(57)【要約】  本開示は、多官能性ラジカル失活剤である治療薬の同定方法を提供する。本開示はまた、式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩ−Ａ）の化合物：並びに、その薬学的に許容可能な塩、これらの化合物を含む組成物、並びに、ＡＴＰ産生の減少及び／または酸化ストレス及び／または脂質過酸化をもたらすミトコンドリアの機能の低下に関連する疾患の処置若しくは抑制などの多様な用途におけるこれらの化合物の使用方法を提供する。
2014510143.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
2014510143.tif 000046
（式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、−ＯＲ５、−ＳＲ５、−ＮＨＲ５または−Ｎ（Ｒ５）２であり、各々は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ６、−ＮＲ６２、−ＣＯ２Ｒ６及び−ＣＯＮＲ６２から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されており；
式中、各Ｒ５は独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり；式中、各Ｒ６は独立して、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
Ｒ２は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、−ＯＲ５、−ＳＲ５、−ＮＨＲ５または−Ｎ（Ｒ５）２であり、各々は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ６、−ＮＲ６２、−ＣＯ２Ｒ６及び−ＣＯＮＲ６２から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されており；
Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、−ＯＲ５、−ＳＲ５、−ＮＨＲ５、−Ｎ（Ｒ５）２であり、各々は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ７、−ＮＲ７２、−ＣＯ２Ｒ７、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、−ＣＯＮ（Ｒ７）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）２、−ＮＨＣ（ＮＨ）Ｎ（Ｒ７）２、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されており、式中、各シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ８で任意選択的に置換されており；
式中、各Ｒ７は独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、複素環、アリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、アリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、ヘテロアリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）または複素環（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり、式中、各シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ８で任意選択的に置換されており；
式中、各Ｒ８は独立して、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノまたはジＣ１〜Ｃ６アルキルアミノであり；並びに
Ｒ４は、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、−ＯＲ５、−ＳＲ５、−ＮＨＲ５、−Ｎ（Ｒ５）２であり、各々は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ７、−ＮＲ７２、−ＣＯ２Ｒ７、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、−ＣＯＮ（Ｒ７）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）２、−ＮＨＣ（ＮＨ）Ｎ（Ｒ７）２、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されており、式中、各シクロアルキル、シク
ロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ８で任意選択的に置換されており；
但し、Ｒ３若しくはＲ４の少なくとも一方は、任意選択的に置換されているＣ４〜Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されているＣ４〜Ｃ２０アルケニル、または任意選択的に置換されているＣ４〜Ｃ２０アルキニルである）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
Ｒ１がＣ１〜Ｃ６アルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が、−ＯＲ５、−ＳＲ５、−ＮＨＲ５または−Ｎ（Ｒ５）２である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２が、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、−ＯＲ５、−ＳＲ５、−ＮＨＲ５または−Ｎ（Ｒ５）２である、請求項１〜３の何れか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２が、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはＣ１〜Ｃ６アルケニルである、請求項１〜４の何れか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２が、−ＯＲ５、−ＳＲ５、−ＮＨＲ５または−Ｎ（Ｒ５）２である、請求項１〜４の何れか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ２が水素またはハロゲンである、請求項１〜３の何れか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ２が水素である、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ２がハロゲンである、請求項７に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ１及びＲ２の両方がＣ１〜Ｃ６アルキルである、請求項１または４に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ１及びＲ２の両方がメチルである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ１がＣ１〜Ｃ６アルキルであり、及び、Ｒ２がＣ１〜Ｃ６アルケニルである、請求項１または４に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ１がＣ１〜Ｃ６アルキルであり、及び、Ｒ２が−ＮＨＲ５である、請求項１または４に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ１がＣ１〜Ｃ６アルキルであり、及び、Ｒ２が−ＯＲ５である、請求項１または４に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ１がＣ１〜Ｃ６アルキルであり、及び、Ｒ２が水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ１がＣ１〜Ｃ６アルキルであり、及び、Ｒ２がハロゲンである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ３が、任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ３アルキル、任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ３アルケニルまたは任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ３アルキニルである、請求項１〜１６の何れか一項に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ３が任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ３アルキルである、請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ３がメチルである、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ３が、−ＯＲ５、−ＳＲ５、−ＮＨＲ５または−Ｎ（Ｒ５）２である、請求項１〜１６の何れか一項に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ４が、任意選択的に置換されているＣ４〜Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されているＣ４〜Ｃ２０アルケニルまたは任意選択的に置換されているＣ４〜Ｃ２０アルキニルである、請求項１〜２０の何れか一項に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ４が任意選択的に置換されているＣ５〜Ｃ２０アルキルである、請求項２１に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ４が、任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ３アルキル、任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ３アルケニルまたは任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ３アルキニルである、請求項１〜２０の何れか一項に記載の化合物。
【請求項２４】
Ｒ４が任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ３アルキルである、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｒ４がメチルである、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｒ４が、−ＯＲ５、−ＳＲ５、−ＮＨＲ５または−Ｎ（Ｒ５）２である、請求項１〜２０の何れか一項に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒ３が、任意選択的に置換されているＣ４〜Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されているＣ４〜Ｃ２０アルケニルまたは任意選択的に置換されているＣ４〜Ｃ２０アルキニルである、請求項２３〜２６の何れか一項に記載の化合物。
【請求項２８】
Ｒ４が任意選択的に置換されているＣ５〜Ｃ２０アルキルである、請求項２７に記載の化合物。
【請求項２９】
【化２】
2014510143.tif 000047
2014510143.tif 000048
2014510143.tif 000049
2014510143.tif 000050
2014510143.tif 000051
2014510143.tif 000052
2014510143.tif 000053
2014510143.tif 000054
2014510143.tif 000055
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３０】
式：
【化３】
2014510143.tif 000056
（式中、
Ｘはハロゲンであり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、−ＯＲ７、−ＳＲ７、−ＮＨＲ７または−Ｎ（Ｒ７）２であり、各々は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ８、−ＮＲ８２、−ＣＯ２Ｒ８、−ＣＯＮＲ８２、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されており、式中、各シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ９で任意選択的に置換されており；
式中、各Ｒ７は独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり；
式中、各Ｒ８は独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、複素環、アリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、アリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、ヘテロアリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）または複素環（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり、式中、各シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ９で任意選択的に置換されており；
各Ｒ９は独立して、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノまたはジＣ１〜Ｃ６アルキルアミノであり；
Ｒ２は、−ＯＲ１１、−ＳＲ１１、−ＮＨＲ１１または−Ｎ（Ｒ１１）２であり；
各Ｒ１１は独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニルまたはハロ（Ｃ１〜Ｃ２０アルキル）であり；
Ｒ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニルまたは−ＯＲ７であり、各々は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ８、−ＮＲ８２、−ＣＯ２Ｒ８、−ＣＯＮＲ８２、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されており、式中、各シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ９で任意選択的に置換されており；
Ｒ４及びＲ５は独立して、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニルまたはＣ２〜Ｃ２０アルキニルであり、各々は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ８、−ＮＲ８２、−ＣＯ２Ｒ８、−ＣＯＮＲ８２、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されており、式中、各シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ９で任意選択的に置換されており；
各Ｒ６は、水素、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、複素環または−ＯＲ１０であり、式中、各アルキル、アルケニル及びアルキニルは、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ８、−ＮＲ８２、−ＣＯ２Ｒ８、−ＣＯＮＲ８２、Ｒ９で任意選択的に置換されて
いるＣ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｒ９で任意選択的に置換されているＣ３〜Ｃ８シクロアルケニル、Ｒ９で任意選択的に置換されているアリール、Ｒ９で任意選択的に置換されているヘテロアリール及びＲ９で任意選択的に置換されている複素環から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されており；
式中、Ｒ１０はＣ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、複素環、アリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、アリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、ヘテロアリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）または複素環（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり、式中、各シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ９で任意選択的に置換されている）
の化合物。
【請求項３１】
ＸがＢｒまたはＣｌである、請求項３０に記載の化合物。
【請求項３２】
Ｒ１が、水素、任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されているＣ２〜Ｃ２０アルケニル、任意選択的に置換されているＣ２〜Ｃ２０アルキニルまたは−ＯＲ７である、請求項３０または３１に記載の化合物。
【請求項３３】
Ｒ１が水素である、請求項３２に記載の化合物。
【請求項３４】
Ｒ１が任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルである、請求項３２に記載の化合物。
【請求項３５】
Ｒ１が、−ＯＲ８、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニルまたはアリールで任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルであり、各シクロアルキル、シクロアルケニル及びアリールが、Ｒ９で任意選択的に置換されている、請求項３４に記載の化合物。
【請求項３６】
Ｒ１が、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニルまたはアリールで任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルであり、各シクロアルキル、シクロアルケニル及びアリールがＲ９で任意選択的に置換されている、請求項３５に記載の化合物。
【請求項３７】
Ｒ１が−ＯＲ７であり、及び、Ｒ７がＣ１〜Ｃ６アルキルである、請求項３２に記載の化合物。
【請求項３８】
Ｒ２が−ＯＨである、請求項３０〜３７の何れか一項に記載の化合物。
【請求項３９】
Ｒ２が−ＮＨＲ１１または−Ｎ（Ｒ１１）２である、請求項３０〜３７の何れか一項に記載の化合物。
【請求項４０】
Ｒ２が−Ｎ（Ｒ１１）２であり、及び、Ｒ１１が、水素、Ｃ４〜Ｃ２０アルキル、Ｃ４〜Ｃ２０アルケニルまたはＣ４〜Ｃ２０アルキニルである、請求項３９に記載の化合物。
【請求項４１】
Ｒ２が−Ｎ（Ｃ４〜Ｃ２０アルキル）２である、請求項４０に記載の化合物。
【請求項４２】
Ｒ３が、水素、任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルまたは−ＯＲ７である、請求項３０〜４１の何れか一項に記載の化合物。
【請求項４３】
Ｒ３が水素である、請求項４２に記載の化合物。
【請求項４４】
Ｒ３が任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルである、請求項４２に記載の化合物。
【請求項４５】
Ｒ３が、−ＯＲ８、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニルまたはアリールで任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルであり、各シクロアルキル、シクロアルケニル及びアリールがＲ９で任意選択的に置換されている、請求項４４に記載の化合物。
【請求項４６】
Ｒ３が、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニルまたはアリールで任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルであり、各シクロアルキル、シクロアルケニル及びアリールがＲ９で任意選択的に置換されている、請求項４５に記載の化合物。
【請求項４７】
Ｒ３が−ＯＲ７であり、及び、Ｒ７がＣ１〜Ｃ６アルキルである、請求項４２に記載の化合物。
【請求項４８】
Ｒ４が任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルである、請求項３０〜４７の何れか一項に記載の化合物。
【請求項４９】
Ｒ４がＣ１〜Ｃ２０アルキルである、請求項４８に記載の化合物。
【請求項５０】
Ｒ５が任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルである、請求項３０〜４９の何れか一項に記載の化合物。
【請求項５１】
Ｒ５がＣ１〜Ｃ２０アルキルである、請求項５０に記載の化合物。
【請求項５２】
Ｒ６が、水素または任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルである、請求項３０〜５１の何れか一項に記載の化合物。
【請求項５３】
Ｒ６が水素である、請求項５２に記載の化合物。
【請求項５４】
Ｒ６が、−ＯＲ８、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニルまたはアリールで任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルであり、各シクロアルキル、シクロアルケニル及びアリールがＲ９で任意選択的に置換されている、請求項５２に記載の化合物。
【請求項５５】
Ｒ６が、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニルまたはアリールで任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルであり、各シクロアルキル、シクロアルケニル及びアリールがＲ９で任意選択的に置換されている、請求項５４に記載の化合物。
【請求項５６】
Ｒ６が−ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、複素環、アリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、アリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、ヘテロアリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）または複素環（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり、各シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール及び複素環がＲ９で任意選択的に置換されている、請求項３０〜５１の何れか一項に記載の化合物。
【請求項５７】
Ｒ６が−ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はアリールまたはアリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり、各アリールがＲ９で任意選択的に置換されている請求項５６に記載の化合物。
【請求項５８】
【化４】
2014510143.tif 000057
2014510143.tif 000058
である、請求項３０に記載の化合物。
【請求項５９】
式：
【化５】
2014510143.tif 000059
（式中、
Ｒ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニルまたは−ＯＲ７であり、各々は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ８、−ＮＲ８２、−ＣＯ２Ｒ８、−ＣＯＮＲ８２、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されており、式中、各シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ９で任意選択的に置換されており；
式中、各Ｒ７は独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり；式中、各Ｒ８は独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、複素環、アリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、アリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、ヘテロアリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）または複素環（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり、式中、各シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ９で任意選択的に置換されており；
各Ｒ９は独立して、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノまたはジＣ１〜Ｃ６アルキルアミノであり；
Ｒ４及びＲ５は独立して、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニルまたはＣ２〜Ｃ２０アルキニルであり、各々は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ８、−ＮＲ８２、−ＣＯ２Ｒ８、−ＣＯＮＲ８２、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されており、式中、各シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ９で任意選択的に置換されており；
各Ｒ６は、水素、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、複素環または−ＯＲ１０であり、式中、各アルキル、アルケニル及びアルキニルは、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ８、−ＮＲ８２、−ＣＯ２Ｒ８、−ＣＯＮＲ８２、Ｒ９で任意選択的に置換されているＣ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｒ９で任意選択的に置換されているＣ３〜Ｃ８シクロアルケニル、Ｒ９で任意選択的に置換されているアリール、Ｒ９で任意選択的に置換されているヘテロアリール及びＲ９で任意選択的に置換されている複素環から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されており；
式中、Ｒ１０はＣ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、複素環、アリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、アリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、ヘテロアリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）または複素環（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり、式中、各シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ９で任意選択的に置換されている）
の化合物。
【請求項６０】
Ｒ３が、水素、任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルまたは−ＯＲ７である、請求項５９に記載の化合物。
【請求項６１】
Ｒ３が水素である、請求項６０に記載の化合物。
【請求項６２】
Ｒ３が任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルである、請求項６０に記載の化合物。
【請求項６３】
Ｒ３が、−ＯＲ８、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニルまたはアリールで任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルであり、各シクロアルキル、シクロアルケニル及びアリールがＲ９で任意選択的に置換されている、請求項５９に記載の化合物。
【請求項６４】
Ｒ３が、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニルまたはアリールで任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルであり、各シクロアルキル、シクロアルケニル及びアリールがＲ９で任意選択的に置換されている、請求項６３に記載の化合物。
【請求項６５】
Ｒ３が−ＯＲ７であり、及び、Ｒ７がＣ１〜Ｃ６アルキルである、請求項６０に記載の化合物。
【請求項６６】
Ｒ４が任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルである、請求項５９〜６５の何れか一項に記載の化合物。
【請求項６７】
Ｒ４がＣ１〜Ｃ２０アルキルである、請求項６６に記載の化合物。
【請求項６８】
Ｒ５が任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルである、請求項５９〜６７の何れか一項に記載の化合物。
【請求項６９】
Ｒ５がＣ１〜Ｃ２０アルキルである、請求項６８に記載の化合物。
【請求項７０】
Ｒ６が水素または任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルである、請求項５９〜６９の何れか一項に記載の化合物。
【請求項７１】
Ｒ６が水素である、請求項７０に記載の化合物。
【請求項７２】
Ｒ６が、−ＯＲ８、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニルまたはアリールで任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルであり、各シクロアルキル、シクロアルケニル及びアリールがＲ９で任意選択的に置換されている、請求項７０に記載の化合物。
【請求項７３】
Ｒ６が、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニルまたはアリールで任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルであり、各シクロアルキル、シクロアルケニル及びアリールがＲ９で任意選択的に置換されている、請求項７２に記載の化合物。
【請求項７４】
請求項１〜７３の何れか一項に記載の化合物または薬学的に許容可能な塩、並びに、許容可能なキャリア、賦形剤及び／または希釈剤を含む薬学的組成物。
【請求項７５】
有効量の請求項１〜７３の何れか一項に記載の化合物または薬学的に許容可能な塩を投与するステップを含む、ＡＴＰ産生の低減及び／または酸化ストレス及び／または脂質過酸化をもたらすミトコンドリアの機能の低下に関連する疾患を処置若しくは抑制する方法。
【請求項７６】
前記疾患が、フリードライヒ運動失調症、レーバ遺伝性視神経萎縮症、カーンズ−セイヤ症候群、ミトコンドリア脳筋症・乳酸アシドーシス・脳卒中様発作症候群、リー症候群、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、アルツハイマー病及びパーキンソン病からなる群から選択される、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記疾患がフリードライヒ運動失調症である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
呼吸鎖病変を伴うミトコンドリアを処置若しくは保護する方法であって、このような処置を必要とする被検体に、有効量の請求項１〜７３の何れか一項に記載の１種以上の化合物を投与するステップを含む方法。
【請求項７９】
ａ）ミトコンドリアを介して生成された活性酸素種（ＲＯＳ）を失活させる能力；
ｂ）ミトコンドリアを介して生成されたＲＯＳにより産生された脂質ラジカルを失活させる能力；
ｃ）ＡＴＰ産生を増大させる能力；及び
ｄ）酸化ストレス下で細胞に細胞保護をもたらす能力
のためのテスト化合物のアッセイステップを含み、このようなテスト化合物が、呼吸鎖病変を伴うミトコンドリアの処置または保護のための候補治療薬である治療薬の同定方法。
【請求項８０】
ミトコンドリアを介して生成されたＲＯＳを失活させる前記テスト化合物の前記能力をアッセイするステップが：ａ）前記テスト化合物でテスト細胞を事前処理するステップ；ｂ）細胞内のグルタチオンを枯渇させる薬剤で前記テスト細胞を処理するステップ；ｃ）蛍光染色剤で前記テスト細胞を処理するステップ；及び、ｄ）前記テスト細胞からの蛍光を計測するステップを含み、対照と比較した前記テスト細胞からの蛍光の低減が前記テスト化合物がＲＯＳを失活させたことを示す、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記薬剤がマレイン酸ジエチルである、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
フローサイトメトリが蛍光の計測に用いられる、請求項８０または８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記方法が、ＲＯＳ産生を対照と比較して少なくとも５０％低減させるテスト化合物を同定するステップを含む、請求項８０〜８２の何れか一項に記載の方法。
【請求項８４】
前記方法が、ＲＯＳ産生を触媒的に低減させるテスト化合物を同定するステップを含む、請求項８０〜８３の何れか一項に記載の方法。
【請求項８５】
前記ＲＯＳが、スーパーオキシド、過酸化物、ヒドロキシルラジカル、一重項酸素または窒素酸化物を含む、請求項８０〜８４の何れか一項に記載の方法。
【請求項８６】
ミトコンドリアを介して生成されたＲＯＳにより産生された脂質ラジカルを失活させるステップが、モデル膜系中の脂質過酸化を計測するステップを含む、請求項７９〜８５の何れか一項に記載の方法。
【請求項８７】
前記モデル膜系がホスホチジルコリンリポソームを含む、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
ミトコンドリアを介して生成されたＲＯＳにより産生された脂質ラジカルを失活させる前記テスト化合物の前記能力をアッセイするステップが：ａ）組み込まれた蛍光体を含有する単層リン脂質ベシクルを前記テスト化合物で事前処理するステップ；ｂ）前記リン脂質ベシクルをフリーラジカルジェネレータで処理するステップ；及び、ｃ）蛍光を計測する
ステップを含み、対照と比較した前記リン脂質ベシクルからの蛍光の維持が、前記テスト化合物がミトコンドリアを介して生成されたＲＯＳにより産生された脂質ラジカルを失活させたことを示す、請求項８６または８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記組み込まれた蛍光体がＣ１１−ＢＯＤＩＰＹ５８１／５９１である、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記フリーラジカルジェネレータが２，２’−アゾ−ビス（２−アミジノプロパン）である、請求項８８または８９に記載の方法。
【請求項９１】
蛍光を計測ステップが少なくとも２０分間の期間にわたって実施される、請求項８８〜９０の何れか一項に記載の方法。
【請求項９２】
前記方法が、モデルにおける脂質過酸化を対照と比較して少なくとも５０％低減させるテスト化合物を同定するステップを含む、請求項８６〜９１の何れか一項に記載の方法。
【請求項９３】
前記方法が、水素原子またはその官能基均等物の供与によりモデル系における脂質過酸化を低減させるテスト化合物を同定するステップを含む、請求項８６〜９２の何れか一項に記載の方法。
【請求項９４】
前記水素原子またはその官能基均等物の供与後の前記テスト化合物が共鳴安定化されている、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
前記方法が、モデル系における脂質過酸化を低減させ、及び、ミトコンドリア呼吸鎖中での電子移動反応に関与するテスト化合物を同定するステップを含む、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
ＡＴＰ産生を増大させる前記テスト化合物の前記能力をアッセイするステップが：ａ）コエンザイムＱ１０（ＣｏＱ１０）欠損テスト細胞を前記テスト化合物で処理するステップ；ｂ）前記テスト細胞を前記テスト化合物でインキュベートするステップ；及び、ｃ）インキュベーション後に前記テスト細胞におけるＡＴＰレベルを計測するステップを含み、対照と比較した前記テスト細胞に係るＡＴＰレベルの増加が、前記テスト化合物がＡＴＰ産生を増大させたことを示す、請求項７９〜９５の何れか一項に記載の方法。
【請求項９７】
前記方法が、前記テスト化合物での処理に先立って、非ミトコンドリアＡＴＰ産生を制限するためにＣｏＱ１０欠損テスト細胞をグルコースに対して飢餓状態とするステップを含む、請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
前記テスト細胞のインキュベーションが少なくとも４８時間にわたる、請求項９６または９７に記載の方法。
【請求項９９】
ＡＴＰレベルを計測するステップが、ルミネンスをもたらすルシフェリン−ルシフェラーゼ反応を支持するための試薬での処理を含む、請求項９６〜９８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１００】
前記方法が、対照と比較して少なくとも１０％ＡＴＰ産生を増大させるテスト化合物を同定するステップを含む、請求項９６〜９９の何れか一項に記載の方法。
【請求項１０１】
前記方法が、ミトコンドリア電子移動鎖から脱離した電子を用いることによりＡＴＰ産生を増大させるテスト化合物を同定するステップを含む、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記方法が、前記テスト細胞を酸化ストレスから保護する前記能力について前記テスト化合物をアッセイするステップを更に含む、請求項７９〜１０１の何れか一項に記載の方法。
【請求項１０３】
前記テスト細胞における細胞がフリードライヒ運動失調症線維芽細胞である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記テスト細胞を酸化ストレスから保護する前記能力をアッセイするステップが：ａ）前記テスト細胞を前記テスト化合物で事前処理するステップ；ｂ）前記テスト細胞をグルタチオン生合成の阻害因子で、または、低減されたグルタチオンの利用可能性を他の方法で低減させる化合物で処理するステップ；ｃ）前記テスト細胞をインキュベートするステップ；及び、ｄ）前記テスト細胞の細胞生存率を計測するステップを含み、対照と比較した生存テスト細胞数の増加が前記テスト化合物が前記細胞を酸化ストレスから保護したことを示す、請求項１０２または１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
前記グルタチオン生合成の阻害因子がＬ−ブチオニン（Ｓ，Ｒ）−スルフォキシイミンである、請求項１０４に記載の方法。
【請求項１０６】
ミトコンドリア膜電位の計測が前記テスト細胞の生存率の計測に用いられる、請求項１０４または１０５に記載の方法。
【請求項１０７】
前記テスト化合物が、１０μΜ未満の濃度で呼吸鎖病変を伴うミトコンドリアを処置若しくは保護するための候補治療薬であるの、請求項７９〜１０６の何れか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、多官能性ラジカル失活剤である治療薬の同定方法を提供する。本発明はまた、生理活性化合物である多官能性ラジカル失活剤及びその薬学的に許容可能な塩、これらの化合物を含む組成物、並びに、ＡＴＰ産生の減少及び／または酸化ストレス及び／または脂質過酸化をもたらすミトコンドリアの機能の低下に関連する疾患の処置若しくは抑制などの多様な用途におけるこれらの化合物の使用方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
ミトコンドリアは、多数の代謝形質転換及び調節機能を担う細胞小器官である。これらは、真核細胞によって利用されるＡＴＰの大半を産生する。ミトコンドリアはまた、酸化ストレスを生じさせるフリーラジカル及び活性酸素種の主なソースである。従って、ミトコンドリアの機能障害は、特にエネルギー需要レベルの高い神経及び筋肉組織に損傷を与える。それ故、エネルギー欠損は運動障害、心筋症、筋障害、失明及び聴覚障害に関係づけられてきている（非特許文献１、非特許文献２）。核及びミトコンドリア遺伝子異常の両方からもたらされるミトコンドリア疾患は多数存在し、これらの疾患の基礎をなす生化学は、幾分か類似している傾向にある。これらは乳酸塩産生の増大、呼吸及びＡＴＰ産生の低減を含み、酸化ストレスの結果を反映する。本発明には、ＡＴＰ産生の減少及び／または酸化ストレス及び／または脂質過酸化をもたらすミトコンドリアの機能の低下に関連する疾患の処置若しくは抑制のための新規化合物が記載されている。本発明にはまた、特にこれらに限定されないが、フリードライヒ運動失調症、レーバ遺伝性視神経萎縮症、カーンズ−セイヤ症候群、ミトコンドリア脳筋症・乳酸アシドーシス・脳卒中様発作症候群、並びに、より一般的には、エネルギー産生及びミトコンドリアの機能の障害に関連する何れかの疾患を含むミトコンドリア障害の処置のためのこれらの化合物の使用が記載されている。ミトコンドリアの機能の低下及びＡＴＰ産生の低減は加齢にも関連している可能性があり、ここに記載されている治療薬は、加齢による影響の緩和にも実用性が見出され得る。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】ジマウロ（ＤｉＭａｕｒｏ）ら著（２００１年）、米国医療遺伝子工学学会誌（Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ．）、１０６、１８〜２６ページ
【非特許文献２】レオナルド（Ｌｅｏｎａｒｄ）ら著（２０００年）、ランセット（Ｌａｎｃｅｔ．）、３５５、２９９〜３０４ページ
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
それ故、一態様において、本開示は：
ａ）ミトコンドリアを介して生成された活性酸素種（ＲＯＳ：ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ）を失活させる能力；
ｂ）ミトコンドリアを介して生成されたＲＯＳにより産生された脂質ラジカルを失活させる能力；
ｃ）ＡＴＰ産生を増大させる能力；及び
ｄ）酸化ストレス下で細胞に細胞保護をもたらす能力
のためのテスト化合物のアッセイステップを含む治療薬の同定方法が提供されており、ここで、このようなテスト化合物は、呼吸鎖病変を伴うミトコンドリアの処置または保護のための候補治療薬である。
【０００５】
本開示の他の態様は、式（Ｉ）の化合物
【０００６】
【化１】
2014510143.tif 000003
【０００７】
及びその薬学的に許容可能な塩を提供する。
本開示の他の態様は、式（ＩＩ）の化合物
【０００８】
【化２】
2014510143.tif 000004
【０００９】
及びその薬学的に許容可能な塩を提供する。
本開示の他の態様は、式（ＩＩ−Ａ）の化合物
【００１０】
【化３】
2014510143.tif 000005
【００１１】
及びその薬学的に許容可能な塩を提供する。
本開示の他の態様は、本開示を含む化合物及び塩と、適切なキャリア、賦形剤または希釈剤とを含む薬学的組成物を提供する。キャリア、賦形剤または希釈剤の厳密な性質は、組成物に係る所望の使用に応じることとなり、また、獣医学的使用に好適なものからヒトへの使用に好適なものの範囲であり得る。組成物は、任意選択的に、使用に好適な１種以上の追加の化合物を含んでいてもよい。
【００１２】
本開示の他の態様は、有効量の本開示の化合物及び塩を投与するステップを含む、ＡＴＰ産生の低減及び／または酸化ストレス及び／または脂質過酸化をもたらすミトコンドリアの機能の低下に関連する疾患を処置若しくは抑制する方法を提供する。
【００１３】
本開示の他の態様は、有効量の本開示の化合物及び塩を投与するステップを含む、フリードライヒ運動失調症、レーバ遺伝性視神経萎縮症、カーンズ−セイヤ症候群、ミトコンドリア脳筋症・乳酸アシドーシス・脳卒中様発作症候群またはリー症候群の１種以上を処置若しくは抑制する方法を提供する。
【００１４】
本開示の他の態様は、有効量の本開示の化合物及び塩を投与するステップを含む、肥満症、アテローム性動脈硬化、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、癌、心不全、心筋梗塞（ＭＩ）、アルツハイマー病、ハンチントン病、総合失調症、双極性障害、脆弱Ｘ症候群、慢性疲労症候群及びリー症候群の１種以上を処置若しくは抑制する方法を提供する。
【００１５】
本明細書に記載されている結果、並びに、本開示によって提供されている化合物の特性及び特徴は、図面を考慮して有利に理解されることが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】Ｃ１１−ＢＯＤＩＰＹ５８１／５９１（２００ｎＭ）を含有するトリス−ＨＣｌ緩衝剤における、４０℃でのリン脂質リポソーム中の２，２’−アゾビス（２−アミジノプロパン）二塩化水素化物（ＡＡＰＨ）（１０ｍＭ）の熱分解により生成された酸素ラジカルにより誘起された脂質過酸化に対する本開示の化合物の効果を示す。プローブの赤色の蛍光減衰を経時的にモニタした（λｅｘ＝５７０、λｅｍ＝６００ｎｍ）。相対蛍光単位は１００％強度に正規化されている。同等の結果が反復実験において得られた。
【図２】リン酸緩衝剤における、４０℃でのリン脂質リポソーム中のＡＡＰＨの熱分解により生成された酸素ラジカルにより誘起された脂質過酸化に対する本開示の化合物の効果を示す。１０ｍＭ  ＡＡＰＨの存在下におけるＣ１１−ＢＯＤＩＰＹ５８１／５９１の蛍光の保存能により脂質過酸化に対する保護を計測した。相対蛍光単位は１００％強度に正規化されている。
【図３】細胞ＡＴＰレベルでのメチレンブルーの効果を示す。明示の濃度のメチレンブルー及び開示の化合物で処理したＦＲＤＡリンパ球細胞における、細胞内ＡＴＰレベルの代表的なアッセイが示されている。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
一態様においては、本開示は：
ａ）ミトコンドリアを介して生成された活性酸素種（ＲＯＳ）を失活させる能力；
ｂ）ミトコンドリアを介して生成されたＲＯＳにより産生された脂質ラジカルを失活させる能力；
ｃ）ＡＴＰ産生を増大させる能力；及び
ｄ）酸化ストレス下で細胞に細胞保護をもたらす能力
のためのテスト化合物のアッセイステップを含む治療薬の同定方法を提供し、ここで、このようなテスト化合物は、呼吸鎖病変を伴うミトコンドリアの処置または保護のための候補治療薬である。
【００１８】
一実施形態において、本開示は、ミトコンドリアを介して生成されたＲＯＳを失活させるテスト化合物の能力をアッセイするステップが：ａ）テスト化合物でテスト細胞を事前処理するステップ；ｂ）細胞内のグルタチオンを枯渇させる薬剤でテスト細胞を処理するステップ；ｃ）蛍光染色剤でテスト細胞を処理するステップ；及び、ｄ）テスト細胞からの蛍光を計測するステップを含む方法を提供し、ここでは、対照と比較したテスト細胞からの蛍光の低減が、テスト化合物がＲＯＳを失活させたことを示す。一実施形態において、本開示は、細胞内のグルタチオンを枯渇させる薬剤が、マレイン酸ジエチル、（Ｒ，Ｓ）−３−ヒドロキシ−４−ペンテノエートまたはＮ−エチルマレイミドである方法を提供する。他の実施形態において、薬剤はマレイン酸ジエチルである。他の実施形態において
、本開示は、フローサイトメトリが蛍光の計測に用いられる方法を提供する。
【００１９】
一実施形態において、本開示は、ＲＯＳ産生を対照と比較して少なくとも５０％低減させるテスト化合物を同定するステップを含む方法を提供する。
一実施形態において、本開示は、ＲＯＳ産生を触媒的に低減させるテスト化合物を同定するステップを含む方法を提供する。ＲＯＳ産生の触媒的低減は、ＲＯＳにおける定量的低減が採用したテスト化合物の量を超えることを実証することにより判定される。
【００２０】
一実施形態において、本開示は、ＲＯＳが、スーパーオキシド、過酸化物、ヒドロキシルラジカル、一重項酸素または窒素酸化物を含む方法を提供する。一実施形態において、ＲＯＳはスーパーオキシドである。
【００２１】
一実施形態において、本開示は、ミトコンドリアを介して生成されたＲＯＳにより産生された脂質ラジカルを失活させるステップが、モデル膜系中の脂質過酸化を計測するステップを含む方法を提供する。一実施形態において、モデル膜系は、ホスホチジルコリン（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）リポソーム、亜ミトコンドリア粒子（ＳＭＰ）、ミトコンドリア膜画分を含む。一実施形態において、モデル膜系は、ホスホチジルコリン（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）リポソームを含む。
【００２２】
一実施形態において、本開示は、ミトコンドリアを介して生成されたＲＯＳにより産生された脂質ラジカルを失活させるテスト化合物の能力をアッセイするステップが：ａ）組み込まれた蛍光体を含有する単層リン脂質ベシクルをテスト化合物で事前処理するステップ；ｂ）リン脂質ベシクルをフリーラジカルジェネレータで処理するステップ；及び、ｃ）蛍光を計測するステップを含む方法を提供し、ここで、対照と比較したリン脂質ベシクルからの蛍光の維持が、テスト化合物がミトコンドリアを介して生成されたＲＯＳにより産生された脂質ラジカルを失活させたことを示す。一実施形態において、組み込まれた蛍光体はＣ１１−ＢＯＤＩＰＹ５８１／５９１である。一実施形態において、フリーラジカルジェネレータは、２，２’−アゾ−ビス（２−アミジノプロパン）、２，２’−アゾビス（２−アミジノプロパン）二塩化水素化物（ＡＡＰＨ）または２，２’−アゾビス（２，４−ジメチル−バレロニトリル）（ＡＭＶＮ）を含む。一実施形態において、フリーラジカルジェネレータは、硫酸第一鉄、アスコルビン酸及び過酸化水素の組み合わせである。一実施形態において、フリーラジカルジェネレータは２，２’−アゾ−ビス（２−アミジノプロパン）である。一実施形態において、蛍光を計測ステップは、少なくとも２０分間の期間にわたって実施される。
【００２３】
一実施形態において、方法は、モデルにおける脂質過酸化を対照と比較して少なくとも５０％低減させるテスト化合物を同定するステップを含む。
一実施形態において、方法は、水素原子またはその官能基均等物の供与によりモデル系における脂質過酸化を低減させるテスト化合物を同定するステップを含む。これは、水素原子を供与することが可能ではないテスト化合物の密接に関連した類似体をテストすることによっても判定可能である。水素原子またはその官能基均等物の供与後のテスト化合物は共鳴安定化されている。これは、比較し得る共鳴安定化が不可能であるテスト化合物の密接に関連した類似体をテストすることによっても判定可能である。
【００２４】
一実施形態において、方法は、モデル系における脂質過酸化を低減させ、及び、ミトコンドリア呼吸鎖中での電子移動反応に関与するテスト化合物を同定するステップを含む。これは、複合体ＩＩＩ、シトクロムｃあるいは複合体ＩＶに対する電子供与をテストすることにより、または、ＡＴＰ産生の増強を実証することにより判定可能である。
【００２５】
一実施形態において、本開示は、ＡＴＰ産生を増大させるテスト化合物の能力をアッセ
イするステップが：ａ）コエンザイムＱ１０（ＣｏＱ１０）欠損テスト細胞をテスト化合物で処理するステップ；ｂ）テスト細胞をテスト化合物でインキュベートするステップ；及び、ｃ）インキュベーション後にテスト細胞におけるＡＴＰレベルを計測するステップを含む方法を提供し、ここで、対照と比較したテスト細胞に係るＡＴＰレベルの増加がテスト化合物がＡＴＰ産生を増大させたことを示す。
【００２６】
一実施形態において、ＡＴＰ産生を増大させるテスト化合物の能力をアッセイするステップが、テスト化合物での処理に先立って、非ミトコンドリアＡＴＰ産生を制限するためにＣｏＱ１０欠損テスト細胞をグルコースに対して飢餓状態とするステップを含む方法を要旨とする。
【００２７】
一実施形態において、ＡＴＰ産生を増大させるテスト化合物の能力をアッセイする方法は、テスト細胞のインキュベーションが少なくとも４８時間にわたる。
一実施形態において、ＡＴＰレベルを計測するステップは、ルミネンスをもたらすルシフェリン−ルシフェラーゼ反応を支持するための試薬での処理を含む。
【００２８】
一実施形態において、本開示は、対照と比較して少なくとも５％ＡＴＰ産生を増大させるテスト化合物を同定するステップを含む方法を提供する。一実施形態において、ＡＴＰ産生は対照と比較して少なくとも１０％増大される。
【００２９】
一実施形態において、ＡＴＰ産生を増大させるテスト化合物の能力をアッセイする方法は、ミトコンドリア電子移動鎖から脱離した電子を用いることによりＡＴＰ産生を増大させるテスト化合物を同定するステップを含む。これは、ＡＴＰの増加に伴ってＲＯＳが低下することを実証することにより判定されることが可能である。
【００３０】
一実施形態において、本開示は、テスト細胞を酸化ストレスから保護する能力についてテスト化合物がアッセイされる方法を提供する。一実施形態において、テスト細胞はフリードライヒ運動失調症線維芽細胞である。他の実施形態において、テスト細胞はフリードライヒ運動失調症リンパ球またはＣＥＭ白血病細胞である。更に他の実施形態において、テスト細胞は、フリードライヒ運動失調症、レーバ遺伝性視神経萎縮症、カーンズ−セイヤ症候群、ミトコンドリア脳筋症・乳酸アシドーシス・脳卒中様発作症候群またはリー症候群を含む幅広い範囲の遺伝性ミトコンドリア疾患に由来する。他の実施形態において、テスト細胞は、特にこれらに限定されないが、肥満症、アテローム性動脈硬化、パーキンソン病、癌、心不全、心筋梗塞（ＭＩ：ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ）、アルツハイマー病、ハンチントン病、総合失調症、双極性障害、脆弱Ｘ症候群及び慢性疲労症候群を含む、顕著なミトコンドリア成分を有する疾患または組織がストレス下にあることが知られている疾患に由来する。
【００３１】
一実施形態において、本開示は、テスト細胞を酸化ストレスから保護する能力をアッセイするステップが：ａ）テスト細胞をテスト化合物で事前処理するステップ；ｂ）テスト細胞をグルタチオン生合成の阻害因子で、または、低減されたグルタチオンの利用可能性を他の方法で低減させる化合物で処理するステップ；ｃ）テスト細胞をインキュベートするステップ；及び、ｄ）テスト細胞の細胞生存率を計測するステップを含む方法を提供し、ここでは、対照と比較した生存テスト細胞数の増加はテスト化合物が細胞を酸化ストレスから保護したことを示す。一実施形態において、グルタチオン生合成の阻害因子はＬ−ブチオニン（Ｓ，Ｒ）−スルフォキシイミンである。他の実施形態において、グルタチオン生合成の阻害因子はＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルジアゼン−１，２−ジカルボキサミドである。一実施形態においては、ミトコンドリア膜電位の計測がテスト細胞の生存率のアッセイに用いられる。
【００３２】
一実施形態において、本開示は、テスト化合物が、１０μΜ未満の濃度で呼吸鎖病変を伴うミトコンドリアを処置若しくは保護するための候補治療薬である方法を提供する。他の実施形態において、濃度は１μΜ未満である。
【００３３】
本開示の他の態様は、式（Ｉ）の化合物
【００３４】
【化４】
2014510143.tif 000006
【００３５】
またはその薬学的に許容可能な塩を提供し、式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、−ＯＲ５、−ＳＲ５、−ＮＨＲ５または−Ｎ（Ｒ５）２であり、各々は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ６、−ＮＲ６２、−ＣＯ２Ｒ６及び−ＣＯＮＲ６２から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されており；
式中、各Ｒ５は独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり；式中、各Ｒ６は独立して、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
Ｒ２は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、−ＯＲ５、−ＳＲ５、−ＮＨＲ５または−Ｎ（Ｒ５）２であり、各々は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ６、−ＮＲ６２、−ＣＯ２Ｒ６及び−ＣＯＮＲ６２から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されており；
Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、−ＯＲ５、−ＳＲ５、−ＮＨＲ５、−Ｎ（Ｒ５）２であり、各々は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ７、−ＮＲ７２、−ＣＯ２Ｒ７、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、−ＣＯＮ（Ｒ７）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）２、−ＮＨＣ（ＮＨ）Ｎ（Ｒ７）２、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されており、式中、各シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ８で任意選択的に置換されており；
式中、各Ｒ７は独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、複素環、アリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、アリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、ヘテロアリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）または複素環（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり、式中、各シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ８で任意選択的に置換されており；
式中、各Ｒ８は独立して、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノまたはジＣ１〜Ｃ６アルキルアミノであり；並びに
Ｒ４は、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、−ＯＲ５、−ＳＲ５、−ＮＨＲ５、−Ｎ（Ｒ５）２であり、各々は、ハロゲン、−ＣＮ、
−ＮＯ２、−Ｎ３、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ７、−ＮＲ７２、−ＣＯ２Ｒ７、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、−ＣＯＮ（Ｒ７）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）２、−ＮＨＣ（ＮＨ）Ｎ（Ｒ７）２、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されており、式中、各シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ８で任意選択的に置換されており；
但し、Ｒ３若しくはＲ４の少なくとも一方は、任意選択的に置換されているＣ４〜Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されているＣ４〜Ｃ２０アルケニル、または任意選択的に置換されているＣ４〜Ｃ２０アルキニルである。
【００３６】
一実施形態において、本開示は式（Ｉ）の化合物を提供し、式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、−ＯＲ５、−ＳＲ５、−ＮＨＲ５または−Ｎ（Ｒ５）２であり、各々は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ６、−ＮＲ６２、−ＣＯ２Ｒ６及び−ＣＯＮＲ６２から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されており；
式中、各Ｒ５は独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり；式中、各Ｒ６は独立して、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、−ＯＲ５、−ＳＲ５、−ＮＨＲ５または−Ｎ（Ｒ５）２であり、各々は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ６、−ＮＲ６２、−ＣＯ２Ｒ６及び−ＣＯＮＲ６２から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されており；
Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、−ＯＲ５、−ＳＲ５、−ＮＨＲ５、−Ｎ（Ｒ５）２であり、各々は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ７、−ＮＲ７２、−ＣＯ２Ｒ７、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、−ＣＯＮ（Ｒ７）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）２、−ＮＨＣ（ＮＨ）Ｎ（Ｒ７）２、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されており、式中、各シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ８で任意選択的に置換されており；
式中、各Ｒ７は独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、複素環、アリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、アリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、ヘテロアリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）または複素環（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり、式中、各シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ８で任意選択的に置換されており；
式中、各Ｒ８は独立して、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノまたはジＣ１〜Ｃ６アルキルアミノであり；並びに
Ｒ４は、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、−ＯＲ５、−ＳＲ５、−ＮＨＲ５、−Ｎ（Ｒ５）２であり、各々は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ７、−ＮＲ７２、−ＣＯ２Ｒ７、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、−ＣＯＮ（Ｒ７）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）２、−ＮＨＣ（ＮＨ）Ｎ（Ｒ７）２、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されており、式中、各シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ８で任意選択的に置換されてお
り；
但し、Ｒ３若しくはＲ４の少なくとも一方は、任意選択的に置換されているＣ４〜Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されているＣ４〜Ｃ２０アルケニル、または任意選択的に置換されているＣ４〜Ｃ２０アルキニルである。
【００３７】
一実施形態において、本開示は式（Ｉ）の化合物を提供し、式中、Ｒ１はＣ１〜Ｃ６アルキルである。他の実施形態において、Ｒ１はメチルである。
他の実施形態において、本開示は式（Ｉ）の化合物を提供し、式中、Ｒ１は、−ＯＲ５、−ＳＲ５、−ＮＨＲ５または−Ｎ（Ｒ５）２である。
【００３８】
一実施形態において、本開示は式（Ｉ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ２はＣ１〜Ｃ６アルキルまたはＣ１〜Ｃ６アルケニルである。他の実施形態において、本開示は式（Ｉ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ２はＣ１〜Ｃ６アルキルである。更に他の実施形態において、Ｒ２はメチルである。
【００３９】
一実施形態において、本開示は式（Ｉ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ２はＣ１〜Ｃ６アルケニルである。他の実施形態において、Ｒ２はビニルまたはアリルである。更に他の実施形態において、Ｒ２はビニルである。
【００４０】
他の実施形態において、本開示は式（Ｉ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ２は、−ＯＲ５、−ＳＲ５、−ＮＨＲ５または−Ｎ（Ｒ５）２である。
更に他の実施形態において、本開示は式（Ｉ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ２は−ＯＲ５である。一実施形態において、Ｒ２は−ＯＲ５であり、及び、Ｒ５は水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルである。他の実施形態において、Ｒ２は−ＯＨである。更に他の実施形態において、Ｒ２は−Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）である。更に他の実施形態において、Ｒ２は−ＯＣＨ３である。
【００４１】
一実施形態において、本開示は式（Ｉ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ２は−ＮＨＲ５または−Ｎ（Ｒ５）２である。一実施形態において、Ｒ２は−ＮＨＲ５であり、及び、Ｒ５は水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルである。他の実施形態において、Ｒ２は−ＮＨ２である。更に他の実施形態において、Ｒ２は−ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）である。更に他の実施形態において、Ｒ２は−ＮＨＣＨ３である。他の実施形態において、Ｒ２は−Ｎ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）２である。更に他の実施形態において、Ｒ２は−Ｎ（ＣＨ３）２である。
【００４２】
一実施形態において、本開示は式（Ｉ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ２は水素またはハロゲンである。
他の実施形態において、本開示は式（Ｉ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ２は水素である。
【００４３】
更に他の実施形態において、本開示は式（Ｉ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ２はハロゲンである。一実施形態において、Ｒ２はＢｒである。一実施形態において、Ｒ２はＣｌである。
【００４４】
一実施形態において、本開示は式（Ｉ）の化合物を提供し、式中、Ｒ１及びＲ２の両方はＣ１〜Ｃ６アルキルである。他の実施形態において、Ｒ１及びＲ２の両方はメチルである。
【００４５】
他の実施形態において、本開示は式（Ｉ）の化合物を提供し、式中、Ｒ１はＣ１〜Ｃ６アルキルであり、及び、Ｒ２はＣ１〜Ｃ６アルケニルである。他の実施形態において、Ｒ
１はメチルであり、及び、Ｒ２はビニルである。
【００４６】
他の実施形態において、本開示は式（Ｉ）の化合物を提供し、式中、Ｒ１はＣ１〜Ｃ６アルキルであり、及び、Ｒ２は−ＮＨＲ５である。他の実施形態において、Ｒ１はメチルであり、及び、Ｒ２は−ＮＨ２である。
【００４７】
他の実施形態において、本開示は式（Ｉ）の化合物を提供し、式中、Ｒ１はＣ１〜Ｃ６アルキルであり、及び、Ｒ２は−ＯＲ５である。他の実施形態において、Ｒ１はメチルであり、及び、Ｒ２は−ＯＣＨ３である。
【００４８】
他の実施形態において、本開示は式（Ｉ）の化合物を提供し、式中、Ｒ１はＣ１〜Ｃ６アルキルであり、及び、Ｒ２は水素である。他の実施形態において、Ｒ１はメチルであり、及び、Ｒ２は水素である。
【００４９】
他の実施形態において、本開示は式（Ｉ）の化合物を提供し、式中、Ｒ１はＣ１〜Ｃ６アルキルであり、及び、Ｒ２はハロゲンである。他の実施形態において、Ｒ１はメチルであり、及び、Ｒ２はＢｒまたはＣｌである。
【００５０】
一実施形態において、本開示は式（Ｉ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ３は、任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ３アルキル、任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ３アルケニルまたは任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ３アルキニルである。一実施形態において、Ｒ３は任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ３アルキルである。他の実施形態において、Ｒ３はメチルである。
【００５１】
一実施形態において、本開示は式（Ｉ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ３は、−ＯＲ５、−ＳＲ５、−ＮＨＲ５または−Ｎ（Ｒ５）２である。
一実施形態において、本開示は式（Ｉ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ４は、任意選択的に置換されているＣ４〜Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されているＣ４〜Ｃ２０アルケニルまたは任意選択的に置換されているＣ４〜Ｃ２０アルキニルである。他の実施形態において、Ｒ４は任意選択的に置換されているＣ５〜Ｃ２０アルキルである。
【００５２】
一実施形態において、本開示は式（Ｉ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ４は、任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ３アルキル、任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ３アルケニルまたは任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ３アルキニルである。一実施形態において、Ｒ４は任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ３アルキルである。他の実施形態において、Ｒ４はメチルである。
【００５３】
一実施形態において、本開示は式（Ｉ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ４は、−ＯＲ５、−ＳＲ５、−ＮＨＲ５または−Ｎ（Ｒ５）２である。この実施形態において、Ｒ３は、任意選択的に置換されているＣ４〜Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されているＣ４〜Ｃ２０アルケニルまたは任意選択的に置換されているＣ４〜Ｃ２０アルキニルである。他の実施形態において、Ｒ４は任意選択的に置換されているＣ５〜Ｃ２０アルキルである。
【００５４】
本開示の他の態様は、
【００５５】
【化５】
2014510143.tif 000007
【００５６】
式（ＩＩ）の化合物を提供し、
式中、
Ｘはハロゲンであり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、−ＯＲ７、−ＳＲ７、−ＮＨＲ７または−Ｎ（Ｒ７）２であり、各々は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ８、−ＮＲ８２、−ＣＯ２Ｒ８、−ＣＯＮＲ８２、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されており、式中、各シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ９で任意選択的に置換されており；
式中、各Ｒ７は独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり；式中、各Ｒ８は独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、複素環、アリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、アリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、ヘテロアリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）または複素環（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり、式中、各シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ９で任意選択的に置換されており；
各Ｒ９は独立して、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノまたはジＣ１〜Ｃ６アルキルアミノであり；
Ｒ２は、−ＯＲ１１、−ＳＲ１１、−ＮＨＲ１１または−Ｎ（Ｒ１１）２であり；
各Ｒ１１は独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニルまたはハロ（Ｃ１〜Ｃ２０アルキル）であり；
Ｒ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニルまたは−ＯＲ７であり、各々は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ８、−ＮＲ８２、−ＣＯ２Ｒ８、−ＣＯＮＲ８２、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されており、式中、各シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ９で任意選択的に置換されており；
Ｒ４及びＲ５は独立して、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニルまたはＣ２〜Ｃ２０アルキニルであり、各々は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ８、−ＮＲ８２、−ＣＯ２Ｒ８、−ＣＯＮＲ８２、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されており、式中、各シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ９で任意選択的に置換されており；
各Ｒ６は、水素、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニル、アリール、ヘテロア
リール、複素環または−ＯＲ１０であり、式中、各アルキル、アルケニル及びアルキニルは、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ８、−ＮＲ８２、−ＣＯ２Ｒ８、−ＣＯＮＲ８２、Ｒ９で任意選択的に置換されているＣ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｒ９で任意選択的に置換されているＣ３〜Ｃ８シクロアルケニル、Ｒ９で任意選択的に置換されているアリール、Ｒ９で任意選択的に置換されているヘテロアリール及びＲ９で任意選択的に置換されている複素環から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されており；
式中、Ｒ１０はＣ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、複素環、アリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、アリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、ヘテロアリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）または複素環（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり、式中、各シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ９で任意選択的に置換されている。
【００５７】
一実施形態において、本開示は式（ＩＩ）の化合物を提供し、式中、ＸはＢｒまたはＣｌである。
一実施形態において、本開示は、式（ＩＩ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ１は、水素、任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されているＣ２〜Ｃ２０アルケニル、任意選択的に置換されているＣ２〜Ｃ２０アルキニルまたは−ＯＲ７である。一実施形態において、Ｒ１は水素である。
【００５８】
一実施形態において、本開示は式（ＩＩ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ１は任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルである。一実施形態において、Ｃ１〜Ｃ２０アルキルは、−ＯＲ８、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニルまたはアリールで任意選択的に置換されており、式中、各シクロアルキル、シクロアルケニル及びアリールはＲ９で任意選択的に置換されている。他の実施形態において、Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニルまたはアリールで任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルであり、式中、各シクロアルキル、シクロアルケニル及びアリールはＲ９で任意選択的に置換されている。
【００５９】
一実施形態において、本開示は式（ＩＩ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ１は−ＯＲ７であり、及び、Ｒ７はＣ１〜Ｃ６アルキルである。
一実施形態において、本開示は式（ＩＩ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ２は−ＯＲ１１である。他の実施形態において、Ｒ２は−ＯＲ１１であり、及び、Ｒ１１は、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）である。
【００６０】
一実施形態において、本開示は式（ＩＩ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ２は−ＯＨである。
一実施形態において、本開示は式（ＩＩ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ２は−ＮＨＲ１１または−Ｎ（Ｒ１１）２である。他の実施形態において、Ｒ２は−ＮＨＲ１１または−Ｎ（Ｒ１１）２であり、及び、Ｒ１１は、水素、Ｃ４〜Ｃ２０アルキル、Ｃ４〜Ｃ２０アルケニルまたはＣ４〜Ｃ２０アルキニルである。
【００６１】
他の実施形態において、本開示は式（ＩＩ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ２は−Ｎ（Ｒ１１）２である。更に他の実施形態において、Ｒ２は−Ｎ（Ｒ１１）２であり、及び、Ｒ１１は、水素、Ｃ４〜Ｃ２０アルキル、Ｃ４〜Ｃ２０アルケニルまたはＣ４〜Ｃ２０アルキニルである。更なる実施形態において、Ｒ２は−Ｎ（Ｒ１１）２であり、及び、Ｒ１１は水素またはＣ４〜Ｃ２０アルキルである。更に、Ｒ２は−Ｎ（Ｃ４〜Ｃ２０アルキル）２である。
【００６２】
他の実施形態において、本開示は式（ＩＩ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ２は−Ｎ（デシル）２である。
他の実施形態において、本開示は式（ＩＩ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ２は−Ｎ（ペンチル）２である。
【００６３】
一実施形態において、本開示は式（ＩＩ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ３は、水素、任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルまたは−ＯＲ７である。一実施形態において、Ｒ３は水素である。他の実施形態においてＲ３は任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルである。更に他の実施形態において、Ｃ１〜Ｃ２０アルキルは、−ＯＲ８、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニルまたはアリールで任意選択的に置換されており、式中、各シクロアルキル、シクロアルケニル及びアリールはＲ９で任意選択的に置換されている。
【００６４】
一実施形態において、本開示は式（ＩＩ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ３は、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニルまたはアリールで任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルであり、式中、各シクロアルキル、シクロアルケニル及びアリールはＲ９で任意選択的に置換されている。
【００６５】
一実施形態において、本開示は式（ＩＩ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ３は−ＯＲ７であり、及び、Ｒ７はＣ１〜Ｃ６アルキルである。
一実施形態において、本開示は式（ＩＩ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ４は任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルである。一実施形態において、Ｒ４はＣ１〜Ｃ２０アルキルである。
【００６６】
一実施形態において、本開示は式（ＩＩ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ５は任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルである。一実施形態において、Ｒ５はＣ１〜Ｃ２０アルキルである。
【００６７】
一実施形態において、本開示は式（ＩＩ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ６は水素または任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルである。一実施形態において、Ｒ６は水素である。他の実施形態において、Ｒ６は、−ＯＲ８、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニルまたはアリールで任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルであり、式中、各シクロアルキル、シクロアルケニル及びアリールはＲ９で任意選択的に置換されている。更に他の実施形態において、Ｃ１〜Ｃ２０アルキルは、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニルまたはアリールで任意選択的に置換されており、式中、各シクロアルキル、シクロアルケニル及びアリールはＲ９で任意選択的に置換されている。
【００６８】
一実施形態において、本開示は式（ＩＩ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ６は−ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、複素環、アリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、アリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、ヘテロアリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）または複素環（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり、式中、各シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ９で任意選択的に置換されている。他の実施形態において、Ｒ６は−ＯＲ１０であり、式中、Ｒ１０はアリールまたはアリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり、式中、各アリールはＲ９で任意選択的に置換されている。
【００６９】
一実施形態において、本開示は式（ＩＩ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｘはハロゲン以外のアニオンである。好適なアニオンとしては、これらに限定され
ないが、炭酸イオン、炭酸水素イオン、水酸化物イオン、硝酸イオン、亜硝酸イオン、シアン化物、リン酸、硫酸イオン、亜硫酸イオン、酢酸イオン、ギ酸イオン、プロピオン酸イオン、イソプロピオン酸イオン、マロン酸イオン、マレイン酸イオン、乳酸イオン、コハク酸イオン、酒石酸イオン、クエン酸イオン及びシュウ酸イオンが挙げられる。
【００７０】
一実施形態において、本開示は、Ｒ２が−ＯＨであり、及び、Ｒ３〜Ｒ６が式（ＩＩ）を参照して上記されているとおりである式（ＩＩ）の化合物を提供する。他の実施形態において、これらの化合物は以下の通り互変異性化可能である。
【００７１】
【化６】
2014510143.tif 000008
【００７２】
従って、本開示の他の態様は、
【００７３】
【化７】
2014510143.tif 000009
【００７４】
式（ＩＩ−Ａ）の化合物を提供し、
式中、
Ｒ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニルまたは−ＯＲ７であり、各々は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ８、−ＮＲ８２、−ＣＯ２Ｒ８、−ＣＯＮＲ８２、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されており、式中、各シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ９で任意選択的に置換されており；
式中、各Ｒ７は独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり；
式中、各Ｒ８は独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、複素環、アリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、アリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、ヘテロアリール（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）または複素環（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり、式中、各シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ９で任意選択的に置換されており；
式中、各Ｒ９は独立して、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノまたはジＣ１〜Ｃ６アルキルアミノであり；
Ｒ４及びＲ５は独立して、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニルまたはＣ２
〜Ｃ２０アルキニルであり、各々は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ８、−ＮＲ８２、−ＣＯ２Ｒ８、−ＣＯＮＲ８２、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されており、式中、各シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び複素環はＲ９で任意選択的に置換されており；
各Ｒ６は、水素、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリールまたは複素環であり、式中、各アルキル、アルケニル及びアルキニルは、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−ＯＲ８、−ＮＲ８２、−ＣＯ２Ｒ８、−ＣＯＮＲ８２、Ｒ９で任意選択的に置換されているＣ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｒ９で任意選択的に置換されているＣ３〜Ｃ８シクロアルケニル、Ｒ９で任意選択的に置換されているアリール、Ｒ９で任意選択的に置換されているヘテロアリール及びＲ９で任意選択的に置換されている複素環から選択される１〜４個の置換基で任意選択的に置換されている。
【００７５】
一実施形態において、本開示は式（ＩＩ−Ａ）の化合物を提供し、式中、Ｒ３は、水素、任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルまたは−ＯＲ７である。一実施形態において、Ｒ３は水素である。他の実施形態において、Ｒ３は任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルである。更に他の実施形態において、Ｃ１〜Ｃ２０アルキルは、−ＯＲ８、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニルまたはアリールで任意選択的に置換されており、式中、各シクロアルキル、シクロアルケニル及びアリールはＲ９で任意選択的に置換されている。
【００７６】
一実施形態において、本開示は式（ＩＩ−Ａ）の化合物を提供し、式中、Ｒ３は、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニルまたはアリールで任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルであり、式中、各シクロアルキル、シクロアルケニル及びアリールはＲ９で任意選択的に置換されている。
【００７７】
一実施形態において、本開示は式（ＩＩ−Ａ）の化合物を提供し、式中、Ｒ３は−ＯＲ７であり、及び、Ｒ７はＣ１〜Ｃ６アルキルである。
一実施形態において、本開示は式（ＩＩ−Ａ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ４は任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルである。一実施形態において、Ｒ４はＣ１〜Ｃ２０アルキルである。
【００７８】
一実施形態において、本開示は式（ＩＩ−Ａ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ５は任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルである。一実施形態において、Ｒ５はＣ１〜Ｃ２０アルキルである。
【００７９】
一実施形態において、本開示は式（ＩＩ−Ａ）を参照して上記されている化合物を提供し、式中、Ｒ６は水素または任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルである。一実施形態において、Ｒ６は水素である。他の実施形態において、Ｒ６は、−ＯＲ８、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニルまたはアリールで任意選択的に置換されているＣ１〜Ｃ２０アルキルであり、式中、各シクロアルキル、シクロアルケニル及びアリールはＲ９で任意選択的に置換されている。更に他の実施形態において、Ｃ１〜Ｃ２０アルキルは、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニルまたはアリールで任意選択的に置換されており、式中、各シクロアルキル、シクロアルケニル及びアリールはＲ９で任意選択的に置換されている。
【００８０】
一実施形態において、本開示は、プロドラッグとして存在することが可能である式（Ｉ
）または（ＩＩ）を参照して上記されている化合物を提供する。例えば、式（Ｉ）中の−ＯＨ基及び式（ＩＩ）中の−Ｒ２はプロドラッグとして存在することが可能である。好適なプロドラッグとしては、アルキル及びアリールエステル、酢酸塩、カルバメート、グリシン及びアラニンなどのアミノ酸エステル等が挙げられる。
【００８１】
他の実施形態において、本開示は、本開示の化合物の薬学的に許容可能な塩を提供する。一般に、薬学的に許容可能な塩は、親化合物の実質的に１つ以上の所望される薬理学的活性を維持し、ヒトへの投与に好適である塩である。薬学的に許容可能な塩としては、無機酸または有機酸と共に形成される酸付加塩が挙げられる。薬学的に許容可能な酸付加塩の形成に好適な無機酸としては、特に限定されないが、一例として、ハロゲン化水素酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸等）、硫酸、硝酸、リン酸等が挙げられる。薬学的に許容可能な酸付加塩の形成に好適な有機酸としては、限定されないが、一例として、酢酸、モノフルオロ酢酸、ジフルオロ酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、シュウ酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、パルミチン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、アルキルスルホン酸（例えば、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸等）、アリールスルホン酸（例えば、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸等）、４−メチルビシクロ［２．２．２］−オクト−２−エン−１−カルボン酸、グルコヘプトン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、第３級ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸等が挙げられる。例えば、一実施形態において、塩は、トリフルオロ酢酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩または塩酸塩である。
【００８２】
薬学的に許容可能な塩としてはまた、親化合物中に存在する酸性プロトンが、無機イオン（例えば、Ｎａ＋、Ｋ＋若しくはＬｉ＋などのアルカリ金属イオン、Ｃａ２＋若しくはＭｇ２＋などのアルカリ土類イオン、アルミニウムイオンまたはアンモニウムイオン）によって置き換えられた場合、または、有機塩基（例えば、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、Ｎ−メチルグルカミン、モルホリン、ピペリジン、ジメチルアミン、ジエチルアミン等）と配位した場合に形成される塩が挙げられる。
【００８３】
本明細書に記載の化合物並びにその塩はまた、技術分野において周知であるとおり、水和物、溶媒和物及びＮ−オキシドの形態であり得る。
治療的用途
一態様においては、本開示は、このような処置を必要とする被検体に有効量の本発明の１種以上の化合物を投与するステップを含む、呼吸鎖病変を伴うミトコンドリアを処置若しくは保護する方法を提供する。
【００８４】
本開示の化合物は、例えば、処置を必要とする被検体におけるＡＴＰ産生の低減及び／または酸化ストレス及び／または脂質過酸化をもたらすミトコンドリアの機能の低下に関連する疾患を処置若しくは抑制するために有用である。本開示は、特にこれらに限定されないが、被検体におけるフリードライヒ運動失調症、レーバ遺伝性視神経萎縮症、カーンズ−セイヤ症候群、ミトコンドリア脳筋症・乳酸アシドーシス・脳卒中様発作症候群及びリー症候群を、塩または溶媒和物または立体異性体を含む、式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩ−Ａ）の何れかに関して上記された化合物を有効量で投与することにより、状態を処置する方法を提供する。
【００８５】
本開示はまた、特にこれらに限定されないが、被検体における肥満症、アテローム性動脈硬化、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、癌、心不全、心筋梗塞（ＭＩ）、アルツ
ハイマー病、ハンチントン病、総合失調症、双極性障害、脆弱Ｘ症候群、慢性疲労症候群及びリー症候群を、塩または溶媒和物または立体異性体を含む、式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩ−Ａ）の何れかに関して上記された化合物を有効量で投与することにより、状態を処置する方法を提供する。
【００８６】
加えて、本発明の化合物は、レドックスストレスの予防及び細胞機能の増強のために用いられることが可能である。
フリードライヒ運動失調症
フリードライヒ運動失調症は重篤な神経変性及び心臓変性状態である。これは、進行性の四肢の運動失調、筋力の低下、構語障害、骨格変形及び心筋症により特徴付けられる。疾患の生化学的基礎は未だ研究中であるが、フリードライヒ運動失調症はフラタキシンの不足に強く関連している（ウィルソン（Ｗｉｌｓｏｎ）ら著（１９９７年）、ネイチャージェネティクス（Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．）、１６、３５２〜３５７ページ；ウィルソン（Ｗｉｌｓｏｎ）ら著（２００３年）、神経科学学会誌（Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．）、２０７、１０３〜１０５ページ）。大多数の患者において、フラタキシンの不足は、フラタキシンに係る遺伝子中のイントロンにおけるＧＡＡトリプレットリピートが伸長し、これによりｍＲＮＡレベルが顕著に低減し、最終的に、タンパク質レベルが低減した結果によるものである（カンプザノ（Ｃａｍｐｕｚａｎｏ）ら著（１９９６年）、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、２７１、１４２３〜１４２７ページ；カンプザノ（Ｃａｍｐｕｚａｎｏ）ら著（１９９７年）、人間の分子遺伝学（Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．）、６、１７７１〜１７８０ページ）。フラタキシンはヘム生合成の最中に鉄シャペロンとして作用し（ベンツェ（Ｂｅｎｃｚｅ）ら著（２００７年）、化学学会誌・ケミカル・コミュニケーションズ（Ｊ．Ｃ．Ｓ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．）、１７９８〜１８００ページ）、ヘム及びＦｅ−Ｓクラスターのインビトロアセンブリを刺激することが可能であることが示されている（パーク（Ｐａｒｋ）ら著（２００３年）、生化学学会誌（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）、２７８、３１３４０〜３１３５１ページ；ユーン（Ｙｏｏｎ）ら著（２００３年）、米国化学学会誌（Ｊ．Ａｍ  Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）、１２５、６０７８〜６０８４ページ；ユーン（Ｙｏｏｎ）ら著（２００４年）、生化学学会誌（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）、２７９、２５９４３〜２５９４６ページ）。フラタキシンは、ミトコンドリア電子移動鎖タンパク質及びミトコンドリアアコニターゼ（Ｆｅ−Ｓクラスターを含有する）と物理的に相互作用することが可能である（ブルトー（Ｂｕｌｔｅａｕ）ら著（２００４年）、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、３０５、２４２〜２４５ページ；ゴンザレス−カボ（Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｃａｂｏ）ら著（２００５年）、人間の分子遺伝学（Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．）、１４、２０９１〜２０９８ページ）。従って、フラタキシン欠乏は、ミトコンドリアにおける進行性の鉄蓄積、並びに、ヘム及びＦｅ−Ｓクラスターにおける欠乏を伴う細胞における鉄ホメオスタシスの撹乱をもたらす。
【００８７】
フラタキシンの欠乏は、１種以上のＦｅを利用するタンパク質の会合不全を介してミトコンドリア呼吸鎖機能不全をもたらすと考えられており；ミトコンドリア呼吸鎖複合体における１種以上のＦｅ−Ｓクラスターは重要な座位を表すと見られる。実際に、これらの複合体の機能低下がフリードライヒ運動失調症患者において記録されている（ブラッドレイ（Ｂｒａｄｌｅｙ）ら著（２０００年）、人間の分子遺伝学（Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．）、９、２７５〜２８２ページ）。ミトコンドリア呼吸鎖機能の損失はＡＴＰ産生の低減をもたらす可能性があり、その一方で、ミトコンドリアにおけるＦｅの蓄積によって呼吸鎖機能の低下に伴って濃度が随伴的に高くなる活性酸素種による酸化障害を小器官がきわめて受けやすくなる。酸化障害はフリードライヒ運動失調症における原発性病変ではなく、酸化ストレスによって疾患の進行の促進が補助されるという説得力のあるエビデンスが存在する。従って、酸化ストレスを克服するストラテジーが、疾患の進行を鈍化させ、効果的な治療を提供するはずである。
他の例示的なミトコンドリア疾患
レーバ遺伝性視神経萎縮症は網膜神経節細胞の変性に関連しており、進行性の視力喪失を生じさせ、種々のレベルの失明をもたらす。レーバ遺伝性視神経萎縮症は、主に２０歳を超える男性に発症し、（核ではなく）ミトコンドリアゲノムにおける突然変異により母性遺伝される。
【００８８】
カーンズ−セイヤ症候群は、典型的には通常２０歳より前に発症する珍しい神経筋障害である。これは、進行性の外眼筋麻痺症（眼筋の麻痺）及び軽度の骨格筋力の低下、聴力損失、協調性の損失、心臓障害及び認知遅延によって特徴付けられる。以下を含むカーンズ−セイヤ症候群の他の名称が多く存在している：筋障害を伴う慢性進行性外眼筋麻痺症（ＣＰＥＯ：Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｅｘｔｅｒｎａｌ  ｏｐｈｔｈａｌｍｏｐｌｅｇｉａ）；赤色ぼろ線維を伴うＣＰＥＯ；ＫＳＳ；ミトコンドリア細胞症、カーンズ−セイヤタイプ；眼頭蓋体性症候群；眼筋麻痺加症候群；筋障害を伴う眼筋麻痺；及び、赤色ぼろ線維を伴う眼筋麻痺。
【００８９】
ミトコンドリア脳筋症・乳酸アシドーシス・脳卒中様発作症候群は、中枢神経系、心筋、骨格筋及び胃腸管系を含む複数の器官系に関与する進行性のミトコンドリア疾患である。症状は、筋力の低下、脳卒中様現象、眼筋麻痺及び認知機能障害を含む。リー症候群は、退行性の脳障害であり、通常は幼齢（例えば２歳未満）で診断される。悪化は、度々、発作、認知症、摂食及び言語障害、呼吸機能不全、心臓障害及び筋力の低下などの症状を伴って急激である。生命予後は不良であり、典型的には、診断から数年内に死亡する。
ミトコンドリアエネルギー産生
ミトコンドリアマトリックス中のクエン酸回路（クレブス（Ｋｒｅｂｓ）回路）から放出されたエネルギーは、ＮＡＤＨ（複合体Ｉ）及びＦＡＤＨ２（複合体ＩＩ）としてミトコンドリア電子移動鎖に入る。これらは、ミトコンドリア内膜内に全てが位置されるＡＴＰ産生に関与する５種のタンパク質複合体のうちの最初の２種である。ＮＡＤＨ（ＮＡＤＨ−特異的脱水素酵素での酸化による）及びＦＡＤＨ２（コハク酸脱水素酵素での酸化による）由来の電子が呼吸鎖を流下し、ミトコンドリアのマトリックスから膜間空間へのプロトンの能動的な輸送（即ち、ミトコンドリア内膜を介した）を生じさせることにより、個別のステップにおいてエネルギーを放出する。呼吸鎖における電子キャリアは、フラビン、タンパク質−結合鉄−硫黄中心、キノン、シトクロム及び銅を含む。複合体間で電子を伝達させる２種の分子が存在する：コエンザイムＱ（複合体Ｉ→ＩＩＩ及び複合体ＩＩ→ＩＩＩ）及びシトクロムｃ（複合体ＩＩＩ→ＩＶ）。呼吸鎖における最終的な電子受容体はＯ２であり、これは複合体ＩＶにおいてＨ２Ｏに変換される。
【００９０】
機能性ミトコンドリアにおいては、複合体Ｉを介した２個の電子の伝達によって４個のＨ＋が膜間空間に輸送される。複合体ＩＩＩを介した電子伝達によって更に２個のＨ＋が膜間空間に輸送され、及び、複合体ＩＶを介した電子伝達によって更に４個のＨ＋が膜間空間に輸送される。膜間空間に伝達された１０個の電子はプロトン電気化学的勾配を形成し；Ｈ＋は、ＡＤＰをＡＴＰに随伴的に転換させながら、複合体Ｖ（ＡＴＰシンターゼ）を介してミトコンドリアのマトリックスに戻ることが可能である。複合体ＩＩを介した電子伝達によってはＨ＋が膜間空間に輸送されないことは興味深い。従って、ＮＡＤＨからの２ｅ−伝達による１０個のプロトン（複合体Ｉ→複合体ＩＩＩ→複合体ＩＶ）と対照的に、ＦＡＤＨ２からの２ｅ−伝達（複合体ＩＩ→複合体ＩＩＩ→複合体ＩＶ）は６個のプロトンしか輸送せず、これに応じて、ＡＴＰ産生量も少ない。解糖によって代謝された各グルコース分子は１２個の電子をもたらし；これらは、ミトコンドリアのマトリックスにおけるクレブス回路を介して５つのＮＡＤＨ分子及び１つのＦＡＤＨ２に転換される。ミトコンドリア電子伝達において利用される５つのＮＡＤＨ分子は約２５のＡＴＰを産生する一方で、単一のＦＡＤＨ２は約３つのＡＴＰ分子しかもたらさない（これらは、グルコース新陳代謝に由来するＡＴＰの他の４つの分子（２つが解糖の最中及び２つがクレブス回路において）である。この分析は通常のＡＴＰ産生における複合体Ｉの関与の重要性を
強調する一方で、治療的介入に対する重要な機会を提供し得る一定の代謝上の現実性／不確定要素を不明瞭にする傾向にもあった。１つの代謝上の現実性は、複合体Ｉは、通常のミトコンドリアにおけるＡＴＰ産生に定量的に重要である一方で、ミトコンドリアＡＴＰ産生の全てについて重要であるわけではないということである。電子はコエンザイムＱレベルで電子移動鎖に入ることが可能であり（複合体ＩＩまたは脂肪酸酸化から）、これにより、複合体Ｉで電子移動鎖に入った場合にもたらされるであろうＡＴＰの約６０％もの量が産生される）。最終的にコエンザイムＱを通過する、個々のミトコンドリア複合体に通常入る電子のフラックスは、おそらくＮＡＤＨ、ＦＡＤＨ２及び脂肪酸酸化に由来する電子の利用可能性に大きく左右されるが、個々の経路の実際の内因的な容量は入念に研究されてはいないようである。
【００９１】
機能性ミトコンドリアにおいて、ミトコンドリアによる呼吸を反映するいくつかの実験パラメータが容易に計測可能である。これらは、ＮＡＤＨ及びＯ２消費、並びに、ＡＴＰ産生を含む。電子移動鎖を流れる電子の計測は容易ではないが、これにより、酸素が消費され、並びに、Ｈ２Ｏ及びＡＴＰが産生される。実際には、ミトコンドリア中の電子は、コエンザイムＱなどのミトコンドリア電子キャリアの１種に結合した場合にのみ計測可能である。ヒトにおいて、このミトコンドリアコエンザイムはコエンザイムＱ１０として存在し、これは分子を実質上不水溶性とする５０−炭素Ｃ−置換基を有する（計算上のオクタノール−水分配係数＞１０２０）（ジェームズ（Ｊａｍｅｓ）ら著（２００５年）、生化学学会誌（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．）、２８０、２１２９５〜２１３１２ページ）。
【００９２】
機能不全性ミトコンドリアにおいても、機能性ミトコンドリアに関して上記されているものと同じタイプの計測を行うことが可能である。複合体Ｉを通る電子の流れが妨げられた場合、計測される数々のパラメータが変化するはずである。これらは、ＮＡＤＨ消費量の低減（ピルビン酸還元を介した乳酸塩の増加として計測される）及びＡＴＰ産生の低減を含む。複合体ＩからコエンザイムＱへの電子の流れが非効率的となるため、この還元されたコエンザイムの濃度は低下することとなる。興味深いことに、酸素を消費するための新たな経路が形成される。複合体ＩＶにおいて酸素は効率的に水に転換されないが（各酸素分子の全部で４電子還元）、不完全な複合体Ｉへの電子の流れの大部分が、スーパーオキシドの産生（各酸素の１電子還元）を伴いながら酸素に向けられる。それ故、酸素利用に係る化学量論が変化する。ミトコンドリアによるスーパーオキシドの産生は、実際には、通常のミトコンドリアにおいてもいくらか生じるが、呼吸鎖に異常を有するミトコンドリアにおけるより頻度の高い現象である。スーパーオキシドは、活性酸素種（ＲＯＳ）の１種の形態である。スーパーオキシド自体は脂質膜、タンパク質及びＤＮＡなどの生物学的分子とは容易に反応するとは考えられておらず、実際に、一定の細胞プロセスの制御に係るシグナル分子として機能する。生物学的には、スーパーオキシド（Ｏ−・２）の主たる宿命は、過酸化物（Ｈ２Ｏ２）及び酸素を生成する自身の不均化反応、即ち
２Ｏ−・２＋２Ｈ＋→Ｈ２Ｏ２＋Ｏ２
である。この反応は自然発生的に生じ、スーパーオキシドジスムターゼによって触媒されることも可能である。スーパーオキシドはまた、一原子価プロセスにおいて過酸化物に還元されることが可能である。スーパーオキシドと同様に、過酸化水素もまた細胞高分子に対して本質的に有害ではなく、実際には多数の酵素機能に重要である。しかしながら、鉄及び銅などの金属イオンの存在下では、過酸化水素はフェントン反応に従ってヒドロキシルラジカル（ＨＯ・）及び水酸化イオン（ＯＨ−）に転換される。即ち以下のとおりである。
ＨＯＯＨ＋Ｆｅ２＋→Ｆｅ３＋＋ＨＯ・＋ＯＨ−
ヒドロキシルラジカルは反応性がきわめて高く、ＤＮＡ、タンパク質及び脂質を含む実質的に殆どの生物学的分子とも反応可能である。ヒドロキシルラジカルは容易に細胞に拡散することも可能であり、細胞を傷つける能力は、反応するまでに移動する距離によってのみ限定される。ヒドロキシルラジカルはまた、スーパーオキシドと反応して、細胞高分子
及びアセンブリに損傷を与えるＲＯＳの他の高反応性形態一重項酸素をもたらすことが可能である（（１Ｏ２）＋ＯＨ−）。特に有害であり、よく研究されたヒドロキシルラジカルによって媒介される反応の１種は、炭素中心ラジカル（Ｒ・）が形成される膜脂質からの炭素中心ラジカル（Ｒ・）が形成される水素原子（Η・）の抽出である。このラジカルΗＯ・＋ＲＨ（脂質）→Ｒ・＋Ｈ２Ｏ
Ｒ・＋Ｏ２→ＲＯＯ・
ＲＯＯ・＋ＲＨ→ＲＯＯＨ＋Ｒ・
は酸素と容易に反応して、ヒドロペルオキシラジカル（ＲＯＯ・）を形成することが可能である。ヒドロペルオキシラジカルは反応性が高く、他の水素原子を膜脂質から抽出して、他の炭素中心ラジカル（これは、全く同じ化学を経ることが可能である）を生成し、最終的には、単一のヒドロキシルラジカルから膜脂質における多くの酸化損傷をもたらす連鎖反応（脂質過酸化）をもたらすことが可能である。この理由のために、脂質過酸化が、細胞及びミトコンドリア膜が機能不全性ミトコンドリアを（部分的に）含有する細胞において変性される主なプロセスを表すと見られる。フリードライヒ運動失調症患者において観察されるリポフスチンの蓄積は、脂質過酸化が疾患を進行させる中心的なプロセスであるという主張と完全に一致する（ラマルシェ（Ｌａ  Ｍａｒｃｈｅ）ら著（１９８０年）、カナダ国神経科学学会誌（Ｃａｎ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．）、７、３８９〜３９６ページ；ユインＤ．（Ｙｉｎ，Ｄ．）（１９９６年）フリーラジカル・バイオロジー・アンド・メディスン（Ｆｒｅｅ  Ｒａｄ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．）、２１、８７１〜８８８ページ；山田ら著（２００１年）、脂質研究学会誌（Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．）、４２、１１８７〜１１９６ページ）。
【００９３】
ミトコンドリア機能不全に影響するミトコンドリア電子移動鎖における全ての病変は高レベルのスーパーオキシドによってもたらされることとなる一方で、いくつかのタイプの病変が更なる機能上の損傷をもたらすことが想定され得ることに注目すべきである場合がある。後者は、タンパク質フラタキシンのレベルが最適以下であるフリードライヒ運動失調症（これは細胞鉄ホメオスタシスに重要である；パーク（Ｐａｒｋ）ら著（２００３年）、生化学学会誌（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）、２７８、３１３４０〜３１３５１ページ；ユーン（Ｙｏｏｎ）ら著（２００３年）、米国化学学会誌（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）、１２５、６０７８〜６０８４ページ；ユーン（Ｙｏｏｎ）ら著（２００４年）、生化学学会誌（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）、２７９、２５９４３〜２５９４６ページ；ベンツェ（Ｂｅｎｃｚｅ）ら著（２００７年）、化学学会誌・ケミカル・コミュニケーションズ（Ｊ．Ｃ．Ｓ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．）、１７９８〜１８００ページ）を確かに含み、タンパク質におけるＦｅＳクラスターのアセンブリは、ミトコンドリア中におけるＦｅ２＋／３＋の蓄積をもたらし、及び、代わりに上記のフェントン化学に寄与する。同様に、筋萎縮性側索硬化症などの障害は、解毒酵素であるスーパーオキシドジスムターゼの欠乏に関連しており、大きく増加した上述のＲＯＳ濃度を有することとなる。
【００９４】
あまり研究されていないミトコンドリア電子伝達のパラメータの１つは、プロセスが、１または２電子伝達が関与するとして最もよく特徴付けられるかどうかである。ＮＡＤＨは絶対的に２電子ドナーであり、ＦＡＤＨ２のように、コエンザイムＱ及びシトクロムｃは２電子レドックス回路に関与するためにこれは重要である。実質的に全ての刊行物が、これらの種が正味で２電子変化を含むとして関与するプロセスを表している。しかしながら、ＦＡＤＨ２は、その還元当量を単一の電子として伝達させ得る（及び、一般的に伝達させる）。更に、複合体ＩＩＩにおけるＱ回路には、単一電子伝達が明らかに関与している。還元されたシトクロムｃは、呼吸の最終ステップに重要な酵素であるシトクロムｃオキシダーゼに、電子を１個ずつ伝達させることが知られている。最後に、機能不全性ミトコンドリア中における電子の蓄積（還元性ストレスをもたらす）は、スーパーオキシドへの酸素の（１電子）還元によって実質的に軽減される（上記を参照のこと）。それ故、電子移動鎖は、関連種の大部分のレドックス回路により２つの電子を伝達させる能力を有す
るが、機能するためにそのようにすることが必ず必須であるかどうかは不明である。
【００９５】
ミトコンドリア機能不全における初期の還元性ストレス（電子の蓄積）が、脂質過酸化の場合のように１電子プロセスであるとすると、還元性ストレスの対処に単一電子のキャリアの実用性が見出されることが可能である（例えば１電子還元中間体が双極子相互作用、置換効果、共鳴効果またはキャプトデイティブ効果によって安定化されている分子）。単一電子が流れるよう設計されており、（ｉ）スーパーオキシドから電子を受け取ること、（ｉｉ）複合体ＩＩＩに電子を供与すること、及び、（ｉｉｉ）炭素−中心脂質ラジカルを失活させることが可能である分子が特に有用である。本発明の多機能ラジカル失活剤（ＭＲＱ：Ｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｒａｄｉｃａｌ  Ｑｕｅｎｃｈｅｒｓ）は、ミトコンドリア、細胞及び生体を酸化ストレスから効果的に保護することが可能である。
薬学的組成物
他の態様において、本開示は、式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩ−Ａ）の何れかに関して上述した化合物の１種以上と、適切なキャリア、賦形剤または希釈剤とを含む組成物を提供する。キャリア、賦形剤または希釈剤の厳密な性質は、組成物に係る所望の使用に応じることとなり、また、獣医学的使用に好適若しくは許容可能であるものからヒトへの使用に好適若しくは許容可能であるものの範囲であり得る。組成物は、任意選択的に、１種以上の追加の化合物を含んでいてもよい。
【００９６】
このような疾患の処置または予防に用いられる場合、本明細書に記載の化合物は、単独で、１種以上の化合物の混合物として、または、このような疾患に関連するこのような疾患及び／または症状処置に有用である他薬剤との混合若しくは併用で投与され得る。化合物はまた、いくつかを挙げるとステロイド、膜安定化剤、５ＬＯ阻害剤、ロイコトリエン合成及び受容体阻害剤、ＩｇＥアイソタイプスイッチ若しくはＩｇＥ合成の阻害剤、ＩｇＧアイソタイプスイッチ若しくはＩｇＧ合成、β−アゴニスト、トリプターゼ阻害剤、アスピリン、ＣＯＸ阻害剤、メトトレキサート、抗−ＴＮＦ薬物、レツキシン、ＰＤ４阻害剤、ｐ３８阻害剤、ＰＤＥ４阻害剤及び抗ヒスタミン剤などの他の障害若しくは疾病の処置に有用な薬剤との混合若しくは併用で投与され得る。化合物は、化合物それ自体または化合物を含む薬学的組成物の形態で投与され得る。
【００９７】
化合物を含む薬学的組成物は、従来の混合、溶解、造粒、糖衣丸−形成研和、乳化、カプセル化、封入または凍結乾燥プロセスにより製造され得る。組成物は、薬学的に用いられることが可能である調製剤への化合物の加工を促進させる１種以上の生理学的に許容可能なキャリア、希釈剤、賦形物または助剤を用いる従来の様式で配合され得る。
【００９８】
化合物は、薬学的組成物自体に、または、水和物、溶媒和物、既述のＮ−オキシド若しくは薬学的に許容可能な塩の形態で配合され得る。典型的には、このような塩は対応する遊離酸及び塩基よりも水溶液中において可溶性であるが、対応する遊離酸及び塩基よりも溶解度に劣る塩もまた形成され得る。
【００９９】
薬学的組成物は、例えば局部投与、点眼投与、経口投与、口腔内投与、全身投与、経鼻投与、注射、経皮投与、直腸投与、膣内投与等を含む実質的に何れかの投与形態に好適な形態、または、吸入若しくは吹送による投与に好適な形態であり得る。
【０１００】
局部投与のために、化合物は、技術分野において周知であるとおり、溶液、ゲル、軟膏剤、クリーム、懸濁液等として配合され得る。全身用配合物は、例えば、皮下、静脈内、筋肉内、髄腔内または腹腔内注射といった注射による投与のために設計されたもの、並びに、経皮、経粘膜、経口または肺内投与用に設計されたものを含む。
【０１０１】
有用な注入可能な調製物は、水性若しくは油性ビヒクル中の有効な化合物の無菌懸濁液、溶液若しくはエマルジョンを含む。組成物はまた、懸濁剤、安定化剤及び／または分散剤などの配合剤を含有していてもよい。注入用配合物は、例えば、アンプルまたはマルチドーズ容器中の単位投与剤形で供され得、及び、防腐剤が加えられていてもよい。あるいは、注入可能な配合物は、特にこれらに限定されないが、無菌パイロジェン除去水、緩衝剤、ブドウ糖溶液等を含む好適なビヒクルでの使用に先立つ還元のための粉末形態で提供されてもよい。この目的のために、有効な化合物は、凍結乾燥中の技術分野において公知である何れかの技術などの技術分野において公知である何れかの技術によって乾燥され、使用に先立って還元されてもよい。
【０１０２】
経粘膜投与のために、浸透されるべきバリアに対する適切な浸透剤が配合物において用いられる。このような浸透剤は技術分野において公知である。
経口投与のために、薬学的組成物は、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填材（例えば、ラクトース、微結晶性セルロースまたはリン酸水素カルシウム）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプンまたはデンプングリコール酸ナトリウム）；または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの薬学的に許容可能な賦形物と共に、従来の手段によって調製された例えば舐剤、錠剤またはカプセルの形態であってもよい。錠剤は、例えば糖質、フィルムまたは腸溶コーティングといった技術分野において周知である方法によってコーティングされていてもよい。
【０１０３】
経口投与用液体調製物は、例えば、エリキシル剤、溶液、シロップ剤若しくは懸濁液の形態であり得、または、使用に先立った水若しくは他の好適なビヒクルにより還元される乾燥生成物として供与され得る。このような液体調製物は、懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ剤、セルロース誘導体または硬化食用脂）；乳化剤（例えば、レシチンまたはアカシア）；非水性ビヒクル（例えば、アーモンド油、油状エステル、エチルアルコール、クレモホール（ｃｒｅｍｏｐｈｏｒｅ）（商標）または分割野菜油）；及び、防腐剤（例えば、メチル若しくはプロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸）などの薬学的に許容可能な添加剤を用いる従来の手段によって調製され得る。調製物はまた、適切に緩衝塩、防腐剤、香味剤、着色剤及び甘味剤を含有していてもよい。
【０１０４】
経口投与用調製物は、周知であるとおり化合物が徐放されるよう好適に配合され得る。
口腔内投与のために、組成物は、従来の様式で配合された錠剤または舐剤の形態であり得る。
【０１０５】
投与の直腸及び膣内経路のために、化合物は、カカオバターまたは他のグリセリドなどの従来の座薬基剤を含有する溶液（保留浣腸用）、座薬または軟膏剤として配合され得る。
【０１０６】
鼻噴投与または吸入または吹送による投与のために、化合物は、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、フルオロカーボン、二酸化炭素または他の好適なガスといった好適な噴射剤を用いた加圧されたパックまたは噴霧器からのエアロゾル噴霧の形態で簡便に送達されることが可能である。加圧エアロゾルの場合、投与単位は、計量された量が送達されるバルブを設けることにより決定され得る。吸入器または注入器において用いられるカプセル及びカートリッジ（例えばゼラチン製のカプセル及びカートリッジ）は、化合物とラクトースまたはデンプンなどの好適な粉末基剤との粉末混合物を含有するよう配合され得る。
【０１０７】
点眼投与のために、化合物は、目への投与に好適な溶液、エマルジョン、懸濁液等とし
て配合され得る。目への化合物の投与に好適な多様なビヒクルは技術分野において公知である。
【０１０８】
持続的送達のために、化合物は、移植または筋肉内注射による投与のための持効性製剤調製物として配合されることが可能である。化合物は、好適な高分子若しくは疎水性材料（例えば、許容可能な油中のエマルジョンとして）若しくはイオン交換樹脂と配合され得るか、または、例えば、難溶性塩といった難溶性誘導体として配合され得る。あるいは、経皮的な吸収のために化合物をゆっくりと放出する粘着性のディスクまたはパッチとして製造される経皮送達系が用いられ得る。この目的のために、浸透エンハンサが用いられて化合物の経皮的浸透が促進され得る。
【０１０９】
あるいは、他の薬学送達系が採用され得る。リポソーム及びエマルジョンが化合物の送達に用いられ得る送達ビヒクルの周知の例である。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ：ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｘｉｄｅ）などの一定の有機溶剤もまた採用され得るが、通常は高い毒性という代償がある。
【０１１０】
薬学的組成物は、所望の場合には、化合物を含有する１種以上の単位投与剤形を含有し得るパックまたはディスペンサデバイスで供与され得る。このパックは、例えば、ブリスターパックなどの金属またはプラスチックフォイルを備えていてもよい。パックまたはディスペンサデバイスには投与のための説明書が添付されていてもよい。
【０１１１】
本明細書に記載の化合物、または、その組成物は、一般に、意図される結果を達成するために効果的な量、例えば処置される特定の疾患を処置若しくは予防するために効果的な量で用いられることとなる。治療的有益性とは、患者が原障害により未だ苦しんでいる可能性があるとしてもその患者が気分若しくは容体の改善を報告するような、処置される原障害の根絶若しくは寛解、及び／または、原障害に関連する症状の１種以上の根絶若しくは寛解を意味する。治療的有益性はまた、一般に、改善が実現しているかどうかに関わらず、疾患の進行の停止若しくは遅延を含む。
【０１１２】
投与される化合物の量は、例えば、特定の処置される指標、投与形態、所望の有益性が予防的若しくは治療的であるかに関わらず、処置される指標の重症度、並びに、患者の年齢及び体重、特定の化合物の生体利用率、選択された投与経路における有効薬物化合物への変換割合及び効率等を含む多様な要因に応じることとなる。
【０１１３】
特定の使用及び投与形態に係る化合物の有効な投与量の判定は、当業者が行うことが十分に可能である。有効な投与量は、最初は、インビトロ活性及び新陳代謝アッセイから推定され得る。例えば、動物において使用される化合物の初期投与量は、インビトロアッセイにおいて計測される特定の化合物のＩＣ５０以上の有効な代謝産化合物の循環血液または血清濃度が達成されるよう配合され得る。所望される投与経路を介した特定の化合物の生体利用率を考慮した、このような循環血液または血清濃度を達成するための投与量の算出は当業者が行うことが十分に可能である。化合物の初期投与量はまた、動物モデルなどのインビボデータから推定可能である。上記の種々の疾患を処置若しくは予防する有効代謝産物の効力をテストするための有用な動物モデルは技術分野において周知である。化合物の生体利用率及び／または有効代謝産物への新陳代謝のテストに好適な動物モデルもまた周知である。当業者は、ルーチン的に、このような情報を応用してヒト投与に好適な特定の化合物の投与量を判定することが可能である。
【０１１４】
投与量は、典型的には、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ／日、０．００１ｍｇ／ｋｇ／日または０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であろうが、他の要因のうち、上述した有効代謝産化合物の活性、化合物の生体利用率、その新陳代謝動態学及び他
の薬物動態学的特性、投与形態及び種々の他の要因に応じてより高くても低くてもよい。投与量及び間隔は、治療的または予防的効果の維持に十分である化合物及び／または有効代謝産化合物の血漿レベルをもたらすために個々に調節され得る。例えば、化合物は、とりわけ、投与形態、特定の処置される指標及び処方する医師の見解に応じて、週に一回、週に数回（例えば、１日おき）、１日一回または１日に数回投与され得る。局所・局部投与などの局所的投与または選択的摂取の場合、化合物及び／または有効代謝産化合物の有効な局所濃度は、血漿濃度に関連していない場合もある。当業者は、過度に実験を行うことなく有効局所投与量を最適化することが可能であろう。
定義
本明細書において用いられる以下の用語及び表現は明記されている意味を有する。
【０１１５】
本明細書において用いられる用語は、前及び／または後ろに一重ダッシュ「−」若しくは二重ダッシュ「＝」が続いて、指定された置換基とその親部分との間の結合の結合次数を示し得；一重ダッシュは単結合を示し、二重ダッシュは二重結合を示す。一重ダッシュまたは二重ダッシュが不在の場合、置換基とその親部分との間に単結合が形成されることが理解され；更に、置換基は、ダッシュが他の物を示している場合を除き、「左から右に」読まれることが意図されている。例えば、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニルオキシ及び−ＯＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキルは同一の官能基を示し；同様に、アリールアルキル及び−アルキルアリールは同一の官能基を示す。
【０１１６】
本明細書において用いられるところ、「アルケニル」という用語は、他に規定されている場合を除き２〜１０個の炭素を含有する、及び、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含有する直鎖若しくは分岐鎖炭化水素を意味する。アルケニルの代表例としては、これらに限定されないが、エテニル、２−プロペニル、２−メチル−２−プロペニル、３−ブテニル、４−ペンテニル、５−ヘキセニル、２−ヘプテニル、２−メチル−１−ヘプテニル、３−デセニル及び３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエニルが挙げられる。
【０１１７】
本明細書において用いられるところ、「アルコキシ」という用語は、本明細書において定義されているところ、酸素原子を介して親分子部分に付加されたアルキル基を意味する。アルコキシの代表例としては、これらに限定されないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、２−プロポキシ、ブトキシ、ｔ−ブトキシ、ペンチルオキシ及びヘキシルオキシが挙げられる。
【０１１８】
本明細書において用いられるところ、「アルキル」という用語は、他に規定されている場合を除き、１〜１０個の炭素原子を含有する直鎖若しくは分岐鎖炭化水素を意味する。アルキルの代表例としては、これらに限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、３−メチルヘキシル、２，２−ジメチルペンチル、２，３−ジメチルペンチル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル及びｎ−デシルが挙げられる。「アルキル」基が２つの他の部分間の連接基である場合、これは、直鎖若しくは分岐鎖でもあり得る；例としては、これらに限定されないが、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨＣ（ＣＨ３）−、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ２−が挙げられる。
【０１１９】
本明細書において用いられるところ、「アルキニル」という用語は、２〜１０個の炭素原子を含有し、また、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含有する直鎖若しくは分岐鎖炭化水素基を意味する。アルキニルの代表例としては、これらに限定されないが、アセチルエニル、１−プロピニル、２−プロピニル、３−ブチニル、２−ペンチニル及び１−ブチニルが挙げられる。
【０１２０】
本明細書において用いられるところ、「アリール」という用語は、フェニル（即ち、単環式アリール）、または、芳香族二環系中に炭素原子のみを含有する少なくとも１つのフェニル環若しくは芳香族二環を含有する二環系を意味する。二環式アリールは、単環式シクロアルキル、単環式シクロアルケニルまたは単環式ヘテロシクリルに縮合したアズレニル、ナフチルまたはフェニルであることが可能である。二環式アリールは、二環系のフェニル部分中に含有される何れかの炭素原子を介して、または、ナフチル若しくはアズレニル環に係る何れかの炭素原子を介して親分子部分に結合している。二環式アリールの縮合単環式シクロアルキル若しくは単環式ヘテロシクリル部分は、１個若しくは２個のオキソ及び／またはチア基で任意選択的に置換されている。二環式アリールの代表例としては、これらに限定されないが、アズレニル、ナフチル、ジヒドロインデン−１−イル、ジヒドロインデン−２−イル、ジヒドロインデン−３−イル、ジヒドロインデン−４−イル、２，３−ジヒドロインドール−４−イル、２，３−ジヒドロインドール−５−イル、２，３−ジヒドロインドール−６−イル、２，３−ジヒドロインドール−７−イル、インデン−１−イル、インデン−２−イル、インデン−３−イル、インデン−４−イル、ジヒドロナフタレン−２−イル、ジヒドロナフタレン−３−イル、ジヒドロナフタレン−４−イル、ジヒドロナフタレン−１−イル、５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１−イル、５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル、２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル、２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル、２，３−ジヒドロベンゾフラン−６−イル、２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イル、ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル、ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル、２Ｈ−クロメン−２−オン−５−イル、２Ｈ−クロメン−２−オン−６−イル、２Ｈ−クロメン−２−オン−７−イル、２Ｈ−クロメン−２−オン−８−イル、イソインドリン−１，３−ジオン−４−イル、イソインドリン−１，３−ジオン−５−イル、インデン−１−オン−４−イル、インデン−１−オン−５−イル、インデン−１−オン−６−イル、インデン−１−オン−７−イル、２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキサン−５−イル、２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキサン−６−イル、２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン３（４Ｈ）−オン−５−イル、２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン３（４Ｈ）−オン−６−イル、２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン３（４Ｈ）−オン−７−イル、２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン３（４Ｈ）−オン−８−イル、ベンゾ［ｄ］オキサジン−２（３Ｈ）−オン−５−イル、ベンゾ［ｄ］オキサジン−２（３Ｈ）−オン−６−イル、ベンゾ［ｄ］オキサジン−２（３Ｈ）−オン−７−イル、ベンゾ［ｄ］オキサジン−２（３Ｈ）−オン−８−イル、キナゾリン−４（３Ｈ）−オン−５−イル、キナゾリン−４（３Ｈ）−オン−６−イル、キナゾリン−４（３Ｈ）−オン−７−イル、キナゾリン−４（３Ｈ）−オン−８−イル、キノキサリン−２（１Ｈ）−オン−５−イル、キノキサリン−２（１Ｈ）−オン−６−イル、キノキサリン−２（１Ｈ）−オン−７−イル、キノキサリン−２（１Ｈ）−オン−８−イル、ベンゾ［ｄ］チアゾール−２（３Ｈ）−オン−４−イル、ベンゾ［ｄ］チアゾール−２（３Ｈ）−オン−５−イル、ベンゾ［ｄ］チアゾール−２（３Ｈ）−オン−６−イ及びベンゾ［ｄ］チアゾール−２（３Ｈ）−オン−７−イルが挙げられる。特定の実施形態において、二環式アリールは、（ｉ）ナフチル、または、（ｉｉ）５員若しくは６員単環式シクロアルキル、５員若しくは６員単環式シクロアルケニルあるいは５員若しくは６員単環式ヘテロシクリルに縮合したフェニル環であり、ここで、縮合シクロアルキル、シクロアルケニル及びヘテロシクリル基は独立してオキソまたはチアである１つまたは２つの基で任意選択的に置換されている。
【０１２１】
本明細書において用いられるところ、「シアノ」及び「ニトリル」という用語は−ＣＮ基を意味する。
本明細書において用いられるところ、「シクロアルキル」という用語は、単環式若しくは二環式シクロアルキル環系を意味する。単環式環系は、３〜８個の炭素原子を含有する環式炭化水素基であって、ここで、このような基は、飽和であっても不飽和であってもよいが、芳香族ではない。特定の実施形態において、シクロアルキル基は完全に飽和である
。単環式シクロアルキルの例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプチル及びシクロオクチルが挙げられる。二環式シクロアルキル環系は、架橋単環または縮合二環である。架橋単環は単環式シクロアルキル環を含有し、ここで、単環の隣接していない２個の炭素原子は、１〜３個の追加の炭素原子を有するアルキレン架橋（即ち、−（ＣＨ２）ｗ−の形態の架橋基であり、式中、ｗは１、２または３である）によってリンクされている。二環系の代表例としては、これらに限定されないが、ビシクロ［３．１．１］ヘプタン、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、ビシクロ［２．２．２］オクタン、ビシクロ［３．２．２］ノナン、ビシクロ［３．３．１］ノナン及びビシクロ［４．２．１］ノナンが挙げられる。縮合二環式シクロアルキル環系は、フェニル、単環式シクロアルキル、単環式シクロアルケニル、単環式ヘテロシクリルまたは単環式ヘテロアリールの何れかに縮合した単環式シクロアルキル環を含有する。架橋または縮合二環式シクロアルキルは、単環式シクロアルキル環中に含有される何れかの炭素原子を介して親分子部分に結合している。シクロアルキル基は、独立してオキソまたはチアである１つまたは２つの基で任意選択的に置換されている。特定の実施形態において、縮合二環式シクロアルキルは、フェニル環、５員若しくは６員単環式シクロアルキル、５員若しくは６員単環式シクロアルケニル、５員若しくは６員単環式ヘテロシクリルまたは５員若しくは６員単環式ヘテロアリールの何れかに縮合した５員若しくは６員単環式シクロアルキル環であり、ここで、縮合二環式シクロアルキルは、独立してオキソまたはチアである１つまたは２つの基によって任意選択的に置換されている。
【０１２２】
本明細書において用いられるところ、「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉまたは−Ｆを意味する。
本明細書において用いられるところ、「ハロアルキル」という用語は、本明細書において定義されるアルキル基を介して親分子部分に付加される、本明細書において定義される少なくとも１種のハロゲンを意味する。ハロアルキルの代表例としては、これらに限定されないが、クロロメチル、２−フルオロエチル、トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチル及び２−クロロ−３−フルオロペンチルが挙げられる。
【０１２３】
本明細書において用いられるところ、「ヘテロアリール」という用語は、少なくとも１つの芳香族複素環を含有する単環式ヘテロアリールまたは二環系を意味する。単環式ヘテロアリールは５員若しくは６員環であることが可能である。５員環は、２つの二重結合と、１、２、３または４個の窒素原子と、任意選択的に、１個の酸素または硫黄原子からなる。６員環は、３つの二重結合と、１、２、３または４個の窒素原子とからなる。５員若しくは６員ヘテロアリールは、ヘテロアリール中に含有される何れかの炭素原子または何れかの窒素原子を介して親分子部分に結合している。単環式ヘテロアリールの代表例としては、これらに限定されないが、フリル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピローリル、テトラゾリル、チアジアゾリル、チアゾリル、チエニル、トリアゾリル及びトリアジニルが挙げられる。二環式ヘテロアリールは、フェニルに縮合した単環式ヘテロアリール、単環式シクロアルキル、単環式シクロアルケニル、単環式ヘテロシクリルまたは単環式ヘテロアリールからなる。二環式ヘテロアリール基の縮合シクロアルキルまたはヘテロシクリル部分は、独立してオキソまたはチアである１つまたは２つの基で任意選択的に置換されている。二環式ヘテロアリールが縮合シクロアルキル、シクロアルケニルまたはヘテロシクリル環を含有する場合、二環式ヘテロアリール基は、二環系の単環式ヘテロアリール部分中に含有される何れかの炭素原子または窒素原子を介して親分子部分に結合している。二環式ヘテロアリールがフェニル環に縮合している単環式ヘテロアリールである場合、二環式ヘテロアリール基は、二環系中の何れかの炭素原子または窒素原子を介して親分子部分に結合している。二環式ヘテロアリールの代表例としては、これらに限定されないが、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチエ
ニル、ベンゾキサジアゾリル、ベンゾキサチアジアゾリル、ベンゾチアゾリル、シノリニル、５，６−ジヒドロキノリン−２−イル、５，６−ジヒドロイソキノリン−１−イル、フロピリジニル、インダゾリル、インドリル、イソキノリニル、ナフチリジニル、キノリニル、プリニル、５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−２−イル、５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−３−イル、５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−４−イル、５，６，７，８−テトラヒドロイソキノリン−１−イル、チエノピリジニル、４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｃ］［１，２，５］オキサジアゾリル及び６，７−ジヒドロベンゾ［ｃ］［１，２，５］オキサジアゾール−４（５Ｈ）−オニルが挙げられる。特定の実施形態において、縮合二環式ヘテロアリールは、フェニル環、５員若しくは６員単環式シクロアルキル、５員若しくは６員単環式シクロアルケニル、５員若しくは６員単環式ヘテロシクリルまたは５員若しくは６員単環式ヘテロアリールの何れかに縮合した５員若しくは６員単環式ヘテロアリール環であり、ここで、縮合シクロアルキル、シクロアルケニル及びヘテロシクリル基は、独立してオキソまたはチアである１つまたは２つの基で任意選択的に置換されている。
【０１２４】
本明細書において用いられるところ、「ヘテロシクリル」という用語は、単環式複素環または二環式複素環を意味する。単環式複素環は、Ｏ、Ｎ及びＳからなる群から独立して選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含有する３、４、５、６または７員環であり、ここで、環は、飽和または不飽和であるが、芳香族ではない。３員若しくは４員環は、Ｏ、Ｎ及びＳからなる群から選択される１個のヘテロ原子を含有する。５員環は、０または１つの二重結合、並びに、Ｏ、Ｎ及びＳからなる群から選択される１、２または３個のヘテロ原子を含有していることが可能である。６員または７員環は、０、１または２つの二重結合、並びに、Ｏ、Ｎ及びＳからなる群から選択される１、２または３個のヘテロ原子を含有する。単環式複素環は、単環式複素環に含有される何れかの炭素原子または何れかの窒素原子を介して親分子部分に結合している。単環式複素環の代表例としては、これらに限定されないが、アゼチジニル、アゼパニル、アジリジニル、ジアゼパニル、１，３−ジオキサニル、１，３−ジオキソラニル、１，３−ジチオラニル、１，３−ジチアニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、イソチアゾリニル、イソチアゾリジニル、イソキサゾリニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、オキサジアゾリニル、オキサジアゾリジニル、オキサゾリニル、オキサゾリジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、ピロリニル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、チアジアゾリニル、チアジアゾリジニル、チアゾリニル、チアゾリジニル、チオモルホリニル１，１−ジオキシドチオモルホリニル（チオモルホリンスルホン）、チオピラニル及びトリチアニルが挙げられる。二環式複素環は、フェニル、単環式シクロアルキル、単環式シクロアルケニル、単環式複素環または単環式ヘテロアリールの何れかに縮合した単環式複素環である。二環式複素環は、二環系の単環式複素環部分中に含有される何れかの炭素原子を介して、または、何れかの窒素原子を介して親分子部分に結合している。二環式ヘテロシクリルの代表例としては、これらに限定されないが、２，３−ジヒドロベンゾフラン−２−イル、２，３−ジヒドロベンゾフラン−３−イル、インドールイン−１−イル、インドールイン−２−イル、インドールイン−３−イル、２，３−ジヒドロベンゾチエン−２−イル、デカヒドロキノリニル、デカヒドロイソキノリニル、オクタヒドロ−１Ｈ−インドリル及びオクタヒドロベンゾフラニルが挙げられる。ヘテロシクリル基は、独立してオキソまたはチアである１つまたは２つの基で任意選択的に置換されている。特定の実施形態において、二環式ヘテロシクリルは、フェニル環、５員若しくは６員単環式シクロアルキル、５員若しくは６員単環式シクロアルケニル、５員若しくは６員単環式ヘテロシクリルまたは５員若しくは６員単環式ヘテロアリールに縮合した５員若しくは６員単環式ヘテロシクリル環であり、ここで、二環式ヘテロシクリルは、独立してオキソまたはチアである１つまたは２つの基によって任意選択的に置換されている。
【０１２５】
本明細書において用いられるところ、「ニトロ」という用語は、−ＮＯ２基を意味する
。
本明細書において用いられるところ、「オキソ」という用語は、＝Ｏ基を意味する。
【０１２６】
本明細書において用いられるところ、「飽和」という用語は、参照される化学構造が、炭素−炭素多重結合をまったく含有していないことを意味する。例えば、本明細書において定義されるところ、飽和シクロアルキル基としては、シクロヘキシル、シクロプロピル等が挙げられる。
【０１２７】
本明細書において用いられるところ、「チア」という用語は、＝Ｓ基を意味する。
本明細書において用いられるところ、「不飽和」という用語は、参照される化学構造が、少なくとも１つの炭素−炭素多重結合を含有するが芳香族ではないことを意味する。例えば、本明細書において定義されるところ、不飽和シクロアルキル基としては、シクロヘキセニル、シクロペンテニル、シクロヘキサジエニル等が挙げられる。
【０１２８】
「薬学的に許容可能な」とは、適切な医学的見解の範囲内で、過剰な毒性、刺激作用、アレルギー応答を伴わずに、または、他の問題若しくは合併症が合理的な有益性／リスク比に見合っているヒト及び動物の組織との接触に好適であるか、または、そうでなければ、ヒト若しくは家畜における使用が許容可能であると米国食品医薬品局によって認可されている化合物、材料、組成物及び／若しくは剤形を指す。
【０１２９】
「薬学的に許容可能な塩」とは、酸及び塩基付加塩の両方を指す。
「プロドラッグ」とは、例えば血中における加水分解によって、インビボで（典型的には急速に）変化して上記式の親化合物をもたらす化合物を指す。一般的な例としては、これらに限定されないが、カルボン酸部分を備える活性形態を有する化合物のエステル及びアミド形態が挙げられる。本発明の化合物の薬学的に許容可能なエステルの例としては、これらに限定されないが、アルキルエステル（例えば約１個〜約６個の炭素を有する）が挙げられ、式中、アルキル基は直鎖若しくは分岐鎖である。許容可能なエステルとしてはまた、特にこれらに限定されないが、ベンジルなどのシクロアルキルエステル及びアリールアルキルエステルが挙げられる。本発明の化合物の薬学的に許容可能なアミドの例としては、これらに限定されないが、第１級アミド、並びに、第２級及び第３級アルキルアミド（例えば約１個〜約６個の炭素を有する）が挙げられる。本発明の化合物のアミド及びエステルは、従来の方法に従って調製され得る。プロドラッグの十分な考察が、Ｔ．ヒグチ（Ｔ．Ｈｉｇｕｃｈｉ）及びＶ．ステラ（Ｖ．Ｓｔｅｌｌａ）、「新規送達系としてのプロドラッグ（Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）」、Ａ．Ｃ．Ｓ．シンポジウムシリーズ（Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ）の第１４巻、及び、「薬物設計におけるバイオリバーシブルキャリア（Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ）」、エドワードＢ．（Ｅｄｗａｒｄ  Ｂ．）編、ロッシュ（Ｒｏｃｈｅ）、アメリカンファーマシューティカルアソシエーションアンドペルガモンプレス（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ）、１９８７年に提供されており、これらは共に、全ての目的について本明細書において参照により援用されている。
【０１３０】
「治療的有効量」とは、被検体に投与された場合に、本明細書に記載の疾患若しくは障害に対する処置をもたらすのに十分な化合物の量を指す。「治療的有効量」を構成する化合物の量は、化合物、障害及びその重症度、並びに、処置されるべき被検体の年齢に応じて様々となるが、技術分野における当業者によってルーチン的に決定されることが可能である。
【０１３１】
「調節（ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ）」または「調節（ｍｏｄｕｌａｔｅ）」とは、機能、
状態または障害の処置、予防、抑制、増強または誘起を指す。例えば、本発明の化合物は、ヒトにおける動脈硬化病変からのコレステロールの除去を刺激することにより、アテローム性動脈硬化を調節可能であると考えられている。
【０１３２】
本明細書において用いられるところ、「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、好ましくはヒトである被検体における本明細書に記載の疾患若しくは障害の処置を包含し、また、以下を含む：
ｉ．疾患若しくは障害の阻害、即ち、その発達の阻止；
ｉｉ．疾患若しくは障害の軽減、即ち、障害の退縮化；
ｉｉｉ．障害の進行の遅延化；及び／または
ｉｖ．疾患若しくは障害の症状の１つ以上の阻害、軽減若しくは進行遅延。
【０１３３】
「被検体」とは、本明細書に記載の１種以上の疾患及び障害で苦しんでいるか、または、苦しむ可能性のある、好ましくはヒト若しくはヒトの小児といった哺乳動物などの温血動物を指す。
【０１３４】
「ＥＣ５０」とは、特定のテスト化合物によって誘起され、誘引され、または、増強される特定の応答の最大発現の５０％で投与量依存応答を誘発させる特定のテスト化合物の投与量、濃度または量を指す。
【０１３５】
「ＩＣ５０」とは、ある応答を計測するアッセイにおいて、最大応答の５０％阻害を達成する特定のテスト化合物の量、濃度または投与量を指す。
ミトコンドリアにおける「呼吸鎖病変」または「呼吸鎖病変を伴うミトコンドリア」とは、酸化性リン酸化によるＡＴＰ産生を担う５種の複合体の構造が、典型的には機能が低下するように構造的に改変されたミトコンドリアを指す。
合成方法
本開示の化合物の合成に有用な通例公知の化学的合成スキーム及び条件を提供する多くの一般刊行物が利用可能である（例えば、スミス（Ｓｍｉｔｈ）及びマーチ（Ｍａｒｃｈ）、「マーチのアドバンスド有機化学：反応、メカニズム及び構造（Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）」、第５版、ウィリーインターサイエンス（Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ）、２００１年；または、ボーゲル（Ｖｏｇｅｌ）、「定性的有機分析を含む実用有機化学の教科書（Ａ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ａｎａｌｙｓｉｓ）」、第４版、ニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）：ロングマン（Ｌｏｎｇｍａｎ）、１９７８年を参照のこと）。
【０１３６】
本明細書に記載の化合物は、ＨＰＬＣ、分取薄層クロマトグラフィ、フラッシュカラムクロマトグラフィ及びイオン交換クロマトグラフィなどのクロマトグラフィ的手法を含む技術分野において公知である手段の何れかによって精製されることが可能である。通常の及び逆相、並びに、イオン性樹脂を含む何れかの好適な固定相を用いることが可能である。最も典型的な本開示の化合物は、シリカゲル及び／またはアルミナクロマトグラフィを介して精製される。例えば、「現代の液体クロマトグラフィへのイントロダクション（Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）」、第２版、Ｌ．Ｒ．シンダー（Ｌ．Ｒ．Ｓｎｙｄｅｒ）及びＪ．Ｊ．カークランド（Ｊ．Ｊ．Ｋｉｒｋｌａｎｄ）編、ジョンウィリーアンドサンズ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ）、１９７９年；並びに、「薄層クロマトグラフィ（Ｔｈｉｎ  Ｌａｙｅｒ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）」、Ｅ．スタール（Ｅ．Ｓｔａｈｌ）編、スプリンガーフェルラグ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ）、ニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９６９年を参照のこと。
【０１３７】
主題の化合物の調製プロセスの何れかの最中においては、関与する分子の何れかにおける感受性または反応性基を保護することが必要及び／または望ましい場合がある。これは、以下のものなどの標準的な研究に記載されている従来の保護基により達成され得る：Ｊ．Ｆ．Ｗ．マクオミー（Ｊ．Ｆ．Ｗ．ＭｃＯｍｉｅ）、「有機化学における保護基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」、プレナムプレス（Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ）、ロンドン（Ｌｏｎｄｏｎ）及びニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９７３年、Ｔ．Ｗ．グリーン（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ）及びＰ．Ｇ．Ｍ．ワッツ（Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ）、「有機合成における保護基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）」、第３版、ウィリー（Ｗｉｌｅｙ）、ニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９９９年、「ペプチド（Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）」；第３巻（Ｅ．グロス（Ｅ．Ｇｒｏｓｓ）及びＪ．メイエンホッファー（Ｊ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ）編）、アカデミックプレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）、ロンドン（Ｌｏｎｄｏｎ）及びニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９８１年、「有機化学の方法（Ｍｅｔｈｏｄｅｎ  ｄｅｒ  ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ
Ｃｈｅｍｉｅ）」、ハウベンベイル（Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ）、追補第４版、第１５／１巻、ゲオルグチエメフェルラグ（Ｇｅｏｒｇ  Ｔｈｉｅｍｅ  Ｖｅｒｌａｇ）、シュツットガルト（Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ）、１９７４年、Ｈ．−Ｄ．ヤクブケ（Ｈ．−Ｄ．Ｊａｋｕｂｋｅ）及びＨ．イェスヘイト（Ｈ．Ｊｅｓｃｈｅｉｔ）、「アミノ酸、ペプチド、タンパク質（Ａｍｉｎｏｓａｕｒｅｎ，Ｐｅｐｔｉｄｅ，Ｐｒｏｔｅｉｎｅ）」、フェルラグケミエ（Ｖｅｒｌａｇ  Ｃｈｅｍｉｅ）、バインハイム（Ｗｅｉｎｈｅｉｍ）、ディアフレンドビーチ（Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ  Ｂｅａｃｈ）、及び、バーゼル（Ｂａｓｅｌ）、１９８２年、並びに／または、ヨッヘンラーマン（Ｊｏｃｈｅｎ  Ｌｅｈｍａｎｎ）、「炭水化物の化学：単糖及び誘導体（Ｃｈｅｍｉｅ  ｄｅｒ  Ｋｏｈｌｅｎｈｙｄｒａｔｅ：Ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  ａｎｄ  Ｄｅｒｉｖａｔｅ）」、ゲオルグチエメフェルラグ（Ｇｅｏｒｇ  Ｔｈｉｅｍｅ  Ｖｅｒｌａｇ）、シュツットガルト（Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ）、１９７４年。保護基は、簡便なその後のステージにおいて公知の方法を用いて除去され得る。
【０１３８】
本発明の化合物を調製するための代表的な合成手法の概略が以下に示されている。
【０１３９】
【化８】
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【０１４０】
【化９】
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2014510143.tif 000012
【０１４１】
【化１０】
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【実施例】
【０１４２】
本開示の化合物及び方法が、例示の目的のために提供されている以下の実施例であって、本開示の範囲または趣旨を記載されている特定の化合物及び方法に限定すると解釈されることは意図されていない以下の実施例によって更に例示されている。
実施例１：３−ヘプチル−１−ヒドロキシ−２，６−ジメチル−５−ビニルピリジン−４（１Ｈ）−オンの調製
【０１４３】
【化１１】
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【０１４４】
４９ｇのポリリン酸及び３０ｍＬの酢酸の混合物に０．６ｍＬ（０．５ｇ、２．９ｍｍｏｌ）の２−デカノンを添加した。得られた溶液を激しく攪拌しながら１３０℃で８時間加熱した。得られた濃い黒色の溶液を０℃に冷却し、１００ｍＬの水を添加した。混合物を数分量のエチルエーテルで抽出した。組み合わせた有機相を１０％水性ＫＯＨで洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗残渣を得た。残渣をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製した。ヘキサン／酢酸エチルでの溶出により、３−ヘプチル−２，６−ジメチル−４Ｈ−ピラン−４−オン（１）を明るい黄色の固体として得た：収率５５５ｍｇ（５４％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．４５（１：１ヘキサン／酢酸エチル）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．４５〜０．５０（ｍ，３Ｈ），０．８８〜１．０４（ｍ，１０Ｈ），１．８２（ｓ，３Ｈ），１．８９（ｓ，３Ｈ），１．９８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）及び５．６２（ｓ，１Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１３．３，１６．６，１８．９，２１．９，２３．６，２７．８，２８．５，２８．９，３１．１，１１２．１，１２４．０，１６０．６，１６３．５及び１７８．４。
【０１４５】
化合物１（０．０１ｇ、３０．６ｍｍｏｌ）を高圧チューブ中で、水性アンモニアと共に１００℃で１８時間加熱した。混合物を室温に冷却した後、粗原料を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製した。５：１酢酸エチル／メタノールでの溶出により、３−ヘプチル−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オン（３）を茶色の固体として得た：収率０．０８３ｇ（８１％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．２５（３：１酢酸エチル／メタノール）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ０．６８〜０．７１（ｍ，３Ｈ），１．０９〜１．２８（ｍ，１０Ｈ），２．２０（ｓ，３Ｈ），２．２７（ｓ，３Ｈ），２．３４〜２．３６（ｍ，２Ｈ）及び６．２９（ｓ，１Ｈ）。
【０１４６】
３（１００ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２．５ｍＬ）中の溶液に、硝酸セリウムアンモニウム（２５ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）、続いて、ヨウ素（１２６ｍｇ、０．４９５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を７０℃で窒素下に７時間撹拌した。反応が完了した後、混合物を室温に冷却し、攪拌しながらチオ硫酸ナトリウムの氷冷水溶液で処理した。混合物を数分量のエチルエーテルで抽出した。組み合わせた有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗残渣を得た。残渣をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製した。ヘキサン／酢酸エチルでの溶出により、３−ヘプチル−５−ヨード−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オン（５）を明るい黄色の固体として得た：収率１１９ｍｇ（７４％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．４５（１：１ヘキサン／酢酸エチル）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８８〜０．９１（ｍ，３Ｈ），１．２９〜１．３５（ｍ，１０Ｈ），２．３３（ｓ，３Ｈ）及び２．５４〜２．５６（ｍ，５Ｈ）。
【０１４７】
ｔ−ＢｕＯＫ（１０２ｍｇ、０．９１２ｍｍｏｌ）及び５（０．０６ｇ、０．７３ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ中の混合物を室温で１時間撹拌し、Ｂｏｃ２Ｏ（１７５ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を６０℃で１時間加熱した。混合物を室温に冷却した後、
粗原料を減圧下で濃縮して黄色の油を得た。残渣をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製した。１：１ヘキサン／酢酸エチルでの溶出により、３−ヨード−５−ヘプチル−２，６−ジメチルピリジン−４−イルｔ−ブチルカーボネート（７）を明るい黄色の油として得た：収率６１ｍｇ（７６％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．７（１：１ヘキサン／酢酸エチル）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．８３〜０．８６（ｍ，３Ｈ），１．２２〜１．３２（ｍ，１０Ｈ），１．５２（ｓ，９Ｈ），２．３５（ｓ，３Ｈ）及び２．５１〜２．５４（ｍ，５Ｈ）。
【０１４８】
７（６０ｍｇ、０．８６４ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（４ｍｌ）中の溶液に、塩化リチウム（７３．２ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（９９．８ｍｇ、１０ｍｏｌ％）及びトリブチル（ビニル）錫（０．３２７ｍｌ、１．１２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を還流で３時間加熱し、次いで、冷却し、ＣＨＣｌ３で希釈した。混合物を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィ［ＡｃＯＥｔ／ＭｅＯＨ（２０：１）］により精製して、ｔ−ブチル３−ヘプチル−２，６−ジメチル−５−ビニルピリジン−４−イルカーボネート（９）（３０ｍｇ、６４％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．８５〜０．８８（ｍ，３Ｈ），１．２７〜１．３２（ｍ，１０Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ），２．４０（ｓ，３Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ），２．４７〜２．５０（ｍ，２Ｈ），５．５０（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１８Ｈｚ，１１．２Ｈｚ）及び６．４５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，１１．６Ｈｚ）。
【０１４９】
９（３０ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）及びｍＣＰＢＡ（１２５ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）中の溶液を０℃で１時間アルゴン雰囲気下で撹拌した。粗原料を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製した。１：１ヘキサン／酢酸エチルでの溶出により、ｔ−ブチル−３−ヘプチル−２，６−ジメチル−５−ビニルピリジン−４−イル−カーボネート−Ｎ−オキシド（１１）を明るい黄色の油として得た：収率２４ｍｇ（７７％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．２５（酢酸エチル）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．８５〜０．８８（ｍ，３Ｈ），１．２６〜１．３２（ｍ，１０Ｈ），１．５０（ｓ，９Ｈ），２．５０（ｓ，３Ｈ），２．５２（ｓ，３Ｈ），２．５５〜２．５７（ｍ，２Ｈ），５．５６（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１８Ｈｚ，１１．２Ｈｚ）及び６．５４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，１１．６Ｈｚ）。
【０１５０】
水性１０Ｍ  ＫＯＨを１１（１３８ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１．５ｍＬ）中の溶液に添加した。１２時間後、室温で、水（３ｍＬ）を添加し、濃縮ＨＣｌを用いてｐＨを１〜２とし、混合物を数分量のエチルエーテルで抽出した。組み合わせた有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗残渣を得た。５：１クロロホルム／メタノールでの溶出により、３−ヘプチル−１−ヒドロキシ−２，６−ジメチル−５−ビニルピリジン−４（１Ｈ）−オン（ＣＰＤ−１）を明るい黄色の油として得た：収率１２ｍｇ（７１％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．３５（１：１酢酸エチル／メタノール）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．８７（ｍ，３Ｈ），１．２６〜１．３９（ｍ，１０Ｈ），２．３９（ｓ，３Ｈ），２．４７（ｓ，３Ｈ），２．６０（ｍ，２Ｈ），５．５７（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１８Ｈｚ，１１．６Ｈｚ）及び６．５４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，１１．２Ｈｚ）。
実施例２：３−ヘキサデシル−１−ヒドロキシ−２，６−ジメチル−５−ビニルピリジン−４（１Ｈ）−オンの調製
【０１５１】
【化１２】
2014510143.tif 000015
【０１５２】
４９ｇのポリリン酸及び３０ｍＬの酢酸の混合物に、０．６ｍＬ（０．５ｇ、１．７７ｍｍｏｌ）の２−ノナデカノンを添加した。得られた溶液を激しく攪拌しながら１３０℃で８時間加熱した。得られた濃い黒色の溶液を０℃に冷却し、１００ｍＬの水を添加した。混合物を数分量のエチルエーテルで抽出した。組み合わせた有機相を１０％水性ＫＯＨで洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗残渣を得た。残渣をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製した。クロロホルムでの溶出により、３−ヘキサデシル−２，６−ジメチル−４Ｈ−ピラン−４−オン（２）を明るい黄色の固体として得た：収率３３１ｍｇ（５０％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．６（１：１ヘキサン／酢酸エチル）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ０．７８〜０．８２（ｍ，３Ｈ），１．１８〜１．２４（ｍ，２８Ｈ），２．１４（ｓ，３Ｈ），２．２１（ｓ，３Ｈ），２．３０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）及び６．０６（ｓ，１Ｈ）。
【０１５３】
化合物２（０．０２ｇ、３０．６ｍｍｏｌ）を高圧チューブ中で、水性アンモニアと共に１００℃で１８時間加熱した。混合物を室温に冷却した後、粗原料を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製した。５：１酢酸エチル／メタノールでの溶出により、３−ヘキサデシル−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オン（４）を茶色の固体として得た：収率０．０１ｇ（５１％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．２５（３：１酢酸エチル／メタノール）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ０．８８〜０．８９（ｍ，３Ｈ），１．２８〜１．３２（ｍ，２８Ｈ），２．２８（ｓ，３Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ），２．４４〜２．４７（ｍ，２Ｈ）及び６．１８（ｓ，１Ｈ）
。
【０１５４】
４（１００ｍｇ、４．５２ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２５ｍＬ）中の溶液に、硝酸セリウムアンモニウム（０．２４８ｇ、０．４５ｍｍｏｌ）、続いて、ヨウ素（０．６３１ｇ、４．９７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を７０℃で窒素下に７時間撹拌した。反応が完了した後、混合物を室温に冷却し、攪拌しながらチオ硫酸ナトリウムの氷冷水溶液で処理した。混合物を数分量のエチルエーテルで抽出した。組み合わせた有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗残渣を得た。残渣をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製した。ヘキサン／酢酸エチルでの溶出により、３−ヘキサデシル−５−ヨード−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オン（６）を明るい黄色の固体として得た：収率９３ｍｇ（６８％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．６０（１：１ヘキサン／酢酸エチル）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８６〜０．８９（ｍ，３Ｈ），１．２４〜１．２８（ｍ，２８Ｈ），２．２０（ｓ，３Ｈ），２．２６（ｓ，３Ｈ）及び２．３２〜２．３９（ｍ，２Ｈ）。
【０１５５】
ｔ−ＢｕＯＫ（１０２ｍｇ、０．９１２ｍｍｏｌ）及び２，３，６−トリメチルピリジン−４（１Ｈ）−オン（１）（０．１ｇ、０．７３ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ中の混合物を室温で１時間撹拌し、Ｂｏｃ２Ｏ（１７５ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を６０℃で１時間加熱した。混合物を室温に冷却した後、粗原料を黄色の油に減圧下で濃縮
した。残渣をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製した。１：１ヘキサン／酢酸エチルでの溶出により、ｔ−ブチル３−ヘキサデシル−５−ヨード−２，６−ジメチルピリジン−４−イルカーボネート（８）を明るい黄色の油として得た：収率８５ｍｇ（７５％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．８５（１：１ヘキサン／酢酸エチル）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．８５〜０．８９（ｍ，３Ｈ），１．２５〜１．３１（ｍ，２８Ｈ），１．５７（ｓ，９Ｈ），２．５０（ｓ，３Ｈ），２．５２〜２．５６（ｍ，２Ｈ）及び２．７２（ｓ，３Ｈ）。
【０１５６】
８（８５ｍｇ、０．８６４ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（４ｍｌ）中の溶液に、塩化リチウム（７３．２ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（９９．８ｍｇ、１０ｍｏｌ％）及びトリブチル（ビニル）錫（０．３２７ｍｌ、１．１２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を還流で３時間加熱し、次いで、冷却し、ＣＨＣｌ３で希釈した。混合物を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィ［ＡｃＯＥｔ／ＭｅＯＨ（２０：１）］により精製して、ｔ−ブチル３−ヘキサデシル−２，６−ジメチル−５−ビニルピリジン−４−イルカーボネート（１０）（１９ｍｇ、２７％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．０２〜０．０３（ｍ，３Ｈ），１．２０〜１．２７（ｍ，２８Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ），２．４８（ｓ，３Ｈ），２．５４〜２．５６（ｍ，２Ｈ），５．５５（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１７．６Ｈｚ，１１．６Ｈｚ）及び６．５０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，１１．２Ｈｚ）。
【０１５７】
１０（３０ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）及びｍＣＰＢＡ（１２５ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）中の溶液を０℃で１時間アルゴン雰囲気下にて撹拌した。粗生成物を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製した。１：１ヘキサン／酢酸エチルでの溶出により、ｔ−ブチル−３−ヘキサデシル−２，６−ジメチル−５−ビニルピリジン−４−イル−カーボネート−Ｎ−オキシド（１２）を明るい黄色の油として得た：収率２３ｍｇ（７６％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．４５（酢酸エチル）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．０１５〜０．０３（ｍ，３Ｈ），１．１７〜１．２０（ｍ，２８Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ），２．５５（ｓ，３Ｈ），２．５８（ｓ，３Ｈ），２．６０〜２．６２（ｍ，２Ｈ），５．６２（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１７．６Ｈｚ，１１．６Ｈｚ）及び６．５６８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，１１．２Ｈｚ）。
【０１５８】
水性１０Ｍ  ＫＯＨを１２（２３ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１．５ｍＬ）中の溶液に添加した。１２時間後、室温で、水（３ｍＬ）を添加し、濃縮ＨＣｌを用いてｐＨを１〜２とし、混合物を数分量のエチルエーテルで抽出した。組み合わせた有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗残渣を得た。５：１クロロホルム／メタノールでの溶出により、３−ヘキサデシル−１−ヒドロキシ−２，６−ジメチル−５−ビニルピリジン−４（１Ｈ）−オン（ＣＰＤ−２）を明るい黄色の油として得た：収率１３ｍｇ（７６％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．２５（３：１酢酸エチル／メタノール）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．０２〜０．０４（ｍ，３Ｈ），１．１７〜１．２４（ｍ，２８Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ），２．５２（ｓ，３Ｈ），２．６１〜２．６５（ｍ，２Ｈ），５．６４（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１７．６Ｈｚ，１１．２Ｈｚ）及び６．５７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，１１．２Ｈｚ）。
実施例３：３−アミノ−５−ヘプチル−１−ヒドロキシ−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オンの調製
【０１５９】
【化１３】
2014510143.tif 000016
【０１６０】
予め混合した硝酸（ｄ１．５、０．１５ｇ）及び硫酸（０．０５ｇ）を硫酸（ｄ１．６４、０．５ｇ）中の３（９４ｍｇ）に５〜１０℃で滴下した。混合物を８０℃で１時間加熱し、次いで、冷却し、氷に加えた。泡立ちが止まるまで飽和水性炭酸ナトリウムを添加した。混合物を数分量のエチルエーテルで抽出した。組み合わせた有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗残渣を得た。ヘキサン／酢酸エチルでの溶出により、３−ヘプチル−２，６−ジメチル−５−ニトロピリジン−４（１Ｈ）−オン（１３）を黄色の油として得た：収率７６ｍｇ（６７％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．４５（１：１ヘキサン／酢酸エチル）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．７７〜０．８１（ｍ，３Ｈ），１．１９〜１．２７（ｍ，１０Ｈ），２．２９（ｓ，３Ｈ），２．３５（ｓ，３Ｈ）及び２．４４〜２．４７（ｍ，２Ｈ）。
【０１６１】
ｔ−ＢｕＯＫ（４０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ、１．２５）及び１３（７６ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ中の混合物を室温で１時間撹拌し、Ｂｏｃ２Ｏ（６３ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を６０℃で５時間加熱した。混合物を室温に冷却した後、粗生成物を減圧下で濃縮して黄色の油を得た。残渣をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製した。１：１ヘキサン／酢酸エチルでの溶出により、ｔ−ブチル３−ヘプチル−２，６−ジメチル−５−ニトロピリジン−４−イルカーボネート（１５）を明るい黄色の油として得た：収率８１ｍｇ（７９％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．７（１：１ヘキサン／酢酸エチル）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．７９〜０．８３（ｍ，３Ｈ），１．１８〜１．２８（ｍ，１０Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ）及び２．４８〜２．５１（ｍ，８Ｈ）。
【０１６２】
１５（２８ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）及びｍＣＰＢＡ（１５ｍｇ、０．０８４ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）中の溶液を０℃で１時間アルゴン雰囲気下にて撹拌した。粗生成物を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製した。１：１ヘキサン／酢酸エチルでの溶出により、ｔ−ブチル３−ヘプチル−２，６−ジメチル−５−ニトロピリジン−４−イルカーボネート−Ｎ−オキシド（１７）を明るい茶色の固体として得た：収率１８ｍｇ（６２％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．４０（酢酸エチル）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．１２（ｓ，９Ｈ），１．７４（ｓ，３Ｈ），２．０６（ｓ，３Ｈ），２．１０（ｓ，３Ｈ）及び６．６３（ｓ，１Ｈ）。
【０１６３】
１５ｍｇの固体ＮａＢＨ４（１１ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）及び４５ｍｇの硫黄（３２ｍｇ、１．０１２ｍｍｏｌ）の混合物に、３ｍＬの無水ＴＨＦを滴下した。混合物を５分間撹拌した後、１８ｍｇの化合物１７（０．０４７ｍｍｏｌ）を１ｍＬのＴＨＦ中に添加した。反応混合物を還流で１時間加熱し、反応混合物を室温に冷却し、粗生成物を減圧下で濃縮して黄色の油を得た。残渣をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製した。１０：１酢酸エチル／メタノールでの溶出により、３−アミノ−５−ヘプチル−１−ヒドロキシ−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オン（ＣＰＤ−３）を明るい黄色の油として得た：収率８ｍｇ（７４％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．２５（１：１酢酸エチル／メタノール）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．８６〜０．９０（ｍ，３Ｈ）
，１．２５〜１．３２（ｍ，１０Ｈ）及び２．３５〜２．４５（ｍ，８Ｈ）。
実施例４：３−アミノ−５−ヘキサデシル−１−ヒドロキシ−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オンの調製
【０１６４】
【化１４】
2014510143.tif 000017
【０１６５】
予め混合した硝酸（ｄ１．５、０．１５ｇ）及び硫酸（０．０５ｇ）を硫酸（ｄ１．６４、０．５ｇ）中の４（５８ｍｇ）に５〜１０℃で滴下した。反応混合物を８０℃で１時間加熱し、次いで、冷却し、氷に加えた。泡立ちが止まるまで飽和水性炭酸ナトリウムを添加した。反応混合物を数分量のエチルエーテルで抽出した。組み合わせた有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗残渣ヘキサン／酢酸エチルでの溶出により、３−ヘキサデシル−２，６−ジメチル−５−ニトロピリジン−４（１Ｈ）−オン（１４）を黄色の油として得た：収率４１ｍｇ（６２％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．６０（１：１ヘキサン／酢酸エチル）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８２〜０．８５（ｍ，３Ｈ），１．２１〜１．２９（ｍ，２８Ｈ），２．３３（ｓ，３Ｈ），２．３９（ｓ，３Ｈ）及び２．４６〜２．５２（ｍ，２Ｈ）。
【０１６６】
ｔ−ＢｕＯＫ（１３ｍｇ、０．１１３ｍｍｏｌ）及び１４（４１ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ中の混合物を室温で１時間撹拌し、Ｂｏｃ２Ｏ（２０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を６０℃で５時間加熱した。混合物を室温に冷却した後、粗生成物を減圧下で濃縮して黄色の油を得た。残渣をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製した。１：１ヘキサン／酢酸エチルでの溶出により、ｔ−ブチル３−ヘキサデシル−２，６−ジメチル−５−ニトロピリジン−４−イルカーボネート（１６）を明るい黄色の油として得た：収率２７ｍｇ（５３％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．８５（１：１ヘキサン／酢酸エチル）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．８４〜０．８７（ｍ，３Ｈ），１．２３〜１．３４（ｍ，２８Ｈ），１．５２（ｓ，９Ｈ），２．４４〜２．５０（ｍ，２Ｈ）及び２．５３〜２．５６（ｓ，６Ｈ）。
【０１６７】
１６（２７ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）及びｍＣＰＢＡ（１０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）中の溶液を０℃で１時間アルゴン雰囲気下で撹拌した。粗生成物を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製した。１：１ヘキサン／酢酸エチルでの溶出により、ｔ−ブチル３−ヘキサデシル−２，６−ジメチル−５−ニトロピリジン−４−イルカーボネート−Ｎ−オキシド（１８）を明るい茶色の固体として得た：収率２０ｍｇ（７２％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．５０（酢酸エチル）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．８４〜０．８８（ｍ，３Ｈ），１．２２〜１．３０（ｍ，２８Ｈ），１．５４（ｓ，９Ｈ），２．５６〜２．６０（ｍ，５Ｈ）及び２．６２（ｓ，３Ｈ）。
【０１６８】
９．０ｍｇの固体ＮａＢＨ４（０．２４ｍｍｏｌ）及び２１ｍｇの硫黄（０．６４６ｍｍｏｌ）の混合物に、３ｍＬの無水ＴＨＦを滴下した。反応混合物を５分間撹拌した後、２０ｍｇの１８（０．０３ｍｍｏｌ）を１ｍＬのＴＨＦ中に添加した。反応混合物を還流で１時間加熱し、反応混合物を室温に冷却し、粗生成物を減圧下で濃縮して黄色の油を得
た。残渣をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製した。１０：１酢酸エチル／メタノールでの溶出により、３−アミノ−５−ヘキサデシル−１−ヒドロキシ−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オン（ＣＰＤ−４）を明るい黄色の油として得た：収率１１ｍｇ（７６％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．３５（１：１酢酸エチル／メタノール）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．８５〜０．９０（ｍ，３Ｈ），１．２０〜１．３２（ｍ，２８Ｈ）及び２．２２〜２．５２（ｍ，８Ｈ）。
実施例５：３−ヘプチル−１−ヒドロキシ−５−メトキシ−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オンの調製
【０１６９】
【化１５】
2014510143.tif 000018
【０１７０】
化合物５（３８ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（５ｍＬ）中の油を含まないＮａＨ（５ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）の撹拌した懸濁液に添加した。水素の放出が停止したら、塩化ベンジル（１４ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を５０℃で４時間加熱した。反応混合物を水（５ｍＬ）に添加し、数分量のエチルエーテルで抽出した。組み合わせた有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗残渣を得た。１：１ヘキサン／酢酸エチルでの溶出により、４−（ベンジルオキシ）−３−ヘプチル−５−ヨード−２，６−ジメチルピリジン（１９）を明るい黄色の油として得た：収率３８ｍｇ（８０％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．７（１：１ヘキサン／酢酸エチル）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．６１〜０．８９（ｍ，３Ｈ），１．２６〜１．３１（ｍ，１０Ｈ），２．５０４（ｓ，３Ｈ），２．６２〜２．６５（ｍ，２Ｈ）２．７５（ｓ，３Ｈ），４．９５（ｓ，２Ｈ），７．３８〜７．４３（ｍ，４Ｈ）及び７．５５〜７．５７（ｍ，１Ｈ）。
【０１７１】
ナトリウム（５．０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）及びＭｅＯＨ（１ｍＬ）から調製したナトリウムメトキシドの溶液に、ヨード誘導体１９（２７ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（１．６６ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１１０℃で１８時間加熱し、冷却し、１Ｍ水性ＮＨ４Ｃｌを添加した。混合物を数分量のエチルエーテルで抽出した。組み合わせた有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗残渣を得た。酢酸エチルでの溶出により、４−（ベンジルオキシ）−３−ヘプチル−５−メトキシ−２，６−ジメチルピリジン（２０）を明るい黄色の油として得た：収率１９ｍｇ（７１％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．３（１：１ヘキサン／酢酸エチル）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．６０〜０．８９（ｍ，３Ｈ），１．２６〜１．３０（ｍ，１０Ｈ），２．４８（ｓ，３Ｈ），２．６０〜２．６２（ｍ，２Ｈ）２．７４（ｓ，３Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ）．４．９５（ｓ，２Ｈ），７．３８〜７．４２（ｍ，４Ｈ）及び７．５３〜７．５６（ｍ，１Ｈ）。
【０１７２】
２０（１９ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）及びｍＣＰＢＡ（１２５ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）中の溶液を０℃で１時間アルゴン雰囲気下で撹拌し、溶液を水性ＮａＨＣＯ３で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗残渣を得た。残渣をＥｔＯＨ中に溶解させ、Ｐｄ／Ｃを添加し、Ｈ２雰囲気（１０５Ｐａ（１ｂａｒ））下にした後、溶液を室温で３０分間撹拌した。セライトを通してろ過した後、こ
れをＥｔＯＨで完全に洗浄し、ろ液を減圧下で濃縮し、シリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製した。２０：１酢酸エチル／メタノールでの溶出により、３−ヘプチル−１−ヒドロキシ−５−メトキシ−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オン（ＣＰＤ−５）を明るい黄色の油として得た：収率９ｍｇ（６１％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．２５（３：１酢酸エチル／メタノール）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．８４〜０．８９（ｍ，３Ｈ），１．２４〜１．３５（ｍ，１０Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ），２．５０（ｓ，３Ｈ）２．６３〜２．６７（ｍ，２Ｈ）及び３．７４（ｓ，３Ｈ）。
実施例６：３−ヘプチル−１−ヒドロキシ−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オンの調製
【０１７３】
【化１６】
2014510143.tif 000019
【０１７４】
トリメチルピロン１（１１３ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）、塩酸ヒドロキシルアミン（７０７ｍｇ、１０．２ｍｍｏｌ）、酢酸ナトリウム（８３５ｍｇ、１０．２ｍｍｏｌ）、水（１ｍＬ）及びエタノール（２ｍＬ）の混合物を８時間還流に加熱した。反応混合物を室温に冷却した後、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製した。５：１酢酸エチル／メタノールでの溶出により、３−ヘプチル−１−ヒドロキシ−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オン（ＣＰＤ−６）を得た：収率６３ｍｇ（５１％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．３５（３：１酢酸エチル／メタノール）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８４〜０．８８（ｍ，３Ｈ），１．２４〜１．４５（ｍ，１０Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ），２．４７（ｓ，３Ｈ），２．６０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）及び６．７３（ｓ，１Ｈ）。
実施例７：３−デシル−１−ヒドロキシ−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オンの調製
【０１７５】
【化１７】
2014510143.tif 000020
【０１７６】
４９ｇのポリリン酸及び３０ｍＬの酢酸の混合物に、０．６ｍＬ（０．５ｇ、２．５３ｍｍｏｌ）の２−トリデカノンを添加した。得られた溶液を激しく攪拌しながら１３０℃で８時間加熱した。得られた濃い黒色の溶液を０℃に冷却し、１００ｍＬの水を添加した。混合物を数分量のエチルエーテルで抽出した。組み合わせた有機相を１０％水性ＫＯＨで洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗残渣を得た。残渣をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製した。クロロホルムでの溶出により、３−デシル−２，６−ジメチル−４Ｈ−ピラン−４−オン（２１）を明るい黄色の固体として得た
：収率３３１ｍｇ（５０％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．５２（１：１ヘキサン／酢酸エチル）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ０．５２〜０．５５（ｍ，３Ｈ），０．９２〜０．９６（ｍ，１０Ｈ），１．８７（ｓ，３Ｈ），１．９４（ｓ，３Ｈ），２．０３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）及び５．７３（ｓ，１Ｈ）；  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１３．７，１６．９，１９．２，２２．３，２３．９，２８．２，２８．９，２９．１，２９．２，２９．３，３１．６，１１２．３，１２４．３，１６１．２，１６４．１及び１７８．９。
【０１７７】
２１（２００ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）、塩酸ヒドロキシルアミン（１．０５ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）、酢酸ナトリウム（１．２４ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）、水（１ｍＬ）及びエタノール（２ｍＬ）の混合物を還流で３日間加熱した。反応混合物を室温に冷却した後、粗原料を減圧下で濃縮して黄色の油を得た。残渣をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製した。５：１クロロホルム／メタノールでの溶出により、３−デシル−１−ヒドロキシ−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オン（ＣＰＤ−７）を明るい黄色の油として得た：収率０．０８ｇ（４０％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．４（３：１酢酸エチル／メタノール）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ０．８４〜０．８８（ｍ，３Ｈ），１．２４〜１．４４（ｍ，１６Ｈ），２．２７（ｓ，３Ｈ），２．４８（ｓ，３Ｈ），２．５７〜２．６１（ｍ，２Ｈ）及び６．６５（ｓ，１Ｈ）。
実施例８：３−ヘキサデシル−１−ヒドロキシ−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オンの調製
【０１７８】
【化１８】
2014510143.tif 000021
【０１７９】
２（２００ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）、塩酸ヒドロキシルアミン（３９９ｍｇ、５．７ｍｍｏｌ）、酢酸ナトリウム（４７１ｍｇ、５．７ｍｍｏｌ）、水（１ｍＬ）及びエタノール（２ｍＬ）の混合物を還流で３日間加熱した。反応混合物を室温に冷却した後、粗生成物を黄色の油に減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製した。５：１クロロホルム／メタノールでの溶出により、３−ヘキサデシル−１−ヒドロキシ−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オン（ＣＰＤ−８）を白色の固体として得た：収率０．０８８ｇ（４２％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．５（３：１酢酸エチル／メタノール）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ０．８３〜０．８５（ｍ，３Ｈ），１．２２〜１．２７（ｍ，２８Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），２．４６（ｓ，３Ｈ），２．５５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）及び６．７（ｓ，１Ｈ）。
実施例９：３−ブロモ−５−ヘプチル−１−ヒドロキシ−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オンの調製
【０１８０】
【化１９】
2014510143.tif 000022
【０１８１】
ＣＰＤ−６（６３ｍｇ、０．２６６ｍｍｏｌ）の酢酸（２Ｍ）中の撹拌溶液に、臭素（０．０４ｍＬ、０．２６６ｍｍｏｌ）の酢酸（１ｍＬ）中の溶液を１０〜１５℃で滴下した。１．５時間後、数滴の飽和水性亜硫酸ナトリウム溶液を添加して過剰量の臭素を除去した。反応混合物を水で希釈し、数分量のエチルエーテルで抽出した。組み合わせた有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗残渣を得た。残渣をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製して、化合物３−ブロモ−５−ヘプチル−１−ヒドロキシ−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オン（ＣＰＤ−９）を得た：収率５７ｍｇ（６９％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．６８（５：１酢酸エチル／メタノール）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．８２〜０．８６（ｍ，３Ｈ），１．２３〜１．３６（ｍ，１０Ｈ），２．４２（ｓ，３Ｈ），２．５１〜２．５４（ｍ，５Ｈ）。
実施例１０：３−ブロモ−５−デシル−１−ヒドロキシ−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オンの調製
【０１８２】
【化２０】
2014510143.tif 000023
【０１８３】
ＣＰＤ−７（４０ｍｇ、０．１４３ｍｍｏｌ）の酢酸（２Ｍ）中の撹拌溶液に、臭素（０．０２ｍＬ、０．１４３ｍｍｏｌ）の酢酸（１ｍＬ）中の溶液を１０〜１５℃で添加した。１．５時間後、数滴の飽和水性亜硫酸ナトリウム溶液を添加して過剰量の臭素を除去した。反応混合物を水で希釈し、数分量のエチルエーテルで抽出した。組み合わせた有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗残渣を得た。残渣をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製して化合物３−ブロモ−５−デシル−１−ヒドロキシ−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オン（ＣＰＤ−１０）を得た：収率３７ｍｇ（７３％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．７５（５：１酢酸エチル／メタノール）；１Ｈ
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ０．８４〜０．８８（ｍ，３Ｈ），１．２４〜１．４４（ｍ，１６Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ）及び２．５１〜２．５４（ｍ，５Ｈ）。実施例１１：３−ブロモ−５−ヘキサデシル−１−ヒドロキシ−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オンの調製
【０１８４】
【化２１】
2014510143.tif 000024
【０１８５】
ＣＰＤ−８（４４ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）の酢酸（２Ｍ）中の撹拌溶液に、臭素（０．００６ｍＬ、０．１２ｍｍｏｌ）の酢酸（１ｍＬ）中の溶液を１０〜１５℃で添加した。１．５時間後、数滴の飽和水性亜硫酸ナトリウム溶液を添加して過剰量の臭素を除去した。反応混合物を水で希釈し、数分量のエチルエーテルで抽出した。組み合わせた有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗残渣を得た。残渣をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製して、化合物３−ブロモ−５−ヘキサデシル−１−ヒドロキシ−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オン（ＣＰＤ−１１）を得た：収率３７ｍｇ（６９％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．８０（５：１酢酸エチル／メタノール）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ０．８１〜０．８４（ｍ，３Ｈ），１．２１〜１．２９（ｍ，２８Ｈ），２．３７（ｓ，３Ｈ）及び２．４７〜２．５０（ｍ，５Ｈ）。
実施例１２：３−クロロ−５−ヘプチル−１−ヒドロキシ−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オンの調製
【０１８６】
【化２２】
2014510143.tif 000025
【０１８７】
ＣＰＤ−６（１１ｍｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）の酢酸（１０ｍＬ）中の撹拌溶液に、Ｎ−クロロスクシンイミド（６．７ｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１００℃で８時間加熱し、室温に冷却した。反応混合物を水で希釈し、数分量のエチルエーテルで抽出した。組み合わせた有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗残渣を得た。残渣をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製して、化合物３−クロロ−５−ヘプチル−１−ヒドロキシ−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オン（ＣＰＤ−１２）を得た：収率７ｍｇ（５４％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．６６（５：１酢酸エチル／メタノール）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．７７〜０．８１（ｍ，３Ｈ），１．１８〜１．２６（ｍ，１０Ｈ），２．２８（ｓ，３Ｈ），２．３５（ｓ，３Ｈ）及び２．４４〜２．４７（ｍ，２Ｈ）。
実施例１３：３−クロロ−５−デシル−１−ヒドロキシ−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オンの調製
【０１８８】
【化２３】
2014510143.tif 000026
【０１８９】
ＣＰＤ−７（４０ｍｇ、０．１４３ｍｍｏｌ）の酢酸（１０ｍＬ）中の撹拌溶液に、Ｎ−クロロスクシンイミド（１９ｍｇ、０．１４３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１００℃で８時間加熱し、室温に冷却した。反応混合物を水で希釈し、数分量のエチルエーテルで抽出した。組み合わせた有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗残渣を得た。残渣をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィにより精製して、化合物３−クロロ−５−デシル−１−ヒドロキシ−２，６−ジメチルピリジン−４（１Ｈ）−オン（ＣＰＤ−１３）を得た：収率３０ｍｇ（６７％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．７（７：１酢酸エチル／メタノール）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．７３〜０．７８（ｍ，３Ｈ），１．１５〜１．２０（ｍ，１６Ｈ），２．２５（ｓ，３Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ）及び２．３７〜２．４０（ｍ，２Ｈ）。
実施例１４：３，７−ビス（ジデシルアミノ）フェノチアジン−５−イウムブロミドの調製
【０１９０】
【化２４】
2014510143.tif 000027
【０１９１】
氷酢酸６０ｍＬ中の１．０ｇ（５．０３ｍｍｏｌ）のフェノチアジンの溶液に、氷酢酸４０ｍＬ中の１６．０８ｇ（１００．６ｍｍｏｌ）の臭素の溶液を激しく攪拌しながら添加した。３分間攪拌した後、４００ｍＬの水を反応混合物に添加した。得られた赤色の沈殿物をろ過し、ジエチルエーテルで洗浄し、減圧下で乾燥させて３，７−ジブロモフェノチアジン−５−イウムブロミド（２２）を得た：収率２．１９ｇ（１００％）；ｍｐ９０℃（ｄｅｃ）。
【０１９２】
２０ｍＬのＣＨＣｌ３中の１．７ｇ（５．７２ｍｍｏｌ）のジデシルアミン溶液に、０．６３ｇ（１．４３ｍｍｏｌ）の２２を添加した。反応混合物を室温で２時間、アルゴン下に撹拌し、減圧下で濃縮して３，７−ビス（ジデシルアミノ）フェノチアジン−５−イウムブロミド（ＣＰＤ−１４）を得た：質量スペクトル（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ），ｍ／ｚ７８８．６９（Ｍ＋）。
実施例１５：３，７−ビス（ジペンチルアミノ）フェノチアジン−５−イウムブロミドの調製
【０１９３】
【化２５】
2014510143.tif 000028
【０１９４】
６０ｍＬのＣＨＣｌ３中の３．２ｇ（２０．１ｍｍｏｌ）のジペンチルアミンの溶液に、４．３７ｇ（１０．０３ｍｍｏｌ）の２２を添加した。反応混合物を室温で２時間、アルゴン下で撹拌し、減圧下で濃縮して３，７−ビス（ジペンチルアミノ）フェノチアジン−５−イウムブロミド（ＣＰＤ−１５）を得た：質量スペクトル（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ），ｍ／ｚ５０９．３８（Ｍ＋Ｈ）＋。
実施例１６：７−（ジデシルアミノ）−３Ｈ−フェノチアジン−３−オンの調製
【０１９５】
【化２６】
2014510143.tif 000029
【０１９６】
５ｍＬの水及び５ｍＬのＴＨＦ中の０．１３ｇのＣＰＤ−１４の溶液に、過剰量のＮＨ４ＯＨ中に溶解した０．０３４ｇ（０．２ｍｍｏｌ）のＡｇＮＯ３を添加した。反応混合物を還流に１時間かけて加熱し、ろ過し、１０ｍＬ分量のＥｔＯＡｃで２回抽出した。紫色の有機層を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。濃色の固体をシリカゲルカラム（３０×１．２５ｃｍ）で精製した。１：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃでの溶出により、ＣＰＤ−１６を濃色の固体として得た：収率２ｍｇ（２．５％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．５（１：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）；質量スペクトル（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ），ｍ／ｚ５０９．３５（Ｍ＋Ｈ）＋。
実施例１７：７−（ジペンチルアミノ）−３Ｈ−フェノチアジン−３−オンの調製
【０１９７】
【化２７】
2014510143.tif 000030
【０１９８】
水１００ｍＬ中の５．１ｇのＣＰＤ−１５の溶液に、過剰量のＮＨ４ＯＨ中に溶解させた１．９ｇ（１１．２ｍｍｏｌ）のＡｇＮＯ３を添加した。反応混合物を１時間還流させ、ろ過し、２０ｍＬ分量のＥｔＯＡｃで５回抽出した。紫色の有機層を塩水で洗浄し、無
水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。濃色の固体をシリカゲルカラム（３０×１．２５ｃｍ）で精製した。ＥｔＯＡｃでの溶出により、ＣＰＤ−１７を濃色の固体として得た：収率４０ｍｇ（＜１％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．５７（ＥｔＯＡｃ）；質量スペクトル（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ），ｍ／ｚ３６９．５５（Ｍ＋Ｈ）＋。
実施例１８：７−（ジメチルアミノ）−３Ｈ−フェノチアジン−３−オンの調製
【０１９９】
【化２８】
2014510143.tif 000031
【０２００】
水５０ｍＬ中の０．５ｇ（１．５６ｍｍｏｌ）のメチレンブルーの溶液に、過剰量のＮＨ４ＯＨ中に溶解させた０．５３ｇ（３．１２ｍｍｏｌ）のＡｇＮＯ３を添加した。反応混合物を還流に１時間加熱し、ろ過し、ＥｔＯＡｃ（２０×５ｍＬ）で抽出した。有機層を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。濃色の固体をシリカゲルカラムで精製した。９：１ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨでの溶出により、ＣＰＤ−１８を濃色の固体として得た：収率−２５ｍｇ（６％）；シリカゲルＴＬＣ  Ｒｆ０．２７（９：１ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ３．１６（ｓ，１Ｈ），６．６０（ｄ，１Ｈ，Ｊ  ２．８  Ｈｚ），６．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ  ２．４  Ｈｚ），６．８３（ｄ，１Ｈ，Ｊ  ２Ｈｚ），６．８６（ｄ，１Ｈ，Ｊ  ２．８  Ｈｚ），７．６７（ｄ，１Ｈ，Ｊ  １０  Ｈｚ），７．７１（ｄ，１Ｈ，Ｊ  ９．２  Ｈｚ）；質量スペクトル（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ），ｍ／ｚ２５７．０７（Ｍ＋Ｈ）＋。
実施例１９：式（Ｉ）の化合物
以下の化合物は、基本的に上記の手法に従い、必要に応じて所望の生成物をもたらすために出発材料を変更して調製され得る。
【０２０１】
【化２９】
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2014510143.tif 000033
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2014510143.tif 000039
【０２０２】
実施例２０：式（ＩＩ）の化合物
【０２０３】
【化３０】
2014510143.tif 000040
【０２０４】
実施例２１：
細胞培養
白血病ＣＥＭ細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）、カタログ番号ＣＲＬ−２２６４）を、１０％ＦＢＳ（フィッシャーサイエンティフィック（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、テキサス州（ＴＸ）、米国（ＵＳＡ））、２ｍＭグルタミン（ハイクローン（ＨｙＣｌｏｎｅ）、サウスローガン（Ｓｏｕｔｈ  Ｌｏｇａｎ）、ユタ州（Ｕｔａｈ）、米国（ＵＳＡ））及び１％ペニシリン−ストレプトマイシン混合抗生物質（セルグロー（Ｃｅｌｌ
ｇｒｏ）、マナサス（Ｍａｎａｓｓａｓ）、ヴァージニア州（ＶＡ）、米国（ＵＳＡ））補助剤を含むＲＰＭＩ（ＧＩＢＣＯ、グランドアイランド（Ｇｒａｎｄ  ｉｓｌａｎｄ）、ニューヨーク州（ＮＹ）、米国（ＵＳＡ））で培養した。細胞を１×１０５〜１×１０６細胞／ｍＬの濃度で対数期に維持した。
【０２０５】
フリードライヒ運動失調症リンパ球及び対照細胞（コリエル（Ｃｏｒｉｅｌｌ）、それぞれカタログ番号ＧＭ１５８１５０及びＧＭ１５８１５１）を、１５％ＦＢＳ（フィッシャーサイエンティフィック（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、テキサス州（ＴＸ）、米国（ＵＳＡ））、２ｍＭグルタミン（ハイクローン（ＨｙＣｌｏｎｅ）、サウスローガン（Ｓｏｕｔｈ  Ｌｏｇａｎ）、ユタ州（Ｕｔａｈ）、米国（ＵＳＡ））及び１％ペニシリン−ストレプトマイシン混合抗生物質（セルグロー（Ｃｅｌｌｇｒｏ）、マナサス（Ｍａｎａｓｓａｓ）、ヴァージニア州（ＶＡ）、米国（ＵＳＡ））補助剤を含むＲＰＭＩ（ＧＩＢＣＯ、グランドアイランド（Ｇｒａｎｄ  ｉｓｌａｎｄ）、ニューヨーク州（ＮＹ）、米国（ＵＳＡ））で培養した。細胞を１×１０５〜１×１０６細胞／ｍＬの濃度で対数期に維持した。
【０２０６】
フリードライヒ運動失調症線維芽細胞及び対照細胞（（コリエル（Ｃｏｒｉｅｌｌ）、それぞれ、カタログ番号ＧＭ０４０７８及びＧＭ０８４０２）。線維芽細胞を、フェノールレッドを含まず、イーグル緩衝塩（ＥＢＳ）及び２５％Ｍ１９９、ＥＢＳ（ＧＩＢＣＯ、グランドアイランド（Ｇｒａｎｄ  ｉｓｌａｎｄ）、ニューヨーク州（ＮＹ）、米国（ＵＳＡ））を含み、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎孔血清（ハイクローン（ＨｙＣｌｏｎｅ）、サウスローガン（Ｓｏｕｔｈ  Ｌｏｇａｎ）、ユタ州（Ｕｔａｈ）、米国（ＵＳＡ））、１％ペニシリン−ストレプトマイシン混合抗生物質（セルグロー（Ｃｅｌｌｇｒｏ）、マナサス（Ｍａｎａｓｓａｓ）、ヴァージニア州（ＶＡ）、米国（ＵＳＡ））、１０ｎｇ／ｍＬインスリン（シグマ（Ｓｉｇｍａ）、セントルイス（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）、ミズーリ州（ＭＯ）、米国（ＵＳＡ））、１０ｎｇ／ｍＬ塩基性線維芽細胞増殖因子βＦＧＦ（ロンザ（Ｌｏｎｚａ）、ウォーカーズビル（Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ）、メリーランド州（ＭＤ）、米国（ＵＳＡ））及び２ｍＭグルタミン（ハイクローン（ＨｙＣｌｏｎｅ）、サウスローガン（Ｓｏｕｔｈ  Ｌｏｇａｎ）、ユタ州（Ｕｔａｈ）、米国（ＵＳＡ））を補足した６４％（ｖ／ｖ）イーグル基礎培地（ＭＥＭ）で培養した。
【０２０７】
ＣｏＱ１０欠損リンパ球及び正常なリンパ球株細胞（コリエルセルリポジトリーズ（Ｃｏｒｉｅｌｌ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｉｅｓ）、それぞれ、カタログ番号ＧＭ−１７９３２、ＧＭ−１５８１５１）。ガラクトースを補足したグルコース不含培地でＣｏＱ１０欠損リンパ球を２週間培養して、解糖ではなく主に酸化性リン酸化を介してエネルギーを産生させた（キンジー（Ｑｕｉｎｚｉｉ）ら；ロビンソンＢＨ（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ
ＢＨ）、ペトロワベネジクトＲ（Ｐｅｔｒｏｖａ−Ｂｅｎｅｄｉｃｔ  Ｒ）、ブンシックＪＲ（Ｂｕｎｃｉｃ  ＪＲ）、ウォランス（Ｗａｌｌａｃｅ  ＤＣ）。「ガラクトース培地における酸化欠損を有する細胞の生育不能性：影響を受けた患者線維芽細胞に対するスクリーニングテスト。（Ｎｏｎｖｉａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｃｅｌｌｓ  ｗｉｔｈ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｄｅｆｅｃｔｓ  ｉｎ  ｇａｌａｃｔｏｓｅ  ｍｅｄｉｕｍ：Ａ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ｔｅｓｔ  ｆｏｒ  ａｆｆｅｃｔｅｄ  ｐａｔｉｅｎｔ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ．）」、バイオケミカル・メディスン・アンド・メタボリック・バイオロジー（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｅｄ．Ｍｅｔａｂ．Ｂｉｏｌ．）、１９９２年；４８：１２２〜１２６ページ）。リンパ球を２５ｍＭガラクトース、２ｍＭグルタミン及び１％ペニシリン−ストレプトマイシン（セルグロー（Ｃｅｌｌｇｒｏ））、並びに、１０％調製ウシ胎孔血清ＦＢＳ（＜０．５μｇ／ｍＬ）（ＧＥＭＩＮＩ、バイオ−プロダクト（Ｂｉｏ−Ｐｒｏｄｕｃｔ））を補足したＲＰＭＩ１６４０グルコース不含培地（Ｇｉｂｃｏ、グランドアイランド（Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ）、ニューヨーク州（ＮＹ））で培養した。
【０２０８】
レーバ細胞（コリエル（Ｃｏｒｉｅｌｌ）、カタログ番号ＧＭ１０７４４）を、１５％ＦＢＳ（フィッシャーサイエンティフィック（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、テキサス州（ＴＸ）、米国（ＵＳＡ））、２ｍＭグルタミン（ハイクローン（ＨｙＣｌｏｎｅ）、サウスローガン（Ｓｏｕｔｈ  Ｌｏｇａｎ）、ユタ州（Ｕｔａｈ）、米国（ＵＳＡ））及び１％ペニシリン−ストレプトマイシン混合抗生物質（セルグロー（Ｃｅｌｌｇｒｏ）、マナサス（Ｍａｎａｓｓａｓ）、ヴァージニア州（ＶＡ）、米国（ＵＳＡ））補助剤を含むＲＰＭＩ（ＧＩＢＣＯ、グランドアイランド（Ｇｒａｎｄ  ｉｓｌａｎｄ）、ニューヨーク州（ＮＹ）、米国（ＵＳＡ））で培養した。細胞を１×１０５〜１×１０６細胞／ｍＬの濃度で対数期に維持した。
【０２０９】
アルツハイマー線維芽細胞（コリエル（Ｃｏｒｉｅｌｌ）、カタログ番号ＡＧ０６８４８）を、イエール塩（ＧＩＢＣＯ、グランドアイランド（Ｇｒａｎｄ  ｉｓｌａｎｄ）、ニューヨーク州（ＮＹ）、米国（ＵＳＡ））及び非必須アミノ酸（インビトロゲン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ニューヨーク州（ＮＹ）、米国（ＵＳＡ））と、１５％ＦＢＳ（フィッシャーサイエンティフィック（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、テキサス州（ＴＸ）、米国（ＵＳＡ））、２ｍＭグルタミン（ハイクローン（ＨｙＣｌｏｎｅ）、サウスローガン（Ｓｏｕｔｈ  Ｌｏｇａｎ）、ユタ州（Ｕｔａｈ）、米国（ＵＳＡ））及び１％ペニシリン−ストレプトマイシン混合抗生物質（セルグロー（Ｃｅｌｌｇｒｏ）、マナサス（Ｍａｎａｓｓａｓ）、ヴァージニア州（ＶＡ）、米国（ＵＳＡ））補助剤とを含むイーグル最少必須培地で培養した。細胞を７５ｍｌフラスコ中で培養し、培養密度で維持した。
【０２１０】
アルツハイマーリンパ芽球（コリエル（Ｃｏｒｉｅｌｌ）、カタログ番号ＡＧ０６８４９）を、１５％ＦＢＳ（フィッシャーサイエンティフィック（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、テキサス州（ＴＸ）、米国（ＵＳＡ））、２ｍＭグルタミン（ハイクローン（ＨｙＣｌｏｎｅ）、サウスローガン（Ｓｏｕｔｈ  Ｌｏｇａｎ）、ユタ州（Ｕｔａｈ）、米国（ＵＳＡ））及び１％ペニシリン−ストレプトマイシン混合抗生物質（セルグロー（Ｃｅｌｌｇｒｏ）、マナサス（Ｍａｎａｓｓａｓ）、ヴァージニア州（ＶＡ）、米国（ＵＳＡ））補助剤を含むＲＰＭＩ（ＧＩＢＣＯ、グランドアイランド（Ｇｒａｎｄ  ｉｓｌａｎｄ）、ニューヨーク州（ＮＹ）、米国（ＵＳＡ））で培養した。細胞を１×１０５〜１×１０６細胞／ｍＬの濃度で対数期に維持した。
【０２１１】
リー症候群細胞（コリエル（Ｃｏｒｉｅｌｌ）、カタログ番号ＧＭ１３７４０）を、１５％ＦＢＳ（フィッシャーサイエンティフィック（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、テキサス州（ＴＸ）、米国（ＵＳＡ））、２ｍＭグルタミン（ハイクローン（ＨｙＣｌｏｎｅ）、サウスローガン（Ｓｏｕｔｈ  Ｌｏｇａｎ）、ユタ州（Ｕｔａｈ）、米国（ＵＳＡ））及び１％ペニシリン−ストレプトマイシン混合抗生物質（セルグロー（Ｃｅｌｌｇｒｏ）、マナサス（Ｍａｎａｓｓａｓ）、ヴァージニア州（ＶＡ）、米国（ＵＳＡ））補助剤を含むＲＰＭＩ（ＧＩＢＣＯ、グランドアイランド（Ｇｒａｎｄ  ｉｓｌａｎｄ）、ニューヨーク州（ＮＹ）、米国（ＵＳＡ））で培養した。細胞を１×１０５〜１×１０６細胞／ｍＬの濃度で対数期に維持した。
Ｉ．脂質過酸化アッセイ
脂質過酸化計測のためのシス−パリナリン酸酸化
脂質過酸化のインビトロでのアッセイのための数々の方法が開発されている（クイペルス（Ｋｕｙｐｅｒｓ）ら著（１９８７年）、バイオケミ・バイオフィジ・アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ．）、２５、２６６〜２７４ページ；パップ（Ｐａｐ）ら著（１９９９年）、フェブス・レター（ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ）、４５３、２７８〜２８２ページ；デュラメン（Ｄｒｕｍｍｅｎ）ら（２００２年）、フリーラジカル・バイオロジー・アンド・メディスン（Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ．）、３３、４７３〜４９０ページ）。これらの方法の殆ど全てがフリーラジカルにより誘起される酸
化反応の阻害に基づいている。脂質過酸化に広範に用いられている蛍光アッセイは脂質に可溶性のシス−パリナリン酸をプローブとして用いる。シス−パリナリン酸は、過酸化ラジカルとの相互作用により蛍光（λｅｘｃ／ｅｍ：３２０／４３２ｎｍ）を失い、ラジカル失活剤の存在下では蛍光を保持する。しかしながら、シス−パリナリン酸は、空気に感応性であり、感光性で、及び、スペクトルのＵＶ領域において吸光する（約３２０ｎｍ）。しかしながら、スペクトルのこの領域は、殆どの化合物が吸光及び発光することが見出された領域でもある。実際の問題としては、シス−パリナリン酸を脂質過酸化のためのプローブとして用いて得た結果は、化合物による発光スペクトルとシス−パリナリン酸発光スペクトルとの重畳により交絡したものとなってしまう。
【０２１２】
脂質過酸化計測のためのＣ１１−ＢＯＤＩＰＹ５８１／５９１酸化
シス−パリナリン酸を用いたスペクトルの重畳に係る問題を克服するために、ＢＯＤＩＰＹクラスの蛍光染料に属する親油性プローブを用いる脂質過酸化用蛍光アッセイを用いた。Ｃ１１−ＢＯＤＩＰＹ５８１／５９１（４，４−ジフルオロ−５（４−フェニル−１，３−ブタジエニル）−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−プロピオン酸）蛍光は酸化により赤色から緑色に変化する。Ｃ１１−ＢＯＤＩＰＹ５８１／５９１（モレキュラープローブズ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）、ユージーン（Ｅｕｇｅｎｅ）、オレゴン州（ＯＲＥ）、米国（ＵＳＡ））ストック溶液濃度を、１４０，０００ｍｏｌ−１ｃｍ−１のモル吸光係数を用いて、５８２ｎｍでのＣ１１−ＢＯＤＩＰＹ５８１／５９１の吸収を計測することにより測定した（Ｒ．Ｐ．ハウグランド（Ｒ．Ｐ．Ｈａｕｇｌａｎｄ）、（１９９９年）、蛍光プローブと研究用ケミカルのハンドブック（Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）、モレキュラープローブズ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．）、ユージーン（Ｅｕｇｅｎｅ）、オレゴン州（ＯＲ））。脂質過酸化インデューサ２，２’−アゾビス（２−アミジノ−プロパン二塩化水素化物）（ＡＡＰＨ）及び酸化防止剤化合物α−トコフェロールはシグマ（Ｓｉｇｍａ）（セントルイス（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）、ミズーリ州（ＭＯ）、米国（ＵＳＡ））から入手した。リン脂質二重層を、１−ステアロイル−２−オレオイル−ホスファチジルコリン（ＳＯＰＣ）及び１，２−ジリノレオイル−ホスファチジルコリン（ＤＬＰＣ）から調製し、並びに、Ａｖａｎｔｉ（登録商標）、ポーラリピッズ（ｐｏｌａｒ  ｌｉｐｉｄｓ，ＩＮＣ）（アラバスタ（Ａｌａｂａｓｔｅｒ）、アラバマ州（ＡＬ）、米国（ＵＳＡ））から購入した。
リポソームの調製
ホスファチジルコリン（ＰＣ）リポソームを既述のとおり調製した（グエイシュアング（Ｇｕｅｙ−Ｓｈｕａｎｇ）ら著（１９８２年）、脂質（Ｌｉｐｉｄｓ）、１７、４０３〜４１３ページ）。簡潔には、ＤＬＰＣ（２５ｍｇ）及びＳＯＰＣ（２５ｍｇ）をクロロホルム中に溶解させ、溶剤を窒素蒸発（約２時間）により除去して丸底フラスコ中でＰＣの薄膜を得た。脂質フィルムを５０ｍＬの１０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１００ｍＭ  ＫＣｌで水化させ、振盪し、１５秒間超音波処理した。得たリポソームを０．２μΜ膜フィルタを通して数回ろ過した。
【０２１３】
Ｃ１１−ＢＯＤＩＰＹ５８１／５９１酸化の計測
Ｃ１１−ＢＯＤＩＰＹ５８１／５９１をリポソームに組み込み、化合物の存在下及び不在下で、ＡＡＰＨの分解に由来する過酸化ラジカルにより酸化させた。１０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１００ｍＭ  ＫＣｌ中に懸濁させたリポソーム（１ｍｇ／ｍＬ）を水晶１ｍＬキュベットに移し、４０℃でサーモスタット付きキュベットホルダを備えるバリアンケアリーエクリプス（Ｖａｒｉａｎ  Ｃａｒｙ  Ｅｃｌｉｐｓｅ）蛍光測定器（バリアン（Ｖａｒｉａｎ）、ケアリー（Ｃａｒｙ）、ノースカロライナ州（ＮＣ））に入れた。リポソームを２００ｎＭ  Ｃ１１−ＢＯＤＩＰＹ５８１／５９１と共に１０分プレインキュベートして、リポソームの脂質相に組み込ませた。ＡＡＰＨ（１０ｍＭ）を添加した後、赤色の蛍光の減衰をλｅｘｃ＝５７０ｎｍ、λｅｍ＝６００ｎｍで見守った。相
対蛍光単位を１００％強度に正規化した。実験を反復することにより得られた結果を検証した（Ｎ＝３回の独立した実験。
【０２１４】
細胞培養物におけるＣ１１−ＢＯＤＩＰＹ５８１／５９１酸化の計測
細胞における脂質過酸化を、酸化剤−感応性親油性プローブＣ１１−ＢＯＤＩＰＹ５８１／５９１を利用して検出した。簡潔には、細胞（５×１０５細胞／ｍＬ）を、１及び２．５μΜの最終濃度のテスト化合物で処理し、３７℃、空気中に５％ＣＯ２を含有する加湿雰囲気下で、４または２４時間インキュベートした。細胞をフェノールレッド不含ＲＰＭＩ−１６４０培地において５００ｎＭ  Ｃ１１−ＢＯＤＩＰＹ５８１／５９１で処理し、暗中に３７℃で３０分間インキュベートした。細胞をリン酸緩衝生理食塩水で２回洗浄し、フェノールレッド不含ＲＰＭＩ−１６４０培地において９０分間、５ｍＭ  ＤＥＭで酸化ストレスを誘起させた。処理した細胞を３分間の３００×ｇでの遠心分離により回収し、次いで、リン酸緩衝生理食塩水で２回洗浄した。細胞を２５０μＬのリン酸緩衝生理食塩水中に再懸濁させ、ＦＡＣＳ（ＦＡＣＳカリブルフローサイトメター（ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒ  ｆｌｏｗ  ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）、ベクトンディキンソン（Ｂｅｃｔｏｎ
Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ））により分析して、Ｃ１１−ＢＯＤＩＰＹ５８１／５９１緑色（酸化）蛍光シグナルの強度変化をモニタした。
【０２１５】
チオバルビツール酸反応性種（ＴＢＡＲＳ）のアッセイ
ウシ心臓ミトコンドリア膜における過酸化水素による脂質過酸化を遊離されるチオバルビツール酸反応性物質の量を計測することにより測定した。スミス（Ｓｍｉｔｈ）（３８）に記載のとおり準備したウシ心臓ミトコンドリア（１ｍｇタンパク質）を８００μＬの５０ｍＭリン酸緩衝剤（ｐＨ８．０）に添加し、２５ｍＭグルコース及びクロコウジカビ（Ａｓｐｅｒｕｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）由来の１Ｕ／ｍＬグルコースオキシダーゼを添加することにより酸化ストレスに供した。サンプルを、３７℃で３０分間、テスト化合物と共に、または、テスト化合物を伴わずにインキュベートした。各々２００μＬの１％（ｗ／ｖ）チオバルビツール酸及び３５％（ｖ／ｖ）過塩素酸、並びに、０．１％（ｗ／ｖ）ブチル化ヒドロキシトルエン（ＤＭＳＯ中の２％ストック溶液から）を添加した。サンプルを１００℃で１５分間加熱した。各サンプルの１ｍＬアリコートを採り、２ｍＬの水中で希釈し、次いで、２ｍＬのｎ−ブタノールで１回抽出した。三重５００μＬアリコートをブタノール相から採り、水晶キュベットに移した。ＴＢＡＲＳを、バリアン（Ｖａｒｉａｎ）蛍光光度計を用いて発光スペクトル（λｅｘ５１５ｎｍ；λｅｍ５５０ｎｍ）から蛍光定量的に測定した。マロンジアルデヒド濃度を、１％（ｖ／ｖ）Ｈ２ＳＯ４中に、４℃で一晩加水分解した１０ｍＭ１，１，３，３−テトラエトキシプロパンの段階希釈を用いて形成した検量線に基づいて判定した。マロンジアルデヒド濃度は、マロンジアルデヒドｎｍｏｌｅ／タンパク質ｍｇとして表記した。ホモジネートのアリコート中のタンパク質をビシンコニン酸法により測定した。
【０２１６】
ＩＩ．活性酸素種（ＲＯＳ）アッセイ
細胞ＲＯＳ産生は、２’，７’−ジクロロジヒドロフルオレセイン二酢酸塩（ＤＣＦＨ−ＤＡ）（ラベル（ＬｅＢｅｌ）ら著（１９９２年）、毒物学における化学的研究（Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．）、５、２２７〜２３１ページ）（モレキュラープローブズ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）、ユージーン（Ｅｕｇｅｎｅ）、オレゴン州（ＯＲＥ）、米国（ＵＳＡ））、膜透過性及び酸化剤−感応性蛍光染料を用いてモニタすることが可能である。ＤＣＦＨ−ＤＡは、過酸化水素及び他のＲＯＳによって酸化された後に蛍光を発するフルオレセインの非蛍光性誘導体である。発光された蛍光は、過酸化水素の濃度に正比例している。ＤＣＦＨ−ＤＡはノニオン性及び非極性であり、細胞によって容易に摂取される。一旦細胞内に入ると、ＤＣＦＨ−ＤＡは細胞エステラーゼによって非蛍光ＤＣＦＨに加水分解され、これが細胞中の染料を捕捉する。過酸化水素を含むＲＯＳの存在下では、ＤＣＦＨは、高度に蛍光性の化合物であるジクロロフルオレセイン（Ｄ
ＣＦ）に酸化される。細胞内ＤＣＦ蛍光が細胞ＲＯＳ産生の指数として用いられる。
【０２１７】
化学薬品マレイン酸ジエチル（ＤＥＭ）を用いてグルタチオン（ＧＳＨ）の薬理学的な枯渇により細胞酸化ストレスを誘起した。細胞（１×１０６細胞／ｍＬ）を１２ウェルプレートに播種（１ｍＬ）し、本発明の化合物（最終濃度１、２．５、５または１０μΜ）で処理し、５％ＣＯ２下に３７℃で１５時間インキュベートした。テストした化合物を、先ずジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中のストック溶液（１ｍＭ）を形成することにより調製した。細胞を５ｍＭ  ＤＥＭで３０分間処理し、３分間の３００×ｇでの遠心分離で回収し、次いで、リン酸緩衝剤生理食塩水（ＰＢＳ）（インビトロゲン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ニューヨーク州（ＮＹ）、米国（ＵＳＡ））で２回洗浄した。細胞をＰＢＳ緩衝剤＋１０ｍＭグルコース中に再懸濁させ、１０μΜＤＣＦＨ−ＤＡと共に暗中に３７℃で２０分インキュベートした。細胞を３分の３００×ｇでの遠心分離により回収し、次いで、ＰＢＳ緩衝剤で２回洗浄した。サンプルを、４８８ｎｍ励起レーザ及びＦＬ１−Ｈチャネル５３８ｎｍ発光フィルタを用いるフローサイトメトリ（ベクトンディキンソンＦＡＣＳカリバー（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｅｒ）、（セルクエストソフトウェア（Ｃｅｌｌ  Ｑｕｅｓｔ  ｓｏｆｔｗａｒｅ、ＢＤバイオセンシズ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ））によりすぐに分析した。各分析においては、細胞残渣が電子的にゲートアウトした後に、１０，０００のイベントが記録された。再現を行い、実験を繰り返す（Ｎ＝３回の独立した実験）ことにより得られた結果を検証した。標準過酸化水素を陽性対照として用いた。
【０２１８】
ＩＩＩ．スーパーオキシド（Ｏ２−・）アッセイ
細胞スーパーオキシド産生は、ＲＯＳのうちスーパーオキシドに対して高度に選択的である蛍光プローブであるジヒドロエチジウム（ＤＨＥ）を用いてモニタすることが可能である（ビンドカスＶＰ（Ｂｉｎｄｏｋａｓ  ＶＰ）、神経科学学会誌（Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ）、１６：１３２４〜１３３６ページ、１９９６年）（インビトロゲン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、米国（ＵＳＡ））。発光された蛍光は、スーパーオキシドラジカルの濃度に正比例している。これは細胞透過性であり、及び、スーパーオキシドアニオンと反応してエチジウムを形成し、これが、次いで、デオキシリボ核酸にインターカレートされ、これにより、赤色の蛍光を呈する（ハワンＨＹ（Ｈｗａｎ  ＨＹ）、腫瘍学レポート（Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｒｅｐｏｒｔｓ）、２１：２５３〜２６１ページ、２００９年）。アンチマイシンＡを用いてチトクロムｂとシトクロムｃとの間のミトコンドリア電子伝達の薬理学的阻害により、細胞スーパーオキシド生成を誘起させた（アレクサンダーＡ．（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  Ａ．）、バイオケミ・バイオフィジ・アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ）、７６７：１２０〜１２９ページ、１９８４年）（シグマアルドリッチ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ））。
【０２１９】
細胞（１×１０６細胞／ｍＬ）を２４ウェルプレートに播種（１ｍＬ）し、本発明の化合物（最終濃度１、２．５、５または１０μΜ）で処理し、５％ＣＯ２下に３７℃で１５時間インキュベートした。テストした化合物を、先ずジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中のストック溶液（１ｍＭ）を形成することにより調製した。細胞を、５０μΜアンチマイシンＡで２時間処理し、次いで、６０μΜ  ＤＨＥで処理した。サンプルを、４８８ｎｍ励起レーザ及びＦＬ２−Ｈチャネル５８５ｎｍ発光フィルタを用いるフローサイトメトリ（ベクトンディキンソンＦＡＣＳカリバー（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｅｒ））、（セルクエストソフトウェア（Ｃｅｌｌ  Ｑｕｅｓｔ  ｓｏｆｔｗａｒｅ、ＢＤバイオセンシズ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ））によりすぐに分析した。各分析においては、細胞残渣が電子的にゲートアウトした後に、１０，０００のイベントが記録された。再現を行い、実験を繰り返す（Ｎ＝３回の独立した実験）ことにより得られた結果を検証した。Ｍｎ（ＩＩＩ）テトラキス（４−安息香酸）ポルフィリンクロリド（ＭｎＴＢＡＰ）（シグマアルドリッチ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、ミズ
ーリ州（ＭＯ）、米国（ＵＳＡ））を陽性対照として用いた。
【０２２０】
ＩＶ．ミトコンドリア膜電位（ΔΨｍ）アッセイ
ミトコンドリア膜電位（ΔΨｍ）（ＦＡＣＳ）の計測。ΔΨｍの測定のために、細胞をテスト化合物で、または、テスト化合物を伴わずに前処理した。細胞を５ｍＭ  ＤＥＭで１２０分間処理し、３分間の３００×ｇでの遠心分離により回収し、次いで、リン酸緩衝生理食塩水で２回洗浄した。細胞をＰＢＳ緩衝剤中に再懸濁させ、暗中に３７℃で、２５０ｎＭ  ＴＭＲＭ（ΔΨｍネルンスト電位に従ってミトコンドリア中に蓄積されるカチオン性染料）と共に１５分間インキュベートした。細胞を３分間の３００×ｇでの遠心分離により回収し、次いで、リン酸緩衝生理食塩水で２回洗浄した。サンプルを、４８８ｎｍ励起レーザ及びＦＬ２−Ｈチャネルを用いるフローサイトメトリによりすぐに分析した。得られた結果を３回の独立した実験で検証した。プロトノフォアＦＣＣＰ（３０μΜ）を用いて化学浸透圧プロトン勾配（ΔμΗ＋）を散逸させてΔΨｍの損失に係る対照とした。各分析において、１０，０００のイベントが記録された。
【０２２１】
Ｖ．トリパンブルー細胞生存率アッセイ
細胞生存率をトリパンブルー排除アッセイにより測定した：この技術を用いて、ＧＳＨ枯渇による細胞死を誘起するよう薬理学的に処理した培養細胞における本発明の化合物の細胞保護効果を評価した。ＤＥＭを用いて細胞ＧＳＨを枯渇させ、酸化ストレスを誘起させた。染料トリパンブルーを排出する能力によりＤＥＭ−処理細胞の生存率を測定した。生存可能な細胞はトリパンブルーを排出し；その一方で、生存不可能な細胞は染料を摂取し、青色に染まる。簡潔には、細胞を１×１０６細胞／ｍＬの密度で接種し、異なる濃度の本発明の化合物で処理した。細胞を３７℃、空気中に５％ＣＯ２の加湿雰囲気下で、５ｍＭ  ＤＥＭと共に３時間インキュベートした。細胞生存率を、細胞を０．４％トリパンブルーで染めることにより、血球計を用いて測定した。各実験群に関して、少なくとも５００個の細胞がカウントされた。アッセイ時には、ＤＥＭ−処理細胞の＞９５％がトリパンブルー陽性であり；その一方で、ＤＥＭ未処理の対照細胞培養物においては、＞９５％の細胞が生存可能であった。細胞生存率を対照の割合として表記した。データは、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ（ｎ＝３）として表記されている。
【０２２２】
ＶＩ．細胞生存率アッセイ（ＦＡＣＳ）
細胞生存率及び細胞傷害性を、２色蛍光アッセイである、Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ（登録商標）生存率／細胞傷害性キット（Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ／Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ｋｉｔ）（モレキュラープローブズ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ））を用いて、正細胞及び死細胞を同時に染色することにより測定した。このアッセイを用いて、細胞生存率の認知された２種のパラメータである、細胞内エステラーゼ活性及び血漿完全性が計測される。膜不透過性ＤＮＡ染料であるエチジウムホモ二量体−１（ＥｔｈＤ−１）を用いて、形質膜の完全性が撹乱された死細胞を同定した。膜透過性染料であるカルセイン−ＡＭを用いて生細胞を標識化した。これは細胞内に浸透し、そこで細胞質エステラーゼによって代謝されて蛍光性となるが、膜不透過性プローブは生存可能な細胞中に保持される。細胞を、ＲＰＭＩ培地で（対照）、及び、テスト化合物の存在下で一晩インキュベートし、次いで、ＤＥＭで３〜６時間処理した。細胞を０．２μΜカルセイン−ＡＭ及び０．４μΜ  ＥｔｈＤ−１で染色した。１５分後、４８８ｎｍでの励起を用いてフローサイトメトリ分析を行った。緑色蛍光（５３９ｎｍ）ＦＬ１−Ｈチャネルの生細胞固体群が第四象限に表れ、赤色蛍光（５８５ｎｍ）ＦＬ２−Ｈチャネルの死細胞固体群が第二象限に現れる。各分析において、１０，０００のイベントが記録された。得られた結果を３回の独立した実験で検証した。
【０２２３】
ＶＩＩ．カルセイン−ＡＭ細胞生存率アッセイ
染料カルセインアセトキシメチル（ＡＭ）を用いる細胞生存率アッセイを用いて、原発
性ＦＲＤＡ患者由来の線維芽細胞におけるＧＳＨ−媒介細胞死に対する本発明の化合物の効果を測定した（ジャウスリン（Ｊａｕｓｌｉｎ）ら著（２００２年）、人間の分子遺伝学（Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、１１、３０５５〜３０６３ページ）。ＦＲＤＡ線維芽細胞をＬ−ブチオニン（Ｓ，Ｒ）−スルホキシイミン（ＢＳＯ）で処理してＧＳＨの新たな合成を阻害して（グリフィス（Ｇｒｉｆｆｉｔｈ）ら著（１９７９年）、生化学学会誌（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）２５４、７５５８〜７５６０ページ）、酸化ストレス、形質膜損傷及び細胞死を生じさせた。フリードライヒ運動失調症患者由来の線維芽細胞は、ＢＳＯとのインキュベーションにおけるＧＳＨの枯渇後に死亡したが、対照細胞は死亡しなかった（ジャウスリン（Ｊａｕｓｌｉｎ）ら著（２００２年）、人間の分子遺伝学（Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、１１、３０５５〜３０６３ページ）。細胞生存率をカルセイン−ＡＭ（モレキュラープローブズ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）、ユージーン（Ｅｕｇｅｎｅ）、オレゴン州（ＯＲ））を用いて判定した。生細胞において、非蛍光カルセインＡＭは細胞内エステラーゼによって加水分解されて強度に緑色蛍光性のアニオンカルセインが生成される。
【０２２４】
ＢＳＯ（Ｌ−ブチオニン（Ｓ，Ｒ）−スルフォキシイミン）及び（＋）−α−トコフェロールをシグマケミカル（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）から購入し、カルセインＡＭをモレキュラープローブズ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）から購入した。細胞を７５ｃｍ２培養フラスコ（Ｔ７５）において増殖させ、３７℃、空気中に５％ＣＯ２の加湿雰囲気下でインキュベートした。細胞に週２回給餌し、３日に一度、培養密度に達したら１：３の比で分割した。本発明の化合物、並びに、イデベノン及びα−トコフェロールの還元型及び酸化型をＤＭＳＯまたはエタノール中に還元して２．５ｍＭストック溶液を得た。
【０２２５】
化合物を既述のプロトコルに従ってスクリーニングした（ジャウスリン（Ｊａｕｓｌｉｎ）ら著（２００２年）、人間の分子遺伝学（Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、１１、３０５５〜３０６３ページ）：線維芽細胞を９６ウェルマイクロタイターである黒色の壁を有する細胞培養プレート（コスター（Ｃｏｓｔａｒ）、コーニング（Ｃｏｒｎｉｎｇ）、ニューヨーク州（ＮＹ）、米国（ＵＳＡ））に３０００細胞／ウェル（１００μＬ）の密度で接種した。プレートを３７℃で、空気中に５％ＣＯ２の加湿雰囲気で一晩インキュベートして、細胞を培養プレートに結合させた。処理化合物及び参照化合物の段階希釈をそれぞれのストック溶液から形成して、各ウェル中で１５０μＬの総体積とした。プレートを細胞培養中で一晩インキュベートした。次の日、５０μＬの４ｍＭ  ＢＳＯ溶液（培養培地中）を各ウェルに添加して１ｍＭの最終ＢＳＯ濃度とした。ＢＳＯ−処理細胞に毒性の最初の兆候が現れた後に（典型的には、２４〜３０時間後）、位相差顕微鏡下で培養物を検査することにより、細胞生存率を評価した。吸引により細胞培地を廃棄し、細胞培養プレートの各ウェルを予め温めたＨＳＳＢで洗浄して血清エステラーゼ活性を除去した。次いで、細胞を２００μＬの１．２μΜカルセイン−ＡＭと共に、ＨＳＳＢ中で、暗中に３７℃で６０分間処理して、染料を細胞に進入させ、及び、エステラーゼにより分割させた。陰性対照／バックグラウンドは２００μＬのＨＳＳＢ緩衝剤であった。それぞれ、４８５ｎｍ及び５２５ｎｍの励起及び発光を用いて、スペクトラマックス（Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ  Ｍ５）分光蛍光計（モレキュラーデバイシズ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）、サニーベイル（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ）、カリフォルニア州（ＣＡ）、米国（ＵＳＡ））で蛍光強度を計測した。処理化合物を三重でアッセイした。ＤＭＳＯまたはエタノールの用いた溶剤ビヒクルは、アッセイにおいて用いた濃度（０．５〜１％）では細胞生存率に影響を有さなかった。ＢＳＯ不処理線維芽細胞の生存率を１００％と設定し、ＢＳＯ−処理細胞及びサンプル−処理細胞の生存率をこの値と相対的に算出した。細胞生存率を対照の割合として表記した。データは、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ（ｎ＝３）として表記されている。
【０２２６】
ＶＩＩＩ．シトクロムｃ還元アッセイ
シトクロムｃ（１０μΜ）還元の比率を５５０ｎｍでの吸光度の変化をモニタすることにより計測した。簡潔には、５０ｍＭリン酸緩衝剤、０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ７．８）及び１０μΜシトクロムｃ（シグマ（Ｓｉｇｍａ）、セントルイス（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）、ミズーリ州（ＭＯ．）米国（ＵＳＡ））を含有する混合物に１００μΜの本発明の化合物を添加することにより反応を開始させた。スーパーオキシドによるシトクロムｃ還元のためには、キサンチンオキシダーゼ（０．０１ＩＵ／ｍＬ）（シグマ（Ｓｉｇｍａ）、セントルイス（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）、ミズーリ州（ＭＯ．）米国（ＵＳＡ））をキサンチン（５０μΜ）の存在下に用いた。
【０２２７】
ＩＸ．総細胞間ＡＴＰ濃度アッセイ
ＣｏＱ１０欠損患者におけるミトコンドリア呼吸鎖活性の還元が報告されている（キンジーＧＭ（Ｑｕｉｎｚｉｉ  ＧＭ）、ロペスＬＣ（Ｌｏｐｅｚ  ＬＣ）、ボンモルトケＪ（Ｖｏｎ−Ｍｏｌｔｋｅ  Ｊ）、ナイニＡ（Ｎａｉｎｉ  Ａ）、クリシュナＳ（Ｋｒｉｓｈｎａ  Ｓ）、シュルケＭ（Ｓｃｈｕｅｌｋｅ  Ｍ）、サルビアチＬ（Ｓａｌｖｉａｔｉ
Ｌ）、ナバスＰ（Ｎａｖａｓ  Ｐ）、ジマウロＳ（ＤｉＭａｕｒｏ  Ｓ）及びヒラノＭ（Ｈｉｒａｎｏ  Ｍ）。「呼吸鎖機能不全及び酸化ストレスは、原発性ＣｏＱ１０欠乏症の重症度に関連している。（Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｃｈａｉｎ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅ  ｗｉｔｈ  ｓｅｖｅｒｉｔｙ  ｏｆ  ｐｒｉｍａｒｙ  ＣｏＱ１０  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ．）」、ＦＡＳＥＢ学会誌（ＦＡＳＥＢ  Ｊ．）、２００８年；２２：１８７４〜１８８５ページ）。呼吸鎖活性を正常化及び回復するためのＣｏＱ１０類似体の使用は、価値ある治療的アプローチをもたらす可能性がある。本発明者らは、テストしたＣｏＱ１０類似体の存在下におけるＣｏＱ１０欠損リンパ球（ＧＭ１７９３２）における酸化性リン酸化の効率を、（ビアライト（ＶｉａＬｉｇｈｔ）（登録商標）Ｐｌｕｓ  ＡＴＰモニタリング試薬キット（Ｐｌｕｓ  ＡＴＰ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  ｒｅａｇｅｎｔ  ｋｉｔ）、ロンザ（Ｌｏｎｚａ））を用いて総細胞ＡＴＰ含有量を計測することにより、評価した。
【０２２８】
簡潔には、リンパ球（２×１０５細胞／ｍＬ）を播種し（１２ウェルプレートに１ｍＬ）、５、１０μΜ及び２５μΜの最終濃度のテスト化合物で処理し、３７℃で、空気中に５％ＣＯ２を含有する加湿雰囲気で４８時間インキュベートした。先ずＤＭＳＯ中に２０ｍＭストック溶液を形成することによりテスト化合物を調製した。細胞（１００μＬ）を９６ウェルマイクロタイターである黒色の壁を有する細胞培養プレートに移した（コスター（Ｃｏｓｔａｒ）、コーニング（Ｃｏｒｎｉｎｇ）、ニューヨーク州（ＮＹ））。ルミネータ（クラリティ（Ｃｌａｒｉｔｙ）（商標）ルミネンスマイクロプレートリーダ）で、ＡＴＰバイオルミネンスアッセイキット（ＡＴＰ  Ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ）（ビアライト（ＶｉａＬｉｇｈｔ）（登録商標）Ｐｌｕｓ  ＡＴＰモニタリング試薬キット（Ｐｌｕｓ  ＡＴＰ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  ｒｅａｇｅｎｔ  ｋｉｔ）、ロンザ（Ｌｏｎｚａ））を用い、製造業者の説明書に従って総細胞内ＡＴＰレベルを計測した。ＡＴＰの検量線を１ｍＭ  ＡＴＰ溶液の段階希釈によって得た。ＡＴＰ標準に対する校正の後、細胞抽出物のＡＴＰ含有量を測定し、細胞中のタンパク質含有量について正規化した。図１は、ＡＴＰの細胞含有量は、正常なリンパ球よりもＣｏＱ１０欠損リンパ球において顕著に低いことを示す。
【０２２９】
Ｘ．ＮＡＤＨオキシダーゼ阻害アッセイ
ウシ心臓ミトコンドリアを大規模手法により得た。逆位亜ミトコンドリア粒子（ＳＭＰ）をマツノ−ヤギ（Ｍａｔｓｕｎｏ−Ｙａｇｉ）及びハテフィ（Ｈａｔｅｆｉ）の方法（生化学学会誌（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）２６０（１９８５年）、１４４２４ページ）により調製し、０．２５Ｍスクロース及び１０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）を含有する緩衝剤中にて−８０℃で保存した。ウシ心臓ミトコンドリア複合体（Ｉ、ＩＩＩ、Ｉ
Ｖ）に対する化合物の阻害効果を評価した。最大ジメチルスルホキシド濃度が２％を超えることはなく、対照酵素活性に対する影響は有していなかった。ウシ心臓ＳＭＰを０．５ｍｇ／ｍＬに希釈した。酵素活性を３０℃でアッセイし、ベックマンコールターＤＵ−５３０（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＤＵ−５３０）（３４０ｎｍ、ε＝６．２２ｍＭ−１ｃｍ−１）で分光測光法的にモニタした。ＮＡＤＨオキシダーゼ活性を５０ｍＭヘペス（ｐＨ７．５）、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２を含有する反応培地（２．５ｍＬ）で測定した。最終ミトコンドリアタンパク質濃度は３０μｇ／ｍＬであった。阻害因子によるＳＭＰを５分間事前平衡化した後、初期の比率を線の直線部分から算出した。
【０２３０】
ＸＩ．ミトコンドリア生体エネルギー評価
呼吸鎖活性を正常化及び回復するためのＣｏＱ１０類似体及びメチレンブルー類似体の使用は、ミトコンドリア疾患に対する価値ある治療的アプローチをもたらす。フリードライヒ運動失調症（ＦＲＤＡ）患者におけるミトコンドリア呼吸鎖活性の還元が報告されている。（ビアライト（ＶｉａＬｉｇｈｔ）（登録商標）Ｐｌｕｓ  ＡＴＰモニタリング試薬キット（Ｐｌｕｓ  ＡＴＰ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  ｒｅａｇｅｎｔ  ｋｉｔ）、ロンザ（Ｌｏｎｚａ））を用いて総細胞ＡＴＰ含有量を計測することにより、ＦＲＤＡリンパ球（ＧＭ１５８５０）において、テストしたＣｏＱ１０類似体及びメチレンブルー類似体の存在下で酸化性リン酸化の効率を評価した。
【０２３１】
ＦＲＤＡリンパ球株細胞をコリエルコリエルセルリポジトリーズ（Ｃｏｒｉｅｌｌ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｉｅｓ）から入手した。ガラクトースを補足したグルコース不含培地でＦＲＤＡリンパ球を２週間培養して、解糖ではなく主に酸化性リン酸化を介してエネルギーを産生させた。リンパ球を、２５ｍＭガラクトース、２ｍＭグルタミン及び１％ペニシリン−ストレプトマイシン、並びに、１０％調製ウシ胎孔血清ＦＢＳ（＜０．５μｇ／ｍＬ）を補足したＲＰＭＩ１６４０グルコース不含培地において培養した。簡潔には、リンパ球（２×１０５細胞／ｍＬ）を播種し（１２ウェルプレートに１ｍＬ）、５０、１２５、２５０、１０００及び５０００ｎＭの最終濃度にてテスト化合物で処理し、３７℃で、空気中に５％ＣＯ２を含有する加湿雰囲気で４８時間インキュベートした。細胞（１００μＬ）を９６ウェルマイクロタイターである黒色の壁を有する細胞培養プレートに移した。ルミネータ（クラリティ（Ｃｌａｒｉｔｙ）（商標）ルミネンスマイクロプレートリーダ）で、ＡＴＰバイオルミネンスアッセイキット（ＡＴＰ  Ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ）（ビアライト（ＶｉａＬｉｇｈｔ）（登録商標）Ｐｌｕｓ  ＡＴＰモニタリング試薬キット（Ｐｌｕｓ  ＡＴＰ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  ｒｅａｇｅｎｔ  ｋｉｔ）、ロンザ（Ｌｏｎｚａ））を用い、製造業者の説明書に従って総細胞内ＡＴＰレベルを計測した。カルボニルシアン化物−ｐ−トリフルオロメトキシ−フェニルヒドラゾン（ＦＣＣＰ）及びオリゴマイシンを、ＡＴＰ合成の阻害に係る対照として用いた。
【０２３２】
結果
本開示の化合物を、ＮＡＤＨオキシダーゼ阻害活性についてアッセイした。％活性として表記した結果が以下の表１に示されている。
【０２３３】
【表１】
2014510143.tif 000041
【０２３４】
本開示の化合物を、ＤＥＭで前処理した培養ＣＥＭ白血病細胞における活性酸素種（ＲＯＳ）産生の抑制についてアッセイした。表２に示されている結果は、掃去活性の％として表記されている。「未処理の対照」はＤＥＭ処理が行われなかったことを表し、一方で、「処理済みの対照」はＤＥＭ処理単独を表す。
【０２３５】
【表２】
2014510143.tif 000042
【０２３６】
本開示の化合物による処理後の細胞生存率をＦＲＤＡ株細胞及びトリパンブルー排除アッセイ（上記のとおり）を用いてアッセイした。結果は生存率で表記されており、表３に示されている。「未処理」とは如何なるストレス負荷も伴わずに増殖された対照細胞を意味し；「処理済」とはＤＥＭでストレスが与えられたが、テスト化合物では処理されていない細胞を意味する。
【０２３７】
【表３】
2014510143.tif 000043
【０２３８】
本開示の化合物も、脂質過酸化抑制についてアッセイした。マレイン酸ジエチル（ＤＥＭ）で処理した培養白血病ＣＥＭリンパ球における脂質過酸化の抑制の結果が、以下の表４及び５に示されている。値は、（１００％平均）×１００／（処理済みの対照の％平均）として算出されている。「未処理の対照」はＤＥＭ処理がなかったことを表し、一方で、「処理済みの対照」はＤＥＭ処理を表す。
【０２３９】
【表４】
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【０２４０】
【表５】
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【０２４１】
加えて、酸素ラジカルによって誘起される脂質過酸化に対する本発明の化合物の効果が図１及び２に図示されている。酸素ラジカルは、４０℃での、Ｃ１１−ＢＯＤＩＰＹ５８１／５９１（２００ｎＭ）を含有するトリス−ＨＣｌ緩衝剤中のリン脂質リポソーム中のＡＡＰＨ（１０ｍＭ）の熱分解から生成した。プローブの赤色の蛍光減衰を３０分間にわたってモニタした（λｅｘ＝５７０、λｅｍ＝６００ｎｍ）。
【０２４２】
メチレンブルー及び本開示の化合物の存在下において、ＦＲＤＡリンパ球における酸化性リン酸化の効率を評価した。４０時間後、メチレンブルー及び本開示の化合物（ＣＰＤ−１８）は、低濃度で、ＦＲＤＡリンパ球における細胞ＡＴＰレベルを顕著に増大させた（図３）。より高い濃度で用いられる場合、ＡＴＰレベルの維持においてはＣＰＤ−１８がメチレンブルーに対して優れていた。
【０２４３】
本明細書に記載の実施例及び実施形態は例示のみを目的としていること、並びに、これらに係る種々の変更または変形は、当業者に示唆されることとなり、本出願の趣旨及び範囲、及び、添付の特許請求の範囲の範囲内に組み入れられるべきであることが理解される。本明細書において言及されている全ての公報、特許及び特許出願は、全ての目的について、本明細書において参照により援用される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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