(57)【要約】  本発明は、茶（ｔｅａ）にジャン（醤）類由来菌株を接種して得られた発酵茶抽出物を有効成分として含む、体内脂質水準減少用、摂取脂質分解抑制用および摂取脂質排出促進用組成物を開示する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
茶（ｔｅａ）にジャン（醤）類由来菌株を接種して得られた発酵茶抽出物を有効成分として含む、体内脂質水準減少用組成物。
【請求項２】
茶（ｔｅａ）にジャン（醤）類由来菌株を接種して得られた発酵茶抽出物を有効成分として含む、摂取脂質分解抑制用組成物。
【請求項３】
茶（ｔｅａ）にジャン（醤）類由来菌株を接種して得られた発酵茶抽出物を有効成分として含む、摂取脂質排出促進用組成物。
【請求項４】
茶（ｔｅａ）は、緑茶、白茶、烏龍茶、紅茶、プーアル茶、黒茶および柿葉茶により構成される群から選択される一つ以上である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
ジャン（醤）類由来菌株は、バチルス・サブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍｓ）、バチルス・ナットウ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｎａｔｔｏ）、バチルス・シトレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｉｔｒｅｕｓ）、バチルス・サーキュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）、バチルス・メセンテリカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃｕｓ）およびバチルス・プミルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｕｍｉｌｕｓ）により構成される群から選択される一つ以上の菌株である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
発酵茶抽出物は、発酵茶をアルコールで抽出した抽出物である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
脂質は、中性脂肪（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ）である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
組成物は、肥満の予防または治療用である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
組成物は、心血管系疾患の予防または治療用である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、発酵茶抽出物を含む体内脂質水準減少用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
緑茶を例に挙げられる様々な種類の茶は、昔から嗜好食品として広く知られている。そのうち緑茶は、葉の状態の葉茶の形態で飲用されたりもするが、より深い香りを感じるために発酵状態の茶で飲用されたりもする。たとえば、発酵茶は発酵の形や程度によって、緑茶、烏龍茶、紅茶、プーアル茶等といった多様な名称で呼ばれる。発酵状態の茶は、葉茶と比較すると、香りにおいて違いが現れるだけでなく、発酵過程において多様な程度に変化した有効成分を有し得る。
【０００３】
一方、現代人は、脂肪質の摂取機会および摂取量は多くなったのに反して運動量は不足し、各種多様なストレスを受けて生きている。こうした生活パターンの変化は、多様な種類の成人病を誘発し、特に、肥満、心血管系疾患を例に挙げられる多様な疾患を引き起こす。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】韓国公開特許第１０−２０１０−０１２２２９６号
【特許文献２】韓国公開特許第１０−２０１０−００９１３９３号
【特許文献３】韓国公開特許第１０−２０１０−０１２４５１９号
【特許文献４】米国特許出願公開第２００９−０１７０１８５号明細書
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】J. K. Lin et al., “Mechanisms of hypolipidemic and anti-obesity effects of tea and tea polyphenols”, Molecular Nutrition & Food Research, Vol.50, pp.211-217 (2006).
【非特許文献２】PV A. BABU ey al., “Green tea extract impedes dyslipidemia and development of cardiac dysfunction in streptozotocin-diabetic rats”, Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology, vol.33, pp.1184-1189 (2006).
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、体内脂質水準減少用、摂取脂質分解抑制用および摂取脂質の排出促進用組成物を提供して、肥満または心血管系疾患を予防または治療する組成物を提供しようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の一側面は、茶（ｔｅａ）に醤類由来菌株を接種して得られた発酵茶抽出物を有効成分として含む、体内脂質水準減少用組成物を提供する。
【０００８】
本発明の他の一側面は、茶（ｔｅａ）に醤類由来菌株を接種して得られた発酵茶抽出物を有効成分として含む、摂取脂質分解抑制用組成物を提供する。
【０００９】
本発明のまた他の一側面は、茶（ｔｅａ）に醤類由来菌株を接種して得られた発酵茶抽出物を有効成分として含む、摂取脂質排出促進用組成物を提供する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明に係る組成物は、茶にジャン（醤）類由来菌株を接種して得られた発酵茶抽出物を有効成分として含むことにより、体内脂質水準減少、摂取脂質分解抑制および摂取脂質排出促進の効果を有する。これは、一般的な緑茶や烏龍茶を例に挙げられる発酵茶に比べて、その効果が顕著に優れる。また、本発明に係る組成物は、前記効果を有することにより、肥満および心血管系疾患を予防または治療することができ、薬学または食品分野を例に挙げられる多様な分野において広く活用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】動物モデルの発酵茶抽出物１００、２００および４００ｍｇ／ｋｇ単回投与群における高脂肪負荷後の血中中性脂肪数値の変化を、蒸留水投与群と比較して示したグラフである。
【図２】動物モデルの発酵茶抽出物１００および２００ｍｇ／ｋｇ単回投与群における便中脂質排泄量（ｍｇ／ｇ）を、蒸留水投与群と比較して示したグラフである。
【図３】動物モデルの発酵茶抽出物２００ｍｇ／ｋｇ長期間投与群における高脂肪負荷後の血中中性脂肪数値の変化を、蒸留水投与群と比較して示したグラフである。
【図４】動物モデルの発酵茶抽出物２００ｍｇ／ｋｇ長期間投与群における便中脂質排泄量（ｍｇ／ｇ）を、蒸留水投与群と比較して示したグラフである。
【図５】ヒトの発酵茶抽出物投与群における高脂肪負荷後の血中中性脂肪数値の変化量（ΔＴＧ）を、水投与群と比較して示したグラフである。
【図６】図５のグラフの直線下面積（ＡＵＣ）を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
体内に消化、吸収される物質のうち、脂肪は、人体の必須構成成分であると同時に、炭水化物、タンパク質といった栄養素（４ｋｃａｌ／ｇ）に比べて高いエネルギー（９ｋｃａｌ／ｇ）を出すエネルギー源であり、西欧化された献立においては、大抵、１日のカロリー摂取量の３０〜４０％（１日６０〜１２０ｇ）を占める。このうち、飲食物により摂取する脂肪の９５％が中性脂肪の形態である。
【００１３】
中性脂肪の吸収は、大部分が小腸で行われるが、胃で一部消化された飲食物の塊と一緒に小腸に到達すると、分泌された胆汁に含まれる膵臓リパーゼ（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｌｉｐａｓｅ）およびコリパーゼ（ｃｏｌｉｐａｓｅ）によって分解されて、小腸細胞を介して容易に吸収される。こうした脂肪をはじめとする脂質の消化、吸収過程を調節すれば、過多な脂質摂取による各種副作用を最小化することができるであろう。
【００１４】
今日まで、大部分の研究は、心血管系疾患の独立的な要因として知られている空腹状態における血中中性脂肪濃度に焦点が当てられていたが、最近、食後の中性脂肪水準も心血管系疾患の予測因子として作用するものと知られて以降、体内の食後中性脂肪水準に対する研究が想到に進められている。一方、大部分の人々が、日常生活の中で持続的、規則的に飲食物を摂取することにより、朝食前の空腹状態を除けば、血中中性脂肪濃度が基底値水準以上に維持され続ける。よって、中性脂肪の消化、吸収を調節して、食後中性脂肪水準を正常に維持すれば、脂質の過多摂取に起因する各種疾患を予防または治療することができるものと考えられる。
【００１５】
本明細書において、「発酵茶」は、発酵された状態の茶（ｔｅａ）を意味するものであり、その原料または発酵の程度が異なる多様な茶をすべて包括する概念である。具体的に、前記「発酵茶」は、茶の木の葉の茶または柿の葉茶を例に挙げられる葉茶、菊花茶または薔薇茶を例に挙げられる花弁茶など、多様な原料の茶を発酵したものをすべて含む。また、発酵の程度に応じて、部分発酵茶、強発酵茶および後発酵茶等をすべて含む。
【００１６】
本明細書において、「脂質」は、脂肪、脂肪酸、鉛、ステロイド、テルペノイド、リン脂質、糖脂質、リポタンパク質などをすべて含む概念である。その具体的な例としては、中性脂肪、コレステロール等を挙げることができる。
【００１７】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１８】
本発明の一側面による組成物は、茶（ｔｅａ）にジャン（醤）類由来菌株を接種して得られた発酵茶抽出物を有効成分として含む。
【００１９】
本発明の一側面による組成物は、ジャン（醤）類由来菌株で発酵させた発酵茶成分を含有することにより、膵臓リパーゼ（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｌｉｐａｓｅ）の酵素活性を減少させて摂取した脂質の分解を抑制することにより、小腸細胞による脂質吸収を低下させることができる。また、前記組成物は、食事などを通じて脂質を摂取した後に急激に増加する血中脂質濃度を低下させ、その体外排出を促進させることができる。したがって、前記組成物は、体内脂質の分解および吸収を抑制し、排出を促進して、体内の脂質濃度および量を減少させるので、高脂血症状を好転させる効果がある。具体的に、前記脂質は、中性脂肪（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ）であってよく、飲食物等により摂取した脂質であってよい。本発明の他の一側面において、前記組成物は、飲食物を介して摂取した脂質の分解を抑制し、排出を促進する組成物であってよい。本発明のまた他の一側面において、前記組成物は、食後高中性脂肪血症改善用組成物であってよい。
【００２０】
本発明の一側面による、茶にジャン（醤）類由来菌株を接種して得られた発酵茶抽出物を有効成分として含む組成物は、肥満の予防または治療効果を有してよい。本発明の他の一側面による、茶にジャン（醤）類由来菌株を接種して得られた発酵茶抽出物を有効成分として含む組成物は、高血圧、高脂血症、心筋梗塞、狭心症、不整脈、冠状動脈疾患または動脈硬化を例に挙げられる心血管系疾患を予防または治療する効果を有してよい。本発明のまた他の一側面による、茶にジャン（醤）類由来菌株を接種して得られた発酵茶抽出物を有効成分として含む組成物は、飲食物等により摂取した脂質を直ちに排出させて体内に蓄積しないようにするので、脂質が蓄積された場合に発生し得る脂肪肝、肝炎、肝硬変または肝臓癌等を予防または治療する効果を有し得る。
【００２１】
本発明の一側面による組成物は、茶にジャン（醤）類由来菌株を接種して得られた発酵茶抽出物を、組成物全体の重量を基準として１〜９９重量％含んでよい。本発明の他の一側面による組成物は、茶（ｔｅａ）にジャン（醤）類由来菌株を接種して得られた発酵茶抽出物を、組成物全体の重量を基準として３０〜９０重量％含んでよい。本発明のまた他の一側面による組成物は、茶にジャン（醤）類由来菌株を接種して得られた発酵茶抽出物を、組成物全体の重量を基準として５０〜７０重量％含んでよい。
【００２２】
本発明の一側面では、前記茶（ｔｅａ）は、その種類において特に限定されず、緑茶、白茶、烏龍茶、紅茶、プーアル茶、黒茶、柿葉茶等や多様な種類のハーブ茶などを含んでいる。本発明の他の一面では、前記茶は、緑茶、白茶、烏龍茶、紅茶、プーアル茶、黒茶および柿葉茶により構成される群から選択される一つ以上の茶であってよい。本発明のまた他の一側面において、前記茶は、緑茶であってよい。本発明のまた他の一側面において、前記茶は、緑茶を後発酵した茶であってよい。
【００２３】
本発明の一側面において、前記ジャン（醤）類由来菌株は、麹を利用して製造した味噌、唐辛子味噌もしくは醤油に由来する菌株、または豆を利用して製造した納豆由来菌株であってよい。本発明の他の一側面において、前記ジャン（醤）類由来菌株は、たとえば、バチルス・サブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍｓ）、バチルス・ナットウ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｎａｔｔｏ）、バチルス・シトレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｉｔｒｅｕｓ）、バチルス・サーキュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）、バチルス・メセンテリカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃｕｓ）およびバチルス・プミルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｕｍｉｌｕｓ）により構成される群から選択される一つ以上の菌株を含む。本発明の他の一側面において、前記ジャン（醤）類由来菌株は、枯草菌とも呼ばれるバチルス・サブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）であってよい。バチルス・サブティリスは、アミラーゼ、プロテアーゼ、アミノ酸、抗微生物製剤（ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）または界面活性剤などの生産に使用される。特に、これは、ヒト、動物および植物等において毒性を示さないため、食品微生物として広く利用され得る。
【００２４】
本発明の一側面による発酵茶は、次のような方法で製造されてよいが、これに限定されるものではない。
【００２５】
培養したジャン（醤）類由来菌株を発酵液に接種する。前記発酵液は、微生物に対する水分とエネルギー供給源として作用し、たとえば、発酵液の総重量を基準として２〜５重量％の砂糖または果糖等を混合し、大豆粉末等を添加して製造してよい。その後、接種した菌株の円滑な発酵代謝のために、菌株を接種した発酵液を培養器で培養する過程を経てよい。その次に、緑茶葉と菌株を接種した発酵液を混合した後、発酵させる。混合する発酵液は、緑茶乾葉重量を基準として１０〜８０重量％が適切であり得る。発酵は、２０〜７０℃の恒温発酵槽で２４時間〜２８日間実施してよい。発酵温度が４０℃を超えると、ジャン（醤）類由来菌株、たとえば、バチルス・サブティリス菌を除く他の残りの菌の生長が抑制される、ないし死滅する効果がある。しかし、発酵温度が高すぎると、ジャン（醤）類由来菌株の生長も阻害され得る。前記のような発酵過程は、後発酵と呼ばれ得る。また、発酵完了後、熱風乾燥を通じて乾燥する過程をさらに経てよい。
【００２６】
本発明の一側面による発酵茶抽出物は、多様な方法で抽出されてよい。本発明の他の一側面による発酵茶抽出物は、たとえば、熱水抽出物またはＣ１〜Ｃ５の低級アルコール抽出物であってよいが、これに限定されるものではない。本発明のまた他の一側面において、発酵茶抽出物は、エタノール抽出物であってよい。
【００２７】
本発明の一側面は、茶にジャン（醤）類由来菌株を接種して得られた発酵茶抽出物を有効成分として含む薬学組成物を提供する。
【００２８】
本発明に係る組成物を医薬品に適用する場合には、前記組成物を有効成分として、常用される無機または有機の担体を加えて、固体、半固体または液状の形態で製剤化してよい。本発明の有効成分を常法に従って実施すれば容易に製剤化することができ、界面活性剤、賦形剤、着色剤、香辛料、安定化剤、防腐剤、保存剤、水和剤、乳化促進剤、懸濁剤、浸透圧調節のための塩および／または緩衝剤、その他の常用の補助剤を適当に使用してよい。
【００２９】
前記の経口投与のための製剤としては、錠剤、丸剤、顆粒剤、軟質および硬質カプセル剤、散剤、細粒剤、粉剤、液剤、懸濁剤、乳濁剤、シロップ剤、ペレット剤等を挙げることができる。これらの剤形は、有効成分以外に、希釈剤（例：ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロースまたはグリシン）、滑沢剤（例：シリカ、タルク、ステアリン酸またはそのマグネシウムもしくはカルシウム塩、またはポリエチレングリコール）を含有してよい。錠剤はまた、マグネシウムアルミニウムシリケート、澱粉ペースト、ゼラチン、トラガカンス、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースまたはポリビニルピロリジンといった結合剤を含有してよく、場合によって、澱粉、寒天、アルギン酸またはそのナトリウム塩といった崩解剤、吸収剤、着色剤、香味剤または甘味剤等の薬剤学的添加剤を含有してよい。前記錠剤は、通常的な混合、顆粒化またはコーティング方法により製造されてよい。
【００３０】
本発明に係る前記薬学組成物は、経口、非経口、直腸、局所、経皮、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下等に投与されてよい。
【００３１】
また、前記有効成分の投与量は、治療を受ける対象の年齢、性別、体重または治療する特定の疾患または病理状態、疾患または病理状態の深刻度、投与経路、または処方者の判断により変わり得る。こうした因子に基づいた投与量の決定は、当業者の水準内にある。一般的な投与量は、０．００１ｍｇ／ｋｇ／日〜３０００ｍｇ／ｋｇ／日、より具体的には、１００ｍｇ／ｋｇ／日〜４００ｍｇ／ｋｇ／日とされてよいが、前記投与量は、いかなる方法によるとしても、本発明の範囲を限定するものではない。
【００３２】
本発明の一側面は、茶にジャン（醤）類由来菌株を接種して得られた発酵茶抽出物を有効成分として含む食品組成物を提供する。前記食品組成物は、健康食品組成物であってよい。
【００３３】
前記食品または健康食品組成物の剤形は、特に限定されないが、たとえば、錠剤、顆粒剤、ドリンク剤、キャラメル、ダイエットバー、ティーバッグ等に剤形化されてよい。特に、本発明の一側面による茶にジャン（醤）類由来菌株を接種して得られた発酵茶抽出物を有効成分として含む食品組成物は、食後に飲食物により摂取された脂質を分解し、その排出を促進する効果に優れ、ひいては体内脂質水準を減少させる効果を示すドリンク剤、より具体的には食後脂質抑制飲物を含む。これは、食後に飲食物により摂取された脂質を直ちに排出されるようにして体内に脂質が蓄積されることを防止するので、脂質が蓄積された場合に発生し得る脂肪肝、肝硬変、肥満等の予防または治療効果を有する。各剤形の食品組成物は、有効成分以外に、当該分野において通常的に使用される成分を、剤形または使用目的に応じて当業者が困難なく適宜選定して配合してよく、他の原料と同時に適用する場合、相乗効果が起こり得る。
【００３４】
前記有効成分の投与量の決定は、当業者の水準内にあり、その１日投与量は、たとえば、０．１ｍｇ／ｋｇ／日〜５０００ｍｇ／ｋｇ／日、より具体的には、５０ｍｇ／ｋｇ／日〜５００ｍｇ／ｋｇ／日とされてよいが、これらに限定されず、投与しようとする対象の年齢、健康状態、合併症等の多様な要因によって異なり得る。
【００３５】
以下、実施例および実験例を挙げつつ、本発明の構成および効果を具体的に説明する。しかし、以下の実施例および実験例は、本発明に対する理解を助けるために例示の目的としてのみ提供されたものであるに過ぎず、本発明の範疇および範囲は、それらによって制限されるものではない。
【００３６】
［実施例１］発酵茶の製造
振動培養器を利用して、３０℃で７２時間培養された菌株であるバチルス・サブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）を回収し、まず、遠心分離器で菌株と活性培地とを分離する。１．０％の生理食塩水を利用して菌株を３回洗浄した後、適切な微生物の代謝のために発酵液を供給する。前記発酵液は、発酵液の総重量に対して、砂糖２．５重量％を混合して製造する。その次に、２７ｐｓｉ（ｐｏｕｎｄｓ  ｐｅｒ  ｓｑｕａｒｅ  ｉｎｃｈ）の圧力、１２０℃の温度で、１５分間高温加圧滅菌する。滅菌が完了した後、常温で２５℃まで冷却させる。前記洗浄工程において損傷を受けた菌株の円滑な発酵代謝のために、発酵液において菌株を安定化させる過程を経る。具体的には、大豆粉末を入れる前の状態の発酵液３００ｍｌに食塩水で３回洗浄した菌株を混合し、培養器で２４時間培養しながら安定化させる。
【００３７】
滅菌された反応タンク内において、小包装単位ごとに用意された緑茶成分を、発酵液にバチルス・サブティリスが接種された発酵菌液と混合し、発酵菌株の数が１０３〜１０８ＣＦＵ／ｍｌとなるように調節する。緑茶乾葉重量に対し、発酵液の割合は３０〜６０重量％となるように混合する。また、急速な温度増加によって菌株が損傷を受けないように、発酵菌液を混合した後にも、茶葉を引き続き攪拌し、茶内部の温度が急速に上がらないようにする。２０分後、反応が完了し、温度が下がった緑茶発酵菌液混合物は、入口を塞いで外気の流入を防ぎ、発酵工程を経る。発酵工程は、６０℃の恒温発酵槽で７日間、実施する。発酵工程が完了した後、８０〜１２０℃で、５時間、熱風乾燥して発酵茶を製造し、これを実施例１とした。
【００３８】
前記方法で製造された発酵茶は、病原性微生物が検出されず、最終製品内総菌数（Ｔｏｔａｌ  ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ａｃｃｏｕｎｔ）が１０２ＣＦＵ／ｇ以下である規格範囲の製品を得ることができる。
【００３９】
［実施例２］抽出物の製造
実施例１の発酵茶１ｋｇを、２０％エタノール溶液１５Ｌに浸漬して７０℃で３時間還流（ｒｅｆｌｕｘ）した後、室温で１２時間抽出する。抽出液を濾過し、減圧濃縮した後、凍結乾燥する。これに、さらに９５％エタノール溶液１．６Ｌを加え、ミキサーを使用して３０分間混ぜた後、濾過して濾液と残渣を別々に分画する。残留物を乾燥して粉末試料として製造し、これを実施例２とした。収率は１５〜２５％程度であり、調製した粉末は使用前まで低温で保管する。
【００４０】
［実験例１］リパーゼ阻害活性評価
リパーゼ活性は、試料を添加した際に、４‐メチルウンベリフェロンのオレイン酸エステル（４‐ＵＭＯ）がブタ膵臓リパーゼによって変換される４−メチルウンベリフェロンの量を蛍光強度測定することにより評価した。
【００４１】
被験試料としては、実施例２の発酵茶抽出物を実験群とし、一般緑茶抽出物および一般プーアル茶抽出物を陽性対照群とし、蒸留水を陰性対照群として使用した。基質として、０．１Ｍ  ＤＭＳＯ溶液で調製した４‐ＵＭＯ（Ｓｉｇｍａ社製造）を使用し、反応酵素としては、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１．３ｍＭ  ＣａＣｌ２を含有する１３ｍＭ  Ｔｒｉｓ‐ＨＣｌ（ｐＨ８．０）緩衝液に調製した５０Ｕ／ｍｌのブタ膵臓リパーゼ（Ｓｉｇｍａ社製造）を使用した。
【００４２】
酵素反応は、２５℃の条件下で、９６ウェルマイクロプレートに５０μｌの４‐ＵＭＯ緩衝液溶液、２５μｌの蒸留水（または試料水溶液）を添加して混合した後、２５μｌのリパーゼ緩衝液溶液を添加して３０分間反応させることにより行った。その後、１００μｌの０．１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ４．２）を添加することにより反応を停止させ、反応を通じて生成された４‐メチルウンベリフェロンの蛍光強度（励起波長３５５ｎｍ、蛍光発光波長４６０ｎｍ）を蛍光プレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社製造、ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ  ３  Ｂｅｎｃｈｔｏｐ  ＭｕｌｔｉＭｏｄｅ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ）を使用して測定した。
【００４３】
被験試料の阻害活性は、陰性対照群の活性に比べて５０％低減された活性を示す試料量であるＩＣ５０（μｇ／ｍｌ）の値を求めた。その結果を下表に示した。
【００４４】
【表１】
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【００４５】
前記結果から見られるように、実施例２の発酵茶抽出物は、ＩＣ５０（μｇ／ｍｌ）の値が０．３２であって、一般緑茶抽出物のＩＣ５０（μｇ／ｍｌ）の値である０．６３および一般発酵茶の一種であるプーアル茶抽出物の１．２３よりも小さい値を示した。すなわち、本発明に係る発酵茶抽出物が最も小さい値を示した。本発明の発酵茶エタノール抽出物のリパーゼ阻害活性が最も優れるため、脂質分解を抑制する機能に最も優れることを確認することができる。
【００４６】
［実験例２］動物モデルにおける発酵茶抽出物の単回投与後の血中中性脂肪減少効果の評価
マウスを被実験動物にし、実施例２の発酵茶抽出物に対する高脂肪負荷試験を実施した。８週令のＣ５７ＢＬ／６マウス（１群あたり５匹）を１２時間絶食させ、脂肪として大豆油を５ｍｌ／ｋｇの量で経口投与して負荷させた。対照群（蒸留水）、実施例１の発酵茶抽出物１００、２００および４００ｍｇ／ｋｇ群に分けて試料を投与し、投与前、投与後１．５、３、４．５時間に眼球静脈から採血して血漿を分離した後、血中中性脂肪濃度を測定した。その結果を図１に示した。
【００４７】
図１から見られるように、対照群として蒸留水のみを投与した場合と発酵茶抽出物１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇおよび４００ｍｇ／ｋｇを投与した場合のいずれも、血中中性脂肪水準は高脂肪負荷後、時間の経過につれて上昇して１．５時間後に最も高い値となり、その後低下するというパターンを示した。すべての時間帯について蒸留水を投与した場合の血中中性脂肪水準が最も高く、発酵茶抽出物の投与量が多いほど血中中性脂肪水準が低くて、発酵茶抽出物４００ｍｇ／ｋｇを投与した場合の血中中性脂肪の水準が最も低かった。すなわち、発酵茶抽出物は、すべての時間帯において高脂肪負荷後の血中中性脂肪水準の上昇を有意に低下させた。また、中性脂肪の経時変化を示す曲線下面積値を算出した場合、投与した発酵茶の含量が高いほど低い値を示した。
【００４８】
前記結果から、発酵茶抽出物は、脂質摂取後に上昇する血中中性脂肪値を抑制する効果を有し、その効果は、発酵茶抽出物投与量に比例することを確認することができる。
【００４９】
［実験例３］動物モデルにおける発酵茶抽出物の脂質排泄促進効果の評価
マウスを被実験動物とし、実施例２の抽出物を投与した後、便中脂質排泄量（ｍｇ／ｇ）を確認した。高脂肪の食餌を３週間実施した８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウス（１群あたり５匹）を、対照群（蒸留水）、実施例２の発酵茶抽出物１００および２００ｍｇ／ｋｇ投与群に分けて、１０日間該当試料を投与し、最後の３日間の便を回収して、便として排泄された総脂質量を比較した。その結果を表２および図２に示した。
【００５０】
【表２】
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前記結果から、発酵茶抽出物を投与した場合、対照群に比べて脂質排泄量が増加し、これは濃度依存的であることを、統計的に有意な水準（５％）において確認することができる。
【００５１】
［実験例４］動物モデルにおける発酵茶抽出物の長期間投与後の血中中性脂肪減少効果の評価および脂質排泄促進効果評価
高脂肪の食餌を３週間実施して高脂血症を誘発させた８週令のＣ５７ＢＬ／６マウス（１群あたり５匹）を被実験動物として、８週間の高脂肪の食餌とともに、毎日朝１０時に、実施例２の発酵茶抽出物２００ｍｇ／ｋｇを毎日経口投与した。最後の８週となる時点で、実施例２の発酵茶抽出物に対する高脂肪負荷試験を実施した。対照群（蒸留水）、実施例２の発酵茶抽出物２００ｍｇ／ｋｇ群に分けて試料を投与した。高脂肪負荷試験方法は、実験例２と同じである。その結果を図３に示した。
【００５２】
一方、発酵茶抽出物を投与した後、２、４、６、８週となる時点の３日前から、２、４、６、８週投与時点までの３日間の排便を収集して、便として排泄された総脂質量を比較した。その結果を図４および表３に示した。
【００５３】
【表３】
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図３のように、発酵茶抽出物を８週間の高脂肪食餌とともに長期間投与した場合、対照群（蒸留水）投与群に比べて、全時点における食後血中中性脂肪水準の上昇が遅延することを確認することができる。また、発酵茶抽出物を投与した後、２、４、６、８週間後に脂質の排便排出量を確認した図４および表３の結果から見られるように、発酵茶抽出物の投与期間が長いほど便中脂質排出量が有意に増加することを確認することができる。
【００５４】
［実験例５］発酵茶抽出物の人体内摂取中性脂肪低減効果の評価
健康な成人男女１０名を対象に、高脂肪食事負荷のクロスオーバー試験を実施した。実験実施日前日の２１時から水以外の飲食摂取を禁止して絶食させ、朝９時の実験食を摂取させた。実験食は、ドーナツ２個、牛乳５０ｍｌであり、その栄養成分値は、カロリー６５５ｋｃａｌ、タンパク質１０．５ｇ、脂質４０ｇ、炭水化物７７．５ｇであった。被験試料として、先の動物実験で使用した量に対応して発酵茶抽出物４８８ｍｇを含む飲料を摂取させた。実験食の摂取前、摂取２、４、および６時間後に、上腕静脈から約３ｍｌを採血して中性脂肪を分析した。
【００５５】
この実験は、クロスオーバー試験であり、１０日間のウォッシュアウト期間を置き、１人あたり２回実施した。具体的に、各々被験試料を含まない飲料（水、対照群）または被験試料を含む飲料を摂取する実験を１回ずつ実施した。実験順序を被験者に通知せず、無作為に実施した。実験結果は、高脂肪負荷後血中中性脂肪値の変化量（ΔＴＧ）の経時変化（図５）、およびその直線下面積（ＡＵＣ）の変化（図６）を比較して、平均値±標準誤差で示し、対応ｔ検定を遂行して、両側検定において危険率５％以下を有意とした。その結果を図５および図６に示した。
【００５６】
前記図から見られるように、実施例２の発酵茶抽出物を摂取する場合、高脂肪負荷後の血中中性脂肪値の上昇を抑制できることを確認することができる。
【００５７】
以下、本発明の一側面による発酵茶抽出物を含む組成物の剤形例をより詳細に説明するが、前記組成物は様々な剤形に応用可能であり、これは、本発明を限定しようとするものでなく、ただ単に具体的に説明しようとするものである。
【００５８】
［剤形例１］軟質カプセル剤
発酵茶抽出物１００ｍｇ、大豆抽出物５０ｍｇ、大豆油１８０ｍｇ、紅蔘抽出物５０ｍｇ、パーム油２ｍｇ、パーム硬化油８ｍｇ、黄蝋４ｍｇおよびレシチン６ｍｇを混合し、通常の方法に従ってカプセルに充填して、軟質カプセルを製造した。
【００５９】
［剤形例２］錠剤
発酵茶抽出物１００ｍｇ、大豆抽出物５０ｍｇ、ブドウ糖１００ｍｇ、紅蔘抽出物５０ｍｇ、澱粉９６ｍｇおよびステアリン酸マグネシウム４ｍｇを混合し、３０％エタノールを４０ｍｇ添加して顆粒を形成した後、６０℃で乾燥し、打錠機を利用して錠剤に打錠した。
【００６０】
［剤形例３］顆粒剤
発酵茶抽出物１００ｍｇ、大豆抽出物５０ｍｇ、ブドウ糖１００ｍｇ、紅蔘抽出物５０ｍｇおよび澱粉６００ｍｇを混合し、３０％エタノールを１００ｍｇ添加して顆粒を形成した後、６０℃で乾燥して顆粒を形成してから包に充填した。
【００６１】
［剤形例４］ドリンク剤
発酵茶抽出物１００ｍｇ、大豆抽出物５０ｍｇ、ブドウ糖１０ｇ、紅蔘抽出物５０ｍｇ、クエン酸２ｇおよび精製水を混合してドリンク剤を製造した後、瓶に充填した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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