(57)【要約】本発明は、一般に、ＲＮＡまたは遺伝子の発現および／または活性を調整するのに有用なオリゴマーに関する。より詳細には、本発明は、複数の細胞、組織、または器官においてＲＮＡ発現を阻害するために広い体内分布プロファイルを有する一本鎖、二本鎖、部分的二本鎖、およびヘアピン構造化学的修飾オリゴマーにならびに修飾オリゴマーを作製し、かつ使用するための方法に関する。一実施形態において、複数の細胞型、組織、または器官にオリゴマーを提供する方法が提供され、この方法は、１つ以上の副溝結合成分（ＭＧＢ）を含むオリゴマーを被験体に投与するステップを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数の細胞型、組織、または器官にオリゴマーを提供する方法であって、１つ以上の副溝結合成分（ＭＧＢ）を含むオリゴマーを被験体に投与するステップを含む、方法。
【請求項２】
複数の細胞型、組織、または器官にオリゴマーを投与する方法であって、１つ以上のＭＧＢを含むオリゴマーを被験体に投与するステップを含む、方法。
【請求項３】
前記オリゴマーが、一本鎖である、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記オリゴマーが、二本鎖である、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記オリゴマーが、抗ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｐｉＲＮＡミメティック、およびｍｉＲＮＡミメティックからなる群より選択される、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記オリゴマーが、非経口的に投与される、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項７】
前記非経口投与が、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、包内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内、および胸骨内の注射および注入からなる群より選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記オリゴマーが、静脈内に投与される、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項９】
前記複数の細胞型が、癌細胞、免疫細胞、上皮細胞、内皮細胞、中胚葉細胞、および間葉細胞、骨細胞、造血細胞、皮膚細胞、有毛細胞、眼の細胞、神経細胞、グリア細胞、筋細胞、髄膜細胞、乳房の細胞、肝細胞、腎臓細胞、膵臓細胞、胃の細胞、腸の細胞、結腸の細胞、前立腺細胞、頸部の細胞、ならびに膣の細胞からなる群より選択される、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項１０】
前記複数の組織が、中胚葉組織、結合組織、平滑筋組織、横紋筋組織、心筋組織、骨組織、骨髄組織、骨の海綿質組織、軟骨組織、脂肪組織、内胚葉組織、肺組織、血管組織、膵臓組織、肝組織、膵管組織、脾臓組織、胸腺組織、扁桃組織、パイエル板組織、リンパ節組織、甲状腺組織、内皮組織、血球、膀胱組織、腎臓組織、消化管組織、食道組織、胃組織、小腸組織、大腸組織、子宮組織、睾丸組織、卵巣組織、前立腺組織、内分泌組織、腸間膜組織、また臍帯組織、外胚葉組織、表皮組織、真皮組織、眼組織、および神経系組織からなる群より選択される、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項１１】
前記複数の器官が、膀胱、骨、脳、乳房、軟骨、頸部、結腸、角膜、眼、神経組織、グリア、食道、ファローピウス管、心臓、膵臓、腸、胆嚢、腎臓、肝臓、肺、卵巣、膵臓、副甲状腺、松果体、下垂体、前立腺、脊髄、脾臓、骨格筋、皮膚、平滑筋、胃、精巣、胸腺、甲状腺、気管、泌尿生殖器管、尿管、尿道、子宮、および膣からなる群より選択される、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項１２】
前記オリゴマーが、プレｍＲＮＡにハイブリダイズする、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項１３】
前記オリゴマーが、標的ｍｉＲＮＡにハイブリダイズする、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項１４】
抗ｍｉＲＮＡ分子が、プレｍＲＮＡにハイブリダイズする、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項１５】
前記オリゴマーが、標的ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡにハイブリダイズする、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項１６】
前記１つ以上のＭＧＢのうちの少なくとも１つが、前記オリゴマーの５’末端または３’末端にコンジュゲートされる、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項１７】
前記１つ以上のＭＧＢのうちの少なくとも１つが、リンカーにより前記オリゴマーにコンジュゲートされる、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記リンカーが、Ｃ、Ｏ、Ｎ、Ｓ、およびＰからなる群より選択される約１０〜約１００原子の鎖を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記リンカーが、
ａ）−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）Ｏ（ＣＨ２）６ＮＨ−、
ｂ）−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）Ｏ（ＣＨ２）４ＮＨ−、
ｃ）−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）（ＯＣＨ２ＣＨ２）６ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）Ｏ（ＣＨ２）６ＮＨ−、
ｄ）ヒドロキシ｛［５−（ヒドロキシメチル）−１−メチルピロリジン−３イル］オキシ｝オキソホスホニウム、ならびに
ｅ）−（ＣＨ２）５ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）−
からなる群より選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記１つ以上のＭＧＢのうちの少なくとも１つが、ネトロプシン、ジスタマイシン、およびレキシトロプシン、ミトラマイシン、クロモマイシンＡ３、オリボマイシン、アントラマイシン、シビロマイシン、１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ）インドール−７−カルボン酸（ＤＰＩ）（１−１０）、Ｎ３カルバモイル１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ）インドール−７−カルボン酸（ＣＤＰＩ）（１−１０）、ならびにＮ−メチルピロール−４−カルボキシ−２−アミド（ＭＰＣ）（１−１０）からなる群より選択される、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項２１】
前記１つ以上のＭＧＢのうちの少なくとも１つが、ＣＤＰＩ３またはＣＤＰＩ４である、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項２２】
前記１つ以上のＭＧＢのうちの少なくとも１つが、ＣＤＰＩ３である、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項２３】
前記オリゴマーが、６〜１００ヌクレオチドを含む、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項２４】
前記オリゴマーが、１０〜５０ヌクレオチドを含む、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項２５】
前記オリゴマーが、１５〜２３ヌクレオチドを含む、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項２６】
前記オリゴマーが、標的ＲＮＡ配列に対して少なくとも７０％相補的なヌクレオチド配列を含む、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項２７】
前記ヌクレオチドが、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、および修飾ヌクレオチドの群より選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２８】
前記修飾ヌクレオチドが、５−メチルシトシン、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、６−アルキルアデニン、６−アルキルグアニン、２−アルキルアデニン、２−アルキルグアニン、２−チオウラシル、２−チオチミン、２−チオシトシン、５−ハロウラシル、５−ハロシトシン、５−アルキニルウラシル、５−アルキニルシトシン、６−アゾウラシル、６−アゾシトシン、６−アゾチミン、５−ウラシル、４−チオウラシル、８−ハロアデニン、８−アミノアデニン、８−チオールアデニン、８−チオアルキルアデニン、８−ヒドロキシルアデニン、８−ハログアニン、８−アミノグアニン、８−チオールグアニン、８−チオアルキルグアニン、８−ヒドロキシルグアニン、５−ハロウラシル、５−ハロシトシン、７−メチルグアニン、７−メチルアデニン、２−Ｆ−アデニン、２−アミノ−アデニン、８−アザグアニン、８アザアデニン、７−デアザグアニン、７−デアザアデニン、３−デアザグアニン、３−デアザアデニン、フェノキサジンシチジン、フェノチアジンシチジン、Ｇ−クランプ、カルバゾールシチジン、ピリドインドールシチジン、７−デアザアデニン、７−デアザグアノシン、２−アミノピリジン、２−ピリドン、２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル、および５−プロピニルシトシンからなる群より選択される塩基を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２９】
前記オリゴマーが、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間リンケージを含む、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項３０】
前記少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間リンケージが、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、アルキルホスホネート、ホスフィネート、ホスホルアミデート、チオノホスホルアミデート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、セレノホスフェート、ボラノホスフェート、モルホリノ、シロキサン、スルフィド、スルホキシド、スルホン、ホルムアセチル、チオホルムアセチル、メチレンホルムアセチル、リボアセチル、アルケン含有骨格、スルファメート、メチレンイミノ、メチレンヒドラジノ、スルホネート、スルホンアミド、またはアミドからなる群より選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間リンケージが、ホスホロチオエートリンケージである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
前記オリゴマーの前記ヌクレオシド間リンケージがすべて、ホスホロチオエートリンケージである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３３】
前記オリゴマーが、少なくとも１つの２’修飾糖成分を含む、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項３４】
前記少なくとも１つの２’修飾糖成分が、ＯＨ、ハロゲン、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、Ｎ−アルキル、Ｏ−アルケニル、Ｓ−アルケニル、Ｎ−アルケニル、Ｏ−アルキニル、Ｓ−アルキニル、Ｎ−アルキニル、Ｏ−アルキル−Ｏ−アルキル、アルカリル、アラルキル、Ｏ−アルカリル、Ｏ−アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、アルコキシアルコキシ、ジメチルアミノオキシエトキシ、アリル、およびＯ−アリルからなる群より選択され、前記アルキル、アルケニル、およびアルキニルが、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキルまたはＣ２〜Ｃ１０アルケニルおよびアルキニルとすることができる、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記少なくとも１つの２’修飾糖成分が、２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）（２’−ＭＯＥ）糖成分である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
前記少なくとも１つの２’修飾糖成分が、２’−Ｏ，４’−Ｃメチレン架橋を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
前記オリゴマーが、３’親油性基を含む少なくとも１つ以上の塩基を含む、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項３８】
前記３’親油性基が、コレステロール、胆汁酸、および脂肪酸からなる群より選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
１つ以上の細胞、組織、または器官におけるＲＮＡの発現を減少させる方法であって、１つ以上のＭＧＢを含むオリゴマーを被験体に投与するステップを含み、前記被験体におけるＲＮＡ発現が、ＭＧＢを含まないオリゴマーを投与された他の被験体におけるＲＮＡ発現と比較して、前記１つ以上の細胞、組織、または器官において減少する、方法。
【請求項４０】
１つ以上の細胞、組織、または器官におけるｍｉＲＮＡのｍｉＲＮＡ活性を減少させる方法であって、１つ以上のＭＧＢを含む抗ｍｉＲＮＡ分子を被験体に投与するステップを含み、前記被験体におけるｍｉＲＮＡ活性が、ＭＧＢを含まない抗ｍｉＲＮＡ分子を投与された他の被験体におけるｍｉＲＮＡ活性と比較して、前記１つ以上の細胞、組織、または器官において減少する、方法。
【請求項４１】
複数の細胞型、組織、または器官における１つ以上のＲＮＡの発現の増大に関連する疾患、障害、または状態を有する被験体を処置する方法であって、
ａ）正常な細胞における１つ以上のＲＮＡのＲＮＡ発現と比較して、病気の細胞、組織、または器官においてＲＮＡ発現が増大している複数の細胞型、組織、または器官における前記１つ以上のＲＮＡを同定するステップおよび
ｂ）前記１つ以上のＲＮＡにハイブリダイズする、１つ以上のＭＧＢを含むオリゴマーを投与するステップを含む、方法。
【請求項４２】
複数の細胞型、組織、または器官における１つ以上のｍｉＲＮＡの活性の増大に関連する疾患、障害、または状態を有する被験体を処置する方法であって、
ａ）正常な細胞における１つ以上のｍｉＲＮＡのｍｉＲＮＡ活性と比較して、病気の細胞、組織、または器官においてｍｉＲＮＡ活性が増大している複数の細胞型、組織、または器官における前記１つ以上のｍｉＲＮＡを同定するステップおよび
ｂ）前記１つ以上のｍｉＲＮＡにハイブリダイズする、オリゴマーおよび１つ以上のＭＧＢを含む抗ｍｉＲＮＡ分子を投与するステップを含む、方法。
【請求項４３】
前記疾患、障害、または状態が、腫瘍媒介性の血管新生、癌、炎症、線維症疾患、自己免疫性疾患、およびＣ型肝炎感染媒介性の疾患からなる群より選択される、請求項４１または請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記疾患、障害、または状態が、肺癌、肝細胞癌、胃腸癌、膵癌、膠芽腫、白血病、リンパ腫、頸部の癌、卵巣癌、腎臓癌、膀胱癌、乳癌、骨肉腫、中枢神経系の癌、結腸癌、結腸直腸癌、胃癌、子宮内膜癌腫または子宮癌腫、唾液腺癌腫、乳頭状腎細胞癌腫、前立腺癌、外陰部の癌、甲状腺癌、および頭頸部癌、ならびに黒色腫からなる群より選択される、請求項４１または請求項４２に記載の方法。
【請求項４５】
前記疾患、障害、または状態が、グレーブス病および橋本甲状腺炎を含む自己免疫性甲状腺疾患、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群、免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症（ＭＧ）、乾癬、強皮症、ならびにクローン病および潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患からなる群より選択される、請求項４１または請求項４２に記載の方法。
【請求項４６】
前記疾患、障害、または状態が、Ｃ型肝炎感染症またはＣ型肝炎感染媒介性の疾患である、請求項４１または請求項４２に記載の方法。
【請求項４７】
前記疾患、障害、または状態が、新生血管形成、発作、虚血、および心筋梗塞からなる群より選択される、請求項４１または請求項４２に記載の方法。
【請求項４８】
前記ｍｉＲＮＡが、
【化２２】
2014509512.tif 000029
【化２３】
2014509512.tif 000030
【化２４】
2014509512.tif 000031
【化２５】
2014509512.tif 000032
【化２６】
2014509512.tif 000033
【化２７】
2014509512.tif 000034
【化２８】
2014509512.tif 000035
からなる群より選択される、請求項４２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表に関する陳述
この出願に関連する配列表は、紙での複製物の代わりにテキスト形式で提供され、本明細書に参照により援用される。配列表を含むテキストファイルの名称は、ＧＲＯＯ＿００１＿０１ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔである。このテキストファイルは、４ＫＢであり、２０１２年３月２日に作成され、そしてＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子的に提出された。
【０００２】
関連出願への相互参照
この出願は、米国特許法§１１９（ｅ）の下、２０１１年３月２日に出願された米国仮出願第６１／４４８，６１８号（これは、その全体が参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。
【０００３】
技術分野
本発明は、一般に、多種多様の組織において遺伝子発現を調整するのに有用なオリゴマーに関する。より詳細には、本発明は、既存のオリゴマーと比較して、好都合な体内分布特性を有する、１つ以上の副溝結合剤にコンジュゲートされたオリゴマーの発見に関する。
【背景技術】
【０００４】
ヒトゲノムは、莫大な量の遺伝的調節を含む。調節は、転写、転写後、翻訳、および翻訳後の段階で存在する。最近、科学者らは、ＲＮＡ干渉を介して遺伝子発現を調節することを試みた。ＲＮＡ干渉は、ＲＮＡ干渉経路（ＲＮＡｉ）によって媒介される、動物における配列特異的転写後遺伝子サイレンシングのプロセスを指す。低分子干渉ＲＮＡ（ｓｈｏｒｔ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡ）（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｍａｌｌ  ｈａｉｒｐｉｎ  ＲＮＡ）（ｓｈＲＮＡ）、Ｐｉｗｉ相互作用ＲＮＡ（Ｐｉｗｉ−ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ  ＲＮＡ）（ｐｉＲＮＡ）模倣物、およびマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）模倣物のような合成二重鎖オリゴヌクレオチドは、遺伝子発現を首尾よく調整して、特定のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の切断につながるように使用されてきた。
【０００５】
さらに、ゲノムを調節する際に役割を果たす、多くのエピジェネティックな修飾因子がある。ほとんどの転写後調節は、遺伝子の３’非翻訳領域における安定化配列の存在または非存在によって媒介されると考えられた。しかしながら、最近、科学者らは、「マイクロＲＮＡ」と称される、新しい種類の小さな非コードＲＮＡを発見した。
【０００６】
マイクロＲＮＡは、配列特異的な様式で遺伝子発現を調節する、小さな非コードＲＮＡのファミリーである。マイクロＲＮＡファミリーの２つの創立メンバーは、発生事象の適時の調節に必要とされる遺伝子としてＣａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓにおいて最初に同定された。それ以来、何百ものマイクロＲＮＡが、蠕虫、ハエ、植物、および哺乳動物を含むほとんどすべての後生動物のゲノムにおいて同定されてきた。マイクロＲＮＡは、多様な発現パターンを有し、様々な発生プロセスおよび生理学的プロセスを調節する。単一のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡのクラスターは、発生プロセス、細胞代謝およびホメオスタシス、ならびに細胞増殖、成長、および細胞死に関連する遺伝子を調節することができる。ｍｉＲＮＡの調節が解除されてしまうと、肥満、癌、心疾患、神経変性疾患、および変性筋骨格系疾患を含む様々な病理学的状態につながり得る。
【０００７】
したがって、ｍｉＲＮＡは、魅力的な薬物の標的となる。しかしながら、抗ｍｉＲＮＡ分子、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｐｉＲＮＡミメティック、およびｍｉＲＮＡミメティックのような候補薬物の全身投与に関連する不十分な体内分布についての課題を克服することにおいてほとんど進歩していない。限られた体内分布に加えて、抗ｍｉＲＮＡ分子、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｐｉＲＮＡミメティック、およびｍｉＲＮＡミメティックは、有害な「オフターゲット（ｏｆｆ−ｔａｒｇｅｔ）」効果を有し得、それらが、病的な遺伝子発現をダウンレギュレートするだけではなく、他の不可欠で有益な細胞のプロセスを調節する遺伝子発現をも阻害する可能性があることを意味する。したがって、これらの分子は、臨床において主流として使用する状態にまだなっていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、より広く体内分布し、増大した生物学的利用能を有し、かつ遺伝子発現を調節するのに非常に有効である抗ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｐｉＲＮＡミメティック、およびｍｉＲＮＡミメティック化合物を開発するための緊急の必要性が当技術分野において存在する。
【０００９】
本発明の方法および組成物は、当技術分野におけるこれらの課題および他の課題に対する解決策を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、一般に、体内分布特性が改善されたオリゴマー化合物およびそのオリゴマー化合物を使用するための方法に関する。
【００１１】
一実施形態では、本発明は、複数の細胞型、組織、または器官にオリゴマーを提供するための方法であって、１つ以上の副溝結合成分（ＭＧＢ）を含むオリゴマーを被験体に投与するステップを含む方法を部分的に企図する。
【００１２】
他の実施形態では、本発明は、複数の細胞型、組織、または器官にオリゴマーを投与するための方法であって、１つ以上のＭＧＢを含むオリゴマーを被験体に投与するステップを含む方法を部分的に企図する。
【００１３】
様々な実施形態では、オリゴマーが、一本鎖オリゴヌクレオチドである。様々な他の実施形態では、オリゴマーが、二本鎖オリゴヌクレオチドである。様々な特定の実施形態では、オリゴマーが、抗ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｐｉＲＮＡミメティック、およびｍｉＲＮＡミメティックからなる群より選択される。特定の実施形態では、オリゴマーが、非経口的に投与される。
【００１４】
ある実施形態では、非経口投与は、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、包内（ｉｎｔｒａｃａｐｓｕｌａｒ）、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下（ｓｕｂｃａｐｓｕｌａｒ）、クモ膜下、脊髄内、および胸骨内（ｉｎｔｒａｓｔｅｒｎａｌ）の注射および注入からなる群より選択される。
【００１５】
ある特定の実施形態では、オリゴマーが、静脈内に投与される。
【００１６】
さらなる実施形態では、複数の細胞型が、癌細胞、免疫細胞、上皮細胞、内皮細胞、中胚葉細胞、および間葉細胞、骨細胞、造血細胞、皮膚細胞、有毛細胞、眼の細胞、神経細胞、グリア細胞、筋細胞、髄膜細胞、乳房の細胞、肝細胞、腎臓細胞、膵臓細胞、胃の細胞、腸の細胞、結腸の細胞、前立腺細胞、頸部の細胞、ならびに膣の細胞からなる群より選択される。
【００１７】
さらなる実施形態では、複数の組織が、中胚葉組織、結合組織、平滑筋組織、横紋筋組織、心筋組織、骨組織、骨髄組織、骨の海綿質組織（ｂｏｎｅ  ｓｐｏｎｇｙ  ｔｉｓｓｕｅ）、軟骨組織、脂肪組織、内胚葉組織、肺組織、血管組織、膵臓組織、肝組織、膵管組織、脾臓組織、胸腺組織、扁桃組織、パイエル板組織、リンパ節組織、甲状腺組織、内皮組織、血球、膀胱組織、腎臓組織、消化管組織、食道組織、胃組織、小腸組織、大腸組織、子宮組織、睾丸組織、卵巣組織、前立腺組織、内分泌組織、腸間膜組織、および臍帯組織、外胚葉組織、表皮組織、真皮組織、眼組織、ならびに神経系組織からなる群より選択される。
【００１８】
特定の実施形態では、複数の器官が、膀胱、骨、脳、乳房、軟骨、頸部、結腸、角膜、眼、神経組織、グリア、食道、ファローピウス管、心臓、膵臓、腸、胆嚢、腎臓、肝臓、肺、卵巣、膵臓、副甲状腺、松果体、下垂体、前立腺、脊髄、脾臓、骨格筋、皮膚、平滑筋、胃、精巣、胸腺、甲状腺、気管、泌尿生殖器管、尿管、尿道、子宮、および膣からなる群より選択される。
【００１９】
いくつかの実施形態では、オリゴマーが、プレｍＲＮＡにハイブリダイズする。他の実施形態では、オリゴマーが、標的ｍｉＲＮＡを含むプレｍＲＮＡにハイブリダイズする。
【００２０】
他の実施形態では、オリゴマーが、標的ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡを含むプレｍＲＮＡにハイブリダイズする。
【００２１】
ある実施形態では、１つ以上のＭＧＢのうちの少なくとも１つが、オリゴマーの５’末端または３’末端にコンジュゲートされる。
【００２２】
ある特定の実施形態では、１つ以上のＭＧＢのうちの少なくとも１つが、リンカーによりオリゴマーにコンジュゲートされる。
【００２３】
さらなる実施形態では、リンカーが、Ｃ、Ｏ、Ｎ、Ｓ、およびＰからなる群より選択される約１０〜約１００原子の鎖を含む。
【００２４】
特定の実施形態では、リンカーが、ａ）−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）Ｏ（ＣＨ２）６ＮＨ−；ｂ）−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）Ｏ（ＣＨ２）４ＮＨ−；ｃ）−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）（ＯＣＨ２ＣＨ２）６ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）Ｏ（ＣＨ２）６ＮＨ−；ｄ）ヒドロキシ｛［５−（ヒドロキシメチル）−１−メチルピロリジン−３イル］オキシ｝オキソホスホニウム；およびｅ）−（ＣＨ２）５ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）−からなる群より選択される。
【００２５】
様々な実施形態では、１つ以上のＭＧＢのうちの少なくとも１つが、ネトロプシン（ｎｅｔｒｏｐｓｉｎ）、ジスタマイシン（ｄｉｓｔａｍｙｃｉｎ）、およびレキシトロプシン（ｌｅｘｉｔｒｏｐｓｉｎ）、ミトラマイシン、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎ）Ａ３、オリボマイシン（ｏｌｉｖｏｍｙｃｉｎ）、アントラマイシン（ａｎｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、シビロマイシン（ｓｉｂｉｒｏｍｙｃｉｎ）、１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ）インドール−７−カルボン酸（ＤＰＩ）（１−１０）、Ｎ３カルバモイル１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ）インドール−７−カルボン酸（ＣＤＰＩ）（１−１０）、ならびにＮ−メチルピロール−４−カルボキシ−２−アミド（ＭＰＣ）（１−１０）からなる群より選択される。
【００２６】
特定の実施形態では、１つ以上のＭＧＢのうちの少なくとも１つが、ＣＤＰＩ３またはＣＤＰＩ４である。
【００２７】
ある実施形態では、１つ以上のＭＧＢのうちの少なくとも１つが、ＣＤＰＩ３である。
【００２８】
さらなる実施形態では、オリゴマーが、６〜１００ヌクレオチドを含む。
【００２９】
さらなる特定の実施形態では、オリゴマーが、１０〜５０ヌクレオチドを含む。
【００３０】
さらなるある実施形態では、オリゴマーが、１５〜２３ヌクレオチドを含む。
【００３１】
さらなる実施形態では、オリゴマーが、標的配列に対して少なくとも７０％相補的なヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、標的配列が、ｍＲＮＡであり、他の実施形態では、標的配列が、ｍｉＲＮＡ配列である。
【００３２】
いくつかの実施形態では、ヌクレオチドが、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、および修飾ヌクレオチドの群より選択される。
【００３３】
いくつかの特定の実施形態では、修飾ヌクレオチドが、５−メチルシトシン、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、６−アルキルアデニン、６−アルキルグアニン、２−アルキルアデニン、２−アルキルグアニン、２−チオウラシル、２−チオチミン、２−チオシトシン、５−ハロウラシル、５−ハロシトシン、５−アルキニルウラシル、５−アルキニルシトシン、６−アゾウラシル、６−アゾシトシン、６−アゾチミン、５−ウラシル、４−チオウラシル、８−ハロアデニン、８−アミノアデニン、８−チオールアデニン、８−チオアルキルアデニン、８−ヒドロキシルアデニン、８−ハログアニン、８−アミノグアニン、８−チオールグアニン、８−チオアルキルグアニン、８−ヒドロキシルグアニン、５−ハロウラシル、５−ハロシトシン、７−メチルグアニン、７−メチルアデニン、２−Ｆ−アデニン、２−アミノ−アデニン、８−アザグアニン、８アザアデニン、７−デアザグアニン、７−デアザアデニン、３−デアザグアニン、３−デアザアデニン、フェノキサジンシチジン、フェノチアジンシチジン、Ｇ−クランプ（Ｇ−ｃｌａｍｐ）、カルバゾールシチジン、ピリドインドールシチジン、７−デアザアデニン、７−デアザグアノシン、２−アミノピリジン、２−ピリドン、２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル、および５−プロピニルシトシンからなる群より選択される塩基を含む。
【００３４】
特定の実施形態では、オリゴマーが、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間リンケージを含む。
【００３５】
ある特定の実施形態では、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間リンケージが、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、アルキルホスホネート、ホスフィネート、ホスホルアミデート、チオノホスホルアミデート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、セレノホスフェート、ボラノホスフェート、モルホリノ、シロキサン、スルフィド、スルホキシド、スルホン、ホルムアセチル（ｆｏｒｍａｃｅｔｙｌ）、チオホルムアセチル（ｔｈｉｏｆｏｒｍａｃｅｔｙｌ）、メチレンホルムアセチル、リボアセチル（ｒｉｂｏａｃｅｔｙｌ）、アルケン含有骨格、スルファメート、メチレンイミノ、メチレンヒドラジノ、スルホネート、スルホンアミド、またはアミドからなる群より選択される。
【００３６】
さらなる特定の実施形態では、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間リンケージが、ホスホロチオエートリンケージである。
【００３７】
さらなるある実施形態では、オリゴマーのヌクレオシド間リンケージがすべて、ホスホロチオエートリンケージである。
【００３８】
特定の実施形態では、オリゴマーが、少なくとも１つの２’修飾糖成分を含む。
【００３９】
ある実施形態では、少なくとも１つの２’修飾糖成分が、ＯＨ、ハロゲン、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、Ｎ−アルキル、Ｏ−アルケニル、Ｓ−アルケニル、Ｎ−アルケニル、Ｏ−アルキニル、Ｓ−アルキニル、Ｎ−アルキニル、Ｏ−アルキル−Ｏ−アルキル、アルカリル、アラルキル、Ｏ−アルカリル、Ｏ−アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、アルコキシアルコキシ、ジメチルアミノオキシエトキシ、アリル、およびＯ−アリルからなる群より選択され、アルキル、アルケニル、およびアルキニルが、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキルまたはＣ２〜Ｃ１０アルケニルおよびアルキニルとすることができる。
【００４０】
さらなる実施形態では、少なくとも１つの２’修飾糖成分が、２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）（２’−ＭＯＥ）糖成分である。
【００４１】
関連するさらなる実施形態では、少なくとも１つの２’修飾糖成分が、２’−Ｏ，４’−Ｃメチレン架橋を含む。
【００４２】
さらなる実施形態では、オリゴマーが、３’親油性基を含む少なくとも１つ以上の塩基を含む。
【００４３】
特定の実施形態では、３’親油性基が、コレステロール、胆汁酸、および脂肪酸からなる群より選択される。
【００４４】
一実施形態では、本発明は、１つ以上の細胞、組織、または器官における１つ以上の遺伝子の発現を減少させるための方法を部分的に企図し、この方法は、１つ以上のＭＧＢを含むオリゴマーを被験体に投与するステップを含み、被験体における１つ以上の遺伝子の遺伝子発現が、ＭＧＢを含まないオリゴマーを投与された他の被験体における遺伝子発現と比較して、１つ以上の細胞、組織、または器官において減少する。
【００４５】
一実施形態では、本発明は、１つ以上の細胞、組織、または器官におけるｍｉＲＮＡのｍｉＲＮＡ活性を減少させるための方法を部分的に企図し、この方法は、１つ以上のＭＧＢを含むオリゴマーを被験体に投与するステップを含み、被験体におけるｍｉＲＮＡ活性が、ＭＧＢを含まないオリゴマーを投与された他の被験体におけるｍｉＲＮＡ活性と比較して、１つ以上の細胞、組織、または器官において減少する。
【００４６】
他の実施形態では、本発明は、複数の細胞型、組織、または器官における１つ以上の遺伝子の遺伝子発現の増大に関連する疾患、障害、または状態を有する被験体を処置するための方法を部分的に企図し、この方法は、ａ）正常な細胞における１つ以上の遺伝子の遺伝子発現と比較して、病気の細胞、組織、または器官において遺伝子発現が増大している複数の細胞型、組織、または器官における１つ以上の遺伝子を同定するステップ；およびｂ）１つ以上の遺伝子にハイブリダイズする、１つ以上のＭＧＢを含むオリゴマーを投与するステップを含む。
【００４７】
他の実施形態では、本発明は、複数の細胞型、組織、または器官における１つ以上のｍｉＲＮＡの活性の増大に関連する疾患、障害、または状態を有する被験体を処置するための方法を部分的に企図し、この方法は、ａ）正常な細胞における１つ以上のｍｉＲＮＡのｍｉＲＮＡ活性と比較して、病気の細胞、組織、または器官においてｍｉＲＮＡ活性が増大している複数の細胞型、組織、または器官における１つ以上のｍｉＲＮＡを同定するステップ；およびｂ）１つ以上のｍｉＲＮＡにハイブリダイズする、１つ以上のＭＧＢを含むオリゴマーを投与するステップを含む。
【００４８】
特定の実施形態では、疾患、障害、または状態が、腫瘍媒介性の血管新生、癌、炎症、線維症疾患、自己免疫性疾患、およびＣ型肝炎感染媒介性の疾患からなる群より選択される。
【００４９】
さらなる特定の実施形態では、疾患、障害、または状態が、肺癌、肝細胞癌、胃腸癌、膵癌、膠芽腫、白血病、リンパ腫、頸部の癌（ｃｅｒｖｉｃａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、卵巣癌、腎臓癌、膀胱癌、乳癌、骨肉腫、中枢神経系の癌、結腸癌、結腸直腸癌、胃癌、子宮内膜癌腫または子宮癌腫、唾液腺癌腫、乳頭状腎細胞癌腫、前立腺癌、外陰部の癌、甲状腺癌、および頭頸部癌、ならびに黒色腫からなる群より選択される。
【００５０】
さらなる特定の実施形態では、疾患、障害、または状態が、グレーブス病および橋本甲状腺炎を含む自己免疫性甲状腺疾患、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（Ｓｊｏｇｒｅｎｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症（ＭＧ）、乾癬、強皮症、ならびにクローン病および潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患からなる群より選択される。
【００５１】
ある特定の実施形態では、疾患、障害、または状態が、Ｃ型肝炎感染症またはＣ型肝炎感染媒介性の疾患からなる群より選択される。
【００５２】
ある他の特定の実施形態では、疾患、障害、または状態が、新生血管形成、発作、虚血、および心筋梗塞からなる群より選択される。
【００５３】
様々な実施形態では、ｍｉＲＮＡが、
【００５４】
【化１】
2014509512.tif 000002
【００５５】
【化２】
2014509512.tif 000003
【００５６】
【化３】
2014509512.tif 000004
【００５７】
【化４】
2014509512.tif 000005
【００５８】
【化５】
2014509512.tif 000006
【００５９】
【化６】
2014509512.tif 000007
【００６０】
【化７】
2014509512.tif 000008
【００６１】
【化８】
2014509512.tif 000009
からなる群より選択される。
【図面の簡単な説明】
【００６２】
【図１】図１は、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識ＭＩ−０１４５２のＩＶ投与の０．１６７時間後のオスＣＤ−１マウスにおける放射能分布の代表的な全身オートラジオグラムを示す図である。
【図２】図２は、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識ＭＩ−０１４５２のＩＶ投与の０．５時間後のオスＣＤ−１マウスにおける放射能分布の代表的な全身オートラジオグラムを示す図である。
【図３】図３は、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識ＭＩ−０１４５２のＩＶ投与の１時間後のオスＣＤ−１マウスにおける放射能分布の代表的な全身オートラジオグラムを示す図である。
【図４】図４は、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識ＭＩ−０１４５２のＩＶ投与の２時間後のオスＣＤ−１マウスにおける放射能分布の代表的な全身オートラジオグラムを示す図である。
【図５】図５は、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識ＭＩ−０１４５２のＩＶ投与の４時間後のオスＣＤ−１マウスにおける放射能分布の代表的な全身オートラジオグラムを示す図である。
【図６】図６は、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識ＭＩ−０１４５２のＩＶ投与の８時間後のオスＣＤ−１マウスにおける放射能分布の代表的な全身オートラジオグラムを示す図である。
【図７】図７は、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識ＭＩ−０１４５２のＩＶ投与の２４時間後のオスＣＤ−１マウスにおける放射能分布の代表的な全身オートラジオグラムを示す図である。
【図８】図８は、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識ＭＩ−０１４５３のＩＶ投与の０．１６７時間後のオスＣＤ−１マウスにおける放射能分布の代表的な全身オートラジオグラムを示す図である。
【図９】図９は、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識ＭＩ−０１４５３のＩＶ投与の０．５時間後のオスＣＤ−１マウスにおける放射能分布の代表的な全身オートラジオグラムを示す図である。
【図１０】図１０は、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識ＭＩ−０１４５３のＩＶ投与の１時間後のオスＣＤ−１マウスにおける放射能分布の代表的な全身オートラジオグラムを示す図である。
【図１１】図１１は、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識ＭＩ−０１４５３のＩＶ投与の２時間後のオスＣＤ−１マウスにおける放射能分布の代表的な全身オートラジオグラムを示す図である。
【図１２】図１２は、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識ＭＩ−０１４５３のＩＶ投与の４時間後のオスＣＤ−１マウスにおける放射能分布の代表的な全身オートラジオグラムを示す図である。
【図１３】図１３は、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識ＭＩ−０１４５３のＩＶ投与の８時間後のオスＣＤ−１マウスにおける放射能分布の代表的な全身オートラジオグラムを示す図である。
【図１４】図１４は、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識ＭＩ−０１４５３のＩＶ投与の２４時間後のオスＣＤ−１マウスにおける放射能分布の代表的な全身オートラジオグラムを示す図である。
【図１５】図１５は、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識ＭＩ−０１４５４のＩＶ投与の０．１６７時間後のオスＣＤ−１マウスにおける放射能分布の代表的な全身オートラジオグラムを示す図である。
【図１６】図１６は、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識ＭＩ−０１４５４のＩＶ投与の０．５時間後のオスＣＤ−１マウスにおける放射能分布の代表的な全身オートラジオグラムを示す図である。
【図１７】図１７は、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識ＭＩ−０１４５４のＩＶ投与の１時間後のオスＣＤ−１マウスにおける放射能分布の代表的な全身オートラジオグラムを示す図である。
【図１８】図１８は、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識ＭＩ−０１４５４のＩＶ投与の２時間後のオスＣＤ−１マウスにおける放射能分布の代表的な全身オートラジオグラムを示す図である。
【図１９】図１９は、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識ＭＩ−０１４５４のＩＶ投与の４時間後のオスＣＤ−１マウスにおける放射能分布の代表的な全身オートラジオグラムを示す図である。
【図２０】図２０は、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識ＭＩ−０１４５４のＩＶ投与の８時間後のオスＣＤ−１マウスにおける放射能分布の代表的な全身オートラジオグラムを示す図である。
【図２１】図２１は、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識ＭＩ−０１４５４のＩＶ投与の２４時間後のオスＣＤ−１マウスにおける放射能分布の代表的な全身オートラジオグラムを示す図である。
【図２２Ａ】図２２は、時間をわたっての生殖器系、筋肉系、および呼吸器系の組織における抗ｍｉＲＮＡ濃度の分布を示す図である。それぞれの群のマウスは、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識抗ｍｉＲＮＡのＩＶ投与を受けた。群Ｉのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５２を投与し（図２２Ａ）、群ＩＩのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５３を投与し（図２２Ｂ）、群ＩＩＩのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５４を投与した（図２２Ｃ）。
【図２２Ｂ】図２２は、時間をわたっての生殖器系、筋肉系、および呼吸器系の組織における抗ｍｉＲＮＡ濃度の分布を示す図である。それぞれの群のマウスは、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識抗ｍｉＲＮＡのＩＶ投与を受けた。群Ｉのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５２を投与し（図２２Ａ）、群ＩＩのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５３を投与し（図２２Ｂ）、群ＩＩＩのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５４を投与した（図２２Ｃ）。
【図２２Ｃ】図２２は、時間をわたっての生殖器系、筋肉系、および呼吸器系の組織における抗ｍｉＲＮＡ濃度の分布を示す図である。それぞれの群のマウスは、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識抗ｍｉＲＮＡのＩＶ投与を受けた。群Ｉのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５２を投与し（図２２Ａ）、群ＩＩのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５３を投与し（図２２Ｂ）、群ＩＩＩのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５４を投与した（図２２Ｃ）。
【図２３Ａ】図２３は、時間をわたっての中枢神経系（ＣＮＳ）、内分泌系、および分泌系の組織における抗ｍｉＲＮＡ濃度の分布を示す図である。それぞれの群のマウスは、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識抗ｍｉＲＮＡのＩＶ投与を受けた。群Ｉのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５２を投与し（図２３Ａ）、群ＩＩのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５３を投与し（図２３Ｂ）、群ＩＩＩのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５４を投与した（図２３Ｃ）。
【図２３Ｂ】図２３は、時間をわたっての中枢神経系（ＣＮＳ）、内分泌系、および分泌系の組織における抗ｍｉＲＮＡ濃度の分布を示す図である。それぞれの群のマウスは、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識抗ｍｉＲＮＡのＩＶ投与を受けた。群Ｉのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５２を投与し（図２３Ａ）、群ＩＩのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５３を投与し（図２３Ｂ）、群ＩＩＩのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５４を投与した（図２３Ｃ）。
【図２３Ｃ】図２３は、時間をわたっての中枢神経系（ＣＮＳ）、内分泌系、および分泌系の組織における抗ｍｉＲＮＡ濃度の分布を示す図である。それぞれの群のマウスは、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識抗ｍｉＲＮＡのＩＶ投与を受けた。群Ｉのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５２を投与し（図２３Ａ）、群ＩＩのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５３を投与し（図２３Ｂ）、群ＩＩＩのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５４を投与した（図２３Ｃ）。
【図２４Ａ】図２４は、時間をわたっての血管系および排出系の組織における抗ｍｉＲＮＡ濃度の分布を示す図である。それぞれの群のマウスは、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識抗ｍｉＲＮＡのＩＶ投与を受けた。群Ｉのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５２を投与し（図２４Ａ）、群ＩＩのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５３を投与し（図２４Ｂ）、群ＩＩＩのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５４を投与した（図２４Ｃ）。
【図２４Ｂ】図２４は、時間をわたっての血管系および排出系の組織における抗ｍｉＲＮＡ濃度の分布を示す図である。それぞれの群のマウスは、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識抗ｍｉＲＮＡのＩＶ投与を受けた。群Ｉのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５２を投与し（図２４Ａ）、群ＩＩのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５３を投与し（図２４Ｂ）、群ＩＩＩのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５４を投与した（図２４Ｃ）。
【図２４Ｃ】図２４は、時間をわたっての血管系および排出系の組織における抗ｍｉＲＮＡ濃度の分布を示す図である。それぞれの群のマウスは、２０ｍｇ／ｋｇ  １４Ｃ標識抗ｍｉＲＮＡのＩＶ投与を受けた。群Ｉのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５２を投与し（図２４Ａ）、群ＩＩのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５３を投与し（図２４Ｂ）、群ＩＩＩのマウスには、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５４を投与した（図２４Ｃ）。
【図２５】図２５は、２０ｍｇ／ｋｇ（３２５μＣｉ／ｋｇ）の［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５２の単回のＩＶ投与後のオスＣＤ  １マウスの組織における放射能の濃度（μｇ当量／ｇ）についてのデータ表を示す図である。
【図２６】図２６は、２０ｍｇ／ｋｇ（３２５μＣｉ／ｋｇ）の［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５３の単回のＩＶ投与後のオスＣＤ  １マウスの組織における放射能の濃度（μｇ当量／ｇ）についてのデータ表を示す図である。
【図２７】図２７は、２０ｍｇ／ｋｇ（２６０μＣｉ／ｋｇ）の［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５４の単回のＩＶ投与後のオスＣＤ  １マウスの組織における放射能の濃度（μｇ当量／ｇ）についてのデータ表を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００６３】
配列識別子の簡単な説明
配列番号１は、抗ｍｉＲＮＡの核酸配列を記載する
配列番号２は、抗ｍｉＲＮＡの核酸配列を記載する
配列番号３は、抗ｍｉＲＮＡの核酸配列を記載する。
【００６４】
詳細な説明
Ａ．概要
抗ｍｉＲＮＡ分子、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｐｉＲＮＡミメティック、ｍｉＲＮＡミメティック、および他の核酸ベースの治療薬の組織への広い領域にわたる送達は、これらの分子の臨床上の使用に対して主な障害となる。成功が限られる、オリゴマーベースの治療上の適用には、眼（Ｓｈｅｎら、Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｏｃｕｌａｒ  ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｓｉＲＮＡ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＶＥＧＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ（２００６）．１３：２２５−２３４）、肺（Ｂｉｔｋｏら、Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｖｉｒｕｓｅｓ  ｂｙ  ｎａｓａｌｌｙ  ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ｓｉＲＮＡ．Ｎａｔ  Ｍｅｄ（２００５）１１：５０−５５）、および膣（Ｐａｌｌｉｓｅｒら、Ａｎ  ｓｉＲＮＡ−ｂａｓｅｄ  ｍｉｃｒｏｂｉｃｉｄｅ  ｐｒｏｔｅｃｔｓ  ｍｉｃｅ  ｆｒｏｍ  ｌｅｔｈａｌ  ｈｅｒｐｅｓ  ｓｉｍｐｌｅｘ  ｖｉｒｕｓ  ２  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ（２００６）４３９：８９−９４）のような、容易に到達できる組織における局所投与が使用される。ＲＮＡベースの治療薬の全身投与は、不十分な体内分布をもたらす、すなわち、治療薬は、腎臓および肝臓に優先的に蓄積する（Ｓｈａｙｎｅ  Ｃ．Ｇａｄ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ．（２００５）．Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ．Ｐ．１２８１）。
【００６５】
したがって、抗ｍｉＲＮＡ分子、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｐｉＲＮＡミメティック、およびｍｉＲＮＡミメティックは魅力的な薬物の候補であるが、これらの候補薬物の全身投与に関連する不十分な体内分布についての課題を克服することにおいてほとんど進歩していない。そのような化合物の全身投与のための現在の戦略は、広範囲の組織にそれらを送達するのに効果的でない。組織取込みを促進するためのより有効な試薬を開発しなければ、これらの化合物は、疾患を処置するのに不十分な臨床上の選択肢のままであり続けるであろう。したがって、広い体内分布プロファイルを有し、遺伝子発現レベルおよびｍｉＲＮＡ発現レベルを効率的に調節するオリゴマーについての重要な必要性がある。
【００６６】
本発明は、遺伝子発現またはｍｉＲＮＡ発現の増大に関連する疾患、障害、および状態の処置のための、非常に必要とされる解決策を提供する。本発明は、遺伝子およびｍｉＲＮＡを標的化する先行技術の方法にまさって、実質的な利点を有する新規なオリゴマーを提供する。本発明のオリゴマーは、驚くべきことにまた予想外に広い体内分布プロファイルを有し、かつより少ないオフターゲット効果に関連する、より安全かつより頑健な処置パラダイムを提供する。様々な実施形態では、本発明は、少なくとも１つのＭＧＢ成分にコンジュゲートされた、広く体内分布するオリゴマーを提供するための方法を部分的に企図する。したがって、本発明のオリゴマーおよび本発明のオリゴマーを含む組成物の投与は、被験体内の多種多様の組織にそれらを送達するための新規で、非常に望ましい戦略をもたらす。したがって、本発明の方法および組成物は、多種多様の細胞および組織における、遺伝子発現ならびにｍｉＲＮＡおよびｍｉＲＮＡクラスターの発現を調節するための好ましい戦略を提供する。
【００６７】
Ｂ．ｓｉＲＮＡおよびＲＮＡｉ
ＲＮＡ干渉は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）によって媒介される、動物における配列特異的転写後遺伝子サイレンシングのプロセスを指す（Ｚａｍｏｒｅら、２０００，Ｃｅｌｌ，１０１，２５−３３；Ｆｉｒｅら、１９９８，Ｎａｔｕｒｅ，３９１，８０６；Ｈａｍｉｌｔｏｎら、１９９９，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８６，９５０−９５１；Ｌｉｎら、１９９９，Ｎａｔｕｒｅ，４０２，１２８−１２９；Ｓｈａｒｐ，１９９９，Ｇｅｎｅｓ  ＆  Ｄｅｖ．，１３，１３９−１４１；およびＳｔｒａｕｓｓ，１９９９，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８６，８８６）。
【００６８】
細胞中の長いｄｓＲＮＡの存在により、ダイサー（Ｄｉｃｅｒ）と呼ばれるリボヌクレアーゼＩＩＩ酵素の活性が刺激される（Ｂａｓｓ，２０００，Ｃｅｌｌ，１０１，２３５；Ｚａｍｏｒｅら、２０００，Ｃｅｌｌ，１０１，２５−３３；Ｈａｍｍｏｎｄら、２０００，Ｎａｔｕｒｅ，４０４，２９３）。ダイサーは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）として知られている、ｄｓＲＮＡの短い断片へのｄｓＲＮＡのプロセシングに関与する（Ｚａｍｏｒｅら、２０００，Ｃｅｌｌ，１０１，２５−３３；Ｂａｓｓ，２０００，Ｃｅｌｌ，１０１，２３５；Ｂｅｒｓｔｅｉｎら、２００１，Ｎａｔｕｒｅ，４０９，３６３）。ダイサー活性から誘発される低分子干渉ＲＮＡは、典型的に、長さが約２１〜約２３ヌクレオチドであり、約１９塩基対の二重鎖を含む（Ｚａｍｏｒｅら、２０００，Ｃｅｌｌ，１０１，２５−３３；Ｅｌｂａｓｈｉｒら、２００１，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．，１５，１８８）。ダイサーはまた、翻訳の制御に関係する、保存された構造の前駆体ＲＮＡからの２１および２２ヌクレオチド小分子ＲＮＡ（ｓｍａｌｌ  ｔｅｍｐｏｒａｌ  ＲＮＡ）（ｓｔＲＮＡ）の切り出しにも関係した（Ｈｕｔｖａｇｎｅｒら、２００１，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９３，８３４）。ＲＮＡｉ応答はまた、一般にＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と呼ばれるエンドヌクレアーゼ複合体をも特徴とし、これは、ｓｉＲＮＡ二重鎖のアンチセンス鎖に対して相補的な配列を有する一本鎖ＲＮＡの切断を媒介する。標的ＲＮＡの切断は、ｓｉＲＮＡ二重鎖のアンチセンス鎖に対して相補的な領域の真中で起こる（Ｅｌｂａｓｈｉｒら、２００１，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．，１５，１８８）。
【００６９】
Ｅｌｂａｓｈｉｒら、２００１，Ｎａｔｕｒｅ，４１１，４９４およびＴｕｓｃｈｌら、国際ＰＣＴ公開第０１／７５１６４号は、ヒト胚性腎臓細胞およびＨｅＬａ細胞を含む培養哺乳動物細胞における合成２１ヌクレオチドＲＮＡの二重鎖の導入によって誘導されるＲＮＡｉを記載する。ショウジョウバエ胚溶解産物における最近の研究（Ｅｌｂａｓｈｉｒら、２００１，ＥＭＢＯ  Ｊ．，２０，６８７７およびＴｕｓｃｈｌら、国際ＰＣＴ公開第０１／７５１６４号）は、効率的なＲＮＡｉ活性を媒介するのに不可欠なｓｉＲＮＡの長さ、構造、化学組成、および配列についての一定の必要条件を明らかにした。これらの研究は、２１ヌクレオチドｓｉＲＮＡ二重鎖が、３’末端のジヌクレオチドオーバーハングを含有する場合に、最も活性であることを示した。
【００７０】
さらに、２’−デオキシ（２’−Ｈ）ヌクレオチドまたは２’−Ｏ−メチルヌクレオチドとの一方または両方のｓｉＲＮＡ鎖の完全な置換は、ＲＮＡｉ活性を消滅させるのに対して、２’−デオキシヌクレオチド（２’−Ｈ）との３’末端ｓｉＲＮＡオーバーハングヌクレオチドの置換は、許容されることが示された。ｓｉＲＮＡ二重鎖の中央における単一のミスマッチ配列もまた、ＲＮＡｉ活性を消滅させることが示された。さらに、これらの研究はまた、ｓｉＲＮＡガイド配列の３’末端ではなくｓｉＲＮＡガイド配列の５’末端によって標的ＲＮＡにおける切断部位の位置が画定されることをも示す（Ｅｌｂａｓｈｉｒら、２００１，ＥＭＢＯ  Ｊ，２０，６８７７）。他の研究は、ｓｉＲＮＡ二重鎖の標的相補鎖上の５’−ホスフェートが、ｓｉＲＮＡ活性に必要とされ、また、ＡＴＰが、ｓｉＲＮＡ上の５’−ホスフェート成分を維持するために利用されることを示した（Ｎｙｋａｎｅｎら、２００１，Ｃｅｌｌ，１０７，３０９）。
【００７１】
より長いｄｓＲＮＡの使用が、記載されている。たとえば、Ｔｕｓｃｈｌら、国際ＰＣＴ公開第０１／７５１６４号は、ショウジョウバエのインビトロＲＮＡｉ系ならびにある機能的なゲノムの適用およびある治療上の適用のための特定のｓｉＲＮＡ分子の使用を記載する。Ｆｉｒｅら、国際ＰＣＴ公開第９９／３２６１９号は、線虫における遺伝子発現を阻害する際に使用するための細胞へある長いｄｓＲＮＡ分子を導入するための特定の方法を記載する。Ｍｅｌｌｏら、国際ＰＣＴ公開第０１／２９０５８号は、ｄｓＲＮＡ媒介性のＲＮＡｉに関与する特異的な遺伝子の同定を記載する。Ｄｒｉｓｃｏｌｌら、国際ＰＣＴ公開第０１／４９８４４号は、標的化された生物における遺伝子サイレンシングを促進するのに使用するための特異的なＤＮＡ発現構築物を記載する。Ｆｉｒｅら、米国特許第６，５０６，５５９号は、ＲＮＡｉを媒介するある長いｄｓＲＮＡ（２９９ｂｐ〜１０３３ｂｐ）構築物を使用してインビトロにおいて遺伝子発現を阻害するためのある方法を記載する。
【００７２】
ＲＮＡ干渉についての例証となるメカニズムは、転写後遺伝子サイレンシング、翻訳阻害、転写阻害、またはエピジェネティックなＲＮＡｉを含むが、これらに限定されない。たとえば、本発明のｓｉＲＮＡ分子は、転写後段階または転写前段階の両方で遺伝子をエピジェネティックにサイレンシングするために使用することができる。非限定的な例では、本発明のｓｉＲＮＡ分子による遺伝子発現のエピジェネティックな調整は、遺伝子発現を改変するための、クロマチン構造またはメチル化パターンのｓｉＲＮＡ媒介性の修飾に起因し得る（たとえばＶｅｒｄｅｌら、２００４，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０３，６７２−６７６；Ｐａｌ−Ｂｈａｄｒａら、２００４，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０３，６６９−６７２；Ａｌｌｓｈｉｒｅ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，１８１８−１８１９；Ｖｏｌｐｅら、２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，１８３３−１８３７；Ｊｅｎｕｗｅｉｎ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，２２１５−２２１８；およびＨａｌｌら、２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，２２３２−２２３７を参照されたい）。他の非限定的な例では、本発明のｓｉＲＮＡ分子による遺伝子発現の調整は、ＲＩＳＣを介してのＲＮＡ（コードＲＮＡもしくは非コードＲＮＡ）のｓｉＲＮＡ媒介性の切断またはその代わりに、当技術分野において知られている翻訳阻害に起因し得る。さらに非限定的な例の実施形態では、本発明のｓｉＲＮＡ分子による遺伝子発現の調整は、転写阻害に起因し得る（たとえばＪａｎｏｗｓｋｉら、２００５，Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１，２１６−２２２を参照されたい）。
【００７３】
本発明は、「ｓｉＲＮＡ」または「低分子干渉ＲＮＡ」と呼ばれるオリゴマーを部分的にさらに企図する。本明細書において使用される場合、「ｓｉＲＮＡ」および「低分子干渉ＲＮＡ」という用語は、ＲＮＡｉを実行することができ、長さが１４〜３０塩基対の二重鎖領域を有する、単分子の核酸および２つの別々の鎖から構成される核酸を指す。さらに、ｓｉＲＮＡという用語および語句「低分子干渉ＲＮＡ」は、修飾ヌクレオチド、修飾ヌクレオチド間リンケージ、非ヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、および前述のヌクレオチドのアナログを含むが、これらに限定されない、リボヌクレオチド成分以外の成分をさらに含有する核酸を含む。ｓｉＲＮＡは、二重鎖とすることができ、小分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、たとえば４〜２３またはそれ以上もの長さのヌクレオチドのループを有するＲＮＡ、ステムループバルジを有するＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、および低分子ＲＮＡ（ｓｈｏｒｔ  ｔｅｍｐｏｒａｌ  ＲＮＡ）をさらに含むことができる。ループまたはヘアピンループを有するＲＮＡは、可撓性リンカーのようなリンカーによってループがステムにつながれている構造を含むことができる。可撓性リンカーは、それらがステムエレメントの有効な分子内ハイブリダイゼーションを可能にするのに十分な長さおよび物質である限り、多種多様の化学構造から構成することができる。典型的に、長さの範囲は、少なくとも約１０〜２４原子である。ｓｉＲＮＡがヘアピンである場合、センス鎖およびアンチセンス鎖は、１つのより長い分子の一部となる。
【００７４】
Ｃ．ｍｉＲＮＡ
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）は、疾患、発生上のタイミング、分化、アポトーシス、細胞増殖、器官発生、および代謝の根底にある生物学的プロセスにおいて重要である。ｍｉＲＮＡのバイオジェネシスは、よく知られており、Ｋｉｍ，ＭｉｃｒｏＲＮＡ  ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ：ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ  ｃｒｏｐｐｉｎｇ  ａｎｄ  ｄｉｃｉｎｇ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，６（Ｍａｙ  ２００５）：３７６−３８５においておよびＨｅ  ａｎｄ  Ｈａｎｎｏｎ，ＭｉｃｒｏＲＮＡｓ：Ｓｍａｌｌ  ＲＮＡｓ  ｗｉｔｈ  ａ  ｂｉｇ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｇｅｎｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，５（２００４）：５２２−５３１において概説されている。
【００７５】
ほとんどのｍｉＲＮＡ遺伝子は、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ（Ｐｏｌ  ＩＩ）によって転写される。転写されたｍｉＲＮＡ転写物は、一次ｍｉＲＮＡ（ｐｒｉｍａｒｙ  ｍｉＲＮＡ）（ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡまたはｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ転写物）として知られている。大多数の知られているＰｏｌ  ＩＩにより転写されたｍｉＲＮＡは、遺伝子間領域にまたは遺伝子に対してアンチセンス方向で見つけられ、それら自体のｍｉＲＮＡ遺伝子プロモーターおよび調節ユニットを含有する。そのようなｐｒｉ−ｍｉＲＮＡは、長さが何百または何千ものヌクレオチドとなり得、スプライスされ、５’末端でキャップされ、ポリアデニル化される（たとえばポリ（Ａ）テイル）。多くのｍｉＲＮＡが、２つ以上のｍｉＲＮＡ遺伝子のクラスター中でコードされ、したがって、ｍｉＲＮＡ遺伝子プロモーターの制御下のｍｉＲＮＡ遺伝子クラスターから転写されるｐｒｉ−ｍｉＲＮＡは、ポリシストロニックｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ転写物として知られている。
【００７６】
Ｐｏｌ  ＩＩによって転写される、他のかなりの割合の知られているｍｉＲＮＡは、既存の遺伝子内に、たとえば５’または３’非翻訳領域（ＵＴＲ）中に、イントロン、および非タンパク質コード遺伝子内にコードされる。通常、そのようなｍｉＲＮＡは、センス方向にあり、宿主遺伝子プレｍＲＮＡおよび／またはｍＲＮＡ転写物の一部として転写される。したがって、この場合、宿主遺伝子のプレｍＲＮＡ（たとえばイントロンｍｉＲＮＡ）またはｍＲＮＡ転写物は、ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ転写物を含む。同様に、ｍｉＲＮＡ遺伝子が宿主遺伝子中でクラスター形成する場合、宿主遺伝子のプレｍＲＮＡ（たとえばイントロンｍｉＲＮＡ）またはｍＲＮＡ転写物は、ｍｉＲＮＡ遺伝子クラスターのポリシストロニックｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ転写物を含む。
【００７７】
ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ転写物は、核のＲＮアーゼＩＩＩ  Ｄｒｏｓｈａによって核中で切断されて、長さが約６５〜７０ｎｔのより小さなステムループヘアピン型構造であるｍｉＲＮＡの前駆体（プレｍｉＲＮＡ）を放出する。Ｄｒｏｓｈａによる核のプロセシングに続いて、プレｍｉＲＮＡは、エクスポーチン（Ｅｘｐｏｒｔｉｎ）−５によって細胞質に輸出される。一度、そこで、ＲＮアーゼＩＩＩ酵素ダイサーは、プレｍｉＲＮＡをプロセシングして、約１８〜２４ｎｔ二重鎖にする。ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）の中に組み込まれ、遺伝子発現をサイレンシングさせる二重鎖の一方の鎖は、ガイド鎖またはｍｉＲＮＡと呼ばれるが、二重鎖の他方の鎖は、分解され、パッセンジャー鎖またはｍｉＲＮＡ＊（スター鎖）と呼ばれる。
【００７８】
いかなる特定の理論によっても束縛されることを望むものではないが、プレｍｉＲＮＡのステムループ構造における５’鎖および３’鎖の熱力学的安定性に依存して、細胞は、より不安定な鎖をガイド鎖となるように優先的に選択し、ｍｉＲＮＡ＊またはパッセンジャー鎖を破壊すると考えられる。しかしながら、標的予測および検証についてのアッセイは、ｍｉＲＮＡ対の両方の鎖が、等しい数の遺伝子を標的化することができ、両方が、それらの標的遺伝子の発現を抑制することができたことを実証した。３４７のｍｉＲＮＡ前駆体（プレｍｉＲＮＡ）のデータセットを使用して、Ｈｕおよび共同研究者らは、７３％超の前駆体が、ガイド鎖およびパッセンジャー鎖の両方から成熟ｍｉＲＮＡを生成したことを決定した（Ｈｕら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｆｅａｔｕｒｅｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｍｉｃｒｏＲＮＡ  ｓｔｒａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ  ａｎｄ  ｆｌｉｅｓ．ＢＭＣ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，１０（２００９）：４１３）。したがって、生物学的に活性なｍｉＲＮＡを、約１８〜２４ｎｔ二重鎖のどちらの鎖からも産生することができる。
【００７９】
したがって、本明細書において使用される場合、用語「ｍｉＲＮＡ」または数字が後続する「ｍｉＲ−」という略語は、サイレンシング複合体の中に組み込まれ、ＲＮＡサイレンシング活性（ｍｉＲＮＡ活性）を有する、生物学的に活性な一本鎖ＲＮＡを指す。特定のｍｉＲＮＡが議論される場合、使用される命名規則は、ｍｉＲＢａｓｅマイクロＲＮＡデータベース（ｗｗｗ．ｍｉｒｂａｓｅ．ｏｒｇ）で使用されるものと同じとする。たとえば、ｍｉＲＮＡクローニング研究により、同じ予測される前駆体から生じる２つの約１８〜２４ｎｔ配列のｍｉＲＮＡが同定され、相対的存在量により、どれが主に発現されたｍｉＲＮＡであるかが示される場合、成熟配列は、ｍｉＲ−１７（主な産物；ガイド鎖）およびｍｉＲ−１７＊（前駆体の反対のアーム由来；パッセンジャーまたは鎖）という形式の名称が割り当てられる。どの配列が主な配列であるかを決定するのにデータが十分でない場合、ｍｉＲ−１４２−５ｐ（５’アーム由来）およびｍｉＲ−１４２−３ｐ（３’アーム由来）のような名称が使用される。どの配列が主な配列であるかを決定するのにデータが十分でない場合、配列を指す共通の専門用語を使用するための手段として、５’アームは、ガイド鎖配列と命名され、３’アームは、パッセンジャー鎖配列と命名される。
【００８０】
これまで報告されたヒトｍｉＲＮＡの数は（Ｓａｎｇｅｒ  ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのｍｉＲＢａｓｅの２０１０年９月の発表）、１０４９であり、示された当初の推定のほぼ５倍である。加えて、さらに多くの予測されたｍｉＲＮＡ遺伝子が、実験による確認を待っている。
【００８１】
例証となる標的ｍｉＲＮＡは、
【００８２】
【化９】
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【００８３】
【化１０】
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【００８４】
【化１１】
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【００８５】
【化１２】
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【００８６】
【化１３】
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【００８７】
【化１４】
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【００８８】
【化１５】
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【００８９】
【化１６】
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を含むが、これらに限定されない。
【００９０】
Ｄ．ｍｉＲＮＡクラスター
最近、多くのｍｉＲＮＡ遺伝子の発見の後に、いくつかのグループは、クラスター形成したｍｉＲＮＡが、多くの生物学的プロセスの至る所で、それらの機能を達成するために組み合わせて働くことを示した。上記に述べられるように、多くのｍｉＲＮＡは、ｍｉＲＮＡ遺伝子クラスター中にコードされている。本明細書において使用される場合、用語「ｍｉＲＮＡ遺伝子クラスター」および「ｍｉＲＮＡクラスター」は、交換可能に使用され、２つ以上のｍｉＲＮＡ遺伝子をコードするゲノム遺伝子座または転写単位を指す。
【００９１】
たとえば、ｍｉｒ−１４３クラスターの発現は、他のいくつかの癌細胞株と同様に結腸癌においてもダウンレギュレートされる（Ｍｉｃｈａｅｌら、Ｒｅｄｕｃｅｄ  ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ  ｉｎ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｎｅｏｐｌａｓｉａ，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１（２００３）８８２−８９１）。ｍｉｒ−４３０クラスターは、ゼブラフィッシュにおいて神経発生を調節することが示された（Ｇｉｒａｌｄｅｚら、ＭｉｃｒｏＲＮＡｓ  ｒｅｇｕｌａｔｅ  ｂｒａｉｎ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  ｚｅｂｒａｆｉｓｈ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０８（２００５）８３３−８３８）。ｍｉｒ−１７クラスターは、Ｅ２Ｆ１発現を調整し、潜在的なヒト癌遺伝子となり得（Ｏ’Ｄｏｎｎｅｌｌら、ｃ−Ｍｙｃ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  Ｅ２Ｆ１  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ４３５（２００５）８３９−８４３）、ｍｉｒ−１５ａクラスターは、ＢＣＬ２を標的とすることによって白血病細胞アポトーシスを誘導することができる（Ｃｉｍｍｉｎｏら、ｍｉＲ−１５  ａｎｄ  ｍｉＲ−１６  ｉｎｄｕｃｅ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｂｙ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＢＣＬ２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１０２（２００５）１３９４４−１３９４９）。
【００９２】
最近の研究では、ヒトにおけるクラスター形成ｍｉＲＮＡの割合は、以前に想像されたものをはるかに超える（Ａｌｔｕｖｉａら、Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ  ａｎｄ  ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ  ｐａｔｔｅｒｎｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３３（２００５）２６９７−２７０６）。ｍｉＲＮＡ遺伝子のこの天然ゲノム構成パターンは、それらが協調して機能する内部メカニズムを提供するが、現在までに、そのようなメカニズムは説明されておらず、発生および疾患の調節におけるクラスターの役割は、よく理解されていない。他の最近の研究では、Ｙｕおよび共同研究者らは、異なるタイプの白血病細胞株におけるクラスター形成ｍｉＲＮＡのサブセットのプロファイリングを実行した（Ｙｕら、Ｈｕｍａｎ  ｍｉｃｒｏＲＮＡ  ｃｌｕｓｔｅｒｓ：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｐｒｏｆｉｌｅ  ｉｎ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ，３４９  Ｂ．Ｂ．Ｒ．Ｃ．：５９−６８）。Ｙｕらは、複数のｍｉＲＮＡが、白血病細胞において発現されるクラスターにおいて活性を示すことを発見したが、分析はそこで終わっている。
【００９３】
いくつかのグループは、ｍｉＲＮＡクラスターを同定するためにゲノミックアプローチを使用した（たとえばＺｈａｎｇら、Ｓｃｉ  Ｃｈｉｎａ  Ｓｅｒ  Ｃ−Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ，（２００９）５２：２６１−２６６；Ｙｕら、２００６；Ａｌｔｕｖｉａら、２００５を参照されたい）。Ａｌｔｕｖｉａおよび共同研究者らは、３１のｍｉＲＮＡクラスターを同定するために２０７のヒトｍｉＲＮＡのセットを使用した。Ｙｕおよび共同研究者らは、３２６のヒトｍｉＲＮＡ遺伝子のデータセットを使用し、５１のクラスターにまとめられる１４８のｍｉＲＮＡを同定した。本発明は、英国のＳａｎｇｅｒ  ＣｅｎｔｅｒのｍｉＲＮＡデータベースから最新のエントリーを使用した。７０９のｍｉＲＮＡ遺伝子のデータセットを使用して、７３のクラスターにまとめられる２２４のｍｉＲＮＡが同定された。７３のクラスターは、Ｙｕら、２００６のクラスターをすべて含有する。表１は、例証となる標的ｍｉＲＮＡクラスター、染色体位置、およびパラロガスなグループの構成を示す。
【００９４】
【表１−１】
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【００９５】
【表１−２】
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【００９６】
【表１−３】
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【００９７】
【表１−４】
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ｍｉＲＮＡ遺伝子のナンバリングは、単純に順次とする。名称／識別子は、ｈｓａ−ｍｉｒ−１２１という形式とする。最初の３つの文字は、生物を表わす、すわなち、「ｈｓａ」は、ヒト（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）を指す。「ｍｉｒ」という接頭語は、ｍｉＲＮＡ遺伝子を指し、さらに、一次転写物の予測されるステムループ部分を指す。同一の成熟配列を発現する別個の前駆体配列およびゲノム遺伝子座は、ｈｓａ−ｍｉｒ−１２１−１およびｈｓａ−ｍｉｒ−１２１−２という形式の名称が付けられる。１つまたは２つのヌクレオチドを除いてほとんど同一の配列を発現する別個の前駆体配列およびゲノム遺伝子座は、さらに小文字を用いて注釈を付けられる、たとえば、たとえばｈｓａ−ｍｉｒ−１２１ａおよびｈｓａ−ｍｉｒ−１２１ｂとなる。
【００９８】
Ｅ．ｍｉＲＮＡミメティック
本発明は、ｍｉＲＮＡミメティックと呼ばれるオリゴマーを部分的にさらに企図する。用語「マイクロＲＮＡミメティック」または「ｍｉＲＮＡミメティック」または「ｍｉＲＮＡ模倣物」は、ＲＮＡｉ経路に入り、遺伝子発現を調節することができる合成非コードＲＮＡを指す。ｍｉＲＮＡ模倣物は、内因性マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）の機能を模倣し、成熟した二本鎖分子または模倣前駆体（たとえばｐｒｉ−もしくはプレｍｉＲＮＡ）として設計することができる。ｍｉＲＮＡ模倣物は、修飾または未修飾ＲＮＡ、ＤＮＡ、ＲＮＡ−ＤＮＡハイブリッド、または代替の核酸化学物質（たとえばロックド核酸（ＬＮＡ）もしくは２’−Ｏ，４’−Ｃエチレン架橋核酸（ＥＮＡ））から構成することができる。成熟二本鎖ｍｉＲＮＡ模倣物については、二重鎖領域の長さは、約１６〜３１ヌクレオチドの間で変化し得、化学修飾パターンは、以下のものを含むことができる：センス鎖は、ヌクレオチド１および２（センスオリゴヌクレオチドの５’末端からカウントして）ならびにすべてのＣおよびＵの２’−Ｏ−メチル修飾を含有する。さらに、センス鎖は、機能性、送達、または特異性を増強するコンジュゲートを含むことができる。アンチセンス鎖修飾は、すべてのＣおよびＵの２’Ｆ修飾、オリゴヌクレオチドの５’末端のリン酸化、および２ヌクレオチド３’オーバーハングに結合した、安定化されたヌクレオチド間リンケージを含んでいてもよい。
【００９９】
Ｆ．ｐｉＲＮＡミメティック
本発明は、ｐｉＲＮＡミメティックと呼ばれるオリゴマーを部分的にさらに企図する。用語「ｐｉＲＮＡミメティック」は、ＲＮＡｉ経路に入り、遺伝子発現を調節することができる合成非コードＲＮＡを指す。ｐｉＲＮＡ模倣物は、転写サイレンシングに関与すると考えられる小さなＲＮＡの一種である内因性Ｐｉｗｉ相互作用ＲＮＡの機能を模倣する（Ｌａｕ，Ｎ．Ｃ．ら、（２００６）Ｓｃｉｅｎｃｅ，３１３：３０５−３０６を参照されたい）。
【０１００】
Ｇ．ｓｈＲＮＡ
本発明は、ｓｈＲＮＡと呼ばれるオリゴマーを部分的にさらに企図する。ｓｈＲＮＡは、単一の自己相補的ＲＮＡ鎖によって形成される二本鎖構造である。ＲＮＡ二重鎖形成は、細胞の内部でまたは外部で開始されてもよい。阻害は、ＲＮＡの二重鎖領域に対応するヌクレオチド配列を遺伝子阻害のために標的化するという点で配列特異的である。標的遺伝子のコード配列または非コード配列の一部分と同一のヌクレオチド配列を含有するｓｈＲＮＡ構築物は、阻害にとって好ましい。標的配列に関して挿入、欠失、および単一点突然変異を有するＲＮＡ配列もまた、阻害にとって有効であることが分かった。本発明を実施するのにＲＮＡおよび標的遺伝子の間の１００％の配列同一性は必要とされないので、本発明は、遺伝子突然変異、株の多型性、または進化の多様性により予想され得る配列変異を許容することができるという利点を有する。配列同一性は、当技術分野において知られている配列比較およびアライメントアルゴリズム（Ｇｒｉｂｓｋｏｖ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９９１およびそこに引用される参考文献を参照されたい）ならびにたとえば、デフォルトパラメーターを使用してＢＥＳＴＦＩＴソフトウェアプログラムにおいて実装されるＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズム（たとえばＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ）によるヌクレオチド配列の間のパーセント差の計算によって最適化されてもよい。阻害性ＲＮＡおよび標的遺伝子の一部分の間の９０％を超える配列同一性またはさらに１００％の配列同一性が、好ましい。その代わりに、ＲＮＡの二重鎖領域は、標的遺伝子転写物の一部分とハイブリダイズすることができるヌクレオチド配列として機能的に画定されてもよい（たとえば１２〜１６時間の４００ｍＭ  ＮａＣｌ、４０ｍＭ  ＰＩＰＥＳ  ｐＨ６．４、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、５０℃または７０℃でのハイブリダイゼーション；その後に続く洗浄）。ある好ましい実施形態では、ｓｈＲＮＡの二重鎖形成部分の長さが、少なくとも２０、２１、または２２ヌクレオチド長であり、たとえば、ダイサー依存性の切断によって産生されるＲＮＡ産物にサイズが一致する。ある実施形態では、ｓｈＲＮＡ構築物は、長さが少なくとも２５、５０、１００、２００、３００、または４００塩基である。ある実施形態では、ｓｈＲＮＡ構築物は、長さが４００〜８００塩基である。ｓｈＲＮＡ構築物は、ループ配列およびループサイズにおける変化に非常に許容性がある。
【０１０１】
細胞の内因性ＲＮＡポリメラーゼは、核酸構築物においてコードされるｓｈＲＮＡの転写を媒介してもよい。ｓｈＲＮＡ構築物はまた、細胞中で発現されるバクテリオファージＲＮＡポリメラーゼ（たとえばＴ３、Ｔ７、ＳＰ６）によって合成されてもよい。好ましい実施形態では、ｓｈＲＮＡの発現が、ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーターによって調節され、そのようなプロモーターは、効率的なサイレンシングをもたらすことが知られている。本質的に、任意のＰｏｌＩＩＩプロモーターが使用されてもよいが、望ましい例として、ヒトＵ６  ｓｎＲＮＡプロモーター、マウスＵ６  ｓｎＲＮＡプロモーター、ヒトおよびマウスＨ１  ＲＮＡプロモーター、ならびにヒトｔＲＮＡ−ｖａｌプロモーターが挙げられる。Ｕ６  ｓｎＲＮＡリーダー配列は、一次転写物に追加されてもよく、そのようなリーダー配列は、一般に効率的なｓｈＲＮＡに対してほとんどまたはまったく効果を有していないが、最適以下のｓｈＲＮＡの効率を増大させる傾向がある。インビボにおける導入遺伝子からの転写については、調節領域（たとえばプロモーター、エンハンサー、サイレンサー、スプライスドナーおよびスプライスアクセプター、ポリアデニル化）は、ｓｈＲＮＡ鎖（複数可）の発現を調節するために使用されてもよい。阻害は、器官、組織、もしくは細胞型における特異的な転写；環境条件の刺激（たとえば感染症、ストレス、温度、化学的誘導物質）；および／またはある発生段階もしくは発達年齢での転写の操作によって制御されてもよい。ＲＮＡ鎖は、ポリアデニル化されてもよくまたはポリアデニル化されなくてもよく、ＲＮＡ鎖は、細胞の翻訳装置によってポリペプチドに翻訳することができてもよく、または翻訳することができなくてもよい。発現構築物の使用および産生は、当技術分野において知られている（国際公開第９７／３２０１６号；米国特許第５，５９３，８７４号明細書、米国特許第５，６９８，４２５号明細書、米国特許第５，７１２，１３５号明細書、米国特許第５，７８９，２１４号明細書、および米国特許第５，８０４，６９３号明細書；ならびにそこに引用される参考文献もまた参照されたい）。
【０１０２】
ｓｈＲＮＡ構築物は、Ｕ６  ｓｎＲＮＡリーダー配列の後に２９ｂｐヘリックスを用いて設計され、転写物は、ヒトＵ６  ｓｎＲＮＡプロモーターによって産生されてもよい。この転写単位は、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）ベースのレトロウイルスを介して送達され、発現カセットは、パッケージシグナルの下流に挿入されてもよい。ｓｈＲＮＡ構築物の最適化についてのさらなる情報は、たとえば、以下の参考文献において見つけられてもよい：Ｐａｄｄｉｓｏｎ，Ｐ．Ｊ．，Ａ．Ａ．Ｃａｕｄｙ，ａｎｄ  Ｇ．Ｊ．Ｈａｎｎｏｎ，Ｓｔａｂｌｅ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ＲＮＡｉ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，２００２．９９（３）：ｐ．１４４３−８；１３．Ｂｒｕｍｍｅｌｋａｍｐ，Ｔ．Ｒ．，Ｒ．Ｂｅｍａｒｄｓ，ａｎｄ  Ｒ．Ａｇａｍｉ，Ａ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  Ｓｔａｂｌｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｈｏｒｔ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡｓ  ｉｎ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００２．２１：ｐ．２１；Ｋａｗａｓａｋｉ，Ｈ．ａｎｄ  Ｋ．Ｔａｉｒａ，Ｓｈｏｒｔ  ｈａｉｒｐｉｎ  ｔｙｐｅ  ｏｆ  ｄｓＲＮＡｓ  ｔｈａｔ  ａｒｅ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｂｙ  ｔＲＮＡ（Ｖａｌ）ｐｒｏｍｏｔｅｒ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ  ｉｎｄｕｃｅ  ＲＮＡｉ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｇｅｎｅ  ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｙｔｏｐｌａｓｍ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｃｅｌｌｓ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ，２００３．３１（２）：ｐ．７００−７、Ｌｅｅ，Ｎ．Ｓ．ら、Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡｓ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ａｇａｉｎｓｔ  ＨＩＶ−１  ｒｅｖ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００２．２０（５）：ｐ．５００−５；Ｍｉｙａｇｉｓｈｉ，Ｍ．ａｎｄ  Ｋ．Ｔａｉｒａ，Ｕ６  ｐｒｏｍｏｔｅｒ−ｄｒｉｖｅｎ  ｓｉＲＮＡｓ  ｗｉｔｈ  ｆｏｕｒ  ｕｒｉｄｉｎｅ  ３’  ｏｖｅｒｈａｎｇｓ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ  ｓｕｐｐｒｅｓｓ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００２．２０（５）：ｐ．４９７−５００；Ｐａｕｌ，Ｃ  Ｐ．ら、Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００２．２０（５）：ｐ．５０５−８。
【０１０３】
Ｈ．抗ｍｉＲＮＡ
特定の実施形態では、本発明は、抗ｍｉＲＮＡ分子であるオリゴマーを部分的に企図する。本明細書において使用される場合、用語「抗ｍｉＲＮＡ分子」または「抗ｍｉＲＮＡ」は、プレｍｉＲＮＡ、ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ、および／またはｍｉＲＮＡの発現および／または活性に干渉するオリゴマーを指す。
【０１０４】
Ｉ．オリゴマー
本発明は、オリゴマーまたはオリゴマー化合物を含む抗ｍｉＲＮＡ分子を部分的に企図する。本明細書において使用される場合、用語「オリゴマー」、「オリゴマーの」、またはその等価物は、細胞中に存在する標的ＲＮＡ配列にハイブリダイズするポリマー構造を指す。オリゴマーは、一本鎖または二本鎖とすることができ、抗ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｐｉＲＮＡミメティック、およびｍｉＲＮＡミメティックを含む。
【０１０５】
標的ＲＮＡ配列は、プレｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ、プレｍｉＲＮＡ、ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ、およびｍｉＲＮＡを含むが、これらに限定されない。標的配列は、それぞれｍｉＲＮＡ遺伝子プロモーターによって転写されてもよく、または宿主遺伝子プロモーターによって転写されてもよいｍｉＲＮＡまたはｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ転写物中に存在し、その場合には、ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ転写物は、宿主遺伝子のプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ配列中に含まれる。
【０１０６】
本発明のオリゴマーは、以下の特徴のうちの１つ以上：副溝結合成分（ＭＧＢ）、修飾または未修飾ヌクレオチドおよびヌクレオシド、ヌクレオチドアナログ、ヌクレオシドアナログ、ヌクレオチドミメティックを含み、これらのそれぞれは、様々な修飾糖または修飾ヌクレオチド間／ヌクレオシド間リンケージ、コンジュゲート（たとえばコレステロール）、ならびにオリゴマーへのコンジュゲートおよび／またはＭＧＢの共有結合を促進するリンカーを含むことができる。一実施形態では、用語「オリゴマー」が、１つ以上のＭＧＢ成分を含むオリゴマーを指す。一実施形態では、用語「オリゴマー」が、１つ以上のＭＧＢ成分を含む複数の単量体単位を指す。本発明のオリゴマーは、ＭＧＢを欠く非コンジュゲートオリゴマーおよび／または分子と比較して、体内分布が増大している。
【０１０７】
本明細書において使用される場合、用語「体内分布」は、被験体に投与または送達されるオリゴマーの細胞および／または組織および／または器官分布を指す。本明細書において使用される場合、用語「促進する」、「増強する」、「刺激する」、または「増大させる」は、一般に、ビヒクルまたは対照分子／組成物のいずれかによって引き起こされる応答と比較して、より大きなまたはより広い組織分布を有する本発明のオリゴマーの能力を指す。当業者に知られている様々な方法は、細胞または組織の体内分布の評価および増大に使用することができ、それらとしては、核医学、全身オートラジオグラフィー、ミクロオートラジオグラフィー；蛍光体イメージング（ｐｈｏｓｐｈｏｒ  ｉｍａｇｉｎｇ）、冷凍イメージング（ｃｒｙｏ−ｉｍａｇｉｎｇ）、ナノ二次イオン質量分析（ｎａｎｏＳＩＭＳ）、マトリクス支援レーザー脱離イメージング（ｍａｔｒｉｘ−ａｓｓｉｓｔｅｄ  ｌａｓｅｒ  ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｉｍａｇｉｎｇ）（ＭＡＬＤＩ−ＭＳ）、Ｘ線撮影法（Ｘ線）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、コンピューター断層撮影法（ＣＴ）、マイクロ超音波単一光子放射型ＣＴ（ｍｉｃｒｏ−ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ  ｓｉｎｇｌｅ  ｐｈｏｔｏｎ  ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ＣＴ）（ＳＰＥＣＴ）、陽電子断層撮影法（ＰＥＴ）、およびその他同種のものが挙げられるが、これらに限定されない。本発明のオリゴマーの体内分布の増大は、ビヒクルまたは対照分子／組成物と比較して、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、またはそれを超える増大を含む。組織分布または体内分布の「増大」または「増強」は、典型的に、「統計的に有意な」増大であり、ビヒクルまたは対照組成物の分布の１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０倍、またそれを超える（たとえば５００倍、１０００倍）の増大を含んでいてもよい（これらの間かつ１を超える全ての整数および小数点を含む、たとえば１．５、１．６、１．７、１．８など）。
【０１０８】
いかなる特定の理論によっても束縛されることを望むものではないが、オリゴマーへの１つ以上のＭＧＢのコンジュゲーションは、本明細書において別記されるように、ＭＧＢを欠くオリゴマーと比較して、オリゴマーおよびその標的ＲＮＡ核酸配列の間のハイブリダイゼーションのハイブリダイゼーション安定性およびストリンジェンシーを増大させることができる。さらに、オリゴマーへの１つ以上のＭＧＢのコンジュゲーションは、本明細書において別記されるように、オリゴマーの組織分布および生物学的利用能の増大をもたらす。これらの特徴は、全身的に投与されるオリゴマーの送達および効能の改善において重要となり得る。
【０１０９】
一実施形態では、本発明は、未修飾オリゴマーと比較して、核酸ベースの薬物の侵入に対する細胞、組織、または器官の障壁をオリゴマーが横断する能力を促進する修飾をオリゴマーが含むことを部分的に企図する。非限定的な一実施例では、１つ以上のＭＧＢを含み、それにコンジュゲートされたまたは連結されたオリゴマーは、ＭＧＢ成分を欠くオリゴマーと比較して、細胞、組織、または器官の障壁を貫通する頻度が実質的に増大している。
【０１１０】
一実施形態では、本発明のオリゴマーが、体内分布の増大という驚くべき予想外の特性を示す。好ましい実施形態では、オリゴマーが、ＭＧＢ成分を欠く抗ｍｉＲＮＡよりも、多数の細胞型もしくは組織型および／または器官において、遺伝子発現またはｍｉＲＮＡ発現を阻害する。
【０１１１】
特定の好ましい実施形態では、オリゴマーが、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、または８以上の細胞型もしくは組織型および／または器官において、標的ＲＮＡの発現を阻害する。
【０１１２】
一実施形態では、オリゴマーが、ガイド鎖ｍｉＲＮＡ配列を含む標的ｍｉＲＮＡ配列にハイブリダイズする。他の実施形態では、オリゴマーが、パッセンジャーまたはスター鎖ｍｉＲＮＡ配列を含む標的ｍｉＲＮＡ配列にハイブリダイズする。
【０１１３】
ある実施形態では、本発明のオリゴマーが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれを超える細胞型、組織、または器官において、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれを超えるＲＮＡの発現または活性を減少させる。さらなる実施形態では、本発明は、すべての細胞型、組織、または器官において、ＲＮＡ発現および／またはＲＮＡの活性を阻害するためにオリゴマーを使用するための方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、単一のタイプの細胞、単一の組織、または単一の器官において、ＲＮＡ発現またはＲＮＡの活性を阻害するためにオリゴマーを使用するための方法を提供する。
【０１１４】
ある実施形態では、細胞、組織、または器官分布が増大しているオリゴマーが、少なくとも１つのＭＧＢ成分および限定を伴うことなく以下の特徴：修飾または未修飾ヌクレオチドおよびヌクレオシド、ヌクレオチドアナログ、ヌクレオシドアナログ、ヌクレオチドミメティックの任意の組み合わせを含み、これらのそれぞれは、様々な修飾糖または修飾ヌクレオチド間／ヌクレオシド間リンケージ、コンジュゲート（たとえばコレステロール）、ならびにオリゴマーへのコンジュゲートおよび／またはＭＧＢの共有結合を促進するリンカーを含むことができる。それぞれの特徴は、下記にさらに詳細に議論される。
【０１１５】
様々な実施形態では、オリゴマーが、それぞれの連結された単量体サブユニットが複素環式塩基成分および糖成分または糖代用物（ｓｕｇａｒ  ｓｕｒｒｏｇａｔｅ）を含む、複数の共有結合単量体サブユニットを含む。単量体単位は、当技術分野において知られているまたは本明細書において記載される様々なヌクレオチド間／ヌクレオシド間リンケージによって連結することができる。オリゴマーのそれぞれの構成成分は、オリゴマー中の他の単量体単位と無関係に、修飾形態または未修飾形態で存在することができる。オリゴマーの例証となる単量体単位は、修飾ヌクレオチドまたは未修飾ヌクレオチドおよびヌクレオシド、ヌクレオチドアナログ、ヌクレオシドアナログ、ヌクレオチドミメティックを含むが、これらに限定されず、これらのそれぞれは、様々な修飾糖または修飾ヌクレオチド間／ヌクレオシド間リンケージを含むことができる。したがって、本発明のオリゴマーは、オリゴマーが、所望の活性、たとえばハイブリダイゼーション特異性、ハイブリダイゼーション親和性、核侵入、および抗ＲＮＡ触媒活性を保持するまたはそれを増大させる限り、任意の適した組み合わせで、修飾単量体単位および／または非修飾単量体単位を含む。
【０１１６】
特定の例証となる実施形態では、修飾オリゴマーは、未修飾オリゴマーよりも好ましい。いかなる特定の理論によっても束縛されることを望むものではないが、修飾オリゴマーは、特定の実施形態において、たとえば核侵入の増大、標的核酸に対するハイブリダイゼーション親和性の増大、標的核酸に対するハイブリダイゼーション特異性の増大、細胞の取込みの増強、ヌクレアーゼに対する抵抗性の増大、および治療上の毒性の減少のような望ましい特性のために、天然の形態よりも好ましい。本明細書において使用される場合、用語「修飾」は、下記に記載されるもののような、ヌクレオシド間リンケージ、糖成分、塩基成分、コンジュゲートへのコンジュゲーション、リンカー、およびＭＧＢ成分に対する置換および／または任意の変化を含む。いくつかの実施形態では、オリゴマーが、完全に修飾され、他の実施形態では、オリゴマーが、部分的に修飾される。さらに、１つ以上のＭＧＢ成分を含むオリゴマーは、ＭＧＢ成分にコンジュゲートされていないまたは連結されていない修飾オリゴマーと比較して、細胞、組織、および／または器官へのオリゴマーの送達、標的核酸に対するハイブリダイゼーション親和性、標的核酸に対するハイブリダイゼーション特異性、細胞の取込み、組織の取込み、器官の取込み、ヌクレアーゼに対する抵抗性を実質的に増強し、かつ治療上の毒性を実質的に減少させる。
【０１１７】
本発明に従うオリゴマーは、約６〜約１００の単量体サブユニット、約１０〜約５０の単量体サブユニット、約１２〜約３５の単量体サブユニット、約１５〜約２５の単量体サブユニット、約１８〜約２３の単量体サブユニット、または任意の介在する数の単量体サブユニットを含むことができる。当業者は、本発明が、長さが６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００サブユニットのオリゴマーを含むことを認識するであろう。
【０１１８】
本明細書において使用される場合、用語「ハイブリダイゼーション」は、相補的な核酸配列（たとえば標的ＲＮＡ配列）に対するオリゴマーの対形成を指す。標的ＲＮＡ配列を含む例示的な核酸配列は、プレｍＲＮＡ配列、ｍＲＮＡ配列、ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ配列、プレｍｉＲＮＡ配列、成熟ｍｉＲＮＡ配列、その相補体（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）、およびそのフラグメントまたは一部分を含むが、これらに限定されない。一実施形態では、ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ転写物を含むプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡが、標的ｍｉＲＮＡ配列を含む。他の実施形態では、ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ転写物が、標的ｍｉＲＮＡ配列を含む。本発明では、対形成のメカニズムは、水素結合を含み、これは、本発明のオリゴマーおよび標的ｍｉＲＮＡ配列の間のワトソン−クリック、フーグスティーン、または逆フーグスティーン水素結合であってもよい。
【０１１９】
本明細書において使用される場合、用語「特異的にハイブリダイズ可能な」は、特異的なハイブリダイゼーションが所望される条件下で、すなわち、インビボもしくはエクスビボアッセイまたは治療的処置の場合には生理学的条件下でおよびインビトロアッセイの場合には標準的なアッセイ条件下で、非標的核酸に対するオリゴマーの非特異的結合を避けるのに十分な程度の相補性があることを意味する。一実施形態では、標的ｍｉＲＮＡ配列に特異的にハイブリダイズすることができるオリゴマーが、標的ｍｉＲＮＡの正常な機能に干渉する。その結果として、オリゴマーは、ｍｉＲＮＡの活性を改変するおよび／またはｍｉＲＮＡの機能を破壊する。
【０１２０】
当業者は、本明細書において議論される修飾のいずれか、たとえば修飾ヌクレオベース、修飾糖を通して本発明のオリゴマーの特異性を調整することができることを認識するであろう。これらの修飾に加えて、１つ以上のＭＧＢ成分に連結されたオリゴマー、たとえば複数のオリゴマー単位を含むオリゴマーは、ＭＧＢ成分を欠くオリゴマーと比較して、標的ｍｉＲＮＡに対するハイブリダイゼーション特異性を実質的に増大させる。
【０１２１】
本明細書において使用される場合、用語、「ストリンジェントなハイブリダイゼーション」または「ストリンジェントな条件」は、本発明のオリゴマーがその標的ＲＮＡ配列に特異的にハイブリダイズする条件を指す。ストリンジェントな条件は、配列依存性であり、異なる環境によりおよび存在する状況で変化するであろう、また、オリゴマーが標的ＲＮＡにハイブリダイズする「ストリンジェントな条件」は、オリゴマーの性質および組成ならびにそれらを調査しているアッセイによって決定される。当業者は、実験プロトコールの変動を理解し、条件が、非特異的ハイブリダイゼーション事象が最小限となるストリンジェントなハイブリダイゼーションに最適である場合を決定することができるであろう。さらに、１つ以上のＭＧＢ成分を含むオリゴマーは、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーを実質的に増大させ、ＭＧＢ成分を欠くオリゴマーと比較して、非特異的ハイブリダイゼーション事象を最小限にする。
【０１２２】
本明細書において使用される場合、用語「相補性」は、あるヌクレオベースの他のヌクレオベースとの正確な対形成のための能力を指す。たとえば、オリゴマーのある位置の単量体サブユニットが、標的ＲＮＡ配列のある位置の単量体サブユニットと水素結合をすることができる場合、その位置は、相補的な位置であると考えられる。対照的に、単量体サブユニットが水素結合をすることができない場合、その位置は、「非相補的である」と考えられる。それぞれの分子における十分な数の相補的な位置が、互いに水素結合することができる単量体サブユニットによって占められる場合、オリゴマーは、標的ＲＮＡ配列に対して実質的に相補的である。本明細書において使用される場合、用語「実質的に相補的な」は、安定した特異的な結合がオリゴマーおよび標的ＲＮＡの間で起こる、十分な数の単量体サブユニットにわたる十分な程度の正確な対形成を指す。
【０１２３】
特定の例証となる実施形態では、オリゴマーが、標的ＲＮＡ配列に対して十分に相補的である。ある実施形態では、オリゴマーが、標的ＲＮＡ配列に対して約７５％〜約９５％、約８０％〜約９５％、約８５％〜約９５％、または約９０％〜約９５％相補的である。他の実施形態では、オリゴマーが、標的ＲＮＡ配列に対して約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、もしくは約９５％またはそれを超えて相補的である。
【０１２４】
したがって、オリゴマーは、標的ＲＮＡ配列に対して約９５％同一、約９０％同一、約８５％同一、約８０％同一である。
【０１２５】
さらなる実施形態では、オリゴマーが、１つ以上のセグメントにわたりハイブリダイズすることができ、介在するまたは隣接するセグメントは、ハイブリダイゼーションに関与しない（たとえばバルジ、ループ構造、またはヘアピン型構造）。本明細書において使用される場合、用語「ミスマッチ」は、オリゴマーおよび標的ＲＮＡの間の非相補的な塩基を指す。
【０１２６】
特定の実施形態では、非相補的な位置またはミスマッチ位置が、オリゴマーが残りの標的ＲＮＡ配列に対して実質的に相補的なままであることを条件として、オリゴマーおよび標的ＲＮＡの間で許容されてもよい。本発明のオリゴマーは、オリゴマーが標的ＲＮＡの発現または活性を調整する能力における著しい減少を引き起こすことなく、標的ＲＮＡ配列に対する１つ、２つ、または３つのミスマッチを有するオリゴヌクレオチド化合物を含むことができる。好ましい実施形態では、標的ＲＮＡのシード配列に対して相補的なオリゴマーの領域の外にあるミスマッチが、好ましい。他の好ましい実施形態では、オリゴマーが、標的ＲＮＡ配列に対して０、１つ、または２つのミスマッチを含有する。より好ましい実施形態では、オリゴマーが、標的ＲＮＡ配列に対して多くとも１つのミスマッチを含有する。さらに好ましい実施形態では、オリゴマーが、シード配列を含む標的ＲＮＡ配列にハイブリダイズする。
【０１２７】
様々な実施形態では、本発明のオリゴマーが、本明細書において記載される、２つ以上の修飾または未修飾ヌクレオチドおよびヌクレオシド、ヌクレオチドアナログ、ヌクレオシドアナログ、ヌクレオチドミメティックの複合構造として形成することができる。そのようなオリゴマーはまた、当技術分野において、ハイブリッド、ヘミマー（ｈｅｍｉｍｅｒ）、ギャップマー（ｇａｐｍｅｒ）、または逆位ギャップマー（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｇａｐｍｅｒ）とも呼ばれた。そのようなハイブリッド構造の調製を教示する代表的な米国特許は、米国特許第５，０１３，８３０号明細書；米国特許第５，１４９，７９７号明細書；米国特許第５，２２０，００７号明細書；米国特許第５，２５６，７７５号明細書；米国特許第５，３６６，８７８号明細書；米国特許第５，４０３，７１１号明細書；米国特許第５，４９１，１３３号明細書；米国特許第５，５６５，３５０号明細書；米国特許第５，６２３，０６５号明細書；米国特許第５，６５２，３５５号明細書；米国特許第５，６５２，３５６号明細書；および米国特許第５，７００，９２２号明細書を含むが、これらに限定されず、これらのそれぞれは、その全体が参照によって本明細書において組み込まれる。
【０１２８】
１．ヌクレオベース
本発明は、オリゴマーが、１つ以上の修飾または非修飾ヌクレオチドおよび／またはヌクレオシドを含むことができることを部分的に企図する。１つ以上の修飾または非修飾ヌクレオチドおよび／またはヌクレオシドを含む本発明のオリゴマーは、ヌクレアーゼに対する抵抗性の増大、標的核酸に対する結合親和性の増大、および他の有益な生物学的特性を有することができる。
【０１２９】
本明細書において使用される場合、用語「ヌクレオチド」は、リン酸化糖とＮ−グリコシド結合した複素環式窒素塩基を指す。ヌクレオチドは、天然塩基および多種多様の当技術分野において認識される修飾塩基を含むことが理解される。そのような塩基は、一般に、ヌクレオチド糖成分の１’位に位置する。ヌクレオチドは、一般に、塩基、糖、およびホスフェート基を含む。リボ核酸（ＲＮＡ）では、糖は、リボースであり、また、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）では、糖は、デオキシリボース、すなわち、リボース中に存在するヒドロキシル基を欠く糖である。例示的な天然窒素塩基は、プリン、アデノシン（Ａ）、およびグアニジン（Ｇ）ならびにピリミジン、シチジン（Ｃ）、およびチミジン（Ｔ）（またはＲＮＡの場合、ウラシル（Ｕ））を含む。デオキシリボースのＣ−１原子は、ピリミジンのＮ−１またはプリンのＮ−９に結合する。ヌクレオチドは、通常、一、二、または三リン酸エステルである。ヌクレオチドは、糖、ホスフェート、および／または塩基成分で未修飾とすることができるまたは修飾することができる（ヌクレオチドアナログ、ヌクレオチド誘導体、修飾ヌクレオチド、非天然ヌクレオチド、および非標準ヌクレオチドとも交換可能に呼ばれる；たとえば国際公開第９２／０７０６５号および国際公開第９３／１５１８７号を参照されたい）。修飾核酸塩基の例は、Ｌｉｍｂａｃｈら（１９９４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２２，２１８３−２１９６）によって要約される。
【０１３０】
特定の例証となる実施形態では、本発明のオリゴマーが、１つ以上の修飾ヌクレオチドを含む。ある実施形態では、ヌクレオチドはすべて、修飾され、他のある実施形態では、ヌクレオチドのいずれも、修飾されない。様々な実施形態では、オリゴマーが、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または１００％の修飾ヌクレオチドを含む。
【０１３１】
ヌクレオチドはまた、ヌクレオシドのリン酸エステルと見なされてもよく、エステル化は、糖のＣ−５に付加されたヒドロキシル基で起こる。本明細書において使用される場合、用語「ヌクレオシド」は、糖とＮ−グリコシド結合した複素環式窒素塩基を指す。ヌクレオシドは、天然塩基を含み、かつよく知られている修飾塩基をさらに含むことが当技術分野において認識される。そのような塩基は、一般に、ヌクレオシド糖成分の１’位に位置する。ヌクレオシドは、一般に、塩基および糖基を含む。ヌクレオシドは、糖および／または塩基成分で未修飾とすることができるまたは修飾することができる（ヌクレオシドアナログ、ヌクレオシド誘導体、修飾ヌクレオシド、非天然ヌクレオシド、または非標準ヌクレオシドとも交換可能に呼ばれる）。上記にも述べられるように、修飾核酸塩基の例は、Ｌｉｍｂａｃｈら（１９９４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２２，２１８３−２１９６）によって要約される。
【０１３２】
特定の例証となる実施形態では、本発明のオリゴマーが、１つ以上の修飾ヌクレオシドを含む。ある実施形態では、ヌクレオシドはすべて、修飾され、他のある実施形態では、ヌクレオシドのいずれも、修飾されない。様々な実施形態では、オリゴマーが、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または１００％の修飾ヌクレオシドを含む。
【０１３３】
本明細書において使用される場合、用語「修飾塩基」、「修飾核酸塩基」、および「修飾ヌクレオベース」は、本明細書において交換可能に使用され、１’位の、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシル以外の塩基またはそれらの等価物を指し、また、そのような塩基は、任意の位置で、たとえば酵素核酸分子の触媒コア内でおよび／または核酸分子の基質結合領域において使用することができる。
【０１３４】
核酸の中に導入することができる例示的な化学修飾核酸塩基および他の天然核酸塩基は、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、イノシン、ジヒドロウリジン、ヒポキササニン（ｈｙｐｏｘａｔｈａｎｉｎｅ）、イソシトシン、イソグアニン、Ｎ６−メチルアデノシン、シュードウラシル、ピリジン−２−オン、ピリジン−４−オン、キューオシン（ｑｕｅｓｏｓｉｎｅ）、トレオニン誘導体、ウリジン−５−オキシ酢酸、ワイブトシン、ワイブトキソシン（ｗｙｂｕｔｏｘｏｓｉｎｅ）、キササニン（ｘａｔｈａｎｉｎｅ）、β−Ｄ−ガラクトシルキューオシン（β−Ｄ−ｇａｌａｃｔｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）、β−Ｄ−マンノシルキューオシン（β−Ｄ−ｍａｎｎｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）、２，２−ジメチルグアノシン、１５−ハロシトシン、１５−ハロウラシル、１−メチルアデノシン、１−メチルイノシン、２−アミノアデニン、２−メチルアデノシン、２−メチルグアノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデノシン、２−プロピルアデニン、２−プロピルグアニン、２−チオシチジン、２−チオシトシン、２−チオチミン、２−チオウラシル、２−チオウリジン、３−デアザアデニンもしくはその他同種のもの、３−デアザグアニン、３−メチルウラシル、３−メチルシチジン、３−ニトロピロール、４−アセチルチジン（４−ａｃｅｔｙｌｔｉｄｉｎｅ）、４−チオウラシル、４−チオウリジン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−アルキルシチジン（たとえば５−メチルシチジン）、５−アルキルウリジン（たとえばリボチミジン）、５−カルボキシメチルアミノメチルウリジン、５−ハロ置換ウラシルもしくはシトシン、５−ハロウリジン（たとえば５−ブロモウリジン）もしくは６−アザピリミジンもしくは６−アルキルピリミジン（たとえば６−メチルウリジン）、５−ヒドロキシメチルシトシン、５−メトキシアミノメチル−２−チオウリジン、５−メチル−２−チオウリジン、５−メチルアミノメチルウリジン、５−メチルカルボニルメチルウリジン（５−ｍｅｔｈｙｌｃａｒｂｏｎｙｈｎｅｔｈｙｌｕｒｉｄｉｎｅ）、５−メチルシトシン、５−メチルオキシウリジン、５−ニトロインドール、５−プロピニルシトシン、５−プロピニルウラシル、５−ウラシル、６−アゾシトシン、６−アゾチミン、６−アゾウラシル、６−メチルアデニン、６−メチルグアニン、７−デアザアデニン、７−デアザグアニン、７−メチルアデニン、７−メチルグアニン、７−メチルグアノシン、８−アミノアデニンもしくはグアニン、８−アザアデニン、８−アザグアニン、８−ハロアデニンもしくはグアニン、８−ヒドロキシルアデニンもしくはグアニン、８−チオアルキルアデニンもしくはグアニン、８−チオールアデニンもしくはグアニン、またはその他同種のものを含むが、これらに限定されない。
【０１３５】
本発明の方法および組成物において使用することができる他の例示的な修飾ヌクレオベースは、限定を伴うことなく、修飾ヌクレオベースを含み、三環式ピリミジン、例えば、フェノキサジンシチジン（１Ｈ−ピリミド［５，４−ｂ］［１，４］ベンゾオキサジン−２（３Ｈ）−オン）、フェノチアジンシチジン（１Ｈ−ピリミド［５，４−ｂ］［１，４］ベンゾチアジン−２（３Ｈ）−オン）、Ｇ−クランプ、例えば、置換フェノキサジンシチジン（たとえば９−（２−アミノエトキシ）−Ｈ−ピリミド［５，４−ｂ］［１，４］ベンゾオキサジン−２（３Ｈ）−オン）、カルバゾールシチジン（２Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−２−オン）、ピリドインドールシチジン（Ｈ−ピリド［３’，２’：４，５］ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−オン）を含む。修飾ヌクレオベースはまた、プリン塩基またはピリミジン塩基が他の複素環、たとえば７−デアザアデニン、７−デアザグアノシン、２−アミノピリジン、および２−ピリドンと交換されるものをも含んでいてもよい。
【０１３６】
ヌクレオベースのさらに例証となる例は、米国特許第３，６８７，８０８号明細書において開示されるもの、Ｔｈｅ  Ｃｏｎｃｉｓｅ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  Ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｐａｇｅｓ  ８５８−８５９，Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ，Ｊ．Ｉ．，ｅｄ．Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９０において開示されるもの、Ｅｎｇｌｉｓｃｈら、Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９１，３０，６１３において開示されるもの、およびＳａｎｇｈｖｉ，Ｙ．Ｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  １５，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐａｇｅｓ  ２８９−３０２，Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．ａｎｄ  Ｌｅｂｌｅｕ，Ｂ．，ｅｄ．，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，１９９３において開示されるものを含む。ある実施形態では、特定のヌクレオベース、たとえば、２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル、および５−プロピニルシトシンを含む５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン、ならびにＮ−２，Ｎ−６およびＯ−６置換プリンが、本発明のオリゴマーの結合親和性を増大させるのに有用である。５−メチルシトシン置換が、０．６〜１．２℃、核酸二重鎖安定性を増大させることが示され（Ｓａｎｇｈｖｉ，Ｙ．Ｓ．，Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．ａｎｄ  Ｌｅｂｌｅｕ，Ｂ．，ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，１９９３，ｐｐ．２７６−２７８）、現在、さらにより詳細には２’−Ｏ−メトキシエチル糖修飾と組み合わせられた場合に、好ましい塩基置換となっている。
【０１３７】
特定の例証となる実施形態では、多環式または複素環式化合物は、本発明のオリゴマーにおいてヌクレオベースとして使用することができる。これらの化合物を開示する例示的な米国特許は、米国特許第３，６８７，８０８号明細書ならびに米国特許第４，８４５，２０５号明細書；米国特許第５，１３０，３０２号明細書；米国特許第５，１３４，０６６号明細書；米国特許第５，１７５，２７３号明細書；米国特許第５，３６７，０６６号明細書；米国特許第５，４３２，２７２号明細書；米国特許第５，４３４，２５７号明細書；米国特許第５，４５７，１８７号明細書；米国特許第５，４５９，２５５号明細書；米国特許第５，４８４，９０８号明細書；米国特許第５，５０２，１７７号明細書；米国特許第５，５２５，７１１号明細書；米国特許第５，５５２，５４０号明細書；米国特許第５，５８７，４６９号明細書；米国特許第５，５９４，１２１号明細書、米国特許第５，５９６，０９１号明細書；米国特許第５，６１４，６１７号明細書；米国特許第５，６４５，９８５号明細書；米国特許第５，６４６，２６９号明細書；米国特許第５，７５０，６９２号明細書；米国特許第５，８３０，６５３号明細書；米国特許第５，７６３，５８８号明細書；米国特許第６，００５，０９６号明細書；米国特許第６，００７，９９２号明細書；および米国特許第５，６８１，９４１号明細書ならびに米国特許出願公開第２００３０１５８４０３号明細書、米国特許第６，０２８，１８３号明細書を含むが、これらに限定されず、これらのそれぞれは、その全体が参照によって本明細書において組み込まれる。
【０１３８】
特定の例証となる実施形態では、本発明のオリゴマーが、１つ以上の修飾ヌクレオベースを含む。ある実施形態では、ヌクレオベースはすべて、修飾され、他のある実施形態では、ヌクレオベースのいずれも、修飾されない。様々な実施形態では、オリゴマーが、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または１００％の修飾ヌクレオベースを含む。
【０１３９】
一実施形態では、本発明のオリゴマーが、たとえばヌクレアーゼ安定性のような特性を増強するためにオリゴマーの一方または両方の末端に一般に付加される、１つ以上の安定化基を含む。例示的な安定化基は、キャップ構造を含む。本明細書において使用される場合、用語「キャップ構造」または「末端キャップ成分」は、オリゴヌクレオチドのどちらかまたは両端に組み込まれた化学修飾を指す。これらの末端修飾は、末端核酸分子を有するオリゴマーをエキソヌクレアーゼ分解から保護することができ、細胞内の送達および／または局在化を支援することができる。キャップは、５’末端（５’−キャップ）または３’末端（３’−キャップ）に存在することができるまたは両方の末端に存在することができる。
【０１４０】
非限定的な実施例では、５’−キャップは、逆位脱塩基残基（成分）、４’，５’−メチレンヌクレオチド；１−（ベータ−Ｄ−エリスロフラノシル）ヌクレオチド、４’−チオヌクレオチド、炭素環式ヌクレオチド；１，５−アンヒドロヘキシトールヌクレオチド；Ｌ−ヌクレオチド；アルファ−ヌクレオチド；スレオ−ペントフラノシルヌクレオチド；非環式３’，４’−セコヌクレオチド；非環式３，４−ジヒドロキシブチルヌクレオチド；非環式３，５−ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、３’−３’−逆位ヌクレオチド成分；３’−３’−逆位脱塩基成分；３’−２’−逆位ヌクレオチド成分；３’−２’−逆位脱塩基成分；１，４−ブタンジオールホスフェート；３’−ホスホルアミデート；ヘキシルホスフェート；アミノヘキシルホスフェート；３’−ホスフェート；３’−ホスホロチオエート；ホスホロジチオエート；または架橋もしくは非架橋メチルホスホネート成分を含む。
【０１４１】
さらなる非限定的な実施例では、本発明の３’−キャップ構造は、４’，５’−メチレンヌクレオチド；１−（ベータ−Ｄ−エリスロフラノシル）ヌクレオチド；４’−チオヌクレオチド、炭素環式ヌクレオチド；５’−アミノ−アルキルホスフェート；１，３−ジアミノ−２−プロピルホスフェート、３−アミノプロピルホスフェート；６−アミノヘキシルホスフェート；１，２−アミノドデシルホスフェート；ヒドロキシプロピルホスフェート；１，５−アンヒドロヘキシトールヌクレオチド；Ｌ−ヌクレオチド；アルファ−ヌクレオチド；修飾塩基ヌクレオチド；ホスホロジチオエート；スレオ−ペントフラノシルヌクレオチド；非環式３’，４’−セコヌクレオチド；３，４−ジヒドロキシブチルヌクレオチド；３，５−ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、５’−５’−逆位ヌクレオチド成分；５’−５’−逆位脱塩基成分；５−ホスホルアミデート；５’−ホスホロチオエート；１，４−ブタンジオールホスフェート；５’−アミノ；架橋および／または非架橋５’ホスホルアミデート、ホスホロチオエート、および／またはホスホロジチオエート、架橋または非架橋メチルホスホネート、ならびに５’−メルカプト成分を含む。
【０１４２】
２．修飾糖
本発明は、オリゴマーが、修飾糖を含むおよび／または置換基を有する、１つ以上の修飾または非修飾ヌクレオシドおよびヌクレオチドを含むことができることを部分的に企図する。１つ以上の糖修飾または置換成分を含む本発明のオリゴマーは、ヌクレアーゼに対する抵抗性の増大、標的核酸に対する結合親和性の増大、および他の有益な生物学的特性を有することができる。
【０１４３】
特定の例証となる実施形態では、修飾糖は、炭素環式または非環式糖；１つ以上のそれらの２’、３’、または４’位に置換基を有する糖；糖の１つ以上の水素原子の代わりに置換成分を有する糖；および糖中の任意の他の２つの原子の間にリンケージを有する糖を含むが、これらに限定されない。
【０１４４】
好ましい実施形態では、本発明のオリゴマーが、２’位で修飾された１つ以上の糖または糖の任意の２つの原子の間に架橋を有するもの（糖は二環式となる）を含む。特定の例証となる実施形態では、本発明のオリゴマーにおいて使用するのに適した糖修飾または置換成分は、ＯＨ；Ｆ；Ｏ−、Ｓ−、もしくはＮ−アルキル；またはＯ−アルキル−Ｏ−アルキルから選択される糖置換基を含む化合物を含むが、これらに限定されず、アルキル、アルケニル、およびアルキニルが、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキルまたはＣ２〜Ｃ１０アルケニルおよびアルキニルであってもよい。例示的な修飾は、ＯＨ、ハロゲン、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、Ｎ−アルキル、Ｏ−アルケニル、Ｓ−アルケニル、Ｎ−アルケニル、Ｏ−アルキニル、Ｓ−アルキニル、Ｎ−アルキニル、Ｏ−アルキル−Ｏ−アルキル、アルカリル、アラルキル、Ｏ−アルカリル、Ｏ−アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、アルコキシアルコキシ、ジメチルアミノオキシエトキシ、アリル、およびＯ−アリルを含むが、これらに限定されず、アルキル、アルケニル、およびアルキニルが、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキルまたはＣ２〜Ｃ１０アルケニルおよびアルキニルとすることができる。
【０１４５】
ある例証となる実施形態では、好ましい糖修飾は、２−メトキシエトキシ（２’−Ｏ−メトキシエチル、２’−ＭＯＥ、もしくは２’−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３としても知られている）、２’−Ｏ−メチル（２’−Ｏ−ＣＨ３）、２’−フルオロ（２’−Ｆ）、または２’炭素原子に４’炭素原子をつなぐ架橋基を有する二環式糖修飾ヌクレオシドからなる群より選択され、例となる架橋成分が、−ＣＨ２−Ｏ−、−（ＣＨ２）２−Ｏ−、または−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏを含み、Ｒが、ＨまたはＣ１〜Ｃ１２アルキルである。
【０１４６】
２’−ＭＯＥ修飾糖は、ヌクレアーゼ抵抗性の増大およびヌクレオチド／ヌクレオシドに対する非常に高い結合親和性をもたらす。２’−ＭＯＥ置換についての結合親和性の増大は、Ｏ−メチル、Ｏ−プロピル、およびＯ−アミノプロピルのような多くの同様の２’修飾よりも大きくなり得る。１つまたは複数の２’−ＭＯＥ修飾または置換成分を含むオリゴマーはまた、遺伝子発現のインビボアンチセンス阻害剤としても使用されてきた（Ｍａｒｔｉｎ，Ｐ．，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，１９９５，７８，４８６−５０４；Ａｌｔｍａｎｎら、Ｃｈｉｍｉａ，１９９６，５０，１６８−１７６；Ａｌｔｍａｎｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．，１９９６，２４，６３０−６３７；およびＡｌｔｍａｎｎら、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９７，１６，９１７−９２６）。
【０１４７】
２’−糖置換基は、アラビノ（上）の位置またはリボ（下）の位置にあってもよい。ある２’−アラビノ修飾は、２’−Ｆである。同様の修飾はまた、オリゴマー上の他の位置、特に、３’末端ヌクレオシド上の糖の３’位でまたは２’−５’連結オリゴヌクレオチドおよび５’末端ヌクレオチドの５’位において行うこともできる。オリゴマーはまた、ペントフラノシル糖の代わりにシクロブチル成分のような糖ミメティックを有していてもよい。そのような修飾糖構造の調製を記載する例証となる米国特許は、米国特許第４，９８１，９５７号明細書；米国特許第５，１１８，８００号明細書；米国特許第５，３１９，０８０号明細書；米国特許第５，３５９，０４４号明細書；米国特許第５，３９３，８７８号明細書；米国特許第５，４４６，１３７号明細書；米国特許第５，４６６，７８６号明細書；米国特許第５，５１４，７８５号明細書；米国特許第５，５１９，１３４号明細書；米国特許第５，５６７，８１１号明細書；米国特許第５，５７６，４２７号明細書；米国特許第５，５９１，７２２号明細書；米国特許第５，５９７，９０９号明細書；米国特許第５，６１０，３００号明細書；米国特許第５，６２７，０５３号明細書；米国特許第５，６３９，８７３号明細書；米国特許第５，６４６，２６５号明細書；米国特許第５，６５８，８７３号明細書；米国特許第５，６７０，６３３号明細書；米国特許第５，７９２，７４７号明細書；および米国特許第５，７００，９２０号明細書を含むが、これらに限定されず、これらのそれぞれは、その全体が参照によって本明細書において組み込まれる。
【０１４８】
他の特定の実施形態では、本発明は、二環式であり、それによって糖のコンフォメーション配置（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  ｇｅｏｍｅｔｒｙ）を固定する糖修飾を部分的に企図する。二環式糖修飾は、本明細書において企図されるオリゴマーに対して、ヌクレアーゼに対する抵抗性の増大、標的核酸に対する結合親和性の増大、および他の有益な生物学的特性を与える。
【０１４９】
ある例証となる実施形態では、修飾二環式糖成分が、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’架橋、たとえばロックド核酸を含む。本明細書において使用される場合、用語「ロックド核酸」（ＬＮＡ）は、リボースの２’−Ｏを４’−Ｃにつなぐメチレン架橋を含有する、コンフォメーション的に制限されたオリゴヌクレオチド類似体を指す（Ｓｉｎｇｈら、Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９８，４：４５５−４５６を参照されたい）。ＬＮＡオリゴヌクレオチドは、上記に述べられる追加のメチレン架橋が、Ｃ３’−エンド（β−Ｄ−ＬＮＡ）またはＣ２’−エンド（α−Ｌ−ＬＮＡ）コンフォメーションのいずれかにリボース成分を固定する、１つ以上のヌクレオチド基礎単位を含有する。
【０１５０】
ＬＮＡおよびＬＮＡ類似体は、相補的なＤＮＡおよびＲＮＡとの非常に高い二重鎖熱安定性、３’−エキソヌクレアーゼ分解に対する安定性、ならびに好適な溶解度特性を示す。アデニン、シトシン、グアニン、５−メチルシトシン、チミン、およびウラシルのＬＮＡ類似体の合成、それらのオリゴマー化、ならびに核酸認識特性が、記載されている（Ｋｏｓｈｋｉｎら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４：３６０７−３６３０を参照されたい）。ミスマッチ配列に関する研究は、ＬＮＡが、対応する未修飾基準鎖と比較して、一般に改善された選択性でワトソン−クリック塩基対合則に従うことを示す。ＬＮＡを含有するアンチセンスオリゴヌクレオチドが記載されており（Ｗａｈｌｅｓｔｅｄｔら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，２０００，９７：５６３３−５６３８）、これらは、効果的であり、無毒性であった。さらに、ＬＮＡ／ＤＮＡコポリマーは、血清および細胞抽出物中で容易に分解されなかった。
【０１５１】
ＬＮＡは、高い熱的親和性（ｔｈｅｒｍａｌ  ａｆｆｉｎｉｔｙ）で、相補的なＤＮＡもしくはＲＮＡとまたは相補的なＬＮＡと二重鎖を形成する。ＬＮＡ媒介性のハイブリダイゼーションの普遍性は、非常に安定したＬＮＡ：ＬＮＡ二重鎖の形成によって強調された（Ｋｏｓｈｋｉｎら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９９８，１２０：１３２５２−１３２５３）。ＬＮＡ：ＬＮＡハイブリダイゼーションは、最も熱的に安定した核酸型二重鎖系であることが示され、ＬＮＡがＲＮＡを模倣する特徴は、二重鎖の段階で確立された。３つのＬＮＡ単量体（ＴまたはＡ）の導入により、ＤＮＡ相補体に対する融点の著しい増大がもたらされた。
【０１５２】
２’−アミノ−ＬＮＡ（Ｓｉｎｇｈら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５−１００３９）および２’−メチルアミノ−ＬＮＡの合成が記載されており、相補的なＲＮＡ鎖およびＤＮＡ鎖とのそれらの二重鎖の熱安定性が報告されている。ホスホロチオエート−ＬＮＡおよび２’−チオ−ＬＮＡの調製もまた、記載されている（Ｋｕｍａｒら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８：２２１９−２２２２）。
【０１５３】
他の修飾二環式糖成分は、ｘｙｌｏ糖アナログを含む（たとえば米国特許出願公開第２００３／００８２８０７号明細書を参照されたい）。二環式糖修飾ヌクレオシドのさらに例証となる実施形態は、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’を含むが、これに限定されない（米国特許出願公開第２００２／０１４７３３２号明細書および米国特許出願公開第２００３／０２０７８４１号明細書；米国特許第６，２６８，４９０号明細書および米国特許第６，６７０，４６１号明細書）。
【０１５４】
特定の例証となる実施形態では、本発明のオリゴマーのヌクレオベースはそれぞれ、修飾糖または置換糖を含む。ある実施形態では、オリゴマーが、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または１００％の修飾糖または置換糖を有するヌクレオチド／ヌクレオシドを含む。
【０１５５】
例証となる一実施形態では、本発明の抗ｍｉＲＮＡ分子が、２’−ＭＯＥ、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’、および４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’からなる群より選択される修飾糖または置換成分を有する、１つ以上のヌクレオチド／ヌクレオシドを含む。抗ｍｉＲＮＡ分子は、限定を伴うことなく全部同じ修飾糖もしくは置換成分または修飾糖もしくは置換成分の組み合わせを含むことができる。
【０１５６】
３．ヌクレオチド間／ヌクレオシド間リンケージ
本発明は、オリゴマーが、１つ以上の修飾ヌクレオチド間および／またはヌクレオシド間リンケージを含むことができることを部分的に企図する。１つ以上の修飾ヌクレオチド間および／またはヌクレオシド間リンケージを含む本発明のオリゴマーは、ヌクレアーゼに対する抵抗性の増大、標的核酸に対する結合親和性の増大、および他の有益な生物学的特性を有することができる。本明細書において使用される場合、用語「修飾ヌクレオチド間リンケージ」は、それらのヌクレオシド間骨格中にリン原子を含む、ヌクレオシドの間のリンケージを指す。本明細書において使用される場合、用語「修飾ヌクレオシド間リンケージ」は、それらのヌクレオシド間骨格中にリン原子を欠く、ヌクレオシドの間のリンケージを指す。
【０１５７】
特定の例証となる実施形態では、５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または１００％のヌクレオチド間および／またはヌクレオシド間リンケージが、本明細書において議論されるように、修飾されてもよい。
【０１５８】
ある例証となる実施形態では、オリゴマーが、たとえば細胞の取込みの増強、他のオリゴヌクレオチドまたは核酸標的に対する親和性の増強、およびヌクレアーゼに対する抵抗性の増大のような望ましい特性のために、天然に存在する形態よりも選択されることが多い、修飾された、すなわち、天然に存在しないヌクレオシド間リンケージを含む。
【０１５９】
例証となる一実施形態では、オリゴマーが、１つ以上のホスホロチオエートヌクレオチド間リンケージを含む。他の例証となる修飾ヌクレオチド間リンケージは、たとえばキラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、３’−アルキレンホスホネート、５’−アルキレンホスホネート、およびキラルホスホネートを含むメチルおよび他のアルキルホスホネート、ホスフィネート、３’−アミノホスホルアミデートおよびアミノアルキルホスホルアミデートを含むホスホルアミデート、チオノホスホルアミデート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、通常の３’−５’リンケージを有するセレノホスフェートおよびボラノホスフェート、これらの２’−５’連結アナログ、ならびに１つ以上のヌクレオチド間リンケージが、３’〜３’、５’〜５’、または２’〜２’リンケージである逆方向の極性を有するものを含む。
【０１６０】
ヌクレオチド間リンケージの調製を教示する例証となる米国特許は、米国特許第３，６８７，８０８号明細書；米国特許第４，４６９，８６３号明細書；米国特許第４，４７６，３０１号明細書；米国特許第５，０２３，２４３号明細書、米国特許第５，１７７，１９６号明細書；米国特許第５，１８８，８９７号明細書；米国特許第５，２６４，４２３号明細書；米国特許第５，２７６，０１９号明細書；米国特許第５，２７８，３０２号明細書；米国特許第５，２８６，７１７号明細書；米国特許第５，３２１，１３１号明細書；米国特許第５，３９９，６７６号明細書；米国特許第５，４０５，９３９号明細書；米国特許第５，４５３，４９６号明細書；米国特許第５，４５５，２３３号明細書；米国特許第５，４６６，６７７号明細書；米国特許第５，４７６，９２５号明細書；米国特許第５，５１９，１２６号明細書；米国特許第５，５３６，８２１号明細書；米国特許第５，５４１，３０６号明細書；米国特許第５，５５０，１１１号明細書；米国特許第５，５６３，２５３号明細書；米国特許第５，５７１，７９９号明細書；米国特許第５，５８７，３６１号明細書；米国特許第５，１９４，５９９号明細書；米国特許第５，５６５，５５５号明細書；米国特許第５，５２７，８９９号明細書；米国特許第５，７２１，２１８号明細書；米国特許第５，６７２，６９７号明細書、米国特許第５，６２５，０５０号明細書、米国特許第５，４８９，６７７号明細書、および米国特許第５，６０２，２４０号明細書を含むが、これらに限定されず、これらのそれぞれは、その全体が参照によって本明細書において組み込まれる。
【０１６１】
特定の例証となる実施形態では、本発明のオリゴマーが、リン原子を含まない１つ以上の修飾ヌクレオシド間リンケージを含む。
【０１６２】
その中にリン原子を含まない例示的な修飾ヌクレオシド間リンケージは、骨格を有し、短鎖アルキルもしくはシクロアルキルヌクレオシド間リンケージ、混合されたヘテロ原子およびアルキルもしくはシクロアルキルヌクレオシド間リンケージ、または１つ以上の短鎖ヘテロ原子もしくは複素環式ヌクレオシド間リンケージを含む。さらなる修飾ヌクレオシド間リンケージは、モルホリノリンケージ（部分的にヌクレオシドの糖部分から形成される）；シロキサンリンケージ；スルフィド、スルホキシド、およびスルホンリンケージ；ホルムアセチルおよびチオホルムアセチルリンケージ；メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチルリンケージ；リボアセチルリンケージ；アルケン含有リンケージ；サルファナート（ｓｕｌｆａｎａｔｅ）リンケージ；メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノリンケージ；スルホネートおよびスルホンアミドリンケージ；アミドリンケージ；ならびに混合性のＮ、Ｏ、Ｓ、およびＣＨ２構成部分を有する他のものを含む。
【０１６３】
上記の非リン含有オリゴヌクレオシドの調製を教示する例証となる米国特許は、米国特許第５，０３４，５０６号明細書；米国特許第５，１６６，３１５号明細書；米国特許第５，１８５，４４４号明細書；米国特許第５，２１４，１３４号明細書；米国特許第５，２１６，１４１号明細書；米国特許第５，２３５，０３３号明細書；米国特許第５，２６４，５６２号明細書；米国特許第５，２６４，５６４号明細書；米国特許第５，４０５，９３８号明細書；米国特許第５，４３４，２５７号明細書；米国特許第５，４６６，６７７号明細書；米国特許第５，４７０，９６７号明細書；米国特許第５，４８９，６７７号明細書；米国特許第５，５４１，３０７号明細書；米国特許第５，５６１，２２５号明細書；米国特許第５，５９６，０８６号明細書；米国特許第５，６０２，２４０号明細書；米国特許第５，６１０，２８９号明細書；米国特許第５，６０２，２４０号明細書；米国特許第５，６０８，０４６号明細書；米国特許第５，６１０，２８９号明細書；米国特許第５，６１８，７０４号明細書；米国特許第５，６２３，０７０号明細書；米国特許第５，６６３，３１２号明細書；米国特許第５，６３３，３６０号明細書；米国特許第５，６７７，４３７号明細書；米国特許第５，７９２，６０８号明細書；米国特許第５，６４６，２６９号明細書、および米国特許第５，６７７，４３９号明細書を含むが、これらに限定されず、これらのそれぞれは、その全体が参照によって本明細書において組み込まれる。
【０１６４】
一実施形態では、本発明の抗ｍｉＲＮＡが、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、アルキルホスホネート、ホスフィネート、ホスホルアミデート、チオノホスホルアミデート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、セレノホスフェート、ボラノホスフェート、モルホリノ、シロキサン、スルフィド、スルホキシド、スルホン、ホルムアセチル、チオホルムアセチル、メチレンホルムアセチル、リボアセチル、アルケン含有骨格、スルファメート、メチレンイミノ、メチレンヒドラジノ、スルホネート、スルホンアミド、またはアミドからなる群より選択される、１つ以上の修飾ヌクレオチド間／ヌクレオシド間リンケージを含む。
【０１６５】
好ましい実施形態では、修飾ヌクレオチド間リンケージは、ホスホロチオエートリンケージである。
【０１６６】
４．ミメティック
オリゴマーはまた、オリゴヌクレオチドミメティックをも含むことができる。本明細書において使用される場合、用語「ミメティック」は、フラノース環のみまたはフラノース環およびヌクレオチド間リンケージの両方が新規な基と交換されるオリゴマーを指し、たとえばモルホリノ環とのフラノース環のみの交換はまた、糖代用物とも当技術分野において呼ばれる。複素環式塩基成分または修飾複素環式塩基成分は、適切な標的核酸とのハイブリダイゼーションのために維持される。
【０１６７】
オリゴヌクレオチドミメティックは、ペプチド核酸（ＰＮＡ）およびシクロヘキセニル核酸のようなオリゴマーを含むことができる（ＣｅＮＡとして知られている、Ｗａｎｇら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２０００，１２２，８５９５−８６０２を参照されたい）。
【０１６８】
オリゴヌクレオチドミメティックの調製を教示する例証となる米国特許は、米国特許第５，５３９，０８２号明細書；米国特許第５，７１４，３３１号明細書；および米国特許第５，７１９，２６２号明細書を含むが、これらに限定されず、これらのそれぞれは、その全体が参照によって本明細書において組み込まれる。
【０１６９】
他の種類のオリゴヌクレオチドミメティックは、ホスホノモノエステル核酸と呼ばれ、骨格中にリン基を組み込んでいる。この種類のオリゴヌクレオチドミメティックは、遺伝子発現を阻害する分野において、有用な物理的、生物学的、および薬理学的特性を有することが報告されている（アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、センスオリゴヌクレオチド、および三重鎖形成オリゴヌクレオチド）。フラノシル環がシクロブチル成分と交換されている他のオリゴヌクレオチドミメティックが、報告されている。
【０１７０】
５．コンジュゲート
本発明は、少なくとも１つのＭＧＢおよび１つまたは複数の共有結合コンジュゲート成分を含むオリゴマーを部分的に企図する。本明細書において使用される場合、用語「コンジュゲート成分」は、親油性成分、例えば、コレステロール、脂質、リン脂質、フォレート、ポリアミン、ポリアミド、ポリエチレングリコール、ポリエーテル、オリゴマーの薬力学的特性を増強する基、ならびにオリゴマーの薬物動態学的特性を増強する基を含むが、これらに限定されない親油性分子を指す。
【０１７１】
コンジュゲート成分は、本明細書において別記されるように、リンカーを介してオリゴマーの１つ以上のオリゴマー単位に共有結合されてもよく、または官能基、たとえば第一級もしくは第二級ヒドロキシル基を介してオリゴマーの１つ以上のオリゴマー単位に直接共有結合されてもよい。様々な実施形態では、同じまたは異なるコンジュゲート成分のうちの１つ以上が、オリゴマーに共有結合することができる。コンジュゲート成分は、オリゴマーの５’末端および／もしくは３’末端にならびに／またはオリゴマーの内部オリゴマー単位にコンジュゲートすることができる。好ましい実施形態では、コンジュゲート成分が、オリゴマーの３’末端の１つ以上の塩基にコンジュゲートされる。
【０１７２】
特定の例証となる実施形態では、本発明のオリゴマーにおいて使用するのに適したコンジュゲート成分は、コレステロール成分（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８９，８６，６５５３−６５５６）、コール酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ａｆｉｅｄ  Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．，１９９４，４，１０５３−１０６０）、チオエーテル、たとえばヘキシル−５−トリチルチオール（Ｍａｎｏｈａｒａｎら、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９９２，６６０，３０６−３０９；Ｍａｎｏｈａｒａｎら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．，１９９３，３，２７６５−２７７０）、チオコレステロール（Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１９９２，２０，５３３−５３８）、脂肪鎖、たとえばドデカンジオールもしくはウンデシル残基（Ｓａｉｓｏｎ−Ｂｅｈｍｏａｒａｓら、ＥＭＢＯ  Ｊ．，１９９１，１０，１１１１−１１１８；Ｋａｂａｎｏｖら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，１９９０，２５９，３２７−３３０；Ｓｖｉｎａｒｃｈｕｋら、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，１９９３，７５，４９−５４）、リン脂質、たとえばジ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロールもしくはトリエチルアンモニウム１，２−ジ−Ｏ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロ−３−Ｈ−ホスホネート（Ｍａｎｏｈａｒａｎら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６，３６５１−３６５４；Ｓｈｅａら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１９９０，１８，３７７７−３７８３）、ポリアミンもしくはポリエチレングリコール鎖（Ｍａｎｏｈａｒａｎら、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９５，１４，９６９−９７３）、またはアダマンタン酢酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６，３６５１−３６５４）、パルミチル成分（Ｍｉｓｈｒａら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１９９５，１２６４，２２９−２３７）、またはオクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ−カルボニル−オキシコレステロール成分（Ｃｒｏｏｋｅら、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，１９９６，２７７，９２３−９３７）のような脂質成分を含むが、これらに限定されない。
【０１７３】
ある例証となる実施形態では、オリゴマーが、親油性成分にコンジュゲートされる。
【０１７４】
例示的な親油性成分は、脂質、コレステロール、オレイル、レチニル、コレステリル残基、コール酸、アダマンタン酢酸、１−ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３−ビス−Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３−プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３−（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３−（オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチル、またはフェノキサジンを含むが、これらに限定されない。
【０１７５】
一実施形態では、親油性成分が、コレステロールである。
【０１７６】
６．副溝結合成分
本発明は、本明細書において別記されるように、オリゴマーにコンジュゲートされた１つまたは複数の同じまたは異なる副溝結合成分（ＭＧＢ）を含むオリゴマーを部分的に企図する。様々な適した副溝結合剤は、文献中に記載されている。たとえばＷｅｍｍｅｒ，Ｄ．Ｅ．，ａｎｄ  Ｄｅｒｖａｎ  Ｐ．Ｂ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，７：３５５  ３６１（１９９７）；Ｗａｌｋｅｒ，Ｗ．Ｌ．，Ｋｏｐｋａ，Ｊ．Ｌ．ａｎｄ  Ｇｏｏｄｓｅｌｌ，Ｄ．Ｓ．，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，４４：３２３  ３３４（１９９７）；Ｚｉｍｍｅｒ，Ｃ  ＆  Ｗａｈｎｅｒｔ，Ｕ．Ｐｒｏｇ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏ．４７：３１  １１２（１９８６）；およびＲｅｄｄｙ，Ｂ．Ｓ．Ｐ．，Ｄｏｎｄｈｉ，Ｓ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｌｏｗｎ，Ｊ．Ｗ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒａｐ．，８４：１  １１１（１９９９）を参照されたい。いかなる特定の理論によっても束縛されることを望むものではないが、１つ以上のＭＧＢにコンジュゲートされたオリゴマーは、ＭＧＢにコンジュゲートされていないまたは連結されていないオリゴマーと比較して、活性、細胞の分布、組織分布、および／もしくは器官分布またはオリゴヌクレオチドの細胞の取込み、組織取込み、もしくは器官取込み、標的核酸に対するハイブリダイゼーション親和性、標的核酸に対するハイブリダイゼーション特異性、細胞の取込み、ヌクレアーゼに対する抵抗性を実質的に増大させ、かつ治療上の毒性を実質的に減少させる。
【０１７７】
本明細書において使用される場合、語句「薬力学的特性を増強する基」は、核の侵入を改善するならびに／またはオリゴマーと標的核酸、たとえばｍＲＮＡ、ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡとの間の配列特異的ハイブリダイゼーションの強度および特異性を増大させるＭＧＢを指す。本明細書において使用される場合、語句「薬物動態学的特性を増強する基」は、所望の細胞内コンパートメント、代謝、または排出で、細胞、組織、および／または器官分布におけるオリゴマー取込みを改善するＭＧＢを指す。
【０１７８】
ＭＧＢは、オリゴマーの所望の機能が損なわれない限り、オリゴマーの５’末端および／もしくは３’末端にならびに／またはオリゴマーの１つ以上の内部オリゴマー単位にコンジュゲートすることができる。一実施形態では、本明細書において使用される場合、用語「所望の機能」が、複数の細胞型、組織、または器官における１つ以上、たとえば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれを超えるＲＮＡの発現を減少させるオリゴマーの能力を指す。
【０１７９】
特定の実施形態では、本発明によって企図されるオリゴマーが、オリゴマーの５’末端にコンジュゲートされたＭＧＢ、オリゴマーの３’末端にコンジュゲートされたＭＧＢ、およびオリゴマーの内部単位にコンジュゲートされた１つ以上のＭＧＢを含む。ある実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれを超えるＭＧＢが、オリゴマーにコンジュゲートされてもよい。他の実施形態では、オリゴマーの約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１００％のオリゴマー単位が、ＭＧＢにコンジュゲートされる。
【０１８０】
好ましい一実施形態では、ＭＧＢが、オリゴマーの５’末端にコンジュゲートされる。他の好ましい実施形態では、ＭＧＢが、オリゴマーの３’末端にコンジュゲートされる。他のさらに好ましい実施形態では、ＭＧＢが、オリゴマーの５’末端にコンジュゲートされ、同じタイプまたは異なるタイプのＭＧＢが、オリゴマーの３’末端にコンジュゲートされる。
【０１８１】
特定の例証となる実施形態では、オリゴマーにコンジュゲートすることができるＭＧＢが、ネトロプシン、ジスタマイシン、およびレキシトロプシン、ミトラマイシン、クロモマイシンＡ３、オリボマイシン、アントラマイシン、シビロマイシンのような天然に存在する化合物ならびにさらなる関連する抗生物質および合成誘導体を含むが、これらに限定されない。あるビス第四級（ｂｉｓｑｕａｒｔｅｒｎａｒｙ）アンモニウム複素環式化合物、ペンタミジン、スチルバミジン、およびベレニル（ｂｅｒｅｎｉｌ）のようなジアリールアミジン、ＣＣ−１０６５ならびに関連するピロロインドールおよびインドールポリペプチド、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３２５８、４’−６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）ならびに天然に存在するまたは合成アミノ酸からなる多くのオリゴペプチドが、副溝結合剤化合物である。
【０１８２】
好ましい例証となる実施形態では、オリゴマーにコンジュゲートすることができるＭＧＢが、ネトロプシン、ジスタマイシン、およびレキシトロプシン、ミトラマイシン、クロモマイシンＡ３、オリボマイシン、アントラマイシン、ならびにシビロマイシンからなる群より選択される。
【０１８３】
特定の好ましい実施形態では、ＭＧＢ成分が、１，２−ジヒドロ−（３Ｈ）−ピロロ［３，２−ｅ］インドール−７−カルボキシレート（ＤＰＩ）、Ｎ−３−カルバモイル１，２−ジヒドロ−（３Ｈ）−ピロロ［３，２−ｅ］インドール−７−カルボキシレート（ＣＤＰＩ）の多量体、およびＮ−メチルピロール−４−カルボキシ−２−アミド（ＭＰＣ）の多量体を含む。特に好ましいＭＧＢ成分は、ＤＰＩ（１−１０）、ＣＤＰＩ（１−１０）、およびＭＰＣ（１−１０）を含む。より好ましい実施形態では、ＭＧＢが、ＣＤＰＩ（１−３）またはＭＰＣ（１−３）を含む。ある好ましい実施形態では、ＭＧＢが、ＣＤＰＩ３またはＣＤＰＩ４を含む。
【０１８４】
ＭＧＢを記載する代表的な米国特許は、米国特許第５，８０１，１５５号明細書；米国特許第６，０８４，１０２号明細書；米国特許第６，３１２，８９４号明細書；米国特許第６，４９２，３４６号明細書；および米国特許第７，２０５，１０５号明細書を含むが、これらに限定されず、これらのそれぞれは、その全体が参照によって本明細書において組み込まれる。
【０１８５】
７．リンカー
本発明は、オリゴマーにコンジュゲートされた、１つまたは複数の同じまたは異なる機能的成分、たとえばＭＧＢ、コレステロールを含むオリゴマーを部分的に企図する。機能的成分は、オリゴマーの様々な位置に直接またはリンカーもしくは連結基を介して共有結合することができる。本明細書において使用される場合、用語「リンカー」および「連結基」ならびにその等価物は、機能的成分、たとえばＭＧＢ、コレステロールにオリゴマーの一部分を共有結合するために使用される分子を指す。一般に、連結基は、直線状もしくは非環式部分、環式部分、芳香環、またはその組み合わせを含むことができる。
【０１８６】
特定の例証となる一実施形態では、連結基が、約１〜約２００の主鎖原子、約１〜約１００の主鎖原子、約１〜約５０の主鎖原子、約１〜約３０の主鎖原子、または約１〜約１５の主鎖原子を有することができる。本明細書において使用される場合、用語「主鎖原子」は、連続的な線で結合したオリゴマーと機能的成分との間の原子のみを指し、すべての環原子を含むが、いかなるペンダント原子もペンダント基も含まない。一実施形態では、主鎖原子が、Ｃ、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｐ、およびＳｉからなる群より選択される。
【０１８７】
例証となる一実施形態では、連結基が、Ｃ、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｐ、およびＳｉから選択される約３〜１００の主鎖原子を有する二価または三価リンカーとすることができる。他の例証となる実施形態では、リンカーが、分岐脂肪鎖、ヘテロアルキル鎖、１つ以上の置換環構造、またはその組み合わせを含む。リンカーは、一般に、コンジュゲーションを達成するための官能基を有する。分子をリンカーに共有結合するために使用される官能基の例証となる例は、ヒドロキシル、アミノ、アルコキシ、カルボキシ、ベンジル、フェニル、ニトロ、チオール、チオアルコキシ、ホスフェート、ホスホニウムイオン、ハロゲン、アルキル、アリール、アルケニル、およびアルキニル基を含むが、これらに限定されない。
【０１８８】
好ましい例証となる実施形態では、連結基が、−Ｏ（ＣＨ２）６ＮＨ−、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）Ｏ（ＣＨ２）６ＮＨ−；−ＯＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨＣＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−、−ＨＮ（ＣＨ２）５ＣＯ−；−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）Ｏ（ＣＨ２）４ＮＨ−；−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）（ＯＣＨ２ＣＨ２）６ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）Ｏ（ＣＨ２）６ＮＨ−；−（ＣＨ２）５ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）−、およびヒドロキシ｛［５−（ヒドロキシメチル）−１−メチルピロリジン−３イル］オキシ｝オキソホスホニウムからなる群より選択される式を含む。
【０１８９】
特定の好ましい実施形態では、連結基が、ヒドロキシ｛［５−（ヒドロキシメチル）−１−メチルピロリジン−３イル］オキシ｝オキソホスホニウム；−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）Ｏ（ＣＨ２）４ＮＨ−；−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）（ＯＣＨ２ＣＨ２）６ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）Ｏ（ＣＨ２）６ＮＨ−；および−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）Ｏ（ＣＨ２）６ＮＨ−からなる群より選択される式を含む。
【０１９０】
ある好ましい実施形態では、連結基が、式−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）Ｏ（ＣＨ２）６ＮＨ−を含む。
【０１９１】
オリゴマーに対してリンカーを通してＭＧＢおよび他の機能的成分を付加するのに適した方法を記載する例証となる米国特許は、米国特許第５，５１２，６７７号明細書；米国特許第５，４１９，９６６号明細書；米国特許第５，６９６，２５１号明細書；米国特許第５，５８５，４８１号明細書；米国特許第５，８０１，１５５号明細書；米国特許第５，９４２，６１０号明細書；および米国特許第５，７３６，６２６号明細書を含むが、これらに限定されない。
【０１９２】
Ｊ．組成物および処方物
本発明に従って使用されるオリゴマーは、固相オリゴヌクレオチド合成のよく知られているインビトロにおける技術を通して好都合にかつ慣例的に作製することができる。そのような合成のための機器は、たとえばＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、Ｃａｌｉｆ．）を含むいくつかのベンダーによって販売されている。当技術分野において知られているそのような合成のためのあらゆる他の手段が、さらにまたはその代わりに用いられてもよい。
【０１９３】
下記に詳細に記載されるように、オリゴマーを含む本発明の組成物は、たとえば、たとえばリポソーム、エマルション、マイクロエマルション、および受容体標的化分子のような他の分子、分子構造、または化合物の混合物と混ぜる、カプセル化する、コンジュゲートする、または他の方法で会合させることによって、特別に処方することができる。処方された組成物は、以下のものに適合したものを含む固体形態または液体形態での処置を必要とする被験体に対する投与に適している。（１）経口投与、たとえば飲薬（水性もしくは非水性溶液もしくは懸濁液）、錠剤、たとえば口腔、舌下、および全身的吸収を目的にするもの、ボーラス、粉末、顆粒、舌に対する適用のためのパスタ；（２）たとえば滅菌溶液もしくは懸濁液または徐放性処方物としての、たとえば皮下、筋肉内、全身的（たとえば静脈内、動脈内、血管内）、または硬膜外注射による非経口投与；（３）たとえば、皮膚に塗布されるクリーム剤、軟膏剤、または制御放出パッチもしくはスプレーとしての局所適用；（４）たとえばペッサリー、クリーム剤、もしくは泡沫のように、膣内にもしくは直腸内に；（５）舌下に；（６）眼に；（７）経皮的に；または（８）吸入剤もしくはエアロゾルとして鼻に。
【０１９４】
本明細書において使用される場合、用語「有効量」は、所望の治療上のまたは予防的な結果を実現するのに必要な投薬量および時間で有効である、オリゴマーの量を指す。有効量は、治療有効量および予防有効（予防）量を含む。有効量は、疾患状態、個体の年齢、性別、および体重、ならびに１つ以上の抑制因子および／または活性化因子が個体において所望の応答を誘発する能力のような要因に従って変化してもよい。
【０１９５】
オリゴマーの「治療有効量」はまた、他のところで開示されるように、治療的に有益な効果がオリゴマーのいかなる毒性または有害作用にも勝る量でもある。用語「治療有効量」は、哺乳動物（たとえば処置を必要とする被験体）における１つ以上の細胞、組織、または器官における活性および／またはＲＮＡ発現の増大に関連する疾患、障害、または状態を軽減させる、阻害する、予防する、または処置するのに有効な量を含む。たとえば、オリゴマーの治療有効量は、オリゴマーの投与前に観察される器官機能に比べて、器官機能または疾患症状の回復についての生理学的指標（たとえば肝機能、肺機能、腎臓機能）において、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、または１００％の改善を引き起こすのに十分な量とすることができる。処置されている被験体が癌を有する、特定の実施形態では、腫瘍体積、転移、または循環癌細胞の減少が、治療有効量を示すのに適しているであろう。
【０１９６】
「予防有効量」は、所望の予防的な結果を実現するのに必要な投薬量および時間で有効である、オリゴマーの量を指す。典型的に、必ずしもということではないが、予防用量が疾患の初期ステージ前にまたはその時に被験体において使用されるので、予防有効量は、治療有効量未満となる。
【０１９７】
本明細書において使用される場合、用語「薬学的に許容され得るキャリア」は、薬学的に許容され得る物質、組成物またはビヒクル、例えば、液体または固体充填剤、希釈剤、賦形剤、製造補助剤（ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  ａｉｄ）（たとえば滑沢剤、滑石、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、もしくはステアリン酸亜鉛、またはステアリン酸）、またはある器官もしくは身体の一部分から他の器官もしくは身体の一部分まで、対象の化合物を運ぶもしくは輸送することに関与する溶媒カプセル化物質を指す。それぞれのキャリアは、処方物の他の成分と適合性であり、かつ処置されている被験体に悪影響を及ぼさないという意味で「許容され得る」ものでなければならない。薬学的に許容され得るキャリアとして役割を果たすことができる物質のいくつかの例は、（１）ラクトース、グルコース、およびスクロースのような糖；（２）コーンスターチおよびジャガイモデンプンのようなデンプン；（３）セルロースならびにカルボキシルメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、および酢酸セルロースのようなその誘導体；（４）トラガント末；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）滑石；（８）ココアバターおよび坐剤のろうのような賦形剤；（９）ラッカセイ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、およびダイズ油のような油；（１０）プロピレングリコールのようなグリコール；（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコールのようなポリオール；（１２）オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルのようなエステル；（１３）寒天；（１４）水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムのような緩衝剤；（１５）アルギン酸；（１６）発熱物質不含水；（１７）等張食塩水；（１８）リンガー溶液；（１９）エチルアルコール；（２０）ｐＨ緩衝化溶液；（２１）ポリエステル、ポリカーボネート、および／またはポリ酸無水物；（２２）薬学的に許容され得る細胞培養培地；ならびに（２３）医薬処方物中に用いられる他の無毒性で適合性の物質を含む。
【０１９８】
本発明のオリゴマーを含有する水性組成物の調製もまた、企図される。典型的に、そのような組成物は液体溶液または懸濁液のいずれかとして注射液として調製される。注射前の、液体中での溶解または懸濁に適している固体形態もまた、調製することができる。
【０１９９】
ある実施形態は、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチレート（ｎａｐｔｈｙｌａｔｅ）、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩、およびラウリル硫酸塩、ならびにその他同種のものを含む「薬学的に許容され得る塩」を含む（たとえばＢｅｒｇｅら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１９７７；６６：１−１９を参照されたい）。さらなる例は、アンモニアを有するまたは薬学的に許容され得る有機第一級、第二級、もしくは第三級アミンを有する薬学的に許容され得る金属カチオンの水酸化物、炭酸塩、または重炭酸塩のような塩基付加塩を含む。代表的なアルカリ塩またはアルカリ土類塩は、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、およびアルミニウム塩、ならびにその他同種のものを含む。塩基付加塩の形成に有用な代表的な有機アミンは、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、およびその他同種のものを含む（たとえばＢｅｒｇｅら、前掲を参照されたい）。
【０２００】
他の実施形態では、治療効果をもたらすのに必要とされる単一剤形中の活性成分（たとえばオリゴマー）の量が、約０．１％の活性成分、約１％の活性成分、約５％の活性成分、約１０％の活性成分、約１５％の活性成分、約２０％の活性成分、約２５％の活性成分、約３０％の活性成分、約３５％の活性成分、約４０％の活性成分、約４５％の活性成分、約５０％の活性成分、約５５％の活性成分、約６０％の活性成分、約６５％の活性成分、約７０％の活性成分、約７５％の活性成分、約８０％の活性成分、約８５％の活性成分、約９０％の活性成分、もしくは約９５％の活性成分、またはそれ以上であり、そのような値の範囲をすべて含む。
【０２０１】
ある実施形態では、本発明の組成物が、シクロデキストリンおよび誘導体、セルロース、リポソーム、エマルション、マイクロエマルション、ミセル形成剤、たとえば胆汁酸、ならびにポリマーキャリア、たとえばポリエステルおよびポリ酸無水物からなる群より選択される賦形剤；ならびに本発明の化合物を含む。ある実施形態では、前述の組成物が、本発明のオリゴマーを経口で生物学的に利用可能（ｏｒａｌｌｙ  ｂｉｏａｖａｉｌａｂｌｅ）にする。
【０２０２】
吸入による投与については、本発明に従って使用するためのオリゴマーは、加圧パックまたは噴霧器および適した噴射剤、たとえば、限定を伴うことなく、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラ−フルオロエタン、または二酸化炭素を使用して、エアロゾルスプレーの形態で好都合に送達することができる。加圧エアロゾルの場合には、投薬単位は、測定量を送達するためのバルブを提供することによって制御されてもよい。たとえば、化合物およびラクトースまたはデンプンのような適した粉末基剤の粉末ミックスを含有する、吸入器または注入器で使用するためのゼラチンのカプセルおよびカートリッジが、処方されてもよい。
【０２０３】
経口投与に適した本発明の組成物は、カプセル、カシェ剤、丸剤、錠剤、ロゼンジ（風味付けされた基剤（ｂａｓｉｓ）、通常、スクロースおよびアラビアゴムもしくはトラガントを使用）、粉末、顆粒の形態または水性もしくは非水性液体中で溶液もしくは懸濁液としてまたは水中油型もしくは油中水型液体エマルションとしてまたはエリキシル剤もしくはシロップとしてまたは香錠（ゼラチンおよびグリセリンもしくはスクロースおよびアラビアゴムのような不活性基剤を使用）のようなおよび／または洗口剤ならびにその他同種としてであり得、それぞれ、活性成分として本発明の所定の量の化合物を含有する。本発明の組成物はまた、ボーラス、舐剤、またはパスタとして投与されてもよい。
【０２０４】
経口投与に適した本発明の組成物についての固体剤形（カプセル、錠剤、丸剤、糖衣剤、粉末、顆粒、トローチ、およびその他同種のもの）において、活性成分は、１つ以上の、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウムのような薬学的に許容され得るキャリアならびに／または以下のもののいずれかと混合される：（１）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、および／もしくはケイ酸のような充填剤もしくはエキステンダー；（２）たとえばカルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、および／もしくはアラビアゴムのような結合剤；（３）グリセロールのような保水剤；（４）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、ある種のシリケート、および炭酸ナトリウムのような崩壊剤；（５）パラフィンのような溶解遅延剤；（６）四級アンモニウム化合物のような吸収促進剤ならびにポロキサマーおよびラウリル硫酸ナトリウムのような界面活性剤；（７）たとえばセチルアルコール、モノステアリン酸グリセロール、および非イオン性界面活性剤のような湿潤剤；（８）カオリンおよびベントナイト粘土のような吸収剤；（９）滑石、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸、およびその混合物のような滑沢剤；（１０）着色剤；ならびに（１１）クロスポビドンもしくはエチルセルロースのような制御放出作用物質。カプセル、錠剤、および丸剤の場合には、医薬組成物はまた、緩衝剤を含んでいてもよい。同様のタイプの固体組成物もまた、高分子量ポリエチレングリコールおよびその他同種のものと同様に、ラクトースまたは乳糖のような賦形剤を使用して、軟性の殻のまたは硬性の殻のゼラチンカプセルにおいて充填剤として用いられてもよい。
【０２０５】
圧縮錠剤は、結合剤（たとえばゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性希釈剤、保存剤、崩壊剤（たとえばデンプングリコール酸ナトリウムまたは架橋カルボキシルメチルセルロースナトリウム）、表面活性剤または分散剤を使用して調製されてもよい。
【０２０６】
本発明の化合物の経口投与のための液体剤形は、薬学的に許容され得るエマルション、マイクロエマルション、溶液、懸濁液、シロップ剤、およびエリキシル剤を含む。活性成分に加えて、液体剤形は、たとえば水または他の溶媒のような、当技術分野において一般に使用される不活性希釈剤、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（特に綿実油、ピーナッツ油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにその混合物のような可溶化剤ならびに乳化剤を含有してもよい。
【０２０７】
不活性希釈剤に加えて、経口組成物はまた、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味料、香味料、着色料、芳香剤、ならびに防腐剤のような補助剤を含むこともできる。
【０２０８】
懸濁液は、活性化合物に加えて、たとえばエトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶セルロース、アルミニウムメタヒドロオキシド（ａｌｕｍｉｎｕｍ  ｍｅｔａｈｙｄｒｏｘｉｄｅ）、ベントナイト、寒天およびトラガント、ならびにその混合物のような懸濁化剤を含有してもよい。
【０２０９】
直腸投与または膣投与のための本発明の組成物は、坐剤として提供されてもよく、これは、たとえばココアバター、ポリエチレングリコール、坐剤ワックス、またはサリチレートを含む１つ以上の適した非刺激性の賦形剤またはキャリアと本発明の１つ以上の化合物を混合することによって調製されてもよく、また、これは、室温で固体であるが体温では液体となり、そのため、直腸または膣腔中で融解し、活性化合物を放出するであろう。
【０２１０】
膣投与に適した本発明の組成物はまた、当技術分野において適切であることが知られているキャリアを含有するペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル、パスタ、泡沫、またはスプレー処方物をも含む。
【０２１１】
本明細書において提供される組成物の局所または経皮的投与のための剤形は、粉末、スプレー、軟膏剤、パスタ、クリーム剤、ローション剤、ゲル、溶液、パッチ、および吸入剤を含む。軟膏剤、パスタ、クリーム剤、およびゲルは、本発明の活性化合物に加えて、動物および植物性脂肪、油、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、滑石、および酸化亜鉛またはその混合物のような賦形剤を含有してもよい。
【０２１２】
粉末およびスプレーは、本発明の化合物に加えて、ラクトース、滑石、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム、およびポリアミド粉末またはこれらの物質の混合物のような賦形剤を含有することができる。スプレーは、クロロフルオロ炭化水素ならびにブタンおよびプロパンのような揮発性非置換炭化水素のような従来の噴射剤をさらに含有することができる。
【０２１３】
経皮的パッチは、身体への本発明の組成物の制御された送達をもたらす追加の利点を有する。吸収促進薬はまた、皮膚を横切る作用物質のフラックスを増大させるために使用することもできる。
【０２１４】
眼科用処方物、眼軟膏剤、粉末、溶液、およびその他同種のものもまた、本発明の範囲内にあるとして企図される。
【０２１５】
非経口投与に適した本発明の組成物は、薬学的に許容され得る滅菌した等張性の水性もしくは非水溶性溶液、分散液、リポソーム、懸濁液もしくはエマルション、または使用直前に滅菌注射用溶液もしくは分散液に再構成されてもよい滅菌粉末を含み、これらは、糖、アルコール、酸化防止剤、緩衝剤、静菌薬、意図されるレシピエントの血液と処方物を等張にする溶質、または懸濁化剤もしくは増粘剤を含有してもよい。
【０２１６】
注射用デポー形態は、ポリラクチド−ポリグリコリド（ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｄｅ）のような生分解性ポリマー中に主題の化合物のマイクロカプセルのマトリクスを形成することによって作製される。他の生分解性ポリマーの例は、ポリ−（オルトエステル）およびポリ−（無水物）を含む。
【０２１７】
ある実施形態では、マイクロ乳化（ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ）技術が、疎水性（水不溶性）抗ｍｉＲＮＡ分子の生物学的利用能を改善するために利用されてもよい（Ｄｏｒｄｕｎｏｏら、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ．１９９１；１７（１２），１６８５−１７１３およびＲＥＶ  ５９０１（Ｓｈｅｅｎ，Ｐ．Ｃら、Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８０（７），７１２−７１４，１９９１）。
【０２１８】
本明細書において使用される場合、語句「非経口投与」および「非経口的に投与される」は、通常注射による、経腸および局所投与以外の投与様式を指し、限定を伴うことなく、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、包内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内、および胸骨内の注射および注入を含む。
【０２１９】
本明細書において使用される場合、用語「全身投与」、「全身的に投与される」、「末梢投与」、および「末梢的に投与される」とは、中枢神経系への直接的ではない、化合物、薬物、または他の物質の投与（たとえば皮下投与）をいい、化合物、薬物、または他の物質が患者の系に入り、したがって、代謝および他の類似のプロセスに供される。
【０２２０】
一般に、本明細書において記載されるオリゴマーを含む組成物の適した１日用量は、治療効果をもたらすのに有効な最も低い用量である、オリゴマーの量になるであろう。オリゴマーの投与は、単一の組成物または複数の組成物中で、別々にまたは同時に実行することができる。いくつかの単位剤形は、ほぼ同時に投与されてもよい。用いられる用量は、医師または資格のある医学的な専門家によって決定されてもよく、所望の治療効果、投与経路および処置の期間、ならびに患者の状態に依存する。
【０２２１】
用語「用量」は、たとえば急性用量、亜急性用量、および慢性または連続用量のような有効用量を含むが、これらに限定されない。
【０２２２】
１つ以上の活性作用物質の「急性用量」または「急性投与」という用語は、患者の年齢および健康の全身状態から考慮して、患者において比較的即時の所望の反応を誘発するための主治医によって決定される投薬量レベルでの、必要に応じた、患者への活性作用物質（複数可）の予定された投与を意味する。
【０２２３】
「亜急性用量」は、上記に記載されるように、急性用量に必要とされる、主治医によって決定されるものよりも低いレベルの活性作用物質（複数可）の用量である。亜急性用量は、慢性のまたは進行中の投薬レジメンにおいて必要に応じて患者に投与されてもよい。
【０２２４】
活性作用物質（複数可）の「慢性用量」または「継続投与」という用語は、進行中の毎日の、患者への活性作用物質（複数可）の予定された投与を意味する。
【０２２５】
有効量は、一般に、上記に記載される要因に依存するであろう。一般に、被験体に対するオリゴマーの経口、経鼻、静脈内、脳室内、皮下、および吸入用量は、１日当たりの体重１キログラム当たり約０．０００００１〜約１０００ｍｇ、１キログラム当たり約０．０００００５〜約９５０ｍｇ、１キログラム当たり約０．００００１〜約８５０ｍｇ、１キログラム当たり約０．００００５〜約７５０ｍｇ、１キログラム当たり約０．０００１〜約５００ｍｇ、１キログラム当たり約０．０００５〜約２５０ｍｇ、１キログラム当たり約０．００１〜約１００ｍｇ、１キログラム当たり約０．００１〜約５０ｍｇ、１キログラム当たり約０．００１〜約２５ｍｇ、１キログラム当たり約０．００１〜約１０ｍｇ、１キログラム当たり約０．００１〜約１ｍｇ、１キログラム当たり約０．００５〜約１００ｍｇ、１キログラム当たり約０．００５〜約５０ｍｇ、１キログラム当たり約０．００５〜約２５ｍｇ、１キログラム当たり約０．００５〜約１０ｍｇ、１キログラム当たり約０．００５〜約１ｍｇ、１キログラム当たり約０．０１〜約１００ｍｇ、１キログラム当たり約０．０１〜約５００ｍｇ、１キログラム当たり約０．０１〜約２５０ｍｇ、１キログラム当たり約０．０１〜約１００ｍｇ、１キログラム当たり約１〜約１００ｍｇ、１キログラム当たり約１〜約５０ｍｇ、１キログラム当たり約１〜約２５ｍｇ、１キログラム当たり約１〜約２０ｍｇ、１キログラム当たり約１０〜約１００ｍｇ、１キログラム当たり約１０〜約５０ｍｇ、１キログラム当たり約１０〜約２５ｍｇ；または１日当たり体重１キログラム当たり約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、もしくは約１００ｍｇの範囲にあるであろう。
【０２２６】
他の実施形態では、オリゴマーが、１日当たり体重１ｋｇ当たり約０．２５〜３ｇ、１ｋｇ当たり約０．５〜２．５ｇ、１ｋｇ当たり約１〜２ｇ、１ｋｇ当たり約１．２５〜１．７５ｇ、または１ｋｇ当たり約１．５ｇの用量で被験体に静脈内に、経口的に、吸入によって、経鼻的に、または非経口的に投与される。
【０２２７】
特定の実施形態では、オリゴマーが、１日当たり体重１ｋｇ当たり約１０ｇ、１ｋｇ当たり約．２５ｇ、１ｋｇ当たり約．５０ｇ、１ｋｇ当たり約．７５ｇ、１ｋｇ当たり約１．０ｇ、１ｋｇ当たり約１．２５ｇ、１ｋｇ当たり約１．５０ｇ、１ｋｇ当たり約１．７５ｇ、または１ｋｇ当たり約２．００ｇの用量で、被験体に経口的に、吸入によって、経鼻的に、または非経口的に（たとえば静脈内に）投与される。
【０２２８】
他の関連する実施形態では、オリゴマーが、１ｋｇ当たり約０．０１μｇ〜１ｍｇ、１ｋｇ当たり約０．１〜１００μｇ、もしくは１ｋｇ当たり約１〜１０μｇまたはそれらの間の任意の増分の濃度で、被験体に経口的に、吸入によって、経鼻的に、または非経口的に（たとえば静脈内に）投与される。たとえば、特定の実施形態では、オリゴマーが、１ｋｇ当たり約１μｇ、１ｋｇ当たり約２μｇ、１ｋｇ当たり約３μｇ、１ｋｇ当たり約４μｇ、１ｋｇ当たり約５μｇ、１ｋｇ当たり約６μｇ、１ｋｇ当たり約７μｇ、１ｋｇ当たり約８μｇ、１ｋｇ当たり約９μｇ、または１ｋｇ当たり約１０μｇの用量で、被験体に経口的に、経鼻的に、または非経口的に投与される。
【０２２９】
特定の実施形態では、オリゴマーが、１ｋｇ当たり約．００５μｇ、１ｋｇ当たり約．０１μｇ、１ｋｇ当たり約１．０μｇ、１ｋｇ当たり約１０μｇ、１ｋｇ当たり約５０μｇ、１ｋｇ当たり約１００μｇ、１ｋｇ当たり約２５０μｇ、１ｋｇ当たり約５００μｇ、または１ｋｇ当たり約１０００μｇの用量で、被験体に経口的に、吸入によって、経鼻的に、または非経口的に（たとえば静脈内に）投与される。
【０２３０】
組成物は、１週間、２週間、３週間、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、１年間、２年間、５年間、１０年間、またはそれを超える期間にわたって、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０回またはそれを超えて、投与されてもよい。
【０２３１】
さらに、本発明の同じまたは異なる組成物の複数の投与は、上記に述べられるように、長期間、複数回、投与されてもよい。
【０２３２】
特定の実施形態では、組成物の送達の頻度が、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、２日ごとに１回、もしくは週に１回または任意の間にある頻度である。
【０２３３】
特定の実施形態では、組成物の連続送達の期間は、３０秒間〜２４時間、３０秒間〜１２時間、３０秒間〜８時間、３０秒間〜６時間、３０秒間〜４時間、３０秒間〜２時間、３０秒間〜１時間、３０秒間〜３０分間、３０秒間〜１５分間、３０秒間〜１０分間、３０秒間〜５分間、３０秒間〜２分間、３０秒間〜１分間、または任意の間にある期間である。
【０２３４】
たとえば、ｔｈｅ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，６２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｏｒａｄｅｌｌ，ＮＪ：Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏ．，２００８；Ｇｏｏｄｍａｎ  ＆  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｅｌｅｖｅｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，２００５；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００；およびＴｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ，Ｆｏｕｒｔｅｅｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ  Ｓｔａｔｉｏｎ，ＮＪ：Ｍｅｒｃｋ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，２００６において記載されるように、当業者に知られている、組成物を処方するためのさらなる方法は、これによって、関連する部分に参照によって組み込まれる。
【０２３５】
Ｋ．使用方法
本発明は、一般に、既存の療法よりも安全で、効率的で、強力な、改善されたオリゴマーを提供する。本発明は、細胞、組織、および／または器官への驚くべきかつ予想外の体内分布の増大を有するオリゴマーをさらに提供する。したがって、遺伝子発現の増大ならびにｍｉＲＮＡ発現および／または活性の増大により特徴付けられるまたは関連する疾患、障害、および状態を処置するための本発明のオリゴマーの使用が、提供される。
【０２３６】
１．ＲＮＡ発現および／または活性を阻害するための方法
特定の例証となる実施形態では、本発明は、標的にハイブリダイズするオリゴマーと標的ＲＮＡを接触させるステップを含む、ＲＮＡの発現および／または活性を阻害するための方法を部分的に提供する。いかなる特定の理論によっても束縛されることを望むものではないが、本発明は、標的ＲＮＡ配列にオリゴマーをハイブリダイズさせることにより、ＲＮＡの発現および／または活性を阻害することができることを部分的に企図する。
【０２３７】
２．処置方法
上記に述べられるように、本発明のオリゴマーは、たとえば、患者が、１つ以上の特定のＲＮＡの発現の増大によって特徴付けられる状態または疾患に罹患している場合のような、多くの臨床設定において有用である。本発明のオリゴマーは、患者が、異なる細胞、組織、および／または器官において発現される１つ以上のＲＮＡの発現の増大によって特徴付けられる状態または疾患のための処置を必要とする場合、臨床設定において特に有用である。
【０２３８】
様々な実施形態では、本発明は、１つ以上の細胞、組織、および／または器官における１つ以上のＲＮＡの活性の増大によって特徴付けられる全身性疾患、障害、または状態を有する被験体を処置するための方法を部分的に企図する。
【０２３９】
本明細書において使用される用語「被験体」は、生物；たとえば、ヒト、非ヒト霊長動物（たとえばヒヒ、オランウータン、サル）、マウス、ブタ、ウシ、ヤギ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、モルモット、ハムスター、ウマ、サル、ヒツジ、または他の非ヒト哺乳動物を含む哺乳動物；たとえば、鳥（たとえばニワトリもしくはアヒル）または魚のような非哺乳動物脊椎動物および非哺乳動物無脊椎動物を含む非哺乳動物を含むが、これらに限定されない。好ましい実施形態では、被験体が、ヒトである。
【０２４０】
典型的な被験体は、腫瘍媒介性の血管新生、癌、炎症、線維症疾患、自己免疫性疾患、およびＣ型肝炎感染媒介性の疾患、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、ならびに高脂血症；癌、膠芽腫、乳癌、リンパ腫、肺癌；糖尿病、代謝障害；筋芽細胞分化；免疫障害を有するまたは有する危険性がある被験体を含む。特定の実施形態では、本発明の組成物および方法を使用して処置することができる疾患、障害、および状態は、１つ以上の細胞型、組織型、および／または器官における１つ以上のＲＮＡの活性の増大によって特徴付けられる、任意の疾患プロセスを含む。したがって、疾患が１つ以上のＲＮＡの活性の増大によって特徴付けられる任意の病気の細胞、組織、または器官が、処置に適用可能である。
【０２４１】
処置に適した疾患、障害、および状態の特定の例証となる例は、癌、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症および高脂血症、感染性疾患、糖尿病、代謝障害、免疫および自己免疫性障害、炎症性疾患、臓器疾患、中枢神経系（ＣＮＳ）疾患、ならびに線維症疾患を含む。
【０２４２】
様々な実施形態では、オリゴマー活性を指す場合の用語「増強する」、「増大させる」、「刺激する」、「促進する」、「促進する」、「高める」は、ＭＧＢを欠く抗ｍｉＲＮＡ分子または対照分子／組成物によって引き起こされる応答と比較して、細胞においてより大きな大きさの生理応答（すなわち下流の効果）をもたらすまたは引き起こす、少なくとも１つのＭＧＢを含む抗ｍｉＲＮＡ分子の能力を意味する。測定可能な生理応答は、たとえば、２つ以上のＲＮＡ標的配列、たとえば遺伝子の遺伝子発現の増大、細胞、組織、または器官侵入の増大、器官機能の改善を示す、生理学的マーカーの増大、癌細胞に対する細胞傷害性薬剤の細胞殺傷活性の増大、腫瘍細胞アポトーシスの増大、癌関連性の症状の改善、ならびに当技術分野における理解および本明細書における説明から明らかな他のものを含んでいてもよい。量の「増大」または「増強」は、典型的に、ＭＧＢを含むオリゴマーによってもたらされる「統計的に有意な」量であり、ＭＧＢ成分を欠くオリゴマーまたは対照組成物によってもたらされる量の１．１、１．２、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０倍、またはそれを超える（たとえば５００、１０００倍）増大を含むことができる（これらの間かつ１を超える全ての整数および小数点を含む、たとえば１．５、１．６、１．７、１．８など）。
【０２４３】
本明細書において使用される場合、用語「ｍｉＲＮＡ標的遺伝子」は、ｍｉＲＮＡによって、転写、転写後、または翻訳レベルで調節される遺伝子を指す。
【０２４４】
用語「低下させる」、「抑制する」、「減少させる」、「阻害する」、「抑制する」、「低くする」、「減ずる」、または「減らす」は、一般に、診断の技術分野における慣例的な技術に従って測定されるように、関連するがより小さな大きさの、ＲＮＡ発現および／もしくは活性における生理応答もしくは細胞応答またはＲＮＡ発現もしくは活性の増大に関連する、関連する疾患もしくは状態（たとえば癌、肝炎、免疫障害、代謝病、感染性疾患、心血管疾患、線維症疾患）の症状を引き起こす、少なくとも１つのＭＧＢを含むオリゴマーの能力に関する。応答の「減少」または「低下」は、ＭＧＢにコンジュゲートされていないもしくは連結されていないオリゴマーまたは対照組成物によってもたらされる応答と比較した、ＭＧＢを含むオリゴマーによってもたらされる、「統計的に有意な」、応答の量の減少または低下とすることができ、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の減少を含み、それらの間の整数をすべて含むことができる。
【０２４５】
本明細書において使用される場合、用語「処置する」、「処置すること」、および「処置」は、本明細書において記載される、治療上のまたは予防手段を指す。「処置」の方法は、ＲＮＡ発現または活性の増大によって特徴付けられる疾患、障害、または状態の１つ以上の症状を阻害する、予防する、逆転させる（治癒する）、遅延させる、その重症度を低下させる、その進行を低下させる、または回復させるための、被験体へのオリゴマー（たとえば、少なくとも１つのＭＧＢを含む）の投与を含む。一実施形態では、処置の目的が、そのような処置の非存在下において予想されるものを超えて、生活の質を改善し、かつ被験体の生存を延長することとすることができる。特定の実施形態では、処置の効能が、本明細書において他のところで議論されるように、ＲＮＡの増大に関連する疾患、障害、または状態の症状の回復〜完全な逆転または治癒の範囲にある。非限定的な実施例では、処置の効能およびその進行は、当技術分野において慣例的に実施されるように、器官機能試験を行ない、かつ処置されている特定の疾患、障害、または状態の生理学的指標をモニターすることによって、測定されてもよい。
【０２４６】
特に例証となる実施形態では、本発明は、２つ以上の細胞型、組織型、または器官において発現される１つ以上のＲＮＡの活性の増大に関連する疾患、障害、または状態を有する被験体を処置するための方法を部分的に企図し、この方法は、２つ以上の細胞型、組織型、または器官において発現され、病気のまたは罹患した細胞、組織、または器官（たとえば標的細胞、組織、器官）において活性を有する１つ以上のＲＮＡを同定するステップおよび標的ＲＮＡにハイブリダイズするオリゴマーを投与するステップを含む。好ましい実施形態では、オリゴマーが、１つ以上のＭＧＢ成分を含む。
【０２４７】
本明細書において使用される場合、用語「罹患した細胞、組織、もしくは器官」または「病気の細胞、組織、もしくは器官」は、処置の目的である細胞、組織、または器官を指す。罹患したまたは病気の細胞、組織、または器官は、１つ以上のＲＮＡの活性を含む。罹患したまたは病気の細胞、組織、または器官は、本発明のオリゴマーおよび本明細書において記載される方法を使用して、処置のために標的化されてもよい。
【０２４８】
本明細書において使用される場合、用語「正常な細胞、組織、もしくは器官」または「非罹患細胞、組織、もしくは器官」は、１つ以上のオリゴマーの活性に関連する疾患、障害、または状態を有していない細胞、組織、または器官を指す。特定の実施形態では、正常な細胞、組織、または器官が、ＲＮＡ発現によって細胞、組織、または器官が病気にかかるまたは病気に冒される程度を測定するためのベースラインを決定するために、比較の目的に使用される。
【０２４９】
３．ＲＮＡ発現および活性の測定
特定の実施形態では、本発明は、１つ以上の細胞、組織、または器官における１つ以上のＲＮＡの発現および／または活性の増大に関連する疾患、障害、または状態によって罹患した被験体を処置するための方法を提供する。当業者は、ｍｉＲＮＡ活性の増大が、ｍｉＲＮＡの知られている標的または疑われている標的の発現の減少に関連するであろうということを認識するであろう。ｍｉＲＮＡ活性およびｍｉＲＮＡの知られているまたは疑われている標的の遺伝子／タンパク質発現の両方は、当技術分野において知られている技術を使用して測定することができる。
【０２５０】
たとえば、ＲＮＡ活性および／またはＲＮＡの知られているもしくは疑われている標的の発現レベルは、たとえば、ノーザンブロット分析、競合的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、または定量的リアルタイムＰＣＲによって定量化することができる。ＲＮＡ分析は、全細胞ＲＮＡまたはポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡに対して実行することができる。ＲＮＡ単離の方法は、当技術分野においてよく知られている。ノーザンブロット分析もまた、当技術分野において慣例的である。定量的リアルタイムＰＣＲは、ＰＥ−Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、Ｃａｌｉｆ．から入手可能な、市販で入手可能なＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ（登録商標）  ７６００、７７００、または７９００  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍを使用して好都合に達成することができ、メーカーの指示に従って使用することができる。
【０２５１】
ＲＮＡ活性および／またはＲＮＡの知られているもしくは疑われている標的の発現レベルを測定し、定量化することができる他の例示的な方法は、ＤＮＡアレイまたはマイクロアレイ（Ｂｒａｚｍａ  ａｎｄ  Ｖｉｌｏ，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，２０００，４８０，１７−２４；Ｃｅｌｉｓら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，２０００，４８０，２−１６）、ＳＡＧＥ（遺伝子発現のシリアル分析（Ｓｅｒｉａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ））（Ｍａｄｄｅｎら、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ，２０００，５，４１５−４２５）、ＲＥＡＤＳ（消化されたｃＤＮＡの制限酵素増幅）（Ｐｒａｓｈａｒ  ａｎｄ  Ｗｅｉｓｓｍａｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１９９９，３０３，２５８−７２）、ＴＯＧＡ（全遺伝子発現分析（ｔｏｔａｌ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ））（Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，２０００，９７，１９７６−８１）、タンパク質アレイおよびプロテオミクス（Ｃｅｌｉｓら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，２０００，４８０，２−１６；Ｊｕｎｇｂｌｕｔら、Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，１９９９，２０，２１００−１０）、発現配列タグ（ＥＳＴ）配列決定（Ｃｅｌｉｓら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，２０００，４８０，２−１６；Ｌａｒｓｓｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２０００，８０，１４３−５７）、サブトラクティブＲＮＡフィンガープリンティング（ｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅ  ＲＮＡ  ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ）（ＳｕＲＦ）（Ｆｕｃｈｓら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２０００，２８６，９１−９８；Ｌａｒｓｏｎら、Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，２０００，４１，２０３−２０８）、サブトラクティブクローニング（ｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅ  ｃｌｏｎｉｎｇ）、ディファレンシャルディスプレイ（ＤＤ）（Ｊｕｒｅｃｉｃ  ａｎｄ  Ｂｅｌｍｏｎｔ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，２０００，３，３１６−２１）、ならびに質量分析法（Ｔｏ，Ｃｏｍｂ．Ｃｈｅｍ．Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎ，２０００，３，２３５−４１）を含む。
【０２５２】
特定の実施形態では、ＲＮＡ発現が、インビトロルシフェラーゼレポーターアッセイを使用して評価することができる。非限定的な一実施例では、特定のＲＮＡを阻害するために設計されたオリゴマーの活性が、ルシフェラーゼ活性が正常なＲＮＡ発現（すなわち、その相補的な配列に結合すること）によって阻害されるＤＵＡＬ−ＬＵＣＩＦＥＲＡＳＥ（登録商標）  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．）を使用して、インビトロにおいて評価することができる。さらに、１つ以上の細胞型、組織、または器官における１つ以上の特定のｍｉＲＮＡを阻害するために設計されたオリゴマーは、標的ｍｉＲＮＡがルシフェラーゼレポーター中のその相補的な配列に結合するのを予防し、したがって、ルシフェラーゼ活性を促進するであろう。ルシフェラーゼレポーターは、興味のあるｍｉＲＮＡ配列を使用して操作することができる。
【０２５３】
さらに、ＲＮＡ活性および／または知られているものの発現レベルは、タンパク質レベルで定量化することができる。さらに、ｍｉＲＮＡの下流標的のタンパク質レベルは、免疫沈降、ウエスタンブロット解析（イムノブロッティング）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、定量的タンパク質アッセイ、タンパク質活性アッセイ（たとえばカスパーゼ活性アッセイ）、免疫組織化学、免疫細胞化学、または蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）のような、当技術分野においてよく知られている様々な方法において定量化することができる。標的に導かれる抗体は、同定することができ、抗体のＭＳＲＳカタログ（Ａｅｒｉｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、Ｍｉｃｈ．）のような様々な供給源から取得され得るかまたは当技術分野においてよく知られている従来のモノクローナルまたはポリクローナル抗体生成方法によって調製することができる。
【０２５４】
４．疾患、障害、および状態
本発明のオリゴマーは、１つ以上のＭＧＢにコンジュゲートされていないまたはＭＧＢを欠くオリゴマーと比較して、体内分布が増大している。本発明のオリゴマー技術のある実施形態は、任意の特定の細胞型に限定されない。本発明のオリゴマー技術の特定の実施形態は、様々な細胞型の中で広い組織分布を実現するのに有用である。したがって、本発明のオリゴマーは、オリゴマーの送達を必要とする、任意の数の異なる細胞型、組織、または器官、たとえば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくはそれ以上またはすべての細胞型、組織、および／または器官に適合させることができる。
【０２５５】
本明細書において開示される方法および組成物と共に使用するための例示的な細胞は、癌細胞、免疫細胞、上皮細胞、内皮細胞、中胚葉細胞、および間葉細胞、骨細胞、造血細胞、皮膚細胞、有毛細胞、眼の細胞、神経細胞、グリア細胞、筋細胞（たとえば骨格筋細胞、心筋細胞、平滑筋細胞）、髄膜細胞、乳房の細胞、肝細胞、腎臓細胞、膵臓細胞、胃の細胞、腸の細胞、結腸の細胞、前立腺細胞、頸部の細胞、膣の細胞を含むが、これらに限定されない。
【０２５６】
本明細書において開示される方法および組成物と共に使用するための例示的な組織は、中胚葉組織、結合組織、平滑筋組織、横紋筋組織、心筋組織、骨組織、骨髄組織、骨の海綿質組織、軟骨組織、脂肪組織、内胚葉組織、肺組織、血管組織、膵臓組織、肝組織、膵管組織、脾臓組織、胸腺組織、扁桃組織、パイエル板組織、リンパ節組織、甲状腺組織、内皮組織、血球、膀胱組織、腎臓組織、消化管組織、食道組織、胃組織、小腸組織、大腸組織、子宮組織、睾丸組織、卵巣組織、前立腺組織、内分泌組織、腸間膜組織、および臍帯組織、外胚葉組織、表皮組織、真皮組織、眼組織、ならびに神経系組織を含むが、これらに限定されない。
【０２５７】
本明細書において開示される方法および組成物と共に使用するための例示的な器官は、膀胱、骨、脳、乳房、軟骨、頸部、結腸、角膜、眼、神経組織、グリア、食道、ファローピウス管、心臓、膵臓、腸、胆嚢、腎臓、肝臓、肺、卵巣、膵臓、副甲状腺、松果体、下垂体、前立腺、脊髄、脾臓、骨格筋、皮膚、平滑筋、胃、精巣、胸腺、甲状腺、気管、泌尿生殖器管、尿管、尿道、子宮、および膣を含むが、これらに限定されない。
【０２５８】
処置に適した疾患、障害、および状態の特定の例証となる例は、腫瘍媒介性の血管新生、癌、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症および高脂血症、感染性疾患、糖尿病、代謝障害、免疫および自己免疫性障害、炎症性疾患、臓器疾患、中枢神経系（ＣＮＳ）疾患、ならびに線維症疾患を含む。
【０２５９】
本明細書における方法および組成物を使用して処置されてもよい例示的な癌は、リンパ細網腫瘍（ｌｙｍｐｈｏｒｅｔｉｃｕｌａｒ  ｎｅｏｐｌａｓｉａ）、リンパ芽球性白血病、脳腫瘍、胃腫瘍、形質細胞腫、多発性骨髄腫、白血病、結合組織腫瘍、リンパ腫、および固形腫瘍を含むが、これらに限定されない。
【０２６０】
処置することができる他の適した癌は、限定を伴うことなく、癌腫、たとえば悪性黒色腫、基底細胞癌腫、卵巣癌腫、乳癌腫、非小細胞肺癌、腎細胞癌腫、膀胱癌腫、再発性表在性膀胱癌、肝癌腫、胃癌腫、前立腺癌腫、膵臓癌腫、肺癌腫、頸部の癌腫、子宮頸部異形成、喉頭乳頭腫症、結腸癌腫、結腸直腸癌腫、カルチノイド腫瘍；肉腫、たとえば骨肉腫、ユーイング肉腫、軟骨肉腫、悪性線維性組織球腫、線維肉腫、およびカポジ肉腫；ならびに膠芽腫を含む。
【０２６１】
ある実施形態では、癌を処置する場合、１つ以上の補助療法または医薬が、本発明によるオリゴマーと組み合わせて投与されてもよい。補助療法は、オリゴマーと同時投与されてもよい（同じまたは異なる組成物においておよび同じまたは異なる投与部位で）。補助療法はまた、オリゴマーの投与の前または後に投与することもできる。
【０２６２】
例示的な補助療法は、限定を伴うことなく、プレドニゾン、デキサメタゾン、またはデカドロンのような副腎皮質ステロイド；アルトレタミン（ヘキサレン、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ））；アミホスチン（エチオール）；アミノグルテチミド（シタドレン）；アムサクリン（Ｍ−ＡＭＳＡ）；アナストロゾール（アリミデクス）；テストステロンのようなアンドロゲン；アスパラギナーゼ（エルスパー（ｅｌｓｐａｒ））；カルメット−ゲラン桿菌；ビカルタミド（カソデックス）；ブレオマイシン（ブレノキサン）；ブスルファン（ミレラン）；カルボプラチン（パラプラチン）；カルムスチン（ＢＣＮＵ、ＢｉＣＮＵ）；クロラムブシル（リューケラン）；クロロデオキシアデノシン（２−ＣＤＡ、クラドリビン、ロイスタチン）；シスプラチン（プラチノール（ｐｌａｔｉｎｏｌ））；シトシンアラビノシド（シタラビン）；ダカルバジン（ＤＴＩＣ）；ダクチノマイシン（アクチノマイシン−Ｄ、コスメゲン）；ダウノルビシン（セルビジン（ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ））；ドセタキセル（タキソテール）；ドキソルビシン（アドリオマイシン（ａｄｒｉｏｍｙｃｉｎ））；エピルビシン；エストラムスチン（エムサイト（ｅｍｃｙｔ））；ジエチルスチルベストロール（ＤＥＳ）のようなエストロゲン；エトポシド（ｅｔｏｐｓｉｄｅ）（ＶＰ−１６、ＶｅＰｅｓｉｄ、エトポホス）；フルダラビン（フルダラ）；フルタミド（オイレキシン）；５−ＦＵＤＲ（フロクスウリジン）；５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；ゲムシタビン（ジェムザール）；ゴセレリン（ゾダレックス（ｚｏｄａｌｅｘ））；ハーセプチン（トラスツズマブ）；ヒドロキシ尿素（ハイドレア）；イダルビシン（イダマイシン）；イホスファミド；ＩＬ−２（プロロイキン、アルデスロイキン）；インターフェロンアルファ（イントロンＡ、ロフェロンＡ）；イリノテカン（カンプトスター（ｃａｍｐｔｏｓａｒ））；リュープロリド（リュープロン）；レバミソール（エルガミソール（ｅｒｇａｍｉｓｏｌｅ））；ロムスチン（ＣＣＮＵ）；メクロレタミン（マスタルジェン（ｍｕｓｔａｒｇｅｎ）、ナイトロジェンマスタード）；メルファラン（アルケラン）；メルカプトプリン（プリントール、６−ＭＰ）；メトトレキサート（メキサート（ｍｅｘａｔｅ））；マイトマイシン−Ｃ（ムタムシン（ｍｕｔａｍｕｃｉｎ））；ミトキサントロン（ノバントロン）；オクトレオチド（サンドスタチン）；ペントスタチン（２−デオキシコホルマイシン、ニペント（ｎｉｐｅｎｔ））；プリカマイシン（ミトラマイシン、ミトラシン）；プロロカルバジン（ｐｒｏｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ）（マチュレーン）；ストレプトゾシン；タモキシフェン（ｔａｍｏｘｉｆｉｎ）（ノルバデックス）；タキソール（パクリタキセル）；テニポシド（ブモン、ＶＭ−２６）；チオテパ；トポテカン（ハイカムチン）；トレチノイン（ベサノイド、オールトランス型レチノイン酸）；ビンブラスチン（バルバン）；ビンクリスチン（オンコビン）、およびビノレルビン（ナベルビン）を含む。適切には、さらなる化学療法剤は、タキソール、パクリタキセル、またはドセタキセルのようなタキサンから選択される。
【０２６３】
本明細書における方法および組成物を使用して処置されてもよい例示的な感染性疾患は、ＨＩＶ感染、ＣＭＶ感染、ＨＳＶ感染、ジフテリア、破傷風、百日咳、ポリオ、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、インフルエンザ菌、麻疹、ムンプス、および風疹を含むが、これらに限定されない。
【０２６４】
本明細書における方法および組成物を使用して処置されてもよい例示的な炎症性疾患は、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）または狼瘡、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症（ＭＧ）、強皮症、多発筋炎、炎症性腸疾患、皮膚筋炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、脈管炎、乾癬性関節炎、剥脱性乾癬性皮膚炎（ｅｘｆｏｌｉａｔｉｖｅ  ｐｓｏｒｉａｔｉｃ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）、尋常性天疱瘡、およびシェーグレン症候群、特に、炎症性腸疾患、クローン病、滑液包炎、滑膜炎、関節包炎、腱炎、ならびに／または外傷および／もしくはスポーツ起源の他の炎症性病変を含むが、これらに限定されない。
【０２６５】
本明細書における方法および組成物を使用して処置されてもよい例示的な代謝病（身体で天然に産生される化学物質の蓄積によって引き起こされる障害）は、クリグラー  ナジャー症候群、糖尿病、脂肪酸酸化障害、ガラクトース血症、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ（Ｇ６ＰＤ）欠損、グルタル酸尿症（ｇｌｕｔａｒｉｃ  ａｃｉｄｕｒｉａ）、グルタル酸血症Ｉ型（ｇｌｕｔａｒｉｃ  ａｃｉｄｅｍｉａ  Ｔｙｐｅ  Ｉ）、グルタル酸血症ＩＩ型、Ｆ−ＨＹＰＤＲＲ−家族性低リン酸血症、ビタミンＤ抵抗性クル病、クラッベ病、長鎖３ヒドロキシアシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損（ＬＣＨＡＤ）、マンノシドーシス、メープルシロップ尿症、ミトコンドリア病、ムコ多糖症（ｍｕｃｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｏｓｉｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）：ニーマン  ピック、有機酸血症、ＰＫＵ、ポンペ病、ポルフィリン症、メタボリック症候群、高脂血症および遺伝性脂質障害（ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ  ｌｉｐｉｄ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、トリメチルアミン尿症（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｕｒｉａ）：魚臭症候群（ｆｉｓｈ  ｍａｌｏｄｏｒ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ならびに尿素サイクル異常症（ｕｒｅａ  ｃｙｃｌｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）を含むが、これらに限定されない。
【０２６６】
本明細書における方法および組成物を使用して処置されてもよい例示的な神経系の疾患、障害、および状態は、脊髄損傷；頭部外傷または外科手術；ウイルス感染；神経変性疾患、たとえばＡＩＤＳ認知症複合；脱髄疾患、たとえば多発性硬化症および急性トランスフェラーゼ脊髄炎；錐体外路障害および小脳障害、たとえば皮質脊髄系（ｅｃｏｒｔｉｃｏｓｐｉｎａｌ  ｓｙｓｔｅｍ）の病変；基底核の障害または小脳障害；運動過剰障害（ｈｙｐｅｒｋｉｎｅｔｉｃ  ｍｏｖｅｍｅｎｔ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、たとえばハンチントン舞踏病および老人舞踏病；たとえば、ＣＮＳドーパミン受容体を遮断する薬物によって誘導される薬物誘導性運動障害；運動低下障害（ｈｙｐｏｋｉｎｅｔｉｃ  ｍｏｖｅｍｅｎｔ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、たとえばパーキンソン病；進行性核上性麻痺（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｓｕｐｒａ−ｎｕｃｌｅｏ  ｐａｌｓｙ）；小脳の構造的病変；脊髄小脳変性症、たとえば脊髄性運動失調症、フリードライヒ運動失調、小脳皮質変性（ｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ  ｃｏｒｔｉｃａｌ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）、多系統変性症（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓ）（Ｍｅｎｃｅｌ、Ｄｅｊｅｒｉｎｅ  Ｔｈｏｍａｓ、Ｓｈｉ−Ｄｒａｇｅｒ、およびＭａｃｈａｄｏ−Ｊｏｓｅｐｈ）、全身的な障害、たとえばレフサム病、無ベータリポタンパク血症、運動失調症、毛細血管拡張症；ならびにミトコンドリア多系病（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｍｕｌｔｉ−ｓｙｓｔｅｍ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）；脱髄性コア障害（ｄｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｎｇ  ｃｏｒｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、たとえば多発性硬化症、急性横断性脊髄炎；ならびに運動単位の障害、たとえば神経原性筋萎縮（前角細胞変性、たとえば筋萎縮性側索硬化症、乳児脊髄性筋萎縮症、および若年性脊髄性筋萎縮症）；アルツハイマー病；中年のダウン症候群；びまん性レビー小体病；レビー小体型老年認知症（ｓｅｎｉｌｅ  ｄｅｍｅｔｉａ  ｏｆ  Ｌｅｗｙ  ｂｏｄｙ  ｔｙｐｅ）；ウェルニッケ−コルサコフ症候群；慢性アルコール中毒症；クロイツフェルト−ヤコブ病；亜急性硬化性全脳炎、ハラーホルデン−スパッツ症候群（Ｈａｌｌｅｒｒｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ  ｄｉｓｅａｓｅ）；ならびにボクサー認知症（ｄｅｍｅｎｔｉａ  ｐｕｇｉｌｉｓｔｉｃａ）を含むが、これらに限定されない。
【０２６７】
本明細書における方法および組成物を使用して処置されてもよい例示的な線維増殖性疾患は、強皮症（モルフェア、全身性斑状強皮症（ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ  ｍｏｒｐｈｅａ）、または線状強皮症を含む）、腎線維症（糸球体硬化症（ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、腎尿細管間質性線維症（ｒｅｎａｌ  ｔｕｂｕｌｏｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、進行性腎疾患、または糖尿病性腎症を含む）、心線維症（たとえば心筋線維症）、肺線維症（たとえば糸球体硬化症肺線維症（ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、特発性肺線維症、珪肺症、石綿肺症、間質性肺疾患、間質性線維性肺疾患（ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ  ｆｉｂｒｏｔｉｃ  ｌｕｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ）、および化学療法／放射線誘導性の肺線維症）、肝線維症（肝硬変を含む）、口腔線維症（ｏｒａｌ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、心内膜心筋線維症、三角筋線維症（ｄｅｌｔｏｉｄ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、膵炎、炎症性腸疾患、クローン病、結節性筋膜炎（ｎｏｄｕｌａｒ  ｆａｓｃｉｌｉｔｉｓ）、好酸球性筋膜炎、異なる程度での線維組織による正常筋組織の交換によって特徴付けられる一般的な線維症症候群、後腹膜線維症、肝線維症、肝硬変、慢性腎不全；骨髄線維化（骨髄線維症）、薬物誘導性麦角中毒、リー−フラウメニ症候群における膠芽腫、散発性膠芽腫（ｓｐｏｒａｄｉｃ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ）、骨髄性白血病（ｍｙｌｅｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性症候群（ｍｙｅｌｏｐｒｏｆｅｒａｔｉｖｅ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、婦人科癌、ハンセン病、コラーゲン形成大腸炎、急性線維症、全身性硬化症、ならびに組織もしくは臓器移植または移植片拒絶から生じる線維症を含むが、これらに限定されない。
【０２６８】
ｍｉＲＮＡ標的ならびに本発明の組成物による処置に適した対応する疾患、障害、および状態の例証となる例は、ｍｉＲ−１、心不整脈；ｍｉＲ−２１、膠芽腫、乳癌、肝細胞癌腫、結腸直腸癌、細胞障害性薬物に対する神経膠腫の感作、および心肥大；ｍｉＲ−２１、ｍｉＲ−２００ｂ、化学療法に対する応答およびｍｉＲ−１４１の調節ならびに胆管癌腫成長；ｍｉＲ−１２２、高コレステロール血症、Ｃ型肝炎感染症、およびヘモクロマトーシス；ｍｉＲ−１９ｂ、リンパ腫および他の腫瘍タイプ；ｍｉＲ−２６ａ、ヒト幹細胞の骨芽細胞分化；ｍｉＲ−１５５、リンパ腫、膵臓腫瘍発生、ならびに乳癌および肺癌；ｍｉＲ−２０３、乾癬；ｍｉＲ−３７５、糖尿病、代謝障害、および膵臓内分泌細胞からのグルコース誘導性のインスリン分泌；ｍｉＲ−１８１、筋芽細胞分化および自己免疫障害、ｍｉＲ−１０ｂ、乳癌細胞浸潤および転移；ｍｉＲ−１２５ｂ−１、乳癌、肺癌、卵巣癌、および頸部の癌；ｍｉＲ−２２１およびｍｉＲ−２２２、前立腺癌腫、ヒト甲状腺乳頭癌腫（ｈｕｍａｎ  ｔｈｙｒｏｉｄ  ｐａｐｉｌｌａｒｙ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）およびヒト肝細胞癌腫；ｍｉＲＮＡ−３７２および−３７３、精巣胚細胞性腫瘍；ｍｉＲ−１４２、Ｂ細胞白血病；ｍｉＲ−１７−１９ｂ、Ｂ細胞リンパ腫、肺癌、および肝細胞癌腫を含むが、これらに限定されない。
【０２６９】
前掲または以下に本明細書において引用される刊行物、特許、および特許出願はすべて、それらの全体が参照によってこれによって組み込まれる。
【０２７０】
本明細書において使用される場合、用語「約」または「およそ」は、基準の期間、数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重さ、または長さに対して、３０、２５、２０、２５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１％異なる期間、数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重さ、または長さを指す。特定の実施形態では、数値に先行する場合の用語「約」または「およそ」が、その値プラスまたはマイナス１５％、１０％、５％、または１％の範囲を示す。
【０２７１】
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用されるように、内容が明白にその他に指示しない限り、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、複数の参照を含む。
【０２７２】
本明細書の全体にわたって、文脈がその他のものを必要としない限り、語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、および「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、あらゆる他のステップもしくはエレメントまたはステップもしくはエレメントの群の排除ではなく、指定のステップもしくはエレメントまたはステップもしくはエレメントの群の包含を暗示することが理解されるであろう。「からなる」によって、語句「からなる」に後続するいかなるものも含み、それらに限定されることを意味する。したがって、語句「からなる」は、列挙されるエレメントが必要とされるかまたは必須であり、他のエレメントが存在しなくてもよいことを示す。「から本質的になる」によって、その語句の後に列挙されるあらゆるエレメントおよび列挙されるエレメントについての本開示において指定される活性または作用に干渉しないまたはその一因とならない他のエレメントに限定されるあらゆるエレメントを含むことを意味する。したがって、語句「から本質的になる」は、列挙されるエレメントが必要とされるかまたは必須であるが、他のエレメントが任意選択ではなく、それらが列挙されるエレメントの活性または作用に影響を及ぼすかどうかに依存して存在してもよく、または存在しなくてもよい。
【０２７３】
前述の発明は、理解の明瞭さのために例証および実施例として詳細に記載されたが、添付の特許請求の範囲の精神または範囲から逸脱することなく、ある変更および修飾がなされてもよいことは、本発明の教示を考慮して当業者に容易に明らかになるであろう。以下の実施例は、限定としてではなく、例証のみとして提供される。当業者らは、本質的に同様の結果をもたらすために変更するかまたは修飾することができる様々な決定的でないパラメーターを容易に認識するであろう。
【実施例】
【０２７４】
（実施例１）
抗ＭＩＲＮＡの定量的全身オートラジオグラフィー（ＱＷＢＡ）分析
オスＣＤ−１マウスに対する１４Ｃ標識抗ｍｉＲＮＡの単一用量ＩＶ投与の後に、非コンジュゲート抗ｍｉＲＮＡ、たとえばＭＩ−０１４５２（配列番号１）と、コンジュゲート抗ｍｉＲＮＡ、たとえばＭＩ−０１４５３（配列番号２）およびＭＩ−０１４５４（配列番号３）の組織分布および濃度パラメーターを比較するために定量的全身オートラジオグラフィー（ＱＷＢＡ）分析を実行した。ＭＩ−０１４５２、ＭＩ−０１４５３、およびＭＩ−０１４５４は、ｍｉＲ−２１に対して導かれる抗ｍｉＲＮＡである（表２を参照されたい）。
【０２７５】
【表２】
2014509512.tif 000022
これらの抗ｍｉＲＮＡの配列組成を明確にするために、小文字「ｍ」は、糖上の２’−ＯＭｅの組み込みを示す。「＊」は、ホスホジエステルリンケージの代わりにホスホロチオエートリンケージ（ＰＳ）の組み込みを示す。Ｌ１は、リンカーであり、以下の組成を有する：「−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）Ｏ（ＣＨ２）６ＮＨ−」。
【０２７６】
方法
１．動物実験
研究の生存中の部分はすべて、Ｘｅｎｏｍｅｔｒｉｃｓ，ＬＬＣで行い（Ｓｔｕｄｙ  ＃  ＸＰＫ１０−３２３）、また、プロトコールにおける方法を下記に簡潔に記載する。３０匹の成体オスＣＤ−１マウス（群当たりＱＷＢＡのために選択した７匹のマウスを含めて１０匹のマウスの３つの群）をＱＷＢＡ分析に使用した。それぞれの群は、尾静脈注射を介してリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の抗ｍｉＲＮＡの単一ＩＶ投与を受けた。用量投与情報を以下の表に要約する。
【０２７７】
【表３】
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１つの時点当たり１つの群当たり２匹のマウスを、投与の０．１６７、０．５、１、２、４、８、および２４時間後（時間）ならびに３、７、および１４日後に安楽死させた。動物は、強く麻酔をかけ、その後、ヘキサン／ドライアイスバス中で凍結させることによって安楽死させた。
【０２７８】
２．全身オートラジオグラフィー
それぞれの凍結させたマウス死体は、２％カルボキシメチルセルロースマトリクス中に包埋し、およそ−２０℃に維持したミクロトーム台（Ｌｅｉｃａ  ＣＭ３６００  Ｃｒｙｏｍａｃｒｏｃｕｔ、Ｎｕｓｓｌｏｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ；またはＶｉｂｒａｔｏｍｅ  ９８００、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）上にマウントした。ある濃度（およそ０．０５μＣｉ／ｇ）の［１４Ｃ］グルコースにより強化した血漿である３つの品質管理標準物質（ＱＣ）を、切片作製前に凍結ブロックの中に入れ、ＱＰＳ  ＳＯＰに従って、切片の厚みについての品質管理に使用した。およそ４０μｍの厚さの切片を矢状面で採取し、接着テープ（Ｓｃｏｔｃｈ  Ｔａｐｅ  Ｎｏ．８２１０、３Ｍ  Ｌｔｄ．、Ｓｔ．Ｐａｕｌ、ＭＮ、ＵＳＡ）上に捕捉させた。切片は、以下の組織、器官、および生体液を包含するように収集した：脂肪（褐色および白色）、副腎、胆汁（管中の）、血液（心臓）、脳（大脳、小脳、髄質）、骨、骨髄、盲腸（および内容物）、精巣上体、眼（ぶどう膜および水晶体）、ハーダー腺、心臓、腎臓（腎皮質および髄質）、大腸（および内容物）、肝臓、肺、リンパ節、膵臓、下垂体、前立腺、唾液腺、精嚢、骨格筋、皮膚、胃（胃粘膜および内容物）、小腸（および内容物）、脾臓、脊髄、精巣、胸腺、甲状腺、ならびに膀胱（および内容物）。
【０２７９】
切片は、少なくとも４８時間、−２０℃のクライオミクロトーム中で昇華によって乾燥させた。１組の切片を厚紙の裏材の上にマウントし、薄いプラスチックラップによりカバーし、較正標準物質（およそ０．０００７〜７．４１０μＣｉ／ｇの１０の様々な濃度で血液と混合した１４Ｃグルコース）と共に１４Ｃ感受性蛍光体イメージングプレート（Ｆｕｊｉ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ、Ｓｔａｍｆｏｒｄ、ＣＴ）に対して曝露させた。イメージングプレートおよび切片は、４日間の曝露期間の間、室温で、銅に内張りされた鉛金庫中で、遮光性の曝露カセット中に入れた。イメージングプレートは、Ｔｙｐｈｏｏｎ  ９４１０（商標）画像収集システムを使用してスキャンし（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ／Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ、ＵＳＡ）、結果として生じた画像は、専用のＱＰＳコンピュータサーバ上に保存した。定量化は、ＭＣＩＤ（商標）画像分析ソフトウェアを使用して、画像濃度測定によって実行し（ｖ．６．０または７．０、Ｉｎｔｅｒｆｏｃｕｓ  Ｉｍａｇｉｎｇ，  Ｉｎｃ．、Ｌｉｎｔｏｎ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）、標準曲線は、１４Ｃ較正標準物質の積分された応答（ＭＤＣ／ｍｍ２）および公称濃度から構築した。
【０２８０】
放射能の濃度は、μＣｉ／ｇとして表現し、それぞれの投与された試験物品の比放射能を使用して、試料１グラム当たりのＭＩ−０１４５２、ＭＩ−０１４５３、およびＭＩ−０１４５４のμｇ当量（μｇ当量／ｇ）に変換した（［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５２については０．０１９７６μＣｉ／μｇ、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５３については０．０１９１１μＣｉ／μｇ、または［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５４については０．０１５５２μＣｉ／μｇ）。定量化の下限値（ＬＬＯＱ）をデータに適用した。［１４Ｃ］放射能の濃度は、試料１グラム当たりの、ＭＩ−０１４５２、ＭＩ−０１４５３、またはＭＩ−０１４５４のμｇ当量（μｇ当量／ｇ）として表現した。較正曲線上の最低標準未満に下がった組織濃度値は、定量化可能限界（ＢＱＬ）未満と示し、ＱＷＢＡ分析の間にオートラジオグラフィー画像上で可視化することができなかった組織は、試料採取されず（ＮＳ）と示し、ＢＱＬであると見なした。
【０２８１】
３．標準物質についての計算
応答曲線は、加重、一次、多項、線形方程式を使用して生成した（１／ＭＤＣ／ｍｍ２）。適合度についての数的な推定値は、相対誤差によって示し、ここで、それぞれの較正標準物質の相対誤差についての絶対値は、容認される≦０．２５０とした。
【０２８２】
標準曲線についての計算：
応答（ＭＤＣ／ｍｍ２）＝ａ１×濃度（μＣｉ／ｇでの密度−標準物質）＋ａ０、
ここで、
＊  密度−標準物質＝μＣｉ／ｇでの濃度
＊  ＭＤＣ／ｍｍ２＝モレキュラーダイナミクスカウント（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ  Ｃｏｕｎｔ）／組織の面積
＊  ａ１＝傾き
＊  ａ０＝ｙ切片
とする。
【０２８３】
それぞれの標準物質についての相対誤差は、
【０２８４】
【化１７】
2014509512.tif 000024
に従って、標準曲線を使用して計算した。
その後、個々の試料濃度は、
【０２８５】
【化１８】
2014509512.tif 000025
に従って計算した。
【０２８６】
ＭＩ−０１４５２
ＬＬＯＱおよび定量化の上限値（ＵＬＯＱ）は、較正曲線において使用した最も低い（０．０００７０６μＣｉ／ｇ）および最も高い（７．４１０４０４９５μＣｉ／ｇ）標準に基づくものとした。この研究については、ＬＬＯＱは、０．０３６μｇ当量／組織１ｇであり、ＵＬＯＱは、３７５．０２μｇ当量／組織１ｇであった。
【０２８７】
【化１９】
2014509512.tif 000026
ＭＩ−０１４５３
ＬＬＯＱおよび定量化の上限値（ＵＬＯＱ）は、較正曲線において使用した最も低い（０．０００７０６μＣｉ／ｇ）および最も高い（７．４１０４０４９５μＣｉ／ｇ）標準に基づくものとした。この研究については、ＬＬＯＱは、０．０３７μｇ当量／組織１ｇであり、ＵＬＯＱは、３８７．７７６μｇ当量／組織１ｇであった。
【０２８８】
【化２０】
2014509512.tif 000027
ＭＩ−０１４５４
ＬＬＯＱおよび定量化の上限値（ＵＬＯＱ）は、較正曲線において使用した最も低い（０．０００７０６μＣｉ／ｇ）および最も高い（７．４１０４０４９５μＣｉ／ｇ）標準に基づくものとした。この研究については、ＬＬＯＱは、０．０４５μｇ当量／組織１ｇであり、ＵＬＯＱは、４７７．４７５μｇ当量／組織１ｇであった。
【０２８９】
【化２１】
2014509512.tif 000028
結果および議論
組織における放射能分布のパターンを示す全身オートラジオグラムを図１〜２１に示し、組織分布のグラフを図２２〜２４に示し、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５２、［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５３、または［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５４のＩＶ投与に後のマウスの組織における薬物に由来する放射能の濃度を、図２５〜２７に要約する。
【０２９０】
１．［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５２
薬物に由来する放射能の最大濃度（Ｃｍａｘ）は、ほとんどの組織（測定した１８の組織のうち１０）について投与の０．１６７時間後に観察された。Ｃｍａｘでの放射能の最も高い濃度は、腎臓皮質（２４６．９５５μｇ当量／ｇ、４時間）および腎臓髄質（３０．２２９μｇ当量／ｇ、１時間）で観察された。他の組織における濃度は、実質的により低かった。最低の組織濃度は、脳（＜０．２００μｇ当量／ｇ）および精嚢（＜１．２５０μｇ当量／ｇ）において測定された。ほとんどの組織濃度は減少したが、投与の２４時間後で定量化の下限値（［１４Ｃ］ＭＩ  ０１４５２：０．０３６μｇ当量／ｇ）を超えたままであった。ＭＩ−０１４５２の体内分布は、非コンジュゲートｍｉＲＮＡが主に腎臓に局在化し、腎排泄は、排出の主な経路であったことを示した。排出は、この研究の終了（投与の２４時間後）までに完了しなかった。
【０２９１】
２．［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５３
薬物に由来する放射能の最大濃度（Ｃｍａｘ）は、ほとんどの組織（測定した１８の組織のうち１３）について投与の０．１６７時間後に観察された。高濃度のＭＩ−０１４５３が、多種多様の組織において見出された。Ｃｍａｘでの放射能の最も高い濃度が、以下の組織中にあった：腎臓皮質（２６４．３１１μｇ当量／ｇ、４時間）、肝臓（８４．０５５μｇ当量／ｇ、８時間）、心臓の血液（６３．０８４μｇ当量／ｇ、０．１６７時間）、および腎臓髄質（３９．８１６μｇ当量／ｇ、０．１６７時間）、肺（３４．５３５μｇ当量／ｇ、０．１６７時間）、ならびに唾液腺（３０．１５８μｇ当量／ｇ、０．１６７時間）。定性的に、膀胱内容物、骨髄、およびいくつかのリンパ組織もまた、高濃度を有するように思われた。最低の組織濃度が、脳および精嚢において測定された。体内分布ＭＩ−０１４５３は、コンジュゲート抗ｍｉＲＮＡが、組織の全体にわたって広く分散しており、腎排泄は、排出の主な経路であったことを示した。ほとんどの組織は、第１の試料採取時点（０．１６７時間）の後に、より低い濃度を有したが、ほとんどの組織における濃度は、２４時間の時点を経由したより後の時点で同様の濃度のままであった。排出は、この研究の終了（投与の２４時間後）までに完了しなかった。
【０２９２】
３．［１４Ｃ］ＭＩ−０１４５４
薬物に由来する放射能の最大濃度（Ｃｍａｘ）は、ほとんどの組織（測定した１８の組織のうち８）について投与の０．１６７時間後に観察された。高濃度のＭＩ−０１４５４が、多種多様の組織において見出された。Ｃｍａｘでの放射能の最も高い濃度が、以下の組織中にあった：腎臓皮質（１３２．９８４μｇ当量／ｇ、２時間）、心臓の血液（１２１．５２６μｇ当量／ｇ、０．１６７時間）、肝臓（１０８．００３μｇ当量／ｇ、８時間）、肺（８３．１６３μｇ当量／ｇ、０．５時間）、副腎（８１．４８９μｇ当量／ｇ、０．５時間）、脾臓（７３．３７８μｇ当量／ｇ、２４時間）、甲状腺（６５．５９４μｇ当量／ｇ、０．１６７時間）、腎臓髄質（４９．４０３μｇ当量／ｇ、時間）、唾液腺（３３．１５３μｇ当量／ｇ、０．１６７時間）、および血液（１２１．５２６μｇ当量／ｇ）。定性的に、膀胱内容物、骨髄、およびいくつかのリンパ組織もまた、高濃度を有するように思われた。最低の組織濃度は、脳（＜２．５００μｇ当量／ｇ）および精嚢（＜２．０００μｇ当量／ｇ）において測定された。体内分布ＭＩ−０１４５４は、コンジュゲート抗ｍｉＲＮＡが、組織の全体にわたって広く分散しており、腎排泄は、排出の主な経路であったことを示した。ほとんどの組織は、第１の試料採取時点（０．１６７時間）の後に、より低い濃度を有したが、ほとんどの組織における濃度は、２４時間の時点を経由したより後の時点で同様の濃度のままであった。排出は、この研究の終了（投与の２４時間後）までに完了しなかった。
【０２９３】
結論
コンジュゲート抗ｍｉＲＮＡの体内分布は、非コンジュゲート抗ｍｉＲＮＡの限られた分布よりも驚くべきことに予想外によかった。高濃度の薬物に由来する放射能が、ほとんどの組織について異なる濃度でとはいえ、コンジュゲート抗ｍｉＲＮＡ、たとえばＭＩ−０１４５３およびＭＩ−０１４５４について、研究期間の全体にわたって組織に広く分布した。対照的に、非コンジュゲート抗ｍｉＲＮＡ、たとえばＭＩ−０１４５２の放射能は、広く分布しなかった、また、非コンジュゲート抗ｍｉＲＮＡは、腎臓において主に検出されたが、いくらかのシグナルがまた、肝臓においても検出された。したがって、本発明のコンジュゲートｍｉＲＮＡは、それらが広く生物にとって利用できるので、好都合であり、したがって、抗ｍｉＲＮＡ治療薬の全身投与で遭遇した限られた生物学的利用能の課題を解決する。
【０２９４】
略語
以下は、本明細書において使用される略語およびそれらの意味のリストである：％ＣＶ＝変動係数；ＢＱＬ＝定量化可能な限界未満；Ｃｍａｘ＝観察された最大濃度；Ｃｉ＝キュリー；ＬＬＯＱ＝定量化の下限値；ＬＳＣ＝液体シンチレーション計数；ＭＣＩＤ＝マイクロコンピュータイメージングデバイスシステム；ＭＤＣ＝モレキュラーダイナミクスカウント；およびＵＬＯＱ＝定量化の上限値。
【０２９５】
これらのおよび他の変更は、上記の詳細な説明に照らして実施形態に対してなすことができる。一般に、以下の特許請求の範囲において、使用される用語は、本明細書および特許請求の範囲において開示される特定の実施形態に特許請求の範囲を限定するように解釈されるべきではないが、そのような特許請求の範囲の権利が及ぶ全範囲の等価物と共にあらゆる可能性のある実施形態を含むように解釈されるべきである。したがって、特許請求の範囲は、本開示によって限定されない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２２Ｃ】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２３Ｃ】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２４Ｃ】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【配列表】
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