いくつかの態様において、スクリーニングして、本明細書において特定する遺伝子の発現を阻害すると特定された試験化合物、または本明細書において特定する遺伝子によってコードされるタンパク質の活性を阻害すると特定された試験化合物は、DSB修復を未処理対照に比べて少なくとも5％、10％、20％、30％、40％、50％、50％、70％、80％、90％、1倍、1.1倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、50倍、100倍、またはそれ以上阻害し得る。
【０２０３】
DSB修復阻害化合物または作用物質は、それが投与される形態で直接機能し得る。または、作用物質を細胞内で改変してまたは用いて、遺伝子を調節する何かを産生することができ、例えば、核酸配列の細胞への導入およびその転写により、遺伝子発現またはタンパク質活性の阻害物質または活性化物質の産生をもたらす。
【０２０４】
処置
いくつかの態様において、本明細書に記載の技術は、（a）増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞を有している対象を選択する段階；および（b）二本鎖切断修復の阻害物質の治療的有効量を対象に投与する段階を含む、処置の方法であって、増大したレベルが、健常個体由来の同じ型の細胞におけるDNA編集酵素のレベルよりも高いAIDのレベルである、方法に関する。いくつかの態様において、本明細書に記載の技術は、（a）増大したレベルのDNA編集酵素を発現するB細胞を有している対象を選択する段階；および（b）二本鎖切断修復の阻害物質の治療的有効量を対象に投与する段階を含む、処置の方法であって、増大したレベルが、健常個体由来のB細胞におけるDNA編集酵素のレベルよりも高いDNA編集酵素のレベルである、方法に関する。いくつかの態様において、DNA編集酵素発現は健常対象において検出不可能である。いくつかの態様において、対象はヒト対照であり得る。
【０２０５】
いくつかの態様において、健常個体由来の同じ型の細胞におけるDNA編集酵素のレベルに比べて増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞を有している対象を、対象から得られた細胞の試料中のDNA編集酵素タンパク質および/またはmRNAのレベルを定量することにより特定する。いくつかの態様において、増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞中のDNA編集酵素のレベルは、健常対象由来の正常な細胞よりも有意に高い。いくつかの態様において、増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞中のDNA編集酵素のレベルは、健常対象由来の非活性化B細胞中で発現されるDNA編集酵素のレベルよりも有意に高い。いくつかの態様において、増大したレベルのDNA編集酵素を発現するB細胞中のDNA編集酵素のレベルは、健常対象由来の非活性化B細胞中で発現されるAIDのレベルよりも有意に高い。
【０２０６】
いくつかの態様において、本明細書に記載の技術は、（a）増大したレベルの活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）を発現する細胞を有している対象を選択する段階；および（b）二本鎖切断修復の阻害物質の治療的有効量を対象に投与する段階を含む、処置の方法であって、増大したレベルが、健常個体由来の同じ型の細胞におけるAIDのレベルよりも高いAIDのレベルである、方法に関する。いくつかの態様において、本明細書に記載の技術は、（a）増大したレベルのAIDを発現するB細胞を有している対象を選択する段階；および（b）二本鎖切断修復の阻害物質の治療的有効量を対象に投与する段階を含む、処置の方法であって、増大したレベルが、健常個体由来のB細胞におけるAIDのレベルよりも高いAIDのレベルである、方法に関する。いくつかの態様において、AID発現は健常対象において検出不可能である。
【０２０７】
いくつかの態様において、健常個体由来の同じ型の細胞におけるAIDのレベルに比べて増大したレベルのAIDを発現する細胞を有している対象を、対象から得られた細胞の試料中のAIDタンパク質および/またはmRNAのレベルを定量することにより特定する。いくつかの態様において、増大したレベルのAIDを発現する細胞中のAIDのレベルは、健常対象由来の正常な細胞よりも有意に高い。いくつかの態様において、増大したレベルのAIDを発現する細胞中のAIDのレベルは、健常対象由来の非活性化B細胞中で発現されるAIDのレベルよりも有意に高い。いくつかの態様において、増大したレベルのAIDを発現するB細胞中のAIDのレベルは、健常対象由来の非活性化B細胞中で発現されるAIDのレベルよりも有意に高い。
【０２０８】
本明細書においてまた提供するのは、対象の状態が、例えば、癌または自己免疫疾患がDSB修復の阻害物質による処置に反応性であるかどうかを、その対象の細胞中のDNA編集酵素（例えば、AID）タンパク質、mRNAおよび/または活性のレベルを判定することにより判定する方法である。対象の細胞（試験試料）における高レベルのDNA編集酵素の存在は、対象がDSB修復の阻害物質による処置に反応性であることを示し得る。DNA編集酵素のレベルは、対象から得られた生体試料中のレベルを評価すること、および、観察されたレベルを対照参照試料中で見られるDNA編集酵素のレベルと比較することによって判定することができる。いくつかの態様において、DNA編集酵素はAIDである。
【０２０９】
1つの態様において、治療する状態（例えば、癌または自己免疫疾患）は、高レベルのDNA編集酵素を有していることが当業者にはすでに公知であり、したがって患者から得られた生体試料中のDNA編集酵素タンパク質、mRNA、および/または発現のレベルを測定する必要なく、DSB修復の阻害物質による処置が指示される。特定の態様において、DNA編集酵素はAIDである。本明細書において用いられる「生体試料」とは、組織試料（例えば、吸引生検材料、ブラシ生検材料、擦過生検材料、針生検材料、パンチ生検材料、切除生検材料、開創生検材料、切開生検材料、もしくは内視鏡生検材料などの組織生検材料）または細胞試料（例えば、上皮細胞もしくはリンパ球）を含む、患者、好ましくはヒト患者から得られた生体材料の試料を意味する。生体試料は、生体液試料、例えば、精液、尿、血液、血清、唾液、脳脊髄液、および細胞溶解物、例えば、リンパ球画分由来の上清であり得る。本明細書に記載の技術のいくつかの態様は、本明細書に記載の方法における生体試料の単離物の使用も含む。
【０２１０】
対照参照試料は、健常個体から、すなわち、癌または自己免疫疾患を持たない個体から得られた生体試料（同じ型の）であり得る。対照参照試料は、同じ型の生体試料中で通常見られるDNA編集酵素および健常個体から得られたDNA編集酵素の同じ濃度を含む、標準試料であってもよい。例えば、特定の細胞画分（例えば、リンパ球）、精液、尿、血液、脳脊髄液、または組織などの、生体試料中で通常見られるDNA編集酵素の量についての標準参照対照試料があってもよい。1つの態様において、対照参照試料は、癌または自己免疫疾患を持たない健常個体集団由来の細胞中で見られるDNA編集酵素mRNAまたはDNA編集酵素タンパク質の平均値または中央値濃度を含む、標準参照試料である。1つの態様において、例えば、細胞がB細胞である場合、参照レベルは、健常個体由来の非活性化Bリンパ球の集団で見られるDNA編集酵素タンパク質またはmRNAのレベルである。1つの態様において、対照参照試料は、患者由来の健常細胞または組織からの患者の生体試料であり、例えば、患者がリンパ腫を有している場合、頬のスワブまたは皮膚生検材料を参照試料として用いることができる。いくつかの態様において、クラススイッチングを起こしているB細胞の集団で見られるDNA編集酵素mRNA、タンパク質、および/または活性のレベルは適切な対照参照試料ではない。
【０２１１】
対象の細胞（例えば、癌または自己免疫細胞を含む生体試料）中で検出されたDNA編集酵素タンパク質、DNA編集酵素mRNA、および/またはDNA編集酵素活性のレベルが、健常対象由来の同じ型の細胞中のDNA編集酵素のレベルを表す、参照対照試料中で見られるDNA編集酵素タンパク質、mRNAおよび/または活性のレベルよりも、統計学的に有意な量だけ高い場合、対象から得られた細胞は、増加または増大したレベルのDNA編集酵素タンパク質および/またはmRNAを有していると特徴決定される。DNA編集酵素のレベルは、任意の単位、例えば、濃度計、光度計、またはELISAプレート読み取り器などから得られた単位で表すことができる。特定の態様において、DNA編集酵素はAIDである。
【０２１２】
本明細書において用いられる、DNA編集酵素タンパク質、mRNA、および/または活性の「高いレベル」、「増大したレベル」、および/または「増加したレベル」なる用語は交換可能に用いられ、健常個体由来の同じ型の細胞中のDNA編集酵素のレベルを表す、対照参照試料中に存在するDNA編集酵素タンパク質、mRNA、および/または活性の量よりも有意に大きいDNA編集酵素タンパク質、mRNA、および/または活性の量を意味する。特定の態様において、DNA編集酵素はAIDである。
【０２１３】
いくつかの態様において、対照参照試料は、DNA編集酵素レベルを判定する細胞と同じ型の健常細胞を含み得る。いくつかの態様において、対照参照試料の細胞は、DNA編集酵素発現のレベルを判定する細胞と類似の齢、発生状態、性別、および/または細胞型のものであり得る。いくつかの態様において、対照参照試料は、DNA編集酵素発現のレベルを判定する対象生物と類似の齢、発生状態、および/または性別の健常生物から得ることができる。いくつかの態様において、試験試料および対照参照試料は、同じ型、すなわち、同じ生体原料から得られ、同じ組成、例えば、同じ数および型の細胞を含む。特定の態様において、DNA編集酵素はAIDである。
【０２１４】
いくつかの態様において、対照参照試料は健常、非活性化および/または非形質転換B細胞を含み得る。いくつかの態様において、DNA編集酵素の増大したレベルは、健常、非活性化および/または非形質転換B細胞中のレベルよりも有意に大きいレベルである。いくつかの態様において、クラススイッチングを起こしているB細胞は有用な参照試料ではないと考えられる。特定の態様において、DNA編集酵素はAIDである。
【０２１５】
ほとんどの正常細胞において、AIDタンパク質/mRNAは検出不可能であり、したがって、いくつかの態様において、単なるAIDの検出は、健常個体由来の細胞中で検出可能なレベルではないレベルに比べて、増加したレベルと考えることができる。いくつかの態様において、AIDの増大したレベルは、例えば、本明細書の実施例11に詳細に記載するとおり、プライマーSEQ ID NO:101およびSEQ ID NO:102を用い、RT-PCRアッセイ法を用いて検出可能な、AIDのレベルであり得る。
【０２１６】
いくつかの態様において、AIDの検出可能なレベルは、血液1mLあたりAID mRNA 1pgまたはそれ以上、例えば、10pg/mL、100pg/mL、1ng/mL、10ng/mL、またはそれ以上であり得る。いくつかの態様において、AIDの検出可能なレベルは、血液1mLあたりAID mRNA 10pgまたはそれ以上であり得る。いくつかの態様において、AIDの検出可能なレベルは、血液1mLあたりAID mRNA 100pgまたはそれ以上であり得る。いくつかの態様において、AIDの検出可能なレベルは、血液1mLあたりAID mRNA 1ngまたはそれ以上であり得る。いくつかの態様において、AIDの検出可能なレベルは、血液1mLあたりAID mRNA 10ngまたはそれ以上であり得る。いくつかの態様において、AIDの検出可能なレベルは、血液1mLあたりAID mRNA 100ngまたはそれ以上であり得る。
【０２１７】
いくつかの態様において、AIDの検出可能なレベルは、細胞1個あたりAID mRNA 5コピー（例えば、転写物）またはそれ以上、例えば、10コピー、100コピー、1,000コピー、またはそれ以上であり得る。
【０２１８】
いくつかの態様において、AIDの検出可能なレベルは、免疫組織化学により測定して、組織切片の20平方ミクロンあたりAIDポリペプチド1個またはそれ以上、例えば、組織切片の20平方ミクロンあたりポリペプチド1個、ポリペプチド10個、ポリペプチド100個、ポリペプチド1,000個、またはそれ以上であり得る。
【０２１９】
いくつかの態様において、AIDの検出可能なレベルは、血液または血清1mLあたりAIDポリペプチド0.1pgまたはそれ以上、例えば、血液1mLあたり0.1pg、1pg、10pg、100pg、1ng、10ng、またはそれ以上であり得る。いくつかの態様において、AIDの検出可能なレベルは、血液または血清1mLあたりAIDポリペプチド0.1pgまたはそれ以上であり得る。いくつかの態様において、AIDの検出可能なレベルは、血液1mLあたりAIDポリペプチド10pgまたはそれ以上であり得る。いくつかの態様において、AIDの検出可能なレベルは、血液1mLあたりAIDポリペプチド100pgまたはそれ以上であり得る。いくつかの態様において、AIDの検出可能なレベルは、血液1mLあたりAIDポリペプチド1ngまたはそれ以上であり得る。いくつかの態様において、AIDの検出可能なレベルは、血液1mLあたりAIDポリペプチド10ngまたはそれ以上であり得る。いくつかの態様において、AIDの検出可能なレベルは、血液1mLあたりAIDポリペプチド100ngまたはそれ以上であり得る。
【０２２０】
いくつかの態様において、血清を含む試料はまず感度を上げるために血清アルブミンを枯渇させることができる。いくつかの態様において、血液を含む試料は、DNA編集酵素のレベルを検出する前に、B細胞または癌細胞を濃縮することができる。いくつかの態様において、発現数値を定量し、ソフトウェア（例えば、Microsoft EXCEL(登録商標)表計算ソフトおよびAffymetrix GENECHIP(登録商標）ソフトウェア）により解析することができる。
【０２２１】
いくつかの態様において、対象の細胞中のAIDのレベルが対照参照試料中に存在するAIDのレベルよりも有意に大きい場合、対象は本明細書に記載の方法による処置の候補である。いくつかの態様において、対象の細胞中のAIDのレベルが対照参照試料中に存在するAIDのレベルよりも少なくとも1.5倍、2倍、5倍、10倍大きい、例えば、1.5倍もしくはそれ以上、2倍もしくはそれ以上、3倍もしくはそれ以上、4倍もしくはそれ以上、5倍もしくはそれ以上、または6倍もしくはそれ以上である場合、対象は本明細書に記載の方法による処置の候補である。
【０２２２】
いくつかの態様において、健常対象および/または本明細書に記載の方法による処置を必要としない対象は、検出可能なレベルのDNA編集酵素を対象の細胞が発現しない者であり得る。いくつかの態様において、DNA編集酵素はAIDであり得る。
【０２２３】
AIDのレベルは、本明細書に記載のとおり、当業者には公知の任意の手段によって測定することができる。特定の態様において、AIDタンパク質のレベルの判定は、以下のアッセイ法の1つまたは複数の使用を含む：ウェスタンブロット、免疫沈降、酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）、放射性免疫測定法（RIA）、サンドイッチアッセイ法、蛍光インサイチューハイブリダイゼーション（FISH）、免疫組織学的染色、ラジオイムノメトリックアッセイ法、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ法、インサイチュー免疫測定法、沈降反応、凝集アッセイ法、補体結合アッセイ法、免疫蛍光測定法、プロテインAアッセイ法、質量分析、および/または免疫電気泳動アッセイ法。特定の態様において、AIDタンパク質のレベルの判定は、抗体、抗体断片、モノクローナル抗体、モノクローナル抗体断片、タンパク質結合タンパク質、および/またはAID結合ペプチドの使用を含む。
【０２２４】
特定の態様において、AID mRNAのレベルの判定は、以下のアッセイ法の1つまたは複数の使用を含む：RT-PCR、定量的RT-PCR、ハイブリダイゼーションアッセイ法、RNA-Seq、ノーザンブロット、ハイスループット配列決定法、マイクロアレイに基づく発現解析、転写増幅、および/または自家持続配列複製。特定の態様において、AID mRNAのレベルの判定は、抗体、抗体断片、モノクローナル抗体、および/またはモノクローナル抗体断片の使用を含む。
【０２２５】
mRNAのレベルを評価するための方法は当業者には周知である。好ましい態様を本明細書において記載する。レーザー捕獲顕微解剖レーザー捕獲顕微解剖（LCM）は当業者には公知であり、例えば、Simon et al. (1998) Trends in Genetics 14:272およびEmmert-Buck et al. (1996) Science 274:998-1001を参照されたい。本明細書に記載の技術の1つの態様において、分析のために腫瘍細胞または生検材料を得、mRNAなどの遺伝子材料を得るためにLCMを用いる。核酸分子を特定の生体試料から、当技術分野において周知のいくつかの手順のいずれか、特定の生体試料に適していると選択された特定の単離手順を用いて単離することができる。例えば、凍結-解凍およびアルカリ性溶解手順は、固体材料から核酸分子を得るために有用であり得；熱およびアルカリ性溶解手順は尿から核酸分子を得るために有用であり得；プロテイナーゼK抽出は血液から核酸を得るために用いることができる（Rolff, A et al. PCR: Clinical Diagnostics and Research, Springer (1994)。
【０２２６】
リアルタイムPCRは、mRNA発現のレベルを判定するために用いることができる増幅技術である。（例えば、Gibson et al., Genome Research 6:995-1001, 1996；Heid et al., Genome Research 6:986-994, 1996参照）。リアルタイムPCRは、増幅中のPCR産物蓄積のレベルを評価する。この技術により、複数の試料中のmRNAレベルの定量的評価が可能となる。mRNAレベルのために、mRNAを生体試料、例えば、腫瘍および正常組織から抽出し、cDNAを標準の技術を用いて調製する。リアルタイムPCRを、例えば、Perkin Elmer/Applied Biosystems（Foster City、Calif.）7700 Prism装置を用いて実施することができる。関心対象の遺伝子のために、マッチするプライマーおよび蛍光プローブを、例えば、Perkin Elmer/Applied Biosystems（Foster City、Calif.）により提供されるプライマー発現プログラムを用いて設計することができる。プライマーおよびプローブの最適濃度は当業者であれば最初に決定することができ、対照（例えば、β-アクチン）プライマーおよびプローブを、例えば、Perkin Elmer/Applied Biosystems（Foster City、Calif.）から購入してもよい。
【０２２７】
試料中の関心対象の特定の核酸の量を定量するために、対照を用いて標準曲線を作製する。標準曲線は、リアルタイムPCRにおいて求めたCt値を用いて作製してもよく、これはアッセイ法に用いる関心対象の核酸の初期濃度に関連する。関心対象の遺伝子の10〜106コピーの範囲の標準希釈液で一般に十分である。加えて、標準曲線を対照配列のために作製する。これにより、比較のために、組織試料中の関心対象の核酸の初期濃度を、対照の量に対して規準化することが可能となる。TaqManプローブを用いてのリアルタイム定量的PCRの方法は、当技術分野において周知である。リアルタイム定量的PCRの詳細なプロトコールは、例えば、RNAについてはGibson et al., 1996 Genome Res., 10:995-1001；およびDNAについてはHeid et al., 1996 Genome Res., 10:986-994において提供されている。
【０２２８】
TaqManに基づくアッセイ法は、発現レベルを定量するためにも用いることができる。TaqManに基づくアッセイ法は、5'蛍光色素および3'反応停止物質を含む蛍光発生オリゴヌクレオチドプローブを用いる。このプローブはPCR産物にハイブリダイズするが、3'末端のブロッキング剤により、それ自体で伸長することはできない。その後のサイクルでPCR産物が増幅されると、ポリメラーゼ、例えば、AmpliTaqの5'ヌクレアーゼ活性がTaqManプローブの切断を引き起こす。この切断により5'蛍光色素および3'反応停止物質が分離され、それにより増幅の関数として蛍光の増加が起こる。
【０２２９】
別の態様において、例えば、RNA転写物の検出をノーザンブロッティングによって達成してもよく、RNAの調製物を変性アガロースゲル上で泳動させ、活性化セルロース、ニトロセルロース、またはガラス、またはナイロン膜などの適切な支持体に転写する。次いで、標識（例えば、放射性標識）cDNAまたはRNAを調製物にハイブリダイズさせ、洗浄し、オートラジオグラフィーなどの方法によって解析する。
【０２３０】
mRNAレベルをモニターするために、例えば、mRNAを試験する生体試料から抽出し、逆転写し、蛍光標識したcDNAプローブを作製する。次いで、調節可能なタンパク質をコードする転写物から生成したcDNAにハイブリダイズ可能なマイクロアレイを標識したcDNAプローブで調べ、スライドを走査し、蛍光強度を測定する。この強度はハイブリダイゼーション強度および発現レベルに相関する。
【０２３１】
特定の種または配列で濃縮したかまたは濃縮していない、RNAの集団をさらに増幅することができる。本明細書において定義する「増幅プロセス」は、RNA内の分子を強化するか、増加させるか、または増強するために設計する。例えば、RNAがmRNAである場合、シグナルが検出可能であるように、または検出を増強するように、RT-PCRなどの増幅方法を用いてmRNAを増幅することができる。そのような増幅方法は、特に生体、組織、または腫瘍試料が小さいサイズまたは体積のものである場合に有益である。
【０２３２】
RNA転写物の検出を、公知の増幅法を用いてさらに達成することができる。例えば、mRNAをcDNAに逆転写した後、ポリメラーゼ連鎖反応を行うこと（RT-PCR）；または米国特許第5,332,770号に記載のとおり、両方の段階で1つの酵素を用いること、もしくはR. L. Marshall, et al., PCR Methods and Applications 4: 80-84 (1994)によって記載されたとおり、mRNAをcDNAに逆転写した後、非対称ギャップリパーゼ連鎖反応を行うこと（RT-AGLCR）は、本明細書に記載の技術の範囲内である。リアルタイムPCRを用いてもよい。他の適切な方法は、リガーゼ連鎖反応（LCR）（例えば、Wu and Wallace 1989, Genomics 4, 560 Landegren et al. 1988, Science 241, 1077参照）；自家持続配列複製法（SSR）（例えば、Guatelli et al. 1990, PNAS USA, 87, 1874参照）；転写増幅法（例えば、Kwoh et al. 1989, PNAS USA 86, 1173参照）；鎖置換増幅法（G. T. Walker et al., 1996, Clin. Chem. 42: 9-13および欧州特許出願第684315号）；ローリングサークル増幅法；ループ媒介等温増幅法；等温キメラプライマー核酸増幅法；Q-β増幅システム（欧州特許出願（EPA）第4544610号）；またはOneCutEventAmplificatioN（OCEAN；Clinical Chemistry 52, 1855-1863 (2006)）を含むが、それらに限定されるわけではない、等温検出法である。等温検出法はさらにヌクレアーゼ連鎖反応（NCR）、RNアーゼ媒介ヌクレアーゼ連鎖反応（RNCR）、ポリメラーゼヌクレアーゼ連鎖反応（PNCR）、RNアーゼ媒介検出法（RMD）、タンデム反復制限酵素促進（TR-REF）連鎖反応または反転逆相補体制限酵素促進（IRC-REF）連鎖反応を用いてもよい。本明細書において用い得る他の公知の増幅法には、PNAS USA 87: 1874-1878 (1990)に記載され、Nature 350 (No. 6313): 91-92 (1991)およびMollasalehi et al., 2012, Anal Biochem, 425, 91-95にも記載されている、いわゆる「NASBA」（核酸配列ベース増幅法）または「3SR」（自家持続配列複製法）；ならびにPCT公開WO9322461およびPCT公開WO2010/019898A1によって記載されている、標的媒介増幅法が含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【０２３３】
いくつかの態様において、AID核酸を、配列決定法、例えば、ハイスループット配列決定法、全トランスクリプトームショットガン配列決定法またはRNA-seqを用いて検出することができる。RNA-seqはいくつかの市販の次世代配列決定法のいずれか（例えば、454 SEQUENCING(商標)またはILLUMINA(商標)）を用いて、トランスクリプトーム全体またはその一部のハイスループット配列決定法を作製することができる。RNA-seqは、例えば、Ryan et al. (2008).BioTechniques 45 (1): 81-94；Wang Z, et al. (2009). Nature Reviews Genetics 10 (1): 57-63；Maher CA, et al. (2009).Nature 458 (7234): 97-101に記載されており、これらはその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０２３４】
別の態様において、AID核酸を「自家持続配列複製法」を用いて検出することができる。これは、以下の3つのレトロウイルス複製に必須の酵素活性を用いることによるインビトロ等温条件下で指数関数的に増幅（複製）される、標的核酸配列を用いた核酸増幅法である：（1）逆転写酵素、（2）RNアーゼH、および（3）DNA依存性RNAポリメラーゼ（Guatelli, et al. 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:1874）。cDNA中間体によるRNA複製のレトロウイルス戦略を模倣することにより、この反応は元の標的のcDNAおよびRNAコピーを蓄積する。実質的に等温とは、温度が約1時間の反応時間経過中に約37℃〜50℃の温度範囲内で変動し得ることを意味する。または、全反応を実施するために1つの温度を選択してもよい。45℃での自家持続配列複製法が好ましい。
【０２３５】
別の態様において、AID核酸を「転写増幅法」を用いて検出することができる。この核酸増幅法において、各サイクルは2つの段階からなる。第一の段階では、RNAまたはDNA標的のcDNAコピーを作製し、第二の段階では、各cDNAコピーの複数のRNA転写物を生成する（例えば、Kwoh (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 1173参照）。
【０２３６】
インサイチューハイブリダイゼーション可視化法を用いてもよく、放射性標識したアンチセンスRNAプローブを生検試料の薄片とハイブリダイズさせ、洗浄し、RNアーゼで切断し、オートラジオグラフィー用の高感度エマルジョンに曝露する。試料の組織学的組成を示すために、試料をヘマトキシリンで染色してもよく、適切な光フィルターでの暗視野撮像により現像されたエマルジョンが示される。ジゴキシゲニンなどの非放射性標識を用いてもよい。
【０２３７】
または、mRNA発現をDNAアレイ、チップまたはマイクロアレイ上で検出することもできる。DNA編集酵素に対応する核酸をチップに固定し、次いでこれを患者から得られた試験試料の標識核酸とハイブリダイズさせる。DNA編集酵素転写物を含む試料で陽性ハイブリダイゼーションシグナルが得られる。DNAアレイの調製法およびそれらの使用は当技術分野において周知である。（例えば、米国特許第6,618,6796号；同第6,379,897号；同第6,664,377号；同第6,451,536号；同第548,257号；米国特許第20030157485号ならびにSchena et al. 1995, Science 20:467-470；Gerhold et al. 1999, Trends in Biochem. Sci. 24, 168-173；およびLennon et al. 2000, Drug discovery Today 5: 59-65を参照されたく、これらはその全体が参照により本明細書に組み入れられる）。遺伝子発現逐次分析法（SAGE）を実施することもできる（例えば、米国特許出願第20030215858号参照）。mRNAレベルをモニターするために、例えば、mRNAを試験する生体試料から抽出し、逆転写し、蛍光標識したcDNAプローブを作製する。次いで、DNA編集酵素cDNAにハイブリダイズ可能なマイクロアレイを標識したcDNAプローブで調べ、スライドを走査し、蛍光強度を測定する。この強度はハイブリダイゼーション強度および発現レベルに相関する。「定量的」増幅の定量的PCR法は当業者には周知である。例えば、定量的PCRは同じプライマーを用いて既知の量の対照配列を同時に共増幅することを含む。これは、PCR反応を較正するために用い得る内部標準を提供する。定量的PCRの詳細なプロトコールは、例えば、Innis et al. (1990), PCR Protocols, A Guide to Methods and Applications, Academic Press, Inc. N.Y.に提供されている。
【０２３８】
DNA編集酵素タンパク質レベルまたはDNA編集酵素活性を、特に生体試料が細胞溶解物などの液体試料である場合に、測定することもできる。1つの態様において、DNA編集酵素タンパク質のレベルを、DNA編集酵素またはDNA編集酵素の断片に特異的に結合する抗体部分またはタンパク質結合タンパク質に生体試料を接触させることにより測定することができる。次いで、抗体-DNA編集酵素複合体の形成を、DNA編集酵素レベルの尺度として検出することができる。DNA編集酵素（例えば、AID）を認識する抗体は、商業的に入手することができるか、または本明細書の他所に記載の方法に従って調製することができる。
【０２３９】
AIDタンパク質レベルまたはAID活性を測定することもできる。1つの態様において、AIDタンパク質のレベルを、AIDまたはAIDの断片に特異的に結合する抗体部分またはタンパク質結合タンパク質に生体試料を接触させることにより測定する。次いで、抗体-AID複合体の形成を、AIDレベルの尺度として検出する。AIDを認識する抗体は、商業的に入手することができる（ab59361、ab93596またはab77401；AbCam Cambridge、MA）か、または本明細書の他所に記載の方法に従って調製することができる。組織試料を切片として、例えば、凍結または固定切片として調製し、抗体で染色することができる。液体試料は、例えば、ELISAまたはフローサイトメトリー分析で分析することができる。
【０２４０】
1つの態様において、抗体部分を検出可能に標識する。本明細書において用いられる「標識抗体」は、検出可能な手段で標識した抗体を含み、酵素的、放射性、蛍光、および化学発光標識した抗体が含まれるが、それらに限定されるわけではない。抗体は、c-Myc、HA、VSV-G、HSV、FLAG、V5、またはHISなどの、検出可能なタグで標識することもできる。AID検出のために抗体に基づく結合部分を用いる、本明細書に記載の診断および予後予測法において、生体試料中に存在するAIDのレベルは検出可能に標識した抗体から発せられるシグナルの強度に相関する。1つの好ましい態様において、抗体に基づく結合部分を、抗体を酵素に連結することによって検出可能に標識する。次いで、酵素はその基質に曝露されると、例えば、分光光度法、蛍光分析または可視的手段によって検出し得る化学部分を生成するような様式で、基質と反応することになる。本明細書に記載の技術の抗体を検出可能に標識するために用い得る酵素には、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ブドウ球菌のヌクレアーゼ、デルタ-V-ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、α-グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、β-ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース-VI-リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ、およびアセチルコリンエステラーゼが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【０２４１】
様々な他の免疫アッセイ法のいずれかを用いて検出を行ってもよい。例えば、抗体を放射性標識することにより、放射免疫学アッセイ法を使用して抗体を検出することが可能である。放射性同位体を、ガンマ計数器もしくはシンチレーション計数器の使用などの手段により、またはオートラジオグラフィーにより、検出することができる。本明細書に記載の技術の目的のために特に有用な同位体は、3H、131I、35S、14C、および好ましくは125Iである。抗体を蛍光化合物で標識することも可能である。蛍光標識した抗体を適切な波長の光に曝露すると、その存在を蛍光により検出することができる。最も一般的に用いられる蛍光標識化合物にはCYE色素、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、o-フタルデヒドおよびフルオレスカミンがある。抗体を152Eu、またはランタニド系列の他のものなどの、蛍光発光金属を用いて検出可能に標識することもできる。これらの金属は抗体に、ジエチレントリアミンペンタ酢酸（DTPA）またはエチレンジアミンテトラ酢酸（EDTA）などの金属キレート基を用いて結合することができる。抗体を、化学発光化合物にカップリングすることによって検出可能に標識することもできる。次いで、化学発光抗体の存在を、化学反応の経過中に生じる発光の存在を検出することにより判定する。特に有用な化学発光標識化合物の例は、ルミノール、ルシフェリン、イソルミノール、セロマティックアクリジニウムエステル（theromatic acridinium ester）、イミダゾール、アクリジニウム塩、およびシュウ酸エステルである。
【０２４２】
1つの態様において、AIDタンパク質のレベルを、酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）、ウェスタンブロッティング、免疫細胞化学、またはフローサイトメトリーなどの、免疫測定法によって検出する。非常に迅速であり得る、ELISA、フローサイトメトリー、またはRIAなどの免疫測定法。抗体アレイまたはタンパク質チップを用いることもでき、例えば、米国特許出願第20030013208A1号；同第20020155493A1号；同第20030017515号および米国特許第6,329,209号；同第6,365,418号を参照されたく、これらはその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０２４３】
最も一般的な酵素免疫測定法は、酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）である。ELISAは、抗体の標識（例えば、酵素結合）型を用いて抗原の濃度を検出および測定する技術である。ELISAには異なる形態があり、これらは当業者には周知である。ELISAの当技術分野において公知の標準的技術は、''Methods in Immunodiagnosis'', 2nd Edition, Rose and Bigazzi, eds. John Wiley & Sons, 1980；Campbell et al., ''Methods and Immunology'', W. A. Benjamin, Inc., 1964；およびOellerich, M. 1984, J. Clin. Chem. Clin. Biochem., 22:895-904に記載されている。
【０２４４】
「サンドイッチELISA」において、抗体（例えば、抗AID）を固相（すなわち、マイクロタイタープレート）に結合し、抗原（例えば、AID）を含む生体試料に曝露する。次いで、固相を洗浄して、結合していない抗原を除去する。次いで、標識抗体（例えば、酵素結合した）を結合抗原（存在する場合）に結合して、抗体-抗原-抗体サンドイッチを形成する。抗体に連結し得る酵素の例は、アルカリ性ホスファターゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、ウレアーゼ、およびB-ガラクトシダーゼである。酵素結合抗体は、基質と反応して、測定し得る着色反応生成物を生じる。
【０２４５】
「競合的ELISA」において、抗原（すなわち、AID）を含む試料と共に抗体をインキュベートする。次いで、抗原-抗体混合物を、抗原（すなわち、AID）でコーティングした固相（例えば、マイクロタイタープレート）と接触させる。試料中に存在する抗原が多いほど、固相に結合するために使用可能な遊離抗体は少なくなる。次いで、標識した（例えば、酵素結合した）二次抗体を固相に添加して、固相に結合した一次抗体の量を判定する。「免疫組織化学アッセイ法」において、組織をアッセイ中のタンパク質に特異的な抗体に曝露することにより、組織切片または細胞を特定のタンパク質について試験する。免疫組織化学アッセイ法には、インサイチュー免疫蛍光、または広視野落射蛍光顕微鏡法、および免疫蛍光顕微鏡法が含まれ得るが、それらに限定されるわけではない。
【０２４６】
「沈降アッセイ法」または「ゲル拡散沈降反応」もAIDタンパク質を検出するために用い得る。抗原（すなわち、AID）を含む試料と共に抗体をインキュベートする。等量点に達すると、沈澱が生成することになる。ゲル拡散沈降反応において、抗原および抗体を寒天ゲル中に、典型的には異なる点において導入し、ゲル中に自由に拡散させる。反応物が最適な比率で接触すると、沈澱が生成することになる。沈降アッセイ法の変種には、放射免疫拡散、二重拡散ゲル沈降、およびオクタロニー二重免疫拡散が含まれるが、それらに限定されるわけではない。定量的沈降アッセイ法は当業者には公知である（Basic Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, Sharma and Sangha (Eds), I.K. International Publishers Pvt. Lt, New Delhi, India (2009)；Essentials of Immunology and Serology, Stanley, J. Thomson, Albany, New York, (2002)）。
【０２４７】
次いで、抗体をいくつかの方法のいずれかにより可視化して、タンパク質の存在および量を判定する。抗体を可視化するために用いる方法の例は、例えば、抗体に連結した酵素（例えば、ルシフェラーゼ、アルカリ性ホスファターゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、またはβ-ガラクトシダーゼ）による、または化学的方法（例えば、DAB/基質クロマゲン（chromagen））である。または、「放射性免疫アッセイ法」を用いてもよい。放射性免疫アッセイ法は、抗原またはエピトープの標識した（例えば、放射性または蛍光標識した）型を用いて抗原の濃度を検出および測定するための技術である。抗原のための放射性標識の例には、3H、14C、および125Iが含まれる。生体試料中の抗原の濃度を、生体試料中の抗原またはエピトープを標識（例えば、放射性）抗原と、抗原に対する抗体への結合について競合させることにより測定する。標識抗原と非標識抗原との間の競合的結合を確実にするために、標識抗原は抗体の結合部位を飽和させるのに十分な濃度で存在する。試料中の抗原の濃度が高いほど、抗体に結合する標識抗原の濃度は低くなる。
【０２４８】
いくつかの態様において、DNA編集酵素のレベルを、タンパク質インサイチューアレイ（PISA）を用いることによって測定することができる。簡単に言うと、PISAは、無細胞システム（例えば、ウサギ網状赤血球抽出物）でタンパク質合成の鋳型となる遊離または固定化PCR DNAを含むアレイ表面を含み、タンパク質はアレイ表面に予めコーティングされている捕獲試薬と結合するタグ配列を通じて同時に固定化される。PISAは、例えば、特許公報WO 02/14860に記載されており、これはその全体が参照により本明細書に組み入れられる。特定の態様において、DNA編集酵素はAIDである。
【０２４９】
いくつかの態様において、DNA編集酵素のレベルを、定量的インサイチュータンパク質分析、例えば、AQUA(商標)を用いて測定することができる。AQUA(商標)は、例えば、Stemmann O., Zou H., Gerber S. A., Gygi S. P., Kirschner M. W.; Dual inhibition of sister chromatid separation at metaphase, Cell 2001, Dec 14, 107: 715-726およびKeshishian, et al. 2007, Molecular & Cellular Proteomics 6.12, 2212-2229に記載されており、これらはその全体が参照により本明細書に組み入れられる。特定の態様において、DNA編集酵素はAIDである。
【０２５０】
医師の選択に従い、本開示に基づいて、他の技術を用いてDNA編集酵素を検出してもよい。1つのそのような技術はウェスタンブロッティングであり（Towbin et al., Proc. Nat. Acad. Sci. 76:4350 (1979)）、適切に処理した試料をSDS-PAGEゲル上で泳動させた後、ニトロセルロースフィルターなどの固体支持体に転写する。次いで、検出可能に標識した抗DNA編集酵素抗体を用いて、DNA編集酵素レベルを評価することができ、検出可能な標識からのシグナルの強度は存在するDNA編集酵素の量に対応する。レベルを、例えば、濃度測定により定量することができる。特定の態様において、DNA編集酵素はAIDである。
【０２５１】
加えて、DNA編集酵素を、MALDI/TOF（飛行時間）、SELDI/TOF、液体クロマトグラフィ-質量分析（LC-MS）、ガスクロマトグラフィ-質量分析（GC-MS）、高性能液体クロマトグラフィ-質量分析（HPLC-MS）、キャピラリー電気泳動-質量分析、核磁気共鳴分光法、またはタンデム質量分析（例えば、MS/MS、MS/MS/MS、ESI-MS/MSなど）などの質量分析を用いて検出してもよい。例えば、米国特許出願第20030199001号、同第20030134304号、および同第20030077616号を参照されたく、これらは参照により本明細書に組み入れられる。質量分析法は当技術分野において周知であり、タンパク質などの生体分子を定量および/または同定するために用いられている（例えば、Li et al. (2000), Tibtech 18:151-160；Rowley et al. (2000), Methods 20: 383-397；およびKuster and Mann (1998), Curr. Opin. Structural Biol. 8: 393-400参照）。さらに、単離したタンパク質の少なくとも部分的なデノボ配列決定を可能にする質量分析技術が開発された。Chait et al., Science 262:89-92 (1993)；Keough et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 96:7131-6 (1999)；総説はBergman, EXS 88:133-44 (2000)。特定の態様において、気相イオン分光光度計を用いる。特定の態様において、DNA編集酵素はAIDである。
【０２５２】
他の態様において、レーザー脱離/イオン化質量分析を用いて試料を分析する。今日のレーザー脱離/イオン化質量分析（「LDI-MS」）は、2つの主要な変種であるマトリックス支援レーザー脱離/イオン化（「MALDI」）質量分析、および表面エンハンス型レーザー脱離/イオン化（「SELDI」）で実施することができる。MALDIでは、マトリックスを含む溶液と分析物を混合し、液体1滴を基板の表面上に置く。次いで、マトリックス溶液を生体分子と共に結晶化する。基板を質量分析計に挿入する。レーザーエネルギーは、基板表面に向けられ、該基板表面で生体試料を著しく断片化することなく脱離およびイオン化する。しかし、MALDIは分析ツールとして限界がある。MALDIには試料を分別する手段がなく、マトリックス材料が、特に低分子量の分析物の検出を妨害することがある。例えば、米国特許第5,118,937号（Hillenkamp et al.）、および米国特許第5,045,694号（Beavis & Chait）を参照されたい。SELDIでは、基板表面を脱離プロセスに積極的に関与するよう改変する。1つの変種において、関心対象のタンパク質と選択的に結合する吸着剤および/または捕獲試薬で表面を誘導体化する。別の変種において、レーザーと衝突した場合に脱離されないエネルギー吸収分子で表面を誘導体化する。別の変種において、関心対象のタンパク質と結合し、レーザーの適用により切断される光分解性結合を含む分子で表面を誘導体化する。これらの方法それぞれにおいて、誘導体化物質は一般に、試料を適用する基板表面の特定の位置に局在する。例えば、米国特許第5,719,060号および国際公開公報第98/59361号を参照されたい。2つの方法を、例えば、分析物を捕獲するためにSELDI親和性表面を用い、マトリックス含有液を捕獲した分析物に添加して、エネルギー吸収材料を提供することにより、組み合わせることができる。
【０２５３】
質量分析計に関するさらなる情報については、例えば、Principles of Instrumental Analysis, 3rd edition, Skoog, Saunders College Publishing, Philadelphia, 1985；およびKirk-Othmer Encyclopedia of Chemical Technology, 4.sup.th ed. Vol. 15 (John Wiley & Sons, New York 1995), pp. 1071-1094を参照されたい。DNA編集酵素mRNAまたはタンパク質の存在の検出は、典型的にはシグナル強度の検出を含む。これは、次いで、基板に結合したポリペプチドの量および特徴を反映し得る。例えば、特定の態様において、第一の試料および第二の試料のスペクトルからのピーク値のシグナル強度を比較して（例えば、視覚的、コンピューター分析など）、特定の生体分子の相対量を判定することができる。Biomarker Wizardプログラム（Ciphergen Biosystems, Inc.、Fremont、Calif.）などのソフトウェアプログラムを用いて、質量スペクトルを分析することができる。質量分析計およびそれらの技術は当業者には周知である。
【０２５４】
いくつかの態様において、DNA編集酵素の活性を、細胞のゲノムのすべて、または一部における全突然変異状態を判定することにより測定することができる。参照細胞における全突然変異状態よりも少なくとも2％大きい、例えば、2％大きいまたはそれ以上の、3％大きいまたはそれ以上の、5％大きいまたはそれ以上の、10％大きいまたはそれ以上の、または20％大きいまたはそれ以上の全突然変異状態は、増加したレベル、増大したレベル、および/または有意なレベルのDNA編集酵素活性を示し得る。いくつかの態様において、高頻度突然変異のレベルを判定することができる。いくつかの態様において、全ゲノムまたはその一部における全突然変異状態を、FISH、全ゲノム配列決定法、ハイスループット配列決定法、エクソーム配列決定法、ハイブリダイゼーション、および/またはPCRを用いて判定することができる。いくつかの態様において、DNA編集酵素の活性を、IGH、BCL6、MYC、BCL11A、CD93、PIM1、および/またはPAX5を含むが、それらに限定されるわけではない、特定の標的遺伝子における高頻度突然変異のレベルを判定することによって測定することができる。特定の態様において、DNA編集酵素はAIDである。遺伝子座における高頻度突然変異の検出は、AID活性を示している。いくつかの態様において、参照細胞中のIGH、BCL6、MYC、BCL11A、CD93、PIM1および/またはPAX5における突然変異のレベルよりも少なくとも2％大きい、例えば、2％大きいまたはそれ以上の、3％大きいまたはそれ以上の、5％大きいまたはそれ以上の、10％大きいまたはそれ以上の、または20％大きいまたはそれ以上の、IGH、BCL6、MYC、BCL11A、CD93、PIM1および/またはPAX5を含む特定の標的遺伝子における突然変異のレベルは、増加したレベル、増大したレベル、および/または有意なレベルのAID活性を示し得る。
【０２５５】
いくつかの態様において、DNA編集酵素の活性を、DNA二本鎖切断を検出するためのFISH分析、例えば、DNA切断検出fish（DBD-FISH）（Volpi and Bridger, BioTechniques, Vol. 45, No. 4, October 2008, pp. 385-409）を用いて判定する。特定の態様において、DNA編集酵素はAIDである。
【０２５６】
いくつかの態様において、DNA編集酵素の活性を、ホスホ-H2AXアッセイ法（例えば、Rakiman et al., Advance Biotech 2008, 39-42；これはその全体が参照により本明細書に組み入れられる）、53BP1アッセイ法（例えば、Schultz et al., Journal of Cell Biology 2000, 151:1381-1390；これはその全体が参照により本明細書に組み入れられる）、またはRAD51アッセイ法（例えば、Hochegger and Takeda (2006), Subcell Biochem., 40, 313-325；これはその全体が参照により本明細書に組み入れられる）を用いて判定する。特定の態様において、DNA編集酵素はAIDである。
【０２５７】
本明細書において用いられる「DSB修復の少なくとも1つの阻害物質を必要とする対象」なる語句は、癌と診断されるかまたは癌を患っていると特定され、増大したレベルのDNA編集酵素タンパク質またはDNA編集酵素mRNAまたはDNA編集酵素活性をその癌の細胞が有している対象を意味し得る。本明細書において用いられる「DSB修復の少なくとも1つの阻害物質を必要とする対象」なる語句は、自己免疫疾患と診断されるか、または自己免疫疾患を患っていると特定され、増大したレベルのDNA編集酵素タンパク質またはDNA編集酵素mRNAまたはDNA編集酵素活性をその自己免疫疾患の細胞が有している対象も意味し得る。DSB修復の少なくとも1つの阻害物質を必要とする対象は、本明細書に記載の生体試料中に存在するmRNAまたはタンパク質またはDNA編集酵素活性のレベルを判定するために用いる任意の方法を用いて特定することができる。または、「DSB修復の少なくとも1つの阻害物質を必要とする対象」なる語句は、B細胞疾患もしくは自己免疫障害もしくは癌と診断されるか、またはB細胞疾患もしくは自己免疫障害もしくは癌を患っていると特定される対象を意味し得る。対象の癌細胞またはB細胞はDNA編集酵素タンパク質、またはDNA編集酵素mRNA、またはDNA編集酵素活性の増加したレベルを有し得る。B細胞疾患の非限定例には、B細胞癌（例えば、リンパ腫および白血病）、異常なB細胞増殖、クラススイッチング、および/または活性化を特徴とする自己免疫疾患が含まれる。いくつかの態様において、自己免疫疾患は、細胞中の異常なDNA編集酵素活性を特徴とする。異常なDNA編集酵素活性を示す自己免疫疾患には、紅斑性狼蒼、ウィスコット-アルドリッチ症候群、自己免疫性リンパ球増殖症候群、重症筋無力症；関節リウマチ（RA）、紅斑性狼蒼性腎炎、多発性硬化症、全身性紅斑性狼蒼、亜急性皮膚紅斑性狼蒼、凍傷状紅斑性狼蒼を含む皮膚紅斑性狼蒼、慢性関節炎、シェーグレン症候群、自己免疫性腎炎、自己免疫性血管炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性心炎、自己免疫性脳炎、炎症性慢性鼻副鼻腔炎、大腸炎、セリアック病、炎症性腸疾患、バレット食道、炎症性胃炎および自己免疫媒介性血液疾患が含まれるが、それらに限定されるわけではない。特定の態様において、DNA編集酵素はAIDである。
【０２５８】
いくつかの態様において、本明細書に記載の方法は、DSB修復の阻害物質を必要とすると特定された対象を選択する段階をさらに含む。DSB修復阻害物質を必要とする対象は、DNA編集酵素mRNA、またはDNA編集酵素タンパク質またはDNA編集酵素活性のレベルに基づいて選択することができる。特定の態様において、DNA編集酵素はAIDである。
【０２５９】
いくつかの態様において、DSB修復の阻害物質を必要とすると特定された対象は、DNA編集酵素タンパク質、またはDNA編集酵素mRNA、またはDNA編集酵素活性の増加したレベルに加えて、IGHにおける高頻度突然変異を示し得る。特定の態様において、DNA編集酵素はAIDである。
【０２６０】
DNA編集酵素の異常発現を特徴する癌を処置するための方法
本明細書において前述したとおり、本発明のいくつかの態様は、（a）DNA編集酵素、例えば、活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）を発現する細胞を有している対象を選択する段階；および（b）二本鎖切断修復の阻害物質の治療的有効量を対象に投与する段階を含む、処置の方法に関する。
【０２６１】
本発明のいくつかの態様は、（a）増大したレベルのDNA編集酵素、例えば、活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）を発現する細胞を有している対象を選択する段階；および（b）二本鎖切断修復の阻害物質の治療的有効量を対象に投与する段階を含む、処置の方法であって、DNA編集酵素の増大したレベルが、健常個体由来の同じ型の細胞におけるDNA編集酵素のレベルよりも高いDNA編集酵素のレベルである、方法に関する。いくつかの態様において、処置の方法は、（a）DNA編集酵素を発現するB細胞を有している対象を選択する段階；および（b）二本鎖切断修復の阻害物質の治療的有効量を対象に投与する段階を含む。いくつかの態様において、処置の方法は、（a）増大したレベルのDNA編集酵素を発現するB細胞を有している対象を選択する段階；および（b）二本鎖切断修復の阻害物質の治療的有効量を対象に投与する段階を含み；DNA編集酵素の増大したレベルが、健常個体由来のB細胞におけるDNA編集酵素のレベルよりも高いDNA編集酵素のレベルである。いくつかの態様において、DNA編集酵素を発現する細胞は癌細胞である。いくつかの態様において、DNA編集酵素を発現するB細胞は癌細胞である。いくつかの態様において、DNA編集酵素はAIDである。本明細書において用いられる「癌細胞」なる用語は、非制御様式で増殖する細胞を意味する。いくつかの態様において、増大したレベルのDNA編集酵素を発現する癌性B細胞を有している対象は、本明細書において以下に記載するとおり、B細胞癌（例えば、B細胞リンパ腫または白血病）を有しているかまたはそれを有していると診断された対象であり得る。いくつかの態様において、DNA編集酵素はAIDである。いくつかの態様において、高レベルのDNA編集酵素を血中、血清中または生検試料中で検出する。
【０２６２】
特定の態様において、本明細書に記載の方法は、組換えおよびDNA修復システムを用いて腫瘍細胞の自己破壊を誘導することにより、B細胞新生物、リンパ腫、および白血病を選択的に処置する。このアプローチは、DNA編集酵素が相同組換え能力の低下した初代B細胞において広範なゲノム切断および細胞死を誘導するとの知見を用いている。本明細書に記載のとおり、本発明者らは、AIDの発現増加を特徴とする細胞の集団をDSB修復の阻害物質で処置すると、細胞死が起こることを明らかにした。したがって、本明細書において提供するのは、高いDNA編集酵素、例えば、AID発現を有している癌の患者をDSB修復の阻害物質で処置するための方法である。
【０２６３】
特定の態様において、処置する癌はDNA編集酵素の高発現を示す型である。特定の態様において、処置する癌はB細胞新生物である。特定の態様において、処置する癌はリンパ腫である。特定の態様において、処置する癌はバーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、MALTリンパ腫、多発性骨髄腫、小リンパ球性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、大細胞型B細胞リンパ腫、および/またはT細胞リンパ腫である。リンパ腫は、免疫系のリンパ細胞（例えば、B細胞、T細胞、またはナチュラルキラー（NK）細胞）における悪性病変である。リンパ腫はしばしばリンパ節から発生し、固形腫瘍として存在する。リンパ腫は脳、骨、または皮膚などの他の器官に転移し得る。結節外部位は腹部に位置することが多い。リンパ腫はリンパ性白血病に密接に関連し、いくつかの場合には、癌の特定の形態はリンパ腫および白血病の両方として分類される。
【０２６４】
リンパ腫についてのいくつかの分類システムが、存在し、つい最近のものでは2001年に作られかつ2008年に更新された世界保健機構の分類である（Jaffe, E.S., et al., (Eds.) World Health Organization Classification of Tumors, Pathology and Genetics of tumors of hematopoietic and lymphoid tissues IARC Press: Lyon, France 2001）。WHOシステムはリンパ腫を、成熟B細胞リンパ腫、成熟T細胞リンパ腫および成熟NK細胞リンパ腫の3つの主な範疇に分割した。別の範疇に含まれるものは、ホジキンリンパ腫（異常なB細胞からなる）およびいくつかの他の珍しいリンパ腫である。
【０２６５】
リンパ腫は生検によって診断することができる。生検から得られた組織を組織検査に供して、悪性細胞の存在、種類、および配列を調べる。細胞がリンパ球であるかどうか、もしそうであれば、どの種類のリンパ球かを調べるためにも試験する。リンパ腫の範囲および体内のどこに位置するかを調べるためのさらなる試験は、追加の生検、核医学、X線、CT走査、またはMRIを含み得る（米国特許公報US2003/0129665参照）。ホジキンリンパ腫は、この疾患に特徴的な他の異常な細胞パターンに加えて、リード-ステルンベルグ細胞の存在によって診断することができる。リンパ腫の各型を区別するマーカーおよび組織学的徴候は当業者には公知である（Jaffe, E.S., et al. (Eds.) World Health Organization Classification of Tumors, Pathology and Genetics of tumors of hematopoietic and lymphoid tissues IARC Press: Lyon, France 2001）。
【０２６６】
特定の態様において、処置する癌は白血病である。白血病は造血組織の悪性新生物である。白血病は慢性および急性の2つの主な形態に分類される。急性白血病は、未熟な血液細胞の急速な増加を特徴とし、これは骨髄の健常な血液細胞を産生する能力を損傷する。慢性白血病は、比較的成熟しているが異常な白血球の蓄積を特徴とする。異常細胞は、正常細胞よりもはるかに高い割合で産生され、血中の異常な白血球の蓄積を引き起こす。しかし、これらの分類にもかかわらず、正常な造血の病的損傷はすべての白血病の特徴である。
【０２６７】
さらに、白血病は、どの血液細胞が冒されているかによって細分される。例えば、白血病はリンパ芽球性またはリンパ性白血病および骨髄球性または骨髄性白血病に分割することができる。リンパ芽球性またはリンパ性白血病では、前リンパ球細胞が典型的に冒され、これはリンパ球由来の細胞の感染と戦う特性を損傷する。ほとんどのリンパ性白血病は、リンパ球の特定のサブタイプであるB細胞に関与する。骨髄球性または骨髄性白血病では、赤血球のいくつかの他の型、および血小板と同様、白血球前駆体が冒されることが多い。したがって、白血病は一般に、急性リンパ芽球性白血病（ALL）、慢性リンパ性白血病（CLL）、および慢性骨髄性白血病（CML）の4つの範疇に細分することができる。各サブタイプの特定の徴候はB細胞に関与し得る。いくつかの態様において、白血病なる用語は、バーキット白血病、慢性リンパ性白血病（CLL）、急性骨髄性白血病（AML）、B細胞急性リンパ性白血病（B-ALL）、およびT細胞急性リンパ芽球性白血病（T-ALL）を含む。1つの態様において、本明細書に記載の白血病なる用語は、ヘアリーセル白血病も含み、これはしばしば前述の分類スキーム外であると考えられる。
【０２６８】
白血病を、当技術分野において公知の任意の方法によって診断することができる。典型的には、全血球計算（CBC）試験を最初に実施する。CBCは血液試料中の白血球、赤血球、および血小板の数を計数する。白血球数が高く、赤血球または血小板のレベルが低い血液の試料は、白血病を示し得、肝機能および腎機能検査の異常は、白血病がそれらの臓器を冒しているかどうかを示す。例えば、CD11bおよびGr-1などの成熟骨髄マーカーを用いて細胞型、細胞数、および/または細胞形態を調べることによるより正確な診断のために、フローサイトメトリーを用いることもできる。癌の各型を区別するマーカーおよび組織学的徴候は当業者には公知である（Jaffe, E.S., et al. (Eds.) World Health Organization Classification of Tumors, Pathology and Genetics of tumors of hematopoietic and lymphoid tissues IARC Press: Lyon, France 2001）。AMLでは、赤血球、血小板および正常な白血球の減少が見られると考えられる。これらの症状には、疲労、息切れ、易傷および出血性、ならびに感染の危険度増加が含まれる。症状は正常な骨髄の白血病細胞による置換によって引き起こされ、白血病細胞は主に骨髄中に蓄積し、正常な血液細胞の産生を妨害する、未成熟の異常な白血球である。
【０２６９】
特定の態様において、処置される癌は、B細胞新生物、B細胞白血病、B細胞急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、バーキット白血病、急性骨髄性白血病、および/またはT-ALLである。B細胞の成熟は最も典型的には、外来抗原が中和された場合に停止または実質的に減少する。しかし、時に、特定のB細胞の増殖が変わらずに続き；そのような増殖は「B細胞リンパ腫」または「B細胞白血病」と呼ばれる癌をきたし得る。特定の態様において、処置する癌は慢性リンパ性白血病（CLL）または慢性骨髄性白血病（CML）である。
【０２７０】
1つの態様において、白血病の診断を補助するために骨髄生検を用いる。骨髄生検試料は骨髄組織または骨髄および骨の混合物を含み得る。別の態様において、細胞遺伝学を用いて個々の細胞における染色体を検査する。細胞遺伝学的試験は、採血または骨髄またはリンパ節生検から採取された試料を用いる。試料の染色体を、細胞のDNAに対する損傷を示す異常について顕微鏡で検査し、白血病の診断を裏付ける。別の態様において、白血病の診断に脊椎穿刺を用いることができる。典型的に、脳脊髄液の試料を下背（腰椎領域）から採取する。次いで、脳脊髄液試料を白血病細胞および他の異常について調べる。MRI（磁気共鳴画像法）、CT（コンピューター体軸断層撮影）走査、およびX線は、白血病の診断を裏付けるために用い得る撮像技術である。
【０２７１】
特定の態様において、処置される癌は形質細胞腫瘍である。形質細胞腫瘍の例には、多発性骨髄腫、形質細胞性骨髄腫、形質細胞白血病、および形質細胞腫が含まれる。
【０２７２】
高レベルのDNA編集酵素発現を特徴とする任意の癌を、DSB修復の阻害物質で処置することができる。例えば、肉腫、上皮細胞癌（癌腫）、結腸癌、胃癌、腸癌、肝癌、肝細胞癌、乳癌、甲状腺癌、食道癌、肺癌、脳癌、頭頸部癌、黒色腫、腎癌、前立腺癌、血管腫、横紋筋肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、線維肉腫、および胆管癌は、高レベルのDNA編集酵素発現、例えば、AIDを特徴とし得る。特定の態様において、処置される癌は、結腸癌、肝癌、胃癌、腸癌、乳癌、肺癌、甲状腺癌、および/または胆管癌である。これらの癌はいずれも当技術分野において公知の任意の方法によって診断することができる。生検、結腸鏡検査、検便、画像法、または当技術分野において公知の他の手段を用いて腫瘍および/またはポリープの存在を検出することができる。これらの方法によって得た組織を組織検査に供して、悪性細胞の存在、型、および配列を判定する。リンパ腫の各型を区別するマーカーおよび組織学的徴候は当業者には公知である（Diagnostic Histopathology of Tumors, Fletcher, C.D.M. (Ed.), 3rd Edition, Churchill Livingstone Elsevier, China (2007)；Methods of Cancer Diagnosis, Therapy and Prognosis. Hayat, M.A. (Ed), (Vol 3), Springer (2009)）。癌の範囲および体内のどこに位置するかを調べるためのさらなる試験は、追加の生検、核医学、X線、CT走査またはMRIを含み得る。
【０２７３】
特定の態様において、DNA編集酵素発現が高い癌、例えばAIDが高い癌を有している患者をDSB修復の阻害物質で処置することにより、癌の指標、マーカー、症状、重症度、転移、再発、および/または腫瘍サイズは、DSB修復の阻害物質による処置前の指標、マーカー、症状、重症度、転移、再発、および/もしくは腫瘍サイズと比べて、またはDSB修復の阻害物質による処置を受けていない患者と比べて、少なくとも10％、例えば、少なくとも20％、少なくとも30％、少なくとも50％、少なくとも75％、少なくとも100％、少なくとも200％、またはそれ以上減少する。
【０２７４】
本明細書に記載の技術は、増加したレベルのAIDタンパク質またはmRNAを有している癌の処置のための、少なくとも1つのDSB修復阻害物質の使用およびと少なくとも1つのそのようなDSB修復阻害物質を含む組成物とに関し得る。例えば、DSB修復阻害物質を含む組成物を用いて、腫瘍サイズ、腫瘍成長、癌細胞数、癌細胞増殖、または癌の転移を低下させる。例えば、DSB修復阻害物質を含む組成物を用いて、例示のために示すにすぎないが、下記の1つに関連する症状の重症度を低下させるか、該症状の継続期間を短縮するか、または該症状の数を低下させる：B細胞癌、白血病、リンパ腫、結腸癌、肝癌、胃癌、腸癌、乳癌、肺癌、甲状腺癌、脳癌、腎癌、黒色腫、前立腺癌、または胆管癌。
【０２７５】
本明細書に記載の技術は、DSB修復阻害物質で処置していない患者と比べて、DSB修復阻害物質で処置した患者における余命を伸ばすため、または緩解までの時間を伸ばすための、少なくとも1つのRAD51媒介性鎖交換修復の阻害物質の使用、またはRAD51媒介性鎖交換修復の阻害物質を含む組成物にも関し得る。
【０２７６】
特定の態様において、DSB修復阻害物質は、DSB修復阻害物質および薬学的に許容される担体を含む組成物中に含まれる。さらなる態様において、DSB修復阻害物質は、薬学的に許容される担体および別の薬学的に有効な化合物を含む組成物中に含まれ得る。
【０２７７】
本明細書に記載の技術の薬学的組成物は、単独で、あるいは、免疫療法もしくは免疫療法剤、または癌を有している患者にとって有益であり得る他の治療法、またはそれらの組み合わせを含むがそれらに限定されるわけではない、他の治療法との組み合わせで投与することができる。本明細書に記載の技術の治療的物質は、本明細書に記載の癌の1つに対して有効な任意の他の治療法と一緒に投与し得ることが企図される。2つまたはそれ以上の治療的物質を一緒に投与する場合、それらを同時に、またはその投与の間にいくらか時間をおいて（すなわち、最適化した送達スケジュールに従って）投与することができる。さらなる態様において、本明細書に記載の技術の薬学的組成物は、少なくとも1つのDSB修復阻害物質および少なくとも1つの追加の薬学的作用物質を含むことができる。
【０２７８】
本明細書において用いられる「免疫療法」なる用語は、抗体または抗体に基づく治療剤での対象の処置を意味する。本明細書において用いられる免疫療法は、受動性または能動性であり得る。本明細書において規定する、受動免疫療法は、抗体の対象（患者）への受動性移入である。能動免疫は、対象（患者）における抗体および/またはT細胞応答の誘導である。
【０２７９】
例示的免疫療法剤には、ベバシズマブ（Avastin(登録商標)）、アレムツズマブ（Campath(登録商標)）、セツキシマブ（Erbitux）、イブリツモマブチウキセタン（Zevalin）、パニツムマブ（Vectibix）、リツキシマブ（Rituxan(登録商標)）、およびトシツモマブ-131I（Bexxar(登録商標)、Corixia Corp.）が含まれる。リツキシマブは、CD20+B細胞を選択的に枯渇させることによって作用する。リツキシマブの治療的有効性は、Collins-Burow et al., Rituximab and its Role as Maintenance Therapy in non-Hodgkin Lymphoma, Expert Rev Anticancer Ther 7(3):257-73 (2007)；Marcus et al., The Therapeutic Use of Rituximab in non-Hodgkin's Lymphoma, Eur J Haemotal Suppl (67):5-14 (2007)；Plosker et al., Rituximab: A Review of its Use in non-Hodgkin's Lymphoma and Chronic Lymphocytic Leukaemia, Drugs (2003)に記載されており、これらはその全体が参照により本明細書に組み入れられる。ベバシズマブ（Avastin(登録商標)、Genentech/Roche）は血管形成を阻止し、様々な癌を処置するために用いられ、セツキシマブ（IMC-C225；Erbitux(登録商標)）は、表皮成長因子受容体（EGFR）阻害物質に対するキメラ（マウス/ヒト）モノクローナル抗体であり、転移性結腸直腸癌および頭頸部の扁平上皮癌の処置のために静脈内注入により投与される。イブリツモマブチウキセタン（Zevalin）は、B細胞非ホジキンリンパ腫のいくつかの型に対するモノクローナル抗体放射免疫療法処置であり、CD20抗原に結合する。パニツムマブは、結腸直腸癌の処置のための、表皮成長因子受容体（EGF受容体、EGFR、ErbB-1およびHER1としても公知）に特異的な完全ヒトモノクローナル抗体である。
【０２８０】
本明細書に記載のいくつかの癌に対する治療法のさらなる型は幹細胞移植である。
【０２８１】
いくつかの態様において、本明細書に記載の技術の薬学的組成物を、免疫療法剤、化学療法剤、放射線処置もしくは癌を有している患者に対して有益であり得る他の治療法、またはそれらの組み合わせを含むが、それらに限定されるわけではない、他の治療法の後または前に投与することができる。
【０２８２】
いくつかの態様において、対象に、本明細書に記載のDSB修復阻害物質を含む組成物の投与を含む処置のサイクルを実施する。次いで、対象に、別の化学療法、免疫療法、放射線もしくは癌を有している患者に対して有益であり得る他の治療法、またはそれらの組み合わせの投与を含む処置のサイクルを実施する。処置の各サイクルは、組成物または治療剤の1回または複数回の投与、すなわち、1回の投与、2回の投与、3回の投与、5回の投与、10回の投与、20回の投与、またはそれ以上を含み得る。処置の各サイクルは、少なくとも1日、すなわち、少なくとも1日、少なくとも2日、少なくとも1週間、少なくとも2週間、少なくとも3週間、少なくとも4週間、少なくとも6週間またはそれ以上持続し得る。いくつかの態様において、少なくとも1日、すなわち、少なくとも1日、少なくとも2日、少なくとも1週間、少なくとも2週間、少なくとも3週間、少なくとも4週間、少なくとも6週間、またはそれ以上持続し得る処置のサイクルの間の休止または中断がある。本明細書に記載のDSB修復阻害物質による処置のサイクル、任意で中断、および別の化学療法、免疫療法、放射線もしくは癌を有している患者に対して有益であり得る他の治療法、またはそれらの組み合わせによる処置のサイクル、および任意で第二の中断を含む処置の過程を部分的または全体に繰り返すことができる。いくつかの態様において、DSB修復阻害物質による処置のサイクルを第二のサイクルで、他の抗癌療法を第一のサイクルで用いる。いくつかの態様において、他の化学療法、免疫療法、放射線もしくは癌を有している患者に対して有益であり得る他の治療法、またはそれらの組み合わせは、対象のDNAに損傷を引き起こす治療法を含む。いくつかの態様において、他の化学療法、免疫療法、放射線もしくは癌を有している患者に対して有益であり得る他の治療法、またはそれらの組み合わせはドキソルビシンを含む。いくつかの態様において、他の化学療法、免疫療法、放射線もしくは癌を有している患者に対して有益であり得る他の治療法、またはそれらの組み合わせはフルダラビンを含む。
【０２８３】
他の治療法には、本明細書に記載の方法の前、最中、または後に行い得る化学療法が含まれるが、それらに限定されるわけではない。1つの態様において、化学療法を本明細書に記載の組成物または方法による処置の前または後に投与するが、その処置の最中には投与しない。化学療法の非限定例には、放射線、またはアクチノマイシン、アムサクリン（Amsidine(登録商標)）、アンスラサイクリン、ブレオマイシン（Blenoxane(登録商標)）、ブスルファン、カンプトテシン、カルボプラチン（Paraplatin(登録商標)）、クロランブシル（Leukeran(登録商標)）、シスプラチン、シクロホスファミド（Cytoxan(登録商標)）、クラドリビン、シタラビン（Cytosar-U(登録商標)）、シトキサン、ダカルバジン（DTIC-Dome(登録商標)）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デキサメタゾン（Decadron(登録商標)）、ドセタキセル、ドキソルビシン（Adriamycin(登録商標)）、エピルビシン、エトポシド（Etopophos(登録商標)）、フルダラビン（Fludara(登録商標)）、ヘキサメチルメラミンオキサリプラチン、イホスファミド（Ifex(登録商標)）、イフォスファミド（iphosphamide）、メルファラン、メルクロレタミン、メトトレキセート、マイトマイシン、ミトキサントロン、ニトロソ尿素、パクリタキセル、プリカマイシン、プレドニゾン、プロカルバジン、テニポシド、トリエチレンチオホスホラミド、エトポシド（VPI6）、ビンクリスチン（Oncovin(登録商標)）、ビンブラスチン、ベンダムスチン（RibomustinおよびTreanda）、CHOP療法、c-myc遺伝子のモノクローナル抗体および阻害物質、DNAメチルトランスフェラーゼ、プロテアソーム、ならびにサイクリン依存性キナーゼなどの化学療法剤による処置が含まれる。
【０２８４】
化学療法剤には、DNA損傷を誘導する作用物質が含まれ得る。そのような作用物質の非限定例には、アルキル化剤、ニトロソ尿素、抗代謝剤、植物アルカロイド、植物抽出物、または放射性同位体が含まれ得る。
【０２８５】
さらに含まれるのは、（1）CODOX-M/IVACレジメン（Magrathプロトコール）−CODOX-M（シクロホスファミド、ビンクリスチン、ドキソルビシンおよび高用量メトトレキセート）とIVAC（イホスファミド、エトポシドおよび高用量シタラビン）を交替で2サイクル、（2）CODOX-Mの3サイクルを含むが、それらに限定されるわけではない、治療クールである。さらに含まれるのは、United Kingdom Lymphoma GroupおよびDana-Farber Cancer Instituteの改変Magrathプロトコールなどの、そのような併用療法の改変版である。
【０２８６】
自己免疫障害を処置する方法
本明細書において前述したとおり、本発明のいくつかの態様は、（a）増大したレベルの活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）を発現する細胞を有している対象を選択する段階；および（b）二本鎖切断修復の阻害物質の治療的有効量を対象に投与する段階を含む、処置の方法であって、AIDの増大したレベルが、健常個体由来の同じ型の細胞におけるAIDのレベルよりも高いAIDのレベルである、方法に関する。いくつかの態様において、増大したレベルのAIDを発現する細胞は自己免疫細胞である。本明細書において用いられる「自己免疫細胞」または「自己反応性細胞」とは、細胞の由来元の生物の細胞または生体成分に対する活性を有し、かつ/またはそれらを認識する、免疫細胞を意味する。自己免疫細胞であり得る細胞の例には、成人脾細胞、T細胞、およびB細胞が含まれるが、それらに限定されるわけではない。いくつかの態様において、対象はヒト対象であり得る。
【０２８７】
いくつかの態様において、処置の方法は、（a）増大したレベルの活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）を発現するB細胞を有している対象を選択する段階；および（b）二本鎖切断修復の阻害物質の治療的有効量を対象に投与する段階を含み、AIDの増大したレベルが、健常個体由来のB細胞におけるAIDのレベルよりも高いAIDのレベルである。いくつかの態様において、増大したレベルのAIDを発現するB細胞は自己免疫疾患に関連するB細胞である。本明細書において用いられる「自己免疫疾患に関連するB細胞」なる用語は、特定の自己免疫疾患において異常な機能、挙動、および/または増殖を示すB細胞を意味する。いくつかの態様において、自己免疫疾患に関連するB細胞は、それらの異常な機能、挙動、および/または増殖による疾患を引き起こすB細胞であり得る。いくつかの態様において、自己免疫疾患に関連するB細胞は、それらの異常な機能、挙動、および/または増殖による自己免疫疾患の1つまたは複数の症状を引き起こすB細胞であり得る。いくつかの態様において、自己免疫疾患に関連するB細胞を有している対象は、異常な機能、挙動、および/または増殖を示すB細胞を特徴とするかまたはそれらによって引き起こされる自己免疫疾患を有している対象、または該自己免疫疾患を有していると診断された対象であり得る。非限定例として、全身性紅斑性狼蒼では、対象のB細胞は自己抗原に特異的な抗体を異常に産生し、関節リウマチでは、対象のB細胞は対象のT細胞と異常に相互作用する。
【０２８８】
特定の態様において、本明細書に記載の方法は、リンパ系組換えシステムを用いて病的B細胞の自己破壊を誘導する一方で、正常細胞は保存することにより、自己免疫疾患を選択的に処置する。このアプローチは、B細胞リコンビナーゼAIDが相同組換え能力の減少した初代B細胞において広範なゲノム切断および細胞死を誘導するとの知見を用いている。本明細書に記載するとおり、DNA編集酵素、例えば、AIDの発現の上昇を特徴とする細胞集団をDSB修復の阻害物質で処置すると、細胞死が起こることが明らかにされている。したがって、本明細書において提供するのは、異常なB細胞増殖、クラススイッチング、または活性化を特徴とする自己免疫疾患の患者を処置するための方法である。いくつかの態様において、自己免疫疾患は、高いB細胞増殖、クラススイッチング、または活性化を特徴とすることができる。いくつかの態様において、自己免疫疾患は、高いAID発現を示すB細胞を有していることを特徴とすることができる。いくつかの態様において、方法は、DSB修復阻害物質によって自己免疫疾患および高いDNA編集酵素発現を示す細胞を有している対象を処置することに関する。いくつかの態様において、方法は、DSB修復阻害物質によって自己免疫疾患および高いAID発現を示すB細胞を有している対象を処置することに関する。特定の態様において、処置する自己免疫疾患は、高いAID発現を有しているB細胞を伴う型である。異常なB細胞増殖、クラススイッチング、および/または活性化を特徴とすることが公知の自己免疫疾患には、紅斑性狼蒼；ウィスコット-アルドリッチ症候群；自己免疫性リンパ球増殖症候群；重症筋無力症；関節リウマチ（RA）；紅斑性狼蒼性腎炎；多発性硬化症；全身性紅斑性狼蒼；円板状狼蒼；亜急性皮膚紅斑性狼蒼；凍傷状紅斑性狼蒼を含む皮膚紅斑性狼蒼；慢性関節炎；シェーグレン症候群；自己免疫性腎炎；自己免疫性血管炎；自己免疫性肝炎；自己免疫性心炎；自己免疫性脳炎；および自己免疫媒介性血液疾患が含まれるが、それらに限定されるわけではない。特定の態様において、自己免疫疾患はDNA編集酵素の異常な発現を特徴とする。特定の態様において、処置する自己免疫疾患は、クローン病、潰瘍性大腸炎、血管炎、強直性脊椎炎、ベーチェット病、腫瘍随伴性自己免疫、または皮膚筋炎である。いくつかの態様において、本明細書に記載の方法に従って処置する自己免疫疾患は、異常なB細胞増殖を特徴とする自己免疫疾患である。
【０２８９】
狼蒼または紅斑性狼蒼または全身性紅斑性狼蒼（SLE）は、体の様々な部分、特に皮膚、関節、血液、および腎臓に慢性炎症を引き起こし得る自己免疫障害である。体の免疫系は通常は抗体と呼ばれるタンパク質を作って、体をウイルス、細菌、および他の外来材料（すなわち、抗原）に対して保護する。狼蒼、または紅斑性狼蒼またはSLEなどの自己免疫障害では、免疫系は、抗原とそれ自体の細胞および組織との差異を区別する能力を失い、したがってそれ自体の細胞および組織に対する抗体を作製して、免疫複合体を生成し得る。これらの免疫複合体は組織中に蓄積し、炎症、組織への損傷および/または疼痛を引き起こし得る。狼蒼の3つの最も一般的な型には、全身性紅斑性狼蒼（SLE）、皮膚紅斑性狼蒼（CLE）、および薬物誘導性狼蒼が含まれる。自己免疫障害のさらなる型には、亜急性皮膚紅斑性狼蒼、凍傷状紅斑性狼蒼を含む皮膚紅斑性狼蒼、関節リウマチ、慢性関節炎、シェーグレン症候群、自己免疫性腎炎、自己免疫性血管炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性心炎、自己免疫性脳炎、および自己免疫媒介性血液疾患が含まれるが、それらに限定されるわけではない。狼蒼または紅斑性狼蒼のさらに詳細な記載は、Wallace, 2000, The Lupus Book: A Guide for Patients and Their Families, Oxford University Press, Revised and Expanded Edition；Kuhn et al., 2004, Cutaneous Lupus Erythematosus, Springer, First Edition；およびLahita, 1999, Systemic Lupus Erythematosus, Academic Press, Third Editionにおいて見いだすことができ、これらはその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０２９０】
紅斑性狼蒼を診断する方法は当技術分野において周知である。狼蒼の存在についての臨床検査には、LE細胞検査、抗核抗体検査、および抗DNA抗体についての検査が含まれる。しかし、狼蒼は、（i）関節炎（全身性狼蒼患者の90〜95％で起こる）、（ii）鼻梁全域、頬および/もしくは眼の下全域の光過敏誘導性「蝶型」紅斑、ならびに/または体の任意の部位の、円板状狼蒼として知られる、赤く膨らんだ鱗状斑などの、皮膚変化（狼蒼患者の75〜80％で起こる）、（iii）貧血、白血球減少、および血小板減少などの血液異常（狼蒼患者の約50％で起こる）、（iv）腎機能障害（狼蒼患者の約50％で起こる）、（v）心膜炎または胸膜炎を引き起こす心臓または肺を覆う膜の刺激などの、心または肺疾患（狼蒼患者の約30％で起こる）、および（vi）神経精神的変化（狼蒼患者の約10〜20％で起こる）を含む特定の臨床症状発現によって認識されることが多い。非限定例として、全身性紅斑性狼蒼と診断されていない対象の自己抗体のレベルと比べて、増大したレベルの少なくとも1つの自己抗体を有することにより、対象を全身性紅斑性狼蒼と診断することができる。全身性紅斑性狼蒼の診断のための例示的自己抗体には、抗核抗体（ANA）、抗二本鎖DNA抗体（抗dsDNA）、抗Sm核抗原抗体（抗Sm）、抗リン脂質抗体、およびそれらの任意の組み合わせが含まれるが、それらに限定されるわけではない。そのような増大したレベルは、全身性紅斑性狼蒼と診断されていない対象と比べて、少なくとも5％、少なくとも10％、少なくとも15％、少なくとも20％、少なくとも25％、少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも1倍、少なくとも2倍、少なくとも3倍、少なくとも4倍、少なくとも5倍、もしくは少なくとも10倍、またはそれ以上であり得る。または、全身性紅斑性狼蒼と診断されていない対象のレベルと比べて、増大したレベルのインターフェロン-βおよび/またはインターフェロン-β遺伝子発現を有していることにより、対象を全身性紅斑性狼蒼と診断することができる。そのような増大したレベルは、全身性紅斑性狼蒼と診断されていない対象と比べて、少なくとも5％、少なくとも10％、少なくとも15％、少なくとも20％、少なくとも25％、少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも1倍、少なくとも2倍、少なくとも3倍、少なくとも4倍、少なくとも5倍、もしくは少なくとも10倍、またはそれ以上であり得る。
【０２９１】
特定の態様において、高いAID発現を示すB細胞を有している自己免疫疾患または自己免疫障害を有している患者をDSB修復阻害物質で処置することにより、自己免疫疾患の指標、マーカー、症状、および/または重症度は、DSB修復阻害物質による処置前の指標、マーカー、症状、および/もしくは重症度と比べて、またはDSB修復阻害物質による処置を受けていない患者と比べて、少なくとも10％、例えば、少なくとも20％、少なくとも30％、少なくとも50％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％、またはそれ以上減少する。
【０２９２】
本明細書に記載の技術は、増加したレベルのAIDタンパク質またはmRNAを有しているB細胞を有している自己免疫疾患または自己免疫障害の処置のための、少なくとも1つのDSB修復阻害物質の使用および少なくとも1つのそのようなDSB修復阻害物質を含む組成物に関し得る。例えば、DSB修復阻害物質を含む組成物を用いて、例示のために示すにすぎないが、下記の1つに関連する症状の重症度を低下させるか、該症状の継続期間を短縮するか、または該症状の数を低下させる；紅斑性狼蒼；全身性紅斑性狼蒼（SLE）；皮膚紅斑性狼蒼（CLE）；薬物誘導性狼蒼；亜急性皮膚紅斑性狼蒼；凍傷状紅斑性狼蒼を含む皮膚紅斑性狼蒼；関節リウマチ；シェーグレン症候群；自己免疫性腎炎；自己免疫性血管炎；自己免疫性肝炎；自己免疫性心炎；自己免疫性脳炎；および自己免疫媒介性血液疾患。この文脈における「低下させる」とは、そのようなレベルの統計学的に有意な減少を意味する。減少は、例えば、少なくとも10％、少なくとも20％、少なくとも50％、少なくとも90％、またはそれ以上であり得る。
【０２９３】
特定の態様において、DSB修復阻害物質は、DSB修復阻害物質および薬学的に許容される担体を含む組成物中に含まれる。さらなる態様において、DSB修復阻害物質は、薬学的に許容される担体および別の薬学的に有効な化合物を含む組成物中に含まれ得る。
【０２９４】
本明細書に記載の技術の薬学的組成物は、単独で、あるいは、抗炎症剤、もしくは自己免疫疾患を有している患者にとって有益であり得る他の治療法、またはそれらの組み合わせを含むがそれらに限定されるわけではない、他の治療法との組み合わせで投与することができる。本明細書に記載の技術の治療的物質は、本明細書に記載の自己免疫疾患の1つに対して有効な任意の他の治療法と一緒に投与し得ることが企図される。2つまたはそれ以上の治療的物質を一緒に投与する場合、それらを同時に、またはその投与の間にいくらか時間をおいて（すなわち、最適化した送達スケジュールに従って）投与することができる。さらなる態様において、本明細書に記載の技術の薬学的組成物は、少なくとも1つのDSB修復阻害物質および少なくとも1つの追加の薬学的作用物質を含むことができる。
【０２９５】
紅斑性狼蒼の処置のための作用物質には、非ステロイド性抗炎症薬（NSAID）、コルチコステロイド、抗マラリア薬（例えば、クロロキニン；ヒドロキシクロロキン；およびキナクリン）、免疫抑制剤（例えば、アザチオプリン、シクロスポリンA、アルキル化剤、ナイトロジェンマスタード、クロランブシルまたはシクロホスファミド）、ヘパリン、アスピリン、ダナゾール（ダノクリン（Danocrine））、デヒドロエピアンドロステロン（DHEA）、ビンクリスチン（オンコビン）、ワーファリン、メチルプレドニゾロンパルス療法、ダプソン、サリドマイド（シノビル（Synovir））；コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム（A-メタプレド（Methapred）、ソルメドロール）、メトトレキセート（リウマトレックス）、ヒドロキシクロロキン（プラキニル）、トリアムシノロン（アリストスパン）、レチノイド（例えば、イストレチノインおよびエトレチネート）が含まれるが、それらに限定されるわけではない。抗炎症薬（NSAID）の非限定例には、アスピリン、サリチレート、イブプロフェン、ナプロキセン、クリノリル、オキサプロジン、およびトルメチンなどが含まれる。
【０２９６】
いくつかの態様において、本明細書に記載の技術の薬学的組成物を、抗炎症薬もしくは免疫抑制剤または自己免疫疾患を有している患者に対して有益であり得る他の治療法あるいはそれらの組み合わせを含むがそれらに限定されるわけではない、他の治療法の後または前に投与することができる。
【０２９７】
細胞の死滅に対する感受性化
いくつかの態様において、細胞を死滅に対して感受性にさせ、かつ/または細胞死を誘導するかもしくは引き起こす方法を本明細書において提供する。いくつかの態様において、細胞死を引き起こす方法であって、細胞にDNA編集酵素の有効量を投与する段階；および、その後、細胞を二本鎖切断修復の阻害物質と接触させる段階を含み、それにより細胞死を引き起こす、方法を本明細書において提供する。いくつかの態様において、細胞を細胞死に対して感受性にさせる方法であって、対象にDNA編集酵素の治療的有効量を投与する段階；および、その後、対象に二本鎖切断修復の阻害物質を投与する段階を含み、それにより対象の細胞を細胞死に対して感受性にさせる、方法を本明細書において提供する。いくつかの態様において、DNA編集酵素は、APOBECファミリーのメンバー、あるいはAID、Rag1もしくはRag2またはSPO11であり得る。
【０２９８】
いくつかの態様において、DNA編集酵素はAPOBECファミリーのメンバーであり得る。APOBECファミリーメンバーの非限定例には、APOBEC1（例えば、SEQ ID NO:138）；APOBEC2（例えば、SEQ ID NO:139）、APOBEC3A（例えば、SEQ ID NO:140）；APOBEC3C（例えば、SEQ ID NO:141）；APOBEC3E（例えば、SEQ ID NO:142）；APOBEC3F（例えば、SEQ ID NO:143）；APOBEC3G（例えば、SEQ ID NO:144）；APOBEC3H（例えば、SEQ ID NO:145）；およびAPOBEC4（例えば、SEQ ID NO:146）が含まれる。
【０２９９】
いくつかの態様において、ポリペプチドの形態、DNA編集酵素をコードする核酸の形態、または、DNA編集酵素をコードする核酸を含むベクターの形態でDNA編集酵素を投与することができる。いくつかの態様において、DNA編集酵素はAIDであり得る。いくつかの態様において、細胞に投与するDNA編集酵素は、SEQ ID NO:099の配列を含むポリペプチド、またはその変異体、機能的断片、もしくは相同体である。いくつかの態様において、細胞に投与するDNA編集酵素は、AIDポリペプチドをコードする核酸、例えば、核酸を投与した細胞中でAIDまたはその変異体、機能的断片、もしくは相同体が発現されるような、SEQ ID NO:100のヌクレオチド配列を含む核酸である。
【０３００】
遺伝子療法組成物および方法も、本明細書に記載の方法と共に用いるために企図される。そのような方法は、医師が、関心対象のポリペプチドをコードするDNAまたはRNA分子を患者に（インビボ遺伝子療法）または患者もしくは供与者から単離した細胞に（エクスビボ遺伝子療法）直接導入することを可能にする。遺伝子療法後に形質導入された細胞によって産生された治療的タンパク質は、直接投与したタンパク質に比べて、例えば、癌細胞、例えば、対象の腫瘍中で比較的一定のレベルで維持することができる。AIDおよび/またはDNA二本鎖切断修復の阻害物質などの、治療的物質のそのような持続的産生は、癌などの慢性疾患の処置において特に適切である。
【０３０１】
さらに、本明細書に記載の本発明のいくつかの態様において用いるベクターに含めることができる、小分子誘導物質を用いての調節可能な遺伝子構築物が開発された。（Rivera et al. (1996) Nat. Med. 2:1028-32；No et al. (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93:3346-51；Gossen and Bujard (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:5547-51；the GeneSwitch(登録商標)システム（Valentis, Inc.、Burlingame、Calif.））。これらのシステムは、その活性が小分子薬物によって制御される操作された転写因子、およびその発現が調節された転写因子によって駆動される導入遺伝子の使用に基づいている。（Rivera et al. (1996) Nat. Med. 2:1028-32；Pollock et al. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:13221-26；米国特許第6,043,082号および同第6,649,595号；Rivera et al. (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96:8657-62）。
【０３０２】
本明細書に記載の方法において有用なベクターには、プラスミド、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ヘルペスウイルス、およびポックスウイルスベクターが含まれ得るが、それらに限定されるわけではない。
【０３０３】
本明細書において用いられる「形質導入」なる用語は、外因性核酸を細胞に導入するための、ウイルス粒子またはウイルスの使用を意味する。
【０３０４】
本明細書において用いられる「トランスフェクション」なる用語は、本明細書に記載のAIDの活性および/またはレベルを増加させる作用物質をコードする核酸配列などの外因性核酸を細胞に導入するための、化学的方法などの方法を意味する。本明細書において用いられるトランスフェクションなどの用語は、外因性核酸を細胞に導入するウイルスに基づく方法は含まない。トランスフェクションの方法には物理的処理（電気穿孔法、ナノ粒子、マグネトフェクション（magnetofection））、および化学的トランスフェクション法が含まれる。化学的トランスフェクション法には、シクロデキストリン、ポリマー、リポソーム、ナノ粒子、カチオン脂質、またはそれらの混合物（例えば、DOPA、リポフェクタミン、およびアプチフェクチン（UptiFectin））、ならびに、DEAEデキストランまたはポリエチレンアミンなどのカチオンポリマーを用いるものが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【０３０５】
二本鎖切断修復の阻害物質は、本明細書において前述するとおり、例えば、小分子、ポリペプチド、タンパク質、RNAi物質、スチルベン誘導体、抗体、または本明細書において前述した抗体のエピトープ結合断片を含むポリペプチドであり得る。
【０３０６】
いくつかの態様において、細胞は、インビトロ細胞、細胞培養中の細胞、または対象から得られた試料中の細胞であり得る。いくつかの態様において、DNA編集酵素、および/または二本鎖切断修復の阻害物質を、例えば、細胞を維持している細胞培養培地に添加することができる。いくつかの態様において、DNA編集酵素、および/または二本鎖切断修復の阻害物質は、それらの細胞中への侵入を媒介するかまたは増大させる組成物に含まれ得る。作用物質を細胞に、インビトロまたはインビボのいずれかで送達するのに適した組成物、例えば、リポソームを、本明細書において以下に記載する。
【０３０７】
いくつかの態様において、細胞はインビボの細胞、例えば、対象中の細胞であり得る。
【０３０８】
いくつかの態様において、例えば、ベクターの有効性を増大させるため、有効用量を最小化するため、および/または副作用もしくはオフターゲット効果を最小化するために、関心対象の特定の細胞または組織（標的細胞または組織）を標的とすることが望ましい。作用物質に特定の細胞型を標的とさせる方法は当技術分野において周知である。総説については、Peng et al., ''Viral Vector Targeting'', Curr. Opin. Biotechnol. 10:454-457,1999；Gunzburg et al., ''Retroviral Vector Targeting for Gene Therapy'', Cytokines Mol. Ther. 2:177-184, 1996.；Wickham, ''Targeting Adenovirus'', Gene Ther. 7:110-114, 2000；Dachs et al., ''Targeting Gene Therapy to Cancer: A Review'', Oncol. Res. 9:313-325, 1997；Curiel, ''Strategies to Adapt Adenoviral Vectors for Targeted Delivery'', Ann NY Acad. Sci. 886:158171, 1999；Findeis et al., ''Targeted Delivery of DNA for Gene Therapy via Receptors'', Trends Biotechnol. 11:202205, 1993を参照されたく；これらはすべてその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０３０９】
いくつかの標的化戦略は、細胞性受容体およびそれらの天然リガンドを全体的または部分的に用いる。例えば、Cristiano et al., ''Strategies to Accomplish Gene Delivery Via the Receptor-Mediated Endocytosis Pathway'', Cancer Gene Ther., Vol. 3, No. 1, pp. 49-57, January-February 1996.；S. C. Philips, ''Receptor-Mediated DNA Delivery Approaches to Human Gene Therapy'', Biologicals, Vol. 23, No. 1, pp. 13-6, March 1995；Michael et al., ''Strategies to Achieve Targeted Gene Delivery Via the Receptor-Mediated Endocytosis Pathway'', Gene Ther., Vol. 1, No. 4, pp. 223-32, July 1994；Lin et al., ''Antiangiogenic Gene Therapy Targeting The Endothelium-Specific Receptor Tyrosine Kinase Tie2'', Proc. Natl. Acad. Sci., USA, Vol. 95, pp. 8829-8834, 1998. Sudimack et al, ''Targeted Drug Delivery Via the Folate Receptor'', Adv. Drug Deliv., pp. 147-62, March 2000；Fan et al., ''Therapeutic Application of Anti-Growth Factor Receptor Antibodies'', Curr. Opin. Oncol., Vol. 10, No. 1, pp. 67-73, January 1998；Wadhwa et al., ''Receptor Mediated Glycotargeting'', J. Drug Target, Vol. 3, No. 2, pp. 111-27, 1995；Perales et al, ''An Evaluation of Receptor-Mediated Gene Transfer Using Synthetic DNA-Ligand Complexes'', Eur. J. Biochem, Vol. 1, No 2, pp. 226, 255-66, December 1994；Smith et al., ''Hepatocyte Directed Gene Delivery by Receptor-Mediated Endocytosis'', Semin Liver Dis., Vol. 19, No. 1, pp. 83-92, 1999を参照されたく；これらはすべてその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０３１０】
特定の細胞型に特異的な表面抗原に対する抗体、特に一本鎖抗体を、標的化要素として用いてもよい。例えば、Kuroki et al., ''Specific Targeting Strategies of Cancer Gene Therapy Using a Single-Chain Variable Fragment (scFv) with a High Affinity for CEA'', Anticancer Res., pp. 4067-71, 2000；Dornburgの「Cell-Type Specific Gene Transfer Using Retroviral Vectors Containing Antibody-Envelope Fusion Proteins」なる表題の米国特許第6,146,885号；Jiang et al., ''In Vivo Cell Type-Specific Gene Delivery With Retroviral Vectors That Display Single Chain Antibodies'', Gene Ther. 1999, 6:1982-7；Engelstadter et al., ''Targeting Human T Cells By Retroviral Vectors Displaying Antibody Domains Selected From A Phage Display Library'', Hum. Gene Ther. 2000, 11:293-303；Jiang et al., ''Cell-Type-Specific Gene Transfer Into Human Cells With Retroviral Vectors That Display Single-Chain Antibodies'', J. Virol 1998,72:10148-56；Chu et al., ''Toward Highly Efficient Cell-Type-Specific Gene Transfer With Retroviral Vectors Displaying Single-Chain Antibodies'', J. Virol 1997, 71:720-5；Chu et al., Retroviral Vector Particles Displaying The Antigen-Binding Site Of An Antibody Enable Cell-Type-Specific Gene Transfer, J. Virol 1995, 69:2659-63；およびChu et al, ''Cell Targeting With Retroviral Vector Particles Containing Antibody-Envelope Fusion Proteins'', Gene Ther. 1994, 1:292-9を参照されたく；これらはすべてその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０３１１】
投与および用量
DSB修復の阻害物質と、第二の薬学的に活性な作用物質とを対象に、同じ薬学的組成物中または異なる薬学的組成物中で（同時または異なる時点で）投与することができる。異なる時点で投与する場合、DSB修復阻害物質および薬学的に活性な作用物質は、他方の投与の5分、10分、20分、60分、2時間、3時間、4時間、8時間、12時間、24時間、48時間、72時間、1週間、2週間、3週間以内、またはそれ以上の時間内で投与することができる。DSB修復阻害物質および薬学的に活性な作用物質を異なる薬学的組成物中で投与する場合、投与経路は異なり得る。例えば、DSB修復阻害物質を、経口経路、または、静脈内投与、筋肉内投与、腫瘍内投与、病変内投与、皮内投与、腹腔内投与、皮下投与、経皮投与、気道（エアロゾル）投与、肺投与、経鼻投与、直腸投与、および局所（口腔および舌下を含む）投与を含む非経口経路を含むが、それらに限定されるわけではない、当技術分野において公知の任意の適切な経路によって投与し、薬学的に活性な作用物質を、異なる経路、例えば、該薬学的に活性な作用物質の投与のために当技術分野において一般に用いられる経路によって投与する。非限定例において、DSB修復阻害物質を経口投与することができ、その一方で薬学的に活性な作用物質を皮下投与することができる。
【０３１２】
DSB修復阻害物質の投与の用量範囲は、化合物の形態、その効力、および癌の症状、マーカー、または指標が低下されることが望まれる程度、例えば、症状、悪心、腫瘍サイズなどについて望まれる低下パーセンテージに依存する。特定の態様において、用量は有害副作用を引き起こすほど大きいべきではない。一般に、用量は、患者の年齢、状態、および性別によって変動し、当業者であれば決定することができる。用量は、任意の合併症がある場合は、個々の医師が調節することもできる。
【０３１３】
特定の態様において、DSB修復阻害物質の有効用量を患者に1回投与する。特定の態様において、DSB修復阻害物質の有効用量を患者に繰り返し投与する。患者に、0.5mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、40mg/kgまたは50mg/kgなどの、DSB修復阻害物質の治療的な量を投与することができる。DSB修復阻害物質を、静脈内注入により、5分、10分、15分、20分、または25分間などの時間をかけて投与することができる。投与を、例えば、1時間に1回で3時間、6時間、12時間、もしくはそれ以上など、または2週間に1回（すなわち、2週間ごとに）で1ヶ月、2ヶ月、3ヶ月、4ヶ月、もしくはそれ以上などの、定期的に繰り返す。最初の処置レジメンの後、処置をより低頻度で投与することができる。例えば、2週間に1回で3ヶ月間の投与の後、投与を1ヶ月に1回で6ヶ月もしくは1年またはそれ以上繰り返すことができる。DSB修復阻害物質の投与は、癌のマーカーまたは症状のレベル、例えば、腫瘍サイズを、少なくとも10％、少なくとも15％、少なくとも20％、少なくとも25％、少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、もしくは少なくとも90％、またはそれ以上低下させることができる。
【０３１４】
DSB修復阻害物質の全用量を投与する前に、患者に、5％注入などの、より低用量を投与し、アレルギー反応などの有害作用についてモニターすることができる。
【０３１５】
癌または自己免疫に対する効果により、DSB修復阻害物質またはそれから調製した薬学的組成物は、生活の質を向上させることができる。
【０３１６】
有効性測定
疾患の処置または予防の有効性を、例えば、癌のマーカー、指標、もしくは症状、または適切な任意の他の測定可能パラメーターを測定することによって評価することができる。そのようなパラメーターの任意の1つ、またはパラメーターの任意の組み合わせを測定することにより、処置または予防の有効性をモニターすることは、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０３１７】
癌の1つもしくは複数のパラメーターにおいて統計学的に有意な改善がある場合、または、処置をしない場合に予想される症状の悪化もしくは発生が見られないことにより、処置は明白である。一例として、癌の測定可能な変化における少なくとも10％の好都合の変化、好ましくは少なくとも20％、30％、40％、50％、またはそれ以上が有効な処置の指標であり得る。所与のDSB修復阻害物質またはその薬物の製剤の有効性は、当技術分野において公知の癌の実験動物モデルを用いて判断することもできる。実験動物モデルを用いる場合、処置の有効性は、マーカーの統計学的に有意な増加が観察されれば証明される。
【０３１８】
所与のRAD51鎖交換修復阻害物質の有効性は、熟練医師であれば判定することができる。しかし、本明細書に記載の化合物による処置後に、癌の徴候、症状またはマーカーの任意の1つまたはすべてが有益な様式で変化し、他の臨床的に許容される症状が、例えば、少なくとも10％改善するまたはさらには回復する場合に、処置は、本明細書において用いられる「有効な処置」であると考えられる。有効性は、入院、または医学的介入の必要性により評価して、個体に悪化が見られないこと（すなわち、疾患の進行が停止している）によって測定することもできる。これらの指標の測定法は当業者には公知であり、かつ/または本明細書において記載する。例えば、白血病の処置には、個体または動物（いくつかの非限定例にはヒト、または哺乳動物が含まれる）における白血病の任意の処置が含まれ、（1）疾患を阻害すること、例えば、新しい血管の病的成長を停止もしくは減速すること；または（2）疾患を軽減すること、例えば、症状の対抗を引き起こし、白血病始原細胞の数を減らすこと；および（3）白血病の発生の見込みを予防もしくは低下させることが含まれる。疾患の処置のための有効量とは、それを必要とする哺乳動物に投与した場合、その疾患に対して、本明細書において規定される有効な処置となるのに十分な量を意味する。作用物質の有効性は、例えば、高い白血球数、感染に対する免疫応答の損傷、白血病始原細胞の存在などの、例えば、白血病の理学的指標を評価することによって判定することができる。癌の動物モデルにおいて、例えば、ヒト癌細胞を移植したマウスにおいて、および、癌の少なくとも1つの症状、マーカー、またはパラメーターの減少につながる組成物または製剤の任意の処置または投与において、有効性を評価することができる。
【０３１９】
有効性は、本明細書に記載の癌の任意の症状の軽減、例えば、挫傷形成、出血、点状出血、感染、呼吸困難、蒼白、悪心、発熱、悪寒、寝汗、インフルエンザ様症状、疲労、膨満感、ならびに/または、血小板、白血球、および/もしくは赤血球の増加によって測定することができる。
【０３２０】
有効性は、入院または医学的介入の必要性により評価して、個体に悪化が見られないこと（すなわち、疾患の進行が停止または少なくとも減速している）によって測定することもできる。
【０３２１】
本明細書に記載の処置の有効性に関する別のマーカーは、生存である。特定の癌の統計学的生存率は詳細に確立されており−本明細書に記載の方法に従って処置した個体または個体群が、予想される時点を超えて、または予想されるよりも高い率で生存する場合、処置を有効と考えることができる。
【０３２２】
有効性試験は、本明細書に記載の方法を用いての処置中に実施することができる。特定の病気に関連するいくつかの症状の重症度の測定値を、処置開始前に、およびその後の処置開始後の後半の特定の時期に記録する。例えば、白血病は、骨髄で誘発され、検出される前に他の器官に広がることもあり、したがって他の癌のタイプで日常的に行う伝統的な腫瘍の病期決定は白血病の病期決定においては有用でない。代わりに、医師は、白血病のタイプおよびサブタイプを同定するために細胞学的（細胞性）分類システムに頼っている。特定の白血病の予後または転帰、および処置に対しておこりそうな反応を、そのような細胞分類システムを用いて判定することができる。1つの態様において、急性白血病の分類法はフレンチアメリカンブリテッシュ（French-American-British）(FAB)システムである。FAB分類に従って、急性白血病は急性骨髄性白血病（AML）の8つのサブタイプおよび急性リンパ性白血病（ALL）の3つのサブタイプに分けられる。当業者であれば、様々な異なる白血病の疾患重症度を判定するそのような方法を知っており、そのような分類スキームに基づいて白血病の重症度を容易に診断することができる。
【０３２３】
本明細書に記載の方法に従っての処置の有効性を、以下の癌の代用または間接的マーカーにより評価することができる。限定する意図なしに、癌の処置の有効性を示すそのようなマーカーには、赤血球数または血小板数の増加、白血球数の正常化、肝および腎機能検査における改善、乳酸脱水素酵素レベルの減少、濾胞性リンパ腫国際予後指標（FLIPI）（Lopez-Guillermo, A. et al., J Clin Oncol 1994; 12:1343-1348；Solal-Celigny et al., Blood 2004 104:1258-1265）のスコア改善、CD11b+およびGr-1+細胞の減少、骨髄生検によって判定した骨髄形態の改善、細胞発生試験によって判定した異常なDNAを有している細胞の減少、および脳脊髄液中の癌細胞の存在減少が含まれ得る。癌の各タイプに特異的な試験は当業者には公知である。非限定例として、バーキットリンパ腫は、CD20+、CD10+、Bcl-6+、Bcl-2-、TdT-、および単型的sIg+である免疫表現型を有し、実質的にすべての細胞は、Ki67+（増殖）であり、c-mycおよびIgHまたはIgLに関与する転座を有し、bcl-2またはbcl-6遺伝子に関与する再構成はない、細胞を検出することによって診断およびモニターすることができる。
【０３２４】
当業者であれば、調査中の診断上の問題を改善するために、2つまたはそれ以上のマーカーの測定値を用いる多くの方法があることを理解すると考えられる。非常に単純であるが、それにもかかわらず多くの場合に有効なアプローチにおいて、試料が、調査した少なくとも1つのマーカーに関して陽性である場合には、結果は陽性と推定される。これは、例えば、CD20+、CD10+、Bcl-6+、Bcl-2-、TdT-、および単型的sIg+である免疫表現型を有し、実質的にすべての細胞は、Ki67+（増殖）であり、c-mycおよびIgHまたはIgLに関与する転座を有し、bcl-2またはbcl-6遺伝子に関与する再構成はない、いずれかの細胞を検出することによって、癌、すなわちバーキットリンパ腫を診断する場合であり得る。しかし、多くの場合、マーカーの組み合わせを数学的/統計学的に評価する。好ましくは、マーカーパネル、例えば、バーキットリンパ腫の免疫表現型および血液パネル計数のマーカーの測定値を数学的に組み合わせ、組み合わせた値は根元的な診断上の問題に相関する。好ましくは、診断上の問題は癌を処置する際のDSB修復阻害物質の有効性である。好ましくは、DSB修復阻害物質を投与していない対照と比較した相対的危険度を示す。好ましくは、対照は年齢および他の共変量についてマッチしている。
【０３２５】
マーカー値を、任意の適切な最新の数学的方法によって組み合わせることができる。マーカーの組み合わせを疾患または疾患を発生する危険度に相関させるための周知の数学的方法は、判別分析（DA）（すなわち、線形DA、二次DA、正則化DA）、カーネル法（すなわち、SVM）、ノンパラメトリック法（すなわち、k-近傍分類法）、PLS（部分最小二乗法）、樹形法（すなわち、ロジック回帰、CART、ランダムフォレスト法、ブースティング/バギング法）、一般化線形モデル（すなわち、ロジスティック回帰）、主成分法（すなわち、SIMCA）、一般化加法モデル、ファジィ論理に基づく方法、ニューラルネットワーク、および遺伝アルゴリズムに基づく方法のような方法を用いる。当業者であれば、本明細書に記載の技術のマーカーの組み合わせを評価するために、適切な方法を選択する上で問題はないと考えられる。好ましくは、マーカー、例えば、癌の有無に関連して用いる方法は、DA（すなわち、線形-、二次-、正則化判別分析）、カーネル法（すなわち、SVM）、ノンパラメトリック法（すなわち、k-近傍分類法）、PLS（部分最小二乗法）、樹形法（すなわち、ロジック回帰、CART、ランダムフォレスト法、ブースティング法）、または一般化線形モデル（すなわち、ロジスティック回帰）から選択される。これらの統計学的方法に関する詳細は、以下の参照文献中に見いだされる： Ruczinski, I., J. of Computational and Graphical Statistics, 12 (2003) 475-511；Friedman, J. H., Regularized Discriminant Analysis, JASA 84 (1989) 165-175；Hastie, T., Tibshirani, R., Friedman, J., The Elements of Statistical Learning, Springer Series in Statistics, 2001；Breiman, L., Friedman, J. H., Olshen, R. A., Stone, C. J., (1984) Classification and regression trees, California: Wadsworth；Breiman, L. Random Forests, Machine Learning, 45 (2001) 5-32；Pepe, M. S., The Statistical Evaluation of Medical Tests for Classification and Prediction, Oxford Statistical Science Series, 28 (2003)およびDuda, R. O., Hart, P. E., Stork, D. G., Pattern Classification, Wiley Interscience, 2nd Edition (2001)。
【０３２６】
いくつかの態様において、生物学的マーカーの基本的組み合わせに対する最適化した多変量カットオフを用いて、例えば、癌発生の危険度が低い、中間、および高い患者を判別することができる。このタイプの多変量解析において、マーカーはもはや独立ではなく、マーカーパネルを形成する。
【０３２７】
診断法の正確さは、その受信者操作特性（ROC）によって最もよく記載される（特にZweig, M. H., and Campbell, G., Clin. Chem. 39 (1993) 561-577参照）。ROCグラフは、観察したデータの全範囲にわたって決定閾値を持続的に変化させることで得られる、感度/特異度の対すべてのプロットである。
【０３２８】
臨床検査の臨床成績は、その診断上の正確さ、または対象を臨床上関連するサブグループに正しく分類する能力に依存する。診断上の正確さは、調査した対象の2つの異なる状態を正しく区別する試験の能力を評価する。そのような状態は、例えば、それぞれ健康および疾患または良性対悪性疾患である。
【０３２９】
それぞれの場合に、ROCプロットは、決定閾値の全範囲について感度対1-特異度をプロットすることにより、2つの分布の間の重なりを示す。y軸は感度、または真の陽性率［(真の陽性試験結果の数)/(真の陽性の数＋偽陰性の試験結果の数)と規定］である。これは疾患または状態存在下での陽性度とも呼ばれている。これは罹患サブグループからのみ計算する。x軸は偽陽性率、または1-特異度［(偽陽性結果の数)/(真の陰性の数＋偽陽性結果の数)と規定］である。これは特異度の指数で、完全に非罹患サブグループから計算する。真の陽性率および偽陽性率は、2つの異なるサブグループからの試験結果を用いて、完全に別々に計算するため、ROCプロットはサンプルにおける疾患の有病率とは無関係である。ROCプロット上の各点は、特定の決定閾値に対応する感度/1-特異度の対を表す。判別が完全（2つの結果の分布に重なりがない）な試験は、左上の角を通るROCプロットを有し、真の陽性率は1.0、または100％（完全な感度）であり、偽陽性率は0（完全な特異度）である。判別なしの試験（2群で同じ結果の分布）の理論的プロットは、左下角から右上角への45度の対角線である。ほとんどのプロットはこれらの2つの極値の間に入る。（ROCプロットが完全に45度の対角線の下に入る場合、これは「陽性度」の基準を「より大きい」から「未満」へと置き換えることにより容易に改善され、逆もまた同じである。）定量的には、プロットが左上角に近いほど、試験の全体の正確さは高くなる。
【０３３０】
臨床検査の診断上の正確さを定量するための1つの好都合な目標は、1つの数字によってその成績を表すことである。最も一般的な世界的尺度はROCプロット下面積である。慣例により、この面積は常に＞0.5である（そうでない場合、決定規準を逆転させてそうなるようにすることができる）。値は1.0（2群の試験値の完全な分離）と0.5（2つの試験値群の間に明白な分布差はない）との間の範囲である。面積は、対角線に最も近い点または特異度90％の感度などの、プロットの特定の部分にのみ依存することはなく、全プロットに依存する。これは、ROCプロットが完全なもの（面積＝1.0）にいかに近いかの定量的、記述的表現である。
【０３３１】
用量制限毒性（DLT）の定義
用量漸増を評価するためのDLTの判定を、NCI CTCバージョン3.0基準を用い、特定の薬物に関する公知で許容される毒性を考慮して、以下のとおりに規定する。前投薬なしで達した毒性はDLTとは考えない。DLTの基準には、最大制吐剤前投薬を行って、等級3以上の任意の悪心、嘔吐；等級3以上のすべての他の薬物関連の非血液毒性；好中球数＜500細胞/ul＞7日間；薬物投与後、好中球数＜500細胞/ulの任意の熱性好中球減少症（T＞101°Fと定義）；血液製剤もしくは血小板輸血を必要とする出血の証拠を伴って、血小板数＜10,000細胞/ulまたは等級3；エリスロポエチンを同時投与して、等級4以上のヘモグロビン毒性が含まれる。反応を標準的基準によって測定する。処置2サイクルごとに患者を再評価する。基準線/スクリーニングスキャンに加えて、確認スキャンを客観的反応の最初の記録の4週間後に行う。
【０３３２】
薬学的組成物
対象への投与のために、化合物を薬学的に許容される組成物で提供することができる。これらの薬学的に許容される組成物は、1つまたは複数の薬学的に許容される担体（添加物）および/または希釈剤と一緒に製剤化した、前述の少なくとも1つのDSB修復阻害物質の治療的有効量を含む。以下に詳細に記載するとおり、本明細書に記載の技術の薬学的組成物は、下記のために適合させたものを含む、固体または液体剤形で投与するために特に製剤化することができる：（1）経口投与、例えば、水薬（水性または非水性液剤または懸濁剤）、ロゼンジ、糖衣錠、カプセル剤、丸剤、錠剤（例えば、口腔、舌下、および全身吸収を標的とするもの）、ボーラス、散剤、顆粒剤、舌に適用するためのペースト；（2）非経口投与、例えば、滅菌液剤もしくは懸濁剤、または持続放出製剤として、例えば、皮下、筋肉内、静脈内、または硬膜外注射による；（3）局所適用、例えば、クリーム、ローション、ゲル、軟膏、または皮膚に適用する制御放出パッチもしくは噴霧剤として；（4）腟内または直腸内、例えば、ペッサリー、クリーム、坐剤、または発泡体として；（5）舌下；（6）眼；（7）経皮；（8）経粘膜；または（9）経鼻。加えて、化合物を患者に植え込む、または薬物送達システムを用いて注射することもできる。コーティングした送達デバイスも有用であり得る。例えば、Urquhart, et al., Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 24: 199-236 (1984)；Lewis, ed. ''Controlled Release of Pesticides and Pharmaceuticals'' (Plenum Press, New York, 1981)；米国特許第3,773,919号；米国特許第6,747,014号；および米国特許第35 3,270,960号を参照されたい。
【０３３３】
多くの組織化された界面活性剤構造が試験され、薬物の製剤のために用いられている。これらには、単分子膜、ミセル、二分子膜、および小胞が含まれる。リポソームなどの小胞は、薬物送達の見地から、それらの特異性およびそれらが提供する作用継続時間ゆえに、多大な興味を惹きつけてきた。リポソームは、親油性材料で形成された膜および水性の内部を有する、ユニラメラまたはマルチラメラ小胞である。水性部分は送達する組成物を含む。リポソームは、カチオン性（Wang et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 1987, 147, 980-985）、アニオン性（Zhou et al., Journal of Controlled Release, 1992, 19, 269-274）、または非イオン性（Hu et al. S.T.P.Pharma. Sci., 1994, 4, 6, 466）であり得る。リポソームは、特定の適用において有用な特定の性質を付与することができ、当技術分野において記載されている、いくつかの異なるリン脂質、脂質、糖脂質、および/またはポリマーを含み得る（Allen et al., FEBS Letters, 1987, 223, 42；Wu et al., Cancer Research, 1993, 53, 3765；Papahadjopoulos et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1987, 507, 64；Gabizon et al., PNAS, 1988, 85, 6949；Klibanov et al. FEBS Lett., 1990, 268, 235；Sunamoto et al., Bull. Chem. Soc. Jpn., 1980, 53, 2778；Illum et al., FEBS Lett., 1984, 167, 79；Blume et al., Biochimica et Biophysica Acta, 1990, 1029, 91；Hughes et al., Methods Mol Biol. 2010;605:445-59；米国特許第4,837,028号；同第5,543,152号；同第4,426,330号；同第4,534,899号；同第5,013,556号；同第5,356,633号；第5,213,804号；同第5,225,212号；同第5,540,935号；同第5,556,948号；同第5,264,221号；同第5,665,710号；欧州特許EP 0 445 131 B1；同EP 0 496 813 B1；および欧州特許公報WO 88/04924；同WO 97/13499；同WO 90/04384；同WO 91/05545；同WO 94/20073；同WO 96/10391；同WO 96/40062；同WO 97/0478）。
【０３３４】
本明細書に記載の技術の組成物は、エマルジョンまたはマイクロエマルジョンとして調製および製剤化することができる。エマルジョンは典型的には、1つの液体が通常は直径0.1μmを超える液滴の形態で別の液体中に分散されている、不均質系であり、当技術分野において記載されている。マイクロエマルジョンは、単一の光学的に等方性で、熱力学的に安定な液体溶液である、水、油および両親媒性物質の系と定義することができ、界面活性剤およびコサーファクタントを含み得る。これらの薬物送達手段はいずれも、当技術分野において記載されている（例えば、Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY；Idson, Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199；Rosoff, Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Volume 1, p. 245；Block in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 2, p. 199, 245, & 335；Higuchi et al., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985, p. 301；Leung and Shah, in: Controlled Release of Drugs: Polymers and Aggregate Systems, Rosoff, M., Ed., 1989, VCH Publishers, New York, pages 185-215；Schott, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985, p. 271；Constantinides et al., Pharmaceutical Research, 1994, 11, 1385-1390；Ritschel, Meth. Find. Exp. Clin. Pharmacol., 1993, 13, 205；Ho et al., J. Pharm. Sci., 1996, 85, 138-143；Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p. 92；米国特許第6,191,105号；同第7,063,860号；同第7,070,802号；同第7,157,099号参照）。
【０３３５】
1つの態様においてリポソームまたはエマルジョン製剤は界面活性剤を含む。界面活性剤は、エマルジョン（マイクロエマルジョンを含む）およびリポソームなどの製剤において広く適用されている。親水性基（「ヘッド」としても公知）の性質は、製剤中で用いられる異なる界面活性剤を分類するための最も有用な手段を提供する（Rieger, Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, p. 285）。適切な界面活性剤には、脂肪酸および/またはそのエステルもしくは塩、胆汁酸および/またはその塩が含まれる。いくつかの態様において、界面活性剤はアニオン性、カチオン性、または非イオン性であり得る。薬物製品における、製剤における、およびエマルジョンにおける界面活性剤の使用は総説として記載されている（Rieger, Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, p. 285）。
【０３３６】
1つの態様において、本明細書に記載の技術は、DSB修復阻害物質の細胞膜を通過する効率的な送達を行うために、様々な透過促進剤を用いる。透過促進剤は、5つの大きい範疇、すなわち、界面活性剤、脂肪酸、胆汁酸、キレート化剤、および非キレート化非界面活性剤の1つに属するとして分類することができ、これらの範疇はすべて他所に記載されている（例えば、Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002；Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.92；Takahashi et al., J. Pharm. Pharmacol., 1988, 40, 252；Touitou, E., et al. Enhancement in Drug Delivery, CRC Press, Danvers, MA, 2006；Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33；El Hariri et al., J. Pharm. Pharmacol., 1992, 44, 651-654；Brunton, Chapter 38 in: Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th Ed., Hardman et al., Eds., McGraw-Hill, New York, 1996, pp. 934-935；Swinyard, Chapter 39 In: Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990, pages 782-783；Yamamoto et al., J. Pharm. Exp. Ther., 1992, 263, 25；Yamashita et al., J. Pharm. Sci., 1990, 79, 579-583；Jarrett, J. Chromatogr., 1993, 618, 315-339；Katdare, A. et al., Excipient development for pharmaceutical, biotechnology, and drug delivery, CRC Press, Danvers, MA, 2006；Buur et al., J. Control Rel., 1990, 14, 43-51参照）
【０３３７】
経口製剤およびそれらの調製物は、米国特許第6,887,906号、米国特許出願公開第20030027780号、および米国特許第6,747,014号に詳細に記載されており、これらはそれぞれ参照により本明細書に組み入れられる。非経口、実質内、くも膜下腔内、脳室内または肝臓内投与のための組成物および製剤には滅菌水性液剤が含まれ、これらは、緩衝剤、希釈剤、ならびに透過促進剤、担体化合物および他の薬学的に許容される担体もしくは賦形剤などであるが、それらに限定されるわけではない、他の適切な添加物も含み得る。水性懸濁剤は、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、および/またはデキストランを含む、懸濁剤の粘性を高める物質をさらに含むことができる。懸濁剤は安定化剤も含み得る。
【０３３８】
本明細書に記載の技術の組成物は、薬学的組成物中で通常見いだされる他の補助成分を、それらの当技術分野において確立された使用レベルでさらに含むことができる。したがって、例えば、組成物は、例えば、止痒剤、収斂剤、局所麻酔薬、もしくは抗炎症剤などの、追加の適合性の薬学的活性材料を含むことができるか、または色素、着香剤、保存剤、抗酸化剤、乳白剤、増粘剤、および安定化剤などの、本明細書に記載の技術の組成物の様々な剤形を物理的に製剤化する際に有用な追加の材料を含むことができる。しかし、そのような材料は、添加される場合、本明細書に記載の技術の組成物の成分の生物活性を過度に妨害すべきではない。製剤は滅菌し、望まれる場合には、製剤のDSB修復阻害物質と有害に相互作用しない補助剤、例えば、滑沢剤、保存剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響をおよぼすための塩、緩衝剤、着色剤、着香剤、および/または芳香物質などと混合することができる。
【０３３９】
適切な乳化剤には、例えば、エトキシル化エーテル、エトキシル化エステル、ポリオキシプロピレン-ポリオキシエチレンブロックコポリマー、およびリン脂質などの、合成非イオン性乳化剤が含まれる。卵もしくは大豆リン脂質などの、天然リン脂質、および修飾もしくは人工的に操作したリン脂質、またはそれたの混合物も用いることができる。いくつかの態様において、乳化剤は卵リン脂質および大豆リン脂質である。卵黄リン脂質は、ホスファチジルコリン、レシチン、およびホスファチジルエタノールアミンを含む。
【０３４０】
本明細書に記載の技術の組成物は、安定化剤も含み得る。アニオン性安定化剤には、例えば、ポリエチレングリコールと結合したホスファチジルエタノールアミン、（PEG-PE）およびホスファチジルグリセロールが含まれ、それらの具体例はジミリストールホスファチジルグリセロール（DMPG）である。さらなる安定化剤には、オレイン酸およびそのナトリウム塩、コール酸およびデオキシコール酸、ならびにそれらのそれぞれの塩、ステアリルアミンおよびオレイルアミンなどのカチオン性脂質、ならびに3|3-[N-(N',N'-ジメチルアミノエタン)カルバモイル]コレステロール（DC-Chol）が含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【０３４１】
本明細書に記載の技術の組成物は、適切な張性改変剤の組み込みにより血液と等張にすることができる。グリセロールが張性改変剤として最もよく用いられる。代わりの張性改変剤には、キシリトール、マンニトールおよびソルビトールが含まれる。薬学的組成物は典型的には生理的に中性のpH、典型的には6.0〜8.5の範囲となるよう製剤化する。pHは塩基、例えば、NaOHもしくはNaHCO3、またはいくつかの場合には、HClなどの酸の添加により調節することができる。
【０３４２】
本技術の組成物は、植物油、ホスファチド乳化剤、典型的には卵レシチンまたは大豆レシチン、ならびに、例えば、Liposyn(登録商標) IIおよびLiposyn(登録商標) III（Abbott Laboratories、North Chicago、Ill.）とIntralipid(登録商標)（Fresenius Kabi AB、Uppsala、Sweden）などの張性改変剤を含む薬学的に安全な油-水エマルジョンまたは同様の油-水エマルジョンと共に製剤化することができる。
【０３４３】
毒性および治療的有効性を、例えば、LD50（集団の50％に対して致死的な用量）およびED50（集団の50％において千代雨滴に有効な用量）を判定するための、細胞培養物または実験動物における標準の薬学的手順によって判定することができる。毒性および治療的効果の間の用量比が治療指数であり、これはLD50/ED50なる比として表すことができる。大きい治療指数を示す組成物が好ましい。マウスの遺伝学がDSB修復阻害物質の試験のためのいくつかのマウスモデルを作製した。そのようなモデルをDSB修復阻害物質のインビボ試験のために、ならびに治療的有効用量を決定するために用いることができる。適切なマウスモデルは、例えば、本明細書に記載のAICDA-/-マウスまたは患者由来の組織異種移植（PDX）を用いて作製したモデルである。DSB修復阻害物質の試験において有用であると考えられる本技術の特定の態様において、Nod-scid、NSG（NOD-scid Il2ry-ヌル；NOD.Cg-Prkdc-scid<Il2rg>/Wjl/SzJ）またはNRG（NOD-RagIl2ry-ヌル；NOD-Rag1<ヌル> IL2rg<ヌル>/Wjl/SzJ）などの免疫無防備状態のマウス系統に、白血病などの初代ヒト癌細胞を移植する。
【０３４４】
細胞培養アッセイ法および動物試験から得られたデータを、ヒトにおいて用いるための一連の用量を製剤化する際に用いることができる。そのような化合物の用量は好ましくは、ED50を含み、毒性がほとんど、または全くない、循環濃度の範囲内に入る。用量は、用いる剤形および用いる投与経路に依存して、この範囲内で変動し得る。
【０３４５】
治療的有効用量は、最初は細胞培養アッセイ法から推定することができる。用量は、動物モデルにおいて、細胞培養中で判定してのIC50（すなわち、症状の最大半減の阻害を達成する治療剤の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するよう製剤化することができる。血漿中の化合物のレベルを、例えば、高性能液体クロマトグラフィによって測定することができる。任意の特定の用量の効果を、適切な生物アッセイ法によってモニターすることができる。
【０３４６】
担体材料と組み合わせて単一の剤形を生成し得るDSB修復阻害物質の量は、一般には治療的効果を生じる化合物の量であると考えられる。一般に、100％のうち、この量は化合物の約0.1％〜99％、好ましくは約5％〜約70％、最も好ましくは10％〜約30％の範囲となる。
【０３４７】
用量は、医師が決定することができ、必要に応じて、処置の観察された効果に合わせるよう調節することができる。一般に、DSB修復阻害物質が1μg/kg〜150mg/kg、1μg/kg〜100mg/kg、1μg/kg〜50mg/kg、1μg/kg〜20mg/kg、1μg/kg〜10mg/kg、1μg/kg〜1mg/kg、100μg/kg〜100mg/kg、100μg/kg〜50mg/kg、100μg/kg〜20mg/kg、100μg/kg〜10mg/kg、100μg/kg〜1mg/kg、1mg/kg〜100mg/kg、1mg/kg〜50mg/kg、1mg/kg〜20mg/kg、1mg/kg〜10mg/kg、10mg/kg〜100mg/kg、10mg/kg〜50mg/kg、または10mg/kg〜20mg/kgの用量で投与されるように組成物を投与する。本明細書において示す範囲はすべての中間範囲を含み、例えば、1mg/kg〜10mg/kgの範囲は、1mg/kg〜2mg/kg、1mg/kg〜3mg/kg、1mg/kg〜4mg/kg、1mg/kg〜5mg/kg、1mg/kg〜6mg/kg、1mg/kg〜7mg/kg、1mg/kg〜8mg/kg、1mg/kg〜9mg/kg、2mg/kg〜10mg/kg、3mg/kg〜10mg/kg、4mg/kg〜10mg/kg、5mg/kg〜10mg/kg、6mg/kg〜10mg/kg、7mg/kg〜10mg/kg、8mg/kg〜10mg/kg、9mg/kg〜10mg/kgなどを含むことが理解されるべきである。前述の範囲の中間の範囲、例えば、1mg/kg〜10mg/kgの範囲において、2mg/kg〜8mg/kg、3mg/kg〜7mg/kg、4mg/kg〜6mg/kgなどの用量範囲も、本明細書に記載の技術の範囲内であることがさらに理解されるべきである。
【０３４８】
処置の期間および頻度に関して、熟練医師にとって、処置がいつ治療上の利益を提供しているかを判定し、用量を増やすかもしくは減らすか、投与頻度を上げるかもしくは下げるか、処置を中止するかどうか、処置を再開するかどうか、または処置レジメンに対して他の変更を行うかどうかを判定するために、対象をモニターすることは典型的である。投与スケジュールは、対象のDSB修復阻害物質に対する感受性などの、いくつかの臨床因子に応じて、1週間に1回から1日に1回まで変動し得る。所望の用量を1度に投与することもできるか、または部分用量、例えば、2〜4の部分用量に分割し、一定期間、例えば、1日を通じて適切な間隔または他の適切なスケジュールで投与することもできる。そのような部分用量は単位剤形で投与することもできる。いくつかの態様において、投与は、長期的、例えば、数週間または数ヶ月間にわたり1日に1回または複数回の投与である。投与スケジュールの例は、1週間、2週間、3週間、4週間、1ヶ月、2ヶ月、3ヶ月、4ヶ月、5ヶ月、もしくは6ヶ月、またはそれ以上にわたり1日1回、1日2回、1日3回、または1日4回もしくはそれ以上の投与である。所望の用量を、持続注入または制御放出製剤による送達を用いて投与することができる。その場合、各部分用量に含まれるDSB修復阻害物質は、1日の全用量を達成するために、それに対応して少量でなければならない。用量単位を、例えば、数日間にわたってDSB修復阻害物質の持続放出を提供する通常の持続放出製剤を用いた、数日間にわたる送達のために配合することもできる。持続放出製剤は、当技術分野において周知であり、かつ、本明細書に記載の技術の作用物質と共に用い得るような、特定の部位での作用物質の送達のために特に有用である。この態様において、用量単位は対応する複数の1日用量を含む。
【０３４９】
当業者であれば、疾患または障害の重症度、以前の処置、全身の健康および/または対象の年齢、ならびに存在する他の疾患を含むが、それらに限定されるわけではない、特定の因子が、対象を有効に処置するのに必要な用量およびタイミングに影響し得ることを理解すると考えられる。さらに、組成物の治療的有効量による対象の処置は、1回処置または一連の処置を含み得る。本明細書に記載するDSB修復阻害物質の有効用量およびインビボでの半減期の推定を、通常の方法を用いて、または本明細書の他所に記載する、適切な動物モデルを用いてのインビボ試験に基づいて行うことができる。
【０３５０】
いくつかの態様において、薬学的組成物は、（a）1つまたは複数のDSB修復阻害物質、および（b）本明細書に記載の1つまたは複数の薬学的に有効な化合物を含み得る。
【０３５１】
スクリーニングアッセイ法
いくつかの態様において、本明細書に記載の技術は、作用物質がDNA二本鎖切断修復の阻害物質であるかどうかを判定する方法、例えば、作用物質の1つまたは複数がDNA二本鎖切断修復の阻害物質であるかどうかを判定するためにそれらをスクリーニングすることに関する。
【０３５２】
いくつかの態様において、試験作用物質がDNA二本鎖切断修復の阻害物質であるかどうかを判定する方法は、（a）DNA編集酵素を発現する細胞を試験作用物質と接触させる段階；および（b）細胞生存度を決定する段階を含み；細胞生存度の減少により、試験作用物質がDNA二本鎖切断修復の阻害物質であることが示される。
【０３５３】
いくつかの態様において、試験作用物質がDNA二本鎖切断修復の阻害物質であるかどうかを判定する方法は、（a）DNA編集酵素を発現する細胞を試験作用物質と接触させる段階；および（b）段階（a）の細胞の細胞生存度を決定する段階；（c）DNA編集酵素を発現しない細胞を試験作用物質と接触させる段階；（d）段階（c）の細胞の細胞生存度を決定する段階；および（e）段階cの生存細胞の比率を段階（d）の生存細胞の比率で割ることにより比を求める段階を含み；0.8未満の比により、試験作用物質がDNA二本鎖切断修復の阻害物質であることが示される。
【０３５４】
本明細書に記載のスクリーニング方法の文脈において、「DNA編集酵素を発現する細胞」は、DNA編集酵素を対照参照細胞におけるレベルよりも高いレベルで発現する細胞である。いくつかの態様において、対照参照細胞は非活性化、非形質転換、健常B細胞であり得る。いくつかの態様において、「DNA編集酵素を発現する細胞」は、非活性化、非形質転換、健常ヒトB細胞において観察される全突然変異率よりも高い全突然変異率を有する細胞であり得る。いくつかの態様において、DNA編集酵素を発現する細胞は増大したレベルのAIDを発現する細胞である。
【０３５５】
いくつかの態様において、試験作用物質と接触させるDNA編集酵素を発現する細胞は、細胞1個あたりDNA編集酵素mRNAの少なくとも1つのコピー、例えば、細胞1個あたり1個またはそれ以上のコピー、細胞1個あたり10個またはそれ以上のコピー、または細胞1個あたり100個またはそれ以上のコピーを発現する細胞であり得る。いくつかの態様において、試験作用物質と接触させるDNA編集酵素を発現する細胞は、細胞1個あたりDNA編集酵素の少なくとも5個のコピーを発現する細胞であり得る。いくつかの態様において、試験作用物質と接触させるDNA編集酵素を発現する細胞は、細胞1個あたりDNA編集酵素の少なくとも10個のコピーを発現する細胞であり得る。いくつかの態様において、試験作用物質と接触させるDNA編集酵素を発現する細胞は、細胞1個あたりDNA編集酵素の少なくとも100個のコピーを発現する細胞であり得る。
【０３５６】
いくつかの態様において、試験作用物質と接触させるDNA編集酵素を発現する細胞は、細胞1個あたりDNA編集酵素ポリペプチドの少なくとも100個のコピー、例えば、細胞1個あたり100個またはそれ以上のコピー、細胞1個あたり200個またはそれ以上のコピー、細胞1個あたり300個またはそれ以上のコピー、細胞1個あたり400個またはそれ以上のコピー、細胞1個あたり500個またはそれ以上のコピー、細胞1個あたり600個またはそれ以上のコピー、細胞1個あたり1000個またはそれ以上のコピー、細胞1個あたり5000個またはそれ以上のコピー、または細胞1個あたり10,000個またはそれ以上のコピーを発現する細胞であり得る。いくつかの態様において、試験作用物質と接触させるDNA編集酵素を発現する細胞は、細胞1個あたりDNA編集酵素ポリペプチドの少なくとも200個のコピーを発現する細胞であり得る。いくつかの態様において、試験作用物質と接触させるDNA編集酵素を発現する細胞は、細胞1個あたりDNA編集酵素ポリペプチドの少なくとも300個のコピーを発現する細胞であり得る。いくつかの態様において、試験作用物質と接触させるDNA編集酵素を発現する細胞は、細胞1個あたりDNA編集酵素ポリペプチドの少なくとも400個のコピーを発現する細胞であり得る。いくつかの態様において、試験作用物質と接触させるDNA編集酵素を発現する細胞は、細胞1個あたりDNA編集酵素ポリペプチドの少なくとも500個のコピーを発現する細胞であり得る。いくつかの態様において、試験作用物質と接触させるDNA編集酵素を発現する細胞は、細胞1個あたりDNA編集酵素ポリペプチドの少なくとも600個のコピーを発現する細胞であり得る。いくつかの態様において、試験作用物質と接触させるDNA編集酵素を発現する細胞は、細胞1個あたりDNA編集酵素ポリペプチドの少なくとも1,000個のコピーを発現する細胞であり得る。いくつかの態様において、試験作用物質と接触させるDNA編集酵素を発現する細胞は、細胞1個あたりDNA編集酵素ポリペプチドの少なくとも5,000個のコピーを発現する細胞であり得る。いくつかの態様において、試験作用物質と接触させるDNA編集酵素を発現する細胞は、細胞1個あたりDNA編集酵素ポリペプチドの少なくとも10,000個のコピーを発現する細胞であり得る。
【０３５７】
いくつかの態様において、試験作用物質と接触させる細胞は、刺激B細胞、脾B細胞、癌細胞、または自己免疫細胞からなる群より選択される細胞であり得る。いくつかの態様において、癌細胞は、リンパ腫；白血病；バーキットリンパ腫；濾胞性リンパ腫；びまん性大細胞型B細胞リンパ腫；B細胞白血病；B細胞急性リンパ芽球性白血病；慢性リンパ性白血病（CLL）；急性骨髄性白血病（AML）；慢性骨髄性白血病（CML）；ならびにエプスタイン-バーウイルスにより形質転換した末梢ヒトBリンパ球由来細胞株GM05881、GM07323、およびGM13689からなる群より選択される疾患を有している対象からのB細胞であり得る。
【０３５８】
いくつかの態様において、試験作用物質と接触させる細胞は安定にトランスフェクトされた細胞株であり得、細胞株はDNA編集酵素をコードするベクターでトランスフェクトされている。トランスフェクションに適した細胞株には、3T3、CH12F3、Caco-2、CCRF-CEM、CHO、CH12-F3、COS-7、HCT 116、HEK 293、HL-60、HepG2、Jurkat、KG-1、K-562、MCF-7、MDCK、MG-63、Mo-B、MOLT-4、Ramos（RA 1）およびU2-OSが含まれるが、それらに限定されるわけではない。初代細胞、胚幹細胞および人工多能性細胞(iPS）から樹立されたさらなる細胞株はスクリーニングのために有用であり得る。
【０３５９】
いくつかの態様において、細胞は、より高いレベルのDNA編集酵素を発現させるよう操作された細胞、例えば、刺激されたB細胞またはDNA編集酵素を含む外因性ポリペプチドおよび/もしくはDNA編集酵素をコードする外因性核酸を含む細胞であり得る。
【０３６０】
本明細書に記載のスクリーニング方法の文脈において、「試験作用物質」または「試験化合物」は、核酸（DNAまたはRNA）、小分子、アプタマー、タンパク質、ペプチド、抗体、抗体のエピトープ結合断片を含むポリペプチド、抗体断片、ペプチド-核酸（PNA）、ロックド核酸（LNA）、小有機または無機分子；糖類；オリゴ糖；多糖；生物学的高分子、例えば、ペプチド、タンパク質、ならびにペプチド類似体および誘導体；ペプチド様物質；核酸；核酸類似体および誘導体；細菌、植物、真菌、または哺乳動物細胞もしくは組織などの生物学的材料から得られた抽出物；天然または合成組成物；ペプチド；アプタマー；および抗体、またはその断片であり得る。いくつかの態様において、試験作用物質は本明細書において前述したスチルベン、スチルベン誘導体、またはスチルベノイドであり得る。スチルベン、スチルベン誘導体、スチルベノイド、および他のDNA二本鎖切断修復の阻害物質の例は、本明細書において前述している。試験作用物質および化合物も本明細書において前述している。
【０３６１】
本明細書に記載のスクリーニング方法の文脈において、「細胞生存度を決定すること」とは、健常な生細胞または死および/もしくは非生細胞のいずれかを示す、細胞代謝、成長、構造、および/または増殖の任意の局面を測定または検出することを意味する。当技術分野において公知の比色、発光、放射分析、および/または蛍光アッセイ法を用いることができる。いくつかの態様において、細胞生存度を決定することは、血球計数器を用いての細胞の手動計数を含み得る。いくつかの態様において、細胞生存度を決定することは、生死細胞染色、例えば、生細胞または死細胞のいずれかを染色する染色法の使用を含み得る。
【０３６２】
細胞生存度を決定するための比色技術には、非限定例として、トリパンブルー排除が含まれる。簡単に言うと、細胞をトリパンブルーで染色し、血球計数器を用いて計数する。生細胞は色素を排除するが、死細胞および瀕死の細胞は青色色素を取り込み、光学顕微鏡下で容易に識別される。ニュートラルレッドは生細胞によって吸収され、細胞リソソーム中で濃縮し；生細胞はニュートラルレッドで染色された細胞の数を定量することにより、光学顕微鏡で判定することができる。
【０３６３】
細胞生存度を決定するための蛍光技術には、非限定例として、蛍光DNA挿入剤であるヨウ化プロピジウムが含まれる。ヨウ化プロピジウムは、生細胞からは排除されるが、死細胞の核を染色する。次いで、ヨウ化プロピジウム標識した細胞のフローサイトメトリーを用いて生および死細胞を定量することができる。乳酸脱水素酵素（LDH）の放出は構造損傷および細胞の死を示し、分光光度的酵素アッセイ法によって測定することができる。ブロモデオキシウリジン（BrdU）は新しく合成されたDNA中に組み込まれ、蛍光色素標識した抗体で検出することができる。蛍光色素Hoechst 33258はDNAを標識し、細胞の増殖を定量するために用いることができる（例えば、フローサイトメトリー）。蛍光色素カルボキシフルオレセイン二酢酸スクシンイミジルエステル（CFSEまたはCFDA-SE）は、細胞分裂分析（例えば、フローサイトメトリー）を提供し得る。この技術はインビトロまたはインビボで用いることができる。7-アミノアクチノマイシンD（7-AAD）は、DNAとの結合後にスペクトルのシフトを起こす蛍光インターカレーターであり、細胞分裂分析（例えば、フローサイトメトリー）を提供し得る。
【０３６４】
細胞増殖を判定するための放射分析技術には、非限定例として、[3H]-チミジンが含まれ、これは生存細胞の新しく合成されたDNA中に組み込まれ、細胞の増殖を判定するためにしばしば用いられる。死細胞からのクロム（51Cr）放出を、細胞生存度を定量するために、シンチレーション計数によって定量することができる。
【０３６５】
細胞生存度を決定するための蛍光定量的技術には、非限定例として、CellTiter-Glo発光細胞生存度アッセイ法（Promega Madison Wis.）が含まれる。この技術は存在するATPの量を定量して、生細胞の数を判定する。
【０３６６】
細胞生存度を決定するためのキットは市販されており、例えば、MUTLITOX-FLOUR(商標) Multiplex Cytotoxicity Assay（カタログNo. G9200；Promega、Inc.；Madison、WI）がある。
【０３６７】
いくつかの態様において、細胞生存度を決定する手段は、ハイスループット法、例えば、蛍光可能マルチプレート読み取り器を用いて生死細胞染色を検出することができる。いくつかの態様において、画像分析を自動画像収集および分析により実施することができる。
【０３６８】
本明細書に記載の技術のいつかの態様は、番号を付した以下の項目のいずれかとして定義される。
1.  （d）対象由来の生体試料を得る段階；
（e）DNA編集酵素のレベルを測定する段階；および
（f）DNA二本鎖切断修復の阻害物質の治療的有効量を、検出可能なレベルのDNA編集酵素を有している対象に投与する段階
を含む、処置の方法。
2.  DNA二本鎖切断修復の阻害物質の治療的有効量を、検出可能なレベルのDNA編集酵素を有していると判定された対象に投与する段階
を含む、処置の方法。
3.  （c）増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞を有している対象を選択する段階；および
（d）DNA二本鎖切断修復の阻害物質の治療的有効量を該対象に投与する段階
を含む、処置の方法であって、該DNA編集酵素の増大したレベルが、健常個体由来の同じ型の細胞におけるDNA編集酵素のレベルよりも高いDNA編集酵素のレベルである、方法。
4.  前記生体試料が血液細胞を含む、項目1記載の方法。
5.  前記生体試料がB細胞を含む、項目1記載の方法。
6.  検出可能なレベルまたは増大したレベルのDNA編集酵素を発現する前記細胞におけるDNA編集酵素のレベルが、健常対象由来の正常細胞におけるよりも統計学的に有意に高い、項目1〜5のいずれか記載の方法。
7.  前記DNA編集酵素が、
組換え活性化遺伝子1（RAG1）、組換え活性化遺伝子2（RAG2）、胞子形成特異的タンパク質11（SPO11）、アポリポタンパク質B mRNA編集酵素触媒ポリペプチド様（APOBEC）ファミリーメンバー、および活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）
からなる群より選択される、項目1〜6のいずれか記載の方法。
8.  前記DNA編集酵素が活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）である、項目7記載の方法。
9.  増大したレベルのAIDを発現するB細胞における活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）のレベルが、健常対象由来の非活性化B細胞において発現されるAIDのレベルよりも有意に高い、項目8記載の方法。
10.  前記対象がヒト対象である、項目1〜9のいずれか記載の方法。
11.  前記生体試料または前記検出可能なレベルのDNA編集酵素を発現する細胞もしくは前記増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞が癌細胞である、項目1〜10のいずれか記載の方法。
12.  前記対象が癌を有している、項目1〜11のいずれか記載の方法。
13.  前記生体試料または前記検出可能なレベルのDNA編集酵素を発現する細胞もしくは前記増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞が自己免疫細胞である、項目1〜11のいずれか記載の方法。
14.  前記対象が、
リンパ腫、白血病、および形質細胞腫瘍
からなる群より選択される状態を有している、項目1〜13のいずれか記載の方法。
15.  前記リンパ腫が、
非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、MALTリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、およびT細胞リンパ腫
からなる群より選択される、項目14記載の方法。
16.  前記白血病が、
急性リンパ芽球性白血病（ALL）、バーキット白血病、B細胞白血病、B細胞急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病（CLL）、急性骨髄性白血病（AML）、慢性骨髄性白血病（CML）、およびT細胞急性リンパ芽球性白血病（T-ALL）
からなる群より選択される、項目14記載の方法。
17.  前記形質細胞腫瘍が、
多発性骨髄腫、形質細胞性骨髄腫、形質細胞白血病、および形質細胞腫
からなる群より選択される、項目14記載の方法。
18.  前記対象が、
上皮細胞癌、結腸癌、肝癌、胃癌、腸癌、食道癌、乳癌、肺癌、および甲状腺癌
からなる群より選択される癌を有している、項目12記載の方法。
19.  前記対象が自己免疫疾患を有している、項目1〜10および13のいずれか記載の方法。
20.  前記自己免疫疾患が、
紅斑性狼蒼、ウィスコット-アルドリッチ症候群、自己免疫性リンパ球増殖症候群、重症筋無力症、関節リウマチ（RA）、紅斑性狼蒼性腎炎、多発性硬化症、全身性紅斑性狼蒼、円板状狼蒼、亜急性皮膚紅斑性狼蒼、凍傷状紅斑性狼蒼を含む皮膚紅斑性狼蒼、慢性関節炎、シェーグレン症候群、炎症性慢性鼻副鼻腔炎、大腸炎、セリアック病、炎症性腸疾患、バレット食道、炎症性胃炎自己免疫性腎炎、自己免疫性血管炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性心炎、自己免疫性脳炎、および自己免疫媒介性血液疾患
からなる群より選択される、項目19記載の方法。
21.  前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
Rad51、Rad51AP1、Rad51B、Rad51C、Rad51D、XRCC2、XRCC3、RAD54、RAD52、BRCA1、BRCA2、ATM、ATR、MRE11、RAD50、NBS1、WRN、BLM、RECQ4、LIG4、XRCC4、PRKDC、DCLRE1C、XRCC6、XRCC5、およびXLF
からなる群より選択される1つまたは複数の遺伝子の発現または活性を減少させる、項目1〜20のいずれか記載の方法。
22.  前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
小分子、タンパク質、ペプチド、抗体、抗体断片、タンパク質結合タンパク質、リボ核酸、デオキシリボ核酸、アプタマー、ペプチド核酸（PNA）、およびロックド核酸（LNA）
からなる群より選択される、項目1〜21のいずれか記載の方法。
23.  前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、スチルベン、スチルベノイド、またはその誘導体である、項目1〜20のいずれか記載の方法。
24.  前記スチルベンまたは前記スチルベン誘導体が、式Vの化合物、またはその立体異性体、鏡像異性体、プロドラッグ、もしくは薬学的に許容される塩である、項目23記載の方法：
2014527036.tif 000028
式中、R1は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R2は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R3は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R4は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R5は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R6は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R7は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R8は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R9は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R10は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
Xは、C(R21)2、-C(O)N(R22)-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-SO2- -CH(R11)CH(R12)-、-C(R11)=C(R12)-、および
2014527036.tif 000029
からなる群より選択され得；
R11は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2NC(O)R21、NC(O)OR21、NC(S)R21、NC(S)N(R22)2、NSO2R21、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R12は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2NC(O)R21、NC(O)OR21、NC(S)R21、NC(S)N(R22)2、NSO2R21、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
各R21は、水素、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群より独立して選択され得；
各R22は、水素、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群より独立して選択され得る。
25.  前記スチルベン誘導体が4,4'ジイソチオシアノスチルベン-2,2'-ジスルホン酸（DIDS）である、項目21記載の方法。
26.  前記スチルベンまたは前記スチルベン誘導体が、
(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ジアセトアミド；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(2-メチルプロパンアミド)；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(2-メトキシアセトアミド)；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ジメタンスルホンアミド；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ジシクロプロパンスルホンアミド；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(プロパン-2-スルホンアミド)；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(プロパン-2-スルホンアミド)；(E)-N-(4-(4-アミノスチリル)フェニル)プロパン-2-スルホンアミド；(E)-1,1'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(3-メチルチオ尿素)；(E)-1,1'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(3-イソプロピルチオ尿素)；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)アセトアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)イソブチルアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-2-メトキシアセトアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)メタンスルホンアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)シクロプロパンスルホンアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)プロパン-2-スルホンアミド；N'-(4-{(E)-2-[4-(ジメチルアミノ)フェニル]-1-エテニル}フェニル)-N,N-ジメチルスルファミド；(E)-1-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-3-メチルチオ尿素；(E)-1-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-3-イソプロピルチオ尿素；(E)-1-シクロプロピル-3-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)チオ尿素；(E)-1-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-3-メチル尿素；(E)-1-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-3-イソプロピル尿素；(E)-1-シクロプロピル-3-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)尿素；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-アセトアミドベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-イソブチルアミドベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(2-メトキシアセトアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(シクロプロパンスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(1-メチルエチルスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-アセトアミドベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-イソブチルアミドベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(2-メトキシアセトアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(メチルスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(シクロプロパンスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(1-メチルエチルスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-シクロプロピルチオウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-エチルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)��ス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-イソブチルアミド-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-イソブチルアミド-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-イソブチルアミド-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(2-メトキシアセトアミド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(2-メトキシアセトアミド)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナ���スチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(メチルスルホンアミド)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-エチルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-イソブチルアミド-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルウレイド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-エチルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(2-メトキシアセトアミド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-メチルチオウレイド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルウレイド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-メチルチオウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルチオウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-エチルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-4,4'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(N-メチルベンズアミド)；(E)-4,4'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(N-イソプロピルベンズアミド)；(E)-4,4'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(N,N-ジメチルベンズアミド)；(E)-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(モルホリノメタノン)；(E)-5-(4-ヒドロキシスチリル)ベンゼン-1,3-ジオール(3,5,4'-トリヒドロキシ-トランス-スチルベン)；およびレスベラトロール
からなる群より選択される、項目21記載の方法。
27.  前記スチルベンまたは前記スチルベン誘導体が、
(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(プロパン-2-スルホンアミド)；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)シクロプロパンスルホンアミド；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(ジメチルアミノ-スルホンアミド)；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)プロパン-2-スルホンアミド；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-4,4'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(N-メチルベンズアミド)；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホネート)；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；および(E)-5-アセトアミド-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート
からなる群より選択される、項目21記載の方法。
28.  前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
4-メチルキナゾリン-2-カルボキサミド；ベンズ[h]イソキノリン-6-アミン；5,6-ジメチル-2-メルカプトメチルベンズイミダゾール；(E)-1-(2-ヒドロキシフェニル)-3-(ピリジン-3-イル)プロパ-2-エン-1-オン；N4-ブチル-6-クロロピリミジン-2,4-ジアミン；1-テルモプシン；6-アミノ-5-ニトロソ-2-フェニルピリミジン-4(1H)-オン；および4-(2-アミノ-4-ニトロフェニルアミノ)フェニル
からなる群より選択される、項目20記載の方法。
29.  前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
7-アザインドール-3-カルボキシアルデヒド；2-アミノ-4-フェニルフェノール；3-(1-メチル-3-ピロリジニル)インドール；1-メチル-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]キノロン；2-アミノ-5-ニトロ-1H-ベンズイミダゾール；2-(5-ニトロ-2-フルフリリデン)アミノエタノール-N-オキシド；ニフラトロン；α-メルカプト-N,2-ナフチルアセトアミド；1-テルモプシン；N4-ブチル-6-クロロ-2,4-ピリミジンジアミン；2-(2-ヒドロキシ-6-プロパン-2-イルオキシ-シクロヘキシル)酢酸；6-アミノ-5-ニトロソ-2-フェニル-1H-ピリミジン-4-オン；4-アミノ-2-ヒドロキシフェニル)アルソン酸；スピロ[1,2-ジヒドロインデン-3,5'-イミダゾリジン]-2',4'-ジオン；N〜4〜-(4-メトキシフェニル)-6-メチルピリミジン-2,4-ジアミン；2-アミノ-9-ペンチル-3H-プリン-6-チオン；2-(4-メトキシフェニル)-3-(ピリジン-3-イル)プロパ-2-エンニトリル；2-クロロピリミジン-4,6-ジカルボキサミド；2-アミノ-3H-フェノキサジン-3-オン；2-メチル-N-ベンジル-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-アミン；4-(ベンジルアミノ)-2-メチル-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン；2-アミノ-1-ナフタレンスルホン酸；N-sec-ブチル-3-メチルベンズアミド；ベンズ[h]イソキノリン-6-アミン；および2-(2-メチルシクロヘキシリデン)ヒドラジンカルボキサミド
からなる群より選択される、項目20記載の方法。
30.  前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が抗体またはポリペプチドであり、該抗体または該ポリペプチドが、抗体の抗原結合断片またはタンパク質結合タンパク質を含む、項目1〜20のいずれか記載の方法。
31.  前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
miRNA、shRNA、siRNA、amiRNA、dsRNA、アンチセンスRNA、またはリボザイム
からなる群より選択されるRNAi物質である、項目1〜20のいずれか記載の方法。
32.  前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、薬学的に許容される担体をさらに含む、項目1〜31のいずれか記載の方法。
33.  治療的物質を投与することをさらに含む、項目1〜32のいずれか記載の方法。
34.  検出可能なレベルまたは増大したレベルを有していることが疑われる前記対象から得られた生体試料中のDNA編集酵素ポリペプチド、mRNA、または活性のレベルを測定することにより、検出可能なレベルまたは増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞を有している該対象を特定する、項目1〜33のいずれか記載の方法。
35.  増大したレベルを有していることが疑われる前記対象から得られた生体試料中のDNA編集酵素ポリペプチド、mRNA、または活性のレベルを測定すること、および、そのレベルを、健常対象から得られた生体試料中で見られるDNA編集酵素ポリペプチド、mRNA、または活性のレベルと比べることにより、検出可能なレベルまたは増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞を有している該対象を特定し、試験試料中のDNA編集酵素ポリペプチド、mRNA、または活性の量の増加により、DNA二本鎖切断修復の阻害物質での処置を必要とする対象が示される、項目1〜34のいずれか記載の方法。
36.  前記DNA編集酵素ポリペプチドのレベルを測定することが、
ウェスタンブロット、免疫沈降、酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）、放射性免疫測定法（RIA）、サンドイッチアッセイ法、タンパク質インサイチューアレイ、免疫組織学的染色、ラジオイムノメトリックアッセイ法、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ法、インサイチュー免疫測定法、沈降反応、免疫蛍光測定法、定量的インサイチュータンパク質分析（AQUA）、質量分析、および免疫電気泳動アッセイ法
からなる群より選択される1つまたは複数のアッセイ法を用いることを含む、項目34または35記載の方法。
37.  前記DNA編集酵素ポリペプチドのレベルを測定することがアッセイ法を用いることを含み、該アッセイ法が、抗体、抗体断片、タンパク質結合タンパク質、または、該DNA編集酵素ポリペプチドに結合するペプチドを用いる、項目34〜36のいずれか記載の方法。
38.  前記抗体または前記抗体断片がモノクローナル抗体である、項目34〜37のいずれか記載の方法。
39.  前記抗体、前記抗体断片、前記タンパク質結合タンパク質、または、前記DNA編集酵素ポリペプチドに結合するペプチドを、検出可能な標識で標識する、項目34〜38のいずれか記載の方法。
40.  前記DNA編集酵素mRNAのレベルを測定することが、
RT-PCR、定量的RT-PCR、ハイブリダイゼーションアッセイ法、ノーザンブロット、マイクロアレイに基づく発現解析、転写増幅、自家持続配列複製、ハイスループット配列決定法、およびRNA-Seq
からなる群より選択される1つまたは複数のアッセイ法を用いることを含む、項目34または35記載の方法。
41.  前記DNA編集酵素活性の活性を測定することが、
ハイブリダイゼーション、ハイスループット配列決定法、エクソーム配列決定法、蛍光インサイチューハイブリダイゼーション（FISH）、PCR、およびゲノム配列決定法
からなる群より選択される1つまたは複数のアッセイ法を用いて、ゲノムまたはその一部の全突然変異状態を判定することを含み、正常な突然変異状態よりも2％またはそれ以上大きい突然変異状態がDNA編集酵素の活性を示す、項目1〜40のいずれか記載の方法。
42.  前記活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）の活性を測定することが、
ハイブリダイゼーション、ハイスループット配列決定法、エクソーム配列決定法、蛍光インサイチューハイブリダイゼーション（FISH）、PCR、およびゲノム配列決定法
からなる群より選択される1つまたは複数のアッセイ法を用いて、標的遺伝子であるIGH、BCL6、MYC、BCL11A、CD93、PIM1、および/またはPAX5における高頻度突然変異の状態を判定することを含む、項目35、36、または41のいずれか記載の方法。
43.  前記活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）の活性を測定することが、ホスホ-H2AXアッセイ法、53BP1アッセイ法、またはRAD51アッセイ法を用いることを含む、項目35または36記載の方法。
44.  細胞死を引き起こす方法であって、
（e）細胞にDNA編集酵素の有効量を投与する段階；および
（f）その後、段階（a）の細胞をDNA二本鎖切断修復の阻害物質と接触させる段階
を含み、それにより細胞死を引き起こす、方法。
45.  細胞を細胞死に対して感受性にさせる方法であって、
（g）DNA二本鎖切断修復の阻害物質を用いて細胞を細胞死に対して感受性にさせるために、対象にDNA編集酵素の治療的有効量を投与する段階；および
（h）その後、該対象にDNA二本鎖切断修復の阻害物質を投与する段階
を含む、方法。
46.  ポリペプチド、DNA編集酵素をコードする核酸、および、DNA編集酵素をコードする核酸を含むベクター
からなる群より選択される形態で前記DNA編集酵素を投与する、項目44記載の方法。
47.  前記DNA編集酵素が、
組換え活性化遺伝子1（RAG1）、組換え活性化遺伝子1（RAG2）、胞子形成特異的タンパク質11（SPO11）、アポリポタンパク質B mRNA編集酵素触媒ポリペプチド様（APOBEC）ファミリーメンバー、および活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）
からなる群より選択される、項目44〜46のいずれか記載の方法。
48.  前記DNA編集酵素が活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）である、項目44〜47のいずれか記載の方法。
49.  試験作用物質がDNA二本鎖切断修復の阻害物質であるかどうかを判定する方法であって、
（a）DNA編集酵素を発現する細胞を試験作用物質と接触させる段階；および
（b）段階（a）の細胞の細胞生存度を決定する段階
を含み、細胞生存度の減少により、該試験作用物質がDNA二本鎖切断修復の阻害物質であることが示される、方法。
50.  （c）DNA編集酵素を発現しない細胞を前記試験作用物質と接触させる段階；
（d）段階（c）の細胞の細胞生存度を決定する段階；および
（e）段階（b）の生存細胞の比率を段階（d）の生存細胞の比率で割ることにより比を求める段階
をさらに含み、
0.8未満の比により、該試験作用物質がDNA二本鎖切断修復の阻害物質であることが示される、項目49記載の方法。
51.  前記DNA編集酵素を発現する細胞が、AIDを発現する細胞である、項目49または50記載の方法。
52.  前記AIDを発現する細胞が、刺激されたB細胞である、項目51記載の方法。
53.  前記細胞が癌細胞である、項目49〜52のいずれか記載の方法。
54.  前記細胞が、DNA編集酵素をコードする核酸ベクターでトランスフェクトされている、項目49〜53のいずれか記載の方法。
55.  前記細胞が、CH12-F3、3T3、CH12F3、Caco-2、CCRF-CEM、CHO、CH12-F3、COS-7、HCT 116、HEK 293、HL-60、HepG2、Jurkat、KG-1、K-562、MCF-7、MDCK、MG-63、Mo-B、MOLT-4、Ramos（RA 1）、およびU2-OSからなる群より選択される細胞株である、項目49〜54のいずれか記載の方法。
56.  前記細胞が自己免疫細胞である、項目49〜55のいずれか記載の方法。
57.  Xがナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛である、式XXIVの化合物、その立体異性体またはプロドラッグ：
2014527036.tif 000030
。
58.  Xがナトリウムである、項目57記載の化合物。
59.  式VIIIの化合物、その立体異性体、プロドラッグ、または薬学的に許容される塩：
2014527036.tif 000031
。
60.  式Xの化合物、その立体異性体、プロドラッグ、または薬学的に許容される塩：
2014527036.tif 000032
。
61.  Xがナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛である、式XXVの化合物、その立体異性体、またはプロドラッグ：
2014527036.tif 000033
。
62.  Xがナトリウムである、項目61記載の化合物。
63.  Xがナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛である、式XXXIの化合物、その立体異性体、またはプロドラッグ：
2014527036.tif 000034
。
64.  Xがナトリウムである、項目63記載の化合物。
65.  Xがナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛である、式XXXIIの化合物、その立体異性体、またはプロドラッグ：
2014527036.tif 000035
。
66.  Xがナトリウムである、項目65記載の化合物。
67.  Xがナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛である、式XXXIIIの化合物、その立体異性体、またはプロドラッグ：
2014527036.tif 000036
。
68.  Xがナトリウムである、項目67記載の化合物。
69.  Xがナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛である、式XXXIVの化合物、その立体異性体、またはプロドラッグ：
2014527036.tif 000037
。
70.  Xがナトリウムである、項目69記載の化合物。
71.  Xがナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛である、式XXXVの化合物、その立体異性体、またはプロドラッグ：
2014527036.tif 000038
。
72.  Xがナトリウムである、項目71記載の化合物。
73.  検出可能なレベルのDNA編集酵素を有していると判定された対象を処置するための、DNA二本鎖切断修復の阻害物質の使用。
74.  前記対象が、
（c）対象由来の生体試料を得ること；および
（d）DNA編集酵素のレベルを測定すること
によって、検出可能なレベルのDNA編集酵素を有していると判定される、項目73記載の使用。
75.  対象を処置するための、DNA二本鎖切断修復の阻害物質の使用であって、
方法が、
（c）増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞を有している対象を選択する段階；および
（d）DNA二本鎖切断修復の阻害物質の治療的有効量を該対象に投与する段階
を含み、該DNA編集酵素の増大したレベルが、健常個体由来の同じ型の細胞におけるDNA編集酵素のレベルよりも高いDNA編集酵素のレベルである、使用。
76.  前記生体試料が血液細胞を含む、項目73記載の使用。
77.  前記生体試料がB細胞を含む、項目73記載の使用。
78.  検出可能なレベルまたは増大したレベルのDNA編集酵素を発現する前記細胞におけるDNA編集酵素のレベルが、健常対象由来の正常細胞におけるよりも統計学的に有意に高い、項目73〜77のいずれか記載の使用。
79.  前記DNA編集酵素が、
組換え活性化遺伝子1（RAG1）、組換え活性化遺伝子2（RAG2）、胞子形成特異的タンパク質11（SPO11）、アポリポタンパク質B mRNA編集酵素触媒ポリペプチド様（APOBEC）ファミリーメンバー、および活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）
からなる群より選択される、項目73〜78のいずれか記載の使用。
80.  前記DNA編集酵素が活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）である、項目79記載の使用。
81.  増大したレベルの活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）を発現するB細胞におけるAIDのレベルが、健常対象健常対象由来の非活性化B細胞において発現されるAIDのレベルよりも有意に高い、項目80記載の使用。
82.  前記対象がヒト対象である、項目73〜81のいずれか記載の使用。
83.  前記生体試料または前記検出可能なレベルのDNA編集酵素を発現する細胞もしくは前記増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞が癌細胞である、項目73〜82のいずれか記載の使用。
84.  前記対象が癌を有している、項目73〜83のいずれか記載の使用。
85.  前記生体試料または前記検出可能なレベルのDNA編集酵素を発現する細胞もしくは前記増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞が自己免疫細胞である、項目73〜84のいずれか記載の使用。
86.  前記対象が、
リンパ腫、白血病、および形質細胞腫瘍
からなる群より選択される状態を有している、項目73〜85のいずれか記載の使用。
87.  前記リンパ腫が、
非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、MALTリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、およびT細胞リンパ腫
からなる群より選択される、項目86記載の使用。
88.  前記白血病が、
急性リンパ芽球性白血病（ALL）、バーキット白血病、B細胞白血病、B細胞急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病（CLL）、急性骨髄性白血病（AML）、慢性骨髄性白血病（CML）、およびT細胞急性リンパ芽球性白血病（T-ALL）
からなる群より選択される、項目86記載の使用。
89.  前記形質細胞腫瘍が、
多発性骨髄腫、形質細胞性骨髄腫、形質細胞白血病、および形質細胞腫
からなる群より選択される、項目86記載の使用。
90.  前記対象が、
上皮細胞癌、結腸癌、肝癌、胃癌、腸癌、食道癌、乳癌、肺癌、および甲状腺癌
からなる群より選択される癌を有している、項目86記載の使用。
91.  前記対象が自己免疫疾患を有している、項目73〜82および85のいずれか記載の使用。
92.  前記自己免疫疾患が、
紅斑性狼蒼、ウィスコット-アルドリッチ症候群、自己免疫性リンパ球増殖症候群、重症筋無力症、関節リウマチ（RA）、紅斑性狼蒼性腎炎、多発性硬化症、全身性紅斑性狼蒼、円板状狼蒼、亜急性皮膚紅斑性狼蒼、凍傷状紅斑性狼蒼を含む皮膚紅斑性狼蒼、慢性関節炎、シェーグレン症候群、炎症性慢性鼻副鼻腔炎、大腸炎、セリアック病、炎症性腸疾患、バレット食道、炎症性胃炎自己免疫性腎炎、自己免疫性血管炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性心炎、自己免疫性脳炎、および自己免疫媒介性血液疾患
からなる群より選択される、項目91記載の使用。
93.  前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
Rad51、Rad51AP1、Rad51B、Rad51C、Rad51D、XRCC2、XRCC3、RAD54、RAD52、BRCA1、BRCA2、ATM、ATR、MRE11、RAD50、NBS1、WRN、BLM、RECQ4、LIG4、XRCC4、PRKDC、DCLRE1C、XRCC6、XRCC5、およびXLF
からなる群より選択される1つまたは複数の遺伝子の発現または活性を減少させる、項目73〜92のいずれか記載の使用。
94.  前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
小分子、タンパク質、ペプチド、抗体、抗体断片、タンパク質結合タンパク質、リボ核酸、デオキシリボ核酸、アプタマー、ペプチド核酸（PNA）、およびロックド核酸（LNA）
からなる群より選択される、項目73〜93のいずれか記載の使用。
95.  前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、スチルベン、スチルベノイド、またはその誘導体である、項目73〜93のいずれか記載の使用。
96.  前記スチルベンまたは前記スチルベン誘導体が、式Vの化合物、またはその立体異性体、鏡像異性体、プロドラッグ、もしくは薬学的に許容される塩である、項目95記載の使用：
2014527036.tif 000039
式中、R1は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R2は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R3は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R4は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R5は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R6は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R7は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R8は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R9は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R10は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
Xは、C(R21)2、-C(O)N(R22)-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-SO2- -CH(R11)CH(R12)-、-C(R11)=C(R12)-、および
2014527036.tif 000040
からなる群より選択され得；
R11は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2NC(O)R21、NC(O)OR21、NC(S)R21、NC(S)N(R22)2、NSO2R21、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R12は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2NC(O)R21、NC(O)OR21、NC(S)R21、NC(S)N(R22)2、NSO2R21、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
各R21は、水素、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群より独立して選択され得；
各R22は、水素、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群より独立して選択され得る。
97.  前記スチルベン誘導体が4,4'ジイソチオシアノスチルベン-2,2'-ジスルホン酸（DIDS）である、項目95記載の使用。
98.  前記スチルベンまたは前記スチルベン誘導体が、
(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ジアセトアミド；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(2-メチルプロパンアミド)；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(2-メトキシアセトアミド)；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ジメタンスルホンアミド；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ジシクロプロパンスルホンアミド；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(プロパン-2-スルホンアミド)；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(プロパン-2-スルホンアミド)；(E)-N-(4-(4-アミノスチリル)フェニル)プロパン-2-スルホンアミド；(E)-1,1'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(3-メチルチオ尿素)；(E)-1,1'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(3-イソプロピルチオ尿素)；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)アセトアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)イソブチルアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-2-メトキシアセトアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)メタンスルホンアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)シクロプロパンスルホンアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)プロパン-2-スルホンアミド；N'-(4-{(E)-2-[4-(ジメチルアミノ)フェニル]-1-エテニル}フェニル)-N,N-ジメチルスルファミド；(E)-1-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-3-メチルチオ尿素；(E)-1-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-3-イソプロピルチオ尿素；(E)-1-シクロプロピル-3-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)チオ尿素；(E)-1-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-3-メチル尿素；(E)-1-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-3-イソプロピル尿素；(E)-1-シクロプロピル-3-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)尿素；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-アセトアミドベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-イソブチルアミドベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(2-メトキシアセトアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(シクロプロパンスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(1-メチルエチルスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-アセトアミドベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-イソブチルアミドベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(2-メトキシアセトアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(メチルスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(シクロプロパンスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(1-メチルエチルスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-シクロプロピルチオウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-エチルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)��ス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-イソブチルアミド-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-イソブチルアミド-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-イソブチルアミド-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(2-メトキシアセトアミド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(2-メトキシアセトアミド)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナ���スチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(メチルスルホンアミド)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-エチルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-イソブチルアミド-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルウレイド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-エチルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(2-メトキシアセトアミド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-メチルチオウレイド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルウレイド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-メチルチオウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルチオウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-エチルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-4,4'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(N-メチルベンズアミド)；(E)-4,4'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(N-イソプロピルベンズアミド)；(E)-4,4'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(N,N-ジメチルベンズアミド)；(E)-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(モルホリノメタノン)；(E)-5-(4-ヒドロキシスチリル)ベンゼン-1,3-ジオール(3,5,4'-トリヒドロキシ-トランス-スチルベン)；およびレスベラトロール
からなる群より選択される、項目95記載の使用。
99.  前記スチルベンまたは前記スチルベン誘導体が、
(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(プロパン-2-スルホンアミド)；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)シクロプロパンスルホンアミド；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(ジメチルアミノ-スルホンアミド)；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)プロパン-2-スルホンアミド；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-4,4'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(N-メチルベンズアミド)；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホネート)；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；および(E)-5-アセトアミド-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート
からなる群より選択される、項目95記載の使用。
100.  前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
4-メチルキナゾリン-2-カルボキサミド；ベンズ[h]イソキノリン-6-アミン；5,6-ジメチル-2-メルカプトメチルベンズイミダゾール；(E)-1-(2-ヒドロキシフェニル)-3-(ピリジン-3-イル)プロパ-2-エン-1-オン；N4-ブチル-6-クロロピリミジン-2,4-ジアミン；1-テルモプシン；6-アミノ-5-ニトロソ-2-フェニルピリミジン-4(1H)-オン；および4-(2-アミノ-4-ニトロフェニルアミノ)フェニル
からなる群より選択される、項目94記載の使用。
101.  前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
7-アザインドール-3-カルボキシアルデヒド；2-アミノ-4-フェニルフェノール；3-(1-メチル-3-ピロリジニル)インドール；1-メチル-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]キノロン；2-アミノ-5-ニトロ-1H-ベンズイミダゾール；2-(5-ニトロ-2-フルフリリデン)アミノエタノール-N-オキシド；ニフラトロン；α-メルカプト-N,2-ナフチルアセトアミド；1-テルモプシン；N4-ブチル-6-クロロ-2,4-ピリミジンジアミン；2-(2-ヒドロキシ-6-プロパン-2-イルオキシ-シクロヘキシル)酢酸；6-アミノ-5-ニトロソ-2-フェニル-1H-ピリミジン-4-オン；4-アミノ-2-ヒドロキシフェニル)アルソン酸；スピロ[1,2-ジヒドロインデン-3,5'-イミダゾリジン]-2',4'-ジオン；N〜4〜-(4-メトキシフェニル)-6-メチルピリミジン-2,4-ジアミン；2-アミノ-9-ペンチル-3H-プリン-6-チオン；2-(4-メトキシフェニル)-3-(ピリジン-3-イル)プロパ-2-エンニトリル；2-クロロピリミジン-4,6-ジカルボキサミド；2-アミノ-3H-フェノキサジン-3-オン；2-メチル-N-ベンジル-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-アミン；4-(ベンジルアミノ)-2-メチル-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン；2-アミノ-1-ナフタレンスルホン酸；N-sec-ブチル-3-メチルベンズアミド；ベンズ[h]イソキノリン-6-アミン；および2-(2-メチルシクロヘキシリデン)ヒドラジンカルボキサミド
からなる群より選択される、項目94記載の使用。
102.  前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が抗体またはポリペプチドであり、該抗体または該ポリペプチドが、抗体の抗原結合断片、またはタンパク質結合タンパク質を含む、項目73〜94のいずれか記載の使用。
103.  前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
miRNA、shRNA、siRNA、amiRNA、dsRNA、アンチセンスRNA、またはリボザイム
からなる群より選択されるRNAi物質である、項目73〜94のいずれか記載の使用。
104.  前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、薬学的に許容される担体をさらに含む、項目73〜103のいずれか記載の使用。
105.  治療的物質を投与することをさらに含む、項目73〜104のいずれか記載の使用。
106.  検出可能なレベルまたは増大したレベルを有していることが疑われる前記対象から得られた生体試料中のDNA編集酵素ポリペプチド、mRNA、または活性のレベルを測定することによって、検出可能なレベルまたは増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞を有している該対象を特定する、項目73〜105のいずれか記載の使用。
107.  増大したレベルを有していることが疑われる前記対象から得られた生体試料中のDNA編集酵素ポリペプチド、mRNA、または活性のレベルを測定すること、および、そのレベルを、健常対象から得られた生体試料中で見られるDNA編集酵素ポリペプチド、mRNA、または活性のレベルと比べることにより、検出可能なレベルまたは増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞を有している該対象を特定し、試験試料中のDNA編集酵素ポリペプチド、mRNA、または活性の量の増加により、DNA二本鎖切断修復の阻害物質での処置を必要とする対象が示される、項目73〜106のいずれか記載の使用。
108.  前記DNA編集酵素ポリペプチドのレベルを測定することが、
ウェスタンブロット、免疫沈降、酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）、放射性免疫測定法（RIA）、サンドイッチアッセイ法、タンパク質インサイチューアレイ、免疫組織学的染色、ラジオイムノメトリックアッセイ法、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ法、インサイチュー免疫測定法、沈降反応、免疫蛍光測定法、定量的インサイチュータンパク質分析（AQUA）、質量分析、および免疫電気泳動アッセイ法
からなる群より選択される1つまたは複数のアッセイ法を用いることを含む、項目106または107記載の使用。
109.  前記DNA編集酵素ポリペプチドのレベルを測定することがアッセイ法を用いることを含み、該アッセイ法が、抗体、抗体断片、タンパク質結合タンパク質、または、DNA編集酵素ポリペプチドに結合するペプチドを用いる、項目106または107記載の使用。
110.  前記抗体または前記抗体断片がモノクローナル抗体である、項目106〜109のいずれか記載の使用。
111.  前記抗体、前記抗体断片、前記タンパク質結合タンパク質、または、前記DNA編集酵素ポリペプチドに結合するペプチドを、検出可能な標識で標識する、項目106〜110のいずれか記載の使用。
112.  前記DNA編集酵素mRNAのレベルを測定することが、
RT-PCR、定量的RT-PCR、ハイブリダイゼーションアッセイ法、ノーザンブロット、マイクロアレイに基づく発現解析、転写増幅、自家持続配列複製、ハイスループット配列決定法、およびRNA-Seq
からなる群より選択される1つまたは複数のアッセイ法を用いることを含む、項目106または107記載の使用。
113.  前記DNA編集酵素活性の活性を測定することが、
ハイブリダイゼーション、ハイスループット配列決定法、エクソーム配列決定法、蛍光インサイチューハイブリダイゼーション（FISH）、PCR、およびゲノム配列決定法
からなる群より選択される1つまたは複数のアッセイ法を用いて、ゲノムまたはその一部の全突然変異状態を判定することを含み、正常な突然変異状態よりも2％またはそれ以上大きい突然変異状態がDNA編集酵素の活性を示す、項目106または107記載の使用。
114.  前記活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）の活性を測定することが、
ハイブリダイゼーション、ハイスループット配列決定法、エクソーム配列決定法、蛍光インサイチューハイブリダイゼーション（FISH）、PCR、およびゲノム配列決定法
からなる群より選択される1つまたは複数のアッセイ法を用いて、標的遺伝子であるIGH、BCL6、MYC、BCL11A、CD93、PIM1、および/またはPAX5における高頻度突然変異の状態を判定することを含む、項目106、107、および113のいずれか記載の使用。
115.  前記活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）の活性を測定することが、ホスホ-H2AXアッセイ法、53BP1アッセイ法、またはRAD51アッセイ法を用いることを含む、項目106または107記載の使用。
【実施例】
【０３６９】
実施例1：脾細胞におけるXRCC2の阻害
成人脾細胞を4〜6月齢C57BL6/Jマウスから単離した。単細胞懸濁液を、脾臓を機械的に破壊し、細かい滅菌メッシュを通して、2〜10mM L-グルタミン（Gibco）および10％(vol/vol)熱不活化ウシ胎仔血清（FBS、Gibco）を含むRPMI-1640培地中に分散させることにより調製した。赤血球を、pH7.5において0.01Mトリス-HCl緩衝液中8.3g/Lの塩化アンモニウムを用いて低張溶解により除去した。残りの脾細胞を、10％ウシ胎仔血清（FBS）を補充した2〜10mM L-グルタミンを含む補充RPMI-1640中、5％CO2加湿雰囲気下、37℃で培養した。細胞にXrcc2を標的とするレンチウイルスshRNAベクター（TRCN0000071023、TRCN0000071024およびTRCN0000071027；Sigmaから）を用いて形質導入した。Xrcc2-特異的短ヘアピンRNA（shRNA）または対照shRNA（スクランブル配列を有する）を安定に発現するCH12-F3-誘導細胞株を、個々のshRNAベクターの直接形質導入により生成し、続いてピューロマイシン耐性について選択した。初代脾細胞の形質導入のために、元のベクターを、ピューロマイシン耐性カセットの高感度緑色蛍光タンパク質（eGFP）（Clontech）をコードする配列での置換によって改変した。対照として、空のpLKO.1-eGFPベクターまたはスクランブルshRNAを発現するベクターを用いた。Hasham, and Tsygankov, 2004, Virology 320, 313-329に記載のとおり、ベクターを偽型ウイルスにパッケージングし、初代細胞に形質導入するために用いた。Xrcc2特異的shRNAを用いて形質導入した細胞はXKD細胞と呼び、対照はCtrlとした。1つのサブセットを非活性化（Non）として1μg/mlのCD40に対する抗体（抗CD40；HM40-3；Pharmingen）だけと培養して、クラススイッチングなしの増殖を誘導し、他のセットを活性化（Act）として1μg/mlの抗CD40に加えて25ng/mlのインターロイキン4（IL-4；Peprotech、Cat. No. 214-14）と共に培養して、増殖およびクラススイッチ組換えを誘導した。培地およびサイトカインを2日後に補充した。刺激の3日後、細胞の生存度をeGFPの発現を用いて評価した。図1は、すべての非活性化細胞が同じ挙動をすることを示す。活性化細胞では、Xrcc2のノックダウンが細胞数の大幅な低下を引き起こす。図1は、p53の欠損（Trp53-/-）がXrcc2 shRNAを発現する群において観察される細胞毒性を部分的に救出し得ることをさらに示す。
【０３７０】
実施例2：AID発現細胞のAID欠損細胞との比較
野生型マウス（AID+/+）またはAID欠損（AID-/-）マウス（Muramatsu et al. et al., 2000, Cell 102: 553-63）のいずれかから、実施例1に記載のとおりに脾細胞を単離および培養し、実施例1に記載のとおりにXrcc2 shRNA（XKD）または対照shRNAを用いて形質導入した。AID+/+ B細胞におけるXRCC2のノックダウンは活性化後に生存を損なった（図2）。これに対して、AID-/-マウスからのXKD B細胞の活性化は細胞生存度または生存における検出可能な変化を生じることはなかった。磁気ビーズに基づく細胞選別（120-000-302；Miltenyi）を介してのCD43発現細胞の枯渇により、XKD細胞をB220+IgM+ B細胞について特異的に濃縮し、活性化後の様々な時点で細胞生存度または生存についてアッセイした場合、AID-/-細胞では変化は観察されなかった（図3）。AIDを発現するB細胞（WT）では、細胞死の増加が第2日および第3日に観察された。
【０３７１】
AID+/+またはAID-/- XKD B細胞培養物を、1μg/ml抗CD40（比活性化、Non）または1μg/ml抗CD40に加えて25ng/ml IL-4（活性化、Act）のいずれかと培養し、次いで細胞を、リン酸化γ-H2AXに対するポリクローナル抗体（1：400希釈；A300-018A；Bethyl Laboratories、Montgomery、TX）を用いて非修復二本鎖切断（DSB）のマーカーであるγ-H2AXのフォーカスについて染色した（Rogakou et al., J Biol Chem 1998, 273:5858-5868）。対照およびXKD B細胞培養物はいずれも、活性化後にAID依存性のγ-H2AX+細胞（1つのγ-H2AXフォーカスまたは複数のγ-H2AXフォーカスを含む細胞）のより大きい比率を示した（図4）。対照shRNAを用いて形質導入したAID-/-培養物またはAID-/- XKD培養物は活性化後にγ-H2AX陽性度の変化を示さなかった（図5）。しかし、細胞1個あたりのフォーカスをγ-H2AX+画分で定量すると、XKD細胞は細胞1個あたりのγ-H2AXフォーカスの数の特異的かつ有意な増加を示すことが判明した（活性化前の細胞1個あたり約2個のフォーカスから活性化後の細胞1個あたり4個超のフォーカス；図5）。この効果はAID-/-細胞では見られず、AIDに依存することが示唆された。
【０３７２】
類似のγ-H2AX反応が、初代細胞（CH12-XKD細胞）において用いたのと同じXRCC2-ノックダウン構築物を含むクラススイッチ適格マウスB細胞株CH12-F3（Nakamura, M. et al. 1996, Int. Immunol. 8, 193-201）において観察された（図6）。CH12-F3細胞を2〜10mM L-グルタミン（Gibco）10％(vol/vol)熱不活化ウシ胎仔血清（FBS）（Omega Scientific）および5％(vol/vol)NCTC 109培地（Gibco）を補充したRPMI-1640培地中で維持した。Xrcc2-特異的shRNAまたは対照shRNA（スクランブル配列を有する）を安定に発現するCH12-F3-誘導細胞株を、個々のshRNAベクターの直接形質導入により生成し、続いてピューロマイシン耐性について選択した。DNA DSBの別のマーカーである、DNA損傷反応因子53BP1を用いて、活性化誘導フォーカスの蓄積がXKD細胞中で特異的に観察されたが、対照細胞では観察されなかった。
【０３７３】
まとめると、AIDはB細胞ゲノムを無差別に攻撃して、広範なDSBを生じ得ることが、本明細書において示される。相同組換え因子XRCC2がAID誘導性の付帯的損傷に対する抵抗性において重要であり、B細胞生存度およびゲノム安定性を確保することも、本明細書においてさらに示された。具体的には、これらの知見は、発生的にプログラムされたDSBを誘導する同じメカニズムが、全体としてゲノムに対する固有かつ同時の危険度を有し得ることを示す。これは、相同組換えが正常なリンパ球発生のためだけでなく、免疫不全または癌などのリンパ系の病態の予防のためにも重要であることを示唆している。
【０３７４】
実施例3：DIDSは受容細胞の細胞生存度を低下させる
DIDSを可能性のある作用物質として有効性確認し、そのDSB修復阻害活性を確かめるため、初代野生型マウス脾細胞の放射線感受性をDIDSへの曝露後に測定した。合計2×106個の脾細胞を0、300μM、600μMもしくは1000μM DIDSを含む培地、または媒体のみの対照中に懸濁し、ただちに137Cs照射器（Shepard）を用いて2.5Gy電離放射線照射を行った。次いで、細胞を同じDIDS濃度を含む培地中で培養し、36時間の回復時間後に細胞数を判定した。DIDS処理は、媒体対照に比べて、用量依存的様式で、2.5Gy放射線照射に対する過敏性を引き起こした。0および300μM DIDSでは、細胞数は媒体のみとほぼ同等であった。しかし、600μM DIDS中で培養した細胞は、生存度の約25％の低下を示し、1000μM DIDS中で培養した細胞は生存度の87％の低下を示した。これらのデータは、DIDS処理が初代脾細胞に予想した放射線感受性を与えることを示し、RAD51阻害におけるその公知の役割に一致する。
【０３７５】
初代マウスB細胞を成獣C57BL/6Jマウス（AID+/+）およびAIDノックアウトマウス（AID-/-）の脾臓から単離した（実施例1および2参照）。1×106個の初代B細胞を組織培養プレートに播種し、第0日および第2日に1μg/ml抗CD40抗体（抗CD40；BD Pharmingen；Cat. No.553721）および25ng/ml IL-4または抗CD40単独で刺激した。0、50μM、100μMまたは150μMのDIDSを、培養開始の0時点および2日後に添加し、この時点で培養量を細胞成長に適応するよう調節した。細胞を6日間培養した。第1、2、3、4および6日に、トリパンブルーで染色した後、血球計数器を用いて生細胞数を計数した。図7に、DIDS処理後の、C57BL/6Jマウス（AID+/+）およびAIDノックアウトマウス（AID-/-）からの生存初代B細胞数を示す。AID+/+ B細胞において、150μM DIDSは第3日から細胞生存度を大幅に低下させる。B細胞生存度の減少は、100μM DIDSの濃度でも観察される。AID+/+ B細胞を抗CD40＋IL-4で刺激しなければ、DIDSは細胞生存度に影響をおよぼさない。さらに、AID-/-細胞はDIDSによって影響を受けず、細胞生存度の有意な変化は示さない。
【０３７６】
細胞を野生型またはAIDノックアウト（-/-）マウスの脾臓から単離し、培養し、第0日および第2日に抗CD40抗体およびIL-4で刺激した。DIDSを第0日および第2日に0または150μMの濃度で添加した。総生細胞数を1日おきにGuava EasyCyteフローサイトメーターアッセイ法を用いて判定した。150μM DIDSで処理した刺激細胞は、より低い生存度を示した（図9）。
【０３７７】
実施例4：AID遺伝子発現プロファイリング
AIDの発現を、多様な組織；脳、血液および骨髄、乳房、結腸、腎臓、肺、卵巣、前立腺ならびに皮膚由来の59のヒト癌細胞株のNCI-60セットでプロファイリングした。図8Aに示すとおり、高いAID発現がリンパ腫および白血病細胞株で検出された。初代ヒト細胞/組織において発現をさらに特徴決定し、高い発現が白血病およびリンパ腫試料で検出された（図8B）。
【０３７８】
実施例5：新規生物活性化合物のスクリーニング
DIDSの生物活性誘導体を特定するために、DIDSの105の化学的変種のライブラリを、スルホネートまたはイソチオシアネート基を他の化学的実体で置換するか、またはスチルベン骨格の2つの環を連結している二重結合を変えることにより作製した。すべての化合物をジメチルスルホキシド（DMSO）に100μMの保存濃度で再懸濁し、連続希釈して10、50、または150μMの作業濃度を生成することにより用いた。これらを個別に96穴マイクロタイター培養皿に二つ組でピペッティングし、10μM化合物のプレート2つ、50μM化合物のプレート2つ、および150μM化合物のプレート2つを作製した。各セットで、1つのプレートには、B220+ IgM+ B細胞を濃縮するための磁気ビーズに基づく選別により単離した、100,000個の正常C57BL/6J脾B細胞（AID+/+）を播種し；1つのプレートには、同じように単離したAID-/-マウスからの100,000個の脾B細胞を播種した。各培養物を第0日に、1μg/mlの抗CD40に加えて25ng/ml IL-4を添加することにより刺激して、増殖およびクラススイッチ組換えを誘導した。2日後、各培養物を、さらなる1μg/mlの抗CD40に加えて25ng/ml IL-4により再度刺激した。さらに2日間培養し、合計4日間の刺激後、生細胞数を各プレートの各ウェルで、MultiTox-Fluor Multiplex Cytotoxicity Assay（Promega, Inc.）を用いて判定した。生存度測定のために、100マイクロリットルの2×MultiTox-Fluor Multiplex Cytotoxicity Reagentを各ウェルに添加し、混合した後、37℃で30分間インキュベートした。次いで、プレートを蛍光可能マルチプレート読み取り器に移し、400nmでの励起および505nmでの発光による検出を用いて分析し、残存する生存細胞の比率を求めた。対照として、媒体のみ（DMSO）または150μM DIDSのいずれかを含むウェルを各プレート上に含めた。各化合物の生存度スコアを、正常B細胞プレートの生存細胞比率を対応するAIDノックアウトプレートの生存細胞比率で割った値として求めた。DIDS比のレベル以下の正常/AIDノックアウト比を示す化合物を、さらなる有効性確認および試験の候補化合物と考えた。DIDS非存在下で、AID-/-細胞に比べてAID+/+細胞で選択的に細胞生存度の低下を引き起こし、AID+/+：AID-/-比が1未満となる化合物を、初期陽性ヒットとして評価する。初期スクリーニングにより、BB5-6、BB1-6、BB1-7、BB2-6、BB2-5、BB5-39、BB4B-2、BB5-4、BB5-47、およびBB8-1の10の誘導体が特定された（図10）。
【０３７９】
実施例6：ヒトCLL細胞に対するDIDSの効果
患者からの血液試料（8〜16mL）を、BD Vacutainer CPTチューブ（BD、Franklin Lakes、NJ）中に末梢血管から採血し、製造者の説明書に従い、遠心沈降して赤血球を分離ゲルの下に捕捉し、24時間以内にJackson Laboratoryに輸送した。受領後、末梢血単核細胞（PBMC）を試料から、製造者の添付書に従って単離した。ヒト患者の14の原発性慢性リンパ性白血病（CLL）試料からの白血球（WBC）数を、全血球数（CBC）から百分率で計算した。計算値を、血球分離および終夜輸送後の経験的血球数と比較した。これにより、顕著に一貫性のある単離の効率が明らかとなる。原発性CLL試料（WBC）を標準濃度に希釈し、3.0×106細胞を培養物中に播種した。重複培養物に0μM（n＝5）、150μM DIDS（n＝4）、または600μM DIDS（n＝2）を補充した。生細胞数を、培養第2、4、6、および8日に血球計数器を用いて手動計数により判定した。DIDS処理した培養物は、未処理対照に比べて、生細胞数の有意な低下を示した（図11）。
【０３８０】
実施例7：脾細胞に対する4'-ブロモ-3'-ニトロプロピオフェノンの効果
初代マウスB細胞を、実施例1に記載のとおり、成獣AID-/-マウスから単離した。培養物を、10％FBSを含むRPMI-1640培地1mlあたり1×106細胞の濃度で樹立した。培養物を抗CD40抗体に加えてIL-4で活性化し、0.5、5、50、または500μMの濃度の4'-ブロモ-3'ニトロプロピオフェノン（NS-123）（Calbiochemから購入；CAS No. 101860-83-7）で処理した。細胞を2日間培養した後、抗CD40抗体に加えてIL-4で再度活性化した。培養1、2、3、および4日後に、トリパンブルー染色により細胞数を判定した。NS-123の50μMおよび500μMの濃度で、AIDヌル脾細胞は生存しなかった。NS-123の5μMの濃度では、脾細胞の生存度は、未処理脾細胞に比べて低下する（図12）。
【０３８１】
初代AIDノックアウトマウス脾細胞を、第0日に、B細胞を活性化するための抗CD40に加えてIL-4を補充したRPMI-1640培地中1×106細胞/mlの濃度で、培養物中に播種した。個々の培養物に0、5、10、20、30、40、または50μM NS-123を補充し、第1、2、3、および4日に、トリパンブルー染色後に生細胞を計数した（図13）。AIDヌル脾細胞におけるNS-123のLD50は14μMと判定された。NS-123の有効性を示すために、脾細胞を野生型マウス（AIDを発現する）から単離し、AID-/-マウスからの脾細胞と比較し、活性化および比活性化を試験することができる。
【０３８２】
実施例8：DSB阻害物質のインビボ試験
AIDを広範にまたは組織特異的に過剰発現するマウスをDSB阻害物質で処置する。1つのそのような適切なマウスモデルは、AIDがBリンパ球（B細胞）で過剰発現されるB6.Cg-Tg(Igk-Aicda)14Mnz/J、またはCAG（ニワトリβアクチンプロモーター、ウサギβグロビンポリA、CMV-IEエンハンサー）プロモーターを用いてAIDが広範に発現されるC57BL/6-Tg(CAG-Aicda)B1Hon/HonRbrcである（Okazaki et al., J Exp Med. 2003, 197(9):1173-81）。そのようなマウスモデルは実際にリンパ腫および他の癌性病変を発生することが報告されている。DSB阻害物質（例えば、スチルベン、DIDS、NS-123、またはレスベラトロール）をマウスに投与することができる。投与は静脈内（i.v.）、腹腔内（i.p.）、筋肉内（i.m.）、もしくは皮下（s.c.）注射により、または持続処置のための浸透圧ポンプを用いて、または飲水を介して行うことができる。
【０３８３】
C57BL/6-Tg(CAG-Aicda)マウスの場合、これらのマウスは導入遺伝子挿入断片に依存してT細胞リンパ腫を発生し、40から80週間の間に死亡することが報告されている（Okazaki et al., J Exp Med. 2003, 197(9):1173-81）。DSB阻害物質による処置は、リンパ腫の減少および寿命の延長をもたらし得る。
【０３８４】
実施例9：異種移植マウスモデル
AID活性を示す原発性慢性リンパ性白血病（CLL）患者からの5×106個の初代白血球（WBC）を0.1mLのPBSに懸濁し、次いで、免疫不全マウス、例えば、NOD-scidまたはNOD-scid IL2Rgamma（NSG）にi.v.注射、または浸透圧ポンプにより投与することができる。腫瘍が末梢血流中に生成した後、マウスを以下の4群の媒体対照、5mg/kg DIDS、25mg/kg DIDS、および50mg/kg DIDSの1つに無作為割り付けすることができ、これらの4群を、30％プロピレングリコールを含むDMSOに混合し、1週間の間隔で4〜8週間i.v.注射する。DIDSを投与しない群は30％プロピレングリコール中に溶解した同じ量のDMSOのみで処置することができる。末梢血を1週間の間隔でフローにより分析することができる。試験終了時に、マウスを屠殺し、組織検査を実施することができる。
【０３８５】
実施例10：AID+またはAID-ヒト腫瘍試料による異種移植マウスモデル
NOD-scid IL2Rgamma（NSGマウス）にAID+およびAID-ヒト腫瘍試料を移植して、患者の疾患を可能なかぎり密接に反映する、複数の重複インビボモデルを作製することができる。次いで、これらを用いて遺伝的化学療法のインビボでの有効性を試験し、有効性をAID発現レベルに関連づけ、可能性のある遺伝的化学療法の副作用を評価することができる。
【０３８６】
各患者試料から複数の受容者（最大15匹）を作成するため、各患者試料からの1×106個の末梢血単核細胞（PBMC）を6週齢の雄NGSマウスに、静脈内、脾臓内、または必要がある場合には骨髄内注射によって導入することができる。以前の試験は、Bリンパ系の癌が60％よりも高いNSGマウスへの移植成功率を有することを示している（Immunol, 2005, 174(10), 6477-89；Leukemia. 24(11), 1859-66；Ann NY Acad Sci, 2007. 1103: p. 90-3）。移植後、受容者の各群をそれぞれ最大5匹までの処置下位群に再分することができる。注射後1週間から1ヶ月の間に、マウス（最大5匹の群）をDIDS（経験的に決定した濃度を用いて）、媒体対照で処置するか、または未処置のままにすることができる。開始レジメンとして、マウスをDIDSまたは他の化合物で、i.v.注射により1週間の間隔で4〜8週間処置することができ、循環中のヒトリンパ系細胞を、1週間の間隔で薬物注射の間に末梢血を採取し、フローサイトメトリーでモニターすることができる。4〜8週間の処置の後、すべての受容マウスを安楽死させることができ、続いて各処置群のすべてのマウスについて、腫瘍発生、腫瘍量、退縮、および生存時間を判定することができる。
【０３８７】
腫瘍量：屠殺時に、末梢血およびリンパ系器官の組織を、フローサイトメトリーまたは免疫蛍光によりヒト白血病細胞について分析する。ヒト細胞を検出し、それらをマウス細胞と区別するために、ヒト白血病診断マーカーであるhCD19、hCD22、およびhCD79a、ならびにmCD19などのマウスマーカーの同時染色を実施することができる。ヒト細胞の数を未処置、媒体処置、およびDIDS処置受容者で比較することができる。DIDSが遺伝的化学療法反応を誘発する場合には、対照群に対して処置群ではヒト白血病細胞がより少ないことが予想されると考えられる。
【０３８８】
アポトーシスを、蛍光標識したアネキシンVで染色し、DNA結合色素である7-アミノ-アクチノマイシンD（7-AAD）で対比染色することにより、測定することができる。前述のとおり、ヒト細胞をマウスと区別することができる。アポトーシス細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって判定することができる。または、AC3を検出するための免疫蛍光顕微鏡検査によってアポトーシスを測定することもできる。
【０３８９】
処置後組織病理学分析。患者由来異種移植マウスの遺伝的化学療法に対する反応または抵抗性を評価するために、すべての薬物処置マウスおよび対照マウスを徹底的な組織病理学分析に供することができる。以前の試験により、骨髄微小環境における白血病細胞はそれ以外では細胞毒性の化学療法に抵抗し得ることが示唆されている。したがって、骨髄、他のリンパ系のニッチ、および腫瘍細胞が占有するCNSなどの可能性のある聖域部位の分析、ならびにCD5、CD19、CD22、CD23、またはCD79aなどのヒトB細胞マーカーの染色を実施することができる。ニッチ自体に対する薬物処置の効果を、適切なマウス組織染料およびマーカーを用いての並行マウス組織病理学を実施することによって調べることができる。組織病理学のために採取したすべての組織（骨髄、脾、異常の証拠を示す他の組織）をホルマリン中で固定し、パラフィン包埋することができる。すべての固定組織をヘマトキシリンおよびエオシン（H&E）で染色することができる。これらの分析のために、マウスにおけるヒト白血病の存在、および薬物処置レジメンによって引き起こされた解剖学的異常を探すことができる。ホルマリン固定し、パラフィン包埋した、異種移植マウスからの大腿および脾臓の切片を、ヒトCD19、CD22、およびCD79a（B細胞白血病マーカー）ならびに陰性対照としての他の系列マーカーのパネル（例えば、CD33、CD34骨髄マーカー）について特異的に免疫染色して、骨髄および二次造血器官のヒト細胞成分を正確に示すことができる。これらの分析の目標は、残存するヒト細胞を測定すること、およびそれらが存在する微小環境を特定することと考えられる。
【０３９０】
実施例11：AID発現分析および遺伝子型同定
RNAおよびDNAの調製のために、1×106個から5×107個の間の細胞を、標準の分子生物学的プロトコールを用いて抽出することができる。AID mRNA発現を各試料中で定量的逆転写PCR（qRT-PCR）によって測定することができる。ヒトAID転写物を検出するためのオリゴヌクレオチドプライマー配列は：hAID順方向5'-TCCTTTTCACTGGACTTTGG-3'（SEQ ID NO:101）；およびhAID逆方向5'-GACTGAGGTTGGGGTTCC-3'（SEQ ID NO:102）である。これらのプライマーを用いてのRT-PCRにより、ヒトAIDに特異的な196塩基対の反応生成物が得られる。ヒトGAPDH転写物（ローディング対照の型）のプライマー配列は：hGAPDH順方向5'-GAGTCAACGGATTTGGTCGT-3'（SEQ ID NO:103）；およびhGAPDH逆方向5'-TTGATTTTGGAGGGATCTCG-3'（SEQ ID NO:104）である。これらのプライマーを用いてのRT-PCRにより、ヒトGAPDH遺伝子に特異的な238塩基対の反応生成物が得られる。発現レベルを、Woo et al., Oncogene 2007, 26(41), 6010-20による多規準化プロトコールを用いて定量し、腫瘍細胞の集まり全域の試料どうしの比較における最高レベルの信頼度を確実にする。各qRT-PCRアッセイ法において、正常ヒト線維芽細胞（NHF）などのAID陰性対照を含めることができる。陰性対照における基準線レベルよりも高いAID mRNAレベルを示す腫瘍は、AID発現（+）と分類することができ；対照レベル以下のAID mRNAレベルを示す試料は、AID陰性（-）範疇に分類することができる。AID発現データを臨床診断情報、特に表面Igおよび体細胞高頻度突然変異状態と統合することができる。AID+範疇内で、試料をAID mRNA発現レベルに従って順位付け、Ig遺伝子座における体細胞高頻度突然変異の有無を標準の臨床代用マーカーにより、または試料採取後の直接配列決定により判定することができる。
【０３９１】
実施例12：AID活性を測定するための配列決定法
遺伝的化学療法の基礎は腫瘍細胞におけるAID活性である。したがって、ゲノム配列分析を実施して、AID突然変異活性を測定することができる。AIDはIgh（主要な生理的標的）、ならびにMyc、Bcl6、Bcl11a（すべて高頻度で標的とされる腫瘍遺伝子）、CD93、および様々な頻度でのその他多くを含む非Ig遺伝子の宿主で作用することが公知である。ロボットによる捕捉システムを用いて、すべての公知のヒトタンパク質コーディング遺伝子−約26,000遺伝子のゲノムDNA隣接プロモーターエレメント（1〜2kb/遺伝子）を単離することができる。この様式で、公知および未知両方のAID標的、ならびに非標的（陰性対照）遺伝子を分析することができる。すべての捕捉した配列を、HiSeq装置（Illumina、San Diego、CA）を用いての配列決定のために、バーコードを付け、多重化（2〜4試料/レーン）することができる。標準のHiSeqレーンは現在のところ200億を超えるヌクレオチドの配列を示すため、4×多重化は2％未満の頻度で任意の1つの遺伝子に起こる突然変異を検出するのに十分な適用範囲を提供することができる（以下の分析戦略参照）。公知のAID標的（IGH（NCBI遺伝子ID 3492）、BCL6（NCBI遺伝子ID 604）、MYC（NCBI遺伝子ID 4609）、BCL11A（NCBI遺伝子ID 53335）、CD93（NCBI遺伝子ID 22918）、PIM1（NCBI遺伝子ID 5292）および/またはPAX5）ならびに点突然変異またはDNA切断のいずれかのためにAIDによってほとんど標的とされることのない2つの遺伝子（陰性対照）、MEF2B CD93（NCBI遺伝子ID 100271849）およびLTB（NCBI遺伝子ID 4050）を分析することができる。このアプローチは、腫瘍および非腫瘍細胞の混合物を含む異種細胞集団における非選択体細胞突然変異を検出するために理想的である。Burrows-Wheeler Aligner（BWA）を用いてのヒト参照ゲノム配列に対する配列のアラインメントの後、自発的に起こる体細胞突然変異を、（1）1試料につき少なくとも2つの独立の読み出しで起こり、したがって配列決定の誤りではなさそうである；および（2）50％未満の頻度で起こり、したがって生殖細胞系列の多型ではなく、非クローン化体細胞事象である、配列相違として特定することができる（Bioinformatics 2009, 25(14): 1754-60）。ほとんどの試料に対して、非CLL細胞を多くの患者の血液から選別し、それに対してAID依存性腫瘍突然変異率を測定し得る、内部の、患者特異的試料として用いることができる。
【０３９２】
（表１）XKD細胞における染色体損傷。対照shRNAを用いて形質導入したマウスリンパ腫細胞株であるCH12-F3細胞（CH12-Ctrl）およびCH12-XKD細胞に関する、未処理のまま（培養補充物なし）または非活性化条件（抗CD40）もしくは活性化条件（抗CD40＋IL-4＋TGF-β）下で培養したものの核型
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【０３９３】
実施例13：DIDSは初代マウスBを放射線感受性にする
初代マウス脾B細胞を、実施例1に記載のとおり、正常な野生型C57BL/6Jマウスから単離し、磁気ビーズ（Miltenyi）で選別して、B220+ IgM+ B細胞を濃縮した。精製したB細胞を、10％FBSおよび0、50、100、または150μM DIDSを含む完全RPMI-1640培地中で培養した。次いで、細胞を、Cs137照射器で0（図14、塗りつぶした丸）または2.5Gy（＝250rad；図14、白い丸）ガンマ照射のいずれかに供した。続いて、照射の24時間後、血球計数器およびトリパンブルー色素排除を用いての手動サイトメトリーにより、細胞生存度を各条件について評価し、DIDSなしの条件に対してプロットした。生細胞の比率を対応する0μM DIDS条件に対して規準化して報告する。誤差バーは3つの独立した実験からの平均値の標準誤差（S.E.M.）を表す。データは、放射線照射処理とDIDSとの組み合わせが、50μM DIDSの濃度で始まって、生存度を有意に低下させることを示している。
【０３９４】
実施例14：DIDSはAID（AICDA）と協同して形質転換B細胞に関して成長を阻害しかつ生存を損なう
マウスBリンパ系白血病細胞株CH12-F3を、2〜10mM L-グルタミン（Gibco）、10％(vol/vol)熱不活化ウシ胎仔血清（Omega Scientific）および5％(vol/vol) NCTC 109培地（Gibco）を補充したRPMI-1640培地（完全RPMI；非活性化）または1μg/ml抗CD40抗体、25ng/ml IL-4および1ng/ml形質転換成長因子β1（TGF-β1）を含む完全RPMI-1640培地（活性化）中で培養した。培養物に0、50、100、または150μM DIDSを補充し、全細胞数を0、1、2、3、4、または6日間の培養後に手動サイトメトリーにより判定した。図15Aにおいて、様々なDIDS濃度で処理した非活性化細胞は細胞生存度または細胞増殖において差を示さない。これに対し、150μM DIDSに曝露した活性化CH12-F3細胞では、全細胞数の強力な減少が観察された（図15B）。
【０３９５】
実施例15：DIDS処理はAIDによって生じるDNA損傷の修復を防止する
8〜12週齢の野生型（AID+/+）およびAIDノックアウト（AID-/-）マウスから、実施例1に示すとおりに単離したマウス初代脾細胞を、150μM DIDSに曝露し、抗CD40に加えてインターロイキン-4で活性化し、固定し、DNA切断マーカーのホスホ-H2AXおよび核DNAについて蛍光DNA染色色素である4',6-ジアミジノ-2-フェニルインドール（DAPI）を用いて染色した。図16Aにおいて、0個、1〜2個、または2個超のホスホ-H2AX陽性フォーカスを含む細胞の比率を、AID+/+（塗りつぶしたバー）およびAID-/-（白抜きのバー）細胞について定量した。2個超のフォーカスを含む細胞の有意に高い比率が、特にDIDS処理したAID+/+細胞で観察された。図16Bにおいて、ホスホ-H2AX陽性細胞（塗りつぶしたバー）のホスホ-H2AX陰性細胞（白抜きのバー）に対する比率を、AID-/-培養物と比較してAID+/+について定量した。AID+/+細胞はより高いパーセンテージのホスホ-H2AX陽性細胞を示す。図16Cにおいて、細胞1個あたりのフォーカスの数を、DIDS処理したAID+/+（塗りつぶしたバー）対AID-/-（白抜きのバー）細胞について定量した。データは、示した数のホスホル-H2AXフォーカス（0〜＞20；x軸）を有している細胞の絶対数（y軸）で表す。
【０３９６】
実施例16：AID（AICDA）発現状態は遺伝的化学療法の候補患者を特定するバイオマーカーである
AID（AICDA）発現状態とIGVH高頻度突然変異状態との組み合わせは、遺伝的化学療法の候補患者をさらに層別化するバイオマーカーである。標準の実施において、IGVH変異陽性（参照配列から2％を超える偏位）CLLは、IGVH変異陰性（参照配列から2％未満の偏位）よりも一般に良好な予後に関連する。ゲノムDNAを初代ヒト慢性リンパ性白血病（CLL）細胞から単離し、特定のIGVHセグメントをPCRによって増幅し、標準のサンガー配列決定法を用いて配列決定した。IGVH遺伝子セグメントの増幅のためのプライマー配列は以下のとおりである：
2014527036.tif 000042
。
突然変異を参照ゲノム配列に対するヌクレオチドの相違として特定し、全ヌクレオチドのパーセンテージとして定量した。変異陽性試料を、臨床診断標準に従い、参照から2％を超える変異を有している試料として特定した。表2の変異陽性試料はJE1010、JE1014、JE1015、JE1021、JE1030、JE1048およびJE1061である。試料JE1050は変異を示していない。試料JE1010、JE1014、JE1048およびJE1050はAID発現についても陽性であった。
【０３９７】
（表２）IgVH高頻度突然変異分析
2014527036.tif 000043
【０３９８】
実施例17：DIDSはAID（AICDA）と協同してCLL細胞の生存を減少させる
AID発現（AID+）またはAID陰性（AID-）初代ヒトCLL細胞を、実施例4に記載のとおりに培養した。細胞を補充なし（未処理：図17の三角）または30μM DIDSを補充した基礎RPMI-1640培地中で培養した。白い丸は、30μM DIDSで処理したAID陰性細胞のデータを表し、塗りつぶした四角は30μM DIDSで処理したAID陽性細胞のデータを表す。細胞生存を、2、4、または8日間の曝露後に生細胞について手動サイトメトリーにより評価した。未処理およびDIDS処理したAID-細胞培養物は識別不可能であったが、DIDS処理したAID+培養物は細胞生存度の低下を示した。
【０３９９】
実施例18：バイオマーカーとしてAID発現を用いることでDIDSによる遺伝的化学療法に反応するCLL患者を特定する
4名の個人のAID発現（AID+）ヒトCLL試料（JE1010、JE1036、JE1070、JE1075）および4名の個人のAID陰性（AID-）ヒトCLL試料（JE1015、JE1019、JE1031、JE1057）を、ヒトAIDまたはヒトGAPDH（ローディング対照）のいずれかに特異的なオリゴヌクレオチドプライマーによる逆転写(RT)-PCRを用いて特定した。RT-PCRをOne-Step RT-PCRキットにより製造者のプロトコール（Qiagen）に従って行った。Xrcc2およびGAPDHを検出するために用いるオリゴヌクレオチドプライマーおよびPCR条件が記載されている（Deans et al., EMBO J 2000 19:6675-6685）。ノックダウン試験のための特異性対照として、関連する遺伝子Rad51をRT-PCRにより検出した。AID転写物を検出するためのオリゴヌクレオチドは
2014527036.tif 000044
であった。これらのプライマーによるRT-PCRは、ヒトAIDに特異的な196塩基対の反応生成物を生じる。ヒトGAPDHを検出するためのオリゴヌクレオチドは
2014527036.tif 000045
であり、238塩基対の反応生成物を生じた。逆転写およびPCR条件は以下のとおりであった：ステップ1. 50℃、30分；ステップ2. 95℃、15分；ステップ3. 94℃、1分；ステップ4. 55℃、30秒；ステップ5.℃、1分；ステップ6. ステップ3〜5を35回繰り返し；ステップ7. 72℃、10分；ステップ8. 4℃、無期限に維持。
【０４００】
RT-PCR生成物を、1.0％アガロースゲル（臭化エチジウムを含む）上の電気泳動によって分離し、Bio-Rad Gel Docシステムで可視化した。
【０４０１】
このアッセイ法は、8つの代表的試料を示す図18Aに示すとおり、AID+およびAID-患者試料を迅速かつ高感度に特定する。8つのAID+および8つのAID- CLL試料を、基礎RPMI-1640培地＋30μM DIDS中で培養し、生存を、2、4、6、または8日後に生細胞について手動サイトメトリーにより評価した。この分析により、DIDSはAID陰性初代ヒトCLL細胞よりもAID陽性初代ヒトCLL細胞において細胞生存度を強力に低下させることが判明した。これにより、単一のマーカーとしてのAID発現はDIDS反応性試料を効果的に特定することも判明している。AIDを発現するCLL細胞を10μM DIDSで処理すると、細胞生存度に対する有意な効果が認められた。合計117名のリンパ腫または白血病患者を試験し、そのうち106名はCLL患者であった。47％で、RT-PCRによりAID発現が認められた。
【０４０２】
実施例16：マウス全身性紅斑性狼蒼（SLE）モデルにおけるDIDSの効果
BXSB.Yaa Cd8/IL15-/-マウスはSLEの確立されたモデルである。これらのマウスは、高ガンマグロブリン血症、循環抗核抗体および免疫複合体処置による糸球体腎炎、ならびに最終的には24週齢前後の病死を含む、ヒトSLEの多くの特徴を示す（Andrews et al. 1978, J Exp Med 148: 1198-215；Dixon et al. 1978, Arthritis Rheum 21: S64-7；Izui et al. 2000, Int Rev Immunol 19: 447-72）。モデルからのCd8aおよびIL15の遺伝的欠失は、はるかに早く現れる同様の臨床表現型をきたし、生存は平均14週齢である（McPhee et al. 2011, J Immunol 187:4695-4704）。
【０４０３】
6週齢雄BXSB.Cg-Cd8a<tm1Mak> IL15<tm1Imx>/Dcr（BXSB.Yaa Cd8/IL15-/-と略記）マウスの眼窩後方からヘパリン処理チューブに採血して、血清を採取した。4％炭酸水素カリウムおよびPBS中の25mg/kg（n＝5）もしくは50mg/kg DIDS（n＝6）または同量の4％炭酸水素カリウム（n＝2およびn＝4）を第0日と、7日ごとに5週間、腹腔内投与した。マウスを1週間に1回秤量し、血清を14日間隔で5週間採取した。次いで、これらのマウスの生存を日齢により評価した。血清のIgG1およびIgG2b含有量をELISAにより分析した。ELISAのために、プレートをヤギ抗マウスIg（IgG1またはIgG2b）でコーティングし、40℃で終夜インキュベートした。プレートを洗浄し、血清試料を適切な希釈でマウス複基準標準と共に適用し、37℃で1時間インキュベートした。プレートを3回洗浄し、アルカリ性ホスファターゼと結合したヤギ抗マウス抗体と共に1時間インキュベートした。プレートを3回洗浄し、P-ニトロフェニルリン酸（p-NPP、AMRESCO）を適用し、標準が十分に発色するまでインキュベートし、SpectraMax ELISAプレート読み取り器でSoftmaxProソフトウェアを用いて読み取った。データを、複基準標本特異的な精製マウス標準の滴定に基づくIgG濃度（mg/ml）で表す。図19Aは、対照と処置動物との間に体重差はないことを示す。しかし、IgG2bの分析により、著しい減少が認められ、狼蒼処置にとって有効であることが示された（図20B）。IgG1について有意な差は観察されなかった（データは示していない）。生存データをGraphpad Prismソフトウェアを用いて解析し、ログランクMantel Cox（25mg/kg群は図20Aでp値＝0.4289および50mg/kg群は図20Bでp値＝0.3698）およびゲーハン-ブレスロー-ウィルコクソン検定（25mg/kg群は図21Aでp値＝0.7003および50mg/kg群は図21Bでp値＝0.7505）の両方を用いて統計学的有意性について評価した。
【０４０４】
実施例17：DIDSはDNA損傷後のRAD51フォーカス形成を破壊する
初代マウスB細胞を野生型C57BL/6Jマウスの脾臓から磁気ビーズ選別（Miltenyi）により単離して、B220+ IgM+ B細胞を精製した。次いで、10％FBSを補充した標準のRPMI-1640培地中、0または150μM DIDS存在下でB細胞を培養し、Cs137照射器で0または2.5Gy電離放射線に曝露し、次いで相同組換え因子RAD51のフォーカスについて免疫蛍光により染色した。核内にRAD51フォーカスの形成を示す各培養物中の細胞の比率を報告する。DIDSと共に培養していない放射線照射細胞（0μM）は、効率的なフォーカス形成を示す。図22に示すとおり、DIDS曝露（150μM）により、放射線誘導性RAD51フォーカス形成は完全に阻害され、Rad51フォーカス+細胞の基準線レベル（放射線非照射、0Gy試料におけるレベルと等価）に対する比率を低下させる。誤差バーは3つの独立した実験からの平均値の標準誤差（S.E.M.）を示す。
【０４０５】
実施例18：DIDS処理はAID発現初代ヒト慢性リンパ性白血病（CLL）細胞において優先的にホスホ-H2AXフォーカスのレベル増加をもたらす
初代ヒトCLL患者由来細胞を、日常的臨床モニタリング時に採取した末梢血から得られた。初代末梢血試料を、日常的なBD Vacutainer CPT Cell Separation Tubes（Becton Dickinson）中への静脈穿刺により採取した。試料を遠心沈降して赤血球（RBC）を分離し、次いで倒置して単核細胞をそれら自体の血漿中に再懸濁した。試料を採血した施設において室温で終夜保存し、次いで分析施設に配送業者により輸送した。各試料をAID発現状態について逆転写PCR（RT-PCR）により試験し、ヒトAID mRNAの存在を検出した（実施例11参照）。次いで、試料をAID+（検出可能なレベルのAID mRNAを示すもの）およびAID-（背景を上回る検出可能なAID mRNAを示さないもの）群に分類した。異なるAID+およびAID-試料からの複数の独立培養物を、10％FBSに加えて0μMまたは30μM DIDSのいずれかを含む標準RPMI-1640培地中で開始した。2日間の培養後、各培養/条件からの細胞をパラホルムアルデヒドを用いて固定し、顕微鏡カバーガラスに封入し、弱界面活性剤で洗浄することにより透過化処理し、DNA二本鎖切断マーカーであるホスホル-H2AX（一次抗体：cat. No. A300-081A、Bethyl Laboratories；1：400希釈）の免疫蛍光検出のために処理した。染色後、細胞をNikon 90i直立落射蛍光顕微鏡を用いて撮像し、各試料について100個の個々の核を撮像した。核DNAを4',6-ジアミジノ-2-フェニルインドール（DAPI）で対比染色した。1〜2個（低）、3〜10個（中）、または10個超（高）のホスホル-H2AXフォーカスを示す細胞の平均パーセンテージを図23AおよびBに示す。誤差バーは4つの独立したAID-（白抜きのバー）試料および5つの独立したAID+試料の培養物（塗りつぶしたバー）の平均値の標準誤差（S.E.M.）を表す。これらのデータは、DIDSがAID媒介性ゲノムDNA二本鎖切断（DSB）の修復を阻害することを示している。
【０４０６】
実施例19：DIDS処理はAID+初代ヒトCLL細胞において優先的にアポトーシスをもたらす
初代ヒトCLL患者由来細胞を、日常的臨床モニタリング時に採取した末梢血から得られた。初代末梢血試料を、日常的なBD Vacutainer CPT Cell Separation Tubes中への静脈穿刺により採取した。試料を遠心沈降して赤血球（RBC）を分離し、次いで倒置して単核細胞をそれら自体の血漿中に再懸濁した。試料を採血した施設で室温で終夜保存し、次いで分析施設に配送業者により輸送した。各試料をAID発現状態について逆転写PCR（RT-PCR）により試験し、ヒトAID mRNAの存在を検出した（実施例11参照）。次いで、試料をAID+（検出可能なレベルのAID mRNAを示すもの）およびAID-（背景を上回る検出可能なAID mRNAを示さないもの）群に分類した。異なるAID+およびAID-試料からの複数の独立培養物を、10％FBSに加えて0μMまたは30μM DIDSのいずれかを含む標準RPMI-1640培地中で開始した。3日間の培養後、細胞をパラホルムアルデヒドで固定し、顕微鏡カバーガラスに封入し、弱界面活性剤で洗浄することにより透過化処理し、アポトーシスマーカーである活性化カスパーゼ3（AC3）（一次抗体：cat. No. ab13847、Abcam；1：100希釈）の免疫蛍光検出のために処理した。核DNAを4',6-ジアミジノ-2-フェニルインドール（DAPI）で対比染色した。染色後、細胞をNikon 90i直立落射蛍光顕微鏡を用いて撮像した。AC3について陽性染色を示す細胞の比率をAID+（図24、塗りつぶしたバー）およびAID-試料（図24、白抜きのバー）について示す。誤差バーは4つの独立したAID-試料および5つの独立したAID+試料の培養物の平均値の標準誤差（S.E.M.）を表す。30μM DIDSで処理したAID陽性細胞は、より高い比率のAC3陽性細胞を示す。
【０４０７】
実施例20：AID発現、およびAID発現の原発性ヒト慢性リンパ性白血病予後との関連
AID発現は、原発性ヒト慢性リンパ性白血病における全般的疾患の悪化に関連する。8名の個人のAID+および8名の個人のAID-原発性ヒトCLL試料を、高白血球（WBC）数（58,000個/μlを超える）に基づいて選択した。次いで、これらを診断時の年齢（診断時年齢）の平均値および中央値について、ならびに処置について解析した。AID+試料は診断時により低い平均年齢（63.75対68歳）および年齢中央値（62.5対68.5歳）を示した（表3）。さらに、AID+患者の4/8が処置を受けた一方、AID-患者の1/8が処置を受けた。
【０４０８】
（表３）AID発現を分析したヒトCLL試料
2014527036.tif 000046
【０４０９】
実施例21：マウスモデルにおけるAIDのインビボ試験
DIDSのインビボでの有効性を試験するために、AID+/+（C57BL/6）またはAID-/-マウス（Muramatsu et al. et al., 2000上記）のいずれかにDIDS（10mg/kgまたは50mg/kg）を1週間に1回の間隔で投与し、第1週に完全フロイントアジュバント（CFA）中のジニトロフェノール結合キーホールリンペットヘモシアニン（DNP-KLH）で免疫化してリンパ球活性化を刺激し、4週間後にDNP-KLH（不完全フロイントアジュバント、IFA中）で追加免疫した。合計7週間後（図25A）、マウスを安楽死させた。群のサイズはn＝5であった。対照群またはDIDS処置群のいずれにおいても、未処置対照群に比べて明白な毒性の徴候を示す動物はなかった。5週間後、AID+/+マウスはAID-/-マウスよりもわずかに大きい体重増加を示したが、この効果はDIDS曝露とは無関係で、0mg/kg対照および50mg/kg実験コホートで同等の影響が見られた（図25B）。これについて、マウスを1週間に1回秤量し、データは5匹のマウスの体重における平均変化比率を表し、誤差バーはS.E.M.を示す。
【０４１０】
7週間の試験ウィンドウ後に、処置および対照動物からの組織を固定し、切断し、ヘマトキシリンおよびエオシン（H&E）染色後に分析した。脾切片の分析により、未処置およびDIDS処置動物の胚中心（GC）構造に肉眼的な解剖学的異常または相違は見られず、AID+/+マウスとAID-/-対照との間にも差は見られなかった。これらのデータは、少なくとも50mg/kgまでのDIDSは、AID+/+またはAID-/-マウスのいずれにおいても、有意な毒性または脾臓の生理学における一般的異常を誘導しないことを示唆している。DIDSがAIDに関連するB細胞特異的表現型を誘導するかどうかを調べるために、DIDS処置したAID+/+およびAID-/-マウスからの骨髄、脾臓、および末梢血を、B220+CD19+ B細胞の存在について、フローサイトメトリーにより分析した（図26）。10μMおよび50μMで処置したAID+/+マウス両方の骨髄でB220+CD19+ B細胞のわずかな（25％）減少が観察されたが、AID+/+またはAID-/-マウスのいずれでも脾B細胞のパーセンテージに一貫した差は見られなかった。これに対し、10μMおよび50μM DIDSはいずれも、循環Bリンパ球の有意な（9〜11分の1）減少を、特にAID+/+マウスで誘導したが、AID-/-マウスでは誘導しなかった。図26において、DNP-KLHで免疫化し、0、10、または50mg/kg DIDSで処置した、AID-/-およびAID+/+マウスからの骨髄、脾臓、および末梢血の終点フローサイトメトリードットプロット分析を示す。プロットはB220（y軸）およびCD19（x軸）の発現について染色したリンパ球ゲートにおける細胞の集団を表す。各プロットの右上角の数字は各分析のB220+/CD19+細胞のパーセンテージを示す。早期/前胚中心から後胚中心へのB細胞成熟の進行を下に示す。
【０４１１】
これらのデータは、インビボでは、全身DIDS処置が成熟した、後胚中心B細胞に選択的に影響をおよぼしたが、初期または前胚中心B細胞には無視できるほどの影響しかなかったことを示唆している。これは、AIDおよびDIDSの組み合わせ効果によって誘導される相乗的細胞毒性を示す、本明細書に記載の細胞培養データと一致している。重要なことに、AID+/+またはAID-/-コホートのいずれにおいても、DIDS処置動物で明白な非B細胞毒性を示すものはなかった。合わせて考えると、これらのデータは、DIDSのインビボ投与がAID発現B細胞、すなわち、胚中心反応を起こしているものまたはAIDを異所的に発現しているものを特異的に感受性にすることを強く示している。
【０４１２】
実施例22：エプスタイン-バーウイルスにより形質転換した末梢ヒトBリンパ球におけるAID発現分析
エプスタイン-バーウイルスにより形質転換した末梢ヒトBリンパ球由来細胞株GM05881、GM07323、およびGM13689（Corriell Institute、NIGMS Human Genetic Cell Repositoryから入手）は、ヒト非ホジキンリンパ腫をうまく表すものである。これらの細胞を2mMグルタミンおよび15％ウシ胎仔血清を補充したRPMI1640培地中で培養した。全RNAを培養した各細胞株から、またはヒト初代刺激B細胞（Stim B）から、またはヒト胎児腎細胞株HEK293Tから、標準のリボ核酸抽出法（実施例11参照）により調製した。次いで、RNAを逆転写(RT)-PCRにより、実施例11に記載のものと同じプライマーを用いてAID転写物について、およびGAPDH転写物（ローディング対照）について分析した。これらのデータは、AIDがこれらの形質転換B細胞において、精製した活性化初代B細胞におけるよりもさらに高いレベルで、高度に発現されることを示している（図27参照）。
【０４１３】
（表４）配列番号
2014527036.tif 000047
2014527036.tif 000048
2014527036.tif 000049
2014527036.tif 000050
【図１】
2014527036.tif 000065
【図２】
2014527036.tif 000066
【図３】
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【図４】
2014527036.tif 000068
【図５】
2014527036.tif 000069
【図６】
2014527036.tif 000070
【図７】
2014527036.tif 000071
【図８】
2014527036.tif 000072
【図９】
2014527036.tif 000073
【図１０】
2014527036.tif 000074
【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
2014527036.tif 000078
【図１５】
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【図１６】
2014527036.tif 000080
【図１７】
2014527036.tif 000081
【図１８】
2014527036.tif 000082
【図１９】
2014527036.tif 000083
【図２０】
2014527036.tif 000084
【図２１】
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【図２２】
2014527036.tif 000086
【図２３】
2014527036.tif 000087
【図２４】
2014527036.tif 000088
【図２５】
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【図２６】
2014527036.tif 000090
【図２７】
2014527036.tif 000091
【配列表】
2014527036000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成26年5月28日(2014.5.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（d）対象由来の生体試料を得る段階；
（e）DNA編集酵素のレベルを測定する段階；および
（f）DNA二本鎖切断修復の阻害物質の治療的有効量を、検出可能なレベルのDNA編集酵素を有している対象に投与する段階
を含む、処置の方法。
【請求項２】
DNA二本鎖切断修復の阻害物質の治療的有効量を、検出可能なレベルのDNA編集酵素を有していると判定された対象に投与する段階
を含む、処置の方法。
【請求項３】
（c）増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞を有している対象を選択する段階；および
（d）DNA二本鎖切断修復の阻害物質の治療的有効量を該対象に投与する段階
を含む、処置の方法であって、該DNA編集酵素の増大したレベルが、健常個体由来の同じ型の細胞におけるDNA編集酵素のレベルよりも高いDNA編集酵素のレベルである、方法。
【請求項４】
前記生体試料が血液細胞を含む、請求項1記載の方法。
【請求項５】
前記生体試料がB細胞を含む、請求項1記載の方法。
【請求項６】
検出可能なレベルまたは増大したレベルのDNA編集酵素を発現する前記細胞におけるDNA編集酵素のレベルが、健常対象由来の正常細胞におけるよりも統計学的に有意に高い、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法。
【請求項７】
前記DNA編集酵素が、
組換え活性化遺伝子1（RAG1）、組換え活性化遺伝子2（RAG2）、胞子形成特異的タンパク質11（SPO11）、アポリポタンパク質B mRNA編集酵素触媒ポリペプチド様（APOBEC）ファミリーメンバー、および活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）
からなる群より選択される、請求項1〜6のいずれか一項記載の方法。
【請求項８】
前記DNA編集酵素が活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）である、請求項7記載の方法。
【請求項９】
増大したレベルのAIDを発現するB細胞における活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）のレベルが、健常対象由来の非活性化B細胞において発現されるAIDのレベルよりも有意に高い、請求項8記載の方法。
【請求項１０】
前記対象がヒト対象である、請求項1〜9のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１】
前記生体試料または前記検出可能なレベルのDNA編集酵素を発現する細胞もしくは前記増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞が癌細胞である、請求項1〜10のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２】
前記対象が癌を有している、請求項1〜11のいずれか一項記載の方法。
【請求項１３】
前記生体試料または前記検出可能なレベルのDNA編集酵素を発現する細胞もしくは前記増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞が自己免疫細胞である、請求項1〜11のいずれか一項記載の方法。
【請求項１４】
前記対象が、
リンパ腫、白血病、および形質細胞腫瘍
からなる群より選択される状態を有している、請求項1〜13のいずれか一項記載の方法。
【請求項１５】
前記リンパ腫が、
非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、MALTリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、およびT細胞リンパ腫
からなる群より選択される、請求項14記載の方法。
【請求項１６】
前記白血病が、
急性リンパ芽球性白血病（ALL）、バーキット白血病、B細胞白血病、B細胞急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病（CLL）、急性骨髄性白血病（AML）、慢性骨髄性白血病（CML）、およびT細胞急性リンパ芽球性白血病（T-ALL）
からなる群より選択される、請求項14記載の方法。
【請求項１７】
前記形質細胞腫瘍が、
多発性骨髄腫、形質細胞性骨髄腫、形質細胞白血病、および形質細胞腫
からなる群より選択される、請求項14記載の方法。
【請求項１８】
前記対象が、
上皮細胞癌、結腸癌、肝癌、胃癌、腸癌、食道癌、乳癌、肺癌、および甲状腺癌
からなる群より選択される癌を有している、請求項12記載の方法。
【請求項１９】
前記対象が自己免疫疾患を有している、請求項1〜10および13のいずれか一項記載の方法。
【請求項２０】
前記自己免疫疾患が、
紅斑性狼蒼、ウィスコット-アルドリッチ症候群、自己免疫性リンパ球増殖症候群、重症筋無力症、関節リウマチ（RA）、紅斑性狼蒼性腎炎、多発性硬化症、全身性紅斑性狼蒼、円板状狼蒼、亜急性皮膚紅斑性狼蒼、凍傷状紅斑性狼蒼を含む皮膚紅斑性狼蒼、慢性関節炎、シェーグレン症候群、炎症性慢性鼻副鼻腔炎、大腸炎、セリアック病、炎症性腸疾患、バレット食道、炎症性胃炎自己免疫性腎炎、自己免疫性血管炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性心炎、自己免疫性脳炎、および自己免疫媒介性血液疾患
からなる群より選択される、請求項19記載の方法。
【請求項２１】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
Rad51、Rad51AP1、Rad51B、Rad51C、Rad51D、XRCC2、XRCC3、RAD54、RAD52、BRCA1、BRCA2、ATM、ATR、MRE11、RAD50、NBS1、WRN、BLM、RECQ4、LIG4、XRCC4、PRKDC、DCLRE1C、XRCC6、XRCC5、およびXLF
からなる群より選択される1つまたは複数の遺伝子の発現または活性を減少させる、請求項1〜20のいずれか一項記載の方法。
【請求項２２】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
小分子、タンパク質、ペプチド、抗体、抗体断片、タンパク質結合タンパク質、リボ核酸、デオキシリボ核酸、アプタマー、ペプチド核酸（PNA）、およびロックド核酸（LNA）
からなる群より選択される、請求項1〜21のいずれか一項記載の方法。
【請求項２３】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、スチルベン、スチルベノイド、またはその誘導体である、請求項1〜20のいずれか一項記載の方法。
【請求項２４】
前記スチルベンまたは前記スチルベン誘導体が、式Vの化合物、またはその立体異性体、鏡像異性体、プロドラッグ、もしくは薬学的に許容される塩である、請求項23記載の方法：
2014527036.tif 000092
式中、R1は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R2は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R3は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R4は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R5は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R6は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R7は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R8は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R9は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R10は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
Xは、C(R21)2、-C(O)N(R22)-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-SO2-、-CH(R11)CH(R12)-、-C(R11)=C(R12)-、および
2014527036.tif 000093
からなる群より選択され得；
R11は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2NC(O)R21、NC(O)OR21、NC(S)R21、NC(S)N(R22)2、NSO2R21、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R12は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2NC(O)R21、NC(O)OR21、NC(S)R21、NC(S)N(R22)2、NSO2R21、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
各R21は、水素、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群より独立して選択され得；
各R22は、水素、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群より独立して選択され得る。
【請求項２５】
前記スチルベン誘導体が4,4'ジイソチオシアノスチルベン-2,2'-ジスルホン酸（DIDS）である、請求項21記載の方法。
【請求項２６】
前記スチルベンまたは前記スチルベン誘導体が、
(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ジアセトアミド；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(2-メチルプロパンアミド)；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(2-メトキシアセトアミド)；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ジメタンスルホンアミド；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ジシクロプロパンスルホンアミド；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(プロパン-2-スルホンアミド)；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(ジメチルアミノ-スルホンアミド)；(E)-N-(4-(4-アミノスチリル)フェニル)プロパン-2-スルホンアミド；(E)-1,1'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(3-メチルチオ尿素)；(E)-1,1'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(3-イソプロピルチオ尿素)；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)アセトアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)イソブチルアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-2-メトキシアセトアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)メタンスルホンアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)シクロプロパンスルホンアミド；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)プロパン-2-スルホンアミド；N'-(4-{(E)-2-[4-(ジメチルアミノ)フェニル]-1-エテニル}フェニル)-N,N-ジメチルスルファミド；(E)-1-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-3-メチルチオ尿素；(E)-1-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-3-イソプロピルチオ尿素；(E)-1-シクロプロピル-3-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)チオ尿素；(E)-1-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-3-メチル尿素；(E)-1-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)-3-イソプロピル尿素；(E)-1-シクロプロピル-3-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)尿素；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-アセトアミドベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-イソブチルアミドベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(2-メトキシアセトアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(シクロプロパンスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(1-メチルエチルスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-アセトアミドベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-イソブチルアミドベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(2-メトキシアセトアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(メチルスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(シクロプロパンスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(1-メチルエチルスルホンアミド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-シクロプロピルチオウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-エチルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジ��ル)ビス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-イソブチルアミド-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-イソブチルアミド-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-イソブチルアミド-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(2-メトキシアセトアミド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(2-メトキシアセトアミド)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(メチルスルホンアミド)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-エチルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-イソブチルアミド-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルウレイド)-2-(4-(メチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-エチルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-イソブチルアミド-2-(2-��ルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(2-メトキシアセトアミド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-メチルチオウレイド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-5-(3-イソプロピルウレイド)-2-(2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-メチルチオウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルチオウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-エチルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-6,6'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-4,4'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(N-メチルベンズアミド)；(E)-4,4'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(N-イソプロピルベンズアミド)；(E)-4,4'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(N,N-ジメチルベンズアミド)；(E)-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(モルホリノメタノン)；(E)-5-(4-ヒドロキシスチリル)ベンゼン-1,3-ジオール(3,5,4'-トリヒドロキシ-トランス-スチルベン)；およびレスベラトロール
からなる群より選択される、請求項21記載の方法。
【請求項２７】
前記スチルベンまたは前記スチルベン誘導体が、
(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(プロパン-2-スルホンアミド)；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)シクロプロパンスルホンアミド；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-N,N'-(エテン-1,2-ジイルビス(4,1-フェニレン))ビス(ジメチルアミノ-スルホンアミド)；(E)-N-(4-(4-(ジメチルアミノ)スチリル)フェニル)プロパン-2-スルホンアミド；(E)-5-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-(4-(1-メチルエチルスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホン酸)ナトリウム；(E)-5-(3-エチルウレイド)-2-(4-(2-メトキシアセトアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホン酸ナトリウム；(E)-4,4'-(エテン-1,2-ジイル)ビス(N-メチルベンズアミド)；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-シクロプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；(E)-5-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-(4-(3-イソプロピルウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；(E)-5-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-(4-(3-メチルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；6,6'-(エタン-1,2-ジイル)ビス(3-(3-イソプロピルウレイド)ベンゼンスルホネート)；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(3-イソプロピルチオウレイド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；(E)-5-アセトアミド-2-(4-(シクロプロパンスルホンアミド)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート；および(E)-5-アセトアミド-2-(4-((N,N-ジメチルスルファモイル)アミノ)-2-スルホナトスチリル)ベンゼンスルホネート
からなる群より選択される、請求項21記載の方法。
【請求項２８】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
4-メチルキナゾリン-2-カルボキサミド；ベンズ[h]イソキノリン-6-アミン；5,6-ジメチル-2-メルカプトメチルベンズイミダゾール；(E)-1-(2-ヒドロキシフェニル)-3-(ピリジン-3-イル)プロパ-2-エン-1-オン；N4-ブチル-6-クロロピリミジン-2,4-ジアミン；1-テルモプシン；6-アミノ-5-ニトロソ-2-フェニルピリミジン-4(1H)-オン；および4-(2-アミノ-4-ニトロフェニルアミノ)フェノール
からなる群より選択される、請求項20記載の方法。
【請求項２９】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
7-アザインドール-3-カルボキシアルデヒド；2-アミノ-4-フェニルフェノール；3-(1-メチル-3-ピロリジニル)インドール；1-メチル-[1,2,4]トリアゾロ[4,3-a]キノロン；2-アミノ-5-ニトロ-1H-ベンズイミダゾール；2-(5-ニトロ-2-フルフリリデン)アミノエタノール-N-オキシド；ニフラトロン；α-メルカプト-N,2-ナフチルアセトアミド；1-テルモプシン；N4-ブチル-6-クロロ-2,4-ピリミジンジアミン；2-(2-ヒドロキシ-6-プロパン-2-イルオキシ-シクロヘキシル)酢酸；6-アミノ-5-ニトロソ-2-フェニル-1H-ピリミジン-4-オン；4-アミノ-2-ヒドロキシフェニル)アルソン酸；スピロ[1,2-ジヒドロインデン-3,5'-イミダゾリジン]-2',4'-ジオン；N〜4〜-(4-メトキシフェニル)-6-メチルピリミジン-2,4-ジアミン；2-アミノ-9-ペンチル-3H-プリン-6-チオン；2-(4-メトキシフェニル)-3-(ピリジン-3-イル)プロパ-2-エンニトリル；2-クロロピリミジン-4,6-ジカルボキサミド；2-アミノ-3H-フェノキサジン-3-オン；2-メチル-N-ベンジル-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-アミン；4-(ベンジルアミノ)-2-メチル-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン；2-アミノ-1-ナフタレンスルホン酸；N-sec-ブチル-3-メチルベンズアミド；ベンズ[h]イソキノリン-6-アミン；および2-(2-メチルシクロヘキシリデン)ヒドラジンカルボキサミド
からなる群より選択される、請求項20記載の方法。
【請求項３０】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が抗体またはポリペプチドであり、該抗体または該ポリペプチドが、抗体の抗原結合断片またはタンパク質結合タンパク質を含む、請求項1〜20のいずれか一項記載の方法。
【請求項３１】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
miRNA、shRNA、siRNA、amiRNA、dsRNA、アンチセンスRNA、またはリボザイム
からなる群より選択されるRNAi物質である、請求項1〜20のいずれか一項記載の方法。
【請求項３２】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項1〜31のいずれか一項記載の方法。
【請求項３３】
治療的物質を投与することをさらに含む、請求項1〜32のいずれか一項記載の方法。
【請求項３４】
検出可能なレベルまたは増大したレベルを有していることが疑われる前記対象から得られた生体試料中のDNA編集酵素ポリペプチド、mRNA、または活性のレベルを測定することにより、検出可能なレベルまたは増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞を有している該対象を特定する、請求項1〜33のいずれか一項記載の方法。
【請求項３５】
増大したレベルを有していることが疑われる前記対象から得られた生体試料中のDNA編集酵素ポリペプチド、mRNA、または活性のレベルを測定すること、および、そのレベルを、健常対象から得られた生体試料中で見られるDNA編集酵素ポリペプチド、mRNA、または活性のレベルと比べることにより、検出可能なレベルまたは増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞を有している該対象を特定し、試験試料中のDNA編集酵素ポリペプチド、mRNA、または活性の量の増加により、DNA二本鎖切断修復の阻害物質での処置を必要とする対象が示される、請求項1〜34のいずれか一項記載の方法。
【請求項３６】
前記DNA編集酵素ポリペプチドのレベルを測定することが、
ウェスタンブロット、免疫沈降、酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）、放射性免疫測定法（RIA）、サンドイッチアッセイ法、タンパク質インサイチューアレイ、免疫組織学的染色、ラジオイムノメトリックアッセイ法、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ法、インサイチュー免疫測定法、沈降反応、免疫蛍光測定法、定量的インサイチュータンパク質分析（AQUA）、質量分析、および免疫電気泳動アッセイ法
からなる群より選択される1つまたは複数のアッセイ法を用いることを含む、請求項34または35記載の方法。
【請求項３７】
前記DNA編集酵素ポリペプチドのレベルを測定することがアッセイ法を用いることを含み、該アッセイ法が、抗体、抗体断片、タンパク質結合タンパク質、または、該DNA編集酵素ポリペプチドに結合するペプチドを用いる、請求項34〜36のいずれか一項記載の方法。
【請求項３８】
前記抗体または前記抗体断片がモノクローナル抗体である、請求項34〜37のいずれか一項記載の方法。
【請求項３９】
前記抗体、前記抗体断片、前記タンパク質結合タンパク質、または、前記DNA編集酵素ポリペプチドに結合するペプチドを、検出可能な標識で標識する、請求項34〜38のいずれか一項記載の方法。
【請求項４０】
前記DNA編集酵素mRNAのレベルを測定することが、
RT-PCR、定量的RT-PCR、ハイブリダイゼーションアッセイ法、ノーザンブロット、マイクロアレイに基づく発現解析、転写増幅、自家持続配列複製、ハイスループット配列決定法、およびRNA-Seq
からなる群より選択される1つまたは複数のアッセイ法を用いることを含む、請求項34または35記載の方法。
【請求項４１】
前記DNA編集酵素活性の活性を測定することが、
ハイブリダイゼーション、ハイスループット配列決定法、エクソーム配列決定法、蛍光インサイチューハイブリダイゼーション（FISH）、PCR、およびゲノム配列決定法
からなる群より選択される1つまたは複数のアッセイ法を用いて、ゲノムまたはその一部の全突然変異状態を判定することを含み、正常な突然変異状態よりも2％またはそれ以上大きい突然変異状態がDNA編集酵素の活性を示す、請求項1〜40のいずれか一項記載の方法。
【請求項４２】
前記活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）の活性を測定することが、
ハイブリダイゼーション、ハイスループット配列決定法、エクソーム配列決定法、蛍光インサイチューハイブリダイゼーション（FISH）、PCR、およびゲノム配列決定法
からなる群より選択される1つまたは複数のアッセイ法を用いて、標的遺伝子であるIGH、BCL6、MYC、BCL11A、CD93、PIM1、および/またはPAX5における高頻度突然変異の状態を判定することを含む、請求項35、36、または41のいずれか一項記載の方法。
【請求項４３】
前記活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）の活性を測定することが、ホスホ-H2AXアッセイ法、53BP1アッセイ法、またはRAD51アッセイ法を用いることを含む、請求項35または36記載の方法。
【請求項４４】
細胞死を引き起こす方法であって、
（e）細胞にDNA編集酵素の有効量を投与する段階；および
（f）その後、段階（e）の細胞をDNA二本鎖切断修復の阻害物質と接触させる段階
を含み、それにより細胞死を引き起こす、方法。
【請求項４５】
細胞を細胞死に対して感受性にさせる方法であって、
（g）DNA二本鎖切断修復の阻害物質を用いて細胞を細胞死に対して感受性にさせるために、対象にDNA編集酵素の治療的有効量を投与する段階；および
（h）その後、該対象にDNA二本鎖切断修復の阻害物質を投与する段階
を含む、方法。
【請求項４６】
ポリペプチド、DNA編集酵素をコードする核酸、および、DNA編集酵素をコードする核酸を含むベクター
からなる群より選択される形態で前記DNA編集酵素を投与する、請求項44または45記載の方法。
【請求項４７】
前記DNA編集酵素が、
組換え活性化遺伝子1（RAG1）、組換え活性化遺伝子2（RAG2）、胞子形成特異的タンパク質11（SPO11）、アポリポタンパク質B mRNA編集酵素触媒ポリペプチド様（APOBEC）ファミリーメンバー、および活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）
からなる群より選択される、請求項44〜46のいずれか一項記載の方法。
【請求項４８】
前記DNA編集酵素が活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）である、請求項44〜47のいずれか一項記載の方法。
【請求項４９】
試験作用物質がDNA二本鎖切断修復の阻害物質であるかどうかを判定する方法であって、
（a）DNA編集酵素を発現する細胞を試験作用物質と接触させる段階；および
（b）段階（a）の細胞の細胞生存度を決定する段階
を含み、細胞生存度の減少により、該試験作用物質がDNA二本鎖切断修復の阻害物質であることが示される、方法。
【請求項５０】
（c）DNA編集酵素を発現しない細胞を前記試験作用物質と接触させる段階；
（d）段階（c）の細胞の細胞生存度を決定する段階；および
（e）段階（b）の生存細胞の比率を段階（d）の生存細胞の比率で割ることにより比を求める段階
をさらに含み、
0.8未満の比により、該試験作用物質がDNA二本鎖切断修復の阻害物質であることが示される、請求項49記載の方法。
【請求項５１】
前記DNA編集酵素を発現する細胞が、AIDを発現する細胞である、請求項49または50記載の方法。
【請求項５２】
前記AIDを発現する細胞が、刺激されたB細胞である、請求項51記載の方法。
【請求項５３】
前記細胞が癌細胞である、請求項49〜52のいずれか一項記載の方法。
【請求項５４】
前記細胞が、DNA編集酵素をコードする核酸ベクターでトランスフェクトされている、請求項49〜53のいずれか一項記載の方法。
【請求項５５】
前記細胞が、CH12-F3、3T3、CH12F3、Caco-2、CCRF-CEM、CHO、CH12-F3、COS-7、HCT 116、HEK 293、HL-60、HepG2、Jurkat、KG-1、K-562、MCF-7、MDCK、MG-63、Mo-B、MOLT-4、Ramos（RA 1）、およびU2-OSからなる群より選択される細胞株である、請求項49〜54のいずれか一項記載の方法。
【請求項５６】
前記細胞が自己免疫細胞である、請求項49〜55のいずれか一項記載の方法。
【請求項５７】
Xがナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛である、式XXIVの化合物、その立体異性体またはプロドラッグ：
2014527036.tif 000094
。
【請求項５８】
Xがナトリウムである、請求項57記載の化合物。
【請求項５９】
式VIIIの化合物、その立体異性体、プロドラッグ、または薬学的に許容される塩：
2014527036.tif 000095
。
【請求項６０】
式Xの化合物、その立体異性体、プロドラッグ、または薬学的に許容される塩：
2014527036.tif 000096
。
【請求項６１】
Xがナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛である、式XXVの化合物、その立体異性体、またはプロドラッグ：
2014527036.tif 000097
。
【請求項６２】
Xがナトリウムである、請求項61記載の化合物。
【請求項６３】
Xがナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛である、式XXXIの化合物、その立体異性体、またはプロドラッグ：
2014527036.tif 000098
。
【請求項６４】
Xがナトリウムである、請求項63記載の化合物。
【請求項６５】
Xがナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛である、式XXXIIの化合物、その立体異性体、またはプロドラッグ：
2014527036.tif 000099
。
【請求項６６】
Xがナトリウムである、請求項65記載の化合物。
【請求項６７】
Xがナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛である、式XXXIIIの化合物、その立体異性体、またはプロドラッグ：
2014527036.tif 000100
。
【請求項６８】
Xがナトリウムである、請求項67記載の化合物。
【請求項６９】
Xがナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛である、式XXXIVの化合物、その立体異性体、またはプロドラッグ：
2014527036.tif 000101
。
【請求項７０】
Xがナトリウムである、請求項69記載の化合物。
【請求項７１】
Xがナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、バリウム、または亜鉛である、式XXXVの化合物、その立体異性体、またはプロドラッグ：
2014527036.tif 000102
。
【請求項７２】
Xがナトリウムである、請求項71記載の化合物。
【請求項７３】
検出可能なレベルのDNA編集酵素を有していると判定された対象を処置するための、DNA二本鎖切断修復の阻害物質の使用。
【請求項７４】
前記対象が、
（c）対象由来の生体試料を得ること；および
（d）DNA編集酵素のレベルを測定すること
によって、検出可能なレベルのDNA編集酵素を有していると判定される、請求項73記載の使用。
【請求項７５】
対象を処置するための、DNA二本鎖切断修復の阻害物質の使用であって、
方法が、
（c）増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞を有している対象を選択する段階；および
（d）DNA二本鎖切断修復の阻害物質の治療的有効量を該対象に投与する段階
を含み、該DNA編集酵素の増大したレベルが、健常個体由来の同じ型の細胞におけるDNA編集酵素のレベルよりも高いDNA編集酵素のレベルである、使用。
【請求項７６】
前記生体試料が血液細胞を含む、請求項73記載の使用。
【請求項７７】
前記生体試料がB細胞を含む、請求項73記載の使用。
【請求項７８】
検出可能なレベルまたは増大したレベルのDNA編集酵素を発現する前記細胞におけるDNA編集酵素のレベルが、健常対象由来の正常細胞におけるよりも統計学的に有意に高い、請求項73〜77のいずれか一項記載の使用。
【請求項７９】
前記DNA編集酵素が、
組換え活性化遺伝子1（RAG1）、組換え活性化遺伝子2（RAG2）、胞子形成特異的タンパク質11（SPO11）、アポリポタンパク質B mRNA編集酵素触媒ポリペプチド様（APOBEC）ファミリーメンバー、および活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）
からなる群より選択される、請求項73〜78のいずれか一項記載の使用。
【請求項８０】
前記DNA編集酵素が活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）である、請求項79記載の使用。
【請求項８１】
増大したレベルの活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）を発現するB細胞におけるAIDのレベルが、健常対象健常対象由来の非活性化B細胞において発現されるAIDのレベルよりも有意に高い、請求項80記載の使用。
【請求項８２】
前記対象がヒト対象である、請求項73〜81のいずれか一項記載の使用。
【請求項８３】
前記生体試料または前記検出可能なレベルのDNA編集酵素を発現する細胞もしくは前記増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞が癌細胞である、請求項73〜82のいずれか一項記載の使用。
【請求項８４】
前記対象が癌を有している、請求項73〜83のいずれか一項記載の使用。
【請求項８５】
前記生体試料または前記検出可能なレベルのDNA編集酵素を発現する細胞もしくは前記増大したレベルのDNA編集酵素を発現する細胞が自己免疫細胞である、請求項73〜84のいずれか一項記載の使用。
【請求項８６】
前記対象が、
リンパ腫、白血病、および形質細胞腫瘍
からなる群より選択される状態を有している、請求項73〜85のいずれか一項記載の使用。
【請求項８７】
前記リンパ腫が、
非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、MALTリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、およびT細胞リンパ腫
からなる群より選択される、請求項86記載の使用。
【請求項８８】
前記白血病が、
急性リンパ芽球性白血病（ALL）、バーキット白血病、B細胞白血病、B細胞急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病（CLL）、急性骨髄性白血病（AML）、慢性骨髄性白血病（CML）、およびT細胞急性リンパ芽球性白血病（T-ALL）
からなる群より選択される、請求項86記載の使用。
【請求項８９】
前記形質細胞腫瘍が、
多発性骨髄腫、形質細胞性骨髄腫、形質細胞白血病、および形質細胞腫
からなる群より選択される、請求項86記載の使用。
【請求項９０】
前記対象が、
上皮細胞癌、結腸癌、肝癌、胃癌、腸癌、食道癌、乳癌、肺癌、および甲状腺癌
からなる群より選択される癌を有している、請求項86記載の使用。
【請求項９１】
前記対象が自己免疫疾患を有している、請求項73〜82および85のいずれか一項記載の使用。
【請求項９２】
前記自己免疫疾患が、
紅斑性狼蒼、ウィスコット-アルドリッチ症候群、自己免疫性リンパ球増殖症候群、重症筋無力症、関節リウマチ（RA）、紅斑性狼蒼性腎炎、多発性硬化症、全身性紅斑性狼蒼、円板状狼蒼、亜急性皮膚紅斑性狼蒼、凍傷状紅斑性狼蒼を含む皮膚紅斑性狼蒼、慢性関節炎、シェーグレン症候群、炎症性慢性鼻副鼻腔炎、大腸炎、セリアック病、炎症性腸疾患、バレット食道、炎症性胃炎自己免疫性腎炎、自己免疫性血管炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性心炎、自己免疫性脳炎、および自己免疫媒介性血液疾患
からなる群より選択される、請求項91記載の使用。
【請求項９３】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
Rad51、Rad51AP1、Rad51B、Rad51C、Rad51D、XRCC2、XRCC3、RAD54、RAD52、BRCA1、BRCA2、ATM、ATR、MRE11、RAD50、NBS1、WRN、BLM、RECQ4、LIG4、XRCC4、PRKDC、DCLRE1C、XRCC6、XRCC5、およびXLF
からなる群より選択される1つまたは複数の遺伝子の発現または活性を減少させる、請求項73〜92のいずれか一項記載の使用。
【請求項９４】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、
小分子、タンパク質、ペプチド、抗体、抗体断片、タンパク質結合タンパク質、リボ核酸、デオキシリボ核酸、アプタマー、ペプチド核酸（PNA）、およびロックド核酸（LNA）
からなる群より選択される、請求項73〜93のいずれか一項記載の使用。
【請求項９５】
前記DNA二本鎖切断修復の阻害物質が、スチルベン、スチルベノイド、またはその誘導体である、請求項73〜93のいずれか一項記載の使用。
【請求項９６】
前記スチルベンまたは前記スチルベン誘導体が、式Vの化合物、またはその立体異性体、鏡像異性体、プロドラッグ、もしくは薬学的に許容される塩である、請求項95記載の使用：
2014527036.tif 000103
式中、R1は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R2は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R3は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R4は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R5は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R6は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R7は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R8は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R9は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
R10は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、置換されていてもよい直鎖または分枝C1〜C10アルキル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルケニル、置換されていてもよい直鎖または分枝C2〜C10アルキニル、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、および置換されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され得；
Xは、C(R21)2、-C(O)N(R22)-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-SO2-、-CH(R11)CH(R12)-、-C(R11)=C(R12)-、および
2014527036.tif 000104
からなる群より選択され得；
R11は、水素、ハロゲン、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2NC(O)R21、NC(O)OR21、NC(S)R21、NC(S)N(R22)2、NSO2R21、NO2、N