(57)【要約】  本発明は、てんかんの治療において使用するための、ナトリウムチャネル又はカルシウムチャネルを介して作用する標準抗てんかん剤（ＳＡＥＤ）と組み合わせた、３００ｍｇ／日より大きい用量のカンナビジオール（ＣＢＤ）の使用に関する。ＳＡＥＤは好ましくは、低閾値若しくは一過性ニューロンカルシウム電流を変調させる、又は高周波数ニューロン発火及びナトリウム依存性活動電位を低減させ、ＧＡＢＡ効果を増強する薬剤である。好ましいＳＡＥＤはエトスクシミド及びバルプロエートである。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
てんかんの治療において使用するための、ナトリウムチャネル又はカルシウムチャネルを介して作用する標準抗てんかん剤（ＳＡＥＤ）と組み合わせた、３００ｍｇ／日より大きい用量のカンナビジオール（ＣＢＤ）。
【請求項２】
てんかんの治療において使用する薬物の生産における、ナトリウムチャネル又はカルシウムチャネルを介して作用する標準抗てんかん剤（ＳＡＥＤ）と組み合わせた、３００ｍｇ／日より大きい用量のカンナビジオール（ＣＢＤ）の使用。
【請求項３】
前記ＳＡＥＤが、
低閾値若しくは一過性ニューロンカルシウム電流を変調させる、又は
高周波数ニューロン発火及びナトリウム依存性活動電位を低減させ、ＧＡＢＡ効果を増強する
薬剤である、請求項１又は２に記載のカンナビジオール（ＣＢＤ）又はＣＢＤの使用。
【請求項４】
前記ＳＡＥＤがエトスクシミド及びバルプロエートからなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載のカンナビジオール（ＣＢＤ）又はＣＢＤの使用。
【請求項５】
治療対象のてんかんの種類が全般発作又は側頭葉発作である、請求項１〜４のいずれか一項に記載のカンナビジオール（ＣＢＤ）又はＣＢＤの使用。
【請求項６】
治療対象のてんかんの種類が既存の薬物療法に対して抵抗性を有するものである、請求項１〜５のいずれか一項に記載のカンナビジオール（ＣＢＤ）又はＣＢＤの使用。
【請求項７】
前記ＣＢＤを、１つ又は複数の他の治療上有効なフィトカンナビノイドとともに使用する、請求項１〜６のいずれか一項に記載のカンナビジオール（ＣＢＤ）又はＣＢＤの使用。
【請求項８】
前記１つ又は複数の他の治療上有効なフィトカンナビノイドがＴＨＣＶ及び／又はＣＢＤＶである、請求項７に記載のカンナビジオール（ＣＢＤ）又はＣＢＤの使用。
【請求項９】
前記ＣＢＤが単離フィトカンナビノイドである、請求項１〜８のいずれか一項に記載のカンナビジオール（ＣＢＤ）又はＣＢＤの使用。
【請求項１０】
前記ＣＢＤが植物性薬剤物質の形態で存在する、請求項１〜９のいずれか一項に記載のカンナビジオール（ＣＢＤ）又はＣＢＤの使用。
【請求項１１】
てんかんを治療する方法であって、ナトリウムチャネル又はカルシウムチャネルを介して作用する標準抗てんかん剤（ＳＡＥＤ）と組み合わせた、３００ｍｇ／日より大きい用量のカンナビジオール（ＣＢＤ）を、それを必要とする被験体に投与することを含む、治療方法。
【請求項１２】
３００ｍｇ／日より大きい用量のカンナビジオール（ＣＢＤ）、及びナトリウムチャネル又はカルシウムチャネルを介して作用する標準抗てんかん剤（ＳＡＥＤ）を含む組合せの製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、標準抗てんかん剤（ＳＡＥＤ）と組み合わせたフィトカンナビノイドカンナビジオール（ＣＢＤ）の使用に関する。好ましくは、ＣＢＤは、ナトリウムチャネル又はカルシウムチャネルを介して作用する作用メカニズムを有するＳＡＥＤ、より好ましくは
エトスクシミドによって例示されるような、低閾値若しくは一過性ニューロンカルシウム電流を変調させる、又は
バルプロエートによって例示されるような、高周波数ニューロン発火（neuronal firing）及びナトリウム依存性活動電位を低減させ、ＧＡＢＡ効果を更に増強することができる
薬剤と組み合わせて使用される。
【背景技術】
【０００２】
てんかんは、世界中でおよそ５千万人の人々が罹患している、広い疾患スペクトルを示す慢性的な神経障害である（非特許文献１）。体内の「エンドカンナビノイド」系に関する理解の進歩によって、大麻ベースの医薬が、中枢神経系におけるこの過剰興奮性の障害を治療する可能性を有し得るという示唆がもたらされている（非特許文献２、非特許文献３、非特許文献４）。
【０００３】
大麻は、痙攣促進（pro-convulsant）効果（非特許文献５）及び抗痙攣効果の両方を有するとされている。したがって、カンナビノイドがまだ明らかにされていない治療上の抗痙攣薬であるか、又は逆に、大麻の娯楽としての及び医薬としての使用者に対する潜在的なリスク因子であるかは、依然として決定されていない（非特許文献６）。
【０００４】
非特許文献７によって、標準的な治療（フェノバルビタール及びフェニトイン）ではその発作が制御されなかった若年男性の症例が記載された。この男性が付き合い程度に大麻を吸い始めると、その発作がなくなった。しかしながら、この男性が大麻のみを摂取すると、発作が再発した。非特許文献７では、「マリファナがヒトのてんかんにおいて抗痙攣効果を有し得る」と結論付けられた。
【０００５】
非特許文献８による研究は、最初の発作の後に入院した３０８人のてんかん患者の大集団に関するものであった。この患者を、発作を起こしたことがない２９４人の患者の対照集団と比較し、大麻の使用によって発作を有する可能性が低減すると考えられることが見出された。しかしながら、この研究は、むしろ逆に、「この研究には入院前の健康状態の尺度が含まれておらず、患者の健康状態の差異が薬剤の使用に影響を及ぼした可能性がある」ため、この研究では「弱い」と主張する非特許文献９において、批判されている。
【０００６】
３つの対照臨床試験によって、カンナビジオールの抗てんかん能が調査された。各試験において、全般大発作又は限局性発作の患者に対して、カンナビジオールが経口形態で投与された。
【０００７】
非特許文献１０は、従来の薬物療法では回復しない１６人の大発作患者に対する研究について報告した。この患者は、各自の通常の薬物療法、及び２００ｍｇ〜３００ｍｇのカンナビジオール又はプラセボの投与を受けた。ＣＢＤの投与を受けた患者のうち、３人は完全な改善、２人は部分的な改善、２人は僅かな改善を示したが、１人は変化しないままであった。唯一の不要な効果は軽度の鎮静であった。プラセボの投与を受けた患者のうち、１人は改善したが７人は変化しないままであった。
【０００８】
非特許文献１１はあまり成功しなかった研究について報告したが、この研究では１２人のてんかん患者は、標準的な抗てんかん剤に加えて１日当たり２００ｍｇ〜３００ｍｇのカンナビジオールの投与を受けた。発作頻度の有意な改善は存在しないようであった。
【０００９】
非特許文献１２では、１日当たり９００ｍｇ〜１２００ｍｇのカンナビジオールの投与を１０ヶ月間受けた単一の患者によるオープン試験が行われた。この単一の患者において発作頻度が顕著に低減した。
【００１０】
ＣＢＤが有益であり得ることを示唆する開示に加えて、標準的な治療（フェノバルビタール及びフェニトイン）に応答しない５人の入院中の児童にテトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）を投与したという報告がある（非特許文献１３）。１人は発作が完全になくなり、１人は発作がほぼ完全になくなり、その他の３人も以前より悪くはならなかった。
【００１１】
特許文献１において、カンナビノイドテトラヒドロカンナビバリン（ＴＨＣＶ）が抗てんかん薬（非特許文献１４によって確認されるもの）として振る舞う可能性があることが示唆されている。
【００１２】
加えて、特許文献２は、ＴＨＣＶ及びＣＢＤの医薬配合物を記載している。かかる配合物が、てんかんを含む多くの種々の種類の疾患において有用であることが示唆されている。
【００１３】
しかしながら、患者ごとに異なる発作感受性に一部起因する、４０種類を超える認識可能なてんかん症候群が存在し（非特許文献１５、非特許文献１６）、これらの種々の種類の疾患に対して効果的な薬剤を見出すことが課題である。
【００１４】
ニューロンの活動は、適切な脳機能のための必要条件である。しかしながら、ニューロンの活動の興奮−抑制の平衡を崩すことによって、てんかん発作が誘導されることがある。これらのてんかん発作は、
ａ）部分発作、及び
ｂ）全般発作
という２つの基本的なカテゴリーにグループ分けすることができる。
【００１５】
部分発作は特定の脳領域において起こり、ほとんどの場合側頭葉（海馬を含有する）に局在したままであるが、全般発作は、部分発作の二次性全般化として前脳全体に現れる（非特許文献１５、非特許文献１６）。部分発作及び全般発作の分類に関するこの考え方は、１９６９年に国際抗てんかん連盟がてんかん発作の分類体系を発表するまで、常識となってはいなかった（非特許文献１７、非特許文献１８、非特許文献１９）。
【００１６】
国際抗てんかん連盟は部分発作を更に分類し、意識状態の存在又は障害に応じて、部分発作を単純部分発作及び複雑部分発作に分けた（非特許文献１９）。
【００１７】
連盟は、全般発作も多数の臨床発作タイプへとカテゴリー分けしたが、そのうちの幾つかの例を以下に概説する：
【００１８】
欠神発作は頻繁に起こり、進行中の活動の突然の開始及び中断を伴う。加えて、ほんの数秒続く発作に伴い発話が遅くなる、又は妨げられる（非特許文献１９）。
【００１９】
「大発作」としてよく知られる強直間代発作は、全般発作の中で最も頻繁に起こるものである（非特許文献１９）。この全般発作タイプには、２つの段階がある：強直性の筋収縮の後、痙攣性運動の間代段階に移行する。患者は、発作中を通じて、またその後不定期間、意識不明のままとなる。
【００２０】
「転倒発作」として知られる脱力発作は、身体における特定の筋肉、筋肉群、又は全ての筋肉の筋緊張の突然の喪失によって生じるものである（非特許文献１９）。
【００２１】
てんかん発作の開始は生命を脅かす場合があり、患者は長期間の健康上の影響も受ける（非特許文献１６）。これらの影響は多くの形をとり得る：
精神衛生上の問題（例えば、幼少期における正常なグルタミン酸作動性シナプスの発達の抑制）、
認知障害（例えば、学習し記憶を蓄えるための海馬中の神経回路の能力の減弱）、及び
形態上の変化（例えば、興奮毒性の結果として内側側頭葉てんかんを示す患者の海馬のＣＡ１領域及びＣＡ３領域中のニューロンの選択的喪失）（非特許文献２０、非特許文献２１）。
【００２２】
てんかんが患者の生活様式にも大きな影響を及ぼす、すなわち患者が、大発作痙攣によって起こる損傷（例えば頭部損傷）の恐怖の中で、又は日々の仕事を行うことができない、若しくは長い無発作期間をおかない限り車を運転することができないという中で生活する可能性があることは注目すべき点である（非特許文献２２）。
【００２３】
現時点で利用可能な多くの異なる標準抗てんかん剤が存在し、これには、以下のものが含まれる：アセタゾールアミド、カルバマゼピン、クロバザム、クロナゼパム、エトスクシミド、酢酸エスリカルバゼピン、ガバペンチン、ラコサミド、ラモトリギン、レベチラセタム、オキシカルバゼピン、フェノバルビタール、フェニトイン、プレガバリン、プリミドン、ルフィナマイド、バルプロ酸ナトリウム、チアガビン、トピラメート、バルプロエート、ビガバトリン及びゾニサミド。
【００２４】
これらのうちの幾つかの作用様式は理解されており、他のものに関しては未知である。幾つかの作用様式を以下の表１（出典：非特許文献２３）に示す。
【００２５】
【表１】
2014501271.tif 000002
【００２６】
３種類の十分に確立され広範に使用されるてんかんのｉｎ  ｖｉｖｏモデルは、以下のものである：
ペンチレンテトラゾール（ＰＴＺ）によって誘導される全般発作のモデル（非特許文献２４、非特許文献２５）、
ピロカルピンによって誘導される側頭葉（すなわち海馬）発作のモデル（非特許文献２６）、及び
ペニシリンによって誘導される部分発作のモデル（非特許文献２７）。
【００２７】
これらは、ヒトにおける治療の研究に必要不可欠な広範な発作及びてんかんのモデルを提供する。
【００２８】
特許文献３に係る出願は、カンナビノイドＴＨＣ及びＣＢＤを使用する医薬配合物を記載している。この出願は引き続き、これらのカンナビノイドのプロピル類似体も配合物に使用することができることを述べている。この出願が書かれた後に、ＴＨＣＶがＴＨＣと非常に異なる挙動を示すことが示されており、したがって、カンナビノイドのプロピル類似体がそのペンチル対応物と同様の挙動を示すという仮説は、現在妥当でない。
【００２９】
特許文献４に係る出願は、全般発作の治療のためのＴＨＣＶの使用を記載しており、ＴＨＣＶと組み合わせたカンナビノイドＣＢＤの使用も記載している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００３０】
【特許文献１】国際公開第２００６／０５４０５７号
【特許文献２】国際公開第２００９／００７６９７号
【特許文献３】国際公開第０２／０６４１０９号
【特許文献４】英国特許第０９１１５８０．９号
【非特許文献】
【００３１】
【非特許文献１】Sander, 2003
【非特許文献２】Mackie, 2006
【非特許文献３】Wingerchuk, 2004
【非特許文献４】Alger, 2006
【非特許文献５】Brust et al., 1992
【非特許文献６】Ferdinand et al., 2005
【非特許文献７】Consroe et al., 1975
【非特許文献８】Ng (1990)
【非特許文献９】Institute of Medicine report (1999)
【非特許文献１０】Cunha et al (1980)
【非特許文献１１】Ames (1986)
【非特許文献１２】Trembly et al (1990)
【非特許文献１３】Davis & Ramsey
【非特許文献１４】Thomas et al 2005
【非特許文献１５】McCormick and Contreras, 2001
【非特許文献１６】Lutz, 2004
【非特許文献１７】Merlis, 1970
【非特許文献１８】Gastaut, 1970
【非特許文献１９】Dreifuss et al., 1981
【非特許文献２０】Swann, 2004
【非特許文献２１】Avoli et al., 2005
【非特許文献２２】Fisher et al., 2000
【非特許文献２３】Schachter SC. Treatment of seizures. In: Schachter SC, Schomer DL, eds. The comprehensive evaluation and treatment of epilepsy. San Diego, CA: Academic Press; 1997. p. 61-74
【非特許文献２４】Obay et al., 2007
【非特許文献２５】Rauca et al., 2004
【非特許文献２６】Pereira et al., 2007
【非特許文献２７】Bostanci and Bagirici, 2006
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００３２】
ＳＡＥＤの使用における利益を高めるか又はそうでなくとも利益をもたらす新規な薬剤の組合せを特定することが、本発明の目的である。組合せの使用によって、従来の用量より低い用量のＳＡＥＤを使用することが可能となる可能性がある。
【課題を解決するための手段】
【００３３】
本発明の第１の態様によれば、てんかんの治療において使用するための、ナトリウムチャネル又はカルシウムチャネルを介して作用する標準抗てんかん剤（ＳＡＥＤ）と組み合わせた、３００ｍｇ／日より大きい用量のカンナビジオール（ＣＢＤ）を提供する。
【００３４】
ナトリウムチャネル又はカルシウムチャネルを介して作用するＳＡＥＤは、
低閾値若しくは一過性ニューロンカルシウム電流を変調させる薬剤、例えばエトスクシミド、又は
高周波数ニューロン発火及びナトリウム依存性活動電位を低減させる（またＧＡＢＡ効果を更に増強することができる）薬剤、例えばバルプロエート
によって例示され得る。
【００３５】
対照的に、（ナトリウムチャネル又はカルシウムチャネルを介する作用とは対照的に）ＧＡＢＡ作動性抑制を（単に）増強するＳＡＥＤ、例えばフェノバルビタールは、ピロカルピンモデルにおいて試験した場合、ＣＢＤとの組合せによる利益をもたらさないようである。このため、例えばエトスクシミド及びバルプロエート（カルシウムチャネル及びナトリウムチャネルを含む明確かつ特徴的な作用メカニズムを有するＳＡＥＤ）と組み合わせたＣＢＤの選択的な利益は、予測できないものであった。
【００３６】
本発明の第２の態様によれば、てんかんの治療において使用する薬物の生産における、ナトリウムチャネル又はカルシウムチャネルを介して作用する標準抗てんかん剤（ＳＡＥＤ）と組み合わせた、３００ｍｇ／日より大きい用量のカンナビジオール（ＣＢＤ）の使用を提供する。
【００３７】
本発明の第３の態様によれば、てんかんを治療する方法であって、ナトリウムチャネル又はカルシウムチャネルを介して作用する標準抗てんかん剤（ＳＡＥＤ）と組み合わせた、３００ｍｇ／日より大きい用量のカンナビジオール（ＣＢＤ）を、それを必要とする被験体に投与することを含む、治療方法を提供する。
【００３８】
本発明の第４の態様によれば、３００ｍｇ／日より大きい用量のカンナビジオール（ＣＢＤ）、及びナトリウムチャネル又はカルシウムチャネルを介して作用する標準抗てんかん剤（ＳＡＥＤ）を含む組合せの製品を提供する。
【００３９】
それぞれの薬剤は、組み合わせて採用される取扱説明書とともに別々に包装してもよく、又は単回使用製品として配合してもよい。
【００４０】
好ましくは、ナトリウムチャネル又はカルシウムチャネルを介して作用する標準抗てんかん剤は、エトスクシミド及びバルプロエートからなる群から採用される。
【００４１】
好ましくは、治療対象のてんかんの種類が全般発作又は側頭葉発作である。
【００４２】
組合せが、以下の１つ又は複数において有益な場合がある：
ａ．強直間代発作の発生率を低減させること、
ｂ．患者が無発作である時間の量を増大させること、
ｃ．発作の開始までの潜時を増大させること、
ｄ．発作の全持続時間を減少させること、並びに
ｅ．発作の重症度及び致死率を低減させること。
【００４３】
したがって、組合せは特に、既存の薬物療法に対して抵抗性を有すると一般的に考えられる病態の治療に十分に適合する。組合せは、ＳＡＥＤを単独で使用する場合に使用される用量よりも、より低い用量のＳＡＥＤの使用を可能にするとも考えられる。
【００４４】
一つの実施の形態において、ＣＢＤを、１つ又は複数の治療上有効な他のフィトカンナビノイドとともに使用する。
【００４５】
好ましくは、１つ又は複数の治療上有効な他のフィトカンナビノイドがＴＨＣＶ及び／又はＣＢＤＶである。
【００４６】
一つの実施の形態において、ＣＢＤが単離形態で存在する。
【００４７】
更なる実施の形態において、ＣＢＤが植物性薬剤物質の形態で存在する。
【００４８】
例示のみの目的で、本発明の多数の実施形態を、添付の図面を参照して以下に記載する。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】ＰＴＺによって誘導される発作に対するバルプロエートと組み合わせた１００ｍｇ／ｋｇのＣＢＤの効果を示す図である。
【図２】ＰＴＺによって誘導される発作の潜時、持続時間及び重症度に対するＣＢＤ及びバルプロエートの効果を示す図である。
【図３】ＰＴＺによって誘導される発作に対する１００ｍｇ／ｋｇのＣＢＤ及びエトスクシミドの効果を示す図である。
【図４】ピロカルピンによって誘導される発作の発生に対するバルプロエートと組み合わせた１００ｍｇ／ｋｇのＣＢＤの抗痙攣効果を示す図である。
【図５】ピロカルピンによって誘導される発作の発生及び致死率に対するバルプロエートと組み合わせた１００ｍｇ／ｋｇのＣＢＤの効果を示す図である。
【００５０】
図１に対する説明文：Ａ：１００ｍｇ／ｋｇのＣＢＤを用いた場合の致死率（％）（黒色のバー）、及びＣＢＤを用いない場合の致死率（％）（白色のバー）。Ｂ：１００ｍｇ／ｋｇのＣＢＤを用いた場合の無発作率（％）（黒色のバー）、及びＣＢＤを用いない場合の無発作率（％）（白色のバー）。Ｃ：１００ｍｇ／ｋｇのＣＢＤを用いた場合の最も重度の（強直間代）発作を発生した動物の％（黒色のバー）、及びＣＢＤを用いない場合の最も重度の（強直間代）発作を発生した動物の％（白色のバー）。
【００５１】
図２に対する説明文：Ａ：発作の開始までの潜時。Ｂ：生存した動物の発作活動の持続時間。Ｃ：発作の重症度の中央値。
【００５２】
図３に対する説明文：Ａ：ＣＢＤを用いない場合のエトスクシミドの種々の用量における発作の開始までの潜時（黒色）、又は１００ｍｇ／ｋｇのＣＢＤを用いた場合のエトスクシミドの種々の用量における発作の開始までの潜時（灰色・白抜き（unfilled））。Ｂ：発作の重症度。Ｃ：致死率（百分率）、記号（key）はＡにおけるものと同様である。
【００５３】
図４に対する説明文：開始までの平均潜時（Ａ）、両側（bilateral）発作の発生までの平均潜時（Ｂ）、及び強直間代発作までの平均潜時（Ｃ）。
【００５４】
図５に対する説明文：Ａ：各用量群における、強直間代発作の完全な発生を示した動物の割合（％）。Ｂ：各用量群における、死んだ動物の割合（％）。Ｃ：各用量群における、無発作であった動物の割合（％）。
【発明を実施するための形態】
【００５５】
以下の実施例は、２つの異なるてんかんのモデル、すなわちＰＴＺによって誘導される発作モデル及びピロカルピンによって誘導される発作モデルにおける標準抗てんかん剤（ＳＡＥＤ）と組み合わせた単離ＣＢＤの使用を記載する。これらの実施例において使用されるＳＡＥＤは、エトスクシミド、バルプロエート及びフェノバルビタール（ピロカルピンモデルのみ）である。利用可能な多くの異なるＳＡＥＤが存在することに留意することが重要であり、これらの実験のために選ばれる薬剤は、てんかんの治療において使用される異なる種類の薬剤と組み合わせた場合にフィトカンナビノイドＣＢＤがどの程度作用することが可能であるかについての包括的な概要を提供する。
【実施例】
【００５６】
実施例１
てんかんのＰＴＺモデルにおける標準抗てんかん剤（ＳＡＥＤ）と組み合わせたフィトカンナビノイドＣＢＤの使用
方法論：
動物：
雄のウィスターラット（Ｐ２４〜２９、７５ｇ〜１１０ｇ）を使用して、全般発作のＰＴＺモデルにおけるＳＡＥＤと組み合わせたフィトカンナビノイドＣＢＤの効果を評価した。実験の前に、試験環境、ケージ、注射プロトコル及び取扱いに動物を慣らした。動物を、２１℃、１２時間の明暗サイクル（０９時００分に明るくする）、湿度５０％の部屋に収容し、飼料及び水を自由に摂取できる状態にした。
【００５７】
ヒト等価用量（ＨＥＤ）は、以下の式を使用して推定することができる：
ＨＥＤ＝動物用量（ｍｇ／ｋｇ）×（動物のＫｍ／ヒトのＫｍ）
ラットのＫｍは６であり、ヒトのＫｍは３７である。
【００５８】
したがって、およそ６０Ｋｇのヒトに対しては、ラットにおける１００ｍｇ／Ｋｇの用量は、約１０００ｍｇのヒト用量と同じであると考えられる。３００ｍｇ／日より大きく、４００ｍｇ／日から１００ｍｇ／日間隔で（すなわち、５００ｍｇ／日、６００ｍｇ／日、７００ｍｇ／日、８００ｍｇ／日、９００ｍｇ／日、１０００ｍｇ／日、１１００ｍｇ／日、１２００ｍｇ／日、１３００ｍｇ／日及び１４００ｍｇ／日から）２０００ｍｇ／日ほどまでのヒト用量が、ＣＢＤを用いた用量漸増研究（実施例２）に基づき、想定される。
【００５９】
実験設定：
５個の６Ｌ容蓋付パースペクス製タンクを、タンクの間に仕切りを設けた単一のベンチ上に配置した。ラットの挙動を観察するために、その仕切り上に閉回路テレビ（ＣＣＴＶ）カメラを取り付けた。Ｓｏｎｙ  Ｔｏｐｉｃａ  ＣＣＤカメラ（Bluecherry, USA）を、ＢＮＣケーブルを介して、Brooktreeのデジタルキャプチャカード（Bluecherry, USA）により低ノイズＰＣと接続した。Zoneminder（http://www.zoneminder.com）のソフトウェアを使用して、ラットをモニタリングし、録画を開始及び終了させ、ビデオファイルを管理した。社内（In-house）Ｌｉｎｕｘスクリプトを使用して、ビデオファイルを、Ｔｈｅ  Ｏｂｓｅｒｖｅｒ（Noldus Technologies）を使用する更なるオフライン解析に好適なフォーマットへとエンコードした。
【００６０】
ＰＴＺモデル：
或る用量範囲のＰＴＺ（体重１ｋｇ当たり５０ｍｇ〜１００ｍｇ）を使用して、発作の誘導に最良の用量を決定した（下記を参照されたい）。結果として、腹腔内（ＩＰ、ストック溶液は、０．９％の生理食塩水中、５０ｍｇ／ｍｌ）注射する８０ｍｇ／ｋｇの用量を使用して、ＣＢＤ／ＳＡＥＤの組合せをスクリーニングした。
【００６１】
実験プロトコル：
試験日に、単離ＣＢＤを、１００ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によって投与するのと並行して、陰性対照群の役割を果たす同体積のカンナビノイドビヒクル（エタノール：クレモホル：０．９％（ｗ／ｖ）ＮａＣｌ溶液（２：１：１７））を動物に注射した。それから動物を１時間観察し、その後動物に８０ｍｇ／ｋｇのＰＴＺのＩＰ注射を行った。陰性ビヒクル対照の実験を、カンナビノイドを投与した被験体の実験と並行して行った。ＰＴＺを投与した後、動物を観察しビデオ録画して、発作の重症度、及び幾つかの種類の発作挙動までの潜時を決定した（以下のｉｎ  ｖｉｖｏ解析を参照されたい）。動物を、発作の最後の徴候の後３０分間フィルムに収め（filmed）、それからそれぞれのケージに戻した。
【００６２】
ｉｎ  ｖｉｖｏ解析：
実験手順中に動物を観察したが、全ての解析は、Ｔｈｅ  Ｏｂｓｅｒｖｅｒ挙動解析ソフトウェア（Noldus, Netherlands）を使用して、録画したビデオファイルによってオフラインで行った。発作の重症度のスコア化システムを使用して、被験体が経験した発作のレベルを決定した（Pohl & Mares, 1987）。全ての動物に関して、発作の全ての徴候を詳細に記載した。
【００６３】
【表２】
2014501271.tif 000003
【００６４】
ＰＴＺの注射から発作の発生の特定の指標までの潜時：
ＰＴＺの注射から第一ミオクローヌス反射（ＦＭＪ、スコア１）までの、及び動物が「強直性要素及び身体のねじれを伴う前肢間代」（スコア３．５）に到達するまでの潜時（単位：秒）を記録した。ＦＭＪは、発作活動の開始の指標であるが、９０％を超える動物がスコア３．５を生じるため、より重度の発作の発生の良好なマーカーである。データを、実験群内の平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として示す。
【００６５】
発作の最大重症度：
これは、以下のスコア化尺度に基づき、各実験群に関する中央値として示す。
【００６６】
致死率（％）：
ＰＴＺによって誘導される発作の結果として死んだ動物の実験群内における百分率。強直間代発作（スコア４及びスコア５）を発生した動物の大部分が結果的に死んだこと、及びスコア６（死）は動物が強直間代発作も経験したことを自動的に示すことに留意されたい。
【００６７】
発作の持続時間：
発作の最初の徴候（通常はＦＭＪ）から（生存した動物と生存しなかった動物とに分けて）発作の最後の徴候までの時間、又は被験体が死んだ場合には死ぬまでの時間（単位：秒）。これは、各実験群に関して平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として示す。
【００６８】
統計：
潜時及び重症度の尺度に関して、試験群に対して一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を行って、ＣＢＤ及びＳＡＥＤの組み合わせによる全体的な効果を検出した（ｐ≦０．０５を有意とみなした）。
【００６９】
有意なＡＮＯＶＡの結果を、その後、事後検定に供して、ビヒクル群と薬剤群との間の差異を検定した（チューキーの検定、ｐ≦０．０５を有意とみなした）。
【００７０】
結果：
図１から、ＳＡＥＤバルプロエートへのＣＢＤの添加が、致死率（百分率）及び強直間代発作の発生率を低減させることに対する効果を有することを観察することができる。ＣＢＤ及びより高用量のバルプロエートの組合せが、動物が無発作であった時間を増大させる上で、より効果的であることも示される。
【００７１】
図２は、ＣＢＤ及びバルプロエートの組合せが、全ての用量範囲において発作の開始までの潜時を増大させることが可能であったことを実証している。加えて、その組合せは、発作の全体的な持続時間を減少させた。
【００７２】
図３に示されるデータは、ＳＡＥＤエトスクシミドとのＣＢＤの組合せも、発作の重症度及び致死率を低減させる上で効果的であったことを実証している。より高用量のエトスクシミドでは、発作の開始までの潜時を増大させることも可能であった。
【００７３】
結論：
この実施例において実証されるデータは、ナトリウムチャネル又はカルシウムチャネルを含む作用メカニズムを有するＳＡＥＤとのＣＢＤの組合せが全般発作を治療する際に有用であることを明らかに示している。
【００７４】
実施例２
（側頭葉）てんかんのピロカルピンモデルにおける標準抗てんかん剤（ＳＡＥＤ）と組み合わせたフィトカンナビノイドＣＢＤの使用
方法論：
単離ＣＢＤを、標準的なビヒクル（エタノール：クレモホル：０.９％（ｗ／ｖ）ＮａＣｌ（１：１：１８））において５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ及び２００ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内（ＩＰ）注射するのと並行して、同体積のビヒクルを単独で動物に投与した。１５分後、メチルスコポラミン（１ｍｇ／ｋｇ、ピロカルピンの末梢ムスカリン様効果を低減させる）を投与し、その４５分後、ピロカルピン（３８０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ）を投与した。
【００７５】
結果：
図４は、てんかんのピロカルピンモデルにおけるＣＢＤ及びバルプロエートの組合せの抗痙攣効果を実証する。これらのデータは、ＣＢＤ及びバルプロエートの組合せが発作の開始の潜時を増大させることが可能であったことを示す。
【００７６】
図５に示されるデータから、ＣＢＤ及びバルプロエートの組合せが、発作の開始の潜時を増大させることに加えて、致死率及び強直間代発作の百分率を減少させることが可能であったことを観察することができる。
【００７７】
以下の表２．１は、データをより詳細に記載している。
【００７８】
【表３】
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【００７９】
上の表は、２つの化合物の組合せを使用することの利点の幾つかをはっきりと示している。
【００８０】
以下の表２．２は、てんかんのピロカルピンモデルにおいて更なるＳＡＥＤフェノバルビタールと組み合わせてフィトカンナビノイドＣＢＤを使用することの効果を記載している。
【００８１】
【表４】
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【００８２】
バルプロエートとの組合せのデータとは対照的に、この結果は、これらのＳＡＥＤの異なる作用メカニズムに起因する可能性がある組合せの選択的性質を実証している。
【００８３】
全体的な結論：
上の実施例において実証されるデータは、ナトリウムチャネル又はカルシウムチャネルを介して作用する標準抗てんかん剤とのＣＢＤの組合せが、種々の種類のてんかんの治療において有益であり得ることを示している。この知見は、その病状が既存の薬物療法に対して抵抗性を有する多くのてんかん患者にとって大きな重要性を有する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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