(57)【要約】本発明は、式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容されるその塩に関し、式中、ＸおよびＲは、明細書に定義された通りである。式（Ｉ）の化合物は、細菌感染症を処置するためのジャイレースおよび／またはトポイソメラーゼＩＶ阻害剤として有用である。式（Ｉ）の化合物は、広範囲の抗菌活性および有利な毒性学的特性を有するか、または前記活性を有する化合物のプロドラッグである。本発明は、前記プロドラッグとして、（Ｒ）−１−エチル−３−（６−フルオロ−５−（２−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）ピリミジン−５−イル）−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）尿素のリン酸エステルを提供する。2014503557.tif 000100
2014503557.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化４１】
2014503557.tif 000096
（式中、Ｒは、水素もしくはフッ素であり、Ｘは、水素、−ＰＯ（ＯＨ）２、−ＰＯ（ＯＨ）Ｏ−Ｍ＋、−ＰＯ（Ｏ−）２・２Ｍ＋、もしくは−ＰＯ（Ｏ−）２・Ｄ２＋であり、Ｍ＋は、薬学的に許容される一価陽イオンであり、Ｄ２＋は、薬学的に許容される二価陽イオンである）の化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【請求項２】
式
【化４２】
2014503557.tif 000097
（式中、Ｒは、水素もしくはフッ素である）を有する請求項１に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【請求項３】
式
【化４３】
2014503557.tif 000098
（式中、Ｘは、−ＰＯ（ＯＨ）２、−ＰＯ（ＯＨ）Ｏ−Ｍ＋、−ＰＯ（Ｏ−）２・２Ｍ＋、もしくは−ＰＯ（Ｏ−）２・Ｄ２＋であり、Ｍ＋は、薬学的に許容される一価陽イオンであり、Ｄ２＋は、薬学的に許容される二価陽イオンである）を有する請求項１に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【請求項４】
式
【化４４】
2014503557.tif 000099
（式中、Ｒは、水素もしくはフッ素である）を有する請求項１に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【請求項５】
（Ｒ）−１−エチル−３−（５−（２−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）ピリミジン−５−イル）−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）尿素である、請求項４に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【請求項６】
（Ｒ）−１−エチル−３−（６−フルオロ−５−（２−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）ピリミジン−５−イル）−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）尿素である、請求項４に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【請求項７】
（Ｒ）−１−エチル−３−（５−（２−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）ピリミジン−５−イル）−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）尿素のメタンスルホン酸塩である、請求項４に記載の塩。
【請求項８】
（Ｒ）−１−エチル−３−（６−フルオロ−５−（２−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）ピリミジン−５−イル）−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）尿素のメタンスルホン酸塩である、請求項４に記載の塩。
【請求項９】
Ｘが、−ＰＯ（ＯＨ）Ｏ−Ｍ＋、−ＰＯ（Ｏ−）２・２Ｍ＋、または−ＰＯ（Ｏ−）２・Ｄ２＋であり、Ｍ＋が、Ｌｉ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、およびＮ（Ｒ９）４＋（式中、各Ｒ９は、独立して水素もしくはＣ１〜Ｃ４アルキル基である）からなる群から選択され、Ｄ２＋が、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、およびＢａ２＋からなる群から選択される、請求項３に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｘが、−ＰＯ（ＯＨ）Ｏ−Ｍ＋、または−ＰＯ（Ｏ−）２・２Ｍ＋であり、Ｍ＋が、Ｌｉ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、およびＮ（Ｒ９）４＋（式中、各Ｒ９は、独立して水素もしくはＣ１〜Ｃ４アルキル基である）からなる群から選択される、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｘが−ＰＯ（Ｏ−）２・２Ｍ＋であり、Ｍ＋が、Ｌｉ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、およびＮ（Ｒ９）４＋（式中、各Ｒ９は、独立して水素またはＣ１〜Ｃ４アルキル基である）からなる群から選択される、請求項９に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｍ＋がＮａ＋である、請求項９に記載の化合物。
【請求項１３】
（Ｒ）−２−（５−（２−（３−エチルウレイド）−６−フルオロ−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−イル）ピリミジン−２−イル）プロパン−２−イルリン酸二ナトリウムである、請求項３に記載の化合物。
【請求項１４】
請求項１に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩、および薬学的に許容される担体、アジュバント、もしくはビヒクルを含む、医薬組成物。
【請求項１５】
請求項２に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩、および薬学的に許容される担体、アジュバント、もしくはビヒクルを含む、医薬組成物。
【請求項１６】
請求項３に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩、および薬学的に許容される担体、アジュバント、もしくはビヒクルを含む、医薬組成物。
【請求項１７】
生物学的試料中のＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｃｏｍｐｌｅｘ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｂｓｃｅｓｓｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋａｎｓａｓｉｉ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｕｌｃｅｒａｎｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、またはβ−溶血性ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉの細菌量を減少させるか、または抑制する方法であって、前記生物学的試料を請求項１に記載の化合物と接触させるステップを含む、方法。
【請求項１８】
患者における院内または非院内細菌感染症を制御、処置、またはその進行、重症度、もしくは影響を低減する方法であって、前記患者に、請求項１に記載の化合物を投与するステップを含む、方法。
【請求項１９】
前記細菌感染症が、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｃｏｍｐｌｅｘ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋａｎｓａｓｉｉ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｕｌｃｅｒａｎｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、またはβ−溶血性ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉのうちの１つまたは複数の存在を特徴とする、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記細菌感染症が、以下、即ち、上気道感染症、下気道感染症、耳感染症、胸膜肺感染症および気管支感染症、複雑性尿路感染症、単純性尿路感染症、腹腔内感染症、心血管感染症、血流感染症、敗血症、菌血症、ＣＮＳ感染症、皮膚感染症および軟部組織感染症、ＧＩ感染症、骨関節症および関節感染症、生殖器感染症、眼感染症、または肉芽腫性感染症、単純性皮膚および皮膚構造感染症（ｕｎｃｏｍｐｌｉｃａｔｅｄ  ｓｋｉｎ  ａｎｄ  ｓｋｉｎ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）（ｕＳＳＳＩ）、複雑性皮膚および皮膚構造感染症（ｃｏｍｐｌｉｃａｔｅｄ  ｓｋｉｎ  ａｎｄ  ｓｋｉｎ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）（ｃＳＳＳＩ）、カテーテル感染症、咽頭炎、副鼻腔炎、外耳炎、中耳炎、気管支炎、膿胸、肺炎、市中細菌性肺炎（ＣＡＢＰ）、院内肺炎（ＨＡＰ）、院内細菌性肺炎、人工呼吸器関連肺炎（ＶＡＰ）、糖尿病性足感染症、バンコマイシン耐性ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ感染症、膀胱炎および腎盂腎炎、腎結石、前立腺炎、腹膜炎、複雑性腹腔内感染症（ｃＩＡＩ）、ならびに他の腹腔内感染症、透析関連腹膜炎、内臓膿瘍、心内膜炎、心筋炎、心膜炎、輸血関連敗血症、髄膜炎、脳炎、脳膿瘍、骨髄炎、関節炎、生殖器潰瘍、尿道炎、膣炎、子宮頸管炎、歯肉炎、結膜炎、角膜炎、眼内炎、嚢胞性線維症患者の感染症、または発熱性好中球減少症患者の感染症のうちの１つまたは複数から選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記細菌感染症が、以下、即ち、市中細菌性肺炎（ＣＡＢＰ）、院内肺炎（ＨＡＰ）、院内細菌性肺炎、人工呼吸器関連肺炎（ＶＡＰ）、菌血症、糖尿病性足感染症、カテーテル感染症、単純性皮膚および皮膚構造感染症（ｕＳＳＳＩ）、複雑性皮膚および皮膚構造感染症（ｃＳＳＳＩ）、バンコマイシン耐性ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ感染症、または骨髄炎のうちの１つまたは複数から選択される、請求項２０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本出願は、２０１１年１月１４日に出願された米国仮特許出願第６１／４３２，９６５号、２０１１年８月４日に出願された米国仮特許出願第６１／５１５，１７４号、２０１１年８月４日に出願された米国仮特許出願第６１／５１５，２４９号、および２０１１年６月２０日に出願された米国仮特許出願第６１／４９９，１３４号の利益を米国特許法§１１９の下、主張する。これら各出願の全内容が、参考として本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
（背景）
抗生物質に対する細菌耐性は、長い間認識されてきており、これは、今日では、深刻な世界的健康問題であると考えられている。耐性の結果として、いくつかの細菌感染症は、抗生物質で処置することが困難であり、または処置不能でさえある。この問題は、細菌のある特定の系統、例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（ＳＰ）、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、およびＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓなどにおける多剤耐性の最近の展開を伴って特に深刻となっている。バンコマイシン耐性ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓの出現は、特に憂慮すべきことであった。その理由は、バンコマイシンは、以前は、この感染症を処置するための唯一の有効な抗生物質であり、多くの感染症にとって「最後の手段」の薬物であると考えられていたためである。ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉなどの多くの他の薬物耐性細菌は、生命を危うくする疾患を引き起こさないが、耐性を誘発する遺伝子が、メチシリン耐性がすでに蔓延しているＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓなどのより死に至る危険のある生物に蔓延し得るという恐怖がある（非特許文献１；非特許文献２）。
【０００３】
別の懸念は、どの程度急速に抗生物質耐性が蔓延し得るかである。例えば、１９６０年代まで、ＳＰは、ペニシリンに普遍的に感受性であり、１９８７年では、米国において、ＳＰ系統の０．０２％のみが耐性であった。しかし、１９９５年までに、ペニシリンに対するＳＰの耐性は、約７パーセントであり、米国の一部の地域では３０％もの高さであることが報告された（非特許文献３）。
【０００４】
特に、病院は、薬物耐性生物の形成および伝播の中心として機能を果たす。病院内で発生する感染症は、院内感染として公知であり、ますます深刻な問題となっている。毎年病院内で感染する２００万の米国人のうち、これらの感染症の半分超が少なくとも１つの抗生物質に耐性となる。疾病管理センターは、１９９２年に、１３，０００を超える病院患者が抗生物質処置に耐性である細菌感染症で死亡したことを報告した（非特許文献４）。
【０００５】
薬物耐性細菌を退治する必要性、および利用可能な薬物の機能停止の増大の結果として、新規抗生物質を発見する関心が復活している。新規抗生物質を開発するための１つの魅力的なストラテジーは、ＤＮＡ複製に必要な、したがって、細菌性細胞増殖および分裂に必要な細菌酵素である、ＤＮＡジャイレースおよび／またはトポイソメラーゼＩＶを阻害することである。ジャイレースおよび／またはトポイソメラーゼＩＶ活性は、ＤＮＡ転写、修復、および組換えにおける事象にも関連する。
【０００６】
ジャイレースは、ＤＮＡのトポロジカル異性体の相互変換を触媒する酵素の群であるトポイソメラーゼの１つである（一般に、非特許文献５；非特許文献６；非特許文献７を参照）。ジャイレース自体は、ＤＮＡスーパーコイル形成を制御し、親二本鎖のＤＮＡ鎖が複製プロセスの間によりが戻される際に起こるトポロジカルストレスを軽減する。ジャイレースは、弛緩型閉環状二本鎖ＤＮＡの、組換えにとってより好都合である負高次らせんへの変換も触媒する。スーパーコイル形成反応の機構は、ＤＮＡの一領域周囲へのジャイレースのラッピング、その領域における二本鎖破壊、破壊箇所を通じたＤＮＡの第２の領域の通過、および破壊された鎖の再結合を伴う。このような開裂機構は、ＩＩ型トポイソメラーゼの特徴である。スーパーコイル形成反応は、ＡＴＰがジャイレースに結合することによって推進される。次いで、ＡＴＰは、反応の間に加水分解される。このＡＴＰの結合および後続の加水分解は、ＤＮＡに結合したジャイレースの活性に必要であるこのジャイレースのコンホメーション変化を引き起こす。ＤＮＡスーパーコイル形成（または弛緩）のレベルは、ＡＴＰ／ＡＤＰ比に依存することも判明している。ＡＴＰの非存在下で、ジャイレースは、スーパーコイルＤＮＡを弛緩することができるだけである。
【０００７】
細菌ＤＮＡのジャイレースは、２つのＡ（ＧｙｒＡ）および２つのＢサブユニット（ＧｙｒＢ）からなる４００キロダルトンのタンパク質四量体である。ＤＮＡの結合および開裂は、ＧｙｒＡに関連し、一方、ＡＴＰは、ＧｙｒＢタンパク質によって結合および加水分解される。ＧｙｒＢは、ＡＴＰａｓｅ活性を有するアミノ末端ドメイン、ならびにＧｙｒＡおよびＤＮＡと相互作用するカルボキシ末端ドメインからなる。対照的に、真核生物のＩＩ型トポイソメラーゼは、負のスーパーコイルおよび正のスーパーコイルを弛緩することができるが、負のスーパーコイルを導入することができないホモ二量体である。理想的には、細菌ＤＮＡのジャイレースおよび／またはトポイソメラーゼＩＶの阻害に基づく抗生物質は、これらの酵素に選択的であり、真核生物のＩＩ型トポイソメラーゼに対して相対的に不活性であるはずである。
【０００８】
トポイソメラーゼＩＶは主に、ＤＮＡ複製の最後に、連結した染色体二量体を分離する。
【０００９】
広く使用されているキノロン抗生物質は、細菌ＤＮＡジャイレース（ＧｙｒＡ）および／またはトポイソメラーゼＩＶ（ＰａｒＣ）を阻害する。キノロンの例として、早期の化合物、例えば、ナリジクス酸およびオキソリン酸など、ならびに後期の化合物であるより強力なフルオロキノロン、例えば、ノルフロキサシン、シプロフロキサシン、およびトロバフロキサシンなどが挙げられる。これらの化合物は、ＧｙｒＡおよび／またはＰａｒＣに結合し、開裂された複合体を安定化させ、したがって、全体的なジャイレースの機能を阻害し、細胞死に導く。フルオロキノロンは、ジャイレース（ＧｙｒＡ）および／またはトポイソメラーゼＩＶ（ＰａｒＣ）の触媒サブユニットを阻害する（非特許文献７を参照）。しかし、薬剤耐性も、このクラスの化合物の問題として認識されている（非特許文献８）。キノロンでは、他のクラスの抗生物質と同様に、より早期の化合物に曝された細菌は、同じクラスのより強力な化合物に対する交差耐性を急速に発達させることが多い。
【００１０】
触媒ターンオーバーに必要なエネルギーの供給／ＡＴＰ加水分解を介した酵素のリセットに関与する関連サブユニットは、それぞれＧｙｒＢ（ジャイレース）およびＰａｒＥ（トポイソメラーゼＩＶ）である（非特許文献９）。ＧｙｒＢおよびＰａｒＥサブユニット中のこれらの同じＡＴＰ結合部位を標的にする化合物は、様々な細菌感染症を処置するのに有用であるはずである（非特許文献１０）。
【００１１】
ＧｙｒＢに結合する公知の阻害剤はより少ない。例として、クマリン、ノボビオシン、およびクメルマイシンＡ１、シクロチアリジン、シノジン、およびクレロシジンが挙げられる。クマリンは、非常にしっかりとＧｙｒＢに結合することが示されている。例えば、ノボビオシンは、タンパク質との水素結合のネットワーク、およびいくつかの疎水性接触を作る。ノボビオシンとＡＴＰは、ＡＴＰ結合部位内で確かに結合するように思われるが、２つの化合物の結合配向（ｂｏｕｎｄ  ｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎ）における重なりは最小である。重なり部分は、ノボビオシンの糖ユニットおよびＡＴＰアデニンである（非特許文献１１）。
【００１２】
クマリン耐性細菌については、最も蔓延している点変異は、クマリン環のカルボニルに結合する表面アルギニン残基（Ｅ．ｃｏｌｉのＧｙｒＢ中のＡｒｇ１３６）におけるものである。この変異を有する酵素は、より低いスーパーコイル形成およびＡＴＰａｓｅ活性を示すが、これらはまた、クマリン薬物による阻害に対して感受性がより低い（非特許文献１２）。
【００１３】
ジャイレーススーパーコイル形成の強力な阻害剤であるにもかかわらず、クマリンは、抗生物質として広く使用されていない。これらは、細菌において浸透性が低く、真核生物に毒性であり、水溶性が乏しいために、一般に適当でない（非特許文献１１）。これらの欠点を克服し、好ましくは、活性のためにＡｒｇ１３６への結合を利用しない新規の有効なＧｙｒＢおよびＰａｒＥ阻害剤を有することが望ましい。このような阻害剤は、他のクラスの抗生物質を悩ます耐性問題の履歴を伴わない魅力的な抗生物質候補であるはずである。
【００１４】
抗生物質に対する細菌耐性は、重要な公衆衛生問題となっているので、より新しく、より強力な抗生物質を開発する必要性が継続している。より具体的には、細菌感染症を処置するのに以前に使用されていない新しいクラスの化合物を代表する抗生物質が必要とされている。ＧｙｒＢ（ジャイレース）およびＰａｒＥ（トポイソメラーゼＩＶ）サブユニットの両方におけるＡＴＰ結合部位を標的にする化合物は、様々な細菌感染症を処置するのに有用であるはずである。このような化合物は、耐性菌の形成および伝播がますます蔓延した状態になりつつある病院における院内感染を処置するのに特に有用であるはずである。さらに、有利な毒性学的特性を伴った広スペクトルの活性を有する新規抗生物質が必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Ｄｅ  Ｃｌｅｒｑら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ａｎｔｉ−ｉｎｆｅｃｔｉｖｅ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｄｒｕｇｓ、１９９９年、１巻、１号
【非特許文献２】Ｌｅｖｙ、「Ｔｈｅ  Ｃｈａｌｌｅｎｇｅ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ」、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ、１９９８年３月
【非特許文献３】Ｌｅｗｉｓ、ＦＤＡ  Ｃｏｎｓｕｍｅｒ  ｍａｇａｚｉｎｅ  （１９９５年９月）；Ｔｈｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ＲｅｐｏｒｔｅｒにおけるＧｅｒｓｈｍａｎ、１９９７年
【非特許文献４】Ｌｅｗｉｓ、「Ｔｈｅ  Ｒｉｓｅ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ」、ＦＤＡ  Ｃｏｎｓｕｍｅｒ  ｍａｇａｚｉｎｅ、１９９５年９月
【非特許文献５】ＫｏｒｎｂｅｒｇおよびＢａｋｅｒ、ＤＮＡ  Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ、２版、１２章、１９９２年、Ｗ．  Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎおよび共著者
【非特許文献６】Ｄｒｌｉｃａ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、１９９２年、６巻、４２５頁
【非特許文献７】ＤｒｌｉｃａおよびＺｈａｏ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、１９９７年、６１巻、３７７〜３９２頁
【非特許文献８】ＷＨＯ  Ｒｅｐｏｒｔ、「Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｑｕｉｎｏｌｏｎｅｓ  ｉｎ  Ｆｏｏｄ  Ａｎｉｍａｌｓ  ａｎｄ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｉｍｐａｃｔ  ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｈｅａｌｔｈ」、１９９８年
【非特許文献９】Ｃｈａｍｐｏｕｘ，  Ｊ．Ｊ．、Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２００１年、７０巻、３６９〜４１３頁
【非特許文献１０】Ｃｈａｒｉｆｓｏｎら、Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．、２００８年、５１巻、５２４３〜５２６３頁
【非特許文献１１】Ｍａｘｗｅｌｌ、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、１９９７年、５巻、１０２頁
【非特許文献１２】Ｍａｘｗｅｌｌ、Ｍｏｌ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．、１９９３年、９巻、６８１頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明は、ジャイレースおよび／またはトポイソメラーゼＩＶ阻害剤として有用な化合物および薬学的に許容されるこれらの塩を対象とする。本発明のジャイレースおよび／またはトポイソメラーゼＩＶ阻害剤は、式（Ｉ）によって表されるもの
【００１７】
【化１】
2014503557.tif 000003
またはその塩であり得、式中、Ｒは、水素またはフッ素であり、Ｘは、水素、−ＰＯ（ＯＨ）２、−ＰＯ（ＯＨ）Ｏ−Ｍ＋、−ＰＯ（Ｏ−）２・２Ｍ＋、または−ＰＯ（Ｏ−）２・Ｄ２＋であり、Ｍ＋は、薬学的に許容される一価陽イオンであり、Ｄ２＋は、薬学的に許容される二価陽イオンである。式（Ｉ）の化合物は、広範囲の抗菌活性および有利な毒性学的特性を有するか、または前記活性を有する化合物のプロドラッグである。
【００１８】
本発明はまた、ジャイレースおよび／またはトポイソメラーゼＩＶ阻害剤として有用な式（ＩＡ）の化合物、または薬学的に許容されるこれらの塩に関する。式（ＩＡ）の化合物は、式（Ｉ）に包含される。式（ＩＡ）の化合物は、
【００１９】
【化２】
2014503557.tif 000004
として表され得、式中、Ｒは、水素またはフッ素である。式（ＩＡ）の化合物は、広範囲の抗菌活性および有利な毒性学的特性を有する。
【００２０】
本発明はまた、ジャイレースおよび／またはトポイソメラーゼＩＶ阻害剤のプロドラッグとして有用な式（ＩＢ）の化合物、または薬学的に許容されるこれらの塩に関する。式（ＩＢ）の化合物は、式（Ｉ）に包含される。式（ＩＢ）の化合物は、
【００２１】
【化３】
2014503557.tif 000005
として表され得、式中、Ｘは、−ＰＯ（ＯＨ）２、−ＰＯ（ＯＨ）Ｏ−Ｍ＋、−ＰＯ（Ｏ−）２・２Ｍ＋、または−ＰＯ（Ｏ−）２・Ｄ２＋であり、Ｍ＋は、薬学的に許容される一価陽イオンであり、Ｄ２＋は、薬学的に許容される二価陽イオンである。式（ＩＢ）の化合物は、化合物（Ｒ）−１−エチル−３−（６−フルオロ−５−（２−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）ピリミジン−５−イル）−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）尿素のリン酸エステルプロドラッグであり、これは、広範囲の抗菌活性および有利な毒性学的特性を有する。本明細書で提供される化合物に加えて、本発明はさらに、式（Ｉ）（これは、式（Ｉ）に包含される他の式、例えば、式（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＣ）、および（ＩＤ）などを含む）の化合物、または薬学的に許容されるその塩、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
【００２２】
別の実施形態では、本発明は、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩、薬学的に許容される担体、および抗生物質、抗炎症剤、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、サイトカインアンタゴニスト、免疫抑制剤、抗がん剤、抗ウイルス剤、サイトカイン、成長因子、増殖因子、免疫調節剤、プロスタグランジン、もしくは抗血管過剰増殖化合物から選択される追加の治療剤を含む医薬組成物に関する。
【００２３】
別の実施形態では、本発明は、細菌感染症の処置を必要とする哺乳動物における細菌感染症を処置する方法であって、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容されるその塩を前記哺乳動物に投与するステップを含む方法に関する。
【００２４】
さらなる実施形態では、本発明は、細菌感染症の処置を必要とする哺乳動物における細菌感染症を処置する方法であって、治療有効量の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩、および前記化合物と一緒に複数回剤形（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｄｏｓａｇｅ  ｆｏｒｍ）の一部として、または別個の剤形として、抗生物質、抗炎症剤、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、サイトカインアンタゴニスト、免疫抑制剤、抗がん剤、抗ウイルス剤、サイトカイン、成長因子、増殖因子、免疫調節剤、プロスタグランジン、もしくは抗血管過剰増殖化合物を前記哺乳動物に投与するステップを含む方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】図１は、化合物１２の対称性を有する独立した２個の分子の熱振動楕円体プロットである。
【図２】図２は、化合物２３の対称性を有する独立した２個の分子の熱振動楕円体プロットである。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
（詳細な説明）
本明細書において、用語「ハロゲン」は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩを意味する。
【００２７】
別段の記載のない限り、本明細書に表される構造は、その構造のすべての立体化学的形態、即ち、各不斉中心に対するＲおよびＳ配置を含むことも意味する。したがって、本化合物の単一の立体化学的異性体、ならびにエナンチオマー混合物およびジアステレオマー混合物は、本発明の範囲内である。
【００２８】
１つまたは複数の原子が、自然において通常見出される原子質量または質量数と異なる原子質量または質量数を有する原子によって置き換えられている式（Ｉ）の化合物の同位体標識された形態も、本明細書に含められる。本発明の化合物中に組み込むことができる同位元素の例として、水素、炭素、窒素、酸素、およびフッ素の同位元素、例えば、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、および１７Ｏなどが挙げられる。このような放射標識された化合物および安定な同位体で標識された化合物は、例えば、研究ツールもしくは診断ツール、または治療プロファイルが改善されたジャイレースおよび／もしくはトポイソメラーゼＩＶ阻害剤として有用である。構造は、適切な場合、化合物または塩の双性イオン形態も包含する。
【００２９】
一実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＣ）の化合物
【００３０】
【化４】
2014503557.tif 000006
を含み、式中、Ｒは、上記に定義した通りである。
【００３１】
別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、以下に示す式（ＩＤ）および（ＩＥ）の化合物、すなわち、
【００３２】
【化５】
2014503557.tif 000007
（Ｒ）−１−エチル−３−（５−（２−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）ピリミジン−５−イル）−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）尿素、または薬学的に許容されるその塩；および
【００３３】
【化６】
2014503557.tif 000008
（Ｒ）−１−エチル−３−（６−フルオロ−５−（２−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）ピリミジン−５−イル）−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）尿素、または薬学的に許容されるその塩を含む。別段の記載のない限り、語句「式（Ｉ）の化合物」は、式（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＣ）、（ＩＤ）、および（ＩＥ）を含めた、式（Ｉ）に包含される、本明細書に示される他の式も含むことが意図されている。
【００３４】
式（ＩＢ）の化合物は、これらの親化合物、１−エチル−３−［６−フルオロ−５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素のプロドラッグである。したがって、プロドラッグを投与すると呈される活性は、プロドラッグの開裂から生じる親化合物の存在に主に起因する。
【００３５】
用語「プロドラッグ」は、投与および吸収された後、何らかの代謝過程を介してｉｎ  ｖｉｖｏで薬物を放出する薬物前駆体である化合物を指す。一般に、プロドラッグは、その親薬物より低い生物活性を有する。プロドラッグは、親薬物の物理的特性も改善することができ、かつ／またはこれは、例えば、その吸収、血中濃度、代謝分布、および細胞取込みを制御することにより、薬物の毒性および望まれない作用を低減することによって、全体的な薬効も改善することができる。
【００３６】
用語「親化合物」または「親薬物」は、プロドラッグを投与した後の代謝過程もしくは異化過程の酵素作用を介して、または化学的過程を介して放出される生物学的に活性な実体を指す。親化合物は、その対応するプロドラッグを調製するための出発原料であってもよい。
【００３７】
Ｍ＋によって定義される一価陽イオンには、アンモニウム、アルカリ金属イオン、例えば、ナトリウムイオン、リチウムイオン、およびカリウムイオンなど、ジシクロヘキシルアミンイオン、ならびにＮ−メチル−Ｄ−グルカミンイオンが含まれる。Ｄ２＋によって定義される二価陽イオンには、アルカリ土類金属イオン、例えば、アルミニウム、カルシウム、およびマグネシウムイオンなどが含まれる。アミノ酸陽イオン、例えば、アルギニン、リシン、オルニチンなどのイオンなども含まれる。Ｍ＋が一価陽イオンである場合、定義２Ｍ＋が存在するならば、Ｍ＋のそれぞれは、同じであっても、異なっていてもよいことが認識される。さらに、定義２Ｍ＋が存在する場合、二価陽イオンＤ２＋が代わりに存在し得ることも同様に認識される。また、ハロゲン化低級アルキル、例えば、メチル、エチル、プロピル、およびブチルの塩化物、メチル、エチル、プロピル、およびブチルの臭化物、ならびにメチル、エチル、プロピル、およびブチルのヨウ化物など；硫酸ジメチル、硫酸ジエチル、硫酸ジブチルなどの硫酸ジアルキル；硫酸ジアミル；長鎖ハロゲン化物、例えば、デシル、ラウリル、ミリスチル、およびステアリルの塩化物、デシル、ラウリル、ミリスチル、およびステアリルの臭化物、ならびにデシル、ラウリル、ミリスチル、およびステアリルのヨウ化物など；臭化ベンジルなどのハロゲン化アラルキルなどの作用物質で、塩基性窒素含有基を四級化することができる。
【００３８】
本発明の様々な実施形態は、以下に示す式（ＩＢ）の化合物または塩を含む：
（１）Ｘが、
（ａ）−ＰＯ（ＯＨ）Ｏ−Ｍ＋、
（ｂ）−ＰＯ（Ｏ−）２・２Ｍ＋、または
（ｃ）−ＰＯ（Ｏ−）２・Ｄ２＋
である化合物、
（２）Ｍ＋が、
（ａ）Ｌｉ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、もしくはＮ（Ｒ９）４＋、または
（ｂ）Ｎａ＋であり、
（ｃ）各Ｒ９が独立して水素またはＣ１〜Ｃ４アルキル基
である化合物、
（３）Ｄ２＋が、
（ａ）Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、およびＢａ２＋、または
（ｂ）Ｃａ２＋
である化合物、
（４）化合物（Ｒ）−２−（５−（２−（３−エチルウレイド）−６−フルオロ−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−イル）ピリミジン−２−イル）プロパン−２−イルホスフェート；ならびに
（５）化合物（Ｒ）−２−（５−（２−（３−エチルウレイド）−６−フルオロ−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−イル）ピリミジン−２−イル）プロパン−２−イルリン酸二ナトリウム。
【００３９】
式（ＩＢ）の化合物または塩の様々な代替の実施形態を、上記（１）〜（３）に列挙した代替の実施形態の１つまたは複数を要求することによって選択することができることが理解される。例えば、本発明のさらなる実施形態は、（１）（ａ）と（２）（ａ）、（１）（ａ）と（２）（ｂ）、（１）（ｃ）と（３）（ａ）、（１）（ｃ）と（３）（ｂ）、（１）（ｂ）と（２）（ａ）、（１）（ｂ）と（２）（ｂ）などを組み合わせることによって得ることができる。
【００４０】
本発明のプロドラッグは、予想外に高い水溶解度を特徴とする。この溶解度は、より高い用量のプロドラッグの投与を促進し、１ユニット投与量当たりより多い薬物充填量をもたらす。
【００４１】
本発明の一実施形態は、細菌感染症の処置を必要とする哺乳動物における細菌感染症を処置する方法であって、治療有効量の式（Ｉ）を有する化合物、または薬学的に許容されるその塩を前記哺乳動物に投与するステップを含む、方法に関する。
【００４２】
別の実施形態によれば、本発明は、生物学的試料中の細菌量を減少させるか、または抑制する方法を提供する。この方法は、前記生物学的試料を式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩と接触させるステップを含む。
【００４３】
用語「生物学的試料」は、本明細書において、細胞培養液またはその抽出物、哺乳動物から得られる生検物質またはその抽出物、および血液、唾液、尿、糞便、精液、涙、もしくは他の体液、またはこれらの抽出物が含まれる。用語「生物学的試料」には生体も含まれ、この場合、「本発明の化合物を生物学的試料と接触させること」は、用語「前記化合物または前記化合物を含む組成物を哺乳動物に投与すること」と同義である。
【００４４】
一実施形態は、前記生物学的試料を、（Ｒ）−１−エチル−３−（５−（２−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）ピリミジン−５−イル）−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）尿素、または薬学的に許容されるその塩、および（Ｒ）−１−エチル−３−（６−フルオロ−５−（２−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）ピリミジン−５−イル）−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）尿素、または薬学的に許容されるその塩からなる群から選択される化合物と接触させるステップを含む。このような方法に有用な医薬組成物は、以下に記載されている。
【００４５】
一実施形態は、前記生物学的試料を、式（ＩＢ）によって定義される、（Ｒ）−１−エチル−３−（６−フルオロ−５−（２−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）ピリミジン−５−イル）−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）尿素のリン酸エステルプロドラッグと接触させるステップを含む。このような方法に有用な医薬組成物は、以下に記載されている。
【００４６】
式（Ｉ）の化合物の抗菌活性は、抗菌剤感受性アッセイで実証され得る。抗菌剤感受性アッセイに使用される条件の詳細は、以下の実施例に示されている。
【００４７】
本発明のジャイレースおよび／もしくはトポイソメラーゼＩＶ阻害剤、またはこれらの医薬用塩を製剤化して、動物またはヒトに投与するための医薬組成物にすることができる。細菌量を計れる程度に減少させるのに十分な量のジャイレースおよび／またはトポイソメラーゼＩＶ阻害剤ならびに薬学的に許容される担体を含む、細菌感染症を処置または予防するのに有効なこれらの医薬組成物は、本発明の別の実施形態である。用語「細菌量を計れる程度に減少させる」は、本明細書において、前記阻害剤を含有する試料と、細菌のみを含有する試料との間の細菌数の測定可能な変化を意味する。
【００４８】
細菌性生物の抗生物質に対する感受性を増大させる作用物質は公知である。例えば、米国特許第５，５２３，２８８号、米国特許第５，７８３，５６１号、および米国特許第６，１４０，３０６号には、グラム陽性菌およびグラム陰性菌の抗生物質感受性を増大させるために、殺菌性／透過性増強タンパク質（ＢＰＩ）を使用する方法が記載されている。細菌性生物の外膜の透過性を増大させる作用物質は、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ（１９９２年）、３９５〜４１１頁においてＶａａｒａ，  Ｍ．によって記載されており、グラム陰性菌の感作は、Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．（２０００年）、３０８５〜３０９２頁においてＴｓｕｂｅｒｙ，  Ｈ．らによって記載されている。
【００４９】
本発明の別の実施形態は、細菌感染症の予防、制御、処置、またはその進行、重症度、もしくは影響の低減の必要のある哺乳動物における細菌感染症を予防、制御、処置、またはその進行、重症度、もしくは影響を低減する、上述した方法であるが、細菌性生物の抗生物質に対する感受性を増大させる作用物質を前記哺乳動物に投与するステップをさらに含む、方法に関する。
【００５０】
別の実施形態によれば、本発明の方法は、それだけに限らないが、霊長類、げっ歯類、爬虫類、およびトリを含めた、動物園動物、実験室動物、人のコンパニオンアニマル、および家畜を含む獣医分野における患者を処置するのに有用である。前記動物の例として、それだけに限らないが、モルモット、ハムスター、アレチネズミ、ラット、マウス、ウサギ、イヌ、ネコ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ウシ、ヤギ、シカ、アカゲザル、サル、タマリン（ｔａｍａｒｉｎｄｓ）、類人猿、ヒヒ、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、テナガザル、ダチョウ、ニワトリ、シチメンチョウ、アヒル、およびガチョウが挙げられる。
【００５１】
本発明の医薬組成物および方法は、細菌感染症をｉｎ  ｖｉｖｏで制御するのに一般に有用となる。本発明の組成物および方法によって制御することができる細菌性生物の例には、それだけに限らないが、以下の生物が含まれる：Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ種、Ｐｒｏｔｅｕｓ種、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、コアグラーゼ陰性（Ｃｏａｇ．Ｎｅｇ．）Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｃｏｍｐｌｅｘ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｂｓｃｅｓｓｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋａｎｓａｓｉｉ、およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｕｌｃｅｒａｎｓ。
【００５２】
したがって、この組成物および方法は、院内感染または非院内感染を制御、処置、またはその進行、重症度、もしくは影響を低減するのに有用となる。院内感染および非院内感染の例として、それだけに限らないが、上気道感染症、下気道感染症、耳感染症、胸膜肺感染症および気管支感染症、複雑性尿路感染症、単純性尿路感染症、腹腔内感染症、心血管感染症、血流感染症、敗血症、菌血症、ＣＮＳ感染症、皮膚感染症および軟部組織感染症、ＧＩ感染症、骨関節症および関節感染症、生殖器感染症、眼感染症、または肉芽腫性感染症が挙げられる。特定の細菌感染症の例として、それだけに限らないが、単純性皮膚および皮膚構造感染症（ｕＳＳＳＩ）、複雑性皮膚および皮膚構造感染症（ｃＳＳＳＩ）、カテーテル感染症、咽頭炎、副鼻腔炎、外耳炎、中耳炎、気管支炎、膿胸、肺炎、市中細菌性肺炎（ＣＡＢＰ）、院内肺炎（ＨＡＰ）、院内細菌性肺炎、人工呼吸器関連肺炎（ＶＡＰ）、糖尿病性足感染症、バンコマイシン耐性ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ感染症、膀胱炎および腎盂腎炎、腎結石、前立腺炎、腹膜炎、複雑性腹腔内感染症（ｃＩＡＩ）、ならびに他の腹腔内感染症、透析関連腹膜炎、内臓膿瘍、心内膜炎、心筋炎、心膜炎、輸血関連敗血症、髄膜炎、脳炎、脳膿瘍、骨髄炎、関節炎、生殖器潰瘍、尿道炎、膣炎、子宮頸管炎、歯肉炎、結膜炎、角膜炎、眼内炎、嚢胞性線維症患者の感染症、または発熱性好中球減少症患者の感染症が挙げられる。
【００５３】
用語「非院内感染」は、地域感染型感染症とも呼ばれる。
【００５４】
一実施形態では、したがって、この組成物および方法は、市中細菌性肺炎（ＣＡＢＰ）、院内肺炎（ＨＡＰ）、院内細菌性肺炎、人工呼吸器関連肺炎（ＶＡＰ）、菌血症、糖尿病性足感染症、カテーテル感染症、単純性皮膚および皮膚構造感染症（ｕＳＳＳＩ）、複雑性皮膚および皮膚構造感染症（ｃＳＳＳＩ）、バンコマイシン耐性ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ感染症、または骨髄炎を制御、処置、またはその進行、重症度、もしくは影響を低減するのに有用となる。
【００５５】
別の実施形態では、したがって、この組成物および方法は、上気道感染症、下気道感染症、耳感染症、胸膜肺感染症および気管支感染症、複雑性尿路感染症、単純性尿路感染症、腹腔内感染症、心血管感染症、血流感染症、敗血症、菌血症、ＣＮＳ感染症、皮膚感染症および軟部組織感染症、ＧＩ感染症、骨関節症および関節感染症、生殖器感染症、眼感染症、または肉芽腫性感染症、単純性皮膚および皮膚構造感染症（ｕＳＳＳＩ）、複雑性皮膚および皮膚構造感染症（ｃＳＳＳＩ）、カテーテル感染症、咽頭炎、副鼻腔炎、外耳炎、中耳炎、気管支炎、膿胸、肺炎、市中細菌性肺炎（ＣＡＢＰ）、院内肺炎（ＨＡＰ）、院内細菌性肺炎、人工呼吸器関連肺炎（ＶＡＰ）、糖尿病性足感染症、バンコマイシン耐性ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ感染症、膀胱炎および腎盂腎炎、腎結石、前立腺炎、腹膜炎、複雑性腹腔内感染症（ｃＩＡＩ）、ならびに他の腹腔内感染症、透析関連腹膜炎、内臓膿瘍、心内膜炎、心筋炎、心膜炎、輸血関連敗血症、髄膜炎、脳炎、脳膿瘍、骨髄炎、関節炎、生殖器潰瘍、尿道炎、膣炎、子宮頸管炎、歯肉炎、結膜炎、角膜炎、眼内炎、嚢胞性線維症患者の感染症、または発熱性好中球減少症患者の感染症を制御、処置、またはその進行、重症度、もしくは影響を低減するのに有用となる。
【００５６】
別の実施形態では、細菌感染症は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、コアグラーゼ陰性Ｓｔａｐｈｌｏｃｏｃｃｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ、またはＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓのうちの１つまたは複数の存在を特徴とする。
【００５７】
別の実施形態では、細菌感染症は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、またはＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓのうちの１つまたは複数の存在を特徴とする。
【００５８】
別の実施形態では、細菌感染は、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、またはＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅのうちの１つまたは複数の存在を特徴とする。
【００５９】
別の実施形態では、細菌感染症は、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｃｏｍｐｌｅｘ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋａｎｓａｓｉｉ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｕｌｃｅｒａｎｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、およびＣｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｏｍａｔｉｓのうちの１つまたは複数の存在を特徴とする。
【００６０】
別の実施形態では、細菌感染症は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｃｏｍｐｌｅｘ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋａｎｓａｓｉｉ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｕｌｃｅｒａｎｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、またはβ−溶血性ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉのうちの１つまたは複数の存在を特徴とする。
【００６１】
いくつかの実施形態では、細菌感染症は、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、フルオロキノロン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、バンコマイシン中間体耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、リネゾリド耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、ペニシリン耐性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、マクロライド耐性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、フルオロキノロン耐性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、バンコマイシン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、リネゾリド耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、フルオロキノロン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、バンコマイシン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ、リネゾリド耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ、フルオロキノロン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ、アンピシリン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ、マクロライド耐性Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、β−ラクタム耐性Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、フルオロキノロン耐性Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、β−ラクタム耐性Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、バンコマイシン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、フルオロキノロン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、マクロライド耐性Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、イソニアジド耐性Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、リファンピン耐性Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、メチシリン耐性コアグラーゼ陰性ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、フルオロキノロン耐性コアグラーゼ陰性ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、糖ペプチド中間体耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、バンコマイシン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、ヘテロバンコマイシン中間体耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、ヘテロバンコマイシン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、マクロライド−リンコサミド−ストレプトグラミン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、β−ラクタム耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、β−ラクタム耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ、ケトライド耐性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、ケトライド耐性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、マクロライド耐性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、バンコマイシン耐性ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、フルオロキノロン耐性Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、多剤耐性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、またはセファロスポリン耐性Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅのうちの１つまたは複数の存在を特徴とする。
【００６２】
別の実施形態によれば、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉは、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、またはメチシリン耐性コアグラーゼ陰性ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓから選択される。
【００６３】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物の一形態が、地域感染型ＭＲＳＡ（即ち、ｃＭＲＳＡ）を処置するのに使用される。
【００６４】
他の実施形態では、式（Ｉ）の化合物の一形態が、それだけに限らないが、ダプトマイシン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ、およびダプトマイシン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓを含めたダプトマイシン耐性生物を処置するのに使用される。
【００６５】
別の実施形態によれば、フルオロキノロン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉは、フルオロキノロン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、フルオロキノロン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、またはフルオロキノロン耐性コアグラーゼ陰性ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓから選択される。
【００６６】
別の実施形態によれば、糖ペプチド耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉは、糖ペプチド中間体耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、バンコマイシン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、バンコマイシン中間体耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、ヘテロバンコマイシン中間体耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、またはヘテロバンコマイシン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓから選択される。
【００６７】
別の実施形態によれば、マクロライド−リンコサミド−ストレプトグラミン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉは、マクロライド−リンコサミド−ストレプトグラミン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓである。
【００６８】
別の実施形態によれば、リネゾリド耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉは、リネゾリド耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、またはリネゾリド耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍから選択される。
【００６９】
別の実施形態によれば、糖ペプチド耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉは、バンコマイシン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ、またはバンコマイシン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓから選択される。
【００７０】
別の実施形態によれば、β−ラクタム耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓは、β−ラクタム耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍである。
【００７１】
別の実施形態によれば、ペニシリン耐性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉは、ペニシリン耐性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅである。
【００７２】
別の実施形態によれば、マクロライド耐性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉは、マクロライド耐性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａである。
【００７３】
別の実施形態によれば、ケトライド耐性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉは、マクロライド耐性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、およびケトライド耐性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓから選択される。
【００７４】
別の実施形態によれば、フルオロキノロン耐性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉは、フルオロキノロン耐性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅである。
【００７５】
別の実施形態によれば、β−ラクタム耐性Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓは、β−ラクタム耐性Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅである。
【００７６】
別の実施形態によれば、フルオロキノロン耐性Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓは、フルオロキノロン耐性Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅである。
【００７７】
別の実施形態によれば、マクロライド耐性Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓは、マクロライド耐性Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅである。
【００７８】
別の実施形態によれば、マクロライド耐性Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａは、マクロライド耐性Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅである。
【００７９】
別の実施形態によれば、イソニアジド耐性Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍは、イソニアジド耐性Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓである。
【００８０】
別の実施形態によれば、リファンピン耐性Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍは、リファンピン耐性Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓである。
【００８１】
別の実施形態によれば、β−ラクタム耐性Ｍｏｒａｘｅｌｌａは、β−ラクタム耐性Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓである。
【００８２】
別の実施形態によれば、細菌感染症は、以下のうちの１つまたは複数の存在を特徴とする：メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、フルオロキノロン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、バンコマイシン中間体耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、リネゾリド耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、ペニシリン耐性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、マクロライド耐性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、フルオロキノロン耐性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、バンコマイシン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、リネゾリド耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、フルオロキノロン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、バンコマイシン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ、リネゾリド耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ、フルオロキノロン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ、アンピシリン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ、マクロライド耐性Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、β−ラクタム耐性Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、フルオロキノロン耐性Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、β−ラクタム耐性Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、バンコマイシン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、フルオロキノロン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、マクロライド耐性Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、イソニアジド耐性Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、リファンピン耐性Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、フルオロキノロン耐性Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、またはセファロスポリン耐性Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ。
【００８３】
別の実施形態によれば、細菌感染症は、以下のうちの１つまたは複数の存在を特徴とする：メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、メチシリン耐性コアグラーゼ陰性ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、フルオロキノロン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、フルオロキノロン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、フルオロキノロン耐性コアグラーゼ陰性ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、バンコマイシン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、糖ペプチド中間体耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、バンコマイシン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、バンコマイシン中間体耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、ヘテロバンコマイシン中間体耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、ヘテロバンコマイシン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、バンコマイシン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ、バンコマイシン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、ペニシリン耐性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、マクロライド耐性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、フルオロキノロン耐性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、マクロライド耐性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、またはβ−ラクタム耐性Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ。
【００８４】
別の実施形態によれば、細菌感染症は、以下のうちの１つまたは複数の存在を特徴とする：メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、バンコマイシン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ、バンコマイシン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、バンコマイシン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、バンコマイシン中間体耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、ヘテロバンコマイシン中間体耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、ヘテロバンコマイシン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、多剤耐性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、イソニアジド耐性Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、およびリファンピン耐性Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ。
【００８５】
本発明の化合物に加えて、本発明の化合物の薬学的に許容される誘導体またはプロドラッグも、上記に特定した障害を処置または予防するための組成物に使用することができる。
【００８６】
「薬学的に許容される誘導体またはプロドラッグ」は、レシピエントに投与すると、直接または間接的に、本発明の化合物、またはその阻害的に（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｉｌｙ）活性な代謝産物もしくはその残基をもたらすことができる、本発明の化合物の任意の薬学的に許容される塩、エステル、エステルの塩、または他の誘導体を意味する。特に好まれる誘導体またはプロドラッグは、本発明の化合物の生体利用率を、そのような化合物が哺乳動物に投与される場合に増大させ（例えば、経口投与された化合物が血液中により容易に吸収されることを可能にすることによって）、または親化学種と比べて、生物学的コンパートメント（例えば、脳もしくはリンパ系）への親化合物の送達を増強するものである。
【００８７】
本発明の化合物の薬学的に許容されるプロドラッグには、限定することなく、エステル、アミノ酸エステル、リン酸エステル、金属塩、およびスルホン酸エステルが含まれる。
【００８８】
本発明の化合物の薬学的に許容される塩には、薬学的に許容される無機酸、有機酸、無機塩基、および有機塩基に由来するものが含まれる。適切な酸塩の例として、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、硫酸水素塩、酪酸塩、クエン酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、グリコール酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、パルモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、およびウンデカン酸塩が挙げられる。シュウ酸などの他の酸は、それ自体では薬学的に許容されないが、本発明の化合物およびこれらの薬学的に許容される酸付加塩を得るとき、中間体として有用な塩を調製するのに使用され得る。
【００８９】
適切な塩基に由来する塩には、アルカリ金属（例えば、ナトリウムおよびカリウム）、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）、アンモニウム、およびＮ＋（Ｃ１〜４アルキル）４の塩が含まれる。本発明は、本明細書に開示される化合物の任意の塩基性窒素含有基の四級化も想定している。水溶性もしくは油溶性、または水分散性もしくは油分散性の生成物を、このような四級化によって得ることができる。
【００９０】
本発明の医薬組成物は、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩、および薬学的に許容される担体を含む。このような組成物は、追加の治療剤を場合により含むことができる。このような作用物質として、それだけに限らないが、抗生物質、抗炎症剤、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、サイトカインアンタゴニスト、免疫抑制剤、抗がん剤、抗ウイルス剤、サイトカイン、成長因子、増殖因子、免疫調節剤、プロスタグランジン、または抗血管過剰増殖化合物が挙げられる。
【００９１】
用語「薬学的に許容される担体」は、本発明の化合物と一緒に患者に投与することができ、本発明の化合物の薬理学的活性を消失させない無毒性担体を指す。
【００９２】
本発明の医薬組成物に使用することができる薬学的に許容される担体として、それだけに限らないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸塩などのバッファー物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩、もしくは硫酸プロタミンなどの電解質、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、羊毛脂、およびα−トコフェロールなどの自己乳化薬物送達系（ＳＥＤＤＳ）、ポリエチレングリコール１０００スクシネート、または他の同様のポリマー送達マトリックスが挙げられる。
【００９３】
用語「薬学的有効量」は、患者における細菌感染症を処置するか、または寛解させるのに有効な量を指す。用語「予防有効量」は、患者における細菌感染症を予防するか、または実質的に和らげるのに有効な量を指す。
【００９４】
処置または予防される特定の状態または疾患状態に応じて、その状態を処置または予防するのに通常投与される追加の治療剤を、本発明の阻害剤と一緒に投与することができる。このような治療剤として、それだけに限らないが、抗生物質、抗炎症剤、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、サイトカインアンタゴニスト、免疫抑制剤、抗がん剤、抗ウイルス剤、サイトカイン、成長因子、増殖因子、免疫調節剤、プロスタグランジン、または抗血管過剰増殖化合物が挙げられる。
【００９５】
本発明の化合物は、細菌感染症レベルをｉｎ  ｖｉｖｏで制御するため、および疾患を処置するか、または細菌によって媒介される影響の進行もしくは重症度を低減するための従来の様式で使用され得る。処置のこのような方法、これらの投与量レベル、および必要条件は、利用可能な方法および技法から当業者によって選択され得る。
【００９６】
例えば、本発明の化合物は、細菌感染症または疾患を罹患している患者に、薬学的に許容される様式で、かつその感染症または疾患の重症度を和らげるのに有効な量で投与するために、薬学的に許容されるアジュバントと一緒に組み合わせられ得る。
【００９７】
あるいは、本発明の化合物を、長期間にわたって、細菌感染症または疾患に対して個体を処置または保護するための組成物および方法において使用することができる。一実施形態では、本発明の化合物を、１〜２週間の期間にわたって、細菌感染症または疾患に対して個体を処置または保護するための組成物および方法において使用することができる。別の実施形態では、本発明の化合物を、４〜８週間の期間にわたって、細菌感染症または疾患に対して個体を処置または保護するための組成物および方法において使用することができる（例えば、心内膜炎または骨髄炎を有するか、またはこれらを発症するリスクのある患者の処置において）。別の実施形態では、本発明の化合物を、８〜１２週間の期間にわたって、細菌感染症または疾患に対して個体を処置または保護するための組成物および方法において使用することができる。この化合物は、医薬組成物中の酵素阻害剤の従来の利用と一致する様式で、単独で、または本発明の他の化合物と一緒に、このような組成物に使用され得る。例えば、本発明の化合物は、細菌感染症または疾患に対して長期間にわたって個体を保護するために、ワクチンに慣例的に使用される薬学的に許容されるアジュバントと組み合わされ、予防有効量で投与され得る。
【００９８】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、細菌感染症を予防するために予防的に使用され得る。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物を、歯科的処置または外科的処置の前、最中、または後に使用することによって、細菌性心内膜炎において遭遇されるものなどの日和見感染症を予防することができる。他の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、それだけに限らないが、抜歯、歯周処置、歯科インプラント配置、および歯内手術を含めた歯科処置において予防的に使用され得る。他の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、それだけに限らないが、一般的な手術、呼吸器手術（扁桃摘出術／アデノイド切除）、消化管手術（上部ＧＩおよび待期的小腸手術、食道硬化療法および拡張、大腸切除、緊急虫垂切除）、外傷手術（穿通性腹部手術）、尿生殖路手術（前立腺切除術、尿道拡張、膀胱鏡検査、膣式子宮摘出術または腹式子宮摘出術、帝王切開）、移植手術（腎臓、肝臓、膵臓、または腎臓移植）、頭頸部手術（皮膚切除、頸部廓清術、喉頭切除、頭頸部がん手術、下顎骨折）、整形外科手術（関節全置換術、外傷性開放骨折）、血管手術（末梢血管処置）、心胸郭手術、冠状動脈バイパス手術、肺切除、ならびに脳手術を含めた外科手術において予防的に使用され得る。
【００９９】
用語「細菌感染症を予防する」は、本明細書において、別段の指定のない限り、細菌感染症を予防するための、本発明のジャイレースおよび／またはトポイソメラーゼＩＶ阻害剤などの抗生物質の予防的使用を意味する。ジャイレースおよび／またはトポイソメラーゼＩＶ阻害剤を用いた処置は、ジャイレースおよび／またはトポイソメラーゼＩＶ阻害剤に感受性である生物によって引き起こされる感染症を予防するのに予防的に行われ得る。予防的処置が考慮され得る状態の１つの一般的なセットは、個体が、例えば、弱くなった免疫、手術、外傷、体内の人工デバイスの存在（一時的もしくは永続的）、解剖学的欠損、高レベルの細菌への曝露、または疾患を引き起こす病原体への予想される曝露に起因して、感染症に対してより脆弱であるときである。免疫を弱まらせ得る要因の例には、化学療法、放射線療法、糖尿病、年齢の進行、ＨＩＶ感染症、および移植が含まれる。解剖学的欠損の例は、心臓弁の欠損であり、これは、細菌性心内膜炎のリスクを増大させる。人工デバイスの例には、人工関節、手術用ピン、カテーテルなどが含まれる。ジャイレースおよび／またはトポイソメラーゼＩＶ阻害剤の予防的使用が適切となり得る状況の別のセットは、個体同士間の病原体の蔓延（直接的または間接的）を予防することである。病原体の蔓延を予防するための予防的使用の具体例は、健康管理機関（例えば、病院または養護ホーム）の者によるジャイレースおよび／またはトポイソメラーゼＩＶ阻害剤の使用である。
【０１００】
式（Ｉ）の化合物は、様々な細菌感染症に対する療法または予防の効果を増大させるために、他の抗生物質と共投与されてもよい。本発明の化合物が他の作用物質と併用療法で投与される場合、これらは、患者に順次または同時に投与され得る。あるいは、本発明による医薬組成物または予防用組成物は、式（Ｉ）の化合物と別の治療剤または予防剤との組合せを含む。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、追加の１つまたは複数の治療剤は、天然ペニシリン、ペニシリナーゼ耐性ペニシリン、抗緑膿菌性ペニシリン、アミノペニシリン、第一世代セファロスポリン、第二世代セファロスポリン、第三世代セファロスポリン、第四世代セファロスポリン、カルバペネム、セファマイシン、キノロン、フルオロキノロン、アミノグリコシド、マクロライド、ケトライド、ポリミキシン、テトラサイクリン、糖ペプチド、ストレプトグラミン、オキサゾリジノン、リファマイシン、またはスルホンアミドから選択される抗生物質である。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、追加の１つまたは複数の治療剤は、ペニシリン、セファロスポリン、キノロン、アミノグリコシド、またはオキサゾリジノンから選択される抗生物質である。
【０１０３】
他の実施形態では、追加の治療剤は、ベンザチンペニシリンＧ、ペニシリンＧ、およびペニシリンＶを含めた天然ペニシリンから、クロキサシリン、ジクロキサシリン、ナフシリン、およびオキサシリンを含めたペニシリナーゼ耐性ペニシリンから、カルベニシリン、メズロシリン、ピペルシリン、ピペルシリン／タゾバクタム、チカルシリン（Ｔｉｃａｒｉｃｉｌｌｉｎ）、およびチカルシリン／クラブラネートを含めた抗緑膿菌性ペニシリンから、アモキシシリン、アンピシリン、およびアンピシリン／スルバクタムを含めたアミノペニシリンから、セファゾリン、セファドロキシル、セファレキシン、およびセファドリン（Ｃｅｐｈａｄｒｉｎｅ）を含めた第一世代セファロスポリンから、セファクロル、セファクロル−ＣＤ、セファマンドール、セフォニシド（Ｃｅｆｏｎａｃｉｄ）、セフプロジル、ロラカルベフ、およびセフロキシムを含めた第二世代セファロスポリンから、セフジニル、セフィキシム、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム（Ｃｅｆｔｉｚｏｘｍｅ）、およびセフトリアキソンを含めた第三世代セファロスポリンから、セフェピム、セフタロリン、およびセフトビプロールを含めた第四世代セファロスポリンから、セフォテタンおよびセフォキシチンを含めたセファマイシンから、ドリペネム、イミペネム、およびメロペネムを含めたカルバペネムから、アズトレオナムを含めたモノバクタムから、シノキサシン、ナリジクス酸、オキソリニック酸、およびピペミド酸を含めたキノロンから、ベシフロキサシン、シプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、グレパフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ノルフロキサシン、オフロキサシン、およびスパルフロキサシンを含めたフルオロキノロンから、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、スペクチノマイシン、ストレプトマイシン、およびトブラマイシンを含めたアミノグリコシドから、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、およびエリスロマイシンを含めたマクロライドから、テリスロマイシンを含めたケトライドから、クロルテトラサイクリン、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、およびテトラサイクリンを含めたテトラサイクリンから、オリタバンシン、ダルババンシン、テラバンシン、テイコプラニン、およびバンコマイシンを含めた糖ペプチドから、ダルホプリスチン／キヌプリスチンを含めたストレプトグラミンから、リネゾリドを含めたオキサゾリドンから、リファブチンおよびリファンピンを含めたリファマイシンから、ならびにバクチトラシン（ｂａｃｔｉｔｒａｃｉｎ）、コリスチン、チガシル、ダプトマイシン、クロラムフェニコール、クリンダマイシン、イソニアジド、メトロニダゾール、ムピロシン、ポリミキシンＢ、ピラジナミド、トリメトプリム／スルファメトキサゾール、およびスルフイソキサゾールを含めた他の抗生物質から選択される。
【０１０４】
他の実施形態では、追加の治療剤は、ペニシリンＧを含めた天然ペニシリンから、ナフシリンおよびオキサシリンを含めたペニシリナーゼ耐性ペニシリンから、ピペルシリン／タゾバクタムを含めた抗緑膿菌性ペニシリンから、アモキシシリンを含めたアミノペニシリンから、セファレキシンを含めた第一世代セファロスポリンから、セファクロル、セファクロル−ＣＤおよびセフロキシムを含めた第二世代セファロスポリンから、セフタジジムおよびセフトリアキソンを含めた第三世代セファロスポリンから、セフェピムを含めた第四世代セファロスポリンから、イミペネム（Ｉｍｅｐｅｎｅｍ）、メロペネム、エルタペネム、ドリペネム、パニペネム、およびビアペネムを含めたカルバペネムから、シプロフロキサシン、ガチフロキサシン、レボフロキサシン、およびモキシフロキサシンを含めたフルオロキノロンから、トブラマイシンを含めたアミノグリコシドから、アジスロマイシンおよびクラリスロマイシンを含めたマクロライドから、ドキシサイクリンを含めたテトラサイクリンから、バンコマイシンを含めた糖ペプチドから、リファンピンを含めたリファマイシンから、ならびにイソニアジド、ピラジナミド、チガシル、ダプトマイシン、またはトリメトプリム／スルファメトキサゾールを含めた他の抗生物質から選択される。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、固体形態の式（Ｉ）の化合物は、グラム陽性感染症を処置するために投与され得る。いくつかの実施形態では、組成物は、固体、液体（例えば、懸濁液）、またはｉｖ（例えば、一形態の式（Ｉ）の化合物を液体中に溶解させ、それがｉｖ投与される）組成物である。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物を含む組成物は、追加の抗生物質剤、例えば、天然ペニシリン、ペニシリナーゼ耐性ペニシリン、抗緑膿菌性ペニシリン、アミノペニシリン、第一世代セファロスポリン、第二世代セファロスポリン、第三世代セファロスポリン、第四世代セファロスポリン、カルバペネム、セファマイシン、キノロン、フルオロキノロン、アミノグリコシド、マクロライド、ケトライド、ポリミキシン、テトラサイクリン、糖ペプチド、ストレプトグラミン、オキサゾリジノン、リファマイシン、またはスルホンアミドと併用して投与される。いくつかの実施形態では、固体形態の式（Ｉ）の化合物を含む組成物は、経口投与され、追加の抗生物質剤、例えば、天然ペニシリン、ペニシリナーゼ耐性ペニシリン、抗緑膿菌性ペニシリン、アミノペニシリン、第一世代セファロスポリン、第二世代セファロスポリン、第三世代セファロスポリン、第四世代セファロスポリン、カルバペネム、セファマイシン、キノロン、フルオロキノロン、アミノグリコシド、マクロライド、ケトライド、ポリミキシン、テトラサイクリン、糖ペプチド、ストレプトグラミン、オキサゾリジノン、リファマイシン、またはスルホンアミドは、ｉｖ投与される。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、固体形態の式（Ｉ）の化合物は、グラム陰性感染症を処置するために投与され得る。いくつかの実施形態では、組成物は、固体、液体（例えば、懸濁液）、またはｉｖ（例えば、一形態の式（Ｉ）の化合物を液体中に溶解させ、それがｉｖ投与される）組成物である。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物を含む組成物は、天然ペニシリン、ペニシリナーゼ耐性ペニシリン、抗緑膿菌性ペニシリン、アミノペニシリン、第一世代セファロスポリン、第二世代セファロスポリン、第三世代セファロスポリン、第四世代セファロスポリン、カルバペネム、セファマイシン、モノバクタム、キノロン、フルオロキノロン、アミノグリコシド、マクロライド、ケトライド、ポリミキシン、テトラサイクリン、またはスルホンアミドから選択される追加の抗生物質剤と併用して投与される。いくつかの実施形態では、固体形態の式（Ｉ）の化合物を含む組成物は、経口投与され、追加の抗生物質剤、例えば、天然ペニシリン、ペニシリナーゼ耐性ペニシリン、抗緑膿菌性ペニシリン、アミノペニシリン、第一世代セファロスポリン、第二世代セファロスポリン、第三世代セファロスポリン、第四世代セファロスポリン、カルバペネム、セファマイシン、モノバクタム、キノロン、フルオロキノロン、アミノグリコシド、マクロライド、ケトライド、ポリミキシン、テトラサイクリン、またはスルホンアミドは、経口投与される。いくつかの実施形態では、追加の治療剤はｉｖ投与される。
【０１０７】
上述した追加の治療剤は、複数回投薬レジメンの一部として、阻害剤含有組成物と別個に投与され得る。あるいは、これらの作用物質は、単一組成物中の阻害剤と一緒に混合された単一剤形の一部とすることができる。
【０１０８】
本発明の医薬組成物は、経口的に、非経口的に、吸入スプレーによって、局所的に、経直腸的に、経鼻的に、頬側に、経膣的に、または移植されたリザーバを介して投与され得る。本発明の医薬組成物は、任意の従来の無毒性の薬学的に許容される担体、アジュバント、またはビヒクルを含有し得る。いくつかの場合では、製剤のｐＨを、薬学的に許容される酸、塩基、またはバッファーを用いて調整することによって、製剤化された化合物、またはその送達形態の安定性を増強することができる。用語の非経口は、本明細書において、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、滑液包内、胸骨内、クモ膜下、病巣内、および頭蓋内の注射または注入技法を含む。
【０１０９】
医薬組成物は、例えば、滅菌した注射可能な水性または油性の懸濁液としての、滅菌した注射可能な調製物の形態であってもよい。この懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０など）、および懸濁剤を使用して、当技術分野で公知の技法によって製剤化され得る。滅菌した注射可能な調製物は、無毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の滅菌注射用溶液または懸濁液、例えば、１，３−ブタンジオール溶液であってもよい。使用することができる、許容されるビヒクルおよび溶媒の中には、マンニトール、水、リンガー液、および等張性塩化ナトリウム溶液がある。さらに、滅菌した固定油が、溶媒または懸濁化媒質として慣用的に使用される。この目的で、合成モノグリセリドまたは合成ジグリセリドを含めた任意の無刺激性固定油を使用することができる。オレイン酸およびそのグリセリド誘導体などの脂肪酸は、天然の薬学的に許容される油、例えば、オリーブ油またはヒマシ油などと同様に、特にこれらのポリオキシエチル化型で、注入可能医薬品の調製に有用である。これらの油溶液または懸濁液は、Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  Ｈｅｌｖｅｔｉｃａに記載されているものなどの長鎖アルコール希釈剤もしくは分散剤、または同様のアルコールも含有する場合がある。
【０１１０】
本発明の医薬組成物は、それだけに限らないが、カプセル、錠剤、ならびに水性懸濁液および水溶液を含めた任意の経口的に許容される剤形で経口投与され得る。経口用途用の錠剤の場合では、一般に使用される担体には、ラクトースおよびコーンスターチが含まれる。ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤も一般に添加される。カプセル形態での経口投与については、有用な希釈剤には、ラクトース、および乾燥コーンスターチが含まれる。水性懸濁液および水溶液、ならびにプロピレングリコールが経口投与される場合、活性成分は、乳化剤および懸濁剤と組み合わされる。必要に応じて、ある特定の甘味料および／または香味料および／または着色剤が添加される場合がある。
【０１１１】
本発明の医薬組成物は、直腸投与のために坐剤の形態で投与され得る。これらの組成物は、本発明の化合物を、室温で固体であるが、直腸温度で液体であり、したがって、直腸内で融解して活性成分を放出する適切な非刺激性賦形剤と混合することによって調製され得る。このような材料には、それだけに限らないが、カカオバター、蜜ろう、およびポリエチレングリコールが含まれる。
【０１１２】
本発明の医薬組成物の局所投与は、所望の処置が、局所的な適用によって容易にアクセス可能な領域または臓器を伴う場合、特に有用である。皮膚に局所的に塗布する場合、医薬組成物は、担体中に懸濁または溶解した活性成分を含有する適切な軟膏で製剤化されるべきである。本発明の化合物の局所投与用担体として、それだけに限らないが、鉱油、流動パラフィン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン、乳化ろう、および水が挙げられる。あるいは、医薬組成物は、担体中に懸濁または溶解した活性化合物を含有する適切なローション剤またはクリームで製剤化されてもよい。適切な担体として、それだけに限らないが、鉱油、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリールアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール、および水が挙げられる。本発明の医薬組成物は、直腸用坐剤製剤によって、または適切な浣腸製剤で下部腸管に局所的に適用されてもよい。局所的に投与される経皮パッチも本発明に含まれる。
【０１１３】
本発明の医薬組成物は、鼻エアロゾルまたは吸入によって投与され得る。このような組成物は、医薬製剤の分野で周知である技法によって調製され、ベンジルアルコール、または他の適切な保存剤、生体利用率を増強するための吸収プロモーター、フルオロカーボン、および／または当技術分野で公知である他の可溶化剤もしくは分散剤を使用して、生理食塩水の溶液として調製され得る。
【０１１４】
別の実施形態によれば、式（Ｉ）の化合物は、埋め込み型デバイスまたは留置デバイスなどを用いて、移植によって（例えば、外科的に）送達され得る。埋め込み型デバイスまたは留置デバイスは、被験体中に永久に、または一時的にあるようにデザインされ得る。埋め込み型デバイスならびに留置デバイスの例として、それだけに限らないが、コンタクトレンズ、中心静脈カテーテル、ならびに無針コネクタ、気管内チューブ、子宮内デバイス、機械心臓弁、ペースメーカー、腹膜透析カテーテル、腰および膝の代替品などの人工関節、中耳腔換気用チューブ、導尿カテーテル、ボイスプロステーシス、ステント、吐出ポンプ、血管フィルター、ならびに移植可能な制御放出組成物が挙げられる。生物膜は、埋め込み型または留置医療用デバイスを有する患者の健康に有害となり得、その理由は、これらは、体内に人工基質を導入し、持続感染を引き起こし得るためである。したがって、埋め込み型デバイスまたは留置デバイスの中または上に式（Ｉ）の化合物を供給することにより、生物膜の生成を予防または低減することができる。さらに、埋め込み型デバイスまたは留置デバイスは、式（Ｉ）の化合物のデポーまたはリザーバとして使用され得る。任意の埋め込み型デバイスまたは留置デバイスを、式（Ｉ）の化合物を送達するのに使用することができるが、ただし、ａ）デバイス、式（Ｉ）の化合物、および式（Ｉ）の化合物を含む任意の医薬組成物は生体適合性であり、ｂ）デバイスは、有効量の式（Ｉ）の化合物を送達または放出することによって、処置される患者に治療効果を付与され得る。
【０１１５】
埋め込み型デバイスまたは留置デバイスを介した治療剤の送達は、当技術分野で公知である。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎａｌ  Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ  Ｒｅｐｏｒｔｓ、２００１年、３巻：２８〜３６頁に公開されたＨｏｆｍａらによる「Ｒｅｃｅｎｔ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｃｏａｔｅｄ  Ｓｔｅｎｔｓ」を参照。これに引用された参考文献を含むその内容全体は、参考として本明細書に援用される。埋め込み型デバイスの他の説明は、米国特許第６，５６９，１９５号、および同第６，３２２，８４７号、ならびに米国特許出願第２００４／００４４４０５号、同第２００４／００１８２２８号、同第２００３／０２２９３９０号、同第２００３／０２２５４５０号、同第２００３／０２１６６９９号、および同第２００３／０２０４１６８号に見出すことができ、これらのそれぞれは、その全体が参考として本明細書に援用される。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、埋め込み型デバイスはステントである。特定の一実施形態では、ステントは、インターロックメッシュケーブル（ｉｎｔｅｒｌｏｃｋｅｄ  ｍｅｓｈｅｄ  ｃａｂｌｅ）を含むことができる。各ケーブルは、構造支柱用金属ワイヤ、および治療剤を送達するためのポリマーワイヤを含むことができる。ポリマーワイヤは、治療剤の溶液中にポリマーを浸漬することによって添加され得る。あるいは、ポリマー前駆体溶液からワイヤを形成する間に、ポリマーワイヤ中に治療剤を埋め込むことができる。
【０１１７】
他の実施形態では、埋め込み型デバイスまたは留置デバイスは、治療剤を含むポリマー被膜で被覆され得る。ポリマー被膜は、治療剤の放出速度を制御するようにデザインされ得る。治療剤の制御放出は、様々な技術を利用することができる。ポリマー物質中に活性剤の不均一溶液および／または分散液を組み込んでいるモノリシック層または被膜を有するデバイスが公知であり、この場合、作用物質は、ポリマーを通じてポリマー−流体界面に拡散し、周囲流体中に放出されるので、作用物質の拡散が律速である。いくつかのデバイスでは、可溶性物質もポリマー材料中に溶解または分散させ、その結果、材料が溶解した後、追加の孔またはチャネルが残される。マトリックスデバイスは一般に、同様に拡散に制限されるが、デバイスのチャネルまたは他の内部形状も、流体への作用物質の放出に役割を果たす。チャネルは、既存のチャネル、または放出される作用物質もしくは他の可溶性物質の後に残されるチャネルであり得る。
【０１１８】
浸食性または分解性のデバイスは一般に、ポリマー中に物理的に固定化された活性剤を有する。活性剤を、ポリマー材料全体にわたって溶解かつ／または分散させてもよい。ポリマー材料は、多くの場合、不安定な結合の加水分解を通じて経時的に、加水分解的に分解され、ポリマーが流体中へと浸食することを可能にし、流体中に活性剤を放出する。親水性ポリマーの浸食速度は一般に、疎水性ポリマーと比べてより速い。疎水性ポリマーは、表面から内側に浸食されて、活性剤をほとんど純粋に表面拡散させると考えられている。親水性ポリマーは、水がポリマーの表面を貫通することを可能にし、表面の真下の不安定な結合の加水分解を可能にし、これは、ポリマーを均質に、またはバルクで浸食させることができると考えられている。
【０１１９】
埋め込み型デバイスまたは留置デバイスの被膜は、それぞれが、治療剤の異なる放出速度を有するポリマーのブレンドを含むことができる。例えば、被膜は、ポリ乳酸／ポリエチレンオキシド（ＰＬＡ−ＰＥＯ）コポリマーおよびポリ乳酸／ポリカプロラクトン（ＰＬＡ−ＰＣＬ）コポリマーを含み得る。ポリ乳酸／ポリエチレンオキシド（ＰＬＡ−ＰＥＯ）コポリマーは、ポリ乳酸／ポリカプロラクトン（ＰＬＡ−ＰＣＬ）コポリマーと比べて、治療剤のより高い放出速度を呈することができる。経時的に送達される治療剤の相対量および投与速度は、遅放出性ポリマーに対する速放出性ポリマーの相対量を制御することによって制御することができる。初期放出速度をより速くするために、速放出性ポリマーの比率を、遅放出性ポリマーに対して増大させることができる。投与量のほとんどが長時間にわたって放出されることが望まれる場合、ポリマーのほとんどを遅放出性ポリマーとすることができる。デバイスは、デバイスにポリマー、活性剤、および溶媒の溶液または分散液を吹き付けることによって被覆され得る。溶媒は、ポリマーおよび活性剤の被膜を残して蒸発することができる。活性剤を、ポリマー中に溶解かつ／または分散させてもよい。いくつかの実施形態では、コポリマーをデバイス上に押し出すことができる。
【０１２０】
１日当たり、体重１ｋｇ当たり約０．０１〜約１００ｍｇの間、好ましくは１日当たり、体重１ｋｇ当たり０．５〜約７５ｍｇの間、最も好ましくは、１日当たり、体重１ｋｇ当たり約１〜５０ｍｇの間の活性成分化合物の投与量レベルが、細菌感染症を予防および処置するための単剤療法において有用である。
【０１２１】
一般に、本発明の医薬組成物は、１日当たり約１〜５回、または代わりに、持続注入として投与されることになる。あるいは、本発明の組成物は、パルス製剤で投与してもよい。このような投与は、長期療法または救急療法として使用され得る。単一剤形を生成するのに担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、処置されるホスト、および特定の投与方法に応じて変化する。一般的な調製物は、約５％〜約９５％の活性化合物（ｗ／ｗ）を含有することになる。好ましくは、このような調製物は、約２０％〜約８０％の活性化合物を含有する。
【０１２２】
本発明の組成物が、式（Ｉ）の化合物と１つまたは複数の追加の治療剤または予防剤との組合せを含む場合、化合物および追加の作用物質の両方は、単剤療法投与法で通常投与される投与量の約１０％〜８０％の間の投与量レベルで存在するはずである。
【０１２３】
患者の状態が改善した後、維持用量の本発明の化合物、組成物、または組合せを、必要であれば投与することができる。その後、投与量もしくは投与の頻度、または両方を、改善された状態が保持されるレベルに、症状に応じて低減することができ、症状が所望レベルに軽減したとき、処置を終えるべきである。しかし、患者は、いずれかの再発または疾患症状の後、長期間ベースの間欠的処置を必要とする場合がある。
【０１２４】
当業者が理解するように、上記に列挙したものより低い、または高い用量を必要とする場合がある。任意の特定の患者に対する具体的な投与量および処置レジメンは、使用される特定の化合物の活性、年齢、体重、全体的な健康状態、性別、飲食物、投与の時間、排泄率、薬物の組合せ、疾患の重症度および過程、ならびに疾患に対する患者の処置、および治療医師の判断を含めた様々な要因に依存することになる。
【０１２５】
別の実施形態によれば、本発明は、細菌感染症、または疾患状態を処置または予防するための方法であって、本明細書に記載される任意の化合物、医薬組成物、または組合せを患者に投与するステップを含む、方法を提供する。用語「患者」は、本明細書において、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。
【０１２６】
本発明の化合物は、ジャイレースＢおよび／またはトポイソメラーゼＩＶ酵素に有効に結合する市販の試薬としても有用である。市販の試薬として、本発明の化合物およびこれらの誘導体は、細菌性ジャイレースＢおよび／もしくはトポイソメラーゼＩＶ、またはこれらの相同体についての生化学的アッセイまたは細胞アッセイにおいて、ジャイレースＢおよび／またはトポイソメラーゼＩＶ活性を遮断するのに使用され得、あるいは親和性クロマトグラフィー用途用のテザー係留された基質（ｔｅｔｈｅｒｅｄ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）としての安定な樹脂に結合するように誘導体化され得る。市販のジャイレースＢおよび／またはトポイソメラーゼＩＶ阻害剤を特徴付けるこれらの使用および他の使用は、当業者に明白となるであろう。
【０１２７】
本発明の化合物は、米国特許第ＲＥ４０２４５Ｅ号、米国特許第７，４９５，０１４Ｂ２号、米国特許第７，５６９，５９１Ｂ２号、米国特許第７，５８２，６４１Ｂ２号、米国特許第７，６１８，９７４Ｂ２号、および米国特許第７，７２７，９９２Ｂ２号によって教示されている、類似の化合物については、当業者に公知の一般的な方法に従って調製することができる。前記特許の６つすべては、本明細書に完全に示されているように、参考として援用される。本発明の化合物を調製するのに使用される条件の詳細を、実施例でさらに示す。
【実施例】
【０１２８】
本発明がより完全に理解されるために、以下の実施例を示す。これらの実施例は、例示目的だけのものであり、本発明の範囲を限定するものとして決して解釈されるべきでない。
【０１２９】
以下の定義は、本明細書で使用される用語および略語を説明するものである：
Ａｃ  アセチル
Ｂｕ  ブチル
Ｅｔ  エチル
Ｐｈ  フェニル
Ｍｅ  メチル
ＴＨＦ  テトラヒドロフラン
ＤＣＭ  ジクロロメタン
ＣＨ２Ｃｌ２  ジクロロメタン
ＥｔＯＡｃ  酢酸エチル
ＣＨ３ＣＮ  アセトニトリル
ＥｔＯＨ  エタノール
Ｅｔ２Ｏ  ジエチルエーテル
ＭｅＯＨ  メタノール
ＭＴＢＥ  メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル
ＤＭＦ  Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＡ  Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド
ＤＭＳＯ  ジメチルスルホキシド
ＨＯＡｃ  酢酸
ＴＥＡ  トリエチルアミン
ＴＦＡ  トリフルオロ酢酸
ＴＦＡＡ  トリフルオロ酢酸無水物
Ｅｔ３Ｎ  トリエチルアミン
ＤＩＰＥＡ  ジイソプロピルエチルアミン
ＤＩＥＡ  ジイソプロピルエチルアミン
Ｋ２ＣＯ３  炭酸カリウム
Ｎａ２ＣＯ３  炭酸ナトリウム
Ｎａ２Ｓ２Ｏ３  チオ硫酸ナトリウム
Ｃｓ２ＣＯ３  炭酸セシウム
ＮａＨＣＯ３  炭酸水素ナトリウム
ＮａＯＨ  水酸化ナトリウム
Ｎａ２ＳＯ４  硫酸ナトリウム
ＭｇＳＯ４  硫酸マグネシウム
Ｋ３ＰＯ４  リン酸カリウム
ＮＨ４Ｃｌ  塩化アンモニウム
ＬＣ／ＭＳ  液体クロマトグラフィー／質量スペクトル
ＧＣＭＳ  ガスクロマトグラフィー質量スペクトル
ＨＰＬＣ  高速液体クロマトグラフィー
ＧＣ  ガスクロマトグラフィー
ＬＣ  液体クロマトグラフィー
ＩＣ  イオンクロマトグラフィー
ＩＭ  筋肉内
ＣＦＵ／ｃｆｕ  コロニー形成単位
ＭＩＣ  最小阻害濃度
Ｈｒまたはｈ  時間
ａｔｍ  気圧
ｒｔまたはＲＴ  室温
ＴＬＣ  薄層クロマトグラフィー
ＨＣｌ  塩酸
Ｈ２Ｏ  水
ＥｔＮＣＯ  イソシアン酸エチル
Ｐｄ／Ｃ  炭素上のパラジウム
ＮａＯＡｃ  酢酸ナトリウム
Ｈ２ＳＯ４  硫酸
Ｎ２  窒素ガス
Ｈ２  水素ガス
ｎ−ＢｕＬｉ  ｎ−ブチルリチウム
ＤＩ  脱イオン化された
Ｐｄ（ＯＡｃ）２  酢酸パラジウム（ＩＩ）
ＰＰｈ３  トリフェニルホスフィン
ｉ−ＰｒＯＨ  イソプロピルアルコール
ＮＢＳ  Ｎ−ブロモスクシンイミド
Ｐｄ［（Ｐｈ３）Ｐ］４  テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）
ＰＴＦＥ  ポリテトラフルオロエチレン
ｒｐｍ  毎分回転数
ＳＭ  出発物質
Ｅｑｕｉｖ．  当量
１Ｈ−ＮＭＲ  プロトン核磁気共鳴
ＨＰＭＣＡＳ  酢酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース
ＰＶＰ  ポリビニルピロリドン
ＥＤＴＡ  エチレンジアミン四酢酸
Ｋ２ＥＤＴＡ  二塩基性エチレンジアミン四酢酸カリウム
ｍＣＰＢＡ  メタ−クロロペルオキシ安息香酸
ａｑ  水性
Ｂｏｃ２Ｏ  ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネート
ＤＭＡＰ  Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン
ｍＬ  ミリリットル
Ｌ  リットル
ｍｏｌ  モル
ｇ  グラム
ＬＣＭＳ  液体クロマトグラフィー−質量分析法
ＭＨｚ  メガヘルツ
ＣＤＣｌ３  ジュウテロクロロホルム
ＮＥｔ３  トリエチルアミン
ｍｍｏｌ  ミリモル
ｐｓｉ  １平方インチ当たりのポンド
ｉＰｒＯＨ  イソプロピルアルコール
ｐｐｍ  百万分率
ＮＨ４ＮＯ３  硝酸アンモニウム
Ｈｚ  ヘルツ
Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２  ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）
Ｌ  リットル
ＭｅＯＤ  ジュウテロ−メタノール
ＣＤ３ＯＤ  ジュウテロ−メタノール
ｅｅ  エナンチオマー過剰率
ｍｉｎ  分
Ｂｎ  ベンジル
ＲＢＦ  丸底フラスコ
ＭｅＣＮ  アセトニトリル
ＰＥＳ  ポリエーテルスルホン
ｍｍ  ミリメートル
μｍ  マイクロメートル
Ｍ  モル
Ｎ  ノルマル
Ｂｏｃ  ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ＥＳＭＳ  エレクトロスプレー質量分析法
ＣＶ  カラム容積
Ｄ２Ｏ  酸化ジュウテリウム
ＮＨ３  アンモニア
ＯＢＤ  最適ベッド密度
ｍｇ  ミリグラム
ＣＬＳＩ  臨床検査標準協会
ＡＴＣＣ  アメリカンタイプカルチャーコレクション
ＭＨＩＩ  ミューラーヒントンＩＩ
μＬ  マイクロリットル
ＷＴ  野生型
ＣＧＳＣ  大腸菌遺伝子ストックセンター
ＭＳ  質量分析法
ＩＳ  内部標準
ＡＰＣＩ  大気圧化学イオン化
ＭＲＭ  多重反応モニタリング
ｍ／ｚ  質量対電荷比
ＬＬＯＱ  定量化の下限
ｎｇ  ナノグラム
ＵＶ  紫外
ＳＤ  標準偏差
％ＣＶ  変動係数
ＰＯ  口周囲
ＭＣ  微結晶性セルロース
ＥＤＴＡ  エチレンジアミン四酢酸またはエチレンジアミンテトラアセテート
ＰＫ  薬物動態学的
ＩＶ  静脈内
Ｄ５Ｗ  水溶液中５％のデキストロース
ＨＰＭＣ−ＡＳ  ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセチルスクシネート
ＰＶＰ  ポリビニルピロリドン（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｒｒｏｌｉｄｏｎｅ）
ＣＡＰＴ  カプチソール
ＡＴＰ  アデノシン三リン酸
ＡＤＰ  アデノシン二リン酸
ＮＡＤＨ  ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（還元型）
ＮＡＤ＋  ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（酸化型）
ＴＲＩＳ  トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン
ｍＭ  ミリモル
ＭｇＣｌ２  塩化マグネシウム
ＫＣｌ  塩化カリウム
μＭ  マイクロモル
ＤＴＴ  ジチオトレイトール
ｎＭ  ナノモル
Ｋｉ  解離定数
ＩＣ５０  最大半量の阻害濃度
μｇ  マイクログラム
ＢＳＡ  ウシ血清アルブミン
ＬＤＨ  乳酸デヒドロゲナーゼ
ＰＶＤＦ  フッ化ポリビニリデン
ＡｃＮ  アセトニトリル
ＶＭＡＸ  反応の最大初期ベロシティまたは速度。
【０１３０】
（実施例１）
２−（２−ニトロフェニル）−２，５−ジヒドロフランおよび２−（２−ニトロフェニル）−２，３−ジヒドロフラン（３ａ＆３ｂ）の調製。
【０１３１】
【化７】
2014503557.tif 000009
１−ブロモ−２−ニトロ−ベンゼン（１）（６００ｇ、９９％、２．９４１ｍｏｌ、Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ  Ａ１１６８６）、１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパン（６２．５０ｇ、９７％、１４７．０ｍｍｏｌ、Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ  Ａ１２９３１）、１，４−ジオキサン（２．９７０Ｌ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ３６０４８１）、炭酸カリウム（８１２．９ｇ、５．８８２ｍｏｌ、ＪＴ−Ｂａｋｅｒ  ３０１２０１）、および２，３−ジヒドロフラン（２）（１．０４１ｋｇ、９９％、１．１２４Ｌ、１４．７０ｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ  ２０００１８）を混合した。撹拌混合物に窒素流を通して４時間泡立て、続いて酢酸パラジウム（ＩＩ）（１６．５１ｇ、７３．５２ｍｍｏｌ、Ｓｔｒｅｍ  ４６１７８０）を添加し、脱酸素化をさらに１０分間継続した。還流させながら窒素下で一晩反応混合物を撹拌した（後処理されたアリコートのＮＭＲは、アリールブロマイドの完全な消費を示した）。これを冷却し、ヘキサン（１Ｌ）で希釈し、フロリジル（Ｆｌｏｒｉｓｉｌ）（登録商標）（５００ｇ、−２００メッシュ）の短いプラグを通して濾過し、ＥｔＯＡｃにより溶出した。濾液を減圧下で濃縮し（２−（２−ニトロフェニル）−２，３−ジヒドロフランは、高真空下で揮発性であり、室温で若干不安定であり得る）、（３ａ）および（３ｂ）の混合物を暗褐色の油状物として得た（６５４．０ｇ）。この粗材料を冷蔵庫に保存し、さらに精製することなく先に進んだ。
【０１３２】
（実施例２）
２−テトラヒドロフラン−２−イル−アニリン（４）の調製。
【０１３３】
【化８】
2014503557.tif 000010
窒素下、炭素上の５％パラジウム（１６．３ｇ、５０％ウェット、３．８３ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ  ３３０１１６）をＰａｒｒボトル内に入れ、続いてＭｅＯＨ（１００ｍＬ、ＪＴ−Ｂａｋｅｒ  ９０９３３３）を加えた。ＭｅＯＨ（３８９ｍＬ）に溶解させた２−（２−ニトロフェニル）−２，５−ジヒドロフランおよび２−（２−ニトロフェニル）−２，３−ジヒドロフラン（３ａ＆３ｂ））（１６３ｇ）の粗混合物を添加し、続いてＮＥｔ３（２３７．６ｍＬ、１．７０５ｍｏｌ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ４７１２８３）を加えた。容器をＰａｒｒ振盪機に置き、Ｈ２で飽和させた。３０ｐｓｉ  Ｈ２を添加し、消費が完了する（ＬＣＭＳおよびＮＭＲが完全な反応を示す）まで振盪した。反応混合物を窒素でパージし、セライト（Ｃｅｌｉｔｅ）（商標）を通して濾過し、ＥｔＯＡｃでリンスした。ロータリーエバポレーターにおいて濾液を濃縮して、褐色の油状物を得た。反応を同一スケールでさらに３回反復し、精製のためにバッチを合わせた。粗生成物を真空蒸留（約１５ｔｏｒｒ）し、１０８〜１２９℃で留出物を収集して、（４）を澄んだ淡黄色の油状物として得た（４２７．９ｇ、平均収率８４％；９８％ＧＣＭＳ純度）。ＬＣＭＳ（Ｃ１８カラム、ギ酸モディファイアを用いて、５分間かけて１０〜９０％ＣＨ３ＣＮ／水勾配で溶出）Ｍ＋１：１６３．９５（１．４６分間）。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）：  δ  ７．１５  −  ７．０４  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．７７  −  ６．６２  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．８５  −  ４．７７  （ｍ，  １Ｈ），  ４．１８  （ｓ，  ２Ｈ），  ４．１２  −  ４．０２  （ｍ，  １Ｈ），  ３．９４  −  ３．８５  （ｍ，  １Ｈ），  ２．２５  −  １．９５  （ｍ，  ４Ｈ）  ｐｐｍ。
【０１３４】
（実施例２ａ）
（Ｒ）−２−（テトラヒドロフラン−２−イル）アニリン（４ａ）の調製。
【０１３５】
【化９】
2014503557.tif 000011
３３ｇの化合物（４）をＭｅＯＨ（２６５ｍｌ）に溶解させ、およそ１２５ｍｇ／ｍｌの濃度とした。この混合物を、０．２ミクロン膜フィルターを通して濾過し、次に、Ｂｅｒｇｅｒ  ｍｕｌｔｉｇｒａｍ超臨界流体クロマトグラフィーシステムを用いて、ＣｈｉｒａｌＰａｋ（登録商標）ＩＣカラム（３０ｍｍ×１５０ｍｍ、カラム温度３５℃、Ｃｈｉｒａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）において１００ｂａｒでクロマトグラフィーを行った。移動相は、（９０：１０）ＣＯ２：ＣＨ３ＯＨであり、２２０ナノメートルでＵＶモニタリングしつつ３５０ｍｌ／分にて溶出した。１５．６４ｇの所望の生成物（４ａ）を緑色の油状物として得た。分析的ＳＦＣ（［９０：１０］ＣＯ２：ＣＨ３ＯＨ、ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＩＣカラム（４．６×１００ｍｍ）において５ｍｌ／分、３５℃で維持、２２０ｎｍでＵＶモニタリングしつつ１００ｂａｒ圧力で泳動）は、９５．５％ｅｅ、９５％全純度を示した。
【０１３６】
（実施例３）
４−ブロモ−２−テトラヒドロフラン−２−イル−アニリン（５）の調製。
【０１３７】
【化１０】
2014503557.tif 000012
メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ、６４１．４ｍＬ）およびアセトニトリル（２１３．８ｍＬ）中の２−テトラヒドロフラン−２−イル−アニリン（４）（５３．４５ｇ、３２７．５ｍｍｏｌ）の溶液を２℃に冷却し、これに撹拌下、内部温度を約８℃よりも低く維持しつつ４回に分けてＮ−ブロモスクシンイミド（５８．８８ｇ、９９％、３２７．５ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｂ８１２５５）を添加した。氷水浴で３０分間冷却しつつ反応混合物を撹拌した（後処理したアリコートのＮＭＲは、出発物質の完全な消費を示した）。１Ｎ  Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（３３０ｍＬ）を添加し、冷浴を除去し、２０分間撹拌した。この混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、層を分離した。有機相を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２×）、水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、シリカの短いプラグを通して濾過し、ＥｔＯＡｃで溶出し、減圧下で濃縮して、（５）を非常に濃い琥珀色の油状物として得た（８２．２５ｇ、７７〜９４％ＨＰＬＣ純度）。さらに精製することなく先に進んだ。ＬＣＭＳ（Ｃ１８カラム、ギ酸モディファイアを用いて、５分間かけて１０〜９０％ＣＨ３ＣＮ／水勾配で溶出）Ｍ＋１：２４２．１０（２．８９分間）。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．２２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ２．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．１６  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ８．４，  ２．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．５４  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．７９  −  ４．７３  （ｍ，  １Ｈ），  ４．１５  （ｓ，  ２Ｈ），  ４．１０  −  ４．０１  （ｍ，  １Ｈ），  ３．９３  −  ３．８５  （ｍ，  １Ｈ），  ２．２６  −  ２．１３  （ｍ，  １Ｈ），  ２．１２  −  １．９７  （ｍ，  ３Ｈ）  ｐｐｍ。
【０１３８】
（実施例４）
Ｎ−（４−ブロモ−２−ニトロ−６−テトラヒドロフラン−２−イル−フェニル）−２，２，２−トリフルオロ−アセトアミド（６）の調製。
【０１３９】
【化１１】
2014503557.tif 000013
無水トリフルオロ酢酸（４５５．３ｍＬ、３．２７５ｍｏｌ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  １０６２３２）に撹拌下２℃で、濃厚油状物として４−ブロモ−２−テトラヒドロフラン−２−イル−アニリン（５）（７９．２９ｇ、３２７．５ｍｍｏｌ）を、滴下漏斗（ａｄｄｉｔｉｏｎ  ｆｕｎｎｅｌ）により、１５分間かけて徐々に添加した（１４℃まで反応温度上昇）。残りの油状物を無水２−メチルテトラヒドロフラン（３９．６ｍＬ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ４１４２４７）でリンスして、反応混合物に加えた。冷浴を除去し、硝酸アンモニウム（３４．０８ｇ、４２５．８ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ  ４６７７５８）を添加した。反応温度は、約３０分間かけて４０℃まで上昇し、この時点において、冷水浴を用いて発熱を制御し、反応を室温に戻した。次に、冷浴を除去し、さらに４０分間撹拌を継続した（ＨＰＬＣは、残存する非ニトロ化材料をほとんど示さなかった）。この反応混合物を、撹拌下のクラッシュアイス（８００ｇ）の混合物へと徐々に注いだ。固体沈殿物を濾過により収集し、水、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（ｐＨ８とする）、再度水で、そしてヘキサンで洗浄した。湿った固体を、先ず対流式オーブンにおいて５０℃で数時間、続いて減圧下のオーブンにおいて４０℃で一晩乾燥させ、（６）を淡褐色の固体として得た（７７．８６ｇ、６２％収率；９８％ＨＰＬＣ純度）。ＬＣＭＳ（Ｃ１８カラム、ギ酸モディファイアを用いて、５分間かけて１０〜９０％ＣＨ３ＣＮ／水勾配で溶出）Ｍ＋１：３８３．１９（３．２７分間）。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ９．８１  （ｓ，  １Ｈ），  ８．０８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ２．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．７３  （ｄ，  Ｊ  ＝  ２．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．８８  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ９．０，  ６．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．１７  −  ４．０８  （ｍ，  １Ｈ），  ４．０３  −  ３．９５  （ｍ，  １Ｈ），  ２．４５  −  ２．３４  （ｍ，  １Ｈ），２．１７  −  ２．０６  （ｍ，  ２Ｈ），  １．９６  −  １．８３  （ｍ，  １Ｈ）  ｐｐｍ。
【０１４０】
（実施例５）
４−ブロモ−２−ニトロ−６−テトラヒドロフラン−２−イル−アニリン（６ａ）の調製。
【０１４１】
【化１２】
2014503557.tif 000014
Ｎ−（４−ブロモ−２−ニトロ−６−テトラヒドロフラン−２−イル−フェニル）−２，２，２−トリフルオロ−アセトアミド（６）（５４．００ｇ、１４０．９ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（１６２ｍＬ）に溶解させ、６Ｍ  ＮａＯＨ水溶液（７０．４５ｍＬ、４２２．７ｍｍｏｌ、ＪＴ−Ｂａｋｅｒ  ５６７２０２）を添加した。反応混合物を還流させて２日間撹拌し（ＨＰＬＣは、完全な変換を示した）、冷却し、ＭＴＢＥ（８００ｍＬ）で希釈し、水（２×２００ｍＬ）、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液、水およびブラインで洗浄した。この混合物をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、（６ａ）を濃い琥珀色の油状物として得た（４０．９６ｇ、９３％収率；全９２％ＨＰＬＣプラスＮＭＲ純度）。ＬＣＭＳ（Ｃ１８カラム、ギ酸モディファイアを用いて、３〜５分間、１０〜９０％ＭｅＯＨ／水勾配で溶出）Ｍ＋１：２８７．２８（３．４４分間）。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ８．２４  （ｄ，  Ｊ  ＝  ２．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．４１  （ｄ，  Ｊ  ＝  ２．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．９１  （ｓ，  ２Ｈ），  ４．８０  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．１４  −  ４．０５  （ｍ，  １Ｈ），  ３．９８  −  ３．９０  （ｍ，  １Ｈ），  ２．３６  −  ２．１９  （ｍ，  １Ｈ），  ２．１５  −  ２．０１  （ｍ，  ３Ｈ）  ｐｐｍ。
【０１４２】
（実施例６）
２−［５−（４−アミノ−３−ニトロ−５−テトラヒドロフラン−２−イル−フェニル）ピリミジン−２−イル］プロパン−２−オール（８）の調製。
【０１４３】
【化１３】
2014503557.tif 000015
４−ブロモ−２−ニトロ−６−テトラヒドロフラン−２−イル−アニリン（６ａ）（４０．４０ｇ、９２％、１２９．５ｍｍｏｌ）、１，４−ジオキサン（２６０ｍＬ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ３６０４８１）、２−［５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリミジン−２−イル］プロパン−２−オール（７）（４１．０５ｇ、１５５．４ｍｍｏｌ）、および２．７Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３水溶液（１４３．９ｍＬ、３８８．５ｍｍｏｌ）を混合した。撹拌下の混合物に窒素流を通して１時間泡立て、続いて、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（７．４８ｇ、６．４７ｍｍｏｌ、Ｓｔｒｅｍ  ４６２１５０）を添加した。反応混合物を還流させて２時間撹拌し（ＨＰＬＣは、完全な反応を示した）、冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、水、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、フロリジル（登録商標）の短いプラグを通して濾過し、ＥｔＯＡｃで溶出した。濾液を減圧下で濃縮して、暗褐色の油状物を得た。ＣＨ２Ｃｌ２中に溶解させ、シリカゲルの短いプラグを通してＣＨ２Ｃｌ２、続いてＥｔＯＡｃで溶出した。沈殿物が生成されるまでロータリーエバポレーターにおいて所望の画分を濃縮し、濃厚褐色スラリーを得、これをＭＴＢＥと摩砕した。濾過により固体を収集し、ＭＴＢＥで洗浄し、高真空下で乾燥して、（８）を黄色の固体として得た（３５．１４ｇ、９９＋％ＨＰＬＣ純度）。ＬＣＭＳ（Ｃ１８カラム、ギ酸モディファイアを用いて、５分間かけて１０〜９０％ＣＨ３ＣＮ／水勾配で溶出）Ｍ＋１：３４５．００（２．６９分間）。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ８．８８  （ｓ，  ２Ｈ），  ８．３６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ２．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．５６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ２．１  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．０９  （ｓ，  ２Ｈ），  ４．９２  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．６２  （ｓ，  １Ｈ），  ４．２０  −  ４．１１  （ｍ，  １Ｈ），  ４．０３  −  ３．９４  （ｍ，  １Ｈ），  ２．３９  −  ２．２６  （ｍ，  １Ｈ），  ２．２３  −  ２．０８  （ｍ，  ３Ｈ），  １．６４  （ｓ，  ６Ｈ）  ｐｐｍ．濾液をさらに濃縮し、０〜８０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出しつつＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、生成物（８）の２回目の収穫物（ｓｅｃｏｎｄ  ｃｒｏｐ）を琥珀色の固体として得た（４．４６ｇ、８８％全収率；８８％ＨＰＬＣ純度）。
【０１４４】
（実施例７）
２−［５−（４−アミノ−３−ニトロ−５−テトラヒドロフラン−２−イル−フェニル）ピリミジン−２−イル］プロパン−２−オール（８）の代替的な調製。
【０１４５】
【化１４】
2014503557.tif 000016
Ｎ−（４−ブロモ−２−ニトロ−６−テトラヒドロフラン−２−イル−フェニル）−２，２，２−トリフルオロ−アセトアミド（６）（１９．００ｇ、４９．５９ｍｍｏｌ）、２−［５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリミジン−２−イル］プロパン−２−オール（７）（１４．４１ｇ、５４．５５ｍｍｏｌ）、２．７Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（７３．４８ｍＬ、１９８．４ｍｍｏｌ）および１，４−ジオキサン（１９０ｍＬ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ３６０４８１）を混合した。撹拌下の混合物に窒素流を通して４０分間泡立て、続いて１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンジクロロパラジウムジクロロメタン付加物（２．０２５ｇ、２．４８０ｍｍｏｌ、Ｓｔｒｅｍ  ４６０４５０）を添加した。反応混合物をＮ２下還流させて、７時間撹拌し、さらに５０ｍＬの飽和炭酸ナトリウム水溶液を添加し、さらに１６時間還流させた。この混合物を冷却し、続いてＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）および水（２００ｍＬ）で希釈した。層を分離し、水相をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）により抽出した。合わせた有機相を水（５００ｍＬ）、ブライン（５００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、フロリジル（登録商標）プラグを通して濾過し、ロータリーエバポレーターにおいて濃縮して、粗製（８）を橙色の油状物として得た。ＩＳＣＯシリカゲルクロマトグラフィーにより粗生成物を精製し２０〜９０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して、（８）を橙色の固体として得た（１５．００ｇ、８７％収率；８１〜８８％純度）。ＬＣＭＳ（Ｃ１８カラム、ギ酸モディファイアを用いて、５分間かけて１０〜９０％ＣＨ３ＣＮ／水勾配で溶出）Ｍ＋１：３４５．３５（２．６８分間）。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ８．８８  （ｓ，  ２Ｈ），  ８．３６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ２．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．５６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ２．１  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．０９  （ｓ，  ２Ｈ），  ４．９２  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．６２  （ｓ，  １Ｈ），  ４．２０  −  ４．１１  （ｍ，  １Ｈ），  ４．０３  −  ３．９４  （ｍ，  １Ｈ），  ２．３９  −  ２．２６  （ｍ，  １Ｈ），  ２．２３  −  ２．０８  （ｍ，  ３Ｈ），  １．６４  （ｓ，  ６Ｈ）  ｐｐｍ。
【０１４６】
（実施例８）
２−［５−（３，４−ジアミノ−５−テトラヒドロフラン−２−イル−フェニル）ピリミジン−２−イル］プロパン−２−オール（９）の調製。
【０１４７】
【化１５】
2014503557.tif 000017
Ｐａｒｒボトルにおける２−［５−（４−アミノ−３−ニトロ−５−テトラヒドロフラン−２−イル−フェニル）ピリミジン−２−イル］プロパン−２−オール（８）（３０．１０ｇ、８７．４１ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（９０ｍＬ）の懸濁液に窒素下、ＭｅＯＨ（９０ｍＬ、ＪＴ−Ｂａｋｅｒ  ９０９３３３）中の炭素上の５％パラジウム（３．０１ｇ、５０％ウェット、０．７０７ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ  ３３０１１６）のスラリーを添加し、続いてＮＥｔ３（２４．３７ｍＬ、１７４．８ｍｍｏｌ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ４７１２８３）を添加した。容器をＰａｒｒ振盪機に置いて、Ｈ２で飽和させた。４５ｐｓｉ  Ｈ２を添加し、消費が完了するまで振盪した（ＨＰＬＣは、完全な変換を示した）。この反応混合物を窒素でパージし、セライト（商標）を通して濾過し、ＥｔＯＡｃでリンスした。この濾液を、２枚のＰ５ペーパーの間に挟み込まれた０．５ミクロンガラス繊維濾紙を通して再度濾過し、減圧下で濃縮して、（９）を淡褐色の発泡体として得た（２８．９６ｇ、９８％収率；９３％ＮＭＲ純度）。ＬＣＭＳ（Ｃ１８カラム、５分間かけてギ酸モディファイアを用いて、１０〜９０％ＣＨ３ＣＮ／水勾配で溶出）Ｍ＋１：３１５．３２（１．５４分間）。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ８．８３  （ｓ，  ２Ｈ），  ６．９２  （ｄ，  Ｊ  ＝  １．８  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．８８  （ｄ，  Ｊ  ＝  １．８  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．９０  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．９，  ６．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．７２  （ｓ，  １Ｈ），  ４．１８  （ｓ，  ２Ｈ），  ４．１７  −  ４．０８  （ｍ，  １Ｈ），  ３．９９  −  ３．８９  （ｍ，  １Ｈ），  ３．４６  （ｓ，  ２Ｈ），  ２．３４  −  ２．１９  （ｍ，  １Ｈ），  ２．１７  −  ２．０５  （ｍ，  ３Ｈ），  １．６３  （ｓ，  ６Ｈ）  ｐｐｍ。
【０１４８】
（実施例９）
１−エチル−３−［５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−テトラヒドロフラン−２−イル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素（１１）の調製。
【０１４９】
【化１６】
2014503557.tif 000018
１，４−ジオキサン（１６０．５ｍＬ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ３６０４８１）中の２−［５−（３，４−ジアミノ−５−テトラヒドロフラン−２−イル−フェニル）ピリミジン−２−イル］プロパン−２−オール（９）（３２．１０ｇ、１０２．１ｍｍｏｌ）の溶液に撹拌下、１ＮのＨ２ＳＯ４水溶液（２４０ｍＬ）にＮａＯＡｃ三水和物（３４．５ｇ）を溶解することにより調製したｐＨ３．５バッファー（２４０．８ｍＬ）を添加した。１−エチル−３−（Ｎ−（エチルカルバモイル）−Ｃ−メチルスルファニル−カルボンイミドイル）尿素（１０）（２８．４６ｇ、１２２．５ｍｍｏｌ、ＣＢ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）を添加し、還流させて一晩撹拌した（ＨＰＬＣは、出発ジアミンの９９％消費を示した）。この反応混合物を室温まで冷却して、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（４８０ｍＬ）および水（１２０ｍＬ）の溶液に撹拌下、数回に分けて注ぎ（起泡（ｆｒｏｔｈｉｎｇ））、ｐＨ８〜９とした。これを３０分間撹拌し、固体を濾過により収集し、大量の水で中性ｐＨとなるまで、続いてより控えめな量のＥｔＯＨで洗浄した。この固体を減圧下で乾燥させ、（１１）をオフホワイトの固体として得た（３４．４８ｇ、８２％収率；９９．４％ＨＰＬＣ純度）。ＬＣＭＳ（Ｃ１８カラム、ギ酸モディファイアを用いて、５分間かけて１０〜９０％ＣＨ３ＣＮ／水勾配で溶出）Ｍ＋１：４１１．４１（１．７３分間）。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＭｅＯＤ）  δ  ９．０２  （ｓ，  ２Ｈ），  ７．６２  （ｓ，  １Ｈ），  ７．３７  （ｓ，  １Ｈ），  ５．３１  （ｓ，  １Ｈ），  ４．２３  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １４．５，  ７．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．０１  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １５．０，  ７．１  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．３８  −  ３．２８  （ｍ，  ２Ｈ），２．５８  −  ２．４６  （ｍ，  １Ｈ），２．１６  −  ２．０５  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．０２  −  １．８８  （ｍ，  １Ｈ），  １．６３  （ｓ，  ６Ｈ），  １．２２  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  ３Ｈ）  ｐｐｍ。
【０１５０】
（実施例１０）
１−エチル−３−［５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素（１２）のキラルクロマトグラフィー単離。
【０１５１】
【化１７】
2014503557.tif 000019
ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＩＣ（登録商標）カラム（Ｃｈｉｒａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製）においてＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＴＥＡ（６０／４０／０．１）で３５℃にて溶出して、１−エチル−３−［５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−テトラヒドロフラン−２−イル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素（１１）（２４．６０ｇ）のラセミ試料を分割し、所望のエナンチオマー（１２）を白色の固体として得た（１１．３５ｇ、４５％収率；９９＋％ＨＰＬＣ純度、９９＋％ｅｅ）。分析的キラルＨＰＬＣ保持時間は、６．２分間であった（ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＩＣ（登録商標）４．６×２５０ｍｍカラム、１ｍＬ／分流速、３０℃）。
【０１５２】
単結晶Ｘ線回折解析により、１２の構造および絶対立体化学を確認した。密封したチューブＣｕ  Ｋ−アルファ源（Ｃｕ  Ｋα放射線、γ＝１．５４１７８Å）およびＡｐｅｘ  ＩＩ  ＣＣＤ検出器を備えるＢｒｕｋｅｒ  Ａｐｅｘ  ＩＩ回折計において、単結晶回折データを取得した。１／２×０．０５×０．０５ｍｍの寸法を有する結晶を選択し、鉱物油を用いてきれいにし、ＭｉｃｒｏＭｏｕｎｔにマウントしてＢｒｕｋｅｒ  ＡＰＥＸＩＩシステムの中央に置いた。逆格子空間において分離した４０フレームの３個のバッチを得て、配向マトリックスおよび初期セル（ｃｅｌｌ）パラメータをもたらした。最終セルパラメータを得て、データ収集が完了した後に完全データセットに基づき精緻化した。系統的非存在および強度統計に基づき、構造を解明し、非中心対称性（ａｃｅｎｔｒｉｃ）Ｐ２１空間群において精緻化した。
【０１５３】
各フレーム６０秒の曝露による０．５°ステップを用いて、分解能０．９Åまでの逆格子空間の回折データセットを得た。１００（２）Ｋにおいてデータを収集した。ＡＰＥＸＩＩソフトウェアを用いて、強度の統合およびセルパラメータの精緻化を達成した。データ収集後の結晶の観察は、分解の兆候を示さなかった。図１に示す通り、構造において対称性を有する独立した２個の分子が存在し、対称性を有する独立した分子のどちらもＲ異性体である。
【０１５４】
Ａｐｅｘ  ＩＩソフトウェアを用いて、データを収集、精緻化および整理（ｒｅｄｕｃｅ）した。ＳＨＥＬＸＳ９７（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ、１９９０）プログラム（複数可）を用いて構造を解明し、ＳＨＥＬＸＬ９７（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ、１９９７）プログラムを用いて構造を精緻化した。結晶は、Ｐ２１空間群を有する単斜セルを示す。格子パラメータは、ａ＝９．８４２３（４）Å、ｂ＝１０．８４２６（３）Å、ｃ＝１９．４４４１（７）Å、β＝１０２．９６６（３）°である。体積＝２０２２．０９（１２）Å３。
【０１５５】
（実施例１１）
１−エチル−３−［５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素のメタンスルホン酸塩（１３）の調製。
【０１５６】
【化１８】
2014503557.tif 000020
撹拌下、無水エタノール（９３．２ｍＬ）に懸濁した１−エチル−３−［５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素（１２）（９．３２ｇ、２２．７１ｍｍｏｌ）の懸濁液を氷水浴により冷却した。メタンスルホン酸（１．５４８ｍＬ、２３．８５ｍｍｏｌ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ４７１３５６）を添加し、冷浴を除去し、室温で２０分間撹拌した。これをロータリーエバポレーターにおいて３５℃で濃縮して濃厚スラリーとし、ＥｔＯＡｃで希釈し、濾過により固体を収集し、ＥｔＯＡｃで洗浄し、減圧下で乾燥して、（１３）の最初の収穫物を白色の固体として得た（８．１０ｇ）。濾液をロータリーエバポレーター（ｒｏｔａｖａｐ）において濃縮して、黄色がかったガラス状の発泡体を得、これをＥｔＯＨに溶解させ、固体スラリーとなるまで濃縮し、ＥｔＯＡｃ／Ｅｔ２Ｏと摩砕し、濾過により収集した。固体をＥｔＯＡｃ／Ｅｔ２Ｏで洗浄し、１回目の収穫物と合わせ、減圧下で乾燥して、（１３）を白色の固体として得た（９．８９ｇ、８６％収率；９９＋％ＨＰＬＣ純度、９９＋％ｅｅ）。分析的キラルＨＰＬＣは、３０℃のＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＩＣ（登録商標）４．６×２５０ｍｍカラムにおいて流速１ｍＬ／分でＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＴＥＡ（６０／４０／０．１）で溶出して、６．３分間の保持時間を有する１種類のエナンチオマーを示す。ＬＣＭＳ（Ｃ１８カラム、ギ酸モディファイアを用いて、５分間かけて１０〜９０％ＣＨ３ＣＮ／水勾配で溶出）Ｍ＋１：４１１．５３（１．７４分間）。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＭｅＯＤ）  δ  ９．０７  （ｓ，  ２Ｈ），  ７．７９  （ｓ，  １Ｈ），  ７．６２  （ｓ，  １Ｈ），  ５．３０  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．２４  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １４．６，  ７．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．０４  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １５．０，  ７．６  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．４０  −  ３．３０  （ｍ，  ２Ｈ），２．７２  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．６５  −  ２．５４  （ｍ，  １Ｈ），２．２０  −  ２．０７  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．０４  −  １．９０  （ｍ，  １Ｈ），  １．６４  （ｓ，  ６Ｈ），  １．２３  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  ３Ｈ）  ｐｐｍ。
【０１５７】
（実施例１２）
２−（２−フルオロ−６−ニトロ−フェニル）−２，３−ジヒドロフラン（１５Ａ）および２−（２−フルオロ−６−ニトロ−フェニル）−２，５−ジヒドロフラン（１５Ｂ）の調製。
【０１５８】
【化１９】
2014503557.tif 000021
２−ブロモ−１−フルオロ−３−ニトロ−ベンゼン（１４）（２００．３ｇ、９８％、８９２．３ｍｍｏｌ、Ｂｏｓｃｈｅ  Ｆ６６５７）、１，４−ジオキサン（９８１．５ｍＬ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ３６０４８１）および２，３−ジヒドロフラン（２）（３４１．１ｍＬ、９９％、４．４６２ｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ  ２０００１８）を反応フラスコに充填し、続いてＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１５５．４ｍＬ、８９２．３ｍｍｏｌ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ５５００４３）およびブロモ（トリ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィン）パラジウム（Ｉ）ダイマー（６．９３６ｇ、８．９２３ｍｍｏｌ、Ｊｏｈｎｓｏｎ  Ｍａｔｔｈｅｙ  Ｃ４０９９）を加えた。この混合物を還流させて２時間撹拌した（ＨＰＬＣは、出発アリールブロマイドの９８％消費を示した）。これを冷却し、濾過により沈殿物を除去し、ＥｔＯＡｃでリンスし、濾液を真空濃縮して、濃い赤褐色の半固体の油状物とした。これをＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、シリカのプラグを通してＣＨ２Ｃｌ２で溶出し、真空濃縮して、１５Ａおよび１５Ｂの混合物を濃い琥珀色の油状物として得た（２９１．３ｇ）。この粗生成物をさらに精製することなく先に進んだ。主要生成物は、２−（２−フルオロ−６−ニトロ−フェニル）−２，３−ジヒドロフラン（１５Ａ）（９６％）であった：ＬＣＭＳ（Ｃ１８カラム、ギ酸モディファイアを用いて、５分間かけて１０〜９０％ＣＨ３ＣＮ／水勾配で溶出）Ｍ＋１：２１０．２３（３．１３分間）；１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．５４  （ｄｔ，  Ｊ  ＝  ８．０，  １．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．４３  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  ８．２，  ５．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．３２  （ｄｄｄ，  Ｊ  ＝  ９．７，  ８．３，  １．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．３３  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ４．９，  ２．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．８０  （ｔ，  Ｊ  ＝  １０．９  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．０６  （ｑ，  Ｊ  ＝  ２．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．１８  −  ３．０７  （ｍ，  １Ｈ），  ２．９４  −  ２．８２  （ｍ，  １Ｈ）  ｐｐｍ．少ない方の生成物は、２−（２−フルオロ−６−ニトロ−フェニル）−２，５−ジヒドロフラン（１５Ｂ）（４％）であった：ＧＣＭＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ  ＨＰ−５ＭＳ  ３０ｍ×２５０μｍ×０．２５μｍカラム、６０℃で２分間から３００℃に１５分間かけて加熱、流速１ｍＬ／分）Ｍ＋１：２１０（１１．９５分間）。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．４７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．４３  −  ７．３４  （ｍ，  １Ｈ），  ７．３０  −  ７．２３  （ｍ，  １Ｈ），  ６．２１  −  ６．１５  （ｍ，  １Ｈ），  ６．１１  −  ６．０６  （ｍ，  １Ｈ），  ５．９７  −  ５．９１  （ｍ，  １Ｈ），  ４．８９  −  ４．７３  （ｍ，  ２Ｈ）  ｐｐｍ。
【０１５９】
（実施例１３）
３−フルオロ−２−テトラヒドロフラン−２−イル−アニリン（１６）の調製。
【０１６０】
【化２０】
2014503557.tif 000022
窒素下、炭素上の５％パラジウム（３７．３ｇ、５０％ウェット、８．７６ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ  ３３０１１６）をＰａｒｒボトル内に入れ、続いてＭｅＯＨ（７０ｍＬ、ＪＴ−Ｂａｋｅｒ  ９０９３３３）を加えた。ＭｅＯＨ（１１７ｍＬ）に溶解させた２−（２−フルオロ−６−ニトロフェニル）−２，３−ジヒドロフランおよび２−（２−フルオロ−６−ニトロフェニル）−２，５−ジヒドロフラン（１５Ａ＆１５Ｂ）（１８６．６ｇ、８９２．１ｍｍｏｌ）の粗混合物を添加し、続いてＮＥｔ３（１２４．３ｍＬ、８９２．１ｍｍｏｌ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ４７１２８３）を加えた。Ｐａｒｒ振盪機に容器を置き、Ｈ２で飽和させた。４５ｐｓｉ  Ｈ２を添加した後、出発物質の消費が完了するまで反応混合物を振盪した（ＨＰＬＣおよびＬＣＭＳは、完全な反応を示した）。反応混合物を窒素でパージし、セライト（商標）を通して濾過し、ＥｔＯＡｃでリンスした。濾液をロータリーエバポレーターにおいて濃縮して、褐色の油状物を得、これをＥｔ２Ｏに溶解させ、水（２×）で洗浄した。エーテル相を１Ｎ  ＨＣｌ水溶液（５×２５０ｍＬ）で抽出し、これをＥｔ２Ｏ（３×）で洗浄し、続いて６Ｎ  ＮａＯＨ水溶液でｐＨ１２〜１４となるまで塩基性化した。塩基性水相をＣＨ２Ｃｌ２（４×）で抽出し、合わせた有機抽出物を飽和水溶ＮＨ４Ｃｌで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、ＣＨ２Ｃｌ２から２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出しつつシリカのパッドを通して濾過した。所望の濾液を減圧下で濃縮して、１６を淡褐色の油状物として得た（１２１．８ｇ、８４％ＧＣＭＳプラスＮＭＲ純度）。ＧＣＭＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ  ＨＰ−５ＭＳ  ３０ｍ×２５０μｍ×０．２５μｍカラム、６０℃で２分間〜３００℃に１５分間かけて加熱、流速１ｍＬ／分）Ｍ＋１：１８２．０（１１．４４分間）。ＬＣＭＳ（Ｃ１８カラム、ギ酸モディファイアを用いて、５分間かけて１０〜９０％ＣＨ３ＣＮ／水勾配で溶出）Ｍ＋１：１８２．１０（２．６１分間）。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ６．９７  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  ８．１，  ６．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．４３  −  ６．３５  （ｍ，  ２Ｈ），  ５．２１  −  ５．１３  （ｍ，  １Ｈ），  ４．５４  （ｓ，  ２Ｈ），  ４．１６  −  ４．０７  （ｍ，  １Ｈ），  ３．９０  −  ３．８１  （ｍ，  １Ｈ），  ２．２３  −  ２．００  （ｍ，  ４Ｈ）  ｐｐｍ．次の通り、追加的な収穫物を得た。合わせたエーテル相を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、デカントし、減圧下で濃縮した。油状物を真空蒸留し（約１５ｔｏｒｒ）、留出物を１０１〜１０８℃で収集した。ＥｔＯＨ（１容積）に溶解させた蒸留油状物の溶液に撹拌下２℃で、ｉＰｒＯＨにおける５Ｍ  ＨＣｌ（１ｅｑ）を徐々に添加した。得られた懸濁液を室温にし、ＥｔＯＡｃ（３容積、ｖｏｌ／ｖｏｌ）で希釈し、２時間撹拌した。白色の固体を濾過により収集し、ＥｔＯＡｃで洗浄し、減圧下で乾燥して、生成物の２回目の収穫物をＨＣｌ塩として得た。母液を濃縮してスラリーとし、ＥｔＯＡｃで希釈し、固体を濾過により収集し、ＥｔＯＡｃで洗浄し、真空乾燥して、生成物の３回目の収穫物としてＨＣｌ塩を得た。ＬＣＭＳ（Ｃ１８カラム、ギ酸モディファイアを用いて、５分間かけて１０〜９０％ＣＨ３ＣＮ／水勾配で溶出）Ｍ＋１：１８２．１０（２．５８分間）。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １０．７３  （ｂｒ．ｓ，  ３Ｈ），  ７．６６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．１  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．３３  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  ８．２，  ５．９  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．１３  −  ７．０５  （ｍ，  １Ｈ），  ５．２６  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ９．０，  ６．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．３８  −  ４．２８  （ｍ，  １Ｈ），  ４．００  −  ３．９１  （ｍ，  １Ｈ），  ２．５９  −  ２．４６  （ｍ，  １Ｈ），  ２．３０  −  １．９５  （ｍ，  ３Ｈ）  ｐｐｍ．３回の収穫物の全収率は、７６％であった。
【０１６１】
（実施例１４）
４−ブロモ−３−フルオロ−２−テトラヒドロフラン−２−イル−アニリン（１７）の調製。
【０１６２】
【化２１】
2014503557.tif 000023
メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１．４５６Ｌ）およびアセトニトリル（４８５ｍＬ）に溶解中の３−フルオロ−２−テトラヒドロフラン−２−イル−アニリン（１６）（１３１．９ｇ、９２％、６６９．７ｍｍｏｌ）の溶液を−２０℃まで冷却し、これに撹拌下、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１２０．４ｇ、９９％、６６９．７ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｂ８１２５５）を３回に分けて添加して、約−１５℃を下回る反応温度を維持した。完全に添加した後、撹拌を−１５〜−１０℃で３０分間継続した。後処理したアリコートの１Ｈ  ＮＭＲは、出発アニリンの９６％消費を示したため、さらに４．８２ｇのＮＢＳを添加し、−１０℃でさらに３０分間撹拌した。１Ｎ  Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（６７０ｍＬ）を反応混合物に添加した。冷浴を除去し、混合物を２０分間撹拌し、次にＥｔＯＡｃで希釈した。層を分離し、有機相を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２×）、水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、デカントし、減圧下で濃縮して、濃い琥珀色の油状物を得た。残渣をヘキサンで希釈し、２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンから５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出しつつ、シリカの短いプラグを通して溶出した。所望の濾液を真空濃縮して、１７を濃い琥珀色の油状物として得た（１８２．９ｇ、９０％収率；８６％ＮＭＲ純度）。ＬＣＭＳ（Ｃ１８カラム、ギ酸モディファイアを用いて、５分間かけて１０〜９０％ＣＨ３ＣＮ／水勾配で溶出）Ｍ＋１：２６０．１２（３．２０分間）。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．１５  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ８．６，  ７．６  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．３０  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ８．７，  １．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．１９  −  ５．１２  （ｍ，  １Ｈ），  ４．５８  （ｓ，  ２Ｈ），  ４．１６  −  ４．０７  （ｍ，  １Ｈ），  ３．９０  −  ３．８１  （ｍ，  １Ｈ），  ２．２３  −  １．９９  （ｍ，  ４Ｈ）  ｐｐｍ。
【０１６３】
（実施例１５）
Ｎ−（４−ブロモ−３−フルオロ−６−ニトロ−２−テトラヒドロフラン−２−イル−フェニル）−２，２，２−トリフルオロ−アセトアミド（１８）の調製。
【０１６４】
【化２２】
2014503557.tif 000024
無水トリフルオロ酢酸（５６５．３ｍＬ、４．０６７ｍｏｌ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  １０６２３２）に撹拌下２℃で、ニートの４−ブロモ−３−フルオロ−２−テトラヒドロフラン−２−イル−アニリン（１７）（１２３．０ｇ、８６％、４０６．７ｍｍｏｌ）を濃厚油状物として、滴下漏斗により約２０分間かけて徐々に添加した（反応温度は１３℃まで上昇）。残りの油状物を無水ＴＨＦ（３５ｍＬ）でリンスして反応混合物に入れた。冷浴を除去し、反応液を３５℃に加熱し、続いてＮＨ４ＮＯ３（４．８８ｇ×２０回、１．２２ｍｏｌ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ａ７４５５）を２．５時間かけて数回に分けて添加し、必要なときのみ氷水浴を用いて反応温度を３０〜４１℃の間に維持して、発熱を制御した。完全に添加した後、反応混合物をさらに１０分間撹拌した（ＨＰＬＣは、反応９９％完了を示した）。これをクラッシュアイス（１．２３ｋｇ）に徐々に注ぎ、１時間撹拌して、濾過性の固体沈殿物を生成させ、これを収集し、水、控えめな量の飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で、再度水で（ｐＨ７となるまで）洗浄した。対流式オーブンにおいて一晩４０℃、続いてオーブンにおいて減圧下で５０℃一晩生成物を乾燥させて、１８をベージュ色の固体として得た（１５２．５ｇ、９０％収率；９６％ＨＰＬＣ純度）。ＬＣＭＳ（Ｃ１８カラム、ギ酸モディファイアを用いて、５分間かけて１０〜９０％ＣＨ３ＣＮ／水勾配で溶出）Ｍ＋１：４０１．３０（３．４１分間）。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １０．５６  （ｓ，  １Ｈ），  ８．１９  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．２２  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １０．３，  ６．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．２２  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １５．８，  ７．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．９９  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １６．１，  ７．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ２．５０  −  ２．３８  （ｍ，  １Ｈ），  ２．２２  −  ２．１１  （ｍ，  ２Ｈ），  １．８６  −  １．７１  （ｍ，  １Ｈ）  ｐｐｍ。
【０１６５】
（実施例１６）
４−ブロモ−３−フルオロ−６−ニトロ−２−テトラヒドロフラン−２−イル−アニリン（１９）の調製。
【０１６６】
【化２３】
2014503557.tif 000025
反応フラスコにＮ−（４−ブロモ−３−フルオロ−６−ニトロ−２−テトラヒドロフラン−２−イル−フェニル）−２，２，２−トリフルオロ−アセトアミド（１８）（２４２．３ｇ、６０４．１ｍｍｏｌ）、１，４−ジオキサン（１．２１２Ｌ）、水性２Ｍ硫酸（３６２．４ｍＬ、７２４．９ｍｍｏｌ）を充填し、還流させて５日間撹拌した（ＨＰＬＣは、９８％変換を示した）。冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で中和し、層を分離し、水相をＥｔＯＡｃで再度抽出した（２×）。合わせた有機相をブライン（２×）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空濃縮して、１９を緑褐色の固体として得た（１８１．７ｇ、９４％収率；９５％ＨＰＬＣ純度）。この生成物をさらに精製することなく次のステップを行った。ＬＣＭＳ（Ｃ１８カラム、ギ酸モディファイアを用いて、５分間かけて１０〜９０％ＣＨ３ＣＮ／水勾配で溶出）Ｍ＋１：３０５．２０（３．６３分間）。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ８．３５  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．４５  （ｓ，  ２Ｈ），  ５．２３  −  ５．１６  （ｍ，  １Ｈ），  ４．２３  −  ４．１４  （ｍ，  １Ｈ），  ３．９３  −  ３．８４  （ｍ，  １Ｈ），  ２．３１  −  １．９６  （ｍ，  ４Ｈ）  ｐｐｍ。
【０１６７】
（実施例１７）
２−［５−（４−アミノ−２−フルオロ−５−ニトロ−３−テトラヒドロフラン−２−イル−フェニル）ピリミジン−２−イル］プロパン−２−オール（２０）の調製。
【０１６８】
【化２４】
2014503557.tif 000026
１，４−ジオキサン（４．２０Ｌ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ３６０４８１）中の４−ブロモ−３−フルオロ−６−ニトロ−２−テトラヒドロフラン−２−イル−アニリン（１９）（５２５．０ｇ、１．７２１ｍｏｌ、Ｂｒｉｄｇｅ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ  Ｃｏ．）の溶液に撹拌下、ＮａＨＣＯ３の１．２Ｍ水溶液（４．３０２Ｌ、５．１６３ｍｏｌ）を添加した。撹拌下の混合物に窒素流を通して２時間泡立て、続いて２−［５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリミジン−２−イル］プロパン−２−オール（７）（５４５．４ｇ、２．０６５ｍｏｌ、Ｂｒｉｄｇｅ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ  Ｃｏ．）および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンジクロロパラジウムジクロロメタン付加物（４２．１６ｇ、５１．６３ｍｍｏｌ、Ｓｔｒｅｍ  ４６０４５０）を添加した。反応混合物を還流させながら一晩撹拌し、冷却し、ＥｔＯＡｃ（８．４Ｌ）で希釈し、層を分離した。有機相を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液、続いてブラインで洗浄した。水相をＥｔＯＡｃ（４Ｌ）で再度抽出し、この有機抽出物をブラインで洗浄した。合わせた有機相をＭｇＳＯ４で乾燥し、フロリジル（登録商標）の短いプラグを通して濾過し、ＥｔＯＡｃで溶出し、濾液をロータリーエバポレーターにおいて濃縮して、暗褐色の湿った固体を得た。これをＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、シリカゲルのパッド上にロードし、ヘキサン、続いて２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、続いて５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出した。ロータリーエバポレーターにおいて所望の濾液を濃縮して濃厚懸濁液とし、固体を濾過により収集し、ＭＴＢＥと摩砕し、真空乾燥させて、２０を鮮黄色の固体として得た（５５．８％収率、９０〜９７％ＨＰＬＣ純度）。濾液を濃縮し、上述の精製を反復して、２０の２回目の収穫物を鮮黄色の固体として得た（１９．７％収率）。濾液を再度濃縮して、暗褐色の油状物を得、これをトルエンおよび最小ＣＨ２Ｃｌ２と共にシリカカラム上にロードした。これをＥｔＯＡｃ／ヘキサン（０％〜５０％）により溶出した。所望の画分を濃縮してスラリーとし、ＭＴＢＥ／ヘキサンで希釈した。固体を濾過により収集し、最小ＭＴＢＥで洗浄して、２０の３回目の収穫物を鮮黄色の固体として得た（４．９％収率）ところ、３回の収穫から８０％の全収率が得られた。ＬＣＭＳ（Ｃ１８カラム、ギ酸モディファイアを用いて、５分間かけて１０〜９０％ＣＨ３ＣＮ／水勾配で溶出）Ｍ＋１：３６３．４８（２．９５分間）。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ８．８４  （ｄ，  Ｊ  ＝  １．６  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ８．２７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．６２  （ｓ，  ２Ｈ），  ５．３１  −  ５．２４  （ｍ，  １Ｈ），  ４．６３  （ｓ，  １Ｈ），  ４．２７  −  ４．１８  （ｍ，  １Ｈ），  ３．９７  −  ３．８７  （ｍ，  １Ｈ），  ２．３３  −  ２．０５  （ｍ，  ４Ｈ），  １．６４  （ｓ，  ６Ｈ）  ｐｐｍ。
【０１６９】
（実施例１８）
２−［５−（４，５−ジアミノ−２−フルオロ−３−テトラヒドロフラン−２−イル−フェニル）ピリミジン−２−イル］プロパン−２−オール（２１）の調製。
【０１７０】
【化２５】
2014503557.tif 000027
窒素下、炭素上の５％パラジウム（１４．２１ｇ、５０％ウェット、３．３３９ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ  ３３０１１６）をＰａｒｒボトル内に入れ、続いて、ＭｅＯＨ（２４２ｍＬ、ＪＴ−Ｂａｋｅｒ  ９０９３３３）およびＮＥｔ３（４６．５４ｍＬ、３３３．９ｍｍｏｌ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ４７１２８３）を加えた。２−［５−（４−アミノ−２−フルオロ−５−ニトロ−３−テトラヒドロフラン−２−イル−フェニル）ピリミジン−２−イル］プロパン−２−オール（２０）（１２１．０ｇ  ３３３．９ｍｍｏｌ）を熱したＴＨＦ（３６０ｍＬ）に溶解させ、冷却し、反応混合物に添加し、さらに１回のＴＨＦ（１２４ｍＬ）でリンスした。容器をＰａｒｒ振盪機に置き、Ｈ２で飽和させた。４５ｐｓｉ  Ｈ２を添加し、消費が完了するまで振盪した（ＨＰＬＣおよびＬＣＭＳは、完全な反応を示した）。この反応混合物を窒素でパージし、セライト（商標）を通して濾過し、ＥｔＯＡｃでリンスした。これを、ペーパー（ガラスマイクロファイバー）を通して再濾過し、濾液を真空濃縮した。反応を同一スケールでさらに３回反復し、バッチを組み合わせて、２１を褐色の固体として得た（４４７ｇ、９９％収率；９３％ＨＰＬＣ純度）。ＬＣＭＳ（Ｃ１８カラム、ギ酸モディファイアを用いて、５分間かけて１０〜９０％ＣＨ３ＣＮ／水勾配で溶出）Ｍ＋１：３３３．４６（１．７９分間）。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ８．８１  （ｄ，  Ｊ  ＝  １．４  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ６．６９  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．２７  −  ５．２０  （ｍ，  １Ｈ），  ４．７３  （ｓ，  １Ｈ），  ４．７０  （ｓ，  ２Ｈ），  ４．２３  −  ４．１４  （ｍ，  １Ｈ），  ３．９４  −  ３．８６  （ｍ，  １Ｈ），  ３．２２  （ｓ，  ２Ｈ），  ２．３２  −  ２．２２  （ｍ，  １Ｈ），  ２．１８  −  １．９９  （ｍ，  ３Ｈ），  １．６３  （ｓ，  ６Ｈ）  ｐｐｍ。
【０１７１】
（実施例１９）
１−エチル−３−［６−フルオロ−５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−テトラヒドロフラン−２−イル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素（２２）の調製。
【０１７２】
【化２６】
2014503557.tif 000028
２−［５−（４，５−ジアミノ−２−フルオロ−３−テトラヒドロフラン−２−イル−フェニル）ピリミジン−２−イル］プロパン−２−オール（２１）（１１１．３ｇ、３３４．９ｍｍｏｌ）および１，４−ジオキサン（５５６．５ｍＬ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ３６０４８１）の懸濁液に撹拌下、１−エチル−３−（Ｎ−（エチルカルバモイル）−Ｃ−メチルスルファニル−カルボンイミドイル）尿素（１０）（９３．３６ｇ、４０１．９ｍｍｏｌ、ＣＢ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）を添加し、続いてＮａＯＡｃ三水和物（１５８．１ｇ）を１ＮのＨ２ＳＯ４水溶液（１．１００Ｌ）に溶解させることにより調製したｐＨ３．５バッファー（１．１１３Ｌ）を加えた。反応混合物を還流させて一晩撹拌し（ＨＰＬＣは、完全な変換を示した）、室温に冷却し、撹拌下の飽和ＮａＨＣＯ３（２．２３Ｌ）水溶液に数回に分けて注いで（起泡）、ｐＨ８〜９とした。これを３０分間撹拌し、固体を濾過により収集し、大量の水で洗浄して中性ｐＨとし、次により控えめな量のＥｔＯＨで洗浄した。固体を減圧下で乾燥させて、２２をオフホワイトの黄色がかった固体として得た（１３５．２ｇ、９４％収率；９９％ＨＰＬＣ純度）。ＬＣＭＳ（Ｃ１８カラム、ギ酸モディファイアを用いて、５分間かけて１０〜９０％ＣＨ３ＣＮ／水勾配で溶出）Ｍ＋１：４２９．５８（２．０３分間）。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＭｅＯＤ）  δ  ８．９５  （ｄ，  Ｊ  ＝  １．６  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．４５  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．３８  （ｂｒ．ｓ，  １Ｈ），  ４．２７  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １４．９，  ７．１  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．０１  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １５．１，  ７．０  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．３７  −  ３．２９  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．５５  （ｂｒ．ｓ，  １Ｈ），  ２．１９  −  ２．０７  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．０２  −  １．８２  （ｂｒ．ｓ，  １Ｈ），  １．６３  （ｓ，  ６Ｈ），  １．２１  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  ３Ｈ）  ｐｐｍ。
【０１７３】
（実施例２０）
１−エチル−３−［６−フルオロ−５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素（２３）のキラルクロマトグラフィー単離。
【０１７４】
【化２７】
2014503557.tif 000029
ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＩＣ（登録商標）カラム（Ｃｈｉｒａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製）において２５℃でＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＴＥＡ（６０／４０／０．１）で溶出して、１−エチル−３−［６−フルオロ−５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−テトラヒドロフラン−２−イル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素（２２）（１３３．６０ｇ）のラセミ試料を分割し、所望のエナンチオマー２３をオフホワイトの固体として得た（６６．８ｇ、４５％収率；９９．８％ＨＰＬＣ純度、９９＋％ｅｅ）。分析的キラルＨＰＬＣ保持時間は、７．７分間であった（ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＩＣ（登録商標）４．６×２５０ｍｍカラム、流速１ｍＬ／分、３０℃）。固体を２：１ＥｔＯＨ／Ｅｔ２Ｏ（５容積）に懸濁し、１０分間撹拌し、濾過により収集し、２：１ＥｔＯＨ／Ｅｔ２Ｏで洗浄し、減圧下で乾燥して、白色の固体を得た（６０．６ｇ）。
【０１７５】
単結晶Ｘ線回折解析により、２３の構造および絶対立体化学を確認した。密封したチューブＣｕ  Ｋ−アルファ源（Ｃｕ  Ｋα放射線、γ＝１．５４１７８Å）およびＡｐｅｘ  ＩＩ  ＣＣＤ検出器を備えるＢｒｕｋｅｒ  Ａｐｅｘ  ＩＩ回折計において、単結晶回折データを取得した。０．１５×０．１５×０．１０ｍｍの寸法を有する結晶を選択し、鉱物油を用いてきれいにし、ＭｉｃｒｏＭｏｕｎｔにマウントし、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＰＥＸＩＩシステムの中央に置いた。逆格子空間において分離した４０フレームの３回のバッチを得て、配向マトリックスおよび初期セルパラメータをもたらした。最終セルパラメータを得て、完全データセットに基づきデータ収集が完了した後に精緻化した。系統的非存在および強度統計に基づき構造を解明し、中心を外れたＰ２１空間群において精緻化した。
【０１７６】
各フレーム３０秒間の曝露による０．５°ステップを用いて、０．８５Åの分解能まで逆格子空間の回折データセットを得た。１００（２）Ｋにおいてデータを収集した。ＡＰＥＸＩＩソフトウェアを用いて、強度の統合およびセルパラメータの精緻化を達成した。データ収集後の結晶の観察は、分解の兆候を示さなかった。図２に示す通り、構造において対称性を有する独立した２個の分子が存在し、対称性を有する独立した分子のどちらもＲ異性体である。
【０１７７】
Ａｐｅｘ  ＩＩソフトウェアを用いてデータを収集、精緻化および整理した。ＳＨＥＬＸＳ９７（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ、１９９０）プログラム（複数可）を用いて構造を解明し、ＳＨＥＬＸＬ９７（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ、１９９７）プログラムを用いて構造を精緻化した。結晶は、Ｐ２１空間群を有する単斜セルを示す。格子パラメータは、ａ＝９．９０１６（２）Å、ｂ＝１０．９１８４（２）Å、ｃ＝１９．２９７５（４）Å、β＝１０２．８２６（１）°である。体積＝２０３４．１９（７）Å３。
【０１７８】
（実施例２１）
１−エチル−３−［６−フルオロ−５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素のメタンスルホン酸塩（２３Ａ）の調製。
【０１７９】
【化２８】
2014503557.tif 000030
ジクロロメタン（６０ｍＬ、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ  ９３１５３３）および無水エタノール（１５ｍＬ、Ｐｈａｒｍｃｏ−ＡＡＰＥＲ  １１１０００２００）に懸濁した１−エチル−３−［６−フルオロ−５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素（２３）（１５．０５ｇ、３５．１３ｍｍｏｌ）の懸濁液に撹拌下、メタンスルホン酸（２．３９２ｍＬ、３６．８９ｍｍｏｌ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ４７１３５６）を添加した。清澄な溶液が観察されるまで室温で撹拌した。約１時間かけてヘプタン（３００ｍＬ）を徐々に添加し、固体沈殿物を濾過（Ｗｈａｔｍａｎ  ＧＦ／Ｆガラスマイクロファイバーペーパー上に置かれたＷｈａｔｍａｎ  ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ＃３ペーパーを使用）により収集した。真空オーブンにおいて減圧下で一晩４０℃にて乾燥して（硫酸カルシウムおよび水酸化カリウムでデシケートし）、２３Ａを白色の固体として得た（１３．４６ｇ、９９＋％ＨＰＬＣ純度、９９＋％ｅｅ）。分析的キラルＨＰＬＣは、ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＩＣ（登録商標）４．６×２５０ｍｍカラムにおいて、流速１ｍＬ／分、３０℃でＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＴＥＡ（６０／４０／０．１）により溶出して、８．６分間の保持時間を有する１種のエナンチオマーを示す。濾液から、白色の固体生成物２３Ａの２回目の収穫物（４．３６ｇ、９８％ＨＰＬＣ純度、９９＋％ｅｅ）を得た。ＬＣＭＳ（Ｃ１８カラム、ギ酸モディファイアを用いて、５分間かけて１０〜９０％ＣＨ３ＣＮ／水勾配で溶出）Ｍ＋１：４２９．５８（２．０３分間）。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＭｅＯＤ）  δ  ９．００  （ｄ，  Ｊ  ＝  １．６  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．６７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．１  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．３９  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．７  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．３０  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １４．９，  ６．９  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．０３  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １４．８，  ７．７  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．４０  −  ３．３１  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．７２  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．７０  −  ２．６０  （ｍ，  １Ｈ），  ２．２１  −  ２．０８  （ｍ，  ２Ｈ），  １．９８  −  １．８４  （ｍ，  １Ｈ），  １．６５  （ｓ，  ６Ｈ），  １．２２  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  ３Ｈ）  ｐｐｍ。
【０１８０】
続いて、（Ｒ）−１−エチル−３−（６−フルオロ−５−（２−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）ピリミジン−５−イル）−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）尿素２３は、下に表記するスキームに従ってリン酸またはリン酸塩プロドラッグに変換することができる。
【０１８１】
【化２９】
2014503557.tif 000031
試薬および条件：（ａ）ジベンジルＮ，Ｎ−ジイソプロピルホスホラミダイト、テトラゾール、２３℃、ＤＭＦ；（ｂ）ｍＣＰＢＡ、０〜２３℃、ＤＭＦ；（ｃ）Ｈ２、Ｐｄ／Ｃ、Ｍ＋ＯＨ−またはＤ２＋（ＯＨ−）２、ＥｔＯＨ、Ｈ２Ｏ；（ｄ）ａｑ  Ｈ＋；（ｅ）ａｑ  Ｍ＋ＯＨ−。
【０１８２】
式（ＩＢ）の化合物は、スキーム１に示す通りに化合物２３から調製され得る。ステップ１において、化合物２３は、ジベンジルＮ，Ｎ−ジイソプロピルホスホラミダイトおよびテトラゾールで処理され、続いてメタ−クロロペルオキシ安息香酸（ｍＣＰＢＡ）で処理されて、リン酸ジベンジル２４をもたらす。ステップ２において、Ｍ＋ＯＨ−またはＤ２＋（ＯＨ−）２の存在下での２４の水素化分解は、式（ＩＢ）の化合物の二価陰イオン型（Ｘ＝−ＰＯ（Ｏ−）２・２Ｍ＋または−ＰＯ（Ｏ−）２・Ｄ２＋）をもたらす。式（ＩＢ）の化合物の遊離酸型（Ｘ＝ＰＯ（ＯＨ）２）は、該二価陰イオン型を水性酸で処理することにより得ることができる。式（ＩＢ）の化合物の一価陰イオン型（Ｘ＝ＰＯ（ＯＨ）Ｏ−Ｍ＋）は、該遊離酸型を１当量のＭ＋ＯＨ−で処理することにより得ることができる。
【０１８３】
【化３０】
2014503557.tif 000032
試薬および条件：（ａ）Ｂｏｃ２Ｏ、ＤＭＦ、２３℃；（ｂ）ジベンジルＮ，Ｎ−ジイソプロピルホスホラミダイト、テトラゾール、２３℃、ＤＭＦ；（ｃ）ｍＣＰＢＡ、０〜２３℃、ＤＭＦ；（ｄ）ＴＦＡ、Ｈ２Ｏ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ、２３℃；（ｅ）Ｈ２、Ｐｄ／Ｃ、Ｍ＋ＯＨ−またはＤ２＋（ＯＨ−）２、ＥｔＯＨ、Ｈ２Ｏ；（ｆ）ａｑ  Ｈ＋；（ｇ）ａｑ  Ｍ＋ＯＨ−。
【０１８４】
あるいは、式（ＩＢ）の化合物は、スキーム２に示す通りに化合物２３から調製され得る。ステップ１において、化合物２３は、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（Ｂｏｃ２Ｏ）で処理されて、保護されたベンゾイミダゾール化合物２５をもたらす。ステップ２において、化合物２５は、ジベンジルＮ，Ｎ−ジイソプロピルホスホラミダイトおよびテトラゾール、続いてｍＣＰＢＡで処理されて、保護されたリン酸ジベンジル２６をもたらす。ステップ３において、化合物２６は、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）で処理されて、保護基を除去し、リン酸ジベンジル２４をもたらす。ステップ４において、Ｍ＋ＯＨ−またはＤ２＋（ＯＨ−）２の存在下での２４の水素化分解は、式（ＩＢ）の化合物の二価陰イオン型（Ｘ＝−ＰＯ（Ｏ−）２・２Ｍ＋または−ＰＯ（Ｏ−）２・Ｄ２＋）をもたらす。式（ＩＢ）の化合物の遊離酸型（Ｘ＝ＰＯ（ＯＨ）２）を、該二価陰イオン型を水性酸で処理することにより得ることができる。式（Ｉ）の化合物の一価陰イオン型（Ｘ＝ＰＯ（ＯＨ）Ｏ−Ｍ＋）を、該遊離酸型を１当量のＭ＋ＯＨ−で処理することにより得ることができる。
【０１８５】
【化３１】
2014503557.tif 000033
試薬および条件：（ａ）Ｂｏｃ２Ｏ、ＤＭＡＰ、ＤＭＦ、２３℃；（ｂ）ジベンジルＮ，Ｎ−ジイソプロピルホスホラミダイト、テトラゾール、２３℃、ＤＭＦ；（ｃ）ｍＣＰＢＡ、０〜２３℃、ＤＭＦ；（ｄ）ＴＦＡ、ＤＣＭ；（ｅ）ａｑ  Ｍ＋ＯＨ−またはＤ２＋（ＯＨ−）２；（ｆ）ａｑ  Ｈ＋；（ｇ）ａｑ  Ｍ＋ＯＨ−。
【０１８６】
式（ＩＢ）の化合物は、スキーム３に示す通りに化合物２３から調製することもできる。ステップ１において、化合物２３は、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の存在下で２当量のＢｏｃ２Ｏで処理されて、ビス保護されたベンゾイミダゾール化合物２８をもたらす。ステップ２において、化合物２８は、ジベンジルＮ，Ｎ−ジイソプロピルホスホラミダイトおよびテトラゾール、続いてｍＣＰＢＡで処理されて、ビス保護されたリン酸ジベンジル２９をもたらす。ステップ３において、化合物２９は、ＴＦＡで処理されて、保護基を除去する。得られた中間体の、水性Ｍ＋ＯＨ−またはＤ２＋（ＯＨ−）２による処理は、式（ＩＢ）の化合物の二価陰イオン型（Ｘ＝−ＰＯ（Ｏ−）２・２Ｍ＋または−ＰＯ（Ｏ−）２・Ｄ２＋）をもたらす。式（ＩＢ）の化合物の遊離酸型（Ｘ＝ＰＯ（ＯＨ）２）は、該二価陰イオン型を水性酸で処理することにより得ることができる。式（Ｉ）の化合物の一価陰イオン型（Ｘ＝ＰＯ（ＯＨ）Ｏ−Ｍ＋）は、該遊離酸型を１当量のＭ＋ＯＨ−で処理することにより得ることができる。
【０１８７】
（実施例２２）
（Ｒ）−２−（５−（２−（３−エチルウレイド）−６−フルオロ−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−イル）ピリミジン−２−イル）プロパン−２−イルリン酸ジベンジル（２４）の調製。
【０１８８】
【化３２】
2014503557.tif 000034
１Ｌ丸底フラスコ中の１−エチル−３−［６−フルオロ−５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素（２３）（１０．２４ｇ、２３．６６ｍｍｏｌ）にＮ２下２３℃で、ＤＭＦ（２００ｍＬ）、続いてテトラゾールの溶液（ＭｅＣＮ中の０．４５Ｍを１０５．２ｍＬ、４７．３２ｍｍｏｌ）、続いてＮ−ジベンジルオキシホスファニル−Ｎ−イソプロピル−プロパン−２−アミン（１２．２６ｇ、１１．９３ｍＬ、３５．４９ｍｍｏｌ）を添加した。４．５時間後、さらなるＮ−ジベンジルオキシホスファニル−Ｎ−イソプロピル−プロパン−２−アミン（４ｍＬ）を添加した。さらに１６時間撹拌した後、反応液を０℃に冷却し（氷水浴）、次に、ｍＣＰＢＡ（１５．１７ｇ、６１．５２ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を０℃で３０分間、次に２３℃で３０分間撹拌し、その後、反応混合物を水（４００ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（７００ｍＬ）との間で分配した。有機層を分離し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）、１０％重亜硫酸ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）およびブライン（５００ｍＬ）で洗浄し、次に脱水（硫酸マグネシウム）し、濾過し、濃縮した。ＩＳＣＯ  ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨブランドのフラッシュクロマトグラフィー精製システム（３３０ｇカラム）を用いたＭＰＬＣにより、流速２００ｍＬ／分で１６．５カラム容積にわたるＤＣＭ中０〜１０％ＥｔＯＨ直線勾配で溶出して、残渣を精製した。真空濃縮した後、（Ｒ）−２−（５−（２−（３−エチルウレイド）−６−フルオロ−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−イル）ピリミジン−２−イル）プロパン−２−イルリン酸ジベンジル（２４）（１３．８９ｇ、２０．１７ｍｍｏｌ、８５．２７％）を白色の固体として得た。ＥＳＭＳ（Ｍ＋１）＝６８９．５；１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  ８．８８  （ｄ，  Ｊ  ＝  １．６  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．３７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．３０  （ｍ，  １０Ｈ），  ５．３８  −  ５．３３  （ｍ，  １Ｈ），  ５．１２  −  ５．０１  （ｍ，  ４Ｈ），  ４．２４  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ６．８，  １４．９  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．９８  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ６．９，  １５．１  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．３５  −  ３．２７  （ｍ，  ３Ｈ），  ２．５２  （ｑ，  Ｊ  ＝  ５．９  Ｈｚ，  １Ｈ），  ２．１４  −  ２．０５  （ｍ，  ２Ｈ），  １．９１  （ｓ，  ６Ｈ）および１．２２  −  １．１４  （ｍ，  ３Ｈ）  ｐｐｍ。
【０１８９】
（実施例２３）
（Ｒ）−２−（５−（２−（３−エチルウレイド）−６−フルオロ−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−イル）ピリミジン−２−イル）プロパン−２−イルリン酸二ナトリウム（Ｗ）の調製。
【０１９０】
【化３３】
2014503557.tif 000035
１Ｌ  Ｐａｒｒ容器に、水（２００ｍＬ）、Ｐｄ／Ｃ（４ｇ、１０ｗｔ％乾量基準、ウェット、Ｄｅｇｕｓｓａ型）、（Ｒ）−２−（５−（２−（３−エチルウレイド）−６−フルオロ−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−イル）ピリミジン−２−イル）プロパン−２−イルリン酸ジベンジル（２４）（１３．８９ｇ、２０．１７ｍｍｏｌ）、ＥｔＯＨ（４００ｍＬ）および１Ｍ  ＮａＯＨ水溶液（４０．３４ｍＬ、４０．３４ｍｍｏｌ）を充填した。得られた混合物を、Ｐａｒｒ振盪機装置において４０分間５０ｐｓｉ  Ｈ２下で水素化した。この反応混合物を０．２２μｍポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）膜を通して濾過して、暗色の濾液を得た。水リンスにより、フィルター膜を通過する、より暗い色の材料が得られた。得られた濾液をセライトのパッドに通し、暗い色の材料は、パッドを水でリンスするまで溶出しなかった。得られた暗い色の溶液（およそ７００ｍＬ）を、３容積のＥｔＯＨ（２１００ｍＬ）で希釈し、０．２２μｍ  ＰＥＳ膜（４個のディスポーザブルＣｏｒｎｉｎｇポリスチレンフィルターシステム＃４３１０９８を用いる）を通して濾過し、濾液を真空濃縮した。得られた残渣を水（１００ｍＬ）およびＥｔＯＨ（３００ｍＬ）に溶解させ、０．２２μｍ  ＰＥＳ膜を通して濾過して、清澄な黄色の溶液を得て、続いてＥｔＯＨ（５０ｍＬ）でリンスしてセライトプラグ（２６ｍｍ直径×６０ｍｍ高さ、ＥｔＯＨで予め湿らせた（ｐｒｅ−ｗｅｔ））を通し、次に濾液を濃縮した。得られた残渣を１Ｌ丸底フラスコ中で水（２５０ｍＬ）に溶解させ、次に撹拌しつつ１ＭＨＣｌ水溶液（４０ｍＬ）を１５分間かけて徐々に添加して、白色の固体スラリーを得た。ＨＣｌ添加完了２０分後、０．２２μｍ  ＰＥＳ膜を通す濾過により固体を収集した。収集した固体を水（１００ｍＬ）で洗浄し、次に１Ｌ丸底フラスコに移して（まだ湿っている）、ＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）中で３０分間スラリーにした。得られた微細な白色沈殿物を濾過により収集し、次に一晩真空乾燥させた。得られた遊離酸（９．１７ｇ、１８．０ｍｍｏｌ）を、水（８０ｍＬ）、次に１．０Ｎ  ａｑ  ＮａＯＨ（３６．０ｍＬ、２ｅｑｕｉｖ）で処理した。得られた溶液を凍結および凍結乾燥して、［１−［５−［２−（エチルカルバモイルアミノ）−６−フルオロ−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル］ピリミジン−２−イル］−１−メチル−エチル］リン酸二ナトリウム（Ｗ）（１０．２０６ｇ、１８．０８ｍｍｏｌ、８９．６６％）を、一致する分析的データを有する淡いクリーム色の固体として得た。ＥＳＭＳ（Ｍ＋１）＝５０９．４；１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  Ｄ２Ｏ）  δ  ８．５８  （ｓ，  ２Ｈ），  ６．９２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．１３  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．９８  −  ３．８１  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．０４  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．２６  （ｔ，  Ｊ  ＝  ５．７  Ｈｚ，  １Ｈ），  １．９７  −  １．９２  （ｍ，  ２Ｈ），  １．６７  （ｓ，  ６Ｈ）および１．０１  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  ３Ｈ）  ｐｐｍ。
【０１９１】
（実施例２４）
Ｂｏｃ−１−エチル−３−［６−フルオロ−５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素（２５）の調製。
【０１９２】
【化３４】
2014503557.tif 000036
ＤＭＦ（２５０  ｍＬ）中の１−エチル−３−［６−フルオロ−５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素（２３）（１０．７２ｇ、２５．０２ｍｍｏｌ）の溶液／懸濁液に２３℃で、Ｂｏｃ２Ｏ（６．１１ｇ、２８．００ｍｍｏｌ）を添加した。２時間後、ＭｅＯＨ中の２Ｍアンモニア（２ｍＬ）を添加して、いかなる過剰Ｂｏｃ２Ｏもクエンチした。クエンチした反応混合物を、ＥｔＯＡｃと水（各４００ｍＬ）との間で分配し、有機層を分離し、水（２×４００ｍＬ）およびブライン（４００ｍＬ）で洗浄し、次にＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮して、Ｂｏｃ−１−エチル−３−［６−フルオロ−５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素（２５）（１２．６９ｇ、２３．５８ｍｍｏｌ、９４．２６％）を得て、これをさらに精製することなく用いた。ＥＳＭＳ（Ｍ＋１）＝５２９．３；１Ｈ  ＮＭＲ  （３００．０  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ９．５０  （ｓ，  １Ｈ），  ９．０２  （ｔ，  Ｊ  ＝  ５．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ８．９１  （ｄ，  Ｊ  ＝  １．６  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．７４  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．５８  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．８  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．６４  （ｓ，  １Ｈ），  ４．２２  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．０５  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  ７．８，  ４．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．４７  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  ７．２，  ４．３  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．４２  −  ２．３５  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．２８  −  ２．１６  （ｍ，  ２Ｈ），  １．７５  （ｓ，  ９Ｈ），  １．６８  （ｓ，  ６Ｈ）および１．３１  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．３  Ｈｚ，  ３Ｈ）  ｐｐｍ。
【０１９３】
（実施例２５）
Ｂｏｃ−１−エチル−３−［６−フルオロ−５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素ジベンジルホスフェート（２６）の調製。
【０１９４】
【化３５】
2014503557.tif 000037
Ｂｏｃ−１−エチル−３−［６−フルオロ−５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素（２５）（１２．６９ｇ、２３．５８ｍｍｏｌ）およびテトラゾール（３．３０４ｇ、４７．１６ｍｍｏｌ）にＮ２下２３℃で、ＤＣＭ（２４０ｍＬ）、続いてＮ−ジベンジルオキシホスファニル−Ｎ−イソプロピル−プロパン−２−アミン（９．７７５ｇ、９．５０９ｍＬ、２８．３０ｍｍｏｌ）を添加した。２３℃で３時間後、反応液を０℃に冷却し、次に、ｍＣＰＢＡ（６．９７７ｇ、２８．３０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を４５分間０℃、次に２０分間２３℃で撹拌した。次に、この反応混合物をＤＣＭ（５０ｍＬ）と飽和重炭酸ナトリウム水溶液（４００ｍＬ）との間で分配した。有機層を分離し、次に重亜硫酸ナトリウム水溶液（３５０ｍＬの水中に６３ｇ）および飽和重炭酸ナトリウム水溶液（４００ｍＬ）で連続的に洗浄し、次に硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、真空濃縮した。ＩＳＣＯ  ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨブランドのフラッシュクロマトグラフィー精製システム（３３０ｇシリカカラム）を用いたＭＰＬＣにより、２００ｍＬ／分で１６カラム容積にわたるヘキサン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ直線勾配で溶出して、残渣を精製した。生成物含有画分を真空蒸発させ、Ｂｏｃ−１−エチル−３−［６−フルオロ−５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素ジベンジルホスフェート（２６）（１１．９２ｇ、１５．１１ｍｍｏｌ、６４．０９％）を得た。ＥＳＭＳ（Ｍ＋１）＝７８９．２；１Ｈ  ＮＭＲ  （３００．０  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ９．５１  （ｓ，  １Ｈ），  ９．０３  （ｔ，  Ｊ  ＝  ５．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ８．９１  （ｄ，  Ｊ  ＝  １．６  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．７３  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．３７  −  ７．２８  （ｍ，  １０Ｈ），  ５．５８  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．８  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．１７  −  ５．０５  （ｍ，  ４Ｈ），  ４．２３  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．０５  （ｔｄ，  Ｊ  ＝  ７．８，  ４．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．５３  −  ３．４４  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．３９  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．９，  １４．５  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．２８  −  ２．１５  （ｍ，  ２Ｈ），  １．９８  （ｓ，  ６Ｈ），  １．７２  （ｍ，  ９Ｈ）および１．３１  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  ３Ｈ）  ｐｐｍ。
【０１９５】
（実施例２６）
（Ｒ）−２−（５−（２−（３−エチルウレイド）−６−フルオロ−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−イル）ピリミジン−２−イル）プロパン−２−イルリン酸ジベンジル（２４）の調製。
【０１９６】
【化３６】
2014503557.tif 000038
ＤＣＭ（３００ｍＬ）中のＢｏｃ−１−エチル−３−［６−フルオロ−５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素ジベンジルホスフェート（２６）（１１．９ｇ、１５．０９ｍｍｏｌ）の溶液に２３℃で、水（２．３２５ｍＬ、１２９．１ｍｍｏｌ）、次にＴＦＡ（３．４４１ｇ、２．３２５ｍＬ、３０．１８ｍｍｏｌ）を添加した。１時間後、ｔｌｃにより部分的な変換しか観察されなかったため、さらなるＴＦＡ（３．４４１ｇ、２．３２５ｍＬ、３０．１８ｍｍｏｌ）を添加した。さらに２．５時間後、ＭｅＯＨ（２ｍＬ）を添加し、この混合物をさらに１８時間撹拌した。この反応混合物を１：１のブライン：飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２００ｍＬ）で洗浄した。水層をＤＣＭ（１５０ｍＬ）で再度抽出し、有機層を組み合わせ、次に脱水し（硫酸マグネシウムで）、濾過し、真空濃縮した。得られた残渣をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）に再び溶解させ、水（１５０ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、次に脱水し（硫酸マグネシウム）、濾過し、濃縮して、（Ｒ）−２−（５−（２−（３−エチルウレイド）−６−フルオロ−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−イル）ピリミジン−２−イル）プロパン−２−イルリン酸ジベンジル（２４）（１０．２１ｇ、１４．８３ｍｍｏｌ、９８．２７％）を白色の固体として得た。ＥＳＭＳ（Ｍ＋１）＝６８９．４；１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  ８．８８  （ｄ，  Ｊ  ＝  １．６  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．３７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．３０  （ｍ，  １０Ｈ），  ５．３８  −  ５．３３  （ｍ，  １Ｈ），  ５．１２  −  ５．０１  （ｍ，  ４Ｈ），  ４．２４  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ６．８，  １４．９  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．９８  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ６．９，  １５．１  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．３５  −  ３．２７  （ｍ，  ３Ｈ），  ２．５２  （ｑ，  Ｊ  ＝  ５．９  Ｈｚ，  １Ｈ），  ２．１４  −  ２．０５  （ｍ，  ２Ｈ），  １．９１  （ｓ，  ６Ｈ）および１．２２  −  １．１４  （ｍ，  ３Ｈ）  ｐｐｍ。
【０１９７】
（実施例２７）
（Ｒ）−２−（５−（２−（３−エチルウレイド）−６−フルオロ−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−イル）ピリミジン−２−イル）プロパン−２−イルリン酸二ナトリウム（Ｗ）の調製。
【０１９８】
【化３７】
2014503557.tif 000039
１Ｌ丸底フラスコに、（Ｒ）−２−（５−（２−（３−エチルウレイド）−６−フルオロ−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−イル）ピリミジン−２−イル）プロパン−２−イルリン酸ジベンジル（２４）（９．３７ｇ、１３．６１ｍｍｏｌ）、ＥｔＯＨ（３００ｍＬ）、水（１５０ｍＬ）、Ｐｄ／Ｃ（１０ｗｔ％乾量基準、ウェット、Ｄｅｇｕｓｓａ型、３ｇ）および１ＭＮａＯＨ水溶液（２７．２２ｍＬ、２７．２２ｍｍｏｌ）を入れた。懸濁液から気体を３分間抜き（針からポンプにより）、次に、水素ガス雰囲気下に置いた（バルーン）。２．５時間２３℃で撹拌した後、０．２２μｍ  ＰＥＳ膜（ディスポーザブルＣｏｒｎｉｎｇフィルターシステム、１Ｌ、ポリスチレン、＃４３１０９８）を通して反応液を濾過して、触媒を除去し、ＥｔＯＨ（５０ｍＬ）で洗浄した。得られた溶液を濃縮し、残渣を水（８０ｍＬ）に溶解させ、ＭｅＣＮ（８０ｍＬ）で処理し、次に凍結および凍結乾燥して、（Ｒ）−２−（５−（２−（３−エチルウレイド）−６−フルオロ−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−イル）ピリミジン−２−イル）プロパン−２−イルリン酸二ナトリウム（Ｗ）（７．１０ｇ、１２．８１ｍｍｏｌ、９４．１２％）を白色の固体として得た。ＥＳＭＳ（Ｍ＋１）＝５０９．３；１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  Ｄ２Ｏ）  δ  ８．５８  （ｓ，  ２Ｈ），  ６．９２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．１３  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．９８  −  ３．８１  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．０４  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．２６  （ｔ，  Ｊ  ＝  ５．７  Ｈｚ，  １Ｈ），  １．９７  −  １．９２  （ｍ，  ２Ｈ），  １．６７  （ｓ，  ６Ｈ）および１．０１  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  ３Ｈ）  ｐｐｍ。
【０１９９】
（実施例２８）
ジＢｏｃ−１−エチル−３−［６−フルオロ−５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素（２８）の調製。
【０２００】
【化３８】
2014503557.tif 000040
ＤＭＦ（３０ｍＬ）における１−エチル−３−［６−フルオロ−５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素（２３）（１．３３３ｇ、３．１１１ｍｍｏｌ）の溶液／懸濁液に、ＤＭＡＰ（３８．０１ｍｇ、０．３１１１ｍｍｏｌ）、続いてＢｏｃ２Ｏ（１．４２６ｇ、１．５０１ｍＬ、６．５３３ｍｍｏｌ）を添加した。３０分後、この反応混合物を水およびＥｔＯＡｃ（各３００ｍＬ）で希釈し、有機層を分離し、水およびブライン（各３００ｍＬ）で洗浄し、次に、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。ＩＳＣＯ  ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨブランドのフラッシュクロマトグラフィー精製システム（８０ｇシリカカラム）を用いたＭＰＬＣにより、流速６０ｍＬ／分で２０カラム容積にわたるヘキサン中０〜６０％ＥｔＯＡｃ直線勾配で溶出して、残渣を精製した。所望の生成物画分を合わせ、蒸発させて、ジＢｏｃ−１−エチル−３−［６−フルオロ−５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素（２８）（１．４３ｇ、２．２７５ｍｍｏｌ、７３．１１％）を清澄な発泡体として得た。ＥＳＭＳ（Ｍ＋１）＝６２９．３；１Ｈ  ＮＭＲ  （３００．０  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ８．９５  （ｄ，  Ｊ  ＝  １．６  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ８．３１  −  ８．２７  （ｍ，  １Ｈ），  ８．０５  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．８０  −  ５．６８  （ｍ，  １Ｈ），  ４．７０  （ｓ，  １Ｈ），  ４．２１  −  ４．０９  （ｍ，  １Ｈ），  ３．９８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．４２  −  ３．３７  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．４５  −  ２．００  （ｍ，  ４Ｈ），  １．６５  （ｓ，  ６Ｈ），  １．６２  （ｓ，  ９Ｈ），  １．３７  （ｓ，  ９Ｈ）および１．２８  −  １．２１  （ｍ，  ３Ｈ）  ｐｐｍ。
【０２０１】
（実施例２９）
ジＢｏｃ−１−エチル−３−［６−フルオロ−５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素ジベンジルホスフェート（２９）の調製。
【０２０２】
【化３９】
2014503557.tif 000041
ジＢｏｃ−１−エチル−３−［６−フルオロ−５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素（２８）（１．１３ｇ、１．７９７ｍｍｏｌ）およびテトラゾール（２５１．８ｍｇ、３．５９４ｍｍｏｌ）に２３℃、Ｎ２下で、ＤＣＭ（３０ｍＬ）、続いてＮ−ジベンジルオキシホスファニル−Ｎ−イソプロピル−プロパン−２−アミン（７４４．７ミリグラム、７２４．４μＬ、２．１５６ｍｍｏｌ）を添加した。１８時間撹拌した後、反応液を０℃に冷却し、次にｍＣＰＢＡ（５３１．５ｍｇ、２．１５６ｍｍｏｌ）で処理した。反応液を１５分間０℃、次に３０分間２３℃で撹拌した。次に、得られた溶液をＥｔＯＡｃと飽和重炭酸ナトリウム水溶液（各３００ｍＬ）との間で分配し、有機層を分離し、次に１０％重亜硫酸ナトリウム水溶液、飽和重炭酸ナトリウム水溶液およびブライン（各３００ｍＬ）で洗浄し、次に硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。ＩＳＣＯ  ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨブランドのフラッシュクロマトグラフィー精製システム（８０ｇシリカカラム）を用いたＭＰＬＣにより、流速６０ｍＬ／分で２０カラム容積にわたるヘキサン中０〜８０％ＥｔＯＡｃ直線勾配で溶出して、残渣を精製した。所望の生成物画分を合わせ、蒸発させて、ジＢｏｃ−１−エチル−３−［６−フルオロ−５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素ジベンジルホスフェート（２９）（１．０３ｇ、１．１５９ｍｍｏｌ、６４．５０％）を清澄なガラス状の油状物として得た。ＥＳＭＳ（Ｍ＋１）＝８８９．５；１Ｈ  ＮＭＲ  （３００．０  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ８．９３  （ｄ，  Ｊ  ＝  １．５  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ８．３１  （ｓ，  １Ｈ），  ８．０４  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．３６  −  ７．２６  （ｍ，  １０Ｈ），  ５．８３  −  ５．７０  （ｍ，  １Ｈ），  ５．１６  −  ５．０５  （ｍ，  ４Ｈ），  ４．２４  −  ４．１８  （ｍ，  １Ｈ），  ４．０３  −  ３．９７  （ｍ，  １Ｈ），  ３．４２  −  ３．３６  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．４３  −  ２．０５  （ｍ，  ４Ｈ），  １．９８  （ｓ，  ６Ｈ），  １．６４  （ｓ，  ９Ｈ），  １．４０  （ｓ，  ９Ｈ）および１．２６  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  ３Ｈ）  ｐｐｍ。
【０２０３】
（実施例３０）
（Ｒ）−２−（５−（２−（３−エチルウレイド）−６−フルオロ−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−イル）ピリミジン−２−イル）プロパン−２−イルリン酸ナトリウム（Ｗ）の調製。
【０２０４】
【化４０】
2014503557.tif 000042
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のジＢｏｃ−１−エチル−３−［６−フルオロ−５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素ジベンジルホスフェート（２９）（１２１ｍｇ、０．１３６１ｍｍｏｌ）の溶液に２３℃で、ＴＦＡ（５ｍＬ）を添加した。２時間後、この反応混合物を真空濃縮した。残渣をＭｅＯＨ（６ｍＬ）に溶解させ、およそ０．５ｍＬのＭｅＯＨ中２Ｍ  ＮＨ３で処理した（材料の完全溶解のため）。得られた溶液を、調製用ＨＰＬＣ、逆相、Ｓｕｎｆｉｒｅ  ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤ  ５μＭカラム１９×１００ｍｍにおける６回注入において精製した。１０〜９０％ａｑ  ＭｅＣＮ  ｗ／０．１％ＴＦＡバッファー、直線勾配、１５分間かけて流速２０ｍＬ／分で溶出。生成物を含有する画分をプールし、凍結乾燥した。得られた材料をＭｅＯＨ（３ｍＬ）に懸濁し、２３℃３０分間撹拌し、次に、プラスチックフリットを通す濾過により沈殿物を収集した。得られた白色の固体を、ＭｅＯＨスラリー（３ｍＬ）に再度付し（ｒｅ−ｓｕｂｊｅｃｔ）、次に濾過により収集して、乾燥後に６８ｍｇの白色の固体を得た。白色の固体を、０．１０Ｍ  ａｑ  ＮａＯＨ（２．６８ｍＬ、２ｅｑｕｉｖ  ＮａＯＨ）で処理して溶液を得、次にこれを水（２ｍＬ）で流しつつ０．４５μｍ  ＰＴＦＥ膜を備えるＡｃｒｏｄｉｓｃ  ＣＲ  １３ｍｍシリンジフィルターに通した。得られた溶液をＭｅＣＮ（３ｍＬ）で処理し、凍結および凍結乾燥して、（Ｒ）−２−（５−（２−（３−エチルウレイド）−６−フルオロ−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−イル）ピリミジン−２−イル）プロパン−２−イルリン酸ナトリウム（Ｗ）を白色の粉末として得た。ＥＳＭＳ（Ｍ＋１）＝５０９．２；１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  Ｄ２Ｏ）  δ  ８．５８  （ｓ，  ２Ｈ），  ６．９２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．１３  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．９８  −  ３．８１  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．０４  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．２６  （ｔ，  Ｊ  ＝  ５．７  Ｈｚ，  １Ｈ），  １．９７  −  １．９２  （ｍ，  ２Ｈ），  １．６７  （ｓ，  ６Ｈ）および１．０１  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  ３Ｈ）  ｐｐｍ。
【０２０５】
（実施例３１）
液体培地における感受性試験
本発明の化合物を、液体培地における感受性試験により抗菌活性に関して試験した。このようなアッセイは、このような実施を統制する最新のＣＬＳＩ文書の指針内で行った。「Ｍ０７−Ａ８  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｌｕｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｓ  ｆｏｒ  Ｂａｃｔｅｒｉａ  ｔｈａｔ  Ｇｒｏｗ  Ａｅｒｏｂｉｃａｌｌｙ；  Ａｐｐｒｏｖｅｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄ−−Ｅｉｇｈｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（２００９年）」。「Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ｉｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ」（Ｖ．  Ｌｏｒｉａｎ編集、出版社Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ、１９９６年）等、他の刊行物は、研究室の抗生物質試験における基本的な実際の技法を提供する。用いた具体的なプロトコールは、次の通りであった。
【０２０６】
プロトコール＃１：微量希釈ブロス方法を用いた化合物のジャイレースＭＩＣの決定
材料：
丸底９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｃｏｓｔａｒ  ３７８８）
Ｍｕｅｌｌｅｒ  Ｈｉｎｔｏｎ  ＩＩ寒天プレート（ＭＨＩＩ；ＢＢＬプレミックス）
Ｍｕｅｌｌｅｒ  Ｈｉｎｔｏｎ  ＩＩ液体ブロス（ＭＨＩＩ；ＢＢＬプレミックス）
ＢＢＬ  Ｐｒｏｍｐｔ接種システム（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｂ２６３０６）
Ｔｅｓｔ  Ｒｅａｄｉｎｇ  Ｍｉｒｒｏｒ（Ｆｉｓｈｅｒ）
細菌を画線してシングルコロニーとした寒天プレート、新たに調製
無菌ＤＭＳＯ
ヒト血清（Ｕ．Ｓ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ  Ｓ１０１０−５１）
溶血させたウマ血液（Ｑｕａｄ  Ｆｉｖｅ  ２７０−１００）
レサズリン０．０１％
スプラーグドーリーラット（Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ  Ｒａｔ）血清（Ｕ．Ｓ．  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ  １０１１−９０ＢまたはＶａｌｌｅｙ  ＢｉｏＭｅｄｉｃａｌ  ＡＳ３０６１ＳＤ）
プールしたマウス血清（Ｖａｌｌｅｙ  ＢｉｏＭｅｄｉｃａｌ  ＡＳ３０５４）  。
【０２０７】
株（培地、ブロスおよび寒天）：
１．Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  ＡＴＣＣ＃２９２１３
ａ．ＭＨＩＩ
ｂ．ＭＨＩＩ＋５０％ヒト血清
ｃ．ＭＨＩＩ＋５０％ラット血清
ｄ．ＭＨＩＩ＋５０％マウス血清
２．Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  ＡＴＣＣ＃２９２１３ＧｙｒＢ  Ｔ１７３Ｉ（ＭＨＩＩ）
３．Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、ＪＭＩコレクション株；表５を参照（ＭＨＩＩ）
４．Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、ＪＭＩコレクション株；表５を参照（ＭＨＩＩ）
５．Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ  ＡＴＣＣ＃２９２１２（ＭＨＩＩ＋３％  溶血させたウマ血液）
６．Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ  ＡＴＣＣ＃４９６２４（ＭＨＩＩ＋３％  溶血させたウマ血液）
７．Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、ＪＭＩコレクション株；表５を参照（ＭＨＩＩ＋３％  溶血させたウマ血液）
８．Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ、ＪＭＩコレクション株；表５を参照（ＭＨＩＩ＋３％  溶血させたウマ血液）
９．Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＡＴＣＣ＃１００１５（ＭＨＩＩ＋３％  溶血させたウマ血液）
１０．Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、ＪＭＩコレクション株；表５を参照（ＭＨＩＩ＋３％  溶血させたウマ血液）
１１．β−ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ、群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｇ）ＪＭＩコレクション株；表５を参照（ＭＨＩＩ＋３％  溶血させたウマ血液）
１２．Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ  ＡＴＣＣ１０９８７（ＭＨＩＩ）
１３．Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ  ＡＴＣＣ１４５７９（ＭＨＩＩ）
１４．Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ＡＴＣＣ６６３８（ＭＨＩＩ）
１５．Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ（１６８）ＡＴＣＣ６０５１（ＭＨＩＩ）  。
【０２０８】
接種物プレップ（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ＋５０％血清以外のあらゆる株に関する）：
１．ＢＢＬ  Ｐｒｏｍｐｔキットを使用して、上に表示する適切な寒天培地において増殖した培養物から、５個の大型または１０個の小型の十分に離間したコロニーをつついて、キットに提供されている１ｍＬの無菌食塩水に接種した。
２．約３０秒間ウェルをボルテックスして、約１０８細胞／ｍＬの懸濁液を生じた。実際の密度は、この懸濁液の希釈物をプレーティングする（ｐｌａｔｅ  ｏｕｔ）ことにより確認することができた。
３．試験する化合物のプレート毎に０．１５ｍＬの細胞を１５ｍＬ（約１０６細胞／ｍＬ）無菌ブロス（または後述を参照）に移すことにより、懸濁液を１／１００希釈し、次に回旋して混合した。化合物（＞８化合物）の２枚以上のプレートを試験する場合、容積はそれに応じて増加した。
【０２０９】
ａ．Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍおよびＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに関しては、１４．１ｍＬ  ＭＨＩＩ＋０．９ｍＬの溶血させたウマ血液を用いた。
４．５０μｌの細胞（約５×１０４細胞）を用いて、ブロス（後述を参照）に希釈した薬物を５０μｌ含有する各マイクロタイターウェルに接種した。
【０２１０】
薬物希釈、接種、ＭＩＣの決定：
１．全薬物／化合物ストックは通常、１００％ＤＭＳＯにおいて１２．８ｍｇ／ｍＬ濃度で調製した。
２．薬物／化合物ストックを、５０μＬのＤＭＳＯにおいて２００×所望の最終濃度に希釈した。ＭＩＣの出発濃度が８μｇ／ｍＬ最終濃度である場合、６．２５μＬのストック＋４３．７５μＬ  ＤＭＳＯを必要とした。各２００×ストックを、新しい９６ウェルマイクロタイタープレートのカラム１の別個の列に置いた。
３．２５μＬのＤＭＳＯを、２００×化合物ストックを含有するマイクロタイタープレートの全列のカラム２〜１２に添加し、カラム１の２５μＬをカラム１１まで系列的に希釈し、カラム毎にチップを交換した。即ち、２５μＬ化合物＋２５μＬ  ＤＭＳＯ＝２×希釈。対照のため、系列の最後に「化合物なし」ＤＭＳＯウェルを残した。
４．試験した株（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ＋５０％ヒト血清を除く）毎に、マトリックスピペッターを用いて５０μＬのＭＨＩＩブロスを有する２枚のマイクロタイタープレートを調製した。
５．５０μｌの細胞の添加前に、５０μＬの培地／マイクロタイターウェルに０．５μＬの各希釈物を移した（ｗ／マトリックス自動ピペッター）。化合物の通常の出発濃度は、培地＋細胞に１／２００希釈した後に８μｇ／ｍＬであった  −  化合物濃度は、マイクロタイタープレートの列にわたり２×ステップで減少した。全ＭＩＣは、２連で行った。
６．全ウェルに、５０μｌの希釈細胞懸濁液（前述を参照）を接種して、最終容積１００μｌとした。
７．接種物を添加した後、手動の多チャネルピペッターにより、各ウェルを徹底的に混合した。同一マイクロタイタープレートにおける低濃度から高濃度の薬物に向かう場合、同一チップを用いた。
８．プレートを３７℃で少なくとも１８時間インキュベートした。
９．１８時間後にｔｅｓｔ  ｒｅａｄｉｎｇ  ｍｉｒｒｏｒによりプレートを観測して、ＭＩＣを、増殖が観察されなかった（ウェルにおける光学的透明性）薬物の最低濃度として記録した。
【０２１１】
Ｓ．ａｕｒｅｕｓ＋５０％ヒト血清、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ＋５０％ラット血清またはＳ．ａｕｒｅｕｓ＋５０％マウス血清の調製。
１．１５ｍＬのＭＨＩＩ＋１５ｍＬヒト血清を合わせることにより、５０％血清培地を調製した  −  合計３０ｍＬ。２枚以上の化合物プレートを試験する場合、容積を３０ｍＬ増分で増加させた。
２．上に記載されている通り、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  ＡＴＣＣ＃２９２１３の同じＢＢＬ  Ｐｒｏｍｐｔ接種物を用いて、上述において調製した３０ｍＬ（約５×１０５細胞／ｍＬ）の５０％ヒト血清培地に０．１５ｍＬの細胞を移すことにより１／２００希釈し、回旋して混合した。
３．所望の数のマイクロタイタープレートの全試験ウェルを、５０％血清培地における１００μＬ細胞で満たした。
４．０．５μＬの各化合物希釈物を１００μＬの細胞／培地に移した（ｗ／マトリックス自動ピペッター）。化合物の通常の出発濃度は、培地＋細胞に１／２００希釈した後に８μｇ／ｍＬであった  −  化合物濃度は、マイクロタイタープレートの列にわたり２×ステップで減少した。全ＭＩＣは、２連で行った。
５．手動の多チャネルピペッターにより各ウェルを徹底的に混合した。同一マイクロタイタープレートにおける低濃度から高濃度の薬物に向かう場合、同一チップを用いた。
６．プレートを３７℃で少なくとも１８時間インキュベートした。インキュベーション後に、２５μＬの０．０１％レサズリンを各ウェルに添加し、３７℃で少なくとも追加的に１時間またはレサズリンの色が変化するまでインキュベートを継続した。
７．ｔｅｓｔ  ｒｅａｄｉｎｇ  ｍｉｒｒｏｒによりプレートを観測し、ＭＩＣを記録した。レサズリンを用いる場合、該色素の色は、増殖なしのウェルにおいて紺青色から明るいピンク色へと変化する。色素をピンク色にする薬物の最低濃度がＭＩＣである。
【０２１２】
プロトコール２：微量希釈ブロス方法を用いた、グラム陰性に対する化合物のジャイレースＭＩＣの決定
材料：
丸底９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｃｏｓｔａｒ  ３７８８）
Ｍｕｅｌｌｅｒ  Ｈｉｎｔｏｎ  ＩＩ寒天プレート（ＭＨＩＩ；ＢＢＬプレミックス）
Ｍｕｅｌｌｅｒ  Ｈｉｎｔｏｎ  ＩＩ液体ブロス（ＭＨＩＩ；ＢＢＬプレミックス）
ＢＢＬ  Ｐｒｏｍｐｔ接種システム（Ｆｉｓｈｅｒ  ｂ２６３０６）
Ｔｅｓｔ  Ｒｅａｄｉｎｇ  Ｍｉｒｒｏｒ（Ｆｉｓｈｅｒ）
細菌を画線してシングルコロニーとした寒天プレート、新たに調製
無菌ＤＭＳＯ  。
【０２１３】
株（全株のためのＭＨＩＩ培地；ブロスおよび寒天）：
１．Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＡＴＣＣ＃２５９２２
２．Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、ＪＭＩコレクション株、表５を参照
３．Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉＡＧ１００  ＷＴ
４．Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＡＧ１００  ｔｏｌＣ
５．Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ  ＡＴＣＣ＃ＢＡＡ−１７１０
６．Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ  ＡＴＣＣ＃１９６０６
７．Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ、ＪＭＩコレクション株、表５を参照
８．Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＡＴＣＣ＃ＢＡＡ−１７０５
９．Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＡＴＣＣ＃７００６０３
１０．Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、ＪＭＩコレクション株、表５を参照
１１．Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ  ＡＴＣＣ＃２５２３８
１２．Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ  ＡＴＣＣ＃４９１４３
１３．Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、ＪＭＩコレクション株、表５を参照
１４．Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  ＡＴＣＣ４９２４７
１５．Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ（Ｒｄ１  ＫＷ２０）ＡＴＣＣ５１９０７
１６．Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  Ｒｄ０８９４（ＡｃｒＡ−）
１７．Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、ＪＭＩコレクション株、表５を参照
１８．Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡＯ１
１９．Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、ＪＭＩコレクション株、表５を参照
２０．Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｍｉｒａｂｉｌｉｓ、ＪＭＩコレクション株、表５を参照
２１．Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａｅ、ＪＭＩコレクション株、表５を参照
２２．Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ  ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−８４
２３．Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ  ＡＴＣＣ１３６３７  。
【０２１４】
接種物プレップ：
１．ＢＢＬ  Ｐｒｏｍｐｔキットを用いて、寒天培地において増殖した培養物から５個の大型または１０個の小型の十分に離間したコロニーをつついて、キットに添えられた１ｍＬ無菌食塩水に接種した。
２．約３０秒間ウェルをボルテックスし、約１０８細胞／ｍＬの懸濁液を得た。実際の密度は、この懸濁液の希釈物をプレーティングすることにより確認することができた。
３．試験する化合物のプレート毎に０．１５ｍＬの細胞を１５ｍＬ（約１０６細胞／ｍＬ）無菌ブロス（後述を参照）に移すことにより、懸濁液を１／１００希釈し、回旋して
混合した。化合物（＞８化合物）の２枚以上のプレートを試験する場合、それに応じて容積を増加させた。
４．５０μｌの細胞（約５×１０４細胞）を用いて、ブロス（後述を参照）に希釈した薬物を５０μｌ含有する各マイクロタイターウェルに接種した。
【０２１５】
薬物希釈、接種、ＭＩＣの決定：
１．全薬物／化合物ストックは通常、１００％ＤＭＳＯにおける１２．８ｍｇ／ｍＬ濃度で調製した。
２．薬物／化合物ストックを、５０μＬ  ＤＭＳＯにおいて２００×所望の最終濃度に希釈した。ＭＩＣの出発濃度が８μｇ／ｍＬ最終濃度である場合、６．２５μＬのストック＋４３．７５μＬ  ＤＭＳＯを必要とした。各２００×ストックを、新しい９６ウェルマイクロタイタープレートのカラム１の別個の列に置いた。
３．２５μＬのＤＭＳＯを、２００×化合物ストックを含有するマイクロタイタープレートの全列のカラム２〜１２に添加し、カラム１の２５μＬをカラム１１まで系列的に希釈し、カラム毎にチップを交換した。即ち、２５μＬ化合物＋２５μＬ  ＤＭＳＯ＝２×希釈。対照のため、系列の最後に「化合物なし」ＤＭＳＯウェルを残した。
４．試験した株毎に、マトリックスピペッターを用いて５０μＬのＭＨＩＩブロスを有する２枚のマイクロタイタープレートを調製した。
５．５０μｌの細胞の添加前に、５０μＬの培地／マイクロタイターウェルに０．５μＬの各希釈物を移した（ｗ／マトリックス自動ピペッター）。化合物の通常の出発濃度は、培地＋細胞に１／２００希釈した後、８μｇ／ｍＬであった  −  化合物濃度は、マイクロタイタープレートの列にわたり２×ステップで減少した。全ＭＩＣは、２連で行った。
６．全ウェルに、５０μｌの希釈細胞懸濁液（前述を参照）を接種して、最終容積１００μｌとした。
７．接種物を添加した後、各ウェルを手動の多チャネルピペッターにより徹底的に混合した。同一マイクロタイタープレートにおける低濃度から高濃度の薬物に向かう場合、同一チップを用いた。
８．プレートを３７℃で少なくとも１８時間インキュベートした。
９．１８時間後にｔｅｓｔ  ｒｅａｄｉｎｇ  ｍｉｒｒｏｒによりプレートを観測し、ＭＩＣを、増殖が観察されなかった（ウェルにおける光学的透明性）薬物の最低濃度として記録した。
【０２１６】
プロトコール＃３：寒天希釈方法を用いた化合物のジャイレースＭＩＣの決定
材料：
ペトリプレート６０×１５ｍｍ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃａｔ．＃１２５６７１００）
遠心分離チューブ、１５ｍＬ（Ｃｏｓｔａｒ）
ＢＢＬ  Ｐｒｏｍｐｔ接種システム（Ｆｉｓｈｅｒ  ｂ２６３０６）
細菌を画線してシングルコロニーとした寒天プレート、新たに調製
無菌ＤＭＳＯ
ＧａｓＰａｋ（商標）インキュベーションコンテナ（ＢＤ  Ｃａｔ．＃２６０６７２）
ＧａｓＰａｋ（商標）ＥＺ嫌気性菌コンテナシステムサシェ（ＢＤ  Ｃａｔ．＃２６０６７８）
ＧａｓＰａｋ（商標）ＥＺ  Ｃ０２コンテナシステムサシェ（ＢＤ  Ｃａｔ．＃２６０６７９）
ＧａｓＰａｋ（商標）ＥＺ  Ｃａｍｐｙコンテナシステムサシェ（ＢＤ  Ｃａｔ．＃２６０６８０）  。
【０２１７】
株：
１．Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ  ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−１３８２；
２．Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、ＣＭＩコレクション株、表４を参照
３．Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、ＣＭＩコレクション株、表４を参照
４．Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓおよびＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｓｐｐ．、ＣＭＩコレクション株、表４を参照
５．Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｐ．、ＣＭＩコレクション株、表４を参照
６．Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、ｓｐｐ．、ＣＭＩコレクション株、表４を参照
７．Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ  ｓｐｐ．、ＣＭＩコレクション株、表４を参照
８．Ｎ．  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ  ＡＴＣＣ  ３５５４１
９．Ｎ．  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ  ＡＴＣＣ  ４９２２６
１０．Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、ＪＭＩコレクション株、表４を参照
１１．Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、ＪＭＩコレクション株、表４を参照  。
【０２１８】
培地調製および増殖条件：
ＣＬＳＩ刊行物「Ｍ１１−Ａ７  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  ｏｆ  Ａｎａｅｒｏｂｉｃ  Ｂａｃｔｅｒｉａ；  Ａｐｐｒｏｖｅｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  −  第７版（２００７年）」に従って、各微生物種に推奨される増殖培地を調製したが、例外として、Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅおよびＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの培地は、「Ｍ０７−Ａ８  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｌｕｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｓ  ｆｏｒ  Ｂａｃｔｅｒｉａ  ｔｈａｔ  Ｇｒｏｗ  Ａｅｒｏｂｉｃａｌｌｙ；  Ａｐｐｒｏｖｅｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄ−−第８版（２００９年）」に従って調製した。
【０２１９】
プレート注液：
１．表１に記載されている各被験化合物の１００×薬物ストックを調製した。１５ｍＬ遠心分離チューブを用いて、１００μＬの各薬物ストックを、１０ｍＬの融解した寒天（水浴において約５５℃まで冷却）に添加した。チューブを２〜３回反転することにより混合し、次に、個々にラベル付けした６０×１５ｍｍペトリ皿に注ぎ入れた。
２．慣用的な試験濃度：０．００２μｇ／ｍＬ〜１６μｇ／ｍＬ（１４プレート）であった。
３．４枚の薬物不含プレートを注いだ：２枚は陽性対照、２枚は好気的対照。
４．プレートを乾かした。同日に使用、あるいはＲＴで一晩保存、あるいは最大３日間４℃で保存した。
５．薬物濃度および株の配置に従ってプレートにラベル付けした。
【０２２０】
嫌気的環境の維持を必要とする細胞の増殖：
１．嫌気細菌を用いて行った全作業は、可能な限り迅速になされた。バイオセーフティーキャビネット内（即ち、好気的環境）で行う作業は、細胞を嫌気チャンバーに戻す前に３０分未満で完了させた。
２．嫌気細菌のインキュベーションは、ＧａｓＰａｋ（商標）チャンバーを用いて達成した。大型のボックススタイルのチャンバー（ＶＷＲ９０００３−６３６）は、２個の嫌気的サシェ（ＶＷＲ９０００３−６４２）を必要としたが、背の高いシリンダースタイルのチャンバー（ＶＷＲ９０００３−６０２）は、１個のサシェしか必要としなかった。
【０２２１】
プレート接種（バイオセーフティーキャビネット内で行った）：
１．上に記載されている個々の寒天プレート上に各株を画線した。要求される時間および環境条件（即ち、嫌気性、微好気性等）でインキュベートした。
２．直接的なコロニー懸濁方法を用いて、白金耳量の新たに画線した細胞を、約４ｍＬの０．９％ＮａＣｌ２に懸濁して、ボルテックスした。
３．懸濁液をＯ．Ｄ．６００  ０．０５（５×１０ｅ７  ｃｆｕ／ｍＬ）に調整した。ボルテックスして混合した。
４．約０．２ｍＬの調整・混合済培養物を９６ウェルプレートに移した。５つ以下の株を試験する場合、全株を共に一列に並べた。５つより多い株を試験する場合、５株以下が一列に収まるよう株をプレートに移した。このことは、小型のプレートに適合させるために必要であった。
５．多チャネルピペッターを用いて、調製した９６ウェルプレートから、各ＭＩＣ試験プレートへと０．００２ｍＬの各株をスポットした。これにより、約１×１０ｅ５  ｃｆｕ／スポットとなった。Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅを試験する場合、株は増殖の際にスウォーミングするが、多チャネルピペッタースポット間の距離は、スウォーミングする細胞がアッセイ結果を損なわないように、十分に開いている。
【０２２２】
ａ．２枚の薬物不含プレートを先ず接種し、一方、他の２枚の薬物不含プレートは、ＭＩＣ試験プレート後の最後に接種した。前者および後者は、増殖および接種対照とした。薬物不含対照の各セット由来の１枚のプレートを、要求される大気条件下でＭＩＣプレートと共にインキュベートし、１セットを好気的にインキュベートして、好気細菌によるコンタミネーションを試験した。厳密な嫌気性菌または微好気性株で作業した場合、好気的培養は、増殖に対し陰性であった。Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅの場合、ある程度の増殖が目に見えた。
６．接種物を乾燥させ（必要な限り短い時間）、次に、適切な数のサシェと共にＧａｓＰａｋにおいてひっくり返して置き、インキュベートした。
７．Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｓｐｐ．を、３７℃、５％ＣＯ２環境で２４時間インキュベートした。
【０２２３】
ＭＩＣの決定：
正確なインキュベーション時間後に試験プレートを検査し、陽性対照プレートにおける増殖の出現と比較して試験プレートにおける増殖の出現において著しい低下が生じた濃度におけるＭＩＣエンドポイントを読み取った。
【０２２４】
【表１】
2014503557.tif 000043
プロトコール４．Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属の種のためのＭＩＣの決定手順
材料
丸底９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｃｏｓｔａｒ  ３７８８）または類似物
フィルムプレートシール（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ＴｏｐＳｅａｌ−Ａ＃６００５２５０または類似物）
Ｍｉｄｄｌｅｂｒｏｏｋ  ７Ｈ１０ブロス、０．２％グリセロール含有
Ｍｉｄｄｌｅｂｒｏｏｋ  ７Ｈ１０寒天、０．２％グリセロール含有
Ｍｉｄｄｌｅｂｒｏｏｋ  ＯＡＤＣ  Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ
Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの接種物調製：
１．−７０℃に保存した調製済凍結Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓストックを用いた。Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓは、７Ｈ１０ブロス＋１０％ＯＡＤＣにおいて増殖させ、次に１００  Ｋｌｅｔｔまたは５×１０７ｃｆｕ／ｍｌの濃度で凍結した。
２．１ｍｌの凍結ストックを取り出し、これを１９ｍｌの７Ｈ１０ブロス＋１０％ＯＡＤＣに添加することにより、１：２０希釈物を調製した（最終濃度２．５×１０６ｃｆｕ／ｍｌ）。
３．この希釈物から、第二の１：２０希釈物を調製した、即ち、１ｍｌを取り出して、これを１９ｍｌの新鮮ブロスに添加した。これが、９６ウェルプレートに添加するための最終接種物である。
【０２２５】
Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ、Ｍ．ａｖｉｕｍ、Ｍ．ａｂｓｃｅｓｓｕｓおよびＮｏｃａｒｄｉａ  ｓｐｃ．の接種物調製：
１．１０  Ｋｌｅｔｔまたは５×１０７／ｍｌの濃度の、７Ｈ１０ブロスにおいて増殖した培養物の調製済凍結ストックまたは新鮮培養物を用いた。
２．１．０ｍｌの培養ストックを取り出し、これを１９ｍｌの７Ｈ１０ブロスに添加することにより、１：２０希釈物を調製した（最終濃度２．５×１０６ｃｆｕ／ｍｌ）。
３．この希釈物から、１：２０希釈物を調製した、即ち、１ｍｌを取り出し、これを１９ｍｌの新鮮ブロスに添加した（最終懸濁液）。
【０２２６】
プレート調製：
１．プレートにラベル付けした。
２．多チャネル電子ピペッターを用いて、５０μｌの７Ｈ１０ブロス＋１０％ＯＡＤＣを、ＭＩＣの決定に利用されている全ウェルに添加した。
３．試験する薬物のストック溶液（例えば、１ｍｇ／ｍｌ濃度）を調製した。
４．凍結ストック溶液を解凍し、７Ｈ１０ブロス＋１０％ＯＡＤＣを用いて希釈して、作業溶液（ｗｏｒｋｉｎｇ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）４×被験最大濃度を得た（例えば、最終濃度３２μｇ／ｍｌ、被験最高濃度８μｇ／ｍｌ）。ストック溶液から希釈物を作製した。１μｇ／ｍｌの濃度から出発するために４μｇ／ｍｌの薬物を調製し、これにより出発濃度は１μｇ／ｍｌとなった。１ｍｇ／ｍｌストックの２５μｌを取り出し、６．２ｍｌのブロスに添加した。薬物の全希釈は、ブロスにおいて行った。
５．５０μｌの４×作業溶液を、指定の列の第一のウェルに添加した。試験する全化合物に対し継続した。多チャネル電子ピペッターを用いて、４×を混合し、１１番目のウェルまで化合物を系列希釈した。残った５０μｌを廃棄した。１２番目のウェルを陽性対照として用いた。
６．Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓは、約１８日間；Ｍ．ａｖｉｕｍおよびＭ．ｋａｎｓａｓｉｉは、約７日間；ＮｏｃａｒｄｉａおよびＭ．ａｂｃｅｓｓｕｓは、約４日間、プレートをフィルムシールして３７℃でインキュベートした。
７．結果を視覚的に読み取り、記録した。増殖が観察されなかった（ウェルにおける光学的透明性）薬物の最低濃度としてＭＩＣを記録した。
【０２２７】
プロトコール５．Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ血清シフトＭＩＣアッセイのプロトコール
材料および試薬：
Ｃｏｓｔａｒ＃３９０４  側面が黒色の平底９６ウェルマイクロタイタープレート
Ｍｉｄｄｌｅｂｒｏｏｋ  ７Ｈ９ブロス（ＢＤ２７１３１０）、０．２％グリセロール含有
Ｍｉｄｄｌｅｂｒｏｏｋ  ＯＡＤＣ  Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ
ウシ胎仔血清
カタラーゼ（Ｓｉｇｍａ  Ｃ１３４５）
デキストロース
ＮａＣｌ２
ＢＢＬ  Ｐｒｏｍｐｔ接種システム（Ｆｉｓｈｅｒ  ｂ２６３０６）
寒天プレート（Ｍｉｄｄｌｅｂｒｏｏｋ  ７Ｈ１１、０．２％グリセロールおよびＯＡＤＣ  ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ含有）、細菌を画線してシングルコロニーとした
無菌ＤＭＳＯ  。
【０２２８】
培地プレップ：
１．血清シフトＭＩＣのため、すべて７Ｈ９＋０．２％グリセロールの基剤を有する３種の異なる培地が必要とされる。あらゆる培地およびサプリメントをＭＩＣ前に滅菌することが重要であった。
２．下の全培地を調製し、次のセクションに記載されている通りに接種した。各培地を用いて全化合物をＭｔｂに対し試験した。
【０２２９】
ａ．７Ｈ９＋０．２％グリセロール＋１０％ＯＡＤＣ（「標準」ＭＩＣ培地）。
【０２３０】
ｂ．７Ｈ９＋０．２％グリセロール＋２ｇ／Ｌデキストロース＋０．８５ｇ／Ｌ  ＮａＣｌ＋０．００３ｇ／Ｌカタラーゼ（０％ＦＢＳ）。
【０２３１】
ｃ．２×７Ｈ９＋０．２％グリセロール＋２ｇ／Ｌデキストロース＋０．８５ｇ／Ｌ  ＮａＣｌ＋０．００３ｇ／Ｌカタラーゼ、等容積のウシ胎仔血清（５０％ＦＢＳ）と合わせる。
【０２３２】
接種物プレップ：
１．ＢＢＬ  Ｐｒｏｍｐｔを用いて、５〜１０個の十分に離間したコロニーをつついて、キットに添えられた１ｍｌの無菌食塩水に接種した。この生物は培養物において増殖が遅いため、通例、プレートは、本アッセイに用いるときには培養２〜３週間経過したものである。
２．十分にボルテックスし、次に水浴において３０秒間超音波処理して、約１０８細胞／ｍｌの懸濁液を得た。実際の密度は、この懸濁液の希釈物のプレーティングにより確認することができた。
３．ＢＢＬ  Ｐｒｏｍｐｔ懸濁液を１／２００希釈することにより（例えば、０．２ｍｌの細胞を４０ｍｌの培地に移し）、３種の培地処方物それぞれにおいて接種物を調製して、約１０６細胞／ｍｌの出発細胞密度を得た。
４．１００μｌの細胞（約５×１０４細胞）を用いて、１μｌのＤＭＳＯに溶解させた薬物（後述を参照）を含有する各マイクロタイターウェルに接種した。
【０２３３】
薬物希釈、接種、ＭＩＣの決定：
１．対照薬物ストック、イソニアジドおよびノボビオシンは、１００％ＤＭＳＯにおける１０ｍＭで調製し、一方、シプロフロキサシンおよびリファンピンは、それぞれ５０％ＤＭＳＯおよび１００％ＤＭＳＯにおいて１ｍＭで調製した。希釈物の調製  −  １００μＬのストック溶液を、９６ウェルプレートの第一のカラムに分注した。カラム１の５０μｌを、カラム２における５０μｌのＤＭＳＯに移すことにより、化合物毎に列にわたり、１１ステップの２倍系列希釈物を調製した。混合し、カラム毎にチップを交換しつつ、引き続きカラム２の５０μＬをカラム１１まで移した。対照としてカラム１２をＤＭＳＯのみのまま残した。
２．１００μｌの細胞の添加前に、１μｌの各希釈物を空のマイクロタイターウェルに移した。イソニアジドおよびノボビオシンの出発濃度は、培地＋細胞に希釈した後に１００μＭであった。シプロフロキサシンおよびリファンピンの出発濃度は、培地＋細胞に希釈した後に１０μＭであった。化合物濃度は、マイクロタイタープレートの列にわたり進む毎に２×ステップで減少した。全ＭＩＣは、３種の培地条件のそれぞれにおいて２連で行った。
３．化合物の試験セットは通例、１０ｍＭおよび５０μＬ容積であった。
４．多チャネルピペッターを用いて、マスタープレートの各カラムから全容積を取り出し、新しい９６ウェルマイクロタイタープレートの第一のカラムに移した。マスタープレートにおける化合物の各カラムについて反復し、新しい９６ウェルプレートのカラム１に移した。
５．対照化合物に関して上に記載されている通り、ＤＭＳＯを希釈剤として用いて、各化合物の２倍、１１点の希釈物を作製した。全事例において、対照のためカラム１２はＤＭＳＯのみとして残した。全希釈を完了した後、１００μｌの細胞の添加前に、対照化合物に対してなされた通り、各希釈物の１μｌを空のマイクロタイターウェルに再度移した。
６．全ウェルを１００μｌの希釈細胞懸濁液（前述を参照）で接種した。
７．接種物を添加した後、プレートの側面を穏やかにタッピングすることによりプレートを混合した。
８．プレートを加湿した３７℃チャンバーにおいて９日間インキュベートした。
９．９日目に、２５μｌの０．０１％無菌レサズリンを各ウェルに添加した。励起４９２ｎｍ、発光５９５ｎｍでバックグラウンド蛍光を測定し、プレートをさらに２４時間インキュベーターに戻した。
【０２３４】
２４時間後、励起４９２ｎｍ、発光５９５ｎｍで各ウェルの蛍光を測定した。
【０２３５】
所定の化合物によるパーセント阻害を次の通りに計算した。パーセント阻害＝１００−（［ウェル蛍光−平均バックグラウンド蛍光］／［ＤＭＳＯ対照−平均バックグラウンド蛍光］×１００）。全３種の培地条件に対し、所定の培地条件においてレサズリンの還元シグナルを≧７０％阻害する最低化合物濃度（「％−阻害」）としてＭＩＣを点数化した。
【０２３６】
表２は、本発明の選択された化合物のためのＭＩＣアッセイの結果を示す。
【０２３７】
表２ならびにその後の表および実施例において、「化合物１２」は、１−エチル−３−［５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素に相当し、「化合物１３」は、化合物１２のメシル酸塩に関する。同様に、「化合物２３」は、１−エチル−３−［６−フルオロ−５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素に相当し、「化合物２３Ａ」は、化合物２３のメシル酸塩に関する。これらは、上の実施例で用いられる前記化合物および塩の同定に用いたものと同じ番号である。
【０２３８】
【表２−１】
2014503557.tif 000044
【０２３９】
【表２−２】
2014503557.tif 000045
【０２４０】
【表２−３】
2014503557.tif 000046
表３は、本発明の選択された化合物のＭＩＣ９０アッセイの結果を示す。
【０２４１】
【表３−１】
2014503557.tif 000047
【０２４２】
【表３−２】
2014503557.tif 000048
表３Ａも、本発明の選択された化合物のＭＩＣアッセイの結果を示す。表３Ａにおいて、「化合物２３Ａ」は、１−エチル−３−［６−フルオロ−５−［２−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ピリミジン−５−イル］−７−［（２Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］尿素（２３Ａ）のメタンスルホン酸塩に相当する。同様に、「化合物Ｗ」は、（Ｒ）−２−（５−（２−（３−エチルウレイド）−６−フルオロ−７−（テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−イル）ピリミジン−２−イル）プロパン−２−イルリン酸二ナトリウム（Ｗ）に相当する。これらは、上の合成実施例における前記化合物の同定に用いたものと同じ番号である。
【０２４３】
【表３Ａ】
2014503557.tif 000049
下の表４において、用語「ＣＭＩ」は、オレゴン州ウィルソンヴィルに位置するＴｈｅ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅの略である。
【０２４４】
【表４−１】
2014503557.tif 000050
【０２４５】
【表４−２】
2014503557.tif 000051
【０２４６】
【表４−３】
2014503557.tif 000052
【０２４７】
【表４−４】
2014503557.tif 000053
【０２４８】
【表４−５】
2014503557.tif 000054
【０２４９】
【表４−６】
2014503557.tif 000055
【０２５０】
【表４−７】
2014503557.tif 000056
下の表５において、用語「ＪＭＩ」は、アイオワ州ノースリバティーに位置するＴｈｅ  Ｊｏｎｅｓ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅの略である。
【０２５１】
【表５−１】
2014503557.tif 000057
【０２５２】
【表５−２】
2014503557.tif 000058
【０２５３】
【表５−３】
2014503557.tif 000059
【０２５４】
【表５−４】
2014503557.tif 000060
【０２５５】
【表５−５】
2014503557.tif 000061
【０２５６】
【表５−６】
2014503557.tif 000062
【０２５７】
【表５−７】
2014503557.tif 000063
【０２５８】
【表５−８】
2014503557.tif 000064
【０２５９】
【表５−９】
2014503557.tif 000065
【０２６０】
【表５−１０】
2014503557.tif 000066
【０２６１】
【表５−１１】
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【０２６２】
【表５−１２】
2014503557.tif 000068
【０２６３】
【表５−１３】
2014503557.tif 000069
【０２６４】
【表５−１４】
2014503557.tif 000070
【０２６５】
【表５−１５】
2014503557.tif 000071
【０２６６】
【表５−１６】
2014503557.tif 000072
（実施例３２）
マウスＳ．ａｕｒｅｕｓ腎感染モデル
動物：Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから雌ＣＤ−１マウス（８〜１０週齢；６匹／群）を入手し、実験動物の管理および使用に関する指針（Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ａｎｉｍａｌｓ）にしたがって収容および維持した。
【０２６７】
細菌株およびストック
アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関からメチシリン感受性Ｓ．ａｕｒｅｕｓ（ＭＳＳＡ）株ＡＴＣＣ２９２１３を入手した。動物研究のためのストックを調製するため、Ｓ．ａｕｒｅｕｓをＭｕｅｌｌｅｒ  Ｈｉｎｔｏｎ寒天プレート上にプレーティングし、３７℃で一晩インキュベートした。プレートの３〜４個のコロニーを用いて、５ｍＬのＭｕｅｌｌｅｒ  Ｈｉｎｔｏｎブロス（ＭＨＢ）に接種し、これを３００ＲＰＭで振盪しつつ８時間３７℃でインキュベートした。５ｍＬの８時間培養物を、１００ｍＬに２０倍希釈し、一晩（１２〜１４時間）インキュベートした。細菌を２０分間３０００ｘでペレットにし、０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有するリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄した。ＰＢＳ／２０％グリセロール中に約１×１０１０ｃｆｕを含有するアリコート（１ｍＬ）を凍結し、使用日まで−８０℃で保存した。系列希釈し、Ｍｕｅｌｌｅｒ  Ｈｉｎｔｏｎ寒天プレート上にプレーティングすることにより、ストック力価を確認した。
【０２６８】
マウスＳ．ａｕｒｅｕｓ腎感染モデル
接種前に、細菌ストックを解凍し、ＰＢＳ／ＢＳＡで１回洗浄した。次にストックを最終濃度１×１０９ｃｆｕ／ｍＬとなるようＰＢＳ／ＢＳＡで希釈して、１００μＬ容積においてマウス１匹につきおよそ１〜２×１０８ｃｆｕの接種物を得た。１０６〜１０９Ｓ．ａｕｒｅｕｓ生物／マウスの攻撃誘発用量を利用して、感染後２６時間目に死亡なしで約１０６ｃｆｕ／腎臓負荷を確立した予備実験（データ図示せず）において、この接種物が最適であることが見出された。これらの予備研究において、１０７ｃｆｕ／マウス未満のＳ．ａｕｒｅｕｓによる攻撃誘発は、一貫性がない感染を誘導したか慢性感染症を誘導しなかったが、一方、１０９ｃｆｕ／マウスの用量は、高い百分率のマウスにおいて急速な疾病および死亡をもたらした。無菌３０ゲージ針を用いて、尾静脈を介した静脈内注射を行った。マウス感染を完了した後、マウスへの攻撃誘発に用いた細菌ストックをプレーティングし、計数して、接種物の濃度を検証した。
【０２６９】
表示の感染後時間（最も一般的には２〜２６時間）における細菌負荷を評価するため、マウスを安楽死させて、腎臓を無菌的に回収し、無菌ＰＢＳ／ＢＳＡ（５ｍＬ／腎臓対）に置いた。手持ち式ホモジナイザー（Ｐｏｗｅｒｇｅｎ  １２５；Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて無菌条件下で腎臓をホモジナイズした。収集および均質化において、全試料を氷上に維持し、ホモジナイザーは、各試料の間に徹底的に洗浄して滅菌した。ホモジネートを無菌ＰＢＳ／ＢＳＡに系列的に希釈し、ＭＨ寒天上にプレーティングして、腎臓対当たりの細菌計数を決定した。
【０２７０】
【表６】
2014503557.tif 000073
ＣＤ−１マウス（６匹／群）を、２×１０８ｃｆｕ／マウスのＳ．ａｕｒｅｕｓ（ＡＴＣＣ２９２１３）によりＩＶで攻撃誘発した。攻撃誘発から２時間後、経口経管栄養により、１０ｍｌ／ｋｇのビヒクル（１０％ＶｉｔＥ  ＴＰＧＳ）または１０、３０、１００ｍｇ／ｋｇの化合物２３Ａでマウスを治療した。３０分間および６時間治療群は、１回治療したが、２４時間群には、１回目の用量の１０時間後に２回目の治療を与えた。増加量の治療後時間後（３０分間、６時間または２４時間）、マウスを安楽死させ、腎臓を回収し、ホモジナイズし、プレーティングして、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ負荷を定量化した。各マウスの腎臓対から得られる負荷およびマウス各群のメジアンを計算した。
【０２７１】
結果：経口投与した化合物２３Ａは、実験的に誘導された腎臓ＭＳＳＡ（ＳＡ２９２１３）感染に対するｉｎ  ｖｉｖｏ効力を提示した。最初の治療後３０分目に、化合物およびビヒクル治療マウスの間で腎臓負荷における差はなかった。３０分間のビヒクル治療群は、より後の時点における化合物効果の比較のための初期対照とした。１回目の用量後６時間目に、全ての化合物での治療は、腎臓における細菌負荷を、時間が一致したビヒクル対照と対比して０．４〜０．６ｌｏｇ低下させた。その上、３０および１００ｍｇ／ｋｇで投与した化合物２３Ａは、３０分間の初期対照と対比して０．３〜０．４ｌｏｇ低下を生じた。
【０２７２】
２４時間の治療期間（１０時間目に投与した治療の２回目の用量を包含する）の後、全治療群に対し、時間が一致したビヒクル対照と比較した細菌密度の減少が観察された。３０および１００ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤで投与した化合物２３Ａは、２．８〜２．９ｌｏｇ低下を生じたが、一方、１０ｍｇ／ｋｇ化合物２３Ａ  ＢＩＤは、より可変的であり、２４時間ビヒクル治療対照と対比して１．８ｌｏｇ低下を生じた。加えて、３０および１００ｍｇ／ｋｇで投与した化合物２３Ａは、３０分間ビヒクル治療対照と対比しておよそ１．５ｌｏｇ低下を示し、殺菌活性を示した。
【０２７３】
要約すると、また上の表６に示す通り、３０および１００ｍｇ／ｋｇ化合物２３ＡのＢＩＤ投薬は、６時間および２４時間評価時間の両方において、３０分間対照群と比較してメチシリン感受性Ｓ．ａｕｒｅｕｓ（ＭＳＳＡ）株ＡＴＣＣ  ２９２１３の細菌増殖を縮小させ、一方、１０ｍｇ／ｋｇ化合物２３Ａによる治療は、６時間目の細菌増殖を制限したが、２４時間目の他の治療群よりも有効性が低かった。
【０２７４】
【表７】
2014503557.tif 000074
ＣＤ−１マウス（６匹／群）を、２×１０８ｃｆｕ／マウスのＳ．ａｕｒｅｕｓ（ＡＴＣＣ２９２１３）によりＩＶで攻撃誘発した。２時間後、マウスの一群（初期対照（ＥＣ））を安楽死させ、腎臓を回収し、ホモジナイズし、プレーティングしてＳ．ａｕｒｅｕｓ負荷を定量化した。感染マウスの追加的な群を、経口経管栄養により１０ｍｌ／ｋｇのビヒクル（１０％ＶｉｔＥ  ＴＰＧＳ；後期対照、ＬＣ）、１０、３０、６０、１００ｍｇ／ｋｇの化合物２３Ａで治療した。２４時間後、治療マウスの群を安楽死させ、腎臓を回収し、ホモジナイズし、プレーティングして、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ負荷を定量化した。各マウスの腎臓対の負荷およびマウス各群のメジアンをまとめた。
【０２７５】
結果：要約すると、また上の表７に示す通り、単一経口用量の化合物２３Ａは、実験的に誘導された腎臓ＭＳＳＡ（ＳＡ２９２１３）感染に対するｉｎ  ｖｉｖｏ効力を提示した。２４時間後、全治療は、時間が一致したビヒクル対照と比較して細菌密度の減少を示した。化合物２３Ａは、１０、３０、６０または１００ｍｇ／ｋｇで投与した場合、ビヒクル対照と対比して１．９、２．３、３．１および３．３ｌｏｇ低下の用量依存性低下を実証した。加えて、６０および１００ｍｇ／ｋｇ化合物２３Ａの用量は、初期対照と対比して細菌負荷を１．２〜１．４ｌｏｇ低下させ、化合物２３Ａが殺菌活性を有することを示唆した。
【０２７６】
【表７Ａ】
2014503557.tif 000075
ＣＤ−１マウス（８匹／群）を、２×１０８ｃｆｕ／マウスのＳ．ａｕｒｅｕｓ（ＡＴＣＣ２９２１３）によりＩＶで攻撃誘発した。２時間後、マウスの一群（初期対照（ＥＣ））を安楽死させ、腎臓を回収し、ホモジナイズし、プレーティングしてＳ．ａｕｒｅｕｓ負荷を定量化した。感染マウスの追加的な群を、経口経管栄養により１０ｍｌ／ｋｇのビヒクル（水；後期対照、ＬＣ）で治療し、１０、３０、６０、１００ｍｇ／ｋｇにおける完全な変換の際の活性部分用量当量である、１０、３０、６０または１００ｍｇ／ｋｇの化合物２３Ａを送達すると予想される、１６、４９、９９または１６６ｍｇ／ｋｇの名目上（ｎｏｍｉｎａｌ）用量レベルで化合物Ｗを投与した。２４時間後、治療マウスの群を安楽死させ、腎臓を回収し、ホモジナイズし、プレーティングして、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ負荷を定量化した。各マウスの腎臓対の負荷およびマウス各群のメジアンをまとめた。
【０２７７】
結果：要約すると、また上の表８に示す通り、単一経口用量の化合物Ｗは、実験的に誘導された腎臓ＭＳＳＡ（ＳＡ２９２１３）感染に対するｉｎ  ｖｉｖｏ効力を提示した。２４時間後、全ての治療は、時間が一致したビヒクル対照と比較して細菌密度の減少を示した。化合物Ｗは、１０、３０、６０または１００ｍｇ／ｋｇ化合物２４と同等な曝露をもたらす１６、４９、９９および１６６ｍｇ／ｋｇで投与した場合、ビヒクル対照と対比して、１．９、２．３、２．７、２．６および３．０ｌｏｇ低下の用量依存性低下を実証した。加えて、１６、４９、９９および１６６ｍｇ／ｋｇ化合物Ｗの用量は、初期対照と対比して細菌負荷を０．７〜１．５ｌｏｇ低下させ、化合物２３Ａが殺菌活性を有することを示唆した。
【０２７８】
（実施例３３）
好中球減少性ラット大腿感染モデル
動物：Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（マサチューセッツ州ウィルミントン）から、７６〜１００グラムの間の重さがある、特定病原体除去、雄スプラーグドーリーラットを入手し、本実験において利用した。研究開始前に動物を最小７日間順化させた。
【０２７９】
細菌：メチシリン感受性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＳＳＡ）ＡＴＣＣ株２９２１３をｉｎ  ｖｉｖｏ実験に利用した。標準微生物学的寒天培地（トリプチケースソイ寒天、５％ヒツジ血液含有）において、被験分離株を２回継代培養した。２回目の移し換えは、大腿感染モデル接種物の調製における使用前の２４時間未満に行った。
【０２８０】
好中球減少性ラット大腿感染モデル：好中球減少症を誘導するため、ラットを、感染３日前に１ｍｌで腹腔内（ＩＰ）注射により投与した、１５０ｍｇ／ｋｇの免疫抑制剤シクロホスファミドで治療した。ノーマルセーラインにおける１０７ｃｆｕ／ｍｌメチシリン感受性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  ２９２１３懸濁液による、両後肢の大腿への筋肉内（ＩＭ）０．２ｍｌ注射により、ラットを感染した。増加量の時間の後（２〜２６時間）、各動物の２本の後肢の大腿を回収し、無菌食塩水でリンスし、秤量し、次に、５０ｍｌ無菌ノーマルセーラインに置き、均質化まで湿った氷（ｗｅｔ  ｉｃｅ）の上に置いた。ホモジナイズした試料の総容積のおよそ半分を、孔の大きいフィルターに通し（軟骨および大型の凝集組織片を除去するため）、食塩水に希釈し、寒天培地プレート（トリプチケースソイ寒天、５％ヒツジ血液含）上で培養した。全培養プレートをおよそ３７℃で１８〜２４時間インキュベートした。コロニー形成単位を数え上げ（ホモジネートのｃｆｕ／ｍｌで）、各治療および対照群のメジアンを計算した。通例、各群は、ｎ＝６を有した。各大腿は、別々の数と考慮した。一群当たりのメジアンｃｆｕ／ｍｌを、２時間目の最初の細菌密度（初期対照）または同時に回収した時間が一致したビヒクル対照群（後期対照；ＬＣ）群の密度と比較した。
【０２８１】
【表８】
2014503557.tif 000076
約２×１０６ｃｆｕ／大腿のＳ．ａｕｒｅｕｓ（ＡＴＣＣ  ２９２１３）による筋肉内（ＩＭ）攻撃誘発により、好中球減少性ラット（３匹／群）を感染させた。２時間後、ラットの一群（初期対照（ＥＣ））を安楽死させ、大腿を回収し、ホモジナイズし、プレーティングして、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ負荷を定量化した。追加的な感染ラットを、経口経管栄養により、１０ｍｌ／ｋｇのビヒクル（２０％Ｃａｖｉｔｒｏｎ／１％ＨＰＭＣＡＳ−ＭＧ；後期対照、ＬＣ）または１０、３０、６０ｍｇ／ｋｇの化合物２３Ａで治療した。８時間治療群は、単一治療（ＱＤ）を与え、治療（ＱＤ）８時間後のｃｆｕ決定のために安楽死させて大腿を収集したが、２４時間治療群は、２用量を１２時間空けて（ｑ１２ｈ）与え、治療２４時間後に安楽死させて大腿を収集した。各々個別の大腿の負荷を決定し、３匹のラットの群のｃｆｕ／ｍｌおよびメジアンをまとめた。
【０２８２】
結果：上の表８に示す通り、経口投与した化合物２３Ａは、ＭＳＳＡ（ＳＡ  ２９２１３）に対するｉｎ  ｖｉｖｏ効力を提示した。１回目の用量の後８時間目に、全群は、時間が一致した対照と比較して負荷が低下し、１０ｍｇ／ｋｇの化合物２３Ａに対し約１．３ｌｏｇ低下、３０および６０ｍｇ／ｋｇの化合物２３Ａに対し約２ｌｏｇ低下した。初期対照と比較すると、１０ｍｇ／ｋｇの化合物２３Ａは、少なくとも静止点までＳＡ  ２９２１３の細菌増殖を保持し、一方、６０および１００ｍｇ／ｋｇの化合物２３Ａは、細菌負荷を約０．５〜０．６ｌｏｇだけ僅かに減少させた。
【０２８３】
２４時間後および１２時間目に投与した治療の２回目の用量の後、全治療群に関し約２．４〜２．８ｌｏｇの後期対照と比較した細菌密度の減少が観察された。初期対照と比較して、１０ｍｇ／ｋｇの化合物２３Ａに対しおよそ０．８ｌｏｇ低下が観察されたが、３０および６０ｍｇ／ｋｇの化合物２３Ａは、約１．１〜１．２ｌｏｇ低下をもたらした。ｓ
【０２８４】
【表９】
2014503557.tif 000077
筋肉内（ＩＭ）攻撃誘発により、約２×１０６ｃｆｕ／大腿のＳ．ａｕｒｅｕｓ（ＡＴＣＣ  ２９２１３）で好中球減少性ラット（３匹／群）を感染させた。２時間後、ラットの一群（初期対照（ＥＣ））を安楽死させ、大腿を回収し、ホモジナイズし、プレーティングして、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ負荷を定量化した。追加的な感染ラットを、経口経管栄養により、１０ｍｌ／ｋｇのビヒクル（１０％ビタミンＥ／ＴＰＧＳ；後期対照、ＬＣ）または３０、６０、１００ｍｇ／ｋｇの化合物１３で治療した。８時間治療群に、単一治療（ＱＤ）を与え、治療（ＱＤ）８時間後にｃｆｕ決定のため安楽死させて大腿を収集し、一方、２４時間治療群は、１２時間空けて（ｑ１２ｈ）２用量を与え、治療２４時間後に安楽死させて大腿を収集した。各々個別の大腿の負荷を決定し、３匹のラットの群のｃｆｕ／個々の大腿およびメジアンを各群についてまとめた。
【０２８５】
結果：上の表９に示す通り、経口投与した化合物１３は、ＭＳＳＡ（ＳＡ  ２９２１３）に対するｉｎ  ｖｉｖｏ効力を提示した。３種の治療群の間で抗菌活性の程度の差が見られた。１回目の用量後８時間目に、全群は、時間が一致した対照と比較して負荷が低下し、１０ｍｇ／ｋｇの化合物１３は、約１．５ｌｏｇ低下し、６０および１００ｍｇ／ｋｇの化合物１３は、約１．７および１．８ｌｏｇ低下した。１回目の用量後８時間目に、１０ｍｇ／ｋｇの化合物１３は、少なくとも静止点までＳＡ２９２１３の細菌増殖を保持し、一方、６０および１００ｍｇ／ｋｇの化合物１３は、初期対照と対比して細菌負荷をそれぞれ約０．４および約０．５ｌｏｇだけ僅かに減少させた。２４時間後かつ１２時間目に投与した治療の２回目の用量の後に、６０および１００ｍｇ／ｋｇの化合物１３により、初期対照と比較して細菌密度のおよそ１ｌｏｇの減少を提示した。対照的に、３０ｍｇ／ｋｇで投与した化合物１３は、初期対照よりも平均０．３ｌｏｇ高い可変性ｃｆｕレベルにより有効でないと思われた。しかし、全用量レベルは、後期対照と比較して細菌密度を減少させた。１０ｍｇ／ｋｇ治療群に対し約１．１ｌｏｇの低下が観察されたが、一方、６０および１００ｍｇ／ｋｇ用量レベルに対し２．８５および約３ｌｏｇの低下が観察された。
【０２８６】
要約すると、６０および１００ｍｇ／ｋｇ化合物１３のｑ１２ｈ用量は、８時間および２４時間両方の評価時間において、最初の対照群と比較してＳＡ  ２９２１３の細菌増殖を縮小し、一方、３０ｍｇ／ｋｇによる治療は、８時間目に細菌増殖を制限したが、２４時間目には他の治療群よりも有効性が低かった。
【０２８７】
（実施例３４）
ラットにおける７日間経口（経管栄養）毒性および毒物動態学研究
本研究の目的は、１）雄ラットに７連続日にわたり、経管栄養により経口投与した場合の化合物１３および化合物２３Ａの潜在的な毒性を評価し、２）１回目および７回目の用量の後に化合物１３および化合物２３Ａの毒物動態学を評価することである。
【０２８８】
動物
種、供給源、病歴および正当化
ニューヨーク州ストーンリッジのＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからＣｒｌ：ＣＤ（ＳＤ）ラットを入手した。動物は、研究室で飼育され、実験的に未処置であった。非臨床毒性評価に一般的に用いられる種であるため、ラットを選んだ。
【０２８９】
数、性別、年齢および体重範囲
４０匹のラット（２０匹の非カニューレ処置雄および頸静脈カニューレを備える２０匹の雄）を注文した。これらの動物から、１５匹の非カニューレ処置雄および１５匹のカニューレ処置雄を用いた。動物は、可能な限り齢が均一であった。ラットは、思春期前から若年成体であり、投薬開始においておよそ９週齢であった。これらの供給者が計算した生年月日を研究記録に保持した。群への割り付け時点における動物の重量範囲は、２１８．５〜３０６．３ｇであった。
【０２９０】
研究デザイン
下の表１０に示す通り、ラットを割り当てた。動物に、経口経管栄養により７連続日被験物またはビヒクルを与え、投薬完了の翌日に屠殺した。投薬の最初の日を研究１日目と指定した。臨床徴候、体重および後述する他のパラメータの変化に関して動物を評価した。
【０２９１】
【表１０】
2014503557.tif 000078
経路／用量
経口経管栄養により１日１回を７連続日、用量容積１０ｍＬ／ｋｇ体重でそれぞれ群Ａおよび群Ｂ〜Ｄに、ビヒクルおよび被験物を投与した。経口経管栄養によりおよそ８時間空けて１日２回を７連続日、用量容積１０ｍＬ／ｋｇ体重でそれぞれ群Ｅおよび群Ｆに、被験物およびビヒクルを投与した。各動物に投与した実際の容積を計算し、各動物の最新の体重に基づき調整した。
【０２９２】
生存中の（ｉｎ−ｌｉｆｅ）観察および測定
観察
研究の間、少なくとも朝に１回、午後に１回、少なくとも４時間空けて、生存率に関して動物を観察した。治療期間中、毎日ケージ横での（ｃａｇｅｓｉｄｅ）観察を行い、投薬前および投薬後（１回目の用量後のみ）に記録した。投薬後観察を、以前の研究由来の２種の化合物のＣｍａｘ／Ｔｍａｘに基づく次に記す時間になされた治療において行った。
【０２９３】
群Ａ〜Ｆに関し、投薬後１時間
ケージ横での観察を剖検の日に１回行った。
【０２９４】
予定外の観察
予定の観察時間以外の時に観察されたいかなる所見も、予定外の観察またはＰｒｏｖａｎｔｉｓに記録する必要があった。しかし、研究の間、異常は観察されなかった。Ｐｒｏｖａｎｔｉｓは、本技術分野において一般的に用いられる電子データ収集、管理および報告システムである。
【０２９５】
体重
投薬を始める前に、１日目に無作為化のために体重を測定した。治療において、１日目および７日目に体重を測定した。加えて、臓器／体重比の計算のため、剖検前に絶食時の体重を測定した。
【０２９６】
食物消費
研究の間、投薬開始３日前から開始して、食物消費を毎日測定した。
【０２９７】
臨床病理学評価
血液学、凝固および血清化学パラメータの評価のための血液試料を、剖検前に全動物の、後眼窩神経叢（ＣＯ２／Ｏ２麻酔下、主研究動物について）または頸静脈カニューレ（毒物動態学動物について）から収集した。毒物動態学動物のためのカニューレ開存性を維持するために用いた残留ヘパリンのため、これらラットの凝固試料は、解析することができなかった。血液収集前に動物を一晩絶食させた。臨床病理学解析のための血液収集日において血液を収集し、試料が臨床病理学群に許容されると判断するまで動物を剖検しなかった。
【０２９８】
血液学
適切な量の血液を、ＥＤＴＡ含有チューブに収集した。下の表１１に表示するパラメータに関して全血試料を解析した。
【０２９９】
【表１１】
2014503557.tif 000079
凝固
適切な量の血液を、クエン酸ナトリウムを含有するチューブに収集し、続いて遠心分離して、プロトロンビン時間（ＰＴ）および活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）決定のための血漿を得た。
【０３００】
血清化学
適切な量の血液を、抗凝固剤を含まないチューブに収集した。試料を凝血させ、続いて遠心分離して、血清を得た。下の表１２に表示するパラメータに関して血清を解析した。
【０３０１】
【表１２】
2014503557.tif 000080
毒物動態学
投薬１および７日目に、血液試料（およそ０．５ｍＬ／試料）を、下に列挙する時点において全毒物動態学動物の頸静脈カニューレから収集して、Ｋ３ＥＤＴＡ含有チューブに入れた。対照群（群Ｆ）の毒物動態学動物は、各収集日の１時間時点（その日の１回目の用量投与後の）における１回の血液収集サンプリングしか行わなかった。各収集の前にカニューレから少量の血液試料（ヘパリンブロッキング溶液含）を除去し、廃棄した。カニューレに新しいシリンジを置き、プロトコールの要求する試料を採取した。血液試料の入ったシリンジを取り外し、食塩水の入った新しいシリンジをカニューレに取り付けた。血液容積を等容積の食塩水と置き換え、次に、カニューレ内にブロッキング溶液を置いた。次の収集時点まで各動物をそのケージに戻した。
【０３０２】
本研究において収集した全試料を、ラベル付けしたコンテナ内に置いた。各ラベルは、次の情報：１）研究番号、２）動物番号、３）収集間隔、４）群および性別ならびに５）収集日を含有した。
【０３０３】
血液試料を反転することにより即座に混合し、次に湿った氷の上に置き、冷却して遠心分離（約１５００ｇ、約１０分間、約５℃）して血漿を得た。血漿を、貫通できる（ｐｉｅｒｃｅａｂｌｅ）ＴＰＥ  ｃａｐｃｌｕｓｔｅｒ保証ＲＮａｓｅ、ＤＮａｓｅフリーキャップを備える９６ウェル１．４ｍＬポリプロピレンチューブに２個のアリコートとして分割し、凍結保存した（≦−７０℃）。
【０３０４】
【表１３】
2014503557.tif 000081
屠殺
研究において瀕死であるように見えた動物はいなかった。プロトコールの定める日数の治療の後、全研究動物を安楽死させ、剖検に付した。全動物は、失血によって屠殺した（深いＣＯ２／Ｏ２麻酔下で腹部大動脈を切断）。
【０３０５】
剖検
研究において、屠殺した全動物に剖検と組織収集を行った。剖検は、次の検査を包含した。
屠殺体および筋肉／骨格系；全外表面および開口部；
頭蓋腔および脳の外表面；
首と、それに伴う臓器および組織；ならびに
胸腔、腹腔および骨盤腔と、それらに伴う臓器および組織。
【０３０６】
あらゆる異常を記載および記録した。
【０３０７】
臓器重量
予定の剖検において安楽死させた全動物に対し、腎臓、肝臓および前立腺を秤量した。秤量後、肝臓および腎臓のおよそ１グラム試料を秤量し、Ｐｒｅｃｅｌｌｙｓ７ｍＬ  ＣＫ２８組織ホモジナイズチューブ（Ｃａｔ．Ｎｏ．０９０４−０１）に移し、スナップ凍結して解析した。
【０３０８】
剖検前に得られた終末絶食時の体重を用いて臓器／身体比を計算した。
【０３０９】
組織保存および骨髄収集
下の表１４に表示する組織および臓器を全動物から収集し、精巣、精巣上体および眼を除いて１０％中性緩衝ホルマリンに保存した。精巣、精巣上体および眼と付随の視神経は、Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｄａｖｉｄｓｏｎ’ｓ溶液に約２４〜４８時間固定し、水でリンスし、次に保存のため１０％中性緩衝ホルマリンに移した。
【０３１０】
【表１４−１】
2014503557.tif 000082
【０３１１】
【表１４−２】
2014503557.tif 000083
【０３１２】
【表１４−３】
2014503557.tif 000084
組織病理学
終末的剖検を予定する全動物に対し、腎臓、肝臓および前立腺をパラフィンに包埋し、切片を作製して、光学顕微鏡検査によりさらに検査するためにヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。群Ａ、Ｄ、ＥおよびＦのみに対し、上に列挙されている残りの組織をパラフィンに包埋し、切片を作製して、光学顕微鏡検査によりさらに検査するためにヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。
【０３１３】
統計解析
適宜、数値的動物データを統計的に評価した。
【０３１４】
比較統計学のため、群Ａ（対照群）を、群ＢおよびＣ（治療群、投薬ＱＤ）と比較し、群Ｆ（対照群、投薬ＢＩＤ）を、群Ｅ（治療群、投薬ＢＩＤ）と比較した。分散の均一性のためのＬｅｖｅｎｅ検定および分布の正規性のためのＳｈａｐｉｒｏ−Ｗｉｌｋｓ検定を用いて、ｐ≦０．０５の有意性でデータを評価した。均一であり、正規分布であると決定されたデータを、分散分析（ＡＮＯＶＡ）により評価した。ＡＮＯＶＡが、ｐ≦０．０５で有意性を確認した場合、統計差（ｐ≦０．０５）を同定するためのパラメトリック検定（Ｄｕｎｎｅｔｔ検定）を用いて、各治療群とそれぞれの対照群のペアワイズ比較を行った。群因子有意性のためのＫｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ検定を用いて、不均一であるまたは非正規分布であると決定されたデータを評価した。群間に有意性（ｐ≦０．０５）が存在した場合、ノンパラメトリック検定（ＷｉｌｃｏｘｏｎとＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ−Ｈｏｌｍ）を用いて、治療群を対照群と比較した。流出が起こった動物の食物消費データは、適用できる期間から除外した。食物消費データの比較統計学は、Ｄｕｎｎｅｔｔ検定（パラメトリック）に限定される。統計学は、試験前食物消費において行われなかった（４日目〜１日目）。
【０３１５】
結果
異なる投与量レベルの化合物２３Ａおよび化合物１３の曝露は、用量に関係した。平均体重に対する有害な観察も効果も、化合物１３または化合物２３Ａのいずれで治療した動物においても観察されなかった。平均食物消費は、１日１回化合物１３（１００または２００ｍｇ／ｋｇ）および１日２回化合物２３Ａ（３００ｍｇ／ｋｇ）で治療した動物の研究の異なる間隔において低下した。しかし、食物消費の減少は、化合物１３および化合物２３Ａ群において体重変化と相関しなかったため、これらの効果は、有害または生物学的に有意であるとはみなされなかった。平均カルシウムイオン濃度（ＣＡ）は、統計的により低かったが、３００ｍｇ／ｋｇ化合物２３Ａを日に２回投与したラット群の平均ＡＬＴおよびＡＳＴは、日に２回治療した対照と比較した場合、統計的により高かった。被験物に関係する病理組織学的所見は、任意の用量レジメンの化合物１３または化合物２３Ａのいずれを与えた動物に対しても見られなかった。
【０３１６】
本研究の範囲内において、また、体重、臨床病理学および組織病理学における変化の非存在に基づき、１日１回を７日間、経口経管栄養により雄ラットに投与した化合物１３のＮＯＥＬ（無作用量（Ｎｏ−Ｏｂｓｅｒｖａｂｌｅ−Ｅｆｆｅｃｔ−Ｌｅｖｅｌ））は、２００ｍｇ／ｋｇ（８４４μｇ＊ｈｒ／ｍｌ  ７日目ＡＵＣ）であったが、１日に１回投与した化合物２３ＡのＮＯＥＬは、１００ｍｇ／ｋｇ（８２μｇ＊ｈｒ／ｍｌ  ＡＵＣ）であった。１日に２回を７日間、経口経管栄養により雄ラットに投与した化合物２３ＡのＮＯＡＥＬ（無毒性量（Ｎｏ−Ｏｂｓｅｒｖａｂｌｅ−Ａｄｖｅｒｓｅ−Ｅｆｆｅｃｔ−Ｌｅｖｅｌ））は、３００ｍｇ／ｋｇ（２９１μｇ＊ｈｒ／ｍｌ  ＡＵＣ）であった。
【０３１７】
したがって、化合物１３および２３Ａは、それぞれ最大２００ｍｇ／ｋｇ／日および６００ｍｇ／ｋｇ／日の用量レベルにおける研究の範囲内において有害毒性を実証しなかった。
【０３１８】
（実施例３５）
雄カニクイザルにおける経口範囲所見毒性および毒物動態学研究
本研究の目的は、１）雄カニクイザルに７連続日、経管栄養により経口投与した場合の化合物２３の潜在的な毒性を評価し、２）１回目および７回目の用量の後に、化合物２３の毒物動態学を評価することである。
【０３１９】
動物
種、供給源、病歴および正当化
カナダ、ケベック州ピンコート（ＰｉｎＣｏｕｒｔ）のＰｒｉｍｕｓ  Ｂｉｏ−Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ  Ｉｎｃ．から、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ  Ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）を入手した。非臨床毒性評価に一般的に用いられる非げっ歯類の種であるため、カニクイザルを選んだ。
【０３２０】
数、性別、年齢および体重範囲
研究において、８頭（２頭の未処置および６頭の処置済み）の雄を用いた。動物は、若年成体であり、投薬開始において２〜４ｋｇの間の重さがあった。
【０３２１】
研究デザイン
下の表１５に示す通り、動物を割り当てた。動物は、経口経管栄養により１日当たり１回、７連続日にわたり化合物２３またはビヒクルを与え、投薬完了の翌日に屠殺した。投薬の最初の日は、研究１日目と指定した。各動物に投与された実際の容積を計算し、各動物の最新の体重に基づき調整した。
【０３２２】
【表１５】
2014503557.tif 000085
生存中の観察および測定
観察
研究において、少なくとも１日１回ケージ横の臨床徴候（不健康、挙動変化等）を記録した。
【０３２３】
体重
群割り当て前、１日目（投薬前）、３日目および７日目ならびに剖検前に終末的（絶食）に、全動物の体重を記録した。
【０３２４】
心電図検査（ＥＣＧ）
前治療期間において１回、そして７日目（投薬後）に再度、全サルの心電図（双極肢誘導Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩならびに増大単極誘導ａＶＲ、ａＶＬおよびａＶＦ）を得た。
【０３２５】
心臓電気機能障害を示す肉眼的変化に関して追跡を評価した。心拍（誘導ＩＩ）、洞および房室リズムまたは伝導性に関与する異常の潜在的な存在を決定した。心拍、ＰＲ間隔、ＱＲＳ持続時間、ＱＴおよびＱＴｃ間隔値を測定した。
【０３２６】
毒物動態学
一連の７種の血液試料（それぞれおよそ０．５ｍＬ）を、１および７日目に次の時点において各サルから収集した。投薬前、投薬後３０分、および２、３、６、１２および２４時間。このために各サルを静脈穿刺により出血させ、抗凝固剤、Ｋ２ＥＤＴＡを含有するチューブに試料を収集した。加工の準備が整うまで、湿った氷の上にチューブを置いた。
【０３２７】
臨床病理学
治療開始前および８日目の終結前に、全動物において研究室調査（血液学、凝固、臨床化学および検尿）を行った。
【０３２８】
少なくとも１２時間だが２０時間以下からなる一晩の食物欠乏期間後に、静脈穿刺により血液試料を収集した。一晩（少なくとも１２時間だが２０時間以下）食物および水を欠乏させた動物から尿を収集した。
【０３２９】
血液学
ＥＤＴＡ抗凝固剤に収集した血液試料において、次のパラメータを測定した。赤血球数、平均赤血球ヘモグロビン量（計算）、ヘマトクリット（計算）、平均赤血球容積、ヘモグロビン、細胞形態、白血球数、血小板数、白血球百分率数（絶対）、網状赤血球（絶対および百分率）ならびに平均赤血球ヘモグロビン濃度（計算）。
【０３３０】
凝固
シトレート抗凝固剤に収集した血液試料において、活性化部分トロンボプラスチン時間およびプロトロンビン時間を測定した。
【０３３１】
臨床化学
凝血活性化因子を含有するチューブに収集した血液試料において、次のパラメータを測定した。ａ／ｇ比（計算）、クレアチニン、アラニンアミノトランスフェラーゼ、グロブリン（計算）、アルブミン、グルコース、アルカリホスファターゼ、リン（無機）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、カリウム、ビリルビン（総）、ナトリウム、カルシウム、総タンパク質、塩化物、トリグリセリド、コレステロール（総）、尿素、γグルタミルトランスフェラーゼおよびソルビトールデヒドロゲナーゼ。
【０３３２】
検尿
尿試料において次のパラメータを測定した。ビリルビン、タンパク質、血液、沈降顕微鏡検査、色および外観、比重、グルコース、ウロビリノーゲン、ケトン、容積ならびにｐＨ。
【０３３３】
屠殺
治療期間の完了時である、一晩の食物なし期間の後の８日目に、全動物を安楽死させた。サルをケタミンにより前麻酔し、次に、ペントバルビタールナトリウムの静脈内過量投与と、続く主要血管の離断による失血により安楽死させた。
【０３３４】
剖検
研究において、屠殺した全動物において剖検と組織収集を行った。剖検は、次の検査を包含した。
屠殺体および筋肉／骨格系；
全外表面および開口部；
頭蓋腔および脳の外表面；
首と、それに伴う臓器および組織；ならびに
胸腔、腹腔および骨盤腔と、それらに伴う臓器および組織。
【０３３５】
あらゆる異常を記載および記録した。
【０３３６】
組織保存
肉眼的検査および選択された臓器秤量の完了において、下の表１６に記す通り、組織および臓器を保持した。他に断りがなければ固定および保存のため、中性緩衝１０％ホルマリンを用いた。
【０３３７】
【表１６】
2014503557.tif 000086
組織病理学
全動物に対し、上に表示する全組織をパラフィンに包埋し、切片を作製して、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色し、光学顕微鏡検査により検査した。
【０３３８】
結果
異なる投与量レベルの化合物２３の曝露は、用量に関係した。
【０３３９】
最大２００ｍｇ／ｋｇ／日の用量の化合物２３の投与に起因し得る、臨床徴候はなく、また、体重、心電図検査パラメータ、臨床病理学パラメータもしくは臓器重量にも変化はなかった。同様に、最大２００ｍｇ／ｋｇ／日の用量の化合物２３の投与に明瞭に起因し得る巨視的または顕微鏡所見はなかった。雄カニクイザルにおける化合物２３の無作用量（ＮＯＥＬ）は、２００ｍｇ／ｋｇ／日であると決定された。
【０３４０】
（実施例３６）
薬物動態研究
後述する実験において、本発明の選択された化合物の薬物動態パラメータを決定した。一般解析手順および具体的な実験プロトコールを次の通りに用いた。
【０３４１】
一般解析手順
後述する薬物動態実験において、次の一般解析手順を用いた。
【０３４２】
試料解析。高速液体クロマトグラフィー／タンデム質量分析（ＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）方法を用いて、血漿中の化合物２３および化合物Ｗの濃度を決定した。抽出前に、用量レベルまたは処方に応じて、血漿試料を、必要に応じてブランク血漿を用いて２、４、５または１０倍に希釈した。化合物２３および化合物Ｗを、内部標準（ＩＳ）と共に、アセトニトリル（血漿／アセトニトリル、１：４比）を用いた直接的なタンパク質沈殿により、（希釈した）血漿各１００μＬから抽出した。遠心分離後、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳシステムに上清抽出物（１０μＬ）を注入した。ＨＰＬＣシステムは、水またはアセトニトリルにおける０．１％ギ酸からなる勾配移動相で溶出させる、Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｔｅｒｒａ  ＭＳ  Ｃ１８カラム、５ミクロン、２．１ｍｍ直径×５０ｍｍ長さを包含した。
【０３４３】
大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）により、多重反応モニタリング（ＭＲＭ）モードで、ＭＳ／ＭＳにより分析物を検出した。定量化の下限（ＬＬＯＱ）は、試料希釈係数に応じて、１、２、４、５、１０または２０ｎｇ／ｍＬであった。アッセイの線形範囲は、１〜５０００ｎｇ／ｍＬであった。日内および日間アッセイ精度は、名目上の値の２％以内であった。日内および日間アッセイの変動は、＜１０％であった。
【０３４４】
用量レベルまたは処方に応じてＤＭＳＯ：アセトニトリル：水（３３：３３：３３）で１０倍〜５００または１０００倍希釈した後に、ＨＰＬＣ／ＵＶ方法により化合物Ｗの用量懸濁液処方物の試料をアッセイした。用量レベルまたは処方に応じてＤＭＳＯ：水（５０：５０）で１０、５０、１００または５００倍希釈した後に、ＨＰＬＣ／ＵＶ方法により化合物Ｗの用量溶液処方物の試料をアッセイした。
【０３４５】
薬物動態データ解析。ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（登録商標）Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎソフトウェア、バージョン５．１．１（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、カリフォルニア州マウンテンビュー）を用いたノンコンパートメント薬物動態方法により、化合物２３および化合物Ｗの血漿濃度−時間プロファイルを解析した。
【０３４６】
ＡＵＣａｌｌ、ＡＵＣｅｘｔｒａｐ、Ｃｍａｘ、ｔｍａｘ、Ｃｌ＿ｏｂｓ、Ｖｓｓ＿ｏｂｓおよびｔ１／２を包含する主要薬物動態パラメータを決定した。
【０３４７】
統計データ解析。ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェア、バージョン５．１．１またはＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ  ２０００を用いて、平均値、標準偏差（ＳＤ）および変動係数（％ＣＶ）を包含する、血漿濃度および薬物動態パラメータ概算値の記述統計データを計算した。
【０３４８】
サル経口研究
雄カニクイザル（用量群当たりｎ＝３）に、経管栄養により化合物Ｗの３、３０および３００ｍｇ／ｋｇの単一の名目上のＰＯ用量を投与した。０．５％ＭＣ（微結晶性セルロース）において化合物Ｗを処方した。動物は、投薬前後に食物および水を自由に入手できた。
【０３４９】
投薬前および投薬後０（投薬前）、０．２５、０．５、１、２、３、４、６、８、１２、２４、４８時間目に、頸動脈カテーテルにより血液試料（それぞれおよそ０．２５ｍＬ）を収集した。湿った氷の上に維持し、かつ抗凝固剤としてカリウムＥＤＴＡを含有したチューブに、各血液試料を収集した。血漿を分離し、解析までおよそ−７０℃で保存した。
【０３５０】
液体クロマトグラフィー／タンデム質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）方法を用いて血漿試料を解析して、試料希釈係数に応じて１〜２０ｎｇ／ｍＬの定量化の下限（ＬＬＯＱ）により、化合物２３および化合物Ｗの濃度を決定した。血漿濃度ｖｓ．時間データを、ノンコンパートメント薬物動態（ＰＫ）解析に付した。この解析の結果を表１７に提示する。
【０３５１】
【表１７】
2014503557.tif 000087
サルＩＶ研究
雄カニクイザル（用量群当たりｎ＝３）に、頸静脈カニューレにより、化合物Ｗの１ｍｇ／ｋｇの単一の名目上ＩＶボーラス用量を投与した。化合物Ｗは、Ｄ５Ｗ（水中５％デキストロース溶液）において処方した。動物は、投薬前後に食物および水を自由に入手できた。
【０３５２】
投薬前および投薬後０（投薬前）、５分、１０分、０．２５、０．５、１、２、３、４、６、８、１２、２４、４８時間目に、頸動脈カテーテルにより血液試料（それぞれおよそ０．２５ｍＬ）を収集した。湿った氷の上に維持し、かつ抗凝固剤としてカリウムＥＤＴＡを含有したチューブに、各血液試料を収集した。血漿を分離し、解析までおよそ−７０℃で保存した。
【０３５３】
液体クロマトグラフィー／タンデム質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）方法を用いて血漿試料を解析して、試料希釈係数に応じて１〜２０ｎｇ／ｍＬの定量化の下限（ＬＬＯＱ）により、化合物２３および化合物Ｗの濃度を決定した。血漿濃度ｖｓ．時間データを、ノンコンパートメント薬物動態（ＰＫ）解析に付した。この解析の結果を表１８に提示する。
【０３５４】
【表１８】
2014503557.tif 000088
ラット経口研究
雄スプラーグドーリーラットの群（用量群当たりｎ＝３）に、経管栄養により化合物Ｗの３、１０、３０、３００ｍｇ／ｋｇの単一の名目上の経口用量を投与した。化合物Ｗは、０．５％ＭＣ（微結晶性セルロース）か、あるいは２０％Ｃａｐｔｉｓｏｌ、１％ＨＰＭＣ−ＡＳ（ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセチルスクシネート）、１％ＰＶＰ（ポリビニルピロリドン）のいずれかにおいて処方した。動物は、投薬前後に食物および水を自由に入手できた。投薬前および投薬後０（投薬前）、０．２５、０．５、１、１．５、２、４、６、８、１２、２４時間目に、頸動脈カテーテルにより血液試料（それぞれおよそ０．２５ｍＬ）を収集した。湿った氷の上に維持し、かつ抗凝固剤としてカリウムＥＤＴＡを含有したチューブに、各血液試料を収集した。血漿を分離し、解析までおよそ−７０℃で保存した。
【０３５５】
液体クロマトグラフィー／タンデム質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）方法を用いて血漿試料を解析して、試料希釈係数に応じて１〜２０ｎｇ／ｍＬの定量化の下限（ＬＬＯＱ）により、化合物２３および化合物Ｗの濃度を決定した。血漿濃度ｖｓ．時間データを、ノンコンパートメント薬物動態（ＰＫ）解析に付した。この解析の結果を表１９に提示する。
【０３５６】
【表１９】
2014503557.tif 000089
ラットＩＶ研究
雄スプラーグドーリーラットの群（用量群当たりｎ＝３）に、頸静脈カニューレにより化合物Ｗの１および５ｍｇ／ｋｇの単一の名目上のＩＶボーラス用量を投与した。化合物Ｗは、Ｄ５Ｗにおいて処方した。動物は、投薬前後に食物および水を自由に入手できた。投薬前および投薬後０（投薬前）、５分、１０分、０．２５、０．５、１、１．５、２、４、６、８、１２、２４時間目に、頸動脈カテーテルにより血液試料（それぞれおよそ０．２５ｍＬ）を収集した。湿った氷の上に維持し、かつ抗凝固剤としてカリウムＥＤＴＡを含有したチューブに、各血液試料を収集した。血漿を分離し、解析までおよそ−７０℃で保存した。
【０３５７】
液体クロマトグラフィー／タンデム質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）方法を用いて血漿試料を解析して、試料希釈係数に応じて１〜２０ｎｇ／ｍＬの定量化の下限（ＬＬＯＱ）により、化合物２３および化合物Ｗの濃度を決定した。血漿濃度ｖｓ．時間データを、ノンコンパートメント薬物動態（ＰＫ）解析に付した。この解析の結果を表２０に提示する。
【０３５８】
【表２０】
2014503557.tif 000090
マウス経口研究
雌ＣＤ−１マウスの群（用量群当たりｎ＝３）に、経管栄養により化合物Ｗの１０、３０、１００ｍｇ／ｋｇの単一の名目上の経口用量を投与した。化合物Ｗは、０．５％ＭＣにおいて処方した。動物は、投薬前後に食物および水を自由に入手できた。投薬前および投薬後０（投薬前）、０．２５、０．５、１、１．５、２、４、６、８、１２、２４時間目に、顎下静脈から血液試料（それぞれおよそ０．０２５ｍＬ）を収集した。湿った氷の上に維持し、かつ抗凝固剤としてカリウムＥＤＴＡを含有したチューブに、各血液試料を収集した。血漿を分離し、解析までおよそ−７０℃で保存した。
【０３５９】
試料希釈係数に応じて１〜２０ｎｇ／ｍＬの定量化の下限（ＬＬＯＱ）により、液体クロマトグラフィー／タンデム質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）方法を用いて血漿試料を解析した。血漿濃度ｖｓ．時間データを、ノンコンパートメント薬物動態（ＰＫ）解析に付した。この解析の結果を表２１に提示する。
【０３６０】
【表２１】
2014503557.tif 000091
上に記載されている研究は、少なくともラット、イヌおよびサルにおいて、化合物Ｗがｉｎ  ｖｉｖｏで化合物２３に変換されることを実証する。
【０３６１】
（実施例３７）
酵素学研究
後述する実験において、本発明の選択された化合物の酵素阻害活性を決定した。
【０３６２】
ＤＮＡジャイレースＡＴＰａｓｅアッセイ
ピルビン酸キナーゼ／乳酸デヒドロゲナーゼによるＡＤＰ産生を、ＮＡＤＨの酸化にカップリングさせることにより、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  ＤＮＡジャイレースのＡＴＰ加水分解活性を測定した。この方法は、以前に記載されている（ＴａｍｕｒａおよびＧｅｌｌｅｒｔ、１９９０年、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、２６５巻、２１３４２頁）。
【０３６３】
１００ｍＭ  ＴＲＩＳ  ｐＨ７．６、１．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１５０ｍＭ  ＫＣｌを含有する緩衝溶液において、ＡＴＰａｓｅアッセイを３０℃で行った。カップリングシステムは、２．５ｍＭホスホエノールピルベート、２００μＭニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）、１ｍＭ  ＤＴＴ、３０μｇ／ｍｌピルビン酸キナーゼおよび１０μｇ／ｍｌ乳酸デヒドロゲナーゼの最終濃度を含有する。酵素（９０ｎＭ最終濃度）および選択された化合物のＤＭＳＯ溶液（３％最終濃度）を添加した。反応混合物を１０分間３０℃でインキュベートした。最終濃度０．９ｍＭまでＡＴＰを添加することにより、反応を開始し、３４０ナノメートルで１０分間の過程にわたり、ＮＡＤＨ消失率をモニターした。率対濃度プロファイルからＫｉおよびＩＣ５０値を決定した。
【０３６４】
本発明の選択された化合物は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  ＤＮＡジャイレースを阻害することが見出された。表２２は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  ＤＮＡジャイレース阻害アッセイにおけるこれらの化合物の阻害活性を示す。
【０３６５】
【表２２】
2014503557.tif 000092
ＤＮＡ  Ｔｏｐｏ  ＩＶ  ＡＴＰａｓｅアッセイ
Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  ＴｏｐｏＩＶ酵素によるＡＴＰからＡＤＰへの変換を、ＮＡＤＨからＮＡＤ＋への変換にカップリングさせ、３４０ｎｍにおける吸光度の変化により反応の進行を測定した。ＴｏｐｏＩＶ（６４ｎＭ）を、緩衝液中で選択された化合物（３％ＤＭＳＯ最終）と共に１０分間３０℃でインキュベートした。緩衝液は、１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ７．５、１．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２００ｍＭ  Ｋ・グルタメート、２．５ｍＭホスホエノールピルベート、０．２ｍＭ  ＮＡＤＨ、１ｍＭ  ＤＴＴ、５μｇ／ｍＬ直鎖化ＤＮＡ、５０μｇ／ｍＬ  ＢＳＡ、３０μｇ／ｍＬピルビン酸キナーゼおよび１０μｇ／ｍＬ乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）からなった。ＡＴＰにより反応を開始し、２０分間３０℃でＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＳｐｅｃｔｒａＭＡＸプレートリーダーにおいて、率を継続的にモニターした。密接な結合阻害剤のためのＭｏｒｒｉｓｏｎ方程式に適合させた、率ｖｓ．選択された化合物の濃度のプロットから、阻害定数ＫｉおよびＩＣ５０を決定した。
【０３６６】
本発明の選択された化合物は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  ＤＮＡ  Ｔｏｐｏ  ＩＶを阻害することが見出された。表２３は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  ＤＮＡジャイレース阻害アッセイにおけるこれらの化合物の阻害活性を示す。
【０３６７】
【表２３】
2014503557.tif 000093
（実施例３８）
水溶解度研究
次の手順に従って、化合物２３および化合物Ｗの水溶解度を決定した。
【０３６８】
試料の調製。次の通り、各化合物の水性試料を調製した。水（０．５ｍＬ）添加前に４ｍｌの透明なバイアル内に化合物を秤量し（２０〜３０ｍｇ化合物）、マグネチックスターラーにより撹拌した。この懸濁液に１．０Ｎ  ＨＣｌを添加して、ｐＨを所望の範囲に調整した。９６時間室温で撹拌した後、０．２２ミクロンフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ遠心分離フィルター、Ｄｕｒａｐｏｒｅ  ＰＶＤＦ  ０．２２μｍ、Ｃａｔ＃ＵＦＣ３０ＧＶＮＢ）を通して懸濁液を濾過した。濾液を収集し、ｐＨメーターによりｐＨを測定した。化合物Ｗを含有する濾液を１０倍希釈して、ＨＰＬＣ解析に適切な濃度とした。化合物２３を含有する濾液は、希釈を必要としなかった。
【０３６９】
標準溶液の調製。次の手順に従って各化合物の標準溶液を調製した。各化合物を１〜２ｍｇ精密に秤量し、１０ｍＬ容積フラスコに入れ、水（化合物Ｗのため）または１：１メタノール：０．１Ｎ  ＨＣｌ（化合物２３のため）のいずれかを添加して、化合物を完全に溶解させた。化合物２３に対し、１：１メタノール：０．１Ｎ  ＨＣｌにおける溶解を補助するために超音波処理を行った。全固体が溶解したら、追加的な溶媒を添加して各溶液の容積を１０ｍｌに調整した。得られた溶液を徹底的に混合して、各化合物の標準溶液を得た。次に、各標準溶液を溶媒により２倍、１０倍および１００倍希釈した。
【０３７０】
溶解度解析。ＨＰＬＣ解析（Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００、注入容積１０μＬ、波長２７１ｎｍ、カラムＸＴｅｒｒａ（登録商標）フェニル５μｍ、４．６×５０ｍｍ、Ｐａｒｔ  Ｎｏ．１８６００１１４４、移動相：Ａ：水中０．１％ＴＦＡ、ＡｃＮ中０．１％ＴＦＡ）により、各試料および各標準溶液のアリコートを解析した。各標準溶液を３回注入し、各試料を２回注入した。ＨＰＬＣのピーク面積の平均、対、標準溶液の濃度をプロットすることにより検量線を得た（元素解析により決定された固体の総含水量に基づき、標準の重量の適切な補正を加えた）。ＨＰＬＣ結果の水性試料のピーク面積ならびに検量線の傾きおよび切片から、各試料の濃度を計算した。下の表２４に列挙する溶解度値は、試料および試料の希釈係数の濃度の積に由来した。
【０３７１】
【表２４】
2014503557.tif 000094
（実施例３９）
肝性および肝臓Ｓ９細胞におけるＩＮ  ＶＩＶＯ代謝研究
ラット、イヌ、サルおよびヒトの肝臓および腸Ｓ９画分において、化合物Ｗから化合物２３への変換を研究した。肝臓Ｓ９画分において０．１、０．３、１、３、１０、２０、４０、１００、２００、３００μＭ、また、腸Ｓ９画分においては１、３、１０、２０、１００、３００、５００、１０００μＭの化合物Ｗをインキュベートした。０、５、１０、１５、３０、４５または６０分間インキュベーションを行った。ＬＣ／ＭＳ−ＭＳにより化合物２３の生成を定量化し、Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ  Ｍｅｎｔｅｎ方程式にデータを適合させた。下の表２５におけるデータは、化合物Ｗが、これらの肝性および腸Ｓ９画分において化合物２３へと迅速に変換することを表示する。
【０３７２】
【表２５】
2014503557.tif 000095
【図１】
2014503557.tif 000101
【図２】
2014503557.tif 000102
【国際調査報告】
2014503557.tif 000103
2014503557.tif 000104
2014503557.tif 000105