(57)【要約】  本発明は、グルカゴンに結合することが可能な核酸分子に関し、核酸分子はＡ型の核酸分子、Ｂ型の核酸分子およびＣ型の核酸分子を含む群から選択される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
グルカゴンに結合することが可能な核酸分子であって、Ａ型の核酸分子、Ｂ型の核酸分子およびＣ型の核酸分子を含む群から選択される核酸分子。
【請求項２】
前記核酸分子がＡ型の核酸分子であり、前記Ａ型の核酸分子が中央のヌクレオチドストレッチを含み、前記中央のヌクレオチドストレッチが、
５’Ｂｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＫＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＲＲＲ３’［配列番号１７３］のヌクレオチド配列を含み、式中、
ｎ１はＧまたはｒＧであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＧまたはｒＧであり、ｎ５はＹまたはｒＴであり、ｎ６はＡまたはｒＡであり、ｎ７はＡまたはｒＡであり、
Ｇ、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｂ、Ｋ、ＹおよびＲのいずれかは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＴのいずれかはリボヌクレオチドである、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項３】
前記中央のヌクレオチドストレッチが、
５’Ｂｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＲ３’［配列番号１７４］のヌクレオチド配列を含み、式中、
ｎ１はＧまたはｒＧであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＧまたはｒＧであり、ｎ５はＴまたはｒＴであり、ｎ６はＡまたはｒＡであり、ｎ７はＡまたはｒＡであり、
Ｇ、Ａ、Ｔ、Ｃ、ＢおよびＲのいずれかは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＴのいずれかはリボヌクレオチドである、請求項２に記載の核酸分子。
【請求項４】
前記中央のヌクレオチドストレッチが、
５’Ｔｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１７５］、
５’Ｔｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＡ３’［配列番号１７６］、
５’Ｃｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１７７］、および
５’Ｇｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１７８］、
の群から選択されるヌクレオチド配列を含み、式中、
ｎ１はＧまたはｒＧであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＧまたはｒＧであり、ｎ５はＴまたはｒＴであり、ｎ６はＡまたはｒＡであり、ｎ７はＡまたはｒＡであり、
Ｇ、Ａ、ＴおよびＣのいずれかは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＴのいずれかはリボヌクレオチドである、請求項２または３に記載の核酸分子。
【請求項５】
前記中央のヌクレオチドストレッチが、
５’Ｇｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１７８］のヌクレオチド配列を含み、式中、
ｎ１はＧまたはｒＧであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＧまたはｒＧであり、ｎ５はＴまたはｒＴであり、ｎ６はＡまたはｒＡであり、ｎ７はＡまたはｒＡであり、
Ｇ、Ａ、ＴおよびＣのいずれかは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＴのいずれかはリボヌクレオチドである、請求項２〜４のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項６】
前記中央のヌクレオチドストレッチが、
５’Ｃｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１７７］のヌクレオチド配列を含み、式中、
ｎ１はＧまたはｒＧであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＧまたはｒＧであり、ｎ５はＴまたはｒＴであり、ｎ６はＡまたはｒＡであり、ｎ７はＡまたはｒＡであり、
Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＴはリボヌクレオチドである、請求項２〜４のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項７】
前記中央のヌクレオチドストレッチが、２’−デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドからなる、請求項２〜６のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項８】
前記中央のヌクレオチドストレッチが、
５’ＧｒＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１７９］、
５’ＧＧＡＡＡＴＧｒＧＧＡＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８０］、
５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡｒＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８１］、
５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧｒＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８２］、
５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８３］、
５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８４］；
５’ＧＧＡＡＡＴＧｒＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８５］、
５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８６］、
５’ＧＧＡＡＡＴＧｒＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８７］、
５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡｒＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８８］、
５’ＧｒＧＡＡＡＴＧｒＧＧＡｒＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８９］、
５’ＧｒＧＡＡＡＴＧｒＧＧＡｒＧｒＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１９０］および
５’ＧｒＧＡＡＡＴＧｒＧＧＡｒＧｒＧＧＣＴＡＧＧｒＴＧＧｒＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１９１］
の群から選択されるヌクレオチド配列を含み、式中、
Ｇ、Ａ、ＴおよびＣのいずれかは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＴのいずれかはリボヌクレオチドである、請求項２〜７のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項９】
前記中央のヌクレオチドストレッチが、２’−デオキシリボヌクレオチドからなる、請求項２〜６のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項１０】
前記核酸分子が、５’→３’方向で、第１の末端のヌクレオチドストレッチ、前記中央のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチを含み、
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチは１〜７ヌクレオチドを含み、
前記第２の末端のヌクレオチドストレッチは１〜７ヌクレオチドを含む、請求項２〜９のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項１１】
前記核酸分子が、５’→３’方向で、第２の末端のヌクレオチドストレッチ、前記中央のヌクレオチドストレッチおよび第１の末端のヌクレオチドストレッチを含み、
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチは１〜７ヌクレオチドを含み、
前記第２の末端のヌクレオチドストレッチは１〜７ヌクレオチドを含む、請求項２〜９のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項１２】
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｖ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＢＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
Ｚ１はＧであるかまたは存在せず、Ｚ２はＳであるかまたは存在せず、Ｚ３はＶであるかまたは存在せず、Ｚ４はＢであるかまたは存在せず、Ｚ５はＢであるかまたは存在せず、Ｚ６はＶであるかまたは存在せず、Ｚ７はＢであるかまたは存在せず、Ｚ８はＶであるかまたは存在せず、Ｚ９はＶであるかまたは存在せず、Ｚ１０はＢであるかまたは存在せず、Ｚ１１はＳであるかまたは存在せず、Ｚ１２はＣであるかまたは存在せず、請求項１０または１１に記載の核酸分子。
【請求項１３】
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｖ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＢＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１はＧであり、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２はＣであるか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２はＣであるか、または
ｃ）Ｚ１はＧであり、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、
ａ）Ｚ１はＧであり、Ｚ２はＣであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＲであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＹであり、Ｚ１１はＧであり、Ｚ１２はＣであるか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＣであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＲであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＹであり、Ｚ１１はＧであり、Ｚ１２はＣであるか、または
ｃ）Ｚ１はＧであり、Ｚ２はＣであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＲであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＹであり、Ｚ１１はＧであり、Ｚ１２は存在しない、
請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項１４】
ａ）前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＡＣＴＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＡＧＴＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｂ）前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＡＣＴＧＡ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＡＧＴＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｃ）前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＡＧＴＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＴＣＡＣＴＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｄ）前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＡＣＴＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＡＣＴＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｅ）前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＧＣＴＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＡＧＴＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｆ）前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＧＣＣＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＴＣＧＧＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含む、
請求項１３に記載の核酸分子。
【請求項１５】
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｖ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＢＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｇ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２は存在しない、
請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項１６】
ａ）前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＧＣＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＧＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｂ）前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＧＣＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＣＧＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｃ）前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＧＧＣＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＧＧＣＣＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｄ）前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＧＣＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＧＧＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｅ）前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＡＧＣＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＣＧＣＴＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｆ）前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＧＴＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＣＡＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｇ）前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＧＴＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＧＡＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含む、
請求項１５に記載の核酸分子。
【請求項１７】
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｖ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＢＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｇ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない、
請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項１８】
ａ）前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＧＣＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＣＧＣＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｂ）前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＧＣＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＣＧＣＧ３’のヌクレオチド配列を含む、
請求項１７に記載の核酸分子。
【請求項１９】
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｖ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＢＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｇ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない、
請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項２０】
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含む、
請求項１９に記載の核酸分子。
【請求項２１】
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｖ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＢＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｇ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＳであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＳであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＳであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＳであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない、
請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項２２】
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含む、
請求項２１に記載の核酸分子。
【請求項２３】
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｖ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＢＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＶであり、Ｚ７は存在せず、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６は存在せず、Ｚ７はＢであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
ｄ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６は存在せず、Ｚ７は存在せず、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｇ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＣであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６は存在せず、Ｚ７は存在せず、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない、
請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項２４】
配列番号６および配列番号７の群から選択されるヌクレオチド配列を含むか、または
配列番号６および配列番号７の群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と少なくとも８５％の同一性を有するか、または
配列番号６および配列番号７の群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と相同的であり、相同性は少なくとも８５％である、請求項２〜６および９〜２３のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項２５】
配列番号２３、配列番号４３、配列番号４７、配列番号４８、配列番号９１、配列番号９２、配列番号１５８および配列番号１５９の群から選択されるヌクレオチド配列を含むか、または
配列番号２３、配列番号４３、配列番号４７、配列番号４８、配列番号９１、配列番号９２、配列番号１５８および配列番号１５９の群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と少なくとも８５％の同一性を有するか、または
配列番号４３、配列番号４７、配列番号４８、配列番号９１、配列番号９２、配列番号１５８および配列番号１５９の群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と相同的であり、相同性は少なくとも８５％である、請求項２〜８および１０〜２３のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項２６】
前記核酸分子がＢ型の核酸分子であり、前記Ｂ型の核酸分子が中央の２９〜３２ヌクレオチドのストレッチを含み、前記中央のヌクレオチドストレッチが、
５’−ＡＫＧＡＲｎ１ＫＧＴＴＧＳＹＡＷＡｎ２ＲＴＴＣＧｎ３ＴＴＧＧＡｎ４ＴＣｎ５−‘３［配列番号１９７］、
５’−ＡＧＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＧＴＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＣＴＧ−‘３［配列番号１９８］、
５’−ＡＧＡＡＧＧＴＣＧＧＴＡＡＧＴＴＴＣＧＧＴＡＧＧＡＴＣＴＧ−‘３［配列番号１９９］、
５’−ＡＧＧＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ−‘３［配列番号２００］、
５’−ＡＧＧＡＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ−‘３［配列番号２０１］および
５’−ＡＧＧＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ−‘３［配列番号２０２］
の群から選択されるヌクレオチド配列を含み、式中、ｎ１はＡまたはｒＡであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＴまたはｒＵであり、ｎ５はＡまたはｒＡであり、
Ｇ、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｋ、Ｙ、Ｓ、ＷおよびＲのいずれかは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＵのいずれかはリボヌクレオチドである、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項２７】
前記中央のヌクレオチドストレッチが、
５’ＡＧＧＡＡｎ１ＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡｎ２ＧＴＴＣＧｎ３ＴＴＧＧＡｎ４ＴＣｎ５３’［配列番号２０３］のヌクレオチド配列を含み、式中、
ｎ１はＡまたはｒＡであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＴまたはｒＵであり、ｎ５はＡまたはｒＡであり、
Ｇ、Ａ、ＴおよびＣのいずれかは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＵのいずれかはリボヌクレオチドである、請求項２６に記載の核酸分子。
【請求項２８】
前記中央のヌクレオチドストレッチが、２’−デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドからなる、請求項２６または２７に記載の核酸分子。
【請求項２９】
前記中央のヌクレオチドストレッチが、
５’ＡＧＧＡＡｒＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ３’［配列番号２０４］、
５’ＡＧＧＡＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡｒＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ３’［配列番号２０５］、
５’ＡＧＧＡＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡｒＵＴＣＡ３’［配列番号２０６］、
５’ＡＧＧＡＡｒＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡｒＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ３’［配列番号２０７］、
５’ＡＧＧＡＡｒＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡｒＵＴＣＧ３’［配列番号２０８］、
５’ＡＧＧＡＡｒＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡｒＵＴＣＡ３’［配列番号２０９］、
５’ＡＧＧＡＡｒＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡｒＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡｒＵＴＣＡ３’［配列番号２１０］および
５’ＡＧＧＡＡｒＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡｒＧＧＴＴＣＧｒＧＴＴＧＧＡｒＵＴＣｒＡ３’［配列番号２１１］
の群から選択されるヌクレオチド配列を含み、式中、
Ｇ、Ａ、ＴおよびＣのいずれかは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＵのいずれかはリボヌクレオチドである、請求項２６〜２８のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項３０】
前記中央のヌクレオチドストレッチが、２’−デオキシリボヌクレオチドからなる、請求項２６または２７に記載の核酸分子。
【請求項３１】
前記核酸分子が、５’→３’方向で、第１の末端のヌクレオチドストレッチ、前記中央のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチを含み、
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチは３〜９ヌクレオチドを含み、
前記第２の末端のヌクレオチドストレッチは３〜１０ヌクレオチドを含む、請求項２６〜３０のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項３２】
前記核酸分子が、５’→３’方向で、第２の末端のヌクレオチドストレッチ、前記中央のヌクレオチドストレッチおよび第１の末端のヌクレオチドストレッチを含み、
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチは３〜９ヌクレオチドを含み、
前記第２の末端のヌクレオチドストレッチは３〜１０ヌクレオチドを含む、請求項２６〜３０のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項３３】
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＫ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＫＶＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
Ｚ１はＣであるかまたは存在せず、Ｚ２はＧであるかまたは存在せず、Ｚ３はＲであるかまたは存在せず、Ｚ４はＢであるかまたは存在せず、Ｚ５はＢであるかまたは存在せず、Ｚ６はＳであるかまたは存在せず、Ｚ７はＳであるかまたは存在せず、Ｚ８はＶであるかまたは存在せず、Ｚ９はＶであるかまたは存在せず、Ｚ１０はＫであるかまたは存在せず、Ｚ１１はＭであるかまたは存在せず、Ｚ１２はＳであるかまたは存在しない、請求項３１または３２に記載の核酸分子。
【請求項３４】
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＫ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＫＶＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１はＣであり、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１はＭであり、Ｚ１２はＳであるか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１はＭであり、Ｚ１２はＳであるか、または
ｃ）Ｚ１はＣであり、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１はＭであり、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１はＣであり、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０はＴであり、Ｚ１１はＣであり、Ｚ１２はＧであるか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０はＴであり、Ｚ１１はＣであり、Ｚ１２はＧであるか、または
ｃ）Ｚ１はＣであり、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０はＴであり、Ｚ１１はＣであり、Ｚ１２は存在しない、
請求項３１〜３３のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項３５】
ａ）前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＧＡＣＴＣＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＣＧＡＧＴＣＧ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｂ）前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＧＧＣＴＣＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＣＧＡＧＴＣＧ３’のヌクレオチド配列を含む、
請求項３４に記載の核酸分子。
【請求項３６】
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＫ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＫＶＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１はＭであり、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１はＭであり、Ｚ１２は存在しない、
請求項３１〜３３のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項３７】
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＫ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＫＶＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＡであり、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０はＴであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＡであり、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０はＴであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＡであり、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０はＴであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない、
請求項３１〜３３のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項３８】
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＫ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＫＶＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＳＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＳであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＳであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＳであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない、
請求項３１〜３３のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項３９】
ａ）前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＴＣＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＣＧＡＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｂ）前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＴＧＣＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＣＧＣＡ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｃ）前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＧＣＣＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＧＧＣＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｄ）前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＣＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＣＧＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｅ）前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＣＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＣＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含む、
請求項３８に記載の核酸分子。
【請求項４０】
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＫ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＫＶＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない、
請求項３１〜３３のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項４１】
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＫ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＫＶＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６は存在せず、Ｚ７はＳであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＳであり、Ｚ７は存在せず、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない、
請求項３１〜３３のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項４２】
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＫ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＫＶＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６は存在せず、Ｚ７は存在せず、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６は存在せず、Ｚ７は存在せず、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない、請求項３１〜３３のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項４３】
配列番号５０、配列番号５４、配列番号５８、配列番号５９、配列番号８８および配列番号１５５の群から選択されるヌクレオチド配列を含むか、または
配列番号５０、配列番号５４、配列番号５８、配列番号５９、配列番号８８および配列番号１５５の群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と少なくとも８５％の同一性を有するか、または
配列番号５０、配列番号５４、配列番号５８、配列番号５９、配列番号８８および配列番号１５５の群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と相同的であり、相同性は少なくとも８５％である、請求項２６〜２８および３０〜４２のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項４４】
配列番号７１、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８９、配列番号９０、配列番号１５６および配列番号１５７の群から選択されるヌクレオチド配列を含むか、または
配列番号７１、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８９、配列番号９０、配列番号１５６および配列番号１５７の群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と少なくとも８５％の同一性を有するか、または
配列番号７１、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８９、配列番号９０、配列番号１５６および配列番号１５７の群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と相同的であり、相同性は少なくとも８５％である、請求項２６〜２９および３１〜４２のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項４５】
前記核酸分子がＣ型の核酸分子であり、前記Ｃ型の核酸分子が、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号９７および配列番号１０２の群から選択されるヌクレオチド配列を含むか、または
配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号９７および配列番号１０２の群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と少なくとも８５％の同一性を有するか、または
配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号９７および配列番号１０２の群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と相同的であり、相同性は少なくとも８５％である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項４６】
前記核酸分子のヌクレオチドまたはそれを形成するヌクレオチドがＬ−ヌクレオチドである、請求項１〜４５のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項４７】
前記核酸分子がＬ−核酸分子である、請求項１〜４５のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項４８】
前記核酸分子が、グルカゴンに結合することが可能である少なくとも１つの結合部分を含み、前記結合部分はＬ−ヌクレオチドからなる、請求項１〜４７のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項４９】
前記核酸分子がグルカゴンによって仲介される活性のアンタゴニストである、請求項１〜４８のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項５０】
前記核酸分子がＧＩＰに結合することが可能である、請求項１〜４９のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項５１】
前記核酸がＧＩＰによって仲介される活性のアンタゴニストである、請求項１〜５０のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項５２】
前記核酸分子が修飾基を含み、生物体からの前記修飾基を含む前記核酸分子の排泄速度は、前記修飾基を含まない核酸と比較して低減される、請求項１〜５１のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項５３】
前記核酸分子が修飾基を含み、前記修飾基を含む前記核酸分子が、前記修飾基を含まない核酸分子と比較して生物体内で増加した保持時間を有する、請求項１〜５１のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項５４】
前記修飾基が生分解性および非生分解性修飾を含む群から選択され、好ましくは、前記修飾基が、ポリエチレングリコール、直鎖ポリエチレングリコール、分枝ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチルデンプン、ペプチド、タンパク質、多糖、ステロール、ポリオキシプロピレン、ポリオキシアミデートおよびポリ（２−ヒドロキシエチル）−Ｌ−グルタミンを含む群から選択される、請求項５２または５３に記載の核酸分子。
【請求項５５】
前記修飾基が、直鎖ポリエチレングリコールまたは分枝ポリエチレングリコールからなるポリエチレングリコールであり、前記ポリエチレングリコールの分子量は、好ましくは約２０，０００〜約１２０，０００Ｄａ、より好ましくは約３０，０００〜約８０，０００Ｄａ、最も好ましくは約４０，０００Ｄａである、請求項５４に記載の核酸分子。
【請求項５６】
前記修飾基がヒドロキシエチルデンプンであり、前記ヒドロキシエチルデンプンの分子量は、約５０ｋＤａ〜約１０００ｋＤａ、より好ましくは約１００ｋＤａ〜約７００ｋＤａ、最も好ましくは３００ｋＤａ〜５００ｋＤａである、請求項５４に記載の核酸分子。
【請求項５７】
前記修飾基が、リンカーを介して前記核酸分子に結合しており、好ましくは、前記リンカーは生分解性リンカーである、請求項５２〜５６のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項５８】
前記修飾基が、前記核酸分子の５’末端ヌクレオチドおよび／もしくは３’末端ヌクレオチドに、ならびに／または前記核酸分子の５’末端ヌクレオチドと前記核酸分子の３’末端ヌクレオチドの間の前記核酸分子のヌクレオチドに結合している、請求項５２〜５６のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項５９】
前記生物体が動物またはヒト生体、好ましくはヒト生体である、請求項５２〜５８のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項６０】
疾患または障害または高グルカゴン血症の処置および／または予防のための方法に使用される、請求項１〜５９のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項６１】
前記疾患または障害が、糖尿病、糖尿病合併症および糖尿病状態を含む群から選択される、請求項６０に記載の核酸分子。
【請求項６２】
前記糖尿病が、１型糖尿病、２型糖尿病および妊娠性糖尿病を含む群から選択される、請求項６１に記載の核酸分子。
【請求項６３】
前記糖尿病合併症または糖尿病状態が、アテローム硬化症、冠状動脈疾患、糖尿病性足疾患、糖尿病網膜症、増殖性糖尿病網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、糖尿病性硝子体網膜症、増殖性糖尿病性硝子体網膜症、糖尿病腎症、糖尿病神経障害、グルコース不耐性、心疾患、高血圧、高コレステロール、耐糖能異常、不能症、インスリン抵抗性、腎不全、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症が有るか無い非アルコール性脂肪肝炎、末梢血管疾患、低減したグルコース感受性、低減したインスリン感受性、肥満、肝脂肪変性、高血糖、糖尿病関連脈管炎、糖尿病ケトアシドーシス、高浸透圧性高血糖性非ケトン性昏睡、体重減少壊死融解性移動性紅斑、貧血、正常な凝固機能の存在下での静脈血栓、および神経精神医学的徴候の群から選択される糖尿病合併症または糖尿病状態である、請求項６２に記載の核酸分子。
【請求項６４】
請求項１〜５９のいずれか１項に記載の核酸分子および任意選択でさらなる構成要素を含み、前記さらなる構成要素は、薬学的に許容される添加剤、薬学的に許容される担体および薬学的に活性な薬剤を含む群から選択される、医薬組成物。
【請求項６５】
請求項１〜５９のいずれか１項に記載の核酸分子および薬学的に許容される担体を含む、請求項６４に記載の医薬組成物。
【請求項６６】
医薬の製造のための、請求項１〜５９のいずれか１項に記載の核酸分子の使用。
【請求項６７】
前記医薬がヒト医療用、または獣医医療用である、請求項６６に記載の使用。
【請求項６８】
診断手段の製造のための、請求項１〜５９のいずれか１項に記載の核酸分子の使用。
【請求項６９】
前記医薬が、疾患または障害または高グルカゴン血症の処置および／または予防のためであり、前記疾患または障害が、糖尿病、糖尿病合併症および糖尿病状態を含む群から選択される、請求項６６に記載の使用。
【請求項７０】
前記糖尿病が、１型糖尿病、２型糖尿病および妊娠性糖尿病を含む群から選択される、請求項６９に記載の核酸分子。
【請求項７１】
前記糖尿病合併症または糖尿病状態が、アテローム硬化症、冠状動脈疾患、糖尿病性足疾患、糖尿病網膜症、増殖性糖尿病網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、糖尿病性硝子体網膜症、増殖性糖尿病性硝子体網膜症、糖尿病腎症、糖尿病神経障害、グルコース不耐性、心疾患、高血圧、高コレステロール、耐糖能異常、不能症、インスリン抵抗性、腎不全、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症が有るか無い非アルコール性脂肪肝炎、末梢血管疾患、低減したグルコース感受性、低減したインスリン感受性、肥満、肝脂肪変性、高血糖、糖尿病関連脈管炎、糖尿病ケトアシドーシス、高浸透圧性高血糖性非ケトン性昏睡、体重減少壊死融解性移動性紅斑、貧血、正常な凝固機能および神経精神医学的徴候の存在下での静脈血栓の群から選択される糖尿病合併症または糖尿病状態である、請求項６９に記載の核酸分子。
【請求項７２】
請求項１〜５９のいずれか１項に記載の核酸分子およびグルカゴンおよび／またはＧＩＰを含み、好ましくは結晶性複合体である複合体。
【請求項７３】
グルカゴンおよび／またはＧＩＰの検出のための、請求項１〜５９のいずれか１項に記載の核酸分子の使用。
【請求項７４】
グルカゴンおよび／またはＧＩＰによって仲介される活性のアンタゴニストのスクリーニング方法であって、
−グルカゴンおよび／またはＧＩＰによって仲介される活性の候補アンタゴニストを用意するステップと、
−請求項１〜５９のいずれか１項に記載の核酸分子を用意するステップと、
−グルカゴンおよび／またはＧＩＰによって仲介される活性のアンタゴニストの存在下でシグナルを提供する試験系を用意するステップと、
−グルカゴンおよび／またはＧＩＰによって仲介される前記活性の前記候補アンタゴニストがグルカゴンおよび／またはＧＩＰによって仲介される活性のアンタゴニストであるかどうか判定するステップと
を含む方法。
【請求項７５】
請求項１〜５９のいずれか１項に記載の核酸分子を含む、グルカゴンの検出のためのキット。
【請求項７６】
試料中の請求項１〜５９のいずれか１項に記載の核酸の検出方法であって、
ａ）請求項１〜５９のいずれか１項に記載の核酸分子の第１の部分と少なくとも部分的に相補的である捕捉プローブ、および請求項１〜５９のいずれか１項に記載の核酸分子の第２の部分と少なくとも部分的に相補的である検出プローブ、あるいは、請求項１〜５９のいずれか１項に記載の核酸分子の第２の部分と少なくとも部分的に相補的である捕捉プローブ、および請求項１〜５９のいずれか１項に記載の核酸分子の第１の部分と少なくとも部分的に相補的である検出プローブを用意するステップと；
ｂ）前記捕捉プローブおよび前記検出プローブを、別々にまたは一緒に、請求項１〜５９のいずれか１項に記載の核酸分子を含有する試料に加えるか、または請求項１〜５９のいずれか１項に記載の核酸分子を含有すると推定される試料に加えるステップと；
ｃ）前記捕捉プローブおよび前記検出プローブを、請求項１〜５９のいずれか１項に記載の核酸分子またはその一部と同時に、または任意の順序で逐次的に反応させるステップと；
ｄ）任意選択で、前記捕捉プローブが、ステップａ）で提供される請求項１〜５９のいずれか１項に記載の核酸分子とハイブリダイズするかどうか検出するステップと；
ｅ）請求項１〜５９のいずれか１項に記載の核酸分子および前記捕捉プローブおよび前記検出プローブからなる、ステップｃ）で形成される複合体を検出するステップと
を含む方法。
【請求項７７】
前記検出プローブが検出手段を含み、および／または前記捕捉プローブが支持体、好ましくは固体支持体に固定化されている、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
ステップｅ）で前記複合体の一部である検出プローブだけが検出されるように、ステップｃ）で形成される前記複合体の一部でないあらゆる検出プローブが前記反応から除去される、請求項７６または７７に記載の方法。
【請求項７９】
ステップｅ）が、前記捕捉プローブおよび前記検出プローブを、請求項１〜５９のいずれか１項に記載の核酸分子またはその一部の存在下、および前記核酸分子またはその一部の非存在下でハイブリダイズさせたときの、前記検出手段によって生成されるシグナルを比較するステップを含む、請求項７６〜７８のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グルカゴンに結合することが可能な核酸分子、医薬、診断薬および検出薬それぞれの製造のためのその使用、そのような核酸分子を含む組成物、そのような核酸分子を含む複合体、そのような核酸分子を用いる、グルカゴンによって仲介される活性のアンタゴニストのスクリーニング方法、ならびにそのような核酸分子の検出方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病（略語ＤＭ）は世界中で有病率の驚異的な増加を示し（特にアジアで）、それは、主に２型糖尿病（略語ＤＭ２）によって引き起こされる。米国のデータは、１９９０年に４．９％であったのに対して、２００１年には、１８歳以上の人々の７．９％が糖尿病と診断されたことを示す。発生率は、年齢と肥満度指数の両方に関連づけられる。米国で２０００年に生まれた男性の場合、糖尿病を発症する可能性は３３％であり、女性の場合にはそれはさらに高く３９％であると数理モデルは予測する。同じモデルは、これらの男性で生存年数９年の減少、女性では１２年の減少を予測する。主な危険因子、例えば肥満、身体活動の不足は周知であるが、それらは影響を及ぼすことが極めて困難であることが見出されている。驚異的な傾向は、ＤＭ２を処置するのに適した新しい治療薬の探索をさらに緊急なものにしている。理想的な薬剤は、血糖を低減するだけでなく、体重に関して少なくとも中性であり、トリグリセリドも減少させるべきである。
【０００３】
いくつかの抗高血糖薬が今日利用できるが、異なる作用機構を有する新規薬剤への切迫した必要性がある。既存薬はしばしば有効ではなく、または経時的に効果が低下し、および／またはかなりの副作用と関連する。２種類の有害事象、体重増加および低血糖が特に一般的であり、憂慮すべきものであり、潜在的に有害である。例外は、薬剤メトホルミンおよびアカルボースである。しかし、それらは一般的にＤＭ２の初期形または重症形で用いられるだけであり、効果が限定的で、しばしば胃腸副作用をもたらす。さらに、糖尿病のメトホルミン処置は、特に慢性の腎不全および心不全を有する高齢患者で、生命にかかわる乳酸性アシドーシスの危険と関連する。
【０００４】
古典的薬剤の他に、過去１０年に新薬が市場に参入した。しかし、これらのほとんどは、標的集団で特に懸念される穏やかな効能または副作用のいずれかによって制限される。グルカゴン様ペプチド（略語ＧＬＰ−１）の類似体（インクレチンとも呼ばれる）またはＧＬＰ−１分解酵素ジペプチジルペプチダーゼ４（略語ＤＰＰＩＶ）の阻害剤は、他の薬剤では効果がなく、抗高血糖作用に関して穏やかな効能を示すだけであることが証明された場合のみに承認された。しかし、インクレチンの注射可能な剤形は、好ましい体重変化プロファイルの利点を少なくとも有する（Ａｍｏｒｉ、Ｌａｕら  ２００７年）。これらの薬剤による療法は、空腹時高血糖を予防するために、通常持続性インスリンの注射を必要とする。別の比較的新しい物質クラスである、ＰＰＡＲアゴニストとして作用するチアゾリジンジオンは、近年、欧州での販売認可の停止（ＥＭＡ２０１０）およびロジグリタゾンに関して米国でのより厳重な処方規則（ＦＤＡ２０１１）につながったが、心血管副作用に関する議論の対象となった。これは、ロジグリタゾンと心不全、心筋梗塞および心不全死との関連性によって引き起こされた（ＮｉｓｓｅｎおよびＷｏｌｓｋｉ  ２００７年）。このクラスの別のメンバーであるトログリタゾンは、薬物性肝臓損傷により販売中止となった。第３のチアゾリジンジオン、ピオグリタゾンの販売は、その薬物（商品名Ａｃｔｏｓ（登録商標））が膀胱がんの危険率を上げることが研究で示唆された後に、フランスで停止された（Ｔａｋｅｄａプレスリリース、２０１１年７月１１日）。
【０００５】
現在用いられている薬物の大部分はインスリン自体またはインスリン活性の相対的不足を重視するが、ＤＭ２が少なくとも、インスリン欠乏またはインスリン抵抗性とともに不適切に高いグルカゴンレベルで特徴付けられる二ホルモン障害であるとの理解を、多くの研究は支持する（ＪｉａｎｇおよびＺｈａｎｇ  ２００３年）。
【０００６】
グルカゴンは、インスリンと同様に、すい臓で生産されるホルモンであるが、末梢組織、特に肝臓ではインスリンと反対の作用を有する。ここでは、それは、食間において血糖レベルを安定させるために、主に糖新生およびグリコーゲン分解を誘導する。
【０００７】
大多数の糖尿病患者では、混合食または炭水化物摂取に続く循環グルカゴンレベルの逆説的な増加が報告されている（Ｏｈｎｅｄａ、Ｗａｔａｎａｂｅら  １９７８年）。これは、ＤＭでの微小および大血管合併症の病態生理において重要な役割を演ずる、食後の血糖レベルの上昇への主要な寄与因子と見られている（ＧｉｎおよびＲｉｇａｌｌｅａｕ  ２０００年）。
【０００８】
したがって、異なるアプローチによってグルカゴンの作用をブロックすることは、広く研究されている。多くのペプチジルおよび非ペプチジル小分子グルカゴン受容体アンタゴニストが、報告されている（ＪｉａｎｇおよびＺｈａｎｇ  ２００３年）。むしろ低いグルカゴン受容体親和性を一般に有するこれらの小分子アンタゴニストのいくつかは、動物モデルにおいて、空腹時血糖を低くするか、外因性グルカゴンによって刺激される血糖上昇をブロックすることが示されている。非ペプチジル小分子グルカゴン受容体アンタゴニストは、ヒトにおいて、グルカゴンによって誘導される肝グルコース生成および血糖の上昇を用量依存的にブロックすることが示された（ＰｅｔｅｒｓｅｎおよびＳｕｌｌｉｖａｎ  ２００１年）。より近年、ｄｂ／ｄｂ−マウスでのアンチセンスオリゴヌクレオチドによるグルカゴン受容体発現の低減は、低血糖を起こさずに、血糖、遊離脂肪酸およびトリグリセリドの低減をもたらした（Ｌｉａｎｇ、Ｏｓｂｏｒｎｅら  ２００４年）。これらの作用は、ＤＭ２患者に理想的である。
【０００９】
その他に、グルカゴン受容体ノックアウトマウスは、生存可能であること、ならびにごく軽度の低血糖、改善された耐糖能およびグルカゴンレベルの上昇の徴候を示すことが見出された。それらは食餌誘発性の肥満にも抵抗性であり（Ｃｏｎａｒｅｌｌｏ、Ｊｉａｎｇら  ２００７年）、β細胞温存において有益であり得るよりも高いインスリン感受性も有する（Ｓｏｒｅｎｓｅｎ、Ｗｉｎｚｅｌｌら  ２００６年）。さらに、グルカゴン受容体ノックアウトマウスは、ストレプトゾトシンで誘導される「１型糖尿病表現型」に抵抗性であり、すなわち、それらは空腹状態で、ならびに経口および腹腔内耐糖能試験の後に、正常血糖を示した（Ｌｅｅ、Ｗａｎｇら  ２０１１年）。
【００１０】
モノクローナル抗体によるグルカゴン自体の中和も、血糖、トリグリセリド、ＨｂＡ１ｃおよび肝グルコース生産の急性および持続的低減につながった（Ｂｒａｎｄ、Ｒｏｌｉｎら  １９９４年；Ｓｏｒｅｎｓｅｎ、Ｂｒａｎｄら  ２００６年）。しかし、それらの潜在的免疫原性のため、上記の抗体および他の抗体は、ＤＭの長期処置のための存続可能な選択肢でないかもしれない。
【００１１】
本質的に、グルカゴンのレベル／活性を下げることによる治療的介入の試みは、グルカゴン拮抗作用の概念を裏づける多くの結果を与えたが、十分な効力を有する化合物または受け入れがたい肝毒性を有する化合物につながらなかった。
【００１２】
ホルモン胃抑制ペプチド（略語ＧＩＰ）、グルカゴンと配列類似性がある４２アミノ酸長のペプチドは、十二指腸および近位空腸に主に位置するＫ細胞から放出される。それは、栄養素、特にグルコースまたは脂肪の摂取の結果分泌され、脂肪はヒトでのＧＩＰ分泌の最も強力な刺激物質である。
【００１３】
ＧＩＰ受容体は、７つの膜貫通ヘリックスを有する一般的なＧタンパク質共役受容体である。ＧＩＰ受容体遺伝子は、すい臓、胃、小腸、脂肪組織、副腎皮質、脳下垂体、心臓、精巣、内皮細胞、骨細胞、気管、脾臓、胸腺、肺、腎臓、甲状腺および脳のいくつかの領域で発現されることが見出された。
【００１４】
ＧＩＰは、その名称が示唆するようにインスリン放出を誘導するだけでなく、脂質ホメオスタシスで役割を担うこともでき、いくつかの動物研究が示すように肥満の発達に必要かもしれない（Ａｓｍａｒ  ２０１１年）。５０日間のＧＩＰ受容体アンタゴニストＰｒｏ３−ＧＩＰの連日投与は、筋肉および肝臓でのトリグリセリドレベルの低減と一緒に、より高齢の高脂肪食糖尿病マウスで、体重減、脂肪組織の蓄積の減少、ならびにグルコース、糖化ヘモグロビンおよびすい臓インスリンのレベルの著しい向上をもたらした。高脂肪食の摂取量の変化は、記されなかった（ＭｃＣｌｅａｎ、Ｉｒｗｉｎら  ２００７年）。同様の傾向として、ＧＩＰ受容体ノックアウトマウスは肥満の発達に抵抗性であることが見出されたが、同じ高脂肪食を与えた野生型マウスは、インスリン抵抗性とともにＧＩＰの過分泌と極度の内臓および皮下脂肪の堆積の両方を示した（Ｍｉｙａｗａｋｉ、Ｙａｍａｄａら  ２００２年）。しかし、経口グルコース負荷の後の初期のインスリン応答は損なわれ、より高い血糖レベルにつながった（Ｍｉｙａｗａｋｉ、Ｙａｍａｄａら  １９９９年）。肥満へのＧＩＰの寄与についての詳細な記載は、ＩｒｗｉｎおよびＦｌａｔｔ（ＩｒｗｉｎおよびＦｌａｔｔ  ２００９年）による近年のレビューで見出すこともできる。
【００１５】
グルカゴンと配列が関連し、同じ遺伝子から転写される他のペプチドは、以下の通りである
・グリセンチン
・グリセンチン関連のポリペプチド
・オキシントモジュリン
・ＧＬＰ−１およびその活性型ＧＬＰ−１（７−３６）およびＧＬＰ−１（７−３７）
・ＧＬＰ−２
【００１６】
さらに、関連するポリペプチドがある
・プレプロ血管作用性腸管ペプチド（８１−１２２）（プレプロ−ＶＩＰ／腸管ペプチドＰＨＶ−４２）
【００１７】
これらのペプチドのアミノ酸配列のアラインメントを、図２１に示す。
【発明の概要】
【００１８】
本発明の根底にある問題は、グルカゴンおよび／またはＧＩＰと特異的に相互作用し、それによって、糖尿病、糖尿病合併症、糖尿病状態および／または高グルカゴン血症の予防および／または処置のために適する手段を提供することである。
【００１９】
本発明の根底にあるこれらおよび他の問題は、添付の独立請求項の主題によって解決される。好ましい実施形態は、従属請求項からとることができる。
【００２０】
本発明の根底にある問題は、第１の態様の第１の実施形態でもある第１の態様において、グルカゴンに結合することが可能な核酸分子により解決され、そこで、核酸分子は、Ａ型の核酸分子、Ｂ型の核酸分子およびＣ型の核酸分子を含む群から選択される。
【００２１】
第１の態様の第１の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第２の実施形態では、核酸分子はＡ型の核酸分子であり、Ａ型の核酸分子は中央のヌクレオチドストレッチを含み、中央のヌクレオチドストレッチは、
５’Ｂｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＫＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＲＲＲ３’［配列番号１７３］のヌクレオチド配列を含み、式中、
ｎ１はＧまたはｒＧであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＧまたはｒＧであり、ｎ５はＹまたはｒＴであり、ｎ６はＡまたはｒＡであり、ｎ７はＡまたはｒＡであり、
Ｇ、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｂ、Ｋ、ＹおよびＲのいずれかは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＴのいずれかはリボヌクレオチドである。
【００２２】
第１の態様の第２の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第３の実施形態では、中央のヌクレオチドストレッチは、
５’Ｂｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＲ３’［配列番号１７４］のヌクレオチド配列を含み、式中、
ｎ１はＧまたはｒＧであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＧまたはｒＧであり、ｎ５はＴまたはｒＴであり、ｎ６はＡまたはｒＡであり、ｎ７はＡまたはｒＡであり、
Ｇ、Ａ、Ｔ、Ｃ、ＢおよびＲのいずれかは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＴのいずれかはリボヌクレオチドである。
【００２３】
第１の態様の第２および３の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第４の実施形態では、中央のヌクレオチドストレッチは、
５’Ｔｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１７５］、
５’Ｔｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＡ３’［配列番号１７６］、
５’Ｃｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１７７］、および
５’Ｇｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１７８］
の群から選択されるヌクレオチド配列を含み、式中、
ｎ１はＧまたはｒＧであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＧまたはｒＧであり、ｎ５はＴまたはｒＴであり、ｎ６はＡまたはｒＡであり、ｎ７はＡまたはｒＡであり、
Ｇ、Ａ、ＴおよびＣのいずれかは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＴのいずれかはリボヌクレオチドである。
【００２４】
第１の態様の第２、３および４の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第５の実施形態では、中央のヌクレオチドストレッチは、
５’Ｇｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１７８］のヌクレオチド配列を含み、式中、
ｎ１はＧまたはｒＧであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＧまたはｒＧであり、ｎ５はＴまたはｒＴであり、ｎ６はＡまたはｒＡであり、ｎ７はＡまたはｒＡであり、
Ｇ、Ａ、ＴおよびＣのいずれかは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＴのいずれかはリボヌクレオチドである。
【００２５】
第１の態様の第２、３および４の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第６の実施形態では、中央のヌクレオチドストレッチは、
５’Ｇｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１７７］のヌクレオチド配列を含み、式中、
ｎ１はＧまたはｒＧであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＧまたはｒＧであり、ｎ５はＴまたはｒＴであり、ｎ６はＡまたはｒＡであり、ｎ７はＡまたはｒＡであり、
Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＴはリボヌクレオチドである。
【００２６】
第１の態様の第２、３、４、５および６の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第７の実施形態では、中央のヌクレオチドストレッチは、２’−デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドからなる。
【００２７】
第１の態様の第２、３、４、５、６および７の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第８の実施形態では、中央のヌクレオチドストレッチは、
５’ＧｒＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１７９］、
５’ＧＧＡＡＡＴＧｒＧＧＡＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８０］、
５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡｒＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８１］、
５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧｒＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８２］、
５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８３］、
５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８４］；
５’ＧＧＡＡＡＴＧｒＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８５］、
５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８６］、
５’ＧＧＡＡＡＴＧｒＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８７］、
５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡｒＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８８］、
５’ＧｒＧＡＡＡＴＧｒＧＧＡｒＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８９］、
５’ＧｒＧＡＡＡＴＧｒＧＧＡｒＧｒＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１９０］および
５’ＧｒＧＡＡＡＴＧｒＧＧＡｒＧｒＧＧＣＴＡＧＧｒＴＧＧｒＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１９１］
の群から選択されるヌクレオチド配列を含み、式中、
Ｇ、Ａ、ＴおよびＣのいずれかは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＴのいずれかはリボヌクレオチドである。
【００２８】
第１の態様の第２、３、４、５および６の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第９の実施形態では、中央のヌクレオチドストレッチは、２’−デオキシリボヌクレオチドからなる。
【００２９】
第１の態様の第２、３、４、５、６、７、８および９の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第１０の実施形態では、核酸分子は、５’→３’方向で、第１の末端のヌクレオチドストレッチ、中央のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチを含み、
第１の末端のヌクレオチドストレッチは１〜７ヌクレオチドを含み、
第２の末端のヌクレオチドストレッチは１〜７ヌクレオチドを含む。
【００３０】
第１の態様の第２、３、４、５、６、７、８および９の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第１１の実施形態では、核酸分子は、５’→３’方向で、第２の末端のヌクレオチドストレッチ、中央のヌクレオチドストレッチおよび第１の末端のヌクレオチドストレッチを含み、
第１の末端のヌクレオチドストレッチは１〜７ヌクレオチドを含み、
第２の末端のヌクレオチドストレッチは１〜７ヌクレオチドを含む。
【００３１】
第１の態様の第１０および１１の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第１２の実施形態では、第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｖ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＢＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
Ｚ１はＧであるかまたは存在せず、Ｚ２はＳであるかまたは存在せず、Ｚ３はＶであるかまたは存在せず、Ｚ４はＢであるかまたは存在せず、Ｚ５はＢであるかまたは存在せず、Ｚ６はＶであるかまたは存在せず、Ｚ７はＢであるかまたは存在せず、Ｚ８はＶであるかまたは存在せず、Ｚ９はＶであるかまたは存在せず、Ｚ１０はＢであるかまたは存在せず、Ｚ１１はＳであるかまたは存在せず、Ｚ１２はＣであるかまたは存在しない。
【００３２】
第１の態様の第１０、１１および１２の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第１３の実施形態では、第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｖ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＢＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１はＧであり、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２はＣであるか、
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２はＣであるか、
ｃ）Ｚ１はＧであり、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、
ａ）Ｚ１はＧであり、Ｚ２はＣであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＲであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＹであり、Ｚ１１はＧであり、Ｚ１２はＣであるか、
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＣであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＲであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＹであり、Ｚ１１はＧであり、Ｚ１２はＣであるか、
ｃ）Ｚ１はＧであり、Ｚ２はＣであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＲであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＹであり、Ｚ１１はＧであり、Ｚ１２は存在しない。
【００３３】
第１の態様の第１３の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第１４の実施形態では、
ａ）第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＧＣＡＣＴＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＧＣＡＧＴＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｂ）第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＧＣＡＣＴＧＡ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＧＣＡＧＴＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｃ）第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＧＣＡＧＴＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＴＣＡＣＴＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｄ）第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＧＣＡＣＴＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＴＡＣＴＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｅ）第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＧＣＧＣＴＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＧＣＡＧＴＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｆ）第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＧＣＧＣＣＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＴＣＧＧＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含む。
【００３４】
第１の態様の第１０、１１および１２の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第１５の実施形態では、第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｖ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＢＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｇ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２は存在しない。
【００３５】
第１の態様の第１５の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第１６の実施形態では、
ａ）第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＧＣＧＣＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＴＧＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｂ）第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＧＣＧＣＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＣＧＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｃ）第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＧＧＧＣＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＧＧＣＣＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｄ）第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＧＣＧＣＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＧＧＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｅ）第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＧＡＧＣＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＣＧＣＴＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｆ）第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＧＣＧＴＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＣＡＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｇ）第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＧＣＧＴＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＧＡＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含む。
【００３６】
第１の態様の第１０、１１および１２の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第１７の実施形態では、第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｖ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＢＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｇ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない。
【００３７】
第１の態様の第１７の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第１８の実施形態では、
ａ）第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＧＧＣＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＣＧＣＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｂ）第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＧＣＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＣＧＣＧ３’のヌクレオチド配列を含む。
【００３８】
第１の態様の第１０、１１および１２の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第１９の実施形態では、第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｖ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＢＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｇ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない。
【００３９】
第１の態様の第１９の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第２０の実施形態では、
第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＧＣＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含む。
【００４０】
第１の態様の第１０、１１および１２の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第２１の実施形態では、第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｖ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＢＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｇ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＳであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＳであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＳであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＳであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない。
【００４１】
第１の態様の第２１の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第２２の実施形態では、
第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＧＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含む。
【００４２】
第１の態様の第１０、１１および１２の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第２３の実施形態では、第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｖ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＢＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＶであり、Ｚ７は存在せず、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６は存在せず、Ｚ７はＢであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
ｄ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６は存在せず、Ｚ７は存在せず、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｇ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＣであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６は存在せず、Ｚ７は存在せず、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない。
【００４３】
第１の態様の第２、３、４、５、６、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２および２３の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第２４の実施形態では、核酸分子は配列番号６および配列番号７の群から選択されるヌクレオチド配列を含むか、
配列番号６および配列番号７の群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と少なくとも８５％の同一性を有するか、
配列番号６および配列番号７の群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と相同的であり、相同性は少なくとも８５％である。
【００４４】
第１の態様の第２、３、４、５、６、７、８、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２および２３の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第２５の実施形態では、核酸分子は配列番号２３、配列番号４３、配列番号４７、配列番号４８、配列番号９１、配列番号９２、配列番号１５８および配列番号１５９の群から選択されるヌクレオチド配列を含むか、
配列番号２３、配列番号４３、配列番号４７、配列番号４８、配列番号９１、配列番号９２、配列番号１５８および配列番号１５９の群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と少なくとも８５％の同一性を有するか、
配列番号４３、配列番号４７、配列番号４８、配列番号９１、配列番号９２、配列番号１５８および配列番号１５９の群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と相同的であり、相同性は少なくとも８５％である。
【００４５】
第１の態様の第１の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第２６の実施形態では、核酸分子はＢ型の核酸分子であり、Ｂ型の核酸分子は２９〜３２ヌクレオチドの中央のストレッチを含み、中央のヌクレオチドストレッチは、
５’−ＡＫＧＡＲｎ１ＫＧＴＴＧＳＹＡＷＡｎ２ＲＴＴＣＧｎ３ＴＴＧＧＡｎ４ＴＣｎ５−‘３［配列番号１９７］、
５’−ＡＧＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＧＴＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＣＴＧ−‘３［配列番号１９８］、
５’−ＡＧＡＡＧＧＴＣＧＧＴＡＡＧＴＴＴＣＧＧＴＡＧＧＡＴＣＴＧ−‘３［配列番号１９９］、
５’−ＡＧＧＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ−‘３［配列番号２００］、
５’−ＡＧＧＡＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ−‘３［配列番号２０１］および
５’−ＡＧＧＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ−‘３［配列番号２０２］
の群から選択されるヌクレオチド配列を含み、式中、ｎ１はＡまたはｒＡであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＴまたはｒＵであり、ｎ５はＡまたはｒＡであり、
Ｇ、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｋ、Ｙ、Ｓ、ＷおよびＲのいずれかは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＵのいずれかはリボヌクレオチドである。
【００４６】
第１の態様の第２６の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第２７の実施形態では、中央のヌクレオチドストレッチは、
５’ＡＧＧＡＡｎ１ＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡｎ２ＧＴＴＣＧｎ３ＴＴＧＧＡｎ４ＴＣｎ５３’［配列番号２０３］のヌクレオチド配列を含み、式中、
ｎ１はＡまたはｒＡであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＴまたはｒＵであり、ｎ５はＡまたはｒＡであり、
Ｇ、Ａ、ＴおよびＣのいずれかは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＵのいずれかはリボヌクレオチドである。
【００４７】
第１の態様の第２６および２７の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第２８の実施形態では、中央のヌクレオチドストレッチは、２’−デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドからなる。
【００４８】
第１の態様の第２６、２７および２８の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第２９の実施形態では、中央のヌクレオチドストレッチは、
５’ＡＧＧＡＡｒＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ３’［配列番号２０４］、
５’ＡＧＧＡＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡｒＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ３’［配列番号２０５］、
５’ＡＧＧＡＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡｒＵＴＣＡ３’［配列番号２０６］、
５’ＡＧＧＡＡｒＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡｒＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ３’［配列番号２０７］、
５’ＡＧＧＡＡｒＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡｒＵＴＣＧ３’［配列番号２０８］、
５’ＡＧＧＡＡｒＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡｒＵＴＣＡ３’［配列番号２０９］、
５’ＡＧＧＡＡｒＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡｒＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡｒＵＴＣＡ３’［配列番号２１０］および
５’ＡＧＧＡＡｒＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡｒＧＧＴＴＣＧｒＧＴＴＧＧＡｒＵＴＣｒＡ３’［配列番号２１１］
の群から選択されるヌクレオチド配列を含み、式中、
Ｇ、Ａ、ＴおよびＣのいずれかは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＵのいずれかはリボヌクレオチドである。
【００４９】
第１の態様の第２６および２７の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第３０の実施形態では、中央のヌクレオチドストレッチは、２’−デオキシリボヌクレオチドからなる。
【００５０】
第１の態様の第２６、２７、２８、２９および３０の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第３１の実施形態では、核酸分子は、５’→３’方向で、第１の末端のヌクレオチドストレッチ、中央のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチを含み、
第１の末端のヌクレオチドストレッチは３〜９ヌクレオチドを含み、
第２の末端のヌクレオチドストレッチは３〜１０ヌクレオチドを含む。
【００５１】
第１の態様の第２６、２７、２８、２９および３０の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第３２の実施形態では、核酸分子は、５’→３’方向で、第２の末端のヌクレオチドストレッチ、中央のヌクレオチドストレッチおよび第１の末端のヌクレオチドストレッチを含み、
第１の末端のヌクレオチドストレッチは３〜９ヌクレオチドを含み、
第２の末端のヌクレオチドストレッチは３〜１０ヌクレオチドを含む。
【００５２】
第１の態様の第３１および３２の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第３３の実施形態では、第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＫ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＫＶＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
Ｚ１はＣであるかまたは存在せず、Ｚ２はＧであるかまたは存在せず、Ｚ３はＲであるかまたは存在せず、Ｚ４はＢであるかまたは存在せず、Ｚ５はＢであるかまたは存在せず、Ｚ６はＳであるかまたは存在せず、Ｚ７はＳであるかまたは存在せず、Ｚ８はＶであるかまたは存在せず、Ｚ９はＶであるかまたは存在せず、Ｚ１０はＫであるかまたは存在せず、Ｚ１１はＭであるかまたは存在せず、Ｚ１２はＳであるかまたは存在しない。
【００５３】
第１の態様の第３１、３２および３３の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第３４の実施形態では、第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＫ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＫＶＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１はＣであり、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１はＭであり、Ｚ１２はＳであるか、
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１はＭであり、Ｚ１２はＳであるか、
ｃ）Ｚ１はＣであり、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１はＭであり、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＴＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１はＣであり、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０はＴであり、Ｚ１１はＣであり、Ｚ１２はＧであるか、
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０はＴであり、Ｚ１１はＣであり、Ｚ１２はＧであるか、
ｃ）Ｚ１はＣであり、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０はＴであり、Ｚ１１はＣであり、Ｚ１２は存在しない。
【００５４】
第１の態様の第３４の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第３５の実施形態では、
ａ）第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＧＡＣＴＣＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＴＣＧＡＧＴＣＧ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｂ）第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＧＧＣＴＣＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＴＣＧＡＧＴＣＧ３’のヌクレオチド配列を含む。
【００５５】
第１の態様の第３１、３２および３３の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第３６の実施形態では、第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＫ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＫＶＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１はＭであり、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１はＭであり、Ｚ１２は存在しない。
【００５６】
第１の態様の第３１、３２および３３の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第３７の実施形態では、第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＫ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＫＶＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＴＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＡであり、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０はＴであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＡであり、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０はＴであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＡであり、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０はＴであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない。
【００５７】
第１の態様の第３１、３２および３３の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第３８の実施形態では、第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＫ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＫＶＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＴＳＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＳであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＳであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＳであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない。
【００５８】
第１の態様の第３８の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第３９の実施形態では、
ａ）第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＧＴＣＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＴＣＧＡＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｂ）第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＴＧＣＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＴＣＧＣＡ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｃ）第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＧＧＣＣＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＴＧＧＣＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｄ）第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＧＣＣＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＴＣＧＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｅ）第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＴＣＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＴＣＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含む。
【００５９】
第１の態様の第３１、３２および３３の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第４０の実施形態では、第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＫ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＫＶＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＴＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない。
【００６０】
第１の態様の第３１、３２および３３の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第４１の実施形態では、第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＫ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＫＶＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６は存在せず、Ｚ７はＳであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＳであり、Ｚ７は存在せず、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない。
【００６１】
第１の態様の第３１、３２および３３の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第４２の実施形態では、第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＫ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＫＶＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６は存在せず、Ｚ７は存在せず、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
第１の末端のヌクレオチドストレッチは５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２の末端のヌクレオチドストレッチは５’ＣＴＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６は存在せず、Ｚ７は存在せず、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない。
【００６２】
第１の態様の第２６、２７、２８、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１および４２の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第４３の実施形態では、核酸分子は配列番号５０、配列番号５４、配列番号５８、配列番号５９、配列番号８８および配列番号１５５の群から選択されるヌクレオチド配列を含むか、
配列番号５０、配列番号５４、配列番号５８、配列番号５９、配列番号８８および配列番号１５５の群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と少なくとも８５％の同一性を有するか、
配列番号５０、配列番号５４、配列番号５８、配列番号５９、配列番号８８および配列番号１５５の群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と相同的であり、相同性は少なくとも８５％である。
【００６３】
第１の態様の第２６、２７、２８、２９、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１および４２の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第４４の実施形態では、核酸分子は配列番号７１、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８９、配列番号９０、配列番号１５６および配列番号１５７の群から選択されるヌクレオチド配列を含むか、
配列番号７１、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８９、配列番号９０、配列番号１５６および配列番号１５７の群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と少なくとも８５％の同一性を有するか、
配列番号７１、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８９、配列番号９０、配列番号１５６および配列番号１５７の群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と相同的であり、相同性は少なくとも８５％である。
【００６４】
第１の態様の第１の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第４５の実施形態では、核酸分子はＣ型の核酸分子であり、
Ｃ型の核酸分子は、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号９７および配列番号１０２の群から選択されるヌクレオチド配列を含むか、
配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号９７および配列番号１０２の群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と少なくとも８５％の同一性を有するか、
配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号９７および配列番号１０２の群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と相同的であり、相同性は少なくとも８５％である。
【００６５】
第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４および４５の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第４６の実施形態では、核酸分子のヌクレオチドまたは核酸分子を形成するヌクレオチドはＬ−ヌクレオチドである。
【００６６】
第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４および４５の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第４７の実施形態では、核酸分子はＬ−核酸分子である。
【００６７】
第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６および４７の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第４８の実施形態では、核酸分子は、グルカゴンに結合することが可能である少なくとも１つの結合部分を含み、このような結合部分はＬ−ヌクレオチドからなる。
【００６８】
第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７および４８の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第４９の実施形態では、核酸分子はグルカゴンによって仲介される活性のアンタゴニストである。
【００６９】
第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８および４９の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第５０の実施形態では、核酸分子はＧＩＰに結合することが可能である。
【００７０】
第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９および５０の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第５１の実施形態では、核酸はＧＩＰによって仲介される活性のアンタゴニストである。
【００７１】
第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０および５１の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第５２の実施形態では、核酸分子は修飾基を含み、修飾基を含む核酸分子の生物体からの排泄速度は、修飾基を含まない核酸と比較して低減される。
【００７２】
第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０および５１の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第５３の実施形態では、核酸分子は修飾基を含み、修飾基を含む核酸分子は、修飾基を含まない核酸分子と比較して生物体内で増加した保持時間を有する。
【００７３】
第１の態様の第５２および５３の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第５４の実施形態では、修飾基は生分解性および非生分解性修飾を含む群から選択され、好ましくは、修飾基は、ポリエチレングリコール、直鎖ポリエチレングリコール、分枝ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチルデンプン、ペプチド、タンパク質、多糖、ステロール、ポリオキシプロピレン、ポリオキシアミデートおよびポリ（２−ヒドロキシエチル）−Ｌ−グルタミンを含む群から選択される。
【００７４】
第１の態様の第５４の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第５５の実施形態では、修飾基は、直鎖ポリエチレングリコールまたは分枝ポリエチレングリコールからなるポリエチレングリコールであり、ポリエチレングリコールの分子量は、好ましくは約２０，０００〜約１２０，０００Ｄａ、より好ましくは約３０，０００〜約８０，０００Ｄａ、最も好ましくは約４０，０００Ｄａである。
【００７５】
第１の態様の第５４の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第５６の実施形態では、修飾基はヒドロキシエチルデンプンであり、ヒドロキシエチルデンプンの分子量は、約５０ｋＤａ〜約１０００ｋＤａ、より好ましくは約１００ｋＤａ〜約７００ｋＤａ、最も好ましくは３００ｋＤａ〜５００ｋＤａである。
【００７６】
第１の態様の第５２、５３、５４、５５および５６の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第５７の実施形態では、修飾基は、リンカーを介して核酸分子に結合しており、好ましくはリンカーは生分解性リンカーである。
【００７７】
第１の態様の第５２、５３、５４、５５および５６の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第５８の実施形態では、修飾基は、核酸分子の５’末端ヌクレオチドおよび／もしくは３’末端ヌクレオチドに、ならびに／または核酸分子の５’末端ヌクレオチドと核酸分子の３’末端ヌクレオチドの間の核酸分子のヌクレオチドに結合している。
【００７８】
第１の態様の第５２、５３、５４、５５、５６、５７および５８の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第５９の実施形態では、生物体は動物またはヒト生体、好ましくはヒト生体である。
【００７９】
本発明の根底にある問題は、第２の態様の第１の実施形態でもある第２の態様において、疾患または障害または高グルカゴン血症の処置および／または予防のための方法で用いるための、第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８および５９の実施形態のいずれか１つによる核酸分子により解決される。
【００８０】
第２の態様の第１の実施形態の一実施形態でもある第２の態様の第２の実施形態では、疾患または障害は、糖尿病、糖尿病合併症および糖尿病状態を含む群から選択される。
【００８１】
第２の態様の第２の実施形態の一実施形態でもある第２の態様の第３の実施形態では、糖尿病は、１型糖尿病、２型糖尿病および妊娠性糖尿病を含む群から選択される。
【００８２】
第２の態様の第３の実施形態の一実施形態でもある第２の態様の第４の実施形態では、糖尿病合併症または糖尿病状態は、アテローム硬化症、冠状動脈疾患、糖尿病性足疾患、糖尿病網膜症、増殖性糖尿病網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、糖尿病性硝子体網膜症、増殖性糖尿病性硝子体網膜症、糖尿病腎症、糖尿病神経障害、グルコース不耐性、心疾患、高血圧、高コレステロール、耐糖能異常、不能症、インスリン抵抗性、腎不全、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症が有るか無い非アルコール性脂肪肝炎、末梢血管疾患、低減したグルコース感受性、低減したインスリン感受性、肥満、肝脂肪変性、高血糖、糖尿病関連脈管炎、糖尿病ケトアシドーシス、高浸透圧性高血糖性非ケトン性昏睡、体重減少壊死融解性移動性紅斑、貧血、正常な凝固機能の存在下での静脈血栓、および神経精神医学的徴候の群から選択される糖尿病合併症または糖尿病状態である。
【００８３】
本発明の根底にある問題は、第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８および５９の実施形態のいずれか１つに記載の核酸分子および任意選択でさらなる構成要素を含み、さらなる構成要素は、薬学的に許容される添加剤、薬学的に許容される担体および薬学的に活性な薬剤を含む群から選択される医薬組成物による第３の態様の第１の実施形態でもある第３の態様で解決される。
【００８４】
第３の態様の第１の実施形態の一実施形態でもある第３の態様の第２の実施形態では、医薬組成物は、第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８および５９の実施形態のいずれか１つに記載の核酸分子および薬学的に許容される担体を含む。
【００８５】
本発明の根底にある問題は、医薬の製造のための、第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８および５９の実施形態のいずれか１つに記載の核酸分子の使用による第４の態様の第１の実施形態でもある第４の態様で解決される。
【００８６】
第４の態様の第１の実施形態の一実施形態でもある第４の態様の第２の実施形態では、医薬はヒト医療用、または獣医医療用である。
【００８７】
本発明の根底にある問題は、診断手段の製造のための、第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８および５９の実施形態のいずれか１つに記載の核酸分子の使用による第５の態様の第１の実施形態でもある第４の態様で解決される。
【００８８】
第４の態様の第１の実施形態の一実施形態でもある第４の態様の第３の実施形態では、医薬は、疾患または障害または高グルカゴン血症の処置および／または予防のためであり、疾患または障害は、糖尿病、糖尿病合併症および糖尿病状態を含む群から選択される。
【００８９】
第４の態様の第３の実施形態の一実施形態でもある第４の態様の第４の実施形態では、糖尿病は、１型糖尿病、２型糖尿病および妊娠性糖尿病を含む群から選択される。
【００９０】
第４の態様の第３の実施形態の一実施形態でもある第４の態様の第５の実施形態では、
糖尿病合併症または糖尿病状態は、アテローム硬化症、冠状動脈疾患、糖尿病性足疾患、糖尿病網膜症、増殖性糖尿病網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、糖尿病性硝子体網膜症、増殖性糖尿病性硝子体網膜症、糖尿病腎症、糖尿病神経障害、グルコース不耐性、心疾患、高血圧、高コレステロール、耐糖能異常、不能症、インスリン抵抗性、腎不全、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症が有るか無い非アルコール性脂肪肝炎、末梢血管疾患、低減したグルコース感受性、低減したインスリン感受性、肥満、肝脂肪変性、高血糖、糖尿病関連脈管炎、糖尿病ケトアシドーシス、高浸透圧性高血糖性非ケトン性昏睡、体重減少壊死融解性移動性紅斑、貧血、正常な凝固機能および神経精神医学的徴候の存在下での静脈血栓の群から選択される糖尿病合併症または糖尿病状態である。
【００９１】
本発明の根底にある問題は、請求項１〜５９のいずれか１項に記載の核酸分子およびグルカゴンおよび／またはＧＩＰを含み、好ましくは結晶性複合体である複合体による第６の態様の第１の実施形態でもある第６の態様で解決される。
【００９２】
本発明の根底にある問題は、グルカゴンおよび／またはＧＩＰの検出ための、第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８および５９の実施形態のいずれか１つに記載の核酸分子の使用による第７の態様の第１の実施形態でもある第７の態様で解決される。
【００９３】
本発明の根底にある問題は、グルカゴンおよび／またはＧＩＰによって仲介される活性のアンタゴニストのスクリーニングの方法であって、
−グルカゴンおよび／またはＧＩＰによって仲介される活性の候補アンタゴニストを用意するステップと、
−第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８および５９の実施形態のいずれか１つに記載の核酸分子を用意するステップと、
−グルカゴンおよび／またはＧＩＰによって仲介される活性のアンタゴニストの存在下でシグナルを提供する試験系を用意するステップと、
−グルカゴンおよび／またはＧＩＰによって仲介される活性の候補アンタゴニストがグルカゴンおよび／またはＧＩＰによって仲介される活性のアンタゴニストであるかどうか判定するステップと
を含む方法による第８の態様の第１の実施形態でもある第８の態様で解決される。
【００９４】
本発明の根底にある問題は、第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８および５９の実施形態のいずれか１つに記載の核酸分子を含む、グルカゴンの検出のためのキットによる第９の態様の第１の実施形態でもある第９の態様で解決される。
【００９５】
本発明の根底にある問題は、試料中の第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８および５９の実施形態のいずれか１つに記載の核酸の検出方法であって、
ａ）第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８および５９の実施形態のいずれか１つに記載の核酸分子の第１の部分と少なくとも部分的に相補的である捕捉プローブ、および第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８および５９の実施形態のいずれか１つに記載の核酸分子の第２の部分と少なくとも部分的に相補的である検出プローブ、あるいは、第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８および５９の実施形態のいずれか１つに記載の核酸分子の第２の部分と少なくとも部分的に相補的である捕捉プローブ、および第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８および５９の実施形態のいずれか１つに記載の核酸分子の第１の部分と少なくとも部分的に相補的である検出プローブを用意するステップと；
ｂ）捕捉プローブおよび検出プローブを、別々にまたは一緒に、第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８および５９の実施形態のいずれか１つに記載の核酸分子を含有する試料に加えるか、または第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８および５９の実施形態のいずれか１つに記載の核酸分子を含有すると推定される試料に加えるステップと；
ｃ）捕捉プローブおよび検出プローブを、第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８および５９の実施形態のいずれか１つに記載の核酸分子またはその一部と同時に、または任意の順序で逐次的に反応させるステップと；
ｄ）任意選択で、捕捉プローブが、ステップａ）で提供される第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８および５９の実施形態のいずれか１つに記載の核酸分子とハイブリダイズするかどうか検出するステップと；
ｅ）第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８および５９の実施形態のいずれか１つに記載の核酸分子および捕捉プローブおよび検出プローブからなる、ステップｃ）で形成される複合体を検出するステップと
を含む方法による第１０の態様の第１の実施形態でもある第１０の態様で解決される。
【００９６】
第１０の態様の第１の実施形態の一実施形態でもある第１０の態様の第２の実施形態では、検出プローブは検出手段を含み、および／または捕捉プローブは支持体、好ましくは固体支持体に固定化されている。
【００９７】
第１０の態様の第１および２の実施形態の一実施形態でもある第１０の態様の第３の実施形態では、ステップｅ）で複合体の一部である検出プローブだけが検出されるように、ステップｃ）で形成される複合体の一部でないあらゆる検出プローブが反応から除去される。
【００９８】
第１０の態様の第１、２および３の実施形態の一実施形態でもある第１０の態様の第４の実施形態では、ステップｅ）は、捕捉プローブおよび検出プローブを、第１の態様の第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８および５９の実施形態のいずれか１つに記載の核酸分子またはその一部の存在下、および前記核酸分子またはその一部の非存在下でハイブリダイズさせたときに、検出手段によって生成されるシグナルを比較するステップを含む。
【００９９】
いかなる理論によっても縛られることを望まないが、本発明による核酸分子が、グルカゴンに特異的におよび高い親和性で結合し、それによってそのグルカゴン受容体へのグルカゴンの結合を阻害すること、および／または、したがって、直接または間接に、糖尿病、糖尿病合併症、糖尿病状態および／または高グルカゴン血症の処置のために有益であり、用いられることを本発明者らは見出した。さらに、本発明者らは、本発明による核酸分子が、グルカゴンとグルカゴン受容体との相互作用をブロックするのに適することを見出した。その範囲において、本発明による核酸分子は、グルカゴン受容体のアンタゴニストとして、およびそれぞれ、グルカゴンの作用、特にその受容体へのグルカゴンの作用のアンタゴニストと見ることもできる。
【０１００】
グルカゴンに対するアンタゴニストは、グルカゴンに結合する分子−例えば本発明による核酸分子−であり、グルカゴンの機能を、好ましくは実施例に記載のインビトロアッセイまたはインビボモデルで阻害する。
【０１０１】
本発明による核酸分子、または組成物、好ましくは核酸分子を含む医薬組成物を用いることによって処置または予防することができる様々な疾患、状態および障害に関して、そのような疾患、状態および障害は、特に本出願の導入部分に記載および説明されるものを含む、本明細書に記載されるものであると認められなければならない。その範囲において、明細書のそれぞれの節および明細書の導入部分は、前記疾患、状態および障害のそれぞれの予防および処置のための、本発明の核酸分子の適合性を教示する、本開示の不可欠な部分を形成する。
【０１０２】
さらに、グルカゴン−グルカゴン受容体系の生理作用がグルカゴンのより高い血漿レベルに関連するならば、本発明による核分子は好ましい。
【０１０３】
本明細書で用いるように、用語グルカゴンは、哺乳動物のグルカゴンを含む任意のグルカゴンを指すが、それに限定されない。好ましくは、哺乳動物のグルカゴンは、ヒト、ラット、マウス、サル、ブタ、ウサギ、ハムスター、イヌ、ヒナ、ニワトリおよびウシのグルカゴンを含む群から選択される（図２２のグルカゴン種のアラインメントを参照）。より好ましくは、グルカゴンはヒトグルカゴンである。様々なグルカゴンのアミノ酸配列が当業者に公知であり、とりわけ図２２に示される。
【０１０４】
グルカゴンに対するアンタゴニストは、グルカゴンに結合する分子（例えば本発明による核酸分子）であり、グルカゴンの機能を、好ましくは実施例に記載のインビトロアッセイまたはインビボモデルで阻害する。
【０１０５】
さらに、本発明者らは、本発明によるＢ型の核酸分子が、そのグルカゴン受容体へのグルカゴンの結合およびその受容体へのＧＩＰの結合を阻害することを見出した。さらに、本発明によるＢ型の核酸分子は、グルカゴンとグルカゴン受容体、およびＧＩＰとＧＩＰ受容体との相互作用をブロックするのに適する。その範囲において、本発明によるＢ型の核酸分子は、グルカゴン受容体のアンタゴニストとして、およびＧＩＰ受容体のアンタゴニストと見ることもできる。
【０１０６】
ＧＩＰに対するアンタゴニストは、ＧＩＰに結合する分子（例えば本発明による核酸分子）であり、ＧＩＰの機能を、好ましくは実施例に記載のインビトロアッセイまたはインビボモデルで阻害する。
【０１０７】
本明細書で用いるように、用語ＧＩＰは、それに限定されないが哺乳動物のＧＩＰを含む任意のＧＩＰを指す。より好ましくは、ＧＩＰはヒトＧＩＰである。ＧＩＰのアミノ酸配列が当業者に公知であり、とりわけ本明細書に開示される配列番号１６８によって代表される。
【０１０８】
本発明による核酸が核酸分子であることは、本発明の範囲内である。その範囲において、否定されていないならば、本明細書において用語核酸および核酸分子は同義で用いられる。さらに、本明細書において、そのような核酸は、好ましくは、本発明による核酸分子、本発明による核酸、発明の核酸または発明の核酸分子とも呼ばれる。
【０１０９】
本明細書に記載される本発明による核酸の特徴は、核酸が単独で、または任意の組合せで用いられる、本発明の任意の態様で実現することができる。
【０１１０】
本明細書でさらに詳細に概説されるように、本発明者らは、それによって、本明細書で、開示されるようにも呼ばれるヌクレオチドストレッチで核酸分子を特徴付けることができる、いくつかの異なるグルカゴン結合核酸分子を同定した（実施例１を参照）。実施例８で実験により示されるように、発明者らは、驚くべきことにいくつかの系で、本発明による核酸分子が糖尿病の処置のために適することを実証することができた。
【０１１１】
グルカゴンおよび／またはＧＩＰに結合する本発明の異なる型のグルカゴン結合核酸分子の各々は、３つの異なるヌクレオチドストレッチ、すなわち、第１の末端のヌクレオチドストレッチ、中央のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチを含む。一般に、本発明のグルカゴン結合核酸分子は、それらの５’末端および３’末端に、末端のヌクレオチドストレッチの各１つ、すなわち、第１の末端のヌクレオチドストレッチまたは第２の末端のヌクレオチドストレッチ（５’末端のヌクレオチドストレッチおよび３’末端のヌクレオチドストレッチとも呼ばれる）を含む。第１の末端のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチは、原則的にそれらの塩基相補性により、互いとハイブリダイズすることができ、それにより、ハイブリダイゼーションの結果、二本鎖構造が形成される。しかし、そのようなハイブリダイゼーションは、生理的および／または非生理的条件下の分子で必ずしも実現されるとは限らない。グルカゴン結合核酸分子の３つのヌクレオチドストレッチ（第１の末端のヌクレオチドストレッチ、中央のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチ）は、互いに５’→３’方向に、すなわち、第１の末端のヌクレオチドストレッチ中央のヌクレオチドストレッチ第２の末端のヌクレオチドストレッチのように配列される。あるいは、第２の末端のヌクレオチドストレッチ、中央のヌクレオチドストレッチおよび末端の第１のヌクレオチドストレッチが、互いに５’→３’方向に配列される。
【０１１２】
異なるグルカゴン結合核酸分子間の規定のストレッチの配列の差は、グルカゴンおよび／またはＧＩＰへの結合親和性に影響することができる。本発明の異なるグルカゴン結合核酸分子の結合分析に基づいて、中央のストレッチおよびそれを形成するヌクレオチドは、グルカゴンおよび／またはＧＩＰへの結合のために、個々に、より好ましくは全体として必須である。
【０１１３】
用語「ストレッチ」および「ヌクレオチドストレッチ」は、特に断らない限り、本明細書において同義で用いられる。
【０１１４】
好ましい実施形態では、本発明による核酸分子は、単一の核酸分子である。さらなる実施形態では、単一の核酸分子は、多数の単一の核酸分子として、または多数の単一の核酸分子種として存在する。
【０１１５】
当業者は、本発明による核酸分子が、好ましくはホスホジエステル連結または結合を通して互いに共有結合しているヌクレオチドから好ましくはなると認める。
【０１１６】
本発明による核酸分子が、原則として互いとハイブリダイズすることができる、２つ以上のストレッチまたはその一部を含むことは、本発明の範囲内である。そのようなハイブリダイゼーションの結果、二本鎖構造が形成される。当業者は、そのようなハイブリダイゼーションは、特にインビトロおよび／またはインビボの条件下で起こることができるか起こることができないと認める。さらに、ハイブリダイゼーションの場合に、少なくとも塩基対形成の規則に基づき、そのようなハイブリダイゼーション、したがって二本鎖構造の形成が原則として起こることができる、２つのストレッチの全長にわたってそのようなハイブリダイゼーションが必ずしも起こるとは限らない。好ましくは本明細書で用いられるように、二本鎖構造は、核酸分子の一部であるか、または２つ以上の別個の鎖もしくは２つの空間的に分離した核酸分子ストレッチの単一の鎖によって形成され、それによって、好ましくはワトソン−クリック型塩基対規則による塩基対形成である、少なくとも１つ、好ましくは２つ以上の塩基対が存在する構造である。当業者は、Ｈｏｏｇｓｔｅｎ塩基対形成などの他の塩基対形成がそのような二本鎖構造に存在するか、それを形成してもよいことを認めよう。２つのストレッチがハイブリダイズするという特徴が、そのようなハイブリダイゼーションがインビボおよび／またはインビトロで実際に起こるか否かを問わず、２つのストレッチの塩基相補性のためにそのようなハイブリダイゼーションが起こると仮定されることを好ましくは示すことも認められる。
【０１１７】
好ましい実施形態では、本明細書で用いられる用語配置は、本明細書に開示される核酸分子に関連して、本明細書に記載される構造的または機能的特徴またはエレメントの順序または配列を意味する。
【０１１８】
当業者は、本発明による核酸分子が、グルカゴンおよび／またはＧＩＰに結合することが可能であると認めよう。いかなる理論によっても縛られることを望まないが、本発明者らは、グルカゴン結合および／またはＧＩＰ結合が、本発明の核酸分子の三次元の構造的形質またはエレメントの組合せから生じると仮定し、それらはそのような形質またはエレメントを形成する本発明の核酸分子のヌクレオチドの一次配列の配向および折畳みパターンに起因し、それによって好ましくは、そのような形質またはエレメントは、本発明の核酸分子の第１の末端のヌクレオチドストレッチ、中央のヌクレオチドストレッチおよび／または第２の末端のヌクレオチドストレッチである。個々の形質またはエレメントは様々な異なる個々の配列によって形成されてもよいこと、その変動の程度は三次元構造に従って異なってよいこと、グルカゴンおよび／またはＧＩＰへの本発明の核酸分子の結合を仲介するために、そのようなエレメントまたは形質が形成されなければならないことは明白である。本発明の核酸の全体の結合特性は、様々なエレメントおよび形質の相互作用からそれぞれもたらされ、それは、本発明の核酸分子とその標的、すなわちグルカゴンおよびＧＩＰそれぞれとの相互作用を最終的にもたらす。再度、いかなる理論によっても縛られることを望まないが、本発明の核酸に特徴的である中央のヌクレオチドストレッチは、グルカゴンおよび／またはＧＩＰとの本発明の核酸分子の結合の仲介にとって重要である。したがって、本発明による核酸分子は、グルカゴンと相互作用することが可能である。さらに、当業者は、本発明による核酸分子が、グルカゴンおよび／またはＧＩＰのアンタゴニストであることを認めよう。この理由で、本発明による核酸分子は、グルカゴンおよび／またはＧＩＰと関連するかそれによって引き起こされる任意の疾患または状態の処置および予防のためにそれぞれ適する。そのような疾患および状態は、グルカゴンおよび／またはＧＩＰが前記疾患および状態にそれぞれ関与するか関連することを立証し、参照により本明細書に組み込まれている、本発明の核酸分子の治療的使用のための科学的な根拠を提供する先行技術から持ってくることができる。
【０１１９】
本発明による核酸分子は、本明細書に開示される特定のヌクレオチド配列に本質的に相同的である核酸分子も含むものとする。実質的に相同的という用語は、相同性が少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％を超えるものであると、理解されるものとする。
【０１２０】
本発明による核酸分子に存在する相同的ヌクレオチドの実際の百分率は、核酸に存在するヌクレオチドの総数によって決まる。修飾パーセントは、核酸分子に存在するヌクレオチドの総数に基づいて計算することができる。
【０１２１】
２つの核酸分子の間の相同性は、当業者に公知である通りに判定することができる。より具体的には、指定されたプログラムパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列の配列相同性パーセントを計算するために、配列比較アルゴリズムを用いることができる。試験配列は、好ましくは、異なる核酸分子に相同的と言われているか、またはそれが相同的であるかどうか、もしそうであるならばどの程度であるか試験される配列または核酸分子であり、それによって、そのような異なる核酸分子も参照配列と呼ばれる。一実施形態では、参照配列は本明細書に記載される核酸分子、好ましくは、配列番号６、配列番号７、配列番号４３、配列番号４７、配列番号４８、配列番号９１、配列番号９２、配列番号７１、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号５０、配列番号５４または配列番号５９のいずれか１つによる配列を有する核酸分子である。比較のための配列の最適なアラインメントは、例えば、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ、１９８１年）のローカル相同性アルゴリズム、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ、１９７０年）の相同性アラインメントアルゴリズム、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ（ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ、１９８８年）の類似性検索法、これらのアルゴリズム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓソフトウェアパッケージ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．中のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡ）のコンピュータによる実行によって、または目視検査によって実行することができる。
【０１２２】
配列同一性パーセントを判定するのに適するアルゴリズムの一例は、ベーシックローカルアラインメント検索ツール（以下、「ＢＬＡＳＴ」）で用いられるアルゴリズムであり、例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（Ａｌｔｓｃｈｕｌら  １９９０年およびＡｌｔｓｃｈｕｌら、１９９７年）を参照されたい。ＢＬＡＳＴ分析を実施するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（以下、「ＮＣＢＩ」）を通して公開されている。ＮＣＢＩから入手できるソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴＮ（ヌクレオチド配列のために）およびＢＬＡＳＴＰ（アミノ酸配列のために）を用いて配列同一性を判定するのに用いられるデフォルトパラメータは、ＭｃＧｉｎｎｉｓら（ＭｃＧｉｎｎｉｓら、２００４年）に記載されている。
【０１２３】
本発明による核酸分子は、本明細書に開示され、それ／それらのヌクレオチド配列によって規定される本発明の核酸に対して、一定程度の同一性を有する核酸分子も含むものとする。より好ましくは、本発明は、それらのヌクレオチド配列またはその一部によって規定される本発明の核酸分子に対して少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％を超える同一性を有する核酸分子も含む。
【０１２４】
本発明による発明の核酸または核酸分子という用語は、好ましくはその核酸分子またはその一部がグルカゴンへの結合に関与するかグルカゴンへの結合が可能である範囲内で、本明細書に開示される核酸配列またはその一部を含む核酸分子、例えば、本発明による核酸の代謝産物または誘導体も含むものとする。そのような核酸分子は、本明細書に開示されるものから、例えばトランケーションによって誘導することができる。トランケーションは、本明細書に開示される本発明の核酸分子の末端の片方または両方と関連していてよい。さらに、トランケーションはヌクレオチドの内部配列と関連していてよく、すなわちそれは、５’末端ヌクレオチドと３’末端ヌクレオチドの間のヌクレオチドの１つまたはいくつかとそれぞれ関連していてよい。さらに、トランケーションは、本明細書に開示される本発明の核酸分子の配列からの、単一のヌクレオチドというわずかな欠失を含むものとする。トランケーションは、本発明の核酸分子の１つを超えるヌクレオチドストレッチに関連していてもよく、それにより、ヌクレオチドストレッチは長さがわずか１ヌクレオチドであってよい。本発明による核酸分子の結合は、好ましくは実施例のパートで本明細書に記載される通りに、慣用される実験を用いて、または本明細書に記載される方法を用いるか採用することによって、当業者が判断することができる。
【０１２５】
本発明による核酸分子は、Ｄ−核酸分子またはＬ−核酸分子のいずれかであってよい。好ましくは、本発明による核酸分子は、Ｌ−核酸分子である。
【０１２６】
一実施形態では、それらの核酸配列に関して完全に本明細書で記載される核酸分子の各々およびいずれも、指示される特定のヌクレオチド配列に限定されることも、本発明の範囲内である。言い換えると、用語「含むこと」または「含む」は、そのような実施形態では、含有するまたはからなるという意味で解釈するものとする。
【０１２７】
本発明による核酸分子はより長い核酸の一部であり、それにより、このより長い核酸はいくつかの部分を含み、それにより、少なくとも１つのそのような部分は本発明の核酸分子またはその一部であることも、本発明の範囲内である。そのようなより長い核酸の他の部分は、１つまたはいくつかのＤ−核酸またはＬ−核酸であってよい。任意の組合せを、本発明と共に用いることができる。より長い核酸のこれらの他の部分は、結合と異なる、好ましくはグルカゴンおよび／またはＧＩＰへの結合と異なる機能を示すことができる。１つの可能な機能は、他の分子との相互作用を可能にすることであり、それにより、そのような他の分子は、例えば固定、架橋、検出または増幅のために、グルカゴンと好ましくは異なる。本発明のさらなる実施形態では、本発明による核酸分子は、個々のまたは組み合わせた部分として、本発明の核酸分子のいくつかを含む。本発明の核酸分子のいくつかを含むそのような核酸も、より長い核酸という用語に包含される。
【０１２８】
本明細書で用いられるＬ−核酸は、Ｌ−ヌクレオチドからなる、好ましくは完全にＬ−ヌクレオチドからなる核酸または核酸分子である。
【０１２９】
本明細書で用いられるＤ−核酸は、Ｄ−ヌクレオチドからなる、好ましくは完全にＤ−ヌクレオチドからなる核酸または核酸分子である。
【０１３０】
明示的に否定されていないならば、本明細書において用語核酸および核酸分子は互換的に用いられる。
【０１３１】
さらに、否定されていないならば、本明細書においていかなるヌクレオチド配列も５’→３’方向で示される。
【０１３２】
好ましくは本明細書で用いられるように、ヌクレオチドのいかなる位置も、そのようなヌクレオチドを含有する配列、ストレッチ、またはサブストレッチの５’末端に対して決められるか呼ばれる。したがって、第２のヌクレオチドは、配列、ストレッチ、またはサブストレッチの５’末端からそれぞれ数えて第２のヌクレオチドである。さらに、それに従って、最後から２番目のヌクレオチドは、配列、ストレッチ、またはサブストレッチの３’末端からそれぞれ数えて第２のヌクレオチドである。
【０１３３】
本発明の核酸分子が、Ｄ−ヌクレオチド、Ｌ−ヌクレオチド、または、例えば少なくとも１つのＬ−ヌクレオチドおよび少なくとも１つのＤ−核酸からなるストレッチのランダムな組合せか規定の配列である両方の組合せからなるかどうかにかかわりなく、核酸は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはその組合せからなることができる。
【０１３４】
核酸分子がリボヌクレオチドおよび２’デオキシリボヌクレオチドの両方からなることも、本発明の範囲内である。２’デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドは、図２９および３０Ａ〜Ｂに示す。本発明による核酸分子の配列でリボヌクレオチドと２’デオキシリボヌクレオチドを区別するために、以下の参照コードが本明細書で用いられる。
【０１３５】
本発明による核酸分子は、主に２’デオキシリボヌクレオチドからなり、そこにおいて、好ましくは、
Ｇは、２’デオキシ−グアノシン−５’−モノホスフェートであり、
Ｃは、２’デオキシ−シチジン−５’−モノホスフェートであり、
Ａは、２’デオキシ−アデノシン−５’−モノホスフェートであり、
Ｔは、２’デオキシ−チミジン−５’−モノホスフェートであり、
ｒＧは、グアノシン−５’−モノホスフェートであり、
ｒＣは、シチジン５’−モノホスフェートであり、
ｒＡは、アデノシン−５’−モノホスフェートであり、
ｒＵは、ウリジン−５’−モノホスフェートであり、
ｒＴは、チミジン−５’−モノホスフェートである。
【０１３６】
本発明による核酸分子は、主にリボヌクレオチドからなり、そこにおいて、好ましくは、
Ｇは、グアノシン−５’−モノホスフェートであり、
Ｃは、シチジン５’−モノホスフェートであり、
Ａは、アデノシン−５’−モノホスフェートであり、
Ｕは、ウリジン−５’モノホスフェートであり、
ｄＧは、２’デオキシ−グアノシン−５’−モノホスフェートであり、
ｄＣは、２’デオキシ−シチジン−５’モノホスフェートであり、
ｄＡは、２’デオキシ−アデノシン−５’−モノホスフェートであり、
ｄＴは、２’デオキシ−チミジン−５’−モノホスフェートである。
【０１３７】
Ｌ−核酸分子として本発明の核酸分子を設計することは、いくつかの理由で有利である。Ｌ−核酸分子は、天然に存在する核酸の鏡像異性体である。しかし、ヌクレアーゼの広範囲にわたる存在のために、Ｄ−核酸分子は、水溶液で、特に生体系または生体試料においてあまり安定でない。天然に存在するヌクレアーゼ、特に動物細胞からのヌクレアーゼは、Ｌ−核酸を分解することができない。このため、Ｌ−核酸分子の生体半減期は、動物およびヒトの体を含むそのような系でかなり増加する。Ｌ−核酸分子の分解性の欠如のために、ヌクレアーゼ分解生成物は生成されず、したがって、そこから生じる副作用は、動物およびヒトの体を含むそのような系では観察されない。この態様は、Ｌ−核酸分子と、グルカゴンの存在が関与する疾患および／または障害の療法で用いられる実際上全ての他の化合物とを区別する。ワトソンクリック塩基対形成と異なる機構を通して標的分子に特異的に結合するＬ−核酸分子、または、標的分子へのアプタマーの結合に関与するアプタマーの部分を特に有する、部分的または完全にＬ−ヌクレオチドからなるアプタマーは、シュピーゲルマーとも呼ばれる。そのようなアプタマーおよびシュピーゲルマーは当業者に公知であり、中でも「Ｔｈｅ  Ａｐｔａｍｅｒ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ」（Ｋｌｕｓｓｍａｎｎ編、２００６年）に記載されている。
【０１３８】
本発明の核酸分子は、それがＤ−核酸、Ｌ−核酸もしくはＤ，Ｌ−核酸として存在するかどうかに関係なく、またはそれがＤＮＡもしくはＲＮＡであるかどうかにかかわらず、一本鎖または二本鎖の核酸分子として存在することができることも本発明の範囲内である。一般的に、核酸分子は、その一次配列のために規定の二次構造を示し、したがってさらに三次構造を形成することができる一本鎖核酸分子である。しかし、核酸分子は、互いに相補的であるか部分的に相補的である２つの鎖が互いとハイブリダイズするという意味で、二本鎖であってもよい。
【０１３９】
本発明の核酸分子は、改変されてもよい。そのような改変は核酸分子の単一のヌクレオチドに関するものであってよく、当技術分野で周知である。そのような改変の例は、中でも、Ｖｅｎｋａｔｅｓａｎら（Ｖｅｎｋａｔｅｓａｎ、Ｋｉｍら  ２００３年）およびＫｕｓｓｅｒ（Ｋｕｓｓｅｒ  ２０００年）によって記載される。そのような改変は、核酸分子を構成する個々のヌクレオチドの全ての１つ、いくつかの２’位での、Ｈ原子、Ｆ原子またはＯ−ＣＨ３基またはＮＨ２基であってよい。さらに、本発明による核酸分子は、少なくとも１つのＬＮＡヌクレオチドを含むことができる。一実施形態では、本発明による核酸分子は、ＬＮＡヌクレオチドからなる。
【０１４０】
一実施形態では、本発明による核酸分子は、多重編成の核酸分子であってよい。本明細書で用いられる多重編成の核酸分子は、少なくとも２つの別個の核酸鎖からなる核酸分子である。これらの少なくとも２つの核酸鎖は機能的単位を形成し、それによって、この機能的単位は、標的分子へのリガンド、好ましくは、グルカゴンおよび／またはＧＩＰの本例では、標的分子へのアンタゴニストである。少なくとも２つの核酸鎖は、本発明の核酸分子を切断して少なくとも２つの鎖を生成するか、または本発明の完全長核酸分子の第１の部分に対応する１つの核酸分子および本発明の完全長核酸分子の別の部分に対応する別の核酸分子を合成するかのいずれかによって、本発明の核酸分子のいずれかから誘導することができる。完全長核酸分子を形成する部分の数により、必要なヌクレオチド配列を有する部分の対応する数が合成される。上で例示されるような２つを超える鎖が存在する多重編成の核酸分子を生成するために、切断アプローチおよび合成アプローチの両方を適用することができることを認めるべきである。言い換えると、少なくとも２つの別々の核酸鎖は、互いに相補的であってハイブリダイズする２つの鎖と一般的に異なるが、前記少なくとも２つの別々の核酸鎖間の一定程度の相補性が存在してもよく、それによって、そのような相補性は前記別々の鎖のハイブリダイゼーションをもたらすことができる。
【０１４１】
最後に、本発明による核酸分子のために、完全に閉じた、すなわち環状の構造が実現されること、すなわち、一実施形態では、本発明による核酸分子が、好ましくは共有結合を通して閉じられ、それによって、より好ましくは、そのような共有結合が、本明細書に開示される本発明の核酸分子またはその任意の誘導体の核酸配列の５’末端と３’末端の間で形成されることも本発明の範囲内である。
【０１４２】
本発明による核酸分子の結合定数を判定する可能性は、本発明による核酸がＫＤ値の好ましい範囲を示すとの上の知見を確認する、実施例３および４に記載の方法の使用である。個々の核酸分子と、この場合はグルカゴンである標的の間の結合強度を表すために適当な尺度は、それ自体、ならびにその判定法が当業者に公知である、いわゆるＫＤ値である。
【０１４３】
好ましくは、本発明による核酸によって示されるＫＤ値は、１μＭ未満である。約１μＭのＫＤ値は、標的への核酸の非特異的結合の特徴であると言われる。当業者が認めるように、本発明による核酸分子の様々な実施形態などの一群の化合物のＫＤ値は、一定の範囲内にある。前述の約１μＭのＫＤは、ＫＤ値の好ましい上限である。本発明の核酸分子の１つなどの標的結合核酸のＫＤの下限は、わずか約１０ピコモルであってよいか、より高くてもよい。グルカゴンに結合する個々の核酸のＫＤ値が好ましくはこの範囲内であることは、本発明の範囲内である。ＫＤ値の好ましい範囲は、この範囲内の任意の第１の数字およびこの範囲内の任意の第２の数字を選択することによって規定することができる。好ましい上のＫＤ値は２５０ｎＭおよび１００ｎＭであり、好ましい下のＫＤ値は５０ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、１００ｐＭおよび１０ｐＭである。より好ましい上のＫＤ値は１０ｎＭであり、より好ましい下のＫＤ値は１００ｐＭである。
【０１４４】
本発明による核酸分子の結合特性に加えて、本発明による核酸分子は、この場合はグルカゴンおよび／またはＧＩＰであるそれぞれの標的分子の機能を阻害する。グルカゴンおよび／またはＧＩＰの機能（例えば、前に記載されるそれぞれの受容体の刺激）の阻害は、グルカゴンおよび／またはＧＩＰへの本発明による核酸分子の結合、ならびに本発明による核酸分子とグルカゴンおよび／またはＧＩＰとの複合体の形成によって達成される。本発明の核酸分子とグルカゴンおよび／またはＧＩＰとのそのような複合体は、グルカゴンおよび／またはＧＩＰ、すなわち本発明の核酸分子との複合体で存在しないグルカゴンおよび／またはＧＩＰによって通常刺激される受容体を刺激することができない。したがって、本発明による核酸分子による受容体機能の阻害は、グルカゴンおよび／またはＧＩＰによって刺激することができるそれぞれの受容体から独立し、そのような阻害は、むしろ、本発明による核酸分子により、グルカゴンおよび／またはＧＩＰによる受容体の刺激を阻止することから起こる。
【０１４５】
本発明による核酸分子の阻害定数を判定する可能性は、本発明による核酸が、治療的処置スキームでの前記核酸分子の使用を可能にする、好ましい阻害定数を示すとの上の知見を確認する、実施例５に記載の方法の使用である。この場合はグルカゴンである標的とそれぞれの受容体との相互作用に及ぼす個々の核酸分子の阻害作用の強度を表すために適当な尺度は、それ自体、ならびにその判定法が当業者に公知である、いわゆる最大半減阻害濃度（略語ＩＣ５０）である。
【０１４６】
好ましくは、本発明による核酸分子によって示されるＩＣ５０値は、１μＭ未満である。約１μＭのＩＣ５０値は、核酸分子による標的機能の非特異的阻害、好ましくは標的による標的受容体の活性化の阻害の特徴であると言われる。当業者が認めるように、本発明による核酸分子の様々な実施形態などの一群の化合物のＩＣ５０値は、一定の範囲内にある。前述の約１μＭのＩＣ５０は、ＩＣ５０値の好ましい上限である。本発明の標的結合核酸分子のＩＣ５０の下限は、わずか約１０ピコモルであってよいか、より高くてもよい。グルカゴンに結合する本発明の個々の核酸のＩＣ５０値が好ましくはこの範囲内であることは、本発明の範囲内である。好ましい範囲は、この範囲内の任意の第１の数字およびこの範囲内の任意の第２の数字を選択することによって規定することができる。好ましい上のＩＣ５０値は２５０ｎＭおよび１００ｎＭであり、好ましい下のＩＣ５０値は５０ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、１００ｐＭおよび１０ｐＭである。より好ましい上のＩＣ５０値は５ｎＭであり、より好ましい下のＩＣ５０値は１ｎＭである。
【０１４７】
本発明による核酸分子は、本例ではグルカゴンおよび／またはＧＩＰである標的分子にそれが結合することがなお可能であるならば、任意の長さを有することができる。本発明による核酸分子の好ましい長さがあることが、当技術分野で認められる。一般的に、長さは１５〜１２０ヌクレオチドである。当業者は、本発明による核酸分子にとって１５〜１２０の間の任意の整数が可能な長さであることを認めよう。本発明による核酸分子の長さのより好ましい範囲は、約２０〜１００ヌクレオチド、約２０〜８０ヌクレオチド、約２０〜６０ヌクレオチド、約２０〜５４ヌクレオチドおよび約３９〜４４ヌクレオチドの長さである。
【０１４８】
本発明の核酸分子が、好ましくは高分子量の部分であり、および／または、好ましくは、中でも、動物体内、好ましくはヒト体内での滞留時間に関して、核酸分子の特性の改変を可能にする部分を含むことは、本発明の範囲内である。そのような改変の特に好ましい実施形態は、本発明による核酸のＰＥＧ化およびＨＥＳ化である。本明細書で用いるように、ＰＥＧはポリ（エチレングリコール）を、ＨＥＳはヒドロキシエチルデンプンを表す。好ましくは本明細書で用いられるＰＥＧ化は、本発明による核酸分子の改変であり、それによって、そのような改変は、本発明による核酸分子に結合するＰＥＧ部分からなる。好ましくは本明細書で用いられるＨＥＳ化は、本発明による核酸分子の改変であり、それによって、そのような改変は、本発明による核酸分子に結合するＨＥＳ部分からなる。これらの改変ならびにそのような改変を用いて核酸分子を改変する方法は、欧州特許出願ＥＰ１３０６３８２に記載され、その開示はこれにより参照により本明細書に組み込まれる。
【０１４９】
ＰＥＧがそのような高分子量部分である場合は、分子量は、好ましくは約２０，０００〜約１２０，０００Ｄａ、より好ましくは約３０，０００〜約８０，０００Ｄａ、最も好ましくは約４０，０００Ｄａである。ＨＥＳがそのような高分子量部分である場合は、分子量は、好ましくは約５０ｋＤａ〜約１０００ｋＤａ、より好ましくは約１００ｋＤａ〜約７００ｋＤａ、最も好ましくは２００ｋＤａ〜５００ｋＤａである。ＨＥＳは、０．１〜１．５、より好ましくは１〜１．５のモル置換を示し、およそ０．１〜１５、好ましくはおよそ３〜１０の、Ｃ２／Ｃ６比で表される置換グレードを示す。ＨＥＳ改変の方法は、例えば、独国特許出願ＤＥ１２００４００６２４９．８に記載され、その開示はこれにより参照により本明細書に組み込まれる。
【０１５０】
改変は、原則として、本発明の核酸分子に、その任意の位置に加えることができる。好ましくは、そのような改変は、核酸分子の５’末端ヌクレオチド、３’末端ヌクレオチドおよび／または５’ヌクレオチドと３’ヌクレオチドの間の任意のヌクレオチドに加えられる。
【０１５１】
改変、ならびに好ましくはＰＥＧおよび／またはＨＥＳ部分は、本発明の核酸分子に直接または間接に、好ましくはリンカーを通して間接に結合させることができる。本発明による核酸分子が、１つまたは複数の改変、好ましくは１つまたは複数のＰＥＧおよび／またはＨＥＳ部分を含むことも、本発明の範囲内である。一実施形態では、個々のリンカー分子は、１つを超えるＰＥＧ部分またはＨＥＳ部分を、本発明による核酸分子に結合させる。本発明に関連して用いられるリンカーは、それ自体直鎖または分枝状のいずれかであってよい。この種のリンカーは当業者に公知であり、国際特許出願ＷＯ２００５／０７４９９３およびＷＯ２００３／０３５６６５にさらに記載される。
【０１５２】
好ましい実施形態では、リンカーは生分解性リンカーである。生分解性リンカーは、中でも、本発明による核酸分子からの改変の放出による、動物体内、好ましくはヒト体内での滞留時間に関して、本発明による核酸分子の特性を改変することを可能にする。生分解性リンカーの使用は、本発明による核酸分子の滞留時間のより優れた制御を可能にすることができる。そのような生分解性リンカーの好ましい実施形態は、それらに限定されないが、国際特許出願ＷＯ２００６／０５２７９０、ＷＯ２００８／０３４１２２、ＷＯ２００４／０９２１９１およびＷＯ２００５／０９９７６８に記載される生分解性リンカーである。
【０１５３】
改変または修飾基が生分解性改変であり、生分解性改変は、直接に、または好ましくはリンカーを通して間接に、本発明の核酸分子に結合させることができることは、本発明の範囲内である。生分解性改変は、中でも、本発明による核酸分子からの改変の放出または分解による、動物体内、好ましくはヒト体内での滞留時間に関して、本発明による核酸分子の特性を改変することを可能にする。生分解性改変の使用は、本発明による核酸分子の滞留時間のより優れた制御を可能にすることができる。そのような生分解性改変の好ましい実施形態は、それらに限定されないが、国際特許出願ＷＯ２００２／０６５９６３、ＷＯ２００３／０７０８２３、ＷＯ２００４／１１３３９４およびＷＯ２０００／４１６４７、好ましくはＷＯ２０００／４１６４７、１８頁、４〜２４行目に記載されているように生分解性である。
【０１５４】
本発明による核酸分子の特性を改変するために、前記の改変の他に、他の改変を用いることができ、それによって、そのような他の改変は、タンパク質、脂質、例えばコレステロール、および糖鎖、例えばアミラーゼ、デキストランなどの群から選択することができる。
【０１５５】
いかなる理論によっても縛られることを望まないが、本発明による核酸分子を、高分子量部分、例えばポリマー、より詳しくは、好ましくは生理的に許容される、本明細書に開示されるポリマーの１つまたはいくつかで改変することによって、本発明のこのように改変される核酸分子の排泄動態は変更される。より詳しくは、本発明のこのように改変される核酸分子の増加する分子量のために、および、本発明の核酸分子が、特にＬ形の場合、すなわちＬ−核酸分子である場合は代謝を受けないことにより、動物体から、好ましくは哺乳動物の体、より好ましくはヒトの体からの排泄は減少する。排泄は腎臓を介して一般に起こるので、本発明者らは、このように改変される核酸分子の糸球体濾過速度は、動物体内での改変核酸分子の滞留時間の増加をもたらすこの種の高分子量改変を持たない核酸分子と比較して、かなり低減されると仮定する。それとの関連で、そのような高分子量改変にもかかわらず、本発明による核酸分子の特異性が有害な影響を受けないことは特に注目に値する。その範囲において、本発明による核酸分子は、中でも、本発明による核酸分子の徐放性を提供するために、徐放性を可能にする医薬製剤が必ずしも必要とは限らないという意外な特性（薬学的に活性な化合物から通常予想することができない特性）を有する。むしろ、高分子量部分を含むその改変形の本発明による核酸分子は、その改変のために徐放性製剤から放出されるかのように既に作用するので、それ自体を徐放性製剤として既に用いることができる。その範囲において、本明細書に開示される本発明による核酸分子の改変、ならびにこのように改変された本発明による核酸分子およびそれを含む任意の組成物は、異なる、好ましくは制御されたその薬物動態および体内分布を可能にすることができる。これは、動物およびヒトの体の循環中の滞留時間、ならびにそのような動物およびヒトの組織への分布も含む。そのような改変は、特許出願ＷＯ２００３／０３５６６５でさらに記載される。
【０１５６】
しかし、本発明による核酸分子がいかなる改変も、特にＰＥＧまたはＨＥＳなどの高分子量改変も含まないことも本発明の範囲内である。そのような実施形態は、本発明による核酸分子が体内の任意の標的器官もしくは組織への優先分布を示す場合、または投与後の本発明による核酸分子の体からの速いクリアランスが所望の場合に特に好ましい。体内の任意の標的器官または組織への優先分布プロファイルを有する、本明細書で開示される本発明による核酸分子は、核酸分子の全身の濃度を低く保ちつつ、標的組織での有効な局所濃度の確立を可能にする。これは、経済的観点から有益であるだけでなく、核酸分子への他の組織の不必要な曝露を低減し、このように副作用の潜在的危険率を低減する、低用量の使用を可能にするであろう。投与後の本発明による核酸分子の体からの速いクリアランスは、とりわけ、本発明による核酸分子またはそれを含む医薬を用いるインビボでの画像化または特定の治療的投与必要条件の場合に、望ましいかもしれない。
【０１５７】
本発明による核酸分子および／または本発明によるアンタゴニストは、医薬の生成または製造のために用いることができる。本発明によるそのような医薬または医薬組成物は、グルカゴンおよび／またはＧＩＰへの結合が可能な本発明の核酸分子の少なくとも１種を、任意選択でさらなる薬学的に活性な化合物と一緒に含有し、それによって、本発明の核酸分子は好ましくはそれ自体薬学的に活性な化合物として作用する。好ましい実施形態では、そのような医薬は、少なくとも薬学的に許容される担体を含む。そのような担体は、例えば、水、緩衝剤、ＰＢＳ、グルコース溶液、好ましくは５％グルコース、塩平衡溶液、クエン酸、デンプン、糖、ゼラチンまたは他の任意の許容される担体物質であってよい。そのような担体は、当業者に一般に公知である。当業者は、本発明の医薬の、またはそれに関連する任意の実施形態、使用および態様が、本発明の医薬組成物にも適用でき、その逆も可能であることを認めよう。
【０１５８】
本発明による、またはそれに従って調製される核酸分子、医薬組成物および医薬がその処置および／または予防のためである適応症、疾患および障害は、それぞれの病原機構における直接的または間接的なグルカゴンの関与から生じる。
【０１５９】
糖尿病に関連するか関与する経路へのグルカゴンの関与に基づき、本発明の核酸分子、本発明の核酸分子の１つまたはいくつかの種を含有する医薬組成物、およびその１つまたはいくつかを含有する医薬が、前記疾患、障害および病的状態の処置および／または予防で用いることができることは明白である。したがって、そのような疾患および／または障害および／または病的状態には、それらに限定されないが、１型糖尿病、２型糖尿病（妊娠性糖尿病を含む）、糖尿病合併症、糖尿病状態および／または真性糖尿病および高グルカゴン血症の後遺症ならびに他の原因によるアルストレーム症候群が含まれ、それによって生じる合併症は、アテローム硬化症、冠状動脈疾患、糖尿病性足疾患、糖尿病網膜症、増殖性糖尿病網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、糖尿病性硝子体網膜症、増殖性糖尿病性硝子体網膜症、糖尿病腎症、糖尿病神経障害、妊娠糖尿病、グルコース不耐性、心疾患、高血圧、高コレステロール、耐糖能異常、不能症、インスリン抵抗性、腎不全、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症が有るか無い非アルコール性脂肪肝炎、末梢血管疾患、グルコース感受性低下、インスリン感受性低下、肥満、肝脂肪変性、高血糖、糖尿病ケトアシドーシス、および高浸透圧性高血糖性非ケトン昏睡、体重減少壊死融解性移動性紅斑（ＮＭＥ）、貧血、正常な凝固機能の存在下での静脈血栓、神経精神医学的徴候（うつ病、認知症、不眠症、運動失調）を含む群から選択される。
【０１６０】
当然、本発明によるグルカゴン結合核酸分子はグルカゴンおよび／またはＧＩＰと相互作用するかそれに結合するので、当業者は、本明細書に記載されるヒトおよび動物の任意の疾患の処置、予防および／または診断のために、本発明によるグルカゴン結合核酸分子を容易に用いることができることを一般に理解する。それに関連して、本発明による核酸分子が、そのような疾患、障害および状態の根底にある作用様式にかかわりなく、本明細書に記載される疾患、障害または状態のいずれかの処置および予防のために用いることができることを認めるべきである。
【０１６１】
以下では、様々な疾患、障害および状態に関連した、本発明による核酸分子の使用の根拠が提供され、したがって、本発明による核酸分子の請求される治療的、予防的および診断的適用性を信頼できるものにする。いかなる不必要な繰り返しも避けるために、それに関連して概説されるグルカゴン−グルカゴン受容体系および／またはＧＩＰ−ＧＩＰ受容体系の関与のために、請求される治療的、予防的および診断的効果が達成されるように、前記系は本発明による核酸分子によって対処することができることを認めるべきである。患者の疾患、障害および状態の詳細、ならびにそれに関連して記載される処置レジメンのあらゆる詳細は、本適用の好ましい実施形態の対象であってよいことをさらに認めるべきである。
【０１６２】
大多数の糖尿病患者では、混合食または炭水化物摂取に続く循環グルカゴンレベルの逆説的な増加が報告されている（Ｏｈｎｅｄａ、Ｗａｔａｎａｂｅら  １９７８年）。これは、ＤＭでの微小および大血管合併症の病態生理において重要な役割を演ずる、食後の血糖レベルの上昇への主要な寄与因子と見られている（ＧｉｎおよびＲｉｇａｌｌｅａｕ  ２０００年）。
【０１６３】
多くのペプチジルおよび非ペプチジル小分子グルカゴン受容体アンタゴニストが、報告されている（ＪｉａｎｇおよびＺｈａｎｇ  ２００３年）。むしろ低いグルカゴン受容体親和性を一般に有するこれらの小分子アンタゴニストのいくつかは、動物モデルにおいて、空腹時血糖を低くするか、外因性グルカゴンによって刺激される血糖上昇をブロックすることが示されている。非ペプチジル小分子グルカゴン受容体アンタゴニストは、ヒトにおいて、グルカゴンによって誘導される肝グルコース生成および血糖の上昇を用量依存的にブロックすることが示された（ＰｅｔｅｒｓｅｎおよびＳｕｌｌｉｖａｎ  ２００１年）。より近年、ｄｂ／ｄｂ−マウスでのアンチセンスオリゴヌクレオチドによるグルカゴン受容体発現の低減は、低血糖を起こさずに、血糖、遊離脂肪酸およびトリグリセリドの低減をもたらした（Ｌｉａｎｇ、Ｏｓｂｏｒｎｅら  ２００４年）。これらの作用は、ＤＭ２患者に理想的である。
【０１６４】
その他に、グルカゴン受容体ノックアウトマウスは、生存可能であること、ならびに軽度なだけの低血糖、改善された耐糖能およびグルカゴンレベルの上昇の徴候を示すことが見出された。それらは食餌誘発性の肥満にも抵抗性であり（Ｃｏｎａｒｅｌｌｏ、Ｊｉａｎｇら  ２００７年）、β細胞温存において有益であるより高いインスリン感受性も有する（Ｓｏｒｅｎｓｅｎ、Ｗｉｎｚｅｌｌら  ２００６年）。さらに、グルカゴン受容体ノックアウトマウスは、ストレプトゾトシンで誘導される「１型糖尿病表現型」に抵抗性であり、すなわち、それらは空腹状態で、ならびに経口および腹腔内耐糖能試験の後に、正常血糖を示した（Ｌｅｅ、Ｗａｎｇら  ２０１１年）。
【０１６５】
モノクローナル抗体によるグルカゴン自体の中和も、血糖、トリグリセリド、ＨｂＡ１ｃおよび肝グルコース生産の急性および持続的低減につながった（Ｂｒａｎｄ、Ｒｏｌｉｎら  １９９４年；Ｓｏｒｅｎｓｅｎ、Ｂｒａｎｄら  ２００６年）。しかし、それらの潜在的免疫原性のため、これらのおよび他の抗体は、ＤＭの長期処置のための存続可能な選択肢でないかもしれない。
【０１６６】
本質的に、グルカゴンのレベル／活性を下げることを通しての治療的介入の試みは、グルカゴン拮抗作用の概念を裏づける多くの結果を与えた。しかし、そのような試みは、十分な効力がない化合物、または受け入れがたい肝毒性を有する化合物のいずれかにつながった。
【０１６７】
１型糖尿病（ＤＭ１）は、ＤＭ２と対照的にインスリン抵抗性による機能的欠乏ではなく、すい臓のβ細胞喪失による絶対的欠乏であるインスリン欠乏によって特徴付けられる。ＤＭ１は、大部分は児童および若年成人で発達するので、若年型糖尿病としばしば呼ばれる。近年発表された研究では、グルカゴン受容体ノックアウトマウスは、ストレプトゾトシンで誘導される「１型糖尿病表現型」に抵抗性であり、すなわち、それらは空腹状態で、ならびに経口および腹腔内耐糖能試験の後に、正常血糖を示した（Ｌｅｅ、Ｗａｎｇら  ２０１１年）。
【０１６８】
ＤＭ１患者において、インスリン依存性の食後のグルカゴン抑制の不足は、耐糖能を損なう。ＤＭの急性の生命にかかわる合併症およびグルカゴン−インスリン不均衡の直接的な結果は、過剰なケトン体産生の後の糖尿病ケトアシドーシス（略語ＤＫＡ）、および高浸透圧性高血糖性非ケトン昏睡（略語ＨＨＮＫ）などの糖尿病合併症である。ＨＨＮＫでは、糖尿の浸透圧作用は腎臓におけるＮａＣｌ吸収阻害をもたらし、したがって高ナトリウム血症につながる水再吸収をもたらす（Ｗａｈｉｄ、Ｎａｖｅｅｄら  ２００７年）。ＤＫＡおよびＨＨＮＫは、ＤＭ２のインスリン依存性の症例でも観察することができる。
【０１６９】
神経内分泌腫瘍は、それらが起源とする細胞によって通常生産されるそれぞれのホルモンの過剰発現につながることがある、稀な腫瘍である。したがって、高グルカゴン血症はグルカゴン産生細胞の過形成または新生物（グルカゴノーマ）、例えばα細胞に由来する新生物に起因する。同様に、グリセンチン、オキシントモジュリンおよびＧＬＰ−１がグルカゴン遺伝子転写産物から生産される、腸管のランゲルハンス細胞の新生物は、プロセシングがゆがめられる場合、これらのペプチドの過剰発現、またはグルカゴンの過剰発現につながることがある。
【０１７０】
高グルカゴン血症は、合併症、例えば、真性糖尿病、ケトアシドーシスおよび体重減少壊死融解性移動性紅斑（略語ＮＭＥ）、貧血、正常な凝固機能の存在下での静脈血栓、神経精神医学的徴候（うつ病、認知症、不眠症、運動失調）ならびに他の症状につながることがある（Ｇｒｉｆｆｉｎｇ、Ｏｄｅｋｅら  ２０１１年）。
【０１７１】
ＧＩＰは、その名称が示唆するようにインスリン放出を誘導するだけでなく、脂質ホメオスタシスにおいて役割を果たすこともでき、いくつかの動物研究が示すように肥満の発達に必要かもしれない（Ａｓｍａｒ  ２０１１年）。５０日間のＧＩＰ受容体アンタゴニストＰｒｏ３−ＧＩＰの連日投与は、筋肉および肝臓でのトリグリセリドレベルの低減と一緒に、より高齢の高脂肪食糖尿病マウスで、体重減、脂肪組織の蓄積の減少、ならびにグルコース、糖化ヘモグロビンおよびすい臓インスリンのレベルの著しい向上をもたらした。高脂肪食の摂取量の変化は、記されなかった（ＭｃＣｌｅａｎ、Ｉｒｗｉｎら  ２００７年）。同じ方向を指して、ＧＩＰ受容体ノックアウトマウスは肥満の発達に抵抗性であることが見出されたが、同じ高脂肪食を与えた野生型マウスは、インスリン抵抗性と一緒にＧＩＰの過分泌と極度の内臓および皮下脂肪の堆積の両方を示した（Ｍｉｙａｗａｋｉ、Ｙａｍａｄａら  ２００２年）。しかし、経口グルコース負荷の後の初期のインスリン応答は損なわれ、より高い血糖レベルにつながった（Ｍｉｙａｗａｋｉ、Ｙａｍａｄａら  １９９９年）。
【０１７２】
さらなる実施形態では、医薬はさらなる薬学的に活性な薬剤を含む。そのようなさらなる薬学的に活性な化合物は、それらに限定されないが、とりわけ糖尿病、好ましくはＤＭ２、および糖尿病合併症の処置および／または予防のための化合物であり、それによって化合物は、スルホニル尿素薬、ビグアニド、アルファ−グルコシダーゼ阻害剤、チアゾリンジオン、ＤＰＰ４阻害剤、メグリチニド、グルカゴン様ペプチド類似体、胃抑制ペプチド類似体、アミリン類似体、インクレチン模倣体、インスリン、ならびにインスリン抵抗性および／またはＤＭ２の処置で用いられるか、インスリン抵抗性および／またはＤＭ２の予防で用いられる他の治療薬などを含む群から選択される。本発明による核酸分子によって本発明に従って対処することができる様々な適応症を考慮すると、前記のさらなる薬学的に活性な薬剤は、そのような疾患の処置および／または予防のために原則として適するいかなるものであってよいことは、当業者ならば理解しよう。本発明による核酸分子は、特に存在するか、または医薬として用いられる場合は、好ましくは、スルホニル尿素薬、ビグアニド、アルファ−グルコシダーゼ阻害剤、チアゾリンジオン、メグリチニド、グルカゴン様ペプチド類似体、胃抑制ペプチド類似体、アミリン類似体、インクレチン模倣体、ＤＰＰ４阻害剤、インスリン、ならびにＤＭ１、インスリン抵抗性および／またはＤＭ２の処置で用いられるか、インスリン抵抗性および／またはＤＭ２の予防で用いられる他の治療薬などと組み合わされる。
【０１７３】
医薬が、原則として前記疾患の処置のための医薬の使用に関連して開示される疾患のいずれかの予防のために、代わりに、または追加で用いられることは、本発明の範囲内である。したがって、それぞれのマーカー、すなわちそれぞれの疾患のためのマーカーは、当業者に公知である。好ましくは、それぞれのマーカーは、高グルカゴン血症である。あるいは、および／またはさらに、それぞれのマーカーは、オキシントモジュリン、グリセンチンおよびＧＩＰ（ＧＩＰ結合核酸分子の場合）を含む群から選択される。さらなる群のマーカーは、強力な渇き、高い水分摂取量、頻尿、極度の空腹感、ＨｂＡ１ｃ値、血漿インスリンレベル、ＯＧＴの後の血漿グルコースレベル、空腹時血漿グルコースレベル、空腹時血漿グルコースレベル、尿グルコースレベル、体重、血圧、けだるさ、疲労、食事制限なしの体重減少、体重増加、頻繁な細菌または真菌感染、不良な創傷治癒、手足の麻痺および視覚障害を含む群から選択される。
【０１７４】
本発明の医薬の１つの実施形態では、そのような医薬は、本明細書で開示される疾患、特に本発明の医薬が用いられるべき疾患のいずれかのための他の処置と一緒に用いるためのものである。
【０１７５】
「併用療法」（または「共療法」）は、本発明の医薬、および、それらの治療薬の共同作用からの有益な作用を少なくとも提供することを目的とする特定の処置レジメンの一部としての少なくとも第２の、またはさらなる薬剤、すなわち本発明の医薬および前記第２の、またはさらなる薬剤の投与を含む。組合せの有益な作用には、それに限定されないが、治療的に有効な薬剤の組合せからもたらされる薬物動態学的または薬力学的共同作用が含まれる。併用されるこれらの治療的に有効な薬剤の投与は、一般的に規定の時間（選択される組合せによって、通常、数分、数時間、数日または数週間）にわたって実行される。
【０１７６】
「併用療法」は、別々の単独療法レジメンの一部としての、これらの治療的に有効な薬剤の２つ以上の投与を包含することを意図することができるが、一般には意図されない。「併用療法」は、これらの治療的に有効な薬剤の逐次的な投与、すなわち治療的に有効な各薬剤は異なる時間に投与されること、ならびにこれらの治療的に有効な薬剤、または治療的に有効な薬剤の少なくとも２つの実質的に同時の投与を包含するものとする。実質的に同時の投与は、例えば、治療的に有効な薬剤の各々の固定比を有する単一のカプセル剤を、または治療的に有効な薬剤の各々の複数の単一のカプセル剤で対象に投与することによって達成することができる。
【０１７７】
治療的に有効な各薬剤の逐次的または実質的に同時の投与は、それらに限定されないが、局所経路、経口経路、静脈内経路、筋肉内経路および粘膜組織を経由する直接吸収を含む任意の適当な経路によって実行することができる。これらの治療薬は、同じ経路によって、または異なる経路によって投与されてもよい。例えば、選択される組合せの第１の治療的に有効な薬剤は注射によって投与し、組合せの他の治療的に有効な薬剤は局所的に投与してもよい。
【０１７８】
あるいは、例えば、全ての治療的に有効な薬剤は局所的に投与することができ、または全ての治療的に有効な薬剤は注射によって投与することができる。治療的に有効な薬剤が投与される順序は、特に明記しない限り厳密に重要でない。「併用療法」は、他の生物学的に活性な成分とさらに組み合わせた、前記の治療的に有効な薬剤の投与も包含することができる。併用療法が非薬物処置をさらに含む場合、非薬物処置は、治療的に有効な薬剤と非薬物処置の組合せの共同作用からの有益な効果が達成される限り、任意の適する時間に実行することができる。例えば、適当な場合には、非薬物処置が治療的に有効な薬剤の投与から、おそらく数日または数週でさえ一時的に切り離されるときでも、有益な効果はなお達成される。
【０１７９】
上において一般用語で概説されるように、本発明による医薬は、原則として当業者に公知であるいかなる形で投与することもできる。好ましい投与経路は全身投与であり、より好ましくは非経口投与、好ましくは注射による。あるいは、医薬は局所的に投与されてもよい。他の投与経路は、筋肉内、腹腔内、および皮下、ｏｒｕｍ経由、鼻腔内、気管内または肺を含み、最も低侵襲性であるが効率の確保された投与経路が優先される。
【０１８０】
非経口投与は、皮下、筋肉内または静脈内注射および注入のために一般に用いられる。さらに、非経口投与のための１つのアプローチは、当業技術者に周知である、一定レベルの投薬量が維持されることを保証する、緩効性または徐放性の系の埋め込みを使用する。
【０１８１】
さらに、本発明の好ましい医薬は、適する鼻腔内ビヒクル、吸入剤の局所使用による鼻腔内形で、または当業者に周知である経皮皮膚パッチの形を用いる経皮経路により投与することができる。経皮送達系の形で投与するために、投薬量の投与は、投薬レジメン全体を通して当然ながら間欠的ではなく連続的である。他の好ましい局所調製物には、クリーム剤、軟膏剤、ローション剤、エアゾールスプレー剤およびゲル剤が含まれる。
【０１８２】
本発明の方法、核酸分子、医薬組成物および医薬に有利に応答する対象には、ヒトおよびヒト患者を含む医科および獣医科の対象全般が含まれる。とりわけ、そのような対象は、好ましくは、ネコ、イヌ、大きな動物、トリ、例えばニワトリなどを含む群から選択される。
【０１８３】
本発明の医薬は、薬学的に許容される媒体に溶解または分散される、それに限定されないが本発明の核酸分子を含む、療法の活性成分の有効量を一般に含む。薬学的に許容される媒体または担体は、任意の全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗細菌および抗真菌剤、等張性および吸収遅延剤などを含む。医薬用の活性物質のためのそのような媒体および薬剤の使用は、当技術分野で周知である。補助活性成分が、本発明の医薬に組み込まれてもよい。
【０１８４】
さらなる態様では、本発明は医薬組成物に関する。そのような医薬組成物は、本発明による少なくとも１つの核酸分子、および好ましくは、薬学的に許容される添加剤を含む。そのような結合剤は、当技術分野で用いられ、および／または公知である任意の添加剤であってよい。より詳しくは、そのような添加剤は、本明細書に開示される医薬の製造に関連して論じられている、任意の添加剤である。さらなる実施形態では、医薬組成物はさらなる薬学的に活性な薬剤を含む。
【０１８５】
本発明の医薬および医薬組成物の調製は、本開示を考慮して当業者に知られる。一般的に、そのような組成物は、液体溶液もしくは懸濁液として注射剤として；注射前の液体の溶液もしくは懸濁液に適する固体形として；錠剤もしくは経口投与のための他の任意の固体として；時限放出カプセル剤として；または、点眼剤、クリーム剤、ローション剤、膏薬、吸入剤などを含む現在用いられている他の任意の形で調製することができる。手術分野で特定領域を処置するための、外科医、医師または医療従事者による無菌の製剤、例えば食塩水をベースとした洗浄液の使用も、特に有益かもしれない。組成物は、マイクロデバイス、微粒子またはスポンジを介して送達することもできる。
【０１８６】
製剤にした後、医薬は投薬製剤に適合する様式で、かつ薬理的に有効な量で投与される。製剤は、様々な剤形で、例えば上記の注射可能な溶液の型で容易に投与されるが、薬物放出カプセル剤などを使用することもできる。
【０１８７】
本発明の医薬は、時限放出および徐放性の錠剤またはカプセル剤、丸剤、散剤、顆粒剤、エリキシル剤、チンキ剤、懸濁剤、シロップ剤および乳剤として経口剤形で投与することもできる。坐薬は、脂肪性の乳剤または懸濁液から有利に調製される。
【０１８８】
医薬組成物または医薬は滅菌されてもよく、および／またはアジュバント、例えば、保存剤、安定剤、湿潤剤または乳化剤、溶液促進剤、浸透圧を調節するための塩および／または緩衝剤を含有することができる。さらに、それらは他の治療的に価値ある物質を含有することもできる。組成物は、混合、顆粒化またはコーティング方法を含む従来の技術によって調製され、約０．１％〜７５％、好ましくは約１％〜５０％の有効成分を一般的に含有する。
【０１８９】
液体、特に注射可能な組成物は、例えば、溶解すること、分散させることなどによって調製することができる。活性化合物は、薬学的に純粋な溶媒、例えば水、食塩水、水性デキストロース、グリセロール、エタノールなどに溶解されるか、それと混合され、それによって注射可能な溶液または懸濁液を形成する。さらに、注射の前に液体に溶解するのに適する固体形を調製することができる。
【０１９０】
本発明の医薬および核酸分子は、それぞれ、リポソーム送達系、例えば小単層膜小胞、大単層膜小胞および多重膜小胞の形で投与することもできる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンを含有する種々のリン脂質から形成することができる。一部の実施形態では、脂質構成成分の膜が薬物の水溶液で水和されて、薬物を封入する脂質層を形成するが、それは当業者に周知である。例えば、本明細書に開示される本発明の核酸分子は、当技術分野で公知の方法を用いて構築される、親油性化合物または非免疫原性の高分子量化合物との複合体として提供することができる。さらに、リポソームは、細胞殺滅を仲介するために、細胞毒性薬剤を内部にターゲッティングおよび運ぶために、それらの表面に本発明の核酸分子を有することができる。核酸関連複合体の例は、米国特許第６，０１１，０２０号で提供される。
【０１９１】
本発明の医薬および核酸分子は、それぞれ、ターゲッティング可能な薬物担体として可溶性ポリマーと結合させることもできる。そのようなポリマーには、ポリビニルピロリドン、ピラン共重合体、ポリヒドロキシプロピル−メタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシエチルアスパナミドフェノールまたはパルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキシドポリリシンを含めることができる。さらに、本発明の医薬および核酸分子は、それぞれ、薬物の制御放出を達成するのに有益な生分解性ポリマーのクラス、例えば、ポリ乳酸、ポリエプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレートおよびヒドロゲルの架橋または両親媒性のブロックコポリマーと結合させることができる。
【０１９２】
所望により、投与される本発明の医薬組成物および医薬は、それぞれ、少量の非毒性補助的物質、例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、および他の物質、例えば酢酸ナトリウム、およびオレイン酸トリエタノールアミンを含有することもできる。
【０１９３】
本発明の核酸分子および医薬をそれぞれ用いる投薬レジメンは、患者の型、種、年齢、体重、性別および医学的状態；処置される状態の重症度；投与経路；患者の腎臓および肝臓の機能；ならびに、使用される本発明の特定の核酸またはその塩を含む、様々な因子に従って選択される。通常技術の医師または獣医は、状態の進行を予防、対抗または阻止するために必要な薬物の有効量を容易に決定し、処方することができる。
【０１９４】
本明細書に開示される疾患のいずれかの処置における、本発明による核酸の有効な血漿レベルは、好ましくは、５００ｆＭ〜２００μＭ、好ましくは１ｎＭ〜２０μＭ、より好ましくは５ｎＭ〜２０μＭ、最も好ましくは５０ｎＭ〜２０μＭである。
【０１９５】
本発明の核酸分子および医薬のそれぞれは、好ましくは単一の日用量、２、３日ごと、週ごと、一週おき、２週ごと、月一の用量または３カ月ごとに投与することができる。
【０１９６】
本明細書に記載される医薬が、本明細書で開示される医薬組成物を構成することは、本発明の範囲内である。
【０１９７】
さらなる態様では、本発明は、そのような処置を必要とする対象の処置方法であって、それによって、本発明の核酸分子の少なくとも１種の薬学的に活性な量の投与を含む方法に関する。一実施形態では、対象は疾患を起こしているか、またはそのような疾患を起こす危険にあり、それによって、その疾患は、本明細書で開示される疾患のいずれか、特に医薬の製造のための本発明による核酸分子のいずれかの使用に関連して開示される疾患のいずれかである。
【０１９８】
本発明による核酸ならびにアンタゴニストが、医薬として、または医薬の製造のためにだけでなく、特に炎症を起こした局所の皮膚病変でのグルカゴンの関与に関して美容目的のために用いることもできることを理解すべきである。
【０１９９】
好ましくは本明細書で用いられるように、診断薬または診断用薬または診断手段（３つの用語の全ては断らない限り互換的に用いられる）は、グルカゴン、好ましくは本明細書に記載されるグルカゴン、より好ましくは本明細書に記載される様々な障害および疾患に関連して本明細書に記載されるグルカゴンを直接または間接に検出するのに適する。診断薬は、本明細書に記載される障害および疾患それぞれのいずれかの検出および／または経過観察に適する。そのような検出は、本発明による核酸分子のグルカゴンへの結合を通して可能である。そのような結合は、直接または間接に検出することができる。それぞれの方法および手段は、当業者に公知である。とりわけ、本発明による核酸分子は、本発明による核酸分子、好ましくはグルカゴンに結合している核酸の検出を可能にする標識を含むことができる。そのような標識は、好ましくは、放射性、酵素および蛍光性標識を含む群から選択される。原則として、抗体のために開発された全ての公知のアッセイを本発明による核酸分子のために採用することができるが、標的結合抗体は標的結合核酸と置換される。非標識の標的結合抗体を用いる抗体アッセイでは、検出は、好ましくは、放射性、酵素および蛍光性標識で修飾され、そのＦｃ断片で標的結合抗体に結合する二次抗体によって行われる。核酸分子、好ましくは本発明による核酸分子の場合、核酸分子はそのような標識で修飾され、それによって、好ましくはそのような標識は、ビオチン、Ｃｙ−３およびＣｙ−５を含む群から選択され、そのような標識は、そのような標識を標的にする抗体、例えば抗ビオチン抗体、抗Ｃｙ３抗体もしくは抗Ｃｙ５抗体によって検出され、または−標識がビオチンである場合には−標識はビオチンに自然に結合するストレプトアビジンもしくはアビジンによって検出される。そのような抗体、ストレプトアビジンまたはアビジンは、好ましくは、それぞれの標識、例えば放射性、酵素または蛍光性標識（二次抗体など）で次に修飾される。
【０２００】
さらなる実施形態では、本発明による核酸分子は、第２の検出手段によって検出または分析され、前記検出手段は分子ビーコンである。分子ビーコンの方法は、当業者に公知であり、Ｍａｉｒａｌら（Ｍａｉｒａｌら、２００８年）によってレビューされている。
【０２０１】
本発明による核酸分子を用いるグルカゴンの検出は、特に、本明細書に規定されるグルカゴンの検出を可能にすることが認められる。
【０２０２】
グルカゴンの検出に関連して、好ましい方法は以下のステップ：
（ａ）グルカゴンの存在について試験される試料を提供するステップ、
（ｂ）本発明による核酸分子を提供するステップ、
（ｃ）試料と核酸分子を、好ましくは反応容器内で反応させるステップ
を含み、それによって、ステップ（ａ）はステップ（ｂ）の前に実施することができ、または、ステップ（ｂ）はステップ（ａ）の前に実施することができる。
【０２０３】
好ましい実施形態では、さらなるステップｄ）が提供され、それは試料と核酸分子との反応の検出からなる。好ましくは、ステップｂ）の核酸分子は、表面に固定化される。表面は、反応容器、例えば反応管の表面、プレートのウェル、またはそのような反応容器に含有されるデバイス、例えばビーズの表面であってよい。表面への核酸分子の固定化は、それらに限定されないが非共有または共有結合を含む、当業者に公知である任意の手段によって実行することができる。好ましくは、結合は、表面と核酸分子との間の共有化学結合を通して確立される。しかし、核酸分子が表面に間接に固定化され、それによって、そのような間接的な固定化はさらなる構成成分または一対の相互作用パートナーの使用を含むことも、本発明の範囲内である。そのようなさらなる構成成分は、好ましくは、固定化される核酸分子と特異的に相互作用し、したがって表面への核酸分子の結合を仲介する、相互作用パートナーとも呼ばれる化合物である。相互作用パートナーは、好ましくは、核酸、ポリペプチド、タンパク質および抗体を含む群から選択される。好ましくは、相互作用パートナーは抗体であり、より好ましくはモノクローナル抗体である。あるいは、相互作用パートナーは核酸分子であり、好ましくは機能的核酸分子である。より好ましくは、そのような機能的核酸分子は、前記核酸分子に少なくとも部分的に相補的である、アプタマー、シュピーゲルマーおよび核酸分子を含む群から選択される。さらなる代替の実施形態では、表面への核酸分子の結合は、多重編成の相互作用パートナーによって仲介される。そのような多重編成の相互作用パートナーは、好ましくは、一対の相互作用パートナー、または第１のメンバーおよび第２のメンバーからなる相互作用パートナーであり、それによって、第１のメンバーは核酸分子に含まれるかそれに結合し、第２のメンバーは表面に結合するかそれに含まれる。多重編成の相互作用パートナーは、好ましくは、ビオチンとアビジン、ビオチンとストレプトアビジン、およびビオチンとニュートラビジンを含む相互作用パートナーの対の群から選択される。好ましくは、相互作用パートナーの対の第１のメンバーはビオチンである。
【０２０４】
そのような方法の好ましい結果は、グルカゴンと核酸分子との固定化された複合体の形成であり、それによって、より好ましくは前記複合体が検出される。複合体からグルカゴンが検出されるのは、実施形態の範囲内である。
【０２０５】
この必要条件に適合するそれぞれの検出手段は、例えば、グルカゴンのその／それらの一部に特異的である任意の検出手段である。特に好ましい検出手段は、核酸分子、ポリペプチド、タンパク質および抗体を含む群から選択される検出手段であり、その生成は当業者に公知である。
【０２０６】
グルカゴンの検出のための方法は、ステップｃ）を実施するために好ましくは用いられた反応容器から試料を除去することも含む。
【０２０７】
さらなる実施形態では、本方法は、グルカゴンの相互作用パートナーを表面に、好ましくは上で規定される表面に固定化するステップも含み、それによって、相互作用パートナーは、本明細書で、好ましくはそれぞれの方法に関連して上で規定される通りであり、より好ましくは、それらの様々な実施形態において、核酸分子、ポリペプチド、タンパク質および抗体を含む。この実施形態では、特に好ましい検出手段は本発明による核酸分子であり、それによって、そのような核酸分子は、好ましくは標識されてもよいか、標識されなくてもよい。そのような核酸分子が標識される場合には、それは直接または間接に検出することができる。そのような検出は、好ましくは、本明細書に記載される核酸分子、ポリペプチドおよびタンパク質を含む群から同様に選択される、第２の検出手段の使用を含むこともできる。そのような検出手段は、好ましくは、本発明による核酸分子に特異的である。より好ましい実施形態では、第２の検出手段は、分子ビーコンである。好ましい実施形態では、核酸分子または第２の検出手段のいずれかまたは両方は、検出標識を含むことができる。検出標識は、好ましくは、ビオチン、ブロモ−デソキシウリジン標識、ジゴキシゲニン標識、蛍光標識、ＵＶ標識、放射標識およびキレーター分子を含む群から選択される。あるいは、第２の検出手段は、好ましくは核酸に含有されるか、含まれるか、またはそれに結合している検出標識と相互作用する。特に好ましい組合せは、以下の通りである：
検出標識はビオチンであり、第２の検出手段はビオチンに対する抗体であり、または
検出標識はビオチンであり、第２の検出手段はアビジンもしくはアビジン含有分子であり、または
検出標識はビオチンであり、第２の検出手段はストレプトアビジンもしくはストレプトアビジン含有分子であり、または
検出標識はビオチンであり、第２の検出手段はニュートラビジンもしくはニュートラビジン含有分子であり、または
検出標識はブロモ−デソキシウリジンであり、第２の検出手段はブロモ−デソキシウリジンに対する抗体であり、または
検出標識はジゴキシゲニンであり、第２の検出手段はジゴキシゲニンに対する抗体であり、または
検出標識はキレーターであり、第２の検出手段は放射性核種であり、それによって、前記検出標識は核酸分子に結合していることが好ましい。この種の組合せが、核酸分子が表面に結合している実施形態にも適用可能であることを認めるべきである。そのような実施形態では、検出標識が相互作用パートナーに結合していることが好ましい。
【０２０８】
最後に、第２の検出手段が第３の検出手段を用いて検出され、好ましくは、第３の検出手段は、酵素、より好ましくは第２の検出手段の検出により酵素反応を示す酵素であり、または第３の検出手段は、放射線、より好ましくは放射性核種によって放出される放射線を検出するための手段であることも、本発明の範囲内である。好ましくは、第３の検出手段は、第２の検出手段を特異的に検出し、および／またはそれと相互作用する。
【０２０９】
さらに、グルカゴンの相互作用パートナーが表面に固定化され、本発明による核酸分子が、好ましくは、相互作用パートナーとグルカゴンの間で形成される複合体に加えられる実施形態では、試料は反応から、より好ましくはステップｃ）および／またはｄ）が実施される反応容器から取り出すことができる。
【０２１０】
一実施形態では、本発明による核酸分子は蛍光部分を含み、その結果として、蛍光部分の蛍光は、核酸分子とグルカゴンおよび遊離グルカゴンの間での複合体形成により異なる。
【０２１１】
さらなる実施形態では、核酸分子は本発明による核酸分子の誘導体であり、それによって、核酸分子の誘導体は、アデノシンを交換する、アデノシンの少なくとも１つの蛍光性誘導体を含む。好ましい実施形態では、アデノシンの蛍光性誘導体は、エテノアデノシンである。
【０２１２】
さらなる実施形態では、本発明による核酸分子の誘導体およびグルカゴンからなる複合体は、蛍光を用いて検出される。
【０２１３】
本方法の一実施形態では、ステップ（ｃ）またはステップ（ｄ）でシグナルが生成され、好ましくは、シグナルは試料中のグルカゴンの濃度と相関している。
【０２１４】
好ましい実施形態では、アッセイは９６ウェルプレートで実施することができ、そこで、構成成分は前記のように反応容器に固定化され、ウェルは反応容器の役割をする。
【０２１５】
本発明の核酸分子は、薬剤発見のための出発物質としてさらに用いることができる。基本的に、２つの可能なアプローチがある。１つのアプローチは化合物ライブラリーのスクリーニングであり、そのような化合物ライブラリーは好ましくは低分子量化合物ライブラリーである。その実施形態では、スクリーニングはハイスループットスクリーニングである。
【０２１６】
好ましくは、ハイスループットスクリーニングは、標的ベースのアッセイでの化合物の速く、効率的な試行錯誤評価である。最良の場合には、分析は比色測定によって実行される。それとの関連で用いられるライブラリーは、当業者に公知である。
【０２１７】
例えば当業者に公知である競合アッセイを用いる化合物ライブラリーのスクリーニングの場合、適当なグルカゴン類似体、グルカゴンアゴニストまたはグルカゴンアンタゴニストを見出すことができる。そのような競合アッセイは、以下の通りに設定することができる。本発明の核酸分子、好ましくはシュピーゲルマー、すなわち本発明のＬ−核酸を、固体相に結合する。グルカゴン類似体を同定するために、標識グルカゴンをアッセイに加えてもよい。潜在的類似体は、本発明の核酸分子に結合するグルカゴン分子と競合し、それは、それぞれの標識によって得られるシグナルの減少と並行する。アゴニストまたはアンタゴニストについてのスクリーニングは、当業者に公知である細胞培養アッセイの使用を含むことができる。
【０２１８】
好ましくはグルカゴンの検出のために、より好ましくはグルカゴンの検出のために、本発明によるキットは、本発明の核酸分子の種の少なくとも１つまたはいくつかを含むことができる。さらに、キットは、少なくとも１つまたはいくつかの陽性または陰性の対照を含むことができる。陽性対照は、好ましくは液体の形である、例えば、グルカゴン、特に本発明の核酸分子がそれに対して選択されるもの、またはそれが結合するものであってよい。陰性対照は、例えば、グルカゴンに類似した生物物理特性で規定されるが、本発明の核酸分子によって認識されないペプチドであってよい。さらに、前記キットは、１つまたはいくつかの緩衝剤を含むことができる。乾燥もしくは凍結乾燥された形で、または液体に溶解されて、様々な成分がキットに含有されてもよい。キットは１つまたはいくつかの容器を含むことができ、それは、次に、キットの１つまたはいくつかの成分を含有することができる。さらなる実施形態では、キットは、キットおよびその様々な成分の使用法に関する情報を使用者に提供する説明書または説明用リーフレットを含む。
【０２１９】
本発明による核酸の薬学的および生物分析的測定は、ヒトおよびヒト以外の体のいくつかの体液、組織および器官でのその薬物動態学的および生体力学的プロファイルの評価にとって重要である。そのような目的のために、本明細書で開示されるか、または当業者に公知である検出方法のいずれかを用いることができる。本発明のさらなる態様では、本発明による核酸分子の検出のためのサンドイッチハイブリダイゼーションアッセイが提供される。検出アッセイの範囲内で、捕捉プローブおよび検出プローブが用いられる。捕捉プローブは、本発明による核酸分子の第１の部分に、検出プローブは第２の部分に相補的である。捕捉プローブは、表面またはマトリックスに固定化される。検出プローブは、好ましくは、本明細書で前述の通りに検出することができるマーカー分子または標識を有する。
【０２２０】
本発明による核酸分子の検出は、以下の通りに実行することができる：
本発明による核酸分子は、その末端の１つで捕捉プローブと、および他の末端で検出プローブとハイブリダイズする。その後、未結合の検出プローブが、例えば１回または数回の洗浄ステップで除去される。標識またはマーカー分子を好ましくは有する結合した検出プローブの量は、その後、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ／２００８／０５２７７４でより詳細に概説される通りに測定することができる。
【０２２１】
好ましくは本明細書で用いられるように、好ましい実施形態では、処置という用語は、さらに、または代わりに予防および／または経過観察を含む。
【０２２２】
好ましくは本明細書で用いられるように、断らない限り、疾患および障害という用語は互換的に用いられるものとする。
【０２２３】
本明細書で用いるように、含むという用語は、好ましくは、そのような用語が続くか、またはそれによって記載される主題を限定することを意図しない。しかし、代わりの実施形態では、含むという用語は含有するという意味で、したがってそのような用語が続くか、またはそれによって記載される対象物を限定すると理解されるものとする。
【０２２４】
様々な配列番号、本発明による核酸分子の化学的性質、その実際の配列および内部参照番号は、以下の表に要約される。
【表１Ａ】
2014533098.tif 000002
【表１Ｂ】
2014533098.tif 000003
【表１Ｃ】
2014533098.tif 000004
【表１Ｄ】
2014533098.tif 000005
【表１Ｅ】
2014533098.tif 000006
【表１Ｆ】
2014533098.tif 000007
【表１Ｇ】
2014533098.tif 000008
【表１Ｈ】
2014533098.tif 000009
【表１Ｉ】
2014533098.tif 000010
【表１Ｊ】
2014533098.tif 000011
【表１Ｋ】
2014533098.tif 000012
【表１Ｌ】
2014533098.tif 000013
【表１Ｍ】
2014533098.tif 000014
【表１Ｎ】
2014533098.tif 000015
【表１Ｏ】
2014533098.tif 000016
【表１Ｐ】
2014533098.tif 000017
【表１Ｑ】
2014533098.tif 000018
【表１Ｒ】
2014533098.tif 000019
【表１Ｓ】
2014533098.tif 000020
【０２２５】
本発明は、図面、実施例および配列表によりさらに説明され、それらから、さらなる特徴、実施形態および利点が解釈され得る。
【図面の簡単な説明】
【０２２６】
【図１】「Ａ型」の本発明のグルカゴン結合核酸分子の配列のアラインメントを示す図である。
【図２Ａ】「Ａ型」のグルカゴン結合核酸分子であるグルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−００１の誘導体を示す図である。
【図２Ｂ】「Ａ型」のグルカゴン結合核酸分子であるグルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−００１の誘導体を示す図である。
【図３Ａ】「Ａ型」のグルカゴン結合核酸分子であるグルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００１の誘導体を示す図である。
【図３Ｂ】「Ａ型」のグルカゴン結合核酸分子であるグルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００１の誘導体を示す図である。
【図３Ｃ】「Ａ型」のグルカゴン結合核酸分子であるグルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００１の誘導体を示す図である。
【図４】「Ｂ型」の本発明のグルカゴン結合核酸分子の配列のアラインメントを示す図である。
【図５】「Ｂ型」のグルカゴン結合核酸分子であるグルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００１の誘導体を示す図である。
【図６Ａ】「Ｂ型」のグルカゴン結合核酸分子であるグルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００２の誘導体を示す図である。
【図６Ｂ】「Ｂ型」のグルカゴン結合核酸分子であるグルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００２の誘導体を示す図である。
【図６Ｃ】「Ｂ型」のグルカゴン結合核酸分子であるグルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００２の誘導体を示す図である。
【図７】「Ｃ型」の本発明のグルカゴン結合核酸分子の配列のアラインメントを示す図である。
【図８】「Ｃ型」の本発明のさらなるグルカゴン結合核酸分子の配列のアラインメントを示す図である。
【図９】シュピーゲルマー２５７−Ｅ１−００１ならびにその誘導体２５７−Ｅ１−Ｒ１５（２５７−Ｅ１−Ｒ１５−００１とも称される）、２５７−Ｅ１−Ｒ２９（２５７−Ｅ１−Ｒ２９−００１とも称される）および２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００１のビオチン化グルカゴンに対する競合プルダウンアッセイの結果を示す図である。ここで、シュピーゲルマー２５７−Ｅ１−００１または２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００１が標識され（→参照分子）、３７℃でのビオチン化グルカゴンへの参照配列の結合を、０．０３２〜５０００ｎＭの非標識シュピーゲルマーと競合させた。
【図１０】グルカゴン結合シュピーゲルマー２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ２４および２５９−Ｈ６−００２−Ｒ３６対シュピーゲルマー２５９−Ｈ６−００２の固定化ビオチン化ヒトグルカゴンに対するビアコア測定による動力学的評価を示す図である。ここで、シュピーゲルマーの５００ｎＭ注入に関するデータが示される。
【図１１】グルカゴン結合シュピーゲルマーＮＯＸ−Ｇ１３の固定化ビオチン化ヒトグルカゴンに対するビアコア測定による動力学的評価を示す図である。ここで、１０００、５００、２５０、１２５、６２．５、３１．３、１５．６、７．８、３．９および１.９５〜０ｎＭのシュピーゲルマーＮＯＸ−Ｇ１３に関するデータが示される。
【図１２】グルカゴン結合シュピーゲルマー２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ２４、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ３６、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３−Ｒ２４、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３−Ｒ３６、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ２４−Ｒ３６および２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３−Ｒ２４−Ｒ３６対シュピーゲルマー２５９−Ｈ６−００２の固定化ビオチン化ヒトグルカゴンに対するビアコア測定による動力学的評価を示す図である。ここで、シュピーゲルマーの５００ｎＭ注入に関するデータが示される。
【図１３】グルカゴン結合シュピーゲルマーＮＯＸ−Ｇ１４の固定化ビオチン化ヒトグルカゴンに対するビアコア測定による動力学的評価を示す図である。ここで、１２５、６２．５、３１．３、１５．６、７．８、３．９、１．９５および０ｎＭのシュピーゲルマーＮＯＸ−Ｇ１４に関するデータが示される。
【図１４】グルカゴン結合シュピーゲルマーＮＯＸ−Ｇ１５の固定化ビオチン化ヒトグルカゴンに対するビアコア測定による動力学的評価を示す図である。ここで、１２５、６２．５、３１．３、１５．６、７．８、３．９、１．９５および０ｎＭのシュピーゲルマーＮＯＸ−Ｇ１５に関するデータが示される。
【図１５】グルカゴン結合シュピーゲルマーＮＯＸ−Ｇ１６の固定化ビオチン化ヒトグルカゴンに対するビアコア測定による動力学的評価を示す図である。ここで、１２５、６２．５、３１．３、１５．６、７．８、３．９、１．９５および０ｎＭのシュピーゲルマーＮＯＸ−Ｇ１６に関するデータが示される。
【図１６】シュピーゲルマー２５９−Ｈ６−００２ならびにその誘導体２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３および２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３−Ｒ２４−Ｒ３６（２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３/２４/３６とも称される）によるｃＡＭＰのグルカゴン誘導性生産の阻害を示す図である。ここで、ａ）ウェル１個当たりのｃＡＭＰの生成量を、各データセットの最大値に対して正規化して、シュピーゲルマー濃度に対する活性パーセントとして表した。
【図１７】シュピーゲルマーＮＯＸ−Ｇ１５およびＮＯＸ−Ｇ１６によるｃＡＭＰのグルカゴン誘導性生産の阻害を示す図である。ここで、ａ）ウェル１個当たりのｃＡＭＰの生成量を、各データセットの最大値に対して正規化して、シュピーゲルマー濃度に対する活性パーセントとして表し、ｂ）ｃＡＭＰ生産が５０％分阻害されるシュピーゲルマー濃度（ＩＣ５０）を、Ｐｒｉｓｍ５ソフトウェアを用いて非線形回帰（４つのパラメータフィット）を使用して算出し、ｃ）決定したＮＯＸ−Ｇ１５（５回の独立した実験）およびＮＯＸ−Ｇ１６（３回の独立した実験）に関するＩＣ５０値は、それぞれ３．４４ｎＭおよび２．４３ｎＭであった。
【図１８】シュピーゲルマー２５９−Ｈ６−００２、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３−ＰＥＧ（ＮＯＸ−Ｇ１３とも称される）および２５７−Ｅ１−００１によるｃＡＭＰのＧＩＰ誘導性生産の阻害を示す図である。ここで、ａ）ウェル１個当たりのｃＡＭＰの生成量を、各データセットの最大値に対して正規化して、シュピーゲルマー濃度に対する活性パーセントとして表し、ｂ）ｃＡＭＰ生産が５０％阻害されるシュピーゲルマー濃度（ＩＣ５０）を、Ｐｒｉｓｍ５ソフトウェアを用いて非線形回帰（４つのパラメータフィット）を使用して算出し、ｃ）シュピーゲルマー２５９−Ｈ６−００２および２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３−ＰＥＧは、ＧＩＰ誘導性ｃＡＭＰ生成の用量依存性阻害を示し、シュピーゲルマー２５７−Ｅ１−００１は、ＧＩＰに対する阻害活性を示さなかった。
【図１９】シュピーゲルマーＮＯＸ−Ｇ１３、ＮＯＸ−Ｇ１４、ＮＯＸ−Ｇ１５およびＮＯＸ−Ｇ１６と競合相手ペプチドグルカゴンであるグルカゴン依存性インスリン分泌性ポリペプチド（略記．ＧＩＰ）、グルカゴン様ペプチド−１（略記．ＧＬＰ−１）（７〜３７）、グルカゴン様ペプチド−２（略記．ＧＬＰ−２）（１〜３３）、オキシントモジュリン（略記．ＯＸＭ）および血管作動性腸管ペプチド（略記．ＶＩＰ）との競合ビアコア選択性アッセイのデータを示す図である。対照は「競合相手ペプチドなし」を意味し、データは、対照（１００％）に対して正規化した。
【図２０Ａ】シュピーゲルマー２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００１、２５７−Ｅ１−７ｘＲ−０３７、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０３０−５’−ＰＥＧ（ＮＯＸ−Ｇ１５とも称される）、２５７−Ｅ１−７ｘＲ−０３７−５’−ＰＥＧ（ＮＯＸ−Ｇ１６とも称される）、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３−５’−ＰＥＧ（ＮＯＸ−Ｇ１３とも称される）および２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２/２３/３５−５’−ＰＥＧ（ＮＯＸ−Ｇ１４とも称される）のグルカゴン、ＧＩＰ、ＧＬＰ−１、ＯＸＭおよびＶＩＰへの結合、ならびにインビトロでのグルカゴン誘導性ｃＡＭＰ生成に対する上記シュピーゲルマーの効果とのＧＩＰ、ＧＬＰ−１、ＯＸＭおよびＶＩＰの競合に関するデータを示す図である。
【図２０Ｂ】シュピーゲルマー２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００１、２５７−Ｅ１−７ｘＲ−０３７、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０３０−５’−ＰＥＧ（ＮＯＸ−Ｇ１５とも称される）、２５７−Ｅ１−７ｘＲ−０３７−５’−ＰＥＧ（ＮＯＸ−Ｇ１６とも称される）、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３−５’−ＰＥＧ（ＮＯＸ−Ｇ１３とも称される）および２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２/２３/３５−５’−ＰＥＧ（ＮＯＸ−Ｇ１４とも称される）のグルカゴン、ＧＩＰ、ＧＬＰ−１、ＯＸＭおよびＶＩＰへの結合、ならびにインビトロでのグルカゴン誘導性ｃＡＭＰ生成に対する上記シュピーゲルマーの効果とのＧＩＰ、ＧＬＰ−１、ＯＸＭおよびＶＩＰの競合に関するデータを示す図である。
【図２１】グリセンチン、グリセンチン関連ポリペプチド（省略名＝ＧＲＰＰ）、オキシントモジュリン（省略名＝ＯＸＹ、省略名＝ＯＸＭ）、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド１（省略名＝ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド１（７〜３７）（省略名＝ＧＬＰ−１（７〜３７））、グルカゴン様ペプチド１（７〜３６）（省略名＝ＧＬＰ−１（７〜３６））およびグルカゴン様ペプチド２（省略名＝ＧＬＰ−２）のアミノ酸配列を示す図である。
【図２２】様々な種のグルカゴンのアミノ酸配列を示す図である。
【図２３Ａ】経時的な血中グルコース（平均値およびＳＥＭ）を示す図２３Ａおよび曲線下面積（ＡＵＣ）決定を示す図２３Ｂによる１型糖尿病マウスモデルにおける腹腔内グルコース負荷試験の結果を示す図である。データは、一元配置ＡＮＯＶＡおよびチューキーポストテストを使用して解析した。ビヒクル群に対して有意なレベル：＊平均値ｐ＜００．５、＊＊平均値ｐ＜０．０１。
【図２３Ｂ】経時的な血中グルコース（平均値およびＳＥＭ）を示す図２３Ａおよび曲線下面積（ＡＵＣ）決定を示す図２３Ｂによる１型糖尿病マウスモデルにおける腹腔内グルコース負荷試験の結果を示す図である。データは、一元配置ＡＮＯＶＡおよびチューキーポストテストを使用して解析した。ビヒクル群に対して有意なレベル：＊平均値ｐ＜００．５、＊＊平均値ｐ＜０．０１。
【図２４Ａ】２型糖尿病マウスモデルにおける腹腔内グルコース負荷試験を示す図である。（Ａ）：経時的な血中グルコースを示し、また（Ｂ）：曲線下面積（ＡＵＣ）決定を示す。データは、一元配置ＡＮＯＶＡおよびチューキーポストテストを使用して解析した。ビヒクル群に対して有意なレベル：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１。
【図２４Ｂ】２型糖尿病マウスモデルにおける腹腔内グルコース負荷試験を示す図である。（Ａ）：経時的な血中グルコースを示し、また（Ｂ）：曲線下面積（ＡＵＣ）決定を示す。データは、一元配置ＡＮＯＶＡおよびチューキーポストテストを使用して解析した。ビヒクル群に対して有意なレベル：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１。
【図２５Ａ】「Ｃ型」の本発明のグルカゴン結合核酸分子であるグルカゴン結合核酸分子ＮＯＸ−Ｇ１１ｓｔａｂｉの誘導体を示す図である。
【図２５Ｂ】「Ｃ型」の本発明のグルカゴン結合核酸分子であるグルカゴン結合核酸分子ＮＯＸ−Ｇ１１ｓｔａｂｉの誘導体を示す図である。
【図２６】グルカゴン結合シュピーゲルマーＮＯＸ−Ｇ１１ｓｔａｂｉ２、ＮＯＸ−Ｇ１１−Ｄ０７、ＮＯＸ−Ｇ１１−Ｄ１６、ＮＯＸ−Ｇ１１−Ｄ１９、ＮＯＸ−Ｇ１１−Ｄ２１およびＮＯＸ−Ｇ１１−Ｄ２２の固定化ビオチン化ヒトグルカゴンに対するビアコア測定による動力学的評価を示す図である。
【図２７】１型糖尿病マウスモデルにおける腹腔内グルコース負荷試験を示す図である。（Ａ）：ＮＯＸ−Ｇ１６の単回用量後の１日目、（Ｂ）：ＮＯＸ−Ｇ１６の５回用量（ｑｌｄ）後の５日目、および（Ｃ）：ＮＯＸ−Ｇ１６の７回用量（ｑｌｄ）後の７日目。上部パネル：経時的な血中グルコース（平均値およびＳＥＭ）。下部パネル：曲線下面積（ＡＵＣ）決定。データは、一元配置ＡＮＯＶＡおよびチューキーポストテストを使用して解析した。ビヒクル群に対して有意なレベル：＊ｐ＜００．５。
【図２８】９回ＮＯＸ−Ｇ１６用量（ｑｌｄ）後の９日目の血漿ＦＧＦ−２１レベルを示す図である。データは、一元配置ＡＮＯＶＡおよびチューキーポストテストを使用して解析した。ビヒクル群に対して有意なレベル：＊ｐ＜００．５、＊＊ｐ＜０．０１。
【図２９】本発明による核酸分子を構成する２’デオキシリボヌクレオチドを示す図である。
【図３０Ａ】本発明による核酸分子を構成するリボヌクレオチドを示す図である。
【図３０Ｂ】本発明による核酸分子を構成するリボヌクレオチドを示す図である。
【実施例１】
【０２２７】
＜グルカゴンを結合する核酸分子＞
いくつかのグルカゴン結合核酸分子およびそれらの誘導体を特定した。それらのヌクレオチド配列を図１〜図８に表す。グルカゴン結合核酸分子は、
ａ）アプタマー（すなわち直接的プルダウンアッセイ（実施例３）および／または比較的競合プルダウンアッセイ（実施例３）を使用して、Ｄ−核酸分子として）、
ｂ）シュピーゲルマー（すなわち比較的競合プルダウンアッセイ（実施例３）を使用して、表面プラズモン共鳴測定（実施例４）により、およびヒトグルカゴン受容体によるインビトロアッセイ（実施例５）によりＬ−核酸）（さらに、シュピーゲルマーはインビボで試験された（実施例８））
を特徴とした。
【０２２８】
シュピーゲルマーおよびアプタマーは、実施例２に記載するように合成した。
【０２２９】
このようにして生成された核酸分子は、わずかに異なる配列を示し、ここで、３つの主なタイプが特定され、グルカゴン結合核酸分子：Ａ型のグルカゴン結合核酸分子（図１〜図３）、Ｂ型のグルカゴン結合核酸分子（図４〜図６）およびＣ型のグルカゴン結合核酸分子（図７および図８）として定義した。
【０２３０】
２’−デオキシヌクレオチド配列モチーフの定義に関して、不明瞭なヌクレオチドに関するＩＵＰＡＣ略記が使用される：
Ｓ  強            ＧまたはＣ、
Ｗ  弱            ＡまたはＴ、
Ｒ  プリン        ＧまたはＡ、
Ｙ  ピリミジン    ＣまたはＴ、
Ｋ  ケト          ＧまたはＴ、
Ｍ  イミノ        ＡまたはＣ、
Ｂ  Ａではない    ＣまたはＴまたはＧ、
Ｄ  Ｃではない    ＡまたはＧまたはＴ、
Ｈ  Ｇではない    ＡまたはＣまたはＴ、
Ｖ  Ｔではない    ＡまたはＣまたはＧ、
Ｎ  全て          ＡまたはＧまたはＣまたはＴ
【０２３１】
断らない限り、それぞれ、任意の核酸配列またはストレッチの配列は、５’→３’方向で示される。
【０２３２】
１．１  Ａ型のグルカゴン結合核酸分子
図１〜図３で表されるように、Ａ型のグルカゴン結合核酸分子は、潜在的なグルカゴン結合モチーフを規定する１つの中央のヌクレオチドストレッチを含む。
【０２３３】
一般に、Ａ型のグルカゴン核酸分子は、５’末端および３’末端に、末端のヌクレオチドストレッチ（第１の末端のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチ）を含む。第１の末端のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチは、互いにハイブリダイズすることができ、ここで、ハイブリダイゼーション時に、二重鎖構造が形成される。しかしながら、かかるハイブリダイゼーションは、分子中で必ずしも付与されるとは限らない。
【０２３４】
Ａ型のグルカゴン結合核酸分子の３つのヌクレオチドストレッチである第１の末端のヌクレオチドストレッチ、中央のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチは、下記の通りに５’→３’方向で配置される：第１の末端のヌクレオチドストレッチ中央のヌクレオチドストレッチ第２の末端のヌクレオチドストレッチ。しかしながら、あるいは、第１の末端のヌクレオチドストレッチ、中央のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチは、下記の通りに互いに５’→３’方向で配列される：第２の末端のヌクレオチドストレッチ中央のヌクレオチドストレッチ第１の末端のヌクレオチドストレッチ。
【０２３５】
規定されるストレッチの配列は、グルカゴンへの結合親和性に影響を及ぼすＡ型のグルカゴン結合核酸分子間で異なり得る。Ａ型の種々のグルカゴン結合核酸分子の結合分析に基づいて、以下で記載されるような中央のヌクレオチドストレッチおよびそれらのヌクレオチド配列は、個々に、より好ましくはそれら全体で、ヒトグルカゴンへの結合に必須である。
【０２３６】
本発明によるＡ型のグルカゴン結合核酸分子を図１〜図３に示す。それらは全て、グルカゴンを結合するそれらの能力に関して、アプタマーおよび／またはシュピーゲルマーとして試験した。グルカゴンに対するその結合親和性に関して特徴付けられるＡ型の第１のグルカゴン結合核酸分子は、２’−デオキシリボヌクレオチドで構成される核酸分子２５７−Ｅ１−００１であった。核酸分子２５７−Ｅ１−００１の平衡結合定数ＫＤは、直接的プルダウン結合アッセイによりアプタマーとして、およびシュピーゲルマーとして決定された（ＫＤ＿アプタマー＝１３７ｎＭ、ＫＤ＿シュピーゲルマー＝１７９ｎＭ、図１）。
【０２３７】
グルカゴン結合核酸分子２５７−Ａ１−００１、２５７−Ｄ４−００１、２５７−Ｆ４−００１、２５７−Ｂ３−００１、２５７−Ｄ３−００１、２５７−Ｅ４−００１、２５７−Ｃ４−００１、２５７−Ｃ１−００１および２５７−Ｈ２−００１（それらは全て、２’−デオキシリボヌクレオチドで構成される）を、グルカゴン結合核酸２５７−Ｅ１−００１に対して比較的競合プルダウンアッセイでアプタマーとして試験した。グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ４−００１は、２５７−Ｅ１−００１と類似の結合親和性を示した。グルカゴン結合核酸分子２５７−Ａ１−００１、２５７−Ｆ４−００１、２５７−Ｃ１−００１および２５７−Ｈ２−００１は、グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−００１と比較して、より弱い結合親和性を示した。グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｄ４−００１、２５７−Ｂ３−００１、２５７−Ｄ３−００１および２５７−Ｃ４−００１は、グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−００１と比較して、はるかに弱い結合親和性を示した（図１）。
【０２３８】
グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−００１の誘導体２５７−Ｅ１−００２、２５７−Ｅ１−００３、２５７−Ｅ１−００４および２５７−Ｅ１−００５は、各々が６個、５個または４個のヌクレオチドを有する第１および第２の末端のヌクレオチドストレッチを含み、ここで、グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−００１は、それぞれ、各々が７個のヌクレオチドを有する第１および第２の末端のヌクレオチドストレッチを含む。グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−００１の誘導体２５７−Ｅ１−００２、２５７−Ｅ１−００３、２５７−Ｅ１−００４および２５７−Ｅ１−００５は、グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−００１と比較して、比較的競合プルダウンアッセイで、低減された結合親和性を示した（図２）。したがって、グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−００１の第１および第２の末端のヌクレオチドストレッチの切断は、グルカゴンに対して低減された結合親和性をもたらした。
【０２３９】
グルカゴン結合核酸分子２５７−Ａ１−００１、２５７−Ｄ４−００１、２５７−Ｆ４−００１、２５７−Ｂ３−００１、２５７−Ｄ３−００１、２５７−Ｅ４−００１、２５７−Ｃ４−００１、２５７−Ｃ１−００１、２５７−Ｈ２−００１、２５７−Ｅ１−００１ならびにその誘導体２５７−Ｅ１−００２、２５７−Ｅ１−００３、２５７−Ｅ１−００４および２５７−Ｅ１−００５は、中央のヌクレオチドストレッチに関して、配列５’ＢＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＧＣＴＡＫＧＹＧＧＡＡＧＧＡＡＴＣＴＲＲＲ３’［配列番号１９２］を共有し、ここで、Ｇ、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｂ、Ｙ、ＫおよびＲは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、式中、
ａ）好ましい実施形態では、中央のヌクレオチドストレッチは、配列５’ＴＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１９３］を含み、式中、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｂ）好ましい実施形態では、中央のヌクレオチドストレッチは、配列５’ＴＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＡ３’［配列番号１９４］を含み、式中、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｃ）好ましい実施形態では、中央のヌクレオチドストレッチは、配列５’ＣＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１９５］を含み、式中、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｄ）好ましい実施形態では、中央のヌクレオチドストレッチは、配列５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１９６］を含み、式中、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドである。
【０２４０】
グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ４−００１および２５７−Ｅ１−００１は、グルカゴンに対して最良の結合親和性を示し、中央のストレッチにa関して以下の配列を含む：
ａ）２５７−Ｅ４−００１：５’ＣＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１９５］
ｂ）２５７−Ｅ１−００１およびその誘導体：５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１９６］
（ここで、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドである）。
【０２４１】
本発明者等は驚くべきことに、比較的競合シュピーゲルマープルダウンアッセイ方式において、グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−００１の結合親和性は、中央のヌクレオチドストレッチの配列内で２’−デオキシリボヌクレオチドをリボヌクレオチドで置き換えることにより改善されることを示した。２’−デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドは、図２９および図３０Ａ〜図３０Ｂに示されており、ここで実施例１．１および相当する図面において、以下の略記を使用した：Ｇは、２’デオキシ−グアノシン（５’一リン酸）であり、Ｃは、２’デオキシ−シチジン（５’一リン酸）であり、Ａは、２’デオキシ−アデノシン（５’一リン酸）であり、Ｔは、２’デオキシ−チミジン（５’一リン酸）であり、ｒＧは、グアノシン（５’一リン酸）であり、ｒＴは、チミジン（５’一リン酸）であり、ｒＡは、アデノシン（５’一リン酸）である。特に、グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−００１において最大７個の２’−デオキシリボヌクレオチドをリボヌクレオチドで置き換えることで、最大４０倍を上回って、グルカゴンの改善された結合親和性をもたらした。より詳細には、本発明者等は驚くべきことに、
ａ）グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−００１の中央のヌクレオチドストレッチにおいて２位、８位、１１位、１２位、２２位または２３位で、１個の２’−デオキシリボヌクレオチドを１個のリボヌクレオチドで置き換えることで、グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−００１の結合親和性と比較して、ビオチン化グルカゴンに対して改善された結合親和性をもたらすこと（図２Ｂおよび図９を参照、シュピーゲルマー２５７−Ｅ１−Ｒ０９−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ１５−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ１８−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ１９−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ２９−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ３０−００１）、
ｂ）グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−００１の中央のヌクレオチドストレッチにおいて８位および２２位または２２位および２３位で、２個の２’−デオキシリボヌクレオチドを２個のリボヌクレオチドで置き換えることで、グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−００１の結合親和性と比較して、ビオチン化グルカゴンに対して改善された結合親和性をもたらすこと（図２Ｂを参照、シュピーゲルマー２５７−Ｅ１−Ｒ１５／２９−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ２９／３０−００１）、
ｃ）グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−００１の中央のヌクレオチドストレッチにおいて８位、２２位および２３位または１１位、２２位および２３位で、３個の２’−デオキシリボヌクレオチドを３個のリボヌクレオチドで置き換えることで、グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−００１の結合親和性と比較して、ビオチン化グルカゴンに対して改善された結合親和性をもたらすこと（図２Ｂを参照、シュピーゲルマー２５７−Ｅ１−Ｒ１５／２９／３０−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ１８／２９／３０−００１）、
ｄ）グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−００１の中央のヌクレオチドストレッチにおいて８位、１１位、２２位および２３位で、４個の２’−デオキシリボヌクレオチドを４個のリボヌクレオチドで置き換えることで、グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−００１の結合親和性と比較して、ビオチン化グルカゴンに対して改善された結合親和性をもたらすこと（図２Ｂを参照、シュピーゲルマー２５７−Ｅ１−Ｒ１５／１８／２９／３０−００１）、
ｅ）グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−００１の中央のヌクレオチドストレッチにおいて２位、８位、１１位、１２位、２２位および２３位で、６個の２’−デオキシリボヌクレオチドを６個のリボヌクレオチドで置き換えることで、グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−００１の結合親和性と比較して、ビオチン化グルカゴンに対して改善された結合親和性をもたらすこと（図２Ｂおよび図９を参照、シュピーゲルマー２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００１）および
ｆ）グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−００１の中央のヌクレオチドストレッチにおいて２位、８位、１１位、１２位、１９位、２２位および２３位で、７個の２’−デオキシリボヌクレオチドを７個のリボヌクレオチドで置き換えることで、グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−００１の結合親和性と比較して、ビオチン化グルカゴンに対して改善された結合親和性をもたらすこと（図３Ｃを参照、シュピーゲルマー２５７−Ｅ１−７ｘＲ−０２３および２５７−Ｅ１−７ｘＲ−０３７）
を見出した。
【０２４２】
Ａ型のグルカゴン結合核酸分子の中央のヌクレオチドストレッチのいくつかの位置で、２’−デオキシリボヌクレオチドをリボヌクレオチドで置き換えることで、グルカゴンに対して改善された結合がもたらされることを示すデータに基づいて、試験したＡ型のグルカゴン結合核酸分子全ての中央のストレッチを下記一般式で要約することができる：
５’Ｂｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＫＧＸ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＲＲＲ３’［配列番号１７３］（式中、ｎ１はＧまたはｒＧであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＧまたはｒＧであり、ｎ５はＹまたはｒＴであり、ｎ６はＡまたはｒＡであり、ｎ７はＡまたはｒＡであり、Ｇ、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｂ、Ｋ、ＹおよびＲは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＧ、ｒＡおよびｒＴはリボヌクレオチドである）。
【０２４３】
グルカゴン結合核酸分子２５７−Ａ１−００１、２５７−Ｆ４−００１、２５７−Ｅ４−００１、２５７−Ｃ１−００１、２５７−Ｈ２−００１、２５７−Ｅ１−００１および中央のヌクレオチドストレッチのいくつかの位置で２’−デオキシリボヌクレオチドに代わってリボヌクレオチドを含む２５７−Ｅ１−００１の誘導体は、Ａ型の他のグルカゴン結合核酸分子よりも、グルカゴンに対してより良好な結合親和性を示し、中央のストレッチに関して以下の配列：５’Ｂｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＲ３’［配列番号１７４］を共有し、式中、ｎ１はＧまたはｒＧであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＧまたはｒＧであり、ｎ５はＴまたはｒＴであり、ｎ６はＡまたはｒＡであり、ｎ７はＡまたはｒＡであり、Ｇ、Ａ、Ｔ、Ｃ、ＢおよびＲは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＧ、ｒＡおよびｒＴはリボヌクレオチドであり、式中、
ａ）好ましい実施形態では、中央のヌクレオチドストレッチは、配列５’Ｔｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１７５］を含み、式中、ｎ１はＧまたはｒＧであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＧまたはｒＧであり、ｎ５はＴまたはｒＴであり、ｎ６はＡまたはｒＡであり、ｎ７はＡまたはｒＡであり、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＧ、ｒＡおよびｒＴはリボヌクレオチドであり、
ｂ）好ましい実施形態では、中央のヌクレオチドストレッチは、配列５’Ｔｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＡ３’［配列番号１７６］を含み、式中、ｎ１はＧまたはｒＧであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＧまたはｒＧであり、ｎ５はＴまたはｒＴであり、ｎ６はＡまたはｒＡであり、ｎ７はＡまたはｒＡであり、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＧ、ｒＡおよびｒＴはリボヌクレオチドであり、
ｃ）好ましい実施形態では、中央のヌクレオチドストレッチは、配列５’Ｃｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１７７］を含み、式中、ｎ１はＧまたはｒＧであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＧまたはｒＧであり、ｎ５はＴまたはｒＴであり、ｎ６はＡまたはｒＡであり、ｎ７はＡまたはｒＡであり、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＧ、ｒＡおよびｒＴはリボヌクレオチドであり、
ｄ）好ましい実施形態では、中央のヌクレオチドストレッチは、配列５’Ｇｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１７８］を含み、式中、ｎ１はＧまたはｒＧであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＧまたはｒＧであり、ｎ５はＴまたはｒＴであり、ｎ６はＡまたはｒＡであり、ｎ７はＡまたはｒＡであり、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＧ、ｒＡおよびｒＴはリボヌクレオチドであり、
より好ましい実施形態では、中央のヌクレオチドストレッチは、配列５’Ｇｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１７８］（式中、ｎ１はＧまたはｒＧであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＧまたはｒＧであり、ｎ５はＴまたはｒＴであり、ｎ６はＡまたはｒＡであり、ｎ７はＡまたはｒＡであり、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＧ、ｒＡおよびｒＴはリボヌクレオチドである）、または
配列５’Ｃｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１７７］（式中、ｎ１はＧまたはｒＧであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＧまたはｒＧであり、ｎ５はＴまたはｒＴであり、ｎ６はＡまたはｒＡであり、ｎ７はＡまたはｒＡであり、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＧ、ｒＡおよびｒＴはリボヌクレオチドである）を含む。
【０２４４】
グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−Ｒ０９−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ１５−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ１８−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ１９−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ２９−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ３０−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ１５／２９−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ２９／３０−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ１５／２９／３０、２５７−Ｅ１−Ｒ１８／２９／３０−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ１５／１８／２９／３０−００１、２５７−Ｅ１−７ｘＲ−０２３、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００１およびそれらの切断誘導体（２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００３・・・２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０２０および２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０２９、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０３３、２５７−Ｅ１−７ｘＲ−０３７、図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃを参照）は、グルカゴンに対して最良の結合親和性を示し、中央のヌクレオチドストレッチに関して以下の配列を含む。
ａ）２５７−Ｅ１−Ｒ０９−００１：５’ＧｒＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１７９］（式中、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＧはリボヌクレオチドである）、
ｂ）２５７−Ｅ１−Ｒ１５−００１：５’ＧＧＡＡＡＴＧｒＧＧＡＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８０］（式中、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＧはリボヌクレオチドである）、
ｃ）２５７−Ｅ１−Ｒ１８−００１：５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡｒＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８１］（式中、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＧはリボヌクレオチドである）、
ｄ）２５７−Ｅ１−Ｒ１９−００１：５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧｒＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８２］（式中、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＧはリボヌクレオチドである）、
ｅ）２５７−Ｅ１−Ｒ２９−００１：５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８３］（式中、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＡはリボヌクレオチドである）、
ｆ）２５７−Ｅ１−Ｒ３０−００１：５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８４］（式中、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＡはリボヌクレオチドである）、
ｇ）２５７−Ｅ１−Ｒ１５／２９−００１：５’ＧＧＡＡＡＴＧｒＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８５］（式中、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＧおよびｒＡはリボヌクレオチドである）、
ｈ）２５７−Ｅ１−Ｒ２９／３０−００１：５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８６］（式中、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＡはリボヌクレオチドである）、
ｉ）２５７−Ｅ１−Ｒ１５／２９／３０−００１：５’ＧＧＡＡＡＴＧｒＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８７］（式中、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＧおよびｒＡはリボヌクレオチドである）、
ｊ）２５７−Ｅ１−Ｒ１８/２９/３０−００１：５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡｒＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８８］（式中、Ｘ１はＧであり、Ｘ２はＧであり、Ｘ３はｒＧであり、Ｘ４はＧであり、Ｘ５はＴであり、Ｘ６はｒＡであり、Ｘ７はｒＡであり、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＧおよびｒＡはリボヌクレオチドである）、
ｋ）２５７−Ｅ１−Ｒ１５／１８／２９／３０−００１：５’ＧＧＡＡＡＴＧｒＧＧＡｒＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８９］（式中、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＧおよびｒＡはリボヌクレオチドである）、
ｌ）２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００１：５’ＧｒＧＡＡＡＴＧｒＧＧＡｒＧｒＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１９０］（式中、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＧおよびｒＡはリボヌクレオチドである）、
ｍ）２５７−Ｅ１−７ｘＲ−０２３：５’ＧｒＧＡＡＡＴＧｒＧＧＡｒＧｒＧＧＣＴＡＧＧｒＴＧＧｒＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’（式中、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＧ、ｒＡおよびｒＴはリボヌクレオチドである）。
【０２４５】
上記で示されるように、グルカゴン結合核酸２５７−Ｅ１−００１は、２’−デオキシリボヌクレオチドで構成され、２５７−Ｅ１−００１の第１および第２の末端のヌクレオチドストレッチのヌクレオチド欠失は、低減された結合親和性をもたらした（図２Ａを参照、２５７−Ｅ１−００２、２５７−Ｅ１−００３、２５７−Ｅ１−００４、２５７−Ｅ１−００４および２５７−Ｅ１−００５）。
【０２４６】
驚くべきことに、２’−デオキシリボヌクレオチドに代わって６個のリボヌクレオチドを有する中央のヌクレオチドストレッチを含むグルカゴン結合核酸２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００１に関して、本発明者等は、第１および第２の末端のヌクレオチドストレッチの、７個のヌクレオチド（２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００１、図３Ａを参照）から６個のヌクレオチド（２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００８／−０１０／−０１１／−０１２／−０１３／−０１６／−０１８／、図３Ａおよび図３Ｂを参照）および５個のヌクレオチド（２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０２０、図３Ｃを参照）への切断は、結合親和性の低減をもたらさないことを示すことができた。５個未満のヌクレオチドを有する末端のストレッチを含むグルカゴン結合核酸２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００１の誘導体は、グルカゴンに対して、低減された結合親和性を示した：各々が４個のヌクレオチドを有する第１および第２の末端のヌクレオチドストレッチを有する２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０２９、各々が３個のヌクレオチドを有する第１および第２の末端のヌクレオチドストレッチを有する２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０３０および２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０３１、各々が２個のヌクレオチドを有する第１および第２の末端のヌクレオチドストレッチを有する２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０３２、ならびに各々が１個のヌクレオチドを有する第１および第２の末端のヌクレオチドストレッチを有する２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０３３（図３Ｃを参照）。
【０２４７】
グルカゴンに対する結合親和性を維持しながら、グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０１０をさらに切断するために、中央のヌクレオチドストレッチの１９位にある２’−デオキシリボヌクレオチドをリボヌクレオチドで置換して、グルカゴン結合核酸２５７−Ｅ１−７ｘＲ−０２３をもたらした。グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０１０およびグルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−７ｘＲ−０２３の両方の分子が、グルカゴンに対して類似の結合親和性を示した（図３Ａおよび図３Ｃ）。驚くべきことに、本発明者等は、同一の中央のヌクレオチドストレッチ、ならびに各々が３個のヌクレオチドを有する第１および第２の末端のヌクレオチドストレッチを含む分子（グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−７ｘＲ−０３７）が、グルカゴンに対して、それぞれ第１および第２の末端の６個のヌクレオチドのストレッチを有するグルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−７ｘＲ−０２３とほぼ同じ結合親和性を有することを示すことができた（図３Ｃを参照）。
【０２４８】
Ａ型のグルカゴン結合核酸分子の第１および第２の末端のストレッチは、１個（２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０３３を参照）、２個（２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０３２を参照）、３個（例えば、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０３０または２５７−Ｅ１−７ｘＲ−０３７）、４個（２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０２９を参照）、５個（例えば、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０２０）、６個（例えば、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０１０）または７個（例えば、２５７−Ｅ１−ＲｘＲ−００１または２５７−Ｅ１−Ｅ１−００１）のヌクレオチドを含み（図１〜図３）、ここで、ストレッチは任意選択で、互いにハイブリダイズして、ハイブリダイゼーション時に二重鎖構造が形成される。この二重鎖構造は、１個〜７個の塩基対で構成され得る。しかしながら、かかるハイブリダイゼーションは、分子中で必ずしも付与されるとは限らない。
【０２４９】
試験したＡ型のグルカゴン結合核酸分子全ての第１の末端のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチを組み合わせると、第１の末端のヌクレオチドストレッチに関する一般式は、５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｖ３’であり、第２の末端のヌクレオチドストレッチに関する一般式は、５’ＢＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’であり、式中、Ｚ１はＧであるかまたは存在せず、Ｚ２はＳであるかまたは存在せず、Ｚ３はＶであるかまたは存在せず、Ｚ４はＢであるかまたは存在せず、Ｚ５はＢであるかまたは存在せず、Ｚ６はＲであるかまたは存在せず、Ｚ７はＢであるかまたは存在せず、Ｚ８はＶであるかまたは存在せず、Ｚ９はＶであるかまたは存在せず、Ｚ１０はＢであるかまたは存在せず、Ｚ１１はＳであるかまたは存在せず、Ｚ１２はＣであるかまたは存在せず、ここで、
第１の好ましい実施形態では、
ｄ）Ｚ１はＧであり、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２はＣであるか、または
ｅ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２はＣであるか、または
ｆ）Ｚ１はＧであり、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２は存在せず、
第２の好ましい実施形態では、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２は存在せず、
第３の好ましい実施形態では、
ｄ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｅ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｆ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
第４の好ましい実施形態では、
ｄ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｅ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｆ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
第５の好ましい実施形態では、
ｄ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｅ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｆ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
第６の好ましい実施形態では、
ｅ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
ｆ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＶであり、Ｚ７は存在せず、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
ｇ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６は存在せず、Ｚ７はＢであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
ｈ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６は存在せず、Ｚ７は存在せず、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない。
【０２５０】
グルカゴン結合核酸分子２５７−Ａ１−００１、２５７−Ｄ４−００１、２５７−Ｆ４−００１、２５７−Ｂ３−００１、２５７−Ｄ３−００１、２５７−Ｅ４−００１、２５７−Ｃ４−００１、２５７−Ｃ１−００１、２５７−Ｈ２−００１、２５７−Ｅ１−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ９−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ１５−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ１８−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ１９−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ２９−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ３０−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ１５／２９−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ２９／３０−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ１５／２９／３０−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ１８／２９／３０−００１、２５７−Ｅ１−Ｒ１５／１８／２９／３０−００１および２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００１の第１の末端のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチを組み合わせると、第１の末端のヌクレオチドストレッチに関する一般式は、５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｖ３’であり、第２の末端のヌクレオチドストレッチに関する一般式は、５’ＢＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２であり、式中、
ｄ）Ｚ１はＧであり、Ｚ２はＣであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＲであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＹであり、Ｚ１１はＧであり、Ｚ１２はＣであるか、または
ｅ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＣであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＲであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＹであり、Ｚ１１はＧであり、Ｚ１２はＣであるか、または
ｆ）Ｚ１はＧであり、Ｚ２はＣであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＲであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＹであり、Ｚ１１はＧであり、Ｚ１２は存在せず、
ここで、グルカゴンに対して最良の結合親和性を有するグルカゴン結合核酸分子は、第１の末端のストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチの下記組合せを含む：
ｇ）２５７−Ａ１−００１：５’ＧＣＡＣＴＧＧ３’（第１の末端のヌクレオチドストレッチ）および５’ＧＣＡＧＴＧＣ３’（第２の末端のヌクレオチドストレッチ）、または
ｈ）２５７−Ｆ４−００１：５’ＧＣＡＣＴＧＡ３’（第１の末端のヌクレオチドストレッチ）および５’ＧＣＡＧＴＧＣ３’（第２の末端のヌクレオチドストレッチ）、または
ｉ）２５７−Ｅ４−００１：５’ＧＣＡＧＴＧＧ３’（第１の末端のヌクレオチドストレッチ）および５’ＴＣＡＣＴＧＣ３’（第２の末端のヌクレオチドストレッチ）、または
ｊ）２５７−Ｅ１−００１：５’ＧＣＡＧＴＧＧ３’（第１の末端のヌクレオチドストレッチ）および５’ＣＴＡＣＴＧＣ３’（第２の末端のヌクレオチドストレッチ）、または
ｋ）２５７−Ｃ１−００１：５’ＧＣＧＣＴＧＧ３’（第１の末端のヌクレオチドストレッチ）および５’ＧＣＡＧＴＧＣ３’（第２の末端のヌクレオチドストレッチ）、または
ｌ）２５７−Ｈ２−００１：５’ＧＣＧＣＣＡＧ３’（第１の末端のヌクレオチドストレッチ）および５’ＴＣＧＧＣＧＣ３’（第２の末端のヌクレオチドストレッチ）。
【０２５１】
グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−００２、２５７−Ｅ１−００３、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００３、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００５、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００６、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００７、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００８、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００９、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０１０、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０１１、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０１２、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０１３、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０１４、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０１５、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０１６、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０１７、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０１８および２５７−Ｅ１−７ｘＲ−０２３の第１の末端のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチを組み合わせると、第１の末端のヌクレオチドストレッチに関する一般式は、５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｇ３’であり、第２の末端のヌクレオチドストレッチに関する一般式は、５’ＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３であり、式中、
ｄ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２は存在せず、または
ｅ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、または
ｆ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２は存在せず、
ここで、グルカゴンに対して最良の結合親和性を有するグルカゴン結合核酸分子は、第１の末端のストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチの下記組合せを含む：
ｈ）２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００８：５’ＧＣＧＣＧＧ３’（第１の末端のヌクレオチドストレッチ）および５’ＣＴＧＣＧＣ３’（第２の末端のヌクレオチドストレッチ）、または
ｉ）２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０１０：５’ＧＣＧＣＧＧ３’（第１の末端のヌクレオチドストレッチ）および５’ＣＣＧＣＧＣ３’（第２の末端のヌクレオチドストレッチ）、または
ｊ）２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０１１：５’ＧＧＧＣＣＧ３’（第１の末端のヌクレオチドストレッチ）および５’ＣＧＧＣＣＣ３’（第２の末端のヌクレオチドストレッチ）、または
ｋ）２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０１２：５’ＧＣＧＣＣＧ３’（第１の末端のヌクレオチドストレッチ）および５’ＣＧＧＣＧＣ３’（第２の末端のヌクレオチドストレッチ）、または
ｌ）２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０１３：５’ＧＡＧＣＧＧ３’（第１の末端のヌクレオチドストレッチ）および５’ＣＣＧＣＴＣ３’（第２の末端のヌクレオチドストレッチ）、または
ｍ）２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０１６：５’ＧＣＧＴＧＧ３’（第１の末端のヌクレオチドストレッチ）および５’ＣＣＡＣＧＣ３’（第２の末端のヌクレオチドストレッチ）、または
ｎ）２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０１８：５’ＧＣＧＴＣＧ３’（第１の末端のヌクレオチドストレッチ）および５’ＣＧＡＣＧＣ３’（第２の末端のヌクレオチドストレッチ）。
【０２５２】
グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００４、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０１９および２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０２０の第１の末端のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチを組み合わせると、第１の末端のヌクレオチドストレッチに関する一般式は、５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｇ３’であり、第２の末端のヌクレオチドストレッチに関する一般式は、５’ＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’であり、式中、
ｄ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、または
ｅ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、または
ｆ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
ここで、グルカゴンに対して最良の結合親和性を有するグルカゴン結合核酸は、第１の末端のストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチの下記組合せを含む：
ｃ）２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０１９：５’ＧＧＣＧＧ３’（第１の末端のヌクレオチドストレッチ）および５’ＣＣＧＣＣ３’（第２の末端のヌクレオチドストレッチ）、または
ｄ）２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０２０：５’ＣＧＣＧＧ３’（第１の末端のヌクレオチドストレッチ）および５’ＣＣＧＣＧ３’（第２の末端のヌクレオチドストレッチ）。
【０２５３】
グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０２９および２５７−Ｅ１−００５の第１の末端のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチを組み合わせると、第１の末端のヌクレオチドストレッチに関する一般式は、５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｇ３’であり、第２の末端のヌクレオチドストレッチに関する一般式は、５’ＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’であり、式中、
ｄ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、または
ｅ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、または
ｆ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
ここで、グルカゴンに対して最良の結合親和性を有するグルカゴン結合核酸分子は、第１の末端のストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチの下記組合せを含む：
２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０２９：５’ＧＣＧＧ３’（第１の末端のヌクレオチドストレッチ）および５’ＣＣＧＣ３’（第２の末端のヌクレオチドストレッチ）。
【０２５４】
グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０３０、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０３１および２５７−Ｅ１−７ｘＲ−０３７の第１の末端のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチを組み合わせると、第１の末端のヌクレオチドストレッチに関する一般式は、５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｇ３’であり、第２の末端のヌクレオチドストレッチに関する一般式は、５’ＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’であり、式中、
ｄ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＳであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＳであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、または
ｅ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＳであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、または
ｆ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＳであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
ここで、グルカゴンに対して最良の結合親和性を有するグルカゴン結合核酸分子は、第１の末端のストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチの下記組合せを含む：
２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０３０：５’ＧＣＧ３’（第１の末端のヌクレオチドストレッチ）および５’ＣＧＣ３’（第２の末端のヌクレオチドストレッチ）。
【０２５５】
グルカゴン結合核酸分子２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０３２および２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０３３の第１の末端のヌクレオチドストレッチならびに第２の末端のヌクレオチドストレッチを組み合わせると、第１の末端のヌクレオチドストレッチに関する一般式は、５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｇ３’であり、第２の末端のヌクレオチドストレッチに関する一般式は、５’ＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’であり、式中、
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＣであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない（２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０３２を参照）か、または
ｄ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６は存在せず、Ｚ７は存在せず、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない（２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０３３を参照）。
【０２５６】
グルカゴン結合核酸分子の官能性を証明するために、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００１、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０３０および２５７−Ｅ１−７ｘＲ−０３７をシュピーゲルマーとして合成した。ペグ化のために、シュピーゲルマー２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０３０および２５７−Ｅ１−７ｘＲ−０３７を、その５’末端にアミノ基を伴って合成した。アミノ修飾されたシュピーゲルマー２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０３０−５’アミノ［配列番号１５８］および２５７−Ｅ１−７ｘＲ−０３７−５’アミノ［配列番号１５９］に、４０ｋＤａのペグ部分をカップリングさせて、グルカゴン結合シュピーゲルマー２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０３０−５’−ＰＥＧ（ＮＯＸ−Ｇ１５とも称される）［配列番号９１］および２５７−Ｅ１−７ｘＲ−０３７−５’−ＰＥＧ（ＮＯＸ−Ｇ１６とも称される）［配列番号 ９２］をもたらした。シュピーゲルマーの合成およびペグ化は、実施例２に記載する。
【０２５７】
グルカゴン結合シュピーゲルマー２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００１、２５７−Ｅ１−７ｘＲ−０３７、ＮＯＸ−Ｇ１５およびＮＯＸ−Ｇ１６は、２〜３ｎＭのＩＣ５０で、グルカゴンのその受容体に対する機能をインビトロで阻害／拮抗することが可能であった（図１７：ＮＯＸ−Ｇ１５およびＮＯＸ−Ｇ１６、図２０Ａ：２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００１、２５７−Ｅ１−７ｘＲ−００３７、ＮＯＸ−Ｇ１５およびＮＯＸ−Ｇ１６、インビトロアッセイのプロトコールに関しては、実施例５を参照）。
【０２５８】
実施例８に示されるように、グルカゴン結合シュピーゲルマーＮＯＸ−Ｇ１５は、１型ＤＭおよび２型ＤＭの動物実験におけるグルコース負荷試験で有効であった（図２３および図２４）。
【０２５９】
さらに、実施例６に示されるように、グルカゴン結合シュピーゲルマー２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００１、２５７−Ｅ１−７ｘＲ−００３７、ＮＯＸ−Ｇ１５およびＮＯＸ−Ｇ１６の結合選択性を決定した（図１９および図２０）。
【０２６０】
１．２  Ｂ型のグルカゴン結合核酸分子
図４〜図６で表されるように、Ｂ型のグルカゴン結合核酸分子は、潜在的なグルカゴン結合モチーフを規定する１つの中央のヌクレオチドストレッチを含む。
【０２６１】
一般に、Ｂ型のグルカゴン結合核酸分子は、５’末端および３末端に、末端のヌクレオチドストレッチ：第１の末端のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチを含む。第１の末端のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチは、互いにハイブリダイズすることができ、ここで、ハイブリダイゼーション時に、二重鎖構造が形成される。しかしながら、かかるハイブリダイゼーションは、分子中で必ずしも付与されるとは限らない。
【０２６２】
Ｂ型のグルカゴン結合核酸分子の３つのヌクレオチドストレッチである第１の末端のヌクレオチドストレッチ、中央のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチは、下記の通りに５’→３’方向で配置される：第１の末端のヌクレオチドストレッチ中央のヌクレオチドストレッチ第２の末端のヌクレオチドストレッチ。しかしながら、あるいは、第１の末端のヌクレオチドストレッチ、中央のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチは、下記の通りに互いに５’→３’方向で配列される：第２の末端のヌクレオチドストレッチ中央のヌクレオチドストレッチ第１の末端のヌクレオチドストレッチ。
【０２６３】
規定されるストレッチの配列は、グルカゴンへの結合親和性に影響を及ぼすＢ型のグルカゴン結合核酸分子間で異なり得る。Ｂ型の種々のグルカゴン結合核酸分子の結合分析に基づいて、以下で記載されるような中央のヌクレオチドストレッチおよびそれらのヌクレオチド配列は、個々に、より好ましくはそれらの全体で、ヒトグルカゴンへの結合に必須である。
【０２６４】
本発明によるＢ型のグルカゴン結合核酸分子を図４〜図６に示す。それらは全て、グルカゴンを結合するそれらの能力に関して、アプタマーおよび／またはシュピーゲルマーとして試験した。グルカゴンに対するその結合親和性に関して特徴付けられるＢ型の第１のグルカゴン結合核酸分子は、デオキシリボヌクレオチドで構成される核酸分子２５９−Ｈ６−００１であった。核酸分子２５９−Ｈ６−００１の平衡結合定数ＫＤは、直接的プルダウン結合アッセイによりアプタマーとして決定された（ＫＤ＿アプタマー＝３３ｎＭ、図４）。
【０２６５】
グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｄ５−００１、２５９−Ｂ７−００１、２５９−Ｂ８−００１、２５９−Ａ５−００１、２５９−Ｃ８−００１、２５９−Ｅ５−００１、２５９−Ｅ７−００１および２５９−Ｆ５−００１（同様に、２’−デオキシリボヌクレオチドで構成される）を、グルカゴン結合核酸２５９−Ｈ６−００１に対して比較的競合プルダウンアッセイでアプタマーとして試験した。グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｃ８−００１は、２５９−Ｈ６−００１と類似の結合親和性を示し、ここで、両分子が、５’−ＡＧＧＡＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ−‘３［配列番号２１２］の配列を有する中央の３２個のヌクレオチドのストレッチを含む。グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｄ５−００１および２５９−Ｂ７−００１は、中央のヌクレオチドストレッチの配列においてわずかな変化を有し、グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００１と比較して、より弱い結合親和性を示した。同様に、グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｂ８−００１、２５９−Ａ５−００１および２５９−Ｅ５−００１は、中央のヌクレオチドストレッチの配列においてわずかな変化を有し、グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００１と比較してはるかに弱い結合親和性を示した。グルカゴン結合核酸２５９−Ｆ５−００１および２５９−Ｅ７−００１は、各々がグルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００１の中央のストレッチに関する中央の２９個のヌクレオチドのストレッチを含み、グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００１と比較して、より弱くはるかに弱い結合親和性を示した（図４）。２５９−Ｆ５−００１（５’−ＡＧＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＧＴＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＣＴＧ−‘３）［配列番号１９８］および２５９−Ｅ７−００１（５’−ＡＧＡＡＧＧＴＣＧＧＴＡＡＧＴＴＴＣＧＧＴＡＧＧＡＴＣＴＧ−‘３）［配列番号１９９］の中央のストレッチは、グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００１（第１のサブストレッチ：５’−ＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡ−‘３［配列番号２１３］、第２のサブストレッチ：５’−ＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴ−‘３［配列番号２１４］）、２５９−Ｆ５−００１（第１のサブストレッチ：５’−ＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡ−‘３［配列番号２１３］、第２のサブストレッチ：５’−ＡＧＴＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴ−‘３［配列番号２１５］）、２５９−Ｅ７−００１（第１のサブストレッチ：５’−ＡＡＧＧＴＣＧＧＴＡ−‘３［配列番号２１６］、第２のサブストレッチ：５’−ＡＧＴＴＴＣＧＧＴＡＧＧＡＴ−‘３［配列番号２１７］）の中央のストレッチ中のサブストレッチに関する２つのサブストレッチを含む。
【０２６６】
グルカゴン結合核酸２５９−Ｈ６−００１の誘導体２５９−Ｈ６−００２、２５９−Ｈ６−００５、２５９−Ｈ６−００３および２５９−Ｈ６−００４は、２’−デオキシリボヌクレオチドで構成され、７個、６個、５個または３個のヌクレオチドを有する第１および第２の末端のヌクレオチドストレッチを含み、ここで、グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００１は、各々が９個のヌクレオチドを有する第１および第２の末端のヌクレオチドストレッチを含む。グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００１の誘導体２５９−Ｈ６−００２および２５９−Ｈ６−００５は、比較的競合プルダウンアッセイにおいて、グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００１と類似の結合親和性を示した。グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００１の誘導体２５９−Ｈ６−００３および２５９−Ｈ６−００４は、比較的競合プルダウンアッセイにおいて、グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００１と比較して、低減された結合親和性を示した（図５）。したがって、グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００１の第１および第２の末端のヌクレオチドストレッチの３個を上回るヌクレオチドの欠失は、グルカゴンに対して低減された結合親和性をもたらした。
【０２６７】
グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｅ７−００１および２５９−Ｆ５−００１に関して示されるように、中央の２９個のヌクレオチドのストレッチを有するグルカゴン結合核酸分子は、グルカゴンに結合することができる。グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００６、２５９−Ｈ６−００７および２５９−Ｈ６−００８は、グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００２（これは、中央の３２個のヌクレオチドのストレッチを有する）の誘導体であり、全てが、グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００２の同じ第１および第２の末端のストレッチ、ならびにグルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００２の中央のストレッチとほぼ同一である中央のヌクレオチドストレッチを含む。グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００２に関して上述するように、中央のストレッチ内の１個または２個のヌクレオチドの欠失に起因して、中央のストレッチは、３１個または３０個のヌクレオチドで構成される：２５９−Ｈ６−００６：中央のヌクレオチドストレッチ：５’−ＡＧＧＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ−‘３［配列番号２１８］、２５９−Ｈ６−００７：中央のヌクレオチドストレッチ：５’−ＡＧＧＡＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ−‘３［配列番号２１９］、２５９−Ｈ６−００８：中央のヌクレオチドストレッチ：５’−ＡＧＧＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ−‘３［配列番号２２０］。グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００２に対する比較的競合プルダウンアッセイでは、２５９−Ｈ６−００２の中央のヌクレオチドストレッチの１個（２５９−Ｈ６−００６および２５９−Ｈ６−００７を参照）または２個（２５９−Ｈ６−００８を参照）のヌクレオチドの欠失が、結合親和性の低減をもたらすことが示された（図５）。
【０２６８】
しかしながら、グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｄ５−００１、２５９−Ｈ６−００１、２５９−Ｂ７−００１、２５９−Ｂ８−００１、２５９−Ａ５−００１、２５９−Ｃ８−００１、２５９−Ｅ５−００１、２５９−Ｅ７−００１、２５９−Ｆ５−００１、２５９−Ｈ６−００２、２５９−Ｈ６−００５、２５９−Ｈ６−００３、２５９−Ｈ６−００４、２５９−Ｈ６−００６、２５９−Ｈ６−００７および２５９−Ｈ６−００８の中央のヌクレオチドストレッチを組み合わせると、これらのグルカゴン結合核酸分子は、
５’−ＡＫＧＡＲＡＫＧＴＴＧＳＹＡＷＡＧＲＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ−‘３（２５９−Ｄ５−００１、２５９−Ｈ６−００１、２５９−Ｂ７−００１、２５９−Ｂ８−００１、２５９−Ａ５−００１、２５９−Ｃ８−００１、２５９−Ｅ５−００１）［配列番号２２１］、
５’−ＡＧＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＧＴＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＣＴＧ−‘３（２５９−Ｆ５−００１）［配列番号１９８］、
５’−ＡＧＡＡＧＧＴＣＧＧＴＡＡＧＴＴＴＣＧＧＴＡＧＧＡＴＣＴＧ−‘３（２５９−Ｅ７−００１）［配列番号１９９］、
５’−ＡＧＧＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ−‘３（２５９−Ｈ６−００６）［配列番号２１８］、
５’−ＡＧＧＡＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ−‘３（２５９−Ｈ６−００７）［配列番号２１９］、
５’−ＡＧＧＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ−‘３（２５９−Ｈ６−００８）［配列番号２２０］
からなる群から選択される２９個、３０個、３１個または３２個のヌクレオチドで構成される中央のヌクレオチドストレッチを含む。
【０２６９】
グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００１および２５９−Ｃ８−００１は、グルカゴンに対して最良の結合親和性を示し、中央のストレッチに関して以下の配列：５’−ＡＧＧＡＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ−‘３［配列番号２１２］を含む。
【０２７０】
本発明者等は驚くべきことに、比較的競合プルダウンアッセイで、または表面プラズモン共鳴分析により、グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００２の結合親和性は、中央のヌクレオチドストレッチの配列内で２’−デオキシリボヌクレオチドをリボヌクレオチドで置き換えることにより改善されることを示した。２’−デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドは、図２９および図３０Ａ〜図３０Ｂに示されており、ここで実施例１．２および相当する図面において、以下の略記を使用した：Ｇは、２’デオキシ−グアノシン（５’一リン酸）であり、Ｃは、２’デオキシ−シチジン（５’一リン酸）であり、Ａは、２’デオキシ−アデノシン（５’一リン酸）であり、Ｔは、２’デオキシ−チミジン（５’一リン酸）であり、ｒＧは、グアノシン（５’一リン酸）であり、ｒＵは、ウリジン（５’一リン酸）であり、ｒＡは、アデノシン（５’一リン酸）である。特に、グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００２の中央のヌクレオチドストレッチにおいて最大５個の２’−デオキシリボヌクレオチドをリボヌクレオチドで置き換えることで、最大２２倍を上回って、グルカゴンの改善された結合親和性をもたらした。より詳細には、本発明者等は驚くべきことに、
ａ）グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００２の中央のヌクレオチドストレッチにおいて６位、１７位または２９位で、１個の２’−デオキシリボヌクレオチドを１個のリボヌクレオチドで置き換えることで、グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００２の結合親和性と比較して、グルカゴンに対して改善された結合親和性をもたらすこと（図６Ａ、図６Ｂおよび図６Ｃを参照、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ２４、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ３６、２５９−Ｈ６−００５−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−００９−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１０−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１１−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１２−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１３−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１５−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１６−Ｒ１２）、
ｂ）グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００２の中央のヌクレオチドストレッチにおいて６位および１７位または６位および２９位または１７位および２９位で、２個の２’−デオキシリボヌクレオチドを２個のリボヌクレオチドで置き換えることで、グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００２の結合親和性と比較して、グルカゴンに対して改善された結合親和性をもたらすこと（図６Ａを参照、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３／２４、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３／３６、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ２４／３６）、
ｃ）グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００２の中央のヌクレオチドストレッチにおいて６位、１７位および２９で、３個の２’−デオキシリボヌクレオチドを３個のリボヌクレオチドで置き換えることで、グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００２の結合親和性と比較して、グルカゴンに対して改善された結合親和性をもたらすこと（図６Ａおよび図６Ｃを参照、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３／２４／３６および２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２／２３／３５）、および
ｄ）グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００２の中央のヌクレオチドストレッチにおいて６位、１７位、２３位、２９位および３２位で、５個の２’−デオキシリボヌクレオチドを５個のリボヌクレオチドで置き換えることで、グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００２の結合親和性と比較して、グルカゴンに対して改善された結合親和性をもたらすこと（図６Ｃを参照、２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２／２３／２９／３５／３８）
を見出した。
【０２７１】
Ｂ型のグルカゴン結合核酸分子の中央のヌクレオチドストレッチのいくつかの位置で、２’−デオキシリボヌクレオチドをリボヌクレオチドで置き換えることで、グルカゴンに対して改善された結合がもたらされることを示すデータに基づいて、グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｄ５−００１、２５９−Ｈ６−００１、２５９−Ｂ７−００１、２５９−Ｂ８−００１、２５９−Ａ５−００１、２５９−Ｃ８−００１、２５９−Ｅ５−００１の中央のストレッチを下記一般式で要約することができる：
５’−ＡＫＧＡＲ  ｎ１ＫＧＴＴＧＳＹＡＷＡｎ２ＲＴＴＣＧｎ３ＴＴＧＧＡｎ４ＴＣｎ５−‘３［配列番号１９７］（式中、ｎ１はＡまたはｒＡであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＴまたはｒＵであり、ｎ５はＡまたはｒＡであり、Ｇ、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｋ、Ｙ、Ｓ、ＷおよびＲは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＧ、ｒＡおよびｒＵはリボヌクレオチドである）。
【０２７２】
グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００１、２５９−Ｃ８−００１、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ２４、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ３６、２５９−Ｈ６−００５−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−００９−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１０−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１１−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１２−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１３−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１５−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１６−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３／２４、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３／３６、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ２４／３６、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３／２４／３６、２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２／２３／３５および２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２／２３／３５／３８は、Ｂ型の他のグルカゴン結合核酸分子よりもグルカゴンに対して、より良好な結合親和性を示し、中央のストレッチに関して以下の配列：５’ＡＧＧＡＡｎ１ＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡｎ２ＧＴＴＣＧｎ３ＴＴＧＧＡｎ４ＴＣｎ５３’［配列番号２０３］を共有し、式中、ｎ１は、ＡまたはｒＡであり、ｎ２は、ＧまたはｒＧであり、ｎ３は、ＧまたはｒＧであり、ｎ４は、ＴまたはｒＵであり、ｎ５は、ＡまたはｒＡであり、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは、２’−デオキシヌクレオチドであり、ｒＧ、ｒＡおよびｒＵは、リボヌクレオチドである。
【０２７３】
グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ２４、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ３６、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３／２４、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３／３６、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３／２４／３６、２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２／２３／３５、２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２／２３／２９／３５／３８は、グルカゴンに対して最良の結合親和性を示し、中央のヌクレオチドストレッチに関して以下の配列を含む：
ａ）２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３：５’ＡＧＧＡＡｒＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ３’［配列番号２０４］（式中、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは、２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＡはリボヌクレオチドである）、
ｂ）２５９−Ｈ６−００２−Ｒ２４：５’ＡＧＧＡＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡｒＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ３’［配列番号２０５］（式中、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＧはリボヌクレオチドである）、
ｃ）２５９−Ｈ６−００２−Ｒ３６：５’ＡＧＧＡＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡｒＵＴＣＡ３’［配列番号２０６］（式中、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＵはリボヌクレオチドである）、
ｄ）２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３／２４：５’ＡＧＧＡＡｒＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡｒＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ３’［配列番号２０７］（式中、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＧおよびｒＡはリボヌクレオチドである）、
ｅ）２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３／３６：５’ＡＧＧＡＡｒＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡｒＵＴＣＧ３’［配列番号２０８］（式中、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＡおよびｒＵはリボヌクレオチドである）、
ｆ）２５９−Ｈ６−００２−Ｒ２４／３６：５’ＡＧＧＡＡｒＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡｒＵＴＣＡ３’［配列番号２０９］（式中、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＧおよびｒＵはリボヌクレオチドである）、
ｇ）２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３／２４／３６および２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２／２３／３５：５’ＡＧＧＡＡｒＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡｒＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡｒＵＴＣＡ３’［配列番号２１０］（式中、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＧ、ｒＡおよびｒＵはリボヌクレオチドである）、
ｈ）２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２／２３／２９／３５／３８：５’ＡＧＧＡＡｒＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡｒＧＧＴＴＣＧｒＧＴＴＧＧＡｒＵＴＣｒＡ３’［配列番号２１１］（式中、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、ｒＧ、ｒＡおよびｒＵはリボヌクレオチドである）。
【０２７４】
Ｂ型のグルカゴン結合核酸分子の第１および第２の末端のストレッチは、３個（２５９−Ｈ６−００４を参照）、５個（２５９−Ｈ６−００３を参照）、６個（例えば、２５９−Ｈ６−００５、２５９−Ｈ６−００５−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−００９−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１０−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１１−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１２−Ｒ１２）、７個（例えば、２５９−Ｈ６−００２およびその誘導体（例えば、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３/２４/３６））または９個（例えば、２５９−Ｈ６−００１）のヌクレオチドを含み（図４〜図６）、ここで、ストレッチは任意選択で、互いにハイブリダイズして、ハイブリダイゼーション時に、二重鎖構造が形成される。この二重鎖構造は、１個〜９個の塩基対で構成され得る。しかしながら、かかるハイブリダイゼーションは、分子中で必ずしも付与されるとは限らない。
【０２７５】
試験したＢ型のグルカゴン結合核酸分子全ての第１の末端のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチを組み合わせると、第１の末端のヌクレオチドストレッチに関する一般式は、５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＫ３’であり、第２の末端のヌクレオチドストレッチに関する一般式は、５’ＣＫＶＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’であり、式中、Ｚ１はＣであるかまたは存在せず、Ｚ２はＧであるかまたは存在せず、Ｚ３はＲであるかまたは存在せず、Ｚ４はＢであるかまたは存在せず、Ｚ５はＢであるかまたは存在せず、Ｚ６はＳであるかまたは存在せず、Ｚ７はＳであるかまたは存在せず、Ｚ８はＶであるかまたは存在せず、Ｚ９はＮであるかまたは存在せず、Ｚ１０はＫであるかまたは存在せず、Ｚ１１はＭであるかまたは存在せず、Ｚ１２はＳであるかまたは存在せず、式中、
第１の好ましい実施形態では、
ｄ）Ｚ１はＣであり、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１はＭであり、Ｚ１２はＳであるか、または
ｅ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＮであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１はＭであり、Ｚ１２はＳであるか、または
ｆ）Ｚ１はＣであり、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１はＭであり、Ｚ１２は存在せず、
第２の好ましい実施形態では、
ｄ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１はＭであり、Ｚ１２は存在しないか、または
ｅ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｆ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１はＭであり、Ｚ１２は存在せず、
第３の好ましい実施形態では、
ｄ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｅ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｆ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
第４の好ましい実施形態では、
ｄ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＳであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｅ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＳであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｆ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＳであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
第５の好ましい実施形態では、
ｄ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳあり、Ｚ８はＶであり、存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｅ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｆ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、Ｚ１３は存在せず、
第６の好ましい実施形態では、
ｄ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８は存在せず、存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｅ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６は存在せず、Ｚ７はＳであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｆ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＳであり、Ｚ７は存在せず、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、Ｚ１３は存在せず、
第７の好ましい実施形態では、
Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６は存在せず、Ｚ７は存在せず、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない。
【０２７６】
グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｆ５−００１および５９−Ｅ７の第１の末端のヌクレオチドストレッチは、５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＧＡＴ３’のヌクレオチド配列を含み、グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｆ５−００１の第２の末端のヌクレオチドストレッチは、５’ＣＧＡＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、式中、Ｚ１はＣであり、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＡであり、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＣであり、Ｚ８はＧであり、Ｚ９はＡであり、Ｚ１０はＧであり、Ｚ１１はＡであり、Ｚ１２はＣである。さらに、第２の末端のヌクレオチドストレッチの３’末端に、さらなる「Ｇ」が存在する。
【０２７７】
グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｄ５−００１、２５９−Ｈ６−００１、２５９−Ｂ７−００１、２５９−Ｂ８−００１、２５９−Ａ５−００１、２５９−Ｃ８−００１および２５９−Ｅ５−００１の第１の末端のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチを組み合わせると、第１の末端のヌクレオチドストレッチに関する一般式は、５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＧＡＧ３’であり、第２の末端のヌクレオチドストレッチに関する一般式は、５’ＣＴＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’であり、式中、
ｄ）Ｚ１はＣであり、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０はＴであり、Ｚ１１はＣであり、Ｚ１２はＧであり、または
ｅ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０はＴであり、Ｚ１１はＣであり、Ｚ１２はＧであり、または
ｆ）Ｚ１はＣであり、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０はＴであり、Ｚ１１はＣであり、Ｚ１２は存在せず、
ここで、グルカゴンに対して最良の結合親和性を有するグルカゴン結合核酸は、第１の末端のストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチの下記組合せを含む：
２５９−Ｈ６−００１：５’ＣＧＡＣＴＣＧＡＧ３’（第１の末端のヌクレオチドストレッチ）および５’ＣＴＣＧＡＧＴＣＧ３’（第２の末端のヌクレオチドストレッチ）、
２５９−Ｃ８−００１５’ＣＧＧＣＴＣＧＡＧ３’（第１の末端のヌクレオチドストレッチ）および５’ＣＴＣＧＡＧＴＣＧ３’（第２の末端のヌクレオチドストレッチ）。
【０２７８】
グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００２、２５９−Ｈ６−００６、２５９−Ｈ６−００７、２５９−Ｈ６−００８、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ２４、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ３６、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３／２４、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３／３６、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ２４／３６および２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３／２４／３６は、５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＧＡＧ３’の配列を有する第１の末端のヌクレオチドストレッチ、および５’ＣＴＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’の配列を有する第２の末端のヌクレオチドストレッチを含み、式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＡであり、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０はＴであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＡであり、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０はＴであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない。
【０２７９】
グルカゴン結合核酸２５９−Ｈ６−００５、２５９−Ｈ６−００５−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−００９−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１０−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１１−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１２−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１３−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１５−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１６−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２／２３／３５および２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２／２３／２９／３５／３８の第１の末端のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチを組み合わせると、第１の末端のヌクレオチドストレッチに関する一般式は、５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＧ３’であり、第２の末端のヌクレオチドストレッチに関する一般式は、５’ＣＴＳＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’であり、式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＳであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＳであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＳであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
ここで、グルカゴンに対して最良の結合親和性を有するグルカゴン結合核酸は、第１の末端のストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチの下記組合せを含む：
ｃ）２５９−Ｈ６−００５−Ｒ１２：５’ＧＴＣＧＡＧ３’（第１の末端のヌクレオチドストレッチ）および５’ＣＴＣＧＡＣ３’（第２の末端のヌクレオチドストレッチ）、または
ｄ）２５９−Ｈ６−０１０−Ｒ１２：５’ＴＧＣＧＡＧ３’（第１の末端のヌクレオチドストレッチ）および５’ＣＴＣＧＣＡ３’（第２の末端のヌクレオチドストレッチ）、または
ｅ）２５９−Ｈ６−０１２−Ｒ１２：５’ＧＧＣＣＡＧ３’（第１の末端のヌクレオチドストレッチ）および５’ＣＴＧＧＣＣ３’（第２の末端のヌクレオチドストレッチ）、または
ｆ）２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２：５’ＧＣＣＧＡＧ３’（第１の末端のヌクレオチドストレッチ）および５’ＣＴＣＧＧＣ３’（第２の末端のヌクレオチドストレッチ）、または
ｇ）２５９−Ｈ６−０１５−Ｒ１２：５’ＣＴＣＧＡＧ３’（第１の末端のヌクレオチドストレッチ）および５’ＣＴＣＧＡＧ３’（第２の末端のヌクレオチドストレッチ）。
【０２８０】
グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００３の第１の末端のヌクレオチドストレッチは、５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００３の第２の末端のヌクレオチドストレッチは、５’ＣＴＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、好ましくは、第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’−ＴＣＧＡＧ−‘３であり、第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’−ＣＴＣＧＡ−‘３である。
【０２８１】
グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００４の第１の末端のヌクレオチドストレッチは、５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、グルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００４の第２の末端のヌクレオチドストレッチは、５’ＣＴＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、式中、Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６は存在せず、Ｚ７は存在せず、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない。
【０２８２】
表面プラズモン共鳴測定により結合親和性を決定するために、および／またはＢ型のグルカゴン結合核酸分子の官能性を証明するために、分子２５９−Ｈ６−００２、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ２４、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ３６、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３／２４、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３／３６、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３／２４／３６、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ２４／３６、２５９Ｈ６−０１４−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２／２３／３５および２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２／２３／２９／３５／３８をシュピーゲルマーとして合成し、ここで、シュピーゲルマー２５９−Ｈ６−００２、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３および２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２/２３/３５を、５’末端にアミノ基を伴って合成した。アミノ修飾されたシュピーゲルマー２５９−２５９−Ｈ６−００２−５’−アミノ［配列番号１５５］、Ｈ６−００２−Ｒ１３−５’−アミノ［配列番号１５６］および２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２/２３/３５−５’−アミノ［配列番号１５７］に、４０ｋＤａのペグ部分をカップリングさせて、グルカゴン結合シュピーゲルマー２５９−Ｈ６−００２−５’−ＰＥＧ（ＮＯＸ−Ｇ１２とも称される）［配列番号８８］、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３−５’−ＰＥＧ（ＮＯＸ−Ｇ１３とも称される）［配列番号８９］、および２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２/２３/３５−５’−ＰＥＧ（ＮＯＸ−Ｇ１４とも称される）［配列番号９０］をもたらした。シュピーゲルマーの合成およびペグ化は、実施例２に記載される。
【０２８３】
グルカゴン結合シュピーゲルマー２５９−Ｈ６−００２、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ２４、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ３６、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３／２４、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３／３６、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３／２４／３６、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ２４／３６、２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２、２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２／２３／３５、ＮＯＸ−Ｇ１３およびＮＯＸ−Ｇ１４の平衡結合定数ＫＤは、表面プラズモン共鳴測定により決定した（図６Ｃ、２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２/２３/２９/３５/３８、１０、１１、１２、１３、プロトコールは実施例４を参照）。
【０２８４】
グルカゴン結合シュピーゲルマーＮＯＸ−Ｇ１３およびＮＯＸ−Ｇ１４は、４．７〜６．０ｎＭのＩＣ５０で、グルカゴンのその受容体へ機能をインビトロで阻害／拮抗することが可能であった（図２０Ａ、インビトロ機能性アッセイのプロトコールに関しては、実施例５を参照）。
【０２８５】
図１０に示されるような表面プラズモン共鳴測定のデータにより、グルカゴン結合分子２５９−Ｈ６−００２の中央のヌクレオチドストレッチにおいて１個の２’デオキシリボヌクレオチドを１個のリボヌクレオチドで置き換えることで、改善された結合親和性がもたらされたことが確認される（２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ２４、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ３６に関して示される）。図１２に示されるような表面プラズモン共鳴測定のデータにより、グルカゴン結合分子２５９−Ｈ６−００２Ｒ１３の中央のヌクレオチドストレッチにおいてさらなる１個または２個の２’デオキシリボヌクレオチドを１個または２個のリボヌクレオチドで置き換えることで、グルカゴンに対して、さらに改善された結合親和性がもたらされることが明らかとなる（２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３＿Ｒ２４、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３＿Ｒ３６および２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３＿Ｒ２４＿Ｒ３６）に関して示される）。この効果はまた、インビトロ機能性アッセイにおいて、シュピーゲルマー２５９−Ｈ６−００２、２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３および２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３−Ｒ２４−Ｒ３６に関しても示された（図６、プロトコールに関しては、実施例５を参照）。
【０２８６】
さらに、実施例６で示されるように、グルカゴン結合シュピーゲルマーＮＯＸ−Ｇ１３およびＮＯＸ−Ｇ１４の結合選択性を決定した（図１９および図２０）。
【０２８７】
１．３  タイプＣ型のグルカゴン結合核酸分子
さらに、「Ａ型」および「Ｂ型」のグルカゴン結合モチーフを共有しないさらに５個のグルカゴン結合核酸を特定し、本明細書中では「Ｃ型」と称する。それらは、直接的プルダウン結合アッセイおよび／または比較的競合プルダウン結合アッセイを使用して、アプタマーとして分析した（図７および図８）。
【０２８８】
驚くべきことに、本発明者等は、グルカゴン結合核酸分子ＮＯＸ−Ｇ１１ｓｔａｂｉ２の結合親和性が、ＮＯＸ−Ｇ１１ｓｔａｂｉ２の配列において１個のリボヌクレオチドを２’−デオキシリボヌクレオチドで置き換えることにより改善されることを、プラズモン共鳴測定により示した。２’−デオキシリボヌクレオチドおよびヌクレオチドは、図２９および図３０Ａ〜図３０Ｂに示されており、ここで実施例１．３および相当する図面において、以下の略記を使用した：Ｇは、グアノシン（５’一リン酸）であり、Ｃは、シチジン５’一リン酸であり、Ａは、アデノシン（５’一リン酸）であり、Ｕは、ウリジン（５’一リン酸）であり、ｄＧは、２’デオキシ−グアノシン（５’一リン酸）であり、ｄＣは、２’デオキシ−シチジン（５’一リン酸）であり、ｄＡは、２’デオキシ−アデノシン（５’一リン酸）であり、ｄＴは、２’デオキシ−チミジン（５’一リン酸）である。特に、グルカゴン結合核酸分子ＮＯＸ−Ｇ１１ｓｔａｂｉ２において５位、７位、１５位、１６位、１９位、２０位、２１位、２２位、２３位、２４位、２５位、２６位、２７位、４６位または４８位で１個のリボヌクレオチドを２’−デオキシヌクレオチドで置き換えることで、グルカゴンに対して改善された結合をもたらした（図２５Ａおよび図２５Ｂ）。図２６では、プラズモン共鳴測定により決定されるようなＮＯＸ−Ｇ１１ｓｔａｂｉ２、ＮＯＸ−Ｇ１１−Ｄ０７、ＮＯＸ−Ｇ１１−Ｄ１６、ＮＯＸ−Ｇ１１−Ｄ１９、ＮＯＸ−Ｇ１１−Ｄ２１およびＮＯＸ−Ｇ１１−Ｄ２２の結合曲線が示される。
【０２８９】
図１〜図８で示される配列のいずれも、本発明による核酸分子であり、それらの切断型を包含するだけでなく、それらの伸長型も包含するが、但し、それぞれ、このようにして切断および伸長された核酸分子は、依然として標的に結合することが可能であることが理解される。
【実施例２】
【０２９０】
＜アプタマーおよびシュピーゲルマーの合成ならびに誘導体化＞
［小規模合成］
本発明の核酸分子を、それぞれアプタマー（Ｄ−ＲＮＡ核酸またはＤ−ＤＮＡ修飾Ｄ−ＲＮＡ核酸）およびシュピーゲルマー（Ｌ−ＲＮＡ核酸またはＬ−ＤＮＡ修飾Ｌ−ＲＮＡ核酸）として、標準的な環外アミン保護基を用いた２’ＴＢＤＭＳ  ＲＮＡおよびＤＮＡホスホルアミダイト化学を使用して、ＡＢＩ３９４合成機（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ、ＵＳＡ）で固相合成により生産した（ＤａｍｈａおよびＯｇｉｌｖｉｅ、１９９３）。オリゴヌクレオチドのＲＮＡ部分に関して、ＤおよびＬ−立体配置のオリゴヌクレオチドｒＡ（Ｎ−Ｂｚ）−、ｒＣ（Ｎ−Ａｃ）−、ｒＧ（Ｎ−ｉｂｕ）−およびｒＵ−ホスホルアミダイトが使用された一方で、ＤＮＡ部分に関しては、ＤおよびＬ−立体配置のｄＡ（Ｎ−Ｂｚ）−、ｄＣ（Ｎ−Ａｃ）−、ｄＧ（Ｎ−ｉｂｕ）−およびｄＴが適用された。ホスホルアミダイトは全て、ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡから購入した。合成および脱保護後に、アプタマーおよびシュピーゲルマーをゲル電気泳動で精製した。
【０２９１】
［大規模合成および修飾］
シュピーゲルマーを、標準的な環外アミン保護基を用いた２’ＴＢＤＭＳ−ＲＮＡおよびＤＮＡホスホルアミダイト化学を使用して、ＡｋｔａＰｉｌｏｔ１００合成機（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ）で固相合成により生産した（ＤａｍｈａおよびＯｇｉｌｖｉｅ、１９９３）。Ｌ−ｒＡ（Ｎ−Ｂｚ）−、Ｌ−ｒＣ（Ｎ−Ａｃ）−、Ｌ−ｒＧ（Ｎ−ｉｂｕ）−、Ｌ−ｒＵ−、Ｌ−ｄＡ（Ｎ−Ｂｚ）−、Ｌ−ｄＣ（Ｎ−Ａｃ）−、Ｌ−ｄＧ（Ｎ−ｉｂｕ）−およびＬ−ｄＴ−ホスホルアミダイトは、ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡから購入した。５’アミノ修飾機は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ.（Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）から購入した。未修飾または５’−アミノ修飾シュピーゲルマーの合成は、Ｌ−リボＡ、Ｌ−リボＣ、Ｌ−リボＧ、Ｌ−リボＵ、Ｌ−２’デオキシＡ、Ｌ−２’デオキシＣ、Ｌ−２’デオキシＧまたはＬ−２’デオキシＴ修飾ＣＰＧ（孔径１０００Å）（Ｌｉｎｋ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｇｌａｓｇｏｗ、ＵＫ）で開始させた。ＲＮＡおよびＤＮＡホスホルアミダイトのカップリング（１サイクル当たり１５分）に関して、アセトニトリル中の０．３Ｍベンジルチオテトラゾール（ＣＭＳ−Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ａｂｉｎｇｄｏｎ、ＵＫ）、および２当量のアセトニトリル中のそれぞれの０．２Ｍホスホルアミダイト溶液を使用した。酸化−キャッピングサイクルを使用した。さらに、オリゴヌクレオチド合成用の標準的な溶媒および試薬は、Ｂｉｏｓｏｌｖｅ（Ｖａｌｋｅｎｓｗａａｒｄ、ＮＬ）から購入した。シュピーゲルマーは、合成ＤＭＴ−ＯＮであった。脱保護後、それを、Ｓｏｕｒｃｅ１５ＲＰＣ媒体（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を使用した分取用ＲＰ−ＨＰＬＣ（Ｗｉｎｃｏｔｔ他、１９９５）により精製した。５’ＤＭＴ基を８０％酢酸で除去した（室温で３０分）。５’アミノ修飾シュピーゲルマーの場合、５’ＭＭＴ基を８０％酢酸で除去した（室温で９０分）。続いて、２ＭのＮａＯＡｃ水溶液を添加して、シュピーゲルマーを、５Ｋ再生セルロース膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）を使用した接線流濾過により脱塩させた。
【０２９２】
［シュピーゲルマーのペグ化］
シュピーゲルマーのインビボでの血漿残留時間を延長させるために、４０ｋＤａのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分を、シュピーゲルマーの５’末端で共有結合的にカップリングした。
【０２９３】
ペグ化に関して（ペグ化の方法の技術的な詳細に関しては、欧州特許出願公開第１３０６３８２号を参照）、精製した５’−アミノ修飾シュピーゲルマーを、Ｈ２Ｏ（２．５ｍｌ）、ＤＭＦ（５ｍｌ）および緩衝液Ａ（５ｍｌ、クエン酸・Ｈ２Ｏ［７ｇ］、ホウ酸［３．５４ｇ］、リン酸［２．２６ｍｌ］および１Ｍ  ＮａＯＨ［３４３ｍｌ］を混合すること、ならびに最終容量が１になるように水を添加することにより調製、ｐＨ＝８．４は、１Ｍ  ＨＣｌで調節した）の混合物中に溶解させた。
【０２９４】
シュピーゲルマー溶液のｐＨは、１Ｍ  ＮａＯＨで８．４にした。次に、４０ｋＤａのＰＥＧ−ＮＨＳエステル（Ｊｅｎｋｅｍ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ａｌｌｅｎ、ＴＸ、ＵＳＡ）を、最大収率７５〜８５％に到達するまで、０．２５当量の６回分で３０分毎に、３７℃で添加した。反応混合物のｐＨは、ＰＥＧ−ＮＨＳエステルの添加中、１Ｍ  ＮａＯＨで８〜８．５に保たれた。
【０２９５】
反応混合物を、尿素溶液（８Ｍ）４ｍｌ、および緩衝液Ｂ（Ｈ２Ｏ中の０．１Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム）４ｍｌとブレンドして、９５℃へ１５分間加熱した。次に、ペグ化されたシュピーゲルマーは、アセトニトリル勾配（緩衝液Ｂ、緩衝液Ｃ：アセトニトリル中の０．１Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム）を使用して、Ｓｏｕｒｃｅ１５ＲＰＣ媒体（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を用いたＲＰ−ＨＰＬＣにより精製した。過剰のＰＥＧは５％緩衝液Ｃで溶出し、ペグ化されたシュピーゲルマーは、１０〜１５％緩衝液Ｃで溶出した。９５％を上回る純度（ＨＰＬＣで評価される場合）を有する生成物分画を合わせて、３Ｍ  ＮａＯＡＣ  ４０ｍｌと混合させた。ペグ化されたシュピーゲルマーを、接線流濾過（５Ｋ再生セルロース膜、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）により脱塩させた。
【実施例３】
【０２９６】
＜グルカゴンに対する結合親和性の決定（プルダウンアッセイ）＞
グルカゴンへの結合分析用に、グルカゴン結合核酸分子を、Ｄ−ヌクレオチドで構成されるアプタマーとして、またはＬ−ヌクレオチドで構成されるシュピーゲルマーとして合成した。アプタマーの結合分析は、Ｄ−アミノ酸で構成されるビオチン化ヒトＤ−グルカゴンを用いて行った。シュピーゲルマーの結合分析は、Ｌ−アミノ酸で構成されるビオチン化ヒトＬ−グルカゴンを用いて行った。
【０２９７】
［直接的プルダウンアッセイ］
［γ−３２Ｐ］標識されたＡＴＰ（Ｈａｒｔｍａｎｎ  Ａｎａｌｙｔｉｃ、Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用してＴ４ポリヌクレオチドキナーゼ（インビトロｇｅｎ、Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）により、アプタマーを５’リン酸標識した。シュピーゲルマーの５’末端にあるＤ立体配置の２つのさらなるアデノシン残基もまた、Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼによるシュピーゲルマーの放射能標識を可能にした。標識された核酸の比放射能は、２００，０００〜８００，０００ｃｐｍ／ｐｍｏｌであった。変性および再生（１’９４℃、氷／Ｈ２Ｏ）後に、低濃度で平衡に達するように、それぞれ様々な量のビオチン化ヒトＤまたはＬ−グルカゴンと一緒に、選択緩衝液（２０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１３７ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＫＣｌ、１ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＣａＣｌ２、０．１％［ｗ／ｖｏｌ］のＴｗｅｅｎ−２０、０．１％［ｗ／ｖｏｌ］のＣＨＡＰＳ）中で２〜６時間、３７℃で１００〜７００ｐＭ濃度で、標識された核酸をインキュベートした。使用されるプラスチック製品の表面または固定化マトリックスへの結合パートナーの非特異的吸着を防止するために、選択緩衝液に、１００μｇ／ｍｌのヒト血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）および１０μｇ/ｍｌの酵母ＲＮＡ（Ａｍｂｉｏｎ、Ａｕｓｔｉｎ、ＵＳＡ）を補充した。アプタマー結合に関するビオチン化Ｄ−グルカゴンの濃度範囲は、０．６４ｎＭ〜１０μＭに設定されたのに対して、シュピーゲルマー結合に関するビオチン化Ｌ−グルカゴンの濃度範囲は、０．３２ｎＭ〜５μＭに設定された。総反応容量は５０μＬであった。ビオチン化グルカゴン、および核酸とビオチオン化グルカゴンとの複合体を、選択緩衝液で予め平衡化させた高容量ニュートラアビジンアガロース粒子（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＵＳＡ）４μｌ上に固定化した。粒子をサーモミキサー中でそれぞれの温度で２０分間、懸濁状態に保った。上清の除去および適当な洗浄後に、固定化放射能をシンチレーションカウンターで定量化した。結合のパーセントをビオチン化グルカゴンの濃度に対してプロットして、１：１の化学量論を仮定してソフトウェアアルゴリズム（ＧＲＡＦＩＴ、Ｅｒｉｔｈａｃｕｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｓｕｒｒｅｙ、Ｕ.Ｋ．）により解離定数を得た。
【０２９８】
［グルカゴン結合核酸の順位に関する競合プルダウンアッセイ］
種々のアプタマーまたはシュピーゲルマーのグルカゴンへの結合を比較するために、競合順位アッセイを実施した。この目的で、利用可能な最も密接（ａｆｆｉｎｅ）なアプタマーまたはシュピーゲルマーのいずれかを放射能標識して（上記を参照）、それぞれ、グルカゴン結合アプタマーまたはシュピーゲルマー用の参照として機能を果たした。変性および再生後に、高容量ニュートラアビジンアガロース粒子（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＵＳＡ）１．５μｌ上の固定化および競合なしの洗浄後に、ビオチン化グルカゴンへのおよそ５〜１０％結合をもたらす条件で、選択緩衝液５０または１００μｌ中でビオチン化グルカゴンとともに３７℃で、標識された核酸をインキュベートした。過剰の変性および再生した非標識アプタマー変異体を、平行結合反応に対して標識された参照アプタマーと一緒に、種々の濃度（例えば、５０、５００および５０００ｎＭ）で添加した。変性および再生した非標識シュピーゲルマー誘導体は、平行結合反応において参照シュピーゲルマーと一緒に１、１０および１００ｎＭの濃度で適用させた。試験されるべき核酸は、標的結合に関して参照核酸と競合し、したがってそれらの結合特性に依存して結合シグナルを減少させた。続いて、このアッセイで最も活性であることがわかったアプタマーまたはシュピーゲルマーはそれぞれ、他のグルカゴン結合核酸分子の比較的分析に関する新たな参照として機能を果たすことができた。各結合曲線の標識されたシュピーゲルマーの結合を正規化した（１００％に対して、競合なしでの結合を設定した）。
【０２９９】
［親和性および選択性の決定のための競合プルダウンアッセイ］
比較順位実験に加えて、競合プルダウンアッセイもまた、グルカゴン結合核酸の親和性定数を決定するために実施した。この目的で、Ｄ−グルカゴン結合アプタマーまたはＬ−グルカゴン結合シュピーゲルマーのいずれかは、上述するように放射能標識されて、参照として機能を果たした。変性および再生後に、標識された参照核酸および競合相手分子の例えば０．１２８〜２０００ｎＭの範囲の５倍希釈物のセットを、選択緩衝液０．１または０．２ｍｌ中で３７℃で２〜４時間、一定量のビオチン化グルカゴンとともにインキュベートした。選択したタンパク質濃度は、最低競合相手濃度で、放射能標識した参照分子のおよそ５〜１０％の最終結合を引き起こすべきである。誘導体核酸配列の結合定数を測定するために、過剰の適当な変性および再生した非標識アプタマーまたはシュピーゲルマー変異体が競合相手として機能を果たしたのに対して、シュピーゲルマーに関しては、未修飾およびペグ化型を試験した。別のアッセイアプローチでは、種々の濃度での非ビオチン化グルカゴンは、アプタマーまたはシュピーゲルマー結合に関してビオチン化グルカゴンに対して競合した。さらに、グルカゴン結合シュピーゲルマーの選択性は、ビオチン化グルカゴンに対して競合するのに使用されるヒトグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）およびグルコース依存性インスリン分泌性ポリペプチド（ＧＩＰ）により検討した。高容量ニュートラアビジンアガロースマトリックス１．５μｌ上のビオチン化グルカゴンおよび結合核酸の固定化、洗浄およびシンチレーション計数（上記を参照）後に、結合放射能標識シュピーゲルマーの正規化されたパーセントを、競合相手分子の相当する濃度に対してプロットした。得られた解離定数は、ＧｒａＦｉｔソフウェアを用いて算出した。
【実施例４】
【０３００】
＜グルカゴン結合シュピーゲルマーのビアコア測定＞
［ビアコアアッセイ設定］
ビオチン化ヒトＬ−グルカゴン（グルカゴン１〜２９−ＡＥＥＡｃ−ＡＥＥＡｃ−ビオチン、ＢＡＣＨＥＭ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄによるカスタム合成）を、カルボキシメチル化（略記．ＣＭ）デキストランコーティングしたセンサチップ上に固定化した。このセンサチップは、０．４Ｍ  ＥＤＣ（Ｈ２Ｏ中の１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、ＧＥ、ＢＲ−１０００−５０）および０．１Ｍ  ＮＨＳ（Ｈ２Ｏ中のＮ−ヒドロキシスクシンイミド、ＧＥ、ＢＲ−１０００−５０）の１：１混合物を使用して、可溶性ニュートラアビジン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）の共有結合的固定化により調製した。同じセンサチップ上の参照フローセルをビオチンでブロックした。
【０３０１】
［一般的な動力学的評価］
グルカゴン結合シュピーゲルマーを、１００μＭのストック濃度（ＵＶ測定により定量化）になるように水中に溶解させて、水浴またはサーモミキサー中で最大９５℃へ３０秒間加熱して、氷上で瞬間（ｓｎａｐ）冷却して、均質な溶解溶液を保証した。動力学的パラメータおよび解離定数は、実行緩衝液中に希釈させた１０００、５００、２５０、１２５、６２．５、３１．２５、１５．６３、７．８、３．９、１．９５、０．９８および０ｎＭの濃度での一連のシュピーゲルマー注入により評価した。全て実験において、分析は、３０μｌ／分の流速で２４０〜３６０の結合時間および２４０〜３６０秒の解離時間を規定するＫｉｎｊｅｃｔコマンドを使用して３７℃で実施した。アッセイは二重参照であったのに対して、ＦＣｌは、（ブロックされた）表面対照（各シュピーゲルマー濃度のバルク寄与）として機能を果たし、分析物を伴わない一連の緩衝液注入は、緩衝液自体のバルク寄与を決定した。データ解析および解離定数（ＫＤ）の算出は、修飾ラングミア１：１化学量論的フィッティングアルゴリズムを使用して、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ３．１．１ソフトウェア（ＢＩＡＣＯＲＥ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）を用いて行った。
【０３０２】
データ解析および解離定数（ＫＤ）の算出は、一定ＲＩおよび１×１０７［ＲＵ／Ｍ＊ｓ］の質量移行係数ｋｔを用いて、修飾ラングミア１：１化学量論的フィッティングアルゴリズムを使用して、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ３．１．１ソフトウェア（ＢＩＡＣＯＲＥ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）を用いて行った。結果は、ｋａ［１/Ｍ＊ｓ］対ｋｄ［１/ｓ］としてプロットした。
【０３０３】
［グルカゴン結合シュピーゲルマーの選択性を決定するための競合ビアコアアッセイ］
ビオチン化ヒトグルカゴンの固定化は、上述するように実施した。分析されるべきシュピーゲルマーは、競合相手として一連の濃度（２０００〜１０００〜５００〜２５０〜０ｎＭ）の様々なグルカゴン関連遊離ペプチド（すなわち、グルカゴン、オキシントモジュリン、ＧＬＰ−１（７〜３７）、ＧＬＰ−２（１〜３３）、ＧＩＰおよびプレプロ−ＶＩＰ（８１〜１２２）と一緒に、または対照として競合相手なしで、固定濃度（ここでは、１２５ｎＭ）で注入した。競合相手なしの固定化Ｌ−グルカゴンへのシュピーゲルマー結合（対照）を１００％に正規化した。シュピーゲルマーがグルカゴンまたは関連ペプチド（競合相手ペプチド）と同時注入されると、固定化グルカゴンへのシュピーゲルマー結合は、可溶性競合相手に対する結合が起こる場合には低減される（２０００ｎＭの競合相手ペプチドに関してのみ応答が示された）。注入の３６０秒後の応答ユニット［ＲＵ］を決定し、対照（＝１００％）に対して正規化して、プロットした。
【実施例５】
【０３０４】
＜グルカゴン結合シュピーゲルマーによるグルカゴン誘導性ｃＡＭＰ生産の阻害＞
グルカゴンに対するヒト受容体を発現する、安定にトランスフェクトされた細胞株は、ヒトグルカゴン受容体をコードする配列（ＮＣＢＩアクセッションＮＭ＿０００１６０）をｐＣＲ３．１ベクター（インビトロｇｅｎ）へクローニングさせることにより生成させた。無血清培地（ＵｌｔｒａＣＨＯ、Ｌｏｎｚａ）中で成長するように適応されたＣＨＯ細胞をグルカゴン受容体プラスミドにトランスフェクトして、安定にトランスフェクトされた細胞をゲネチシンによる処置により選択した。
【０３０５】
阻害実験用に、グルカゴン受容体を発現するＣＨＯ細胞を、４〜６×１０４個／ウェルの密度で９６ウェルプレート（細胞培養物で処置、平坦な底部）上に播種して、１００ユニット／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンおよび０．５ｍｇ／ｍｌのゲネチシンを含有するＵｌｔｒａＣＨＯ培地中で、３７℃、５％ＣＯ２で一晩培養した。刺激の２０分前に、３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）の溶液を最終濃度が１ｍＭになるように添加した。
【０３０６】
刺激溶液（グルカゴン＋様々な濃度のシュピーゲルマー）は、ハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）＋１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ中で構成され、３７℃で３０分間インキュベートした。細胞への添加の直前に、ＩＢＭＸを、最終濃度が１ｍＭになるように添加した。刺激のため、培地を細胞から除去して、刺激溶液（グルカゴン＋シュピーゲルマー）を添加した。３７℃で３０分間のインキュベーション後、溶液を除去して、ｃＡＭＰ−スクリーン（Ｓｃｒｅｅｎ）（商標）システムキット（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）の構成成分である溶解緩衝液中に、細胞を溶解させた。このキットは、供給業者の指示書に従ってｃＡＭＰ含有量の決定に使用した。
【実施例６】
【０３０７】
＜グルカゴン結合シュピーゲルマーによるＧＩＰ誘導性ｃＡＭＰ生産の阻害＞
グルカゴン結合シュピーゲルマーが同様に、グルカゴン依存性インスリン分泌性ポリペプチド（ＧＩＰ）の作用を阻止することができるかどうかを検討するために、ＲＩＮ−ｍ５Ｆラットインスリノーマ細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ−１１６０５）を、１×１０５個／ウェルの密度で９６ウェルプレート（細胞培養物で処置、平坦な底部）上に播種して、１０％ウシ胎児血清、１００ユニット／ｍｌのペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを含有するＰＲＭＩ１６４０培地中で、３７℃、５％ＣＯ２で一晩培養した。刺激の２０分前に、３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）の溶液を最終濃度が１ｍＭになるように添加した。
【０３０８】
刺激溶液（ＧＩＰ＋様々な濃度のシュピーゲルマー）は、ハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）＋１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ中で構成され、３７℃で３０分間インキュベートした。細胞への添加の直前に、ＩＢＭＸを、最終濃度が１ｍＭになるように添加した。刺激のため、培地を細胞から除去して、刺激溶液（ＧＩＰ＋シュピーゲルマー）を添加した。３７℃で３０分間のインキュベーション後、溶液を除去して、ｃＡＭＰ−スクリーン（Ｓｃｒｅｅｎ）（商標）システムキット（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）の構成成分である溶解緩衝液中に、細胞を溶解させた。このキットは、供給業者の指示書に従ってｃＡＭＰ含有量の決定に使用した。
【実施例７】
【０３０９】
＜グルカゴン結合シュピーゲルマー選択性の決定＞
グルカゴン前駆体は、８つの鎖、すなわちグリセンチン、グリセンチン関連ポリペプチド（ＧＲＰＰ）、オキシントモジュリン（ＯＸＹ／ＯＸＭ）、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１［７〜３７］）、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１［７〜３６］）およびグルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ−２）に切断される（図２１を参照）。また、ＢＬＡＳＴ検索により、グルカゴン配列関連ペプチドとして、グルコース依存性インスリン分泌性ペプチド（ＧＩＰ）および腸管ペプチドＰＨＶ−４２（プレプロ血管作動性腸管ペプチド／プレプロ−ＶＩＰ［８１〜１２２］）も特定された。Ａ型（例えば、シュピーゲルマー２５７−Ｅ１−６ｘＲ−００１、２５７−Ｅ１−７ｘＲ−０３７、２５７−Ｅ１−６ｘＲ−０３０−５’−ＰＥＧ（ＮＯＸ−Ｇ１５とも称される）および２５７−Ｅ１−７ｘＲ−０３７−５’−ＰＥＧ（ＮＯＸ−Ｇ１６とも称される））、ならびにＢ型（例えば、２５９−Ｈ６−０２−Ｒ１３−５’−ＰＥＧ（ＮＯＸ−Ｇ１３とも称される）および２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２/２３/３５−５’−ＰＥＧ（ＮＯＸ−Ｇ１４とも称される））のグルカゴン結合核酸分子の選択性は、遊離グルカゴン、オキシントモジュリン、ＧＬＰ−１［７〜３７］、ＧＬＰ−２［１〜３３］、ＧＩＰおよびプレプロ−ＶＩＰ［８１〜１２２］を用いた競合結合アッセイ方式で、プルダウンアッセイ（実施例３を参照）および／またはビアコア測定（実施例４を参照）により決定した。細胞ベースのアッセイ（実施例５および実施例６）を使用して、グルカゴン、オキシントモジュリン、ＧＬＰ−１およびＧＩＰに対するＡ型のグルカゴン結合核酸分子の結合を確認した。
【０３１０】
プルダウンアッセイ（実施例３を参照）および／またはビアコア測定で、Ａ型およびＢ型のグルカゴン結合核酸分子は、グルカゴンおよびオキシントモジュリンに対して匹敵する結合を示し、細胞ベースのアッセイでは、グルカゴン誘導性およびオキシントモジュリン誘導性ｃＡＭＰ形成を阻害した。これらのデータにより、グルカゴンのＣ末端は、Ａ型およびＢ型のグルカゴン結合核酸分子のグルカゴン結合に必須ではないことが示される。グルカゴン配列関連ペプチドＧＬＰ−１［７〜３７］、ＧＬＰ−２［１〜３３］およびプレプロ−ＶＩＰ［８１〜１２２］は、Ａ型およびＢ型のグルカゴン結合核酸分子により認識されなかった。驚くべきことに、Ｂ型のグルカゴン結合核酸分子２５９−Ｈ６−００２−Ｒ１３−５’−ＰＥＧ（ＮＯＸ−Ｇ１３とも称される）および２５９−Ｈ６−０１４−Ｒ１２/２３/３５−５’−ＰＥＧ（ＮＯＸ−Ｇ１４とも称される）は、ＧＩＰへの結合を示し、細胞ベースのアッセイでは、ＧＩＰ誘導性ｃＡＭＰ形成を阻害した（図１８、図１９、図２０）。
【実施例８】
【０３１１】
＜１型および２型糖尿病動物実験におけるグルコース負荷に対するグルカゴン結合シュピーゲルマーの効果＞
＜８．１  １型糖尿病動物実験におけるグルコース負荷に対するグルカゴン結合シュピーゲルマーの効果＞
［方法］
雄ＢＡＬＢ／ｃマウスを２０〜２４ｇで入手して、実験を開始する前の１週間、標準的な条件で収容した。
【０３１２】
最近公開されたデータ（Ｌｅｅ、Ｗａｎｇ他、２０１１）によれば、１型糖尿病（略記．ＤＭ１）は、試験日の３週前に第１のストレプトゾトシン（略記．ＳＴＺ）注入（１００ｍｇ／ｋｇ（体重））、および実験の２週前に第２の注入（８０ｍｇ／ｋｇ（体重））により誘導された。１型糖尿病の表現型達成を確証するために、空腹時グルコースレベルおよび体重を、腹腔内グルコース負荷試験（略記．ｉｐＧＴＴ）の１日前に測定した。初期体重と比較した場合に２５％を上回る体重損失を伴う動物、および２００ｍｇ／ｄＬ未満、または５００ｍｇ／ｄＬ超の空腹時血中グルコースレベルを伴う動物を排除した。
【０３１３】
実験日に、下記手順を行った：
実験の開始の２．５時間前（時間：−９５分）にマウスを絶食させた。
時間：              行動
−９５分：          基本血漿グルコースの決定
−９０分：          ＮＯＸ−Ｇ１５（１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ）またはグルカゴン受容体アンタゴニストｄｅｓ−Ｈｉｓ１−Ｇｌｕ９−グルカゴン（２ｍｇ/ｋｇおよび４ｍｇ/ｋｇ）またはビヒクル（注入量のＨ２Ｏ）の腹腔内注入
−５分：            血中グルコースの決定
０分：              グルコースの腹腔内注入（２ｇ／ｋｇ）
２０分：            血中グルコースの決定
４０分：            血中グルコースの決定
７０分：            血中グルコースの決定
１００分：          血中グルコースの決定
【０３１４】
［結果］
ＳＴＺ処置したマウスは、２．５時間の絶食間隔後に３００〜４００ｍｇ／ｄＬの基本グルコースレベルの強力な上昇を示した。腹腔内グルコース注入の２０分後に、グルコースレベルは、ビヒクル処置群において最高のピークに達した。陽性対照として使用されたペプチド性受容体アンタゴニスト（Ｄａｌｌａｓ−Ｙａｎｇ，Ｓｈｅｎ他、２００４）は、グルコース負荷前の高い用量群でグルコース濃度の低下を示した。両方の群が、ビヒクル群よりも低いピークに達した。同様に、両方のシュピーゲルマー用量群が、ビヒクルよりも低いピークグルコース濃度を有した。上述の効果はまた、シュピーゲルマーで処置した群において経時的な血中グルコースに関して有意に低い曲線下面積（略記．ＡＵＣ）をもたらした（図２３）。
【０３１５】
＜８．２  ２型糖尿病動物実験におけるグルコース負荷に対するグルカゴン結合シュピーゲルマーＮＯＸ−Ｇ１５の効果＞
ヒトで観察される後期２型糖尿病（略記．ＤＭ２）症状を模倣して、食事性肥満マウスを低用量のストテプトゾトシンで処置することができる（Ｌｕｏ，Ｑｕａｎ他、１９９８、Ｓｔｒｏｗｓｋｉ，Ｌｉ他、２００４）。
【０３１６】
［方法］
雄ＢＡＬＢ／ｃマウスを２０〜２４ｇで入手した。１０週の高脂肪食（略記．ＨＦＤ）の摂食によりインスリン耐性を誘導させた。さらに、ＨＦＤの８週後に、ＳＴＺの用量（１００ｍｇ／ｋｇ（体重））を投与して、後期ＤＭ２生理学を模倣する部分的β細胞不全を誘導した（Ｂａｒｉｂａｕｌｔ  ２０１０）。糖尿病は、絶食血中グルコースレベルおよび体重を測定することにより確認した。２００ｍｇ／ｄＬ未満、または３００ｍｇ／ｄＬ超の血中グルコースレベルを伴うマウスを排除した。同様に、ＨＦＤにも関らずストレプトゾトピン注入前に、および注入の１週後に安定な重量プロファイルを有さないマウスも排除した。
【０３１７】
実験日に、下記手順を行った：
実験の開始の２．５時間前（時間：−１２０分）にマウスを絶食させた。
時間：              行動
−１２０分：        基本血中グルコースの決定
−９０分：          ＮＯＸ−Ｇ１５（１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ）またはグルカゴン受容体アンタゴニストｄｅｓ−Ｈｉｓ１−Ｇｌｕ９−グルカゴン（４ｍｇ/ｋｇ）またはビヒクル（注入量のＨ２Ｏ）の腹腔内注入
−５分：            血中グルコースの決定
０分：              グルコースの腹腔内注入（２ｇ／ｋｇ）
２０分：            血中グルコースの決定
４０分：            血中グルコースの決定
７０分：            血中グルコースの決定
１００分：          血中グルコースの決定
１２０分：          血中グルコースの決定
【０３１８】
［結果］
ＤＭ２マウスは、２．５時間の絶食間隔後に１７０ｍｇ／ｄＬの基本グルコースレベルの上昇を示した。腹腔内グルコース注入の４０分後に、グルコースレベルは、ビヒクル処置群において最高のピークに達した。陽性対照として使用されたペプチド性受容体アンタゴニスト（Ｄａｌｌａｓ−Ｙａｎｇ，Ｓｈｅｎ他、２００４）は、わずかに低いグルコース濃度を示し、またより迅速な正常化を示した。両方のシュピーゲルマー用量群は、ビヒクルおよびグルカゴン受容体アンタゴニストよりも低いピークグルコース濃度およびより迅速な正常化を有した。上述の効果はまた、シュピーゲルマーで処置した群において経時的な血中グルコースに関して有意に低い曲線下面積（略記．ＡＵＣ）をもたらした（図２４を参照）。
【０３１９】
＜８．３  １型糖尿病動物実験におけるグルコース負荷に対するグルカゴン結合シュピーゲルマーＮＯＸ−Ｇ１６の効果＞
［方法］
雄ＢＡＬＢ／ｃマウスを２０〜２４ｇで入手して、実験を開始する前の１週間、標準的な条件で収容した。
【０３２０】
最近公開されたデータ（Ｌｅｅ、Ｗａｎｇ他、２０１１）によれば、１型糖尿病（略記．ＤＭ１）は、試験日の３週前に第１のストレプトゾトシン（略記．ＳＴＺ）注入（１００ｍｇ／ｋｇ（体重））、および実験の２週前に第２の注入（８０ｍｇ／ｋｇ（体重））により誘導された。１型糖尿病の表現型達成を確証するために、空腹時グルコースレベルおよび体重を、腹腔内グルコース負荷試験（略記．ｉｐＧＴＴ）の１日前に測定した。初期体重と比較した場合に２５％を上回る体重損失を伴う動物、および２００ｍｇ／ｄＬ未満、または５００ｍｇ／ｄＬ超の空腹時血中グルコースレベルを伴う動物を排除した。処置群１つ当たり２０匹のマウスが存在した。
【０３２１】
実験日に、下記手順を行った：
時間：              行動
−４８０分：        食物除去
−１２５分：        基本血中グルコースの決定
−１２０分：        ＮＯＸ−Ｇ１６（０．１ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（０．９％生理食塩水）の腹腔内注入
−５分：            血中グルコースの決定（シュピーゲルマーのみの効果）
０分：              グルコースの腹腔内注入（２ｇ／ｋｇ）
１５分：            血中グルコースの決定
３０分：            血中グルコースの決定
４５分：            血中グルコースの決定
６０分：            血中グルコースの決定
９０分：            血中グルコースの決定
【０３２２】
処置は、９日間毎日、およそ午前９時に行った。ｉＰＧＴＴは、１日目、３日目および７日目に実施した。
【０３２３】
［結果］
ＳＴＺ処置したマウスは、２時間の絶食間隔後に３００〜４００ｍｇ／ｄＬの基本グルコースレベルの強力な上昇を示した。腹腔内グルコース注入の２０分後に、グルコースレベルは、ビヒクル処置群において最高のピークに達した。両方のシュピーゲルマー用量群は、ビヒクルよりも低いピークグルコース濃度を有した。上述の効果はまた、１ｍｇ／ｋｇのシュピーゲルマーで処置した群において経時的な血中グルコースに関して有意に低い曲線下面積（略記．ＡＵＣ）をもたらした（図２７）。これにより、ＮＯＸ−Ｇ１６の反復用量の血糖効果作用を７日間にわたって維持することができることが示され、内分泌ホルモンまたは他のシグナル伝達物質およびそれらの受容体の上方または下方制御によりシュピーゲルマー効果をくつがえすことが起きないことを示す。
【０３２４】
９日目に、ＮＯＸ−Ｇ１６を絶食の４時間後に投与した。さらに２時間後に採血した。線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ−２１）レベル（これらは、糖尿病で増大される）。は、両方のシュピーゲルマー用量群で有意に低減され、したがってＮＯＸ−Ｇ１６の反復投与が、疾患の長期転帰に対して有益な効果を有し得るという証拠を提供する。
【０３２５】
＜参照文献＞
本明細書中に引用される文書の完全な書誌データは、断らない場合には、下記の通りであり、ここで、上記参照文献の開示は、参照により本明細書に援用される。
【表２Ａ】
2014533098.tif 000021
【表２Ｂ】
2014533098.tif 000022
【表２Ｃ】
2014533098.tif 000023
【０３２６】
本明細書、特許請求の範囲および／または図面に開示される本発明の特徴は、別個におよびそれらの任意の組合せで、その様々な形態で本発明を実現するための材料であり得る。
【図１−１】
2014533098.tif 000024
【図１−２】
2014533098.tif 000025
【図２Ａ】
2014533098.tif 000026
【図２Ｂ−１】
2014533098.tif 000027
【図２Ｂ−２】
2014533098.tif 000028
【図３Ａ】
2014533098.tif 000029
【図３Ｂ】
2014533098.tif 000030
【図３Ｃ】
2014533098.tif 000031
【図４】
2014533098.tif 000032
【図５】
2014533098.tif 000033
【図６Ａ】
2014533098.tif 000034
【図６Ｂ】
2014533098.tif 000035
【図６Ｃ】
2014533098.tif 000036
【図７】
2014533098.tif 000037
【図８】
2014533098.tif 000038
【図９】
2014533098.tif 000039
【図１０】
2014533098.tif 000040
【図１１】
2014533098.tif 000041
【図１２】
2014533098.tif 000042
【図１３】
2014533098.tif 000043
【図１４】
2014533098.tif 000044
【図１５】
2014533098.tif 000045
【図１６】
2014533098.tif 000046
【図１７】
2014533098.tif 000047
【図１８】
2014533098.tif 000048
【図１９Ａ】
2014533098.tif 000049
【図１９Ｂ】
2014533098.tif 000050
【図２０Ａ】
2014533098.tif 000051
【図２０Ｂ】
2014533098.tif 000052
【図２１】
2014533098.tif 000053
【図２２】
2014533098.tif 000054
【図２３Ａ】
2014533098.tif 000055
【図２３Ｂ】
2014533098.tif 000056
【図２４Ａ】
2014533098.tif 000057
【図２４Ｂ】
2014533098.tif 000058
【図２５Ａ】
2014533098.tif 000059
【図２５Ｂ】
2014533098.tif 000060
【図２６】
2014533098.tif 000061
【図２７Ａ】
2014533098.tif 000062
【図２７Ｂ】
2014533098.tif 000063
【図２７Ｃ】
2014533098.tif 000064
【図２８】
2014533098.tif 000065
【図２９】
2014533098.tif 000066
【図３０Ａ】
2014533098.tif 000067
【図３０Ｂ】
2014533098.tif 000068
【配列表】
2014533098000001.xml
【手続補正書】
【提出日】平成26年6月26日(2014.6.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
グルカゴンに結合することが可能なＬ−核酸分子であって、Ａ型のＬ−核酸分子、Ｂ型のＬ−核酸分子およびＣ型のＬ−核酸分子からなる群から選択され、
前記Ａ型のＬ−核酸分子が中央のヌクレオチドストレッチを含み、前記中央のヌクレオチドストレッチが、
５’Ｂｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＫＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＲＲＲ３’［配列番号１７３］のヌクレオチド配列を含み、
式中、ｎ１はＧまたはｒＧであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＧまたはｒＧであり、ｎ５はＹまたはｒＴであり、ｎ６はＡまたはｒＡであり、ｎ７はＡまたはｒＡであり、
Ｇ、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｂ、Ｋ、ＹおよびＲのいずれかは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＴのいずれかはリボヌクレオチドであり、
前記Ｂ型のＬ−核酸分子が中央のひと続きの２９〜３２ヌクレオチドを含み、前記中央のヌクレオチドストレッチが、
５’−ＡＫＧＡＲｎ１ＫＧＴＴＧＳＹＡＷＡｎ２ＲＴＴＣＧｎ３ＴＴＧＧＡｎ４ＴＣｎ５−‘３［配列番号１９７］、
５’−ＡＧＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＧＴＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＣＴＧ−‘３［配列番号１９８］、
５’−ＡＧＡＡＧＧＴＣＧＧＴＡＡＧＴＴＴＣＧＧＴＡＧＧＡＴＣＴＧ−‘３［配列番号１９９］、
５’−ＡＧＧＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ−‘３［配列番号２００］、
５’−ＡＧＧＡＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ−‘３［配列番号２０１］および
５’−ＡＧＧＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ−‘３［配列番号２０２］
の群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
式中、ｎ１はＡまたはｒＡであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＴまたはｒＵであり、ｎ５はＡまたはｒＡであり、
Ｇ、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｋ、Ｙ、Ｓ、ＷおよびＲのいずれかは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＵのいずれかはリボヌクレオチドであり、
前記Ｃ型のＬ−核酸分子は、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号９７および配列番号１０２の群から選択されるヌクレオチド配列を含むか、または
前記Ｃ型のＬ−核酸分子は、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号９７および配列番号１０２の群から選択されるヌクレオチド配列を含むＬ−核酸分子と少なくとも８５％の同一性を有するか、または
前記Ｃ型のＬ−核酸分子は、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号９７および配列番号１０２の群から選択されるヌクレオチド配列を含むＬ−核酸分子と相同的であり、相同性は少なくとも８５％である、Ｌ−核酸分子。
【請求項２】
前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記中央のヌクレオチドストレッチが、
５’Ｂｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＲ３’［配列番号１７４］のヌクレオチド配列を含み、
式中、ｎ１はＧまたはｒＧであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＧまたはｒＧであり、ｎ５はＴまたはｒＴであり、ｎ６はＡまたはｒＡであり、ｎ７はＡまたはｒＡであり、
Ｇ、Ａ、Ｔ、Ｃ、ＢおよびＲのいずれかは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＴのいずれかはリボヌクレオチドである、請求項１に記載のＬ−核酸分子。
【請求項３】
前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記中央のヌクレオチドストレッチが、
５’Ｔｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１７５］、
５’Ｔｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＡ３’［配列番号１７６］、
５’Ｃｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１７７］、および
５’Ｇｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１７８］、
の群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
式中、ｎ１はＧまたはｒＧであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＧまたはｒＧであり、ｎ５はＴまたはｒＴであり、ｎ６はＡまたはｒＡであり、ｎ７はＡまたはｒＡであり、
Ｇ、Ａ、ＴおよびＣのいずれかは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＴのいずれかはリボヌクレオチドである、請求項１または２に記載のＬ−核酸分子。
【請求項４】
前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記中央のヌクレオチドストレッチが、
５’Ｇｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１７８］のヌクレオチド配列を含み、
式中、ｎ１はＧまたはｒＧであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＧまたはｒＧであり、ｎ５はＴまたはｒＴであり、ｎ６はＡまたはｒＡであり、ｎ７はＡまたはｒＡであり、
Ｇ、Ａ、ＴおよびＣのいずれかは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＴのいずれかはリボヌクレオチドである、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項５】
前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記中央のヌクレオチドストレッチが、
５’Ｃｎ１ＡＡＡＴＧｎ２ＧＡｎ３ｎ４ＧＣＴＡＧＧｎ５ＧＧｎ６ｎ７ＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１７７］のヌクレオチド配列を含み、
式中、ｎ１はＧまたはｒＧであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＧまたはｒＧであり、ｎ５はＴまたはｒＴであり、ｎ６はＡまたはｒＡであり、ｎ７はＡまたはｒＡであり、
Ｇ、Ａ、ＴおよびＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＴはリボヌクレオチドである、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項６】
前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記中央のヌクレオチドストレッチが、２’−デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドからなる、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項７】
前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記中央のヌクレオチドストレッチが、
５’ＧｒＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１７９］、
５’ＧＧＡＡＡＴＧｒＧＧＡＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８０］、
５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡｒＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８１］、
５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧｒＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８２］、
５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８３］、
５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８４］；
５’ＧＧＡＡＡＴＧｒＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８５］、
５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８６］、
５’ＧＧＡＡＡＴＧｒＧＧＡＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８７］、
５’ＧＧＡＡＡＴＧＧＧＡｒＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８８］、
５’ＧｒＧＡＡＡＴＧｒＧＧＡｒＧＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１８９］、
５’ＧｒＧＡＡＡＴＧｒＧＧＡｒＧｒＧＧＣＴＡＧＧＴＧＧｒＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１９０］および
５’ＧｒＧＡＡＡＴＧｒＧＧＡｒＧｒＧＧＣＴＡＧＧｒＴＧＧｒＡｒＡＧＧＡＡＴＣＴＧＡＧ３’［配列番号１９１］
の群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
式中、Ｇ、Ａ、ＴおよびＣのいずれかは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＴのいずれかはリボヌクレオチドである、請求項１〜６のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項８】
前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記中央のヌクレオチドストレッチが、２’−デオキシリボヌクレオチドからなる、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項９】
前記Ａ型のＬ−核酸分子が、５’→３’方向に、第１の末端のヌクレオチドストレッチ、前記中央のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチを含み、
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチは１〜７ヌクレオチドを含み、
前記第２の末端のヌクレオチドストレッチは１〜７ヌクレオチドを含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項１０】
前記Ａ型のＬ−核酸分子が、５’→３’方向に、第２の末端のヌクレオチドストレッチ、前記中央のヌクレオチドストレッチおよび第１の末端のヌクレオチドストレッチを含み、
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチは１〜７ヌクレオチドを含み、
前記第２の末端のヌクレオチドストレッチは１〜７ヌクレオチドを含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項１１】
前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｖ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＢＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
Ｚ１はＧであるかまたは存在せず、Ｚ２はＳであるかまたは存在せず、Ｚ３はＶであるかまたは存在せず、Ｚ４はＢであるかまたは存在せず、Ｚ５はＢであるかまたは存在せず、Ｚ６はＶであるかまたは存在せず、Ｚ７はＢであるかまたは存在せず、Ｚ８はＶであるかまたは存在せず、Ｚ９はＶであるかまたは存在せず、Ｚ１０はＢであるかまたは存在せず、Ｚ１１はＳであるかまたは存在せず、Ｚ１２はＣであるかまたは存在しない、請求項９または１０に記載のＬ−核酸分子。
【請求項１２】
前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｖ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＢＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１はＧであり、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２はＣであるか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２はＣであるか、または
ｃ）Ｚ１はＧであり、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、
ａ）Ｚ１はＧであり、Ｚ２はＣであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＲであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＹであり、Ｚ１１はＧであり、Ｚ１２はＣであるか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＣであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＲであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＹであり、Ｚ１１はＧであり、Ｚ１２はＣであるか、または
ｃ）Ｚ１はＧであり、Ｚ２はＣであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＲであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＹであり、Ｚ１１はＧであり、Ｚ１２は存在しない、
請求項９〜１１のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項１３】
ａ）前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＡＣＴＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＡＧＴＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｂ）前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＡＣＴＧＡ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＡＧＴＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｃ）前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＡＧＴＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＴＣＡＣＴＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｄ）前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＡＣＴＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＡＣＴＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｅ）前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＧＣＴＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＡＧＴＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｆ）前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＧＣＣＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＴＣＧＧＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含む、
請求項１２に記載のＬ−核酸分子。
【請求項１４】
前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｖ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＢＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｇ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＳであり、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１はＳであり、Ｚ１２は存在しない、
請求項９〜１１のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項１５】
ａ）前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＧＣＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＧＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｂ）前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＧＣＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＣＧＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｃ）前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＧＧＣＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＧＧＣＣＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｄ）前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＧＣＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＧＧＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｅ）前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＡＧＣＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＣＧＣＴＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｆ）前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＧＴＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＣＡＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｇ）前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＧＴＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＧＡＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含む、
請求項１４に記載のＬ−核酸分子。
【請求項１６】
前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｖ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＢＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｇ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＶであり、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０はＢであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない、
請求項９〜１１のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項１７】
ａ）前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＧＣＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＣＧＣＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｂ）前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＧＣＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＣＧＣＧ３’のヌクレオチド配列を含む、
請求項１６に記載のＬ−核酸分子。
【請求項１８】
前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｖ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＢＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｇ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＧであり、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＹであり、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＹであり、Ｚ８はＲであり、Ｚ９はＣであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない、
請求項９〜１１のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項１９】
前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含む、
請求項１８に記載のＬ−核酸分子。
【請求項２０】
前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｖ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＢＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｇ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＳであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＳであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＳであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＳであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない、
請求項９〜１１のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項２１】
前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含む、
請求項２０に記載のＬ−核酸分子。
【請求項２２】
前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｖ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＢＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＶであり、Ｚ７はＢであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＶであり、Ｚ７は存在せず、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６は存在せず、Ｚ７はＢであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
ｄ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６は存在せず、Ｚ７は存在せず、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６Ｇ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ａ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＧであり、Ｚ７はＣであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６は存在せず、Ｚ７は存在せず、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない、
請求項９〜１１のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項２３】
前記Ａ型のＬ−核酸分子が、配列番号６および配列番号７の群から選択されるヌクレオチド配列を含むか、または
前記Ａ型のＬ−核酸分子が、配列番号６および配列番号７の群から選択されるヌクレオチド配列を含むＬ−核酸分子と少なくとも８５％の同一性を有するか、または
前記Ａ型のＬ−核酸分子が、配列番号６および配列番号７の群から選択されるヌクレオチド配列を含むＬ−核酸分子と相同的であり、相同性は少なくとも８５％である、請求項１〜５および８〜２２のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項２４】
前記Ａ型のＬ−核酸分子が、配列番号２３、配列番号４３、配列番号４７、配列番号４８、配列番号９１、配列番号９２、配列番号１５８および配列番号１５９の群から選択されるヌクレオチド配列を含むか、または
前記Ａ型のＬ−核酸分子が、配列番号２３、配列番号４３、配列番号４７、配列番号４８、配列番号９１、配列番号９２、配列番号１５８および配列番号１５９の群から選択されるヌクレオチド配列を含むＬ−核酸分子と少なくとも８５％の同一性を有するか、または
前記Ａ型のＬ−核酸分子が、配列番号４３、配列番号４７、配列番号４８、配列番号９１、配列番号９２、配列番号１５８および配列番号１５９の群から選択されるヌクレオチド配列を含むＬ−核酸分子と相同的であり、相同性は少なくとも８５％である、請求項１〜７および９〜２２のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項２５】
前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記中央のヌクレオチドストレッチが、
５’ＡＧＧＡＡｎ１ＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡｎ２ＧＴＴＣＧｎ３ＴＴＧＧＡｎ４ＴＣｎ５３’［配列番号２０３］のヌクレオチド配列を含み、式中、
ｎ１はＡまたはｒＡであり、ｎ２はＧまたはｒＧであり、ｎ３はＧまたはｒＧであり、ｎ４はＴまたはｒＵであり、ｎ５はＡまたはｒＡであり、
Ｇ、Ａ、ＴおよびＣのいずれかは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＵのいずれかはリボヌクレオチドである、請求項１に記載のＬ−核酸分子。
【請求項２６】
前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記中央のヌクレオチドストレッチが、２’−デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドからなる、請求項１または２５に記載のＬ−核酸分子。
【請求項２７】
前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記中央のヌクレオチドストレッチが、
５’ＡＧＧＡＡｒＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ３’［配列番号２０４］、
５’ＡＧＧＡＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡｒＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ３’［配列番号２０５］、
５’ＡＧＧＡＡＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡｒＵＴＣＡ３’［配列番号２０６］、
５’ＡＧＧＡＡｒＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡｒＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＴＴＣＡ３’［配列番号２０７］、
５’ＡＧＧＡＡｒＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡｒＵＴＣＧ３’［配列番号２０８］、
５’ＡＧＧＡＡｒＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡｒＵＴＣＡ３’［配列番号２０９］、
５’ＡＧＧＡＡｒＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡｒＧＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡｒＵＴＣＡ３’［配列番号２１０］および
５’ＡＧＧＡＡｒＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＡｒＧＧＴＴＣＧｒＧＴＴＧＧＡｒＵＴＣｒＡ３’［配列番号２１１］、
の群から選択されるヌクレオチド配列を含み、式中、
Ｇ、Ａ、ＴおよびＣのいずれかは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ｒＧ、ｒＡおよびｒＵのいずれかはリボヌクレオチドである、請求項２５または２６に記載のＬ−核酸分子。
【請求項２８】
前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記中央のヌクレオチドストレッチが、２’−デオキシリボヌクレオチドからなる、請求項１または２５に記載のＬ−核酸分子。
【請求項２９】
前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記Ｌ−核酸分子が、５’→３’方向に、第１の末端のヌクレオチドストレッチ、前記中央のヌクレオチドストレッチおよび第２の末端のヌクレオチドストレッチを含み、
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチは３〜９ヌクレオチドを含み、
前記第２の末端のヌクレオチドストレッチは３〜１０ヌクレオチドを含む、請求項１および２５〜２８のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項３０】
前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記Ｌ−核酸分子が、５’→３’方向に、第２の末端のヌクレオチドストレッチ、前記中央のヌクレオチドストレッチおよび第１の末端のヌクレオチドストレッチを含み、
前記第１の末端のヌクレオチドストレッチは３〜９ヌクレオチドを含み、
前記第２の末端のヌクレオチドストレッチは３〜１０ヌクレオチドを含む、請求項１および２５〜２８のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項３１】
前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＫ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＫＶＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
Ｚ１はＣであるかまたは存在せず、Ｚ２はＧであるかまたは存在せず、Ｚ３はＲであるかまたは存在せず、Ｚ４はＢであるかまたは存在せず、Ｚ５はＢであるかまたは存在せず、  Ｚ６はＳであるかまたは存在せず、Ｚ７はＳであるかまたは存在せず、Ｚ８はＶであるかまたは存在せず、Ｚ９はＶであるかまたは存在せず、Ｚ１０はＫであるかまたは存在せず、  Ｚ１１はＭであるかまたは存在せず、Ｚ１２はＳであるかまたは存在しない、請求項２９または３０に記載のＬ−核酸分子。
【請求項３２】
前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＫ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＫＶＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１はＣであり、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１はＭであり、Ｚ１２はＳであるか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１はＭであり、Ｚ１２はＳであるか、または
ｃ）Ｚ１はＣであり、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１はＭであり、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、式中、
ａ）Ｚ１はＣであり、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０はＴであり、Ｚ１１はＣであり、Ｚ１２はＧであるか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０はＴであり、Ｚ１１はＣであり、Ｚ１２はＧであるか、または
ｃ）Ｚ１はＣであり、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０はＴであり、Ｚ１１はＣであり、Ｚ１２は存在しない、
請求項２９〜３１のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項３３】
ａ）前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＧＡＣＴＣＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＣＧＡＧＴＣＧ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｂ）前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＧＧＣＴＣＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＣＧＡＧＴＣＧ３’のヌクレオチド配列を含む、
請求項３２に記載のＬ−核酸分子。
【請求項３４】
前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＫ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＫＶＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１はＭであり、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２はＧであり、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１はＭであり、Ｚ１２は存在しない、
請求項２９〜３１のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項３５】
前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＫ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＫＶＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＲであり、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０はＫであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＡであり、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０はＴであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＡであり、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０はＴであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３はＡであり、Ｚ４はＣであり、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９はＧであり、Ｚ１０はＴであり、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない、
請求項２９〜３１のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項３６】
前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＫ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＫＶＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９はＮであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＳＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＳであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＳであり、Ｚ９はＶであり、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４はＢであり、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＳであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない、
請求項２９〜３１のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項３７】
ａ）前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＴＣＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＣＧＡＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｂ）前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＴＧＣＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＣＧＣＡ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｃ）前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＧＣＣＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＧＧＣＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｄ）前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＧＣＣＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＣＧＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｅ）前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＣＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＣＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含む、
請求項３６に記載のＬ−核酸分子。
【請求項３８】
前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＫ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＫＶＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＢであり、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８はＶであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在せず、
好ましくは、前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５はＴであり、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＣであり、Ｚ７はＧであり、Ｚ８はＡであり、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない、
請求項２９〜３１のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項３９】
前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＫ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＫＶＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、
ａ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＳであり、Ｚ７はＳであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｂ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６は存在せず、Ｚ７はＳであり、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
ｃ）Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６はＳであり、Ｚ７は存在せず、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない、
請求項２９〜３１のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項４０】
前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＳＡＫ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＫＶＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６は存在せず、Ｚ７は存在せず、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しないか、または
前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第１の末端のヌクレオチドストレッチが５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｚ５Ｚ６ＧＡＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記Ｂ型のＬ−核酸分子の前記第２の末端のヌクレオチドストレッチが５’ＣＴＣＺ７Ｚ８Ｚ９Ｚ１０Ｚ１１Ｚ１２３’のヌクレオチド配列を含み、
式中、Ｚ１は存在せず、Ｚ２は存在せず、Ｚ３は存在せず、Ｚ４は存在せず、Ｚ５は存在せず、Ｚ６は存在せず、Ｚ７は存在せず、Ｚ８は存在せず、Ｚ９は存在せず、Ｚ１０は存在せず、Ｚ１１は存在せず、Ｚ１２は存在しない、請求項２９〜３１のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項４１】
前記Ｂ型のＬ−核酸分子が、配列番号５０、配列番号５４、配列番号５８、配列番号５９、配列番号８８および配列番号１５５の群から選択されるヌクレオチド配列を含むか、または
前記Ｂ型のＬ−核酸分子が、配列番号５０、配列番号５４、配列番号５８、配列番号５９、配列番号８８および配列番号１５５の群から選択されるヌクレオチド配列を含むＬ−核酸分子と少なくとも８５％の同一性を有するか、または
前記Ｂ型のＬ−核酸分子が、配列番号５０、配列番号５４、配列番号５８、配列番号５９、配列番号８８および配列番号１５５の群から選択されるヌクレオチド配列を含むＬ−核酸分子と相同的であり、相同性は少なくとも８５％である、請求項１、２５〜２７および２９〜４０のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項４２】
前記Ｂ型のＬ−核酸分子が、配列番号７１、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８９、配列番号９０、配列番号１５６および配列番号１５７の群から選択されるヌクレオチド配列を含むか、または
前記Ｂ型のＬ−核酸分子が、配列番号７１、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８９、配列番号９０、配列番号１５６および配列番号１５７の群から選択されるヌクレオチド配列を含むＬ−核酸分子と少なくとも８５％の同一性を有するか、または
前記Ｂ型のＬ−核酸分子が、配列番号７１、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８９、配列番号９０、配列番号１５６および配列番号１５７の群から選択されるヌクレオチド配列を含むＬ−核酸分子と相同的であり、相同性は少なくとも８５％である、請求項１、２５〜２７および２９〜４０のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項４３】
前記核酸分子がグルカゴンによって仲介される活性のアンタゴニストである、請求項１〜４２のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項４４】
前記Ｌ−核酸分子がＧＩＰに結合することが可能である、請求項１〜４３のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項４５】
ＧＩＰによって仲介される活性のアンタゴニストである、請求項１〜４４のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項４６】
前記Ｌ−核酸分子が修飾基を含み、前記修飾基を含む前記Ｌ−核酸分子の生物体からの排泄速度は、前記修飾基を含まないＬ−核酸分子と比較して低減される、請求項１〜４５のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項４７】
前記Ｌ−核酸分子が修飾基を含み、前記修飾基を含む前記Ｌ−核酸分子が、前記修飾基を含まないＬ−核酸分子と比較して生物体内において増加した保持時間を有する、請求項１〜４５のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項４８】
前記修飾基が生分解性および非生分解性修飾を含む群から選択され、好ましくは、前記修飾基が、ポリエチレングリコール、直鎖ポリエチレングリコール、分枝ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチルデンプン、ペプチド、タンパク質、多糖、ステロール、ポリオキシプロピレン、ポリオキシアミデートおよびポリ（２−ヒドロキシエチル）−Ｌ−グルタミンを含む群から選択される、請求項４６または４７に記載のＬ−核酸分子。
【請求項４９】
前記修飾基が、直鎖ポリエチレングリコールまたは分枝ポリエチレングリコールからなるポリエチレングリコールであり、前記ポリエチレングリコールの分子量は、好ましくは約２０，０００〜約１２０，０００Ｄａ、より好ましくは約３０，０００〜約８０，０００Ｄａ、最も好ましくは約４０，０００Ｄａである、請求項４８に記載のＬ−核酸分子。
【請求項５０】
前記修飾基がヒドロキシエチルデンプンであり、前記ヒドロキシエチルデンプンの分子量は、約５０ｋＤａ〜約１０００ｋＤａ、より好ましくは約１００ｋＤａ〜約７００ｋＤａ、最も好ましくは３００ｋＤａ〜５００ｋＤａである、請求項４８に記載のＬ−核酸分子。
【請求項５１】
前記修飾基が、リンカーを介して前記Ｌ−核酸分子に結合しており、好ましくは、前記リンカーは生分解性リンカーである、請求項４６〜５０のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項５２】
前記修飾基が、前記Ｌ−核酸分子の５’末端ヌクレオチドおよび／もしくは３’末端ヌクレオチドに、ならびに／または前記Ｌ−核酸分子の５’末端ヌクレオチドと前記Ｌ−核酸分子の３’末端ヌクレオチドの間の前記Ｌ−核酸分子のヌクレオチドに結合している、請求項４６〜５０のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項５３】
前記生物体が動物またはヒト生体、好ましくはヒト生体である、請求項４６〜５２のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項５４】
疾患または障害または高グルカゴン血症の処置および／または予防のための方法に使用される、請求項１〜５３のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項５５】
前記疾患または障害が、糖尿病、糖尿病合併症および糖尿病状態を含む群から選択される、請求項５４に記載のＬ−核酸分子。
【請求項５６】
前記糖尿病が、１型糖尿病、２型糖尿病および妊娠性糖尿病を含む群から選択される、請求項５５に記載のＬ−核酸分子。
【請求項５７】
前記糖尿病合併症または糖尿病状態が、アテローム硬化症、冠状動脈疾患、糖尿病性足疾患、糖尿病網膜症、増殖性糖尿病網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、糖尿病性硝子体網膜症、増殖性糖尿病性硝子体網膜症、糖尿病腎症、糖尿病神経障害、グルコース不耐性、心疾患、高血圧、高コレステロール、耐糖能異常、不能症、インスリン抵抗性、腎不全、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症が有るか無い非アルコール性脂肪肝炎、末梢血管疾患、低減したグルコース感受性、低減したインスリン感受性、肥満、肝脂肪変性、高血糖、糖尿病関連脈管炎、糖尿病ケトアシドーシス、高浸透圧性高血糖性非ケトン性昏睡、体重減少壊死融解性移動性紅斑、貧血、正常な凝固機能の存在下での静脈血栓、および神経精神医学的徴候の群から選択される糖尿病合併症または糖尿病状態である、請求項５６に記載のＬ−核酸分子。
【請求項５８】
請求項１〜５３のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子および任意選択的にさらなる構成要素を含み、前記さらなる構成要素は、薬学的に許容される添加剤、薬学的に許容される担体および薬学的に活性な薬剤を含む群から選択される、医薬組成物。
【請求項５９】
請求項１〜５３のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子および薬学的に許容される担体を含む、請求項５８に記載の医薬組成物。
【請求項６０】
医薬の製造のための、請求項１〜５３のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子の使用。
【請求項６１】
前記医薬がヒト医療用、または獣医医療用である、請求項６０に記載の使用。
【請求項６２】
診断手段の製造のための、請求項１〜５３のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子の使用。
【請求項６３】
前記医薬が、疾患または障害または高グルカゴン血症の処置および／または予防のためであり、前記疾患または障害が、糖尿病、糖尿病合併症および糖尿病状態を含む群から選択される、請求項６０に記載の使用。
【請求項６４】
前記糖尿病が、１型糖尿病、２型糖尿病および妊娠性糖尿病を含む群から選択される、請求項６３に記載の使用。
【請求項６５】
前記糖尿病合併症または糖尿病状態が、アテローム硬化症、冠状動脈疾患、糖尿病性足疾患、糖尿病網膜症、増殖性糖尿病網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、糖尿病性硝子体網膜症、増殖性糖尿病性硝子体網膜症、糖尿病腎症、糖尿病神経障害、グルコース不耐性、心疾患、高血圧、高コレステロール、耐糖能異常、不能症、インスリン抵抗性、腎不全、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症が有るか無い非アルコール性脂肪肝炎、末梢血管疾患、低減したグルコース感受性、低減したインスリン感受性、肥満、肝脂肪変性、高血糖、糖尿病関連脈管炎、糖尿病ケトアシドーシス、高浸透圧性高血糖性非ケトン性昏睡、体重減少壊死融解性移動性紅斑、貧血、正常な凝固機能および神経精神医学的徴候の存在下での静脈血栓の群から選択される糖尿病合併症または糖尿病状態である、請求項６３に記載の使用。
【請求項６６】
請求項１〜５３のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子およびグルカゴンおよび／またはＧＩＰを含み、好ましくは結晶性複合体である複合体。
【請求項６７】
グルカゴンおよび／またはＧＩＰの検出のための、請求項１〜５３のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子の使用。
【請求項６８】
グルカゴンおよび／またはＧＩＰによって仲介される活性のアンタゴニストのスクリーニング方法であって、
グルカゴンおよび／またはＧＩＰによって仲介される活性の候補アンタゴニストを用意するステップと、
請求項１〜５３のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子を用意するステップと、
グルカゴンおよび／またはＧＩＰによって仲介される活性のアンタゴニストの存在下でシグナルを提供する試験系を用意するステップと、
グルカゴンおよび／またはＧＩＰによって仲介される前記活性の前記候補アンタゴニストがグルカゴンおよび／またはＧＩＰによって仲介される活性のアンタゴニストであるかどうか判定するステップと
を含む方法。
【請求項６９】
請求項１〜５３のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子を含む、グルカゴンの検出のためのキット。
【請求項７０】
試料中の請求項１〜５３のいずれか１項に記載のＬ−核酸の検出方法であって、
ａ）請求項１〜５３のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子の第１の部分と少なくとも部分的に相補的である捕捉プローブ、および請求項１〜５３のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子の第２の部分と少なくとも部分的に相補的である検出プローブ、あるいは、請求項１〜５３のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子の第２の部分と少なくとも部分的に相補的である捕捉プローブ、および請求項１〜５３のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子の第１の部分と少なくとも部分的に相補的である検出プローブを用意するステップと、
ｂ）前記捕捉プローブおよび前記検出プローブを、別々にまたは一緒に、請求項１〜５３のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子を含有する試料に加えるか、または請求項１〜５３のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子を含有すると推定される試料に加えるステップと、
ｃ）前記捕捉プローブおよび前記検出プローブを、請求項１〜５３のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子またはその一部と同時に、または任意の順序で逐次的に反応させるステップと、
ｄ）任意選択的に、前記捕捉プローブが、ステップａ）で提供される請求項１〜５３のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子とハイブリダイズするかどうか検出するステップと、
ｅ）請求項１〜５３のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子および前記捕捉プローブおよび前記検出プローブからなる、ステップｃ）で形成される複合体を検出するステップと
を含む方法。
【請求項７１】
前記検出プローブが検出手段を含み、および／または前記捕捉プローブが支持体、好ましくは固体支持体に固定化されている、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
ステップｅ）で前記複合体の一部である検出プローブだけが検出されるように、ステップｃ）で形成される前記複合体の一部でないあらゆる検出プローブが前記反応から除去される、請求項７０または７１に記載の方法。
【請求項７３】
ステップｅ）が、前記捕捉プローブおよび前記検出プローブを、請求項１〜５３のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子またはその一部の存在下、および前記Ｌ−核酸分子またはその一部の非存在下でハイブリダイズさせたときの、前記検出手段によって生成されるシグナルを比較するステップを含む、請求項７０〜７２のいずれか１項に記載の方法。
【国際調査報告】
2014533098.tif 000170
2014533098.tif 000171
2014533098.tif 000172
2014533098.tif 000173