(57)【要約】本発明は、生物学的試料中に存在する高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するための改善された免疫親和性法を提供する。他の態様において、本発明は、アミロイドタンパク質に関連する疾患を診断するための方法を提供する。また、本発明は、免疫グロブリン製剤の投与を含む治療に反応する可能性が高い候補者を特定するための方法も提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物学的試料中に存在する高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するための方法であって、
（ａ）前記生物学的試料を適切な条件下で複数のアミロイド抗原と接触させて、
（ｉ）アミロイド抗原および非特異的抗体を含む複合体、ならびに
（ｉｉ）アミロイド抗原および高アビディティ抗アミロイド抗体を含む複合体、
を形成するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）で形成された前記アミロイド抗原複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄して、アミロイド抗原および非特異的抗体を含む少なくとも１つの複合体を解離するステップと、
（ｃ）残留複合体の存在またはレベルを検出するステップと、
を含む、前記方法。
【請求項２】
前記生物学的試料がチオフィリック（ｔｈｉｏｐｈｉｌｉｃ）クロマトグラフィーで調製された免疫グロブリン組成物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記非特異的抗体が低アビディティ抗アミロイド抗体である、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
生物学的試料中に存在する高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するための方法であって、
（ａ）前記生物学的試料をチオフィリック樹脂と接触させて、前記抗アミロイド抗体に結合させるステップと、
（ｂ）前記抗体を非変性ｐＨで前記チオフィリック樹脂から溶出して、溶出物を形成するステップと、
（ｃ）前記溶出物をアミロイド抗原と接触させて、前記アミロイド抗原および前記抗アミロイド抗体を含む複合体を形成するステップと、
（ｄ）前記複合体の存在またはレベルを検出するステップと、
を含む、前記方法。
【請求項５】
前記ステップ（ｃ）で形成された前記複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄するステップをさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
アミロイド関連疾患または状態の治療の候補者である対象を特定するための方法であって、
（ａ）前記対象に由来する生物学的試料を適切な条件下で複数のアミロイド抗原と接触させて、
（ｉ）アミロイド抗原および非特異的抗体を含む複合体、ならびに
（ｉｉ）アミロイド抗原および高アビディティ抗アミロイド抗体を含む複合体、
を形成するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）で形成された前記アミロイド抗原複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄して、アミロイド抗原および低アビディティ抗アミロイド抗体を含む少なくとも１つの複合体を解離するステップと、
（ｃ）残留複合体のレベルを検出するステップと、
（ｄ）前記抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、前記対象が免疫グロブリン製剤の投与を含む治療から利益を得るかどうかを決定するステップと、
を含む、前記方法。
【請求項７】
前記治療が免疫グロブリン製剤の投与を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記治療が身体的活動または社会的活動を含む、請求項６または請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記治療がコリンエステラーゼ阻害剤、グルタミン酸部分拮抗薬、または精神医学的薬物を含む、請求項６〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記生物学的試料がチオフィリッククロマトグラフィーで調製された免疫グロブリン組成物である、請求項６〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記非特異的抗体が低アビディティ抗アミロイド抗体である、請求項６〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記高アビディティ抗アミロイド抗体が、βアミロイド（Ａβ；Ａベータ）、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ；アミリン）、α−シヌクレイン（ＳＮＣＡ）、主要プリオンタンパク質（ＰｒＰ）、ハンチンチン（ＨＤ）、カルシトニン（ＣＣＰ）、心房性ナトリウム利尿因子（ＡＮＦ）、アポリポタンパク質ＡＩ（アポ−ＡＩ）、血清アミロイドＡタンパク質（ＳＡＡ）、メディンアミロイド（乳脂肪球−ＥＧＦ因子８タンパク質；ＭＦＧ−Ｅ８の断片）、プロラクチン（ＰＲＬ）、トランスサイレチン（ＡＴＴＲ）、リゾチームＣ（１，４−β−Ｎ−アセチルムラミダーゼＣ）、β２ミクログロブリン（β２Ｍ）、ゲルゾリン（ＡＧＥＬ）、形質転換成長因子β誘導タンパク質ｉｇ−ｈ３（βｉｇ−ｈ３；ケラトエピセリン）、シスタチンＣ（ＣＳＴ３）、免疫グロブリン軽鎖（ＡＬ）、およびポリグルタミン反復を有するアミロイドタンパク質からなる群から選択されるアミロイドタンパク質に特異的である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記抗アミロイド抗体がアミロイドタンパク質モノマーを特異的に認識する、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗アミロイド抗体がアミロイドタンパク質オリゴマーを特異的に認識する、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗アミロイド抗体がアミロイドタンパク質原線維を特異的に認識する、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗アミロイド抗体が抗βアミロイド抗体である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
免疫グロブリン製剤の投与を含む治療の候補者である対象を特定するための方法であって、
（ａ）前記生物学的試料をチオフィリック樹脂と接触させて、該試料中に存在する抗アミロイド抗体に結合させるステップと、
（ｂ）前記抗体を非変性ｐＨで前記チオフィリック樹脂から溶出して、溶出物を形成するステップと、
（ｃ）前記溶出物をアミロイド抗原と接触させて、前記アミロイド抗原および前記抗アミロイド抗体を含む複合体を形成するステップと、
（ｄ）前記複合体の存在またはレベルを検出するステップと、
（ｅ）前記抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、前記対象が免疫グロブリン製剤の投与を含む治療から利益を得るかどうかを決定するステップと、
を含む、前記方法。
【請求項１８】
前記治療が免疫グロブリン製剤の投与を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記治療が身体的活動または社会的活動を含む、請求項１７または請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記治療がコリンエステラーゼ阻害剤、グルタミン酸部分拮抗薬、または精神医学的薬物を含む、請求項１７〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ステップ（ｃ）で形成された前記複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄するステップをさらに含む、請求項１７〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記対象がアミロイドタンパク質に関連する疾患を有すると診断されている、請求項６〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記疾患が、アルツハイマー病、２型糖尿病、パーキンソン病、伝染性海綿状脳症、ハンチントン病、甲状腺髄様癌、心不整脈、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、大動脈中膜アミロイド、プロラクチノーマ、家族性アミロイド多発ニューロパチー、遺伝性非ニューロパチー性全身性アミロイドーシス、透析関連アミロイドーシス、フィンランド型アミロイドーシス、格子状角膜ジストロフィー、脳アミロイド血管症、脳アミロイド血管症（アイスランド型）、および全身性ＡＬアミロイドーシスからなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記疾患がアルツハイマー病である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
対象においてアミロイドタンパク質に関連する疾患を診断するための方法であって、
（ａ）前記対象に由来する生物学的試料を適切な条件下で複数のアミロイド抗原と接触させて、
（ｉ）アミロイド抗原および非特異的抗体を含む複合体、ならびに
（ｉｉ）アミロイド抗原および高アビディティ抗アミロイド抗体を含む複合体、
を形成するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）で形成された前記アミロイド抗原複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄して、アミロイド抗原および非特異的抗体を含む少なくとも１つの複合体を解離するステップと、
（ｃ）残留複合体のレベルを検出するステップと、
（ｄ）前記抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、前記対象を診断するステップと、
を含む、前記方法。
【請求項２６】
前記生物学的試料がチオフィリッククロマトグラフィーで調製された免疫グロブリン組成物である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記非特異的抗体が低アビディティ抗アミロイド抗体である、請求項２５または請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
対象においてアミロイドタンパク質に関連する疾患を診断するための方法であって、
（ａ）前記生物学的試料をチオフィリック樹脂と接触させて、抗アミロイド抗体に結合させるステップと、
（ｂ）前記抗体を非変性ｐＨで前記チオフィリック樹脂から溶出して、溶出物を形成するステップと、
（ｃ）前記溶出物をアミロイド抗原と接触させて、前記アミロイド抗原および前記抗アミロイド抗体を含む複合体を形成するステップと、
（ｄ）前記複合体の存在またはレベルを検出するステップと、
（ｅ）前記抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、前記対象を診断するステップと、
を含む、前記方法。
【請求項２９】
前記ステップ（ｃ）で形成された前記複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄するステップをさらに含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記疾患がアルツハイマー病、２型糖尿病、パーキンソン病、伝染性海綿状脳症、ハンチントン病、甲状腺髄様癌、心不整脈、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、大動脈中膜アミロイド、プロラクチノーマ、家族性アミロイド多発ニューロパチー、遺伝性非ニューロパチー性全身性アミロイドーシス、透析関連アミロイドーシス、フィンランド型アミロイドーシス、格子状角膜ジストロフィー、脳アミロイド血管症、脳アミロイド血管症（アイスランド型）、および全身性ＡＬアミロイドーシスからなる群から選択される、請求項２５〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記疾患がアルツハイマー病である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
治療有効量の免疫グロブリン製剤を前記対象に投与することをさらに含む、請求項６〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記治療が身体的活動または社会的活動を含む、請求項６〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記治療がコリンエステラーゼ阻害剤、グルタミン酸部分拮抗薬、または精神医学的薬物を含む、請求項６〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
対象におけるアミロイドタンパク質に関連する疾患の進行の予後を提供するための方法であって、
（ａ）前記対象に由来する生物学的試料を適切な条件下で複数のアミロイド抗原と接触させて、
（ｉ）アミロイド抗原および非特異的抗体を含む複合体、ならびに
（ｉｉ）アミロイド抗原および高アビディティ抗アミロイド抗体を含む複合体、
を形成するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）で形成された前記アミロイド抗原複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄して、アミロイド抗原および非特異的抗体を含む少なくとも１つの複合体を解離するステップと、
（ｃ）残留複合体のレベルを検出するステップと、
（ｄ）前記抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、前記疾患の進行の予後を提供するステップと、
を含む、前記方法。
【請求項３６】
前記生物学的試料がチオフィリッククロマトグラフィーで調製された免疫グロブリン組成物である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記非特異的抗体が低アビディティ抗アミロイド抗体である、請求項３５または請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
対象におけるアミロイドタンパク質に関連する疾患の進行の予後を提供するための方法であって、
（ａ）前記生物学的試料をチオフィリック樹脂と接触させて、抗アミロイド抗体に結合させるステップと、
（ｂ）前記抗体を非変性ｐＨで前記チオフィリック樹脂から溶出して、溶出物を形成するステップと、
（ｃ）前記溶出物をアミロイド抗原と接触させて、前記アミロイド抗原および前記抗アミロイド抗体を含む複合体を形成するステップと、
（ｄ）前記複合体の存在またはレベルを検出するステップと、
（ｅ）前記抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、前記疾患の進行の予後を提供するステップと、
を含む、前記方法。
【請求項３９】
前記ステップ（ｃ）で形成された前記複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄するステップをさらに含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
アミロイドタンパク質に関連する疾患の治療の予後を提供するための方法であって、
（ａ）前記対象に由来する生物学的試料を適切な条件下で複数のアミロイド抗原と接触させて、
（ｉ）アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む複合体、ならびに
（ｉｉ）アミロイド抗原および高アビディティ抗アミロイド抗体を含む複合体、
を形成するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）で形成された前記アミロイド抗原複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄して、アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む少なくとも１つの複合体を解離するステップと、
（ｃ）残留複合体のレベルを検出するステップと、
（ｄ）前記抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、前記疾患の治療の予後を提供するステップと、
を含む、前記方法。
【請求項４１】
前記生物学的試料が全血漿またはその画分である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記生物学的試料がチオフィリッククロマトグラフィーで調製された免疫グロブリン組成物である、請求項４０または請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記非特異的抗体が低アビディティ抗アミロイド抗体である、請求項４０〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
アミロイドタンパク質に関連する疾患の治療の予後を提供するための方法であって、
（ａ）前記生物学的試料をチオフィリック樹脂と接触させて、抗アミロイド抗体に結合させるステップと、
（ｂ）前記抗体を非変性ｐＨで前記チオフィリック樹脂から溶出して、溶出物を形成するステップと、
（ｃ）前記溶出物をアミロイド抗原と接触させて、前記アミロイド抗原および前記抗アミロイド抗体を含む複合体を形成するステップと、
（ｄ）前記複合体の存在またはレベルを検出するステップと、
（ｅ）前記抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、前記疾患の治療の予後を提供するステップと、
を含む、前記方法。
【請求項４５】
前記ステップ（ｃ）で形成された前記複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄するステップをさらに含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記生物学的試料が全血漿またはその画分である、請求項４４または請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するための生物学的試料を調製するための方法であって、
（ａ）前記対象に由来する生物学的試料を適切な条件下で複数のアミロイド抗原と接触させて、
（ｉ）アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む複合体、ならびに
（ｉｉ）アミロイド抗原および高アビディティ抗アミロイド抗体を含む複合体、
を形成するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）で形成された前記アミロイド抗原複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄して、アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む少なくとも１つの複合体を解離するステップと、
を含む、前記方法。
【請求項４８】
前記生物学的試料がチオフィリッククロマトグラフィーで調製された免疫グロブリン組成物である、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記非特異的抗体が低アビディティ抗アミロイド抗体である、請求項４７または請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するための生物学的試料を調製するための方法であって、
（ａ）前記生物学的試料をチオフィリック樹脂と接触させて、前記抗アミロイド抗体に結合させるステップと、
（ｂ）前記抗体を非変性ｐＨで前記チオフィリック樹脂から溶出して、溶出物を形成するステップと、
（ｃ）前記溶出物をアミロイド抗原と接触させて、前記アミロイド抗原および前記抗アミロイド抗体を含む複合体を形成するステップと、
を含む、前記方法。
【請求項５１】
前記ステップ（ｃ）で形成された前記複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄するステップをさらに含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
カオトロピック剤およびチオフィリッククロマトグラフィー吸着剤からなる群から選択される少なくとも１つを含む、生物学的試料中に存在する高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するためのキット。
【請求項５３】
カオトロピック剤およびチオフィリッククロマトグラフィー吸着剤の双方を含む、請求項５２に記載のキット。
【請求項５４】
生物学的試料中に存在する高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するためのキットを製造するための、カオトロピック剤および／またはチオフィリッククロマトグラフィー吸着剤の使用。
【請求項５５】
生物学的試料中に存在する高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するためのキットを製造するための、カオトロピック剤およびチオフィリッククロマトグラフィー吸着剤の組み合わせの使用。
【請求項５６】
前記抗アミロイド抗体が、βアミロイド（Ａβ；Ａベータ）、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ；アミリン）、α−シヌクレイン（ＳＮＣＡ）、主要プリオンタンパク質（ＰｒＰ）、ハンチンチン（ＨＤ）、カルシトニン（ＣＣＰ）、心房性ナトリウム利尿因子（ＡＮＦ）、アポリポタンパク質ＡＩ（アポ−ＡＩ）、血清アミロイドＡタンパク質（ＳＡＡ）、メディンアミロイド（乳脂肪球−ＥＧＦ因子８タンパク質；ＭＦＧ−Ｅ８の断片）、プロラクチン（ＰＲＬ）、トランスサイレチン（ＡＴＴＲ）、リゾチームＣ（１，４−β−Ｎ−アセチルムラミダーゼＣ）、β２ミクログロブリン（β２Ｍ）、ゲルゾリン（ＡＧＥＬ）、形質転換成長因子β誘導タンパク質ｉｇ−ｈ３（βｉｇ−ｈ３；ケラトエピセリン）、シスタチンＣ（ＣＳＴ３）、免疫グロブリン軽鎖（ＡＬ）、およびポリグルタミン反復を有するアミロイドタンパク質からなる群から選択されるアミロイドタンパク質に特異的である、請求項１７〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
前記抗アミロイド抗体がアミロイドタンパク質モノマーを特異的に認識する、請求項１〜５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５８】
前記抗アミロイド抗体がアミロイドタンパク質オリゴマーを特異的に認識する、請求項１〜５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５９】
前記抗アミロイド抗体がアミロイドタンパク質原線維を特異的に認識する、請求項１〜５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６０】
前記抗アミロイド抗体が抗βアミロイド抗体である、請求項１〜５９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６１】
前記生物学的試料がヒト由来である、請求項１〜６０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６２】
前記カオトロピック剤がチオシアネート塩である、請求項１〜６１のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
序文
アミロイドβペプチド（Ａβ）のミスフォールディングおよび凝集は、アルツハイマー病（ＡＤ）の中心的な病因である。ヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）レパートリーは、ワクチン接種または受動免疫化の不在下で発生するＡβペプチドに対する内因性抗体を含む。内因性抗Ａβ抗体活性は、様々な年齢の正常成人およびＡＤを有する患者の血液中で検出されている（Ｗｅｋｓｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ  Ｇｅｒｏｎｔｏｌ．，３７：９４３−９４８（２００２）（非特許文献１）、Ｈｙｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ  Ｎｅｕｒｏｌ．，４９：８０８−８１０．５（２００１）（非特許文献２）、Ｍｒｕｔｈｉｎｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ａｇｉｎｇ．，２５：１０２３−１０３２（２００４）（非特許文献３）、Ｎａｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄ．，３：２９−３９（２００３）（非特許文献４）、Ｓｏｈｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ．，１４：３８７９−３８８３（２００９）（非特許文献５））。静注用免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）として公知のヒト血漿由来抗体製剤は、高レベルの内因性抗アミロイド抗体を含有することが報告されており、ＡＤの有望な治療法として研究されている（Ｄｏｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．，７５：１４７２−１４７４（２００４）（非特許文献６）、Ｈｙｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ  Ｎｅｕｒｏｌ．，４９：８０８−８１０．５（２００１）（非特許文献２）、Ｍｒｕｔｈｉｎｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ａｇｉｎｇ．，２５：１０２３−１０３２（２００４）（非特許文献３））。
【０００２】
公開されている研究は、ＡＤ患者と高齢正常対照との対比において、抗Ａβ抗体の相対力価の広く分散した推定値を提示している。標準ＥＬＩＳＡ法による無処理血漿標本の初期研究は、Ａβモノマーに対する内因性抗体のより低い力価が高齢対応非認知症対照よりもＡＤ患者に認められるとしている（Ｗｅｋｓｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ  Ｇｅｒｏｎｔｏｌ．，３７：９４３−９４８（２００２）（非特許文献１））。その後の研究は、低ｐＨでＧタンパク質カラムから溶出した血漿免疫グロブリンに対して実施したＥＬＩＳＡ（Ａｋｅｒｓｔｒoｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．，２６１：１０２４０−１０２４７（１９８６）（非特許文献７））に基づき、ＡＤ患者における循環抗Ａβモノマー抗体の同等または増加した力価を報告している（Ｍｒｕｔｈｉｎｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ａｇｉｎｇ，２５：１０２３−１０３２（２００４）（非特許文献３））。この方法で得られるより高い力価は、全血漿のアッセイでは検出されず、かつＧタンパク質精製過程で酸性化により抗原から解放されたときに測定可能な、結合した抗アミロイド抗体のプールの存在を反映すると仮定された。しかしマウスモデルでは、ポリクローナルＩｇＧの低ｐＨへの暴露は、抗体の部分変性をもたらし、見掛け上の抗Ａβ抗体力価を人為的に大きく増加させる（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＢＭＣ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，８：２２（２００７）（非特許文献８））。したがって、Ｇタンパク質クロマトグラフィーおよび酸溶出によりヒト血漿から単離されたＩｇＧを用いたアッセイは、人為的に上昇した抗アミロイド活性の測定値をもたらす。
【０００３】
内因性抗Ａβ抗体活性の測定は、Ａβの凝集形態で線状ネオエピトープならびに立体配座ネオエピトープを認識する、複数のクラスのヒト抗体が存在することによりさらに複雑になる。これまでの報告は、Ａβ原線維（Ｏ'Ｎｕａｌｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７６：７０７１−７０７８（２００６）（非特許文献９））、Ａβオリゴマー（Ｍｏｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．，２８０：１７４５８−１７４６３（２００５）（非特許文献１０）、Ｒｅｌｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓ  ａｎｄ  Ｄｅｍｅｎｔｉａ，３：Ｓ１９６，Ｘ（２００８）（非特許文献１１）、Ｏ'Ｎｕａｌｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４７：１２２５４−１２２５６（２００８）（非特許文献１２））、およびＡβモノマーの立体配座エピトープ（Ｂａｕｍｋｅｔｎｅｒ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔ  Ｓｃｉ．，１５：４２０−４２８（２００６）（非特許文献１３））に対する内因性ヒト抗体を同定している。他のタイプのアミロイド結合性抗体、さらにはＡβに対する触媒抗体が報告されている（Ｔａｇｕｃｈｉ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．，２８４：４７１４−４７２２（２００８）（非特許文献１４））。従来のＥＬＩＳＡは、存在する抗体タイプの多様性、ならびに交差反応性および多価性などの現象を無視した場合に、総抗アミロイド活性を過小または過大に推定する可能性がある。
【０００４】
外来抗原および自己抗原の双方に対する多価抗体は、ヒトの天然抗体レパートリーの一部である（Ｄｊｏｕｍｅｒｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃａｎｄ  Ｊ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，６１：  ３５７-３６３（２００５）（非特許文献１５））。ほとんどの多価抗体は、生殖系列超可変領域を有し、一価親和性成熟抗体と比較して、その抗原に対してより低い親和性を示し、かつより柔軟な抗原結合部位を有する。これらは病原体に対する防御機構としての機能を果たすと考えられている。一部の多価抗体の興味深い特長は、穏やかな破壊的処置、例えば約４未満のｐＨまたは破壊的物質への暴露などによって、一価抗体から作成することができることである（Ｂｏｕｖｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．，１６：１６３−１７２（２００１）（非特許文献１６）、Ｄｉｍｉｔｒｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，４４：１８５４−１８６３（２００７）（非特許文献１７））。
【０００５】
抗Ａβ抗体アッセイの感度および信号対雑音比を改善する方法が記載されており、これには放射性免疫沈降アッセイ（Ｂｒｅｔｔｓｃｈｎｅｉｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．，５７：８１３−８１６（２００５）（非特許文献１８））、ならびに年齢およびＡＤに応じて血漿中の内因性ヒト抗Ａβ抗体を特徴付けるために最近使用された新規のペプチドマイクロアレイ法（Ｂｒｉｔｓｈｇｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ．，１０６：１２１４５−１２１５０（２００９）（非特許文献１９））などがある。後者の手法は、ＥＬＩＳＡと比較して改善された信号対雑音比をもたらしたが、これに全血漿を使用することは、抗Ａβ抗体測定への他の血漿タンパク質および巨大分子の作用により、問題がある可能性がある。
【０００６】
内因性抗Ａβ抗体レベルの測定の交絡のこれらおよび他の要因は、ＩＶＩＧ（静注用免疫グロブリン製剤）によるＡＤの治療の研究に対して重大な影響を有する。ＩＶＩＧは、最初、比較的低いレベルで抗Ａβモノマー抗体を含有すると報告された（Ｄｏｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．，７５：１４７２−１４７４（２００４）（非特許文献６））。この報告された抗Ａβ抗体量の少なさは、ＩＶＩＧがＡＤ患者に抗アミロイド作用を及ぼす可能性に疑問を投げ掛けた。それにもかかわらず、ＡＤ患者を対象とするＩＶＩＧのヒト臨床試験は、好ましい臨床成績、ならびに血漿中および脳脊髄液中のＡβレベルの変化をもたらした（Ｄｏｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．，７５：１４７２−１４７４（２００４）（非特許文献６）、Ｒｅｌｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．  ｏｆ  Ａｇｉｎｇ，３０：１７２８−１７３６（２００９）（非特許文献２０））。内因性抗アミロイド抗体活性は、ＡＤを対象にＩＶＩＧをテストするための最初の論理的根拠を提供はしたが、これがこの疾患に対するＩＶＩＧの作用の主要なまたは独自の作用機序であるかどうかは確実には知られていない。真の内因性抗アミロイド抗体が生物学的に有意義な作用を与えるのに十分なレベルでヒト血漿中に存在するかどうかという疑問は、まだ解明されていない。
【０００７】
このように、ＡＤおよび他のアミロイド関連障害の病因および治療において内因性抗体が果たしうる役割をいっそうよく理解するために、ヒト血漿における抗アミロイド活性をアッセイするための改善された方法が必要とされる。本発明は、アミロイド特異的抗体の検出および定量化、ひいてはアミロイドの検出に関連する問題に対処する改善された検出方法を提供する。したがって、本発明は、アミロイドタンパク質に関連する疾患のより正確な診断、アミロイド関連治療の患者選定、および他のアミロイド関連適用例を提供する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｗｅｋｓｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ  Ｇｅｒｏｎｔｏｌ．，３７：９４３−９４８（２００２）
【非特許文献２】Ｈｙｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ  Ｎｅｕｒｏｌ．，４９：８０８−８１０．５（２００１）
【非特許文献３】Ｍｒｕｔｈｉｎｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ａｇｉｎｇ．，２５：１０２３−１０３２（２００４）
【非特許文献４】Ｎａｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄ．，３：２９−３９（２００３）
【非特許文献５】Ｓｏｈｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ．，１４：３８７９−３８８３（２００９）
【非特許文献６】Ｄｏｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．，７５：１４７２−１４７４（２００４）
【非特許文献７】Ａｋｅｒｓｔｒoｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．，２６１：１０２４０−１０２４７（１９８６）
【非特許文献８】Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＢＭＣ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，８：２２（２００７）
【非特許文献９】Ｏ'Ｎｕａｌｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７６：７０７１−７０７８（２００６）
【非特許文献１０】Ｍｏｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．，２８０：１７４５８−１７４６３（２００５）
【非特許文献１１】Ｒｅｌｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓ  ａｎｄ  Ｄｅｍｅｎｔｉａ，３：Ｓ１９６，Ｘ（２００８）
【非特許文献１２】Ｏ'Ｎｕａｌｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４７：１２２５４−１２２５６（２００８）
【非特許文献１３】Ｂａｕｍｋｅｔｎｅｒ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔ  Ｓｃｉ．，１５：４２０−４２８（２００６）
【非特許文献１４】Ｔａｇｕｃｈｉ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．，２８４：４７１４−４７２２（２００８）
【非特許文献１５】Ｄｊｏｕｍｅｒｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃａｎｄ  Ｊ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，６１：  ３５７-３６３（２００５）
【非特許文献１６】Ｂｏｕｖｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．，１６：１６３−１７２（２００１）
【非特許文献１７】Ｄｉｍｉｔｒｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，４４：１８５４−１８６３（２００７）
【非特許文献１８】Ｂｒｅｔｔｓｃｈｎｅｉｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．，５７：８１３−８１６（２００５）
【非特許文献１９】Ｂｒｉｔｓｈｇｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ．，１０６：１２１４５−１２１５０（２００９）
【非特許文献２０】Ｒｅｌｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．  ｏｆ  Ａｇｉｎｇ，３０：１７２８−１７３６（２００９）
【発明の概要】
【０００９】
発明の簡単な概要
本発明は、ヒト血漿および静注用免疫グロブリン製剤中の内因性抗アミロイド抗体を調製およびアッセイするための改善された方法を提供する。これらの新規の方法は、ヒト血漿が、より低いアビディティでＡβに結合する多価抗体ならびにＡβおよびその凝集体に対して中程度ないし高アビディティを有する内因性抗アミロイド抗体を含有することを示す。
【００１０】
一態様において、本発明は、試料中に存在する高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するための方法を提供する。一部の実施形態において、この方法は、（ａ）生物学的試料を適切な条件下で複数のアミロイド抗原と接触させて、（ｉ）アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む複合体、ならびに（ｉｉ）アミロイド抗原および高アビディティ抗アミロイド抗体を含む複合体、を形成するステップと、（ｂ）ステップ（ａ）で形成されたアミロイド抗原複合体を、カオトロピック剤を含む溶液で洗浄して、アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む少なくとも１つの複合体を解離するステップと、（ｃ）残留複合体の存在またはレベルを検出するステップと、を含む。
【００１１】
一部の実施形態において、生物学的試料は、血液またはその画分（例えば、血漿または血清）である。一部の実施形態において、生物学的試料は、ステップ（ａ）の前に、チオフィリック（ｔｈｉｏｐｈｉｌｉｃ）クロマトグラフィーを用いて分離される。一部の実施形態において、生物学的試料は、ステップ（ｂ）のあとに、チオフィリッククロマトグラフィーを用いて分離される。一部の実施形態において、チオフィリッククロマトグラフィーを用いて、生物学的試料から非免疫グロブリン物質を除去して、濃縮された免疫グロブリン調製物を得る。
【００１２】
第２の態様において、本発明は、生物学的試料中に存在する高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するための方法であって、（ａ）生物学的試料をチオフィリック樹脂と接触させて、抗アミロイド抗体に結合させるステップと、（ｂ）抗体を非変性ｐＨでチオフィリック樹脂から溶出して、溶出物を形成するステップと、（ｃ）溶出物をアミロイド抗原と接触させて、アミロイド抗原および抗アミロイド抗体を含む複合体を形成するステップと、（ｄ）複合体の存在またはレベルを検出するステップと、を含む方法を提供する。
【００１３】
一部の実施形態において、生物学的試料は、血液またはその画分（例えば、血漿または血清）である。一部の実施形態において、アミロイド抗原と抗アミロイド抗体との間で形成される複合体は、複合体の存在またはレベルを検出する前に、カオトロピック塩を含有する溶液で洗浄される。
【００１４】
第３の態様において、本発明は、アミロイド関連疾患または状態の治療の候補である対象を特定するための方法を提供する。一部の実施形態において、この方法は、（ａ）対象に由来する生物学的試料を適切な条件下で複数のアミロイド抗原と接触させて、（ｉ）アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む複合体、ならびに（ｉｉ）アミロイド抗原および高アビディティ抗アミロイド抗体を含む複合体、を形成するステップと、（ｂ）ステップ（ａ）で形成されたアミロイド抗原複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄して、アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む少なくとも１つの複合体を解離するステップと、（ｃ）残留複合体のレベルを検出するステップと、（ｄ）抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、対象が免疫グロブリン製剤の投与を含む治療から利益を得るかどうかを決定するステップと、を含む。一実施形態において、治療は、免疫グロブリン製剤の投与を含む。
【００１５】
本明細書に記載の態様の一部の実施形態において、対照は、アミロイド関連疾患を有さない個人または個人の群に由来し、対照に対して増加したレベルの残留複合体は治療の候補者であることを示す。一部の実施形態において、対照は、アミロイド関連疾患を有する個人または個人の群に由来し、対照に対して類似するレベルの残留複合体は治療の候補者であることを示す。当業者は、少なくとも１つの適当な対照を選定し、適宜結果を解釈する方法を理解するであろう。
【００１６】
第４の態様において、本発明は、アミロイド関連疾患または状態の治療の候補者である対象を特定するための方法を提供する。一部の実施形態において、この方法は、（ａ）生物学的試料をチオフィリック樹脂と接触させて、試料中に存在する抗アミロイド抗体に結合させるステップと、（ｂ）抗体を非変性ｐＨでチオフィリック樹脂から溶出して、溶出物を形成するステップと、（ｃ）溶出物をアミロイド抗原と接触させて、アミロイド抗原および抗アミロイド抗体を含む複合体を形成するステップと、（ｄ）複合体の存在またはレベルを検出するステップと、（ｅ）抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、対象が免疫グロブリン製剤の投与を含む治療から利益を得るかどうかを決定するステップと、を含む。一実施形態において、治療は、免疫グロブリン製剤の投与を含む。上記に説明したように、当業者は、アミロイド関連障害を診断するための少なくとも１つの適当な対照を選定し、適宜結果を解釈する方法を理解するであろう。
【００１７】
第５の態様において、本発明は対象においてアミロイドタンパク質に関連する疾患を診断するための方法を提供する。一部の実施形態において、この方法は、（ａ）対象に由来する生物学的試料を適切な条件下で複数のアミロイド抗原と接触させて、（ｉ）アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む複合体、ならびに（ｉｉ）アミロイド抗原および高アビディティ抗アミロイド抗体を含む複合体、を形成するステップと、（ｂ）ステップ（ａ）で形成されたアミロイド抗原複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄して、アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む少なくとも１つの複合体を解離するステップと、（ｃ）残留複合体のレベルを検出するステップと、（ｄ）抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、対象を診断するステップと、を含む。一部の実施形態において、本発明は、対象においてアルツハイマー病、またはアルツハイマー病を発症する可能性を診断するための方法を提供する。上記に説明したように、当業者は、アミロイド関連障害を診断するための少なくとも１つの適当な対照を選定し、適宜結果を解釈する方法を理解するであろう。
【００１８】
第６の態様において、本発明は、対象においてアミロイドタンパク質に関連する疾患を診断するための方法を提供する。一部の実施形態においてこの方法は、（ａ）生物学的試料をチオフィリック樹脂と接触させて、抗アミロイド抗体に結合させるステップと、（ｂ）抗体を非変性ｐＨでチオフィリック樹脂から溶出して、溶出物を形成するステップと、（ｃ）溶出物をアミロイド抗原と接触させて、アミロイド抗原および抗アミロイド抗体を含む複合体を形成するステップと、（ｄ）複合体の存在またはレベルを検出するステップと、（ｅ）抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、対象を診断するステップと、を含む。上記に説明したように、当業者は、アミロイド関連障害を診断するための少なくとも１つの適当な対照を選定し、適宜結果を解釈する方法を理解するであろう。
【００１９】
第７の態様において、本発明は、対象におけるアミロイドタンパク質に関連する疾患の進行の予後を提供するための方法を提供する。一部の実施形態において、この方法は、（ａ）対象に由来する生物学的試料を適切な条件下で複数のアミロイド抗原と接触させて、（ｉ）アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む複合体、ならびに（ｉｉ）アミロイド抗原および高アビディティ抗アミロイド抗体を含む複合体、を形成するステップと、（ｂ）ステップ（ａ）で形成されたアミロイド抗原複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄して、アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む少なくとも１つの複合体を解離するステップと、（ｃ）残留複合体のレベルを検出するステップと、（ｄ）抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、疾患の進行の予後を提供するステップと、を含む。一部の実施形態において、本発明は、対象におけるアルツハイマー病の進行の予後を提供するための方法を提供する。上記に説明したように、当業者は、アミロイド関連障害の予後を提供するための少なくとも１つの適当な対照を選定し、適宜結果を解釈する方法を理解するであろう。
【００２０】
第８の態様において、本発明は、対象におけるアミロイドタンパク質に関連する疾患の進行の予後を提供するための方法を提供する。一部の実施形態においてこの方は、（ａ）生物学的試料をチオフィリック樹脂と接触させて、抗アミロイド抗体に結合させるステップと、（ｂ）抗体を非変性ｐＨでチオフィリック樹脂から溶出して、溶出物を形成するステップと、（ｃ）溶出物をアミロイド抗原と接触させて、アミロイド抗原および抗アミロイド抗体を含む複合体を形成するステップと、（ｄ）複合体の存在またはレベルを検出するステップと、（ｅ）抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、疾患の進行の予後を提供するステップと、を含む。一部の実施形態において、本発明は、対象におけるアルツハイマー病の進行の予後を提供するための方法を提供する。上記に説明したように、当業者は、アミロイド関連障害の予後を提供するための少なくとも１つの適当な対照を選定し、適宜結果を解釈する方法を理解するであろう。
【００２１】
第９の態様において、本発明は、アミロイドタンパク質に関連する疾患の治療、例えば公知のＡＤに対する療法または予防的戦略の予後を提供するための方法を提供する。一部の実施形態において、治療は、対象における免疫グロブリン製剤、例えばＩＶＩＧの投与を含んでもよい。一部の実施形態において、この方法は、（ａ）対象に由来する生物学的試料を適切な条件下で複数のアミロイド抗原と接触させて、（ｉ）アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む複合体、ならびに（ｉｉ）アミロイド抗原および高アビディティ抗アミロイド抗体を含む複合体、を形成するステップと、（ｂ）ステップ（ａ）で形成されたアミロイド抗原複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄して、アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む少なくとも１つの複合体を解離するステップと、（ｃ）残留複合体のレベルを検出するステップと、（ｄ）抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、疾患の治療の予後を提供するステップと、を含む。一部の実施形態において、本発明は、対象におけるアルツハイマー病の治療の予後を提供するための方法を提供する。上記に説明したように、当業者は、アミロイド関連障害を診断するための少なくとも１つの適当な対照を選定し、適宜結果を解釈する方法を理解するであろう。
【００２２】
第１０の態様において、本発明は、アミロイドタンパク質に関連する疾患の治療、例えば公知のＡＤに対する療法または予防的戦略の予後を提供するための方法を提供する。一部の実施形態において、治療は、対象における免疫グロブリン製剤、例えばＩＶＩＧの投与を含んでもよい。一部の実施形態において、この方法は、（ａ）生物学的試料をチオフィリック樹脂と接触させて、抗アミロイド抗体に結合させるステップと、（ｂ）抗体を非変性ｐＨでチオフィリック樹脂から溶出して、溶出物を形成するステップと、（ｃ）溶出物をアミロイド抗原と接触させて、アミロイド抗原および抗アミロイド抗体を含む複合体を形成するステップと、（ｄ）複合体の存在またはレベルを検出するステップと、（ｅ）抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、疾患の治療の予後を提供するステップと、を含む。一部の実施形態において、本発明は、対象におけるアルツハイマー病の治療の予後を提供するための方法を提供する。上記に説明したように、当業者は、アミロイド関連障害を診断するための少なくとも１つの適当な対照を選定し、適宜結果を解釈する方法を理解するであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】ヒト血漿中のＩｇＧは、空のＥＬＩＳＡウェルならびにＡβに有意に結合する。Ａβおよびブランクプレートへの相対的結合は、個別に異なる。ブランクウェルを含むプレートおよびＡβモノマーペプチド含有プレートを用いたＥＬＩＳＡにより、ヒト血漿試料（ｎ＝２３）をアッセイした。各個人について、得られる吸光度値（Ａ４５０ｎｍ）をヒストグラムにプロットする（ブランクウェル＝黒；Ａβウェル＝グレー）。
【図２】空のウェルとの結合は、ＩｇＧ分子の抗原結合領域（Ｆａｂ）を介して生じる。５個人のプールされたＩｇＧから単離された市販のＦａｂ断片、Ｆａｂ２'断片、およびＦｃ断片を、標準ＥＬＩＳＡ法により、ブランクプレートおよびアミロイド含有プレートに結合させた。結合したＦａｂ断片およびＦａｂ２'断片は、抗ヒトκ二次抗体を用いて検出し、Ｆｃ断片は、分子のＦｃ部分に特異的な抗ヒトＩｇＧ二次抗体を用いて検出した。ブランクプレートへの結合は、Ｆｃ領域ではなく、明らかにＩｇＧ分子のＦａｂ領域およびＦａｂ２'領域に媒介される。
【図３】ＩＶＩＧにおける抗Ａβ抗体の交差反応性が、抗Ａβ抗体の結合特性に対するサイログロブリンの作用によって例示される（ａ＝Ａβプレート、ｂ＝サイログロブリンの競合を含むＡβプレート、ｃ＝サイログロブリンプレート、ｄ＝サイログロブリンの競合を含むサイログロブリンプレート）。ＥＬＩＳＡ測定は、場合によって４０μｇ／ｍＬのサイログロブリンを含む、１ｍｇ／ｍＬから出発するＩＶＩＧの３倍連続希釈物を用いて、サイログロブリン（三角印）またはＡβモノマーペプチド（丸印）を含有するプレートに対して実施した。この濃度のサイログロブリンは、ＩＶＩＧにおける抗サイログロブリン抗体のサイログロブリンプレートへの結合を完全に排除し、Ａβプレートへの結合をおよそ５０％減少させる。
【図４】Ａβ４２オリゴマー含有ＥＬＩＳＡプレートに結合したＩＶＩＧ抗体のアビディティは、空のＥＬＩＳＡウェルに結合したものを上回る。アビディティを測定するために、ＩＶＩＧをＡβ４２オリゴマー含有ＥＬＩＳＡプレート、または抗原を有さないブランクプレートに結合させた。次に、表示するとおりに濃度を次第に上げたカオトロピック塩のチオシアン酸アンモニウムとともに４つ組のウェルをインキュベートし、標準ＥＬＩＳＡ法により結合ヒト抗体の量を測定した。示される結果は、２つの独立した測定の平均および標準偏差である。Ａβオリゴマーに結合する抗体は、空のウェルに結合する抗体よりも、そのリガンドに対してより高いアビディティを有する。
【図５】４Ｍチオシアネート処理は、Ａβ４２オリゴマーを含むウェルの空のウェルに対する結合比を向上させる。標準ＥＬＩＳＡ実験が示されているが、この中で黒三角印はＡβ４２オリゴマープレートへの結合を示し、黒丸印はブランクプレートへの結合を示す。白印は、４Ｍチオシアネートとのインキュベーションが後続する同じ結合実験を示す。対照である対象に由来する精製ヒトＩｇＧ（１ｍｇ／ｍＬ）を用いたＡβ４２オリゴマーのブランクプレートに対する結合比は、４Ｍチオシアネート処理を伴わない場合のおよそ３からこの処理後に７〜１０まで実質的に増加した。したがって、カオトロピック剤による処理は、空のＥＬＩＳＡウェルに結合する低アビディティ抗体と無関係に、精製ヒトＩｇＧの混合物中の高アビディティ抗Ａβオリゴマー抗体の測定を可能にする。
【図６】βメルカプトエタノールで還元し、等しい質量で装填したタンパク質試料のクーマシー染色した１０％ＳＤＳ：ＮｕＰＡＧＥゲルは、チオフィリック吸着剤上のクロマトグラフィーにより精製されたＩｇＧが、混入血漿タンパク質をほぼ完全に含まないことを示す。レーンは、（ａ）ＩＶＩＧ、（ｂ）Ｇタンパク質上のクロマトグラフィーにより精製されたＩｇＧ、（ｃ）チオフィリック吸着剤上のクロマトグラフィーにより精製されたＩｇＧ、および（ｄ）元の血漿試料である。また、分子量マーカー（Ｍ）、およびそれらのサイズ（ｋＤ）も示される。
【図７】全血漿およびチオフィリッククロマトグラフィーまたはＧタンパク質クロマトグラフィーにより血漿から単離された抗体のＡβオリゴマーＳＰＲセンサーへの結合である。ＳＰＲセンサグラムは、Ａβ４２オリゴマーセンサーを用いて、任意反応単位（ｙ軸）を時間の関数として示す。試料注入は、０から開始し１２５秒で終了した。ＳＰＲ緩衝液の通液は２５０秒まで継続し、その後センサーを除去し再構成した。血漿の結合反応を示す赤のラインは、他の血漿タンパク質および巨大分子からの干渉の結果、ほぼゼロである。下部（ピンク）のラインは、Ｇタンパク質および酸溶出を用いて単離されたＩｇＧに対する反応を示す。この結果は、多価性が誘導され、その結果対照センサーへの結合が増加したため、マイナスとなっている。上部（青）のラインは、チオフィリック吸着剤を用いて調製されたＩｇＧの反応である。最初の１２５秒は、総抗オリゴマー抗体結合活性（高親和性および低親和性）を反映し、一方緩衝液洗浄後のセンサグラムの部分（１２５秒以降）は、高親和性結合活性を有する抗体に主として起因する。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
発明の詳細な説明
序文
アルツハイマー病の診断は、この疾患が、特に早期には、他の様々な精神的状態と共通する症状を示すことから困難である。確定診断は、脳に形成されたＡβのもつれやプラークの可視化によって達成することができる。同様に、他のアミロイド関連疾患および状態は、コンゴレッド法を用いてアミロイド沈着を染色することができる組織生検を用いて一般に診断される（Ｌｉｎｋｅ，Ｒ．Ｐ．（２００６）"Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｍｉｓｆｏｌｄｉｎｇ，ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  ｄｉｓｅａｓｅｓ"（Ｖ．Ｎ．  Ｕｖｅｒｓｋｙ  ａｎｄ  Ａ．Ｌ．  Ｆｉｎｋ，  ｅｄｓ．）、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，Ｖｏｌｕｍｅ  ４，（Ｍ．Ｚ．Ａｔａｓｓｉ，  ｅｄ．）第２３９頁〜第２７６頁第１１．１章；Ｓｐｒｉｎｇｅｒ）。しかしながら、脳や心臓などの器官の生検実施に伴うリスクおよび合併症により、これはアルツハイマー病、クロイツフェルト・ヤコブ病、および心アミロイドーシスを含む様々なアミロイド関連疾患の診断に対する現実的な解決策ではない。
【００２５】
有利にも、本発明は、血液および血漿試料中のアミロイドタンパク質の特異的検出および／または定量化により、アミロイド関連疾患を診断するための、またはその診断を支援するための、非侵襲的方法を提供する。特定の実施形態において、本明細書において提供される方法は、アミロイド関連障害の診断を支援するために有用であり、この方法は第２の診断方法を用いることをさらに含む。例えば、本明細書において提供される方法は、他の診断ツールと組み合わせて使用して、アミロイドタンパク質関連障害に対する診断または予後を提供することができる。一実施形態において、本明細書において提供される方法は、認識力テスト、精神病歴、精神状態試験、神経心理テスト、家族歴、ＣＴスキャン、脳波記録法（ＥＥＧ）、陽電子放射型断層撮影法（ＰＥＴ）スキャン、単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）スキャン、磁気共鳴分光画像法（ＭＲＳＩ）、他の障害を除外するためのテスト（例えば、理学的検査、胸部Ｘ線、磁気共鳴画像法、心電図（ＥＣＧ））などを含むがこれらに限定されない、アルツハイマー病の診断に使用されるテストまたは評価と組み合わせて使用することができる。これらの方法は、低アビディティおよび／または多価抗体のアミロイドタンパク質への非特異的結合など、これらのタンパク質の検出に関連する大きな障害を克服する
【００２６】
同様に、本発明は、治療法の決定を支援する方法も提供する。本明細書において提供される高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するための非侵襲的方法は、アミロイド関連障害のための療法の指定および／または投与を可能にする。例えば、本発明は、アミロイド関連障害のための治療の利益を得る可能性が高い患者を特定するための方法、アミロイド関連障害を診断するための方法、アミロイド関連障害の予後を提供するための方法を提供する。したがって、特定の実施形態において、この方法は、アミロイド関連障害のための治療（例えば、ＩＶＩＧ投与または他の公知の療法）を対象に指定および／または投与するステップをさらに含む。
【００２７】
ヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）レパートリーは、免疫化の不在下で発生するβアミロイド（Ａβ）に対する内因性抗体を含む。これらの抗体は、アルツハイマー病（ＡＤ）などのアミロイド関連疾患の診断および治療のために使用することができる。本発明は、血漿中またはプール免疫グロブリン製剤中、例えばＩＶＩＧ（プールされた血漿に由来する免疫グロブリン製剤）中のこれらの抗体の測定を複雑にする問題に対処する。これらの問題には、空のＥＬＩＳＡウェルへの比較的高いバックグラウンド結合、他の血漿タンパク質に起因するアッセイの干渉、および多価性による交絡作用が含まれる。また、抗体特異性に疑問を差し挟むこの交絡を招く問題に対処することは、アミロイド特異的抗体を用いたアミロイド検出の信頼性も改善する。
【００２８】
本発明は、他にもある態様のなかでも特に、血漿中の抗Ａβ抗体の測定を改善する方法を提供する。抗Ａβ抗体測定の正確性を混乱させる可能性がある１つの因子は、ヒト血漿中にブランクＥＬＩＳＡプレート（ならびにＡβプレートの未充填部分）に結合する多価ＩｇＧが存在することである。ブランクプレート結合は個別に異なり、標準ＥＬＩＳＡブロッキング剤またはバックグラウンド除去法によって効果的に排除されない。
【００２９】
ヒトの血漿または血清中の抗Ａβ抗体の定量化は、ほとんどの場合、モノマーまたは凝集（オリゴマーまたは原線維）Ａβペプチドを含有するＥＬＩＳＡプレート上で実施されている。この方法でアッセイされる正常ヒトドナー由来の血漿試料は、ブランクＥＬＩＳＡウェル（いかなる添加された抗原も有さないウェル）に有意に結合する。従来のブロッキング剤、例えば脱脂乳、ウシ胎仔血清、アルブミン、および市販のブロッキング調製物の使用にもかかわらず、多大な非特異的ブランクプレート結合が生じる（Ｋｌａｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｍｅｔｈ．１８７，第２６３頁〜第２６９頁）。
【００３０】
ブランクＥＬＩＳＡウェルに結合する能力を有する抗体の存在は、空のウェルに対して得られる観測吸光度値が、アミロイド含有プレートに対して得られる値と同程度またはそれ以上となりうることから、個別の抗Ａβオリゴマー抗体の測定を複雑にする（図１）。
【００３１】
ブランクプレート結合は、抗原−抗体複合体を適切なモル濃度のカオトロピック塩溶液に暴露して、特異的抗Ａβ抗体の結合を著しく減少させずに、弱く結合した多価抗体を除去することによって著しく減少さられることが、本明細書において明らかにされる。
【００３２】
抗Ａβ抗体測定における不正確性の別の原因である可能性があるものは、全血漿中に存在する他のタンパク質および巨大分子による結合干渉である。ＩｇＧを血漿から単離することで、この干渉を排除することができるが、Ｇタンパク質クロマトグラフィーによる単離時の低ｐＨへの暴露は多価性を発生させ、これは抗Ａβ抗体の測定値を人為的に上昇させる。
【００３３】
本明細書において提供される改善された方法を使用した表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）測定は、Ａβに対して比較的低アビディティの多価抗体、ならびにＡβモノマーおよび凝集体（例えば、オリゴマー、線維）上の立体配座エピトープに対して中程度ないし高アビディティの抗体をヒト血液（およびＩＶＩＧ）が含有することを裏付ける。
【００３４】
単離時にＩｇＧを変性条件に暴露することを回避することで、より正確な結合測定値を得ることができることが本明細書において明らかにされる。チオフィリッククロマトグラフィーを受けたＩｇＧのアッセイは、出発物質から本質的に変化していない抗アミロイド抗体の力価をもたらし、これは人為的な多価性が生成されていないことを示す。対照的に、Ｇタンパク質カラムからの酸溶出を受けたＩｇＧは、人為的に抗アミロイド活性が１０倍以上にも増加する。チオフィリック吸着剤カラムを通して生成されたＩｇＧは、抗原に結合した抗体を含みうる。したがって、測定力価は遊離抗体のものである。チオフィリッククロマトグラフィーは、そのうちの一部が全血漿中の抗アミロイド抗体の測定に干渉する血漿タンパク質の大部分を除去する。全血漿を用いたマイクロアレイ法などの測定は、様々な年齢および病状により個別に異なりうる他のタンパク質の存在によって混乱する可能性がある（Ｂｒｉｔｓｈｇｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．，１０６：１２１４５−１２１５０（２００９））。
【００３５】
上記に説明したように、ヒト抗アミロイド抗体の測定に伴う複雑性は、内因性アミロイド特異的ＩｇＧが実際に存在するのかどうか、あるいはかかる抗体が天然多価抗体であるのか、または人為的に誘導された多価抗体であるのかについて、不確実性を生み出してきた。本明細書において提示される結果は、親和性クロマトグラフィーによって、内因性ヒト抗アミロイド抗体がＩＶＩＧから実際に単離できることを示す。これらの抗体は、百ナノモル単位の範囲の結合定数で、βアミロイドの線状エピトープまたは立体配座エピトープのいずれかに対する特異性を示す。これは、同じＳＰＲセンサーを用いてマウスモノクローナル抗アミロイド抗体について測定されたＫｄと同じ桁内であり、この活性が非特異的多価抗体−抗原相互作用により生じたものである場合に予想されるよりも相当に高い結合アビディティを表す。
【００３６】
さらに、βアミロイド親和性カラムおよびＩＡＰＰ原線維親和性カラムに連続的に通して単離された抗原線維抗体は、モノマーおよびオリゴマーのアミロイド抗原、ならびにブランクプレートとのより低い交差反応性を示す。これらの結果は、アミロイドの集合段階によって異なる立体配座ネオエピトープが、ヒトＩｇＧレパートリーによって認識されることを示唆する。
【００３７】
本明細書において、高アビディティ内因性抗アミロイド抗体は、血漿由来ヒトＩｇＧの総質量の０．１％未満に相当することが示される。個々の血漿試料に対して、より高いＩＶＩＧのアミロイド結合能力は、多数の血漿ドナーからのその由来に固有のＩＶＩＧのクローン多様性を反映しうる。抗Ａβ活性の増加の別の原因は、ＩＶＩＧ製造に伴う化学的過程および物理的過程の結果生じる、より特異性の低い結合である可能性がある。
【００３８】
自然自己抗体は、自己抗原の取り込みを調節し、特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞反応を促進することができる（Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３１：２６６０−２６６８（２００１））。多価抗Ａβ自己抗体および／または穏やかな変性条件への暴露により作成されたものは、循環しているまたは中枢神経系中のＡβペプチドレベルに影響を与えることができる。したがって、内因性抗Ａβ抗体は、ＡＤ患者におけるＩＶＩＧの治療効果に関与しうる。
【００３９】
有利にも、本明細書において提供される方法は、高アビディティ抗アミロイド抗体の特異的検出および定量化を可能にする。具体的には、本明細書において提供される方法は、高親和性、例えば当該アミロイドタンパク質に対して特異的に産生したモノクローナル抗体の範囲のＫｄで、当該アミロイドタンパク質に結合する抗体の異種集団の検出および定量化を可能にする。
【００４０】
定義
本明細書で使用する「カオトロピック剤」とは、タンパク質の三次元構造を不安定にする化学物質を指す。特定の実施形態において、カオトロピック剤は、イオン性カオトロープ（例えば、カオトロピックイオンまたはカオトロピック塩）あるいは非イオン性カオトロープを指しうる。カオトロピック塩の非限定的な例には、グアニジン塩、例えば塩化グアニジン、硝酸グアニジン、チオシアン酸グアニジン、チオシアネート塩、例えばチオシアン酸アンモニウム、チオシアン酸カリウム、チオシアン酸ナトリウム、チオシアン酸リチウム、チオシアン酸カルシウム、チオシアン酸グアニジン、過塩素酸塩、例えば過塩素酸アンモニウム、過塩素酸ナトリウム、過塩素酸リチウム、過塩素酸マグネシウム、過塩素酸カルシウム、ヨウ化物塩、例えばヨウ化アンモニウム、ヨウ化カリウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化リチウム、ヨウ化マグネシウム、ヨウ化カルシウム、塩素酸塩、例えば塩素酸ナトリウム、塩素酸リチウム、塩素酸マグネシウム、塩素酸カルシウムなどがある。非イオン性カオトロープには、尿素およびチオ尿素があるが、これらに限定されない。
【００４１】
クロマトグラフィーおよび類似する親和性に基づく方法に関連して、「チオフィリック」とは、高濃度の特定の塩における、タンパク質、とりわけ免疫グロブリンに対する硫黄含有リガンドに基づく親和性選択を指す。タンパク質は、塩の除去により溶出することができる。チオフィリック親和性クロマトグラフィー（ＴＡＣ）は、異なるクラスおよび種の免疫グロブリンに対する広い特異性を有し、比較的穏やかな条件、材料費の削減、および広範囲の特異性により、Ａタンパク質精製またはＧタンパク質精製よりも有利である。ＴＡＣで使用するための塩の例には、硫酸アンモニウム、硫酸ナトリウム、および硫酸カリウムがあるが、他のものも一般に使用される。ＴＡＣ試薬およびゲルは、例えばＭｉｌｌｉｐｏｒｅ（登録商標）から市販されている。概説は、Ｍａｔｅｊｔｓｃｈｕｋ（２００４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４４：１９５−２０４を参照されたい。
【００４２】
用語「抗体」、「免疫グロブリン」、および同様の用語は、検体（抗原）に特異的に結合およびこれを認識する、１つまたは複数の免疫グロブリン遺伝子により実質的にコードされたポリペプチド、またはその断片を指す。認識される免疫グロブリン遺伝子には、κ、λ、α、γ、δ、ε、およびμ定常領域遺伝子、ならびに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が含まれる。軽鎖は、κまたはλのいずれかに分類される。重鎖は、γ、μ、α、δ、またはεに分類され、これはそれぞれ免疫グロブリンクラスＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥを定義する。
【００４３】
例となる免疫グロブリン（抗体）構造単位は、２対のポリペプチド鎖から構成され、各対は１つの「軽」鎖（約２５ｋＤ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤ）を有する。各鎖のＮ末端は、抗原認識に主に関与するアミノ酸約１００〜１１０以上の可変領域を画定する。可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）という用語は、それぞれこれらの軽鎖および重鎖を指す。各重鎖のＣ末端はジスルフィド結合し、抗体の定常領域を形成する。
【００４４】
用語「特異的結合」とは、非標的組成物よりも少なくとも２倍高い親和性、例えば少なくとも４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、２５倍、５０倍、または１００倍高い親和性で標的（抗原、エピトープなど）に結合する分子（例えば、標的化剤、抗体）を指す。
【００４５】
用語「抗原」、「検体」、「抗体標的」などは、本明細書において互換的に使用される。一部の例では、抗体とその標的とが相互作用する部位は、例えば、標的部位、結合相互作用部位、または「エピトープ」と定義される。一部の例では、エピトープは三次元部分である。したがって、例えば標的がタンパク質である場合、エピトープは、連続するアミノ酸から構成されていても、またはタンパク質フォールディングにより近付けられたタンパク質の異なる部分に由来するアミノ酸から構成されていてもよい（例えば、不連続エピトープ）。三次元構造を形成する他のタイプの標的分子にも同じことが当てはまる。
【００４６】
したがって、用語「アミロイド抗原」は、アミロイドのモノマー、オリゴマー、または原線維を指してもよく、あるいはその代わりにアミロイド断片または単一エピトープを指してもよい。当業者は、所定のアミロイドタンパク質または凝集体が、典型的には複数のアミロイド抗原またはエピトープを含むであろうことを理解するであろう。
【００４７】
抗体親和性は、単一の抗原決定基および抗体の単一の結合部位との間の反応の強度である。これは抗原決定基と抗体の結合部位との間に働く引力と斥力との合計である。親和性は、典型的には解離定数（ＫＤ、Ｋｄなど）に関して表される。抗原に対する抗体の親和性が高いほど、Ｋｄは低くなる。
【００４８】
本明細書で使用する用語「低親和性」および「非特異的」は、相対的な用語である。高親和性、中程度の親和性、低親和性、および親和性なしの間の区切りは、所望のストリンジェンシー、および個別に得られる親和性測定値の範囲に応じて使用者が設定してよい。典型的には、高親和性抗体のＫｄは約１０ｎＭ未満であろう。特定の実施形態では、高親和性抗体のＫｄは約１０ｎＭ未満、あるいは約９ｎＭ未満、８ｎＭ未満、７ｎＭ未満、６ｎＭ未満、５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、９００ｐＭ未満、８００ｐＭ未満、７００ｐＭ未満、６００ｐＭ未満、５００ｐＭ未満、４００ｐＭ未満、３００ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、５０ｐＭ未満、２５ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、５ｐＭ未満、１ｐＭ未満、またはそれ以下であろう。典型的には、低親和性抗体のＫｄは、約１００ｎＭを上回るであろう。特定の実施形態において、低親和性抗体のＫｄは、約１００ｎＭを上回る、あるいは約２００ｎＭを上回る、３００ｎＭを上回る、４００ｎＭを上回る、５００ｎＭを上回る、６００ｎＭを上回る、７００ｎＭを上回る、８００ｎＭを上回る、９００ｎＭを上回る、１μＭを上回る、２μＭを上回る、３μＭを上回る、４μＭを上回る、５μＭを上回る、６μＭを上回る、７μＭを上回る、８μＭを上回る、９μＭを上回る、１０μＭを上回る、またはそれ以上であろう。
【００４９】
アビディティは、多数の抗原決定基を有する抗原と多価抗体との全体的な結合強度の尺度である。アビディティは、抗体の結合価および抗原の結合価の双方に影響される。しかしながらアビディティは、個々の親和性の合計以上のものである。すなわち、親和性は単一の抗原決定基と個々の抗体結合部位との間の結合強度であり、一方アビディティは、多価抗原と抗体との間の全体的結合強度を指す。本明細書において提供される方法の実施形態において、検出される抗アミロイド抗体は、標的アミロイドタンパク質に対して高アビディティを有する。特定の実施形態において、検出される抗アミロイド抗体は、標的アミロイドエピトープに対して高アビディティおよび高親和性の双方を有する。他の実施形態において、検出される抗アミロイド抗体は、標的アミロイドタンパク質に対して高アビディティを有するが、個々のアミロイドエピトープに対して低親和性を有する。
【００５０】
本明細書で使用する「アミロイドタンパク質」は、インビボまたはインビトロで重合してクロスβ構造を形成することができるポリペプチドを指す。これらのタンパク質は、アミロイドーシスを特徴とする状態（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、クロイツフェルト・ヤコブ病など）に罹患している個人の器官および／または組織に異常に沈着する。したがって、抗アミロイド抗体は、アミロイドタンパク質を特異的に認識する抗体である。抗アミロイド抗体は、１つまたは複数のオリゴマー状態の特定のアミロイドタンパク質、例えばモノマー、ダイマー、またはオリゴマーのアミロイドタンパク質を特異的に認識する。アミロイドタンパク質の非限定的な例には、βアミロイド（Ａβ；Ａベータ）、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ；アミリン）、α−シヌクレイン（ＳＮＣＡ）、主要プリオンタンパク質（ＰｒＰ）、ハンチンチン（ＨＤ）、カルシトニン（ＣＣＰ）、心房性ナトリウム利尿因子（ＡＮＦ）、アポリポタンパク質ＡＩ（アポ−ＡＩ）、血清アミロイドＡタンパク質（ＳＡＡ）、メディンアミロイド（乳脂肪球−ＥＧＦ因子８タンパク質；ＭＦＧ−Ｅ８の断片）、プロラクチン（ＰＲＬ）、トランスサイレチン（ＡＴＴＲ）、リゾチームＣ（１，４−β−Ｎ−アセチルムラミダーゼＣ）、β２ミクログロブリン（β２Ｍ）、ゲルゾリン（ＡＧＥＬ）、形質転換成長因子β誘導タンパク質ｉｇ−ｈ３（βｉｇ−ｈ３；ケラトエピセリン）、シスタチンＣ（ＣＳＴ３）、および免疫グロブリン軽鎖（ＡＬ）がある。これらのいずれかまたは他のアミロイドタンパク質は、本明細書において提供される方法を用いることによって検出することができる。
【００５１】
本明細書で使用する「生物学的試料」とは、対象に由来する細胞または細胞集団あるいはある量の組織または流体を指す。最も多くの場合、試料は動物、例えばヒトから採取される。「生物学的試料」には、血液および血液画分（例えば、血漿、血清など）、他の生体液（例えば、尿、唾液、リンパ液、脳脊髄液（ＣＳＦ）など）、組織の切片、例えば生検試料および剖検試料、組織学的目的で採取した凍結切片、リンパ組織、培養細胞などがある。
【００５２】
本明細書で使用する用語「約」は、特定の値からプラスまたはマイナス１０％のおおよその範囲を示す。例えば、「約２０％」という表現は、１８〜２２％の範囲を包含する。本明細書で使用するとき、約は正確な量も含む。したがって、「約２０％」は、「約２０％」および「２０％」を意味する。本明細書で使用する「約」は、特定された値またはその周囲の一連の値を指す。
【００５３】
用語「用量」および「投与量」は、本明細書において互換的に使用される。用量は、投与ごとに個人に与えられる有効成分の量を指す。用量は、投与頻度、個人の体格および耐性、状態の重症度、副作用のリスク、および投与経路を含む多数の要素によって異なるであろう。当業者は、上記の要素に応じて、または治療の進展に基づいて、用量を変更してもよいことを認識するであろう。用語「剤形」は、医薬品の特定の形態を指し、投与経路により異なる。例えば、剤形は、液体、例えば注射用の生理食塩水であってもよい。
【００５４】
「治療有効」量または用量、あるいは「十分な／有効な」量または用量は、それが投与される目的の効果を生じる用量である。正確な用量は、治療の目的によって異なり、公知の技法を用いて当業者が確定することができるであろう（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ（ｖｏｌｓ．１−３，１９９２）、Ｌｌｏｙｄ，Ｔｈｅ  Ａｒｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ（１９９９）、Ｐｉｃｋａｒ，  Ｄｏｓａｇｅ  Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ（１９９９）、およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００３，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓを参照）。
【００５５】
本明細書で使用する用語「予防する」は、患者における認知的症状またはアミロイドプラークの可能性の低下または頻度の減少を指す。予防は、完全であっても、または不完全であってもよく、本発明を用いずに生じるであろうよりも少ない症状が患者に観察されてもよい。
【００５６】
用語「療法」、「治療」、および「改善」は、症状の重症度またはアミロイド凝集の量の低下、あるいは認知機能の向上を指す。本明細書で使用する用語「治療する」および「予防する」は、絶対的な用語として使用していない。治療は、いかなる発病の遅延、症状の改善、患者生存の向上、生存期間または生存率の増加なども指しうる。治療の効果は、治療を受けていない個人または個人の集合と比較することができる。
【００５７】
基準となる「対照」試料または値は、通常は試験試料と比較するための公知の基準である。例えば、試験試料を未知のアミロイド状態の患者から採取して、アミロイドーシス（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、クロイツフェルト・ヤコブ病など）を診断された患者、および／またはアミロイドーシスに罹患していない、または低い抗アミロイド抗体力価を有することがわかっている個人から採取した対照試料と比較してもよい。また、対照は、類似する病歴を有する類似する個人、例えば、アルツハイマー病患者、パーキンソン病患者、クロイツフェルト・ヤコブ病患者などの集団、または同じ年齢、体重などの集団から収集した平均値であってもよい。また、対照値は、同一の個人から、例えば、症状の発症前、様々な治療時点またはそれらの時点の前に、事前に得た試料から取得することもできる。一部の例では、対照は、１個人内または個人間での比較、例えば、抗アミロイド抗体力価と１つまたは複数の公知の抗体の力価との比較を含みうる。
【００５８】
当業者は、所定の状況でどの対照が有益であるかを理解し、対照値との比較に基づいてデータを分析することができるであろう。また、対照は、データの有意性を判断するためにも有益である。例えば、所定のパラメータに関する値が対照において大きく異なる場合、試験試料における差異は有意であるとみなされない。
【００５９】
アルツハイマー病および他のアミロイド関連障害
アミロイドタンパク質および異常タンパク質凝集体は、多数の異なる疾患および状態の一因となる。本発明は、診断および治療過程の決定に使用することができる、様々な形態のアミロイドタンパク質または一部のタンパク質凝集体に対する特異的高アビディティ自己抗体を検出するための方法を提供する。
【００６０】
アミロイド関連障害には、アルツハイマー病（ＡＤ）だけではなく、パーキンソン病、家族性アミロイド多発ニューロパチー（ＦＡＰ）、様々な形態のアミロイドーシス（例えば、老人性全身性のもの、フィンランド型のもの、アイスランド型のもの、軟髄膜のもの、家族性の内臓のもの、皮膚性のもの、透析関連のものなど）、および大動脈中膜アミロイドも含まれる。異常タンパク質凝集に関連するさらなる障害には、２型糖尿病、伝染性海綿状脳症、クロイツフェルト・ヤコブ病、ハンチントン病、甲状腺髄様癌、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、プロラクチノーマ、前頭側頭認知症、ダウン症候群、レビー小体病、および類似の疾患が含まれる。
【００６１】
したがって、本発明は、アミロイド関連障害に見られる特定の形態のアミロイドおよびアミロイド凝集体に対する自己抗体を検出および／または単離するために使用することができる。さらに、本明細書において開示される方法は、βアミロイド（Ａβ；Ａベータ）、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ；アミリン）、α−シヌクレイン（ＳＮＣＡ）、主要プリオンタンパク質（ＰｒＰ）、ハンチンチン（ＨＤ）、カルシトニン（ＣＣＰ）、心房性ナトリウム利尿因子（ＡＮＦ）、アポリポタンパク質ＡＩ（アポ−ＡＩ）、血清アミロイドＡタンパク質（ＳＡＡ）、メディンアミロイド（乳脂肪球−ＥＧＦ因子８タンパク質；ＭＦＧ−Ｅ８の断片）、プロラクチン（ＰＲＬ）、トランスサイレチン（ＡＴＴＲ）、リゾチームＣ（１，４−β−Ｎ−アセチルムラミダーゼＣ）、β２ミクログロブリン（β２Ｍ）、ゲルゾリン（ＡＧＥＬ）、形質転換成長因子β誘導タンパク質ｉｇ−ｈ３（βｉｇ−ｈ３；ケラトエピセリン）、シスタチンＣ（ＣＳＴ３）、免疫グロブリン軽鎖（ＡＬ）、ポリグルタミン反復を有するタンパク質、Ｔａｕタンパク質（Ｔａｕ）、および他のアミロイドタンパク質から形成される異常タンパク質凝集体に対する抗体の検出に適用することもできる。
【００６２】
例えば、ＡＤおよびパーキンソン病の場合にはＡβ原線維に対する特異的自己抗体の検出は、診断または危険因子の評価において使用することができる。本発明の診断方法は、医療の当業者により決定することが可能な、例えば年齢、家族歴、認知的症状などに基づきアミロイド関連障害を発症するリスクがあるとみなされる個人に適用することができる。
【００６３】
アミロイド関連障害の危険因子および症状は、熟練した医師によって最適に決定することができるであろう。これらの障害を発症するリスクは、年齢とともに上昇し、家族歴と相関する。多くの場合、絶対的に確実な診断は実現不可能と考えられる。ＡＤの観察可能な症状には、破壊的記憶喪失、問題を解決する能力の差、時間や場所についての混乱、日常的な作業完了の困難、引きこもり、および気分の変化がある。これらは疾患の理学的発現、例えばアミロイドプラーク形成の増加および脳容積の全体的減少と相関する。
【００６４】
抗アミロイド免疫グロブリンの検出および単離
低レベルの自己抗体が、所定の抗原を接種していない個人の血液中に認められる。例えば、複数の個人からプールした血漿調製物は、Ａβなどのアミロイドタンパク質に結合するＩｇＧ抗体の小画分を含む。本明細書において説明するように、抗体特異性を決定する不正確な方法および抗体単離の過酷な方法は、アミロイド特異的抗体が実際に存在するのか、あるいは人為的なものまたは非特異的相互作用を示すのかについて、不確実性を生み出してきた。
【００６５】
本発明は、様々な形態のアミロイド、例えばモノマー、オリゴマー、および原線維のアミロイドタンパク質（すなわちＡβ）に対して特異的な抗体を検出および／または単離する方法を提供する。例えば、Ａβ−特異的ＩｇＧの小集団は、穏やかなカオトロピック洗浄を用いて低親和性抗体および非特異的抗体を除去することによって、生物学的試料から単離することができる。一部の実施形態において、この方法は、まずチオフィリック親和性に基づく方法を用いて、試料中の他のタンパク質からＩｇＧを分離することと、穏やかなカオトロピック洗浄を用いて、低親和性抗体および非特異的抗体を除去することとを含む。これらのステップは、いかなる順序で実施してもよい。典型的には、生物学的試料は血漿または血清である。
【００６６】
当業者は、カオトロピック剤が、高親和性抗体の結合特異性を著しく妨害せずに、低親和性抗体または非特異的抗体の弱い結合相互作用を妨害するのに十分な量で存在すべきであることを理解するであろう。例えば、尿素はカオトロピック剤であるが、高濃度の尿素は多価性を発生させる可能性がある。これは、カオトロピック剤によって生じるあらゆるアミロイド特異的親和性は典型的には低いことから、本発明の検出方法にとって致命的ではない。
【００６７】
抗体は、標準的方法を用いて、例えば検出可能に標識された抗体結合剤、例えば抗ヒト二次抗体、抗原（例えば、Ａβ）、Ａタンパク質、Ｇタンパク質などを用いて、検出することができる。かかる方法には、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、免疫蛍光法、および当技術分野で公知の他のタンパク質検出方法（例えば、米国特許第４，３６６，２４１号、第４，３７６，１１０号、第４，５１７，２８８号、および第４，８３７，１６８号を参照）が含まれる。一般的なイムノアッセイの概説については、ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＣＥＬＬ  ＢＩＯＬＯＧＹ，ＶＯＬ．３７，Ａｓａｉ，ｅｄ．Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９３）、ＢＡＳＩＣ  ＡＮＤ  ＣＬＩＮＩＣＡＬ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ  ７ＴＨ  ＥＤＩＴＩＯＮ，  Ｓｔｉｔｅｓ  ＆  Ｔｅｒｒ，ｅｄｓ．（１９９１）も参照されたい。免疫結合アッセイ（またはイムノアッセイ）は、典型的には、抗体に特異的に結合し、しばしばそれを固定化するリガンド（例えば、アミロイド、Ａβ、または特定の形態のＡβ）を使用する。
【００６８】
イムノアッセイは多くの場合、リガンドおよび抗体によって形成された結合複合体に特異的に結合し、それを標識する標識剤も使用する。標識剤は、それ自体が抗体／検体複合体を成す部分のひとつ、例えば検出可能に標識された検体であってもよい。あるいは、標識剤は、抗体／検体複合体に特異的に結合する第３の部分、例えば別の抗体であってもよい。
【００６９】
標識剤が標識を含有する第２の抗アミロイド抗体である、競合アッセイを用いることもできる。そのとき２種類の抗体は固定化アミロイド抗原との結合で競合する。あるいは、非競合形式では、抗アミロイド抗体は標識を有さないが、この抗アミロイド抗体が由来する種、例えばヒトの抗体に特異的でありかつこの抗アミロイド抗体に結合する第２の抗体が標識される。
【００７０】
免疫グロブリン定常領域を特異的に結合することができる他のタンパク質、例えばＡタンパク質またはＧタンパク質も標識剤として使用することができる（概して、Ｋｒｏｎｖａｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１１：１４０１−１４０６（１９７３）、およびＡｋｅｒｓｔｒｏｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５：２５８９−２５４２（１９８５）を参照）。
【００７１】
アッセイ全体を通じて、毎回の試薬の配合後に、インキュベーションステップおよび／または洗浄ステップが必要となりうる。インキュベーションステップは、約５秒から数時間、例えば約５分〜約２４時間と異なってよい。しかしながら、インキュベーション時間は、アッセイ形式、抗体、溶液の量、濃度などによって異なるであろう。通常は、アッセイは、周囲温度で実施することになるが、１０℃〜４０℃など、ある温度範囲にわたって実施してもよい。
【００７２】
所望であれば、使用者は、高、中、低親和性／アビディティの区切り範囲を設定して、これらの範囲内の抗体を検出してもよい。親和性アッセイを用いて、抗体の解離定数（Ｋｄ）を測定することができる。「解離定数」という表現は、抗体の抗原に対する親和性を指す。抗体と抗原との間の結合の特異性は、抗体の解離定数（ＫＤ＝１／Ｋ、式中Ｋは親和性定数）が１μＭ未満の場合に存在し、特異性および親和性が向上すると、抗体はしばしばＫＤ＜１００ｎＭまたは＜１０ｎＭを有する。ＫＤ＝［Ａｂ−Ａｇ］／［Ａｂ］［Ａｇ］であり、式中、［Ａｂ］は抗体の平衡濃度であり、［Ａｇ］は抗原の平衡濃度であり、［Ａｂ−Ａｇ］は抗体−抗原複合体の平衡濃度である。典型的には、抗原と抗体との間の結合相互作用には、可逆的非共有結合的会合、例えば静電引力、ファン・デル・ワールス力、および水素結合が含まれる。この結合特異性を測定する方法は、単一重鎖および／または軽鎖、ＣＤＲ、融合タンパク質、または重鎖および／または軽鎖の断片に適合する。
【００７３】
得られるＡβ特異的抗体の集団は異種であるが、高親和性、例えばＡβに対して特異的に産生したモノクローナル抗体の範囲のＫｄでＡβに結合する。
【００７４】
アミロイド関連障害およびアルツハイマー病に対する療法
アミロイド関連疾患および状態、例えばＡＤの治療は、典型的には、この疾患の認知的症状および気分症状に重点を置く。早期治療および予防方法には、身体的および社会的活動、記憶ゲーム、ならびにパズルおよび問題の解決が含まれる。症状を示す個人に対する薬物療法には、コリンエステラーゼ阻害剤（アセチルコリンの減少に対処するため）、グルタミン酸部分拮抗薬（例えば、メマンチン）、および精神医学的薬物（例えば、抗精神病薬、睡眠補助薬、抗不安薬、およびβ遮断薬）が含まれる。コリンエステラーゼ阻害剤には、Ａｒｉｃｅｐ（登録商標）ｔ（塩酸ドネペジル）、Ｅｘｅｌｏｎ（登録商標）（リバスティグミン）、Ｒａｚａｄｙｎｅ（登録商標）（ガランタミン）、およびＣｏｇｎｅｘ（登録商標）（タクリン）が含まれる。
【００７５】
また、プールされた免疫グロブリン製剤がＡＤ症状の改善効果を有しうることも観察されている。ＩＶＩＧ（静注用免疫グロブリン）と称されるかかる製剤は、例えば米国特許出願第１２／７８９，３４５号（２０１０年５月２７日出願）および米国特許出願第１２／７８９，３６５号（２０１０年５月２７日出願）に記載されているように調製される。ＩＶＩＧを用いてＡＤ、パーキンソン病、および他のタンパク質凝集障害を治療する方法は、米国特許公開第２００９／０１４８４６３号および第２００９／０２２１０１７号に開示されている。
【００７６】
簡潔に述べると、ＩＶＩＧは、複数の個人に由来する静脈血をプールし、血漿画分を分離し、クロマトグラフィー、限外濾過、および透析濾過の組み合わせを用いて、ＩｇＧ免疫グロブリンを濃縮することによって作製される。ＩＶＩＧは、典型的には、静脈内注入によって投与される。
【００７７】
抗アミロイド抗体の検出のための方法
一態様において、本発明は、生物学的試料中の抗アミロイド抗体を検出するための改善された方法を提供する。例えば、本明細書において、哺乳動物の血液中に存在する高アビディティ抗アミロイド抗体の測定のための方法が提供される。一実施形態において、本発明は、生体液中に存在する凝集または非凝集アミロイドタンパク質に対する抗体の正確な定量化のための方法を提供する。これらの抗体は、アルツハイマー病（ＡＤ）を含むヒトアミロイドーシス疾患および他の神経変性障害の予測、診断、および治療のための有意な手段として浮上してきた。また、抗体は、他の哺乳動物種、特にこれらの疾患のモデルとして使用されるものにおいても産生しうる。このように、本発明は、凝集アミロイドタンパク質、ならびに検査される流体中のモノマーレベルが低い場合には未凝集アミロイドモノマーに対する抗体の定量化および特徴付けを改善する。
【００７８】
したがって、本発明は、例えば個人に由来する生物学的試料から、抗アミロイド抗体を検出する方法を提供する。典型的には、抗アミロイド抗体は、生物学的試料、例えば血清、血漿、脳脊髄液、リンパ液、尿、または他の生体液もしくは画分に対して可溶性であるだろう。しかしながら、抗アミロイド抗体は、組織生検でも検出可能である。
【００７９】
好適な方法において、生物学的試料（例えば、血液、血清、または血漿試料）が採取され、または生検が実施され、採取された生物学的試料がインビトロでテストされる。特定の実施形態において、試料中に存在する免疫グロブリンは、検出前に濃縮される。他の実施形態において、免疫グロブリンは、検出前にさらに濃縮されない。次に組織または流体は、アミロイド抗原と接触させられ、得られるいかなる免疫複合体も試料中に抗アミロイド抗体が存在することを示す。かかる検出を容易にする目的で、アミロイド抗原を放射性標識してもよく、または検出可能な標識であるエフェクタ分子、例えば蛍光標識と結合させてもよい。
【００８０】
抗アミロイド抗体ならびにアミロイドタンパク質および／または凝集体は、標準的イムノアッセイ法を用いて検出することができる。標準的方法には、例えば、ラジオイムノアッセイ、サンドイッチイムノアッセイ（ＥＬＩＳＡを含む）、免疫蛍光アッセイ、ウエスタンブロット、親和性クロマトグラフィー（固相に結合した親和性リガンド）、および標識抗体によるインサイチュー検出が含まれる。かかる使用に適した検出可能な標識には、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、電気的、光学的、または化学的手段により検出可能なあらゆる組成物が含まれる。本発明において有用な標識には、磁気ビーズ（例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ）、蛍光染料（例えば、フルオレセインイソチオシアネート、テキサスレッド、ローダミン、緑色蛍光タンパク質、など）、放射性標識（例えば、３Ｈ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、または３２Ｐ）、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、およびＥＬＩＳＡで一般に使用される他のもの）、および比色標識、例えばコロイド金または着色ガラスもしくはプラスチック（例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックス）ビーズが含まれる。一部の実施形態において、抗アミロイド抗体結合を検出するために二次検出剤（例えば、ヤギ抗ヒトＦＩＴＣ）が採用される。適用可能な技術の概要は、Ｈａｒｌｏｗ  ＆  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９８８）に記載されている。
【００８１】
生体標本から抽出した抗アミロイド抗体を測定するために現在採用されている方法は、変性条件への暴露の結果としての抗アミロイド活性の人為的な増加および損失を受ける。例えば、一部の方法は、Ａタンパク質またはＧタンパク質親和性クロマトグラフィーを用いた抗体（Ｉｇ）の濃縮時に、あるいは結合した抗原から抗体を遊離させるために、酸性化を採用する。低ｐＨへの暴露は、一部の哺乳動物免疫グロブリンを完全または部分的に変性させる。これは、機能の損失または多価性の増加につながり、これら両現象は、特異的抗アミロイド抗体のレベルの測定に有害影響を与える。有利にも、本明細書において提供される方法は、酸または他の変性条件への暴露を用いずに、Ｉｇを血漿から分離し、弱く結合した抗原分子を抗アミロイド抗体から解離する。
【００８２】
一実施形態において、本発明は、哺乳動物の血漿および他の生体液中のアミロイド形成性タンパク質に対する抗体のレベルを定量化するための方法を提供する。既存の方法とは異なり、本発明は、非特異的抗体結合、血漿巨大分子からの干渉、および精製時の免疫グロブリンの変性による結合活性の人為的発生の交絡作用を回避する。
【００８３】
例えば、内因性抗アミロイド活性を測定するために全血漿を使用する以前のアッセイは、他の未だに同定されていない血漿巨大分子からの干渉によって、人為的に変更される。有利にも、本明細書において提供される方法は、当該抗アミロイド抗体を保存する様式で、これらの未同定血漿巨大分子の干渉活性を排除する。
【００８４】
従来のガラス、金属、またはプラスチック基体上で行う測定は、抗体のアミロイドタンパク質およびアッセイプレートへの非特異的結合による影響を受ける。ヒト血漿は、アミロイド凝集体に対して低アビディティを有する比較的多量の多価抗体を含有する。かかる抗体、ならびにアッセイ基体に非特異的に結合する抗体の存在は、様々なアッセイ方法で測定された抗アミロイド活性を人為的に変更する。有利にも、本明細書において提供される方法は、結合のアビディティの差に基づいて、特異的抗体と非特異的抗体とを区別することができる。
【００８５】
カオトロピック洗浄ステップを採用する方法
一実施形態において、本発明は、哺乳動物の血漿および他の生体液中のアミロイド形成性タンパク質に対する抗体のレベルを定量化するための方法を提供する。既存の方法とは異なり、本発明は、非特異的抗体結合、血漿巨大分子からの干渉、および精製時の免疫グロブリンの変性による結合活性の人為的発生の交絡作用を回避する。
【００８６】
例えば、従来のガラス、金属、またはプラスチック基体上で行う測定は、抗体のアミロイドタンパク質およびアッセイプレートへの非特異的結合による影響を受ける。ヒト血漿は、アミロイド凝集体に対して低アビディティを有する比較的多量の多価抗体を含有する。かかる抗体、ならびにアッセイ基体に非特異的に結合する抗体の存在は、様々なアッセイ方法で測定された抗アミロイド活性を人為的に変更する。有利にも、本明細書において提供される方法は、結合のアビディティの差に基づいて、特異的抗体と非特異的抗体とを区別することができる。
【００８７】
したがって、一態様において、本発明は、試料中に存在する高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するための方法を提供する。一部の実施形態において、この方法は、（ａ）生物学的試料を適切な条件下で複数のアミロイド抗原と接触させて、（ｉ）アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む複合体、ならびに（ｉｉ）アミロイド抗原および高アビディティ抗アミロイド抗体を含む複合体、を形成するステップと、（ｂ）ステップ（ａ）で形成されたアミロイド抗原複合体を、カオトロピック剤を含む溶液で洗浄して、アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む少なくとも１つの複合体を解離するステップと、（ｃ）残留複合体の存在またはレベルを検出するステップと、を含む。
【００８８】
一実施形態において、生物学的試料は、生体液、例えば、血液、血漿、尿、リンパ液、滑液などである。他の実施形態において、生物学的試料は、組織試料または生検であってよい。好適な実施形態において、生物学的試料は、血液試料またはその画分（例えば、血漿または血漿画分）である。別の好適な実施形態において、生物学的試料は、免疫グロブリン調製物または濃縮物である。具体的な実施形態において、免疫グロブリン濃縮は、チオフィリッククロマトグラフィーによって実施される。別の特定の実施形態において、免疫グロブリン濃縮は、混合モードリガンドクロマトグラフィーによって実施される。
【００８９】
一実施形態において、検出される抗アミロイド抗体は、βアミロイド（Ａβ；Ａベータ）、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ；アミリン）、α−シヌクレイン（ＳＮＣＡ）、主要プリオンタンパク質（ＰｒＰ）、ハンチンチン（ＨＤ）、カルシトニン（ＣＣＰ）、心房性ナトリウム利尿因子（ＡＮＦ）、アポリポタンパク質ＡＩ（アポ−ＡＩ）、血清アミロイドＡタンパク質（ＳＡＡ）、メディンアミロイド（乳脂肪球−ＥＧＦ因子８タンパク質；ＭＦＧ−Ｅ８の断片）、プロラクチン（ＰＲＬ）、トランスサイレチン（ＡＴＴＲ）、リゾチームＣ（１，４−β−Ｎ−アセチルムラミダーゼＣ）、β２ミクログロブリン（β２Ｍ）、ゲルゾリン（ＡＧＥＬ）、形質転換成長因子β誘導タンパク質ｉｇ−ｈ３（βｉｇ−ｈ３；ケラトエピセリン）、シスタチンＣ（ＣＳＴ３）、免疫グロブリン軽鎖（ＡＬ）、およびポリグルタミン反復を有するアミロイドタンパク質から選択されるアミロイドタンパク質に対して特異的な抗体である。一実施形態において、抗アミロイド抗体は、アミロイドタンパク質モノマーに対して特異的である。別の実施形態において、抗アミロイド抗体は、アミロイドタンパク質オリゴマー（すなわち、ダイマー、トリマーなど）に対して特異的である。さらに別の実施形態において、抗アミロイド抗体は、アミロイドタンパク質原線維に対して特異的である。
【００９０】
好適な実施形態において、検出される抗アミロイド抗体は、βアミロイド（Ａβ；Ａベータ）に対して特異的な抗体である。一実施形態において、抗Ａβ抗体はＡβモノマーに対して特異的である。別の実施形態において、抗Ａβ抗体はＡβオリゴマー（すなわち、ダイマー、トリマーなど）に対して特異的である。さらに別の実施形態において、抗Ａβ抗体はＡβ原線維に対して特異的である。
【００９１】
本明細書において提供される方法の一実施形態において、低親和性抗体または非特異的抗体は、低アビディティ抗アミロイド抗体である。具体的な実施形態において、低アビディティ抗アミロイド抗体は、低アビディティ抗Ａβ抗体である。
【００９２】
本明細書において提供される方法において採用されるカオトロピック洗浄ステップは、いかなる公知のカオトロピック剤を用いて実施してもよい。カオトロピック塩を使用する場合、この塩は、塩素酸イオン（ＣｌＯ３−）以上のカオトロピック効果を有するアニオン、またはカルシウムイオン以上のカオトロピック効果を有するカチオンのいずれかを一般に含むであろう。
【００９３】
一実施形態において、カオトロピック塩はグアニジン塩である。本明細書において提供される方法とともに使用することができるグアニジン塩の非限定的な例には、塩化グアニジン、硝酸グアニジン、およびチオシアン酸グアニジンがある。
【００９４】
別の実施形態において、カオトロピック塩はチオシアネート塩である。本明細書において提供される方法とともに使用することができるチオシアネート塩の非限定的な例には、チオシアン酸アンモニウム、チオシアン酸カリウム、チオシアン酸ナトリウム、チオシアン酸リチウム、チオシアン酸カルシウム、およびチオシアン酸グアニジンがある。具体的な実施形態において、カオトロピック塩はチオシアン酸アンモニウムである。一実施形態において、チオシアン酸アンモニウムは、洗浄剤濃度約０．５Ｍ〜約４．０Ｍで使用する。別の実施形態において、チオシアン酸アンモニウムは、洗浄剤濃度約１．０Ｍ〜約３．０Ｍで使用する。さらに別の実施形態において、チオシアン酸アンモニウムは、洗浄剤濃度約１．５Ｍ〜約２．５Ｍで使用する。
【００９５】
さらに別の実施形態において、カオトロピック塩は過塩素酸塩である。本明細書において提供される方法とともに使用することができる過塩素酸塩の非限定的な例には、過塩素酸アンモニウム、過塩素酸ナトリウム、過塩素酸リチウム、過塩素酸マグネシウム、および過塩素酸カルシウムがある。
【００９６】
さらに別の実施形態において、カオトロピック塩はヨウ化物塩である。本明細書において提供される方法とともに使用することができるヨウ化物塩の非限定的な例には、ヨウ化アンモニウム、ヨウ化カリウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化リチウム、ヨウ化マグネシウム、およびヨウ化カルシウムがある。
【００９７】
さらに別の実施形態において、カオトロピック塩は塩素酸塩である。本明細書において提供される方法とともに使用することができる塩素酸塩の非限定的な例には、塩素酸ナトリウム、塩素酸リチウム、塩素酸マグネシウム、および塩素酸カルシウムがある。
【００９８】
本明細書において提供される方法の洗浄ステップで使用されるカオトロピック剤の濃度は、非特異的（すなわち、低アビディティ）抗アミロイド抗体とアミロイド抗原との間の相互作用を妨害するのに十分であるが、特異的（すなわち、高アビディティ）抗アミロイド抗体とアミロイド抗原との間の相互作用を妨害しないように選択されるべきである。使用されるカオトロピック剤の絶対濃度は、特定のカオトロピック剤の強度および使用する特定のシステム（例えば、抗Ａβ抗体ＥＬＩＳＡアッセイ）において形成される抗体−アミロイド抗原相互作用の強度を含む多数の要因に左右されるであろう。当業者は、その特定のシステムに使用するカオトロピック剤の最適な濃度を容易に決定する方法を認識するであろう。一実施形態において、カオトロピック剤は、洗浄剤濃度約０．５Ｍ〜約４．０Ｍで使用する。別の実施形態においてカオトロピック剤は、洗浄剤濃度約１．０Ｍ〜約３．０Ｍで使用する。さらに別の実施形態において、カオトロピック剤は、洗浄剤濃度約１．５Ｍ〜約２．５Ｍで使用する。
【００９９】
本明細書において提供される方法の特定の実施形態において、生物学的試料（すなわち、血液、血漿、尿、リンパ液など）中に認められる免疫グロブリンは、生物学的試料を１種または複数種のアミロイド抗原と接触させるステップの前に濃縮される。好ましくは、免疫グロブリンは、抗体を部分的または完全に変性させない方法によって濃縮される。一実施形態において、本明細書において提供される高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するための方法は、抗体の変性をもたらさないクロマトグラフ法により免疫グロブリンを濃縮するステップを含む。一実施形態において、このクロマトグラフ法は、チオフィリック樹脂を用いて実施される。別の実施形態において、このクロマトグラフ法は、混合モードリガンド化学物質を用いて実施される（Ｕｐｆｒｏｎｔ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ａ／Ｓ社）。他の実施形態において、本明細書において提供される高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するための方法は、抗体の変性をもたらさない非クロマトグラフ法により免疫グロブリンを濃縮するステップを含む。
【０１００】
チオフィリック濃縮ステップを採用する方法
一実施形態において、本発明は、哺乳動物の血漿および他の生体液中のアミロイド形成性タンパク質に対する抗体のレベルを定量化するための方法を提供する。既存の方法とは異なり、本発明は、非特異的抗体結合、血漿巨大分子からの干渉、および精製時の免疫グロブリンの変性による結合活性の人為的発生の交絡作用を回避する。
【０１０１】
例えば、内因性抗アミロイド活性を測定するために全血漿を使用した以前のアッセイは、他の未だに同定されていない血漿巨大分子からの干渉によって、人為的に変更される。有利にも、本明細書において提供される方法は、当該抗アミロイド抗体を保存する様式で、これらの未同定血漿巨大分子の干渉活性を排除する。
【０１０２】
生体標本から抽出した抗アミロイド抗体を測定するために現在採用されている方法は、変性条件への暴露の結果としての抗アミロイド活性の人為的な増加または損失を受ける。例えば、一部の方法は、Ａタンパク質またはＧタンパク質親和性クロマトグラフィーを用いた抗体（Ｉｇ）の濃縮時に、あるいは結合した抗原から抗体を遊離させるために、酸性化を採用する。低ｐＨへの暴露は、一部の哺乳動物免疫グロブリンを完全または部分的に変性させる。これは、機能の損失または多価性の増加につながり、これら両現象は、特異的抗アミロイド抗体のレベルの測定に有害影響を与える。有利にも、本明細書において提供される方法は、酸または他の変性条件への暴露を用いずに、Ｉｇを血漿から分離し、弱く結合した抗原分子を抗アミロイド抗体から解離する。
【０１０３】
したがって、一態様において、本発明は、生物学的試料中に存在する高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するための方法であって、（ａ）生物学的試料をチオフィリック樹脂と接触させて、抗アミロイド抗体に結合させるステップと、（ｂ）抗体を非変性ｐＨでチオフィリック樹脂から溶出して、溶出物を形成するステップと、（ｃ）溶出物をアミロイド抗原と接触させて、アミロイド抗原および抗アミロイド抗体を含む複合体を形成するステップと、（ｄ）複合体の存在またはレベルを検出するステップと、を含む方法を提供する。
【０１０４】
一実施形態において、検出される抗アミロイド抗体は、βアミロイド（Ａβ；Ａベータ）、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ；アミリン）、α−シヌクレイン（ＳＮＣＡ）、主要プリオンタンパク質（ＰｒＰ）、ハンチンチン（ＨＤ）、カルシトニン（ＣＣＰ）、心房性ナトリウム利尿因子（ＡＮＦ）、アポリポタンパク質ＡＩ（アポ−ＡＩ）、血清アミロイドＡタンパク質（ＳＡＡ）、メディンアミロイド（乳脂肪球−ＥＧＦ因子８タンパク質；ＭＦＧ−Ｅ８の断片）、プロラクチン（ＰＲＬ）、トランスサイレチン（ＡＴＴＲ）、リゾチームＣ（１，４−β−Ｎ−アセチルムラミダーゼＣ）、β２ミクログロブリン（β２Ｍ）、ゲルゾリン（ＡＧＥＬ）、形質転換成長因子β誘導タンパク質ｉｇ−ｈ３（βｉｇ−ｈ３；ケラトエピセリン）、シスタチンＣ（ＣＳＴ３）、免疫グロブリン軽鎖（ＡＬ）、およびポリグルタミン反復を有するアミロイドタンパク質から選択されるアミロイドタンパク質に対して特異的な抗体である。一実施形態において、抗アミロイド抗体は、アミロイドタンパク質モノマーに対して特異的である。別の実施形態において、抗アミロイド抗体は、アミロイドタンパク質オリゴマー（すなわち、ダイマー、トリマーなど）に対して特異的である。さらに別の実施形態において、抗アミロイド抗体は、アミロイドタンパク質原線維に対して特異的である。
【０１０５】
好適な実施形態において、検出される抗アミロイド抗体は、βアミロイド（Ａβ；Ａベータ）に対して特異的な抗体である。一実施形態において、抗Ａβ抗体はＡβモノマーに対して特異的である。別の実施形態において、抗Ａβ抗体はＡβオリゴマー（すなわち、ダイマー、トリマーなど）に対して特異的である。さらに別の実施形態において、抗Ａβ抗体はＡβ原線維に対して特異的である。
【０１０６】
本明細書において提供される方法の一実施形態において、低親和性抗体または非特異的抗体は低アビディティ抗アミロイド抗体である。具体的な実施形態において、低アビディティ抗アミロイド抗体は低アビディティ抗Ａβ抗体である。
【０１０７】
本明細書において提供される方法の特定の実施形態において、アミロイド抗原および抗アミロイド抗体を含む複合体は、前記複合体の存在またはレベルを検出する前に、非特異的抗体（すなわち、低アビディティ抗体）とアミロイド抗原との間の相互作用を解離するために、カオトロピック塩を含有する溶液で洗浄される。本明細書において提供される方法で採用されるカオトロピック洗浄ステップは、いかなる公知のカオトロピック剤を用いて実施してもよい。カオトロピック塩を使用する場合、この塩は、塩素酸イオン（ＣｌＯ３−）以上のカオトロピック効果を有するアニオン、またはカルシウムイオンに優るカオトロピック効果を有するカチオンのいずれかを一般に含むであろう。一実施形態において、カオトロピック剤は、尿素、チオ尿素、グアニジン塩、チオシアネート塩、過塩素酸塩、ヨウ化物塩、および塩素酸塩から選択される。具体的な実施形態において、カオトロピック塩はチオシアン酸アンモニウムである。一実施形態において、チオシアン酸アンモニウムは、洗浄剤濃度約０．５Ｍ〜約４．０Ｍで使用する。別の実施形態において、チオシアン酸アンモニウムは、洗浄剤濃度約１．０Ｍ〜約３．０Ｍで使用する。さらに別の実施形態において、チオシアン酸アンモニウムは、洗浄剤濃度約１．５Ｍ〜約２．５Ｍで使用する。
【０１０８】
本明細書において提供される方法の洗浄ステップで使用されるカオトロピック剤の濃度は、非特異的（すなわち、低アビディティ）抗アミロイド抗体とアミロイド抗原との間の相互作用を妨害するのに十分であるが、特異的（すなわち、高アビディティ）抗アミロイド抗体とアミロイド抗原との間の相互作用を妨害しないように選択されるべきである。使用されるカオトロピック剤の絶対濃度は、特定のカオトロピック剤の強度、および使用する特定のシステム（例えば、抗Ａβ抗体ＥＬＩＳＡアッセイ）において形成される抗体−アミロイド抗原相互作用の強度を含む多数の要因に左右されるであろう。当業者は、その特定のシステムに使用するカオトロピック剤の最適な濃度を容易に決定する方法を認識するであろう。一実施形態において、カオトロピック剤は、洗浄剤濃度約０．５Ｍ〜約４．０Ｍで使用する。別の実施形態においてカオトロピック剤は、洗浄剤濃度約１．０Ｍ〜約３．０Ｍで使用する。さらに別の実施形態において、カオトロピック剤は、洗浄剤濃度約１．５Ｍ〜約２．５Ｍで使用する。
【０１０９】
診断方法および予後判定方法
特定の態様において、本明細書において提供される抗アミロイド抗体を検出するための方法は、上述のようなアミロイド関連疾患のリスクがあるかまたは罹患している個人の診断および予後のために使用することができる。例えば、血清および一部の組織中の高レベルのアミロイド、とりわけＡβは、アルツハイマー病に関連するアミロイドプラークの発生可能性の増加を示しうる。また、高レベルのアミロイド特異的自己抗体も、個人にＡＤリスクがあるかまたはＡＤ関連症状の悪化リスクがあることを示す。
【０１１０】
診断および／または適切な治療の選定のための方法
したがって、一部の実施形態において、本発明は、アミロイド関連障害を有する対象またはアミロイド関連障害を有することが疑われる対象の診断および／または治療過程の選定のための方法を提供する。一部の実施形態において、この方法は、アミロイドタンパク質に特異的な自己抗体の検出および／または測定を含む。アミロイドタンパク質に対して高アビディティを有する内因性抗体を検出するための方法は、本明細書において概説される。
【０１１１】
一実施形態において、抗アミロイド抗体を検出するための方法は、対象から、抗体含有試料、便利には血液または血漿試料を得ることを含んでもよい。試料は、例えば、血漿および細胞物質にさらに分離して、抗体含有画分を単離することもできるが、このステップは必ずしも必要ではない。また、試料にサイズ濾過および／またはクロマトグラフィー方法を実施してもよい。一部の実施形態において、試料にチオフィリッククロマトグラフィーを実施して、試料から非免疫グロブリンタンパク質を除去する。試料または溶離液は、次に、抗体と抗原との間の相互作用を検出するために設計されたシステムにおけるアミロイド抗原、例えば、例としてＥＬＩＳＡプレートまたはクロマトグラフィーマトリックスである便利なマトリックスに結合した抗原と接触させてもよい。アミロイド抗原は、異種アミロイドまたは主に同種のアミロイドのモノマー、オリゴマー、または原線維など、いかなる形態であってもよい。アミロイド−抗体複合体を形成させるのに十分なインキュベーション後、アミロイド−抗体複合体を、カオトロピック剤を含む洗浄剤に暴露して、低親和性抗体および非特異的抗体を除去する。このカオトロピック洗浄後、アミロイド抗原と複合体化した抗体の存在またはレベルを検出する。抗体は、所望であれば検出前に抗原から溶出してもよく、あるいは標識したアミロイド抗原と競合させて除去し、検出を簡略にしてもよい。抗体は、上述のようにして検出することができる。
【０１１２】
一部の実施形態において、少なくとも１つの対照を試料と同時に試験して、抗体の量および／または結合のレベルを比較する。他の実施形態において、アッセイの結果は、当該システムに対してあらかじめ確定された対照レベルと比較してもよい。例えば、陽性対照は、アミロイド関連疾患を有することがわかっている個人または個人の群から得た同一の生物学的試料を含みうる。適切な陽性対照の別の例は、例えば高親和性および／またはアビディティ対照としての公知の抗アミロイドモノクローナル抗体である。例となる陰性対照には、アミロイド関連疾患を発症するリスクが低い個人または個人の群から得た同一の生物学的試料を含みうる。適切な陰性対照の別の例は、非アミロイド抗原に対して特異的であるか、またはアミロイド抗原に対して低アビディティを有する公知の抗体である。
【０１１３】
かかる方法を用い、比較的高レベルの抗アミロイド抗体を、対象がアミロイド関連障害を有する可能性、またはアミロイド関連障害の発症リスクが高い可能性の増大と相関させれば、当業者は、対象におけるアミロイド関連疾患を診断することができる。
【０１１４】
上記の方法は、アミロイド関連疾患療法の対象となる患者群を選定するために適用することができる。例えば、抗アミロイド抗体のレベルは複数の個人において測定することができる。上記に説明したように、比較的高レベルの抗アミロイド抗体を有すると測定された個人を治療対象に選定することができる。一部の実施形態において、抗アミロイド抗体のレベルは、治療過程全体にわたり定期的に検出される。一部の実施形態において、治療はＩＶＩＧの投与を含む。
【０１１５】
カオトロピック洗浄ステップを採用する方法
一態様において、本発明は、哺乳動物の血漿および他の生体液中のアミロイド形成性タンパク質に対する抗体のレベルを定量化することを含む、アミロイド関連疾患または状態の治療の候補者である対象を特定する方法であって、非特異的および低アビディティ抗アミロイド抗原結合に関連するシグナルを減少させるためにカオトロピック洗浄ステップが採用される方法を提供する。好適な実施形態において、治療は、免疫グロブリン製剤の投与を含む。具体的な実施形態において、アミロイド関連疾患はアルツハイマー病である。
【０１１６】
関連する態様において、本発明は、哺乳動物の血漿および他の生体液中のアミロイド形成性タンパク質に対する抗体のレベルを定量化することを含む、アミロイドタンパク質に関連する疾患を診断するための方法であって、非特異的および低アビディティ抗アミロイド抗原結合に関連するシグナルを減少させるためにカオトロピック洗浄ステップが採用される方法を提供する。好適な実施形態において方法はアルツハイマー病を診断するための方法である。
【０１１７】
既存の方法とは異なり、本発明は、非特異的抗体結合、血漿巨大分子からの干渉、および精製時の免疫グロブリンの変性による結合活性の人為的発生の交絡作用を回避する。
【０１１８】
例えば、従来のガラス、金属、またはプラスチック基体上で行う測定は、抗体のアミロイドタンパク質およびアッセイプレートへの非特異的結合による影響を受ける。ヒト血漿は、アミロイド凝集体に対して低アビディティを有する比較的多量の多価抗体を含有する。かかる抗体、ならびにアッセイ基体に非特異的に結合する抗体の存在は、様々なアッセイ方法で測定された抗アミロイド活性を人為的に変更する。有利にも、本明細書において提供される方法は、結合のアビディティの差に基づいて、特異的抗体と非特異的抗体とを区別することができる。
【０１１９】
したがって、具体的な実施形態において、本発明は、アミロイド関連疾患または状態の治療の候補者である対象を特定するための方法を提供する。一部の実施形態において、この方法は、（ａ）対象に由来する生物学的試料を適切な条件下で複数のアミロイド抗原と接触させて、（ｉ）アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む複合体、ならびに（ｉｉ）アミロイド抗原および高アビディティ抗アミロイド抗体を含む複合体、を形成するステップと、（ｂ）ステップ（ａ）で形成されたアミロイド抗原複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄して、アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む少なくとも１つの複合体を解離するステップと、（ｃ）残留複合体のレベルを検出するステップと、（ｄ）抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、対象がアミロイド関連疾患または状態の治療から利益を得るかどうかを決定するステップと、を含む。好適な実施形態において、治療は免疫グロブリン製剤の投与を含む。
【０１２０】
治療の候補者である対象を特定するための方法の一部の実施形態において、対照は、アミロイド関連疾患を有さない個人または個人の群に由来し、対照に対して増加したレベルの残留複合体は治療の候補者であることを示す。一部の実施形態において、対照は、アミロイド関連疾患を有する個人または個人の群に由来し、対照に対して類似するレベルの残留複合体は治療に適していることを示す。さらに別の実施形態において、対照は、アミロイド関連疾患を診断され、特定の治療過程に有利に反応した個人または個人の群に由来する。別の実施形態において、対照は、アミロイド関連疾患を診断され、特定の治療過程に有利に反応しなかった個人または個人の群に由来する。当業者は、少なくとも１つの適当な対照を選定し、適宜結果を解釈する方法を理解するであろう。
【０１２１】
特定の実施形態において、治療の候補者である対象を特定するための方法は、対象に治療過程を指定する、または治療を施すステップをさらに含む。一般に、この治療過程は、生物学的試料中の抗アミロイド抗体のレベルが対照閾値（例えば、アミロイド関連状態を有する可能性が高い、または特定の治療に反応する可能性が高い対象を示す閾値）を上回るか、あるいは、陰性対照（例えば、アミロイド関連状態を有さない群または個人に由来する対照レベル、あるいは特定の治療に有利に反応しなかった群または個人に由来する対照レベル）より、陽性対照（例えば、アミロイド関連状態を有する群または個人に由来する対照レベル、あるいは特定の治療に有利に反応した群または個人に由来する対照レベル）により近似している場合に指定されることになる。好適な実施形態において、治療は免疫グロブリン製剤の投与を含む。
【０１２２】
特定の実施形態において、治療は、認知治療、例えば身体的および／または社会的活動、記憶ゲーム、ならびにパズルおよび／または問題の解決、薬物療法、例えばコリンエステラーゼ阻害剤（アセチルコリンの減少に対処するため）、グルタミン酸部分拮抗薬（例えば、メマンチン）、および精神医学的薬物（例えば、抗精神病薬、睡眠補助薬、抗不安薬、およびβ遮断薬）から選択される。コリンエステラーゼ阻害剤には、Ａｒｉｃｅｐｔ（登録商標）（塩酸ドネペジル）、Ｅｘｅｌｏｎ（登録商標）（リバスティグミン）、Ｒａｚａｄｙｎｅ（登録商標）（ガランタミン）、およびＣｏｇｎｅｘ（登録商標）（タクリン）、ならびにこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。好適な実施形態において、治療は免疫グロブリン製剤の投与を含む。具体的な実施形態において、方法はアルツハイマー病の治療の候補者である対象を特定することを含む。
【０１２３】
関連する実施形態において、本発明は、対象においてアミロイドタンパク質に関連する疾患を診断するための方法を提供する。一部の実施形態において、この方法は、（ａ）対象に由来する生物学的試料を適切な条件下で複数のアミロイド抗原と接触させて、（ｉ）アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む複合体、ならびに（ｉｉ）アミロイド抗原および高アビディティ抗アミロイド抗体を含む複合体、を形成するステップと、（ｂ）ステップ（ａ）で形成されたアミロイド抗原複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄して、アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む少なくとも１つの複合体を解離するステップと、（ｃ）残留複合体のレベルを検出するステップと、（ｄ）抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、対象を診断するステップと、を含む。
【０１２４】
対象においてアミロイドタンパク質に関連する疾患を診断するための方法の一部の実施形態において、対照は、アミロイド関連疾患を有さない個人または個人の群に由来し、対照に対して増加したレベルの残留複合体は、その対象がアミロイド関連状態を有する高い可能性を示す。一部の実施形態において、対照は、アミロイド関連疾患を有する個人または個人の群に由来し、対照に対して類似するレベルの残留複合体は、その対象がアミロイド関連状態を有する高い可能性を示す。当業者は、少なくとも１つの適当な対照を選定し、適宜結果を解釈する方法を理解するであろう。
【０１２５】
特定の実施形態において、対象においてアミロイドタンパク質に関連する疾患を診断するための方法は、対象に治療過程を指定する、または治療を施すステップをさらに含む。一般に、この治療過程は、生物学的試料中の抗アミロイド抗体のレベルが対照閾値（例えば、アミロイド関連状態を有する可能性が高い、または特定の治療に反応する可能性が高い対象を示す閾値）を上回るか、あるいは、陰性対照（例えば、アミロイド関連状態を有さない群または個人に由来する対照レベル、あるいは特定の治療に有利に反応しなかった群または個人に由来する対照レベル）より、陽性対照（例えば、アミロイド関連状態を有する群または個人に由来する対照レベル、あるいは特定の治療に有利に反応した群または個人に由来する対照レベル）により近似している場合に指定されることになる。好適な実施形態において、治療は免疫グロブリン製剤の投与を含む。
【０１２６】
特定の実施形態において、治療は、認知治療、例えば身体的および社会的活動、記憶ゲーム、ならびにパズルおよび／または問題の解決、薬物療法、例えばコリンエステラーゼ阻害剤（アセチルコリンの減少に対処するため）、グルタミン酸部分拮抗薬（例えば、メマンチン）、および精神医学的薬物（例えば、抗精神病薬、睡眠補助薬、抗不安薬、およびβ遮断薬）から選択される。コリンエステラーゼ阻害剤には、Ａｒｉｃｅｐｔ（登録商標）（塩酸ドネペジル）、Ｅｘｅｌｏｎ（登録商標）（リバスティグミン）、Ｒａｚａｄｙｎｅ（登録商標）（ガランタミン）、およびＣｏｇｎｅｘ（登録商標）（タクリン）、ならびにこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。好適な実施形態において、治療は免疫グロブリン製剤の投与を含む。具体的な実施形態において、方法はアルツハイマー病を診断することを含む。
【０１２７】
治療の候補者である対象を特定するための方法または対象においてアミロイドタンパク質に関連する疾患を診断するための方法の一実施形態において、生物学的試料は、生体液、例えば血液、血漿、尿、リンパ液、滑液などである。他の実施形態において、生物学的試料は、組織試料または生検であってよい。好適な実施形態において、生物学的試料は、血液試料またはその画分（例えば、血漿または血漿画分）である。別の好適な実施形態において、生物学的試料は、免疫グロブリン調製物または濃縮物である。具体的な実施形態において、免疫グロブリン濃縮は、チオフィリッククロマトグラフィーによって実施される。別の具体的な実施形態において、免疫グロブリン濃縮は、混合モードリガンドクロマトグラフィーによって実施される。
【０１２８】
一実施形態において、検出される抗アミロイド抗体は、βアミロイド（Ａβ；Ａベータ）、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ；アミリン）、α−シヌクレイン（ＳＮＣＡ）、主要プリオンタンパク質（ＰｒＰ）、ハンチンチン（ＨＤ）、カルシトニン（ＣＣＰ）、心房性ナトリウム利尿因子（ＡＮＦ）、アポリポタンパク質ＡＩ（アポ−ＡＩ）、血清アミロイドＡタンパク質（ＳＡＡ）、メディンアミロイド（乳脂肪球−ＥＧＦ因子８タンパク質；ＭＦＧ−Ｅ８の断片）、プロラクチン（ＰＲＬ）、トランスサイレチン（ＡＴＴＲ）、リゾチームＣ（１，４−β−Ｎ−アセチルムラミダーゼＣ）、β２ミクログロブリン（β２Ｍ）、ゲルゾリン（ＡＧＥＬ）、形質転換成長因子β誘導タンパク質ｉｇ−ｈ３（βｉｇ−ｈ３；ケラトエピセリン）、シスタチンＣ（ＣＳＴ３）、免疫グロブリン軽鎖（ＡＬ）、およびポリグルタミン反復を有するアミロイドタンパク質から選択されるアミロイドタンパク質に対して特異的な抗体である。一実施形態において、抗アミロイド抗体は、アミロイドタンパク質モノマーに対して特異的である。別の実施形態において、抗アミロイド抗体はアミロイドタンパク質オリゴマー（すなわち、ダイマー、トリマーなど）に対して特異的である。さらに別の実施形態において、抗アミロイド抗体は、アミロイドタンパク質原線維に対して特異的である。
【０１２９】
一実施形態において、アミロイドタンパク質に関連する疾患または状態は、アルツハイマー病、２型糖尿病、パーキンソン病、伝染性海綿状脳症、ハンチントン病、甲状腺髄様癌、心不整脈、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、大動脈中膜アミロイド、プロラクチノーマ、家族性アミロイド多発ニューロパチー、遺伝性非ニューロパチー性全身性アミロイドーシス、透析関連アミロイドーシス、フィンランド型アミロイドーシス、格子状角膜ジストロフィー、脳アミロイド血管症、脳アミロイド血管症（アイスランド型）、および全身性ＡＬアミロイドーシスからなる群から選択される。好適な実施形態において、疾患または状態はアルツハイマー病である。特に好適な実施形態において、疾患または状態はアルツハイマー病であり、検出される抗アミロイド抗体は、抗βアミロイド（Ａβ；Ａベータ）抗体である。
【０１３０】
本明細書において提供される方法の特定の実施形態において、特定のアミロイドタンパク質の存在またはレベルの検出は、特定の疾患または状態を診断するため、あるいは特定の疾患または状態の治療の候補者を選定するために有用である。本明細書において提供される方法における使用に特に適したアミロイドとアミロイド疾患との組み合わせの非限定的な例は、表１に記載されている。特定の実施形態において、表１に記載のアミロイドタンパク質に対して特異的な高アビディティ抗体の存在またはレベルの検出は、記載されている対応する疾患の診断となるであろう。
【０１３１】
（表１）特定の疾患に関連するアミロイドタンパク質の非限定的な例
2014507649.tif 000002
【０１３２】
好適な実施形態において、検出される抗アミロイド抗体は、βアミロイド（Ａβ；Ａベータ）に対して特異的な抗体である。一実施形態において、抗Ａβ抗体はＡβモノマーに対して特異的である。別の実施形態において、抗Ａβ抗体はＡβオリゴマー（すなわち、ダイマー、トリマーなど）に対して特異的である。さらに別の実施形態において、抗Ａβ抗体はＡβ原線維に対して特異的である。
【０１３３】
本明細書において提供される方法の一実施形態において、低親和性抗体または非特異的抗体は低アビディティ抗アミロイド抗体である。具体的な実施形態において、低アビディティ抗アミロイド抗体は低アビディティ抗Ａβ抗体である。
【０１３４】
本明細書において提供される方法で採用されるカオトロピック洗浄ステップは、いかなる公知のカオトロピック剤を用いて実施してもよい。カオトロピック塩を使用する場合、この塩は、塩素酸イオン（ＣｌＯ３−）以上のカオトロピック効果を有するアニオン、またはカルシウムイオンに優るカオトロピック効果を有するカチオンのいずれかを一般に含むであろう。
【０１３５】
一実施形態において、カオトロピック塩はグアニジン塩である。本明細書において提供される方法とともに使用することができるグアニジン塩の非限定的な例には、塩化グアニジン、硝酸グアニジン、およびチオシアン酸グアニジンがある。
【０１３６】
別の実施形態において、カオトロピック塩はチオシアネート塩である。本明細書において提供される方法とともに使用することができるチオシアネート塩の非限定的な例には、チオシアン酸アンモニウム、チオシアン酸カリウム、チオシアン酸ナトリウム、チオシアン酸リチウム、チオシアン酸カルシウム、およびチオシアン酸グアニジンがある。具体的な実施形態において、カオトロピック塩はチオシアン酸アンモニウムである。一実施形態において、チオシアン酸アンモニウムは、洗浄剤濃度約０．５Ｍ〜約４．０Ｍで使用する。別の実施形態において、チオシアン酸アンモニウムは、洗浄剤濃度約１．０Ｍ〜約３．０Ｍで使用する。さらに別の実施形態において、チオシアン酸アンモニウムは、洗浄剤濃度約１．５Ｍ〜約２．５Ｍで使用する。
【０１３７】
さらに別の実施形態において、カオトロピック塩は過塩素酸塩である。本明細書において提供される方法とともに使用することができる過塩素酸塩の非限定的な例には、過塩素酸アンモニウム、過塩素酸ナトリウム、過塩素酸リチウム、過塩素酸マグネシウム、および過塩素酸カルシウムがある。
【０１３８】
さらに別の実施形態において、カオトロピック塩はヨウ化物塩である。本明細書において提供される方法とともに使用することができるヨウ化物塩の非限定的な例には、ヨウ化アンモニウム、ヨウ化カリウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化リチウム、ヨウ化マグネシウム、およびヨウ化カルシウムである。
【０１３９】
さらに別の実施形態において、カオトロピック塩は塩素酸塩である。本明細書において提供される方法とともに使用することができる塩素酸塩の非限定的な例には、塩素酸ナトリウム、塩素酸リチウム、塩素酸マグネシウム、および塩素酸カルシウムがある。
【０１４０】
本明細書において提供される方法の洗浄ステップで使用されるカオトロピック剤の濃度は、非特異的（すなわち、低アビディティ）抗アミロイド抗体とアミロイド抗原との間の相互作用を妨害するのに十分であるが、特異的（すなわち、高アビディティ）抗アミロイド抗体とアミロイド抗原との間の相互作用を妨害しないように選択されるべきである。使用されるカオトロピック剤の絶対濃度は、特定のカオトロピック剤の強度、および使用する特定のシステム（例えば、抗Ａβ抗体ＥＬＩＳＡアッセイ）において形成される抗体−アミロイド抗原相互作用の強度を含む多数の要因に左右されるであろう。当業者は、その特定のシステムに使用するカオトロピック剤の最適な濃度を容易に決定する方法を認識するであろう。一実施形態において、カオトロピック剤は、洗浄剤濃度約０．５Ｍ〜約４．０Ｍで使用する。別の実施形態においてカオトロピック剤は、洗浄剤濃度約１．０Ｍ〜約３．０Ｍで使用する。さらに別の実施形態において、カオトロピック剤は、洗浄剤濃度約１．５Ｍ〜約２．５Ｍで使用する。
【０１４１】
本明細書において提供される方法の特定の実施形態において、生物学的試料（すなわち、血液、血漿、尿、リンパ液など）中に認められる免疫グロブリンは、生物学的試料を１種または複数種のアミロイド抗原と接触させるステップの前に濃縮される。好ましくは、免疫グロブリンは、抗体を部分的または完全に変性させない方法によって濃縮される。一実施形態において、本明細書において提供される高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するための方法は、抗体の変性をもたらさないクロマトグラフ法により免疫グロブリンを濃縮するステップを含む。一実施形態において、このクロマトグラフ法は、チオフィリック樹脂を用いて実施される。別の実施形態において、このクロマトグラフ法は、混合モードリガンド化学物質を用いて実施される（Ｕｐｆｒｏｎｔ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ａ／Ｓ社）。他の実施形態において、本明細書において提供される高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するための方法は、抗体の変性をもたらさない非クロマトグラフ法により免疫グロブリンを濃縮するステップを含む。
【０１４２】
チオフィリック濃縮ステップを採用する方法
一態様において、本発明は、哺乳動物の血漿および他の生体液中のアミロイド形成性タンパク質に対する抗体のレベルを定量化することを含み、免疫グロブリン製剤の投与を含む、治療の候補者である対象を特定するための方法であって、非特異的抗体結合、血漿巨大分子からの干渉、および精製時の免疫グロブリンの変性による結合活性の人為的発生に関連するシグナルを減少させるためにチオフィリック濃縮ステップが採用される方法を提供する。
【０１４３】
関連する態様において、本発明は、哺乳動物の血漿および他の生体液中のアミロイド形成性タンパク質に対する抗体のレベルを定量化することを含む、免疫グロブリン製剤の投与を含むアミロイドタンパク質に関連する疾患を診断するための方法であって、非特異的抗体結合、血漿巨大分子からの干渉、および精製時の免疫グロブリンの変性による結合活性の人為的発生に関連するシグナルを減少させるためにチオフィリック濃縮ステップが採用される方法を提供する。
【０１４４】
既存の方法とは異なり、本発明は、非特異的抗体結合、血漿巨大分子からの干渉、および精製時の免疫グロブリンの変性による結合活性の人為的発生の交絡作用を回避する。
【０１４５】
例えば、内因性抗アミロイド活性を測定するために全血漿を使用した以前のアッセイは、他の未だに同定されていない血漿巨大分子からの干渉によって、人為的に変更される。有利にも、本明細書において提供される方法は、当該抗アミロイド抗体を保存する様式で、これらの未同定血漿巨大分子の干渉活性を排除する。
【０１４６】
生体標本から抽出した抗アミロイド抗体を測定するために現在採用されている方法は、変性条件への暴露の結果としての抗アミロイド活性の人為的な増加および損失を受ける。例えば、一部の方法は、Ａタンパク質またはＧタンパク質親和性クロマトグラフィーを用いた抗体（Ｉｇ）の濃縮時に、あるいは結合した抗原から抗体を遊離させるために、酸性化を採用する。低ｐＨへの暴露は、一部の哺乳動物免疫グロブリンを完全または部分的に変性させる。これは、機能の損失または多価性の増加につながり、これら両現象は、特異的抗アミロイド抗体のレベルの測定に有害影響を与える。有利にも、本明細書において提供される方法は、酸または他の変性条件への暴露を用いずに、Ｉｇを血漿から分離し、弱く結合した抗原分子を抗アミロイド抗体から解離する。
【０１４７】
したがって、具体的な実施形態において、本発明は、アミロイド関連疾患または状態の治療の候補者である対象を特定するための方法を提供する。一部の実施形態において、この方法は、（ａ）生物学的試料をチオフィリック樹脂と接触させて、試料中に存在する抗アミロイド抗体に結合させるステップと、（ｂ）抗体を非変性ｐＨでチオフィリック樹脂から溶出して、溶出物を形成するステップと、（ｃ）溶出物をアミロイド抗原と接触させて、アミロイド抗原および抗アミロイド抗体を含む複合体を形成するステップと、（ｄ）複合体の存在またはレベルを検出するステップと、（ｅ）抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、対象が免疫グロブリン製剤の投与を含む治療から利益を得るかどうかを決定するステップと、を含む。好適な実施形態において、治療は免疫グロブリン製剤の投与を含む。
【０１４８】
治療の候補者である対象を特定するための方法の一部の実施形態において、対照は、アミロイド関連疾患を有さない個人または個人の群に由来し、対照に対して増加したレベルの残留複合体は治療の候補者であることを示す。一部の実施形態において、対照は、アミロイド関連疾患を有する個人または個人の群に由来し、対照に対して類似するレベルの残留複合体は治療の候補者であることを示す。さらに別の実施形態において、対照は、アミロイド関連疾患を診断され、特定の治療過程に有利に反応した個人または個人の群に由来する。別の実施形態において、対照は、アミロイド関連疾患を診断され、特定の治療過程に有利に反応しなかった個人または個人の群に由来する。当業者は、少なくとも１つの適当な対照を選定し、適宜結果を解釈する方法を理解するであろう。
【０１４９】
特定の実施形態において、治療の候補者である対象を特定するための方法は、免疫グロブリン製剤の投与を含む、対象に治療過程を指定する、または治療を投与するステップをさらに含む。一般に、この治療過程は、生物学的試料中の抗アミロイド抗体のレベルが対照閾値（例えば、アミロイド関連状態を有する可能性が高い、または特定の治療に反応する可能性が高い対象を示す閾値）を上回るか、あるいは、陰性対照（例えば、アミロイド関連状態を有さない群または個人に由来する対照レベル、あるいは特定の治療に有利に反応しなかった群または個人に由来する対照レベル）より、陽性対照（例えば、アミロイド関連状態を有する群または個人に由来する対照レベル、あるいは特定の治療に有利に反応した群または個人に由来する対照レベル）により近似している場合に指定されることになる。好適な実施形態において、治療は免疫グロブリン製剤の投与を含む。
【０１５０】
特定の実施形態において、治療は、認知治療、例えば身体的および／または社会的活動、記憶ゲーム、ならびにパズルおよび／または問題の解決、薬物療法、例えばコリンエステラーゼ阻害剤（アセチルコリンの減少に対処するため）、グルタミン酸部分拮抗薬（例えば、メマンチン）、および精神医学的薬物（例えば、抗精神病薬、睡眠補助薬、抗不安薬、およびβ遮断薬）から選択される。コリンエステラーゼ阻害剤には、Ａｒｉｃｅｐｔ（登録商標）（塩酸ドネペジル）、Ｅｘｅｌｏｎ（登録商標）（リバスティグミン）、Ｒａｚａｄｙｎｅ（登録商標）（ガランタミン）、およびＣｏｇｎｅｘ（登録商標）（タクリン）、ならびにこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。好適な実施形態において、治療は免疫グロブリン製剤の投与を含む。具体的な実施形態において、方法はアルツハイマー病の治療の候補者である対象を特定することを含む。
【０１５１】
関連する実施形態において、本発明は、対象においてアミロイドタンパク質に関連する疾患を診断するための方法を提供する。一部の実施形態において、この方法は、（ａ）生物学的試料をチオフィリック樹脂と接触させて、抗アミロイド抗体に結合させるステップと、（ｂ）抗体を非変性ｐＨでチオフィリック樹脂から溶出して、溶出物を形成するステップと、（ｃ）溶出物をアミロイド抗原と接触させて、アミロイド抗原および抗アミロイド抗体を含む複合体を形成するステップと、（ｄ）複合体の存在またはレベルを検出するステップと、（ｅ）抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、対象を診断するステップと、を含む。
【０１５２】
対象においてアミロイドタンパク質に関連する疾患を診断するための方法の一部の実施形態において、対照は、アミロイド関連疾患を有さない個人または個人の群に由来し、対照に対して増加したレベルの残留複合体は、その対象がアミロイド関連状態を有する高い可能性を示す。一部の実施形態において、対照は、アミロイド関連疾患を有する個人または個人の群に由来し、対照に対して類似するレベルの残留複合体は、その対象がアミロイド関連状態を有する高い可能性を示す。当業者は、少なくとも１つの適当な対照を選定し、適宜結果を解釈する方法を理解するであろう。
【０１５３】
特定の実施形態において、対象においてアミロイドタンパク質に関連する疾患を診断するための方法は、対象に治療過程を指定する、また治療を投与するステップをさらに含む。一般に、この治療過程は、生物学的試料中の抗アミロイド抗体のレベルが対照閾値（例えば、アミロイド関連状態を有する可能性が高い、または特定の治療に反応する可能性が高い対象を示す閾値）を上回るか、あるいは、陰性対照（例えば、アミロイド関連状態を有さない群または個人に由来する対照レベル、あるいは特定の治療に有利に反応しなかった群または個人に由来する対照レベル）より、陽性対照（例えば、アミロイド関連状態を有する群または個人に由来する対照レベル、あるいは特定の治療に有利に反応した群または個人に由来する対照レベル）により近似している場合に指定されることになる。好適な実施形態において、治療は免疫グロブリン製剤の投与を含む。
【０１５４】
特定の実施形態において、治療は、認知治療、例えば身体的および／または社会的活動、記憶ゲーム、ならびにパズルおよび／または問題の解決、薬物療法、例えばコリンエステラーゼ阻害剤（アセチルコリンの減少に対処するため）、グルタミン酸部分拮抗薬（例えば、メマンチン）、および精神医学的薬物（例えば、抗精神病薬、睡眠補助薬、抗不安薬、およびβ遮断薬）から選択される。コリンエステラーゼ阻害剤には、Ａｒｉｃｅｐｔ（登録商標）（塩酸ドネペジル）、Ｅｘｅｌｏｎ（登録商標）（リバスティグミン）、Ｒａｚａｄｙｎｅ（登録商標）（ガランタミン）、およびＣｏｇｎｅｘ（登録商標）（タクリン）、ならびにこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。好適な実施形態において、治療は免疫グロブリン製剤の投与を含む。具体的な実施形態において、方法はアルツハイマー病を診断することを含む。
【０１５５】
治療の候補者である対象を特定する方法または対象においてアミロイドタンパク質に関連する疾患を診断するための方法の一実施形態において、生物学的試料は、生体液、例えば血液、血漿、尿、リンパ液、滑液などである。他の実施形態において、生物学的試料は、組織試料または生検であってよい。好適な実施形態において、生物学的試料は、血液試料またはその画分（例えば、血漿または血漿画分）である。別の好適な実施形態において、生物学的試料は、免疫グロブリン調製物または濃縮物である。具体的な実施形態において、免疫グロブリン濃縮は、チオフィリッククロマトグラフィーによって実施される。別の具体的な実施形態において、免疫グロブリン濃縮は、混合モードリガンドクロマトグラフィーによって実施される。
【０１５６】
一実施形態において、検出される抗アミロイド抗体は、βアミロイド（Ａβ；Ａベータ）、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ；アミリン）、α−シヌクレイン（ＳＮＣＡ）、主要プリオンタンパク質（ＰｒＰ）、ハンチンチン（ＨＤ）、カルシトニン（ＣＣＰ）、心房性ナトリウム利尿因子（ＡＮＦ）、アポリポタンパク質ＡＩ（アポ−ＡＩ）、血清アミロイドＡタンパク質（ＳＡＡ）、メディンアミロイド（乳脂肪球−ＥＧＦ因子８タンパク質；ＭＦＧ−Ｅ８の断片）、プロラクチン（ＰＲＬ）、トランスサイレチン（ＡＴＴＲ）、リゾチームＣ（１，４−β−Ｎ−アセチルムラミダーゼＣ）、β２ミクログロブリン（β２Ｍ）、ゲルゾリン（ＡＧＥＬ）、形質転換成長因子β誘導タンパク質ｉｇ−ｈ３（βｉｇ−ｈ３；ケラトエピセリン）、シスタチンＣ（ＣＳＴ３）、免疫グロブリン軽鎖（ＡＬ）、およびポリグルタミン反復を有するアミロイドタンパク質から選択されるアミロイドタンパク質に特異的な抗体である。一実施形態において、抗アミロイド抗体は、アミロイドタンパク質モノマーに対して特異的である。別の実施形態において、抗アミロイド抗体はアミロイドタンパク質オリゴマー（すなわち、ダイマー、トリマーなど）に対して特異的である。さらに別の実施形態において、抗アミロイド抗体はアミロイドタンパク質原線維に対して特異的である。
【０１５７】
一実施形態において、アミロイドタンパク質に関連する疾患または状態は、アルツハイマー病、２型糖尿病、パーキンソン病、伝染性海綿状脳症、ハンチントン病、甲状腺髄様癌、心不整脈、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、大動脈中膜アミロイド、プロラクチノーマ、家族性アミロイド多発ニューロパチー、遺伝性非ニューロパチー性全身性アミロイドーシス、透析関連アミロイドーシス、フィンランド型アミロイドーシス、格子状角膜ジストロフィー、脳アミロイド血管症、脳アミロイド血管症（アイスランド型）、および全身性ＡＬアミロイドーシスからなる群から選択される。好適な実施形態において、疾患または状態はアルツハイマー病である。特に好適な実施形態において、疾患または状態はアルツハイマー病であり、検出される抗アミロイド抗体は抗βアミロイド（Ａβ；Ａベータ）抗体である。
【０１５８】
本明細書において提供される方法の特定の実施形態において、特定のアミロイドタンパク質の存在またはレベルの検出は、特定の疾患または状態を診断するため、あるいは特定の疾患または状態の治療の候補者を選定するために有用である。本明細書において提供される方法における使用に特に適したアミロイドとアミロイド疾患との組み合わせの非限定的な例は、表１に記載されている。特定の実施形態において、表１に記載のアミロイドタンパク質に対して特異的な高アビディティ抗体の存在またはレベルの検出は、記載されている対応する疾患の診断となるであろう。
【０１５９】
好適な実施形態において、検出される抗アミロイド抗体は、βアミロイド（Ａβ；Ａベータ）に対して特異的な抗体である。一実施形態において、抗Ａβ抗体はＡβモノマーに対して特異的である。別の実施形態において、抗Ａβ抗体はＡβオリゴマー（すなわち、ダイマー、トリマーなど）に対して特異的である。さらに別の実施形態において、抗Ａβ抗体はＡβ原線維に対して特異的である。
【０１６０】
本明細書において提供される方法の一実施形態において、低親和性抗体または非特異的抗体は低アビディティ抗アミロイド抗体である。具体的な実施形態において、低アビディティ抗アミロイド抗体は低アビディティ抗Ａβ抗体である。
【０１６１】
本明細書において提供される方法の特定の実施形態において、アミロイド抗原および抗アミロイド抗体を含む複合体は、前記複合体の存在またはレベルを検出する前に、非特異的抗体（すなわち、低アビディティ抗体）とアミロイド抗原との間の相互作用を解離するために、カオトロピック塩を含有する溶液で洗浄される。本明細書において提供される方法で採用されるカオトロピック洗浄ステップは、いかなる公知のカオトロピック剤を用いて実施してもよい。カオトロピック塩を使用する場合、この塩は、塩素酸イオン（ＣｌＯ３−）以上のカオトロピック効果を有するアニオン、またはカルシウムイオンに優るカオトロピック効果を有するカチオンのいずれかを一般に含むであろう。一実施形態において、カオトロピック剤は、尿素、チオ尿素、グアニジン塩、チオシアネート塩、過塩素酸塩、ヨウ化物塩、および塩素酸塩から選択される。具体的な実施形態において、カオトロピック塩はチオシアン酸アンモニウムである。一実施形態において、チオシアン酸アンモニウムは、洗浄剤濃度約０．５Ｍ〜約４．０Ｍで使用する。別の実施形態において、チオシアン酸アンモニウムは、洗浄剤濃度約１．０Ｍ〜約３．０Ｍで使用する。さらに別の実施形態において、チオシアン酸アンモニウムは、洗浄剤濃度約１．５Ｍ〜約２．５Ｍで使用する。
【０１６２】
本明細書において提供される方法の洗浄ステップで使用されるカオトロピック剤の濃度は、非特異的（すなわち、低アビディティ）抗アミロイド抗体とアミロイド抗原との間の相互作用を妨害するのに十分であるが、特異的（すなわち、高アビディティ）抗アミロイド抗体とアミロイド抗原との間の相互作用を妨害しないように選択されるべきである。使用されるカオトロピック剤の絶対濃度は、特定のカオトロピック剤の強度、および使用する特定のシステム（例えば、抗Ａβ抗体ＥＬＩＳＡアッセイ）において形成される抗体−アミロイド抗原相互作用の強度を含む多数の要因に左右されるであろう。当業者は、その特定のシステムに使用するカオトロピック剤の最適な濃度を容易に決定する方法を認識するであろう。一実施形態において、カオトロピック剤は、洗浄剤濃度約０．５Ｍ〜約４．０Ｍで使用する。別の実施形態においてカオトロピック剤は、洗浄剤濃度約１．０Ｍ〜約３．０Ｍで使用する。さらに別の実施形態において、カオトロピック剤は、洗浄剤濃度約１．５Ｍ〜約２．５Ｍで使用する。
【０１６３】
予後を提供するための方法
一部の実施形態において、抗アミロイド抗体レベルの検出は、対象の予後を提供することができる。対象は、未治療もしくは未診断であってもよく、または現在治療を受けているか、もしくはアミロイド関連疾患に対する予防措置を取っていてもよい。したがって、抗アミロイド抗体のレベルは、長期にわたって対象をモニタリングするために定期的に検出することができる。具体的な実施形態において、高レベルの抗アミロイド抗体の検出により、対象の予後の提供が可能である。
【０１６４】
一部の実施形態において、抗アミロイド抗体を検出する方法を使用して、治療方法を決定することができる。アミロイド関連疾患を発症するリスクが比較的低いと思われる場合には、対象は、予防措置を取るように勧められることがある。しかしながら、アミロイド関連疾患の発症のリスクがより高いと判断される一部の場合においては、治療が処方されてもよい。治療は、免疫グロブリン製剤、例えばプールされた免疫グロブリン製剤、例えばＩＶＩＧ、または他の形の免疫療法の投与を含んでもよい。
【０１６５】
アミロイドを検出する方法は、上記に概説されている。例えば、この方法は、対象から生物学的試料を得ること、試料をアミロイドタンパク質またはその抗原と接触させること、抗アミロイド抗体結合の有無を検出すること、および対照と比較して、試料中の高アビディティ抗アミロイド抗体のレベルに基づいて、アミロイド関連傷害の発症の可能性の増加を診断することを含む。一部の実施形態において、この方法は、対象に適した治療過程を選定することをさらに含む。一部の実施形態において、治療は、本明細書に記載のように、対象にＩＶＩＧを投与することを含む。
【０１６６】
カオトロピック洗浄ステップを採用する方法
一態様において、本発明は、哺乳動物の血漿および他の生体液中のアミロイド形成性タンパク質に対する抗体のレベルを定量化することを含む、アミロイドタンパク質に関連する疾患または状態の進行の予後を提供する方法であって、非特異的および低アビディティ抗アミロイド抗原結合に関連するシグナルを減少させるためにカオトロピック洗浄ステップが採用される方法を提供する。
【０１６７】
関連する態様において、本発明は、哺乳動物の血漿および他の生体液中のアミロイド形成性タンパク質に対する抗体のレベルを定量化することを含む、アミロイドタンパク質に関連する疾患または状態の治療の予後を提供する方法であって、非特異的および低アビディティ抗アミロイド抗原結合に関連するシグナルを減少させるためにカオトロピック洗浄ステップが採用される方法を提供する。
【０１６８】
既存の方法とは異なり、本発明は、非特異的抗体結合、血漿巨大分子からの干渉、および精製時の免疫グロブリンの変性による結合活性の人為的発生の交絡作用を回避する。
【０１６９】
例えば、従来のガラス、金属、またはプラスチック基体上で行う測定は、抗体のアミロイドタンパク質およびアッセイプレートへの非特異的結合による影響を受ける。ヒト血漿は、アミロイド凝集体に対して低アビディティを有する比較的多量の多価抗体を含有する。かかる抗体、ならびにアッセイ基体に非特異的に結合する抗体の存在は、様々なアッセイ方法で測定された抗アミロイド活性を人為的に変更する。有利にも、本明細書において提供される方法は、結合のアビディティの差に基づいて、特異的抗体と非特異的抗体とを区別することができる。
【０１７０】
したがって、具体的な実施形態において、本発明は、対象におけるアミロイドタンパク質に関連する疾患の進行の予後を提供するための方法を提供する。一部の実施形態において、この方法は、（ａ）対象に由来する生物学的試料を適切な条件下で複数のアミロイド抗原と接触させて、（ｉ）アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む複合体、ならびに（ｉｉ）アミロイド抗原および高アビディティ抗アミロイド抗体を含む複合体、を形成するステップと、（ｂ）ステップ（ａ）で形成されたアミロイド抗原複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄して、アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む少なくとも１つの複合体を解離するステップと、（ｃ）残留複合体のレベルを検出するステップと、（ｄ）抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、疾患の進行の予後を提供するステップと、を含む。
【０１７１】
アミロイドタンパク質に関連する疾患の進行の予後を提供するための方法の一部の実施形態において、対照は、疾患の進行を経験した個人または個人の群に由来し、対照に対して類似するか、または増加したレベルの残留複合体は、疾患の高い可能性または進行を示す。一部の実施形態において、対照は、疾患の進行を経験していない個人または個人の群に由来し、対照に対して類似するレベルの残留複合体は、疾患の進行の低い可能性を示す。さらに別の実施形態において、対照は、以前に採取された同一の患者に由来し、対照に対して増加したレベルの残留複合体は、疾患の高い可能性または進行を示す。特定の実施形態において、以前の試料は、約１ヶ月前、もしくは２ヶ月前、３ヶ月前、４ヶ月前、５ヶ月前、６ヶ月前、７ヶ月前、８ヶ月前、９ヶ月前、１０ヶ月前、１１ヶ月前、１２ヶ月前、１３ヶ月前、１４ヶ月前、１５ヶ月前、１６ヶ月前、１７ヶ月前、１８ヶ月前、１９ヶ月前、２０ヶ月前、２１ヶ月前、２２ヶ月前、２３ヶ月前、２４ヶ月前、２５ヶ月前、２６ヶ月前、２７ヶ月前、２８ヶ月前、２９ヶ月前、３０ヶ月前、３１ヶ月前、３２ヶ月前、３３ヶ月前、３４ヶ月前、３５ヶ月前、または４年前、５年前、６年前、７年前、８年前、９年前、１０年前、あるいはそれ以上前に採取されていてもよい。当業者は、少なくとも１つの適当な対照を選定し、適宜結果を解釈する方法を理解するであろう。
【０１７２】
特定の実施形態において、アミロイドタンパク質に関連する疾患の進行の予後を提供するための方法は、対象に治療過程を指定する、または治療を投与するステップをさらに含む。一般に、この治療過程は、生物学的試料中の抗アミロイド抗体のレベルが対照閾値（例えば、疾患の高い可能性または進行を示す閾値）を上回るか、あるいは、陰性対照（例えば、疾患の進行を経験していない群または個人に由来する対照レベル）より、陽性対照（例えば、疾患の進行を経験している群または個人に由来する対照レベル）により近似している場合に指定されることになる。好適な実施形態において、治療は、免疫グロブリン製剤の投与を含む。
【０１７３】
特定の実施形態において、治療は、認知治療、例えば身体的および／または社会的活動、記憶ゲーム、ならびにパズルおよび／または問題の解決、薬物療法、例えばコリンエステラーゼ阻害剤（アセチルコリンの減少に対処するため）、グルタミン酸部分拮抗薬（例えば、メマンチン）、および精神医学的薬物（例えば、抗精神病薬、睡眠補助薬、抗不安薬、およびβ遮断薬）から選択される。コリンエステラーゼ阻害剤には、Ａｒｉｃｅｐｔ（登録商標）（塩酸ドネペジル）、Ｅｘｅｌｏｎ（登録商標）（リバスティグミン）、Ｒａｚａｄｙｎｅ（登録商標）（ガランタミン）、およびＣｏｇｎｅｘ（登録商標）（タクリン）、ならびにこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。好適な実施形態において、治療は免疫グロブリン製剤の投与を含む。具体的な実施形態において、方法はアルツハイマー病を診断することを含む。
【０１７４】
関連する実施形態において、本発明は、アミロイドタンパク質に関連する疾患の治療、例えばＡＤに対する公知の療法または予防的戦略の予後を提供するための方法を提供する。一部の実施形態において、この治療は、免疫グロブリン製剤、例えばＩＶＩＧなどの対象への投与を含んでもよい。一部の実施形態において、この方法は、（ａ）対象に由来する生物学的試料を適切な条件下で複数のアミロイド抗原と接触させて、（ｉ）アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む複合体、ならびに（ｉｉ）アミロイド抗原および高アビディティ抗アミロイド抗体を含む複合体、を形成するステップと、（ｂ）ステップ（ａ）で形成されたアミロイド抗原複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄して、アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む少なくとも１つの複合体を解離するステップと、（ｃ）残留複合体のレベルを検出するステップと、（ｄ）抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、疾患の治療の予後を提供するステップと、を含む。
【０１７５】
アミロイドタンパク質に関連する疾患の治療の予後を提供するための方法の一部の実施形態において、対照は、特定の治療に対して有利に反応した個人または個人の群に由来し、対照に対して類似するレベルの残留複合体は、疾患の治療の良好な予後を示す。一部の実施形態において、対照は、特定の治療に対して有利に反応しなかった個人または個人の群に由来し、対照に対して類似するレベルの残留複合体は、疾患の治療の不良な予後を示す。当業者は、少なくとも１つの適当な対照を選定し、適宜結果を解釈する方法を理解するであろう。
【０１７６】
特定の実施形態において、アミロイドタンパク質に関連する疾患の治療の予後を提供するための方法は、対象に治療過程を指定する、または治療を投与するステップをさらに含む。一般に、この治療過程は、生物学的試料中の抗アミロイド抗体のレベルが、陰性対照（例えば、特定の治療に対して有利に反応しなかった群または個人に由来する対照レベル）より、陽性対照（例えば、特定の治療に対して有利に反応した群または個人に由来する対照レベル）により近似している場合に指定されることになる。好適な実施形態において、治療は免疫グロブリン製剤の投与を含む。
【０１７７】
特定の実施形態において、治療は、認知治療、例えば身体的および／または社会的活動、記憶ゲーム、ならびにパズルおよび／または問題の解決、薬物療法、例えばコリンエステラーゼ阻害剤（アセチルコリンの減少に対処するため）、グルタミン酸部分拮抗薬（例えば、メマンチン）、および精神医学的薬物（例えば、抗精神病薬、睡眠補助薬、抗不安薬、およびβ遮断薬）から選択される。コリンエステラーゼ阻害剤には、Ａｒｉｃｅｐｔ（登録商標）（塩酸ドネペジル）、Ｅｘｅｌｏｎ（登録商標）（リバスティグミン）、Ｒａｚａｄｙｎｅ（登録商標）（ガランタミン）、およびＣｏｇｎｅｘ（登録商標）（タクリン）、ならびにこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。好適な実施形態において、治療は免疫グロブリン製剤の投与を含む。具体的な実施形態において、方法はアルツハイマー病を診断することを含む。
【０１７８】
アミロイドタンパク質に関連する疾患の進行の予後を提供するため、またはアミロイドタンパク質に関連する疾患の治療の予後を提供するための方法の一実施形態において、生物学的試料は、生体液、例えば血液、血漿、尿、リンパ液、滑液などである。他の実施形態において、生物学的試料は、組織試料または生検であってよい。好適な実施形態において、生物学的試料は、血液試料またはその画分（例えば、血漿または血漿画分）である。別の好適な実施形態において、生物学的試料は、免疫グロブリン調製物または濃縮物である。具体的な実施形態において、免疫グロブリン濃縮は、チオフィリッククロマトグラフィーによって実施される。別の具体的な実施形態において、免疫グロブリン濃縮は、混合モードリガンドクロマトグラフィーによって実施される。
【０１７９】
一実施形態において、検出される抗アミロイド抗体は、βアミロイド（Ａβ；Ａベータ）、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ；アミリン）、α−シヌクレイン（ＳＮＣＡ）、主要プリオンタンパク質（ＰｒＰ）、ハンチンチン（ＨＤ）、カルシトニン（ＣＣＰ）、心房性ナトリウム利尿因子（ＡＮＦ）、アポリポタンパク質ＡＩ（アポ−ＡＩ）、血清アミロイドＡタンパク質（ＳＡＡ）、メディンアミロイド（乳脂肪球−ＥＧＦ因子８タンパク質；ＭＦＧ−Ｅ８の断片）、プロラクチン（ＰＲＬ）、トランスサイレチン（ＡＴＴＲ）、リゾチームＣ（１，４−β−Ｎ−アセチルムラミダーゼＣ）、β２ミクログロブリン（β２Ｍ）、ゲルゾリン（ＡＧＥＬ）、形質転換成長因子β誘導タンパク質ｉｇ−ｈ３（βｉｇ−ｈ３；ケラトエピセリン）、シスタチンＣ（ＣＳＴ３）、免疫グロブリン軽鎖（ＡＬ）、およびポリグルタミン反復を有するアミロイドタンパク質から選択されるアミロイドタンパク質に対して特異的な抗体である。一実施形態において、抗アミロイド抗体は、アミロイドタンパク質モノマーに対して特異的である。別の実施形態において、抗アミロイド抗体はアミロイドタンパク質オリゴマー（すなわち、ダイマー、トリマーなど）に対して特異的である。さらに別の実施形態において、抗アミロイド抗体は、アミロイドタンパク質原線維に対して特異的である。
【０１８０】
一実施形態において、アミロイドタンパク質に関連する疾患または状態は、アルツハイマー病、２型糖尿病、パーキンソン病、伝染性海綿状脳症、ハンチントン病、甲状腺髄様癌、心不整脈、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、大動脈中膜アミロイド、プロラクチノーマ、家族性アミロイド多発ニューロパチー、遺伝性非ニューロパチー性全身性アミロイドーシス、透析関連アミロイドーシス、フィンランド型アミロイドーシス、格子状角膜ジストロフィー、脳アミロイド血管症、脳アミロイド血管症（アイスランド型）、および全身性ＡＬアミロイドーシスからなる群から選択される。好適な実施形態において、疾患または状態はアルツハイマー病である。特に好適な実施形態において、疾患または状態はアルツハイマー病であり、検出される抗アミロイド抗体は抗βアミロイド（Ａβ；Ａベータ）抗体である。
【０１８１】
本明細書において提供される方法の特定の実施形態において、特定のアミロイドタンパク質の存在またはレベルの検出は、アミロイドタンパク質に関連する疾患の進行の予後を提供するため、または疾患の治療の予後を提供するために有用である。本明細書において提供される方法における使用に特に適したアミロイドとアミロイド疾患との組み合わせの非限定的な例は、表１に記載されている。特定の実施形態において、表１に記載のアミロイドタンパク質に対して特異的な高アビディティ抗体の存在またはレベルの検出は、記載されている対応する疾患の診断となるであろう。
【０１８２】
好適な実施形態において、検出される抗アミロイド抗体は、βアミロイド（Ａβ；Ａベータ）に対して特異的な抗体である。一実施形態において、抗Ａβ抗体はＡβモノマーに対して特異的である。別の実施形態において、抗Ａβ抗体はＡβオリゴマー（すなわち、ダイマー、トリマーなど）に対して特異的である。さらに別の実施形態において、抗Ａβ抗体はＡβ原線維に対して特異的である。
【０１８３】
本明細書において提供される方法の一実施形態において、低親和性抗体または非特異的抗体は低アビディティ抗アミロイド抗体である。具体的な実施形態において、低アビディティ抗アミロイド抗体は低アビディティ抗Ａβ抗体である。
【０１８４】
本明細書において提供される方法で採用されるカオトロピック洗浄ステップは、いかなる公知のカオトロピック剤を用いて実施してもよい。カオトロピック塩を使用する場合、この塩は、塩素酸イオン（ＣｌＯ３−）以上のカオトロピック効果を有するアニオン、またはカルシウムイオンに優るカオトロピック効果を有するカチオンのいずれかを一般に含むであろう。
【０１８５】
一実施形態において、カオトロピック塩はグアニジン塩である。本明細書において提供される方法とともに使用することができるグアニジン塩の非限定的な例には、塩化グアニジン、硝酸グアニジン、およびチオシアン酸グアニジンがある。
【０１８６】
別の実施形態において、カオトロピック塩はチオシアネート塩である。本明細書において提供される方法とともに使用することができるチオシアネート塩の非限定的な例には、チオシアン酸アンモニウム、チオシアン酸カリウム、チオシアン酸ナトリウム、チオシアン酸リチウム、チオシアン酸カルシウム、およびチオシアン酸グアニジンがある。具体的な実施形態において、カオトロピック塩はチオシアン酸アンモニウムである。一実施形態において、チオシアン酸アンモニウムは、洗浄剤濃度約０．５Ｍ〜約４．０Ｍで使用する。別の実施形態において、チオシアン酸アンモニウムは、洗浄剤濃度約１．０Ｍ〜約３．０Ｍで使用する。さらに別の実施形態において、チオシアン酸アンモニウムは、洗浄剤濃度約１．５Ｍ〜約２．５Ｍで使用する。
【０１８７】
さらに別の実施形態において、カオトロピック塩は過塩素酸塩である。本明細書において提供される方法とともに使用することができる過塩素酸塩の非限定的な例には、過塩素酸アンモニウム、過塩素酸ナトリウム、過塩素酸リチウム、過塩素酸マグネシウム、および過塩素酸カルシウムがある。
【０１８８】
さらに別の実施形態において、カオトロピック塩はヨウ化物塩である。本明細書において提供される方法とともに使用することができるヨウ化物塩の非限定的な例には、ヨウ化アンモニウム、ヨウ化カリウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化リチウム、ヨウ化マグネシウム、およびヨウ化カルシウムがある。
【０１８９】
さらに別の実施形態において、カオトロピック塩は塩素酸塩である。本明細書において提供される方法とともに使用することができる塩素酸塩の非限定的な例には、塩素酸ナトリウム、塩素酸リチウム、塩素酸マグネシウム、および塩素酸カルシウムがある。
【０１９０】
本明細書において提供される方法の洗浄ステップで使用されるカオトロピック剤の濃度は、非特異的（すなわち、低アビディティ）抗アミロイド抗体とアミロイド抗原との間の相互作用を妨害するのに十分であるが、特異的（すなわち、高アビディティ）抗アミロイド抗体とアミロイド抗原との間の相互作用を妨害しないように選択されるべきである。使用されるカオトロピック剤の絶対濃度は、特定のカオトロピック剤の強度、および使用する特定のシステム（例えば、抗Ａβ抗体ＥＬＩＳＡアッセイ）において形成される抗体−アミロイド抗原相互作用の強度を含む多数の要因に左右されるであろう。当業者は、その特定のシステムに使用するカオトロピック剤の最適な濃度を容易に決定する方法を認識するであろう。一実施形態において、カオトロピック剤は、洗浄剤濃度約０．５Ｍ〜約４．０Ｍで使用する。別の実施形態においてカオトロピック剤は、洗浄剤濃度約１．０Ｍ〜約３．０Ｍで使用する。さらに別の実施形態において、カオトロピック剤は、洗浄剤濃度約１．５Ｍ〜約２．５Ｍで使用する。
【０１９１】
本明細書において提供される方法の特定の実施形態において、生物学的試料（すなわち、血液、血漿、尿、リンパ液など）中に認められる免疫グロブリンは、生物学的試料を１種または複数種のアミロイド抗原と接触させるステップの前に濃縮される。好ましくは、免疫グロブリンは、抗体を部分的または完全に変性させない方法によって濃縮される。一実施形態において、本明細書において提供される高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するための方法は、抗体の変性をもたらさないクロマトグラフ法により免疫グロブリンを濃縮するステップを含む。一実施形態において、このクロマトグラフ法は、チオフィリック樹脂を用いて実施される。別の実施形態において、このクロマトグラフ法は、混合モードリガンド化学物質を用いて実施される（Ｕｐｆｒｏｎｔ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ａ／Ｓ社）。他の実施形態において、本明細書において提供される高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するための方法は、抗体の変性をもたらさない非クロマトグラフ法により免疫グロブリンを濃縮するステップを含む。
【０１９２】
チオフィリック濃縮ステップを採用する方法
一態様において、本発明は、哺乳動物の血漿および他の生体液中のアミロイド形成性タンパク質に対する抗体のレベルを定量化することを含む、アミロイドタンパク質に関連する疾患または状態の進行の予後を提供する方法であって、非特異的抗体結合、血漿巨大分子からの干渉、および精製時の免疫グロブリンの変性による結合活性の人為的発生に関連するシグナルを減少させるために、チオフィリック濃縮ステップが採用される方法を提供する。
【０１９３】
関連する態様において、本発明は、哺乳動物の血漿および他の生体液中のアミロイド形成性タンパク質に対する抗体のレベルを定量化することを含む、アミロイドタンパク質に関連する疾患または状態の治療の予後を提供するための方法であって、非特異的抗体結合、血漿巨大分子からの干渉、および精製時の免疫グロブリンの変性による結合活性の人為的発生に関連するシグナルを減少させるために、チオフィリック濃縮ステップが採用される方法を提供する。
【０１９４】
既存の方法とは異なり、本発明は、非特異的抗体結合、血漿巨大分子からの干渉、および精製時の免疫グロブリンの変性による結合活性の人為的発生の交絡作用を回避する。
【０１９５】
例えば、内因性抗アミロイド活性を測定するために全血漿を使用した以前のアッセイは、他の未だに同定されていない血漿巨大分子からの干渉によって、人為的に変更される。有利にも、本明細書において提供される方法は、当該抗アミロイド抗体を保存する様式で、これらの未同定血漿巨大分子の干渉活性を排除する。
【０１９６】
生体標本から抽出した抗アミロイド抗体を測定するために現在採用されている方法は、変性条件への暴露の結果としての抗アミロイド活性の人為的な増加および損失を受ける。例えば、一部の方法は、Ａタンパク質またはＧタンパク質親和性クロマトグラフィーを用いた抗体（Ｉｇ）の濃縮時に、あるいは結合した抗原から抗体を遊離させるために、酸性化を採用する。低ｐＨへの暴露は、一部の哺乳動物免疫グロブリンを完全または部分的に変性させる。これは、機能の損失または多価性の増加につながり、これら両現象は、特異的抗アミロイド抗体のレベルの測定に有害な影響を与える。有利にも、本明細書において提供される方法は、酸または他の変性条件への暴露を用いずに、Ｉｇを血漿から分離し、弱く結合した抗原分子を抗アミロイド抗体から解離する。
【０１９７】
したがって、具体的な実施形態において、本発明は、対象におけるアミロイドタンパク質に関連する疾患の進行の予後を提供するための方法を提供する。一部の実施形態において、この方法は、（ａ）生物学的試料をチオフィリック樹脂と接触させて、抗アミロイド抗体に結合させるステップと、（ｂ）抗体を非変性ｐＨでチオフィリック樹脂から溶出して、溶出物を形成するステップと、（ｃ）溶出物をアミロイド抗原と接触させて、アミロイド抗原および抗アミロイド抗体を含む複合体を形成するステップと、（ｄ）複合体の存在またはレベルを検出するステップと、（ｅ）抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、疾患の進行の予後を提供するステップと、を含む。
【０１９８】
アミロイドタンパク質に関連する疾患の進行の予後を提供するための方法の一部の実施形態において、対照は、疾患の進行を経験した個人または個人の群に由来し、対照に対して類似する、または増加したレベルの残留複合体は、疾患の高い可能性または進行を示す。一部の実施形態において、対照は、疾患の進行を経験していない個人または個人の群に由来し、対象に対して類似するレベルの残留複合体は、疾患の進行の低い可能性を示す。さらに別の実施形態において、対照は、以前に採取された同一の患者に由来し、対照に対して増加したレベルの残留複合体は、疾患の高い可能性または進行を示す。特定の実施形態において、以前の試料は、約１ヶ月前、もしくは２ヶ月前、３ヶ月前、４ヶ月前、５ヶ月前、６ヶ月前、７ヶ月前、８ヶ月前、９ヶ月前、１０ヶ月前、１１ヶ月前、１２ヶ月前、１３ヶ月前、１４ヶ月前、１５ヶ月前、１６ヶ月前、１７ヶ月前、１８ヶ月前、１９ヶ月前、２０ヶ月前、２１ヶ月前、２２ヶ月前、２３ヶ月前、２４ヶ月前、２５ヶ月前、２６ヶ月前、２７ヶ月前、２８ヶ月前、２９ヶ月前、３０ヶ月前、３１ヶ月前、３２ヶ月前、３３ヶ月前、３４ヶ月前、３５ヶ月前、または４年前、５年前、６年前、７年前、８年前、９年前、１０年前、あるいはそれ以上前に採取されていてもよい。当業者は、少なくとも１つの適当な対照を選定し、適宜結果を解釈する方法を理解するであろう。
【０１９９】
特定の実施形態において、アミロイドタンパク質に関連する疾患の進行の予後を提供するための方法は、対象に治療過程を指定する、または治療を投与するステップをさらに含む。一般に、この治療過程は、生物学的試料中の抗アミロイド抗体のレベルが対照閾値（例えば、疾患の高い可能性または進行を示す閾値）を上回るか、または、陰性対照（例えば、疾患の進行を経験していない群または個人に由来する対照レベル）より、陽性対照（例えば、疾患の進行を経験している群または個人に由来する対照レベル）により近似している場合に指定されることになる。好適な実施形態において、治療は、免疫グロブリン製剤の投与を含む。
【０２００】
特定の実施形態において、治療は、認知治療、例えば身体的および／または社会的活動、記憶ゲーム、ならびにパズルおよび／または問題の解決、薬物療法、例えばコリンエステラーゼ阻害剤（アセチルコリンの減少に対処するため）、グルタミン酸部分拮抗薬（例えば、メマンチン）、および精神医学的薬物（例えば、抗精神病薬、睡眠補助薬、抗不安薬、およびβ遮断薬）から選択される。コリンエステラーゼ阻害剤には、Ａｒｉｃｅｐｔ（登録商標）（塩酸ドネペジル）、Ｅｘｅｌｏｎ（登録商標）（リバスティグミン）、Ｒａｚａｄｙｎｅ（登録商標）（ガランタミン）、およびＣｏｇｎｅｘ（登録商標）（タクリン）、ならびにこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。好適な実施形態において、治療は免疫グロブリン製剤の投与を含む。具体的な実施形態において、方法はアルツハイマー病を診断することを含む。
【０２０１】
関連する実施形態において、本発明は、アミロイドタンパク質に関連する疾患の治療、例えばＡＤに対する公知の療法または予防的戦略の予後を提供するための方法を提供する。一部の実施形態において、治療は、免疫グロブリン製剤、例えばＩＶＩＧの対象への投与を含んでよい。一部の実施形態において、この方法は、（ａ）生物学的試料をチオフィリック樹脂と接触させて、抗アミロイド抗体に結合させるステップと、（ｂ）抗体を非変性ｐＨでチオフィリック樹脂から溶出して、溶出物を形成するステップと、（ｃ）溶出物をアミロイド抗原と接触させて、アミロイド抗原および抗アミロイド抗体を含む複合体を形成するステップと、（ｄ）複合体の存在またはレベルを検出するステップと、（ｅ）抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、疾患の治療の予後を提供するステップと、を含む。
【０２０２】
アミロイドタンパク質に関連する疾患の治療の予後を提供するための方法の一部の実施形態において、対照は、特定の治療に対して有利に反応した個人または個人の群に由来し、対照に対して類似するレベルの残留複合体は、疾患の治療の良好な予後を示す。一部の実施形態において、対照は、特定の治療に対して有利に反応しなかった個人または個人の群に由来し、対照に対して類似するレベルの残留複合体は、疾患の治療の不良な予後を示す。当業者は、少なくとも１つの適当な対照を選定し、適宜結果を解釈する方法を理解するであろう。
【０２０３】
特定の実施形態において、アミロイドタンパク質に関連する疾患の治療の予後を提供する方法は、対象に治療過程を指定する、または治療を投与するステップをさらに含む。一般に、この治療過程は、生物学的試料中の抗アミロイド抗体のレベルが、陰性対照（例えば、特定の治療に対して有利に反応しなかった群または個人に由来する対照レベル）より、陽性対照（例えば、特定の治療に対して有利に反応した群または個人に由来する対照レベル）に、より近似している場合に指定されることになる。好適な実施形態において、治療は免疫グロブリン製剤の投与を含む。
【０２０４】
特定の実施形態において、治療は、認知治療、例えば身体的および／または社会的活動、記憶ゲーム、ならびにパズルおよび／または問題の解決、薬物療法、例えばコリンエステラーゼ阻害剤（アセチルコリンの減少に対処するため）、グルタミン酸部分拮抗薬（例えば、メマンチン）、および精神医学的薬物（例えば、抗精神病薬、睡眠補助薬、抗不安薬、およびβ遮断薬）から選択される。コリンエステラーゼ阻害剤には、Ａｒｉｃｅｐｔ（登録商標）（塩酸ドネペジル）、Ｅｘｅｌｏｎ（登録商標）（リバスティグミン）、Ｒａｚａｄｙｎｅ（登録商標）（ガランタミン）、およびＣｏｇｎｅｘ（登録商標）（タクリン）、ならびにこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。好適な実施形態において、治療は免疫グロブリン製剤の投与を含む。具体的な実施形態において、方法はアルツハイマー病を診断することを含む。
【０２０５】
アミロイドタンパク質に関連する疾患の進行の予後を提供するため、またはアミロイドタンパク質に関連する疾患の治療の予後を提供するための方法の一実施形態において、生物学的試料は、生体液、例えば 血液、血漿、尿、リンパ液、滑液などである。他の実施形態において、生物学的試料は、組織試料または生検であってよい。好適な実施形態において、生物学的試料は、血液試料またはその画分(例えば、血漿または血漿画分)である。別の好適な実施形態において、生物学的試料は、免疫グロブリン調製物または濃縮物である。具体的な実施形態において、免疫グロブリン濃縮は、チオフィリッククロマトグラフィーによって実施される。別の具体的な実施形態において、免疫グロブリン濃縮は、混合モードリガンドクロマトグラフィーによって実施される。
【０２０６】
一実施形態において、検出される抗アミロイド抗体は、βアミロイド（Ａβ；Ａベータ）、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ；アミリン）、α−シヌクレイン（ＳＮＣＡ）、主要プリオンタンパク質（ＰｒＰ）、ハンチンチン（ＨＤ）、カルシトニン（ＣＣＰ）、心房性ナトリウム利尿因子（ＡＮＦ）、アポリポタンパク質ＡＩ（アポ−ＡＩ）、血清アミロイドＡタンパク質（ＳＡＡ）、メディンアミロイド（乳脂肪球−ＥＧＦ因子８タンパク質；ＭＦＧ−Ｅ８の断片）、プロラクチン（ＰＲＬ）、トランスサイレチン（ＡＴＴＲ）、リゾチームＣ（１，４−β−Ｎ−アセチルムラミダーゼＣ）、β２ミクログロブリン（β２Ｍ）、ゲルゾリン（ＡＧＥＬ）、形質転換成長因子β誘導タンパク質ｉｇ−ｈ３（βｉｇ−ｈ３；ケラトエピセリン）、シスタチンＣ（ＣＳＴ３）、免疫グロブリン軽鎖（ＡＬ）、およびポリグルタミン反復を有するアミロイドタンパク質から選択されるアミロイドタンパク質に対して特異的な抗体である。一実施形態において、抗アミロイド抗体は、アミロイドタンパク質モノマーに対して特異的である。別の実施形態において、抗アミロイド抗体は、アミロイドタンパク質オリゴマー（すなわち、ダイマー、トリマーなど）に対して特異的である。さらに別の実施形態において、抗アミロイド抗体は、アミロイドタンパク質原線維に対して特異的である。
【０２０７】
一実施形態において、アミロイドタンパク質に関連する疾患または状態は、アルツハイマー病、２型糖尿病、パーキンソン病、伝染性海綿状脳症、ハンチントン病、甲状腺髄様癌、心不整脈、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、大動脈中膜アミロイド、プロラクチノーマ、家族性アミロイド多発ニューロパチー、遺伝性非ニューロパチー性全身性アミロイドーシス、透析関連アミロイドーシス、フィンランド型アミロイドーシス、格子状角膜ジストロフィー、脳アミロイド血管症、脳アミロイド血管症（アイスランド型）、および全身性ＡＬアミロイドーシスからなる群から選択される。好適な実施形態において、疾患または状態はアルツハイマー病である。特に好適な実施形態において、疾患または状態はアルツハイマー病であり、検出される抗アミロイド抗体は抗βアミロイド（Ａβ；Ａベータ）抗体である。
【０２０８】
本明細書において提供される方法の特定の実施形態において、特定のアミロイドタンパク質の存在またはレベルの検出は、アミロイドタンパク質に関連する、疾患の進行の予後を提供するためまたは疾患の治療の予後を提供するために有用である。本明細書において提供される方法における使用に特に適したアミロイドとアミロイド疾患との組み合わせの非限定的な例は、表１に記載されている。特定の実施形態において、表１に記載のアミロイドタンパク質に対して特異的な高アビディティ抗体の存在またはレベルの検出は、記載されている対応する疾患の診断となるであろう。
【０２０９】
好適な実施形態において、検出される抗アミロイド抗体は、βアミロイド（Ａβ；Ａベータ）に対して特異的な抗体である。一実施形態において、抗Ａβ抗体はＡβモノマーに対して特異的である。別の実施形態において、抗Ａβ抗体はＡβオリゴマー（すなわち、ダイマー、トリマーなど）に対して特異的である。さらに別の実施形態において、抗Ａβ抗体はＡβ原線維に対して特異的である。
【０２１０】
本明細書において提供される方法の一実施形態において、低親和性抗体または非特異的抗体は低アビディティ抗アミロイド抗体である。具体的な実施形態において、低アビディティ抗アミロイド抗体は低アビディティ抗Ａβ抗体である。
【０２１１】
本明細書において提供される方法の特定の実施形態において、アミロイド抗原および抗アミロイド抗体を含む複合体は、前記複合体の存在またはレベルを検出する前に、非特異的抗体（すなわち、低アビディティ抗体）とアミロイド抗原との間の相互作用を解離するために、カオトロピック塩を含有する溶液で洗浄される。本明細書において提供される方法で採用されるカオトロピック洗浄ステップは、いかなる公知のカオトロピック剤を用いて実施してもよい。カオトロピック塩を使用する場合、この塩は、塩素酸イオン（ＣｌＯ３−）以上のカオトロピック効果を有するアニオン、またはカルシウムイオンに優るカオトロピック効果を有するカチオンのいずれかを一般に含むであろう。一実施形態において、カオトロピック剤は、尿素、チオ尿素、グアニジン塩、チオシアネート塩、過塩素酸塩、ヨウ化物塩、および塩素酸塩から選択される。具体的な実施形態において、カオトロピック塩はチオシアン酸アンモニウムである。一実施形態において、チオシアン酸アンモニウムは、洗浄剤濃度約０．５Ｍ〜約４．０Ｍで使用する。別の実施形態において、チオシアン酸アンモニウムは、洗浄剤濃度約１．０Ｍ〜約３．０Ｍで使用する。さらに別の実施形態において、チオシアン酸アンモニウムは、洗浄剤濃度約１．５Ｍ〜約２．５Ｍで使用する。
【０２１２】
本明細書において提供される方法の洗浄ステップで使用されるカオトロピック剤の濃度は、非特異的（すなわち、低アビディティ）抗アミロイド抗体とアミロイド抗原との間の相互作用を妨害するのに十分であるが、特異的（すなわち、高アビディティ）抗アミロイド抗体とアミロイド抗原との間の相互作用を妨害しないように選択されるべきである。使用されるカオトロピック剤の絶対濃度は、特定のカオトロピック剤の強度、および使用する特定のシステム（例えば、抗Ａβ抗体ＥＬＩＳＡアッセイ）において形成される抗体−アミロイド抗原相互作用の強度を含む多数の要因に左右されるであろう。当業者は、それらの特定のシステムに使用するカオトロピック剤の最適な濃度を容易に決定する方法を認識するであろう。一実施形態において、カオトロピック剤は、洗浄剤濃度約０．５Ｍ〜約４．０Ｍで使用する。別の実施形態においてカオトロピック剤は、洗浄剤濃度約１．０Ｍ〜約３．０Ｍで使用する。さらに別の実施形態において、カオトロピック剤は、洗浄剤濃度約１．５Ｍ〜約２．５Ｍで使用する。
【０２１３】
薬学的組成物および投与量
免疫グロブリン、例えば、異種性のヒト抗体を含む濃縮免疫グロブリン調製物を含む薬学的組成物は、当技術分野で公知の様々な方法によって投与することができる。投与経路および／または投与形式は、所望の結果によって異なるが、典型的には静脈内、筋肉内、腹腔内、または皮下となる。薬学的組成物は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄、または表皮投与（例えば、注射または注入による）に適した許容される担体を含んでもよい。
【０２１４】
組成物の適正な流動性を、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散の場合は必要とされる粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持することができる。場合によっては、等張剤、例えば、糖類、多価アルコール、例えばマンニトールまたはソルビトール、ならびに塩化ナトリウムを組成物中に含むことが好ましい。注入可能な組成物の長期吸収は、吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムまたはゼラチンを組成物中に含むことによってもたらすことができる。
【０２１５】
本発明の薬学的組成物は、当技術分野で周知であり、日常的に実施される方法に従って調製することができる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，２０ｔｈ  ｅｄ．，２０００、およびＳｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，  ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８を参照されたい。薬学的組成物は、好ましくは、ＧＭＰ条件下で製造される。典型的には、治療有効用量または有効用量の免疫グロブリン製剤が、本発明の薬学的組成物に使用される。薬学的組成物は、当業者に公知の従来の方法によって剤形に配合される。投与計画は、最適な所望の反応（例えば、治療的反応）を提供するために調節される。例えば、単一のボーラスを投与してもよく、複数の分割用量を長時間かけて投与してもよく、あるいは治療状況の要件によって指示されるように、用量を比例的に減少または増加してもよい。投与の簡易性および投与量の均一性のために、投与量単位形態の非経口組成物を配合することが有利な場合がある。本明細書に使用される際、投与量単位形態とは、治療される対象に対する単位投与量として好適な物理的に分離した単位を指し、各単位は、必要な薬学的担体と関連して、所望の治療効果を生じるように計算された、所定の量の活性化合物を含有する。
【０２１６】
実際の投与量レベルは、特定の患者に対して、患者に有毒となることなく、所望の治療的反応を達成するために効果的な有効成分の量を得られるように異なってよい。医師は、薬学的組成物の用量を、所望の治療効果を達成するために必要なものよりも低いレベルの投与量から開始し、所望の効果が達成されるまで、投与量を徐々に増加させることができる。一般的に、有効用量は、治療される特異的な疾患または状態、その重症度、患者の生理学的状態、投与される他の薬、および治療が予防的であるかまたは治療的であるかを含む、多数の異なる因子によって異なる。例示的な治療計画は、２週間に１回、または１ヶ月に１回、または３〜６ヶ月に１回の投与を伴う。
【０２１７】
組成物は、複数回投与されてもよい。単一の投与の間隔は、毎週、毎月、または毎年であってもよい。間隔はまた、患者における治療の進行を測定することによって示されるように、不規則であってもよい。投与量および頻度は、患者における抗体の半減期によって異なってよい。
【０２１８】
免疫グロブリン製剤の場合、静注用免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）が一般に使用される。ＩＶＩＧ剤形は、注入による投与用に設計される。本発明のＩｇＧ製剤は、治療有効用量の量を有意に減少させる、例外的に高い免疫グロブリン濃度（１０％ｗ／ｖ以上）を達成しているため、本発明の組成物は、患者への皮下投与および／または筋肉内投与、ならびに一般に使用される静脈内投与に特に有利である。
【０２１９】
用語「有効量」は、対象内で治療されている病状（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病など）の改善または治療をもたらす、免疫グロブリン、特にＩｇＧ製剤の量を指す。対象に投与される有効量は、年齢、体重、疾患の重症度、投与経路（例えば、静脈内注入、皮下）、および治療に対する反応の個人差を考慮して、医師が決定することができる。特定の実施形態において、本発明の免疫グロブリン製剤は、毎日約５ｍｇ／キログラム〜約２０００ｍｇ／キログラムで、対象に投与することができる。追加の実施形態において、免疫グロブリン製剤は、少なくとも約１０ｍｇ／キログラム、少なくとも１５ｍｇ／キログラム、少なくとも２０ｍｇ／キログラム、少なくとも２５ｍｇ／キログラム、少なくとも３０ｍｇ／キログラム、または少なくとも５０ｍｇ／キログラムの量で投与することができる。追加の実施形態において、免疫グロブリン製剤は、毎日、最大約１００ｍｇ／キログラム、最大約１５０ｍｇ／キログラム、最大約２００ｍｇ／キログラム、最大約２５０ｍｇ／キログラム、最大約３００ｍｇ／キログラム、最大約４００ｍｇ／キログラムの用量で対象に投与することができる。他の実施形態において、免疫グロブリン製剤の用量は、より多いかまたはより少ないかであってもよい。さらに、免疫グロブリン製剤は、１日当たり、１つまたは複数の用量で投与されてもよい。ＩｇＧ製剤で治療される疾患に詳しい臨床医が、当技術分野で公知の基準に従って、患者に対する適切な用量を決定することができる。
【０２２０】
特定の実施形態において、濃縮ＩｇＧ製剤は、１回の投与あたり、約５ｍｇ／キログラム〜約２０００ｍｇ／キログラムの用量で、対象に投与されてもよい。特定の実施形態において、用量は、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも約２０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ、７０ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇ、９０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、１２５ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、１７５ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、３５０ｍｇ／ｋｇ、４００ｍｇ／ｋｇ、４５０ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、５５０ｍｇ／ｋｇ、６００ｍｇ／ｋｇ、６５０ｍｇ／ｋｇ、７００ｍｇ／ｋｇ、７５０ｍｇ／ｋｇ、８００ｍｇ／ｋｇ、８５０ｍｇ／ｋｇ、９００ｍｇ／ｋｇ、９５０ｍｇ／ｋｇ、１０００ｍｇ／ｋｇ、１１００ｍｇ／ｋｇ、１２００ｍｇ／ｋｇ、１３００ｍｇ／ｋｇ、１４００ｍｇ／ｋｇ、１５００ｍｇ／ｋｇ、１６００ｍｇ／ｋｇ、１７００ｍｇ／ｋｇ、１８００ｍｇ／ｋｇ、１９００ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも約２０００ｍｇ／ｋｇであってもよい。
【０２２１】
本発明によると、治療過程を完了するために必要な時間は、医師によって決定され、１日程度の短いものから、１ヶ月を超える範囲に及んでもよい。特定の実施形態において、治療過程は、１〜６ヶ月であってもよい。
【０２２２】
キット
本発明は、高親和性抗アミロイド抗体の検出および／または単離のためのキットをさらに提供する。キットは、アミロイド関連障害の診断、および例えばＩＶＩＧを用いての、適切な治療法のための個人の選定のために使用することができる。
【０２２３】
キットは、典型的には、書面または電子形式の使用説明書、および所望のアッセイのための標準的な試薬、溶液、および緩衝液を含む。キットは、場合によって標準対照、または消耗品の実験機器、例えば、ＥＬＩＳＡプレート、クロマトグラフィー用具、容器、および反応容器を含むこともある。キットはまた、生物学的試料の採取用の装置、例えば、シリンジおよび血液分画装置を含んでもよい。
【０２２４】
本発明のキットは、アミロイドに対して特異的な内因性高アビディティ抗体の検出用の物質を含んでもよい。キットは、試料中で、他のタンパク質からＩｇＧを分離するためのチオフィリッククロマトグラフィー試薬および適当な洗浄剤および溶出緩衝液を含んでもよい。
【０２２５】
キットはまた、高アビディティアミロイド特異的抗体を低アビディティ抗体または非特異的な抗体から分離するための物質を含んでもよい。このような物質は、アミロイドの所望の形態、例えば、モノマー、オリゴマー（球状体）、または原線維のアミロイド（例えば、Ａβ）に結合される固体支持体を含んでもよい。固体支持体は、ビーズ、クロマトグラフィー固定相（例えば、アガロース、シリカなど）、ＥＬＩＳＡプレートなどであってもよい。物質はまた、低親和性の抗体をアミロイド結合支持体から分離および除去するための、少なくとも１つのカオトロピック洗浄緩衝液を含んでもよい。キットは、有利には、試験試料との比較用に、公知の高アビディティ（陽性）対照および低アビディティ（陰性）対照を含んでもよい。
【０２２６】
本発明のキットは、本明細書に記載のように、高アビディティ抗アミロイド抗体の検出のための試薬をさらに含んでもよい。
【０２２７】
一実施形態において、本発明は、高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するための生物学的試料を調製するための方法であって、（ａ）対象に由来する生物学的試料を適切な条件下で複数のアミロイド抗原と接触させて、（ｉ）アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む複合体、ならびに（ｉｉ）アミロイド抗原および高アビディティ抗アミロイド抗体を含む複合体、を形成するステップと、（ｂ）ステップ（ａ）で形成されたアミロイド抗原複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄して、アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む少なくとも１つの複合体を解離するステップとを含む、方法を提供する。具体的な実施形態において、生物学的試料は、チオフィリッククロマトグラフィーで調製された免疫グロブリン組成物である。別の具体的な実施形態において、非特異的抗体は、低アビディティ抗アミロイド抗体である。
【０２２８】
一実施形態において、本発明は、高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するための生物学的試料を調製するための方法であって、（ａ）生物学的試料をチオフィリック樹脂と接触させて、抗アミロイド抗体に結合させるステップと、（ｂ）抗体を非変性ｐＨでチオフィリック樹脂から溶出して、溶出物を形成するステップと、（ｃ）溶出物をアミロイド抗原と接触させて、アミロイド抗原および抗アミロイド抗体を含む複合体を形成するステップと、を含む方法を提供する。具体的な実施形態において、この方法は、ステップ（ｃ）で形成された複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄するステップをさらに含む。
【０２２９】
一実施形態において、本発明は、生物学的試料中に存在する高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するためのキットであって、カオトロピック剤およびチオフィリッククロマトグラフィー吸着剤からなる群から選択される少なくとも１つを含むキットを提供する。一実施形態において、このキットは、カオトロピック剤およびチオフィリッククロマトグラフィー吸着剤の双方を含む。
【０２３０】
別の実施形態において、本発明は、生物学的試料中に存在する高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するためのキットを製造するための、カオトロピック剤および／またはチオフィリッククロマトグラフィー吸着剤の使用を提供する。
【０２３１】
別の実施形態において、本発明は、生物学的試料中に存在する高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するためのキットを製造するための、カオトロピック剤およびチオフィリッククロマトグラフィー吸着剤の組み合わせの使用を提供する。
【実施例】
【０２３２】
実施例１
ヒト血漿の収集およびＩｇＧの調製
健康成人およびＡＤを有する患者からの血液試料を、Ｗｅｉｌｌ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄによって承認されたプロトコルの下で入手し、標準的な方法による血漿の製造のためにＥＤＴＡ管に収集した。−８０℃で保管し、３０分間室温に暴露して解凍した標本に対して全血漿を使用する実験を実施した。ＩｇＧを、（１）Ｇタンパク質セファロース（Ａｋｅｒｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．，２６１：１０２４０−１０２４７（１９８６）上の標準的なクロマトグラフィー、および（２）チオフィリック吸着剤上の分取クロマトグラフィーの２つの方法によって、製造業者（Ｐｉｅｒｃｅ社、米国イリノイ州ロックフォード）の指定通りに血漿から精製した。Ｇタンパク質クロマトグラフィーについては、ＩｇＧを０．１Ｍグリシン−ＨＣｌ、ｐＨ２．８で溶出し、低ｐＨへの暴露時間を減少させるために２Ｍトリス塩基を含有する管に収集した。いずれのカラムからの溶出ＩｇＧも使用前にＰＢＳに対して透析した。
【０２３３】
実施例２
様々なオリゴマー種のＡβの調製
Ａβモノマー（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社、米国カリフォルニア州カマリロ）を５０％のアセトニトリルに溶解し、３７℃で３０分間インキュベートし、凍結乾燥させた。結果として得られたペレットを１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−プロパノール、すなわちＨＦＩＰに溶解し、３７℃で２０〜３０分間インキュベートし、次いでアルゴン下で乾燥させた。
【０２３４】
Ａβオリゴマーを、前述のように調製した（Ｂａｒｇｈｏｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，９５：８３４−８４７（２００５））。乾燥Ａβペプチドフィルムを、次いで、５ｍＭで乾燥ＤＭＳＯ中に溶解し、超音波処理器で３０分間超音波分解し、Ａβ構造の完全な破壊を確保した。Ａβを、ＰＢＳで４００μＭに調整し、１０分の１の量の２％ＳＤＳを添加し、その混合物を３７℃で６時間インキュベートした。次いで、混合物を３倍量の水で希釈し、４℃で１８時間インキュベートした。得られた球状オリゴマーを、ＳＤＳ：ＰＡＧＥおよびＳＥＣで特徴付け、４℃で最大４週間保管した。
【０２３５】
Ａβ原線維を、Ｏ'Ｎｕａｌｌａｉｎ法（Ｏ'Ｎｕａｌｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７６：７０７１−７０７８（２００６））の修正法によって調製し、ＨＦＩＰ処理したＡβモノマーを、作りたての２ｍＭ  ＮａＯＨに溶解した。穏やかな攪拌後、溶液を１０，０００ｘｇで６０分間遠心分離して、大きな塊または原線維を除去した。次いで上清を０．０５％のアジ化ナトリウムを含有する１倍ＰＢＳに調整し、３７℃で１０〜１４日間攪拌しながらインキュベートした。原線維構造を、ネガティブ染色したグリッドの透過電子顕微鏡法によって確認した。
【０２３６】
実施例３
ヒト抗Ａβ抗体のＥＬＩＳＡ
モノマー（ギ酸中１ｍｇ／ｍＬ）または事前に作成されたＡβ球状体のいずれかのＡβを合計０．１μｇ含有するｐＨ９．６の０．１Ｍ  ＮａＨＣＯ３緩衝液０．１ｍＬでＭａｘｉｓｏｒｐ  ＥＬＩＳＡプレート（Ｎｕｎｃ社、デンマーク、ロスキレ）を３７℃で１時間コーティングした。Ａβ原線維プレートは、前述のように調製した（Ｏ'Ｎｕａｌｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７６：７０７１−７０７８（２００６））。プレートは、即座に使用するか、または４℃で保管した。Ａβコーティング緩衝液を除去した後、プレートを、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０（ＰＢＳＴ）を含有する０．２ｍＬのＰＢＳ（１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、１０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、ｐＨ７．４）で３回洗浄した。最終洗浄後、プレートをＰＢＳＴ中の０．２ｍＬ／ウェルの１％ＢＳＡで、３７℃で１時間ブロッキングした。ブロッキング溶液を除去し、プレートを、上述のように、ＰＢＳＴで３回洗浄した。
【０２３７】
各ＥＬＩＳＡプレートを使用して、ＰＢＳＴで１：１０にそれぞれ希釈した１０個の血漿試料、ならびに陰性ＰＢＳＴ対照および１０ｍｇ／ｍＬのＩＶＩＧ陽性対照（Ｇａｍｍａｇａｒｄ  Ｌｉｑｕｉｄ、Ｂａｘｔｅｒ社）をアッセイした。完全な力価が成された後、各試料をＰＢＳＴ中の３倍連続希釈物として分析した。プレートを、３７℃で１時間インキュベートし、０．２ｍＬのＰＢＳＴで３回洗浄し、ＰＢＳＴ中の西洋ワサビペルオキシターゼ結合ヤギ親和性精製抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社、米国カリフォルニア州カマリロ）の１：１０，０００希釈物０．１ｍＬを用いて、３７℃で３０分間インキュベートした。プレートを、ＰＢＳＴで４回洗浄し、０．１ｍＬ／ウェルのＴＭＢ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、米国カリフォルニア州カールスバッド）を室温で１５〜３０分間添加することによって発現させた。陰性対照ウェルが変色する最初の兆候時に、０．１ｍＬの１Ｍ  ＨＣｌを各ウェルに添加して、反応を終結させた。４０５ｎｍでの光学密度（ＯＤ）を、Ｓｙｎｅｒｇｙ  ＨＴ  ＥＬＩＳＡリーダ（Ｂｉｏ−Ｔｅｋ社、米国バーモント州ウィヌースキ）を使用して測定した。
【０２３８】
抗Ａβ抗体力価を、ＫＣ４  Ｓｉｇｎａｔｕｒｅソフトウェアを使用して計算し、４つのパラメータのＳ字形曲線を血漿またはＩＶＩＧの連続希釈物から得られた光学密度に適合させた。曲線を適合させる前に、二次抗体のみの対照の平均光学密度を血漿またはＩＶＩＧを有するウェルの光学密度から差し引いた。必要であれば、試料の希釈を減らして、最低希釈試料の最大光学密度がＩＶＩＧ標準値の最大値の半分未満になるようにした。試料中の抗Ａβ抗体の力価を、光学密度が１０ｍｇ／ｍＬまで希釈されたＩＶＩＧ標準物の半最大光学密度（通常２．０〜３．０）に等しい希釈の逆数として表した。
【０２３９】
実施例４
ＳＰＲ測定
カルボキシル化センサーを、ＳｅｎｓｉＱ  ＳＰＲ装置（ＩＣＸ  Ｎｏｍａｄｉｃｓ社、米国オクラホマ州オクラホマシティ）に装填し、０．１Ｍ  リン酸を１分注入してすすいで表面の汚染物質を除去し、２ｍＭ  ＥＤＣ、０．５ｍＭ  ＮＨＳを対照および実験チャネルの両方に注入することによって活性化した。ｐＨ４．７の１０ｍＭ  酢酸緩衝液中のニュートラアビジン（２５μｇ／ｍＬ）、続いて１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．４）中のビオチン標識Ａβモノマー、オリゴマー、または原線維の５０μｇ／ｍＬ溶液、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１．３４ｍＭ  ＥＤＴＡ、および１％のＴｗｅｅｎ２０を実験チャネルに注入した。両チャネルへの１Ｍ  エタノールアミン（ｐＨ８）の注入によって、結合を終結させた。血漿または精製ＩｇＧ製剤の連続２倍希釈物を使用して、ＳＰＲ抗体結合アッセイを行った。結合の分析を、Ｑｄａｔソフトウェア（ＩＣＸ  Ｎｏｍａｄｉｃｓ社、米国オクラホマ州オクラホマシティ）を使用して行った。
【０２４０】
実施例５
カオトロピック塩による選択的な抗原−抗体の解離
選択的解離の条件を、まず、ブランクプレートおよびＡβ−コーティングプレートへ結合する抗体のアビディティを測定することによって測定した。次いで、ブランクプレートまたはアミロイドプレートに対する結合の最適な解離を提供するために必要なカオトロピック塩（チオシアン酸アンモニウム）のモル濃度を測定した（Ｐｕｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．，８６：８３−８７（１９８６））。簡潔にいうと、ＡβコーティングされたＥＬＩＳＡプレートを、ＰＢＳＴ中に希釈したヒト血漿またはマウスモノクローナル抗Ａβ抗体（１ｕｇ／ｍＬ）の１：１０希釈物とともに、上述のようにインキュベートした。ウェルを空にし、ｐＨ６．０の５０ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液０．２ｍＬ、または濃度を次第に上げたチオシアン酸アンモニウムを含有するこの緩衝液をウェルの各組に対して４通りに添加した。プレートを２５℃で３０分間インキュベートし、ＰＢＳＴで３回洗浄し、上述のように標準ＥＬＩＳＡ用に処理した。
【０２４１】
実施例６
親和性精製による抗アミロイド抗体の単離
アミノ末端またはカルボキシ末端で樹脂にＡβペプチドを結合させる、抗Ａβモノマー抗体の親和性精製用の樹脂を購入した（Ａｌｐｈａ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｎｔｌ．社、米国テキサス州サンアントニオ）。抗Ａβオリゴマーおよび抗Ａβ原線維抗体用の樹脂を、上述のように作製されたＡβオリゴマーと原線維を製造業者（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）の推奨通りにＮ−ヒドロキシコハク酸イミド−活性セファロース４Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗに結合することによって調製した。カラムをＰＢＳ中で平衡化し、ＰＢＳ中１０ｍｇ／ｍＬに希釈した５ｇ／ｍＬのＩＶＩＧを０．５ｍＬ／分で少なくとも合計５回、５００ｍＬの完全通過でカラムを通し、その後ＰＢＳで洗浄し、ｐＨ２．５の０．１Ｍ  グリシンで標準溶出した。溶出したＩｇＧを、即座に中和し、限外濾過スピンカラム上での遠心分離によって濃縮し、ＰＢＳに対して透析した。
【０２４２】
実施例７
抗Ａβ抗体測定時のブランクプレート結合
ヒト血漿または血清中の抗Ａβ抗体の定量化は、ほとんどの場合、モノマーまたは凝集（オリゴマーまたは原線維）のいずれかのＡβペプチドを含有するＥＬＩＳＡプレート上で実施されてきた。この方法でアッセイされる正常ヒトドナー由来の血漿試料は、ブランクＥＬＩＳＡウェル（いかなる添加された抗原も有さないウェル）に有意に結合する。従来のブロッキング剤、例えば、脱脂乳、ウシ胎仔血清、アルブミン、および市販のブロッキング調製物の使用にもかかわらず、多大な非特異的ブランクプレート結合が生じる（Ｋｌａｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｍｅｔｈ．１８７，２６３−２６９）。ブランクＥＬＩＳＡプレートへの結合の範囲は、血漿ドナーによって異なる（図１）。
【０２４３】
ブランクＥＬＩＳＡプレートへの結合は、血漿試料およびプールされた免疫グロブリン調製物、例えばＩＶＩＧから単離された精製ＩｇＧでも生じる。ＩＶＩＧは、飽和可能で濃度に依存する形でブランクプレート、Ａβモノマープレート、Ａβオリゴマープレート、およびＡβ原線維プレートに結合する。Ａ４５０ｎｍ単位における最大結合値は、それぞれ４．５４（ブランク）、２．７（モノマー）、２．８８（オリゴマー）、および２．８２（原線維）であった。ＥＬＩＳＡ曲線の最良適合に基づいて、吸光度単位におけるＩＶＩＧの最大結合は、ブランクプレートでいずれのアミロイド含有プレートよりもおよそ１．６倍大きかった。同様の結果が、正常な個人またはＡＤ患者の血漿から単離された血漿ＩｇＧに対して得られた。最大結合の絶対値は個別に異なった。ブランクプレートへのＩＶＩＧの実質的な結合は、アミロイド含有プレートと比較して、ブランクプレートで潜在的な抗体結合部位数がより多いことを示す。
【０２４４】
最大結合の振幅の差にもかかわらず、ブランクＥＬＩＳＡウェルに結合する抗体の見掛け上の力価は、一般的にＡβペプチドまたはその集合体を含有するウェルに結合するものよりも低い。ＩＶＩＧに対するブランクプレートの半最大結合力価は、抗Ａβモノマー、Ａβオリゴマー、およびＡβ原線維抗体に対するものよりも、それぞれ、１７．６倍、３．９倍、および６．５倍低かった。典型的な最大半値力価の値は、２．４４（ブランクプレート）、４２．８４（モノマー）、９．４２（オリゴマー）、および１５．８５（原線維）であった。ほとんどの個人ドナーの血漿から単離されたＩｇＧに対して、同様の結果が得られた。ブランクプレート結合の範囲は個別に異なったが、ＥＬＩＳＡ曲線への適合から誘導された最大結合値は、常にブランクプレートの場合に抗アミロイド抗体よりも高かった。これは、力価曲線ではなく、単一の希釈物に基づく抗アミロイド抗体レベルの測定値が、ブランクプレート結合の付加効果のために過大評価される傾向にあることを示唆する。
【０２４５】
ブランクＥＬＩＳＡウェルに結合する能力のある抗体の存在は、空のウェルに対して得られた観察された吸光度値が、アミロイド含有プレートに対して得られたものに匹敵するか、またはより大きい場合さえあるため、個人における抗Ａβオリゴマー抗体の測定を複雑化する（図１）。これは、プレートに結合する抗体が同一であることを意味しない。実際に、空のウェルで使用した濃度で得られた吸光度は、図１に示される２２個人のうち６個人において、アミロイド含有ウェルに対するものよりも大きく、抗体の全てが同一の特異性を有するわけではないことを示唆する。したがって、ブランクプレート結合は、場合によってはブランクプレートおよびアミロイド含有プレートの両方に結合する能力のある多価抗体の存在を反映する。
【０２４６】
実施例８
ブランクプレート結合は、Ｆａｂ媒介される
プレート結合相互作用の性質を判定するために、５個人に由来する市販のＩｇＧのプール、ならびにこの同一プールから単離されたＦａｂ断片、Ｆａｂ２'断片、およびＦｃ断片を検査した。ブランクＥＬＩＳＡウェルへの抗体の結合は、他のドメインが関与する非特異的相互作用とは対照的に、ＩｇＧ分子の抗原結合領域（Ｆａｂ）への結合の結果であることが認められた。図２は、ＩｇＧの抗原結合領域（Ｆａｂ断片およびＦａｂ２'断片）が、免疫グロブリン分子の他のドメインを介した非特異的相互作用よりも、むしろ空のウェルへの結合に関与することを示す。
【０２４７】
実施例９
ブランクプレート結合抗体の枯渇
血漿試料からのＩｇＧの単離は、ブランクＥＬＩＳＡプレートへの抗体の結合を排除しない。ポリスチレンおよび／またはアガロースのカラムにＩＶＩＧを通過させることで、これらの基体に容易に結合するＩｇＧ分子を枯渇させ、ブランクＥＬＩＳＡウェルへのＩＶＩＧの結合を減少させる可能性があるかどうかを試験した。枯渇は、ブランクプレート結合抗体に特異的ではなかった。ブランクプレートおよびＡβ含有プレートで得られた吸光度の絶対比は、カラムクロマトグラフィーにかかわらず、比較的一定に留まった。この手法のさらなる欠点は、抗Ａβ結合抗体の合計量が全枯渇手順によって実質的に減少されたことであり、Ａβに結合する抗体の一部がアガロースまたはポリスチレンにも付着しうることを示唆する。かかる結合は、Ａβおよびポリスチレンを含む複数の非関連エピトープに結合する低親和性多価抗体に起因する可能性が高い。
【０２４８】
特定の抗Ａβ抗体の多価性についてのより直接的な証拠は、血漿タンパク質のサイログロブリンを使用する競合研究によってもたらされる（図３）。Ａβペプチド含有ＥＬＩＳＡウェルへのＩＶＩＧの結合は、サイログロブリンが競合として使用される場合に減少し、大型プールのＩＶＩＧ中の抗Ａβ抗体が多価であり、これらのタンパク質の両方に結合することができることを裏付ける。図３に見られるように、サイログロブリン含有ＥＬＩＳＡプレートへのＩＶＩＧの結合を完全に排除したサイログロブリンの濃度は、ＡβプレートへのＩＶＩＧの結合を、対照値のおよそ５０％まで減少させる。
【０２４９】
実施例１０
カオトロピック塩によるブランクプレート結合の減少
アビディティの差に基づいて、ブランクウェルに結合した抗体をＡβに結合したものから分ける可能性を試験した。アビディティ測定を、濃度を次第に上げたカオトロピック塩のチオシアン酸アンモニウムを使用して行い、ＥＬＩＳＡプレート上に形成された抗体／抗原複合体を解離した。ウェルがブランクであるか、または球状ＡβオリゴマーでコーティングされているＥＬＩＳＡプレートへのＩＶＩＧの結合を比較した。図４は、ＩＶＩＧ中の抗球状Ａβオリゴマー抗体のアビディティは、ブランクプレートへのＩＶＩＧの結合に見られたものよりも明らかに大きかったことを示す典型的な実験を示す。ブランクプレート上では、リン酸緩衝液の対照条件に対して認められた結合の５０％は、プレートがおよそ２．５Ｍのチオシアン酸アンモニウム中でインキュベートされる際に生じる。Ａβオリゴマー含有プレートについては、５０％結合への減少は、本研究に使用される最高濃度の４Ｍ  チオシアン酸アンモニウムにおいてさえも達成されない。架橋および非架橋方法（Ｂａｒｇｈｏｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，９５：８３４−８４７（２００５）、Ｋａｙｅｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，２：１８−２９（２００７））を含む、いくつかの独立した方法によって調製されたＡβオリゴマーは、本質的に同一の結果を有した。
【０２５０】
これらの結果は、結合アビディティに基づいて、少なくとも一部の抗Ａβオリゴマー抗体を、ブランクプレートに結合する抗体から区別することができることを示唆する。この仮説をさらに試験するために、高親和性抗Ａβオリゴマー抗体のＩＶＩＧを、Ａβ球状体（ｇｌｏｂｕｌｏｍｅｒ）含有親和性カラムを通して枯渇させた。抗Ａβオリゴマー枯渇ＩＶＩＧについては、球体Ａβオリゴマーの最大結合の５０％を達成するために必要なカオトロピック塩の濃度は、４Ｍ超から１．３Ｍ  チオシアン酸アンモニウムへ減少した。同様に、空のウェルについては、２．５Ｍから０．９Ｍ  チオシアン酸アンモニウムへの減少があった。これらの結果は、ヒトレパートリー中の一部の抗体は、Ａβオリゴマーおよび空のウェルの両方と相互作用することを示唆する。しかしながら、Ａβオリゴマーに対して特異的に高アビディティを有する抗体も存在する。
【０２５１】
実施例１１
抗体結合に続く、チオシアン酸アンモニウム中でのインキュベーションが、高親和性抗Ａβオリゴマー抗体と、より無差別に空のＥＬＩＳＡウェルに結合するものとの区別を可能にすることを確認するために、若年対照２例および高齢対照２例の４個人からの血漿中ＩｇＧおよび精製ＩｇＧのアビディティを測定した（図５）。これらの個人からの精製ＩｇＧは、１ｍｇ／ｍＬにおいて、空のウェルへの一貫した結合を示した。ブランクプレート結合に対して観察された吸光度は、実施例１０におけるＩＶＩＧで得られた結果と同様に、４Ｍ  チオシアネート処理後に約８０％減少した。対照的に、Ａβ４２オリゴマーを含有するウェルへの相対的な結合は、約２０％のみの減少であった。Ａβオリゴマーと同様に、抗Ａβモノマーおよび抗Ａβ原線維の抗体の両方は、チオシアン酸アンモニウム解離に対して、ブランクプレートへの抗体結合よりも抵抗性がある。したがって、空のＥＬＩＳＡウェルに結合する能力を有する抗体からの最小限の干渉で、精製ヒト抗体の混合物における抗Ａβ抗体の測定を可能にする一連の条件を定義することが可能であると思われる。
【０２５２】
実施例１２
酸および不安定化剤による多価抗体の発生
血清の弱酸性条件への暴露でさえも、多価抗体の力価を増加させることが示されており、その多数が自己抗原を標的にする（Ｂｏｕｖｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．，１６：１６３−１７２  （２００１）、Ｄｊｏｕｍｅｒｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃａｎｄ  Ｊ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，６１：３５７-３６３（２００５））。弱酸性化による多価性の発生もまた、ｐＨ変化が、抗原結合部位の部分変性を通じて多価結合の増加につながった、特異的モノクローナル抗体に関して報告されている。（Ｄｉｍｉｔｒｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，４４：１８５４−１８６３（２００７））。いくつかのロットのＩＶＩＧ（Ｇａｍｍａｇｕａｒｄ，Ｂａｘｔｅｒ）を試験し、ｐＨ３．０での酸性化が、３．７倍〜９．８倍の範囲でＡβモノマー力価の増加をもたらすことを見出した。力価におけるこの増加は、中性ｐＨおよび室温での２４時間のインキュベーション期間により逆転した。ｐＨ２．０でのインキュベーションによる多価性の発生は、完全に可逆ではなかった。これは、非常に低いｐＨでのインキュベーションが抗体の構造的完全性を不可逆的に変化させ、それでもなお様々な抗原に非特異的に結合する能力を保持することを示唆する。
【０２５３】
６Ｍ  尿素への暴露は、よりストリンジェントな変性処理であり、また、ＩＶＩＧ中に存在する多数の自己抗体の見掛け上の力価を増加させる（Ｂｏｕｖｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．，１６：１６３−１７２（２００１））。ＰＢＳ中で１０ｍｇ／ｍＬにおけるＩＶＩＧを、単独または６Ｍ  尿素を含むＰＢＳに対して透析した。抗体力価の増加を、尿素処理後の抗体力価をＰＢＳ対照の抗体力価で割ることによって計算した（Ｗａｒｄｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０１：１３７４−１３７７（２００３）。表１に示される結果は、各自己抗原に対する２回の実験の最小値の平均である。表１は、６Ｍ  尿素処理が、ＩＶＩＧにおける抗体のＡβを含む１組の自己抗原への結合を、増加させたことを示す。増加は、対照のＩＶＩＧ製剤と比較して、尿素処理後に４倍〜２３倍に及び、最大の効果がＡβペプチドに見られた。したがって、ＩｇＧの部分変性は、特に血清抗Ａβ抗体の力価を、おそらくは抗原結合部位を変化させてより無差別な結合を可能にすることによって増加させた。
【０２５４】
（表１）６Ｍ  尿素に対する透析後のＩＶＩＧの自己抗体力価の増加＊
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【０２５５】
酸または他の変性条件への暴露によるＡβ結合活性の人為的発生は、精製ヒトＩｇＧ調製物中の抗Ａβ抗体力価の測定に重要な意味合いを有する。例えば、正常対照において、Ｇタンパク質方法によって精製されたＩｇＧによるブランクプレート結合の半最大力価は、元の血漿に対するものの１００倍を超える高さであった。これらの同一の個人において、５０倍の増加がオリゴマープレートへの結合に関して酸性化後に認められた。少なくとも部分的にＩｇＧを変性させ得る方法、例えば、Ｇタンパク質樹脂からの酸溶出によるヒトＩｇＧの精製は、酸誘導の多価性により人工的に高い力価をもたらす。
【０２５６】
実施例１３
非変性ＩｇＧ精製の効果
次に、チオフィリック吸着剤クロマトグラフィーによるＩｇＧの単離が、酸溶出と関連する多価性の発生を回避するかどうかを調査した。チオフィリック吸着剤クロマトグラフは、スルホン基がチオエーテル基に近接する部分へのＩｇＧの結合を十分に引き出す。図６に示されるように、チオフィリッククロマトグラフィーによって調製されたＩｇＧは、血漿中に存在する非免疫グロブリンタンパク質の大半を除去する。チオフィリック吸着剤は、Ｇタンパク質クロマトグラフィーよりも、他の血漿成分の除去への有効性が幾分低いが、免疫グロブリンを多価性の発生を助長しうる変性条件にさらすことはない。この断定と一致して、チオフィリック吸着剤を使用するＩＶＩＧからのＩｇＧの再精製は、Ａβプレートまたはブランクプレートのいずれかへの抗体結合の力価を変化させない。
【０２５７】
全血漿中の抗Ａβ抗体の結合を、様々な方法によって精製されたものと比較するために、上述のように表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用した。正常対照からの全血漿の結合をチオフィリック吸着剤またはＧタンパク質クロマトグラフィーのいずれかによって同一の血漿から精製されたＩｇＧと比較した。測定を、Ａβオリゴマーセンサー上で実施した。Ａβオリゴマーセンサーは、ニュートラアビジンに結合したビオチン化Ａβオリゴマーを含み、これはセンサー上でＰＥＧ鎖に共有結合していた。
【０２５８】
３つの調製物の比較濃度に対するＳＰＲ反応曲線を、図７に示す。チオフィリック試薬によって精製されたＩｇＧは、全血漿よりも、より正の偏差をもたらす。この差は、Ａβ結合を有する血漿タンパク質による干渉の減少を反映すると思われる。ＩｇＧがチオフィリッククロマトグラフィーによって単離される場合、ブランクプレート結合に対する半最大力価における増加は、血漿よりもおよそ３倍大きく、オリゴマープレートへの結合についてはほぼ５倍大きかった。したがって、Ａβオリゴマープレートへの特異的結合は、チオフィリック単離法で改善され、干渉する血漿タンパク質の排除を反映する可能性が高い。
【０２５９】
Ｇタンパク質クロマトグラフィーによって精製されたＩｇＧは、際立って異なる負の反応を示し、これは抗原含有プレートよりも対照センサーに対するより強い結合を示している。対照センサーは末端にアラニンを有するＰＥＧコーティングを有し、Ｇタンパク質クロマトグラフィー後の負の反応は、酸暴露後にＩｇＧ中に新しい多価特異性が発生することに起因する可能性が高く、そのうちの少なくとも一部は対照センサー上のＰＥＧコーティングを認識する。
【０２６０】
実施例１４
血漿抗アミロイド活性の測定
ヒト血漿中で測定される抗アミロイド活性が、全て天然の多価性または誘発された多価性の結果であったかどうかを判定するために、親和性クロマトグラフィーを使用して、抗Ａβモノマー抗体、Ａβオリゴマー抗体、およびＡβ原線維抗体を含む、様々な特異性のヒト抗アミロイド抗体をＩＶＩＧから分離した。抗Ａβモノマー抗体の場合、２種類の抗体を単離した。抗体の第１の組は、アミノ末端で親和性樹脂に結合するＡβモノマーに結合し（抗ＡβＮ）、第２のものは、カルボキシル末端で結合されるＡβモノマーに結合した（抗ＡβＣ）。
【０２６１】
抗Ａβモノマー抗体および抗オリゴマー抗体の２種類について、ＳＰＲ分析によって解離定数を測定した。表２は、単離した抗アミロイド抗体、およびアミノ末端付近に位置するＡβエピトープに結合する６Ｅ１０単クローン性抗Ａβ抗体に対するＫｄ測定値を示す。結合親和性は、親和性精製に使用されたものと同一形態のアミロイドを含有するセンサーに対して高いため、Ｋｄ値は、親和性精製抗体が異なる特異性を有することを示している。しかしながら、いくつかの重複する特異性が存在する可能性がある。全ての親和性精製抗体調製物は、ブランクＥＬＩＳＡプレートのウェルへの結合を示した。ブランクウェル結合に対して得られた様々なアミロイドプレート上で見られる吸光密度の割合は、異なる親和性精製抗体調製物によって変化した。例えば、抗ＡβＮ抗体の場合、ブランクウェルへの結合は、モノマーウェルへの結合のほぼ２８％、原線維ウェルへの結合のほぼ１５％、およびオリゴマーウェルへの結合の実質的に全てと同等であった。
【０２６２】
（表２）ＩＶＩＧに由来する親和性精製抗アミロイド抗体のＫｄ
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【０２６３】
表３は、ＩＶＩＧから単離された、親和性精製抗Ａβ抗体のブランクプレート結合特性をまとめたものである。抗原線維抗体の場合、２つの異なる調製物をアッセイした。第１の抗体調製物は、Ａβ４２原線維カラム上で親和性精製され、Ａβペプチドに対する抗体、および原線維化と関連する構造的ネオエピトープを含む。抗Ａβ原線維抗体の第２の調製物は、ＩＡＰＰ（膵島アミロイドポリペプチド）原線維カラム上で２回目に親和性精製され、おそらくは、原線維に関連するネオエピトープに対する抗体のみを含有する（Ｏ'Ｎｕａｌｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７６：７０７１−７０７８（２００６））。後者の画分は、減少したブランクプレート結合を示した。
【０２６４】
（表３）親和性精製抗Ａβ抗体のブランクプレート結合、ブランクプレート結合とアミロイドプレート結合との比率
2014507649.tif 000005
＊原線維状Ａβ４２親和性樹脂上の通過により精製
＊＊原線維状Ａβ４２親和性樹脂上での精製、続いて原線維状ＩＡＰＰ樹脂上での再精製により精製
【０２６５】
本明細書に記載の実施例および実施形態は、例示のみを目的とするものであり、それを踏まえた様々な修正または変更が、当業者に提示されることであろうが、本出願の精神と範囲および添付の請求項の範囲の内に含まれるものであることを理解されたい。本明細書に引用されるすべての刊行物、特許、および特許出願は、あらゆる目的で、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【手続補正書】
【提出日】平成26年1月16日(2014.1.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物学的試料中に存在する高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するための方法であって、
（ａ）前記生物学的試料を適切な条件下で複数のアミロイド抗原と接触させて、
（ｉ）アミロイド抗原および非特異的抗体を含む複合体、ならびに
（ｉｉ）アミロイド抗原および高アビディティ抗アミロイド抗体を含む複合体、
を形成するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）で形成された前記アミロイド抗原複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄して、アミロイド抗原および非特異的抗体を含む少なくとも１つの複合体を解離するステップと、
（ｃ）残留複合体の存在またはレベルを検出するステップと、
を含む、前記方法。
【請求項２】
前記生物学的試料がチオフィリック（ｔｈｉｏｐｈｉｌｉｃ）クロマトグラフィーで調製された免疫グロブリン組成物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記非特異的抗体が低アビディティ抗アミロイド抗体である、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記高アビディティ抗アミロイド抗体が、βアミロイド（Ａβ；Ａベータ）、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ；アミリン）、α−シヌクレイン（ＳＮＣＡ）、主要プリオンタンパク質（ＰｒＰ）、ハンチンチン（ＨＤ）、カルシトニン（ＣＣＰ）、心房性ナトリウム利尿因子（ＡＮＦ）、アポリポタンパク質ＡＩ（アポ−ＡＩ）、血清アミロイドＡタンパク質（ＳＡＡ）、メディンアミロイド（乳脂肪球−ＥＧＦ因子８タンパク質；ＭＦＧ−Ｅ８の断片）、プロラクチン（ＰＲＬ）、トランスサイレチン（ＡＴＴＲ）、リゾチームＣ（１，４−β−Ｎ−アセチルムラミダーゼＣ）、β２ミクログロブリン（β２Ｍ）、ゲルゾリン（ＡＧＥＬ）、形質転換成長因子β誘導タンパク質ｉｇ−ｈ３（βｉｇ−ｈ３；ケラトエピセリン）、シスタチンＣ（ＣＳＴ３）、免疫グロブリン軽鎖（ＡＬ）、およびポリグルタミン反復を有するアミロイドタンパク質からなる群から選択されるアミロイドタンパク質に特異的である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記抗アミロイド抗体がアミロイドタンパク質モノマーを特異的に認識する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記抗アミロイド抗体がアミロイドタンパク質オリゴマーを特異的に認識する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記抗アミロイド抗体がアミロイドタンパク質原線維を特異的に認識する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記抗アミロイド抗体が抗βアミロイド抗体である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
第１０の態様において、本発明は、アミロイドタンパク質に関連する疾患の治療、例えば公知のＡＤに対する療法または予防的戦略の予後を提供するための方法を提供する。一部の実施形態において、治療は、対象における免疫グロブリン製剤、例えばＩＶＩＧの投与を含んでもよい。一部の実施形態において、この方法は、（ａ）生物学的試料をチオフィリック樹脂と接触させて、抗アミロイド抗体に結合させるステップと、（ｂ）抗体を非変性ｐＨでチオフィリック樹脂から溶出して、溶出物を形成するステップと、（ｃ）溶出物をアミロイド抗原と接触させて、アミロイド抗原および抗アミロイド抗体を含む複合体を形成するステップと、（ｄ）複合体の存在またはレベルを検出するステップと、（ｅ）抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、疾患の治療の予後を提供するステップと、を含む。一部の実施形態において、本発明は、対象におけるアルツハイマー病の治療の予後を提供するための方法を提供する。上記に説明したように、当業者は、アミロイド関連障害を診断するための少なくとも１つの適当な対照を選定し、適宜結果を解釈する方法を理解するであろう。
[本発明1001]
生物学的試料中に存在する高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するための方法であって、
（ａ）前記生物学的試料を適切な条件下で複数のアミロイド抗原と接触させて、
（ｉ）アミロイド抗原および非特異的抗体を含む複合体、ならびに
（ｉｉ）アミロイド抗原および高アビディティ抗アミロイド抗体を含む複合体、
を形成するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）で形成された前記アミロイド抗原複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄して、アミロイド抗原および非特異的抗体を含む少なくとも1つの複合体を解離するステップと、
（ｃ）残留複合体の存在またはレベルを検出するステップと、
を含む、前記方法。
[本発明1002]
前記生物学的試料がチオフィリック（ｔｈｉｏｐｈｉｌｉｃ）クロマトグラフィーで調製された免疫グロブリン組成物である、本発明1001の方法。
[本発明1003]
前記非特異的抗体が低アビディティ抗アミロイド抗体である、本発明1001または本発明1002の方法。
[本発明1004]
生物学的試料中に存在する高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するための方法であって、
（ａ）前記生物学的試料をチオフィリック樹脂と接触させて、前記抗アミロイド抗体に結合させるステップと、
（ｂ）前記抗体を非変性ｐＨで前記チオフィリック樹脂から溶出して、溶出物を形成するステップと、
（ｃ）前記溶出物をアミロイド抗原と接触させて、前記アミロイド抗原および前記抗アミロイド抗体を含む複合体を形成するステップと、
（ｄ）前記複合体の存在またはレベルを検出するステップと、
を含む、前記方法。
[本発明1005]
前記ステップ（ｃ）で形成された前記複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄するステップをさらに含む、本発明1004の方法。
[本発明1006]
アミロイド関連疾患または状態の治療の候補者である対象を特定するための方法であって、
（ａ）前記対象に由来する生物学的試料を適切な条件下で複数のアミロイド抗原と接触させて、
（ｉ）アミロイド抗原および非特異的抗体を含む複合体、ならびに
（ｉｉ）アミロイド抗原および高アビディティ抗アミロイド抗体を含む複合体、
を形成するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）で形成された前記アミロイド抗原複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄して、アミロイド抗原および低アビディティ抗アミロイド抗体を含む少なくとも1つの複合体を解離するステップと、
（ｃ）残留複合体のレベルを検出するステップと、
（ｄ）前記抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、前記対象が免疫グロブリン製剤の投与を含む治療から利益を得るかどうかを決定するステップと、
を含む、前記方法。
[本発明1007]
前記治療が免疫グロブリン製剤の投与を含む、本発明1006の方法。
[本発明1008]
前記治療が身体的活動または社会的活動を含む、本発明1006または本発明1007の方法。
[本発明1009]
前記治療がコリンエステラーゼ阻害剤、グルタミン酸部分拮抗薬、または精神医学的薬物を含む、本発明1006〜1008のいずれかの方法。
[本発明1010]
前記生物学的試料がチオフィリッククロマトグラフィーで調製された免疫グロブリン組成物である、本発明1006〜1009のいずれかの方法。
[本発明1011]
前記非特異的抗体が低アビディティ抗アミロイド抗体である、本発明1006〜1010のいずれかの方法。
[本発明1012]
前記高アビディティ抗アミロイド抗体が、βアミロイド（Ａβ；Ａベータ）、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ；アミリン）、α−シヌクレイン（ＳＮＣＡ）、主要プリオンタンパク質（ＰｒＰ）、ハンチンチン（ＨＤ）、カルシトニン（ＣＣＰ）、心房性ナトリウム利尿因子（ＡＮＦ）、アポリポタンパク質ＡＩ（アポ−ＡＩ）、血清アミロイドＡタンパク質（ＳＡＡ）、メディンアミロイド（乳脂肪球−ＥＧＦ因子8タンパク質；ＭＦＧ−Ｅ8の断片）、プロラクチン（ＰＲＬ）、トランスサイレチン（ＡＴＴＲ）、リゾチームＣ（1，4−β−Ｎ−アセチルムラミダーゼＣ）、β2ミクログロブリン（β2Ｍ）、ゲルゾリン（ＡＧＥＬ）、形質転換成長因子β誘導タンパク質ｉｇ−ｈ3（βｉｇ−ｈ3；ケラトエピセリン）、シスタチンＣ（ＣＳＴ3）、免疫グロブリン軽鎖（ＡＬ）、およびポリグルタミン反復を有するアミロイドタンパク質からなる群から選択されるアミロイドタンパク質に特異的である、本発明1001〜1011のいずれかの方法。
[本発明1013]
前記抗アミロイド抗体がアミロイドタンパク質モノマーを特異的に認識する、本発明1001〜1012のいずれかの方法。
[本発明1014]
前記抗アミロイド抗体がアミロイドタンパク質オリゴマーを特異的に認識する、本発明1001〜1012のいずれかの方法。
[本発明1015]
前記抗アミロイド抗体がアミロイドタンパク質原線維を特異的に認識する、本発明1001〜1012のいずれかの方法。
[本発明1016]
前記抗アミロイド抗体が抗βアミロイド抗体である、本発明1001〜1015のいずれかの方法。
[本発明1017]
免疫グロブリン製剤の投与を含む治療の候補者である対象を特定するための方法であって、
（ａ）前記生物学的試料をチオフィリック樹脂と接触させて、該試料中に存在する抗アミロイド抗体に結合させるステップと、
（ｂ）前記抗体を非変性ｐＨで前記チオフィリック樹脂から溶出して、溶出物を形成するステップと、
（ｃ）前記溶出物をアミロイド抗原と接触させて、前記アミロイド抗原および前記抗アミロイド抗体を含む複合体を形成するステップと、
（ｄ）前記複合体の存在またはレベルを検出するステップと、
（ｅ）前記抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、前記対象が免疫グロブリン製剤の投与を含む治療から利益を得るかどうかを決定するステップと、
を含む、前記方法。
[本発明1018]
前記治療が免疫グロブリン製剤の投与を含む、本発明1017の方法。
[本発明1019]
前記治療が身体的活動または社会的活動を含む、本発明1017または本発明1018の方法。
[本発明1020]
前記治療がコリンエステラーゼ阻害剤、グルタミン酸部分拮抗薬、または精神医学的薬物を含む、本発明1017〜1019のいずれかの方法。
[本発明1021]
前記ステップ（ｃ）で形成された前記複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄するステップをさらに含む、本発明1017〜1020のいずれかの方法。
[本発明1022]
前記対象がアミロイドタンパク質に関連する疾患を有すると診断されている、本発明1006〜1021のいずれかの方法。
[本発明1023]
前記疾患が、アルツハイマー病、2型糖尿病、パーキンソン病、伝染性海綿状脳症、ハンチントン病、甲状腺髄様癌、心不整脈、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、大動脈中膜アミロイド、プロラクチノーマ、家族性アミロイド多発ニューロパチー、遺伝性非ニューロパチー性全身性アミロイドーシス、透析関連アミロイドーシス、フィンランド型アミロイドーシス、格子状角膜ジストロフィー、脳アミロイド血管症、脳アミロイド血管症（アイスランド型）、および全身性ＡＬアミロイドーシスからなる群から選択される、本発明1022の方法。
[本発明1024]
前記疾患がアルツハイマー病である、本発明1023の方法。
[本発明1025]
対象においてアミロイドタンパク質に関連する疾患を診断するための方法であって、
（ａ）前記対象に由来する生物学的試料を適切な条件下で複数のアミロイド抗原と接触させて、
（ｉ）アミロイド抗原および非特異的抗体を含む複合体、ならびに
（ｉｉ）アミロイド抗原および高アビディティ抗アミロイド抗体を含む複合体、
を形成するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）で形成された前記アミロイド抗原複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄して、アミロイド抗原および非特異的抗体を含む少なくとも1つの複合体を解離するステップと、
（ｃ）残留複合体のレベルを検出するステップと、
（ｄ）前記抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、前記対象を診断するステップと、
を含む、前記方法。
[本発明1026]
前記生物学的試料がチオフィリッククロマトグラフィーで調製された免疫グロブリン組成物である、本発明1025の方法。
[本発明1027]
前記非特異的抗体が低アビディティ抗アミロイド抗体である、本発明1025または本発明1026の方法。
[本発明1028]
対象においてアミロイドタンパク質に関連する疾患を診断するための方法であって、
（ａ）前記生物学的試料をチオフィリック樹脂と接触させて、抗アミロイド抗体に結合させるステップと、
（ｂ）前記抗体を非変性ｐＨで前記チオフィリック樹脂から溶出して、溶出物を形成するステップと、
（ｃ）前記溶出物をアミロイド抗原と接触させて、前記アミロイド抗原および前記抗アミロイド抗体を含む複合体を形成するステップと、
（ｄ）前記複合体の存在またはレベルを検出するステップと、
（ｅ）前記抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、前記対象を診断するステップと、
を含む、前記方法。
[本発明1029]
前記ステップ（ｃ）で形成された前記複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄するステップをさらに含む、本発明1028の方法。
[本発明1030]
前記疾患がアルツハイマー病、2型糖尿病、パーキンソン病、伝染性海綿状脳症、ハンチントン病、甲状腺髄様癌、心不整脈、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、大動脈中膜アミロイド、プロラクチノーマ、家族性アミロイド多発ニューロパチー、遺伝性非ニューロパチー性全身性アミロイドーシス、透析関連アミロイドーシス、フィンランド型アミロイドーシス、格子状角膜ジストロフィー、脳アミロイド血管症、脳アミロイド血管症（アイスランド型）、および全身性ＡＬアミロイドーシスからなる群から選択される、本発明1025〜1032のいずれかの方法。
[本発明1031]
前記疾患がアルツハイマー病である、本発明1030の方法。
[本発明1032]
治療有効量の免疫グロブリン製剤を前記対象に投与することをさらに含む、本発明1006〜1031のいずれかの方法。
[本発明1033]
前記治療が身体的活動または社会的活動を含む、本発明1006〜1032のいずれかの方法。
[本発明1034]
前記治療がコリンエステラーゼ阻害剤、グルタミン酸部分拮抗薬、または精神医学的薬物を含む、本発明1006〜1033のいずれかの方法。
[本発明1035]
対象におけるアミロイドタンパク質に関連する疾患の進行の予後を提供するための方法であって、
（ａ）前記対象に由来する生物学的試料を適切な条件下で複数のアミロイド抗原と接触させて、
（ｉ）アミロイド抗原および非特異的抗体を含む複合体、ならびに
（ｉｉ）アミロイド抗原および高アビディティ抗アミロイド抗体を含む複合体、
を形成するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）で形成された前記アミロイド抗原複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄して、アミロイド抗原および非特異的抗体を含む少なくとも1つの複合体を解離するステップと、
（ｃ）残留複合体のレベルを検出するステップと、
（ｄ）前記抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、前記疾患の進行の予後を提供するステップと、
を含む、前記方法。
[本発明1036]
前記生物学的試料がチオフィリッククロマトグラフィーで調製された免疫グロブリン組成物である、本発明1035の方法。
[本発明1037]
前記非特異的抗体が低アビディティ抗アミロイド抗体である、本発明1035または本発明1036の方法。
[本発明1038]
対象におけるアミロイドタンパク質に関連する疾患の進行の予後を提供するための方法であって、
（ａ）前記生物学的試料をチオフィリック樹脂と接触させて、抗アミロイド抗体に結合させるステップと、
（ｂ）前記抗体を非変性ｐＨで前記チオフィリック樹脂から溶出して、溶出物を形成するステップと、
（ｃ）前記溶出物をアミロイド抗原と接触させて、前記アミロイド抗原および前記抗アミロイド抗体を含む複合体を形成するステップと、
（ｄ）前記複合体の存在またはレベルを検出するステップと、
（ｅ）前記抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、前記疾患の進行の予後を提供するステップと、
を含む、前記方法。
[本発明1039]
前記ステップ（ｃ）で形成された前記複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄するステップをさらに含む、本発明1038の方法。
[本発明1040]
アミロイドタンパク質に関連する疾患の治療の予後を提供するための方法であって、
（ａ）前記対象に由来する生物学的試料を適切な条件下で複数のアミロイド抗原と接触させて、
（ｉ）アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む複合体、ならびに
（ｉｉ）アミロイド抗原および高アビディティ抗アミロイド抗体を含む複合体、
を形成するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）で形成された前記アミロイド抗原複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄して、アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む少なくとも1つの複合体を解離するステップと、
（ｃ）残留複合体のレベルを検出するステップと、
（ｄ）前記抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、前記疾患の治療の予後を提供するステップと、
を含む、前記方法。
[本発明1041]
前記生物学的試料が全血漿またはその画分である、本発明1040の方法。
[本発明1042]
前記生物学的試料がチオフィリッククロマトグラフィーで調製された免疫グロブリン組成物である、本発明1040または本発明1041の方法。
[本発明1043]
前記非特異的抗体が低アビディティ抗アミロイド抗体である、本発明1040〜1042のいずれかの方法。
[本発明1044]
アミロイドタンパク質に関連する疾患の治療の予後を提供するための方法であって、
（ａ）前記生物学的試料をチオフィリック樹脂と接触させて、抗アミロイド抗体に結合させるステップと、
（ｂ）前記抗体を非変性ｐＨで前記チオフィリック樹脂から溶出して、溶出物を形成するステップと、
（ｃ）前記溶出物をアミロイド抗原と接触させて、前記アミロイド抗原および前記抗アミロイド抗体を含む複合体を形成するステップと、
（ｄ）前記複合体の存在またはレベルを検出するステップと、
（ｅ）前記抗アミロイド抗体のレベルと対照レベルとを比較することにより、前記疾患の治療の予後を提供するステップと、
を含む、前記方法。
[本発明1045]
前記ステップ（ｃ）で形成された前記複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄するステップをさらに含む、本発明1044の方法。
[本発明1046]
前記生物学的試料が全血漿またはその画分である、本発明1044または本発明1045の方法。
[本発明1047]
高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するための生物学的試料を調製するための方法であって、
（ａ）前記対象に由来する生物学的試料を適切な条件下で複数のアミロイド抗原と接触させて、
（ｉ）アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む複合体、ならびに
（ｉｉ）アミロイド抗原および高アビディティ抗アミロイド抗体を含む複合体、
を形成するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）で形成された前記アミロイド抗原複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄して、アミロイド抗原および低親和性抗体または非特異的抗体を含む少なくとも1つの複合体を解離するステップと、
を含む、前記方法。
[本発明1048]
前記生物学的試料がチオフィリッククロマトグラフィーで調製された免疫グロブリン組成物である、本発明1047の方法。
[本発明1049]
前記非特異的抗体が低アビディティ抗アミロイド抗体である、本発明1047または本発明1048の方法。
[本発明1050]
高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するための生物学的試料を調製するための方法であって、
（ａ）前記生物学的試料をチオフィリック樹脂と接触させて、前記抗アミロイド抗体に結合させるステップと、
（ｂ）前記抗体を非変性ｐＨで前記チオフィリック樹脂から溶出して、溶出物を形成するステップと、
（ｃ）前記溶出物をアミロイド抗原と接触させて、前記アミロイド抗原および前記抗アミロイド抗体を含む複合体を形成するステップと、
を含む、前記方法。
[本発明1051]
前記ステップ（ｃ）で形成された前記複合体を、カオトロピック剤を含有する溶液で洗浄するステップをさらに含む、本発明1050の方法。
[本発明1052]
カオトロピック剤およびチオフィリッククロマトグラフィー吸着剤からなる群から選択される少なくとも1つを含む、生物学的試料中に存在する高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するためのキット。
[本発明1053]
カオトロピック剤およびチオフィリッククロマトグラフィー吸着剤の双方を含む、本発明1052のキット。
[本発明1054]
生物学的試料中に存在する高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するためのキットを製造するための、カオトロピック剤および／またはチオフィリッククロマトグラフィー吸着剤の使用。
[本発明1055]
生物学的試料中に存在する高アビディティ抗アミロイド抗体を検出するためのキットを製造するための、カオトロピック剤およびチオフィリッククロマトグラフィー吸着剤の組み合わせの使用。
[本発明1056]
前記抗アミロイド抗体が、βアミロイド（Ａβ；Ａベータ）、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ；アミリン）、α−シヌクレイン（ＳＮＣＡ）、主要プリオンタンパク質（ＰｒＰ）、ハンチンチン（ＨＤ）、カルシトニン（ＣＣＰ）、心房性ナトリウム利尿因子（ＡＮＦ）、アポリポタンパク質ＡＩ（アポ−ＡＩ）、血清アミロイドＡタンパク質（ＳＡＡ）、メディンアミロイド（乳脂肪球−ＥＧＦ因子8タンパク質；ＭＦＧ−Ｅ8の断片）、プロラクチン（ＰＲＬ）、トランスサイレチン（ＡＴＴＲ）、リゾチームＣ（1，4−β−Ｎ−アセチルムラミダーゼＣ）、β2ミクログロブリン（β2Ｍ）、ゲルゾリン（ＡＧＥＬ）、形質転換成長因子β誘導タンパク質ｉｇ−ｈ3（βｉｇ−ｈ3；ケラトエピセリン）、シスタチンＣ（ＣＳＴ3）、免疫グロブリン軽鎖（ＡＬ）、およびポリグルタミン反復を有するアミロイドタンパク質からなる群から選択されるアミロイドタンパク質に特異的である、本発明1017〜1055のいずれかの方法。
[本発明1057]
前記抗アミロイド抗体がアミロイドタンパク質モノマーを特異的に認識する、本発明1001〜1056のいずれかの方法。
[本発明1058]
前記抗アミロイド抗体がアミロイドタンパク質オリゴマーを特異的に認識する、本発明1001〜1056のいずれかの方法。
[本発明1059]
前記抗アミロイド抗体がアミロイドタンパク質原線維を特異的に認識する、本発明1001〜1056のいずれかの方法。
[本発明1060]
前記抗アミロイド抗体が抗βアミロイド抗体である、本発明1001〜1059のいずれかの方法。
[本発明1061]
前記生物学的試料がヒト由来である、本発明1001〜1060のいずれかの方法。
[本発明1062]
前記カオトロピック剤がチオシアネート塩である、本発明1001〜1061のいずれかの方法。
【国際調査報告】
2014507649.tif 000013
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