(57)【要約】  医薬組成物または医薬品セットの形態に作製され得る、糖尿病治療のための組み合わせが特許請求される。当該組み合わせには、血糖降下薬および酸化的リン酸化を脱共役させ得る天然フェノール化合物が含まれる。当該組み合わせは、血糖降下製剤の使用によりもたらされる副作用の発生率、より詳細には乳酸アシドーシスのリスクを軽減する可能性を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの抗糖尿病薬および少なくとも１つの天然フェノール化合物を含む、糖尿病を治療するための組み合わせ。
【請求項２】
天然フェノール化合物またはそのような化合物の混合物を、少なくとも２％の量で含む、請求項１に記載の組み合わせ。
【請求項３】
抗糖尿病薬が、ビグアナイド薬、チアゾリジンジオン薬またはそれらの組み合わせを含む群から選択される、請求項１に記載の組み合わせ。
【請求項４】
天然フェノール化合物が、クロロゲン酸またはエピガロカテキン−３−没食子酸またはエピカテキン−３−没食子酸またはエラグ酸またはケルセチンまたはジヒドロケルセチンまたはフィセチンまたはクルクミンまたはリスベラトロールまたはカプサイシンまたはコーヒー酸フェネチルエステルからなる群から選択される、請求項１に記載の組み合わせ。
【請求項５】
天然フェノール化合物の混合物として植物抽出物を含む、請求項１に記載の組み合わせ。
【請求項６】
抗糖尿病薬としてメトホルミン、および植物抽出物としてコーヒー豆抽出物を含む、請求項５に記載の組み合わせ。
【請求項７】
抗糖尿病薬としてメトホルミン、および植物抽出物として未焙煎コーヒー豆抽出物を含む、請求項５に記載の組み合わせ。
【請求項８】
未焙煎コーヒー豆抽出物の量の少なくとも２５％の量の、アスコルビン酸またはその薬剤的に許容される誘導体をさらに含む、請求項７に記載の組み合わせ。
【請求項９】
請求項１に記載の組み合わせおよび薬剤的に許容される担体を含む、糖尿病治療用の医薬組成物。
【請求項１０】
治療的有効量の、メトホルミン、未焙煎コーヒー豆抽出物およびアスコルビン酸を含み、前記アスコルビン酸が天然アスコルビン酸、合成アスコルビン酸、またはそれらの組み合わせである、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
メトホルミン、未焙煎コーヒー豆抽出物およびアスコルビン酸の質量が、１００：２０：１０〜１００：４０：３０の割合である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
粉剤、粒剤、錠剤、ペレット剤、ゲル剤、カプセル剤、飴剤、懸濁剤、乳剤、可溶化物（solubilisate）の形態に作製されている、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組み合わせを含む、糖尿病治療用の医薬品セット。
【請求項１４】
治療的有効量の、メトホルミン、未焙煎コーヒー豆抽出物およびアスコルビン酸を含む、請求項１３に記載の医薬品セット。
【請求項１５】
メトホルミン、未焙煎コーヒー豆抽出物およびアスコルビン酸の質量が、１００：２０：１０〜１００：４０：３０の割合である、請求項１４に記載の医薬品セット。
【請求項１６】
粉剤、粒剤、錠剤、ペレット剤、カプセル剤、飴剤、懸濁剤、乳剤、可溶化物（solubilisate）の形態に作製されている、請求項１３に記載の医薬品セット。
【請求項１７】
請求項１に記載の組み合わせを患者に処方することを含む、糖尿病併用療法の方法。
【請求項１８】
請求項１に記載の組み合わせが医薬組成物を構成する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
医薬組成物は、患者が乳酸アシドーシスの症状を示している場合に処方され、かつ、１日に２〜３回、食中または食後に、特許請求される組成物を含む２〜３個のカプセル剤、錠剤、またはいずれかの他の剤形の他の単位の量で適用される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
請求項１に記載の組み合わせが医薬品セットを構成する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
医薬品セットは、患者が乳酸アシドーシスの症状を示している場合に処方され、かつ、１日に２〜３回、食中または食後に、１回に１セットまたは２セットの量で適用される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
抗糖尿病製剤を用いる糖尿病治療における、乳酸アシドーシスを抑制する薬剤としての、酸化的リン酸化を脱共役させる能力を有する天然フェノール化合物またはその混合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医薬品産業に関し、詳細には、糖尿病治療のための医薬品に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病は、世界のほぼ全ての国において、依然として国家の公衆衛生業務における重大な問題である。過去３０年から４０年に渡り、糖尿病の有病率および発生率の著しい増加が世界中で明白になっており、この傾向は、人口の６〜１０％が糖尿病を患い、かつその有病率が、主に４０才以上の年齢群において明らかな上昇傾向にある工業先進国において、特に顕著である。
【０００３】
公知の通り、糖尿病治療計画の主要な目的は、糖尿病の症状の軽減、生活の質の改善、ならびに急性合併症（高浸透圧性昏睡およびケトアシドーシス）および例えば糖尿病性神経障害、糖尿病性腎症、早期アテローム性動脈硬化といった慢性合併症の両者の予防である（Diabetes Control and Complications Trial Research Group; N. Engl. J. Med., 329, 977-986 (1993））。
【０００４】
慢性高血糖症は、疾患の診断における根拠となる、糖尿病の主要な徴候であるだけでなく、微小血管および大血管障害、神経障害、腎障害等の、ほぼすべての合併症の発症における最も重要な要因でもある。
【０００５】
長期に渡る高血糖は、膵臓のβ細胞への刺激の増加をもたらし、それが次いでそれらの機能的能力の消耗を招き、結果として疾患の進行に寄与する。
【０００６】
糖尿病治療の目的は、長期間に渡り炭水化物代謝の補強を達成すること、すなわち、健常者において日中観察されるものと実質的に同じであろう、血漿中のグルコース量の指標を確実に達成することである。糖尿病の治療は、食事療法および運動療法を処方することから始まる。しかし、目標とする炭水化物代謝指標を達成するためには、患者側の多大な努力が必要とされるが、通常、そのような努力は糖尿病患者においてわずかな程度でしか実践されていない。これが、糖尿病治療において、薬剤療法が主要な役割を果たす理由である。
【０００７】
血糖降下薬療法は、単に血糖症指標(glycemia indicator)を低下させ、それにより高血糖に起因する疾患の臨床症状を排除するだけではない。血糖降下薬療法は、インスリン分泌細胞の消耗に起因するインスリン欠乏の増進、およびインスリン欠乏の増進を所与とする高血糖の進行により形成される、「悪循環」をも解消する。本明細書に記載される、インスリン欠乏下での血糖降下薬の正の作用は、２型糖尿病、および１型糖尿病の初期段階に、より大きく関連する。
【０００８】
現在、２型糖尿病の治療において、以下の群の経口血糖降下薬が使用されている：
・胃腸管中での炭水化物の消化およびグルコースの吸収を遅延させる（アルファ−グルコシダーゼ阻害剤であるグアー、アカルボース、ミグリトール等）；
・膵臓によるインスリン生成を増強する（スルホニル尿素誘導体であるグリベンクラミド、グリピジド、グリクラジド、グリキドンおよびグリメピリド）；
・食後のインスリン分泌を促進する（グリニド薬、インクレチンミメティクス、ＤＰＰ−４阻害剤、アミリンおよびグルカゴン様ペプチド１アナログ）；
・細胞へのグルコース取り込みを促進し、かつ細胞によるグルコース放出を阻害する（ビグアナイド薬、現在では、特にメトホルミン）；
・組織のインスリン感受性を増強する製剤、またはインスリン増感薬であるチアゾリジンジオン薬（グリタゾン類）−ピオグリタゾン、ロシグリタゾン；
・インスリン。
【０００９】
A−グルコシダーゼ阻害剤（アカルボース）は、腸でのグルコース吸収を減少させ、通常、疾患の早期において有効である。該阻害剤の副作用は、鼓腸および下痢の症状と関連する。ほとんどの患者において、当該薬剤の投与を投与開始から３年以内に中止する必要が生じる。
【００１０】
スルホニル尿素誘導体は、膵臓のＢ細胞によるインスリン分泌を刺激する。現在最も一般的に使用されるスルホニル尿素は、グリクラジド、グリベンクラミド、グリピジドおよびグリキドンである。スルホニル尿素による治療は、１型糖尿病または二次性（膵性）糖尿病、妊娠および授乳、手術、重症感染症、外傷、スルホニル尿素剤または類似の薬剤に対するアレルギーの既往、または重度の低血糖のリスクが存在する場合には、禁忌である。
【００１１】
グリニド薬（メグリチニド類）は、作用の急速な発現および短い持続時間を特徴とし、これにより、一方で食後高血糖の効果的な制御を可能にしつつ、他方では低血糖のリスクを増加させないことをも可能にする。
【００１２】
食後グルコースレベルに作用することを特に意図した製剤は、インクレチンミメティクス、ＤＰＰ−４阻害剤、アミリンアナログおよびグルカゴン様ペプチド１アナログである。これらの薬剤は、膵臓および胃腸管のホルモン分泌における、現存する欠乏を補い、インスリンおよびグルカゴンの分泌、満腹感、ならびに胃内容排出に作用する。これらは、極めて急速な発現および短時間の血糖降下作用を特徴とし、従って、その使用により、それらがグルコース代謝に及ぼす影響に起因する、いかなる不利な展開を伴うこともない。急速かつ短時間の作用は、上記薬剤を食後血糖降下薬としてのみ有用たらしめる。
【００１３】
錠剤型のビグアナイド系血糖降下薬の群は、現在、主にメトホルミンによって代表される。ビグアナイド薬はインスリン分泌を促進しない。それらの血糖降下作用は、血中に十分なインスリンが存在する場合のみ現れる。ビグアナイド薬は、末梢組織上でその作用を増強し、インスリン抵抗性を減少させる。ビグアナイド薬は、筋肉および脂肪組織によるグルコースの取り込みを増加させる。それらは、肝臓のグルコース生成、腸でのグルコース吸収を減少させ、グルコースの利用を増加させ、食欲を減少させる。腎機能障害、いずれかの病因（心不全、肺疾患、貧血、感染症）による低酸素状態、糖尿病の急性合併症、アルコール中毒、乳酸血症の既往を有する場合、ビグアナイド薬を処方することは禁忌である。メトホルミンの副作用の中で、注目すべきは、高用量の薬剤を投与する際の消化不良の症状である。乳酸アシドーシスを発症する患者の症例が知られているが、これは、肝臓における嫌気性解糖を増加させかつ糖新生を阻害する当該薬剤の能力を反映するものである。
【００１４】
スルファニルアミド系血糖降下製剤およびビグアナイド薬の使用は、これらの薬剤の治療量と中毒量が近いことに起因する、胃腸障害、皮膚アレルギー、および低血糖状態の形態での副作用を生じ得る。
【００１５】
チアゾリジンジオン薬は、末梢組織、特に脂肪組織におけるインスリン抵抗性を減少させることにより血糖コントロールに作用し、また肝臓のグルコース生成をも減少させる。この群の製剤は低血糖の原因とはならないが、体重増加に寄与しうる。これらの薬剤は、心不全の症状、ならびに前増殖段階および増殖段階の糖尿病性網膜症の徴候を有する患者においては禁忌である。
【００１６】
血糖降下薬の単剤療法が有効でないことが判明した場合、時として血糖降下製剤を組み合わせることにより所望の効果が達成される場合もある。経口血糖降下製剤の以下の組み合わせが可能である：スルホニル尿素製剤およびチアゾリジンジオン薬、メトホルミンおよびメグリチニド薬、メトホルミンおよびチアゾリジンジオン薬、スルホニル尿素製剤およびa−グルコシダーゼ阻害剤。経口血糖降下製剤の組み合わせにより血糖コントロールが達成されない場合、インスリンおよびビグアナイド薬による併用療法、またはインスリンによる単剤療法が処方されるであろう。
【００１７】
スルホニル尿素製剤およびメトホルミンは双方とも、炭水化物代謝の補強に作用するが、これらの血糖降下作用の機序は異なる。これらの側面により、これらの薬剤を併用療法において使用することが可能となる。
【００１８】
複合作用を有する経口血糖降下製剤グリボメット（Glibomet）は、2.5 mgのグリベンクラミドおよび400 mgのメトホルミンから成る。該薬剤に含まれるグリベンクラミドは膵臓のＢ細胞によるインスリン分泌を刺激し、一方メトホルミンは主に肝臓においてインスリン抵抗性を低下させ、これには、糖新生の阻害、肝臓におけるグルコース形成速度の低下、およびそれらの循環系への受け入れが伴う。併用薬の使用は血糖降下作用を促進するが、メトホルミンの使用に伴う乳酸アシドーシスの脅威はそのままである。
【００１９】
薬剤的に許容される担体中にナテグリニドおよび抗糖尿病薬グリタゾンを含む、代謝障害、主に糖尿病および糖尿病に関連する障害の治療のための併用薬が公知である。グリタゾンは、ピオグリタゾン、ロシグリタゾンまたはトログリタゾンに代表され得る（ロシア特許第２２８０４４７号、２０００年９月１５日）。
【００２０】
併用薬は、複合製剤（combined preparation）または医薬組成物の形態をとり得る。そのような医薬組成物は、第３の抗糖尿病薬として、医薬担体中のメトホルミンを含み得る。ナテグリニドと別の抗糖尿病薬の併用は、２型糖尿病に対する相乗的治療効果および薬剤作用の長い持続時間を確実にし、結果としてインスリンの使用を後に引きのばすことにつながる。この組み合わせの欠点は、ともに乳酸アシドーシスの発症に寄与し得る、グリタゾンとメトホルミンを使用することである。
【００２１】
有効量のエクセナチドおよびダラルジン（dalargin）の組み合わせを含む、糖尿病治療のための薬剤が公知である（ロシア特許第２４１３５２８号、２００７年１月１８日）。この組み合わせは併用薬であり、エクセナチドの血糖降下およびコレステロール低下作用の増強により、糖尿病の効果的な治療を確実にする。この組み合わせの欠点は、注射形態の投与が好ましく用いられることである。
【００２２】
有効量のメトホルミンおよびグリベンクラミドの組み合わせを含む、インスリン非依存性２型糖尿病の治療のための薬剤が公知であり、また、1.7〜2.2 m2/gの粉末粒子表面面積を有する、経口投与用併用薬の一部を成すグリベンクラミドを用いて、インスリン非依存性糖尿病または高血糖症を治療する方法が公知である（ロシア特許第２２８６７８８号、１９９９年７月１２日）。
【００２３】
本発明は、グリベンクラミド単一形態の生物学的利用率に匹敵する、メトホルミン含有薬剤の組成物中のグリベンクラミドの生物学的利用率を確実にする。しかしながら、提案される製剤におけるメトホルミンの使用は、乳酸アシドーシスの可能性の増大を考慮する必要をもたらす。
【００２４】
このように、現在使用されている経口投与用の血糖降下薬は、異なる機序によって血糖を低下させるという課題を解決し、それゆえ、それらはある条件下においてのみ効果的である。主要疾患の症状の曖昧な発現、および一部の患者サブグループにおいて禁忌を生じる併用条件は、望まれない副作用をもたらす。最も重要な禁忌のうちの１つは、乳酸アシドーシスの素因である。
【００２５】
その目的で使用される圧倒的多数の製剤（スルホニル尿素誘導体、グリニド薬、ビグアナイド薬、チアゾリジンジオン薬およびインスリン）およびほぼすべてのそれらの組み合わせの投与期間中の血中グルコース量の低下は、体組織細胞におけるグルコースの顕著な蓄積を特徴とする。過剰なグルコースが細胞内に蓄積して解糖産物の生成の増加を招き、該産物のその後の変換物は、酸化エネルギー代謝においてそれらが使用される度合いが不十分な場合、いくつかの望まれない副作用をもたらすが、中でも最も危険なのが乳酸アシドーシスである。
【００２６】
体内での乳酸の過剰な蓄積およびその後の乳酸アシドーシスは、ビグアナイド薬摂取の副作用として、最も明白に観察される。患者が乳酸アシドーシスおよびケトアシドーシスの症状を有する場合に、同一の代謝シフトが血糖降下手段（スルホニル尿素誘導体、チアゾリジン薬、およびグリニド薬）の使用を制限する根拠となる。加えて、高レベルの解糖産物は脂肪酸合成の活性化を招き、結果として、いくつかの血糖降下製剤（スルホニル尿素誘導体、チアゾリジン薬、グリニド薬）の投与期間中に観察される体重増加の理由となる。
【００２７】
先に述べたとおり、血糖降下薬に関する記載された問題は、そのような薬剤が組み合わせて使用された場合も、依然として残る。
【００２８】
従って、その使用に伴う解糖産物の細胞内蓄積がより少ないであろう抗糖尿病製剤の開発は、現在、実に適切であると思われる。これは、望まれない副作用の可能性を低減することを可能にする。
【００２９】
公知の通り、解糖の間に形成されるピルビン酸の代謝は、クレブス回路におけるその酸化に関連し、これには解糖の間に合成される補助因子に加え、さらなる補助因子の復元が伴う。上記補助因子の主な消費は、ミトコンドリアでの酸化的リン酸化の連鎖におけるＡＴＰ合成の間に生じる。ピルビン酸形成が増大した条件下では、天然のＡＴＰ消費は、還元型の補助因子の効率的な流出を確実にするには不十分となる。これが、グルコース量が増加した細胞内での、ピルビン酸からの過剰量の乳酸形成を招く。エネルギー依存性プロセスにおけるバックグラウンドＡＴＰの消費を増加させることを目的とし、糖尿病治療の実践において、他の解糖産物の還元型補助因子の放出を増加させるために、より高レベルの運動が用いられる。
【００３０】
同時に、細胞内プロセスにおいて還元型補助因子の消費を確実に促進するような成分を抗糖尿病薬の組成物において使用することにより、還元型補助因子の放出を増加させるという課題を解決できるだろう。
【００３１】
この点において、著者らは、ミトコンドリア内の酸化的リン酸化を脱共役させ得るいくつかの物質に注目した。当該脱共役により、ATP形成を伴わない、すなわち無意味な、酸素を水に還元するための還元型補助因子の使用が増大する。
【００３２】
著者らによるその後の研究は、ミトコンドリア内の酸化的リン酸化を脱共役させ得る天然フェノール化合物を使用することで、血糖降下製剤の投与期間中の解糖産物の蓄積に関連するアシドーシス発症を抑制し得ることを示している。
【００３３】
脂質代謝障害を治療する目的で、脂肪組織における熱産生を促進するために、酸化的リン酸化を脱共役させ得る天然フェノール化合物およびそれらを含む産物を使用することが提案されている（米国特許出願公開第２０１００２１５７８２号）。しかしながら、著者らは、血糖降下製剤投与期間中の解糖産物の蓄積に関連するアシドーシス発症を抑制するための、酸化的リン酸化を脱共役する目的での天然フェノール化合物のいかなる使用についても認識していない。
【００３４】
さらに、著者らにより実施された研究によれば、天然フェノール化合物とともにアスコルビン酸をさらに体内に投与すると、天然フェノール化合物がフェノール形態に保持されることによって前述の効果が促進される。還元された補助因子ＮＡＤＮ（ＮＡＤＰＨ）の、天然フェノール化合物を直接またはアスコルビン酸およびその誘導体の関与によって還元する能力により、安定した脱共役作用を得る可能性が提供される。
【００３５】
このように、天然ポリフェノール化合物の関与による、体細胞における上述の酸化還元サイクルの形成は、過剰な還元型補助因子を消費するためのさらなる経路を作り出す。
【００３６】
さらに、アスコルビン酸およびその誘導体の使用は、天然フェノール化合物の生物学的利用率を改善する。
【００３７】
抗酸化防御障害（antioxidant defense disorders）に関連する疾患の治療および予防のための、未焙煎コーヒー豆抽出物を含む医薬組成物の使用が公知であることを述べておく価値がある（ロシア特許第２３７８００３号、２００８年６月６日）。
【００３８】
その組成物の適用の効果は、血中グルコースレベル、糖化ヘモグロビン、コレステロールおよびトリグリセリドの低減にある。
【００３９】
コーヒー豆を含む組成物の注射により、患者において糖尿病または糖尿病誘発性障害を治療する方法が公知である（米国特許出願公開第２００９０１７５９７号）。
【００４０】
患者の糖尿病または糖尿病誘発性障害の治療におけるその組成物の適用の効果は、血糖、糖化ヘモグロビンＡ１Ｃ、トリグリセリドおよび低密度リポタンパク質レベルの安定化、または血糖レベルの正常化と定義される。
【００４１】
上述のすべての場合において、目的とするのは、所与の組成物の抗酸化作用による、糖尿病の直接的な治療効果を達成することである。
【００４２】
血糖降下製剤による糖尿病の治療において、解糖産物の蓄積に関連するアシドーシス発症を抑制する目的で、天然フェノール化合物を酸化的リン酸化の脱共役に使用するという著者らが発見した効果を、記載、暗示、または予測した公知の資料は存在しない。
【００４３】
提案される発明に最も近いものは、抗糖尿病薬、特にメトホルミンを含む医薬組成物、および、抗糖尿病製剤を患者に処方することを含む糖尿病の治療方法である（Balabolkin M.I., Diabetology, Moscow, Meditsina, 2000; Ametov A.S. Type 2 Diabetes mellitus: Basics of Pathogenesis and Therapy. Moscow, 2003）。
【００４４】
しかしながら、既に先に述べたとおり、その目的で使用される圧倒的多数の抗糖尿病製剤（スルホニル尿素誘導体、チアゾリジン薬、グリニド薬、ビグアナイド薬、チアゾリジンジオン薬、インスリン）およびほぼすべての公知のそれらの組み合わせの投与下での血糖の低下は、体組織細胞におけるグルコースの顕著な蓄積を特徴とする。細胞内に蓄積する過剰なグルコースは、解糖産物の生産増大をもたらし、その産物のその後の変換物は、それらが酸化のエネルギー代謝において使用される度合いが不十分な場合、いくつかの望まれない副作用をもたらし、中でも最も危険なのが乳酸アシドーシスである。
【００４５】
本発明の目的は、解糖産物の利用促進によって血糖降下製剤適用の副作用の発生率を減少させ、かつ、乳酸の生成をも減少させるであろう、糖尿病治療のための併用薬を開発すること、および全般的な糖尿病治療においてそのような薬剤を使用する機会を創出することである。
【００４６】
本発明の技術的効果は、公知の血糖降下薬の使用における乳酸アシドーシス発症のリスクを低減することにある。
【発明の概要】
【００４７】
本発明の本質は、公知の血糖降下物質と、酸化的リン酸化を脱共役させる能力を有する天然フェノール化合物と、さらには天然フェノール化合物を活性フェノール状態に維持することによりその生物学的利用率を改善するアスコルビン酸との組み合わせの使用にある。
【００４８】
定められた目的を達成するために、著者らは、少なくとも１つの抗糖尿病薬、および酸化的リン酸化を脱共役させる能力を有する天然フェノール化合物またはそのような化合物の混合物を含む、糖尿病治療のための組み合わせを提案している。
【００４９】
好ましくは、上記組み合わせは、少なくとも２％の量で、天然フェノール化合物またはそのような化合物の混合物を含む。
【００５０】
好ましくは、上記組み合わせ中の抗糖尿病薬は、ビグアナイド薬、チアゾリジンジオン薬またはそれらの組成物を含む群から選択される。
【００５１】
好ましくは、上記組み合わせにおいて使用される、酸化的リン酸化を脱共役させる能力を有する天然フェノール化合物は、クロロゲン酸またはエピガロカテキン−３−没食子酸またはエピカテキン−３−没食子酸またはエラグ酸またはケルセチンまたはジヒドロケルセチンまたはフィセチンまたはクルクミンまたはリスベラトロールまたはカプサイシンまたはコーヒー酸フェネチルエステルからなる群から選択される。
【００５２】
このような化合物は、未焙煎コーヒー豆抽出物、緑茶、ザクロ、アカシアカテキュー、ウコン、イタドリ、唐辛子、プロポリス、および植物または動物由来のいくつかの他の産物の組成中に存在することが知られている。前記天然フェノール化合物は、それらを含む産物から公知の方法により単離してもよく、または合成的に得てもよく、または濃縮抽出物の形態で使用してもよい。著者らにより実施された研究によれば、天然フェノール化合物の有効量（１回分の用量）は、10〜200 mgである。
【００５３】
好ましくは、上記組み合わせ中の天然フェノール化合物の混合物は、植物抽出物から成る。
【００５４】
好ましくは、上記組み合わせは、抗糖尿病薬としてメトホルミンを、植物抽出物としてコーヒー豆抽出物を含む。
【００５５】
好ましくは、上記組み合わせは、抗糖尿病薬としてメトホルミンを、植物抽出物として未焙煎コーヒー豆抽出物を含む。
【００５６】
好ましくは、上記組み合わせは、未焙煎コーヒー豆抽出物の量の少なくとも２５％の量の、アスコルビン酸またはその薬剤的に許容される誘導体をさらに含む。
【００５７】
著者らはまた、少なくとも１つの抗糖尿病薬と、天然フェノール化合物またはそのような化合物の混合物と、薬剤的に許容される担体との組み合わせを含む組成物薬を構成する、糖尿病およびその合併症の治療のための医薬組成物も提案している。
【発明を実施するための形態】
【００５８】
上記を前提として、好ましい実施形態は、メトホルミン、未焙煎コーヒー豆抽出物およびアスコルビン酸を抗糖尿病薬として治療的に有効な量で含む組成物である。
【００５９】
上記を前提として、メトホルミン、未焙煎コーヒー豆抽出物およびアスコルビン酸の質量は、１００：２０：１０〜１００：４０：３０の割合で互いに関連することが好ましい。
【００６０】
上記を前提として、組成物は、粉剤、粒剤、錠剤、ペレット剤、カプセル剤、飴剤、懸濁剤、乳剤または可溶化物（solubilisate）の形態に作製されてよく、また、補助剤を、特には、充填剤（二酸化ケイ素、微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム等）、結合剤（ポリビニルピロリドン、ビニルピロリドンおよびビニルアセテートコポリマー等）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム等）、乳化剤（オキシエチル化ヒマシ蝋、レシチン等）、可溶化剤（ポリソルベート、ポロキサマー等）、延長化剤（prolongator）（ベヘン酸グリセリド、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等）、および矯正剤（フルクトース、ラクトース、ソルバイト等）を含み得る。
【００６１】
組成物中の抗糖尿病薬は、それらの個々の投与に関して推奨される用量で使用される。本願組成物の投与の頻度は、その成分である抗糖尿病薬の投与の頻度と一致する。投与の期間は、いずれかの乳酸アシドーシス症状が続く限り継続されるべきであるが、最短でも２週間であるべきである。乳酸アシドーシス再発のリスクが低減されるので、患者がｐＨ値および血中乳酸量の回復後も本願組成物を服用し続けることが好ましい。
【００６２】
著者らはまた、少なくとも１つの抗糖尿病薬および１つの天然フェノール化合物またはそのような化合物の混合物の組み合わせを含む、糖尿病治療に有効な医薬品セットも提案している。
【００６３】
このようなセットは、抗糖尿病薬から成る個々に製造された製剤、および天然フェノール化合物またはその混合物を含む個々に製造された別の製剤を構成する。そのような製剤は、アスコルビン酸またはその薬剤的に許容される誘導体を含み得る。
【００６４】
抗糖尿病薬から成る前記製剤は、例えば、塩酸メトホルミン、および補助剤（ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶セルロース、ポビドン、ステアリン酸マグネシウム）を含んでもよく、錠剤形態であってもよい。
【００６５】
天然フェノール化合物を含む製剤は、例えば、未焙煎コーヒー豆抽出物（５０〜５５％ポリフェノール類）、アスコルビン酸、および補助剤として微結晶セルロースを含み得る。そのような組成をハードゼラチンカプセルに入れてもよい。
【００６６】
錠剤およびカプセル剤を、適切な標示を付したブリスターパックまたはフラスコにパッケージし、同じ箱の中に、同数の錠剤およびカプセル剤を収めてもよい。
【００６７】
組成に応じて、１、２および３個の錠剤およびカプセル剤を、単用量として処方し得る。
【００６８】
また、少なくとも１つの抗糖尿病薬と、天然フェノール化合物またはそのような化合物の混合物とから成る組み合わせを患者に処方することを含む、糖尿病併用療法の方法も提案する。
【００６９】
前述の一般性を限定することなく、本願医薬組成物は、組み合わせとして使用され得る。
【００７０】
患者において乳酸アシドーシス症状が発生した際に、またはアシドーシスの素因を既往歴に有するという患者の情報がある場合の糖尿病治療の開始時に、上記医薬組成物が糖尿病の治療において使用される。組成物に含まれる特定の抗糖尿病性血糖降下薬の治療的有効量に対応する量で、１日用量を２つまたは３つの１回分用量に分けて、該組成物が処方される。これは、食中または食後、１日２または３回の、本願組成物を含む２〜３個のカプセル剤または錠剤の服用に相当する。患者は、アシドーシスの症状が消失するまで、しかし最短でも２週間以上、該組成物を服用する。血液ｐＨ値および血中乳酸量の回復後は、本願発明に従う天然フェノール化合物を加えていない、１つの抗糖尿病性血糖降下薬のみによる治療に切り替えることが可能である。しかしながら、本願組み合わせは、乳酸アシドーシス再発のリスクを低減するため、患者にとって好ましい選択肢は、該組み合わせの服用を継続することである。
【００７１】
提案される糖尿病併用療法の方法において、本願組み合わせは、医薬品セットの形態で使用され得る。
【００７２】
医薬組成物の形態での本願組み合わせの使用について患者に関し指示がある場合、本発明の医薬品セットが用いられる。医薬組成物の場合のように、医薬品セット形態の併用薬の量は、それに含まれる特定の抗糖尿病性血糖降下薬の治療的有効量により決定される。組み合わせは、食中または食後に１日２〜３回、服用あたり１セットまたは２セットで処方される。医薬品セットの投与は、患者のアシドーシス症状が消失するまで、しかし、２週間以上は継続される。そうは言っても、好ましい選択肢は、その後の糖尿病治療において本願セットの投与を継続することである。その期間では、血糖降下作用または抗アシドーシス作用を増強する目的で、臨床検査結果に応じて、適切な種類の個々の成分を当該セットの１回分の用量に追加してもよい。
【００７３】
請求人はまた、血糖降下製剤を使用する糖尿病治療における、乳酸アシドーシスの発症を抑制する薬剤としての、酸化的リン酸化を脱共役させる能力を有する天然フェノール化合物またはそのような化合物の混合物の適用を保護することも意図する。
【００７４】
以下の実施例は、その範囲を限定することなく、本発明の利用可能性および有効性を実証する。
【実施例】
【００７５】
実施例１
ハードゼラチンカプセル内に封入された医薬組成物によって表される、本発明の糖尿病治療のための組み合わせ
【００７６】
カプセルには、250 mgの塩酸メトホルミン、125 mgの未焙煎コーヒー豆抽出物（50〜55％ポリフェノール類）および25 mgの微結晶セルロースの混合物が含まれる。
【００７７】
２個または３個のカプセル剤の１回分用量で、組み合わせが処方される。
【００７８】
実施例２
ハードゼラチンカプセル内に封入された医薬組成物によって表される、本発明の糖尿病治療のための組み合わせ
【００７９】
カプセルには、250 mgの塩酸メトホルミン、60 mgの未焙煎コーヒー豆抽出物（50〜55％ポリフェノール類）、36.5 mgのアスコルビン酸および3.5 mgの二酸化ケイ素の混合物が含まれる。
【００８０】
一回に２〜３個のカプセル剤を服用するように、組み合わせが処方される。
【００８１】
実施例３
ハードゼラチンカプセル内に封入された医薬組成物によって表される、本発明の糖尿病治療のための組み合わせ
【００８２】
カプセルには、250 mgの塩酸メトホルミン、1 mgのマレイン酸ロシグリタゾン、50 mgのクロロゲン酸、74 mgのアスコルビン酸および25 mgの微結晶セルロースの混合物が含まれる。
【００８３】
一回に２〜３個のカプセル剤を服用するように、組み合わせが処方される。
【００８４】
実施例４
錠剤形態の医薬組成物によって表される、本発明の糖尿病治療のための組み合わせ
【００８５】
錠剤には、250 mgの塩酸メトホルミン、60 mgのクロロゲン酸、および補助剤（微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸マグネシウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリエチレングリコール、二酸化チタン）が含まれる。
【００８６】
上記錠剤は、メトホルミンおよびクロロゲン酸の混合物に結合剤を添加して、湿式造粒法により顆粒を製造すること；その後顆粒を可溶化剤および滑沢剤と混合すること；混合物を錠剤化すること；ならびに得られた錠剤を親水性ポリマーフィルムでコーティングすること；を含む方法により製造される。
【００８７】
一回に２〜３個の錠剤を服用するように、組み合わせが処方される。
【００８８】
実施例５
錠剤形態の医薬組成物によって表される、本発明の糖尿病治療のための組み合わせ
【００８９】
錠剤には、250 mgの塩酸メトホルミン、1.25 mgのグリベンクラミド、30 mgのクロロゲン酸、40 mgのアスコルビン酸、および補助剤（微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸マグネシウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリエチレングリコール、二酸化チタン）が含まれる。
【００９０】
上記錠剤は、メトホルミン、グリベンクラミド、クロロゲン酸およびアスコルビン酸の混合物に結合剤を添加して、湿式造粒法により顆粒を製造すること；その後顆粒を可溶化剤および滑沢剤と混合すること；混合物を錠剤化すること；ならびに得られた錠剤を親水性ポリマーフィルムでコーティングすること；を含む方法により製造される。
【００９１】
一回に２〜３個のカプセル剤を服用するように、組み合わせが処方される。
【００９２】
実施例６
別々に製造された、抗糖尿病性血糖降下薬を含有する錠剤と、天然フェノール化合物を含有する錠剤とから成る医薬品セットによって表される、本発明の糖尿病治療のための組み合わせ。
【００９３】
血糖降下物質を含有する錠剤には、500 mgの塩酸メトホルミン、15 mgの塩酸ピオグリタゾン、および補助剤（微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸マグネシウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリエチレングリコール、二酸化チタン、タルク）が含まれる。
【００９４】
上記錠剤は、メトホルミンおよびピオグリタゾンの混合物に結合剤を添加して、湿式造粒法により顆粒を製造すること；その後顆粒を可溶化剤および滑沢剤と混合すること；混合物を錠剤化すること；ならびに得られた錠剤を親水性ポリマーフィルムでコーティングすること；を含む方法により製造される。
【００９５】
ポリフェノール化合物を含有する錠剤には、100 mgのクロロゲン酸および補助剤（ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶セルロース、ポビドン、ステアリン酸マグネシウム）が含まれる。
【００９６】
上記錠剤は、クロロゲン酸および結合剤の混合物の顆粒を湿式造粒法により製造すること；その後顆粒を可溶化剤および滑沢剤と混合すること；ならびに混合物を錠剤化すること；を含む方法により製造される。
【００９７】
一方では血糖降下薬を含有する錠剤を、他方では天然フェノール化合物を含有する錠剤を、異なる標示を付したブリスターパックまたはフラスコにパッケージして、同じ箱の中に、同数の各種類の錠剤を収める。
【００９８】
一回に１個または２個の各種類の錠剤を服用するように、組み合わせが処方される。
【００９９】
実施例７
別々に製造された、抗糖尿病性血糖降下薬を含有する錠剤と、天然フェノール化合物およびアスコルビン酸の混合物を含有するカプセル剤とから成る医薬品セットによって表される、本発明の糖尿病治療のための組み合わせ
【０１００】
錠剤には、500 mgの塩酸メトホルミンおよび補助剤（ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶セルロース、ポビドン、ステアリン酸マグネシウム）が含まれる。
【０１０１】
上記錠剤は、メトホルミンに結合剤を添加した混合物の顆粒を湿式造粒法により製造すること；その後顆粒を可溶化剤および滑沢剤と混合すること；ならびに混合物を錠剤化すること；を含む方法により製造される。
【０１０２】
カプセルには、100 mgの未焙煎コーヒー豆抽出物（50〜55％ポリフェノール類）、75 mgのアスコルビン酸および25 mgの微結晶セルロースの混合物が含まれる。
【０１０３】
錠剤およびカプセル剤を、それぞれの標示を付したブリスターパックまたはフラスコにパッケージし、同じ箱の中に、同数の錠剤およびカプセル剤を収める。
【０１０４】
一回に１セット（１個の錠剤および１個のカプセル）または２セット（２個の錠剤および２個のカプセル剤）を服用するように、組み合わせが処方される。
【０１０５】
実施例８
別々に製造された、抗糖尿病性血糖降下薬を含有する錠剤と、天然フェノール化合物およびアスコルビン酸の混合物を含有する錠剤とから成る医薬品セットによって表される、本発明の糖尿病治療のための組み合わせ
【０１０６】
血糖降下薬を含有する錠剤には、500 mgの塩酸メトホルミン、5 mgのグリベンクラミド、および補助剤（クロスカルメロースナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、デンプン、微結晶セルロース、ポビドン、ラクトース一水和物）が含まれる。
【０１０７】
上記錠剤は、メトホルミンおよびグリベンクラミドの混合物に結合剤を添加して、湿式造粒法により顆粒を製造すること；その後顆粒を可溶化剤および滑沢剤と混合すること；ならびに混合物を錠剤化すること；を含む方法により製造される。
【０１０８】
200 mgの未焙煎コーヒー豆抽出物、50 mgのアスコルビン酸、および補助剤（コンプリトール 888 ATO、コリドン VA64、コリドン 17PF、ステアリン酸マグネシウム）を含む、活性物質の徐放のための錠剤。
【０１０９】
上記錠剤は、活性物質および補助成分の混合物の直接圧縮ケーキの粉砕により得られた顆粒形態の錠剤塊の直接圧縮法により製造される。
【０１１０】
一方では血糖降下薬を含有する錠剤を、他方では天然フェノール化合物およびアスコルビン酸の混合物を含有する錠剤を、異なる標示を付したブリスターパックまたはフラスコにパッケージして、同じ箱の中に、同数の各種類の錠剤を収める。
【０１１１】
一回に１個または２個の各種類の錠剤を服用するように、組み合わせが処方される。
【０１１２】
実施例９
別々に製造された、抗糖尿病性血糖降下薬を含有する錠剤と、天然フェノール化合物およびアスコルビン酸の混合物の懸濁液を含有するソフトゼラチンカプセルから成る医薬品セットによって表される、本発明の糖尿病治療のための組み合わせ
【０１１３】
実施例７のメトホルミンの錠剤。
75 mgの未焙煎コーヒー豆抽出物（50〜55％ポリフェノール類）および50 mgのアスコルビン酸の混合物を150 mgのポリソルベート80（Tween 80）中に懸濁した懸濁液を含むソフトゼラチンカプセル。
【０１１４】
カプセル剤に充填する懸濁液は、予め混合された未焙煎コーヒー豆抽出物とアスコルビン酸の調合物を、真空リアクター中で絶えず撹拌しながらポリソルベート80中に徐々に混和することにより、均一なペースト状の形態に製造される。
【０１１５】
錠剤およびカプセル剤を、それぞれの標示を付したブリスターパックまたはフラスコにパッケージし、同じ箱の中に、同数の錠剤およびカプセル剤を収める。
【０１１６】
実施例１０
ミトコンドリア内の酸化的リン酸化を脱共役させる能力がある天然フェノール化合物による、MDCK連続株細胞（イヌの肝細胞）において誘発された細胞内pH低下の抑制を、細胞培養液にメトホルミンおよびロシグリタゾンを添加することにより実施した。
【０１１７】
MDCK細胞培養物は、10％仔ウシ血清を添加したDMEM培地中で37℃、5％CO2（pH7.4）にて増殖させた。連続した単層の形成後、トリプシン−EDTA溶液を使用して、細胞を懸濁液に移した。EDTA−トリプシンのあらゆるそれ以上の作用を停止させるために、細胞を完全に分離した際、胎仔ウシ血清およびDMEM培地を、等しい割合（１：１）で培養フラスコ中に導入した。細胞をDMEM培地で２回洗浄した。最後の洗浄の完了後、以下の血糖降下物質：塩酸メトホルミン（５ＭＭ）またはマレイン酸ロシグリタゾン（２５μΜ）；のうちの１つ、および１種の天然フェノール化合物（５０μΜ）を添加した、１０ＭＭのｄ−グルコースを含有するクレブス−ヘンゼライト培地中、１・１０６細胞／ｍＬの濃度で、培養フラスコ中に細胞懸濁液を調製した。
【０１１８】
懸濁液を、３７℃で６０分間、試験管を振盪することにより１０分毎に撹拌しながらインキュベートした。インキュベーションの完了後、細胞を遠心分離により沈殿させ、１０ＭＭのｄ−グルコースおよび５μΜのｐＨ感受性色素２’，７’−ビス−（２−カルボキシエチル）−５−（および−６）−カルボキシフルオレセインアセトキシメチルエステル（BCECF-AM）を含有するクレブス−ヘンゼライト培地中に再懸濁した。得られた懸濁液を、３７℃で２５分間インキュベートして、細胞に色素を吸収させた。次いで懸濁液をクレブス−ヘンゼライト培地中で３回洗浄し、ここでHEPESを炭酸水素塩に置き換えた。得られた細胞を、同じバッファー中に1・106細胞/mLの濃度で懸濁し、３７℃に温度調節しながら、蛍光測定のためにマイクロキュベット中に導入した。Perkin Elmer製LS-5分光蛍光光度計で、蛍光波長を530nm、励起波長を２つの波長：490nm（pH感受性の蛍光）および440nm（等吸収点）に設定して、蛍光測定を実施した。H+/K+イオン透過担体ナイジェリシン（10μg/mL）を含有する、異なるpH値（6.5〜7.5）のクレブス−ヘンゼライト培地中に懸濁した1・106細胞/mLの細胞懸濁液を用いて取得した検量線の相関に基づき、440nmでの蛍光に対する490nmでの蛍光の比率を使用して、細胞内pHを算出した。
【０１１９】
細胞培養液へのメトホルミンおよびロシグリタゾンの添加を用いた、MDCK連続株細胞（continuous line cells）の細胞内pHを変化させる、ミトコンドリア内の酸化的リン酸化を脱共役させる能力がある天然フェノール化合物の影響を、表１に示す。
【０１２０】
得られた結果（表１）は、ビグアナイド薬（メトホルミン）およびチアゾリジンジオン薬（ロシグリタゾン）の群からの血糖降下薬を細胞培養液に添加することによりMDCK連続株細胞中で誘発される細胞内pHの低下を防止する、酸化的リン酸化を脱共役させ得る天然フェノール化合物の能力を証明している。
【０１２１】
実施例１１
高用量のメトホルミンの静脈内注射、ミトコンドリア内の酸化的リン酸化を脱共役させ得る天然フェノール化合物およびアスコルビン酸の溶液および分散物の胃内投与による、ラットにおける乳酸アシドーシス発症抑制の実証
【０１２２】
本実験では、８か月齢、体重250〜280 gのスプラーグドーリーラットを使用した。動物は、水および齧歯類用飼料を自由に摂取できるようにして、各１２時間の明／暗周期下に置いた。実験開始の１２時間前に飼料の摂取を停止させたが、水は引き続き自由に摂取できるようにした。生理的溶液中2.5％溶液の形態の250 mg/kgの用量のメトホルミンを、１時間間隔で４回、尾静脈に直接的に注射した。最初のメトホルミン注射の３０分前に、水またはアスコルビン酸水溶液中の、天然フェノール化合物の溶液または懸濁液を、実験動物に経口で投与した。天然フェノール化合物の用量は5 mg/kgであり、アスコルビン酸の用量は2.5 mg/kgであった。インタクトな動物；メトホルミンのみを投与した動物；ならびにメトホルミンと天然フェノール化合物不含のアスコルビン酸溶液とを投与した動物をコントロール群とした。
【０１２３】
最後のメトホルミン注射の１時間後、動物の舌下静脈から血液を採取し（約0.5 mL）、血餅を形成させるために、抗凝固薬を加えずに試験管内に入れて30分間室温で放置した。15分間、2,000 gにて遠心分離することにより血清を分離して、0.25mLを1.5mLマイクロ遠心管に入れた。除タンパクのため、得られた血清に0.25mLの冷たい0.5Mメタリン酸溶液を添加、撹拌し、５分間氷上に放置した。４℃で５分間、10,000 gにて遠心分離することにより、変性したタンパク質を沈殿させた。上清（0.4 mL）を新しいマイクロ遠心管に回収し、25μLの5M炭酸カリウム溶液の添加により酸を中和し、４℃で５分間、10,000 gにて遠心分離することにより残渣を分離した。回収した上清を直ちに使用して、Perkin Elmer製LS-5分光蛍光光度計上のマイクロキュベットでの使用に適応させた標準的な試薬のセットを使用し、蛍光定量的手法に従って乳酸量を測定した。
【０１２４】
ラットにおける、ミトコンドリア内の酸化的リン酸化を脱共役させ得る天然フェノール化合物がメトホルミンにより引き起こされる乳酸アシドーシス発症に及ぼす影響を、表２に示す。
【０１２５】
得られた結果（表２）は、ミトコンドリア内の酸化的リン酸化を脱共役させ得る天然フェノール化合物の、乳酸の蓄積および乳酸アシドーシスの発症を抑制する能力、特に、高用量の血糖降下薬メトホルミンの投与によって誘発されるものを抑制する能力を証明している。前述のフェノール化合物とアスコルビン酸とを併せた投与は、記録された抗アシドーシス作用の促進に寄与するが、これは、本発明によるこれらの物質の併用の利益を裏付けている。
【０１２６】
実施例１２
臨床例−メトホルミン単一製剤の投与から、メトホルミン錠剤ならびに未焙煎コーヒー豆抽出物およびアスコルビン酸を含有するカプセル剤の形態の組み合わせに移行した患者における、乳酸アシドーシス症状の除去
【０１２７】
初めて２型糖尿病と診断された、患者Ｖ、４７歳。診断確定後、１日500 mgから開始する、メトホルミン単一製剤の形態で、血糖降下療法を処方した。７日間の間、胃腸管において望ましくない作用は観察されず、メトホルミンの用量を、500 mgを１日２回に増量した。１週間後に実施された臨床検査では、患者における軽度の乳酸アシドーシス症状が検出されたが（表３を参照のこと）、これは、上限をわずかに超える血中乳酸量、および下限よりも低下した血液ｐＨにより示された。アシドーシスを発症する傾向は、肝機能不全に関連し、さらに肝炎の病歴と関連していた。同定された生化学的変化を考慮して、患者を２週間の間、血糖降下薬の錠剤および天然フェノール化合物とアスコルビン酸との混合物を含むカプセル剤から成る実施例７の１日に２つの組み合わせに切り替えた。適当な時期に実施された臨床検査では、乳酸量および血液ｐＨの正常化が証明された。実施例７による１日に２つの組み合わせにさらにメトホルミン単一製剤の500 mg錠を４週間の間追加（合計、500 mgを１日３回）し、続いてその後４週間の間500 mgを１日３回の用量でのメトホルミン単一製剤の投与に移行した後も、前記指標の正常値は安定していた。しかしながら、残存する肝機能不全のバックグラウンドに対して、いかなるそれ以上の乳酸量低下およびｐＨ上昇の傾向も患者にみられないことを考慮すると、その後の患者の治療において、実施例７の２つの組み合わせ、および支持療法として500 mgのメトホルミン単一製剤の追加の錠剤（合計、500 mgのメトホルミンを１日３回）を処方することが合理的であると思われた。４週間後に実施された患者の臨床検査では、炭化水素の代謝を特徴づける生化学的血液指標の更なる改善が認められたが、このことは、患者のアシドーシスの素因を前提とした２型糖尿病の治療における、経口血糖降下薬と天然フェノール化合物およびアスコルビン酸との組み合わせの使用の正の治療効果を証明している。
【０１２８】
経口血糖降下薬と天然フェノール化合物およびアスコルビン酸との組み合わせによる治療中の患者Ｖの炭化水素代謝を特徴づける、生化学的臨床検査の血液指標の動態を表３に示す。
【０１２９】
【表１】
2014527506.tif 000002
備考。
１．３つの平行試験において測定を行った。データは平均値±平均誤差として表される。
２．血糖降下物質およびミトコンドリアの酸化的リン酸化を脱共役させ得る物質を含まない培地中でのインキュベーション下の細胞における細胞内ｐＨは、7.43±0.06と等しかった。インキュベーション培地に血糖降下薬のみを添加した時の、細胞内ｐＨの記録された低下は、スチューデントのｔ検定によるP＜0.05に相当する。
３．＊−脱共役剤を含まない試験におけるｐＨ値と比較してスチューデントのｔ検定でP＜0.05。
【０１３０】
【表２】
2014527506.tif 000003
備考。
１．各群は３匹の動物を含んだ。データは平均値±平均誤差として表される。
２．インタクトな動物の血清中乳酸量は1.64±0.19mMである。メトホルミン投与により引き起こされる乳酸量の記録された増加は、スチューデントのｔ検定によるP＜0.05に相当する。
３．＊−天然フェノール化合物を含まない投与を受けた群と比較してスチューデントのｔ検定でP＜0.05。＊＊−アスコルビン酸を含まない投与を受けた群と比較してP＜0.05。
【０１３１】
【表３】
2014527506.tif 000004
備考。組み合わせおよびメトホルミンの用量は本明細書に記載される通りである。
【国際調査報告】
2014527506.tif 000005
2014527506.tif 000006
2014527506.tif 000007